Brevet FR3088544A1 — publié le 20200522

Description Titre de l'invention : Absolue d'immortelle pour son utilisation pour la photoprotection de la peau Domaine technique [0001] L'invention concerne l'absolue d'immortelle pour son utilisation pour la photo- protection de la peau et une composition cosmétique à cet effet. [0002] Elle trouve pour application particulièrement avantageuse la prévention et/ou le traitement des altérations ou des dommages de la peau, des phanères et/ou des muqueuses occasionnées par les radiations solaires, plus précisément les rayons ultraviolets. [0003] Elle trouve son application dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique. Technique antérieure [0004] Le soleil émet des radiations de différentes longueurs d'ondes. Les radiations solaires les plus courtes (rayons gamma et rayons X) ne pénètrent pas l'atmosphère. Les autres radiations dites non ionisantes passent la barrière de l'atmosphère. Parmi celles-là, les radiations ultra-violettes s'étendant de 100 à 400nm comprennent les UV-A (400-315 nm), les UV-B (315-280 nm) et les UV-C (280-100 nm). Toutefois, en raison de l'absorption des UV par la couche d'ozone de l'atmosphère, les UV-C sont très peu nombreux à atteindre la surface de la Terre, les UV-A sont majoritaires suivis des UV-B. [0005] Ce sont d'ailleurs, les rayons lumineux de longueurs d'onde comprises entre 280 nm et 400 nm qui permettent le brunissement de l'épiderme humain c'est-à-dire le bronzage. Par ailleurs, les rayons UV-B sont connus pour provoquer des érythèmes et des brûlures cutanées qui peuvent nuire au développement du bronzage naturel, c'est ce qui est couramment dénommé coup de soleil. [0006] On sait également que les rayons UV-A, de longueurs d'onde comprises entre 320 nm et 400 nm sont susceptibles d'induire une altération de celle-ci, notamment dans le cas d'une peau sensible ou d'une peau continuellement exposée au rayonnement solaire. Les rayons UV-A provoquent en particulier une perte d'élasticité de la peau et l'apparition de rides conduisant à un vieillissement prématuré. Ils favorisent le déclenchement de la réaction érythémateuse ou amplifient cette réaction chez certains sujets et peuvent même être à l'origine de réactions phototoxiques ou photo-allergiques. [0007] De nombreuses compositions cosmétiques destinées à la photoprotection (UV-A et/ ou UV-B) de la peau ont été proposées à ce jour. [0008] Les plus courantes sont des compositions antisolaires comprenant des concentrations 2 diverses de un ou plusieurs écrans ou filtres organiques et/ou inorganiques capables de repousser et/ou d'absorber sélectivement le rayonnement UV nocif. Ces écrans ou filtres et leurs quantités étant sélectionnés en fonction de l'indice de protection recherché. [0009] Ces formulations possèdent cependant un certain pouvoir sensibilisant, pouvant induire la survenue d'allergies cutanées après usage répété. Par ailleurs, il n'est pas possible du fait de la nature des filtres ou des écrans existants d'augmenter les quantités de filtres dans les compositions. En effet, les formulations ne sont alors plus adaptées et l'indice dc protection n'est pas augmenté de manière proportionnelle. [0010] Il existe donc le besoin de proposer une composition photoprotectrice prévenant et/ ou traitant les effets néfastes des rayonnements solaires sur la peau sans les inconvénients des filtres ou écrans solaires connus. Résumé de l'invention [0011] Pour atteindre cet objectif, la présente invention propose l'absolue d'immortelle, He- lichrysum italicum, pour son utilisation pour la photo protection cutanée. C'est-à-dire que l'absolue d'immortelle est destinée à la prévention et/ou au traitement des altérations dc la peau occasionnées par les radiations solaires, en particulier les rayons ultraviolets. [0012] De manière surprenante, la demanderesse s'est aperçue