Brevet FR3112943A1 — publié le 20220204

L’invention concerne un polysaccharide statistique de masse moléculaire moyenne en poids comprise entre 100kDa et 1000kDa de formule I : Formule I dans laquelle : Rc est un groupement comportant un agent chélatant, Z est un liant pouvant être une simple liaison ou une chaine hydrocarbonée comportant entre 1 et 12 atomes de carbone, ladite chaine pouvant être linéaire ou ramifiée et pouvant comporter une ou plusieurs insaturations et pouvant comporter un ou plusieurs hétéroatomes, de préférence choisis parmi l’azote, l’oxygène, le soufre et les atomes de la famille des halogènes, x est compris entre 0,005 et 0,6, y est compris entre 0,1 et 0,9, le rapport y/x étant supérieure à 0,16, la somme x + y étant supérieure à 0,4. L’invention a également trait à l’utilisation dudit polysaccharide dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal, dans un procédé d’imagerie IRM., dans un procédé de Curie-thérapie ou dans procédé de marquage anti-contrefaçon de denrées alimentaires. Polysaccharide comportant un groupement chélatant soluble à pH physiologique et utilisation de celui-ci ** La présente divulgation relève du domaine des composés porteur d’un groupe chélatant. En particulier, l’invention concerne les polysaccharides chélatés ou pouvant chélater un ou plusieurs métaux et leurs utilisations dans des techniques diverses telles que la dialyse pour l’homéostasie, l’imagerie par IRM, la Curie-thérapie ou encore le marquage anti-contrefaçon de denrées alimentaires. Les polysaccharides sont des polymères issus de la biomasse végétale, fongique, animale ou bactérienne. Ces polymères possèdent des propriétés physicochimiques très variées et peuvent être mis en forme pour un large éventail d’applications biologiques. La modification chimique des polysaccharides permet d’adapter leurs propriétés, en particulier leur solubilité en milieu aqueux à des pH proches de la neutralité. Leur fonctionnalisation par des agents chélatants hautement spécifiques permet également des applications dans le domaine biomédical. En effet, après greffage de ces motifs sur la structure de polysaccharides, le polymère pourrait être utilisé en tant que détoxifiant pour purifier les organismes vivants de métaux pathogènes comme dans le cadre du maintien de l’homéostasie. Le maintien de l’homéostasie du milieu intérieur de l’organisme, c’est-à-dire de l’ensemble des liquides ou fluides biologiques de l’organisme, est nécessaire au bon fonctionnement de ce dernier. Dans de nombreuses pathologies, des dysrégulations systémiques ou locales de l’homéostasie des métaux et/ou de peptides ou protéines ont été mises en évidence. En ce qui concerne les métaux, des thérapies de chélation, visant à diminuer la concentration en ions métalliques sont déjà utilisées depuis de nombreuses années dans les cas d’intoxications aigues. Ainsi, un certain nombre de chélatants sont déjà acceptés chez l’homme, chacun étant associé à un groupe de métaux particuliers (G. Crisponi et al., Coordination Chemistry Reviews, 2015). De plus en plus d’études scientifiques mettent en avant le rôle important que pourraient avoir les métaux dans nombre d’atteintes neurologiques, notamment le fer, mais également le cuivre, le zinc, le manganèse et même l’aluminium et le plomb (E. J. McAllum et al., J. Mol. Neurosci., 2016). C’est en particulier le cas pour la neurodégénérescence avec surcharge en fer qui est une maladie rare associée à une anomalie génétique liée à une accumulation du fer dans certaines zones du cerveau et qui ne bénéficie à ce jour que de traitements palliatifs (S. Wiethoff et al., Handb. Clin. Neurol., 2017). Par ailleurs, de nombreuses études ont montré que le fer avait tendance à s’accumuler dans le cerveau avec l’âge (J. Acosta-Cabronero et al., Journal of Neuroscience, 2016). La maladie de Wilson est aussi une maladie génétique entrainant une accumulation de cuivre dans l’organisme et entrainant différents problèmes en particulier hépatiques et/ou neurologiques (Anna Członkowskal et al., Nature Rev., 2018). Plusieurs maladies neurologiques telles qu’Alzheimer, Parkinson et la maladie d’Huntington s’accompagnent également d’accroissement de la quantité de fer dans des zones spécifiques entrainant des dommages cellulaires ainsi que du stress oxydant (A. A. Belaidi et al., Journal of Neurochemistry, 2016). A titre d’exemple, la maladie de Huntington est une maladie neurodégénérative se traduisant par des troubles du mouvement, un déclin cognitif et des problèmes d’ordre psychiatriques. Dans cette pathologie, de nombreux marqueurs du stress oxydant sont observés au niveau du cerveau qui peut être relié à une dérégulation de l’homéostasie du fer (S. J. A. van den Bogaard et al., International Review of Neurobiology, 2013). L’augmentation du niveau de fer au niveau de plusieurs régions du cerveau (putamen, noyau caudé et pallidum) a été ainsi validée par plusieurs études IRM dont celle de Bartzorkis (G. Bartzorkis et al., Archives of Neurology, 1999). Dans la maladie d’Alzheimer