Brevet FR3115293A1 — publié le 20220422

Composition liquide de bactéries et procédé de conservation de bactérie s La présente invention concerne une composition liquide comprenant des bactéries et un procédé de conservation desdites bactéries permettant leur libération contrôlée. Les compositions de l’invention permettent une conservation et un stockage efficaces des bactéries et ont pour application la maîtrise bactériologique de l’environnement des animaux, des denrées alimentaires ou tous types de surfaces par application d’un biofilm entrant en compétition avec d’autres bactéries non désirées. Composition liquide de bactéries et procédé de conservation de bactéries Domaine de l'invention La présente invention concerne une composition liquide comprenant des bactéries, permettant de conserver celles-ci de manière prolongée, et un procédé de conservation de bactéries permettant leur libération contrôlée. Les compositions de l’invention permettent une conservation et un stockage efficace des bactéries et ont pour application la maîtrise bactériologique de l’environnement des animaux, des denrées alimentaires ou tous types de surfaces par application d’un biofilm entrant en compétition avec d’autres bactéries non désirées. L’invention a également pour objet un procédé de conservation de bactéries, mettant en œuvre une telle composition liquide. Art antérieur Les Bacillus forment un genre de bactéries à gram positif, appartenant à la famille des bacillacées ( Bacillaceae ), l’ordre des bacillales ( Bacillales ), la classe des bacilles ( Bacillis ), le phyllum des firmicutes ( Firmicutes ). De forme bacilles, les dimensions de ces bactéries sont variables ; elles peuvent aller de (0.5 × 1.2 µm) à (2.5 × 10 µm). Elles sont aérobies ou aéro-anaérobies facultatives, et tirent leur énergie par respiration ou fermentation. Ces bactéries sont capables de produire des endospores leur permettant de résister à des conditions environnementales défavorables. Celles-ci donneront naissance à de nouvelles bactéries en cas de conditions favorables. Les Bacillus sont hétérotrophes, saprophytes et ubiquitaires. Elles sont fréquemment retrouvées dans le sol où certaines espèces ont un rôle dans le cycle du carbone et de l'azote. On peut trouver des Bacillus dans des denrées alimentaires. Les bactéries du genre Bacillus sont connues comme étant capables de former des inclusions intracellulaires de polyhyxyalcanoates sous des conditions de stress (ex : déficit d’éléments tels que le phosphore, l’azote, l’oxygène combiné avec un excès en sources carbonées). Il en existe un grand nombre d'espèces avec des propriétés physiologiques et des habitats très variés (terre, poussière, etc.). Certaines espèces sont trouvées dans l'eau douce, d'autres dans l'eau de mer. Il existe des espèces thermophiles, acidophiles, psychrophiles, alcalinophiles. Les espèces saprophytes sont responsables de multiples dégradations de produits alimentaires (sûrissement et caillage du lait, etc.). Certaines d'entre elles ont des rôles utiles comme producteurs d'antibiotiques (tyrothricine, polymyxine, bacitracine...) ou d'antifongiques (mycosubtiline). Dans certaines circonstances, il peut être utile d’implanter des bactéries dans un milieu ou sur une surface, pour qu’elles puissent se développer dans ce milieu ou sur cette surface. La conservation des bactéries, en vue d’une telle utilisation, a toujours été un problème. Concernant les bactéries qui ont la possibilité de sporuler, donc de posséder une structure de survie sous une forme telle que la bactérie peut survivre avec une activité réduite car lui offrant une résistance aux agressions chimiques et physiques bien plus importante que l’état végétatif, il existe la demande internationale de brevet WO 2020/049188 se rapportant à des compositions et des procédés de conservation de bactéries ayant la capacité de sporuler, par utilisation d’une solution comprenant de 15 à 60 % de propylène glycol. Cependant, les inconvénients du propylène glycol sont nombreux : ils ne permettent pas d’utiliser la solution contenant les bactéries directement, car une telle concentration de propylène glycol peut s’avérer gênante pour les animaux ou pour la nourriture pouvant être en contact avec cette solution. De plus la composition de l’art antérieur n’est