Brevet FR3070047A1 — publié le 20190215

BIOMARQUEURS DU NEUROBLASTOME DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne le domaine de l'oncologie, en particulier le diagnostic et le traitement du neuroblastome. ETAT DE LA TECHNIQUE Le cancer est une maladie de l'homme et des animaux qui se traduit par une croissance incontrôlée des cellules endogènes. Le terme « cancer » est utilisé pour désigner la formation de tumeurs malignes et de néoplasmes (tumeurs ou carcinomes). Généralement, la croissance des cancers comporte deux étapes successives, en premier lieu la croissance tumorale locale et dans un second temps, la dissémination cancéreuse. La croissance tumorale locale consiste en l'apparition d'un clone tumoral, à partir d'une cellule « transformée », sous l'action d'agents carcinogènes initiateurs et promoteurs. La prolifération cellulaire aboutit à la constitution de la tumeur. La dissémination cancéreuse à partir de la tumeur initiale peut s'effectuer par dissémination régionale et/ou par développement de tumeurs secondaires appelées métastases. Ce phénomène est également désigné comme étant la phase métastatique. Les cancers dérivés des cellules de crêtes neurales sont caractérisés par l'apparition de tumeurs solides composées de cellules qui sont issues de la différenciation des cellules de la crête neurale, au cours de l'embryogenèse. La crête neurale désigne, chez l'embryon des craniates, une population de cellules transitoires et multipotentes générées à partir de la région la plus dorsale du tube neural. Les cellules de la crête neurale migrent dans l'ensemble de l'embryon au cours du développement et donnent naissance à une grande diversité de types cellulaires chez l'adulte. La crête neurale est à l'origine des mélanocytes (à l'exception des cellules pigmentaires de l'oeil), d'une grande partie des os et des cartilages du squelette facial et du cou, de quelques cellules endocrines, et donne naissance à toutes les cellules gliales et à la majeure partie des neurones du système nerveux périphérique. Les tumeurs issues des cellules de crête neurale sont de nature diverse et incluent notamment le neuroblastome, les mélanomes, les phéochromocytomes, les 2 paragangliomes, les chemodectomes, les neurogangliomes, les tumeurs PEC (perivascular epithelioid cell), les tumeurs neuro-ectodermales mélanotiques de l'enfance (MNTI), les carcinomes médullaires de la thyroïde, les tumeurs neuroendocrines gastro-entéropancréatiques, le sarcome d'Ewing et tumeurs de même famille, les tumeurs malignes des 5 gaines nerveuses périphériques (MPNSTs) (aussi appelées « Schwannoma malignes », « Neurofibrosarcome », et « Neurosarcome »), les neurofibromes, les perineuriomes, les neurothécomes, les myxomes de gaine nerveuse, certain type de médulloblastomes, et des tumeurs atypiques tératoïdes et rabdoïdes. Parmi ces tumeurs issues des cellules dérivées de crêtes neurales, le 10 neuroblastome est un cancer pédiatrique responsable de plus de 15% de la mortalité infantile liée au cancer. On distingue plusieurs stades cliniques du neuroblastome : - Les stades 1, 2 et 3 sont caractérisés par la présence d'une tumeur plus ou moins volumineuse, mais strictement localisée dans l'abdomen, parfois le 15 long de la colonne vertébrale ou au niveau des glandes surrénales ; - Le stade 4 correspond à la forme métastatique, de mauvais pronostic ; - Le stade 4S se caractérise par la présence de métastases hépatiques et cutanées généralement importantes, mais jamais de métastase osseuse. Cette forme assez particulière régresse dans la grande majorité des cas, soit 20 spontanément, soit suite à une chimiothérapie peu agressive. La caractérisation moléculaire des tumeurs issues de tissus embryonnaires est malaisée car il n'existe pas de tissu sain correspondant au tissu de la tumeur: en effet, les cellules des crêtes neurales ont disparu au cours du développement, et n'existent plus dans un organisme mammifère après sa naissance. Ainsi, il n'existe pas de tissu de référence 25 avec lequel on puisse comparer les taux d'expression des gènes exprimés différemment en cas de cancer. Les neuroblastomes sont hautement hétérogènes. Actuellement, la caractérisation moléculaire des tumeurs de neuroblastome est principalement basée sur la détection de l'amplification du gène N-myc. En effet, la présence de multiples copies de 30 l'oncogène N-myc dans une cellule tumorale est associée à un risque élevé de développer des métastases, donc pour la tumeur de progresser vers le stade 4 métastatique. 3 Concernant le traitement du neuroblastome, il se base sur les techniques classiques telles que la chirurgie, la radiothérapie dont la curiethérapie, la chimiothérapie dont l'hormonothérapie, l'immunothérapie et plus récemment la thérapie anti-angiogénique. Cependant, en dépit de progrès récents, ces techniques ne sont pas toutes 5 efficaces, et engendrent, malheureusement fréquemment, une intolérance de la part des patients, ainsi que des effets secondaires sévères tels qu'une dépression médullaire, des vomissements, des nausées, une alopécie, une asthénie, une perte d'appétit, une anémie, une thrombopénie, ou une non préservation des tissus sains. Par exemple, le neuroblastome de stade 4 est traité de manière intensive par 10 chimiothérapie, avec des effets secondaires importants à court et long terme. Seulement 40% des patients guérissent, les autres présentant des rechutes successives avec une issue fatale. Les cas de rechute ne sont pas prédictibles, et aucune thérapie n'est actuellement disponible pour les traiter. Ainsi, il existe actuellement un besoin de procédés permettant de mieux prédire 15 l'évolution d'une tumeur, notamment de déterminer son degré d'agressivité et d'invasivité, sa probabilité de rechute après traitement classique, et de nouveaux actifs anticancéreux plus efficaces, qui agissent sélectivement sur les cellules cancéreuses et leurs voies de signalisation, qui soient moins toxiques, et qui entraînent moins, voire pas ou très peu d'effets secondaires. 20 Des cibles thérapeutiques spécifiques des cellules cancéreuses sont donc activement recherchées pour d'une part distinguer les tumeurs selon leur stade, et d'autre part pour identifier de nouveaux traitements ciblant les différents sous-types de neuroblastomes et qui soient mieux tolérés par les patients. Afin d'identifier de telles cibles, des études de protéomique ont permis de montrer 25 que certaines protéines sont sur-exprimées ou au contraire sous-exprimées dans les tumeurs de neuroblastome, lorsque celles-ci deviennent de type métastatique. Le taux d'expression de ces protéines, ou de leurs gènes associés, est ainsi un indicateur fiable de la sévérité et de l'agressivité de la tumeur. De plus, le taux d'expression de plusieurs gènes codant pour ces protéines 30 spécifiques permet de définir une « signature moléculaire » de la tumeur, d'anticiper son devenir, et donc d'adapter le traitement anti-cancéreux. Enfin, les protéines identifiées comme étant des biomarqueurs peuvent être utilisées en tant que cibles thérapeutiques. Notamment, les protéines surexprimées dans les 4 tumeurs métastasiques agressives peuvent être avantageusement régulées grâce à des inhibiteurs spécifiques de leur expression, ce qui conduit les cellules tumorales à adopter un profil moins agressif. Dans le cas des neuroblastomes, plusieurs cibles spécifiques ont été identifiées 5 jusqu'à présent et sont en cours d'investigation thérapeutique, mais très peu ont abouti à des résultats précliniques encourageants. Une surexpression du facteur anti-apoptose Bd-2 a été mise en évidence dans des tumeurs neuroblastiques ; une inhibition de l'expression de ce facteur résulte en une apoptose massive des cellules tumorales traitées par un tel inhibiteur, validant l'intérêt de 10 cette cible thérapeutique (Lamers et al., 2012) Une surexpression de l'oncogène Lin28B a été observée dans des cellules de neuroblastome agressif : ce composé agit en régulant négativement la quantité de microARNs de la famille let-7, ce qui entraine un taux de protéine N-MYC élevé dans les cellules neuroblastiques, induisant l'agressivité de la tumeur. (Molenaar et al., 2012) 15 D'autres biomarqueurs et cibles thérapeutiques doivent maintenant être identifiés, afin de développer de nouvelles options thérapeutiques pour les patients atteints d'un neuroblastome, et pour mieux distinguer les différents types de tumeurs, autrement que par exploration clinique. La présente invention a pour objet de satisfaire à ces besoins. 20 EXPOSE DE L'INVENTION La présente invention concerne des procédés de diagnostic et de traitement du neuroblastome. La présente invention concerne en particulier l'identification de protéines, toutes membres d'une même voie de signalisation cellulaire, dont le taux d'expression, considéré 25 pour une ou plusieurs de ces protéines, varie en fonction du stade de la tumeur, notamment lorsque les cellules cancéreuses progressent d'un stade « non invasif » à un stade invasif, plus agressif. Plus particulièrement, la présente invention concerne un procédé de caractérisation moléculaire in vitro d'une tumeur de neuroblastome, comprenant les étapes suivantes: 30 a) Obtention d'un échantillon de ladite tumeur ; b) Mesure dans cet échantillon du taux d'expression d'un ou plusieurs des 19 gènes codant pour les protéines choisies parmi le groupe 5 consistant en : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2, 5 c) Comparaison du taux d'expression du ou desdits gènes mesuré à l'étape (b) avec une valeur de référence déterminée pour le ou chacun desdits gènes. La présente invention concerne également un modulateur de l'expression ou de l'activité d'au moins une protéine choisie parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, 10 Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2, pour son utilisation dans le traitement du neuroblastome. Plus particulièrement, la présente invention est relative à : Sema3C, ou un activateur de l'expression ou de l'activité de Sema3C, pour 15 son utilisation dans le traitement du neuroblastome de stade métastatique (4 ou 4S) ; et Un inhibiteur de l'expression ou de l'activité d'une ou plusieurs plexine(s) choisie(s) parmi Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine Cl et Plexine D1, pour son utilisation dans le traitement du 20 neuroblastome. DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1. Pour chaque gène biomarqueur codant pour la protéine mentionnée en haut de la 25 figure, un graphique représente les niveaux d'expression du gène mesuré dans plusieurs échantillons de tumeurs, issues d'une cohorte de patients (Kocak and Wolf). Des résultats similaires ont été obtenus sur une deuxième cohorte de patients (Shi and Fisher). Les résultats sont présentés dans l'ordre suivant : tumeurs de stade 1 (stl), stade 2 (st2), stade 3 (st3), stade 4 (st4) et stade 4S (st4S). Les chiffres entre parenthèses indiquent le nombre 30 d'échantillons pour chaque stade. Les taux d'expression sont reportés en ordonnées. Si un stade se distingue des autres par un taux d'expression moyen/médian significativement différent, la légende indique : Stade différent / autres stades. 