Brevet FR3108847A1 — publié le 20211008

La présente invention concerne un composé polysaccharidique issu de la dépolymérisation partielle d’un exopolysaccharide d’origine marine. Ce composé est particulièrement adapté pour une utilisation en tant que principe actif dans des compositions destinées à améliorer l’aspect de la peau. Figure pour l’abrégé : Fig. 1 composé d’origine marine et son utilisation pour améliorer l’aspect de la peau La présente technique se rapporte à un composé d’origine marine destiné à être utilisé dans des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques. En particulier, la présente technique concerne un tel composé permettant d’améliorer l’aspect de la peau. Comme tout organe, la peau possède un système circulatoire. En raison de ses dimensions très fines, ce système appartient uniquement à la microcirculation. Le derme et l’hypoderme sont richement vascularisés par un réseau sanguin très structuré d’artérioles de moyen, puis petit calibre, de capillaires et de veinules. A l’inverse, l’épiderme, comme tout épithélium, n’est pas vascularisé ; il est nourri par imbibition à partir des réseaux capillaires des papilles dermiques. La microcirculation cutanée remplit quatre fonctions majeures : - la nutrition des cellules, du derme, de l’hypoderme, de l’épiderme et des annexes cutanées, - le maintien de la pression artérielle par un tonus vasoconstricteur, - la tolérance par la peau des longues périodes d’ischémies dues au poids du corps, - une réactivité vasomotrice nécessaire à la thermorégulation. Au niveau du derme, une diminution du nombre des capillaires avec amincissement des parois des petits vaisseaux est observée avec l’âge. Ces résultats histologiques sont à corréler avec les mesures de flux sanguin ; celui-ci diminue au cours du temps dans certaines parties du corps habituellement richement vascularisées telles que les lèvres, l’extrémité du nez, le bout des doigts et le front. Un dysfonctionnement de la microcirculation occasionné par des facteurs externes (exposition solaire, chaleur, froid, microorganismes, alimentation) ou internes (système immunitaire) peut conduire à des problèmes de rougeurs, d’insuffisance veineuse ou de couperose (rosacée). La microcirculation est également altérée par le vieillissement cutané au cours duquel une diminution progressive de la formation de nouveaux vaisseaux (angiogenèse) peut être observée. Cette altération avec l’âge de la microcirculation cutanée peut avoir diverses conséquences : froideur, pâleur de la peau, ischémie cutanée, alopécie, etc. Ainsi, de longue date, l’amélioration de l’aspect de la peau est une préoccupation majeure des sociétés. L’art antérieur est riche en solutions qui peuvent être de formes chirurgicales, médicamenteuses ou bien encore naturelles. Parmi les solutions naturelles, différents protocoles (changement de l’alimentation, application d’eau froide, de vapeur d’eau sur le visage, etc.) et produits (extraits végétaux notamment) sont proposés. Notamment, on connaît le brevet FR2981847B1 qui propose un exopolysaccharide extrait à partir de la souche bactérienne Cobetia marina (CNCM I-4353) possédant des propriétés apaisantes ou anti-inflammatoires. L’efficacité des solutions de l’art antérieur n’est cependant pas toujours démontrée et un besoin continue d’exister pour des solutions cosmétiques naturelles alternatives et/ou plus efficaces pour permettre l’amélioration de l’aspect de la peau. L’invention a notamment pour objectif de pallier à ces inconvénients de l’art antérieur. Plus précisément, un premier objet selon l’invention est un composé polysaccharidique provenant de la dépolymérisation partielle d’un exopolysaccharide issu de la bactérie marine CNCM I-4353. Un tel composé se compose de la répétition de la séquence en oses suivante, dans l’ordre : de 1 à 4 monomères de glucose, de 1 à 2 monomères de galactose, de 1 à 3 monomères de rhamnose, de 1 à 3 monomères de N-acétylglucosamine et de 1 à 3 monomères d’acide galacturonique, qui comprend au moins un acide aminé choisi parmi la sérine ou la thréonine, dans lequel au moins un desdits oses porte un groupement sulfate, et dont le poids moléculaire est compris entre 1 kDa et 160 kDa, de préférence d’environ 20 kDa. Dans au moins un mode de réalisation particulier, la dépolymérisation partielle permettant d’obtenir le composé polysaccharidique est effectuée par hydro-thermolyse accélérée par fluide supercritique (HTAC) comprenant les étapes suivantes : - la mise en solution dudit exopolysaccharide issu de ladite bactérie marine, - l’introduction de ladite solution dans un autoclave, - l’injection de CO 2 chauffé entre 100°C et 150°C dans ledit autoclave jusqu’à une pression de 50 à 200 bars, pendant une à quatre heures. Un tel composé est avantageux car sa taille est suffisamment réduite, par rapport à l’exopolysaccharide d’origine marine, pour lui permettre d’être mieux assimilé, et notamment de mieux pénétrer la peau, tout en conservant les décorations en acides aminés et en groupes sulfate de l’exopolysaccharide d’origine marine. Un second objet selon l’invention est une composition qui comprend un tel composé polysaccharidique. Selon un mode de réalisation, une telle composition est une solution aqueuse, de préférence comprenant d’environ 0,1% à environ 5% en poids dudit composé, de préférence d’environ 0,5% à environ 1% en poids dudit composé, ainsi qu’au moins un conservateur présent à la concentration d’environ 0,5% en poids à environ 5,0% en poids. Ce mode de réalisation présente l’avantage de fournir un ingrédient simple à utiliser, de bonne conservation, qui convient tout particulièrement à la réalisation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques. Selon un autre mode de réalisation, la composition est destinée à un usage cosmétique ou pharmaceutique et comprend moins de 1% en poids dudit composé, de préférence moins de 0,01% en poids dudit composé, de préférence environ 0,004% en poids dudit composé. De façon préférée, cette composition se présentant sous une forme choisie parmi une solution, un gel, une crème, une pommade, un lait, un beurre, une émulsion huile dans eau, une émulsion eau dans l’huile, une émulsion triple. Dans un mode de réalisation avantageux, la composition comprend au moins un additif choisi parmi les parfums, les colorants, les conservateurs, les huiles essentielles de végétaux, les extraits végétaux, notamment de fruits ou d’algues. Avantageusement, cette composition est destinée à être appliquée sur la peau. Un troisième objet selon l’invention concerne une utilisation cosmétique non thérapeutique d’une telle composition, pour améliorer l’aspect de la peau. En particulier, cette utilisation est destinée à améliorer le teint, et/ou à prévenir les signes cutanés du vieillissement de la peau. Cette utilisation est particulièrement avantageuse car elle permet notamment de redonner de la consistance à la peau, de repulper la peau et de raviver l’éclat naturel du teint. Un dernier objet selon l’invention concerne une composition pour limiter la perte de densité capillaire dans la peau âgée, et/ou pour stimuler la production de mélanine. Cette composition est particulièrement avantageuse pour redonner de la couleur à la peau. Brève description des figures La figure 1 présente les effets du composé polysaccharidique sur la production de VEGF