Brevet FR3086290A1 — publié le 20200327

COMPLEXES DE CYCLOHEPTYNE-COBALT CARBONYLES ET LEURS APPLICATIONS EN BIOCONJUGAISON OBJET DE L'INVENTION La présente invention concerne le domaine de la chimie « click » et, en particulier, de nouveaux alcynes cycliques protégés sous forme de complexes de cobalt pour des applications en bioconjugaison. ARRIERE-PLAN DE L'INVENTION Au début des années 2000, des réactions de conjugaison compatibles avec l'étude d'organismes vivants ont été développées. Ces réactions dites bio-orthogonales permettent d'étudier, et parfois même de visualiser, des phénomènes biologiques en temps réel, au sein ou à la surface d'un système vivant, tel qu'une cellule ou même un organisme. Parmi les différentes réactions de conjugaison existantes à l'heure actuelle, les réactions de chimie click, en particulier la cycloaddition entre un alcyne et un azoture, font partie des plus exploitées, notamment pour l'imagerie et l'étiquetage de biomolécules. Le couplage entre une molécule comportant un azoture, par exemple une protéine modifiée avec un azoture obtenue par conversion chimique ou par expression dans des bactéries auxotrophes, avec un alcyne, relié quant à lui à un agent diagnostique, permet de créer rapidement et sélectivement un lien entre les deux entités, sous la forme d'un motif triazole. Les avantages de cette réaction ont permis également d'étendre les applications à la conjugaison de biomolécules à un agent thérapeutique. En particulier, le développement de conjugués anticorps-médicament ou ADC (pour « Antibody-Drug Conjugate ») s'est récemment retrouvé au centre de l'attention des chercheurs. En effet, cette approche qui vise à cibler l'action d'un principe actif grâce à un processus de reconnaissance cellulaire médié par des anticorps permet de limiter les doses injectées pour une même efficacité, de diminuer les effets secondaires et/ou de considérer l'utilisation de molécules connues pour être efficaces mais trop peu sélectives. Plus particulièrement dans le cas du traitement d'un cancer, l'avantage du ADC est d'éliminer les cellules cancéreuses sans affecter les cellules saines. Le marché des ADC constitue donc un marché émergent prometteur. 2 Les avancées dans ce domaine sont donc intimement reliées au développement de composés efficaces assurant la conjugaison de la biomol écule avec l'agent thérapeutique ou diagnostique. Il a été notamment constaté que l'utilisation d'alcynes cycliques contraints (ou tendus) permettait de réaliser la réaction de cycloaddition avec un azoture, mais également avec une 5 nitrone ou un oxyde de nitrile, en l'absence de catalyseur. Le bicyclo[6.1.0]nonyne (BCN), décrit dans la demande WO 2011/136645, est l'un des alcynes cycliques contraints les plus utilisés pour la bioconjugaison. Cependant, sa réactivité n'est pas optimale et sa synthèse est relativement complexe, car elle nécessite notamment une séparation 10 des di astéréoi somères. Le 3,3,6,6-tetramethyl-thiacycloheptyne (TMTH) et ses dérivés sont des cycloheptynes qui ont été décrits par King et al. (Chem. Commun. 2012, 48, 9308) pour des applications en 15 bioconjugaison. Cependant, malgré leur bonne réactivité, la synthèse de tels composés est longue et complexe, ce qui limite leur utilisation et leur dissémination. TMTH Des composés présentant un motif cycloheptyne-hexacarbonyle dicobalt, en particulier le 20 composé (A), représenté par la formule ci-dessous, ont été décrits par Green (Synlett. 2001, 2, 243 et Eur. J. Org. Chem. 2008, 36, 6053). Ces composés ont été préparés par une double réaction de Nicholas entre un nucléophile bissilylé et un dérivé butyn-1,4-diéther protégé par un groupe hexacarbonyle dicobalt. L'absence de substituants sur le cycle formé et d'une seconde fonctionnalité ne permet toutefois pas d'utiliser ce type de composés en 25 bioconjugaison. 