Brevet FR3101886A1 — publié le 20210416

La présente invention concerne une cellule souche humaine génétiquement modifiée, dans laquelle ladite cellule souche humaine comprend un acide nucléique exogène comprenant une région codant pour une protéine de fusion comprenant une protéine cytochrome P450 2B6 humaine mutante (CYP2B6*) de SEQ ID No.1 ou un variant ou un fragment de celle-ci et une protéine NADPH-cytochrome P450 réductase de SEQ ID No.2 ou un variant ou un fragment de celle-ci, liée de manière fonctionnelle à un promoteur, ledit acide nucléique exogène ayant été intégré dans un des gènes sphère de sécurité « safe harbor » de ladite cellule souche humaine. L’invention concerne également l’utilisation de ladite cellule pour le traitement du cancer et/ou les récidives de cancer et/ou des métastases associées, notamment les tumeurs solides, et en particulier les carcinomes hépatocellulaires et/ou des métastases associées. Cellule souche humaine génétiquement modifiée exprimant une protéine cytochrome P450 2B6 humaine mutante et son utilisation dans le traitement du cancer La présente invention concerne une cellule souche humaine génétiquement modifiée, dans laquelle ladite cellule souche humaine comprend un acide nucléique exogène comprenant une région codant pour une protéine de fusion comprenant une protéine cytochrome P450 2B6 humaine mutante (CYP2B6*) de SEQ ID No.1 ou un variant ou un fragment de celle-ci et une protéine NADPH-cytochrome P450 réductase de SEQ ID No.2 ou un variant ou un fragment de celle-ci, liée de manière fonctionnelle à un promoteur, ledit acide nucléique exogène ayant été intégré dans un des gènes sphère de sécurité « safe harbor » de ladite cellule souche humaine. L’invention concerne également l’utilisation de ladite cellule pour le traitement du cancer, notamment les tumeurs solides, et en particulier les carcinomes hépatocellulaires. Art antérieur Les cancers du foie représentent mondialement plus de 841 080 nouveaux cas par année, dont 90% sont des carcinomes hépatocellulaires. Le carcinome hépatocellulaire est la troisième cause de mortalité par cancer dans le monde. L'infection chronique par les virus de l'hépatite C (VHC) et de l'hépatite B (VHB) ou encore la cirrhose alcoolique sont les principales causes du carcinome hépatocellulaire. Par ailleurs, depuis ces 10 dernières années, l'émergence de la stéatohépatite non alcoolique (NASH) liée à l'augmentation de l'obésité, des états pré-diabétique et du diabète de type 2, est une cause émergeante d'hépatocarcinome. Le traitement du carcinome hépatocellulaire est indispensable sous peine d'une évolution fatale. Au regard de l'augmentation des patients atteints de stéatohépatites non-alcooliques, il est fort probable que le nombre de patients atteints de carcinome hépatocellulaire augmentera dans les années à venir. La survie spontanée des patients atteint de carcinome hépatocellulaire n'excède pas 15 mois. La classification BCLC (Barcelona Cancer Liver Center) permet de distinguer 5 types de situation clinique. Les stades 0 et A (précoce) (15% des patients) définissent des patients avec une maladie précocement diagnostiquée, en bon état général et porteur d'un carcinome hépatocellulaire inférieur à 3cm. Ces patients sont éligibles aux seuls traitements curatifs que sont la chirurgie de résection tumorale et transplantation hépatique. La survie à 5 ans est de 60%. Le stade B (intermédiaire) concerne des patients dont l'état général est conservé mais présentant un ou des carcinome(s) hépatocellulaire(s) dont la taille dépasse les 3 cm, sans envahissement du tronc porte ou de métastases. Ces patients peuvent bénéficier de chimioembolisation hépatique à la doxorubicine. La médiane de survie de ces patients est de 20 mois. Le stade C (avancé) défini un patient atteint d'un hépatocarcinome avec envahissement portal, des métastases ganglionnaires et pulmonaires associées à une altération modérée de son état général. Le traitement de référence à ce stade avancé est le Sorafénib, inhibiteur multikinases antiangiogénique administré par voie orale, commercialisé sous le nom de Nexavar® par Onyx/Bayer. Chez ces patients la médiane de survie est de 11 mois. D'autres traitements de seconde ligne ont été récemment approuvés. Il s'agit du Regorafenib (inhibiteur de kinase) commercialisé sous le nom de Stivarga® par Bayer et le Nivolumab (anticorps anti-PD1) commercialisé sous le nom d’Opdivo®, par BMS. Tous ces traitements ont une efficacité limitée et sont responsables d'effets indésirables majeurs (diarrhées, perte de poids, syndrome main-pied et hypophosphatémie, hypertension artérielle) souvent à l'origine d'une mauvaise observance du traitement aboutissant à des résultats suboptimaux. Le stade D concerne les patients arrivés au stade palliatifs pour lequel seuls des soins de support peuvent être proposés. Ainsi, il existe donc un besoin de nouvelles formes efficaces de traitement du cancer, notamment les tumeurs solides et en particulier des carcinomes hépatocellulaires, en particulier des traitements pouvant fournir une thérapie contrôlée et soutenue, seule ou en combinaison avec d’autres thérapies, tout en améliorant la qualité de vie du patient et en diminuant les effets secondaires liés au traitement. Afin de prévenir et/ou traiter le cancer et/ou les métastases associées, et en particulier les tumeurs