Brevet FR3077067A1 — publié le 20190726

La présente invention concerne l'encapsulation dans des matériaux lamellaires de substances actives et/ou de microorganismes destinés à la croissance ou au traitement des plantes. L'encapsulation de substances actives dans des argiles telles que des argiles de synthèse est déjà connue (US 2009/0233107). Toutefois une telle encapsulation a lieu après la synthèse de l'argile, ce qui nécessite donc l'utilisation d'un procédé en 2 étapes. En outre il n'existe aucun document mentionnant l'encapsulation de 10 microorganismes au sein d'une argile, qu'elle soit naturelle ou de synthèse. Or les inventeurs ont découvert de façon surprenante qu'il était possible d'encapsuler de tels microorganismes et/ou des substances actives au sein 15 d'argile de synthèse de type talc ou saponite au cours de la synthèse de ces argiles, c'est-à-dire en une seule étape, tout en maintenant l'activité des substances actives et des microorganismes. La présente invention concerne donc un procédé d'encapsulation d'un zo composé choisi dans le groupe constitué par au moins une substance active, au moins un microorganisme et leurs mélanges dans un matériau hybride organique-inorganique de structure lamellaire de type 2:1, ledit matériau ayant la formule générale I suivante : Nax[(Mg3)(Alx(RSi)4_x)08,x(OH)2] (I) 25 dans laquelle x est un nombre tel que 0x 98 0/0, Sigma Aldrich) sont introduits sous agitation puis 2g de phényltriméthoxysilane (PhényITMS) (98%, ABCR) sont ajoutés. L'ensemble est laissé sous agitation puis le pH de la solution est porté à une valeur de 10 par addition de 15 mL d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (>97 °/0, Sigma Aldrich) de concentration 1M. 15 Après 24h d'agitation à température ambiante, le solide est séparé de la solution par centrifugation (vitesse de 10000 tours par min durant 10 min). Le solide est lavé à trois reprises avec de l'éthanol avant d'être séché dans une étuve à 40°C durant 48h. Le composé obtenu est ensuite broyé dans un mortier en agate avant d'être caractérisé. On récupère 1,35 20 g de composé dénommé 100%phényl TRYPTO. Le diffractogramme de rayons X de l'échantillon présente plusieurs pics de diffraction dans les domaines angulaires 2-10°2 thêta, 15-25°2 thêta, 3040°2 thêta et 55-652 thêta. Ces pics correspondent respectivement à des réflexions sur les plans réticulaires (001), (020 ; 110), (130 ; 220) et (060 25 :330), caractéristiques de la présence d'une phase lamellaire. La valeur de la périodicité d050 est de 0,156 nm, valeur caractéristique pour une phase lamellaire de type hybride organique-inorganique de structure de type talc de formule Mg3(RSi)408(OH)2 dans laquelle R représente un groupe phényle. La périodicité d001 est de l'ordre de 1,32 nm. 16 La quantité de tryptophane dans le composé (taux d'encapsulation) a été déterminée par en spectrophotométrie UV à une longueur d'onde de 280 nm. Le composé comporte 63,4 mg de tryptophane par g de matériau. L'analyse par thermogravimétrie réalisée sous air entre 30 et 800°C à une 5 vitesse de montée en température de 5°C/min montre que la perte de masse la plus importante (décomposition des produits) ne commence qu'à partir de 300°C, ce qui confirme que le tryptophane a bien été encapsulé au sein du matériau (tableau 1). Tableau 1 : résultat des analyses thermogravirnétriques réalisées sous 10 azote et sous air SOUS N2 Echantillon Pics (°C) Plage utilisée (°C) Perte de Masse (%) 100%Phényl 80 30-200 6,81 TRYPTO 358 - 480 200-800 43,83 Sous air Pics (°C) Plage utilisée (°C) Perte de Masse (%) 70 30-200 6,84 364 - 450 - 604 200-800 45,24 La comparaison entre le spectre de RMN du solide du 13C du tryptophane seul et du composé 100%Phényl TRYPTO indique la présence d'une résonance large à environ 111 ppm, attribuée à la présence de 15 tryptophane. La mobilité de ce dernier est fortement réduite, ce qui montre que le tryptophane est présent dans l'espace interfoliaire. On obtient donc bien du tryptophane encapsulé dans un matériau hybride organique-inorganique de structure lamellaire de type 2:1 de formule Mg3(RSi)408(OH)2. 