Brevet FR3074043A1 — publié le 20190531

Chitosane à charge anionique La présente invention concerne un carboxyalkyl chitosane, des compositions le comprenant, son procédé de fabrication et ses différentes applications, en particulier dans le domaine thérapeutique, rhumatologique, ophtalmologique, médecine esthétique, chirurgie plastique, chirurgie interne, dermatologique, ou cosmétique. Etat de la technique Il est connu des dérivés de chitosane, notamment dans les demandes de Kiomed Pharma publiées sous les numéros WO 2016/016463 et WO 2016/016464 et les brevets correspondants. Ces demandes se concentrent sur les propriétés physiques, chimiques ou physico-chimiques des dérivés de chitosane. Ces compositions demandent encore à être améliorées, en particulier dans le cadre d'un traitement thérapeutique de manière à procurer aux patients qui peuvent être amenés à utiliser de telles compositions un bénéfice thérapeutique optimisé, et en particulier à augmenter le rapport bénéfice/risque. On peut obtenir un chitosane soluble par augmentation du degré d'acétylation (DA) par réacétylation du chitosane fongique. On peut en effet obtenir des formulations solubles à pH physiologique par réacétylation du chitosan fongique, mais on constate : - une dégradation très rapide in vivo ou conditions similaires, une réaction immunitaire du sujet chez lequel est injecté ou implanté ce chitosane, par exemple par injection ou implantation intra-articulaire, apparaît, le chitosane n'est pas adéquat pour les applications visées, et ne permet donc pas une utilisation thérapeutique suffisamment satisfaisante du chitosane, en particulier par injection ou implantation intra-articulaire. Il existe différentes publications concernant la carboxyalkylation du chitosane, et en particulier la carboxyméthylation du chitosane, essentiellement dans le but de solubiliser le chitosane. En théorie, un chitosane présente une formule sans unité Nacétyl-glucosamine, mais en pratique, le chitosane étant issu de la chitine, qui elle comprend des unités N-acétyl-glucosamine, et le chitosane présente un certain degré d'acétylation (DA), qui est la proportion d'unités N-acétyl-glucosamine du chitosane. Le DA du chitosane est en général faible. Au-delà, surtout au-delà de 30%, il s'agit en général de chitosane réacétylé. Par ailleurs, la demande de brevet chinois CN1431229A concerne des dérivés de chitosane carboxyméthylé pour leur capacité hydratante, mais se limite à cette caractéristique. 2 L'art antérieur a également envisagé la carboxyméthylation de la chitine d'origine animale, en particulier crustacée. Mais la chitine d'origine crustacée est difficile à substituer, notamment il faut la congeler et l'alcaliniser pour pouvoir la substituer (voir par exemple la demande de brevet chinois CN106474569). Le procédé est difficile à mettre 5 en oeuvre et en particulier à industrialiser. D'autre part, un tel procédé de substitution à partir de chitine d'origine crustacée est coûteux en énergie, peu reproductible, et risque de dégrader le polymère et d'hydrolyser les groupes acétyle des unités N-acétylglucosamine de manière significative et difficilement contrôlable. 10 Buts de l'invention L'invention a pour but de résoudre le problème technique consistant à fournir un dérivé de chitosane adéquat pour être utilisé chez un être humain ou animal, en particulier dans le domaine thérapeutique, rhumatologique, ophtalmologique, médecine esthétique, chirurgie plastique, chirurgie interne, dermatologique, ou cosmétique. 15 Plus particulièrement, l'invention a pour but de résoudre le problème technique consistant à fournir un dérivé de chitosane adéquat pour être utilisé chez un être humain ou animal dans le domaine thérapeutique, en particulier utilisable à titre de viscosupplément, et en particulier de pouvoir être injectée dans ou en mélange avec un fluide synovial. 20 L'invention a notamment pour but de résoudre le problème technique consistant à fournir un fluide synovial reconstruit, c'est-à-dire une composition restaurant les propriétés d'une articulation, comme par exemple en lui apportant une capacité à lubrifier les surfaces de cartilage. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant à 25 fournir un dérivé de chitosane, ou une composition en comprenant, présentant de bonnes propriétés et compatibilité en mélange avec un fluide synovial, et en particulier un fluide synovial d'un être humain ou animal, par exemple pour traiter une pathologie articulaire ou dégénérescence du fluide synovial en cause. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant à 30 fournir un dérivé de chitosane, ou une composition en comprenant, limitant la réaction immunitaire d'un sujet, et en particulier d'un être humain ou animal, recevant une administration, par exemple par injection, d'un dérivé de chitosane ou une composition en comprenant. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant à 35 fournir un dérivé de chitosane, ou une composition en comprenant, présentant des caractéristiques peu variables selon le pH. 3 L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant à fournir un dérivé de chitosane, ou une composition en comprenant, présentant une osmolalité et un pH adapté à son utilisation en contact avec un tissu d'un être humain ou animal, et acceptable en termes de durée de vie in situ, réaction immunologique et/ou 5 réaction à corps étranger et propriétés biomécaniques, selon l'indication thérapeutique visée, en particulier dans le contexte de la médecine régénérative. Description de l'invention Il a été découvert de manière surprenante qu'un dérivé de chitosane selon la 10 présente invention permet de résoudre au moins l'un, et de préférence l'ensemble, des problèmes techniques décrits ci-dessus. Il a été en particulier découvert qu'un dérivé de chitosane présentant une charge électrostatique (caractérisée par son potentiel zeta) sur une plage de pH autour du pH du milieu où il est administré, et notamment à pH égal à 7,5, inférieure à une certaine valeur 15 permettait de résoudre au moins l'un, et de préférence l'ensemble, des problèmes techniques décrits ou suggérés. Notamment, un tel dérivé de chitosane permet de limiter la réponse immunitaire d'un sujet à qui on a administré, typiquement par injection ou implantation, le dérivé de chitosane ou une composition en comprenant. La présente invention concerne selon un deuxième aspect un dérivé de chitosane 20 présentant des unités glucosamine, des unités N-acétyl-glucosamine et des unités glucosamine substituées par un groupe carboxyalkyl, ledit carboxyalkyl chitosane présentant un potentiel zeta, mesuré à pH 7,5, inférieur ou égal à -10 mV, et de préférence inférieur ou égal à -15 mV. Il a été en particulier découvert également qu'un dérivé de chitosane d'origine 25 fongique permettait de résoudre au moins l'un, et de préférence l'ensemble, des problèmes techniques décrits ou suggérés. Notamment, un dérivé de chitosane d'origine fongique permet de limiter la réponse immunitaire d'un sujet à qui on a administré, typiquement par injection ou implantation, le dérivé de chitosane ou une composition en comprenant. 30 La présente invention concerne selon un premier aspect un carboxyalkyl chitosane d'origine fongique présentant des unités glucosamine, des unités N-acétyl- glucosamine et des unités glucosamine substituées par un groupe carboxyalkyl, ledit carboxyalkyl chitosane présentant de préférence un degré de substitution par un groupe carboxyalkyl supérieur à 20%, exprimé en nombre de mole du substituant par rapport au nombre de 35 mole d'unités totales. On parle également de dérivé de chitosane ou de chitosane substitué. 4 Le chitosane est par exemple référencé sous le numéro CAS 9012-76-4. Le chitosane utilisé pour l'invention est avantageusement d'origine fongique, et de préférence issu du mycélium d'un champignon du type Ascomycète, et en particulier d'Aspergillus figer, et/ou d'un champignon Basidiomycète, et en particulier Lentinula 5 edodes (shiitake) et/ou Agaricus bisporus (champignon de Paris). De préférence, le chitosane est issu d'Agaricus bisporus. Le chitosane est de préférence très pur, c'est-à-dire contenant peu d'impuretés issues de son origine fongique ou du procédé de fabrication, et d'une qualité microbiologique compatible avec son utilisation comme implant ou composition pharmaceutique. Une méthode de préparation du chitosane est 10 celle décrite dans les brevets WO 03/068824 (EP 1483299 ; US 7 556 946). En général, la chitine est mise en suspension aqueuse en présence d'hydroxyde de sodium, puis le milieu est porté à haute température pendant une durée variable selon la masse moléculaire désirée. Le chitosane est ensuite purifié par solubilisation en milieu acide et précipité en milieu alcalin, lavé et séché. 