6 Une courbe de corrélation est présentée en bas de figure, représentant une courbe de Kaplan-Meier faisant le lien entre le taux d'expression du gène biomarqueur et le taux de survie sans rechute des patients. L'existence d'une corrélation entre le taux d'expression du gène et un mauvais pronostic de survie est indiquée en dessous de chaque graphe. 5 A) Biomarqueurs spécifiques du stade 4. B) Biomarqueur spécifique des stades 4 et 4S métastatiques. C) Biomarqueurs spécifiques du stade 4S. Figure 2. Signature génétique des lignées cellulaires neuroblastiques SHEP et IGRN91. 10 Les taux d'expression des gènes codant pour les protéines Plexine AI, Plexine A2, Neuropiline 1, Neuropiline 2, Sema3F, Sema3D, Sema3C, Sema3B et Sema3A ont été mesurés dans des lignées cellulaires immortalisées issues de tumeurs neuroblastiques de stade 4. Ces taux d'expression ont été normalisés par rapport à celui du gène HPRT. Figure 3. Mesure du facteur de variation d'expression des gènes codant pour les 15 protéines Sema3C, Sema3F et Sema3D, et comparaison avec une valeur de référence La valeur de référence « 0 » représentée sur la figure correspond à une variation nulle entre le taux d'expression mesuré dans les cellules IGR-N91 avant leur greffe dans un embryon de poulet, et le taux d'expression mesuré dans les cellules IGR-N91 après greffe et incubation pendant 48h de l'embryon greffé. 20 Les différences observées sont représentées en valeur positives (augmentation du taux d'expression) ou négatives (diminution du taux d'expression) par rapport à la valeur de référence des cellules « naïves » avant leur greffe dans l'embryon. Figure 4. Effets de de l'introduction d'ARN interférents dirigés contre une séquence inerte scramble scr (contrôle : CTL), contre la plexine Al (PlxnAl) et contre la plexine 25 A2 (PlxnA2) A) Les ARN interférents sont introduits dans des cellules de lignées neuroblastiques SHEP et IGR-N91. La prolifération des cellules est mesurée grâce au kit Cell Proliferation Reagent WST-1 (Merck). B) Les trois ARN interférents sont introduits dans des cellules neuroblastiques SHEP. 30 L'activation de la caspase-3 est mesurée par la technique DEVD-AFC qui consiste à mesurer la fluorescence émise par le clivage du composé DEVD-AFC par la caspase-3 activée. 7 C) Effets de l'inhibition de l'expression de la plexine Al (PlxnAl) et de la plexine A2 (PlxnA2) par utilisation d'ARN interférents (siPLxnAl et siPlxnA2) dans un test de croissance en agar mou sur les cellules neuroblastiques SHEP, en utilisant comme contrôle un ARN interférent dirigé contre une séquence inerte (siCTL). Les clones sont visualisés à l'aide de la 5 fluorescence émise par la GFP, exprimée de manière stable dans les cellules SHEP. D) Mesure de la taille et du nombre de clones formés en agar mou après inhibition de l'expression de la Plexine Al et de la Plexine A2 Figure 5. Inhibition de l'expression des Plexines Al et A2 avec les microRNA de la famille miR-30 sous forme polycistronique (« poly », incluant mir-30a, mi-30b, mir-30c') et 10 avec le microRNA mir-30C seul (« c ») Les cellules HeLa ont été co-transfectées avec des constructions génétiques codant pour les gènes cibles (PlxnAl, PlxnA2 et Lin28b) intégrés dans un plasmide rapporteur de l'activité des miRNAs (pmiR-Glo luciferase reporter system, promega) et avec les constructions codant pour mir-30 sous forme polycistronique ou pour mir-30C seul. L'expression de ces 15 protéines de fusion est ensuite évaluée en fonction de l'activité de fluorescence mesurée sur les cellules. Figure 6. Rôle pro-métastatique de Sema3C A) Construction génétique permettant d'induire, en présence de doxycycline, l'expression d'un sh-RNA dirigé contre l'ARN messager de Sema3C. Les résultats correspondants sont 20 présentés dans le tableau 3. B) Les cellules IGR-N91, après introduction transitoire de siRNA dirigés contre Sema3C, ou d'une construction contrôle, sont cultivées sous forme de gouttes, dans un milieu de culture avec ou sans Sema3C. Les cellules sont cultivées in vitro dans un milieu contrôle (à gauche de la figure) ou dans un 25 milieu contenant de la protéine Sema3C. Le pourcentage d'agrégation cellulaire est indiqué sur la courbe des ordonnées. Les points noirs représentent le pourcentage d'agrégation des cellules transformées avec un ARN interférent contrôle (siRNA scr). Les points gris représentent le pourcentage d'agrégation des cellules transformées avec un ARN interférent de type sh-RNA dirigé contre l'ARN messager de sema3C (siRNA Sema3c). 30 8 DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Remarques préliminaires La présente invention est basée sur l'identification de gènes biomarqueurs, codant pour des protéines impliquées dans la voie de signalisation des sémaphorines, dont le 5 taux d'expression est différent d'une tumeur à l'autre, et cette différence de taux d'expression par rapport à une valeur de référence étant représentative du stade de la tumeur. La voie de signalisation Sémaphorine/Neuropiline/Plexine est constituée d'un réseau de gènes fonctionnellement associés, codant pour des récepteurs (neuropilines et plexines) et des ligands (sémaphorines) sécrétés et/ou transmembranaires, dont les 10 interactions médient des contrôles de la migration et de la prolifération cellulaire des cellules de neuroblastome. Les sémaphorines ont été identifiées en premier lieu comme étant des facteurs guidant la progression des axones. Cette famille de protéines comprend plus de 30 membres, répartis en 8 classes : les classes 3 à 7 regroupant les sémaphorines 15 exprimées chez les vertébrés. Toutes les sémaphorines sont caractérisées par la présence d'un domaine 'sema' d'environ 500 acides aminés, localisé près de l'extrémité N-terminale, essentiel pour l'activité de ces protéines. Les sémaphorines de classe 3 (Sema 3A, 3B, 3C, 3D, 3E et 3F) sont les seules à être sécrétées et non transmembranaires chez les vertébrés. La famille des plexines regroupe neuf récepteurs transmembranaires, 20 caractérisés par la présence dans leur domaine extracellulaire d'un domaine de type « sema » d'environ 500 acides aminés, similaire à celui présent dans les protéines de la famille des sémaphorines. Les plexines sont les récepteurs des sémaphorines, dans certains cas en association avec les neuropilines, et transmettent leur signal via l'activation de voies intracellulaires. Les plexines possèdent toutes, dans leur domaine intracellulaire, un domaine 25 GAP (GTPase-activating protein) séparé en deux par un domaine RBD (RHO-GTPase- binding domain). La dimérisation des plexines permettrait d'activer le domaine GAP. Quatre classes de plexines ont été définies (A-D) en fonction de leur structure, et regroupe les neuf membres de la famille dénommés AI, A2, A3, A4, BI , B2, B3, Cl et Dl. Chaque plexine présente une spécificité pour la fixation d'une ou plusieurs 30 sémaphorines. Par exemple, les plexines A sont les récepteurs des sémaphorines 6: la plexine Al fixe spécifiquement Sema6D, alors que les plexines A2 et A4 lient indifféremment les sémaphorines Sema6A et Sema6B. Toutes les plexines A sont capables de lier Sema3A. La plexine Al lie Sema3E. 9 D'abord identifiées pour leur rôle dans le développement du système nerveux, il a ensuite été montré que les plexines sont impliquées dans le développement embryonnaire et notamment dans les processus tels que l'angiogenèse, le développement du coeur, la morphogenèse squelettique et la morphogenèse rénale. (Pour revue, voir Perala et al., 5 2012). Les récepteurs 'Neuropilinet et 'Neuropiline2' (NPR1, NPR2) agissent en tant que co-récepteurs des sémaphorines, en association avec les plexines qui transmettent le signal à la cellule par l'activation de leur domaine GAP. Les études portant sur l'implication fonctionnelle de cette voie de signalisation, 10 dans le contexte du développement du système nerveux, montrent que les interactions contractées entre les membres de cette voie régulent le comportement des cellules. Ainsi, la co-expression des ligands et des récepteurs par une même cellule module la sensibilité de réponse de cette cellule aux sémaphorines sécrétées, présentes dans l'environnement extracellulaire. Par exemple, le couple Sema3A/Neuropilinel exprimé par une cellule diminue 15 la réponse de cette cellule à Sema3A exogène (Moret et al, 2007). De même, le couple Sema3C/Neuropiline régule la réponse à Sema3A, Sema3C et Sema3F exogènes. Il diminue la sensibilité de la cellule aux deux premières et renforce au contraire la réponse à la troisième (Sanyas et al, 2012). D'une manière générale, il y a un contrôle du niveau d'expression des neuropilines à la surface cellulaire, qui détermine la sensibilité des cellules 20 aux ligands. De plus, la co-expression des plexines A et de leurs ligands sémaphorines transmembranaires inhibe la réponse cellulaire aux sémaphorines exogènes. Enfin, il a également été montré qu'en fonction des membres de la voie exprimés, et de ses effecteurs de signalisation au sein de la cellule, l'effet fonctionnel final peut être un effet promoteur ou au contraire inhibiteur de la prolifération et de la migration cellulaire. Ces données expliquent 25 que dans le contexte des cancers, les membres de cette voie de signalisation sont parfois identifiés comme des oncogènes, ou au contraire sont considérés comme des suppresseurs de tumeurs. Des mutations dans les gènes de cette voie de signalisation, comme sema6C et plexine Al ont par exemple été récemment décrites dans le génome de tumeurs de neuroblastome (Li et al., 2017). 30 Procédé de caractérisation moléculaire d'une tumeur de neuroblastome La présente invention concerne un procédé de caractérisation moléculaire in vitro d'une tumeur de neuroblastome, comprenant les étapes suivantes: 10 a) Obtention d'un échantillon de ladite tumeur ; b) Mesure dans cet échantillon du taux d'expression d'un ou plusieurs des gènes codant pour les protéines choisies parmi le groupe consistant en : une sémaphorine, une plexine et une neuropiline, 5 c) Comparaison du taux d'expression du ou desdits gènes mesuré à l'étape (b) avec une valeur de référence déterminée pour le ou chacun desdits gènes. Il est entendu que la présente invention est relative à une tumeur de neuroblastome, et que les sémaphorines, plexines et neuropilines concernées sont de facto celles exprimées par les cellules de neuroblastome. 10 Ainsi, la présente invention concerne un procédé de caractérisation moléculaire in vitro d'une tumeur de neuroblastome, comprenant les étapes suivantes: a) Obtention d'un échantillon de ladite tumeur ; b) Mesure dans cet échantillon du taux d'expression d'un ou plusieurs des 19 gènes codant pour les protéines choisies parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, 15 Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2, c) Comparaison du taux d'expression du ou desdits gènes mesuré à l'étape (b) avec une valeur de référence déterminée pour le ou chacun desdits gènes. 20 Au sens de l'invention, un procédé de caractérisation moléculaire désigne un procédé in vitro permettant d'obtenir des informations diverses sur la tumeur : stade, risque de dissémination dans l'organisme, agressivité, résistance à certains traitements thérapeutiques, etc..., cette caractérisation étant indépendante de l'examen clinique. 