Brevet FR3082748A1 — publié le 20191227

DOMAINE TECHNIQUE La présente invention concerne un extrait de parties aériennes de germandrée lisse, son procédé d'obtention, et une composition comprenant un tel extrait pour des applications cosmétique ou thérapeutique. La composition est avantageusement cosmétique, pharmaceutique, ou dermatologique. Le domaine de l'invention concerne l'industrie pharmaceutique ou l'industrie cosmétique et plus spécifiquement la formulation de compositions pharmaceutiques ou cosmétiques destinées à la réparation cutanée. ETAT DE LA TECHNIQUE Le domaine de la cosmétique est en constante recherche de nouvelles molécules ou de nouveaux extraits ayant des effets cosmétiques ou dermatologiques. La demande du marché est de plus en plus orientée vers des produits naturels respectueux de l'environnement et de l'Homme. La peau est la première barrière protégeant le corps contre les agressions externes. Ces agressions externes affaiblissent cette fonction barrière. De plus, l'exposition aux agressions externes fragilise la peau et induit plusieurs processus de dégénérescence qui accélèrent le vieillissement cutané. Ainsi, la peau peut être sujette à de petites coupures, brûlures et plaies superficielles, cicatrices suites à de légères interventions (dans le cadre de soins esthétiques par exemple), mais également à des écorchures, des érythèmes fessiers, des irritations et éruptions cutanées, des gerçures, des dartres, des crevasses ou encore des perlèches (inflammation transmissible, mais bénigne, généralement due à une infection par des streptocoques, des levures ou une carence en vitamines, se caractérisant par la formation de fissures et de croûtes humides à la commissure des lèvres). Enfin la peau est régulièrement soumise à la sécheresse cutanée. Il est essentiel que la peau retrouve au plus vite sa fonction de barrière et que les signes de ces agressions soient le plus rapidement rendus invisibles. 2 Le traitement de ces signes est devenu un enjeu majeur, notamment pour l'industrie cosmétique. Par conséquent, il existe un besoin consistant à identifier des nouveaux actifs, de préférence d'origine naturelle, répondant aux attentes du 5 consommateur et agissant notamment sur la réparation cutanée. EXPOSE DE L'INVENTION La présente invention propose à cet effet un extrait de parties aériennes de germandrée lisse contenant au moins 4 % en poids de polyphénols, exprimé 10 en milligrammes d'équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de l'extrait sec. De manière surprenante, les inventeurs ont découvert que les extraits de parties aériennes de germandrée lisse sont notamment riches en polyphénols et présentent avantageusement des propriétés cosmétiques, dermatologiques, 15 pharmaceutiques jamais décrites jusqu'à présent. En particulier, c'est la première fois que des extraits de parties aériennes de germandrée lisse sont utilisés en tant que tels, pour leurs propriétés spécifiques, notamment en vue d'améliorer la réparation cutanée. En effet, Teucrium lucidum L. ou Chamaedrys lucida L. ou germandrée 20 lisse est une plante de la famille des Lamiaceae assez commune dans les Alpes-Maritimes, le Var et les Alpes-de-Haute-Provence (source telabotanica). C'est une plante vivace que l'on retrouve principalement sur les rochers et coteaux arides des montagnes du Sud-Est (source telabotanica). On la retrouve également en Espagne et en Italie septentrionale, et est de même signalée en 25 Algérie (source telabotanica). C'est une plante glabre dont les feuilles sont lobées, celles de l'inflorescence étant bien plus petites que les autres. Les fleurs purpurines, claires, sont groupées en un épi terminal lâche. La plante présente une hauteur totale variant de 20 à 60 cm et un diamètre de corolle variant de 8 à 10 mm (10-3 mètres). Sa période de floraison s'étend de juin à 30 août. Elle pousse à des altitudes comprises entre 200 et 2200 mètres. 3 La germandrée lisse a été très peu étudiée à ce jour. De plus, à notre connaissance, aucun produit cosmétique ou thérapeutique ne contient un extrait de germandrée lisse. Une seule publication datant de 1985 traite de la composition en 5 diterpènes de plusieurs espèces de germandrée, notamment la germandrée lisse. Il est indiqué que cinq diterpènes (teucvidine, teufline, teucrine G, teucrine F et 6-a-hydroxyteuscordine) peuvent se retrouver dans cette dernière : BRUNO (M.), PIOZZI (F.), RODRIGUEZ (B.), SAVONA (G.), SERVETTAZ (O.). - Ent-clerodane diterpenoids from six further species of Teucrium. 10 Phytochemistry, 24(11), p. 2597-2599 (1985). La germandrée lisse n'a pas fait l'objet d'autres études concernant sa composition chimique ou encore son activité biologique. FIGURES: 15 Figure 1 : Dosages des polyphénols totaux dans un extrait de germandrée lisse selon l'invention par comparaison avec un extrait de Gingko biloba pris pour référence. Figure 2 : Dosages des flavondides dans un extrait de germandrée lisse selon l'invention par comparaison avec un extrait de Gingko biloba pris 20 pour référence. Figure 3 : Activités biologiques démontrées pour un extrait de germandrée lisse selon l'invention. Figure 4 : Activités biologiques démontrées et dosages des polyphénols totaux et des flavonoÏdes de la fraction 3. 25 Figure 5 : Activités biologiques démontrées et dosages des polyphénols totaux et des flavonoïdes de la fraction 4. Figure 6 : Activités biologiques démontrées et dosages des polyphénols totaux et des flavonoïdes de la fraction 6. 