Brevet FR3076351A1 — publié le 20190705

Dispositif d'analvse d'un echantillon Description DOMAINE TECHNIQUE Le domaine technique de ('invention est ('analyse d'echantillons, en particulier par imagerie sans lentille. ART ANTERIEUR De nombreux developpements ont eu lieu ces dernieres annees dans le domaine de l'imagerie sans lentille pour des applications biologiques. Les principes de l'imagerie sans lentille ont ete decrits dans le document W02008090330, presentant un dispositif pour ('observation d'un echantillon, comportant des cellules, par imagerie sans lentille. rechantillon est dispose entre une source de lumiere et un capteur d'image, sans disposer de lentille de grossissement optique entre l'echantillon et le capteur d'image. Ainsi, le capteur d'image collecte une image dune onde lumineuse transmise par rechantillon. Cette image est representative d'interferences entre l'onde lumineuse emise par Ia source et transmise par rechantillon, et des ondes de diffraction, resultant de Ia diffraction par rechantillon de l'onde lumineuse emise par Ia source de lumiere. Ces interferences peuvent prendre Ia forme dune succession d'anneaux concentriques, notamment lorsque rechantillon comporte des particules de geometrie spherique, circulaire ou cylindrique. Lorsque rechantillon est dense, et comporte par exemple un grand nombre de particules, ('image formee correspond a une image de tavelures, usuellement designe par le terme image de speckle. On acquiert ainsi des images, dont le champ d'observation est nettement plus important que celui d'un microscope, du fait de Ia surface importante du capteur d'image. L'imagerie sans lentille a connu de nombreux developpements dans le domaine de ('analyse du sang. Les documents EP2233923 et EP2669678 decrivent des applications de cette technologie a ('analyse de Ia coagulation du sang. Les documents EP3115770 et US9506935 decrivent des applications de l'imagerie sans lentille a Ia mesure d'un analyte dans le sang, et respectivement Ia mesure de Ia glycemie ou de proteines D-Dimer. L'imagerie sans lentille peut etre mise en oeuvre en utilisant une diode electroluminescente pour illuminer rechantillon, la diode etant optiquement couplee a un filtre spatial, par exemple un diaphragme. Cela est decrit dans W02008090330. Le document W02016078946, propose une amelioration, en interposant un diffuseur de lumiere entre la diode electroluminescente et le 2 diaphragme, notamment pour limiter l'effet d'un decentrage de la diode electroluminescente par rapport a l'ouverture definie par le diaphragme. Dans un autre domaine technique, en ('occurrence l'imagerie de fluorescence, le recours a un support d'echantillon diffusant a ete propose dans US8120784. Dans ce brevet, un echantillon 5 comportant des fluorophores est illumine par une source de lumiere et on en acquiert une image par une modalite d'imagerie de fluorescence. L'image est acquise en utilisant un capteur d'image couple a une optique de focalisation. Le diffuseur permet alors d'eviter ('apparition de sources de lumiere parasite dans le support maintenant rechantillon. L'invention exposee ci-apres correspond a une amelioration des dispositifs d'imagerie sans 10 lentille decrits ci-dessus, pour ameliorer la performance des analyses, et en particulier des analyses realisees sur des echantillons sanguins. EXPOSE DE L'INVENTION Un premier objet de ('invention est un dispositif d'analyse d'un echantillon comportant : - une source de lumiere, configuree pour emettre une onde lumineuse, dite onde 15 lumineuse incidente, vers un echantillon, la source de lumiere etant soit couplee a un filtre spatial soit non couplee a un filtre spatial ; - un support, destine a recevoir rechantillon analyse, definissant une zone de support, de telle sorte que lorsque rechantillon est dispose sur le support, it s'etend selon la zone de support; 20 - un capteur d'image, configure pour recevoir une image de rechantillon illumine par la source de lumiere, aucune optique de grossissement ou de formation d'image n'etant disposee entre le capteur d'image et rechantillon ; le dispositif etant caracterise en ce qu'il comporte un diffuseur, dispose entre : - la source de lumiere et la zone de support, lorsque la source de lumiere et nest pas 25 couplee a un filtre spatial ; - ou entre le filtre spatial et la zone de support, lorsque la source de lumiere est couplee un filtre spatial ; - ou entre la zone de support et le capteur d'image. Londe lumineuse emise par la source de lumiere peut se propager selon un axe de propagation. 