Brevet FR3112147A1 — publié le 20220107

PROCEDE DE CALIBRATION D’UN SYSTEME FLUIDIQUE POUR LA PRODUCTION DE VESICULES EXTRACELLULAIRES ET SYSTEME FLUIDIQUE DE PRODUCTION ASSOCIE La présente invention a pour objet un procédé de calibration d’un système fluidique (1) de production de vésicules extracellulaires (EV) à partir de cellules productrices (6), le procédé comprenant les étapes suivantes de détermination (E1) d’un premier niveau d’imperméabilité cellulaire (V1) dépendant d’un nombre initial (N1) de cellules productrices préalable à une production de vésicules extracellulaires (EV), de pilotage (E2) d’au moins une première production (PR1) de vésicules extracellulaires (EV) configurée à une première valeur d’agitation (XCTL1) et à une première durée de production (T1), d’au moins une première mesure (E3) d’imperméabilité cellulaire (Vt) des cellules de la première production (PR1) et comparaison par rapport à un deuxième niveau d’imperméabilité cellulaire prédéterminé (V2) inférieur audit premier niveau d’imperméabilité (V1), l’enregistrement (E7) d’au moins une plage d’agitation (PA1) dont la limite inférieure (Lim1) est égale à la première valeur d’agitation (XCTL1) pour laquelle le niveau d’imperméabilité (Vt) mesuré de la première production (PR1) est sensiblement égal audit deuxième niveau d’imperméabilité (V2). Figure pour l’abrégé : figure 2 Procédé de calibration d’un système fluidique pour la production de vésicules extracellulaires et système fluidique de production associé Domaine de l’invention Le domaine de l’invention concerne un procédé de calibration d’un système fluidique de production de vésicules extracellulaires et un système fluidique pour la production de vésicules extracellulaires. L’invention concerne également un procédé de production de vésicules extracellulaires dont les paramètres de configuration sont obtenus par le procédé de calibration. Etat de la technique Les cellules sont connues pour libérer des vésicules extracellulaires dans leur environnement, par exemple, in vivo, dans les fluides biologiques d’un organisme. Les vésicules extracellulaires ont été identifiées comme des moyens efficaces pour délivrer des médicaments, de manière personnalisée ou ciblée, dans le corps humain. Elles présentent d’abord une biocompatibilité native et une tolérance immunitaire. Elles peuvent également internaliser des nanoparticules théranostiques, permettant à la fois de cartographier certaines parties du corps et/ou de délivrer des principes actifs ayant des fonctions thérapeutiques. Les vésicules extracellulaires ont également une fonction de communication intercellulaire : elles permettent, par exemple, de transporter des lipides, des protéines membranaires et cytoplasmiques et/ou des nucléotides du cytoplasme cellulaire, tels que des ARNm, des microARN ou des ARN longs non-codants, entre différentes cellules. En particulier, l’utilisation de vésicules extracellulaires peut permettre de résoudre des problèmes connus lors de l’utilisation thérapeutique de cellules, tels que la réplication cellulaire, la différentiation, les occlusions vasculaires, les risques de rejet et les difficultés de stockage et congélation. Il existe en conséquent un besoin industriel pour la production de vésicules cellulaires en quantités suffisantes pour une utilisation thérapeutique, notamment en remplacement ou en complément de thérapies cellulaires. A cet effet, Piffoux et al. (Piffoux, M., Silva, A. K., Lugagne, J. B., Hersen, P., Wilhelm, C., & Gazeau, F., 2017, Extracellular Vesicle Production Loaded with Nanoparticles and Drugs in à Trade ‐ off between Loading, Yield and Purity : Towards a Personalized Drug Delivery System, Advanced Biosystems ) décrivent la comparaison de différentes méthodes de production de vésicules extracellulaires. Une première méthode consiste à produire des vésicules extracellulaires à partir de cellules endothéliales de la veine du cordon ombilical (HUVEC), en soumettant ces cellules à des contraintes hydrodynamiques mimant les contraintes exercées dans des conditions physiologiques au sein des capillaires sanguins ou dans des conditions pathologiques lors de sténose des vaisseaux sanguins. Ces contraintes sont entraînées par le passage des cellules productrices dans des canaux microfluidiques. Une puce microfluidique comprend deux cents canaux dans lesquels les cellules sont transportées dans un écoulement laminaire, pour produire des vésicules de manière parallélisée. Toutefois, cette méthode présente des problèmes de dimensionnement : les quantités de vésicules produites par une puce microfluidique ne sont pas adaptées aux quantités requises pour les applications susmentionnées. De plus, le rendement de vésicules extracellulaires produites par cellule introduite dans une telle puce (environ 2.10 4 vésicules par cellule) est très inférieur au rendement théorique maximum de vésicules produites par une cellule, par exemple de l’ordre de 3,5.10 6 vésicules par cellule pour une cellule de type MSC (acronyme de Cellule Souche Mésenchymateuse en anglais). Enfin, cette méthode nécessite une conformité aux normes dite G.M.P. (acronyme anglais de Bonnes Pratiques de Fabrication), nécessaires à la fabrication de médicaments. Une deuxième méthode couramment utilisée dans la littérature et décrite par Piffoux et al. consiste à cultiver des HUVEC dans un milieu de culture de type DMEM (acronyme anglais de Dulbecco’s Modiﬁed Eagle's Medium) sans sérum, pendant trois jours (technique dite de starvation en anglais, ou carence en sérum). L’absence de sérum entraîne un stress cellulaire déclenchant une libération de vésicules par les cellules productrices. Cette méthode présente un rendement plus élevé et permet de produire une plus grande quantité de vésicules que la méthode utilisant une puce microfluidique (environ 4.10 4 vésicules par cellule productrice). Toutefois, le rendement calculé correspond à une durée de production beaucoup plus longue que la durée de production de la méthode précédente. Cette méthode ne permet pas de produire une quantité de vésicules extracellulaires suffisante pour les applications susmentionnées. Enfin, cette méthode ne permet pas de produire des vésicules de manière continue car elle induit la mort des cellules. Watson et al. (Watson, D. C., Bayik, D., Srivatsan, A., Bergamaschi, C., Valentin, A., Niu, G., ... & Jones, J. C., 2016, Efficient production and enhanced tumor delivery of engineered extracellular vesicles , Biomaterials, 105, 195-205) décrivent une méthode de production des vésicules permettant d’augmenter la quantité de vésicules produites. Cette méthode consiste à cultiver des cellules adhérentes de type HEK293 dans des flasques de culture, puis dans des membranes à fibres creuses (Hollow Fiber Membrane en anglais). Le passage central des fibres creuses permet d’acheminer le milieu de culture aux cellules productrices. Les cellules productrices sont au préalable ensemencées autour de ce passage, où elles produisent des vésicules dans un espace inter-fibre. Le milieu liquide compris dans l’espace inter-fibre est collecté trois fois par semaine, permettant de produire environ 3.10 12 vésicules en plusieurs semaines, pour des quantités de cellules ensemencées très grandes, par exemple de l’ordre de 5.10 8 cellules, entraînant un rendement d’environ 6000 vésicules extracellulaires par cellule et un ratio de pureté très bas (par exemple 1,09.10 9 particules par microgramme de protéines). Cette production n’est toutefois pas assez élevée et trop lente au regard des applications susmentionnées. De plus, cette méthode est décrite en utilisant des cellules productrices correspondant à une lignée cellulaire particulièrement résistante à la culture en milieu dépourvu en sérum : cette méthode peut ne pas être transposable à une production de vésicules par des cellules productrices telles que des cellules souches, par exemple humaines, moins résistantes et particulièrement appropriées aux applications thérapeutiques visées. Il est également bien connu de l’homme du métier que la culture de cellules en suspension en 3 dimensions (3D) nécessite d’utiliser une méthode à faible agitation afin de ne pas induire la mort des cellules qu’on cherche à cultiver. Il est notamment connu de l’homme du métier que la longueur de Kolmogorov est un critère qui permet d’évaluer la turbulence créée par l’action de mélange et de déterminer quand la turbulence est excessive pour une culture 3D. Par ailleurs, on rappelle que les demanderesses ont déposé les demandes de brevet FR3068361A1 et WO2019/002608A1 décrivant un système fluidique et un procédé de production de vésicules extracellulaires dont le pilotage de l’agitation augmente sensiblement les quantités de production de telles vésicules et permet d’envisager une production à grande échelle. Néanmoins, le paramétrage d’une production dépend de multiples paramètres, tout d’abord biologiques inhérents aux cellules, ainsi que des paramètres liés au système fluidique en lui-même. En particulier, on a observé des écarts de production importants d’un système fluidique à un autre rendant problématique la tâche de paramétrage des protocoles de production pour optimiser leur rendement. Il existe donc un besoin de remédier aux problèmes précités. L’invention a pour objectif de proposer un protocole de production de vésicules extracellulaires de rendement amélioré par rapport aux techniques de production connues. Un objectif est d’optimiser la calibration et la configuration d’un système fluidique de production, dont le principe s’appuie sur l’action de contraintes fluidiques appliquées par les fluctuations du liquide autour des cellules par agitation et génération d’un flux turbulent, de manière à augmenter la productivité à grande échelle d’un tel système de production. Un objectif est de proposer un protocole de calibration des paramètres de contrôle d’un tel système en fonction de chaque type de cellules productrices susceptible d’être utilisé pour le système. Un autre objectif est l’identification d’une plage d’agitation optimale pour diverses cellules productrices. Un autre objectif est de proposer un procédé de production de vésicules extracellulaires exploitant le potentiel maximum de production d’une cellule productrice et dont les paramètres de contrôle optimaux peuvent être identifiés à partir du protocole de calibration selon l’invention. Présentation de l’invention Plus précisément, l’invention concerne un procédé de calibration d’un système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices comprenant un agitateur adapté à la génération d’un écoulement turbulent du milieu liquide dans un récipient pour exercer des contraintes fluidiques sur les cellules productrices afin de réaliser une production avantageuse de vésicules extracellulaires, le procédé comprenant les étapes suivantes : - la détermination d’un premier niveau d’imperméabilité dépendant d’un nombre initial de cellules productrices préalable à une production de vésicules extracellulaires, - le pilotage d’au moins une première production de vésicules extracellulaires configurée à une première valeur d’agitation et à une première durée. Selon l’invention, le procédé comporte en outre : - au moins une première mesure d’imperméabilité des cellules de la première production et comparaison par rapport à un deuxième niveau d’imperméabilité prédéterminé inférieur audit premier niveau d’imperméabilité, chaque mesure d’imperméabilité cellulaire d’une production de vésicules extracellulaires consistant à calculer un ratio de perte d’imperméabilité dépendant d’un nombre de cellules productrices imperméables de chaque dite production par rapport au nombre initial correspondant aux conditions préalables à ladite production, - l’enregistrement d’au moins une plage d’agitation dont la limite inférieure est égale à la première valeur d’agitation pour laquelle le niveau d’imperméabilité mesuré de la première production est sensiblement égal audit deuxième niveau d’imperméabilité. Selon une variante, le procédé de calibration comprend en outre les étapes suivantes : - le pilotage d’au moins une deuxième production de vésicules extracellulaires configurée à une deuxième valeur d’agitation et à une deuxième durée, - une deuxième mesure d’imperméabilité des cellules productrices de la deuxième production et comparaison par rapport à un troisième niveau d’imperméabilité prédéterminé inférieur audit deuxième niveau d’imperméabilité, - l’enregistrement de la plage d’agitation délimitée par la limite inférieure et une limite supérieure, ladite limite supérieure étant égale à la deuxième valeur d’agitation à partir de laquelle le niveau d’imperméabilité mesuré de la deuxième production est sensiblement égal au troisième niveau d’imperméabilité. Selon une première variante de calibration, le premier niveau est un ratio initial correspondant à un niveau d’imperméabilité cellulaire à 100% et le deuxième niveau d’imperméabilité cellulaire et le troisième niveau d’imperméabilité cellulaire délimitent une plage d’imperméabilité cellulaire comprise entre 95% et 60% du ratio de perte d’imperméabilité cellulaire, ou comprise entre 90% et 65%, de préférence comprise entre 85% et 70%. Selon une deuxième variante de calibration, le premier niveau est un ratio initial correspondant à un niveau d’imperméabilité cellulaire à 100% et dans lequel le deuxième niveau d’imperméabilité cellulaire et le troisième niveau d’imperméabilité cellulaire délimitent une plage d’imperméabilité cellulaire comprise entre 70% et 0% du ratio de perte d’imperméabilité cellulaire, entre 70% et 0%, entre 70% et 5%, entre 50% et 5%, entre 35% et 0%, entre 25% et 5%, ou bien encore entre 15% et 5%. Selon une variante, l’enregistrement est configuré pour enregistrer une pluralité de plages d’agitation de production de vésicules extracellulaires où chaque plage est associée spécifiquement à une valeur de durée de production spécifique et à un type de cellule productrice spécifique. Selon une variante, chaque mesure d’imperméabilité cellulaire calcule un nombre de cellules productrices imperméables en fin de la production de vésicules extracellulaires, ou de manière continue selon un rythme d’échantillonnage en cours de production de vésicules extracellulaires. L’invention prévoit également un système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices comprenant au moins : - un agitateur adapté à la génération d’un écoulement turbulent du milieu liquide dans un récipient pour exercer des contraintes fluidiques sur les cellules productrices afin de réaliser la production de vésicules extracellulaires, - des moyens de pilotage d’une production de vésicules extracellulaires en fonction de paramètres de configuration comprenant au moins un niveau d’agitation et une durée, - des moyens de mesure du niveau d’imperméabilité cellulaire des cellules productrices, les moyens de mesure du niveau d’imperméabilité cellulaire sont adaptés pour calculer un ratio de perte d’imperméabilité dépendant d’un nombre de cellules imperméables de ladite production de vésicules extracellulaires par rapport au nombre correspondant aux conditions préalables à ladite production, - et les moyens de pilotage sont configurés à une valeur d’agitation prédéterminée de manière que le niveau d’imperméabilité cellulaire en fin de ladite production est inférieur ou égal à un deuxième niveau d’imperméabilité cellulaire prédéterminé qui est au moins inférieur au premier niveau d’imperméabilité cellulaire initial préalable à ladite production, ledit premier niveau étant dépendant d’un nombre initial de cellules productrices imperméables préalablement à ladite production de vésicules extracellulaires. Selon une variante du système, au moins la valeur d’agitation et la durée sont pilotées de manière que le niveau d’imperméabilité cellulaire en fin de ladite production est compris dans une plage d’imperméabilité cellulaire délimitée par le deuxième niveau d’imperméabilité cellulaire prédéterminé et un troisième niveau d’imperméabilité cellulaire prédéterminé au moins inférieur audit deuxième niveau. Selon un premier mode de production, le premier niveau est un ratio initial correspondant à un niveau d’imperméabilité cellulaire à 100% et dans lequel le niveau d’imperméabilité cellulaire en fin de ladite production est compris entre 95% et 60% du ratio de perte d’imperméabilité, ou compris entre 90% et 65%, de préférence compris entre 85% et 70%. Selon un deuxième mode de production, le premier niveau est un ratio initial correspondant à un niveau d’imperméabilité cellulaire à 100% et dans lequel le niveau d’imperméabilité en fin de ladite production est compris entre 70% et 0% du ratio de perte d’imperméabilité, entre 70% et 5%, entre 50% et 5%, entre 35% et 0%, entre 25% et 5%, ou bien encore entre 15% et 5%. Selon une variante préférentielle, le système comprend en outre des moyens de configuration d’une production de vésicules extracellulaires enregistrant au moins une première configuration de production prédéterminée définie par une plage d’agitation et une durée prédéterminée, dans lequel ladite plage est obtenue par le procédé de calibration selon l’un quelconque des modes de réalisation précédents, et dans lequel les moyens de pilotage sont configurés pour sélectionner la valeur d’agitation d’une production comprise dans ladite plage pour exécuter ladite production. Selon cette dernière variante, soit