Brevet FR3088804A1 — publié le 20200529

Description Titre de l'invention : COMPOSITION ANTIFONGIQUE POUR PELLICULAGE DE SEMENCES [0001] L'invention se rapporte au domaine de la protection des semences contre les maladies fongiques et au traitement de celles-ci par des composés d'origine naturelle. [0002] La fusariose du blé (ou gale du blé) est une maladie affectant le blé, l'orge, l'avoine, le seigle, le triticale et les graminées. Elle est due à diverses espèces de champignons du genre Fusarium (F. graminearum, F. culmortun, F. tricincttrn, F. poae, F. avenaceum, F. langsethiae ou F. sporotrichioides) mais aussi du genre Microdochium (M. tnajus ou M. nivale (autrefois appelé Fusarium nivale)). [0003] M. nivale provoque une fonte des semis, qui entraîne la mort des pousses et un éclaircissage. Pour les autres espèces, un symptôme fréquent est la coloration brun foncé des noeuds inférieurs, et l'on peut aussi observer le blanchiment de tout ou partie de l'épi. Lc principal problème est la production potentielle de mycotoxincs dans les grains (en particulier par F. gramineartun), substances toxiques dont la concentration dans les grains, la farine et les produits à base de farine destinés à l'alimentation humaine et animale doit être inférieure aux valeurs fixées par la réglementation. La fusariose est également une maladie problématique chez le maïs. [0004] La carie commune du blé est une maladie provoquée par le champignon Tilletia caries, mais aussi éventuellement par Tilletia foetida. Les grains malades prennent une couleur foncée, deviennent gonflés, car constitués essentiellement de spores. À la récolte au moment du battage, les grains s'écrasent facilement, libérant une odeur désagréable. Les spores contenues dans les grains cariés se dispersent et contaminent les grains sains et le sol. Bien que l'on puisse, à cc jour, prévenir ou traiter cette maladie par les traitements de semences fongicides efficaces (tant que des substances chimiques homologuées sont disponibles), elle reste néanmoins présente. De fait, la lutte contre cette maladie, préventive ou curative, ne passe que par le traitement de semences, car il n'est pas possible de traiter les plantes unc fois que la maladie est apparue en végétation. [0005] La plupart des spécialités chimiques efficaces vis-à-vis des fusarioses sont également homologuées et efficaces vis-à-vis de semences contaminées par des spores de carie. On peut citer Vibrance® Gold (difénoconazole, fludioxonil et sedaxane, Syngenta), Redigo0 (prothioconazole, Bayer Agri), Rancona® 15 ME (ipconazole, Aysta LifeSciences) ou CelestO Power (fludioxonil et sedaxane, Syngenta). [0006] En agriculture biologique, face à la contamination des semences, les spécialités au- torisées sont le Copseed (sulfate de cuivre nibasique, Nufarm) et le vinaigre. 2 [0007] Dans une logique de développement de produits d'origine naturelle, en particulier pour l'agriculture biologique, il apparaît important de développer de nouvelles compositions capables de protéger les semences contre les maladies fongiques, et notamment les fusarioses et la carie. Ceci permet en particulier d'anticiper des possibles restrictions ou retraits d'homologation de produits issus de la chimie traditionnelle. [0008] L'invention se rapporte ainsi à une nouvelle composition pour pelliculage des semences afin de les protéger contre les maladies fongiques, comprenant un broyat de racines de raifort, et en particulier un simple broyat de racines de raifort. [0009] Cc résultat est surprenant, dans la mesure où il n'a jamais été rapporté qu'un simple broyat de racines de raifort est capable de générer un effet antifongique in vivo par simple traitement de semence, c'est-à-dire application d'une très faible quantité de cet extrait. [0010] Ainsi, dans un premier aspect, l'invention se rapporte à une méthode pour protéger des graines de plante d'attaques d'un pathogène fongique, comprenant l'étape de pelliculage des graines dans un broyat de racines de raifort. [0011] Le pelliculage de graines est une technique connue dans l'art et rappelée plus bas. [0012] Dans le mode de réalisation préféré, le broyat de racines de raifort est un broyat complet de racines de raifort, c'est-à-dire que le broyat ne subit aucune transformation ou extraction après broyage. [0013] Dans un