30 4 DESCRIPTION DETAILLEE * La réparation cutanée La réparation cutanée regroupe l'ensemble des phénomènes 5 physiologiques naturels aboutissant à la restauration de la structure cutanée suite à une altération de cette dernière. Elle se décompose en trois principales étapes complémentaires, l'inflammation, la prolifération cellulaire et le remodelage, qui se mettent en place en cascade. Ce processus, très complexe, offre une multitude de cibles pour un actif cosmétique, thérapeutique ou 10 dermatologique qui va permettre d'accélérer la réparation cutanée et de minimiser la cicatrice résiduelle en stimulant la migration et la prolifération de différentes lignées cellulaires telles que les fibroblastes, les kératinocytes et les macrophages par exemple. Le mécanisme de réparation cutanée étant très complexe, un actif peut 15 agir sur différentes cibles, notamment sur l'activité de certaines protéases et de certains inhibiteurs intervenant lors de ce processus. Les protéases sont des enzymes notamment responsables de la dégradation de composants de la matrice extracellulaire (collagène, fibronectine, laminine, élastine, acide hyaluronique, etc.) - dégradation essentielle pour éliminer des éléments 20 endommagés de la matrice extracellulaire (MEC) lors d'une blessure. Elles interviennent également dans la promotion de la migration et l'adhérence cellulaire, ainsi que de l'angiogenèse. Les inhibiteurs tissulaires de métalloprotéinases matricielles (MMPI), eux, interviennent dans le processus en régulant l'activité de ces dernières, permettant ainsi la mise en place de MEC 25 néoformée. La réparation cutanée consiste ainsi en un équilibre subtil entre dégradation et dépôt de MEC, orchestré par les protéases et leurs inhibiteurs. " L'extrait L'invention a pour objet un extrait de parties aériennes de germandrée 30 lisse, avantageusement riche en polyphénols. Typiquement, l'extrait comprend au moins 1 c/o en poids de polyphénols, exprimé en milligrammes d'équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de l'extrait sec. 5 Avantageusement, l'extrait de parties aériennes de germandrée lisse comprend au moins 4 °/0, avantageusement au moins 5 %, en poids de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de l'extrait sec. 5 On entend par extrait de parties aériennes de germandrée lisse riche en polyphénols, un extrait obtenu par des procédés permettant de concentrer les polyphénols potentiellement présents dans les parties aériennes de germandrée lisse de manière à ce que cet extrait comprenne au moins 1 % en poids de polyphénols, de préférence au moins 4 % en poids et plus 10 avantageusement au moins 5 % en poids exprimé en milligrammes d'équivalent d'acide gallique par rapport au poids de l'extrait sec, typiquement par dosage du réactif de Folin-Ciocalteu. Selon une variante avantageuse de l'invention, l'extrait comprend, exprimé en milligrammes d'équivalent d'acide gallique par rapport à l'extrait sec obtenu, 15 de 1 % à 30 % en poids de polyphénols, avantageusement 3 % à 20 % en poids de polyphénols, plus avantageusement 5 % à 15 % en poids de polyphénols. De manière particulièrement avantageuse selon l'invention, les 20 polyphénols sont des flavonoïdes, tels que des flavonols. Selon une caractéristique particulière de la présente invention, l'extrait selon la présente invention comprend au moins 0,5 %, avantageusement au moins 1 % en poids de flavonoïdes, exprimé en milligrammes d'équivalent de quercétine, par rapport au poids de l'extrait sec, typiquement par dosage au 25 chlorure d'aluminium. Avantageusement, l'extrait de parties aériennes de germandrée lisse comprend entre 1 et 5 %, tout particulièrement entre 3 et 4 %, en poids de flavonoïdes, exprimé en milligrammes d'équivalent de quercétine, par rapport au poids de l'extrait sec. Typiquement, les flavonoïdes de l'extrait selon la présente invention sont des flavonols. 30 Dans le cadre de la présente invention, les parties aériennes de germandrée lisse sont choisies dans le groupe constitué par les feuilles, les 6 tiges, les fleurs, les graines, ou leurs mélanges. Les racines de germandrée lisse et les hypocotyles de germandrée lisse qui poussent sous terre, ne font donc pas partie des parties aériennes de germandrée lisse au sens de la présente invention. 5 * Procédé d'extraction L'extrait de germandrée lisse selon l'invention est avantageusement susceptible d'être obtenu par extraction solide-liquide des parties aériennes, fraîches ou sèches, préférentiellement sèches, de germandrée lisse dans un 10 solvant. Le solvant est avantageusement choisi parmi un solvant ou des mélanges de solvants présentant un moment dipolaire compris entre 0 et 6 D (debye), avantageusement entre 1,5 et 4 D. L'invention a également pour objet un procédé de préparation d'un extrait de parties aériennes de germandrée lisse comprenant au moins une étape 15 d'extraction solide-liquide des parties aériennes de germandrée lisse dans un solvant ou des mélanges de solvants présentant un moment dipolaire compris entre 0 et 6 D, avantageusement entre 1,5 et 4 D. Typiquement, le procédé comprend les étapes successives suivantes : 20 (a) dispersion et extraction dans un solvant adapté de parties aériennes de germandrée lisse, le solvant étant avantageusement un solvant ou des mélanges de solvants présentant un moment dipolaire compris entre 0 et 6 D, avantageusement entre 1,5 et 4 D, à titre d'exemple un solvant ou un mélange de solvants aqueux et/ou alcoolique et/ou glycérolique et/ou glycolique ; 25 (b) centrifugation et/ou filtration du mélange obtenu suite à l'étape (a) et obtention d'un filtrat ; (c) le cas échéant, ultrafiltration et/ou diafiltration et/ou nanofiltration du filtrat obtenu suite à l'étape (b) ; (d) le cas échéant, décoloration et/ou désodorisation éventuelle(s) du 30 filtrat obtenu à l'étape b) ou éventuellement à l'étape c) ; (e) récupération de l'extrait de parties aériennes de germandrée lisse et 7 (f) séchage éventuel de l'extrait obtenu à l'étape (e), éventuellement sur un support. Dans un mode de réalisation particulier, le solvant d'extraction, notamment 5 utilisé à l'étape a), est choisi parmi des alcools tels que l'éthanol, le méthanol, le glycérol, ou un glycol comme le propanediol, le propylène glycol ou un éther, seul ou en mélange. Dans un autre mode de réalisation particulier, le solvant d'extraction est un solvant hydroalcoolique, tel qu'un mélange eau-éthanol et/ou hydro- 10 et/ou hydro-glycolique tel qu'un mélange eau-propanediol, avantageusement dans une proportion comprise entre 30 et 90 % d'alcool, de glycérol, de glycol dans l'eau. De préférence, le solvant d'extraction est un solvant hydro-alcoolique comprenant 50 % d'alcool dans 50 % d'eau en poids du poids final. 