Brevet FR3117734A1 — publié le 20220624

La présente invention vise l’utilisation du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate, isolé de l’algue Asparagopsis taxiformis , pour le traitement d’infections bactériennes, notamment dues à des bactéries de la famille des Flavobacteriaceae, et d’infections parasitaires ; elle trouve un intérêt particulier pour le traitement des animaux aquatiques, en particulier des poissons et notamment des poissons d’élevage. « Composé antibactérien et antiparasitaire » La présente invention se rapporte au domaine du traitement des infections bactériennes et parasitaires. Plus particulièrement, elle vise l’utilisation du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate, isolé de l’algue Asparagopsis taxiformis , pour le traitement d’infections bactériennes, notamment dues à des bactéries de la famille des Flavobacteriaceae, et d’infections parasitaires. La présente invention trouve un intérêt particulier pour le traitement des animaux aquatiques, en particulier des poissons et notamment des poissons d’élevage. L’intensification des élevages piscicoles et l’augmentation du stress des poissons résultant de ces conditions d’élevage favorisent la propagation d’agents pathogènes et l’apparition de maladies. Lorsqu’une épidémie telle qu’une infection bactérienne survient dans une exploitation piscicole, elle cause des épisodes de forte mortalité entrainant des pertes économiques importantes. Pour remédier à cela, une solution est l’utilisation d’antibiotiques à spectre large, elle est toutefois controversée en aquaculture en raison de ses conséquences sanitaires et environnementales délétères ; l’utilisation de nombreux antibiotiques est d’ailleurs interdite en aquaculture dans certains pays. En effet, l’utilisation continue et intensive d’antibiotiques peut notamment provoquer l’émergence de souches résistantes et l’accumulation des antibiotiques dans les tissus des animaux destinés à la consommation. Parmi les pathogènes rencontrés en aquaculture, les bactéries Gram-négatives de la famille des Flavobacteriaceae comprennent de nombreux agents pathogènes s’attaquant aux poissons parmi lesquels Flavobacterium psychrophilum, Flavobacterium columnare, et Tenacibaculum maritimum; cette famille comprend aussi des agents pathogènes des oiseaux tels que Riemerella anatipestifer, Ornithobacterium rhinotracheale, et Coenonia anatina; ou encore des hommes, Capnocytophaga canimorsus et Elizabethkingia meningoseptica (McBride M.J. (2014) The Family Flavobacteriaceae. In: Rosenberg E., DeLong E.F., Lory S., Stackebrandt E., Thompson F. (eds) The Prokaryotes. Springer, Berlin, Heidelberg). Parmi eux, Flavobacterium psychrophilum est l’agent responsable de la maladie bactérienne des eaux froides (Bacterial coldwater disease, BCWD) ou flavobacteriose qui provoque une décoloration blanchâtre le long du côté extérieur de la nageoire adipeuse puis progresse jusqu’au pédoncule caudal. Le traitement de cette maladie peut être réalisé avec des bains d’oxytétracycline, d’ammonium quaternaires, d’amoxicilline ou de florfénicol. La bactérie Gram-négative Tenacibaculum maritimum est, quant à elle, responsable de la tenacibaculose, une pathologie ulcérative qui entraine des pertes importantes en pisciculture. La tenacibaculose cause principalement des lésions à la surface du corps des poissons comme des lésions ulcératives, des nécroses, des altérations au niveau de la bouche, des nageoires effilochées, une décomposition de la queue et parfois des nécroses des tissus des branchies et des yeux. Cette bactérie a été isolée sur toutes les espèces majeures de poissons en pisciculture comme les dorades, la sériole à queue jaune, la sole, le turbot, le loup de mer, le saumon et le barramundi. Les traitements actuels contre cette pathologie sont principalement basés sur l’utilisation d’antibiotiques alors que de nombreuses études indiquent qu’un traitement répété avec le même antibiotique entraine un phénomène de résistance chez Tenacibaculum maritimum. Les pathogènes de type parasites sévissant en aquaculture sont, par exemple : - les monogènes de la famille des Capsalidae et Diplectanidae (genres Diplectanum et Neobenedenia par exemple) ; En particulier, les Capsalidae peuvent parasiter plusieurs organes des poissons osseux et des élasmobranches, tels que la peau, les nageoires ou les branchies. En particulier, Neobenedenia