Brevet FR3089111A1 — publié le 20200605

Description Titre de l'invention : Dispositif d'imagerie de fluorescence [0001] L'invention concerne un dispositif et un procédé d'imagerie de fluorescence d'une cible comprenant au moins un marqueur, ce marqueur étant un marqueur fluorescent dans une gamme de longueurs d'onde d'émission prédéfinie, en vue de la localisation dudit marqueur fluorescent dans ladite cible. [0002] Elle concerne plus particulièrement un dispositif d'imagerie de fluorescence comprenant une première source lumineuse, dite d'excitation, apte à émettre dans une gamme de longueurs d'onde d'excitation un rayonnement d'excitation dudit marqueur, une deuxième source lumineuse, cite d'éclairage, apte à illuminer ladite cible dans une gamme de longueurs d'onde supérieure à la gamme de longueurs d'onde d'excitation, une unité de pilotage, un module d'acquisition d'image comprenant un capteur d'image et un système optique de focalisation d'un rayonnement de la cible sur ledit capteur d'image. [0003] L'imagerie de fluorescence est une technique permettant de localiser les marqueurs fluorescents dans une cible, telle qu'un échantillon biologique, cet échantillon biologique pouvant être notamment le corps humain ou animal ou une partie dudit corps. Le principe de l'imagerie de fluorescence est d'illuminer un champ d'observation comprenant la cible à l'aide d'une source de lumière dans une bande spectrale d'excitation des fluorophores. Sous l'effet de cette illumination, les fluorophores émettent un rayonnement de fluorescence dans une bande spectrale de fluorescence, encore appelée bande spectrale d'émission. Ce rayonnement peut être capté par un capteur d'image de manière à former une image de fluorescence sur laquelle apparaissent les différentes zones fluorescentes. Il est. alors possible d'acquérir une image du champ observé comprenant la cible à l'aide d'un autre capteur d'image et de superposer l'image de fluorescence sur cette image. Toutefois, jusqu'à présent, un tel dispositif d'imagerie est peu compact et onéreux. [0004] Un but de l'invention est de proposer un dispositif d'imagerie de fluorescence du type précité dont la conception permet de disposer d'un dispositif compact, peu onéreux et dont les images sont de bonne qualité. [0005] A cet effet, l'invention a pour objet un dispositif d'imagerie de fluorescence d'une cible comprenant au moins un marqueur, fluorescent dans une gamme de longueurs d'onde d'émission prédéfinie, notamment pour la localisation dudit marqueur fluorescent dans ladite cible, ledit dispositif comprenant une première source lumineuse, dite d'excitation, apte à émettre dans une gamme de longueurs d'onde d'excitation un rayonnement d'excitation dudit marqueur, une deuxième source lumineuse, dite d'éclairage, apte à illuminer ladite cible dans une gamme de longueurs 2 d'onde supérieure à la gamme de longueurs d'onde d'excitation, une unité de pilotage, un module d'acquisition d'image comprenant un capteur d'image et un système optique de focalisation d'un rayonnement de la cible sur ledit capteur d'image, caractérisé en cc que le capteur d'image du module d'acquisition d'image est associé à un filtre présentant au moins une bande passante comprenant au moins partiellement la gamme de longueurs d'onde d'émission de la deuxième source lumineuse, et en ce que l'unité de pilotage est configurée pour piloter les première et deuxième sources lumineuses suivant une séquence d'éclairage comprenant au moins une activation de la première source lumineuse, une absence d'activation des première et deuxième sources lumineuses et une activation de la deuxième source lumineuse et pour adresser des signaux de commande au module d'acquisition d'images, et en cc que le module d'acquisition d'images est configuré pour acquérir successivement l'image correspondant à chacune des phases de la séquence en fonction d'au moins une partie des signaux de commande émis par l'unité de pilotage. [0006] Grâce au fait que la gamme de longueurs d'onde dans laquelle la deuxième source lumineuse illumine la cible peut être incluse au moins partiellement dans la gamme de longueurs d'onde d'émission du marqueur, c'est-à-dire dans la gamme de longueurs d'onde dans laquelle