Brevet FR3110411A1 — publié le 20211126

La présente invention est relative à un complexe comprenant du rétinol, du tripeptide-1 et du lactate de menthyle, ainsi qu’à une composition cosmétique à application topique comprenant un tel complexe à titre d’ingrédient actif. Elle se rapporte également à un procédé cosmétique non thérapeutique pour les soins de la peau mettant en œuvre une telle composition, ainsi qu’à l’utilisation cosmétique et non thérapeutique d’une telle composition cosmétique pour une action anti-âge, et notamment pour favoriser la synthèse des protéines (fibronectine- collagène). Figure pour l’abrégé : Fig. 1 Complexe à base de rétinol, de tripeptide-1 et de lactate de menthyle et ses applications en cosmétique La présente invention se rapporte au domaine technique général des produits cosmétiques de soin, à usage topique, utilisables notamment sur la peau. Plus précisément, la présente invention est relative à un complexe comprenant du rétinol, du tripeptide-1 et du lactate de menthyle, ainsi qu’à une composition cosmétique à application topique comprenant un tel complexe à titre d’ingrédient actif. Elle se rapporte également à un procédé cosmétique non thérapeutique pour les soins de la peau mettant en œuvre une telle composition, ainsi qu’à l’utilisation cosmétique et non thérapeutique d’une telle composition cosmétique pour une action anti-âge, et notamment pour favoriser la synthèse des protéines (fibronectine- collagène). La peau est le principal organe du corps humain avec une surface totale d’environ 2 m². La peau comprend plusieurs couches intégrées, allant de la couche superficielle, l’épiderme, jusqu’aux couches plus profondes, le derme et l’hypoderme, et chacune de ces couches possède des propriétés spécifiques permettant à l’ensemble de réagir et de s’adapter aux conditions de son environnement. L’épiderme, principalement composé de kératinocytes, de mélanocytes et de cellules de Langerhans, joue un rôle fondamental pour assurer la protection et le maintien d’une bonne trophicité. Les kératinocytes sont des cellules extrêmement dynamiques qui subissent une prolifération et une différenciation permanentes aux termes desquelles elles se transforment en cellules mortes (cornéocytes), s’éliminant régulièrement par desquamation. Le derme se compose principalement de collagène, d’élastine et de protéoglycanes, molécules synthétisées par les fibroblastes dermiques. Les fibres de collagène assurent la résistance mécanique et la texture de la peau, l’élastine est responsable de l’élasticité, et les protéoglycanes, combinant protéines et glycosaminoglycane, jouent un rôle majeur de structure et d’hydratation de la peau. Les glycosaminoglycanes, tels que l’acide hyaluronique, sont des molécules très hygroscopiques qui sont capables de retenir des quantités importantes d’eau. D’autres cellules, comme les macrophages et les leucocytes, sont également présentes dans la couche du derme. L’hypoderme, qui est la couche la plus profonde de la peau, contient les adipocytes qui produisent des lipides pour que le tissu sous-cutané fabrique une couche lipidique protégeant les muscles, les os et les organes internes contre les chocs. La peau protège l’organisme des agressions extérieures, contribue à la respiration et est le principal organe jouant sur l’immunité. Les agressions de l’environnement, y compris les agressions climatiques telle que l'exposition au soleil, les variations de températures, la pollution, jouent un rôle néfaste sur la peau en générant des radicaux libres qui sont des espèces réactives de l’oxygène (ou ROS, de l’expression anglophone « Reactive oxygene species ») telles que l’anion superoxyde (O 2 •- ). L'attaque par voie radicalaire initie des réactions en chaîne qui ne s'arrêtent que lorsque deux radicaux libres s'inactivent mutuellement. En particulier, les radicaux libres génèrent un stress oxydant altérant les lipides membranaires des cellules de la peau et les cellules elles-mêmes, non seulement au niveau de l’ADN mitochondrial et des mitochondries, qui sont le centre énergétique des cellules et « l’atelier » de réparation cellulaire, provoquant un vieillissement prématuré et/ou accéléré de la peau. Il est donc important, non seulement de protéger les cellules de la peau des effets néfastes des agressions de l’environnement, mais également de stimuler les défenses naturelles de la peau afin de prévenir et/ou retarder l’apparition de signes