spp. est pathogène chez les poissons, surtout en conditions d'aquaculture. - les crustacés de la famille de Caligidae (genres Caligus et Lepeophtheirus) ; - les copépodes de la famille des Hatschekiidae ; et - les Myxosporidés de la famille des Kudoidae du genre Kudoa. Il est donc nécessaire de développer de nouvelles stratégies, notamment alternatives aux traitements utilisant des antibiotiques, pour contrôler les infections bactériennes et parasitaires, en particulier celles provoquant des maladies et/ou altérant la qualité de la chair chez les poissons et animaux aquatiques. Dans ce contexte, les Inventeurs ont isolé un composé, le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate, à partir de l’algue Asparagopsis taxiformis , qui présente une activité antimicrobienne et antiparasitaire. Bien qu’il soit connu que des extraits d’algues Asparagopsis taxiformis puissent présenter une activité antimicrobienne (Genovese et al. , 2012, Mar. Environ. Res. 73, 1-6 ; Genovese et al. , 2013, Mycoses, 56, 516-519 ; Hutson et al. , 2012, Int. J. Parasitol., 42, 1135-1141) et antibactérienne en particulier contre Tenacibaculum maritimum (thèse de M. Reverter), l’identification et la caractérisation de ce composé s’est avérée très difficile en raison de sa structure chimique fortement halogénée et l’absence d’atome d’hydrogène et également en raison de la forte sensibilité de ce composé à l’eau qui provoque son hydrolyse, en particulier, le taux d’humidité de l’algue entre sa récolte et l’extraction, s’il n’est pas contrôlé, peut empêcher l’isolement de ce composé. Ce composé a la structure chimique représentée à la . L’algue rouge Asparagopsis taxiformis est connue pour différents usages en médecine traditionnelle chinoise : le traitement de l’hyperthyroïdie (CN105663825), le traitement de tumeurs (CN104367702) ou encore des vasculites allergiques (CN104116870) ; elle est aussi utilisée comme complément alimentaire des ruminants pour réduire la production de gaz et/ou de méthane (CA2937580). La présente invention se rapporte ainsi au pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation pour la prévention et/ou le traitement d’infections bactériennes. Par « prévention d’une infection bactérienne », on entend empêcher ou inhiber le développement de la bactérie responsable de l’infection dans l’hôte avant le développement de l’infection. Par « traitement d’une infection bactérienne », on entend inhiber la progression d’une bactérie au sein de l’hôte après infection et ainsi empêcher le développement, réduire ou faire disparaitre les symptômes résultant de cette infection. Plus particulièrement, la présente invention se rapporte au pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation pour la prévention et/ou le traitement d’infections bactériennes dues à une bactérie de la famille des Flavobacteriaceae , notamment pour la prévention et/ou le traitement d’infections bactériennes dues à une bactérie choisie parmi Flavobacterium psychrophilum, Flavobacterium columnare, Tenacibaculum maritimum, Riemerella anatipestifer, Ornithobacterium rhinotracheale, Coenonia anatina, Capnocytophaga canimorsus et Elizabethkingia meningoseptica. Le traitement utilisant le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate, que ce soit à des fins prophylactiques ou thérapeutiques, s’adresse aux individus les plus susceptibles de développer ou ayant développé une infection aux bactéries de la famille des Flavobacteriaceae ; ainsi, le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate est de préférence utilisé pour la prévention et/ou le traitement d’infections bactériennes dues à Capnocytophaga canimorsus ou Elizabethkingia meningoseptica chez l’homme et pour la prévention et/ou le traitement d’infections bactériennes dues à Riemerella anatipestifer, Ornithobacterium rhinotracheale, et Coenonia anatina chez les oiseaux, en particulier les oiseaux d’élevage (aviculture) ou d’ornement. Selon un mode de réalisation préféré, l’utilisation du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate est destiné au traitement d’infections bactériennes dues à Flavobacterium psychrophilum, Flavobacterium columnare et Tenacibaculum maritimum, chez les animaux aquatiques, tels que les coquillages, les crustacés, les amphibiens et les poissons, de préférence, dans le cadre de l’aquaculture animale en eau douce, saumâtre ou eau de mer, en particulier