Brevet FR3124077A1 — publié le 20221223

Utilisation d ’ un acide gras à chaîne courte comme agent antipelliculaire La présente invention concerne le domaine cosmétique, et notamment les utilisations cosmétiques d’au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, ou un milieu de culture conditionné obtenu à partir d’au moins un micro-organisme capable de produire ce(s) acide(s) gras à chaîne courte, comme agent antipelliculaire, pour prévenir et/ou traiter les troubles desquamatifs de la peau associés à la prolifération excessive de levures du genre Malassezia sur la peau et pour maintenir et/ou restaurer à un niveau normal, l’écoflore de la peau et notamment en prévenant la colonisation excessive de la peau par le genre Malassezia et/ou en médiant la croissance de Cutibacterium acnes . Figure pour l’abrégé : 1 Utilisation d ’ un acide gras à cha î ne courte comme agent antipelliculaire La présente invention concerne le domaine cosmétique, et notamment les utilisations cosmétiques d’au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, ou d’un milieu de culture conditionné obtenu à partir d’au moins un micro-organisme, capable de produire ce(s) acide(s) gras à chaîne courte, comme agent antipelliculaire, pour prévenir et/ou traiter les troubles desquamatifs de la peau associés à la prolifération excessive de levures du genre Malassezia sur la peau et pour maintenir et/ou rétablir à un niveau normal l’écoflore de la peau, notamment en prévenant la colonisation excessive de la peau par les levures du genre Malassezia et/ou en médiant la croissance de Cutibacterium acnes . Les troubles desquamatifs de la peau, tels que les pellicules ou la dermatite séborrhéique, touchent jusqu’à 50 % de la population mondiale. Ils touchent aussi bien les hommes que les femmes et sont perçus comme ayant un impact psychosocial très négatif. L’aspect des pellicules est désagréable tant sur le plan esthétique qu’en raison de l’inconfort qu’elles provoquent (notamment des picotements ou des démangeaisons), et c’est pourquoi de nombreuses personnes confrontées à ce problème souhaitent l’éliminer efficacement et définitivement. Ces troubles correspondent à une desquamation excessive et visible de la peau résultant d’une multiplication trop rapide des cellules de l’épiderme et de leur maturation anormale. Ce phénomène peut être provoqué notamment par des traitements trop agressifs de la peau ou des cheveux, des conditions climatiques extrêmes, le stress, l’alimentation, la fatigue et la pollution. Les affections pelliculaires et de dermatite séborrhéique résultent généralement d’un trouble de la microflore cutanée et plus particulièrement d’une colonisation excessive par un champignon qui appartient à la famille des levures du genre Malassezia , notamment l’espèce Malassezia restricta , et d’une moindre abondance de Cutibacterium acnes , par rapport à un cuir chevelu sain. De nombreux traitements ont été développés avec pour objectif principal d’éradiquer les levures Malassezia de la peau. Ainsi, l’activité des agents actifs actuellement utilisés, tels que pyrithione de zinc, piroctone olamine ou disulfure de sélénium, repose principalement sur leur propriété fongicide. Cependant, il est bien connu que beaucoup de ces agents conventionnels étendent leur effet antimicrobien sur au moins une des autres bactéries et ne sont donc pas sélectifs vis-à-vis des levures du genre Malassezia , et notamment de l’espèce Malassezia restricta , et peuvent donc tuer ou altérer la microflore commensale bénéfique de la peau. Ainsi, les solutions pour trouver de nouveaux agents actifs qui ont une activité d’inhibition de la croissance sélective contre les levures du genre Malassezia (connues pour être responsables des troubles desquamatifs de la peau), et notamment l’espèce Malassezia restric ta, sont devenues un défi majeur pour