par les kératinocytes. Des kératinocytes en culture n’ont pas reçu de traitement (« Contrôle ») ou ont été traités avec un composé selon l’invention à une concentration de 0,0005% (« EPS-H 0,05% »). En présence du composé selon l’invention, la mesure de la fluorescence, exprimée en unités arbitraires (UA) est augmentée par rapport au contrôle, traduisant l’augmentation de la production de VEGF par les kératinocytes. La figure 2 représente les effets du composé polysaccharidique sur l’angiogénèse. L’évolution dans le temps (14 jours) de la longueur du réseau vasculaire formé (en mm/mm²) au sein d’une co-culture de cellules NHDF et HUVECs, a été mesurée pour quatre lots : un lot « Contrôle » (courbe pointillée sans marqueurs) qui n’a reçu aucun traitement, un lot « Contrôle + VEGF » (courbe pointillée avec marqueurs) qui a reçu uniquement du VEGF, un lot « EPS-H » qui n’a reçu que le composé polysaccharidique selon l’invention à 0,0005% (courbe en trait plein sans marqueurs) et enfin un lot « EPS-H + VEGF » qui a reçu le composé polysaccharidique selon l’invention (0,0005%) ainsi que du VEGF (courbe en trait plein avec marqueurs). La figure 3 présente les effets du composé polysaccharidique sur le teint. A. Variation de la composante rosée de la peau après 28 jours de traitement des volontaires avec la crème comprenant le composé polysaccharidique à 0,004% en poids (« EPS-H ») ou la crème placébo (« Placébo ») ; B. Variation de l'intensité vasculaire de la peau après 28 jours de traitement des volontaires avec la crème comprenant le composé polysaccharidique (« EPS-H ») ou la crème placébo (« Placébo ») ; C. Variation de l'indice CLBT après 28 jours de traitement des volontaires avec la crème comprenant le composé polysaccharidique (« EPS-H ») ou la crème placébo (« Placébo ») (* p Description détaillée de l’invention Ces objectifs, ainsi que d’autres qui apparaîtront par la suite, sont atteints, en tout ou partie, à l’aide d’un composé polysaccharidique et des compositions, en particulier des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques le comprenant. On entend par « environ » une variation de plus ou moins 10% de la valeur, cette variation pouvant résulter de la précision de mesure, de l’opérateur, ou de la variation naturelle d’un paramètre physique, chimique ou biologique en fonction des conditions pouvant lui être appliquées (variation de la température, de l’hygrométrie, etc.). On entend par « amélioration de l’aspect de la peau » la modification directe ou indirecte des composantes visibles de la peau de manière à les réduire lorsqu’elles sont délétères à l’impression visuelle donnée, et à les augmenter lorsqu’elles sont bénéfiques à l’impression visuelle donnée par la peau. Par exemple, l’amélioration de l’aspect de la peau peut comprendre la diminution des signes cutanés du vieillissement de la peau, tels que le relâchement cutané, l’apparition des rides et ridules, ou la perte de densité capillaire dans la peau, et/ou l’augmentation de la consistance, et/ou l’augmentation de la composante rosée, et/ou raviver l’éclat naturel du teint, et/ou la stimulation de la microcirculation et/ou de l’angiogénèse et/ou de l’augmentation de la production de mélanine. On entend par « % en poids » le pourcentage en poids d’un élément par rapport au poids total de la composition à laquelle il appartient, sauf mentions contraires explicites. Le composé polysaccharidique selon l’invention provient de la transformation d’un exopolysaccharide dit « natif », produit pas une bactérie marine planctonique, Cobetia marina , vivant dans les eaux bordant les côtes de Guérande (France). Cette souche bactérienne a fait l’objet d’un dépôt selon le Traité de Budapest, à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM), Institut Pasteur, 28 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15, France, dépôt effectué au nom de la société Polymaris Biotechnology, sise à Morlaix, en date du 7 octobre 2010. L’exopolysaccharide natif a une taille de plus de 1,4 MDa (exprimés en équivalent dextran par une analyse HPSEC). Il se compose d’un enchaînement de monomères de glucose, de galactose, de rhamnose, de N-acetyl glucosamine et d’acide galacturonique, respectivement dans les proportions suivantes : 1 à 4 monomères de glucose, 1 à 2 monomères de galactose, 1 à 3 monomères de rhamnose, 1 à 3 monomères de N-acetyl glucosamine et 1 à 3 monomères d’acide galacturonique. L’exopolysaccharide natif présente des groupements sulfate, avec une teneur globale en sulfate de l’ordre de 10 à 20% du poids total du polymère. De façon étonnante pour un polysaccharide marin, l’exopolysaccharide natif est décoré de 2 acides aminés (thréonine et sérine). L’exopolysaccharide natif peut être obtenu par des méthodes de culture et d’extraction classiques, connues de l’homme de l’art. Le document de brevet FR2981847B1 décrit de telles méthodes. En particulier, l’exopolysaccharide natif peut être obtenu par le procédé suivant : les bactéries CNCM I-4353 sont mises en culture dans du milieu nutritif. De façon préférée, le milieu nutritif se compose d’une solution de pectone à la concentration d’environ 1 g.L -1 à environ 10 g.L -1 , préférentiellement environ 4 g.L -1 , d’un extrait de levure à la concentration d’environ 0.1 g.L -1 à environ 10 g.L -1 , préférentiellement d’environ 1 g.L -1 , de sels à une concentration comprise entre environ 20 g.L -1 à environ 40 g.L -1 , préférentiellement environ 27 g.L -1 , et une source de carbone (glucose, saccharose, ou fructose) à la concentration d’environ 10 g.L -1 à environ 50 g.L -1 , préférentiellement environ 30 g.L - 1 . La culture est réalisée en condition d’aérobie, avec une pression en oxygène (PO 2 ) entre environ 30% et environ 60%, à une température comprise entre environ 15°C et environ 35°C, préférentiellement entre environ 25°C et environ 30°C. Le milieu est récupéré en fin de phase exponentielle de croissance des bactéries. Les bactéries sont éliminées par toute méthode bien connue de l’homme de l’art (filtration, centrifugation…). Les exopolysaccharides sont ensuite extraits du milieu par séparation membranaire, par ultrafiltration avec un seuil de coupure compris entre environ 50 kDa et 600 kDa, préférentiellement d’environ 300 kDa. Les exopolysaccharides natifs sont ensuite purifiés, puis éventuellement séchés par lyophilisation. De préférence, l’exopolysaccharide natif est alors solubilisé dans de l’eau à une concentration finale inférieure à environ 10% en poids, de préférence à une concentration d’environ 0,1% à environ 5% en poids, de préférence d’environ 0,25% à environ 2,5% en poids, plus préférentiellement d’environ 0,5% à environ 2,0% en poids. De façon plus préférée, l’exopolysaccharide natif est solubilisé à une concentration d’environ 1% en poids dans de l’eau. De préférence un conservateur est ajouté. Le conservateur peut être utilisé seul ou être une combinaison de conservateurs. De préférence, la teneur totale en conservateur(s) est comprise entre environ 0,1 et environ 10%, de façon plus préférée entre environ 0,5% et environ 5%. En particulier, la teneur totale en conservateur(s) est de 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1,0%, 1,1%, 1,2%, 1,3%, 1,4%, 1,5%,2,0%, 2,5%, 3,0%, 3,5%, 4,0%, 4,5%, ou 5,0%. Selon un mode de réalisation préféré, le conservateur est choisi parmi le phenethyl