Brevet FR3104946A1 — publié le 20210625

La présente invention a pour objet des vésicules de tensioactifs catanioniques dérivés de sucre comprenant des dendrimères anti-inflammatoires et leur utilisation en tant que médicament, plus particulièrement dans le traitement du psoriasis. Formulation d’un dendrimère anti-inflammatoire pour le traitement de psoriasis La présente invention a pour objet des vésicules de tensioactifs catanioniques dérivés de sucre comprenant des dendrimères anti-inflammatoires et leur utilisation en tant que médicament, plus particulièrement dans le traitement du psoriasis. Le psoriasis est une maladie inflammatoire chronique de la peau qui est la conséquence d’un renouvellement accéléré de l’épiderme entretenu par l’inflammation et qui se manifeste par l’apparition de plaques rouges recouvertes de pellicules blanches qui se détachent de la peau (squames). Cette maladie qui affecte plus de 125 millions de personnes dans le monde et a un fort impact sur la qualité de vie des personnes atteintes. Aucun traitement ne permet aujourd’hui de soigner le psoriasis et les causes de cette maladie sont multiples et encore mal connues. Des traitements permettant d’atténuer les symptômes ont toutefois été développés tels que l’application topique de corticostéroïde ou de vitamine D. Ces traitements permettent de soulager les symptômes légers du psoriasis mais ne sont que peu efficaces pour le traitement des formes les plus sévères. Les formes les plus sévères sont traitées par administration orale d’immunosuppresseurs tels que la cyclosporine, mais ces derniers entrainent d’important effets secondaires. Des anticorps monoclonaux et récepteurs solubles ciblant les médiateurs pro-inflammatoires tels que le TNF, l’IL-12, IL-23 et l’IL-17 ont été proposés. Ces médicaments biologiques ont un coût élevé et voient leur efficacité diminuer au cours du temps. Ils sont également contre-indiqués dans le cas de certaines co-morbidités associées au psoriasis. Il reste donc un besoin de développer de nouveaux traitements pour le traitement du psoriasis pour une application par voie topique limitant ainsi les effets secondaires. Les dendrimères sont des macromolécules constituées de monomères combinés ensemble pour former une architecture tridimensionnelle multibranchée à structure définie. Les dendrimères ont une taille et une structure parfaitement définies grâce à leur synthèse itérative. Leur multivalence en fait des nano-objets très attractifs pour de nombreuses applications, notamment en biologie et en médecine. En particulier, les dendrimères phosphorés à surface Azabisphosphonate (dendrimère ABP) sont capables d’activer des monocytes et d’induire une réponse anti-inflammatoire (WO2010/013086, Portevin D. et al. J Transl Med. 2009 ; 7 :82). Plus particulièrement, les propriétés anti-inflammatoires ont été validées dans des modèles animaux de polyarthrite rhumatoïde dans laquelle les monocytes sont connus pour jouer un rôle primordial dans l’inflammation et l’ostéoclastogénèse (Hayder M. et al. 2011 ; Sci Trans Med. 3(81)). L’effet anti-inflammatoire du dendrimère ABP a également été validé dans des modèles de l’uvéite (Fruchon et al. 2013. Molecules;18(8):9305-16) et de scléroses en plaque (Caminade AM. Nat. Commun. 2015 ; 6, 7722). En revanche, l’effet potentiel de ces dendrimères dans le traitement du psoriasis a seulement été suggéré dans la demande internationale WO2010/013086. Résumé Le traitement du psoriasis par voie cutanée nécessite le franchissement du stratum corneum qui assure à lui seul la fonction de barrière de la peau ce qui rend son franchissement par des principes actifs très complexe. Ainsi, pour traiter le psoriasis par voie cutanée, il est nécessaire d’améliorer la pénétration des substances actives dans la peau. Pour permettre une meilleure pénétration cutanée des dendrimères, les inventeurs ont formulé les dendrimères aza-bisphosphonates avec des tensioactifs catanioniques dérivés de sucre. Les tensioactifs catanioniques dérivés de sucre s'associent spontanément sous forme de vésicules et peuvent encapsuler des principes actifs hydrophobes dans leur bicouche membranaire. Alors que les dendrimères ABP hydrophiles présentent un taux d’encapsulation avec les tensioactifs dérivés de sucre faible et une température de transition de la phase « solide-fluide » de la bicouche membranaire de 37°C, les inventeurs ont découvert de manière surprenante que le complexe formé suite à la combinaison de la forme acide phosphonique du dendrimère ABP (ABP-OH) avec un tensioactif dérivé de sucre entraine une diminution de la température de transition du complexe à 33°C. Ainsi au contact de la peau, ce complexe devient fluide et est donc capable de diffuser plus facilement dans les couches profondes de la peau améliorant aussi son action anti-inflammatoire. De plus, le taux d’encapsulation de ces formes acide phosphonique est plus élevé que celui des dendrimères ABP hydrophiles et les complexes sont stables à un pH proche de celui de la peau. Dans un premier aspect, l’invention concerne une vésicule comprenant : - un tensioactif catanionique de formule (I) ou un mélange de tensioactifs catanioniques de formule générale (I) : [Chem . 1] (I) dans laquelle est un sucre, R 1 est choisi parmi H et une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 20 chaînons, R 2 est une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 20 chaînons, R 3 et R 4 sont indépendamment l’un de l’autre une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 19 chaînons ; et - un dendrimère de formule (II) : [Chem. 2] (II) dans laquelle est choisi parmi les pentoses, les hexoses et les groupes de formules suivantes : , , et, Z est choisi parmi -CH 2 - et -CH=N-, R est choisi parmi H et C1-C12-alkyle, A est choisi parmi et , où X est choisi parmi S et O, et n est nombre entier compris entre 3 et 8. Selon un autre aspect, l’invention concerne une composition pharmaceutique comprenant au moins une vésicule selon l’invention et un excipient pharmaceutiquement acceptable. Selon un autre aspect, l’invention concerne une vésicule selon l’invention ou une composition pharmaceutique selon l’invention pour son utilisation dans le traitement du psoriasis. Enfin, l’invention concerne un procédé de préparation d’une vésicule selon l’invention. Fig. 1 représente un schéma illustrant l’obtention de la formulation bioactive. Fig. 2 montre la température de transition pour la formulation TriCat 12/ABP. Fig. 3 montre en a) la distribution de la taille mesurée par DLS des vésicules formées par la formulation TriCat 12/G1-A (1/0,5), b) le cliché de microscopie électronique à balayage des vésicules formées par la formulation TriCat 12/G1-A (1/0,5). Fig. 4 montre la température de transition de phase de la formulation TriCat 12/G1-A. Fig. 5 montre la mesure du diamètre hydrodynamique moyen et de l’intensité en DLS de la formulation TriCat 12/G1-A sur deux mois à 4°C. Fig.6 montre la mesure du diamètre hydrodynamique moyen et de l’intensité en DLS de la formulation TriCat 12/G1-A sur deux mois à +4°C et -20°C. Fig. 7 montre la quantification par fluorescence de la quantité de dendrimère G1A-NIR (dendrimère G1A sous sa forme fluorescente) formulé ou non avec le TriCat 12, qui a pénétré dans la peau d’oreille de cochon (cellules de Franz) après 24h à 35°C. Fig. 8 montre l’observation par microscopie confocale de la fluorescence (en blanc) du dendrimère G1-A-NIR non formulé (A) et formulé avec le TriCat 12 (B) qui a pénétré dans la peau d’oreille de cochon (cellules de Franz) après 24h à 35°C. Fig. 9 montre l’analyse par cytométrie de flux de la morphologie (taille et granulosité) des monocytes (sur les graphes, chaque point est une cellule). Le graphe du haut montre les monocytes contrôles non activés. Le graphe du bas à gauche montre les monocytes cultivés en présence des vésicules TriCat 12 seules (pas d’activation). Le graphe du bas de droite montre les monocytes cultivés avec les vésicules TriCat 12 chargées avec le dendrimère G1-A. Les monocytes activés sont dans l’ellipse. Fig. 10 montre en a) la distribution de la taille mesurée par DLS des vésicules formées par la formulation TriCat 12/G1-B (1/0,5), b) cliché de microscopie électronique à balayage des vésicules formées par la formulation TriCat 12/G1-B (1/0,5). Fig. 11 montre la température de transition de la formulation TriCat 12/G1-B. Fig. 12 montre la mesure du diamètre hydrodynamique moyen et de l’intensité en DLS de la formulation TriCat 12/G1-B sur deux mois à 4°C. Fig. 13 montre l’observation par microscopie confocale de la fluorescence (en blanc) du dendrimère G1-B-NIR (dendrimère G1-B sous sa forme fluorescente) non formulé (A) et formulé avec le TriCat 12 (B) qui a pénétré dans la peau d’oreille de cochon (cellules de Franz) après 24h à 35°C. Les inventeurs ont montré que la formulation de dendrimères azabisphosphonates sous la forme acide phosphonique avec des tensioactifs catanioniques dérivés de sucre favorise la pénétration du dendrimère dans la peau améliorant ainsi son effet anti-inflammatoire pour le traitement du psoriasis. La présente invention concerne ainsi une vésicule comprenant : - un tensioactif catanionique de formule générale (I) ou un mélange de tensioactifs catanioniques de formule générale (I) : [Chem. 1] (I) dans laquelle est un sucre, en particulier est choisi parmi les monosaccharides, les disaccharides, les polysaccharides et les polyols, plus particulièrement est un disaccharide ou un polyol, encore plus particulièrement est le 1-déoxylactilol, R 1 est choisi parmi H et une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 20 chaînons, en particulier