notamment, il a été mis en évidence des interactions entre certains ions métalliques, notamment des ions issus de métaux tels le zinc, le fer ou le cuivre, avec les peptides Aß pouvant conduire à une agrégation accrue des protéines (Tougu et al. Metallomics, 2010). Il est ainsi admis que dans de nombreuses protéinopathies, les cations métalliques jouent un rôle important dans la formation de configurations anormales de certaines protéines, en particulier certains favorisent la formation d’agrégats, fibrilles ou autres dépôts solides. Dans les protéinopathies, on serait ainsi localement dans une double dérégulation de l’homoéostasie, dérégulation de l’homéostasie de certains métaux et dérégulation de l’homéostasie de molécules cibles de type protéines, à l’origine des agrégats et autres dépôts solides. La demande de brevet WO 2019/122790 divulgue un dispositif médical pouvant être introduit dans l’organisme pour le maintien de l’homéostasie métallique à des fins thérapeutiques comprenant un agent chélatant permettant d’extraire des métaux. Problème technique S’il existe donc des dispositifs médicaux qui donnent satisfaction, il est toujours bénéfique d’améliorer les résultats obtenus à ce jour. Par ailleurs, un dispositif comprenant un agent chélatant pouvant être utilisé pour capter un métal dans un organisme peut potentiellement être introduit dans l’organisme sous une forme déjà chélatée. Dans cette dernière configuration, d’autres applications très variées sont envisageable, comme l’imagerie à résonance magnétique (IRM), la Curie thérapie, ou encore le marquage anti-contrefaçon de denrée alimentaires. Ainsi, un objectif de l’invention est de proposer un polysaccharide comportant un agent chélatant pouvant être introduit dans un organisme sous forme chélatée ou non pour son utilisation dans diverses applications. L’invention concerne un polysaccharide statistique de masse moléculaire moyenne en poids comprise entre 100kDa et 1000kDa de formule I : Formule I dans laquelle : Rc est un groupement comportant un agent chélatant, Z est un liant pouvant être une simple liaison ou une chaine hydrocarbonée comportant entre 1 et 12 atomes de carbone, ladite chaine pouvant être linéaire ou ramifiée et pouvant comporter une ou plusieurs insaturations et pouvant comporter un ou plusieurs hétéroatomes, de préférence choisis parmi l’azote, l’oxygène, le soufre et les atomes de la famille des halogènes, x est compris entre 0,005 et 0,6, y est compris entre 0,1 et 0,9, le rapport y/x étant supérieure à 0,16, la somme x + y étant supérieure à 0,4. L’invention a également trait à l’utilisation dudit polysaccharide dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal. L’invention concerne aussi l’utilisation dudit polysaccharide dans un procédé d’imagerie IRM. L’invention est en outre dirigée vers l’utilisation dudit polysaccharide dans un procédé de Curie-thérapie. L’invention se rapporte également à l’utilisation dudit polysaccharide dans un procédé de marquage anti-contrefaçon de denrées alimentaires. D’autres caractéristiques, détails et avantages apparaîtront à la lecture de la description détaillée ci-après, et à l’analyse des dessins annexés, sur lesquels : Fig. 1 La est un chromatogramme HPLC-UV obtenu en utilisant une colonne SEC Phenomenex GFC-P 4000 d’un polysaccharide selon l’invention. Fig. 2 La est Spectre RMN 1H d’un polysaccharide selon l’invention. Fig. 3 La est un graphique représentant l’Intensité de luminescence à 594 nm en fonction de la quantité d’europium ajoutée dans une solution comprenant un polysaccharide selon l’invention. Fig. 4 La représente un graphique d’analyse thermogravimétrique d’un chitosane de masse moléculaire moyenne en poids de 600 kDa avec un taux d’acétylation de 0,5% et d’un polysaccharide selon l’invention greffé avec du DOTAGA (graphique A) et un graphique représentant les courbes dérivées (graphique B). Fig. 5 La représente la déconvolution de deux spectres infrarouges à transformée de Fourier. Fig. 6 La représente deux graphiques de l’évolution de la quantité de métaux en fonction du temps dans une solution dialysée par de l’eau ultrapure (graphique A) et un fluide de dialyse comprenant un polysaccharide selon l’invention greffé avec du DOTAGA ( graphique B). Fig. 7 La représente trois graphiques de l’évolution de la quantité de métaux en fonction du temps dans un fluide de dialyse comprenant un polysaccharide selon l’invention greffé avec du DOTAGA. Description détaillée de l’invention Comme préalablement indiqué, l’invention concerne un polysaccharide statistique de masse moléculaire moyenne en poids comprise entre 100kDa et 1000kDa de formule I : Formule I dans laquelle : Rc est un groupement comportant un agent chélatant, Z est un liant pouvant être une simple liaison ou une chaine hydrocarbonée comportant entre 1 et 12 atomes de carbone, ladite chaine pouvant être linéaire ou ramifiée et pouvant comporter une ou plusieurs insaturations et pouvant comporter un ou plusieurs hétéroatomes, de préférence choisis parmi l’azote, l’oxygène, le