Brevet FR3083870A1 — publié le 20200117

Test de diagnostic rapide de la fièvre de la vallée du Rift (FVR) DOMAINE DE L'INVENTI La présente invention concerne notamment un dispositif de bandelette irnrnunochromatographique pour test de diagnostic rapide (TDR) destiné à la détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un antigène spécifique du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV), ainsi qu'un procédé notamment destiné à la détection précoce d'une infection naturelle par ledit virus mettant en oeuvre ledit dispositif. 10 ETAT DE LA TECHNIQUE Le virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) est décrit comme un virus émergent transmis par voie vectorielle, par plusieurs espèces de moustiques. li touche un large éventail d'animaux domestiques et sauvages (petits ruminants, bovins, camélidés, buffles) et l'Homme, en Afrique et dans la péninsule arabique. Ce virus appartenant au genre 15 Phiebo virus, à la famille des Phenuiviridae et à l'ordre des Bunyavirales, est transmis par des moustiques appartenant au moins à 6 genres différents (Faburay et al., 2017). Identifié à l'origine dans la vallée du Grand Rift au Kenya en 1930 et initialement confiné au continent Africain, il s'est ensuite répandu à Madagascar, dans l'archipel des Comores et dans la péninsule arabique. On s'inquiète de plus en plus de son expansion. En effet, une grande 20 diversité d'espèces de moustiques le transmette, y compris des espèces distribuées dans des pays où la circulation de la FVR n'est pas encore connue mais où les facteurs environnementaux et climatiques présents sont en faveur de la circulation du virus RVFV (Brustolin et al., 2017). La survenue récente de foyers de FVR dans plusieurs pays d'Afrique (Soudan, 25 Ouganda, Niger; Mali, Kenya et Rwanda) en 2017-2018 illustre l'actualité de l'émergence de la FVR. Les mouvements humains et animaux, incluant les mouvements ruraux dans des territoires notamment confrontés aux guerres civiles, ont probablement un rôle dans la propagation du RVFV et dans son extension potentielle en dehors de ses frontières traditionnelles vers l'Afrique du Nord et éventuellement vers l'Europe. Dans ce dernier cas, 30 'introduction du RVFV pourrait provoquer de graves épidémies puisque les populations humaines ou animales sont encore immunoiogiquement naïves au regard de ce virus. Le développement d'outils de diagnostic rapides capables de détecter l'infection par le virus RVFV est donc crucial aussi bien pour l'Homme que les animaux élevés et vivants en zones endémiques et/ou à risque pour la FVR. 2 A la connaissance de Demandeur, il n'existe pas d'outil de diagnostic de la FVR qui soit simple, peu coûteux et fiable pour faciliter des diagnostics de terrain rapides et précis, permettant notamment d'anticiper et d'alerter précocement les épidérnieslépizooties et ainsi de mieux les gérer. Le Demandeur a ainsi mis au point un dispositif de bandelette immunochromatographique à écoulement latéral sur la base de la détection de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV). Ses performances ont été évaluées à partir de sérums de terrain de statut connu et de souches isolées provenant de 10 différents hôtes et origines géographiques sur une période de 69 ans, avec un accent particulier sur l'Afrique. Lin très bon niveau de sensibilité et de spécificité illustré par l'absence de réactivité croisée avec d'autres virus appartenant au genre Phlebovims, Flavivirus, Orthobunya virus, Alpha virus, Reovirus a été observé. Le dispositif de bandelette immunochromatographique selon l'invention représente donc 15 un outil de diagnostic d'intérêt, rapide et sensible, qui peut être utilisé pour la détection d'une infection naturelle par le virus RVI-W surie terrain en conditions d'épidémie/épizootie. La disponibilité de ce test de diagnostic rapide (TDR) permet de fournir un soutien supplémentaire au jugement clinique médical en première instance et permet de réduire le temps nécessaire à la confirmation du test dans les cas secondaires de la maladie. Par 20 conséquent, l'utilisation d'un test selon l'invention effectué sur le terrain, à proximité des foyers où se trouvent les populations humaines et animales infectées, permet d'obtenir un contrôle précoce et une gestion plus efficace des foyers incriminés et donc de limiter la propagation de la maladie. Enfin et de façon avantageuse, ce test ne requiert aucune compétence professionnelle, 25 ni aucun réactif ou équipement spécifique, permettant de fournir un test de première intention complémentaire intéressant pour les laboratoires de diagnostic dépourvus d'installations spécialisées. Dans le cas d'échantillons trouvés positifs, une confirmation par des tests alternatifs peut alors être envisagée avec un envoi de ces échantillons vers des laboratoires de référence nationaux et internationaux. La durée de conservation du test, dans un sachet 30 en aluminium scellé contenant un dessicant, est d'au moins 12 mois à 4 ' C sans perte de sensibilité, ce qui présente un grand intérêt pour les régions éloignées et difficilement accessibles où ce test est applicable. 35 3 EXPOSE DE L'INVENTION Un premier objet de l'invention est un dispositif de bandelette iminunochromatographique, de préférence à écoulement latéral; pour test de diagnostic rapide (TDR) destiné à la détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un antigène spécifique du virus de la fièvre de ia vallée du Rift (RVFV) comprenant la nucléoprotéine (N) dudit virus ou un fragment antigénique de celle--ci, caractérisé en ce qu'il comprend, au moins : (i) Une membrane comprenant une zone de capture ou zone de test (T) sur laquelle est adsorbé un anticorps de capture spécifique de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou 10 d'un fragment antigénique de celle-ci, et une zone de contrôle (C) sur laquelle est adsorbé un anticorps de contrôle, (ii) Un papier filtre comprenant une zone sur laquelle est adsorbé un anticorps de révélation, spécifique de la nucléoprotéine (N) ou d'un fragment antigénique de celle-ci, couplé à un système de révélation, 15 ledit filtre étant superposé et fixé par adhésion à ladite membrane (i) de sorte à ce que les zones comprenant ledit anticorps de révélation, ledit anticorps de capture et ledit anticorps de contrôle soient distinctes ; (iii) et éventuellement un cadre en plastique protecteur, ou alternativement 20 (i') Une membrane comprenant successivement : - une première zone sur laquelle est adsorbée un anticorps de révélation, spécifique de la nucléoprotéine (N) ou d'un fragment antigénique de celle-ci, couplé à un système de révélation, - une zone de capture ou zone de test (T) sur laquelle est adsorbé un 25 premier anticorps (anticorps de capture) spécifique de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou d'un fragment antigénique de celle-ci et - une zone de contrôle (C) sur laquelle est adsorbé un anticorps de contrôle, (ii') et éventuellement un cadre en plastique protecteur. 