Brevet FR3091993A1 — publié le 20200731

Description Titre de l'invention : PROCEDE D'OBTENTION D'UN EXTRAIT DE FEUILLES DE PATCHOULI ET SES UTILISATIONS COS- METIQUES Domaine technique 100011 La présente invention concerne le domaine de la cosmétique et plus particulièrement celui des ingrédients actifs entrant dans la formulation des compositions pour les soins de la peau. L'invention a trait à un procédé d'obtention d'un extrait particulier de feuilles de patchouli (Pogosteinorz cablin). L'invention concerne également des extraits de feuilles de patchouli comprenant de 50 à 80 % de composés volatils, de 2 à 5 % de composés phénoliques et de 15 à 48 % de composés lipidiques obtenus par un tel procédé, les compositions cosmétiques comprenant de tels extraits, et enfin l'utilisation cosmétiques de telles compositions pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères. Arrière-plan technique de l'invention 100021 Le patchouli (Pogosteinon cabiai) est une plante tropicale de la famille des Lamiacées principalement cultivée en Asie et en particulier en Indonésie, d'environ 1 mètre de haut, aux feuilles larges et veloutées. Après séchage, le patchouli possède une odeur puissante, à la fois boisée et terreuse avec des accents fumés et camphrés. [0003] Le patchouli est surtout utilisé en parfumerie et en cosmétique, sous forme d'huile essentielle produite par simple distillation des feuilles ou par des techniques d'extraction plus complexes (KR1034010B1, US7879584B2). [0004] Les composés majoritaires des huiles essentielles de patchouli sont le patchoulol, le gamma-guaiene, l'alpha-guaiene. l'alpha-patchoulene et le bêta-caryophyllène. Une huile essentielle obtenue par extraction à la vapeur d'eau contient de 30 % à 40 % de patchoulol parmi des dizaines d'autres composés comme des sesquiterpènes : alphabulnésene (20-25 %). alpha-guaiène (10-12 %), bêta-patchoulène (2-3 %), bêtacaryophyllène (3-4 %) et des alcools sesquiterpéniques comme le pogostol (2-3 %), selon les études de Yahya et Yunus (Yahya et Yunus, Influence of Sample Preparation and Extraction Time on Chemical Composition of Steam Distillation Derived Patchouli Oil, Procedia engineering. 2013 February 1; 53). [0005] Le patchouli est connu et utilisé en médecine ayurvédique pour le réconfort de l'esprit et en aromathérapie pour détendre et soulager les dépressions (Swamy MK et al. A Comprehensive Review on the Phytochemical Constitucnts and Pharmacological Activities of Pogosternon cablin Benth.: An Aromatic Médicinal Plant of Industrial Importance. Molecules. 2015 May 12; 20(5):8521-47). En occident, il est associé au 2 mouvement hippie des années 1970. [0006] Le patchouli est également connu pour être anti-inflammatoire, antiémétiques, an- talgiques et antiseptiques, pour ses effets sur la peau et les cheveux (KR2008081393A, W02010086717), pour ses propriétés antioxydantes et protectrices vis-à-vis du photo-vieillissement (Lin RF. Prevention of UV radiation-induced cutancous photoaging in mite by topical administration of patchouli oil; J Ethnopharmacol. 2014 Jun 11;154(2):408-18). [0007] La peau est un organe composé de plusieurs couches (derme, épiderme et straium cortzeurn), qui recouvre toute la surface du corps et assure des fonctions protectrices vis-à-vis des agressions extérieures, sensitives, immunitaires, métaboliques, thermorégulatrices ou encore de barrière limitant la déshydratation. [0008] En particulier, le stranun corneum assure un rôle de barrière physique protectrice, communément nommé « fonction barrière de la peau ». Cette fonction revêt une importance majeure dans l'homéostasie tissulaire et dans la protection vis-à-vis de l'environnement extérieur. [0009] L'aspect de la peau peut être modifié par des altérations internes (vieillissement in- trinsèque, maladies et changements hormonaux tels que la grossesse) ou externes (facteurs environnementaux, tels que la pollution, la lumière du soleil, les pathogènes, les variations de température, etc.). Toutes ces altérations affectent non seulement la peau, mais aussi les annexes kératiniques telles que les poils, les cils, les sourcils, les ongles et les cheveux. [0010] Le système cannabinoïde endogène ou endocannabinoïde tire son nom de de la plante qui a permis sa découverte ; le cannabis. Ce système est présent chez tous les vertébrés, dans de nombreux organes où il participe à la régulation d'un nombre très vaste de processus physiologiques, dont le développement neural, l'inflammation, l'immunité, l'appétit, le métabolisme, la perception des informations sensorielles, notamment nociceptives, les cycles de veille et de sommeil ainsi que la régulation du stress et de l'état émotionnel. [0011] La peau et ses annexes (follicule pileux, glande sébacée) sont dotés de leur propre système cannabinoïde complet et fonctionnel, comprenant les ligands endocannabinoïdes, leurs récepteurs CB1 et CB2 associés aux protéines G, ainsi que leurs enzymes de synthèse et de métabolisation (Ashton JC et al. ; Tamis Bir6,Balàzs I. T6th,1 Gybrgy Haskô, Ralf Paus and Pà1Pacher. The endocannabinoid system of the skia in health and disease: novel perspectives and therapeutic opportunities. Trends Pharmacol Sci. 2009 Aug; 30(8): 411-420). Le système endocannabinoïde de la peau intervient en particulier dans les fonctions de régulation de la prolifération et de la différenciation des cellules de l'épiderme, et la modulation de l'inflammation. En complément, les agonistes des récepteurs CB2 stimulent la synthèse de la bêta- 3 endorphine, connue pour son effet anti-douleur (Su et al. Cannabinoid CB2 Receptors Contribute to Upregulation of b-endorphin in lnflamed Skin Tissues by Electroacupuncture. Molecular Pain 2011, 7:98. Ibrahim M. M. CB2 cannabinoid receptor activation produces antinociception by stimulating peripheral release of endogenous opioids. Froc Natl Acad Sei U S A. 2005, February 22, vol.102, no.8, 3093-3098). [0012] De nouvelles molécules agissant sur les récepteurs CB2, donc non liées à l'effet psy- chotrope, ont été récemment développées (Klein TW. Cannabinoid-based drugs as anti-inflammatory therapcutics. Nature reviews. 2005 May 5, 400-411). Les cannabinoïdes exogènes peuvent aussi être utilisés par voie topique pour leur propriété anti-inflammatoire (Mounessa JS, Siegel JA, Dunnick CA, Dellavalle RP. The rolc of cannabinoids in dcrmatology. J Am Acad Dcrmatol. 2017 Jul; 77W:188-190). Cette activité anti-inflammatoire a également été rapportée pour le THC (A9-tetrahydrocannabinol), composant principal de Cannabis saliva. Le THC peut exercer un effet anti-inflammatoire et anti-douleur via les récepteurs cannabinoïdes CB1 et CB2. L'effet psychotrope du THC est quant à lui [tiédie par les récepteurs cannabinoïdes CB1. [0013] Dans le domaine de la cosmétique le développement de nouveaux extraits de plantes pouvant agir sur le système endocannabinoïde de la peau et avoir des effets apaisants présente également un très grand intérêt. [0014] Les inventeurs ont ainsi mis en évidence qu'un nouvel extrait particulier de patchouli, comprenant à la fois des composés volatils, des composés phénoliques et des composés lipidiques, présentait des effets apaisants et protecteurs sur la peau et le cuir chevelu. L'extrait de l'invention est différent d'une huile essentielle de patchouli classique par son contenu en composés phénoliques, représentés par un mélange de flavonoïdes non glycosylés, et en composés lipidiques, représentés principalement par un mélange d'acides gras, de phytostérols, de triterpènes et d'acyls glycérides. Or il a été démontré que cette composition particulière de l'extrait renforce son activité biologique par rapport à une classique huile essentielle de patchouli. Résumé de l'invention [0015] L'invention a