17 b) composé 80Ph-20TEOS TRYPTO 2 g de nitrate de magnésium hexahydraté(99°/o, Sigma Aldrich) sont ajoutés à 20 mL d'éthanol absolu (99,9%, Carlo Erba), le mélange est maintenu sous agitation jusqu'à dissolution complète. 200mg de L- 5 tryptophane (>98%, Sigma Aldrich) sont ajoutés sous agitation puis un mélange constitué de 1,646 g de phényltriméthoxysilane (PhényITMS) (98%, ABCR) et de 0,432g tétraéthylsilane (TEOS) (98%, ABCR) est ajouté (mélange en masse de 79,2% de PhényITMS et 20,8% de TEOS qui représente 80% de PhényITMS et 20% de TEOS en mol). L'ensemble est 10 laissé sous agitation puis le pH de la solution est porté à une valeur de 10 par addition de 15 mL d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (>97%, Sigma Aldrich) de concentration 1M. Après 24h d'agitation à température ambiante, le solide est séparé de la solution par centrifugation (vitesse de 10000 tours par min durant 10 min). Le solide 15 est lavé à trois reprises avec de l'éthanol avant d'être séché dans une étuve à 40°C durant 48h. Le composé obtenu est ensuite broyé dans un mortier en agate avant d'être caractérisé. On récupère 1,43 g de composé dénommé 80Ph-20TEOS TRYPTO. Le diffractogramme de rayons X de l'échantillon présente plusieurs pics de 20 diffraction dans les domaines angulaires 2-10°2 thêta, 15-25°2 thêta, 30- 40°2 thêta et 55-652 thêta. Ces pics correspondent respectivement à des réflexions sur les plans réticulaires (001), (020 ; 110), (130 ; 220) et (060 :330), caractéristique de la présence d'une phase lamellaire. La valeur de la périodicité dom est de 0,156 nm, valeur caractéristique pour une phase 25 lamellaire de type hybride organique-inorganique de structure de type talc de formule Mg3(RSi)408(OH)2 dans laquelle R représente un mélange de groupe phényle et de groupe 0-éthyle. La périodicité d001 est égale à 1,4 nm. 18 La quantité de tryptophane dans le composé (taux d'encapsulation) a été déterminée par spectrophotométrie UV à une longueur d'onde de 280 nm, le composé comporte 68,7 mg de tryptophane par g de matériau. L'analyse par thermogravimétrie réalisée sous air entre 30 et 800°C à une 5 vitesse de montée en température de 5°C/min montre que la perte de masse la plus importante (décomposition des produits) ne commence qu'à partir de 300°C, ce qui confirme que le tryptophane a bien été encapsulé au sein du matériau (tableau 2). Tableau 2: résultat des analyses thermogravirnétriques réalisées sous 10 azote et sous air SOUS N2 Echantillon Pics (°C) Plage utilisée (°C) Perte de Masse (°/0) 80Ph- 80 30-200 8,47 20TEOS TRYPTO 358 - 480 200-800 39,32 Sous air Pics (°C) Plage utilisée (°C) Perte de Masse (°/0) 69 30-200 8,30 364 - 450 200-800 41,30 La comparaison entre le spectre de RMN du solide du 13C du tryptophane seul et du composé 80Ph-20TEOS TRYPTO indique la présence d'une résonance large à environ 111 ppm, attribuée à la présence de 15 tryptophane. La mobilité de ce dernier est fortement réduite, signe que le tryptophane est présent dans l'espace interfoliaire. On obtient donc bien du tryptophane encapsulé dans un matériau hybride organique-inorganique de structure lamellaire de type 2:1 de formule Mg3(RSi)408(OH)2. 19 c) composés MTES TRYPTO, C16TMS TRYPTO, TEOS TRYPTO, 20Ph-80TEOS TRYPTO, 40Ph-60TEOS TRYPTO et 60Ph-40TEOS TRYPTO Par un procédé identique à celui utilisé pour préparer le composé 5 100%Phényl TRYPTO d'autres composés selon l'invention ont été préparés en remplaçant le phényltriméthoxysilane comme source de silicium par du méthyltriéthoxysilane (MTES) ou de l'hexadécyltriméthoxysilane (C16TMS) ou du tétraéthylsilane (TEOS). Les composés obtenus ont été nommés respectivement MTES TRYPTO, C16TMS TRYPTO et TEOS TRYPTO. 