Brevet FR3119539A1 — publié le 20220812

[Titre : Composition thérapeutique inhibitrice de la DHODH Composition thérapeutique comprenant une teinture mère d’un extrait de feuilles d’une plante appartenant au genre « Neurolaena » et à l’espèce « lobata » pour utilisation en tant que médicament inhibiteur de la dihydroorotate dehydrogenase humaine (DHODH).] Composition thérapeutique inhibitrice de la DHODH Les virus à génome ARN sont responsables de nombreuses pathologies humaines telles que par exemple la grippe, la dengue, l’hépatite C, la rougeole, la bronchiolite des nourrissons ou encore plus récemment le coronavirus dit Covid-19. L’arsenal thérapeutique classique de lutte contre les virus à génome ARN consiste à cibler l’activité d’une protéine virale essentielle au cycle du virus : telles que par exemple l’ARN polymérase, l’intégrase, une hélicase ou une protéase. Cependant, bien que ces protéines virales puissent être conservées chez plusieurs virus à génome à ARN, le développement de molécules thérapeutiques à large spectre, actives contre différents virus, reste relativement limité. De plus, la plasticité des génomes viraux, ainsi que la capacité d’adaptation et d’évolution des virus à génome ARN, facilitent l’apparition rapide de mutants d’échappement. Ces mutants rendent inefficaces le traitement par les molécules thérapeutiques à large spectre qui ciblent une protéine virale essentielle au cycle du virus. Afin de contourner ces problèmes de mutation des cibles thérapeutiques, une nouvelle approche thérapeutique ciblant la cellule hôte, plutôt que le virus lui -même, a été développée ces dernières années. Le principe de cette nouvelle approche est de bloquer les mécanismes cellulaires essentiels à la réplication virale, de sorte à empêcher la prolifération virale en stimulant la réponse immunitaire innée dans les cellules infectées par un virus à génome ARN. L’un des mécanismes cellulaires connu, essentiel à la réplication virale, est le cycle de biosynthèse de la pyrimidine. En effet, la pyrimidine est cruciale pour la survie des cellules humaines, notamment lorsque ces dernières sont des cellules hôtes de pathogène, notamment des virus à génome ARN. Plus particulièrement, chez les mammifères et dans les cellules humaines, la synthèse de la pyrimidine se fait par deux voies de biosynthèses : la « voie de novo pyrimidine », et, une autre « voie de sauvetage » qui est réalisée dans des conditions physiologiques particulières. La plupart des parasites humains ne possèdent pas la « voie de sauvetage » de synthèse des pyrimidines, or les pyrimidines sont nécessaires à la fabrication des nucléotides pyrimidiques. Ces nucléotides pyrimidiques sont essentiels à la survie de la cellule et à sa multiplication. Ainsi, le blocage de la « voie de novo pyrimidine » est considéré comme un moyen thérapeutique efficace pour cibler sélectivement les parasites humains sans affecter l’hôte humain et son fonctionnement cellulaire normal. En d’autres termes, tous les pathogènes humains, dont les virus à génome ARN, sont déficitaires de la « voie de sauvetage » de biosynthèse de la pyrimidine. Par conséquent, la « voie de novo pyrimidine », de la cellule hôte, est une voie ciblée en thérapie pour éliminer ces pathogènes, notamment pour empêcher la réplication des virus à ARN dans les cellules hôtes. La voie de biosynthèse de novo pyrimidine est une voie de synthèse qui se fait en plusieurs étapes successives tels que visible sur la . Plus particulièrement, la quatrième étape de la voie de biosynthèse de novo pyrimidine consiste en une déshydrogénation du dihydroorotate dit « DHO » qui conduit à la formation d’orotate « ORO ». L’enzyme, de type oxydoréductase, qui catalyse la réaction de déshydrogénation du dihydroorotate, est la dihydroorotate déshydrogénase dit « DHODH ». Lors de la déshydrogénation du DHO en ORO, il y a un transfert d’électron entre deux cofacteurs, dont l’un est donneur d’électrons et l’autre accepteur d’électrons. Par exemple, le transfert d’électron, lors de cette réaction de déshydrogénation du dihydroorotate, se fait grâce au couple d’oxydoréduction des flavines mononucléotides FMN/FMNH 2 avec le couple des ubiquinones QH 2 /Q ou avec le couple nicotinamide adénine NAD+/NADH. La DHODH se lie à son cofacteur FMN en conjonction avec l'ubiquinone pour catalyser l'oxydation du dihydroorotate en orotate. La voie de biosynthèse de novo des pyrimidines assure la synthèse d’uridine 5 monophosphate dit UMP. L’UMP sert de précurseur pour les autres nucléotides pyrimidiques. Ces derniers sont nécessaires et indispensables à la division cellulaire et à l’activité métabolique de la cellule hôte qui est infectée par le virus à génome ARN. Ainsi, il a été démontré qu’inhiber la DHODH des cellules hôtes entraine une chute de la quantité de pyrimidines dans les cellules infectées ce qui amplifie la réponse immune innée antivirale. De manière connue, les enzymes DHODH sont séparées en deux groupes, les DHODH de classes 1 et les DHODH de classe 2. Ces deux classes de DHODH sont établit en fonction de