3 (C0),Co-Co(C0), (À) Brâse (RSC Adv. 2014, 4, 15493) et Tomooka (Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 1190) ont décrit la préparation des composés cycliques à 8 et 9 chaînons, tels que représentés par la 5 formule (B) : V X si ( RQ 24 - RGC(0)- avec R6 étant un alkyle en CI-CG, un cycloalkyle en C3-C12, un alcoxy en C1-C6, ou un aryle, et - R7S(0)2- avec 127 étant un alkyle en C1-C6, un cycloalkyle en C3-C12 ou un aryle, 5 et Z étant un groupe choisi parmi un atome de chlore, de brome et ORii où Ri est un hydrogène, un alkyle en Ci-C6, ou un aryle ; ou - R5-0-R5 où R5 représente un groupe choisi parmi : - R6C(0)- avec R6 étant un alkyle en Ci-C6, un cycloalkyle en C3-Cu, un alcoxy en C I-C6, ou un aryle, et 10 - R7S(0)2.- avec R7 étant un alkyle en CI-C6, un cycloalkyle en CI-Ci2 ou un aryle ; et les étapes (a) (b), (c), (d), et (e) telles que définies ci-dessus. Utilisation 15 Le composé de formule (I) selon l'invention contient une fonction alcyne protégée par un groupement dicobalt, et une seconde fonctionnalité réactive à l'extrémité de sa chaîne Q, de préférence un alcyne vrai, et est particulièrement adapté pour la bioconj ugaison d'une molécule cible à un agent, en particulier un agent diagnostique ou thérapeutique. 20 Dans le cadre de la présente invention, l'étiquetage, l'imagerie et/ou la modification de la molécule cible est réalisé par conjugaison de la molécule cible avec un agent adapté pour l'application recherchée (diagnostique ou thérapeutique) via un composé de formule (1) qui assure le lien entre ladite molécule cible et ledit agent. Par « conjugué », on entend ainsi un complexe molécule cible/composé de formule (1)/agent. 25 Cette conjugaison peut notamment être réalisée au moyen de réactions dites « click » ou de réactions de couplage. Des exemples de réactions « click » sont notamment les réactions de cycloaddition entre un alcyne et un 1,3-dipôle ou un 1,3-(hétéro)diène, les réactions d'hydrothiolation d'alcène (réaction « thiol-ène » entre un thiol et un alcène) ou d'alcyne (réaction « thiol-yne » entre un thiol et un alcyne). Des exemples de réactions de couplage sont 30 notamment des réactions d'estérification ou de formation d'amide. Le choix de la réaction utilisée pour la conjugaison est dépendant des fonctions réactives mises en jeu. On qualifie de « orthogonal » ou « bioorthogonal », toute réaction ou procédé pouvant se produire dans un système vivant, telle qu'une cellule ou un organisme vivant, sans interférer avec les réactions ou procédés biochimiques naturels dudit système vivant. 25 L'invention concerne une utilisation d'un composé de formule (I) pour l'étiquetage, l'imagerie et/ou la modification orthogonale d'une molécule cible. Par « molécule cible », on entend toute molécule, en particulier une biomolécule, comprenant 5 (ou modifiée avec) au moins une fonction réactive vis-à-vis d'un alcyne et/ou de la fonctionnalité à l'extrémité de la chaîne Q du composé de formule (I), en particulier un 1,3-dipôle, un 1,3-(hétéro)diène, une fonction thiol, amine, alcool, acide carboxylique, ester, anhydride, ou chlorure d'acide, et de préférence, un 1,3-dipôle. Des exemples de 1,3-dipôle sont notamment les azotures, les nitrones, les diazométhanes, les 10 oxydes de nitrile, ou les nitrilamines. Des exemples de 1,3-diène sont notamment le 1,3- butadiène, le 1,3-cyclohexadiène ou le furane. Des exemples de 1,3-hétérodiène sont notamment le 1-oxa-1,3-butadiène ou le 3-aza-1,3-butadiène. De