10 Par un procédé identique à celui utilisé pour préparer le composé 80Ph- 20TEOS TRYPTO d'autres composés selon l'invention ont été préparés en remplaçant le mélange 20% TEOS et 80% PhényITMS comme source de silicium par un mélange 80% TEOS et 20% PhényITMS en mol, un mélange 60% TEOS et 40% PhényITMS en mol et un mélange 40% TEOS 15 et 60% PhényITMS en mol. Les composés obtenus ont été nommés respectivement 20Ph-80TEOS TRYPTO, 40Ph-60TEOS TRYPTO et 60Ph40TEOS TRYPTO. La quantité de composés récupérés et les taux d'encapsulation déterminés par spectrophotométrie UV à une longueur d'onde de 280 nm sont zo rassemblés dans le tableau 3 ci-dessous. Tableau 3 Composé source de masse taux encapsulation silicium récupérée (g) (mg tryptophane /g de matériau) MTES TRYPTO MTES 1,123 45,9 C16TMS TRYPTO C16TMS 1,173 24,7 TEOS TRYPTO TEOS 1,074 23,4 20Ph-80TEOS TRYPTO 20Ph-80TEOS 1,36 37,6 40Ph-60TEOS TRYPTO 40Ph-60TEOS 1,49 48,9 60Ph-40TEOS TRYPTO 60Ph-40TEOS 1,36 58 20 Le diffractogramme de rayons X des échantillons de chacun des composés présente plusieurs pics de diffraction dans les domaines angulaires 2-1002 thêta, 15-25°2 thêta, 30-4002 thêta et 55-652 thêta. Ces pics correspondent respectivement à des réflexions sur les plans réticulaires 5 (001), (020 ; 110), (130 ; 220) et (060 :330), caractéristique de la présence d'une phase lamellaire. La valeur de la périodicité dom est de 0,156 nm, valeur caractéristique pour une phase lamellaire de type hybride organique-inorganique de structure de type talc de formule Mg3(RSi)408(OH)2. La périodicité d001 est égale à 1,4 nm. io La comparaison entre le spectre de RMN du solide du 13C du tryptophane seul et des composés selon l'invention indique la présence d'une résonance large à environ 111 ppm, attribuée à la présence de tryptophane. La mobilité de ce dernier est fortement réduite, signe que le tryptophane est présent dans l'espace interfoliaire. 15 On obtient donc bien pour chaque composé selon l'invention du tryptophane encapsulé dans un matériau hybride organique-inorganique de structure lamellaire de type 2:1 de formule Mg3(RSi)408(OH)2. Dans le cas où la source de silicium est un mélange entre le TEOS et le PhényITMS, on observe une corrélation linéaire entre la quantité de zo tryptophane encapsulée et le % de TEOS utilisé, à l'exception du cas où la teneur en TEOS est de 0% (composé 100%Phényl TRYPTO). Exemple 1.2 : encapsulation d'une huile essentielle 2 g de nitrate de magnésium hexahydraté (99%, Sigma Aldrich) sont ajoutés à 20 mL d'un mélange composé à d'éthanol absolu (99,9%, Carlo 25 Erba) et d'huile (Greenfix 3000) dans des proportions égale à 0%, 25%, 75% ou 100 % en volume d'huile. Le mélange est maintenu sous agitation jusqu'à dissolution complète. 1,646 g de phényltriméthoxysilane (98%, ABCR) et 0,432g de tétraéthylsilane (98%, ABCR) sont ensuite ajoutés (mélange en masse de 79,2% de PhényITMS et 20,8% de TEOS qui 21 représente 80% de PhényITMS et 20% de TEOS en mol). L'ensemble est laissé sous agitation puis le pH de la solution est porté à une valeur de 10 par addition de 15 mL d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (>97 0/0, Sigma Aldrich) de concentration 1M. Après 24h d'agitation à 5 température ambiante, le solide est séparé de la solution par centrifugation (vitesse de 10000 tours par min durant 10 min). Les solides sont lavés à trois reprises avec de l'éthanol avant d'être séchés dans une étuve à 40°C durant 48h. Les composés obtenus sont ensuite broyés dans un mortier en agate avant d'être caractérisés et sont 10 dénommés SHE5 (25% d'huile), SHE15 (75% d'huile), SH20 (100% d'huile) et 80%P-20%T (0% d'huile). Les quantités obtenues pour les différents échantillons sont respectivement de 2,24g, 2,62g, 0,12g et 1,43g. La comparaison entre les diffractogrammes de rayons X des échantillons 15 SHE5 (25% d'huile), SHE15 (75% d'huile), SH20 (100% d'huile) et 80%P-20%T (0% d'huile) montre la présence de pics de diffraction dans les domaines angulaires 2-10°2 thêta, 15-25°2 thêta, 30-40°2 thêta et 5565°2 thêta. Ces pics correspondent respectivement à des réflexions sur les plans réticulaires (001), (020 ; 110), (130 ; 220) et (060 :330), 20 caractéristiques de la présence d'une phase lamellaire. La