pas complètement naturelle et biodégradable, selon les normes de plus en plus strictes qui sont imposées dans le domaine alimentaire ou animal. Le propylène glycol ne disparaît pas complètement dans le temps et la toxicité d’une solution ayant une telle concentration en propylène glycol peut entraîner des problèmes écologiques, ayant un impact sur la santé des plantes et des animaux. On cherche donc aujourd’hui, dans un objectif de développement durable, à utiliser des compositions plus naturelles, en particulier d’origine non pétrochimique. Enfin, une solution de conservation de bactéries dans du propylène glycol ne facilite pas, quand elle est utilisée, l’implantation facile des bactéries conservées sur un biofilm existant. Il existe un besoin d’une solution alternative permettant la conservation de bactéries de manière prolongée, sans affecter leurs propriétés, tout en permettant leur mise en œuvre par un utilisateur en vue d’obtenir une maîtrise bactériologique d’un environnement. Il y a en particulier un besoin pour une telle solution alternative qui soit naturelle et biodégradable, non toxique pour les animaux ou pour la nourriture et la santé humaine, et ne mettant pas en œuvre de produits d’origine pétrochimique. Objectifs de l’invention La présente invention a pour objectif de pallier ces inconvénients de l’art antérieur, en proposant notamment un procédé de conservation de bactéries alternatif aux procédés connus. Un objectif particulier est de proposer un tel procédé de conservation de bactéries qui permette une mise en œuvre facile et efficace des bactéries conservées, en vue d’obtenir une maîtrise bactériologique d’un environnement. Un autre objectif particulier de l’invention est de proposer un tel procédé de conservation de bactéries dont la fabrication et l’utilisation présentent un impact minimal sur l’environnement. Ces objectifs, ainsi que d’autres qui apparaîtront plus clairement par la suite, sont atteints selon l’invention par une composition liquide comprenant 5 à 35 % d’un mélange comprenant 60 à 80 % d’une huile végétale ou d’un acide gras, 20 à 40 % de potasse, et 10 4 à 10 9 bactéries par ml dudit mélange ; et 65 à 95 % d’eau ; les pourcentages de potasse et d’huile végétale ou d’acide gras étant exprimés en volume par rapport au volume dudit mélange, et les pourcentages de mélange et d’eau étant exprimés en volume par rapport au volume total de la composition liquide. Avantageusement, le mélange contenu dans la composition liquide de l’invention constitue un savon qui, quand il est à une concentration suffisamment importante, permet de conserver les bactéries qu’il contient. Selon un mode de réalisation particulier, le mélange contenu dans la composition liquide de l’invention comprend 69 % (+/- 5 %) d’une huile végétale ou d’un acide gras, 31 % (+/- 5 %) de potasse, et 10 4 à 10 9 bactéries par ml de composition liquide, les pourcentages étant exprimés en volume par rapport au volume dudit mélange. Dans un autre mode de réalisation, la composition liquide de l’invention comprend 69 % (+/- 3 %) d’une huile végétale ou d’un acide gras, 31 % (+/- 3 %) de potasse, et 10 5 à 10 8 bactéries par ml de composition liquide, les pourcentages étant exprimés en volume par rapport au volume dudit mélange. De préférence, une composition liquide selon l’un des modes de réalisation mentionné ci-dessus comprend 10 5 à 10 8 bactéries par ml de composition liquide. De façon avantageuse, les bactéries mises en œuvre dans une telle composition comprennent notamment bacillus pumilus, bacillus subtilis, Paenibacillus polymyxa, bacillus megaterium et /ou Paracoccus pantotrophus . Selon des modes de réalisation préférentiels, les bactéries mises en œuvre dans une telle composition comprennent une majorité de bactéries choisies parmi bacillus pumilus, bacillus subtilis, Paenibacillus polymyxa, bacillus megaterium et/ou Paracoccus pantotrophus . De préférence, les bactéries mises en œuvre dans une telle composition sont choisies parmi bacillus pumilus, bacillus subtilis, Paenibacillus polymyxa, bacillus megaterium et/ou Paracoccus pantotrophus . Les avantages d’une composition selon l’invention sont nombreux au regard de l’art antérieur. En effet, une telle composition présente l’avantage de conserver pendant une longue durée les