R 1 est choisi parmi H et C1-C20- alkyle, plus particulièrement, R 1 est choisi parmi H et C4-C18-alkyle, plus particulièrement encore R 1 est H, et R 2 est une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 20 chaînons, en particulier R 2 est C1-C20-alkyle, plus particulièrement R 2 est C4-C18-alkyle, plus particulièrement encore R 2 est C8-C16-alkyle, toujours plus particulièrement R 2 est dodécyle, R 3 et R 4 sont indépendamment l’un de l’autre une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 19 chaînons, en particulier R 3 et R 4 sont indépendamment l’un de l’autre C1-C19-alkyle, plus particulièrement R 3 et R 4 sont C3-C17-alkyle, plus particulièrement encore R 3 et R 4 sont C7-C15-alkyle, toujours plus particulièrement R 3 et R 4 sont undécyle ; et - un dendrimère de formule (II) : [Chem.2] (II) dans laquelle est choisi parmi les pentoses, les hexoses et les groupes de formules suivantes : , , , et en particulier est choisi parmi les groupes de formules suivantes : , , , et , plus particulièrement est choisi parmi les groupes de formules suivantes : , et , encore plus particulièrement est ; Z est choisi parmi -CH 2 - et -CH=N-, R est choisi parmi H et C1-C12-alkyle, en particulier R est C1-C12-alkyle, plus particulièrement R est C1-C8-alkyle, plus particulièrement encore R est C1-C4-alkyle, toujours plus particulièrement R est choisi parmi méthyle, n-hexyle et n-octyle ; A est choisi parmi et , où X est choisi parmi S et O ; en particulier A est , où X est choisi parmi S et O ; plus particulièrement X est S, et n est un nombre entier compris entre 3 et 8, en particulier n est égal à 6. Par « alkyl(e) », on entend au sens de la présente invention un radical hydrocarbure de formule C n H 2n+1 dans lequel n est un nombre entier supérieur ou égal à 1. Les radicaux alkyles peuvent être linéaires ou ramifiées, de préférence linéaires. Des radicaux alkyles particuliers de l’invention sont de 1 à 20 atomes de carbones, plus particulièrement de 1 à 12 atomes de carbones. Par « sucre », on entend au sens de la présente invention les monosaccharides, les disaccharides, les polysaccharides, les polyols et leurs dérivés. Les dérivés de sucres incluent notamment les radicaux de type sucre dans lesquels une fonction hydroxyle a été supprimée. Un sucre particulièrement préféré de l’invention est le 1-déoxylactilol. Dans un mode de réalisation, la vésicule selon l’invention est caractérisée en ce qu’elle comprend un seul tensioactif catanionique de formule (I). Dans un autre mode de réalisation, la vésicule selon l’invention est caractérisée en ce qu’elle comprend un mélange de tensioactifs catanioniques de formule (I), en particulier un mélange de deux tensioactifs catanioniques différents de formule (I). Selon ce mode de réalisation, le ratio molaire entre les deux tensioactifs catanioniques différents de formule (I) peut être compris entre 99/1 et 1/99. Dans un mode de réalisation particulier, la vésicule selon l’invention est caractérisée en ce que, dans le tensioactif catanionique de formule (I), est le 1-déoxylactilol. Ainsi, selon ce mode de réalisation, le tensioactif catanionique présente dans la formulation est celui de la formule (Ia) : [Chem. 3] (Ia) dans laquelle R 1 , R 2 , R 3 et R 4 sont tels que définis dans la formule (I). Dans un mode de réalisation, la vésicule selon l’invention est caractérisée en ce que, dans le dendrimère de formule (II), est . Ainsi, selon ce mode de réalisation, le dendrimère présent dans la vésicule est celui de la formule (IIa) : [Chem. 4] (IIa) dans laquelle Z , R , X et n sont tels que définis dans la formule (II). Selon une variante de ce mode de réalisation, le dendrimère de formule (IIa) présent dans la vésicule est celui dans lequel Z est -CH=N-. Selon une autre variante de ce mode de réalisation, le dendrimère de formule (IIa) présent dans la vésicule est celui dans lequel Z est -CH 2 -. Selon une autre variante de ce mode de réalisation, le dendrimère de formule (IIa) présent dans la vésicule est celui dans lequel A est où X est choisi parmi S et O. Selon une autre variante de ce mode de réalisation, le dendrimère de formule (IIa) présent dans la vésicule est celui dans lequel A est . Avantageusement, le ratio molaire tensioactif catanionique/dendrimère dans la vésicule selon l’invention est compris entre 50/1 et 1/1, en particulier entre 30/1 et 1/1, plus particulièrement entre 20/1 et 1/1, encore plus particulièrement entre 10/1 et 1/1, toujours plus particulièrement entre 5/1 et 1/1. De manière tout à fait particulière, le ratio molaire tensioactif catanionique/dendrimère dans la vésicule selon l’invention est d’environ 2/1. La vésicule selon l’invention permet d’encapsuler le dendrimère dans le tensioactif catanionique. Avantageusement, le taux d’encapsulation du dendrimère de formule (I) dans le tensioactif catanionique de formule (II) est supérieur à 50%. En particulier, le taux d’encapsulation du dendrimère de formule (I) dans le tensioactif catanionique de formule (II) est compris entre 50% et 95%, plus particulièrement entre 60% et 85%, plus particulièrement encore entre 70% et 80%. Par « taux d’encapsulation » on entend au sens de la présente invention le ratio entre le nombre de mole de dendrimère stabilisé dans le tensioactif catanionique sur le nombre de mole de dendrimère initialement utilisé pour la préparation de la vésicule. Le taux d’encapsulation peut être déterminé par toutes les méthodes connues de l’homme du métier, en particulier par dosage par spectrophotométrie UV-visible ou par spectroscopie de fluorescence. Avantageusement, le diamètre moyen des vésicules selon l’invention est compris entre 50 et 500 nm, en particulier entre 100 et 350 nm. Le diamètre moyen peut être déterminé par toutes les méthodes connues de l’homme du métier, en particulier par diffusion dynamique de la lumière (DLS), notamment au moyen d’un laser He-Ne émettant une lumière monochromatique d’une longueur d’onde de 633 nm. Avantageusement, la température de transition de phase des vésicules selon l’invention est comprise entre 30 et 35°C, en particulier est de 33°C. Procédé de préparation La présente demande concerne aussi un procédé de préparation des vésicules telles que décrites précédemment. Le tensioactif catanionique de formule (I) présent dans la vésicule selon l’invention est formé par l’association d’un N-alkylaminosucre de formule (I’) : [Chem. 5] (I’) dans laquelle est un sucre, R 1 est choisi parmi H et une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 20 chaînons, en particulier R 1 est choisi parmi H et C1-C20-alkyle, R 2 est une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 20 chaînons, en particulier R 2 est C1-C20-alkyle ; et d’un acide phosphinique de formule (I’’) : [Chem. 6] (I’’) dans laquelle R 3 et R 4 sont indépendamment l’un de l’autre une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 19 chaînons, en particulier R 3 et R 4 sont indépendamment l’un de l’autre C1-C19-alkyle. Ainsi, le procédé de préparation d’une vésicule selon l’invention comprend successivement les étapes suivantes : (a) mélange d’un ou plusieurs N-alkylaminosucres de formule (I’), en particulier un N-alkylaminosucre de formule (I’), d’un acide phosphinique de formule (I’’) et du dendrimère de formule (II) tel que défini précédemment ; et (b) optionnellement, séparation de la vésicule obtenue du dendrimère non-encapsulé. Avantageusement, l’étape de mélange est réalisée dans une solution aqueuse, en particulier dans l’eau. Avantageusement, le N-alkylaminosucre, l’acide phosphinique et le dendrimère sont mélangés avec un ratio molaire compris entre 100/50/1 et 1/1/1. En particulier, l’étape de mélange est réalisée avec un ratio molaire N-alkylaminosucre/acide phosphinique/dendrimère de 2/2/1. Le mélange peut être effectué au moyen de toutes les techniques connues de l’homme du métier, en particulier par agitation magnétique, par agitation vortex et/ou par sonication par ultrasons, plus particulièrement par agitation vortex puis par agitation magnétique ou par sonication par ultrasons. L’étape de mélange peut être effectuée à température ambiante ou en chauffant à une température comprise entre la température ambiante et 100°C, en particulier entre 25°C et 75°C, pendant une durée comprise entre 5 minutes et 72 heures, en particulier entre 10 minutes et 48 heures. Une fois l’étape de mélange réalisée, la vésicule obtenue peut être ensuite séparée du dendrimère non-encapsulé. L’étape de séparation peut être réalisée au moyen de toutes les techniques connues de l’homme du métier, en particulier par filtration. Composition pharmaceutique La présente demande de brevet a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant la vésicule telle que décrite précédemment et un excipient pharmaceutiquement acceptable. Le terme « pharmaceutiquement acceptable » se réfère uniquement aux ingrédients d'une composition pharmaceutique compatibles entre eux et non délétères pour le patient. Dans un mode de réalisation, un excipient pharmaceutiquement acceptable ne produit pas d’effet secondaire, allergique ou autre réaction indésirable lorsqu’il est administré à un animal, de préférence un humain. Pour une administration humaine, les préparations doivent satisfaire les critères de stérilité, de pyrogénicité, de sécurité générale et de pureté standards tels que requis par les offices de réglementation, comme par exemple la FDA ou l’EMA. En particulier, la composition pharmaceutique telle que décrite précédemment sera destinée à une application topique ou transcutanée. La composition pharmaceutique telle que décrite précédemment peut ainsi comprendre un ou des excipients