Brevet FR3083247A1 — publié le 20200103

TITRE DE L'INVENTION Polypeptides et compositions à activité polysaccharide oxydase lytique. DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne, de manière générale, les enzymes à activité polysaccharide oxydases. En particulier, l'invention concerne le domaine de la production d'éthanol de deuxième génération par oxydation et hydrolyse enzymatique de matériaux contenant des polysaccharides, et notamment la biomasse lignocellulosique. Aussi, l'invention concerne le domaine des celluloses, ainsi que des procédés 10 pour la fabrication de fibres de celluloses et de défibrillation de substrats cellulosiques. A RH. ER E-P LA N TECHNOLOGIQUE La biomasse lignocellulosique est un substrat polysaccharidique et une source renouvelable pour la production de biocarburants et de molécules plateformes pour 15 l'industrie. Sa conversion en produits d'intérêts, tels que les saccharides et les fibres de cellulose, requiert l'action combinée d'enzymes, pour la plupart d'origine fongique. Compte tenu de la complexité et de la récalcitrance de la biomasse lignocellulosique, sa dégradation est un des verrous dans le développement d'un procédé de bioéthanol 2G économiquement viable. 20 Pour dégrader ce type de substrat polysaccharidique, composé essentiellement de cellulose, hemicelluloses et de lignine, les microorganismes cellulolytiques produisent généralement des mélanges enzymatiques contenant des cellulases, hémicellulases, pectinases et des enzymes lignolytiques. Une action concertée des différentes enzymes est nécessaire pour une dégradation optimale de la lignocelluiose. La dégradation de la cellulose nécessite notamment l'action coordonnée et synergique de différents types d'enzymes. Plus particulièrement, convertir efficacement de la cellulose en petites molécules nécessite Faction synergique des cellulases, c'est-à-dire des endoglucanases (EG), des cellobiohydrolases (CUI) et des 13-glucosidases. Les 13G clivent les liaisons fi-1,4 au hasard dans les chaînes cellulosiques, libérant ainsi de nouvelles terminaisons pour 30 l'action des cellobiohydrolases (Gard) qui à leur tour libèrent des unités de cellobiose. Les p-glucosidases produisent des molécules de glucose à partir du cellobiose, atténuant ainsi l'effet inhibiteur du cellobiose sur la CBH. Toutes les enzymes avec activités sur carbohydrates sont répertoriées dans la base de données CAZy (Carbohydrate Active enzymes, Lombard et al., 2014), en classes (en fonction de leur mode d'action) et en familles en fonction de leur séquence et de paramètres structuraux, qui déterminent aussi les propriétés enzymatiques. Par exemple, les enzymes hydrolytiques se trouvent dans la classe des glycos de hydrolases (GH), et les cellulases notamment dans les familles GH5, CiF16, GLU, 1G GH12 GE145 et GH4S. Aussi, des effets synergiques ont été lontres pour des enzymes à activité oxydative agissant sur la cellulose. Les premiers représentants de cette famille, les « Tyne Polysaccharide Alonooxygénases » (LPMO) ont été isolés des champignons filamenteux TLïeiavia teirestris et Thennoascus auranhacus (Harris et al. ; Stimulation of Lignocellulosic Biomass Hydrolysis by Proteins of Glycoside Ilydrolase Family 61 Structure and Function of a large, Enigmatic Family ; Biochemistry (Moscl.) 49, 3305- 3316 ; 2010). Elles oxydent les liaisons glycosidiques des chaines de polysaccharides en libérant des acides aidoniques, et augmentent ainsi l'accessibilité du substrat pour les enzymes hydrolytiques. 20 Ces monooxygénases (LPMG) sont classées parmi e enzymes à activité ire A) (Levasseur et al., 2014) au sein des familles AA9, AA10'A.A. 1 1'AA 13, AA14 et .AA1 5. Les L.1.31V10 avec activité sur cellulose appartiennent la famille A.A9. d'autres familles de monooxygénases ont été découvertes : la famille AA10 regroupe des enzymes bactériennes analogues aux A,A.9, les membres de la famille AAl l ont une 25 activité sur la chitine, ceux de la famille AAI3 agissent sur l'amidon, ceux de la famille AA14 agissent sur le xyla.ne et ceux de la famille A Al5 sur celllulose et chitine. Un producteur d'enzymes tzéquemment employé en industrie est le champignon Trichoderma reesei qui est capable de produire des grandes quantités 30 d'enzymes. Notamment, le cocktail d'enzymes dit « K975 » représente une faible diversité d'enzymes et n'est pas suffisamment efficace. En comparant le génome de T reesei à d'autres génomes issus d'espèces proches, on constate effectivement que il reesei possède à la fois moins de gènes impliqués dans la dégradation des carbohydrates de la paroi végétale et que les enzymes sont moins diversifiées. Des nombreux travaux de recherche ont donc visé à supplérnenter ce mélange par des enzymes ayant une plus importante activité spécifique ou une activité complémentaire au répertoire présent dans T r-eesei, ce qui permettrait de diminuer la dose d'enzymes à mettre en oeuvre. Il a ainsi été montré qu'un cocktail enzymatique de T reesei contenant 7 % de la protéine AA9 (LPM0) de T aurantiocus était capable d'hydrolyser 90 % de la cellulose à 4 mg de protéine par gramme de cellulose, permettant de réduire la quantité d'enzymes nécessaire d'un facteur 2. D'autres membres de la famille AA9 ont été identifiés chez plusieurs espèces fongiques, notamment chez Podospora anserina, Myeeliophthora ihermophila ou Phaneroehaele ehusosporinin. %VO 2018/050300 enseigne l'identification de LPMOs, et leur mise en oeuvre dans un procédé de production de sucres à partir de biomasse. lignocellulosique. 1.5 WO 2016/193617 enseigne des procédés de fabrication de nanocelluloses, comprenant une étape de traitement enzymatique du dit substrat par une enzyme de clivage appartenant à la famille des mono-oxygenases lytiques de polysaccharides rj-PM0s), aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de celluloses. Malgré les nouvelles stratégies de pretraitement, les coûts de production des 20 nanocelluloses restent élevés, les rendements incertains, et la qualité et les propriétés sont variables. ll subsiste ainsi un besoin d'identifier de nouvelles familles enzyma q es pour le traitement de ces substrats polvsaecharidiques, et notamment la biomasse lignoceilulosique. En particulier, il subsiste un besoin d'identifier des familles d'enzymes 25 capables, seules ou en combinaison avec le dit cocktail de T reeseit, d'améliorer le rendement d'hydrolyse enzymatique. Par exemple, il subsiste un besoin de familles enzymatiques capables d'hydrolyser des biomasses récalcitrantes telles que le mi scanthus et/cl le peuplier. Il subsiste également un besoin de familles enzymatiques permettant 30 d'améliorer les procédés existants d'obtention sucres et/ou de fibres de cellulose à partir de substrats polysaccharidiques tels que les biomasses lignocellulosiques. L'invention a pour objet de répondre à ces besoins. 4 RES U NIE DE L'INVENTION Selon un premier objet, l'invention concerne un polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence 5 SE() ID N°1 ou SEQ ID N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le" ou moins. En particulier, l'invention concerne un polypeptide isolé à activité polysacchruide oxydase tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 80% avec une séquence 10 polypeptidique de référence SE() fD N°1 ou SEQ ID N°2, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le-18 ou moins. Tout particulièrement, le dit polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase peut Ste caractérisé en ce qu'il comprend une séquence polypeptidique de référence choisie parmi SEQ H) N9 à SEQ ID N°382. Selon un second objet, l'invention concerne une composition à activité polysaccharide-oxydase, caractérisée en ce qu'elle comprend un polypeptide à acti polysaccharide oxydase tel que éfini ci-dessus. En particulier, la dite composition peut être caractérisée en ce qu'elle 20 comprend en outre au moins un polypeptide à activité polysaccharide-dégradase choisi parmi : une cellulase, une hemicellulase, une ligninase et une carbohydrate oxydase. La dite composition à activité polysaccharide oxydase peut être caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue à partir d'un ou plusieurs organismes de type champignon ou levure, notamment choisis parmi les genres Achlya, Actemoniran, 25 Aspergillus, Cephalasporitun, Chrysasporium, Cochlioholus, Endothia, Eusarium, Municola, Hipocrea, Mryceliophthora, kfueor, ,Veurospora, Peniciilium. Pyricularia, Thielavia, Tolypodadium, Trichoderma, Podospora, Pvcnoporns, Thermonospora tout particulièrement Aspergillus ou Trichodertna ou Podospora; préférentiellement Aspergillus ou Podospora. 30 La dite composition a activité polysaccharide-oxydase peut être caractérisée ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase est obtenu de façon recombinante. Selon un troisième mode de réalisatio 'ention concerne un lsit comprenant au moins : - une première partie comprenant un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase tel que défini ci-dessus, ou une composition comprenant le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase; - une seconde partie comprenant un polypeptide à activité polysaccharide-degradase choisi parmi une cellulase, une hemicellulase, une lignina.se et une carbohydrate oxydase, ou une composition comprenant le dit polypeptide à activité polysaccharide-dégradase. 10 Selon un quatrième mode de réalisation, l'invention concerne un hôte apte à exprimer de manière recombinante un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase tel que défini ci-dessus. Le dit hôte peut être notamment une levure, une bactérie ou un champignon. Selon un cinquième mode de réalisation, concerne un acide nucléique isolé codant pour un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase tel que défini ci-dessus. 20 Selon un sixième mode de réalisation, l'invention concerne un procédé d'obtention d'un sucre à partir d'un substrat polysaccharidi que, comprenant au moins une étape de mise en contact du dit substrat avec un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase tel que défini ci-dessus. ou d'une composition à activité polysaccharide-oxydase comprenant le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase. De préférence, le dit 25 substrat est un substrat lignocellulosique. En particulier, l'invention concerne un procédé de production d'alcool à partir d'un substrat lignocellulosique, caractérisé en ce qu'il comprend l'obtention d'un sucre par un procédé d'obtention d'un sucre tel que défini ci-dessus, et la fermentation alcoolique dudit sucre par un microorganisme alcooligène. 30 Selon un septième mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de préparation d'un substrat cellulosique pour la fabrication de fibres de cellulose, lequel procédé comprend au moins les étapes suivantes consistant à a) disposer d'un substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose 5 h) mettre en contact, en présence d'un donneur d'électron, le dit substrat avec au moins un polypeptide à activité polysaccharide oxydase dans des conditions aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de cellulose; caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide oxydase présente une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence 1G SEQ ID N°1 ou SEQ ID N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de 1e-18 ou moins. Selon un huitième mode de réalisation, l'invention concerne un ,procédé de défibrillation d'un substrat cellulosique, lequel procédé comprend au moins les étapes 1.5 suivantes consistant à a) disposer d'un substrat cellulosique apte à. former des fibres de cellulose, lequel a été préalablement mis en contact avec un donneur d'électrons et un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase, dans des conditions aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de cellulose en présence d'un donneur d'électron; et 20 b) traiter mécaniquement ledit substrat cellulosique, afin de défibriller le dit substrat caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide oxydase présente une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEI,/ 11) Mi ou SEQ ID N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite 25 méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de I e'l8 ou moins. Selon un neuvième mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de fabrication de fibres de cellulose, lequel procédé comprend au moins les étapes suivantes consistant 30 disposer substrat cellulosique apte des fibres de cellulose ; 7 h) mettre en contact, en présence d'un donneur d'électron, ledit substrat cellulosique avec au moins un polypeptide à activité polysaccharide oxydase clans des conditions aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de cellulose; c) traiter mécaniquement ledit substrat cellulosique, afin de fabriquer lesdites fibres de cellulose à partir du dit substrat cellulosique, caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide oxydase présente un identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de SEQ ID N°1 ou SEQ ID N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de lés ou moins. 10 Selon un dixième mode de réalisation, l'invention concerne des fibres de celluloses issues d'un procédé de défibrillation etiou ri'un procédé de fabrication de fibres de cellulose tels) que définis) ci-dessus. DESCRIPTION D S FIGURES Figure 1: Suivi au cours du temps du rendement d'hydrolyse avec le cocktail de T. reesei; sur trois biomasses prétraitée. Les barres d'erreur représentent l'écart--type calculé sur 3 réplicats. En ordonnée : rendement d'hydrolyse sur trois biomasses prétraitée A. Sur paille B. Sur miscanthus C. Sur peuplier (exprimées en 20 pourcentage par rapport à la cellulose disponible dans le substrat initiai). En abscisse le temps en heure à partir du temps 0 d'hydrolyse. Courbe A. Sur paille : Augmentation du rendement d'hydrolyse jusqu'à une valeur de 90% à Temps (h) 140.Courbe B. Sur Peuplier : Augmentation du rendement d'hydrolyse jusqu'à une valeur de 60% à Temps (h) 140. Courbe C. Sur miscanthus : Augmentation du rendement d'hydrolyse jusqu'à une 25 valeur de 50% à Temps (h) 140. Figure 2A-2C: Modification du rendement d'hydrolyse en présence de sécrétantes issus de la souche CIRM-IIRFI'd 1490 d'Aspergillus japonicus, par rapport au rendement d'hydrolyse en présence du cocktail de référence seul. A. Sur paille B. Sur miscanthus C. Sur peuplier. Les moyennes ont été calculées sur 7 à 15 réplicats par 30 point (les x signalent les moyennes pour lesquelles le test de Student par rapport à la référence donne une p-value entre deux polypeptides signifie que le pourcentage d'acides aminés identiques entre les deux séquences polypeptidiques à comparer, obtenu après un alignement optimal, ce 1.5 pourcentage étant entièrement statistique et les différences entre les deux séquences polypeptidiques étant distribués aléatoirement sur Leur longueur. La comparaison de deux séquences polypeptidiques est traditionnellement réalisée en comparant les séquences après les avoir alignées de façon optimale, la dite comparaison doit pouvoir être conduite par segment ou en utilisant une « fenêtre d'alignement ». L'alignement optimal des 20 séquences pour leur comparaison est réalisé en utilisant le software de comparaison BLAST-P. Dans son principe, le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides aminés est déterminé en comparant les deux séquences alignées de façon optimale au sein desquelles les séquences d'acides nucléiques a comparer peuvent contenir des additions ou 25 délétions par rapport à la séquence de référence de l'alignement optimal entre les deux séquences polypeptidiques. