Brevet FR3084079A1 — publié le 20200124

NOUVELLE SOUCHE VIRALE ATTENUEE ET SON UTILISATION EN TANT QUE VACCIN DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne des souches virales modifiées génétiquement à partir d'une nouvelle souche de metapneumovirus humain. La présente invention concerne ces souches modifiées, dont la virulence est atténuée, pour leur utilisation dans le traitement prophylactique ou thérapeutique des infections aux virus de la famille des Pneumoviridae, ainsi que des compositions vaccinales comprenant lesdites souches virales modifiées. INTRODUCTION Les infections aiguës des voies respiratoires inférieures sont l'une des causes majeures de morbidité et de mortalité à l'échelle mondiale. Chez les enfants de moins de 5 ans en particulier, elles représentent jusqu'à plus de 15 % de la mortalité, selon les pays évalués, et sont ainsi la deuxième cause de mortalité d'après l'Organisation Mondiale de la Santé. La majorité des infections aiguës des voies respiratoires inférieures, associées à des pathologies variables allant du simple rhume à la pneumonie grave, sont notamment causées par des virus, tels que ceux appartenant aux familles suivantes : virus de la famille des Orthomyxoviridae (comprenant notamment les virus Influenza) ; (ii) virus de la famille des Paramyxovindae ; (iii) virus de la famille des Adenoviridae ; (iv) virus de la famille des Picomaviridae ; (y) virus de la famille des Coronaviridae et (vi) virus de la famille des Pneumoviridae, comprenant notamment le virus respiratoire syncytial humain et le métapneumovirus humain. Le virus respiratoire syncytial humain (hRSV) et le métapneumovirus humain (hMPV) sont des virus responsables d'infections aiguës des voies respiratoires telles que des bronchiolites, des bronchites ou des pneumonies. Ils touchent principalement les populations à risques que sont les jeunes enfants de moins de 5 ans, les personnes âgées et les personnes immunodéprimées. 2 Le virus hRSV est l'agent étiologique principal des bronchiolites et pneumonies chez les nourrissons de moins de 1 an, avec une incidence accrue en-dessous de 6 mois de vie. Chez l'adulte, l'infection à hRSV est rare et bénigne, sauf chez le sujet âgé. La transmission se fait essentiellement par voie respiratoire, le virus se répliquant dans le tractus 5 respiratoire. Le virus hRSV a été isolé en 1957. Il s'agit d'un un virus à ARN monocaténaire de polarité négative, de type « enveloppé », à capside à symétrie hélicoïdale. Il appartient à la famille des Pneumoviridae et au genre Orthopneumovirus. Le virus hMPV est prévalent dans les bronchiolites et pneumonies chez les nourrissons, et 10 touche particulièrement sévèrement les enfants entre 1 et 3 ans. Les principaux symptômes de l'infection par le hMPV chez l'enfant comportent la rhinorrhée, la toux, la détresse respiratoire ou encore de la fièvre. Le hMPV peut aussi causer des infections des voies respiratoires supérieures, pouvant être associées à des otites, alors que les symptômes non respiratoires, tels que la diarrhée, les vomissements et l'apparition d'érythème, sont plus 15 rares. Le hMPV cible préférentiellement les cellules ciliées de l'arbre respiratoire humain. Dans les pathologies respiratoires chez les adultes, le virus hMPV a été identifié chez 5 à 10% des adultes ou personnes âgées présentant une infection aigüe des voies respiratoires, et chez 3 à 5% des adultes ayant une exacerbation d'une pathologie pulmonaire chronique ou d'une pneumonie acquise en communauté. 20 Le virus hMPV a été isolé et décrit pour la première fois en 2001 aux Pays-Bas (van den Hoogen et a/., 2001). L'année suivante, plusieurs souches de HMPV ont été isolées chez des patients localisés en Amérique du Nord (Peret et al., 2002). Les hMPV sont des virus à ARN monocaténaire négatif, appartenant à la famille des Pneumoviridae et au genre Metapneumovirus. 