15 En particulier, en présence d'éthanol, on choisit une proportion comprise entre 0 et 100 % d'éthanol dans l'eau, préférentiellement 40 % à 60 % d'éthanol, et avantageusement 50 `ro (les % sont exprimés en poids de l'éthanol par rapport au poids total eau + éthanol). En particulier, en présence de glycérol, on choisit une proportion comprise 20 entre 0 et 100 % de glycérol dans l'eau, préférentiellement entre 30 et 80 °/0, et avantageusement 50 % (les % sont exprimés en poids de glycérol par rapport au poids total eau + glycérol). En particulier, en présence de glycol et plus particulièrement de propanediol, on choisit une proportion comprise entre 0 et 100 °A, de 25 propanediol dans l'eau, préférentiellement entre 10 et 80 %, et avantageusement 80 % (les % sont exprimés en poids de propanediol par rapport au poids total eau + propanediol). En particulier, en présence d'éther et plus particulièrement d'éther diéthylique, on choisit une proportion comprise entre 0 et 80 % d'éther 30 diéthylique dans du méthanol, préférentiellement entre 10 et 80 °/0, et avantageusement 50 % (les % sont exprimés en poids d'éther diéthylique par rapport au poids total méthanol + éther diéthylique). 8 Plus particulièrement, dans le cadre de l'extraction solide-liquide, des parties aériennes, fraîches ou sèches, de germandrée lisse notamment dans l'étape a) du procédé, sont introduites dans le solvant d'extraction dans un ratio 5 poids de la plante (en équivalent de matière sèche) / poids du solvant compris entre 1/20 et 1/1, typiquement 1/5. De préférence, les parties aériennes sont découpées, avantageusement broyées, préférentiellement de sorte à présenter des morceaux de dimensions maximales de 1 cm, de préférence 0,5 cm. 10 La température d'extraction est avantageusement comprise entre 4 et 100 °C, et préférentiellement entre 10 et 60 °C, etplus particulièrement entre 15 et 30 °C, plus préférentiellement à températureambiante soit le plus souvent entre 20 et 25 °C. 15 Avantageusement, aucune enzyme n'est ajoutée. La durée d'extraction varie avantageusement de 30 minutes à 12 h (heure), et préférentiellement de 30 minutes à 2 h, et plus avantageusement elle est d'environ 1 h. 20 L'extraction est réalisée sous agitation. L'agitation est par exemple réalisée par un agitateur comprenant notamment une agitation mécanique, à titre d'exemple un mobile d'agitation tournant entre 50 et 3000 tours/minute est placé dans un contenant recevant le solvant et les parties aériennes à extraire. 25 A l'issue de l'extraction, la matière sèche résiduelle est avantageusement séparée de la phase liquide, par exemple lors de l'étape b) par filtration, décantation ou centrifugation. La phase liquide ainsi obtenue est dénommée filtrat. 30 Ces premières étapes de séparation peuvent être suivies d'étapes de purification, étape c), par exemple par ultrafiltration et/ou nanofiltration et/ou diafiltration permettant de concentrer les molécules d'intérêt potentielles aux 9 dépens d'autres. L'ultrafiltration est définie comme une filtration permettant la rétention de particules de taille variant entre 10 et 100 nanomètres (nm), la nanofiltration est définie comme une filtration permettant la rétention de particules dont la taille (par exemple le diamètre lorsque la particule peut être 5 assimilée à une sphère, ou par exemple la dimension d'extension principale de la particule lorsque celle-ci n'est pas sphérique) minimale varie entre 1 et 10 nanomètres (nm) et la diafiltration est définie comme une ultrafiltration dans laquelle le rétentat est dilué avec de l'eau et re-ultrafiltré, pour réduire la concentration de composants de perméat solubles et augmenter davantage la 10 concentration des composants retenus. En outre, il peut être avantageux d'effectuer une étape de décoloration et/ou de désodorisation du filtrat liquide, obtenu après l'étape b) ou l'étape c), de sorte à obtenir un extrait limpide. La décoloration est réalisée par distillation moléculaire ou par absorption sur charbon actif. Ces procédés sont destinés à 15 séparer les pigments contenus dans le filtrat de sorte à faciliter la formulation de l'extrait. La désodorisation quant à elle est réalisée principalement par distillation moléculaire et est destinée à atténuer et/ou éliminer une/des odeur(s) désagréable(s) ou trop marquée(s). 20 Le filtrat obtenu à l'étape b) ou éventuellement c) ou éventuellement d) est récupéré et constitue l'extrait selon l'invention. L'extrait obtenu se présente typiquement sous forme liquide, mais également peut être séché selon les méthodes connues de l'Homme de l'art, soit par évaporation du solvant, soit par atomisation ou lyophilisation par 25 exemple, avec ou sans support tel que la maltodextrine. Selon un mode de réalisation de l'invention, l'extrait obtenu à l'issue de l'étape e) ou éventuellement de l'étape f) est soumis à une étape de fractionnement. Cette étape est destinée à séparer ou fractionner au moins en 30 partie les composés de l'extrait issu de l'étape e), ou éventuellement de l'étape f). A titre d'exemple, le fractionnement est soit réalisé par distillation moléculaire, notamment en faisant varier la température d'ébullition avec ou 10 sans ajout d'un co-solvant à l'extrait, soit par dépôt de l'extrait sur colonne de silice, notamment en éluant par différents mélanges de solvants pour récupérer différentes fractions qui peuvent ensuite être concentrées par évaporation du solvant. 