bactéries qu’elle contient. Il a en effet été constaté que la composition selon l’invention, comprenant un savon, crée un milieu non favorable à la germination des bactéries. En réaction à ce milieu, les bactéries se mettent sous forme de spores, dans laquelle elle peuvent se conserver pendant une très grande durée. L’utilisation d’une composition liquide selon l’invention, par exemple par pulvérisation sur une surface de la composition liquide diluée dans l’eau, permet d’implanter sur la surface les bactéries conservées, pour obtenir une saturation du biofilm couvrant cette surface en « bonnes » bactéries. Le nouveau biofilm obtenu ainsi est une composition bactériologique maîtrisée, et peut opposer un effet barrière gênant l’implantation d’autres bactéries sur les surfaces. L’invention présente un avantage particulier, lié au fait que la composition selon l’invention comprend un savon. En effet, un tel savon dilué dans l’eau possède un pouvoir nettoyant, plus ou moins fort en fonction de son taux de dilution. Il a ainsi un effet tendant à ouvrir ou à décoller le biofilm existant sur une surface sur laquelle il est appliqué. Une telle ouverture, ou un tel décollement du biofilm, permet de faciliter l’implantation sur la surface des bactéries conservées dans la composition. De plus les compositions liquides selon l’invention sont des produits naturels, biodégradables et leurs applications peuvent se réaliser sans rinçage. Pour son utilisation, la composition liquide selon l’invention est diluée dans l’eau. Différents taux de dilution peuvent être utilisés, en fonction des application envisagées. Par exemple, selon un mode de réalisation, une composition liquide selon l’invention peut être diluée à 1 %. Avec une telle dilution, en effet, la composition liquide selon l’invention perd une grande partie de ses propriétés empêchant la germination des bactéries. Les bactéries peuvent alors germer et se développer. Dans ce cas, la composition garde un léger effet nettoyant, et peut être utilisée en pulvérisation sur des surfaces, par exemple sur des animaux ou sur des fruits et légumes, pour y implanter les bactéries conservées. Selon un autre mode de réalisation, une composition liquide selon l’invention diluée à 10 % peut être utilisée comme un produit nettoyant de surface industrielle ou ménager, ou de bâtiments. Avec une telle dilution, la composition liquide selon l’invention présente un effet nettoyant relativement important. Du fait de sa concentration relativement forte, elle peut conserver ses propriétés empêchant la germination des bactéries. Les bactéries qu’elle contient peuvent cependant, après l’application de la composition liquide diluée, trouver les conditions leur permettant de germer et se développer. Les bactéries contenues dans la composition présentant une telle dilution peuvent ainsi se réactiver de façon progressive après l’application de la solution sur une surface ou dans un milieu. Une composition liquide selon l’invention diluée à 20 % peut être versée dans un milieu aqueux, par exemple dans des latrines ou dans des fosses septiques, pour y maîtriser la population bactérienne. Les domaines d’application de la solution selon l’invention sont très larges : humain, animal (par exemple réduction de la mortalité sur les porcelets) ou alimentaire pour traiter les fruits et les légumes. Dans un mode de réalisation préférentiel de l’invention, les bactéries incluses dans la composition liquide selon l’invention comprennent des bactéries choisies parmi bacillus pumilus, bacillus subtilis, Paenibacillus polymyxa, bacillus megaterium , Paracoccus pantotrophus ou leurs mélanges. Ainsi, dans un mode de réalisation préféré de l’invention, la composition liquide selon l’invention comprend 10 6 à 10 8 Paracoccus pantotrophus par ml du mélange inclus dans la composition liquide. Elle peut également comprendre, en plus du Paracoccus pantotrophus, 10 6 à 10 8 bactéries choisies parmi bacillus pumilus, bacillus subtilis, Paenibacillus polymyxa, bacillus megaterium, Paracoccus pantotrophus ou leurs mélanges, par ml du mélange inclus dans la composition liquide. Une telle composition a montré une efficacité particulière pour maîtriser la population bactérienne dans les aquariums ou dans les bassins de pisciculture. Les souches de Bacillus