pharmaceutiquement acceptables pour une formulation adaptée à une administration topique. Les excipients pharmaceutiquement acceptables peuvent notamment être tout excipient parmi ceux connus de l'homme de l'art en vue d'obtenir une composition pour l'application topique sous forme d'un lait, d'une crème, d'un baume, d'une huile, d'une lotion, d'un gel, d'un gel moussant, d'une pommade, ou d'un spray. Utilisation thérapeutique La présente demande de brevet a également pour objet la vésicule ou la composition pharmaceutique telles que décrites précédemment pour son utilisation comme médicament, plus particulièrement pour le traitement du psoriasis chez un sujet qui en a besoin. Par « psoriasis », on entend une maladie inflammatoire chronique de la peau induisant le renouvellement anormal de la peau provoquant des plaques rouges épaisses recouvertes de squames. Par psoriasis, on entend toutes les formes de psoriasis, notamment le psoriasis en plaques, le psoriasis en gouttes, le psoriasis chez le nourrisson, le psoriasis pustuleux, le psoriasis érythrodermique, psoriasis inversé, psoriasis du visage, du cuir chevelu, de l’ongle des muqueuses. Le terme « sujet » fait référence à un animal, plus particulièrement un mammifère. De préférence, le sujet est un être humain. Au sens de la présente invention, un sujet peut être un patient, à savoir une personne recevant des soins médicaux, subissant ou ayant subi un traitement médical, ou surveillée dans le cadre du développement d'une maladie. Le terme « traiter » ou « traitement » se réfère à la fois à un traitement thérapeutique et à des mesures prophylactiques ou préventives, dans lesquels l’objectif est de prévenir ou de ralentir (diminuer) la condition pathologique ciblée, en particulier dans le cas du traitement du psoriasis de réduire la surface de la peau atteinte, diminuer le degré de rougeur des lésions, leur épaisseur et l’intensité de la désquamation. En particulier, la vésicule ou la composition telles que décrites précédemment pour son utilisation comme médicament, en particulier pour le traitement du psoriasis sont caractérisées en ce qu’elles sont formulées pour une application topique. La présente demande de brevet a également pour objet une méthode de traitement du psoriasis chez un sujet qui en a besoin comprenant l’administration d’une dose thérapeutiquement efficace de la vésicule ou de la composition telles que décrites précédemment chez ledit sujet. En particulier, la présente demande a pour objet une méthode de traitement du psoriasis chez un sujet qui en a besoin comprenant l’administration topique d’une dose thérapeutiquement efficace de la vésicule ou la composition pharmaceutique telle que décrite précédemment chez ledit sujet. Le terme « dose thérapeutiquement efficace » se réfère à la dose d’agent thérapeutique nécessaire et suffisante pour ralentir ou stopper la progression, l’aggravation ou la détérioration de l’un ou plusieurs symptômes de la maladie de psoriasis, par exemple réduire la surface de la peau atteinte, diminuer le degré de rougeur des lésions, leur épaisseur et l’intensité de la désquamation. La présente invention sera mieux comprise à la lumière des exemples et figures non-limitatifs qui suivent. Exemples I. Matériel et méthodes 1. Synthèse des composés utilisés N-dodécylamino-1-déoxylactitol a été synthétisé selon le protocole décrit dans la thèse de Pauline Castagnos (thèse Castagnos, Pauline (2011). Vésicules catanioniques : design et mécanismes de délivrance de principes actifs). 8,75mmol (soit 3,15g) d’α-lactose sont dissoutes dans 20mL d’eau ultrapure. 14,88mmol (soit 2,76g) de dodécylamine sont dissoutes dans 25mL de méthanol. 5% massique (par rapport à la masse totale de réactifs) de palladium supporté sur charbon (soit 0,338g) sont placés en suspension dans 10mL de méthanol. L’amine, le palladium et enfin le lactose sont placés dans un réacteur fermement vissé. Après trois purges sous 20 bars d’hydrogène, le réacteur est rempli d’hydrogène sous 22 bars puis désolidarisé de la bouteille d’hydrogène et placé dans un bain de sable thermostaté à 60°C, de façon à avoir une température d’environ 50°C dans le réacteur. Le milieu réactionnel est ainsi laissé sous agitation magnétique pendant 3 jours. Après refroidissement du réacteur, le milieu réactionnel est remis à pression atmosphérique. Afin d’éliminer l’excès de palladium, on effectue une filtration sur célite du milieu réactionnel en utilisant un filtre de porosité 5. Après avoir tassé la célite à l’eau ultrapure, le milieu réactionnel chauffé à 50°C y est déposé, puis lavé par 200mL de solution d’eau ultrapure/méthanol (1 : 1) à 50°C. Le filtrat est ensuite séché à l’évaporateur rotatif. Lorsqu’il ne reste que de l’eau, celle-ci est éliminée par lyophilisation. Une poudre blanche hygroscopique est récupérée (m=1,62g, R=36%). RMN 1 H (D 2 O, 300MHz) : δ (ppm) : 0,81 (m, 3H, CH 3 ) ; 1,48 (m, 20H, CH 2 aliphatiques) ; 3,48 à 3,84 (m, 20H, OH, CH et CH 2 du sucre) ; 4,42 (d, 1H, H anomérique) MS : m/z: 512,4 FT- IR ( KBr ) : ν max (cm -1 ) : 3435 (N-H st (amine secondaire), alcools), 2924 (élongation C-H), 2853 (élongation CH, CH 2 , CH 3 ), 1638 (élongation N-H), 1466 (déformation angulaire CH 2 ), 1380 (C-H), 1079 (C-N st (amine secondaire)), 720 (N-H δ, présence d’une chaîne aliphatique supérieure à 4C) Analyse élémentaire : C : 53,90%, H : 9.68%, N : 2.79%, Pd théo : 56,34% ; H théo : 9,65% ; N théo : 2,74%) Pureté sur le carbone : 95,7% L’a cide bis-α-( hydroxydodécyl ) phosphinique a été synthétisé selon le protocole décrit dans l’article (Brun, A.; Etemad-Moghadam, G. New double-chain and aromatic (alpha-hydroxyalkyl)phosphorus amphiphiles. Synthesis 2002, 10, 1385−1390.) 2,5mmol d’hypophosphite de sodium monohydraté (soit 2,38g) sont agitées en présence de 30mL de 1,4-dioxane. 56mmol de dodécylaldéhyde (soit 10,3g) sont ajoutées, de même que 4mL d’acide chlorhydrique à 37%. Le mélange réactionnel est chauffé à reflux (101°C) pendant 24h. Après son refroidissement, le ballon est passé à l’évaporateur rotatif jusqu’à l’obtention d’une pâte solide brune. Cette dernière est lavée successivement avec 15mL d’eau ultrapure, 15mL de tétrahydrofurane (THF), 4x15mL d’acétone, 15mL d’eau ultrapure, 15mL de tétrahydrofurane, 4x15mL d’acétone et 15mL de tétrahydrofurane. Les lavages sont tous effectués en utilisant un fritté de porosité 4. On obtient une poudre compacte blanche (m=2,00g, R=20,5%). RMN 1 H (CDCl 3 / CD 3 OD, locké CD 3 OD, 55°C, 300MHz) : δ (ppm) : 0,85 (t, 6H, CH 3 ); 1,25 (m, 36H, CH 2 aliphatiques); 1,61 (m, 4H, CH 2 en α); 1,77 (m, 4H, CH 2 α); 3,60 (m, 2H de CHOH) RMN 13 C (CDCl 3 / CD 3 OD, locké CD 3 OD, 55°C, 300MHz) : δ (ppm) : 13,6 (s, CH 3 ) ; 22,4 à 31,7 (CH 2 ), entre 60 et 70 (CH) RMN 31 P (CDCl 3 / CD 3 OD, locké CD 3 OD, 55°C, 300MHz) : δ (ppm) : 45,43 et 46,52 : pics dus à la pseudo-asymétrie du phosphore. Pas de pic vers 30ppm : il ne reste pas de monosubstitué MS : 433,3 (M-H)- FT-IR ( KBr ) : νmax (cm -1 ) : 3313 (C-OH) ; 2918 (C-H) ; 2848 (C-H) ; 2369 (P-OH) ; 1465 (δCH 2 ) ; 1222 (P=O); 1141 (P=O); 1115 (PO-OH); 1067 (P-OH); 960 (P-OH); 941 (P-OH) Analyse élémentaire : C : 65,67%, H : 9.18% (C théo : 66,32% ; H théo : 11,83%) Pureté sur le carbone : 99,0% Dendrimère ABP Le dendrimère ABP a été synthétisé selon le protocole décrit dans Poupot et al. FASEB J. 2006, 20(13)2339-51. Dendrimère G1-A Le dendrimère G1-A a été synthétisé selon le protocole décrit dans Poupot et al. FASEB J. 2006, 20(13)2339-51. Dendrimère G1-A-NIR Schéma de synthèse [schéma 1] Synthèse du composé b Acide 4-hydroxy-benzenepropanoique (90 mg, 0.54 mmol), 1-Éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide (EDC) (90.18 mg, 0.47 mmol), et 1.1 équivalents de 4-diméthylaminopyridine (DMAP) (48.64 mg, 0.39 mmol) sont ajoutés à une solution d’ADIBO-amine a (100 mg, 0.36 mmol) dans 5 mL de N , N -diméthylformamide DMF. Le mélange réactionnel est agité pendant une nuit à température ambiante. Le milieu réactionnel est lyophilisé, le résidu brut est solubilisé dans 50 mL du dichlorométhane (DCM) puis lavé avec de l’eau (3 x 25 mL). La phase organique est séchée et concentrée sous pression réduite. Le résidu est purifié sur une colonne de silice (éluant : hexane/AcOEt, 60/40) pour donner le produit b avec un rendement de 85% sous forme d’une huile transparente. 1 H NMR (500 MHz, Chloroform -d) δ :2.01–1.92 (m, 1H, CH 2 -CON), 2.30–2.23 (m, 2H, C’ 0 4 -CH 2 -), 2.50-2.50 (m, 2H, CH 2 -CON), 2.80-2.69 (m, 3H, -CH 2 -CO-NH-), 3.25–3.19 (m, 1H, -CH 2 -NH-CO), 3.39–3.32 (m, 1H, -CH 2 -NH-CO), 3.72 (d, 2 J HH =13.9 Hz, 1H, r-C H 2 -N-CO-), 5.16 (d, 2 J HH =13.9 Hz, 1H, r-C H 2 -N-CO-), 6.14–6.08 (t, 3 J HH = 6.0 Hz, 1H, CO-NH), 6.71 (d, 2 J HH = 8.2 Hz, 4H, C’ 0 3 H), 6.95 (d, 3 J HH = 8.2 Hz, 4H, C’ 0 2 H), 7.17 (br s, 1H, H Ar ), 7.23-7.27 (m, , 1H, H Ar ), 7.35 – 7.27 (m, 2H, H Ar ), 7.49 – 7.35 (m, 4H, H Ar ), 7.70 (d, 3 J HH = 7.6 Hz, 2H, H Ar ), 8.04 (s, 1H, OH) ppm. 13 C NMR (126 MHz, Chloroform-d ) δ : 30.80(-CH 2 -CO-NH-). 34.75(s, CH 2 -CON), 35.22(s, -CH 2 -NH-CO), 38.55 (s, C’ 0 4 -CH 2 -), 55.63 (-CH 2 -N-CO), 107.74(s, C≡C’), 114.79(s, C≡C’), 115.38(s, C’ 0 2 ), 122.48 (s, C f ), 122.91 (s, C f ’), 125.66 (s, C e ’), 127.27 (s, CH Ar ), 127.93 (s, CH Ar ’ ), 128.37 (s, CH Ar ), 128.53 (s, CH Ar ), 128.69 (s, CH Ar ), 129.05 (s, C’ 0 3 ), 129.29 (s, CH Ar ), 131.96 (s, C’ 0 4 ), 132.09 (s, CH Ar ), 147.91 (s, C Ar ), 150.88 (s, C Ar ), 154.81(s, C’ 0 1 ), 172.44 (s, CONH) ppm. Synthèse du composé d A une solution de composé b (130 mg, 0.30 mmol) dans le THF (30 mL) avec du Cs 2 CO 3 (199 mg, 0.61 mmol) est ajoutée le composé c (465 mg, 0.6 mmol). Après une nuit d’agitation à température ambiante, le mélange est centrifugé, filtré puis concentré sous pression réduite. Le résidu brut est purifié sur une colonne de silice (éluant : DCM/AcOEt, 60/40) pour donner le composé d avec un rendement de 88% sous forme d’une huile transparente. Le composé c peut être préparé selon Rolland, O.et al. (2008) Chemistry – A European Journal, 14: 4836-4850. 