conserver et/ou restaurer une microflore cutanée saine et répondre ainsi aux besoins des consommateurs. Un but de la présente invention est de fournir un agent actif efficace pour inhiber la croissance des levures du genre Malassezia (responsables des troubles desquamatifs de la peau), notamment l’espèce Malassezia restricta , sans étendre son effet antimicrobien à d’autres bactéries, notamment Staphylococcus epidermidis , et/ou Staphylococcus capitis , et/ou Cutibacterium acnes , qui constituent ensemble une large portion du microbiome de la peau. Un autre but de l’invention est de proposer un agent actif qui peut maintenir et/ou restaurer à un niveau normal, l’écoflore de la peau et notamment en prévenant la colonisation excessive de la peau par les levures du genre Malassezia et/ou en médiant la croissance de Cutibacterium acnes . Le demandeur a découvert de manière étonnante que l’utilisation cosmétique d’au moins un acide gras à chaîne courte ayant une longueur de chaîne ne comprenant pas plus de 5 atomes de carbone choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, a permis de traiter efficacement les affections pelliculaires et/ou de dermatite séborrhéique associés à la prolifération de levures du genre Malassezia sans avoir d’effet antimicrobien sur Staphylococcus epidermidis et Cutibacterium acnes contrairement aux acides gras à chaîne moyenne ayant une longueur de chaîne comprenant plus de 6 atomes de carbone comme acide caproïque, acide caprylique, éthylcaproate, monocaprylate de glycéryle, monocaprylate de propylèneglycol, et un sel métallique d’un acide gras à chaîne courte comme le propionate de zinc montré dans l’exemple 3 de la présente demande. En plus de la sélectivité sur le genre Malassezia , lesdits acides gras à chaîne courte médient la croissance de Cutibacterium acnes , une bactérie commensale de la peau, qui est diminuée dans les affections pelliculaires et de dermatite séborrhéique. Ainsi, ces effets contribuent à un effet de rééquilibrage de l’écoflore de la peau. Un objet de la présente invention est donc l’utilisation cosmétique i) d’au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, ou ii) d’un milieu de culture conditionné obtenu à partir d’au moins un micro-organisme capable de produire un ou plusieurs acides gras à chaîne courte, ledit milieu comprenant au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, en tant qu’agent antipelliculaire. Un autre objet de la présente invention est une utilisation cosmétique i) d’au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, ou ii) d’un milieu de culture conditionné obtenu à partir d’au moins un micro-organisme capable de produire un ou plusieurs acides gras à chaîne courte, ledit milieu comprenant au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, pour prévenir et/ou traiter les troubles desquamatifs de la peau associés à la prolifération des levures du genre Malassezia , plus particulièrement de l’espèce Malassezia restricta , tels que les pellicules et/ou la dermatite séborrhéique. L’invention concerne également une utilisation cosmétique i) d’au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, ou ii) d’un milieu de culture conditionné obtenu à partir d’au moins un micro-organisme capable de produire un ou plusieurs acides gras à chaîne courte, ledit milieu comprenant au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, pour maintenir et/ou rétablir à un niveau normal, l’écoflore de la peau et notamment en prévenant la colonisation excessive de la peau par les levures du genre Malassezia , plus particulièrement l’espèce Malassezia restricta , et/ou en médiant la croissance de Cutibacterium acnes . Un autre objet de la présente invention est un procédé cosmétique destiné à prévenir et/ou traiter les troubles desquamatifs de la peau associés à la prolifération des levures du genre Malassezia , plus particulièrement de l’espèce Malassezia restricta , tels que les pellicules et/ou la dermatite séborrhéique, comprenant l’application, sur les cheveux et/ou la peau, d’une composition cosmétique comprenant une quantité efficace i) d’au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, ou ii) d’un milieu de culture conditionné obtenu à partir d’au moins un micro-organisme capable de produire un ou plusieurs acides gras à chaîne courte, ledit milieu comprenant au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci. Un autre objet de la présente invention est un procédé cosmétique destiné à maintenir et/ou restaurer à un niveau normal, l’écoflore de la peau et notamment en prévenant la colonisation excessive de la peau par les levures du genre Malassezia , plus particulièrement l’espèce Malassezia restricta , et/ou en médiant la croissance de Cutibacterium acnes , comprenant l’application, sur les cheveux et/ou la peau, d’une composition cosmétique comprenant une quantité efficace i) d’au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, ou ii) d’un milieu de culture conditionné obtenu à partir d’au moins un micro-organisme capable de produire un ou plusieurs acides gras à chaîne courte, ledit milieu comprenant au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci. Définitions Dans le présent document, le terme « traitement » ou « traitement » désigne toute action visant à améliorer le confort ou le bien-être d’un individu. Ce terme recouvre donc l’atténuation, le soulagement ou la suppression des symptômes des pellicules ou de la dermatite séborrhéique, mais se limite à un traitement cosmétique. Aux fins de la présente invention, le terme « sels non métalliques » désigne les sels qui ne comprennent pas d’ion(s) métallique(s) tel(s) qu’ion de zinc, ion d’aluminium, ion de cuivre, ion de fer, et leurs mélanges. Aux fins de la présente invention, le terme « peau » désigne la peau du corps entier, incluant le cuir chevelu, de préférence la peau du cuir chevelu et la peau du visage telle que le front, le nez, les joues, le menton, la poitrine, le cou. Dans le cadre de la présente invention, le terme « écoflore de la peau » désigne la flore microbienne naturellement présente sur la peau saine, notamment les micro-organismes commensaux de la peau, comme par exemple Staphylococcus epidermidis , et/ou Staphylococcus capitis , et/ou Cutibacterium acnes . Au sens de la présente invention, les termes « prévenir » signifient réduire le risque de manifestation d’un phénomène, notamment dans le cadre de l’invention les pellicules et la dermatite séborrhéique. Au sens de la présente invention, les termes « quantité efficace » signifient une quantité suffisante pour obtenir l’effet attendu. Au sens de la présente invention, les termes « composition cosmétique » désignent une composition convenable pour une application sur la peau, en particulier une composition qui comprend un milieu physiologiquement acceptable. Par « milieu physiologiquement acceptable », on entend un milieu convenable pour l’administration topique d’une composition, c’est-à-dire compatible avec la peau du visage, du corps et du cuir chevelu. Au sens de la présente invention, les termes « acide gras à chaîne courte » désignent un acide carboxylique à chaîne aliphatique comprenant 3 à 5 atomes de carbone, de préférence, un acide carboxylique à chaîne aliphatique ayant 3 atomes de carbone. Figures : Effet des AGCC sur la croissance de Malassezia restricta . : Effet des AGCC sur la croissance de Cutibacterium acnes . : Effet des AGCC sur la croissance de Sta p hylococcus epidermidis . : Effet des acides gras (50 mM) sur la croissance de Malassezia restricta , quantifiée en utilisant la coloration par fluorescence. : Effet des esters d’acides gras et des sels métalliques (50 mM) sur la croissance de Malassezia restricta , quantifiée