Brevet FR3083053A1 — publié le 20200103

AGENT CONSERVATEUR ALIMENTAIRE COMPRENANT UN EXTRAIT D'ULYA SP, SON UTILISATION POUR CONSERVER LES PRODUITS DE BOULANGERIE, ET PRODUITS DE BOULANGERIE LE COMPRENANT RESUME DE L'INVENTION La présente invention concerne l'extrait d'Ulm sp et son utilisation pour l'obtention de produits agroalimentaires, notamment des produits de boulangerie, en particulier du pain. La présente invention concerne notamment un agent conservateur alimentaire comprenant un extrait d'Ulva sp; l'utilisation de cet extrait pour conserver les produits de boulangerie, notamment le pain , une pâte boulangère comprenant ledit extrait , pâton précuit obtenu par cuisson de ladite pâte boulangère ; le pain cuit obtenu par la cuisson de ladite pâte boulangère ou dudit pâton précuit ; un produit céréalier autre que le pain comprenant ledit extrait, et ses produits de préparation. En effet, il a été démontré que l'extrait d'UR/a sp présentait des propriétés satisfaisantes de conservation du pain et une innocuité démontrée pour son utilisation dans l'alimentation humaine. ART ANTERIELIR Le pain est l'un des aliments les plus consommés dans le monde. Il est fabriqué à partir de farine et d'eau, et souvent de sel. Ceux-ci constituent les composés (ou agents) de base. En outre, suivant les cultures, le type de pain et son procédé de fabrication, il peut comprendre des agents additionnels (ou agents additifs). Ainsi, le pain comprend souvent de la levure ou levain. En l'absence de levure, on parle de pain azyme. La consommation de pain frais, acheté quotidiennement et à consommer rapidement après sa fabrication, s'est développée au cours du 20àme siècle. Une des contaminations les plus connues est la contamination par la bactérie Bacillus mesentericus, dite « pain filant ». Cette contamination a lieu avant la cuisson. Elle devient cependant rare de nos jours du fait de l'amélioration des conditions d'obtention des farines et de fabrication des pains. D'autres microorganismes peuvent être à l'origine du développement de moisissures, qui rendent le pain impropre à la consommation humaine. Or, outre le pain à consommation rapide, il s'est développé également les pains à longue conservation, de plusieurs jours à plusieurs semaines. Il s'agit notamment des pains emballés, disponibles en boulangerie ou dans les grandes surfaces. Ces pains peuvent d'ailleurs être fabriqués de manière artisanale ou industrielle. Une bonne conservation du pain nécessite l'ajout d'agents conservateurs, voire d'agents additionnels comme les agents acidifiants. Les agents conservateurs visent à ralentir ou prévenir le développement de micro-organismes et l'apparition de moisissures. Selon le règlement (CE) n°1333/2008 du 16 décembre 2008 sur les additifs alimentaires, les agents conservateurs sont définis comme « des substances qui prolongent la durée de la conservation des denrées alimentaires en les protégeant des altérations dues aux microorganismes et/ou qui les protègent contre la croissance de microorganismes pathogènes ». L'utilisation des agents conservateurs est strictement réglementée dans l'Union européenne, notamment par le truchement du règlement (UE) n°1129/2011 du 11 novembre 2011 qui établit une classification. Les agents conservateurs peuvent être des agents minéraux et/ou des agents organiques. Les agents minéraux peuvent être choisis parmi le groupe consistant en les nitrates, les nitrites, les anhydrides sulfureux, les anhydrides sulfites, l'acide borique et leurs mélanges. Les agents organiques peuvent être choisis parmi le groupe consistant en l'acide propionique, l'acide sorbique, l'acide benzoïque, leurs sels, et