31 P NMR (121 MHz, Chloroform-d) δ : 7.40 (s, P=N). 1 H NMR (600 MHz, Acetone-d6) δ : 1.96 - 1.88 (m, 1H, CH 2 CON). 2.34-2.31 (m, 2H, CH 2 -C’0 4 ), 2.44-2.48 (m, 0.5H, CH 2 CON), 2.47 - 2.53 (m, 0.5H, CH 2 CON), 2.82 – 2.79 (m, 2H, CH 2 CONH), 3.17-3.12 (m, 1H, CH 2 NH-), 3.26-3.20 (m, 1H, CH 2 NH-), 3.65 (d, 1 J HH = 14.0 Hz, 1H, CH 2 NCO), 5.12 (d, 1 J HH = 14.0 Hz, 1H, CH 2 NCO), 6.79 (t, 3 J HH = 6.1 Hz, 1H, CONH), 7.01 – 6.97 (m, 2H, C’ 0 2 H), 7.13 (d, 3 J HH = 8.4 Hz, 2H, C’ 0 3 H), 7.21 (d, 3 J HH = 8.4 Hz, 4H, C 0 2 H), 7.26 – 7.23 (m, 1H, CH Ar ), 7.29 – 7.27 (m, 6H, C 0 2 H), 7.33 – 7.30 (m, 1H, H Ar ), 7.36 - 7.40 (m, 1H, CH Ar ), 7.49 – 7.45 (m, 2H, CH Ar ,), 7.54 – 7.51 (m, 1H, H Ar ), 7.67 (d, 3 J HH = 7.4 Hz, 1H, CH Ar ), 7.85-7.84 (m, 2H, C 0 3 H), 7.86-7.85 (m, 5H, C 0 3 H), 7.87-7.86 (m, 3H, C 0 3 H), 9.99 (s, 3H, CHO), 10.00 (s, 1H, CHO), 10.01 (s, 1H, CHO). 13 C NMR (151 MHz, Acetone-d6) δ : 30.43 (s, CH 2 CONH), 34.52 (s, CH 2 CON), 35.29 (s, CH 2 NH-), 37.08 (s, CH 2 -C’ 0 4 ), 54.95 (s, -CH 2 NCO), 107.98 (s, C≡C), 114.35 (s, C≡C), 120.59 (s, C’ 0 2 H), 121.27 (s, C 0 2 H), 121.35 (s, C 0 2 H), 122.15 (s, C Ar ), 123.05 (s, C Ar ), 125.17 (s, CH Ar ), 126.87 (s, CH Ar ), 127.60 (s, CH Ar ), 127.92 (s, CH Ar ), 128.10 (s, CH Ar ), 128.79 (s, CH Ar ), 129.46 (s, C’ 0 3 H), 131.30 (s, C 0 3 H), 131.34 (s, C 0 3 H), 132.51 (s, CH Ar ), 133.98 (s, C Ar ), 134.05 (s, CH Ar ), 134.11(s, CH Ar ), 139.32 (br s, C Ar , C’ 0 4 ), 148.11 (br s, C Ar , C’ 0 1 ), 148.62(s, C Ar ), 151.80(s, C Ar ), 154.46 (br s, Cq, C 0 1 ), 154.65 (br s, Cq, C 0 1 ), 170.64 (s, CON), 170.85 (s, CONH), 190.65 (s, CHO), 190.80 (s, CHO). Composé e A une solution de composé d (300 mg, 0.25 mmpl) dans 10 mL de CHCl 3 sont ajoutés 7 équivalents de dichlorothiophospho(N-methyl)hydrazide à 0.2 M (8.75 mL, 1.75 mmol) dans le chloroforme. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation pendant 2 heures à température ambiante. A la fin de la réaction (contrôle par RMN 1H), le solvant est concentré sous pression réduite. Le résidu obtenu est solubilisé dans 2 mL de THF puis précipité par ajout dans un grand volume de pentane (100 mL). Le solide formé est filtré et séché pour obtenir le composé e avec un rendement de 83% sous forme d’une poudre blanche. 31 P NMR (243 MHz, Chloroform-d) δ : 8.30 (s, N=P), 62.42 (s, P=S), 62.47 (s, P=S), 62.57(s, P=S). 1 H NMR (600 MHz, Chloroform-d) δ : 1.96-1.91 (m, 1H, -CH 2 CON-), 2.25 (t, 3 J HH = 7.8 Hz, 2H, -CH 2 -C’ 0 4 ), 2.44-2.39 (m, 1H, CH 2 CON-), 2.84- 2.76 (m, 2H, -CH 2 -CONH-), 3.22 – 3.14 (m, 1H, -CH 2 -NHCO), 3.37-3.33 (m, 1H, -CH 2 -NHCO), 3.50 (d, 3 J HP = 13.9, 15H, CH 3 -NPS), 3.69 (d, 1 J HH = 14.0 Hz, 1H, -CH 2 -NCO), 5.13 (d, 1 J HH = 14.0 Hz, 1H, -CH 2 -NCO), 6.01 (t, 3 J HH = 6.2 Hz, 1H, -CONH-), 6.92 (d, 3 J HH = 8.1 Hz, 2H, C’ 0 2 H), 7.02 – 6.98 (m, 4H, C 0 2 H, 2H, C’ 0 3 H), 7.06 (d , 3 J HH = 8.2 Hz, 6H, C 0 2 H), 7.21 (d, 3 J HH = 7.6 Hz, 1H, H Ar ), 7.29 (d, 3 J HH = 6.1 Hz, 3H, H Ar ), 7.44 – 7.35 (m, 3H, H Ar ), 7.61- 7.58 (m, 3 J HH = 8.7 Hz, 10H, C 0 3 H), 7.64 (s, 4H, -CH=N-), 7.66 (s, 1H, -CH Ar ), 7.68 (s, 2H, -CH=N-). 13 C NMR (151 MHz, Chloroform-d) δ : 30.76(s, CH 2 CONH), 31.96 (d, 2 J CP = 12.6 Hz, CH 3 -NPS), 34.72 (s, -CH 2 CON-), 35.21 (s, -CH 2 -NH), 37.95 (s, CH 2 -C’ 0 4 ), 55.53(s, -CH 2 NCO), 107.78 (s, C≡C), 114.75 (s, C≡C), 120.88 (s, C’ 0 2 H), 121.30 (s, C’ 0 3 H), 121.39(s, C 0 2 H), 122.48 (s, C Ar ), 122.90 (s, C Ar ), 125.59 (s, CH Ar ), 127.27 (s, CH Ar ), 127.86 (s, CH Ar ), 128.33 (s, CH Ar ), 128.50 (s, CH Ar ), 128.60 (s, C 0 3 ), 128.66 (s, CH Ar ), 129.04 (s, CH Ar ), 129.35 (s, CH Ar ), 131.14 (s, CH Ar ), 131.24 (s, CH Ar ), 131.26 (s, C Ar ), 132.02 (s, CH Ar ), 138.03, 140.59, 140.62 (d, 3 J CP = 9.3 Hz, C=N), 140.74 (d, 3 J CP = 9.4 Hz, C=N), 140.71 (s, C Ar ), 140.77 (s, C Ar ), 147.98 (s, C Ar ), 148.54 (m, C’ 0 1 ), 150.94 (s, C Ar ), 151.74 (d, 2 J CP = 9.8 Hz, C 0 1 ), 151.89 (br d, C 0 1 ), 171.24(s, CONH), 172.22 (s, CON). Synthèse du composé f A une suspension de composé aminobismethylenephosphonate dérivé de la tyramine préparé selon Rolland et al. (2008), A European Journal, 14: 4836-4850, (680 mg, 1.78 mmol) dans le THF (15 mL) et de Cs 2 CO 3 (1.15g, 3.56 mmol) est ajouté le composé e (350 mg, 0.18 mmol). Après une nuit d’agitation à température ambiante, les insolubles sont éliminés par centrifugation et le solvant est éliminé par pression réduite. Le dendrimère f est obtenu sous forme d’une huile transparente avec un rendement de 97%. Le composé peut être purifié sur colonne chromatographique. 31 P NMR (243 MHz, Chloroform-d) δ : 8.33 (s, NP), 26.81 (s, POMe), 63.15 (s, PS), 6312 (s, PS), 1 H NMR (600 MHz, Chloroform-d) δ : 1.86 – 1.90 (m, 1H, CH 2 CON), 2.18 (t, 3J HH = 7.8 Hz, 2H, CH 2 -C’ 0 4 ), 2.37 – 2.41 (m, 1H, CH 2 CON), 2.74 (t, 3 J HH = 7.6 Hz, 20H, C 1 4 -CH 2 ), 3.03 (t, 3 J HH = 7.6 Hz, 20H, CH 2 -N), 3.17 (d, 2 J HP = 9.5 Hz, 40H, CH 2 -PO ), 3.25 (d, 3 J HH = 10.3 Hz, 4H, CH 3 -N-), 3.25 (d, 3 J HP = 10.0 Hz, 6H, CH 3 -N), 3.30 (d, 3 J HP = 10.0 Hz, 5H, CH 3 -N), 3.71 (d, 3 J HP = 10.4 Hz, 120H, POMe), 5.08 (d, 2 J HH = 14 Hz, 1H, CH 2 -C a ’), 6.24 (t , 3 J HH = 6.1 Hz, 1H, CONH), 6.91 (d, 3 J HH = 8.4 Hz, 2H, C’ 0 2 H), 6.96 (d, 3 J HH = 8.6 Hz, 1H, C’ 0 3 H), 7.00 (d, 3 J HH = 8.2 Hz, 5H, C 0 2 H), 7.04 (d, 3 J HH = 8.4 Hz, 3H, C 0 2 H), 7.10–7.08 (m, 20H, C 1 2 H), 7.15 (d, 3 J HH = 7.9 Hz, 20H, C 1 3 H), 7.24 (m, 2H, CH Ar ), 7.35–7.31 (m, 2H, CH Ar ), 7.60 (d, 3 J HH = 8.9 Hz, 10H, C 0 3 H), 7.63 (d, 3 J HH = 9.0 Hz, 15H, C 0 3 H, CH=N). 13 C NMR (151 MHz, Chloroform-d) δ :31.91 (s, CH 2 ), 32.92 (d, 2 J CP = 5.9 Hz, CH 3 -NPS), 33.01 (br s, C 1 4 -CH 2 , CH 3 -NPS), 34.71 (s, CH 2 CON), 35.25 (s, CH 2 -NH), 37.74 (s, CH 2 -C’ 0 4 ), 49.44 (d, 1 J CP = 157.5 Hz, CH 2 -PO), 49.49 (d, 1 J CP = 157.6 Hz, -CH 2 -PO), 51.15–53.51 (m, POMe), 55.42 (s, CH 2 NCO), 58.12 (t, 3 J CP = 7.6 Hz, CH 2 -N), 107.84 (s, C≡C), 114.71 (s, C≡C), 120.81 (s, C’ 0 2 ), 121.24–121.18 (m, C 1 2 , C 0 2 ), 122.36 (s, CH Ar ), 122.93 (s, CH Ar ), 125.50 (s, CH Ar ), 127.17 (s, CH Ar ), 127.80 (s, CH Ar ), 128.25-128.22 (m, C 0 3 ), 128.37 (s, CH Ar ), 128.64 (s, CH Ar ), 129.02 (s, CH Adibo ), 129.35 (s, C’ 0 3 ), 129.91 (s, C 1 3 ),132.14–132.07 (m, C 0 4 ), 136.54 (s, C 1 4 ), 136.58 (s, C 1 4 ), 138.01 (s, C Ar ), 138.72 (d, 3 J CP =13.8 Hz, C=N), 148.00 (s, C Ar ), 148.64 (s, C Ar ), 148.93 (s, C 1 1 ), 148.98 (s, C 1 1 ), 151.00 (s, C Ar ), 151.25 (br s, C 0 1 ), 171.52 (s, CONH), 171.90 (s, CON). Synthèse du composé NIR Ce composé est préparé selon le schéma suivant en adaptant la procédure décrite dans S. A. Klymchenko,; V. G. Pivovarenko; O. Turan; D. P. Alexander New Journal of Chemistry, 27(9), 1336-1343; 2003. Schéma de synthèse [Schéma 2] Synthèse du chlorure de 1-(3-azidopropyl)-4-methylquinolinium A une solution de iodure de 1-(3-azidopropyl)-4-methylquinolinium (1 g, 2.8 mmol) dans un mélange H 2 O/MeCN (50/50) est ajoutée une résine basique (DOWEX MARATHON MSA) (3 g). Le mélange réactionnel est agité pendant 3 jours à température ambiante. Le mélange est ensuite filtré, concentré à sec sous pression réduite. Le résidu est solubilisé dans DCM (100 mL), ensuite lavé 2 fois avec H 2 O (30 mL). La phase organique est récupérée, séchée avec Na 2 SO 4 , filtrée et concentrée sous pression réduite. Le résidu brut est rapidement purifié sur une colonne de silice (éluant : DCM/MeOH, 90/10) pour donner un solide noir avec un rendement de 70%. 1 H NMR (300 MHz, Chloroform -d) δ : 2.71-2.33 (m, 2H, CH 2 ), 3.05 (s, 3H, Me), 3.82 (t, 3 J HH = 6.5 Hz, 2H, CH 2 -N 3 ), 5.65-5.39 (m, 2H, CH 2 -N), 8.08 – 7.98 (m, 2H, CH Ar ), 8.20-8.3 (m, 1H, CH Ar ), 8.40 (d, 3 J HH = 8.5 Hz, 1H, CH Ar ), 8.56 (d, 3 J HH = 9.0 Hz, 1H, CH Ar ), 10.25 (d, 3 J HH = 6.0 Hz, 1H, CH Ar ). 13 C NMR (75 MHz, Chloroform-d) δ : 20.70 (s, Me), 29.45 (s, CH2), 48.35 (s, CH2), 54.99 (s, CH2-N), 119.10 (s, CHAr), 123.32(s, CHAr), 126.94 (s, CHAr), 129.51 (s, CAr), 130.13 (s, CHAr), 135.86 (s, CHAr), 137.14 (s, CAr), 148.79 (s, CAr), 158.56 (s, CHAr). Synthèse du composé NIR chlorure de (E)-1-(3-azidopropyl)-4-(2-(6-(diethylamino)benzofuran-2-yl)vinyl)quinolinium A une solution de clorure de 1-(3-azidopropyl)-4-methylquinolinium (500 mg, 1.9 mmol) dans EtOH (30 mL) est ajoutée du 6-Diethylaminobenzo[b]furan-2-carbaldehyde (1.2g, 7.5 mmol) et une quantité catalytique de piperidine (3 à 4 gouttes), la solution est agitée au reflux pendant 5 heures. Le mélange est évaporé à sec sous pression réduite. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant: DCM/MeOH 90/10) pour donner le NIR sous forme d’une poudre avec un rendement de 65%. 35 Cl NMR (59 MHz, Methylene Chloride-d2) δ : 233.98 (s, Cl - ). 1 H NMR (300 MHz, Methylene Chloride-d2) δ :1.25 (t, 3 J HH = 7.1 Hz, 6H, C H 3 -CH 2 -N), 2.46 – 2.23 (m, 2H, CH 2 -CH 2 -N=), 3.46 (q, 3 J HH = 7.1 Hz, 4H, CH 3 -C H 2 -N), 3.70 (t, 3 J HH = 6.3 Hz, 2H, CH 2 -N 3 ), 5.17 – 4.99 (m, 2H, CH 2 -N=), 6.62 – 6.56 (m, 1H, CH Ar ), 6.69 (d, 3 J HH = 8.9 Hz, 1H, CH Ar ), 7.15 (s, 1H, CH furane ), 7.37 (d, 3 J HH = 8.9 Hz, 1H, CH Ar ), 7.56 (d, 3 J HH = 14.9 Hz, 1H, CHC=C), 7.83 (d, 3 J HH = 8.4 Hz, 1H, CH Ar ), 7.90 (d, 3 J HH =15.2 Hz, 1H, CH C=C ), 8.09 – 8.00 (m, 1H, CH Ar ), 8.19 (d, 3 J HH = 8.9 Hz, 1H, CH Ar ), 8.23 (d, 3 J HH = 6.7 Hz, 1H, CH Ar ), 8.46 (d, 3 J HH = 8.6 Hz, 1H, CH Ar ), 9.48 (d, 3 J HH = 6.6 Hz, 1H, CH Ar ). 