30 La zone de support s'etend de preference perpendiculairement ou sensiblement perpendiculairement a l'axe de propagation. Par sensiblement perpendiculairement, on entend formant un angle de 90° avec une tolerance angulaire de ± 10° ou ± 20°. 3 Londe lumineuse incidente emise par la source de lumiere s'etend selon une bande spectrale d'illumination. L'image de rechantillon est formee par le capteur d'image selon tout ou partie de la bande spectrale d'illumination. La source de lumiere est apte a eclairer une surface sensible du capteur d'image, a travers 5 rechantillon. Le filtre spatial peut etre un diaphragme, dispose entre une source de lumiere et la zone support, la source de lumiere et le diaphragme formant une source de lumiere ponctuelle. Le diffuseur peut etre dispose entre la source de lumiere ponctuelle et la zone de support. Le diffuseur peut etre dispose entre la zone de support et le capteur d'image. 10 Londe lumineuse incidente se propage vers rechantillon selon un axe de propagation. Selon un mode de realisation, le dispositif comporte une chambre fluidique, maintenue par le support d'echantillon, et s'etendant dans la zone de support, la chambre fluidique etant apte a recevoir rechantillon. La chambre fluidique peut comporter une paroi transversale, s'etendant perpendiculairement a l'axe de propagation, ou sensiblement perpendiculairement a ce dernier, 15 la paroi transversale formant le diffuseur. Le diffuseur peut etre est une surface diffusante ou diffractante menagee dans la paroi transversale. Le capteur d'image peut comporter une fenetre transparente, s'etendant entre rechantillon et les pixels. La fenetre transparente peut former tout ou partie du diffuseur. Le diffuseur peut etre constitue d'un materiau dont le coefficient de diffusion reduit est compris 20 entre 0.1 cm-1 et 500 cm-1. Un autre objet de ('invention est un procede d'analyse d'un echantillon, rechantillon etant dispose entre une source de lumiere et un capteur d'image, le procede comportant les etapes suivantes : a) illumination de rechantillon par la source de lumiere, la source de lumiere etant 25 configuree pour emettre une onde lumineuse, dite onde lumineuse incidente, se propageant vers rechantillon, la source de lumiere etant soit couplee a un filtre spatial soit non couplee a un filtre spatial ; b) acquisition dune image de rechantillon par le capteur d'image, le capteur d'image etant exposé a une onde lumineuse, dite onde lumineuse d'exposition, se propageant entre 30 rechantillon et le capteur d'image, aucune optique de grossissement ou de formation d'image n'etant dispose entre le capteur d'image et l'echantillon; c) analyse de rechantillon en fonction de ('image acquise par le capteur d'image ; le procede etant caracterise en ce qu'un diffuseur de lumiere est dispose : 4 - entre le filtre spatial et rechantillon ou entre rechantillon et le capteur d'image, lorsque la source de lumiere est couplee a un filtre spatial ; - entre la source de lumiere et rechantillon, ou entre rechantillon et le capteur d'image, lorsque la source de lumiere nest pas couplee a un filtre spatial. 5 Le diffuseur de lumiere peut etre dispose entre la source de lumiere et rechantillon, de maniere a diffuser l'onde lumineuse incidente. Le diffuseur de lumiere peut etre dispose entre rechantillon et le capteur d'image, de fagon a diffuser l'onde lumineuse d'exposition. L'echantillon peut etre dispose dans une chambre fluidique, s'etendant entre la source de lumiere et rechantillon. De preference, la distance entre la chambre fluidique et le capteur 10 d'image est inferieure a 1 cm, voire a 5 mm. Selon un mode de realisation, - l'onde lumineuse incidente se propage vers ('echantillon selon un axe de propagation ; - ('echantillon est dispose dans une chambre fluidique ; - une paroi transversale de la chambre fluidique forme tout ou partie du diffuseur, la paroi 15 transversale s'etendant perpendiculairement ou sensiblement perpendiculairement, selon une tolerance angulaire de ±20°, a l'axe de propagation. Le diffuseur peut etre selectionne, prealablement aux etapes a) a c), par une phase de selection comportant les etapes suivantes : i) illumination du capteur d'image par la source de lumiere; 20 ii) acquisition dune serie d'images par le capteur d'image ; iii) determination d'un niveau d'intensite associe a chaque image, et obtention d'un parametre representant une dispersion des niveaux d'intensite ainsi determines ; les etapes i) a iii) etant successivement mises en oeuvre avec et sans diffuseur, le diffuseur etant selectionne lorsque la dispersion en presence de diffuseur est moindre que sans le diffuseur. 