soufre et les atomes de la famille des halogènes, x est compris entre 0,005 et 0,6, y est compris entre 0,1 et 0,9, le rapport y/x étant supérieure à 0,16, la somme x + y étant supérieure à 0,4. De manière préférée, le polysaccharide selon l’invention présente une constante de complexation d’au moins 10 15 pour un élément de transition d ou f. Le groupement Rc Conformément à l’invention, le groupement Rc est un agent chélatant. En d’autres termes le groupement Rc permet de chélater un ou plusieurs métaux en formant un complexe. Le groupement Rc peut contenir un ou plusieurs sites de coordination. De préférence, le site de coordination est un atome d’azote ou d’oxygène. De manière avantageuse, le groupement Rc comporte entre 4 et 8 sites de coordination, de manière plus avantageuse entre 6 et 8 sites de coordination et de manière encore plus avantageuse le groupement Rc comporte 8 sites de coordination. On entend par site de coordination une unique fonction capable de chélater un métal. Par exemple, une fonction amine représente un site de coordination par la formation d’une liaison dative entre l’atome d’azote et le métal et une fonction acide hydroxamique représente également un site de coordination par la formation d’une liaison dative entre l’oxygène du motif carbonyle et par une liaison covalente avec l’oxygène du motif N-oxyde le site de coordination formant ainsi un cycle à cinq chainons. Dans un mode de réalisation de l’invention, le groupement Rc est choisi dans le groupe constitué du DOTA (acide 1,4,7,10-tétraazacyclododécane-N,N’,N’’,N’’’-téracétique), NOTA (acide 1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-triacétique), NODAGA (acide 1,4,7-triazacyclononane-1-glutarique-4,7-acide diacétique), DOTAGA (acide 2-(4,7,10-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tétraazacyclododécan-1-yl)pentanedioïque), DOTAM (1,4,7,10-tetrakis(carbamoylméthyl)-1,4,7,10 tétraazacyclododécane), NOTAM (1,4,7-tetrakis(carbamoylméthyl)-1,4,7-triazacyclononane), DOTP (1,4,7,10-tétraazacyclododécane 1,4,7,10-tétrakis(méthylène phosphonate), NOTP (1,4,7-tétrakis(méthylène phosphonate)-1,4,7-triazacyclononane), TETA (acide 1,4,8,11-tétraazacyclotétradécane-N,N’,N’’,N’’’-téraacétique), TETAM (1,4,8,11-tétraazacyclotétradécane-N,N’,N’’,N’’’-tétrakis(carbamoyl méthyl), du DTPA (acide diéthylène triaminopentaacétique) et DFO (deferoxamine), de préférence dans le groupe constitué du DOTAGA, DFO, DOTAM et du DTPA et de manière plus préférée le groupement Rc est le DOTAGA. Le liant Z Le choix du liant Z dans la formule I dépend essentiellement du groupement Rc et du métal à chélater. En effet, pour des raisons stériques notamment, le groupement Rc peut être plus ou moins proche du cycle à 6 chainons de l’unité C. Dans la formule I, Z est une simple liaison ou une chaine hydrocarbonée comportant entre 1 et 12 atomes de carbone, ladite chaine pouvant être linéaire ou ramifiée et pouvant comporter une ou plusieurs insaturations et pouvant comporter un ou plusieurs hétéroatomes, de préférence choisis parmi l’azote, l’oxygène, le soufre et les atomes de la famille des halogènes. Dans un mode de réalisation particulier Z est une chaine alkyle comportant entre 1 et 12 atomes de carbone. Dans un autre mode de réalisation particulier, Z est un polyéthylène glycol (PEG). Unités monomériques du polysaccharide selon l’invention Le polysaccharide selon l’invention est composé de 3 unités monomériques, à savoir une unité A de type N-acétylglucosamine, une unité B de type glucosamine et une unité C de type glucosamine fonctionnalisée par un agent chélatant (Rc) lié par un liant Z à l’azote de la glucosamine. Le polysaccharide selon l’invention est un polymère statistique. En d’autres termes, l’enchainement des différentes unités monomériques A, B et C est aléatoire. Dans la formule I, x représente la proportion d’unités A et x est compris entre 0,005 et 0,6, de manière préférée, x est compris entre 0,1 et 0,6, de manière plus préférée x est compris entre 0,35 et 0,45. Dans la formule I, y représente la proportion d’unités C et y est compris entre 0,1 et 0,9. Le reste des unités monomériques de la formule I sont des unités B. Ainsi, dans la formule I, la proportion d’unités B est égale à 1-x-y. Conformément à l’invention, dans la formule I, le rapport y/x est supérieur à 0,16. En effet, l’efficacité du produit est déterminé par le nombre de site de chélation, directement lié au nombre de métaux nécessaires par exemple pour une détection par imagerie. Pour pouvoir être introduit sous forme liquide dans un organisme tout en produisant les effets désirés, le polysaccaride selon l’invention doit être soluble à pH physiologique. Pour ce faire, la somme x + y est supérieure à 0,4. La combinaison du rapport particulier entre le nombre d’unités A et le nombre d’unités C et de la somme de la proportion d’unités A et de la proportion d’unité C, permet d’obtenir une chélation et une solubilité adéquat pour permettre l’utilisation du polysaccharide selon l’invention dans des domaines varié tels