valeur de la périodicité d050 est de 0,156 nm, valeur caractéristique pour une phase lamellaire de type hybride organique-inorganique de structure de type talc. Les périodicités d001 sont de l'ordre de 1,4 nm. Il est à noter que l'intensité des pics de diffraction diminue avec la teneur en huile dans le 25 mélange. L'analyse par thermogravimétrie réalisée sous air entre 30 et 800°C à une vitesse de montée en température de 5°C/min montre que la perte de masse la plus importante (décomposition des produits) ne commence qu'à 22 partir de 300°C, ce qui confirme que l'huile a bien été encapsulée au sein du matériau (tableau 4). Tableau 4: résultat des analyses thermogravirnétriques réalisées sous azote et sous air Echantillon SOUS N2 Pics (°C) Plage utilisée (°C) Perte de Masse (°/0) 67 30-200 12,95 361 37,86 SHE5 Sous air 200-800 Pics (°C) Plage utilisée (°C) Perte de Masse (°/0) 76 30-200 12,69 339 45,24 SOUS N2 200-800 Pics (°C) Plage utilisée (°C) Perte de Masse (°/0) 74 14,02 30-200 345 - 521 38,46 200-800 SHE15 Sous air Pics (°C) Plage utilisée (°C) Perte de Masse (°/0) 75 13,89 30-200 55,60 339 - 460 - 598 - 761 200-800 SOUS N2 Pics (°C) Plage utilisée (°C) Perte de Masse (°/0) 46 8,76 30-200 349 - 597 36,83 200-800 SHE20 Sous air Pics (°C) Plage utilisée (°C) Perte de Masse (°/0) 50 8,58 30-200 353 - 599 200-800 55,94 23 Exemple 2 : encapsulation d'un microorganisme Exemple 2.1 : encapsulation de Bacillus subtills a) composé 1000/0Phényl BS Une préculture de Badius subtilis (accessible sous le numéro CIP 52.62 de 5 l'institut Pasteur) est préparée à partir de cryotubes contenant 400 pL d'une suspension de Badius subtills maintenue à -20°C dans 1,6 mL de glycérol. Le milieu nutritif dans lequel est incorporé le contenu du cryotube est un bouillon LB (lysogeny broth). Il est composé de 10 g de tryptone (peptone de type hydrolysat pancréatique de caséine), 5 g io d'extrait de levure et 10 g de NaCI pour un litre d'eau déminéralisée. L'extrait de levure est obtenu à partir d'autolysats de levures. Il s'agit de biomasse de levures en suspension conduites à l'autolyse par passage à 50°C pendant plusieurs heures, dont on récupère la phase liquide. Ce milieu est préparé directement dans les erlenmeyers puis est autoclave 15 pendant 20 minutes à 121°C. L'ensemencement s'effectue ensuite à la flamme pour éviter toute contamination. Un dénombrement en milieu solide sur boite de pétri (90 mm de diamètre) est réalisé après 18h d'incubation à 37°C afin de déterminer la concentration initiale en bactérie qui est ajoutée lors de la synthèse. 20 La synthèse est réalisée dans un bioréacteur. La première étape consiste à nettoyer le bioréacteur avec de l'éthanol absolu. La préculture est introduite dans le bioréacteur (à 10% du volume final soit 200 mL de milieu LB contenant les bactéries en une teneur de 103 UFC/ml). Dans une bouteille de 2L, 97g de nitrate de magnésium (99%, Sigma Aldrich) sont 25 dissouts dans un litre d'éthanol absolu (99,9%, Carlo Erba). 100g de phényltriméthoxysilane (PhényITMS) (98%, ABCR) sont ensuite ajoutés à cette solution puis l'ensemble est versé dans le bioréacteur. Une partie de la soude est rapidement introduite manuellement, jusqu'à pH = 9.5 environ puis le reste est ajouté progressivement par l'intermédiaire de la 24 pompe jusqu'à atteindre un pH = 10 (volume de solution aqueuse de soude 1M : 750 mL). Après 24h d'agitation le gel est centrifugé durant 10 minutes à une vitesse de 9500 tours par min, lavé trois fois à l'eau déminéralisée puis le culot est surgelé avant d'être lyophilisé. L'échantillon 5 ainsi préparé est dénommé 100%Phényl BS et contient la même quantité de bactérie qu'au départ. La caractérisation de l'échantillon par diffraction de rayons X indique la formation d'une phase lamellaire de type organique-inorganique de structure de type talc de formule Mg3(RSi)408(OH)2 dans laquelle R 10 représente un groupe phényle (présence des réflexions caractéristiques des plans réticulaires (001), (020,110), (130,220) et (060)) avec