Brevet FR3075205A1 — publié le 20190621

La presente invention concerne une chitine, un chitosan ainsi qu'un procede de preparation de chitine et/ou chitosan a partir d'insectes. Selon ('invention, par « chitine », on entend un polymere compose majoritairement d'unites glucosamine et N-acetyl-glucosamine, lesdites unites pouvant etre optionnellement substituees par des acides amines et/ou des peptides. 10 Par « compose majoritairement », on entend que ledit polymere comporte entre 55% et 98% en poids, de preference entre 75 et 90% en poids d'unites glucosamine et N-acetyl-glucosamine. La chitine serait le deuxieme polymere le plus synthetise dans le monde vivant apres la cellulose. En effet, la chitine est synthetisee par de nombreuses especes 15 du monde vivant: elle constitue en partie l'exosquelette des crustaces et des insectes et la paroi laterale qui entoure et protege les champignons. Plus particulierement, chez les insectes, la chitine constitue ainsi 3 a 60% de leur exosquelette. Par « chitosan », on entend selon la presente invention les produits de desacetylation de la chitine. La limite usuelle entre le chitosan et la chitine est 20 determinee par le degre d'acetylation : un compose ayant un degre d'acetylation inferieur a 50% est nomme chitosan, au-dela, un compose ayant un degre d'acetylation superieur a 50% est nomme chitine. Les applications de la chitine et/ou du chitosan sont nombreuses: cosmetique (composition cosmetique), medicale et pharmaceutique (composition pharmaceutique, 25 traitement des brOlures, biomateriaux, pansements corneens, fils chirurgicaux), dietetique et alimentaire (alimentation humaine notamment en cenologie et alimentation animale, plus specifiquement en aquaculture et aviculture), technique (agent filtrant, texturant, floculant ou adsorbant notamment pour la filtration et depollution de ('eau), etc. En effet, la chitine et/ou le chitosan sont des materiaux biocompatibles, 30 biodegradables et non toxiques. Usuellement, la chitine et le chitosan sont obtenus a partir des differentes especes synthetisant la chitine, telles que celles citees ci-avant, et notamment a partir de crustaces ou d'insectes. II est particulierement avantageux d'obtenir de la chitine et du chitosan a partir 35 d'insectes, ces derniers representant une matiere premiere abondante et renouvelable. L'obtention d'une chitine et/ou d'un chitosan de purete elevee est recherchee dans de nombreuses applications, telles que par exemple en cosmetique et en pharmacie. Une purete elevee limite notamment les risques d'allergie, de fievre locale ou generalisee, relatifs a ('application de produits cosmetiques ou pharmaceutiques comportant de la chitine et/ou du chitosan. De telles reactions peuvent en effet etre provoquees par les impuretes telles que les acides amines residuels, les cendres ou encore des lipides. L'invention concerne donc une chitine dont la purete par difference est superieure a 97,75%. Dans le cadre de la presente demande, pour mesurer la purete, les teneurs en impuretes connues, a savoir en acides amines, lipides et cendres, sont soustraites a la valeur de purete absolue (100%) pour obtenir la valeur de la purete estimee par difference. Ainsi, par exemple, un echantillon qui contient 30% d'acides amines, 10% de lipides et 1% de cendres, se voit des lors attribuer une purete par difference de 100- 30-10-1=59%. La chitine selon l'invention, qui presente une purete par difference elevee, possede ainsi des teneurs faibles en acides amines, lipides et cendres. La chitine selon l'invention presente avantageusement une purete par difference superieure ou egale a 98%, de preference superieure ou egale a 98,1%. La teneur en acides amines de la chitine selon l'invention est de preference determinee selon la methode NF EN ISO 13904 pour le tryptophane et NF EN ISO 13903 pour les autres acides amines. L'abondance relative, exprimee en pourcentage, peut etre calculee en rapportant la teneur de chaque acide amine a la teneur totale en acides amines. Dans toute la demande, lorsqu'aucune date n'est precisee pour un reglement, une norme ou une directive, it s'agit du reglement, de la norme ou de la directive en vigueur a la date de depot. Les methodes de determination de la teneur en matiere grasse (lipides) sont bien connues de l'homme du métier. A titre d'exemple et de maniere preferee, la determination de cette teneur sera effectuee en adaptant la methode du reglement CE 152/2009. La methode de determination de la teneur en cendres est bien connue de l'homme du métier. De preference, cette teneur est determinee selon la norme NF V18-101. Avantageusement, la chitine selon l'invention comporte moins de 1,2% en poids d'acides amines sur le poids sec total de chitine. De preference, la chitine selon l'invention comporte moins de 1% en poids, plus preferentiellement moins de 0,9% en poids, encore plus preferentiellement moins de 0,8% en poids, et encore plus preferentiellement moins de 0,75% en poids d'acides 5 amines sur le poids sec total de chitine. Avantageusement, les acides amines residuels presents dans la chitine selon l'invention consistent en : Cysteine, Valine, Histidine, Lysine, Tryptophane ou une combinaison de deux ou plus de ceux-ci, de preference en une combinaison de tous ces acides amines. 