Brevet FR3103825A1 — publié le 20210604

La présente invention concerne un dispositif d’exposition permettant de maîtriser le temps d’exposition des cellules à une atmosphère d’étude, tel qu’un aérosol ou un gaz. En particulier, l’invention propose un dispositif d’exposition cellulaire à une atmosphère comportant une partie supérieure (100) de décharge d’atmosphère d’étude et une partie inférieure (200) comportant une plaque de culture cellulaire pourvue d’une pluralité de chambres d’exposition, ladite partie supérieure (100) étant alimentée par une atmosphère d’étude et comportant un réseau de conduits acheminant ladite atmosphère aux chambres d’exposition, caractérisé en ce que : -la partie supérieure (100) comporte au moins une paire de conduits, un conduit d’entrée (120) et un conduit de sortie (130) d’atmosphère reliés à une buse (150) de dépôt, -ladite buse (150) se connecte de manière étanche à l’une des chambres d’exposition de la partie inférieure (200), et comporte une cloison (155) séparant un sous-conduit d’entrée (154) d’atmosphère d’un sous-conduit de sortie (156) d’atmosphère de ladite chambre d’exposition, et dans lequel une atmosphère d’étude injectée à ladite chambre d’exposition est évacuée à travers le sous-conduit de sortie (156) de la buse de dépôt (155) par aspiration, dans un temps contrôlé, et en créant un flux de passage d’atmosphère. L’invention concerne également un procédé d’étude des effets de l’exposition de cultures cellulaires à une atmosphère. Figure pour l’abrégé : Figure 1 DISPOSITIF ET PROCÉDÉ D’EXPOSITION DE CELLULES A UN AÉROSOL DOMAINE DE L’INVENTION L’invention porte sur un dispositif et procédé d’exposition de cultures cellulaires à une atmosphère tel qu’un aérosol pour des études toxicologiques. ARRIÈRE-PLAN TECHNOLOGIQUE Des dispositifs d’exposition cellulaire à un gaz ou à un aérosol ont été proposés pour étudier in vitro les effets toxiques ou thérapeutiques liés à l’inhalation de substances par voie respiratoire. Pour reproduire les caractéristiques du tissu pulmonaire, des cultures cellulaires sont adhérées sur un support perméable maintenu dans du milieu de culture liquide, de sorte à reproduire l’interface air/liquide des cellules pulmonaires. L’exposition des cellules est réalisée en diluant une substance à tester dans un gaz, un vapeur, ou un aérosol. Cette atmosphère à étudier est ensuite injectée dans un dispositif d’exposition cellulaire comportant une entrée d’atmosphère reliée à un réseau de conduits alimentant une pluralité de chambres de culture cellulaire. Les différents échantillons de cellules reçoivent ainsi une même atmosphère injectée dans le dispositif, et ces échantillons sont ensuite utilisés pour mesurer une réponse cellulaire à l’atmosphère testée. Par exemple, Vitrocell Systems GmbH et Cultex Laboratories GmbH commercialisent ces dispositifs. L’optimisation des dispositifs d’exposition cellulaire a souvent été centrée sur le perfectionnement de la sédimentation de l’atmosphère injectée sur les cellules. L’intérêt étant d’associer une dose exacte de substance étudiée aux effets mesurés, ainsi que d’améliorer la reproductivité des essais. Par exemple, la demande de brevet américaine No. US 2018/0171280 A1 divulgue un dispositif d’exposition cellulaire comportant une partie supérieure de décharge d’aérosol comportant une entrée d’aérosol se divisant dans un réseau de conduits verticaux s’adaptant à une pluralité de chambres d’exposition d’une plaque de culture cellulaire. En particulier, ce document suggère de créer un gradient de température dans les conduits pour assurer le dépôt sur les cellules de la totalité de l’aérosol poussé au travers des conduits. La demande internationale No. WO2013/155513A1 propose de perfectionner la sédimentation d’un aérosol sur des cultures cellulaires en rapprochant au maximum des cellules un nébuliseur pour générer l’aérosol. L’inconvénient de ces dispositifs réside dans le fait qu’ils ne reproduisent les conditions naturelles d’inhalation des poumons, notamment du fait que l’atmosphère injectée stagne sur les cellules. Au contraire, le processus respiratoire conditionne un flux de passage d’une atmosphère inhalée sur la surface des tissus pulmonaires. D’autre part, ces dispositifs ont été conçus pour étudier les effets d’une exposition dans un temps relativement court après cette exposition. Ces études ne sont donc pas représentatives des effets à moyen et à long terme de l’inhalation d’une atmosphère, voire de l’inhalation répétée d’une atmosphère. Le but de la présente invention est de proposer un dispositif d’exposition cellulaire permettant