pour premier objet un procédé d'obtention d'un extrait de feuilles séchées de patchouli (Pogostemon (-Tibial) comprenant les étapes suivantes : a) La partie haute des parties aériennes de patchouli est récoltée puis séchée et broyée ou cryobroyée. b) on réalise une extraction au dioxyde de carbone supercritique en présence d'une solution hydro-alcoolique d'éthanol à une concentration comprise entre 50 et 96 % dans l'eau (volume/volume). c) on récupère l'extrait de patchouli qui est décoloré en présence de charbon actif et filtré au préalable de l'évaporation du co-solvant. L'invention a pour deuxième objet un extrait brut de patchouli susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention comprenant entre 50 et 80 % de composés volatils principalement de type sesquiterpènes et alcools sesquiterpéniques, entre 2 et 5 % de composés phénoliques de type flavonoïdes non glycosylés, et entre 15 et 48 % de composés lipidiques comme notamment les acides gras et les phytostérols. [0016] L'invention a également pour objet un extrait solubilisé de patchouli comprenant de 2 à 6 % d'extrait brut solubilisé dans un solvant de type alcool gras saturé ou insaturé comprenant de 8 à 30 carbones. [0017] L'invention a pour troisième objet une composition cosmétique pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères, comprenant comme agent actif, un extrait de patchouli obtenu selon le procédé de l'invention et un milieu physiologiquement acceptable. [0018] L'invention a pour quatrième objet l'utilisation cosmétique d'une composition comprenant l'extrait de patchouli de l'invention pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères, plus particulièrement pour améliorer l'aspect de la peau, lutter contre les signes du vieillissement cutané, pour améliorer l'hydratation de la peau et pour renforcer la fonction barrière ou encore apaiser la peau. Brève description des dessins [0019] L'invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la lecture de la description et des modes de réalisation non limitatifs qui suivent, illustrés au regard des figures annexés dans lesquelles : [0020] [fig.1] Quantification du marquage de l'ILII-RI (récepteur de l'interleukine I) sur biopsies de peau exposées aux UVB et traitées par l'extrait dc patchouli. La figure 1 représente l'effet dc l'extrait de patchouli sur le taux d'ILI -R1 évalué sur des biopsies de peau, après une irradiation par les UVB. [0021] [fig.2] Quantification du marquage de l'ILII-RI (récepteur de l'interleukine I) sur biopsies de peau exposées aux UVB et traitées par l'extrait dc patchouli ou par l'huile essentielle de patchouli. La figure 2 représente les résultats obtenus avec l'extrait de patchouli et une huile essentielle de patchouli sur le taux d'ILI-Ri évalué sur des biopsies de peau, après une irradiation par les UVB. [0022] [fig.3] Quantification du marquage de l'ILl-R1 (récepteur de l'interleukine 1) sur biopsies de peau exposées au lipopolysaccharide bactérien et traitées par l'extrait de patchouli. La figure 3 représente les résultats obtenus avec l'extrait de patchouli sur le taux d'ILI-R1 évalué sur des biopsies de peau exposées au lipopolysaccharide d'origine bactérienne. [0023] [fig.4] Quantification du marquage de TRPV1 sur biopsies de peau exposées aux UVB et traitées par l'extrait de patchouli. La figure 4 représente les résultats obtenus avec l'extrait de patchouli sur le récepteur TRPV1, associé à la réponse aux cannahinoïdes, sur des biopsies de peau exposées à une irradiation par les UVB. [0024] [fig.5] Profils chromatographiques d'une huile essentielle de patchouli selon l'exemple 3 et de l'extrait brut de patchouli de l'exemple 1, en CLHP/DEDL sur une colonne RP-C18 avec élution en mode gradient (0-8 min 100 % A, 8-25 min passage de 100 % A à 100 % B puis 25-35 min 100 % B - A : H20/ACN/HCO2H 95/5/0.1 (vol :vol :vol) et B : IPA/ACN/FICO2H 80/20/0.1 (vol :vol :vol). On retrouve sur l'axe des ordonnées la réponse du détecteur en mV et en abscisse le temps d'analyse en minutes. Description détaillée de l'inventionProcédé d'extraction [0025] Des méthodes d'extractions du patchouli utilisant le CO, supercritique sont décrites dans plusieurs documents. Le document CN101485647B (également publié sous le numéro W02010096987) décrit une extraction par du CO, supercritique et les conditions optimales de pression (12-30 Mpa) et de température (55-60°C). [0026] Donelian A. et collègues (J. Supercritical Fluids 48 (2009) 15-20) décrivent une ex- traction par CO, supercritique des feuilles de Patchouli et déterminent que les conditions optimales sont 14 MPa à 40°C, permettant de produire l'huile essentielle la plus concentrée en patchoulol et d'obtenir le plus haut rendement d'extraction. [0027] Hybertson B. M. (J Chem Eng Data. 2007 January 1; 52(1)) quant à lui a établi que le taux de patchoulol extrait par CO2 supercritique varie en fonction de la température et de la pression appliquées. Les conditions donnant la plus forte concentration de patchoulol sont 40°C, et 25 MPa. [0028] 11 est bien connu d'utiliser du dioxyde de carbone à l'état supercritique car il présente l'avantage d'être un solvant puissant totalement neutre, non toxique, non inflammable, pouvant être mis en oeuvre à une température assez basse (31°C) pour une pression supérieure à sa pression critique de 73,8 bar Ainsi la température d'extraction ne dénature pas les principes actifs de l'extrait obtenu. De plus, cette méthode permet d'obtenir des extraits exempts de tous résidus du solvant d'extraction. Il est aussi possible d'utiliser d'autres fluides supercritiques dont notamment l'argon. [0029] Néanmoins aucun document de l'état de l'art ne décrit la méthode d'extraction de l'invention utilisant comme solvant à la fois du dioxyde de carbone à l'état super- critique et un co-solvant polaire tel qu'une solution hydro-alcoolique d'éthanol 6 [0030] Le procédé d'extraction, objet de l'invention, utilise la partie haute des parties aériennes séchée de patchouli (Pogosternotz cablin) comprenant les étapes suivantes : a) La partie haute des parties aériennes de patchouli est récoltée puis séchée et broyée ou cryobroyée. h) on réalise une extraction au dioxyde de carbone supercritique avec l'ajout d'un cosolvant polaire sous la forme d'une solution hydro-alcoolique d'éthanol, à une concentration comprise entre 50 et 96 % dans l'eau (volume/volume). c) on récupère l'extrait de patchouli qui est décoloré en présence de charbon actif et filtré, au préalable de l'évaporation du co-solvant. [0031] Pour réaliser l'étape a) la partie haute des parties aériennes de patchouli (Pogostenzon cablin) est récoltée puis séchée. De préférence, les feuilles et les tiges sont broyées ou cryohroyées dans un broyeur à couteaux comportant une grille de 4 mm, ce qui permet d'obtenir une poudre dont la taille des particules se situe entre 100 et 800 pan, avantageusement entre 300 et 600 pm et plus préférentiellement entre 400 et 500 pm. [0032] Le ternie « partie haute des parties aériennes » est défini comme les feuilles et les tiges les plus fines, après avoir écarté le matériel végétal en mauvais état et les tiges trop grosses. [0033] Au sens de la présente description, « partie haute des parties aériennes » ne comprend pas les fruits, les fleurs et les graines. [0034] Dans le cours de la présente description, les termes « parties hautes des parties aériennes » et « feuilles » seront utilisés indifféremment pour désigner les feuilles et les tiges les plus fines. [0035] Pour réaliser l'étape b) le fluide à l'état supercritique est choisi parmi le dioxyde de carbone et l'argon, on préfèrera cependant utiliser le dioxyde de carbone. [0036] Selon des modes de réalisation particuliers de l'étape b) : - La solution hydro-alcoolique