autre mode de réalisation, le broyat de racines de raifort est mélangé à un liquide aqueux. [0014] La méthode selon l'invention est particulièrement adaptée pour protéger les semences d'un pathogène fongique est choisi dans le groupe constitué de Fusarium graminearum, Fusarium culmorum, Fusarium tricinctum, Fusarium poae, Fusarium avenaceum, Fusarium langsethiae, Fusarium sporotrichioides, Microdochium majus, Microdochium nivale, dans le groupe des Tilletia, par exemple Tilletia caries ou le groupe de pathogènes du genre Pythium. [0015] En particulier, elle s'avère particulièrement adaptée contre Fusarium graminearum et Tilletia caries. [0016] Le fait que le broyat de racines de raifort soit utilisable directement dans une com- position enrobant des semences est particulièrement inattendu, dans la mesure où la quantité estimée de principe actif présent sur la semence est relativement faible. [0017] La quantité de broyat que l'on va utiliser sera différent suivant les espèces. [0018] Ainsi, pour le blé, dans un mode de réalisation préféré, on utilise préférentiellement 1,8 kg de broyat de racines de raifort pour 1 quintal (q) de semences. On peut toutefois utiliser des doses inférieures ou supérieures. Ainsi, on peut envisager des doses de 0,5 kg/q, 0,8 kg/q, 1 kg/q, 1,5 kg/q, 2 kg/q, 2,5 kg/q voire une dose supérieure à 2,5 kg/q. 3 [0019] Pour le maïs, on utilise préférentiellement 0,8 kg de broyat par quintal de semences. Des doses de 0,4 kg/q, 0,5 kg/q, 0,7 kg/q, 1 kg/q, 1,2 kg/q, 1,5 kg/q ou supérieures à 1,5 kg/q pourraient aussi convenir. [0020] Le pelliculage des semences sert à une protection efficace des semences. Ainsi qu'indiqué par le Gnis Pédagogie, afin d'obtenir le niveau de protection nécessaire, il convient d'appliquer de façon homogène sur toute la surface des semences les matières actives adaptées aux pathogènes que l'on souhaite combattre. De fait, si la surface du grain n'est pas entièrement couverte par les produits, y compris dans le sillon, la protection risque d'être inefficace. Le pelliculage permet de fixer les produits généralement par une couche très fine sans modifier la forme de la graine [0021] On formule un produit de traitement de semences en ajoutant la matière active à des formulants, adjuvants, agents pelliculants connus dans l'art. Ces composés n'ont pas d'effet biologique et sont utilisés notamment pour assurer une bonne tenue de la substance active sur la graine, ainsi qu'un bon recouvrement de la semence. [0022] Ainsi, on effectue le pelliculage en mélangeant le broyat de moines de raifort avec un formulant et/ou un agent pelliculant. Puis on pulvérise le mélange sur les semences, pour application sur les graines, l'homogénéisation étant ensuite réalisée généralement dans des mélangeurs statiques. [0023] On utilise, en tant que formulant, des solvants organiques ou de l'eau, des dis- persants, des émulgatcurs, des tensioactifs ou des mouillants, des colorants... [0024] Les pelliculants sont utilisés pour appliquer un film microporeux à la surface de la semence. Ils permettent d'améliorer la couverture de la graine et l'homogénéité du recouvrement par la substance active. Ils peuvent également faciliter l'écoulement des semences dans le semoir. [0025] Les enrobants peuvent modifier la forme, la taille et/ou le poids de la semence, ce qui permet d'améliorer la précision du semis. La poudre de raifort peut être intégrée à cet enrobant. [0026] On peut effectuer un pelliculage monocouche ou répéter les étapes de pelliculage pour obtenir un pelliculage multicouche et augmenter ainsi la dose pour obtenir une dose optimale. [0027] Dans un mode de réalisation préféré, la plante est une graminée. [0028] En particulier, la méthode est particulièrement adaptée pour des semences de blé. [0029] On peut aussi appliquer la méthode sur des semences d'orge, de seigle, maïs, colza ou tournesol mais cette méthode s'applique également sur des espèces potagères cucurbitacée, solanacée, brassicacée ou astéracées. [0030] L'invention se rapporte également à une composition pour pelliculage de graines, ca- ractérisée en ce qu'elle comprend un broyat de racines de raifort et au moins un agent pelliculant ou un formulant. Cette composition a des propriétés antifongiques et est destinée notamment à pelliculer des semences, ainsi que