Brevet FR3075641A1 — publié le 20190628

UTILISATION COSMETIQUE D'UN MILIEU DE CULTURE ACELLULAIRE A TITRE D'AGENT ACTIF POUR LE SOIN DES MATIERES KERATINIQUES La présente invention concerne un milieu de culture pour son utilisation cosmétique pour le soin des matières kératiniques en particulier de la peau, plus préférentiellement de la peau âgée. Il est connu de l'art antérieur l'utilisation en cosmétique de cellules végétales dédifférenciées, principalement sous forme d'extraits, pour les propriétés qui ont pu leur être reconnues. Par « cellules végétales dédifférenciées » on entend une cellule de plante provenant d'un organe (feuille, tige, racine, pétale, ...) que l'on a mise en culture dans des conditions particulières, et qui reprend sa forme dédifférenciée, c'est-à-dire qu'elle perd sa spécificité de feuille, tige, racine ou pétale, et redevient capable éventuellement d'engendrer la plante entière. Par « extrait de cellules végétales dédifférenciées », on entend ici un produit correspondant à une biomasse de cellules végétales dédifférenciées qui, après culture et une fois séparée de son milieu de culture, subit divers traitements pouvant aller de la simple congélation de ladite biomasse jusqu'à des purifications très élaborées de constituants des cellules végétales. US2005265953 décrit des compositions cosmétiques comprenant des cellules végétales dédifférenciées et en particulier issues d'une plante du genre de Rosa sp ayant des propriétés antioxydantes. WO 2013102882 décrit notamment l'utilisation cosmétique d'une composition comprenant des cellules dédifférenciées de plante du genre Rosa sp. pour le soin de la peau, en particulier pour le soin des peaux âgées. Néanmoins, dans ces demandes, l'agent actif est constitué par la biomasse de cellules végétales dédifférenciées du genre Rosa sp. séparée de son milieu de culture, milieu de culture qui par ailleurs n'a pas subi d'étape de stabilisation. Un des inconvénients de la mise en oeuvre de cette biomasse est notamment que son incorporation dans des compositions cosmétiques est susceptible d'engendrer des problèmes de stabilisation, et en particulier un déphasage induit par une sédimentation de la biomasse. Par ailleurs, le milieu de culture séparé de cette biomasse et non stabilisé tel que décrit dans ces demandes n'est pas approprié pour un usage cosmétique. Il existe ainsi un besoin de proposer une alternative aux actifs constitués essentiellement de biomasse de cellules végétales qui soit d'une part plus facile à stocker, à formuler et/ou à stabiliser dans des compositions cosmétiques, en particulier l'absence de 2 biomasse dans le milieu permet d'assurer une bonne stabilité en évitant notamment les problèmes de sédimentation ou décantation. D'autre part, il existe un besoin de disposer d'actifs tout aussi performant pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter les défauts esthétiques liés au vieillissement de la peau, en 5 particulier pour atténuer l'amincissement de la peau, améliorer l'aspect de surface de la peau, corriger les rides et ridules, diminuer la perte d'élasticité et/ou la perte de fermeté de la peau. De manière surprenante et inattendue, la demanderesse a découvert que le milieu de culture acellulaire issu d'une étape de dédifférenciation de cellules végétales d'une plante du genre Rosa sp. suivie d'une étape de clarification et d'une étape de stabilisation, jusqu'alors non 10 stabilisé et éliminé en fin de culture, présente également des propriétés anti-âges. L'absence d'étape de stabilisation du milieu de culture dans les demandes US2005265953 et W02013102882 étant notamment à l'origine de problèmes de contamination microbienne. Ainsi, la présente invention a pour premier objet l'utilisation d'un milieu de culture acellulaire issu d'une étape de dédifférenciation de cellules végétales d'une plante du genre Rosa 15 sp. suivie d'une étape de clarification et d'une étape de stabilisation, à titre d'agent actif pour le soin des matières kératiniques, en particulier de la peau, plus particulièrement de la peau âgée; en particulier pour prévenir et/ou traiter un défaut esthétique consécutif à une dégradation des fibres de collagène de la peau. Au sens de l'invention, on entend par « peau » toute la surface cutanée d'un être 20 humain, y compris le cuir chevelu, de préférence la surface cutanée présente au niveau du corps telle que les mains, et/ou du visage et/ou du cou. Un second objet de la présente invention concerne ledit milieu de culture acellulaire issu d'une étape de dédifférenciation de cellules végétales d'une plante du genre Rosa sp. suivie d'une étape de clarification et d'une étape de stabilisation. 