que l'absolue d'immortelle, Helichrysum italicum, présentait des propriétés permettant dc lutter efficacement contre les effets néfastes occasionnés par les radiations solaires que ce soit en préventif pour réduire l'exposition et la réaction de la peau aux radiations ou en réparation pour réduire les dommages cellulaires. [0013] En effet, l'absolue d'immortelle est utile dans la photoprotection en tant qu'anti-inflammatoire et/ou en tant qu'antioxydant et/ou en tant que génoprotecteur. [0014] En effet, avantageusement, l'absolue d'immortelle, Helichrysion Ualicum, assure une photoprotection dite adaptative permettant d'induire des processus biologiques protecteurs endogènes ou améliorer leur efficience. [0015] Avantageusement, l'absolue d'Immortelle, Helichrysum italicum, permet également une photoprotcction interne susceptible d'inhiber les effets nocifs des rayons ultraviolets. [0016] De manière préférée, l'absolue d'immortelle assure également au moins partiellement une photoprotection externe qui permet d'empêcher la pénétration du rayonnement. [0017] Un autre aspect de la présente invention concerne une composition, avantageusement pour son utilisation pour la photoprotection comprenant de l'absolue d'immortelle Helichnsum italicum et de préférence un excipient appropiié. Brève description des dessins 3 100181 Les buts, objets, ainsi que les caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront mieux de la description détaillée d'un mode de réalisation de cette dernière qui est illustré par les dessins d'accompagnement suivants dans lesquels : [0019] [fig.1] présente la répartition des familles olfactives de l'absolue d'immortelle par analyse CGO. [0020] [fig.2] est un graphe illustrant l'expression du marquage H2AX sur cellules HaCat en culture. [0021] [fig.3] est un graphe illustrant l'effet de l'absolue d'immortelle sur la production de monoxyde d'azote par le LPS.. [0022] [fig.4] est un graphe illustrant l'effet de l'absolue d'immortelle sur la production de PGE2 induite par le LPS. Description des modes de réalisation [0023] Avant d'entamer une revue détaillée de modes de réalisation de l'invention, sont énoncées ci-après des caractéristiques optionnelles qui peuvent éventuellement être utilisées en association ou alternativement : [0024] Avantageusement, la photo protection est destinée à la prévention et/ou au traitement des altérations de la peau occasionnées par les radiations solaires, les altérations de peau étant choisies parmi l'une au moins du groupe comprenant : l'érythème solaire également dénommé érythème actinique ou coup de soleil ou brulurc photo-induite, le photo vieillissement induit, les cancers cutanés photo-induits tels que les mélanomes ou épithéliomas, la lucite estivale bénigne dénommée allergie solaire, la photosensibilité photo-induite, les démangeaisons photo-induites, ou les réactions autoimmuncs photo-induites, [0025] Avantageusement, l'absolue d'immortelle pour son utilisation dans la photoprotection en tant qu'anti-inflammatoire et/ou en tant qu'antioxydant et/ou en tant que génoprotecteur. [0026] Avantageusement, l'absolue d'immortelle est d'origine Balkans. [0027] Avantageusement, l'absolue d'immortelle, Helichrysum italicum, comprend une quantité de fi-action volatile comprise entre 10 et 70 %, plus précisément entre 30% et 70% plus précisément entre 40% et 60%. [0028] Avantageusement, les radiations solaires sont constituées des rayons UV-A et UV-B. [0029] Avantageusement, l'absolue d'immortelle, Helichrysum italicum, est susceptible d'être obtenue par un procédé d'obtention comprenant les étapes suivantes : [0030] - macération d'immortelle Helichrysum Ualicum, préférentiellement sèche, dans un solvant organique, ou un mélange de solvants organiques, volatihs) préférentiellement de type apolairc, préférentiellement de type hydrocarbure, puis filtration