15 De préférence, le chitosane est de grade suffisamment pur pour une utilisation pharmaceutique. Le chitosane est avantageusement purifié et ensuite de préférence séché. Après purification, le procédé de l'invention peut comprendre une étape de séchage du carboxyalkyl chitosane, puis éventuellement de broyage de celui-ci pour obtenir une 20 poudre. On peut sécher le carboxyalkyl chitosane par exemple par évaporation de l'eau, par exemple par un procédé de spray-drying (atomisation), de lit fluidisé, ou par séchage à la chaleur sous vide ou à pression atmosphérique, ou encore par lyophilisation. Le carboxyalkyl chitosane peut être solubilisé dans une solution aqueuse, et par exemple dans une eau de qualité pharmaceutique acceptable pour une injection ou 25 implantation dans un corps, et en particulier un corps humain. Le chitosane préparé peut-être de différentes masses moléculaires, et généralement allant de 10 000 à 500 000. Selon une variante, la masse moléculaire moyenne est comprise entre 20 000 et 30 60 000. Selon une autre variante, la masse moléculaire moyenne est comprise entre 60 000 et 100 000. Selon une autre variante, la masse moléculaire moyenne comprise entre 100 000 et 120 000. 35 Selon une autre variante, la masse moléculaire moyenne comprise entre 120 000 et 150 000. 5 Selon une autre variante, la masse moléculaire moyenne est comprise entre 150 000 et 220 000. Selon une autre variante, la masse moléculaire moyenne est comprise entre 220 000 et 300 000. 5 Selon une autre variante, la masse moléculaire moyenne est comprise entre 300 000 et 500 000. Lorsque le chitosane est réticulé, la masse moléculaire du polymère réticulé peut être bien plus élevée. Il est possible d'hydrolyser le chitosane afin de diminuer sa masse moléculaire. 10 De préférence ici, la masse moléculaire moyenne est la masse moléculaire moyenne en viscosité (Mv), calculée à partir de la viscosité intrinsèque selon l'équation de Mark-Houwink. La viscosité intrinsèque est mesurée par viscosimétrie capillaire, avec un viscosimètre capillaire de type Ubbelohde, selon la méthode de la monographie 2.2.9 de la Pharmacopée Européenne. On mesure le temps d'écoulement de la solution à travers 15 un tube capillaire adapté (Lauda, par exemple le tube capillaire Ubbelohde 510 01 de diamètre 0,53mm) à l'aide d'un viscosimètre automatique I-Visc (Lauda), d'abord à la concentration initiale en chitosane, puis pour plusieurs dilutions, par exemple selon les recommandations de la monographie 2.2.9. On en déduit la viscosité intrinsèque réduite pour chacune des concentrations. On porte la viscosité réduite en fonction de la 20 température, et on extrapole la valeur à la concentration 0 pour en déduire la viscosité intrinsèque. Il faut par exemple porter la viscosité réduite (hréd en mL/g) des i dilutions en fonction de la concentration C des i dilutions (g/mL) selon la formule 5. Formule 2. [hréal = (t1 - fo) - (1 - C). Pour calculer la masse viscosimétrique moyenne, on applique l'équation de Mark- 25 Houwink avec les constantes k et alpha recommandées par Rinaudo et al. (in : Int J Biol Macromol, 15, 281, 1993), selon le degré d'acétylation (DA) du chitosane, selon l'une des trois formules suivantes. Formule 3. Mv = ([h]/0,082)"76), pour un DA de 2% ; Formule 4. Mv = ([h]/0,076)"76), pour un DA de 10% (par exemple 11.5%) ; 30 Formule 5. Mv = ([h]/0,074)"76), pour un DA de 20% (par exemple 21%). Pour les valeurs de DA intermédiaires, on réalise une interpolation linéaire pour calculer la masse viscosimétrique moyenne (Mv). De préférence, le chitosane utilisé est d'une masse moléculaire moyenne 35 comprise entre 120 000 et 150 000 ou encore comprise entre 150 000 et 220 000 ou 6 encore comprise entre 220 000 et 300 000, ou encore au-dessus de 300 000, et en général jusqu'à 500 000. On peut aussi mesurer de la masse moléculaire finale du carboxyalkyl chitosane : on peut par exemple mesurer sa viscosité intrinsèque par viscosité capillaire, en déduire 5 sa masse moléculaire moyenne (Mw) (en déterminant au préalable les paramètres K et alpha du carboxyalkyl chitosane), ou par une méthode par chromatographie par exemple par perméation de gel. Typiquement, dans le carboxyalkyl chitosane selon l'invention les unités 10 glucosamine sont des unités D-glucosamine (unités D-glucosamine, unités N-acétyl-D- glucosamine, et au moins l'une des unités D-glucosamine et des unités N-acétyl-Dglucosamine étant substituées). Selon une variante, un chitosane substitué présente une substitution des unités Dglucosamine uniquement. 