25 Selon un troisième objet la présente invention se rapporte à une composition cosmétique comprenant ledit milieu de culture acellulaire. Selon un autre de ses objets, l'invention concerne un procédé de traitement cosmétique pour le soin des matières kératiniques, de préférence la peau, en particulier de la peau âgée, comprenant l'application sur lesdites matières kératiniques de la composition 30 cosmétique selon l'invention. Selon un cinquième objet, l'invention concerne le procédé d'obtention dudit milieu de culture acellulaire. Au sens de la présente invention, le terme « prévenir » signifie réduire le risque de manifestation du phénomène considéré. 3 Description détaillée de l'invention Milieu de culture et procédé d'obtention Définitions 5 Par « étape de dédifférenciation », on entend une étape permettant l'obtention de cellules végétales dédifférenciées à partir d'un organe spécialisé d'une plante ou de cellules différenciées issues de cet organe. Par « clarification » on entend une manipulation consistant en la séparation physique dudit milieu de culture acellulaire et desdites cellules végétales dédifférenciées, cette séparation 10 physique peut par exemple être réalisée par filtration. Par « stabilisation » on entend un milieu de culture acellulaire ayant subi une manipulation destinée à le préserver dans l'état stérile dans lequel il se trouvait à un instant donné choisi, tout en ayant conservé ses propriétés intrinsèques. En particulier, s'agissant dudit milieu de culture acellulaire, cette manipulation est destinée, par exemple, à rendre ledit milieu axénique 15 empêchant ainsi le développement ultérieur de germes, tout en préservant, par exemple, les éventuelles propriétés biologiques dont il est doté. Les techniques de stabilisation convenant à la présente invention sont notamment la filtration stérilisante, l'autoclavage, l'ultra haute température, la stérilisation haute pression, la lyophilisation, l'atomisation, ou la congélation. Par « cellules végétales différenciées » on entend des cellules non embryogènes et 20 non méristématiques, comme par exemple des cellules issues de la plante entière ou bien d'une partie de la plante, en particulier d'organes spécialisés de la plante tels que les feuilles, les tiges, les fleurs, les pétales, les sépales, ou encore les racines cultivées in vitro ou in vivo, en particulier les feuilles. Par « culture in vivo », on entend toute culture de type classique c'est à dire en sol à 25 l'air libre ou en serre, ou encore hors-sol. Par « culture in vitro », on entend l'ensemble des techniques connues de l'homme du métier qui permet de manière artificielle l'obtention d'un végétal ou d'une partie d'un végétal. La pression de sélection imposée par les conditions physicochimiques lors de la croissance des cellules végétales in vitro permet d'obtenir un matériel végétal standardisé et disponible tout 30 au long de l'année contrairement aux plantes cultivées in vivo. Préférentiellement selon l'invention, on utilise un végétal issu de culture in vivo. Au sens de l'invention, on entend par « cellule végétale dédifférenciée » toute souche cellulaire issue d'organes spécialisés d'une plante, en particulier issues de cellules différenciées d'une plante et obtenue par des conditions de culture in vitro spécifiques, ne présentant plus aucun 4 caractère de spécialisation et apte, sous l'effet d'une induction, à toute différenciation conforme à leur génome et à générer à elle seule un plant entier de végétal dont elle provient. De telles cellules sont capables de vivre par elle-même et non en dépendance avec d'autres cellules. Les cellules végétales dédifférenciées sont distinctes des cellules végétales 5 indifférenciées encore appelées cellules méristématiques ou cellules souches qui existent naturellement chez les végétaux. Milieu de culture acellulaire et procédé d'obtention Le milieu de culture acellulaire selon l'invention est un milieu de culture 10 acellulaire issu d'une étape de dédifférenciation de cellules végétales d'une plante du genre Rosa sp. suivie d'une étape de clarification et d'une étape de stabilisation. Ladite étape de dédifférenciation de cellules végétales d'une plante du genre Rosa sp. comprend en particulier la mise en culture de cellules végétales différenciées issues d'une plante du genre Rosa sp. dans un milieu de culture A, comprenant au moins une phytohormone. 