de se rapprocher des conditions naturelles d’exposition des tissus pulmonaires à une atmosphère tel qu’un aérosol ou un gaz. Un deuxième but de l’invention est d’étudier l’effet toxicologique ou thérapeutique d’une atmosphère en fonction d’un temps d’exposition d’une culture cellulaire à ladite atmosphère, ainsi que d’observer ses effets sur des cultures cellulaires à moyenne et à longue durée. À cette fin, l’invention propose un dispositif d’exposition cellulaire à une atmosphère comportant une partie supérieure de décharge d’atmosphère d’étude et une partie inférieure comportant une plaque de culture cellulaire pourvue d’une pluralité de chambres d’exposition, ladite partie supérieure étant alimentée par une atmosphère d’étude et comportant un réseau de conduits acheminant ladite atmosphère aux chambres d’exposition, caractérisé en ce que : -la partie supérieure comporte au moins une paire de conduits, un conduit d’entrée et un conduit de sortie d’atmosphère reliés à une buse de dépôt, -ladite buse se connecte de manière étanche à l’une des chambres d’exposition de la partie inférieure, et comporte une cloison séparant un sous-conduit d’entrée d’atmosphère d’un sous-conduit de sortie d’atmosphère de ladite chambre d’exposition, et dans lequel une atmosphère injectée à ladite chambre d’exposition est évacuée à travers le sous-conduit de sortie de la buse de dépôt par aspiration, dans un temps contrôlé et en créant un flux de passage d’atmosphère. Le dispositif de l’invention permet de contrôler le temps d’exposition des cultures à une atmosphère en programmant l’évacuation de l’atmosphère de la chambre de culture. Il est également créé un flux de passage d’atmosphère sur la surface des cultures cellulaires pour mimétiser le processus du cycle respiratoire. Dans un mode de réalisation, l’entrée de l’atmosphère est contrôlée par l’ouverture d’une électrovanne reliée au conduit d’entrée, et l’évacuation d’atmosphère de la chambre d’exposition est contrôlée par une électrovanne proportionnelle reliée au conduit de sortie. Avantageusement, lorsqu’une atmosphère est injectée à la chambre d’exposition l’électrovanne proportionnelle du conduit de sortie est dans une configuration partiellement ouverte, prévenant ainsi un changement de pression interne pouvant décoller les cellules lorsque l’électrovanne est ouverte dans un degré assurant l’évacuation de l’atmosphère. Le principe de fonctionnement de la partie supérieure de décharge d’atmosphère peut être adapté de nombreuses manières pour délivrer une atmosphère tel qu’un aérosol à une pluralité de chambres d’exposition de la plaque de culture cellulaire. Dans des modes de réalisation préférés, la partie supérieure de décharge peut comporter toutes ou partie des caractéristiques suivantes : - l’au moins une paire de conduits d’entrée et de sortie d’atmosphère est reliée à une pluralité de buses de dépôt, et de préférence à trois buses de dépôt ; - le conduit d’entrée comporte des sorties successives pour alimenter une pluralité de buses, et une structure interne réduisant graduellement une section interne du conduit d’entrée à mesure qu’un flux d’atmosphère est divisé en son intérieur pour alimenter lesdites sorties successives. - l’au moins une paire des conduits d’entrée et de sortie d’atmosphère est disposée dans un axe horizontal, et est reliée à l’au moins une buse de dépôt au moyen d’un tuyau d’entrée et d’un tuyau de sortie disposés dans un axe sensiblement vertical, lesdits tuyaux étant optionnellement reliés, respectivement, à la buse de dépôt par un raccord. - le dispositif comporte une pluralité de paires de conduits d’entrée et de sortie d’aérosol, chaque conduit d’entrée permettant une alimentation indépendante d’une atmosphère d’étude. Dans un mode de réalisation préféré, le dispositif d’exposition comporte un incubateur dans lequel sont intégrées la partie supérieure de décharge d’atmosphère et la partie inférieure, ledit incubateur comportant : - des moyens de contrôle et de réglage d’une atmosphère de culture régnant à l’intérieur dudit incubateur ; - au moins un sas d’entrée et/ou de sortie de matériel et de réactifs. Ce mode de réalisation permet de continuer la culture de cellules suite à leur exposition temporaire à une atmosphère d’étude spécifique (tel qu’un aérosol) dans un environnement contrôlé, c'est-à-dire dans une atmosphère de culture configurable, et sans nécessité de manipulations supplémentaires pouvant stresser ou contaminer les cellules. De préférence, l’incubateur comporte également : -des moyens de guidage et de mouvement de la partie supérieure pour la