25 Le niveau d'intensite associe a chaque image peut etre un niveau d'intensite moyen de chaque image ou le niveau d'intensite des pixels de chaque image. Les etapes i) a iii) peuvent etre mises en oeuvre en presence d'un echantillon dit de calibration entre la source de lumiere et le capteur d'image, ou sans echantillon entre la source de lumiere et le capteur d'image. 30 Le coefficient de diffusion reduit du diffuseur est de preference compris entre 0.1 cm-1 et 500 4 CM . 5 D'autres avantages et caracteristiques ressortiront plus clairement de la description qui va suivre de modes particuliers de realisation de ('invention, donnes a titre d'exemples non limitatifs, et representes sur les figures listees ci-dessous. 5 FIGURES Les figures 1A, 1B et 1C illustrent trois modes de realisation d'un dispositif selon ('invention. Les figures 2A et 2B representent respectivement une evolution temporelle d'un coefficient de correlation entre des images successivement acquises au cours de ('analyse de la coagulation d'un echantillon sanguin, respectivement en ('absence et en presence d'un diffuseur. 10 Les figures 3A, 3B et 3C montrent des histogrammes des intensites moyennes des pixels d'images obtenues respectivement sans diffuseur, avec un premier diffuseur et avec un deuxieme diffuseur interposes entre une source laser et un capteur d'image. EXPOSE DE MODES DE REALISATION PARTICULIERS La figure 1A represente un exemple de dispositif objet de ('invention. Une source de lumiere 11 15 est configuree pour produire une onde lumineuse 12, ou onde lumineuse incidente, dans une bande spectrale d'illumination, en direction d'un echantillon 10. Londe lumineuse 12 se propage selon un axe de propagation Z. Sur la figure 1A, on a represente le front d'onde de l'onde lumineuse incidente 12. L'echantillon 10 comporte un liquide ainsi que des particules 20 baignant dans ce liquide. Le 20 liquide peut notamment etre un liquide corporel, par exemple du sang. II peut notamment s'agir de plasma sanguin. Les particules 20 peuvent etre des particules sanguines, et plus particulierement des globules rouges. La distance 4 entre la source de lumiere et ('echantillon est de preference superieure a 5 mm. Elle est de preference comprise entre 1 et 30 cm, typiquement entre 2 cm et 10 cm, par exemple 25 5 cm. La source de lumiere 11 peut etre une diode electroluminescente ou une source de lumiere laser, par exemple une diode laser. De preference, la source de lumiere, vue par rechantillon, est consideree comme ponctuelle, mais cela n'est pas necessaire. Le terme ponctuel designe le fait que son diametre doit etre 30 inferieure au cinquieme, mieux au dixieme de la distance entre ('echantillon et la source de 6 lumiere. Ainsi, l'onde lumineuse incidente 12 parvient a l'echantillon sous la forme d'ondes planes, ou pouvant etre considerees comme telles. La source de lumiere 11 peut etre associee a un filtre spatial, par exemple un diaphragme 18, de fawn a apparaitre ponctuelle. L'ouverture du diaphragme est typiquement comprise entre 50 5 pm et 1mm, de preference 50 pm et 500 p.m. La presence d'un diaphragme n'est pas necessaire. En particulier, lorsque la source de lumiere est une source laser, la presence d'un diaphragme nest pas requise. C'est egalement le cas lorsque la source de lumiere s'etend selon une faible surface d'emission. Une telle configuration est representee sur la figure 1B. La source de lumiere 11 peut egalement etre fibree. Dans ce cas, une fibre optique s'etend entre 10 une premiere extremite, disposee face a la source de lumiere, et collectant la lumiere de cette derniere, et une deuxieme extremite, emettant la lumiere vers rechantillon. Dans cette description, une telle fibre optique est consideree comme etant un filtre spatial. La source de lumiere 11 peut comporter un filtre optique 19, notamment un filtre passe-bande, permettant d'ajuster la bande spectrale d'illumination de l'onde lumineuse 12 de la source de 15 lumiere 11. L'echantillon 10 est contenu dans une chambre fluidique 13. Les parois laterales de la chambre ne sont pas representees. La chambre fluidique 13 est par exemple une microcuvette, d'utilisation courante dans les dispositifs de type point of care, dans laquelle rechantillon 10 penetre par capillarite. Sur la figure 1A, on a represents deux parois transversales 15 de la 20 chambre fluidique 13. Les parois transversales 15 sont transparentes et distantes Tune de l'autre de 150 p.m. Elles s'etendent de preference perpendiculairement ou sensiblement perpendiculairement a l'axe de propagation Z. La distance entre ces deux parois transversales 15, selon l'axe de propagation Z, correspond a l'epaisseur E de l'echantillon. Cette derniere varie typiquement entre 20 pm et 1 cm, et est de preference comprise entre 50 p.m et 500 pm, par 25 exemple 150 p.m. Dans les exemples decrits ci-apres, la chambre fluidique est telle que decrite dans la demande de brevet W02017006037, et plus particulierement en lien avec les figures 2A et 2B de cette demande de brevet. L'echantillon repose sur un support d'echantillon 10s, le support d'echantillon definissant une zone, dite zone de support Zs, destinee a recevoir rechantillon lorsque ce dernier est analyse. 