Brevet FR3119767A1 — publié le 20220819

La présente invention concerne une composition comprenant au moins de l’acide élénolique et au moins un agent acidifiant. L’invention a également pour objet une telle composition pour son utilisation comme médicament ou complément alimentaire, en particulier pour renforcer l’immunité d’un être humain ou d’un animal. Composition pour renforcer le système immunitaire L’invention concerne une composition particulière comprenant de l’acide élénolique, présentant une absorption au niveau de la barrière intestinale et une biodisponibilité buccale optimisée. L’invention a également pour objet ladite composition pour son utilisation comme médicament ou complément alimentaire en particulier pour booster le système immunitaire et ainsi prévenir et/ou traiter des maladies. Etat de l’art L'olivier et d'autres membres de la famille Oleaceae ont été documentés comme une source de substances médicinales depuis l’antiquité. De nombreux chercheurs ont étudié le cocktail de substances phytogéniques produit par l'olive et d'autres membres de cette famille. Parmi ces substances, on connaît en particulier un glucoside appelé oleuropéine. De nombreuses études scientifiques ont montré que ce composé avait certaines propriétés antifongiques et antibactériennes, ainsi que des propriétés antioxydantes et anti-inflammatoires. Compte tenu de ses propriétés dans le domaine de la santé, de nombreux produits contenant de l’oleuropéine sont apparus sur le marché et sont aujourd’hui largement commercialisés en particulier sous forme de compléments alimentaires. La plupart des composés actifs de l’olivier disponibles dans le commerce sont naturellement présents dans les olives et la feuille de l’olivier. Des extraits contenant des quantités significatives d’Oleuropéine peuvent être préparés à partir de feuilles d'olivier ou de l’eau d’olive (comme dans les demandes WO2016083525 et US6165475 par exemple) qui est obtenue par séparation lors de la fabrication de l’huile à partir des olives. L’oleuropéine est le composé phénolique majoritairement présent dans l’olivier. Il est particulièrement abondant dans les jeunes olives avec des concentrations jusqu’à 140mg/g et de l’ordre de 60 à 90mg/g dans les feuilles sèches. D’un point de vue structurel, l’Oleuropéine est un ester de l’acide élénolique et de l’hydroxytyrosol et possède un squelette oléosidique commun au sécoiridoïdes glucosides de la famille des Oléaceae. Des études relativement récentes ont montré que l'hydrolyse de produits issus d’extraits de l’olivier tels que l'oleuropéine qui contiennent un groupement ester, conduit à des dérivés phénoliques de plus petit poids moléculaire tels que l’acide élénolique et l’hydroxytyrosol. Ces phénols ont une activité antioxydante plus élevée que leurs précurseurs de poids moléculaire élevé, et pour certains composés, des propriétés particulières. L’hydroxytyrosol a par exemple été décrit pour présenter des propriétés intéressantes pour le traitement de certaines affections inflammatoires comme dans US10653742 ou pour le traitement de la maladie de parkinson comme dans US20173667995. L’acide élénolique quant à lui a par exemple été décrit pour présenter une activité antivirale intéressante pour le traitement d’affections d’origine virale comme dans WO9614064. Toutefois, ces molécules présentent l’inconvénient d’être peu biodisponibles avec une absorption au niveau de la barrière intestinale qui est très faible. En ce qui concerne l’oleuropéine, les données disponibles dans la littérature concernant son métabolisme sont peu nombreuses et les résultats peuvent apparaitre parfois contradictoires concernant notamment les produits de métabolisation dans le plasma et dans les urines (C. Nediani et al. Oleuropein, a Bioactive Compound from Olea europaea L., as a Potential Preventive and Therapeutic Agent in Non-Communicable Diseases – 2019 (Review)). Cette situation pourrait s’expliquer par le fait que de nombreux facteurs tels que la nature et la composition des extraits évalués, leurs possibles interactions avec la nourriture, les méthodes d’analyse mises en œuvre pour la quantification des métabolites, de même que les paramètres liés aux sujets (génotype, l’âge, le sexe), peuvent influencer la biodisponibilité orale limitée de l’oleuropéine (environ 50% à 60%) entrainant une importante variabilité des résultats. Concernant l’acide élénolique, il existe peu d’études décrivant spécifiquement son absorption dans l’organisme après une administration par voie orale. La demanderesse s’y est intéressée et a réalisé des études sur un modèle de perméabilité membranaire montrant que son absorption et sa biodisponibilité par voie orale sont faibles et ne sont pas adaptées à une utilisation efficace comme médicament ou complément alimentaire. Il existe donc un besoin pour des compositions optimisées à base d’acide élénolique destinées à la voie orale, en particulier des compositions permettant une absorption membranaire intestinale et une biodisponibilité par voie orale de l’acide élénolique améliorées. Pour répondre à ce besoin, l’invention propose une composition comprenant au moins de l’acide élénolique et au moins un agent acidifiant. Préférentiellement l’agent acidifiant est présent de façon à ce que la composition présente un pH acide, en particulier un pH inférieur à 4,5. En effet, de façon surprenante, la présence d’un agent acidifiant avec l’acide élénolique permet d’obtenir une amélioration significative de la perméabilité membranaire intestinale de cette molécule et donc son absorption lorsque la composition est administrée par voie orale. Les effets de l’acide élénolique ainsi administré sont augmentés et l’invention a par conséquent également pour objet une composition comprenant au moins de l’acide élénolique et au moins un agent acidifiant pour son utilisation comme médicament ou complément alimentaire chez l’Homme ou