solides, et notamment le carcinome hépatocellulaire et/ou les métastases associées, les inventeurs ont mis au point une nouvelle cellule souche humaine génétiquement modifiée capable de métaboliser le cyclophosphamide et d’induire la mort immunologique des cellules tumorales en provoquant une forte réponse immunitaire anti-tumorale. Cellule souche humaine génétiquement modifiée, dans laquelle ladite cellule souche humaine comprend un acide nucléique exogène comprenant une région codant pour une protéine de fusion comprenant une protéine cytochrome P450 2B6 humaine mutante (CYP2B6*) de SEQ ID No.1 ou un variant ou un fragment de celle-ci, ledit variant ou fragment ayant au moins 80% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID No.1 et comprenant les résidus 114V, 199M et 477W tels que représentés dans la séquence d’acides aminés SEQ ID No.1 ; et une protéine NADPH-cytochrome P450 réductase de SEQ ID No.2 ou un variant ou un fragment de celle-ci, , ledit variant ou fragment ayant au moins 80% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID No.2 ; liée de manière fonctionnelle à un promoteur, ledit acide nucléique exogène ayant été inséré dans un des gènes sphère de sécurité « safe harbor » de ladite cellule souche humaine et caractérisée en ce que ladite cellule souche humaine génétiquement modifiée n’étant pas une cellule souche humain d’origine embryonnaire. Cellule souche humaine génétiquement modifiée selon la revendication 1, dans laquelle ladite cellule souche humaine est choisie parmi les cellules souches mésenchymateuses (MSC), les cellules souches pluripotentes induites (iPSC) et les cellules souches mésenchymateuses induites (iMSC). Cellule souche humaine génétiquement modifiée selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le gène sphère de sécurité « safe harbor » choisi parmi : le site AAVS1 du chromosome 19, le site CCR5 du chromosome 3, le site hROSA26 du chromosome 3, le site 323 du chromosome 1, le site 325 du chromosome 8, le site 289 du chromosome 1, le site 227 du chromosome 1, le site 229 du chromosome 2, le site 253 du chromosome 2, le site 255 du chromosome 5, le site 257 du chromosome 7, le site 259 du chromosome 14, le site 261 du chromosome 17, le site 263 du chromosome X, le site 317 du chromosome 2, le site 303 du chromosome 2 , le site 331 du chromosome 3, le site 283 du chromosome 4, le site 231 du chromosome 4, le site 315 du chromosome 5, le site 327 du chromosome 5, le site 305 du chromosome 5, le site 307 du chromosome 16, le site 309 du chromosome 20, le site 285 du chromosome 6,le site 233 du chromosome 6, le site 311 du chromosome 6, le site 299 du chromosome 6, le site 301 du chromosome 7, le site 293 du chromosome 8, le site 319 du chromosome 11, le site 333 du chromosome 12, le site 295 du chromosome 12, le site 329 du chromosome 12, le site 297 du chromosome 17, le site 291 du chromosome 22, le site 313 du chromosome X et le site 321 du chromosome X. Cellule souche humaine génétiquement modifiée selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle le promoteur est un promoteur constitutif, de préférence le promoteur EF1-α. Cellule souche humaine génétiquement modifiée selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle ledit acide nucléique exogène comprend en outre un gène marqueur de sélection. Cellule souche humaine génétiquement modifiée selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle la cellule souche humaine a été obtenue par transduction rétrovirale avec un vecteur viral comprenant l’acide nucléique exogène. Cellule souche humaine génétiquement modifiée selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, pour son utilisation en tant que médicament. Cellule souche humaine génétiquement modifiée pour son utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce qu’elle est sous une forme adaptée pour son administration par voie trans-artérielle. Procédé de sélection de cellules souches génétiquement modifiées selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu’il comprend les étapes de : a) transduction des cellules souches humaines avec un vecteur viral comprenant l’acide nucléique exogène, b) mise en culture des cellules souches humaines dans un milieu de culture prédéfini, c) sélection les cellules souches humaines génétiquement modifiées exprimant le gène marqueur de sélection à leur surface membranaire. Composition pharmaceutique comprenant la cellule souche humaine génétiquement modifiée selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Composition pharmaceutique selon la revendication 10, comprenant en outre au moins un second principe actif. Composition pharmaceutique selon la revendication 11, dans laquelle le second principe actif est un agent anti-cancéreux. Composition pharmaceutique selon l’une quelconque des revendications 10 à 12, caractérisée en ce qu’elle est sous une forme adaptée pour son administration par voie trans-artérielle. Cellule souche humaine génétiquement modifiée selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 ou composition pharmaceutique selon l’une quelconque des revendications 10 à 13 pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement du cancer et/ou les récidives de cancer et/ou des métastases associées, de préférence des tumeurs solides, de préférence les carcinomes hépatocellulaires, et/ou des métastases associées.