30 L'invention porte également sur un kit pour test de diagnostic rapide (TDR) destiné à la détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un antigène spécifique du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) comprenant la nucléoprotéine om dudit virus ou un fragment antigénique de celui-ci, comprenant au moins : ) Un dispositif de bandelette immunochroinatographique tel que défini selon l'invention, et b) Un tampon de migration de l'échantillon biologique dans le dispositif. Un autre objet de l'invention concerne un procédé immunochromatographi ue ou test de diagnostic rapide (TDR) pour la détection, dans un échantillon biologique, d'au un moins antigène spécifique du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou un fragment antigénique de celle-ci, mettant en oeuvre un dispositif tel que défini selon l'invention, comprenant les étapes de : 10 (i) Mise en contact de l'échantillon biologique susceptible de contenir la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou un fragment antigénique de celle-ci (antigène) avec un anticorps de capture spécifique de la nucléoprotéine (N) et un anticorps de révélation spécifique de la nucléoprotéine (N), dans des conditions 15 permettant la formation d'un complexe anticorps de capture-antigène- anticorps de révélation, et (ii) Détection dudit complexe anticorps de capture-antigène-anticorps de révélation. 20 Le procédé immunochromatographique selon l'invention est notamment destiné à détecter le virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) chez un animal infecté naturellement, et caractérisé en ce que l'échantillon biologique prélevé chez ledit animal est choisi dans le groupe constitué de sérum ou de plasma, en particulier provenant de prélèvements sanguins ou d'exsudats d'organes (foie, rate). 25 DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1: Représentation schérnatigi du génome du s RVFV, souche MR12 (Flic,k & Bouloy, 20051 Figure 2 : Caractérisation des anticorps monoclonaux sélectionnés pour le test de 30 diagnostic rapide de l'invention : Figure 2A (IFA, imrnunofluorescence Assay) ; Figure 26 : Western Biot SDS-PAGE (Sodium Dodécyl Sulfate PolyAcnylarnide Gel Electrophoresis) (13.5%) coloré au bleu de Coomassie. Puits 1 : marqueur de poids moléculaire, puits 2 : contrôle IgG, puits 3: anticorps purifié 8E10-4A4, puits 4 anticorps purifié 10H3-4E4-3D5. Figure 3 : Test bandelette de diagnostic rapide pour la détection du virus FVR utilisant 35 les deux anticorps monoclonaux sélectionnés, DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION La présente invention porte donc notamment sur un dispositif de bandelette immunochromatographique, de préférence à écoulement latéral; pour test de diagnostic rapide (TDR) destiné à la détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un antigène spécifique du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) comprenant la nucléoprotéine (N) dudit virus ou un fragment antigénique de celle-ci, caractérisé en ce qu'il comprend, au moins : (i) Une membrane comprenant une zone de capture ou zone de test (T) sur ID laquelle est adsorbé un anticorps de capture spécifique de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou d'un fragment antigénique de celle-ci, et une zone de contrôle (C) sur laquelle est adsorbé un anticorps de contrôle, Un papier filtre comprenant une zone sur laquelle est adsorbé un 15 anticorps de révélation, spécifique de la nucléoprotéine (N) ou d'un fragment antigénique de celle-d, couplé à un système de révélation, ledit filtre étant superposé et fixé par adhésion à ladite membrane (i) de sorte à ce que les zones comprenant ledit anticorps de révélation, ledit anticorps de capture et ledit anticorps de contrôle soient distinctes ; 20 (iii) et éventuellement un cadre en plastique protecteur, ou alternativement (V) Une membrane comprenant successivement : une première zone sur laquelle est adsorbée un anticorps de révélation, spécifique de la nucléoprotéine (N) ou d'un fragment antigénique de celle- 25 ci, couplé à un système de révélation, une zone de capture ou zone de test (T) sur laquelle est adsorbé un premier anticorps (anticorps de capture) spécifique de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou d'un fragment antigénique de celle-ci et 30 une zone de contrôle (C) sur laquelle est adsorbé un anticorps de contrôle, (ii') et éventuellement un cadre en plastique protecteur. Par 'détection', on entend une détection qualitative, c'est-à-dire la présence ou 35 l'absence d'un antigène spécifique du RVFV dans l'échantillon biologique testé. 6 Par 'échantillon biologique', on entend notamment un échantillon sanguin (sérum, plasma) susceptible de contenir des antigènes spécifiques du viras de la fièvre de la vallée du Rift, et en particulier la nucléoprotéine (N) ou un fragment antigénique de celle-ci. Selon un mode particulier, ledit échantillon biologique est choisi parmi un échantillon de sérum ou de plasma provenant d'un prélèvement sanguin ou des exsudats d'organes infectés (foie, rate) notamment de plasma. Selon un mode particulier de l'invention, on utilisera un échantillon de sérum ou de plasma. En particulier, ledit échantillon biologique est un échantillon prélevé à partir de toute l0 espèce animale mammifère sensible au virus RVFV, telle que notamment de bovins, buffles, ovins, caprins, ou camélidés. Selon un mode particulier, l'échantillon biologique sera un échantillon biologique d'un animal susceptible d'avoir été infecté depuis au moins 12 heures, ou en particulier dans une fenêtre de temps pouvant aller de 12 heures à 6 jours. 