13 C NMR (75 MHz, Methylene Chloride-d2) δ :12.46 (s, C H 3 -CH 2 -N), 29.02 (s, C H 2 -CH 2 -N 3 ), 45.08 (s, CH 3 - C H 2 -N), 48.40 (s, CH 2 -N 3 ), 54.09 (s, CH 2 -N=), 91.85 (s, CH Ar ), 110.75 (s, CH Ar ), 114.00 (s, CH Ar ), 115.00 (s, CH Ar ), 117.06 (s, CH Ar ), 118.09 (s, C Ar ), 118.23 (s, CH Ar ), 123.05 (s, CH Ar ), 125.73 (s, CH Ar ), 126.39 (s, C Ar ), 128.71 (s, CH Ar ), 130.00 (s, CH Ar ), 134.92 (s, CH Ar ), 137.89 (s, C Ar ), 146.12 (s, CH Ar ), 149.31 (s, C Ar ), 151.11 (s, C Ar ), 152.20 (s, C Ar ), 159.46 (s, C Ar ). Synthèse du composé g A une solution de dendrimère f (300, 0.055 mmol) dans l’acétonitrile anhydre (3 mL) est ajoutée l’azoture fluorescent dans le proche infrarouge NIR (25.5 mg, 0.11 mmol). Le mélange réactionnel est agité pendant trois jours à température ambiante. Le solvant est ensuite éliminé sous pression réduite pour donner le dendrimère g avec un rendement quantitatif sous forme d’une huile bleue 31 P NMR (121 MHz, CD2Cl2) δ : 8.40 (s, N 3 P 3 ), 29.64 (s, -PO 3 Me 2 ), 63.26 (s, -P=S-). 1 H NMR (500 MHz, CD2Cl2) δ : 1.19 (t, 3 J HH = 7.1 Hz, 6H, C H 3 -CH 2 -N), 2.63 – 2.19 (m, 4H, CH 2 ), 2.74 (br s, 22H, C 1 4 -CH 2 , CH 2 ), 3.04 (br s, 20H, C 1 4 -CH 2 -C H -), 3.17 (d, 2 J HP = 9.4 Hz, 41H, -CH 2 -P, CH 2 ), 3.39-3.26 (m, 17H, CH 3 -N, CH 2 ), 3.60–3.45 (m, 4H, Me-C H 2 -N), 3.64-3.57 (m, 120H, POCH 3 ), 7.10-6.73 (m, 16H, C0 3 H, C’0 2 H, C’0 3 H, CH Ar ,), 7.13 (d, 3 J HH = 7.2 Hz, 24H, C 1 2 H, H Ar ), 7.21 (d, 3 J HH = 7.3 Hz, 22H, C 1 3 H, H Ar ), 7.37–7.25 (m, 4H, H Ar ), 7.58-7.38 (m, 4H, H Ar ), 8.10-7.57 (m, 19H, CH=N, C 0 3 H, H Ar ). 13 C NMR (126 MHz, CD2Cl2) δ : 29.66 (s, CH 3 ), 32.76 (s, CH 2 ), 32.88 (s, CH 3 ),45.08 (s, CH 2 ), 49.34 (d, 1 J CP = 157.4 Hz, N-CH 2 -P), 49.40 (d, 1 J CP = 157.4 Hz, N-CH 2 -P), 52.49 (br s, POCH 3 ), 58.07 (s, CH 2 ), 58.12 (s, CH 2 ), 58.17 (s, CH 2 ), 120.89 (s, CH Ar ), 121.13 (s, C 1 2 ), 128.21 (s, C 0 3 ), 129.38 (s, CH Ar ), 129.93 (s, C 1 3 ), 132.29 (br s, C0 4 ), 136.98 (s, C 1 4 ), 138.98 (s, CH=N--), 148.94 (br s, C1 1 ), 148.98 (br s, C1 1 ), 151.25 (br s, C0 1 ). Synthèse du composé G1-A-NIR A une solution de dendrimère g (300, 0.05 mmol) dans le CH 3 CN anhydre (30 mL) à 0°C est ajouté goutte à goutte BrTMS (0.33 mL, 2.55 mmol). Après une nuit d’agitation, le mélange est évaporé à sec sous pression réduite. Le résidu brut est repris dans le 10 mL de MeOH. Après une heure d’agitation à température ambiante, le solide est récupéré par filtration puis lavé 2 fois avec du MeOH (20 mL) et avec Et 2 O (20 mL). Le solide obtenu est séché sous pression réduite pour donner le dendrimère G1-A-NIR sous forme d’une poudre verte avec un rendement quantitatif. Le composé est ensuite converti en sel de sodium pour être analysé. A une suspension de composé acide phosphonique dans l’eau sous agitation sont ajoutés 20 équivalents d’une solution aqueuse de NaOH 0.1 M. La solution résultante est filtrée sur microfiltre à 0.4 µM puis lyophilisée pour donner le composé attendu sous forme d’une poudre bleue avec un rendement de 85%. 31 P NMR (121 MHz, Deuterium Oxide) δ : 6.78 (s, POHONa), 6.83 (s, POHONa), 9.26 (s, P=N), 64.09 (s, PS), 64.35 (s, PS). Dendrimère G1-B Le dendrimère G1-B est synthétisé selon le schéma réactionnel présenté dans le schéma 3 : [Schéma 3] - Synthèse du composé 1-G’0 A une solution de N 3 P 3 Cl 6 (2000 mg, 5,75 mmol) dans le THF (200 mL) à température ambiante sont ajouté successivement K 2 CO 3 (14,3 g, 103,5 mmol) et le 4-hydroxybenzaldéhyde (4634 mg, 37,95 mmol). Après 72h sous agitation à température ambiante, le mélange est filtré puis concentré à sec. Le résidu brut est lavé 4 à 5 fois avec du MeOH pour donner le composé 1-G’ 0 sous forme d’une poudre blanche avec un rendement de 81%. RMN 1 H (300 MHz, Chloroforme- d ) : δ (ppm) 9,83 (s, 6H, CHO), 7,74 (d, 3 J HH = 8.6 Hz, 12H, C 0 3 H), 7,12 (d, 3 J HH = 8,5 Hz, 12H, C 0 2 H). RMN 31 P (121 MHz, Chloroforme- d ) : δ (ppm) 7,15 (s, P 0 ). RMN 13 C (75 MHz, Chloroforme- d ) : δ (ppm) 190,47 (s, C HO), 154,44 (dd, 2 J CP = 5,1 Hz, 4 J CP = 2,5 Hz, C 0 1 ), 133,74 (s, C 0 4 ), 131,38 (s, C 0 3 ), 121,21 (d, 4 J CP = 2,5 Hz, C 0 2 ). - Synthèse du composé 1-G’’0 A une solution de composé 1-G’ 0 (500 mg, 0,580 mmol) dans le THF (50 mL) à température ambiante est ajoutée une solution de méthylamine à 8M dans EtOH (1,3 ml, 10,45 mmol). Après une nuit d’agitation à température ambiante, le mélange est concentré à sec pour donner le dendrimère 1-G’’ 0 sous forme d’une poudre blanche. RMN 1 H (300 MHz, Acetonitrile- d 3 ) : δ (ppm) 8,24 (d, 4 J HH = 1,7 Hz, 6H, CH=N), 7,55 (d, 3 J HH = 8,6 Hz, 12H, C 0 3 H), 6,99 (d, 3 J HH = 8,5 Hz, 12H, C 0 2 H), 3,50 (s, 18H, N-CH 3 ) RMN 31 P (121 MHz, Acetonitrile- d 3 ) : δ (ppm) 8,66 (s, P 0 ). RMN 13 C (75 MHz, Acetonitrile- d 3 ) : δ (ppm) 160,80 (s, C=N), 151,57 (dd, 2 J CP = 5,1 Hz, 4 J CP = 2,5 Hz, C 0 1 ), 133,94 (s, C 0 4 ) 129,13 (C 0 3 ), 120,66 (dd, 3 J CP = 3,2 Hz, 5 J CP = 1,8 Hz, C 0 2 ), 47,29 (s, CH 3 ). - Synthèse du composé 1-G’’’0-HCl A une solution de dendrimère 1-G’’ 0 (500 mg, 0,53 mmol) dans un mélange THF/MeOH (25/5) mL est ajoutée NaBH 4 (201 mg, 5,32 mmol). Après une nuit sous agitation à température ambiante, le mélange est concentré à sec. Le résidu brut est dilué dans 200 mL de DCM puis lavé une fois avec 50 mL d’eau distillée. La phase organique est récupérée, séchée avec Na 2 SO 4 , filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit est ensuite dissous dans du MeOH (30 mL) auquel est ajouté 9,5 mL d’HCl (1 M dans MeOH). Après 2h sous agitation à température ambiante, la solution est filtrée puis concentrée sous pression réduite. Le résidu est ensuite lavé 3 fois avec 25 mL de CH 2 Cl 2 pour donner le produit 1-G’’’ 0 -HCl (forme protonée HCl) sous forme d’une poudre blanche. RMN 1 H (400 MHz, Methanol- d 4 ) : δ (ppm) 7,54 (d, 3 J HH = 8,5 Hz, 12H, C 0 3 H), 7,05 (d, 3 J HH = 8,3 Hz, 12H, C 0 2 H), 4,27 (s, 12H, CH 2 NH), 2,75 (s, 18H, N-CH 3 ). RMN 31 P (162 MHz, Methanol- d 4 ) : δ (ppm) 8,29 (s, P 0 ). RMN 13 C (101 MHz, Methanol- d 4 ) : δ (ppm) 151,07 (dd, 2 J CP = 5,1 Hz, 4 J CP = 2,5 Hz, C 0 1 ), 131,46 (s, C 0 3 ), 128,71 (s, C 0 4 ), 121,12 (dd, 3 J = 3,2, 5 J = 1,7 Hz, (s, C 0 2 ), 51,30 (s, CH 2 NH), 31,88 (s, N-CH 3 ). - Synthèse du composé 1-G’’’0 Le composé 1-G’’’ 0 -HCl (300 mg) est solubilisé dans 25 mL d’eau distillée auquel est ajouté 25 mL d’une solution de NaOH (2M). La phase aqueuse est ensuite extraite 3 fois avec 200 mL de CH 2 Cl 2 . La phase organique est ensuite séchée avec Na 2 SO 4 , filtrée et concentrée sous vide pour donner le dendrimère 1-G’’’ 0 sous forme d’huile transparente avec un rendement de 80%. RMN 1 H (400 MHz, Chloroforme- d ) : δ (ppm) 7,12 (d, 3 J HH = 8,5 Hz, 12H, C 0 3 H), 6.91 (d, 3 J HH = 8,3 Hz, 12H, C 0 2 H), 3.69 (s, 12H, CH 2 NH), 2.43 (s, 18H, N-CH 3 ). RMN 31 P (162 MHz, Chloroforme- d ) : δ (ppm) 8,71 (s, P 0 ). RMN 13 C (101 MHz, Chloroforme- d ) : δ (ppm) 149,55 (dd, 2 J CP = 5,1 Hz, 4 J CP = 2,5 Hz, C 0 1 ), 136,70 (s, C 0 3 ), 128,99 (s, C 0 4 ), 120,82 (dd, 3 J = 3,4, 5 J = 1,7 Hz, C 0 2 ), 55,43 (s, CH 2 NH), 36,06 (s, N-CH 3 ). - Synthèse du composé 1-G1 A une solution de PSCl 3 (3,109 mL, 30,60 mmol) dans le CH 2 Cl 2 (100 mL) à température ambiante est ajoutée goutte à goutte une solution de dendrimère 1-G’’’0 (800 mg, 0,85 mmol) en présence de Et 3 N (0,740 mL, 5,31 mmol) dans le CH 2 Cl 2 (25 mL) sur une durée de 30 min. Après 3h d’agitation à température ambiante, le mélange est concentré à sec sous pression réduite. Le résidu brut est ensuite solubilisé dans 200 mL de CH 2 Cl 2 puis filtré sur un gel de silice pour donner le dendrimère 1-G1 sous forme d’huile transparente avec un rendement de 82%. RMN 1 H (300 MHz, Chloroforme- d ) : δ (ppm) 7,22 (d, 3 J HH = 8,5 Hz, 12H, C 0 3 H), 6,99 (d, 3 J HH = 8,3 Hz, 12H, C 0 2 H), 4,60 (d, 3 J HP = 15,1 Hz, 12H, CH 2 NH), 2,82 (d, 3 J HP = 16,2 Hz, 18H, N-CH 3 ). RMN 31 P (121 MHz, Chloroforme- d ) : δ (ppm) 64,12 (s, P 1 ), 8,35 (s, P 0 ). RMN 13 C (75 MHz, Chloroforme- d ) : δ (ppm) 150,26 (dd, 2 J CP = 5,1 Hz, 4 J CP = 2,5 Hz, C 0 1 ), 132,73 (d, 3 J CP = 6,5 Hz, C 0 4 ), 129,17 (s, C 0 3 ), 121,29 – 121.15 (m, C 0 2 ), 54,18 (d, 2 J CP = 5,5 Hz, CH 2 NH), 35,11 (d, 2 J CP = 2,5 Hz, N-CH 3 ). - Composé 3-G’1(OMe) A une solution de composé 1-G 1 préparé précédemment (1 mmol) dans le THF (30 mL) avec du Cs 2 CO 3 (24 mmol) est ajouté le phénol aza-bis-diméthyl-phosphonate (voir WO 2005/052031 A1) (12 mmol). Après une nuit d’agitation à température ambiante, le mélange est centrifugé, filtré puis concentré sous pression réduite. Le résidu brut est dilué dans un minimum de THF puis lavé un large volume d’éther diéthylique. Après séchage sous pression réduite le dendrimère 3-G’ 1 ( OMe ) est obtenu sous forme d’une huile transparente avec un rendement quantitatif. 