Brevet FR3104998A1 — publié le 20210625

L’invention concerne un principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait de Debaryomyces nepalensis. Un tel principe actif présente un effet cosmétique remarquable en particulier pour hydrater la peau et agir sur la fonction barrière de la peau. Principe actif cosmétique comprenant un extrait de Debaryomyces nepalensis L’invention concerne un extrait d’une levure spécifique, présentant un effet cosmétique sur la peau, en particulier pour améliorer la qualité de la peau, notamment en agissant sur la fonction barrière de la peau. La peau constitue l’interface entre l’organisme et l’environnement extérieur. Sa fonction première est de former une barrière efficace contre les agressions extérieures, qu’elles soient physiques, chimiques ou microbiologiques. La fonction barrière est également essentielle au maintien de l’hydratation et des propriétés physiques du tissu cutané. De nombreuses solutions cosmétiques ont été proposées pour agir sur la fonction barrière et pour améliorer l’hydratation de la peau, mais les consommateurs sont à la recherche de nouvelles solutions naturelles et plus efficaces. L’objectif de l’invention est donc de proposer une solution naturelle capable de réparer ou renforcer efficacement la fonction barrière de la peau. Pour y répondre, l’invention propose d’utiliser une levure particulière : Debaryomyces nepalensis. Debaryomyces nepalensis est une levure halotolérante impliquée dans la fermentation alimentaire. Elle forme des colonies de couleur blanche à crème, butyreuses. Elle se reproduit par bourgeonnement, n’a pas de filaments mais des asques persistants contenant chacun une ascospore. Debaryomyces nepalensis n’a jamais été décrite pour une application quelconque en cosmétique. Or, de façon surprenante, un extrait issu de culture de Debaryomyces nepalensis présente des propriétés remarquables au niveau de la peau. L’invention a par conséquent pour objet un principe actif comprenant au moins un extrait de Debaryomyces nepalensis. Ce principe actif peut être utilisé seul ou dans une composition en contenant pour un traitement cosmétique en application topique sur une peau saine. D’autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description détaillée de l’invention qui va suivre. Brève description des figures : la figure 1 représente les profils de Chromatographie sur couche mince du principe actif selon l’invention (exemple 1) et trois autres principes actifs hors invention (exemples 2, 3 et 4). : la figure 2 représente les profils des masses molaires des sucres du principe actif selon l’invention (exemple 1) et de ceux d’un principe actif hors invention (exemple 2). : la figure 3 représente les profils des masses molaires des sucres du principe actif selon l’invention (exemple 1) et de ceux d’un principe actif hors invention (exemple 3). : la figure 4 représente les profils des masses molaires des sucres du principe actif selon l’invention (exemple 1) et de ceux du principe actif hors invention (exemple 4). Définitions Par « actif cosmétique » ou « principe actif cosmétique » ou « principe actif » au sens de l’invention, on entend au moins une molécule, préférentiellement un ensemble de molécules présentant un effet cosmétique sur la peau, en particulier présentant un effet sur une ou plusieurs cellules cutanées. Par « Debaryomyces nepalensis » au sens de l’invention, on entend toute levure portant cette classification de la famille des Debaryomycetaceae. Elle peut être aussi référencée sous les appellations synonymes de : Debaryomyces cavensis Giovannozzi, Debaryomyces japonicus H. Naganishi et Saccharomyces disaccharomellis Kawano et al. Ce terme exclut les levures génétiquement modifiées. Par « extrait de Debaryomyces nepalensis » au sens de l’invention, on entend tout extrait issu de la culture de la levure Debaryomyces nepalensis obtenu par un procédé d’extraction des molécules de la levure ou par des procédés de transformation (par exemple par hydrolyse) de ces molécules. On entend également une ou plusieurs molécule(s) excrétée(s) par la levure et/ou une ou plusieurs molécule(s) de la paroi cellulaire de la levure. Par « fraction glucidique » au sens de l’invention on entend l’ensemble des carbohydrates