Brevet FR3120789A1 — publié le 20220923

La présente demande se rapporte à une composition de polysaccharides de levure comprenant des β(1,6)-glucanes, de préférence également des mannanes et des α-glucanes, caractérisée en ce que lesdits polysaccharides de levures sont extraits de fragments pariétaux de levures. Typiquement, les β-glucanes sont des β(1,6)-glucanes. Elle se rapporte également à un procédé d’obtention d’une telle composition comprenant au moins une étape de fractionnement d’une composition pariétale de levure(s) et d’extraction d’une fraction insoluble, et au moins une étape d’extraction d’une fraction soluble à partir de la fraction insoluble obtenue à l’étape a). La présente demande se rapporte enfin à une composition à visée thérapeutique, humaine ou vétérinaire, pour le traitement des pathologies gastro-intestinales associées à des microorganismes pathogènes ainsi qu’à son utilisation non thérapeutique pour l’amélioration du confort intestinal. Figure de l’abrégé : pas de figure ** Inhibiteurs glycosidiques de levure La présente divulgation se rapporte à un procédé d’obtention d’une composition de polysaccharides pariétaux de levures et à son utilisation pour le traitement de pathologies gastrointestinales ou pour la préparation de compléments alimentaires visant à améliorer le confort intestinal. Un déséquilibre du microbiote en espèces bactériennes pro-inflammatoires et anti-inflammatoires, tout comme la prédominance de certaines familles de bactéries (Entérobactéries, Fusobactéries), ou la raréfaction d'autres espèces ( Clostridi es , Faecalibacterium ) ont été décrits chez des personnes atteintes de maladies inflammatoires chroniques de l’intestin (MICI). Des souches spécialisées de Escherichia coli ( E. coli ) sont également responsables de diarrhées, de toxi-infections alimentaires, d’infections urinaires, de septicémies et de méningites (Kaper J.B., Nataro J.P., Mobley H.L. — Pathogenic Escherichia coli , Nature Review Microbiology, 2004 , 2 , 123- 1 40 ). En outre, de nombreuses études soutiennent maintenant le concept selon lequel le microbiote intestinal serait un facteur environnemental majeur pouvant moduler le risque de cancer colorectal. Ainsi, des bactéries commensales du microbiote pourraient être directement pro-oncogènes. C’est le cas par exemple, de certaines souches de E . coli produisant in vivo dans la lumière intestinale, une génotoxine dénommée colibactine, qui induit des dommages à l’ADN des entérocytes similaires à ceux induits par une irradiation de rayons ionisants gamma (Cuevas-Ramos G et al., « Escherichia coli induces DNA damage in vivo and triggers genomic instability in mammalian cells ». PNAS. U S A, 2010, 107, 11537-11542). De nombreux microorganismes ont déjà été décrits dans la littérature pour leurs applications bénéfiques chez l'homme sur le tractus digestif et pour leur intérêt nutritionnel, comme décrit, par exemple, dans WO 2006/021965. Ces microorganismes sont communément désignés alors par le terme probiotique qui correspond à des microorganismes vivants capables d'apporter à l'hôte un bénéfice sur la santé lorsqu'ils sont administrés en quantité adéquate (Joint FAO/WHO Expert Consultation Probiotics in food, FAO Food and nutrition paper Nr85, ISBN 92-5-105513-0). Plus particulièrement, l’utilisation de levures Saccharomyces cerevisiae ( S. cerevisiae ) pour traiter les pathologies associées aux entérobactéries est connue. Ainsi, la demande antérieure FR 2 928 652 enseigne que la souche de levure S . cerevisiae (CNCM I-3856, ScProl) présente un intérêt thérapeutique et prophylactique pour le traitement de pathologies gastro-intestinales associées aux microorganismes pathogènes en limitant notamment la colonisation et/ou l’invasion intestinale de ces microorganismes. En particulier, l’administration de cette levure entraine une diminution des entérobactéries au niveau du colon. Les résultats montrent que les fractions riches en mannoprotéines extraites de souches de levure (ScProl et/ou SCB1) sont capables d’inhiber in vitro l’adhésion et l’invasion de cellules épithéliales humaines par des souches de E. coli associées à la Maladie de Crohn, une des principales MICI (souches AIEC, Adherent Invasive E. Coli ). L’étude de Sivignon et al. (Inflamm Bowel Dis. 2015; 21(2):276-286) enseigne également que des composés pariétaux issus de la souche CNCM I-3856 diminuent la colonisation intestinale par les bactéries AIEC ainsi que les symptômes