31 P-{ 1 H} (243 MHz, CDCl 3 ) NMR δ = 8.40 (s, N=P), 26.85 (s, PO), 68.32 (s, PS); 1 H NMR (600 MHz, CDCl 3 ) δ = 2.75 (d, 3 J HH = 10.1 Hz, 24H, C 1 4 -CH 2 ), 2.77 (d, 3 J HP = 7.6 Hz, 18H, CH 3 ), 3.06 (d, 3 J HH = 7.7 Hz, 24H, C 1 4 -CH 2 - CH 2 ), 3.19 (d, 2 J HP = 9.4 Hz, 48H, CH 2 -P), 3.73 (d, 3 J HP = 10.6 Hz, 144H, POMe), 6.94 (d, 3 J HH = 8.2 Hz, 12H, C 0 2 H), 7.07 (d, 3 J HH = 8.1 Hz, 24H, C 1 2 H), 7.18 (br d, 3 J HH = 8.2 Hz, 36H, C 0 3 and C 1 3 H); 13 C-{ 1 H} NMR (151 MHz, CDCl 3 ) δ = 33.05 (s, CH 2 ), 33.64 s, (CH 3 N), 49.46 (dd, 1 J CP = 157.3, 3 J CP =7.2 Hz, CH 2 -P), 53.56-51.75 (m, POCH 3 ), 53.47 (d, 2 J CP = 10.3 Hz, C 1 4 - CH 2 ), 58.22 (t, 3 J CP = 7.7 Hz, C 1 4 -CH 2 - CH 2 ), 120.91 (br d, 3 J CP = 4.4 Hz, C 0 2 and C 1 2 ), 129.30 (s, C 0 3 ), 129.87 (s, C 1 3 ), 134.10 (br d, 2 J CP = 4.5 Hz, C 0 4 ), 136.22 (s, C 1 4 ), 149.35 (d, 2 J CP = 7.5 Hz, C 1 1 ), 150.01 (br s, C 0 1 ) ppm. - Composé G1-B A une solution de dendrimère 3-G 1 ( OMe ) (1g, 0.17 mmol) dans le CH 3 CN anhydre (30 mL) à 0°C est ajouté goutte à goutte BrTMS (1.34, 10.2 mmol). Après une nuit d’agitation, le mélange est concentré à sec sous pression réduite. Le résidu est agité une heure dans MeOH (10 mL), ensuite lavé 2 fois avec MeOH (20 mL puis une fois avec Et 2 O (20 mL). Le solide obtenu est séché sous pression réduite pour donner le dendrimère G1-B sous forme d’une poudre blanche avec un rendement quantitatif . Le composé G1-B n’est pas suffisamment soluble dans l’eau pour être analysé par RMN, il est converti en mono sel de sodium selon la procédure suivante : A une suspension de G1-B dans l’eau sous agitation sont ajoutés 24 équivalents d’une solution aqueuse de NaOH 0.1 M. La solution résultante est filtrée sur microfiltre à 0.4 µM puis lyophilisée pour donner la forme saline de G1-B (24 atomes de sodium) sous forme d’une poudre blanche avec un rendement de 90%. 31 P-{ 1 H} (162 MHz, D 2 O/CD 3 CN) NMR δ = 6.93 (s, PO), 9.59 (s, N=P), 68.77(s, PS); 1 H NMR (600 MHz, D 2 O/CD 3 CN) δ =2.76 (d, 3 J HP = 10.7 Hz, 18H, CH 3 ), 3.13 (t, 3 J HH = 8.8 Hz, 24H, C 1 4 -CH 2 ), 3.47 (d, 2 J HP = 11.9 Hz, 48H, CH 2 -P), 3.72 (t, 3 J HH = 8.6 Hz, 24H, C 1 4 -CH 2 - CH 2 ), 4.47 (d, 2 J HP = 13.5 Hz, 12H, C 0 4 -CH 2 ), 6.91 (d, 2 J HH = 8.1 Hz, 12H, C 0 2 H), 7.15 (d, 2 J HH = 8.1 Hz, 24H, C 1 2 H), 7.29 (d, 2 J HH = 8.3 Hz, 12H, C 0 3 H),7.38 (d, 2 J HH = 8.2 Hz, 24H, C 1 3 H); 13 C-{ 1 H} NMR (151 MHz, D 2 O/CD 3 CN) δ =29.07 (s, C 1 4 - CH 2 ), 33.58 (s, CH 3 ), 52.91 (d, 1 J CP = 127.6 Hz, CH 2 -P), 52.94 (s, C 0 4 - CH 2 ), 57.81 (s, C 1 4 -CH 2 - CH 2 ), 121.14 (br s, C 0 2 ), 121.42 (d, 3 J CP = 4.4 Hz C 1 2 ), 129.61 (s, C 0 3 ), 130.59 (s, C 1 3 ), 133.95 (s, C 1 4 ), 134.89 (s, C 0 4 ), 149.18 (s, C 0 1 ), 149.60 (d, 3 J CP = 7.6 Hz, C 1 1 ) ppm. Dendrimère G1-B-NIR Schéma de synthèse : [Schéma 4] Composé m A une solution de 4-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)benzaldehyde (Fu H. et al. Molecules, 2014,16 :17715-17726) (1g, 4.83 mmol) dans le THF (30 mL) est ajoutée une solution de méthylamine (8M dans EtOH) (1,8 mL, 14,49 mmol). Après une nuit d’agitation à température ambiante, le mélange est concentré à sec pour donner le produit m sous forme d’une huile incolore avec un rendement de 95%. 1 H NMR (300 MHz, Methanol-d4) δ 1.39 – 1.74 (m, 3H, -CH 2 -), 1.75 – 1.92 (m, 2H, -CH 2 -), 1.90 – 2.06 (m, 1H, -CH 2 -O), 3.55 – 3.62 (m, 1H, -CH 2 -O), 3.79 – 3.87 (m, 1H, -CH 2 -), 5.46 (t, 3 J HH = 3.1 Hz, 1H, O-CH-O ), 7.08 (d, 3 J HH = 8.8 Hz, 2H, C 0 2H), 7.63 (d, 3 J HH = 8.8 Hz, 2H, C 0 3H), 8.21 (q, 4 J HH = 1.6 Hz, 1H, -CH=N-). 13 C NMR (75 MHz, Methanol-d4) δ 18.46 (s, -CH 2 -), 24.89 (s, -CH 2 -), 29.95 (s, -CH 2 -), 46.32 (s, CH 3 -), 61.73 (s, -CH 2 -O), 96.10 (s, -CH-O), 116.17 (s, C 0 2 ), 129.22 (s, C 0 4 ), 129.30 (s, C 0 3 ), 159.41 (s, C 0 4 ), 163.46 (s, C=N). Composé n A une solution de composé m (1g, 4.5 mmol), Pd/C à10% (225 mg) et MeOH (40 mL) sont introduits dans un tube de type Fisher Porter. Le tube est placé lentement sous vide de façon à chasser l’air. La pression en H 2 est ensuite ajustée à 5 bars. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures à température ambiante. Après une dépressurisation lente, le mélange réactionnel est récupéré, filtré et concentré sous pression réduite. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant: AcOEt) pour obtenir le composé n sous forme d’une huile transparente avec un rendement de 80%. 1 H NMR (300 MHz, Chloroform -d) δ 1.33 – 1.72 (m, 3H, -CH 2 -), 1.77 – 1.82 (m, 2H, -CH 2 -), 1.87 – 2.07 (m, 1H, -CH 2 -O), 2.36 (s, 3H, CH 3 ), 3.50 – 3.57 (m, 1H, -CH 2 -O), 3.61 (s, 2H, -CH 2 -N), 3.76 – 3.99 (m, 1H, -CH 2 -), 5.34 (t, 3 J HH = 3.3 Hz, 1H, O-CH-O), 6.96 (d, 3 J HH = 8.6 Hz, 2H, C 0 2 H), 7.09 – 7.26 (m,2H, C 0 2 H). 13 C NMR (75 MHz, Chloroform-d) δ 18.78 (s, -CH 2 -), 25.16 (s, -CH 2 -), 30.33 (s, -CH 2 -), 35.63 (s, -CH 3 ), 55.31 (s, -CH 2 -N), 61.96 (s, -CH 2 -O), 96.38 (s, O-CH-O), 116.36 (s, C 0 2 ), 129.25 (s, C 0 3 ), 132.78 (s, C 0 3 ), 156.12 (s, C 0 4 ). Composé o A une solution de PSCl 3 (2.2 mL, 22.6 mmol) dans le DCM (100 mL) est ajoutée goutte à goutte une solution de composé n (1g, 4.52 mmol) en présence de Et 3 N (0,62 mL, 4.52 mmol) dans le DCM (40 mL) sur une durée de 30 min. Après une 4 heure d’agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est concentré à sec sous pression réduite. Le résidu brut est ensuite solubilisé dans 200 mL de DCM puis filtré sur un gel de silice pour donner le dendron o sous forme d’huile transparente avec un rendement de 85%. 31 P NMR (162 MHz, Chloroform-d) δ 63.18 (s, PS). Composé p A une solution de composé o (1 mmol) dans le THF (30 mL) avec du Cs 2 CO 3 (4 mmol) est ajoutée le phénol aminobismethylene phosphonate dérivé de la tyramine (Rolland et al. (2008), A European Journal, 14: 4836-4850) (2 mmol). Après une nuit sous agitation à température ambiante, le mélange est centrifugé, filtré puis concentré sous pression réduite. Le résidu brut est ensuite purifié par colonne chromatographique sur gel de silice avec mélange d’éluant (MeOH/EtOAc) pour donner, après élimination des solvants sous pressions réduite, le composé p sous forme d’une huile transparente avec 85% de rendement. 31 P NMR (162 MHz, Chloroform-d) δ 26.95 (s, POMe), 68.48 (s, P=N). 1 H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 1.58-1.72 (m, 3H, -CH 2 ), 1.81-1.94 (m, 2H, CH 2 ), 1.96-2.05 (m, 1H, CH 2 ), 2.78-2.83 (m, 7H, C 1 4 -CH 2 , CH 3 N), 3.09 (t, 3 J HH = 7.6 Hz, 4H, CH 2 N), 3.22 (d, 3 J HH = 8.9 Hz, 8H, ), 3.55-3.67 (m, 1H, CH 2 -O), 3.75 (d, 3 J HP = 10.3 Hz, 24H, POMe), 3.89-3.95 (m, 1H, CH 2 -O), 4.44 (d, 3 J HP = 12.0 Hz, 2H), 5.41 (t, 3 J HH = 3.3 Hz, 1H, O-CH 2 -O), 6.99 (d, 3 J HH = 8.6 Hz, 2H, C 0 2 H), 7.12 (d, 3 J HH = 8.4, 4H, C 1 2 H), 7.16-7.25 (m, 6H, C 0 3 H, C 1 3H). Composé q A une solution de composé p (1 mmol) dans MeOH (30 mL) est ajouté du pyridinium p-toluenesulfonate (1.5 mmol). Le mélange réactionnel est agité pendant une nuit à température ambiante. Le solvant est éliminé sous pression réduite et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : MeOH/AcOEt) pour donner après élimination des solvants sous pression réduite le composé q sous forme d’une huile transparente avec un rendement de 80%. 31 P NMR (162 MHz, Chloroform-d) δ 26.76 (s, POMe), 68.38 (s, PS). Composé r A une suspension de dendron q (1g, 1.04 mmol) dans le THF (30 mL) avec du Cs 2 CO 3 (794 mg, 2.08 mmol) est ajouté l’hexachlorocyclotriphosphazene (70 mg, 0.20 mmol). Après une nuit d’agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est centrifugé, filtré sur célite puis concentré sous pression réduite. Le composé r est obtenu sous forme d’une huile transparente avec un rendement de 90%. 31 P NMR (121 MHz, Chloroform -d) δ 6.50 (d, 2 J PP = 83.3 Hz, P=N), 21.50 (dd, 2 J PP = 85.2, 2 J PP = 81.6 Hz, P=N), 26.41 (s, POMe), 68.12 (s, PS). Composé s A une suspension du composé b (130 mg, 0.30 mmol) dans le THF (30 mL) avec du Cs 2 CO 3 (199 mg, 0.61 mmol) est ajouté le composé r 989 mg, 0.2 mmol). Après une nuit d’agitation à 45°C, le mélange est centrifugé, filtré puis concentré sous pression réduite. Le résidu est purifié sur une colonne de silice avec DCM/MeOH (60/40) pour donner le dendrimère t avec un rendement de 90%. Le produit peut être purifié par chromatographie flash sur colonne de silice. 31 P NMR (162 MHz, Chloroform- d ) δ 8.45 (s, P=N), 26.89 (s, POMe), 68.33 (s, PS). Composé t A une solution de dendrimère s (500, 0.093 mmol) dans l’acétonitrile anhydre (3 mL) est ajoutée le composé azoture NIR (43.4 mg, 0.18 mmol). Le mélange réactionnel est agité pendant trois jours à température ambiante. Le solvant est ensuite éliminé sous pression réduite pour donner le dendrimère t avec un rendement quantitatif sous forme d’une huile bleue. 31 P NMR (162 MHz, Chloroform-d) δ 8.40 (s, P=N), 26.86 (s, POMe), 68.38 (s, PS). G1B-NIR A une solution de dendrimère t (500, 0.086 mmol) dans le CH 3 CN anhydre (50 mL) maintenue à 0°C est ajouté goutte à goutte du BrTMS (0.56 mL, 4.38 mmol). Après une nuit d’agitation, le mélange est concentré à sec sous pression réduite. Le résidu brut est repris dans le 10 mL de MeOH. Après une heure d’agitation à température ambiante, le solide est récupéré par filtration puis lavé 2 fois avec du MeOH (20 mL) et avec Et2O (20 mL). Le solide obtenu est ensuite séché sous pression réduite pour donner le dendrimère G1B-NIR sous forme d’une poudre verte avec un rendement quantitatif. Le composé est ensuite converti en sel de sodium pour être analysé. A une suspension de composé acide phosphonique dans l’eau sous agitation sont ajoutés 20 équivalents d’une solution aqueuse de NaOH 0.1 M. La solution résultante est filtrée sur microfiltre à 0.4 µM puis lyophilisée pour donner le composé attendu sous forme d’une poudre bleue avec un rendement de 85%. 31 P NMR (162 MHz, Deuterium Oxide) δ 6.66 (s, PO 3 HNa), 6.69 (s, PO 3 HNa), 6.74 (s, PO 3 HNa), 9.42 (s, P=N), 68.49 (s, PS), 68.69 (s, PS). 