présents dans l’extrait de Debaryomyces nepalensis. Par « hydrolysat de Debaryomyces nepalensis » au sens de l’invention, on entend tout extrait de levure Debaryomyces nepalensis obtenu par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique ou chimique de la biomasse de Debaryomyces nepalensis. Par « molécules de Debaryomyces nepalensis » ou « molécules de la levure » on entend des molécules natives de Debaryomyces nepalensis, y compris des molécules de la paroi cellulaire de Debaryomyces nepalensis et/ou des molécules excrétées par Debaryomyces nepalensis Par « support d’atomisation » au sens de l’invention on entend un adjuvant neutre pouvant être ajouté dans une solution lors du séchage par atomisation. Description détaillée de l’invention L’invention se rapporte donc à un principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait de Debaryomyces nepalensis. Selon un mode de réalisation, l’extrait de Debaryomyces nepalensis est un extrait obtenu par un procédé d’extraction de molécules de Debaryomyces nepalensis ou de transformation de molécules de Debaryomyces nepalensis. Préférentiellement, l’extrait de Debaryomyces nepalensis est un hydrolysat de la biomasse de Debaryomyces nepalensis, préférentiellement un hydrolysat chimique. L’extrait selon l’invention peut contenir une ou plusieurs molécule(s) de la paroi cellulaire de Debaryomyces nepalensis. De façon préférée, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis comprend une fraction glucidique. Préférentiellement l’extrait selon l’invention comprend au moins 25% carbohydrates en poids de matières sèches de l’extrait, encore plus préférentiellement au moins 40%. La teneur en sucres totaux dans le principe actif peut être déterminée par la méthode de DUBOIS (Dubois M. et al, Analytical chemistry, 28, 3, 350-356, 1956). La composition en sucres simples de la fraction glucidique de l’extrait de Debaryomyces nepalensis peut être déterminée par chromatographie liquide ionique et la taille des masses molaires par HPLC avec détection RI. La fraction glucidique de l’extrait selon l’invention comprend préférentiellement au moins des oligosaccharides, préférentiellement des oligosaccharides phosphatés. De façon préférée la fraction glucidique comprend au moins 50% d’oligosaccharides en poids de matière sèche de la fraction glucidique, de préférence au moins 70%. Ces oligosaccharides, sont préférentiellement constitués de molécules de masses molaires allant de 360 Da à 3060 Da. L’extrait selon l’invention comprenant également d’autres constituants, notamment des protéines et/ou des cendres minérales. La teneur en cendres minérales peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l’incinération des échantillons du principe actif selon l’invention à 550°C dans un four à moufle électrique. Préférentiellement, l’extrait selon l’invention présente une teneur en cendres inférieure à 15% en poids de matière sèche de l’extrait. La teneur en protéines peut être déterminée par la méthode de LOWRY (Lowry et al., Protein measurement with the folin reagent, J. Biol. Chem., 193, 265, 1951) ou par le dosage de l’azote total selon la méthode de KJELDHAL (référence : Official method of analysis of the A.O.C., 12th ed. W Horwitz, E.D., New-York, 15-60, 1975). Préférentiellement, l’extrait selon l’invention présente une teneur en protéines inférieure à 20% en poids de matière sèche, déterminée par la méthode de Lowry, encore plus préférentiellement comprise entre 0 et 15% en poids de matières sèches de l’extrait. Le principe actif selon l’invention peut se présenter sous forme solide ou sous forme liquide. Lorsqu’il se présente sous forme liquide, le principe actif selon l’invention est préférentiellement constitué par un extrait liquide tel que décrit précédemment. Il se présente de façon préférée sous forme d’un liquide limpide, avec une faible odeur et une couleur jaune très clair. Les caractéristiques physiques (odeur, couleur etc.) peuvent être modifiées par tout procédé connu de l’homme du métier. Lorsqu’il se présente sous forme liquide, le principe actif selon l’invention peut être distribué par un film sec le contenant. Lorsqu’il se présente sous forme solide le principe actif selon l’invention comprend préférentiellement au moins