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions dans lesquelles un acide aminé est identique entre les deux séquences, de préférence entre deux séquences complètes, puis en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions dans la fenêtre d'alignement et en multipliant le 30 résultat par 100 afin d'obtenir le pourcentaue d'identité entre les deux séquences. Comme il est entendu dans la présente demande, des séquences polypeptidiques ayant au moins 20% d'identité en acides aminés avec une séquence de référence comprennent celles qui ont au moins 21%, 23%, 2.ois, 25%, 26% 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%. .35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53% 54%, 55%, 56%, 57%, 28%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, ' 92%, 93%, 94%, 9. , 96%, 97%, 98% et 99% d'identité en acides aminés avec ladite séquence de référence. De manière similaire, le «pourcentgge d'identité» entre deux séquences 10 d'acides nucléiques représente le pourcentage de résidus nucléotidique identiques entre les deux séquences d'acides nucléiques à comparer, obtenus après un alignement optimal, ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux séquences étant distribuées de façon aléatoire sur la longueur des séquences. La comparaison de deux séquences d'acides nucléiques est traditionnellement réalisée en comparant les séquences après les avoir alignées de façon optimale, la dite comparaison pouvant être conduite par segment ou en utilisant une « fenêtre d'alignement ». L'alignement optimal des séquences en vue de leur comparaison est réalisé en utilisant le software de comparaison BLAST-N. En principe, le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides nucléiques est déterminé en comparant les deux séquences alignées de façon optimale dans 20 lesquelles les séquences d'acides nucléiques à comparer peuvent contenir des additions ou des délétions par rapport à la séquence de référence de l'alignement optimal entre les deux séquences Le pourcentage d'identité est calculé selon le nombre de positions auxquels les résidus nucléotidiques sont identiques entre les deux séquences, de préférence entre les deux séquences complètes, puis en divisant ce nombre de positions identiques par le 25 nombre total de positions dans la fenêtre d'alignement et en multipliant le résultat par 100 afin d'obtenir le pourcentage d'identité entre les deux séquences. Comme il est entendu ici, les séquences nucléotidiques ayant au moins 20% d'identité avec la séquence de référence incluent celles ayant au moins least 21%, 22%, 23%, 24%. 25%, 26%. 27% 28%, 29%, 30%, 31%, 32% 33%, 34%. 35% 36%, 37% 30 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47% 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%'é 55%, 56%, 57%, 28%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%'0 70% 71% 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, Sa A, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98% et 99% d'identité en nucléotides avec la séquence de référence. Les matrices BLOSUM (Blocks Substitution Matin() sont des matrices de 5 score de substitution dans lesquelles les scores pour chaque position sont dérivés de l'observation de la fréquence de substitution des blocks dans des alignements locaux pour des protéines apparentées. Chaque matrice est dessinée pour une distance d'évolution particulière. Dans la matrice BLOSUM62, par exemple, l'alignement à partir duquel les scores ont été dérivés a été créé à partir de séquences ne partageant pas plus de 62% 10 d'identité. Les séquences qui possèdent plus de 62% d'identité sont représentées par une séquence unique dans l'alignement afin de ne pas surreprésenter des membres proches d'une même famille. Comme utilisé ici. une E-valeur (aussi appelé Expect Value ou e-value) est un paramètre calculé quand la méthode BLAST-P est utilisée, le dit paramètre représentant le 1.5 nombre d'alignements différents avec des scores équivalents ou avec meilleur que S dont l'apparition est attendue lors d'une recherche dans la base de données par hasard. Ainsi, plus la E-valeur (ou «E-value ») sera basse, et plus le score et l'alignement seront signi fi ca tifs. Ainsi, une e-value de 1 ou moins englobe les e-values de le2° ou moins, le- 20 ou moins, 1 e3° ou moins, 1 e1° ou moins, 1 e-5" ou moins, I e6° ou moins, 1 e-7" ou moins, I eT" ou moins, 1 e-9° ou moins et I e-m° ou moins. Par « substrat cellulosique » ou «substrat lig,nocellulosique », on entend en toute matière de la biomasse (englobant les matières organiques d'origine végétale, algues 25 incluses, animale ou fongique) et contenant de la cellulose, notamment sous forme de fibres cellulosiques (c.à.d. des fibres de cellulose). Par « biomasse lignotelhdosique », on entend toute biomasse susceptible d'être mise en oeuvre en tant que substrat lignoceliulosique. La biomasse lignocellulosique peut notamment être classée en fonction de son origine : 30 - résidus agricoles produits lors de la culture de ddiërentes plantes destinées a l'alimentation - déchets forestiers de bois dur ou de bois tendre issus de l'industrie du bois ou des pâtes et papiers ; - plantes énergétiques issues de cultures dédiées (i.e herbes vivaces et taillis à courte rotation) ; - déchets solides municipaux et industriels Par exemple, un substrat lignocellulosique peut être obtenu à partir d'une biomasse lignocellulosique englobant: le peuplier' le pin, le rniscanthus, le saule; le panic érigé (ou « viviichways »), le maïs, la canne à sucre, le blé, le riz, l'avoine, l'orge, la betterave, l'olivier, la vigne, le coton, l'eucalyptus, les arbres fruitiers. Le substrat cellulosique est obtenu avantageusement à partir de bois (dont la 10 cellulose est le composant principal), mais aussi de tout végétal fibreux riche en cellulose, comme par exemple, le coton, le lin, le chanvre, le bambou, le kapok, les fibre de noix de coco (con), la ramie, la jute, le sisal, le raphia, le papyrus et certains roseaux, la bagasse de canne à sucre, la betterave notamment la pulpe de betterave), les agrumes:, les tiges de maïs ou de sorgho, ou encore les plantes annuelles à paille. Les substrats cellulosiques peuvent également être obtenus a partir d'animaux marins (comme le tunicier par exemple), d'algues (comme par exemple Vatonia ou Ciadophora) ou de bactéries pour la cellulose bactérienne (comme par exemple les souches bactériennes de type Gluconacetobacier). On choisira, selon les applications, de la cellulose issue de parois primaires 20 comme le parenchyme des Fruits (par exemple les betteraves, les agrumes etc.) ou de parois secondaires, comme le bois. Le substrat cellulosique consiste avantageusement en un matériau cellulosique préparé par des moyens chimiques ou mécaniques, à partir de toute source cellulosique telle que mentionnée ci-dessus (et notamment à partir du bois). 25 Le matériel contenant la lignocellulose est généralement présent, par exemple, dans les tiges, les feuilles, le son, les enveloppes et les rachis des plantes ou feuilles, branches, et le bois des arbres. De manière non-limitative, le matériel contenant la lignocellulose peut aussi être du matériel herbacé, des restes de l'agriculture et de la sylviculture, des déchets municipaux solides, des déchets papier, et des restes de broyage 30 de pulpe et de papier. Il faut comprendre ici que le matériel contenant la lignocellulose peut se trouver sous la tonne de matériel de la paroi cellulaire de la plante contenant de la lignine, cellulose, et hémicellulose dans une matrice mixte. Selon certains modes de réalisation particuliers, notamment ceux visant la production de fibres de cellulose, le matériel contenant de la lignocellulose est une biomasse ]ignocel]ulosique choisie dans le groupe consistant en : l'herbe, le switchgrass, la snartine, l'ivraie, la baldingère faux-roseau, le mi scanthus, les résidus de transformation du 5 sucre; la bagasse de canne à sucre, les déchets agricoles, la paille de riz, la balle de riz, la paille d'orge, l'épi de maïs, la paille (le céréales, la paille de blé, la paille de canota, la paille d'avoine, la coque d'avoine, la canne de maïs, la farine de soja, la farine de maïs, les déchets forestiers, la fibre de pâte de bois recyclée, la boue de papier, la sciure de bois, le bois dur, le bois résineux, l'agave et ses combinaisons. Dans un mode de réalisation 10 préféré, le matériel contenant de la lignocellulose est choisi dans un groupe comprenant : la farine de maïs, la fibre de maïs, la paille de riz, le bois de pin, les copeaux de bois, le peuplier, la bagasse, le papier et les déchets de traitement de la Ore. Par « cellulose », on entend un homopolysaccharide linéaire issu de la 1.5 biomasse (englobant les matières organiques d'origine végétale' algues incluses, la cellulose d'origine animale ainsi que la cellulose d'origine bactérienne) et constitué d'unités (ou cycles) de glucose (D-Anhydroglucopyranose - AGU pour «Anhydre) glucose unit. ») reliées entre elles par des liaisons glycosidiques P-(1-4). Le motif de répétition est un dimère de glucose également appelé cellobiose. 20 Les AGU possèdent 3 fonctions hydroxyles 2 alcools secondaires (sur les carbones en positions 2 et 3 du cycle de glucose) et un alcool primaire (sur le carbone en position 6 du cycle de glucose). Ces polymères s'associent par des liaisons intermoléculaires de type liaison hydrogène, conférant ainsi une structure fibreuse à la cellulose. En particulier, l'association 25 des chaînes formées de dimères de cellobiose forme une nanofibrille élémentaire de cellulose (dont le diamètre est d'environ 5 nm). L'association de nanofibrilles élémentaires forme une nanofibrille (dont le diamètre varie généralement de 50 à 500 nm ; ce qui inclut 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 et 500 nrn). L'agencement de plusieurs de ces nanofibrilles forme ensuite ce qui est généralement appelé une fibre de 30 cellulose Le terme «fibre de cellulose » désigne l'ensemble des formes de cellulose susceptibles d'être obtenues l'issue d'un procédé de défibrillation, ou délamination d'un substrat cellulosique ; ce qui inclut lesformes de cellulose ayant une dimension le d du nanomètre, ainsi que les formes de cellulose ayant une dimension supérieure. Le terme « nanocelluloses » désigne les différentes formes de cellulose ayant une dimension de l'ordre du nanomètre. Ce terme englobe en particulier selonl'invention, deux familles de nanocelluioses : les nanocristaux de cellulose et les fibrilles de cellulose. Les ternies «fibrilles de cellulose « nanofibrilles 61e cellulose) », « (moeres (de cellulose)», «cellulose nanofibrillée», «microfibrilles (de cellulose)», «cellulose microfibriliée», «microfibrillated cellulose», «cellulose nangfibrits » sont synonymes. 1G Chaque nanofibrille de cellulose contient des parties cristallines stabilisées par un solide réseau de liaisons hydrogènes inter- et intra-chaines. Ces régions cristallines sont séparées par des régions amorphes. L'élimination des parties amorphes des nanofibrilles de cellulose, permet d'obtenir des nanocristaux de cellulose (N-CCs). 1.5 Les NCCs comportent avantageusement au moins 50% de partiet cristalline, de préférence encore au moins 55% de partie cristalline. Ils ont généralement un diamètre allant de 5 à 70 nm (de préférence inférieur à 15 rim) et une longueur allant de 40 mn à environ 1 ion, de préférence allant de 40 nm à 500 mn ; ce qui inclut 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 et 500 nm. 20 Les termes « nanocristaux de cellulose », « cellulose nanocristalline», « cellulose iskers », «uncrocristour » ou « cellulose nanotlyslal» sont synonymes. Dans la suite de la présente demande, le terme « nanocristaux de cellulose » (A('es) sera utilisé de manière générique. Comme utilisé ici, un « matériel contenant des polysaccharicdes» englobe une 25 substance ou une composition comprenant des polysaccharides. Le terme «polysaccharide » est utilisé dans son sens conventionnel et désigne des carbohydrates polymériques composés de longues chantes de monosaccharides maintenus ensemble par des liaisons glycosidiques. Lors de Mur hydrolyse, les polysaccharides libèrent les monosaccharides ou oligosaccharides solubles les constituant. 30 Les polysaccharides sont préférentiellement considérés sont les polysaccharides dérivés de plantes, et tout particulièrement la cellulose, telle que celle retrouvée dans la lignocellulose. 18 Ce ternie englobe ainsi tout matériel (ou substrat ou biomasse. .omprenant au moins un (ou une pluralité de) polysaccharide(s) choisis parmi la cellulose, l'hémicellulose et la ec - ce qui inclut notamment les substrats pol cc 1aridiques comprenant au moins 30 % eri poids de cellulose et d'hémicellutose. 