25 Les échantillons de tumeurs sont obtenus selon les techniques habituelles, par des expérimentateurs qualifiés. En particulier, des prélèvements sur des patients peuvent être réalisés au sein d'hôpitaux ou de cliniques, dans les services d'oncologie. Il est toutefois précisé que cette étape de prélèvement est exclue du procédé selon l'invention. La mesure du taux d'expression d'un gène peut être réalisée selon toutes les 30 techniques classiques bien connues de l'Homme du métier. Par exemple, des techniques couramment utilisées sont la qRT-PCR (quantitative Real Time - Polymerase Chain Reaction) et l'hybridation in situ sur coupes tissulaires et sur cellules. 11 L'expression du gène peut également être déterminée via le dosage de son produit, la protéine. Les techniques de mesure quantitative des protéines exprimées sont notamment la technique immuno-enzymatique ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) pour les protéines circulantes, l'immunohistochimie sur coupes tissulaires ou cellules, et le 5 Western blot pour la quantification protéique sur des lysats et/ou fluides. La présente invention concerne également un procédé de caractérisation moléculaire in vitro d'une tumeur de neuroblastome, comprenant les étapes suivantes: a) Obtention d'un échantillon de ladite tumeur ; b) Mesure dans cet échantillon du taux de production d'une ou plusieurs des 19 10 protéines choisies parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine Bl, Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2, c) Comparaison du taux de production de la ou desdites protéines mesuré à l'étape (b) 15 avec une valeur de référence déterminée pour la ou chacune desdites protéines. Ce procédé de caractérisation pourra être effectué en lieu et place de celui comprenant la mesure du taux d'expression des gènes, ou bien être effectué en sus du procédé comprenant la mesure du taux d'expression des gènes. Par ailleurs, au sens de l'invention, la mesure du taux de production d'une ou 20 plusieurs protéines inclut la mesure du taux de présence en surface des protéines membranaires ou associées à la membrane, et/ou du taux de sécrétion des protéines par la cellule. En particulier, le taux de présence en surface de protéines membranaires ou associées à la membrane, et la quantité de protéines sécrétées par la cellule, pourront être 25 comparés ce qui donnera des indications supplémentaires sur la caractérisation moléculaire de la tumeur. L'expression « valeur de référence » désigne la valeur chiffrée d'un taux d'expression d'un gène dans une ou plusieurs tumeurs dont le(s) stade(s) est(sont) connu(s). 30 Pour un gène (i), cette valeur sera désignée ci-dessous Vi. 12 Selon un aspect préféré de l'invention, la valeur de référence Vi est une moyenne ou une médiane de plusieurs valeurs du taux d'expression d'un même gène, mesurées dans différentes tumeurs de stade connu. Il est ainsi possible de définir une valeur de référence pour chaque gène, 5 spécifique des tumeurs de stade 1, spécifique des tumeurs de stade 2, spécifique des tumeurs de stade 3, spécifique des tumeurs de stade 4 et spécifique des tumeurs de stade 4S. D'autres valeurs de référence peuvent être définies, comme cela sera présenté par la suite. La comparaison de la valeur obtenue à l'étape (b) pour un gène (i), cette valeur 10 étant désignée ci-après Ti, avec la valeur de référence Vi correspondante, permet de déterminer s'il existe, ou non, une différence entre ces deux valeurs. Dans la présente demande, les termes « différence » et « variation » sont utilisés indistinctement, et désigne tous les deux soit une augmentation significative, soit une diminution significative, de la valeur du taux d'expression d'un gène Ti par rapport à sa valeur 15 de référence Vi. Au sens de l'invention, une différence (augmentation ou diminution) est considérée comme étant significative par la réalisation de tests statistiques bien connus de l'Homme du métier. Selon un mode de réalisation de l'invention, les valeurs de référence et de taux 20 d'expression mesurés peuvent être normalisées, pour tenir compte de la quantité de biomasse cellulaire. Cette normalisation des valeurs relatives obtenues pour chaque gène s'obtient en divisant ces valeurs par la valeur du taux d'expression d'un ARN messager représentatif de la quantité de cellules. L'ARN messager représentatif de la quantité de cellules peut notamment être celui de la protéine HPRT (hypoxanthine-guanine 25 phosphoribosyltransférase). Cette même technique de normalisation des valeurs relatives pourra être mise en oeuvre lorsque les taux mesurés sont des taux de production de protéines. Selon une mise en oeuvre particulière de l'invention, le procédé comprend de plus une étape d) de détermination du stade de la tumeur parmi l'un des stades 1, 2, 3, 4 ou 4S, 30 en fonction de la différence observée entre le taux d'expression Ti d'au moins un gène tel que cité ci-dessus, et sa valeur de référence Vi. L'expression « détermination du stade » désigne un aspect particulier de la caractérisation moléculaire de la tumeur, consistant à attribuer à la tumeur un classement 13 parmi les catégories suivantes : stades 1, 2, 3, 4 ou 4S, ces stades cliniques ayant été définis par les praticiens hospitaliers. Toutefois, le procédé selon l'invention met ici en oeuvre une technologie indépendante des investigations cliniques classiques. De manière avantageuse, le procédé selon l'invention peut être réalisé par la 5 mesure, dans l'échantillon de tumeur, du taux d'expression d'un seul gène choisi parmi ceux codants pour Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2. En effet, chaque biomarqueur peut être utilisé de manière indépendante des 10 autres biomarqueurs pour caractériser de façon moléculaire la tumeur d'où provient l'échantillon étudié. Toutefois, il peut être pertinent de mesurer le taux d'expression de plusieurs gènes codant pour des protéines choisies parmi les sémaphorines, les plexines et les neuropilines, afin d'obtenir une « cartographie » aussi dénommée « signature moléculaire » 15 d'une tumeur. Une telle caractérisation moléculaire d'une tumeur permet aux expérimentateurs de déterminer, en fonction des différences observées avec les valeurs de référence Vi pour chaque gène (i), de la manière la plus précise possible le « statut » de la tumeur, ceci incluant le stade, les risque de métastase, l'agressivité, l'invasivité et les chances de réponse 20 à un traitement de ladite tumeur. Pour des tumeurs de même caractéristique, les variations de cette signature sont représentatives de différences entre les patients. Avantageusement, la caractérisation moléculaire d'une tumeur selon le procédé de l'invention peut permettre au personnel soignant de choisir le traitement thérapeutique le plus adapté à la tumeur ainsi caractérisée, et ainsi de pratiquer une médecine personnalisée. 25 Lorsque le taux d'expression de plusieurs gènes est mesuré, il est entendu que le taux d'expression pourra être mesuré pour deux, trois, quatre, cinq, six, sept, huit, neuf, dix, onze, douze, treize, quatorze, quinze, seize, dix-sept, dix-huit ou dix-neuf gènes choisis parmi les gènes codants pour les protéines Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine 30 A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2. Il est entendu que toutes les combinaisons possibles de deux, trois, quatre, cinq, six, sept, huit, neuf, dix, onze, douze, treize, quatorze, quinze, seize, dix-sept, dix-huit ou dix-neuf gènes choisis parmi les gènes codants pour les protéines Sema3C, Sema3A, Sema3B, 14 Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2 sont comprises selon l'invention. Parmi toutes ces combinaisons de 19 gènes, il sera notamment possible de 5 mesurer le taux d'expression des gènes codants pour les protéines suivantes : au moins une sémaphorine, au moins une plexine et au moins une neuropiline ; au moins une sémaphorine et au moins une plexine ; au moins une sémaphorine et au moins une neuropiline ; 10 au moins une sémaphorine ; au moins Sema3C ; au moins deux sémaphorines et au moins deux plexines ; au moins Sema3D, Sema4C, Plexine A3 et Plexine B1 ; au moins trois sémaphorines, au moins quatre plexines et au moins une 15 neuropiline ; au moins Sema4C, Sema4D, Sema6D, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B2, Plexine CI, Plexine D1 et Neuropiline I. Selon un premier aspect de l'invention, à l'étape (b), la mesure du taux 20 d'expression est effectuée pour un ou plusieurs des 9 gènes codant pour les protéines suivantes: Sema4C, Sema4D, Sema6D, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B2, Plexine Cl, Plexine D1 et Neuropiline I. Cette combinaison particulière de neuf biomarqueurs est particulièrement indiquée pour distinguer les tumeurs de stade 4, comme cela est présenté dans la figure 1A. 25 En effet, tous ces gènes présentant un taux d'expression significativement différent de ceux relevés dans des échantillons de tumeurs de stade 1, 2, 3 ou 4S. Dans cette mise en oeuvre, la valeur de référence Vi pour chaque gène est obtenue à partir de mesures de taux d'expression du gène (i) sur plusieurs tumeurs dont le stade 1, 2, 3 ou 4S est connu. 30 La valeur de référence Vi pourra en particulier être le résultat de la moyenne arythmétique, ou de la médiane, calculée à partir des taux d'expression obtenus sur les tumeurs dont le stade 1, 2, 3 ou 4S est connu. 15 Selon une mise en oeuvre spécifique, la présente invention concerne un procédé de caractérisation in vitro d'une tumeur de neuroblastome, dans lequel: A l'étape (b), la mesure du taux d'expression est effectuée pour un ou plusieurs des 9 gènes codant pour les protéines suivantes: Sema4C, 5 Sema4D, Sema6D, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B2, Plexine Cl, Plexine D1 et Neuropiline 1, et A l'étape (c), pour chaque gène, la valeur de référence est une médiane du taux d'expression dudit gène mesuré sur des tumeurs de stade clinique 1, 2, 3 et 4S. 10 Selon une autre mise en oeuvre spécifique, la présente invention concerne un procédé in vitro de détermination du stade d'une tumeur de neuroblastome, comprenant les étapes suivantes : a) Obtention d'un échantillon de ladite tumeur ; b) Mesure dans cet échantillon du taux d'expression d'un ou plusieurs des 9 gènes 15 codant pour les protéines choisies parmi le groupe consistant en : Sema4C, Sema4D, Sema6D, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B2, Plexine Cl, Plexine D1 et Neuropiline 1, et c) Comparaison du taux d'expression du ou desdits gènes mesuré à l'étape (b) avec une valeur de référence déterminée pour le ou chacun desdits gènes, cette valeur 20 de référence étant une médiane du taux d'expression dudit gène mesuré sur des tumeurs de stade clinique 1, 2, 3 et 4S. Selon cette mise en oeuvre, dans les cas où une différence significative est observée entre le taux d'expression Ti d'un gène dans la tumeur dont le stade doit être déterminé, et sa valeur de référence Vi, cela signifiera que la tumeur est de stade 4. 