connecter et la déconnecter de la partie inférieure ; -un bras robotique comportant des outils de préhension interchangeables et permettant de manipuler les plaques de culture de la partie inférieure d’exposition cellulaire ; -une paroi avant permettant une visibilité de l’intérieur de l’incubateur et comportant une paire de gants reliés de manière étanche. L’invention concerne également un procédé d’étude des effets de l’exposition de cultures cellulaires à une atmosphère comportant les étapes suivantes : -une étape de culture dans laquelle des échantillons de cellules sont cultivés dans une plaque de culture cellulaire comportant une pluralité de chambres d’exposition, chaque chambre d’exposition étant pourvue d’un puits comportant du milieu de culture liquide et d’un échantillon de cellules soutenu par un insert, ledit insert s’introduisant dans le puits de manière à que les cellules soient situées à l’interface air/liquide ; - une étape d’exposition dans laquelle une atmosphère d’étude est injectée dans la pluralité des chambres d’exposition au moyen d’un dispositif de décharge d’atmosphère comportant des buses se connectant de manière étanche à la pluralité des chambres d’exposition, et dans laquelle un flux de passage d’atmosphère d’étude est créé sur les cellules par une sortie concomitante de ladite atmosphère d’étude injecté. Dans des modes de réalisation préférés, le procédé de l’invention peut comporter toutes ou partie des caractéristiques suivantes : - lors de l’étape d’exposition, uniquement une partie des chambres d’exposition est connectée et exposée par les buses de dépôt à l’atmosphère d’étude, et une partie des chambres d’exposition non exposées est utilisée comme témoin (contrôle) pour l’étude. - lors de l’étape d’exposition, un temps d’exposition de cellules à ladite atmosphère d’étude est contrôlé par un débit de sortie de l’atmosphère d’étude injectée à la chambre d’exposition. - à la fin de l’étape d’exposition le dispositif de décharge d’atmosphère est déconnecté des chambres d’exposition et l’on réalise une étape de culture post-exposition. - les étapes de culture, d’exposition et de culture post-exposition sont réalisées dans un seul environnement confiné et dans lequel l’on configure des paramètres d’une atmosphère de culture tels qu’une température, une humidité relative et une composition d’air. Le fait de réaliser les trois étapes dans un environnement ou endroit unique permet en outre d’observer l’effet de l’atmosphère de culture sur les cultures cellulaires. Notamment, lorsqu’une partie des chambres d’exposition désignée comme témoin (contrôle) est uniquement exposée à ladite atmosphère de culture, et pas à l’atmosphère d’étude. Ce mode de réalisation permet également de prolonger la durée de vie de cultures cellulaires. PRÉSENTATION DES FIGURES D’autres avantages, buts et caractéristiques particulières de la présente invention ressortiront de la description qui va suivre faite, dans un but explicatif et nullement limitatif, en regard des dessins annexés. Une vue simplifiée d’une perspective avant de la partie supérieure de décharge d’atmosphère et de la partie inférieure du dispositif de l’invention selon un mode de réalisation. Une vue simplifiée d’une perspective latérale de la partie supérieure de décharge d’atmosphère et de la partie inférieure du dispositif de l’invention selon un mode de réalisation. Une vue schématique d’un exemple de structure interne d’un conduit d’entrée. Une vue schématique d’une section longitudinale d’une buse de dépôt et d’un insert, éclatés, selon un mode de réalisation de l’invention. Une vue schématique d’une section longitudinale d’une buse de dépôt insérée dans un insert selon un mode de réalisation de l’invention. Une vue en perspective d’une buse de dépôt selon un mode de réalisation de l’invention. Un exemple schématique d’un incubateur selon un mode de réalisation de l’invention. Un exemple schématique montrant l’intérieur de l’incubateur. Un diagramme des étapes du procédé de l’invention. DESCRIPTION DÉTAILLÉE DE MODES DE RÉALISATION DE L’INVENTION La présente invention propose un dispositif d’exposition permettant de maîtriser le temps d’exposition des cellules à une atmosphère d’étude, ainsi que reproduisant les conditions naturelles d’exposition de cellules pulmonaires lors de l’inhalation d’une atmosphère telle qu’un gaz ou qu’un vapeur. En particulier, le dispositif de l’invention permet d’étudier les effets du passage contrôlé d’une atmosphère sur des tissus cellulaires cultivés à l’interface liquide/air. Par atmosphère on entend un mélange gazeux (i. e. de l’air) comportant