l’animal. D’autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description détaillée de l’invention, des exemples et des figures qui vont suivre. Brève description des Figures représente un schéma du principe du test de perméabilité de membrane artificielle parallèle (PAMPA) utilisé comme modèle in vitro de perméation transcellulaire passive (A : puits donneur : le composé à tester dans un tampon ; B : puits récepteur : le composé à tester dans le puits donneur s'écoule à travers la membrane dans le puits récepteur ; C : membrane : imite une membrane cellulaire) représente les résultats d’une étude de la perméabilité de l’acide élénolique seul réalisé avec un test PAMPA. représente les résultats d’une étude de la perméabilité comparée de l’acide élénolique seul et d’une composition A selon l’invention combinant de l’acide élénolique et un agent acidifiant réalisé avec un test PAMPA. représente les résultats d’une étude de la perméabilité comparée de l’acide élénolique seul et d’une composition B selon l’invention combinant de l’acide élénolique et un agent acidifiant réalisé avec un test PAMPA. représente les résultats d’une étude de la perméabilité comparée de l’acide élénolique seul et d’une composition A et B selon l’invention combinant de l’acide élénolique et un agent acidifiant réalisé avec un test PAMPA. représente les résultats d’une étude de la perméabilité comparée de l’acide élénolique seul et d’une composition B et C selon l’invention combinant de l’acide élénolique et un agent acidifiant ainsi que d’une composition D identique à la C mais sans agent acidifiant, réalisé avec un test PAMPA. représente les résultats d’une étude de la perméabilité comparée de l’acide élénolique seul et des compositions A et A’ , A’ étant identique à la composition A mais ne contenant pas d’acide citrique. Description détaillée de l’invention Définition Par « agent acidifiant » au sens de l'invention, on entend toute substance ou composé capable de diminuer la valeur du pH de la composition dans laquelle il est intégré. Un agent acidifiant peut être par exemple un acide organique ou minéral, ou toute molécule thérapeutique ou non thérapeutique susceptible d’avoir une action de diminution du pH tel qu’un acide aminé à caractère acide. Par « animal » on entend tout animal à l’exception de l’être humain. Par « complexe de zinc » au sens de l’invention on entend une structure chimique dans laquelle le zinc est lié à une molécule généralement de nature organique par l’intermédiaire d'une liaison de coordination bien connue de l’homme du métier. Par « liant » ou « agent liant » au sens de l’invention on entend une substance chimique généralement de nature organique et de structure polymérique capable d’agglomérer des particules solides par une technique de granulation sèche ou humide, d’extrusion ou de fusion avantageusement dans ce dernier cas le liant possèdera un point de fusion inférieur à 100°C et préférentiellement inférieur à 80°C Par substances « faiblement solubles » dans les fluides digestifs au sens de l’invention on entend une substance dont la solubilité aqueuse est inférieure à 1mg/ml soit 0,1% du poids du composé dans l’eau Composition La présente invention a donc pour objet une composition comprenant au moins de l’acide élénolique et au moins un agent acidifiant. L’invention a également pour objet une composition qui présente un pH acide, préférentiellement inférieur à 4,5, comprenant au moins de l’acide élénolique. Le pH de la composition, lorsque la composition est sous forme solide, est préférentiellement le pH de la composition mise dans l’eau. Selon un mode de réalisation préféré, l’invention a pour objet une composition présentant un pH acide, préférentiellement inférieur à 4,5, comprenant de l’acide élénolique et au moins un agent acidifiant. De façon préférée le pH de la composition est donc inférieur à 4,5, préférentiellement inférieur à 4. Le pH est préférentiellement compris entre 1 et 4,5, encore plus préférentiellement entre 2 et 4 et avantageusement entre 2 et 3,5, préférentiellement entre 2,5 et 3,5 afin de ne pas présenter un caractère trop acide pour les muqueuses. L’agent acidifiant dans la composition peut être par exemple un acide organique ou minéral (tel que l’acide chlorhydrique ou phosphorique), ou toute substance à caractère acide tel qu’un acide aminé à caractère acide comme l’acide glutamique. Il peut également s’agir d’une substance thérapeutique à caractère acide tel que l’acide ascorbique ou l’acide acétylsalicylique. La composition décrite dans l’invention peut comporter un mélange de plusieurs agents acidifiants, au moins deux, comme par exemple un mélange d’acide citrique et d’acide ascorbique. Préférentiellement, l’agent acidifiant est un acide organique, en particulier un acide organique de grade pharmaceutique ou alimentaire. Ledit acide organique peut être utilisé seul ou en mélange et choisi notamment parmi l’acide citrique, l’acide tartrique, l’acide lactique, l’acide malique, l’acide ascorbique, l’acide sorbique, l’acide propionique, l’acide fumarique. L’acide élénolique peut être une molécule naturelle c’est-à-dire une molécule obtenue par un procédé d’extraction à partir d’un organisme vivant naturel tel que l’olivier ou bien une molécule de synthèse c’est-à-dire une molécule obtenue en utilisant en tout ou partie un procédé de synthèse ou hémisynthèse chimique ou biotechnologique. Lorsque l’acide élénolique est obtenu à partir d’un organisme naturel, il peut s’agir d’acide élénolique extrait d’olivier. Selon un mode de réalisation, l’acide élénolique est préférentiellement présent sous forme d’un extrait d’olivier comprenant de l’acide élénolique. Ainsi la composition selon l’invention peut comprendre un extrait d’olivier comprenant au moins 0,1% en poids d’acide élénolique, préférentiellement entre 0,1 et 10% en poids, et en particulier entre 0,1 et 5% en poids (pourcentages en poids par rapport