Brevet FR3076184A1 — publié le 20190705

UTILISATION DE DERIVES DE TREHALOSE POUR STIMULER LES DEFENSES NATURELLES DE PLANTES La presente invention concerne le domaine agricole et, plus particulierement, l'utilisation de derives de trehalose ou un procede mettant en oeuvre ces derives, pour stimuler les defenses naturelles des plantes. ARRIERE-PLAN TECHNOLOGIQUE DE l'INVENTION De nos jours, l' augmentation du rendement dans la culture des plantes est devenue primordiale pour satisfaire les besoins de notre societe. De maniere generale, ce rendement depend de la bonne sante et de l'integrite de la plante, permettant ainsi de lui assurer un bon developpement et une bonne croissance. Pendant leur croissance, les plantes sont soumises aux agressions d' agents pathogenes, tels que les champignons. Pour lutter contre ces agressions, l'utilisation massive des produits phytosanitaires ou pesticides est conventionnellement utilisee malgre les impacts importants qu'ils presentent sur l'environnement et la sante. Ainsi, dans le cadre du developpement d'une agriculture durable et plus respectueuse de l'environnement, l'utilisation des pesticides, tels que les fongicides, doit etre diminuee. Toutefois, toute diminution de l'utilisation de pesticides doit s'accompagner de la mise en place de nouvelles strategies de lutte contre les agents pathogenes, de facon a maintenir une production de qualite en quantite suffisante pour repondre aux besoins alimentaires croissants. L'une des strategies developpees consiste a stimuler les defenses des plantes pour qu'elles se defendent par elles-memes plus efficacement, permettant ainsi une reduction des quantites de pesticides appliquees sur les cultures. Dans ce contexte, diverses molecules ont ete developpees pour leur effet stimulateur des defenses des plantes (SDP). Toutefois tres peu de produits ou principes actifs sont aujourd'hui homologues et commercialises en tant que « SDP ». En ce qui concerne plus particulierement le ble (premiere culture cerealiere Francaise), seuls le Iodus 2® Cereales et la Vacciplant®, comprenant la laminarine en tant que principe actif, sont homologues en tant que SDP contre la septoriose et l'oidium. Cependant, l'efficacite au champ de ces SDP, en particulier le 2 Iodus 2 Cereales, reste assez faible et l'efficacite obtenue en conditions de culture controlee au laboratoire est rarement retrouvee en plein champ. Le developpement de nouveaux produits SPD plus efficaces contre la septoriose et l'oidium, maladies majeures des cultures de ble, est donc necessaire. 5 Dans ce contexte, Renard-Merlier et al. (Phytochemistry, 2007, 68, 1156-1164) et Randoux et al. (Phytopathology, 2010, 100, 1352-1363) ont teste le potentiel effet SDP du trehalose, a l' &at experimental en conditions controlees, pour ameliorer la lutte contre le champignon responsable de l'oidium, Blumeria graminis f. sp. trnici. Un pourcentage 10 de protection efficace d'environ 38 % du trehalose a ete obtenu grace a l'induction des mecanismes de defense du ble vis-a-vis de l'oidium (Tayeh et al., Phytopathology, 2014, 104, 293-305). Toutefois, cette protection est tres variable selon le mode d' application du trehalose et une infiltration de trehalose dans les feuilles de ble s'est montree etre plus efficace qu'une pulverisation foliaire. En outre, la dose utilisee de 15 g/L pour obtenir ce 15 pourcentage de protection le plus efficace est trop elevee pour envisager une application en champs. Ainsi, it existe aujourd'hui un reel besoin de developper de nouvelles molecules efficaces pour stimuler les defenses naturelles d'une plante, en particulier contre un agent 20 pathogene, tels que les champignons responsables de l'oidium et de la septoriose chez le ble. RESUME DE L' INVENTION 25 Devant cette problematique, les inventeurs ont synthetise des derives de trehalose difonctionnalises en 6,6'. En outre, ils ont demontre, de maniere surprenante, que ces derives particuliers de trehalose permettaient de proteger plus efficacement une plante, en particulier le ble, contre des agents pathogenes en stimulant ses defenses naturelles. 30 La presente invention concerne donc sur une utilisation d'un compose de formule (I) : 3 dans laquelle Ri represente un groupe choisi parmi : - un groupe -OR3, avec R3 etant un groupe choisi parmi : - un groupe alkyle en Ci-Cio, optionnellement substitue par au 5 moins un phenyle ou un groupe carboxyle, ou - un groupe acetyle ou tosyle, - un azoture ou un groupe -NR4R5, avec R4 et R5 etant independamment un hydrogene ou un groupe alkyle en Ci-C6, - un halogene, 10 - un hydrogene, ou - un groupe -O-CO-R6 ou -NH-CO-R6, avec R6 etant un phenyle optionnellement substitue par un hydroxyle ; ou un de ses sels pour stimuler les defenses naturelles d'une plante. 15 Selon un mode prefere de l'invention, Ri represente un groupe choisi parmi : - un groupe -OR3, avec R3 etant un groupe choisi parmi : - un groupe alkyle en Ci-Cio, optionnellement substitue par au moins un groupe carboxyle, ou - un azoture ou un groupe -NR4R5, avec R4 et R5 etant un hydrogene. 20 Selon un mode plus prefere, le compose de formule (I) ou un de ses sels utilise dans la presente invention est choisi parmi : - 6,6'-di-O-trityl-cc,a-trehalose ; - 6,6'-di-0-ethyl-6,6'-dideoxy-cc,a-trehalose ; 25 - 6,6'-di-O-butyl-6,6'-dideoxy-cc,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-hexy1-6,6'-dideoxy-cc,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-octy1-6,6'-dideoxy-cc,a-trehalose ; - 6,6' -di-O-carb oxym ethyl-a-a-trehal o se ; 4 - 6,6'-di-O-carboxyethyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxypropyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxybutyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxypentyl-a-a-trehalose ; 5 - 6,6'-di-O-toluene-p-sulfonyl-a,a-trehalose ; - 6,6'-diazido-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-diamino-6,6'-dideoxy-a-a-trehalose ; - 6,6'-diiodo-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-dichloro-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; 10 - 6,6'-dibromo-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-difluoro-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6' -di-0-(2-hydroxybenzoy1)-6,6' -dide oxy-a, a-trehalose ; et - 6,6' -di-(2-hydroxyb enzoylamino)-6, 6 ' -dide oxy-a, a-trehalose. 15 Un autre objet de l'invention concerne un procede pour stimuler les defenses naturelles d'une plante, comprenant l'application d'une composition comprenant un compose de formule (I) ou un de ses sels tels que defini ci-dessus, sur ladite plante. Selon un mode particulier, la composition est une composition aqueuse ou hydroalcoolique. Selon un autre mode particulier, la composition est appliquee par 20 pulverisation foliaire, par enrobage des graines, ou par arrosage et infiltration du sol. De preference, la plante est une cereale et, plus particulierement du ble. Un autre objet particulier de l'invention est un procede pour stimuler les defenses naturelles d'une plante, tel que defini ci-dessus, contre un agent pathogene fongique, de 25 preference Zymoseptoria tritici, et Blumeria graminis. Selon un mode prefere de l'invention, la composition mise en oeuvre dans le procede tel que defini ci-dessus est appliquee a une dose comprise entre 1 et 60 kg par hectare de champs, de preference entre 1 et 50, entre 1 et 20, entre 1 et 10 kg et entre 1,5 et 6 kg par 30 hectare de champs, et de maniere encore plus preferee a une dose d' environ 1,75, 3,5, ou 5,25 kg par hectare de champs. 5 Un autre objet de l'invention concerne aussi un compose ou un de ses sels choisi parmi : - 6,6'-di-O-butyl-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-hexy1-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxyethyl-a-a-trehalose ; 5 - 6,6'-di-O-carboxypropyl-a-a-trehalose; - 6,6'-di-O-carboxybutyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxypentyl-a-a-trehalose ;et - 6,6'-di-O-(2-hydroxybenzoyl)-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose. 10 LEGENDE DES FIGURES Figure 1 : Mesure de l'activite peroxydase dans les feuilles de ble apres traitement par les composes ICB11 et TNH2 (ICB21) a 1,5g/L ou sans traitement (H2O): A : Activite peroxydase mesuree 24 heures (J1) et 48 heures (J2 apres traitement. 15 B : Activite peroxydase mesuree 48h apres traitement (J2), 1 jour apres inoculation par le champignon B. graminis (J2+10 ou sans inoculation (J2+1ni). C: Activite peroxydase mesuree 48h apres traitement, 2 jours apres inoculation par le champignon B. graminis (J2+2i) ou sans inoculation (J2+2ni). Figure 2 : Activite lipoxygenase mesuree dans les feuilles de ble apres traitement par les 20 composes ICB11 et TNH2 (ICB21) a 1,5g/L ou sans traitement (H2O): A : Activite lipoxygenase mesuree 24 heures (J1) et 48 heures (J2) apres traitement. B : Activite lipoxygenase mesuree 48h apres traitement (J2), 1 jour apres inoculation par le champignon B. graminis (J2+1i) ou sans inoculation (J2+1ni). 25 C: Activite lipoxygenase mesuree 48h apres traitement, 2 j ours apres inoculation par le champignon B. graminis (J2+2i) ou sans inoculation (J2+2ni). Figure 3: Repartition des differents evenements de germination des spores du champignon B. graminis observes par categorie (spores non germees, spores avec un petit tube germinatif appressorial (TGA), spores avec un long TGA, spores avec plusieurs 30 TGA, spores avec des TGA avortes) 24 heures apres traitement avec les composes ICB5, ICB8, ICB11 et ICB21 (TNH2) a 1,5 g/L ou sans traitement (H2O). 