leurs mélanges. Outre les agents conservateurs, il est aussi possible d'augmenter la conservation du pain en modifiant les conditions physico-chimiques, par exemple le pH. Ces problématiques de conservation se retrouvent également dans tout autre produit céréalier, cuit ou non-cuit, autre que le pain. Malgré la forte réglementation pour ce type de produits et l'existence d'une liste fermée d'agents additifs autorisés, notamment d'agents conservateurs, les consommateurs sont de plus en plus attentifs à consommer des produits naturels. Ainsi, pour ce qui concerne le pain, les consommateurs sont à la recherche de produits comprenant - outre les composés de base - des agents naturels, en complément ou en remplacement des agents additifs usuels. En particulier, les consommateurs sont à la recherche de pains comprenant - outre les composés de base - des agents naturels, en complément ou en remplacement des agents conservateurs usuels. Pour être spécifique, les consommateurs sont à la recherche de pains comprenant - outre les composés de base - des agents naturels, en complément ou en remplacement des agents conservateurs usuels choisis parmi le groupe consistant en les agents conservateurs minéraux et/ou organiques. Ces agents naturels doivent assurer une bonne conservation du pain dans le temps, et avoir une innocuité démontrée. En outre, ces agents naturels doivent préserver les propriétés organoleptiques des produits les contenant. Enfin, ces 2 agents naturels ne doivent pas altérer les propriétés physiques des produits les contenant, notamment leur texture. OBJECTIFS DE L'INVENTION La présente invention a pour objectif, dans au moins un mode de réalisation, la fourniture d'agents conservateurs naturels pour produits céréaliers, notamment le pain, et leurs produits de préparation. La présente invention a également pour objectif, dans au moins un mode de réalisation, la fourniture d'agents conservateurs naturels en complément, voire en remplacement, des agents conservateurs usuels, notamment les agents conservateurs minéraux (par exemple les nitrates, les nitrites, les anhydrides sulfureux, les anhydrides sulfites, l'acide borique et leurs mélanges) et/ou des agents organiques (par exemple l'acide propionique, l'acide sorbique, l'acide benzoïque, leurs sels, et leurs mélanges). La présente invention a également pour objectif, dans au moins un mode de réalisation, la fourniture d'agents conservateurs naturels dont l'innocuité pour la consommation humaine, par incorporation dans les produits agroalimentaires, notamment les produits céréaliers, est démontrée. La présente invention a également pour objectif, dans au moins un mode de réalisation, la fourniture d'agents conservateurs naturels préservant les propriétés organoleptiques des produits céréaliers les comprenant, notamment le pain. La présente invention a également pour objectif, dans au moins un mode de réalisation, la fourniture d'agents conservateurs naturels n'altérant pas les propriétés physiques des produits les contenant, notamment leur texture. DESCRIPTION DE L'INVENTION Selon un premier aspect, la présente invention concerne un agent conservateur alimentaire comprenant un extrait d' tilva sp. Cet agent conservateur est destiné à être incorporé aux produits céréaliers, en particuliers les produits de boulangerie, notamment le pain. Selon un second aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'un extrait d' Li/va .sp. pour conserver les produits céréaliers, en particulier les produits de boulangerie, notamment le pain. 3 Selon un troisième aspect, la présente invention concerne une pâte boulangère comprenant un extrait d' Ulva sp. L'invention