au poids total de l’extrait sec). Selon un mode de réalisation l’extrait d’olivier est un extrait titré en acide élénolique. L’extrait d’olivier peut être un extrait de tout ou partie de l’olivier, en particulier des feuilles, des tiges et/ou des fruits (pression des olives). Préférentiellement l’extrait d’olivier est un extrait obtenu en tout ou partie à partir au moins des feuilles d’olivier, et selon un mode de réalisation il s’agit d’un extrait obtenu uniquement à partir de feuilles d’olivier. Si l’acide élénolique n’est pas obtenu directement selon une technique d’extraction, il peut potentiellement être obtenu par une technique de synthèse ou d’hémisynthèse organique ou via un procédé biologique à partir de précurseurs tels que l’oleuropéine par exemple. Préférentiellement, dans la composition selon l’invention, le ratio acide élénolique / agent acidifiant est compris entre 10/1 et 1/10, préférentiellement entre 5/1 et 1/5 en fonction de la nature et du pouvoir acidifiant de l’acide, ainsi que la composition finale du produit notamment du pH de la composition sans l’agent acidifiant. Préférentiellement, une dose de composition selon l’invention comprend au moins 1 mg d’acide élénolique, encore plus préférentiellement entre 1 et 100 mg, notamment entre 1 et 50 mg et en particulier entre 1 et 20 mg. Il s’agit préférentiellement d’une dose quotidienne pour un être humain. Préférentiellement l’agent acidifiant est présent dans une quantité permettant d’obtenir une composition présentant un pH acide, en particulier un pH inférieur à 4,5. En plus de l’acide élénolique, la composition selon l’invention peut comprendre au moins un autre principe actif, préférentiellement au moins un autre principe actif capable de renforcer l’immunité d’un être humain ou d’un animal. Ledit principe actif peut être choisi parmi des vitamines telles que la vitamine A, la vitamine D, la vitamine C, la vitamine B6, l'acide folique et la vitamine B12 ou des minéraux tel que le fer, le cuivre, le Magnésium, le sélénium et le zinc qui contribuent au fonctionnement normal du système immunitaire. Il peut également s’agir de probiotiques ou des substances ayant un impact significatif sur la régulation du microbiote (ou flore microbienne intestinale), de certains champignons comme le shitaké ou encore des substances végétales par exemple comme l’échinacée, le ginseng, le sureau, le thym, l’ail, le curcuma, le cassis, le cyprès, l’arbre à thé, l’acérola qui peuvent notamment être utilisés sous forme d’extraits. A noter que ces constituants peuvent également être mélangés entre eux afin de composer des combinaisons aux propriétés renforcées. Parmi les immunostimulants d’origine naturelle on peut également citer les immunostimulants d’origine microbienne qui consistent généralement en des compositions riches en acides nucléiques et en acides aminés d’origine microbienne. Enfin on peut également citer des substances médicinales permettant de lutter contre des infections de type bactérienne, virale, parasitaire. Parmi les substances minérales évoquées précédemment on pourra citer par exemple le zinc notamment sous forme de sels ou de complexes de zinc acceptables pour une utilisation comme médicament ou complément alimentaire. A titre d’exemple on pourra citer le citrate de Zinc, le gluconate de Zinc, le sulfate de Zinc, le bisglycinate de Zinc. La composition selon l’invention peut se présenter sous toute forme, en particulier sous toute forme adaptée à une administration par voie orale. Préférentiellement, elle se présente sous forme solide, en particulier sous une forme solide adaptée à une administration par voie orale. Il peut s’agir notamment d’une dose unitaire en particulier d’une forme orale solide unitaire. Selon un mode de réalisation, la composition selon l’invention se présente sous forme de microparticules ou de microgranules. Préférentiellement la taille des microgranules ou des microparticules est comprise entre 10 et 2000 µm, encore plus préférentiellement entre 50 et 500 µm, et en particulier entre 200 et 500 µm. Cette taille est particulièrement avantageuse pour que les microparticules ou microgranules soient dégluties facilement et sans effort pour la personne ou l’animal qui les ingère, tout en présentant à la fois i) un faible risque d’inhalation de poussières ou de très petites particules et ii) un bon écoulement pour faciliter le conditionnement du produit. La composition selon l’invention sous forme solide peut se présenter sous forme d’une poudre, d’une poudre agglomérée, d’un comprimé ou d’une gélule. Selon un mode de réalisation préférée, la composition selon l’invention se présente sous forme de microparticules ou de microgranules non agglomérées et conditionnées en l’état ou sous forme de gélule. Alternativement ces particules peuvent être agglomérées par un processus mécanique pour former un comprimé. Dans le cas où la composition selon l’invention se présente sous forme d’une poudre, et en particulier sous forme d’une poudre de microparticules ou de microgranules, elle peut être conditionnée dans un stick prêt à l’emploi ou sachet prêt à l’emploi. L’invention a donc également pour objet un stick ou sachet prêt à l’emploi comprenant une composition selon l’invention sous la forme d’une poudre. Avantageusement, selon un mode de réalisation, la composition selon l’invention est sous une forme solide ne nécessitant pas une étape de dilution préalable dans l’eau lors de la prise de produit par l’être humain ou l’animal. L’invention peut ainsi avoir pour objet particulier un stick ou sachet prêt à l’emploi comprenant une composition selon l’invention sous forme d’une poudre ne nécessitant pas une étape de dilution préalable dans l’eau lors de la prise de produit par l’être humain ou l’animal. En plus du ou des principes actifs et du ou des agents acidifiants, la composition selon l’invention, lorsqu’elle se présente sous forme solide, comprend