6 Figure 4 : Observation des surfaces necrosees (taches brunes) dues a la septoriose chez les plantules de ble traitees avec differents composes. A : Representation graphique du pourcentage de surfaces necrosees selon differents traitements avec ICB5, ICB8, ICB11, ou ICB21 (THN2) en comparaison avec 5 le Vacciplant et le trehalose natif. B : Photographies de feuilles de plantules de ble traitees avec ICB5, ICB8, ICB11, ou ICB21 (THN2) a 1,5 g/L, et sans traitement (Controle). Figure 5 : Comparaison du pourcentage de pycnides chez des plantules de ble (cultivar Alixan) traitees avec du Vacciplant (Laminarine a 37 g/L), par rapport au traitement avec 10 du trehalose natif, ou ICB5, ICB8, ICB11, et ICB21 (TNH2) a 1,5 g/L, et sans traitement (Controle). Figure 6 : Evaluation du pourcentage de pycnides chez des plantules de ble (cultivar Pakito) traitees avec ICB5, ICB8, ICB11, et ICB21 (THN2) a 1,5 g/L, et sans traitement (Controle). 15 Figure 7 : Photographies d'observations microscopiques des pycnides apres &coloration des feuilles de ble (A : Feuille de ble inoculee avec Z. tritici; B : Feuille de ble traitee par ICB11 a 1,5 g/L et inoculee avec Z. tritici; C : Feuille de ble traitee par ICB21 (THN2) a 1,5 g/L et inoculee avec Z. tritici). Figure 8 : Evaluation du pourcentage de pycnides chez des feuilles de ble (cultivar 20 Alixan) inoculees avec Z. tritici et traitees avec ICB11, et ICB21 (THN2) a 1,5 g/L, et sans traitement (Controle). Figure 9 : Evaluation de l'accumulation de callose sur des feuilles de ble traitees avec ICB11, et ICB21 (TNH2) a 1,5 g/L et sans traitement (H2O) (48h apres traitement (J2)), inoculees ou non avec Z. tritici (a 2, 9 et 11 jours apres inoculation). 25 Figure 10 : Mesure de l'activite peroxydase dans les feuilles de ble apres traitement par les composes ICB11 et TNH2 (ICB21) a 1,5g/L ou sans traitement (H2O): A : Activite peroxydase mesuree 24 heures (J1) et 48 heures (J2 apres traitement. B : Activite peroxydase mesuree 48h apres traitement (J2), 1 jour apres inoculation par le champignon Z. tritici (J2+10 ou sans inoculation (J2+1ni). 30 C: Activite peroxydase mesuree 48h apres traitement, 2 jours apres inoculation par le champignon Z. tritici (J2+2i) ou sans inoculation (J2+2ni). 7 D: Activite peroxydase mesuree 48h apres traitement, 9 jours apres inoculation par le champignon Z. tritici (J2+9i) ou sans inoculation (J2+9ni). E: Activite peroxydase mesuree 48h apres traitement, 11 jours apres inoculation par le champignon Z. tritici (J2+1 1i) ou sans inoculation (J2+1 lni). 5 F: Activite peroxydase mesuree 48h apres traitement, 13 jours apres inoculation par le champignon Z. tritici (J2+13i) ou sans inoculation (J2+13ni). Figure 11 : Mesure de l'activite lipoxygenase dans les feuilles de ble apres traitement par les composes ICB11 et TNH2 (ICB21) a 1,5g/L ou sans traitement (H2O): A : Activite lipoxygenase mesuree 24 heures (J1) et 48 heures (J2 apres 10 traitement. B : Activite lipoxygenase mesuree 48h apres traitement (J2), 1 jour apres inoculation par le champignon Z. tritici (J2+10 ou sans inoculation (J2+1ni). C: Activite lipoxygenase mesuree 48h apres traitement, 2 jours apres inoculation par le champignon Z. tritici (J2+2i) ou sans inoculation (J2+2ni). 15 D: Activite lipoxygenase mesuree 48h apres traitement, 9 j ours apres inoculation par le champignon Z. tritici (J2+9i) ou sans inoculation (J2+9ni). E: Activite lipoxygenase mesuree 48h apres traitement, 11 jours apres inoculation par le champignon Z. tritici (J2+1 1i) ou sans inoculation (J2+1 lni). F: Activite lipoxygenase mesuree 48h apres traitement, 13 j ours apres inoculation 20 par le champignon Z. tritici (J2+13i) ou sans inoculation (J2+13ni). DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Les composes de formule (I), et leurs sels decrits dans la presente demande permettent de 25 stimuler les defenses naturelles d'une plante, notamment le ble, lui assurant ainsi une protection efficace contre des agents pathogenes, tels que les champignons, en reduisant la surface de necroses, le developpement des pustules et des pycnides. Plus particulierement, les inventeurs ont demontre que les composes de l'invention presentaient toutes les caracteristiques des produits SDP en induisant notamment 30 l'expression d'enzymes et de genes caracteristiques des defenses des plantes, ainsi que l'accumulation d'un depot de callose. 8 Composes de formule (I) Le trehalose est un sucre, et plus precisement, un disaccharide compose deux molecules de glucose liees par une liaison 1,1-a-glycosidique. Il est d'origine naturel et peut se 5 trouver dans certaines plantes et champignons. Le trehalose serait implique dans la capacite qu' auraient certaines plantes a resister a des periodes prolongees de dessiccation. En outre, le trehalose presente egalement, a forte concentration, un effet SDP chez le ble tel qu'illustre par les travaux de Tayeh et al. (Phytopathology, 2014, 104, 293-305). 10 Les composes de formule (I) et leurs sels tels que &finis dans la presente demande et utilises pour stimuler les defenses naturelles des plantes sont des derives de trehalose fonctionnalises sur le groupement Ri (positions 6 et 6' du trehalose natif). Plus specifiquement, les composes et leurs sels repondent a la formule generale (I) 15 suivante : dans laquelle Ri represente un groupe choisi parmi : - un groupe -0R3, avec R3 etant un groupe choisi parmi : 20 - un groupe alkyle en Ci-Cio, optionnellement substitue par au moins un phenyle ou un groupe carboxyle, ou - un groupe acetyle ou tosyle, - un azoture ou un groupe -NR4R5, avec R4 et R5 etant independamment un hydrogene ou un groupe alkyle en Ci-C6, 25 - un halogene, - un hydrogene, ou - un groupe -O-CO-R6 ou -NH-CO-R6, avec R6 etant un phenyle optionnellement substitue par un hydroxyle. 9 Dans le cadre de la presente invention, les termes ci-dessous ont les definitions suivantes : Le terme « alkyle » designe un radical hydrocarbons sature ou instaure, lineaire ou ramifie, ayant plus particulierement de 1 a 10, de preference 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 atomes de carbones. On peut citer, par exemple, les radicaux methyle, ethyle, propyle, 5 isopropyle, butyle, isobutyle, tert-butyle, pentyle, hexyle, heptyle, octyle, nonyle, decyle. Le terme « halogene » correspond a un atome de fluor, de chlore, de brome, ou d'iode, et est de preference un atome de chlore ou d'iode. Le terme « azoture » correspond a un groupe N3. Le terme « carboxyle » correspond a un groupe COOH. 10 L' expression « substitue par au moins » signifie que le radical est substitue par un ou plusieurs groupes de la liste. Le terme « sel » designe tous les sels du compose d'interet de formule (I). Ils comprennent des sels de groupes acides ou basiques presents dans le compose specifie. Les sels d'addition acide comprennent, mais ne sont pas limites, a des sels de chlorhydrate, 15 bromhydrate, iodhydrate, nitrate, sulfate, bisulfate, phosphate, phosphate acide, isonicotinate, acetate, lactate, salicylate, citrate, tartrate, pantothenate, bitartrate, ascorbate, succinate, maleate, gentisinate, fumarate, gluconate, glucaronate, saccharate, formate, benzoate, glutamate, methanesulfonate, ethanesulfonate, benzenesulfonate, ptoluenesulfonate et le pamoate (c'est-d-dire, 1,1'- methylene-bis-(2-hydroxy-3- 20 naphtoate)). De preference, un sel acide est le chlorhydrate ou le bromhydrate. Des sels de base adaptes comprennent, mais ne sont pas limites, a des sels d'aluminium, calcium, lithium, magnesium, potassium, sodium, zinc, et diethanolamine. De preference, un sel basique est le sodium. 25 Selon un mode particulier de l' invention, Ri represente un groupe choisi parmi : - un groupe -OR3, avec R3 etant un groupe choisi parmi : - un groupe alkyle en Ci-Cio, optionnellement substitue par au moins un groupe carboxyle, ou - un azoture ou un groupe -NR4R5, avec R4 et R5 etant un hydrogene. 30 De preference, Ri represente un groupe choisi parmi : - un groupe -OR3, avec R3 etant un groupe choisi parmi : 10 - un groupe alkyle en Ci-C7, optionnellement substitue par au moins un groupe carboxyle, ou - un groupe -NR4R5, avec R4 et R5 etant un hydrogene. 5 Un compose de formule (I) ou un de ses sels prefere, utilise dans la presente invention, est un compose choisi parmi : - 6,6'-di-O-trityl-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-0-ethyl-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-butyl-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; 10 - 6,6' -di-O-hexy1-6,6' -di deoxy-a, a-trehalose ; - 6,6'-di-O-octy1-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxymethyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxyethyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxypropyl-a-a-trehalose; 15 - 6,6' -di-O-carboxybutyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxypentyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-toluene-p-sulfonyl-a,a-trehalose ; - 6,6'-diazido-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-diamino-6,6'-dideoxy-a-a-trehalose ; 20 - 6,6'-diiodo-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-dichloro-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-dibromo-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-difluoro-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6' -di-0-(2-hydroxybenzoy1)-6,6' -dide oxy-a, a-trehalose ; et 25 - 6,6' -di-(2-hydroxybenzoylamino)-6,6' -dide oxy-a, a-trehalos e ; de preference, choisi parmi : - 6,6'-di-0-ethyl-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-octy1-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxyethyl-a-a-trehalose ; et 30 - 6,6'-diamino-6,6'-dideoxy-a-a-trehalose ; et de maniere encore plus preferee, choisi parmi : 11 - 6,6'-di-O-carboxyethyl-a-a-trehalose ; et - 6,6'-diamino-6,6'-dideoxy-a-a-trehalose. Un objet de l'invention concerne aussi un compose ou un de ses sels choisi parmi : 5 - 6,6'-di-O-butyl-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-hexy1-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxyethyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxypropyl-a-a-trehalose; - 6,6'-di-O-carboxybutyl-a-a-trehalose ; 10 - 6,6'-di-O-carboxypentyl-a-a-trehalose ;et - 6,6'-di-O-(2-hydroxybenzoyl)-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose. Application 15 L'invention concerne l'utilisation d'un compose de formule (I) ou un de ses sels tels que decrits ci-dessus pour stimuler les defenses naturelles d'une plante. L'invention concerne egalement un procede pour stimuler les defenses naturelles d'une plante, comprenant l'application d'une composition comprenant un compose de formule (I) ou un de ses sels tels que decrits ci-dessus, sur ladite plante. 