Brevet FR3100971A1 — publié le 20210326

La présente invention concerne une méthode de détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine d’un sujet comprenant la détermination de la teneur en au moins un ester de cholestérol dans un échantillon sanguin dudit sujet, le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine étant corrélé à la teneur dudit au moins un ester de cholestérol, ledit au moins un ester de cholestérol étant le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate Prédiction du contenu de la rétine en acides gras polyinsaturés oméga-3 à travers le dosage de 7 molécules d’esters de cholestérol L’invention relève du domaine de l’ophtalmologie et plus pratiquement de la prédiction du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine. La dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA) est une pathologie dégénérative de la partie centrale de la rétine, appelée macula. Elle touche principalement les personnes âgées et est responsable de 50% des cas de cécité dans les pays industrialisés. Environ 600 000 personnes sont touchées par la maladie en France. Les formes avancées de DMLA (appelées DMLA néovasculaire et DMLA atrophique) sont associées à une perte de la vision, et sont généralement précédées par des anomalies précoces et asymptomatiques. L’étiologie de la DMLA est multifactorielle, et implique des facteurs génétiques mais aussi environnementaux comme l’alimentation. Dans ce contexte, le rôle des acides gras polyinsaturés oméga-3 ou oméga-3 suscite un intérêt croissant pour 3 raisons : - les acides gras polyinsaturés oméga-3, et en particulier l’acide docosahexaénoïque (DHA), sont des constituants majeurs de la rétine où ils préviennent certains processus pathologiques observés dans la DMLA comme l’inflammation, la néovascularisation et la mort cellulaire ; - des études ont montré un appauvrissement du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine de sujets atteints de DMLA ; - plus de 20 études épidémiologiques ont montré de manière très concordante une réduction du risque de DMLA de 40% chez les sujets ayant un apport alimentaire élevé en acides gras polyinsaturés oméga-3. Ces données suggèrent donc un effet protecteur des acides gras polyinsaturés oméga-3 contre la DMLA. La famille des acides gras polyinsaturés oméga-3 regroupe notamment un acide gras précurseur, l’acide α-linoléique (ou C18:3n-3 ou ALA) et trois dérivés à longue chaîne, l’acide eicosapentaénoïque (ou C20:5n-3 ou EPA), l’acide docosapentaénoïque (ou C22:5n-3 ou DPAn-3) et l'acide docosahexaénoïque (DHA ou C22:6n-3). L’ALA est un nutriment indispensable pour l’homme, car les organismes animaux sont incapables de le synthétiser de novo , et dépendent donc exclusivement d’un apport alimentaire. La synthèse de l’EPA, du DPAn-3 et du DHA à partir de l’ALA est possible chez l’homme mais très limitée. Il est donc recommandé d’apporter également ces acides gras à travers une alimentation riche en poissons et fruits de mer. Malgré ces recommandations, les apports alimentaires en acides gras polyinsaturés oméga-3 des français restent en deçà des recommandations issues des agences sanitaires. Connaitre les concentrations en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine apparait donc comme étant une information importante pour : 1. identifier les sujets dont la rétine en est appauvrie et qui pourraient donc être à risque de DMLA, et 2. suivre l’efficacité d’une supplémentation nutritionnelle à base d’acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la restauration des teneurs physiologiques en ces acides gras dans la rétine. Pour des raisons éthiques évidentes, il est cependant impossible de réaliser des biopsies de la rétine chez l’homme in vivo en vue d’un dosage biochimique de son contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3. Par conséquent, une mesure indirecte s’impose. Trois études ont tenté de corréler le contenu en acides gras circulants à celui de la rétine. Une première étude s’est limitée à étudier les associations des teneurs rétiniennes en acides gras polyinsaturés oméga-3 avec les teneurs sanguines en divers acides gras, sans tenter de prédire le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine, ni investiguer les structures lipidiques qui portent les acides gras dans le sang (phospholipides, esters de cholestérol, triglycérides…) (Gorusupudi et al. J Lipid Res 2016;57:499-508). La seconde a identifié les esters de cholestérol dans leur ensemble en tant que marqueurs circulants du contenu en DHA de la rétine (Bretillon et al. Exp Eye Res 2008;87:521-528). La troisième a montré que le contenu en DHA des érythrocytes n’était pas un bon marqueur circulant du contenu en DHA de la rétine (Acar et al. PLoS ONE 2012;7:e35102). Aucune de ces études n’a considéré le contenu global en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine (elles ont ciblé le DHA ou bien des ratios de concentrations d’acides gras oméga-6 / acides gras oméga-3). Elles n’ont pas non plus permis de construire un modèle d’estimation du vrai contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 tel qu’il pourrait être mesuré à travers une analyse directe. A ce jour, deux approches sont couramment utilisées pour évaluer de façon indirecte le contenu de la rétine en acides gras polyinsaturés oméga-3. La première est basée sur des apports alimentaires qui, à travers des questionnaires alimentaires, permettent chez un sujet d’évaluer la consommation de tel ou tel aliment riche en acides gras polyinsaturés oméga-3 et de l’extrapoler à un enrichissement tissulaire. La seconde consiste en une évaluation des teneurs en acides gras polyinsaturés oméga-3 circulants et là encore, d’extrapoler un enrichissement sanguin à un enrichissement tissulaire. Cette évaluation dans le compartiment sanguin peut être plus ou moins globale et concerner aussi bien le sang total, les érythrocytes, le plasma total ou bien différents compartiments du plasma (phospholipides et esters de cholestérol en majorité). L’utilisation des apports alimentaires est confrontée à un grand nombre de difficultés, et en particulier à celles liées aux méthodes d’évaluation alimentaire : longueur et complexité des questionnaires alimentaires, biais de mémoire, difficultés de prise en compte de la grande complexité et de la variabilité quotidienne du régime alimentaire humain, imprécisions dans l’estimation des quantités d’aliments ingérées et dans la teneur en nutriments des aliments… Concernant l’utilisation de la composition lipidique du plasma/des différents compartiments du plasma, celle-ci est basée sur la supposition que la composition en acides gras des tissus périphériques (dont la rétine) suit le même schéma que celle du plasma. Or, il est connu que la relation entre les lipides alimentaires, les lipides plasmatiques et les lipides tissulaires est non linéaire car modulée par plusieurs autres facteurs tels que le métabolisme, la génétique, l’âge, le sexe ou le mode de vie (tabagisme, consommation d’alcool, activité physique). A ce jour, aucune étude n’a montré la validité absolue ou non de tel ou tel compartiment dans l’estimation du contenu en acides gras de la rétine, mis à part les deux études préliminaires précédemment citées montrant l’invalidité de l’utilisation des érythrocytes chez le sujet humain adulte et au contraire l’intérêt des esters de cholestérol dans leur ensemble. Problème technique Ainsi, et malgré un intérêt médical majeur, il est impossible à ce jour de mesurer le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine de façon fiable. Il est donc nécessaire de disposer d’un outil d’évaluation des acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine. Avantageusement, l’invention permet d’estimer le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine à travers le dosage sanguin d’au moins un ester de cholestérol. Les inventeurs ont, par l’affinement dans l’usage des esters de cholestérol en tant que marqueur du contenu en acides gras polyinsaturés oméga 3 de la rétine, utilisé des valeurs de dosage d’un ester de cholestérol, préférentiellement de sept esters de cholestérol, au lieu des 25 présents dans le sang. En effet, la construction et l’utilisation d’un modèle mathématique, permet avantageusement de prédire la concentration en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine à partir d’une valeur de dosage d’un ester de cholestérol, préférentiellement de 7 esters de cholestérol dans le sang. Ainsi, la présente invention a pour objet une méthode de détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine d’un sujet comprenant la quantification de la teneur en au moins un ester de cholestérol dans un échantillon sanguin dudit sujet, le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine étant corrélé à la teneur en esters de cholestérol. L’invention a également pour objet une méthode de prévention d’une pathologie rétinienne liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 par la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine selon la méthode de détermination selon l’invention. L’invention concerne également une méthode de suivi de traitement d’une pathologie liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 comprenant les étapes d’administration d’au moins un traitement et de détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine selon la méthode de détermination de l’invention. L’invention concerne également une méthode de diagnostic de carences en acides gras polyinsaturés oméga-3 comprenant la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine selon la méthode de détermination de l’invention. Méthode de détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 La présente invention concerne une méthode de détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine d’un sujet comprenant la détermination de la teneur en au moins un ester de cholestérol dans un échantillon sanguin dudit sujet, le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine étant corrélé à la teneur dudit au moins un ester de cholestérol, ledit au moins un ester de cholestérol étant le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate. En effet, et avantageusement, les inventeurs de la présente invention ont démontré que la détermination de la teneur en cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate (C20:5 ω3 methyl ester), préférentiellement contenu dans le plasma permet de prédire le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine d’un sujet. On entend par « contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine » la somme en pourcentage pondéral des acides gras totaux de l’ensemble des acides gras polyinsaturés oméga-3 présents dans la rétine, à savoir, la somme en pourcentage pondéral des acides gras totaux de l’acide α-linoléique (ou C18:3n-3 ou ALA), de l’acide eicosapentaénoïque (ou C20:5 ω-3 ou EPA), de l’acide docosapentaénoïque (ou C22:5 ω-3 ou DPA ω-3) et de l'acide docosahexaénoïque (DHA ou C22:6 ω-3). Selon un mode de réalisation de la méthode de détermination, la teneur en au moins six esters de cholestérol supplémentaires est déterminée. Les esters de cholestérol sont choisis parmi le cholesteryl tetradecanoate, le cholesteryl pentadecanoate, le cholesteryl hexadecanoate, le cholesteryl 7-hexadecenoate, le cholesteryl 9-hexadecenoate, le cholesteryl heptadecanoate, le cholesteryl octadecanoate, le cholesteryl trans-9-octadecenoate, le cholesteryl cis-9-octadecenoate, le cholesteryl 11-octadecenoate, le cholesteryl 9,12-octadecadienoate, le cholesteryl eicosanoate, le cholesteryl 6,9,12-octadecatrienoate, le cholesteryl 11-eicosenoate, le cholesteryl 9,12,15-octadecatrienoate, le cholesteryl 11,14-eicosadienoate, le cholesteryl 5,8,11-eicosatrienoate, le cholesteryl 8,11,14-eicosatrienoate, le cholesteryl 5,8,11,14-eicosatetraenoate, , le cholesteryl 15-tetracosenoate, le cholesteryl 7,10,13,16-docosatetraenoate, le cholesteryl 4,7,10,13,16-docosapentaenoate, le cholesteryl 7,10,13,16,19-docosapentaenoate, et le cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate. La nomenclature des esters de cholestérol est détaillée dans le tableau 1. nomenclature biologistes nomenclature chimistes 1 C14:0 cholesteryl ester cholesteryl tetradecanoate 2 C15:0 cholesteryl ester cholesteryl pentadecanoate 3 C16:0 cholesteryl ester cholesteryl hexadecanoate 4 C16:1 ω-9 cholesteryl ester cholesteryl 7-hexadecenoate 5 C16:1 ω-7 cholesteryl ester cholesteryl 9-hexadecenoate 6 C17:0 cholesteryl ester cholesteryl heptadecanoate 7 C18:0 cholesteryl ester cholesteryl octadecanoate 8 C18:1 ω-9 trans cholesteryl ester cholesteryl trans-9-octadecenoate 9 C18:1 ω-9 cholesteryl ester cholesteryl cis-9-octadecenoate 10 C18:1 ω-7 cholesteryl ester cholesteryl 11-octadecenoate 11 C18:2 ω-6 cholesteryl ester cholesteryl 9,12-octadecadienoate 12 C20:0 cholesteryl ester cholesteryl eicosanoate 13 C18:3 ω-6 cholesteryl ester cholesteryl 6,9,12-octadecatrienoate 14 C20:1 ω-9 cholesteryl ester cholesteryl 11-eicosenoate 15 C18:3 ω-3 cholesteryl ester cholesteryl 9,12,15-octadecatrienoate 16 C20:2 ω-6 cholesteryl ester cholesteryl 11,14-eicosadienoate 17 C20:3 ω-9 cholesteryl ester cholesteryl 5,8,11-eicosatrienoate 18 C20:3 ω-6 cholesteryl ester cholesteryl 8,11,14-eicosatrienoate 19 C20:4 ω-6 cholesteryl ester cholesteryl 5,8,11,14-eicosatetraenoate 20 C20:5 ω-3 cholesteryl ester cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate 21 C24:1 ω-9 cholesteryl ester cholesteryl 15-tetracosenoate 22 C22:4 ω-6 cholesteryl ester cholesteryl 7,10,13,16-docosatetraenoate 23 C22:5 ω-6 cholesteryl ester cholesteryl 4,7,10,13,16-docosapentaenoate 24 C22:5 ω-3 cholesteryl ester cholesteryl 7,10,13,16,19-docosapentaenoate 25 C22:6 ω-3 cholesteryl ester cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate Selon un mode de réalisation, les 6 esters de cholestérol supplémentaires sont le cholesteryl 9,12,15-octadecatrienoate, le cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate, le cholesteryl 9,12-octadecadienoate, le cholesteryl 6,9,12-octadecatrienoate, le cholesteryl 8,11,14-eicosatrienoate, le cholesteryl 5,8,11,14-eicosatetraenoate. Ainsi, et selon un mode de réalisation, la teneur en 7 esters de cholestérol est déterminée. Les inventeurs ont en effet, identifié outre le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate, six esters de cholestérol supplémentaires que sont le cholesteryl 9,12,15-octadecatrienoate, le cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate, le cholesteryl 9,12-octadecadienoate, le cholesteryl 6,9,12-octadecatrienoate, le cholesteryl 8,11,14-eicosatrienoate, le cholesteryl 5,8,11,14-eicosatetraenoate), parmi les vingt-cinq présents dans le sang qui permettent d’obtenir une détermination fiable et précise du contenu en acides gras polyinsaturés omega-3 de la rétine. On entend par « teneur en au moins un ester de cholestérol », le pourcentage pondéral en au moins un acide gras des esters de cholestérol. L’homme du métier pourra utiliser toute méthode connue pour déterminer la teneur en ester de cholestérol. Selon un mode de réalisation et pour déterminer la teneur en ester de cholestérol, une méthode consiste en une étape de trans-estérification. L’étape de trans-estérification correspond à une catalyse acide dans laquelle la partie stérol de l'ester de cholestérol est échangée contre un groupement alkyl. Le groupement alkyl est choisi parmi le méthyl, le propyl, ou le butyl. Selon un mode de réalisation, l’étape de trans-estérification est une étape de trans-méthylation des acides gras des esters de cholestérol. La teneur en ester de cholestérol peut en effet être déterminée par la formation des esters méthyliques des acides gras des esters de cholestérol. Les esters méthyliques des esters de cholestérol sont obtenus après trans-méthylation des acides gras de l’ester de cholestérol correspondant. Typiquement, les esters méthyliques des acides gras des esters de cholestérol sont formés après transméthylation des acides gras selon la méthode de Morrison & Smith (Morrison & Smith J lipid Res 1964 ;53 :600-608). Les esters méthyliques des acides gras des esters de cholestérol identifiés selon la présente invention sont le 9,12,15-octadecatrienoic acid methyl ester (C18:3 ω-3 methyl ester), le 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid methyl ester (C22:6 ω-3 methyl ester), le 9,12-octadecadienoic acid methyl ester (C18:2 ω-6 methyl ester), le 6,9,12-octadecatrienoic acid methyl ester (C18:3 ω-6 methyl ester), le 8,11,14-eicosatrienoic acid methyl ester (C20:3 ω-6 methyl ester), le 5,8,11,14-eicosatetraenoic acid methyl ester (C20:4 ω-6 methyl ester), le 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate acid methyl ester (C20:5 ω-3 methyl ester). Selon un mode de réalisation, le contenu pondéral relatif de chacun des 25 esters méthyliques d’acides gras des esters de cholestérol est déterminé. Le contenu pondéral relatif des esters méthyliques des acides gras est analysé et déterminé par toute méthode connue de l’homme du métier, typiquement par chromatographie en phase gazeuse couplée à une détection à ionisation de flamme, telle que décrit dans Acar et al. (Acar et al PLoS One 2012;7(4) : e35102). Les proportions relatives des 25 espèces d’esters méthyliques sont calculées et exprimées en pourcentage des acides gras totaux des esters de cholestérol. Typiquement, les proportions sont calculées, à partir de tout logiciel d’intégration de données connu de l’homme du métier, par exemple à l’aide du logiciel EZChrom Elite (Agilent technologies, Massy, France) et sont exprimées en pourcentage des acides gras totaux des esters de cholestérol. Cette étape permet de déterminer le pourcentage pondéral en au moins un acide gras des esters de cholestérol et donc de déterminer la teneur en chaque ester de cholestérol On entend par « corrélation », le calcul de la valeur estimée du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine à partir de la teneur d’au moins un ester de cholestérol, préférentiellement à partir de la teneur d’au moins 7 esters de cholestérol et préférentiellement encore à partir de la teneur en 7 esters de cholestérol. Typiquement, le calcul est réalisé par tout algorithme qui permet de prédire, pour un nouvel échantillon, le contenu en acide gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine à partir du dosage d’au moins 1 ester de cholestérol, préférentiellement à partir d’au moins 7 esters de cholestérol et préférentiellement encore à partir de 7 esters de cholestérol. A titre illustratif, et pour la détermination de la teneur en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine à partir d’un ester de cholestérol, l’algorithme est basé sur une régression linéaire selon la formule : où C20:5 ω3 EC correspond à la teneur en cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate, centrée et réduite suivant la distribution dans l’échantillon d’apprentissage (voir Tableau 2 ci-dessous). A titre illustratif également, et pour la détermination de la teneur en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine à partir d’au moins 7 esters de cholestérol, l’algorithme est basé sur la méthode sparse groupe partial least squares (sgPLS) décrite par Liquet et al. (Liquet B et al. Bioinformatics. 