Brevet FR3104947A1 — publié le 20210625

La présente invention concerne un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec, ainsi qu’une composition dermatologique ou dermo-cosmétique le contenant, pour leur utilisation dans le traitement et/ou la prévention de dermatoses inflammatoires, notamment le psoriasis, la dermatite atopique ou l’acné. Extrait de Curcuma longa sans curcuminoïde, dans les dermatoses inflammatoires DOMAINE TECHNIQUE DE L’INVENTION Le domaine de l’invention concerne un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec, ainsi qu’une composition dermatologique ou dermo-cosmétique le contenant, pour leur utilisation dans le traitement et/ou la prévention de dermatoses inflammatoires, notamment le posriasis, la dermatite atopique ou l’acné. ETAT DE LA TECHNIQUE Les dermatoses sont des affections de la peau et des muqueuses, qui se caractérisent par des manifestations inesthétiques comme des rougeurs et des plaques de desquamation. Plusieurs pathologies sont regroupées sous la dénomination de dermatoses inflammatoires. On peut citer, à titre d’exemples, le psoriasis, la dermatite atopique, l’eczéma, l’acné, la rosacée, le lichen plan, les prurigos, ou encore les dermites séborrhéiques. Ces dermatoses résultent bien souvent de phénomènes inflammatoires et/ou de désordres immunitaires. Le psoriasis, maladie inflammatoire de la peau par excellence, se caractérise par l’apparition d’épaisses plaques de peau qui desquament. Ces plaques sont présentes à différents endroits du corps, le plus souvent sur les coudes, les genoux et le cuir chevelu. Cette maladie chronique évolue par cycles, avec des périodes de rémission. Le psoriasis peut être très désagréable voire même douloureux lorsqu’il se manifeste sur la paume des mains, la plante des pieds ou dans les plis de la peau. Il existe plusieurs types de psoriasis, la forme la plus courante est le psoriasis en plaques ou psoriasis vulgaire. Les autres formes sont le psoriasis en gouttes, érythrodermique et pustuleux. La dermatite atopique est la manifestation cutanée de l’atopie, c’est une dermatose inflammatoire chronique, survenant sur un terrain génétiquement déterminé. Elle est maintenant considérée comme une préoccupation majeure de la santé publique. La dermatite atopique est souvent associée à d’autres désordres atopiques tels que la rhinite allergique et l’asthme. Cette affection apparait le plus souvent au cours de la petite enfance et se caractérise par des éruptions répétées pendant plusieurs années. Elle évolue par poussées entrecoupées de rémissions spontanées. Les lésions se caractérisent par une sécheresse cutanée importante et par des lésions inflammatoires : éruptions érythémateuses papuleuses, vésiculeuses, squameuses et très prurigineuses. Sur le plan histologique, la dermatite atopique se caractérise comme bien des dermatoses, par une infiltration de lymphocytes, monocytes et de polynucléaires éosinophiles autour de petits vaisseaux et des capillaires. Sur le plan biochimique, il a été montré que les chimiokines sont fortement impliquées dans les dermatoses et dans les maladies inflammatoires chroniques en général. L’acné est une pathologie cutanée commune, résultat d’une inflammation des follicules pilo-sébacés due en grande partie à la colonisation de Cutibacterium acnes dans l’infundibulum (Dréno et al., JEADV 2018, 32 (Suppl 2) 5-14). Dans le cas d’affections légères d’une dermatose inflammatoire, des émollients et des kératolytiques sont préconisés. Ces traitements ont pour but de rendre les lésions tolérables pour le malade et ils n’ont souvent qu’un effet suspensif. Pour les affections plus sévères, ce sont des anti-inflammatoires ou des corticoïdes susceptibles de réguler l’inflammation de la peau, qui sont utilisés depuis plusieurs années. Tous ces traitements ont des effets secondaires importants, parfois très lourds pour les patients. Du fait des effets secondaires importants des traitements existants précités pour les troubles cutanés ou du cuir chevelu résultant de l’état d’activation de la réponse immunitaire innée et inflammatoire épidermique de la peau, il existe un réel besoin de disposer de nouveaux actifs cosmétiques ou dermatologiques et de nouvelles compositions cosmétiques ou dermatologiques utilisables en relais ou en accompagnement des traitements desdits troubles cutanés ou du cuir chevelu. Par ailleurs, la dermatose inflammatoire, notamment le psoriasis ou la dermatite atopique, a des origines ou des causes multifactorielles. Les raisons de ces maladies dites auto-immunes ne sont pas encore complètement élucidées mais seraient liées à une dérégulation du système immunitaire notamment au niveau des réponses cellulaires. On peut classer les réponses cellulaires en 3 catégories : Th1, Th2 et récemment Th17. Bien que le psoriasis et la dermatite atopique présentent des différences au niveau des signes cliniques, elles présenteraient des ressemblances notamment au niveau d’IL-17 et IL-22 caractéristiques de la