dans le cadre de la pisciculture, de la conchyliculture, de l’astaciculture ou encore de la pénéiculture. De préférence, le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate est utilisé pour la prévention et/ou le traitement de la tenacibaculose et/ou de la flavobactériose. Selon un autre de ses objets, la présente invention se rapporte au pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation pour la prévention et/ou le traitement d’infections parasitaires. Par « prévention d’une infection parasitaire », on entend empêcher ou inhiber le développement du parasite responsable de l’infection dans l’hôte avant le développement de l’infection. Par « traitement d’une infection parasitaire », on entend inhiber la progression d’un parasite au sein de l’hôte après infection et ainsi empêcher le développement, réduire ou faire disparaitre les symptômes résultant de cette infection. Plus particulièrement, la présente invention se rapporte au pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation pour la prévention et/ou le traitement d’infections parasitaires dues à un monogène de la famille des Capsalidae et Diplectanidae, en particulier du genre Diplectanum et Neobenedenia ; un crustacé de la famille de Caligidae, en particulier des genres Caligus et Lepeophtheirus ; un copépode de la famille des Hatschekiidae ; et un Myxosporidé de la famille des Kudoidae, en particulier du genre Kudoa. Selon un mode de réalisation préféré, l’utilisation du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate est destinée au traitement d’infections parasitaires chez les animaux aquatiques, tels que les coquillages, les crustacés, les amphibiens et les poissons, de préférence, dans le cadre de l’aquaculture animale en eau douce, saumâtre ou eau de mer, en particulier dans le cadre de la pisciculture, de la conchyliculture, de l’astaciculture ou encore de la pénéiculture. Le terme poisson fait référence à la fois aux poissons d'eau froide et chaude qui peuvent être traités par les compositions pharmaceutiques de la présente invention ; il s’agit de tout poisson sensible à une infection par une bactérie de la famille des Flavobacteriaceae. Le poisson peut être un poisson marin ou d'eau salée. Des exemples de poissons comprennent les salmonidés (Oncorhynchus sp. Et Salmo sp.), Les anguilles américaines, européennes et japonaises (Anguilla sp.), Le tilapia (Oreochromis sp.), Le bar rayé et le bar rayé hybride (Morone chrysops et M. saxatilis), plie (Seriola sp.), dorade (Spams sp.), perche de mer (Lates calcarifer), mérou estuarien (Epinephelus tawine), doré jaune (Stitzostedion vitreum), poisson-chat de rivière (Ictalurus punctutus), centrachidés (comme l'achigan à grande bouche, Micropterus salmoides), les barbottes brunes (Nebulosus sp.), les vairons à grosse tête (Pimephales promelas), les brins dorés (Netemigonus crysoleucas), la carpe (Cyprinus carpio), toutes les espèces de thon, les espèces de poissons d'aquarium comme le noir mollies (Poecilia sphenops), platies (Xiphosphorus maculatus), lamproie marine (Petromyzon marinus), tanche (Tinea tinea), carassin (Carassius carassius), poisson rouge (Carassius auratus), poisson doux (Plecoglossus altivelis), vairon d'eau douce (Zacco platypus) , ainsi que la perche (Perca fluviati lis), le gardon (Rutilus rutilus) et le bar (Serranidae sp.). Dans un mode de réalisation préféré, les poissons sont utilisés en pisciculture. L’utilisation d’un composé actif d’origine naturelle issu d’une algue présente un intérêt marqué dans le cadre du traitement des animaux d’élevage qu’ils soient terrestres ou aquatiques car il permet d’éviter l’introduction de molécules exogène dans l’environnement. La présente invention se rapporte également au pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation pour induire une réponse immunitaire. Le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate peut être utilisé sous forme purifiée, c’est-à-dire une poudre contenant au moins 95%, de préférence 96%, 97%, 98% et encore préférentiellement 99%, en poids de pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate. Selon un mode de réalisation, le procédé d’extraction du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate à partir de l’algue Asparagopsis taxiformis comprend les étapes de : a- Séchage et broyage d’ Asparagopsis taxiformis ; b- Macération de la poudre obtenue à l’étape a dans un