leur similarité de séquence, de leurs sites de fixation, de leur localisation cellulaire et de leur substrat préféré. Les DHODH classe 1 sont des enzymes cytosoliques présents chez les pathogènes de type protozoaires. Les DHODH classe 2 sont des enzymes de type protéine monomérique se liant à la membrane interne des mitochondries des eucaryotes. En d’autres termes, chez l’homme, la DHODH, appartient à la classe 2, c’est une protéine mitochondriale située sur la surface externe de la membrane mitochondriale interne. La DHODH humaine présente deux domaines constitués par le domaine alpha / bêta-baril contenant le site actif et le domaine alpha-hélicoïdal, ce dernier forme l'ouverture d'un tunnel menant au site actif. A ce jour, il existe plusieurs inhibiteurs connus de la DHODH humaine tel que le brequinar, le tériflunomide ou encore le léflunomide. Par exemple, le léflunomide est utilisé pour traiter la polyarthrite rhumatoïde ou la sclérose en plaques. Les effets immunosuppresseurs du léflunomide ont été attribués à l'épuisement de l'apport de pyrimidine pour les cellules T ou encore à des voies plus complexes médiées par l’interféron ou l'interleukine. L’inhibition de la DHODH humaine, par le léflunomide est due à la fixation du léflunomide sur le domaine alpha-hélicoïdal qui forme l'ouverture d'un tunnel menant au site actif de la DHODH. Bien que commercialisé en tant que principe actif de médicament, le léflunomide entraine des effets secondaires chez 1% à 10% des patients, notamment de type diarrhées, nausées, vomissements, aphtes, douleurs abdominales, inflammation du côlon, maux de tête, inflammation des tendons, accentuation de la chute naturelle des cheveux, eczéma, peau sèche, augmentation des transaminases, baisse des globules blancs. L’inhibition de la DHODH humaine par le brequinar se fait par le même mécanisme, que le léflunomide, en occupant l’ouverture du tunnel menant au site actif. Le brequinar a voulu être utilisé comme anticancéreux à la fin des années 1980, néanmoins comme il est responsable de multiples effets secondaires indésirables, il n’a pas été accepté comme médicament. De plus, le brequinar est reconnu comme très toxique pour les cellules humaines, ainsi l’idée de l’utiliser en thérapie pour lutter contre des infections virales a été très vite abandonnée par le corps médical. Ainsi, dans le cas de pathologie, liée à une infection virale par un virus à génome à ARN, les inhibiteurs connues de la DHODH semblent inappropriés pour traiter les symptômes viraux d’un patient, en particulier à cause de leur effet secondaire et cytotoxique sur les cellules, sans distinction du type de cellule. C’est pourquoi, dans le cas d’une infection virale, notamment par un virus à ARN, il convient de trouver une solution alternative aux inhibiteurs connus de la DHODH, tel que le brequinar, tériflunomide ou encore au léflunomide. Cette solution alternative, en plus d’empêcher la voie de novo pyrimidine par inhibition de l’activité enzymatique de la DHODH, est souhaitée non cytotoxique pour l’ensemble des cellules humaine et avec un minimum d’effets secondaires en cas de prise sous forme de médicament. De plus, dans le contexte actuel, la plupart des patients sont attachés à l’origine et aux modes de conception des médicaments. En général, les patients souhaitent minimiser au maximum, la part des composants synthétiques constituants le médicament. Ces composants synthétiques peuvent être responsables des effets secondaires tout comme le principe actif. En conséquence, en plus d’inhiber la DHODH humaine, l’objectif de la présente invention consiste également à trouver un inhibiteur de la DHODH qui soit autant que possible d’origine naturelle, de conception simple avec une faible empreinte carbone, afin de limiter les effets secondaires tous en traitant l’infection au virus à ARN et les symptômes associés. La présente invention a pour but de pallier les inconvénients de l'état de la technique, en proposant une composition thérapeutique comprenant une teinture mère d’un extrait de feuilles d’une plante appartenant au genre « Neurolaena » et à l’espèce « lobata » pour utilisation en tant que médicament inhibiteur de la dihydroorotate dehydrogenase humaine (DHODH). Cette composition thérapeutique a pour avantage d’avoir, en tant que principe actif inhibiteur de l’activité de la DHODH, ladite teinture mère de Neurolaena lobata . Cette teinture mère est avantageusement facile et rapide à préparer, à moindre couts à échelle industrielle. De plus, ladite teinture mère de la composition thérapeutique de l’invention est avantageusement d’origine naturelle, c’est à dire non synthétique, tout en étant reconnu dans la littérature comme non cytotoxique in vivo. En conséquence, ladite composition thérapeutique présente peu, voir pas d’effets secondaires liés à son principe actif d’origine naturelle et non cytotoxique. Suite à l’ingestion par un patient, ladite composition thérapeutique de l’invention inhibe l’activité de la DHODH sans avoir d’effet cytotoxique. La prise de ladite composition thérapeutique, incluant