alcool, le phénoxyéthanol, l’hexanediol, le benzoate de sodium, l’acide citrique, ou leurs mélanges, ou tout autre conservateur ou mélange de conservateurs permettant une bonne protection antimicrobienne du produit. Selon un mode de réalisation préféré, le conservateur ajouté est choisi parmi la liste suivante : le phenethyl alcool à une concentration finale d’environ 1%, le phenoxyethanol à une concentration finale d’environ 1,5%, l’hexanediol à une concentration finale d’environ 3%, un mélange de benzoate de sodium (pour environ 86% en poids dans le mélange) et d’acide citrique (pour environ 14% en poids dans le mélange) à une concentration finale d’environ 0,7%. L’exopolysaccharide natif alors obtenu est partiellement dépolymérisé. La dépolymérisation peut être effectuée par différentes techniques connues de l’homme de l’art, telles que la dépolymérisation par voie acide, la dépolymérisation par voie enzymatique, ou encore la dépolymérisation par hydro-thermolyse. Cette dernière technique est préférée puisqu’elle permet une dépolymérisation partielle de l’exopolysaccharide, sans modifier le motif saccharidique, sans nuire ni à la décoration en acides aminés ni à la sulfatation des oligosaccharides. Par ailleurs, cette technique est la plus respectueuse de l’environnement. L’hydro-thermolyse accélérée par CO 2 supercritique (HTAC) telle que décrite dans le document FR3053340B1 est particulièrement préférée. Selon une méthode préférée, la HTAC comprend la solubilisation de l’exopolysaccharide natif dans de l’eau, de préférence de l’eau déminéralisée, à une concentration finale de 0,2% à 1,0%, en présence d’un conservateur ; puis cette solution est introduite dans un autoclave, dans lequel du CO 2 chauffé entre 100°C et 150°C est injecté jusqu’à atteindre une pression de 50 à 200 bars, pendant 1 à 4 heures. A l’issue de la dépolymérisation partielle de l’exopolysaccharide natif, le composé polysaccharidique selon l’invention est obtenu. On entend par « le composé polysaccharidique » le composé polysaccharidique selon l’invention, partiellement dépolymérisé et obtenu suite à la dépolymérisation partielle de l’exopolysaccharide natif issu de la bactérie CNCM I-4353. Le composé polysaccharidique selon l’invention a un poids moléculaire qui est compris entre environ 1 kDa et environ 160 kDa, de préférence entre environ 2 kDa et environ 80 kDa, plus préférentiellement entre environ 5 kDa et environ 50 kDa, encore plus préférentiellement entre environ 10 kDa et environ 30 kDa, de façon plus préférée encore entre environ 15 kDa et environ 20 kDa. Ainsi, selon un mode de réalisation préféré, le poids moléculaire du composé polysaccharidique est d’environ 20 kDa. Ce composé polysaccharidique comprend un enchainement osidique de 1 à 4 monomères de glucose, de 1 à 2 monomères de galactose, de 1 à 3 monomères de rhamnose, de 1 à 3 monomères de N-acétylglucosamine et de 1 à 3 monomères d’acide galacturonique. Il comprend au moins un acide aminé choisi parmi la sérine et la thréonine. De préférence, le composé polysaccharidique selon l’invention comprend au moins une sérine et au moins une thréonine. Le composé polysaccharidique selon l’invention comprend également au moins un groupement sulfate. L’invention a également pour objet une composition comprenant le composé polysaccharidique. Selon un mode de réalisation, cette composition comprend le composé polysaccharidique à une concentration inférieure à environ 10% en poids, de préférence à une concentration d’environ 0,1% à environ 5% en poids, de préférence d’environ 0,25% à environ 2,5% en poids, plus préférentiellement d’environ 0,5% à environ 2,0% en poids. De façon plus préférée, la composition comprend le composé polysaccharidique à une concentration d’environ 1% en poids. Avantageusement, la composition selon ce mode de réalisation comprend également un ou plusieurs agents de conservation, ou conservateurs. Ces conservateurs sont cosmétiquement et/ou pharmaceutiquement acceptables, permettent une bonne protection antimicrobienne de la composition et sont bien connus de l’homme de l’art. Par exemple, il peut s’agir de phenéthyl alcool, de phénoxyéthanol, d’hexanediol, de benzoate de sodium, d’acide citrique, ou de leurs mélanges, en particulier un mélange de benzoate de sodium et d’acide citrique. Le conservateur ou la combinaison de conservateurs est avantageusement utilisé dans la composition à une concentration inférieure à environ 10% en poids, de préférence comprise entre environ 0,5% et environ 5,0% en poids, de préférence entre environ 1,0% et environ 3,0% en poids. Par exemple, le phénéthyl alcool peut être utilisé à environ 1% en poids, le phénoxyéthanol à environ 1,5% en poids, l’hexanediol à environ 3% en poids, et une combinaison peut comprendre du benzoate de sodium à 0,6% en poids et de l’acide citrique à 0,1% en poids. Ainsi, une composition préférée selon l’invention comprend d’environ 0,5% à environ 2% en poids, de préférence environ 1% en poids, d’un composé polysaccharidique selon l’invention, environ 0,5% en poids à environ 5,0% en poids d’au moins un conservateur, et de l’eau qsp 100%. Dans une telle composition comprenant le composé polysaccharidique en solution à 1% en poids, la teneur en sulfates totaux liés aux sucres est de l’ordre de 0,05% à 0,1% et la teneur en acides aminés est de l’ordre de 500 à 1000 ppm pour la thréonine, et de 100 à 500 ppm pour la sérine. De façon préférée, l’eau et le conservateur dans la composition selon ce mode de réalisation ont été ajoutés à l’exopolysaccharide natif en amont de la dépolymérisation partielle de l’exopolysaccharide natif. Ainsi, la composition selon ce mode de réalisation préféré est directement obtenue après la dépolymérisation partielle de l’exopolysaccharide natif. Une telle composition prend alors la forme d’une solution aqueuse, qui peut être avantageusement utilisée comme ingrédient pour la fabrication de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques, notamment destinées à être appliquées sur la peau. Une composition selon ce mode de réalisation présente l’avantage d’une bonne conservation et d’une grande simplicité d’incorporation dans des préparations cosmétiques ou pharmaceutiques. Le composé polysaccharidique selon l’invention est ainsi avantageusement utilisé comme principe actif dans une composition. On entend par « principe actif » toute substance permettant de conférer à une composition ses propriétés thérapeutiques ou cosmétiques. Ce terme s’applique donc au domaine de l’industrie pharmaceutique ou cosmétique. Une composition comprenant le composé polysaccharidique au titre de principe actif selon l’invention est dite cosmétique lorsque son utilisation n’entraine pas la prévention ni le traitement d’états pathologiques. Ceci est le cas notamment lorsque la composition est appliquée à des personnes en bonne santé qui ne tireront aucun avantage thérapeutique du traitement. Par exemple, l’amélioration de l’éclat du teint ou la prévention des signes cutanés du vieillissement de la peau appartiennent au domaine purement cosmétique qui ne visent que les couches superficielles de l’épiderme et ne sont pas destinées à traiter de manière profonde les désordres systémiques. Lorsqu’elle est utilisée à des fins thérapeutiques, c’est-à-dire lorsque cette composition permet de prévenir la survenue, soigner ou