concerne également un pâton précuit obtenu par cuisson de ladite pâte boulangère ; un pain cuit obtenu par la cuisson de ladite pâte boulangère ou dudit pâton précuit ; un pain comprenant un extrait d' Ulva sp; un produit céréalier autre que le pain comprenant un extrait d'Ulva sp, et ses produits de préparation. La pâte boulangère (avant cuisson) et le pâton précuit peuvent être préparés de manière extemporanée ou peuvent être préparés pour obtention ultérieure d'un pain après cuisson. La pâte boulangère, le pâton et le pain peuvent être frais, congelés ou surgelés. Par « conservation » et « conserver », on entend entre une période pendant laquelle un produit alimentaire - notamment le pain - reste sain ; conserve à un niveau acceptable ses propriétés sensorielles, chimiques, physiques et microbiologiques ; et est en accord avec les valeurs annoncées sur l'emballage. Pour le pain, un élément clé est la durée de conservation sans moisissure (MFSL pour « mouldfree shell filé »), qui est classiquement de 4 à 10 jours suivant l'activité de l'eau, les conditions de conservation et l'utilisation ou non d'agents conservateurs. Dans la présente invention, les expressions « produits céréaliers » et « produits de boulangerie » sont interchangeables. Les inventeurs ont mis en avant de manière inattendue que l'extrait d' Ulva sp présentait des propriétés de conservation des aliments, notamment les produits céréaliers, tout à fait satisfaisantes. En effet, les boulangers et l'industrie du pain sont à la recherche de nouvelles solutions pour réduire la teneur des produits céréaliers - notamment le pain - en agents conservateurs de synthèse, sans altérer la bonne conservation des produits, qui ne sont pas destinés à une consommation immédiate. Outre la bonne conservation, il est également important de préserver les propriétés physiques (par exemple la texture) et les propriétés organoleptiques (par exemple le goût et l'odeur) du produit. Or, au vu des nombreux tests pratiqués et rapportés ci-contre, les inventeurs ont démontré que l'extrait d'Ulva sp - qui est un produit d'origine naturel - présente des propriétés conservatrices satisfaisantes. En outre, les inventeurs ont démontré que l'extrait d'Ulva sp n'altère pas les propriétés physiques et organoleptiques de manière significative. En cela, l'extrait d'Ulva sp représente un substitut ou un complément aux agents conservateurs utilisés de manière usuelle dans les produits céréaliers, en particulier les produits de boulangerie, notamment le pain. Eau La pâte boulangère comprend de l'eau 4 En particulier, la pâte boulangère comprend entre 20% et 55% d'eau en poids, par rapport au poids totale de la pâte avant cuisson. Farines La pâte boulangère comprend de la farine. La farine est choisie parmi les farines panifiables ; préférentiellement les farines panifiables choisies parmi le groupe consistant en le blé (ou froment), l'épeautre, le seigle ou leurs mélanges. Les farines panifiables comprennent du gluten en quantité suffisante pour permettre la création d'un réseau de gluten lors du pétrissage. Le gluten est un ensemble de protéines, notamment la prolamine, la gliadine et la gluténine. Ces protéines, insolubles dans l'eau, donnent à la farine des propriétés viscoélastiques. Ces propriétés sont utiles à la fabrication du pain, les bulles de CO2, dégagées lors de la dégradation anaérobie des sucres fermentiscibles par les levures, sont piégées dans le réseau de gluten. On dit alors que la pâte « lève ». Outre la farine panifiable, le pain peut comprendre de la farine non-panifiable ; préférentiellement de la farine non-panifiable choisie parmi le groupe consistant en le