30 La zone de support Zs correspond au volume occupe par rechantillon lorsqu'il est dispose sur le support 10s. La zone de support Zs peut s'etendre perpendiculairement a l'axe de propagation Z, ou sensiblement perpendiculairement a ce dernier. 7 L'echantillon 10 est dispose entre la source de lumiere 11 et un capteur d'image 16, apte a etablir une image I, dite image de transmission, dune onde lumineuse 14 transmise par l'echantillon 10. Le capteur d'image s'etend selon un plan de detection P, de preference parallelement, ou sensiblement parallelement aux parois transversales 15 de Ia chambre 5 fluidique 13. Le terme sensiblement parallelement signifie que les deux elements peuvent ne pas etre rigoureusement paralleles, une tolerance angulaire de quelques degres, inferieure a 10° ou a 20° etant admise. Le capteur d'image peut former une image de rechantillon dans tout ou partie de Ia bande spectrale d'illumination de l'onde lumineuse 12. Le capteur d'image 16 comporte une matrice de pixels, de type CCD (de l'anglais Charge Coupled 10 Device) ou un CMOS (de l'anglais Complementary Metal-Oxyde Semiconductor). De preference, le capteur d'image comprend une matrice de pixels, au-dessus de laquelle est disposee une fenetre de protection transparente. La distance entre la matrice de pixels et la fenetre de protection est generalement comprise entre quelques dizaines de pm a 150 a 200 p.m. De preference, le plan de detection P selon lequel s'etend le capteur d'image est 15 perpendiculaire a l'axe de propagation Z de l'onde lumineuse incidente 12, ou sensiblement perpendiculaire a l'axe de propagation Z. On remarque, dans cet exemple, l'absence d'optique de grossissement entre le capteur d'image 16 et rechantillon 10. Cela n'empeche pas la presence eventuelle de microlentilles de focalisation au niveau de chaque pixel du capteur d'image 16. Cela permet de former une image 20 de transmission de l'onde lumineuse 14 transmise par l'echantillon en minimisant la distance entre rechantillon et le capteur d'image. Londe lumineuse 14 transmise par rechantillon est egalement l'onde lumineuse d'exposition, a laquelle est exposé le capteur d'image 16. Une telle configuration, designee par le terme imagerie sans lentille, permet d'utiliser un dispositif d'analyse particulierement simple et compact. En l'absence d'optique de grossissement, la 25 distance d entre l'echantillon et les pixels du capteur d'image est de preference inferieure a 2 cm, voire a 1 cm, et preferentiellement comprise entre 50 pm et 2 cm, de preference comprise entre 100 pm et 5 mm. Un processeur 40, par exemple un microprocesseur, est apte a traiter les images I acquises par le capteur d'image 16. En particulier, le processeur est un microprocesseur relie a une memoire 30 programmable 42 dans laquelle est stockee une sequence d'instructions pour effectuer les operations de traitement d'image et de calcul decrites dans cette description. Cette memoire 8 programmable 42 peut egalement comporter des informations de calibration du dispositif, comme cela sera evoque ulterieurement. Le microprocesseur peut etre relie a un ecran 44. Les dispositifs decrits en lien avec les figures 1A a 1C peuvent permettre une analyse d'un echantillon, par exemple un echantillon sanguin, et plus particulierement : 5 - une determination d'un parametre de coagulation, par exemple d'un temps de coagulation, comme decrit dans EP2669678 ou EP2233923; - un dosage d'un analyte present dans rechantillon, par exemple un taux de glycemie, comme decrit dans EP3115770, ou un taux de proteines D Dimer, comme decrit dans US9506935. 