20 Dans le cas d'une plante ayant eu un premier contact avec un agent pathogene, la stimulation des defenses naturelles se traduit par un ensemble de modifications biologiques qui conferent a cette plante une presensibilisation (« resistance systemique acquise »). L'agent pathogene provoque en reaction chez la plante la production de 25 molecules elicitrices (couramment appelees « eliciteurs ») qui induisent et stimulent les defenses naturelles. La plante devient ainsi capable de reagir plus efficacement face a une nouvelle attaque. La stimulation des defenses naturelles des plantes peut egalement etre induite de maniere externe, c' est-à-dire sans que la plante ait ete en contact avec un agent pathogene mais sur laquelle un eliciteur a ete appliqué. Ainsi, dans le cadre de la presente 30 invention, les composes de formules (I) sont des produits presentant des proprietes elicitrices, stimulant ainsi les defenses naturelles des plantes. 12 Par « agent pathogene », on entend ici tout organisme capable de causer une maladie chez les plantes. Par exemple, un agent pathogene peut etre une bacterie, un parasite, un virus, ou un champignon. Dans le cadre de la presente invention, un agent pathogene est de preference un champignon. 5 Par « stimuler les defenses naturelles d'une plante », on entend ici l'induction ou l'augmentation d' au moins une des modifications biologiques suivantes : une production de molecule(s) antibiotique(s), un renforcement de la paroi cellulaire illustre par un depot de callose, une expression accrue d'un ou plusieurs genes de defense tels que Pall, LOX1, 10 PR1, PDX2, CHI4, NPR1, et OXO, et une augmentation des activites enzymatiques, telles que la peroxydase et la lipoxygenase. Cette stimulation des defenses naturelles permet ainsi de proteger efficacement la plante de toute maladie telle que la septoriose en reduisant la surface de necroses et/ou le developpement des pycnides, et l'oidium en reduisant le developpement des pustules. 15 L'invention concerne aussi un procede ou une methode pour renforcer la paroi cellulaire et/ou exprimer un ou plusieurs genes de defense d'une plante et/ou augmenter activite enzymatique, en particulier la peroxydase et/ou la lipoxygenase, chez une plante, comprenant l'application d'une composition comprenant un compose de formule (I) ou 20 un de ses sels tels que decrits ci-dessus, sur ladite plante. Selon un mode particulier de l'invention, la plante est une cereale, par exemple l'orge, l'avoine, le millet, le mais, le riz, le seigle, le ble, etc. De preference la plante est du ble. Dans le contexte de l'invention, le ble comprend toutes les varietes de ble connues de 25 l'homme du métier et notamment les cultivars de ble Alixan et Pakito. Au cours de sa croissance et de son developpement, le ble peut developper un nombre considerable de maladies. On peut citer par exemple l'oidium, la fusariose, la septoriose, le pietin-verse, et la rouille brune, couronnee, jaune, et noire. Les maladies les plus 30 communes sont notamment l'oidium et la septoriose. 13 Les symptomes de l'oidium peuvent etre observes sur les feuilles, les tiges et les epis, mais ce sont les feuilles qui sont les plus souvent attaquees. Generalement, des pustules blanches se developpent, et produisent une masse de spores ayant une apparence poudreuse. Au fur et a mesure de leur croissance, les pustules d'oidium foncent et 5 prennent une couleur grise ou brune. A terme, des organes contenant des spores noires (les cleistotheces) sont retrouves incorpores dans les pustules de l'oidium. Des champignons responsables de l'apparition de l'oidium chez le ble sont notamment des champignons appartenant a la famille des Erysiphaceae, tels que Blumeria graminis forma specialis tritici (Blumeria graminis f. sp. tritici). 10 Les symptomes de la septoriose peuvent etre observes des les premieres phases de croissance. Dans les jeunes parcelles de ble a semis automnal, des plaques aqueuses, qui prennent rapidement une apparence brune et necrotique, sont déjà observables debut decembre, ainsi que tout au long de l'hiver sur les &ages foliaires inferieurs. Celles-ci 15 contiennent des pycnides noires apparentes qui caracterisent la presence du champignon Mycosphaerella graminicola (anamorphe Zymoseptoria tritici), responsable de la septoriose du ble. Ainsi, un objet prefere de l'invention est un procede ou une methode tel que decrit ci- 20 dessus pour stimuler les defenses naturelles d'une plante contre un agent pathogene fongique, de preference Zymoseptoria tritici, et Blumeria graminis. La composition comprenant un compose de formule (I) ou un de ses sels et mise en oeuvre dans la methode ou le procede pour stimuler les defenses naturelles d'une plante peut etre 25 formulee sous une forme connue de l'homme du métier pour etre appliquee sur une plante. De preference, la composition se presente sous forme de poudre ou de solution, et est avantageusement une solution. Selon un mode prefere de l'invention, la composition est une solution aqueuse ou hydro-alcoolique. Lorsque la composition est une solution 30 aqueuse, le compose de formule (I) ou un de ses sels est dissous dans de l' eau a une concentration donnee. Lorsque la composition est une solution hydro-alcoolique, le compose de formule (I) ou un de ses sels est dissous dans un mélange comprenant de 14 l'eau et un solvant alcoolique, telle que le methanol, methanol, le propylene glycol, le propanol, le butanol, etc. La concentration ou la dose en compose de formule (I) ou un de ses sels dans la 5 composition mise en oeuvre dans la methode ou le procede de l'invention dependent bien entendu de l' espece de plante a traiter et de son stade de developpement. De preference, la composition est appliquee a une dose comprise entre 1 et 60 kg par hectare de champs, de preference entre 1 et 50, entre 1 et 20, entre 1 et 10 kg et entre 1,5 et 6 kg par hectare de champs, et de maniere encore plus preferee a une dose d'environ 1,75, 3,5, ou 5,25 kg 10 par hectare de champs. Les doses decrites ci-dessus et appliquees pour un traitement en champs, peuvent etre extrapolees des tests realises en laboratoire. En effet, les inventeurs ont demontre dans les exemples ci-apres qu'une concentration minimale de 0,5 g/L d'un compose de l'invention etait suffisante pour assurer un pourcentage de protection satisfaisant chez le ble. En 15 conditions de laboratoire, il est generalement appliqué un volume de 15 mL d'une solution comprenant un compose de l'invention sur une surface d'application au sol de 0,0429 m2. Dans le cas ou le compose a une concentration de 0,5 g/L, il est donc appliqué 7,5 mg (0,5 g x 15 mL) sur 0 ,0429 m2, ce qui correspond a 1,748 kg pour 100 m2, c' esta-dire environ 1,75 kg par hectare de champs. De maniere similaire, une concentration de 20 1 g/L d'un compose de l'invention correspond a une dose d'environ 3,5 kg par hectare de champs. Une concentration de 1,5 g/L d'un compose de l'invention correspond a une dose d'environ 5,25 kg par hectare de champs et une concentration de 15 g/L d'un compose de l'invention correspond a une dose d'environ 52,5 kg par hectare de champs. Bien entendu, l'homme du métier tiendra compte des normes applicables pour une application en 25 champs et veillera a ne pas utiliser des doses superieures aux normes etablies par hectare de champs. La composition comprenant un compose de formule (I) ou un de ses sels et mise en oeuvre dans la methode ou le procede pour stimuler les defenses naturelles d'une plante peut etre 30 appliquee par tout moyen connus de l'homme du métier. Par exemple, la composition peut etre appliquee directement sur la plante par pulverisation foliaire ou sur la semence de la plante par enrobage des graines. Une pulverisation foliaire consiste a vaporiser une 15 solution sous forme de gouttelettes sur les feuilles de plante. L'enrobage des graines consiste a recouvrir la graine d'un film comprenant la composition. La composition peut aussi etre appliquee directement sur le sol sur lequel pousse la plante, par arrosage et infiltration. Dans un mode de realisation particulier, la composition est appliquee par 5 pulverisation foliaire, par enrobage des graines, ou par arrosage et infiltration du sol. D'autres aspects et avantages de l'invention apparaitront a la lecture des exemples qui suivent, qui doivent etre consideres comme illustratifs et non limitatifs. 