de colites associés dans un modèle murin mimant la maladie de Crohn. La conséquence de l’inhibition de l’adhésion des AIEC sur la paroi intestinale est une diminution importante de l’invasion des AIEC dans les tissus intestinaux et donc de leur pouvoir infectieux. Ces dernières années, une attention croissante a été accordée aux glucanes isolés de la paroi cellulaire des levures. Les glucanes pariétaux de levures ont ainsi été utilisés pour renforcer ou amorcer la réponse immunitaire chez les humains et les animaux dont la fonction immunologique est normale ou diminuée (G. Hetland. Curr. Med. Chem. – Anti-infective Agents 2003, 2:135; P.J. Rice, B.E. Lockhart, L.A. Barker, E.L. Adams, H.E. Ensley, D.L. Williams. Int. Immunopharmacol. 2004, 33:829). La demande WO 2009/103884 enseigne plus particulièrement, que les béta-glucanes pariétaux de levure (notamment la souche CNCM I-3856) limitent l’inflammation intestinale. Jawahara et al ., (PLoS One 2012; 7(7):e40648) divulgue en outre, que les fractions béta-glucanes de levures S . cerevisiae (notamment la souche LYSC 318.2) sont capables d’inhiber l’action pathogène de C andida albicans . Enfin, Pengkumsri et al., (Food Sci Technol, Campinas 2017, 31(1):124-130) divulgue que les fractions béta-glucanes ont des propriétés d’immuno-modulation qui pourraient être utiles dans le traitement des colites humaines. Il n’existe toujours pas actuellement, à la connaissance des inventeurs, de traitement curatif satisfaisant des MICI. La chirurgie, avec exérèse des parties lésées de l’intestin grêle, est parfois envisagée, mais il s’agit une opération handicapante dont les récidives sont fréquentes. On traite ainsi généralement uniquement les symptômes, tels que l’inflammation (par le biais d’anti-inflammatoires stéroïdiens ou non et d’anticorps dirigés contre des cytokines inflammatoires) et la douleur chronique (par le biais typiquement d’analgésiques tels que les cannabinoïdes). Chez les patients dont la maladie est évolutive, les médecins instaurent rapidement un traitement immunomodulateur, pour stopper les crises, éviter l’apparition de nouvelles lésions et prévenir les risques d’évolution tumorale liés aux états inflammatoires chroniques. Néanmoins ces traitements impliquent également des effets secondaires importants à moyen et long terme. Ainsi les corticoïdes sont de moins en moins utilisés. Il est donc essentiel d’une part de développer et de perfectionner les traitements prophylactiques existants, permettant d’améliorer le confort intestinal chez les sujets sains, et d’autre part de prévenir le développement de pathologies chez des sujets à risque et d’autre part développer des thérapies efficaces mieux tolérées pour les patients souffrant de pathologies gastro-intestinales comme les MICI. Il reste donc important de poursuivre l’effort d’innovation pour identifier de nouvelles solutions ayant une efficacité augmentée sur l’amélioration de la condition de vie des patients souffrant de pathologies gastro-intestinales notamment les pathologies impliquant des agents infectieux. En particulier, il serait tout à fait pertinent d’identifier de nouveaux ingrédients actifs ou compositions dont l’efficacité en termes d’action anti-adhésion et/ou anti-invasive est supérieure. Résumé Il est proposé une composition de polysaccharides de levure comprenant des β-glucanes et/ou des α-glucanes et/ou des mannanes, caractérisée en ce que lesdits polysaccharides de levures sont extraits de parois de levures. Typiquement, les β-glucanes sont des β(1,6)-glucanes. Dans certains modes de réalisation, la composition comprend en outre des mannanes et des α-glucanes. En particulier la présente demande propose une composition comprenant de 5 à 25 %, notamment de 10 à 20 %, d’α-glucanes ; de 30 à 50 %, notamment de 35 à 45 %, de β-glucanes (en particulier de β6-glucanes) ; et de 30 à 55 %, notamment de 40 à 50 %, de mannannes. Typiquement, les levures sont choisies parmi les levures du genre S accharomyces . Elles peuvent ainsi être choisies parmi le groupe comprenant les souches déposées auprès de la Collection Nationale de Culture de Microorganismes sous les numéros CNCM I-3799, CNCM I-3856, CNCM I-4407, CNCM I-4563, CNCM I-4812, CNCM I-4978, CNCM I-5128, CNCM I-5129, CNCM I-5268, et CNCM I-5269 et la souche déposée auprès de la Collection des levures industrielles DBVPG 6763. Selon un autre aspect, il est proposé un procédé d’obtention d’une composition de levure comprenant : a) au moins une étape de fractionnement (typiquement par incubation à chaud) d’une composition pariétale de levure(s) et de récupération (extraction) d’une fraction insoluble (appelée « fraction insoluble a ») ; et b) au moins une étape d’extraction d’une fraction soluble (appelée « fraction soluble b ») à partir de la fraction insoluble a), ladite fraction contenant des β-glucanes (en particulier des β6-glucanes), de préférence également des mannanes et généralement des α-glucanes – cette étape comprend typiquement au moins une étape d’incubation de la fraction soluble a) dans une solution d’acide faible, et de récupération (extraction) d’une fraction soluble (« fraction soluble b »). Typiquement, le procédé comporte une étape préliminaire d’obtention d’une fraction pariétale insoluble de levure(s). Le procédé comprend de préférence une étape a1) d’incubation de la fraction insoluble a) dans une solution de base forte, à l’issue de laquelle la fraction insoluble (appelée fraction insoluble a1) est récupérée. Lorsque cette étape intermédiaire est mise en œuvre, la fraction (ou composition) incubée dans la solution d’acide faible de l’étape b) décrite ci-dessus est alors la « fraction insoluble a1 ». La présente divulgation se rapporte également à une composition de polysaccharides de levure comprenant des β-glucanes, des mannanes et des α-glucanes telle que décrite dans la présente demande, notamment telle qu’obtenue selon le procédé ici décrit, pour son utilisation dans le traitement et/ou la prévention des pathologies gastro-intestinales. La présente invention se rapporte enfin à une utilisation non thérapeutique d’une composition telle que définie dans la présente divulgation, et notamment obtenue selon le procédé ici décrit, pour la préparation d’une composition alimentaire destinée à améliorer le confort gastro-intestinal et/ou à améliorer et maintenir l’homéostasie du microbiote intestinal. Les caractéristiques exposées dans les paragraphes suivants peuvent, optionnellement, être mises en œuvre. Elles peuvent être mises en œuvre indépendamment les unes des autres ou en combinaison les unes avec les autres. D’autres caractéristiques, détails et avantages apparaîtront à la lecture de la description détaillée ci-après, et à l’analyse des dessins annexés, sur lesquels : Fig. 1 : Schémas illustrant les différents protocoles mis en œuvre. Le schéma du haut (A) illustre l’extraction des différentes fractions de polysaccharides de levure à partir de levure entière ou d’écorces de levures. Le schéma du bas (B) correspond au procédé de l’invention dans laquelle les différentes fractions polysaccharidiques de levure sont extraites à partir d’écorces de levures. Fig. 2 Schéma du protocole de préincubation sur cellules épithéliales intestinales T84 et Caco-2. Les fractions extraites de levures sont incubées dans un premier temps avec les bactéries AIEC puis ajoutées aux cultures de cellules épithéliales intestinales organisées en épithélium. Le niveau d’adhésion résiduelle de la souche bactérienne AIEC LF82 est ensuite estimé pour des concentrations décroissantes de fractions de levure (1 ; 0,5 ; 0,25 ; 0,1 mg/mL). Fig. 3 Niveaux d'adhésion résiduelle (pourcentages) de la souche AIEC LF82 aux cellules T84 (protocole de préincubation) en présence de « fraction soluble a » (appelée également Fehling mannanes en raison du protocole d’extraction des phospho-peptidomannanes) (fraction 1, aussi nommée fraction soluble a »), ou de la « fraction soluble b » (fraction 3) obtenus à partir de la souche de levure entière CNCM I-3856 (moyennes ± sem; **:p Fig. 4 Niveaux d'adhésion résiduelle (pourcentages) de la souche AIEC LF82 aux cellules T84 (protocole de préincubation) en présence de β3-glucanes-phosphate (fraction 6) obtenue à partir de la souche de levure entière CNCM I-3856 (moyennes ± sem; **:p Fig. 5 Niveaux d'adhésion résiduelle (pourcentages) de la souche AIEC LF82 aux cellules T84 (protocole de préincubation) en présence de la « fraction soluble b » (fraction 3) obtenue à partir de la souche de levure entière CNCM I-3856 ou à partir d’écorces de levure CNCM I-3856 - (moyennes ± sem; * :p Fig. 6 Niveaux d'adhésion résiduelle (pourcentages) de la souche AIEC LF82 aux cellules T84 (protocole de préincubation) en présence de la « fraction soluble b » (fraction 3) obtenue à partir d’écorces de levure CNCM I-3856 ou à partir d’écorces de levure CNCM I-5268 (moyennes ± sem; * :p Fig. 7 Niveaux d'adhésion