sarrasin, l'orge, le maïs, la châtaigne, la noix, le riz, le quinoa, l'amarante ou leurs mélanges. En particulier, la pâte boulangère comprend entre 50% et 75% de farine en poids, par rapport au poids totale de la pâte avant cuisson. Sel La pâte boulangère peut comprendre su sel (NaC1) Levure La pâte boulangère peut comprendre un extrait de levure, préférentiellement un extrait de levure appartenant au genre Saccharomyces cerevisiae, très préférentiellement un extrait de levure appartenant à l'espèce Saccharomyces cerevisiae. L'appellation Saccharomyces cerevisiae inclus présentement Saccharomyces carlsbergensis. Ledit extrait de levure peut aussi comprendre de la levure de brasserie. La levure est à l'origine d'une réaction de la fermentation alcoolique, dite panification au levain. Au cours de cette fermentation, il est produit du CO2 et de l'éthanol. Le CO2, contribue à la formation de la mie. L'éthanol, quant à lui, s'évapore en cours de cuisson. En particulier, la pâte boulangère comprend entre 0,5% et 4% de levure en poids, par rapport au poids totale de la pâte avant cuisson. Extraits d' Ulves sp. Le pain comprend un extrait d' Ulva sp. Ulva sp sont également dénommées Ulves et correspondent aux algues vertes regroupées dans le genre Ulves. Selon la base de données AlgaeBase, la classification de ces algues est la suivante Eukaryota (domaine), Plantae (règne), Viridiplantae (sous-règne), Ch/orophyta (infra-règne), Chlorophyta (embranchement), Tetraphythia. (sous-embranchement), Ulvophyceae (classe), Uvales (ordre, ttivaceae (famille), Ulva (genre). Le genre Ulva intègre aujourd'hui deux morphotypes, la morphotype feuille, communément appelés de laitues de mers, et la morphotype tube, communément appelé Ulve en tube. Ce morphotype était classifié dans le genre Enteromorpha jusqu'au 2003 (Hayden et al). De nombreuses sous espèces ont été répertoriés pour les deux morphotypes le plus connu pour le morphotype feuille étant Ulva Lactuca et pour le morphotype tube Ulva intestinalis. La présente invention concerne uniquement les algues du genre Ulva, et leurs extraits, qui sont comestibles et dont l'innocuité en alimentation humaine est démontrée. En particulier, la pâte boulangère comprend entre 0,5% et 3% d'extrait sec d' Ulva sp en poids, par rapport au poids total humide de la pâte avant cuisson. Procédé d'obtention d'un extrait d' Ulva sp. L'extrait d'UN(' sp est préférentiellement un extrait aqueux ou sec. Ledit extrait est obtenu par les procédés d'extraction conventionnels. Ledit extrait d' Ulva sp peut être obtenu par un procédé d'extraction comprenant les étapes suivantes : a) Fourniture d'algues fraiches, sèches ou congelées ; b) Lavage et dessablage desdites algues; c) Broyage des algues lavées et dessablées d) Traitement desdites algues broyées pour obtenir une matière sèche entre 5 et 20% par l'ajout d'eau ; e) Séparation de la phase solide du broyat de sa phase liquide (par exemple par presse ou centrifugeuse) , f) Filtration de ladite phase liquide (par exemple par clarificateur, filtre, décanteur); g) Stabilisation de ladite phase liquide filtré (par exemple par pasteurisation ou par stérilisation) ; 6 h) Ultrafiltration du filtrat stabilisé, par exemple par ultrafiltration en cascade sur 3 seuils de coupure compris entre 0,5 !lm et 11(Da ; i) Obtention d'un extrait d' tfiva sp, étant soit la fraction stabilisée obtenu à l'étape g) ou les produits d'ultrafiltration obtenus à l'étape h). Autres agents conservateurs Le pain peut comprendre en outre des agents conservateurs, autres que l'extrait d'Ulva sp. Les agents conservateurs peuvent être des agents minéraux et/ou des agents organiques. Les