5 A titre d'exemple, le solvant utilisé au cours de cette étape de fractionnement est choisi parmi les solvants hydro-alcooliques ou alcane-éther ou éther-alcool ou alcool. Selon une possibilité, le solvant utilisé au cours de cette étape de fractionnement est choisi parmi eau/éthanol ou eau/méthanol, de préférence en 10 proportion variant de 10 à 90 % d'alcool dans l'eau avantageusement 50 1%, cyclohexane / éther diéthylique ou éther diéthylique / méthanol, de préférence en proportions variant de 10 à 90 1%, avantageusement dans un ratio éther diéthylique / méthanol compris entre 80:20 et 20:80 en volume, par exemple 50:50 préférentiellement 80:20. 15 * La composition L'invention a également pour objet une composition comprenant, de préférence en tant qu'actif, un extrait de parties aériennes de germandrée lisse, éventuellement en association avec un excipient approprié. L'excipient est 20 approprié à la destination cosmétique ou pharmaceutique ou dermatologique. L'excipient est par exemple un véhicule adapté. La composition est avantageusement cosmétique, pharmaceutique, ou dermatologique. L'invention concerne également une composition cosmétique ou 25 dermatologique comprenant dans un véhicule cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable un extrait de parties aériennes de germandrée lisse selon l'invention. Ladite composition est de préférence formulée pour être administrée ou 30 appliquée par voie topique. 11 Selon une variante avantageuse de l'invention, la composition comprend 0,10 à 10%, typiquement 0,5 à 7%, avantageusement entre 0,10 % et 1 %, en poids d'extrait, exprimé en pourcentage d'extrait sec. La composition selon l'invention peut être formulée sous la forme de 5 différentes préparations adaptées à une administration topique. La composition selon l'invention est avantageusement formulée sous la forme de différentes préparations adaptées à une administration topique, plus particulièrement pour application sur la peau, les muqueuses et/ou les phanères. 10 Selon une première variante, les différentes préparations sont adaptées à l'administration topique et incluent notamment les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les sérums, les solutions aqueuses, hydroalcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays, les shampooings, les vernis ou tout autre produit pour application externe. 15 Dans le cas d'une émulsion, il peut s'agir d'une émulsion eau dans huile ou huile dans eau. La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention peut comprendre également un solvant choisi en fonction des différents ingrédients et de la forme d'administration. 20 A titre d'exemples, on peut citer l'eau (de préférence de l'eau déminéralisée), un alcool tel que l'éthanol, ou un éther de diéthylène glycol tel que l'éthoxydiglycol ou l'éther monométhylique de diéthylène glycol. Ladite composition cosmétique peut également comprendre au moins un additif usuel dans le domaine, tel que par exemple au moins un composé choisi 25 parmi un agent émollient ou humectant, un agent gélifiant et/ou épaississant, un agent tensioactif, une huile, un agent actif, un colorant, un conservateur, un agent antioxydant, un agent actif, une poudre organique ou inorganique, un filtre solaire et un parfum. D'autres additifs habituellement utilisés en cosmétique peuvent également 30 être présents dans la composition selon l'invention, notamment des conservateurs, des agents antioxydants ou des parfums bien connus dans le domaine technique. 12 La composition comprenant un extrait de parties aériennes de germandrée lisse ayant les spécifications indiquées est particulièrement destinée à une utilisation cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique. 5 Dans le cadre d'une utilisation cosmétique, pharmaceutique, ou dermatologique, la composition sera avantageusement formulée sous la forme d'une préparation adaptée à une administration topique. 10 L'invention a également pour objet l'utilisation d'un extrait de parties aériennes de germandrée lisse pour la fabrication d'une composition cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique. " Utilisation de l'extrait ou de la composition 15 La présente invention concerne avantageusement un extrait ou une composition destiné à être utilisé pour la réparation du tissu cutané. L'utilisation est destinée à réparer une lésion cutanée ou favoriser la cicatrisation des plaies, à éliminer les cicatrices, à prévenir ou traiter les lésions cutanées de type légères interventions, petites coupures, plaies superficielles et brûlures. 20 Avantageusement, la composition ou l'extrait selon la présente invention est utilisé dans la prévention et/ou le traitement des troubles ou des pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères tels que les cheveux. 25 De manière particulièrement avantageuse, l'extrait ou la composition selon l'invention est destiné à être utilisé pour des applications cosmétiques, avantageusement par voie topique, notamment pour le soin ou l'hygiène de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères tels que les cheveux. 