25 L'âge moyen des enfants hospitalisés des suites d'une infection par le hMPV est de 6 à 12 mois, soit plus tard que celle provoquée par le hRSV, qui survient principalement entre 0 et 3 mois. Toutefois, l'épidémiologie du hMPV présente de nombreux points communs avec celle du hRSV : - il est présent sur tous les continents ; 30 - sa distribution annuelle est majoritairement hivernale et printanière, recoupant celle du hRSV ; - sa transmission se fait aussi probablement par gouttelettes salivaires. 3 Il n'existe aujourd'hui sur le marché aucune modalité prophylactique ou thérapeutique efficace et spécifique contre l'infection par les virus hRSV et hMPV, bien que d'actives recherches soient en cours (Mazur et al., 2018). A titre de traitement, la ribavirine, non exempte d'effets indésirables, ou encore les 5 immunoglobulines intraveineuses, très onéreuses, peuvent être utilisées ponctuellement dans les cas graves d'infections par hMPV ou hRSV. D'autres types de traitements sont en cours de développement tels que l'utilisation de peptides inhibiteurs de fusion, les glycosaminoglycanes sulfate, les ARN interférents et certains immunomodulateurs. La démarche clinique usuelle et largement privilégiée aujourd'hui consiste à traiter surtout les 10 symptômes de l'infection, en mettant les patients sous assistance respiratoire (administration d'oxygène ou ventilation mécanisée) et en leur administrant des bronchodilatateurs, corticostéroïdes et/ou antibiotiques pour prévenir ou traiter les surinfections bactériennes. En ce qui concerne la vaccination, les populations particulièrement touchées par le hMPV étant les nourrissons, les jeunes enfants et les personnes âgées, il est crucial de pouvoir 15 disposer rapidement de vaccins efficaces et sécuritaires, afin de réduire les atteintes respiratoires sévères qui ont un impact dramatique dans ces tranches d'âge. La mise au point d'un vaccin contre le hRSV et le hMPV représente donc non seulement un enjeu sanitaire majeur, mais également un réel enjeu socio-économique avec l'objectif de réduire les coüts importants des traitements et d'hospitalisations associés à ces infections, et 20 de diminuer l'utilisation d'antibiotiques dans le contexte des surinfections bactériennes, et ainsi de limiter l'émergence de résistances. ETAT DE LA TECHNIQUE Les tableaux 1, 2 et 3 ci-dessous listent les différentes approches en cours de 25 développement pour obtenir des vaccins vivants atténués à partir de souches virales sauvages de hMPV. Des souches virales sont considérées comme étant atténuées in vitro lorsque celles-ci présentent une capacité réplicative diminuée par rapport au virus sauvage (VVT), et/ou lorsque ces souches virales entrainent la formation de foyers infectieux, notamment de 30 syncytia (cellules adjacentes fusionnant suite à l'infection virale), plus restreints. In vivo, les souches virales atténuées se répliquent à un titre maximal plus faible et/ou induisent une 4 pathologie moins sévère (en termes de perte de poids ou de profil inflammatoire ou d'atteintes histo-pathologiques) que la souche virale sauvage. Tableau 1. Liste des candidats vaccins vivants atténués sur la base d'une souche de virus hMPV présentant une ou des mutations, développés ou en cours de développement Nom du virus Description Atténuation Atténuation Anticorps Référence in vitro in vivo neutralisants protecteurs cp-HMPV M11 Insertion de 11 mutations aa parmi les 17 induites par des passages sur cellules Vero, température décroissante jusqu'à 25°C. V Vero > 39'C V H V H (Herfst, de (B1/NL/1/99) Graaf et al. 2008) cp-HMPV HRSV3 (B1/NLJ1/99) 4 mutations cp CO/d pin de hRSV v Vero > v H v H (Herfst, de 37'C Graaf et al. 2008) rhMPV-R329K rhMPV-D331A (A1/NLJ1/00) Mutations dans le domaine de liaison à l'intégrine de la protéine F v LLC-MK2 v CR v CR (Wei, Zhang et al. 2014) HMPV M2 (A1/NL/1/00) Suppression du site de N- glycosylation (aa 172) de la protéine F v Vero. v M y M (Yu, Li et al. v M SCID 2012) (Liu, Shu et al. 