que la dialyse pour la captation d’au moins un métal, l’imagerie IRM, la Curie-thérapie et le marquage anti-contrefaçon de denrées alimentaires. De manière avantageuse, x est compris entre 0,1 et 0,6, de préférence entre 0,35 et 0,45. De manière avantageuse, y est compris entre 0,05 et 0,6, de préférence entre 0,1 et 0,3. Le polysaccharide selon l’invention a une masse moléculaire moyenne en poids comprise entre 100kDa et 1000kDa, de manière avantageuse, la masse moléculaire moyenne en poids du polysaccharide selon l’invention est comprise entre 250kDa et 750 kDa, de manière plus avantageuse entre 400 kDa et 600kDa et de manière encore plus avantageuse, entre 450kDa et 550kDa. Procédé d’obtention du polysaccharide selon l’invention Le polysaccharide selon l’invention peut être obtenu à partir de chitosane, partiellement acétylé ou non, en particulier par acétylation d’une partie des fonctions amines puis fonctionnalisation d’au moins une partie des fonctions amines toujours présentes après l’acétylation. Dans un mode de réalisation particulier, le procédé d’obtention du polysaccharide selon l’invention comporte au moins les trois étapes successives suivantes : Etape 1 : solubilisation d’un chitosane dans une solution acide à un pH compris entre 4 et 5 ; Etape 2 : acétylation partielle des fonctions amines du chitosane solubilisé en étape 1 (formation des unités A) ; Etape 3 : fonctionnalisation d’au moins une partie des fonctions amines toujours présentes à l’issu de l’étape 2 (formation des unités C). L’étape 3 peut être subdivisée en plusieurs sous étapes, notamment lorsque le liant Z est une chaine hydrocarbonée telle que définit précédemment. Dans les modes de réalisations où le liant Z est une chaine hydrocarbonée telle que définit précédemment, l’étape 3 peut comprendre une sous étape 3-1 consistant à greffé ladite chaine hydrocarbonée sur au moins une partie des fonctions amines toujours présentes à l’issue de l’étape 2, puis une sous étape 3-2 consistant au greffage du groupement Rc sur ladite chaine hydrocarbonée. De manière alternative, l’étape 3 ne comporte pas de sous étape. Dans cette alternative, ladite chaine hydrocarbonée est couplée avec le groupement Rc préalablement à l’étape 3, ladite étape 3 est alors réalisée avec une molécule comprenant le groupement Rc et ladite chaine hydrocarbonée. De manière alternative, le polysaccharide selon l’invention peut être obtenu à partir d’un chitosane présentant le taux d’acétylation souhaité, ainsi, dans ce mode de réalisation les unités A sont déjà présentes et n’ont pas besoin d’être formée. Dans ce mode de réalisation, le procédé d’obtention du polysaccharide selon l’invention comporte au moins les deux étapes successives suivantes : Etape 1b : solubilisation d’un chitosane partiellement acétylé (unité A) dans une solution acide à un pH compris entre 4 et 5 ; Etape 2b : fonctionnalisation d’au moins une partie des fonctions amines dudit chitosane partiellement acétylé solubilisé à l’étape 1b (formation des unités C). De la même manière que précédemment pour ladite étape 3, ladite étape 2b peut être subdivisée en plusieurs sous étapes, notamment lorsque le liant Z est une chaine hydrocarbonée telle que définit précédemment. Dans les modes de réalisations où le liant Z est une chaine hydrocarbonée telle que définit précédemment, l’étape 2b peut comprendre une sous étape 2b-1 consistant à greffé ladite chaine hydrocarbonée sur au moins une partie des fonctions amines, puis une sous étape 2b-2 consistant au greffage du groupement Rc sur ladite chaine hydrocarbonée. De manière alternative, l’étape 2b ne comporte pas de sous étape. Dans cette alternative, ladite chaine hydrocarbonée est couplée avec le groupement Rc préalablement à l’étape 2b, ladite étape 2b est alors réalisée avec une molécule comprenant le groupement Rc et ladite chaine hydrocarbonée Utilisation du polysaccharide selon l’invention Le polysaccharide selon l’invention peut être utilisé dans diverses applications grâce à sa solubilité à pH physiologique. Le groupement Rc permet de chélater un métal, dès lors il peut être envisagé d’introduire le dit polysaccharide dans un organisme sous deux formes différente, sous forme chélaté, c’est-à-dire avec un métal ou sous forme libre, c’est-à-dire sans métal. Comme indiqué précédemment, l’invention a également trait à l’utilisation dudit polysaccharide dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal, dans un procédé d’imagerie IRM, dans un procédé de Curie-thérapie ou encore dans un procédé de marquage anti-contrefaçon de denrées alimentaires. Le polysaccharide selon l’invention peut être utilisé en tant que tel, ou formulé dans une composition. Dans le cas où le polysaccharide est formulé dans une composition, le dit polysaccharide est avantageusement sous forme d’hydrogel. Utilisation dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal Dans un mode de réalisation particulier, la dialyse est une dialyse MARS ou une dialyse du CSF. Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal le métal appartient de préférence au groupe constitué du cuivre, du fer, du plomb, du zinc, de l’aluminium, du gadolinium et du manganèse et de manière plus préférentielle, dans le groupe constitué du cuivre, du fer et du plomb. Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal, le groupement Rc est de préférence choisi dans le groupe constitué de DOTAGA, DFO, DOTAM et DTPA. Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal, x est de préférence compris entre 0,35 et 0,45. Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal, y est de préférence compris entre 0,15 et 0,4 et plus préférentiellement entre 0,2 et 0,4. Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal, le rapport y/x est de préférence compris entre 0,25 et 1,5. Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal, la somme x + y est de préférence comprise entre 0,5 et 0,8. Utilisation dans un procédé d’imagerie IRM Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé d’imagerie IRM le métal appartient de préférence au groupe constitué du gadolinium, du fer, du manganèse et du dysprosium et de manière plus préférentielle, le métal est le gadolinium. Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé d’imagerie IRM, le groupement Rc est de préférence le DOTAGA. Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé d’imagerie IRM, x est de préférence compris entre 0,05 et 0,35. Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé d’imagerie IRM, y est de préférence compris entre 0,1 et 0,9. Utilisation dans un procédé de Curie thérapie Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de Curie-thérapie le métal est un isotope radioactif. Ainsi, lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de Curie thérapie, le métal appartient de préférence au groupe des isotopoes radioactifs constitué du 177 Lu, 166 Ho, 212 Bi, 213 Bi, 90 Y et 225 At Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de Curie thérapie, le groupement Rc est de préférence choisi dans le groupe constitué de DOTAGA. Utilisation dans un procédé de marquage anti-contrefaçon de denrées alimentaires Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de marquage anti-contrefaçon de denrées alimentaires le métal appartient de préférence au groupe constitué des lanthanides et du bismuth Lorsque le polysaccharide est utilisé dans un procédé de marquage anti-contrefaçon de denrées alimentaires, le groupement Rc est de préférence choisi dans le groupe constitué du DOTA, du NOTA, du NODAGA, du DOTAGA, du DOTAM, du NOTAM, du DOTP, du NOTP du TETA et du TETAM. Pour l’utilisation du polysaccharide selon l’invention dans un procédé de marquage anti-contrefaçon de denrées alimentaires, les chélatants cycliques sont en effet avantageux afin d’éviter une transmétallation. Exemples Matériel et méthodes L’anhydride acétique (>99%) et le propane-1,2-diol ont été fournis par Sigma-Aldrich (France), le DOTAGA anhydride et le DTPA-Bisanhydride a été fourni par CheMatech (France), l’eau ultra-pure (eau Milli-Q) a été obtenue grâce à un système de filtration Eolia. Le chitosane a été fourni par Mahtani, le GdCl 3 par Sanofi, le KBr et tous les sels métalliques utilisés dans l’exemple 4 (nitrates de Al, Mn, Cu, Pb et Zn) par Sigma-Aldrich (France). La filtration tangentielle est réalisée au moyen d’une machine de filtration tangentielle Sartoflow Smart avec des membranes Sartocon Slice 200 en polyethersulfone avec un seuil de coupure de 100 kDa. L’HPLC-UV est réalisée avec un appareil Agilent 1200 avec un détecteur DAD. La colonne d’exclusion stérique utilisée est une Polysep-GFC-P-4000 avec comme éluant un tampon à 0,1 M acétique acide/acétate d’ammonium. La détection est opérée par un détecteur UV à une longueur d’onde de 295 nm. La substance à analyser est injectée à une concentration d’environ 10 g.L -1 . Les études de spectrophotométrie UV-Visible ont été réalisées sur un appareil Cary 50 UV-VIS de la société Varian. La spectroscopie RMN du proton a été réalisée sur un Brucker Avance III 400 MHz à température ambiante. Tous les échantillons ont été dissous à 8 mg/mL dans l’eau deutérée (D 2 O) comprenant 5 µL d’HCL 12N et placés dans des tubes RMN de 5 mm. Le TMPSA est utilisé comme référence interne. L’analyse élémentaire a été faite à l’Institut des Sciences Analytiques, UMR 5280, Pole Isotopes & Organique, 5 rue de la Doua 69100 Villeurbanne. Les études de luminescence en temps résolu ont été réalisées à l’aide d’un appareillage de type Cary Eclipse de chez Agilent. La relaxivité à 1,5T a été réalisée avec un appareillage de type Minispec mq-60 de chez Brucker (Karlsruhe, Allemagne). Exemple 1 : Préparation d’un polysaccharide selon l’invention avec un taux d’acétylation de 40% (x=0,4) et un taux de greffage de DOTAGA de 10% (y=0,1) à partir d’un chitosane de masse moyenne 250 kDa Dans l’étape 1, 60 g de chitosane, 4 L d’eau ultra-pure et 45 mL d’acide acétique glacial sont introduits dans un réacteur de 10 L et placés sous agitation pendant une durée de 16 heures à un pH de 4,5 ± 0,5. Une solution jaune pâle est obtenue. Dans l’étape 2, 