30 L'extrait ou la composition selon l'invention est également destiné à être utilisé pour une application cosmétique de régénération cutanée et/ou de cicatrisation, dans le traitement de la peau sensibilisée post-opération 13 esthétique et/ou de la peau desséchée, et dans la modulation de processus cellulaires intervenants dans la réparation cutanée, associés aux mécanismes de régénération et/ou de cicatrisation de la peau. 5 La composition ou l'extrait selon l'invention est également avantageusement destiné à être utilisé dans la prévention du vieillissement cutané, en particulier du vieillissement intrinsèque ou encore du vieillissement photo-induit. La composition ou l'extrait selon l'invention est également 10 avantageusement destiné à être utilisé pour prévenir et/ou atténuer des altérations de la peau dues au vieillissement. Le vieillissement et le photo-vieillissement de la peau et les altérations qui y sont associées peuvent se manifester de différentes manières, parmi lesquelles on peut citer : la perte de fermeté et d'élasticité dues à une perte tissulaire au niveau de 15 l'épiderme et/ou du derme, conduisant à la formation de rides ; la perte d'éclat due à la réduction de la microcirculation et à un ralentissement du renouvellement cellulaire au niveau de l'épiderme ; l'apparition de taches pigmentaires ; l'apparition de purpura et/ou de pseudo-cicatrices; et/ou la sécheresse 20 cutanée résultant d'une diminution de la fonction barrière de la couche cornée et d'un ralentissement du renouvellement épidermique. La composition ou l'extrait selon la présente invention peut également être avantageusement destiné à être utilisé dans la prévention et/ou le traitement 25 des altérations du tissu dermique. *Procédé de soin cosmétique L'invention concerne également un procédé de soin cosmétique non thérapeutique de la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses, en vue 30 d'améliorer leur état et/ou leur aspect, comprenant l'administration ou consistant à administrer une composition cosmétique ou un extrait selon la présente invention. 14 Dans un mode de réalisation du procédé cosmétique selon l'invention, la composition ou l'extrait selon l'invention est destiné à être utilisé en vue d'améliorer la fermeté, l'élasticité ou la tonicité de la peau, ou de prévenir le manque de fermeté ou de tonicité ou d'élasticité de la peau, on encore de 5 participer à la réorganisation de la structure de la matrice extracellulaire, ou encore pour prévenir et/ou traiter les altérations du tissu dermique. Dans un autre mode de réalisation du procédé cosmétique selon l'invention, la composition ou l'extrait selon l'invention est destiné à être utilisé 10 comme agent anti-vieillissement ou anti-âge de la peau, des phanères ou des muqueuses, en particulier contre le vieillissement intrinsèque ou extrinsèque, notamment comme anti-photo-vieillissement. Dans autre un mode de réalisation du procédé cosmétique selon 15 l'invention, la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses visés sont avantageusement ceux qui présentent des rougeurs (notamment du front, du nez et des joues) dues à une dilatation (chronique) des capillaires sous-cutanés. 20 Un autre aspect de l'invention concerne une utilisation cosmétique d'un extrait de germandrée lisse. Avantageusement, comme antioxydant et/ou pour la réparation cutanée. *Activités biologiques de l'extrait 25 L'extrait de germandrée lisse selon l'invention a été testé pour différentes activités biologiques considérées notamment comme des activités cibles dans la réparation cutanée. L'activité anti-inflammatoire a été évaluée par un test d'inhibition de la 30 lipoxygénase. La lipoxygénase est une protéine enzymatique qui catalyse les réactions d'oxydation des acides gras ou autres alcènes. Enzyme contenant du fer, elle intervient dans la biosynthèse des leucotriènes qui jouent un rôle 15 important dans la pathologie de nombreuses maladies inflammatoires et allergiques. La première phase de la réparation cutanée étant une phase inflammatoire, les inhibiteurs de cette enzyme permettent de réguler au mieux cette phase qui est indispensable pour la mise en place des phases suivantes. 5 Les tests sont réalisés sur plaque 96 puits préférentiellement avec dépôt grâce à un robot de pipetage. Les étapes du test sont décrites ci-après : - Dépôt dans les puits de l'échantillon d'extrait à analyser - Dépôt dans les puits de l'enzyme lipoxygénase dans une solution tampon, agitation 10 Incubation pendant 10 min puis lecture de l'absorption à 235 nm à l'aide d'un spectrophotomètre pour définir une première valeur - Dépôt dans les puits du substrat acide linoléique dans une solution tampon, agitation Incubation pendant 50 min puis lecture de l'absorbance à 235 nm à 15 l'aide d'un spectrophotomètre pour définir une deuxième valeur. La différence entre les valeurs des deux mesures d'absorption permet de calculer le pourcentage d'inhibition. Ce pourcentage d'inhibition supérieur ou égal à 30 % est considéré comme correspondant à une activité d'inhibition significative. 20 L'activité anti-oxydante a été évaluée par un test au DPPH. La peau sécrète un sébum qui est oxydé afin de protéger la peau notamment de l'exposition aux UV. Cependant, cette oxydation engendre la formation de peroxydes qui attaquent les cellules membranaires. Il est donc important 25 d'inhiber leur formation. Le test au DPPH permet de mesurer la capacité d'un ingrédient à réduire le radical chimique par transfert d'un hydrogène sur le DPPH- et à former la molécule stable DPPH et ainsi déterminer son potentiel anti-radicalaire. 30 Les tests sont réalisés sur plaque 96 puits préférentiellement avec dépôt grâce à un robot de pipetage. Les étapes du test sont décrites ci-après : - Dépôt dans les puits de l'échantillon d'extrait à analyser 16 - Dépôt dans les puits d'un mélange éthanol/tampon acétate 50/50, agitation Lecture de l'absorption à 517 nm à l'aide d'un spectrophotomètre pour définir une première valeur 5 - Dépôt dans les puits du réactif DPPH dans une solution éthanolique, agitation Incubation pendant 30 min puis lecture de l'absorbance à 517 nm à l'aide d'un spectrophotomètre pour définir une deuxième valeur. La différence entre les valeurs des deux mesures d'absorption permet de 10 calculer le pourcentage d'inhibition. Ce pourcentage d'activité supérieur ou égal à 30 'Vo est considéré comme correspondant à une activité significative. L'activité anti-élastase a été évaluée par un test d'inhibition de l'élastase. 15 L'élastase est l'enzyme qui catalyse l'hydrolyse de l'élastine, une fibre élastique qui, avec le collagène, détermine les propriétés mécaniques de la peau. Localisée dans la matrice extracellulaire, la régulation de son activité influence la tension et l'élasticité de la peau favorisant ainsi sa restauration et l'apparence de la cicatrice résiduelle. 