de vieillissement cutanés tels que rides et ridules. Ces défenses naturelles peuvent être stimulées par ajout dans les compositions cosmétiques d’actifs tel que le rétinol. Le rétinol est une des formes de la vitamine A. En stimulant la synthèse du collagène et/ou de la fibronectine, il aide à lutter contre le vieillissement de la peau. Cependant le rétinol est susceptible de générer des effets d’inconfort, voire d’intolérance chez le consommateur ou la consommatrice. Il est donc nécessaire de trouver un actif ou un mélange d’actifs améliorant cette tolérance. Les travaux réalisés par la Demanderesse ont montré que l’association du Tripeptide-1 et du lactate de menthyle avec le rétinol améliore la tolérance dudit rétinol, tout en augmentant son efficacité. Cette association présente de plus un effet rafraichissant permettant de calmer les effets d’inconfort. De plus, les essais effectués ont montré qu’une telle association a un effet plus durable sur l’expression de la fibronectine, caractéristique d’une action anti-âge plus efficace. Ainsi, la présente invention a pour premier objet un complexe cosmétique comprenant du rétinol, du Tripeptide-1 et du lactate de menthyle. Un second objet de l’invention est l’utilisation cosmétique et non thérapeutique d’un complexe tel que défini selon le premier objet de l’invention, à titre d’ingrédient actif ayant des propriétés anti-âge et anti-rides, dans une composition cosmétique destinée à prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutané. Un troisième objet de l’invention est une composition cosmétique à application topique comprenant, dans un support cosmétiquement acceptable, au moins un complexe tel que défini selon le premier objet de l’invention, c’est-à-dire comprenant du rétinol, du Tripeptide-1 et du lactate de menthyle. Enfin, un quatrième objet de l’invention est un procédé de traitement cosmétique non thérapeutique pour prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutané comprenant au moins une étape d’application sur la peau d’une composition cosmétique à application topique telle que définie selon le troisième objet de l’invention, c’est-à-dire comprenant au moins un complexe tel que défini selon le premier objet de l’invention. Le Tripeptide-1, également connu sous l’acronyme “GHK” pour les acides aminés qui le constituent (glycine, histidine, et lysine), peut être utilisé, dans la présente invention, par exemple sous la forme de la solution aqueuse vendue sous la dénomination commerciale KOLLAREN BG 100® de la société LUCAS MEYER et renfermant également un dextrane. Il possède une action stimulante sur le collagène I et le collagène III, améliorant la fermeté de la peau. Le lactate de menthyle est un liquide incolore, conférant une action rafraichissante. Le complexe conforme à l’invention peut par exemple se présenter sous la forme d’un kit à plusieurs compartiments dans lequel un premier compartiment contient le rétinol, un deuxième compartiment contient le tripeptide-1 et le troisième compartiment le lactate de menthyle. En variante, ledit kit peut comprendre un compartiment contenant deux des constituants du complexe ci-dessus. La quantité de rétinol à utiliser selon l’invention peut varier par exemple de 0,01 à 1% en masse, de préférence de 0,05 à 0,5 % en masse, de préférence encore de 0,1 à 0,3 % en masse par rapport à la masse totale de la composition cosmétique. La quantité de tripeptide-1 à utiliser selon l’invention peut varier par exemple de 0,1 à 10 % en masse, de préférence de 0,5 à 5 % en masse, de préférence encore de 1 à 3 % en masse, par rapport à la masse totale de la composition cosmétique. La quantité de lactate de menthyle à utiliser selon l’invention peut varier par exemple de 0,1 à 10 % en masse, de préférence de 0,5 à 5 % en masse, de préférence encore de 1 à 3 % en masse, par rapport à la masse totale de la composition cosmétique. Selon une forme de réalisation préférée de l’invention, la composition cosmétique comprend de 0,1 à 0,2 % en masse de rétinol, de 1 à 2 %en masse de Tripeptide-1 et de 1 à 2 % en masse de lactate de menthyle, par rapport à la masse totale de la composition cosmétique. Au sens de la présente invention, on entend par « support cosmétiquement acceptable », les supports et excipients habituellement utilisés dans les compositions cosmétiques et/ou dermatologiques et qui sont compatibles avec la peau et/ou ses phanères, qui présentent une couleur, une