Brevet FR3083087A1 — publié le 20200103

COMPOSITIONS SOUS FORME D'UNE SOLUTION AQUEUSE INJECTABLE COMPRENANT DU GLUCAGON HUMAIN ET UN CO- POLYAMINOACIDE [0001] Le glucagon humain est une hormone hyperglycémiante d'action brève qui permet d'augmenter la glycémie, corrigeant ainsi un niveau hypoglycémique pouvant résulter d'un excès d'insuline. Il permet la libération de glucose par stimulation de la glycogénolyse hépatique, et possède des propriétés antagonistes de l'insuline (hypoglycémiante). Le glucagon humain est normalement sécrété par les cellules alpha des ilots de Langerhans dans le pancréas lorsqu'une hypoglycémie est détectée. [0002] Le glucagon humain est utilisé à des fins thérapeutiques, comme le traitement d'urgence d'hypoglycémies sévères, encore appelé « rescue », mais également dans un cadre diagnostique lors de la réalisation d'examens médicaux, par exemple pour inhiber la motilité gastro-intestinale. D'autres applications sont également envisagées pour le glucagon humain, en particulier son utilisation dans un système de régulation bi-hormonal de la glycémie aussi appelé pancréas artificiel et dans l'hyperinsulinisme congénital qui est une maladie rare caractérisée par des niveaux très élevés d'insuline. [0003] L'utilisation clinique du glucagon humain a été limitée à cause de certaines de ses propriétés peu favorables pour développer un produit pharmaceutique stable à visée thérapeutique. En effet, le glucagon humain présente une très faible solubilité à pH physiologique, une forte instabilité physique, à cause de sa propension à former des fibrilles sur une large gamme de pH. C'est pour cette raison que les seuls produits commerciaux à base de glucagon humain (Glucagen®, NOVO NORDISK et Glucagon pour injection, ELI LILLY) sont des formes lyophilisées à reconstituer extemporanément. [0004] Les travaux d'Onoue et al. (Pharm. Res. 2004, 21(7), 1274-83) ont montré le caractère potentiellement dangereux de ces fibrilles : le glucagon humain fibrille étant cytotoxique dans des cellules de mammifères en culture. [0005] Outre son instabilité physique, le glucagon humain subit divers types de dégradation chimique. En solution aqueuse, il se dégrade rapidement pour former plusieurs produits de dégradation. Au moins 16 produits de dégradation du glucagon humain ont été identifiés par Kirsh et al. (International Journal of Pharmaceutics, 2000, 203, 115-125). La dégradation chimique de ce glucagon humain est donc rapide et complexe. [0006] La mauvaise stabilité chimique et physique du glucagon humain en solution a conduit des sociétés pharmaceutiques comme NOVO NORDISK, ELI LILLY et plus récemment FRESENIUS KABI à commercialiser ce glucagon humain sous la forme d'un lyophilisat à reconstituer à pH acide (pH . 58 [000382] On entend par « composition stable physiquement » des compositions qui après une certaine durée de stockage à une certaine température satisfont aux critères de l'inspection visuelle décrite dans la pharmacopée européenne, américaine et internationale, c'est-à-dire des compositions qui sont limpides et qui ne contiennent pas 5 de particules visibles, mais également incolores. [000]83] On entend par « composition stable chimiquement » des compositions qui, après stockage un certain temps et à une certaine température, présentent une recouvrance minimum des principes actifs et sont conformes aux cahiers des charges applicables aux produits pharmaceutiques, 10 [000384] Une méthode classique pour mesurer les stabilités des protéines ou peptides consiste à mesurer la formation de fibrilles à l'aide de Thioflavine T, encore appelée ThT. Cette méthode permet de mesurer dans des conditions de température et d'agitation qui permettent une accélération du phénomène, le temps de latence avant la formation de fibrilles par mesure de l'augmentation de la fluorescence. Les 15 compositions selon l'invention ont un temps de latence avant la formation de fibrilles nettement supérieur à celui du glucagon au pH d'intérêt. [000385] On entend par « solution aqueuse injectable» des solutions à base d'eau qui répondent aux conditions des pharmacopées EP et US, et qui sont suffisamment 20 liquides pour être injectées. [000386] On entend par « co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques » des enchainements linéaires non cycliques d'unités acide glutamique ou acide aspartique liées entre elles par des liaisons peptidiques, lesdits enchainements présentant une partie C terminale, correspondant à l'acide carboxylique d'une 25 extrémité, et une partie N-terminale, correspondant à l'amine de l'autre extrémité de l'enchainement. [000387] On entend par« radical alkyl » une chaine carbonée, linéaire ou ramifiée, qui ne comprend pas d'hétéroatome. 30 [000388] Le co-polyaminoacide est un co-polyaminoacide statistique ou bloc. [000389] Le co-polyaminoacide est un co-polyaminoacide statistique dans l'enchaînement des unités glutamiques etiou aspartiques. [000390] Dans les formules les indiquent les sites de rattachements des différents éléments représentés. 35 [000391] Dans les formules I, V et VI, les * indiquent les sites de rattachement des radicaux hydrophobes au co-polyaminoacide. Les radicaux Hy sont rattachés au copolyaminoacide via des fonctions amides. 59 [000]92] Dans les formules II et II', les indiquent, de gauche à droite respectivement, les sites de rattachement de GpR : - au co-polyaminoacide et à GpR si r = 2 ou à GpA si a = 1 ou à GPC si a = O. 5 [000]93] Dans les formules III et III', les * indiquent, de gauche à droite respectivement, les sites de rattachement de GpA : - à GpR si r = 1 ou 2 ou au co-polyaminoacide si r = 0 et - à GpC. [000]94] Dans la formule IV, le * indique le site de rattachement de GpC : 10 à GpA si a = 1, GpR si r = 1 ou 2 et a = 0 ou au co-polyaminoacide si r = 0 et a = 0. [000395] Tous les rattachements entre les différents groupes GpR, GpA et GpC sont des fonctions amides. [000396] Les radicaux 11y, GpR, GpA, GpC, et D sont chacun indépendamment 15 identiques ou différents d'une unité monomérique à l'autre. [000397] Lorsque le co-polyaminoacide comprend une ou plusieurs d'unité(s) aspartique(s), celle(s)-ci peu(ven)t subir des réarrangements structuraux. [000]98] Dans un mode de réalisation la composition selon l'invention est 20 caractérisée en ce que les co-polyaminoacides peuvent en outre comprendre des unités monomériques de formule VIII et/ou VIII' : Ox 0 N H Formule VIII Formule VIII' 25 [000399] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 15 et G, est 3. [000400] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de 30 formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est -CH2-CH2-, GpC répond à la formule IVd CH 3 dans laquelle x = 16 et Cx est CFI3 [000401] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 15 et C. est 5 [000402] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est , GpC répond à la formule IVd dans 10 laquelle x 15 et C. est 3 [000403] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est NH2, GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 15 et est 15 [000404] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, " GpR répond à la formule 11 dans laquelle R est GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 17 et C. est 20 [000405] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est 0 , GpC répond à la formule IVd dans 25 laquelle u = 19 et est CH, [000406] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est -CH2-CH2-, GpC répond à la formule IVa H C 3 30 dans laquelle b = 1, B est 3 , x rr 15 et C. est 61 [000407] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est -CH2-CH2-, GpC répond à la formule IVa dans laquelle b = 1, B est x = 11 et Cr est CH3 [000408] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r =- 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule ll dans laquelle R est O 10 , GpC répond à la formule IVf dans laquelle u = 19 et Cr est c H [000409] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, 15 GpR répond à la formule II dans laquelle R est -CH2-CH2-, GpC répond à la formule IVd dans laquelle 13 et Cr est CH3 [000410] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 1, p 2, 20 GpR répond à la formule II dans laquelle R est -CH2-CH2-, GpA répond à la formule IIIb, GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 9 et Cr est CH3 [000411] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de 25 formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 1, p = 2, GpR répond à la formule II dans laquelle R est -C112-0-12-, GpA répond à la formule Mb. GpC répond à la formule DM dans laquelle x = 11 et G est CH3 30 [000412] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 1, p = 2, 62 GpR répond à la formule II dans laquelle R est -CH2-0-12-, GpA répond à la formule Wb, GpC répond à la formule IVd dans laquelle x 13 et C. est CH3 [00041]] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 1, p = 2, GpR répond à la formule IL dans laquelle R est , GpA répond à la formule Mb, GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 13 et C. est CH3 10 * [000414] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 1, p = 2, GpR répond à la formule II dans laquelle R est -CH.2-CH2-, GpA répond à la formule Mb, 15 GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 15 et C. est eH [000415] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 1, p = 2, GpR répond à la formule II dans laquelle R est -CH2-CH2-, GpA répond à la formule Ma. 20 GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 13 et C. est CH3 [000416] Dans un mode de réalisation, le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r 1, a - 1, p = 2, GpR répond à la formule II dans laquelle R est -(CH2)6-, GpA répond à la formule Mb, 25 GpC répond à la formule 1Vd dans laquelle x = 15 et C. est CH [000417] Les valeurs de degré de polymérisation DP et de ratio i sont estimées par RMN 1H dans D20 en comparant l'intégration des signaux provenant des groupes 30 hydrophobes à celle des signaux provenant de la chaine principale du copolyaminoacide. [000418] Dans un mode de réalisation, le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est un co-polyaminoacide de formule VII ou 35 VIIb, dans laquelle DP = +/- 5, 0,033 is i 0,05 et le radical hydrophobe de formule I 63 est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est -CH2-CH2-, GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 15 et Cx est 5 [000419] Dans un mode de réalisation, le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est un co-polyaminoacide de formule VII ou VIIb, dans laquelle DP = 30 +/- 5, 0,028 5 0,04 et le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule l dans laquelle, r = 1, a = 0, p o 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est GpC 10 répond à la formule IVd dans laquelle x = 17 et Cx est [000420] Dans un mode de réalisation, le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est un co-polyaminoacide de formule VII ou 15 VlIb, dans laquelle DP = 45 +/- 10, 0,018 i 0,028 et le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 17 et C. est T,' 20 [000421] Dans un mode de réalisation, le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est un co-polyaminoacide de formule VII ou VIIb, dans laquelle DP = 60 +/- 10, 0,014 5 i 5 0,02 et le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule dans laquelle, r = 1, 25 a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 17 et Cx est Dans un mode de réalisation, le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et 30 de radicaux hydrophobes est un co-polyaminoacide