Brevet FR3091163A1 — publié le 20200703

Description Titre de l'invention : PEPTIDE ANALOGUE DE LA THYMULINE (PAT) POUR SON UTILISATION DANS LE TRAITEMENT DES ACCIDENTS VASCULAIRES CEREBRAUX Domaine technique 100011 La présente invention concerne le domaine pharmaceutique. Elle concerne plus parti- culièrement un peptide analogue de la thymuline (PAT) pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des accidents vasculaires cérébraux (AVC), ainsi qu'une composition comprenant un tel peptide utilisé selon l'invention. 100021 Un AVC est une pathologie se caractérisant par une chute brutale du débit sanguin dans une partie du cerveau, équivalent à un infarctus du myocarde. 100031 L'AVC se produit lorsque l'apport sanguin au cerveau est bloqué (AVC ischémique), ou lorsqu'un vaisseau sanguin dans le cerveau est rompu (AVC hémorragique). Les effets d'un AVC dépendent de l'emplacement et du volume du tissu endommagé. Les AVC peuvent entraîner la mort, mais aussi de graves handicaps tels qu'une paraplégie, aphasie, déficience visuelle ou encore des troubles cognitifs. 100041 Chaque année, environ 16 millions d'accidents vasculaires cérébraux surviennent dans le monde, causant un total de 5,7 millions de décès, alors qu'environ un tiers des patients souffrent d'une invalidité permanente. Technique antérieure [0005] La principale limite réside dans le temps nécessaire pour diagnostiquer un accident vasculaire cérébral (tomodensitométrie, IRM). En effet, dans une telle situation, le temps est précieux et des lésions cérébrales majeures surviennent dans une courte fenêtre après un AVC ischémique aigu (AVCi), pendant que le patient est transporté à l'urgence puis après une revascularisation. [0006] Le pilier de la prévention des AVC est la gestion des facteurs de risque : le sevrage tabagique, le traitement de l'hypertension artérielle et des maladies cardiaques. et le contrôle de la glycémie chez les diabétiques. De plus, les médecins peuvent prescrire des traitements antithrombotiques comme l'aspirine, la warfarinc ou la ticlopidinc. [0007] Malgré la prévalence de l'AVC, actuellement, le seul médicament approuvé pour le traitement de l'AVC est l'activateur du plasminogène recombinant de tissu thrombolytique (tPA), un médicament qui doit être administré dans les 4,5 heures suivant les premiers signes pour prévenir les dommages cliniques graves. [0008] Le traitement de référence de l'AVCi aigu par thrombolyse intraveineuse (TI V) par rt-PA seule, requiert une prise en charge quasi immédiate, c'est-à-dire une perfusion jusqu'à 4h30 après le début des symptômes pour dissoudre le caillot, avec une cf- 2 ficacité d'autant plus importante qu'elle est réalisée tôt. [0009] Son efficacité est toutefois imparfaite puisque le caillot ne disparaît pas toujours, ou trop tard pour empêcher la constitution de lésions cérébrales irréversibles. [0010] Les limites de la thrombolyse sont une fenêtre thérapeutique étroite, un taux faible de recanalisation et un risque hémorragique certain. En effet, même s'il est utilisé dans la fenêtre thérapeutique, le tPA présente néanmoins un risque d'hémorragie intracérébrale symptomatique. [0011] Puisque le médicament de référence ne fonctionne pas toujours et présente des incon- vénients, un traitement alternatif est de directement retirer le caillot. Il s'agit de la thrombectomie mécanique, action de retrait du caillot par capture dans un stcnt (sorte de petit ressort métallique) ou aspiration directe. [0012] Depuis le pli de l'aine, une tubulure (cathéter) est introduite dans l'artère de la jambe. Le ncuroradiologue fait alors progresser cette tubulure jusque dans les artères cérébrales, guidé en temps réel par rayons X. Un guidage extrêmement précis est absolument nécessaire puisqu'il faut « naviguer » dans des artères de 2 à 4 millimètres de diamètre, sans les blesser, ce qui entraînerait une hémorragie cérébrale, potentiellement mortelle. Cette navigation se poursuit jusqu'à entrer en contact avec le caillot, le capturer et l'extraire du corps du patient. Cc sauvetage est réalisé avec succès dans près de 90% des cas. Le flux sanguin est rétabli, permettant d'irriguer à nouveau le cerveau et de limiter les conséquences cliniques de