l’extrait tel que précédemment décrit et un support d’atomisation choisi parmi la maltodextrine, la gomme arabique, la lécithine de soja ou l’isomalt. Selon un mode de réalisation, particulièrement adapté, l’extrait représente au moins 10% en poids du principe actif. L’extrait présent dans le principe actif selon l’invention peut être un extrait de toute souche de Debaryomyces nepalensis. Préférentiellement, l’extrait selon l’invention est un extrait d’une souche de Debaryomyces nepalensis isolée et identifiée sur la rhizosphère de la plante Malva sylvestris. Il peut s’agir de la souche identifiée par le numéro NCYC 3413. Il peut s’agir également de la souche déposée à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain sous le numéro BCCM 56661 ou de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137. L’extrait constituant le principe actif selon l’invention peut être obtenu par tout procédé d’extraction. Préférentiellement, il est obtenu par un procédé comprenant une étape d’hydrolyse. Préalablement au procédé d’obtention de l’extrait en tant que tel, il est préféré de produire la biomasse de Debaryomyces nepalensis. Cette étape est réalisée selon le mode de culture des levures dans un milieu adapté à leur développement, selon les méthodes et moyens connus de l’homme de métier. Selon un mode de réalisation, avant culture, la levure est prélevée et isolée de son environnement, préférentiellement à partir de la plante Malva sylvestris, en particulier à partir de racines de la plante Malva sylvestris. La culture de la levure Debaryomyces nepalensis peut-être conduite sur un milieu adapté à son développement (par exemple milieu de culture pour levures ATCC Medium : 1245 YPD Medium), de manière classique pour l’homme du métier afin d’obtenir une biomasse de la levure en quantité industrielle. Une fois la quantité de biomasse suffisante, les molécules d’intérêt produites sont séparées par centrifugation. Il s’agit du produit A. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : - Solubilisation du produit A dans l’eau, - Hydrolyse, - Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble, - Purification(s), notamment par ultrafiltration - Filtration(s), - Filtration(s) stérilisante(s), notamment sur filtre 0.22µm. Le procédé peut éventuellement comprendre une étape de traitement thermique de l’extrait, en vue d’inactiver les enzymes présentes. Des étapes de décoloration ou désodorisation peuvent aussi être ajoutées. L’extrait peut ensuite éventuellement être associé à un support d’atomisation et séché, pour se présenter sous forme solide. Les étapes des procédés décrits ci‐avant, prises individuellement, sont usuelles dans le domaine des extractions d’actifs à partir de matières premières naturelles et l’homme du métier est à même d’en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales. Le principe actif selon l’invention, lorsqu’il est appliqué sur la peau permet d’améliorer la qualité de la peau et notamment de sublimer l’éclat du teint. La qualité de la peau peut se définir notamment sur trois critères : - comme une fonction barrière mécanique intacte, - et une fonction barrière immune non altérée, - et un équilibre du microbiote cutané. Une peau de bonne qualité présente un éclat du teint sublimé. Le maintien de la barrière mécanique de la peau dépend notamment de la cohésion des couches supérieures de l’épiderme assurée par les jonctions serrées. Celles-ci sont notamment constituées de protéines transmembranaires qui jouent un rôle structural en connectant les membranes des cellules adjacentes (occludines, claudines et molécules d’adhésion jonctionnelle telles que la connexine 43 ou la connexine 26). La formation et le maintien de la barrière épidermique sont également régulés par la vitamine D dont le récepteur est codé par le gène VDR (Vitamine D Receptor). Celui-ci appartient à la superfamille des récepteurs nucléaires et il est exprimé dans tout l’épiderme bien que majoritairement présent dans la couche basale. Par cette voie, la vitamine D régule de nombreux processus impliqués dans l’homéostasie cutanée : la formation et le maintien de la barrière épidermique, la croissance capillaire, le système immunitaire inné ainsi que le vieillissement. Le maintien d’une fonction