Brevet FR3081090A1 — publié le 20191122

PROBIOTIQUE POUR VOLAILLE DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne le domaine des probiotiques pour volaille. Elle concerne plus particulièrement un probiotique et un aliment pour volaille le comprenant, l'utilisation d'une levure adaptée aux acides organiques faibles et une telle levure. ARRIÈRE PLAN TECHNIQUE Durant de nombreuses années, les antibiotiques qui, à des doses non médicamenteuses, ont un effet de facteur de croissance, ont été couramment utilisés pour améliorer les performances zootechniques dans l'élevage de volaille. Cependant, une telle utilisation en routine n'est pas sans conséquences, par exemple sur le développement des résistances aux antibiotiques de la part des bactéries. Aussi, en 2006, l'Union Européenne a-t-elle décidé d'interdire l'utilisation d'antibiotiques chez la volaille comme facteur de croissance, pour limiter l'apparition de phénomènes de résistance. Les industriels ont donc cherché des alternatives aux antibiotiques. C'est ainsi que l'utilisation des probiotiques en volaille s'est étendue. La plupart des probiotiques commercialisés pour la volaille sont d'origine bactérienne principalement de la famille des Bacillus, compte tenu de leur capacité à sporuler et ainsi à résister aux contraintes thermiques élevées de la fabrication des aliments avicoles. S'il a été constaté que les levures, notamment Saccharomyces cerevisiae, peuvent avoir un effet positif sur la croissance et les performances d'élevage des porcins et des bovins, leur impact sur la croissance et le gain de poids des volailles n'a pas été démontré et était souvent très limité et non significatif Par exemple, dans U52002/0146399, est proposé un produit pouvant être ajouté à l'alimentation animale notamment pour la volaille, comprenant de l'acide sorbique et au moins une culture de micro-organismes ayant une activité probiotique, telle que, par exemple, une culture de la levure Saccharomyces cerevisiae. Dans W097/00017 est proposé un probiotique, notamment utile pour des poules, contenant de la farine d'algues, de la levure sèche active et un composant minéral, la levure pouvant appartenir à l'espèce Saccharomyces cerevisiae. En outre il n'existe actuellement dans l'Union Européenne aucune autorisation de levure comme probiotique pour les volailles. 2 Il existe donc un réel besoin de trouver des probiotiques levures efficaces permettant d'améliorer les performances de croissance et de gain de poids de la volaille. RE SUME DE L'INVENTION 5 Dans ce cadre les inventeurs ont développé un nouveau probiotique comprenant une levure active aux propriétés particulières. En effet, les levures actives selon l'invention sont dites adaptées aux acides organiques faibles. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention concerne un probiotique pour volaille caractérisé en ce qu'il comprend une levure active adaptée aux acides organiques faibles. 10 Les inventeurs ont également mis au point, selon un second aspect, un aliment pour volaille comprenant le probiotique selon l'invention. Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'une levure active adaptée aux acides organiques faibles pour améliorer les performances zootechniques de la volaille. Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'une levure active adaptée 15 aux acides organiques faibles dans un aliment pour volaille. De façon avantageuse, l'utilisation d'une levure adaptée ou d'un probiotique selon l'invention permet d'éviter l'adjonction d'enzymes dans 1 ' alimentation. DESCRIPTION DETAILLEE 20 La présente invention se rapporte à un nouveau probiotique pour volaille comprenant une levure active adaptée aux acides organiques faibles. Les inventeurs ont en effet découvert de manière surprenante que des levures ayant subi un processus d'adaptation aux acides organiques faibles lors de leur culture sont plus efficaces chez la volaille que des levures n'ayant pas subi ce processus. Ces levures dites « adaptées » 25 permettent ainsi d'améliorer les performances de croissance, de gain de poids, et l'indice de conversion de la consommation de l'aliment par rapport au gain de poids. Par « probiotique », on entend des micro-organismes vivants qui, lorsqu'ils sont ingérés en quantité suffisante, exercent des effets positifs sur la santé, au-delà des effets nutritionnels traditionnels. 