cette occlusion. [0013] Depuis la démonstration scientifique du bénéfice pour les patients, la thrombectomie est recommandée dans tous les cas d'AVC de moins de six heures avec présence d'un caillot au niveau d'une artère proximale. [0014] L'association de la thrombectomie à la thrombolyse intraveineuse (TIV) apparait désormais être le traitement de référence des accidents vasculaires cérébraux ischémiques (AVCO avec occlusion proximale dans les 6 premières heures. Au-delà de ce délai, la thrombectomie seule dans les 24 premières hem-es pourrait être envisagée chez des patients sélectionnés. [0015] La thrombectomie mécanique est un bel exemple de la mise à disposition rapide et efficace du progrès médical pour les patients victimes d'AVC. [0016] Toutefois, une telle formation est parmi les plus longues et exigeantes au monde (trois ans de formation réalisée près de dix ans après le début des études de médecine). De plus, elle requiert des praticiens formés à la neuroradiologie interventionnelle pour réaliser des interventions permettant de sauver des vies et prévenir le handicap. Enfin, elle ne concerne que des patients sélectionnés présentant un caillot au niveau d'une artère proximale. [0017] De nouvelles options thérapeutiques sont indispensables pour étendre la fenêtre thé- rapeutique de la thrombolyse et pour fournir une neuroprotection pour ralentir la mort 3 cellulaire après un accident vasculaire cérébral. [0018] On connait par exemple le document W02015023830 qui décrit l'utilisation de r isoxsuprinc (agoniste p2-adrénergique) ou de chlorphenesine pour le traitement d'accidents vasculaires cérébraux ischémique ou hémorragique. [0019] Un autre composé identifié par screcning à haut débit pour lutter contre les accidents vasculaires cérébraux a également été rapporté (Wang IK et al.. Cardiac glycosides provide neuroprotection against ischemic strokc: discovery by a brain slice-based compound screcning platform. Proc Natl Acad Sei US A. 2006;103:10461-6). Dans cette étude, des tranches de cerveau organotypiques de rat ont été utilisées pour évaluer les effets de petites molécules sur la survie neuronale dans un modèle d'AVC. L'étude a identifié la neriifoline, un glycoside cardiaque, en tant que médicament candidat contre l'AVC dans le modèle OGD et a confirmé la fonctionnalité in vivo de la molécule dans un modèle animal d'AVC. [0020] Il n'y a toutefois apparemment pas encore de médicament approuvé pour protéger contre les dommages neuronaux en cours après l'évènement aigu, ce qui peut aggraver la situation clinique de manière significative. Il n'y a également apparemment pas non plus encore de médicament approuvé pour tous les patients qui ne sont pas admissibles au traitement thrombolytique ou par thrombectomic mécanique. Problème technique [0021] Considérant ce qui précède, un problème que se propose de résoudre la présente invention est de fournir un nouveau composé pour le traitement de patients présentant un accident vasculaire cérébral, qui puisse agir seul chez des patients non admissibles à un traitement thrombolytique ou par thrombectomie mécanique, ou combiné à un traitement thrombolytique ou par thrombectomic mécanique. Solution technique [0022] La solution à ce problème posé a pour premier objet un peptide analogue de la thymulinc (PAT) correspondant à la séquence suivante : SEQ ID n'l : Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gy-Ser-Asp (EAKSQGGSD), ou un de ses sels pharmaccutiquement acceptables, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des accidents vasculaires cérébraux. [0023] Elle a pour second objet une composition comprenant un peptide utilisé selon l'invention, dissous dans un solvant approprié, éventuellement accompagné de conservateur, agent tampon, adjuvant d'isotonicité, agent tensioactif pris seul ou en mélange. Avantages apportés [0024] Le peptide PAT utilisé selon l'invention de SEQ ID n°1 (Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asp = EAKSQGGSD) a été initialement développé comme une substance anti-inflammatoire puissante clans les pathologies auto-immunes (polyarthrite rhumatoïde, maladie de Crohn). Des travaux antérieurs ont également montré que ce peptide présente des activités neuroprotectrices dans certains modèles in vitro (neurones de culture mésencéphalique et épineuse, utilisés principalement pour étudier les maladies neuro-dégénératives). 