traiter les symptômes d’une pathologie, alors cette composition est qualifiée de pharmaceutique. La distinction entre une composition pharmaceutique et une composition cosmétique réside donc principalement dans le degré d'action de la composition et du domaine industriel dont la composition relève, à savoir pharmaceutique ou cosmétique. Selon un autre mode de réalisation, une composition selon l’invention comprend le composé polysaccharidique à une concentration inférieure à environ 1% en poids, de préférence à une concentration d’environ 0,001% à environ 0,01% en poids, de préférence d’environ 0,0025% à environ 0,0075% en poids. De façon préférée, la composition comprend environ 0,001%, environ 0,002%, environ 0,003%, environ 0,004%, environ 0,005%, environ 0,006%, environ 0,007%, environ 0,008%, environ 0,009% ou environ 0,01% en poids du composé polysaccharidique, et plus préférentiellement environ 0,004% en poids du composé polysaccharidique. Une composition selon ce mode de réalisation est avantageusement utilisée pour une application sur la peau. Elle présente l’avantage d’obtenir un effet rapidement visible et satisfaisant avec des concentrations faibles du composé polysaccharidique. Avantageusement, une composition selon ce mode de réalisation comprend également au moins un additif choisi parmi les parfums, les colorants, les huiles essentielles de végétaux, les extraits végétaux, notamment de fruits ou d’algues. Ces additifs sont bien connus pour leur utilisation dans les compositions cosmétiques et/ou pharmaceutiques, et permettent principalement d’améliorer les caractéristiques organoleptiques de la composition et la qualité de l’expérience de l’utilisateur de la composition. Selon un mode de réalisation, une composition comprenant le composé polysaccharidique selon l’invention est formulée sous la forme d’une solution, un gel, une crème, une pommade, un lait, un beurre, une émulsion huile dans eau, une émulsion eau dans l’huile, une émulsion triple. Ces formulations et textures sont simples à produire, et sont compatibles avec une application topique. Elles seront choisies en fonction de l’application souhaitée et du type de peaux. Par exemple, il est plus intéressant de formuler un lait plutôt qu’une crème pour une application sur le corps entier, tandis qu’un beurre se révèle être mieux adapté pour une application sur peaux sèches. Exemples D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront mieux des exemples qui suivent, donnés à titre illustratif et non limitatif. A. Exemples de préparations Exemple 1 : composé polysaccharidique L’exopolysaccharide natif a été obtenu en cultivant les bactéries CNCM I-4353. Brièvement, un milieu nutritif a été préparé selon la composition suivante : 4 g.L -1 de solution de pectone, 1 g.L -1 d’extrait de levure, 27 g.L -1 de sels et 30 g.L -1 d’une source de carbone (glucose, saccharose, fructose). Des bactéries de la souche CNCM I-4353 ont été cultivées dans ce milieu nutritif dans un réacteur aéré avec agitation. La culture a été réalisée en condition d’aérobie, avec une pression en oxygène de 30% à 60%, à une température de 25°C à 30°C. Pendant leur croissance, les bactéries ont produit et excrété l’exopolysaccharide natif. Le milieu a été récupéré en fin de phase exponentielle de croissance. Les bactéries ont été éliminées, et les exopolysaccharides ont été extraits du milieu de culture, par ultrafiltration avec un seuil de coupure de 300 kDa. L’exopolysaccharide natif a ensuite été purifié et séché par lyophilisation. L’exopolysaccharide natif a une taille, telle que mesurée par analyse HPSEC, qui est supérieure à 1,4 MDa (exprimés en équivalents dextran). Il se compose d’un enchainement de monomères dans les proportions suivantes : de 1 à 4 monomères de glucose, de 1 à 2 monomères de galactose, de 1 à 3 monomères de rhamnose, de 1 à 3 monomères de N-acétyl glucosamine et de 1 à 3 monomères d’acide galacturonique. Il présente des groupements sulfate, avec une teneur globale en sulfate de l’ordre de 10% à 20% du poids total du polymère. L’exopolysaccharide natif est décoré de 2 acides aminés qui sont la thréonine et la sérine. L’exopolysaccharide natif a été modifié par dépolymérisation par hydro-thermolyse accélérée par les fluides supercritiques (HTAC). Brièvement, l’exopolysaccharide natif a été solubilisé dans l’eau à une concentration finale de 1%. Un conservateur constitué d’environ 86% de benzoate de sodium et d’environ 14% d’acide citrique a été ajouté à une concentration finale d’environ 0,7%. Cette solution a alors été introduite dans un autoclave, puis du CO 2 chauffé à 140°C a été injecté dans l’autoclave jusqu’à atteindre une pression de 100 bars, pendant 1 heure. Cette dépolymérisation a permis d’obtenir un composé polysaccharidique dont la taille, telle que mesurée par analyse HPSEC, est comprise entre 1 kDa et 160 kDa (exprimés en équivalents dextran). La population majoritaire a une masse moléculaire moyenne aux alentours de 18 kDa, soit environ 20 kDa. Ce composé polysaccharidique comprend un enchainement de monomères identique à celui de l’exopolysaccharide natif. Il a également conservé les groupements sulfate, la thréonine et la sérine, qui étaient présents sur l’exopolysaccharide natif. Le composé polysaccharidique peut alors être séché par lyophilisation pour obtenir un extrait sec. Exemple 2 : composition A l’issue de la dépolymérisation partielle selon l’exemple 1, le composé polysaccharidique est en solution dans l’eau. Cette composition aqueuse comprend environ 1% en poids dudit composé polysaccharidique dans l’eau, et 0,7% en poids d’un conservateur qui est constitué de benzoate de sodium (0,6% final) et d’acide citrique (0,1% final). Ce produit aqueux est dénommé « EPS HTAC MNB ». Exemple 3 : autre composition Cet exemple porte sur la préparation d’une composition notamment pour un usage cosmétique. Dans cet exemple, une composition cosmétique sous la forme d’une crème comprend le composé polysaccharidique obtenu dans l’exemple 1 à une concentration de 0,004% en poids. Il s’agit notamment d’une crème comprenant 1% en poids de la composition « EPS HTAC MNB » selon l’exemple 2. Les composés utilisés et leur concentration en poids par rapport au poids total de la crème (% en poids) sont listés dans le tableau 1 ci-dessous, en référence à la nomenclature INCI ( International Nomenclature of Cosmetic Ingredients ) de l’Union Européenne (UE). Phase Dénomination selon INCI UE % (en poids) A CETEARYL ISONONANOATE 6,00 A PHENOXYETHANOL 0,80 B AQUA 89,93 B CHLORPHENESIN 0,27 C ACRYLATES/C10-30 ALKYL ACRYLATE CROSSPOLYMER 0,40 D XANTHAN GUM 0,30 D PROPYLENE GLYCOL 0,50 E SODIUM POLYACRYLATE 0,50 F POLYACRYLATE-13 POLYISOBUTENE POLYSORBATE 20 SORBITAN ISOSTEARATE AQUA 0,10 G AQUA SODIUM HYDROXIDE 0,80 H (Produit de l’exemple 2 « EPS HTAC MNB ») : AQUA SACCHARIDE ISOMERATE SODIUM BENZOATE CITRIC ACID 0,40 100,00 Ces composés sont bien connus dans le domaine de la formulation cosmétique ou pharmaceutique et sont accessibles, sous forme individualisée ou en combinaison, dans le commerce. La crème a été réalisée en procédant aux étapes suivantes : la phase A a été chauffée à 75°C, la phase B a été chauffée à 75°C sous émulseur à 600 rotations par minutes (« rpm »), puis la phase C a été dispersée dans la phase B sous émulseur à 2000 rpm jusqu´à homogénéisation. Le mélange