barrière fonctionnelle est possible grâce à une desquamation optimale. Ce processus résulte de l’action d’enzymes spécifiques telles que la SCCE (Stratum corneum chymotryptic enzyme) ou kallikréine 7 (KLK 7), la SCTE (Stratum corneum tryptic enzyme) ou encore la kallikréine 5 (KLK5). Ses sérine-protéases-clés de la desquamation sont présentes dans l’espace intercornéocytaire et sont responsables de la dégradation des composants des cornéodesmosomes dont notamment la desmocolline et la desmogléine. Une barrière immune fait intervenir un système de défenses innées. Les kératinocytes possèdent à leur surface des senseurs du danger qui leur confèrent la capacité de détecter les microorganismes indésirables. Les récepteurs TLR détectent l’intrusion et la prolifération de ces microorganismes étrangers. En réponse à une menace, les kératinocytes produisent des peptides microbiens, dont les majoritaires dans la peau sont les β-défensines (hBD) et les cathélicidines, on peut également retrouver la psoriasine (codée par le gène S100A7) décrite pour réguler les Escherichia coli ou les ribonucléases (RNases) telle que la RNase 7 qui régule les bactéries du genre Corynebacterium. Dotés d’une activité antimicrobienne directe et indirecte, ces peptides sont capables de tuer ou d’inactiver un large spectre de microorganismes en perméabilisant notamment les membranes microbiennes. Ils sont nécessaires également à l’élaboration de la barrière mécanique. Cependant, avec l’âge, les défenses innées sont affaiblies. La susceptibilité aux invasions pathogènes est augmentée et une altération de la fonction barrière apparaît. Avantageusement, le principe actif selon l’invention est capable d’agir sur les barrières mécanique et immune. En particulier, le principe actif selon l’invention appliqué sur la peau est capable d’augmenter la synthèse de trois protéines marqueurs de la fonctionnalité de la barrière mécanique de la peau : Occludine, Claudine-1 et Desmogléine et permet également la régénération de la peau notamment en augmentant la synthèse de Kallikréine 5 et Kallikréine 7. De plus, le principe actif selon l’invention renforce également l’efficacité de la barrière immune. L’actif selon l’invention augmente également la synthèse des récepteurs TLR2 et TLR3 ainsi que les peptides antimicrobiens β-défensine 1 (codés par le gène DEFB1 encore appelé HBD-1) et la psoriasine (S100A7) Le principe actif selon l’invention permet également de réguler l’hydratation de la peau. En effet, il permet de stimuler la synthèse et la libération de l’acide hyaluronique en stimulant le taux de hyaluronane synthétase 2 et en augmentant le taux de CD44 pour favoriser la fixation de l’acide hyaluronique dans les espaces interstitiels et renforcer la capacité à retenir l’eau. Afin de maintenir un gradient hydrique optimal, les lipides intercornéocytaires jouent un rôle essentiel. Le gène FASN code pour l’acide gras synthase qui réalise la biosynthèse des acides gras linéaires saturés. En restaurant la fonctionnalité des barrières immune et mécanique de la peau, particulièrement affaiblies avec l’âge, le principe actif selon l’invention rééquilibre le microbiote des peaux matures. Ses actions rééquilibrante et protectrice conduisent à l’amélioration de la qualité de la peau. Le principe actif selon l’invention est préférentiellement utilisé dans des compositions, ces compositions comprenant un milieu cosmétiquement acceptable. Il s’agit de compositions dans différentes formes galéniques, adaptées à une application par voie topique sur la peau. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d’émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l’aspect de crèmes ou gels ou tous autres aspects des cosmétiques de soin peau. Afin de prouver la spécificité de la levure Debaryomyces nepalensis, un procédé identique a été réalisé sur d’autres souches de levure. La levure Saccharomyces cerevisiae est une levure utilisée comme organisme modèle en biologie cellulaire. Elle est largement décrite, utilisée aussi bien en alimentaire qu’en cosmétique, voir même en pharmaceutique. Deux autres levures, Pichia anomala et Metschnikowia agaves, déjà décrites pour leur utilisation en cosmétique, ont aussi été envisagées. Exemples Exemple 1 : exemple de