30 Par « levure active », on entend une levure vivante capable de fermenter. Par « levure active adaptée aux acides organiques faibles », on entend une levure dont la tolérance à un acide organique faible donné est augmentée grâce à une précédente exposition à cet acide (Warth, 1988, Appl. Environ. Microbiol., 54 (8) : 2091-2095). La croissance et la 3 capacité fermentaire de la levure adaptée ne sont ainsi pas inhibées lorsque la levure est en présence d'un acide organique faible pour au moins la seconde fois. Au sens de la présente invention, les termes « levure active adaptée aux acides organiques faibles », « levure adaptée aux acides organiques faibles », « levure adaptée » ont la même 5 signification. Un procédé d'obtention d'une levure adaptée à un acide organique faible est décrit dans l'exemple 1, basé sur le procédé décrit dans le brevet US4318991. Par « acides organiques faibles », on entend les acides organiques en tant que tels et leurs sels. Ils sont choisis parmi l'acide acétique, l'acide benzoïque, l'acide butyrique, l'acide 10 citrique, l'acide formique, l'acide fumarique, l'acide lactique, l'acide malique, l'acide propionique, l'acide sorbique, et leurs sels tels le propionate de calcium ou de sodium. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la levure active est du genre Saccharomyces, de préférence Saccharomyces cerevisiae ou Saccharomyces cerevisiae var. boulardii également appelée Saccharomyces boulardii. 15 De façon avantageuse, la présente invention a pour objet un probiotique pour volaille dont le rapport de l'activité selon le test Al (décrit ci-après) entre une levure dite « adaptée » et une levure non adaptée est supérieur ou égal à 1. Ainsi, selon la présente invention, la levure active sélectionnée est une levure active, par 20 exemple du genre Saccharomyces, qui se caractérise par un rapport de l'activité selon le test Al entre cette levure active sélectionnée dite « adaptée » et la levure non adaptée, comme suit : Activité de la levure adaptée selon le test Al Activité de la levure non adaptée selon le test Al 25 supérieur ou égal à 1. Ledit test Al correspond au protocole suivant : on mesure pendant 2 heures le volume de CO2 dégagé par la levure active avec le fermentomètre de Burrows et Harrisson suivant la méthode standard décrite aux pages 579 à 584 du livre de référence « Guide pratique d'analyses dans les industries de céréales » 30 coordonné par B.Godon et W.Loisel (Ed Lavoisier - Tec & Doc - 1997 - ISBN. 2-7430- 0123-2 - 2° édition) en utilisant le mode opératoire adapté suivant : (a) Peser des lots de 20 g de farine, la farine étant une farine de froment ayant un temps de chute Hagberg de 200 à 300 secondes (tel que défini dans aux pages 680 et 681 4 du livre de référence cité ci-dessus), et les mettre dans des tubes propres et secs, puis ajouter dans chacun des tubes 2 g de saccharose et faire incuber ces tubes dans le râtelier du bain-marie, qui se trouve à 30°C, pendant au moins 30 minutes avant de commencer l'essai ; 5 (b) Prendre comme échantillon de levure l'équivalent de 1,066 g de matière sèche levure ; (c) Préparer les échantillons délayés de levure dans 100 ml d'eau distillée (la méthode pour levure sèche est décrite à la page 583 dudit livre de référence) et ajouter 0,5 ml d'acide acétique à 6,6% (p/v) juste avant l'ajustement à 100 ml ; 10 (d) Pipeter les 15 ml de l'échantillon délayé bien mélangé nécessaires au malaxage, ces 15 ml apportant 1,066 g x 0,15 = 0,160 g de matières sèches levure ; et suivre pour le reste les instructions du mode opératoire décrit dans le livre de référence, en réalisant la mesure sur 2 heures. Afin de tenir compte de l'effet du séchage sur l'activité de la levure, l'activité de la levure 15 active selon le test Al est définie comme suit : - la levure testée est sous forme sèche, c'est-à-dire à une teneur en matières sèches d'au moins 90%, son activité correspond au volume de CO2 mesuré. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la levure adaptée aux acides 20 organiques faibles comprise dans le probiotique volaille est obtenue par culture et adaptation d'une souche Saccharomyces cerevisiae choisie parmi les souches déposées auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux 75724 Paris cedex 15, respectivement sous les numéros CNCM I-5128, I-5129, I-5130 et I-5131, le 31 août 2016, sous les numéros CNCM I-5222 et I-5223, le 30 août 2017 et sous le numéro 25 CNCM I-4407 le 2 décembre 2010. Le terme « levures » désigne des levures obtenues par culture d'une souche de levure. La culture de la souche de levure est effectuée dans un milieu de culture approprié à la croissance de la souche de levure. L'homme du métier est capable de déterminer quelle est la composition d'un milieu de 30 culture approprié à une souche de levure donnée selon le protocole décrit dans le livre de référence « Yeast technology » par Gerald Reed et Tilak W. Nagodawithana (ISBN 0-442- 31892-8) aux pages 284 à 293. 5 Un procédé de culture d'une souche et d'obtention d'une levure adaptée à un acide organique faible est décrit dans l'exemple 1. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la levure adaptée aux acides 5 organiques faibles, comprise dans le probiotique volaille, est sous forme sèche. On entend par levure sèche, toute levure ayant un taux de matière sèche supérieur à 90%. La levure sèche active est une levure vivante, séchée de façon à conserver son pouvoir fermentaire et lui assurer une conservation très longue. Ladite levure sèche active présente une teneur élevée en cellules vivantes de levure et peut se présenter sous différentes formes, 10 par exemple sous forme de sphérules, de granules ou de poudre, toutes ces formes ayant une teneur moyenne en eau comprise entre 4 et 8%. Le séchage est effectué selon toute méthode connue de l'homme du métier et compatible avec la viabilité des cellules, c'est-à-dire permettant de conserver une teneur élevée en cellules vivantes. L'homme du métier sait également que, selon le type de séchage effectué, 15 la teneur en cellules vivantes est plus ou moins élevée, et les performances dans le test Al peuvent être affectées. Le poids de matière sèche est déterminé par les méthodes classiques bien connues de l'homme du métier. 20 Selon un autre aspect, la présente invention concerne un aliment pour volaille comprenant le probiotique décrit ci-dessus. Le probiotique et l'aliment pour volaille selon l'invention peuvent également comprendre un ou plusieurs ingrédients autres que ladite levure active adaptée, comme notamment des 25 vitamines, des minéraux alimentaires, des oligo-éléments, des enzymes alimentaires, des acidifiants, des extraits végétaux, des parois de levure et des graisses alimentaires, ainsi que, le cas échéant, d'autres micro-organismes à effet probiotique. Selon les connaissances de l'homme du métier de l'élevage de volailles, la période de 30 croissance d'un poulet est comprise de la naissance à 35 -42 jours. Durant ce laps de temps, il passe d'une masse de 30 à 50 grammes à une masse de 2 à 3 kilogrammes, avec une masse qui est multipliée par 5 à 6 en 10 jours. Son alimentation, en termes de quantité, est fixée préférentiellement en fonction de son âge. 6 Selon un mode de réalisation particulier de l'invention et sur cette base de poids de l'animal, l'animal reçoit entre 10' et 1011 CFU de levure active adaptée aux acides organiques faibles par kilogramme d'aliment par jour, de préférence entre 109 et 1011 CFU/kg d'aliment/jour, et encore plus de préférence entre 109 et 101° CFU/kg d'aliment/jour. 5 Le terme CFU ou UFC signifie unité formant colonie, un CFU ou UFC correspond à une colonie. Selon un autre aspect, l'invention concerne une méthode pour améliorer les performances zootechniques de l'animal consistant