selon l’invention sont déposées auprès de la Belgian Coordinated Collections of Microorganisms (BCCM/LMG) (https://bccm.belspo.be/catalogues/lmg-catalogue-search) et auprès de la ATCC® Bacteriology Collection (https://www.lgcstandards-atcc.org/) sous les numéros d’accession suivants : - Bacillus pumilus : LMG 18928 ; ATCC 7061. - Bacillus subtilis : LMG 8197 ; ATCC 6633. - Paenibacillus polymyxa : LMG 63 20 (= LMG 13294) ; ATCC 842. - Bacillus megaterium: LMG 12408 ; ATCC 15374. - Paracoccus pantotrophus : LMG 4218 ; ATCC 35512. Ces souches font toutes partie de la classe de risque 1, c’est-à-dire qu’elles ne présentent aucun risque pour la santé humaine ou animale. Selon un mode préféré de réalisation de l’invention, la composition liquide selon l’invention est caractérisée en ce que la ou les bactéries sont présentes dans la composition sous forme lyophilisée, sporulée, ou partiellement ou totalement inactivée. De façon préférentielle, le pH de la composition liquide selon l’invention est inférieur à 10, et de préférence égal à 9,7. Pour cela, la composition liquide selon l’invention peut contenir une solution tampon. Ainsi, préférentiellement, la composition liquide selon l’invention peut comprendre de l'acide citrique. Selon un mode de réalisation préféré, la composition liquide selon l’invention est caractérisée en ce que l’huile végétale ou les acides gras sont choisis dans le groupe constitué par l'huile d'arachide, l'huile de colza, l’huile de ricin, l'huile de maïs, l’huile d'olive, l’huile de palme, l’huile de coco ou de coprah, l’huile de palmiste, la stéarine d'huile de palme et l’huile de son de riz hydrogéné, ou leurs mélanges. L’huile de coco et l’huile de coprah sont considérées, pour la mise en œuvre de l’invention, comme équivalentes. Plus particulièrement, la composition liquide selon un mode de réalisation de l’invention est caractérisée en ce que l’huile végétale est l’huile de coco ou de coprah. Plus particulièrement, la composition liquide selon un mode de réalisation de l’invention est caractérisée en ce que les acides gras sont choisis parmi l’acide laurique, l’acide myristique, l’acide palmitique, l’acide stéarique, l’acide oléique, l’acide linoléique. De façon avantageuse, cette composition liquide selon un mode de réalisation de l’invention comprend au moins 10 6 bactéries par ml du mélange inclus dans la composition liquide. L’invention concerne également un procédé de conservation à température ambiante de bactéries, comprenant une étape de mise en contact d’au moins une bactérie avec une composition liquide comprenant 5 à 35 % d’un mélange comprenant 60 à 80 % d’une huile végétale ou d’un acide gras, 20 à 40 % de potasse, ; et 65 à 95 % d’eau ; les pourcentages de potasse et d’huile végétale ou d’acide gras étant exprimés en volume par rapport au volume dudit mélange, et les pourcentages de mélange et d’eau étant exprimés en volume par rapport au volume total de la composition liquide, à raison de 10 4 à 10 9 bactéries par ml dudit mélange. Ce procédé de conservation peut avantageusement, selon des modes de réalisation particuliers de l’invention, mettre en œuvre une étape de mise en contact d’au moins une bactérie avec une composition liquide présentant une ou plusieurs des caractéristiques présentées ci-dessus en lien avec la composition liquide de l’invention, afin de former une composition liquide selon un mode de réalisation de l’invention. Enfin l’invention se rapporte également à l’utilisation d’une composition selon l’invention pour le traitement par effet barrière et de tous types de surfaces ou de milieux ayant besoin d’être maîtrisés bactériologiquement. L’avantage de l’utilisation de la composition selon l’invention est qu’elle permet de coloniser les surfaces ou des milieux à traiter par ajout d’un biofilm vivant, qui empêche les autres bactéries de venir contaminer le milieu par effet de compétition. Il y a recolonisation des surfaces ou des milieux à traiter par les bactéries selon l’invention, permettant cet effet barrière. De préférence, un tel procédé d’utilisation comprend une étape de dilution dans l’eau de la composition selon l’invention, suivie d’une étape d’application de la composition diluée sur la surface ou dans le milieu à traiter. Avantageusement, le taux de cette dilution est