une composition chimique spécifique et pouvant comporter des particules liquides ou solides en suspension. L’atmosphère d’étude est par exemple un aérosol, de la vapeur, de la fumée, un gaz ou une suspension de particules dans l’air. Le dispositif d’exposition de l’invention comporte une partie supérieure de décharge d’atmosphère et une partie inférieure de culture cellulaire comportant une pluralité de chambres d’exposition. La partie supérieure du dispositif est alimentée par une atmosphère et comporte un réseau de conduits acheminant ladite atmosphère aux chambres d’exposition. En particulier, le dispositif de l’invention comporte la configuration suivante : - La partie supérieure comporte au moins une paire de conduits, un conduit d’entrée et un conduit de sortie d’atmosphère reliés à une buse de dépôt ; -La buse de dépôt se connecte de manière étanche à l’une des chambres d’exposition de la partie inférieure, et comporte une cloison séparant un sous-conduit d’entrée d’atmosphère d’un sous-conduit de sortie d’atmosphère. Lorsqu’une atmosphère d’étude est injectée à ladite chambre d’exposition, cette configuration permet d’évacuer l’atmosphère à travers le sous-conduit de sortie de la buse de dépôt par aspiration, dans un temps contrôlé. Avantageusement, l’injection de l’atmosphère et son évacuation par aspiration peuvent être réglées de manière à créer un flux de passage d’atmosphère sur des inserts des cultures cellulaires présentes dans les chambres d’exposition. Ce flux de passage empêche que l’atmosphère stagne sur les cellules, de sorte à imiter les conditions naturelles d’inhalation d’air ou d’un vapeur sur les tissus pulmonaires d’une personne. Par exemple, lorsque l’atmosphère est un aérosol, le dispositif permet de prévenir la condensation de gouttelettes sur les cultures cellulaires. Par ailleurs, pour faciliter la description de l’invention, une paire de conduits comportant un conduit d’entrée d’atmosphère et un conduit de sortie d’atmosphère est entendue, au sens de la présente invention comme une paire de conduits d’entrée et de sortie d’atmosphère. Le terme injection est utilisé pour décrire l’introduction d’une atmosphère dans le conduit d’entrée, et à la chambre d’exposition, indépendamment du mécanisme ou de la méthode utilisés pour effectuer ladite introduction. Pour contrôler l’injection et l’évacuation de l’atmosphère, le conduit d’entrée d’atmosphère et le conduit de sortie d’atmosphère sont pourvus, respectivement, d’une électrovanne ouvrant ou fermant l’accès et la sortie de l’atmosphère. En particulier, le conduit de sortie est pourvu d’une électrovanne proportionnelle permettant d’ajuster le débit du flux de passage d’atmosphère. Le temps d’exposition des cellules peut être ainsi aisément contrôlé en programmant l’ouverture et la fermeture des électrovannes, et notamment le degré d’ouverture de l’électrovanne proportionnelle relié au conduit de sortie. Dans un mode de réalisation préféré, lorsqu’une atmosphère est injectée à la chambre d’exposition, l’électrovanne proportionnelle du conduit de sortie est dans une configuration partiellement ouverte pour éviter un différentiel de pression pouvant décoller les cellules lors de l’évacuation de l’atmosphère injectée à la chambre d’exposition. Les figures 1 et 2 illustrent de manière schématique et simplifiée un mode de réalisation de la partie supérieure 100 de décharge d’atmosphère et la partie inférieure 200 de culture cellulaire. La partie inférieure de culture comporte un support 210 apte à recevoir une plaque de culture cellulaire comportant une pluralité de puits pour cultiver des échantillons individuels de cellules sur des inserts à membrane pour culture cellulaire s’adaptant audits puits. Les inserts sont par exemple des inserts disponibles dans le commerce et commercialisés sous la marque enregistrée Corning Transwell R comportant une membrane de polyéthylène téréphtalate (PET). Comme illustré, la partie supérieure 100 comporte trois paires de conduits d’entrée 120 et de sortie 130 d’atmosphère, chaque paire de conduits étant relié à une ou plusieurs buses 150 de dépôt au moyen des tuyaux 141 et d’un raccord 145. Dans un mode de réalisation préféré, chaque conduit d’entrée est disposé dans un axe horizontal et alimente avec la même atmosphère trois buses de dépôt. Avantageusement, le conduit d’entrée 120 est pourvu d’une structure 121 interne diminuant graduellement la section interne du conduit pour alimenter les trois buses avec la même pression. La figure 3 montre un exemple de réalisation de la structure 121 interne dans lequel un diamètre interne