25 Selon un deuxième aspect de l'invention, à l'étape (b), la mesure du taux d'expression est effectuée pour un ou plusieurs des 3 gènes codant pour les protéines suivantes: Sema4C, Sema3D et Plexine Bl. Cette combinaison particulière de trois biomarqueurs est particulièrement 30 indiquée pour distinguer les tumeurs de stade 4S, comme cela est présenté dans la figure 1C. En effet, tous ces gènes présentant un taux d'expression significativement différent de ceux relevés dans des échantillons de tumeurs de stade 1, 2, 3 ou 4. 16 Dans cette mise en oeuvre, la valeur de référence Vi pour chaque gène est obtenue à partir de mesures de taux d'expression du gène (i) sur plusieurs tumeurs dont le stade 1, 2, 3 ou 4 est connu. La valeur de référence Vi pourra en particulier être le résultat de la moyenne 5 arythmétique, ou de la médiane, calculée à partir des taux d'expression obtenus sur des tumeurs dont le stade 1, 2, 3 ou 4 est connu. Selon une mise en oeuvre spécifique, la présente invention concerne un procédé de caractérisation in vitro d'une tumeur de neuroblastome, dans lequel: A l'étape (b), la mesure du taux d'expression est effectuée pour un ou 10 plusieurs des 3 gènes codant pour les protéines suivantes: Sema4C, Sema3D et Plexine B1, et A l'étape (c), pour chaque gène, la valeur de référence est une médiane du taux d'expression dudit gène mesuré sur des tumeurs de stade clinique 1, 2, 3 et 4. 15 Selon une autre mise en oeuvre spécifique, la présente invention concerne un procédé in vitro de détermination du stade d'une tumeur de neuroblastome, comprenant les étapes suivantes : a) Obtention d'un échantillon de ladite tumeur ; b) Mesure dans cet échantillon du taux d'expression d'un ou plusieurs des 3 gènes 20 codant pour les protéines choisies parmi le groupe consistant en : Sema4C, Sema3D et Plexine B1, et c) Comparaison du taux d'expression du ou desdits gènes mesuré à l'étape (b) avec une valeur de référence déterminée pour le ou chacun desdits gènes, cette valeur de référence étant une médiane du taux d'expression dudit gène mesuré sur des 25 tumeurs de stade clinique 1, 2, 3 et 4. Selon cette mise en oeuvre, dans les cas où une différence significative est observée entre le taux d'expression Ti d'un gène dans la tumeur dont le stade doit être déterminé, et sa valeur de référence Vi, cela signifiera que la tumeur est de stade 4S. 30 Selon un troisième aspect de l'invention, à l'étape (b), la mesure du taux d'expression est effectuée pour au moins le gène codant pour la protéine Sema3C. 17 L'utilisation de ce biomarqueur est particulièrement indiquée pour distinguer les tumeurs de stade 4 ou 4S, c'est-à-dire les tumeurs de type métastatiques, comme cela est présenté dans la figure 1B. En effet, ce gène présente un taux d'expression significativement différent (son expression est nettement diminuée) de ceux relevés dans des échantillons de 5 tumeurs de stade 1, 2, et 3. Dans cette mise en oeuvre, la valeur de référence Vi pour ce gène est obtenue à partir de mesures de taux d'expression du gène codant pour Sema3C sur plusieurs tumeurs dont le stade 1, 2, ou 3 est connu. La valeur de référence Vi pourra en particulier être le résultat de la moyenne 10 arythmétique, ou de la médiane, calculée à partir des taux d'expression obtenus sur des tumeurs dont le stade 1, 2, 3 est connu. Selon une mise en oeuvre spécifique, la présente invention concerne un procédé de caractérisation in vitro d'une tumeur de neuroblastome, dans lequel: A l'étape (b), la mesure du taux d'expression est effectuée pour au moins 15 le gène codant pour la protéine Sema3C; et que A l'étape (c), la valeur de référence est une médiane du taux d'expression dudit gène mesuré sur des tumeurs de stade clinique 1, 2 et 3. Selon une autre mise en oeuvre spécifique, la présente invention concerne un 20 procédé in vitro de détermination du stade d'une tumeur de neuroblastome, comprenant les étapes suivantes : a) Obtention d'un échantillon de ladite tumeur ; b) Mesure dans cet échantillon du taux d'expression d'au moins le gène codant pour la protéine Sema3C, et 25 c) Comparaison du taux d'expression du gène mesuré à l'étape (b) avec une valeur de référence déterminée pour le gène codant pour Sema3C, cette valeur de référence étant une médiane du taux d'expression dudit gène mesuré sur des tumeurs de stade clinique 1, 2, et 3. Selon cette mise en oeuvre, dans les cas où une différence significative est 30 observée entre le taux d'expression T du gène sema3C dans la tumeur dont le stade doit être déterminé, et sa valeur de référence Vi, cela signifiera que la tumeur est de stade 4 ou 4S et est donc à un stade métastatique. 18 Procédé de suivi (cc monitoring d'une tumeur de neuroblastome 5 Le procédé selon la présente invention permet avantageusement de suivre l'évolution d'une tumeur chez un patient donné. Pour cela, le procédé de caractérisation moléculaire in vitro d'une tumeur sera réalisé sur des échantillons issus de la même tumeur, mais obtenus à des moments différents, notamment avant et après le début d'un traitement thérapeutique, ou avant et 10 après une intervention chirurgicale, ou encore après une rémission puis lors d'une récidive de la tumeur. Plus généralement, l'étape (a) d'obtention de l'échantillon de la tumeur pourra être réalisée à un moment T1, et la valeur de référence sera celle obtenue par mesure du taux d'expression d'un gène sur un échantillon de tumeur obtenu à un moment To, To étant 15 antérieur à T1. Selon cette mise en oeuvre, le procédé de caractérisation moléculaire in vitro de la tumeur est caractérisé en ce que : l'étape (a) d'obtention d'échantillon de la tumeur d'un patient est réalisée à un temps T1 ; et 20 A l'étape (c), la valeur de référence déterminée pour un gène est le taux d'expression dudit gène mesuré dans un échantillon de tumeur du même patient, obtenu à un temps To, To étant antérieur à T1. Selon une mise en oeuvre particulière du procédé, le temps T1 est situé 25 chronologiquement après le début de l'administration d'un traitement thérapeutique au patient ; et le temps To est situé chronologiquement avant le début dudit traitement. Ainsi, la comparaison du profil moléculaire de la tumeur avant et après le début du traitement permet d'évaluer les effets thérapeutiques du traitement, et éventuellement de l'adapter pour améliorer ses effets. 19 Selon une mise en oeuvre spécifique, la présente invention concerne un procédé in vitro de suivi de l'évolution d'une tumeur de neuroblastome chez un patient, comprenant les étapes suivantes : a) Obtention d'un échantillon de ladite tumeur à un temps T1; 5 b) Mesure dans cet échantillon du taux d'expression d'un ou plusieurs des 19 gènes codant pour les protéines choisies parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine Bl, Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2, 10 c) Comparaison du taux d'expression du ou desdits gènes mesuré à l'étape (b) avec une valeur de référence déterminée pour le ou chacun desdits gènes, ladite valeur de référence déterminée pour chaque gène ayant été obtenue par la mesure du taux d'expression dudit gène dans un échantillon de tumeur du même patient obtenu à un temps To, To étant antérieur à T1. 15 Puces à ADN et kits de diagnostic L'invention est aussi relative à une puce à ADN portant au moins 19 sondes oligonucléotidiques, chacune des sondes étant spécifique d'un gène parmi les gènes codant pour les protéines suivantes : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, 20 Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2. La présente invention concerne également un kit de diagnostic permettant de mettre en oeuvre le procédé tel que décrit ci-dessus, comprenant les composants suivants : - Une puce à ADN telle que décrite ci-dessus, et - Des réactifs permettant la quantification, dans un échantillon de tumeur de 25 neuroblastome, du taux d'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes codant pour les protéines suivantes : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2. 30 L'invention concerne également l'utilisation de cette puce à ADN et/ou de ce kit de diagnostic pour caractériser in vitro une tumeur de neuroblastome, d'un point de vue moléculaire. 20 L'invention concerne également l'utilisation de cette puce à ADN et/ou de ce kit de diagnostic pour suivre in vitro l'évolution d'une tumeur de neuroblastome chez un patient. Composés thérapeutiques pour leur utilisation dans le traitement du neuroblastome La notion de « traitement du neuroblastome » recouvre plusieurs aspects tels que 5 la réduction de la taille de la tumeur, la disparition de la tumeur primaire et/ou des tumeurs secondaires (métastases) et la prévention des récidives. On entend par « traiter le cancer » le fait de ralentir ou d'inhiber totalement le développement d'une tumeur chez le patient, et/ou le fait de faire disparaitre complètement du corps du patient toutes les cellules cancéreuses et en particulier la tumeur d'origine. 10 La présente invention décrit des cibles thérapeutiques pour le traitement du neuroblastome : il s'agit des protéines Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine Al, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2. Par composé thérapeutique, on entend un composé efficace pour ralentir ou 15 inhiber le développement d'une tumeur de neuroblastome chez le patient, et/ou un composé permettant de faire disparaitre une tumeur de neuroblastome. Par « tumeur » on entend une tumeur primaire ou une tumeur secondaire (métastase) issue de la dissémination de la tumeur primaire. Plus spécifiquement, au sens de l'invention, un tel composé thérapeutique 20 consiste en un modulateur de l'expression ou de l'activité d'au moins une protéine choisie parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2. L'invention concerne donc un modulateur de l'expression ou de l'activité d'au 25 moins une protéine choisie parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine Al, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2, pour son utilisation dans le traitement du neuroblastome. L'expression « modulateur de l'expression ou de l'activité » désigne un composé 30 capable d'influencer de manière spécifique l'expression ou l'activité d'une protéine choisie parmi la liste ci-dessus. 