10 Lorsqu'on effectue une analyse d'un parametre de coagulation, un reactif, propice au declenchement dune reaction de coagulation, est mélange a rechantillon. On acquiert successivement differentes images de rechantillon a l'aide du capteur d'image. On determine une correlation entre les images acquises, par exemple entre deux images successives, en calculant un coefficient de correlation. La figure 2A represente une evolution temporelle d'un 15 coefficient de correlation. L'axe des abscisses represente le temps, tandis que l'axe des ordonnees est la valeur du coefficient de correlation. La courbe obtenue suit une decroissance marquee, suivi d'un plateau bas, avant une remontee rapide, la remontee rapide temoignant de ('immobilisation des globules rouges, ou autres particules diffractantes, dans le sang. A partir dune telle courbe, un temps de coagulation peut etre etabli. Sur cette courbe, revolution du 20 processus de coagulation est representee par une double fleche. Le temps de coagulation K. correspond a une difference entre les instants t, et to representes sur cette figure. Lorsqu'on realise un dosage d'un analyte, un indicateur colore, sensible a ('analyte, et/ou un reactif propice a ('agglutination de particules en presence de ('analyte peut etre introduit dans rechantillon. On mesure une evolution temporelle de rintensite de l'onde lumineuse 25 d'exposition 14 au cours du temps, ce qui permet un dosage de ('analyte. Les inventeurs ont constate que les analyses precedemment evoquees etaient plus repetables en presence d'un diffuseur de lumiere 17, destine a diffuser la lumiere se propageant vers le capteur d'image. En ('absence d'un filtre spatial 18 couple a la source de lumiere 11, le diffuseur de lumiere 17 peut etre dispose entre la source de lumiere 11 et rechantillon 10. Lorsque la 30 source de lumiere 11 est couplee a un filtre spatial 18, comme illustre sur la figure 1A, le diffuseur peut etre dispose entre le filtre spatial 18 et rechantillon 10. Quelle que soit la configuration, le diffuseur 17 peut egalement etre dispose entre rechantillon 10 et le capteur 9 d'image 16. Le diffuseur 17 peut etre une plaque diffusante, disposee entre la source de lumiere (ou entre le filtre spatial) et la zone de support, destinee a recevoir rechantillon, ou entre la zone de support et le capteur d'image. Le diffuseur 17 peut egalement etre dispose au niveau de la chambre fluidique 13 dans laquelle s'etend rechantillon 10. Par exemple, une paroi 5 transversale 15 de la chambre peut faire office de diffuseur. Sur la figure 1B, on a represents un diffuseur 17 accole a une paroi transversale 15. Sur la figure 1C, on a represents un diffuseur 17 integre dans une paroi transversale 15. Le diffuseur 17 peut egalement etre menage au niveau du capteur d'image 16, par exemple au niveau dune fenetre, dite fenetre d'entree du capteur d'image, a travers laquelle se propage 10 l'onde lumineuse 14. La fenetre d'entree s'etend entre rechantillon 10 et les pixels du capteur d'image 16. Elle peut etre realisee selon un materiau diffusant, ou peut etre rendue diffusante suite a un traitement de surface. Le diffuseur 17 peut comporter une surface permettant la diffusion ou la diffraction de la lumiere. II peut par exemple s'agir dune surface rugueuse. II peut egalement s'agir d'un element 15 diffusant dont les surfaces sont lisses. La capacite de diffuser peut etrequantifiee par le coefficient de diffusion reduit its', connu de l'homme du métier. Dans ce cas, le coefficient de diffusion reduit du diffuseur 17 est de preference superieur a 0.1 cm', voire superieur a 1 cm'. II est de preference inferieur a 500 cm', voire inferieur a 300 cm', ou a 100 cm'. Le diffuseur 17 utilise peut avoir fait l'objet dune selection prealable, sur la base d'images 20 acquises par le capteur d'image 16, en presence ou en ('absence d'echantillon entre la source de lumiere 11 et le capteur d'image. La phase de selection est detainee dans la suite de la description. La presence d'un tel diffuseur permet de reduire la variabilite des mesures. Les analyses effectuees sont plus precises et/ou plus repetables qu'en ('absence de diffuseur, comme on le 25 montre dans les essais decrits ci-dessous. Une premiere serie d'essais a ete realisee en mettant en oeuvre des essais de coagulation sanguine, comme decrit dans la demande EP2669678. Au cours de ces essais, rechantillon a ete introduit dans la chambre fluidique decrite en lien avec les figures 2a et 2b de W02017006037, et insere dans le dispositif d'analyse decrit en lien avec les figures la et lb de ce document. 