une périodicité d001 égale à 1,3 nm. Peu de bactéries isolées sont observables sur les clichés de microscopie électrique à balayage. Ces dernières sont emprisonnées dans les 15 agglomérats. b) composé C16TMS BS Une préculture de Badius subtilis (accessible sous le numéro CIP 52.62 de l'institut Pasteur) est préparée à partir de cryotubes contenant 400 pL 20 d'une suspension de Badius subtills maintenue à -20°C dans 1,6 mL de glycérol. Le milieu nutritif dans lequel est incorporé le contenu du cryotube est un bouillon LB (lysogeny broth) tel que décrit ci-dessus. Ce milieu est préparé directement dans les erlenmeyers puis est autoclavé pendant 20 minutes à 121°C. L'ensemencement s'effectue ensuite à la 25 flamme pour éviter toute contamination. Un dénombrement en milieu solide sur boite de pétri (90 mm de diamètre) est réalisé après 18h d'incubation à 37°C afin de déterminer la concentration initiale en bactérie qui est ajoutée lors de la synthèse (103 UFC/ml). 25 La synthèse est réalisée dans un bioréacteur. La première étape consiste à nettoyer le bioréacteur avec de l'éthanol absolu. La préculture est introduite dans le bioréacteur (à 10% du volume final soit 200 mL de milieu LB contenant les bactéries). Dans une bouteille de 2L, 55,65 g de 5 nitrate de magnésium hexahydraté (99%, Sigma Aldrich) sont dissouts dans un litre d'éthanol absolu (99,9%, Carlo Erba). 100g d'hexadécyltriméthoxysilane (C16TMS) (>85%, Sigma) sont ensuite ajoutés à cette solution puis l'ensemble est versé dans le bioréacteur. Une partie de la soude est rapidement introduite manuellement, jusqu'à pH = io 9.5 environ puis le reste est ajouté progressivement par l'intermédiaire de la pompe jusqu'à atteindre un pH = 10 (volume de solution de soude 1M : 450 mL). Une fois ce pH atteint, la pompe est arrêtée. Après 24h d'agitation le gel est centrifugé durant 10 minutes à une vitesse de 9500 tours par min , lavé trois fois à l'eau déminéralisée puis le culot est surgelé 15 avant d'être lyophilisé. L'échantillon ainsi préparé a pour référence C16TMS BS. La quantité de bactérie présente dans l'échantillon est de 102 UFC/ml. La caractérisation de l'échantillon par diffraction de rayons X indique la formation d'une phase lamellaire de type organique-inorganique de structure de type talc de formule Mg3(RSi)400(OH)2 dans laquelle R zo représente un groupe CH3(CH2)14CH2 ((présence des réflexions caractéristiques des plans réticulaires (001), (020,110), (130,220) et (060)) avec une périodicité d001 égale à 1,5 nm. Peu de bactéries sont observables sur les clichés de microscopie électrique à balayage ces dernières sont emprisonnées dans les agglomérats. 25 Exemple 2.2 : encapsulation de Piriformospora indica a) composé C16TMS PI Le champignon Piriformospora indica (P. indica) (accessible sous le numéro DSM 11827 du Max-Planck-Institut für terrestrische Mikrobiologie) est dans un premier temps placé dans un incubateur (boîte de 140 mm de 26 diamètre) pendant 72h à 28 ± 1°C, avec une gélose YCG afin d'obtenir une culture fraiche. Le mycélium est recueilli à l'aide d'une spatule stérile puis introduit dans un erlenmeyer contenant une solution de tween 80 à 0,5% ainsi que des billes. Après 2 minutes d'agitation, un dénombrement 5 en milieu solide est réalisé afin de déterminer la concentration de départ (NO, en UFC/mL). 5,56 g de nitrate de magnésium hexahydraté (99%, Sigma Aldrich) sont dispersés dans 100 mL d'éthanol absolu (99,9%, Carlo Erba). Le mélange est maintenu sous agitation jusqu'à dissolution complète. 