et évaporation du solvant, ou du mélange de solvant, aboutissant à l'obtention d'une concrète, puis lavage à l'alcool de la concrète, puis glaçage de la concrète lavée à l'alcool, puis filtration et évaporation de l'alcool aboutissant à l'obtention de l'absolue. [0031] Avantageusement, l'absolue d'immortelle, Helichrysum Ualicum, est susceptible d'être obtenue par un procédé d'obtention comprenant les étapes suivantes : [0032] mélange d'immortelle Helichrysum Ualicum, préférentiellement sèche, avec ou sans l'alcool comme co-solvant, avec du CO2 sous une pression de 200 à 300 bars et sous une température de 35 à 50nC, préférentiellement pendant 30 minutes à 60 minutes, en absence de co-solvant ajout d'alcool, obtention d'un extrait alcoolique glaçage et filtration de l'extrait alcoolique, aboutissant à l'obtention de l'absolue d'immortelle, Helichrysum Ualicum. [0033] Avantageusement, la composition est une composition photoprotectrice [0034] Avantageusement, la composition comprend une quantité de 0,001% à 0,05%, préfé- rentiellement de 0,01% à 0,05% d'absolue d'Immortelle par rapport au poids total de la composition. [0035] Avantageusement, la composition est une composition cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique. [0036] Avantageusement, la composition est formulée pour être appliquée par voie topique de préférence cutanée. [0037] Suivant une variante de l'invention, la composition pour son utilisation pour la photo- protection cutanée est destinée à être appliquée en topique sur la peau avant et/ou après une exposition aux radiations solaires. [0038] Selon une variante l'invention concerne une méthode de soin cosmétique et/ou es- thétique comprenant l'application topique sur les matières kératiniques humaines (peau, lèvres, cheveux, cils, sourcils, ongles) d'une composition définie selon l'invention, pour lutter contre ou prévenir le vieillissement prématuré photo-induit des matières kératiniques humaines (peau, lèvres, cheveux, cils, sourcils, ongles). [0039] Selon une variante l'invention concerne une méthode de soin cosmétique et/ou es- thétique comprenant l'application topique sur les matières kératiniques humaines (peau, lèvres, cheveux, cils, sourcils, ongles) d'une composition ou tels que définie, pour la protection des matières kératiniques humaines (peau, lèvres, cheveux, cils, sourcils, ongles) contre le rayonnement solaire. [0040] La photoprotection regroupe les divers moyens capables de s'opposer aux dommages cutanés induits par les radiations solaires. [0041] On entend par "absolue" la définition donnée par la norme iso 9235:2013 relative aux matières premières aromatiques naturelles : un produit obtenu par extraction à l'éthanol à partir d'une concrète, d'une pommade florale, d'un résinoïde ou d'un extrait par fluide supercritique. La solution éthanol igue obtenue est généralement refroidie et filtrée dans le but de supprimer les "cires" ; l'éthanol est ensuite éliminé par distillation. [0042] De même, une "concrète" est définie par la même norme comme un extrait obtenu à partir d'une matière première naturelle, pouvant être fraîche et préférentiellement sèche dans le cadre de l'invention, par extraction au moyen d'un ou plusieurs solvant(s). Le(s) solvant(s) est/sont ensuite totalement ou partiellement éliminé(s). [0043] Le terme "photovicillissement" regroupe l'ensemble des processus dus à l'exposition prolongée de la peau aux rayonnements ultraviolets qui entraînent le vieillissement prématuré de la peau et présente les mêmes caractéristiques physiques que le vieillissement, tel que la flaccidité, l'affaissement, des changements de couleur ou des irrégularités dans la pigmentation, une kératinisation anormale et/ou excessive. [0044] Par "cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable", on entend compatible avec la peau et/ou ses phanères, qui présente