solvant apolaire tel que l’hexane, l’heptane, le cyclohexane, de préférence, le cyclohexane ; c- filtration sous vide du mélange obtenu à l’étape b- sur gel de silice ; d- évaporation du cyclohexane ; e- récupération de la poudre obtenue. Ce procédé se montre très performant en ce qu’il permet en deux étapes seulement d’obtenir le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate, qui est naturellement présent à une teneur de l’ordre de 0,8 à 1% en poids du poids sec de l’algue, avec une pureté de l’ordre de 95%. Alternativement, l’extraction du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate à partir de l’algue Asparagopsis taxiformis peut être réalisée à l’aide de fluide supercritique, tel que le CO 2 . Selon un autre mode de réalisation, le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate est préparé par synthèse chimique. Dans le cadre de la présente invention, l’administration du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate peut se faire par toute voie, telle que locale, injection, orale…, que l’homme du métier jugera approprié en fonction de la localisation de l’infection et de l’hôte à traiter. Dans le cadre de la prévention et du traitement d’infections bactériennes ou parasitaires chez des animaux aquatiques, selon l’invention, le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate est de préférence administré par voie orale, par exemple par dissémination dans l’environnement de l’animal. En raison de l’extrême fragilité du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate à l’eau, il conviendra de formuler ce composé dans des compositions anhydres qui le protègent de l’humidité et de mettre en œuvre un procédé de préparation de ces compositions qui ne nécessite pas la mise en contact du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate avec de l’eau. La présente invention se rapporte ainsi au pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate encapsulé dans un excipient hydrophobe et à une composition pharmaceutique comprenant du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate encapsulé dans un excipient hydrophobe. La concentration en pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate dans la composition pharmaceutique selon l’invention peut être comprise entre 1 et 50 mg/g de composition, de préférence, entre 5 et 40 mg/g de composition, encore préférentiellement entre 10 et 20 mg/g de composition. La présente invention se rapporte encore à la composition pharmaceutique selon l’invention, c’est-à-dire comprenant pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate encapsulé dans un excipient hydrophobe, pour son utilisation telle que décrite plus haut pour : - la prévention et/ou le traitement d’infections bactériennes et pour induire une réponse immunitaire ; l’utilisation est en particulier destinée à la prévention et/ou au traitement d’infections bactériennes dues à une bactérie de la famille des Flavobacteriaceae , notamment à la prévention et/ou au traitement d’infections bactériennes dues à une bactérie choisie parmi Flavobacterium psychrophilum, Flavobacterium columnare, Tenacibaculum maritimum, Riemerella anatipestifer, Ornithobacterium rhinotracheale, Coenonia anatina, Capnocytophaga canimorsus et Elizabethkingia meningoseptica ; et/ou - la prévention et/ou le traitement d’infections parasitaires dues un monogène de la famille des Capsalidae et Diplectanidae, en particulier du genre Diplectanum et Neobenedenia ; un crustacé de la famille de Caligidae, en particulier des genres Caligus et Lepeophtheirus ; un copépode de la famille des Hatschekiidae ; et un Myxosporidé de la famille des Kudoidae, en particulier du genre Kudoa. De nombreuses technologies d’enrobages à sec sont connues de l’homme du métier et peuvent être mises en œuvre pour la préparation de composition anhydre et protectrice contre l’humidité comprenant le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate. Selon un mode de réalisation préféré et adapté à l’administration du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate par voie orale à des animaux aquatiques, le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate est enrobé dans un excipient lipidique, anhydre et comestible ; de préférence, il s’agit d’une matière grasse alimentaire, anhydre et solide à température ambiante, par exemple entre 18 et 25°C selon la zone géographique et la saison. La matière