10g lo d'hexadécyltriméthoxysilane (C16TMS) (>85%, Sigma) sont ensuite ajoutés L'ensemble est laissé sous agitation puis le pH de la solution est porté à une valeur de 10 par addition d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (>97 0/0, Sigma Aldrich) de concentration 1M. La formulation est ensuite ensemencée à 10 % avec une préculture de P. Indica. Après 15 24h d'agitation à température ambiante, le solide est séparé de la solution par centrifugation (vitesse de 9000 tours par min durant 10 min), lavé trois fois à l'eau distillée avant d'être surgelé et lyophilisé durant 48h (échantillon de référence C16TMS PI). A titre de comparaison, un échantillon est préparé dans les mêmes conditions en l'absence de P. zo Indica. L'analyse par diffraction de rayons X indique que dans les deux cas une phase lamellaire est obtenue avec une périodicité d001 égale à 1,53 nm pour l'échantillon C16TMS PI et à 1,60 nm pour le composé sans P. Indica. Les clichés MEB de l'échantillon C16TMS PI montre la présence de formes 25 très proches des hyphes observés avec le champignon seul Hyphes (large d'environ 2pm) recouverts de particules de matériau. Le champignon est donc encapsulé sous sa forme végétative (hyphes + conidiophores) dans le matériau de formule I selon l'invention. 27 Exemple 2.3: encapsulation de spiruline a) composé C-16 algue 2 g de nitrate de magnésium hexahydraté (99%, Sigma Aldrich) sont dispersés dans 20 mL d'éthanol absolu (99,9%, Carlo Erba). Le mélange 5 est maintenu sous agitation jusqu'à dissolution complète. 1g de spiruline (cyanobactenum Arthrospira platensis commercialisée sous la dénomination SPIRULINA NATURAL par la société EARTHRISEC)) est introduit dans le milieu puis 1,111 g d'hexadécyltriméthoxysilane (C16TMS) (>85%, Sigma) sont ensuite ajoutés à chaque mélange. 10 L'ensemble est laissé sous agitation puis le pH de la solution est porté à une valeur de 9 par addition de 9 mL d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (>97 °/(:), Sigma Aldrich) de concentration 1M. Après 24h d'agitation à température ambiante, le solide est séparé de la solution par centrifugation (vitesse de 10000 tours par min durant 10 min), lavé à trois 15 reprises avec de l'éthanol avant d'être séché dans une étuve à 40°C durant 48h. Le composé obtenu est ensuite broyé dans un mortier en agate avant d'être caractérisé et dénommé C-16 algue. A titre de comparaison, un échantillon a également été préparé en l'absence de spiruline (échantillon de référence Talc classique). 20 L'analyse par diffraction de rayons X indique que dans les deux cas une phase lamellaire de structure de type talc est obtenue avec une périodicité d001 égale à 1,6nm dans les deux cas (présence de pics de diffraction dans les domaines angulaires 2-10°2 thêta, 15-25°2 thêta, 30-40°2 thêta et 5565°2 thêta correspondant respectivement à des réflexions sur les plans 25 réticulaires (001), (020 ; 110), (130 ; 220) et (060 :330)). La présence de spiruline n'inhibe pas la formation du matériau. La présence de spiruline n'induit pas d'augmentation de la périodicité d001. La spiruline est donc bien encapsulée sous sa forme végétative (structure torsadée) dans le matériau selon l'invention. 28 Exemple 3: Evaluation de la capacité de solubilisation d'un phosphate non soluble dans l'eau à l'aide d'un composé selon l'invention a) Préparation de la bactérie encapsulée : 5 10 g de nitrate de magnésium hexahydraté (99%, Sigma Aldrich) sont ajoutés à 20 mL d'éthanol absolu (99,9%, Carlo Erba). Le mélange est maintenu sous agitation jusqu'à dissolution complète. 10 g de phényltriméthoxysilane (98%, ABCR) sont ensuite ajoutés sous agitation. Sous agitation, le mélange est ensemencé à 10 °A) v/v d'une préculture de io Bacillus subt-MS CIP 52.62 de concentration 108 UFC/mL. L'ensemble est laissé sous agitation puis le pH de la solution est porté à une valeur de 10 par addition d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (>97 °/(:), Sigma Aldrich) de concentration 1M. Après 24h d'agitation à température ambiante, un dénombrement bactérien est réalisé sur l'ensemble 15 ensemencé définissant la concentration bactérienne à 1,7 x 105 UFC/ml. b) Test de solubilisation : Dans des erlenmeyers de 200mL, un milieu de culture liquide (glucose, 10g/L ; MgC12.6H20, 5g/L ; Mg504.7H20, 0,25g/L ; KCI, 0,2g/L ; (NH4)2504, 0,1g/L) de pH 7,0, additionné d'une source de phosphore 20 insoluble en milieu aqueux (NH4MgPO4-6H20, 8,9g/erlenmeyer) est préparé. Chaque erlenmeyer est ensuite ensemencé