10 Avantageusement, la chitine selon l'invention comporte moins de 2% en poids de cendres sur le poids sec total de chitine. La chitine selon l'invention comporte de preference moins de 1,6% en poids, plus preferentiellement moins de 1,4% en poids, encore plus preferentiellement moins de 1,2% en poids de cendres sur le poids sec total de chitine. 15 Avantageusement, la chitine selon l'invention comporte moins de 1% en poids, de preference moins de 0,5% en poids, plus preferentiellement moins de 0,2% en poids de lipides sur le poids sec total de chitine. Encore plus preferentiellement, la chitine selon l'invention ne comporte pas de lipides. 20 Avantageusement, la chitine selon l'invention a une masse moleculaire superieure ou egale a 450 kg.mo1-1, de preference superieure ou egale a 500 kg.mo1-1, plus preferentiellement superieure ou egale a 600 kg.mo1-1. La masse moleculaire est determinee grace a la mesure de la viscosite par chute de bille. 25 De preference, la masse moleculaire est determinee selon une methode de mesure de la viscosite par chute de bille basee sur celle decrite dans la publication suivante : « Pacheco et al. ; Structural characterization of chitin and chitosan obtained by biological and chemical methods ; Biomacromolecules ; 12, 3285-3290, 2011 ». Cette methode est notamment utilisee dans l'Exemple 1. 30 De preference, la chitine selon l'invention est une chitine isolee. Par chitine « isolee », on entend une chitine qui a ete isolee ou extraite de son milieu naturel. Plus particulierement, dans le cadre de la presente demande, la chitine est isolee ou extraite d'insectes, plus specifiquement de cuticules d'insectes. 35 L'invention concerne egalement un chitosan dont la purete par difference est superieure a 97,75%. De preference, la purete par difference du chitosan selon l'invention est superieure ou egale a 98%, plus preferentiellement superieure ou egale a 98,1%. La purete par difference du chitosan selon l'invention est mesuree de la meme 5 maniere qu'indique ci-avant pour la chitine. Avantageusement, le chitosan selon l'invention a une masse moleculaire superieure ou egale a 250 kg.mo1-1, de preference superieure ou egale a 300 kg.mo1-1. De preference, le chitosan selon l'invention est un chitosan isole. Par chitosan « isole », on entend un chitosan qui a ete obtenu a partir d'une 10 chitine isolee ou extraite de son milieu nature!. Plus particulierement, dans le cadre de la presente demande, le chitosan est obtenu a partir d'une chitine isolee ou extraite d'insectes, plus specifiquement de cuticules d'insectes. L'invention concerne egalement un procede d'obtention de chitine et/ou 15 chitosan, a partir d'insectes, comprenant les etapes suivantes : - la separation des cuticules de la partie molle des insectes, - ('hydrolyse enzymatique des cuticules par une protease, pour obtenir un residu solide, et - le traitement basique du residu solide. 20 Le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention permet l'obtention d'une chitine et/ou d'un chitosan de purete elevee. En outre, le procede selon l'invention, et plus particulierement l'etape d'hydrolyse enzymatique, permet de reduire certains inconvenients inherents a l'etape de traitement basique subsequente, comme par exemple reduire la quantite de base 25 utilisee lors de cette etape. Cette etape permet egalement la recuperation d'un hydrolysat. Par « insectes », on entend des insectes a n'importe quel stade de developpement, tel qu'un stade adulte, larvaire ou un stade de nymphe (stade intermediaire). Avantageusement, les insectes mis en oeuvre dans le procede selon 30 l'invention sont a un stade larvaire lorsque les insectes sont des holometaboles, a un stade de nymphe (stade intermediaire) lorsque les insectes sont des heterometaboles, ou le cas echeant a un stade adulte. Les insectes mis en oeuvre dans le procede selon l'invention peuvent etre comestibles. 35 Avantageusement, les insectes preferes pour la mise en oeuvre du procede selon l'invention sont par exemple les coleopteres, les dipteres, les lepidopteres, les isopteres, les orthopteres, les hymenopteres, les blattopteres, les hernypteres, les heteropteres, les epherneropteres et les mecopteres, de preference, les coleopteres, les dipteres, les orthopteres, les lepidopteres ou leurs mélanges, encore plus 5 preferentiellement les coleopteres. Les coleopteres preferentiellement mis en oeuvre dans le procede selon l'invention appartiennent aux families des Tenebrionidae, Melolonthidae, Dermestidae, Coccinellidae, Cerambycidae, Carabidae, Buprestidae, Cetoniidae, Dryophthoridae, ou leurs mélanges. 