préférentiellement également des excipients. Selon un mode de réalisation particulier, elle comprend au moins un ingrédient permettant d’assurer la cohésion des microparticules ou des microgranules, en particulier au moins un liant ou agent liant, lequel peut être mis en œuvre par exemple selon une technique de granulation, d’extrusion ou d’atomisation. Le liant est préférentiellement choisi parmi des polymères naturels ou synthétiques, incluant leurs éventuels mélanges. En particulier, il peut être choisi parmi l’amidon et ses dérivés, la cellulose et ses dérivés, le polyéthylène glycol, la polyvinylpyrrolidone ou povidone, et leurs mélanges. La composition selon l’invention est destinée à libérer l’acide élénolique au niveau de la barrière intestinale. Aussi, la composition selon l’invention comprend préférentiellement également au moins un agent permettant le contrôle de la libération du ou des principes actifs de la composition. Ledit agent de contrôle de la libération du ou des principes actifs de la composition peut être choisi notamment parmi les polymères à solubilité pH dépendante, les polymères à pouvoir gélifiant, les substances faiblement solubles dans les fluides digestifs, et leurs mélanges. De façon préférée, ledit agent de contrôle de la libération du ou des principes actifs de la composition est choisi parmi les polymères naturels (amidon , cellulose), les polymères synthétiques (PVP), des agents permettant de maintenir la cohésion des microparticules ou des microgranules préférentiellement jusqu’au site d’absorption intestinal dans l’organisme tels que des polymères à solubilité pH dépendante (poly méthacrylates), à pouvoir gélifiant (cellulose, alginate), ou encore des substances faiblement solubles dans les fluides digestifs tels que des lipides à haut point de fusion (ester de glycérol) et leurs mélanges. Ainsi l’agent de contrôle de la libération du ou des principes actifs de la composition peut être notamment choisi parmi les polyméthacrylates, la cellulose, les alginates, les esters de glycérol et leurs mélanges. Procédé Il existe plusieurs procédés qui permettent de préparer la composition selon l’invention. Il peut s’agir d’un simple mélange sec de constituants solides permettant de former une poudre contenant plusieurs constituants et selon un procédé de mélange bien connu de l’homme du métier. Selon un mode de réalisation, la composition selon l’invention est donc obtenue par mélange des constituants sec pour obtenir un mélange homogène. Dans ce cas le procédé peut comprendre le mélange des différents constituants sous forme d’une poudre sèche (granulométrie préférentiellement inférieure à 100 µm) dans un mélangeur jusqu’à obtention d’un mélange homogène, les constituants étant introduits successivement après avoir été préalablement pesés et mélangés pendant une durée nécessaire pour assurer une bonne homogénéité du mélange final. Dans d’autres cas, les constituants du mélange peuvent être introduits dans un véhicule liquide tel que l’eau de façon à former une solution ou une suspension. Lorsque la composition selon l’invention se trouve sous forme solide à base de microgranules ou microparticules, elle peut être obtenue par un procédé qui comprend au moins la mise en œuvre des étapes suivantes : - dans un mélangeur pesage et introduction des différents constituants du mélange successivement pendant une durée nécessaire (préférentiellement entre 10 et 20 minutes) pour avoir un mélange homogène, - dans un deuxième temps, l’homme de l’art pourra effectuer une granulation humide à l’aide d’un liquide de mouillage adapté (en général de l’eau) cette étape étant suivie d’un séchage. Lorsque la composition se présente sous forme solide, en particulier sous forme de microgranules ou de microparticules, on peut utiliser une technique de granulation sèche ou humide bien connue de l’homme du métier, ou à titre de variante une technique de granulation à l’aide d’un agent fusible encore appelée granulation par fusion. L’obtention du grain pourra se faire à l’aide de simples mélangeurs granulateurs bien connus de l’homme du métier ou des mélangeurs utilisant un système d’air fluidisé permettant à la fois d’effectuer l’opération de granulation en phase humide et le séchage dans le même réacteur. Ces équipements peuvent également être utilisés avantageusement pour effectuer des opérations de granulation par fusion évoquée ci-dessus. Suivant le cas il pourra être avantageux d’utiliser un système d’extrusion suivie d’une sphéronisation bien connue de l’homme du métier notamment lorsque des caractéristiques de forme sphérique de granules sont recherchées. Enfin, l’homme du métier pourra également utiliser une technique de nébulisation suivie d’un séchage ou suivant le cas d’un refroidissement pour former des microparticules ou microgranules sous forme solide (encore appelées dispersions solides) Cette technique peut être mise en œuvre notamment lorsque l’agent acidifiant est un acide se présentant sous forme liquide. Dans pareil cas, un mode de réalisation peut consister à procéder à un mélange en milieu liquide (de préférence un milieu aqueux) des différents composés, suivi d’un séchage par une technique appropriée de la solution contenant l’acide élénolique et ledit acide afin de former des particules solides encore appelées dispersions solides comprenant au moins l’acide élénolique et ledit acide. Utilisation s La composition selon l’invention est adaptée pour une utilisation chez l’être humain ou chez l’animal sous forme de complément alimentaire ou de médicament. Elle présente des effets en particulier pour stimuler le système immunitaire et renforcer l’immunité et peut être utilisée notamment pour des applications à visée anti-inflammatoires, antioxydantes et antivirales. Par rapport au compositions connues d’acide élénolique, , la composition d’acide élénolique selon l’invention présente une amélioration