15 Selon une autre variante, un chitosane substitué présente une substitution des unités D-glucosamine et N-acétyl-D-glucosamine simultanément, et dans lequel le groupe carboxyalkyl est lié de manière covalente, selon une variante aux groupes amine du chitosane uniquement, ou selon une autre variante aux groupes amine et hydroxyle du chitosane simultanément. 20 La substitution est en général seulement partielle, toutes les unités ne sont pas nécessairement substituées. Selon un mode de réalisation, le degré de substitution des unités D-glucosamine exprimé en nombre de moles d'unités D-glucosamine par rapport au nombre de moles d'unités totales (unités D-glucosamine et N-acétyl-D-glucosamine, substituées ou non) du 25 chitosane substitué, va de 30% à 250%. Selon un mode de réalisation, le degré de substitution par un groupe carboxyalkyl supérieur à 50%, exprimé en nombre de mole du substituant par rapport au nombre de mole d'unités totales. Selon un mode de réalisation, le degré de substitution des unités D-glucosamine 30 exprimé en nombre de moles d'unités D-glucosamine par rapport au nombre de moles d'unités totales (unités D-glucosamine et N-acétyl-D-glucosamine, substituées ou non) du chitosane substitué, va de 50% à 200%, et encore de préférence supérieur à 70%. Selon un mode de réalisation, le degré de substitution par un groupe carboxyalkyl inférieur à 80%, exprimé en nombre de mole du substituant par rapport au nombre de 35 mole d'unités totales. Typiquement, la substitution se réalise par liaison covalente. 7 Selon une variante, le carboxyalkyl chitosane est un N,0-carboxyalkyl chitosane. La proportion d'unités substituées par un groupe carboxyalkyl en position 0 (soit 03 soit 06 des unités glucosamine et/ou N-acétyl-glucosamine) et/ou en position N (des unités glucosamines) varie. Le degré de substitution peut donc être supérieur à 100%. 5 Avantageusement, le degré de substitution (DS) et le degré d'acétylation (DA) du carboxyalkyl chitosane sont mesurés par RMN du carbone 13 en phase solide, à l'aide d'un Spectromètre Bruker (Avance III HD 400MHz), équipé d'une sonde PH MAS VIN 4005B BL4 N-P/H. Par exemple, le spectre est enregistré à température ambiante, un temps de relaxation compris entre 1 et 8 secondes, un nombre de scans compris entre 64 10 et 512. Les aires des signaux des carbones sont déterminées après déconvolution. Les carbones considérés sont les suivants : « CH3 acétyle » (carbone du méthyl du groupe acétyle des unités N-acétyl-glucosamine, substituées ou non), « Cl » (carbone en position 1 des unités glucosamine et N-acétyl-glucosamine) et « 0=0» (carbone du carbonyl du substituent carboxyméthyl et carbone du carbonyl 0=0 du groupe acétyle des 15 unités N-acétyl-glucosamine, substituées ou non). Pour déterminer le DS d'un carboxyalkyl chitosan donné, il faut également enregistrer le spectre RMN du carbone 13 du chitosane précurseur de ce carboxyalkyl chitosan. A partir du spectre du chitosan précurseur, on calcule le « ratio CSU », c'est-à-dire le rapport entre l'aire du signal du groupe « 0H3 acétyle » (carbone du méthyl du groupe acétyle des unités N-acétyl- 20 glucosamine) et l'aire du signal du « 0=0» (carbone carbonyle du groupe acétyle des unités N-acétyl-D-glucosamine). Le DA du carboxyalkyle chitosane est calculé selon la Formule 1, et le DS selon la Formule 2, où I représente l'aire du signal du carbone considéré. 25 Formule 1 : 8 Formule 2: 5 On peut déterminer le DA et le DS à l'aide d'autres méthodes connues pour les carboxyalkyl chitosanes, par exemple par RMN du proton en milieu aqueux, à l'aide d'un spectromètre de résonance magnétique, par exemple selon la méthode décrite par Liu et al. (in : Carb Polym 137, 600, 2016), par exemple avec une hydrolyse préalable du 10 carboxyalkyl chitosane y ajoutant une solution concentrée d'acide chlorhydrique deutéré avant analyse. Si une autre méthode RMN est plus avantageuse pour estimer le degré de substitution de manière fiable, il convient d'utiliser une telle méthode. Les méthodes ci-dessus doivent être adaptée par l'homme du métier en ce qui concerne la préparation de 15 l'échantillon et les signaux à intégrer, notamment en fonction de la résolution, de la robustesse et de la position des protons des signaux à utiliser pour le calcul du degré de substitution. Le degré de carboxyalkylation du chitosane peut varier avantageusement de 20 à 250%, de préférence de 50 à 200%, et par exemple de 70 à 170%, exprimé en nombre de 20 moles de carboxyalkyle par rapport au nombre de moles d'unités totales. Selon une variante, le degré de carboxyalkylation du chitosane peut varier avantageusement de 40 à 130%, et par exemple de 