2. Préparation des vésicules La formulation du dendrimère est obtenue par mélange dans l’eau du tensioactif catanionique TriCat-n et du précurseur dendrimérique acide G1-X [Fig. 1]. Contre-exemple : Préparation d’une vésicule comprenant le dendrimère ABP A 5,82 mg de dendrimère ABP , 1,02 mg de N-dodécylamino-1-déoxylactitol (L-Hyd 12) et 0,87 mg d’acide bis-α-(hydroxydodécyl)phosphinique sont ajoutés à température ambiante 2 mL d’eau ultrapure. Le mélange est vortexé pendant 5 min puis soniqué à l’aide d’une sonde à ultrasons pendant 15 min à la puissance 3 avec 30% de cycles actifs en contrôlant la température à 45°C. Préparation d’une vésicule comprenant le dendrimère G1-A (TriCat12/G1-A) A 5,29 mg de dendrimère G1-A , 1,02 mg de N-dodécylamino-1-déoxylactitol (L-Hyd 12) et 0,87 mg d’acide bis-α-(hydroxydodécyl)phosphinique sont ajoutés à température ambiante 2 mL d’eau ultrapure. Le mélange est vortexé pendant 5 min puis soniqué à l’aide d’une sonde à ultrasons pendant 15 min à la puissance 3 avec 30% de cycles actifs en contrôlant la température à 45°C. Préparation d’une vésicule comprenant le dendrimère G1-X-NIR A 5,31 mg de dendrimère G1- X -NIR , 1,02 mg de N-dodécylamino-1-déoxylactitol (L-Hyd 12) et 0,87 mg d’acide bis-α-(hydroxydodécyl)phosphinique sont ajoutés à température ambiante 2 mL d’eau ultrapure. Le mélange est vortexé pendant 5 min puis soniqué à l’aide d’une sonde à ultrasons pendant 15 min à la puissance 3 avec 30% de cycles actifs en contrôlant la température à 45°C. Préparation d’une vésicule comprenant le dendrimère G1-B (TriCat12/G1-B) A 5,21 mg de dendrimère G1-B , 1,02 mg de N-dodécylamino-1-déoxylactitol (L-Hyd 12) et 0,87 mg de d’acide bis-α-(hydroxydodécyl)phosphinique sont ajoutés à température ambiante 2 mL d’eau ultrapure. Le mélange est vortexé pendant 5 min puis laissé sous agitation magnétique (500 tr/min) pendant 24 h à température ambiante. 3. Mesure par DLS La mesure de la taille et de la distribution de la taille des vésicules est mesurée par DLS (diffusion dynamique de lumière). Chaque analyse est effectuée sur les échantillons, filtrés à 1,2 μm avec un filtre Minisart Acétate de cellulose, placés dans des cuves de plastique (cuves Polystyrène semi-micro, Brand). Les mesures sont effectuées sur un appareil Malvern Instruments Nano S ou Nano ZS, tous deux équipés d’un laser He-Ne qui émet une lumière monochromatique de longueur d’onde 633 nm. L’intensité diffusée est mesurée à 25,0°C ± 0,1°C à un angle de 173°. Le résultat est une moyenne de 4 mesures et a été traité par l’algorithme Contin. 4. Mesure de la température de transition Les échantillons sont préparés saturés à 1.10 -2 M en TriCat12. Des quantités équimolaires de L-Hyd12 et d’acide phosphonique sont dispersées à une concentration de 1.10 -2 M et de dendrimère à la concentration de 5.10 -4 M dans 2 mL eau. Le mélange est mis sous agitation à 300 rpm pendant 2 jours. Deux méthodes sont réalisées: la première consiste à lyophiliser le milieu puis le mettre en dispersion dans 100 µL d’eau suivie du protocole de formation classique des vésicules. La deuxième méthode consiste à soniquer tout de suite 100 µL du milieu sans passer par l’étape de lyophilisation. Un résultat identique est obtenu par les deux méthodes. Une autre méthode consiste à soniquer immédiatement le mélange suivant le protocole classique sans passer par l’étape d’agitation, des résultats similaires sont obtenus mais avec cette méthode il y a plus de bruit de fond. Les mesures sont ensuite réalisées sur un appareil DSC 1 STARe System avec capteur MultiSTAR® HSS8. Dans ce dispositif, le creuset échantillon et le creuset référence sont placés dans un même four. Afin de maximiser l’intensité du signal du produit, la référence est remplie avec 75 μL du solvant tandis que 75 μL de la solution à analyser sont placés dans le creuset échantillon. La méthode mise au point consiste à amener l’échantillon de 25 à 5°C à 5°C/min puis de faire 4 cycles de 5 à 60°C à 2°C/min. 5. Mesure du taux d’encapsulation Afin d’évaluer l’efficacité d’encapsulation du dendrimère dans les vésicules de TriCat12/dendrimère, un dosage spectrofluorimétrique a été mis au point en utilisant l’analogue fluorescent du dendrimère, G1-X-NIR. La quantité totale de G1-X-NIR (encapsulées ou non) a été déterminée par mesure de l’intensité de fluorescence (IF) d’un échantillon pour lequel les structures vésiculaires ont été cassées par addition de méthanol dans la solution (1mL de méthanol pour 20 μL de solution vésiculaire). En parallèle, le G1-X-NIR non encapsulée a été séparé des vésicules par une filtration à 1,2 µm (filtre Minisart Acétate de cellulose, Sartorius). Une solution contrôle de G1-X-NIR a permis de vérifier l’élimination de 70% (SD= 3%) de G1-X -NIR par cette technique (à tenir en compte dans le calcul). Après dilution du filtrat dans du méthanol (1 mL méthanol pour 20 µL de filtrat), la mesure de l’intensité de fluorescence (IF) a permis de quantifier le G1-X-NIR majoritairement encapsulée. 6. Observation par cryoMEB L’observation des vésicules a été réalisée par microscopie électronique à balayage après cryofracture (cryoMEB). L’appareil utilisé pour l’analyse est un ESEM Quanta FEG250 de l’entreprise FEI (Platerforme TRI-Genotoul), opérant à 5 kV et environ 1.10 -4 Pa. Les solutions sont déposées sur le porte échantillon puis solidifiées dans du diazote pâteux (-210°C). Elles sont ensuite fracturées dans une chambre à -140°C. Puis l’échantillon subit une étape de sublimation à -90°C pendant 5 minutes. L’échantillon subit alors une métallisation de 60 s au platine par plasma. Il est transféré pour l’observation dans la chambre cryogénique du MEB, maintenue en tout temps à -140°C par un flux de diazote gazeux. 7. Mesure de la stabilité de la formulation à 4°C Les solutions de TriCat12/dendrimère sont stockées à 4°C dans des cuves de DLS. Au moment de la mesure de la taille, la solution est mise à température ambiante pendant 5 min puis la taille est mesurée à 25°C en DLS. 8. Mesure de la stabilité de la formulation après congélation Afin d’évaluer la stabilité de la formulation à la congélation, des aliquotes de la formulation de TriCat12/dendrimère sont congelées à -20°C. Après un temps t (jours), la solution est décongelée dans un bain à ultrasons à 25°C pendant 10 min, filtrée à 1,2 µm puis la taille est mesurée en DLS à 25°C. 9. Evaluation de la pénétration cutanée in vitro sur cellule de Franz Quantification du dendrimère fluorescent (G1X-NIR) dans la peau La méthode de diffusion en cellules à flux continu de type Franz (PermGear®, Standard Franz Cells) est utilisée pour étudier in vitro la pénétration cutanée de la formulation au cours du temps sans la perturbation du système. Ces expériences ont été faites sur la peau d’oreilles de cochons qui représente un modèle prédictif de la pénétration cutanée humaine, ayant des propriétés histologiques et physiologiques similaires à la peau humaine. Des échantillons de peau d’oreilles porcines ont été obtenus de l’abattoir (Arcadie Sud-Ouest, Montauban), de façon que le tissu cutané soit intact. Après dissection de la peau du tissu-sous-jacent, la peau est nettoyée avec de l’eau, dégraissée, épilée puis coupée en morceaux de carré d’environ 2 cm. Ces patchs de peau sont congelés à -80˚C pour une utilisation subséquente. Lors de l’expérience, les peaux ont été décongelées à température ambiante et placées sur les cellules de Franz dans le compartiment donneur de façon que la face qui baigne dans le liquide récepteur corresponde à la face interne de la peau alors que la face qui est en contact avec l’air est celle du stratum cornéum. Un analogue fluorescent de dendrimère est utilisé avec une émission dans le proche infrarouge (G1-X-NIR), pour les études de pénétration et rétention cutanée in vitro . Une dose (300 µl) de PBS (blanc), de G1-X-NIR seul ou formulé dans les vésicules de TriCat12/G1-X-NIR a été déposée sur la face du stratum cornéum, en utilisant une micropipette, pour couvrir la surface de diffusion de 1,77 cm² pendant 24 h. La surface externe de la cellule a été couverte avec du parafilm pour éviter l’évaporation et les variations du volume. Le compartiment récepteur en contact avec la surface interne de la peau a été remplie par 12 mL d’une solution tampon phosphate (PBS; pH=7.45), thermostaté à 37°C et maintenue sous agitation constante (300 rpm) pour assurer un renouvellement constant du volume, ce qui se rapproche des conditions physiologiques. Après 24 h, la peau est rincée avec du PBS afin d’éliminer le reste du dépôt et séchée avec du papier absorbant. La zone de traitement est ensuite découpée en petits morceaux dans un pilulier avec 3 mL de PBS et homogénéisée à l’aide d’un disperseur (Ultra-Turrax Ika®- Werke, T 25 Basic) durant 5 min à 21500 rpm. La dispersion est ensuite filtrée à 0,45 µm (filtre Minisart Acétate de cellulose, Sartorius) puis le dendrimère dans le filtrat est dosé par spectrofluorométrie (λ excitation = 632 nm et λ emission = 650 à 850 nm). Observation de la pénétration cutanée par microscopie confocale La microscopie confocale est choisie pour évaluer la profondeur de pénétration du G1-X-NIR dans les différentes couches de la peau (Stratum cornéum, épiderme viable et le derme). La première étape est la diffusion du G1-X-NIR sur cellule de Franz, selon le protocole décrit précédemment. Après 24h d’application, la peau est rincée délicatement au PBS et séchée. La zone traitée est coupée en trois morceaux égaux pour être représentatif de toute la peau. Ces trois morceaux sont congelés, inclus dans de l’O.C.T (Tissue-Tek®) dans un moule plastique (Tissue-Tek® Cryomold®), dans de l’isopentane refroidi à -80°C. Des coupes de 10 µm d’épaisseur obtenues à l’aide de cryostat (CM1950, Leica), sont ensuite observées à l’aide d’un microscope confocal SP8 Leica à objectif inversé (63X), à immersion huile. Les paramètres utilisés lors de l’observation sur le logiciel LAS X sont : λ excitation = 635 nm et λ emission = 650 à 800 nm. La peau traitée avec du PBS est utilisé comme un blanc pour évaluer l’auto-fluorescence de la peau. Les images obtenues sont ensuite traitées sur le logiciel Fiji avec le plugin Bio-formats. 