D a été ajouté dans le mélange des phases B et C sous émulseur à 2500 rpm pendant 5minutes. La phase E a été ajoutée dans le mélange des phases B, C et D sous émulseur à 2500 rpm pendant 10 minutes. La phase A a été émulsionnée dans le mélange des phases B, C, D et E sous émulseur à 2500 rpm pendant 10 minutes. La phase F a été ajoutée sous émulseur à 2500 rpm pendant 5 minutes puis la phase G a été ajoutée sous émulseur à 2500 rpm pendant 10 minutes. Enfin, le mélange obtenu a été refroidi à 35°C sous pales et la phase H a été ajoutée, avec un maintien de l’agitation pendant 20 minutes. B. Effet bonne mine L’efficacité du composé à produire un effet bonne mine a été évaluée au travers de trois expérimentations. Tout d’abord, son effet sur la synthèse de VEGF, majoritairement responsable de la croissance de néo-vaisseaux, a été testé. Ensuite, une analyse cinétique in situ de co-culture de fibroblastes et de cellules HUVECs permettant de quantifier la formation des néo-vascularisations a été conduite pour évaluer son effet pro-angiogenèse. Enfin, ces résultats ont été complétés par une étude clinique menée sur des sujets volontaires. Exemple 4 : synthèse de VEGF Culture cellulaire Des kératinocytes épidermiques humains ont été prélevés sur l’abdomen d’une femme caucasienne âgée de 37 ans. Ces kératinocytes ont été mis en culture dans des plaques de 6 puits à 68400 cellules par puits dans 2 mL de milieu complet. Après 6 jours de culture, les cellules étaient à 90% de confluence et ont reçu les différents traitements. Traitement La solution EPS HTAC MNB de l’exemple 2 a été ajoutée dans du milieu basal (Cell Applications) à 0,05%(v/v) (soit 0,0005% de composé polysaccharidique tel qu’obtenu à l’exemple 1). Après 48 heures d’incubation, les surnageants de culture cellulaire ont été récupérés et congelés à -80°C. Dosage Le dosage du VEGF ( Vascular Endothelial Growth Factor ) a été réalisé en utilisant des puces à protéines (protein array, Raybiotech). Ceci permet le profilage et la quantification des protéines secrétées par une cellule ou un tissu afin d’étudier de façon globale les voies de signalisation cellulaire en fournissant une analyse simultanée des protéines exprimées. Les surnageants ont été décongelés, biotinés puis déposés sur les biopuces (lames de verre). Les protéines ont ensuite été révélées par un conjugués fluorescent. Les biopuces ont alors été séchées et les signaux de fluorescence ont été visualisés par balayage laser. Pour chaque lame, les signaux immunofluorescents ont été scannés à l’aide du matériel Innoscan 710 (Innopsys), puis les mesures d’intensités ont été analysées avec le logiciel Analysis Tool Softwareet pour quantifier l’expression protéique de l’échantillon. Résultats En présence du composé polysaccharidique selon l’invention, la synthèse de VEGF est augmentée de 60% par rapport au contrôle non traité (figure 1). Exemple 5 : vascularisation Culture cellulaire Des fibroblastes dermiques humains (NHDF) ainsi que des cellules endothéliales de veine ombilicale humaine (HUVECs CytoLight Green) infectées par un lentivirus qui expriment une protéine verte fluorescente (kit CellPlayer 96-Well Kinetic Angiogenesis Prime, EssenBioscience) ont été placées en co-culture dans un incubateur à lecteur de plaque automatique (IncuCyte, EssenBioscience). Les deux premiers jours (J0, J1) les cellules ont été co-cultivées dans du milieu de culture. Traitement Les traitements ont été appliqués à partir du jour J2 (flèche noire sur la figure 2) jusqu’au jour J14 : un premier lot n’a reçu aucun traitement (contrôle), un autre lot uniquement du VEGF à 4 ng.mL - 1 (« + VEGF »), un troisième a reçu uniquement l’EPS HTAC MNB de l’exemple 2 à une concentration de 0,05% (« + EPS-H », soit 0,0005% du composé polysaccharidique selon l’exemple 1) et un dernier lot a reçu une combinaison de 0,05% de l’EPS HTAC MNB de l’exemple 2 avec du VEGF à 4 ng.mL - 1 (« +VEGF + EPS-H »). Le VEGF a été utilisé comme molécule activatrice de l’angiogénèse. Le milieu de culture pour chacun des lots a été changé aux jours J5, J8 et J12. Les cellules ont été scannées toutes les deux heures dans l’incubateur à lecteur de plaque automatique. La fluorescence des HUVECs a ainsi permis de visualiser la cinétique de formation des tubes. Un algorithme intégré à l’incubateur a été utilisé pour quantifier l’angiogénèse par la mesure de la longueur du tube, la surface du tube et la formation du point de branchement. La différenciation des cellules HUVECs en réseaux angiogéniques a été mesurée par la longueur du réseau de vaisseaux formés, en mm.mm - ². Résultats Les résultats sont présentés en figure 2. Dans la co-culture, le VEGF testé à 4 ng.mL 1 augmente la longueur du réseau de vaisseaux par rapport au lot contrôle (co-culture sans traitements). Ce résultat attendu valide le test. L’EPS HTAC MNB de l’exemple 2 à 0,05% contribue également à l’augmentation de la longueur du réseau de vaisseaux par rapport au lot non-traité. En association avec le VEGF, le composé polysaccharidique selon l’invention potentialise l'effet du VEGF seul, en augmentant de façon plus importante la longueur du réseau. Exemple 6 : effet sur la peau de volontaires Protocole expérimental Un test clinique a été réalisé sur un panel constitué de 67 femmes, de type caucasien, avec une peau saine, une peau claire (phototype I, II ou III), âgées de 50 à 70 ans (âge moyen de 61 ans), présentant un manque de fermeté, un teint terne selon l’échelle CLBT ( Color , Luminosity , Brightness and Transparency ) du laboratoire de test clinique (Spincontrol). Le panel a été divisé en deux groupes : 34 sujets ont reçu une crème selon l’exemple 3 comprenant le composé polysaccharidique de l’exemple 1 (groupe traité « EPS-H » sur la figure 3), et 33 sujets ont reçu une crème selon l’exemple 3 mais ne contenant pas le composé polysaccharidique (groupe « placébo » sur la figure 3). Pendant environ un mois (de J0 à J28), les sujets des deux groupes ont appliqué une quantité de crème correspondant à une utilisation normale de ce type de produit sur la totalité du visage, deux fois par jour (matin et soir). Des photographies ont été réalisées de 3/4 du visage sous lumière polarisée croisée. Résultats Toutes les données ont été collectées sous forme d’une étude randomisée en double aveugle concernant les deux traitements. 