Brevet FR3102186A1 — publié le 20210423

Souche de levure de l’espèce Saccharomyces cerevisiae comprenant au moins un polymorphisme au niveau d’un nucléotide dans la séquence de deux gènes localisés sur les chromosomes 2, 4, 7, 11, 12 et 15 et sélectionnés parmi les gènes YDL237W , YDL054C , YKL029C , YDL021W , YOR380W , YBR218C , YOR090C , YLL041C , YGL008C , YGL037C et YBL036 C . Figure pour l’abrégé : Fig. 8 Levures œnologiques permettant le contrôle de la teneur en acide des vins et méthodes de sélection de telles levures. La présente invention est du domaine des levures destinées à être utilisées dans l’industrie agroalimentaire, et vise en particulier des levures destinées à être utilisées dans la biotransformation du jus de raisin en vin. Le jus de raisin adapté à la vinification étant communément qualifié de moût de raisin. La présente invention concerne plus particulièrement, mais non exclusivement, un procédé de sélection de levains du genre Saccharomyces et en particulier de l’espèce Saccharomyces cerevisiae afin de mieux contrôler le pH du produit de la fermentation du jus de raisin en vin et ceci en sélectionnant leur aptitude à dégrader (ou à produire) des acides organiques et en particulier l’acide malique et l’acide succinique. La teneur de l’ensemble des acides organiques du vin contribue de manière importante à son acidité finale et donc au pH final ce qui est un paramètre important de sa qualité organoleptique. Le jus de raisin comporte naturellement de nombreuses substances organiques, et entre-autres des acides organiques tels que l’acide malique et l’acide tartrique. L’acidité du jus de raisin et des vins préparés à partir de ce jus, est étroitement dépendante de la teneur de ces deux acides. Les teneurs en acide malique dans le raisin diminuent au cours de sa maturation pour atteindre des valeurs de 2 à 7 g/L au moment de la maturité. De plus, lors de la transformation du jus de raisin en vin, les levures peuvent dégrader partiellement l’acide malique et produire d’autres acides organiques tel que l’acide succinique et l’acide pyruvique qui vont à leur tour modifier l’acidité du vin. A noter que, dans la plupart des vins rouges et certains vins blancs il est important de dégrader complètement l’acide malique afin de maîtriser l’équilibre acide des vins. En œnologie, la teneur en acide malique est principalement contrôlée par la fermentation malo-lactique réalisée par les bactéries lactiques en particulier par Oenococcus oeni . Cette fermentation a lieu après la fermentation alcoolique, et peut être initiée en utilisant des levains industriels inoculés dans le vin ou dans le moût en fermentation. Cependant, le succès de l’implantation de telles bactéries dans le vin n’est pas facilement reproductible, surtout dans des conditions extrêmes comme par exemple avec un pH faible, une présence de SO 2 , et/ou un degré alcoolique fort. D’autres méthodes ont été mise en œuvre, telles que l’expression dans la levure Saccharomyces cerevisiae à la fois de l’enzyme malo-lactique de Oenococcus oeni et du transporteur d’acide malique de Schizosaccharomyces pombe , qui permettent à la levure de dégrader de manière complète l’acide malique lors de la fermentation alcoolique comme cela est décrit dans l'article de Volschenk et al., publié dans Nat. Biotechnol ., 1997, Mar, 15(3), 253-257 . Les contraintes réglementaires liées au statut d’organisme génétiquement modifié (OGM) de la souche de levure, interdisent l’utilisation de cette méthode dans la plupart les pays producteurs de vins, et des alternatives efficaces doivent donc être trouvées. Une de ces alternatives consistant à employer d’autres espèces de levure comme la fermentation du vin par la levure Schizosaccharomyces pombe qui est capable de consommer la totalité de l’acide malique, est décrite dans l’article de Taillandier et al., Journal of Biotechnology , , 40, 3, 199-205. Cependant, cette espèce Schizosaccharomyces pombe produit des composés indésirables qui ne sont pas compatibles avec la production industrielle de vin, et son utilisation ne peut donc pas être considérée comme une alternative efficace. Le brevet EP 2 183 364 décrit l’utilisation de l’espèce Saccharomyces cerevisiae avec une sélection au sein de la variabilité génétique de l’espèce de caractères œnologiques liés à la production de phénols volatils. L’espèce Saccharomyces cerevisiae présente une variabilité génétique naturelle particulièrement attractive, mais jusqu’alors aucun candidat permettant une réduction significative de l’acide malique n’a été convenablement sélectionné et aucune souche pouvant consommer la quasi-totalité de l’acide malique, avec à tout le moins une réduction significative de l’acide malique d’au moins 50% n’a pu être convenablement identifiée. Pour remédier à tout ou partie des inconvénients de l’état de la technique précitée, la présente invention concerne une souche de levure de l’espèce Saccharomyces cerevisiae comprenant au moins un polymorphisme au niveau d’un nucléotide (connu sous l’acronyme anglo saxon « SNP », signifiant « single nucleotide polymorphism ») dans la séquence d’au moins deux gènes localisés sur les chromosomes (chr) 2, 4, 7, 11, 12 et 15 et sélectionnés parmi les gènes YDL237W ( AIM6 ) , YDL054C ( MCH1 ) , YKL029C ( MAE1 ) , YDL021W ( GPM2 ) , YOR380W ( RDR1 ) , YBR218C ( PYC2 ) , YOR090C ( PTC5 ) , YLL041C ( SDH2 ) , YGL008C ( PMA1 ) , YGL037C ( PNC1 ) et YBL036C . Les séquences génétiques et/ou peptidiques sont celles identifiées dans la base de donnée Saccharomyces GENOME DATABASE (SGD) pour la souche S288C et correspondent, plus particulièrement, aux séquences détaillées dans la partie « liste de séquences » ( sequence listing ) de la présente description. Les inventeurs ont mis en évidence de manière tout à fait inattendue que l’utilisation de marqueurs génétiques permettait d’accélérer la sélection d’individus performants sans réaliser des tests fermentaires. Une telle sélection permet d’obtenir pour sensiblement la moitié des individus concernés, une nette amélioration du taux d’acide malique consommé et une modification du pH du vin résultant. Avantageusement, la souche de levure de l’espèce Saccharomyces cerevisiae comprend au moins un polymorphisme au niveau d’un nucléotide (SNP) dans la séquence des deux gènes localisés sur les chromosomes 7 et 12 sélectionnés parmi les gènes YLL041C et YGL008C . Une telle sélection des individus permet d’obtenir une teneur d’acide malique consommée moyenne, qui est prise sur l’ensemble de la population, et qui est supérieure à 51%, en étant exprimée en pourcentage massique calculé par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ. Avantageusement, la souche de levure de l’espèce Saccharomyces cerevisiae selon l’invention comprend au moins un polymorphisme au niveau d’un nucléotide dans la séquence des quatre gènes localisés sur les chromosomes 4, 7 et 12 sélectionnés parmi YLL041C , YGL008C , YDL054C et YDL237W . Une telle sélection des individus permet d’obtenir une teneur d’acide malique moyenne (prise sur l’ensemble de la population) consommée supérieure à 54% calculée par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ. Avantageusement, la souche de levure de l’espèce Saccharomyces cerevisiae selon l’invention comprend au moins un polymorphisme au niveau d’un nucléotide dans la séquence des six gènes localisés sur les chromosomes 4, 7, 11, 12 et 15 sélectionnés parmi YLL041C , YGL008C , YDL054C , YKL029C , YOR090C et YDL237W . Une telle sélection des individus permet d’obtenir une teneur d’acide malique consommée moyenne supérieure à 57% (prise sur cet ensemble sélectionné) calculée par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ. Avantageusement, la souche de levure de l’espèce Saccharomyces cerevisiae selon l’invention comprend au moins le polymorphisme de séquence peptidique (p.Lys158Glu) au niveau du gène YLL041C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Pro74Leu) au niveau du gène YGL008C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Ser63Leu) au niveau du gène YDL054C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Glu165Ala) au niveau du gène YDL237W , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Ile605) au niveau du gène YKL029C , et le polymorphisme de séquence peptidique (p.Met419Leu) au niveau du gène YOR090C . Avantageusement, la souche de levure de l’espèce Saccharomyces cerevisiae selon l’invention comprend au moins un polymorphisme au niveau d’un nucléotide dans la séquence des sept gènes localisés sur les chromosomes 2, 4, 7, 11, 12 et 15 sélectionnés parmi YLL041C , YGL008C , YDL054C , YKL029C , YOR090C , YBR218C et YDL237W . Une telle sélection des individus permet d’obtenir une teneur d’acide malique consommée supérieure à 58.5% (prise sur l’ensemble de la population) calculée par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ. Avantageusement, la souche de levure de l’espèce Saccharomyces cerevisiae selon l’invention comprend au moins le polymorphisme de séquence peptidique (p.Lys158Glu) au niveau du gène YLL041C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Pro74Leu) au niveau du gène YGL008C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Ser63Leu) au niveau du gène YDL054C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Glu165Ala) au niveau du gène YDL237W , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Ile605) au niveau du gène YKL029C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Met419Leu) au niveau du gène YOR090C , et le polymorphisme de séquence peptidique (p.Glu722Lys) au niveau du gène YBR218C . Avantageusement, la souche de levure de l’espèce Saccharomyces cerevisiae selon l’invention comprend au moins un polymorphisme au niveau d’un nucléotide dans la séquence des onze gènes localisés sur les chromosomes 2, 4, 7, 11, 12 et 15 sélectionnés parmi YDL237W , YDL054C , YKL029C , YDL021W , YOR380W , YBR218C , YOR090C , YLL041C , YGL008C , YGL037C et YBL036 C . Une telle sélection des individus permet d’obtenir une teneur d’acide malique consommée au dela de 80% et qui produisent un vin dont le pH est modifié d’une valeur pouvant atteindre 0.4 unités selon les souches à partir du même jus de raisin de départ. La présente invention concerne également un procédé de sélection de souches de levures œnologiques telles que décrites précédemment dans le cadre de la présente invention comportant