réponse Th17 (Miyagaki and Sugaya, J. Dermatol Sci. 78(2) 89-94, 2015). Il-17 et IL-22 seraient donc des cibles intéressantes pour traiter ces maladies. Ainsi des anticorps monoclonaux dirigés contre IL-17, IL-17R, IL-22, IL-23, TNFa ont été développés pour bloquer la voie Th17 (Lowes et al., Annu Rev Immunol 32, 227-255, 2014). Ces molécules sont efficaces pour le traitement du psoriasis, mais présentent de nombreux effets secondaires et induisent un coût de traitement exorbitant. Par ailleurs, il est également connu que la voie Th17 est fortement activée dans les lésions de patients présentant de l’acné (Kelhala et al., Plos One 9(8) e105238, 2014). La présente invention a pour objet de répondre aux besoins susmentionnés. En effet, les inventeurs ont mis en évidence, de façon tout à fait inattendue, qu’un extrait de Curcuma longa présente des activités pharmacologiques d’intérêt pour le traitement et la prévention des dermatoses inflammatoires et plus particulièrement du psoriasis, de la dermatite atopique ou de l’acné, alors que cet extrait ne contient pas de curcumine et notamment ne contient pas de curcuminoïdes. La teneur en curcumoïde peut être déterminée comme décrit dans la partie expérimentale ci-après, à savoir par HPLC (High Performance Liquid Chromatography - chromatographie liquide haute performance) en mode réverse, avec une détection UV à la longueur d’onde de 425nm. Un premier objet de l’invention concerne par conséquent un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec, pour son utilisation dans le traitement et/ou la prévention des dermatoses inflammatoires. Un autre objet de l’invention concerne l’utilisation d’un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec, pour la fabrication d’une composition dermatologique ou cosmétique destinée au traitement et/ou à la prévention des dermatoses inflammatoires. Un autre objet de l’invention concerne l’utilisation d’un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec, pour le traitement et/ou la prévention des dermatoses inflammatoires. Un autre objet de l’invention concerne une méthode de traitement et/ou de prévention d’une dermatose inflammatoire comprenant l’administration à une personne en ayant besoin d’une quantité efficace d’un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec. Définitions Au sens de la présente invention, le terme « prévention » signifie éviter l’apparition d’une maladie, d’un trouble ou d’un ou plusieurs signes et/ou symptômes. Par le terme « traitement » ou « traiter » une dermatose inflammatoire, on entend diminuer et/ou inhiber le développement d’une dermatose inflammatoire et/ou au moins un de ses symptômes. Dans la présente invention, on entend désigner par « dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable » ce qui est utile dans la préparation d’une composition dermatologique ou cosmétique, qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation dermatologique ou cosmétique, notamment par application topique. Par « application topique », on entend une application sur la peau (incluant le cuir chevelu), les muqueuses et/ou les phanères. Par « extrait de Curcuma longa », on entend désigner le produit d’extraction des rhizomes de la plante Curcuma longa . Par « produit d’extraction », on entend le produit obtenu après extraction des rhizomes de la plante Curcuma longa , avec un solvant, appelé solvant d’extraction, (c’est-à-dire une solution liquide dans le solvant d’extraction) éventuellement sous une forme concentrée ou sèche après évaporation partielle ou totale du solvant d’extraction. Il peut s’agir d’un extrait sec. Par « extrait sec », on entend, au sens de la présente invention, un extrait dépourvu de solvant d’extraction ou en contenant uniquement à l’état de trace non significative. Un tel extrait sec contient ainsi uniquement de la matière issue des rhizomes de Curcuma longa . Il peut contenir également des traces non significatives de solvant d’extraction. Par « curcuminoïde », on entend la curcumine, la déméthoxycurcumine et la bisdéméthoxycurcumine qui répondent respectivement aux formules Chem 1, Chem 2 et Chem 3 ci-dessous. DESCRIPTION DETAILLEE DE L’INVENTION Curcuma longa Curcuma longa ou Curcuma domestica ou encore Curcuma aromatica appartient à la famille des Zingiberaceae. C’est une herbe à rhizomes formés de tubercules juxtaposés, elliptiques ou cylindriques, de couleur jaune et aromatique. Les feuilles, alternes, ont un pétiole atteignant 45 cm de long. Elles ont une inflorescence cylindrique de 20 x 5 cm portée par un court pédoncule à la base de la tige. En Asie, le Curcuma est bien connu. En Indonésie, les indigènes l’utilisent pour soigner des affections urinaires et des diarrhées rebelles. En Inde, il sert à soigner la gale et d’autres maladies de la peau. Ce rhizome possède également une action cholagogue du fait qu’il stimule les sécrétions biliaires, pancréatiques et gastriques. En Chine, au Japon et en Corée, le rhizome de cette plante est utilisé contre diverses