décrit plus haut, afin de protéger les semences contre les fusarioses, et/ou les septorioses et les caries. [0031] L'utilisation d'une telle composition pour pelliculer des semences est aussi un objet de l'invention. En effet le broyat objet de l'invention peut être utilisé en pulvérisation directe sur des plantes en culture ou en traitement de semence. [0032] Enfin, l'invention se rapporte à un broyat de racines de raifort en tant que produit phytosanitaire. Ce produit phytosanitaire présente une activité antifongique. L'invention se rapporte ainsi à un broyat de racines de raifort utilisé en tant qu'antifongique. Brève description des dessins [0033] [fig.1] : Nombre de plantes levées par pathothcst blé / Fusarium gramincarum ; Rcp 1 et rep 2 correspondent aux 2 séries de tests. T : plantes témoin non contaminées ; T + Fg : plantes témoins, contaminées par Fusarium gramincarum ; T+ Fg + P : plantes témoin, contaminées par Fusarium gramincarum pelliculées ; T + Fg + P + Redigo0 : plantes témoin, contaminées par Fusarium gramincarum pelliculées avec du Redigo0 ; Fg + P + Raifort Root ; plantes, contaminées par Fusarium gramincarum pelliculées avec du broyat de racines de raifort. [0034] [fig.2] : photos des pathotcst blé / Fusarium gramincarum, 35 jours après semis. T : plantes témoin non contaminées ; T + Fg : plantes témoins, contaminées par Fusarium gramincarum ; T + Fg + P : plantes témoin, contaminées par Fusarium gra- mincarum pelliculées ; T + Fg + P + Rcdigo0 : plantes témoin, contaminées par Fusarium gramincarum pelliculées avec du Redigo® ; Fg + P + Racines Raifort ; plantes, contaminées par Fusarium gramincarum pelliculées avec du broyat de racines de raifort [0035] [fig.3] : taux de levée pathotcst maïs / Fusarium gramincarum, 14 jours après semis. T : plantes témoin non contaminées ; T + Fg : plantes témoins, contaminées par Fusarium gramincarum ; T + Fg + P : plantes témoin, contaminées par Fusarium gra- minearum pelliculées ; T + Fg + P + Influx Th : plantes témoin, contaminées par Fusarium graminearum pelliculées avec de l'influx XL et du Thirame; Fg + P + Raifort root ; plantes, contaminées par Fusarium graminearum pelliculées avec du broyat de racines de raifort. [0036] [fig.4] : photographies de croissance de Fusarium graminearum a 7 jour en présence de broyat de racine de raifort. Les témoins A, B et C correspondent aux 3 répliquas. Echantillon A-A, A- B et A-C correspondent a la culture de ces 3 répliquas en présence de poudre de Raifort. [0037] [fig.5] : photographies de croissance de Fusarium gramincarum a 3 jour en présence des différentes fractions générées. FO, Fl , F2, F3 et F4, Fractions obtenues lors de l'extraction successive de la poudre de raifort (voir tableau 4) ; [0038] [fig.6] : Pourcentage d'inhibition de la croissance mycélienne de Fusarium gramincarum par fumigation en fonction de la quantité de poudre de raifort par boite de pétri. La courbe du haut (bleue) correspond à une observation à 3 jours et la courbe du bas (rouge) à une observation à 4 jours. [0039] EXEMPLES [0040] Exemple 1. Production du broyat de racine de raifort [0041] Les racines de raifort (Artnoricia rusticana) ont été coupées en tranches, congelées puis broyées avec un broyeur à billes pour obtenir une poudre fine, (broyas). Cette poudre est ensuite utilisée en traitement de semence. [0042] Pour obtenir une semence traitée, on élabore une « bouillie de traitement » composée du broyat ou poudre décrit ci-dessus, d'un « poli iculant » et d'eau. Ce « poil iculant » est composé d'un adhésif de 20 à 50%, d'éléments colorants de 10 à 40% et 10 à 40% de charges. La semence est traitée en multicouche, application de plusieurs couches successives avec un temps de séchage intermédiaire (2h). Cette application se fait dans un bol type SATEC: la bouillie incluant le broyat de racines de raifort est pulvérisée sur les semences tenues en rotation dans le bol pendant quelques secondes. [0043] Exemple 2. Activité du broyat de racine de raifort en traitement de semence blé / Pathotest Fusarium graminearum [0044] Le pathotest à l'encontre du fusarium a été conduit à partir de lots de semences de blé (poids de mille grains, PMG 40g) naturellement contaminées par Fusarium gramineartun et des lots de semences témoin saines (T). [0045] Les semences du lot