les étapes consistant à : 1- réaliser une hybridation par croisement de deux souches œnologiques A et B de l’espèce Saccharomyces cerevisiae ; 2- identifier les allèles responsables de la consommation de l’acide malique en éliminant une des deux copies parentales en réalisant un hybride hémizygote par insertion d’un gène de résistance à un antibiotique ; 3- obtenir des descendants méiotiques issus des hybrides de l’étape 1- par l’induction de la sporulation et isolement des spores ; 4- déterminer le phénotype des descendants obtenus dans l’étape 3- pour la consommation d’acide malique ; 5- extraire l’ADN des descendants obtenus à l’étape 3- ; 6- effectuer un génotypage du génome des descendants permettant de connaitre le génotype d’au moins deux locus ; 7- réaliser une cartographie génétique à partir des données obtenues à l’étape 4- et à l’étape 6- ; et 8- sélectionner les individus porteurs d’allèles démaliquants. Dans le cadre de la présente invention, le terme « sélection » signifie l’identification et l’isolement de levures œnologiques, c'est-à-dire des levures intervenant dans le processus de fabrication du vin, et notamment dans le métabolisme des acides et des bases présentes dans les vins. Le terme « allèle démaliquant » signifie l’allèle qui confère une plus forte consommation de la teneur d’acide malique au cours de la fermentation alcoolique. Alternativement, le terme « allèle maliquant » signifie l’allèle qui confère une plus faible consommation de la teneur d’acide malique au cours de la fermentation alcoolique. Le terme « génotyper », signifie déterminer l’hérédité d’une portion d’ADN à un point précis du génome. Dans le cadre de la présente invention, le génotypage correspond à l’identification d’une séquence nucléotidique qui est associée au caractère démaliquant ou au caractère maliquant. L’étape 1- consiste, de préférence, en l’obtention d’un hybride par croisement de deux souches A et B de l’espèce Saccharomyces cerevisiae selon la méthode d’appariement de spores au micromanipulateur décrite dans l’article de Marullo et al. (Marullo et al. 2009 FEMS Yeast Research , 9, 8 :1148-1160). L’hybride obtenu est appelé H1, il est le produit de la conjugaison de spores issues du croisement entre la souche A et la souche B. L’hybride H1 obtenu est hétérozygote en de nombreux points de son génome. Avantageusement, la technique des hybrides hémizygotes mise en œuvre à l’étape 2- est la méthode décrite dans l’article de Steinmetz et al., 2002, Nature , 416, 6878 :326-330. Le principe de ladite méthode consiste à éliminer par recombinaison homologue une des deux copies parentales du gène étudié, en insérant au locus dudit gène étudié, un gène de résistance à un antibiotique. Ainsi les hybrides hémizygotes n’expriment qu’une seule des deux copies parentales du gène étudié. S’il existe une différence significative (au seuil de 10%) entre les deux hybrides, l’allèle a un effet sur le phénotype étudié. Les gènes testés dont l’effet est significatif sur le pourcentage de consommation d’acide malique en fin de fermentation alcoolique sont présentés dans le tableau 1. L’acide L-malique est quantifié par dosage enzymatique après avoir observé l’arrêt complet de la fermentation alcoolique selon la méthode décrite dans Peltier, et al., 2018, PLOS ONE , 13(1), 191353 (https://doi.org/10.1101/191353). L’allèle noté DEMAL est celui qui consomme le plus d’acide malique, l’allèle noté MAL est celui qui préserve le plus la teneur en acide malique. Les résultats présentés ont été mesurés dans un mout de Merlot (échantillon Merlot 2 du tableau 1) et dans un mout de Sauvignon (échantillon Sauvignon Blanc 1 du tableau 1) dont les teneurs en acides maliques initiales sont respectivement estimées à 2,28 et 4,32 g/L. gènes Mout Allèle % MALIQUE consommé DEMAL-MAL Test WMW (a) * Mal Demal Moy allele DEMAL Moy allele MAL YLL041C Merlot2 A B 28,9 16,7 12,2 *** 5 YDL021W Merlot2 A B 34,2 25 9,2 * 14 YGL008C Merlot2 B A 39 30,7 8,3 *** 13 YBR218C Merlot2 A B 39,5 32 7,5 *** 16 YKL029C Merlot2 A B 29,4 22,8 6,6 * 19 YOR090C Merlot2 A B 37,3 31,6 5,7 * 5 YGL037C Merlot2 A B 52,9 43,4 9,5 * 14 YGL008C Sauvignon 1 B A 36,8 32,9 3,9 *** 6 YBR218C Sauvignon1 A B 30,3 27,8 2,5 * 7 * La colonne (a) représente le nombre de répétitions par groupes Ainsi les inventeurs ont mis en évidence de manière tout à fait inattendue que l’utilisation de variations génétiques naturelles peut permettre de diminuer ou d’augmenter la teneur en acide malique des vins en fin de fermentation alcoolique. Avantageusement, l’étape 3- est réalisée par une microdissection ou une purification en masse de spores. L’étape 3- comporte une induction de la sporulation d’un hybride, le susdit hybride H1, sur un milieu comprenant de préférence de l’acétate de potassium à 1% pendant 3 jours à 24°C. L’utilisation de la microdissection des ascospores est de préférence réalisée à l’aide d’un micromanipulateur, par exemple selon la méthode publiée dans Marullo et al., 2009, FEMS Yeast Research , 9, 8 :1148-1160. Alternativement, les ascospores sont isolés en masse après une purification partielle en utilisant de préférence la méthode publiée dans l’article de Curran B.P.G. et al., 2006, « Basic Investigations in Saccharomyces cerevisiae » , Methods in Molecular Biology , vol 313, 1-13. Chacunes des variations hétérozygotes retrouvées chez l’hybride H1 ségrége au sein de sa descendance. De préférence, à l’étape 4- le niveau d’acide malique consommé est mesuré en fin de fermentation alcoolique par un test enzymatique. La mesure du pourcentage d’acide malique consommé pour un ensemble de 94 descendants de l’hybride H1 est réalisé par dosage enzymatique de l’acide L-malique après avoir observé l’arrêt complet de la fermentation alcoolique selon la méthode décrite dans Peltier et al., 2018, PLOS ONE , 13(1), 191353 (https://doi.org/10.1101/191353). A l’étape 5- l’ADN des descendants est extrait. L’ADN de chaque descendant est avantageusement extrait en utilisant des kits d’extraction tels que le kit DNA-Wizard Promega selon le protocole décrit dans Marti-Raga et al. 2017, G3 February, 399-412. Avantageusement, une amplification de l’ADN génomique est réalisée entre les étapes 5- et 6-. Une amplification est réalisée avec un kit, de préférence le kit Nextera XT ou tout autre kit adapté pour le séquençage de petits génomes. La procédure utilisée permet d’indexer grâce à des amorces d’ADN spécifiques, 96 individus et d’amplifier leur ADN afin de construire une Library pour un séquençage Illumina. Le protocole utilisé est celui fourni par le fabricant, il est décrit dans Marti-Raga et al. 2017, G3 February, 399-412. Avantageusement, le génotypage effectué à l’étape 6- met en œuvre un séquençage, lequel séquençage est réalisé de préférence à l’aide d’un kit de séquençage qui consiste dans un premier temps à amplifier l’ADN afin de construire une Library pour le séquençage Illumina MySeq à l’aide du kit de séquençage (Pair End 2x250 bases) MySeq Reagent Kit V2 selon les prescriptions fournies par le constructeur comme décrit dans Marti-Raga et al. 2017, G3 February, 399-412. Les lectures de séquences obtenues sont de préférence filtrées par des méthodes bio-informatiques en utilisant la suite FASTX-Toolkit (http:// hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/). Les lectures retenues (qualité Q>20) sont ensuite alignées avec le logiciel BWA (Li, H., and R. Durbin, 2010. Bioinformatics 26(5): 589–595) sur le génome de référence S288C (sacCer3, version avril 2011). A l’aide de la suite d’outils SAM tools décrite dans l’article de Li, H. et al., 2009, Bioinformatics , 25, 2078–2079, les SNP de chacun des descendants sont identifiés et positionnés sur le génome par le logiciel Pileup. Ces SNP permettent la construction d’une carte génétique très dense constituée de 1000 marqueurs bi alléliques. La méthode de construction de ce type de carte et les outils bioinformatiques utilisés sont décrits dans l’article Marti-Raga et al. 2017, G3 February, 399-412. Avantageusement, la cartographie génétique utilisée à l’étape 7- du procédé selon l’invention est une méthode qui établit un lien statistique entre l’hérédité de marqueurs génétiques et la variation d’un caractère quantitatif. Les marqueurs génétiques qui sont statistiquement liés sont des « locus de caractère quantitatifs » (dont la traduction anglaise est « Quantitative Trait Loci », avec l’acronyme associé « QTL ») tels que ceux décrit dans la demande EP 2 183 364. Les méthodes de détection de QTL chez les levures sont décrites dans la littérature, par exemple dans l’article publié par Peltier et al., 2018, BMC Genomics 19, 772. A l’étape 7- les marqueurs bi-alléliques (ils sont de l’ordre du millier) de l’étape 6- sont utilisés pour réaliser la cartographie génétique. Un lien statistique est trouvé entre la variation du caractère quantitatif et quatre marqueurs génétiques avec un seuil de significativité très important (II_150, XV_1052, IV_31 et IV_360). Un seuil de significativité avec un taux de fausse découverte de 5% est calculé à partir des données permutées : il est de pval = 0.0004 pour le pourcentage d’acide malique consommé. Le test statistique utilisé est basé sur cartographie par la méthode dite de « interval mapping » en utilisant une régression de Haley-Knott (Peltier et al. 2018. , BMC Genomics 19, 772). La position génomique des marqueurs, le gène concerné et la valeur de la probabilité du test (risque de première espèce) sont listés dans le tableau 2. Pour chaque marqueur on indique également l’effet de l’allèle MAL et DEMAL exprimé en pourcentage d’acide malique consommé. L’allèle DEMAL correspondant au « caractère démaliquant » qui signifie l’allèle qui confère le phénotype responsable de l’élimination de la plus forte teneur d’acide malique (à l’inverse de l’allèle MAL). nom du MARQUEUR II_150 XV_1052 IV_31 IV_360 P value (-log10) avec un seuil de fausse découverte de 0.05 8.89 4.28 4.35 6.98 Gene impacté YBL036C YOR380W YDL237W YDL054C chromosome chr2 chr15 chr4 chr4 position 150422 1052746 31151 360451 référence (S288C) A G A G allèle MAL T (Souche A) A (Souche B) A (Souche A) A (Souche B) allèle DEMAL A (Souche B) G (Souche A) C (Souche B) G (Souche A) Acide aminé modifié allèle MAL NP* H486 E165 S279 Acide aminé modifié allèle DEMAL NP* R486 A165 P279 % consommé allèle MAL en Sauvignon Blanc 1 26.3 26.6 26.8 