le marqueur est fluorescent à l'état excité par une source d'excitation lumineuse, le capteur d'image est apte à collecter au moins partiellement le rayonnement de fluorescence émis par ladite cible, en particulier par le marqueur de la cible, sous l'effet d'une excitation par ladite première source lumineuse, et le rayonnement émis par ladite cible à l'état éclairé par la deuxième source lumineuse. Il en résulte la possibilité d'utiliser un même capteur d'image pour l'acquisition des images de la cible indépendamment de la source lumineuse utilisée. Il en résulte également un pilotage aisé des sources lumineuses et la possibilité de combiner aisément en un temps court lesdites images acquises. Le pilotage particulier des sources lumineuses permet par ailleurs d'augmenter la qualité des images par suppression du bruit et de travailler dans un champ d'observation ouvert réduisant ainsi les contraintes d'encombrement et d'usage pour un utilisateur du dispositif Il doit être noté que les phases de la séquence d'éclairage, qui comprennent toujours au moins une phase d'activation de la première source lumineuse, une absence d'activation des première et deuxième sources lumineuses et une activation de la deuxième source lumineuse, peuvent s'opérer dans un ordre quelconque . [0007] Selon un mode de réalisation de l'invention, le module d'acquisition d'image est configuré pour, à chaque acquisition d'image, générer un ensemble de données comprenant les données de l'image acquise et des données relatives à au moins une partie des signaux de commande émis par l'unité de pilotage. Il est ainsi possible d'identifier aisément chaque image pour en faciliter le traitement ultérieur. 3 [0008] Selon un mode de réalisation de l'invention, le dispositif comprend un module de traitement d'images configuré pour recevoir des données et traiter lesdites données. [0009] Selon un mode de réalisation de l'invention, le module de traitement d'images est configure pour soustraire aux données de l'image acquise pendant la phase d'activation de la première source lumineuse les données de l'image acquise pendant la phase d'absence d'activation des première et deuxième sources lumineuses pour obtenir une image exempte de bruit. [0010] Selon un mode de réalisation de l'invention, le module de traitement d'images est configure pour superposer l'image exempte de bruit avec l'image acquise pendant la phase d'activation de la deuxième source lumineuse. [0011] Selon un mode de réalisation de l'invention, le filtre est disposé entre le système optique de focalisation et le capteur d'images. Il en résulte une qualité accrue des images acquises et un système plus compact. [0012] Selon un mode de réalisation de l'invention, le filtre est un filtre interférentiel ou une combinaison d'un filtre interférentiel et d'un filtre coloré et la bande passante du filtre est comprise entre 660 et 1700 nm. [0013] Selon un mode de réalisation de l'invention, le système optique de focalisation comprend un diaphragme à iris fixe ou réglable et au moins une lentille optique. [0014] Selon un mode de réalisation de l'invention, le capteur d'image est un capteur de type caméra CMOS, CCD ou InGaAs. [0015] Selon un mode de réalisation de l'invention, la première source lumineuse est une diode électroluminescente ou un laser et la deuxième source lumineuse est une diode électroluminescente. [0016] Selon un mode de réalisation de l'invention, le capteur d'image présente, pour chaque image à capter, un temps d'exposition, et le temps d'exposition est fonction de la longueur d'une partie des signaux de commande émis par l'unité de pilotage. [0017] Selon un mode de réalisation de l'invention, le temps d'exposition pour acquérir l'image correspondant à la phase d'activation de la première source lumineuse et le temps d'exposition pour acquérir l'image correspondant à la phase d'absence d'activation des première et deuxième sources lumineuses sont identiques. Il en résulte un traitement ultérieur simplifié desdites images. [0018] Selon un mode de réalisation de l'invention, le dispositif comprend au moins une troisième source lumineuse configurée pour émettre dans la partie visible du spectre à une longueur d'onde inférieure à 600 nm