2013) HMPV-MTase (A1/NL/1/00) Mutations du site méthyltransférase de la polymérase L G1696A, G1700A, and D1755A v LLC-MK2 v CR v CR (Zhang, Wei et al. 2014) Le terme « Vero » désigne une lignée de cellules de rein de singe vert africain, couramment I 0 utilisée en culture cellulaire pour tester divers virus. Le terme « LLC-MK2 » désigne une lignée cellulaire issue de cellules de rein de singe rhésus, utilisée pour des tests d'infection par divers virus. Le symbole v` indique que les cellules utilisées sont susceptibles à l'infection virale. Les abréviations suivantes sont utilisées pour les modèles d'études in vivo : M pour Mouse; H 15 pour hamster; CR pour Cotton Rat; CM pour Cynomolgus Macaque; AGM pour African Green Monkey; Ch pour Chimpanze; Rh pour Singe Rhésus; et SCID pour Severe Combined ImmunoDeficiency. 5 Tableau 2. Liste des candidats vaccins vivants atténués développés ou en développement, comprenant une souche de virus hMPV présentant une délétion complète d'au moins un gène Nom du virus Description Atténuation in Atténuation in Anticorps Références vitro vivo neutralisants protecteurs HMPV-ASH (A2/CAN97-83) Délétion du gène SH 0 LLC-MK2 0 H / H (Biacchesi, Skiadopoulos et al. 2004) (Biacchesi, Pham et al. / Ch / Ch 2005) HMPV-AG (A2/CAN97-83) Délétion du gène G 0 LLC-MK2 V H à 3 jours / H (Biacchesi, Skiadopoulos et al. 2004) (Biacchesi, Pham et al. 0 H > 3 jours / Ch 2005) / Ch HMPV-ASH/AG (A2/CAN97-83) Délétion des gènes SH et G 0 LLC-MK2 / H à 3 jours. / H (Biacchesi, 0 H > 3 jours Skiadopoulos et al. 2004) HMPV- AM2-2 (A2/CAN97-83) Mutations codon in itiation + codon stop 0 Vero / H / H (Buchholz, Biacchesi et al. 2005) (Biacchesi, Pham et al. V Ch V Ch 2005) (Schickli, Kaur et al. 2008) HMPV-AM2-1 (A2/CAN97-83) Mutation codon stop 0 Vero 0 H 0 H (Buchholz, Biacchesi et al. 2005) HMPV-AM2-1/ AM2-2 Délétion du gène M2 complet 0 Vero 0 H 0 H (Buchholz, (A2/CAN97-83) Biacchesi et al. 2005) A : délétion totale du gène. 0 = pas d'atténuation ou d'avantage réplicatif. Toutes les souches virales atténuées testées sont dérivées de la souche sauvage CAN97-83 du sous-groupe A2. 5 10 6 Tableau 3. Liste des candidats vaccins vivants atténués développés ou en développement, basés sur une souche de virus hMPV chimérique Nom du Description Atténuation Atténuation in vivo Ac Test Clinique Réf. virus in vitro neutralisants protecteurs HMPV-Pa (A2/CAN97- 83) Fond génétique virus HMPV (SH stabilisé) Échange du gène P avec l'homologue aMPV C 0 Vero / H / H Phase I (Pham, Biacchesi et al. 2005) (Karron, San Mateo et al. 2017) 7 AGM / AGM NCT01255410 HMPV Na (A2/CAN97- 83) Fond génétique virus HMPV (SH stabilisé) Échange du gêne N avec l'homologue aMPV C 0 Vero / H à 3 jours. 0 H > 3 jours /H (Pham, / AGM / AGM Biacchesi et al. 2005) b/hPIV3/ hMPV F2 (A1/NL/1/00) Fond génétique PIV-3 bovin Échange des gênes F et HN avec leur homologue hP1V-3 0 H / H (Tang, Schickli et al. 2003) (Tang, Mahmood et al. 2005) Ajout F hMPV en 2' position sur le génome O AGM / AGM 7 Rh (hMPV/hPIV) séronégatif SeV-MPV-Ft (A2/ CAN00- 16) Fond génétique virus SeV - / CR / CR (Russell, Ajout gène F hMPV tronqué pour son domaine TM Jones et al. 2017) 5 Les abréviations suivantes sont utilisées : TM = domaine transmembranaire ; PIV = Virus Parainfluenza; SeV = Virus Sendai. La demande internationale WO 2005/014626 est relative à plusieurs souches de virus hMPV, désignées par les dénominations suivantes : CAN 97-83, CAN 98-75 and HMPV 00-1. Cette 10 demande décrit une souche de virus hMPV recombinante, désignée CAN 97-83, modifiée génétiquement pour atténuer sa virulence. Les modifications proposées concernent notamment la délétion totale des gènes codant pour les protéines G et/ou SH. Les souches virales modifiées peuvent être utilisées en thérapie humaine, pour prévenir ou traiter les infections aux pneumovirus. L'administration de la souche sauvage ou de ces souches 15 atténuées à des hamsters permet de