à fournir à l'animal entre 10' et 1011 CFU de levure 10 active adaptée aux acides organiques faibles par kilogramme d'aliment et par jour, de préférence entre 109 et 1011 CFU/kg d'aliment/jour, et encore plus de préférence entre 109 et 10' CFU/kg d'aliment/jour. Selon un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation d'une levure active adaptée aux 15 acides organiques pour améliorer les performances zootechniques de la volaille. Par « performances zootechniques », on entend les performances de croissance, le gain de masse ou de poids de l'animal, l'indice de consommation, et les paramètres de reproduction des animaux. Il a en effet été constaté que l'utilisation d'une levure adaptée chez la volaille permettait 20 d'augmenter le gain de poids, la quantité d'aliment ingéré et d'améliorer l'indice de consommation de l'aliment par rapport au gain de poids, en particulier chez la volaille en croissance. Selon un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation d'une levure active adaptée aux 25 acides organiques dans un probiotique et/ou dans un aliment pour volaille tels que décrits ci- dessus. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la levure active adaptée aux acides organiques et/ou le probiotique sont mis en oeuvre sous une forme adaptée à une 30 utilisation dans une matrice alimentaire, ladite matrice étant par exemple des granulés, de la farine, ou de l'eau de boisson. 7 La levure adaptée aux acides organiques faibles et/ou le probiotique sont par exemple sous forme de granulés ou de farine lorsqu'ils sont mélangés à l'aliment et sous forme hydrodispersible, lorsqu'ils sont mélangés à l'eau de boisson. 5 Selon un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation d'une levure active adaptée aux acides organiques faibles dans laquelle l'animal, pesant entre 30 et 3000 g, reçoit entre 10' et 1011 CFU de levure active adaptée aux acides organiques faibles par kilogramme d'aliment par jour, de préférence entre 109 et 1011 CFU/kg d'aliment/jour, et encore plus de préférence entre 109 et 101° CFU/kg d' al i m ent/j our. 10 Le probiotique, l'aliment, l'utilisation de la levure adaptée et la levure adaptée suivant l'invention sont notamment utiles dans le domaine de l'élevage de volailles choisies dans le groupe comprenant : - les oiseaux de basse-cour et gallinacées, et notamment les poules, y compris les 15 poussins, les coqs et coquelets, les chapons et les poules pondeuses, les dindes et les dindons, - les ansériformes et notamment les canards, les canes, les oies, et les faisans, les pintades, les cailles et les perdrix, - les colombins, notamment les pigeons, 20 - les ratites, notamment les autruches, les émeus et les kiwis. Le probiotique suivant l'invention comprend au moins 90% en masse de matière sèche de la levure active sélectionnée dite « adaptée ». La présente invention va être illustrée à l'aide des exemples de réalisation qui suivent, étant 25 entendu que ceux-ci n'ont aucune portée limitative. EXEMPLES Exemple 1 : Procédé d'obtention d'une levure active sèche adaptée à un acide organique faible 30 1.1.Procédé de culture « standard » Les levures peuvent être obtenues par une culture sur mélasse de betteraves ou de cannes par exemple, suivant le procédé discontinu alimenté (en anglais : fed-batch). Le procédé de culture comporte une succession d'étapes de fermentation comme décrit aux 8 pages 284 à 293 du livre de référence « Yeast technology » par Gerald Reed et Tilak W. Nagodawithana (ISBN 0-442-31892-8). 1.2.Procédé pour induire une adaptation 5 Le procédé pour induire l'adaptation à un acide organique faible correspond au procédé de culture standard ci-dessus, modifié comme il suit selon les étapes suivantes : 1. Acidification : 2 à 3 h avant la fin de la culture (cf ci-dessus le procédé de culture « standard ») et avant la phase d'adaptation, ajuster le pH du milieu de culture à une valeur comprise entre 4,0 et 5,5 et le maintenir jusqu'à la fin de la phase d'adaptation, 10 par exemple avec de l'acide sulfurique ; 2. Adaptation : ajouter dans le milieu de culture une quantité d'acide organique faible ou de son sel associé de façon à obtenir entre 1500 et 3000 ppm (partie par million) d'acide organique faible en poids dans le mélange final. La dose d'ajout d'acide faible est liée à la composition de l'acide faible ou de son sel associé utilisé. 