Brevet FR3087448A1 — publié le 20200424

LIGNÉE PDC MODIFIÉE POUR SECRÉTER UNE CYTOKINE DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne une lignée PDC (cellules dendritiques 5 plasmacytoïdes) modifiée génétiquement pour secréter une cytokine, et son utilisation pour augmenter l'expansion de cellules spécifiques d'antigènes dans des immunothérapies. ETAT DE LA TECHNIQUE Des approches d'immunothérapie cherchant à favoriser la production de cellules 10 spécifiques d'antigènes sont connues. Une approche utilisant une lignée de cellules dendritiques plasmacytoïdes ou PDC (appelée « PDC*Iine ») pour induire des cellules cytotoxiques spécifiques d'antigènes à partir de cellules mononucléées de donneur (CMN), en particulier des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC), a été développée par les inventeurs (WO 2009/138489). Cette approche consiste à mettre en 15 culture des CMN en présence de « PDC"line » irradiée et chargée avec un antigène, les cellules mononuclées partageant au moins une molécule HLA avec « PDC*Iine » (HLAA2, par exemple). Les travaux menés par les demandeurs ont montré l'intérêt de cette approche thérapeutique et son potentiel important dans le traitement par immunothérapie de 20 cancers tels que le mélanome ou les cancers du poumon (Aspord & al., 2012, données non publiées). La capacité d'induire l'expansion des cellules spécifiques d'antigènes est un facteur déterminant de la mise en oeuvre de ces nouvelles approches thérapeutiques. Il est connu, notamment de la demande WO 2009/138489 que la présence de cytokines est 25 nécessaire à cette expansion. Le protocole expérimental décrit consiste, la première semaine, en une coculture de PDC*Iine irradiée et chargée avec un antigène avec des CMN réalisée sans cytokine, puis, la deuxième semaine, en une nouvelle stimulation avec la PDC*Iine irradiée chargée avec un antigène et de l'IL-2. L'importance des cytokines dans les mécanismes de développement des différentes 30 réponses immunitaires est bien connue de l'homme du métier, notamment pour l' IL-2 et l'IL15 (Waldmann, Nat Rev 2006). L'IL-2 est produite principalement par des lymphocytes T activés, tandis que l'IL-15 et son récepteur associé IL-15Ra (Dubois & al., 2002), est produite par des monocytes ou des cellules dendritiques myéloïdes (M DC) (Jakobisiak & al., 2011). La modification transitoire ou permanente de MDC générées in vitro pour 35 produire de l'IL15 a été décrite dans le but d'augmenter la fonction de cellules (van den Bergh & al., 2015, Steel & al (2010) ou Zhang & al. (2014)) dans l'induction de réponse antitumorale (NK, anticorps ou T spécifique d'antigène). 2 Même si les MDC et les PDC sont toutes les deux des cellules présentatrices d'antigène, ce sont deux types cellulaire différents capables d'induire différents types de réponses immunitaires selon l'origine du pathogène ou de l'antigène et du contexte environnemental en général, différenciées par un certain nombre de caractéristiques : origine, localisation tissulaire, expression de Toll-like Recepteur, production de cytokines, notamment. Aucun de ces articles sur les MDC modifiées pour exprimer IL15 ne mentionne la possibilité d'employer des PDC, ni même d'envisager un effet au moins équivalent sur des PDC avec de l'IL15 ou même de l'IL2. Alors que la méthode d'activation et d'expansion classique décrite dans WO 10 2009/138489 permet déjà d'obtenir des niveaux d'expansion particulièrement élevés (Aspord & al., 2010), il reste Intéressant d'améliorer cette nouvelle approche thérapeutique au niveau de l'expansion des cellules spécifiques d'antigènes. EXPOSE DE L'INVENTION L'invention concerne donc une nouvelle lignée de PDC génétiquement modifiée 15 pour exprimer une cytokine choisie parmi l'interleukine 15 (IL15) et l'interleukine 2 (IL2). En particulier, les cellules PDC génétiquement