70 à 130%, exprimé en nombre de moles de carboxyalkyle par rapport au nombre de moles d'unités totales. Le degré de substitution du chitosane est typiquement corrélé au ratio massique 25 des réactifs par rapport au chitosane au départ de la réaction. Comme agents carboxyalkylants, on peut citer les chlorures d'acide (ou leurs sels, par exemple le monochloroacétate de sodium), comme par exemple ceux portant un ou plusieurs groupe carboxyméthyle, carboxyéthyle, carboxypropyle, carboxybutyle, etc. Selon une variante, la présente invention concerne un carboxyalkyle chitosane où 30 la partie alkyl du carboxyalkyl est en Cl -05, linéaire ou ramifiée. Selon une variante, la présente invention concerne un carboxyméthyle chitosane. Selon cette variante, le chitosane substitué est un chitosane N-carboxyalkylé. Selon cette variante, le chitosane substitué est un chitosane 0-carboxyalkylé. Selon cette variante, le chitosane substitué est un chitosane N-carboxyalkylé et O- 35 carboxyalkylé. 9 Avantageusement, le potentiel zeta, mesuré à pH 7,5, est inférieur ou égal à -18 mV. Avantageusement, le carboxyalkyl chitosane présente un potentiel zeta, mesuré à 5 pH 7,5, inférieur ou égal à -22 mV, et de préférence inférieur ou égal à -24 mV. Selon une variante spécifique, le chitosane substitué présente, de préférence une masse moléculaire moyenne de 150 000 à 220 000 et un degré de substitution allant de 50 à 200%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. 10 Selon une autre variante spécifique, le chitosane substituée présente, une masse moléculaire moyenne de 120 000 à 150 000 et un degré de substitution allant de 70 à 200%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. Selon une variante spécifique, le chitosane substitué présente, de préférence une masse moléculaire moyenne de 220 000 à 300 000 et un degré de substitution allant de 15 70 à 200%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. Selon une autre variante spécifique, le chitosane substituée présente, une masse moléculaire moyenne de 220 000 à 300 000 et un degré de substitution allant de 50 à 200%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. Selon une autre variante spécifique, le chitosane substituée présente, une masse 20 moléculaire moyenne de 300 000 à 500 000 et un degré de substitution allant de 50 à 200%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. Selon une autre variante spécifique, le chitosane substituée présente, une masse moléculaire moyenne de 300 000 à 500 000 et un degré de substitution allant de 70 à 200%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. 25 Selon une variante spécifique, le chitosane substitué présente, de préférence une masse moléculaire moyenne de 120 000 à 150 000 et un degré de substitution allant de 20 à 50%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. Selon une autre variante spécifique, le chitosane substituée présente, une masse moléculaire moyenne de 220 000 à 300 000 et un degré de substitution allant de 20 à 30 50%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. Selon une autre variante spécifique, le chitosane substituée présente, une masse moléculaire moyenne de 300 000 à 500 000 et un degré de substitution allant de 20 à 50%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. Selon une variante spécifique, le chitosane substitué présente un degré de 35 substitution allant de 20 à 80%, et de préférence de 40 à 60%, et un degré d'acétylation de 20 à 80%, et de préférence de 30 à 75%. 10 Selon une variante spécifique, le chitosane substitué présente un degré de substitution allant de 50 à 200%, et de préférence de 70 à 200%, et un degré d'acétylation de 20 à 80%, et de préférence de 30 à 75%. Selon une variante spécifique, le chitosane substitué présente un degré de 5 substitution allant de 50 à 200%, et de préférence de 70 à 200%, et un degré d'acétylation de 20 à 50%, et de préférence de 20 à 40%. Selon une variante spécifique, le chitosane substitué présente un degré de substitution allant de 50 à 200%, et de préférence de 70 à 200%, et un degré d'acétylation de 50 à 75%. 