maladies telles que les aménorrhées, les douleurs abdominales. En Afrique de l’Est, la poudre du rhizome est utilisée pour soulager les maux de tête et pour soigner la variole. Au Zanzibar, les femmes l’emploient comme lactagogue tandis qu’à l’île Maurice, cette même poudre sert d’emménagogue dans le traitement des troubles menstruels. Au Cameroun, elle est utilisée contre la constipation. Au Maroc, en médecine populaire, cette herbe est prescrite contre les maladies du foie et du sang et même en cas d’amnésie. Curcuma longa est une plante qui contient une quantité importante d’amidon et d’arabinogalactane (40 à 50%). Toutefois, les constituants les plus actifs sont les curcuminoïdes (3 à 5%) et principalement la curcumine, un pigment jaune orangé. Les rhizomes de cette essence végétale possèdent, en plus de leur intérêt culinaire, certaines propriétés médicinales liées à la teneur en phellandrène et surtout en zingibérène. Cette plante contient également des huiles volatiles (3 à 7%), des composés polyphénoliques, des minéraux, des vitamines (3,5%) et des peptides hydrosolubles. Les composants principaux du rhizome de C urcuma longa sont : - Des curcuminoïdes, qui donnent la coloration jaune et qui sont les principes actifs principaux, parmi eux la curcumine, la déméthoxycurcumine et la bisdméthoxycurcumine; - Des quinoïdes ; - Des sesquiterpènes, dont les α et γ alantones, le bisabolène, le bisacumol, la bisacurone, le caryophyllène, le curcumène et la curcuménone ; - Des stéroïdes, dont le cholestérol, le campestérol ou le stigmastérol ; - Des monoterpènes, dont le cinéol, le camphène ou le terpinène ; - Des phénylpropanoïdes, dont l’acide caféique, l’acide p-cumarique ou le 4-hydroxy cinnamoylméthane ; - Des lignanes, dont l’iso-procurcuménol ou le 4-hydroxy-cinnamoyl-(féruloxyl)méthane ; - Des benzénoïdes, dont le gaïacol ; - Des carbohydrates, dont l’ukonane A ; - Des alcaloïdes ; - De l’huile essentielle, dont la turmérone, la déshydroturmérone, le gingibérène, l’atlantone, le curcuménol, le bornéol, le camphre ou le terpinène. La curcumine possède un grand nombre d’activités biologiques, comme des activités anti-inflammatoire, antioxydante, anti-cancéreuse, antivirale, antimicrobienne, et des propriétés hépato-protectrices. La nature non-toxique de cette molécule en fait une cible potentielle pour des traitements de désordres cutanés tels que le psoriasis, les sclérodermies et le cancer cutané. Les effets inhibiteurs de la curcumine sur la cascade inflammatoire sont dus à de multiples mécanismes comme l’inhibition de NF-κB, une régulation à la baisse d’IL-1β, d’IL-6 et de TNF-α et une inactivation de la voie STAT3. Le travail de Varma et al. (Eur J Pharmacol vol 813, 33-41, 2017) a consisté à développer un modèle in vitro d’inflammation mimant le psoriasis en utilisant l’Imiquimod, la curcumine a permis de valider pharmacologiquement ce modèle, renforçant encore le fait que les propriétés antiinflammatoires de C urcuma longa sont portées par la curcumine. Par ailleurs, Bleu et al. (Phytothrrapie 9 :7-17, 2011) rapportent dans une étude les effets pharmacodynamiques d’un extrait hydroalcoolique de Curcuma longa . Il est rapporté des effets hypotenseurs dose-dépendants chez le lapin, ces effets s’accompagnent d’une augmentation de la fréquence et d’une diminution de l’amplitude respiratoire. Ce même extrait induit une forte diminution dose-dépendante des contractions rythmiques du duodénum isolé du lapin. Ces effets négatifs de l’extrait hydroalcoolique de Curcuma longa rappellent les effets bien connus des antagonistes calciques. Les inventeurs ont, de façon surprenante, montré qu’un extrait de Curcuma longa selon l’invention présente une acticité antagoniste sur le canal calcique Cav1.4, liée à une activité anti-inflammatoire via une immuno-modulation du psoriasis et de la dermatite atopique. Extrait selon l’invention Un extrait de Curcuma longa selon la présente invention est un extrait de rhizome de la plante Curcuma longa . Le rhizome de Curcuma longa peut être frais ou sec, et entier, coupé ou broyé, puis soumis à une étape d’extraction. Un procédé de préparation d’un extrait selon l’invention comprend une étape d’extraction des rhizomes de Curcuma longa , par un solvant d’extraction. L’extraction peut être réalisée à température ambiante (par exemple entre 15 et 30°C, notamment entre 20 et 25°C) et/ou à pression atmosphérique ou à haute pression (par exemple 10 à 150 bars). Le solvant d’extraction peut être un solvant ou un mélange de solvants choisi(s) parmi : - L’eau, - Les alcools tels que l’éthanol, le méthanol, l’isopropanol, - Les cétones dont l’acétone et la méthyléthylacétone, - L’acétate d’éthyle, - Le chlorure de méthylène, - L’éther diisopropylique, - L’hexane, l’heptane, ou - Le CO 2 et plus particulièrement le CO 2 supercritique. De préférence, le solvant d’extraction est le CO 2 supercritique. L’extraction peut être réalisée par différentes technologies, notamment dites « vertes », telles que à