par la mesure de l’ATP. : Effet des acides gras, des esters et des sels métalliques sur la croissance de Cutibacterium acnes . : Effet des acides gras, des esters et des sels métalliques sur la croissance de Staphylococcus epidermidis . : Effet des AGCC sur la croissance de Cutibacterium acne s lorsque Cutibacterium acnes est cultivé en co-culture avec Sta p hylococcus epidermidis en condition aérobie. Exemples Exemple 1 - É valuation de l ’ inhibition sélective de la croissance de Malassezia restricta par le propionate de sodium, le butyrate de sodium et le valérate de sodium (selon l ’ invention). A) Matériel et procédés Organismes et conditions de croissance M. restricta ATCC MYA-4611 , S. epidermidis ATCC 12228, et C. acnes ATCC 6919 ont été achetés auprès de l’ATCC. M. restricta a été systématiquement cultivé dans un milieu modifié de Dixon (MD) (pH 6), composé de 36 g d’extrait de malt (Sigma 70167), 20 g d’oxbile desséché (Sigma 70168), 6 g de Bacto TM Peptone (BD 211677), 1 % (v/v) de Tween 40 (Sigma P1504), 0,2 % (v/v) d’acide oléique (Fluka 75096), et 0,2 % (v/v) de glycérol (Promega H5433) dans 1 litre de dH 2 O. C. acnes et S. epidermidis ont été cultivés dans un milieu de bouillon cœur-cervelle modifié (MBHI) (pH 7), contenant 37 g de base BHI (Accumedia 7116B), 0,4 % (v/v) de Tween-40 (Sigma P1504), 0,2 % (v/v) d’acide oléique (Fluka 75096) et 0,2 % (v/v) de glycérol (Promega H5433) dans 1 litre de dH 2 O. M. restricta et S. epidermidis ont été systématiquement cultivés dans des conditions aérobies, secoués à 200 tr/min, et C. acnes a été cultivé dans des conditions anaérobies. Tous les organismes ont été cultivés à 33 °C. Chaque fois que cela était nécessaire, les milieux ont été complétés avec : acétate de sodium (CH 3 COOH, Sigma Ref. 32319), propionate de sodium (CH 3 CH 2 COOH, Sigma Ref. P1880), butyrate de sodium (CH 3 (CH 2 ) 2 COOH, Sigma Ref. 303410), acide valérique (CH 3 (CH 2 ) 3 COOH, Fluka Ref. 75054). Pour l’acide valérique, le pH du milieu cellulaire modifié a été neutralisé avec du NaOH (hydroxyde de sodium, Sigma 283060). Quantification du nombre total de cellules par SYTO9 Les cellules de M. restricta provenant de 1 ml de la culture ont été récoltées par centrifugation à 10 000 x g pendant 5 minutes à température ambiante. Les cellules ont été lavées une fois, centrifugées au culot et remises en suspension dans une solution de NaCl à 0,9 %. Des volumes égaux de la suspension cellulaire ci-dessus et du stock de travail de SYTO 9 (3 ul du composant SYTO 9 du kit de viabilité bactérienne Live/Dead BacLight, ThermoFisher Scientific, L7012, dilué dans 1 ml de solution de NaCl à 0,9 %) ont été bien mélangés, incubés dans l’obscurité pendant 10 minutes, et le motif d’intensité de fluorescence a été mesuré dans un lecteur de microplaques Tecan avec des longueurs d’onde d’excitation/émission de 485/530 nm. Un étalon pour la corrélation des unités de fluorescence et de la concentration a été préparé en utilisant un fluorimètre et un hémocytomètre sous un microscope optique. Cette courbe étalon a été utilisée pour calculer le nombre total de cellules. Essais de croissance Les cellules de M. restricta stockées sous forme de stocks de glycérol (30 % de glycérol dans un milieu MD) ont été réactivées en les étalant sur des plaques de gélose MD et incubées pendant 2 à 3 jours à 33 °C. Une pré-culture a été réalisée à partir du tapis de cellules cultivées sur la plaque de gélose. Les cellules de ¼ de la plaque ont été raclées, homogénéisées après suspension dans 70 ml de milieu MD dans un erlenmeyer à chicanes de 250 ml et incubées pendant 24 heures à 33 °C à 200 tr/min. Pour les expériences, 10 7 cellules/ml ont été inoculées dans du milieu MD frais avec ou sans acides gras à chaîne courte. La croissance a été suivie en mesurant la densité cellulaire avec SYTO 9 pendant 24 heures