une couleur, une odeur et un toucher agréables et qui ne génère pas d'inconforts inacceptables (picotements, tiraillements, rougeurs), susceptibles de détourner le consommateur d'utiliser cette composition. [0045] On entend par matières kératiniques humaines, les cheveux, les cils, les sourcils, les ongles et en particulier la peau y compris les lèvres. [0046] On entend par radiations solaires les rayonnements émis par le soleil et arrivant à la surface de la Terre en particulier les rayons UV-A et UV-B mais également les rayons infrarouges provoquant un échauffement de la peau. [0047] L'immortelle, en particulier du genre Helichrysum et de l'espèce italicum est une espèce de plantes à fleurs de la famille des Asteraceae. Elle est présente tout autour de la Méditerranée. Helichnsum italicum est une plante herbacée buissonneuse vivace de 25 à 50 cm, à la tige ligneuse. Ses fleurs sont jaunes, en capitules globuleux, rassemblés en corymbe. La floraison peut avoir lieu selon les années du mois de mai à septembre. Helichnsum italicurn est endémique du pourtour méditerranéen. En particulier, dans le cadre de l'invention, l'immortelle Helichnstun italicum est d'origine des Balkans incluant Chypre, la Grèce, l'Albanie, le Monténégro, l'Italie, la Slovénie, la Croatie, la Bosnie-et-Herzégovine, la Serbie. La demanderesse s'est aperçue de manière surprenante que l'origine géographique de l'immortelle, Helichrysum italicum, avait des conséquences sur la composition et l'activité de l'absolue. 6 [0048] L'immortelle est réputée pour sa forte fragrance. Ainsi, elle est connue dans le domaine de la parfumerie et de la cosmétique sous forme d'huile essentielle. En effet, l'huile essentielle est une forme qui contient la part la plus importante de composés volatils qui sont recherchés dans la parfumerie. [0049] L'absolue présente une composition bien distincte de l'huile essentielle notamment du fait des procédés d'obtention qui ne permettent pas de recueillir les mêmes types de composés. L'absolue d'immortelle Helichrysum italicum présente avantageusement une fraction volatile comprise entre 10 et 70%, plus précisément entre 30 et 70% plus précisément entre 40 et 60%. La présence d'une fraction non volatile non négligeable contrairement à l'huile essentielle constitue un préjugé plutôt négatif pour un homme du métier quant à une utilisation de l'absolue d'immortelle. De plus une fraction non volatile importante peut être un frein pour l'intégration dans des formulations, notamment des formulations cosmétiques et/ou dermatologiques que ce soit du fait de la consistance, la couleur de l'absolue qui n'est pas optimisée pour les formulations cosmétiques et/ou dermatologiques. [0050] Avantageusement, ce sont les parties aériennes de Helichrysum italicum qui sont utilisées pour l'obtention de l'absolue. Dans le cadre de la présente invention, les parties aériennes sont choisies dans le groupe constitué par les sommités fleuries, les feuilles, les tiges, les fleurs, les graines, ou leurs mélanges. [0051] L'absolue d'immortelle conforme à l'invention est susceptible d'être obtenue par les procédés classiques connus de l'homme du métier. De manière préférée, le procédé comprend les étapes suivantes d'obtention d'une concrète puis à partir de la concrète d'obtention de l'absolue. Plus précisément, le procédé comprend avantageusement une étape de macération d'immortelle Helichn,sum italicutn. Préférentiellement, l'immortelle Helichrysum italicum est utilisée sèche dans un solvant organique, ou un mélange de solvants organiques, volatils préférentiellement de type apolaires, hydrocarbures. Selon un mode de réalisation préféré, la macération de la matière sèche se fait successivement, par exemple trois fois dans un nouveau volume de solvant de sorte à épuiser la matière végétale. A titre d'exemple, le solvant, ou mélange de