la durée de production est égale à la durée prédéterminée avant la production de la première configuration de production prédéterminée, soit la durée de production est finalisée lorsque le niveau d’imperméabilité cellulaire mesuré est compris dans la plage d’imperméabilité cellulaire délimitée par le deuxième niveau d’imperméabilité cellulaire et le troisième niveau d’imperméabilité cellulaire. Selon une variante, les moyens de configuration comprennent une pluralité de configurations de production mémorisées, chaque configuration étant spécifique à une durée de production et à un type de cellules productrices. L’invention concerne également un procédé de production ex vivo de vésicules extracellulaires comprenant les étapes suivantes : - à une première étape, un milieu liquide de cellules productrices est introduit dans le récipient du système fluidique. Lors de cette étape, ou avant cette étape, le procédé de production comporte une étape de contrôle durant laquelle on détermine le nombre initial de cellules productrices imperméables, - une deuxième étape de paramétrage de la production planifiée au moins par un niveau d’agitation prédéterminé et une durée de production qui peut être déterminée ou non, - une troisième étape de production de vésicules extracellulaires au niveau d’agitation et à la durée de production précédemment configurés de manière que le niveau d’imperméabilité cellulaire en fin de ladite production est inférieur ou égal à un deuxième niveau d’imperméabilité prédéterminé qui est au moins inférieur au premier niveau d’imperméabilité cellulaire initial préalable à ladite production, et de préférence compris dans la plage d’imperméabilité cellulaire délimitée par le deuxième niveau d’imperméabilité cellulaire prédéterminé et le troisième niveau d’imperméabilité cellulaire prédéterminé inférieur au deuxième niveau, - une étape de contrôle en continu soit de la durée écoulée depuis l’instant de déclenchement de la production, soit du niveau d’imperméabilité des cellules productrices lors de la production, - en cas de détection d’au moins l’une des deux conditions, une quatrième étape de collecte du milieu liquide contenant les vésicules extracellulaires. Selon une variante, la durée de production peut conditionner la fin de la production, mais cela n’est pas obligatoire. De préférence, le paramétrage prévoit la sélection desdits paramètres de configuration dans un fichier de configuration enregistré en mémoire des moyens de configuration du système fluidique. Ce fichier de configuration est obtenu à partir du procédé de calibration selon l’invention. Selon une première variante de production, le deuxième niveau d’imperméabilité cellulaire et le troisième niveau d’imperméabilité cellulaire délimitent une plage d’imperméabilité cellulaire comprise entre 95% et 60% du ratio de perte d’imperméabilité, ou comprise entre 90% et 65%, de préférence comprise entre 85% et 70%. Selon une deuxième variante de production, le deuxième niveau d’imperméabilité cellulaire et le troisième niveau d’imperméabilité cellulaire délimitent une plage d’imperméabilité cellulaire comprise entre 70% et 0% du ratio de perte d’imperméabilité, entre 70% et 0%, entre 70% et 5%, entre 35% et 0%, entre 25% et 5%, ou bien encore entre 15% et 5%. Selon une variante, la durée de production (T) peut être comprise entre des valeurs d’environ 20 minutes à environ 6 heures, encore plus préférentiellement d’environ 1 heure à environ 6 heures, encore plus préférentiellement d’environ 2 heures à environ 3 heures, ou bien encore plus préférentiellement être égale à environ 2 heures ou alternativement environ 3 heures ou alternativement environ 4 heures. De préférence, il est prévu en fin de production d’opérer une séparation des vésicules extracellulaires et des débris cellulaires. Néanmoins, cette dernière opération n’est pas obligatoire. L’invention porte aussi sur les vésicules extracellulaires produites par mise en œuvre du système fluidique selon l’invention tel que décrit dans la présente demande, et/ou par le procédé de production ex vivo de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices selon l’invention tel que décrit dans la présente demande. Selon un mode de réalisation, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules humaines, préférentiellement des cellules humaines saines, à l’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines. Alternativement, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules pathologiques, par exemple des cellules issues de tissus et/ou de lignées cancéreuses telles que des cellules HeLa. Selon un mode de réalisation, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules animales, de préférence des cellules murines, par exemple des cellules MSC murines (cellules souches mésenchymateuses murines). Selon une caractéristique préférée, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules non-adhérentes. Selon une autre caractéristique préférée, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules adhérentes détachées de leur support de culture, par exemple par traitement approprié lequel est choisi parmi un traitement enzymatique, un traitement chimique, un traitement mécanique ou une combinaison de ces moyens. Selon un mode de réalisation, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules souches notamment des cellules souches pluripotentes induites, des cellules multipotentes. A titre d’exemple, lesdites cellules souches sont choisies parmi des cellules mésenchymateuses multipotentes, des cellules génétiquement modifiées, des cellules endothéliales de la veine du cordon ombilical (HUVEC) ou des cellules primaires en général. Selon un autre mode de réalisation, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules de lignée cellulaire, préférentiellement de lignée humaine de monocytes ou de lignée humaine de cellules d’origine hématopoïétique dérivées de lymphocytes B, plus préférentiellement il s’agit de cellules THP-1 ou de cellules de Raji. Selon un autre mode de réalisation, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules primaires, par exemple des globules rouges. Selon une caractéristique préférée, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules isogéniques, c’est-à-dire qu’elles proviennent du sujet pour lequel les vésicules extracellulaires produites par lesdites cellules productrices seront utilisées, par exemple par administration ou par utilisation ex vivo . Selon une autre caractéristique préférée, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules ne provenant pas du sujet pour lequel les vésicules extracellulaires produites par lesdites cellules productrices seront utilisées, par exemple par administration ou par utilisation ex vivo . Selon une caractéristique plus préférée, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules allogéniques, c’est-à-dire provenant de la même espèce que l’espèce du sujet pour lequel les vésicules extracellulaires produites par lesdites cellules productrices seront utilisées. Alternativement, les cellules productrices utilisées dans le cadre de la présente invention sont des cellules xénogéniques, c’est-à-dire provenant d’une espèce différente de l’espèce du sujet pour lequel les vésicules extracellulaires produites par lesdites cellules productrices seront utilisées. Pour les cellules productrices, en particulier les cellules humaines, utilisées dans le cadre de l’invention, on exclut d’utiliser les cellules souches embryonnaires humaines. Selon une caractéristique préférée, la concentration des cellules productrices dans le milieu liquide du récipient du système fluidique est comprise entre 5.10 4 et 9.10 14 cellules productrices par litre de milieu liquide, de préférence entre 5.10 7 et 1.10 14 cellules productrices par litre, préférentiellement entre 5.10 7 et 1.10 13 par litre, encore plus préférentiellement entre 2.10 8 et 1.10 12 par litre, encore plus préférentiellement environ 2,5.10 8 par litre dudit milieu liquide. Selon une autre caractéristique préférée, la concentration des cellules productrices dans le milieu liquide du récipient du système fluidique est comprise entre 1.10 8 et 1.10 12 cellules productrices par litre de milieu liquide. En particulier, un objet de l’invention est constitué par les vésicules produites par le système fluidique selon l’invention. En particulier, un objet de l’invention est l’utilisation des vésicules produites par le système fluidique selon l’invention pour agir sur des cellules. En particulier, un objet de l’invention est l’utilisation des vésicules produites par le système fluidique selon l’invention à des fins d’imagerie et/ou à des fins thérapeutiques et/ou à des fins diagnostiques. Il est bien connu de l’homme du métier que la structure des vésicules extracellulaires varie en fonction des cellules productrices utilisées et en fonction du procédé d’obtention utilisé, notamment en termes de marqueurs membranaires et constituants présents sur ces vésicules. Selon un mode de réalisation, les vésicules extracellulaires selon la présente invention présentent un diamètre moyen compris entre 40 et 300 nm, préférentiellement entre 45 et 90 nm, plus préférentiellement entre 50 et 65 nm, encore plus préférentiellement environ 60 nm, ledit diamètre moyen des vésicules extracellulaires étant mesuré par une méthode d’interférométrie en combinaison ou non avec de la fluorescence, de préférence ledit diamètre moyen est mesuré grâce à l’appareil ExoView™ R100 commercialisé par l’entreprise NanoView Bioscience. Selon un mode de réalisation, les vésicules extracellulaires selon la présente invention présentent un diamètre moyen compris entre 50 et 500 nm, préférentiellement entre 100 et 110 nm, plus préférentiellement entre 105 et 109 nm, encore plus préférentiellement environ 106 nm ou alternativement environ 108 nm, ledit diamètre moyen des vésicules extracellulaires étant mesuré par une méthode de suivi individuel de particules (ou NTA pour Nanoparticle Tracking Analysis) par exemple avec l’appareil NanoSight NS300 commercialisé par l’entreprise Malvern Panalytical. En particulier, un objet de l’invention est l’utilisation des vésicules produites par le système fluidique selon l’invention pour agir sur des cellules. En particulier, un objet de l’invention est l’utilisation des vésicules produites par le système fluidique selon l’invention à des fins d’imagerie et/ou à des fins thérapeutiques et/ou diagnostiques. Selon un mode de réalisation, l’agitateur du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices en suspension selon l’invention est constitué d’une pale. Alternativement, ledit agitateur est constitué de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou plus de 8 pales. Selon une caractéristique préférée, l’au moins une pale dudit agitateur est une pale verticale. Selon un mode de réalisation, l’agitateur du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices en suspension selon l’invention est un agitateur du type hélice par exemple marine ou hélice à pales profilées, ou une turbine par exemple turbine de Rushton, ou une ancre d’agitation, ou un agitateur barrière, ou une hélice à rubans hélicoïdaux, ou une roue à aubes, ou une roue dentée, ou un agitateur magnétique ou une combinaison de ces agitateurs. Dans un mode de réalisation, des structures statiques peuvent être présentes dans le récipient, par exemple des baffles, ou encore des structures formant une barrière partielle au mouvement liquide, telles celles utilisées dans un mélangeur statique. Selon un mode de réalisation, le récipient du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices en suspension selon l’invention est une flasque à agitation d’une contenance de 100 mL (par exemple l’appareil Spinner stirring flask Bellco for cell suspensions, référence Bellco 505001), comprenant une pale d’un diamètre de 3,8 cm et un volume de travail inférieur à 100 mL. Selon un autre mode de réalisation, le récipient du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices en suspension selon l’invention est une flasque à agitation dont les caractéristiques structurelles (contenance, diamètre de la pale et volume de travail) sont toutes augmentées ou diminuées de manière proportionnelle par rapport à celles mentionnées ci-dessus pour la flasque à agitation d’une contenance de 100 mL ; selon un autre mode de réalisation, lesdites caractéristiques structurelles sont toutes augmentées ou diminuées de manière non proportionnelle par rapport à celles mentionnées ci-dessus pour la flasque à agitation d’une contenance de 100 mL, notamment lors d’un changement d’échelle. Selon un mode de réalisation, le récipient du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices en suspension selon l’invention est une flasque à agitation d’une contenance de 500 mL (par exemple l’appareil Spinner stirring flask Bellco for cell suspensions, référence Bellco 505005), comprenant une pale d’un diamètre de 7,6 cm et un volume de travail de 200 mL à 500 mL, ou une flasque à agitation dont les caractéristiques structurelles (contenance, diamètre de la pale et volume de travail) sont toutes augmentées ou diminuées de manière proportionnelle par rapport à celles mentionnées ci-avant pour la flasque à agitation d’une contenance de 500 mL, ou une flasque à agitation dont lesdites caractéristiques structurelles (contenance, diamètre de la pale et volume de travail) sont toutes augmentées ou diminuées de manière non proportionnelle par rapport à celles mentionnées ci-dessus pour la flasque à agitation d’une contenance de 500 mL, notamment lors d’un changement d’échelle. Selon un mode de réalisation, le récipient du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices en suspension selon l’invention est une flasque à agitation d’une contenance de 1000 mL (par exemple l’appareil Spinner stirring flask Bellco for cell suspensions, référence Bellco 505010), comprenant une pale d’un diamètre de 10,8 cm et un volume de travail supérieur ou égal à 300 mL et inférieur à 1L, ou une flasque à agitation dont les caractéristiques structurelles (contenance, diamètre de la pale et volume de travail) sont toutes augmentées ou diminuées de manière proportionnelle par rapport à celles mentionnées ci-avant pour la flasque à agitation d’une contenance de 1000 mL. Selon un autre mode de réalisation, le récipient du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices en suspension selon l’invention est un bioréacteur dont le volume de travail est entre 400 et 1000 mL et le diamètre de la pale est de 6 cm. Selon un autre mode de réalisation, le récipient du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices en suspension selon l’invention est un bioréacteur dont le volume de travail et le diamètre de la pale sont augmentés ou diminués de manière proportionnelle par rapport aux valeurs respectives de 400 mL et 6 cm. Selon un autre mode de réalisation, le récipient du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices selon l’invention est un bioréacteur avec moyen d’agitation par pale, dont l’homme de l’art peut disposer ou concevoir. Selon un autre mode de réalisation, le récipient du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices selon l’invention est un bioréacteur dont le volume de travail et le diamètre de la pale sont augmentés ou diminués de manière non proportionnelle par rapport aux valeurs respectives mentionnées ci-dessus, notamment lors d’un changement d’échelle. Selon un autre mode de réalisation, le récipient du système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices selon l’invention est un bioréacteur ou une flasque à agitation dont les caractéristiques géométriques, le volume de travail, le type de mélangeur et ses caractéristiques, et le mode de fonctionnement sont choisis selon des pratiques accessibles par l'homme de l'art. Le principe de l’invention repose sur le postulat que les niveaux de productions optimaux de vésicules extracellulaires se situent dans des zones connexes du déclenchement d’une baisse d’imperméabilité membranaire. En effet, on cherche à provoquer suffisamment de contraintes fluidiques sur les cellules productrices afin d’amener celles-ci jusqu’à leur potentiel de vésiculation maximum, phase durant laquelle les cellules productrices puisent dans leur réserves internes de lipides. En particulier, il a été identifié deux zones de perte d’imperméabilité cellulaire intéressante d’un point de vue de rendement de production. Une première zone correspond à une zone de perte d’imperméabilité cellulaire raisonnable en fin de production tout en présentant des rendements intéressants. Une deuxième zone correspond à une zone de production supérieure mais en contrepartie qui est associée à une forte baisse du niveau d’imperméabilité des cellules productrices. Le procédé de calibration tire profit de ce postulat et permet d’établir un point de repère, indépendamment du type cellulaire et de la configuration du système de production, permettant de détecter des zones de production optimale par une identification se basant sur le calcul d’un ratio de perte d’imperméabilité. En outre, le procédé de calibration repose sur une méthode de mesure du niveau d’imperméabilité cellulaire à bas coût et adaptée pour un suivi en continu du niveau d’imperméabilité des cellules productrices. Grâce au procédé de calibration, il est donc possible d’améliorer significativement les rendements de production de