d'éthanol, utilisée comme co-solvant, est à une concentration comprise entre 60 et 80 % (volume/volume dans l'eau) ou préférentiellement à une concentration de 70 % (% volume/volume dans l'eau). - Le rapport massique entre le dioxyde de carbone et la solution hydro-alcoolique d'éthanol est d'environ 15. - La température d'extraction est comprise entre 35 et 70°C, avantageusement entre 40 et 65°C et préférentiellement entre 50 et 60°C. - La pression au sein de l'extracteur est comprise entre 90 et 1000 bar, préférentiellement entre 160 et 800 bar et encore plus préférentiellement entre 230 et 700 bar. - Le rapport massique de solvant supercritique (dioxyde de carbone) par rapport à la quantité de matière première mise en jeu (feuilles séchées de patchouli) est compris entre 10 et 70, avantageusement entre 25 et 55 et préférentiellement entre 30 et 50. [0037] Dans les modes de réalisation particuliers décrits ci-dessus, l'extrait brut comprend 7 65 % de composés volatils, 3,5 % de composés phénoliques et 31,5 % de composés lipidiques. [0038] Pour réaliser l'étape h) avantageusement, la poudre obtenue à l'étape a) est placée dans une cartouche en acier inoxydable, cette cartouche est placée dans un extracteur à fluide supercritique. Lc solvant utilisé pour extraire est le dioxyde de carbone à l'état supercritique. Dans le même temps, le co-solvant polaire, c'est-à-dire, la solution hydro-alcoolique d'éthanol, est également injectée dans la cartouche d'extraction. [0039] A l'étape c) l'extrait obtenu à l'étape h) est décoloré en présence de charbon actif, puis filtré. La solution hydro-alcoolique d'éthanol est ensuite évaporée. Le rendement d'extraction du procédé décrit ci-dessus est ainsi proche de 6 %. [0040] Après l'étape c), l'extrait brut de feuilles de patchouli est sous forme pâteuse et comprend entre 50 et 80 % de composés volatils, entre 2 et 5 % de composés phénoliques et entre 15 et 48 % de composés lipidiques. [0041] Dans un mode de réalisation particulièrement adapté à l'utilisation ultérieure de l'extrait de patchouli dans une composition cosmétique, on réalise une étape supplémentaire d) dans laquelle l'extrait brut obtenu est solubilisé dans un solvant de type alcool gras saturé ou insaturé comprenant de 8 à 30 carbones. [0042] De préférence le solvant est l'octyldodécanol agro-sourcé ; capable de solubiliser toutes les familles de composés décrits dans l'extrait. Après cette étape de solubilisation, l'extrait se présente sous la forme d'une solution limpide et fluide contenant entre 2 et 6 % d'extrait brut de feuilles de Patchouli. [0043] De préférence l'extrait solubilisé contient 4 % d'extrait brut de feuilles de Patchouli. [0044] Après solubilisation à l'étape d) l'extrait dit « extrait solubilisé » est sous forme liquide et il contient un mélange de molécules d'intérêt possédant des polarités très variées. [0045] L'octyldodécanol sert de solvant et de support liquide physiologiquement acceptable aux composés d'intérêt. Par agro-sourcé, on entend des molécules provenant totalement ou partiellement de la biomasse, en effet ces solvants sont composés de carbone renouvelable. [0046] Optionnellement une étape e) de purification de l'extrait obtenu à l'étape c) ou d) peut être effectuée par toute technique connue de l'homme du métier et notamment par chromatographie ou par distillation moléculaire. Extrait [0047] Le deuxième objet de l'invention est un extrait brut de patchouli susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention. [0048] Une étude de l'état de l'art antérieur poussée a été menée sur les composés constituants une huile essentielle de Patchouli. A la connaissance des inventeurs, la présence de flavonoïdes ou de lipides dans ces huiles essentielles n'a jamais été ré- 8 pertoriée (The essential oil of patchouli, Pogastemon cablin: A revicw, Flavour FragrJ. 2017;1-46.). [0049] On entend par « extrait brut » de patchouli l'extrait sous forme pâteuse obtenu à l'étape c) du procédé. [0050] L'extrait brut comprend: - de 50 à 80 % de composés volatils (principalement des sesquiterpènes et des alcools sesquiterpéniques), avantageusement de 55 à 75 % et préférentiellement de 60 à 70 % - de 2 à 5 % de composés phénoliques (principalement des flavonoïdes non glycosylés), avantageusement de 2,5 à 4,5 % et préférentiellement de 3 à 4 % - de 15 à 48 % de composés lipidiques (notamment des acides gras, phytostérols, tri-terpènes, acyl glycérides), avantageusement de 20,5 à 42,5 % et préférentiellement de 26 à 32 %. [0051] Dans un mode de réalisation très avantageux, l'extrait brut comprend 65 % de composés volatils, 3,5 % de composés phénoliques et 31,5 % de composés lipidiques. [0052] Par « composés volatils » au sens de l'invention on entend des molécules suf- fisamment légères pour être détectées par chromatographie en phase gazeuse. Il s'agit principalement de sesquiterpènes et d'alcools sesquiterpéniques de formule brute respective C14124 et C1511,60 présentes dans l'extrait. [0053] Par « composé phénolique » au sens de l'invention on entend des flavonoïdes non glycosylés détectés dans l'extrait. [0054] Par « composé lipidique » au sens de l'invention on entend le groupe des molécules de nature apolaires appartenant aux familles des acides gras, des triterpènes, des stérols et des acyls glycérides présentes dans l'extrait. [0055] Chaque fraction de l'extrait brut a été analysée afin de déterminer les principales molécules pouvant posséder une activité biologique sur la peau. [0056] Les composés volatils sont analysés par chromatographie en phase gazeuse (GC) couplé à un détecteur de spectrométrie de masse (MS) et/ou à un détecteur à ionisation de flamme (FID). La validation des identifications est rendue possible par comparaison des indices de rétention linéaire et des spectres de masse contenus dans des librairies. La quantification par GC/FID est faite par étalonnage interne avec utilisation des facteurs de réponse prédits et calculés. [0057] Les composés phénoliques et lipidiques sont suivis par injection en chromatographie liquide à haute performance (CLHP) couplé à un détecteur évaporatif à diffusion de lumière (DEDL). Les identifications sont confirmées après analyse de résonnance magnétique nucléaire (RMN) et/ou MS des composés isolés avec confirmation par injection de standards quand cela est possible. Les flavonoïdes sont dosés avec un détecteur à barrette de diode (DAD/UV) par étalonnage interne avec de l'acide gallique. Après validation de la conformité du profil lipidique, la teneur globale en 9 lipides (acides gras, stérols, triterpènes, acyls glycérides...) est estimée par soustraction des teneurs en volatils et en flavonoïdes. [0058] Les molécules majoritairement identifiées sont : Dans la fraction volatile, des composés de type sesquiterpènes et alcool sesquiterpéniques comme l'a-guaiène, l'a-bulnesène, et le patchoulol. Dans la fraction phénolique, des composés de type flavonoïdes non glycosylés comme le pachypodol. Dans la fraction lipidique, des composés de type acides gras (tel que les acides linolénique, linoléique et palmitique), phytostérols (tel que le (i-sitostérolet, le stigmastérol, ...), triterpènes (tel que l'acide oléanolique) et acyl glycérides. [0059] La liste non exhaustive des composés présents dans chacune des fractions est donnée dans le tableau 1 suivant : [0060] [Tableaux 1] Famille chimique Identification Composés volatils (notamment ses- quitcrpèncs et alcools sesquiter- péniques) - Fraction A Alpha bulnesène Patchoulol Pogostol Alpha guaiènc Bêta patchoulène Bêta caryophyllène Seychellène Alpha patchoulène Norpatchoulenol Composés phénoliques (notamment flavonoïdes) - Fraction B Pachypodol 5-hydroxy-7,3',4'-trimethoxyflavanone Rhamnetine Rhamnazine Retusine 