2016 Jan 1 ;32(1) :35-42). L’algorithme comprend et préférentiellement consiste en 4 étapes : 1. Plusieurs sommes et ratios sont calculés à partir du dosage d’au moins sept esters de cholestérol. Le dosage d’ester de cholestérol contenus dans le plasma est un dosage indirect. Les esters de cholestérol subissent une trans-estérification qui conduit à des esters méthyliques d’acides gras. Les esters méthyliques d’acides gras ainsi obtenus sont quantifiés par des méthodes connues, par exemple par chromatographie en phase gazeuse. La quantité relative en un ester méthylique d’acide gras correspond à un pourcentage des esters méthyliques d’acides gras totaux. Dans un mode de réalisation, les sommes et ratios présents dans la formule mathématique ci-après reproduite (math. 2), sont calculés à partir des dosages des 7 molécules d’intérêt issues des 25 esters méthyliques d’acides gras des esters de cholestérol. Les 7 molécules d’intérêt issues des 25 esters méthyliques d’acides gras des esters de cholestérol sont les suivantes : 9,12,15-octadecatrienoic acid methyl ester (C18:3 ω-3 methyl ester), 5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid methyl ester (C20:5 ω-3 methyl ester), 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid methyl ester (C22:6 ω-3 methyl ester), 9,12-octadecatrienoic acid methyl ester (C18:2 ω-6 methyl ester), 6,9,12-octadecatrienoic acid methyl ester (C18:3 ω-6 methyl ester), 8,11,14-eicosatrienoic acid methyl ester (C20:3 ω-6 methyl ester), 5,8,11,14-eicosatrienoic acid methyl ester (C20:4 ω-6 methyl ester). La formule mathématique est ci-après détaillée [Math. 2] : (0,117939545 x C20:5ω3_EC) + (0,000429538 x C22:6ω3_EC) + (0,127303513 x Tot_ω3_EC) – (0,089285375 x ratio_ω6_ω3_EC) + (0,12438627 x ratio_dietω3_ω6_EC) + (0,095117859 x ratio_EPADPAω3DHA_AA_EC) –(0,086291782 x ratio_AA_EPA_EC) + (0,115467043 x tot_ω3_LC_EC) dans laquelle : - C20:5ω3_EC correspond à la teneur en cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate ; - C22:6ω3_EC correspond à la teneur en cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate - Tot_ω3_EC correspond à la somme des teneurs en cholesteryl 9,12,15-octadecatrienoate, cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate cholesteryl 7,10,13,16,19-docosapentaenoate, cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate - ratio_ω6_ω3_EC correspond au ratio de la somme des teneurs en cholesteryl 9,12-octadecadienoate, cholesteryl 6,9,12-octadecatrienoate, cholesteryl 11,14-eicosadienoate, cholesteryl 5,8,11,14-eicosatetraenoate, cholesteryl 7,10,13,16-docosatetraenoate, cholesteryl 4,7,10,13,16-docosapentaenoate sur la somme des teneurs en cholesteryl 9,12,15-octadecatrienoate, cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate, cholesteryl 7,10,13,16,19-docosapentaenoate, cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate - ratio_diet ω3_ω6_EC correspond au ratio de la somme des teneur en cholesteryl 9,12,15-octadecatrienoate, cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate et cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate sur la teneur en cholesteryl 9,12-octadecadienoate - ratio_EPADPAω3DHA_AA_EC correspond au ratio de la somme des teneurs en cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate, cholesteryl 7,10,13,16,19-docosapentaenoate, cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate sur la teneur en cholesteryl 5,8,11,14-eicosatetraenoate - ratio_AA_EPA_EC correspond au ratio de la teneur en cholesteryl 5,8,11,14-eicosatetraenoate sur la teneur en cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate - tot_ω3_LC_EC correspond à la somme des teneurs en cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate, cholesteryl 7,10,13,16,19-docosapentaenoate, cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate. 2. L’ensemble des paramètres sont centrés et réduits en utilisant les moyennes et écart-types de l’échantillon d’apprentissage (l’échantillon test étant supposé issu de la même distribution que l’échantillon d’apprentissage). Les moyennes et écarts-types de l'échantillon d'apprentissage sont fournis dans le tableau suivant : Moyenne Ecart-type C20:5ω3_EC 0,70065217 0,43111948 C22:6ω3_EC 0,56717391 0,21281879 Tot_ω3_EC 1,75413043 0,61243984 ratio_ω6_ω3_EC 31,3562904 12,3336094 ratio_dietω3_ω6_EC 0,04338134 0,01719207 ratio_EPADPAω3DHA_AA_EC 0,20686941 0,11487994 ratio_AA_EPA_EC 11,3806181 4,69275976 tot_ω3_LC_EC 1,26782609 0,55703945 3. Calcul de la formule mathématique à partir de l’échantillon test centré-réduit. 4. Afin d’obtenir la prédiction de la concentration en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine, le résultat obtenu à l’étape 3 est multiplié par l’écart-type de la concentration en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine de l’échantillon d’apprentissage. Les valeurs ainsi obtenues sont additionnées à la moyenne de la concentration en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine de l’échantillon d’apprentissage. L’écart-type et la moyenne de la concentration en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine de l’échantillon d’apprentissage sont les suivantes : - Moyenne : 16,64348 - Ecart-type : 2,915459 On entend par « échantillon d’apprentissage », l’échantillon de 46 donneurs post-mortem, auquel la méthode sgPLS a été appliquée afin d’obtenir l’algorithme de prédiction. On entend par « échantillon test » l’échantillon sanguin du sujet dont on cherche à déterminer la teneur rétinienne en acides gras oméga 3. Selon la méthode selon l’invention, l’échantillon sanguin est choisi parmi le sang total, le sérum et le plasma. Préférentiellement, l’échantillon est le plasma. Dans un mode de réalisation, la méthode selon l’invention comprend une étape de prélèvement sanguin et d’isolement du plasma. L’homme du métier pourra utiliser toute méthode connue d’isolement du plasma. Typiquement, le plasma pourra être séparé des globules rouges par centrifugation d’un échantillon de sang total. La méthode selon l’invention comprend en outre une étape d’extraction des lipides totaux. Les lipides totaux pourront eux être extraits à partir d’un échantillon sanguin, par toute méthode connue de l’homme du métier. Typiquement, les lipides totaux du plasma, du sang et du sérum sont extraits par la méthode de Moilanen & Nikkari (Moilanen & Nikkari Clin Chim Acta 1981 ;114(1) :111-116). La méthode selon l’invention comprend en outre une étape d’isolement des esters de cholestérol à partir des lipides totaux. Typiquement, les esters de cholestérol seront isolés à partir des lipides totaux, par toute méthode connue de l’homme du métier. A titre illustratif, les esters de cholestérol sont isolés à partir des lipides totaux selon une procédure décrite dans Bretillon et al 2008 (Bretillon et al Exp Eye Res 2008 ;87(6) :521-528). Méthode de prévention d ’une pathologie rétinienne liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 L’invention concerne une méthode de prévention d’une pathologie rétinienne liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 comprenant la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine selon la méthode de détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 selon l’invention. On entend par « pathologie rétinienne liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga 3 » toute pathologie associée, au moins en partie, à une diminution du contenu en acides gras polyinsaturés de la rétine. En effet, en tant que composants majeurs de la rétine humaine, les acides gras polyinsaturés oméga-3, et en particulier le DHA, sont essentiels à la structure et à la fonction de la rétine (SanGiovanni, J.P. & Chew, E.Y. The role of omega-3 long-chain polyunsaturated fatty acids in health and disease of the retina. Prog Retin Eye Res 24, 87-138 (2005)). La plus forte teneur en acides gras polyinsaturés oméga-3 se trouve dans les membranes externes des cellules photoréceptrices rétiniennes (Fliesler, S.J. & Anderson, R.E. Chemistry and metabolism of lipids in the vertebrate retina. Prog Lipid Res 22, 79-131 (1983)), où ils exercent des fonctions biologiques importantes par le biais d'activités anti-inflammatoires, anti-apoptotiques et anti-angiogéniques. Dans des études post-mortem, la concentration de DHA était significativement plus basse dans les yeux atteints d’une pathologie rétienne que chez les témoins du même âge (Liu, A., Chang, J., Lin, Y., Shen, Z. & Bernstein, P.S. Long-chain and very long-chain polyunsaturated fatty acids in ocular aging and age-related macular degeneration. J Lipid Res 51, 3217-3229 (2010)). Selon un mode de réalisation, la pathologie rétinienne liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga 3 est une rétinopathie telle que la dégénérescence maculaire liée à l’âge, la rétinopathie diabétique, la rétinopathie du prématuré. La néovascularisation oculaire est la cause la plus fréquence de cécité, et ce chez toutes les populations de patients, quel que soit leur âge : rétinopathie du prématuré chez les enfants, rétinopathie diabétique chez les adultes et dégénérescence maculaire liée à l’âge chez les personnes âgées. Un modèle animal a été élaboré afin d’étudier la rétinopathie (évaluation de l’apparition des néovaisseaux rétiniens, et de la croissance de ces vaisseaux après lésion sur un œil de souris). L’influence des acides gras polyinsaturés oméga-3 et oméga-6 sur la croissance vasculaire après lésion et la néovascularisation pathologique ainsi induite ont été étudiés sur un modèle de souris présentant une rétinopathie induite par hypoxie. Il a été démontré que l’augmentation des apports en acides gras polyinsaturés oméga-3 réduit l’angiogenèse pathologique. La prise d’une supplémentation en acides gras polyinsaturés oméga-3 serait donc avantageuse dans la prévention de la rétinopathie (Kip M Connor et al., (2007), Increased dietary intake of ω-3-polyunsaturated fatty acids reduces pathological retinal angiogenesis. Nature Medecine ; doi:10.1038/nm1591). Dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA) Selon un mode de