agents minéraux peuvent être choisis parmi le groupe consistant en les nitrates, les nitrites, les anhydrides sulfureux, les anhydrides sulfites, l'acide borique et leurs mélanges. Les agents minéraux peuvent être choisis notamment parmi le groupe consistant en l'anhydride sulfureux (E220), le sulfite de sodium (E221), le sulfite acide de sodium (E222), le di sulfite de sodium (E223), le disulfite de potassium (E224), le sulfite de calcium (E226), le sulfite acide de calcium (E227), le sulfite acide de potassium (E228), le nitrite de potassium (E249), le nitrite de sodium (E250), le nitrate de sodium (E251), le nitrate de potassium (E252) et leurs mélanges. Les agents organiques peuvent être choisis parmi le groupe consistant en l'acide propionique, l'acide sorbique, l'acide benzoïque, leurs sels, et leurs mélanges; préférentiellement l'acide sorbique (E200), le sorbate de potassium (E202), le sorbate de calcium (E203), l'acide benzoïque (E210), le benzoate de sodium (E211), le benzoate de potassium (E212), le benzoate de calcium (E213), le p-hydroxybenzoate d'éthyle (E214), le dérivé sodique de l'ester éthylique de l'acide p-hydroxybenzoïque (E215), le phydroxybenzoate de méthyle (E218), le dérivé sodique de l'ester méthylique de l'acide phydroxybenzoïque (E219), l'acide propionique (E280), le propionate de sodium (E281) le propionate de calcium (E282), le propionate de potassium (283) et leurs mélanges. Dans l'Union européenne, les règlements (CE) n°1333/2008 et (UE) n°1129/2011 définissent les agents conservateurs autorisés et leur quantités respectives en fonction des pains concernés. Ainsi, dans le pain tranché préemballé et le pain de seigle, seuls sont autorisés l'acide sorbique et ses sels (E200 à E203), l'acide propionique et ses sels (E280 à E283). Il en est de même pour les produits de la boulangerie précuits et préemballés destinés à la vente au détail ; et le pain à valeur énergétique réduite destiné à la vente au détail. Dans le pain préemballé, seuls sont autorisés l'acide propionique et ses sels (E280 à E283). Il en est 7 de même pour les rolls, buns et pitta préemballés , et les produits de boulangerie fine préemballés dont l'activité de l'eau est supérieure à 0,65. Dans les produits de boulangerie fine dont l'activité de l'eau est supérieure à 0,65, seuls sont autorisés l'acide sorbique et ses sels (E200 à E203). Agents acidifiants Le pain peut comprendre en outre des agents additionnels, non-classifiés en tant qu'agents conservateurs, tel que les acidifiants. Les agents acidifiants peuvent être choisis parmi le groupe consistant en l'acide lactique (E270), l'acide acétique (E260), l'acide de calcium (E263), le vinaigre alimentaire, le phosphate acide de calcium (E341) et leurs mélanges. Agents additionnels Le pain peut comprendre en outre des agents additionnels, autres que les composés de base, ledit extrait d'Uh'a sp, les agents conservateurs et les agents acidifiants. Les agents additionnels peuvent être choisis parmi le groupe consistant en l'acide ascorbique, la Lcystéine, les agents exhausteurs de goût, les émulsifiants, les agents stabilisants-épaississants, les enzymes et leurs mélanges. Les agents stabilisants-épaississants peuvent être choisis parmi le groupe consistant en la farine pré-gélatinisée, les amidons modifiés, le carboxyméthylcellulose, les gommes (par exemple les gommes de xanthane), les alginates, les carraghénates ou leurs mélanges. Les émulsifiants peuvent être choisis parmi le groupe consistant en la lécithine, les monoglycérides d'acides gras, les diglycérides d'acides gras et leurs esters ou leurs mélanges. Les enzymes peuvent être choisis parmi le groupe consistant