principe actif selon l’invention Le principe actif selon l’exemple 1 est constitué par un extrait qui est un hydrolysat obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : - Solubilisation de la biomasse de Debaryomyces nepalensis dans l’eau à raison de 50 g/L - Hydrolyse acide - Séparation des phases soluble et insoluble - Purification de la phase soluble pour éliminer les molécules de tailles supérieures à 5 kDa - Filtration et filtration stérilisante L’extrait est caractérisé par : - Une teneur en matières sèches de 14,6 g/L - Une quantité de sucres (méthode de Dubois) de 6,6g/L (soit 45,2%) dont une partie se présente sous forme d’oligosaccharides phosphatés - Une quantité de protéines (méthode de Lowry) de 0,53 g/L (soit 3,6%) Exemple 2 : exemple de principe actif obtenu à partir d’une levure hors invent ion Le principe actif selon l’exemple 2 est constitué par un hydrolysat obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes identiques à celles de l’exemple 1 : - Solubilisation de la biomasse de la levure Saccharomyces cerevisiae dans l’eau à raison de 50 g/L - Hydrolyse acide - Séparation des phases soluble et insoluble - Purification de la phase soluble pour éliminer les molécules de tailles supérieures à 5 kDa - Filtration et filtration stérilisante Il est constitué par : - Une teneur en matières sèches de 15,0 g/L - Une quantité de sucres (méthode de Dubois) de 7,7g/L (soit 51,3%) - Une quantité de protéines (méthode de Lowry) de 0,20 g/L (soit 1,3%) La figure 1 présente les profils obtenus par Chromatographie sur Couche Mince de différents principes actifs. Il apparait clairement que le profil du principe actif selon l’exemple 2 est très différent de celui du principe actif selon l’exemple 1. La figure 2 compare les Masses Molaires des sucres du principe actif selon l’exemple 2 à ceux du principe actif selon l’exemple 1. La taille des molécules produites par le procédé de fabrication à partir de la levure Saccharomyces cerevisiae présente une différence avec la taille de celles du principe actif issu de Debaryomyces nepalensis. L’identification et la quantification des sucres sont réalisées par chromatographie liquide ionique en utilisant une gamme d’étalonnage. La présence d’oligosaccharides phosphatés a été détectée par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse. Les résultats sont présentés dans le Tableau 1. Exemple 2 Exemple 1 Teneur en matières sèches en g/l 15.0 14.6 Teneur en sucres totaux en g/L 7.7 6.6 Teneur en sucres liés par rapport à la teneur en sucres totaux (%) 96 71 Glucose (%) 95 39 Mannose (%) 5 61 Oligosaccharides phosphatés Absence Présence La proportion de sucres liés, le rapport glucose/mannose ainsi que la présence d’oligosaccharides phosphatés sont très différents entre le principe actif selon l’exemple 2 et le principe actif selon l’exemple 1. Il est donc possible de conclure que le choix de la levure est primordial pour obtenir le principe actif selon l’invention. Exemple 3 : exemple de principe actif obtenu à partir d’une levure hors invention Le principe actif selon l’exemple 3 est constitué par un hydrolysat obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes identiques à celles de l’exemple 1 : - Solubilisation de la biomasse de la levure Metschnikowia agaves dans l’eau à raison de 50 g/L - Hydrolyse acide - Séparation des phases soluble et insoluble - Purification de la phase soluble pour éliminer les molécules de tailles supérieures à 5 kDa - Filtration et filtration stérilisante Il est constitué par : - Une teneur en matières sèches de 12,6 g/L - Une quantité de sucres (méthode de Dubois) de 2,3g/L (soit 18,3%) - Une quantité de protéines (méthode de Lowry) de 0,20 g/L (soit 1,6%) La figure 1 présente les profils de Chromatographie sur Couche Mince de différents principes actifs. Il apparait clairement que le profil du principe actif selon l’exemple 3 est très différent de celui du principe actif selon l’exemple 1. La figure 3 compare les Masses Molaires des sucres du principe actif selon l’exemple 3 à ceux du principe actif selon l’exemple 1. La taille des molécules produites par le procédé de fabrication à partir de la levure Metschnikowia agaves présente une différence avec la taille de celles du principe actif issu de