pression atmosphérique (utilisant les ultrasons, les micro-ondes, la lixiviation, la macération, la décoction …) ou à hautes pressions (par exemple 10 à 150 bars), avec des solvants d’extraction à l’état super- ou sub-critique (tels que le CO 2 ou l’eau), et/ou à des températures comprises entre 20°C et 250°C. Selon un mode préféré de l’invention, l’extraction à l’aide de CO 2 supercritique de rhizomes de Curcuma longa permet l’obtention d’une huile turmérique qui est purifiée notamment par distillation moléculaire pour l’obtention d’une fraction riche en turmérones (supérieure ou égale à 65% en poids, par rapport au poids de l’extrait sec). Un tel procédé (détaillé dans l’exemple 1) qui écarte les composants curcuminoïdes, entraine une diminution importante voire l’élimination de la coloration jaune-orangée, qui était difficilement compatible pour un développement cosmétique. Dans un mode de réalisation de l’invention, l’extrait présente une teneur en curcumine, notamment en curcuminoïde, inférieure à 0,1% en poids, par rapport au poids de l’extrait sec. De préférence, l’extrait présente une teneur en curcumine, notamment en curcuminoïde, inférieure à 0,08%, plus particulièrement inférieure à 0,06%, plus particulièrement encore inférieure à 0,05%, encore plus particulièrement encore inférieure à 0,04%, voire plus particulièrement encore inférieure à 0,03% en poids, par rapport au poids de l’extrait sec. Préférentiellement l’extrait de Curcuma longa selon l’invention provient de la société EVONIK sous la dénomination TEGO® Turmerone et présente le numéro CAS 84775-52-0. Traitement et/ou prévention de dermatoses inflammatoires L’extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec, est utile pour le traitement et/ou la prévention de dermatoses inflammatoires. De préférence il s’agit du psoriasis, de la dermatite atopique ou de l’acné. De façon encore préférée, il s’agit du psoriasis ou de la dermatite atopique. De façon encore plus avantageuse, il s’agit du psoriasis. Avantageusement, l’extrait sera utilisé dans une forme apte à une application par voie topique. Composition dermatologique ou cosmétique Un autre objet de la présente invention concerne une composition dermatologique ou cosmétique comprenant à titre de principe actif au moins un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec tel que défini ci-dessus avec au moins un excipient dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable, pour son utilisation dans le traitement et/ou la prévention des dermatoses inflammatoires. Un autre objet de la présente invention concerne l’utilisation d’une composition dermatologique ou cosmétique comprenant à titre de principe actif au moins un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec tel que défini ci-dessus avec au moins un excipient dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable, dans le traitement et/ou la prévention des dermatoses inflammatoires. Un autre objet de la présente invention concerne l’utilisation d’une composition dermatologique ou cosmétique comprenant à titre de principe actif au moins un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec tel que défini ci-dessus avec au moins un excipient dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable, pour la préparation d’un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des dermatoses inflammatoires. Un autre objet de l’invention concerne une méthode de traitement et/ou de prévention d’une dermatose inflammatoire comprenant l’administration à une personne en ayant besoin d’une quantité efficace d’une composition dermatologique ou cosmétique comprenant à titre de principe actif au moins un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec tel que défini ci-dessus avec au moins un excipient dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable. Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l’invention est utilisée dans le traitement et/ou la prévention d’une dermatose inflammatoire choisie parmi le psoriasis, la dermatite atopique ou l’acné. De façon préférée, la composition selon l’invention est utilisée dans le traitement et/ou la prévention du psoriasis ou de la dermatite atopique. De façon encore préférée, la composition selon l’invention est utilisée dans le traitement et/ou la prévention du psoriasis. Dans un mode de réalisation particulier, la composition dermatologique ou cosmétique selon l’invention comprend 0,01 à 1%, préférentiellement 0,05 à 0,5%, de façon encore préférée de 0,08 à 0,2% en poids d’extrait sec de Curcuma longa selon l’invention par rapport au poids total de la composition. Avantageusement, la composition dermatologique ou cosmétique selon l’invention comprend 0,1% en poids d’extrait sec de Curcuma longa selon l’invention par rapport au poids total de la composition. De telles compositions peuvent être fabriquées selon des procédés bien connus de l’homme du métier. Les compositions selon l’invention sont avantageusement destinées à une application topique, notamment