vésicules extracellulaires. De surcroît, on envisage que le procédé de calibration puisse être configuré en mémoire de moyens de pilotage du système fluidique afin de mettre en œuvre de manière automatisée, préalablement à une production de vésicules extracellulaires, une phase de calibration des paramètres de pilotage, en l’occurrence le niveau d’agitation du milieu liquide et la durée de production, pour détecter les zones optimales de rendement de production. On envisage également que le système fluidique soit apte à configurer une pluralité de configurations optimales, où chaque configuration dépend d’un type cellulaire et une durée de production spécifique. Un autre avantage de l’invention est qu’il permet de produire de façon optimisée des vésicules en grande quantité et dans un système conforme aux normes G.M.P (acronyme anglais de Bonnes Pratiques de Fabrication), nécessaires à la fabrication de médicaments. D’autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaitront plus clairement à la lecture de la description détaillée qui suit comprenant des modes de réalisation de l’invention donnés à titre d’exemples nullement limitatifs et illustrés par les dessins annexés, dans lesquels : Figures représente un exemple de système fluidique apte à mettre en œuvre le procédé de calibration selon l’invention et apte à la production à grande échelle de vésicules extracellulaires. est un organigramme représentant un mode de réalisation du procédé de calibration d’un système fluidique selon l’invention. est un graphique représentant une première variante de plage d’agitation optimale obtenue par le procédé de calibration selon l’invention. est un graphique représentant une deuxième variante de plage d’agitation optimale obtenue par le procédé de calibration selon l’invention. est un schéma représentatif du système fluidique et des moyens de configurations dont les paramètres de pilotage sont configurés conformément aux valeurs obtenues à partir de la calibration. est un organigramme représentant un procédé de production de vésicules extracellulaires ex vivo conformément à l’invention. Description détaillée L’invention est un procédé de calibration d’un système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices comprenant un agitateur adapté à la génération d’un écoulement turbulent du milieu liquide dans un récipient pour exercer des contraintes fluidiques sur les cellules productrices afin de réaliser la production de vésicules extracellulaires. L’invention vise à rechercher une plage d’agitation optimale en considération d’un rendement de production de vésicules extracellulaires, d’une durée de production recherchée et d’un type cellulaire donné. Définitions Le terme « vésicule extracellulaire » désigne de manière générale une vésicule libérée de manière endogène par une cellule productrice, dont le diamètre est compris entre 30 nm et 500 nm. Une vésicule extracellulaire correspond en particulier à un exosome et/ou une microvésicule et/ou un corps apoptotique cellulaire. Le terme « cellule productrice » désigne de manière générale indépendamment soit une cellule adhérente sur un support de culture (support de culture désigné aussi sous le nom de micro-porteur), soit une cellule qui n’est pas adhérente sur un support de culture (désignée aussi par le terme « cellule en suspension »), et peut se diviser et se multiplier. Dans le cas des cellules adhérentes, celles-ci peuvent être adhérentes sur des microporteurs eux-mêmes en suspension dans le milieu liquide de culture. Selon un autre aspect de l’invention, le terme « cellules productrices » désigne des cellules humaines, à l’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, d’origine animale ou végétale, des bactéries ou autres micro-organismes capables de sécréter des vésicules extracellulaires. Selon un autre aspect de l’invention, le terme « cellules productrices » désigne des cellules adhérentes détachées de leur support de culture et mises en suspension. Un mélange doux créé par l’agitateur permet aux cellules productrices en suspension telles que définies de rester en suspension dans le milieu liquide de culture. Selon un autre aspect de l’invention, le terme « cellules productrices » désigne des agrégats cellulaires. Le terme « agrégats cellulaires » désigne un assemblage de plusieurs cellules productrices qui adhèrent entre elles. Un mélange doux créé par l’agitateur permet aux cellules productrices en suspension telles que définies de rester en suspension dans le milieu liquide de culture. Les termes « microporteur » et « microsupport » désignent une matrice généralement sphérique permettant la croissance de cellules productrices adhérentes à sa surface ou à l'intérieur et dont la taille caractéristique maximum est comprise entre 50 µm et 500 µm, et préférentiellement entre 100 µm et 300 µm. Les microporteurs sont généralement des billes dont la densité est choisie sensiblement proche de celle du milieu liquide de culture des cellules productrices. Ainsi, un mélange doux permet aux billes de rester en suspension dans le milieu liquide de culture. Le terme « contraintes fluidiques » désigne les contraintes de cisaillement et/ou d’étirement agissant en surface des cellules productrices sous l’action du fluide turbulent. Le terme « agitateur » doit être compris selon un sens extrêmement général, qui est celui d’un moyen ou d’une combinaison de moyens permettant par action sur le liquide de générer au moins un écoulement, de favoriser le mélange du liquide ou de générer de la turbulence dans ce liquide. Le terme « cellule imperméable » doit être compris au sens de non-modification de la semi-perméabilité naturelle de la membrane d’une cellule ; une cellule perd son « imperméabilité » au sens ci-dessus si cette cellule laisse passer dans son milieux intracellulaire des colorants qui seraient présent dans le milieu extracellulaire, et qui même en ce cas sont normalement non présent dans le milieu intracellulaire (par exemple le bleu de Trypan) Le terme « environ », ou « sensiblement » placé devant un nombre, signifie au maximum plus ou moins 10% de la valeur nominale de ce nombre. La mesure de nombre de cellules imperméables peut être entachée d’erreurs d’échantillonnage ou d’erreurs de mesure qui sont généralement liées à la façon de prélever l’échantillon et/ou au principe de mesure. L’homme de l’art sait obtenir une estimation indirecte de ces erreurs en procédant à des mesures multiples dans les mêmes conditions : les éventuelles variations de mesures alors que les conditions sont apparemment les mêmes sont indicatrices d’erreurs de mesures. En ce sens, les niveaux indiqués pour les pertes d’imperméabilité cellulaires prescrits dans la présente demande sont naturellement à prendre en compte avec une barre d’erreur qui est fonction des erreurs effectives estimées par selon le procédé ci-dessus pour le type de mesure réalisées pour la détermination du nombre de cellules imperméables. De plus la présente méthode de calibration se base sur le rapport entre le nombre de cellules imperméables à un temps T et le nombre de cellules initialement imperméables. Les erreurs de mesures à la fois au numérateur et au dénominateur de ce rapport sont à prendre en compte dans l’erreur susceptible d’affecter ce rapport. Selon le procédé de calibration selon la présente invention, les erreurs sur la détermination du rapport ci-dessus sont à prendre en compte pour la détermination des niveaux d’imperméabilité. Le terme « cellule » désigne la plus petite unité structurale et fonctionnelle fondamentale des organismes vivants, constituée d’un protoplasme ou cytoplasme, séparée du milieu externe par une membrane. Dans le cadre de la présente invention, le terme « cellule » englobe aussi les globules rouges et les plaquettes. Le terme « cellules saines » désigne des cellules issues de tissus sains, par opposition à des cellules issues de tissus ou organes pathologiques c’est-à-dire dont les fonctions sont altérées. L’expression « entre X et Y » concerne la gamme de valeurs comprises entre X et Y, les bornes X et Y étant incluses dans ladite gamme. Le terme « immunothérapie » désigne le traitement d'une maladie par une intervention sur le système immunitaire. Le terme « médecine régénérative » désigne l’ensemble des méthodes biomédicales utilisées pour le remplacement ou la régénération de tissus ou organes humains dans un but thérapeutique. Le terme « sujet » désigne un animal, en particulier un mammifère lequel peut être choisi parmi l’humain, le rat, la souris, le cochon, le chinchilla, le cobaye, la chèvre, le mouton, le chat, le chien, la vache, le singe, de sexe masculin ou féminin, quel que soit l’âge. Au sens de la présente invention, un sujet peut être un patient, à savoir une personne recevant des soins médicaux, subissant ou ayant subi un traitement médical, ou surveillée dans le cadre du développement d'une maladie. Le terme « thérapie cellulaire » désigne l’utilisation chez un sujet ou un patient de cellules somatiques vivantes, manipulées ou modifiées en leurs caractéristiques biologiques, pour prévenir, traiter, ou atténuer certaines pathologies. Au sens de la présente invention, le terme « débris cellulaire » désigne les résidus cellulaires à la suite de la destruction des cellules, notamment fragments de la membrane plasmique, éléments du cytosol, fragment de noyau, d’enveloppe nucléaire d’organelle intracellulaire, et généralement tout assemblage de protéine ou nucléoprotéiques. Les débris cellulaires peuvent être éventuellement éliminés lors d’une étape de clarification, si leur taille caractéristique est telle qu’une étape de préfiltration ou de centrifugation douce permettent de les éliminer en séparant ces débris des vésicules. Un débris peut notamment être un fragment de membrane cellulaire et dont la topologie membranaire n’est pas celle d’un globule fermé comme c’est le cas pour des vésicules extracellulaires. De façon surprenante et inattendue, une valeur d'agitation excessive peut être mauvaise à la fois en terme de quantité d'EV produites par cellules initiales et aussi en terme de quantité de contaminants cellulaires en fin de production. A ce titre, la production de vésicules selon certains modes de calibrations préférés de l’invention peut permettre après clarification d’obtenir des vésicules avec une pureté avantageuse. L’homme de l’art connait diverses méthodes pour définir certains types de pureté. Par ailleurs, l’homme de l’art sait que toutes les types d’impuretés présentes dans la solution qui contient les vésicules ne présentent pas nécessairement le même problème vis à vis d’éventuelles étapes de purification Selon un autre mode avantageux de calibration selon la présente invention, on peut chercher à maximiser la quantité de vésicules produites, au détriment d’une certaine perte de pureté. L’optimisation complémentaire finalement choisie est naturellement dépendante des étapes éventuellement envisagées pour procéder à la purification des espèces gênantes au regard d’essais in-vivo par exemple, tant en terme de qualification GMP, que d’effets éventuellement indésirables. Architecture générale du système fluidique La illustre schématiquement un système fluidique (1) pour la production optimisée de vésicules extracellulaires (EV). Le système fluidique (1) de production de vésicules extracellulaires (EV) vise à la production en grande quantité de vésicules extracellulaires (EV) dans un récipient (4). Toutefois, l’invention n’est pas limitée à ce mode de réalisation et peut comprendre une série de récipients (4) reliés fluidiquement en parallèle ou en série. Le récipient (4) contient un milieu liquide (5). Le récipient (4) peut notamment être une cuve, une flasque, par exemple en verre ou en matière plastique, ou tout autre récipient adapté à contenir un milieu liquide (5). Le récipient peut être souple, ou contenir des parties souples. Le volume du récipient (4) est l’un des facteurs permettant de produire des vésicules extracellulaires (EV) en grande quantité : ce volume peut être compris entre 50 mL et 500 L, préférentiellement entre 100 mL et 100 L, et préférentiellement entre 300 mL et 40 L. Le volume du récipient (4) illustré schématiquement dans la est de 1 L. Le récipient (4) comprend typiquement une ou plusieurs entrées gazeuses et une ou plusieurs sorties gazeuses, par lesquelles peut s’écouler une atmosphère comprenant des concentrations en air, O2, N2 et en CO2 adaptées pour les cellules, par exemple comprenant 5% de CO2. Cette atmosphère peut provenir d’un injecteur/mélangeur de gaz adapté ou d’une étuve à atmosphère contrôlée en CO2. Une deuxième pompe (17) permet de commander cet écoulement gazeux dans le récipient (4). Le récipient (4) comprend également une sortie (9) susceptible de comprendre du milieu liquide (5) et des vésicules extracellulaires (EV). Cette sortie peut être complétée d’un moyen de séparation et/ou de filtration des cellules en suspension permettant de ne pas récupérer des cellules en suspension en dehors du récipient (4). Cette sortie (9) permet d’extraire hors du récipient (4) les vésicules extracellulaires (EV) produites. Le récipient (4) peut également comprendre au moins une entrée (8) adaptée à introduire le milieu liquide (5) dans le récipient (4). Le milieu liquide (5) peut être de manière générale une solution saline, par exemple isotonique. Préférentiellement, le milieu liquide (5) est un milieu liquide de culture avec adjonction de composés permettant la culture des cellules d’intérêt, ou un milieu complémenté en sérum ou lysat plaquettaire préalablement purifié des vésicules extracellulaires ou un milieu sans sérum, permettant de ne pas contaminer les vésicules extracellulaires (EV) produites par le système fluidique (1) par des protéines ou d’autres vésicules provenant d’un sérum ou lysat plaquettaire. Il peut être utilisé un milieu liquide (5) sans sérum tel le DMEM par exemple. Le volume maximum de milieu liquide (5) est déterminé en partie par le récipient (4). Ce volume maximum peut également être compris entre 50 mL et 500 L, préférentiellement entre 100 mL et 100 L, et plus préférentiellement entre 300 mL et 40 L. Le volume minimum de milieu liquide (5) contenu par le récipient (4) est en partie déterminé par le choix de l’agitateur (7) permettant d’agiter le milieu liquide (5). Le système fluidique (1) comprend également des cellules productrices en suspension (6), le terme cellules productrices en suspension incluant à la fois les cellules en suspension (cellules non-adhérentes) et les cellules mises en suspension (cellules adhérentes). Les vésicules extracellulaires (EV) sont produites par le système fluidique (1) à partir de ces cellules productrices en suspension (6). Les cellules productrices en suspension (6) peuvent être cultivées, avant la production de vésicules extracellulaires (EV) par le système fluidique (1) dans un milieu de culture cellulaire adapté. Ainsi, aucun transfert de cellules n’est nécessaire entre la culture des cellules productrices en suspension (6) et la production des vésicules extracellulaires (EV), ce qui permet d’éviter toute contamination et de simplifier le procédé dans son ensemble. La majorité des cellules productrices en suspension (6) est en suspension de manière homogène dans le milieu, même si une proportion minoritaire de cellules productrices en suspension (6) peut être sédimentée au fond du récipient (4) ou collée sur la paroi du récipient (4), par exemple par l’agitation du milieu liquide (5). Préférentiellement, le système fluidique (1) est adapté de manière à générer une agitation douce permettant d’homogénéiser les cellules productrices (6) dans le milieu liquide (5) au sein du récipient (4), préférentiellement avant la production des vésicules extracellulaires. De manière générale, tout type de cellules productrices (6) peut être utilisé, de préférence des cellules productrices (6) en suspension non adhérentes. Le récipient (4) comprend également un agitateur (7) permettant d’agiter le milieu liquide (5). L’agitateur (7) peut être une roue à aubes, dont les aubes sont au moins en partie plongées dans le milieu liquide (5), et mise en mouvement par tout moyen connu de l’homme du métier permettant par un moyen quelconque connu de l’homme de métier d’obtenir une transmission de forces, par exemple et de façon non-limitative par couplage magnétiques et/ou mécanique. L’agitateur (7) peut également être un système de perfusion de milieu liquide (5) à un débit suffisant pour agiter le milieu liquide (5) contenu par le récipient, ou un système à murs rotatifs (par exemple agencés sur des rouleaux). L’agitateur (7) peut alternativement être du type rouleur à bouteilles ou rollers à bouteilles, agitateur orbital pour Erlenmeyers, avec ou sans baffles (shaken flask), agitateur à bascule (wave), biorécipient avec agitation pneumatique (air-lift) ou un agitateur rotatif à pales tel qu’un agitateur de type hélice marine, turbine de Rushton, ancres d’agitation, agitateur barrière, hélice rubans hélicoïdaux. Un agitateur rotatif préféré est une turbine à pales verticales. Enfin, des structures statiques peuvent être présentes dans le récipient, par exemple des baffles, ou encore des structures formant une barrière partielle au mouvement liquide, telles celles utilisées dans un mélangeur statique, peuvent naturellement aussi être utilisées. L’agitateur (7) et les dimensions du récipient (4) sont