Brevet FR3123566A1 — publié le 20221209

La présente invention concerne l’utilisation cosmétique de la 7-prényl-theophylline pour ses propriétés anti-âge. Figure pour l’abrégé : Néant UTILISATION COSMETIQUE DE LA 7-PRENYL-THEOPHYLLINE POUR SES PROPRIETES ANTI-AGE. La présente invention concerne l’utilisation de la 7-prenyl-theophylline (INCI name: Isopentenyltheophylline) de structure I ci-dessous pour ses propriétés anti-âge en cosmétique. (I) Dans une demande antérieur (FR3026105), nous avions breveté ce composé et ses dérivés pour des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques permettant de lutter contre les peaux sèches à tendance atopique. Nous montrons dans cette demande les effets anti-âge de la 7-prenyl-theophylline par action sur le collagène, l’élastine et l’acide hyaluronique qui sont 3 composants majeurs de la matrice extracellulaire impliqués dans le vieillissement naturel ou prématuré de la peau jeune ou âgée. Ce composé peut être associé à d’autres composés anti-âge afin d’amplifier ou intervenir en synergie sur ces effets anti-âge. Il peut aisément entrer dans une composition cosmétique, caractérisée en ce qu’elle contient de 0,01 à 1% en poids de composé de formule (I) par rapport au poids total de la composition. L’exemple 1 ci-dessous illustre les propriétés anti-âge revendiquées par mesure de l’effet du composé I sur la teneur en collagène, en élastine et en acide hyaluronique. Culture et traitement des monocouches : A confluence, les fibroblastes sont trypsinés et ensemencés dans des plaques 6 puits à raison de 0,08.106 cellules par puits. Après 24 heures de cultures, 2 ml de milieu avec ou sans actif sont ajoutés. L'Actif est dilués aux concentrations choisies dans du milieu de culture DMEMc. Après 48 heures de culture en présence de l'actif le surnageant est prélevé sur antiprotéase (10%). Les aliquots sont conservés à -80°C jusqu'aux dosages. Les monocouches cellulaires sont lavées avec du PBS et 400 µl de NaOH 0,1N sont ajoutés. Le lysat cellulaire est conservé à -20°C jusqu'au dosage des protéines. Dosage du collagène I - Principe La quantité de collagène I produite par les cellules est déterminée par dosage ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, kit Uscn Life Science). Les échantillons sont déposés dans une plaque 96 puits pré-coatée avec un anticorps spécifique du collagène I. Les standards et les échantillons sont déposés dans la plaque avec une solution d'anticorps anti-collagène I couplé à la biotine. La révélation se fait par ajout d'une solution d'avidine couplée à la «Horseradish Peroxydase» (HRP) puis de substrat TMB. Enfin, la réaction enzymatique est stoppée par ajout d'une solution d'acide sulfurique. La coloration obtenue est proportionnelle à la quantité de collagène I et la lecture des densités optiques est effectuée immédiatement. - Mode opératoire 100 µl d'échantillon ou de standard sont déposés dans chaque puits. Après 2 heures d'incubation à 37°C, les puits sont vidés et 100 µl du réactif de détection A sont ajoutés. Après une incubation d'une heure à 37°C, les puits sont lavés 3 fois avec la solution de lavage. 100 µl du réactif de détection B sont ensuite déposés et la plaque est incubée 30 minutes à 37°C. 5 lavages sont effectués puis 90 µl de la solution de substrat sont ajoutés dans les puits. Au bout de 20 minutes à 37°C et à l'abri de la lumière, une coloration bleue proportionnelle à la quantité de collagène I apparaît. 50 µl de la solution stop sont ajoutés et la lecture des densités optiques est effectuée immédiatement à 450 nm (spectrophotomètre Multiscan Ex, Thermo). - Calculs La courbe standard est tracée en représentant les densités optiques en fonction de la quantité de collagène de la gamme étalon. La quantité de collagène de chaque échantillon est déterminée grâce à cette courbe standard. Les concentrations de collagène III sont exprimées en ng/mg de protéines. Dosage de l'élastine - Principe La quantité d'élastine produite par les cellules est déterminée par dosage ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, kit Uscn Life Science). Les échantillons sont déposés dans une plaque 96 puits pré-coatée avec un anticorps spécifique de