15 DISPOSITIF DE BANDELETTE IMMUNOCHROMATOGRAPHIQUE Test bandelette Le test de bandelette irnmunochrornatographique selon l'invention peut être un test à 20 écoulement latéral, c'est-à-dire incluant une migration latérale de l'échantillon biologique (fluide) par capillarité.. Selon un autre mode de réalisation, la migration du fluide par capillarité peut se faire en vertical, par exemple lorsque la bandelette est immergée en son extrémité dans l'échantillon biologique à tester. Les tests d'écoulement latéral (Lateral Flow Test, LET), tests bandelettes 25 immunochrornatographiques ou tests de diagnostic rapide (TDR) sont des outils de détection rapide, la détection pouvant aller généralement de quelques minutes à 1 heure (généralement 15 minutes), à usage unique, capables de détecter ia présence d'un analyte dans un échantillon liquide, le long d'une bande rnembranaire placée dans un dispositif plastique protecteur. 30 Le résultat peut être facilement visualisé à l'oeil nu (ligne de test et ligne de contrôle 'C'), comme illustré à la Figure 3. On parlera dans le reste de la description indifféremment de test ce diagnostic rapide ou de test d'écoulement latéral ou de test bandelette irnmunochrornatographique. 35 7 Antigène spécifique du virus RVFV Le virus de la FVR est un virus à ARN linéaire simple brin enveloppé de forme sphérique d'un diamètre de 80-110 nrn. Comme tous les Bunyavirus, le RVFV est composé d'un Génome à ARN tri-segmenté, qui se compose d'un grand segment (L, Large) qui code pour la polymérase, d'un segment moyen (M, Medium), qui code pour les deux glycoprotéines G, et GN et une protéine non structurale NSrn et d'un petit segment (S, Small) qui code pour la nucléoprotéine N et une protéine non structurale NSs (Mick & Bouloy, 2005). Par 'antigène' spécifique du RVFV selon l'invention, on entend la nucléoprotéine (N) synthétique ou recombinante dudit virus ou un fragment peptidique antigénique de celle-d. Les fragments antigéniques de la nucléoprotéine (N) dudit virus FVR peuvent être détectés à la place de la nucléoprotéine (N), à condition que lesdits fragments soient capables de se lier à des anticorps spécifiques de la nucléoprotéine (N). L'homme du métier, sur la base de ses connaissances et des méthodes à disposition, pourra ainsi; en exprimant des partes de la séquence ou en réalisant une cartographie des épitopes (epitcpe mapping) par synthèse de peptides chevauchants, définir des fragments antigéniques utilisables selon l'invention pour produire les anticorps spécifiques correspondants. Selon un mode particulier, l'antigène spécifique de la nucléoprotéine N comprend une 28 séquence SEO ID NO : 1 en nucléotides (735 paires de bases) (numéro d'accès Genbank AF 134534.1) ou une séquence SEO ID NO : 2 en acides aminés (245 acides aminés) (numéro d'accès Genbank AF00698.1) de la nucléoprotéine (N). De même que lesdites protéines, les fragments antigéniques peuvent être d'origine synthétique ou recombinante, 25 Selon un mode particulier de l'invention, l'antigène cible selon la présente invention comprend au moins une séquence en acides aminés présentant au moins 99% d'identité, de préférence 100% d'identité avec la SEO ID N°2 de la nucléoprotéine (N) dudit virus de la FVR. Le pourcentage d'identité entre deux séquences a une signification reconnue dans l'état 30 de l'art ; il est déterminé sur la base d'un alignement global des séquences à comparer, c'est- à-dire sur un alignement des séquences prises dans leur intégralité sur toute la longueur en utilisant tout algorithme bien connu de l'homme du métier tel que l'algorithme de Needleman et ',Nunsch-1970 ; et l'homme du métier utilisera les méthodes connues de comparaison et d'alignement, par exemple les algorithmes de comparaison de séquences, pour mesurer l'identité entre deux séquences polypeptidiques. On peut citer à titre d'exemple les algorithmes BLAST disponibles sur les sites NOBI et Uniprot Anticorps anti-RVEV et anticorps de contrôle Le terme "anticorps" selon l'invention comprend des anticorps entiers et tout fragment de liaison à un antigène ou une chaîne unique de celui-ci. Ainsi; le terme "anticorps" comprend toute molécule contenant une protéine ou un peptide qui comprend au moins une partie d'une molécule d'immunoglobuline. Ainsi le terme anticorps comprend également les immunoglobulines de tout isotype, les fragments d'anticorps qui retiennent la liaison 10 spécifique à l'antigène, y compris Fab, Fab F (ab) 2. Les anticorps peuvent être polyclonaux, monoclonaux, multi-spécifiques (par exemple, des anticorps bispécifiques) ou des fragments d'anticorps, du moment qu'ils présentent l'activité biologique souhaitée. Les anticorps peuvent etre isolés de n'importe quelle source biologique appropriée, par exemple, souris, rat, lapin, etc... 15 Le terme "anticorps monoclonal" se réfère à un anticorps obtenu à partir d'une population d'anticorps sensiblement homogène. Les anticorps monoclonaux sont hautement spécifiques, car chaque anticorps monoclonal est dirigé contre un seul déterminant de l'antigène. Les anticorps peuvent être marqués de manière détectable, par exemple, avec un radio-isotope, une enzyme qui génère un produit détectable; une protéine fluorescente, etc... Les anticorps peuvent être en outre conjugués, avec par exemple de la biotine (impliquée dans la liaison spécifique blotine.