4',5-dihydroxy-3',7-dimethoxyflavanone 3,5-dihydroxy-4',7-dimethoxyflavone 5-hydroxy-3,4',7-trimethoxyflavone Composés lipidiques (notamment acides gras, stérols, triterpènes, acyls glycérides) - Fraction C Acide linolénique Acide oléanolique Acide linoléique Linoléate de méthyl Acide palmitique Acide oléique Acide stéarique Bêta sitosterol Stigmasterol Acyl glycérides [0061] Quelques marqueurs de l'extrait brut ont pu être quantifiés. Celui-ci contient notamment : - 16,1 à 25,7 % de patchoulol co-élué avec le pogostol, avantageusement 17,7 à 24,1 %, préférentiellement 19,3 à 22,5 % de patchoulol (Fraction A). - 10,2 à 16,2 % d'a-bulnesène, avantageusement 11,2 à 15,2 %, préférentiellement 12,2 à 14,2 % d'a-bulnesène (Fraction A). - 7,0 à 11,0 % d'a-guaiène, avantageusement 7,6 à 10,4 %, préférentiellement 8,3 à 9,7 % d'a-guaiène (Fraction A). - 1 à 2,6 % de pachypodol co-élué avec la 5-hydroxy-7,3',4-trimethoxyflavanone, avantageusement 1,3 à 2,3 % et préférentiellement 1,55 à 2,05 % (Fraction B). [0062] Un autre objet de l'invention est l'extrait susceptible d'être obtenu après l'étape d) de soluhilisation dans un solvant de type alcool gras saturé ou insaturé comprenant de 8 à 30 carbones. [0063] De préférence le solvant est l'octyldodécanol agro-sourcé. [0064] On entend par « extrait » de patchouli ou « extrait solubilisé » au sens de l'invention, l'extrait liquide obtenu après soluhilisation à l'étape d) du procédé. [0065] L'extrait ainsi solubilisé est une solution limpide jaune pâle de consistance huileuse. [0066] L'extrait ainsi solubilisé contient un mélange de molécules d'intérêt possédant des polarités très variées. L'analyse de l'extrait montre que les molécules extraites s'avèrent différentes en qualité et en quantité de celles décrites dans l'état de l'art. [0067] L'extrait de l'invention est différent d'une huile essentielle de patchouli classique par son contenu en flavonoïdes, en phytostérols et en acides gras libres ou non. Or il a été démontré dans l'exemple 7 de la présente demande que cet extrait présentait une efficacité supérieure pour apaiser la peau qu'une huile essentielle de patchouli classique. [0068] L'extrait solubilisé de patchouli est composé notamment de : - de 2 à 6 % d'extrait brut en poids du poids total de l'extrait solubilisé. - Préférentiellement, de 4 % d'extrait brut, en poids du poids total de l'extrait de patchouli. Compositions cosmétiques [0069] L'invention a pour troisième objet une composition comprenant, en tant qu'agent actif un extrait solubilisé de patchouli (Pogostemon cablin) susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention, et un milieu physiologiquement acceptable. [0070] Dans cette description, à moins qu'il n'en soit spécifié autrement, il est entendu que, lorsqu'un intervalle est donné, il inclut les bornes supérieure et inférieure dudit intervalle. [0071] Dans cette description, à moins qu'il n'en soit spécifié autrement, les pourcentages sont donnés en poids. [0072] Un milieu physiologiquement acceptable désigne un véhicule adapté pour une mise en contact avec les couches externes de la peau, du cuir chevelu ou des phanères, sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire ou réaction d'intolérance, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable. [0073] A titre de milieu physiologiquement acceptable communément utilisé dans le domaine d'application envisagé, on peut citer par exemple des adjuvants nécessaires à la formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des antioxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des huiles essentielles, des 11 vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc. [0074] Préférentiellement, la composition selon l'invention comprend l'extrait de patchouli susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention à une concentration de 0,1 à 10 % en poids par rapport au poids total de la composition, préférentiellement de 0,5 % à 5 %, et un milieu physiologiquement acceptable. [0075] La composition utilisable selon l'invention pourra être appliquée par toute voie ap- propriée, notamment topique externe, et la formulation des compositions sera adaptée par l'homme du métier. [0076] Les compositions selon l'invention sont particulièrement adaptées à une application topique sur des peaux saines. [0077] Dans le cadre de la présente invention, on entend par peau saine une peau qui ne présente pas de pathologie cutanée. [0078] Par application topique, on désigne le fait d'appliquer ou d'étaler une composition comprenant l'extrait de patchouli de l'invention à la surface de la peau, du cuir chevelu d'une muqueuse ou des phanères. [0079] La « peau » désigne la peau du visage, notamment le contour des yeux et la bouche, le nez, le front, le cou, les mains, mais aussi la peau de l'ensemble du corps, y compris le cuir chevelu. [0080] Les phanères désignent les annexes cutanées kératinisées présentes chez l'homme ou l'animal, riches en kératine, et plus particulièrement les cheveux, les poils, les cils, les sourcils et les ongles. [0081] Les compositions topiques pour la mise en oeuvre de l'invention pourront notamment se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydro-alcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile, émulsion multiple, micro-émulsion, nanoémulsion ou tout système colloïdal utilisable en cosmétique ; elles peuvent aussi se présenter sous forme de suspensions, ou encore de poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou le cuir chevelu. [0082] Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick ou encore formulées pour être compatibles avec une délivrance sous forme d'aérosol. [0083] Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que les adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition selon l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition peuvent 12 être choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids par rapport au poids total de la composition. [0084] Dans un mode de réalisation particulier les compositions peuvent contenir un ou des agents actifs additionnels pour renforcer l'effet de l'extrait de patchouli selon l' invention. [0085] L'TNCI Dictionary & Handhook ("International Nomenclature of Cosmctic In- gredients" 13ème Ed. 2010, publié par "the Personal Care Products Council, Inc.", Washington, D.C.) décrit une grande variété d'ingrédients cosmétiques habituellement utilisés dans l'industrie du soin de la peau et pouvant être utilisés comme agents actifs additionnels dans les compositions selon la présente invention. [0086] Des exemples non limitatifs de ces classes d'agents actifs additionnels incluent : les agents anti-âge, les agents and-rides, les agents hydratants, les agents adoucissants, les agents kératolytiques ou desquamants, les agents and-séborrhéiques, les agents antipelliculaires, les agents modulant la différenciation ou la prolifération des cellules cutanées, les agents modulant la pigmentation cutanée, les agents auto bronzants, les agents anti-pollution atmosphérique, les agents anti-glycation, les agents raffermissants, les agents stimulant la synthèse de d'aquaporinc, les agents stimulant la synthèse de lipides et de composants du stratum corneum (céramides, acides gras, les agents stimulant la prolifération des adipocytes, les agents stimulant la synthèse des glycosaminoglycanes, les agents de réparation de l'ADN, les agents protégeant l'ADN, les agents pour le traitement et/ou le soin de la peau sensible, les agents raffermissants, les agents anti-vergetures, les agents astringents, les agents dermo-relaxants, les facteurs de croissance de cytokine, les agents agissant sur la circulation et/ ou microcirculation capillaire, les agents inhibant la perméabilité vasculaire, les agents agissant