odeur et un toucher agréables et qui ne génèrent pas d'inconforts inacceptables (picotements, tiraillements, rougeurs pour les utilisatrices et utilisateurs de ces compositions). A titre d’exemple, de tels supports comprennent généralement de l’eau, un mélange d’eau et d’un ou plusieurs solvants organiques, ou un solvant ou un mélange de solvants organiques cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptables. Suivant une forme avantageuse de réalisation, la composition cométique conforme à la présente invention peut contenir, outre le complexe décrit ci-dessus, c’est-à-dire outre le rétinol, le tripeptide-1 et le lactate de menthyle, un ou plusieurs actifs supplémentaires renforçant ou complétant avantageusement leur activité, et compatibles, c’est-à-dire non susceptibles de réagir les uns avec les autres ou de masquer ou limiter leurs effets. De tels ingrédients actifs peuvent par exemple être choisis parmi tout type de composés habituellement utilisés dans les compositions cosmétiques et tels que des émollients, des agents hydratants des couches supérieures de l’épiderme, des correcteurs de teint, des vitamines, des agents kératolytiques, des alpha-hydroxyacides, des agents stimulants de la circulation tels que par exemple des extraits de marron d’inde, de vigne rouge, de cyprès, etc... La composition cosmétique conforme à la présente invention peut se présenter sous les formes galéniques classiquement utilisées pour une application par voie topique, notamment sous forme de gel, d’émulsion (en particulier crème ou lait), d’émulsion biphasique huile-dans-eau ou eau-dans-huile, de masque, de pommade, lesdites formes galéniques contenant en outre des excipients et supports usuels et acceptables sur le plan cosmétologique. La composition cosmétique conforme à l’invention est de préférence utilisée sous forme de crème, de sérum, de lotion ou de gel. Ces formes d’application par voie topique sont préparées par les techniques usuelles, et par exemple, dans le cas d’une crème, par dispersion d’une phase grasse dans une phase aqueuse pour obtenir une émulsion huile-dans-eau, ou inversement pour préparer une émulsion eau-dans-huile dans les cas de crèmes. La composition cosmétique conforme à l’invention peut en outre renfermer un ou plusieurs excipients acceptables sur le plan cosmétologique. Ces excipients appropriés pour la formulation sont bien connus de l’homme du métier et comprennent en particulier les agents de pénétration tels que le phytantriol, l’octyl dodécanol et l’escine ; les épaississants tels que les gommes naturelles et les polymères de synthèse ; les tensioactifs ; les émulsionnants tels que des dérivés de polyglycérol ; les conservateurs tels que le phénoxyéthanol et l’acide déhydroacétique ; les colorants ; les parfums ; etc… On peut également ajouter à la composition cosmétique des agents de protection contre les rayons ultraviolets, et par exemple des filtres solaires UV-A et UV-B hydrophiles ou lipophiles, ou des filtres minéraux formant écran anti-ultraviolet. L’utilisation non thérapeutique de la composition cosmétique conforme à l’invention comprend tous les soins du corps et de la peau y compris les produits solaires, protecteurs et bronzants, les produits anti-âges, anti-séborrhéiques, toniques, les produits assurant l’amélioration de l’aspect de la peau y compris le traitement acnéique et les rougeurs cutanées, les agents dépigmentants et/ou de blanchiment de la peau, etc.. La composition cosmétique conforme à la présente invention est parfaitement tolérée par la peau, elle ne présente aucune phototoxicité et son utilisation sur des périodes, même prolongées, ne génère aucun effet systémique. De préférence, le procédé de traitement cosmétique non thérapeutique pour prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutané comprend une à deux applications par jour de la composition cosmétique conforme à l’invention sur les zones à traiter, principalement sur le visage et le cou. Les exemples suivants illustrent l’invention sans pour autant en limiter la portée, en référence aux figures annexées, dans lesquelles : est un graphique montrant les résultats du marquage du collagène I dans le derme papillaire sur tous les lots testés ; est un graphique montrant le pourcentage de surface occupée par le collagène I dans le derme papillaire sur tous les lots testés ; est un graphique montrant les résultats du marquage du collagène III dans le derme