21 Il pourra s'agir, en fonction de la protéine ciblée, d'un activateur ou d'un inhibiteur de ladite expression ou activité. L'Homme du métier saura choisir parmi les différents composés susceptibles de présenter l'activité requise : par exemple, l'inhibition de l'expression d'une protéine pourra 5 être réalisée à l'aide d'ARN interférents ou de microARNs ; l'inhibition de son activité pourra être réalisée par l'utilisation d'antagonistes, notamment des anticorps ; et la stimulation de son expression pourra être obtenue grâce à des composés stabilisateurs des molécules d'ARN messagers. Il est à noter que les séquences de ces protéines, notamment des protéines 10 humaines, ainsi que les séquences des gènes codant ces protéines, sont accessibles dans les bases de données publiques et peuvent être utilisées pour générer des composés inhibiteurs ou activateurs de l'expression ou de l'activité desdites protéines. La présente invention concerne également une méthode pour traiter le neuroblastome, comprenant l'administration à un patient atteint de ce cancer d'un modulateur 15 de l'expression ou de l'activité d'au moins une protéine choisie parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2. L'invention concerne également Sema3C, ou un activateur de l'expression ou de 20 l'activité de Sema3C, pour son utilisation dans le traitement du neuroblastome de stade métastatique (4 ou 4S). En effet, les inventeurs ont identifié le rôle pro-métastatique d'une diminution de l'expression de Sema3C : comme cela est montré en figure 6B, et dans le tableau 3, en cas de diminution de l'expression de Sema3C, les cellules qui auparavant avaient un 25 comportement cohésif se désagrègent et migrent vers d'autres tissus. Les résultats présentés en figure 6B démontrent que la cohésion de ces cellules peut être rétablie par ajout d'une protéine Sema3C exogène. Ainsi, la protéine Sema3C ou tout composé capable d'activer son expression ou son activité, ou encore tout composé capable de mimer son activité, sont susceptibles d'être 30 utilisé dans le traitement du neuroblastome de stade métastatique. Il est entendu que le terme « Sema3C » désigne à la fois la protéine en tant que telle, mais également ses formes dérivées ainsi que des peptides ou des agonistes mimant l'activité de cette protéine, et inclut également les acides nucléiques codant pour une protéine 22 Sema3C, humaine ou non, ou leurs homologues codant pour une protéine d'une autre espèce, présentant la même fonction biologique. L'invention concerne également une méthode pour traiter le neuroblastome de stade métastatique, et/ou pour prévenir les métastases chez un patient présentant une 5 tumeur de neuroblastome à un stade non-métastatique, comprenant l'administration audit patient d'une protéine Sema3C, ou d'un activateur de l'expression ou de l'activité de Sema3C. La présente invention concerne également un inhibiteur de l'expression ou de l'activité d'au moins une plexine choisie parmi Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine 10 A4, Plexine BI , Plexine Cl et Plexine DI, pour son utilisation dans le traitement du neuroblastome. Selon une mise en oeuvre particulière, la présente invention concerne un inhibiteur de l'expression ou de l'activité d'au moins une plexine choisie parmi Plexine Al et Plexine A2. 15 Plus particulièrement, la présente invention concerne un inhibiteur de l'expression ou de l'activité de la Plexine Al. Plus particulièrement, la présente invention concerne un inhibiteur de l'expression ou de l'activité de la Plexine A2. La présente invention concerne également une méthode pour traiter le 20 neuroblastome, comprenant l'administration à un patient atteint de ce cancer d'un inhibiteur de l'expression ou de l'activité d'au moins une plexine choisie parmi Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine BI , Plexine Cl et Plexine Dl. Selon un premier mode réalisation de l'invention, l'inhibiteur d'au moins une plexine est un inhibiteur de son activité. 25 Un inhibiteur de l'activité d'une plexine est un composé agissant sur l'une des activités ci-dessous, en la contrariant : (i) la capacité de la plexine à former un homodimère, (ii) sa capacité à lier son ou ses ligand(s) naturel(s), (iii) sa capacité à activer l'une des voies de signalisation intracellulaire suite à la 30 fixation du ou de ses ligand(s) naturel(s). Un inhibiteur agissant sur la capacité de la plexine à former un homodimère sera notamment une molécule protéique, en particulier un peptide ou un anticorps, capable de 23 modifier la conformation spatiale de la plexine afin d'empêcher sa dimérisation avec une autre plexine. Un inhibiteur agissant sur la capacité de la plexine lier son ou ses ligand(s) naturel(s), telle qu'une sémaphorine, sera notamment une molécule protéique, en particulier 5 un peptide ou un anticorps, capable de modifier la conformation spatiale de la plexine afin d'empêcher la liaison de la sémaphorine, et/ou capable de bloquer ou d'encombrer stériquement le site de fixation de la sémaphorine. Un inhibiteur agissant l'une des voies de signalisation intracellulaire activée par une plexine sera notamment une molécule protéique, en particulier un peptide ou un 10 anticorps, capable de modifier la conformation spatiale de la plexine afin d'empêcher l'activation des domaines catalytiques présents dans le domaine intracellulaire de la plexine, ou de bloquer le site de liaison aux protéines intracellulaires impliquées dans cette voie de signalisation. Il est entendu qu'un même inhibiteur de l'activité d'au moins une plexine pourra 15 agir sur plusieurs capacités de ladite plexine, comme par exemple sur sa capacité à former un homodimère et à lier son ligand naturel. Selon une mise en oeuvre particulière de l'invention, l'inhibiteur de l'activité d'au moins une plexine est choisi parmi un anticorps ou un peptide. Selon un deuxième mode de réalisation de l'invention, l'inhibiteur d'au moins une 20 plexine est un inhibiteur de son expression. L'homme du métier connait de nombreux moyens de réduire l'expression d'une protéine, qui incluent de manière non limitative toutes les technologies de modification génétique, et tous les facteurs inhibant la transcription du gène codant pour une plexine, ou encore la traduction de l'ARN messager vers la protéine ; ces moyens englobent l'utilisation 25 d'ARN interférents et de microARNs. Un tel inhibiteur de l'expression de la plexine sera en particulier un inhibiteur réduisant efficacement, c'est-à-dire d'au moins 40%, ou mieux d'au moins 60%, ou encore mieux d'au moins 80%, l'expression de la plexine contre laquelle il est dirigé. Plus particulièrement, l'inhibiteur de l'expression ou de l'activité d'au moins une 30 plexine peut être un inhibiteur d'expression choisi parmi un ARN interférent et un micro-ARN. Selon une mise en oeuvre particulière de l'invention, l'inhibiteur est un ARN interférent inhibant l'expression d'au moins une plexine. 24 Les ARN interférents sont des ARNs s'hybridant à l'ARN messager (ARNm) produit d'expression du gène comprenant la séquence codant pour la plexine. Les ARNs interférents inhibent la traduction soit par simple encombrement stérique, soit en favorisant le clivage de l'ARNm. 5 Les technologies d'ARN interférents et leur usage in vitro et in vivo sont bien connues de l'homme du métier, et sont décrits dans de nombreux articles scientifiques et demandes de brevet. De manière préférentielle, les ARN interférents sont préparés et sélectionnés pour obtenir au moins 40 % d'inhibition de l'expression du gène cible dans une cellule, voire au moins 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % voire plus de 99 % d'inhibition. 10 Parmi les ARN interférents, les « siRNA » pour Small Interfering RNA ou ARN interférent de petite taille, sont des séquences courtes d'environ 15 à 30 paires de bases (bp), de préférence de 19 à 25 bp. Le design et la préparation des siRNA et leur utilisation pour la transfection de cellules in vivo et in vitro sont bien connus et décrits dans de nombreuses publications. 15 Les siRNA peuvent être conçus et préparés en employant des logiciels appropriés disponibles en ligne, bien connus de l'homme du métier. Les siRNA peuvent également être commandés auprès de sociétés commerciales spécialisées, telles que Santa Cruz et Sigma-Aldrich, qui fournissent sur demande des siRNA pré-designés. 20 Parmi les ARN interférents, on citera également les « shRNA » ou petits ARN en épingle à cheveux, qui sont des ARN adoptant une structure en tige et boucle. La présente invention concerne également un vecteur pour l'expression d'un ARN interférent défini ci-dessus et ci-après, lequel vecteur comprenant un acide nucléique comprenant une séquence codant pour ledit ARN interférent placé sous le contrôle d'un ou 25 plusieurs éléments de régulation permettant l'expression dudit ARN interférent dans une cellule hôte. L'invention concerne aussi un vecteur pour la délivrance d'un ARN interférent dans une cellule hôte, caractérisé en ce qu'il comprend un ARN interférent selon l'invention, défini ci-dessus et ci-après et des moyens permettant la délivrance dudit ARN interférant 30 dans une cellule hôte. De tels moyens sont connus de l'homme du métier, comme par exemple les lipides lipofectamines (http://www.invitrogen.com/content.cfm?pageid=4005) ou Mi rus (http://www.mirusbio.com/products/rnai/index.asp). 25 Des ARN interférents capables d'inhiber l'expression de certaines plexines ont été décrits dans l'art antérieur, et sont incorporés dans la présente demande par référence. On peut citer notamment : des ARN interférents inhibant l'expression de la plexine Al ont été utilisés pour 5 élucider les voies de signalisation activées en réponse à la fixation de la sémaphorine Sema6D (Catalano et al., 2009) ; des ARN interférents de type shRNA inhibant l'expression des plexines AI, A2, A3 et A4 ont été utilisés dans des cellules endothéliales HUVEC (Kigel et al., 2011) ; des ARN interférents de type shRNA inhibant l'expression de la plexine Al ont été 10 introduits dans des cellules gastriques cancéreuses MGC803, entrainant une diminution des niveaux de VEGFR2 (Lu et al., 2016) ; des ARN interférents de type shRNA inhibant l'expression de la plexine Al ont été utilisés dans des cellules de carcinome pulmonaire (Yamada et al., 2016). Selon une autre mise en oeuvre particulière de l'invention, l'inhibiteur est un 15 micro-ARN inhibant l'expression d'au moins une plexine. Les micro-ARN, en abrégé miARN, sont des acides ribonucléiques (ARN) simple- brin, courts (de 21 à 24 nucléotides), exprimés uniquement dans les cellules eucaryotes. Les miARN sont des régulateurs post-transcriptionnels capables d'inhiber l'expression d'un gène : leur appariement à une séquence complémentaire de l'ARN 20 messager du gène cible conduit à la répression traductionnelle ou à la dégradation de cet ARN messager. Chez l'Homme, les micro-ARN sont abondants dans un grand nombre de types cellulaires, et cibleraient environ 60 % des gènes. Ainsi, des thérapies fondées sur les miARN sont actuellement à l'étude, ces thérapies visant à inhiber spécifiquement l'expression 25 de certains gènes, notamment impliqués dans les processus tumoraux. Ainsi, l'inhibition de l'expression d'au moins une plexine pourra être réalisée par l'utilisation d'au moins un micro-ARN ciblant spécifiquement cette plexine. Selon un aspect préféré de l'invention, le microARN utilisé pour le traitement du neuroblastome est un microARN de la famille des miR-30. 30 L'expression de la famille miR-30 est très fortement diminuée dans les neuroblastomes agressifs, suggérant que ceux-ci pourraient réguler la croissance tumorale des neuroblastomes. 