solvant, est choisi parmi le groupe des hydrocarbures comprenant par exemple : hexane, cyclohexane. Le macérat est ensuite préférentiellement filtré pour retirer la matière végétale et le solvant, ou mélange de solvants, est évaporé, aboutissant à l'obtention d'une concrète. La concrète est un produit pâteux et dur. La concrète est lavée à l'alcool. C'est-à-dire que l'on ajoute de l'alcool à la concrète. A titre préféré, l'alcool choisi est de l'éthanol. La concrète mélangée à l'alcool est glacée. Le glaçage qui consiste à refroidir la concrète, par exemple en dessous de 5°C, par exemple à moins 15°C, pennet de figer les cires que l'on souhaite retirer. La concrète mélangée à l'alcool et glacée est filtrée pour retirer les cires et l'alcool est évaporé aboutissant à l'obtention 7 de l'absolue. L'absolue d'immortelle est un produit de consistance visqueuse à très visqueuse. [0052] La demanderesse s'est aperçue que l'absolue d'immortelle Heliehrystun italicum présentait des propriétés intéressantes pour le domaine cosmétique et pharmaceutique. [0053] En particulier, pour la photoprotection et en particulier dans le cadre de la prévention et/ou du traitement des altérations des matières kératiniques humaines ducs à des radiations solaires. [0054] Les zones de la peau naturellement exposées aux radiations solaires ou qui subissent fréquemment une surexposition aux radiations solaires sont sujettes aux effets néfastes du rayonnement solaire conduisant à des altérations par exemple les érythèmes solaires, le photovieillissement induit, le risque d'apparition de cancers cutanés tels que les mélanomes, ou épithéliomas, la lucite estivale bénigne également dénommée allergie solaire. [0055] L'absolue d'immortelle Helichrystun italicutn selon l'invention permet de prévenir ces altérations notamment lorsque l'absolue est appliquée préalablement à l'exposition aux radiations solaires ou bien de traiter ces altérations lorsque l'absolue est appliquée après l'exposition. [0056] L'absolue d'immortelle Helichrystun italicutn présente un rôle de photoprotecteur adaptatif et/ou interne notamment du fait qu'elle présente un effet génoprotecteur face aux rayons UV-B qui a pu être démontré dans l'exemple 5. En outre, elle présente un effet anti-oxydant qui est particulièrement recherché dans la photoprotection pour limiter la production d'espèces oxydantes pouvant être délétère pour les cellules ou réduire leur nombre, comme démontré dans l'exemple 6. De même, un effet anti-inflammatoire à des doses réduites est démontré dans l'exemple 7 et assure un rôle apaisant en limitant les réactions anti-inflammatoires permettant d'utiliser l'absolue d'immortelle en application post exposition solaire. [0057] Avantageusement, l'absolue d'immortelle Helichnuttm italicum réduit, retarde et/ou prévient le dommage cellulaire, le stress thermique, le stress oxydatif, le choc osmotique et/ou l'inflammation causée par les radiations solaires. [0058] L'invention concerne également une composition comprenant de l'absolue d'immortelle Helichrystun italicum et un excipient acceptable. L'excipient est cosmétiquement et/ou pharmaceutiquement acceptable. [0059] La composition est avantageusement une composition photoprotectrice. [0060] A titre d'exemple, les compositions conformes à l'invention peuvent comporter en plus d'autres agents photoprotecteurs, appelés aussi agents filtrants ou filtres, organiques ou inorganiques complémentaires filtrant des longueurs d'onde comprises dans les UVA et/ou les UVB, hydrophiles ou lipophiles ou bien insolubles dans les solvants cosmétiques ou pharmaceutiques notamment dermatologiques couramment 8 utilisés. La composition de l'invention peut aussi comprendre des filtres minéraux qui sont des pigments. [0061] Les compositions selon l'invention trouvent leur application dans un grand nombre de traitements, notamment