compris entre 1 % et 10 %. Description détaillée de modes de réalisation de l’invention Définitions Selon la présente invention, le terme « vivant », « vivante » ou « viable » signifie que les bactéries de la présente invention sont capables d'une croissance et d'un développement normaux. Dans la présente invention, les bactéries vivantes ont été séchées ou lyophilisées de manière à laisser les bactéries viables. Il existe de nombreuses méthodes de préparation des bactéries lyophilisées connues de l’homme du métier. Selon la présente invention, le terme CFU désigne "unités formant colonie", et les unités formant colonie par gramme de produit (CFU/g) peuvent être mesurées comme indiqué dans la section "Exemples". Aux fins de la présente invention, le terme « stable » signifie que la composition liquide selon l’invention maintient un niveau de bactéries viables à un niveau stable pour la durée totale de la période de stockage. Cela signifie qu'au moins 10 4 CFU/g de ces bactéries sont viables dans la composition topique pendant au moins 6 mois à température ambiante, entre 20 et 25°C / 60 % RH (Relative Humidity). Selon la présente invention, le terme « RH » signifie « humidité relative » et correspond au rapport de la pression partielle de la vapeur d'eau contenue dans l'air sur la pression de vapeur saturante (ou tension de vapeur) à la même température. Elle est donc une mesure du rapport entre le contenu en vapeur d'eau de l'air et sa capacité maximale à en contenir dans ces conditions. Ce rapport change si on change la température ou la pression bien que l'humidité absolue de l'air n'ait pas changé. Elle est mesurée à l'aide d'un hygromètre. Selon la présente invention, le terme « huile » désigne une huile ou un mélange d’huiles et/ou d’acides gras. Les huiles utilisées dans la composition de l'invention sont sélectionnées parmi les huiles qui sont solides ou fluides à température ambiante. Selon la présente invention, un « buffer » ou une solution tampon est un acide ou une base utilisé pour maintenir l'acidité (pH) d'une solution proche d'une valeur choisie après l'ajout d'un autre acide ou d'une base. Ainsi, le tampon amène le pH des compositions de l'invention à la valeur souhaitée. Les buffer ou solution tampon sont connus de l’homme du métier. Exemple 1 - Pr éparation de composition liquide selon l’invention et mesures de la stabilité. Plusieurs solutions selon l’invention sont réalisées. Leur composition se retrouve en Table 1. Composition 1 95 % d’eau et 5 % d’un mélange comprenant : - 69 % d’huile de coco - 31 % de potasse - 10 6 par ml de Bacillus pumilus Composition 2 95 % d’eau et 5 % d’un mélange comprenant : - 69 % d’huile de coco - 31 % de potasse - 10 6 par ml de Bacillus subtilis Composition 3 95 % d’eau et 5 % d’un mélange comprenant : - 69 % d’huile de coco - 31 % de potasse - 10 6 par ml de Paenibacillus polymyxa Composition 4 95 % d’eau et 5 % d’un mélange comprenant : - 69 % d’huile de coco - 31 % de potasse - 10 6 par ml de Bacillus megatterium Composition 5 95 % d’eau et 5 % d’un mélange comprenant : - 69 % d’huile de coco - 31 % de potasse - 10 6 par ml de Paracoccus pantotrophus Composition 6 95 % d’eau et 5 % d’un mélange comprenant : - 69 % d’huile de coco - 31 % de potasse - 10 6 par ml d’un mélange de Bacillus pumilus, Bacillus subtilis, Paenibacillus polymyxa, megatterium Composition 7 95 % d’eau et 5 % d’un mélange comprenant : - 69 % d’huile de coco - 31 % de potasse - 10 6 par ml d’un mélange de Paracoccus pantotrophus , Bacillus pumilus, Bacillus subtilis, Paenibacillus polymyxa, megatterium Dans la réalisation de la composition 6 avec un mélange de bactéries, la proportion des bactéries respectives dans les compositions liquides de l’invention est la suivante : Souches Proportion Bacillus pumilus 50 à 60 % Bacillus subtilis 5 à 10 % Paenibacillus polymyxa 30 à 40 % Bacillus megaterium 0.5 à 1 % Dans la réalisation de la composition 7 avec un mélange de bactéries, la proportion des bactéries respectives dans les compositions liquides de l’invention est de 50 % de Paracoccus pantotrophus , et de 50 % du mélange de bactéries mis en œuvre dans la composition 6, dans les proportions décrites à la Table 2. Mode de préparation L’ensemble des compositions 1 à 7 ont été réalisées avec le même procédé de fabrication qui sera décrit par la suite. De manière préférentielle, les compositions selon l’invention sont fabriquées en saponification à chaud. 