11 présente ainsi des propriétés anti-inflammatoires associées à une activité neuroprotectrice, sans danger jusqu'à des doses intraveineuses élevées (40 mg) et une demi-vie courte (5 min dans le plasma). [0025] De manière inattendue, le Demandeur a décidé d'utiliser cc peptide pour le traitement de l'AVC, en particulier de l'AVCi en bénéficiant de ses activités inflammatoire et antioxydantc capables de réduire la mort neuronale et de traiter les AVC. [0026] Dans cette description, à moins qu'il n'en soit spécifié autrement, il est entendu que, lorsqu'un intervalle est donné, il inclut les bornes supérieure et inférieure dudit intervalle. Brève description des dessins [0027] L'invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la lecture de la description ct des modes de réalisation non limitatifs qui suivent, illustrés au regard des dessins annexés dans lesquels : Fig.1 100281 1E2.11 représente l'effet neuroprotecteur du PAT de SEQ ID n'l selon l'invention sur un modèle de stress oxydatif neuronal cortical primaire chez le rat dont les cellules sont privées d'oxygène / glucose (OGD). Fig.2 100291 I fig.21 représente l'effet contre l'infarctus du PAT de SEQ ID n°1 selon l'invention dans un modèle d'occlusion de l'artère cérébrale moyenne (MCAO) chez la souris. Description des modes de réalisation [0030] L'invention concerne un peptide analogue de la thymuline (PAT) correspondant à la séquence suivante : SEQ ID n°1 : Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asp (EAKSQGGSD), ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des accidents vasculaires cérébraux. [0031] Par sel pharmaceutiquement acceptable, on entend de manière non limitative un acétate, un sulfate ou un chlorhydrate. [0032] L'utilisation d'un PAT de SEQ ID n°1 selon l'invention dans lequel un ou plusieurs acides aminés sont en configuration D est également décrite. [0033] Par accident vasculaire cérébral, on entend une pathologie se caractérisant par une chute brutale du débit sanguin dans une partie du cerveau. Les neurones touchés par le manque d'oxygène et de glucose libèrent des cytokines pro-inflammatoires et des espèces réactives oxygénées (ROS) qui endommagent le tissu. Dans les minutes suivant la formation de l'occlusion, la réaction inflammatoire s'aggrave par l'activation des cellules rnicroglialcs ainsi que la sécrétion de molécules d'adhésions causant la libération de nouvelles cytokines et ROS. Ainsi, les tissus sont de plus en plus endommagés par le recrutement via infiltration des cellules de l'inflammation allant jusqu'à l'activation de matrices de métalloproteases provocant une perturbation de la barrière hemato-encéphalique ainsi que des oedèmes. [0034] Le PAT de SEQ ID n'l selon l'invention est utilisé pour traiter des patients chez lesquels l'apport sanguin au cerveau est bloqué (AVC ischémique), ou lorsqu'un vaisseau sanguin dans le cerveau est rompu (AVC hémorragique). [0035] Par patient, on entend un être humain ou un animal, tel que par exemple un chien ou un chat, préférentiellement un être humain. [0036] Préférentiellement, le PAT de SEQ ID n'1 selon l'invention est utilisé dans le traitement d'un accident vasculaire cérébral ischémique aigu (AVCi). [0037] Le PAT de SEQ ID n'l utilisé selon l'invention est préférentiellement sous une forme adaptée pour une administration par voie parentérale, en particulier sous cutanée (s.e.), intranasale, intrapéritonéale (i.p.) et intraveineuse (i.v.). [0038] Le PAT de SEQ ID 1101 utilisé selon l'invention est plus préférentiellement sous une forme adaptée pour une administration par voie intraveineuse en bolus. [0039] Le PAT de SEQ ID 11°1 utilisé selon l'invention est administré à un dosage compris entre 0,1 et 50 mg/kg, de préférence entre 1 et 10 mg/kg, par exemple 2 mg/kg, 3 mg/ kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg ou 9 mg/kg, plus préférentiellement 3 mg/kg. [0040] Avantageusement, le PAT de SEQ ID n°1 utilisé selon l'invention est administré seul chez des patients non admissibles à un traitement thrombolytique ou par