-avidine). Les anticorps peuvent également être liés à un support solide, y compris, mais sans s'y limiter, à des plaques ou des billes de polystyrène; et analogues. Dans le cadre de la présente invention; ils seront liés à un support solide tel qu'une membrane de nitrocellulose ou un filtre. Des anticorps monoclonaux peuvent être générés en utilisant des techniques 'd'hybridome ou des procédés de recombinaison d'ADN connus dans l'art. Lin hybridome est une cellule produite en laboratoire à partir de la fusion d'un lymphocyte producteur d'anticorps et d'une cellule cancérigène produisant un anticorps, généralement un myélome ou un lymphome. lin hybridome prolifère et produit un apport continu d'un anticorps monoclonal spécifique. Des techniques alternatives pour générer ou sélectionner des anticorps comprennent l'exposition in vitro de lymphocytes à des antigènes d'intérêt, et le criblage de banques d'affichage d'anticorps dans des cellules, des phages ou des systèmes similaires. Le terme "anticorps polyclonal" se rapporte à une préparation d'anticorps qui sont dérivés de lignées de lymphocytes B différentes. Ils sont un mélange de molécules d'immunoglobulines sécrétées contre un antigène spécifique, chacune reconnaissant un épitope différent. Selon un mode particulier et préféré l'invention, on utilisera des anticorps monoclonaux. Ils sont produits selon les méthodes connues de l'homme du métier. Selon un mode particulier, des particules virales dites VLPs (Virus Like Particles) produites par le système d'expression baculovirus basé sur la construction plasmidique oft1/4PhC3-1- -N (Agate Bioservices, Sagard, France) exprimant la protéine N ont été purifiées selon Liu et al. 2008. Elles ont ensuite été administrées à des souris Balb/c (Siotern, Le Rivier d'Apprieu, France), ID permettant la fusion et la production d'anticorps monoclonaux (Mab, Monoclonal antibody) spécifiques de la protéine N du RVFV. Anticorps de capture L'anticorps de capture spécifique de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du 15 Rift (RVFV) (SEO ID NO : 2) ou d'un fragment antigénique de celle-ci est adsorbé sur la membrane du dispositif de l'invention, au niveau d'une zone de capture ou zone de test Cl. Selon un mode particulier, l'anticorps de capture est un anticorps monoclonal spécifique de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) (SECt ID NO : 2). Selon un mode particulier, l'anticorps de capture est un anticorps produit chez la souris 20 purifié à partir d'ascite (chromatographie d'affinité sur protéine A cerarnic hyper DE), d'isotype IgG2a, désigné 10H3-4E4-305. Il est conditionné dans un tampon phosphate 1 OrnM-NaCI 0,15M- pH7,4- sans agent conservateur, et conservé aliquote à une température inférieure ou égale à -20°C. Sur gel de polyacrylarnide SDS PAGE 13,5% en conditions dénaturantes et coloré au bleu de 25 Coomassie, il présente une bande à 50kDa et une bande entré 25 et 30kDa, conformément au profil d'un contrôle IgG. L'homme du métier saura déterminer la quantité d'anticorps de capture à adsorber sur ladite membrane de nitrocellulose. 30 Anticorps conjugue (autrement nommé anticorps de révélation) L'anticorps de révélation spécifique de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) (SEO ID NO : 2) ou d'un fragment antigénique de celle-ci, couplé à un système de révélation, est adsorbé sur un papier filtre destiné à être superposé et fixé par adhésion à ladite membrane du dispositif, de sorte à ce que les zones comprenant ledit anticorps de révélation, ledit anticorps de capture et ledit anticorps de contrôle soient IO distinctes. Selon un autre mode, l'anticorps de révélation est adsorbé sur la membrane du dispositif sur une zone la plus proche de la zone de dépôt (S) de l'échantillon, en amont des zones de test (T) et de contrôle (C). Selon un mode particulier, l'anticorps de révélation est un anticorps monoclonal spécifique de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) (SEC) ID NO 2) couplé à un système de révélation. Le système de révélation peut être choisi dans le groupe constitué de peroxydase, phosphatase alcaline, fluorophore, marqueur chemo-luminescent ou radioactif, particules d'or colloïdal, latex simple ou coloré. Selon un mode particulier et préféré, l'anticorps de révélation est couplé à des particules d'or 10 colloïdal. Selon un mode particulier, l'anticorps de révélation est un anticorps produit chez la souris purifié à partir d'ascite (chromatographie d'affinité sur protéine A ceramic hyper DF), eisotype IgG1 , désigné 8E10-4A4. Il est conditionné dans un tampon phosphate 10mM-NaCI 0,15M- p1-17,4- sans agent 15 conservateur, et conservé aliquoté à une température inférieure ou égale à -20t. Sur gel de polyacrylamide SDS-PAGE 13,5% en conditions dénaturantes et coloré au bleu de Ciesomassie, il présente une bande à 50kDa et une bande entre 25 et 30kDa, conformément au profil d'un contrôle IgG. L'homme du métier saura déterminer la quantité d'anticorps de révélation à adsorber sur le 20 papier filtre ou, selon un autre mode de réalisation, sur ladite membrane de nitrocellulose. Anticorps de contrôle Un anticorps de contrôle est adsorbé sur une zone de contrôle (C) de la membrane du dispositif de l'invention. 25 Selon un mode particulier, l'anticorps de contrôle est un anticorps de lapin anti-souris capable de reconnaître et se lier à l'anticorps de révélation sus-décrit. L'homme du métier saure déterminer le quantité d'anticorps de contrôle à adsorber ladite membrane de nitrocellulose. 30 Membrane Selon un mode particulier et préféré, la membrane du dispositif est une membrane de nitrocellulose. On peut mentionner notamment la membrane de nitrocellulose kiigh Flow Membrane de Millipore. USA. 35 11 Filtre Le filtre du dispositif est généralement un papier filtre de type papier Whatman. Le filtre est superposé et fixé par adhésion à la membrane, en particulier de sorte a ce que les zones comprenant ledit anticorps de révélation, ledit anticorps de capture et ledit anticorps de contrôle soient distinctes. Par 'zones distinctes', on entend que les zones sont visibles individuellement sur la bandelette, et ne forment pas une seule et même zone, pour assurer une lisibilité correcte des résultats. Perfectionnements du dispositif ID Selon un autre mode de l'invention, et pour améliorer encore le seuil de détection d'au moins un antigène spécifique de la FVR, on peut utiliser en outre un anticorps secondaire (de type anticorps de révélation) capable de reconnaître et se lier au premier anticorps de révélation (anticorps primaire). Cet anticorps secondaire serait lui-même couplé à un système de révélation parmi ceux décrits ci-dessus. 