10 Plus preferentiellement, it s'agit des coleopteres suivants : Tenebrio molitor, Alphitobius diaperinus, Zophobas morio, Tenebrio obscurus, Tribolium castaneum et Rhynchophorus ferrugineus, ou leurs mélanges. Encore plus preferentiellement, it s'agit de Tenebrio molitor. Le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention comprend une 15 etape de separation des cuticules de la partie molle des insectes. La cuticule est la couche externe (ou exosquelette) secretee par l'epiderme des insectes. Elle est en general formee de trois couches : l'epicuticule, l'exocuticule et l'endocuticu le. Par « partie molle », on vise la chair (comportant notamment les muscles et les 20 visceres) et le jus (comportant notamment les liquides biologiques, l'eau et l'hemolymphe) des insectes. En particulier, la partie molle ne consiste pas en le jus des insectes. La separation des cuticules de la partie molle des insectes peut etre effectuee a l'aide de tout type de separateur adapt& 25 Selon un premier mode de realisation, la separation des cuticules de la partie molle est realisee a l'aide d'un separateur a bande. Selon un second mode de realisation, la separation des cuticules de la partie molle est realisee a l'aide d'un filtre presse. Cette etape de separation des cuticules de la partie molle des insectes est plus 30 amplement decrite dans l'etape 2 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention ci-apres. Cette separation des cuticules de la partie molle de l'insecte permet notamment de separer la chitine de la partie molle. En effet, les cuticules obtenues a ('issue de cette etape de separation presentent une teneur en chitine elevee de l'ordre de 10 35 a 30% en poids sur le poids total de cuticules, comme indique ci-apres. En particulier, l'etape de separation des cuticules de la partie molle s'effectue sans qu'aucune etape prealable de broyage des insectes, notamment sous forme de particules, n'ait ete effectuee. Le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon !Invention comprend 5 avantageusement une etape d'abattage prealable a l'etape de separation des cuticules de la partie molle. Cette etape d'abattage est plus amplement decrite dans l'etape 1 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention ci-apres. Avantageusement, suite a l'etape 1 d'abattage, les insectes sont directement 10 utilises pour la mise en oeuvre de l'etape 2 de separation des cuticules de la partie molle des insectes, c'est-a-dire que les insectes ne sont soumis a aucun traitement, tel qu'un broyage, une congelation ou une deshydratation entre l'etape 1 et l'etape 2. Le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention comprend une etape d'hydrolyse enzymatique des cuticules par une protease, pour obtenir un residu 15 solide, suite a l'etape de separation des cuticules de la partie molle des insectes. Avantageusement, l'hydrolyse enzymatique est effectuee pendant une duree comprise entre 3 et 10 heures, preferentiellement comprise entre 4 et 8 heures. On notera que dans le cadre de la presente demande, et sauf stipulation contraire, les gammes de valeurs indiquees s'entendent bornes incluses. 20 De preference, l'hydrolyse enzymatique est realisee a une temperature comprise entre 40 et 80°C, preferentiellement comprise entre 50 et 70°C. Avantageusement, l'hydrolyse enzymatique est realisee a un pH compris entre 6 et 8, preferentiellement entre 6,5 et 7,5. L'hydrolyse enzymatique peut etre realisee avec une seule protease ou 25 alternativement avec un mélange d'enzymes contenant au moins une protease, plus preferentiellement un mélange d'enzymes contenant plusieurs proteases, tel qu'un mélange contenant une endoprotease et une exoprotease, ou une protease et une polysaccharase. L'enzyme ou le mélange d'enzymes est introduit(e) a une quantite allant de 0,2 30 a 10% en poids, preferentiellement de 1 a 8% en poids, plus preferentiellement de 3 a 7% en poids par rapport au poids de cuticules (humides) soumises a l'hydrolyse enzymatique. En termes d'activite enzymatique, la quantite d'enzyme ou de mélange d'enzymes introduite est equivalente a une activite comprise entre 2000 et 5000 SAPU 35 (« Spectrophotometric Acid Protease Unit »), de preference comprise entre 3000 et 4000 SAPU, pour 100 g en poids humide, avec une humidite de 30 a 70%, de substrat a transformer, c'est-a-dire de cuticules d'insectes. Cette etape d'hydrolyse enzymatique des cuticules est plus amplement decrite dans l'etape 3 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention 5 ci-apres. Le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention comprend une etape de traitement basique du residu solide, suite a l'etape d'hydrolyse enzymatique des cuticules. Avantageusement, le traitement basique est realise a l'aide d'une base forte. 