du conduit diminue graduellement dans le sens d’arrivée du flux d’atmosphère et forme trois segments, chacun alimentant une sortie S1, S2, S3 d’atmosphère reliée à une buse de dépôt. De préférence, un segment de conduit à section constante est laissé avant d’alimenter une sortie. En particulier, les buses 150 de dépôt sont supportées par une base mobile 110 de la partie supérieure superposant lesdites buses aux puits de la plaque de culture cellulaire de la partie inférieure 200. Les buses 150 de dépôt sont positionnées sur les puits de culture cellulaire, formant une connexion étanche entre les tube-inserts des puits et lesdites buses. Cette connexion étanche est par exemple assurée au moyen d’un joint torique. Dans le mode de réalisation illustré aux figures 1 et 2, la base mobile 110 comporte deux plaques 111, 111’ horizontales, parallèles et pourvues des orifices 115 de positionnement et de réception des buses de dépôt. Sur la figure 1, les buses de dépôt sont illustrées en voie d’insertion et sur la figure 2 les buses 150 sont illustrées insérées dans leurs orifices 115 de positionnement. Le dispositif de l’invention est très avantageux en ce qu’il permet d’utiliser des plaques de cultures cellulaires disponibles dans le commerce et d’adapter les dimensions et le nombre de chambres d’exposition du dispositif suivant un type de plaque de culture cellulaire souhaitée. Dans un mode de réalisation préféré, le dispositif est compatible avec une plaque de culture de 18 puits, et comporte 9 buses de dépôt de manière à laisser un puits de culture cellulaire témoin pour chaque puits de culture cellulaire exposé à un aérosol. La figure 4 illustre une vue schématique d’une section longitudinale de la buse de dépôt et d’un insert. La buse 150 de dépôt comporte une structure générale en « Y » présentant dans une partie supérieure un port d’entrée 152, et un port de sortie 153 pour relier ladite buse de dépôt aux conduits d’entrée 120 et de sortie 130 respectivement. Une cloison 155 interne de la buse permet de diviser un flux d’entrée d’atmosphère, descendant sur un insert 250 de culture cellulaire, d’un flux d’évacuation d’atmosphère ascendant par ladite buse 150 de dépôt. Suivant ce mode de réalisation, la buse de dépôt est reliée au conduit d’entrée et au conduit de sortie au moyen de tuyaux de dépôt et de raccords 145. Néanmoins, plusieurs modes de réalisation peuvent être envisagés pour relier la buse 150 de dépôt et les conduits d’entrée 120 et de sortie 130 d’aérosol sans que cela sorte du cadre de l’invention. A titre d’exemple, la buse de dépôt est réalisée comme un tuyau comportant une cloison interne et étant relié directement au conduit d’entrée et de sortie d’aérosol. Dans le mode de réalisation illustré aux figures 4 à 6, la buse de dépôt comporte une partie inférieure cylindrique comportant une gorge 159 inférieure pour recevoir un joint torique, et un collet 151 permettant de bloquer l’insertion de la buse avec une partie supérieure de l’insert 250. Par exemple, le collet 151 de la buse se bloque contre un anneau 259 supérieur de l’insert 250 illustré à la figure 5. Avantageusement, le collet 151 comporte un profil hexagonal permettant d’immobiliser la buse de dépôt contre une paroi interne de l’anneau 259 de l’insert 250. L’invention propose d’introduire la buse 150 de dépôt dans l’insert 250 pour la positionner au plus près des cellules cultivées au fond de l’insert (Fig. 5). De préférence, une extrémité inférieure de la buse de dépôt est située à 7 mm ± 1 mm des cellules lorsque la buse est insérée dans l’insert. Les dimensions de la partie cylindrique de la buse de dépôt sont donc adaptées aux dimensions de l’insert afin de permettre ce positionnement. Un deuxième but de l’invention et de fournir un dispositif d’exposition permettant une culture prolongée des cultures cellulaires dans des conditions contrôlées suite à leur exposition à une atmosphère d’étude. À cette fin, le dispositif d’exposition cellulaire comporte un incubateur (Fig. 7) dans lequel sont intégrées la partie supérieure de décharge d’atmosphère et la partie inférieure de culture cellulaire. L’incubateur 300 permet de contrôler les conditions atmosphériques dans lesquelles sont cultivées les cellules suite à leur exposition à une atmosphère d’étude telle qu’un aérosol généré par la vaporisation d’un liquide de cigarette électronique, une fumée etc. L’incubateur du dispositif comporte : - des moyens de contrôle et de réglage des paramètres d’une atmosphère de culture régnant à l’intérieur dudit incubateur tels que l’humidité relative, la composition de l’air, et