en les amylases, les hémicellulases, les glucose oxydase, les amyloglucosidases, les lipases, les phospholipases ou leur mélanges. EXEMPLES De nombreux tests ont été réalisés afin de démontrer les propriétés conservatrices de l'extrait d'Ufpa sp sur le pain. Procédé de fabrication du pain Les pains testés ci-après ont été obtenus comme suit la levure est humidifiée et mélangée dans 10G d'eau , le sel est mélangé dans 54g d'eau , la farine est préparée, en y 8 ajoutant possiblement l'extrait d' Ulva sp ; l'eau salée, la farine et préparée et la levure sont mélangées pendant 5min à 40rpm (étape de frasage) ; le mélange est ensuite mélangé à nouveau pendant 5min à 60rpm (étape de pétrissage) ; la pâte obtenue est ensuite placée pendant 50min à 38°C (étape de pointage), avant d'être façonnée sous forme de pâton de forme choisie (étape de façonnage) ; le pâton est placé pendant 50min à 38°C (étape d'apprêt) ; puis le pâton est cuit pendant 15min à 200°C pour obtenir le pain. Test préliminaire Les propriétés conservatrices de deux concentrations d'extrait d' Ulva sp ont été testées et comparées avec un témoin négatif (absence d'agents conservateurs). Les compositions P01 à P03 testées sont les suivantes : P01 P02 P03 Extrait d' U-Lva sp Og 1,5g 3,0g obtenu selon les (0,89%) (1,75%) étapes g) et 0 Farine de blé 100g 100g 100g traditionnelle T65 Eau 64,08 64,0g 64,08 Levure 2,0g 2,0g 2,0g Sel 2,0g 2,0g 2,0g Total 168,0g 169,5g 171,0g (100%) (100%) (100%) Après cuisson, les pains P01, P02 et P03 sont placés à température ambiante pendant plusieurs jours. P01 P02 P03 Temps (jours) 7 11,3 , 10,7 Une inspection visuelle démontre que des moisissures apparaissent sur P01 (témoin négatif) à 7 jours, alors que celles-ci n'apparaissent sur P02 et P03 (pains comprenant de l'extrait dUlva sp.) après 10 jours ou plus. Cela démontre donc les propriétés conservatrices de l'extrait d' Ulva :sp. Test 2 Les compositions PO4 à P06 testées sont les suivantes : 9 PO4 P05 P06 Extrait d'ULva sp Og 1,0g 3,0g obtenu selon étapes (0.59%) (1,75%) (g) et (i) Farine de blé 100g 100g 100g traditionnelle T65 Eau 64,0g 64,0g 64,0g Levure 2,0g 2,0g 2,0g Sel 2,0g 2,0g 2,0g Total 168,0g 169,0g 171,0g (100%) (100%) (100%) Après cuisson, les pains PO4, P05 et P06 sont placés à température ambiante dans un sac plastique pendant plusieurs jours. PO4 P05 P06 Temps (jours) 8,2 10,2 12,5 Moyenne de 6 essais Une inspection visuelle, réalisée sur 6 essais, démontre que les moisissures apparaissent sur P05 et P06 (pains comprenant de l'extrait dUlva sp.) au moins 2 jours après P01 (témoin). Test 3 Les compositions P07 à P09 testées sont les suivantes : P07 P08 P09 Extrait d' ULvct sp Og 1,0g 3,0g obtenu selon étapes (0.59%) (1,75%) (g) et (i) Farine de blé 100g 100g 100g boulangère Eau 64,0g 64,0g 64,0g Levure 2,0g 2,0g 2,0g Sel 2,08 2,0g 2,0g Total 168,0g 169,0g 171,0g (100%) (100%) (100%) Après cuisson, les pains P07, P08 et P09 sont placés à température ambiante dans un sac plastique pendant plusieurs jours. P07 P08 P09 Temps (jours) 11,8 16,2 16,7 Moyenne de 6 essais Une inspection visuelle, réalisée sur 6 essais, démontre que les moisissures apparaissent sur P08 et P09 (pains comprenant de l'extrait t'Ulm sp.) plusieurs jours après P07 (témoin). Test 4 Les compositions P10 à P13 testées sont les suivantes : P10 Pll P12 P13 Extrait d' ULva sp Og Og 0,86g 3,43g obtenu selon étapes (0,5%) (2,0%) (g) et (I) Acide propionique Og 0,34g Og Og Farine de blé 100g 100g 100g 100g boulangère Eau 64,0g 64,0g 64,0g 64,0g Levure 2,08 2,0g 2,08 2,0g Sel 2,08 2,08 2,08 2,08 Total 168,0g 168,34g 168,86g 171,43g 000%) (100%) (100%) (100%) Après cuisson, es pains P10 à