réalisation, la pathologie est la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA). Il a en effet été démontré que le contenu en acides gras polyinsaturés de la rétine de sujet atteints de la DMLA était diminué (Liu, A., Chang, J., Lin, Y., Shen, Z. & Bernstein, P.S. Long-chain and very long chain polyunsaturated fatty acids in ocular aging and age-related macular degeneration. J Lipid Res 51, 3217-3229 (2010). De nombreuses publications ont également décrit la réduction du risque de DMLA associée à un apport alimentaire élevé en acides gras polyinsaturés oméga-3 (Chong, E.W., Kreis, A.J., Wong, .T.Y., Simpson, J.A. & Guymer, R.H. Dietary omega-3 fatty acid and fish intake in the primary prevention of age-related maculair degeneration : a systematic review and metaanalysis. Arch Ophthalmol 126, 826-833 (2008)), ainsi que la réduction du risque de DMLA associée à une concentration sanguine élevée en acides gras polyinsaturés oméga-3 (Merle BM, DElyfer MN, Korobelnik JF, Rougier MB, Malet F, Feart C, Le Goff M, Peuchant E, Letenneur L, Dartigues JF, Colin J, Barberger-Gateau P, Delcourt C. High Concentrations of plasma n3 Fatty Acids Are Associated with Decreased Risk for Late Age-Related macular Degeneration. J Nutr 143:505-11 (2013). Les stades précoces et intermédiaires de la DMLA comportent des altérations de l’épithélium pigmentaire à type d’hypo- ou d’hyperpigmentation et des drusen et ne sont pas responsables d’altération importante de la fonction visuelle. Les stades avancés (DMLA) correspondent aux formes exsudatives (humides ou néovasculaires) et aux formes atrophiques (sèches), responsables d’altérations sévères de la vision centrale. Selon les études, la prévalence de DMLA exsudative représente 35 à 65 % des stades avancés. DMLA précoce et intermédiaire : Les DMLA précoce et intermédiaire associent un ou plusieurs des éléments suivants entre eux : - drusen intermédiaires : petites taches jaunâtres asymptomatiques observées dans la région périmaculaire (diamètre compris entre 63 µm et 125 µm ) ; - grands drusen (également dits « séreux ») : drusen de plus grande taille (supérieur à 125 µm), le plus souvent asymptomatiques mais pouvant s’accompagner d’une diminution des capacités visuelles à l’obscurité ; - altérations pigmentaires à type d'hypopigmentation ou d’hyperpigmentation de l'épithélium pigmentaire. Elles traduisent la mort des cellules de l’épithélium pigmentaire. DMLA exsudative La DMLA exsudative est caractérisée par la prolifération de néovaisseaux choroïdiens qui traversent la membrane de Bruch et se développent sous l’épithélium pigmentaire ou dans l’espace sous-rétinien. DMLA atrophique La DMLA atrophique (ou atrophie géographique) est caractérisée une ou plusieurs plages de dépigmentation de la rétine, d’au moins 175 µm de diamètre, avec des bords nets et une visibilité accrue des vaisseaux choroïdiens. La classification simplifiée en quatre stades pour le diagnostic et le suivi de la DMLA peut être utilisée et ce telle que représentée dans le tableau 3 (Ferris FL, 3rd, Wilkinson CP, Bird A, Chakravarthy U, Chew E, Csaky K, Sadda SR. Clinical classification of age-related macular degeneration. Ophthalmology 2013;120:844-51). Catégorie 1: Pas de DMLA (pas d’anomalies ou anomalies dues au vieillissement) aucun ou quelques petits drusen (diamètre inférieur à 63 µm) ; pas d’anomalies pigmentaires (hypo- et hyper-pigmentation) Catégorie 2 : DMLA précoce Drusen intermédiaires (entre 63 et 125 µm), en l’absence de grands drusen (supérieur à 125 µm) Absence d’anomalies pigmentaires Catégorie 3 : DMLA intermédiaire Grands drusen (supérieur à 125 µm) Et/ou anomalies pigmentaires Catégorie 4 : DMLA avancée DMLA néovasculaire ou atrophique Les formes avancées de DMLA correspondent à la catégorie 4 et incluent les formes néovasculaires et l’atrophie géographique. Il s’agit de patients ayant en général déjà une baisse de l’acuité visuelle. Rétinopathie diabétique La rétinopathie diabétique (RD) est une complication micro vasculaire du diabète représentant la première cause de cécité aux États-Unis et en Europe avant 50 ans. L’excès de sucre dans le sang fragilise la paroi des capillaires. Il s’ensuit la rupture puis l’éclatement des vaisseaux rétiniens. Au fur et à mesure, des zones étendues de la rétine ne sont plus oxygénées. En réaction, la rétine produit de nouveaux vaisseaux encore plus fragiles. Le phénomène s'amplifie et s'étend jusqu'à la macula où se situe le centre de la vision. La macula s'épaissit, il se produit un œdème maculaire, responsable alors d’une baisse de l’acuité visuelle qui peut être très importante et que partiellement réversible (Fédération Française des Diabétiques, la rétinopathie diabétique et les maladies des yeux). . Les acides gras polyinsaturés à longue chaine (AGPLC), tels que l’acide docosahexaénoïque (DHA, C:22 6n-3) et l’acide arachidonique (AA, C20:4n-6) jouent un rôle clé dans la pathogenèse du diabète, au même titre que les métabolismes du glucose et des lipides. Il a été démontré que les AGPLC de la famille n-3 inhibent de nombreux processus cellulaires et biochimiques impliqués dans la physiopathologie de la rétinopathie diabétique et préviennent les dommages vasculaires rétiniens causés par le diabète (Koehrer P, Saab S, Berdeaux O, Isaico R, Gregoire S, et al. (2014) Erythrocyte Phospholipid and Polyunsaturated Fatty Acid Composition in Diabetic Retinopathy. PLoS ONE 9(9): e106912. doi:10.1371/journal.pone.0106912 ). Sala-Vila, A. et al. (Dietary Marine ω-3 Fatty Acids and Incident Sight-Threatening Retinopathy in Middle-Aged and Older Individuals With Type 2 Diabetes: Prospective Investigation From the PREDIMED Trial. JAMA Ophthalmol 134(10):1142-1149 (2016)), ainsi que Sasaki, M. et al. (The Associations of Dietary Intake of Polyunsaturated Fatty Acids With Diabetic Retinopathy in Well-Controlled Diabetes. Invest Ophthalmol Vis Sci 56(12):7473-7479 (2015)) ont également mis en évidence des anomalies du métabolisme des acides gras polyinsaturés omega-3 chez des sujets atteins de la rétinopathie diabétique. De nombreux articles montrent également une prévention des dysfonctions rétiniennes consécutives au diabète chez l’animal (Shen, J.H. et al. Effect of α-linolenic acid on streptozotocin-induced diabetic retinopathy indices in vivo. Arch Med Res 44(7), 514-520 (2013), Tikhonenko, M. et al. N-3 polyunsaturated Fatty acids prevent diabetic retinopathy by inhibition of retinal vascular damage and enhanced endothelial progenitor cell reparative function. PLoS One 8(1):e55177 (2013), Sapieha, P. et al. Omega-3 polyunsaturated fatty acids preserve retinal function in type 2 diabetic mice. Nutr Diabetes 23;2:e36. doi: 10.1038/nutd.2012.10 (2012), Tikhonenko, M. et al. Remodeling of retinal Fatty acids in an animal model of diabetes: a decrease in long-chain polyunsaturated fatty acids is associated with a decrease in fatty acid elongases Elovl2 and Elovl4. Diabetes 59(1):219-227 (2010)). Rétinopathie du prématuré La rétinopathie du prématuré (ROP) est une maladie neuro-vasculaire affectant les enfants prématurés. Cette pathologie est induite par une variété de facteurs qui induisent une première phase de réduction de la croissance des vaisseaux rétiniens et de dégénérescence micro-vasculaire et une seconde phase de néovascularisation pathologique, qui peut entrainer un décollement de la rétine. Le développement du cerveau et de la rétine a lieu au cours du troisième trimestre de grossesse. Les acides gras polyinsaturés à longue chaine sont sélectivement transférés de la mère au fœtus. Parmi ceux-ci, l’acide docosahexaénoïque (DHA) et l’acide arachidonique (AA) sont les plus abondants. Avec les soins courants, les enfants prématurés reçoivent d’insuffisantes quantités de DHA et d’AA comme en témoigne le faible taux sérique de ces acides gras. Les résultats d’études in vivo sur des animaux, comparant les apports nutritionnels en oméga-3 et oméga-6 suggèrent que ces lipides alimentaires essentiels affectent la santé rétinienne. Des recherches menées sur les acides gras polyinsaturés à longue chaine se sont principalement focalisées sur le rôle des oméga-3 et ont démontré que les acides gras polyinsaturés à longue chaine et plus particulièrement le DHA est essentiel pour le développement du cerveau et des yeux. Il a également été constaté que de faibles niveaux sériques d’acide arachidonique seraient impliqués dans la pathogénèse de la rétinopathie du prématuré (Chatarina A. Löfqvist, PhD; Svetlana Najm, MD; Gunnel Hellgren, PhD; Eva Engström, MD, PhD; Karin Sävman, MD, PhD; Anders K. Nilsson, PhD; Mats X. Andersson, PhD; Anna-Lena Hård, MD, PhD;Lois E. H. Smith, MD, PhD; Ann Hellström, MD, PhD, 2018, Association of Retinopathy of Prematurity With Low Levels of Arachidonic Acid, A Secondary Analysis of a Randomized Clinical Trial, JAMA Ophthalmol. doi:10.1001/jamaophthalmol.2017.6658). Cette mise en évidence des anomalies du métabolisme des acides gras polyinsaturés oméga-3 chez les enfants atteints de rétinopathie du prématuré a également été décrite par Pallot, C. et al. (Alteration of erythrocyte membrane polyunsaturated fatty acids in preterm newborns with retinopathy of prematurity. Sci Rep 9, 7930 (2019)) et Martin, C. R. et al. (Decreased postnatal docosahexaenoic and arachidonic acid blood levels in premature infants are associated with neonatal morbidities. J Pediatr 159, 743–749, e741–742 (2011)). Deux articles montrent également les effets des acides gras polyinsaturés omega-3 et de leurs dérivés oxygénés sur le phénotype rétinien chez un modèle animal de rétinopathie du prématuré (Connor, K. M. et al. Increased dietary intake of omega-3-polyunsaturated fatty acids reduces pathological retinal angiogenesis. Nat Med 13, 868–873 (2007) et Stahl, A. et