papillaire sur tous les lots testés ; est un graphique montrant le pourcentage de surface occupée par le collagène III dans le derme papillaire sur tous les lots testés ; est un graphique montrant les résultats du marquage de la fibronectine dans le derme papillaire sur tous les lots testés ; présente des photos comparatives de la morphologie générale (cellulaire et tissulaire) de l'excipient (E), de la composition de référence (R) et de la composition selon l'invention (P) après 11 jours de traitement. EXEMPLES EXEMPLE 1 : Préparation d’une crème de jour comprenant du rétinol, du Tripeptide-1 et du lactate de menthyle. Par les techniques usuelles, on a préparé une crème de jour pour le soin des peaux normales à mixtes ayant la composition massique indiquée ci-après (quantités indiquées en % en masse) : - 6,00 de glycérine vendue sous la dénomination commerciale GLYCERIN 4811® par la société UNIVAR - 4,00 de butylène glycol-1,3 vendu par la société UNIVAR - 5,00 d’eau des glaciers suisses vendue sous la dénomination commerciale SWISS GLACIER WATER® par la société BOTANICA - 0,25 de Chlorphénésine vendue sous la dénomination commerciale ELESTAB CPN ® par la société AMI - 0,50 d’un mélange aqueux d’acide lévulinique, de glycérine et de lévulinate de sodium vendu sous la dénomination commerciale DERMOSOFT 700 B ® par la société ADARA - 1,50 de copolymère d’acrylates de sodium & lécithine vendu sous la dénomination commerciale LECIGEL® par la société LUCAS MEYER - 2,00 copolymère d'hydroxyethyl acrylate/acrylate de sodium / acryloyldimethyl taurate de sodium, de squalane, de polysorbate 60 vendu sous la dénomination commerciale SIMULGEL NS® par la société SEPPIC - 8,00 de carbonate dicaprylyl et de tocophérol vendu sous la dénomination commerciale CETIOL CC® par la société BASF - 3,00 de beurre de karité vendu sous la dénomination commerciale LIPEX SHEA® par la société UNIPEX - 5,00 d’huile de macadamia raffinée vendue sous la dénomination commerciale HV-HUILE DE MACADAMIA RAFFINEE® par la société IMCD - 0,50 de cétyl phosphate de potassium vendu sous la dénomination commerciale AMPHISOL K® par la société IES INGREDIENTS - 2,00 d’un mélange de stéarate de sorbitane et d’acide stéarique vendu sous la dénomination commerciale MONTANE 60® par la société SEPPIC - 0,50 de Stéaroyl glutamate de sodium/chlorure de sodium vendu sous la dénomination commerciale EUMULGIN SG ® par la société BASF/AMI - 1,00 de lactate de menthyle vendu sous la dénomination commerciale FRESCOLAT ML CRYSTALS NEW QUALITY® par la société SAFIC-ALCAN - 0,30 de rétinol vendu sous la dénomination commerciale RETINOL CT50® par la société BIOPHIL - 1,00 de la solution aqueuse de Tripeptide-1 et de dextrane vendue sous la dénomination commerciale KOLLAREN BG 100® par la société LUCAS MEYER - Eau déminéralisée qsp 100,00. Cette crème de jour peut être utilisée une à deux fois par jour par application sur les zones de la peau à traiter. Elle permet de lutter contre les effets du vieillissement cutané. EXEMPLE 2 : Préparation d’un sérum aqueux comprenant du rétinol, du Tripeptide-1 et du lactate de menthyle Par les techniques usuelles, on a préparé un sérum aqueux pour les soins du visage ayant la composition massique indiquée ci-après (quantités indiquées en % en masse) : - 10,00 d’eau des glaciers suisses vendue sous la dénomination commerciale SWISS GLACIER WATER® par la société BOTANICA - 0,05 de EDTA disodique vendu sous la dénomination commerciale DISSOLVINE NA2P par la société BRENNTAG - 0,60 d’extrait de pamplemousse vendu sous la dénomination commerciale JAMONG 500G® par la société MAPRECOS - 0,30 de Chlorphénésine vendue sous la dénomination commerciale ELESTAB CPN ® par la société AMI - 0,50 de carbomer vendu sous la dénomination commerciale CARBOPOL ULTREZ 10® par la société GATTEFOSSE - 3,00 de copolymère d’acrylates de sodium & lécithine vendu sous la dénomination commerciale LECIGEL® par la société LUCAS MEYER - 0,80 de POTASSIUM CETYL PHOSPHATE vendu sous la dénomination commerciale AMPHISOL K® par la société IES INGREDIENTS - 4,00 de squalane vendu sous la dénomination commerciale PHYTOSQUALAN® par la société SOPHIM - 0,10 de tocophérol vendu sous la dénomination commerciale BIOXAN SF T50® par la société QUIMASSO - 1,50 de polysorbate 60 vendu sous la dénomination commerciale MONTANOX 60 DF® par la société SEPPIC - 2,00 de de lactate de menthyle vendu sous la dénomination commerciale FRESCOLAT ML CRYSTALS NEW