26 Les résultats des expériences menées par les inventeurs, présentés en figure 5, démontrent que ce microARN a un net effet sur l'expression des plexines Al et A2, l'inhibition d'expression étant significative et étant accompagnée d'un effet fonctionnel puisque les cellules de neuroblastome présentent une prolifération diminuée lorsque l'expression des 5 plexines est ainsi inhibée. La présente invention concerne également un vecteur pour l'expression d'un micro-ARN tel que défini ci-dessus, lequel vecteur comprenant un acide nucléique comprenant une séquence codant pour ledit micro-ARN placé sous le contrôle d'un ou plusieurs éléments de régulation permettant l'expression dudit micro-ARN dans une cellule 10 hôte. L'invention concerne aussi un vecteur pour la délivrance d'un micro-ARN dans une cellule hôte, caractérisé en ce qu'il comprend un micro-ARN tel que défini ci-dessus, et des moyens permettant la délivrance dudit micro-ARN dans une cellule hôte. 15 La présente invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant, dans un milieu pharmaceutiquement acceptable, au moins un composé thérapeutique choisi parmi le groupe consistant en : un modulateur de l'expression ou de l'activité d'une protéine choisie parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, 20 Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2, Sema3C ou un activateur de l'expression ou de l'activité de Sema3C, et un inhibiteur de l'expression ou de l'activité d'au moins une plexine d'au 25 moins une plexine choisie parmi Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine Bl, Plexine Cl et Plexine Dl. Un milieu pharmaceutique acceptable désigne un véhicule permettant de conserver et d'administrer l'inhibiteur selon l'invention, et optionnellement des excipients, dont l'administration à un individu ou un animal ne s'accompagne pas d'effets délétères 30 significatifs, et qui sont bien connus de l'homme du métier. Une composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre tout excipient pharmaceutique nécessaire, tels que des agents tampons ou des agents pour ajuster le pH ou l'isotonicité, ou encore des agents mouillants. Une composition pharmaceutique selon 27 l'invention peut également comprendre un ou plusieurs agents anti-oxydants, et/ou un ou plusieurs agents conservateurs. Une composition pharmaceutique telle que décrite ci-dessus peut être administrée par toute voie convenable, telle que la voie orale, buccale, sublinguale, 5 ophtalmique, rectale, topique, ou par la voie parentérale, notamment par une voie intrapéritonéale, intradermique, sous-cutanée, intraveineuse ou intramusculaire. Une composition pharmaceutique selon l'invention peut être formulée pour l'administration par voie orale, sous forme d'un comprimé, d'une capsule ou d'une gélule, à libération prolongée ou contrôlée, d'une pilule, d'une poudre, d'une solution, d'une 10 suspension, d'un sirop ou d'une émulsion. Selon un autre mode de réalisation, une composition pharmaceutique selon l'invention peut être préparée pour une administration par voie parentérale, sous une forme injectable. Un polypeptide ou un acide nucléique tels que décrits dans l'invention peut être formulé avec différents véhicules, tels qu'un liposome ou un polymère de transfection. 15 Une composition pharmaceutique de l'invention peut de préférence comprendre un acide nucléique, notamment un ARN interférent ou un microARN tels que définis dans la présente description, en suspension dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable, par exemple un véhicule aqueux. Différents véhicules aqueux peuvent être utilisés, par exemple de l'eau, une solution tampon saline, une solution de glycine à 0,4 % ou 0,3 %, ou une 20 solution d'acide hyaluronique. Une composition pharmaceutique selon l'invention peut être stérilisée par toute méthode conventionnelle connue, telle que la filtration. La solution aqueuse résultante peut être conditionnée pour être utilisée en l'état, ou être lyophilisée. Une préparation lyophilisée peut être combinée avec une solution stérile avant utilisation. 25 Selon une mise en oeuvre préférée de l'invention, la composition pharmaceutique comprend une quantité efficace d'un composé thérapeutique tel que défini ci-dessus. Une quantité efficace d'un composé thérapeutique est une quantité qui, seule ou en combinaison avec des doses ultérieures, induit la réponse désirée, à savoir un effet antiprolifératif à l'égard des cellules cancéreuses. La quantité efficace d'un tel inhibiteur peut 30 dépendre d'un paramètre ou d'une pluralité de paramètres, tel que la voie d'administration, l'administration en dose unique ou multiple, les caractéristiques du patient, ce qui englobe l'âge, la condition physique, la taille, le poids et la présence d'affections en plus de celle 28 traitée. Ces paramètres et leurs influences sont bien connus de l'homme de l'art et peuvent être déterminés par toute méthode connue. Préférentiellement, ladite composition pharmaceutique comprend en tant que composé thérapeutique un ARN interférent ou un microARN inhibant l'expression d'au moins 5 une plexine choisie parmi Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine Cl et Plexine D1, et notamment un microARN de la famille des miR-30. La présente invention concerne également un produit de combinaison comprenant : 10 - au moins un composé thérapeutique choisi parmi le groupe consistant en : o un modulateur de l'expression ou de l'activité d'une protéine choisie parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine Bl, Plexine CI, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2, 15 o Sema3C ou un activateur de l'expression ou de l'activité de Sema3C, et o un inhibiteur de l'expression ou de l'activité d'au moins une plexine d'au moins une plexine choisie parmi Plexine AI, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine Cl et Plexine D1, et au moins un agent de chimiothérapie ou un agent anti-angiogénique ou un 20 agent d'immunothérapie. Un agent de chimiothérapie convenant à l'invention peut être choisi parmi des cytostatiques, des antimétabolites, des substances intercalantes de l'ADN, des composés inhibiteurs des topoisomérases I and II, des inhibiteurs de tubuline, des agents alkylants, la néocarcinostatine, la calichéamicine, la dynémicine or l'espéramicine A, des composés 25 inhibiteurs des ribosomes, des inhibiteurs des tyrosine phosphokinases, des composés induisant la différentiation cellulaire, ou des inhibiteurs de l'histone déacétylase. En particulier, un agent de chimiothérapie convenant à l'invention peut être choisi, de manière non limitative : - parmi des cytostatiques et des antimétabolites, tels que la 5-fluorouracile, 30 la 5-fluoro-cytidine, la 5-fluoro-uridine, la cytosine arabinoside ou le méthotrexate, - parmi des substances intercalantes de l'ADN, telle que la doxorubicine, la daunomycin, l'idarubicin, l'épirubicin ou le mitoxantrone, 29 - parmi des composés inhibiteurs des topoisomérases I and II, telles que la camptothécine, l'étoposide ou le m-AMSA, - parmi des inhibiteurs de tubuline, telle que la vincristine, la vinblastine, la vindésine, le taxol, le nocodazole ou la colchicine, 5 - parmi des agents alkylants, telle que la cyclophosphamide, la mitomycin C, la rachelmycine, le cisplatine, le gaz moutarde phosphoramide, le melphalan, la bléomycine, la N-bis(2-chloroethyl)-4-hydroxyaniline, - parmi la néocarcinostatine, la calichéamicine, la dynémicine ou l'espéramicine A, 10 - parmi des composés inhibiteurs des ribosomes, telle que la verrucarine A, - parmi des inhibiteurs des tyrosine phosphokinases, telle que la quercétine, la génistéine, l'erbstatine, la tyrphostine ou la rohitukin et ses dérivés, - parmi des composés induisant la différentiation cellulaire, tel que l'acide rétinoïque, l'aide butyrique, les esters de phorbol ou l'aclacinomycine, ou 15 encore - parmi des inhibiteurs de l'histone déacétylase, tel que Cl-994 ou MS275. Un agent inhibant l'angiogenèse convenant à l'invention peut être choisi parmi les listes suivantes, non limitatives : des anticorps monoclonaux ciblant le VEGF tel que le Bevacizumab, 20 des composés protéiques mimant des domaines des récepteurs du VEGF, tel que l'Aflibercept, des inhibiteurs des tyrosine phosphokinases tel que le Sorafenib, le Sunitinib, le Pazopanib, l'Axitinib, le Vantetanib ou le Cabozantinib, des analogues de la rapamycine tel que le Temsirolimus ou l'Everolimus. 25 Un agent d'immunothérapie convenant à l'invention peut être choisi parmi des cytokines, telle que l'interleukine-2, des cellules du système immunitaire, notamment des cellules immunitaires du patient prélevées, activées et réinjectées à ce dernier, ou des anticorps dirigés contre les cellules cancéreuses. 30 Un inhibiteur de l'expression ou de l'activité d'au moins une plexine peut également être mis en oeuvre en association avec un traitement de radiothérapie. Un traitement de radiothérapie susceptible de convenir à l'invention peut être une radiothérapie externe utilisant une source externe de rayons X, une curiethérapie consistant 30 à mettre en contact la source radioactive avec la tumeur, ou une radiothérapie métabolique vectorielle. Ces méthodes sont connues de l'homme de l'art. La présente invention concerne également un produit de combinaison tel que défini ci-dessous, pour son utilisation simultanée, séparée ou séquentielle dans le traitement 5 du neuroblastome. EXEMPLES Tableau 1. Liste des outils génétiques et de leur provenance Nom du produit Fournisseur Référence siRNA Universel Negative Control #1 Sigma-Aldrich- Aldrich SIC001 human Sema3C siRNA (NM_006379) Sigma-Aldrich- Aldrich SASI_Hs01_00161889 Human Sema3C#2 siRNA (N M_006379) Sigma-Aldrich- Aldrich SASI_Hs01_00161890 SMARTvector Inducible Non-targeting mCMV turboRFP Control Dharmacon VSC6571 SMARTvector Inducible Human SEMA3C mCMV- TurboRFP shRNA Dharmacon V3SH7676-08EG10512 (shRNA sequence V3SH7670-225814784) human PlexinA1 siRNA human PlexinA2 siRNA Sigma-Aldrich- Aldrich Sigma-Aldrich- Aldrich SASI_Hs01_00010384 SASI_Hs01_00153626 miR-30 polycistron N/A hsa-miR-30c-2 (acc number : M10000254, HUGO :) hsa-miR-30d (M10000255, MIR300) hsa-miR-30a (M10000088, MIR30A) hsa-miR-30e (M10000749, MIR30E) hsa-miR-30b (M10000441, MIR30B) 10 L'analyse statistique des données a été réalisée avec le logiciel Prism 6.0e (GraphPad). 31 Exemple 1. Profils d'expression des gènes de la voie de signalisation des sémaphorines dans des échantillons de tumeurs de neuroblastome de différents stades Les cohortes de patients étudiés sont présentées dans les références bibliographiques 5 suivantes : Cohorte GSE45480 de Wolf & Kocak : Kocak et al., 2013; cette cohorte référence 649 échantillons de tumeurs ; Cohorte GSE49710 de Shi & Fisher: Wang et al., 2014; cette cohorte regroupe 498 échantillons de tumeurs. 