ou 96 heures. C. acnes et S. epidermidis ont été inoculés dans le milieu MBHI à une densité cellulaire de départ DO 600 de 0,05 et 0,25, respectivement. La croissance bactérienne a été mesurée en étalant les cultures diluées en série sur des plaques de gélose de bouillon cœur-cervelle à différents moments et les colonies ont été comptées après 72 heures pour C. acnes et 24 heures pour S. epidermidis . Quantification des unités formant des colonies (CFU) La croissance bactérienne a été quantifiée en étalant les cultures diluées en série sur des plaques de gélose de bouillon cœur-cervelle à différents moments et les colonies ont été comptées après 72 heures pour C. acnes et 24 heures pour Staphylococcus sp . B) Résultats Le propionate de sodium, le butyrate de sodium et le valérate de sodium inhibent complètement la croissance de Malassezia restricta à une concentration de 30 mM. Aucun effet de l’acétate n’a été observé à la même concentration ( ). Le propionate de sodium, le butyrate de sodium et le valérate de sodium n’affectent pas la croissance de C. acnes et de S. epidermidis aux concentrations où une inhibition complète de Malassezia restricta a été observée (30 mM) ( et 3). Conclusion : le propionate de sodium, le butyrate de sodium et le valérate de sodium inhibent sélectivement Malassezia restricta et n’affectent pas la croissance des autres principaux microbes commensaux de la peau comme C. acnes et S. epidermidis . Exemple 2 - É valuation de la promotion de la croissance de Cutibacterium acnes par le propionate de sodium (selon l ’ invention) A) Matériel et procédés Organismes et conditions de croissance S. epidermidis ATCC 12228, et C. acnes ATCC 6919 ont été achetés auprès de l’ATCC. C. acnes et S. epidermidis ont été cultivés dans un milieu de bouillon cœur-cervelle modifié (MBHI) (pH 7), contenant 37 g de base BHI (Accumedia 7116B), 0,4 % (v/v) de Tween-40 (Sigma P1504), 0,2 % (v/v) d’acide oléique (Fluka 75096), et 0,2 % (v/v) de glycérol (Promega H5433) dans 1 litre de dH 2 O. S. epidermidis a été systématiquement cultivé dans des conditions aérobies, secoué à 200 tr/min, et C. acnes a été cultivé dans des conditions anaérobies. Tous les organismes ont été cultivés à 33 °C. Chaque fois que cela était nécessaire, le milieu a été complété avec : propionate de sodium (CH 3 CH 2 COOH, Sigma Ref. P1880), Essais de croissance C. acnes et S. epidermidis ont été inoculés dans un milieu MBHI à une densité cellulaire de départ DO 600 de 0,05 et 0,25 respectivement. La croissance bactérienne a été mesurée en étalant les cultures diluées en série sur des plaques de gélose de bouillon cœur-cervelle à différents moments et les colonies ont été comptées après 72 heures pour C. acnes et 24 heures pour S. epidermidis . Essais de co-culture Pour les co-cultures, des volumes égaux de cellules en croissance exponentielle des deux espèces ont été mélangés à une densité cellulaire de 10 5 cellules par ml dans des plaques de 24 puits à fond de verre. La croissance de chaque espèce dans les co-cultures a été quantifiée en étalant la suspension de culture sur un milieu de gélose. Pour la quantification sélective de chaque bactérie dans la co-culture, les plaques de gélose ont été soit cultivées en conditions aérobies pour favoriser la croissance sélective de S. epidermidis , soit cultivées en conditions anaérobies pour dénombrer sélectivement C. a c nes avec de la furazolidone, qui tue uniquement S. epidermidis . Quantification des unités formant des colonies (CFU) La croissance bactérienne a été quantifiée en étalant les cultures diluées en série sur des plaques de gélose de bouillon cœur-cervelle à différents moments et les colonies ont été comptées après 72 heures pour C. acnes et 24 heures pour Staphylococcus Sp . B) Résultats S. epidermidis a été cultivé jusqu’à la formation d’un biofilm pendant 24 heures