QUALITY® par la société SAFIC-ALCAN - 3,00 de butylène glycol-1,3 de la société UNIVAR - 0,60 de rétinol vendu sous la dénomination commerciale RETINOL CT50® par la société BIOPHIL - 1,00 de la solution aqueuse de Tripeptide-1 et de dextrane vendue sous la dénomination commerciale KOLLAREN BG 100® par la société LUCAS - Eau déminéralisée qsp 100,00. Ce sérum peut être utilisé une à deux fois par jour par application sur les zones de la peau à traiter. Il permet de lutter contre les effets du vieillissement cutané. EXEMPLE 3 : Préparation d’un masque pour le visage comprenant du rétinol, du Tripeptide-1 et du lactate de menthyle Par les techniques usuelles, on a préparé un masque pour le visage ayant la composition massique indiquée ci-après (quantités indiquées en % en masse) : - 0,10 de disodium EDTA vendu sous la dénomination commerciale DISSOLVINE NA2® par la société BRENNTAG - 8,00 de glycérine vendue sous la dénomination commerciale GLYCERIN 4811® par la société UNIVAR - 0,2 de gomme xanthane vendue sous la dénomination commerciale RHODICARE T® par la société SACI-CFPA - 0,10 d'allantoïne de la société IES INGREDIENTS - 0,25 de chlorphénésine vendue sous la dénomination commerciale ELESTAB CPN ® par la société AMI - 0,20 de trométhamine vendu sous la dénomination commerciale TRIS AMINO ULTRA PC® par la société UNIVAR - 0,50 de mélange de glycine et d’acide caprylique vendu sous la dénomination commerciale LIPACIDE C8G® par la société SEPPIC - 5,00 d’huile de jojoba vendue sous la dénomination commerciale HV-HUILE DE JOJOBA GOLDEN® par la société BIOCOSMETICS - 5,00 d’Huile de Limnanthes vendue sous la dénomination commerciale HV-MEADOWFOAM SEED OIL® par la société SACI-CFPA - 0,50 de tocophéryl acétate vendu sous la dénomination commerciale BIOXAN E 1300 IU® par la société QUIMASSO - 3,00 de copolymère d’hydroxyéthyl acrylate/acryloyldiméthyle taurate de sodium, , de SQUALANE, de POLYSORBATE 60, de SORBITANE ISOSTEARATE vendu sous la dénomination commerciale SIMULGEL NS® par la société SEPPIC - 6,00 de diméthicone vendue sous la dénomination commerciale MASSOCARE SIL DM5® par la société QUIMASSO - 6,00 de cyclopentasiloxane vendu sous la dénomination commerciale MASSOCARE SIL CM 50® par la société QUIMASSO - 0,10 de rétinol vendu sous la dénomination commerciale RETINOL CT50® par la société BIOPHIL - 1,00 de la solution aqueuse de Tripeptide-1 et de dextrane vendue sous la dénomination commerciale KOLLAREN BG 100® par la société LUCAS MEYER - 1,00 de de lactate de menthyle vendu sous la dénomination commerciale FRESCOLAT ML CRYSTALS NEW QUALITY® par la société SAFIC-ALCAN - Eau déminéralisée qsp 100,00. Ce masque peut être utilisé 2 à 3 fois par semaine, par application sur le visage à traiter. Il permet de lutter contre les effets du vieillissement cutané. EXEMPLE 4 : Préparation d’une lotion nettoyante comprenant du rétinol, du Tripeptide-1 et du lactate de menthyle Par les techniques usuelles, on a préparé une lotion nettoyante pour le visage ayant la composition massique indiquée ci-après (quantités indiquées en % en masse) : - 5,00 d’eau des glaciers suisses vendue sous la dénomination commerciale SWISS GLACIER WATER® par la société BOTANICA - 0,05 d’Extrait de Centella asiatica vendu sous la dénomination commerciale HETEROSIDES® par la société SEPPIC - 0,25 de Benzoate de Sodium vendu sous la dénomination commerciale PUROX S® par la société UNIVAR - 3,00 de pentylène glycol vendu sous la dénomination commerciale HYDROLITE 5 GREEN® par la société SAFIC-ALCAN - 0,50 d’allantoïne de la société IES INGREDIENTS - 0,30 de chlorphénésine vendue sous la dénomination commerciale ELESTAB CPN ® par la société AMI - 1,00 de copolymère réticulé acrylates/C10-30 alkyl acrylate vendu sous la dénomination commerciale CARBOPOL ULTREZ 20® par la société GATTEFOSSE - 12,00 de glycérine vendue sous la dénomination commerciale GLYCERIN 4811® par la société UNIVAR - 0,30 de Poudre de Chondrus crispus vendue sous la dénomination commerciale GENUVISCO CARRAGEENAN CG-131® par la société AZELIS - 10,00 de lauroyl sarcosinate de sodium vendu sous la dénomination commerciale PROTELAN LS 9011 / SL® par la société QUIMASSO - 0,10 de rétinol vendu sous la dénomination commerciale RETINOL CT50® par la société BIOPHIL - 1,00 de la solution aqueuse de Tripeptide-1 et de dextrane vendue sous la dénomination commerciale KOLLAREN BG 100® par la société LUCAS MEYER - 1,00 de lactate de menthyle vendu