de formule VII ou VIIID, dans laquelle DP = 25 +/- 5, 0,033 5. i 0,05 et le radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II 0 dans laquelle R est , GpC, repond à la formule IVd dans laquelle x = 19 et Cx est 35 64 [000422] Dans un mode de réalisation, le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est un co-polyarninoacide de formule VII ou VIIh, dans laquelle DP = 25 +/- 5, 0,025 i 5 0,07 et le au moins un radical hydrophobe 5 de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 0, p = 1, GpR répond à la formule II dans laquelle R est 0 , GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 19 et Cx est c H3 10 [00042]] Dans un mode de réalisation, le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est un co-polyaminoacide de formule VII ou VIIb, dans laquelle DP = 27 +/- 5, 0,031 5 i 0,045 et le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 1, p = 2, GpR répond à la formule II dans laquelle R est -042-CH2-, GpA répond à 15 la formule Wb , GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 11 et Cx est CH3 [000424] Dans un mode de réalisation, le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est un co-polyaminoacide de formule VII ou 20 VlIb, dans laquelle DP = 22 +/- 5, 0,037 5 i 0,055 et le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, a = 1, p = 2, GpR répond à la formule II dans laquelle R est -CH2-CH2-, GpA répond à la formule Illb , GpC répond à la formule IVd dans laquelle x 13 et G est CH3 25 [000425] Dans un mode de réalisation, le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est un co-polyaminoacide de formule VII ou VIIb, dans laquelle DP = 22 +/- 5, 0,037 i 0,055 et le au moins un radical hydrophobe de formule I est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle, r = 1, 30 a = 1, p = 2, GpR répond à la formule II dans laquelle R est , GpA répond à la formule IIIb GpC répond à la formule IVd dans laquelle x = 13 et Cx est CH3 [000426] Dans un mode de réalisation, le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est un co-polyaminoacide de formule VII ou VIIb, dans laquelle DP = 60 +/- 10, 0,014 Exemple AB19 : Co-polyaminoacide AB19 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 10500 g/mol [000859] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- 5 polyarninoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (1,64 g, 2,99 r)mol) et au y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (49,3 g, 187 mmol), un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 est obtenu. Extrait sec : 23,4 mg/g DP (estimé par RMN LH) = 65 donc i = 0,015 10 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB19 est de 10293 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) Mn = 10500 g/mol. Exemple AB20 : Co-polyaminoacide AB20 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié à une de ses 15 extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 10400 g/mol [000860] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (0,545 g, 1,00 mmol), du chloroforme (10 mL), du tamis moléculaire 4 Â (3 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite IRN 150 20 (3 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est rincée avec du chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène. Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (10 mL) pour être utilisé directement dans la réaction de polymérisation. [000861] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate N- 75 carboxyanhydride (17,0 g, 64,6 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (30 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4°C, puis la solution de molécule AA6 préparée comme décrit précédemment est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4°C et température ambiante pendant 2 jours, puis précipité dans du diisopropyléther (0,6 L). 30 Le précipité est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (40 mL) puis séché pour donner un solide blanc qui est dissous dans 80 mL de THF. A cette solution sont ajoutés successivement de la DIPEA, (1,7 mL, 9,8 mmol) puis de l'anhydride acétique (0,9 mL, 9,5 mmol). Après une nuit d'agitation à température ambiante, la solution est versée lentement dans du diisopropyléther (480 mL) sur une 35 durée de 30 min et sous agitation. Après 1 h d'agitation, le précipité est filtré, lavé deux fois avec du dlisopropyléther (80 mL) puis séché sous vide à 30°C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-L-glutamique) cappé à une de ses extrémités par un groupement 121 acétyle et modifié à l'autre de ses extrémités par la molécule AA6 sous la forme d'un solide blanc. [000862] Le solide est dilué dans du TFA (65 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans de l'acide acétique (45 mL, 257,0 mmol) est alors 5 ajoutée goutte à goutte et à 4°C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther / eau et sous agitation (780 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (70 mL) puis 10 avec de l'eau (70 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (300 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 440 mL. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,90/0 puis 15 de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4°C. Extrait sec : 21,5 mg/g DP (estimé par RMN tH) = 60 donc I = 0,017 20 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB20 est de 9619 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) Mn = 10400 g/mol. Exemple AB21' : Co-polyaminoacide AB21' - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses 25 extrémités par la molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3478 g/mol [00086]] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 (0,916 g, 1,38 mmol) et au y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (7,19 g, 27,3 mmol), un 30 poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA10 est obtenu. Extrait sec : 14,8 mg/g DP (estimé par RMN = 25 donc i = 0,04 La masse molaire moyenne calculée du co-polyarninoacide AB21' est de 4364 g/mol. 35 HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3478 g/mol. 122 Exemple AB23 : Co-polyaminoacide AB23 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA14 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3600 g/mol 5 [000864] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide AB14 appliqué à la molécule AA14 sous forme d'amine libre (0,820 g, 1,34 mmol) et au y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (7,75 g, 29,4 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA14 est obtenu. 10 Extrait sec : 16,8 mg/g DP (estimé par RMN 'H) = 22 donc ï = 0,045 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide A623 est de 3897 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3600 g/mol. 15 Exemple AB33 : Co-polyaminoacide AB33 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA15 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 1800 g/mol 1000865] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide ABIA appliqué à la molécule AA15 (0,82 g, 1,34 mmol) et à 7,75 g 20 (29,4 mmol) de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, une solution de poly-L- glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA15 est obtenu. Extrait sec : 16,8 mg/g DP (estimé par RMN 1H) = 22 donc i = 0,045 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB33 est de 3897 g/mol. 25 HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 1800 g/mol. Exemple AB34 : Co-polyaminoacide AB34 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2600 g/mol 30 [000866] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate N- carboxyanhydride (70,9 g, 269,3 mmol) est solubilisé dans du DMF anhydre (125 mL). Le mélange est refroidi à 4 °C, puis une solution de molécule AA4 sous forme d'amine neutre (6,80 g, 12,23 mmol) dans le DMF (35 mL) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 18 h, puis chauffé à 65 °C 35 pendant 2 h. Le milieu réactionnel est alors refroidi à température ambiante et versé goutte-à-goutte dans du diisopropyléther (2,4 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (2 x 125 mL) puis séché sous pression réduite à 30 °C pour donner un solide blanc. Le solide est solubilisé dans du 123 N,N-diméthylacétamide (DMAc, 150 mL) puis du Pd/A1203 (6 g) est ajouté sous atmosphère d'argon. Le mélange est placé sous atmosphère d'hydrogène (10 bar) et agité à 60 °C pendant 24 h. Après refroidissement à température ambiante et filtration du catalyseur sur fritté P4 puis sur membrane Omnipore 0,2 pm PTFE hydrophile, une solution d'eau à pH 2 (900 mL) est coulée goutte-à-goutte sur la solution de DMAc, sur une période de 45 min et sous agitation. Après 18 h sous agitation, le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec de l'eau puis séché sous pression réduite à 30 °C. Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (1,25 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 1 N. Le pH est ensuite ajusté à pH 12 et la solution est 10 maintenue sous agitation pendant 1 It Après neutralisation à pH 7, la solution est filtrée sur 0,2 pm, diluée avec de l'éthanol afin d'obtenir une solution contenant 30 °/0 massique d'éthanol, puis filtrée sur filtre de charbon actif (3M R53SLP). La solution obtenue est filtrée sur 0,45 pm et purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perrnéat soit inférieure à 50 pS/crn. La 15 solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C. Extrait sec : 38,1 mg/g DP (estimé par RMN 1-H) = 23 donc i = 0,043 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB34 est de 3991 g/mol. 20 HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2600 g/mol. Exemple AB35 Co-polyaminoacide AB35 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la moUéculmAA14~1 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2600 g/mol 25 [000867] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide AB34 appliqué à la molécule AA14-1 (0,4 g, 0,65 mmol) en solution dans le chloroforme (6,5 inL) et à 3,79 g (14,4 mmol) de y-benzyl-L-glutamate Ncarboxyanhydride en solution dans le DMF (6,5 mL), et en omettant l'étape de filtration sur charbon actif, une solution de pn|y'L'g|utannatedc sodium modifié à une de ses 30 extrémités par la noulécu|e4A14-1 est obtenu.Extrait sec : 21,0 mg/g DP (estimé par RMN 'H) = 22 donc i = 0,045 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB35 est de 3896 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2600 g/mol. 35 124 Exemple AB36 : Co-polyaminoacide AB36 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA16 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol [000868] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide AB34 appliqué à la molécule AA16 (3,28 g, 4,67 mmol) et à 27,02 g (102,6 mmol) de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, une solution de poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA16 est obtenu. Extrait sec : 23,9 mg/g DP (estimé par RMN 'H) = 22 donc ï = 0,045 10 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB36 est de 3987 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) Mn = 2800 g/mol. Exemple AB37: Co-polyaminoacide AB37 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA17 et ayant une masse 15 molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol [000869] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide AB34 appliqué à la molécule AA17 (4,50 g, 9,73 mmol) et à 56,33 g (214,0 mmol) de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, une solution de poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA17 est obtenu. 