sur le métabolisme cellulaire, les agents destinés à améliorer la jonction dermoépidermique, les agents induisant la pousse des cheveux et/ou des poils, les agents stimulant la lipolyse, les agents amincissants, les agents asti-cellulite, les écrans solaires, les agents capables de réduire ou traiter les poches sous les yeux, et leurs mélanges, tant qu'ils sont physiquement et chimiquement compatibles avec les autres ingrédients de la composition et spécialement avec les actifs de la présente invention. [0087] Par ailleurs, la nature de ces agents actifs additionnels ne doit pas altérer de manière inacceptable les bénéfices des actifs de l'invention. Ces agents actifs additionnels peuvent être synthétiques ou naturels comme par exemple les extraits de plantes ou venir d'un procédé de biofermentation. [0088] De tels agent actifs additionnels peuvent également être choisis selon leur com- position chimique, dans le groupe comprenant : les sucres aminés, glucosamine, Dglucosarnine, N-acetyl- glucosamine, N-acetyl-D-glucosamine, mannosamine, N- 13 acetyl mannosamine, galactosaminc, N-acétyl galactosamine, vitamine B3 et ses dérivés, le niacinamide, déhydro-acétate de sodium, l'acide déhydroacétique et ses sels, phytosterols, composés d'acide salicylique, hexamidincs, composés dihydroxyprolinc de dialkanoyl, extraits et dérivés de soja, equol, isoflavones, flavonoïdes, phytantriol, farnesol, géraniol, bisabolol, peptides et leurs dérivés, di -, tri -, tétra ponta -, et hexapeptides et leurs dérivés, lys-thr-thr-lys-scr, palrnitoyl-lys-thr-thr-lys-ser, carnosine, composés d'acide aminé N-acyl, rétinoïdes, propionate de rétinyl, rétinyl, palmitate de rétinyl, acétate de rétinyl, rétinal, acide rétinoïque, vitamines hydrosolubles, ascorbates, vitamine C, glucoside ascorhyl, palmitate ascorbyl, magnésium ascorhyl phosphate, sodium ascorhyl phosphate, vitamines et leurs sels et dérivés, provitamines et leurs sels et dérives, ethyl panthenol, vitamine A et ses dérivés, vitamine B et ses dérivés, vitamine BI, vitamine B2, vitamine B6, vitamine BU, vitamine E, vitamine F, vitamine K et ses dérivés, acide pantothénique et ses dérivés, éther éthylique de pantothenyl, panthenol et ses dérivés, panthenol ethyl igue, dexpanthenol, biotinc, acides aminés et leurs sels et les dérivés, acides aminés hydrosolubles, asparagine, alanine, indol, acide glutamique, vitamines insolubles dans l'eau, bêta-ionol, cedrol, et leurs dérivés, acides aminés insolubles dans l'eau, tyrosine, tryptaminc, matériaux particulaires, hydroxytoluene hutylé, hydroxyanisolc hutylé, allantoinc, nicotinate de tocophérol, tocophérol, esters de tocophérol, pal mitoyl-gly-his-lys, phytostérol, hydroxy acides, acide glycolique, acide lactique, acide lactohionique, kétoacides, acide pyruvique, acide phytique, acide lysophosphatidique, stilbenes, cinnamates, resveratrol, kinétine, zeatin, dimethylaminoethanol, peptides naturels, les peptides de soja, sels de sucres acides, gluconate de manganèse, gluconate de zinc, olamine de piroctone, 3,4,4'- trichlorocarbanilide, triclocarban, pyrithione de zinc, hydroquinone, acide kojique, acide ascorbique, magnésium ascorbyl phosphate, ascorbyl glucoside, pyridoxine, l'aloe vera, les alcools de terpène, allantoine, bisabolol, glycyrrhizinate di-potassique, acide de glycérol, de sorbitol, de pentaerythritol, de pyrrolidone et ses sels, dihydroxyacetone, erythrulose, glycéraldéhyde, tartaraldehyde, l'essence de clou de girofle, le menthol, le camphre, l'essence d'eucalyptus, eugénol, le lactate de menthyle, le distillat d'hamamélis, copolymère d'eicosene et vinyl pyrrolidone, iodopropyl butylcarbamate, un polysaccharide, un acide gras essentiel, un salicylate, un acide glycyrrhétinique, des caroténoïdes, des céramides et des pseudo-céramides, un lipide complexe, les huiles en général d'origine naturelle tels le beurre de karité, l'huile d'abricot, l'huile d'onagre, l'huile de pruneau, l'huile de palme, l'huile de monoï, l'huile de kahai, hydroquinone, l'HEPES, la procystéine, 110-octanoy1-6-D-maltose, le sel disodique d'acide méthyl glycine diacétique, les stéroïdes tels que la diosgénine et les dérivés de la DHEA, la DHEA déhydroépiandrostérone et/ou un précurseur ou dérivé chimique ou biologique, le N-éthylcarbonyl-4-para-arninophénol, les alpha hydroxy 14 acides, les bêta hydroxy acides, les hydratants, les enzymes hydrolytiques épidermiques, les extraits de plantes, les phytohormones, les extraits de levure, un inhibiteur de métalloprotéinases, les enzymes, les inhibiteurs enzymatiques, les inducteurs enzymatiques, les coenzymes, les agents chélatants, les extraits végétaux et dérivés de plantes, les huiles essentielles, les extraits marins, les agents venant d'un procédé de biofermentation et/ou de biotechnologie, les sels minéraux, les extraits cellulaires. [0089] A titre d'exemples, on peut encore citer : - les peptides commercialement connus sous le nom MATRIXYLO, ARGTRELINE®, CHRONOGENTM, LAMINIXYL ISTM, PEPTIDE Q1 OTm, COLLAXYL TM (brevet FR2827170, ASHLANDO), PEPTIDE VINCI O1TM (brevet FR2837098, ASHLANDO), PEPTIDE VINCI 02TM (brevet FR2841781, ASHLANDO), ATPeptideTM (brevet FR2846883, ASHLANDO) ou encore le peptide de synthèse de séquence Arg-Gly-Ser-NH2, commercialisé sous le nom ATPeptideTm par ASHLANDO; - l'extrait d'Artémia salina, commercialisé sous le nom GP4GTM (FR2817748, ASHLANDO) ; - les extraits peptidiques végétaux tels que les extraits de lin (LipigénineTM, brevet FR2956818, ASHLANDO), les extraits de soja, d'épeautre, de vigne, de colza, de lin, de riz, de maïs, de pois, de cacao ; - les extraits de levures, par exemple le DynagenTM, (brevet FR2951946, ASHLAND®) ou l'ActopontineTM (brevet FR2944526, ASHLAND®). Utilisations [0090] Un dernier objet de l'invention concerne l'utilisation cosmétique de compositions comprenant un extrait solubilisé de patchouli selon la présente invention pour le soin de la peau saine, du cuir chevelu et des phanères. [0091] L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation cosmétique de la com- position selon l'invention pour améliorer l'aspect de la peau, lutter contre les signes du vieillissement cutané, pour améliorer l'hydratation de la peau et pour renforcer la fonction barrière. [0092] L'invention concerne encore l'utilisation cosmétique d'une composition selon l'invention pour apaiser la peau. [0093] L'invention concerne également l'utilisation cosmétique d'une composition selon l'invention pour augmenter l'expression des récepteurs endocannabinoïdes CB2 dans la peau. [0094] L'invention concerne également l'utilisation cosmétique d'une composition selon l'invention pour diminuer l'expression des récepteurs endocannabinoïdes TRPV1 dans la peau. 100951 En particulier, l'invention concerne l'utilisation cosmétique d'une composition selon l'invention pour diminuer l'expression des récepteurs endocannabinoïdes TRPV1 dans la peau, après irradiation par les UVB. [0096] On entend par « apaiser la peau » diminuer la sensation d'inconfort, telle que les possibles picotements, démangeaisons, sensation de chaleur représentant les désagréments liés à la peau sensible et à la peau sèche, lorsque que la peau est néanmoins considérée comme saine. On entend également par apaiser la peau diminuer les signes visibles de la peau sensible tels que la rougeur ou les squames dus à la sécheresse de la peau, ainsi que les autres signes perceptibles de la peau sensible tels qu'une peau moins lisse et moins douce au toucher. [0097] On entend par « améliorer l'aspect de la peau » que le grain de la peau apparait plus fin, plus régulier. [0098] Par « signes du vieillissement cutané » on entend les modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement comme les rides et ridules, les crevasses, les poches