10 Selon une autre variante spécifique, le chitosane substituée présente un degré de substitution allant de 90 à 200%, et de préférence de 90 à 150%, et un degré d'acétylation de 20 à 80%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. Selon une variante spécifique, le chitosane substitué présente un degré de substitution allant de 90 à 200%, et de préférence de 90 à 150%, et un degré d'acétylation 15 de 20 à 50%, et de préférence de 20 à 40%. Selon une variante spécifique, le chitosane substitué présente un degré de substitution allant de 90 à 200%, et de préférence de 90 à 150%, et un degré d'acétylation de 50 à 75%. Selon une variante spécifique, le chitosane substitué présente, de préférence une 20 masse moléculaire moyenne de 220 000 à 300 000, un degré de substitution allant de 90 à 200%, et de préférence de 90 à 150%, et un degré d'acétylation de 50 à 75%, la masse moléculaire étant de préférence exprimée avant substitution. Selon une variante, le carboxyalkyl chitosane est réticulé. Ainsi plusieurs chaines de chitosane pleuvent être réticulées, par exemple par réaction avec un agent réticulant, 25 comme par exemple des agents réticulant utilisés pour la réticulation des polysaccharides, comme par exemple génipine, butyl biglycidyl ether, glutaraldéhyde, epichlorohydrin , 1-bromo-3,4-epoxybutane, 1-bromo-4,5-epoxypentane, 1-chloro-2,3- epithio- propane, 1-bromo-2,3-epithiopropane, 1-bromo-3,4-epithio- butane, 1-bromo-4,5- epithiopentane, 2,3-dibromopropanol, 2,4-dibromobutanol, 2,5-dibromopentanol, 2,3- 30 dibromopro- panethio1,2,4-dibromobutanethiol, and 2,5-dibromopentane- thiol epichlorohydrin, 2,3-dibromopropano1,1-chloro-2,3-epithiopropane, dimethylaminopropylcarbodiimide, dextran oxydé, acide gallique, gallate d'épigallocatéchine, curcumin, acide tannique, ou encore des composés diisocyanate tel que diisocyanate d'hexaméthylène ou diisocyanate de toluène. 35 Avec un carboxyalkyl chitosane réticulé la masse moléculaire peut être très élevée. 11 En substituant le chitosane, il a été possible de préparer une solution d'un carboxyalkyle chitosane soluble dans une solution aqueuse dont le pH varie dans une large gamme, alors que le chitosane non substitué n'est soluble qu'a pH en dessous de 5,5 à 6,5. Le carboxyalkyle chitosane présente ainsi une capacité à être solubilisé à 5 différents pH grâce à la présence de groupes carboxyalkyle qui modifient son profil de solubilité, et en particulier au pH physiologique ou au pH des fluides physiologiques modifiés par une pathologie, par exemple une pathologie inflammatoire. Il est connu que le pH des fluides physiologiques comme le liquide synovial d'une articulation, l'humeur aqueuse, l'humeur vitrée, les larmes, peuvent varier de manière significative entre 10 individus, en raison de différents facteurs comme l'âge, la pathologie, etc. Il est donc avantageux que le carboxyalkyl chitosane puisse rester soluble dans une large gamme de pH, par exemple de 6,0 à 8,5, ou encore de 5,0 à 8,5, ou encore de 4,5 à 8,5. Selon un mode de réalisation, la formulation de chitosane substitué présente une osmolalité de 100 à 700 mosm/kg, de préférence de 200 à 500 mosm/kg. 15 Avantageusement, l'osmolalité de la formulation de chitosane substitué est comprise entre 250 et 400 mosm/kg, et de préférence de 275 à 325 mosm/kg. Selon une variante, la formulation de chitosane substitué présente une osmolalité compatible avec une articulation. Selon une variante, la formulation de chitosane substitué présente une osmolalité 20 compatible avec une surface oculaire ou intraoculaire. Il est préférable que l'osmolalité de la formulation de chitosane substitué soit comprise entre 250 et 400, et plus spécifiquement entre 250 et 380 mosm/kg. Par « soluble dans l'eau », on entend que le carboxyalkyle chitosane ne présente pas de trouble visible à l'oeil nu lorsqu'il est mis en solution aqueuse. Plus spécifiquement, 25 on peut confirmer la solubilité, c'est-à-dire l'absence de trouble, d'une solution de carboxyalkyl chitosane à une concentration par exemple de 1% (m/m) dans l'eau ou un tampon, par exemple un tampon phosphate, par une densité optique inférieure à 0,5, et de préférence inférieure à 0,2, mesurée par spectrométrie UV-visible à la longueur d'onde de 500nm en référence à une cuve de référence ne comprenant que le solvant aqueux 30 utilisé pour l'échantillon mesuré, mais en l'absence du chitosane substitué. Une autre méthode consiste en une inspection visuelle selon la monographie 2.9.20 de la Pharmacopée Européenne. Lorsque le chitosane n'est pas suffisamment substitué, la composition n'est pas soluble dans une gamme de pH satisfaisante, par exemple allant de pH 6,0 à pH 8,5, à température ambiante. 