et un capteur d'image visible. Dans ce cas, l'image acquise peut être utilisée en complément en ou substitution de l'image acquise à l'état activé de la deuxième source lumineuse. [0019] Selon un mode de réalisation de l'invention, le dispositif peut comprendre une source lumineuse d'excitation du marqueur supplémentaire. [0020] L'invention a encore pour objet un procédé d'imagerie de fluorescence, à l'aide d'un dispositif d'imagerie, d'une cible comprenant au moins un marqueur, fluorescent dans une gamme de longueurs d'onde d'émission prédéfinic, notamment pour la localisation dudit au moins un marqueur fluorescent dans ladite cible, ledit dispositif d'imagerie comprenant une première source lumineuse, dite d'excitation, une deuxième source lumineuse, dite d'éclairage, une unité de pilotage, un module d'acquisition d'image comprenant un capteur d'image et un système optique de focalisation d'un rayonnement de la cible sur ledit capteur d'image, ledit procédé comprenant : - une étape d'éclairage de la cible avec la première source lumineuse dite d'excitation apte à émettre, dans une gamme de longueurs d'onde d'excitation, un rayonnement d'excitation du ou d'au moins l'un des marqueurs, fluorescent dans la gamme de longueurs d'onde d'émission prédéfinie, et d'acquisition, à l'aide du module d'acquisition d'images de l'image du rayonnement dit de fluorescence émis par la cible, en particulier par le ou au moins l'un des marqueurs de la cible sous l'effet dudit éclairage, caractérisé en ce que le procédé comprend également : - une étape d'éclairage de ladite cible avec la deuxième source lumineuse, dite d'éclairage, illuminant ladite cible dans une gamme de longueurs d'onde, supérieure à la gamme de longueurs d'onde d'excitation et incluse au moins partiellement dans la gamme de longueurs d'onde d'émission du ou d'au moins l'un des marqueurs, et d'acquisition, à l'aide du même module d'acquisition d'images que dans l'étape d'éclairage à l'aide de la première source lumineuse, de l'image de la cible sous l'effet dudit éclairage, et - une étape d'acquisition, à l'aide du même module d'acquisition d'images que dans l'étape d'éclairage à l'aide de la première source lumineuse, de l'image de la cible, à l'état désactivé des première et deuxième sources lumineuses, l'étape d'acquisition de l'image du rayonnement émis pal- la cible à l'état désactivé des première et deuxième sources lumineuses étant, de préférence, opérée entre les étapes d'éclairage de la cible avec les première et deuxième sources lumineuses. [0021] Selon un mode de mise en oeuvre du procédé, ledit procédé comprend une étape de traitement de chacune des images acquises. [0022] Selon un mode de mise en oeuvre du procédé à l'aide d'un dispositif comprenant un module de traitement d'image, le procédé comprend, après chaque étape d'acquisition d'une image commandée à partir des signaux de commande émis par l'unité de pilotage, une étape de génération d'un ensemble de données comprenant les données de l'image acquise et des données relatives à au moins une partie des signaux de commande émis pal- une unité de pilotage avant de procéder à l'étape de traitement de chacune des images acquises. [0023] L'invention sera bien comprise à la lecture de la description suivante d'exemples de réalisation, en référence aux dessins annexés dans lesquels : [0024] [fig.1] représente une vue partielle en perspective d'un dispositif d'imagerie de fluo- rescence conforme à l'invention ; [0025] [fig.2] représente une vue schématique partielle d'un dispositif d'imagerie de fluo- rescence conforme à l'invention ; [0026] [fig.3] représente, sous forme de blocs, une représentation schématique partielle d'un dispositif d'imagerie conforme à l'invention ; [0027] [fig.4] représente, sous forme de graphiques, le pilotage de l'unité de pilotage et les images acquises. [0028] [fig.SÀ] représente, sous forme d'une vue schématique, une image obtenue à l'aide d'un dispositif d'imagerie conforme à l'invention ; [0029] [fig.SB] représente, sous forme d'une vue schématique, une image obtenue à l'aide d'un dispositif d'imagerie conforme à l'invention ; [0030] [fig.SC] représente, sous forme d'une vue schématique, une image obtenue à l'aide d'un dispositif