ladite teinture mère, génère une augmentation de la réponse immune innée chez des patients dont le système immun est affaibli par des pathogènes ou toutes autres maladies. De plus, selon d’autres caractéristiques de l’invention, ladite composition thérapeutique est pour une utilisation dans une méthode permettant de traiter les symptômes associés à une infection virale de virus à génome à ARN. Ladite composition thérapeutique, comprenant une teinture mère de Neurolaena lobata ayant pour propriété d’inhiber l’activité de la DHODH et d’empêcher la voie de novo de synthèse de la pyrimidine, est appropriée dans le cas d’infection virale par un virus à ARN, notamment à ARN positif. En effet, les virus à ARN sont déficitaires de la « voie de sauvetage des pyrimidines ». Les virus à ARN pour leur mécanisme d’infection cellulaire ont pour nécessiter d’utiliser la « voie de novo » de la cellule hôte pour synthétiser la pyrimidine qui est nécessaire dans le mécanisme de réplication cellulaire, nécessaire à la multiplication virale. Ainsi, l’inhibition de la voie de novo de la cellule hôte, empêche la réplication cellulaire, c’est-à-dire la réplication virale des virus à ARN. C’est pourquoi, l’utilisation de ladite composition thérapeutique de l’invention dans une méthode permettant de traiter les symptômes associés à une infection virale de virus à génome à ARN est appropriée. Selon un mode de réalisation préféré, la composition thérapeutique de l’invention s’utilise dans une méthode permettant de traiter les symptômes associés à une infection virale de virus à génome à ARN choisi parmi les familles de virus de la liste suivante : les Coronaviridae, les Flaviviridae, les Orthomyxoviridae, ou encore les Togaviridae. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront de la description détaillée qui va suivre des modes de réalisation non limitatifs de l'invention, en référence aux figures annexées, dans lesquelles : la représente schématiquement les étapes de la voie de novo de synthèse de la pyrimidine dans les cellules humaines, dont la quatrième étape qui consiste en la réaction de déshydrogénation, c’est à dire l’action de l’enzyme dyhydroorate deshydrogénase « DHODH » pour transformer le dyhydroorate « DHO » en orotate ORO, la représente schématiquement l’action inhibitrice de ladite composition de l’invention sur la DHODH humaine mitochondriale, au sein d’une cellule hôte humaine infectée par un virus à génome ARN, la montre la courbe d’évolution, en fonction du temps de contact avec la DHODH et son substrat, de la densité optique mesurée à 600 nm, d’un échantillon à une concentration de 0,01 µg/mL constitué soit par du brequinar, soit par une teinture mère d’un extrait d’un extrait de feuilles de Neurolaena lobata nommé « H1 », ou soit encore par une autre teinture mère d’un extrait de feuilles de Neurolaena lobota nommé « H2 », la montre la courbe d’évolution, en fonction du temps de contact avec la DHODH et son substrat, de la densité optique mesurée à 600 nm, d’un échantillon à une concentration de 0,1 µg/mL constitué soit par du brequinar, soit par « H1 », ou soit encore par « H2 », la montre la courbe d’évolution, en fonction du temps de contact avec la DHODH et son substrat, de la densité optique mesurée à 600 nm, d’un échantillon à une concentration de 1 µg/mL constitué soit par du brequinar, soit par « H1 », ou soit encore par « H2 », la , représente la courbe d’évolution du pourcentage d’inhibition de l’activité de la DHODH sur son substrat, observée entre 0 et 275 secondes de mise en présence avec l’échantillon, en fonction de la concentration de l’échantillon H1 ou H2 ; la représente la courbe d’évolution du pourcentage d’inhibition de l’activité de la DHODH sur son substrat, observée entre 0 et 275 secondes de mise en présence avec l’échantillon, en fonction de la concentration de l’échantillon H1, H2 ou de brequinar. La présente invention concerne une composition thérapeutique comprenant une teinture mère d’un extrait de feuilles d’une plante appartenant au genre « Neurolaena » et à l’espèce « lobata » pour utilisation en tant que médicament inhibiteur de la dihydroorotate dehydrogenase humaine (DHODH). La représente schématiquement la voie de novo de synthèse des pyrimidines comprenant plusieurs étapes, dans laquelle l’étape 4 implique l’action de la dihydroortate deshydrogénase humaine « DHODH ». Dans la voie de novo de synthèse des pyrimidines, les précurseurs du noyau pyrimidique sont la glutamine, l’acide aspartique et le CO 2 . Tel que visible sur la , dans la première étape, il y a formation du carbamylphosphate par la carbamylphosphate synthétase. En seconde étape, l’aspartate transcarbamylase catalyse la formation du carbamylaspartate. Ce dernier est transformé à la troisième étape, par la dihydroorotase, en dihydroorotate « DHO ». Puis en quatrième étape, la dihydroorate deshydrogénase « DHODH » va catalyser la transformation du « DHO » en orotate « ORO » qui servira de précurseur réactionnel pour obtenir l’Uridine monophosphate « UMP » . L’UMP est utile dans le