adaptés à commander un écoulement turbulent du milieu liquide (5) dans le récipient (4). Par écoulement turbulent, on entend un écoulement dont le nombre de Reynolds est supérieur à 2000. Le nombre de Reynolds peut par exemple être calculé par la formule (IV). Préférentiellement, le nombre de Reynolds Re de l’écoulement de milieu liquide (5) est supérieur à 7 000, préférentiellement supérieur à 10 000 et préférentiellement supérieur à 12 000. D’autres agitateurs (7) permettant de commander un écoulement au moins partiellement turbulent selon la présente invention sont des agitateurs bien connus de l’homme du métier et susceptibles d’être implantés dans le système selon la présente invention. Classiquement, l’écoulement turbulent est induit et/ou contrôlé par au moins un paramètre de configuration opérationnel de l’agitateur, désigné dans la description par le paramètre de configuration du niveau d’agitation. A titre d’exemples non limitatifs, le paramètre de configuration peut être la vitesse de rotation d’un agitateur, un débit d’injection en mélangeur statique, une fréquence de secouage, etc..). Par ailleurs, il est de pratique courante d’établir une commande du niveau d’agitation d’un système fluidique par une correspondance paramétrique inhérente au fluide turbulent, pouvant par exemple être un taux d’injection d’énergie, ou bien encore une longueur de Kolmogorov. Ce mode de pilotage du niveau d’agitation d’un système fluidique est décrit dans les demandes de brevet FR3068361A1 et WO2019/002608A1. On prend donc le soin d’apporter en description les formules théoriques ci-après dont l’objet est d’établir cette correspondance de calcul de manière que l’homme du métier de par ses connaissances générales puisse calculer le paramètre de configuration adapté au pilotage du système fluidique choisi. Eléments théoriques La longueur de Kolmogorov (ou dimension de Kolmogorov ou longueur d’eddy) est la longueur à partir de laquelle la viscosité d’un fluide permet de dissiper l’énergie cinétique d’un écoulement de ce fluide. En pratique, la longueur de Kolmogorov correspond à la taille des plus petits tourbillons dans un écoulement turbulent. Cette longueur L K est calculée dans la publication de Kolmogorov (Kolmogorov, A. N., 1941, January, The local structure of turbulence in incompressible viscous fluid for very large Reynolds numbers , In Dokl. Akad. Nauk, SSSR, Vol. 30, No. 4, pp. 301-305) et décrite par la formule (I) suivante : [Math 1] (I) dans laquelle ν est la viscosité cinématique du milieu liquide en écoulement et ε est le taux moyen de dissipation d’énergie dans le fluide par unité de masse (ou taux d’injection d’énergie dans le fluide). Haruki Furukawa et al (Haruki Furukawa, Yoshihito Kato ,Yoshiro Inoue, Tomoho Kato, Yutaka Tada,and Shunsuke Hashimoto,(2012) Correlation of Power Consumption for Several Kinds of Mixing Impellers,Int J. Chem. Eng. Article ID 106496, DOI: 10.1155/2012/106496), Zhou et al. (Zhou, G., Kresta, S. M., 1996, Impact of tank geometry on the maximum turbulence energy dissipation rate for impellers , AIChE journal, 42(9), 2476-2490) décrivent la relation entre ε moyen et la géométrie d’un récipient dans lequel un milieu liquide est agité par agitateur de type roue à aubes. Cette relation est donnée par la formule (II) suivante : [Math 2] (II) dans laquelle N p est le nombre de puissance (ou nombre de Newton) adimensionné de l’agitateur dans le milieu liquide, D est le diamètre de l’agitateur (en mètre), N est la vitesse de rotation (en nombre de tours par seconde) et V est le volume de milieu liquide (en mètre cube). Cette relation est utilisée pour le calcul de ε moyen correspondant à la géométrie d’un récipient et d’un agitateur utilisés pour la mise en œuvre de l’invention. Le nombre de puissance Np est donné de manière connue par la formule (III) : [Math 3] (III) dans laquelle P est la puissance apportée par l’agitateur, et ρ est la densité du milieu liquide. La formule (III) peut être ajustée comme décrit dans Haruki Furukawa et al (Haruki Furukawa, Yoshihito Kato ,Yoshiro Inoue, Tomoho Kato, Yutaka Tada,and Shunsuke Hashimoto,(2012) Correlation of Power Consumption for Several Kinds of Mixing Impellers,Int J. Chem. Eng. Article ID 106496, DOI: 10.1155/2012/106496), et Nienow et al. (Nienow, A. W., & Miles, D., 1971, Impeller power numbers in closed vessels, Industrial & Engineering Chemistry Process Design and Development , 10(1), 41-43) ou Zhou et al. (Zhou, G., Kresta, S. M., 1996, Impact of tank geometry on the maximum turbulence energy dissipation rate for impellers , AIChE journal, 42(9), 2476-2490) en fonction du nombre de Reynolds de l’écoulement du milieu liquide. Il est également possible de calculer le nombre de Reynolds du système par la formule (IV) suivante : [Math 4] (IV) Alternativement, l’homme du métier de par ses connaissances générales et avec des modes de calcul alternatifs peut calculer la longueur de Kolmogorov. En tout état, le calcul présenté ci-dessus n’est qu’une façon parmi tant d’autres connues de l’homme du métier de calculer la longueur de Kolmogorov. L’agitateur (7) utilisé dans les exemples de réalisation de l’invention comprend une roue à aube agencée dans un récipient (4) et mise en mouvement par un système de transmission de forces magnétiques ou mécaniques. La vitesse de la roue à aube dans le milieu liquide (5) entraine un écoulement du milieu liquide (5). L’agitateur est adapté à commander un écoulement, qui, compte-tenu des dimensions du récipient (4), peut être partiellement turbulent. Dans le cas de l’agitateur (7) illustré en , plusieurs paramètres permettent de calculer une valeur représentative de la turbulence du milieu liquide (5), en particulier la viscosité cinématique v du milieu liquide (5), les dimensions du récipient (4) et en particulier le volume V de milieu liquide (5) contenu dans le récipient (4), le nombre de puissance Np correspondant à la partie immergée de la roue à aube ou de la pale, le diamètre D de l’agitateur et en particulier de la roue, la vitesse N de rotation de la roue. L’utilisateur peut ainsi calculer, en fonction de ces paramètres, des valeurs représentatives de la turbulence de l’écoulement, et en particulier la longueur de Kolmogorov LK, telle que donnée par les équations (I), (II) et (III). Dans un exemple de réalisation du système fluidique (1), la vitesse de rotation de l’agitateur (7) est susceptible d’être commandée à 500 rpm (rotations par minute) par exemple, le diamètre d’une roue à aube ou de la pale est de 10,8 cm et le volume de milieu liquide contenu par le récipient (4) est de 400 mL. Le nombre de puissance N P mesuré de la roue à aube ou de la pale dans le milieu liquide (5), par la formule (III), est sensiblement égal à 3,2. L’énergie dissipée par unité de masse ε, calculée, par la formule (II), est égale à 6,80.10 -1 J.kg -1 . La longueur de Kolmogorov L K calculée par la formule (I) est ainsi égale à 11,0 µm. De manière générale, pour une production de vésicules extracellulaires le système fluidique est piloté en fonction d’au moins un paramètre du niveau d’agitation de l’agitateur (7) et un paramètre de durée de production. Ces deux paramètres de configuration déterminent un rendement de production de vésicules extracellulaires (EV) et sont généralement propres aux types cellulaires des cellules productrices (6). La méthode de calibration selon l’invention vise à identifier une gamme opératoire de production optimale dépendante d’une perte d’imperméabilité des cellules productrices (6). Protocole de production des vésicules extracellulaires (EV) Les vésicules extracellulaires (EV) sont produites dans un récipient (4) contenant un milieu liquide (5), par exemple sans sérum, des cellules productrices (6) en suspension. Le milieu utilisé avant la production pour la culture des cellules productrices (6) comprenant du sérum, on lave trois à quatre fois le récipient (4) avec du milieu liquide (5) DMEM sans sérum, chaque lavage correspondant par exemple à un volume d’environ 400 mL. On commande ensuite l’agitation du milieu liquide (5) par l’agitateur (7) de manière à entraîner un écoulement turbulent dans le récipient (4). La production de vésicules extracellulaires (EV) peut être mesurée pendant la production. A cet effet, l’agitation peut être continue, intermittente, croissante ou décroissante. On laisse sédimenter les cellules productrices (6) au fond du récipient (4), puis on prélève un échantillon de milieu liquide (5) comprenant des vésicules extracellulaires EV. On réalise une centrifugation de l’échantillon à 2000 G pendant 10 minutes, de manière à éliminer les débris cellulaires. Le surnageant est analysé par une méthode de suivi individuel de particules de manière à compter le nombre de vésicules extracellulaires (EV) et d’en déduire la concentration en vésicules extracellulaires (EV) des échantillons. On peut vérifier que la concentration en vésicules extracellulaires (EV) au début de l’agitation est proche de zéro ou négligeable. Les vésicules extracellulaires (EV) produites peuvent également être observées et/ou comptées par cryo-microscopie électronique à transmission. A cet effet, une goutte de 2,7 µL de solution comprenant des vésicules extracellulaires (EV) est déposée sur une grille adaptée à la cryo-microscopie, puis plongée dans l’éthane liquide, entraînant une congélation quasi-instantanée de ladite goutte, évitant la formation de cristaux de glace. La grille supportant les vésicules extracellulaires (EV) est introduite dans le microscope et les vésicules extracellulaires (EV) sont observées à une température de l’ordre de -170°C. Séparation des vésicules extracellulaires Les vésicules extracellulaires (EV) produites dans le récipient (4) sont susceptibles d’être extraites du récipient (4) par la sortie (9) du récipient (4), suspendues dans du milieu liquide (5). Un filtre (18) peut être agencé à la sortie (9) de manière à filtrer les cellules productrices (6) en suspension et les débris cellulaires lors de l’extraction de vésicules extracellulaires (EV) du récipient (4). Une connectique (13) est fluidiquement reliée à la sortie (9), permettant le transport du milieu liquide (5) comprenant les vésicules extracellulaires (EV) produites. Le système fluidique (1) peut comprendre un séparateur (15) de vésicules extracellulaires (EV). Le séparateur (15) comprend une entrée du séparateur (10), dans laquelle le milieu liquide (5) comprenant des vésicules extracellulaires (EV) issu du récipient (4) peut être acheminé de manière directe ou indirecte. Le séparateur (15) peut également comprendre une première sortie (11) du séparateur, par laquelle le milieu liquide (5) est susceptible de sortir du séparateur (15) avec une concentration en vésicules extracellulaires (EV) plus petite qu’en entrée (10) du séparateur (15), voire sensiblement nulle. Le séparateur (15) peut également comprendre une deuxième sortie (12) du séparateur (15), par laquelle le milieu liquide (5) est susceptible de sortir du séparateur (15) avec une concentration en vésicules extracellulaires (EV) plus élevée qu’en entrée (10) du séparateur (15). De manière générale, le séparateur (15) de vésicules extracellulaires (EV) peut être relié fluidiquement au récipient (4) de manière à être susceptible de réintroduire un milieu liquide (5) appauvri en vésicules (EV) dans le récipient (4), par exemple par l’entrée (8) du récipient (4). Ainsi, la production et/ou l’extraction de vésicules extracellulaires (EV) peu(ven)t être réalisée(s) de manière continue, à volume de milieu liquide (5) sensiblement constant dans le récipient (4). Selon un mode de réalisation alternatif, le système fluidique ne comprend pas de séparateur (15) de vésicules extracellulaires (EV) ou le système fluidique comprend un séparateur (15) de vésicules extracellulaires (EV) pouvant être relié fluidiquement ou non, par exemple par l’intermédiaire d’un moyen de fermeture dudit séparateur (15), au récipient (4). Ainsi, la production et/ou l’extraction de vésicules extracellulaires (EV) peu(ven)t être réalisée(s) de manière discontinue ou continue en fonction de l’ouverture ou fermeture du moyen de fermeture disposé en amont du séparateur (15). Dans le cas d’un fonctionnement en discontinu, le récipient contenant les cellules productrices est agité et la durée de production est choisie de préférence pour un temps supérieur à 20 minutes. Le liquide peut ensuite être extrait du récipient, et peut être soumis à une ou plusieurs étapes de purification ultérieures, pour notamment séparer les vésicules des cellules productrices. Cette séparation peut être réalisée au moyen de techniques connues de l’homme de l’art, par exemple et pris de façon non limitative, par des techniques acoustiques, des méthodes de filtration telle la séparation par filtration tangentielle, l’utilisation de filtres rotatifs ou des combinaisons quelconques de moyens de séparation. Dans le cas d’un fonctionnement en continu et selon un mode de réalisation préféré, le système de séparation est interne au récipient, les vésicules sont séparées progressivement dans un sous-compartiment du récipient. Divers moyens techniques sont connus de l’homme de l’art pour réaliser ce type de séparation, par exemple et de façon non limitative, l’utilisation de filtres rotatifs, ou encore de moyens acoustiques, ou des combinaisons quelconques de moyens de séparation. Selon un autre mode de réalisation, le système de séparation entre cellules et vésicules peut faire intervenir un circuit fluidique conçu pour faire circuler le milieu avec les cellules productrices et les vésicules entre le récipient d’une part et un système de séparation extérieur au récipient d’autre part. Ce système de séparation extérieur au récipient peut faire intervenir des techniques connues de l’homme de l’art, par exemple, et de façon non-limitative, de la filtration tangentielle, ou de la séparation acoustique, ou encore des combinaisons quelconques de moyens de séparation connus. A la sortie du système de séparation, le liquide appauvri en vésicules est réinjecté dans le récipient, de façon à ce que la production de vésicules par les cellules productrices puisse continuer dans le récipient. Dans l’exemple de réalisation d’un système fluidique (1) illustré dans la , le milieu liquide (5) peut être extrait du récipient (4) par une première pompe (16), via une connectique (13), de manière à transporter le milieu liquide (5) dans un collecteur (19). Une autre première pompe (16’) permet d’acheminer le milieu liquide (5) contenu dans le collecteur (19) à l’entrée (10) du séparateur (15), via une autre connectique. La première sortie (11) du séparateur (15) est reliée au récipient (4) via une connectique, de manière à réintroduire du milieu liquide (5) appauvri en vésicules extracellulaires (EV) dans le récipient (4). La deuxième sortie (12) du séparateur (15) est reliée au collecteur (19) via une connectique, de manière à enrichir le milieu liquide (5) contenu dans le collecteur (19) en vésicules extracellulaires (EV). Dans une variante, l’entrée (10) du séparateur (15) peut être directement reliée à la sortie (9) du récipient (4) (ou par l’intermédiaire d’une première pompe (16)). La première sortie (11) du séparateur (15) est reliée au récipient (4) et la deuxième sortie (12) du séparateur (15) est reliée au collecteur (19). Plusieurs séparateurs peuvent également être disposés en série pour faire varier le degré de séparation en vésicules extracellulaires (EV) dans le milieu liquide (5), et/ou en parallèle pour adapter le débit de milieu liquide (5) dans chaque séparateur (15) au débit d’une première pompe (16). Principe d’optimisation de production par identification d’une gamme opératoire dépendante d’une perte d’imperméabilité des cellules productrices Mesure d’imperméabilité Une cellule normale a besoin d'une perméabilité membranaire sélective de manière à laisser entrer certains composés nécessaires à la cellule et à en éjecter d’autres, notamment maintenir une osmolarité en libérant certains ions à l'exclusion d'autres. Dans la présente invention, on considère qu’une cellule est imperméable si la perméabilité membranaire sélective est maintenue. La mesure d’imperméabilité mise en œuvre dans le procédé de calibration selon l’invention consiste à estimer un ratio de perte d’imperméabilité (RPI) des cellules productrices (6) dépendant d’un nombre de cellules productrices imperméables Nn d’une production de vésicules extracellulaires par rapport au nombre de cellules productrices imperméables correspondant aux conditions initiales préalables à ladite production N1. Le suivi de ce ratio (RPI) consiste par exemple à calculer la formule RPI=Nn/N1 pour chaque production et permet de détecter une plage de production optimale. Au sens de la description, un niveau d’imperméabilité cellulaire élevé correspond à un ratio proche de 100%, tandis qu’un niveau d’imperméabilité cellulaire bas correspond à un ratio proche de 0%. Pour les productions de vésicules, de façon très étonnante et inhabituelle, que ce soit en en cours de production, ou encore en fin de production, on a identifié qu’il est très avantageux de ne pas s’intéresser au nombre de cellules imperméables rapporté au nombre de cellules totales d’un même échantillon et tel que mesuré sur un prélèvement unique ou une mesure continue ou discontinue d’un élément unique de milieu. On a déterminé qu’il est critique