d'imagerie conforme à l'invention ; [0031] [fig.SD] représente, sous forme d'une vue schématique, une image obtenue à l'aide d'un dispositif d'imagerie conforme à l'invention ; [0032] [fig.SE] représente, sous forme d'une vue schématique, une image obtenue à l'aide d'un dispositif d'imagerie conforme à l'invention ; [0033] [fig.6] représente, sous forme graphique, les plages de longueurs d'onde des différents éléments constitutifs du dispositif associées au spectre d'absorption ou d'excitation et au spectre d'émission ou de fluorescence du marqueur. [0034] Comme mentionné ci-dessus, le dispositif 1 d'imagerie de fluorescence, objet de l'invention, a pour objet de permettre l'acquisition d'images d'une cible comprenant un marqueur 21 fluorescent, ces images, une fois traitées, permettant notamment une localisation du marqueur 21 fluorescent dans la cible 20. La cible 20 peut être un échantillon biologique, tel qu'un tissu biologique, un corps humain ou animal, une partie de corps humain ou animal, ou autre. Cette cible 20 est placée dans un champ d'observation qui peut être une table d'opération ou une paillasse dans le cas de l'utilisation du dispositif 1 d'imagerie au sein d'un laboratoire. Cette cible 20 comprend un ou plusieurs marqueur(s) 21 fluorescent(s). Le terme "marqueur" doit être pris dans son acceptation la plus large au sens de fluorochrome ou fluorophore, c'est-à-dire une structure moléculaire ou particulaire apte à émettre une lumière ou rayonnement de fluorescence dans une gamme Li de longueurs d'onde d'émission ou de fluorescence prédéfinie lorsqu'il est éclairé par un rayon d'excitation dans une gamme L2 de longueurs d'onde d'excitation. [0035] Dans l'exemple représenté, le marqueur 21 est une molécule d'Indocyanine Green ou ICG dont la gamme Li de longueurs d'onde d'émission est comprise entre 800 et 1400 6 nm approximativemcnt.et dont la gamme de longueurs d'onde d'excitation est comprise entre 600 et 850 nm approximativement. [0036] Le dispositif 1 d'imagerie est conçu pour fonctionner avec des marqueurs 21 aux ca- ractéristiques d'excitation ou d'absorption et d'émission ou de fluorescence prédéfinics connues. Généralement, le marqueur 21 est un marqueur exogène injecté dans la cible 20. En variante, cc marqueur 21 peut être un marqueur endogène. La cible 20 peut comprendre un ou plusieurs marqueurs 21. [0037] Le dispositif 1 d'imagerie se présente, dans l'exemple représenté, à la manière d'une torche lumineuse sous forme d'un corps allongé apte à être saisi manuellement par l'opérateur. Cc corps allongé est muni, à l'une de ses extrémités, d'une première source 2 lumineuse qui forme la source d'excitation du marqueur 21. Cette première source 2 lumineuse est, dans l'exemple représenté, une diode laser. En variante, cette source 2 lumineuse peut être une diode électroluminescente. Dans le cas de plusieurs marqueurs 21, plusieurs sources 2 lumineuses d'excitation peuvent être prévues. Cette première source 2 lumineuse émet donc dans la gamme L2 de longueurs d'onde un rayon d'excitation de la cible 20, en particulier du marqueur 21 qui, sous l'effet dudit rayonnement d'excitation, émet un rayonnement de fluorescence dans la gamme Ll de longueurs d'onde prédéfinie. Généralement, la gamme L2 de longueurs d'onde d'excitation est supérieure à 600 nm tandis que la gamme Ll de longueurs d'onde d'émission ou de fluorescence du marqueur, qui est supérieure à la gamme L2 de longueurs d'onde d'excitation, est comprise entre 660 et 1700 nm. [0038] Dans l'exemple représenté, eu égard au choix du marqueur 21, la gamme L2 de longueurs d'onde d'excitation est comprise entre 780 et 790 nm et la gamme Ll de longueurs d'onde d'émission du marqueur 21 entre 800 et 1400 nm approximativement. [0039] Le dispositif 1 d'imagerie comprend une deuxième source lumineuse 3 d'éclairage émettant dans une gamme L3 de longueurs d'onde supérieures à la gamme L2 de longueurs d'onde d'excitation, et incluse au moins partiellement dans la gamme Ll de longueurs d'onde d'excitation du marqueur 21. Cette deuxième source lumineuse est ici une diode électroluminescente qui émet dans la gamme L3 de longueurs d'onde comprise entre 850 et 880 nm. [0040] Cette deuxième source lumineuse L3 