al. Lipid metabolites in the pathogenesis and treatment of neovascular eye disease. Br J Ophthalmol 95, 1496–1501 (2011)). Méthode de prévention Les termes « prévention » ou « méthode de prévention » ne sont pas des termes absolus et, lorsqu’ils sont appliqués à une pathologie rétinienne associée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga 3 telle qu’une rétinopathie, ils désignent une procédure ou un plan d’action conçu, même avec une probabilité de succès faible mais devant induire un effet bénéfique global tel que le retard d’apparition de la pathologie, ou la diminution de la gravité d’un ou plusieurs symptômes ou la stabilisation de la pathologie. Typiquement, dans le cas de la DMLA et de la rétinopathie diabétique, la prévention s’entend de la prévention de la pathologie mais également de la prévention de l’aggravation de la pathologie. Typiquement la prévention de la DMLA ou de la rétinopathie diabétique s’entend du retard de l’apparition de la pathologie. La prévention de l’aggravation de la DMLA ou de la rétinopathie diabétique s’entend du retard de la perte de vision ou de la perte d’acuité visuelle chez le patient atteint de DMLA ou de rétinopathie diabétique. Typiquement, dans le cas de la rétinopathie du prématuré, la prévention s’entend de la prévention de l’apparition de la pathologie à la prévention de la sévérité de la pathologie. Typiquement, une augmentation du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine est associée à une diminution du risque d’apparition et/ou d’aggravation de la pathologie et/ou de sévérité. Méthode de traitement d’une pathologie rétinienne liée à un déficit en oméga-3 L’invention concerne également une méthode de traitement d’une pathologie rétinienne liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 comprenant: - la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine d’un sujet comprenant la quantification de la teneur en au moins 1 ester de cholestérol dans un échantillon sanguin dudit sujet, le contenu en en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine étant corrélé à la teneur dudit au moins un ester de cholestérol, ledit au moins un ester de cholestérol étant le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate ; - l’administration d’un traitement chez le sujet en ayant besoin. Typiquement, la pathologie rétinienne liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 est une rétinopathie telle que la dégénérescence maculaire liée à l’âge, la rétinopathie diabétique et la rétinopathie du prématuré. Ainsi, l’invention concerne également une méthode de traitement de la dégénérescence maculaire liée à l’âge comprenant : - la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine d’un sujet comprenant la quantification de la teneur en au moins 1 ester de cholestérol dans un échantillon sanguin dudit sujet, le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine étant corrélé à la teneur dudit au moins un ester de cholestérol, ledit au moins un ester de cholestérol étant le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate ; - l’administration d’un traitement chez le sujet en ayant besoin. Typiquement, ledit traitement pourra être choisi parmi une supplémentation nutritionnelle à base d’acides gras polyinsaturés oméga-3 associée ou non à l’administration de vitamines et minéraux. L’invention concerne également une méthode de traitement de la rétinopathie diabétique comprenant : - la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine d’un sujet comprenant la quantification de la teneur en au moins 1 ester de cholestérol dans un échantillon sanguin dudit sujet, le contenu en en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine étant corrélé à la teneur dudit au moins un ester de cholestérol, ledit au moins un ester de cholestérol étant le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate ; - l’administration d’un traitement chez le sujet en ayant besoin. Typiquement, ledit traitement pourra être choisi parmi une supplémentation nutritionnelle à base d’acides gras polyinsaturés oméga-3 associée ou non à l’administration de vitamines et minéraux. L’invention concerne également une méthode de traitement de la rétinopathie du prématuré comprenant : - la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine d’un sujet comprenant la quantification de la teneur en au moins 1 ester de cholestérol dans un échantillon sanguin dudit sujet, le contenu en en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine étant corrélé à la teneur dudit au moins un ester de cholestérol, ledit au moins un ester de cholestérol étant le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate ; - l’administration d’un traitement chez le sujet en ayant besoin. Typiquement, ledit traitement pourra être choisi parmi une supplémentation nutritionnelle à base d’acides gras polyinsaturés oméga-3 associée ou non à l’administration de vitamines et minéraux. Méthode de suivi de traitement d’une pathologie rétinienne liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 L’invention concerne une méthode de suivi de traitement d’une pathologie liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 comprenant les étapes : - d’administration d’au moins un traitement ; - de détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine selon la méthode de détermination selon l’invention. Typiquement, le traitement est une supplémentation nutritionnelle à base d’acides gras polyinsaturés oméga-3 associée ou non à l’administration de vitamines et minéraux. Selon un mode de réalisation, la pathologie est une rétinopathie choisie parmi la dégénérescence maculaire liée à l’âge, la rétinopathie diabétique, la rétinopathie du prématuré. Parmi les stratégies préventives émergentes, les acides gras polyinsaturés oméga-3 permettent de promouvoir une structure et une fonction rétiennes normales, ainsi que de réduire l’incidence et de ralentir la progression de la DMLA (SanGiovanni, J.P. & Chew, E.Y. The role of omega-3 long-chain polyunsaturated fatty acids in health and disease of the retina. Prog Retin Eye Res 24, 87-138 (2005)) mais également de prévenir toutes les rétinopathies (Kip M Connor et al., (2007), Increased dietary intake of ω-3-polyunsaturated fatty acids reduces pathological retinal angiogenesis.Nature Medecine ; doi:10.1038/nm1591). Typiquement, une augmentation du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 du contenu de la rétine est synonyme d’efficacité du traitement. Méthode de diagnostic de carences en acides gras polyinsaturés oméga-3 L’invention concerne une méthode de diagnostic de carences en acides gras polyinsaturés oméga-3 comprenant la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine selon la méthode de détermination selon l’invention. On entend par « carences en acides gras polyinsaturés oméga-3 », un déficit en acide gras polyinsaturés par rapport à un sujet sain, i.e., un sujet ne présentant pas de carences en acides gras polyinsaturés. Typiquement, une diminution du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 du contenu de la rétine est synonyme de carence en acides gras polyinsaturés oméga-3. Dans un mode de réalisation, la comparaison avec un échantillon témoin est réalisée. On entend par « échantillon témoin », la distribution des valeurs chez des sujets sains, i.e., des sujets ne présentant pas de carences en acides gras polyinsaturés. Le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine des sujets sains du groupe témoin est déterminé par la méthode selon l’invention. Exemples Dans les exemples qui suivent, les inventeurs ont déterminé les lipides circulants ayant la performance prédictive la plus élevée afin de déterminer le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine. Dans ces exemples, des données émanant de prélèvement d’yeux et de sang de donneurs ont permis d’établir un algorithme basé sur la concentration plasmatique de sept espèces d’esters de cholestérol, permettant de déterminer le contenu rétinien en acides gras oméga-3 (exemple 1). Les inventeurs ont par ailleurs démontré l’association entre DMLA et statut rétinien en acides gras polyinsaturés oméga-3 (exemple 2) ainsi que l’impact d’une supplémentation alimentaire en acides gras polyinsaturés oméga-3 (exemple 3), montrant ainsi que la combinaison de ces sept esters de cholestérol constitue un biomarqueur qui permet de mettre au point une médecine personnalisée pour identifier les sujets à risque de rétinopathie et plus particulièrement de DMLA et/ou de surveiller les supplémentations en acides gras polyinsaturés oméga-3. La capacité prédictive du seul cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate a également été démontrée à l’exemple 4. Matériels et Méthodes Dans les exemples qui suivent, les matériels et méthodes ci-après détaillés ont été utilisés. Les études sur des sujets humains ont été menées conformément aux directives de la Déclaration d'Helsinki. Des consentements écrits ont été obtenus et les protocoles ont été acceptés par les comités d'éthique locaux (CPP Sud Est I, hôpital universitaire, Saint Etienne, France; CPP Est III, hôpital universitaire, Dijon, France; CPP Sud-Ouest et Outre Mer III, hôpital universitaire, Bordeaux, France). Etude Donneurs Des globes oculaires, du plasma et des érythrocytes humains ont été obtenus de 46 donneurs (corps donnés à la Science, 30 femmes et 16 hommes, âge médian 86,5 ans, intervalle interquartile 76-92 ans). Les tissus ont été collectés et préparés selon les procédures déjà décrites et connues de l’homme du métier. Les échantillons ont été conservés à -80 ° C jusqu'à d'autres analyses. Etude cas-témoin Les sujets ont été sélectionnés parmi 2 études en cours à Bordeaux (étude Alienor) et à Dijon (étude Montrachet), qui utilisent des méthodes