la température. - au moins un sas 310 d’entrée et/ou de sortie de matériel et de réactifs permettant de maintenir les conditions atmosphériques configurées lors de l’entrée et la sortie desdits éléments. Le dispositif de l’invention permet de maintenir les cellules dans des conditions contrôlées pendant une durée totale d’exposition et de culture cellulaire souhaitée. Ainsi, les risques de contamination microbienne et de stress cellulaire liés à la manipulation des cultures suite à leur exposition à une atmosphère sont avantageusement réduits. Bien entendu, lors de la phase d’exposition, les chambres de cultures seront exposées à l’atmosphère d’étude injectée au moyen de la partie supérieure du dispositif. Une fois l’exposition terminée, la partie supérieure est déconnectée et les chambres d’exposition sont en contact direct de l’atmosphère de culture contrôlée régnant à l’intérieur de l’incubateur. Dans un mode de réalisation préféré, une partie des chambres d’exposition n’est pas connectée par des buses de dépôt lors de l’étape d’exposition à l’atmosphère d’étude, ces chambres d’exposition « témoin » sont donc en contact direct et constant avec l’atmosphère de culture régnant à l’intérieur de l’incubateur. Grâce à ces témoins, il peut être avantageusement pris en compte l’effet de l’atmosphère de culture sur la réponse des cellules. À titre d’exemple, l’atmosphère de culture peut être configurée pour ressembler au mieux à une atmosphère dans les poumons avec 100% d’humidité relative, 5 % de CO 2 , et 37°C de température. La figure 7 représente une vue schématique de l’incubateur 300 du dispositif de l’invention. En particulier, la partie supérieure de décharge 100 et la partie inférieure 200 d’exposition cellulaire sont intégrées dans une enceinte étanche supportée par des pieds 312 et comportant un sas 310 latéral pour l’entrée et pour la sortie de matériel, notamment des plaques de culture cellulaire, des inserts et du milieu de culture. Une paroi avant de l’enceinte est avantageusement réalisée dans un matériau transparent permettant d’observer l’intérieur de l’enceinte et comporte également une paire de gants permettant d’effectuer des manipulations à l’intérieur de l’enceinte sans perdre l’atmosphère confinée en son intérieur. La figure 8 illustre de manière très simplifiée l’intérieur de l’enceinte de l’incubateur. Dans ce mode de réalisation, l’intérieur de l’enceinte est configuré pour recevoir deux parties inférieures 200, 200‘ de culture cellulaire et deux parties supérieures de décharge d’atmosphère (tuyaux 141 non visibles). En particulier, chaque partie inférieure 200, 200’ de culture cellulaire est installée sur un bloc chauffant 340 et entre une paire de rails 315 verticaux servant de support à la partie supérieure de décharge d’aérosol et guidant son mouvement descendant et ascendant sur la partie inférieure. De préférence, un ascenseur 350 et un moteur assurent un mouvement automatisé de la partie supérieure. Bien entendu, l’enceinte de l’incubateur comporte également des entrées étanches (non illustrées) pour alimenter une atmosphère aux conduits d’entrée 120 d’aérosol du dispositif, ainsi que pour évacuer l’atmosphère des conduits de sortie 130. L’enceinte peut également être pourvue d’une ou plusieurs prises électriques, des capteurs de température, de pression et/ou d’humidité, des lampes, des filtres d’air, des portes supplémentaires permettant l’entrée de matériaux ou d’équipement volumineux, etc. De préférence, le toit de l’enceinte suit un plan incliné de sorte à promouvoir l’écoulement de la condensation à l’intérieur de l’enceinte et de récupérer et évacuer cette eau au moyen d’une rigole de récupération d’eau. Dans un mode de réalisation préféré, le dispositif d’exposition cellulaire comporte un bras robotique 320 à l’intérieur de l’enceinte de l’incubateur. Ce bras permet d’automatiser la préparation des plaques de culture et comporte des outils de préhension interchangeables permettant de manipuler les plaques de culture, de placer les inserts dans les puits, et de rajouter le milieu de culture. Par exemple, le bras robotique utilise des porte plaques 321 pour déplacer les blocs chauffants et les plaques de culture. L’invention concerne également un procédé d’étude des effets de l’exposition de cultures cellulaires à un aérosol. En particulier, le procédé 20 de l’invention comporte les étapes suivantes schématisées sur la figure 9 : -une étape de culture 21 dans laquelle des échantillons de cellules sont cultivés dans une plaque de culture cellulaire comportant une pluralité de chambres d’exposition, chaque