10 Avantageusement, la base forte est choisie parmi l'hydroxyde de sodium ou soude, de potassium, d'ammonium. De preference, la base forte est l'hydroxyde de sodium. De preference, la base utilisee pour le traitement basique est sous forme d'une solution basique aqueuse. 15 Dans ce cas, la concentration molaire de la base en solution aqueuse est avantageusement comprise entre 0,1 et 5 moll-1, de preference comprise entre 0,5 et 2 moll-1, encore plus preferentiellement egale a 1 moll-1 (par exemple soude molaire). De preference, la concentration de la base est ajustee de maniere a obtenir un 20 ratio base en poids sec en g : cuticules en poids sec en g : eau en poids en g compris entre 0,1 : 0,45 : 2 et 0,8 : 0,45: 15, de preference d'environ 0,36 : 0,45 : 9,23. Cette etape de traitement basique des cuticules est plus amplement decrite dans l'etape 4 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention ci-apres. 25 Avantageusement, l'etape de traitement basique des cuticules est suivie d'une etape de recuperation de la chitine. Cette etape de recuperation de la chitine est plus amplement decrite dans l'etape 5 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention ciapres. 30 Optionnellement, le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention comprend en outre une etape de lavage de la chitine. Cette etape optionnelle de lavage de la chitine est plus amplement decrite dans l'etape 6 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention ciapres. 35 Optionnellement, le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention comprend en outre une etape de sechage de la chitine. Cette etape optionnelle de sechage de la chitine est plus amplement decrite dans l'etape 7 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention ci-apres. 5 La chitine pouvant etre commercialisee sous forme de poudre, le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention peut optionnellement comprendre une etape de broyage de Ia chitine. Cette etape optionnelle de broyage de Ia chitine est plus amplement decrite dans l'etape 8 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention 10 ci-apres. L'etape de broyage peut egalement etre effectuee afin de favoriser Ia reaction de desacetylation, qui permet de preparer du chitosan a partir de chitine. L'etape de desacetylation, qui vise a transformer Ia chitine en chitosan, n'est donc mise en oeuvre que lorsque le produit souhaite est le chitosan. 15 Cette etape de desacetylation de Ia chitine est plus amplement decrite a l'etape 9 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention ci-apres. Avantageusement, l'etape de desacetylation de Ia chitine est suivie d'une etape de recuperation du chitosan. Cette etape de recuperation du chitosan est plus amplement decrite dans 20 l'etape 10 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention ci- apres. Optionnellement, le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention comprend en outre une etape de sechage du chitosan. Cette etape optionnelle de sechage du chitosan est plus amplement decrite a 25 l'etape 11 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention ci- apres. On notera que les etapes 6 a 8, 11 mentionnees ci-avant, et decrites plus amplement dans le procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention ci-apres, sont optionnelles. Toutefois, le procede d'obtention de chitine et/ou 30 chitosan selon l'invention comprend avantageusement une ou plusieurs de ces etapes, de preference toutes ces etapes. On notera par ailleurs que les caracteristiques des etapes 1 a 11 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention, qui sont decrites ciapres, ne sont pas limitees a une mise en oeuvre dans ledit procede detaille, mais 35 s'appliquent a tous les modes de realisation du procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon ('invention decrits dans la presente demande, independamment du nombre d'etapes prevu dans ces modes de realisation. Ces caracteristiques s'appliquent egalement a un procede particulier d'obtention de chitine et a un procede particulier d'obtention de chitosan selon 5 ('invention, decrits ci-apres. L'invention vise donc plus particulierement un procede particulier d'obtention de chitine, a partir d'insectes, comprenant les etapes suivantes : - I'abattage des insectes, - Ia separation des cuticules de Ia partie molle des insectes, 10 - ('hydrolyse enzymatique des cuticules par une protease, pour obtenir un residu solide, - le traitement basique du residu solide, et - Ia recuperation de Ia chitine. Ce procede comprend donc les etapes 1 a 5 du procede detaille d'obtention de 15 chitine et/ou chitosan ci-apres et avantageusement une ou plusieurs des etapes optionnelles 6 a 8 de ce procede detaille. L'invention concerne egalement Ia chitine susceptible d'être obtenue par le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon ('invention, ou par le procede particulier d'obtention de chitine selon ('invention. 