15 On entend par « mise en culture de cellules végétales différenciées issues d'une plante du genre Rosa sp. dans un milieu de culture A» à la fois l'introduction de cellules végétales différenciées issues d'une plante du genre Rosa sp. dans le milieu de culture A mais également l'introduction d'une plante ou parties de plante du genre Rosa sp. dans le milieu de culture A, en particulier une feuille ou fragment de feuille. 20 Les phytohormones sont en particulier choisies parmi les auxines, les cytokines et les gibbérellines. Le milieu de culture A peut encore être appelé milieu de culture de départ. Les Auxines convenant tout particulièrement à l'invention sont l'AIA (Acide Indole 3-acétique), l'AIB (Acide Indol 3-butyrique), l'acide Phénylacétique, l'ANA (Acide 1- 25 Naphtalène Acétique) pour les principaux. De préférence, le milieu de culture A comprend au moins une auxine telle que l'acide 1-naphtalène acétique. Les Cytokinines, impliquées dans l'allongement cellulaire, convenant tout particulièrement à l'invention sont la Kinétine (N-(furan-2-ylméthyl)-7H-purin-6-amine ; Ref CAS n° 525-79-1), la Zeatine (2-méthy1-4-(7H-purin-6-ylamino)but-2-én-1-ol ; Ref CAS n° 30 1637-39-4) et la Benzyl Adenine (N-benzy1-7H-purin-6-amine ; Ref CAS n° 1214-39-7) pour les plus importantes. De préférence, le milieu de culture A comprend au moins une cytokinine telle que la kinétine. Les Gibberellines forment une famille d'hormones végétales ou phytohormones, qui englobent plus d'une centaine de composés, ces composés étant répertoriées par leur numéro 5 d'ordre GA1, GA2, .../ GA126. Les diverses Gibbérellines sont très proches entre elles du point de vue structurel. Les Gibbérellines convenant particulièrement à l'invention sont essentiellement racinaires et comportent de très nombreux dérivés dont les plus importants sont l'acide Gibberellique aussi appelé Gibbérelline A3, ainsi que les Gibberellines Al et Al2. 5 Avantageusement, le milieu de culture A comprend au moins une phytohormone choisie parmi l'acide Indole 3-acétique, l'acide Indolbutyrique, l'acide Phénylacétique, l'acide Naphtalène Acétique, la Kinétine, la Zeatine, la Benzyl Adenine, l'acide Gibberellique, les Gibberellines Al, A3, GA3, et leurs mélanges. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, le milieu de culture A comprend au moins une auxine telle que l'acide 1-naphtalène 10 acétique et au moins une cytokinine telle que la kinétine. De manière préférée, le milieu de culture A est un milieu aqueux. On entend au sens de la présente invention par « milieu aqueux » un milieu comprenant de l'eau et éventuellement un solvant aqueux additionnel en particulier compatible avec la culture de cellules végétales. 15 Selon un mode de réalisation particulier, le milieu de culture A est un milieu aqueux comprenant : au moins une phytohormone telle que l'acide 1-naphtalène acétique, la kinétine et leurs mélanges ; et au moins un sel éventuellement sous forme hydraté choisi parmi NH4NO3 ; 20 KNO3 ; CaC12,21{20 ; Mea' ; KH2PO4 ; MnSO4,41{20 ; Zn504,71-120 ; M; Na2Mo04,2H20 ; Cu504,5H20 ; Na2EDTA,2H20 ; Fe504,7H20 ; et leurs mélanges ; et au moins une source carbonée, de préférence choisie parmi les mono, les oligo ou les polysaccharides, et leurs mélanges, en particulier ladite source carbonée 25 est choisie parmi le glucose, le fructose, le saccharose, et leurs mélanges, de préférence le saccharose ; et éventuellement au moins un composé choisi parmi le myo-inositol ; l'acide nicotinique ; la pyridoxine HC1 ; la thiamine HC1 et leurs mélanges. Avantageusement, la quantité de source carbonée présente dans le milieu de culture 30 A est comprise entre 5 et 40 g/1 de milieu de culture, de préférence entre 10 et 35g/1, encore mieux la quantité de source carbonée présente dans le milieu de culture A est de 30g/1 de milieu de culture. Selon au mode de réalisation préféré, le milieu de culture A est un milieu aqueux contenant au moins NH4NO3 ; KNO3 ; CaC12,2H20 ; Mg504 ; KH2PO4 ; MnSO4,4H20 ; 6 ZnSO4,7H20 ; M ; Na2Mo04,2H20 ; CuSO4,5H20 ; Na2EDTA,2H20 ; FeSO4,7H20 ; du myoinositol ; de l'acide nicotinique ; de la pyridoxine HC1 ; de la thiamine HC1 ; de l'acide naphtalène acétique ; de la kinétine ; et du saccharose. Avantageusement, le milieu de culture A peut comprendre de 1200 à 2000 mg/1 de 5 NH4NO3 ; de 1500 à 2100 mg/1 de KNO3 ; de 300 à 500 mg/1 de CaC12,2H20 ; de 150 à 200 mg/1 de MgSO4 ; de 153 à 187 mg/1 de KH2PO4 ; de 10 à 30 mg/1 de MnSO4,4H20 ; de 5 à10 mg/1 de ZnSO4,7H20 ; de 0,001 à 0,91 mg/1 de M; de 0,001 à 0,30 mg/1 de Na2Mo04,2H20 ; de 0,01 à 0,05 mg/1 de CuSO4,5H20 ; de 10,5 à 50 mg/1 de Na2EDTA,2H20 ; de 10 à 30 mg/1 de FeSO4,7H20 ; de 70 à 150 mg/1 de myo-inositol ; de 0,3 à 0,6 mg/1 d'acide nicotinique ; de 0,4 10 à 0,6 mg/1 de pyridoxine ; de 0,08 à 0,15 mg/1 de thiamine ; de 0,001 à 11 mg/1 d'acide naphtalène acétique ; de 0,001 à 1 mg/1 de kinétine ; de 10 à 35 g/1 de saccharose ; et de l'eau. Les concentrations des différents constituants compris dans le milieu de culture A sont exprimées en concentration massique. Contrairement au milieu de culture A, le milieu de culture acellulaire selon 15 l'invention comprend notamment des composés excrétés par les cellules végétales dédifférenciées ou générés lors du processus de culture des cellules végétales dédifférenciées, et en particulier des hormones comme la 6-fufurylaminopurine, des vitamines comme les vitamines Bi, B6 et PP, des sucres comme le glucose et le fructose, des polyphénols, des lipides, des protéines présentant un poids moléculaire compris entre 3kDa et 14kDa, ainsi 20 que des acides aminés libres. Ainsi le milieu de culture acellulaire contient notamment de la 6- fufurylaminopurine, des vitamines Bi, B6 et PP, des sucres comme le glucose et le fructose, des polyphénols, des lipides, des protéines présentant un poids moléculaire compris entre 3kDa et 14kDa, ainsi que des acides aminés libres. 25 De préférence, le milieu de culture acellulaire selon l'invention est obtenu par mise en culture de cellules végétales différenciées issues d'au moins une feuille d'une plante du genre Rosa sp. dans le milieu de culture A tel que défini précédemment. Le genre Rosa comporte plus de 200 espèces parmi lesquelles on peut citer Rosa 30 alba, Rosa alpina, Rosa canina, Rosa cinnamonea, Rosa gallica, Rosa repens, Rosa rubrifolia, Rosa rubiginosa, Rosa sempervirens, Rosa spinosissima, Rosa stylosa, Rosa tomentosa, ou encore Rosa villosa. De manière préférée encore, le milieu de culture acellulaire selon l'invention est obtenu par mise en culture de cellules végétales différenciées issues d'un rosier Lancôme®, et 7 plus particulièrement à partir d'un rosier dit Rose Lancôme delboip. Un tel rosier est disponible commercialement, par exemple auprès de la société DELBARD (France). De manière tout à fait préférée, le milieu de culture acellulaire selon l'invention est obtenu en utilisant comme produit de départ des feuilles d'un rosier Lancôme delboip ou des 5 cellules issues desdites feuilles. Par « feuille » on entend feuilles entières et des fragments de feuilles. Les cellules issues de feuilles peuvent être obtenues selon toute technique bien connue de l'homme du métier. Préférentiellement, les feuilles ou cellules issues de feuilles sont fournies sous forme axénique (débarrassée de tout contaminant biologique). En particulier, au moins une feuille est prélevée 10 puis décontaminée par immersion dans une solution d'hypochlorite de calcium. Le rosier Lancôme® est en particulier un hybride de thé. Selon un mode de réalisation préférentiel, ledit milieu de culture est obtenu selon un procédé comprenant les étapes suivantes : 15 a) fournir des feuilles de rose Lancôme, ou des cellules issues desdites feuilles telles que définies précédemment, b) cultiver les feuilles ou les cellules fournies à l'étape a) en présence d'un milieu de culture A tel que défini précédemment, de manière à générer des cellules dédifférenciées, et c) récupérer le milieu de culture obtenu à la fin de l'étape b) par exemple par filtration, et 20 d) stabiliser ledit milieu obtenu à l'étape c). La culture à l'étape b) est avantageusement effectuée à une température allant de 24 à 30°C, et de préférence de 26 à 27 °C. La culture à l'étape b) est avantageusement effectuée dans une atmosphère 25 comprenant environ 10 % de pression partielle d'02. Le procédé est préférentiellement effectué en lots (batch) pendant 6 à 14 jours, de préférence 6 à 10 jours. Le procédé peut être effectué selon une technique de fermentation à écoulement discontinu (fed batch) ou de fermentation en continu. 