les protéger contre une infection ultérieure par un virus 7 HMPV CAN 97-83. Toutefois, WO 2005/014626 ne fait pas état de propriétés complètes de protection, en particulier aucun suivi de poids des animaux traités n'est réalisé. Les mêmes résultats expérimentaux sont présentés dans les articles scientifiques cités dans le tableau 2. Avec les mêmes souches atténuées, des résultats in vivo ont ensuite été obtenus sur un 5 modèle animal de singes ; les souches virales recombinantes délétées des gènes SH, G et M2-2 continuent à se répliquer dans les voies respiratoires des singes ; et par ailleurs induisent la production d'anticorps neutralisants tout comme la souche virale sauvage CAN97-83. D'autres souches de hMPV isolées ont été décrites dans le brevet US 8,841,433, leur 10 utilisation pour la préparation de vaccins étant également proposée. Les vaccins basés sur l'utilisation de souches virales vivantes atténuées présentent de nombreux avantages. D'une part, les vaccins produits à partir de virus vivants atténués présentent l'avantage d'induire une forte réponse immunitaire à partir d'un virus dont la capacité à se multiplier est 15 considérablement réduite, permettant ainsi d'éviter l'apparition de la pathologie tout en mimant l'infection naturelle. Lors de la mise au point de ces souches atténuées, il est important de trouver la balance idéale entre l'atténuation et l'immunogénicité. D'autre part, ces vaccins peuvent être administrés par voie intra-nasale, et ainsi mimer la voie d'entrée naturelle des virus sauvages, induisant ainsi une réponse immunitaire assez 20 similaire à la réponse physiologique à une infection. De plus, cette stratégie de vaccination ne génère pas une réaction inflammatoire exagérée, comme cela peut être le cas avec les vaccins inactivés. Enfin, l'ajout d'adjuvant n'est généralement pas nécessaire. C'est donc la stratégie vaccinale optimale pour la prévention dans les populations à risque 25 tels que les jeunes enfants et les nourrissons. EXPOSE DE L'INVENTION L'invention a pour objet une souche virale atténuée dérivée d'une souche clinique particulière rC-85473 de metapneumovirus humain, comprenant la séquence génomique représentée par 30 la séquence SEQ ID NO. 1, ladite souche atténuée comprenant une ou des modifications génétiques de ladite séquence SEQ ID NO.1. 8 Les souches virales atténuées selon l'invention sont notamment les souches recombinantes modifiée par délétion des gènes codant pour les protéines accessoires G et/ou SH, pour générer des virus recombinants désignés AG rC-85473 et ASH rC-85473, respectivement. Ces souches ont été caractérisées aux niveaux de leur infectivité et leur réplication virale en 5 modèles cellulaires in vitro et ex vivo (sur des épithéliums respiratoires humains reconstitués et cultivés à l'interface air-liquide), ainsi qu'au niveau de la pathogénèse virale et de la protection vaccinale en modèle murin d'infection par hMPV. Les résultats présentés dans la section expérimentale mettent en évidence les propriétés spécifiques de ces souches virales AG C-85473 et ASH rC-85473, en comparaison de celles 10 de souches virales modifiées de manière similaire, également délétées des gènes G ou SH, mais dérivées d'une autre souche clinique de virus hMPV (CAN98-75). Les virus AG ou ASH rC-85473 présentent en particulier : (i) un caractère viral atténué en modèle murin, à la différence du virus recombinant ASH CAN98-75 qui lui est très virulent ; 15 (ii) tout en conservant leur capacité de réplication en systèmes cellulaires adhérents (lignée de référence LLC-MK2) et en suspension, à la différence des virus recombinants CAN98-75 qui sont beaucoup moins productifs ; (iii) Les virus AG ou ASH C-85473 présentent de manière avantageuse des propriétés de protection significatives : 100% de survie des souris 20 infectées, peu de perte de poids, induction d'une réponse d'anticorps neutralisants contre la souche virale homologue (C-85473, sérotype A) et au moins contre une souche hétérologue (CAN98-75, sérotype B), ainsi qu'une pathogénèse pulmonaire réduite chez les animaux infectés, vis-à-vis d'un challenge infectieux par un virus hMPV sauvage (souche rC- 25 85473), qui lui occasionne 50% de létalité dans les groupes témoins non immunisés. Cette souche virale atténuée peut être utilisée in vitro en tant que vecteur d'expression d'au moins un gène exogène, en particulier un gène codant pour un antigène viral, et en premier lieu, des antigènes viraux issus du virus respiratoire syncytial (hRSV) et en particulier sa 30 protéine de fusion F. L'invention concerne également cette souche virale atténuée pour son utilisation en tant que médicament, et plus particulièrement pour prévenir et/ou traiter les infections par des virus de la famille des Pneumoviridae. 9 Enfin, l'invention concerne également une composition vaccinale comprenant, dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable, au moins une souche virale atténuée telle que définie ci-dessus, et optionnellement un adjuvant. DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1 : Virus recombinants hMPV générés à partir des souches cliniques C85473 et CAN98-75. 1A. Représentation schématique du génome des virus recombinants générés par génétique inverse à partir de la souche clinique C-85473, et dans laquelle a été clonée la séquence 10 codante de la GFP (Green Fluorescent Protein) à son extrémité 3'. Le virus rC-85473 contient le génome de la souche C-85473 sauvage exprimant en plus le gène GFP. Les génomes des virus recombinants issus de la souche C-85473 et délétés des gènes SH (ASH-rC-85473) ou G (AG-C-85473) sont représentés en dessous. Les virus modifiés génétiquement sont fonctionnels et réplicatifs, tel qu'indiqué par les clichés de cellules LLC- 15 MK2 infectées à une Multiplicity of Infection (MOI) de 0,01 par ces virus, et observées en microscopie à fluorescence à trois jours post-infection. 1B. Représentation schématique du génome des virus recombinants générés par génétique inverse à partir de la souche clinique CAN98-75, et dans laquelle a été clonée la séquence codante de la GFP (Green Fluorescent Protein). Le virus rCAN98-75 contient le génome de 20 la souche CAN98-75 sauvage exprimant en plus le gène GFP à son extrémité 3'. Les génomes des virus recombinants issus de la souche CAN98-75 et délétés des gènes SH (ASH-rCAN98-75) ou G (AG-rCAN98-75) sont représentés en dessous. Les virus modifiés génétiquement sont fonctionnels et réplicatifs, tel qu'indiqué par les clichés de cellules LLCMK2 infectées à MOI 0,01 par ces virus et observés en microscopie à fluorescence à trois 25 jours post-infection. Figure 2 : Capacités réplicatives in vitro des souches virales rC-85473 et rCAN98-75 et de leurs souches dérivées. 2A. Titre viral évalué en TCID50/m1 dans les surnageants cellulaires prélevés chaque jour pendant 7 jours après une infection de cellules LLC-MK2 par les virus recombinants 30 rCAN98-75 (ronds noirs), ASH-rCAN98-75 (carrés noirs) et AG-rCAN98-75 (triangles noirs) à une multiplicité d'infection (MOI) de 0.01. 10 2B. Titre viral évalué en TCID50/ml dans les surnageants cellulaires prélevés chaque jour pendant 7 jours après une infection de cellules LLC-MK2 par les virus recombinants rC85473 (ronds noirs), ASH-rC-85473 (carrés noirs) et AG- rC-85473 (triangles noirs) à une multiplicité d'infection de 0.01. 5 ** p 160) des souris immunisées 15 préalablement par les virus recombinants ASH-rC-85473 et aG-rC-85473. Le tableau 7 ci-dessous présente les résultats d'essais de micro-neutralisation, réalisés à partir des sérums prélevés chez les souris des différents groupes à J+20 (1 jour avant le challenge infectieux) et à J+42 (21 jours après le challenge infectieux). Après inactivation 30 minutes à 56°C et dilution des sérums, ceux-ci ont été incubés avec 20 100 TCID50 (c'est-à-dire 100 unités infectieuses telles que déterminées d'après le TCD150/m1) de virus rC-85473 ou de virus rCAN98-75 pendant 2 heures à 37°C. Ce mix a ensuite été appliqué à des cellules LLC-MK2 pour une détermination de titre de neutralisation. Le titre d'anticorps neutralisant est déterminé par la plus forte dilution de sérum à laquelle les 25 cellules LLC-MK2, incubées avec le mix sérum+virus, ne montrent pas d'effets cytopathiques, c'est-à-dire sont considérées négatives pour l'infection (sur la base de tests effectués en duplicat). 