est également disposée à l'extrémité du corps allongé du dispositif 1 au voisinage de la première source lumineuse 2 d'excitation. [0041] Le dispositif 1 comprend encore une unité 4 de pilotage qui peut être logée à l'intérieur du corps allongé. Cette unité 4 de pilotage se présente sous la forme d'un système électronique et informatique qui comprend par exemple un micro-processeur et une mémoire de travail. Selon un aspect particulier, l'unité de pilotage peut se présenter sous la forme d'un automate programmable. [0042] Autrement dit, les fonctions et étapes décrites peuvent être mises en oeuvre sous 7 forme de programme informatique ou via des composants matériels (p. ex. des réseaux de portes programmables). En particulier, les fonctions et étapes opérées par l'unité 4 de pilotage peuvent être réalisées par des jeux d'instructions ou modules informatiques implémentés dans un processeur ou contrôleur ou être réalisées par des composants électroniques dédiés ou des composants de type FPGA ou ASIC. Il est aussi possible de combiner des parties informatiques et des parties électroniques. [0043] Lorsqu'il est précisé que l'unité 4 de pilotage est configurée pour réaliser une opération donnée, cela signifie que l'unité de pilotage d'image comprend des instructions informatiques et les moyens d'exécution correspondants qui permettent de réaliser ladite opération et/ou que l'unité 4 de pilotage comprend des composants électroniques correspondants. [0044] Le dispositif 1 d'imagerie comprend un module 5 d'acquisition d'image. Ce module 5 d'acquisition d'image comprend un capteur 6 d'image et un système 8 optique de focalisation. Ce module 5 d'acquisition d'image est apte à former une image il d'un rayonnement d'émission produit par la cible 20, en particulier par le marqueur 21 de la cible 20 sous l'effet de l'illumination par la première source lumineuse 2 et une image 13 d'un rayonnement émis par la cible 20 à l'état éclairé par la deuxième source lumineuse 3. On note que, dans le cas où la cible 20 est éclairée par la deuxième source lumineuse 3, le rayonnement résiduel d'émission peut être émis par la cible 21 dans la même gamme de longueurs d'onde que la gamme de longueurs d'onde d'absorption de la source 3. [0045] Dans les exemples représentés, le capteur 6 d'image ou photodétecteur matriciel est un capteur de type CCD (acronyme anglais signifiant charged coupled device, dispositif à transfert de charge) ou un capteur de type CMOS (acronyme anglais signifiant complementary metal-oxyde semi-conducteur, semi-conducteur d'oxyde de métal complémentaire) ou un capteur de type InGaAs (Indium Gallium Arsenide) avec une électronique embarquée. [0046] Le système 8 optique de focalisation est configuré pour former une image du rayonnement d'émission de la cible sur le capteur 6 d'image. Ce système 8 optique de focalisation peut comprendre un diaphragme 81 à iris fixe ou réglable et au moins une lentille 82 optique. [0047] Ce système 8 optique de focalisation présente une longueur focale inférieure à 30 mm Le module 5 d'acquisition d'images comporte un axe optique défini par le système 8 optique de focalisation et le capteur 6 d'image. Les images formées par le capteur 6 d'image comportent des pixels. La valeur de chaque pixel correspond à l'intensité du rayonnement émanant d'une partie de la surface S de la cible. [0048] Le module 5 d'acquisition d'image comprend encore un filtre 7 présentant au moins une bande passante L4 incluant au moins partiellement la gamme L3 de longueurs 8 d'onde d'émission de la deuxième source lumineuse 3, c'est-à-dire la gamme L3 de longueurs d'onde à l'intérieur de laquelle le rayonnement de la deuxième source lumineuse 3 est émis par ladite source. Ce filtre 7 peut être un filtre interférentiel ou une combinaison d'un filtre interférentiel et d'un filtre coloré et la bande passante du filtre 7 est comprise entre 660 nm et 1 700 nm. Idéalement, le filtre 7 est disposé entre le système 8 optique de focalisation et le capteur 6 d'images pour améliorer la qualité des images produites. Ce filtre 7 n'est pas passant dans la gamme L2 de longueurs d'onde d'excitation de la première source lumineuse 2 pour éviter un parasitage par cette lumière d'excitation. A