20 Extrait sec : 26,8 mg/g DP (estimé par RMN 'H) 24 donc i = 0,042 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB37 est de 4049 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/mol. 25 Partie B: BB : synthèse des des composés intermédiaires hydrophobes Hy permettant d'obtenir les radicaux -Hy dans lesquelles p = 2 [000870] Les composés intermédiaires hydrophobes sont représentés dans le tableau 30 suivant par la molécule hydrophobe correspondante avant greffage sur le co- polyaminoacide. COMPOSES INTERMEDIAIRES HYDROPHOBES CeHis 'NH 126 COMPOSES INTERMEDIAIRES HYDROPHOBES H2N r-N ...1)13E127 C"H27 C13H 27 N° - BA4 BAB BA7 Tableau ld : Liste des composés intermédiaires hydrophobes synthétisées selon l'invention. 127 Part BA : Synthèse des composés intermédiaires hydrophobes dans lesquelles p = 2 Exemple BA1 : molécule BA1 5 Molécule 51 ; produit obtenu par la réaction entre l'acide décanoïque et la L-proline. [000871] A une solution d'acide décandique (14,28 g, 82,91 mmol) dans le THF (520 mL) à 0°C sont ajoutés successivement du dicyclohexyle carbodiimide (DCC) (16,29 g, 78,96 mmol) et du N-hydroxysuccinimide (NH3) (9,09 g, 78,96 mmol). Après 60 h d'agitation à température ambiante, le milieu est refroidi à 0°C pendant 20 min, filtré 10 sur fritté. De la L-proline (10 g, 86,86 mmol), de la diisopropyléthylamine (D1PEA) (68,8 mL) et de l'eau (60 mL) sont ajoutés au filtrat. Après 24 h d'agitation à température ambiante, le milieu est dilué avec de l'eau (300 mL). La phase aqueuse est lavée avec de l'acétate d'éthyle (2 x 250 mL), acidifiée jusqu'à pFI -1 avec une solution aqueuse d'HO 1 N puis extraite avec du dichlorométhane (3 x 150 mL). Les phases organiques 15 combinées sont séchées sur NazSO4, filtrées, concentrées sous vide et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle). Rendement : 14,6 g (6996) RMN (CDCI3, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,26 (12H) ; 1,65 (2H) ; 2,02 (3H) ; 2,34 (2H) ; 2,41 (1H) ; 3,48 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,58 (1H). 20 LC/MS (ESI) : 270,2 ; (calculé ([M+11]+) : 270,4). Molécule 82 : produit obtenu par la réaction entre la molécule BI et la L-lysine. [000872] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BI appliqué à la molécule B1 (14,57 g, 54,07 mmol) et à la L-lysine (4,15 g, 28,39 25 mmol), une huile jaune est obtenue. Rendement : 10,4g (93%) RMN 1H (CDCI3, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,26 (24H) ; 1,35-1,65 (8H) ; 1,85-2,35 (12H) ; 2,53 (0,2H) ; 2,90 (0,8H) ; 3,45-3,75 (5H) ; 4,50-4,70 (31-1) ; 7,82 (1H). LC/MS (ESI) : 649,6 ; (calculé ([M+H]/) : 649,9). 30 Mol:écule B3 : produit obtenu par réaction entre la molécule B2 et la Bocéthylènediamine. [00087]] A une solution de molécule 52 (16,4 g, 25,27 mmol) dans le THE (170 mL) sont ajoutés de la DIPEA (8,80 mL) et du 2-(1H-benzotriazol-1-y1)-1,1,3,3- 35 tétraméthyluronium tétrafluoroborate (TBTU, 8,52 g, 26,54 mmol) à température ambiante. Après 30 min d'agitation, de la Boc-éthylènediamine (4,45 g, 27,8 mmol) est ajoutée. Après agitation à température ambiante pendant 2 h, le solvant est évaporé sous pression réduite et le résidu est dilué avec de l'acétate d'éthyle (400 mL). La phase 128 organique est lavée avec de l'eau (250 mL), une solution aqueuse saturée de NaHCO3 (250 ml), une solution aqueuse de 1 N HCI (250 mL), une solution aqueuse saturée en NaCI (250 mL) et est séchée Sur Na2SO4. Après hltration et concentration sous vide, le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle, 5 méthanol) pour donner une huile incolore. Rendement : 12,8 g (64%) RMNI-H (CDC13, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,25-1,60 (42H) ; 1,80 2,05 (4H) ; 2,15-2,45 (9H) ; 3,10-3,75 (10H) ; 4,30 (1H) ; 4,50 (2H) ; 5,50 (0,6H) ; 5,89 (0,2H) ; 6,15 (0,2H) ; /,03 (1H) ; 7,47 (1H). l0 LC/MS (ES[) : 791,8 ; (calculé ([M+Hr) : 792,1). Molécule BA1 [000874] A une solution de la molécule B3 (12,78 g, 16,15 mmol) dans le dichlorométhane (110 ruL) à 5°C est ajoutée une solution de HCI 4 N dans le dioxane 15 (20,2 mL). Après 20 h d'agitation à 5°C, le milieu est concentré sous vide. Le résidu obtenu est dissous dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA1 sous forme de sel de chlorhydrate. Rendement : 11,4 g (97%) RMN 1H (DMSO-ds, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,25-1,50 (33H) ; 1,57(1M) ; 1,70-2,40 (12H) ; 20 2,82 (2H) ; 3,00 (2H) ; 3,25-3,70 (6H) ; 4,05-4,50 (31-1) ; 7,75-8,45 (6H). LC/MS (ESI) : 691,6 ; (calculé ([M+H]f) : 692,0). Exemple BA2 : molécule BA2 Molécule 84 Produit obtenu par la réaction entre l'acide laurique et la L-proline. 25 [000875] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 51 appliqué à l'acide laurique (31,83 g, 157,9 rtirnol) et à la L-proline (20 g, 173,7 mmol), une huile jaune est obtenue. Rendement : 34,3 g (73°k) RMN 1-51 (CDCI3, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,26 (16H) ; 1,70 (2H) ; 1,90-2,10 (3H) ; 2,35 30 (2H) ; 2,49 (1H) ; 3,48 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,60 (1H). LC/MS (ESI) : 298,2 ; (calculé ([M+H]+) : 298,4). CIMOçuie J35 Produit obtenu par la réaction entre la molécule 54 et la L-lysine. [000876] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 35 51 appliqué à la molécule 54 (33,72 g, 113,36 mmol) et à la L-lysine (8,70 g, 59,51 mmol), un solide blanc est obtenu. Rendement : 26,2 g (66°k) 129 RMN (CDCI3, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,26 (32H) ; 1,35-1,65 (8H) ; 1,85-2,35 (15H) ; 2,87 (1H) ; 3,40-3,75 (5H) ; 4,50-4,75 (3H) ; 7,87 (1H). LC/MS (ESI) : 705,6 ; (calculé ([M+Htr) : 706,0). 5 MolécuIe : Produit obtenu par réaction entre la Boc-éthylènediamine et la molécule B5. [000877] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B5 (25,74 g, 36,51 mmol) et à la Boc-éthylènediamine (6,43 g, 40,16 mmol), une huile incolore est obtenue. 10 Rendement : 30,9 g (quantitatif) RMN 1H (CDCI3, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,35-1,65 (50H) ; 1,85-2,35 (13H) ; 3,05-3,75 (10H) ; 4,25-4,65 (3H) ; 5,50 (0,4H) ; 5,88 (0,2H) ; 6,16 (0,2H) ; 7,08 (1H) ; 7,26 (1H) ; 7,49 (0,2H) LC/MS (ESI) : 847,8 ; (calculé ([M+Hr) : 848,2). 15 Molécule BA2 [000878] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BA1 appliqué à la molécule 56 (30,9 g, 36,47 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est dissous dans le méthanol et évaporé sous vide, cette 20 opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA2 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite. Rendement : 27,65 q (970/0) RMN (DMSO-ds, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,10-2,40 (54H) ; 2,75-3,15 (4H) ; 3,25-3,60 (6H) ; 4,05-4,50 (3H) ; 7,50-8,50 (6H). 25 LC/MS (ESI) : 747,6 ; (calculé ([M+Hr) : 748,1). Exemple BA3 : molécule BA3 Molécule Produit obtenu par la réaction entre l'acide myristique et la L-proline. [000879] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 30 51 appliqué à l'acide myristique (18,93 g, 82,91 mmol) et à la L-proline (10 g, 86,86 mmol), une huile jaunâtre est obtenue. Rendement : 20 g (78°70) RMN 1H (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,28 (20H) ; 1,70 (2H) ; 1,90-2,10 (3H) ; 2,36 (2H) ; 2,51 (1H) ; 3,47 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,61 (1H). 35 LC/MS (ESI) : 376,7 ; (calculé ([M+H]+) : 376,6). Molécule 58 Produit obtenu par la réaction entre la molécule B7 et la L-lysine [000880] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 51 appliqué à la molécule B7 (20,02 g, 61,5 mmol) et à la L-lysine (4,72 g, 32,29 rnmol), un solide blanc est obtenu. 5 Rendement : 12,3 g (53%) RMN 1H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,26 (40H) ; 1,351,50 (6H) ; 1,50-2,10 (10H) ; 2,10-2,25 (4H) ; 3,01 (2H) ; 3,31-3,55 (4H) ; 4,10-4,40 (31-1) ; 7,68 (0,6H) ; 7,97 (IH) ; 8,27 (0,4H) ; 12,50 (IH). LC/MS (ESI) : 761,8 ; (calculé ([M+H]+l : 762,1). 10 Molécule 69 Produit obtenu par la réaction entre la Boc-éthylènediamine et la molécule B8. [000881] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B8 (12 g, 15,77 mmol) et à la Boc-éthylènediamine (3,03 g, 15 18,92 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (acétate d'éthyle, méthanol). Rendement : 12,5 g (880/0) RMN 1H (DMSO-dr, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,20-1,55 (55H) ; 1,50-2,25 (I4H) ; 2,95-3,10 (6H) ; 3,31-3,55 (4H) ; 4,10-4,40 (3H) ; 6,74 (1H) ; 7,60-8,25 (3H). 20 LC/MS (ESI) : 904,1 ; (calculé ([M+H]+) : 904,3). Molécule BA3 [000862] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B9 (12,5 g, 13,84 mmol), le résidu obtenu après 25 concentration sous vide est dissous dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA3 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite. Rendement : 9,2 g (790/0) RMN 11-I (DMSO-c15, ppm) 0,85 (6H) ; 1,10-1,65 (48H) ; 1,70-2,35 (12H) ; 2,85 (2H) ; 30 3,01 (2H) ; 3,25-3,65 (6H) ; 4,10-4,50 (3H) ; 7,70-8,40 (61-1). LC/MS (ESI) : 803,9 ; (calculé ([M+H]t) : 804,2). Exemple BA4 molécule BA4 Molécule 810 Produit obtenu par la réaction entre la molécule B8 et le Boc-1-amino- 35 4,7,10-trioxa-13-tridécane. [000883] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 53 appliqué à la molécule 50(29,8U g, 39,15 mmol) et au Boc-1-amino-4,7,10-trioxa13-tridécane (15,05 g, 46,96 mmol), une huile épaisse incolore est obtenue. 131 Rendement : 25,3 g (61%) RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,25-2,35 (75H) ; 2,85-3,20 (6H) ; 3,25-3,65 (16H) ; 4,10-4,45 (3H) ; 6,38 (0,1H) ; 6,72 (0,9H) ; 7,50-8,25 (3H). LC/MS (ESI) : 1064,2 ; (calculé ([M+H]+) : 1064,5). 5 Molécule BA4 [000884] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BA1 appliqué à la molécule B10 (25,3 g, 23,8 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est dissous dans le méthanol et évaporé sous vide, cette 10 opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA4 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite. Rendement : 20,02 g (8496) RMN 1H (DMSO-ds, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,15-2,35 (66H) ; 2,80-3,20 (6H) ; 3,30-3,65 (16H) ; 4,10-4,45 (3H) ; 7,55-8,60 (6H) 15 LC/MS (ESI) : 964,9 ; (calculé ([M-F1-1]+) : 964,6). Exemple BAS : molécule BAS Molécule :11 : Produit obtenu par réaction entre le chlorure de palmitoyle et la L-proline [000885] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 20 A26 appliqué au chlorure de palmitoyle (15,39 g, 55,99 mmol) et à la L-proline (12,89 g, 111,98 mmol), un solide blanc de molécule est obtenu. Rendement : 19,10 g (96%) RMN (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,19-1,45 (24H) ; 1,58-1,74 (2H) ; 1,88-2,14 (3H) ; 2,15-2,54 (3H) ; 3,47 (1H) ; 3,58 (1H) ; 4,41 (0,1H) ; 4,61 (0,9H) 6,60-8,60 (1H). Molécule 812 Produit obtenu par réaction entre la molécule 811 et la L-Lysine [000886] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule B11 (19,10 g, 54,02 mmol) et à la L-lysine (4,15 g, 28,36 30 rnmol), un résidu huileux est obtenu après concentration du milieu réactionnel sous pression réduite. Ce résidu est dilué dans de l'eau (150 mL), lavé à l'acétate d'éthyle (2 x 75 rriL) puis la phase aqueuse est acidifiée jusqu'à pH 1 par addition lente de HCI 6 N. Le produit est extrait 3 fois au dichlorométhane, la phase organique est séchée sur Na2SO4 puis filtrée et concentrée sous pression réduite pour donner 11,2 g de résidu .3S huileux jaune. Parallèlement, la phase organique d'acétate d'éthyle précédente est lavée avec une solution aqueuse de HCI 2 N (2 x 75 mL), une solution aqueuse saturée en NaCI (75 mL), séchée sur Na2SO4, filtrée et concentrée pour donner 10,2 g de résidu 132 huileux jaune. Un solide blanc est obtenu après recristallisation de chacun de ces résidus dans l'acétone. Rendement : 11,83 g (54%) RMN 'H (CDCI3, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,06-2,44 (70H) ; 2,78-2,96 (1H) ; 3,35-3,75 (5H) 5 ; 4,28-4,43 (0,1H) ; 4,43-4,52 (0,2H) ; 4,52-4,61 (1,8H) ; 4,61-4,75 (0,9H) ; 7,74- 8,02 (2H). LC/MS (ESI) : 818,0 ; (calculé ([M+H]+) : 818,7). Molécule B13 : Produit obtenu par couplage entre la molécule B12 et la Bocéthylènediamine 10 [000887] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A27 appliqué à la molécule B12 (18,00 g, 22,02 mmol) en solution dans le THF et à la Boc-éthylènediamine (4,23 g, 26,43 mmol), un solide blanc est obtenu après recristallisation deux fois dans l'acétonitrile 15 (0,35H). LC/MS (ESI) : 960,4 ; (calculé ([M+H]) : 960,8). 