de mettre en relation le nombre de vésicules produites d’une part, et le rapport entre le nombre de cellules productrices imperméables à un moment T en cours de production, rapporté au nombre de cellules imperméables en début de la production. La mesure de ce ratio est particulièrement avantageuse pour les productions de vésicules extracellulaires sous l’action de contraintes mécaniques par agitation turbulente, car elle permet d’identifier la phase du procédé de production où l’on observe le processus de baisse du nombre de cellules productrices imperméables, indiquant un processus d’altération de la porosité membranaire. La mesure de l’imperméabilité membranaire couplée au contrôle du ratio du nombre de cellules imperméables rapporté au nombre de cellules imperméables initial a pour avantage d’identifier au moins la limite inférieure, et de préférence à la fois la limite inférieure et la limite supérieure, d’une plage optimale de niveau d’agitation pour une production de vésicules extracellulaires. En outre, la mesure d’imperméabilité est avantageuse, car celle-ci est de bas coût, facile à mettre en œuvre et assure une mesure de comptage unitaire du nombre cellules productrices de manière à pouvoir observer l’évolution du nombre de cellules productrices imperméables durant une production de vésicules extracellulaires. La mesure d’imperméabilité des cellules peut être opérée en continu de manière automatisée selon un rythme d’échantillonnage par un moyen de mesure intégrant le système fluidique ou bien manuellement par un opérateur par prélèvement d’échantillon et de moyens de mesure appropriés. Les moyens de mesure sont aptes à effectuer des mesures en continu selon un pas d’échantillonnage prédéterminé, pouvant être compris entre une minute à plusieurs heures par exemple, en fonction du protocole de contrôle, de préférence une minute, 10 minutes, 15 minutes, 30 minutes, 45 minutes, ou bien encore 1 heure, ou 2 heures. Par exemple, la mesure d’imperméabilité peut reposer sur le comptage du nombre de cellules viables, cette mesure consistant à détecter une porosité non sélective de la membrane d’une cellule. On connait des composés qui sont capables d’entrer dans une cellule que si la membrane cellulaire a perdu sa perméabilité sélective, par exemple le bleu trypan. A l’aide de ce genre de composés mis en présence des cellules en solution, la mesure du nombre de cellules viables par unité de volume peut se déterminer l’absence de ces composés à l’intérieur de la cellule. Ce comptage sur un échantillon prélevé de l’ordre de 100 microlitres peut se faire en quelques minutes avec un appareil de table, comme par exemple le NucleoCounter® (NC-200™ commercialisé par l’entreprise Chemometec). Selon cette technique non limitative, l’échantillon prélevé (après éventuellement ajout de certains réactifs) est introduit dans une cassette jetable contenant du DAPI et de l’Acridine Orange, ladite cassette étant ensuite mise en place dans l’appareil. Un fichier est enfin enregistré automatiquement sur ordinateur contenant les données suivantes non limitatives : estimation du nombre de cellules viables par millilitre, et barre d’erreur, estimation du nombre de cellules non viables par millilitre, barre d’erreur, estimation de débris, etc. D’autres techniques de mesure d’imperméabilité sont connues de l’homme du métier, dont certaines intégrées au système fluidique lui-même et lequel est apte à exploiter automatiquement en temps réel ces données selon un rythme d’échantillonnage de manière continue. Les données d’imperméabilité peuvent être enregistrées en mémoire de moyens de configuration de production d’une station de pilotage à des fins de calibration et/ou de pilotage d’une production de vésicules extracellulaires. L’homme du métier de par ses connaissances générales sait adapter la technique de mesure d’imperméabilité afin de calculer et de comparer différents niveaux d’imperméabilité représentatifs d’un ratio de perte d’imperméabilité. Ce ratio exprimé en pourcentage ou par une variable représentative d’une grandeur physique mesurable, dépend d’un nombre de cellules imperméables d’une production de vésicules extracellulaires par rapport au nombre correspondant aux conditions préalables à ladite production, et est utilisé pour mettre œuvre le procédé de calibration selon l’invention. Préférentiellement, la mesure d’imperméabilité mise en œuvre pour le procédé de calibration consiste à calculer unitairement le nombre de cellules imperméables d’une production de vésicules extracellulaires rapporté au nombre de cellules imperméables correspondant aux conditions préalables à ladite production. Par exemple, une technique de mesure d’imperméabilité standard pour une mesure d’altération de perméabilité est la technique de mesure appelée en anglais « Dye exclusion » où une cellule saine ne laisse pas entrer tous les composants en présence, et en particulier exclut l’entrée de certains colorants à l'intérieur de la cellule de sorte à maintenir les colorants dans le milieu extra-cellulaire. Une autre méthode proche prévoit l’utilisation de deux colorants, un adapté pour pénétrer sans problème dans les cellules normales de façon à marquer toutes les cellules (par exemple l’acridine orange (« cell perméable ») ou le DAPI (partial cell permeability) , et un autre colorant adapté pour ne rentrer que dans une cellule avec perméabilité altérée (par exemple le bleu de Trypan). On peut citer par exemple l’article des auteurs Simon Johnson, et a l. (Simon Johnson, Vy Nguyen, David Coder, Assessment of Cell Viability , 2013, CurrentProtocols), décrivant des alternatives classiques de colorants. On connait également des méthodes par cytométrie de flux, ou par imagerie automatisée, telle le NucleoCounter, ou par microscopie in-situ visant le milieu liquide du système fluidique adaptée pour détecter des altérations de forme sans usage de colorant, ou bien encore par microscopie automatisée travaillant sur un flux du milieu liquide extrait du récipient de façon continue selon un rythme d’échantillonnage. Alternativement, une autre technique de mesure d’imperméabilité peut être le suivi des propriétés diélectriques des cellules productrices. Le principe repose sur les propriétés capacitives au sens électrique d’une cellule. Cette technique consiste à mesurer une variable représentative d’un changement de permittivité du milieu liquide par balayage en fréquence. On peut citer la publication « A novel approach for using Dielectric Spectroscopy to Predict Viable Cell Volume (VCV) in early Process Development », C. Justice et. al, 2011 , ELSEVIER , décrivant la mise en œuvre d’une telle méthode. Alternativement, une autre technique repose sur la détection dans le milieu liquide de protéines qui sont normalement maintenues dans la cellule. Le dosage d’activité enzymatique est une méthode possible et peut être mise en œuvre par le kit ToxiLight TM commercialisé par l’entreprise Fonza par exemple. Enfin, une autre méthode alternative peut être associée à la détection d’un processus d’apoptose. La membrane cellulaire externe présente des propriétés similaires à une polarité, à savoir que la composition lipidique de la face interne est différente de la composition lipidique de la face externe. En cas d’apoptose, la membrane cellulaire finit par perdre cette polarité, et certains lipides qui sont de façon générale peu ou pas exposés vers l’extérieur deviennent détectables sur la surface externe de la cellule. Mesure de concentration des vésicules extracellulaires Pour détecter et mesurer la concentration de ces vésicules, il existe un certain nombre de techniques nécessitant des moyens de mesure spécifiques. A ce titre le « NTA » (Nanoparticle Tracking Analysis, par exemple l’appareil NanoSight NS300 commercialisé par l’entreprise Malvern Panalytical) est un appareil qui permet de mesurer la concentration de ces vésicules dans un liquide dans une gamme approximative de taille de 10 nanomètres à 1000 nanomètres. D’autres techniques de mesure de concentration de cellules imperméables sont connues de l’homme du métier qui saura choisir la technique adaptée au système fluidique utilisé pour mettre en place un suivi d’un rendement de production. Eventuellement, on envisage que la mesure de concentration de cellules imperméables puisse être réalisée en mode de suivi continu par des moyens de mesure intégrés au système. Paramètre de pilotage d’une production Le système fluidique (1) est piloté lors de la mise en œuvre du procédé de calibration en fonction d’au moins le paramètre du niveau d’agitation de l’agitateur (7) et un paramètre de durée de production. Ces deux paramètres de configuration déterminent un rendement de production de vésicules extracellulaires et les valeurs optimales sont spécifiques au type cellulaire des cellules productrices. Le paramètre du niveau d’agitation peut être la vitesse de rotation d’un agitateur, un débit d’injection en mélangeur statique, ou une fréquence de secouage par exemple. Ce paramètre de niveau d’agitation est contrôlé par les moyens de pilotage du système fluidique. Le contrôle du niveau d’agitation peut être dépendant d’autres paramètres selon le système utilisé. Le procédé de calibration selon l’invention prévoit l’enregistrement de l’ensemble des paramètres pilotables et susceptibles d’agir sur le niveau d’agitation de la production de vésicules extracellulaires du système fluidique lors de la détection de niveaux d’imperméabilité recherchés pour identifier la plage optimale. On précise que le niveau d’agitation doit être interprété comme un taux d’injection d’énergie au sens général, lequel taux dépend notamment de la vitesse de l’agitateur, du type d’agitateur ainsi que la forme et les dimensions du récipient du système fluidique. Par ailleurs, lorsque le paramètre de niveau d’agitation est une vitesse de rotation d’un actionneur du système fluidique, une limite inférieure du niveau d’agitation correspond à des valeurs basses de vitesse de rotation d’une plage d’agitation. Une limite supérieure correspond à une valeur élevée de vitesse de rotation d’une plage d’agitation. Inversement, lorsque le paramètre de niveau d’agitation correspond à une longueur de Kolmogorov L k , une limite inférieure du niveau d’agitation correspond à une valeur haute L k d’une plage d’agitation. Une limite supérieure du niveau d’agitation correspond à une valeur basse Lk d’une plage d’agitation. Dans un exemple de réalisation du système fluidique (1) où l’agitateur comprend une roue à aube, la vitesse de rotation de l’agitateur (7) est pilotable dans une plage d’agitation comprise généralement entre 0 rpm et 800 rpm. De préférence la plage d’agitation peut être comprise entre 30 rpm et 500 rpm, de préférence comprise 40 rpm et 400 rpm, de préférence entre 200 rpm et 500 rpm et de préférence entre 250 rpm et 400 rpm. Le procédé de calibration selon l’invention vise à établir une plage optimale du niveau d’agitation dans la plage opérable par le système fluidique. Le paramètre de durée de production est essentiel et sera établi à des valeurs spécifiquement contrôlées lors des phases de production de vésicules extracellulaires du procédé de calibration. A titre d’exemple non limitatif, les durées de production prédéterminées peuvent être comprises entre des valeurs d’environ 20 minutes à environ 6 heures, encore plus préférentiellement d’environ 1 heure à environ 6 heures, encore plus préférentiellement environ 2 heures à environ 3 heures, ou bien encore plus préférentiellement être égale à environ 2 heures ou alternativement environ 3 heures ou alternativement environ 4 heures. Le procédé de calibration selon l’invention vise à détecter une perte d’imperméabilité caractéristique d’un rendement de production de vésicules extracellulaires optimal spécifiquement dans ces plages de durée de production afin d’établir une plage d’agitation optimale, pour une ou chacune des durées de production spécifiques mentionnées précédemment et un type cellulaire donné. Description du p rocédé d e calibration permettant la détermination d’une plage optimale d’agitation En on décrit maintenant un mode de réalisation préférentiel du procédé de calibration selon l’invention consistant à identifier, indépendamment du type de cellule et du modèle de système fluidique, une plage optimale des paramètres d’agitation à partir de la détection d’une perte d’imperméabilité des cellules productrices, où ladite perte est caractéristique d’un rendement de production de vésicules optimal. Le procédé de calibration s’applique de préférence à des cellules productrices en suspension du fait d’un comportement vésiculaire plus stable sous l’action de contraintes fluidiques. Toutefois, on n’écarte pas la possibilité que le procédé de calibration s’applique aussi à des cellules productrices adhérentes à des microporteurs. Le procédé de calibration consiste à rechercher au moins la limite inférieure, et de préférence à la fois la limite inférieure et la limite supérieure, d’une plage d’agitation optimale pour un type cellulaire donné et une durée de production choisie. Pour chaque limite de la plage d’agitation, le procédé de calibration peut prévoir une ou plusieurs productions de vésicules extracellulaires nécessaires à la détection d’un niveau de perte d’imperméabilité cellulaire caractéristique d’une limite de la plage optimale. Le procédé de calibration comporte une première phase de recherche de la limite inférieure (Lim1) de la plage d’agitation comprenant les étapes (E1), (E2) et (E3) répétibles jusqu’à la détection (CD1) du niveau de perte d’imperméabilité recherché en fin d’une production, et ensuite optionnellement une deuxième phase de recherche de la limite supérieure (Lim2) de la plage d’agitation comprenant les étapes (E4), (E5) et (E6) répétibles jusqu’à la détection (CD2) du niveau de perte d’imperméabilité recherché en fin d’une production. Selon une variante de recherche telle que décrite par la , les valeurs d’agitation de chaque production de vésicules extracellulaires (E2) et (E5), sont choisies successivement dans la plage opérable du système fluidique conformément à une méthodologie de type dichotomie. L’homme du métier de par ses connaissances générales saura appliquer d’autres méthodologies de recherche de la valeur d’agitation afin de détecter le niveau de perte d’imperméabilité recherché en fin de production. Etape E1 : D étermination d’un premier niveau d’imperméabilité initial de référence avant une production de vésicules extracellulaires (EV) Plus précisément, le procédé de calibration comporte une première étape (E1) de détermination d’un niveau d’imperméabilité cellulaire initial (V1) à partir duquel on caractérisera une perte d’imperméabilité. Le niveau (V1) dépend d’un nombre initial (N1) de cellules productrices préalable à une production de vésicules extracellulaires (EV). De manière générale, le niveau (V1) dépend d’une grandeur physique mesurée qui est spécifique à la technique de mesure d’imperméabilité dont la valeur dépend du nombre initial de cellules productrices. Préférentiellement lors de cette étape (E1), on calcule unitairement le nombre de cellules imperméables afin d’établir la référence permettant d’identifier la perte d’imperméabilité. Pour la mise en œuvre du procédé de calibration, on exploite plusieurs niveaux d’imperméabilité (V1), (V2) et (V3) comme niveaux de référence prédéterminés pour identifier une perte d’imperméabilité caractéristique d’une plage de production de vésicules extracellulaires de rendement optimal. Le niveau d’imperméabilité initial (V1) peut dans un mode de réalisation se déterminer sur un échantillon de cellules non soumises à une action d’agitation. Toutefois, selon un mode préféré du procédé de calibration, la mesure d’imperméabilité initiale (V1) est exécutée après une phase d’agitation « douce » à des fins de contrôle. Cette phase préalable à la phase de production est exécutée durant une durée prédéterminée Tinit, par exemple comprise entre 5 minutes et 6 heures, encore plus préférentiellement d’environ 1 heure à environ 6 heures, encore plus préférentiellement environ 2 heures à environ 3 heures, ou bien encore plus préférentiellement être égale à environ 2 heures ou alternativement environ 3 heures ou alternativement environ 4 heures. Dans un mode préféré, il n’est pas forcément nécessaire de réaliser une étape longue (à savoir plus que quelques minutes) pour la détermination du niveau d’imperméabilité initiale, s’il a auparavant été établi que l’agitation douce utilisée ne modifie pas significativement le niveau d’imperméabilité. Dans un mode préféré de réalisation, on peut utiliser aussi un petit échantillon de cellules mis dans un récipient de petite taille adaptée au volume de l’échantillon et maintenu sous agitation douce. On peut alors procéder au contrôle que l’agitation douce sur ce petit échantillon n’a pas significativement modifié le niveau d’imperméabilité des cellules au bout d’un temps T. De plus, cette phase préalable à la phase de production est exécutée à une valeur d’agitation négligeable ou très inférieure à une valeur d’agitation de production (par exemple, pour un agitateur rotatif tel que décrit en à une valeur de régime de rotation des pâles comprise entre 10 rpm et 50 rpm pour les durées prédéterminées (Tinit) mentionnées précédemment. Ces paramètres de contrôle de la phase préalable (E1) sont choisis en fonction