grasse alimentaire, anhydre et solide à température ambiante est telle que son point de fusion est compris entre 23 et 26°C ; il peut d’agit d’une matière grasse pure ou d’un mélange de matières grasses dont les proportions sont ajustées pour que le mélange ait le point de fusion désiré ; à titre d’exemple, la matière grasse est choisie parmi la cire de carnauba, la cire de candelilla, la cire de son de riz, le beurre de karité, le beurre de cacao, l’huile de coco ; de préférence, l’huile de coco, encore préférentiellement l’huile de coco sous forme vierge et sous forme désodorisée. Selon un mode de réalisation préféré, la composition pharmaceutique comprend en outre un ingrédient appétent pour l’individu auquel est destinée la composition. Cet ingrédient peut être un aliment ou un arôme naturel ; il existe de très nombreux produits commerciaux qui peuvent être utilisés dans la composition selon l’invention, l’homme du métier choisira celui le plus attractif pour l’hôte visé. Un exemple d’une composition selon l’invention consiste à incorporer le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate dans un aliment pour poisson (granulés ou flocons disponibles dans le commerce) enrobé ensuite dans un excipient lipidique, anhydre et comestible. FIGURES : représentation chimique du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate ; : spectre de masse du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate avant (A) et après (B) optimisation ; : chromatogrammes à 254 nm (A) et : avec un détecteur ELSD (B) ; et : Résultats des tests antibiogrammes en milieu solide du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate sur les souches Flavobacterium psychrophilum (Fp) (histogramme de gauche) et Tenacibaculum maritimum (Tm) (histogramme de droite) ; : Résultats des tests antiparasitaires de l’activité du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate sur le parasite Anguillicola crassus isolé d’anguilles péchées dans le milieu naturel. EXEMPLES Exemple 1 - Extraction du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate à partir de l’algue Asparagopsis taxiformis a- Récolte et séchage d’Asparagopsis taxiformis : Les algues sont récoltées à Moorea en Polynésie française (latitude -17,48262 et longitude -149,87213) à une profondeur d’environ 10 mètres. Elles sont débarrassées des épiphytes et rincées à l’eau de mer puis essorées, congelées à -20°C puis lyophilisées jusqu’à ce qu’il ne reste plus aucune traces d’eau. Les algues séchées sont ensuite conditionnées sous vide dans des sachets hermétiques et conservées au congélateur à -20°C jusqu’à leur utilisation. b- Broyage et macération de la poudre obtenue dans du cyclohexane : Les algues lyophilisées sont broyées finement immédiatement avant leur utilisation à l’aide d’un pilon dans un mortier. La poudre d’algue est ensuite extraite par macération dans du cyclohexane selon le protocole suivant donné pour une masse de 40 g et à ajuster proportionnellement en fonction de la quantité de matière première à extraire : 40 g de poudre d’algue lyophilisée sont extraites par 3 macérations successives pendant 30 minutes dans du cyclohexane (VWR GPR RECTAPUR) sous agitation. L’opération est répétée 3 fois. Les extraits sont regroupés et filtrés sur coton pour éliminer les résidus d’algues. D’autres solvants organiques ont été testés pour extraire le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate (méthanol, dichlorométhane, acétate d’éthyle) mais aucun n’a permis d’obtenir une sélectivité comparable au cyclohexane. c- Purification par filtration sous vide sur gel de silice : Le filtrat obtenu est purifié par chromatographie flash sous vide sur 3 grammes de gel de silice (63 – 200 µm, Sigma-Aldrich : 60741-1kg) par élution avec du cyclohexane. L’éluat est transvasé dans un ballon rodé et le solvant est évaporé à sec à l’évaporateur rotatif. Un résidu blanc cristallin est obtenu dans le ballon et doit être stocké à -20°C dans un tube hermétiquement fermé. Le résidu obtenu représente 0,8 à 1% du poids sec de l’algue. Exemple 2 - Caractérisation du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate La caractérisation structurale du composé est établie par RMN du 1 H et du 13 C (Jeol, 500MHz) et par spectrométrie de masse haute résolution (Thermo Fisher Qexactive+) ( ). RMN 1 H dans le DMSO- d6 : pas de signal. RMN 13 C dans le DMSO- d6 , δ en ppm : 22.6 ; 24.6 ; 96.9 ; 144.0 et 158.6. (-)-HRESIMS : des ions pseudomoléculaires sont observables à m/z 850.2421 [C 5 O 2 Br 8 + I] - (calculé pour C 5 O 2 Br 8 I, 850.2410) ; 802.25711 [C 5 O 2 Br 8 + Br] - (calculé pour C 5 O 2 Br 9 , 802.2549) ; 758.3077 [C 5 O 2 Br 8 + Cl] - (calculé pour C 5 O 2 Br 8 Cl, 758.3054). Des fragmentations en sources se produisent et donnent des ions fragments intenses à m/z 474.5818 [C 4 O 2 Br 5 ] - (calculé pour C 4 O 2 Br 5 , 474.5815) ; 446.5869 [C 3 OBr 5 ] - (calculé pour C 3 OBr 5 , 446.5866) ; 371.6084 [C 2 O 2 Br 4 ] - (calculé pour C 2 O 2 Br 4 , 371.6631). Il est à noter que l’ion pseudomoléculaire [M-H] - qui permettrait d’obtenir la formule brute du composé ne peut être obtenu en (-)-ESI puisque la molécule ne contient pas d’hydrogène. Le composé ne s’ionise pas en (+)-ESI et ne donne donc pas de réponse dans ce mode d’ionisation. La pureté du composé est estimée par des analyses en chromatographie liquide haute performance (HPLC) couplées à un détecteur à diffusion de lumière (ELSD) à 95% (Figures 3 et 4). Exemple 3 - Caractérisation de l’activité biologique du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate 7 souches bactériennes pathogènes les plus virulentes et/ou fréquentes en aquaculture (Gram -) ont été sélectionnées : Aeromonas salmonicida (furonculose) , Edwardsiella anguillarum (Enteric Septicemia of Cat-fish (ESC) et ‘’Hole in the Head Disease’’) , Yersinia ruckeri (yersiniose ou maladie de la bouche rouge) , Vibrio anguillarum et V. harveyi (vibriose) , Flavobacterium psychrophilum (flavobactériose) et Tenacibaculum maritimum (ténacibaculose). Les références des souches commandées au Centre de Recherches Biologiques de l’Institut Pasteur (CRBIP) sont données ci-dessous : CIP 103209T - Aeromonas salmonicida salmonicida CIP 82.80T - Yersinia ruckeri CIP 103534T - Flavobacterium psychrophilum CIP 63.36T - Vibrio anguillarum CIP 103192T - Vibrio harveyi CIP 103528T - Tenacibaculum maritimum DSMZ-27202- Edwardsiella anguillarum Les milieux de culture ont été préparés comme suit : Marine Broth, Difco™ 2216 : 37.4 g de poudre pour 1 L d’eau distillée ; Mueller Hinton, Sigma – Aldrich : 23 g de poudre pour 1 L d’eau distillée ; Bacteriological agar, Sigma – Aldrich : 15 g de poudre pour 1 L de milieu. Les produits chimiques utilisés sont listés ci-dessous : Acide dibromoacétique : Sigma – Aldrich 241032 50 g ; Bromoforme : Sigma – Aldrich 442551 ; Erythromycine : Sigma – Aldrich E5389-5G ; Ampicilline : Sigma – Aldrich 59349 – 100MG ; kanamycine : Sigma – Aldrich K4000-25G ; Amoxicilline : Acros organics 455140050. L’optimisation de leurs conditions de culture en milieu solide et liquide ainsi que des cinétiques de croissance ont été réalisées. Des antibiotiques ont été sélectionnés pour chaque souche ont servi de référence positive lors des tests in vitro (microplaques et antibiogrammes). Edwarsiella anguillarum (DSMZ-27202) sensible : Érythromycine Flavobacterium psychrophilum (CIP 103534T) sensible : Érythromycine Tenacibaculum maritimum (CIP 103528T) sensible : Ampicilline Vibrio harveyi (CIP 103192T) sensible : Érythromycine Un premier screening en milieu liquide (microplaques 96 puits Costar 3596, stériles, transparentes avec couvercles) est réalisé en dissolvant le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate dans du DMSO à raison d’une concentration finale de 1% de DMSO dans les puits de mesure. Des témoins à 1% de DMSO dans le milieu de culture sans bactérie permettent de soustraire l’absorbance du milieu. Des témoins à 1% de DMSO dans le milieu de culture avec bactéries permettent de vérifier que cette concentration n’est pas toxique. Pour chaque concentration de produit testée, 20 µl de solution sont déposées dans les puits correspondant qui sont ensuite complétés avec 180 µl de culture bactérienne préalablement diluée (A = 0.1). Les plaques sont incubées pendant 48h, sans agitation, avec lecture de l’absorbance à T = 0h, T = 24h et T = 48 h avec un lecteur de microplaques : BioTek Epoch 2 à λ = 620 nm. Ces tests en culture liquide ont permis de mettre en évidence l’activité spécifique du composé sur les souches Flavobacterium psychrophilum (Fp) et Tenacibaculum maritimum (Tm) et d’établir que la concentration minimale inhibitrice du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate est inférieure à 50 μg/mL (70 μmole/L). L’acide dibromoacétique et le bromoforme