Brevet FR3101875A1 — publié le 20210416

La présente invention concerne un nouvel analogue fluorescent de la vancomycine et son utilisation pour la détection de bactéries Gram+, en particulier dans une méthode de diagnostic rapide pour identifier la présence de bactéries Gram+ in vivo , par exemple des kératites infectieuses, ou encore in vitro sur des fluides ou tissus prélevés sur un sujet, humain ou animal. ANALOGUE FLUORESCENT DE LA VANCOMYCINE DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne un nouvel analogue fluorescent de la vancomycine et son utilisation pour la détection de bactéries Gram+, en particulier dans une méthode de diagnostic rapide pour identifier la présence de bactéries Gram+ in vivo , par exemple des kératites infectieuses, ou encore in vitro sur des fluides ou tissus prélevés sur un sujet, humain ou animal. ARRIERE PLAN DE L'INVENTION La vancomycine est un antibiotique bien connu dont le spectre se limite aux bactéries Gram positif (staphylocoques, streptocoques par exemple). Il inhibe la synthèse des peptidoglycanes constituant leur paroi. Des dérivés colorés ou fluorescents de la vancomycine sont également connus, employés notamment comme sondes indicatrices de la présence de colonies de bactéries Gram+ (Kocaoglu & Carlson, 2016, Gao & al., 2006). On citera également le produit BODIPY (marque enregistrée) FL Vancomycin commercialisé par la société ThermoFisher Scientific comme réactif de laboratoire. Ces analogues de l’état de la technique présentent des problèmes de stabilité et de purification et aucun de ces analogues n’est adapté ni indiqué pour un usage dans une méthode de diagnostic simplifiée in vitro ou in vivo , et en particulier in vivo , et notamment pour détecter rapidement les kératites infectieuses. BREVE DESCRIPTION DE L'INVENTION L’invention concerne un nouvel analogue fluorescent de la vancomycine de formule B-L-CO-V dans laquelle B est un fluorophore dérivé de BODIPY, L est un bras de liaison, et -CO-V est la vancomycine, la liaison du L-CO-V étant une liaison sur le résidu acide carboxylique de la vancomycine, en particulier une liaison amide. L’invention concerne aussi une composition, en particulier une composition stérile, comprenant ledit analogue fluorescent de la vancomycine et un véhicule approprié à son utilisation, en particulier pour son application topique. L’invention concerne également une méthode pour détecter la présence de bactéries Gram+ dans un échantillon biologique, ladite méthode comprenant l’ajout d’une quantité appropriée dudit analogue fluorescent de la vancomycine à l’échantillon biologique puis à observer la persistance d’une émission de fluorescence, marqueur de la présence de bactéries Gram+ dans l’échantillon biologique. La persistance de cette émission de fluorescence vient du fait que l’analogue fluorescent de la vancomycine s’est lié à la paroi cellulaire des bactéries Gram+ présentes. représente un dérivé « vert » de la vancomycine selon l’invention. représente le schéma de préparation du dérivé de la figure 1 selon l’invention. représente un dérivé « rouge » de la vancomycine selon l’invention. représente le schéma de préparation du dérivé de la figure 3 selon l’invention. représente le Bodipy Composé du COMBO AP343A (état de la technique). Analogue fluorescent de la vancomycine de formule B-L-CO-V dans laquelle B est un fluorophore dérivé de BODIPY, L est un bras de liaison, et -CO-V est la vancomycine, la liaison du L-CO-V étant une liaison sur le résidu acide carboxylique de la vancomycine. Analogue selon la revendication 1, caractérisé en ce que le fluorophore B est un composé de formule I (I) dans laquelle S 1 représente un groupe de formule -CΞC-L'-A, où L' est un groupement de liaison qui est une liaison simple (auquel cas S 1 est un groupe de formule -CΞC-A) ; ou un groupement hydrocarboné divalent choisi dans le groupe consistant en les alkylènes linéaires ou ramifiée, comprenant éventuellement un ou plusieurs atomes d’oxygène, azote ou soufre au sein de leur chaîne (comme les groupements poly(éthylène glycol), poly(éthoxy) ou poly(propoxy), par exemple) ; les alcénylènes linéaires ou ramifiés ; les alcynylènes linéaires ou ramifiés, et les arylènes ; ou une chaîne hydrocarbonée divalente constituée par un enchaînement d'au moins deux groupements hydrocarbonés