de la configuration de production adaptée pour déterminer le niveau d’imperméabilité initial (V1) de manière à ne provoquer aucune altération membranaire des cellules productrices. Le niveau d’imperméabilité initial (V1) est déterminé au moyen du système fluidique (1) de la , soit à partir du volume de milieu liquide (5) contenant les cellules productrices présent dans le récipient (4), soit à partir d’un volume de milieu liquide d’une même culture de cellules productrices destinée à servir pour une ou plusieurs productions de vésicules extracellulaires. Comme nous le verrons dans la suite de la description, le procédé de calibration prévoit au moins une, et très certainement, plusieurs phases de production de vésicules extracellulaires nécessaires à la recherche de chacune des limites (Lim1), (Lim2) de la plage d’agitation optimale. Le niveau d’imperméabilité cellulaire initial (V1) de chaque production peut être déterminé à partir d’un unique et même milieu de culture approvisionnant toutes les productions nécessaires au procédé de calibration, dans une méthodologie par exemple dans laquelle les productions de vésicules extracellulaires sont réalisées simultanément sur plusieurs systèmes fluidiques pour accélérer le processus de recherche. En variante, pour chaque production de vésicules extracellulaires nécessaire à l’identification des limites de la plage d’agitation optimale, le procédé de calibration comporte une étape de détermination du niveau d’imperméabilité initial (V1) des cellules productrices fraîches à chaque production. Etape E2 : P roduction PR1 de vésicules extracellulaires d’une durée T1 Ensuite, le procédé comporte à partir du même milieu liquide de cellules productrice pour lequel on a déterminé le niveau d’imperméabilité initial (V1), le pilotage (E2) d’au moins une première production (PR1) de vésicules extracellulaires (EV) configurée à une première valeur d’agitation (XCTL1) et à une première durée prédéterminée (T1). Selon le procédé de calibration, la valeur d’agitation (XCTL1) d’une production (E2) reste constante durant toute la durée de production (T1). La première valeur d’agitation (XCTL1) de la production (E2) peut être configurée à différentes valeurs au cours du processus de recherche de la limite inférieure (Lim1). Selon une variante de méthodologie de recherche par dichotomie, la première valeur du niveau d’agitation (XCTL1) est choisie à la valeur d’agitation maximale opérable par le système fluidique, ou de manière générale à une valeur élevée de la plage opérable. Une première plage de recherche de valeur d’agitation est alors définie par la borne minimale et la borne maximale opérable par le système fluidique. La première durée prédéterminée (T1) est par exemple comprise entre 20 minutes et 6 heures, encore plus préférentiellement d’environ 1 heure à environ 6 heures, encore plus préférentiellement environ 2 heures à environ 3 heures, ou bien encore plus préférentiellement pour être égale à environ 2 heures ou alternativement environ 3 heures ou alternativement environ 4 heures. Comme cela est bien connu de l’homme du métier, certains types cellulaires sont plus ou moins sensibles à l’action des contraintes fluidiques. On envisage donc que la durée (T1) est fonction du type cellulaire. Etape E 3 : M esure d u niveau d ’imperméabilité Le procédé de calibration comporte ensuite au moins une première mesure (E3) d’imperméabilité cellulaire (Vt) des cellules de la première production (PR1). La mesure d’imperméabilité est exécutée de manière continue en cours de la production (PR1), ou uniquement en fin de la production (PR1) lorsque la durée (T1) est écoulée. Selon l’invention, chaque mesure d’imperméabilité (E3) d’une production de vésicules extracellulaires consiste à calculer un niveau d’imperméabilité (Vt) égal à un ratio de perte d’imperméabilité (RPI) dépendant du nombre de cellules productrices imperméables de chaque dite production (E3) par rapport au nombre initial (N1) de cellules imperméables correspondant aux conditions préalables à ladite production (E3). Plus précisément, le ratio de perte d’imperméabilité (RPI) est égal à la relation suivante : RPI=100*Nn/N1, où Nn est le nombre de cellules productrices imperméable en fin d’une production, et N1 est le nombre initial de cellules productrices imperméables préalable à ladite production. On précise que le premier niveau initial (V1) est un ratio initial correspondant à un niveau d’imperméabilité de 100%, où V1=100*N1/N1. Le procédé de calibration comprend une étape de comparaison entre le niveau d’imperméabilité (Vt) en fin d’étape de production (E2), et un deuxième niveau d’imperméabilité (V2) dont la valeur est strictement inférieure au premier niveau (V1). Le deuxième niveau (V2) est spécifiquement choisi pour délimiter une plage de production de vésicules extracellulaires optimale en terme de rendement et où V2=100*N2/N1. En cas de détection que le niveau d’imperméabilité (Vt) obtenu en fin de l’étape de production (E2) diffère du niveau d’imperméabilité (V2) prédéterminé, qu’il soit supérieur ou inférieur, le procédé de calibration prévoit de répéter en boucle au moins les étapes de production de vésicules extracellulaires (E2) et de mesure d’imperméabilité (E3) avec un nouvel échantillon de cellules fraîches, c’est-à-dire n’ayant pas été soumises à une agitation de production, mais aussi l’étape (E1) si la détermination d’un niveau initial (V1) est une nouvelle fois nécessaire pour chaque production comme c’est le cas en . A chaque boucle de recherche, la valeur d’agitation (XCTL1) est modifiée à une nouvelle valeur d’agitation spécifique à chaque nouvelle production, jusqu’à la détection d’un niveau d’imperméabilité (Vt) environ égal au niveau (V2). Par exemple, selon la méthode de recherche dichotomique, à chaque boucle de recherche de la valeur d’agitation, si le ratio (RPI) est inférieur au niveau (V2), la valeur du niveau d’agitation (XCTL1) pour la production de vésicules extracellulaires de la boucle de recherche suivante est configurée à un niveau d’agitation inférieur. Si le ratio de perte d’imperméabilité (RPI) est supérieur au niveau (V2), le niveau d’agitation (XCTL1) pour la production de vésicules extracellulaires de la boucle de recherche suivante est augmenté. Le niveau d’agitation de la boucle suivante est choisi à une valeur intermédiaire, de préférence la valeur médiane de la plage de recherche de la boucle précédente. Les boucles de recherche sont répétées ainsi de suite jusqu’à ce que le niveau d’imperméabilité mesuré d’une étape de mesure (E3) soit environ égal au niveau d’imperméabilité (V2) prédéterminé qui est recherché. Enfin, la phase de recherche de la limite inférieure (Lim1) se termine en cas de détection, évènement illustré par la référence (CD1) en , que le niveau d’imperméabilité (Vt) obtenu en fin de l’étape de production (E2) est sensiblement égal au niveau d’imperméabilité (V2), c’est-à-dire avec une marge sur le ratio qui est dépendante de la marge d’erreur caractéristique du type de mesure réalisée telle que définie dans la présente demande. Dans ce cas, le procédé comporte l’enregistrement, dans une mémoire électronique du système fluidique ou la station de pilotage du système fluidique, d’une valeur du niveau d’agitation (XCTL1) qui a été configurée lors de l’étape de production (E2) de la dernière boucle de recherche. La limite inférieure (Lim1) de la plage d’agitation optimale est égale à la valeur du niveau d’agitation (XCTL1). On rappelle que la plage d’agitation (PA1) est spécifique au moins à un type cellulaire (CEL1) et à une durée de production donnée (T1). Les figures 3A et 3B sont des graphiques représentant des valeurs du ratio de perte d’imperméabilité (Vt) en fin de production tracées en trait en pointillé continu, sur l’axe des ordonnées de gauche, en fonction de valeurs configurables du niveau d’agitation (XCTL) pour la production de vésicules extracellulaires, sur l’axe des abscisses. Dans cet exemple, le ratio de perte imperméabilité (Vt) est égal à Nn/N1. La quantité de vésicules extracellulaires (QEV) est tracée en trait en pointillé discontinu dont les valeurs sont représentées sur l’axe des ordonnées de droite. Il s’agit de la quantité de vésicules extracellulaires produite pour chaque production d’une durée (T1) en fonction de la valeur d’agitation (XCTL). La quantité de vésicule (QEV) est une variable de rendement exprimée en nombre de vésicules extracellulaires par nombre de cellules initiales imperméables. Dans une première variante de plage d’agitation optimale (PA1), illustrée par la , le niveau d’imperméabilité (V2) est un ratio de perte d’imperméabilité (RPI) dont la valeur est égale ou inférieure à 95%, et à titre d’exemple est égale à 95%. Alternativement, (V2) peut être égal soit à 90%, soit à 85%. Cette valeur de perte d’imperméabilité membranaire des cellules productrices marque la limite inférieure (Lim1) d’un domaine d’agitation pour lequel une fraction de cellules productrices perd son imperméabilité ou n’est plus prise en compte dans les mesures, par exemple parce qu’elles demeurent fixées à la paroi du réacteur, mais ce qui évite encore dans ce domaine précis la présence excessive de débris cellulaires rendant difficile une collecte des vésicules extracellulaires dans le milieu liquide. Cette valeur de ratio de perte d’imperméabilité marque le déclenchement d’un processus d’altération de la porosité membranaire d’une fraction des cellules productrices qui toutefois n’empêche pas la collecte des vésicules après production. Le procédé de calibration prévoit ensuite, pour cette première variante de plage d’agitation, de rechercher la limite supérieure (Lim2) du domaine d’agitation correspondant à un niveau d’imperméabilité prédéterminé (V3) en fin de production de vésicules extracellulaires pouvant atteindre une valeur du ratio de perte d’imperméabilité d’environ 60% par exemple. Donc, le procédé prévoit en outre une deuxième phase de recherche de la limite supérieure (Lim2) exécutée par les étapes (E4), (E5) et (E6), puis finalement l’enregistrement (E7) des limites inférieure (Lim1) et supérieure (Lim2) de la plage d’agitation optimale (PA1). Dans une deuxième variante de plage d’agitation optimale (PA1), illustrée par la , le niveau d’imperméabilité (V2) est un ratio de perte d’imperméabilité dont la valeur vise un domaine de perte supérieure, pour des valeurs du ratio (RPI) égale ou inférieure à 70%, et à titre d’exemple (V2) peut être égale soit à 70% comme représenté en , soit à 35%, soit éventuellement jusqu’à une valeur de 25%. Cette deuxième variante vise à délimiter la plage d’agitation optimale où on accepte une perte du nombre de cellules productrices supérieures pour obtenir une quantité supérieure de vésicules extracellulaires. Pour cette deuxième variante de plage d’agitation, le procédé de calibration prévoit ensuite de rechercher la limite supérieure (Lim2) du domaine d’agitation correspondant à un niveau d’imperméabilité prédéterminé (V3) en fin de production de vésicules extracellulaires pouvant atteindre une valeur de ratio de 5% par exemple, voire 0%. Donc, le procédé prévoit en outre une deuxième phase de recherche de la limite supérieure (Lim2) exécutée par les étapes (E4), (E5) et (E6), puis finalement l’enregistrement (E7) des limites inférieure et supérieure (Lim1) et (Lim2) de la plage d’agitation optimale. On décrit maintenant la deuxième phase de recherche de la limite supérieure (Lim2) de la plage d’agitation durant laquelle le procédé comprend les étapes (E4), (E5) et (E6) répétibles jusqu’à la détection (CD2) du niveau de perte d’imperméabilité recherché en fin d’une production. Les étapes (E4), (E5) et (E6) s’exécutent similairement aux étapes (E1), (E2) et (E3) respectivement à la différence que le niveau d’imperméabilité recherché est le niveau prédéterminé (V3) de valeur strictement inférieure au niveau (V2). Par ailleurs, identiquement à la première phase de recherche, la deuxième valeur d’agitation (XCTL2) de chaque production de vésicules extracellulaires (E5) peut être modifiée successivement dans la plage opérable du système fluidique conformément à une méthodologie de type dichotomie. L’homme du métier de par ses connaissances générales saura appliquer d’autres méthodologies de recherche de la valeur d’agitation afin de détecter le niveau de perte d’imperméabilité recherché en fin de production. Etape E4 : Détermination d’un premier niveau d’imperméabilité initial de référence avant une production de vésicules extracellulaires (EV) Le procédé de calibration comporte l’étape (E4) de détermination du niveau initial d’imperméabilité d’une nouvelle culture de cellules productrices. Cette étape s’exécute identiquement à l’étape (E1). Elle est réalisée sur un milieu liquide de cellules productrices fraîches pour déterminer un nombre initial toujours référencé (N1) de cellules imperméables préalablement à une production de vésicules extracellulaires. Etape E 5 : Production PR2 de vésicules extracellulaires d’une durée T2 Ensuite, le procédé de calibration comporte à partir du même milieu liquide de cellules productrice pour lequel on a déterminé le niveau d’imperméabilité initial (V1), le pilotage (E5) d’une production de vésicules extracellulaires configurée à un deuxième niveau d’agitation (XCTL2) dont la valeur est supérieure à la valeur d’agitation (XCTL1), et à une durée (T2), de préférence égale à la durée (T1). Le niveau d’agitation (XCTL2) est supérieur car cette phase de recherche consiste à obtenir en fin de production un niveau d’imperméabilité inférieur (V3) par rapport au niveau (V2). Selon le procédé de calibration, la valeur d’agitation (XCTL2) d’une production (E5) reste constante durant toute la durée de production. La perte d’imperméabilité étant un processus essentiellement irréversible, si un niveau d’imperméabilité obtenu est proche de zéro alors la valeur à retenir pour le niveau d’agitation selon la présente invention est la plus faible valeur d’agitation (XCTL) pour laquelle on obtient un niveau d’imperméabilité proche de zéro. Selon la variante de méthodologie de recherche par dichotomie, la valeur d’agitation (XCTL2) est choisie à la valeur d’agitation maximale opérable par le système fluidique. Ainsi, pour cette deuxième phase de recherche, une première plage de recherche de valeur d’agitation est alors définie par la valeur (XCTL1) et la borne maximale opérable par le système fluidique. La durée prédéterminée (T2) est par exemple comprise entre 20 minutes et 6 heures, encore plus préférentiellement d’environ 1 heure à environ 6 heures, encore plus préférentiellement environ 2 heures à environ 3 heures, ou bien encore plus préférentiellement pour être égale à environ 2 heures ou alternativement environ 3 heures ou alternativement environ 4 heures. Comme cela est bien connu de l’homme du métier, certains types cellulaires sont plus ou moins sensibles à l’action des contraintes fluidiques. On envisage donc que la durée (T2) est fonction du type cellulaire. Etape E 6 : Mesure du niveau d’imperméabilité De nouveau, à la suite de la production de vésicules extracellulaires, le procédé de calibration comporte une mesure (E6) d’imperméabilité (Vt) des cellules de cette dernière production (E5). La mesure d’imperméabilité (E6) est exécutée de manière continue en cours de la production, ou uniquement en fin de la production lorsque la durée (T2) est écoulée. Selon l’invention, chaque mesure d’imperméabilité (E6) d’une production de vésicules extracellulaires consiste à calculer un niveau d’imperméabilité (Vt) égal à un ratio de perte d’imperméabilité (RPI) dépendant du nombre de cellules productrices imperméables de chaque dite production (E5) par rapport au nombre initial de cellules imperméables (N1) correspondant aux conditions préalables à ladite production (E5). Le procédé de calibration comprend une étape de comparaison entre le niveau d’imperméabilité (Vt) en fin d’étape de production (E5), et le troisième niveau d’imperméabilité (V3) dont la valeur est strictement inférieure au deuxième niveau (V2). Le troisième niveau (V3) est spécifiquement choisi pour délimiter la borne supérieure de la plage de production de vésicules extracellulaires optimale en terme de rendement et où V3=100*N3/N1. En cas de détection que le niveau d’imperméabilité (Vt) obtenu en fin de l’étape de production (E5) diffère du niveau d’imperméabilité (V3) prédéterminé, qu’il soit supérieur ou inférieur, le procédé de calibration prévoit de répéter en boucle au moins les étapes de production de vésicules extracellulaires (E5) et de mesure d’imperméabilité (E6), mais aussi l’étape (E4) si la détermination d’un niveau initial (V1) est une nouvelle fois nécessaire pour chaque production, avec de nouvelles valeurs d’agitation spécifiques à chaque production, jusqu’à la détection d’un niveau d’imperméabilité (Vt) environ égal au niveau (V3). Par exemple, selon la méthode de recherche dichotomique, à chaque boucle de recherche de la valeur d’agitation, si le ratio (RPI) est inférieur au niveau (V3), la valeur du niveau d’agitation (XCTL2) pour la production de vésicules extracellulaires de la boucle de recherche suivante est configurée à un niveau d’agitation inférieur. Si le ratio (RPI) est supérieur au niveau (V3), le niveau d’agitation (XCTL2) pour la production de vésicules extracellulaires de la boucle de recherche suivante est augmenté. Le niveau