manière préférée, ladite molécule cible comprend une fonction azoture. Par « biomolécule », on entend toute molécule naturellement présente dans un organisme 15 vivant. Des exemples de biomolécules sont notamment les anticorps, protéines, glycanes, protéoglycanes, lipides, enzymes, hormones, acides ou bases nucléiques. De préférence, la biomolécule est un anticorps. Ladite biomolécule comprenant (ou modifiée avec) ladite au moins une fonction réactive peut notamment être obtenue par expression de bactéries autotrophes, génie génétique ou conversion chimique. 20 Selon l'invention, un agent, en particulier un agent thérapeutique ou diagnostique, inclut toute molécule comprenant (ou modifié avec) au moins une fonction réactive vis-à-vis d'un alcyne et/ou de la fonctionnalité à l'extrémité de la chaîne Q du composé de formule (I), en particulier un 1,3-dipôle, un 1,3-(hétéro)diène, une fonction thiol, amine, alcool, acide carboxylique, ester, 25 anhydride, ou chlorure d'acide, et adaptée à l'application recherchée. De manière préférée, ledit agent comprend une fonction azoture. Des exemples d'agents utilisés pour l'étiquetage, l'imagerie et/ou la modification d'une molécule cible sont par exemple les fluorophores tels que Alexa Fluor 555, la fluorescéine, la rhodamine, la chromomycine, ou la cyanine 3, la biotine, les chaînes polyéthylène glycol (PEG) 30 ou polypropylène glycol (PPG), les isotopes radioactifs, les stéroïdes, les composés pharmaceutiques, les oligo- ou polysaccharides, les nucléotides, oligonucléotides ou polynucléotides, ou les étiquettes peptidiques telles que FLAG. 26 Selon un mode particulier, un composé de formule (I) est utilisé pour l'étiquetage, l'imagerie et/ou la modification orthogonale d'un anticorps. Selon ce mode, le composé de formule (I) conjugue un anticorps avec un agent thérapeutique. 5 Les conjugués (complexes molécule cible/composé de formule (I)/agent) peuvent être préparés par deux méthodes qui diffèrent selon l'ordre des étapes mises en oeuvre, en particulier l'étape de déprotection de l'alcyne cyclique du composé de formule (I). Selon un premier mode de réalisation, une méthode pour préparer un conjugué tel que défini 10 ci-dessus comprend les étapes successives suivantes : (1) une étape de déprotection de l'alcyne cyclique du composé de formule (I) ; (2) une étape de réaction du composé obtenu à l'étape (1) avec une molécule cible telle que définie ci-dessus ; et, (3) une étape de réaction du composé obtenu à l'étape (2) avec un agent tel que défini ci-dessus. 15 Cette méthode est notamment illustrée par la Figure 2 (« Méthode 2A »). L'étape (1) de déprotection comprend l'élimination du groupement dicobalt (Co2(CO)4(L)(L')) du composé de formule (I) pour restaurer la fonction alcyne cyclique. Cette déprotection peut 20 être réalisée en faisant réagir un composé de formule (I) avec un agent de déprotection adapté, notamment un N-oxyde d'amine tertiaire, tel que le N-oxyde de triméthylamine (TMANO) ou le N-oxyde de N-méthylmorpholine (NMO). De préférence, l'agent de déprotection est TMANO. L'étape (1) est avantageusement mise en oeuvre à une température comprise entre -10 °C et 50 25 °C. L'étape (1) est avantageusement mise en oeuvre dans un solvant organique tel que l'acétonitrile, ou dans l'eau. La quantité d'agent de déprotection est avantageusement comprise entre 2 et 10 équivalents, de préférence entre 3 et 8 équivalents, par rapport au composé de formule (I). 