cosmétiques ou dermatologiques, en particulier de la peau y compris des lèvres et/ou des cheveux, y compris le cuir chevelu, notamment pour la protection et/ou le soin dc la peau y compris des lèvres et/ou des cheveux, et/ou pour le maquillage de la peau y compris des lèvres. [0062] Les compositions selon l'invention peuvent par exemple être utilisées comme produit de maquillage. [0063] Les compositions selon l'invention peuvent par exemple être utilisées comme produit de soin et/ou de protection solaire pour le visage et/ou le corps de consistance liquide à semi-liquide, telles que des laits, des crèmes plus ou moins onctueuses, gel-crèmes, des pâtes, des brumes de soin. Elles peuvent éventuellement être conditionnées en aérosol et se présenter sous forme de mousse ou dc spray. Enfin, les compositions selon l'invention peuvent par exemple être utilisées comme produit de soin et/ou de protection solaire moussant de type shampoing ou huile capillaires. Exemples [0064] Exemple 1 : Obtention de l'absolue d'immortelle, Helichrystmt itctlicum [0065] Macération dc 120 kg de plante, plus précisément de parties aériennes, préféren- tiellement sèche, dans 2000 L de solvant ou de mélange de solvants, hexanc, cyclohexane, type hydrocarbures pendant 4h, à r= 45°C. Trois macérations successives avec les mêmes paramètres, la même quantité de plantes, avec une nouvelle quantité de solvant. Evaporation du solvant ou mélange de solvants, tout d'abord à 90°C à pression atmosphérique, puis à 60°C sous vide. La concrète est obtenue avec un rendement de 6% à partir dc la plante, préférentiellement sèche. [0066] L'alcool, type éthanol, est ajouté à la concrète (10 volumes d'alcool pour 1 volume de concrète), le mélange est homogénéisé pendant 2h à l'aide d'une batteuse à pâles thermostat& à 30°C. Le mélange est ensuite glacé à -15°C pendant 12h. Le produit est ensuite filtré sous vide afin d'éliminer les cires insolubles (système Büchner). [0067] L'absolue est obtenue avec un rendement de 75% à partir de la concrète. [0068] Exemple 2 : Caractérisation par UHPLC d'absolue d'Immortelle, Helichrysutn italicum obtenue par le procédé de l'exemple 1. [0069] Une analyse par UHPLC-UV/MS/ELSD des composés majoritaires de l'absolue d'irniaoitelle. [0070] DAD (Détecteur à barrettes de Diodes: de 195 nm à 650 nm [0071] SM (Spectromètre de masse) : ESI+ (Ionisation par électrospray positif) de 100 à 1200 iniz (masse moléculaire) à tension de cône de 10 V. 9 [0072] Les composés majoritaires identifiés sont des dérivés phloroglucinol alpha-pyronc (structure de l'arzanol et dérivés) qui absorbent à des longueurs d'ondes : 292 nm, 297 nm, 295 ntn, 289 nm, 294 nm Des dérivés protocatéchiques ou d'acides hydroxycinnamiques sont également détectés. [0073] Exemple 3 : Estimation de la fraction volatile d'absolue d'Immortelle. Helichrysurn italicurn obtenue par le procédé de l'exemple 1. [0074] La fraction volatile d'une absolue est estimée en utilisant la technique de chroma- tographie en phase gazeuse avec un détecteur à ionisation de flamme (GC-F1D), injection liquide sur colonnes polaire et apolairc par étalonnage interne. [0075] D'après cette technique, nous considérons une estimation générale de la fraction volatile de l'absolue entre 10 et 70%. [0076] Exemple 4 : Analyse olfactive de l'absolue d'immortelle, Helichrysum italicum, obtenue par le procédé de l'exemple 1. [0077] L'analyse olfactive est réalisée par chromatographie gazeuse-olfactornétrie (CGO) avec 9 panelistes experts. Les résultats représentent en figure 1 la répartition des familles olfactives décrivant l'absolue d'immortelle. [0078] Exemple 5 : Etudc de l'activité génoprotectrice face aux UVB d'absolue d'Immortelle. Helichrysum italicum obtenue par le procédé de l'exemple 1. [0079] Après un prétraitement de 24h par l'absolue d'immortelle, les kératinocytes ont été irradiés