sous les yeux, les cernes, le flétrissement, la perte d'élasticité, de fermeté et/ou de tonus de la peau, l'irrégularité du grain de peau ou du teint, mais également toutes modifications internes de la peau qui ne se traduisent pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, l'amincissement de la peau, ou toutes dégradations internes de la peau consécutives à des stress environnementaux tels que la pollution et les rayonnements UV. [0099] On entend par « améliorer la fonction barrière » que les propriétés de protection de la peau vis-à-vis des agressions extérieures (radiations UV, pollution, microorganismes, etc.) sont améliorées. On sait que des altérations de la fonction barrière résultent des stress extérieurs tels que les UV. Les conséquences sont majeures au niveau de la perte de la cohésion cellulaire et de l'intégrité mécanique. Certaines enzymes impliquées dans les phases terminales de la différenciation kératinocytaire jouent un rôle clé dans la protection face aux UV. Des modifications de l'expression et/ou de l'activité de ces enzymes ont des conséquences importantes sur l'intégrité de la fonction barrière et l'homéostasie de la peau. [0100] On entend par « amélioration de l'hydratation cutanée », toutes améliorations des modifications de l'aspect extérieur de la peau dues à la déshydratation comme, par exemple, la sécheresse, les tiraillements et l'inconfort. Exemples [0101] La présente invention va maintenant être illustrée au moyen des exemples non li- mitatifs suivants : [0102] Exemple 1 : Préparation d'un extrait de patchouli selon l'invention Pour la réalisation des exemples, les plantes Pogosteinon cablin ont été cultivées en 16 Colombie. Permis : Les demandeurs se sont renseignés sur la nécessité d'obtenir un permis de Recherche et de Commercialisation auprès du gouvernement Colombien pour avoir accès aux ressources génétiques de Pogostemon Cablin qui a répondu qu'aucun permis n'était nécessaire. Les feuilles sont récoltées, séchées puis cryobroyées dans un broyeur à couteaux comportant une grille de 4 mm, ce qui permet d'obtenir une poudre dont la taille des particules se situe entre 400 et 500 pur. La poudre obtenue est placée dans une cartouche en acier inoxydable, cette cartouche est placée dans un extracteur à fluide supercritique. Le solvant utilisé pour extraire est le dioxyde de carbone à l'état supercritique et de l'éthanol à 70 % (70 % dans l'eau volume/volume) en tant que co-solvant polaire. Le rapport massique dioxyde de carbone/solution hydro-alcool igue d'éthanol est de 15. La pression au sein de l'extracteur est de 400 bar. La température d'extraction est de 50°C. L'extrait ainsi obtenu est décoloré à l'aide de charbon actif puis filtré et l'éthanol est ensuite évaporé. Le rendement d'extraction est de 6 %. L'extrait pâteux, obtenu à cette étape est un objet de la présente invention. Cet extrait brut est ensuite solubilisé dans de l'octyldodecanol agro-sourcé afin d'obtenir une solution limpide et fluide contenant 4 % d'extrait brut de feuilles de Patchouli, en poids du poids total d'extrait solubilisé. L'extrait solubilisé obtenu est également un objet de la présente invention. Il se trouve sous forme d'une solution liquide, translucide et de couleur jaune pâle. Son odeur est caractéristique et le profil obtenu par CPG montre bien la présence des composés volatils de Pogostemon cablin. Le profil CLHP/DEDL, quant à lui, atteste bien de la présence des composés phénoliques et lipidiques caractéristiques de notre extrait. La teneur globale en composés phénoliques, déterminée par CLHP via un étalonnage interne avec de l'acide gallique, est de 0,14 %. [0103] Exemple 2 : Caractérisation de l'extrait de patchouli brut obtenu selon l'exemple 1 L'extrait brut est engagé dans deux étapes successives de distillation moléculaire pour séparer les composés volatils, retrouvés dans le distillat, des composés type phénoliques et lipides, retrouvés dans le résidu. Le distillat est conservé pour l'étude des composés volatils par CPG. Il constitue la fraction A. Le résidu est ensuite déposé sur une colonne de silice, de taille adaptée à la masse d'extrait à purifier. La séparation des composés d'intérêt est faite par chromatographie flash grâce à un gradient de solvants allant de 100 % heptane à 100 % acétate d'éthyle. Une phase de rinçage avec du méthanol termine l'élution. Le contenu des tubes de récolte contenant des composés de même famille sont regroupés puis les solvants sont éliminés à l'évaporateur rotatif. Ce fractionnement permet d'obtenir une fraction riche 17 en flavonoïdes non glycosylés (fraction B) dissociée de la fraction lipidique (fraction C). Chacune de ces fractions est ensuite engagée dans un fractionnement plus affiné par CLHP préparative sur colonne Cl 8 afin d'isoler indépendamment chaque composé. L'étude conjointe des spectres RMN et/ou et des données de spectrométrie de masse permet l'identification de plusieurs composés. Ces dernières sont confirmées par l'injection d'un standard lorsque cela est possible. La liste non exhaustive des composés présents dans chacune des fractions est : [0104] [Tableaux2] Famille chimique Identification Composés volatils (notamment ses- quiterpenes et alcools scsquitcr- péniques) - Fraction A Bêta patchoulènc Bêta caryophyllènc Seychellène Alpha guaiène Alpha patchoulène Alpha bulnesène Norpatchoulenol Patchoulol Pogostol Composés phénoliques (notamment flavonoïdes) - Fraction B Rhamnetine Rhamnazine Pachypodol Retusine 4',5-dihydroxy-3',7-dimethoxyflavanone 3,5-dihydroxy-4',7-dimethoxyflavone 5-hydroxy-7,3',4'-trimethoxyflavanone 5-hydroxy-3,4' a-timethoxyflavone Composés lipidiques (notamment acides gras, stérols, triterpènes, acyls glycérides) - Fraction C Acide linolénique Acide oléanolique Acide linoléique Linoléate de méthyl Acide palmitique Acide oléique Acide stéarique Bêta sitosterol Stigmasterol Acyl glycérides [0105] Quelques marqueurs de l'extrait brut ont pu être quantifiés. Celui-ci contient notamment : - 20,9 % de patchoulol co-élué au pogostol (Fraction A) - 13,2 % d'a-bulnesène (Fraction A) - 9,0 % d'a-guaiène (Fraction A) - 1,8 % de pachypodol co-élué à la 5-hydroxy-7,3',4-trimethoxyflavanone (Fraction B) [0106] Exemple 3 : Réalisation d'un extrait de patchouli type huile essentielle De manière conventionnelle, l'extraction de l'huile essentielle de patchouli est réalisée par distillation à la vapeur d'eau. Les parties aériennes (feuilles et tiges) de patchouli sont coupées et séchées puis sont placées clans des alambics et sont traversées par un courant de vapeur ; cette vapeur libère les molécules volatiles ou huile essentielle qui est. entrainée par la vapeur d'eau et se condense clans le condenseur. Fiant donné que l'huile essentielle est généralement moins dense que l'eau 18 et n'est pas ou peu hydrosoluble, elle est recueillie à la sortie dans un décanteur appelé essencier. L'eau qui contient encore de l'huile essentielle à l'état de traces est appelée hydrolat et peut servir comme solution aromatique. L'huile essentielle de patchouli est un liquide plus ou moins visqueux allant du jaune au brun rougeâtre. [0107] Exemple 4 : Mise en évidence des différences phytochimiques majeures entre une huile essentielle et l'extrait obtenu selon l'exemple 1. L'extrait brut de patchouli, obtenu à l'exemple 1 a été analysé en parallèle d'une huile essentielle obtenu à l'exemple 3, par chromatographie liquide couplé à un détecteur DEDL à la même concentration. La séparation est faite sur une colonne RPC18 en mode gradient d'élution avec des mélanges acidifiés d'eau/acétonitrile (ACN) sur la voie A et d'acétonitrile /isopropanol (IPA) sur la voie B pendant une durée de 35 minutes. Dans ces conditions, les composés phénoliques sont détectés