similaires. Entre 2009 et 2011, les participants étaient âgés de 75 ans ou plus et avaient subi un examen oculaire et un prélèvement de sang à jeun. Les examens oculaires ont eu lieu dans les services d’ophtalmologie des hôpitaux universitaires de Bordeaux et de Dijon, et ont consisté en un historique ophtalmologique, des mesures de l’acuité visuelle et de la réfraction et deux rétinographies non mydriatiques à 45°. Les photographies rétiniennes ont été interprétées conformément à la classification internationale et à une modification du système de classement utilisé dans l'étude multi-ethnique de l'athérosclérose pour la taille, l'emplacement et la superficie des druses. Les participants ont été classés en fonction de leur pire œil dans les trois groupes exclusifs suivants: - pas de DMLA, - DMLA précoce (présence de drusen séreux (> 125 microns) et / ou drusen réticulaire et / ou anomalies pigmentaires) ; - DMLA avancée (atrophie géographique ou maladie néovasculaire ). Les cas de DMLA étaient atteints de DMLA avancée (atrophie géographique ou maladie néovasculaire) et les témoins étaient exempts de toute forme de DMLA précoce ou avancée et présentaient une acuité visuelle supérieure à 20/40. Les critères d'exclusion pour les deux cas et les témoins étaient la présence de glaucome et la présence de diabète. Trente et un cas ont été identifiés parmi les participants ayant subi un examen ophtalmologique et un prélèvement sanguin à jeun entre 2009 et 2011 et les témoins ont été appariés dans un rapport 1:1 pour l'âge (+/- 2 ans), le sexe et l'utilisation de médicaments hypolipidémiants. Les échantillons de plasma ont été conservés à -80 C jusqu'à l'analyse des lipides. Etude de supplémentation Des échantillons de plasma ont été obtenus de 55 sujets participant à l’essai clinique en double aveugle et randomisé intitulé « influence de la lutéine sur la macula de personnes issues de parents AMD (LIMPIA) »-( Korobelnik JF, Rougier MB, Delyfer MN, Bron A, Merle BMJ, Savel H, Chene G, Delcourt C, Creuzot-Garcher C. Effect of Dietary Supplementation With Lutein, Zeaxanthin, and omega-3 on Macular Pigment: A Randomized Clinical Trial. JAMA Ophthalmol 2017;135:1259-66). Des participants adultes en bonne santé âgés de 40 à 70 ans ont été recrutés. Chaque participant a été randomisé dans un rapport de 1:1 pour recevoir soit deux capsules par jour d’un complément alimentaire contenant de la lutéine, de la zéaxanthine, de la vitamine C, de la vitamine E, du zinc, du cuivre, du resvératrol et également de l’huile de poisson riche en acides gras polyinsaturés oméga-3 (Nutrof Total, Laboratoires Théa) ou un placebo contenant de la paraffine. Des échantillons de sang ont été prélevés au début et après 3 et 6 mois de supplémentation. Le sang total a été centrifugé à 3 000 tours/minute pendant 10 minutes à 4°C pour isoler le plasma des globules rouges. Les échantillons de plasma ont été conservés à -80°C jusqu'à une analyse plus poussée. Analyses statistiques Etude donneurs : Le modèle avec l'erreur de prédiction la plus faible a été obtenu à l'aide d’une extension de la méthode de la régression des moindres carrés partiels (sgPLS ou sparse groupe PLS) décrite par Liquet et al (Liquet B et al. Bioinformatics. 2016 Jan 1;32(1):35·42). . Étude cas-témoin : Les différences entre les cas et les témoins pour le contenu prédit en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine, les acides gras polyinsaturés oméga-3 totaux dans le plasma et dans les globules rouges, ont été évaluées par régression linéaire mixte ajustée en fonction de l'âge, de l'indice de masse corporelle, du tabagisme, de l'utilisation du supplément en oméga-3, du HDL cholestérol et LDL cholestérol, avec un facteur aléatoire pour les paires cas-témoins. Etude de supplémentation : Les concentrations plasmatiques d'esters de cholestérol et le contenu prédit en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine ont été comparés entre les participants sous supplémentation et les participants sous placebo à l'aide de modèles de régression linéaire ajustés en fonction de l'âge, du sexe, de l'indice de masse corporelle (IMC), du cholestérol HDL et LDL. Toutes les valeurs p inférieures à 0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives. Les analyses pour les études de contrôle de cas et de supplémentation ont été effectuées à l'aide du logiciel SAS (SAS, version 9.4; SAS Institute Inc., Cary, Caroline du Nord, États-Unis). Exemple 1 : Identification d’un biomarqueur du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine Rationnel Le sang est un fluide complexe composé d’éléments cellulaires comprenant des globules blancs et des globules rouges, des plaquettes et une partie liquide appelée plasma. Les lipides sanguins se trouvent principalement dans les membranes des globules rouges et dans les particules de lipoprotéines plasmatiques. Les membranes des globules rouges sont presque exclusivement constituées de phospholipides. En raison d'une durée de vie d'environ 120 jours, la composition en acides gras des phospholipides des globules rouges est représentative de l'apport alimentaire à long terme des lipides. Par ailleurs, les lipoprotéines plasmatiques transportent des composés lipidiques biologiquement importants, tels que les chylomicrons et les lipoprotéines de très basse densité (VLDL) qui sont des structures transportant principalement les triglycérides formés dans l’intestin et dans le foie respectivement à partir de lipides et de glucides alimentaires. Leurs compositions en acides gras sont associées à l'apport alimentaire à très court terme. En revanche, les lipoprotéines de basse densité (LDL) et de haute densité (HDL) sont impliquées dans le transport à double sens des lipides entre le foie et les tissus périphériques. Ils sont enrichis en phospholipides (en particulier la sous-classe de phosphatidylcholine) et en esters de cholestérol. Les compositions en acides gras des LDL et des HDL sont considérées comme des indices de la consommation de graisses alimentaires à moyen terme. Afin de déterminer si les lipides d'un ou de plusieurs de ces compartiments sanguins pourraient constituer des indicateurs fiables du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine et de la supplémentation acides gras polyinsaturés oméga-3, l’étude BLISAR (Biomarkers of LIpid Status And Metabolism in Retinal ageing) a été menée entre 2015 et 2018. Résultats Le sang et les tissus oculaires de 46 donneurs humains provenant de l’Université de Saint-Étienne (corps donnés à la Science) ont été analysés afin de déterminer leur composition en acides gras par lipidomique. En plus des lipides plasmatiques rétiniens et totaux, les marqueurs à long et à moyen terme des lipides alimentaires ont été étudiés en isolant et en analysant les compositions en acides gras du plasma (lipides totaux, phosphatidylcholines et esters de cholestérol) ainsi que des globules rouges. Les profils en acides gras confirment l’importance quantitative des acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine (16,8% contre 3,4% dans les globules rouges et 2,9% dans les lipides totaux du plasma). Par une analyse lipidomique, un ensemble de données sur les lipides présents dans les 4 compartiments sanguins (globules rouges, plasma total, phosphatidylcholines plasmatiques et esters de cholestérol plasmatiques), correspondant à 332 espèces différentes a été généré. Le modèle avec l'erreur de prédiction la plus faible a été obtenu à l'aide d’une extension de la méthode de la régression des moindres carrés partiels (sgPLS ou sparse groupe PLS) et a été caractérisé par un coefficient de corrélation de 0,62 entre les valeurs observées et prédites du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine, obtenu par validation croisée. Ce prédicteur du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine est basé sur un algorithme combinant les concentrations plasmatiques de 7 espèces d’esters de cholestérol. Trois des esters de cholestérol identifiés sont de la famille des acides gras polyinsaturés oméga-3, c’est-à-dire le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate, le cholesteryl9,12,15-octadecatrienoate, le cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate Les quatre autres esters de cholestérol sont de la famille des acides gras polyinsaturés oméga-6 à savoir le cholesteryl 9,12-octadecadienoate, le cholesteryl 6,9,12-octadecatrienoate, le cholesteryl 8,11,14-eicosatrienoate, le cholesteryl 5,8,11,14-eicosatetraenoate. Les esters méthyliques des esters de cholestérol susmentionnés sont utilisés afin de déterminer et mesurer la quantité relative des acides gras des esters de cholestérol. La méthode de détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 est ci-après détaillée : Méthode de détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine La méthode de détermination des acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine se décompose en plusieurs étapes : 1. Prélèvement sanguin et isolement du plasma ; 2. Extraction des lipides totaux à partir du plasma ; 3. Isolement des esters de cholestérol à partir des lipides totaux ; 4. Formation des esters méthyliques des acides gras des esters de cholestérol, dit autrement, on forme des esters méthyliques à partir de l’acide gras issu de l’hydrolyse de l’ester de cholestérol ; 5. Détermination des quantités relatives de 25 esters méthyliques d’acides gras des esters de cholestérol ; 6. Calcul de la valeur estimée du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine à partir des quantités relatives des esters méthyliques d’acides gras de 7 esters de cholestérol. Prélèvement sanguin et isolement du plasma Un échantillon de sang est prélevé chez un sujet humain par ponction veineuse dans un tube traité à