5 Le terme « matériel contenant de la lignocelluiose » utilise ici fait référence à urn matériel constitué principalement de cellulose, d'hémicellulose et de lignine. Ce ternie est synonyme de « matériel fignocellulosique ». Un tel matériel est aussi référencé comme « biomasse ». Selon cette définition, un matériel contenant de la lieocellulose est un exemple de substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose. 10 Ce terme englobe ainsi tout matériel (ou substrat ou biomasse) lignocellulosique contenant au moins 30 % en poids (wt), de préférence au moins 50% en poids, de préférence au moins 70?.: en poids, de préférence au moins 90% en poids de lignocellulose. A cet égard, un matériel lignocellulosique est susceptible de comprendre d'autres composés tels que des polypeptides et sucres, ce qui inclut des sucres fermentables 1.5 et/ou non-fermemables. Ainsi, un matériel contenant de la bgnocellulose particulièrement considéré selon l'invention peut être choisi parmi le pin, le peuplier, la paille et le miscanthus. Comme utilisé dans la présente demande, une « enzyme oxydant tes //thly, cc arides» ou un «polypeptide à activité polysaccharide oxydase » englobent les 20 polypeptides avec les propriétés suivantes : - le dit polypeptide produit du peroxyde d'hydrogène en présence d'ox composé donneur d'électrons, tel que les ascorbates, - le dit polypeptide augmente de manière dose dépendante, en l'absence ou en présence d'un composé donneur d'électrons, la dégradation d'un matériel contenant des 25 polysaccharides tel que la lignocellulose, causée par des cellulases et/ou des hémicellulases telles que, par exemple, les xylanases, le dit polypeptide augmente de manière dose dépendante, en l'absence ou en présence d'un composé donneur d'électrons, la dégradation d'un matériel contenant des polysaccharides tel que la lignocellulose, causé par des cellulases. 30 Le terme « composé donneur d'électron » est utilisé ici dans son sens habituel pour un homme du métier. Ainsi, un composé donneur d'électron est une entité chimique 19 capable de donner des électrons à un autre composé. Un composé donneur d'électron est un agent réducteur grâce à sa capacité à donner des électrons et est lui-même oxydé quand il donne des électrons à une autre entité chimique. Un composé donneur d'électrons comme spécifié plus haut pour les propriétés d'oxydation des polysaccharides, englobe, de maniere non exhaustive, des ascorbates et des cellobiose déshydrogénases (CDH). En l'absence d'un réducteur, tel que l'ascorbate, l'agent réducteur peut de façon avantageuse être fourni par la biomasse (la lignine) qui peut agir en tant que donneur d'électron. Le terme "LP/140", ou "Lytic Polysaccharide Alonooxygenase", désigne dans 1G son sens le plus large, et sauf indication contraire, l'ensemble des familles répertoriées dans la hase de données CAZy (Carbohydrate Active enzymes, Lombard et al., 2014) et antes à oxyder des polysaccharides. Ce terme inclut donc en particulier l'ensemble des polypeptides à activité polysaccharide oxydase appartenant aux familles A.A9, A.A10, ,AA l 1, AA13, AAI4 et AA15. Ce terme inclut aussi les -UNI° de type T (capables 1.5 d'oxyder les liaisons glycosidiques sur le carbone Cl.), de type II (capables d'oxyder les liaisons glycosidiques sur le carbone C4) et de type III (capables d'oxyder les liaisons glycosidiques à la fois en CI et en C4). Le terme « enzyme dégradant tes polysaccharides » ou un « po/y/Jet/fi e à 20 activité polysaccharide dégradase s, englobe les polypeptides qui, outre les polysaccharides oxydases, contribuent à la dégradation des substrats polvsaccharidiques tels que les biomasses lignocellulosiques. Ainsi, des polypeptides à activité polysaccharide dégradase peuvent être choisis parmi les cellulases, hémicellulases, ligninases et carbohydrate oxydases. 25 Les cellulases englobent les endogiticanases, cellobiohydrolases et beta- glucosidases. Les hemiceilulases englobent les xylanases, mannanases, xylosidases, mannosidases, arabinofuranosidaes et esterases. Ainsi le terme « cellulase» est susceptible d'inclure les exo-gluc,anases, endo-glucanases, cellobiohydrolases, cellulose phosphorylases, pectinases, pectate lyases, polygalacturonase, pectin esterases, cellobiose 30 dehvdrogenases, mannanases arabinotbranosidases' feruoyl esterases, arabinofbranosidases, fructofuranosidases, galactosidases, galactosidases, amylases, acetylxylan esterases, chitin deacetylases, chitinases, et 'ucosidases. Les li gni nases englobent les peroxydases, copper radical oxydases laccases). Les carbohydrate oxydases englobent les lytic polysaccharide monooxygenases (LPMO) et les GMC oxydor e ses (i.e. glucose dehydrogenases, cellobiose dehydrogenases). Le terme "traitement ch liqu 'ait référence à tous les prétraitements chimiques qui permettent la séparation et/ou la libération de la cellulose, hémicellulose et/ou lignine. Des exemples de ces prétraitements chimiques adéquats incluent, par exemple des acides dilués, de la chaux, des bases, des solvants organiques, de 1G l'ammoniaque, du dioxyde de soufre, du dioxyde de carbone. De plus l'oxydation humide et l'hydrothermolyse à pli contrôlé sont aussi considérées comme des prétraitements chimiques. Les méthodes de prétraitements utilisant de l'ammoniaque sont notamment décrites dans les demandes PCT WO 2006/110891,, WO 2006/110899, WO 2006/110900, et WO 2006/110901 1.5 D'autres exemples de prétraitement adéquat sont décrits par Schell et al., 2003, Appl. Biochem and Biotechn. Vol. 105-108: 69-85, et Mosier et al., 2005, Bioresource Techn y 96: 673-686, et U.S. Publication No. 2002/0164730. Le terme «pré/fa/tentent mécanique » fait référence à tous les traitements mécaniques (ou physiques) qui permettent la séparation et/ou la libération de la cellulose, 20 de l'hémicellulose et/ou de la lignine à partir d'un matériel contenant de la lignocellulose. Par exemple, les prétraitements mécaniques incluent différents types de broyage, irradiation, explosion à la vapeur et l'hydrothermolyse. Le prétraitement mécanique inclut la fragmentation d'un solide (comminution ou réduction mécanique de la taille). La fragmentation d'un solide inclut les techniques de broyages en milieu sec, de broyage en 25 milieu humide et de broyage par balles vibrantes. Le prétraitement mécanique peut aussi inclure des Cortes pressions et/ou des températures élevées (explosion à la vapeur). Dans certaines représentations de l'étape de prétraitement, la dite étape peut combiner un prétraitement mécanique et chimique. Comme il a été utilisé dans la présente invention, le terme «prétraitement 30 biologique » fait référence à tous les traitements biologiques (lui permettent la séparation et/ou la libération de la cellulose., hémicellulose et/ou lignine à partir d'un matériel contenant de la lignoceilulosc. Les prétraitements biologiques peuvent impliquer l'application de microorganismes capables de solubiliser la lignine (voir, par exemple, lisu, 1996, Pretreatment of biomass, dans le Handbook on Bioethanol: Production and Utilization, r/vyman, ect, Taylor & Francis, Washington, DC, 179-212; Ghosh et Singh, 1993, ,Phyisicochemical and biological treatments for enzymatichnicrobial conversion of 5 lignocellulosic biomass, Adv. Appl. Microbiol. 39: 295-333_ McMillan, 1994, Pretreating lignocellulosic biomass: une revue, dans Enzymatic Conversion of Biomass for Fuels Production, Himmel, Baker, and Overend, eds., ACS Symposium Series 566, American Chemical Society, Washington, DC, chapter 15; Gong, Cao, Du, et Tsao, 1999, Ethanol production from renewable resources, dans Advances in Biochemical 1G Engineering/Biotechnology, Scheper, ed., Springer-Veriag Berlin Heidelberg, Germany, 65: 207-241 ; Olsson et Hahn-Hagerdal, 1996, Fermentation of lignocellulosic hydrolysates for ethanol production, Enz. Microb. Tech. 18: 312-331 ; e Vallander et Eriksson, 1990, Production of ethanol from lignocellulosic materials: State of Hie art, Adv hochent Eng 11Biotechnol. 42: 63-95). 15 Polypeptides et compositions à activité polysaccharide-oxydase Selon un mode de réalisation principal, l'invention concerne un polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase:, comprenant une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence 20 SEQ ID N°1 (provenant de Podospora anserina) ou SEQ ID N°2 (provenant de Aspergillus acideauts), en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e--value de le-18 ou moins. En particulier, concerne un polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une 25 séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 40% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N't ou SEQ ID N°2, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de 1 e18 ou moins. Par exemple, un polypeptide à activité polysaccharide oxydase selon l'invention peut ètre caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité 3O d'acide aminé d'au moins 45% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ IF) N°1 ou SEQ IF) N°2, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une évalue de le-18 ou moins. En particulier, l'invention concerne un polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 60% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ H) N°1 ou SEQ ID N°2, la dite méthode de 5 comparaison BLAST-P donnant une c-value de le' ou moins. En particulier, l'invention concerne un polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 80% avec une séquence polypeptidique de référence SIX) ID N°1 ou SEQ ID N°2, la dite méthode de 1G comparaison BLAST-P donnant une e--value de le-18 ou moins. En particulier, l'invention concerne un polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce q comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 90% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°1 ou SEQ 1D N°2, la dite méthode de 1.5 comparaison BLAST-P donnant une e-value de leis ou moins. Selon certains modes de réalisation, l'invention concerne un des dits polypeptides isolés à activité polysaccharide oxydase, tels que définis ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence polypeptidique de référence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence choisie parmi SEQ ID N°5 à 20 SEQ ID N°382, ce qui inclut SEQ ID N°7 à 382. Selon certains modes de réalisation, l'invention concerne un des dits polypeptides isolés à activité polysaccharide oxydase, tels que définis ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence polypeptidique de référence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 80% avec une séquence choisie parmi SEC) ID N"5 à 25 SEQ ID N°382, ce qui inclut SEC) ID N°7 à 382. Selon certains modes de réalisation, l'invention concerne un des dits polypeptides isolés à activité polysaccharide oxydase, tels que définis ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence polypeptidique de référence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 90% avec une séquence choisie parmi SEQ ID N°5 à 30 SEQ ID N°382, ce qui inclut SEQ ID N°7 à 382. Par exemple, l'invention concerne un polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence polypeptidique de référence choisie parmi SEQ HL N°5 à SEQ ID N°382. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne un polypeptide 5 isolé à activité polysaccharide oxydase, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ Ill N°5 ou SEQ la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le-18 ou moins. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne un polypeptide 10 salé à activité polysaccharide oxydase, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 40% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°5 ou SEQ ID N°6, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le' ou moins. Par exemple, un polypeptide à activité polysaccharide oxydase elon 1.5 l'invention peut être caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 45% avec une séquence polypeptidique de SEQ ID N°5 ou SEQ ID N°6, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value del e-'5 ou moins. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne un polypeptide 20 isolé à activité polysaccharide oxydase, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 60% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°5 ou SEQ ./1) N°6, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le.' ou moins. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne un polypeptide 25 isolé à activité polysaccharide oxydase, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 80% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ILL N°5 ou SEQ ID N86, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le-18 ou moins. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne un polypeptide 30 isolé à activité polysaccharide oxydase, tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 90% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°5 ou SEQ ID N°6, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le"rs ou moins. Selon un mode de réalisation l'invention concerne une composition à 5 activité polysaccharide-oxydase, caractérisée en ce qu'elle comprend un polypeptide à activité polysaccharide oxydase tel que défini ci-dessus. En particulier, l'invention concerne une composition à activité polysaccharide-oxydase telle que définie ci-dessus, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un polypeptide à activité polysaccharide-dégradase choisi parmi : une cellulase, une hémicellulase, une ligninase et une carbohydrate oxydase. A titre non exhaustif, la dite composition à activité polysa.ccharide-oxydase peut être caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue à partir d'un ou plusieurs organismes choisis parmi : Agaricus bisporus, Alternaria alternata, Amanite thiersii, Armillaria ostoyae, Armillaria soildipes, Ascochyta t'alti« Aspergillus arachidicola, 1.5 Aspergillus bombycis, Aspergillus brasiliensis, Aspergillus campestris, Aspergillus candidas, Aspergillus carbonarius, Aspergillus clavants, Aspergillus cristatus, Aspergillus _fischeri, Aspergillus. Amis, Aspergillus .funrigalus, Aspergillus glaucus, Aspergillus kawaehil, Aspergillus 4,Jan/us, Aspergillus h'chuensis, Aspergillus tridulans'4.spergillus figer, Aspergillus 1101111.71S, _Aspergillus novernigains, Aspergillus ochraceoroseus, 20 Aspergillus oryzae, Aspergillus parashicus'Asperelhis ruher, Aspergillus steynii, Aspergillus sydowit'4spergillus taiehungensis, Aspergillus terreu.sl, Aspergillus thermomutatus, Aspergillus tubingensis, Aspergillus turcosus, Aspergillus udagawae, Aspergillus versicolor'4sperellus itenaü, Aureobasidium melcuyeenum, asidium namibiae, Aureobasidizun ndiutans, Aureobasidium subglaciale, Auricularia subglabra, 25 Bipolaris maydis, Ripa/tufs oryzae, &palans sorokiniana, Bipolaris vicioriae, Bipolaris zeicota, Bouyobasidium hotryosum, Botrytis cinerea, Ceratoeystis limbriata, Ceratocvstis platafi, Cereospora herteroae, Cercospora heticola, Cercospora zeina, Chaelomium