15 L'homme du métier saura ajuster le pH et la quantité d'acide organique faible à utiliser sans déployer des efforts excessifs. 1.3.Séchage Les levures sèches actives sélectionnées, c'est-à-dire levures sèches présentant une 20 teneur élevée en cellules vivantes de levure, sont obtenues par séchage selon une technique connue de l'homme du métier pour obtenir un taux de matière sèche supérieur à 90%. Exemple 2 : Mesure du rapport de l'activité selon le test Al entre une levure adaptée et une levure non adaptée 25 Les levures a et b correspondent à 2 lots différents a et b de la souche de levure non adaptée déposée à la CNCM le 31 août 2016 sous le numéro 1-5131, c'est-à-dire une levure n'ayant pas subi le procédé d'adaptation décrit dans l'exemple 1.2. La levure dite « adaptée », selon le procédé décrit dans l'exemple 1.1 et 1.2, utilisée dans le test Al correspond à 2 lots différents a et b de la même souche de levure I-5131. 30 Le test Al est celui décrit supra. 9 Résultats du test Al : Souches Activité (ml de CO2) I-5131 non adaptée (a) 103 I-5131 non adaptée (b) 113 I-5131 adaptée (a) 106 I-5131 adaptée (b) 132 Tableau 1 Rapport de l'activité selon les tests Al entre la levure 1-5131 adaptée et la levure 5 1-5131 non adaptée : Lots Rapport Lot (a) 1,029 Lot (b) 1,168 Tableau 2 Conclusion : Les levures adaptées utilisées selon l'invention présentent ainsi un rapport supérieur à 1. 10 Exemple 3 : Essais d'une levure dite adaptée, pour l'alimentation de la volaille Les levures sèches actives adaptées présentent des propriétés avantageuses surprenantes dans le domaine de l'aviculture. Ces propriétés avantageuses surprenantes sont illustrées par les résultats du test suivant sur 15 des poussins. Classiquement, selon les connaissances de l'homme du métier de l'élevage de volailles, l'alimentation utilisée pour les poussins est un blé viscosant, autrement dit un blé de qualité moyenne voire mauvaise. Ceci représente un challenge nutritionnel, autrement dit une sorte de stress. Selon les connaissances de l'homme du métier, l'un des moyens d'améliorer la 20 digestibilité d'un tel blé est l'adjonction d'enzymes. Dans le cadre de la présente invention, il n'y a pas d'adjonction d'enzymes, ce qui représente un avantage non négligeable en termes de coût. Dans ce test, les résultats obtenus par l'adjonction d'un probiotique selon l'invention à un aliment farine pour poussins sont comparés avec les résultats obtenus avec cet aliment sans 25 additif, et avec un mélange de cet aliment avec la même levure sèche active non adaptée. 10 Poussins Le test a été effectué sur une population de poussins répondant aux critères suivants : poulets ROSS âgés au début de l'essai de 21 jours. Composition de l'aliment farine pour poussins 5 L'aliment farine consiste principalement en du blé et du maïs sans enzymes anti-viscosantes (comme expliqué ci-dessus) selon la composition suivante : Ingrédient Quantité (/0) Blé 40,0 Maïs 39,8 Farine de soja 16,6 DL méthionine 0,1 Di-phosphate de calcium 1,5 Carbonate de calcium 1,0 Prémélange vitamines - 0,6 minéraux Sel 0,4 Tableau 3 La composition des différents mélanges pour poussins est donnée dans le tableau 4 ci-dessous. Mélange testé Additif ajouté par g d'aliment farine Témoin / Mélange levure non adaptée 800 g/T soit 107 CFU/g d'aliment de la levure sèche active 1-5128 Mélange levure adaptée 800 g/T soit 107 CFU/g d'aliment de la levure sèche active adaptée 1-5128 10 Tableau 4 Protocole du test La population de poussins a été divisée de manière aléatoire en 2 réplicats de 3 lots de 6 cages contenant chacune 20 poussins, chaque lot de poussins recevant un mélange à tester 15 selon le tableau 4. A partir du premier jour, les poussins de chaque groupe ont été