Debaryomyces nepalensis. L’identification et la quantification des sucres sont réalisées par chromatographie liquide ionique en utilisant une gamme d’étalonnage. La présence d’oligosaccharides phosphatés a été détectée par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse. Les résultats sont présentés dans le Tableau 2. Exemple 3 Exemple 1 Teneur en matières sèches en g/l 12.6 14.6 Teneur en sucres totaux en g/L 2.3 6.6 Teneur en sucres liés par rapport à la teneur en sucres totaux (%) 10 71 Glucose (%) 13 39 Mannose (%) 81 61 Autre sucre (%) 5 Absence Oligosaccharides phosphatés Absence Présence La proportion de sucres liés, le rapport glucose/mannose ainsi que la présence d’oligosaccharides phosphatés sont très différents entre le principe actif selon l’exemple 3 et le principe actif selon l’exemple 1. Il est donc possible de conclure que le choix de la levure est primordial pour obtenir le principe actif selon l’invention. Exemple 4 : exemple de principe actif obtenu à partir d’une levure hors invention . Le principe actif selon l’exemple 4 est constitué par un hydrolysat obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes, identiques à celles de l’exemple 1 : - Solubilisation de la biomasse de la levure Pichia anomala dans l’eau à raison de 50 g/L - Hydrolyse acide - Séparation des phases soluble et insoluble - Purification de la phase soluble pour éliminer les molécules de tailles supérieures à 5 kDa - Filtration et filtration stérilisante Il est constitué par : - Une teneur en matières sèches de 15,1 g/L, - Une quantité de sucres (méthode de Dubois) de 6,8g/L (soit 45,0%) - Une quantité de protéines (méthode de Lowry) de 0,20 g/L (soit 1,3%). La figure 1 présente les profils de Chromatographie sur Couche Mince de différents principes actifs. Il apparait clairement que le profil du principe actif selon l’exemple 4 est très différent de celui du principe actif selon l’exemple 1. La figure 4 compare les profils de Masses Molaires de sucres du principe actif selon l’exemple 4 et de ceux du principe actif selon l’exemple 1. La taille des molécules produites par le procédé de fabrication à partir de la levure Pichia anomala présente une différence avec la taille de celles du principe actif issu de Debaryomyces nepalensis. L’identification et la quantification des sucres sont réalisées par chromatographie liquide ionique en utilisant une gamme d’étalonnage. La présence d’oligosaccharides phosphatés a été détectée par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse. Les résultats sont présentés dans le Tableau 3. Exemple 4 Exemple 1 Teneur en matières sèches en g/l 15.1 14.6 Teneur en sucres totaux en g/L 6.8 6.6 Teneur en sucres liés par rapport à la teneur en sucres totaux (%) 17 71 Glucose (%) 92 39 Mannose (%) 8 61 Oligosaccharides phosphatés Absence Présence La proportion de sucres liés, le rapport glucose/mannose ainsi que la présence d’oligosaccharides phosphatés sont très différents entre le principe actif selon l’exemple 4 et le principe actif selon l’exemple 1. Il est donc possible de conclure que le choix de la levure est primordial pour obtenir le principe actif selon l’invention. Essais et résultats démontrant l’efficacité du principe actif selon l’invention Effet de l’ extrait issu de levures Debaryomyces nepalensis sur l’expression de marqueurs épidermiques Etude par qPCR sur culture de kératinocytes humains normaux : L’objectif de cette étude est d’évaluer l’effet du principe actif selon l’invention sur des marqueurs épidermiques. L’expression des marqueurs épidermiques a été étudiée par PCR quantitative sur une culture de kératinocytes humains normaux 37 ans ± 3 (n=3). Le protocole opératoire est présenté ci-après : Tout d’abord, les kératinocytes humains normaux sont ensemencés et incubés à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2. Avant d’être traités un temps T1 ou un temps T2 avec soit : - Principe actif selon l’exemple 1 à 0,1% ou 0,5% (V/V). - Solution de calcium Les cellules sont récupérées et les ARN totaux extraits pour l’étude par PCR quantitative. Les ARN ont été reverse-transcrits et les ADN complémentaires obtenus ont été analysés par la technique de PCR quantitative. Les ARNm ribosomal protein S18 (RPS18), hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HPRT) and