modifiées selon l'invention sont chargées avec un ou plusieurs antigènes, sous forme peptidique. L'invention concerne aussi l'utilisation de la nouvelle lignée PDC génétiquement modifiée pour l'amplification de cellules spécifiques d'antigènes, en particulier des cellules 20 mononuclèées (CMN), plus particulièrement des cellules mononuclèes du sang périphérique (PBMC). L'invention concerne aussi un produit de combinaison ou kit, comprenant d'une part une lignée de PDC génétiquement modifiée selon l'invention et d'autre part des cellules mononuclèées (CMN), en particulier pour une utilisation simultanée dans le traitement de 25 maladies par immunothérapie. L'invention concerne également une composition vaccinale comprenant une lignée PDC génétiquement modifiée selon l'invention et un véhicule approprié pour son administration. DESCRIPTION DES FIGURES 30 La Figure 1 représente la mesure de l'expression de la molécule CD34 sur la lignée PDC*Iine non-transduite (à gauche) ou transduite par le surnageant rétroviral codant pour I'll-2 ou l'IL-15. La Figure 2 représente l'expression de l'IL2 ou de l'IL15 par la lignée PDC"line transduite par le surnageant rétroviral IL2 ou IL15.Les cytokines sont détectées au niveau 35 de l'ARN messager (A, normalisée par rapport au G6PDH) ou dans le surnageant des cellules transduites (B, en pg/ml). La Figure 3 représente l'expansion de lymphocytes T CDB+ anti-Melan-A après 3 coculture de 14 jours de la lignée PDC, non modifiée ou modifiée génétiquement par l'IL2 ou l'IL15, chargée avec l'antigène Melan-A, et des cellules mononucléées de 3 donneurs sains. Les lymphocytes T CD8+ anti-Melan-A sont détectés par cytométrie en flux en utilisant des multiméres HLA-A2/Melan-A. En A, une expérience représentative est 5 montrée; en B, les résultats de 3 expériences sont représentés (% de cellules CD8+ multimères). La Figure 4 représente la fonction des cellules CD8+ issues de la coculture de 14 jours. La fonction des cellules cytotoxiques est objectivée par la détection d'IFNy intracytoplasmique après stimulation par la lignée cible (T2) chargée avec le peptide utilisé dérivé de Melan-A. En A, l'illustration de la détection intracytoplasmique de la cytokine sur l'ensemble des cellules CD8+ spécifiques et non-spécifiques, obtenues avec les différentes lignées. En B, le pourcentage de cellules CD8+ positives pour l'IFNy dans les cellules non-spécifiques (Multimer-) et les cellules spécifiques (Multimer+) générées avec chaque lignée. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION L'invention concerne donc une nouvelle lignée de PDC génétiquement modifiée pour exprimer une cytokine choisie parmi I L15 et IL2. Les lignées PDC utiles selon l'invention pour être génétiquement modifiées, également appelées lignées PDC initiales, sont bien connues de l'homme du métier, notamment décrites dans EP 1 572 989 et WO 2009/138489. Il s'agit en particulier de cellules obtenues à partir de cellules de leucémie à PDC. On citera en particulier les lignées GEN2.2 et GEN3 déposées sous les numéros 2938 et 3110 à la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, 75015Paris) et toutes lignées issues de cellules leucémiques à PDC. Par lignées issues de cellules leucémiques à PDC, on entend selon l'invention des lignées dérivées de nodules tumoraux consécutif à l'injection de cellules leucémiques à PDC à des souris immunodéficients, ces nodules étant dilacérés pour obtenir une suspension cellulaire qui est mise en culture dans un milieu synthétique favorisant la croissance de ladite lignée. Par expression d'une cytokine choisie parmi IL15 et IL2, on entend selon l'invention la sécrétion de la cytokine par la lignée modifiée génétiquement. Les séquences des cytokines sont bien connues de l'homme du métier. On citera en particulier, pour l'IL2 la séquence protéique identifiée