10 La micropuce Agilent-020382 44k (GPL16876) a été utilisée. Les analyses bioinformatiques ont été réalisées avec la plateforme Genomics Analysis and Visualization Platform (http://r2.amc.n1). a) Biomarqueurs du stade 4 La figure 1A présente les mesures de taux d'expression réalisées sur des échantillons de 15 tumeurs neuroblastiques, issus de la cohorte de patients GSE45480 de Wolf & Kocak. Une ou deux sondes ont été utilisées pour chaque gène. Les résultats obtenus sur la cohorte GSE49710 de Shi & Fisher (non montrés) sont identiques à ceux ici présentés, et ce pour chacun des gènes étudiés. Neuf gènes présentent des différences significatives d'expression dans des échantillons de 20 tumeurs de stade 4, par rapport à l'expression mesurée dans des tumeurs de stades 1, 2, 3 et 4S. Sept de ces gènes présentent de plus une corrélation avec un mauvais pronostic. Seuls les taux d'expression des plexines Dl et B2 ne sont pas liés à un mauvais pronostic de survie. b) Biomarqueurs des stades 4 et 4S métastatiques 25 La figure 1B présente la mesure de taux d'expression du gène codant pour Sema3C réalisée sur des échantillons de tumeurs neuroblastiques, issus de la cohorte de patients de Kocak (G5E45480). Les résultats obtenus sur les cohortes de Kocak et de Shi & Fisher sont identiques. Le gène sema3C présente une variation significative d'expression dans les échantillons de 30 tumeurs de stade 4 et 48, par rapport aux tumeurs des stades 1, 2 et 3. 11 s'agit d'une diminution de l'expression de Sema3C. 32 De plus, une corrélation avec un mauvais pronostic de survie est établie. c) Biomarqueurs spécifiques du stade 4S La figure 1C présente les mesures de taux d'expression réalisées sur des échantillons de tumeurs neuroblastiques, issus de la cohorte de patients de Kocak (GSE45480) 5 Les résultats obtenus sur la cohorte de Shi & Fisher sont identiques (non montrés). Les gènes codant pour Sema3D, Plexine B1 et Sema4C présentent une différence significative d'expression dans les échantillons de tumeurs de stade 4S, par rapport aux taux d'expression observés dans des tumeurs des stades 1, 2, 3 et 4. Les différences observées sont les suivantes : pour Sema3D, une diminution de l'expression 10 du gène dans les tumeurs 4S. et pour Plexine B1 et Sema4C, une augmentation significative d'expression dans les tumeurs 4S. Exemple 2. Profils d'expression de neuf gènes de la voie de signalisation des sémaphorines dans des lignées cellulaires immortalisées issues de tumeurs de neuroblastome de stade 4 15 a) Le taux d'expression de sept gènes a été mesuré dans un panel de 26 lignées primaires et 4 lignées immortalisées issues de tumeurs de neuroblastome de stade 4. L'expression quantifiée par RT-PCR quantitative (RT-qPCR) révèle des différences de taux d'expression pour chaque gène, d'une lignée à l'autre. (Résultats non montrés) b) Le taux d'expression de neuf gènes a été mesuré dans des cellules immortalisées 20 issues de neurobastome, les lignées IGR-N91 et SHEP. La technique employée est la RT-qPCR, le taux d'acide nucléique amplifié étant normalisé par rapport à celui du gène codant pour la protéine de ménage HPRT. La figure 2 présente ces différents niveaux d'expression, variables d'une lignée à l'autre. Ces résultats mettent en évidence l'expression de ces neuf gènes par les cellules de 25 neuroblastome. Il est entendu que le taux d'expression de ces gènes ici présenté ne permet pas de déduire, avec ces seules données, que ces gènes peuvent servir de biomarqueurs. En effet, ce sont les différences d'expression observées entre un stade et un autre qui sont significatives au regard d'un procédé de diagnostic ou de suivi. 33 Exemple 3. Profils d'expression de gènes de la voie de signalisation des sémaphorines dans des échantillons de tumeurs de neuroblastome de stade 4, après greffe dans des embryons de poulet HH14 et incubation pendant 48 heures Des tumeurs de neuroblastome ont été produites in vivo par microgreffe de cellules 5 tumorales humaines dans les tissus d'un embryon aviaire, un modèle de tumorignèse exposé dans la demande de brevet VVO 2016/005398. Des tumeurs se forment dans les dérivés sympathiques de l'hôte, mimant le site des tumeurs primaires des patients atteints de neuroblastome. Les tumeurs sont ensuite été prélevées et leur transcriptome est comparé par RNAseq 10 (séquençage aléatoire du transcriptome entier) à celui de ces mêmes cellules avant leur greffe (« naive tumors »). Cette analyse a révélé une signature de modifications d'expression de 13 gènes du réseau Sémaphorine/Neuropiline/Plexine, qui corrèle les données d'analyse des expressions dans les cohortes de patients. 15 a) Des cellules de la lignée cellulaire neuroblastique IGR-N91 ont été greffées dans un embryon de poulet selon le protocole exposé dans la demande de brevet VVO 2016/005398. Après 48 heures d'incubation, les tumeurs qui se sont développées au sein de l'embryon ont été prélevées et analysées. Les taux d'expression des gènes codant pour Sema3C, Sema3F 20 et Sema3D ont été déterminés par RT-PCR quantitative, à la fois sur les cellules IGR-N91 avant la greffe (« naive cells »), et sur les tumeurs prélevées dans l'embryon de poulet 48 après cette greffe. La figure 3 présente les variations d'expression observées entre les cellules avant leur implantation dans l'embryon, et les cellules ayant formé une tumeur in vivo dans un modèle 25 animal. Les gènes codant pour Sema3C et Sema3F présentent une diminution d'expression après implantation in vivo ; au contraire le gène Sema3D présente une forte augmentation de son taux d'expression. Ces données confirment les résultats obtenus par RNASeq. b) Des cellules issues de tumeurs de neuroblastome ont été greffées dans un embryon de poulet selon le protocole exposé dans la demande de brevet VVO 2016/005398. 30 Après 48 heures d'incubation, les tumeurs qui se sont développées au sein de l'embryon ont été prélevées et analysées. Les taux d'expression de 13 gènes ont été déterminés par extrait des résultats de séquençage aléatoire du transcriptome entier, à la fois sur les cellules 34 tumorales avant la greffe (« naive cells »), et sur les tumeurs prélevées dans l'embryon de poulet 48 après cette greffe. Le tableau 2 ci-dessous présente les différences d'expression observées entre les cellules avant leur implantation dans l'embryon, et les cellules ayant formé une tumeur in vivo dans 5 un modèle animal. Tableau 2. Variation du taux d'expression de 13 gènes de la voie de signalisation des sémaphorines après développement de tumeurs in vivo dans un modèle animal Numéro Locus chromosomique Gène codant pour la protéine : Moyenne du taux d'expressio n dans les tumeurs prélevées Moyenne du taux d'express ion dans Variation p-value d'accession les entre les (eqvar) (platefornne « naïve deux NCBI) cells » types de cellules NM_006080 ch r7:83587658-83824217 SEMA3A 8,53902 6,96972 1,22516 0,439958 NM_006379 ch r7:80371853-80548667 SEMA3C 7,2216 14,9633 -2,07202 0,09333 NM_152754 ch r7:84624871-84751247 SEMA3D 3,08308 1,3208 2,33426 0,0246087 NM_012431 ch r7:82993221-83278479 SEMA3E 2,09159 2,7487 -1,31417 0,441106 NM_004186 ch r3:50192847-50226508 SEMA3F 1,39908 3,14351 -2,24683 0,0962234 NM_017789 ch r2:97525472-97535735 SEMA4C 1,74128 2,81916 -1,61901 0,153451 NM_020796 chr5:115779250-115910551 SEMA6A 4,71055 3,40428 1,38371 0,140427 NM_0011989 99 ch r15:47476402-48066420 SEMA6D 4,1238 4,9143 -1,19169 0,55635 NM_153618 chr15:48010685-48066420 SEMA6D 5,57269 3,1809 1,75192 0,1914 NM_025179 ch r1:208195587-208417665 PLXNA2 2,30759 2,92134 -1,26597 0,587959 10 NM_0011055 ch r7:132068246-132261323 PLXNA4 0,515186 2,28353 -4,43243 0,0424805 43 NM_020911 ch r7:131808090-132261323 PLXNA4 2,00981 4,12258 -2,05123 0,0928033 NM_015103 ch r3:129274055-129325582 PLXN D1 2,68071 2,64011 1,01538 0,939199 NM_003873 ch r10:33466418-33623833 NRP1 10,2367 15,0383 -1,46906 0,403491 NR_045259 ch r10:33466418-33623833 NRP1 10,9158 12,2219 -1,11966 0,814142 NM_201266 ch r2:206547223-206662857 NRP2 4,96087 4,94254 1,00371 0,99542 Les 13 gènes dont le taux d'expression a été mesuré sur les cellules avant et après implantation dans l'embryon de poulet subissent des variations d'expression différentielles entre ces deux états. 5 L'analyse des variations d'expression montre que les gènes codant pour les protéines Sema3C, Sema3F, Sema4C et Plexine A4 ont une expression réduite dans les cellules formant les tumeurs sympathiques, tandis que l'expression des gènes Sema3D et Sema6D est nettement augmentée. Grâce à ce test in vivo, il est montré que ces 13 gènes sont des biomarqueurs pertinents dont 10 l'expression est modulée en fonction du stade de la tumeur et de son environnement (ici, ré- implantation des cellules dans un environnement embryonnaire). Exemple 4. Inhibition de l'expression des plexines Al et A2 dans des lignées cellulaires neuroblastiques, grâce à des ARN interférents a) Effets des ARN interférents dirigés contre les plexines sur la prolifération 15 cellulaire et la mort par apoptose Afin de savoir si les récepteurs Plexine Al et/ou A2 ont un rôle oncogène dans le neuroblastome, leur expression a été inhibée par la technique d'ARN interférence, dans deux types de lignées cellulaires : les lignées neuroblastiques SHEP et IGR-N91 (Figure 4 A). Dans les cellules contrôle désignées par `CTL', un ARN interférent contrôle (siRNA dirigé 20 contre une séquence inerte) est introduit par transfection. L'inhibition de l'expression des protéines Plexine Al (PlxnAl) ou A2 (PlxnA2) réduit la prolifération des cellules cancéreuses neuroblastiques. L'effet sur la prolifération cellulaire est 36 important, jusqu'à -70% lors de l'inhibition de l'expression de la Plexine AI, et jusqu'à plus de -30% lors de l'inhibition de l'expression de la Plexine A2. De plus, l'inhibition de l'expression de la Plexine Al provoque une activation significative de l'activité de la caspase 3 (Figure 4B), et par conséquent de la mort des cellules traitées par 5 apoptose. Cet effet n'est cependant pas observé lors de l'inhibition de l'expression de la Plexine A2. Il est donc probable que les deux plexines ne sont pas impliquées dans les mêmes processus cellulaires. 10 b) Inhibition de l'expression des plexines Al ou A2 par ARN interférents, sur des cellules en culture en agar mou Une diminution significative de la survie et de la prolifération est observée dans le test de croissance en agar mou, se traduisant par une réduction des colonies de cellules, à la fois en taille et en nombre (Figure 4C et 4D). Le test est réalisé sur les cellules neuroblastiques 15 SHEP exprimant de manière stable la GFP. Exemple 5. Inhibition de l'expression des plexines Al et A2 dans des lignées cellulaires neuroblastiques, grâce à des micro-RNA Par analyse bioinformatique (www.targetscan.org), les plexines Al et A2 ont été identifiées comme étant de potentielles cibles des microRNAs de la famille miR-30. 