1,2 L de propane-1,2-diol sont ajoutés à la solution jaune pâle obtenue à l’étape 1 et l’agitation est maintenue pendant 1 h. Une solution composée de 14 mL d’anhydride acétique dissous dans 600 mL de propane-1,2-diol est ensuite ajoutée lentement en 10 min afin d’obtenir une acétylation homogène le long de la chaîne polymérique, le milieu réactionnel est maintenu sous agitation pendant 4 h. Le taux d’acétylation peut être déterminé par analyse élémentaire. L’unité non acétylée du polysaccharide (unité B) présente une masse molaire de 161,2 g.mol -1 (C 6 NO 4 H 11 ) tandis-que l’unité acétylée (unité A) présente une masse molaire de 203,2 g.mol -1 (C 8 NO 5 H 13 ). L’analyse élémentaire du polysaccharide obtenu à l’issue de l’étape 2 d’acétylation est la suivante : C 39,22% ; H 7,55% et N 6,77%, ce qui correspond à un taux d’unités acétylées (unités A) de 40% (x=0,4) Dans l’étape 3, 2 L de la solution obtenue à l’étape 2 d’acétylation, sont placés dans un réacteur sous agitation. 120 g de DOTAGA anhydride sont ensuite ajoutés et l’agitation est maintenue pendant 16 h. A l’issue de cette réaction, la solution est diluée par 10 dans de l’eau ultra-pure et purifiée par filtration tangentielle en utilisant une membrane de 100 kDa. Après une première étape de re-concentration jusqu’à 16 L, la solution est filtrée par 480 L de solution à 0,1 M en acide acétique à volume constant (16 L), suivi par 320 L d’eau ultra-pure et par une autre étape de re-concentration jusqu’à 8 L. L’HPLC-UV permet de vérifier que le DOTAGA a bien été éliminé ( ). Le pic aux alentours de 7 min correspond au polymère tandis que le pic aux alentours de 11 min correspond aux DOTAGA non greffés. La solution à une concentration de polysaccharide de 10 g/L est ensuite filtrée sur un filtre nylon (0,4 µm) avant lyophilisation. La RMN du proton permet de déterminer le taux y de fonctionnalisation par le DOTAGA sur le polysaccharide en connaissant le taux x d’acétylation. L’unité non greffée et non acétylée (unité B) est constituée de 7 protons, liés de manière covalente à des atomes de carbone, présentant un déplacement chimique compris entre 2,9 et 4,3 ppm. L’unité acétylée (unité A) présente ces 7 mêmes protons ainsi que 3 protons, liés de manière covalente à un atome de carbone, présents sur l’acétyle caractérisés par un déplacement chimique compris entre 2 et 2,2 ppm. Enfin, l’unité greffée avec le DOTAGA (unité C) inclut 34 protons, liés de manière covalente à des atomes de carbone, dont 32 intègrent entre 2,9 et 4,3 ppm et 2 intégrent entre 2 et 2,2 ppm. Le spectre RMN représenté à la permet grâce aux intégrations des différents massifs de déterminer les valeurs de y grâce à l’équation suivante : Le taux d’unité greffée (unité C) est d’environ 0,1. Ainsi, le polysaccharide obtenu à un taux d’unité A d’environ 0,4 (x=0,4), un taux d’unité B d’environ 0,5 (1-x-y=0,5) et un taux d’unité C d’environ 0,1 (y=0,1). Le taux d’unités greffées (unité C) peut également être déterminé par fluorescence avec de l’europium. L’europium présente en effet une luminescence principalement centrée autour de 590 ( 5 D 0 -> 7 F 1 ) et 615 nm ( 5 D 0 -> 7 F 2 ). Cette luminescence est éteinte lorsque l’ion europium est coordonné seulement avec des molécules d’eau. Le principe de la méthode de détermination du taux d’unités greffées est d’ajouter des quantités croissantes d’europium, afin que celui-ci soit chélaté, la luminescence augmente alors, lorsque tous les sites de chélation sont remplis, la luminescence atteint un plateau. En pratique, le polysaccharide obtenu à l’issue de l’étape 3 a été placé dans un tampon acétate à pH 5, un sel de chlorure d’europium dissous dans le tampon acétate a ensuite été ajouté. Une courbe de dosage est ensuite tracée en excitant à 396 nm et en relevant l’émission à 590 nm ( ). Ce dosage permet de remonter à une quantité de chélate de 0,4 µmol par mg de polymère, soit un taux d’environ 10% (y=0,1). Exemple 2 : Préparation d’un polysaccharide selon l’invention avec un taux d’acétylation de 0,5% (x=0,005) et un taux de greffage de DOTAGA de 60% (y=0,6) à partir d’un chitosane de masse moyenne 600 kDa présentant un taux d’acétylation de 0,5% Dans l’étape 1b, 3 g d’un chitosane de masse moyenne 600 kDa présentant un taux d’acétylation de 0,5%, 150 mL d’eau ultra-pure et 2,1 mL d’acide acétique glacial sont introduits dans un réacteur de 1 L et placés sous agitation pendant une durée de 16 heures à un pH de 4,5 ± 0,5. Une solution jaune pâle est obtenue. A la suite de l’étape 1b de solubilisation, 150 mL de propane-1,2-diol sont ajoutés à la solution précédente et l’agitation est maintenue pendant 1 h. 11 g de DOTAGA anhydride sont ensuite ajoutés et l’agitation est maintenue pendant 16 h. A l’issue de cette réaction, la solution brun claire est diluée par 10 dans l’eau ultra-pure et purifiée par filtration tangentielle en utilisant une membrane de 100 kDa. Ce premier cycle de purification est suivi d’un second en utilisant l’eau ultra-pure pour une purification d’un facteur 50. Les filtrations