entre 17 et 21 minutes tandis que les composés lipidiques Muent après 23 minutes. Comme le montre la figure 5, les composés phénoliques et lipidiques ne sont pas détectés dans une huile essentielle. La concentration en patchoulol est conforme à la norme standard. [0108] Exemple 5 : Evaluation de l'effet de l'extrait de patchouli préparé selon l'exemple 1, sur la synthèse de collagène I dans des biopsies de peau ex vivo : Le but de cette étude est de montrer l'effet de l'extrait de patchouli préparé selon l'exemple 1 sur la synthèse de collagène I dans des biopsies de peau saine. En effet, une réduction du taux de ce collagène est liée à l'atrophie de la matrice extracellulaire dermique, au cours du vieillissement cutané. Protocole : Le collagène I est évalué par immuno-histochimie. Des biopsies de peau humaine saine en culture sont traitées par l'extrait de patchouli obtenu selon l'exemple 1 et formulé à 1 % (masse/masse) dans une crème appliquée deux fois par jour pendant 48 heures par voie topique (20 pl/biopsie). La formulation de la crème est donnée dans le tableau 3 ci-dessous. Des biopsies contrôles reçoivent une crème placebo. Les formules utilisées sont des émulsions classiques huile-dans-eau. Puis, la détection du collagène I est réalisée par immunomarquage à l'aide d'un anticorps spécifique. Cette technique est réalisée à partir de coupes en paraffine, incubées en présence de l'anticorps anti-collagène I (polyclonal de lapin, Abcam). Après une heure et demie d'incubation suivie de rinçages, les coupes sont incubées en présence de l'anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor® 488, hivitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L'expression de collagène I est alors observée et quantifiée par analyse d'image (Volocity0 image analysis software, Improvision). 19 [0109] [Tahleaux3] Liste des ingrédients (Nom commercial I INCI) % Fournisseur (poids/poids) phase A Purificd Water Watcr/Aqua Qs. 100 Local EDTA tetrasodium Salt Tetrasodium EDTA 0,05 Fisher Lubrajelt MS Free hydrogel Glycerin (and) Glyceryl Acrylate/Acrylic Acid Copolymer (and) Phenoxyethanol 3,00 Ashland LiquaParTm/RokonsalTm MEP preservative Phenoxyethanol (and) Me- thylparaben (and) Ethylparaben (and) Propylparahen 1,00 Ashland phase B UltraThixTM P-100 polymer Acrylic Acid/VP Crosspolymer 0,60 Ashland phase C Sodium Hydroxide Sodium Hydroxide 0,02 Fisher Purificd Water Watcr/Aqua 0,50 Local phase D Belse W3230 Bis-Stearoxydimethylsilane (and) Stearyl Alcohol (and) Di meth icone 2,00 Wacker Simulsolt 165 PEG-100 Stearate (and) Glyceryl Stearate 2,00 Seppic Refined Shea Butter Butyrospermum Parkii (Shea) Butter 2,00 Ashland CeraphylTM 28 ester Cetyl Lactate 1,50 Ashland Ceraphyl 791 ester Isocetyl Stearoyl Stearate 2,00 Ashland Ceraphyl ODS ester Octyldodecyl Stearate 3,00 Ashland Ccraphyl 368 ester Ethylhcxyl Palmitate 4,00 Ashland Extrait de Patchouli selon 1,00 Ashland 21 exemple 11 phase E Sodium Hydroxide Sodium Hydroxide 0,03 Fisher Purificd Watcr Watcr/Aqua 0,50 Local phase F total 100,00 % [0110] Résultats : Le traitement avec l'extrait de patchouli à 1 % a montré une augmentation de l'intensité de marquage du collagène I dans les biopsies de peau à 48 heures (+54 %, hautement significatif par rapport aux biopsies traitées avec la crème placebo). Conclusion : L'extrait de patchouli à 1 % a permis d'augmenter le taux de collagène 1, qui est diminué au cours du vieillissement, dans des biopsies de peau saine ex vivo. [0111] Exemple 6 : Evaluation de l'effet de l'extrait de patchouli préparé selon l'exemple 1, sur les récepteurs cannabinoïdes CB2 dans des biopsies de peau ex vivo : Le but de cette étude est de montrer l'effet de l'extrait de patchouli préparé selon l'exemple 1 sur les récepteurs aux cannabinoïdes CB2 dans des biopsies de peau saine. Les récepteurs CB2 font partie du système endocannabinoïde de la peau. Des endocannabinoïdes ainsi que des cannabinoïdes exogènes peuvent agir sur ces récepteurs. Les agonistes des récepteurs CB2 sont liés à des effets anti-inflammatoires et antidouleur. Protocole : Les récepteurs CB2 sont étudiés par immuno-histochimie Des biopsies de peau saine ont été traitées pendant 48 heures avec une crème dont la formule est donnée dans le tableau 3, contenant ou non (dans le cas du placebo) l'extrait de patchouli à 1 % (20 pl par biopsie). A l'issue de ce traitement, les biopsies sont fixées par différents solvants, puis incluses dans la paraffine. Des coupes de 6 'lm sont réalisées, puis incubées avec un premier anticorps spécifique des récepteurs CB2 (polyclonal de lapin, Thermofisher) pendant une heure et demi. Après des rinçages successifs, les coupes sont incubées en présence de l'anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L'expression de CB2 est alors observée et quantifiée par analyse d'image (Volocity0 image analysis software, Improvision). Résultats : Dans les biopsies de peau traitées avec l'extrait de patchouli selon l'exemple 1, on observe une augmentation de l'intensité de marquage de CB2. Cette augmentation est de +20 % avec l'extrait à 0,1 % et de +36 % avec l'extrait à 1 %, comparé aux biopsies traitées avec la crème placebo. Conclusion : L'extrait de patchouli obtenu selon l'exemple 1 a permis d'augmenter l'expression des récepteurs cannahinoïdes CB2 dans les biopsies de peau saine ex vivo. L'effet de patchouli sur les récepteurs CB2 peut être associé à une diminution de l'inflammation dans des peaux saine agressées et fragilisées. [0112] Exemple 7 : Evaluation de l'effet apaisant de l'extrait de patchouli à la suite d'un stress UVB : Le but de cette étude est d'évaluer l'effet de l'extrait de patchouli obtenu selon l'exemple 1 sur le statut inflammatoire d'une peau saine soumise à une irradiation par les UVB. L'inflammation a été évaluée par caractérisation de l'lLl-Rl, récepteur de l'interleukine-1, cette interleukine ainsi que son récepteur étant augmentée dans l'inflammation induite par les UVB. Une diminution de l'ILI -R1 dans les biopsies de peau exposées à un stress UVB permettra donc d'évaluer un effet apaisant de l'extrait de patchouli. Dans ce même type d'expérience, l'effet de l'extrait de patchouli obtenu selon l'exemple 1 sera comparé à celui d'une huile essentielle de patchouli à la dilution équivalente de 1 %, obtenu selon l'exemple 3. Protocole : Des biopsies de peau saine en culture sont exposées à une irradiation par les UVB 200 rniicrn2. Puis la crème contenant, ou non dans le cas du placebo, l'extrait de patchouli à 0,5 et 1 %, préparé selon l'exemple 1 et formulé dans une crème selon formule donnée dans le tableau 3, est appliquée sur les biopsies (20 pL par biopsie). En parallèle, une série de biopsies est traitée avec une crème identique mais formulée avec 1 % d'une huile essentielle de patchouli au lieu de l'extrait selon l'exemple 1. Après 48 heures de traitement, les biopsies sont fixées par différents solvants, puis incluses dans la paraffine. Des coupes de 6 pm sont réalisées, puis incubées avec un premier anticorps spécifique des récepteurs de l'interleukine-1 (IL1-R1 polyclonal de lapin, Tebu Rockland) pendant deux heures. Après des rinçages successifs, les coupes sont incubées en présence de l'anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L'expression de 1'm1-Ri est alors observée et quantifiée par analyse d'image (Volocity® image analysis software, Improvision). Résultats : L'exposition des biopsies de peau ex vivo aux UVB a généré une augmentation du 23 marquage de l'ILI -R1, révélant un état inflammatoire de la peau. Dans les biopsies irradiées et traitées avec la crème contenant l'extrait de patchouli, le taux d'IL1 -R1 est plus faible, comparé au placebo. Un effet dose dépendent est observé entre 0,5 % et 1 % d'extrait de patchouli