15 On peut également optimiser !e dispositif de l'invention en jouant sur les paramètres suivants : nature des tampons, et/ou nature de la membrane. Selon un mode particulier de l'invention, le dispositif de bandelette immunochromatographique est sous une forme lyophilisée et de préférence conditionnée 20 dans un emballage stérile et étanche, en particulier un sachet en aluminium scellé. KIT L'invention porte également sur un kit pour test de diagnostic rapide (TDR) destiné à la détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un antigène spécifique du virus de la 25 fièvre de la vallée du Rift (RVFV) comprenant la nucléoprotéine (N) dudit virus ou un fragment antigénique de celui-ci, comprenant au moins : a) Un dispositif de bandelette immunochromatographique tel que défini ci-dessus, et h) Un tampon de migration de l'échantillon biologique dans le dispositif. Par 'tampon de migration', on entend un tampon permettant de faciliter la migration de 30 l'échantillon biologique dans le dispositif selon l'invention. Le tampon de migration peut notamment comprendre différents solvants et sels adaptés pour la migration de l'échantillon biologique, en particulier d'un échantillon biologique de type sérum ou plasma. De préférence, on utilisera un volume de tampon de migration égal au volume de l'échantillon biologique (mélange volume à volume). 35 12 PROCEDE INIMUNOCHROMATOGRAPHIQUE L'invention porte également sur un procédé immunochromatographique ou test de diagnostic rapide (TDR) pour la détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un antigène spécifique du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou un fragment antigénique de celle-ci, mettant en oeuvre un dispositif tel que défini ci-dessus, comprenant les étapes de: (i) Mise en contact de l'échantillon biologique susceptible de contenir la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou un fragment antigénique de celle-ci (antigène) l0 avec un anticorps de capture spécifique de la nucléoprotéine (N) et un anticorps de révélation spécifique de la nucléoprotéine (N), dans des conditions permettant la formation d'un complexe anticorps de capture-antigène-anticorps de révélafion, et (ii) Détection dudit complexe anticorps de capture-antigène-anticorps 15 de révélation. Selon un mode particulier : un volume de l'échantillon biologique mélangé au tampon de migration, de préférence volume à volume, est déposé sur la zone 20 (S) réservée à l'échantillon, entraînant la réhydratation des anticorps de révélation et leur migration par capillarite le long de la membrane ; si l'antigène est présent dans l'échantillon testé, le complexe antigène -anticorps de révélation est capturé par l'anticorps de capture immobilisé sur la membrane au niveau de la zone de test (T) 25 formant un complexe anticorps de révélation-antigène-antigène, visualisé sous la forme d'une ligne, de préférence rouge, au niveau de la zone de test (T), révélant un résultat positif ; le système de révélation, en particulier les particules d'or, en excès (ou non), a continué à migrer le long du dispositif jusqu'à être capturé 30 par l'anticorps de contrôle immobilisé au niveau de la zone de contrôle (C) formant une ligne, de préférence rouge, au niveau de la zone de contrôle (C) validant le test. Le procédé imrnunochromatographique selon l'invention est destiné en particulier à détecter 35 le virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) chez un animal infecté naturellement. 13 Selon un mode particulier, l'échantillon biologique prélevé chez ledit animal est choisi dans le groupe constitué de sérum et de plasma, en particulier provenant de prélèvements sanguins ou d'exsudats d'organes (foie, rate). L'invention va désormais être illustrée dans les exemples non-Umitatifs suivants. EXEMPLES 10 Le développement du test selon l'invention a reposé sur 2 étapes la production de VL.Ps contenant la protéine N reconnue comme antigène o-dominant dans la réponse immunitaire dirigée contre le virus de la FVR (ii) la production de 2 anticorps monoclonaux dirigés contre cette protéine N, les uns non marqués fixés sur la membrane, les autres marqués à l'or colloïdal permettant 15 la révélation des antigènes présents dans l'échantillon à tester Exemple 1 : Préparation de l'antigène spécifique de la FVR Les cènes codant pour la nucléoprotéine N (SEQ ID re1) et les glycoprotéines G,IGG (SEC) ID N-3) de la souche RVF ZH 548 isolée d'un prélèvement humain lors de l'épidémie de 20 RVF de 1977 en Egypte (EI-Akkad et al., 1978) on: été sous-clonés respectivement dans le plasmide pAPtiC3T, sous le contrôle d'un promoteur polyhédrine (Agate Bioservices, Bagard, France) et dans le plasmide pTenTwinAPATK sous le contrôle du promoteur p10 (Agate Bioservices, Bagartl, France). La protéine nucléocapsidique N ou nucléoprotéine N est une protéine immunogène 25 protectrice clé connue pour induire une très bonne réponse immunitaire. Les anticorps dirigés contre la nucléoprotéine N sont facilement détectés de façon précoce après l'infection et chez les hôtes infectés en convaiescence, fournissant alors une base solide pour la détection diagnostique de la maladie. 30 Exemple 2: Préparation et sélection des anticorps monoclonaux spécifiques de la nucléoprotéine N permettant le développement du test de diagnostic rapide FVR Dans cette étude, des anticorps monoclonaux spécifiques du virus de la FVR dirigés contre la nucléoprotéine N ont été conjugués avec de l'or colloïdal (anticorps de révélation) pour lier les antigènes de FVR capturés par la membrane immobilisée (anticorps de capture), 35 et former une ligne rouge, témoignant de la présence d'antigènes de FVR dans l'échantillon 14 testé. Les performances du di x)sitif selon l'invention développé pour la mise en évidence d'une infection par le virus de la FVR ont été évaluées à partir d'une collection de souches virales de RVFV connues provenant de différentes épizooties/ épidémies et de sérums négatifs connus également provenant de différents territoires à risque pour la FVR ou ayant déjà connu des épidémies/ épizooties de FVR (Afrique : Mauritanie, Tunisie, et Océan Indien : Madagascar, Mayotte, Réunion, Union des Comores), 2.1 Production et sélection d'anticorps monoclonaux dirigés contre les antigènes du virus de la FVR l0 Des particules virales (VLP, Virus Like Perfides) exprimées par le système d'expression bagulovirus basé sur la construction