chambre d’exposition étant pourvue d’un puits comportant du milieu de culture liquide et d’un échantillon de cellules soutenu par un insert, ledit insert s’introduisant dans ledit puits de manière à que les cellules soient situées à l’interface liquide/air ; - une étape d’exposition 22 dans laquelle un aérosol est injecté dans la pluralité des chambres d’exposition au moyen d’un dispositif de décharge d’aérosol comportant des buses se connectant de manière étanche à ladite pluralité des chambres d’exposition, et dans laquelle un flux de passage d’aérosol est créé sur les cellules par une sortie concomitante dudit aérosol injecté. De même manière que le dispositif de l’invention, le procédé de l’invention est avantageux en ce qu’il propose d’exposer les cellules à un flux de passage d’aérosol se rapprochant des conditions naturelles d’inhalation/expiration. D’autre part, le procédé de l’invention est particulier en ce qu’il propose d’exposer uniquement une partie de la pluralité des chambres d’exposition présentes dans une seule plaque de culture. Les chambres d’exposition, ou puits non exposés, peuvent être utilisées comme des témoins. Avantageusement, ces témoins auront suivi une manipulation quasi-identique aux échantillons exposés, améliorant ainsi la précision de résultats et facilitant l’organisation des essais. Le procédé de l’invention propose de contrôler le temps d’exposition des cellules en configurant un débit de sortie de l’atmosphère injectée aux chambres d’exposition. Une troisième étape de culture post-exposition 23 est ensuite effectuée pour un temps t donné, et à la fin de laquelle les échantillons de cultures cellulaires seront étudiés pour évaluer leur réponse à l’atmosphère d’étude. En particulier, le procédé de l’invention propose de réaliser l’ensemble des étapes de culture 21, d’exposition 22, et de culture post-exposition 23 dans un seul environnement confiné et dans lequel l’on configure des paramètres d’une atmosphère de culture tels qu’une température, une humidité relative et une composition d’air. Le fait de réaliser les trois étapes dans un environnement ou endroit unique permet de limiter au maximum la manipulation des cellules et de prolonger leur capacité de vie, ainsi que d’observer l’effet de l’atmosphère de culture. Ces trois étapes peuvent être réalisées au moyen du dispositif d’exposition de l’invention comportant un incubateur dans lequel sont intégrées la partie supérieure de décharge d’atmosphère et la partie inférieure de culture cellulaire. Le dispositif et procédé de l’invention sont particulièrement utiles dans les études de toxicologie de liquides pour cigarette électronique. Dans ce mode de mise en œuvre de l’invention, un robot vapoteur est relié au dispositif de l’invention, alimentant avec une seule vapeur, ou différentes vapeurs, les conduits d’entrée d’atmosphère du dispositif. Bien entendu, le dispositif est également compatible avec un robot fumeur, et d’autres dispositifs générateurs de vapeur ou de gaz, ainsi que des dispositifs permettant l’injection d’une atmosphère des particules suspendues dans l’air (type nébulisateur). Dispositif d’exposition cellulaire à une atmosphère comportant une partie supérieure (100) de décharge d’atmosphère d’étude et une partie inférieure (200) comportant une plaque de culture cellulaire pourvue d’une pluralité de chambres d’exposition, ladite partie supérieure (100) étant alimentée par une atmosphère d’étude et comportant un réseau de conduits acheminant ladite atmosphère aux chambres d’exposition, caractérisé en ce que : -la partie supérieure (100) comporte au moins une paire de conduits, un conduit d’entrée (120) et un conduit de sortie (130) d’atmosphère reliés à une buse (150) de dépôt, -ladite buse (150) se connecte de manière étanche à l’une des chambres d’exposition de la partie inférieure (200), et comporte une cloison (155) séparant un sous-conduit d’entrée (154) d’atmosphère d’un sous-conduit de sortie (156) d’atmosphère de ladite chambre d’exposition, et dans lequel une atmosphère d’étude injectée à ladite chambre d’exposition est évacuée à travers le sous-conduit de sortie (156) de la buse de dépôt (150) par aspiration, dans un temps contrôlé, et en créant un flux de passage d’atmosphère. Dispositif d’exposition cellulaire selon la revendication 1, dans lequel : -l’entrée ou injection de l’aérosol est contrôlé par l’ouverture d’une électrovanne reliée au conduit d’entrée (120) ; -l’évacuation d’aérosol de la chambre d’exposition est contrôlée par une électrovanne proportionnelle reliée au conduit de sortie (130), et lorsqu’une atmosphère est