35 12 Le degré d'acétylation (DA) du chitosane est déterminé comme par exemple décrit dans les demandes de brevet WO 2017009335 et WO 2017009346 par titrage potentiométrique. Le DA peut alternativement être mesuré par d'autres méthodes connues pour le chitosane, comme la RMN du proton, la RMN du carbone 13 en phase 5 solide, la spectrométrie infra-rouge. Avantageusement, le carboxyalkyl chitosane présente un degré d'acétylation compris entre 5 et 80%, exprimé en nombre de mole unités N-acétyl- glucosamine par rapport au nombre de mole d'unités totales. Le degré d'acétylation est exprimé en nombre d'unités N-acétyl-D-glucosamine par rapport au nombre d'unités totales N-acétyl-D- 10 glucosamine et D-glucosamine présentes. Avantageusement, le carboxyalkyl chitosane présente un degré d'acétylation compris entre 40 et 80%, exprimé en nombre de mole unités N-acétyl-glucosamine par rapport au nombre de mole d'unités totales. Selon une variante, le degré d'acétylation va de 5 à 20%. 15 Selon une variante, le degré d'acétylation va de 15 à 25%. Selon une variante, le degré d'acétylation va de 20 et 45%. Selon une variante, le degré d'acétylation va de 20 à 30%. Selon une variante, le degré d'acétylation va de 25 à 40%. Selon une variante, le degré d'acétylation va de 40 à 50%. 20 Selon une variante, le degré d'acétylation va de 50 à 60%. Selon une variante, le degré d'acétylation va de 60 à 75%. Le degré d'acétylation est déterminé par RMN du carbone 13 ou par RMN du proton, selon la même méthode que pour la détermination du DS. Le carboxyalkyl chitosane présente avantageusement un degré d'acétylation contrôlé. Par les termes « 25 chitosane ayant un degré d'acétylation contrôlé » on entend un produit dont le degré d'acétylation, c'est-à-dire la proportion des unités N-acétyl-glucosamine, peut être ajustée de manière contrôlée, notamment par une réaction d'acétylation. Selon une variante, une composition selon l'invention peut se présenter sous la 30 forme d'une solution et peut ne pas être gélifiée par variation de la température (non- thermogélifiable). Selon une variante, les caractéristiques rhéologiques d'une solution selon l'invention peuvent évoluer avec la température, mais sans passer par une transition sol-gel. Les caractéristiques rhéologiques d'une solution selon l'invention peuvent notamment 35 se constater par le module d'élasticité (G') et/ou le module de perte (G"), ou encore le module complexe G*. 13 Selon une variante, les caractéristiques rhéologiques d'une solution selon l'invention sont sensiblement constantes quelles que soit la température. Selon une variante, une composition selon l'invention peut se présenter sous la forme d'une solution et être thermogélifiable. 5 Selon une variante, une composition selon l'invention peut être se présenter sous la forme d'un gel et ne pas être thermogélifiable. L'invention permet donc selon une variante, de préparer une composition thermogélifiable fluide à une température inférieure à celle d'utilisation, typiquement à une température inférieure à la température physiologique, par exemple de 37°C, mais qui soit 10 sous forme de gel à la température d'utilisation, typiquement à la température physiologique, par exemple de 37°C, à pH neutre (pH 7) ou à pH physiologique, et par exemple de 7 à 8,5, avec une osmolalité convenable pour l'utilisation envisagée. Il s'agit par exemple d'une osmolalité physiologique. Selon une variante, la composition thermogélifiable présente une transition sol-gel 15 thermoréversible. Avantageusement, la présente invention permet de fournir une composition à faible concentration de chitosane substitué. Avantageusement, la concentration de carboxyalkyl chitosane est inférieure à 10%, par exemple inférieure ou égal à 5%, en masse par rapport à la masse totale de la 20 composition (m/m). Selon une variante, la concentration de chitosane est inférieure à 4%, par exemple inférieure ou égal à 3%, ou encore par exemple inférieure ou égal à 2% en masse par rapport à la masse totale de la composition (m/m). Avantageusement, la composition de l'invention peut comprendre également un 25 autre biopolymère que le chitosane substitué. Selon une variante avantageuse, le biopolymère est un polysaccharide, oxydé ou non, réticulé par des liaisons covalentes ou non, par exemple l'acide hyaluronique ou le hyaluronate de sodium. L'acide hyaluronique peut présenter une masse moléculaire jusqu'à 5 millions Da. La masse moléculaire de l'acide hyaluronique peut être reflétée par sa viscosité 30 intrinsèque ou encore par sa viscosité dynamique en solution. L'acide hyaluronique peut présenter une densité allant de 1 à 4 m3/kg, et par exemple être caractérisé comme de faible (par exemple environ 1 à 2 m3/kg) ou haute (par exemple environ 2 à 4 m3/kg) masse moléculaire. Avantageusement, la concentration d'acide hyaluronique est inférieure à 4%, par 35 exemple inférieure ou égale à 3%, ou encore par exemple inférieure ou égale à 2% en masse par rapport à la masse totale de la composition (m/m). 