significative de la perméabilité membranaire. Cette propriété particulière découle de l’environnement acide de l’acide élénolique au niveau de la barrière intestinale. Par amélioration significative de la perméabilité membranaire on entend préférentiellement une amélioration d’au moins 25% de la perméabilité membranaire de l’acide élénolique selon les conditions d’essais décrites dans la partie exemples et essais de la présente demande, préférentiellement plus de 50%, et de façon particulièrement avantageuse plus de 75% d’augmentation de la perméabilité membranaire. Cette augmentation de la perméabilité et de la biodisponibilité permet d’envisager une utilisation efficace de la composition selon l’invention pour renforcer l’immunité et/ou stimuler le système immunitaire chez l’être humain ou l’animal. Ainsi l’invention a pour objet une composition selon l’invention pour son utilisation comme médicament ou complément alimentaire chez l’être humain ou l’animal, en particulier dans la prévention ou le traitement de maladies virales et/ou inflammatoires et/ou pour une action antioxydante. L’invention peut avoir pour objet l’utilisation d’une composition selon l’invention comme complément alimentaire. L’invention a également pour objet une composition selon l’invention pour son utilisation pour renforcer l’immunité d’un être humain ou d’un animal. De façon spécifique, la composition selon l’invention peut être utilisée dans la prévention ou le traitement des maladies impliquant des virus sensibles à l’acide élénolique tels que des virus de type influenza, des coronavirus, rhinovirus. Plus largement, elle peut être utilisée dans la prévention ou le traitement de maladies virales, fongiques ou bactériennes, en particulier de maladies d’origine bactériennes, fongiques ou virales à germes sensibles à l’acide élénolique. Il peut s’agir par exemple des maladies d’origine bactériennes, fongiques ou virales de la sphère orale, buccale ou respiratoire. Quand ces maladies sont d’origine virale il peut s’agir par exemple de rhume, de rhinopharyngites, de grippe ou d’herpès. L’invention a donc également pour objet une composition selon l’invention pour ces utilisations. Préférentiellement, la composition selon l’invention est utilisée à raison d’une à deux administrations orales quotidiennes sur une durée de plusieurs jours à plusieurs semaines. De façon usuelle, la dose active par administration orale est comprise entre 1 à 50 mg d’acide élénolique L’invention est à présent illustrée par des exemples non limitatifs de compositions selon l’invention et par des résultats. Exemples Exemple 1 : composition A à base d’acide él é nolique selon l’invention Cet exemple est une composition A à base d’acide élénolique telle que décrite dans le tableau 1. Ingrédients Composition centésimale Extrait sec de feuille d’olivier titré à 4% en acide Elénolique 81,30% Citrate de Zinc 13% Acide Citrique 5,70% Total 100,00% La composition est un mélange sec obtenu comme suit : dans un mélangeur adapté on a pesé puis introduit successivement les différents constituants du mélange pendant une durée nécessaire de l’ordre de 5 à 10 minutes pour avoir un mélange homogène. Exemple 2 : composition A ’ à base d’acide élénolique selon l’invention Cet exemple est une composition A’ à base d’acide élénolique telle que décrite dans le tableau 2. Il s’agit de la composition A sans agent acidifiant. Ingrédients Composition centésimale Extrait sec de feuille d’olivier titré à 4% en acide Elénolique 86,2% Citrate de Zinc 13,8% Total 100,00% La composition est un mélange sec obtenu comme suit : dans un mélangeur adapté on a pesé puis introduit successivement les différents constituants du mélange pendant une durée nécessaire pour avoir un mélange homogène. Exemple 3 : composition B à base d’acide élénolique selon l’invention Cet exemple est une composition B à base d’acide élénolique telle que décrite dans le tableau 3. Ingrédients Composition centésimale Extrait sec de feuille d’olivier titré à 4% en acide Elénolique 15,00% Citrate de Zinc 2,42% Acide Citrique 1,00% Cellulose 35,00% Fraction de levures 5,00% Erythritol 31,79% Dibénéhate de glycérol 2,14% Amidon de riz 2,57% Arôme 5,00% Edulcorant 0,08% Total 100,00% La composition est un mélange sec sous forme de granulés obtenu comme suit : dans un mélangeur adapté on a pesé puis introduit successivement les différents constituants du mélange pendant une durée nécessaire pour avoir un mélange homogène puis procédé à une granulation humide et un séchage selon un mode opératoire bien connu de l’homme du métier. Le mélange initial des différents constituants dure environ 10 à 15 minutes. La phase de granulation prend entre 15 à 20 minutes suivant le débit d’introduction u liquide de granulation (ici de l’eau) dans le mélangeur. Il est usuel d’utiliser un système de pulvérisation fine du liquide durant cette étape afin d’obtenir une meilleure répartition du liquide au sein du mélange pulvérulent. Lorsque le grain est formé, on procède à une étape de séchage. Le temps de séchage pour un séchage à l’étuve du grain formé à une température de 40°C peut durer plusieurs heures (6heures à 12 heures) avant d’obtenir l’humidité résiduelle souhaitée généralement inférieure à 6%. Si on utilise un granulateur sécheur, le temps de séchage final sera significativement réduit du fait de la technologie de fluidisation utilisée bien connue de l’homme du métier (1h maximum). La taille moyenne des microgranules obtenues est comprise entre 200µm et 500µm. Exemple 4 : compositions C selon l’invention et D hors invention Cet exemple décrit des compositions C et D ayant comme base la composition B. Ces compositions sont décrites dans le tableau 4. Ingrédients Composition centésimale C Composition centésimale D Extrait sec de feuille d’olivier titré à 4% en acide Elenolique 15,00% 15,00% Citrate de Zinc 2,42% 2,42% Acide Citrique 2,00% 0,00% Cellulose 34,00% 