10 EXEMPLES Exemple 1 : Synthese des composes ICB Les composes synthetises selon les methodes decrites ci-dessous ont ete analyses par 15 RMN et/ou spectrometrie de masse. Les spectres de Resonance Magnetique Nucleaire (RMN) ont ete enregistres sur un spectrometre Brucker Avance II 400 operant a 400 MHz pour le proton et a 100 MHz pour le carbone. Les spectres de masse haute resolution ont ete enregistres sur un Spectrometre Agilent 20 Technologies 6540 UHD Accurate-Mass Q-TOF LC-MS en mode introduction directe equipe d'une source electrospray en mode positif ou negatif avec une valeur variable suivant les molecules. Les spectres de masse ont ete enregistres sur un Spectrometre Maldi-TOF/TOF Brucker Daltonics Ultraflex II en mode reflectron positif avec pour matrice le 2.5 DHB. 25 - 6,6'-di-O-trityl-ot,ot-trehalose (ICB1) 20 g de trehalose anhydre et 45,56 g de chlorure de trityle ont ete dissous dans 400 mL de pyridine. Le mélange reactionnel a ete agite pendant 1 nuit a temperature ambiante. Le solvant a ete evapore. Le trehalose n'ayant pas reagi, a ete elimine par un lavage a l' eau. 30 Le solide obtenu a ete agite avec du toluene pendant une nuit et filtre sous vide. Cette operation a ete repetee une fois puis le produit a ete fibre et seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 95% a ete obtenue. 16 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 6 (ppm) : 7,42-7,22 (m, H arom. du trityle, 30H), 5,12 (d, J=3,6Hz, 2H), 4,89 (d, J=4,9Hz, 2H), 4,83 (d, J=5,3Hz, 2H), 4,77 (d, J=6,4Hz, 2H), 4,034,01 (m, 2H), 3,61-3,59 (m, 2H), 3,37-3,35 (m, 2H), 3,19 (app d, J=8,2Hz, 2H), 3,16-3,14 (m, 2H). 5 13C-RMN (400 MHz, DMSO) 6 (ppm): 144,5 ; 128,8 ; 128,3 ; 127,3 (C sur cycle de trityle), 93,6 (C1) ; 73,8 ; 72,1 ; 71,6 ; 71,0 (C2-05) ; 7,0 (C6). - 6,6'-di-0-ethyl-6,6'-dideoxy-ot,a-trehalose (ICB5) a) synthese du 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acetyl-6,6'-di-O-trityl-ot,ot-trehalose 10 20 g de 6,6'-di-O-trityl-a,a-trehalose ont ete dissous dans 200 mL de pyridine anhydre et 200 mL d'anhydride acetique. Le mélange reactionnel a ete laisse sous agitation pendant une nuit a temperature ambiante. Celui-ci a ensuite ete verse dans de l'eau froide et place au froid pendant une nuit. Le solide a ete fibre et seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 91% a ete obtenue. 15 1H-RMN (400 MHz, CDC13) 6 (ppm): 7,43-7,25 (m, H arom. du trityle, 30H), 5,48 (t, J=9,8Hz, 2H), 5,46 (d, J=3,6Hz, 2H), 5,22-5,17 (t, dd, J=10,8Hz, J=10,8Hz, J=4,4Hz, 4H), 4,16-4,12 (m, 2H), 3,13 (d, J=3,0Hz, 4H), 2,01 (s, 6H, Ac), 1,92 (s, 6H, Ac), 1,77 (s, 6H, Ac). 13C-RMN (400 MHz, CDC13) 6 (ppm): 170,2 ; 169,7 ; 169,2 (C=0 Ac) ; 143,4 ; 128,6 ; 20 127,9 (C sur cycle de trityle) ; 92,7 (C1) ; 70,6 ; 69,8 ; 69,7 ; 68,9 (C2-05) ; 61,8 (C6) ; 20,7 ; 20,6 ; 20,4 (CH3 Ac). b) synthese 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acetyl-ot,ot-trehalose 1 g de 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acetyl-6,6'-di-O-trityl-a,a-trehalose ont ete dissous dans 20 mL d'acide acetique a 80% aqueux. Le mélange a ete laisse sous agitation a 75°C pendant 25 20h puis refroidi a temperature ambiante. Le trityl deprotege a ete precipite par ajout d'eau distillee. La phase aqueuse a ensuite ete extraite avec de l'ether diethylique puis evaporee et sechee sous vide. Une poudre crème avec un rendement de 85% a ete obtenue. 1H-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 5,51 (dd, J=9,4Hz, J=10,3Hz, 2H), 5,28 (d, J=3,9Hz, 2H), 4,99 (dd, J=9,4Hz, J=10,4Hz, 2H), 4,96 (dd, J=10,3Hz, J=4,0Hz, 2H), 3,94-3,92 (m, 30 2H), 3,63-3,61 (m, 4H), 2,07 (s, 6H, Ac), 2,06 (s, 6H, Ac), 2,02 (s, 6H, Ac). 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 162,8 ; 162,4 ; 162,1 (C=0 Ac); 93,1 (C1); 72,4 ; 72,0 ; 70,9 (C2-05) ; 60,4 (C6) ; 20,7 ; 20,2 (CH3 Ac). 17 FIRMS (ESI+) (m/z): calcule pour Ci6H26Na013+ [M+ Na]+ 449,1266, experimental 449,1262. c) Synthese du 6,6'-diethyl-6,6'-dideoxy-ot,ot-trehalose 1 g de 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acetyl-6,6'-diethyl-a,a-trehalose ont ete dissous dans 20 mL 5 de methanol. Du sodium metallique a ete ajoute jusqu'a un pH= 9. Le mélange a ete laisse sous agitation pendant 48h. La solution a ete neutralisee avec des solutions d'acide chlorhydrique a 1N et 0,1 N. Le solvant a ete evapore sous vide et le solide obtenu a ete seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 96% a ete obtenue. 1H-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm) : 5,16 (d, J=3,6Hz, 2H), 3,84 (t, J=4,5Hz, 2H), 3,81 10 (t, J=4,6Hz, 2H), 3,76 (d, J=6,3Hz, 2H), 3,63-3,62 (m, 2H), 3,44-3,42 (m, 4H), 2,70 (q, J=6,9Hz, 4H, CH2), 1,17 (t, J=6,8Hz, 6H, CH3). 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm) : 93,3 (C1) ; 72,6 ; 72,2 ; 71,1 ; 69,7 (C2-05) ; 60,6 (C6) ; 30,4 (CH2O) ; 25,4 (CH3). MALDI-TOF (m/z): calcule pour Ci6H3oNa0ii+ [M-Na]+421,1 experimental 420,9. 15 - 6,6'-di-O-butyl-6,6'-dideoxy-ot,ot-trehalose (ICB6) lg de 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acetyl-6,6'-diethyl-a,a-trehalose ont ete dissous dans 20 mL de methanol. Du sodium metallique a ete ajoute jusqu'a un pH= 9. Le mélange a ete laisse sous agitation pendant 48h. La solution a ete neutralisee avec des solutions d'acide 20 chlorhydrique a 1N et 0,1 N. Le solvant a ete evapore sous vide et le solide obtenu a ete seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 73% a ete obtenue. 1H-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm) : 5,14 (d, J=4,9Hz, 2H), 3,86 (t, J=3,7Hz, 2H), 3,81 (t, J=6,2Hz, 2H), 3,73 (d, J=3,9Hz, 2H), 3,66-3,62 (m, 2H), 3,43-3,40 (m, 4H), 3,13 (m, 4H, CH2), 1,33 (qi, J=7,4Hz, 8H, CH2), 0,91 (t, J=7,4Hz, 6H, CH3). 25 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm) : 93,3 (C1) ; 72,6 ; 72,2 ; 71,1 ; 69,7 (C2-05) ; 60,6 (C6) ; 36,5 (CH2O) ; 28,7 ; 26,4 (CH2) ; 25,5 (CH3). MALDI-TOF (m/z): calcule pour C20H3sNa011+ [M-Na]+477,2 experimental 477,1. - 6,6'-di-O-hexy1-6,6'-dideoxy-mot-trehalose (ICB7) 30 lg de 2,3,4,2%3 ',4'-hexa-0-acety1-6,6'-dihexyl-a,a-trehalose ont ete dissous dans 20 mL de methanol. Du sodium metallique a ete ajoute jusqu'a un pH= 9. Le mélange a ete laisse sous agitation pendant 48h. La solution a ete neutralisee avec des solutions d'acide 18 chlorhydrique a 1N et 0,1 N. Le solvant a ete evapore sous vide et le solide obtenu a ete seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 59% a ete obtenue. 11-1-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 5,11 (d, J=5Hz, 2H), 3,83-3,30 (m, 14H), 1,48-1,40 (m, 4H, OCH2CH2), 1,28-1,15 (m, 8H, CH2), 0,90 (t, J=6,7Hz, 6H, CH3). 5 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 93,3 (C1) ; 72,6 ; 72,3 ; 71,2 ; 69,8 (C2-05) ; 60,7 (C6) ; 40,2 (CH2O) ; 37,1 ; 34,8 ; 31,1 ; 29,2 ; 28,4 ; 25,4 (CH2) ; 25,5 (CH3). MALDI-TOF (m/z): calcule pour C24H46Na0ii+ [M-Na]+510,3 experimental 533,1. - 6,6'-di-O-octy1-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose (ICB8) 10 lg de 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acetyl-6,6'-dioctyl-cc,a-trehalose ont ete dissous dans 20 mL de methanol. Du sodium metallique a ete ajoute jusqu'a un pH= 9. Le mélange a ete laisse sous agitation pendant 48h. La solution a ete neutralisee avec des solutions d'acide chlorhydrique a 1N et 0,1 N. Le solvant a ete evapore sous vide et le solide obtenu a ete seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 74% a ete obtenue. 15 11-1-R1VIN (400 MHz, D20) 6 (ppm) : 5,00 (dd, J=2,8Hz, J=3,6Hz, 2H), 3,85-3,35 (m, 14H, H2, H3, H4, H5, H6, OCH2 ), 1,49-1,44 (m, 4H, OCH2CH2), 1,32-1,14 (m, 10H, CH2), 0,80 (t, J=6,8Hz, 6H, CH3). 13C-RIVIN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 93,3 (C1) ; 72,6 ; 72,3 ; 71,2 ; 69,8 (C2-05) ; 60,7 (C6) ; 40,2 (CH2O) ; 37,1 ; 34,8 ; 31,1 ; 29,2 ; 28,4 ; 27,1 ; 25,4 (CH2) ; 25,5 (CH3). 20 MALDI-TOF (m/z): calcule pour C28H54Na011+ [M-Na]+589,3 experimental 589,2. - 6,6'-di-O-carboxymethyl-a-a-trehalose (ICB9 et ICB10) 5g de trehalose sec ont ete dissous dans 30 mL de dioxane suivi de l'addition de 4 g de soude en micro-perles. L' agitation a 40°C a ete laissee pendant 2h. Puis 4,82 equivalents 25 d'acide-2-chloroacetique ont ete ajoutes petit a petit, l'ensemble a ete laisse sous agitation pendant 3h. Un lavage avec 15 mL de methanol a ete effectue. Le solide a ensuite ete seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 66% a ete obtenue. 11-1-R1VIN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 5,11 (s, 2H), 3,97 (s, 4H), 3,79-3,70 (m, 8H), 3,57 (d, J=7,2Hz, 2H), 3,37 (t, J=8,8Hz, 2H). 30 13C-RIVIN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 6 174,9 (C=0) ; 93,2 (C1) ; 72,5 ; 72,1 ; 71,0 ; 69,6 (C2- 05) ; 60,5 (C6) ; 43,8 (CH2 C=0). MALDI-TOF (m/z): calcule pour C16H24Na2015+ [M]+502,1 experimental 502,9. 19 La meme synthese a ete realisee en utilisant de l'acide 2-bromoacetique avec un rendement de 22,5%. - 6,6'-di-O-carboxyethyl-a-a-trehalose de sodium (ICBM 5 5g de trehalose sec ont ete dissous dans 30mL de dioxane suivi de l'addition de 4 g de soude en micro-perles. L'agitation a 40°C a ete laissee pendant 2h. Puis 4,82 equivalents d'acide-3-bromopropionique ont ete ajoutes petit a petit, l'ensemble a ete laisse sous agitation pendant 3h. Un lavage avec 15mL de methanol a ete effectue. Le solide a ensuite seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 85% a ete obtenue. 