P13 sont placés à température ambiante dans un sac plastique pendant plusieurs jours. P10 Pll P12 P13 Temps (jours) 5,2 20,0 17,3 15,0 Moyenne de 6 essais Une inspection visuelle, réalisée sur 6 essais, démontre que les moisissures apparaissent sur P12 et P13 (pains comprenant de l'extrait citfiva .sp ) plusieurs jours après P10 (témoin), mais quelques jours avant P11 (témoin positif) A noter que l'apparente diminution d'efficacité avec la concentration la plus élevée de l'extrait cltIlva sp. pourrait être 11 due à la présence de spores ou non dans les tranches de pain testées, ce qui aurait biaisé en partie les résultats obtenus. Test 5 Les compositions P14 à P17 testées sont les suivantes : P14 P15 P16 P17 Extrait d' UL va sp Og Og 3,0g Og PF15/294 obtenu (1,75%) selon étapes (g) et (i) Extrait d' Ulm! sp Og Og Og 3,0g 270,16PA obtenu (1,75%) selon étapes (g) et (0 Acide propionique Og 0,2g Og Og Farine de blé 100g 100g 100g 100g boulangère Eau 64,0g 64,0g 64,0g 64,0g Levure 2,0g 2,0g 2,0g 2,0g Sel 2,0g 2,0g 2,0g 2,0g Total 168,0g 168,2g 171,0g 171,0g (100%) (100%) (100%) (100%) Après cuisson, es pains P14 à P17 sont placés à température ambiante dans un sac plastique pendant plusieurs jours. P14 P15 P16 P17 Temps (jours) 8,8 18,8 14,5 14,5 Moyenne de 6 essais Une inspection visuelle, réalisée sur 6 essais, démontre que les moisissures apparaissent sur P16 et P17 (pains comprenant de l'extrait citfiva sp.) plusieurs jours après P14 (témoin), mais quelques jours avant P15 (témoin positif). Test 6 Pour ce test, il a été procédé à l'humidification de tranches de pain de mie avec différents extraits d' tilva sp en une quantité de 1,25g. Les pains testés sont les suivants : 12 - P18 - Tranche de pain (35g) + 7,5g d'eau - P19 - Tranche de pain (35g) + 7,5g d'eau + 1,25g d'extrait d'Ulva sp PF15/294 obtenu selon étapes (g) et (i); - P20 - Tranche de pain (35g) + 7,5g d'eau + 1,25g d'extrait d'Ulva sp P3 obtenu selon étapes (h) et (i) avec un seuil de coupure de 15 à 50kDa; - P21 - Tranche de pain (35g) + 7,5g d'eau + 1,25g d'extrait d'Ulva sp Pl obtenu selon étapes (h) et (i) avec un seuil de coupure de 0,5 à 2 pm; - P22 - Tranche de pain (35g) + 7,5g d'eau + 1,25g d'extrait d'Ulve, sp JAV270/16PA obtenu selon étapes (g) et (i) avec un seuil de coupure de 100 à 300pm , - P23 - Tranche de pain (35g) + 7,5g d'eau + 1,25g d'extrait d'Utva sp R1 obtenu selon étapes (h) et (i) avec un seuil de coupure de 100 à 300pm , - P24 - Tranche de pain (35g) + 7,5g d'eau + 1,25g d'extrait d'Ulva sp R2 obtenu selon étapes (h) et (i) avec un seuil de coupure de 50 à 100nm ; - P25 - Tranche de pain (35g) + 7,5g d'eau + 1,25g d'extrait d'Utva sp R3 obtenu selon étapes (h) et (i) avec un seuil de coupure de 15 à 50 kDa ; et - P26 - Tranche de pain (35g) + 7,5g d'eau + 1,25g d'extrait d'Ulva sp P3 obtenu selon étapes (h) et (i) avec un seuil de coupure de 15 à 50kDa. Pour ce faire, les tranches de pain de mie sans conservateurs ont été découpées de telle sorte à ce qu'elles entrent dans une boite de pétri. Elles ont ensuite été aspergées d'eau (et d'extrait d'Ulva sp. Les couvercles des boites de pétri ont été refermés, puis les boites ont été incubées à température ambiante pendant 20jours. Une inspection visuelle a été réalisée chaque jour. Les résultats suivants ont été obtenus : P18 P19 P20 P21 P22 P23 P24 P25 P26 Temps (jours) 6,2 18,8 12,6 20 20 20 20 20 20 Moyenne de 8 essais Ce test démontre que l'apparition des moisissures est fortement retardée pour les tranches de pain qui ont été aspergés d'extraits d'Ulva sp, tant du jus d'Ulva sp que de ses extraits, ce qui confirme à nouveau les propriétés conservatrices de cet agent. 13