l'EDTA, au citrate ou à l'héparine. Le tube contenant le sang total est centrifugé à 3000 tours par minute pendant 10 minutes à 4°C afin de séparer le plasma des globules rouges. La phase supérieure contenant le plasma est prélevée et stockée dans un tube sec. Les lipides totaux du plasma peuvent être extraits immédiatement ou l'échantillon de plasma peut être congelé en attendant la suite des procédures. Extraction des lipides totaux du plasma Les lipides totaux du plasma sont extraits par la méthode de Moilanen & Nikkari (Moilanen & Nikkari Clin Chim Acta 1981;114(1):111·116). Dans un tube en verre, 5 millilitres d'un mélange de chloroforme/méthanol (1:1, v:v) sont ajoutés à un volume d'environ 450 microlitres de plasma. Le tube est agité au vortex pendant 1 minute puis centrifugé à 3000 tours par minute pendant 3 minutes. La phase supérieure est isolée dans un autre tube en verre à l'aide d'une pipette pasteur. Quatre millilitres de chloroforme sont ajoutés dans ce second tube ainsi que 3 millilitres de chlorure de sodium acide (17mmol/L). Le tube est agité au vortex pendant 1 minute puis centrifugé à 3000 tours par minute pendant 3 minutes. La phase supérieure est éliminée à l'aide d'une pipette pasteur alors que la phase inférieure contenant l'extrait des lipides plasmatiques est isolé dans un pilulier en verre. L'extrait de lipides totaux est d'abord séché sous un flux d'azote puis dilué dans du chloroforme à une concentration de 10mg/ml. Les esters de cholestérol peuvent être isolés immédiatement à partir des lipides totaux ou bien congelés en attendant la suite des procédures. Isolement des esters de cholestérol à partir des lipides totaux Les esters de cholestérol sont isolés à partir des lipides totaux selon une procédure décrite dans Bretillon et al 2008 (Bretillon et al Exp Eye Res 2008;87(6):521-528). Une plaque de verre recouverte de gel de silice est préalablement lavée dans une cuve de migration contenant 100mL d'acétate d'éthyle. Elle est ensuite placée à l'étuve à 120°, pendant 30 minutes pour être activée. Les lipides totaux extraits sont déposés sur la plaque sous forme d'une bande d'environ 3cm à l'aide d'une seringue en verre puis la plaque est placée pendant 25 à 30 minutes dans une cuve chromatographique de migration contenant 101 millilitres d'un mélange d'hexane/éther éthylique/acétate d'éthyle (80:20:1, v:v:v). La plaque est ensuite retirée de la cuve et laissée sous une hotte pendant quelques minutes. Elle est ensuite exposée à une vaporisation de 2',7'-dichlorofluorescéine puis observée sous une lumière ultraviolette à 366nm. La bande de silice contenant les esters de cholestérol située à environ 8 à 9 cm du dépôt est marquée à l'aide d'un crayon puis grattée à l'aide d'une lame de rasoir pour être récupérée dans un tube en verre dans lequel est ajouté 1 millilitre de toluène. Les esters de cholestérol isolés peuvent être transméthylés immédiatement en vue d'une analyse chromatographique ou bien conservés à 4°C en attendant la suite des procédures. Formation des esters méthyliques des acides gras des esters de cholestérol Les esters méthyliques des acides gras des esters de cholestérol sont formés par transméthylation selon la méthode de Morrison & Smith (Morrison & Smith J Lipid Res 1964;53:600·608). Un millilitre d'un mélange de Trifluorure de Bore/méthanol (1:1, v:v) est ajouté au tube contenant le gel de silice avec les esters de cholestérols et le toluène. Le tube est placé dans une étuve à 95°C pendant 2 heures. Il est ensuite refroidi à température ambiante. Après ajout de 5 millilitres de bicarbonate de sodium et 5 millilitres d'hexane, le tube est agité au vortex pendant 1 minute puis centrifugé à 3000 tours par minute pendant 3 minutes. La phase supérieure est isolée dans un tube en verre à l'aide d'une pipette pasteur. Après séchage des esters méthyliques des acides gras des esters de cholestérol sous un flux d'azote, ceux-ci sont dilués dans 1 millilitre d'hexane. Les esters méthyliques des acides gras des esters de cholestérol peuvent être analysés immédiatement par chromatographie en phase gazeuse ou stockés à 4°C en attendant la suite des procédures. Détermination du profil en acides gras des esters de cholestérol Le profil en acides gras des esters de cholestérol est déterminé par chromatographie en phase gazeuse couplée à une détection à ionisation de flamme selon Acar et al (Acar et al PloS One 2012;7{4): e35102). Les esters méthyliques des acides gras des esters de cholestérol sont injectés dans un chromatographe en phase gazeuse équipé d'une colonne CPSIL·88 (100m x 0,25mm de diamètre interne, épaisseur de film 0,20µm, Varian, Les Ulis, France). L'hydrogène est utilisé en tant que gaz vecteur à une pression de 210kPa. La température du four du chromatographe est de 60°C pendant 5 minutes, puis montée jusqu'à 165°C à 15°C par minute. Après être maintenue à 165°C pendant 1 minute, elle est montée jusqu'à 225°C à 2°C par minute. Elle est maintenue à 225°C pendant 17 minutes. Les températures de l'injecteur et du détecteur sont réglées à 250°C. Les esters méthyliques d'acides gras sont identifiés par comparaison de leurs temps de rétention à ceux de standards commerciaux. Les proportions relatives des 25 espèces d'esters méthyliques sont calculées à l'aide du logiciel EZChrom Elite (Agilent Technologies, Massy, France) et sont exprimés en pourcentage des acides gras totaux des esters de cholestérol. Calcul de la valeur estimée du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine Utilisation du % relatif de 7 esters méthyliques d'acides gras des esters de cholestérol : 9,12,15-octadecatrienoic acid methyl ester (C18:3n-3 methyl ester), 5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid methyl ester (C20:5n-3 methyl ester), 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid methyl ester (C22:6n-3 methyl ester), 9,12-octadecadienoic acid methyl ester (C18:2n-6 methyl ester), 6,9,12-octadecatrienoic acid methyl ester (C18:3n-6 methyl ester), 8,11,14-eicosatrienoic acid methyl ester (C20:3n-6 methyl ester), 5,8,11,14-eicosatetraenoic acid methyl ester (C20:4n-6 methyl ester). L'algorithme mathématique permet de prédire, pour un nouvel échantillon (échantillon test), le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine à partir du dosage des 7 molécules d'esters de cholestérol dans le plasma présentées ci-dessus. Cet algorithme est basé sur la méthode sparse group partial least squares {sgPLS} décrite par Liquet et al (Liquet B et al. Bioinformatics. 2016 Jan 1;32(1):35·42), qui a été appliquée à des échantillons de rétine, plasma et globules rouges collectés à partir de 46 donneurs humains (échantillon d'apprentissage). L’algorithme mathématique consiste en 4 étapes : 1. Plusieurs sommes et ratios sont calculés à partir des dosages des 7 molécules d’intérêt. 2. L’ensemble des paramètres sont centrés et réduits en utilisant les moyennes et écart-types de l’échantillon d’apprentissage (ce qui suppose que l’échantillon test est issu de la même distribution que l’échantillon d’apprentissage). 3. Le modèle obtenu par sgPLS est appliqué aux valeurs obtenues à l’étape 2. 4. Afin d’obtenir la prédiction de la concentration en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine, le résultat obtenu à l’étape 3 est multiplié par l’écart-type de la concentration en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine de l’échantillon d’apprentissage. Les valeurs ainsi obtenues sont additionnées à la moyenne de la concentration en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine de l’échantillon d’apprentissage. Conclusions De manière avantageuse, les espèces d'esters de cholestérol de la famille des acides gras polyinsaturés oméga-3 ont contribué de manière positive à l'estimation du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine alors que ceux de la famille des acides gras polyinsaturés oméga-6 ont abaissé ce contenu estimé, ce qui est compatible avec le métabolisme compétitif bien établi d’ oméga-3 et oméga-6. L’identification d’un biomarqueur basé sur les concentrations plasmatiques de 7 espèces lipidiques spécifiques est novatrice et avantageuse, car les études et tentatives précédentes, basées sur l'analyse de globules rouges ou de lipides plasmatiques totaux, n'ont pas permis d'établir de corrélation étroite entre les lipides circulants et le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine. Avantageusement encore, il est possible de confirmer la meilleure robustesse de la prédiction et ce comparativement aux études et approches ayant déterminé les teneurs en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans les globules rouges et le sang total (r = 0,62 versus r = 0,40 pour les acides gras oméga-3 des lipides totaux du plasma et r = 0,14 pour les acides gras oméga-3 des globules rouges). Cela indique qu’une approche plus subtile axée sur un petit nombre d’esters de cholestérol plasmatiques est plus efficace pour estimer le contenu rétinien en acides gras polyinsaturés oméga-3. De plus, l'identification des esters de cholestérol en tant que biomarqueurs du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine renforce les observations antérieures réalisées par les inventeurs, suggérant que ces lipides sont la source préférentielle d'acides gras pour la rétine. Exemple 2 : Association entre DMLA et statut rétinien en acides gras polyinsaturés oméga-3 Au cours de la deuxième phase de l’étude, l’association entre la DMLA et le statut en acides gras polyinsaturés oméga-3 a été étudiée. Premièrement, dans une étude cas-témoin post mortem, une teneur inférieure en acides gras polyinsaturés oméga-3 a été observée dans les rétines affectées par la DMLA (14,4% ± 1,9%) par rapport à celles de donneurs en bonne santé (16,8% ± 3,1%), confirmant