72 kg d’huile végétale de coco (ou de coprah) sont chauffés doucement pour obtenir une température aux alentours de 80°C. Puis on ajoute lentement 32 kg de potasse et 116 kg d’eau en agitant afin d’obtenir une saponification à chaud et un batch de 220 kg. Le mélange est remué lentement jusqu'à ce qu'il soit refroidi à moins de 30°C. Ensuite, 10 10 bactéries (soit approximativement 10 9 bactéries par kg du mélange d’huile et de potasse), préalablement acclimatées à température ambiante, sont tamisées et introduites dans le mélange à température ambiante, et on ajoute une quantité de 1980 kg d’eau tout en maintenant le pH de la solution inférieur à 10, jusqu’à l’obtention d’un pH de 9,7 préférable pour la réalisation de l’invention. L’utilisation d’une solution tampon peut être envisagée. Une fois la composition liquide complétée par les bactéries homogénéisées, on attend le refroidissement de la composition afin de permettre son stockage et sa future utilisation. Les inventeurs ont observé que les propriétés de conservation des bactéries dans la composition liquide selon l’invention se vérifiaient pour une concentration en eau de la composition liquide comprise entre 65 % et 95 %. A titre préférentiel, une composition selon l’invention comprenant 25 % du mélange de savon (constitué par l’huile ou les acides gras et la potasse) et de bactéries, et 75 % d’eau, est utile comme nettoyant pour les surfaces de bâtiments, notamment d’élevage. Dans des modes de réalisation avantageux, par exemple représentés par les compositions 5 et 7, les compositions selon l’invention peuvent comporter la bactérie Paracoccus pantotrophus . La conservation dans une composition liquide de l’invention de cette bactérie hétérotrophe est particulièrement utile dans le domaine de l’aquariophilie, dans lequel le propylène glycol est évité, car potentiellement toxique pour les poissons. Paracoccus pantotrophus est présent au moins à une concentration de 10 6 et au maximum 10 8 / CFU par ml du mélange inclus dans la composition liquide. Il peut être utilisé seul ou associé avec d’autres bactéries. Il peut en particulier être associé avec le mélange de bactéries utilisé pour la composition 6, et comprenant les bactéries listées à la Table 2, dans les proportions mentionnées à cette Table 2. Il est par exemple possible que les bactéries intégrées dans la composition selon l’invention comprennent 90 % de Paracoccus pantotrophus et 10 % du mélange de bactéries conforme à la Table 2. Il est également possible, selon un autre exemple, que les bactéries intégrées dans la composition selon l’invention comprennent 50 % de Paracoccus pantotrophus et 50 % du mélange de bactéries conforme à la Table 2. En fonction des proportions de bactéries présentes, l’utilisation de la composition selon l’invention peut avoir des effets différents. Comparaison des valeurs obtenues dans l’étude de stabilité des compositions liquides selon l’invention comprenant différents types de bactéries. Les bactéries conservées dans les compositions liquides selon l’invention montrent une stabilité importante au fil du temps de conservation, y compris à température ambiante. Elles sont en effet conservées sous forme de spores parce que le savon crée un milieu non favorable à leur germination. Ainsi, la stabilité des compositions liquides n'a montré qu'une perte limitée de cellules viables pendant une période de stockage jusqu'à 12 mois, en cas de stockage à température ambiante, plus précisément entre 20 et 25°C, avec un taux d’humidité de 60 % HR. La demanderesse a de manière surprenante découvert qu’une composition liquide selon la présente invention et comprenant différents types de bactéries est étonnamment stable, puisqu'une quantité d'au moins jusqu’à 10 5 CFU/g desdites bactéries sont viables même après 12 mois de conservation. Une telle durée peut ainsi correspondre à la durée de vie commerciale minimale du produit vendu, ce qui permet de garder l’activité du produit tout au long de son utilisation par l’utilisateur final. Les différentes compositions selon l’invention sont diluées, par exemple entre 10 % et 1 %, afin de faciliter la germination des bactéries