l'élastine. Les standards et les échantillons sont déposés dans la plaque avec une solution d'anticorps anti-élastine couplé à la biotine. La révélation se fait par ajout d'une solution d'avidine couplée à la «Horseradish Peroxydase» (HRP) puis de substrat TMB. Enfin, la réaction enzymatique est stoppée par ajout d'une solution d'acide sulfurique. La coloration obtenue est proportionnelle à la quantité d'élastine et la lecture des densités optiques est effectuée immédiatement. - Mode opératoire 100 µl d'échantillon dilué au 1/10ème ou 100 µl de standard sont déposés dans chaque puits. Après 1 heures d'incubation à 37°C, les puits sont vidés et 100 µl du réactif de détection A sont ajoutés. Après une incubation d'une heure à 37°C, les puits sont lavés 3 fois avec la solution de lavage. 100 µl du réactif de détection B sont ensuite déposés et la plaque est incubée 30 minutes à 37°C. Cinq lavages sont effectués puis 90 µl de la solution de substrat sont ajoutés dans les puits. Au bout de 20 minutes à 37°C et à l'abri de la lumière, une coloration bleue proportionnelle à la quantité d'élastine apparaît. 50 µl de la solution stop sont ajoutés et la lecture des densités optiques est effectuée immédiatement à 450 nm (spectrophotomètre Multiscan Ex, Thermo). - Calculs La courbe standard est tracée en représentant les densités optiques en fonction de la quantité d'élastine de la gamme étalon. La quantité d'élastine de chaque échantillon est déterminée grâce à cette courbe standard. Les concentrations d'élastine sont exprimées en ng/mg de protéines. Dosage de l'acide hyaluronique - Principe La quantité d'acide hyaluronique des différents échantillons est déterminée par dosage ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) à l'aide d'un kit TECO. Ce kit est un dosage sandwich sensible qui utilise d’une part des microplaques recouvertes par la protéine de liaison de l’acide hyaluronique (HABP) et d’autre part la protéine de liaison HABP conjuguée à HRP pour la détection. La protéine de liaison HABP conjuguée à HRP se lie à l’acide hyaluronique contenu dans l’échantillon, puis réagit avec le substrat. L’intensité de la couleur est proportionnelle au taux d’AH contenu dans les échantillons. - Mode opératoire 100 µl de standard ou 100 µl d'échantillon dilués au 1/100ème sont déposés dans chaque puits. La plaque est incubée 2 heures à température ambiante, sous agitation. Après lavage de la plaque, 100 µl de conjugué HRBP-HRP sont déposés dans chaque puits. La plaque est incubée 30 minutes à température ambiante, sous agitation. Après lavage des puits, 100 µl de substrat TMB sont ajoutés. La plaque est incubée 30 minutes à température ambiante, à l'obscurité et sous agitation. La réaction est stoppée par l'ajout de 100 µl de solution stop par puits. La lecture des densités optiques est immédiatement effectuée à 450 nm. - Calculs La droite d'étalonnage est tracée en représentant la DO en fonction de la concentration d'acide hyaluronique. Une droite de régression est ensuite tracée et les quantités d'acide hyaluronique contenues dans les échantillons sont déterminées grâce à l'équation de cette droite de régression. Les concentrations d'acide hyaluronique sont exprimées en µg/mg de protéines. Calculs et analyses statistiques : Les valeurs sont exprimées par la moyenne σ erreur-type de la distribution des moyennes (sem). Une analyse de variance à un facteur est réalisée, suivie si nécessaire d'un test de Fisher. Les significativités ne sont retenues que lorsque p Résultats Les teneurs en collagène I, en élastine et en acide hyaluronique sont significativement augmentées en présence du composé I. Les figures 1, 2 et 3 montrent ces effets. Description des figures : Taux d'acide hyaluronique en présence ou non du composé I. : Taux de collagène I en présence ou non du composé I. : Taux d’élastine en présence ou non du composé Utilisation cosmétique de la 7-prenyl-theophylline pour ses propriétés anti-âge résultant d’un vieillissement naturel ou prématuré de la peau jeune ou âgée. Composition cosmétique selon la revendication 1 caractérisée en ce qu’elle contient de 0,01 à 1% en poids de 7-prenyl-theophylline par rapport au poids total de la composition.