30 L'étape (2) comprend la réaction du composé déprotégé obtenu à l'étape (1) avec ladite molécule cible. Dans l'étape (2), une réaction se produit entre l'alcyne cyclique déprotégé du composé obtenu à l'étape (1) et la fonction réactive de ladite molécule cible, de préférence un azoture 27 L'étape (2) est avantageusement mise en oeuvre à une température comprise entre -10 °C et 50 °C. L'étape (2) est avantageusement mise en oeuvre dans un solvant organique tel que l'acétonitrile, ou dans l'eau. La quantité de molécule cible est avantageusement comprise entre 1 et 5 équivalents par rapport au composé déprotégé obtenu à l'étape (1). 5 Les étapes (1) et (2) sont avantageusement mises en oeuvre successivement en « one pot », c' està-dire sans isoler le composé obtenu à l'étape (1). Selon un mode préféré, les étapes (1) et (2) sont mises en oeuvre simultanément, autrement dit le composé de formule (I) et ladite molécule cible réagissent en présence d'un N-oxyde d'amine tertiaire. 10 L'étape (3) comprend la réaction entre la fonctionnalité à l'extrémité de la chaîne Q du composé obtenu à l'étape (2), de préférence un alcyne vrai, avec la fonction réactive dudit agent, de préférence un azoture. Selon un mode particulier, l'étape (3) est mise en oeuvre en présence d'un catalyseur tel que 15 CuSO4, et éventuellement d'ascorbate de sodium. L'étape (3) est avantageusement mise en oeuvre à une température comprise entre -10 °C et 50 °C. L'étape (3) est avantageusement mise en oeuvre dans un solvant organique tel que le tertbutanol, dans l'eau ou dans un mélange de ceux-ci. La quantité d'agent est avantageusement comprise entre 1 et 5 équivalents par rapport au composé obtenu à l'étape (2). La quantité de 20 catalyseur est avantageusement comprise entre 0,01 et 0,5 équivalents, de préférence entre 0,05 et 0,2 équivalents, par rapport au composé obtenu à l'étape (2). Il est bien entendu que les étapes (2) et (3) sont interchangeables en conjuguant par l'exemple l'agent dans un premier temps au composé déprotégé obtenu à l'étape (1), puis ensuite la 25 molécule cible. Selon un deuxième mode de réalisation, une méthode pour préparer un conjugué tel que défini ci-dessus comprend les étapes successives suivantes : (1') une étape de réaction du composé de formule (I) avec une molécule cible ; 30 (2') une étape de déprotecti on de l'alcyne cyclique du composé obtenu à l'étape (1') et, (3') une étape de réaction du composé obtenu à l'étape (2') avec un agent. Cette méthode est notamment illustrée par la Figure 2 (« Méthode 2B »). 28 L'étape (1') comprend la réaction entre la fonctionnalité à l'extrémité de la chaîne Q du composé de formule (1), de préférence un alcyne vrai, avec ladite molécule cible comprenant au moins une fonction réactive, de préférence un azoture. Les conditions expérimentales de l'étape (1') peuvent être similaires aux conditions expérimentales décrites ci-dessus pour 5 l'étape (3) de la méthode 2A. L'étape (2') de déprotection comprend l'élimination du groupement dicobalt (Co2(C0)4(L)(L')) du composé obtenu à l'étape (1') pour restaurer la fonction alcyne cyclique. Les conditions expérimentales de l'étape (2') peuvent être similaires aux conditions expérimentales décrites 10 ci-dessus pour l'étape (1) de la méthode 2A. L'étape (3') comprend la réaction entre l'alcyne cyclique du composé déprotégé obtenu à l'étape (2') avec un agent, qui comprend au moins une fonction réactive, de préférence un azoture. Les conditions expérimentales de l'étape (3') peuvent être similaires aux conditions expérimentales décrites ci-dessus pour l'étape (2) de la méthode 2A. 15 Il est bien entendu que les étapes (1') et (3') sont interchangeables en conjuguant par l'exemple l'agent dans un premier temps au composé de formule (I) puis ensuite la molécule cible. Les méthodes pour préparer un conjugué de ladite molécule cible et dudit agent à partir