sous la dénomination commerciale FRESCOLAT ML CRYSTALS NEW QUALITY® par la société SAFIC-ALCAN - Eau déminéralisée qsp 100,00. Cette lotion peut être utilisée quotidiennement sur le visage ; elle permet de lutter contre les effets du vieillissement cutané. Les exemples 5 à 7 ci-après démontrent que la composition selon l’invention booste la synthèse des protéines anti-âge (collagène et fibronectine) de manière plus importante que le rétinol, tout en diminuant l’inflammation provoquée par ce dernier, à partir d’explants de peau humaine ex vivo. Produits testés (% massique) Composition E (Excipent) - 96,73 % eau - 0,27 % ELESTAB CPN® (chlorphénésine) - 3,00 % SOLUBILISANT LRI (PPG-26-BUTETH-26 / PEG-40 HYDROGENATED CASTOR OIL / AQUA) Composition R (Référence) - 96,53 % eau - 0,27 % ELESTAB CPN® - 0,20 RETINOL CT50® (RETINOL / POLYSORBATE 20 / TOCOPHEROL) - 3,00 % SOLUBILISANT LRI Composition P (Produit selon l’invention) - 94,53 % eau - 0,27 % ELESTAB CPN® - 3,00 % SOLUBILISANT LRI - 0,20 % RETINOL CT50® - 1,00 % FRESCOLAT ML CRYSTALS® (lactate de menthyle) - 1,00 % KOLLAREN BG 100® (EAU / BUTYLENE GLYCOL BEHENATE / DEXTRANE / TRIPEPTIDE-1)° Préparation des explants : 35 explants de 12±1 mm de diamètre ont été préparés à partir d’une plastie abdominale d’une femme de type caucasien âgée de 43 ans (phototype III). Les explants ont été mis en survie en milieu BEM (BIO-EC’s Explants Medium) à 37°C en atmosphère humide, enrichie de 5 % de CO2. Répartition des explants Les explants ont été répartis en 5 lots comme suit : Lots Désignation Traitement Nbr explant Prélèvement T0 Témoin plastie Aucun 3 J0 T Témoin non traité Aucun 8 J5 et J11 E Excipient E 8 J5 et J11 R Référence R 8 J5 et J11 P Produit P 8 J5 et J11 Application des produits A J0, J1, J4, J6 et J8, les produits E, R et P ont été appliqués en topique, à raison de 2 μL par explant (2 mg/cm2) et étalés à l’aide d’une spatule. Les explants des lots témoins T n’ont reçu aucun traitement, excepté le renouvellement du milieu. Le milieu a été renouvelé pour moitié (1 ml par puits) à J1, J4, J6 et J8. Prélèvements A J0, les 3 explants du lot T0 ont été prélevés et coupés en deux. Une partie a été fixée dans une solution de formol tamponnée, et l’autre a été congelée à –80°C. A J5 et à J11, 3 explants de chaque lot ont été prélevés et traités de la même façon qu’à J0. Le quatrième explant a été congelé entièrement et conservé à -80°C. A J5 et J11, le milieu de culture BEM de chaque lot a été prélevé à raison de 2mL par explant, en vue d’éventuels dosages. Traitements histologiques Après 24h dans le formol tamponné, les prélèvements ont été déshydratés et imprégnés en paraffine à l’aide d’un automate de déshydratation Leica PEARL. Ils ont été mis en bloc à l’aide d’une station d’enrobage Leica EG 1160. Des coupes de 5 μm ont été réalisées à l’aide d’un microtome type Minot, Leica RM 2125 et montées sur des lames de verre histologiques Superfrost®. Les échantillons congelés ont été coupés à 7 -µm d’épaisseur avec un cryostat Leica CM 3050. Les coupes ont ensuite été montées sur des lames de verre silanisées Superfrost® Plus. Les observations microscopiques ont été réalisées en microscopie optique, à l’aide d’un microscope Leica type DMLB ou Olympus BX43. Les prises de vue ont été réalisées avec une caméra Olympus DP72 et le logiciel Cell^D. Exemple 5 : contrôle de la viabilité cellulaire La viabilité cellulaire des structures épidermiques et dermiques a été observée sur coupes paraffinées après coloration au trichrome de Masson variante de Goldner. Elle a été évaluée par un examen microscopique. Lots concernés : T0, (T, E, R, P) à J5 et J11, soit 27 explants A J0, sur le lot témoin T0, la viabilité cellulaire est bonne dans l’épiderme et dans le derme. A J11, sur le lot témoin TJ11, la viabilité cellulaire est assez bonne dans l’épiderme et bonne dans le derme. Effet de l’application des produits sur la viabilité cellulaire, comparé au lot TJ11 : - L’excipient E induit de très légères altérations épidermiques - La référence R induit de légères altérations épidermiques - Le produit P induit de très légères altérations épidermiques Effet des produits sur la viabilité cellulaire, comparé au lot EJ11 : - La référence R induit une légère augmentation des altérations cellulaires - Le produit P n’induit aucune modification. Exemple 6 : Collagènes Le collagène est une protéine structurale qui renforce et soutient les tissus conjonctifs tels