de 1mL d'une préculture de Bacillus subtills CIP 52.62 (Institut Pasteur) à la concentration de 6,5x104 UFC /mL (libre) ou de 382,3 pL d'une préculture de Bacillus subtilis CIP 25 52.62 à la concentration de 1,7 x 105 UFC/ml (composé selon l'invention 100%Phényl BS : bactérie encapsulée préparée selon l'exemple 3a). Les erlenmeyers sont maintenus en étuve sous agitation. Un dénombrement des colonies est réalisé tous les 2 jours ainsi qu'une mesure du pH et de la concentration en phosphore solubilisé et en phosphore immobilisé par la 29 flore bactérienne (mesure du Phosphore total par ICP et mesure du phosphate inorganique en solution par HPIC). Les résultats sont présentés dans les figures 1 à 3. La comparaison de développement de Bacillus subt-MS indique une meilleure capacité de solubilisation du phosphore non 5 soluble eau (figure 1). La comparaison de développement de Bacillus subt-MS indique une baisse du pH de la solution à corréler à la solubilisation d'origine bactérienne du phosphore (figure 2). La comparaison de la concentration en phosphore indique une solubilisation bactérienne plus importante que son immobilisation par la flore 10 bactérienne (figure 3). On constate donc une meilleure croissance des bactéries encapsulées selon l'invention REVENDICATIONS1. Procédé d'encapsulation d'un composé choisi dans le groupe constitué par au moins une substance active, au moins un microorganisme et leurs mélanges dans un matériau hybride organique-inorganique de structure lamellaire de type 2:1, ledit matériau ayant la formule générale I suivante : Nax[(Mg3)(Alx(RS04-)08-Fx(OH)2] (I) dans laquelle io x est un nombre tel que Ox 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que x=0 ; 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que le composé est une substance active, avantageusement choisie 25 dans le groupe constitué par un acide aminé, en particulier le tryptophane, une huile essentielle et leurs mélanges, de façon avantageuse, il s'agit du tryptophane. 31 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que le composé est un microorganisme, avantageusement choisi dans le groupe constitué par une bactérie telle que Bacillus subtilis, une microalgue telle que la spiruline, un champignon tel que le Piriformospora 5 indica, et leurs mélanges, de façon avantageuse, le microorganisme est sous forme végétative, plus particulièrement il s'agit d'une bactérie. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la source de silicium nécessaire à la synthèse du matériau de formule I de l'étape a) est un organoalcoxysilane ou un mélange d'organoalcoxysilanes de formule générale II suivante : RSKOR')3 (II) dans laquelle R est tel que défini dans la revendication 1 et R' est un groupe méthoxy ou éthoxy. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que la source de silicium est choisie dans le groupe constitué par le phényltriméthoxysilane de formule (a) suivante : Phényl-Si(OCH3)3 (a), le tétraéthylorthosilicate de formule (b) suivante : Si(0C2H5)4 (b), l'hexadécyltriméthoxysilane de formule (c) suivante : CH3(CH2)14CH2-Si(OCH3)3 (c) et leurs mélanges. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le composé encapsulé est une substance active et en ce que la source de silicium est un mélange d'organoalcoxysilanes de formule générale II, avantageusement un mélange entre le phényltriméthoxysilane (a) et le tétraéthylorthosilicate (b), de façon avantageuse le mélange comprend 20% en mol de tétraéthylorthosilicate et 80% en mol de phényltriméthoxysilane par rapport au nombre de mol total du mélange. 32 8. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le composé encapsulé est un microorganisme et en ce que la source de silicium est choisie dans le groupe constitué par la phényltriméthoxysilane (a) et l'hexadécyltriméthoxysilane (c). 