du 20 composé de formule (I) peuvent être réalisées in vitro ou in vivo. Selon un mode de réalisation particulier pour la préparation de conjugués, le composé de formule (I) est greffé sur un support solide. L'utilisation d'un support solide permet de faciliter les étapes de purification lors de la bioconjugaison, voire de s'en affranchir. Plus 25 particulièrement, l'utilisation d'un support solide permet d'éliminer efficacement les traces de cobalt pouvant contaminer le produit de bioconjugaison. Un support solide peut être notamment une silice, du verre ou une résine polystyrène éventuellement sur laquelle est greffé un autre polymère tel que le polyéthylène glycol. Ce 30 support solide est avantageusement fonctionnalisé avec au moins un groupement de liaison. Par « groupement de liaison », on entend tout groupement chimique capable de former une liaison avec un composé de formule (1), en particulier avec au moins un des atomes de cobalt (Co) du composé de formule (1), de sorte que ledit composé de formule (I) soit greffé au support solide. 29 Le groupement de liaison peut notamment être un groupement phosphino de formule -PR2 dans lequel R est un alkyle en C1-C6, un cycloalkyle en C3-C12, ou un aryle, de préférence un phényle. EXEMPLES 5 L'invention sera mieux comprise à la lumière des exemples suivants, qui sont donnés à titre purement illustratif et n'ont pas pour but de limiter la portée de l'invention, définie par les revendications annexées. 10 Exemple 1 : Sauf mention contraire, tous les produits commerciaux ont été utilisés sans purification préalable. Les spectres RMN 1H et 13C, ont été enregistrés sur un spectromètre Bruker Avance 1300 MHz (1H : 300 MHz, 111C, : 75,3 MHz). Les déplacements chimiques 5 pour les spectres RMN sont exprimés en ppm par rapport au pic résiduel du solvant. Les constantes de couplage 15 J sont exprimées en hertz (Hz). Les abbréviations suivantes sont utilisées pour la multiplicité des pics : s, singulet ; d, doublet ; t, triplet ; m, multiplet ; dd, doublet de doublet ; dt, doublet de triplet. Les rendements sont donnés pour les produits isolés après purification. Les analyses CCM (Chromatographie sur Couche Mince) ont été effectuées avec les plaques Fluka Silica Gel 60 F254. Les spectres de masse haute résolution ont été obtenus à l'aide d'un spectromètre 20 de masse tandem Qq-TOF (API Q-STAR Pulsari, Applied Biosystems). Les spectres infra- rouge ont été enregistrés sur un spectromètre FT-IR Perkin Elmer Spectrum 100. ) Préparation du diacétate de 2,5-ditnethylhex-3-ytze-2,5-diyle I AcO OAc 1 25 A une solution de 2,5-dimethylhex-3-yne-2,5-diol (5 mmol, 710 mg, 1 éq.) dans le dichlorométhane anhydre sous atmosphère d'azote (C = 0,1 M), ont été ajoutés la triéthylamine (50 mmol, 6,9 mL, 10 éq.), la DMAP (5 mmol, 610 mg, 1 éq.) puis l'anhydride acétique (25 mmol, 2,5 mL, 5 éq.) à température ambiante. La solution résultante a été agitée à température ambiante pendant 16 heures. Après évaporation sous vide du solvant, le résidu brut a été purifié 30 directement par chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole/Et20 7:3). Le composé 1 a été obtenu sous la forme d'un liquide incolore (m = 848 mg, rendement = 75%). RIVIN 1H (300 MHz, CDCI3): S [ppm] = 2,00 (s, 6H); 1,62 (s, 12H). 30 2) Préparation du composé 2a (C0)3co Co(C0)3 OAc AcO 2a A une solution du composé I (1,2 mmol, 270 mg, 1 éq.) dans le di chl orométhane anhydre sous atmosphère d'azote (C = 0,1 M) sous atmosphère d'azote, a été ajouté Co2COs (1,2 mmol, 450 5 mg, 1 éq.) à température ambiante. La solution résultante a été agitée pendant 4 heures à température ambiante, puis le solvant a été évaporé sous vide. Le complexe a ensuite été purifié par chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole/Et20 8:2). Le composé 2a a été obtenu sous la forme d'un solide rouge (m= 660 mg, rendement = 99%). Rf: 0,62 (8:2 cyclohexane/Et20). 