1. Composante rosée à J0 et J28 Les résultats pour la composante rosée sont présentés en figure 3A. Après 28 jours d’utilisation du composé polysaccharidique, une augmentation significative (p Ces résultats traduisent une stimulation de la micro-vascularisation cutanée. Le teint est plus rosé avec le composé polysaccharidique qu’avec le placébo. L’aspect de la peau est significativement amélioré en 28 jours grâce à l’utilisation de la crème comprenant le composé polysaccharidique (p 2. Mesure de l’intensité vasculaire à J0 et J28 Les résultats sur l’intensité vasculaire sont présentés en figure 3B. Après 28 jours d’utilisation de la crème comprenant le composé polysaccharidique, il a été noté une augmentation de +3% en moyenne de l’intensité vasculaire (en limite de significativité, test t de Student, p=0,068). L’augmentation maximale observée pour un sujet atteint +27%. L’amélioration a été appréciée pour 63% des sujets. Parallèlement, il n’y a aucune évolution significative de l’intensité vasculaire parmi les sujets du groupe utilisant le placebo. L’effet de la crème comprenant le composé polysaccharidique est significativement supérieur de celui de la crème placébo (p t de Student). Il résulterait de son influence sur la stimulation de l’intensité vasculaire en 28 jours, qui participe à l’amélioration de l’aspect de la peau. 3. Analyse globale du teint selon la méthode CLBT L’indice CLBT permet d’avoir une évaluation globale du teint. L’évolution de cet indice entre les deux groupes est présentée en figure 3C. Après 28 jours de traitement par la crème contenant le composé polysaccharidique, cet indice augmente de 6,3 par rapport à J0. Bien que non significative, la variation est supérieure à 5, ce qui traduit une bonne tendance à l’amélioration du teint. En revanche, après 28 jours d’utilisation de la crème placébo, comparé à J0, il a été noté une augmentation de l’indice de 3,1. c’est donc une variation inférieure à 5 : elle ne permet pas de mettre en évidence une amélioration du teint. Après 28 jours, l’évolution du teint était significativement meilleure chez les sujets ayant utilisé la crème amendée composé polysaccharidique comparée aux sujets ayant reçu la crème placébo (p t de Student). Ainsi, l’utilisation d’une crème enrichie en composé polysaccharidique améliore l’aspect de la peau de façon significativement plus efficace qu’une crème ne contenant pas ce composé. 4. Analyse détaillée du teint selon la méthode CLBT L’analyse détaillée du teint selon la méthode CLBT prend en compte la couleur de la peau, selon 4 échelles de saturation (rose-rouge, beige, olive, rose clair), exprimées en pourcentage de variation, ainsi que les caractéristiques physiques mesurées selon 3 paramètres (luminosité, éclat, transparence), auxquels est attribué un score de 0 à 10 (figure 3D). L’analyse détaillée montre que, après 28 jours de traitement avec la crème comprenant le composé polysaccharidique, la peau est moins olivâtre (baisse significative de -17% en moyenne et jusqu’à -50%), le teint est plus clair avec une peau moins beige (baisse significative de -9% en moyenne et jusqu’à -25%, avec une baisse observée sur 90% des volontaires), le teint est plus frais avec une augmentation significative de la couleur rosé (de +12% en moyenne, et jusqu’à +66%), le teint est plus éclatant (augmentation significative de l’éclat du teint de +3,5% en moyenne, et jusqu’à +26%). De plus, l’application de la crème comprenant le composé polysaccharidique tend à augmenter la luminosité de la peau (de +1,7% en moyenne, et jusqu’à +35%) et à améliorer la transparence de la peau (de +5,8% en moyenne, et jusqu’à +110%). En conclusion, le teint est unifié, en termes de texture et de couleur. En comparaison avec le placébo, tous les paramètres de variations mesurés sont en faveurs du composé polysaccharidique (à l’exception du paramètre éclat). 5. Questionnaire d’auto-évaluation à J28 Les sujets ont répondu à un questionnaire d’auto-évaluation sur les effets de la peau suite aux traitements. Les résultats de ce questionnaire, exprimés en pourcentage de consentement aux différents critères, sont présentés dans le tableau 2 ci-dessous : La crème utilisée… Placébo Crème de l’exemple 3 Redonne de la consistance à la peau 58% 75%** Fortifie la peau 58% 59% Repulpe la peau 48% 69%* Redonne du rose aux joues 45% 53% Ravive l’éclat naturel du teint 58% 78%** * p Après 28 jours de traitement avec la crème contenant le composé polysaccharidique, les sujets ont estimé de façon significative (p 6. Questionnaires psychométriques Divers tests psychométriques ont été conduits. Les résultats sont présentés dans le tableau 3 ci-dessous. Placébo Crème de l’exemple 3 Sentiment d’optimisme (score) -2,548 0,515* Estime de soi globale (score), dont : 0,483 1,121 1) Apparence -0,064 1,181* 2) Performance 0,064 0,212 3) Social 0,483 0,09 * p t de Student 6.a. Optimisme Dans ce test, il a été mesuré l’évaluation de l’optimisme au cours de la période de 28 jours. Les résultats du suivi de l’évaluation de l’optimisme montrent une différence significative (p=0,023, test t de Student) entre le groupe de volontaires ayant testé la crème contenant le composé polysaccharidique (crème selon l’exemple 3) et le groupe de volontaires ayant testé la crème placébo sans actif, et ceci en faveur du composé polysaccharidique. Le composé polysaccharidique a donc amélioré l’évaluation de l’optimisme par les volontaires. 6.b. Estime de soi Dans ce test, il a été mesuré l’évaluation de l’estime de soi au cours de la période de 28 jours. Les résultats du suivi de l’évaluation indiquent que l’estime de soi globale est plus forte chez les sujets ayant testé la crème selon l’exemple 3, contenant le composé polysaccharidique, (score de 0,515) que chez les sujets ayant testé la crème placébo sans le composé polysaccharidique (score de -2,548). Une analyse plus détaillée des 3 paramètres mesurés pour cette analyse montre que la dimension « apparence » est significativement plus élevée (p t de Student) pour le groupe actif que pour le groupe placébo. Le paramètre « performance » est stable pour les 2 groupes (ce qui était attendu et valide le test), et le paramètre « social » est plus en faveur du placébo. Conclusion sur l’effet bonne mine Le composé polysaccharidique a été évalué quant à sa capacité à moduler la synthèse de VEGF, à moduler l’angiogénèse dans un modèle de co-culture cellulaire, et enfin à offrir un effet bénéfique sur l’aspect de la peau de volontaires dans le cadre d’une étude clinique. Le composé polysaccharidique a démontré qu’il produisait un effet « bonne mine » significatif qui, sans vouloir être lié par une quelconque théorie, pourrait résulter d’un regain de fonction d’apport nutritifs aux cellules de l’épiderme, possiblement grâce à l’amélioration de la vascularisation. C. Synthèse de mélanine La mélanogénèse regroupe la synthèse et la distribution de mélanine. La mélanine est le pigment responsable de la couleur de la peau, des cheveux et des yeux. Elle est synthétisée par les mélanosomes qui sont de petits organites à l’intérieur des mélanocytes. La mélanogénèse est stimulée par les rayonnements dans l’ultra-violet et par la lumière visible bleue. La mélanine est transférée des mélanocytes aux kératinocytes voisins. Exemple 7 : modèle murin Culture cellulaire Des mélanocytes issus de mélanomes murins, de la lignée cellulaire B16-F10, ont été cultivés dans des plaques 96 puits. Traitement L’EPS HTAC MNB de l’exemple 2 a été ajoutée au milieu de culture aux concentrations de 0,02%, 0,05% et 0,1% (respectivement 0,0002%, 0,0005% et 0,001% du composé polysaccharidique selon l’exemple 1). L’alpha-MSH est utilisée comme contrôle positif à la concentration de 25 pM. Après 72 heures d’incubation à 37°C sous atmosphère enrichie à 5% de CO 2 , la quantité intracellulaire de mélanine a été mesurée par mesure d’absorbance à 405 nm par un lecteur de microplaques (Fluostar). De plus, des observations ont été réalisées au microscope, permettant de comparer la coloration des cellules, en fonction des traitements. Résultats Production de mélanine En l’absence d’alpha-MSH, la présence du composé polysaccharidique testé aux concentrations 0,0002%, 0,0005% et 0,001% a conduit à l’augmentation de la quantité de mélanine de +66%, +60% et %66% par rapport au contrôle non traité, respectivement (significatif avec une