alimentés ad libitum avec le 11 mélange correspondant au lot d'essai. Les poussins disposaient également ad libitum d'eau. Aucune autre source d'alimentation n'était mise à la disposition des poussins. La quantité de farine consommée par chaque groupe était mesurée. A différents moments durant le test, le poids vivant des poussins était mesuré, 5 respectivement à JO, J+7 jours, J+14 jours J+21 jours. Résultats : Les résultats du test, à J+21 jours, sont donnés dans le tableau 5, dans lequel : FI-x signifie la quantité totale moyenne (en g) de mélange consommé par poussin du 10 groupe donné après x jours, en l'occurrence ici FI-21, après 21 jours ; LW-x signifie le poids vivant moyen (en g) des poussins du groupe donné après x jours, en l'occurrence ici LW-21 après 21 jours. FCR-x signifie le rapport entre, d'une part, le gain de poids vivant moyen (en g) des poussins du groupe donné après x jours et, d'autre part, la quantité totale moyenne de 15 mélange consommé par poussin dudit groupe après x jours, en l'occurrence ici FCR-21 après 21 jours. Control 1-5128 1-5128 SEM ANOVA (P) adaptée Initial LW 40 40 40 LW-21 516,2a 514,6a 545,2b 6,9 0,036 FI-21 820,9 814,3 833,6 7,8 0,551 FCR-21 1,67a 1,65a 1,60b 0,01 0,021 SEM signifie standard error of the mean, appellation anglo-saxonne de l'écart type de la moyenne. 20 ANOVA signifie ANalysis Of VAriance Conclusion : Les résultats montrent que la supplémentation avec une levure adaptée améliore significativement les résultats de croissance (LW21) et de conversion alimentaire (FCR21) des poulets alors que la levure non adaptée n'a pas d'effet. REVENDICATIONS1. Probiotique pour volaille comprenant une levure active adaptée aux acides organiques faibles, de préférence une levure active du genre Saccharomyces et plus de préférence une levure Saccharomyces cerevisiae ou Saccharomyces cerevisiae var. boulardii. 2. Probiotique pour volaille selon la revendication 1, caractérisé en ce que le rapport de l'activité selon les tests Al entre une levure active adaptée aux acides organiques faibles et une levure active non adaptée aux acides organiques faibles est supérieur ou égal à 1. 3. Probiotique pour volaille selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la levure Saccharomyces cerevisiae adaptée aux acides organiques faibles est obtenue par culture et adaptation d'une souche choisie parmi les souches déposées à la CNCM respectivement sous les numéros 1-5128, I-5129, I-5130 et I-5131, le 31 août 2016 et I-5222 et I-5223, le 30 août 2017 et I-4407 déposée le 2 décembre 2010. 4. Probiotique pour volaille selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la levure active est sous forme sèche. 5. Aliment pour volaille comprenant le probiotique selon l'une quelconque des revendications précédentes. 6. Probiotique pour volaille selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou aliment pour volaille selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'animal reçoit entre 107 et 1011 CFU de levure active adaptée aux acides organiques faibles par kilogramme d'aliment par jour, de préférence entre 109 et 1011 CFU/kg d'aliment/jour, et encore plus de préférence entre 109 et 1019 CFU/kg d'aliment/jour. 7. Utilisation d'une levure active adaptée aux acides organiques faibles pour améliorer les performances zootechniques de la volaille. 8. Utilisation d'une levure active adaptée aux acides organiques faibles dans un probiotique et/ ou un aliment pour volaille. 9. Utilisation, selon l'une des revendications 7 ou 8, d'une levure active adaptée aux acides organiques faibles caractérisée en ce qu'elle est sous forme de granulés, de farine ou hydrodispersible. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, d'une levure active adaptée aux acides organiques faibles caractérisée en ce que l'animal reçoit entre 107 13 et 1011 CFU de levure active adaptée aux acides organiques faibles par kilogramme d'aliment par jour, de préférence entre 109 et 10" CFU/kg d'aliment/jour, et encore plus de préférence entre 109 et 10' CFU/kg d'aliment/jour.