30 Les parametres des essais sont les suivants : source de lumiere : diode laser de longueur d'onde 670 nm ; epaisseur de la chambre fluidique : 150 p.m ; 10 capteur d'image : CMOS, au format VGA, comportant des pixels de 5 pm x 5 p.m ; distance entre la source de lumiere et rechantillon : 5 cm ; distance entre rechantillon et le capteur d'image : 3 mm. rechantillon utilise etait du sang total, auquel on a ajoute un reactif de coagulation 5 (thromboplastine). On a acquis des images de rechantillon selon une frequence d'acquisition de 10Hz, le temps de pose de chaque image etant de 100 ms. On a selectionne, sur chaque image, une region d'interet (200 pixels x 20 pixels), et on a calcule un coefficient de correlation entre les regions d'interet de deux images successives. Des mesures ont ete effectuees sans diffuseur. Des mesures ont ete egalement effectuees en interposant un diffuseur 17 entre la source de 10 lumiere 11 et rechantillon 10, le diffuseur 17 etant plaque contre une paroi transversale 15 de la chambre fluidique 13. Le diffuseur utilise, designs par D1, etait compose d'un papier calque de 70g/m2, d'epaisseur comprise entre 60 et 70 p.m. Les figures 2A et 2B representent revolution temporelle du coefficient de correlation respectivement sans et en presence du diffuseur, en fonction du temps. On observe que la coagulation est observee dans les deux configurations, le 15 phenomene de coagulation etant represents par une double fleche sur chacune de ces figures. Les mesures ont ete repetees, en suivant le meme protocole, a partir d'un meme sang, 4 fois en ('absence du diffuseur et 4 fois en presence du diffuseur. Au cours de chaque mesure, on a estime le temps de coagulation Tc, tel que precedemment defini, auquel on considere que la coagulation est atteinte. 20 On a determine, dans chaque configuration, un coefficient de variation CV (K.) correspondent a recart type du temps de coagulation 6(Tc) sur la moyenne du temps de coagulation Tc, de telle sorte que CV (K.) = 6(Tc) Tc Selon la premiere configuration, sans diffuseur, CV (K.) = 12.4 10 -3. Selon la deuxieme configuration, en presence du diffuseur, CV (K.) = 8.5 10 -3. 25 Ainsi, le diffuseur 17 permet de reduire la dispersion du temps de coagulation Tc mesure, la dispersion etant quantifiee par le coefficient de variation. La reproductibilite des mesures est donc amelioree. Une deuxieme serie d'essais a ete realisee, en effectuant un dosage de la glycemie dans des echantillons comportant du sang total. Les parametres experimentaux sont similaires a ceux 30 listes en lien avec la premiere serie d'essais. Sur chaque echantillon, 500 mesures ont ete effectuees. 11 Le dosage de la glycemie a ete realise par le declenchement dune double reaction enzymatique a partir du glucose present dans le sang. L'echantillon etait du sang total, auquel des enzymes (Diaphorase et Glucose dehydrogenase) ont ete ajoutees, ainsi qu'un sel de tetrazolium, aboutissant a la formation d'un indicateur colore (Formazan), dont la concentration depend de 5 la quantite de glucose dans rechantillon. La reaction colorimetrique engendree est connue, et est par exemple decrite dans EP3115770, cite dans fart anterieur. Dix minutes apres le mélange, le sang a ete introduit dans Ia chambre fluidique 13. On a realise 500 images de rechantillon, a Ia frequence de 10 images par secondes, le temps de pose de chaque image etant de 0.1 s. A ce stade, on considere que Ia transmission du sang est stabilisee. Autrement dit, les fluctuations 10 entre les differentes images ne sont representatives que du bruit de mesure, et ne sont pas !lees a une evolution de Ia reaction colorimetrique dans rechantillon. On a selectionne, sur chaque image acquise, une region d'interet de 80 x 80 pixels, dont on a mesure l'intensite moyenne, exprimee en niveaux de gris GL. On a ensuite calcule un coefficient de variation : 15 CV(GL) = 0- (GGLL ) 06 GL designe l'intensite moyenne sur les 500 images acquises ; 6(GL) represente l'ecart-type. Trois echantillons ont ete testes, et pour chaque echantillon, on a utilise une premiere configuration, sans diffuseur, et une deuxieme configuration, avec le diffuseur Dl. 20 Lorsqu'aucun diffuseur n'etait utilise, les coefficients de variation CV(GL) ont pris les valeurs respectives de 0.29 %, 0.59% et 0.68 %. En presence d'un diffuseur, les coefficients de variation ont pris les valeurs respectives de 0.18 %, 0.18% et 0.16 %. Comme constate suite a la premiere serie d'essais, la presence d'un diffuseur reduit la dispersion des mesures et ameliore leur reproductibilite. 25 Au cours dune troisieme serie d'essais, on a utilise la chambre fluidique 13 vide, cette derniere ayant fait l'objet de mesures temporellement espacees. On a ainsi acquis une premiere image a un instant t1, puis : - une deuxieme image, a ti + 11 minutes ; - une troisieme image, a ti + 17 minutes ; 30 - une quatrieme image, a ti + 26 minutes ; - une cinquieme image, a ti + 37 minutes ; 12 - une sixieme image, a ti. + 49 minutes ; - une septieme image, a t1 + 59 minutes ; - une huitieme image, a t1 + 70 minutes ; - une neuvieme image, a ti + 78 minutes ; 5 - une dixieme image, a ti + 87 minutes. On a ensuite determine une region d'interet de 200 pixels x 200 pixels sur chaque image, dont on a obtenu l'intensite moyenne I. On a calcule un coefficient de variation de l'intensite moyenne I de chaque image, note CV(I), tel que CV(I) = c*, 00 10 - / designe la moyenne des intensites moyennes des regions d'interet des images; - o-(/) represente l'ecart-type de l'intensite moyenne de chaque image. Les essais ont ete effectues sans diffuseur, ainsi qu'avec le diffuseur D1, tel que precedemment decrit, ainsi qu'avec un diffuseur D2, forme d'un papier calque de densite 90 g/m2. En ('absence de diffuseur, CV(I) = 3.07 %. 