sous la référence UniProtKB P60568 et la séquence codante identifiée sous la référence Ensembl ENSG00000109471 et pour l'IL-15 la séquence protéique identifiée sous la référence UniProtKB P40933 et la séquence codante identifiée sous la référence Ensembl ENSG00000164136. Les variants ou fragments de ces cytokines qui ont la même activité que les séquences ci-dessus sont 4 également partie de l'invention. De préférence les cytokines sont les cytokines humaines identifiées ci-dessus. Par lignée PDC génétiquement modifiée, on entend selon l'invention toute lignée transduite par une particule virale permettant l'intégration du gène dans le génome de la 5 lignée, ce virus pouvant être un adénovirus, un lentivirus ou un rétrovirus. De préférence on utilisera un rétrovirus de type Moloney murine leukemia virus (Mo-MLV). Ces particules rétrovirales étant produites par la lignées d'encapsulation HEK 293T, expriment naturellement ou après transfection les séquences gag/pol et env rétrovirales. L'homme du métier saura préparer une particule virale comprenant une séquence 10 codante pour le ou les gènes d'intérêt et les éléments de régulations, en particulier les séquences employées pour permettre l'expression des cytokines dans des cellules de mammifères génétiquement modifiées. On citera notamment les séquences d'enveloppe virale, permettant l'entrée du virus dans la cellule, telles que 4070A, MK-G, HA, LCMV, RD114, HIV, VSV, MLV, GALV, BAEV), les séquences promotrices permettant l'initiation 15 de la transcription du gène d'intérêt, telles que les séquences de type LTR (Long Terminal Repeat) modifiées ou non, PGK, EF-1, CMV, SFFV, RSV, ou SV40, les séquences augmentant l'efficacité de transduction telle que cPPT, les séquences facilitant ou initiant la traduction, telle que la séquence IRES (Internai Ribosome Entry Site) (Pelletier, Nature 1988), ou la séquence Kozak (Kozak, Nucl acid Res 1991), des séquences favorisant 20 l'expression de la protéine, telle que la séquence WPRE (Donello et al., J. Virol 1998). De préférence on emploiera les séquences LTR, IRES, Kozak et VVPRE. Les méthodes de transduction des cellules de PDC avec une particule virale pour obtenir une nouvelle lignée de PDC génétiquement modifiée pour exprimer une cytokine choisie parmi IL15 et IL2 sont également connues de l'homme du métier. On citera en 25 particulier l'utilisation d'agents polycationiques, tels que le polybrene ou le DOGS (dioctadecylamidoglycyl spermine), ou d'agents favorisant les contacts entre virus et cellules d'intérêt, tels que des fragments de fibronectine (Rétronectin). De préférence on emploiera la méthode utilisant la Rétronectine. De préférence, la cytokine seule est exprimée. Dans certains cas, notamment pour 30 IL15, la lignée PDC exprime également le récepteur de la cytokine, en particulier le récepteur IL15Ra. Le récepteur IL15Ra est bien connu de l'homme du métier, en particulier sa séquence protéique Dans le cas où la lignée PDC modifiée selon l'invention n'exprime pas ledit récepteur, la lignée PDC pourra également être modifiée pour exprimer ledit récepteur, 35 selon les méthodes usuelles de la technique. Les cellules PDC modifiées selon l'invention sont particulièrement utiles pour l'amplification de cellules spécifiques d'antigènes, en particulier des cellules 5 mononucléées (CMN), plus particulièrement des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC). Bien qu'elles puissent être employées directement, les cellules PDC modifiées selon l'invention sont de préférence associées à des antigènes, en particulier des antigènes 5 peptidiques. Dans le cadre de la présente invention le terme « antigène » définit une molécule ou une partie de la molécule reconnue par des cellules du système immunitaire et capable de déclencher une réaction immunitaire à médiation cellulaire. Les antigènes