10 11-I-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 5,13 (d, J=3,5Hz, 2H), 3,81-3,70 (m, 8H), 3,59-3,58 (m, 2H), 3,54 (t, J=6,2Hz, 4H), 3,38 (t, J=9,2Hz, 2H), 2,72 (q, J=6,0Hz, 4H), 2,37 (t, J=6,6Hz, 4H). 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 182,4 (C=0) ; 93,2 (C1) ; 72,5 ; 72,2 ; 71,1 ; 69,7 (C2-05) ; 60,5 (C6) ; 37,4 (CH20) ; 30,3 (CH2C0) ; 26,8 (C-CH2-C). 15 FIRMS (ESI+) (m/z): calcule pour Ci8E128Na015+ [M+ Na]+ 509,15, experimental 509,16. - 6,6'-di-O-carboxypropyl-a-a-trehalose de sodium (ICB12) 5g de trehalose sec ont ete dissous dans 30mL de dioxane suivi de l'addition de 4 g de soude en micro-perles. L'agitation a 40°C a ete laissee pendant 2h. Puis 4,82 equivalents 20 d'acide-4-bromobutanoique ont ete ajoutes petit a petit, l'ensemble a ete laisse sous agitation pendant 3h. Un lavage avec 15mL de methanol a ete effectue. Le solide a ensuite seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 41% a ete obtenue. 11-I-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 5,13 (d, J=3,8Hz, 2H), 3,80-3,69 (m, 8H), 3,59-3,58 (m, 2H), 3,52 (t, J=6,7Hz, 4H), 3,35 (t, J=9,3Hz, 2H), 2,16 (t, J=7,8Hz, 4H), 1,72 (q, 25 J=7,3Hz, 4H). 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 183,1 (C=0) ; 93,2 (C1) ; 72,2 ; 72,1 ; 71,1 ; 66,5 (C2-05) ; 61,5 (C6) ; 48,9 (CH20) ; 34,0 (CH2CO) ; 28,4 (C-CH2-C). MALDI-TOF (m/z): calcule pour C20I-132Na2011+ [M-Na]+581,2 experimental 581,8. 30 - 6,6'-di-O-carboxybutyl-a-a-trehalose de sodium (ICB13 et ICB14) 5g de trehalose sec ont ete dissous dans 30 mL de dioxane suivi de l'addition de 4 g de soude en micro-perles. L'agitation a 40°C a ete laissee pendant 2h. Puis 4,82 equivalents 20 d'acide-5-chloropentanoique ont ete ajoutes petit a petit, l'ensemble a ete laisse sous agitation pendant 3h. Un lavage avec 15 mL de methanol a ete effectue. Le solide a ensuite ete seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 45% a ete obtenue. La meme synthese a ete realisee en utilisant de l'acide 5-bromopentanoique, avec un 5 rendement de 12,8%. 1H-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 5,04-5,00 (m, 2H), 3,73-3,45 (m, 16H), 3,50-3,45 (m, 2H), 2,07 (t, J=7,4Hz, 4H), 1,64-1,54 (m, 8H). 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 183,4 (C=0) ; 93,2 (C1) ; 72,5 ; 72,1 ; 71,0 ; 69,6 (C2-05) ; 60,5 (C6) ; 45,2 (CH20) ; 36,7 (CH2CO) ; 31,6 ; 23,2 (C-CH2-C). 10 MALDI-TOF (m/z): calcule pour C22H36Na2015+ [M-Na]+609,1 experimental 609,0. - 6,6'-di-O-carboxypentvl-a-a-trehalose de sodium (ICB15 et ICB16) 5g de trehalose sec ont ete dissous dans 30 mL de dioxane suivi de l'addition de 4 g de soude en micro-perles. L'agitation a 40°C a ete laissee pendant 2h. Puis 4,82 equivalents 15 d'acide-6-chlorohexanoique ont ete ajoutes petit a petit, l'ensemble a ete laisse sous agitation pendant 3h. Un lavage avec 15mL de methanol a ete effectue. Le solide a ensuite ete seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 32% a ete obtenue. La meme synthese a ete realisee en utilisant de l'acide 6-bromohexanoiqueavec un rendement de 8,0% 20 1H-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 5,11 (d, J=3,4Hz, 2H), 3,82-3,55 (m, 12H), 3,42-3,38 (m, 4H), 2,11 (t, J=7,3Hz, 4H), 1,81-1,77 (m, 4H), 1,51-1,46 (m, 4H), 1,39-1,33 (m, 4H). 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 183,8 (C=0) ; 93,2 (C1) ; 72,4 ; 72,2 ; 71,0 ; 69,6 (C2-05) ; 60,5 (C6) ; 37,4 (CH20) ; 35,1 (CH2C0) ; 31,8 ; 27,3 ; 24,9 (C-CH2-C). MALDI-TOF (m/z): calcule pour CisH3oNa013+ [M-H]+477,4 experimental 478,5. 25 - 6,6'-di-O-toluene-p-sulfonyl-ot,a-trehalose (ICB18) 1g de 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acety1-6,6'-di-O-toluene-p-sulfonyl-a,a-trehalose a ete dissout dans 20 mL de methanol. Sous agitation, quelques grammes de sodium ont ete ajoutes jusqu'a obtenir un pH de 9. Le mélange a ete laisse sous agitation a temperature 30 ambiante pendant 48h. Ensuite, de l'acide chlorhydrique a 0.1M a ete ajoute jusqu'd avoir un pH de 4-5. Le mélange a ete evapore. La poudre obtenue a ete mise en contact avec de 21 methanol et le milieu a ete laisse reposer 24h. La poudre a ete filtree et sechee. Une poudre blanche avec un rendement de 98% a ete obtenue. 1H-RMN (400 MHz, CDC13) : 6 7.67 (d, J=7.64Hz, 4H, arom. H ortho de C-SO2), 7.35 (d, J=7.52Hz, 4H, arom. H ortho de C-CH3), 5.50 (s, 2H), 4.41-4.34 (m, 6H), 4.29-4.26 5 (m,6H), 2.37 (s, 6H, Me de Ts) 13C-RMN (400 MHz, CDC13) : 6 142.61 ; 139.36 ; 129.53 ; 125.40 (C sur cycle de Ts), 95.12 (C1) ; 75.86 ; 71.08 ; 70.12 ; 69.80 (C2-05) ; 68.86 (C6) ; 20.58 (Me de Ts) - 6,6'-diazido-6,6'-dideoxy-ot,ot-trehalose (ICB20) 10 Dans un ballon de 50mL, 1,25 g de 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acety1-6,6'-diazido-6,6'- dideoxy-a,a-trehalose ont ete dissous dans 20 mL de methanol. Du sodium metallique a ete ajoute jusqu'd un pH= 9. Le mélange a ete laisse sous agitation pendant 48h. La solution a ete neutralisee avec des solutions d'acide chlorhydrique a 1N et 0,1 N. Le solvant a ete evapore et le solide obtenu a ete seche sous vide. Une poudre blanche avec 15 un rendement de 97% a ete obtenue. 1H-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm) : 5,14 (d, J=3,6Hz, 2H), 3,92-3,90 (m, 2H), 3,77 (t, J=9,4Hz, 2H), 3,61 (dd, J=9,2Hz, J=3,0Hz, 2H), 3,51 (d, J=5,7Hz, 2H), 3,48 (d, J=5,7Hz, 2H), 3,40 (t, J=9,3Hz, 2H). 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm) : 93,8 (C1) ; 72,3 ; 71,0 ; 70,9 ; 70,5 (C2-05) ; 51,0 20 (C6). HRMS (ESI-) (m/z): calcule pour C12H20C1N609+ [M+ Cl]- 427,0986, experimental 427,0985. - 6,6'-diamino-6,6'-dideoxy-a-a-trehalose (ICB21/ TNH2) 25 a) Synthese du 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acety1-6,6'-di-O-toluene-p-sulfonyl-a,a- trehalose 20 g de trehalose sec ont ete dissous dans 300 mL de pyridine. Puis, sous agitation vigoureuse, 50g de chlorure de tosyle ont ete ajoutes tres lentement. Apres 35 min, 300 mL d' anhydride acetique ont ete ajoutes et la solution a ete laissee sous agitation pendant 30 une nuit. Le milieu reactionnel a ete alors place dans un mélange d'eau et de glace puis mis au froid pendant une nuit. Apres precipitation du compose, celui-ci a ete filtre. Le precipite blanc a ensuite ete filtre puis mis une nuit sous agitation avec du methanol. Le 22 precipite a ensuite ete filtre et seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 50 % a ete obtenue. 1H-RMN (400 MHz, CDC13) 6 (ppm) : 7,71 (d, J=8,2Hz, 4H, arom. H ortho de C-SO2), 7,36 (d, J=8,0Hz, 4H, arom. H ortho de C-CH3), 5,33 (t, J=4,7Hz, 2H), 4,96-4,80 (m, 6H), 5 4,13-3,96 (m, 6H), 2,45 (s, 6H, CH3 du tosyle), 2,02 (s, 6H, Ac), 2,00 (s, 6H, Ac), 1,99 (s, 6H, Ac). 13C-RMN (400 MHz, CDC13) 6 (ppm): 169,9 ; 169,5 ; 169,5 (C=0 Ac) ; 145,3 ; 132,4 ; 129,8 ; 128,0 (C sur cycle de Ts) ; 92,8 (C1) ; 69,8 ; 69,2 ; 68,5 ; 68,1 (C2-05) ; 67,5 (C6) ; 21,6 (CH3 du tosyle) ; 20,6 ; 20,5 (CH3 Ac). 10 b) Synthese du 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acety1-6,6'-diazido-6,6'-dideoxy-a,a- trehalose 2g de 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acety1-6,6'-di-O-toluene-p-sulfonyl-a,a-trehalose et 308 mg d'azide de sodium ont ete dissous dans 14 mL de DMF. Le mélange a ete laisse sous agitation a 90°C pendant 16h. Par la suite, it a ete refroidi a temperature ambiante et 15 precipite dans de l'eau distillee. Apres avoir fibre le mélange, une recristallisation dans 20 mL d'ether a ete realisee. Le precipite a ensuite ete filtre et seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 88% a ete obtenue. 1H-RMN (400 MHz, CDC13) 6 (ppm): 5,50 (t, J=5,5Hz, 2H), 5,35 (d, J=3,8Hz, 2H), 5,11 (d, J=4,0Hz, 2H), 5,01 (t, J=5,0Hz, 2H), 4,11-4,09 (m,2H), 3,39 (dd, J=7,3Hz, 2H), 3,20 20 (dd, J=12,9Hz, J=2,4Hz, 2H), 2,15 (s, 6H, Ac), 2,09 (s, 6H, Ac), 2,05 (s, 6H, Ac). 13C-RMN (400 MHz, CDC13) 6 (ppm): 169,9 ; 169,6 ; 169,6 (C=O, Ac) ; 93,8 (C1) ; 69,9; 69,8 ; 69,7 ; 69,6 (C2-05) ; 50,9 (C6) 20,6 (CH3, Ac). HRMS (ESI+) (m/z): calcule pour C24H32N6Na015+ [M+ Na]+ 667,1818, experimental 667,1817. 25 c) Synthese du 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acety1-6,6'-diamino-6,6'-dideoxy-a,a- trehalose 2 g de 2,3,4,2',3',4'-hexa-0-acety1-6,6'-diazido-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ont ete places dans 20 mL de dioxane et 4 mL de methanol. Sous N2, 4,5g de triphenylphosphine ont ete ajoutees lentement et le mélange a ete laisse sous agitation a temperature ambiante 30 pendant lh. Ensuite, 14 mL d'ammoniac (30%) ont ete ajoutes et le mélange a ete laisse sous agitation a temperature ambiante pendant 16h. Le solvant a ete evapore sous vide et le residu a ete triture avec de l'eau. La suspension resultante a ete acidifiee jusqu'a un pH 23 de 4 avec de l'acide chlorhydrique a 1N et 0,1N. Ph3P et Ph3PO resultants ont ete filtres et laves avec de l' eau (2x50 mL) et les phases aqueuses combinees ont ete lavees avec du dichloromethane (2x50mL). La phase aqueuse a ensuite ete evaporee et sechee sous vide. Une poudre crème avec un rendement de 80% a ete obtenue. 5 1H-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 5,50 (t, J=5,4Hz, 2H), 5,13 (d, J=3,6Hz, 2H), 5,09 (d, J=3,8Hz, 2H), 5,05 (t, J=4,0Hz, 2H), 3,96-3,91 (m, 2H), 3,28 (dd, J=7,3Hz, 2H), 3,11 (dd, J=12,9Hz, J=2,4Hz, 2H), 2,15 (s, 6H, Ac), 2,09 (s, 6H, Ac), 2,05 (s, 6H, Ac). 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 130,7 ; 128,1 (C=O, Ac) ; 92,2 (C1) ; 72,1 ; 71,5; 70,8 ; 68,3 (C2-05) ; 58,7 (C6) ; 28,2 ; 23,7 ; 21,3 (CH3, Ac). 