20 L'expérience présentée est réalisée sur des cellules de la lignée HeLa co-transfectées avec mir-30 (sous forme polycistronique ou mir-30c seul) et des constructions génétiques codant pour les gènes cibles (PlxnAl , PlxnA2 ou Lin28b) intégrés dans un plasmide rapporteur de l'activité des miRNAs (pmiR-Glo luciferase reporter system, promega). La figure 5 montre que la forme polycistronique de la famille de microRNAs miR-30, tout 25 comme la forme mir-30c seule, permettent d'obtenir une réduction significative de l'expression des Plexines Al et A2, respectivement de 35% et de 45%, in vitro. Pour comparaison, les effets sur l'oncogène Lin28B, cible connue de la famille mir-30 (expression protéique réduite de 40%) ont également été mesurés. Exemple 6. Effet fonctionnel de la sous-expression de Sema3C dans des lignées 30 cellulaires neuroblastiques 37 Dans des échantillons de tumeurs de patients, le taux d'expression de Sema3C est nettement diminué dans les tumeurs métastasiques de stade 4 ou 4S, par rapport au taux d'expression observé dans les tumeurs de stade 1, 2 ou 3 (voir figure 1B). Afin de connaitre les effets sur les cellules de cette nette sous-expression de Sema3C dans 5 les tumeurs de stade 4 ou 4S, une diminution de l'expression d'un facteur 2 de Sema3C a été reproduite dans des cellules de lignée neuroblastique IGR-N91. Un ARN interférent de type sh-RNA, inductible par la doxycycline, a été introduit de façon stable dans les cellules IGR-N91 : la figure 6A présente la construction moléculaire réalisée. Les cellules ainsi transformées ont été greffées dans les tissus d'un embryon de poulet. Une 10 tumeur s'est ainsi formée in vivo. L'injection de doxycycline dans l'embryon, en diminuant de moitié l'expression de Sema3C dans la tumeur, a généré un signal pro-métastatique pour cette tumeur. Les cellules tumorales se sont désolidarisées du tissu tumoral primaire et ont migré en empruntant des voies de dissémination le long de l'aorte dorsale et des nerfs périphériques. 15 Le tableau 3 ci-dessous récapitule les effets in vivo de cette diminution de l'expression de Sema3C : Tableau 3. Effets de l'inhibition inductible de Sema3C sur des cellules IGR-N91 :: sh-RNA scr. IGR-N91 :: sh-RNA sema3C % d'embryons Controle (n=8) + Doxycycline Controle (n=11) + Doxycycline (n=12) présentant les éléments suivants : (n=6) Tumeurs implantées 100 100 100 100 dans les tissus sympatho-adrénaux Dissémination loco- 88 67 82 92 régionale Dissémination à 38 33 45 92 distance (métastases) 38 Dans les embryons contrôles, 33 à 45 % d'embryons présentent une dissémination distance des tumeurs primaires. Mais en présence d'un sh-RNA diminuant de moitié l'expression de Sema3C, le taux d'embryons présentant une dissémination à distance de la tumeur primaire est de 92%, soit presque la totalité des embryons qui sont touchés par un 5 phénomène métastatique de la tumeur primaire in vivo. Un essai ex vivo a ensuite été développé pour modéliser les effets induits par le changement de niveau d'expression de Sema3c sur la cohésion des cellules tumorales de neuroblastome. Les cellules IGR-N91, après introduction transitoire de siRNA dirigés contre Sema3C, 10 ou d'une construction contrôle, sont cultivées sous forme de gouttes, dans un milieu de culture avec (à droite) ou sans Sema3C (à gauche de la figure 6B). Le pourcentage d'agrégation cellulaire est indiqué sur la courbe des ordonnées. Les points noirs représentent le pourcentage d'agrégation des cellules transformées avec un ARN interférent contrôle (siRNA scr). Les points gris représentent le pourcentage 15 d'agrégation des cellules transformées avec un ARN interférent de type sh-RNA dirigé contre l'ARN messager de sema3C (siRNA Sema3c). En présence de Sema3c, les cellules transformées avec siRNA Sema3c (grises) retrouvent le comportement d'agrégation qu'elles avaient perdu suite à l'inhibition de l'expression de Sema3C. 20 39 REFERENCES BREVETS W02016005398 NON BREVETS 5 Lamers F, Schild L, den Hartog IJ, Ebus ME, VVesterhout EM, Ora I, Koster J, Versteeg R, Caron HN, Molenaar JJ. Targeted BCL2 inhibition effectively inhibits neuroblastoma tumour growth. EurJ Cancer. 2012 Nov;48(16):3093-103. Molenaar JJ, Domingo-Femàndez R, Ebus ME, Lindner S, Koster J, Drabek K, Mestdagh P, van Sluis P, Valentijn LJ, van Nes J, Broekmans M, Haneveld F, Volckmann R, Bray I, 10 Heukamp L, Sprüssel A, Thor T, Kieckbusch K, Klein-Hitpass L, Fischer M, Vandesompele J, Schramm A, van Noesel MM, Varesio L, Speleman F, Eggert A, Stallings RL, Caron HN, Versteeg R, Schulte JH. LIN28B induces neuroblastoma and enhances MYCN levels via let-7 suppression. Nat Genet. 2012 Nov;44(11):1199-206. Perala N, Sariola H, Immonen T. More than nervous: the emerging mies of plexins. 15 Differentiation. 2012 Jan;83(1):77-91. Moret F, Renaudot C, Bozon M, Castellani V. Semaphorin and neuropilin co-expression in motoneurons sets axon sensitivity to environmental sema phorin sources during motor axon pathfinding. Development. 2007 Dec;134(24):4491-501. Sanyas I, Bozon M, Moret F, Castellani V. Motoneuronal Sema3C is essentiel for setting 20 stereotyped motor tract positioning in limb-derived chemotro pic sema phorins. Development. 2012 Oct;139(19):3633-43. Li Y, Ohira M, Zhou Y, Xiong T, Luo W, Yang C, Li X, Gao Z, Zhou R, Nakamura Y, Kamijo T, Kaneko Y, Taketani T, Ueyama J, Tajiri T, Zhang H, Wang J, Yang H, Yin Y, Nakagawara A. Genomic analysis-integrated whole-exome sequencing of neuroblastomas identifies genetic 25 mutations in axon guidance pathway. Oncotarget. 2017 May 23. Catalano A, Lazzarini R, Di Nuzzo S, Orciari S, Procopio A. The plexin-Al receptor activates vascular endothelial growth factor-receptor 2 and nuclear factor-kappaB to mediate survival and anchorage-independent growth of malignant mesothelioma cells. Cancer Res. 2009 Feb 30 15;69(4):1485-93. Kigel B, Rabinowicz N, Varshavsky A, Kessler 0, Neufeld G. Plexin-A4 promotes tumor progression and tumor angiogenesis by enhancement of VEGF and bFGF signaling. Blood. 2011 Oct 13;118(15):4285-96. 5 Lu Y, Xu Q, Chen L, Zuo Y, Liu S, Hu Y, Li X, Li Y, Zhao X. Expression of semaphorin 6D and ifs receptor plexin-A1 in gastric cancer and their association with tumor angiogenesis. Oncol Lett. 2016 Nov;12(5):3967-3974. Yamada D, VVatanabe S, Kawahara K, Maeda T. Plexin Al signaling confers malignant phenotypes in lung cancer cells. Biochem Biophys Res Commun. 2016 Nov 4;480(1):75-80. 10 Kocak H, Ackermann S, Hero B, Kahlert Y, Oberthuer A, Juraeva D, Roels F, Theissen J, VVestermann F, Deubzer H, Ehemann V, Brors B, Odenthal M, Berthold F, Fischer M. Hox-C9 activates the intrinsic pathway of apoptosis and is associated with spontaneous regression in neuroblastoma. Cell Death Dis. 2013 Apr 11;4:e586. Wang C, Gong B, Bushel PR, Thierry-Mieg J, Thierry-Mieg D, Xu J, Fang H, Hong H, Shen J, 15 Su Z, Meehan J, Li X, Yang L, Li H, Labaj PP, Kreil DP, Megherbi D, Gaj S, Caiment F, van Delft J, Kleinjans J, Scherer A, Devanarayan V, Wang J, Yang Y, Qian HR, Lancashire LJ, Bessarabova M, Nikolsky Y, Furlanello C, Chierici M, Albanese D, Jurman G, Riccadonna S, Filosi M, Visintainer R, Zhang KK, Li J, Hsieh JH, Svoboda DL, Fuscoe JC, Deng Y, Shi L, Peules RS, Auerbach SS, Tong W. The concordance between RNA-seq and microarray data 20 depends on chemical treatment and transcript abundance. Nat Biotechnol. 2014 Sep;32(9):926-32. REVENDICATIONS1. Procédé de caractérisation moléculaire in vitro d'une tumeur de neuroblastome, comprenant les étapes suivantes : a) Mesure dans un échantillon de ladite tumeur du taux d'expression d'un ou plusieurs des 19 gènes codant pour les protéines choisies parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine Ai, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B1 , Plexine Cl, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2, b) Comparaison du taux d'expression du ou desdits gènes mesuré à l'étape (a) avec une valeur de référence déterminée pour le ou chacun desdits gènes. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que : A l'étape (a), la mesure du taux d'expression est effectuée pour un ou plusieurs des 9 gènes codant pour les protéines suivantes : Sema4C, Sema4D, Sema6D, Plexine A3, Plexine A4, Plexine B2, Plexine Ci, Plexine D1 et Neuropiline 1; et que A l'étape (b), pour chaque gène, la valeur de référence est une médiane du taux d'expression dudit gène mesuré sur des tumeurs de stade clinique 1,2, 3 et 4S. 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que : A l'étape (a), la mesure du taux d'expression est effectuée pour un ou plusieurs des 3 gènes codant pour les protéines suivantes : Sema4C, Sema3D et Plexine B1 ; et que A l'étape (b), pour chaque gène, la valeur de référence est une médiane du taux d'expression dudit gène mesuré sur des tumeurs de stade clinique 1,2, 3 et 4. 4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que : A l'étape (a), la mesure du taux d'expression est effectuée pour au moins le gène codant pour la protéine Sema3C ; et que A l'étape (b), la valeur de référence est une médiane du taux d'expression dudit gène mesuré sur des tumeurs de stade clinique 1, 2 et 3. 42 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, comprenant de plus une étape c) de détermination du stade de la tumeur parmi l'un des stades 1, 2, 3, 4 ou 4S, en fonction de la différence observée entre le taux d'expression d'au moins un gène et sa valeur de référence. 6. Procédé in vitro de suivi de l'évolution d'une tumeur de neuroblastome chez un patient, comprenant les étapes suivantes : a) Mesure dans un échantillon de ladite tumeur à un temps T1 du taux d'expression d'un ou plusieurs des 19 gènes codant pour les protéines telles que listées en revendication 1, b) Comparaison du taux d'expression du ou desdits gènes mesuré à l'étape (a) avec une valeur de référence déterminée pour le ou chacun desdits gènes, ladite valeur de référence déterminée pour chaque gène ayant été obtenue par la mesure du taux d'expression dudit gène dans un échantillon de tumeur du même patient à un temps To, To étant antérieur à Ti. 7. .Modulateur de l'expression ou de l'activité d'une protéine choisie parmi le groupe consistant en : Sema3C, Sema3A, Sema3B, Sema3D, Sema3E, Sema3F, Sema4C, Sema4D, Sema6A, Sema6D, Plexine Ai, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine Bi, Plexine Cl, Plexine D1, Neuropiline 1 et Neuropiline 2, pour son utilisation dans le traitement du neuroblastome. 8. Modulateur pour son utilisation dans le traitement du neuroblastome selon la revendication 7, caractérisé en ce que ledit modulateur est un activateur de l'expression ou de l'activité de Sema3C, et que le neuroblastome est un neuroblastome de stade métastatique (4 ou 4S). 9. Sema3C pour son utilisation dans le traitement du neuroblastome de stade métastatique (4 ou 4S). 10. Modulateur pour son utilisation dans le traitement du neuroblastome selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un inhibiteur de l'expression ou de l'activité d'une ou plusieurs plexine(s) choisie(s) parmi Plexine Ai, Plexine A2, Plexine A3, Plexine A4, Plexine Bi, Plexine Cl et Plexine Dl. 11. Modulateur pour son utilisation selon la revendication 10, caractérisé en ce que ledit modulateur est un inhibiteur d'expression choisi parmi un ARN interférent et 43 un micro-ARN, et en particulier en ce que ledit inhibiteur d'expression est un microRNA de la famille des miR-30. 12. Composition pharmaceutique comprenant, dans un milieu pharmaceutiquement acceptable, au moins un composé thérapeutique choisi parmi le groupe consistant en : un modulateur de l'expression ou de l'activité d'une protéine tel que défini dans l'une des revendications 7, 8, 10 et 11, et Sema3C. 13. Produit de combinaison comprenant : au moins un composé thérapeutique choisi parmi le groupe consistant en : un modulateur de l'expression ou de l'activité d'une protéine tel que défini dans l'une des revendications 7, 8, 10 et 11, et Sema3C, et au moins un agent de chimiothérapie ou un agent antiangiogénique ou un agent d'immunothérapie.