par des UVB et la détection de l'histone yH2Ax a été réalisée par imtnunomarquage et analysée sur la base de micro-photographies en fluorescence [0080] L'observation d'une augmentation du marquage yH2Ax suite à une irradiation UVB est le reflet d'une augmentation des doubles cassures d'ADN. Un traitement efficace aura pour effet de diminuer le pourcentage de cellules marquées 7H2Ax ou de diminuer l'intensité globale de marquage yH2Ax par cellule induite par l'irradiation UVB. Ceci sera le reflet d'une diminution du nombre de cassures d'ADN double brins. [0081] L'EGCG est le produit de référence de cette étude (Epigallocatechine-3-gallate). [0082] Les résultats sont donnés à la figure 2. [0083] Dans cette étude, l'irradiation des cellules par des UVB à la dose de 200 mJ/cm2 a induit une augmentation significative du taux de noyaux H2Ax positifs (+ 800 %) en comparaison aux cellules Témoins non irradiées. [0084] En comparaison aux cellules témoins Ethanol 0,05% irradiées UVB, les cellules traitées préventivement par la référence EGCG à 25 jtM a induit une forte diminution du taux de noyaux H2Ax positifs (- 800%). [0085] D'une manière générale, le traitement préventif des cellules avant h-radiations UVB par le composé aux trois concentrations testées a fortement diminué (0,01 g/1: - 1200% ; 0,005 g/1 : - 300 % ; 0,001 g/1: - 1200 %) le taux de noyaux H2Ax positifs par rapport à la condition Ethanol Irradiée UVB (0,000025%). [0086] L'absolue d'immortelle aux concentrations de 0,001 g/I, 0,005 g/I et 0,01 g/la fortement diminué le pourcentage de noyaux cellulaires yH2Ax positifs. Dans les conditions du test, nous avons clairement montré un effet génoprotecteur de l'ingrédient. Dès la concentration de 0,001 g/I, l'effet est maximum. [0087] L'évaluation de la cytotoxicité a été réalisée par la méthode de relargage du rouge neutre et par la méthode NITT de mesure de l'activité déshydrogénase mitochondriale. [0088] Les concentrations d'essai ont été choisies en fonction des résultats d'études préli- minaires d'évaluation de la cytotoxicité du composé sur le type cellulaire utilisé. [0089] Les concentrations choisies correspondent aux concentrations les plus élevées en composé qui ne présentent pas de cytotoxicité. [0090] Exemple 6 : Etudc de l'activité anti-oxydante par les tests ABTS et DPPH d'absolue d'Immortelle. Helichrysum italicum obtenue par le procédé de l'exemple 1. [0091] Deux types de tests ont été réalisés afin de mesurer l'activité and-oxydante. [0092] Le test ABTS permet de mesurer la capacité à piéger les radicaux peroxyls. Per- oxydation lipidique. [0093] Le test DPPH permettant de mesurer la capacité à piéger les radicaux oxygénés ou non. [0094] Les résultats obtenus ont été comparés aux valeurs de l'EC50 de l'acide ascorbique, anti-oxydant reconnu. L'EC50 correspond à la concentration en anti-oxydant nécessaire pour réduire de 50% la concentration initiale de DPPH ou de ABTS. Plus la valeur de l'EC50 est faible, plus le composé a une activité anti-oxydante importante. [0095] [Tableaux' :RésultatsdestestsABTSetDPPLI] Produit ABTS EC 50 (g/L) ABTS Ecart type (g/L) DPPH EC 50 (g/L) DPPH Ecart type (ge-) Abs im- mortelle 0,022 0,001 0,040 0,001 Gamme (g/L) I 0,003 à 0,032 0,007 à 0,073 Acide as- corbique° 0,0021 0.0002 0,00260 0,00007 [0096] *solutions dans l'éthanol [0097] °solution dans l'eau pure L'immortelle présente une excellente activité au regard de ces résultats. [0098] Exemple 7 : Etude de l'activité anti-inflammatoire sur cellules du système im- munitaire d'absolue d'Immortelle, Helicluystim italicurn obtenue par le procédé de l'exemple 1. 