par application sur la peau. Les compositions selon l’invention pourront ainsi se présenter sous les formes qui sont habituellement connues pour une administration topique, c’est-à-dire notamment les lotions, les mousses, les gels, les dispersions, les émulsions, les sprays, les sérums, les baumes, les masques ou les crèmes. Avantageusement il s’agira d’une crème, ou d’un baume. L’invention vise ainsi des compositions dermatologiques ou cosmétiques selon l’un des modes de réalisation de la présente invention, caractérisées en ce qu’elles se présentent sous une forme propre et adaptée à une application topique. Ces compositions contiennent généralement, outre un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec, selon la présente invention, un milieu physiologiquement acceptable, en général à base d’eau ou de solvant, par exemple des alcools, des éthers ou des glycols. Elles peuvent également contenir des agents tensioactifs, des agents complexants, des conservateurs, des agents stabilisants, des émulsifiants, des épaississants, des gélifiants, des humectants, des émollients, des oligo-éléments, des huiles essentielles, des parfums, des colorants, des agents matifiants, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants, des eaux thermales, etc. Les exemples suivants illustrent l’invention sans en limiter la portée. EXEMPLES Exemple 1, caractérisation d’un extrait de Curcuma longa selon l’invention L’extrait de Curcuma longa selon l’invention est préparé selon le procédé décrit dans le brevet américain N° US8420137. Brièvement, une extraction en phase supercritique au CO 2 de rhizomes de Curcuma longa est réalisée, puis une séparation d’un solide contenant des curcuminoïdes obtenu par précipitation à partir du mélange d’extraction obtenu précédemment, puis une élimination des solvants présents dans le mélange d’extraction obtenu aux deux premières étapes pour obtenir un concentré et enfin une distillation de ce concentré sous une pression inférieure à 1 bar pour obtenir un distillat de l’extrait. L’extrait de Curcuma longa ainsi préparé contient au moins 65% de turmérones. De façon préférée, il s’agit de la matière commerciale appelée TEGO® Turmerone de la société EVONIK. Un extrait Curcuma longa selon l’invention a été analysé par HPLC (High Performance Liquid Chromatography - chromatographie liquide haute performance) en mode réverse pour connaitre la teneur en curcuminoïdes. La quantification a été réalisée par détection UV à la longueur d’onde de 425nm. Le contenu de curcumimoïdes de cet extrait est estimé inférieur à 0,03% ce qui correspond à la limite de quantification dans ces conditions. Exemple 2, évaluation d’un extrait de Curcuma longa selon l’invention dans un modèle de lymphocytes Th17 Il est clairement connu aujourd’hui que la réponse immunitaire adaptative joue un rôle clé dans l’apparition des lésions psoriasiques et les nouveaux traitements ciblant l’IL-12, l’IL-23 ou l’IL-17 montrent une grande efficacité clinique chez les patients atteints de psoriasis en plaques modéré à sévère. Néanmoins, ces traitements systémiques restent contraignants et une approche topique offre toujours des avantages non négligeables : un traitement parfaitement limité épargnant la peau saine péri-lésionnelle, une meilleure hydratation cutanée avec protection contre le grattage, une meilleure acceptabilité des patients et une meilleure tolérance. En outre, les traitements locaux constituent la base de la prise en charge des psoriasis légers, c’est-à-dire les patients ayant une atteinte limitée à moins de 10% de la surface corporelle. Le but de cette étude est d’évaluer l’activité potentielle d’un extrait de Curcuma longa selon l’invention pour moduler la production de cytokines impliquées dans les pathologies comme le psoriasis, la dermatite atopique ou encore l’acné. Pour se faire, des lymphocytes Th17 isolés et amplifiés à partir du sang circulant de donneurs sont utilisés comme modèle in vitro d’immunopathogénèse du psoriasis. Protocole : L’extrait de Curcuma longa testé est préparé selon l’exemple 1 et a été solubilisé dans du DMSO (diméthylsulfoxyde) aux concentrations de 11, 33,3 et 100 µg/ml. De la curcumine aux trois mêmes concentrations est également évaluée dans ce modèle. Les lymphocytes T sont triés à partir de cellules sanguines récupérées de poches de sang fournies par l’Etablissement Français du Sang, pour obtenir le phénotype suivant : CD4+, CD45RA, CXCR3-CCR6+. Le nombre de lymphocytes Th17 ainsi obtenu est augmenté par une mise en culture de ces cellules en présence d’un cocktail de cytokines (IL-2, anti-TNFα et anti-INFγ) pendant deux semaines. Le test est réalisé sur des lymphocytes Th17 humains isolés et amplifiés en absence (conditions contrôle) ou en présence (traité) des composés à tester et sont stimulés ou non par les facteurs de stimulation anti-CD3/anti-CD28. Les teneurs des cytokines pro-inflammatoires de Th17 (IL-17 et IL-22) sont quantifiées 24h après la stimulation. Les lymphocytes sont