injectée à la chambre d’exposition l’électrovanne proportionnelle du conduit de sortie (130) est dans une configuration partiellement ouverte. Dispositif d’exposition cellulaire selon l’une des revendications précédentes, dans lequel l’au moins une paire des conduits d’entrée (120) et de sortie (130) d’atmosphère est disposée dans un axe horizontal, et est reliée à l’au moins une buse (150) de dépôt au moyen d’un tuyau d’entrée et d’un tuyau de sortie disposés dans un axe sensiblement vertical. Dispositif d’exposition cellulaire suivant l’une des revendications précédentes, dans lequel l’au moins une paire de conduits d’entrée (120) et de sortie (130) d’atmosphère est reliée à une pluralité de buses (150) de dépôt, et de préférence à trois buses de dépôt, et dans lequel le conduit d’entrée (120) comporte : - des sorties (S 1 ,S 2 , S 3 ) successives pour alimenter ladite pluralité de buses (155), et - une structure interne (121) réduisant graduellement une section interne dudit conduit d’entrée (120) à mesure qu’un flux d’atmosphère se divise en son intérieur pour alimenter lesdites sorties (S 1 ,S 2 , S 3 ) successives. Dispositif d’exposition cellulaire selon l’une des revendications précédentes, dans lequel le dispositif comporte une pluralité de paires de conduits d’entrée (120) et de sortie d’aérosol (130), chaque conduit d’entrée (120) permettant une alimentation indépendante d’une atmosphère d’étude. Dispositif d’exposition cellulaire suivant l’une des revendications précédentes, comportant un incubateur (300) dans lequel sont intégrées la partie supérieure (100) de décharge d’atmosphère et la partie inférieure (200), ledit incubateur (300) comportant : - des moyens de contrôle et de réglage d’une atmosphère de culture régnant à l’intérieur dudit incubateur ; - au moins un sas (310) d’entrée et/ou de sortie de matériel et de réactifs. Dispositif d’exposition cellulaire suivant la revendication 6, dans lequel l’incubateur (300) comporte en son intérieur : -des moyens de guidage (315) et de mouvement de la partie supérieure (100) pour la connecter et la déconnecter de la partie inférieure (200), et/ou -un bras (320) robotique comportant des outils de préhension interchangeables et permettant de manipuler les plaques de culture de la partie inférieure, et/ou -une paroi avant permettant une visibilité de l’intérieur de l’incubateur (300) et comportant une paire de gants reliés (330) de manière étanche. Procédé (20) d’étude des effets de l’exposition de cultures cellulaires à une atmosphère au moyen du dispositif d’exposition suivant l’une des revendications 1 à 7, ledit procédé comportant une étape de culture (21) dans laquelle des échantillons de cellules sont cultivés dans une plaque de culture cellulaire comportant une pluralité de chambres d’exposition, chaque chambre d’exposition étant pourvue d’un puits comportant du milieu de culture liquide et d’un échantillon de cellules soutenu par un insert, ledit insert s’introduisant dans ledit puits de manière à que les cellules soient situées à l’interface air/liquide, ledit procédé étant caractéristique en ce que l’on réalise : - une étape d’exposition (22) dans laquelle une atmosphère d’étude est injectée dans la pluralité des chambres d’exposition au moyen d’un dispositif de décharge d’atmosphère comportant des buses se connectant de manière étanche à ladite pluralité des chambres d’exposition, et dans laquelle un flux de passage d’atmosphère d’étude est créé sur les cellules par une sortie concomitante de ladite atmosphère d’étude injectée. Procédé d’étude suivant la revendication 8, dans lequel lors de l’étape d’exposition (22), uniquement une partie des chambres d’exposition est connectée et exposée par les buses de dépôt à l’atmosphère d’étude, et une partie des chambres d’exposition non exposées est utilisée comme témoin pour l’étude. Procédé suivant l’une des revendications 8 ou 9, dans lequel lors de l’étape d’exposition (22), un temps d’exposition de cellules à ladite atmosphère d’étude est contrôlé par un débit de sortie de l’atmosphère d’étude injectée à la chambre d’exposition. Procédé suivant l’une des revendications 8 à 10, dans lequel à la fin de l’étape d’exposition le dispositif de décharge d’atmosphère est déconnecté des chambres d’exposition et l’on réalise une étape de culture post-exposition (23), et les étapes de culture (21), d’exposition (22) et de culture post-exposition (23) sont réalisées dans un seul environnement confiné et dans lequel l’on configure des paramètres d’une atmosphère de culture tels qu’une température, une humidité relative et une composition d’air.