selon la présente invention peuvent être des antigènes natifs ou modifiés, tumoraux ou microbiens 10 (notamment bactériens ou viraux), tels que des peptides, protéines, glycopeptides, glycoprotéines, protéines phosphorylées. L'homme du métier choisira le ou les antigènes à associer à la lignée PDC modifiée selon l'invention en fonction de la maladie à traiter. Dans une mise en oeuvre préférée de l'invention les antigènes sont des peptides 15 susceptibles d'être obtenus à partir de protéines antigéniques d'origine tumorale ou virale. Ces peptides sont bien connus de l'homme du métier, décrits notamment dans de nombreuses demandes de brevets ou brevets, en particulier EP 1 485 719, EP 2 113 253, US 7 087 712, US 7 528 224, WO 94/020127, WO 95/02553, WO 98/22589, WO 2000/003693, WO 2000/020445, WO 2000/052163, WO 2000/078806, WO 2004/067023, 20 WO 2007/036638, WO 2007/039192, WO 2008/045286, WO 2011/012720, WO 2015/0965572 et WO 2016/179573. De nombreux antigènes tumoraux susceptibles d'être employés sont également décrits dans des bases de données disponibles en ligne, comme par exemple aux adresses http://cvc.dfci.harvard.edu/tadb/ ou 25 https://docs.google. com/spreadsheets/u/1/d/1BFn5_mu7ogUh35NsLUozj9EB2rbLtj7XjMyt 7BoYNxg/pubhtml?widget=true&headers=false#gid=1609210712 ou encore dans des publications telles que Djureinovic & al. (JCI Insight. 2016;1(10):e86837). De même de nombreux antigènes viraux susceptibles d'être employés sont également décrits dans des bases de données disponibles en ligne comme par exemple 30 aux adresses https://www.iedb.org/ ou http://crdd.osdd.net/raghava/antigendb/. Selon un mode particulier de réalisation de l'invention les peptides susceptibles d'être obtenus à partir d'antigènes tumoraux peuvent être choisis parmi les peptides compris dans la séquence des antigènes CEA, NY-BR1, Her-2/Neu, PSA, RAGE-1, PRAME, TRP-2, MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A9, MAGE-A10, 35 MAGE-C1, MAGE-C2, Multi-MAGE, MUC-1, p53, hTERT, survivin, melan-A/MART-1, GP100, tyrosinase, CAMEL ou NY-ESO1, modifiés ou non, seuls ou en association. De même tout antigène choisi parmi des protéines mutées ou des protéines issues de la 6 transcription d'un ARN messager généré par un nouveau cadre de lecture d'une séquence nucléique (néo-antigène). Selon un autre mode de réalisation de l'invention, les peptides susceptibles d'être obtenus à partir d'antigènes viraux peuvent être choisis parmi les peptides compris dans 5 la séquence des antigènes env, nef, gp41, gp120, gag ou pol du virus HIV, HBc ou HBs du virus HBV, core, NS3 ou NS5 du virus HCV, Flu M1 du virus influenza, CMVpp65 du virus CMV, BMLF1, LMP2, EBNA-2 ou EBNA-3a du virus EBV, LTA ou VOP1 du virus BKV, la nucléoprotéine du virus Hatan, NS3 du virus de la Dengue, E6 et E7 du virus HPV, la proteine E, NS3, ou BS4b du West Nile Virus, modifiés ou non, seuls ou en 10 association. De manière préférentielle, on citera Melan-A, gp100, Tyrosinase, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A10, Multi-MAGE, CTAG2, CTAG1, Survivin, Her-2/Neu, hTERT et MUGI. Selon un premier mode préféré de réalisation de l'invention, les cellules PDC génétiquement modifiées sont chargées avec un ou plusieurs antigènes. On dira 15 également qu'elles sont pulsées, c'est à dire incubées avec un ou plusieurs antigènes. L'invention concerne donc une lignée PDC génétiquement modifiée telle que définie ci-dessus et dans les exemples, chargée avec un des antigènes listés précédemment. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, les cellules sont également génétiquement modifiées pour exprimer lesdits antigènes. Les outils de modification 20 génétiques sont les mêmes que ceux employés pour modifier les cellules PDC pour exprimer les cytokines. Dans le cas des antigènes, l'homme du métier choisira également les éléments génétiques qui permettent d'exprimer les antigènes au niveau cellulaire de façon à ce qu'ils soient transformés en épitopes et présentés par les molécules HLA, in vitro ou in vivo. De tels éléments sont également bien connus de l'homme du métier (Hu, 25 Immunological review 2011). Pour un usage thérapeutique, les lignées PDC génétiquement modifiées selon l'invention, définies précédemment et ci-après, sont des lignées irradiées. Les méthodes et conditions d'irradiation pour inhiber la croissance et les capacités de multiplication des lignées PDC transformées selon l'invention sont bien connues de 30 l'homme du métier, notamment décrites dans WO 2009/138489. L'invention concerne aussi l'utilisation de la nouvelle lignée PDC génétiquement modifiée pour l'amplification de cellules spécifiques d'antigènes, en particulier des cellules mononucléées (CMN), plus particulièrement des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC). 35 L'invention concerne aussi la nouvelle lignée PDC génétiquement modifiée pour son utilisation en thérapie, en particulier pour le traitement de maladies par immunothérapie. L'invention concerne aussi un produit de combinaison ou kit, comprenant d'une part 7 une lignée de PDC génétiquement modifiée selon l'invention et d'autre part des cellules mononucléées (CMN), en particulier pour une utilisation simultanée dans le traitement de maladies par immunothérapie. La maladie traitée dépendra essentiellement des antigènes qui seront associée à la 5 lignée selon l'invention, avec par exemple les antigènes tumoraux étant employés pour le traitement des cancers et les antigènes viraux pour le traitement des infections virales. L'invention concerne également une composition vaccinale comprenant une lignée PDC génétiquement modifiée selon l'invention et un véhicule approprié pour son administration. 10 L'invention concerne également une méthode de prévention et/ou de traitement des cancers et/ou maladies infectieuses caractérisée en ce qu'on injecte une lignée de PDC génétiquement modifiée irradiée et pulsée selon l'invention dans chez un patient qui a besoin du traitement, les cellules spécifiques d'antigènes dudit patient et les PDC partageant au moins un allèle du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH). 15 L'invention concerne aussi une méthode de prévention et/ou de traitement des cancers et/ou maladies infectieuses caractérisée en ce qu'on injecte chez un patient qui a besoin du traitement les effecteurs spécifiques obtenus par incubation d'une lignée de PDC selon l'invention avec au moins un antigène, les PDC pulsées, éventuellement irradiées, étant ensuite mises en contact avec des cellules spécifiques d'antigènes dudit 20 patient et cultivées, les PDC et les cellules spécifiques d'antigènes partageant au moins un allèle du complexe majeur d'histocompatibilité (CM H). Par « effecteur spécifique » on entend selon l'invention les cellules de l'immunité capables de reconnaître un antigène spécifique ou un produit issu de cet antigène, en particulier des effecteurs cytotoxiques et plus particulièrement des lymphocytes T 25 spécifiques de l'antigène utilisé, et notamment CD8+. Ces méthodes sont notamment décrites dans la demande WO 2009/138489. EXEMPLES Exemple 1 : Génération des lignées PDC*Iine modifiées génétiquement pour exprimer IL-2 ou 1L15. 