dans la crème (-9 % et -17 %, respectivement, figure 1). La crème formulée avec l'huile essentielle de patchouli à 1 % a conduit à un effet non significatif, comparé au placebo (figure 2). Conclusion : L'extrait de patchouli à 0,5 et 1 % a diminué significativement le taux d'IL1 -R1 dans les biopsies de peau saine irradiées avec les UVB, révélant un taux d'inflammation diminué, et par conséquent un potentiel effet apaisant de l'extrait, de manière significativement différente par rapport à l'huile essentielle de patchouli. [0113] Exemple 8 : Evaluation de l'effet apaisant de l'extrait de patchouli à la suite d'un stress induit par le lipopolysaccharide (LPS) bactérien : Le but de cette expérience est de tester l'effet apaisant de l'extrait de patchouli obtenu selon l'exemple 1, sur des biopsies de peau exposé à un stress bactérien. Pour ce faire, les biopsies sont incubées en présence de lipopolysaccharide (LPS) d'origine bactérienne, composé antigénique induisant une réponse de type inflammatoire. Protocole : Des biopsies de peau saine en culture sont incubées en présence de LPS à 0,5 mg/ml pendant une nuit. Puis la crème contenant, ou non dans le cas du placebo, l'extrait de patchouli à 1 %, préparé selon l'exemple 1, est appliquée sur les biopsies (20 RI. par biopsie). La formule de la crème est donnée dans le tableau 3. Après 48 heures de traitement, les biopsies sont fixées par différents solvants, puis incluses dans la paraffine. Des coupes de 6 mm sont réalisées, puis incubées avec un premier anticorps spécifique des récepteurs de l'interleukine-1 (ILI-RI polyclonal de lapin, Tebu Rockland) pendant deux heures. Après des rinçages successifs, les coupes sont incubées en présence de l'anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L'expression de l'ILi-Ri est alors observée et quantifiée par analyse d'image (Volocity® image analysis software, Improvision). Résultats : L'exposition des biopsies de peau ex vivo au LPS bactérien a généré une augmentation du marquage de l'ILI-R1, révélant un état inflammatoire de la peau. Dans les biopsies stressées par le LPS et traitées avec la crème contenant l'extrait de patchouli, le taux d'ILI-RI est plus faible (-37 %, très significatif par rapport aux biopsies stressées par le LPS et traitées avec la crème placebo) (Figure 3). Conclusion : 24 L'extrait de patchouli à 1 % a diminué significativement le taux d'ILl-Rl dans les biopsies de peau saine exposées à un stress d'origine bactérienne, révélant un taux d'inflammation diminué, et par conséquent un potentiel effet apaisant de l'extrait face à une agression bactérienne. [0114] Exemple 9 : Evaluation de l'effet de l'extrait de patchouli sur le récepteur TRPV1 à la suite d'une irradiation UVB : Les endocannahinoïdes et les agonistes des récepteurs cannahinoïdes CB1 et CB2 peuvent exercer leur effet anti-inflammatoire en agissant sur d'autres récepteurs tels que TRPV1 (Transicnt Receptor Potential Vanilloidc 1) associé à la nociception et au prurit (Michacl J. Caterina. TRP Channel Cannahinoid Receptors in Skin Sensation, Homcostasis, and Inflammation. ACS Chem. Ncurosci. 2014, 5, 1107-1116). Le récepteur TRPVI (Transicnt Receptor Potential Vanilloidc 1) agit comme un détecteur de différents stress associés à une perception douloureuse (nociception), incluant la chaleur, une baisse de pH, ainsi que l'activation par des médiateurs pro inflammatoires endogènes. Son activation se traduit par une réaction inflammatoire, pouvant s'accompagner d'une perception d'inconfort, de démangeaisons, comme dans le cas du prurit, voire d'une sensation douloureuse. TRPV1 est un récepteur pour les endocannabinoïdes et cannahinoïdes exogènes, qui peuvent exercer un effet analgésique (Michacl J. Caterina. TRP Channel Cannahinoid Receptors in Skin Sensation, Homcostasis, and Inflammation. ACS Chem. Neuroset 2014, 5, 1107-1116). Dans la présente étude, l'effet de l'extrait de patchouli obtenu selon l'exemple 1 sur les récepteurs TRPVI a été évalué sur des biopsies de peau en culture, exposées à un stress UVB. Protocole : Des biopsies de peau saine en culture sont exposées à une irradiation par les UVB 200 rniicrn2. Puis la crème contenant, ou non dans le cas du placebo, l'extrait de patchouli à 1 %, préparé selon l'exemple 1, est appliquée sur les biopsies (20 pL par biopsie). La formule de la crème est donnée dans le tableau 3. Après 48 heures de traitement, les biopsies sont fixées par différents solvants, puis incluses dans la paraffine. Des coupes de 6 mn sont réalisées, puis incubées avec un premier anticorps spécifique des récepteurs TRPVI (polyclonal de lapin, Invitrogen) pendant deux heures. Après des rinçages successifs, les coupes sont incubées en présence de l'anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L'expression de TRPV1 est alors observée et quantifiée par analyse d'image (Volocity® image analysis software, Improvision). Résultats : Les biopsies de peau exposées à un stress UVB ont montré une augmentation du marquage de TRPVI qui, selon la bibliographie, est associé à une augmentation de l'état inflammatoire. Dans les biopsies de peau traitées avec l'extrait de patchouli obtenu selon l'exemple 1, on observe une baisse de l'intensité de marquage de TRPVI, indiquant une réduction de l'état inflammatoire induit par les UVB (-31 %, hautement significatif par rapport aux biopsies irradiées aux UVB et traitées par la crème placebo) (figure 4). Conclusion : Le traitement des biopsies de peau saine par l'extrait de patchouli a montré une réduction de l'expression de TRPVI dans la peau saine irradiée par les UVB, associée à une baisse de l'inflammation et de la sensibilité cutanée. [0115] Exemple 10 : Evaluation de l'effet de l'extrait de patchouli préparé selon l'exemple 1, sur la synthèse de loricrine dans des biopsies de peau ex vivo: Le but de cette étude est de montrer l'effet de l'extrait de patchouli préparé selon l'exemple 1 sur la synthèse de loricrine dans des biopsies de peau ex vivo. En effet, cette protéine est impliquée dans le processus de différenciation de l'épiderme et participe donc à l'élaboration de la barrière cutanée, en lien avec l'hydratation de la peau. Protocole : La loricrinc est évaluée par immuno-histochimic. Des biopsies de peau saine humaine en culture sont traitées par l'extrait de patchouli obtenu selon l'exemple 1 et formulé à 0,5 % (masse/masse) dans une crème appliquée deux fois par jour pendant 48 heures par voie topique (20 pl/biopsie). La formule de la crème est donnée dans le tableau 3. Des biopsies contrôles reçoivent une crème placebo. Les formules utilisées sont des émulsions classiques huile-dans-eau. Puis, la détection de la loricrine est réalisée par immunomarquage à l'aide d'un anticorps spécifique. Cette technique est réalisée à partir de coupes en paraffine, incubées en présence de l'anticorps anti-loricrine (polyclonal de lapin, Abcam). Après une hem-e et demi d'incubation suivie de rinçages, les coupes sont incubées en présence de l'anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L'expression de loricrine est alors observée et quantifiée par analyse d'image (Volocity0 image analysis software, Improvision). Résultats : Le traitement avec l'extrait de patchouli à 0,5 % a montré une augmentation de l'intensité de marquage de la loricrine dans les biopsies de peau à 48 heures (+39 %, hautement significatif par rapport aux biopsies traitées avec la crème placebo). 26 Conclusion : L'extrait de patchouli a permis d'augmenter le taux de loricrine dans les biopsies de peau saine ex vivo, en relation avec un effet sur la différenciation de l'épiderme et la fonction barrière cutanée. 27 [Revendication 1] [Revendication 2] [Revendication 3] [Revendication 4] [Revendication 5] [Revendication 6]