traités avec les composés à tester 30 minutes avant la stimulation et pendant 24 heures. Dans le contexte de cette étude, les inventeurs ont cherché à évaluer la capacité de l’extrait de Curcuma longa selon l’invention à inhiber la sécrétion de cytokines par les lymphocytes Th17 en inhibant la voie de signalisation de Cav1.4. A cette fin, la Nicardipine, un bloqueur des canaux calciques non-sélectif, a été testée (10 µg/ml), solubilisée également dans le DMSO et est utilisée comme contrôle positif. Chaque condition expérimentale a été réalisée en triplicata et répétée à partir de sang de donneur différent. Les cytokines pro-inflammatoires des lymphocytes Th17, IL-17 et IL-22 sont mesurées par des kits ELISA selon les instructions du fournisseur. L’analyse statistique est déterminée sur le pourcentage d’inhibition après vérification de la normalité et de l’égalité des variances, en utilisant une ANOVA (ANalysis Of VAriance - analyse de variance) une voie suivie du test de Dunnett comme post test. Résultats : La libération d’IL-17 (pg/ml) après traitement des lymphocytes Th17 avec les billes anti-CD3/anti-CD28 est représentée dans le tableau 1 ci-dessous. Il s’agit de billes « coatées », sur lesquelles sont fixées les anticorps cités, afin de stimuler les lymphocytes. Groupes Concentration Moy IL-17 (pg/ml) Erreur Standard % Inh Stats vs. stim Contrôle 159 53 P Stimulation 1187 109 - Nicardipine 10 µg/ml 721 63 43 P Curcumine 11 µg/ml 395 70 77 P 33,3 µg/ml 356 71 80 P 100 µg/ml 378 79 78 P Extrait selon l’invention 11 µg/ml 917 180 27 NS 33,3 µg/ml 915 56 24 NS 100 µg/ml 498 51 65 P L’exposition des lymphocytes Th17 aux billes anti-CD3/anti-CD28 induit une augmentation marquée et statistiquement significative d’une libération d’IL-17 (Tableau 1). La Nicardipine (10µg/ml) réduit de 43% cette production d’IL-17. Ce résultat fournit la preuve de la bonne réactivité du modèle des lymphocytes Th17 isolés et amplifiés, ce résultat permet de valider le test. Le traitement des lymphocytes Th17 avec la curcumine montre une inhibition importante de la libération d’IL-17. Aux trois concentrations testées (11, 33,3 et 100µg/ml), la curcumine inhibe de façon statistique (respectivement 77%, 80% et 78% d’inhibition) la libération d’IL-17. Le traitement des lymphocytes Th17 avec l’extrait de Curcuma longa selon l’invention montre de façon surprenante une inhibition de la libération d’IL-17. En effet, à la concentration de 100µg/ml l’extrait de Curcuma longa selon l’invention réduit significativement de 65% la production d’IL-17. Aux concentrations inférieures, l’effet inhibiteur n’atteint pas la significativité statistique (NS = non significatif). La libération d’IL-12 (pg/ml) après traitement des lymphocytes Th17 avec les billes anti-CD3/anti-CD28 est représentée dans le tableau 2 ci-dessous. Groupes Concentration Moy IL-22 (pg/ml) Erreur Standard % Inh Stats vs. stim Contrôle 92 16 P Stimulation 945 357 - Nicardipine 10 µg/ml 440 88 37 Curcumine 11 µg/ml 407 97 33 33,3 µg/ml 399 70 37 100 µg/ml 479 61 16 Extrait selon l’invention 11 µg/ml 505 211 40 33,3 µg/ml 391 117 48 100 µg/ml 242 44 68 P L’exposition des lymphocytes Th17 aux billes anti-CD3/anti-CD28 induit une augmentation marquée et statistiquement significative d’une libération d’IL-22 (Tableau 2). La Nicardipine réduit la production d’IL-22, mais l’inhibition n’atteint pas le seuil de significativité statistique. Comme la Nicardipine est un bloqueur des canaux Cav1.4, et qu’elle ne réduit pas significativement la production d’IL-22, il est possible que cette libération d’IL-22 par la stimulation des lymphocytes Th17 soit indépendante de la voie des canaux calciques de type 1.4. Le traitement des lymphocytes Th17 avec l’extrait de Curcuma longa selon l’invention montre également une inhibition de la libération d’IL-22. En effet, à la concentration de 100µg/ml l’extrait de Curcuma longa selon l’invention réduit significativement de 68% la production d’IL-17. Aux concentrations inférieures, l’effet inhibiteur n’atteint pas la significativité statistique, bien qu’il semble exister une effet concentration-dépendant (40% d’inhibition à 11 µg/ml, 48% d’inhibition à 33,3 µg/ml et 68% d’inhibition à 100 µg/ml). Les inventeurs ont ainsi montré que les lymphocytes Th17 stimulés induisaient une libération massive d’IL-17 et d’IL-22. Dans ce modèle, les inventeurs démontrent qu’un extrait de Curcuma longa selon l’invention est très efficace en limitant cette libération d’interleukines inflammatoires, marqueur clé dans le psoriasis et l’acné, démontrant un rôle protecteur dans ces pathologies. L’extrait de Curcuma longa selon l’invention est donc doté d’activité anti-inflammatoire et donc d’un effet apaisant. Exemple 3 , évaluation d’un extrait de Curcuma longa selon l’invention sur la cible Ca v 1.4 Il existe un certain nombre d’arguments qui suggèrent l’intérêt clinique des antagonistes des canaux Cav1.4 pour le traitement du psoriasis. En effets, des études ont montré qu’en inhibant le