suivantes sont effectuées dans HCl 0,01 M pour un facteur final de purification de 1250. Le greffage par le DOTAGA (unités C) a été montré par analyse thermogravimétrique à l’aide d’un appareil TA Instruments TGA-Q500 avec un chauffage de 10°C/min, sous atmosphère inerte, de 30°C à 700°C. Le greffage du DOTAGA induit une diminution de la température de dégradation proportionnelle au taux de greffage. Ainsi, la comparaison des analyses thermogravimétrique (graphique (A) de la ) du chitosane de départ et du polysaccharide selon l’invention et des courbes dérivées (graphique (B) de la ) permet de déduire que l’étape de fonctionnalisation a bien été effective. Les spectres IR sont normalisés en utilisant la bande présentant un maximum d’absorption (1072 cm-1) ( ). Par déconvolution du spectre et en regardant l’aire de la bande à 1590 cm-1 (bande d’élongation de la liaison NH2 des amines), il est possible de valider la formation de liaisons amides et de les quantifier. Le calcul est effectué en comparant les aires des bandes des spectres situées vers 1590 cm-1. Pour la détermination du facteur z= 100*(1-x-y) de l’équation suivante, il est nécessaire de déterminer le degré de fonctionnalisation du produit chitosane / DOTAGA par d'autres techniques. Dans cet exemple, le spectre IR de chitosane + DOTAGA (6,0%) a été utilisé comme spectre de référence (spectre (A)). Où D s est le degré de substitution du chitosane analysé, A’ (1590) est l’aire de la bande à 1590 cm -1 du spectre IR du chitosane à analyser, A’ T est l’area totale du spectre IR du chitosane à analyser, A ref (1590) est l’aire de la bande IV à 1590 cm -1 du spectre IR du chitosane de référence, A Tref est l’aire totale du spectre du chitosane de référence et z est le pourcentage de groupes d’amines libres du chitosane (x = 0.02 ; y = 0.06) utilisée comme référence (z = 92). On obtient alors un taux de greffage de DOTAGA proche de 60% (spectre (B)). Exemple 3 : Préparation d’un polysaccharide selon l’invention avec un taux d’acétylation de 60% (x=0,6) et un taux de greffage de DTPA de inférieur à 5% (y 0,05) à partir d’un chitosane de masse moyenne 250 kDa Dans l’étape 1, 0,25 g de chitosane, 25 mL d’eau ultra-pure et 0,18 mL d’acide acétique glacial sont introduit dans un réacteur de 250 mL et placés sous agitation pendant une durée de 16 heures à un pH de 4,5 ± 0,5. Une solution jaune pâle est obtenue. Dans l’étape 2, 5 mL de propane-1,2-diol sont ajoutés à la solution jaune pâle obtenue à l’étape 1 et l’agitation est maintenue pendant 1 h. Une solution composée de 0,045 mL d’anhydride acétique dissous dans 5 mL de propane-1,2-diol est ensuite ajoutée lentement en 10 min afin d’obtenir une acétylation homogène le long de la chaîne polymérique, le milieu réactionnel est maintenu sous agitation pendant 4 h. Dans l’étape 3, une solution composée de 0,346 g de DTPA-Bisanhydride dissous dans 15 ml de propane-1,2-diol et 16,58 µL d’eau ultra-pure est maintenu sous agitation pendant 1,5 h. Ensuite cette solution est ajoutée à la solution obtenue à l’étape 2 et l’agitation est maintenue pendant 16 h. À l’issue de cette réaction, la solution est diluée par 10 en ajoutant de l’eau ultra-pure et purifiée par filtration tangentielle en utilisant une membrane de 100 kDa. Les filtrations suivantes sont effectuées dans de l’eau ultra-pure pour un facteur final de purification de 6250. La solution à une concentration de 5 g/L est ensuite lyophilisée. Exemple 4 : utilisation du polymère de l’exemple 1 pour la captation de métaux Le polysaccharide synthétisé dans l’exemple 1 a été formulé pour être incorporé dans un dialysat d’hémodialyse dans le but de démontrer sa capacité à procéder à une extraction métallique dans le cadre d’une hémodialyse conventionnelle. Pour les besoins de l’expérience, un hémodialyseur à haut flux Dialife DIAPH06, une pompe péristaltique Cole Parmer 7555-05 Masterflex, des tubulures Masterflex L/S PharMed BPT Tubing, L/S #16 ont été utilisés. La solution métallique utilisée ici a été réalisée pour présenter un taux d’environ 50 ppb de Cu, de Zn, de Pb, d’Al et de Mn dans 5 L d’eau. Le débit est de 200 mL/min et la température de 37°C. Un dialysat ne comprenant que de l’eau a été comparé à un dialysat comprenant 0,001 mol.L -1 de DOTAGA, correspondant à 1,6 g/L du polysaccharide synthétisé dans l’exemple 1. Pour tous les métaux à l’exception de l’aluminium, une captation supérieure est observée pour le fluide de dialyse comprenant le polymère fonctionnalisé 25 min après le début de la dialyse par analyse ICP/MS ( ). La quantité de métal présente dans la solution à dialyser est en effet de 30 contre 42 ppb pour le manganèse, de 18 contre 46 ppb pour le zinc, de 7 contre 46 ppb pour le cuivre et de 8 contre 55 ppb pour le plomb après dialyse avec la solution du polysaccharide de l’exemple 1 en comparaison avec une dialyse effectuée avec une solution aqueuse ne contenant pas de polysaccharide selon l’invention. Exemple 5 : utilisation du polymère de l’exemple 1 dans un procédé de dialyse de sang de porc pour la captation de métaux Afin de démontrer la capacité de captation en milieu biologique, une expérience similaire à celle décrite à l’exemple 4 a été réalisée avec du sang de porc à la place de la solution aqueuse métallique présentée à l’exemple 4. Pour les besoins de l’expérience, un hémodialyseur à haut flux Dialife 20HP, trois pompes péristaltiques Cole Parmer (7555-05, 7523-80 and 7523-90) Masterflex, des tubulures Masterflex L/S PharMed BPT Tubing, L/S #16 et Ismatec SC0328 PharMed BPT Tubing ont été utilisés. 