pour maximiser sa croissance, puis des cellules de C. acnes ont été ajoutées dans un milieu frais saturé en oxygène avec ou sans propionate. La croissance de C. acnes sera minimale à moins que le propionate ne soit métabolisé par la couche de S. epidermidis , ce qui créerait des conditions favorables à la croissance de C. acnes . La croissance de C. acnes et de S. epidermidis a été suivie pendant 24, 48 et 72 heures, et il a été constaté que la croissance de C. acnes était augmentée en présence de propionate ( ). La croissance significativement plus élevée de C. acnes dans des conditions aérobies en présence de propionate démontre que le propionate est capable de moduler la dynamique de la communauté du microbiome de la peau en favorisant la croissance de C. acnes en présence de Staphylococcus Sp. Exemple 3 - Évaluation de la sélectivité de l ’ inhibition de la croissance de Malassezia restricta par le propionate de sodium, le butyrate de sodium et le valérate de sodium (selon l ’ invention) par rapport aux acides gras à chaîne moyenne : acide caproïque, acide caprylique, caproate d ’ éthyle, monocaprylate de glycéryle, monocaprylate de propylène glycol (hors invention) et au sel métallique d ’ acide gras à chaîne courte : propionate de zinc (hors invention). A) Matériel et procédés Organismes et conditions de croissance M. restricta ATCC MYA-4611, S. epidermidis ATCC 12228 et C. acnes ATCC 6919 ont été achetés auprès de l’ATCC. M. restricta a été systématiquement cultivé dans le milieu modifié de Dixon (MD) (pH 6), composé de 36 g d’extrait de malt (Sigma 70167), 20 g d’oxbile desséché (Sigma 70168), 6 g de Bacto TM Peptone (BD 211677), 1 % (v/v) de Tween 40 (Sigma P1504), 0,2 % (v/v) d’acide oléique (Fluka 75096), et 0,2 % (v/v) de glycérol (Promega H5433) dans 1 litre de dH 2 O. C. acnes et S. epidermidis ont été cultivés dans un milieu de bouillon cœur-cervelle modifié (MBHI) (pH 7), contenant 37 g de base BHI (Accumedia 7116B), 0,4 % (v/v) de Tween-40 (Sigma P1504), 0,2 % (v/v) d’acide oléique (Fluka 75096) et 0,2 % (v/v) de glycérol (Promega H5433) dans 1 litre de dH 2 O. M. restricta et S. epidermidis ont été systématiquement cultivés dans des conditions aérobies, secoués à 200 tr/min, et C. acne s a été cultivé dans des conditions anaérobies. Tous les organismes ont été cultivés à 33 °C. Chaque fois que nécessaire, le milieu a été complété avec 50 mM de : propionate de sodium (CH 3 CH 2 COOH, Sigma Ref. P1880), butyrate de sodium (CH 3 (CH 2 ) 2 COOH, Sigma Ref. 303410), acide valérique (CH 3 (CH 2 ) 3 COOH, Fluka Ref. 75054). Pour l’acide valérique, le pH du milieu cellulaire modifié a été neutralisé avec du NaOH (hydroxyde de sodium, Sigma 283060). Quantification du nombre total de cellules de M. restricta par SYTO9 Les cellules de M. restricta provenant de 1 ml de la culture ont été récoltées par centrifugation à 10 000 x g pendant 5 minutes à température ambiante. Les cellules ont été lavées une fois, centrifugées au culot et remises en suspension dans une solution de NaCl à 0,9 %. Des volumes égaux de la suspension cellulaire ci-dessus et du stock de travail de SYTO 9 (3 ul du composant SYTO 9 du kit de viabilité bactérienne Live/Dead BacLight, ThermoFisher Scientific, L7012, dilué dans 1 ml de solution de NaCl à 0,9 %) ont été bien mélangés, incubés dans l’obscurité pendant 10 minutes et le motif d’intensité de fluorescence a été mesuré dans un lecteur de microplaques Tecan avec des longueurs d’onde d’excitation/émission de 485/530 nm. Un étalon pour la corrélation des unités de fluorescence et de la concentration a été préparé en utilisant un fluorimètre et un hémocytomètre sous un microscope optique. Cette courbe étalon a été utilisée pour calculer le nombre total de cellules. Essais de croissance Les cellules de M. restricta stockées sous forme de stocks de glycérol (30 % de glycérol