36,00% Fraction de levures 5,00% 5,00% Erythritol 31,79% 31,79% Dibénéhate de glycérol 2,14% 2,14% Amidon de riz 2,57% 2,57% Arôme 5,00% 5,00% Edulcorant 0,08% 0,08% Total 100,00% 100,00% Les compositions sont des mélanges secs sous forme de granulés obtenus comme dans l’exemple 3. E tude de la perméabilité membranaire de l’acide élénolique Cette étude consiste analyser de façon spécifique le potentiel de perméabilité membranaire de l’acide élénolique afin d’en déduire son absorption et sa biodisponibilité par voie orale. Dans cet essai c’est en particulier la perméabilité membranaire de l’acide élénolique contenu dans un extrait de feuille d’olivier qui a été étudié en utilisant un modèle d’étude membranaire dénommé PAMPA (Parallel Artificial Membrane Permeability Assay - Essai parallèle de perméabilité des membranes artificielles) décrit dans la littérature et connu de l’homme du métier pour être largement utilisé dans l’industrie pharmaceutique en vue de la prédiction de l'absorption orale. Ce test de perméabilité de membrane artificielle parallèle (PAMPA) est utilisé comme modèle in vitro de perméation transcellulaire passive. Il est simple et évite les complexités du transport actif, ce qui permet d’évaluer et classifier les substances étudiées en se basant uniquement sur une propriété de perméabilité simple. Le schéma de principe du test est représenté sur la . La méthode consiste à introduire le composé à tester dans un compartiment donneur situé en partie supérieure du dispositif et utilise généralement une plaque à 96 puits adaptée à une lecture à haut débit. La perméation du composé à travers une membrane de nature lipidique artificielle est quantifiée par une technique chromatographique adaptée après une incubation de plusieurs heures à température ambiante ou à 37°C. Des substances témoins de différents niveaux de perméabilité (Faible, Moyenne et Elevée) sont utilisées pour évaluer l’intégrité de la membrane, valider les conditions de l’essai et évaluer la perméabilité de la substance d’essai afin d’en déduire son classement. On a ainsi évalué la perméabilité membranaire de l’acide élénolique contenu dans un extrait de feuille d’olivier du marché en utilisant ce modèle de perméabilité de membrane artificielle parallèle selon les conditions opératoires décrites ci-après: - Compartiment Donneur : Un volume de 200µl de solution aqueuse d’extrait de feuille d’Olivier dosée à 2mg/ml d’Acide élénolique est déposé dans le compartiment donneur. A noter que le pH de cette solution titrée en acide élénolique obtenue à partir de l’extrait de feuille d’olivier est de 4,66, - Temps d’incubation : 18h - Température de l’essai : 37°C - Méthode d’analyse : Chromatographie liquide haute performance (Agilent Technologies) Injecteur automatique 1200 series Détecteur à barette de diodes (DAD) 1200 series Colonne C18 en phase inverse Prontosil C18AQ (4,6 mm x 250 mm, 5 μm) Spectrophotomètre FLUOSTAR Omega (BMG Labtech). Toutes les analyses ont été répétées 3 fois. Les valeurs de perméabilité exprimées en cm/s ont été obtenues après analyse des concentrations dans les compartiments donneur et accepteur en utilisant la formule de calcul suivante connue de l’homme du métier et rappelée ci-après (dans laquelle Pe représente la valeur de la perméabilité) : Pe = C x -Ln (1 – Concentration Accepteur /Concentration Equilibre) avec C=7,72 x 10 -6 pour un temps d’incubation de 18h . Les valeurs de perméabilité obtenues sont indiquées dans le tableau 5 ci-dessous et sur la . Substance étudiée Perméabilité (cm/s) Niveau de Perméabilité Témoin Perméabilité Haut 7.84 x 10 -6 Haut Témoin Perméabilité Moyen 3.43 x 10 -6 Moyen Témoin Perméabilité Faible 1.25 x 10 -6 Faible Solution titrée en Acide élénolique 1.29 x 10 -6 Faible On constate que la valeur de perméabilité membranaire obtenue pour l’acide élénolique est comparable à celle du témoin de faible perméabilité et que le taux de passage transmembranaire correspondant calculé pour l’acide élénolique est évalué à 6.14 % (+/- 0.15%). La faible perméabilité membranaire de l’acide élénolique n’est donc pas idéale pour des effets in vivo adaptés. Etude comparée de la perméabilité membranaire de la composition A Pour cette étude, une solution aqueuse à base de la composition A titrée à 2 mg/ml d’acide élénolique a été préparée. Le pH de cette solution est de 3,43. On a introduit 200 µl de cette solution aqueuse dans le compartiment donneur du modèle de perméabilité membranaire parallèle artificielle décrit précédemment selon les mêmes conditions opératoires. Toutes les analyses ont été répétées 3 fois Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous et sur la . Substance étudiée Perméabilité (cm/s) Niveau de Perméabilité Témoin Perméabilité Haut 7.84 x 10 -6 Haut Témoin Perméabilité Moyen 3.43 x 10 -6 Moyen Témoin Perméabilité Faible 1.25 x 10 -6 Faible Solution titrée en Acide Elénolique 1.29 x 10 -6 Faible Composition A selon l’exemple 1 de l’invention 2.73 x 10 -6 Faible à Moyen On constate que la valeur de perméabilité membranaire obtenue pour l’acide élénolique est comparable à celle du témoin de faible perméabilité comme observé précédemment. En revanche, la valeur de la perméabilité de l’acide élénolique contenue dans la composition A selon l’invention est significativement augmentée. Le taux de passage de passage transmembranaire correspondant calculé pour l’acide élénolique est de 6.14 % (+/- 0.15%) et de 11.9 % (+/-0.04%) pour l’acide élénolique contenu dans la composition A soit un accroissement du passage membranaire d’environ + 94%. Les données issues de ces essais réalisés sur un modèle de perméabilité de membrane artificielle parallèle permettent de prédire une absorption améliorée ainsi qu’une biodisponibilité orale améliorée de l’acide élénolique contenue dans la composition A selon l’invention en comparaison avec une solution d’acide élénolique. Etude comparée de la perméabilité membranaire