25.6 % consommé allèle DEMAL en Sauvignon Blanc 1 33.3 31 33,1 33.5 % consommé allèle MAL en Merlot 2 25,8 27 27,6 24.3 % consommé allèle DEMAL en Merlot 2 32,3 30.4 33,3 33.8 DEMAL-MAL (Sauvignon Blanc 1) (%) 7 34.4 6,3 7,9 DEMAL-MAL (Merlot 2) (%) 6,5 3,4 5,7 9,5 *NP : non pertinent Ainsi, à partir des résultats obtenus suite à l’identification des allèles MAL et DEMAL (étape 2- du procédé) et de la cartographie des QTL chez l’hybride H1 (étapes 3- à 7-) les gènes et/ou les QTL présentant des variations nucléotidiques qui sont liées au pourcentage massique de consommation de l’acide malique au cours de la fermentation alcoolique du jus de raisin par la levure Saccharomyces cerevisiae sont directement identifiés. Ces variations nucléotidiques affectent la séquence des gènes YDL237W , YDL054C , YKL029C , YDL021W , YOR380W , YBR218C , YOR090C , YLL041C , YGL037C , YGL008C et YBL036 C . Ces variations de séquence nucléotidique peuvent être aisément génotypées au sein d’une large population d’individus par des méthodes de typage génétique, c'est-à-dire toute méthode de biochimie ou de biologie moléculaire capable de renseigner la présence d’une variation de séquence nucléotidique ou protéique tel que la PCR, le séquençage d’ADN, le séquençage de protéine, et/ou une méthode basée sur la détection de SNP mettant en œuvre de la spectrométrie de masse, selon la technologie qualifiée de sequenom ® Gabriel, S., 2009, Current Protocols in Human Genetics , Suppl. (60. doi.org/10.1002/ 0471142905.hg0212s60). A partir de la séquence génomique des souches A et B de l’espèce Saccharomyces cerevisiae , présentées précédemment dans le cadre de l’invention, certaines variations nucléotidiques qui affectent la séquence des protéines codées par les gènes présentés précédemment dans le cadre de l’invention ( YDL237W , YDL054C , YKL029C , YDL021W , YOR380W , YBR218C , YOR090C , YLL041C , YGL037C , YGL008C et YBL036C ), sont déduites. Le tableau 3 établit le lien entre les allèles et un phénotype observé. Les allèles MAL et DEMAL utilisés sont déterminés à partir de la séquence de référence sacCer3 (sacCer3, version avril 2011) issue de la souche S288C et disponible sur la base de données SGD (« Saccharomyces Genome Database ») avec un lien accessible via https://www.yeastgenome.org/. La nomenclature utilisée est celle de la description des mutations génétiques décrite dans l’article de den Dunnen JT et al., 2000, Human Genome Variation Society , Hum.Mutat. 15:7-12. Locus GENE Nom systématique Allele DEMAL Allele MAL II_661 PYC2 YBR218C p.Glu722Lys p.Glu722 IV_360 MCH1 YDL054C p.Ser63Leu p.Ser63 VII_480 PMA1 YGL008C p.Pro74Leu p.Asp200Glu XI_382 MAE1 YKL029C p.Ile605 p.Ile605Val XII_53 SDH2 YLL041C p.Lys158Glu p.Lys158 XV_491 PTC5 YOR090C p.Met419Leu p.Met419 IV_31 AIM6 YDL237W p.Glu165Ala p.Glu165 VI_427 PNC1 YGL037C p.Val112Ala p.Val112 IV_414 GPM2 YDL021W p.Thr2Ille p.Thr2 II_150 - YBL036C g.150422A g.150422T XV_1052 RDR1 YOR380W p.Gly79 p.Gly79Asp Afin d’utiliser ces variations de séquences nucléotidiques pour améliorer les souches de levure, on détermine des pools d’allèles qui vont permettre de diminuer ou de préserver la teneur en acide malique des vins en fin de fermentation alcoolique. Plusieurs pools d’allèles sont définis et sont désignés par les acronymes suivants : Q2demal, Q2mal, Q4demal, Q4mal, Q6demal, Q7demal, Q6c et Q7c. Les chiffres (2, 4, 6 ou 7) correspondent au nombre de locus pris en compte dans chaque pool. Les pools Q2demal, Q4demal, Q6demal et Q7demal contiennent uniquement des allèles liés au caractère démaliquant. Les pools Q2mal et Q4mal contiennent uniquement des allèles liés au caractère maliquant. Les pools Q6c et Q7c contiennent le pools d’allèles Q4demal complétés avec respectivement 2 et 3 allèles maliquants. Pools de deux allèles Q2demal : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) Q2mal : YLL041C (p.Lys158) + YGL008C (p.Asp200Glu) Pools de 4 allèles Q4demal : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) Q4mal : YLL041C (p.Lys158) + YGL008C (p.Asp200Glu) + YDL054C (p.Ser63) + YDL237W (p.Glu165) Pools de 6 allèles Q6demal : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) + YKL029C (p.Ile605) + YOR090C (p.Met419Leu) Q6c : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) + YKL029C (p.Ile605Val) + YOR090C (p.Met419) Pool de 7 allèles Q7demal : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) + YKL029C (p.Ile605) + YOR090C (p.Met419Leu) + YBR218C (p.Glu722Lys) Q7c : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) + YKL029C (p.Ile605Val) + YOR090C (p.Met419) + YBR218C (p.Glu722) A l’étape 8- le procédé selon l’invention comporte avantageusement un génotypage mettant en œuvre une détection de polymorphisme au niveau d’un nucléotide (SNP) par spectrométrie de masse, de préférence selon la technologie qualifiée de sequenom ® (sequenom®iPLEX® Gold) avec l’appareillage MassARRAY® Analyzer Chip Prep Module 384, commercialisé par la société Agena Biosciences® et selon le protocole décrit dans l’article de Gabriel S. et al., 2009, Current Protocols in Human Genetics , Suppl. 60. (doi.org/10.1002/ 0471142905.hg0212s60). Le design des primers est réalisé par l’outil MassARRAY® Assay Design (version 4.0.0.2) permettant d’amplifier des fragments de moins de 120 bases et en sélectionnant des différences de masse entre allèles comprises entre 16 et 70 Da. Environ 15 ng d’ADN sont nécessaires pour génotyper les individus en utilisant la plateforme MassARRAY® iPLEX® (Agena Biosciences®). Le procédé selon l’invention comporte avantageusement une étape d’isolation d’au moins une souche. Le procédé selon l’invention comporte avantageusement une étape d’isolation d’au moins deux souches, respectivement désignées par les lettres X et Z, par exemple les clones X28 et Z8, issus de la descendance de deux populations issues d’hybrides obtenus : par exemple, en croisant les souches A et B d’une part, et des souches C et D d’autre part. Les hybrides et leur descendance sont obtenus selon les étapes 1 et 3 telles que décrites précédemment dans le cadre de l’invention. Avantageusement, lesdits deux clones X28 et Z8, obtenus selon le procédé selon l’invention, sont croisés et l’hybride résultant est mis à sporuler pour obtenir une vaste descendance en mettant en oeuvre les étapes 1 et 3 telles que décrites précédemment. L’ADN de cette descendance est extrait par une méthode décrite par Albertin et al. qui permet une extraction rapide compatible avec la technique de génotypage du sequenom ® (Albertin et al., 2018, Yeast , 35, 141–156). La descendance et ensuite génotypée par la technologie qualifiée de sequenom ® décrite en détail dans la partie expérimentale. La sélection de clones ayant un génotype approprié permet de choisir des individus au phénotype extrême sans avoir recours à des tests fermentaires. La présente invention concerne aussi une utilisation d’une levure de Saccharomyces cerevisiae comportant une souche telle que décrite précédemment dans le cadre de la présente invention pour augmenter le pH d’un vin. La partie expérimentale qui suit détaille les protocoles mis en œuvre. PARTIE EXPERIMENTALE Séquences Les séquences suivantes correspondent aux séquences listées dans la partie « sequence listing » : YDL237W est décrite par les séquences SEQ ID N°1 et/ou SEQ ID N°2 ; YDL054C est décrite par les séquences SEQ ID N°3 et/ou SEQ ID N°4 ; YKL029C est décrite par les séquences SEQ ID N°5 et/ou SEQ ID N°6 ; YDL021W est décrite par les séquences SEQ ID N°7 et/ou SEQ ID N°8 ; YOR380W est décrite par les séquences SEQ ID N°9 et/ou SEQ ID N°10 ; YBR218C est décrite par les séquences SEQ ID N°11 et/ou SEQ ID N°12 ; YOR090C est décrite par les séquences SEQ ID N°13 et/ou SEQ ID N°14 ; YLL041C est décrite par les séquences SEQ ID N°15 et/ou SEQ ID N°16 ; YGL008C est décrite par les séquences SEQ ID N°17 et/ou SEQ ID N°18 ; YGL037C est décrite par les séquences SEQ ID N°19 et/ou SEQ ID N°20 ; et YBL036C est décrite par les séquences SEQ ID N°21 et/ou SEQ ID N°22. Matériel s et Méthodes Obtention d’un hybride H 1 : par croisement de deux souches A et B de l’espèce Saccharomyces cerevisiae selon une méthode d’appariement de spores décrite dans l’article de Marullo, P. et al., 2009, FEMS Yeast Research , 9, 8 :1148-1160: l’hybride H1 obtenu est le produit de la conjugaison de spores issues du croisement entre la souche A et la souche B. Obtention d’un hybride H2 : par croisement de deux souches C et D de l’espèce Saccharomyces cerevisiae selon une méthode décrite dans Marullo, P. et al., 2009, FEMS Yeast Research , 9, 8 :1148-1160: l’hybride H2 obtenu est le produit de la conjugaison de spores issues du croisement entre la souche C et la souche D. Isolation d ’un clone X28 : A partir de l’hybride H1 issu du croisement des souches A et B on isole le descendant X28 issu d’une population de 94 descendants isolés par micromanipulation (Marullo et al., 2009, FEMS Yeast Research , 9, 8 :1148-1160). Cette technique consiste à disséquer des asques de levures formés à partir d’une culture sur milieu Acétate de Potassium ACK pendant 3 jours à 24°C. Les asques sont digérés par de la cytohélicase (2mg/mL) et les spores sont isolées à l’aide d’un micromanipulateur (Singer™ MS200). La teneur en acide malique des 94 descendants est mesurée en fin de fermentation alcoolique, laquelle fermentation est réalisée de la manière suivante : Les fermentations ont été réalisées dans des flacons de 20 mL commercialisés par la société Fisher Scientific® sous la référence 20-HSV. Ils ont été utilisés pour fermenter 10 mL de moût de l’échantillon Merlot 2 dont la teneur en acide malique de départ est de 2,280 g/L. Les flacons ont été fermés par des bouchons à vis avec un septum en silicone / PTFE HT de 3 mm commercialisé par la société Fisher Scientific®. Des aiguilles hypodermiques ont été insérées dans le septum pour le dégagement du CO 2 . Les fermentations ont été initiées avec l’inoculation de 2.10E6 cellules viables.mL -1 de culture en phase liquide (YPD) réalisée dans des microplaques deepwell de 1 mL commercialisées par la société Fisher Scientific®. La concentration de cellules viables a été estimée par cytométrie en flux en utilisant un appareil de la marque Cell Lab Quanta™ commercialisé par la société Beckman Coulter®. La température de fermentation a été maintenue à 24°C à l'aide d'un incubateur vendu par la société