20 Les tests sont réalisés sur plaque 96 puits préférentiellement avec dépôt grâce à un robot de pipetage. Les étapes du test sont décrites ci-après : - Dépôt dans les puits de l'échantillon d'extrait à analyser - Dépôt dans les puits de l'enzyme élastase dans une solution tampon, agitation 25 - Incubation de 20 min et lecture de l'absorption à 410 nm à l'aide d'un spectrophotomètre pour définir une première valeur - Dépôt dans les puits du substrat peptidique dans une solution tampon, agitation - Incubation pendant 40 min puis lecture de l'absorbance à 410 nm à 30 l'aide d'un spectrophotomètre pour définir une deuxième valeur. La différence entre les valeurs des deux mesures d'absorption permet de calculer le pourcentage d'inhibition. Ce pourcentage d'inhibition supérieur ou 17 égal à 30 °X) est considéré comme correspondant à une activité d'inhibition significative. L'activité anti-hyaluronidase a été évaluée par un test d'inhibition de la hyaluronidase. La hyaluronidase est une enzyme qui dégrade les acides hyaluroniques, constituants majeurs de la matrice extracellulaire. Ces glycosaminoglycanes de haut poids moléculaire comblent les espaces intercellulaires et participent à l'hydratation (en retenant l'eau) et la cohésion 10 des tissus cutanés. Ils participent également à la migration et à la prolifération cellulaire. Largement présentes dans le corps et notamment à la périphérie des fibres de collagène et d'élastine, ces glycosaminoglycanes sont également responsables de l'organisation et de la structure de la matrice extracellulaire de la peau. 15 Les tests sont réalisés sur plaque 96 puits préférentiellement avec dépôt grâce à un robot de pipetage. Les étapes du test sont décrites ci-après : - Dépôt dans les puits de l'échantillon d'extrait à analyser - Dépôt dans les puits de l'enzyme hyaluronidase dans une solution tampon, agitation 20 Incubation de 20 min à 37 °C et lecture de l'absoption à 405 nm à l'aide d'un spectrophotomètre pour définir une première valeur - Dépôt dans les puits du substrat acide hyaluronique dans une solution tampon, agitation Incubation pendant 30 min à 37 °C 25 - Dépôt d'un révélateur CTAB dissout dans une solution de NaOH, agitation - Agitation pendant 2 min puis lecture de l'absorbance à 405 nm à l'aide d'un spectrophotomètre pour définir une deuxième valeur. La différence entre les valeurs des deux mesures d'absorption permet de 30 calculer le pourcentage d'inhibition. Ce pourcentage d'inhibition supérieur ou égal à 30 fr/0 est considéré comme correspondant à une activité d'inhibition significative. 18 L'activité blanchissante a été évaluée par un test d'inhibition de la tyrosinase réalisé sur deux substrats différents : L-tyrosine et L-DOPA. La tyrosinase est une enzyme liée au développement naturel de la coloration de la peau, des cheveux et des yeux par son intervention lors de l'étape d'initiation 5 de la mélanogénèse, processus de synthèse de la mélanine, un pigment humain produit et sécrété par les mélanocytes distribués dans la couche basale du derme afin notamment de protéger la peau des rayons UV du soleil. Lorsqu'il y a une blessure, une suractivité de ces derniers entraîne une surproduction de mélanine, ce qui provoque une hyper-pigmentation de la peau. Mettre en 10 évidence le pouvoir blanchissant de l'ingrédient permet donc de caractériser des inhibiteurs de l'activité de la tyrosinase, qui auront pour effet de rendre la cicatrice résiduelle moins rouge à la fin du processus de réparation. Les tests sont réalisés sur plaque 96 puits préférentiellement avec dépôt grâce à un robot de pipetage. Les étapes du test sont décrites ci-après : 15 - Dépôt dans les puits de l'échantillon d'extrait à analyser - Dépôt dans les puits de l'enzyme tyrosinase dans une solution tampon, agitation Incubation de 20 min et lecture de l'absorption à 480 nm à l'aide d'un spectrophotomètre pour définir une première valeur 20 - Dépôt dans les puits du substrat L-DOPA ou L-tyrosine dans une solution tampon, agitation Incubation pendant 20 min puis lecture de l'absorbance à 480 nm à l'aide d'un spectrophotomètre pour définir une deuxième valeur. La différence entre les valeurs des deux mesures d'absorption permet de 25 calculer le pourcentage d'inhibition. Ce pourcentage d'inhibition supérieur ou égal à 30 % est considéré comme correspondant à une activité d'inhibition significative. 19 EXEMPLES Exemple 1 : Préparation d'un extrait hydroalcoolique de parties aériennes de germandrée lisse. 5 Les parties aériennes de germandrée lisse séchées et broyées sont mises en suspension sous agitation dans un ratio de 1/5 dans un mélange éthanol/eau 50/50 poids/poids pendant 2 h (heure) à température ambiante. La matière sèche résiduelle est séparée de la phase liquide soit par filtration, soit par décantation ou encore par centrifugation et la phase liquide ainsi obtenue 10 peut être filtrée à l'aide de filtres de porosité adaptée afin d'obtenir une solution limpide. L'extrait peut éventuellement être décoloré et/ou désodorisé avant d'être séché. L'extrait obtenu présente les caractéristiques suivantes : - Polyphénols totaux (Folin-Ciocalteu) : 112, 2 mg d'équivalent d'acide gallique/g d'extrait sec. 15 - FlavonoÏdes totaux : 37,11 mg d'équivalent de quercétine/g d'extrait sec. Les résultats ont été comparés aux quantités mesurées pour le Ginko bicha dans la publication MALTAS (E.), YiLoiz (S.). - Evaluation of Phytochemicals and Antioxidant Activity of Ginkgo biloba from Turkey. 20 Pharmacologia, 3(4), p. 113-120 (2012). Les résultats sont illustrés en figures 1 et 2. Il ressort que les quantités sont nettement plus importantes que pour le Ginko biloba. 