mécanisme de polymérisation avec l’ARN nécessaire à la multiplication cellulaire. Selon l’invention, la teinture mère d’un extrait de feuilles d’une plante appartenant au genre « Neurolaena » et à l’espèce « lobata » est avantageusement d’origine naturelle. En effet, Neurolaena lobata est une plante appartenant à la famille des Astéracées que l’on retrouve dans les Antilles et en Amérique centrale, notamment en Guadeloupe. Sur ces territoires, cette plante se cultive et se récolte facilement car les conditions agroécologiques et pédoclimatiques y sont favorables. Ainsi, par son origine naturelle, l’usage d’un extrait de Neurolaena lobota permet avantageusement de diminuer le risque d’effets secondaires lors de son utilisation au sein d’une composition thérapeutique pour traiter une maladie. En outre, pour conforter cette idée, plusieurs études et publications scientifiques ont démontré qu’un extrait de Neurolaena lobata ne présente aucune toxicité in vivo . En particulier, chez des souris, après ingestion, par voie orale, d’une dose de 5000 mg/kg d’extrait hydroalcoolique des parties aériennes de Neurolaena lobata , aucune toxicité physiologique n’a été observée après plusieurs jours. En conséquence, en plus de son origine naturelle, le choix d’un extrait de Neurolaena lobata, en tant que principe actif d’une composition thérapeutique visant à inhiber l’activité de la DHODH, respecte avantageusement l’objectif de l’invention d’être non cytotoxique pour l’ensemble des cellules humaines, en particulier celles impliquées dans la réponse immune. Selon l’invention, ladite teinture mère d’un extrait de feuilles de Neurolaena lobata consiste en une solution hydroalcoolique. Selon un mode de réalisation privilégié, la teinture mère est réalisée à partir d’un extrait uniquement de feuilles d’une plante de Neurolaena lobota . Selon l’invention, ladite composition thérapeutique est sous une forme galénique pour une ingestion par voie orale. Par exemple, ladite composition thérapeutique est sous une forme liquide tel qu’un sirop, ou encore, sous une forme solide tel qu’un comprimé. Selon l’invention, ladite composition thérapeutique comprend en tant que principe actif ladite teinture mère de Neurolaena lobata possédant un effet inhibiteur de l’activité de la DHDOD, ainsi que d’autres excipients permettant sa formulation galénique. Les interactions pouvant exister entre ces excipients et ladite teinture mère n’influencent et n’impactent pas l’effet inhibiteur de la DHODH. De préférence, ladite composition thérapeutique de l’invention comprend uniquement des excipients d’origine naturelle, qui n’engendrent pas ou peu d’effets secondaires lorsqu’ils sont en formulation avec ladite teinture mère de Neurolaena lobata . Selon un mode de réalisation préféré, ladite composition thérapeutique est utilisée dans une méthode permettant de traiter les symptômes associés à une infection virale. Plus spécifiquement, ladite composition thérapeutique de l’invention est utilisée dans une méthode permettant de traiter les symptômes associés à une infection par un virus à génome à ARN choisi parmi les familles de virus de la liste suivantes : les Coronaviridae, les Flaviviridae, les Orthomyxoviridae, ou encore les Togaviridae. Parmi les Coronaviridae, on citera à titre d’exemple le SARS-CoV-2, la Covid 19 ; parmi les Flaviviridae, on citera les herpavirus responsables notamment de l’Hépatite C, les Flavivirus responsable de la dengue, de la fièvre jaune ou encore du zika. Parmi les Orthomyxoviridae, on citera par exemple le virus infuenza responsable de la grippe, et parmi les Togaviridae, on citera le virus responsable du chikungunya. En effet, pour leur réplication virale au sein de la cellule hôte, les virus à ARN ont besoin que la voie de novo de synthèse des pyrimidines de la cellule hôte soit fonctionnelle. En effet, ces virus sont dépourvus d’une voie de synthèse de pyrimidine. Cependant, si cette voie cellulaire est bloquée par l’usage de la composition thérapeutique de l’invention inhibant l’activité de la DHODH, la réplication virale des virus à ARN au sein de la cellule hôte ne sera plus possible. Ces derniers étant déficitaires à la fois de la voie de novo mais aussi de la voie de sauvetage de synthèse de la pyrimidine. La montre le mécanisme d’action de la composition de l’invention sur l’inhibition de la DHODH, dans une cellule humaine infectée par un virus à génome à ARN. Grâce à la teinture mère d’un extrait de feuilles de Neurolaena lobata de la composition de l’invention, la réaction de déshydrogénation réalisée par la DHODH dans la mitochondrie n’a pas lieu. La voie de novo de synthèse de la pyrimidine est bloquée, et la voie de sauvetage n’est pas utilisable par le virus qui en est dépourvu. L’UMP et les bases pyrimidiques des nucléotides ne peuvent pas être utilisés par le virus à ARN pour démarrer la réplication virale. En conséquence, aucun virion ne peut être fabriqué par la cellule hôte, même après introduction du génome virale à ARN au sein de ladite cellule hôte. L’inhibition de la DHODH inhibe la