plasmidique pAPhC3T -N et pTenTwinAPATK-Grleic (Agate Bioservices, Bagard, France) exprimant respectivement les protéines N et GN/Ge ont été produites et purifiées selon Liu et al. 2008. Elles ont ensuite été administrées à 5 souris Balloic (Biotem Le Rivier dApprieu, 15 France), permettant la fusion et la production d'anticorps monoclonaux (Mab) spécifiques des protéines N ou ON / OC du virus RVEV 2.3 Sélection des anticorps monoclonaux pour une utilisation dans le test de diagnostic rapide 20 L'évaluation de le réactivité et de la spécificité desdits anticorps monoclonaux contre les antigènes de FVR a été testée selon deux méthodes en parallèle : (i) un test ELISA (Enzyme Linked Irnmunosorbent Assay) basé sur les VLP à une concentration de 1 pg ml, et un anticorps de révélation IgG IgM anti-souris de chèvre conjugué à la peroxydase (1: 10000, Jackson Irrimunoresearch, 25 USA), et (ii) un test d'immungfluorescence (IFA, lmmunofluorescence Assay) basé sur des cellules eucaryotes de type Vero infectées avec la souche de FVR Smithbum (Boshra et al. 2011) (Genbank numéro d'accès D0380157 (segment S), DO 380193 (segment M), D0375430 (segment L)) à une multiplicité d'infection 30 (MOI) de 0,25 pfu (perfides forming units) par cellule avec un anticorps anti- souris marqué FITC (1: 1000) (Dako, France) comme anticorps de révélation. Les résultats sont présentés dans a Tableau 1 suivant : [ identification' ELISA- VLPs (DO)" _[ IFA "" lsotypage ..... ..... 15 de l'anticorps 6A5 7 0,2 .... GNG .__.__. ++ lgrvi __._ __ .__._ / _C 6E3 ft1± G N/G c ++ IgG3, 19 .__.__.__.__. __.__.__._ ..... __._ ._ _ 7H7 0,9 - GN/GC/N _ttt lel 8E10 2,9 + N +++ 1901 10F6 2,8 +++ IgG2a, IgG3; IgGl, 1gM 10H3 2,8 +++ 1gG2a 12G6 2,7 1506 2,8 + N +++ IgG2b 6E8 0.16 GNIGC +++ Tableau 1 RéJultats IFA et ELISA VLPs ayant permis la sélection des anticorps monoclonaux. *Résultats exprimés en Densité Optique, une valeur supérieure à 1 est considérée comme positive. ++ correspond à un signai positif, +-H- à un signal très positif ; Figure 2A L'anticorps 8E10-4A4 est un anticorps de souris purifié à partir d'ascite (chromatographie d'affinité sur protéine A ceramic hyper DF, Sigma, France); d'isotypeigG1. Il est conditionné dans un tampon phosphate 10mM-NaCI 0,15M- pH7,4- sans agent conservateur, et conservé aliquote à une température inférieure ou égale à -20°C. Sur gel de polyacrylamkie SDS-PAGE 13,5% en conditions dénaturantes et coloré au bleu de 10 Coomassie, il présente une bande à 50kDa et une bande entre 25 et 30kDa, conformément au profil d'un anticorps contrôle de classe IgG (Figure 26). L'anticorps 10H3-4E4-3D5 est un anticorps de souris purifié à partir d'ascite (chromatographie d'affinité sur protéine A ceramic hyper DF, Sigma France), d'isotype IgG2a. Il est conditionné dans un tampon phosphate lOrnM-NaCl 0,15M- p1-17,4- sans agent 15 conservateur, et conservé aliquoté à une température inférieure ou égale à -20`C. Sur gel de polyaciylarnide 505-PAGE 13,5% en conditions dénaturantes et coloré au bleu de Coomassie, il présente une bande à 50kDa et une bande entre 25 et 30kDa, conformément au profil d'un anticorps contrôle de classe IgG (Figure 26). 20 Les résultats ELISA sont présentés dans le Tableau 2 suivant, en valeur de densité optique (DO); une valeur supérieure à 1 est considérée comme positive, le bruit de fond (background et Sf9) doit a- inférieur à une valeur de 0.3, le contrôle positif doiE avoir une valeur supérieur à 1 : Tableau 2 25 16 Identification . ELISA FUSA GN/Go FUSA N Sf9 de VLPs i l'hybridonr Dution Dilution 1:10 Dilution 1 :10 Dilution 1:10 1. i 10H3-4E4- 1.455 0.154 1.371 0.184 I 3D5 Bruit de fond 0.054 0.123 0.162 0.226 Contrôle 2.156 2.6 2.844 2.557 positif 8E10 4A4 1 0.447 0.288 0.928 i ------------------ ------------------ 0.261 0.36 0.166 -- ----- --------------i 0.209 ----------------t-------------- Bruit de fond I 0.077 Contrôle i1,552 3.100 2.207 2.924 _positi L'ensemble de ces tests ELISA et NA ont permis de confirmer que l'anticorps monoclonal 10H3-4E4-3D5, d'isotype IgG2a et l'anticorps monoclonal 8E10-4A4, de type lel étaient dirigés contre la protéine N et sont les plus adaptés à une utilisation dans le dispositif de bandelette immunochromatographique selon l'invention. 2.2 Préparation des anticorps conjugués (anticorps de révélation) L'anticorps monoclonal 8E10-4A4 d'isotype IgG1 est couplé à 40 rim de particules d'or 10 colloïdal (Ferris et al., 2009) et stocké à 4°C jusqu'à utilisation. Exemple 3. Production d'hybridomes et caractérisation des anticorps monoclonaux Après fusion de spiénocytes provenant d'une souris immunisée avec des particules virales de type VLPs purifiées exprimant les protéines N et GN1Gc du virus FVR avec des 15 cellules de la lignée de myélome murin SP210-AG14 (ATCC CRL-1581), sep; lignées d'hybridomes présentant une forte réactivité contre la protéine N du virus FVR et appartenant aux IgG de sous-classe lei ou IgG2a ont été clonées (3 cycles) et sélectionnées et étudiées pour leur pertinence pour la détection de l'antigène du virus de la FVR dans un test de diagnostic à écoulement latéral (FLT) selon l'invention. 20 Sur la base d'essais préliminaires réalisés avec des tests prototypes, les deux anticorps monoclonaux purifiés, l'anticorps 10H3-4E4-3D5 en tant qu'anticorps pour la fixation sur la 17 membrane de nitrocellulose (anticorps de capture) et l'anticorps hiab 8E10-4A4 en tant qu'anticorps conjugué (anticorps de révélation), ont été choisis pour être incorporés dans un dispositif pour d'autres validations de sensibilité et de spécificité. Les tests de dépistage (ELISA et IFA) ont donné les résultats attendus dans les deux cas (Tableau 1 et 2, Figure 1 et Figure 2A). Exemple 4 Préparation du test de diagnostic rapide FVR L'assemblage du TDR selon l'invention s'est fait à partir d'un premier anticorps monoclonal ID fixé à la membrane (anticorps de capture) et un second anficorps monoclonal couple à des particules d'or (anticorps de révélation). Un volume de 150 microlitres de sérum prélevé chez l'animal sera déposé sur la partie 'S' réservée à l'échantillon du TDR (S pour Semple), l'ajout de trois gouttes de tampon de migration (150 microlitres) sur l'échantillon est réalisé, la