20 L'invention vise donc egalement un procede particulier d'obtention de chitosan, a partir d'insectes, comprenant les etapes suivantes : - I'abattage des insectes, - Ia separation des cuticules de Ia partie molle des insectes, - ('hydrolyse enzymatique des cuticules par une protease, pour obtenir un 25 residu solide, - le traitement basique du residu solide, - Ia recuperation de Ia chitine, - Ia desacetylation de Ia chitine, et - Ia recuperation du chitosan. 30 Ce procede comprend donc les etapes 1 a 5, 9 et 10 du procede detaille d'obtention de chitine et/ou de chitosan ci-apres et avantageusement une ou plusieurs des etapes optionnelles 6 a 8, 11 de ce procede detaille. L'invention concerne egalement le chitosan susceptible d'être obtenu par le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon ('invention, ou par le procede 35 particulier d'obtention de chitosan selon ('invention. 10 La chitine et/ou le chitosan selon l'invention ainsi que la chitine et/ou le chitosan susceptible(s) d'être obtenu(s) par un procede selon l'invention peu(ven)t avantageusement etre utilise(s) dans diverses applications : - dans des compositions cosmetiques, pharmaceutiques, nutraceutiques ou 5 dietetiques, - comme biomateriaux pour traiter des brOlures en tant que seconde peau, pour realiser des pansements corneens ou des fils chirurgicaux, - comme agent filtrant, texturant, floculant et/ou adsorbant notamment pour la filtration et depollution de l'eau. 10 Procede &tale d'obtention de chitine et/ou chitosan selon l'invention - Etape 1 : Abattade des insectes Cette etape 1 d'abattage peut avantageusement s'effectuer par choc thermique, tel que par ebouillantage ou par blanchiment. Cette etape 1 permet d'abattre les 15 insectes tout en abaissant la charge microbienne (reduction du risque d'alteration et sanitaire) et en inactivant les enzymes internes des insectes pouvant declencher une autolyse, et ainsi un brunissement rapide de ceux-ci. Pour rebouillantage, les insectes, de preference des larves, sont ainsi ebouillantes a l'eau pendant 2 a 20 minutes, preferentiellement, 5 a 15 minutes. 20 De preference, l'eau est a une temperature comprise entre 87 a 100°C, preferentiellement 92 a 95°C. La quantite d'eau introduite lors de rebouillantage est determinee de la fagon suivante : le ratio du volume d'eau en ml sur le poids en g d'insecte est de preference compris entre 0,3 et 10, plus preferentiellement entre 0,5 et 5, encore plus 25 preferentiellement entre 0,7 et 3, encore plus preferentiellement de I'ordre de 1. Pour le blanchiment, les insectes, de preference des larves, sont blanchis a l'eau ou a Ia vapeur (buses ou lit de vapeur) a une temperature comprise entre 80 et 105°C, de preference entre 87 et 105°C, plus preferentiellement entre 95 et 100°C, encore plus preferentiellement 98°C ou bien a l'eau a une temperature comprise entre 30 90 et 100°C, preferentiellement entre 92 et 95°C (par buses d'aspersion) ou en mode mixte (eau + vapeur) a une temperature comprise entre 80 et 130°C, de preference entre 90 et 120°C, plus preferentiellement entre 95 et 105°C, encore plus preferentiellement 98°C. Lorsque les insectes sont blanchis uniquement a Ia vapeur, le blanchiment est avantageusement realise dans des blancheurs a vapeur a circulation 35 forcee (« forced steaming »). Le temps de sejour dans Ia chambre de blanchiment est 11 compris entre 5 secondes et 15 minutes, preferentiellement entre 1 et 7 minutes. Avantageusement, suite a l'etape 1 d'abattage, les insectes sont directement utilises pour Ia mise en oeuvre de l'etape 2 de separation des cuticules de Ia partie molle des insectes, c'est-a-dire que les insectes ne sont soumis a aucun traitement, tel 5 qu'un broyage, une congelation ou une deshydratation entre l'etape 1 et l'etape 2. - Etape 2 : Separation des cuticules de Ia partie molle des insectes L'etape 2 a pour objectif de separer les cuticules de Ia partie molle des insectes. La separation des cuticules de Ia partie molle des insectes peut etre effectuee a 10 ('aide de tout type de separateur adapt& Selon un premier mode de realisation, Ia separation des cuticules de Ia partie molle est realisee a ('aide d'un separateur a bande. Par « separateur a bande », on vise un dispositif permettant Ia separation de Ia partie solide de Ia partie molle d'un produit, et qui comporte une bande de serrage (ou 15 bande presseuse) et un tambour perfore. A titre d'exemple, un separateur a bande peut comprendre une bande de serrage et un tambour perfore, Ia bande de serrage entourant au moms une partie du tambour perfore. La bande