Binder™ GmbH. Les flacons sont placés sous agitation à 175 tr. / min. au cours de la fermentation à l'aide d'un agitateur orbital tel que celui commercialisé par la société Stuart® sous la référence SSL1. Le détail de la méthode est donnée dans l’article de Peltier et al. , 2018, PLOS ONE , 13(1), 191353. (https://doi.org/10.1101/191353). Les pourcentages de consommation indiqués dans la présente description sont calculés par rapport à la teneur totale d’acide malique présent au départ dans l’échantillon considéré. La distribution de la teneur en acide malique consommé - en abscisse, exprimée en pourcentage massique calculé par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ - est montrée à la figure 1 pour la descendance de H1 et en particulier pour le clone X28 dans le mout de Merlot de l’échantillon Merlot 2. Isolation d’un clone Z 8 : De la même manière que pour l’hybride H1 on obtient l’hybride H2 issu du croisement de la souche C et D. De sa descendance (obtenue comme décrit ci-dessus dans le cadre de l’obtention de X28) on isole le clone Z8 qui présente également un phénotype extrême pour la consommation d’acide malique. La distribution de la teneur (ladite teneur étant exprimée en pourcentage massique calculé par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ) en acide malique consommé est montrée sur la figure 1 pour la descendance de H2 et en particulier pour le clone Z8 dans le mout de Merlot de l’échantillon merlot 2. La souche B est une souche qui dégrade le plus d’acide malique avec 45% d’acide malique dégradé en comparaison avec les souches A, C et D. Le niveau de consommation d’acide malique des souches X28 et Z8 est reporté à la figure 2 (dans laquelle les valeurs lues en ordonnée correspondent au pourcentage en acide malique consommé moyen dans un mout de Merlot (Merlot 2) et de Sauvignon Blanc (Sauvignon Blanc 1) dont les teneurs en acide malique initiales sont respectivement estimées à 2,28 et 4,32 g/L) ; les valeurs de consommation d’acide malique sont également indiquées pour les quatre souches parentales A, B, C et D et pour les hybrides H1 et H2. La figure 2 montre que le phénotype de consommation est extrême pour les souches X28 et Z8, en comparaison avec le phénotype de consommation des autres souches. Ainsi, le clone X28 sélectionné montre un pourcentage de consommation de 66% ce qui illustre l’efficacité des méthodes de croisement/sélection mises en œuvre dans le cadre de l’invention pour améliorer les caractères quantitatifs. Mise en œuvre de la technique des hybrides hemizygotes . La technique des hybrides hémizygotes est ensuite mise en œuvre selon la méthode décrite dans l’article de Steinmetz et al., 2002, Nature , 416, 6878 :326-330. Une recombinaison homologue permet d’éliminer une des deux copies parentales du gène étudié en insérant une cassette conférant à la levure la résistance à la généticine (G418) : à partir de l'hybride H1, les allèles testés sont remplacés par des cassettes de délétion Kan-MX4 qui confèrent une résistance à la généticine (G418), comme cela est décrit dans l’article de Goldstein et al., 1999, - Yeast - Wiley Online Library., 15(14), 1541–1553. Ces cassettes sont amplifiées par PCR (acronyme anglo-saxon de « Polymerase Chain Reaction ») en utilisant comme matrice l'ADN génomique des souches de la collection de délétion Euroscarf (http://euroscarf.de) préalablement délétées pour le gène en question. Les cassettes ont été amplifiées avec les 500 bases en amont et en aval du gène visé, en 5’ et 3’ de la séquence codante. L’hybride H1 a été transformé avec les cassettes en utilisant le protocole décrit par Gietz, et al., 2007, Nature Protocols , 2(1), 31–34. (https://doi.org/10.1038/nprot.2007.13). L’insertion correcte des cassettes dans les mutants obtenus a été vérifiée par l’amplification positive par PCR d’un fragment qui comporte une centaine de paires de bases (pb) en amont de la zone d’insertion de la cassette, et se terminant au milieu de la cassette. Avec cette stratégie, une transformation réussie remplace l'un des deux allèles de l'hybride. Pour les transformants obtenus, l’identité de l’allèle restant a été déterminée par : - la méthode de RFLP (de l’acronyme anglo-saxon de « Restriction F ragment L ength P olymorphism ») telle que décrite dans l’article de Botstein D. et al., 1980, Am. J. Hum. Genet., 32:314-331 ; ou - la méthode de Sanger telle que décrite dans l’article de Sanger, F. et al. « Nucleotide sequence of bacteriophage phi X174 DNA », Nature, vol. 265, 1977, p. 687-695. Lorsqu’il existe une différence d’au moins 5% entre les deux hybrides sur le pourcentage d’acide malique consommé, l’allèle est considéré comme ayant un effet sur le phénotype étudié. Les gènes testés dont l’effet est significatif sur le pourcentage de consommation d’acide malique en fin de fermentation alcoolique sont présentés dans le tableau 1. L’allèle noté DEMAL est celui qui consomme le plus d’acide malique, l’allèle noté MAL est celui qui préserve le plus la teneur en acide malique. Les résultats présentés ont été mesurés dans le mout de Merlot 2 et de Sauvignon Blanc 1 dont les teneurs en acides maliques initiales sont respectivement estimées à 2,28 et 4,32 g/L. Cartographie de QTL. L’ADN de chaque descendant est avantageusement extrait en utilisant des kits d’extraction tels que le kit DNA-Wizard Promega selon le protocole décrit dans Marti-Raga et al. 2017, G3 February, 399-412. Une amplification est réalisée avec un kit, de préférence le kit Nextera XT ou tout autre kit adapté pour le séquençage de petits génomes. La procédure utilisée permet d’indexer grâce à des amorces d’ADN spécifiques 96 individus et d’amplifier l’ADN afin de construire une Library pour un séquençage Illumina. Le protocole utilisé est celui fourni par le fabricant, il est décrit dans Marti-Raga et al. 2017, G3 February, 399-412. Un génotypage est ensuite effectué qui met en œuvre un séquençage, lequel séquençage est réalisé à l’aide d’un kit de séquençage qui consiste dans un premier temps à amplifier l’ADN afin de construire une Library pour le séquençage Illumina comme décrit ci-avant. L’amplification décrite précédemment est mise en œuvre, et, elle est suivie par le séquençage complet du génome de chaque descendant en utilisant un appareillage Illumina MySeq à l’aide du kit de séquençage (Pair End 2x250 bases) MySeq Reagent Kit V2 selon les prescriptions fournies par le constructeur comme décrit dans Marti-Raga et al. 2017, G3 February, 399-412. Les lectures de séquences obtenues sont de préférence filtrées par des méthodes bio-informatiques en utilisant la suite FASTX-Toolkit (http:// hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/). Les lectures retenues présentent le paramètre de qualité Q>20, ce qui définit un taux d’erreur inférieur à 1%. Ces lectures sont ensuite alignées avec le logiciel BWA (Li, H., and R. Durbin, 2010. Bioinformatics 26(5): 589–595) sur le génome de référence S288C (sacCer3, version avril 2011) disponible sur la base de données SGD (https://www.yeastgenome.org/). A l’aide de la suite d’outils SAM tools décrite dans l’article de Li, H. et al., 2009, Bioinformatics , 25, 2078–2079, les SNP de chacun des descendants sont identifiés et positionnés sur le génome par le logiciel pileup. Ces SNP permettent la construction d’une carte génétique très dense constituée de 1000 marqueurs bi alléliques. La méthode de construction de ce type de carte et les outils bioinformatiques utilisés sont décrits dans l’article Marti-Raga et al. 2017, G3 February, 399-412. Une cartographie génétique est ensuite réalisée, laquelle cartographie établit un lien statistique entre l’hérédité de marqueurs génétiques et la variation d’un caractère quantitatif. Les marqueurs génétiques qui sont statistiquement liés sont des « locus de caractère quantitatifs » dont la traduction anglaise est « Quantitative Trait Loci », avec un acronyme anglo-saxon communément utilisé qui est « QTL » ; de tels QTL sont notamment décrits dans la demande EP 2 183 364. Les méthodes de détection de QTL chez les levures sont décrites dans la littérature, par exemple dans l’article publié par Peltier et al., 2018, BMC Genomics 19, 772. Des marqueurs bi-alléliques identifiés lors du génotypage sont utilisés pour réaliser la cartographie génétique. Un lien statistique est trouvé entre la variation du caractère quantitatif et quatre marqueurs génétiques avec un seuil de significativité très important (II_150, XV_1052, IV_31 et IV_360, voir le tableau 2). S é lection génétique de la desce n dance de l’hybride H3 : un croisement entre les clones Z8 et X28 est ensuite effectué pour donner l’hybride H3 selon le même protocole que celui décrit ci-avant pour l’obtention des hybrides H1 et H2. A partir de cet hybride H3, des spores en masse sont isolés par un procédé faisant appel à l’hydrophobicité de leur paroi, et qui est détaillé dans la description qui suit directement. Une préparation de spores est obtenue après 3 jours de culture sur milieu acétate de potassium (ACK) à 1% en masse à une température de 24°C ; puis ces spores sont digérées dans une préparation de cytohélicase (2mg/mL) et les spores sont purifiées en réalisant des lavages successifs à l’eau et avec une solution aqueuse de Nonidet P40 (également connu sous son nom donné par la classification IUPAC: « octylphenoxypolyethoxyethanol ») à 0.01%. Le degré d’enrichissement en spores varie de 80 à 99% selon les échantillons. A partir de cette préparation, on isole des colonies sur boite de pétri. Dans le cas présent, sensiblement 1000 descendants sont isolés. L’ADN de ces descendants est extrait par une méthode décrite par Albertin et al. (Albertin et al., 2018, Yeast , 35, 141–156) qui permet une extraction rapide compatible avec la technique de génotypage du sequenom ® . Les phénotypes des 1000 descendants isolés de l’hybride H3 est évalué par la méthode du sequenom® selon le protocole décrit par Gabriel S. et al., 2009, Current Protocols in Human Genetics , Suppl. 