lecture se fait dans un délai de 30 minutes. Une ligne contrôle notée C doit apparaitre sur 15 chaque test réalisé et permet de le valider. Si une bande apparait au niveau de la zone de test T, l'échantillon est considéré comme positif (confient un antigène spécifique du virus de la FVR), si aucune bande n'apparait au niveau de la zone T, niais qu'une bande apparait au niveau de la zone C. l'échantillon est considéré comme négatif ne contenant pas d'antigène de FVR. 20 4.1 Adsorption de l'anticorps monoclonal 10113-4E4-305 (anticorps de capture) sur une membrane de nitrocellulose L'anticorps monoclonal 10H3-4E4-3D5 d'isotype IgG2a, en solution dans un tampon phosphate (10 niM, NaCI 0.15 M, phi7,4) à une concentration finale de 2,2 mg/mil est 25 appliqué sur une membrane de nitrocellulose (Hi-flow membrane, Millipore, USA) en utilisant l'équipement Bio-Dot air-brush (Bio-Dot, UK). Un volume de 50p1 de ia solution d'anticorps est déposé par 30cm de membrane. Les anticorps de lapin anti-souris (Dako, Denmark) sont déposés à une concentration de 2.2 mg/mi au niveau de la zone contrôle (C) et en parallèle au niveau de la zone de test (T) 30 contenant les anticorps monoclonaux spécifiques dirigés contre la protéine N du virus RVFV. Les membranes sont séchées à 37°C pour 45 min et stockées dans des sachets d'aluminium scellés jusqu'à utilisation à 4t. 4.2 Adsorption de l'anticorps monoclonal couplé aux particules d'or identifié 35 8E10-4A4 (anticorps de révélation) sur papier filtre (bandelette) 18 L'anticorps couplé aux particules d'or 8E10-4A4 (anticorps de révélation), d'isotype IgG1 est appliqué sur papier filtre (Whatman. UK) en utilisant l'équipement Bio Dot air brush (Bio Dot, UK) à un volume de lplimm de papier filtre. Les papiers filtres (bandelettes) sont ensuite séchés. 4.3 Mise en oeuvre du test TDR selon l'invention Le papier filtre (bandelette) est appliqué au-dessus de la membrane de nitrocellulose qu'il recouvre, parallèlement au témoin, et les bandelettes d'anticorps de révélation sont collées à la membrane grâce à un adhésif découpé en bandes de largeur de 0,8 cm. Les 10 bandelettes et les membranes ont été assemblées dans un dispositif tel que décrit précédemment (Brüning et ale 1999) de sorte que le papier filtre (bandelette) soit situé au-dessus de la membrane de nitrocellulose. Différents surnageants viraux ou sérums provenant d'animaux domestiques ou sauvages de statut connu (volume de 150 pl) ont été mélangés avec un volume égal de 15 tampon de migration (150 pl) et déposés sur ce test à écoulement latéral (LFT, Lateral Flow Test). Ceci entraîne la réhydratation des anticorps monoclonaux (Mab) conjugués aux particules d'or (anticorps de révélation) et leur migration par capillarité sur toute la longueur de la membrane. Si l'antigène spécifique du virus de la FVR est présent dans l'échantillon testé, ceci 20 signifie que le complexe antigène FVR-anticorps-couplé aux particules d'or (anticorps de révélation) est capturé par l'anticorps monoclonal immobilisé sur la membrane (anticorps de capture) au niveau de la zone ou ligne «T» (test). Ceci entraîne leur reconnaissance et attachement, visualisable sous la forme d'une ligne rouge correspondant donc à un résultat positif. Les particules d'or en excès (ou non) continuent leur migration tout au long du 25 dispositif jusqu'à ce qu'elles soient capturées par ranticorps de lapin anti-souris immobilisé (anticorps de contrôle), conduisant à la formation d'une ligne rouge au niveau de la zone ou ligne contrôle (C) permettant de valider le test. Les zones de test (T) et de contrôle (C) sont observées pour leur développement de couleur au bout de 15 et 30 minutes suite à l'ajout de l'échantillon. Les résultats rendus sont 30 soit positifs soit négatifs. Une représentation schématique de la visualisation des résultats négatif et positif est illustrée en Figure 3. 4.4 Validation du test : Evaluation de la sensibilité et de la spécificité 35 diagnostique 19 L'échantillon (sérum ou suspension virale, volume de 1500) (contrôle positif) est mélangé avec 150 pl de tampon de migration et est appliqué au niveau de la zone 'S' (S, Sarnple) réservée à l'échantillon. Le test est valide lorsqu'une bancieiligne rouge est visible au niveau de la zone contrôle 'C'. Le test est positif lorsqu'une bande rouge est visible au niveau de la zone 'T' (test) et négatif lorsqu'aucune bande rouge n'est visible au niveau de la zone 'T' (test). 4.4,1 Sensibilité L'analyse de la sensibilité du LET s'est faite grâce à différents échantillons (souches ID virales de FVR référencées, souches virales autres que RVF mais appartenant à la famille des Bunyavirales, autres virus provoquant des signes cliniques proches de ceux de la FVR, échantillons de terrain provenant d'animaux atteints en phase aigué de la maladie). Bien que le virus de la EVR soit considéré comme ayant un seul génotype et sérotype, la sensibilité diagnostique, c'est-à-dire la proportion d'échantillons d'animaux de référence 15 infectés testés positifs, a été évaluée avec 25 isolats viraux de FVR. provenant de différentes origines géographiques (n = 25, tableau 3). La limite de détection (c'est-à-dire la plus petite quantité détectable d'antigène) a été évaluée en utilisant des dilutions sérielles de raison 10 de six isolats viraux différents (n ra. 6, tableau 4). Les échantillons ont été considérés comme de vrais positifs lorsqu'ils ont été trouvés positifs dans un test de RT-PCR basé sur la 20 technique de Bird et al. 2007, considéré comme la technique de référence dans cette étude. Les résultats correspondant à la sensibilité diagnostique du test LET (Ose; Diagnostic Sensitivity) sont présentés dans le tableau 3A. Vingt-cinq souches de FVR isolées provenant de différentes origines géographiques détectées positives au virus de FVR selon la technologie Tagman real finie RT-PCR (technique de référence actuelle pour la détection du 25 virus de la FVR (Bird et al., 2007)) ont été détectées positives par le test de diagnostic rapide LET de l'invention (Tableau 3) avec une sensibilité diagnostique du test (DSe) de 100% (na.25). Tableau 3 Origine des échantillons utilisés pour évaluer la sensibilité et la spécificité 30 du test