ainsi les observations précédentes. Après ajustement pour l'âge, le sexe, le temps après le décès, la différence entre la teneur en acides gras polyinsaturés oméga-3 de rétines affectées par la DMLA et la teneur en acides gras polyinsaturés oméga-3 de rétines contrôles était de -2,41% (p = 0,04). Ensuite, en utilisant la méthode précédemment décrite (mesure des 25 esters de cholestérol du plasma, application de l’algorithme à ces mesures), la teneur prédite en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine a été comparée entre 31 sujets atteints de DMLA avancée et 31 témoins appariés pour l'âge, le sexe et l'utilisation de médicaments hypolipidémiants. Cette teneur prédite en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine était plus faible dans les cas que chez les témoins (17,8% contre 18,9%). Après ajustement en fonction de l'âge, de l'indice de masse corporelle, du tabagisme, de l'utilisation d’une supplémentation en oméga-3, du cholestérol HDL et du cholestérol LDL, la différence entre le contenu prédit en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine entre les cas de DMLA et les témoins était de -1,39% (p = 0,04). En revanche, dans les globules rouges, la teneur en acides gras polyinsaturés oméga-3 était similaire chez les cas et chez les témoins (6,0% contre 5,6% p = 0,42, après ajustement multivarié). Ces observations concordent parfaitement avec la physiopathologie de la DMLA, caractérisée par la perte du métabolisme riche en acides gras polyinsaturés oméga-3 des cellules photoréceptrices. Compte tenu des fonctions cruciales jouées par le DHA dans la structure et la fonction rétiniennes et de son épuisement dans les yeux de patients atteints de DMLA, il est logique de maintenir de hauts niveaux rétiniens d’acides gras polyinsaturés oméga-3 pour prévenir le développement et / ou la progression de la maladie. Cette hypothèse a été consolidée par plus de 20 études épidémiologiques montrant un risque significativement réduit de développer une DMLA chez les sujets consommant beaucoup d’acides gras polyinsaturés oméga-3. Toutefois, dans les deux essais randomisés (AREDS2 (Lutein + zeaxanthin and omega-3 fatty acids for age-related macular degeneration: the Age-Related Eye Disease Study 2 (AREDS2) randomized clinical trial. JAMA 2013;309:2005-15 et NAT2 Souied EH, Delcourt C, Querques G, Bassols A, Merle B, Zourdani A, Smith T, Benlian P. Oral Docosahexaenoic Acid in the Prevention of Exudative Age-Related Macular Degeneration: The Nutritional AMD Treatment 2 Study. Ophthalmology 2013;120:1619-31.), la supplémentation en acides gras polyinsaturés oméga-3 n'a pas modifié la progression de la maladie aux stades avancés de la maladie. Une explication possible de ces données contradictoires réside probablement dans la sensibilité des sujets à la supplémentation nutritionnelle. En effet, alors que la supplémentation en acides gras polyinsaturés oméga-3 n’avait aucun effet sur la progression de la DMLA lorsque l’ensemble de la population était prise en compte, il a été montré dans l’étude NAT2 que les sujets qui maintenaient des taux sanguins élevés et constants en acides gras polyinsaturés oméga-3 avaient un risque significativement plus faible de développer une DMLA avancée. Cette découverte souligne la nécessité de surveiller le statut métabolique des sujets participant aux interventions nutritionnelles. Exemple 3 : Sensibilité à une supplémentation alimentaire en acides gras polyinsaturés oméga-3 du contenu prédi t en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine La sensibilité à une supplémentation alimentaire en acides gras polyinsaturés oméga-3 du contenu prédit en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine a donc été évaluée. À cette fin, des échantillons de sang prélevés dans le cadre de l’essai clinique randomisé LIMPIA dans lequel des participants en bonne santé d’âge moyen recevaient une dose quotidienne de 676 mg d’acides gras polyinsaturés oméga-3 pendant 6 mois, ou un placebo ont été analysés. La plage interquartile du contenu prédit en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine au départ variait de 17,2% à 19,7% des acides gras totaux, avec des valeurs médianes d'environ 18,5% pour les deux groupes, ce qui est conforme aux précédentes observations chez des sujets sains d'âge moyen. Après 3 mois de supplémentation, le contenu prédit en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine était significativement augmenté chez les sujets supplémentés (valeurs médianes de 18,8% et 21,6% des acides gras totaux des groupes placebo et des groupes supplémentés, respectivement; p Après 6 mois de supplémentation, cette différence a été maintenue car le contenu prédit en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine correspondait parfaitement à celui calculé à 3 mois (valeurs médianes de 18,9 et 21,7% des acides gras totaux des groupes placebo et supplémenté, respectivement; p Ainsi, et avantageusement, un biomarqueur sanguin du statut en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine, basé sur la mesure de 7 espèces lipidiques plasmatiques, inversement corrélé au risque de DMLA avancée et augmenté avec la supplémentation en acides gras polyinsaturés oméga-3, a été identifié. Ce biomarqueur sanguin est ainsi un outil fiable et précis pour la préparation et la conduite d’essais cliniques mais permet également de prévenir l’apparition de pathologies rétiniennes liées à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 ainsi que de diagnostiquer des carences en acides gras polyinsaturés oméga-3. Exemple 4 : Calcul de la capacité prédictive de l'acide eicosapentaénoïque (C20:5n-3 ou EPA) : Les inventeurs ont vérifié s’il était possible de déterminer le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine à partir seulement du cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate (C20:5n-3 ou EPA) plutôt qu’à partir des 7 esters de cholestérol identifiés par la méthode sgPLS . Le résultat de la régression linéaire de la concentration en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine sur le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate est détaillé dans le tableau 4 : Coefficient p-value C20:5n-3 4.1717 4.98e-06 La capacité prédictive du C20:5n-3 a été évaluée en calculant le coefficient de corrélation entre les contenus en acides gras polyinsaturés oméga-3 dans la rétine prédits et ceux observés, estimé par validation croisée dans l’échantillon d’apprentissage de 46 donneurs. Un coefficient de corrélation r égal à 0.59 est obtenu. Ce résultat montre que la capacité de prédiction est presque similaire à celle obtenue par la formule mathématique issue de la méthode sgPLS ( r=0.62) avec seulement le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate (C20:5n-3). Avantageusement encore, il est ici démontré que le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate est un biomarqueur sanguin du statut en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine, au même titre que les 7 esters de cholestérol identifiés. Méthode de détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine d’un sujet comprenant la détermination de la teneur en au moins un ester de cholestérol dans un échantillon sanguin dudit sujet, le contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine étant corrélé à la teneur dudit au moins un ester de cholestérol, ledit au moins un ester de cholestérol étant le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate. Méthode de détermination selon la revendication 1 caractérisée en ce que la teneur de sept esters de cholestérol est déterminée. Méthode de détermination selon la revendication 2, caractérisée en ce que les sept esters de cholestérol sont le cholesteryl 5,8,11,14,17-eicosapentaenoate, le cholesteryl 9,12,15-octadecatrienoate, le cholesteryl 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoate, le cholesteryl 9,12-octadecadienoate, le cholesteryl 6,9,12-octadecatrienoate, le cholesteryl 8,11,14-eicosatrienoate, le cholesteryl 5,8,11,14-eicosatetraenoate. Méthode de détermination selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l’échantillon sanguin est choisi parmi le sang total, le sérum et le plasma. Méthode de prévention d’une pathologie rétinienne liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 comprenant la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine selon la méthode de détermination selon l’une quelconque des revendications 1 à 4. Méthode de prévention selon la revendication 5 caractérisée en ce que la pathologie est une rétinopathie choisie parmi la dégénérescence maculaire liée à l’âge, la rétinopathie diabétique et la rétinopathie du prématuré. Méthode de suivi de traitement d’une pathologie liée à un déficit en acides gras polyinsaturés oméga-3 comprenant la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine d’un patient à qui il a été administré un traitement, selon la méthode de détermination selon l’une quelconque des revendications 1 à 4. Méthode de suivi de traitement selon la revendication 7 caractérisée en ce que ladite pathologie est une rétinopathie choisie parmi la dégénérescence maculaire liée à l’âge, la rétinopathie diabétique et la rétinopathie du prématuré. Méthode de suivi de traitement selon la revendication 7 ou 8 caractérisée en ce que la pathologie est la dégénérescence maculaire liée à l’âge et ledit traitement est une supplémentation nutritionnelle à base d’acides gras polyinsaturés oméga-3 associée ou non à l’administration de vitamines et minéraux. Méthode de diagnostic de carences en acides gras polyinsaturés oméga-3 comprenant la détermination du contenu en acides gras polyinsaturés oméga-3 de la rétine selon la méthode de détermination selon l’une quelconque des revendications 1 à 4.