10 HRMS (ESI+) (m/z): calcule pour C24H36N2Na015+ [M+ Na]+ 615,2008, experimental 615,2009. d) 6,61-diamino-6,6'-dideoxy-cr,cr-trehalose (ICB21 / TNH2) Dans un ballon de 50mL, 1,34g trehalose amine Oacetyle a ete dissout dans 20mL de methanol. Sous agitation, quelques milligrammes de sodium ont ete ajoutes jusqu'd un 15 pH 9. Le mélange a ete laisse sous agitation a temperature ambiante pendant 48h. La solution a ete acidifiee avec des solutions HC1 a 1N et 0,1N, filtree et evaporee. Le produit a ete recristallise dans de methanol, filtre et seche sous vide. Une poudre blanche avec un rendement de 87% a ete obtenue. 1H-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 5,19 (d, J=3,4Hz, 2H), 3,97 (t, J=7,0Hz, 2H), 3,79 (t, 20 J=3,2Hz, 2H), 3,66-3,61 (m, 4H), 3,35 (dd, J=7,1Hz, 2H), 3,11 (dd, J=12,0Hz, J=3,0Hz, 2H). 13C-RMN (400 MHz, D20) 6 (ppm): 94,1 (C1) ; 72,1 ; 71,5 ; 70,8 ; 68,3 (C2-05) ; 40,5 (C6). HRMS (ESI+) (m/z): calcule pour Ci2H24N2Na09+ [M+ Na] 363,1374, experimental 25 363,1374. - 6,6'-diiodo-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose (ICB24) 8 g de trehalose anhydre ont ete dissous dans 200 mL de DIVIF. Ensuite, 30.65 g de triphenylphosphine et 23.75 g de diiode ont ete ajoutes. Le mélange a ete chauffe a 80 °C 30 pendant 1h30 puis evapore jusqu'd obtenir 1/3 du volume d'origine. Enfin, 300 mL de methanol ont ete additionnes. Quelques grammes de sodium solide ont ete ajoutes jusqu'd pH 9. L'agitation a temperature ambiante a ete laissee pendant 30 min puis le mélange a 24 ete neutralise sous DOWEX 50W, 8, H+ form. La resine a ete eliminee par filtration et lavee avec du methanol. La solution a ensuite ete filtree a travers du charbon animal et concentree pour obtenir un residu. Le residu a ensuite ete triture avec 250 mL d' eau. Ph3P et Ph3PO resultants ont ete elimines par filtration. Le solide obtenu a ete mis dans 50 mL 5 de xylene et laisse sous agitation pendant plusieurs heures puis fibre. Le solide a ete lave plusieurs fois avec du dichloromethane et du butanol pour eliminer les traces de diode et de DMF. Une poudre jaune avec un rendement de 61% a ete obtenue. 11-1-RMN (400 MHz, DMSO) 6 (ppm) : 4.99 (d, J=3.6Hz, 2H), 4.92 (t, J=3.5Hz, 4H), 3.64 (d, J=5.8Hz, 2H), 3.54-3.42 (m, 8H) 2.70 (s, 4H), 2.53 (m, 6H) 10 13C-RMN (400 MHz, DMSO) 6 (ppm) : 93.41 (C1) ; 73.64 ; 72.03 ; 71.05 ; 70.99 (C2- 05) ; 60.60 (C6) FIRMS (ESI+) (m/z): calcule pour Ci2H2012Na09+ [M+ Na]+ 584,9089, experimental 584,9092. 15 - 6,6'-dichloro-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose (ICB25) 2 g de trehalose sec ont ete dissous dans 10 mL de DMF et 3 mL de chlorure de thionyle. La reaction etait exothermique. La solution a ete laissee sous agitation pendant 2h a temperature ambiante et a ete evaporee sous vide. 10 mL d' eau distillee ont ete additionnes et une serie d' extraction avec 10-15 mL de dichloromethane a ete effectuee 20 jusqu'd obtenir une phase organique incolore. La phase aqueuse a ete evaporee. Un liquide brun avec un rendement de 10% a ete obtenu. 11-1-RMN (400 MHz, DMSO) 6 (ppm): 4.89 (dd, J=5.8Hz, 4H), 3.70 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.61 (m, 2H), 3.59-3.52 (m, 4H), 3.28 (d, J= 3.4Hz, 2H), 3.22 (s, 4H) 13C-RMN (400 MHz, DMSO 6 (ppm): 6 93.90 (C1) ; 73.24 ; 71.73 ; 71.30 ; 71.20 (C2- 25 C5) ; 61.13 (C6) HRMS (ESI+) (m/z): calcule pour Ci2H20C12Na09+ [M+ Na]+ 401,0377, experimental 401,0360. 30 25 Exemple 2 : Tests contre l'oIdium (Blumeria graminis f sp. tritici) 1. Tests in planta 5 1.1. Conditions de culture du ble Des grains de ble ont ete imbibes dans de l'eau pendant 24 heures puis ont ete semes en quinconce dans des barquettes en plastique remplies de terreau, a raison de 24 plantules par barquette. La culture a ete faite en armoire de croissance, avec 12 heures de jour a 18 10 °C et 12 heures de nuit a 12 °C. L'humidite relative etait de 70%. Lorsqu'elles etaient agees de 10 jours, les plantules ont ete pulverisees avec 10 mL d'un compose ICB de l'invention a 15 g/L ou 1,5 g/L. Apres 48 heures, les plantules ont ete inoculees avec une suspension de B. graminis a 250 000 spores/mL de Fluorinert FC43 (heptacosafluorotributylamine, 3M, Cergy-Pontoise, France). La lecture des symptomes 15 (pustules blanchatres) a ete realisee 12 jours apres l'inoculation. 1.2. Resultats de protection du ble Le taux d'infection a ete evalue sur les premieres feuilles formees depuis la base des 20 plantes (collet). Le pourcentage d'infection obtenu apres traitement des plants de ble par les differents composes ICB est defini par rapport au temoin (plants de ble pulverise avec de l'eau distillee et inocules) et est calcule selon la formule suivante : 25 % infection = (nombre de pustules blanchatres sur la premiere feuille des plants traites avec le compose ICB X 100) / nombre de pustules blanchatres sur la premiere feuille du plant temoin 30 Le pourcentage de protection est calcule selon la formule suivante : % de protection = 100 - % d'infection 26 Les resultats sont presentes dans le tableau 1 ci-dessous. Tableau 1 : % de protection Composes 15 g/L 1,5 g/L Trehalose natif 38% 3% ICB5 68% 29% ICB6 70% 48% ICB7 97% 33% ICB8 99% 81% ICB11 - 73 % ICB12 29% 5% ICB13 73% 50% ICB14 54% 63% ICB15 70% 46% ICB21 (TNH2) - 74 % 5 Les meilleurs taux de protection contre l'oidium du ble ont ete obtenus avec les composes ICB8, ICB11, et ICB21 (TNH2). 1.3. Validation de l'effet inducteur de defenses : dosages d' activites enzymatiques 10 Les dosages de l'activite peroxydase et lipoxygenase ont ete realises sur la premiere feuille formee a partir de la base des plants de ble ages de 10 jours : - au moment du traitement par les composes ICB11 et ICB21 (ou TNH2) a 1,5 g/L (sans inoculation), - a 24 heures (J1) et 48 heures (J2) apres traitement, et 15 - a 1 jour (J2+1i ou J2+1ni) et 2 jours (J2+2i ou J2+2ni) apres inoculation (i) par le champignon B. graminis ou sans inoculation (ni). Pour les feuilles de bles infectees, l'inoculation par le champignon B. graminis a ete effectuee a J2. 20 Les resultats concernant le dosage de l' activite peroxydase sont illustres par la figure 1. Ces resultats montrent que les composes ICB11 et ICB21 (TNH2) induisent une augmentation de l'activite peroxydase, visible des 24 h a 48 h apres traitement, dans les feuilles de ble traitees, hors contexte infectieux (Figure 1A). 27 Apres infection (inoculation) par le champignon B. graminis, les composes ICB11 et ICB21 (TNH2) induisent egalement une augmentation significative de l'activite peroxydase dans les feuilles de ble traitees et inoculees compare aux feuilles de ble nontraitees et inoculees et aux feuilles de ble traitees et non-inoculees (Figures 1B et 1C). 5 Les resultats concernant le dosage de l'activite lipoxygenase sont illustres par la figure 2. Ces resultats montrent que les composes ICB11 et ICB21 (TNH2) induisent une augmentation de l'activite lipoxygenase 24 h et 48 h apres traitement, dans les feuilles de ble traitees, hors contexte infectieux (Figure 2A). 10 Apres infection (inoculation) par le champignon B. graminis, les composes ICB11 et ICB21 (TNH2) induisent egalement une augmentation de l'activite lipoxygenase dans les feuilles de ble traitees et inoculees compare aux feuilles de ble non-traitees et inoculees et aux feuilles de ble traitees et non-inoculees (Figures 2B et 2C). 15 2. Effet direct sur la germination des spores de B. graminis L'effet direct des composes ICB5, ICB8, ICB11, et ICB21 (TNH2) sur le pouvoir germinatif des spores de B. graminis a ete evalue en saupoudrant un inoculum frais (age de 10 jours) au-dessus de boites de Peri contenant un milieu solide constitue d'agar a 12% 20 dans de l' eau distillee sterile et un des produits ICB5, ICB8, ICB11, ou ICB21 (TNH2) une concentration de 1,5 g/L. Les boites de Petri ont ete mises a incuber a la lumiere pendant 24 heures et la germination des spores de B. graminis a ete observee au microscope photonique. 25 Les resultats sont illustres par la figure 3. Aucun effet sur le nombre et l'aspect des tubes germinatifs des spores de B. graminis n'a ete observe, quel que soit le compose ICB5, ICB8, ICB11, et ICB21 (TNH2) test& Ceci demontre que la protection observee est due a un effet SDP (stimulateur de defense des plantes) plutot qu'a un effet antifongique ou fongistatique. 30 28 Exemple 3 : Tests contre la septoriose (Zymoseptoria tritici) 1. Tests in planta 5 1.1. Conditions de culture du ble Des grains de ble ont ete imbibes dans de l'eau pendant 24 heures puis ont ete semes en quinconce dans des barquettes en plastique remplies de terreau, a raison de 24 plantules par barquette. La culture a ete faite en armoire de croissance, avec 16 heures de jour a 20 10 °C et 8 heures de nuit a 16 °C. L'humidite relative etait de 70%. Lorsqu' elles etaient agees de 22 j ours, les plantules ont ete pulverisees avec 15 mL d'un compose ICB de l'invention a 15 g/L ou 1,5 g/L. Apres 48 heures (J2), les plantules ont ete inoculees avec une suspension de spores de Z. tritici a 1.106 spores/mL d' eau distillee contenant 0,025% de Citowett (B.A.S.F., Levallois-Perret, France). La lecture des symptomes a ete realisee 15 environ 3 semaines apres l'inoculation. 