15 En presence du diffuseur D1, CV(I) = 0.47 %. En presence du diffuseur D2, CV(I) = 0.67 %. De meme que dans la premiere serie d'essais et la deuxieme serie d'essais, la reproductibilite des mesures est amelioree. Ainsi, lorsqu'on effectue une analyse d'un echantillon a partir dune image acquise selon une 20 configuration sans lentille, ('interposition d'un diffuseur, comme precedemment decrit, permet d'ameliorer la reproductibilite des mesures. Le diffuseur peut etre choisi en fonction du coefficient de diffusion, ou du coefficient de diffusion reduit, du materiau qui le constitue. Des plages de valeurs ont ete indiquees ci-avant. Le diffuseur peut egalement etre selectionne de fawn experimentale, en effectuant differentes 25 images sans echantillon interpose entre la source de lumiere et le capteur d'image, et en determinant une intensite moyenne dans une region d'interet predeterminee, ou dans ('ensemble de ('image, selon le principe decrit en lien avec la troisieme serie d'essais. Un diffuseur est retenu s'il permet d'obtenir une reduction de la dispersion des images par rapport a la configuration sans diffuseur. La dispersion des images peut etre quantifiee par un coefficient 30 de variation, comme defini en lien avec la troisieme serie d'essais. On peut egalement etablir un 13 indicateur de dispersion de l'intensite des pixels de chaque image, et etablir une moyenne ou une mediane des indicateurs de dispersion ainsi calcules. La selection du diffuseur peut egalement etre realisee en utilisant un echantillon de calibration, dont on maitrise les proprietes optiques de diffusion, par exemple de l'intralipide, et en 5 effectuant une serie d'images avec et sans diffuseur. Les figures 3A, 3B et 3C illustrent une distribution de l'intensite des pixels sur une zone d'interet de 200 x 200 pixels sur une image acquise en utilisant respectivement aucun diffuseur, puis les diffuseurs D1 et D2. On observe que les diffuseurs D1 et D2 permettent un resserrement de chaque distribution, temoignant ainsi qu'une moindre dispersion des resultats. Ce type d'essai permet de selectionner l'un de ces 10 diffuseurs pour ('utiliser dans le dispositif comme precedemment decrit. L'invention pourra etre mise en oeuvre dans des domaines de ('analyse d'un fluide, par exemple ('analyse d'un fluide biologique, tel du sang, mais egalement dans le domaine du controle d'echantillons dans d'autres domaines industriels, par exemple l'agroalimentaire ou le controle de l'environnement. L'invention ne se limite pas a ('observation d'echantillons liquide, et peut 15 s'appliquer a ('observation d'echantillons solides, par exemple des residus secs ou des lames de tissus, de type lame d'anatomopathologie, REVENDICATIONS1. Dispositif d'analyse d'un echantillon comportant : une source de lumiere (11), configuree pour emettre une onde lumineuse (12), dite onde lumineuse incidente, vers un echantillon (10), Ia source de lumiere etant couplee a un filtre spatial (18) ou non couplee a un filtre spatial ; un support (10s), destine a recevoir rechantillon analyse, definissant une zone de support (Zs), de telle sorte que lorsque rechantillon est dispose sur le support, it s'etend selon la zone de support; - un capteur d'image {16), configure pour recevoir une image de rechantillon illumine par la source de lumiere (11), aucune optique de grossissement ou de formation d'image n'etant disposee entre le capteur d'image et la zone de support (Zs); le dispositif etant caracterise en ce qu'il comporte un diffuseur (17), dispose entre : - la source de lumiere (11) et Ia zone de support (Zs), lorsque Ia source de lumiere (11) et n'est pas couplee a un filtre spatial ; - ou entre le filtre spatial (18) et la zone de support (Zs), lorsque la source de lumiere est couplee a un filtre spatial ; ou entre la zone de support (Zs) et le capteur d'image (16). 2. Dispositif selon Ia revendication 1, dans lequel le filtre spatial (18) est un diaphragme, dispose entre une source de lumiere (11) et la zone support (Zs), la source de lumiere et le diaphragme formant une source de lumiere ponctuelle. 3. Dispositif selon la revendication 2, dans lequel le diffuseur est dispose entre la source de lumiere ponctuelle et la zone de support (Zs). 