112,2 mg d'équivalent d'acide gallique/g d'extrait pour l'extrait selon l'invention et 60 mg d'équivalent d'acide gallique/g d'extrait pour le Ginko bicha et 37,11 mg d'équivalent de quercétine/g d'extrait pour l'extrait selon 25 l'invention et 28 mg d'équivalent de quercétine/g d'extrait pour le Ginko biloba. Les résultats pour l'extrait obtenu sont illustrés en figures 1 et 2 en comparaison aux valeurs de référence du Ginko biloba de la publication citée ci-dessus. 30 Exemple 2 : Tests biologiques de l'activité de l'extrait. Pour réaliser les tests d'activités biologiques, l'extrait de germandrée lisse par exemple obtenu à l'exemple 1 est dilué dans du diméthyl sulfoxide (DMSO) 20 à une concentration de 3,433 mg/mL, ceci afin d'obtenir une concentration finale dans le puits de 100 pg/mL. Pour chacun des tests, un extrait commercial utilisé en cosmétique et testé à la même concentration que l'extrait sert de témoin positif : 5 - Pour le test d'inhibition de l'élastase : extrait commercial de Rubus idaeus L. - Pour le test d'inhibition de la lipoxygénase : extrait commercial d'Arnica montana L. - Pour le test d'inhibition de la tyrosinase : extrait éthanolique 10 d'Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. - Pour le test au DPPH : extrait commercial de Rosmarinus officinalis L. - Pour le test d'inhibition de la hyaluronidase : extrait commercial de Rubus idaeus L. 15 Les résultats pour les tests sont représentés en figure 3. L'extrait de germandrée lisse présente un pouvoir d'inhibition important sur trois des cinq enzymes testées. Il présente une activité antioxydante meilleure que l'extrait de Rosmarinus officines, reconnu pour son action antioxydante forte. Cette activité est même comparable à celle du trolox, un 20 dérivé de la vitamine E, également reconnu pour ses propriétés antioxydantes très intéressantes. Il présente une activité anti-inflammatoire, meilleure que l'extrait d'Arnica montana, reconnu dans le domaine pour cette activité. Pour finir, il possède une propriété anti-hyaluronidase très intéressante avec une action similaire à celle de l'extrait de Rubus idaeus, reconnu dans le domaine 25 pour cette activité. Exemple 3 : Fractionnement de l'extrait hydroalcoolique de parties aériennes de germandrée lisse. 30 Un fractionnement bioguidé est réalisé en utilisant sept mélanges de solvants afin de couvrir une large gamme de polarité. Les tests d'activités in vitro ont été réalisés sur chacune des fractions obtenues. 21 L'extrait obtenu à l'exemple 1, dénommé ci-après extrait brut, est séparé par des mélanges de solvants selon le tableau 1 ci-dessous. Pour chaque fraction, le rendement du fractionnement est donné. Le 5 rendement est obtenu en calculant le rapport entre la quantité en poids de l'extrait sec obtenu par rapport à la quantité en poids de l'extrait brut avant fractionnement. Chaque fraction est soumise aux différents tests d'activités et les résultats sont résumés dans le tableau 1 et illustrés aux figures 4 à 6. 10 Tableau 1 : Activités et rendements d'extraction des fractions de l'extrait de germandrée lisse Fraction Solvant Rendement Activités 1 Cyclohexane / Ether diéthylique 0,31 % Pas d'activité 2 Ether diéthylique 0,93 % Anti-élastase Anti-inflammatoire 3 Ether diéthylique / 1,36 % Anti-élastase Anti-inflammatoire Méthanol (80 : 20) 4 Ether diéthylique / 4,21 °h, Anti-inflammatoire Anti-oxydante Méthanol (50 : 50) 5 Ether diéthylique / 32,53 "Yo Pas d'activité Methanol (20 : 80) 6 Méthanol 26,06 % Anti-oxydante Antihyaluronidase Anti-inflammatoire 7 Méthanol / Eau (50 : 50) 12,07 % Anti-oxydante Antihyaluronidase Anti-inflammatoire Chaque fraction est également analysée pour déterminer la quantité de 15 polyphénols et de flavonoïdes dans la fraction. Les résultats sont donnés dans le tableau 2 ci-après et illustrés également en figures 4 à 6. 22 Sont représentées sur ces figures les mesures d'activité pour l'extrait selon l'exemple 2, pour la fraction selon l'exemple 3 et pour le témoin commercial positif tel que décrit à l'exemple 2 ainsi que les mesures de polyphénols et de flavonoÏdes pour l'extrait selon l'exemple 2, pour la fraction 5 selon l'exemple 3 et pour la référence correspondant au Ginko bilobé selon la publication de MALTAS (E.), YILDiz (S.). mentionnée ci-dessus. Tableau 2 : Étude de la composition en flavonoldes et polyphénols de l'extrait brut de germandrée lisse ainsi que des fractions résultantes. Fraction Solvant Dosage des flavonoïdes mg eq de quercétine / g d'extrait Dosage des polyphénols totaux mg eq d'acide gallique / g d'extrait Extrait brut Eau! Ethanol 37,11 +/- 0,09 112,2 +/- 0,6 (50 :50) 1 Cyclohexane / Ether diéthylique n.r. n.r. 2 Ether diéthylique 11,67 +/- 0,03 13,8 +/- 0,1 3 Ether diéthylique / Méthanol (80 : 20) 14,91 +/- 0,03 50,9 +/- 0,3 4 Ether diéthylique / Méthanol (50 : 50) 11,94 +/- 0,03 59,1 +/- 0,3 5 Ether diéthylique / 11,13 +/- 0,02 38,1 +/- 0,2 Methanol (20 : 80) 6 Méthanol 192,4 +/- 0,5 219 +/- 1 7 Méthanol / Eau 38,07 +/- 0,09 128,32 (50 : 50) 10 n.r. : non renseigné Il ressort que la fraction 4 présente un rendement d'extraction meilleur et des activités intéressantes par rapport à la fraction 3 notamment. La fraction 6 15 présente un rendement d'extraction meilleur et des quantités de polyphénols et de flavonoÏdes importantes, pour les mêmes activités par rapport à la fraction 7 23 notamment. De plus, le méthanol seul est plus facilement éliminé qu'un mélange méthanol / eau. Exemple 4 : Composition pour application par voie topique 5 Les inventeurs présentent ci-dessous un exemple de composition pour application par voie topique. Les extraits de parties aériennes de germandrée lisse peuvent être incorporés à divers produits cosmétiques tels que des eaux nettoyantes, des émulsions huile dans eau, des émulsions eau dans huile, des huiles, des laits, des lotions, des shampooings, des produits moussants et 10 sprays, dont trois exemples de composition sont présentés ci-dessous. Tableau 3 : Exemple de formulation pour un soin réparateur cutané composé de l'ingrédient cosmétique