que la peau, les os et ligaments. Il constitue la protéine la plus abondante chez les mammifères, en représentant environ 25-30% de la masse corporelle totale. Actuellement 27 types de collagène (I à XXVII) ont été identifiés et regroupés en deux grandes sous-familles : les collagènes fibrillaires et les collagènes non-fibrillaires. Dans la peau, ils représentent 60 à 75% (du poids sec) et on y retrouve les collagènes principaux de type I, III, IV, V, VII, VIII, XII, XVI… Le collagène de type I est un collagène fibrillaire qui s’associe de façon très organisée avec les collagènes de type III et V pour former les fibres de collagènes. Le collagène VII joue un rôle essentiel dans le renforcement et la stabilisation de la peau et est un constituant majeur des fibrilles d’ancrage dans la sub-lamina densa. Le collagène de type IV est un collagène non-fibrillaire qui est l’élément structural le plus important des membranes basales. Lors du vieillissement physiologique ou après des expositions aux UVs, l’expression des collagènes, tels que collagène I, collagène III ou collagène IV peut diminuer à cause d’une dégradation spécifique induite par des collagénases, protéases neutres et cathépsines lysosomiales. La figure 1 compare les résultats du marquage du collagène I dans le derme papillaire et la figure 2 le pourcentage de surface occupée par le collagène I dans le derme papillaire à J5 et J11. On note qu’à J11, sur le lot témoin EJ11, 60,1 % de la surface du derme papillaire est occupée par l'immunomarquage du collagène-I. Effet des produits sur l'expression du collagène-I, comparé au lot EJ11 : - la référence R induit augmentation significative de 25%** - le produit P induit augmentation significative de 35%**. (p La figure 3 compare les résultats du marquage du collagène III dans le derme papillaire et la figure 4 le pourcentage de surface occupée par le collagène III dans le derme papillaire à J5 et J11. On note qu’à J11, sur le lot témoin EJ11, 71,5 % de la surface du derme papillaire est occupée par l'immunomarquage du collagène-III. Effet des produits sur l'expression du collagène-III, comparé au lot EJ11 : - la référence R induit diminution significative de 12%* - le produit P induit diminution non-significative de 3%. (*:p Conclusion Le produit P augmente significativement l'expression du collagène I après 11 jours de traitement. Il augmente également significativement l'expression du collagène III après 5 jours de traitement. Ce niveau d'expression est maintenu après 11 jours de traitement. En comparaison avec la référence R , le produit P présente une activité comparable après 5 jours de traitement. Après 11 jours de traitement, le produit P surexprime plus fortement le collagène I. De plus, il maintient une surexpression de collagène III, alors qu'elle diminue avec la référence R . Exemple 6 : Fibronectine Le marquage de la fibronectine dans le derme papillaire sur tous les lots est présenté sur la figure 5. A J0, sur le lot témoin T0, le marquage de la fibronectine est modéré à assez net dans le derme papillaire. A J5 , sur le lot témoin TJ5, l’expression de la fibronectine est faible dans le derme papillaire. Effet de l’application des produits sur l’expression de la fibronectine, comparé au lot TJ5 : - L’excipient E n’induit aucune modification - La référence R induit une augmentation modérée - Le produit P induit une augmentation modérée. Effet des produits sur l’expression de la fibronectine, comparé au lot EJ5 : - La référence R induit une augmentation modérée - Le produit P induit une augmentation modérée. Evaluation de l’activité anti-âge d’un produit à partir d’explants de peau humaine ex vivo A J11, sur le lot témoin TJ11, l’expression de la fibronectine est faible dans le derme papillaire. Effet de l’application des produits sur l’expression de la fibronectine, comparé au lot TJ11 : - L’excipient E induit une légère diminution - La référence R n’induit aucune modification - Le produit P induit une augmentation légère. Effet des produits sur l’expression de la fibronectine, comparé au lot EJ11 : - La référence R induit une augmentation légère - Le produit P induit une augmentation modérée. Des cellules nettement marquées ont été observées dans le derme papillaire pour le lot RJ11 et, de manière encore plus importante, pour le lot PJ11. Ceci suggère qu’une synthèse de la fibronectine est toujours en train de se reproduire au sein des fibroblastes des lots