globosum, Chaetomium globosum, Clohesyomyces aquaticus, Colletotrichum chlorophyti, Colletotrichum zoriraiae, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum graminicola, 30 Colletotrichum higginsianum, Colletotrichum ifcafuni, Colletotricbum nymphaede, Colletotrichum orbiculare, ('olletotrichum orehidophilum, Callerotrichum Colletatrichum sirurondsii, Colletorrichum sublineola, Colletotrichum °niella lustricola, Coniochoeta Orbni ria, Coi mespora cassitcr Cylindrohasidium fol-rendit, Daidinia sp., Diaporthe ampelina, Diaporihe helianthi, Diplocarpon rosae, Diplodia corticola, /*piocha seriata, Dothistroma septosporum, Eisinoe, Eisinoe austrahs, Emergomyces pasteuriana, Epicoccum Eutypa lita, glanduiosa, Fus'arium avenaceum, Fusarium culmorum, Fusarium Fluait/n gramilleari1111, langsethiae, Fusarium 112(1711ellé 111Sal ilyntantli FitYarilint 0.13",7)017fin Fusarium noac, Eusarium prokfèratton, Ensarium pseudogramineamm, Fusarium venenahen, Fusarnan verticillioldes, GCleiftnainiOlnyeeS Ginrea tozoyensi stellatum, Grosmannia ciavigera, Helicocarpus griseus, Heterohasidion 11 10 Hirsuiella minnesolensis, Histoplasma capsulaium. HOrtaect werneckii, Hydnomerulins pinastri, Himoxylon sp., litapia argiliacea, Leptosphaeria maculons, Leucoagaricu.s, Lomentaspora prolificans, Magnaporthe myzae, Mapmporthiopsis page, Marssonina brunnea, Marssonina coronariae, Melitnomyces bicolor, Metiniomyces variabihs, Microdochium holleyt Ifontlionhthora roreri, Mvcosphaerella eumusae'VeolUsicoccum 1.5 parvum, Neonectria ditissima, Ophiocordyceps australis, Ophioconlyceps camp:notirepedis, Ophiocordyceps unilaterafts'. Panaeolus cvanescens, Paraphaeosphaeria sporulosa, Parasiagonospora nodorum, Perliciifiopsis zonata, Penicillium ai" (merise, Penicillium brasil[anum, Penicillium camembert?, Pc=itfcfltrlfnd coprophilum, Petucillium digitalum, Penh:111nm? expansion, Penicillium fiavtgenwn, Penicillium Fenice/mn 20 i,riseotulvum, Pente/ilium nordicum,Penicillium oxaliCHM, Pentathlon poloniaon,Penicithum roqueffirti, Penicillium tubais, Penicilhum s Peniciifium subrubescens, Penrcilliueu vzrlpinu n, Peniophora, Pestalotiopsis norius, Phialocephala, scoptfOrmis, Phialocephala, subalpina, PlelirOhlS osireatus,Plicaturopsis Pseudogmuunsvus vetrucosusi'seudomassariefia 25 vexata,Putictularia strigosozonala, Pyrenochaeta,Pyrenophora teres,Pyrenophom repentis, Rhizoctonia sciant, Rhynchosporium commune, Rosellinia necatrix, Ruistroemia, Scedosporium apiospermum, Schizophyllum commune, Sclerotinia horealls, Sclerofinia sclerotiorum,Selpula lacrymans,Selosphaeria turcica,Sordaria macraspora,Sphaerulina musiva'SPorothrix brasiliensis,,ÇpOTOthfir inSCCOMM,SpOT011711X schenckii,Stachybotrys 30 chartarun'Stachybotrys chforohalortata, Stagonaspora, Stemphyhum tvcopersici, Diermotheiomyces thermophila, Thielavia terres tris, Thielaviopsis punctulata,Valsa Verruconis galiopava,Verticiffium allatfae,Verticillnon dahhae,Verticillium fongisporum. En particulier, la dite composition à activité polysaccharide-oxydase peut ètre caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue à partir d'un ou plusieurs organismes de type bactérie, champignon (par exemples champignons filamenteux) ou 5 levure, choisis parmi les genres : Escherichia, Lactococcus, Bacillus'Streptomyces, Pseudomonas, Phanerochaele, Achlya, Acremonium, Aspergillus, Cephalosporium, Chtysosporium, Cachtioholus, Endothia, Fusarium, Gliocladium, Humicola, Hypocrea, Myteliophlhora, itisrarc3,, Neurospora, Pvricularia, ihiefavia. iblypocladium, Trichoderma, Podospora, Pycnoporus, Fusarium, Thernumospora; tout particulièrement 1G Aspergillus ou Trichoderma ou Pochaspora; préférentiellement Aspergillus ou Podospora. En particulier, la dite composition à activité polysaccharide-oxydase peut ètre caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue à partir d'un ou plusieurs organismes de type champignon ou levure, choisis parmi les genres Achlya, Acremonium, A sper gil s, C ephalo sporium, Chryso.sporium, Cochli ()bolus, Endothia, Fu sarium, 1.5 (aioe7adizrm, Humicola, Hypocrea, Myceliophthora, Mucor, hleurospora, Penicilhum, Pyricularia, hie%rvaa, Tolmociadium, Trichoderma, Podospora, Pycmparus, Fusarium, lhermonaspora; tout particulièrement Aspergillus. ou Trichoderma ou Podospora; préférentiellement Aspergillus ou Podospora. Un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase selon e peut 20 également être obtenu de façon recombinante. Ainsi, une composition à activité polysaccharide-oxydase selon':'invention peut être caractérisée en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase est obtenu de façon recombinante. 25 Selon certains modes de réalisation, une composition à activité polysaccharide- oxydase selon l'invention comprend seulement un polypeptide (ou « enzyme » polysaccharide--oxydase selon vention, soit un polypeptide ayant une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°1 (provenant de Podospora cinserinat ou SEQ ID N°2 (provenant 30 de Aspergillus aculeatus}, en utilisant une méthode de comparaison BI.A.ST-P' la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le' ou moins. Selon certains modes de réalisation, ne composition c é polysaccharide- oxydase selon l'invention comprend une pluralité de polypeptides à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention, soit plus d'un polypeptide ayant une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique 5 de référence SEQ II3 N°1 (provenant de Podospora anserina) ou SEQ I31 N°2 (provenant de Aqtetgillus aculecaus), en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de leiI8 ou moins. Selon certains de ces modes de réalisation, une composition polysaccharide--oxydase selon l'invention comprend au moins 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 10 polypeptides à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention. Selon certains modes de réalisation, une composition à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention comprend en outre au moins un autre polypeptide à activité polysaccharide oxydase ; en particulier choisis) parmi les lytic polysaccharide monooxygenases, ce qui inclut les polypeptides appartenant aux groupes de LI)N10 AA9, 1.5 AA.10, AAI 1, AA13 et AA14. Selon certains modes de réalisation, une composition à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention peut être mise en oeuvre en tant que composition pour dégrader un substrat pol y saccharklique, tel que les biomasses fignocellulosiques. Selon certains autres modes de réalisation, composition à activité 20 polysaccharide-oxydase selon l'invention peut être mise en oeuvre en tant que composition auxiliaire en combinaison avec un ou plusieurs polypeptides à activité polysaccharidedégradase. Aussi, selon un mode de réalisation alternatif un polypeptide à activité 25 poIysacchar oxydase selon l'invention peut être mis en oeuvre sous forme de kit Avantageusement, un tel kit peut comprendre un polypeptide à a polysaccharide--oxydase ou une composition à activité polysaccharide-oxydase selon l'inventionet d'autre part un polypeptide à activité polysaccharide-degradase ou une composition comprenant le dit polypeptide à activité polysaccharide-dégradase. 30 Ainsi, l'invention concerne également un kit comprenant au moins 28 - une première partie comprenant un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention, ou une composition comprenant le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase, - une seconde partie comprenant un polypeptide à activité polysaccharidedegradase choisi parmi une cellulase, une hémicellulase, une ligninase et une carbohydrate oxydase, ou une composition comprenant le dit polypeptide à activité polysaccharidedégradase. De tels kits peuvent, notamment, correspondre à des kits pour : 10 l'obtention d'un sucre à partir d'un substrat polysaccharidique ; - la préparation d'un produit de fermentation d'un substrat polysaccharidique ; - la production d'alcool à partir d'un substrat lignocellulosique - la préparation d'un substrat cellulosique pour la fabrication de fibres de cellule - la défibrillation d'un substrat cellulosique ; 1.5 - la fabrication de fibres de cellulose. Selon un autre mode de réalisation, l'invention concerne un hôte apte à exprimer de manière recombinante un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention. Le dit hôte peut être notamment une cellule procaryote ou eucaryote. Selon un 20 mode particulier de réalisation, le dit hôte est une levure ou une bactérie ou un champignon, par exemple un champignon filamenteux. Selon 1 n, un « hôte » peut notamment être une levure dans un groupe comprenant : Saccharomyces, Kiuyveromyces, Candida, Pichia, ,.'s'chiza.s-ac haromyces, Hansenula, Kloeckera ,S"Chwanniomyces, et tlarrowia. 25 En particulier, les levures peuvent être choisies parmi: S. cerevisiae, S. iinlderi, S. bararett, S. exig[uus'X M'CIFILUP '1*;. diaSkitiCUS, k. kalis, K. MarrialMS, or K. Selon certains modes de réalisation, ie parmi: Saecharon, cerevisiae, Schizzosaccharomyces pombe, Issatchenkla orientahs, Candida albicans, 30 Candida mexicana, Pichia pastoris, Pichia mississipplensis, Pichia mexicam,t, st pairs, Pichia Llarinosa, Ciavispora opuntiae' Clavispora lusitaniae, Yarirowia hpolytica, Hansenula polymorpha, Phaffia rhodozyma, Candida unlis, Accula adeninivorans, 29 Debaryr rnvices Fransetafi,Debaryomyces polymorphus, Scwomyees pombe, Hansenula polymoipha, et Schwanniomyces occidentalis. Selon d'autres modes de réalisation un «hôte» peut notamment être une bactérie choisie dans un groupe comprenant Lscherichia, Lactococcus, Bacilius, Streptomyces, Pseudomonas, Selon d'autres modes de réalisation un « hôte » peut notamment être un champignon choisi dans un groupe comprenant : Aspergillus, frichoderma, Podaspora, Myteliophlhora, Chusasporium, Neuraspora, Fusurium, Phanerochaele, Selon un mode de réalisation préféré, le dit hôte est une levure. 10 L'invention concerne égaiement un acide nucléique isolé codant pour un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention. Ainsi, un acide nucléique permettant l'expression d'un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention peut être introduit dans le génome d'un hôte (i.e. 1.5 levure) d'intérêt, ou encore introduit en tant que vecteur non-integre selon des techniques d'ingénierie génétique connues dans le domaine. L'invention concerne également un procédé de production d'un polypeptide à activité polysaccharide oxydase; comprenant une étape de mise en culture d'un hôte apte à exprimer un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention. 20 Aussi, l'invention concerne des vecteurs incluant un acide nucléique codant pour un polypeptide à activité polysaccharide oxydase selon l'invention. Les dits vecteurs plasmides ou YAC) sont en particulier des vecteurs d'expression capable de diriger l'expression d'un gène donné, et associés à un opéron. 25 L'invention concerne donc également un procédé de production polypeptide à activité -saccharide oxydase; consistant à: (a) cultiver un hôte apte à la production d'un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase; caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence 30 SES ID (provenant de Podaspora anserina) ou SES ID N°2 (provenant de Aspergillus aculeatus), en utilisant une méthode de comparaison .13LAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e--value de le' Is ou moins ; et rt récupérer le dit polypeptide du dit hôte. Procédés d'obtention de sucres à partir de substrats polvsaccharidiques Les polypeptides à activité polysaccharide-oxydases selon l'invention peuvent être mis en oeuvre à la fois dans des procédés d'obtention d'un sucre à partir d'un substrat poiysaccharidique, des procédés de fermentation et de production d'alcool à partir d'un substrat lignocel Eulosi que. Des procédés d'obtention d'éthanol à partir de substrats polysaceharidiques, 10 tels que les biomasses lignocellulosique, sont ainsi décrit dans Margeot et at ("New improyements for lignocellulosic ethanol"; Current Opinion in Biotechnology; 20:372-380, 2009). Ainsi, un procédé complet de production d'éthanol à partir de biomasse lignocellulosique comprend généralement quatre étapes principales: 1.5 1. un pré-traitement du substrat polysacch, (i.e. biomasse lignocellulosique); pour casser la structure de la paroi lignocellulosique, en liquéfiant certains composants et en diminuant la cristallinité de la cellulose. Il existe des pré-traitements physiques (mécaniques ou hydrothermaux) qui permettent la réduction de la taille des particules et la solubilisation d'une partie des 20 hémicelluloses, des pré-traitements chimiques qui utilisent des acides, bases ou agents oxydants pour solubiliser les hémicelluloses et retirer la lignine, et des prétraitements biologiques qui utilisent des espèces fongiques capables de dégrader la lignine. Certains pré-traitements combinent des méthodes physiques et chimiques comme par exemple l'explosion à la vapeur en présence d'acide dilué ou l'explosion à froid à l'ammoniaque. 25 hydrolyse enzymatique du dit substrat, consistant à dépolymériser la cellulose émicelluloses restantes en monomères, à l'aide d'enzymes spécifiques. Ces enzymes sont secrétées par une variété d'organismes cellulolytiques, aérobies ou anaérobies, mésophiles ou thermophiles, appartenant notamment aux genres 30 Clostridium, Thermornonospora, Celiulomonas, Bacteriodes ou Streptomyces pour les bactéries, et Phanerochaete, Trichoderma, Aspergillus ou Persicillium pour les champignons filamenteux. 3. une fermentation du dit substrat pour obtenir le dit éthanol à partir des sucres (i.e. pentoses et hexoses) issus de l'étape d'hydrolyse. Cette étape de fermentation est notamment mise en oeuvre par des 5 microorganismes tels que la levure Saccharomyces' cerevisiae, qui est le microorganisme le plus utilisé dans l'industrie grâce à ses forts rendements et sa faible sensibilité aux inhibiteurs. Cependant, elle n'est naturellement pas capable d'utiliser les pentoses produits lors de l'hydrolyse enzymatique. Aussi, afin d'améliorer les rendements, des souches modifiées capables de fermenter des sucres tels que le xylose l'arabinose ont été 10 développés. 