de germandrée lisse Ingrédients Nom INCI Pourcentage Eau Aqua QSP 100,00% Propylène glycol Propylene glycol 10,00 % Dehyquart® A-CA Cetrimonium Chloride 0,26 % Acide stéarique et acide Stearic acid (and) 1,70% palmitique Palmitic acid Lanette® SX Cetearyl Alcohol (and) Sodium Lauryl Sulfate (and) Sodium Cetearyl Sulfate 0,90 '%o SinnowaxO AO Cetearyl Alcohol (and) 0,90 % Ceteareth-33 Carbopol® Ultrez 10 Carbomer 0,80 % Polymer Triéthanolamine Triethanolamine 0,35 % Microcaree PHC Phenoxyethanol (and) 1,00 % Chlorphenesin (and) Glycerin Acide citrique Citric acid 0,06 % Silicone DC 1401 Cyclopentasiloxane 0,15% (and) Dimethiconol Colorant bleu CI 42090 0,20% 24 Huile essentielle de lavandin Lavandula hybrida ail 0,10 % Extrait de germandrée lisse 0,10 - 1,00 % Tableau 4 : Exemple de formulation pour un lait corps réparateur cutané composé de l'ingrédient cosmétique de germandrée lisse Ingrédients Nom INCI Pourcentage Eau Aqua 81,52% Propylène glycol Propylene glycol 1,00 % Glycérine Glycerin 2,00 % Sorbitol (solution 70 °/0) Sorbitol (and) Aqua 1,00 % Cutine FS 45 Palmitic Acid (and) 3,00% Stearic Acid Huile de paraffine Paraffinum Liquidium 6,40 % Lanette SX Cetearyl Alcohol (and) Sodium Lauryl Sulfate (and) Sodium Cetearyl Sulfate 2,50 % Triéthanolamine Triethanolamine 0,30 °A, Acide lactique Lactic Acid 0,10 % Acide tartrique Tartric Acid 0,05 % Acétate de vitamine E Vitamin E Acetate 0,03 % Extrait de germandrée - 1,00% lisse _ Parfum Parfum 0,10% Microcare PHC Phenoxyethanol (and) 1,00% Chlorphenesin 5 25 Tableau 5 : Exemple de formulation pour un shampoing réparateur composé de l'ingrédient cosmétique de germandrée lisse Ingrédients Nom INCI Pourcentage Eau Aqua 50, 00 % Texapon NSO IS Sodium Laureth Sulfate 40,00 % Dehyton K Cos Cocamidipropyl Betaine 5,00 cl/ci Microcare PHC Phenoxyethanol (and) 1,00% Chlorphenesin Extrait de germandrée - 1,00% lisse _ Parfum Parfum 1,00 % Chlorure de sodium Sodium Chloride 2,00 % REVENDICATIONS1. Extrait de parties aériennes de germandrée lisse contenant au moins 4 % en poids de polyphénols exprimé en milligrammes d'équivalent d'acide gallique, par rapport au poids de l'extrait sec. 2. Extrait selon la revendication précédente comprenant au moins 1 % en poids de flavonotcles exprimé en milligramme d'équivalent de quercétine, par rapport au poids de l'extrait sec. 3. Extrait selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel les parties aériennes sont choisies parmi le groupe comprenant des feuilles, des tiges, des fleurs, des graines. 4. Extrait de parties aériennes de germandrée lisse caractérisé en ce qu'il est susceptible d'être obtenu par un procédé comprenant les étapes successives suivantes : (a) dispersion et extraction, dans un solvant adapté, de parties aériennes de germandrée lisse, le solvant étant un solvant aqueux et/ou alcoolique et/ou glycérolique et/ou glycolique ; (b) centrifugation et/ou filtration du mélange obtenu suite à l'étape (a) et obtention d'un filtrat ; (c) le cas échéant, ultrafiltration et/ou diafiltration et/ou nanofiltration du filtrat obtenu suite à l'étape (b) ; (d) le cas échéant, décoloration et/ou désodorisation du filtrat obtenu suite à l'étape (b) ou à l'étape (c) ; (e) récupération de l'extrait de parties aériennes de germandrée lisse. 5. Extrait selon la revendication précédente dans lequel le solvant de l'étape (a) est choisi parmi un solvant ou un mélange de solvants présentant un moment dipolaire compris entre 0 et 6 D. 27 6. Extrait selon l'une quelconque des deux revendications précédentes dans lequel la quantité de parties aériennes de germandrée lisse introduite dans le solvant est comprise entre 1/20 et 1/1, préférentiellement 1/5, le ratio 5 étant en poids de parties aériennes sèches / poids du solvant. 7. Extrait selon l'une quelconque des trois revendications précédentes dans lequel le procédé comprend après l'étape (e) une étape de fractionnement de l'extrait obtenu à l'étape (e) par un solvant ou un mélange de solvants, notamment un mélange d'éther diéthyl igue et de méthanol. 8. Extrait selon la revendication précédente dans lequel le solvant de l'étape de fractionnement comprend un ratio éther diéthylique / méthanol compris entre 80:20 et 20:80 en volume, préférentiellement 80:20. 15 9. Extrait selon l'une quelconque des cinq revendications précédentes dans lequel le procédé comprend après l'étape (e) une étape (f) de séchage de l'extrait éventuellement sur un support. 20 10. Composition comprenant un extrait selon l'une quelconque des revendications précédentes et de préférence un excipient approprié. 11. Composition selon la revendication précédente comprenant une quantité de 0,10% à 1 % dudit extrait de germandrée lisse. 25 12. Composition selon l'une quelconque des deux revendications précédentes caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique. 30 13. Composition selon l'une quelconque des trois revendications précédentes formulée pour être administrée par voie topique. 28 14. Extrait selon l'une des revendications 1 à 9 ou composition selon l'une quelconque des revendications 10 à 13 pour son utilisation pour la protection et la réparation du tissu cutané. 5 15. Extrait selon l'une des revendications 1 à 9 ou composition selon l'une quelconque des revendications 10 à 13 pour son utilisation pour favoriser la cicatrisation des plaies. 16. Extrait selon l'une des revendications 1 à 9 ou composition selon l'une quelconque des revendications 10 à 13 pour son utilisation pour éliminer les cicatrices. 17. Extrait selon l'une des revendications 1 à 9 ou composition selon l'une quelconque des revendications 10 à 13 pour son utilisation pour prévenir 15 et/ou traiter les lésions cutanées. 18. Extrait selon l'une des revendications 1 à 9 ou composition selon l'une quelconque des revendications 10 à 13 pour son utilisation pour prévenir et/ou atténuer des altérations de la peau dues au vieillissement. 20