béta-glucuronidase (GUSB), témoins internes de référence, ont été analysés en parallèle des ARNm de la liste des marqueurs d’intérêt (18 gènes). L’incorporation de fluorescence (SYBR Green) est mesurée en continu à l’aide d’un thermocycleur. L’analyse des Ct (quantification relative) est réalisée à l’aide d’un logiciel. Les résultats sont donnés dans les tableaux 4 (Effet du principe actif selon l’invention sur les marqueurs épidermiques au temps T1) et 5 (Effet du principe actif selon l’invention sur les marqueurs épidermiques au temps T2) Témoin Solution de Ca 2+ Exemple 1 (0,1%) Exemple 1 (0,5%) Inflammation IL1a 100 110±6 95±14 92±8 Défense microbienne DEFB4 100 107±44 104±6 71±42 S100A7 100 111±12 104±15 103±30 Métabolisme lipidique CERS3 100 104±15 104±14 103±20 FASN 100 101±26 98±8 136 ±80 Différentiation prolifération FLG 100 105±25 107±11 102±13 TGM1 100 190 ±63 113±7 119 ±5 MKi67 100 91±4 99±2 104±10 Jonctions OCLN 100 278 ±64 110±17 133 ±18 DSG1 100 155 ±34 124 ±6 132 ±22 Hydratation HAS2 100 141 ±15 96±17 112±13 CD44 100 88±29 105±26 118 ±50 Rythme circadien CLOCK 100 124 ±9 97±9 113±26 BMAL1 100 95±13 108±9 105±8 Stress oxydatif NRF2 100 107±13 111±15 112±16 Détoxification CYP1A1 100 100±29 103±21 110±18 Activité Pro-vitaminique VDR 100 68±46 87±27 203 ±227 Synthèse matricielle NGF 100 136 ±54 98±40 101±41 Témoin Solution de Ca Exemple 1 (0,1%) Exemple 1 (0,5%) Inflammation IL1a 100 152 ±9 97±9 108±4 Défense microbienne DEFB4 100 106±44 107±41 108±28 S100A7 100 114±16 89±12 103±14 Métabolisme lipidique CERS3 100 110±13 86±5 89±12 FASN 100 125 ±40 109±38 108±21 Différentiation prolifération FLG 100 86±5 92±22 85±8 TGM1 100 348 ±230 99±17 97±21 MKi67 100 128 ±24 100±3 103±3 Jonctions OCLN 100 317 ±130 98±7 100±8 DSG1 100 148 ±44 114±34 109±22 Hydratation HAS2 100 169 ±81 107±34 123 ±21 CD44 100 102±9 97±10 107±7 Rythme circadien CLOCK 100 113±14 94±2 99±3 BMAL1 100 107±7 92±3 100±2 Stress oxydatif NRF2 100 95±16 85±8 90±5 Détoxification CYP1A1 100 176 ±62 94±15 95±15 Activité Pro-vitaminique VDR 100 134 ±40 117 ±56 141 ±30 Synthèse matricielle NGF 100 126 ±20 66±15 101±15 Testé sur kératinocytes humains normaux, l’exemple 1 selon l’invention tend à booster le métabolisme des lipides (FASN), la différenciation (TGM1), les jonctions (OCLN - DSG1), l’hydratation (HAS2 - CD44) et l’activité pro vitaminique (VDR). A la lumière des résultats des tests sur kératinocytes humains normaux, il apparait clairement que le principe actif selon l’invention a des effets sur la régulation de l’hydratation de la peau. En effet, il stimule notamment le taux de hyaluronane synthétase 2 grâce à l’augmentation de l’expression du gène HAS2. Il augmente également la biosynthèse des acides gras linéaires saturés par l’intermédiaire du gène FASN qui intervient dans le maintien du gradient hydrique optimal. L’exemple selon l’invention agit également sur le maintien de la fonction barrière en augmentant la synthèse des protéines transmembranaires Occludines et il a également un rôle dans la formation et le maintien de la barrière épidermique en augmentant la synthèse du récepteur de la vitamine D (VDR). E ffet d’un principe actif selon l’invention sur l’expression d ’autres marqueurs épidermiques L’objectif de cette étude est d’évaluer l’effet d’un principe actif selon l’invention sur des marqueurs épidermiques. L’expression des marqueurs épidermiques a été étudiée par PCR quantitative sur une culture de kératinocytes humains normaux 39 ans ± 9 (n=6), selon le protocole décrit en suivant : Tout d’abord, les kératinocytes humains normaux sont ensemencés et incubés à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO 2 . Par la suite, les kératinocytes sont traités avec : - Le principe actif selon l’exemple 1 à 0,5%, 1,0% et 3,0% (V/V) - Une solution de calcium. Les cellules sont récupérées et les ARN totaux extraits pour l’étude par PCR quantitative. Les ARN ont été reverse-transcrits et les ADN complémentaires obtenus ont été analysés par la technique de PCR quantitative. Les ARNm ribosomal protein S18 (RPS18), hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HPRT) and béta-glucuronidase (GUSB), témoins internes de référence, ont été analysés en parallèle des ARNm de la