60. (doi.org/10.1002/ 0471142905.hg0212s60) : le design des primers est réalisé par l’outil MassARRAY® Assay Design version 4.0.0.2 permettant d’amplifier des fragments de moins de 120 bases et en sélectionnant des différences de masse entre allèles comprise entre 16 et 70 Da. Environ 15 ng d’ADN sont nécessaires pour génotyper les individus en utilisant la plateforme MassARRAY® iPLEX (Agena Bioscience®). Après une amplification en multiple, les produits de PCR sont analysés en spectrométrie de masse et la taille des allèles de chaque amplifiat est estimée à l’aide du logiciel de la suite MassARRAY® System. Le génotypage porte sur les pools alléliques Q2demal, Q4demal, Q6demal et Q7demal qui contiennent uniquement des allèles liés au caractère démaliquant. Exemple 1 : Dans le cas de la descendance de H3, les individus qui sont recherchés : les individus porteurs du pool allélique Q4demal qui comporte les allèles suivants : Q4demal : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala). Parmi l’ensemble des descendants de H3 isolés, les individus présentant la combinaison allélique Q4demal sont analysés pour leurs propriétés fermentaires. Ces 53 individus présentent une valeur moyenne de 56.15% d’acide malique dégradé avec 25% des individus qui montrent une consommation d’acide malique supérieure à 61,72% d’acide malique dégradé ce qui est très supérieur à la valeur moyenne des populations H1 et H2 et à celle de levures commerciales (figure 3, sur laquelle la valeur en ordonnée correspond au pourcentage d’acide malique consommé calculé par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ, pour chacun des pools indiqués en abscisse). Un des descendants de l’hybride H3, W647, est croisé avec un descendant de l’hybride H1 : X41. Le croisement entre W647 et X41 donne l’hybride H4. Ce nouveau croisement permet d’incorporer les allèles démaliquants des gènes YKL029C , YOR090C et YBR218C dans l’hybride H4. A partir de cet hybride des spores sont isolées par le même procédé faisant appel à l’hydrophobicité de leur paroi que le procédé décrit ci-avant. Dans le cas de cet hybride H4, plus de 1000 descendants sont isolés. Leur ADN est extrait et les individus sont génotypés par la méthode de sequenom ® . Exemple 2 : Dans la descendance de l’hybride H4 on sélectionne les individus porteurs des pools alléliques Q2demal, et de préférence des pools alléliques Q4demal, et de manière d’avantage préférée des pools alléliques Q6demal, voire des pools alléliques Q7demal. Parmi l’ensemble des descendants de H4 isolés, les individus qui présentent la combinaison allélique Q7demal : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) + YKL029C (p.Ile605) + YOR090C (p.Met419Leu) + YBR218C (p.Glu722Lys) sont analysés pour leur propriétés fermentaires. Ces 10 individus présentent une valeur moyenne de 58.59 % d’acide malique dégradé avec 25% des individus qui montrent une consommation d’acide malique supérieure à 64.42% d’acide malique dégradé (voir sur la figure 3), ce qui est très supérieur à la valeur moyenne des population H1 et H2 et à celle de levures commerciales (voir la figure 2). Synthèse de l’ensemble des résultats obtenus dans les conditions des e x emples 1 et 2 : Les résultats reportés sur la figure 3 (figure 3, sur laquelle la valeur en ordonnée correspond au pourcentage d’acide malique consommé calculé par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ, pour chacun des pools indiqués en abscisse) montrent que la sélection des individus de H3 et de H4 par les pools Q2demal, Q4demal, Q6demal et Q7demal permet d’obtenir des clones bien plus performants qu’un panel de 34 souches industrielles (pool indiqué tout à gauche du diagramme sur la figure 3) dont les valeurs d’acide malique dégradé en fin de fermentation sont comprises entre 5 et 35%. La valeur des levures industrielles a été mesurée dans les conditions de fermentation décrites dans l’article de Peltier et al., 2018, PLOS ONE , 13(1), 191353. (https://doi.org/10.1101/191353). Ces résultats sont confirmés par le test statistique de Wilcoxon, selon les conditions décrites dans Frank Wilcoxon, « Individual comparisons by ranking methods », Biometrics Bulletin (en), vol. 1, n°6, 1945, p. 80–83, qui indique une différence très significative entre les levures industrielles et les clones H3 et H4. Les résultats reportés sur la figure 4 (figure 4, sur laquelle la valeur en ordonnée correspond au pourcentage d’acide malique consommé calculé par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ, pour chacun des pools indiqués en abscisse) montrent que les individus de H3 et de H4 porteurs du pool Q2demal : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu), dégradent plus d’acide malique en fin de fermentation que ceux porteurs du pool Q2mal : YLL041C (p.Lys158) + YGL008C (p.Asp200Glu). Ces résultats sont confirmés par le test statistique de Wilcoxon qui indique une différence très significative entre les groupes. Les résultats reportés sur la figure 5 (figure 5, sur laquelle la valeur en ordonnée correspond au pourcentage d’acide malique consommé calculé par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ, pour chacun des pools indiqués en abscisse) montrent que les individus de H3 et de H4 porteurs du pool Q4demal : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) dégradent plus d’acide malique en fin de fermentation que ceux porteurs du pool Q4mal : YLL041C (p.Lys158) + YGL008C (p.Asp200Glu) + YDL054C (p.Ser63) + YDL237W (p.Glu165). Ces résultats sont confirmés par le test statistique de Wilcoxon, selon les conditions décrites dans Frank Wilcoxon, « Individual comparisons by ranking methods », Biometrics Bulletin (en), vol. 1, n°6, 1945, p. 80–83, qui indique une différence significative entre les groupes, Les résultats reportés sur la figure 6 (figure 6, sur laquelle la valeur en ordonnée correspond au pourcentage d’acide malique consommé calculé par rapport à la masse totale d’acide malique présent au départ, pour chacun des pools indiqués en abscisse) montrent que, au sein de la descendance des hybrides H3 et H4, les allèles des gènes YKL029C et YOR090C ont un effet très significatif sur la dégradation de l’acide malique quelque soit les autres génotypes (visible dans les deux premières séries à gauche de la figure : le pool qualifié de DEMAL pour YKL029C (p.Ile605)+ YOR090C (p.Met419Leu), et le pool qualifié de MAL pour YKL029C (p.Ile605Val)+ YOR090C (p.Met419)). Ces résultats montrent l’intérêt d’incorporer les allèles YKL029C (p.Ile605Val) et YOR090C (p.Met419Leu) au pool Q4demal : ce pool correspond au pool Q6demal. Ainsi, les individus de H4 porteurs du pool Q6demal : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) + YKL029C (p.Ile605) + YOR090C (p.Met419Leu) dégradent plus d’acide malique en fin de fermentation que ceux porteurs du pool contrôle Q6c : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) + YKL029C (p.Ile605Val) + YOR090C (p.Met419). Ces résultats sont confirmés par le test statistique de Wilcoxon qui indique une différence significative entre les groupes au seuil de 10%. Les résultats reportés sur figure 7 montrent que, au sein de la descendance des hybrides H3 et H4, les allèles des gènes YKL029C , YOR090C et YBR218C ont un effet significatif sur la dégradation de l’acide malique quelque soit les autres génotypes (visible dans les deux premières séries à gauche de la figure : le pool qualifié de DEMAL pour YKL029C (p.Ile605)+ YOR090C (p.Met419Leu)+ YBR218C (p.Glu722Lys) et le pool qualifié de MAL pour YKL029C (p.Ile605Val)+ YOR090C (p.Met419)+ YBR218C (p.Glu722)). Ces résultats montrent l’intérêt d’incorporer les allèles YKL029C (p.Ile605Val) + YOR090C (p.Met419Leu) + YBR218C (p.Glu722Lys) au pool Q4demal. Ce nouveau pool est nommé Q7demal. Ainsi, les individus de H4 porteurs du pool Q7demal : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) + YKL029C (p.Ile605Val) + YOR090C (p.Met419Leu) + YBR218C (p.Glu722Lys) dégradent plus d’acide malique en fin de fermentation que ceux porteur du pool contrôle Q7c : YLL041C (p.Lys158Glu) + YGL008C (p.Pro74Leu) + YDL054C (p.Ser63Leu) + YDL237W (p.Glu165Ala) + YKL029C (p.Ile605Val) + YOR090C (p.Met419) + YBR218C (p.Glu722). Ainsi, la sélection sur la base du génotype des descendants des hybrides H3 et H4 à l’aide des pools Q2demal, Q4demal, Q6demal et Q7demal permet d’identifier des individus qui présentent une valeur d’acide malique dégradé très importante. Par contraste, la sélection d’individus parmi les mêmes populations présentant les pools Q2mal, Q4mal, Q6c et Q7c permet la sélection d’individus dégradant une masse d’acide malique moins importante calculée par rapport à la masse totale présente au départ (voir le tableau 4). Les effectifs et les valeurs moyenne des pools sont présentés dans le tableau 4 Pool % ac. Malique consommé Variance Nombre de souches descendants de H3 et H4 Q2demal 51.11123 141.95109 184 Q2mal 22.50 179 17 Q4demal 54.03593 113.09332 120 Q4mal 20.78336 76.49577 5 Q6demal 56.94121 88.02613 38 Q6c 50.23928 193.81062 23 Q7demal 58.59455 83.66503 10 Q7c 52.04401 120.84890 9 Les résultats obtenus et réportés sur la figure 8 montrent que la proportion d’individus qui consomment plus de 55% d’acide malique (valeur en ordonnée sur le diagramme de la figure 8) augmente selon que l’on utilise le pool d’allèle Q2demal, Q4demal Q6demal et Q7demal. Ce résultat est validé par un test de contingence au seil de 5% (test de khi2). Avec le pool Q7demal, la proportion de clones au-dessus de 55 est de 70% : ces résultats sont montrés sur la figure 8 ou les bâtons du diagramme correspondent au nombre d’individus testés, et la courbe le nombre d’individus identifiés comme étant au dessus dudit seuil de 55%. Grâce au procédé de croisement et de sélection mis en œuvre tel que décrit ci-dessus, trois individus remarquables sont identifiés : FMGS_215, FMGS_889 et FMGS2_107. Les pourcentages de consommation d’acide malique de ces trois individus sont supérieurs à 65 % dans le vin issu du Merlot 2. On peut voir sur la figure 9 (les valeurs en ordonnées correspondant au pourcentage en acide malique) le comportement des souches sur trois mouts de Sauvignon blanc et trois mouts de Merlot (désignés sur la figure : « must 1 à 6 ») présentant des teneurs en d’acide malique initiales décroissantes : de 9.3 g/L à 2.3 g/L. Dans tous les cas les souches sélectionnées consomment plus d’acide malique que la souche B qui est la meilleure souche de notre collection pour ce caractère. L’acide L-malique est quantifié par dosage enzymatique après avoir observé l’arrêt complet de la fermentation alcoolique selon la méthode décrite dans Peltier, et al., 2018, PLOS ONE , 13(1), 191353 (https://doi.org/10.1101/191353) en utilisant un kit enzymatique conforme à la méthode