30 Après culture dans le milieu de culture A, le milieu de culture acellulaire selon l'invention est récupéré à l'étape c), par exemple par filtration. Selon un mode de réalisation particulier, l'étape b) de culture est réalisée pendant une durée de 6 à 14 jours, et préférentiellement de 6 à 10 jours. 8 Les cellules dédifférenciées obtenues à l'étape b) se caractérisent notamment par les caractéristiques suivantes : - la taille des cellules isolées ( REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique d'un milieu de culture acellulaire issu d'une étape de dédifférenciation de cellules végétales d'une plante du genre Rosa sp. suivie d'une étape de clarification et d'une étape de stabilisation, à titre d'agent actif pour le soin des matières kératiniques, en particulier pour le soin de la peau telle que la peau âgée. 2. Utilisation selon la revendication précédente, pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter un défaut esthétique consécutif à une dégradation des fibres de collagène de la peau. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, pour prévenir et/ou réduire et/ou traiter des signes cutanés du vieillissement. 4. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle les signes cutanés du vieillissement sont choisis parmi un amincissement de la peau, une perte de fermeté, une perte d'élasticité, une perte de densité, ou une perte de tonicité de la peau, une altération de l'aspect de surface de la peau, une apparition d'un microrelief marqué de la peau, une apparition de rugosité, une formation et/ou une présence de ridules et/ou de rides, une altération de l'éclat du teint de la peau, un aspect papyracé de la peau, un affaissement de la peau, ou un flétrissement de la peau. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite étape de dédifférenciation comprend la mise en culture de cellules végétales différenciées issues d'une plante du genre Rosa sp. dans un milieu de culture A comprenant au moins une phytohormone. 6. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle ledit milieu de culture A est un milieu aqueux contenant au moins NH4NO3 ; KNO3 ; CaC12,2H20 ; MgSO4 ; KH2PO4 ; MnSO4,4H20 ; ZnSO4,7H20 ; M ; Na2Mo04,2H20 ; CuSO4,5H20 ; Na2EDTA,2H20 ; FeSO4,7H20 ; du myo-inositol ; de l'acide nicotinique ; de la pyridoxine HC1 ; de la thiamine HC1 ; de l'acide naphtalène acétique ; de la kinétine ; et du saccharose. 7. Utilisation selon la revendication 5 ou 6, dans laquelle lesdites cellules issues d'une plante du genre Rosa sp sont des cellules végétales différenciées, en particulier issues d'une feuille, d'une tige, d'une fleur, d'un pétale, d'un sépale, ou d'une racine, et de préférence d'une feuille, encore mieux d'une feuille de rosier Lancôme. 8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite étape de stabilisation est effectuée par filtration stérilisante, autoclavage, ultra haute température, stérilisation haute pression, lyophilisation, atomisation ou congélation. 20 9. Milieu de culture acellulaire issu d'une étape de dédifférenciation de cellules végétales d'une plante du genre Rosa sp. suivie d'une étape de clarification et d'une étape de stabilisation. 10. Composition cosmétique comprenant à titre d'agent actif un milieu de culture 5 acellulaire tel que défini selon la revendication 9. 11. Composition selon la revendication précédente, dans laquelle ledit milieu de culture est présent entre 0,001 % et 30 % en poids de matière sèche, et préférentiellement entre 0,005 % et 20 % en poids de matière sèche, encore mieux entre 0.01% et 10% en poids par rapport au poids total de la composition. 10 12. Procédé de traitement cosmétique pour le soin des matières kératiniques comprenant l'application sur lesdites matières kératiniques d'une composition cosmétique telle que définie selon la revendication 10. 13. Procédé d'obtention d'un milieu de culture acellulaire tel que défini dans la revendication 9 comprenant les étapes suivantes : 15 a) fournir des feuilles de rose Lancôme, ou des cellules issues desdites feuilles, b) cultiver les feuilles ou les cellules fournies à l'étape a) en présence d'un milieu de culture A comprenant au moins une phytohormone, de manière à générer des cellules dédifférenciées, et c) récupérer le milieu de culture obtenu à la fin de l'étape b) par exemple par 20 filtration, et d) stabiliser ledit milieu obtenu à l'étape c).