10 L de sang de porc ont été dialysés à différents débits : 200 mL/min (de 0 à 10 min et de 70 à 80 min), 100 mL/min (de 10 à 30 min) et 50 mL/min (de 30 à 70 min) respectivement. Le fluide de dialyse a été formulé par le polysaccharide synthétisé à l’exemple 1 à une concentration de 0,001 mol.L -1 . Les résultats de l’étude après analyse par ICP/MS sont présentés en . Une forte augmentation des taux de Zn, Fe et Pb est observée dans le fluide de dialyse comprenant le polysaccharide synthétisé à l’exemple 1 en comparaison avec une dialyse réalisée sans le polysaccharide synthétisé à l’exemple 1. La quantité de métal présente dans la solution de dialysat est ainsi de 83 contre 20 ppb pour le zinc, de 257 contre 55 ppb pour le cuivre et de 2604 contre 62 ppb pour le fer. Exemple 6 : Ajout de gadolinium pour l’obtention d’un polymère imageable en IRM Après la purification de l’exemple 2, 4,9 g de chlorure de gadolinium hexahydrate sont ajoutés à la solution, le pH est ensuite ajusté à 5 et la solution est laissée sous agitation à 80°C pendant 48 heures. Continuellement le pH est ajusté à 5 avec de la soude à 0,5 M jusqu’à ce qu’il devienne stable, indication que le DOTAGA a complexé tous les ions Gd 3+ . Exemple 7 : utilisation du polysaccharide complexé avec du gadolinium Le polysaccharide selon l’invention complexé avec du gadolinium à l’exemple 6 a été mis en œuvre dans un procédé d’imagerie par IRM. L’efficacité du polymère complexé avec le gadolinium pour l’IRM a été évalué par la mesure de sa relaxivité longitudinale (r 1 = 15.2 mM -1 s -1 par gadolinium) et de sa relaxivité transversale (r 2 = 21.5 mM -1 .s -1 par gadolinium) à 37°C sous un champ de 1.5T. Le rapport r 2 /r 1 est de 1.4 ce qui est typique d’un agent de contraste positif. La relaxivité longitudinale est un peu moins de 4 fois plus importante que celle des agents de contraste commerciaux (~4 mM -1 .s -1 ). Polysaccharide statistique de masse moléculaire moyenne en poids comprise entre 100kDa et 1000kDa de formule I : Formule I dans laquelle Rc est un groupement comportant un agent chélatant, Z est un liant pouvant être une simple liaison ou une chaine hydrocarbonée comportant entre 1 et 12 atomes de carbone, ladite chaine pouvant être linéaire ou ramifiée et pouvant comporter une ou plusieurs insaturations et pouvant comporter un ou plusieurs hétéroatomes, de préférence choisis parmi l’azote, l’oxygène, le soufre et les atomes de la famille des halogènes, x est compris entre 0,005 et 0,6, y est compris entre 0,1 et 0,9, le rapport y/x étant supérieur à 0,16, la somme x + y étant supérieure à 0,4. Polysaccharide selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le groupement Rc est choisi dans le groupe constitué du DOTA, NOTA, NODAGA, DOTAGA, DOTAM, NOTAM, DOTP, NOTP, TETA, TETAM, DTPA et DFO, de préférence dans le groupe constitué du DOTAGA, DFO, DOTAM et du DTPA et de manière plus préférée le groupement RC est le DOTAGA. Polysaccharide selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que x est compris entre 0,05 et 0,6, de préférence entre 0,05 et 0,35. Polysaccharide selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que y est compris entre 0,05 et 0,6, de préférence entre 0,1 et 0,3. Polysaccharide selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il est formulé dans une composition sous forme d’hydrogel. Polysaccharide selon l’une des revendications 1 à 5 pour son utilisation dans un procédé de dialyse pour la captation d’au moins un métal, de préférence une dialyse MARS ou une dialyse du CSF, le métal appartenant de préférence au groupe constitué du cuivre, du fer, du plomb, du zinc, de l’aluminium, du gadolinium et du manganèse. Polysaccharide selon l’une des revendications 1 à 5 pour son utilisation dans un procédé d’imagerie IRM. Polysaccharide selon l’une des revendications 1 à 5 pour son utilisation dans un procédé de Curie-thérapie. Utilisation du polysaccharide selon l’une des revendications 1 à 5, dans procédé de marquage anti-contrefaçon de denrées alimentaires. Procédé d’obtention du polysaccharide selon l’une des revendications 1 à 5 à partir de chitosane, comportant au moins les trois étapes successives suivantes : Etape 1 : solubilisation d’un chitosane dans une solution acide à un pH compris entre 4 et 5 ; Etape 2 : acétylation partielle des fonctions amines du chitosane solubilisé en étape 1(formation des unités A) ; Etape 3 : fonctionnalisation d’au moins une partie des fonctions amines qui n’ont pas été acétylées en étape 2 (formation des unités C).