5 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 et 5 à 7, caractérisé en ce que le composé encapsulé est une substance active et en ce que l'étape a) comprend les étapes successives suivantes : al) Ajout d'une source de magnésium, avantageusement du nitrate de 10 magnésium hexahydraté, de la substance active, de la source de silicium, dans le cas où x*O, de la source d'aluminium, avantageusement de l'acétylacétonate d'aluminium et d'un éventuel solvant; a2) ajustement du pH à entre 8 et 14, avantageusement à 10; a3) agitation du mélange, avantageusement pendant une durée comprise 15 entre 1 et 24 heures, en particulier au moins 12 heures, de façon à obtenir un gel ; a4) récupération de la phase solide du gel obtenu à l'étape a3) ; a5) séchage de la phase solide du gel obtenu à l'étape a4). 20 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 4 à 6 et 8, caractérisé en ce que le composé encapsulé est un microorganisme et en ce que l'étape a) comprend les étapes successives suivantes : al) ajout d'une source de magnésium, avantageusement du nitrate de magnésium hexahydraté, du microorganisme, d'un solvant, d'une source 25 de silicium et dans le cas où x*O, de la source d'aluminium, avantageusement de l'acétylacétonate d'aluminium ; a2) ajustement du pH à entre 8 et 14, avantageusement à i0; 33 a3) agitation du mélange, avantageusement pendant une durée comprise entre 1 et 24 heures, en particulier au moins 12 heures, de façon à obtenir un gel. 5 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes successives suivantes après l'étape a3) de : a4) récupération de la phase solide du gel obtenu à l'étape a3) ; a5) séchage de la phase solide du gel obtenu à l'étape a4). io 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 ou 11, caractérisé en ce que le microorganisme se trouve sous la forme d'une préculture dudit microorganisme, avantageusement ayant une teneur en microorganisme comprise entre 103 et 1010 UFC/ml, et en ce qu'il comprend une étape préalable avant l'étape a) de préparation de la 15 préculture de microorganisme. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 11 ou 12, caractérisé en ce que l'étape de séchage a5) consiste en une lyophilisation. 20 14. Composé encapsulé dans un matériau hybride organique-inorganique de structure lamellaire de type 2:1, ledit matériau ayant la formule générale I suivante : Nax[(Mg3)(Alx(RSi)4_x)08+x(OH)2] (I) 25 dans laquelle x est un nombre tel que 0 )( 15. Composé encapsulé dans un matériau hybride organique-inorganique de structure lamellaire de type 2:1 selon la revendication 14, caractérisé en ce qu'il est susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 13. 10 16. Composition, avantageusement destinée à la fertilisation, la nutrition, la stimulation de la croissance et/ou la prophylaxie des végétaux et/ou l'amélioration des propriétés physiques, chimiques et/ ou biologiques du sol ou du substrat de culture des végétaux, comprenant le composé 15 encapsulé dans un matériau hybride organique-inorganique de structure lamellaire de type 2:1 selon l'une quelconque des revendications 14 ou 15 et un excipient approprié. 17. Composition selon la revendication 16, caractérisée en ce qu'elle se 20 trouve sous forme solide, en particulier sous forme de poudre, de granulés ou de microgranulés, sous forme liquide ou sous forme de gel. 18. Composition selon l'une quelconque des revendications 16 ou 17, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre des nutriments 25 avantageusement choisis dans le groupe constitué par l'azote, le phosphore, le potassium, le calcium, le magnésium, le silicium, les oligoéléments et leurs mélanges, des matières premières organiques et/ou des matières premières minérales. 35 19. Utilisation du composé selon l'une quelconque des revendications 14 ou 15 ou de la composition selon l'une quelconque des revendications 16 à 18 pour la fertilisation, la nutrition, la stimulation de la croissance et/ou la prophylaxie des végétaux et/ou l'amélioration des propriétés physiques, 5 chimiques et/ ou biologiques du sol ou du substrat de culture des végétaux. 20. Utilisation selon la revendication 19 par application foliaire, racinaire, plein champ ou hors-sol.