dans un milieu MD) ont été réactivées en les étalant sur des plaques de gélose MD et incubées pendant 2 à 3 jours à 33 °C. Une pré-culture a été réalisée à partir du tapis de cellules cultivées sur la plaque de gélose. Les cellules de ¼ de la plaque ont été raclées, homogénéisées après suspension dans 70 ml de milieu MD dans un erlenmeyer à chicanes de 250 ml et incubées pendant 24 heures à 33 °C à 200 tr/min. Pour les expériences, 10 7 cellules/ml ont été inoculées dans un milieu MD frais avec ou sans acides gras à chaîne courte à une concentration de 50 mM. La croissance a été suivie en mesurant la densité cellulaire avec SYTO 9 ou en estimant la concentration d’ATP (voir ci-dessous) pendant 24 heures ou 96 heures. C. acnes et S. epidermidis ont été inoculés dans un milieu MBHI à une densité cellulaire de départ DO 600 de 0,05 et 0,25, respectivement. La croissance bactérienne a été mesurée en étalant les cultures diluées en série sur des plaques de gélose de bouillon cœur-cervelle à différents moments et les colonies ont été comptées après 72 heures pour C. acnes et 24 heures pour S . epidermidis . Estimation de l’ATP L’ATP cellulaire a été mesurée à l’aide du kit de viabilité cellulaire BacTiterGlo Microbial (Promega) en suivant le protocole du fabricant. En bref, l’activité de la luciférase, qui utilise l’ATP comme substrat, a été estimée comme une mesure directe de l’ATP produit par les cellules. B) Résultats En raison des caractéristiques variables des différents composés qui interfèrent avec les lectures du test, l’estimation de la croissance de M. restricta a été réalisée à l’aide de deux procédés différents : - Pour tous les acides gras et les esters de l’acide caproïque, le nombre total de cellules après 72 heures d’incubation a été quantifié par mesure de la fluorescence des cellules colorées avec le colorant fluorescent SYTO9 (voir procédés). La densité cellulaire initiale de M. restricta était de 1 x 10 7 cellules/ml ( ). - Pour les esters d’acide caprylique et le propionate de zinc, la viabilité cellulaire a été quantifiée en estimant la quantité totale d’ATP dans le lysat cellulaire préparé à partir de cellules cultivées pendant 24 heures (puisque ces composés rendent le milieu opaque). Les mesures d’ATP ont été exprimées en unités de luminescence relative (RLU) de la luminescence émise par l’enzyme luciférase en présence d’ATP ( ). La croissance de C. acnes a été quantifiée en estimant les unités formant des colonies (CFU) après 72 heures de croissance dans des milieux contenant les acides gras et leurs esters ( ). La croissance de S. epidermidis a été quantifiée en estimant les unités formant des colonies (CFU) après 24 heures de croissance dans des milieux contenant les acides gras et leurs esters ( ). Les résultats sont présentés dans les tableaux 1 et 2 ci-dessous. [Tableau 1] Tableau 1 – Composés testés selon l ’ invention Rep.# Témoin NaP NaB NaV C. acnes (log10 CFU/ml) #1 8,37 7,82 8,26 8,90 #2 8,16 8,34 8,10 8,03 #3 8,05 8,29 8,34 8,00 S. epidermidis (log10 CFU/ml) #1 9,55 8,82 8,87 9,29 #2 9,64 9,00 8,90 9,08 #3 8,72 9,16 9,15 8,90 M. restricta (log10 du nombre total de cellules) #1 8,06 6,95 6,94 6,86 #2 7,98 6,79 6,88 6,92 #3 8,01 6,82 6,88 6,93 *NaP: propionate de sodium, NaB: butyrate de sodium, NaV: valérate de sodium. [Tableau 2] Tableau 2 – Composés testés hors invention Rep.