d’agitation de la boucle suivante est choisi à une valeur intermédiaire, de préférence la valeur médiane de la plage de recherche de la boucle précédente. Les boucles de recherche sont répétées ainsi de suite jusqu’à ce que le niveau d’imperméabilité mesuré d’une étape de mesure (E6) soit environ égal au niveau d’imperméabilité (V3) prédéterminé qui est recherché. Enfin, la phase de recherche de la limite supérieure (Lim2) se termine en cas de détection, évènement illustré par la référence (CD2) en , que le niveau d’imperméabilité (Vt) obtenu en fin de l’étape de production (E6) est sensiblement égal au niveau d’imperméabilité (V3), c’est-à-dire avec une marge sur le ratio de dépendante de la marge d’erreur caractéristique du type de mesure réalisée telle que définie dans la présente demande, ladite marge d’erreur étant typiquement comprise entre 0% et 35%, de préférence entre 5% et 30%. Pour la première variante de plage d’agitation optimale (PA1), illustrée par la , le niveau d’imperméabilité (V3) est un ratio de perte d’imperméabilité dont la valeur est égale à 60%, soit à 65%, soit à 70%. Cette valeur associée à la limite supérieure d’agitation empêche une trop forte présence de débris cellulaires et contaminants dans le milieu liquide. Pour la deuxième variante de plage d’agitation optimale (PA1), illustrée par la , le niveau d’imperméabilité (V3) est un ratio de perte d’imperméabilité dont la valeur est égale soit à 0%, soit de préférence à 5%. Cette dernière valeur indique la fin de la zone ayant le rendement optimal. Cette valeur augmente la présence de débris cellulaires et contaminants dans le milieu liquide mais permet d’obtenir des rendements de production supérieurs et garde cependant un intérêt d’utilisation pour certains usages malgré une plus forte présence de contaminants. Etape E 7 : Enregistrement plage optimale d’agitation Ensuite, le procédé de calibration comporte l’étape (E7) d’enregistrement, dans une mémoire électronique du système fluidique ou la station de pilotage du système fluidique, de la valeur du niveau d’agitation (XCTL1) qui a été configurée lors de l’étape de production (E2) qui a permis d’atteindre le niveau prédéterminé (V2) en fin de production de vésicules, ainsi que la valeur du niveau d’agitation (XCTL2) qui a été configurée lors de l’étape de production (E5) qui a permis d’atteindre le niveau prédéterminé (V3) en fin de production de vésicules. La limite inférieure (Lim1) de la plage d’agitation optimale (PA1) est égale à la valeur d’agitation (XCTL1) et la limite supérieure (Lim2) est égale à la valeur d’agitation (XCTL2). On rappelle que la plage d’agitation (PA1) est spécifique au moins à un type cellulaire (CEL1) et à la durée de production choisie pour (T1) et (T2) des phases de production respective (E2), (E5). Ces données sont enregistrées dans un fichier de configuration du système fluidique. Finalement, pour la première variante de plage d’agitation optimale (PA1) décrite en , le deuxième niveau d’imperméabilité (V2) et le troisième niveau d’imperméabilité (V3) délimitent une plage d’imperméabilité comprise entre 95% et 60% du ratio de perte d’imperméabilité. Alternativement, la plage d’agitation (PA1) est comprise entre 90% et 65% de ratio de perte d’imperméabilité, de préférence comprise entre 85% et 70%, avec une marge approximative dépendante de la marge d’erreur caractéristique du type de mesure réalisée telle que définie dans la présente demande. Pour ce domaine d’agitation les cellules productrices commencent à perdre leur fonction de sélection membranaire tout en n’étant pas totalement endommagées, ce qui évite encore dans ce domaine précis la présence d’un grand nombre de débris cellulaires et/ou de contaminants rendant difficile la tâche d’une collecte des vésicules extracellulaires dans le milieu liquide et/ou de leur purification. Cette plage de perte d’imperméabilité marque le déclenchement d’un processus d’altération rapide des cellules productrices identifié par une baisse du nombre de cellules productrices imperméable par rapport au nombre calculé dans les conditions initiales à la production. De plus, comme cela est illustré par la , les mesures de concentrations des vésicules extracellulaires (QEV) montrent que le rendement de production est particulièrement élevé. Dans la deuxième variante de plage d’agitation optimale (PA1) décrite en , le deuxième niveau d’imperméabilité (V2) et le troisième niveau d’imperméabilité (V3) délimitent une plage d’imperméabilité comprise entre 70% et 0% du ratio de perte d’imperméabilité. Alternativement, la plage d’imperméabilité est comprise entre 70% et 5%, 50% et 5%, 35% et 0%, de préférence comprise entre 25% et 5%, ou bien encore entre 15% et 5%, avec une marge approximative de quelques pourcents. Pour ces domaines de perte d’imperméabilité entre 70% et 5%, les rendements de productions de vésicules extracellulaires (QEV) sont maximaux comme cela est illustré par la . L’altération significative de la porosité membranaire peut entrainer la présence des protéines intracellulaires normalement maintenues captives dans les cellules productrices. Ces protéines vont se mélanger aux vésicules extracellulaires produites dans le liquide qui contient les cellules productrices. Cependant, pour ce domaine le taux d’impureté du milieu liquide peut être réduit par une méthode adaptée. On n’envisage que ce taux d’impureté reste acceptable et n’altère peu ou pas les effets thérapeutiques dans certains usages des vésicules extracellulaires. Au-delà de cette zone, les niveaux d’agitation trop élevé provoquent des contraintes fluidiques destructives des cellules productrices réduisant les rendements de production de vésicules extracellulaires (EV). Variantes du procédé de calibration Le procédé de calibration selon l’invention permet d’obtenir une plage d’agitation optimale spécifique à chaque type cellulaire et à chaque durée de production. Les durées de chaque production des étapes (E2) et (E5) du procédé de calibration sont égales ou cours d’un même processus de calibration. Toutefois, on n’écarte pas la possibilité de rechercher plusieurs plages d’agitation optimales pour des valeurs de durée de production différentes. On a observé des niveaux d’agitation optimaux plus faibles pour des durées de production plus longues. De même, le niveau d’agitation (XCTL1) et (XCTL2) de chaque production (E2) et (E5) est pilotée à une valeur constante durant toute la durée de la production respective. Dans une variante, les mesures d’imperméabilité (E3) et (E6) sont exécutées uniquement une fois que les étapes de production (E2) et (E5) sont terminées respectivement. Dans une autre variante, les mesures (E3) et (E6) sont opérées de manière continue durant les étapes de productions (E2) et (E5) respectivement. Par ailleurs, la décrit un procédé de calibration dans lequel la limite inférieure (Lim1) est recherchée par les étapes (E1), (E2) et (E3) préalablement à la recherche de la limite supérieure (Lim2) exécutée par les étapes (E4), (E5) et (E6) du procédé de calibration. On n’écarte pas la variante du procédé où la limite supérieure (Lim2) est recherchée avant la limite inférieure (Lim1), ou bien simultanément. Le procédé de calibration peut comporter une boucle de recherche (E2), (E3), ou plusieurs boucles de recherche (E2), (E3) avant de trouver la valeur (XCTL1) pour laquelle le niveau d’imperméabilité (Vt) est égal à (V2). De même, le procédé de calibration peut comporter une boucle de recherche (E5), (E6) ou plusieurs boucles de recherche avant de trouver la valeur (XCTL2) pour laquelle le niveau d’imperméabilité (Vt) est égal à (V3). En , on a décrit un mode de recherche des limites inférieure et supérieure par une approche de type dichotomie. D’autres modes de recherche sont applicables par l’homme du métier. R eprésentation du système fluidique et les moyens de configurations et pilotage de la production On décrit maintenant un système et procédé de production ex vivo de vésicules extracellulaires au moyen d’un système fluidique de production de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices (6). Un tel système fluidique (1) a déjà été décrit en et préférentiellement le système est spécialement configuré par des paramètres de production obtenus par le procédé de calibration selon l’invention pour exécuter le procédé de production de vésicules extracellulaires. En , en plus du système fluidique (1) représenté cette fois brièvement, on décrit les moyens de pilotage (20) dudit système (1) permettant une production optimale à grande échelle. Ces moyens de pilotage (20) comprennent des moyens de pilotage (22) d’une production en fonction de paramètres de configuration comprenant au moins un niveau d’agitation (XCTL) et une durée de production (T), des moyens de mesure (23) du niveau d’imperméabilité cellulaire (Vt) des cellules productrices en cours de production ou après une production, et préférentiellement des moyens de configuration (21) d’une production de vésicules extracellulaires enregistrant une ou plusieurs configurations de production prédéterminées (PA1), (PA2) et (PA3), où chaque configuration de production est définie par une plage d’agitation optimale et une durée prédéterminée. Chaque configuration de production est spécifique à une durée de production et à un type de cellules productrices. Les moyens de pilotage (20) sont configurés pour sélectionner la valeur d’agitation d’une production comprise dans une desdites plages d’agitation pour exécuter une production de vésicules extracellulaires. Plus précisément, les moyens de configuration (21) peuvent être des fichiers de configuration enregistrés en mémoire d’un programme de production logiciel et les moyens de pilotage (22) peuvent comprendre un programme de pilotage, automatique ou manuel, des paramètres de configuration du niveau d’agitation (XCTL) et de durée de production (T) et de la mesure de niveau d’imperméabilité cellulaire (Vt) afin de contrôler le niveau d’imperméabilité des cellules productrices en fin de production, ainsi que la concentration des vésicules extracellulaires, conformément par exemple aux techniques décrites précédemment dans la description. Par ailleurs, les moyens de configuration (21) sont spécifiquement prévus pour exécuter le procédé de calibration selon l’invention au moyen d’un programme de calibration logiciel enregistré en mémoire. Préférentiellement, chaque configuration de production prédéterminée (PA1), (PA2), (PA3) a été obtenue par le procédé de calibration selon l’invention. Conformément à l’invention, les moyens de mesure (23) du niveau d’imperméabilité cellulaire (Vt) sont adaptés pour calculer un ratio de perte d’imperméabilité dépendant d’un nombre de cellules imperméables de ladite production de vésicules extracellulaires par rapport au nombre correspondant aux conditions préalables à ladite production. De cette manière, le système (1) est spécifiquement configuré pour détecter une baisse du nombre de cellules productrices et le déclenchement d’une phase d’altération de la fonction de sélection membranaire. Cette phase est particulièrement intéressante car elle indique une zone précise de rendement élevé pour la production de vésicules extracellulaires. En outre, conformément à l’invention les moyens de pilotage (22) sont configurés lors d’une production de vésicules extracellulaires à une valeur d’agitation prédéterminée (XCTL) de manière que le niveau d’imperméabilité (Vt) en fin de ladite production est inférieur ou égal à un deuxième niveau d’imperméabilité prédéterminé (V2) qui est au moins inférieur au premier niveau d’imperméabilité initial (V1) préalable à ladite production, ledit premier niveau (V1) étant dépendant d’un nombre initial (N1) de cellules productrices préalable à ladite production de vésicules extracellulaires (EV). Le pilotage de fin de production en fonction du deuxième niveau (V2) correspondant à un ratio de perte d’imperméabilité prédéterminé selon l’invention marque le début d’une zone de production en rendement élevé. Le système fluidique de production prévoit au moins deux modes de production. Dans un premier mode, la durée de production est égale à la durée prédéterminée avant la production. Cette durée est enregistrée en configuration de production prédéterminée du système, par exemple par les configurations (PA1), (PA2), et (PA3). La durée de production peut être comprise entre des valeurs d’environ 20 minutes à environ 6 heures, encore plus préférentiellement d’environ 1 heure à environ 6 heures, encore plus préférentiellement environ 2 heures à environ 3 heures, ou bien encore plus préférentiellement être égale à environ 2 heures ou alternativement environ 3 heures ou alternativement environ 4 heures. Dans un deuxième mode, la durée de production est finalisée lorsque le niveau d’imperméabilité (Vt) mesuré est compris dans une plage d’imperméabilité délimitée par le deuxième niveau d’imperméabilité (V2), et de préférence à la fois par le deuxième et le troisième niveau d’imperméabilité (V2) et (V3). Selon ce deuxième mode, la durée de production peut être préconfigurée sans nécessairement conditionner strictement la fin de production afin de laisser une marge opérative de production prenant en compte les aléas des conditions biologiques de production. La durée de production est par exemple encadrée par des bornes autour de cette durée préconfigurée. Lorsque le niveau d’imperméabilité (Vt) mesuré de manière continue selon un rythme d’échantillonnage sur le système fluidique, les moyens de pilotage (22) sont adaptés pour raccourcir la durée de production si le niveau d’imperméabilité (Vt) est atteint avant la durée préconfigurée, mais aussi pour prolonger la durée de production jusqu’à ce que le niveau d’imperméabilité (Vt) atteigne une valeur comprise dans la plage d’imperméabilité optimale. Dans les deux cas, la durée de production sera comprise entre les bornes autour de la durée préconfigurée. Le niveau d’imperméabilité (V3) a pour avantage de limiter les débris cellulaires en fin de production et également de limiter la quantité d’impuretés en fin de production. Cependant, on n’écarte pas la possibilité d’un usage thérapeutique des vésicules extracellulaires même en présence d’impuretés et de petits débris cellulaires ce qui permet d’opérer une production à un ratio de perte d’imperméabilité égal à environ 5%, voire même 0%. On envisage également au cours du procédé de production la mise en œuvre d’une ou plusieurs techniques de séparation par clarification des débris cellulaires et des vésicules permettant la collecte des vésicules extracellulaires uniquement et des impuretés éventuelles. Cette étape de clarification, consiste à retirer les cellules, les débris, et de façon générale on cherche à éliminer tout ce qui est de taille caractéristique plus importante que typiquement 0,5 à 1 micromètre. On sait en effet que les vésicules que l'on cherche à obtenir ont des tailles caractéristiques dans la gamme 10nm à 500nm, plus préférentiellement dans la gamme 20nm à 300nm. A partir d’un liquide clarifié contenant des vésicules, l’homme de l’art peut éventuellement souhaiter procéder à une ou plusieurs étapes de purification, avec très généralement la limitation que plus on cherche à purifier, plus le rendement baisse et/ou les vésicules elles-mêmes peuvent éventuellement être altérées lors du/des processus de purification. Selon un mode de réalisation particulier, une ou plusieurs étapes d’élimination partielle des impuretés résiduelles peut être réalisée en fin du procédé de production. Le système fluidique de production de vésicules extracellulaires est spécifiquement configuré conformément au protocole de calibration selon l’invention. Selon un premier mode de production, le premier niveau (V1) est un ratio initial correspondant à un niveau d’imperméabilité à 100% et le niveau d’imperméabilité (Vt) en fin de ladite production est compris entre 95% et 60% de ratio de perte d’imperméabilité, ou compris entre 90% et 65%, de préférence compris entre 85% et 70%. Ce mode de production est avantageux car cette plage de perte d’imperméabilité marque le déclenchement d’un processus d’altération rapide des cellules productrices identifié par une baisse du nombre de cellules productrices imperméable par rapport au nombre calculé dans les conditions initiales à la production. De plus, les mesures de concentrations des vésicules extracellulaires (QEV) ont montré que le rendement de production est élevé spécifiquement dans cette zone. Selon un deuxième mode de production, le premier niveau (V1) est un ratio initial correspondant à un niveau d’imperméabilité à 100% et dans lequel le niveau d’imperméabilité (Vt) en fin de ladite production est compris entre 70% et 0% du ratio de perte d’imperméabilité, entre 70% et 5%, entre 35% et 0%, entre 25% et 5%, ou bien encore entre 15% et 5%. Ce deuxième mode de production permet d’atteindre un rendement supérieur par rapport au premier mode de production. Bien que l’altération significative de la porosité membranaire puisse entrainer la présence des protéines intracellulaires normalement maintenues captives dans les cellules productrices, ce deuxième mode reste d’intérêt. En effet, pour ce domaine le taux d’impureté du milieu liquide peut être réduit par une méthode adaptée. On n’envisage que ce taux d’impureté reste acceptable et n’altère peu ou pas les effets thérapeutiques dans