concernés, avec une augmentation de son expression potentiellement plus visible sur un end-point plus tardif. Fibronectine (% surface) T0 TJ5 EJ5 RJ5 PJ5 TJ11 EJ11 RJ11 PJ11 Moyenne 37,6 19,8 16,4 32,2 28,6 17,8 13,9 17,4 23,6 Ecart-type 9,2 5,0 4,7 3,9 5,9 5,0 2,5 4,2 3,0 A J0 , comme présenté sur la Table 2 ci-dessus, sur le lot témoin T0, 37,6% de la surface du derme papillaire est occupée par l’immunomarquage de la fibronectine. A J5, sur le lot témoin TJ5, 19,8% de la surface du derme papillaire est occupée par l’immunomarquage de la fibronectine. Effet de l’application des produits sur l’expression de la fibronectine dans le derme papillaire, comparé au lot TJ5 : - L’excipient E induit une diminution non-significative de 17% - La référence R induit une augmentation significative de 63% ** - Le produit P induit une augmentation significative de 44% ** . Effet des produits sur l’expression de la fibronectine, comparé au lot EJ5 : - La référence R induit augmentation significative de 95%** - Le produit P induit augmentation significative de 75%** A J11, sur le lot témoin TJ11, 17,8% de la surface du derme papillaire est occupée par l’immunomarquage de la fibronectine. Effet de l’application des produits sur l’expression de la fibronectine dans le derme papillaire, comparé au lot TJ11 : - L’excipient E induit une diminution significative de 22% # . - La référence R induit une diminution non-significative de 2%ns - Le produit P induit une augmentation significative de 33%* * Effet des produits sur l’expression de la fibronectine, comparé au lot EJ11 : - La référence R induit augmentation significative de 25%# - Le produit P induit augmentation significative de 69%** En comparaison avec la référence R (rétinol à 0,2 %), le produit P présente une activité anti-âge comparable, mais qui se prolonge jusqu’à 11 jours, alors qu’elle diminue avec la référence R. Il présente donc, un effet plus durable sur l’expression de la fibronectine, caractéristique d’une activité anti-âge plus efficace. De plus, la référence R provoque des altérations épidermiques plus importantes qu’avec l’excipient E, ce qui n’est pas le cas du produit P (voir les photos comparatives présentées sur la figure 6). Note : Dans tout le texte ci-dessus : ns:non-significatif / #:p $ Complexe cosmétique comprenant du rétinol, du tripeptide-1 et du lactate de menthyle. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce qu’il se présente sous la forme d’un kit à plusieurs compartiments dans lequel un premier compartiment contient le rétinol, un deuxième compartiment contient le tripeptide-1 et le troisième compartiment le lactate de menthyle. Utilisation cosmétique et non thérapeutique d’un complexe tel que défini selon l’une des revendications 1 ou 2, à titre d’ingrédient actif ayant des propriétés anti-âge et anti-rides, dans une composition cosmétique destinée à prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutané. Composition cosmétique à application topique comprenant, dans un support cosmétiquement acceptable, du rétinol, du tripeptide-1 et du lactate de menthyle. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que la quantité de rétinol varie de 0,01 à 1 % en masse, de préférence de 0,05 à 0,5 % en masse, de préférence encore de 0,1 à 0,3 % en masse, par rapport à la masse totale de ladite composition cosmétique. Composition selon l’une des revendications 4 ou 5, caractérisée en ce que la quantité de tripeptide-1 varie de 0,1 à 10 % en masse, de préférence de 0,5 à 5 % en masse, de préférence encore de 1 à 3 % en masse, par rapport à la masse totale de ladite composition cosmétique. Composition selon l’une quelconque des revendications 4 à 6, caractérisée en ce que la quantité de lactate de menthyle varie de 0,1 à 10 % en masse, de préférence de 0,5 à 5 % en masse, de préférence encore de 1 à 3 % en masse, par rapport à la masse totale de la composition cosmétique. Composition selon l’une quelconque des revendications 4 à 7, caractérisée en ce qu’elle comprend de 0,1 à 0,2 % en masse de rétinol, de 1 à 2 % en masse de tripeptide-1 et de 1 à 2 % en masse de lactate de menthyle par rapport à la masse totale de la composition cosmétique. Procédé cosmétique non thérapeutique pour prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutané comprenant au moins une étape d’application sur la peau d’une composition cosmétique à application topique telle que définie à l’une quelconque des revendications 4 à 8.