28 Tableau 7. Essai de microneutralisation Sérums Jour 20 avant Jour 42, 21 jours après Jour 42, 21 jours après challenge infectieux le challenge infectieux le challenge infectieux (souche C-85473) (souche CAN98-75, sérotype B) Mock 5 10 10 rC-85473 5 160 80 ASH rC-85473 5 -10 L. 160 160 AG rC-85473 5 - 10 160 80 Les chiffres représentent la dilution des sérums testés à laquelle les titres d'anticorps 5 spécifiques neutralisent efficacement l'infection virale (titre de microneutralisation). Un résultat de 5 ou 10 est représentatif d'une primo réponse immunitaire (première rencontre avec le virus). Un résultat supérieur ou égal à 160 est caractéristique d'une réponse immunitaire maximale, et signifie que l'organisme avait déjà rencontré le virus précédemment et donc était immunisé. 10 Les souches virales dérivées de la souche d'origine rC-85473 permettent d'obtenir une réponse humorale neutralisante satisfaisante contre le virus hMPV C-85473 (sérotype A) et au moins contre le virus CAN98-75 (sérotype B), après immunisation préalable par les souches atténuées. 15 Exemple 5: Capacités d'attachement cellulaire in vitro des virus recombinants rC- 85473 et rCAN98-75. Des cellules LLCMK2 ont été infectées (PO) avec : - le virus rCAN98-75 et ses formes atténuées ASH-rCAN98-75 et AG-rCAN98-75 (figure 5A) ; 20 - le virus rC-85473 et ses formes atténuées ASH-rC-85473 et AG-C-85473 (figure 5B) ; 29 Les cellules ont été infectées sur glace, pendant 0.5, 1, 2 ou 3h pour faire varier le temps d'attachement des virus aux cellules, avant d'être lavées puis incubées à 37°C pendant 24h. Le pourcentage de cellules infectées mesuré à 24h post-infection est représentatif de la quantité de virus capable de se lier aux cellules dans le temps imparti (0.5, 1, 2 ou 3h). 5 Les résultats indiquent des capacités d'attachement aux cellules LLCMK2 en culture (et donc des capacités d'infection) différentes pour les virus recombinants en fonction de l'origine de leur génome CAN98-75 ou C-85473. Les résultats montrent une capacité d'attachement cellulaire et d'infection cellulaire bien meilleure pour les virus atténués ASH- rC-85473 et AG-rC-85473 (environ 60% de cellules 10 infectées) en comparaison de celles des virus ASH-rCAN98-75 (40%) et AG-rCAN98-75 (moins de 20% de cellules infectées). Exemple 6: Capacités réplicatives ex vivo des virus recombinants rC-85473 et rCAN98- 75 en modèle 3D d'épithélium respiratoire humain reconstitué et cultivé à l'interface 15 air-liquide. Des épithéliums respiratoires humains reconstitués (MucilAir® HAE, Epithelix) et maintenus en culture à l'interface air-liquide selon les instructions du fournisseur Epithelix, ont été utilisés pour réaliser ces expériences ex vivo. Les photos présentées en figure 6A indiquent que les virus recombinants rCAN98-75 20 apparaissent moins infectieux et moins réplicatifs que les virus recombinants rC-85473 (plus faible intensité de la fluorescence et dimensions plus réduites des foyers d'infection). Les résultats de quantification de génome viral dans les épithéliums (figure 6C) confirment les capacités réplicatives des virus recombinants rC-85473, ASH- rC-85473 et AG- rC-85473, ainsi que des virus recombinants rCAN98-75 et ASH-rCAN98-75, à la différence du virus AG- 25 rCAN98-75 très faiblement réplicafit Les résultats de quantification de génome viral à la surface du pôle apical des épithéliums (figure 6B) indiquent une production de virus recombinants rCAN98-75, ASH-rCAN98-75, AG-rCAN98-75, rC-85473 et ASH- rC-85473. En revanche, aucun génome de virus AG- rC-85473 n'est détecté, indiquant l'absence de 30 production de progéniture virale. Une hypothèse est que le virus AG-C-85473 aurait perdu la capacité de bourgeonner à la surface des cellules infectées dans ce système ex vivo complexe et pluristratifié. 