30 Les séquences des gènes d'intérêt codant pour 1L2 (SEQ ID NO 1) et 1L15 (SEQ ID NO 2) ont été synthétisées par ThermoFischer (https://www.thermofisher. com/frffrihome/life-science/cloning/gene-synthesis/geneart- gene-synthesis.html) et fournis dans un plasmide permettant l'amplification du plasmide après transformation des bactéries DH5alpha (NEB). La séquence d'intérêt (IL2 ou 1L15) 35 a ensuite été sous-clonée dans le plasmide SFGACD34 (Quintarelli, Blood 2007, généreusement fourni par le Dr M. Pule) entre les sites de restriction Sal-1 et Mul-I à l'aide de la technologie Gibson Assembly (NEB). La présence d'une séquence tronquée de 8 CD34 dans le plasmide SFGACD34 (sans domaine intracytoplasmique) permet la sélection des cellules exprimant le gène d'intérêt. Une suspension rétrovirale a ensuite été obtenue par triple transfection de la lignée HEK-293T avec le plasmide SFGACD34- 1L2 ou SFGACD34-1L15 et les plasmides d'expression MoMLV gag-pol pEQ-PAM3(-E) et 5 RD114 env (généreusement fournis par les Dr M. Pule et Dr M. Collins (Cosset, J Virol 1995)) en présence de GeneJuice (VWR). Les cellules de la lignée PDC ont été par la suite transduites avec le surnageant rétroviral correspondant à l'IL2 ou l'IL15 en présence de rétronectine (Takara) et l'expression de CD34 a été mesurée, reflétant l'efficacité de transduction. Cette lignée est 10 dérivée des cellules d'un patient ayant une leucémie PDC (Chaperot, Blood 2001), patient dont sont issues les lignées GEN2.2 et GENS. Comme le montre la figure 1, plus de 90% de PDC*line ont été transduites. Cette expression de CD34 est corrélée à l'expression des gènes 1L2 ou 1L15. En effet, l'analyse par RT-qPCR (technique TagMan, Roche) montre une expression relative, 15 par rapport au gène de la G6PDH, élevée pour l'IL2 ou I'l L15, d'un facteur supérieur à 20 ou 30 respectivement (Figure 2A). Par ailleurs, en utilisant la technique CBA (BD) ou ELISA (R&D), les deux cytokines sont retrouvées produites sous forme soluble dans le surnageant des lignées modifiées génétiquement correspondantes à la concentration de 20 000 pg/ml et de 2 500 pg/ml pour l'IL2 et pour l'IL15 respectivement (Figure 2B). 20 Exemple 2 : Expansion de lymphocytes CDB+ après co-culture de CMN avec les lignées transduites chargées avec un peptide tumoral. La capacité des lignées modifiées a ensuite été évaluée à l'aide d'une coculture avec des cellules mononuclées (CMN) de donneur sain HLA-A2+. Brièvement, les cellules de la lignée PDC modifiée génétiquement ou non ont été chargées avec le 25 peptide Melan-A26L35, irradiées puis mises en culture avec des CMN en plaque 24 puits pendant 14 jours. Différentes quantités de cellules de la lignée PDC ont été ajoutées aux 2 million de CMN (10/1 ou 20/1) par puits. A J7, les cellules sont restimulées avec la lignée PDC chargées avec Melan-A en présence d'IL-2 soluble. A D14, l'expansion des lymphocytes CD8+ anti-Melan-A est mesurée à l'aide de dextramer Melan-A/A2 30 (Multimer) marqué à un fluorochrome (Immudex) et des anticorps anti-CD3 et CD8 (Beckman Coulter). Les résultats présentés dans la figure 3 montrent que l'expression de l'IL2 ou de l'IL15 par la lignée PDC permet une expansion plus forte que la lignée non modifiée. Cette augmentation est en moyenne d'une facteur supérieur ou égal à 3,7. 35 Exemple 3 : Fonctionnalité des effecteurs générés avec la lignée PDC modifiée ou non par l'IL2 ou l'IL15 : Expression intracytoplasmique d'IFNy. Les lymphocytes T amplifiés après une coculture de 14 jours en présence de la 9 lignée PDC chargée avec Melan-A, transduite ou non par l'IL-2 ou l'IL15, ont été marqués avec le dextramer Melan-A/A2 (Multimer) et restimulés par la lignée cible T2 chargée avec Melan-A en présence d'un inhibiteur de dégranulation, le GoIgiSTOP (Beckton Dickinson) pendant 4h. Les cellules ont ensuite été marquées avec un anticorps anti-IFNy 5 (Becton Dickinson) et des anticorps anti-CD3 et CD8. La figure 4A représente le phénotypage obtenu représentant l'information des cellules IFNy positives en fonction des cellules marquées par le multimer. La figure 4B montre que seules les cellules spécifiques de Melan-A (multimer+) produisent de l'IFNy quand elles sont stimulées par la lignée T2/Melan-A. Les résultats montrent que les lymphocytes spécifiques de Melan-A amplifiés 10 en présence de la lignée PDC modifiée pour exprimer l'IL2 ou l'IL15 secrètent 1,8 à 2,1 fois plus d'IFNy, que les lymphocytes spécifiques de Melan-A amplifiés avec la lignée non modifiée. 