10 RMN rH (300 MHz, CDC13): 6 [ppm] = 2,01 (s, 6H); 1,93 (m, 12H). RMN 13C (75 MHz, CDC13): 6 [ppm] = 170,0; 83,6; 28,9; 22,3. FT-IR (D/cm-1, KBr): 2992, 2094, 2053, 2025, 1740, 1453, 1368, 1228, 1135, 1018, 937. 3) Préparation du 1,3-bis(triméthylsily1)-2-méthylènepropane 2b 15 2b Une solution de 3-chloro-2-chlorométhylprop-1-ène (8 mmol, 1 mL, 1 éq.) et chlorure de triméthylsilyle (16 mmol, 2 mL, 2 éq.) dans le THF (5 mL) a été ajoutée à une suspension de morceaux de lithium fraîchement coupés (56 mmol, 400 mg, 7 éq.) et de naphthalène (0,8 mmol, 100 mg, 0.1 éq.) dans le THF (10 mL) à -78 °C sous atmosphère d'azote. Le mélange résultant 20 a ensuite été remonté à température ambiante, tout en maintenant l'agitation pendant 24 heures, jusqu'à apparition d'une solution rougeâtre. Le mélange a ensuite été traité avec de l'eau (10 mL), extrait avec de l'éther diéthylique (3 x 20 mL), et la phase organique a été séchée sur sulfate de sodium. Le brut du composé 2b a été obtenu et utilisé ainsi sans purification (m = 1,1 g, rendement brut = 68%). 25 RIVIN [H (300 MHz, CDC13): S [ppm] = 4,39 (s, 2H); 1,49 (s, 4H); 0,05 (s, 18H). 31 4) Préparation du composé 3 (cc), co co (00), 3 A une solution du composé 2a (1,2 mmol, 660 mg, 1 éq.) dans le dichlorométhane anhydre (C = 0,1 M) sous atmosphère d'azote, a été ajouté le l,3-bis(triméthylsilyl)-2-méthylènepropane 5 2b (1,2 mmol, 240 mg, 1 éq.). La solution résultante a été refoidie à -40 °C puis BF3.OEt2 (2,4 mmol, 0,72 mL, 2 éq., C= 46,5%) a été additioné. La solution résultante a été agitée pendant 1 heure à -40 °C, puis le solvant a été évaporé sous vide. Le composé a été purifié par chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole 100 %). Le composé 3 a été obtenu sous la forme d'un solide rouge (m= 245 mg, rendement = 45%). Rf: 0,71 (éther de pétrole 100 %). 10 RMIN 'H (300 MHz, CDC13): S [ppm] = 4,96 (s, 2H); 2,28 (s, 4H); 1,27 (s, 12H). RMN 13C (75 MHz, CDC13): 6 [ppm] = 143,9; 118,8; 52,6; 37,9; 32,1. FT-IR KBr): 2960, 2087, 2045, 2020, 1862, 1453, 1379, 1247, 836. 5) Préparation du composé 4 (CO)3C0 Co (C0)3 OH 15 4 A une solution du composé 3 (0,5 mmol, 227 mg, 1 éq.) dans le THF anhydre (C = 0,1 M) sous atmosphère d'azote, a été ajouté BH3.THF (0,75 mmol, 0,75 mL, 1,5 éq., C = 1 M dans le THF) à 0 °C. La solution résultante a été agitée à température ambiante, jusqu'à consommation totale du substrat (typiquement 16 heures - contrôle CCM) puis NaBO3.4H20 (2,5 mmol, 382 mg, 5 20 éq.) en suspension dans l'eau (2 mL) a été ajoutée au mélange à température ambiante. Le mélange résultant a été vigoureusement agité pendant 4 heures à température ambiante (mélange biphasique). Le mélange a ensuite été traité avec de l'eau (10 mL), extrait avec de l'acétate d'éthyle (3 x 10 mL), et la phase organique a été séchée sur sulfate de sodium anhydre. 32 Le composé a été purifié par chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole/Et20 8:2). Le composé 4 a été obtenu sous la forme d'un solide rouge (m=142 mg, rendement = 60%). Rf: 0,25 (7:3 cyclohexane/acétate d'éthyle). RMN IF1 (300 MHz, CDC13): 5 [ppm] = 3,45 (t, J = 6,1 Hz, 2H); 2,13-1,96 (m, 1H); 1,79 (d, J 5 = 13,5 Hz, 2H); 1,34 (d, J = 13,3 Hz, 2H); 1,29 (s, 12H). RMN 13C (75 MHz, CDC13): S [ppm] = 69,1; 46,9; 37,9; 35,6; 33,8; 31,9. FT-IR (u/cm-1, KBr): 3371, 2994, 2929, 2086, 2043, 2019, 1591, 1469, 1379, 1362, 1248, 858, 837. 