de serrage permet I'apport et ('application des insectes contre le 20 tambour perfore de sorte a faire passer, par pression, Ia partie molle des insectes a travers les perforations du tambour, tandis que Ia partie solide des insectes (cuticules) reste a l'exterieur du tambour. Les cuticules peuvent ensuite etre recuperees a ('aide d'un couteau racleur. A titre d'exemple, on peut citer les separateurs a bande provenant de Ia societe 25 Baader, tels que les separateurs a bande 601 a 607 (« soft separator 601 to 607 »), ou encore les separateurs a bande SEPAmatic® de BFD Corporation (gamme 410 a 4000V). Avantageusement, le diametre des perforations du tambour est compris entre 0,5 et 3 mm, de preference entre 1 et 2 mm. 30 Concernant Ia pression, I'homme du métier est a meme de determiner Ia pression a exercer permettant Ia separation des cuticules de Ia partie molle des insectes. Selon un second mode de realisation, Ia separation des cuticules de Ia partie molle est realisee a ('aide d'un filtre presse. 35 Un filtre presse est compose de toiles filtrantes, et permet une separation selon 12 le principe de filtration sous pression. Avantageusement, le filtre presse utilise dans le procede d'obtention de chitine et/ou chitosan selon ('invention est un filtre presse a bandes. Un filtre presse a bandes comporte deux bandes de serrage perforees 5 (egalement appelees « toiles filtrantes »). Les insectes sont places entre les deux bandes de serrage perforees de sorte a faire passer, par pression, la partie molle des insectes a travers les perforations des bandes de serrage, tandis que la partie solide des insectes restent entre les deux bandes de serrage perforees. L'homme du métier est a merne de determiner le diametre des perforations des 10 bandes de serrage ainsi que la pression a exercer, permettant la separation des cuticules de la partie molle des insectes. A titre d'exemple, on peut citer le filtre presse a bandes (ou « presse a bandes ») provenant de la societe Flottweg, ou encore les filtres presses a bandes de la societe ATR Creations. 15 Cette etape de separation des insectes se distingue d'un pressage classique pouvant etre realise par exemple avec une presse mono-vis ou bi-vis en ce qu'elle permet une separation (nette) de la partie molle et des cuticules des insectes et non une separation d'un jus d'une fraction solide. Avantageusement, la separation des cuticules de la partie molle des insectes 20 est effectuee a l'aide d'un separateur a bande. Les cuticules obtenues dans l'etape 2 comportent entre 10 et 30%, de preference entre 15 et 25% en poids de chitine, sur le poids sec total de cuticules. La determination du taux de chitine est effectuee par extraction de celle-ci. A titre d'exemple, une methode de determination du taux de chitine pouvant etre utilisee 25 est la methode AOAC 991.43. - Etape 3: Hydrolyse enzymatique des cuticules par une protease L'hydrolyse enzymatique est effectuee par une protease ou peptidase. Dans la presente demande, les noms ou suffixes « peptidase » et « protease » sont utilises indifferemment pour designer une enzyme lysant une liaison peptidique des proteines. 30 Avantageusement, l'hydrolyse enzymatique est effectuee pendant une duree comprise entre 3 et 10 heures, preferentiellement comprise entre 4 et 8 heures. De preference, l'hydrolyse enzymatique est realisee a une temperature comprise entre 40 et 80°C, preferentiellement comprise entre 50 et 70°C. Avantageusement, l'hydrolyse enzymatique est realisee a un pH compris entre 35 6 et 8, preferentiellement entre 6,5 et 7,5. 13 L'hydrolyse enzymatique peut etre realisee avec une seule protease ou alternativement avec un mélange d'enzymes contenant au moins une protease, plus preferentiellement un mélange d'enzymes contenant plusieurs proteases, tel qu'un mélange contenant une endoprotease et une exoprotease, ou une protease et une 5 polysaccharase. De preference, la protease est choisie parmi le groupe constitue par les aminopepdidases, les metallocarboxypeptidases, les endopeptidases serine, les endopeptidases cysteine, les endopeptidases aspartiques, les metalloendopeptidases. Avantageusement, les enzymes peuvent etre choisies parmi les suivantes : Enzyme(s) Classe Numero Fournisseur EC Flavourzyme Amino-peptidases EC Novozyme 3.4.11.1 Fungal protease EC Bio-Cat 500 3.4.11.1 FoodPro PXT Endo-peptidases s6rine EC 3.4.21 Dupont Danisco Chymotrypsine EC Novozyme 3.4.21.1 Protamex EC 3.4.21 Novozyme Trypsine EC Novozyme 3.4.21.36 Alcalase EC Novozyme 3.4.21.4 PapaThe Endo-peptidases cysteine EC Bio-Cat 3.4.22.2 Bromelaine EC Bio-Cat (ananase) 3.4.22.32 Prolyve NP Endo-peptidases aspartique EC 3.4.23 Lyven Pepsine EC Sigma Aldrich 3.4.23.1 Neutral prot6ase Metallo-endo-peptidase EC Bio-Cat 3.4.24.28 FoodPro PAL Endo-peptidase fongique acide EC 3.4.21 Dupont Danisco Pancrealyve Exo & endo peptidase (cocktail n.a.