20 Molécule BAS [000888] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule 1313 (24,4 g, 25,43 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est solubilisé dans du dichlorométhane (150 mL), la phase 25 organique est lavée 2 fois avec une solution aqueuse de soude 2 M (90 mL). De l'acétonitrile (120 mL) est ajouté et le dichlorométhane est éliminé par concentration sous pression réduite. Le milieu est ensuite laissé au repos pendant 72 h et un solide blanc est obtenu après filtration et rinçage à l'acétonitrile puis séchage sous pression réduite. Cette opération est répétée 4 fois. 30 Rendement : 14,28 g (65%) RMN 1+1 (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,06-2,32 (70H) ; 2,53-2,63 (2H) ; 2,89-3,61 (10H) ; 4,04-4,43 (3H) ; 7,55-7,62 (0,65H) ; 7,65-7,72 (0,65H) ; 7,80 (0,65H) ; 7,91 (0,35H) ; 8,03 (0,35H) ; 8,14-8,23 (0,35H). LC/MS (ESI) : S60,0 ; (calculé ([M+H]+) : 860,8). Rendement : 17,5 g (83%) RMN 1E1 (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,15-2,29 (79H) ; 2,92-3,12 (6H) ; 3,30-3,59 (4H) ; 4,06-4,13 (0,65H) ; 4,16-4,29 (2H) ; 4,38-4,42 (0,35H) ; 6,71-6,76 (1H) ; 7,60- 7,69 (1,3H) ; 7,76-7,81 (0,65H) ; 7,93-7,97 (0,35H) ; 8,00-8,04 (0,35H) ; 8,10-8,17 35 133 Exemple BA6 : molécule BA6 Molécule 814 : produit obtenu par couplage entre la molécule A26 et l'acide 2,3- diaminopropionique [000889] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 5 f31 appliqué à la molécule A26 (80,00 g, 245,78 mmol) et au dichlorhydrate de l'acide 2,3-diaminopropionique (22,84 g, 129,04 mmol), un solide blanc est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile. Rendement : 69y (7896) RMN 111 (DMSO-d6, ppm) : 0,86 (6H) ; 1,08-1,38 (40H) ; 1,40-1,55 (4H) ; 1,68-2,30 10 (12H) ; 3,16 3,66 (6H) ; 4,20-4,39 (3H) ; 7,67-8,31 (2H) ; 12,70 (1H). LC/MS (ESI) : 719,4 ; 741,5 ; (calculé ([M-I-Hr) : 719,6 ; ([M-FNa]+) : 741,6). Molécule F115 : produit obtenu par couplage entre la molécule B14 et la Bocéthylènediamine 15 [000890] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A27 appliqué à la molécule B14 (32,00 g, 44,50 mmol) en solution dans le dichlorométhane et à la Boc-éthylènediamine (8,56 g, 53,40 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle, méthanol). 20 Rendement : 24,5 g (64%) RMN 1-H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,16-2,42 (65H) ; 2,89-3,14 (4H) ; 3,17-3,66 (6H) ; 4,11-4,43 (3H) ; 6,77 (1H) ; 7,38-8,23 (3H). LC/MS (ESI) : 861,7 ; (calculé ([M+H]+) : 861,7). 25 Molécule BA6 [000891] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAS appliqué à la molécule 315 (24,50 g, 28,45 mmol), un solide blanc est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile. Rendement : 19,7 g (91%) 30 RMN 1-H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,10-2,40 (58H) ; 2,51-2,62 (2H) ; 2,90-3,16 (2H) ; 3,16-3,67 (6H) ; 4,04-4,47 (3H) ; 7,33-8,27 (3H). LC/MS (ESI) : 761,5 ; (calculé ([M+H]+) : 761,6). Exemple BA7 : molécule BA7 N-(tert-butoxycarbonyI)-1,6- 35 Molécule B16 : produit obtenu par la réaction entre le la préparation de la molécule N-(tert-butoxycarbonyI)-1,6- diaminohexane et la molécule 88 [000892] Par un procédé similaire à celui utilisé pour A27 appliqué à la molécule B8 (10 g, 13,14 mmol) et au 134 diaminohexane (3,41 g, 15,77 mmol) dans le dichlorométhane, un solide blanc est obtenu après recristallisation dans leacétonitrile. Rendement : 10,7 g (85%) RMN 11-1 (CDCI3, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,17-2,40 (79H) ; 3,00-3,71 (10H) ; 4,26-4,58 5 (3H) ; 4,67 (1H) ; 6,74 (1H) ; 7,34-7,49 (2H). LC/MS (ESI) : 959,9 ; (calculé ([M+H]F) : 959,8). Molécule BA7 [000893) Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 10 BAI appliqué à la molécule 816 (10,5 g, 10,94 mmol), une solution aqueuse de NaOH 2N est ajoutée goutte à goutte au milieu réactionnel refroidi à 0°C. La phase aqueuse est extraite au dichlorométhane puis la phase organique est lavée 3 fois avec une solution aqueuse de NaCI 5%. Après séchage sur Na2SO4, la phase organique est filtrée, concentrée sous vide et le résidu est recristallisé dans l'acétonitrile. 15 Rendement : 5,4 g (58%) RMN 1H (CDCI3, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,19-2,40 (72H) ; 2,67 (2H) ; 3,03-3,70 (DU); 4,26-4,57 (3H) ; 6,71 (1H) ; 7,39 7,49 (2H). LC/MS (E51) : 859,8 ; (calculé ([Ml-H]+) : 859,7). 20 OB: Synthèse des copolyaminoacides Co-polyaminoacides définis de formules VII ou VIIb lal CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES Na tHe FIN i = 0,034, OP (m) = 29 = 11 ou pyroglutamate CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES ONa RI = 0,042, DP (m) = 24 Ri = H ou ro lutamate BB16 = 0,043, DP (m) = 23 Ri = H ou pyroglutamate 136 CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES Onla 1 = 0,015, DP (m) = 65 Ri =Hou pyroglutamate i = 0,025, DP (m) = 40 Ri = hou pyroglutamate BB18 N° BB17 137 N° CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES BB19 CN3 -4c2.c.ztç''' r \ - f HN , ,,' - , i = 0,04, DP (m) = 25 = H ou pyroqlutamate BB20 - ONa 0 H o 01-3F127 i = 0,059, DP (m) = 17 = Il ou pyroqlutamate 138 CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES 7 HN = 0,11, DP (m) = 9 H ou pyroqIutamate ONa H H = 0,048, DP (m) = 21 Ri = H ou pyrocilutamate 139 CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES ONai BB24 i = 0,048, DP (m) = 21 = H ou pyroqiutannate Ni 1= 0,040, DP (m) = 25 = H ou ovroglutamate CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES BB25 O ONa N C15 H31 - 0,043 , DP (m) = 23 Ri = H ou pyroglutamate i = 0,048, DP (m) = 21 Ri = H ou pyroglutamate BB26 C151-131 141 NH = 0,089, DP (m+n) = 22 C 13 H27 NH "NNH C13 H27 Hy = 0 Ri =1-10u pyroglutamate 142 143 144 66343 = 0,09, DP (m) = 22 H27 NH H 3 27 i = 0,04, DP (m) = 25 Rt = H ou pyroelutamate Tableau le : liste des co-polyaminoacides synthétisés selon l'invention, Part BB : synthèse des co-polyaminoacides Exemple BB14 : co-polyaminoacide BB14 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA2 et ayant une masse molaire 5 moyenne en nombre (Mn) de 4020 g/mol [000894] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (2,12 g, 2,70 mmol), du chloroforme (40 mL), du tamis moléculaire 4 Â (1,5 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite IRN 150 (1,5 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est rincée avec du 10 chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène. Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (20 na) pour être utilisé directement dans la réaction de polymérisation. [000895] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate N- carboxyanhydride (18 g, 68,42 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF 15 anhydre (100 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4°C, puis la solution de molécule BA2 préparée comme décrit précédemment est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4°C et température ambiante pendant 2 jOurS, puis chauffé à 65°C pendant 2 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à température ambiante puis versé goutte à goutte dans 20 du diisopropyléther (1,2 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (100 mL) puis séché sous vide à 30°C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (105 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 3390 dans de l'acide acétique (38 mL, 220 mmol) est alors ajoutée goutte à goutte et à 0°C. La solution est agitée pendant 2 h à température 25 ambiante puis est coulée goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther / eau et sous agitation (600 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (200 mL) puis avec de l'eau (100 r)L). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (450 mL) en 30 ajustant le pN à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9% puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7. La solution 35 aqueuse est filtrée sur 0,2 um et conservée à 4°C. Extrait sec : 22,3 mg/g DP (estimé par RMN 1H) = 29 donc i = 0,034 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide B1314 est de 5089 g/mol. 146 HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4020 g/nnol. Exemple BB15 : co-polyaminoacide BB15 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire 5 moyenne en nombre (Mn) de 3610 g/mol [000896] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide B814 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (3,62 g, 4,32 mmol) et à 25,0 g (94,97 mmol) de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu. 10 Extrait sec : 26,5 mg/g DP (estimé par RMN 1H) = 24 donc i = 0,042 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide 5515 est de 4390 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (ca(ibrant PEG) : Mn = 3610 g/mol. 15 Exemple BB16 : co-polyaminoacide BB16 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/mol [000897] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA4 (5,70 g, 5,70 20 mmol) et à 29,99 g (113,9 mmol) de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA4 est obtenu. Extrait sec : 32,3 mg/g DP (estimé par RMN = 23 donc i = 0,043 25 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB16 est de 4399 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/mol. Exemple BB17 co-polyaminoacide BB17 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire 30 moyenne en nombre de 10700 g/mol [000898] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (2,51 g, 3 mmol) et à 52,7 g (200 mmol) de y-benzyl-L-glutamatc N-carboxyanhydridc, un poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu. 35 Extrait sec : 24,5 mg/g DP (estimé par RMN 1H) = 65 donc i = 0,015 La masse molaire moyenne calculée du co-polyarninoacide BB17 est de 10585 g/rnol. FIPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10700 g/mol. 147 Exemple BB18 co-polyaminoacide BB18 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre de 6600 g/mol [000899] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (2,51 g, 3 mmol) et à ]1,6 g (120 mmol) de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu. Extrait sec : 27,3 mg/g DP (estimé par RMN 1-11) = 40 donc i = 0,025 10 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB18 est de 6889 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 6600 g/mol. Exemple BB19 : co-polyaminoacide BB19 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire 15 moyenne en nombre (Mn) de 3400 g/mol [000900] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (36,26 g, 43,2 mmol) et de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (250,0 g, 949,7 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule 8A3 est 20 obtenu. Extrait sec : 22,4 mg/g DP (estimé par RMN 11-I) = 25 donc i = 0,04 La masse molaire moyenne calculée du co-poiyaminoacide Bf319 est de 4540 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3400 g/mol. 25 Exemple BB20 : co-polyaminoacide BB20 