4, une puri ion du dit éthanol, généralement en vue de son utilisation en tant que carburant, qui doit répondre à un certain nombre de spécifications. Cette purification consiste donc généralement en une distillation, une rectification et une déshydratation Selon un ;iode de réalisation, ces étape peuvent être réalisées séparément, ou encore simultanément. Par exemple, ces différentes étapes peuvent être réalisées séparément, comme c'est le cas dans un procédé noté SHE ("Separate Hydrolysés and 20 Fermentation") où les enzymes et les levures peuvent être utilisés chacun dans leurs conditions optimales. Il est aussi possible de réaliser ces étapes simultanément, par un procédé que n'on nomme SSCF ("Simultancous Saccharification and (.7o-Fermentation") Enfin, le concept de bioprocédé consolidé ("Consolidated Bioprocessing" ou CEP) propose d'effectuer la production de cellulases, l'hydrolyse enzymatique et la fermentation 25 à l'aide d'un seul microorganisme. Afin de rendre le hioéthanol iignocellulosique rentable, il est généralement nécessaire d'optimiser chacune des étapes de sa production. Il est notamment essentiel de bien choisir le pré-traitement adapté au type de biomasse traitée, afin de maximiser son effet, tout en limitant la formation d'inhibiteurs et en réduisant les coûts et la 30 consommation d'énergie. L'hydrolyse enzymatique est souvent considérée comme l'étape la plus critique et termes de rendements et de coût. Les polypeptides à activité polyssaccharide oxydases selon l'invention sont particulièrement avantageux dans le cadre d'une étape d'hydrolyse de substrats polysacch ari di ques. Ainsi, selon un mode de réalisation,l'invention concerne an procédé 5 d'obtention d'un sucre à partir d'un substrat polysaccharidique, comprenant au moins une étape de mise en contact du dit substrat avec un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase, comprenant une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°1 (provenant de Podospora anserina) ou SEQ ID N°2 (provenant de Aspergillus aculeatus), en utilisant une méthode 1G de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une évalue de le-18 ou moins, ou d'une composition à activité polysaccharide oxydase comprenant le dit polypeptide. En particulier, ['invention concerne un procédé d'obtention d'un sucre à partir d'un substrat polysaccharidique, comprenant au moins une étape de mise en contact du dit 1.5 substrat avec un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase, comprenant une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°5 (provenant de Podospora anserina) ou SEQ ID N°6 (provenant de Aspergillus aculeatus), en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e--value de le-18 ou moins, ou 20 composition à activité polysaccharide oxydase comprenant le dit polypeptide. Ainsi, n concerne un procédé d'obtention d'une sucre à pan d'un substrat po!ysaccharidique, comprenant les étapes de : a) disposer d'un substrat polysaccharidique 25 b) mettre en contact le dit substrat polysaccharidique avec un un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase, comprenant une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°1 (provenant de Podospora anserina) ou SEQ ID N°2 (provenant de. Aspergillus aculeatus), en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison 30 BLAST-P donnant une e-value de le-`11 ou moins, ou d'une composition à activité polysaccharide oxydase comprenant le dit polypeptide ; c) collecter le dit sucre obtenu à l'issue de l'étape b). 33 En particulier, l'invention concerne un procédé d'obtention d'un sucre à partir d'un substrat polysaccharidique, comprenant les étapes de : a) disposer d'un substrat polysaccharidique ; b) mettre en contact le dit substrat polysaccharidique avec un un polypeptide à 5 activité polysaccharide-oxydase, comprenant une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°5 (provenant de Podospora anserina) ou SEQ ID N°6 (provenant de .Aspergillus aculeatus), en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e. value de 1 e'is ou moins, ou d'une composition à activité 10 polysaccharide oxydase comprenant le dit polypeptide ; c) collecter le dit sucre obtenu à l'issue de l'étape b). En particulier, concerne un procédé d'obtention d'un sucre tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que le dit substrat est un substrat lignocellulosique, et tout particulièrement une biomasse .iignocel.iulosique. Selon un autre mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de préparation d'un produit de fermentation à partir d'un substrat polysaccharidique, caractérisé en ce comprend l'obtention d'un sucre par un procédé tel que défini ci- 20 dessus, et la fermentation dudit sucre de sorte à obtenir un produit de fermentation. Ainsi, l'invention concerne un procédé de préparation d'un produit de fermentation à partir d'un substrat polysaccharidique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) mettre en contact le dit substrat avec un polypeptide à activité 25 polysaccharide-oxydase, comprenant une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ N°1 (provenant de Podospora anserina) cu SEQ ID N°2 (provenant de Aspergillus aculeatus), en utilisant une méthode de comparaison RLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le' ou moins, ou d'une composition à activité polysaccharide 30 oxydase comprenant le dit polypeptide, de sorte à obtenir un sucre ; b) fermenter le dit sucre de sorte à obtenir un produit de fermentation. En particulier, l'invention concerne un procédé de préparation d'un produit de fermentation à partir d'un substrat polysaccharidique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) mettre en contact le dit substrat avec un polypeptide à activité 5 polysaccharide-oxydase, comprenant une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°5 (provenant de Podospora anserina) ou SEQ ID N°6 (provenant de Aspergillus aculeatus), en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le-i8 ou moins, ou d'une composition à activité polysaccharide 1G oxydase comprenant le dit polypeptide, de sorte à obtenir un sucre ; h) fermenter le dit sucre de sorte à obtenir un produit de fermentation. Selon un autre mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'alcool à partir d'un substrat lignocellulosique, caractérisé en ce qu'il comprend l'obtention d'un sucre par un procédé tel que défini ci-dessus, et la fermentation alcoolique dudit sucre par un microorganisme alcooligéne. Le produit de la fermentation est préférentiellement le butanol, d'éthanol, d' isopropanol ou d'un de leurs mélanges. 20 Ainsi, dans le cadre de la fermentation ethanolique, le produit de fermentation alcoolique considéré est l'éthanol. Aussi., de maniére préférée, un procédé de fermentation et/ou production d'alcool selon vention est un procédé de production de butanol, d'éthanol, d' isoprepanol ou d'un de leurs mélanges. 2.5 Ainsi, I v concerne tin procédé de production d'alcool à partir d'un substrat lignocellulosique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) mettre en contact le dit substrat avec un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase, comprenant une séquence présentant une identité d'acide aminé 30 d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ III N°1 (provenant de Podaspora anserina) ou SEQ H) N°2 (provenant de Aspergillus aculeatus), en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de 1 e-'8 ou moins, ou d'une composition à activité polysaccharide oxydase comprenant le dit polypeptide, de sorte à obtenir un sucre ; b) fermenter le dit sucre par un microorganisme alcooligène de sorte à produire le dit alcool 5 En particulier, l'invention concerne un procédé de production d'alcool à partir d'un substrat lignocellulosique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) mettre en contact le dit substrat avec un polypeptide à activité polysaccharide--oxydase, comprenant une séquence présentant une identité d'acide aminé 1G d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ. 111 N°5 (provenant de Poclospora cm:serina) ou SEQ ID N°6 (provenant de Aspergillus aculeatus), en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P; la dite méthode de comparaison ELA ST-P donnant une eryolue de le' ou moins, ou d'une composition à activité polysaccharide oxydase comprenant le dit polypeptide, de sorte à obtenir un sucre ; 1.5 1)) fermenter le dit sucre par un microorganisme alcooligene de sorte à produire le dit alcool. Fibres de cellulose, procédés de préparation de substrats et de .éli ° -ion ris de Série 22 INRA) 20 Différentes formes de cellulose ont été identifiées avec une dimension de l'ordre du nanomètre, désignées sous le nom générique de « nalloceikeloses ». Les propriétés notamment mécaniques des fibres de cellulose, dont ces nanocelluloses' leur capacité à former des films et leu: viscosité, leur confèrent également un intérêt majeur dans de nombreux domaines industriels. Plusieurs stratégies de prétraitements des fibres de 5 cellulose ont ainsi été développées afin de réduire la consommation d'énergie requise pour leur délamination mécanique. Les procédés définis ci-après concernent l'obtention de e celluloses à partir d'un substrat cellulosique. ils impliquent la mise en oeuvre d'un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention. 30 Selon un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de préparation d'un substrat cellulosique pour la fabrication de fibres de cellulose, lequel procédé comprend au moins les étapes suivantes consistant à : a) disposer d'un substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose 5 b) mettre en contact, en présence d'un donneur d'électron, le dit substrat avec au moins un polypeptide à activité polysaccharide oxydase, dans des conditions aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de cellulose; caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase présente une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence 1G SEO 111 N°1 ou SEQ ID N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison I3LAST-P donnant une e-value de le'18 ou moins. Selon -un mode particulier de réalisation, l'invention concerne un procédé de préparation d'un substrat cellulosique pour la fabrication de fibres de cellulose, lequel 1.5 procédé comprend au moins les étapes suivantes consistant à a) disposer d'un substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose ; b) mettre en contact, en présence d'un donneur d'électron, le dit substrat avec au moins un polypeptide a. activité polysaccharide oxydase, dans des conditions aptes à assurer un clivage oxydant' desdites fibres de cellulose; 20 caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase présente une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEO ID N°5 ou SEO IL) N°6, en utilisant une méthode de comparaison BLA.ST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de ie-is ou moins. 25 Selon un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de défibrillation d'un substrat cellulosique, lequel procédé comprend au moins les étapes suivantes consistant à : a) disposer d'un substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose, lequel a été préalablement mis en contact avec un donneur d'électrons et un polypeptide à 30 activité polysaccharide-oxydase, dans des conditions aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de cellulose en présence d'un donneur d'électron; et b) traiter mécaniquement dit substrat cellulosique, fi briller le dit substrat, se présente une Bique de référence caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide-o identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence p SEQ ID N°1 ou SEQ IIà N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le-'5 ou moins. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne un procédé de défibrillation d'un substrat cellulosique, lequel procédé comprend au moins les étapes 1G suivantes consistant à : a) disposer d'un substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose, lequel a été préalablement mis en contact avec un donneur d électrons et un polypeptide à identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polype' clivage oxydatif défi:briller le dit ase présente une tidique de référence activité polysaccharide-oxydase, dans des conditions aptes à assurer un desdites fibres de cellulose en présence d'un donneur d'électron; et I)) traiter mécaniquement ledit substrat cellulosique, afin substrat, caractérisé n ce que le dit polypeptide à act polysaccharide-, SEQ ID N°5 ou SEQ ID N°6, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite 20 méthode de comparaison 13LAST-P donnant une e-value de I e.-18: ou moins. Selon un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de fabrication de fibres de cellulose, lequel procédé comprend au moins les étapes suivantes consistant à: a) disposer d'un substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose ; I)) mettre en contact, en présence d'un donneur d'électron, ledit substrat 25 cellulosique avec au moins un polypeptide à activité polysaccharide oxydase dans des conditions aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de cellulose; c) traiter mécaniquement ledit substrat cellulosique, afin de fabriquer lesdites fibres de cellulose à partir du dit substrat cellulosique, caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase présente une 30 identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ N°1 ou SEQ ID N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e--value de le- Is ou moins. 