Cav1.4, la réponse immunitaire était fortement réduite (Omilusik et al., Immunity, 35 : 349-360, 2011 ; Robert et al., J Allergy Clin Immunol 133 (4) : 1175-1183, 2014). Les Th17 de souris et d’homme expriment le canal calcique Cav1.4 et des inhibiteurs pharmacologiques de ces canaux, réduisent la production des cytokines Th17. L’application topique d’un antagoniste des canaux Cav1.4 (Nicardipine) sur un modèle murin du psoriasis, modèle induit par l’application topique d’Imiquimod, réduit fortement les atteintes cutanées. Le courant ionique de type L est un courant calcique à charge longue. Il s’inactive lentement. Il est impliqué dans la génération de potentiel d’action dans les dendrites et dans la transmission synaptique. Les protéines-canaux impliquées sont au nombre de 4 : Cav1.1 (muscles squelettiques), Cav1.2 (muscle cardiaque, muscles lisses), Cav1.3 (neurones, cellules endocrines), Cav1.4 (mis en évidence pour la première fois dans la rétine). Le but de cette étude est d’évaluer l’activité antagoniste potentielle d’un extrait de Curcuma longa selon l’invention contre les canaux Cav1.4 humains exprimés de façon stable dans des cellules HEK293 dans un test de mesure directe au calcium libre. L’extrait de Curcuma longa est préparé selon l’exemple 1, il est testé à 7 concentrations allant de 0,3 à 300 µg/ml. De la curcumine est également évaluée à 7 concentrations (0,1 à 100 µg/ml). Des composés contrôles sont évalués dans cette étude : il s’agit du FPL 64176 (N° CAS : 120934-96-5), qui est un activateur non spécifique des canaux Cav1 (Cav1.1, Cav1.2, Cav1.3 et Cav1.4) et qui est testé de 3nM à 50µM, de la nifédipine, qui est un bloqueur spécifique de Cav1.4 et qui est évaluée de 1nM à 0,1mM, et de la nicardipine, qui est un bloqueur non-spécifique de Cav1.4 et qui est testée de 0,1nM à 10µM. Tous ces produits ont été solubilisés dans du DMSO. L’étude est réalisée sur une lignée stable de cellules HEK293 exprimant le canal Cav1.4 humain. Protocole : Les cellules sont trypsinisées, c’est-à-dire qu’on enlève le milieu de culture et on met une solution de trypsine pour les décoller, les cellules sont comptées et ensemencées dans des plaques noires à fond clair, de 96 puits à une densité de 50 000 cellules par puits dans un volume de 100µl et incubées jusqu’au lendemain. Le milieu est retiré et les cellules sont lavées avec du PBS (Phosphate Buffer Saline – tampon phosphate salin) deux fois puis 70µl d’un composé à tester pour son activité antagoniste est ajouté, solubilisé dans le tampon d’essai (20mM HEPES-HBSS pH 7.4). Les cellules sont ensuite chargées avec le marqueur fluorescent calcique 5. Le colorant a été concentré 10 fois dans l’eau et ensuite dilué au 1/10 dans le tampon. La solution colorante est ajoutée dans les puits et incubée à température ambiante pendant 1 heure. Pour les tests d’antagoniste, le composé à tester est ajouté dans les puits et incubé à température ambiante pendant 10 minutes. Les plaques sont ensuite placées dans le FLIPR (lecteur de plaque d’imagerie par fluorescence) et la fluorescence est enregistrée aux longueurs d’ondes excitation/émission : 488nm/510-570nm. Après 20 secondes, l’agoniste (FPL 64176) (80µl solubilisé dans le tampon d’essai (20mM HEPES-HBSS pH 7,4)) est ajouté et la fluorescence est enregistrée aux mêmes longueurs d’ondes. Pour les tests d’agonistes, le protocole est similaire, excepté qu’aucun antagoniste n’est ajouté. Pour tous ces tests, 3 mesures différentes sont réalisées sur 3 jours séparés. Dans une première série d’expériences, les composés sont évalués comme agonistes (détermination de CE 50 ). Dans une seconde série d’expériences, les composés sont testés comme antagonistes contre l’agoniste de référence (FLP 64176) et permettent de déterminer leur valeur de CI 50 ). Pour la détermination des valeurs de CE 50 et de CI 50 , deux stratégies sont employées. - Pour chaque série, une courbe concentration-réponse est ajustée aux données grâce au logiciel GraphPad Prism, permettant la détermination de 3 valeurs de CE 50 et de CI 50 (une par expérience). Ensuite les 3 valeurs sont moyennées. On parle de valeurs de CE 50 et de CI 50 moyennées. - Les données brutes sont normalisées, en définissant la valeur RFU (Relative Fluorescence Unit - unité relative de fluorescence) la plus haute comme 100%. Ensuite, pour chaque concentration de composé à tester, la moyenne normalisée RFU est calculée afin de tracer une unique courbe avec les données réunies, appelées encore données « poolées », et normalisées obtenues des 3 expériences. Une courbe concentration-réponse est ajustée grâce au logiciel GraphPad Prism, permettant la détermination d’une seule valeur de CE 50 et de CI 50 par composé. On parle de valeurs de CE 50 et de CI 50 poolées. Les valeurs moyennées et poolées qui sont du même ordre de grandeur sont considérées comme robustes et fiables. Résultats : La détermination des valeurs de CE 50 est résumée dans le tableau 3 ci-dessous. Groupes Exp n° 1 (µg/ml) Exp n° 2 (µg/ml) Exp