OIV-OENO-599-2018 (Recueil des méthodes internationales d’analyses – Organisation internationale de la vigne et du vin). Ce dosage colorimétrique est basé sur la mesure de l’absorbance à 340 nm en spectrophotométrie UV. Dans certaines conditions, le pourcentage d’acide malique consommé dépasse 80% (figure 9). Par ailleurs, des expérimentations ont été réalisées en mesurant le pH des trois mouts de Sauvignon blanc et des trois mouts de Merlot (désignés sur les figures 9 et 10 : « must 1 à 6 ») qui montre que l’utilisation des trois souches FMGS_215, FMGS_889 et FMGS2_107 dans six matrices différentes permet de contrôler de façon remarquable le pH final des vins (voir la figure 10, où les valeurs en ordonnée correspondent au pH final qui est mesuré directement en utilisant un pH mètre préalablement étalonné). Entre les souches démaliquantes et la souche témoin A l’écart de pH peut atteindre 0.4 unités de potentiel Hydrogène. SEQUENCES LISTING Strain – S288C AIM6 / YDL237W Sequence (03-02-2011) 33390 FR 1 1173 DNA Saccharomyces Genome Database 1 atgttaggac tgaaagggtg tctaactatt cttattggat acgttattgc tgtctgtgct 60 ttgttttcca gtaggggaag aaatccttca ttaactgatt gggaaaagtt aaaggaccag 120 aaaatatcga atattgataa ctttgggttg accggtcaac atcttttaga atttttccag 180 gaaaacttgc catttctaag tttttcagag gaaaagtatc gtcacaaaca cgtttcttta 240 tattatgatg tattcaaaga atatatctta cgtcgtgcca gttcaaaaaa gtgtttacca 300 gtagactctg ctatcgcaaa gttgaacaaa gatgttaacc caatgccagt tcactcccat 360 aatgactact ggaggaaact tccgcttttt gaaggtctgg cctatggtgc tagtagtact 420 gaagccgacg tgtggaatat agatgaaaag atcctagctg tgggtcataa tgaagcgtat 480 ttggacccag ttgaattgac attagacaag ctatacactg gccccctctt ggagatttta 540 gacgaggtga attgccaaga ttcagacgcc gatcgcaaaa atggtgtatt tttcaactct 600 ccagaaactt cactcttctt ttatattgat ttcaagtcgg atgataacga actaacttat 660 aaactgctga tggagcaata tttcaaatct ctgattgatt ctggatattt gacatattac 720 gatatgaaga aggatgaaat tatttggaga cctgttactg tgatactaac gggcaactac 780 ccgacgtcat tggatatttt agacaatgga aatgataacg gctattttga gtcaagtcaa 840 aggtttgcat ttctagatgc gccgttgtta agtttggagc ccaaatactc aaagctatct 900 gtagctgcga cggtttcgtt cagccaatta atgaaacatt gtggttctga tcattggaaa 960 gtatcgctaa gaggtcgtat ggattcgaat gagatcagtt gtgctaaaag cataattgat 1020 ggtgctcacg cattgaaact taaaacaaga atttggggag ccccaacctg gccagctaac 1080 ctggtggaaa ctatttctcg ccaaattatt catgacttgg gttccgattt acttaacctg 1140 gacaatttat tcatggcatc gtcattgata taa 1173 AIM6 / YDL237W Sequence 2 390 PRT Saccharomyces Genome Database 2 MLGLKGCLTI LIGYVIAVCA LFSSRGRNPS LTDWEKLKDQ KISNIDNFGL TGQHLLEFFQ 60 ENLPFLSFSE EKYRHKHVSL YYDVFKEYIL RRASSKKCLP VDSAIAKLNK DVNPMPVHSH 120 NDYWRKLPLF EGLAYGASST EADVWNIDEK ILAVGHNEAY LDPVELTLDK LYTGPLLEIL 180 DEVNCQDSDA DRKNGVFFNS PETSLFFYID FKSDDNELTY KLLMEQYFKS LIDSGYLTYY 240 DMKKDEIIWR PVTVILTGNY PTSLDILDNG NDNGYFESSQ RFAFLDAPLL SLEPKYSKLS 300 VAATVSFSQL MKHCGSDHWK VSLRGRMDSN EISCAKSIID GAHALKLKTR IWGAPTWPAN 360 LVETISRQII HDLGSDLLNL DNLFMASSLI 390 MCH1 / YDL054C Sequence (31-07-1996) 33390 FR 3 1461 DNA Saccharomyces Genome Database 3 atgcctctat caaaggtgga gcactacctt tcataccata cgcgcttact cttaccccat 60 gttttgtctc ttcagtcatc acatcgtgtt gcatacatct tttcgctatt atctgcggtg 120 tcaactggct tcattacttt gatatctctt tactctcaac cgtggcagaa acatttaaat 180 tattcctcat ggcaaatcaa caccatcgct agtatgacta atttggggat gtacttgacg 240 ccaccaatct tggggatgat cgctgattct catggcccca ttactttaag tcttttagcc 300 atcatagggt tcatacctag ctattcatat ctggcttacg tttttaatca tccggagtta 360 tctctcggag gaaatggtga ctcatcattc aatctatcca tcatttgttt cgttttcata 420 ggtatatcaa caagcgcttt atactttagc gctttactga catgcactaa gctatatcct 480 catacaaaac tactatccat tagcttacca acgacatgtt atggtatttc ttctgtagtc 540 ggttctcaac tgctaagaat caaatggttc tggtcctcta acgcaagttc ttcctcgtcc 600 aatagtgact taaacctggg aagagtattc caaacatttg ccctcgttta tgtcgttatt 660 gggctacttg catggatagc caccagcgtg gtatcacttt tgcattttaa tgaagagcaa 720 gacaaccaaa aacggctgga tgatcaaact gatgtggaac aatcaccgct gttagaacga 780 agtaatcatg ttcaagaaaa gtttacgcag acgatgctaa ggatctttag tgatcctgtg 840 acatatatcc tagcggtatc aattttgtta tcacttgggc ccctcgagat gtttattgcc 900 aatatgggat cactgactaa cctgctagtc caattagatg cgccaacctt atctacaaag 960 ttgttatcca catacgcgct atcttccact tttacgagat tgctcacagg catagtggca 1020 gacttcttcg ccaagaaaaa aatatcaatt aaatggatcc tgttgacttt cctttcatta 1080 ggggtatgtg cacaactgtt tttattgaaa atgacctctt cagcgtcacc ctgggggcta 1140 gtacctacag gatcattggt tggaattgta tacggtggac ttttcactgt ttatccgacg 1200 ctggtcctgt tagtatgggg cgaacgctca ttcgggactg tttacggtag cttactaatt 1260 gcacctgcta taggttctat gatattttgc atgttgtatg ccaaatttta cgattctcgc 1320 tgtatgagtg gcggaggaga tctgcgaaat ccgtcctgta tttcggctgt ctacaagtac 1380 agcagtatcg cattcgttgt atccgctgtt ctttcagctg tagtattttg gaaattaaaa 1440 agtagaaaac tcagaattta a 1461 MCH1 / YDL054C Sequence 4 486 PRT Saccharomyces Genome Database 4 MPLSKVEHYL SYHTRLLLPH VLSLQSSHRV AYIFSLLSAV STGFITLISL YSQPWQKHLN 60 YSSWQINTIA SMTNLGMYLT PPILGMIADS HGPITLSLLA IIGFIPSYSY LAYVFNHPEL 120 SLGGNGDSSF NLSIICFVFI GISTSALYFS ALLTCTKLYP HTKLLSISLP TTCYGISSVV 180 GSQLLRIKWF WSSNASSSSS NSDLNLGRVF QTFALVYVVI GLLAWIATSV VSLLHFNEEQ 240 DNQKRLDDQT DVEQSPLLER SNHVQEKFTQ TMLRIFSDPV TYILAVSILL SLGPLEMFIA 300 NMGSLTNLLV QLDAPTLSTK LLSTYALSST FTRLLTGIVA DFFAKKKISI KWILLTFLSL 360 GVCAQLFLLK MTSSASPWGL VPTGSLVGIV YGGLFTVYPT LVLLVWGERS FGTVYGSLLI 420 APAIGSMIFC MLYAKFYDSR CMSGGGDLRN PSCISAVYKY SSIAFVVSAV LSAVVFWKLK 480 SRKLRI 486 MAE1 / YKL029C Sequence (31-07-1996) 33390 FR 5 2010 DNA Saccharomyces Genome Database 5 atgcttagaa ccagactatc cgtttccgtt gctgctagat cgcaactaac cagatccttg 60 acagcatcaa ggacagcacc attaagaaga tggcctattc agcaatcgcg tttatattct 120 tctaacacta gatcgcataa agctaccaca acaagagaaa atactttcca aaagccatac 180 agcgacgagg aggtcactaa aacacccgtc ggttctcgcg ccagaaagat cttcgaagct 240 cctcacccac atgccactcg tttgactgta gaaggtgcca tagaatgtcc cttggagagc 300 tttcaacttt taaactctcc tttatttaac aagggttctg catttacaca agaagaaagg 360 gaagcgttta atttagaagc attgctacca ccacaagtga acactttgga cgaacaactg 420 gaaagaagct acaagcagtt atgctatttg aagacgccct tggccaaaaa cgacttcatg 480 acgtctttga gagtacagaa caaagtccta tattttgcat taataaggag acatatcaag 540 gaattagttc ctatcattta caccccaacc gaaggtgatg ctattgctgc ctattcccac 600 aggttcagaa agccagaagg tgtgttttta gacattaccg aacctgattc catcgaatgt 660 agattggcta catacggtgg agacaaagat gtagactaca tcgttgtgtc ggattcggaa 720 ggtattctgg gaattggtga ccaaggtatc ggtggtgtac gtattgctat ctccaaattg 780 gcattgatga cgctgtgcgg tggtattcat cccggccgtg tgctacctgt gtgtttggac 840 gtcggtacta acaacaagaa actagcccgt gacgaattgt acatgggtaa caagttctcc 900 agaatcaggg gtaagcaata tgacgacttc ttggaaaaat tcatcaaggc cgttaagaaa 960 gtgtatccaa gcgccgttct gcatttcgaa gatttcggtg ttaagaacgc tagaagatta 1020 ctagaaaagt acaggtacga attgccatca ttcaacgatg acattcaggg caccggtgcc 1080 gtcgtgatgg cctcgttgat tgctgctttg aaacatacca acagagactt gaaagacacc 1140 agagtgctta tttacggtgc cgggtctgcg ggcctcggta tcgcagatca aattgtgaat 1200 catatggtca cgcacggcgt tgacaaggaa gaagcgcgca agaaaatctt cttgatggac 1260 agacgtgggt taattctaca atcttacgag gctaactcca ctcccgccca acacgtatac 1320 gctaagagtg atgcggaatg ggctggtatc aacacccgct ctttacatga tgtggtggag 1380 aacgtcaaac caacgtgttt ggttggctgc tccacacaag caggcgcatt cactcaagat 1440 gtcgtagaag aaatgcacaa gcacaatcct agaccgatca ttttcccatt atccaaccct 1500 actagactac acgaagccgt tcctgccgat ttaatgaagt ggaccaacaa caacgctctt 1560 gtagctaccg gatctccttt cccacctgtt gatggttacc gtatctcgga gaacaacaat 1620 tgttactctt tcccaggtat cggtttaggt gccgtactat cgcgtgccac caccatcaca 1680 gacaagatga tctccgctgc agtggaccaa ctagccgaat tgtcgccact aagagagggc 1740 gactcgagac ctgggttgct acccggcctg gacaccatca ccaacacttc tgcgcgtcta 1800 gctaccgctg tgatcttgca agcactcgag gagggaaccg cccgtatcga gcaagaacaa 1860 gtaccgggag gagctcccgg cgaaactgtc aaggttcctc gtgactttga cgaatgttta 1920 cagtgggtca aagcccaaat gtgggagcct gtgtacagac ctatgatcaa ggtccaacat 1980 gacccatcgg tgcacaccaa ccaattgtag 2010 MAE1 / YKL029C Sequence 6 669 PRT Saccharomyces Genome Database 6 MLRTRLSVSV AARSQLTRSL TASRTAPLRR WPIQQSRLYS SNTRSHKATT TRENTFQKPY 60 SDEEVTKTPV GSRARKIFEA PHPHATRLTV EGAIECPLES FQLLNSPLFN KGSAFTQEER 120 EAFNLEALLP PQVNTLDEQL ERSYKQLCYL KTPLAKNDFM TSLRVQNKVL YFALIRRHIK 180 ELVPIIYTPT EGDAIAAYSH RFRKPEGVFL DITEPDSIEC RLATYGGDKD VDYIVVSDSE 240 GILGIGDQGI GGVRIAISKL ALMTLCGGIH PGRVLPVCLD VGTNNKKLAR DELYMGNKFS 300 RIRGKQYDDF LEKFIKAVKK VYPSAVLHFE DFGVKNARRL LEKYRYELPS FNDDIQGTGA 360 VVMASLIAAL KHTNRDLKDT RVLIYGAGSA GLGIADQIVN HMVTHGVDKE EARKKIFLMD 420 RRGLILQSYE ANSTPAQHVY AKSDAEWAGI NTRSLHDVVE NVKPTCLVGC STQAGAFTQD 480 VVEEMHKHNP RPIIFPLSNP TRLHEAVPAD LMKWTNNNAL VATGSPFPPV DGYRISENNN 540 CYSFPGIGLG AVLSRATTIT DKMISAAVDQ LAELSPLREG DSRPGLLPGL DTITNTSARL 600 ATAVILQALE EGTARIEQEQ VPGGAPGETV KVPRDFDECL QWVKAQMWEP VYRPMIKVQH 660 DPSVHTNQL 669 GPM2 / YDL021W Sequence (31-07-1996) 33390 FR 7 936 DNA Saccharomyces Genome Database 7 atgactgcaa gcacaccatc caatgtcatg acattgttct tgttaaggca tggacaaagt 60 gaattgaatc acgagaatat attctgtggt tggattgacg ctaagctaac cgaaaaaggt 120 aaagaacaag ctcgtcattc tgccgagcta atcgaacaat attgtaaagc taataatttg 180 agattacccc agattggtta cacctcacgt ttaattagga cccaacagac catagaaacg 240 atgtgtgaag aatttaagtt aaagccacaa ctgcaggttg tttacgactt taataaaatc 300 aaacttggag acgaatttgg cagtgatgac aaggataata tgaaaatccc gattcttcaa 360 acttggaggc taaatgaacg tcattacggt tcctggcagg gccagaggaa accgaatgtt 420 ttaaaagaat atggtaagga taaatatatg ttcattagga gagattacga gggtaagcca 480 ccacctgtag atcttgaccg tgagatgatt caacaagaaa atgagaaggg ctcttctact 540 gggtacgaat tcaaggagcc aaacagacaa ataaaatatg aattggaatg cagcaatcat 600 gacattgtat taccggattc cgaatctctt cgtgaagtgg tttatagatt gaatcctttt 660 ctacaaaatg tcatattaaa attagccaat caatatgatg aatcttcatg cctgattgtg 720 ggccatggaa gttcagtgag atcgctactg aaaattctgg agggtatatc agatgatgac 780 atcaagaatg ttgatattcc aaatggtatc cccttagtcg ttgaattaga taagaataat 840 ggtcttaagt ttatcagaaa attctaccta gatcctgaat ctgctaagat caatgctgag 900 aaagtccgta atgagggttt cataaaaaat ccttaa 936 GPM2 / YDL021W Sequence 8 311 PRT Saccharomyces Genome Database 8 MTASTPSNVM TLFLLRHGQS ELNHENIFCG WIDAKLTEKG KEQARHSAEL IEQYCKANNL 60 RLPQIGYTSR LIRTQQTIET MCEEFKLKPQ LQVVYDFNKI KLGDEFGSDD KDNMKIPILQ 120 TWRLNERHYG SWQGQRKPNV LKEYGKDKYM FIRRDYEGKP PPVDLDREMI QQENEKGSST 180 GYEFKEPNRQ IKYELECSNH DIVLPDSESL REVVYRLNPF LQNVILKLAN QYDESSCLIV 240 GHGSSVRSLL KILEGISDDD IKNVDIPNGI PLVVELDKNN GLKFIRKFYL DPESAKINAE 300 KVRNEGFIKN P 311 RDR1 / YOR380W Sequence (31-07-1996) 33390 FR 9 1641 DNA Saccharomyces Genome Database 9 atggcatccc