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2500 g/mol 30 [000901] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide 5B14 appliqué à la molécule BA3 sous forme d'amine libre (1,017 g, 12,7 mmol) et de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (5,0 g, 19,0 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu. 35 Extrait sec : 11,2 mg/g DP (estimé par RMN 1H) = 17 donc i = 0,059 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB20 est de 3332 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2500 g/moi. 148 Exemple BB21 co-polyaminoacide BB21 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en 5 nombre (Mn) de 1100 g/mol [000902] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA3 sous forme d'amine libre (3,814 g, 4,75 mmol) et de y-benzyl-L-giutamate N-carboxyanhydride (10,0 g, 38,0 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est 10 obtenu. Extrait sec : 16,1 mg/g DP (estimé par RMN 1+1) = 9 donc I = 0,11 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB21 est de 2123 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 1100 g/mol. L5 Exemple BB22 : co-polyaminoacide BB22 - poly-D-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2900 g/mol 20 [000903] Par un procédé similaire â celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA3 sous forme d'amine libre (2,77 g, 3,45 mmol) et de y-benzyl-D-glutamate N-carboxyanhydride (20,0 g, 76,0 mmol), un polyD-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule 8A3 est obtenu. Extrait sec : 15,2 mg/g 25 DP (estimé par RMN iLH) = 21 donc i = 0,048 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide 8522 est de 3936 g/mol. HPL_C-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2900 g/mol. Exemple BB23 : 30 co-polyaminoacide BB23 - copolymère aléatoire d'unité D- ou L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol [000904] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate N- 35 carboxyanhydride (20,0 g, 76,00 mmol) et du y-benzyl-D-glutamate Ncarboxyanhydride (20,0 g, 76,00 mmol) sont places sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (75 mi.) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4°C, puis une solution de molécule BA3 sous forme 149 d'amine libre (5,55 g, 6,91 mmol) dans le chloroforme (14,5 mL) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4°C et température ambiante pendant 18 h, puis chauffé à 65°C pendant 2 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à température ambiante puis versé goutte à goutte dans du dlisopropyléther (1,2 L) sous agitation. Le 5 précipité blanc est récupéré par filtration, lavé trois fois avec du diisopropyléther (80 mL) puis séché sous vide à 30°C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (152 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans de l'acide acétique (106 mL, 220 mmol) est alors ajoutée goutte à goutte et à 0°C, La solution est agitée pendant 3 h à température ambiante puis est coulée goutte à goutte sur un 10 mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther / eau et sous agitation (1,84 L). La phase aqueuse est séparée dans une ampoule de coulée et le pH est ajusté à 7,2 par ajout d'une solution aqueuse de NaOH 10 N. Après ajout d'eau (250 mL), le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,996 puis de l'eau jusqu'à ce que la cnnduct|roétr|edu perméat soit inférieure à 50 pS/cm. 15 La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 25 g/L, filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4°C. [000905] Extrait sec : 28,2 mg/g DP (estimé par RMN 21 donc i = 0,048 20 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB23 est de 3936 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/mol. Exemple BB24 co-polyaminoacide BB24 - copolymère à bloc de poly-Dglutamate et poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par 25 la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol [000906] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-D-glutamate N- carhoxyanhydride (13,5 g, 51,3 rnmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (52 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation 30 complète, refroidi à 0°C, puis une solution de molécule BA3 sous forme d'amine libre (3,43 g, 4,27 mmol) dans du chloroforme (8,6 mL) est introduite rapidement. Le mélange est agité à 0°C pendant 24 h, puis une solution de y-tert-butyl-L-glutamate N-carboxyanhydridc (13,5 g, 58,9 mmol) dans le DMF (15 mL) est ajoutée. Le mélange est alors agité entre 0°C et température ambiante pendant 21 h, puis chauffé à 65°C 35 pendant 2 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à température ambiante puis versé goutte à goutte dans du diisopropyléther (0,8 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé trois fois avec du diisopropyléther (52 mL) puis séché sous vide à 30°C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (96 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans de l'acide acétique (68 mL, 388 rnmol) est alors ajoutée goutte à goutte et à 0°C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther / eau et sous agitation (1,2 L). Après 2 h d'agitation, le mélange 5 hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (100 mL) puis avec de l'eau (100 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (900 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié 10 par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9% puis de l'eau jusqu'à ce que la conductiméthe du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 20 g/L théorique et le pH est ajusté à 7. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4°C. Extrait sec : 23,9 mg/g 15 DP (estimé par RMN I-H) = 25 donc i = 0,04 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB24 est de 4541 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/mol. Exemple BB25 : 20 co-polyaminoacide BB25 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BAS et ayant une masse molaire moyenne en nombre (t4n) de 2800 g/mol [000907] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BAS sous forme d'amine libre (1,70 g, 1,98 25 mmol) et de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (11,46 g, 43,5 mmol), un poly- L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BAS est obtenu. Extrait sec : 19,8 mg/g DP (estimé par RMN IH) = 23 donc i = 0,043 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB25 est de 4295 g/mol. 30 HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/rnol. Exemple BB26 : co-polyaminoacide BB26 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA6 et ayant une masse molaire moyenne en 35 nombre (Mn) de 2900 g/mol [000908] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA6 sous forme d'amine libre (3,05 g, 4,01 151 mmol) et de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (22,78 g, 86,5 mmol), un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA6 est obtenu. Extrait sec : 16,9 mg/g DP (estimé par RMN 1H) = 21 donc i = 0,048 5 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacicle BB26 est de 3894 g/mol. HPLC SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2900 g/mol. Exemple BB27 : co-polyaminoacide BB27 - poly-L-glutamate de sodium modifié à l'une de ses 10 extrémités par la molécule BA3 et modifié par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2300 g/mol [000909] Co-polyaminoacide BB27-1 : acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3600g/mol modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et cappé à l'autre extrémité par l'acide pidolique. 15 [000910] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate N- carboxyanhydride (122,58 g, 466 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (220 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à -10°C, puis une solution de molécule BA3 sous forme d'amine libre (17,08 g, 21,3 mmol) dans le chloroforme (40 aiL) est introduite 20 rapidement. Le mélange est agité entre 0°C et température ambiante pendant 2 jours, puis chauffé à 65°C pendant 4 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à 25°C puis est ajouté de l'acide pidolique (13,66 g, 105,8 mmol), du HOBt (2,35 g, 15,3 mmol) et de !FOC (20,28 g, 105,8 mmol). Après 24 h d'agitation à 25°C, la solution est concentrée sous vide pour éliminer le chloroforme et 50% du DMF. Le mélange 25 réactionnel est alors chauffé à 55°C et 1150 mL de méthanol sont introduit en 1 h, Le mélange réactionnel est alors refroidi à 0°C. Après 18 h, le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé trois fois avec 270 mL de diisopropyl éther puis séché sous vide à 30°C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (390 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans de l'acide acétique (271 mL, 1547 30 mmol) est alors ajoutée goutte à goutte et à 0°C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther / eau et sous agitation (970 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec du diisopropyl éther (380 mL) puis deux fois avec 35 de l'eau (380 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (3,6 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pro puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,90/0, une solution de NaOH 0,1 N, une solution de NaCI 152 0,9%, une solution de tampon phosphate (150 mM), une solution de NaCI 0,9% puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique, filtrée sur 0,2 pm puis acidifié à pH 2 sous agitation par addition d'une solution de HCI à 37%. Le 5 précipité est alors récupéré par filtration, lavé deux fois avec de l'eau puis séché sous vide à 30°C pour obtenir un solide blanc. Co-polyaminoacide BB27 [000911] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- 10 polyaminoacïde BB2 appliqué à la molécule BA3 sous forme d'amine libre (1,206 g, 1,50 mmol) et au co-polyaminoacide BB27-1 (5,5 g, 33,4 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à l'une de ses extrémités par la molécule BA3 et modifié par la molécule BA3 est obtenu. Extrait sec : 19,0 mg/g 15 DP (estimé d'après la RMN 1H) : 22 D'après la RMN 1H i = 0,089 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB27 est de 4826 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2300 g/mol. 20 Exemple BB42 : co-polyaminoacide BB42 - poly-L-glutamate de sodium modifié à un de ses extrémités par la molécule B8 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3200 g/mol [000912] A une solution de molécule B8 (2,366 g, 3,11 mmol) dans le DMF (19,5 25 mL) sont introduits du DCC (0,659 g, 3,19 mmol) et du NHS (0,365 g, 3,17 mmol). Après 16 h d'agitation à température ambiante, la solution est filtrée pour être utilisée directement dans la réaction suivante. [000913] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate N- carboxyanhydride (18,0 g, 68,4 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF 30 anhydre (40 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 0°C, puis de l'hexylamine (0,411 mL, 3,11 mmol) est introduit rapidement. Après 30 h d'agitation à 0°C, la solution de molécule B8 préparée précédemment est additionnée. La solution est agitée entre 0°C et température ambiante pendant 72 h puis coulée goutte à goutte dans du diisopropyléther (0,9 L) 35 sous agitation. Le précipité est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (5 fois 100 mL) puis séché sous vide à 30°C pour donner un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (69 mL), puis la solution est refroidie à 4°C. Une solution de HBr à 33% dans l'acide acétique (48 mL, 0,274 mol) est alors ajoutée goutte à goutte. Le 153 mélange est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (0,8 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et 5 d'eau (70 mL) puis avec de l'eau (70 mL). Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (0,42 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 0,63 L. La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une 10 solution de NaCI 0,9%, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 uS/cm. La solution obtenue est filtrée sur filtre 0,2 um et stockée à 2- 8°C. Extrait sec : 22,2 mg/g DP (estimé d'après la RMN ) : 22 15 D'après la RMN : i = 0,045 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide 131342 est de 4160 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) Mn = 3200 g/mol. Exemple BB251: co-polyaminoacide BB25' - poly-L-glutamate de sodium 20 modifié à un de ses extrémités par la molécule BA3 et à l'autre extrémité par la molécule B8 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2000 g/mol [000914] À une solution de molécule 88 (0,946 g, 1,24 mmol) dans le DMF (8 mL) sont introduits du DCC (0,257 g, 1,24 mmol) et du NHS (0,143 g, 1,24 mrrol). Après 25 16 h d'agitation à température amhiante, la solution est filtrée pour être utilisée directement dans la réaction suivante. [000915] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (6,0 g, 22,8 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (14 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à 30 complète dissolution, refroidi à 0 °C, puis une solution de molécule BA3 sous forme d'amine libre (0,832 g, 1,04 mmol) dans le chloroforme (2,0 mL) est introduit rapidement. Après 18 h d'agitation à O °C, la solution de molécule B8 préparée précédemment est additionnée. La solution est agitée entre 0 °C et température ambiante pendant 22 h puis coulée goutte-à-goutte dans du diisopropyléther (0,34 L) 35 sous agitation. Le précipité est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (7 fois 15 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (23 mL), puis la solution est refroidie à 4 °C. Une solution de HBr à 33 % dans l'acide acétique (15 mL, 85,7 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte. Le mélange 154 est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyiéther et d'eau sous agitation (0,28 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec un mélange 1:1 (v/v) de 5 diisopropyléther et d'eau (24 mL) puis deux fois avec de l'eau (24 mL). Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (0,16 L) en ajustant le pH à 12 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après 30 min le pH est ajusté à 7 par ajout lent d'une solution aqueuse de HCI 1 N. La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de 10 l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution obtenue est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8°C. Extrait sec : 18,9 mg/g DP (estimé d'après la RMN 1H) : 22 D'après la RMN : h = 0,09 15 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide 13525' est de 4871 g/rnol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2000 g/mol. Exemple 8E143: co-polyaminoacide BB43 - poly-L-glutamate de sodium modifié à un de ses 20 extrémités par la molécule BA3 et à l'autre extrémité par la molécule B8 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2000 g/mol [000916] A une solution de molécule B8 (0,946 g, 1,24 rnmol) dans le DMF (8 mL) sont introduits du DCC (0,257 g, 1,24 mmol) et du NHS (0,143 g, 1,24 mmol). Après 16 h d'agitation à température ambiante, la solution est filtrée pour être utilisée 25 directement dans la réaction suivante. [000917] Dans un ballon préalablement sèche à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate N- carboxyanhydride (6,0 g, 22,8 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (14 mL) est introduit. Le mélange est alors agitë sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 0°C, puis une solution de molécule BA3 sous forme d'amine libre 30 (0,832 g, 1,04 mmol) dans le chloroforme (2,0 mL) est introduit rapidement. Après 18 h d'agitation à 0°C, la solution de molécule B8 préparée précédemment est additionnée. La solution est agitée entre 0°C et température ambiante pendant 22 h puis coulée goutte à goutte dans du diisopropyléther (0,34 L) sous agitation. Le précipité est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (7 fois 15 mL) puis séché sous vide 35 à 30°C pour donner un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (23 puis la solution est refroidie à 4°C. Une solution de HBr à 33% dans l'acide acétique (15 rnL, 85,7 mmol) est alors ajoutée goutte à goutte. Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (0,28 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec un mélange 1:1 (v/v) diisopropyléther et d'eau (24 mL) puis deux fois avec de l'eau (24 mL). Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau 5 (0,16 L) en ajustant le pH à 12 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après 30 minutes le pH est ajusté à 7 par ajout lent d'une solution aqueuse de HCI 1 N. La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9%, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 p3/cm. La solution obtenue est filtrée 10 sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8°C. Extrait sec 18,9 mg/g DP (estimé d'après la RMN 1H) : 22 D'après la RMN 1.1H : il = 0,09 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB43 est de 4871 g/mol. 15 HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2000 g/mol. Exemple BB44 : co-polyaminoacide BB44 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA7 et ayant une masse molaire moyenne en 20 nombre (Mn) de 3300 g/mol [000918] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co- polyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA7 sous forme d'amine libre (4,45 g, 5,18 mmol) et à 30,0 g (113,96 mmol) de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA7 est 25 obtenu. Extrait sec : 29,0 mg/g DP (estimé par RMN 'H) = 25 donc i = 0,04 La masse molaire moyenne calculée du co-polyarninoacide EIB44 est de 4597 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/mol. 30 Partie C : Compositions [000919] Le glucagon utilisé est du glucagon humain issu d'un processus de synthèse 35 peptidique. Il provient de la société Bachem (référence 4074733). Le nicotinamide utilisé, testé selon les recommandations de la pharmacopée européenne, provient de Sigma-Aldrich (référence 72347). Le Treprostinil utilisé provient de Ferrer Internacional (référence 1100269). 156 Exemple Cl Solution de uca à 2._mg/mL dans chlorhydrique contenant 2 rri,g/mL L-méthionirte [000920] Dans un tube Falcon de 50 mL est introduit 94,7 mg de glucagon DS en 5 poudre suivi de 45 mL d'une solution d'acide chlorhydrique à 0,003 N contenant 2 mg/mL de L-méthionine. La poudre de glucagon est mélangée par des inversions répétées du tube jusqu'à complète dissolution du glucagon. La solution de glucagon à 2 mg/mL est alors filtrée sur membrane (0,22 pm). 10 Exemple C2 : Solutib k [000921] Dans un tube Falcon de 20 mL est introduit 23.4 mg de glucagon DS en poudre suivi de 11.3 mL d'une solution d'acide chlorhydrique à 0,003 N. La poudre de glucagon est mélangée par des inversions répétées du tube jusqu'à complète dissolution du glucagon. La solution de glucagon à 2 mg/mL est alors filtrée sur membrane (0,22 15 pm). Exemple C3 Solution de Glucacton à 4 rinctiml dans l'acide chlorhYdrique contenant 2 mg/ML de L-méthionine [000922] Du glucagon (160 mg) en poudre est introduit dans un tube Falcon de 45 20 ml puis 40 mL de la solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 0,006 N contenant 2 ing/mL de L-méthionine est ajoutée. La poudre de glucagon est mélangée par des inversions répétées du tube jusqu'à complète dissolution du glucagon. La solution de glucagon à4 mg/m1 est alors filtrée sur membrane (0,22 pm). 25 Exemple C4 : Solution de cilucagou à 4 rria/m1 clans l'acide chlorhydrique [000923] Du glucagon (160 mg) en poudre est introduit dans un tube Falcon de 45 ml. Une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 0.003 N (40 ml) est ajoutée. La poudre de glucagon est mélangée par des inversions répétées du tube jusqu'à complète dissolution du glucagon. La solution de glucagon à 4 mg/m1 est alors filtrée sur 30 membrane (0,22 pm). [000924] Dans une fiole de 50 ml, 3,0 g de Trizma® base (Sigma-Aldrich 04577) sont pesés. De l'eau est ajoutée sans compléter au trait de jauge. Une fois la poudre 35 solubilisée, Le pH de la solution est ajusté à pH 7,2 ± 0,1 par ajout de Na0H/HCI 1 N puis la solution est filtrée sur membrane (0,22 pm). Le volume d'eau est ajusté pour obtenir la solution concentrée de Tris. 157 Exem e C : re aration de solutions de ol aminoacide 5 à 7 roi ti de LI a à 2 mo/m1 [000925] À des solutions concentrées en glycérol (pour obtenir 300 mOsmole/kg 5 dans la formulation finale), en tampon phosphate (4 mM) et en m-crésol (54 mM), est ajoutée une solution de co-polyaminoacide BB15 à 15,22 mg/mL. À ce stade des additifs, comme citrate, nicotinamide, Treprostinil et magnésium, peuvent être ajoutés. La composition est brièvement agitée jusqu'à dissolution du co-polyaminoacide, puis la solution est filtrée sur membrane (0,22 pm). 10 6,5 ml d'une solution de glucagon fraichement préparée, selon le protocole décrit à l'exemple C2, sont mélangés à 6,5 ml de la solution de co-polyaminoacide BB15, telle que préparée ci-dessus, de manière à obtenir les compositions finales CRO-1 à CRO-11 (Tableau 1). Le pH de la solution est ajusté à pH 7,2 ± 0,1 par ajout de Na0H/HCI 1 N puis filtrée sur membrane (0,22 pm). 15 Une inspection visuelle est effectuée pour déterminer si l'on obtient ou non une solution limpide. L'inspection visuelle des échantillons est effectuée afin de détecter les particules visibles, ou une turbidité. Cette inspection est réalisée selon les recommandations de la Pharmacopée Européenne (EP 2.9.20) : les échantillons sont soumis à un éclairage d'au moins 2000 Lux et sont observés face à un fond blanc et un fond noir. Quand des 20 particules sont visibles dans la moitié des échantillons la composition est estimée non limpide. Exemple CSO : Préparation de solotions de co-polyaminoacIde 5515 à6,3 req/mi et de cilutacion à 2 mo/m1 25 [000926] À des solutions concentrées en glycérol (pour obtenir 300 mOsmole/kg dans la formulation finale), en tampon phosphate (4 mM) et en m-crésol (54 mM), est ajoutée une solution de co-polyaminoacide BB15 à 12,6 mg/mL. À ce stade des additifs, comme citrate, nicotinamide, 1 reprostinil et magnésium, peuvent être ajoutés. La composition est brièvement agitée jusqu'à dissolution du co-polyaminoacide, puis la 30 solution est filtrée sur membrane (0,22 prn). 6,5 ml d'une solution de glucagon fraichement préparée, selon le protocole décrit à l'exemple C2, sont mélangés à 6,5 ml de la solution de co-polyaminoacide, telle que préparée ci-dessus, de manière à obtenir les compositions finales C50-1 à C50-1 (Tableau 1). Le pH de la solution est ajusté à pH 7,2 ± 0,1 par ajout de Na0H/HCI 1N 35 puis filtrée sur membrane (0,22 pm). Une inspection visuelle est effectuée pour déterminer si l'on obtient ou non une solution limpide. Par comparaison, la solution de glucagon à pH neutre n'est pas soluble au-delà de 0,2 mg/mL. 158 Composition Concentration en Ratio Glycérol (mP4) Additif Aspect co- Co- polyami noacide /Glucag visuel de la polyaminoacide on solution B1315 frnen11) CRO-1 7,6 3 260 i limpide 10 mM citrate limpide CRO-2 7,6 3 220 CR0-3 7,6 3 249 20 mM limpide nicotinamide CR0-4 7,6 3 228 40 mM limpide nicotinamide CRU-5 7,6 3 188 80 mM limpide nicotinamide CRO-6 7,6 263 2 mM Mg i limpide CR0-7 7/6 3 2 5 5ooM^Yg limpide CRO-8 7' 6 3 242 10mM Mg limpide CR0-9 3 268 7,6 13 ng/mL limpide Treprostinil CRO-10 7,6 3 268 128 ng/mL limpide Treprostinil CRO-11 7,6 3 268 1000 ng/mL _Treprostinil limpide CS0-1 6,3 2,5 257 - limpide C60-2 6,3 2,5 248 5 mM citrate limpide CS0-3 6,3 2,5 168,7 5 mM citrate limpide + 80 mM nicotinamide C50-4 6,3 2,5 188 80 mM limpide nicotinamide Tableau 2 : Compositions et aspect visuel des solutions de glucagon à 2 mg/mL à pH 7,2 à différentes concentrations en co-polyaminoacide 13815 contenant du m-crésol (27 mM), 1 mg/mL de L-méthionine et du tampon phosphate (2 mM). Exemple CVO Préparation d'une solubon de_glucagon à 1 mcimL et contenant du copcity minoacide131315 à différentes concentrations, un tampon phosphate (2 mMYli et de la glycérine à pH 7,2. 