l'inverse, il est passant dans la gamme Ll de longueurs d'onde d'émission prédéfinic du marqueur 21 de sorte que le capteur 6 d'image est apte à collecter au moins partiellement le rayonnement de fluorescence émis par ladite cible, en particulier par le marqueur 21 de la cible 20 sous l'effet d'une excitation par la première source lumineuse 2 pour former une image il et le rayonnement émis par la cible 20 à l'état éclairé par la deuxième source lumineuse 3 pour former une image 13 . [0049] En pratique, l'unité 4 de pilotage est configurée pour, c'est-à-dire comprend un processeur et des instructions informatiques exécutables par le processeur pour, piloter les première et deuxième sources lumineuses 2, 3 suivant une séquence d'éclairage comprenant au moins une activation de la première source lumineuse 2, une absence d'activation des première et deuxième sources lumineuses 2, 3 et une activation de la deuxième source lumineuse 3 et pour adresser des signaux Si et S2 de commande au module 5 d'acquisition d'images. La commande des première et deuxième sources lumineuses 2, 3 à partir de l'unité 4 de pilotage s'opère par émission par l'unité 4 de pilotage de signaux S3 de commande à la première source lumineuse 2 et de signaux 54 de commande à la deuxième source lumineuse 3. [0050] Le module 5 d'acquisition d'images est quant à lui configuré pour, via le capteur 6, acquérir successivement les images I1, 12, 13 correspondant à chacune des phases de la séquence en fonction des signaux de commande émis par l'unité 4 de pilotage, ces signaux de commande étant représentés en SI à la figure 3. Ainsi, le module 5 d'acquisition d'image acquiert : - une image II qui est une image de fluorescence lors de l'activation de la première source lumineuse 2 ; - une image 12 qui est une image dite de bruit, c'est-à-dire une image du champ d'observation à l'état désactivé des deux sources lumineuses et - une image 13 qui correspond à l'image de la cible 20 à l'état activé de la deuxième source lumineuse 3. [0051] Ces images I1, 12 13 sont respectivement illustrées aux figures SA à 5C. Dans le cas où un dispositif 1 d'imagerie comprend au moins une troisième source lumineuse 10 configurée pour émettre dans la partie visible du spectre à une longueur d'onde in- 9 férieure à 600 nm et un capteur 11 d'image visible, l'image acquise par le capteur 11 d'image visible peut, dans certaines conditions, être utilisée en remplacement ou en complément de l'image T3. De même, dans le cas où la cible comprend plusieurs marqueurs, il peut être prévu l'activation de plusieurs sources lumineuses d'excitation et donc l'acquisition de plusieurs images correspondant à T1, I1', Il ", etc... [0052] On note que le capteur 6 d'image présente, pour chaque image il, 12,13 à capter, un temps d'exposition. Ce temps d'exposition est fonction de la longueur des signaux S1 de commande émis par l'unité 4 de pilotage et qui servent à commander l'activation des première et deuxième sources lumineuses 2 et 3. [0053] L'unité 4 de pilotage est configurée pour envoyer au module 5 d'acquisition d'image, en sus des signaux S1 de commande du capteur d'images, des signaux S2 de commande. Le module 5 d'acquisition d'image est configuré pour, à chaque acquisition d'image, générer un ensemble El, E2, E3 de données comprenant les données de l'image 11, 12, 13 acquises à partir des signaux de commande S1 et des données relatives à au moins une partie des signaux de commande émis par l'unité 4 de pilotage, en l'occurrence à la partie S2 des signaux de commande émise par l'unité 4 de pilotage. [0054] Le dispositif 1 d'imagerie comprend encore un module 9 de traitement d'images configuré pour recevoir chaque ensemble El, E2, E3 de données et traiter ledit ensemble de données. L'ensemble de données est envoyé sous forme d'une trame de données. Cette trame de données peut être considérée comme un fichier traité par le module 9 de traitement d'image. Ce module 9 de traitement d'image se présente sous la forme d'un système électronique et informatique qui comprend par exemple un microprocesseur et une mémoire de travail programmable dans laquelle est stockée une séquence d'instructions pour effectuer les opérations de traitement d'image et