caggatcgac agcattacca cacaagcgac aaagagtccg aaaggcttgc 60 gtgccctgta gggaacgtaa aaggaaatgt aatggcaaat ctccatgtga aatgtgcgtt 120 gcctatggat atgtatgtca ttatattgac ggtcgtgtcc cttcggcatc acctcaagtg 180 caacaagtag gtgaaacatc tcctgatacg gagagcagac cttttgttct tccgggtata 240 catagaaacg aacaaccgca gcctataaat acacagaacg ttacaagtca aaacattgta 300 gatccaacta agtctaggta cacgatccag cactctgcag ttgctttccc ccgctgtctt 360 ggtctcgaac tccgatcaac taatcctcca cgcctacatt ccttcgcttg gcattgcgga 420 atcagaccgg 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cactgcgcta tcagcagcat acgctcttgt aaaactggat 1320 caagcatggt ggaatgtgtt gagcacctca ttccagtacg tctgtgtcct tcttgccatc 1380 gacacaccgg aaagtctttc acatgttgct actgccatga aaacgttaga taatattact 1440 caaattctcg gtacacgtat tgcttttgaa gcacaaaaga ccgcaaaact gcttcttgag 1500 gattccatga aaaaaaaaag acaagaaatt cagcagcttg agcaggcaac tcaccagaga 1560 tctaatcttg aaactactca cctactcgat attgactggg atgctttgct agatccatca 1620 gacacgttaa actttatgta a 1641 RDR1 / YOR380W Sequence 33390 FR 10 546 PRT Saccharomyces Genome Database 10 MASPGSTALP HKRQRVRKAC VPCRERKRKC NGKSPCEMCV AYGYVCHYID GRVPSASPQV 60 QQVGETSPDT ESRPFVLPGI HRNEQPQPIN TQNVTSQNIV DPTKSRYTIQ HSAVAFPRCL 120 GLELRSTNPP RLHSFAWHCG IRPEENPNSH VLLSDLVTKE EYYRISKVYF SVVHPIFDVV 180 NPEQLAKNVE KYWDGDVKTL EYGAVIAGVI ALGSFFMGSL GHPREMDIVQ YAKGILDDPT 240 FSRIPTVEQV SAWVLRTIYL RATSRPHVAW LASCVTIHLS EAIGLHHEID REDIAISNNV 300 PPKRTTVVSE HTRRLFWCAW SINTILSYDY GRSSVTLNRI TCKPVKETDG NFTAHLVALA 360 HLIPQDSVNA NAAQLLQALA AVHESPNAHP FLSLTKGDIC LSLYRRLRLL NHILDKNVVL 420 QIIDIGNTAL SAAYALVKLD QAWWNVLSTS FQYVCVLLAI DTPESLSHVA TAMKTLDNIT 480 QILGTRIAFE AQKTAKLLLE DSMKKKRQEI QQLEQATHQR SNLETTHLLD IDWDALLDPS 540 DTLNFM 546 PYC2 / YBR218C Sequence (28-01-1997) 33390 FR 11 3543 DNA Saccharomyces Genome Database 11 atgagcagta gcaagaaatt ggccggtctt agggacaatt tcagtttgct cggcgaaaag 60 aataagatct tggtcgccaa tagaggtgaa attccgatta gaatttttag atctgctcat 120 gagctgtcta tgagaaccat cgccatatac tcccatgagg accgtctttc aatgcacagg 180 ttgaaggcgg acgaagcgta tgttatcggg gaggagggcc agtatacacc tgtgggtgct 240 tacttggcaa tggacgagat catcgaaatt gcaaagaagc ataaggtgga tttcatccat 300 ccaggttatg ggttcttgtc tgaaaattcg gaatttgccg acaaagtagt gaaggccggt 360 atcacttgga tcggccctcc agctgaagtt attgactctg tgggtgacaa agtctctgcc 420 agacacttgg cagcaagagc taacgttcct accgttcccg gtactccagg acctatcgaa 480 actgtgcaag aggcacttga cttcgttaat gaatacggct acccggtgat cattaaggcc 540 gcctttggtg gtggtggtag aggtatgaga gtcgttagag aaggtgacga cgtggcagat 600 gcctttcaac gtgctacctc cgaagcccgt actgccttcg gtaatggtac ctgctttgtg 660 gaaagattct tggacaagcc aaagcatatt gaagttcaat tgttggctga taaccacgga 720 aacgtggttc atcttttcga aagagactgt tctgtgcaaa gaagacacca aaaagttgtc 780 gaagtcgctc cagcaaagac tttgccccgt gaagttcgtg acgctatttt gacagatgct 840 gttaaattag ctaaggtatg tggttacaga aacgcaggta ccgccgaatt cttggttgac 900 aaccaaaaca gacactattt cattgaaatt aatccaagaa ttcaagtgga gcataccatc 960 actgaagaaa tcaccggtat tgacattgtt tctgcccaaa tccagattgc cgcaggtgcc 1020 actttgactc aactaggtct attacaggat aaaatcacca cccgtgggtt ttccatccaa 1080 tgtcgtatta ccactgaaga tccctctaag aatttccaac cggataccgg tcgcctggag 1140 gtctatcgtt ctgccggtgg taatggtgtg agattggacg gtggtaacgc ttatgcaggt 1200 gctactatct cgcctcacta cgactcaatg ctggtcaaat gttcatgctc tggttctact 1260 tatgaaatcg tccgtaggaa gatgattcgt gccctgatcg aattcagaat cagaggtgtt 1320 aagaccaaca ttcccttcct attgactctt ttgaccaatc cagtttttat tgagggtaca 1380 tactggacga cttttattga cgacacccca caactgttcc aaatggtatc gtcacaaaac 1440 agagcgcaaa aactgttaca ctatttggca gacttggcag ttaacggttc ttctattaag 1500 ggtcaaattg gcttgccaaa actaaaatca aatccaagtg tcccccattt gcacgatgct 1560 cagggcaatg tcatcaacgt tacaaagtct gcaccaccat ccggatggag acaagtgcta 1620 ctggaaaagg gaccatctga atttgccaag caagtcagac agttcaatgg tactctactg 1680 atggacacca cctggagaga cgctcatcaa tctctacttg caacaagagt cagaacccac 1740 gatttggcta caatcgctcc aacaaccgca catgcccttg caggtgcttt cgctttagaa 1800 tgttggggtg gtgctacatt cgacgttgca atgagattct tgcatgagga tccatgggaa 1860 cgtctgagaa aattaagatc tctggtgcct aatattccat tccaaatgtt attacgtggt 1920 gccaacggtg tggcttactc ttcattacct gacaatgcta ttgaccattt tgtcaagcaa 1980 gccaaggata atggtgttga tatatttaga gtttttgatg ccttgaatga tttagaacaa 2040 ttaaaagttg gtgtgaatgc tgtcaagaag gccggtggtg ttgtcgaagc tactgtttgt 2100 tactctggtg acatgcttca gccaggtaag aaatacaact tagactacta cctagaagtt 2160 gttgaaaaaa tagttcaaat gggtacacat atcttgggta ttaaggatat ggcaggtact 2220 atgaaaccgg ccgctgccaa attattaatt ggctccctaa gaaccagata tccggattta 2280 ccaattcatg ttcacagtca tgactccgca ggtactgctg ttgcgtctat gactgcatgt 2340 gccctagcag gtgctgatgt tgtcgatgta gctatcaatt caatgtcggg cttaacttcc 2400 caaccatcaa ttaatgcact gttggcttca ttagaaggta acattgatac tgggattaac 2460 gttgagcatg ttcgtgaatt agatgcatac tgggccgaaa tgagactgtt gtattcttgt 2520 ttcgaggccg acttgaaggg accagatcca gaagtttacc aacatgaaat cccaggtggt 2580 caattgacta acttgttatt ccaagctcaa caactgggtc ttggtgaaca atgggctgaa 2640 actaaaagag cttacagaga agccaattac ctactgggag atattgttaa agttacccca 2700 acttctaagg ttgtcggtga tttagctcaa ttcatggttt ctaacaaact gacttccgac 2760 gatattagac gtttagctaa ttctttggac tttcctgact ctgttatgga cttttttgaa 2820 ggtttaattg gtcaaccata cggtgggttc ccagaaccat taagatctga tgtattgaga 2880 aacaagagaa gaaagttgac gtgccgtcca ggtttagaat tagaaccatt tgatctcgaa 2940 aaaattagag aagacttgca gaacagattc ggtgatattg atgaatgcga tgttgcttct 3000 tacaatatgt atccaagggt ctatgaagat ttccaaaaga tcagagaaac atacggtgat 3060 ttatcagttc taccaaccaa aaatttccta gcaccagcag aacctgatga agaaatcgaa 3120 gtcaccatcg aacaaggtaa gactttgatt atcaaattgc aagctgttgg tgacttaaat 3180 aagaaaactg ggcaaagaga agtgtatttt gaattgaacg gtgaattaag aaagatcaga 3240 gttgcagaca agtcacaaaa catacaatct gttgctaaac caaaggctga tgtccacgat 3300 actcaccaaa tcggtgcacc aatggctggt gttatcatag aagttaaagt acataaaggg 3360 tctttggtga aaaagggcga atcgattgct gttttgagtg ccatgaaaat ggaaatggtt 3420 gtctcttcac cagcagatgg tcaagttaaa gacgttttca ttaaggatgg tgaaagtgtt 3480 gacgcatcag atttgttggt tgtcctagaa gaagaaaccc tacccccatc ccaaaaaaag 3540 taa 3543 PYC2 / YBR218C Sequence 12 1180 PRT Saccharomyces Genome Database 12 MSSSKKLAGL RDNFSLLGEK NKILVANRGE IPIRIFRSAH ELSMRTIAIY SHEDRLSMHR 60 LKADEAYVIG EEGQYTPVGA YLAMDEIIEI AKKHKVDFIH PGYGFLSENS EFADKVVKAG 120 ITWIGPPAEV IDSVGDKVSA RHLAARANVP TVPGTPGPIE TVQEALDFVN EYGYPVIIKA 180 AFGGGGRGMR VVREGDDVAD AFQRATSEAR TAFGNGTCFV ERFLDKPKHI EVQLLADNHG 240 NVVHLFERDC SVQRRHQKVV EVAPAKTLPR EVRDAILTDA VKLAKVCGYR NAGTAEFLVD 300 NQNRHYFIEI NPRIQVEHTI TEEITGIDIV SAQIQIAAGA TLTQLGLLQD KITTRGFSIQ 360 CRITTEDPSK NFQPDTGRLE VYRSAGGNGV RLDGGNAYAG ATISPHYDSM LVKCSCSGST 420 YEIVRRKMIR ALIEFRIRGV KTNIPFLLTL LTNPVFIEGT YWTTFIDDTP QLFQMVSSQN 480 RAQKLLHYLA DLAVNGSSIK GQIGLPKLKS NPSVPHLHDA QGNVINVTKS APPSGWRQVL 540 LEKGPSEFAK QVRQFNGTLL MDTTWRDAHQ SLLATRVRTH DLATIAPTTA HALAGAFALE 600 CWGGATFDVA MRFLHEDPWE RLRKLRSLVP NIPFQMLLRG ANGVAYSSLP DNAIDHFVKQ 660 AKDNGVDIFR VFDALNDLEQ LKVGVNAVKK AGGVVEATVC YSGDMLQPGK KYNLDYYLEV 720 VEKIVQMGTH ILGIKDMAGT MKPAAAKLLI GSLRTRYPDL PIHVHSHDSA GTAVASMTAC 780 ALAGADVVDV AINSMSGLTS QPSINALLAS LEGNIDTGIN VEHVRELDAY WAEMRLLYSC 840 FEADLKGPDP EVYQHEIPGG QLTNLLFQAQ QLGLGEQWAE TKRAYREANY LLGDIVKVTP 900 TSKVVGDLAQ FMVSNKLTSD DIRRLANSLD FPDSVMDFFE GLIGQPYGGF PEPLRSDVLR 960 NKRRKLTCRP GLELEPFDLE KIREDLQNRF GDIDECDVAS YNMYPRVYED FQKIRETYGD 1020 LSVLPTKNFL APAEPDEEIE VTIEQGKTLI IKLQAVGDLN KKTGQREVYF ELNGELRKIR 1080 VADKSQNIQS VAKPKADVHD THQIGAPMAG VIIEVKVHKG SLVKKGESIA VLSAMKMEMV 1140 VSSPADGQVK DVFIKDGESV DASDLLVVLE EETLPPSQKK 1180 PTC5 / YOR090C Sequence (31-07-1996) 33390 FR 13 1719 DNA Saccharomyces Genome Database 13 atgtctccct taactagaac cgtagctata aagaaaacgg ttaaggttct atctaaatgt 60 caatctggta gagaatacac acagaagttt ctccaacgtg catattcaac atcacatgcc 120 aacagcacat actattcaag gacaaagcta ttcatatcat cacattctaa agctctaaac 180 attgctctac taagcgggtc cctactgttg acctactcct actattcccc taaaaagatc 240 ctctcccttg atacaattaa cggaataaaa gattattcta caaatactag tggtaacatt 300 aacatgccgt cacctaatcc aaaaggaaca gagacacaaa agagtcaacg gtctcagaat 360 gaccaatctg ttcttatctt gaacgattct aaaatagagg ctaaactaca tgatagagag 420 gaaagccatt ttgttaaccg tggcactggt atattcaggt atgatgtggc acagttgccc 480 tctaaccatc caatagaaga cgatcacgta gaacaaatca ttaccattcc gatagaaagt 540 gaggatggca agtccataga gaaggatttg tatttttttg gaatttttga tggacatggt 600 ggtcctttca cttcggaaaa attatctaaa gatctagtcc gttatgtagc gtatcaatta 660 ggtcaggtat atgaccagaa caaaacggtt ttccattccg accccaacca attaatcgat 720 tctgcaattt cgaaaggttt tttgaaacta gataatgatc ttgtaatcga atcgttcagg 780 aagctgtttc aagatccaaa caacacaaat attgcaaaca ctttaccagc gatttctggt 840 tcttgtgcac tattaagttt atacaactcc actaactcaa ttttgaaagt ggctgtcact 900 ggagactcaa gggctttaat ttgtggtttg gacaacgagg gcaattggac ggtaaagtcg 960 ctatccaccg accagaccgg tgataatttg gatgaagtac ggagaattag gaaagaacat 1020 ccaggagaac caaacgttat aagaaacgga agaatattgg gttcattaca accatccagg 1080 gcatttggag actatcgcta caagatcaaa gaagtcgatg gaaaaccatt atcggatttg 1140 cctgaagttg ccaaacttta ttttagaaga gagccaaggg atttcaagac acccccatat 1200 gtcactgcgg aaccagtgat tacttctgcc aaaattggtg agaacactaa atttatggtg 1260 atgggttcgg atggtttatt cgaattacta actaatgaag aaattgcttc cttggttatc 1320 aggtggatgg ataaaaatat gaatctggca cctgtgaagg cagaaccggg gaaattacca 1380 aaagttatcg atgtatctga agacaaggaa gcacaaagac cggcattcag gtacaaggat 1440 aataattcga gctcaccatc aggatcaaac ccagagtatc ttattgaaga caaaaacgtc 1500 gccactcatt taattagaaa tgcattaagt gcgggcggaa gaaaagaata tgtatcggca 1560 ttggtaagta taccatcgcc gatgagtaga agatacagag atgacttgac agtaacagtg 1620 gcgttctttg gtgattctgg aacaccctca attgtctcca atgctacttc aatagttatg 1680 aacccggagg caacaacaaa gccaaaacct agattatga 1719 PTC5 / YOR090C Sequence 14 572 PRT Saccharomyces Genome Database 14 MSPLTRTVAI KKTVKVLSKC QSGREYTQKF LQRAYSTSHA NSTYYSRTKL FISSHSKALN 60 IALLSGSLLL TYSYYSPKKI LSLDTINGIK DYSTNTSGNI NMPSPNPKGT ETQKSQRSQN 120 DQSVLILNDS KIEAKLHDRE ESHFVNRGTG IFRYDVAQLP SNHPIEDDHV EQIITIPIES 180 EDGKSIEKDL YFFGIFDGHG GPFTSEKLSK DLVRYVAYQL GQVYDQNKTV FHSDPNQLID 240 SAISKGFLKL DNDLVIESFR KLFQDPNNTN IANTLPAISG SCALLSLYNS TNSILKVAVT 300 GDSRALICGL DNEGNWTVKS LSTDQTGDNL DEVRRIRKEH PGEPNVIRNG RILGSLQPSR 360 AFGDYRYKIK EVDGKPLSDL PEVAKLYFRR EPRDFKTPPY VTAEPVITSA KIGENTKFMV 420 MGSDGLFELL TNEEIASLVI RWMDKNMNLA PVKAEPGKLP KVIDVSEDKE AQRPAFRYKD 480 NNSSSPSGSN PEYLIEDKNV ATHLIRNALS AGGRKEYVSA LVSIPSPMSR RYRDDLTVTV 540 AFFGDSGTPS IVSNATSIVM NPEATTKPKP RL 572 SDH2 / YLL041C Sequence (31-07-1996) 33390 FR 15 801 DNA Saccharomyces Genome Database 15 atgttgaacg tgctattgag aaggaaggcc ttttgtttgg tgacgaagaa gggtatggct 60 