probabilité p t de Student). La présence du composé polysaccharidique a donc significativement stimulé la production de mélanine. En présence d’alpha-MSH, le composé polysaccharidique testé à 0,0002%, 0,0005% et 0,001% a également significativement stimulé la production de mélanine, la quantité de celle-ci ayant été augmentée de +20%, +21% et +19% par rapport au témoin ayant reçu uniquement l’alpha-MSH (significatif avec une probabilité p t de Student). En présence ou non d’alpha-MSH, le composé polysaccharidique selon l’invention est efficace pour stimuler la production de mélanine par les mélanocytes. Observations microscopiques Des photographies au microscope d’une zone de culture cellulaire ont été prises pour le contrôle non traité, le témoin n’ayant reçu que l’alpha-MSH à 25 pM, et le lot ayant reçu le composé polysaccharidique à 0,0002% en combinaison avec l’alpha-MSH (données non présentées). Ces photographies mettent en évidence que le lot qui a été incubé avec le composé polysaccharidique et l’alpha-MSH présente visuellement une plus forte production de mélanine que le lot traité avec l’alpha-MSH uniquement. Exemple 8 : modèle de mélanocytes humain Culture cellulaire Des mélanocytes humains issus de cellules souches pluripotentes induites (iPSC) ont été mis en culture sur des plaques de 96 puits. Traitement L’EPS HTAC MNB de l’exemple 2 a été ajoutée à 0,1% ou 0,2% dans le milieu de culture (correspondant respectivement à 0,001% et 0,002% du composé polysaccharidique selon l’exemple 1). Après 72 heures d’incubation à 37°C sous atmosphère enrichie à 5% de CO2, la quantité de mélanine intracellulaire a été mesurée sur les cellules adhérentes par la mesure de l’absorbance à 405 nm en utilisant un lecteur de microplaques (Fluostar). A nouveau, des images ont été prises au microscope pour les différents lots. La mélanine extracellulaire a également été mesurée dans les surnageants de culture. Résultats Mélanine intracellulaire La présence du composé polysaccharidique dans le milieu de culture a contribué significativement à l’augmentation de la mélanine dans les mélanocytes. En effet, en présence du composé polysaccharidique à 0,001% et à 0,002%, la quantité de mélanine intracellulaire a significativement augmenté de +26% et +37% respectivement (différence significative avec une probabilité p t de Student). Visuellement, la coloration des images microscopiques obtenues confirme cette augmentation de 26% statistiquement significative pour les cellules traitées avec le composé polysaccharidique à 0,001%, comparativement aux cellules non-traitées. Mélanine extracellulaire La quantité de mélanine mesurée dans les cultures cellulaires traitées avec l’EPS HTAC MNB de l’exemple 2 à 0,1% et 0,2% étaient significativement supérieures à la quantité mesurée dans les cultures non traitées, de +78% (p t de Student) et +92% (p t de Student) respectivement. Exemple 9 : modèle d’épiderme reconstruit Modèle biologique Un épiderme humain mélanisé reconstruit a été obtenu (RHEm, BioAlternatives). Traitement L’EPS HTAC MNB de l’exemple 2 a été utilisé à 0,05% dans l’eau. Cette solution a été appliquée aux jours J0, J2 et J5 (lot traité). Un autre lot n’a pas reçu de traitement (lot témoin). Après 7 jours d’incubation à 37°C, les paramètres d’intérêt ont été mesurés. Résultats Quantité de mélanine La mélanine totale a été marquée au nitrate d’argent (Warthin Starry) qui est la méthode la plus sensible et la plus spécifique. Cinq tranches sont préparées et la coloration de surface (en pourcentage) est analysée en comparaison avec un épiderme non-traité. L’épiderme traité contenait plus de mélanine que l’épiderme non-traité. La mesure de la coloration de surface était augmentée de +85% en présence du traitement comparativement au contrôle. Cet effet est statistiquement significatif à p t de Student). Exemple 10 : Expression génique et protéique 1. Production de TYRP1 La protéine TYRP1 (tyrosine-related protein 1) est une enzyme de la mélanogénèse impliquée dans la synthèse de la mélanine. La protéine TYRP1 a été immunomarquée par un anticorps spécifique. Cinq tranches ont été préparées et le marquage de TYRP1 (exprimé en intensité de fluorescence par µm2) a été analysé pour les deux lots. La présence du composé polysaccharidique selon l’invention a significativement augmenté l’intensité du marquage de TYRP1, de +57% par rapport au lot non traité (p t de Student). 2. Expression des gènes de la mélanogénèse L’ARN total a été extrait de l’épiderme reconstruit, amplifié par RT-qPCR. Les transcrits ont été analysés en utilisant des sondes spécifiques PCR ciblant 64 gènes impliqués dans la mélanogénèse. L’expression des gènes du lot traité était modulée ainsi, par rapport au lot non-traité : - +63% pour le gène tyrp1, codant pour la protéine TYRP1 ; - +30% pour le gène mlana (également connu comme melan-a ou mart-1) qui est un gène spécifique des cellules pigmentaires, impliqué dans la biogénèse en assurant la stabilité de GPR143. Il joue un rôle vital dans l’expression, la stabilité, le trafic et le traitement de la protéine des mélanocytes PMEL17, qui est critique pour la formation des mélanosomes de stade II ; - +82% pour le gène rab27a, une protéine contribuant au complexe permettant la migration des mélanosomes depuis l’aire périnucléaire vers les dendrites du mélanocyte, après que la synthèse de mélanine a été terminée ; - +45% pour le gène rac1, qui est un intermédiaire de signalisation important dans la formation des dendrites et qui participe à la capacité bien connue à induire la formation de dendrites de l’hormone de stimulation alpha-mélanocyte et de la lumière ultra-violette ; - +64% pour le gène mreg, impliqué dans le transfert du mélanosome, codant pour la mélanoréguline. Ce gène fonctionne comme un régulateur de mécanismes de perte qui pilote les transferts intercellulaires de mélanosomes depuis un mélanocyte vers un kératinocyte. Une perte en MREG réduit la maturation des lysosomes, l’activité des lysosomes, augmente le pH des lysosomes et réduit la dégradation des protéines, et induit une accumulation de AE2, un composé rétinoïde de la lipofuscine, qui est lié au vieillissement. Ce résultat est en accord avec l’effet stimulateur observé sur alpha-MSH. 3. Expression des gènes de protection contre l’oxydation Le composé polysaccharidique a conduit à une augmentation de l’expression de gènes impliqués dans la protection contre l’oxydation, exprimés par les kératinocytes et/ou les mélanocytes dans l’épiderme, et participerait à la protection de la peau : - +27% pour le gène hmox1 (heme oxygenase 1), - +41% pour le gène cat (catalase), - +57% pour le gène gsr (glutathion reductase), - +70% pour le gène sod2 (superoxide dismutase 2), - +75% pour le gène sod1 (superoxide dismutase 1), - +91% pour le gène txn (thioredoxin 1). 4. Effet sur les facteurs de régulation de la mélanogénèse Plusieurs protéines sécrétées par les kératinocytes peuvent réguler la mélanogénèse. La plupart d’entre eux sont activés par les rayonnements UV et stimulent la production de mélanine, tels que l’endothéline (ET-1), GM-CSF et le SCF (Stem Cell Factor). Ces trois facteurs de régulation sont aussi produits par d’autres cellules que les kératinocytes, telles que les cellules endothéliales, les cellules inflammatoires ou les fibroblastes. Au contraire, certains facteurs réduisent la production de la mélanine comme le TNF-alpha produit par les kératinocytes et les cellules inflammatoires. 