10. Purification des monocytes et analyse par FACS Le sang humain des donneurs sains est récupéré de l’établissement français du sang (EFS, Toulouse, France). Les cellules mononucléées sanguines périphériques (PBMCs : peripheral blood mononuclear cells) sont ensuite séparées du sang à l’aide d’un gradient de densité avec une solution de Pancoll (PANBiotech GmbH) par centrifugation à 1200 rpm pendant 20 min à 20°C. A partir des PBMCs, les monocytes sont isolées par une sélection négative avec des anticorps dirigés contre toutes les cellules du sang (cellules T, cellules B, cellules NK, cellules dendritiques, érythrocytes et granulocytes) excepté les monocytes en utilisant le kit Dynabeads® Untouched™ Human Monocytes (Invitrogen). La pureté des monocytes a été vérifiée, en cytométrie en flux, supérieure à 90% pour chaque donneur avec un anticorps anti-CD14-APC-Cy7 (Miltenyi Biotec). Les monocytes fraichement purifiés ont été resuspendus dans une plaque 48 puits à 1 million par ml dans du RPMI 1640 + GLUTAMAX, pénicilline et streptomycine à 100 U/mL et 10% de sérum de veau fœtal (SVF). Toutes les molécules ont été ajoutées au début des cultures à la concentration de 20 µM de G1-X sauf le TriCat12 seul à la concentration de 40 µM. Après 5 jours de culture à 37°C, la morphologie des monocytes a été analysée par cytométrie en flux avec un cytomètre MACSQUANT Q10 (Miltenyi Biotec). Toutes les données de cytométrie ont été analysées par le logiciel Flowlogic™ (Miltenyi Biotec). II. Résultats 1. Formulation TriCat12/ABP Le procédé de préparation de la formulation TriCat12/ABP permet d’obtenir des vésicules dont le diamètre moyen se situe vers 250-300 nm avec une température de transition de la bicouche de 37°C . Le procédé de préparation de la formulation TriCat12/ABP est capable d’encapsuler en moyenne entre 25% du dendrimère initialement engagé dans la formulation. La séparation du dendrimère non encapsulé est difficilement accessible avec les techniques connues de l’homme du métier. Le potentiel Zeta est de -55 ± 4 mV et le pH de la solution ~ 6,5. 2. Formulation TriCat12/G1-A 2.1 Caractérisation des vésicules Le procédé de préparation de la formulation mettant en jeu un précurseur le dendrimère sous sa forme acide phosphonique permet d’augmenter sa capacité d’insertion dans la partie hydrophobe des vésicules et ainsi d’obtenir un taux d’encapsulation moyen de 75% et de séparer simplement l’actif non encapsulé par filtration. La formulation du dendrimère G1-A par le TriCat-12 donne lieu à la formation de vésicules, dont le diamètre moyen se situe vers 100-350 nm . La formulation TriCat 12/G1-A possède une température de transition de phase de 33°C. En dessous de 33°C, la bicouche membranaire de la vésicule est rigide et stable. Au-dessus de 33°C (la température de peau oscillant entre 30 et 35°C), cette membrane devient fluide et ses propriétés de bio-adressage sont augmentées (diffusion dans les tissus, fusion avec les cellules, relargage des principes actifs) . Le potentiel Zeta est de -53 ± 2.5 mV et le pH de la solution ~ 2,8. De même, la formulation du dendrimère G1-A-NIR par le TriCat-12 donne lieu à la formation de vésicules, dont le diamètre moyen se situe vers 100-350 nm. Le pH de la solution est ~ 2,8. La formulation TriCat 12/G1-A-NIR est stable pendant au moins 1 mois lorsqu’elle est stockée à 4°C en solution. 2.2 Stabilité de la formulation TriCat12/G1-A La formulation TriCat 12/G1-A est stable pendant plus de deux mois lorsqu’elles sont stockées à 4°C en solution . Des expériences ont été réalisées pour vérifier si les vésicules pouvaient être endommagées par une étape de congélation. Ces expériences démontrent qu’on peut congeler les formulations et les décongeler sans modifications de leurs propriétés physico-chimiques . 2.3 Pénétration de la formulation dans la peau La méthode de diffusion en cellules à flux continu de type Franz est utilisée pour étudier in vitro la pénétration cutanée de la formulation au cours du temps. Ces expériences ont été faites sur les peaux d’oreilles de cochons, dont les propriétés histologiques et physiologiques sont similaires à celles de la peau humaine. Ces expériences montrent qu’après 24h, la quantité de dendrimère qui a pénétré dans la peau est significativement supérieure lorsque celui-ci est formulé ). La microscopie confocale a été choisie pour évaluer la profondeur de pénétration du dendrimère dans les différentes couches de la peau (stratum corneum, épiderme viable et le derme). Les expériences en microscopie confocale montrent que le dendrimère ne pénètre dans l’épiderme et le derme que lorsqu’il est formulé dans les vésicules, sinon il reste dans les couches superficielles de la peau (stratum corneum) . 2.4 Activation des monocytes Un changement de morphologie (augmentation de la granulosité et de la taille) traduit une activation des monocytes humains primaires. Les résultats montrent que les vésicules TriCat12 seules ne modifient pas la morphologie des monocytes humains, alors que les vésicules TriCat12 chargées avec le dendrimère G1-A entrainent une augmentation de la granulosité et de la taille. Par ailleurs, on note que près de la moitié des cellules sont dans l’ellipse des monocytes activés . 3. Formulation TriCat 12/G1-B 3.1 Caractérisation des vésicules La formulation du dendrimère G1-B par le TriCat-12 donne lieu à la formation de vésicules, dont le diamètre moyen se situe vers 200-300 nm . Le taux d’encapsulation moyen est 70 % en dendrimère G1-B. Le Potentiel Zeta est de -41 ± 2.6 mV et le pH de la solution ~ 2.7 En dessous de 33°C la bicouche membranaire des formulations est rigide et très stable. Au-dessus de 33°C (la température de la peau oscillant entre 30 et 35°C), cette membrane devient fluide et ses propriétés de bio-adressage sont augmentées (diffusion dans les tissus, fusion avec les cellules, relargage des principes actifs) . 3.2 Stabilité de la formulation Les formulations sont stables (en terme de diamètre et de quantité (représentée par l’intensité diffusée DCR)) pendant plus de deux mois lorsqu’elles sont stockées à 4°C en solution . 3.3 Pénétration de la formulation dans la peau Des expériences sur peau de cochon ont été réalisées pour vérifier par microscopie confocale si le dendrimère pouvait pénétrer dans les couches profondes de la peau. Ces clichés montrent que le dendrimère pénètre mieux dans l’épiderme lorsqu’il est formulé dans les vésicules, sinon il reste préférentiellement dans les c ouches superficielles de la peau (stratum corneum) . Vésicule comprenant : - un tensioactif catanionique de formule (I) ou un mélange de tensioactifs catanioniques de formule générale (I) : [Chem . 1] (I) dans laquelle est un sucre, R 1 est choisi parmi H et une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 20 chaînons, R 2 est une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 20 chaînons, R 3 et R 4 sont indépendamment l’un de l’autre une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 19 chaînons ; et - un dendrimère de formule (II) : [Chem. 2] (II) dans laquelle est choisi parmi les pentoses, les hexoses et les groupes de formules suivantes : , , , et , Z est choisi parmi -CH 2 - et -CH=N-, R est choisi parmi H et C1-C12-alkyle, A est choisi parmi et , où X est choisi parmi S et O, et n est nombre entier compris entre 3 et 8. Vésicule selon la revendication 1, caractérisée en ce que, dans le tensioactif catanionique dérivé de sucre de formule (I), est le 1-déoxylactilol. Vésicule selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que, dans le dendrimère de formule (II), est [N=P] 3 . Vésicule selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le ratio molaire tensioactif catanionique/dendrimère est compris entre 50/1 et 1/1. Vésicule selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le taux d’encapsulation du dendrimère de formule (I) dans le tensioactif catanionique de formule (II) est supérieur à 50%. Vésicule selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le diamètre moyen est compris entre 50 et 500 nm. Composition pharmaceutique comprenant au moins une vésicule selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 et un excipient pharmaceutiquement acceptable. Vésicule selon les revendications 1 à 6 ou composition pharmaceutique selon la revendication 7 pour son utilisation en tant que médicament. Vésicule selon les revendications 1 à 6 ou composition pharmaceutique selon la revendication 7 pour son utilisation dans le traitement du psoriasis. Vésicule selon les revendications 1 à 6 ou composition pharmaceutique selon la revendication 7 pour son utilisation dans le traitement du psoriasis par administration par voie topique. Procédé de préparation d’une vésicule selon les revendications 1 à 6 comprenant successivement les étapes suivantes : (a) mélange d’un ou plusieurs N-alkylaminosucres de formule (I’) : [Chem. 5] (I’) dans laquelle est un sucre, R 1 est choisi parmi H et une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 20 chaînons, R 2 est une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 20 chaînons; et d’un acide phosphinique de formule (I’’) : [Chem. 6] (I’’) dans laquelle R 3 et R 4 sont indépendamment l’un de l’autre une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, de 1 à 19 chaînons et du dendrimère de formule (II) tel que défini dans les revendications 1 à 6 ; et (b) optionnellement, séparation de la vésicule obtenue du dendrimère non-encapsulé.