actgccacaa cagctgcagc tacgcatacc cccagattga aaacttttaa agtttacaga 120 tggaatccag acgagccaag tgctaaacct catttacagt catatcaagt ggatctgaat 180 gactgtgggc ccatggtact tgatgcgctg ttaaagatca aagacgaaca ggattctacc 240 ctaactttta gaagatcatg tagagaaggt atctgcggtt catgtgccat gaacattggc 300 ggtagaaaca cgctagcttg tatatgtaag atcgaccaga acgaatccaa acaactcaag 360 atctatccat taccccacat gtttattgtc aaagatttgg tacctgattt aactaacttc 420 taccaacaat acaaatctat ccaaccttac ttacagagat catcgtttcc aaaggatgga 480 acggaagtgc tacaaagtat tgaagatcgt aagaaactgg atggtcttta cgaatgtatt 540 ctgtgtgcat gctgctctac ttcatgtcca tcgtactggt ggaaccaaga acagtatttg 600 ggccctgccg tgctaatgca agcctaccgt tggctaattg actctagaga ccaagctaca 660 aagacaagaa aggccatgct aaacaactcc atgtcattgt acagatgtca caccatcatg 720 aactgtacta gaacttgtcc aaagggcttg aatcctggtt tggctattgc tgaaattaag 780 aaatctttgg catttgccta g 801 SDH2 / YLL041C Sequence 33390 FR 16 266 PRT Saccharomyces Genome Database 16 MLNVLLRRKA FCLVTKKGMA TATTAAATHT PRLKTFKVYR WNPDEPSAKP HLQSYQVDLN 60 DCGPMVLDAL LKIKDEQDST LTFRRSCREG ICGSCAMNIG GRNTLACICK IDQNESKQLK 120 IYPLPHMFIV KDLVPDLTNF YQQYKSIQPY LQRSSFPKDG TEVLQSIEDR KKLDGLYECI 180 LCACCSTSCP SYWWNQEQYL GPAVLMQAYR WLIDSRDQAT KTRKAMLNNS MSLYRCHTIM 240 NCTRTCPKGL NPGLAIAEIK KSLAFA 266 PMA1 / YGL008C Sequence (31-07-1996) 33390 FR 17 2757 DNA Saccharomyces Genome Database 17 atgactgata catcatcctc ttcatcatcc tcttcagcat cttctgtttc agctcatcag 60 ccaactcaag aaaagcctgc taagacttac gatgacgctg catctgaatc ttctgacgat 120 gacgatatcg atgctttaat cgaagaacta caatctaatc acggtgtcga cgacgaagac 180 agtgataacg atggtccagt tgccgccggt gaagctagac cagttccaga agaatattta 240 caaactgacc catcttacgg tttaacttcc gatgaagttt tgaaaagaag aaagaagtac 300 ggtttgaatc aaatggctga cgaaaaagaa tctttagtcg ttaagttcgt tatgtttttc 360 gtcggtccaa ttcaattcgt tatggaagcc gctgctattt tggctgccgg tttgtccgat 420 tgggtcgatt tcggtgttat ctgtggtttg ttaatgttaa acgctggtgt tggtttcgtt 480 caagaattcc aagctggttc tattgtcgat gaattgaaaa agactttggc taacactgct 540 gttgttatca gagacggtca attggttgaa attccagcca acgaagtcgt cccaggtgat 600 attttgcaat tggaagatgg tactgttatc ccaactgatg gtcgtattgt cactgaagac 660 tgtttcttgc aaatcgatca atctgctatt actggtgaat ctttggctgt cgacaaacat 720 tacggtgacc aaactttctc ttcttccact gttaagagag gtgaaggttt catggttgtt 780 accgctaccg gtgacaacac tttcgttggt agagctgctg ctttggttaa caaagccgct 840 ggtggtcaag gtcatttcac tgaagttttg aacggtattg gtattatctt attggttttg 900 gtcattgcca ctttgttgtt ggtctggact gcttgtttct acagaaccaa cggtattgtt 960 agaatcttga gatacactct aggtattact attattggtg tcccagtcgg tttgccagct 1020 gtcgttacca ccactatggc cgtcggtgct gcttacttgg ctaagaaaca agccattgtt 1080 caaaagttgt ctgctattga atccttggct ggtgtcgaaa tcttgtgttc cgacaaaacc 1140 ggtactttga ccaagaacaa gttgtccttg cacgaaccat acactgttga aggtgtttct 1200 ccagacgact tgatgttgac tgcttgtttg gctgcttcca gaaagaagaa gggtttggat 1260 gctattgata aggctttctt gaagtctttg aagcaatatc caaaggctaa ggacgctttg 1320 accaagtaca aggttttgga attccatcca tttgaccctg tctccaagaa ggttactgcc 1380 gttgtcgaat ctccagaagg tgaaagaatt gtttgtgtta agggtgctcc attattcgtc 1440 ttgaagactg tcgaagaaga tcacccaatc ccagaagatg tccatgaaaa ctacgaaaac 1500 aaggttgctg aattggcttc tagagggttc cgtgctttag gtgttgctag aaagagaggt 1560 gaaggtcact gggaaatctt gggtgttatg ccatgtatgg atccaccaag agacgatact 1620 gctcaaactg ttagcgaagc tagacacttg ggtctaagag ttaagatgtt aactggtgat 1680 gctgttggta ttgctaagga aacttgtaga caattgggtt tgggtaccaa catttacaac 1740 gctgaaagat taggtctagg tggcggtggt gacatgccag gttctgaatt agctgatttt 1800 gttgaaaatg ccgatggttt cgctgaagtt ttcccacaac ataaatacag agttgttgaa 1860 atcttgcaaa acagaggtta cttggttgct atgactggtg atggtgttaa cgatgctcca 1920 tctttgaaga aggctgatac tggtattgct gtcgaaggtg ctactgatgc tgccagatct 1980 gctgctgata ttgttttctt ggctcctggt ctatctgcta ttattgatgc tttgaagacc 2040 tccagacaaa tttttcacag aatgtactct tacgttgttt accgtattgc tttgtctcta 2100 catttggaaa tcttcttggg tctatggatt gctattttgg ataactcttt ggacattgat 2160 ttgattgttt tcatcgctat tttcgctgat gttgctactt tggctattgc ttacgataat 2220 gctccttact ctccaaagcc cgttaaatgg aacctaccaa gattatgggg tatgtctatt 2280 attttgggca tagttttagc tataggttct tggattacct tgactactat gttcttacca 2340 aagggtggta ttatccaaaa cttcggtgct atgaacggta ttatgttctt gcaaatttcc 2400 ttgactgaaa actggttgat tttcattacc agagctgctg gtccattctg gtcttctatc 2460 ccatcctggc aattggctgg tgccgtcttc gctgtcgaca tcatcgctac catgtttacc 2520 ttattcggtt ggtggtctga aaactggact gatattgtta ctgtcgtccg tgtctggatc 2580 tggtctatcg gtatcttctg tgttttgggt ggtttctact acgaaatgtc cacttctgaa 2640 gcctttgaca gattgatgaa cggtaagcca atgaaggaaa agaagtctac cagaagtgtc 2700 gaagacttca tggctgctat gcaaagagtc tctactcaac acgaaaagga aacctaa 2757 PMA1 / YGL008C Sequence 18 918 PRT Saccharomyces Genome Database 18 MTDTSSSSSS SSASSVSAHQ PTQEKPAKTY DDAASESSDD DDIDALIEEL QSNHGVDDED 60 SDNDGPVAAG EARPVPEEYL QTDPSYGLTS DEVLKRRKKY GLNQMADEKE SLVVKFVMFF 120 VGPIQFVMEA AAILAAGLSD WVDFGVICGL LMLNAGVGFV QEFQAGSIVD ELKKTLANTA 180 VVIRDGQLVE IPANEVVPGD ILQLEDGTVI PTDGRIVTED CFLQIDQSAI TGESLAVDKH 240 YGDQTFSSST VKRGEGFMVV TATGDNTFVG RAAALVNKAA GGQGHFTEVL NGIGIILLVL 300 VIATLLLVWT ACFYRTNGIV RILRYTLGIT IIGVPVGLPA VVTTTMAVGA AYLAKKQAIV 360 QKLSAIESLA GVEILCSDKT GTLTKNKLSL HEPYTVEGVS PDDLMLTACL AASRKKKGLD 420 AIDKAFLKSL KQYPKAKDAL TKYKVLEFHP FDPVSKKVTA VVESPEGERI VCVKGAPLFV 480 LKTVEEDHPI PEDVHENYEN KVAELASRGF RALGVARKRG EGHWEILGVM PCMDPPRDDT 540 AQTVSEARHL GLRVKMLTGD AVGIAKETCR QLGLGTNIYN AERLGLGGGG DMPGSELADF 600 VENADGFAEV FPQHKYRVVE ILQNRGYLVA MTGDGVNDAP SLKKADTGIA VEGATDAARS 660 AADIVFLAPG LSAIIDALKT SRQIFHRMYS YVVYRIALSL HLEIFLGLWI AILDNSLDID 720 LIVFIAIFAD VATLAIAYDN APYSPKPVKW NLPRLWGMSI ILGIVLAIGS WITLTTMFLP 780 KGGIIQNFGA MNGIMFLQIS LTENWLIFIT RAAGPFWSSI PSWQLAGAVF AVDIIATMFT 840 LFGWWSENWT DIVTVVRVWI WSIGIFCVLG GFYYEMSTSE AFDRLMNGKP MKEKKSTRSV 900 EDFMAAMQRV STQHEKET 918 PNC1 / YGL037C Sequence (31-07-1996) 33390 FR 19 651 DNA Saccharomyces Genome Database 19 atgaagactt taattgttgt tgatatgcaa aatgatttta tttcaccttt aggttccttg 60 actgttccaa aaggtgagga attaatcaat cctatctcgg atttgatgca agatgctgat 120 agagactggc acaggattgt ggtcaccaga gattggcacc cttccagaca tatttcgttc 180 gcaaagaacc ataaagataa agaaccctat tcaacataca cctaccactc tccaaggcca 240 ggcgatgatt ccacgcaaga gggtattttg tggcccgtac actgtgtgaa aaacacctgg 300 ggtagtcaat tggttgacca aataatggac caagtggtca ctaagcatat taagattgtc 360 gacaagggtt tcttgactga ccgtgaatac tactccgcct tccacgacat ctggaacttc 420 cataagaccg acatgaacaa gtacttagaa aagcatcata cagacgaggt ttacattgtc 480 ggtgtagctt tggagtattg tgtcaaagcc accgccattt ccgctgcaga actaggttat 540 aagaccactg tcctgctgga ttacacaaga cccatcagcg atgatcccga agtcatcaat 600 aaggttaagg aagagttgaa ggcccacaac atcaatgtcg tggataaata a 651 PNC1 / YGL037C Sequence 20 216 PRT Saccharomyces Genome Database 20 MKTLIVVDMQ NDFISPLGSL TVPKGEELIN PISDLMQDAD RDWHRIVVTR DWHPSRHISF 60 AKNHKDKEPY STYTYHSPRP GDDSTQEGIL WPVHCVKNTW GSQLVDQIMD QVVTKHIKIV 120 DKGFLTDREY YSAFHDIWNF HKTDMNKYLE KHHTDEVYIV GVALEYCVKA TAISAAELGY 180 KTTVLLDYTR PISDDPEVIN KVKEELKAHN INVVDK 216 YBL036C Sequence (28-01-1997) 33390 FR 21 774 DNA Saccharomyces Genome Database 21 atgtccactg gtattactta tgatgaagat agaaagacac aattaattgc ccaatacgaa 60 tctgtaaggg aagttgtgaa tgcagaggca aaaaatgttc atgttaatga aaatgcctcc 120 aaaattttat tattggttgt ttcgaaattg aaaccagcta gcgatataca aattctttac 180 gaccatggtg tgagggagtt cggggaaaac tatgttcaag agttgatcga aaaggcaaaa 240 ttactaccag acgatatcaa gtggcacttt attggcggtt tgcaaacgaa taaatgtaaa 300 gatttggcta aagtgccaaa tttatactct gttgaaacaa tcgactcctt gaagaaagcc 360 aaaaaattaa acgaatcgag ggctaaattt caaccagatt gcaacccaat attgtgtaat 420 gttcaaatta atacctccca tgaggatcaa aaatcgggct tgaataatga agcagaaata 480 tttgaagtca tcgacttctt cttatccgaa gaatgcaagt atattaagtt gaatgggtta 540 atgactattg gttcatggaa cgtctctcat gaagatagca aagaaaacag agactttgct 600 acgctggttg agtggaagaa gaagattgat gctaaatttg gtacatcatt gaaattgtct 660 atggggatga gtgctgattt cagggaggct ataaggcaag gaacagcgga agtcagaatt 720 ggtaccgaca tttttggtgc tagacctcca aaaaatgaag ctagaatcat ttag 774 YBL036C Sequence 22 257 PRT Saccharomyces Genome Database 22 MSTGITYDED RKTQLIAQYE SVREVVNAEA KNVHVNENAS KILLLVVSKL KPASDIQILY 60 DHGVREFGEN YVQELIEKAK LLPDDIKWHF IGGLQTNKCK DLAKVPNLYS VETIDSLKKA 120 KKLNESRAKF QPDCNPILCN VQINTSHEDQ KSGLNNEAEI FEVIDFFLSE ECKYIKLNGL 180 MTIGSWNVSH EDSKENRDFA TLVEWKKKID AKFGTSLKLS MGMSADFREA IRQGTAEVRI 240 GTDIFGARPP KNEARII 257 Utilisation d’une souche de levure de l’espèce Saccharomyces cerevisiae pour modifier le pH d’un vin, comprenant au moins un polymorphisme de séquence peptidique dans la séquence des six gènes localisés sur les chromosomes 4, 7, 11, 12 et 15 sélectionnés parmi YLL041C , YGL008C , YDL054C , YKL029C , YOR090C et YDL237W . Utilisation d’une souche selon la revendication 1, comprenant au moins un polymorphisme dans la séquence des sept gènes localisés sur les chromosomes 2, 4, 7, 11, 12 et 15 sélectionnés parmi YLL041C , YGL008C , YDL054C , YKL029C , YOR090C , YBR218C et YDL237W . Utilisation d’une souche selon l’une des revendications 1 à 2, comprenant au moins un polymorphisme dans la séquence des onze gènes localisés sur les chromosomes 2, 4, 7, 11, 12 et 15 sélectionnés parmi YDL237W , YDL054C , YKL029C , YDL021W , YOR380W , YBR218C , YOR090C , YLL041C , YGL008C , YGL037C et YBL036 C . Utilisation d’une souche selon la revendication 1, comprenant au moins le polymorphisme de séquence peptidique (p.Lys158Glu) au niveau du gène YLL041C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Pro74Leu) au niveau du gène YGL008C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Ser63Leu) au niveau du gène YDL054C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Glu165Ala) au niveau du gène YDL237W , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Ile605) au niveau du gène YKL029C , et le polymorphisme de séquence peptidique (p.Met419Leu) au niveau du gène YOR090C . Utilisation d’une souche selon la revendication 2, comprenant au moins le polymorphisme de séquence peptidique (p.Lys158Glu) au niveau du gène YLL041C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Pro74Leu) au niveau du gène YGL008C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Ser63Leu) au niveau du gène YDL054C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Glu165Ala) au niveau du gène YDL237W , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Ile605) au niveau du gène YKL029C , le polymorphisme de séquence peptidique (p.Met419Leu) au niveau du gène YOR090C , et le polymorphisme de séquence peptidique (p.Glu722Lys) au niveau du gène YBR218C .