# Témoin Cpo EH_Cpo Cpy GM_Cpy PGM_Cpy Zn_Pro C. acnes (log10 CFU/ml) #1 8,37 8,29 9,94 0,00 0,00 0,00 0,00 #2 8,16 8,26 8,47 0,00 0,00 0,00 0,00 #3 8,05 8,41 8,00 0,00 0,00 0,00 0,00 S. epidermidis (log10 CFU/ml) #1 9,55 7,67 5,54 3,03 0,00 4,15 5,05 #2 9,64 7,57 5,66 3,00 0,00 4,11 0,00 #3 8,72 7,64 5,55 3,34 0,00 4,12 5,00 M. restricta (log10 du nombre total de cellules) #1 8,06 6,93 6,80 6,98 #2 7,98 6,95 6,69 6,91 #3 8,01 6,87 6,74 6,84 (Unités de luminescence relative) #1 543000 16700 -2410 12500 #2 1480000 -1470 -2430 11900 #3 1070000 -2030 -2270 10300 * Cpo: acide caproïque, EH Cpo: caproate d’éthyle, Cpy: acide caprylique, GM Cpy: mono caprylate de glycéryle, PGM Cpy: mono caprylate de glycéryle de propylène glycol, Zn Pr: propionate de zinc . Conclusion : le propionate de sodium, le butyrate de sodium et le valérate de sodium (composés selon l’invention) inhibent sélectivement M. restricta et n’affectent pas la croissance des autres principaux microbes commensaux de la peau comme C. acnes et S. epidermidis , contrairement à l’acide caproïque, au caproate d’éthyle, à l’acide caprylique, au mono caprylate de glycéryle, au mono caprylate de glycéryle de propylène glycol, au propionate de zinc (composés ne relevant pas de l’invention) qui se sont avérés inhiber au moins un des microbes commensaux de la peau. Exemple 3 - Crème pour le visage On prépare la composition décrite ci-dessous. [Tableau 3] Tableau 3 – Composition de crème pour le visage Composés Concentration (p/p) Propionate de sodium 1,0 Méthylstéaroyltaurate de sodium 0,23 Gomme xanthane 0,05 carbomère 0,2 eau qs 100 La composition est appliquée sur la peau présentant une affection de dermatite séborrhéique. Utilisation cosmétique i) d’au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, ou ii) d’un milieu de culture conditionné obtenu à partir d’au moins un micro-organisme capable de produire un ou plusieurs acides gras à chaîne courte, ledit milieu comprenant au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, comme agent antipelliculaire. Utilisation cosmétique i) d’au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, ou ii) d’un milieu de culture conditionné obtenu à partir d’au moins un micro-organisme capable de produire un ou plusieurs acides gras à chaîne courte, ledit milieu comprenant au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, pour prévenir et/ou traiter les troubles desquamatifs de la peau associés à la prolifération des levures du genre Malassezia , tels que les pellicules et/ou la dermatite séborrhéique. Utilisation cosmétique i) d’au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, ou ii) d’un milieu de culture conditionné obtenu à partir d’au moins un micro-organisme capable de produire un ou plusieurs acides gras à chaîne courte, ledit milieu comprenant au moins un acide gras à chaîne courte choisi parmi acide propionique, acide butyrique, acide valérique, des sels non métalliques de ceux-ci, des esters de ceux-ci et des mélanges de ceux-ci, pour maintenir et/ou rétablir à un niveau normal l’écoflore de la peau et notamment en empêchant une colonisation excessive de la peau par les levures du genre Malassezia , et/ou en médiant la croissance de Cutibacterium acnes . Utilisation cosmétique selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit acide gras à chaîne courte est choisi parmi propionate de sodium, butyrate de sodium, valérate de sodium, et des mélanges de ceux-ci. Utilisation cosmétique selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit acide gras à chaîne courte est obtenu à partir d’au moins un micro-organisme de l’espèce Cutibacterium acnes , de préférence à partir d’au moins un micro-organisme de la souche Cutibacterium acnes ATCC 6919. Utilisation cosmétique selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle ledit milieu de culture conditionné est obtenu par le procédé comprenant les étapes suivantes : mise en culture d’au moins un micro-organisme capable de produire un ou plusieurs acides gras à chaîne courte, de préférence un micro-organisme de l’espèce Cutibacterium acnes tel que Cutibacterium acnes ATCC 6919 ; séparation, en particulier par centrifugation, du surnageant de culture de la biomasse ; récupération du surnageant de culture ; et stabilisation facultative du surnageant de culture, par exemple par filtration et/ou autoclavage.