multiplication virale des virus à génome ARN et empêche la production et la sortie de virions à l’extérieur de la membrane cellulaire de l’hôte. Ainsi, l’usage de la composition de l’invention, à action inhibitrice de l’activité de la DHODH empêche la multiplication virale et le développement des symptômes associés à la présence du pathogène au sein de l’organisme. La composition de l’invention constitue donc un moyen thérapeutique efficace pour traiter les infections virales, notamment par des virus à génomes ARN. Il en résulte que l’utilisation de la composition thérapeutique de l’invention dans une méthode pour traiter les symptômes associés à une infection par un virus à génome ARN consiste en une solution pour lutter contre l’infection et limiter la multiplication virale. La composition thérapeutique de l’invention est une bonne alternative aux solutions existantes de traitement de maladie virale ciblant l’inhibition de la DHODH. Cette utilisation spécifique permet d’empêcher la réplication virale au sein de la cellule hôte, en inhibant la voie de novo de synthèse de la pyrimidine, tout en augmentant la réponse immune par les cellules de défense et sans effet cytotoxique. La présente composition thérapeutique de l’invention consiste donc en une solution alternative permettant d’inhiber la DHODH, c’est-à-dire de bloquer la voie de novo de synthèse des pyrimidines nécessaire à la réplication des virus à ARN, ceci sans être invasives et destructrices des cellules impliquées dans la réponse immune contre le pathogène. La composition thérapeutique de l’invention a également pour avantage d’être facile à fabriquer tout en étant le plus naturelle possible aux yeux des consommateurs et des patients qui en feraient l’usage. Les résultats d’expériences ci-dessous sont destinés à illustrer l’effet d’inhibition de la DHODH par la composition thérapeutique de l’invention. La composition thérapeutique de l’invention comprend une teinture mère d’un extrait de feuilles d’une plante de Neurolaena lobata. C ette teinture mère constitue l’échantillon à tester. La mesure de l’inhibition de l’action de la DHODH sur son substrat est réalisée dans une plaque multi puits classique à paroi transparente. Les puits contiennent les échantillons à tester, la DHODH et son substrat. Pour évaluer l’inhibition de la DHODH par l’échantillon, on utilise le paramètre de la densité optique dit « DO ». En effet, on mesure, dans chaque puit, la « DO » à une longueur d’onde de 600 nm, à plusieurs intervalles de temps, et, pendant une durée de 5 min. Plus spécifiquement, chaque puit comprend l’échantillon dilué ou non, l’enzyme de la DHODH et son substrat colorimétrique dilué dans un tampon test. Ledit substrat colorimétrique comprend de la DHO qui peut être transformée en ORO par action de la DHODH. Au cours du temps, la consommation du substrat colorimétrique DHO par l’enzyme DHODH se traduit par une diminution de la DO. Cette diminution signifiant la transformation de la DHO colorée en ORO non coloré par l’activité de la DHODH. En d’autres termes, la DHO est consommée, réduite en ORO par l’activité de la DHODH, ce qui provoque une modification de la DO mesuré. En cas d’inhibition de l’activité de la DHODH par l’échantillon, la DO reste stable au cours du temps. En effet, dans le cas d’une inhibition, le substrat DHO colorimétrique ne sera pas transformé par la DHODH en ORO, la DO restera donc celle de la DHO initiale. Pour mener les expériences, il a été utilisé : une solution d’enzyme de classe 1 nommée « rhDHODH » pour « recombinant humain DHODH », un tampon test constitué de 50 mM Tris, 150 mM KCl et 0,1% Triton ® X-100, à pH 8, un mélange de substrat de la DHODH contenant : 2 mM de L- dihydroorotique dit « DHO », 0,2 mM de décylubiquinone dit « Q » et 0,12 mM de 2,6 Dichloroindophenol sodium salt hydrate dit « DPIP » dans le tampon test, un échantillon de teinture mère, d’un extrait de feuilles d’une plante de Neurolaena lobata , dilué ou non, dans un tampon de dilution constitué de diméthylsulfoxyde dit « DMSO ». Il est à noter que dans le mélange de substrat de la DHODH, le L-dihydroorotique dit « DHO » consiste en le substrat colorimétrique utilisé par la DHODH lors de la réaction de déshydrogénation. Dans le mélange de substrat, la décylubiquinone dit « Q » et le Dichloroindophenol sodium salt hydrate dit « DPIP » sont les accepteurs et donneurs d’électrons. Le transfert de ces électrons permet la réalisation de la réaction de deshydrogenation par l’oxydoreductase DHODH Préparation de la teinture mère d’un extrait de feuilles et de tiges d’une plante de Neurolaena lobata constituant l’échantillon H1. La teinture mère H1 d’un extrait de feuilles d’une plante de Neurolaena lobota est obtenue en réalisant les étapes de procédé suivants : On récolte les feuilles de Neurolaena lobata On sèche lesdites feuilles On broie lesdites feuilles sèches jusqu’à obtention d’une poudre On fait macérer la poudre dans une solution d’alcool de canne à sucre pendant 21 jours jusqu’à obtention d’un macérat, le ratio des quantités étant 1 g de