divalents du type précité ; et A est un groupement fonctionnel polaire choisi parmi les groupes sulfonate, sulfate, phosphate, ammonium, carboxylate, hydroxyle, phosphonate, sulfate d'alkylammonium et polyoxyéthylène; S 2 représente un groupe -CΞC-L'-A identique ou différent de S 1 , où L' et A ont les significations précitées; F; H; ou une chaîne hydrocarbonée, linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, éventuellement interrompue par un ou plusieurs atomes d'oxygène, d'azote ou de soufre, éventuellement cyclisée en totalité ou en partie, éventuellement aromatique, et éventuellement fonctionnalisée, et chacun des groupes R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 ou R 7 désigne, indépendamment des autres, H ou une chaîne hydrocarbonée, linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, éventuellement interrompue par un ou plusieurs atomes d'oxygène, éventuellement cyclisée en totalité ou en partie, éventuellement aromatique et éventuellement fonctionnalisée, étant entendu que tout ou partie des groupes R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 et R 7 , peuvent être reliés entre eux pour former une forme pontée (à savoir qu'au moins deux des groupes R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 et R 7 peuvent former ensemble un cycle avec les carbones auxquels ils sont reliés). Analogue selon l’une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que L est un dérivé bifonctionnel de formule Z 1 -R 8 -Z 2 -. Dans laquelle R 8 est une chaîne hydrocarbonée divalente, linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, éventuellement interrompue par un ou plusieurs atomes d'oxygène, éventuellement cyclisée en totalité ou en partie, Z 1 est le groupe permettant la liaison avec le fluorophore B, particulièrement choisi parmi les groupes -CΞC-, -O-, -NH- et –S-, plus particulièrement -CΞC- et -NH-, et Z 2 est le groupe permettant la liaison avec l’acide carboxylique de la vancomycine, en particulier choisi parmi les groupes -O-, -NH- et –S-, plus particulièrement -NH-. Analogue selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que L est choisi parmi les groupes divalents suivants -HN-(CH 2 -CH 2 ) n -CH 2 -NH- -HN-CH 2 -(O-CH 2 -CH 2 ) n -O-CH 2 -NH-, et -CΞC-(CH 2 -CH 2 ) n -CH 2 -NH- n étant un entier de 1 à 6, de préférence 1, 2 ou 3, plus préférentiellement 1. Analogue selon l’une des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que la liaison B-L- se fait par R 1 de formule -Ar-CO-L- ou -Ar-L-, dans laquelle Ar est un radical divalent aromatique hydrocarboné, de 1 à 4 cycles fusionnés ou non, ayant notamment de 4 à 16 atomes de carbone de préférence de 4 à 10 atomes de carbone, et pouvant contenir dans leur cycle des atomes d'azote, de soufre ou d'oxygène (hétérocycles). Dérivé de BODIPY de formule B-L-H, B et L étant définis selon l’une des revendications 1 à 5. Dérivé de BODIPY selon la revendication 6 de formule II (II) dans laquelle L, S 1 , S 2 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 et R 7 sont définis selon l’une des revendications 2 à 4. Composition liquide caractérisée en ce qu’elle comprend un analogue fluorescent de la vancomycine selon l’une des revendications 1 à 5 et un véhicule approprié pour son utilisation. Composition selon la revendication 8, caractérisée en ce qu’elle est sous une forme appropriée pour son application sur la peau et les muqueuses. Composition selon la revendication 9, caractérisée en ce qu’elle est un collyre pour une application sur l’œil. Utilisation d’un analogue fluorescent de la vancomycine selon l’une des revendications 1 à 5 pour la détection de bactéries Gram+ dans un échantillon biologique. Utilisation selon la revendication 11, caractérisé en ce que les bactéries Gram+ sont des bactéries pathogènes du genre Staphylococcus . Méthode pour détecter la présence de bactéries Gram+ dans un échantillon biologique, caractérisée en ce qu’elle comprend l’ajout d’une quantité appropriée d’un analogue fluorescent de la vancomycine selon l’une des revendications 1 à 5 à l’échantillon biologique puis à observer la persistance d’une émission de fluorescence, marqueur de la présence de bactéries Gram+. Méthode selon la revendication 13, caractérisée en ce que les bactéries Gram+ sont des bactéries pathogènes du genre Staphylococcus .