résiduelle (pourcentages) des cellules AIEC LF82 aux cellules T84 (protocole de préincubation) en présence de la « fraction soluble b » (fraction 3), α-glucanes (fraction 5), ou β6-glucanes (fraction 4) provenant d’écorces de levure CNCM I-5268 (moyennes ± sem; *:p Fig. 8 Niveaux d'adhésion résiduelle (pourcentages) de la souche AIEC LF82 aux TC7/Caco-2 (protocole de préincubation) en présence de la « fraction soluble a » (fraction 1) obtenue à partir de la souche de levure entière CNCM I-3856 ou de la souche de levure LV04, ou de la « fraction soluble b » (fraction 3) obtenue à partir de la souche de levure entière CNCM I-3856, ou à partir d’écorces de levure CNCM I-5268 (moyennes ± sem. ; **:p Fig. 9 Niveaux d'invasion résiduelle (pourcentages) des cellules TC7/Caco-2 par la souche bactérienne AIEC LF82 (protocole de préincubation) en présence de la « fraction soluble b » (fraction 3) provenant d’écorces de levure CNCM I-5268. Fig. 10 Graphique représentant le protocole d’administration des fractions de levure (FL : fraction de levure) in vivo chez la souris (modèle murin de colonisation par les AIEC). L’administration des fractions de levures est réalisée à la dose de 5mg/souris par voie orale. Fractions testées : « soluble a » (fraction 1), obtenue à partir de la souche de levure entière CNCM I-3856 ou « soluble b » (fraction 3), obtenue à partir de la souche de levure entière CNCM I-3856, ou à partir d’écorces de levure CNCM I-5268. Fig. 11 Estimation du nombre de bactéries AIEC LF82 dans les fèces de souris 2 ou 3 jours après infection des animaux en fonction de la fraction de levure administrée. Les résultats sont donnés en nombre de bactéries AIEC/g de fèces (box and whiskers, min. to max.) (FP : fraction pariétale). Fig. 12 Quantification des bactéries AIEC LF82 associées à la muqueuse intestinale de souris traitées ou non, avec les fractions de levures, 4 jours après l’infection. Les résultats sont donnés en nombre de bactéries AIEC/g de tissus (box and whiskers, min to max) (FP : fraction pariétale). Composition de polysaccharides de levure comprenant des β(1,6)-glucanes, caractérisée en ce que lesdits polysaccharides de levures sont extraits de fragments pariétaux de levures. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que la levure est choisie parmi les levures du genre S accharomyces . Composition selon l’une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que la levure est choisie parmi les levures de l’espèce S accharomyces cerevisiae , notamment obtenue à partir de l’une quelconque des souches déposées auprès de la Collection Nationale de Culture de Microorganismes sous les numéros CNCM I-3799, CNCM I-3856, CNCM I-4407, CNCM I-4563, CNCM I-4812, CNCM I-4978, CNCM I-5128, CNCM I-5129, CNCM I-5268, CNCM I-5269. Composition de polysaccharides de levure obtenue selon l’un des revendications 1 à 3 caractérisée en ce qu’elle comprend : - 5 à 25 %, notamment 10 à 20 %, d’α-glucanes, - 30 à 50 %, notamment, 35 à 45 % de β-glucanes, et - 30 à 55 %, notamment 40 à 50 % de mannanes. Procédé d’obtention d’une composition de levure selon l’une des revendications 1 à 3 comprenant : a) au moins une étape de fractionnement d’une composition pariétale de levure(s) à l’issue de laquelle une fraction insoluble est récupérée, et b) au moins une étape d’extraction dans une solution d’acide faible d’une fraction soluble à partir de la fraction insoluble obtenue à l’étape a). Composition selon l’une des revendications 1 à 4, ou obtenue selon le procédé de la revendication 5, pour son utilisation en tant que médicament. Composition selon l’une des revendications 1 à 4, ou obtenue selon le procédé de la revendication 5, pour le traitement des pathologies gastro-intestinales associées à des microorganismes pathogènes. Composition pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 6 ou 7, caractérisée en ce que la composition est à usage vétérinaire. Composition pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 7 ou 8, caractérisée en ce que les microorganismes pathogènes sont des bactéries Escherichia coli associées à la muqueuse intestinale (mucosa-associated E coli). Utilisation non thérapeutique d’une composition telle que définie dans l’une des revendications 1 à 4, ou obtenue selon le procédé de la revendication 5, pour la préparation d’une composition alimentaire destinée à améliorer le confort gastro-intestinal et/ou à améliorer la flore intestinale chez l’homme ou l’animal.