poudre pour 62,5 mL de solution d’alcool de canne à sucre, On filtre ledit macérat jusqu’à obtention d’un filtrat, nommé H1 Dans le procédé susmentionné, selon un mode de réalisation préféré, on peut sécher les feuilles sous un courant d’air chaud, à une température de préférence inférieure à 40°C, pendant environs 120 heures, jusqu’à ce qu’elles présentent un taux d’humidité résiduelle de l’ordre de 6 à 7%. Le taux d’humidité est déterminé par toutes méthodes appropriées connues de l’homme du métier. Par exemple, le taux d’humidité peut être déterminé en utilisant un dessiccateur installé dans une pièce présentant une température inférieur à 40°C, avec un taux d’humidité relative inférieure à 85°C, sans exposition directe aux rayons du soleil , au courant d’air ou au vibration. Par exemple, le dessicateur référencé XM60 commercialisé par PRECISA France, avec une précision standard de 1 mg ou de 0,1 mg en haute résolution et des plages de température allant de 30°C à 230°C avec une incrémentation de 1°C peut être utilisé pour mesurer le taux d’humidité résiduelle. De préférence dans le protocole susmentionné, on fait macérer la poudre dans une solution d’alcool de canne à sucre, à une température de 25°C pendant environs 21 jours, avec mise sous agitation lente tous les jours pendant 12h. Préparation de la teinture mère d’un extrait de feuilles et de tiges d’une plante de Neurolaena lobata constituant l’échantillon H2 La teinture mère H2 d’un extrait de feuilles d’une plante de Neurolaena lobata est obtenue en réalisant les étapes de procédé suivants : On récolte les feuilles de Neurolaena lobata On sèche lesdites feuilles On fait macérer 100 g de feuilles séchées dans 1L d’une solution d’éthanol pure pendant 7 jours jusqu’à obtention d’un macérat, On filtre ledit macérat sur célite jusqu’à obtention d’un filtrat, On concentre par évaporateur rotatif ledit filtrat, On sèche sous pression ledit filtrat concentré, notamment à l’aide d’une rampe à vide, jusqu’à obtention de l’échantillon H2. Protocole d’analyse de l’inhibition de la DHODH par la composition de l’invention . Afin de vérifier l’inhibition de la DHODH par la composition thérapeutique de l’invention, il a été préparé deux solutions mères nommées respectivement H1 et H2. La solution mère H1 est obtenue en mettant en œuvre le procédé susmentionné après récolte des feuilles d’une plante de Neurolaena lobata . La solution mère H2 est obtenue en mettant en œuvre le procédé susmentionné Afin de tester l’impact de l’échantillon sur l’inhibition de la DHODH et de connaître « l’effet dose réponse », chaque échantillon H1 et H2 a été dilué dans un tampon de DMSO. Les dilutions des échantillons H1 et H2 ont permis d’obtenir les concentrations suivantes : en µg d’échantillon / mL total de solution dans le puits : 0,01 µg/mL ; 0,1 µg/mL ; 1µg/mL ; 10 µg/mL ; 100 µg/mL ; 1000 µg/mL indiquées dans respectivement dans le tableau 1 et le tableau 2 ci-dessous. Pour démarrer le protocole, chaque dilution de l’échantillon H1 ou H2 a été mis en présence de l’enzyme rh DHODH et du mélange de substrat au sein d’un puit. Afin d’obtenir une moyenne de DO mesurée pour une concentration d’échantillon H1 ou H2, on a réalisé des tripliqua pour chacune des concentrations de dilution de H1 et H2. Plus spécifiquement, pour obtenir les résultats ci-dessous, on a réalisé les étapes suivantes du protocole : On ajoute, dans chaque puits comportant les dilutions des échantillons H1 ou H2, l’enzyme rh DHODH préparée le jour même dans une solution tampon test, On laisse en présence l’enzyme et l’échantillon pendant 6 min à 37°C, On ajoute ensuite 50 µL du mélange de substrat coloré susmentionné, ceci consiste en le temps 0, On mesure dans chaque puits par lecture immédiate la DO à 600 nm, à intervalle régulier, toutes les 55 secondes, pendant 275 secondes. La quantité d’enzyme ajouté dans chaque puit est la même. Dans le protocole, on ajoute l’enzyme dans le puits de sorte à avoir une concentration de 0,06 µg d’enzyme rh DHODH /mL de solution totale dans le puit. Le tableau 1 ci-dessous montre les résultats obtenus pour l’échantillon H1 : Tableau 1 : Inhibition de l’activité de la DHODH par l’échantillon H1 Dans le tableau 1, la 1 ère colonne donne les intervalles de temps de prise de mesure de la DO à 600 nm. En d’autres termes, ceci correspond au temps de mise en contact de l’échantillon H1 avec la rh DHODH en présence du mélange de substrat. Dans le tableau 1, la deuxième ligne indique la concentration de l’échantillon H1 dans le puit. Cette concentration est exprimée en µg d’échantillon H1/mL de solution totale dans le puit. Chaque colonne du tableau 1 indique la valeur moyenne de DO mesurée à 600 nm des tripliqua pour une même concentration d’échantillon H1, et pour un temps défini de mise en contact avec la rh DHODH et son substrat. Par exemple, tel que visible dans le tableau 1, après 110 secondes de mise en contact de l’échantillon H1 à une concentration de 0,1 µg/mL avec la rh DHODH, et le mélange de substrat coloré, la valeur moyenne de la DO mesurée sur les trois