de la composition B Pour cette étude, une solution aqueuse à base de la composition B titrée à 2 mg/ml d’acide élénolique a été préparée puis centrifugée afin d’éliminer les particules non solubles. Le pH de cette solution est de 4,02. On a introduit 200 µl de cette solution aqueuse (après centrifugation) dans le compartiment donneur du modèle de perméabilité membranaire parallèle artificielle décrit précédemment selon les mêmes conditions opératoires. Toutes les analyses ont été répétées 3 fois Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous et sur la . Substance étudiée Perméabilité (cm/s) Niveau de Perméabilité Témoin Perméabilité Haut 7.84 x 10 -6 Haut Témoin Perméabilité Moyen 3.43 x 10 -6 Moyen Témoin Perméabilité Faible 1.25 x 10 -6 Faible Solution titrée en Acide Elénolique 1.30 x 10 -6 Faible Composition B selon l’exemple 2 de l’invention 2.22 x 10 -6 Faible à Moyen On constate que la valeur de perméabilité membranaire obtenue pour l’acide élénolique est comparable à celle du témoin de faible perméabilité comme observé précédemment. En revanche, la valeur de la perméabilité de l’acide élénolique contenue dans la composition B étudiée est significativement augmentée. Le taux de passage de passage transmembranaire correspondant calculé pour l’acide élénolique est de 6,18 % (+/- 0.32%) et de 9,14 % (+/-0.44%) pour l’acide élénolique contenu dans la composition B soit un accroissement du passage membranaire d’environ + 48%. Les données issues de ces essais réalisés sur un modèle de perméabilité de membrane artificielle parallèle permettent de prédire une absorption améliorée ainsi qu’une biodisponibilité orale améliorée de l’acide élénolique contenue dans la composition B en comparaison avec une solution d’acide élénolique. Cependant cette amélioration parait plus faible en comparaison avec la valeur obtenue pour la composition A. Cette différence s’explique par un probable effet « tampon » lié à la présence de divers additifs en quantité significative dans la composition B en comparaison avec la composition A. Etude comparée de la perméabilité membranaire des compositions C et D Cette étude a été réalisée en vue de montrer plus spécifiquement l’influence du pH et de la dose d’acide citrique, sur la perméabilité membranaire de l’acide élénolique en particulier au sein d’une composition complexe. Pour cette étude, une solution aqueuse à base de la composition C titrée à 2 mg/ml d’acide élénolique et une solution aqueuse à base de la composition D titrée à 2 mg/ml d’acide élénolique ont été préparées puis centrifugées afin d’éliminer les particules non solubles. Le pH de la solution pour la composition C est de 3,52 et le pH de la solution pour la composition D est de 5,05. Puis pour chacune des compositions C et D en solution, on a introduit 200 µl dans le compartiment donneur du modèle de perméabilité membranaire parallèle artificielle décrit précédemment selon les mêmes conditions opératoires. Toutes les analyses ont été répétées 3 fois Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous et sur la . Substance étudiée Perméabilité (cm/s) Niveau de Perméabilité Témoin Perméabilité Haut 7.84 x 10 -6 Haut Témoin Perméabilité Moyen 3.43 x 10 -6 Moyen Témoin Perméabilité Faible 1.25 x 10 -6 Faible Solution titrée en Acide élénolique 1.30 x 10 -6 Faible Composition C selon l’exemple 3 (invention) 3.01 x 10 -6 Moyen Composition D selon l’exemple 3 (hors invention) 4,43 x 10 -7 Faible à Nul La valeur de perméabilité membranaire obtenue pour l’acide élénolique est comparable à celle du témoin de faible perméabilité comme observé précédemment alors que la valeur de perméabilité membranaire obtenue pour l’acide élénolique dans la composition C est comparable à celle du témoin de perméabilité moyenne traduisant une amélioration significative de la perméabilité membranaire. En revanche, la valeur de la perméabilité de l’acide élénolique contenue dans la composition D est significativement diminuée. Le taux de passage de passage transmembranaire correspondant calculé pour l’acide élénolique est de 6,18 % (+/- 0.32%) et de 11,82 % (+/-0.66%) pour l’acide élénolique contenu dans la composition C soit un accroissement du passage membranaire d’environ + 91%. En revanche le taux de passage de passage transmembranaire pour l’acide élénolique contenu dans la composition D (ne contenant pas d’acide citrique) est significativement réduit (2,23%) et inférieur à la valeur de référence de l’acide élénolique non formulé. Etude comparée de la perméabilité membranaire de la composition A ’ Pour cette étude, une solution aqueuse à base de la composition A’ titrée à 2 mg/ml d’acide élénolique a été préparée. Le pH de cette solution est de 4,62. On a introduit 200 µl de cette solution A’ dans le compartiment donneur du modèle de perméabilité membranaire parallèle artificielle décrit précédemment selon les mêmes conditions opératoires. Toutes les analyses ont été répétées 3 fois Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous et sur la . Substance étudiée Perméabilité (cm/s) Niveau de Perméabilité Témoin Perméabilité Haut 7.84 x 10 -6 Haut Témoin Perméabilité Moyen 3.43 x 10 -6 Moyen Témoin Perméabilité Faible 1.25 x 10 -6 Faible Solution titrée en Acide Elénolique 1.29 x 10 -6 Faible Composition A selon l’exemple 1 de l’invention 2.73 x 10 -6 Faible à Moyen Composition A’ selon l’exemple 1 de l’invention 1.29 x 10 -6 Faible On constate que la valeur de perméabilité membranaire obtenue pour l’acide élénolique est comparable à celle du témoin de faible perméabilité comme observé précédemment. De même, la valeur de la perméabilité de l’acide élénolique contenue dans la composition A selon l’invention est significativement augmentée. En revanche, la valeur de la perméabilité de l’acide élénolique contenue dans la composition A’ sans agent acidifiant est similaire à celle du témoin de faible perméabilité et à la solution titrée d’acide