thrombectornie mécanique. [0041] Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, le PAT de SEQ ID n°1 est combiné à un traitement thrombolytique, préférentiellement choisi parmi un activateur tissulaire recombinant du plasminogene (rt-PA), l'altéplase, la streptokinase, la desmotéplase, le ténectéplase, la microplasmine, le rétéplase, l'ancrod et l'urokinase. [0042] De préférence, le PAT de SEQ ID n°1 est combiné à un traitement thrombolytique jusqu'à 6 heures après la survenue des premiers signes de l'accident vasculaire cérébral. [0043] Selon un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, le 6 PAT de SEQ ID n°1 est combiné à un traitement par thrombectomie mécanique. [0044] De préférence, le PAT de SEQ ID n°1 est combiné à un traitement par throm- bectomie mécanique jusqu'à 24 heures après la survenue des premiers signes de l'accident vasculaire cérébral. [0045] Un autre objet concerne une composition comprenant un PAT de SEQ ID n°1 pour son utilisation selon l'invention, dissous dans un solvant approprié, éventuellement accompagné de conservateur, agent tampon, adjuvant d'isotonicité, agent tensioactif pris seul ou en mélange. [0046] Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à cc que les adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Exemples [0047] La présente invention va maintenant être illustrée au moyen des exemples suivants. [0048] Exemple 1 : Validation de l'activité du PAT de SEQ ID n°1 selon l'invention dans des modèles cellulaires privés d'oxygène et de glucose (OGD) (in vitro) Cette étude vise à examiner l'effet du PAT de SEQ ID n°1 selon l'invention (6 concentrations) sur un modèle de stress oxydatif neuronal cortical primaire chez le rat dont les cellules sont privées d'oxygène / glucose (OGD) ; le riluzole est utilisé comme contrôle positif 1 heure avant OGD, les neurones sont traités avec le PAT de SEQ ID n°1 selon l'invention. Le modèle utilisé dans cette approche préliminaire permet de mimer une mort neuronale ischémique et d'identifier un éventuel effet neuroprotecteur du peptide selon l'invention testé. Protocole Les neurones corticaux de rat ont été cultivés comme décrit par Singer (1999). Après 10 jours de culture de neurones, le composé à tester (peptide selon l'invention ou riluzole) a été pré-incubé avec des neurones pendant 1 heure avant la privation d'oxygène et de glucose. Ensuite, le milieu de culture a été retiré et un milieu de culture frais sans glucose a été ajouté. Les cellules ont été transférées dans un incubateur anaérobie en conditions 95% N, /5% CO2 à 37°C. Au bout de 2 heures, 25 niM de D-glucose ont été ajoutés dans le milieu de culture et les cellules ont été transférées dans un incubateur classique avec 95% air / 5% CO2 à 37°C. Le riluzole à 5 ktM (Sigma, Ref: R116, lot: 057K3900V) a été utilisé comme composé de référence, 6 puits par condition. Les conditions suivantes ont été réalisées : Condition contrôle (milieu de culture) OGD (2h) + condition contrôle (milieu de culture) OGD (2h) + Riluzole (5 [LM) comme composé de référence 7 OGD (2h) + PAT de SEQ ID n'l selon l'invention (10 nM, 1 FIM, 100 nM, 10 nM, 1 nM, 0,1 nM) [0049] Evaluation : mesure du nombre total de neurones corticaux Après 24 heures de reperfusion d'oxygène/glucose, les cellules ont été fixées par une solution froide d'éthanol à 95% / acide acétique (5%) pendant 5 minutes. Les cellules ont ensuite été perméabilisées et les sites non spécifiques ont été bloqués. La survie neuronale totale a été évaluée (le nombre de corps cellulaires neuronaux MAP2 positifs a été compté). Pour chaque puits de culture, 20 photos par puits ont été prises en utilisant le matériel InCell AnalyzerTM 2200 (CE Healthcarc) avec un grossissement x 20. Toutes les photos ont été prises dans les mêmes conditions. Le nombre de neurones a été automatiquement évalué avec le système d'analyse fourni (CE Healthcarc). Statistiques Toutes les données ont été exprimées en moyenne +/- erreur standard de la moyenne (s.e.m) (6 données par condition expérimentale, 1 culture). Une analyse globale des données a été réalisée en utilisant une analyse de variance à un facteur (ANOVA) suivant le test de Dunnett. La significativité statistique a été fixée à p