testés dans la même gamme de concentrations (de 10 à 60 µg/mL) ne présentent aucune activité sur les bactéries testées. Cependant, l’étude de la stabilité du composé en présence d’eau à température ambiante laisse penser que cette CMI en réalité inférieure à celle qui a été mesurée ici. La stabilité du composé en solution a été étudiée par des analyses en chromatographie liquide couplée à un détecteur UV (DAD) et à un détecteur à diffusion de lumière (ELSD). Plusieurs conditions ont été testées à des concentrations de 0,3 mg/mL à -20°C et à température ambiante, dans le méthanol seul et dans le mélange méthanol/eau (60/40). Les résultats montrent que la conservation en solution à -20°C permet d’éviter la dégradation. La présence d’eau a un faible impact si le composé est conservé à -20°C mais en revanche elle conduit à sa dégradation totale à température ambiante. La stabilité du composé à l’état solide a été testée sur une période de six mois à -20°C sans observer de dégradation. Des tests en milieu solide (antibiogrammes) ont été réalisés sur les souches sélectionnées. Les souches ont été ensemencées sur milieu gélosé, étalement selon la méthode des stries en cadran. 24h avant le test une colonie de chaque souche a été mise en culture dans 10 mL de milieu liquide puis incubée à 28°C sous agitation pendant 48h. Les composés à tester ont été dissous dans un mélange de dichlorométhane et de méthanol (50/50, V/V). La gamme de concentrations testées allait de 0,05 à 100 µg/disque et a été obtenue par dilutions successives d’une solution mère à 10 mg/mL. Un témoin négatif est réalisé avec le solvant seul. Des solutions d’antibiotiques à 0,05 µg/disque ont servi de témoins positifs. Après dépôt de 10 µL sur chaque disque, le solvant est évaporé sous la sorbonne. Après 60 minutes, les disques ont été déposés sur les boites préparées avec un mélange de milieu Marine Broth et d’agar et inoculées par inondation (2 mL d’inoculum par boite). Les tests ont été réalisés en triplicats avec une lecture après 24h d’incubation à 27°C par mesure des diamètres d’inhibition de croissance bactérienne. Les résultats sont présentés aux Figures 5 et 6. Aucune activité n’a été mise en évidence pour le bromoforme et l’acide dibromoacétique aux concentrations testées. L’activité du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate a été confirmée uniquement pour les souches Flavobacterium psychrophilum et Tenacibaculum maritimum . La concentration minimale inhibitrice du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate a pu être évaluée à environ 1 µg/disque. Formulation du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour les tests in vivo Etant donnée l’instabilité du composé en présence d’eau à température ambiante, le traitement par balnéation a été écarté. L’administration par voie orale a donc été préférée. Cependant, afin d’éviter la dégradation du composé avant l’ingestion par les poissons, la formulation des aliments a été réalisée comme suit : Des granulés commerciaux adaptés à l’espèce de poisson utilisée pour l’expérimentation sont supplémentés à raison de 10 mg de pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate par gramme de granulés. Pour ce faire, les granulés pour le nourrissage des poissons sont imbibés par une solution de pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate préparée dans le cyclohexane à la concentration adéquate. Après évaporation du solvant au Genevac, les granulés secs sont conservés à -20°C. Un revêtement hydrophobe est pulvérisé à température ambiante sur les granulés étalés sur des boîtes de Pétri afin de recouvrir la surface et limiter ainsi le contact du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate avec l’eau des aquariums. Le produit hydrophobe utilisé ici est l’huile de coco désodorisée de la marque Bio Planète, solide en-dessous de 22-23 degrés. Des tests d’appétence réalisés sur des guppys ( Poecilia reticulata ) ont montré que l’enrobage avec de l’huile de coco vierge demande un temps d’acclimatation avant la prise de nourriture alors qu’elle est immédiate avec l’huile de coco désodorisée. Exemple 4 - Tests in vitro du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate sur Anguillicola crassus , nématode parasite de la vessie gazeuse de Anguilla sp . Des anguilles européennes ( Anguilla anguilla ) au stade « jaune » collectée dans l’étang de Canet en Roussillon ont été endormies en les déposant dans un bain d’eugénol (Sigma-aldrich W246700-1KG-1K) (5mL d’eugénol 30% pour 10L d’eau). Elles ont ensuite été disséquées, les vessies gazeuses parasitées contenant Anguillicola crassus ont été extraites et déposées dans de l’eau déminéralisée à 8g/L de sel (Instant Ocean – Aquarium systems) jusqu’à leur utilisation. Le pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate a été solubilisé dans du diméthylsulfoxyde (Honeywell Riedel-de-Haën™) à la concentration de 5 mg/mL. Les tests ont été réalisés dans des boites de pétri (100x20mm CytoOne). 