contaminé (T + Fg) ont été soit non traitées soit pelliculées avec du Redigo® aux doses homologuées (T + Fg + P + Redigo®), soit pelliculées avec du pelliculant seul (T + Fg + P), soit pelliculées avec du pelliculant et un broyat de racines de raifort (Fg + P + Raifort root) appliqué en deux couches, à la dose de 1,7 Kg par quintal. [0046] 50 graines par conditions ont été semées (5 graines/pot), conservées 5 jours en chambre froide à 10°C et ensuite en module climatique avec une phase dejour de 16h (300nm) à 21°C et une phase de nuit de 8h à 19°C, à 80% d'hygrométrie. Deux répétitions ont été faites (séries 1 et séries 2). La notation est faite autour de 35 jours après semis, elle porte sur le nombre de plantes levées (figure 1). Des photos de ces pa- 6 thotests 35 jours après semis sont également disponibles (figure 2). [0047] La présence de pathogènes fongiques sur les graines affecte la levée des plantes, la présence de l'agent REDIGO® sur ces plantes permet aux semences de lever malgré la présence de pathogènes fongiques. Un très bon résultat est également obtenu avec utilisation de hroyat de racines de raifort en pelliculage. [0048] Exemple 3. Activité du broyat de racine de raifort en traitement de semence maïs / Pathotest Fusarium graminearum [0049] Le pathotcst à l'encontre du fusarium a été conduit à partir de lots de graines de maïs (PMG 290g) naturellement contaminées par Fusarium gratnineartun et des lots de graines témoin saines (T). [0050] Les semences du lot contaminé (T + Fg) ont été soit non traitées, soit pelliculées avec de l'influx XL et du Thirame aux doses homologuées (T + Fg + P + Influx Th), soit pelliculées avec du pelliculant seul (T + Fg + P), soit pelliculées avec du pclliculant et un broyat de racines de raifort (Fg + P + Raifort root). Celui-ci a été appliqué en deux couches, à la dose de 0,8 Kg par quintal. [0051] Les résultats de levée sont présentés figure 3. Les graines traitées avec du hroyat de racines de raifort ont une meilleure levée que les plantes traitées avec du pelliculant seul, sans avoir un taux équivalent aux témoins traitées avec de l'Influx XL et du Thirame. [0052] Exemple 4. Activité du broyat de racine de raifort en traitement de semence blé. pathotest Tilletia caries s [0053] Contamination artificielle d'un lot de semence saine, des graines de la variété RENAN indemne de carie ont été utilisées. La contamination avec la souche de Tilletia caries, est faite avec 1 g de spore / kg de semences, avec application d'un tampon fixateur. [0054] Les premiers tests ont été réalisés à partir de 30 graines ; la détection de la conta- mination se fait au stade 3 feuilles, par le protocole Orgeur et al., 31st ISTA Congress June 2016: Transmission from seed to plant and from soil to plant of Tilletia caries (early detection by PCR and damage threshold). [0055] 7 [Tableaux1] Nombre de plantules contaminées / nombre de plantules semées Essai I Essai 2 Témoin sain 0 / 10 0 / 10 Témoin contaminé 4 / 10 5 / 10 Témoin contaminé, pelliculé 12 / 30 10 / 30 Témoin contaminé, pelliculé, REDIGO 0 / 30 3 / 30 Contaminé, pelliculé, broyai de racines de raifort 1 / 30 0 / 30 [0056] Lc broyat de racines de raifort a un impact sur la transmission de la carie de la semence à la plantule, son efficacité est comparable à celle du REDIGO®. [0057] Dans l'expérience suivante, les semis ont été réalisés en parcelles. [0058] Les semis sont réalisés à faible densité pour faciliter le comptage (20% de la dose optimale) et les semis ont été fait de façon tardive pour ralentir la levée, une levée peu rapide étant propice à la contamination par la plantule, la propagation de la maladie se fait préférentiellement avant le stade 2 feuilles. [0059] Caractéristiques de l'essai : [0060] [Tableaux2] site Type de sol Date de semis Densite de semis surface Nombre de répétitions Essai 1 St Argilocalcairc 25 230 gr/ m2 16 m2 4 Douchard (18) octobre Essai 2 Brain l'Authion (49) Limonoargileux 26 220 gr/ m2 10 m2 4 octobre [0061] La densité est exprimée en graille par mètre carré. [0062] La notation est faite au stade grain laiteux. Chaque épi est noté individuellement. L'épi est considéré comme carié si l'un des grains est carié. La notation est réalisée 8 lorsque le seuil de 5% d'épis cariés est obtenu pour le témoin non traité. [0063] [Tablcaux3] Essai 