4. Dispositif selon l'une quelconque des revendications precedentes, dans lequel le diffuseur est dispose entre Ia zone de support (Zs) et le capteur d'image (16). 5. Dispositif selon rune quelconque des revendications precedentes, dans lequel l'onde lumineuse incidente se propage vers rechantillon selon un axe de propagation (Z), le dispositif comportant une chambre fluidique (13), maintenue par le support d'echantillon (10s), et s'etendant dans Ia zone de support (Zs), Ia chambre fluidique (13) etant apte a recevoir rechantillon, Ia chambre fluidique comportant une paroi transversale (15), s'etendant perpendiculairement a l'axe de propagation (Z), ou sensiblement perpendiculairement a ce 15 dernier, selon une tolerance angulaire de ± 20°, la paroi transversale (15) formant le diffuseur (17). 6. Dispositif selon la revendication 5, dans lequel le diffuseur(17) est une surface diffusante ou diffractante menagee dans la paroi transversale (15). 5 7. Dispositif selon Tune quelconque des revendications precedentes, dans lequel le diffuseur (17) est constitue d'un materiau dont le coefficient de diffusion reduit est compris entre 0.1 cm-1 et 500 cm-1 8. Procede d'analyse d'un echantillon (10), rechantillon (10) etant dispose entre une source de lumiere (11) et un capteur d'image (16), le procede comportant les etapes suivantes : 10 a) illumination de rechantillon par la source de lumiere, la source de lumiere etant configuree pour emettre une onde lumineuse (12), dite onde lumineuse incidente, se propageant vers rechantillon, la source de lumiere etant couplee a un filtre spatial (18) ou etant non couplee a un filtre spatial ; b) acquisition dune image de rechantillon par le capteur d'image, le capteur d'image etant 15 exposé a une onde lumineuse (14), dite onde lumineuse d'exposition, se propageant entre rechantillon (10) et le capteur d'image (16), aucune optique de grossissement ou de formation d'image n'etant dispose entre le capteur d'image et l'echantillon; c) analyse de rechantillon en fonction de l'image acquise par le capteur d'image ; le procede etant caracterise en ce qu'un diffuseur de lumiere (17) est dispose : 20 - lorsque la source de lumiere (11) est couplee a un filtre spatial (18), entre le filtre spatial et rechantillon (10) ou entre rechantillon (10) et le capteur d'image (16); - lorsque la source de lumiere (11) nest pas couplee a un filtre spatial (18), entre la source de lumiere (11) et rechantillon (10), ou entre rechantillon (10) et le capteur d'image (16). 25 9. Procede selon la revendication 8, dans lequel le diffuseur de lumiere (17) est dispose entre la source de lumiere (11) et rechantillon (10), de maniere a diffuser l'onde lumineuse incidente (12). 10. Procede selon la revendication 8, dans lequel le diffuseur de lumiere (17) est dispose entre rechantillon (10) et le capteur d'image (16), de fawn a diffuser l'onde lumineuse d'exposition 30 (14). 11. Procede selon Tune quelconque des revendications 8 a 10, dans lequel : 16 - l'onde lumineuse incidente (12) se propage vers rechantillon (10) selon un axe de propagation (Z) ; - rechantillon (10) est dispose dans une chambre fluidique (13) ; - une paroi transversale (15) de la chambre fluidique forme le diffuseur (17), la paroi 5 transversale s'etendant perpendiculairement ou sensiblement perpendiculairement, selon une tolerance angulaire de ±200, a l'axe de propagation (Z). 12. Procede selon Tune quelconque des revendications 8 a 11, dans lequel le diffuseur (17) est selectionne, prealablement aux etapes a) a c), par une phase de selection comportant les etapes suivantes : 10 i) illumination du capteur d'image (16) par la source de lumiere (11); ii) acquisition dune image ou d'une serie d'images par le capteur d'image ; iii) determination d'un niveau d'intensite associe a chaque image, et obtention d'un parametre representant une dispersion des niveaux d'intensite ainsi determines ; les etapes i) a iii) etant mises en oeuvre avec et sans diffuseur (17), le diffuseur etant selectionne 15 lorsque la dispersion en presence de diffuseur est moindre que sans le diffuseur. 13. Procede selon la revendication 12, dans lequel les etapes i) a iii) sont mises en oeuvre en presence d'un echantillon dit de calibration entre la source de lumiere (11) et le capteur d'image (16). 14. Procede selon la revendication 12, dans lequel les etapes i) a iii) sont mises en oeuvre sans 20 echantillon entre la source de lumiere (11) et le capteur d'image (16). 15. Procede selon Tune quelconque des revendications 8 a 14, dans lequel le coefficient de diffusion reduit du diffuseur (17) est compris entre 0.1 cm-1 et 500 cm-1. 25