30 Ces différences seraient de nature à argumenter davantage en faveur du caractère inventif de notre invention, se focalisant sur les propriétés différentes entre virus recombinants de différentes origines en termes de souche virale hMPV, pour la protection de nos candidats vaccins vivants atténués ASH- rC-85473 et AG- rC-85473 Tableau 8. Récapitulatif des séquences présentées dans le séquence listing Description SEQ ID NO. 1 Séquence génomique complète de la souche sauvage de hMPV C85473 SEQ ID NO. 2 Séquence complète du virus HMPV recombinant ASH4C-85473 SEQ ID NO. 3 Séquence complète du virus HMPV recombinant AG-rC-85473 SEQ ID NO. 4 Séquence complète du virus HMPV recombinant sauvage rC-85473 couplée à la séquence de la OFF' SEQ ID NO. 5 Séquence complète du virus HMPV recombinant ASH-rC-85473 couplée à la séquence de la OFF' SEQ ID NO. 6 Séquence complète du virus HMPV recombinant AG-rC-85473 couplée à la séquence de la OFF SEQ ID NO. 7 SEQ ID NO. 8 Séquence complète du génome HMPV sauvage CAN98-75 Séquence complète du virus HMPV recombinant sauvage CAN98-75 couplée à la séquence de la OFF' 31 REFERENCES Brevets WO 2005/014626 US 8,841,433 Références bibliographiques par ordre de citation dans le texte van den Hoogen BG, de Jong JC, Groen J, Kuiken T, de Groot R, Fouchier RA, et al. 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Souche virale atténuée selon la revendication 1, caractérisée en ce que les modifications de la séquence SEQ ID NO.1 comprennent l'inactivation du gène codant pour la protéine SH. 3. Souche virale atténuée selon la revendication 2, caractérisée en ce que ladite souche comprend la séquence SEQ ID NO.2. 4. Souche virale atténuée selon la revendication 1, caractérisée en ce que les modifications de la séquence SEQ ID NO.1 comprennent l'inactivation du gène codant pour la protéine G. 5. Souche virale atténuée selon la revendication 4, caractérisée en ce que ladite souche comprend la séquence SEQ ID NO.3. 6. Souche virale atténuée selon la revendication 1, caractérisée en ce que les modifications de la séquence SEQ ID NO.1 comprennent l'inactivation des deux gènes codant pour la protéine G et la protéine SH. 7. Souche virale atténuée selon l'une des revendications 1 à 6, dont la séquence comprend au moins un gène exogène, en particulier un gène codant pour un antigène viral. 8. Utilisation in vitro d'une souche virale atténuée selon la revendication 7, en tant que vecteur d'expression d'au moins un gène exogène dans des cellules cibles du metapneumovirus humain. 9. Souche virale atténuée selon l'une des revendications 1 à 7, pour son utilisation en tant que médicament. 10. Souche virale atténuée selon l'une des revendications 1 à 7, pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter les infections par des virus de la famille des Pneumoviridae. 11. Souche virale atténuée pour son utilisation selon la revendication 10, pour prévenir et/ou traiter les infections par des metapneumovirus humains. 12. Souche virale atténuée pour son utilisation selon la revendication 10, pour prévenir et/ou traiter les infections par des orthopneumovirus, tel que le virus respiratoire syncytial humain. 13. Souche virale atténuée selon la revendication 7 pour son utilisation pour prévenir 5 et/ou traiter les infections par des virus dont au moins un antigène viral est exprimé par ladite souche virale atténuée. 14. Composition vaccinale comprenant, dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable, au moins une souche virale atténuée selon l'une des revendications 10 1 à 7, et optionnellement un adjuvant.