* Lyven proteases + amylases) Izyme BA Prot6ase aspartique EC 3.4.23 Novozyme Sumizyme Cocktail enzymatique n.a.* Takabio - Shin 14 Enzyme(s) Classe Numero Fournisseur EC Nihon Neutrase Endoprotease EC 3.4.24 Novozyme base de Zn de f3 amyloliquefaciens Novozyme 37071 Protease n.a.* Novozyme *n.a. : non applicable Avantageusement, l'enzyme mise en oeuvre lors de l'hydrolyse est une endopeptidase aspartique, telle que la Prolyve NP. L'enzyme ou le mélange d'enzymes est introduit(e) a une quantite allant de 0,2 5 a 10% en poids, preferentiellement de 1 a 8% en poids, plus preferentiellement de 3 a 7% en poids par rapport au poids de cuticules (humides) soumises a l'hydrolyse enzymatique. En termes d'activite enzymatique, la quantite d'enzyme ou de mélange d'enzymes introduite est equivalente a une activite comprise entre 2000 et 5000 SAPU 10 (« Spectrophotometric Acid Protease Unit »), de preference comprise entre 3000 et 4000 SAPU, pour 100 g en poids humide, avec une humidite de 30 a 70%, de substrat a transformer, c'est-a-dire de cuticules d'insectes. II est usuel d'exprimer ('activite enzymatique d'une protease en SAPU. Cette activite enzymatique est mesuree en se basant sur le principe de la 15 mesure de liberation de la tyrosine a 275 nm lors de l'hydrolyse de la caseine par une enzyme proteolytique (Valley research SAPU Assay method, par Karen PRATT). SAPU (AA - x 11 g m x30 xC x1 SAPU/g = une unite spectrophotometrique de protease AA = absorbance correlee i = ordonnee a l'origine 20 11 = volume final de reaction M = coefficient directeur de la courbe de calibration 30 = temps de reaction (en minutes) C = concentration de l'enzyme (g/mL) dans la solution enzymatique ajoutee 1 = 1 mL volume de la solution d'enzyme ajoutee 25 L'activite enzymatique peut egalement etre exprimee a l'aide de ('activite specifique d'une enzyme. L'activite specifique d'une enzyme est ('activite catalytique exprimee en Unite 15 Internationale (I.U.) par unite de masse d'enzyme (par exemple : I.U./g d'enzyme). Avantageusement, Ia concentration de ('enzyme ou du mélange d'enzyme mis(e) en oeuvre est comprise entre 100 et 250 I.U. par gramme de matiere seche de cuticules, de preference entre 120 et 180 I.U. par gramme de matiere seche de 5 cuticules. Avantageusement, l'etape d'hydrolyse enzymatique s'effectue en presence d'eau, telle que de l'eau douce. La quantite d'eau mise en oeuvre lors de ('hydrolyse enzymatique est determinee de Ia facon suivante : le ratio du volume d'eau en L sur le poids en g de 10 cuticules humides est de preference compris entre 0,01 et 5, plus preferentiellement entre 0,05 et 2, encore plus preferentiellement entre 0,1 et 1. L'etape d'hydrolyse enzymatique est avantageusement realisee sous agitation. A l'issue de Ia reaction d'hydrolyse enzymatique des cuticules, le milieu reactionnel est ensuite separe, af in de recuperer un residu solide comprenant de Ia 15 chitine et un hydrolysat. L'etape de separation peut etre realisee par toute methode de separation appropriee. Ces methodes sont connues de l'homme du métier. A titre d'exemple, il est possible d'utiliser un extracteur de jus, tel que ceux commercialises par Ia societe Angel®. 20 Le residu solide recupere est avantageusement homogeneise, par exemple par melangeage. - Etape 4 : Traitement basique du residu solide Dans l'etape 4, le residu solide recupere a l'issue de l'etape 3 est soumis a un traitement basique, c'est-a-dire qu'il est mis en contact avec une base (ou agent 25 basique). Avantageusement, le traitement basique est realise a l'aide d'une base forte. Avantageusement, Ia base forte est choisie parmi l'hydroxyde de sodium ou soude, de potassium, d'ammonium. De preference, Ia base forte est l'hydroxyde de sodium. 30 De preference, Ia base utilisee pour le traitement basique est sous forme d'une solution basique aqueuse. Dans ce cas, Ia concentration molaire de Ia base en solution aqueuse est avantageusement comprise entre 0,1 et 5 moll-1, de preference comprise entre 0,5 et 2 moll-1, encore plus preferentiellement egale a 1 moll-1 (par exemple soude 35 molaire). 16 De preference, la concentration de la base est ajustee de maniere a obtenir un ratio base en poids sec en g : residu solide en poids sec en g : eau en poids en g compris entre 0,1 : 0,45 : 2 et 0,8 : 0,45: 15, de preference d'environ 0,36 : 0,45 : 9,23. Le traitement basique est avantageusement realise pendant une duree 5 comprise entre 5 et 60 heures, de preference pendant une duree comprise entre 5 et 50 heures. La duree du traitement basique pourra avantageusement etre adaptee selon les proprietes de la chitine que l'on souhaite obtenir, telles que sa blancheur (couleur blanche). 