de calcul décrites. [0055] Autrement dit, les fonctions et étapes décrites peuvent être mises en oeuvre sous forme de programme informatique ou via des composants matériels (p. ex. des réseaux de portes programmables). En particulier, les fonctions et étapes opérées par le module 9 de traitement d'image peuvent être réalisées par des jeux d'instructions ou modules informatiques implémentés dans un processeur ou contrôleur ou être réalisées par des composants électroniques dédiés ou des composants de type FPGA ou ASIC. Il est aussi possible de combiner des parties informatiques et des parties électroniques. [0056] Lorsqu'il est précisé que le module de traitement d'image est configuré pour réaliser une opération donnée, cela signifie que ledit module de traitement d'image comprend des instructions informatiques et les moyens d'exécution correspondants qui permettent de réaliser ladite opération et/ou que le module comprend des composants électroniques correspondants. [0057] Les traitements peuvent être divers. Dans les exemples représentés, le module 9 de traitement d'image est configuré pour soustraire aux données de l'image Il acquise pendant la phase d'activation de la première source lumineuse 2, les données de l'image 12 acquises pendant la phase d'absence d'activation des première et deuxième sources lumineuses pour obtenir une image exempte de bruit, le bruit étant représenté en 22 à la figure 5B. Cette image exempte de bruit correspond à l'image obtenue à la figure 5D. De même, le module 9 de traitement d'image est configuré pour superposer l'image exempte de bruit avec l'image 13 acquise pendant la phase d'activation de la deuxième source lumineuse 3. L'image qui en résulte est représentée à la figure 5E. Cette image correspond à la cible 20 avec la fluorescence du marqueur 21 visible. [0058] Pour parfaire le dispositif 1 d'imagerie, des fonctions de correction connues peuvent être prises en compte, telles que la fonction de correction de l'image en fonction de la distance entre la source lumineuse et la cible ou en fonction du temps d'exposition. [0059] Dans les exemples représentés, le capteur d'image présente, pour chaque image II, 12,13 à capter, un temps d'exposition. Ce temps d'exposition est fonction de la longueur des signaux S1 de commande émis par l'unité 4 de pilotage pour commander l'acquisition d'images par le capteur 6 d'image. Ainsi, le temps d'exposition pour acquérir l'image 11 correspondant à la phase d'activation de la première source lumineuse 2 et le temps d'exposition pour acquérir l'image 12 correspondant à l'image 12 acquise pendant la phase d'absence d'activation des première et deuxième sources lumineuses 2.3 sont identiques. [0060] En pratique, le fonctionnement d'un tel dispositif 1 d'imagerie peut s'opérer comme suit. Le dispositif 1 est généralement placé à une distance de la cible comprise entre 10 et 30 cm. Le dispositif 1 peut être déplacé manuellement par un opérateur de façon à localiser d'éventuelles zones fluorescentes clans la cible. Ces zones fluorescentes peuvent être situées en surface ou à quelques millimètres de profondeur. L'opérateur peut par exemple porter un tel dispositif 1 dans sa main et balayer le champ d'observation afin de réaliser un examen complet de la cible 20. [0061] Au cours de ce balayage, l'unité 4 de pilotage adresse des signaux S3. S4 de commande aux première et deuxième sources lumineuses 2 et 3 et des signaux Si, S2 de commande au module d'acquisition d'image de sorte que des séquences d'image 12,13 sont acquises successivement par le capteur 6 d'image du module d'acquisition d'image avec l'image II correspondant à une image acquise à l'état éclairé de la cible 20, avec la première source lumineuse 2, l'image 12 correspondant à l'image acquise à l'état désactivé des première et deuxième sources lumineuses et l'image 13 correspondant à l'image acquise à l'état activé de la deuxième source lumineuse 3. Ces images Il, 12.13 forment avec les signaux S2 de commande des ensembles El, E2, E3 de données qui sont ensuite traités par le module de traitement d'image pour permettre 11 à l'opérateur de localiser les zones de fluorescences dans la cible. 12 [Revendication I] [Revendication 2] [Revendication 3]