38 Selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne un procédé de fabrication de fibres de cellulose, lequel procédé comprend au moins les étapes suivantes consistant à: 5 a) disposer d'un substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose ; b) mettre en contact, en présence d'un donneur d'électron, ledit substrat cellulosique avec au moins un polypeptide à activité polysaccharide oxydase dans des conditions aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de cellulose; c) traiter mécaniquement ledit substrat cellulosique, afin de fabriquer lesdites 10 fibres de cellulose à partir du dit substrat cellulosique, caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase présente une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°5 ou SEI? ID N°6, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e- value de le-is ou moins. Le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase selon l'invention est mélangé avec le substrat cellulosique, de manière à permettre la mise en contact entre le dit polypeptide el les libres de cellulose. L'étape de traitement enzymatique est de préférence réalisée sous agitation 20 douce, de façon à assurer une bonne dispersion des enzymes au sein des fibres. Cette étape de traitement enzymatique est par exemple mise en oeuvre pendant une durée allant de 24h à 72h (de préférence 48h). De préférence, l'étape de traitement enzymatique est mise en oeuvre à une température allant de 30 à 50 `IC, notamment de 30 à 45 'C. 25 Le pH des conditions réactionnelles de l'enzyme au contact du substrat cellulosique est généralement compris entre 3 et 7, ce qui inclut entre 4 et 7, et notamment entre 4 et 6 Selon l'invention le dit polypeptide peut être ajouté au substrat cellulosique selon un rapport (ou ratio) enzyme/cellulose allant de 1 :1000 à 1 :50, notamment de 1 :500 30 à :50 ou de I .100 à I :50 ou encore de 1 :1000 à 1. :500, de I 500 à 1 : 100. De préférence, le dit polypeptide est utilisé à une concentration allant de 0,001 à 10 g/L, notamment de 0,1 à 5 g/L, et de préférence encore de 0,5 à 5 g/L. 39 Selon un mode de réalisation particulier, le substrat cellulosique est soumis à au moins deux (voire seulement à deux) étapes de traitement enzymatique successives (en série, avantageusement séparées par une étape de rinçage)- ou les, polypeptide(s) mis en oeuvre au cours de chacune de ces étapes de 5 traitement enzymatique sont identiques ou différentes les conditions (notamment le ratio enzyme/substrat) sont identiques ou différentes entre ces étapes successives. De manière non-exclusive, des tests de clivage de la cellulose par un polypeptide selon l'i -tion peuvent être menés selon le protocole suivant : Par exemple un test de clivage peut être réalisé dans un volume de 300 0 de 1G liquide contenant 4,4 el d'enzyme LPMO et 1 mN1 d'ascorbate et 0,1 (poids/volume') de poudre de cellulose gonflée à l'acide phosphorique (PASC phosphoric acid-swoller cellulose - préparée comme décrit dans Wood TM, Alethotis Enzmi 1988, 160 :19-25) dans 50 inlvl d'un tampon acétate de sodium à pH 4,8 ou 5 tM de cello-oligosaccharides (Megazyme, Viricklow, Ireland) dans 10 mM de tampon acétate de sodium à pH 4,8. 1.5 La réaction enzymatique peut être mise en oeuvre dans un tube de 2 mi incubé dans un thermomixer (Eppendorf, Montesson, France) à 50°C et 580 rpm (rotation par minute). Les fibres sont mises en contact des enzymes (à une concentration comprise entre 1 et 5 g/L et selon des rapports enzyme/cellulose de 1 :50, 1 :100, 1 :500 et 1 :1000) 20 et d'ascorbate (2 m M) puis soumises à une agitation douce pendant 48 heures à 40 'C. Après 16 h d'incubation, l'échantillon est porté à 100°C pendant 10 minutes afin de stopper la réaction enzymatique, puis centrifugé à 15 000 tours par minutes (rpm) pendant 15 minutes à 4°C, afin de séparer la fraction solution de la fraction insoluble restante. 25 Les fibres traitées sont ensuite soumises à une action mécanique avec un homogeneiseur-disperseur (Ultra-Turrax puissance 500 W, vitesse maximum pendant 3 minutes), suivie d'un traitement aux ultrasons pendant 3 minutes. Selon un mode de réalisation, les dits procédés sont caractérisés, en ce que les 30 fibres de cellulose obtenues à l'issue du procédé sont des nanofibrilles de cellulose. Selon un mode de réalisation, les dits procédés sont caractérisés, en ce que le donneur d'électron est choisi parmi l'ascorbate, le gal late, le catéchol, le glutathion réduit, les fragments de lignine et les carbohydrates déshydrogénases fongiques ; et de préférence I 'ascorhate. Selon un mode de réalisation, les dits procédés sont caractérisés, en ce que le substrat cellulosique est obtenu à partir de bois, d'un végétai fibreux riche en cellulose, de betterave, d'agrumes, de plantes annuelles à paille, d'animaux marins, d'algues, de champignons ou de bactéries. Selon un mode de réalisation, les dits procédés sont caractérisés, en ce que le substrat cellulosique est choisi parmi les p )apetières chimiques, de préférence les pâtes papetières de bois chimiques, de préférence encore l'une au moins des pâtes papetières suivantes : les pâtes blanchies, les pâtes semi-blanchies, les pâtes écrues, les pâtes au bisulfite, les pâtes au sulfate, les pâtes à la soude, les pâtes kraft. Selon un mode de réalisation, les dits procédés sont caractérisés, en ce que le 15 substrat cellulosique est une pâte papetière dérivée du bois, de plantes annuelles ou de plantes à fibres. Selon un mode de réalisation, les dits procédés sont caractérisés, en ce que ladite au moins une étape de traitement mécanique comprend l'un au moins des traitements mécaniques suivants 20 - un traitement d'homogénéisation, un traitement de microfluidisation. - un traitement d'abrasion, et/ou - un traitement de cryobroyage. Selon un mode de réalisation, les dits procédés sont caractérisés, en ce que, suite 25 â ladite étape de traitement mécanique, ledit procédé comprend une étape de post- traitement choisie parmi : un traitement acide, un traitement enzymatique, une oxydation, une acétylation, une silylation, ou encore une dérivatisation de groupements chimiques portés par les dites fibres de cellulose. Selon un autre objet, l'invention concerne des fibr= s de celluloses issues d'un 30 procédé de défibrillation etlou d'un procédé de fabrication de fibres de cellulose tels que définis ci-dessus. Les dites fibres de celluloses peuvent être caractérisées en ce que lesdites libres de cellulose, de préférence de nanocellulose, comportent des cycles de glucose dont au moins un atome de carbone est oxydé en position(s) C i et/ou C.4, voire également C6. Selon un mode de réalisation aréféré, les fibres de celluloses sont nanofibrilles de cellulose. Fraie() de Le substrat cellulosique mis en contact avec la dite enzyme est ensuite soumis à au moins une étape de traitement mécanique qui est destinée à délaminer les fibres de 10 cellulose pour l'obtention des nanocelluloses. La délamination (dite encore «fibrillation » ou « défibrillation ») consiste à séparer, par un phénomène mécanique, les fibres de cellulose au sein du substrat cellulosique, notamment pour la fabrication de nanocelluloses. Comme démontré, le clivage oxydatif des fibres de cellulose, catalysé par ladite 15 au moins une LP1\10, facilite la délamination de ces fibres de cellulose lors de l'étape de traitement mécanique. Cette étape de délamination mécanique des fibres de cellulose peut alors être dans des conditions moins drastiques et donc moins coûteuses en énergie. Les traitements mécaniques visant a délaminer les fibres de cellulose sont 20 connus de l'homme du métier et peuvent être mis en oeuvre dans le(s) procédé(s) de l'invention. De manière générale,on peut citer les traitements mécaniques faibles avec un homogénéiseur-disperseur (par exemple du type d'Ultra-Turrax) et/ou les traitements ultrasons. 25 On peut encore par exemple se référer au document de Lavoine N et al (Carbohydrate Polymers, 20 92.) :735-64) qui décrit notamment (pages 740 à 744) des traitements mécaniques pour la préparation de cellulose microlibrillée (par exemple des nanofibrilles de cellulose). Typiquement, un traitement mécanique peut être choisi parmi des traitements 30 mécaniques d'homogénéisation, de microlluidisation, d'abrasion, ou de cryobroyage. Le traitement d'homogénéisation implique le passage du substrat cellulosique pretraité, typiquement une pâte de cellulose ou une suspension liquide de cellulose, au navets d'un espace étroit sous pression élevée (tel que décrit par exemple dans le brevet US 4,486,743). Ce traitement d'homogénéisation est de préférence effectué au moyen d'un homogénéisent de type Gaufra. Dans un tel dispositif, le substrat cellulosique prétraité, 5 typiquement sous forme d'une suspension de cellulose, est pompé à haute pression et distribué au travers d'une valve automatique de faible orifice. Une succession rapide d'ouvertures et de fermetures de la valve soumet les fibres à une importante chute de pression (généralement d'au moins 20 N1Pa) et à une action de cisaillement à vitesse élevée suivie d'un impact de décélération à vitesse élevée. Le passage du substrat dans l'orifice est IG répété (généralement de 8 à 10 fois) jusqu'à ce que la suspension de cellulose devienne stable. Afin de maintenir une température du produit dans une gamme allant de 70 à 80°C durant le traitement d'homogénéisation, de l'eau de refroidissement est généralement utilisée. Ce traitement d'homogénéisation peut également être mis en oeuvre à l'aide d'un 1.5 dispositif de type microfluidiseur (voir par exemple Sisqueira et al. Polymer 2010 2(4) :728-65). Dans un tel dispositif, la suspension de cellulose passe au travers d'une tine chambre typiquement en forme de « z» (dont les dimensions du canal sont généralement comprises entre 200 et 400 uni) sous pression élevée (environ 2070 bars). Le taux de cisaillement élevé qui est appliqué (généralement supérieur à 107.s-1) permet d'obtenir des 20 nanotibrilles très fines. Un nombre variable de passages (par exemple de 2 à 30, notamment de 10 à .30 ou de 5 à 25, et en particulier de 5 à 20) avec des chambres de tailles différentes peut être utilisé, pour augmenter le degré de fibrillation. Le traitement d'abrasion ou de meulage (voir par exemple iwamoto Set al., 2007 Applied Physics A89(2) :461-66) est basé sur l'utilisation d'un dispositif de meulage apte à 25 exercer des forces de cisaillement fournies par des pierres de meulage. Le substrat cellulosique prétraité, généralement sous forme d'une pàte de cellulose, est passé entre une pierre de meulage statique et une pierre de meulage en rotation, typiquement à une vitesse de l'ordre de 1500 rotations par minute (ipm). Plusieurs passages (généralement entre 2 et 5) peuvent être nécessaires pour obtenir des fibrilles de 30 taille nanométrique. Un dispositif de type mixeur (par exemple tel que décrit dans Unetani K et al., Biomacr tolecules 2011, ln D 348-53) peut également être utilisé pour produire des 43 microfibrilles à partir du substrat cellulosique é ailé, par exemple à partir d'une suspension de fibres de bois. Le traitement de cryobroyage (ou cryoconcassage) (Duttesne et al., 1997, Journal cf .Applied Polymer Science, 64(6) :1185-94) consiste à broyer une suspension de substrat cellulosique prétraité préalablement congelée avec de l'azote liquide. Les cristaux de glace formés à l'intérieur des cellules font exploser les membranes cellulaires et libèrent des fragments de parois. Ces procédés sont généralement utilisés pour la production de microfibrilles de cellulose à partir (le produits, ou de résidus, de l'agriculture. 10 Fiippi1/42fie pos1:fretmet?' far signi Jtsfilyjosiluw Dans certains modes de réalisation, le procédé de défibrillation et/c fabrication de fibres de cellulose comprend au moins une étape de post-traitement du substrat cellulosique, mise en oeuvre après que ledit substrat ait été soumis au traitement mécanique. Généralement, ladite au moins une étape de post-traitement vise à augmenter le degré de fibrillation des celluloses (notamment des nanocelluloses) obtenues et/ou à conférer auxdites nanocelluloses de nouvelles propriétés mécaniques, en fonction des applications envisagées. Ladite au moins une étape de post-traitement peut notamment être choisie parmi 20 un traitement acide, un traitement enzymatique, une oxydation, une acétylation, une slylation, ou encore une dérivatisation de certains groupements chimiques portés par les microfibrilles. On peut également se référer par exemple au document de Lavoine N et al (Carbohydrate Polymers, 2012, (92) :735-64) qui décrit notamment (point 13, pages 747 à 748) des post-traitements qui peuvent être combinés à différents prétraitements et 25 traitements mécaniques des fibres de celluloses. EXEMPLES Exemple 1 : Souches fongiques et conditions de culture La souche d'Aspergillus japonicus utilisée dans cette étude est maintenue dans 5 la collection du Centre International de Ressources Microbiennes - Champignons Filamenteux (CIRM-CF, INRA, Marseille, France) sous le numéro d'accession CERM BRFM. Elle a été cultivée sur milieu gélose MYA2, contenant 20 g/l d'extrait de malt, 20 g!l d'agar et 1 d'extrait de levure. Les spores ont été récoltées et conservées à -80°C dans 20% de glycérol et 80% d'eau. 1G Les milieux de culture liquides contenant une fraction autoclavée de son de maïs ou de la pulpe de betterave (fournis par ARD, Pomacle, France) en tant que source de carbone et inducteur de sécrétion de protéines ont été préparés da la manière suivante : 15 gil d'inducteur ; 2,5 de maltose; 1,84 de tartrate d'ammonium comme source d'azote; 0,5 g/l d'extrait de levure; 0,2 g/L de 10/12PO4; 0,0132 g/L de CaC12.21120 et 0,5 gilL de 1.5 MgSO4 71-120. Un autre milieu inducteur a été préparé en utilisant 4 gli d'Ayicel (Sigma- Aldrich, USA); 10 g/1 de xylose; 1,8 gli de tartrate diammonium; 0,5 d'extrait de levure; 0,2 gil de 1012PO4; 0,0132 g/11. de CaC12.21120 et 0,5 g/L de MgSO4.71120. Les trois milieux de culture ont été inoculés par 2x105spores/ML des cinq souches, et incubés dans des fioles bafflées dans l'obscurité à 30°C sous agitation rotative à 20 105 rpm (lnfors FIT, Suisse). Exemple 2 : Préparation des séerétomes Après 7 jours d'incubation, les cultures ont été arrêtées et le milieu liquide a été séparé du mycélium à l'aide de Miracloth (Calbiochem, USA). 40 rriL ont été filtrés sur des 25 membranes de polyéthersulfone 0,22 pin (Mera-Millipore, Allemagne) puis diafiltrés et concentrés sur des membranes de poiyéthersuifone avec un seuil de coupure de 101:Da (Vivaspin, Sartorius, Allemagne) dans du tampon acétate de sodium 50mM pHS jusqu'à un volume final de 2 rut.. Les sécrétomes ont été conservés à -20°C, et leur concentration totale de protéines a été évaluée par les méthodes de Bradford (Bio-Rad Protein Assay, 30 Ivry, France) et du BCA (Bicinchoninic Acid Protein Assas, Sigma-Aldrich) en utilisant une gamme standard d'albumine sérique bovine (B SA). Exemple Clonage de gênes et expression recombinante chez Maki pastoris : Les séquences protéiques sélectionnées, desquelles on a ôté les séquences prédites des peptides signaux natifs, ont été utilisées pour générer des séquences 5 nucléotidiques codantes optimisées pour une expression chez P. pastorts. La synthèse totale des gênes a été réalisée (Genewiz, USA) et ils ont été clonés dans le vecteur d'expression pPICZaA (Invitrogen), de manière à être en phase avec la séquence signal utilisée (celle du facteur a de la levure) et avec la séquence codant pour l'étiquette polyhistidine Cl-terminale. 