10 La duree du traitement basique pourra etre inferieure a 40 heures, voire inferieure a 30 heures, telle que par exemple 24 heures. Avantageusement, le traitement basique est realise a une temperature comprise entre 60 et 100°C, de preference comprise entre 80 et 100°C, plus preferentiellement d'environ 90°C. 15 Pour cela, le milieu reactionnel peut, par exemple, etre chauffe a l'aide d'un bain d'huile, d'un echangeur de chaleur ou d'un systeme de chauffage a double enveloppe, de sorte a atteindre la temperature souhaitee. L'etape de traitement basique est avantageusement realisee sous agitation. - Etape 5: Recuperation de Ia chitine 20 L'etape 5 de recuperation de la chitine, a partir du milieu reactionnel obtenu a la fin de l'etape 4, peut etre realisee par toute methode de recuperation appropriee. Ces methodes sont connues de l'homme du métier. A titre d'exemple, on peut citer la filtration, la centrifugation et la decantation. Avantageusement, la recuperation de la chitine est realisee par filtration. 25 - Etape (optionnelle) 6: Lavade de Ia chitine La chitine recuperee a ('issue de l'etape 5 est ensuite optionnellement levee. L'etape 6 de lavage de la chitine est avantageusement realisee a l'aide d'eau du robinet, de preference tiede, c'est-a-dire dont la temperature est comprise entre 15 et 60 °C. 30 De preference, le lavage est realise jusqu'a neutralisation du pH. - Etape (optionnelle) 7: Sechacie de Ia chitine La chitine est ensuite optionnellement sechee. De preference, l'etape de sechage est realisee a une temperature comprise entre 40 et 105°C, de preference a environ 60°C. 35 L'etape de sechage est realisee pendant une duree comprise entre 10 et 80 17 heures, de preference pendant environ 24 heures. Avantageusement, le sechage est realise a l'aide d'une etuve de sechage, telle que le modele FED 115 de la societe Binder®. Afin de preparer du chitosan a partir de la chitine, les etapes suivantes peuvent 5 en outre etre realisees : - Etape (optionnelle) 8: Broyage de Ia chitine La chitine obtenue a ('issue de l'etape 5, 6 ou 7 est ensuite optionnellement broyee, par exemple dans un broyeur ultracentrifuge a tamis. La production de chitosan a partir de chitine, par la reaction de desacetylation, 10 depend en grande partie de la taille des particules de chitine. Ainsi, un broyage fres fin de la chitine avant desacetylation permet d'augmenter significativement les rendements et la vitesse de la reaction de desacetylation, comme cela est illustre dans le Tableau 1 ci-apres : Broyage 30 s Broyage 45 s Broyage 60 s Broyage 120 s 50% des REVENDICATIONS1. Chitine dont la purete par difference est superieure a 97,75%. 2. Chitine selon la revendication 1, comportant moins de 1,2% en poids d'acides amines sur le poids sec total de chitine. 3. Chitine selon la revendication 1 ou 2, comportant moins de 2% en poids de cendres sur le poids sec total de chitine. 10 4. Chitosan dont la purete par difference est superieure a 97,75%. 5. Procede d'obtention de chitine et/ou chitosan, a partir d'insectes, comprenant les etapes suivantes : 15 - la separation des cuticules de la partie molle des insectes, - ('hydrolyse enzymatique des cuticules par une protease, pour obtenir un residu solide, et - le traitement basique du residu solide. 20 6. Procede selon la revendication 5, dans lequel la separation des cuticules de la partie molle des insectes est effectuee a ('aide d'un separateur a bande. 7. Procede selon la revendication 5, dans lequel la separation des cuticules de la partie molle des insectes est effectuee a ('aide d'un filtre presse. 25 8. Procede selon ('une quelconque des revendications 5 a 7, dans lequel la protease est choisie parmi le groupe constitue par les aminopepdidases, les metallocarboxypeptidases, les endopeptidases serine, les endopeptidases cysteine, les endopeptidases aspartiques, les metalloendopeptidases. 30 9. Procede selon ('une quelconque des revendications 5 a 8, dans lequel le traitement basique est realise avec une base forte. 10. Procede d'obtention de chitine, a partir d'insectes, comprenant les etapes 35 suivantes : - I'abattage des insectes, 27 - la separation des cuticules de la partie molle des insectes, - ('hydrolyse enzymatique des cuticules par une protease, pour obtenir un residu solide, - le traitement basique du residu solide, et 5 - Ia recuperation de Ia chitine. 11. Chitine susceptible d'être obtenue par le procede selon ('une quelconque des revendications 5 a 10. 12. Procede d'obtention de chitosan, a partir d'insectes, comprenant les etapes suivantes : - I'abattage des insectes, - la separation des cuticules de la partie molle des insectes, - ('hydrolyse enzymatique des cuticules par une protease, pour obtenir un residu solide, - le traitement basique du residu solide, - la recuperation de la chitine, - la desacetylation de la chitine, et - la recuperation du chitosan. 20 13. Chitosan susceptible d'être obtenu par le procede selon ('une quelconque des revendications 5 a 9, 12.