liste des marqueurs d’intérêt (21 gènes). L’incorporation de fluorescence (SYBR Green) est mesurée en continu à l’aide d’un thermocycleur. L’analyse des Ct (quantification relative) est réalisée à l’aide d’un logiciel. Les résultats sont donnés dans le Tableau 6 (Effet du principe actif selon l’exemple 1 sur les marqueurs épidermiques.). Témoin Solution de Ca 2+ Exemple 1 (0,5%) Exemple 1 (1,0%) Exemple 1 (3,0%) Barrière mécanique OCLN 100 501***±194 111±27 117**±28 176***±40 CLDN1 100 464***±155 112±27 121**±31 179***±48 DSG1 100 334***±182 149***±62 154**±70 242***±151 GJA1 100 120±62 122±57 118±56 125±65 GJB2 100 61***±25 115±31 108±30 103±41 VDR 100 109±66 119±58 121±62 136±68 Barrière immune DEFB1 100 150***±44 105±11 103±10 132***±20 DEFB4 100 283***±316 132±96 151±86 248±256 S100A7 100 121***±15 109±28 111±33 132***±33 TLR2 100 110***±10 101±11 107±13 112***±11 TLR3 100 71***±23 118**±22 125*±50 115*±27 CAMP 100 49***±13 88±13 85***±13 82***±18 RNASE7 100 77***±12 94*±11 91*±19 89**±14 Régénération KLK5 100 163***±15 102±10 111**±12 129***±19 KLK7 100 410***±60 120***±15 126***±17 194***±43 MKI67 100 114***±19 110±21 107±16 110±44 COL4A1 100 92±51 117±62 109±46 110±55 COL7A1 100 59***±14 107±16 92*±20 81***±17 ITGB4 100 94±87 141±122 126±90 125±100 CASP14 100 73**±40 110±46 88±36 123±99 Dans le Tableau 6 les symboles suivants signifient : * : résultats significatifs selon le test t de Student par rapport au témoin (p ** : résultats significatifs selon le test t de Student par rapport au témoin (p *** : résultats significatifs selon le test t de Student par rapport au témoin (p Testé sur kératinocytes humains normaux, le principe actif selon l’exemple 1 augmente significativement les marqueurs de la : - barrière mécanique (Occludine +76%, Claudine 1 +79% et Desmogléine 1 + 142%), - barrière immune (β défensine 1 +32%, S100A7 +32%, TLR2 +12% et TLR3 +15%), - régénération (Kallikréine 5 +29% et Kallikréine 7 +94%). Le principe actif selon l’invention a une action significative sur des composantes de la fonction barrière de la peau. Principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait de Debaryomyces nepalensis. Principe actif cosmétique selon la revendication 1, caractérisé en ce que l’extrait de Debaryomyces nepalensis est un extrait obtenu par un procédé d’extraction de molécules de Debaryomyces nepalensis ou de transformation de molécules de Debaryomyces nepalensis. Principe actif cosmétique selon l’une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l’extrait de Debaryomyces nepalensis est un hydrolysat de la biomasse de Debaryomyces nepalensis. Principe actif cosmétique selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l’extrait de Debaryomyces nepalensis est un hydrolysat chimique de la biomasse de Debaryomyces nepalensis. Principe actif cosmétique selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que l’extrait contient une ou plusieurs molécule(s) de la paroi cellulaire de Debaryomyces nepalensis. Principe actif cosmétique selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que l’extrait de Debaryomyces nepalensis comprend au moins une fraction glucidique. Principe actif cosmétique selon la précédente revendication, caractérisé en ce que les carbohydrates représentent au moins 25% en poids de matière sèche de l’extrait. Principe actif cosmétique selon la précédente revendication, caractérisé en ce que les carbohydrates représentent au moins 40% en poids de matière sèche de l’extrait. Principe actif cosmétique selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que l’extrait de Debaryomyces nepalensis comprend des oligosaccharides. Principe actif selon la revendication précédente, caractérisé en ce que les oligosaccharides ont des masses molaires allant de 360 Da à 3060 Da. Principe actif cosmétique selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que l’extrait de Debaryomyces nepalensis comprend des oligosaccharides phosphatés. Principe actif cosmétique selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que l’extrait de Debaryomyces nepalensis comprend des protéines et/ou des cendres minérales. Principe actif cosmétique selon l’une des précédentes revendications caractérisé en ce qu’il se présente sous forme liquide ou sous forme solide.