élénolique non formulée. Cet essai comparatif montre qu’une composition ne contenant pas d’acide citrique n’entraine pas de modification de pH et ne permet pas de modifier significativement la perméabilité membranaire de l’acide élénolique. Les données issues de ces essais réalisés sur un modèle de perméabilité de membrane artificielle parallèle permettent de prédire une absorption améliorée ainsi qu’une biodisponibilité orale améliorée de l’acide élénolique contenue dans la composition A selon l’invention en comparaison avec une solution d’acide élénolique ou d’une composition d’acide élénolique sans agent acidifiant (A’). Les données issues de ces différents essais réalisés sur un modèle de perméabilité de membrane artificielle parallèle confirment que : - la présence d’un agent acidifiant tel que l’acide citrique dans la composition permet d’améliorer significativement la perméabilité membranaire de l’acide élénolique, en particulier lorsque la composition comprend un pH inférieur à 4,5, encore plus préférentiellement inférieur à 4 et notamment un pH compris entre 2,5 et 3,5. - dans le cas d’une composition complexe associant de nombreux ingrédients à l’origine d’un effet tampon, il est nécessaire d’ajuster la quantité d’agent acidifiant dans la composition pour obtenir une amélioration significative de la perméabilité membranaire de l’acide élénolique. Composition comprenant au moins de l’acide élénolique et au moins un agent acidifiant. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le pH de la composition est inférieur à 4,5. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l’agent acidifiant est un acide minéral ou organique de grade pharmaceutique ou alimentaire. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que l’acide organique de grade pharmaceutique ou alimentaire est choisi parmi l’acide citrique, l’acide tartrique, l’acide lactique, l’acide malique, l’acide ascorbique, l’acide acétylsalicylique, l’acide sorbique, l’acide propionique, l’acide fumarique, l’acide glutamique et l’acide aspartique. Composition selon l’une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu’il comprend un extrait d’olivier comprenant entre 0,1 et 10% d’acide élénolique. Composition selon l’une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu’il comprend un mélange de plusieurs agents acidifiants. Composition selon l’une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu’elle comprend également au moins un liant de granulation, d’extrusion ou d’atomisation. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que le liant est choisi parmi des polymères synthétiques, des polymères naturels, et leurs mélanges. Composition selon la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce que le liant est choisi parmi l’amidon et ses dérivés, la cellulose et ses dérivés, le polyéthylène glycol, la polyvinylpyrrolidone, et leurs mélanges. Composition selon l’une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu’elle comprend également au moins un agent permettant le contrôle de la libération du ou des principes actifs de la composition. Composition selon la précédente revendication, caractérisée en ce que l’agent de contrôle de la libération du ou des principes actifs de la composition est choisi parmi les polymères à solubilité pH dépendante, les polymères à pouvoir gélifiant, les substances faiblement solubles dans les fluides digestifs, et leurs mélanges. Composition selon la revendication 10 ou 11, caractérisée en ce que l’agent de contrôle de la libération du ou des principes actifs de la composition est choisi parmi les polyméthacrylates, la cellulose, les alginates, les esters de glycérol et leurs mélanges. Composition selon l’une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu’elle comprend également au moins un autre principe actif. Composition selon la précédente revendication, caractérisée en ce qu’elle comprend au moins un autre principe actif capable de stimuler ou renforcer l’immunité d’un être humain ou d’un animal. Composition selon l’une des revendication 13 ou 14, caractérisée en ce qu’elle comprend au moins un sel de Zinc et/ou un complexe de Zinc. Composition selon l’une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu’elle se présente sous une forme solide adaptée à une administration par voie orale. Composition selon la précédente revendications, caractérisée en ce qu’elle se présente sous forme de microparticules ou de microgranules. Composition selon la précédente revendication, caractérisée en ce que la taille des microgranules ou des microparticules est compris entre 10 et 2000 µm, préférentiellement entre 50 et 500 µm, encore plus préférentiellement entre 200 et 500 µm. Composition selon l’une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu’elle se présente sous forme d’une poudre, d’une poudre agglomérée, d’un comprimé ou d’une gélule. Stick ou sachet prêt à l’emploi comprenant une composition selon la précédente revendication sous forme d’une poudre. Composition selon l’une revendications 1 à 19 pour son utilisation comme médicament ou complément alimentaire chez l’être humain ou l’animal. Composition pour son utilisation selon la précédente revendication, dans la prévention ou le traitement de maladies virales et/ou inflammatoires et/ou pour une action antioxydante. Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 21 ou 22, pour renforcer l’immunité d’un être humain ou d’un animal. Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 21 à 23, dans la prévention ou le traitement de maladies d’origine bactérienne, fongique ou virale. Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 21 à 24, dans la prévention ou le traitement de maladies d’origine bactérienne, fongique ou virale à germes sensibles à l’acide élénolique. Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 21 à 25, dans la prévention ou le traitement de rhumes, de rhinopharyngites, de la grippe ou de l’herpès.