1 Essai 2 Nombre d'épi Nombre d'épi Efficacité par rapport au témoin contaminé Nombre d'épi Nombre d'épi Efficacité par rapport au témoin contaminé totaux / in2 cariés / in2 totaux/ m2 cariés / ni2 Témoin sain 424 0 493 2 Témoin contaminé 536 75 617 65 REDIGO® 435 0 100 422 0 100 Vinaigre 434 20 73 511 15 80 COPSEED 451 17 78 504 17 78 broyat de racines de raifort 407 5 94 467 2 97 100641 On voit ainsi que le broyai de racines de raifort apporte une protection contre la carie proche de l'efficacité de REDIGO® 100651 Enfin la viabilité des spores de Tilletia caries a été vérifiée sur deux lots de semences artificiellement contaminées. Un lot témoin sur lequel aucun traitement n'est appliqué et un lot sur lequels le broyai de racine de raifort a été appliqué. La viabilité des spores de Tilletia caries a été vérifiée par la méthode de coloration au tétrazolium décrite dans le poster d'Orgeur et al., « qualité sanitaire des semences de blé : Evaluation de la viabilité des spores de Tillera spp. (AFPP). on identifie 16,8 % de spores viables pour le témoin contre 6,4 % pour le lot de semences traites avec le broyat de racine de raifort. [0066] Exemple 5. Détermination de l'activité antifongique de la poudre de Raifort : [0067] La poudre de raifort solubilisée dans de l'eau à la concentration de 1,5g/5m1 est mélangée au milieu de culture PDA (Potato Dextrose Agar) avant dépôt d'un disque mycélien de Fusarhun graminearum. [0068] Les témoins A, B et C correspondent aux 3 répliquas. Echantillon A-A, A- B et A-C correspondent à la culture de ces 3 répliquas en présence de poudre de Raifort.Les photographies au 7eme jour de croissance sont présentées dans la figure 4. La souche n'a pas poussé après 7 jours dans le milieu de culture contenant la poudre de raifort. 9 [0069] Exemple 6. Fractionnement de la poudre de raifort détermination de l'activité antifongique des fractions ; [0070] Des extraits de poudre de raifort ont été générés afin d'identifier les familles de composés actifs. Une extraction successive a été réalisée à partir de 3g de poudre de l'échantillon A. 4 fractions ont été obtenues (extrait cyclohexane, dichlorométhane, méthanol et eau). Les rendements d'extraction sont présentés dans le tableau 4. [0071] Fractions et rendement obtenus lors de l'extraction successive de la poudre de raifort. [0072] [Tablcaux4] code Fraction Rendement FO Poudre après extraction - FI Cyclohcxanc 4% F2 Dichlorométhanc 7% F3 Méthanol 11% F4 Eau 21% 100731 Des tests miniaturisés ont été développés en microplaque de 12 puits afin d'étudier l'activité des extraits générés. Chaque extrait a été testé à la dose de 1 mg/ml. La poudre avant et après extraction (F0) a également été testée, a la dose 1,5N. la figure 5 présente les photographies des microplaqucs après 3 jours d'essais. [0074] Aucune inhibition de la croissance mycélienne n'a été constatée pour les extraits testés (F1 à F4) ainsi que pour la poudre après extraction (F0). Seule la poudre avant extraction est active. [0075] Des essais antifongiques par fumigation ont été réalisés en boite de pétri. Un disque mycélicn de Fusarium graminearum a été déposé sur la gélose PDA ; L'échantillon à tester a ensuite été déposé dans le couvercle de la boite, retournée de façon à éviter le contact direct entre le disque et l'échantillon. [0076] Plusieurs modalités ont été testées : [0077] 1/ poudre de raifort (échantillon B) 2g, lg, 0,5g, 0,1g [0078] 2/ poudre de raifort (échantillon B) diluée dans l'eau (1N) : 2g, lg, 0,5g, 0,1g [0079] 3/ extrait cyclohexanc, dilué dans le cyclohexane : quantité finale 10mg [0080] 4/ extrait dichlorométhanc, dilué dans le cyclohexane : quantité finale 10mg [0081] Une inhibition totale de la croissance mycélienne a été observée pour les deux premières modalités. [0082] Des essais de fumigation ont été réalisés avec la poudre en présence d'eau, à plusieurs concentrations, afin de déterminer une 1050 (concentration inhibitrice médiane) : 0 ; 0,5 ; 1 ; 5 ; 10 ; 50 ; 100 mg de poudre ont été utilisés par boite de Pétri. La figure 6 présente les courbes d'inhibition obtenues à 3 et 4 jours. [Revendication 1] [Revendication 2] [Revendication 3] [Revendication 4] [Revendication 5] [Revendication 6] [Revendication 7] [Revendication 8] [Revendication 9] [Revendication 10] [Revendication 11]