10 6) Préparation du composé 5 (co),Co_co(co), 5 A une solution du composé 4 (0,3 mmol, 141 mg, 1 éq.) dans le dichlorométhane anhydre (C = 0,1 M) sous atmosphère d'azote, ont été ajoutés le chlorure de 5-hexynoyle (0,45 mmol, 59 mg, 1,5 éq.) et la triéthylamine (0,3 mmol, 41 mL, 1 éq.) à température ambiante. La solution 15 résultante a été agitée à température ambiante, jusqu'à consommation totale du substrat (typiquement 1 heure, contrôle CCM). Après évaporation sous vide du solvant, le résidu brut a été purifié directement par chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole /Et20 8:2). Le composé 5 a été obtenu sous la forme d'un solide rouge (m = 86 mg, rendement = 51%). Rf 0,44 (8:2 éther de pétrole/Et20). 20 RIVLN 1H (300 MHz, CDC13): S [ppm] = 3,94 (d, J = 6,4 Hz, 2H); 2,50 (t, J = 7,4 Hz, 2H); 2,30 (td, J = 6,9 et 2,6 Hz, 2H); 2,00 (t, J = 2,6 Hz, 1H); 1,94 - 1,83 (m, 2H); 1,74 (d, J = 13,0 Hz, 2H); 1,47 - 1,39 (m, 2H); 1,32 (s, 12H). RIV1N 13C (75 MHz, CDC13): S [ppm] = 173,0; 109,9; 70,1; 69,2; 46,8; 37,7; 33,6; 32,9; 32,2; 31,7; 23,6; 17,9. 25 FT-IR (u/cm-1, KBr): 3313, 2966, 2937, 2086, 2044, 2019, 1737, 1591, 1469, 1451, 1381, 1363, 1157, REVENDICATIONS1 Composé de formule (I) L(C0)2C0 CO (C0)2L1 s R1 R3 R2 R4 dans lequel r Ri, R2, R3 et R4 représentent chacun indépendamment un alkyle en C1-C6, un cycloalkyle en C3-C12, ou un hétérocycloalkyle en C3-Cu, et/ou Ri et R. forment ensemble avec le carbone auquel ils sont rattachés un cycle choisi parmi un cycloalkyle en C3-C 12 et un hétérocycloalkyle en C3-C12, et/ou R3 et R4 forment ensemble avec le carbone auquel ils sont rattachés un cycle choisi parmi un cycloalkyle en C3-C12 et un hétérocycloalkyle en C3-C 12 ; r Q représente une chaîne comprenant à son extrémité une fonctionnalité permettant la conjugaison à une molécule ; et r L et L' représentent chacun indépendamment un ligand donneur de deux électrons choisi parmi - un ligand CO, - un ligand azoté, tel que le diazote, une pyridine, une amine N(Ra)(Rb)(Rc), ou un nitrile Rd-CN, - un ligand phosphoré, tel qu'une phosphine P(Re)(R)(Rg) ou un phosphite P(OR1)(0R)(ORJ), Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rr, Rg, R1,, Ri, et R, étant choisis indépendamment parmi un hydrogène, un alkyle en Ci-C6, un cycloalkyle en C3-C12, un aryle et un hétéroaryle, et - un ligand carbéni que C(Rk)(R), Rk et Ri étant choisis indépendamment parmi un alkyle en C1-C6, un cycloalkyle en C3-C12, un aryle et un hétéroaryle, ou formant ensemble avec le carbone auquel ils sont rattachés un cycloalkyle en C3-C12 ou un hétérocycloalkyle en C3-C12. 34 2. Composé selon la revendication I, dans lequel Ri, R2, R3 et R4 représentent un méthyle. 3. Composé selon la revendication I ou 2, dans lequel L et L' représentent un ligand CO. 5 4. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel Q est une chaîne -X-Y, dans lequel : - X représente une unité divalente choisie parmi -(alkyle en Ci-C12)-, -(cycloalkyle en C3- C 12)-, -(aryle)-, -(hétéroaryle)-, -(aryle)-(alkyle en CI-C6)-, -(alkyle en C l-C6)-(aryle)-, 10 -(hétéroaryle)-(alkyle en CI-CG)-, -(alkyle en CI-C6)-(hétéroaryle)-, -(alkyle en CI-C6)- (aryle)-(alkyle en CI-CG)-, -(alkyle en CI-C6)-(hétéroaryle)-(alkyle en CI-C6)-, et (alkyle en Ci-C6)-(cycloalkyle en C3-C12)-(alkyle en Ci-C6)- ; et - Y est une fonctionnalité choisie parmi un alcool, amine, acide carboxylique, ester, chlorure d'acide, anhydride, alcyne vrai, et alcène. 