4.1. Culture cellulaire Des kératinocytes de l’épiderme humain (Cell Applications) ont été utilisé au passage 6 (correspondant au jour J0). 4.2. Traitement L’EPS HTAC MNB de l’exemple 2 à 0,05% en poids dans l’eau (soit 0,0005% du composé polysaccharidique de l’exemple 1) a été appliqué une fois pour 48 heures, du jour J6 au jour J8. Après deux jours d’incubation à 37°C, les surnageants ont été collectés et les protéines sécrétées ont été analysées grâce à un profileur protéique (selon le protocole Tebu-Bio) : première dyalyse, quantification, biotinylation, seconde dialyse, marquage à la streptavidine, et scan avec le scanner Innoscan (Innopsys). 4.3. Résultats La présence du composé polysaccharidique dans les cultures cellulaires a conduit à l’augmentation des trois protéines connues pour stimuler la mélanogénèse, que sont ET-1 (+68%), GM-CSF (+80%) et SCF (+83%). Par ailleurs, la production de TNF-alpha, connu pour inhiber la mélanogénèse, a été diminuée de 58%. 4.4. Conclusion Le composé polysaccharidique a permis la régulation de la libération des protéines sécrétées par les kératinocytes humains impliqués dans la production de la mélanine. Conclusion sur la synthèse de mélanine Le composé polysaccharidique a permis la stimulation 1) de la production de mélanine dans différents types de mélanocytes (B16, iPSC, épiderme), 2) des enzymes associées à la mélanine (gène trp1 et protéine TRP1), 3) de la production des mélanosomes (mlana/mart-1), 4) du transport des mélanosomes (rab27a), 5) de la formation des dendrites (rac1), 6) du transfert des mélanosomes (mreg/megalorgulin), 7) de plusieurs enzymes anti-oxydantes, et 8) de trois facteurs stimulateurs de mélanogénèse (GM-CSF, CSF, ET-1). Le composé polysaccharidique permet également la réduction d’un facteur de régulation inhibiteur de la mélanogénèse (TNF-alpha). Le composé polysaccharidique a montré dans ces exemples un effet pro-pigmentant. D. Prévention des signes du vieillissement cutané Exemple 11 : Expression génique - dégradation MEC La matrice extracellulaire (MEC) est en constant déséquilibre entre production et dégradation. Des enzymes sont fortement impliquées dans la dégradation de la MEC, notamment les métalloprotéinases (MMPs) et les A Disintegrin-Like And Metalloprotease with Thrombospondin (ADAMTs). Le stress, l’inflammation et le vieillissement tendent à augmenter leur expression. L’augmentation de l’interleukine 1 beta (IL1B) ou du plasminogene activator de type urokinase (PLAU) sont notamment des facteurs qui stimulent les gènes de la dégradation de la MEC. La déposante a analysé les expressions de ces gènes dans un modèle 3D de peau vieillie et testé la capacité du composé polysaccharidique selon l’invention à prévenir leur expression ou à en réduire le niveau. 1. Expression génique dans une peau jeune et une peau âgée Les niveaux d’expression des gènes plau, il1b, adamts, mmp1, mmp3 et mmp14 dans une peau jeune et dans une peau âgée ont été comparés. Résultats L’expression est augmentée dans la peau âgée par rapport à la peau jeune pour tous les gènes considérés. 2. Expression génique dans une peau âgée en présence ou non du composé poly saccharidique Les niveaux d’expression des gènes plau, il1b, adamts, mmp1, mmp3 et mmp14 dans une peau âgée traitée par l’EPS HTAC MNB de l’exemple 2 en solution à 0,5% en volume (soit 0,005% du composé polysaccharidique selon l’exemple 1) et dans une peau âgée non traitée ont été comparés. Résultats Le traitement des peaux âgées avec le composé polysaccharidique selon l’invention a diminué l’expression des gènes codant pour les enzymes de dégradation de la MEC qui étaient stimulés par rapport à une peau jeune. Conclusion sur le vieillissement cutané Le vieillissement de la peau, naturel ou engendré par des conditions de stress connues pour augmenter le vieillissement de la peau (UV, LB, inflammation), augmente la dégradation de la matrice extracellulaire MEC. Cette dégradation est liée à une augmentation des enzymes de dégradation comme MMPs et ADAMTs. L’application d’un composé polysaccharidique selon l’invention sur une peau âgée a diminué l’expression des gènes codants pour ces enzymes de dégradation. Ainsi, le composé polysaccharidique selon l’invention a démontré un effet favorable sur la limitation du vieillissement de la peau en réduisant la dégradation de la matrice. Composé polysaccharidique caractérisé en ce que : - il provient de la dépolymérisation partielle d’un exopolysaccharide issu de la bactérie marine CNCM I-4353, - il se compose de la répétition de la séquence en oses suivante, dans l’ordre : de 1 à 4 monomères de glucose, de 1 à 2 monomères de galactose, de 1 à 3 monomères de rhamnose, de 1 à 3 monomères de N-acétylglucosamine et de 1 à 3 monomères d’acide galacturonique, - il comprend au moins un acide aminé choisi parmi la sérine ou la thréonine, - au moins un desdits oses porte un groupement sulfate, et - son poids moléculaire est compris entre 1 kDa et 160 kDa, de préférence d’environ 20 kDa. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la dépolymérisation partielle est effectuée par hydro-thermolyse accélérée par fluide supercritique (HTAC) comprenant les étapes suivantes : - la mise en solution dudit exopolysaccharide issu de ladite bactérie marine, - l’introduction de ladite solution dans un autoclave, - l’injection de CO 2 chauffé entre 100°C et 150°C dans ledit autoclave jusqu’à une pression de 50 à 200 bars, pendant une à quatre heures. Composition comprenant un composé selon la revendication 1 ou 2. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce qu’elle est une solution aqueuse comprenant : - environ 0,1% à environ 5% en poids, de préférence d’environ 0,5% à environ 1% en poids dudit composé, et - environ 0,5 % en poids à environ 5,0 % en poids d’au moins un conservateur. Composition selon la revendication 3, pour un usage cosmétique ou pharmaceutique, comprenant moins de 1% en poids dudit composé, de préférence moins de 0,01% en poids dudit composé, de préférence environ 0,004% en poids dudit composé. Composition selon la revendication 5, se présentant sous une forme choisie parmi une solution, un gel, une crème, une pommade, un lait, un beurre, une émulsion huile dans eau, une émulsion eau dans l’huile, une émulsion triple. Composition selon l’une des revendications 5 et 6, comprenant au moins un additif choisi parmi les parfums, les colorants, les conservateurs, les huiles essentielles de végétaux, les extraits végétaux, notamment de fruits ou d’algues. Composition selon l’une des revendications 5 à 7, destinée à être appliquée sur la peau. Composition selon l’une des revendications 5 à 8, pour limiter la perte de densité capillaire dans la peau âgée. Composition selon l’une des revendications 5 à 8, pour stimuler la production de mélanine. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d’une composition selon l’une des revendications 5 à 8 pour améliorer l’aspect de la peau. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d’une composition selon la revendication 11 caractérisée en ce qu’elle améliore le teint. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d’une composition selon la revendication 11 pour prévenir les signes cutanés du vieillissement de la peau.