puits, de contenance identique, est de 0,315. La ligne du signe Δ du tableau 1 indique la différence entre la valeur moyenne de la DO mesuré à 0 seconde de mise en présence et la valeur moyenne de DO mesurée à 275 secondes de mise en présence entre l’échantillon H1, la rh DHODH et son substrat. Le signe Δ donne la diminution de la DO entre 0 et 275 secondes de mise en présence, c’est-à-dire la capacité de transformation de la DHO en ORO par l’activité effective de la DHODH. Dans le tableau 1, les deux dernières lignes donnent, pour chaque concentration d’échantillon de H1, le pourcentage d’activité de transformation de la DHO coloré en ORO par l’activité de la rh DHODH, ainsi que le pourcentage d’inhibition de l’activité de la rhDHODH par l’échantillon H1. Le % d’activité est calculé de la manière suivante, pour une concentration donné d’échantillon H1 (par la suite H2) : % d’activité = (ΔH1X100) / Δ du contrôle négatif. Par exemple, pour l’échantillon H1 à 0,01µg/mL : le %d’activité = (0,092 X 100) / 0,208 = 44,231. Le % d’inhibition est calculé par la formule suivante : 100- la valeur du % d’activité. Pour valider l’activité effective de la rh DHODH de transformation de son substrat DHO lors de l’expérience, un control négatif a été réalisé en duplica. Ce contrôle négatif est essentiel pour valider l’activité de la DHODH sur son substrat et pour déterminer le % d’activité et le % d’inhibition des échantillons. La colonne de control négatif montre les valeurs moyennes de DO mesuré, à 600 nm, aux différents intervalles de mesures en seconde. Le control négatif contient : rh DHODH noté « E » dans le tableau 1 à une concentration de 0,06 µg/ mL de solution totale dans le puits, avec 50 µL du mélange de substrat coloré noté « S » et, en remplacement de l’échantillon H1, uniquement une solution de tampon de DMSO noté « T ». Les résultats montrent qu’entre 0 et 275 secondes, la valeur moyenne de la DO mesuré à 600 nm diminue. En conséquence, le substrat coloré DHO est bien transformé en ORO, par l’activité de réduction par l’enzyme rh DHODH. L’enzyme rh DHODH est bien fonctionnelle vis-à-vis du mélange substrat. De plus, ni la solution tampon de DMSO, ni la solution de tampon test dans laquelle est dilué le substrat DHO n’impacte l’activité de déshydrogénation par l’enzyme rh DHODH. Tel que visible dans le tableau 1, l’échantillon H1 de l’invention inhibe l’activité de la DHODH pour son substrat. Pour toutes les concentrations de H1 testées, le pourcentage d’inhibition est compris entre 51% et 56%. Il est également constaté que pour les concentrations testées, une augmentation de la concentration de l’échantillon H1 n’est pas synonyme d’une augmentation de la valeur du pourcentage d’inhibition à l’encontre de l’activité de la DHODH. Le même protocole et les mêmes mesures de DO ont permis de quantifier le pourcentage d’inhibition de l’échantillon H2. Le tableau 2 ci-dessous montrent les résultats obtenus pour les différentes concentrations testées de l’échantillon H2 Tableau 2 : Inhibition de l’activité de la DHODH par l’échantillon H2 Tel que visible dans le tableau 2, l’échantillon H2 de l’invention inhibe l’activité de la DHODH. Pour toutes les concentrations de H2 testées, le pourcentage d’inhibition est compris entre 48% et 67%. A la différence de l’échantillon H1, il semble y avoir un effet dose-réponse. En effet, pour une concentration de 1000 µg/mL, le pourcentage d’inhibition semble significativement plus élevé que pour une concentration de 0,01 µg/mL. En d’autres termes, quand on augmente la concentration de l’échantillon H2 en présence de l’enzyme, le pourcentage d’inhibition augmente. L’échantillon H2 diffère de l’échantillon H1 par le protocole de préparation de l’extrait des feuillesde Neurolaena lobata . Il semblerait que les éléments responsables de l’activité inhibitrice de la rh DHODH soit concentré dans les feuilles mais que selon le mode de préparation de la teinture mère de feuille, l’activité inhibitrice est différente. Les figures 3 à 5 illustrent l’évolution de la densité optique mesurée à 600 nm au cours du temps, pour des échantillons de H1, H2 ou de brequinar à une concentration donnée. La courbe de la présente la mesure des valeurs de DO à 600 nm, au cours du temps, pour des échantillons à une concentration de 0,01 µg/ml totale dans le puits. De la même manière, la courbe de la est pour des échantillons à une concentration de 0,1 µg/mL et la courbe de la est pour des échantillons à une concentration de 1 µg/mL. Il est à noter que dans tous les cas, peu importe la concentration de l’échantillon, pour le brequinar, inhibiteur connu de la DHODH, la DO à 600 nm reste quasiment stable au cours du temps. Le brequinar est donc bien un inhibiteur de la DHODH. Pour les échantillons H1 et H2, il est observé une diminution de la DO mesurée à 600 nm. Cette diminution est synonyme de l’activité de la rh DHODH. Néanmoins, il est constaté que pour chacun des échantillons, la diminution de la DO est franche à partir de 110 secondes de mise en contact. Entre 0 et 110 secondes, la DO mesurée