10 [000927] Dans un flacon contenant des solutions concentrées d'excipients (phosphate, glycérol) et potentiellement des additifs (m-crésol, citrate), est ajoutée une solution de co-polyaminoacide BB15. La composition est brièvement agitée jusqu'à dissolution du co-polyaminoacide, puis la solution est filtrée sur membrane (0,22 pm). [000928] Le mélange équivolumique de cette solution avec la solution de glucagon 15 fraichement préparée, telle que décrite à l'exemple Cl, conduit aux compositions finales CVO-1 à CVO-13 contenant 1 mg/mL de glucagon. Le pH de la solution est ajusté à pH 7,2 ± 0,1 par ajout de Na0H/HCI 1 N puis filtrée sur membrane (0,22pm). Le détail des compositions est récapitulé dans le tableau ci-dessous. 159 [000929] Une inspection visuelle est effectuée pour déterminer si l'on obtient ou non une solution limpide. Par comparaison, la solution de glucagon à pH neutre n'est pas soluble au-delà de 0,2 mg/mL. Compositio Concentration en Ratio Glycéro Additifs Aspect n co- Copolya minoa cide/ Gluca I visuel de la polyaminoacide gon (mM) solution BB15 Ung/r111) CVO-1 3,8 3 255 10 mM citrate | limpide CVO-2 3,8 3 235 15 mM citrate limpide limpide __ limpide limpjde limpide limpide CVO-3 CVO-4CVO-5 CV0-6 3_28 3 3 3 3 215 20 mM citrate CVO-7 4e 5 3 255 10 no citrate 4,5 235 15 mM citrate 20 mM citrate 435 215 10 mM citrate + 20 mM nicotinamide 3,8 235 CVO-8 3,S 3 215 0 mM citrate + 40 limpide M nicohnamide CVO-9 3,8 3 175 0 mM citrate + 80 mM nicohnamide limpide CVO-10 3,8 3 85 10 mM citrate + limpide 170 mM nicotinamide CVO-11 3,8 3 255 40 mM limpide nicotinamide CVO-12 3,8 3 215 80 mM limpide nicotinamide CVO-13 3,8 3 125 170 mM limpide nicotinamide Tableau 3 : Compositions et aspect visuel des solutions de glucagon à 1 mg/mL à pH 7,2 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15 contenant 1 mg/mL de L-méthionine et du tampon phosphate (2 mM). Exem les CA Pre aration de 5 utions uca à a n di 10 co~polvarninoacicies, un tampon Tris (2 mil), de la glycérine et différentes concentrations de chlorure de sodium et chlorure de zinc à pH 7 2. [000930] Dans un flacon sont ajoutées successivement une solution concentrée de glycérol (afin d'obtenir 300 mOsmole/kg dans la formulation finale), une solution concentrée de tampon Tris (exemple C5), des additifs (NaCI, chlorure de zinc) et le co- 15 polyaminoacide en solution ou sous forme de lyophilisat. La composition est agitée jusqu'à dissolution du co-polyaminoacide. Le pH de la solution est ajusté à pH 7,2 ± 0,1 par ajout de Na0H/HCI 1 N puis la solution est filtrée sur membrane (0,22 pm). [000931] Le mélange équivolumique de cette solution est ajoutée à la solution de glucagon traichement préparée, telle que décrite à l'exemple Cl, et conduit aux 20 compositions finales CA1 à CA6 et CA7 à CA32 contenant 1 rng/mL de glucagon. Le pH de la solution est ajusté à pH 7,2 ± 0,1 par ajout de Na0H/HCI 1 N puis filtrée sur membrane (0,22pm). Le détail des compositions est récapitulé dans les tableaux 1 et 2. [0009]2] Une inspection visuelle est effectuée pour déterminer si l'on obtient ou non 5 une solution limpide (Par comparaison, la solution de glucagon à pH neutre n'est pas soluble au-delà de 0.2 mg/mL). L'inspection visuelle des échantillons est effectuée afin de détecter les particules visibles, ou une turbidité. Cette inspection est réalisée selon les recommandations de la Pharmacopée Européenne (EP 2.9.20) : les échantillons sont soumis à un éclairage d'au moins 2000 Lux et sont observés face à un fond blanc et un 10 fond noir. Quand des particules sont visibles dans la moitié des échantillons la composition est estimée non limpide. Solut I -- Ratio NaCI Zn Glycér ol(mM Aspe ion Co- Concentrat Copolyaminoa (mM) (mM) ) ct polyamino 1 acide ion de co- cide/glucagon visue polyamino I de acide la (mg/mL) solut ion CA1 153 10,7 9,0 0 0 289 d9 "rnPi e CA2 10,7 9,0 25 0 239 limpid 9,0 __ 0 189 e 50 limpid e CA3 10,7 CA4 10,7 9,0 0 1.29 285 limpid e CA5 10,7 9,0 25 1.29 235 limpid 50 1.29 185 e limpid ^ 10,7 9,0 Tableau 4 : Compositions et aspect visuel des solutions de glucagon à 1 mg/mL contenant du tampon Tris (2 mM), 1 mg/mL de L-méthionine en présence de différentes 15 concentrations en co-polyaminoacido, de chlorure de sodium et de chlorure de zinc à pH 7,2. 161 Compo Co- Concentrat Ratio Copolyam inoacide/ glucagon NaCI (mM) ZnCl2 Glycéri Aspect sition polyam Ion de co- (mM) ne visuel inoacid polyamino (mM) de la e acide solution (mg/m0 CA7 5.9 5 274 Limpide CA8 .9 ' 50 174 Limpide CA9 5.9 5 100 0 74 Limpide [A10 5.9 200 0 0 Limpide CA11 5.9 300 0 O Limpide CA12 AB14 5.9 0 2.87 266 Limpide CA13 5.9 5 50 2.87 166 Limpide 5.9 5 100 2.87 66 Limpide CA15 5.9 5 200 2.87 0 Limpide ...,_ ..._... CA-16 5.9 5 00 2.87 0 Limpide CA17 5.6 5 0 0 282 Limpide .6 5 25 232 Limpide 5.6 5 50 1 182 Limpide CA20 5.6 5 100 0 82 Limpide CA21 5.6 5 700 0 0 Limpide CA22 5.6 5 300 0 0 Limpide CA23 5.6 0 2.87 274 Limpide AB33 CA24 5.6 5 25 2.87 224 Limpide [A25 5.6 5 50 2.87 174 Limpide C426 5.6 100 2.87 74 Limpide CA27 5.6 200 2.87 0 Limpide CA28 5.6 5 300 2. 7 0 Limpide CA29 54 2.87 283 Limpide CA 0 5.4 5 50 2.87 183 Limpide AB37 CA31 5.4 5 100 2.87 83 Limpide CA32 5.4 5 200 2.87 0 Limpide Tableau 5 : Compositions et aspect visuel des solutions de glucagon à 1 mg/mL à pH 7,2 contenant du tampon Tris (2 mM), 1 mg/mL de L-méthionine et des concentrations variables en co-polyaminoacide, chlorure de sodium et de zinc. 5 Suivi de la stabilité physique des compositions [0009]3] Les compositions précédemment préparées ont été transférées dans des cartouches (easy-to-fill de OMPI de 3 ml - Ref P40 B4100.3250) à raison de 1 mL par cartouche et placées en conditions statiques à 37 °C et à 4 °C. 10 L'inspection visuelle des échantillons placés en conditions statiques est effectuée à 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 semaines à 37°C et une fois par mois pour les conditions à 4 °C, afin de détecter l'apparition de particules visibles, de fibrilles ou d'une turbidité. Cette inspection est réalisée selon les recommandations de la Pharmacopée Européenne (EP 162 2.9.20) : les échantillons sont soumis à un éclairage d'au moins 2000 Lux et sont observés face à un fond blanc et un fond noir pour respecter les recommandations de la pharmacopée Européenne. Quand des particules sont visibles dans la moitié des échantillons la composition est estimée non stable. Stable signifie donc qu'au jour de l'inspection au moins la moitié des échantillons étaient dépourvus de particules, de fibrilles ou d'une turbidité. [000934] L'étude des stabilités physiques des compositions précédemment préparées et décrites dans le tableau ci-dessous a été menée sur des volumes de 1 ml 10 de composition dans des cartouches de contenance de 3 ml (OMPI - ref : P40E14100.3250). Par comparaison, la solution de glucagon à pH acide à 2 mg/mL n'est stable ue 2 ours à 37°C. Exemples concentration Concentration Stabilité Stabilité en glucagon de co- 37 oc 4 .c (mg/ mi») polyaminoacides Additifs (semaines) (mois) 2 BB15 (mg/mlj CRO-2 | 7,6 10 mM >3 >8 citrate CRO-3 2 7,6 20 mM >6 >10 N icotinamide >6 CR0-4 2 7,6 40 mM >10 Nicotinamide CR0-5 2 7,6 80 mM >6 >10 Nicotinarnide CRO-6 2 7,6 2 mM Mg >6 >10 CRO-8 2 7,6 13 riemL >6 >10 Tre rostinil CRO-9 2 7,6 128 ng/mL >6 >10 Treprostinil CRO-10 2 7,6 1000 ng/ml_ >6 >10 Treprostinil , Tableau 6 : Résultats de stabilité physique des compositions CRO-2 à CRO-10 à 37 °C et 4 °C. 15 [000935] Les compositions selon l'invention, contenant du nicotinamide et du Treprostinil présentent une stabilité physique à 37 °C en conditions statiques en cartouche supérieures à trois semaines à 37 °C et à huit mois à 4 °C. L'addition de copolyaminoacide permet donc de solubiliser et de stabiliser le glucagon à pH neutre. 20 163 Exemples Concentration Concentration de Stabilité 37 en glucagon co-polyaminoacides Additifs °C (mg/mL1 BB15 (mg/mL) semaines 1 3.8 10 mM citrate >3 CVO-1 CV0-2 1 3,8 15 mM citrate >3 20 mM citrate CVO-3 1 3,6 >3 >3 CV0-4 1 4.5 10 mM citrate CVO-5 1 4,5 15 mM citrate >3 CVO-6 1 4,5 20 mM citrate >3 - 10 mM citrate CVO-7 + 20mM nicotinamide 10mM citrate + 40 mM Nicotinamide 1 3,8 >3 CVO-8 1 3,8 >3 CVO-9 1 3,8 10mM citrate + >3 80 mM Nicotinamide CVO-10 1 3,8 10 mM citrate 3 + 170 mM Nicotinamide - CV0-11 1 33,8 , 40 mM 3 Nicotinamide Tableau 7 : Resultats de stabilité ohvsiaue des compositions CVO-1 à CVO-11 à 37 °C. [000936] Les compositions selon l'invention, contenant du citrate, du nicotinamide ou une combinaison des deux présentent une stabilité physique à 37 °C en conditions 5 statiques en cartouche d'au moins deux semaines à 37 °C. L'addition de co- polyaminoacide permet de solubiliser et de stabiliser le glucagon à pH neutre. Exemple DA1 : Stablité physique en cartouche à 37 °C de solutions de glucagon à 1 mg/mL en présence du co-polyaminoacide B3, de tampon Tris (2 mM), de 10 chlorure de sodium et de chlorure de zinc à pH 7,2. [000937] L'étude des stabilités physiques des compositions des exemples CAl et CA6 décrites dans le tableau ci-dessous a été menée sur des volumes de 1 ml de composition dans des cartouches de contenance de 3 ml (OMPI - ref : P40B4100.3250). Par 15 comparaison, la solution de glucagon à pH acide à 1 mg/mL n'est stable que 2 jours à 37 °C. 164 [000938] suivant. Les résultats des inspections visuelles sont reportés dans le tableau Co- Concentration de NaCI Zn Temps de polyaminoacide co-polyaminoacide (mM) (mM) stabilité à 0 37«C (semaine) 4 Tableau 8 : Résultats des stabilités physiques des solutions de glucagon à 1 mg/mL à pH 7,2 contenant du tampon Tris (2 mM), 1 mg/mL de L-méthionine et des concentrations variables en co-polyaminoacide , chlorure de sodium et chlorure de zinc. [000939] L'addition de BioChaperone permet de solubiliser et de stabiliser le glucagon à pH neutre alors que le glucagon en solution à pH acide n'est stable que quelques jours à 37 °C (2 jours). La combinaison de sel et chlorure de zinc permet 10 d'améliorer les temps de latence des compositions du co-polyaminoacide 8B14/glucagon. Résultats des observations visuelles au mélange et des mesures de fibrillation par ThT 15 [000940] Les compositions précédemment préparées ont été aliquetées dans une plaque 96 puits en triplicat (3*150pL) et placées en conditions statiques à 37 °C et à 4 °C. Principe [000941] La mauvaise stabilité d'un peptide peut conduire à la formation de fibrilles 20 amyloïdes, définies comme des structures macromoléculaires ordonnées. Celles-ci peuvent éventuellement résulter à la formation de gel au sein de l'échantillon. L'essai de suivi de la fluorescence de la thioflavine T (ThT) est utilisé pour analyser la stabilité physique des solutions. La Thioflavine est une petite molécule sonde ayant une signature de fluorescence caractéristique lorsqu'elle se lie à des fibrilles de type 25 amyloïdes (Naiki et al. (1989) Anal. BioChem. 