et de pouvoir utiliser les mélanges obtenus. Cette dilution permet donc l’activation des bactéries conservées. Le degré de dilution que l’on réalise a avantageusement une influence sur les propriétés du produit final, et notamment sur sa détergence et son pouvoir nettoyant. Une ou plusieurs bactéries prises ensemble peuvent être utilisées pour mettre en œuvre l’invention. Les différentes caractéristiques présentées peuvent être avantageusement combinées. Leur présence dans des parties différentes n’exclut pas cette possibilité. Les différents exemples ne sont pas limitatifs des compositions liquides selon l’invention. L'utilisation des termes "un" et "une" et "le" et des références similaires dans le contexte décrivant l'invention (notamment dans le cadre des revendications) doivent être interprétées de manière à éviter le singulier et le pluriel, sauf indication contraire ou clairement contredite par le contexte. Les termes "comprenant", "ayant", les termes "y compris" et "contenant" doivent être interprétés comme des termes non limitatifs (c'est-à-dire signifiant "y compris, mais sans s'y limiter"), sauf indication contraire. Dans le présent exposé, le terme "comprendre" ou "comporter" n’exclut pas d’autres éléments ou d’autres étapes. Composition liquide comprenant : - 65 à 95 % d’eau ; et - 5 à 35 % d’un mélange comprenant : - 60 à 80 % d’une huile végétale ou d’un acide gras, - 20 à 40 % de potasse, et - 10 4 à 10 9 bactéries par ml dudit mélange ; les pourcentages de potasse et d’huile végétale ou d’acide gras étant exprimés en volume par rapport au volume dudit mélange, et les pourcentages de mélange et d’eau étant exprimés en volume par rapport au volume total de la composition liquide. Composition liquide selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit mélange comprend : - 69 % (+/- 3 %) d’une huile végétale ou d’un acide gras, - 31 % (+/- 3 %) de potasse, - 10 5 à 10 8 bactéries par ml dudit mélange, les pourcentages étant exprimés en volume par rapport au volume dudit mélange. Composition liquide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite bactérie est choisie parmi bacillus pumilus, bacillus subtilis, Paenibacillus polymyxa, bacillus megaterium , Paracoccus pantotrophus ou leurs mélanges. Composition liquide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la ou les bactéries sont présentes dans la composition sous forme lyophilisée, sporulée, ou partiellement ou totalement inactivée. Composition liquide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre de l'acide citrique. Composition liquide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le pH de la composition liquide est inférieur à 10, de préférence égal à 9,7. Composition liquide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l’huile végétale est choisie dans le groupe constitué par l'huile d'arachide, l'huile de colza, l’huile de ricin, l'huile de maïs, l’huile d'olive, l’huile de palme, l’huile de coco ou de coprah, l’huile de palmiste, la stéarine d'huile de palme et l’huile de son de riz hydrogéné, ou leurs mélanges. Composition liquide selon la revendication 7, caractérisée en ce que l’huile végétale est l’huile de coco ou de coprah. Composition liquide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle comprend au moins 10 6 Bacillus pumilus par ml dudit mélange. Composition liquide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle comprend au moins 10 6 Paracoccus pantotrophus par ml dudit mélange. Procédé de conservation de bactéries, comprenant une étape de mise en contact d’au moins une bactérie avec une composition liquide comprenant : - 65 à 95 % d’eau ; et - 5 à 35 % d’un mélange comprenant : - 60 à 80 % d’une huile végétale ou d’un acide gras, et - 20 à 40 % de potasse ; les pourcentages de potasse et d’huile végétale ou d’acide gras étant exprimés en volume par rapport au volume dudit mélange, et les pourcentages de mélange et d’eau étant exprimés en volume par rapport au volume total de la composition liquide. Utilisation d’une composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 10, comprenant : - une étape de dilution dans l’eau de la composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 10, puis - une étape d’application de la composition diluée sur une surface ou dans un milieu à traiter.