1.2. Resultats de protection du ble 1.2.1. Protection obtenue chez le cultivar de ble Alixan inocule par la souche 20 T02596 La septoriose du ble, due a Mycosphaerella graminicola (anamorphe Zymoseptoria tritici), se manifeste par l'apparition de taches brunatres sur les feuilles de ble, qui correspondent a des necroses des tissus et donc a la mort des cellules des feuilles de ble 25 dans la zone infectee. Le pourcentage de surface foliaire necrosee est evalue visuellement sur les deuxieme (F2) et troisieme (F3) feuilles formees depuis la base du plant de ble. 30 Le pourcentage d'infection obtenu apres traitement des plants de ble par les differents composes ICB est demi par rapport au temoin (plants de ble pulverise avec de l'eau distillee et inocules) et est calcule selon la formule suivante : 29 % infection = (% de surface foliaire necrosee sur les plants traites avec le compose ICB X 100) / % de surface necrosee chez les plants temoin Le pourcentage de protection est calcule selon la formule suivante : 5 % de protection = 100 - % d'infection Les resultats sont presentes dans le tableau 2 ci-dessous. Tableau 2 : % de protection Composes 15 g/L 1,5 g/L Feuilles F2 F3 F2 F3 Trehalose natif 0-26% 0-59% 0-3% 0-6% ICB5 80% 91% 49% 77% ICB8 74% 29% 0% 0% ICB9 0% 2% 15% 81% ICB11 54% 53% 86% 87% ICB12 0% 0% 96% 95% ICB13 95% 66% 0% 41% ICB21 (TNH2) 88% 73% 79 % 63% 10 Les meilleurs taux de protection contre le champignon Zymoseptoria tritici ont ete obtenus avec les composes ICB5, ICB8, ICB11 et ICB21 (TNH2). Des tests de protection ont egalement ete realises en reduisant la dose des composes ICB. 15 Les resultats sont presentes dans le tableau 3 ci-dessous. Tableau 3 : Dose % de protection ICB21 (TNH2) ICB11 0 0 0 0,25 g/L 28% 28% 0,5 g/L 41% 41% 1 g/L 18 % 46 % 1,5 g/L 50% 48% 30 Les resultats du tableau 3 montrent que la reduction de la concentration des composes ICB a 1 et 0,5 g/L permet d'obtenir une protection equivalente a la concentration 1,5 g/L. L'effet des composes ICB5, ICB8, ICB11 et ICB21 (TNH2) a ete compare a celui du 5 Vacciplant (laminarine) commercialise par la societe Arysta, utilise a la dose preconise au champ : 0,5 L/ha de la solution commerciale a 37 g/L de laminarine. Les resultats sont presentes dans le tableau 4 ci-dessous. Tableau 4 : Composes % de protection Trehalose natif, 1,5 g/L 25% ICB5, 1,5 g/L 14% ICB8, 1,5 g/L 28% ICB11, 1,5 g/L 48% ICB21 (TNH2), 1,5 g/L 50% Vacciplant 11% 10 Les resultats montrent un % de protection d'environ 5 fois superieur pour les composes ICB11 et ICB21 (TNH2), par rapport au % de protection obtenu avec Vacciplant. Une reduction significative du pourcentage de surface necrosee due a la maladie chez les 15 plantules de ble traitees par les composes ICB11 et ICB21 (TNH2), est egalement obseryee sur les photographies de la figure 4. L' evaluation de la maladie passe egalement par l' observation de l' apparition de pycnides, structures de formation des pycnidiospores, qui sont des unites de dissemination du 20 champignon, responsables de la propagation de la maladie. Les resultats sont presentes dans la figure 5. Ces resultats montrent une reduction significative du nombre de pycnides formees apres traitement des plantules de ble avec ICB8 (environ 40 %), et plus fortement avec ICB11 25 et ICB21 (TNH2) (environ 50%) a 1,5 g/L, par rapport au controle. Cette reduction est egalement observee par rapport au traitement avec le Vacciplant (0,5 L/ha de la solution commerciale a 37 g/L de laminarine) et le trehalose natif (1,5 g/L). 31 1.2.2. Protection obtenue chez le cultivar de ble Pakito inocule par la souche 101193 Le protocole utilise chez le cultivar de ble Pakito inocule par la souche TO1193 etait 5 identique au protocole utilise chez le cultivar de ble Alixan inocule par la souche T02596. Les resultats concernant le pourcentage de protection des composes ICB5, ICB8, ICB11 et ICB21 (TNH2) sont presentes dans le tableau 5 ci-dessous, et les resultats concernant l'observation des pycnides est presentee dans la figure 6. 10 Tableau 5: Composes % de protection ICB5, 1,5 g/L 0% ICB8, 1,5 g/L 30% ICB11, 1,5 g/L 47% ICB21 (TNH2), 1,5 g/L 56% Les resultats montrent un taux de protection similaire chez le cultivar de ble Pakito a celui observe chez le cultivar de ble Alixan (reduction de la surface necrosee et du nombre de 15 pycnides formees) avec les composes ICB11 et ICB21 (TNH2). 1.3. Analyse microscopique des pycnides sur des feuilles traitees chez le cultivar de ble Alixan et inoculees avec Z. tritici 20 Les resultats sont presentes dans les figures 7 et 8. L'analyse microscopique montre et confirme une diminution du nombre des pycnides d'environ 50% apres traitement avec les composes ICB11 et ICB21 (TNH2) a 1,5 g/L (Figure 8). Cette diminution du nombre des pycnides est egalement observee sur les photographies de la figure 7. En outre, une reduction de la taille des pycnides (surface 25 noire) est egalement observee. 32 1.4. Effet des composes de l'invention sur l'induction de la callose Des plants de ble de 3 semaines ont ete traites avec les produits TNH2 et ICB 11 et inocules avec la souche T02596. Les plantes traitees avec de l'eau et inoculees ont ete 5 utilisees comme controles Les prelevements suivants ont ete effectues : J+lni, J+2ni, J2+ lni, J2+2ni, J2+39ni, J2+1 lni, J2+1i, J2+2i, J2+9i et J2+1 1i. Les feuilles ont ete fixees et decolorees pendant 2h avec une solution d'ethanol/acide acetique (3/1, v/v). Les plantes ainsi decolorees ont ensuite ete rincees avec de l'ethanol a 70 %, 50 % puis 25 % pendant 2h chacun. Les plantes ont finalement rincees dans de l' eau distillee une nuit. 10 Les plantules ont ete incubees dans du NaOH 10 % a 37°C pendant lh pour clarifier les tissus, puis incubees avec le bleu d'aniline a 0,01 % K2HPO4 150 mM, pH 10 pendant plusieurs heures. Les depots de callose ont ete observes au microscope confocal avec une longueur d'onde d'excitation de 405 nm et une longueur d'onde d' emission de 523 nm. 15 Les resultats sont presentes dans la figure 9. Les resultats montrent que les composes ICB11 et ICB21 (TNH2) a 1,5 g/L induisent l'accumulation d'un depot de callose sur les feuilles de ble inoculees avec Z. tritici (i) 2, 9, et 11 jours apres traitement par rapport aux feuilles non inoculees (ni), empechant ainsi 20 la penetration du pathogene Z. tritici. 1.5. Dosages d' activites enzymatiques Les plantes ont ete cultivees selon le protocole decrit au point 1.1. 25 Les dosages de l'activite peroxydase et lipoxygenase ont ete realises sur la troisieme feuille de chaque plante : - au moment du traitement par les composes ICB11 et ICB21 (ou TNH2) a 1,5 g/L (sans inoculation), - a 24 heures (J1) et 48 heures (J2) apres traitement, et 30 - a 1 jour (J2+1i ou J2+1ni), 2 jours (J2+2i ou J2+2ni), 9 jours (J2+9i ou J2+9ni), 11 jours (J2+11i ou J2+1 lni), et 13 jours (J2+13i ou J2+13ni), apres inoculation (i) par le champignon Z. tritici ou sans inoculation (ni). 33 Pour les feuilles de bles infectees, l'inoculation par le champignon Z. tritici a ete effectuee a. J2. Les resultats concernant le dosage de l'activite peroxydase sont illustres par les figures 10A, 10B, 10C, 10D, 10E, et 10F. 5 Ces resultats montrent que les composes ICB11 et ICB21 (TNH2) induisent une augmentation de l'activite peroxydase 48 h apres traitement dans les feuilles de ble traitees, hors contexte infectieux (Figure 10A). Apres infection (inoculation) par le champignon Z. tritici, les composes ICB11 et ICB21 (TNH2) induisent egalement une augmentation significative de l'activite peroxydase dans 10 les feuilles de ble traitees et inoculees compare aux feuilles de ble non-traitees et inoculees et aux feuilles de ble traitees et non-inoculees (Figures 10B-10F), et ce jusqu' 13 jours apres inoculation. Les resultats concernant le dosage de l' activite lipoxygenase sont illustres par les figures 15 11A, 11B, 11C, 11D, 11E, et 11F. Ces resultats montrent que les composes ICB11 et ICB21 (TNH2) induisent une augmentation de l'activite lipoxygenase 48 h apres traitement, dans les feuilles de ble traitees, hors contexte infectieux (Figure 11A). Apres infection (inoculation) par le champignon Z. tritici, les composes ICB11 et ICB21 20 (TNH2) induisent egalement une augmentation de l'activite lipoxygénase dans les feuilles de ble traitees et inoculees compare aux feuilles de ble non-traitees et inoculees et aux feuilles de ble traitees et non-inoculees (Figures 11B-11F), et ce jusqu'a 13 jours apres inoculation. 25 1.6. Analyses de l'expression de genes de defense des plantes apres traitement avec les composes de l'invention et inoculation avec Z. tritici. Protocole : Les plantules de ble traitees avec les produits ICB11 et TNH2 a 1,5 g/1 pendant 48h ont 30 ete inoculees avec la souche T02596, afin de suivre l'expression de genes marqueurs de defense par PCR quantitative en temps reel (qRT-PCR). L'ARN total a ete extrait a partir des feuilles a 1, 2, 3 et 12 jours apres inoculation (JAI) en utilisant le kit RNeasy plant 34 Mini kit (Qiagen). Avant l'etape de qRT-PCR, l'ARN a ete traite avec la RNase-Free DNase I (Qiagen) pour eliminer les l'ADN genomique residue!. La synthese d'ADNc s'est faite a partir de li.tg d'ARN total en utilisant le kit High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems). La qRT-PCR a ete effectuee dans un appareil 5 qRT-PCR ABI PRISM 7300 afin de mesurer l'effet des produits a base de trehalose sur l'expression des genes suivants: PDX2, PR1, PAL1, LOX1 et CHI4. L'expression relative des genes a ete calculee selon la methode AACt (Livak et Schmittgen, Methods, 2001, 4, 402-408). Des plantes traitees avec de l'eau ont ete utilisees comme controle negatif. 