1G Les plasmides ont ph >s via une transformation de cellules compétentes Dtlia d'Escherichia coli, puis purifiés à l'aide d'un kit HiSpeed Piasmid Midi (f)iagen, Pays-Bas), linéarisés par l'enzyme de restriction Pinel et transformés dans des cellules X33 de Pichia postons (Invitrogen) par electroporation. Les transformants ont été isolés sur un milieu gélosé contenant de la zéocine (100 et 500 nig(E). 1.5 Pour tester l'expression de chaque vecteur, plusieurs transfi.rmant résistants la zéocine ont été cultivés en plaque de 24 puits, dans 5 int, de milieu de croissance BMGY contenant 0,2 giL de biotine, à 30°C et 250 rpm pendant environ 16h, jusqu'à atteindre une densité optique à 600 mn comprise entre 2 et 6. Après centrifugation, les cellules ont été reprises dans 1 mL de milieu BMMY et incubées à 20°C et 200 rpm 20 pendant 3 jours afin d'induire l'expression des protéines; le milieu a été supplémenté chaque jour par du méthanol à 3% (vol/vol). Les surnageants de culture ont été purifiés par chromatographie d'affinité avec des billes selon une procédure automatisée décrite par Haon et ah Recombinant protein production lticility fer frimai biomass-degrading ex v nes using the yeast Plehh, pastorà ». Front. Mierobiol. 6. 2015), et les protéines 25 purifiées ont été déposées sur un gel SDS-PAGE sans coloration avec révélation par photo- activation et fluorescence (BioRad, France) pour vérifier leur production. Afin de produire les protéines en quantités suffisantes, les transformants ayant le meilleur taux de sécrétion ont été cultivés dans 2 L de milieu BMGY contenant I mL![, de sels PTM4 (Pichia Trace Minerais 4), 0,2 giL, de biotine dans des fioles à 30°C, et 250 30 rpm pendant environ 16h, jusqu'à atteindre une densité optique à 600 mn comprise entre 2 et 6. L'expression des protéines a été induite en incubant les cellules dans 400 trit, de milieu BIWVIY contenant 1 mLit de sels PTM4 à 20°C et 200 rpm pendant 3 jours, durant lesquels le milieu a été supplémenté par du méthanol à 3% (vol/vol) chaque jour. Les surnageants ont été récupérés par centrifugation (4000xg, 4°C, 10 min) et filtrés sur des membranes de 0,45 um (Millipore) pour éliminer les cellules restantes. Une colonne de nickel chélaté His-Bind Resin (1.9 cm3 ; GE Healthcare, DK) a été connectée à un appareil de FPLC Akta. (GE Healthcare) et équilibrée avec du Tris-1IC1 50 rn_M (pH 7,8), de NaCI 50 MM et de l'imidazole 10 Après avoir ajusté le pH à 7,8, les surnageants ont été chargés sur la colonne à 4°C. La colonne a été lavée avec le tampon d'équilibrage (TrisHCl 50 inM pH 7,8, NaCI 50 mM,, imidazole 10 mM) et les enzymes ont été éluées avec le même tampon contenant 150 mM d'hnidazole Les éluats ont été concentrés à l'aide 1G d'unités de centrifugation Amicon (seuil de coupure 10 kDa ; Millipore) à 4000xg et lavés à plusieurs reprises avec du tampon acétate de sodium 50 inlyl (pH 5). Une fraction de chaque éluat a été chargée sur un gel SDS-PAGE sans coloration avec révélation par photo-activation et fluorescence (Bio Rad, France) pour vérifier leur pureté_ La concentration en protéines a été déterminée par absorption à 280 nrn à l'aide d'un spectrophotomètre Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific) et des niasses et coefficients molaires théoriques calculés à partir des séquences protéiques. Exemple 4 Tests de dégradation de la cellulose en présence de polypeptides selon l'invention 20 Les tests de dégradation de la cellulose par les polypeptides à activité polysaccharide oxydase ont été effectués en triplicats, dans un volume de 300 pl, contenant 1% (m/v) d'Avicel (Sigma-Aldrich) ou de PASC (Pho,sphoric Acitl Swollen Cellulose), préparée à partir d'Avicel selon la méthode décrite par Wood (« Preparation of crystalline, amorphous, and dyed cellulase substrates. in Methods in Enzymology, (Academic Press), 25 pp. 19-25) dans du tampon phosphate 50 mM pH 6. Les L13100 (0,5 à 5 uM) et le donneur d'électrons (L-cystéine ou ascorbate, 10 FtM à 1 mM) ont été ajoutés, en présence ou non d'F202 (100 MM), et les tubes ont été incubés dans un thermomixer (Eppendorf, Montessori, France) à 50"C et 830 rpm, pendant 4 à 16h. La réaction a été arrêtée en ébouillantant les échantillons à 100°C pendant au moins 10 min, puis ils ont été centrifugés 30 à 15000xg pendant 5 min pour séparer les produits solubles de la fraction insoluble. Afin de tester la synergie des polypeptides d'intérêt avec la CBFII de T rees( un mélange réactionnel d'un volume total de 800 uL contenant 1% (m nanofibrilles de cellulose dans du tampon acétate 50 MM pH 5.2, ainsi que S u LPN10 et I triN4 d'a.scorbate a été incubé dans un thermomixer (41,ppendorf) à 50°C, et 850 rpm, pendant 16h. Les échantillons (en triplicats) ont été ébouillantés à 100°C pendant au moins 10 min, puis centrifugés à 15000xg pendant 5 min. La fraction insoluble restante du substrat a été 5 lavée deux fois dans le tampon, et l'hydrolyse par la CBFII de 7, reesei (0,8 flg, fournie par Il IPEN) a été réalisée dans un volume de 800 !IL contenant du tampon acétate 50 rnM plI 5,2, pendant 30 min à 50°C et 850 rpm. La réaction a été arrêtée comme décrit plus haut, et les fractions solubles et insolubles ont été séparées. Les mono et oligosaccharides issus de la dégradation des substrats 1G cellulosiques ont été détectés par HPAPC-PAD (Dionex, Thermo Fisher Seientific), selon la méthode décrite par Westereng et al. (2013), en utilisant des cello-oligosaccharides (DP2 à DP6) non oxydés comme standards (Megazyme, Irlande). 15 Exemple 5 t Substrats et cocktails enzymatiques La paille de blé, le miscanthus et le peuplier prétraités ont été obtenus auprès dIFP Energies Nouvelles (Rueil-Malmaison, France), Les biornasses ont été prétraitées par enplosion à la vapeur en conditions acides, lavées à l'eau chaude pour éliminer les produits libres, et séchées à 55°C. Après une semaine à température ambiante, elles ont été 20 broyées et tamisées afin de ne retenir que les particules de taille inférieure à 0,8 mm, et leur teneur en eau (% mitn) a été déterminée par séchage à 105°C en étuve à convection naturelle (VWR, USA). Le cocktail dit « K975 », est constitué du sécrétome de la souche CL847 de Triehoderma reesei, produit en présence de lactose selon le protocole détaillé clans 25 Herpoél-Gimbert et al. (Comparative secretome analyses of two Triehoderma reesei RUT- C30 and CL847 hypersecretory strains, Biotechnology for Biofuels 2008, 1 :18), et dont l'activité f3-glucosidase spécifique est de 0,8 Ur/mg. ) Il a été complété par un cocktail commercial de13-glucosidases d'Aspergillus figer SP188 (Novozyme, Danemark). 30 Exemple 6 Hydrolyses enzymatiques Les hydrolyses enzymatiques en tubes de 2 mL ont été réalisées en triplicats dans un volume réactionnel de I mL, en présence de paille de blé, de miscanthus ou de 48 peuplier (50 mg de biomasse sèche), dans du tampon acétate de sodium C mM (pH 4,8) auquel a été ajouté du chloramphénicol (0,1 pour éviter les contaminations microbiennes. Ce mélange a été incubé pendant au moins lh à 15°C sous agitation rotative à 850 rprn (Infors) afin d'imprégner la biomasse, puis le cocktail K975 a été ajouté à raison 5 de 5 mg/g de matière sèche (MS), et le cocktail SP188 dans des quantités permettant d'obtenir une activité fi-glimosidase totale de 80 trEg MS. Pour les tests de supptémentation, 10 pl de sécrétomes ont été ajoutés (ou 10 pl de tampon dans les conditions de référence). L'hydrolyse a été réalisée à 45°C sous agitation rotative à 850 rpm (Infors). A chaque temps de prélèvement, les triplicats ont été 1G ébouillantés à 100°C pendant au moins 5 min pour inactiver les enzymes, puis refroidis et centrifugés à 15000x2 pendant 5 min, et le surnageant a été prélevé et conservé à -20°C. Les hydrolyses enzymatiques miniaturisées ont été réalisées en microplaques de 96 puits, dans lesquelles ont été distribués 100 jit, de suspension de biomasse à 6,39/ (m/v) dans du tampon acétate de sodium 50 inM (pu 4,8) en présence de chloramphénicol 1.5 (0,1 u/L). Pendant la distribution, la suspension de biomasse a été prélevée à l'aide (rune pipette multicanaux dans un bécher sous agitation magnétique constante, puis les plaques ont été scellées et conservées à -20°C. Pour les tests de supplémentation, les enzymes ont été mées à l'aide d'un robot Tecan Genesis Evo 200 (Tecan, Lyon, France) : les cocktails K975 et SP188 ont été 20 distribués dans les quantités indiquées plus haut, dans un volume de 15 pl-, puis 10 pl_ de sécrétomes dilués I 0x ont été ajoutés (ou 10 pi. de tampon dans les conditions de référence, présentes sur chaque plaque). Chaque essai a été réalisé en septuplicats, auquel s'ajoute un puits contrôle contenant les enzymes seuls (sans biomasse) ; une colonne de chaque plaque a. été consacrée aux conditions contrôles contenant la biomasse seule (sans 25 enzymes). Pendant l'hydrolyse, les plaques scellées ont été incubées à 45°C sous agitation rotative à 850 rpm (Infors), pendant 24 à 06h. A chaque temps de prélèvement, les plaques correspondantes ont été centrifugées après ajout de 120 pL de tampon, puis le surnageant a été filtré et conservé à -20°C. Pour les deux types d'hydrolyses (z séquentiel » ou « simuL tc é »), la 30 concentration de glucose dans les échantillons a été mesurée ri l'aide du réactif Glucose GOD-PAP (Biiolabo, Maizy, France) à l'aide d'une gamme standard de glucose, et les 49 rendements ont été calculés en tenant compte de la quantité de glucose cellulosique initialement présent. Plusieurs hydrolyses ont été réalisées pour chaque condition, et afin de pouvoir combiner les résultats:, les rendements obtenus en présence de sécrétomes ont été traduits en pourcentage d'amélioration par rapport à la référence interne de chaque hydrolyse. Un test de Student a été réalisé pour chaque condition afin de déterminer si la moyenne des résultats était statistiquement différente de la moyenne des références, en utilisant la valeur de la p-value comme critère. 10 Exemple 7 Tests de saccharification de biomasses en supplémentation de T: reesei Afin de déterminer si les sécrétomes produits peuvent présenter un intérêt pour l'amélioration rendements d'hydrolyse enzymatique, ils ont été testés dans des conditions se rapprochant de celles envisagées dans les procédés industriels de bioconversion de la biomasse lignocellulosique. Trois biomasses modèles, d'origine et de 1.5 compositions différentes, ont été choisies pour cette étude la paille de blé' le miscanthus et le peuplier. Ces substrats, issus de déchets agricoles et de cultures énergétiques dédiées, sont fréquemment envisagés comme matières premières pour la production de bioéthanol en Europe. Ils ont été prétraités par explosion à la vapeur en présence d'acide sulfurique dilué (voir Tableau 1). Après lavage et séchage, leur composition en sucres a été 20 déterminée par CPG après hydrolyse acide Tableau 1: Conditions de prétraitement et composition des trois substrats modèles de cette étude Peuplier Miscantlms Paille 195 - 10.5/13 1 15 1 17.5 I2 1 0.4% 1 0.70 i i i 1 0.44 0.15 i 1 1 0.39 1 0.52 i 1 1 2- 09 1 1.58 _i_ Température vapeur (°C) Pression (bar) Durée prétraitement (min) [H2SO4] Composition (% de poids sec) Rh am n ose Arabinose Xylose 7.5 0.7% 0.27 0.11 0.63 195 1 180/190 50 Mannose 0.18 0 i a- _ Glucose total 53.28 I çct 41 1 0. 16 Glucose cellulosique Teneur en eau (%rialm) 50.85 I :., /.011 1 76% -I- , 1 ç:-. cn 15.66% Il 51.30 L 1 6.97% 1 Le cocktail cellulolytique de T reesei utilisé (noté K975) est issu de la souche C1.847' cultivée en présence de lactose ; celle-ci ayant une activité P-glucosidase assez faible, une préparation commerciale de P-glucosidases d'A. figer (SP188, Novozyme) y a été ajoutée en excès, afin de s'assurer que les potentielles améliorations de performances lors de la supplémentation ne soient pas dues à une simple augmentation de l'activité Pglucosidase. Ce cocktail de référence a été utilisé pour réaliser l'hydrolyse des trois, biomasses choisies, avec une concentration en biomasse relativement élevée (5?/ ni/y) afin de se rapprocher de conditi réalistes du point de -vue du procédé, et une dose d'enzyme 10 faible (5 ing/g de matière sèche), correspondant pour l'industrie à des conditions permettant de réduire les coûts, et pour laquelle la marge d'amélioration des rendements d'hydrolyse est élevée. La cinétique de cette hydrolyse sur 5 jours est présentée sur la Figure 1 Dans les conditions choisies, le rendement final d'hydrolyse de la paille de blé est proche de 15 10e-b, ce qui signifie que la quasi-totalité de la cellulose a été transformée en monomères de glucose. Le miscanthus et le peuplier sont plus récalcitrants, puisque dans les mêmes conditions ils ne sont hydrolysés qu'a. 50 et 60% respectivement. Les objectifs d'amélioration sont multiples : dans le cas de la paille, il s'agira d'augmenter les rendements au début de l'hydrolyse (à 24 et 48h) et donc d'accélérer la réaction, tandis que 20 pour le miscanthus et le peuplier il sera possible d'améliorer à la fois la cinétique initiale et le rendement après une période plus longue (96h par exemple). Dans les mêmes conditions, le cocktail de référence a ensuite été supplémenté par les différents sécrétomes d'Aspergillus. Dans un souci de simplification expérimentale, 2.5 à une quantité fixe de cocktail' des volumes égaux de chacun des sécrétomes concentrés ont été ajoutés, selon le protocole établi dans Bertin et al. (« Exploring the Natural Fungal Biodiversity of Tropical and Temperate Forests toward improvement of Biomass Conversion Appl. Environ. Microbiol. 