n° 3 (µg/ml) CE 50 moy (µg/ml) CE 50 poolée (µg/ml) Curcumine 19,8 25,7 7,8 17,8 ± 5,3 18,6 Extrait selon l’invention N/A N/A N/A N/A N/A FPL64176 0,97 µM 2,54µM 0,98µM 1,5 ± 0,5µM 1,5 µM Exp : Expérience, Moy : moyenné, N/A : Non-analysé. Les valeurs de CE 50 moyennées sont exprimées comme valeur ± esm (erreur standard à la moyenne). FLP64176 est robuste et de ce fait valide complètement l’étude puisque la valeur moyennée calculée est rigoureusement identique à la valeur poolée normalisée (CE 50 = 1,5 µM). La curcumine montre une activité agoniste sur Cav1.4 avec une valeur de CE 50 de 17,8 ± 5,3 µg/ml. Puisque cette valeur de CE 50 tombe dans le haut de la gamme des concentrations étudiées, la curcumine ne peut pas être étudiée en tant qu’antagoniste sur Cav1.4. L’extrait de Curcuma longa selon l’invention ne présente aucune activité agoniste aux concentrations testées sur le canal Cav1.4 humain, puisqu’aucune courbe concentration-réponse n’a pu être établie. La détermination des valeurs de CI 50 est résumée dans le tableau 4 ci-dessous. Groupes Exp n° 1 (µg/ml) Exp n° 2 (µg/ml) Exp n° 3 (µg/ml) CI 50 moy (µg/ml) CI 50 poolée (µg/ml) Extrait selon l’invention 21,3 18,2 12,6 17,4 ± 2,5 16,7 Nifédipine 1,1 µM 2,3 µM 0,4 µM 1,3 ± 0,5 µM 1,3 µM Nicardipine 345 nM 178 nM 246 nM 256 ± 48 nM 292 nM Exp : Expérience, Moy : moyenné. La détermination de la valeur de CI 50 de la Nifédipine, antagoniste de référence spécifique de Cav1.4, est robuste et valide le test puisque la valeur moyennée calculée est rigoureusement identique à la valeur poolée normalisée (CI 50 = 1,3 µM). La Nicardipine, antagoniste de référence non spécifique présente une activité sur Cav1.4 avec une valeur de CI 50 calculée de 256 ± 48 nM. L’extrait de C urcuma longa selon l’invention présente des courbes concentration-réponse reproductibles entre les expériences permettant d’obtenir des valeurs de CI 50 calculées du même ordre de grandeur qu’avec les données normalisées et poolées. En conséquence, cet extrait de Curcuma longa selon l’invention présente une activité antagoniste sur Cav1.4 avec une valeur de CI 50 calculée de 17,4 ± 2,5 µg/ml. Conclusion : L’extrait de Curcuma longa selon l’invention est capable de bloquer le canal calcique Cav1.4 de façon efficace (faible valeur de CI 5 0 ), ce qui en fait un actif intéressant dans les pathologies liées à l’activité Th17 comme le psoriasis, la dermatite atopique ou l’acné par son effet immuno-modulateur. Extrait de Curcuma long a ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec, pour son utilisation dans le traitement et/ou la prévention d’une dermatose inflammatoire choisie parmi le psoriasis, la dermatite atopique et l’acné. Extrait de Curcuma longa pour son utilisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit extrait provient des rhizomes du Curcuma longa . Extrait de Curcuma longa pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que ledit extrait contient moins de 0,05% en poids de curcumine, notamment moins de 0,05% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids total de l’extrait sec. Extrait de Curcuma longa pour son utilisation selon l’une quelconque des revendication 1 à 3, caractérisé en ce que ledit extrait est obtenu par extraction avec du CO 2 supercritique. Extrait de Curcuma longa pour son utilisation selon l’une quelconque des revendication 1 à 4, caractérisé en ce que ledit extrait est sous une forme adaptée pour une application par voie topique. Composition dermatologique comprenant au moins un extrait de Curcuma longa ayant moins de 0,1% en poids de curcumine, notamment ayant moins de 0,1% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids de l’extrait sec, avec au moins un excipient dermatologiquement acceptable, pour son utilisation dans le traitement et/ou la prévention d’une dermatose inflammatoire choisie parmi le psoriasis, la dermatite atopique et l’acné. Composition dermatologique pour son utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que l’extrait de Curcuma long a est un extrait de rhizome de Curcuma longa . Composition dermatologique pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 6 et 7, caractérisée en ce que l’extrait de Curcuma longa contient moins de 0,05% en poids de curcumine, notamment moins de 0,05% en poids de curcuminoïde, par rapport au poids total de l’extrait sec. Composition dermatologique pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisée en ce que l’extrait de Curcuma longa est obtenu par extraction avec du CO 2 supercritique. Composition dermatologique pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 6 à 9, caractérisée en ce qu’elle comprend 0,01 à 1%, de préférence 0,05 à 0,5%, de manière encore préférée 0,08 à 0,2% d’extrait de Curcuma longa en poids d’extrait sec par rapport au poids total de la composition. Composition dermatologique pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 6 à 10, caractérisée en ce qu’elle est sous une forme adaptée pour une application par voie topique.