10 Resultats : Les resultats du tableau 7 montrent que le pretraitement des plantes avec les produits ICB11 et TNH2 suivi d'une inoculation avec le pathogene augmente fortement l'expression des genes de defense PAL1, PDX2, PR1 et CHI4. En effet, le traitement avec 15 les produits potentialise l'expression des genes de defense, puisque !'induction des genes augmente 2 fois plus par rapport a celle observee chez des plantes traitees avec de !'eau. L'induction forte du gene PR1, caracteristique de la voie de l'acide salicylique (12 JAI), semble en totale correlation avec l'expression du gene PAL1, plus precoce (1 et 2 JAI), gene codant pour une enzyme situee tres en amont de la voie des phenylpropanoides, 20 conduisant notamment a la synthese d'acide salicylique. Le produit d' expression du gene PR1 est une proteine basique possedant des proprietes fongicides. De meme, l' expression du gene CHI4 codant pour une chitinase capable de degrader la paroi de champignons, augmente de 1,5 a 2 fois apres traitement avec les produits ICB11 et TNH2 par rapport au traitement avec de l'eau. L'expression du gene PDX2 augmente fortement apres 25 traitement et inoculation. Une forte induction de ce gene contribue a une forte activite enzymatique de la peroxydase, connue pour son role dans !'utilisation des peroxydes, toxiques pour la plante. L'induction du gene PDX2 peut ainsi indiquer la synthese d'une peroxydase qui permettrait un renforcement de la paroi cellulaire, par l' accumulation de lignine par exemple, empechant la penetration des agents pathogenes. Hors contexte 30 infectieux, le traitement seul avec les produits n'induit pas une forte expression de genes. En effet, a 3 et 4 jours apres traitement, it n'y pas de mobilisation du metabolisme de la plante vers l'expression de genes de defense. Toutefois, la plante reste en alerte puisque l'inoculation par l'agent pathogene Z. tritici declenche une expression importante des marqueurs de defense. Tableau 6 : sequence des amorces utilisees pour les experiences de qPCR. (F : Forward, R : Reverse) NOMS SEQUENCES DES AMORCES 5'>3' Pathogenesis-related Protein 1 (PRI) F: CATGCACCTTCGTATGCCTAACT (SEQ ID NO : 1) R: TGGCTTATTACGGCATTCCTTT (SEQ ID NO : 2) Peroxidase (PDX2) F: AGCCACAGCCACAACCAGATA (SEQ ID NO : 3) R: AGAAATGCGAGAGGCAGAACC (SEQ ID NO : 4) Phenylalanine ammonia-lyase F: CCCCCATTGGTGTCTCCAT (SEQ ID NO : 5) R: ACTGCGCGAACATCAGCTT (SEQ ID NO : 6) (PAL 1) Lipoxygenase (LOX1) F: GGGCACCAAGGAGTACAAGGA (SEQ ID NO : 7) R: GCTCGTGATGGTGTGGATGA (SEQ ID NO : 8) Chitinase 4 (CHI4) F: GTCGTCACCGATGCGTTCT (SEQ ID NO : 9) R: AAACTGGCGCGTGTAAAAGC (SEQ ID NO : 10) 5 10 15 20 36 Tableau 7 : expression des genes apres traitement chez plantes inoculees ou non. Nom du gene Expression relative H2O ICB11 TNH2 Jour 1 Jour 1 Jour 1 ni i ni i ni i Pall (SEQ ID NO : 11) 0,488 8,206 3,562 20,235 0,553 13,209 - LOX1 (SEQ ID NO : 17) 1,203 0,343 3,216 1,244 1,329 0,248 PR1 (SEQ ID NO : 13) 0,488 11,175 2,791 42,405 2,759 27,026 PDX2 (SEQ ID NO : 15) 0,231 44,169 0,263 82,057 0,088 73,308 CHI4 (SEQ ID NO : 19) 1,577 16,388 4,052 25,832 2,414 28,127 Nom Jour 2 Jour 2 Jour 2 ni i ni i ni i Pall 0,681 1,649 1,247 8,415 0,733 11,583 LOX1 0,141 0,205 5,058 1,354 2,807 0,229 PR1 0,674 20,975 2,811 55,467 0,774 36,927 PDX2 0,501 40,274 0,342 69,261 0,369 65,201 CHI4 3,114 17,360 2,295 36,098 5,030 26,246 Nom Jour 12 Jour 12 Jour 12 ni i ni i ni i Pall 0,323 0,694 0,466 5,786 0,862 7,405 LOX1 0,160 0,198 1,098 0,627 0,412 1,173 PR1 1,412 39,074 5,270 70,923 6,514 65,471 PDX2 0,275 0,309 0,631 3,727 0,735 3,154 CHI4 8,938 16,046 5,689 34,213 7,921 27,579 2. Effet direct sur la germination des spores de Z. tritici 5 Les composes ICB5, ICB8, ICB11, et ICB21 (TNH2) ont ete incorporees a un milieu gelose sterile compose d'Agar a 12% dans de l' eau distillee a des concentrations finales variees (0,15 g/L, 0,5 g/L, 1 g/L, 1,5 g/L, 7,5 g/L, et 15 g/L). Une goutte de solution de spores du champignon Z. tritici a 1.106 spores/mL d'eau a ete deposee a 5 emplacements sur le milieu gelose. Apres 8 et 12 jours d'incubation a l'obscurite, les diametres des 10 disques correspondant au developpement du champignon ont ete mesures. Les resultats ont montre que quelle que soit la concentration utilisee, les composes testes ne modifient pas la germination et le developpement du champignon. Aucun effet fongicide ni fongistatique n'a ete observe. Ceci demontre que la protection observee est 37 due a un effet SDP (stimulateur de defense des plantes) plutot qu' a un effet antifongique ou fongistatique. En conclusion des exemples 2 et 3, les inventeurs ont demontre de maniere surprenante 5 que les composes de l'invention, en particulier ICB11 et ICB21 (TNH2) etaient des composes SDP efficaces en : - protegeant la plante de ble en reduisant la surface de necroses responsables de la septoriose, et en reduisant le developpement des pustules responsables de l'oidium ; - reduisant le developpement des pycnides responsables de la propagation de la 10 septoriose ; - induisant l'expression des activites de la peroxydase et de la lipoxygenase apres traitement et inoculation, permettant ainsi a la plante de repondre plus rapidement et plus efficacement, et donc de la rendre plus resistante ou tolerante lorsqu' elle est soumise a un agent pathogene ; 15 - induisant l'accumulation d'un depot de callose sur les feuilles des plantes ; - induisant l'expression des genes de defense des plantes ; et en - ne presentant pas d'effet sur la germination et le developpement des champignons responsables de l'oidium et de la septoriose, demontrant ainsi que la protection des plantes etait due a un effet SDP, REVENDICATIONS1. Utilisation d'un compose de formule (I) : R1 HO 0 HO HO dans laquelle Ri represente un groupe choisi parmi : - un groupe -OR3, avec R3 etant un groupe choisi parmi : - un groupe alkyle en Ci-Cio, optionnellement substitue par au moins un phenyle ou un groupe carboxyle, ou - un groupe acetyle ou tosyle, - un azoture ou un groupe -NR4R5, avec R4 et R5 etant independamment un hydrogene ou un groupe alkyle en Ci-C6, - un halogene, - un hydrogene, ou - un groupe -O-CO-R6 ou -NH-CO-R6, avec R6 etant un phenyle optionnellement substitue par un hydroxyle ; ou un de ses sels pour stimuler les defenses naturelles d'une plante. 2. Utilisation d'un compose de formule (I) ou un de ses sels selon la revendication 1 dans laquelle Ri represente un groupe choisi parmi : - un groupe -OR3, avec R3 etant un groupe choisi parmi : - un groupe alkyle en Ci-Cio, optionnellement substitue par au moins un groupe carboxyle, ou - un azoture ou un groupe -NR4R5, avec R4 et R5 etant un hydrogene. 3. Utilisation d'un compose de formule (I) ou un de ses sels selon la revendication 1, dans laquelle ledit compose ou un de ses sels est choisi parmi : - 6,6'-di-O-trityl-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-0-ethyl-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; 39 - 6,6'-di-O-butyl-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-hexy1-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-octy1-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6' -di-O-carboxymethyl-a-a-trehalose; 5 - 6,6' -di-O-carboxyethyl-a-a-trehalose ; - 6,6' -di-O-carboxypropyl-a-a-trehalose; - 6,6' -di-O-carboxybutyl-a-a-trehalose; - 6,6' -di-O-carboxypentyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-toluene-p-sulfonyl-a,a-trehalose ; 10 - 6,6'-diazido-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-diamino-6,6'-dideoxy-a-a-trehalose ; - 6,6'-diiodo-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-dichloro-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-dibromo-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; 15 - 6,6' -difluoro-6,6' -di deoxy-a, a-trehalose ; - 6,6' -di-0-(2-hydroxybenzoy1)-6,6' -dide oxy-a, a-trehalose ; et - 6,6' -di-(2-hydroxyb enzoylamino)-6, 6 ' -dide oxy-a, a-trehalose. 4. Procede pour stimuler les defenses naturelles d'une plante, comprenant l'application 20 d'une composition comprenant un compose de formule (I) ou un de ses sels tels que &finis selon l'une quelconque des revendications 1 a 3, sur ladite plante. 5. Procede selon la revendication 4, dans lequel ladite composition est une composition aqueuse ou hydro-alcoolique. 25 6. Procede selon la revendication 4 ou 5, dans lequel la composition est appliquee par pulverisation foliaire, par enrobage des graines, ou par arrosage et infiltration du sol. 7. Procede selon l'une quelconque des revendications 4 a 6, dans lequel la plante est une cereale, de preference du ble. 40 8. Procede selon l'une quelconque des revendications 4 a 7, pour stimuler les defenses naturelles d'une plante contre un agent pathogene fongique, de preference Zymoseptoria tritici, et Blumeria graminis. 5 9. Procede selon l'une quelconque des revendications 4 a 8, dans lequel la composition est appliquee a une dose comprise entre 1 et 60 kg par hectare de champs, de preference entre 1 et 50, entre 1 et 20, entre 1 et 10 kg et entre 1,5 et 6 kg par hectare de champs, et de maniere encore plus preferee a une dose d'environ 1,75, 3,5, ou 5,25 kg par hectare de champs. 10 10. Compose ou un de ses sels choisi parmi : - 6,6'-di-O-butyl-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-hexy1-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxyethyl-a-a-trehalose ; 15 - 6,6'-di-O-carboxypropyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxybutyl-a-a-trehalose ; - 6,6'-di-O-carboxypentyl-a-a-trehalose ;et - 6,6'-di-O-(2-hydroxybenzoyl)-6,6'-dideoxy-a,a-trehalose.