78, 6483-6490, 2012). La quantité de protéines 51 es n'est pas la même dans tous les échantillons, mais elle reflète les proportions initiales de protéines sécrétées par les souches fongiques sur chaque milieu de culture. Ces essais ont initialement été réalisés en tubes, en triplicats, mais les biomasses utilisées étant hétérogènes, id est apparu que la variabilité des résultats était importante. Les tests de 5 saccharification ont été miniaturisés en microplaques et automatisés à l'aide d'un robot Tecan, selon une méthode déjà développée dans Navarro et al (1« Automated assay for screening the enzymatic release of reducing sugars from micronized biomass. Microb. Factories 9, 58, 2010). Ainsi, la biomasse est broyée finement et une suspension suffisamment 1G homogène est réalisée pour pouvoir être pipelet en microplaques, avant ajout d'un cocktail de référence et différents sécrétomes. Chaque test compte 7 réplicats. Les données issues de trois séries d'hydrolyse (une en tubes et deux en microplaques) ont été traitées statistiquement à l'aide d'un test de Student. Grâce aux données issues du test de saccharification mis au point l'influence 1.5 sur le rendement d'hydrolyse des sécrétomes peut être comparée pour chaque biomasse (Figure 2A-C"). Les différences de performance sur les trois biomasses sont importantes : plusieurs sécrétomes permettent d'améliorer à l'hydrolyse de la paille et celle du miscanthus, dès 24b, 20 Exemple 8 Tests de saccharification de biomasse en présence de polypeptides à activité polysaccharide oxydase Les tests de supplémentation du cocktail de T reesei par les polypeptides pour la saccharification du miscanthus ont été réalisés en triplicats selon la méthode d'hydrolyse enzymatique décrite phis haut, en utilisant 5 mg de biorna.sse, 1 mg/g MS du cocktail K975 25 et 80 fillg MS de f3-glucosidase apporté par le cocktail SP188, pendant 24h à 45°C et 850 rpm. Dans une partie des échantillons, un traitement par les LPMO (2,2 ply1) en présence d'ascorbate 1 niNi a été effectué pendant 24h avant le début de l'hydrolyse ; dans l'autre partie, les LPMO et l'ascorbate ont été ajoutés au début de l'hydrolyse, en même temps que le cocktail cellulolytique. 30 Dans les échantillons de référence, les polypeptides n'ont pas été ajoutés. Après 24h, la réaction a été arrêtée et la concentration de glucose dans les échantillons a été mesurée à l'aide du réactif Glucose GOD-POD (Biolabo). 52 Exemple 9 : Sélection et production de protéines fongiques d'intérêt Afin de pouvoir étudier la fonction des polypeptides d'intérêt, il a été décidé de les produire de manière hétérologue dans la levure Pichia pastoris, à l'aide de gènes 5 synthétiques placés dans un vecteur. Plusieurs versions de la séquence d'Aspergillus aculeatus ont été exprimées (avec le module X273 N-terminal seul, avec une extension C.- terminale tronquée, et avec l'extension C-terminale complète), ainsi qu'une protéine similaire comportant une extension C-terminale très courte, retrouvée chez Podaspora anserina (PaX273). 1G Chacune des constructions testées débute par un peptide signal, suivi de l'histidine n-terminale impliquée dans la triade catalytique, et se termine à une position terminale variable. Pour les clones issus d'Aspergillus aculeatus, la séquence polypeptidique de référence est SEQ ID N°2. Pour le clone issu de Podospora anserina, la séquence polypeptidique de référence est SEQ ID N°1. 15 Tableau 2: Séquences polypeptidiques choisies pour l'expression chez flair: pas taris. i I Organisme source [ AaX273_ complète i Aspergillus aculeatus i I AaX273 tronquée I Aspergillus aculeatus 19 6 l l AaX273Nter 1 Aspergillus aculeatus Ir 19.0 i i t t t 1 PaX273 I Fados-pont anserma 1 20.7 Au total, 4 gènes ont donc été synthétisés et transformés chez Pichia postons 70 (voir Tableau 2). Les transformants correspondants é cultivés en petits volumes, selon la procédure accélérée mise en place au laboratoire (Haon et al., « Recombinant protein production facility For fang& biiemass-degrading enzymes using the yeast Pichia pastoris. Front Nlicrobi oh 6, 2015) afin de vérifier la bonne expression des protéines. 30.2 53 Exemple 10 : Etude d'une nouvelle famille de Len° fongiques Analyse bio-informatique de la famille X273 Afin de mesurer l'étendue de la famille X273 dans les génomes fongiques; une recherche d'homologies basée sur la séquence du module X273 de Podoàpora anserina, 5 d'une longueur de 165 acides aminés, a été effectuée, à l'aide de l'outil NCBI Blast, et en ne gardant que les séquences les plus proches (e-value égale ou inférieure à Dans un second temps, en vue d'optimiser la sélection des séquences polypeptidiques d'intérêt, on se base sur un alignement de séquences réalisé à l'aide de Clustal Omega (EMBL-EBI) puis on réalise une curation manuelle afin d'écarter les 1G séquences suivantes : - Fragments N-ter ou C-ter ne correspondant pas à des protéines entières (no m ent celles ne comportant pas la lé" histidine, caractéristique des LPMOs) - Séquences dont l'extrémité N-ter ne correspond pas à un peptide signal selon le logiciel SignalP 4.1. Séquences comportant des insertions ou des délétions importantes, possiblement dues à de mauvais modèles d'épissage, - Séquences ayant une extension C-terminale très longue. Outre SEQ 10 N°1 et 2, on parvient ainsi à une liste affinée de prêt de 378 20 séquences polypeptidiques (SEQ ID N°7 à 382), provenant d'organismes ffirtgiques, et principalement d'ascomycètes : 334 séquences, contre 41 provenant de basidiomycètes et 3 de champignons non classifiés. Les acides aminés consensus sont représentés graphiquement en figure 3, après 25 alignement des 378 modules catalytiques correspondant aux séquences protéiques SEQ ID N-°1, 2 et 7 à 382. La. ligure est générée par l'application WebLogo, selon Crooks et al. (WebLogo : A Sequence Logo Generator. Genome Res, 14, 1188-1190 ; 2004). L'alignement des séquences correspondant au module X273 révèle plusieurs régions bien conservées au sein de la famille. Toutes les séquences comportent notamment une histidine N-terminale, ainsi qu'une deuxième histidine strictement conservée, ce qui est une caractéristique du centre actif («Histidine ∾̳») de toutes les LPMO caractérisées jusqu'à présent. On compte une vingtaine d'autres résidus strictement conservés, dont 54 stéines potentiellement impliquées dans la formation de ponts disulfures. En plus du module X273, la plupart des protéines de la liste possèdent une extension C-terminale, plus ou moins longue selon les espèces. Pour 7 d'entre elles, trouvées chez 4 organismes différents, cette extension comporte un module de liaison a la cellulose (CBMI). Dans le tableau 3, les positions relatives de ces acides aminés conservés sont déterminées par rapport aux séquences références SEQ N°1 et SEQ ID N°2. Tableau 3: Positions conservées dans le module catalytique X273 Acides amines conservés Position dans SEQ ID 1 Position dans SEQ ID 2 Histidine (H) 19. 105 t 20, 109 Glycine (G) -------------------------------- I 31, 107 1 32, 111 Proline (P) 25 1 26 I Argunne (R) 1 29 I Cystéine (C) 38, 69, 74, 157, 163, 139, 73,78, 162, 168, 186 1 1 lr i Asparagine (N) 110 1 114 1 G utamme (G) 166, 1741-171. 181 [ Tryptophane (W) 169 ti 174 l Glycine (D) ou Alanine (A) 20, 76 I., 80 I Glycine (D) ou Asparagine (N) 161 1 166 1 Acide aspartique (D) ou Asparagine (N) 49 1 50 I 1 - - Proline (P) ou Alanine (A) 151 1 155 1 Thréonine (T) ou Asparagine (N) 1 75 1 182 Tyrosyne (Y) ou Phénylalanine (F) 176 i 183 1 Acide aspartique (D) ou Leucine (L) 181 1188 10 Production hétérologue et test d'activité Les clones de P. pastoris exprimant les X273 d'A. aculeains et de P. allSerilla ont été utilisés pour produire les protéines en fioles de IL. La version de la protéine d'A. acide/lins retenue est celle ayant été la plus produite en petits volumes, c'est à dire celle qui a été tronquée en laissant une dizaine d'acides aminés de l'extension C-terminale. Après purification, on obtient une quantité totale de 47,5 mg pour AaX273 et 61 mg pour PaX273. Les protéines purifiées ont ensuite été chargées en cuivre, afin que leur centre actif soit fonctionnel, et l'excédent de cuivre éliminé par diafiltration. Une analyse par spectrométrie de masse avec plasma à couplage inductif (1CP-MS) a permis de confirmer la présence d'environ un atome de cuivre par molécule de X273. 55 Grâce à un essai fluorimétrique en présence d'Amplex lied, la production d'H202 par les enzymes X273 en présence d'un donneur d'électron (acide ascorbique) et en l'absence de substrat a pu être établie, ce qui indique que ces enzymes ont une activité d'oxydation et se comportent comme les autres familles de 1._,-PM0 Caractérisation des produits de dégradation de la cellulose Afin de déterminer si les LPM0 ont une activité sur la cellulose, on peut observer indirectement leur effet en utilisant leur synergie avec les cellulases. Ainsi, après avoir laissé agir les protéines X273 sur des nanotibrilles de celluloses (NCF), celles-ci ont 1G été hydrolysées par la CBHI (Cel7A) de T reesei. La quantité de cellobiose mesurée par chromatographie d'échange d'ions (HPAEC-PAD) à la suite de cette hydrolyse est plus importante dans les échantillons ayant été traités par les X273 que dans l'échantillon témoin (voir Figure 4). Cela indique que les X273 semblent introduire dans les chaînes de cellulose 1.5 des coupures servant de nouvelles extrémités d'attaque à la cellobiohydrolase, qui libère donc plus de cellobiose que lorsqu'elle agit seule. La visualisation de l'action directe des LPIv1.0 sur les fibres de cellulose est plus difficile, étant donné que seuls les polysaccharides solubles (dont le degré de polymérisation est généralement inférieur à 6) sont détectés par les méthodes de 20 chromatographie. On peut toutefois quantifier les courtes chaînes de cellulose libérées par l'accumulation de ces clivages, et déterminer s'il oxydés (notamment en CI etiou en C4). Ainsi, des tests ont menés sur PASC (Phasphorie .4cid Wolin) Cellule Avicel (cellulose microcristalline), en présence de H202., et en diminuant la quanti 25 donneur d'électrons selon les conditions proposées par Bissaro et ul ( REVENDICATIONS1. Polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 20°A avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°1 ou SEQ ID N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le-18 ou moins. 2. Polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase selon la revendication I, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence présentant une identité d'acide aminé d'au moins 80% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°1 ou SEQ ID N°2, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de le-'x ou moins. 3. Polypeptide isolé à activité polysaccharide oxydase selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence polypeptidique de référence choisie 15 parmi SEQ ID N°5 à SEQ ID N°382. 4. Composition à activité polysaccharide-oxydase, caractérisée en ce qu'elle comprend un polypeptide à activité polysaccharide oxydase tel que défini selon la revendication 1 ou 2 ou 3. 5. Composition à activité polysaccharide-oxydase selon la revendication 4, 20 caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un polypeptide à activité polysaccharide-degradase choisi parmi une cellulase, une hémicellulase, une ligninase et une carbohydrate oxydase. 6. Kit comprenant au moins : - une première partie comprenant un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase tel 25 que défini selon la revendication 1 ou 2 ou 3, ou une composition comprenant le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase; - une seconde partie comprenant un polypeptide à activité polysaccharide-dégradase choisi parmi une cellulase, une hémicellulase, une ligninase et une carbohydrate oxydase, ou une composition comprenant le dit polypeptide à activité polysaccharide-dégradase 30 7. Un hôte apte à exprimer de manière recombinante un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase tel que défini selon la revendication 1 ou 2 ou 3 ; 60 8. Acide nucléique isolé codant pour un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase tel que défini selon la revendication 1 ou 2 ou 3. 9. Procédé d'obtention d'un sucre à partir d'un substrat polysaccharidique, comprenant au moins une étape de mise en contact du dit substrat avec un polypeptide à 5 activité polysaccharide-oxydase tel que défini selon la revendication 1 ou 2 ou 3, ou d'une composition à activité polysaccharide-oxydase telle que définie selon la revendication 4 ou 5. 10. Procédé de production d'alcool à partir d'un substrat lignocellulosique, caractérisé en ce qu'il comprend l'obtention d'un sucre par un procédé tel que défini selon 10 la revendication 9, et la fermentation alcoolique dudit sucre par un microorganisme alcooligène. 11. Procédé de préparation d'un substrat cellulosique pour la fabrication de fibres de cellulose, lequel procédé comprend au moins les étapes suivantes consistant à : a) disposer d'un substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose ; b) mettre en contact, en présence d'un donneur d'électron, le dit substrat avec au moins un polypeptide à activité polysaccharide oxydase dans des conditions aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de cellulose; caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide oxydase présente une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°1 ou SEQ ID N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de 1 e' ou moins. 12. Procédé de défibrillation d'un substrat cellulosique, lequel procédé comprend au moins les étapes suivantes consistant à : a) disposer d'un substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose, lequel a été préalablement mis en contact avec un donneur d'électrons et un polypeptide à activité polysaccharide-oxydase, dans des conditions aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de cellulose en présence d'un donneur d'électron; et b) traiter mécaniquement ledit substrat cellulosique, afin de défibriller le dit substrat, caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide oxydase présente une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence 61 SEQ ID N°1 ou SEQ ID N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de I e-18 ou moins. 13. Procédé de fabrication de fibres de cellulose, lequel procédé comprend au moins les étapes suivantes consistant à: 5 a) disposer d'un substrat cellulosique apte à former des fibres de cellulose ; b) mettre en contact, en présence d'un donneur d'électron, ledit substrat cellulosique avec au moins un polypeptide à activité polysaccharide oxydase dans des conditions aptes à assurer un clivage oxydatif desdites fibres de cellulose; c) traiter mécaniquement ledit substrat cellulosique, afin de fabriquer lesdites 10 fibres de cellulose à partir du dit substrat cellulosique, caractérisé en ce que le dit polypeptide à activité polysaccharide-oxydase présente une identité d'acide aminé d'au moins 20% avec une séquence polypeptidique de référence SEQ ID N°1 ou SEQ ID N°2, en utilisant une méthode de comparaison BLAST-P, la dite méthode de comparaison BLAST-P donnant une e-value de ou moins. 15 14. Fibres de celluloses issues d'un procédé de défibrillation selon la revendication 12, et/ou d'un procédé de fabrication de fibres de cellulose selon la revendication 13.