10 REFERENCES - Aspord C, & al., Novel cancer vaccine strategy based on HLA-A*0201 matched allogeneic plasmacytoid dendritic cells. PLoS One. 2010 May 4;5(5):e10458 - Aspord & al., HLA-A(*)0201(+) plasmacytoid dendritic cells provide a cell-based 5 immunotherapy for melanoma patients. J Invest Dermatol. 2012 Oct;132(10):2395-406 - Djureinovic & al., Profiling cancer testis antigens in non-small-cell lung cancer, JCI Insight. 2016;1(10):e86837 - Dubois & al., IL-15R Recycles and Presents IL-15 In trans to Neighboring Cells , Immunity, Vol. 17, 537-547, November, 2002, 10 - Dubsky & al., IL-15-induced human DC efficiently prime melanoma- specific naive CD8+ T cells to differentiate into CTL, Eur. J. Immunol. 2007. 37: 1678-1690 - Jakobisiak & al., Interleukin 15 as a promising candidate for tumor immunotherapy, Cytokine & Growth Factor Reviews 22 (2011) 99-108 - Steel & al., Interleukin-15 and Its Receptor Augment Dendritic Cell Vaccination against 15 the neu Oncogene through the Induction of Antibodies Partially Independent of CD4 Help, Cancer Res; 70(3) February 1, 2010, 1072-1081 - Vand den Bergh & al., Transpresentation of interleukin - 15 by IL - 15/IL - 15R a mRNA - engineered human dendritic cells boosts antitumoral natural killer cell activity, Oncotarget, 2015, Vol. 6, No. 42, 44123-44133 20 - Zhang & al., Dendritic cell-derived interleukin-15 is crucial for therapeutic cancer vaccine potency, Oncolmmunology 3:10, e959321; November 1, 2014 - EP 1 485 719, EP 2 113 253, US 7 087 712, US 7 528 224, WO 94/020127, WO 95/02553, WO 98/22589, WO 2000/003693, WO 2000/020445, WO 2000/052163, WO 2000/078806, WO 2004/067023, WO 2007/036638, WO 2007/039192, WO 25 2008/045286, WO 2009/13848, WO 2011/012720, WO 2015/0965572 et WO 2016/179573 - http://cvc.dfci.harvard.edu/tadb/ - https://docs.google. com/spreadsheets/u/1/d/1BFn5_mu7ogUh35NsLUozj9EB2rbLtj7Xj Myt7BoYNxg/pubhtml?widget=true&headers=false#gid=1609210712 REVENDICATIONS1. Lignée de PDC génétiquement modifiée pour exprimer une cytokine choisie parmi l'interleukine 15 (I L15) et l'intrtlrukine 2 (IL2). 2. Lignée génétiquement modifiées selon la revendication 1, caractérisée en ce que la lignée PDC initiale est obtenue à partir de cellules dendritiques plasmacytoides leucémiques. 3. Lignée génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que la modification est réalisée à l'aide de particules virales 4. Lignée génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la cytokine seule est exprimée. 5. Lignée génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle est chargée avec un ou plusieurs antigènes. 6. Lignée génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle est également génétiquement modifiée pour exprimer un ou plusieurs antigènes. 7. Lignée génétiquement modifiée selon l'une des revendications 5 ou 6, caractérisée en ce que les antigènes sont des antigènes peptidiques. 8. Lignée génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle est irradiée. 9. Utilisation d'une lignée génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 8 pour l'amplification in vitro de cellules spécifiques d'antigènes. 10. Lignée génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 8 pour son utilisation en thérapie. 11. Produit de combinaison ou kit, comprenant d'une part une lignée de PDC génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 8 et d'autre part des cellules spécifiques d'antigènes. 12. Produit de combinaison selon la revendication 11, pour une utilisation simultanée dans le traitement de maladies par immunothérapie. 13. Composition vaccinale comprenant une lignée PDC génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 8 et un véhicule approprié pour son administration.