15 5. Composé selon la revendication 4, dans lequel X est un alkyle en Ci-C12, de préférence un alkyle en C3, et Y est un alcyne vrai. 6. Composé selon l'une quelconque des revendications I à 5, dans lequel le composé est de 20 formule (CO), co_co(co)s 7. Procédé de préparation d'un composé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, comprenant les étapes successives suivantes : 25 (a) une étape de réaction du composé de formule (11) : R3 35 R2 R50 dans lequel - Ri, R2, Ri et R-1 représentent chacun indépendamment un alkyle en Ci-C6, un cycloalkyle en C3-C12, ou un hétérocycloalkyle en 03-C i2, et/ou Ri et R2 forment 5 ensemble avec le carbone auquel ils sont rattachés un cycle choisi parmi un cycloalkyle en C3-C12 et un hétérocycloalkyle en C3-C12, et/ou R3 et Ra forment ensemble avec le carbone auquel ils sont rattachés un cycle choisi parmi un cycloalkyle en C3-C12 et un hétérocycloalkyle en C3-C12, et - Rs, représente un groupe choisi parmi : 10 - R6C(0)- avec R6 étant un alkyle en C un cycloalkyle en Ci-C. 12, un alcoxy en Ci-CG, ou un aryle, et - R7S(0)2- avec R7 étant un alkyle en Ci-C6, un cycloalkyle en C3-Ci 2 ou un aryle, avec un complexe dicobalt Co2(CO)6(L)(L'), dans lequel L et L' représentent chacun 15 indépendamment un ligand donneur de deux électrons choisi parmi : - un ligand CO, - un ligand azoté, tel que le diazote, une pyridine, une amine N(Ra)(Rb)(Rc), ou un nitrile Rd-CN, - un ligand phosphoré, tel qu'une phosphine P(Rc)(Rr)(Rg) ou un phosphite 20 P(ORii)(OR)(ORi), Ra, Rb, Rc, Ra, Re, RF, Rg, Rh, RI, et R, étant choisis indépendamment parmi un hydrogène, un alkyle en Ci-CG, un cycloalkyle en C3-C 12, un aryle et un hétéroaryle, et, - un ligand carbénique C(Rk)(121), Rk et Ri étant choisis indépendamment parmi un alkyle en Ci-CG, un cycloalkyle en C3-C12, un 25 aryle et un hétéroaryle, ou formant ensemble avec le carbone auquel ils sont rattachés un cycloalkyle en C3-C12 ou un hétérocycloalkyle en C3-C12, de préférence L et L' représentent un ligand CO ; (b) une étape de réaction du composé obtenu à l'étape (a) avec un composé de formule (III) : 36 Rto R10 Si Si I I R9 R9 Ra (111), dans lequel Rs, R9, et Rio représentent chacun indépendamment un alkyle en Ci-C6 ou un aryle, de préférence un méthyle ; (c) une étape de réaction du composé obtenu à l'étape (b) avec un borane, de préférence BI-li ; (d) une étape de réaction du composé obtenu à l'étape (c) avec un oxydant, de préférence le perborate de sodium ; et (e) une étape de réaction du composé obtenu à l'étape (d) avec un composé de formule (IV) . 0 CI (W), dans lequel Q représente une chaîne comprenant à son extrémité une fonctionnalité permettant 10 la conjugaison à une molécule, de préférence une chaîne -X-Y, où : X représente une unité divalente choisie parmi -(alkyle en Ci-Ci2)-, -(cycloalkyle en C3 - C 12)-, -(aryle)-, -(hétéroaryle)-, -(aryle)-(alkyle en CI-C6)-, -(alkyle en C i-Co)-(aryle)-, -(hétéroaryle)-(alkyle en Cr-05)-, -(alkyle en Ci-05)-(hétéroaryle)-, -(alkyle en Cr-C6)(aryle)-(alkyle en Ci-C6)-, -(alkyle en Ci-C6)-(hétéroaryle)-(alkyle en Ci-C6)-, et - 15 (alkyle en Ci-Co)-(cycloalkyle en C3-C12)-(alkyle en Ci-Co)- ; et fr Y est une fonctionnalité choisie parmi un alcool, une amine, un acide carboxylique, un ester, un chlorure d'acide, un anhydride, un alcyne vrai, et un alcène ; ou un dérivé ester, acide carboxylique, ou anhydride de celui-ci. 20 8. Procédé selon la revendication 7, dans lequel Ri, R2, R3 et R4 représentent un méthyle. 9. Procédé selon la revendication 7 ou 8, dans lequel R5 représente un groupe R5C(0)- dans lequel R6 est un méthyle. 25 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, dans lequel Q est une chaîne -X- Y où X est un alkyle en Ci-C12, de préférence un alkyle en C3, et Y est un alcyne vrai. 37 11. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour l'étiquetage, l'imagerie et/ou la modification orthogonale d'une molécule cible. 5