11 [0099] Effet de l'absolue d' immortelle sur la surproduction de NO induite par le LPS [0100] Un dosage des nitritcs, reflet de la production de NO par les macrophages LAW a été réalisé dans les surnageants de culture prélevés en fin d'expérimentation. Ce dosage a été standardisé sur la quantité de cellules de façon à s'affranchir d'une éventuelle variation du nombre de cellules dans les puits. [0101] Le traitement des macrophages de la lignée RAW 264.7 avec du LPS 100 nen] durant 22h entraîne une très forte accumulation de nitritcs dans les surnageants dc culture. [0102] La référence Aminoguanidinc ou AMG, un inhibiteur de la NO Synthasc inductiblc ou NOSi, enzyme impliquée dans la synthèse de NO, à la concentration 0,1 mM inhibe fortement la production de NO induite par le LPS (-84% par rapport au contrôle LPS). [0103] L' Hydrocortisone, un corticostéroïde anti-inflammatoire, à la concentration de 1 FtM inhibe faiblement la production dc NO induite par le LPS (-20% par rapport au contrôle LPS). [0104] La N-acetylcysteine, un antioxydant à large spectre, décrit comme inhibiteur de la voie NFKB, à la concentration de 5 mM, inhibe modérément la production de NO par les macrophages stimulés par le LPS (-40% par rapport au contrôle LPS). [0105] Le solvant Ethanol à 0,1% n'a pas d'effet sur la production de NO. [0106] Les résultats sont illustrés en figure 3. [0107] On observe un effet inhibiteur concentration dépendant de l'absolue d'Immortelle obtenu à l'exemple 1 sur la production de NO induite par le LPS de la production de NO est maximale à la concentration de 0,050 g/1 (-64% par rapport au contrôle LPS). L'EC50 de l'absolue Immortelle est estimée entre 0,025 g/let 0,050 g/1 sur ce test. [0108] Effet de l'immortelle absolue sur la surproduction de PGE2 induite par le LPS. [0109] Le traitement des macrophages de la lignée RAW 264.7 avec du LPS 100 ng/ml durant 22h entraîne une très forte accumulation de prostaglandine E2 dans les surnageants de culture. [0110] La référence Aminoguanidine, un inhibiteur de la NO Synthase inductible ou iNOS, enzyme impliquée dans la synthèse de NO, à la concentration 0,1 mM n' a pas eu d' effet sur la surproduction de PGE2 induite par le traitement LPS. [0111] L' Hydrocortisone, un corticostéroïde anti-inflammatoire, à la concentration de 1 mM inhibe modérément la surproduction de PGE2 induite par le traitement LPS (-27% par rapport au contrôle LPS). [0112] La N-acetylcystéine, un antioxydant à large spectre, démit comme inhibiteur de la voie NFKB, à la concentration de 5 mM, a inhibé très faiblement la surproduction de PGE2 induite par le traitement LPS (-4% par rapport au contrôle LPS). [0113] Le solvant Ethanol à 0,1% a inhibé faiblement la surproduction de PGE2 induite par 12 le traitement LPS (-13% par rapport au contrôle LPS). [0114] Les résultats sont illustrés en figure 4. [0115] On observe un effet inhibiteur concentration dépendante de absolue d'Immortelle obtenu à l'exemple 1 sur la production de PGE2 induite par le traitement LPS. L'inhibition de la production de PGE2 est observée dès la concentration de 0,010 g/L (-66% par rapport au contrôle LPS). L'EC50 de l'absolue d'Immortelle est inférieure à 0,010 g/I sur ce test. [0116] Exemple 8 Etude de phototoxicité de l'absolue d'Immortelle, Helichrysurn italicum obtenue par le procédé de l'exemple 1. [0117] Des essais de phototoxicité in vitro 3T3 NRU selon la ligne directrice OCDE N°432 ont été réalisés. Les résultats montrent une absence de phototoxicité de l'absolue d'immortelle sur la gamme de concentrations de 7.81g/ml à 1000pg/ml. [0118] Exemple 9 Etude de génotoxicité de l'absolue d'Immortelle, Helichrystun ifalicum obtenue par le procédé de l'exemple 1. [0119] Des essais de mutation reverse sur des bactéries, aussi appelé test d'Ames, ont été réalisés selon la ligne directrice OCDE N°471. Les essais ont été réalisés avec les concentrations d'absolue d'immortelle obtenues à l'exemple 1 suivantes : 5000, 1600, 500, 160, 50, 16 et 5 pg/boîte. Aucune activité mutagène ou pro-mutagène n'a été mise en évidence pour toutes les concentrations étudiées. 13