20 mL d’eau déminéralisée à 8 g/L de sel ont été ajoutés dans chaque boite de pétri. 200 µL de d’extrait ont été déposés dans les boites de pétri pour une concentration finale dans la boite de 50 µg/mL. Un contrôle négatif avec le DMSO a été réalisé ainsi qu’un contrôle sans solvant ni extrait mais avec uniquement de l’eau déminéralisée à 8 g/L de sel. Chaque condition a été répliquée 3 fois. Après agitation des boites de pétri pour homogénéiser les solutions, 5 parasites sélectionnés aléatoirement ont été déposés dans chaque boite. Le mouvement des parasites a ensuite été observé à l’œil nu toutes les 20 minutes et le nombre de parasites répondant à un stimulus par contact avec l’extrémité d’une pince brussel a été noté à chaque pas de temps. Les résultats sont présentés à la (courbe du haut : eau contrôle ; courbe du milieu : eau contrôle + 1% DMSO ; courbe du bas : composé). L’activité du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate est maximale de 0 à 20 minutes avec une diminution de 45% de la mobilité des parasites. Les mesures entre 20 et 10 minutes montrent une tendance générale à la baisse de mobilité des parasites avec le contrôle 1% DMSO et avec le composé mais ces résultats sont difficilement exploitables du fait de la reprise de mobilité des parasites durant cette période. La reprise de la mobilité d’un temps à l’autre provient sans doute d’un manque de mouvement d’un ou de plusieurs parasites lors de l’observation alors que ce dernier n’était pas mort. On peut donc considérer que lorsque le niveau est supérieur postérieurement, il était au moins égal à celui-ci au point le précédent. Au bout de 120 minutes, la différence entre le contrôle DMSO et le composé est de nouveau significative. Pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation pour la prévention et/ou le traitement d’infections bactériennes. Pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation selon la revendication 1, pour la prévention et/ou le traitement d’infections bactériennes dues à des bactéries de la famille des Flavobacteriaceae . Pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour la prévention et/ou le traitement de la tenacibaculose et/ou de la flavobactériose. Pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour la prévention et/ou le traitement d’infections d’animaux aquatiques, de préférence les poissons. Pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il est administré par voie orale. Pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il induit une réponse immunitaire. Procédé d’extraction du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate comprenant les étapes de : a- Séchage et broyage d’ Asparagopsis taxiformis ; b- Macération de la poudre obtenue à l’étape a dans un solvant apolaire ; c- filtration sous vide du mélange obtenu à l’étape b- sur gel de silice ; d- évaporation du cyclohexane ; e- récupération de la poudre obtenue. Pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate encapsulé dans un excipient hydrophobe. Pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate encapsulé selon la revendication 8, caractérisé en ce que ledit excipient hydrophobe est une matière grasse alimentaire, anhydre et solide à température ambiante et ayant un point de fusion compris entre 23 et 26°C. Composition pharmaceutique orale comprenant du pentabromopropèn-2-yl tribromoacétate encapsulé dans un matériau hydrophobe selon la revendication 8 ou la revendication 9. Composition pharmaceutique orale selon la revendication 10, caractérisée en ce qu’elle comprend également un ingrédient appétent pour l’individu auquel est destinée la composition. Composition pharmaceutique orale selon la revendication 10 ou la revendication 11 pour son utilisation pour la prévention et/ou le traitement d’infections bactériennes.