TDR (LET) selon l'invention: Identification, année d'isolement, origine des souches virales ou échantillons de sérums testés dans cette étude. A. Sensibilité et détectabilité Genre Souche Année Pay source Résultat 20 Espèces d'isolement LFT Phiebovirus Souche de RVFV Smithburn * 1944 Ouganda moustique Positif Phiebovirus La souche de RVFV Lunyo 1955 Ouganda moustique Positif Phlebovirus Souche RVFV AN 1830 " 1956 Afrique du Sud mouton Positif . REVENDICATIONS1 Dispositif de bandelette immunochromatographique, de préférence à écoulement latéral, pour test de diagnostic rapide (TDR) destiné à la détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un antigène spécifique du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) comprenant la nucléoprotéine (N) dudit virus ou un fragment antigénique de celle-ci, caractérisé en ce qu'il comprend, au moins : Une membrane comprenant une zone de capture ou zone de test (T) sur laquelle est adsorbé un anticorps de capture spécifique de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou d'un fragment antigénique de celle-ci, et une zone de contrôle (C) sur laquelle est adsorbé un anticorps de contrôle, (ii) Un papier filtre comprenant une zone sur laquelle est adsorbé un anticorps de révélation, spécifique de la nucléoprotéine (N) ou d'un fragment antigénique de celle-ci, couplé à un système de révélation, ledit filtre étant superposé et fixé par adhésion à ladite membrane (i) de sorte à ce que les zones comprenant ledit anticorps de révélation, ledit anticorps de capture et ledit anticorps de contrôle soient distinctes ; (iii) et éventuellement un cadre en plastique protecteur, ou alternativement (i') Une membrane comprenant successivement : - une première zone sur laquelle est adsorbée un anticorps de révélation, spécifique de la nucléoprotéine (N) ou d'un fragment antigénique de celle- ci, couplé à un système de révélation, - une zone de capture ou zone de test (T) sur laquelle est adsorbé un premier anticorps (anticorps de capture) spécifique de la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou d'un fragment antigénique de celle-ci et - une zone de contrôle (C) sur laquelle est adsorbé un anticorps de contrôle, (ii') et éventuellement un cadre en plastique protecteur. 2. Dispositif de bandelette immunochromatographique selon la revendication 1, caractérisé en ce que la membrane est une membrane de nitrocellulose. 28 3 Dispositif de bandelette immunochromatographique selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le système de révélation comprend des particules d'or colloïdal couplées à l'anticorps de révélation. 5 4 Dispositif de bandelette immunochromatographique selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'anticorps de capture est un anticorps monoclonal, en particulier un anticorps désigné 10H3-4E4-3D5. 5 Dispositif de bandelette immunochromatographique selon l'une quelconque des 10 revendications précédentes, caractérisé en ce que l'anticorps de révélation est un anticorps monoclonal, en particulier un anticorps désigné 8E10-4A4. 6 Dispositif de bandelette immunochromatographique selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est sous une forme 15 lyophilisée et de préférence conditionnée dans un emballage stérile et étanche, en particulier un sachet en aluminium scellé. 7 Kit pour test de diagnostic rapide (TDR) destiné à la détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un antigène spécifique du virus de la fièvre de 20 la vallée du Rift (RVFV) comprenant la nucléoprotéine (N) dudit virus ou un fragment antigénique de celui-ci, caractérisé en ce qu'il comprend au moins : a) Un dispositif de bandelette immunochromatographique tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 6, et b) Un tampon de migration de l'échantillon biologique dans le dispositif. 25 8 Procédé immunochromatographique ou test de diagnostic rapide (TDR) pour la détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un antigène spécifique du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou un fragment antigénique de celle-ci, mettant en oeuvre un dispositif tel que défini dans l'une quelconque des 30 revendications 1 à 6, comprenant les étapes de : (i) Mise en contact de l'échantillon biologique susceptible de contenir la nucléoprotéine (N) du virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) ou un fragment antigénique de celle-ci (antigène) avec un anticorps de capture spécifique de la nucléoprotéine (N) et un anticorps de 35 révélation spécifique de la nucléoprotéine (N), dans des conditions 29 permettant la formation d'un complexe anticorps de capture-antigèneanticorps de révélation, et (ii) Détection dudit complexe anticorps de capture-antigène-anticorps de révélation. 5 9. Procédé immunochromatographique selon la revendication 8, caractérisé en ce que : un volume de l'échantillon biologique mélangé au tampon de migration, de préférence volume à volume, est déposé sur la zone 10 (S) réservée à l'échantillon, entraînant la réhydratation des anticorps de révélation et leur migration par capillarité le long de la membrane ; si l'antigène est présent dans l'échantillon testé, le complexe antigène -anticorps de révélation est capturé par l'anticorps de capture immobilisé sur la membrane au niveau de la zone de test (T) 15 formant un complexe anticorps de révélation-antigène-antigène, visualisé sous la forme d'une ligne, de préférence rouge, au niveau de la zone de test (T), révélant un résultat positif ; le système de révélation, en particulier les particules d'or, en excès (ou non), a continué à migrer le long du dispositif jusqu'à être capturé 20 par l'anticorps de contrôle immobilisé au niveau de la zone de contrôle (C) formant une ligne, de préférence rouge, au niveau de la zone de contrôle (C) validant le test. 10. Procédé immunochromatographique selon la revendication 8 ou 9, destiné à 25 détecter le virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) chez un animal infecté naturellement, et caractérisé en ce que l'échantillon biologique prélevé chez ledit animal est choisi dans le groupe constitué de sérum ou de plasma, en particulier provenant de prélèvements sanguins ou d'exsudats d'organes (foie, rate). 30