177, 244-249 ; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274-284). [000942] Cette méthode permet de suivre la formation de fibrilles pour de faibles concentrations de ThT au sein de solutions non diluées. Ce suivi est réalisé dans des conditions de stabilité accélérées : sous agitation et à 37 °C. 30 Conditions expérimentales [000943] Les échantillons ont été préparés juste avant le début de la mesure. La préparation de chaque composition est décrite dans l'exemple associé. La Thioflavine T a été ajoutée dans la composition à partir d'une solution mère concentrée de manière à Induire une dilution négligeable de la composition. La concentration de Thioflavine T dans la composition est de 40 pM. [000944] Un volume de 150 pL de la composition a été introduit au sein d'un puit 5 d'une plaque 96 puits puis 2,7 pL de solution concentrée de ThT a été introduite. Chaque composition a été analysée en trois essais (triplicat) au sein d'une même plaque. La plaque a été scellée par du film transparent afin d'éviter l'évaporation de la composition. [000945] Cette plaque a ensuite été placée dans l'enceinte d'un lecteur de plaques (Xenius XC, SAFAS). La température est réglée à 37 °C, et une agitation latérale de 960 10 rpm avec 1 mm d'amplitude est imposée. [000946] Une lecture de l'intensité de fluorescence dans chaque puit est réalisée avec une longueur d'onde d'excitation de 442 nm, et une longueur d'onde d'émission de 482 nm au cours du temps. [000947] Le processus de fibrillation se manifeste par une forte augmentation de la 15 fluorescence après un délai appelé temps de latence. [000948] Le temps de latence est déterminé graphiquement, en prenant le temps où la tangente à la phase linéaire de croissance coupe l'axe des abscisses. [000949] La valeur de temps de latence reportée correspond à la moyenne des mesures de temps de latence faites sur trois puits. 20 [000950] Un exemple de détermination graphique est représenté à la figure 1. [000951] Les résultats de temps de latence obtenus sont présentés dans le tableau ci-dessous. [000952] Par comparaison, la solution de glucagon pH acide à 2 mg/mL montre un temps de fibrillation de 0,6 h environ. 25 [000953] La composition CS0-4 contenant du nicotinamide permet d'obtenir des temps de latence supérieurs à 15 heures à partir d'un ratio molaire BB15/glucagon de 2,5 contre quelques minutes pour la solution de glucagon seule à pH acide. Concentration Ratio Additifs Temps de de co- latence de polyaminoacides fibrillation BB15 (mg/mL) 6,3 5 5 mM citrate > 15h 6,3 2,5 5 mM citrate 15h >15 h + 80 mM nicotinamide 6,3 BO mM Nicotinamide Concentration Compositions en glucagon (mg/mL) CS0-4 2 Tableau 9 : Mesure du temps de latence des solutions CS0-2 à CS0-4. 30 166 Exemple DB1 : Stabilité de solutions à 1 mg/mL de glucagon contenant du copolyaminoacide, du tampon Tris (2 mM), de la glycérine et des concentrations variables en chlorure de sodium et chlorure de zinc à pH 7,2, [000954] Les résultats de temps de latence obtenus sont présentés dans le tableau 5 ci-dessous. Par comparaison, dans ces conditions, le glucagon seul est insoluble en solution à pH physiologique et la solution de glucagon à pH acide à 1 mg/mL montre un temps de fibrillation de 0.5 h environ. Solution Co- Ratio NaCI Zn (mM) Temps de polyamino Copolyaminoacide/glu cagon (mM) fibrillation acide (h) CA7 A614 5 0 0 18 5 50 2.87 CA31 5 100 2.87 CA32 5 200 2.87 >6 Tableau 10 : Mesure du temps de latence des solutions CA7, CA13, CA14, CA16 et 10 CA29 à CA31. [000955] L'ajout de sel ou de zinc seuls ou en mélange dans les compositions co- polyaminoacide/glucagon permet d'obtenir REVENDICATIONS1. Composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins : a) du glucagon humain ; b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante : dans laquelle *-(GpR GpA GpC) a Formule I - GpR est un radical de formules II , II' ou II": 0 H H 11 H O O *-N-R-N-* * R N * II II' ou *-1-I-R11-* Ir - GpA est un radical de formules III ou III' : O HN-* JLA/ 0 HN-* III ou * II A NH *mi; les * indiquent les sites de rattachement des différents groupes; - a est un entier égal à 0 ou à 1; - b est un entier égal à 0 ou à 1; p est un entier égal à 1 ou à 2 et - GpC est un radical de formule IV : 0 IV; 168 o si p est égal à 1 alors a est égal à 0 ou à 1 et GpA est un radical de formule III' et, o si p est égal à 2 alors a est égal à 1, et GpA est un radical de formule III; - c est un entier égal à 0 ou à 1, et si c est égal à 0 alors d est égal à 1 ou à 2; - d est un entier égal à 0, à 1 ou à 2; - r est un entier égal à 0, à 1 ou à 2, et o si r est égal à 0 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au copolyaminoacide via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminale du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine en position N terminale du précurseur du co-polyaminoacide et une fonction acide portée par le précurseur du radical hydrophobe , et o si r est égal à 1 ou 2 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au copolyaminoacide : + via une liaison covalente entre un atome d'azote du radical hydrophobe et un carbonyl du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine du précurseur du radical hydrophobe et une fonction acide portée par le précurseur du co-polyaminoacide ou + via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminal du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction acide du précurseur du radical hydrophobe et une fonction amine en position N terminale portée par le précurseur du co-polyaminoacide; - R est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant une ou plusieurs fonctions -CONH2 ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant un ou plusieurs cycles insaturés ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ; - plus précisément, R est un radical choisi dans le groupe constitué par : o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant si GpR est un radical de formule II de 2 à 12 atomes de carbone, si GpR est un radical de formule II' de 1 à 11 atomes de carbone ou si GpR est un radical de formule II" de 1 à 10 atomes de carbone ; 169 o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant si GpR est un radical de formule II de 2 à 11 atomes de carbone, si GpR est un radical de formule II' de 1 à 11 atomes de carbone ou si GpR est un radical de formule II" de 1 à 10 atomes de carbone, ledit radical alkyle portant une ou plusieurs fonctions -CONH2, et A est un radical alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 8 atomes de carbone et éventuellement substitué par un radical issu d'un cycle saturé, insaturé ou aromatique ; B est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant un noyau aromatique, comprenant de 1 à 9 atomes de carbone; Cx est un radical alkyl monovalent linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant une partie cyclique, dans lequel x indique le nombre d'atomes de carbone et : o si p est égal à 1, x est compris entre 11 et 25 (11 x 25) : o si p est égal à 2, x est compris entre 9 et 15 (9 x 15), le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques étant compris entre entre 0 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle p = 1, représentée par la formule V suivante : *-(GpR GpAh GpC formule V GpR, GpA, GpC, r et atels que définis dans la revendication 1. 170 3. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle a = I. et p = 2, représentée par la formule VI suivante : *-(GpR)-GpA-( GpC) 2 Formule VI dans laquelle GpR, GpA, GpC et r tels que définis dans la revendication 1. 4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII suivante : 0 0 R2 n Ri 1, H Hy formule VII dans laquelle, D représente, indépendamment, soit un groupe -CH2- (unité aspartique) soit un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique), Hy est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, Ri est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, ou un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à Cio, un groupe acyle ramifié en C3 à Cio, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate, R2 est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, ou un radical -NR'R", R' et R" identiques ou différents étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à Cio, le benzyle et lesdits R' et R" alkyles pouvant former 171 ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et 5, X représente un H ou une entité cationique choisie dans le groupe comprenant les cations métalliques ; n + m représente le degré de polymérisation DP du co-polyaminoacide, c'està-dire le nombre moyen d'unités monomériques par chaîne de copolyaminoacide et 5 n + m 250. 5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les copolyaminoacides de formule VII dans laquelle n = 0 de formule VIIb suivante : 0 OX R2 m O Formule VIIb dans laquelle m, X, D, R1 et R2 tels que définis dans la revendication 4et au moins RI. ou R2 est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI. 6. Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les copolyaminoacides de formule VIIb dans laquelle R2 est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI dans lesquelles r = 1 ou 2 et GpR est de Formule II'. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 4 à 6, caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, VIIb dans lesquelles le groupe D est un groupe -CH2- (unité aspartique). 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 4 à 7, caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est N H 172 choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, VIIb dans lesquelles le groupe D est un groupe -0-12-0-12- (unité glutamique). 9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 40 mg/mL. 10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en glucagon humain est comprise entre 0,25 et 5 mg/mL. 11. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le ratio molaire [radical hydrophobe]/[glucagon humain] est inférieur à 15. 12. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un composé polyanionique. 13. Composition selon la revendication 12, caractérisée en ce que le composé polyanionique est choisi dans le groupe constitué des polyacides carboxyliques et leurs sels de Na+, K+, Ca2+ ou Mg2+. 14. Composition selon la revendication 13, caractérisée en ce que le polyacide carboxylique est choisi dans le groupe constitué par l'acide citrique, l'acide tartrique, et leurs sels de Na+, K+, Ca2+ ou Mg2+. 15. Composition selon la revendication 14, caractérisée en ce que le polyacide carboxylique est l'acide citrique et ses sels de Na+, K+, Ca2+ ou Mg2+. 16. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un promoteur d'absorption choisi dans le groupe constitué par choisi parmi les promoteurs d'absorption, les promoteurs de diffusion ou les agents vasodilatateurs, seuls ou en mélange. 17. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un sel de zinc. 173 18. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une hormone gastrointestinale. 19. Composition selon la revendicationl8, caractérisée en ce que l'hormone gastrointestinale est choisie dans le groupe constitué par l'exenatide, le liraglutide, le lixisenatide, l'albiglutide et le dulaglutide, leurs analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 20. Composition selon l'une quelconque des revendications 18 et 19, caractérisée en ce que la concentration en hormone gastrointestinale est comprise dans un intervalle de 0,01 à 10 mg/mL.