à 600 nm est plutôt stable. Ce constat semble signifier que l’enzyme DHODH n’est pas active immédiatement. Dans les 110 premières secondes, la DHODH ne réalise pas ou peu la réaction de déshydrogénation, lorsqu’elle est en présence des échantillons H1 ou H2. Les échantillons H1 et H2 semblent donc ralentir le démarrage de l’activité de la DHODH vis-à-vis de son substrat. Afin de valider, effectivement, l’activité de l’enzyme rh DHODH de réduction de son substrat, on a également réalisé un control positif en duplica. Les puits de control positif comporte, en remplacement de l’échantillon H1 ou H2 dilué, du brequinar, qui est un inhibiteur connu de l’activité de la DHODH. En parallèle à la mesure de DO des échantillons, on a mesuré la DO d’une solution de bréquinar diluée dans un tampon DMSO en présence de la rh DHODH, et de son substrat. De la même manière que pour les échantillons, on a mesuré l’action de différente concentration de la solution brequinar sur l’inhibition de la rh DHODH. Afin de valider l’activité de la rh DHODH sur son substrat, il est réalisé en triplica un control positif, en parallèle du protocole de mesure de l’inhibition de la DHODH par le brequinar. Les puits de control positif comportent la rh DHODH dit « E », et son mélange de substrat dit « T » ainsi, qu’en remplacement du brequinar, du tampon DMSO dit « T ». Le tableau 3 ci-dessous montrent les résultats obtenus pour les différentes concentrations testées de l’échantillon de brequinar Tableau 3 : Inhibition de l’activité de la DHODH par le brequinar Dans le tableau 3, l’activité de la rh DHODH de transformation de son substrat est validée par le control positif. En effet, au cours du temps, on observe effectivement une diminution de la DO mesurée à 600 nm. Cette diminution résulte bien de la transformation de la DHO en ORO, par l’activité de deshydrogénation de la rh DHODH. Ni le tampon DMSO, ni le tampon test, n’impacte l’activité de l’enzyme rh DHODH. L’enzyme rh DHODH est donc fonctionnelle dans ce protocole de mesure de l’inhibition de la DHODH par le brequinar. Le tableau 3 montrent que les différentes concentrations de brequinar testé présente une activité d’inhibition de la rh DHODH comprise entre 92% et 100%. Pour mettre en avant l’activité d’inhibition des échantillons H1 et H2, la montre la courbe du pourcentage d’inhibition des échantillons H1 et H2 l’un par rapport à l’autre, en fonction de leur concentration, après 275 secondes de mise en contact avec la DHODH et son substrat. Sur la , il est constaté que pour des concentrations allant de 0,01 à 1000 µg/mL, H1 présente un pourcentage d’inhibition de la rh DHODH relativement stable. Au contraire, H2 présente une augmentation significative de son pourcentage d’inhibition pour une concentration dépassant les 100µg/mL. En particulier, pour une concentration de 1000µg de H2/ mL de solution totale dans le puit, le pourcentage d’inhibition de la rh DHODH atteint avantageusement 66,3%. De la même manière, la montre l’évolution du pourcentage d’inhibition des échantillons H1, H2 et du brequinar en fonction de leur concentration après 275 secondes de mise en contact avec la DHODH et son substrat. Il est constaté que les échantillons H1 et H2, tout comme le brequinar sont des inhibiteurs de l’activité de la DHODH sur substrat. Bien que l’inhibition de la DHODH par les échantillons H1 et H2 ne soit pas à 100% et aussi performante que le brequinar, elle existe. En conséquence, au regard des résultats obtenus, les échantillons de teintures mères de Neurolaena lobata H1 et H2 d’origine naturelle présentent effectivement et de manière significative une activité inhibitrice de l’enzyme DHODH. Ainsi, la composition thérapeutique de l’invention comportant une teinture mère d’un extrait de feuilles d’une plante appartenant au genre « Neurolaena » et à l’espèce « lobata » a pour effet d’inhiber l’activité de la DHODH. De ce fait, une composition thérapeutique comprenant l’un ou l’autre de ces échantillons, c’est-à-dire une teinture mère de Neurolaena lobata à base de feuille est un produit naturel, non toxique prometteur pour traiter des maladies dont la cible thérapeutique est l’inactivation de la DHODH. En particulier, la composition thérapeutique de l’invention est une piste envisageable pour traiter des maladies résultant de l’infection par un pathogène virale, notamment les virus à génome à ARN. Composition thérapeutique comprenant une teinture mère d’un extrait de feuilles d’une plante appartenant au genre « Neurolaena » et à l’espèce « lobata » pour utilisation en tant que médicament inhibiteur de la dihydroorotate dehydrogenase humaine (DHODH). Composition thérapeutique, selon la revendication 1, pour une utilisation dans une méthode permettant de traiter les symptômes associés à une infection virale de virus à génome à ARN. Composition thérapeutique, selon la revendication précédente, caractérisé en ce que ledit virus à génome à ARN est choisi parmi les familles de virus de la liste suivante : les Coronaviridae, les Flaviviridae, les Orthomyxoviridae, les Togaviridae.