certains usages prévus des vésicules extracellulaires. Description d’un p rocédé de production des vésicules extracellulaires La décrit un mode de réalisation du procédé de production ex vivo de vésicules extracellulaires conformément à l’invention au moyen du système fluidique décrit en et . Ce procédé peut être exécuté par les moyens de configuration (20) du système fluidique au moyen d’un programme de production. A une première étape (E20), un milieu liquide de cellules productrices est introduit dans le récipient du système fluidique où il est prévu de générer un écoulement turbulent du milieu liquide pour exercer des contraintes fluidiques sur les cellules productrices afin de réaliser la production de vésicules extracellulaires. Lors de cette étape, ou avant cette étape, le procédé de production comporte une étape de contrôle durant laquelle on détermine le niveau d’imperméabilité initial (V1) des cellules productrices. De préférence, cette étape consiste à calculer un nombre initial de cellules productrices imperméables (N1) préalablement à la production planifiée de vésicules extracellulaires. A une deuxième étape (E21), le procédé de production comporte une étape de paramétrage de la production planifiée au moins par un niveau d’agitation prédéterminé (XCTL), et une durée de production (T). La durée (T) peut conditionner la fin de la production, mais cela n’est pas obligatoire. De préférence, cette étape prévoit la sélection desdits paramètres de configuration dans un fichier de configuration enregistré en mémoire des moyens de configuration du système fluidique. Ce fichier de configuration est obtenu à partir du procédé de calibration selon l’invention. La durée de production (T) peut être comprise entre des valeurs d’environ 20 minutes à environ 6 heures, encore plus préférentiellement d’environ 1 heure à environ 6 heures, encore plus préférentiellement environ 2 heures à environ 3 heures, ou bien encore plus préférentiellement être égale à environ 2 heures ou alternativement environ 3 heures ou alternativement environ 4 heures. A une troisième étape (E23), le procédé de production comporte une étape de production de vésicules extracellulaires au niveau d’agitation et à la durée de production précédemment configurés de manière que le niveau d’imperméabilité (Vt) en fin de ladite production est inférieur ou égal à un deuxième niveau d’imperméabilité prédéterminé (V2) qui est au moins inférieur au premier niveau d’imperméabilité initial (V1) préalable à ladite production, et de préférence compris dans la plage d’imperméabilité délimitée par le deuxième niveau d’imperméabilité prédéterminé (V2) et le troisième niveau d’imperméabilité prédéterminé (V3) inférieur au deuxième niveau (V2). Les niveaux (V2) et (V3) sont égaux aux niveaux prédéterminés configurés dans le système de production tel que décrit en et conformément aux deux modes de productions décrits précédemment. A cet effet, le procédé de production prévoit une étape de contrôle (CD3) en continu soit de la durée écoulée depuis l’instant de déclenchement de la production, soit du niveau d’imperméabilité des cellules productrices lors de la production. En cas de détection d’au moins l’une des deux conditions, le procédé de production comporte une quatrième étape (E24) de collecte du milieu liquide contenant les vésicules extracellulaires. De préférence, il est prévu en fin de production d’opérer une séparation des vésicules extracellulaires et des débris cellulaires. Cette dernière peut en particulier concerner une séparation des vésicules extracellulaires et des composés clarifiables comme les cellules elles-mêmes, les débris divers, une fraction d’ADN, etc. Néanmoins, cette dernière opération n’est pas obligatoire. Lors de l’exécution du procédé de production, il est envisageable que des étapes de contrôles de la concentration en vésicules extracellulaires soit exécutées afin de contrôler les rendements de production. Cependant, ces étapes ne sont pas obligatoires si les paramètres de configuration ont été obtenus par le procédé de calibration. Applications et u tilisation s envisagées des vésicules extracellulaires produites par le système fluidique et le procédé de production selon l’inventio n La présente invention porte aussi sur les vésicules extracellulaires produites par le système fluidique selon l’invention tel que décrit dans la présente demande, et/ou obtenues grâce au procédé de production ex vivo de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices selon l’invention tel que décrit dans la présente demande, pour leur utilisation en immunothérapie, en médecine régénérative, en alternative ou en complément à la thérapie cellulaire, en tant que vecteur pour délivrer au moins un agent thérapeutique et/ou d’imagerie et/ou dans le traitement de tumeurs, de maladies infectieuses, de maladies inflammatoires, de maladies immunologiques, de maladies métaboliques, de maladies cancéreuses, de maladies génétiques, de maladies dégénératives ou de maladies secondaires à des chirurgies ou traumatismes. La présente invention porte aussi sur une méthode de traitement en immunothérapie, en médecine régénérative, en alternative ou en complément à la thérapie cellulaire, en tant que vecteurs d’au moins un agent thérapeutique et/ou d’imagerie, et/ou de traitement de tumeurs, de maladies infectieuses, de maladies inflammatoires, de maladies immunologiques, de maladies métaboliques, de maladies cancéreuses, de maladies génétiques, de maladies dégénératives ou de maladies secondaires à des chirurgies ou traumatismes, impliquant l’administration à un sujet en ayant besoin de vésicules extracellulaires produites par le système fluidique selon l’invention tel que décrit dans la présente demande, et/ou obtenues grâce au procédé de production ex vivo de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices selon l’invention tel que décrit dans la présente demande. La présente invention porte aussi sur l’utilisation des vésicules extracellulaires produites par le système fluidique selon l’invention tel que décrit dans la présente demande, et/ou obtenues grâce au procédé de production ex vivo de vésicules extracellulaires à partir de cellules productrices selon l’invention tel que décrit dans la présente demande, en vue de la fabrication d'un médicament utilisé en immunothérapie, en médecine régénérative, en alternative ou en complément à la thérapie cellulaire, en tant que vecteur d’au moins un agent thérapeutique et/ou d’imagerie, et/ou utilisé dans le traitement de tumeurs, de maladies infectieuses, de maladies inflammatoires, de maladies immunologiques, de maladies métaboliques, de maladies cancéreuses, de maladies génétiques, de maladies dégénératives ou de maladies secondaires à des chirurgies ou traumatismes. Selon un mode de réalisation, l’utilisation thérapeutique des vésicules extracellulaires, les vésicules extracellulaires pour leur utilisation thérapeutique, les méthodes de traitement ou l’utilisation des vésicules extracellulaires pour leur utilisation en vue de la fabrication d’un médicament, telles que décrites ci-dessus, implique l’administration et/ou l’utilisation ex vivo desdites vésicules extracellulaires. L’administration peut par exemple être parentérale ou entérale, telles qu’une administration injectable (notamment intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, intrarachidienne…), orale buccale, cutanée, locale, vaginale, rectale, oculaire, auriculaire, etc. Selon une caractéristique préférée, l’invention porte sur les vésicules extracellulaires selon l’invention, telles que décrites dans la présente demande, obtenues à partir de cellules productrices THP-1 ou de lymphocytes, pour leur utilisation par exemple en immunothérapie et/ou cancérologie. Selon une autre caractéristique préférée, l’invention porte sur les vésicules extracellulaires selon l’invention, telles que décrites dans la présente demande, obtenues à partir de cellules productrices qui sont des cellules souches mésenchymateuses (MSC), pour leur utilisation en médecine régénérative ou dans le traitement de tumeurs, de maladies infectieuses, de maladies inflammatoires, de maladies immunologiques, de maladies métaboliques, de maladies cancéreuses, de maladies génétiques, de maladies dégénératives ou de maladies secondaires à des chirurgies ou traumatismes. Selon une autre caractéristique préférée, l’invention porte sur les vésicules extracellulaires selon l’invention, telles que décrites dans la présente demande, obtenues à partir de tout type de cellules ou à partir de globules rouges, et chargées en au moins un agent thérapeutique, pour leur utilisation pour délivrer l’au moins un agent thérapeutique dans le corps d’un sujet. Selon une autre caractéristique préférée, l’invention porte sur l’utilisation des vésicules extracellulaires selon l’invention, telles que décrites dans la présente demande, obtenues à partir de tout type de cellules ou à partir de globules rouges, et chargées en au moins un agent d’imagerie, pour réaliser un examen d’imagerie médicale. Selon une autre caractéristique préférée, l’invention porte sur l’utilisation des vésicules extracellulaires selon l’invention, telles que décrites dans la présente demande, obtenues à partir de tout type de cellule ou à partir de globules rouges, et chargées en au moins un agent thérapeutique et au moins un agent d’imagerie, pour réaliser le suivi de la distribution desdites vésicules extracellulaires dans le corps d’un sujet par imagerie médicale et délivrer l’au moins un agent thérapeutique dans le corps dudit sujet. Procédé de calibration d’un système fluidique (1) de production de vésicules extracellulaires (EV) à partir de cellules productrices (6) comprenant un agitateur (7) adapté à la génération d’un écoulement turbulent du milieu liquide dans un récipient pour exercer des contraintes fluidiques sur les cellules productrices (6) afin de réaliser la production de vésicules extracellulaires (EV), le procédé comprenant les étapes suivantes : - la détermination (E1) d’un premier niveau d’imperméabilité cellulaire (V1) dépendant d’un nombre initial (N1) de cellules productrices imperméables préalable à une production de vésicules extracellulaires (EV), - le pilotage (E2) d’au moins une première production (PR1) de vésicules extracellulaires (EV) configurée à une première valeur d’agitation (XCTL1) et à une première durée de production (T1), le procédé étant caractérisé en ce qu’il comporte en outre : - au moins une première mesure (E3) d’imperméabilité (Vt) des cellules de la première production (PR1) et comparaison par rapport à un deuxième niveau d’imperméabilité prédéterminé (V2) inférieur audit premier niveau d’imperméabilité (V1), chaque mesure d’imperméabilité cellulaire d’une production de vésicules extracellulaires (PR1) consistant à calculer un ratio de perte d’imperméabilité (RPI) dépendant d’un nombre de cellules productrices imperméables de chaque dite production par rapport au nombre initial (N1) correspondant aux conditions préalables à ladite production, - l’enregistrement (E7) d’au moins une plage d’agitation (PA1) dont la limite inférieure (Lim1) est égale à la première valeur d’agitation (XCTL1) pour laquelle le niveau d’imperméabilité (Vt) mesuré de la première production (PR1) est sensiblement égal audit deuxième niveau d’imperméabilité cellulaire (V2). Procédé de calibration selon la revendication 1 comprenant en outre les étapes suivantes : - le pilotage (E5) d’au moins une deuxième production (PR2) de vésicules extracellulaires configurée à une deuxième valeur d’agitation (XCTL2) et à une deuxième durée de production (T2), - une deuxième mesure (E6) d’imperméabilité (Vt) des cellules productrices de la deuxième production (PR2) et comparaison par rapport à un troisième niveau d’imperméabilité cellulaire prédéterminé (V3) inférieur audit deuxième niveau d’imperméabilité (V2), - l’enregistrement (E7) de la plage d’agitation (PA1) délimitée par la limite inférieure (Lim1) et une limite supérieure (Lim2), ladite limite supérieure (Lim2) étant égale à la deuxième valeur d’agitation (XCTL2) à partir de laquelle le niveau d’imperméabilité cellulaire (Vt) mesuré de la deuxième production est sensiblement égal au troisième niveau d’imperméabilité (V3). Procédé de calibration selon la revendication 2, dans lequel le premier niveau (V1) est un ratio initial correspondant à un niveau d’imperméabilité cellulaire à 100% et dans lequel le deuxième niveau d’imperméabilité (V2) et le troisième niveau d’imperméabilité (V3) délimitent une plage d’imperméabilité cellulaire comprise entre 95% et 60% du ratio de perte d’imperméabilité (RPI), ou comprise entre 90% et 65%, de préférence comprise entre 85% et 70%. Procédé de calibration selon la revendication 2, dans lequel le premier niveau (V1) est un ratio initial correspondant à un niveau d’imperméabilité cellulaire à 100% et dans lequel le deuxième niveau d’imperméabilité (V2) et le troisième niveau d’imperméabilité (V3) délimitent une plage d’imperméabilité cellulaire comprise entre 70% et 0% du ratio de perte d’imperméabilité (RPI), entre 70% et 0%, entre 70% et 5%, entre 35% et 0%, entre 25% et 5%, ou bien encore entre 15% et 5%. Procédé de calibration selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel l’enregistrement est configuré pour enregistrer une pluralité de plages d’agitation (PA1, PA2, PA3) de production de vésicules extracellulaires où chaque plage est associée spécifiquement à une valeur de durée de production spécifique et à un type de cellule productrice spécifique. Procédé de calibration selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel chaque mesure (E3, E6) d’imperméabilité cellulaire calcule un nombre de cellules productrices imperméables en fin de la production de vésicules extracellulaires, ou de manière continue selon un rythme d’échantillonnage en cours de production de vésicules extracellulaires. Système fluidique (1) de production de vésicules extracellulaires (EV) à partir de cellules productrices (6) comprenant au moins : - un agitateur (7) adapté à la génération d’un écoulement turbulent du milieu liquide dans un récipient pour exercer des contraintes fluidiques sur les cellules productrices (6) afin de réaliser la production de vésicules extracellulaires (EV), - des moyens de pilotage (22) d’une production de vésicules extracellulaires en fonction de paramètres de configuration comprenant au moins un niveau d’agitation (XCTL) et une durée de production (T), - des moyens de mesure (23) du niveau d’imperméabilité cellulaire (Vt) des cellules productrices (6), caractérisé en ce que les moyens de mesure (23) du niveau d’imperméabilité (Vt) sont adaptés pour calculer un ratio de perte d’imperméabilité (RPI) dépendant d’un nombre de cellules imperméables de ladite production de vésicules extracellulaires par rapport au nombre correspondant aux conditions préalables à ladite production, et en ce que les moyens de pilotage (22) sont configurés à une valeur d’agitation prédéterminée (XCTL) de manière que le niveau d’imperméabilité (Vt) en fin de ladite production est inférieur ou égal à un deuxième niveau d’imperméabilité prédéterminé (V2) qui est au moins inférieur au premier niveau d’imperméabilité initial (V1) préalable à ladite production, ledit premier niveau étant dépendant d’un nombre initial (N1) de cellules productrices imperméables préalablement à ladite production de vésicules extracellulaires (EV). Système fluidique selon la revendication 7, dans lequel les moyens de pilotage (22) comprenant au moins une valeur d’agitation et une durée sont configurés de manière à ce que le niveau d’imperméabilité (Vt) en fin de ladite production est compris dans une plage d’imperméabilité délimitée par le deuxième niveau d’imperméabilité prédéterminé (V2) et un troisième niveau d’imperméabilité prédéterminé (V3) inférieur au deuxième niveau (V2). Système fluidique selon l’une quelconque des revendications 7 à 8 comprenant en outre des moyens de configuration (21) d’une production de vésicules extracellulaires enregistrant au moins une première configuration de production prédéterminée définie par une plage d’agitation (PA1) et une durée prédéterminée (T1), dans lequel ladite plage (PA1) est obtenue par le procédé de calibration selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, et dans lequel les moyens de pilotage (22) sont configurés pour sélectionner la valeur d’agitation d’une production comprise dans ladite plage (PA1) pour exécuter ladite production. Système fluidique selon la revendication 9, dans lequel les moyens de pilotage (22) sont configurés soit de manière à ce que la durée de production est égale à la durée prédéterminée avant la production de la première configuration de production prédéterminée, soit de manière à ce que la durée de production est finalisée lorsque le niveau d’imperméabilité (Vt) mesuré est compris dans la plage d’imperméabilité délimitée par le deuxième niveau d’imperméabilité (V2) et le troisième niveau d’imperméabilité (V3). Système fluidique selon la revendication 9 ou 10, dans lequel les moyens de configuration (21) comprennent une pluralité de configurations de production mémorisées (PA1, PA2, PA3), chaque configuration étant spécifique à une durée de production et à un type de cellules productrices. Vésicules extracellulaires produites par le système fluidique selon l’une quelconque des revendications 7 à 11.