14 Selon une variante spécifique, la concentration d'acide hyaluronique est inférieure à 1,9% (m/m), exprimée en masse par rapport la masse de la composition finale. Avantageusement, la concentration d'acide hyaluronique est comprise entre 0,5 et 1,5% (m/m), exprimée en masse par rapport à la masse de la composition finale. Selon une 5 variante particulière, la concentration d'acide hyaluronique est environ de 0,9%, de 1,0%, de 1,1%, de 1,2%, de 1,3%, de 1,5% (m/m), exprimée en masse par rapport à la masse de la composition finale. Le ratio entre le chitosane et l'acide hyaluronique peut par exemple varier de 5 à 95 (3/0, par exemple de 10 à 90%, et encore par exemple de 30 à 70% de chitosane 10 substitué et de 5 à 95%, par exemple de 10 à 90%, et encore par exemple de 30 à 70% respectivement, d'acide hyaluronique, les pourcentages exprimés par rapport : masse sèche de chitosane substitué /masse sèche d'acide hyaluronique). Selon une variante, ce ratio entre le chitosane et l'acide hyaluronique est de 1/1 (soit 50% de chitosane et 50% d'acide hyaluronique). Selon une autre variante, le ratio entre le chitosane et l'acide 15 hyaluronique est de 1,5/0,5 (soit 75% de chitosane et 25% d'acide hyaluronique). Selon une variante, l'acide hyaluronique peut être réticulé entre différentes chaines d'acide hyaluronique. La présente invention concerne également un procédé de préparation du 20 carboxyalkyl chitosane. Selon une variante, le procédé de préparation du carboxyalkyl chitosane selon l'invention comprend la préparation d'un chitosane d'origine fongique, la réacétylation du chitosane et la carboxyalkylation du chitosane réacétylé. Ainsi, l'invention concerne un chitosane réacétylé ou un carboxyalkyl chitosane réacétylé. 25 Selon un mode de réalisation, on peut ainsi dissoudre du chitosane dans un milieu aqueux, de préférence légèrement acidifié (pH 6 par exemple). On peut ajouter de l'anhydride acétique à la solution de chitosane en une ou plusieurs fois. On ajoute ensuite un agent basique comme par exemple de la soude et/ou de l'urée. On ajoute ensuite un agent alkylant comme par exemple du monochloroacétate de sodium (c'est-à-dire le sel 30 de sodium de l'acide chloroacétique) ou l'acide chloroacétique. Ensuite le chitosane substitué est purifié, récupéré et séché. Selon une variante, le procédé de préparation du carboxyalkyl chitosane selon l'invention comprend la préparation d'un chitosane, la carboxyalkylation du chitosane, puis la réacétylation du chitosane carboxyalkylé. Avantageusement, une telle méthode permet 35 un contrôle précis du degré d'acétylation du carboxyalkyl chitosane final, et en particulier d'obtenir un degré d'acétylation élevé, par exemple au-dessus de 40%. Ainsi, l'invention 15 concerne un chitosane réacétylé puis carboxyalkylé ou un carboxyalkyl chitosane réacétylé. Selon une variante, le procédé de préparation du carboxyalkyl chitosane selon l'invention comprend la préparation d'une chitine d'origine fongique, la carboxyalkylation 5 de la chitine, et éventuellement la réacétylation de la chitine carboxyalkylé pour obtenir le carboxyalkyl chitosane selon l'invention. Selon une variante, le procédé de préparation du chitosane carboxyalkylé selon l'invention comprend la préparation d'une chitine d'origine fongique, une déacétylation de la chitine, la carboxyalkylation de la chitine, et éventuellement la réacétylation de la chitine 10 carboxyalkylée pour obtenir le carboxyalkyl chitosane selon l'invention. Selon un mode de réalisation, l'étape de carboxyalkylation comprend une étape d'alcalinisation des groupes hydroxyles du chitosane, pour favoriser un degré de substitution élevé, et par exemple à la fois en position N- des unités de glucosamine et Odes unités de glucosamine et N-acetyl-glucosamine. 15 Selon un mode de réalisation, le procédé de l'invention comprend une étape d'alcalinisation comprenant la dispersion de chitosane dans d'une solution d'alcool, comme par exemple l'isopropanol en présence d'un agent basique comme par exemple la soude, et l'agitation pendant une durée d'au moins une heure à une température de minimum -32°C et de préférence maximum 15°C. A cet t suspension on ajoute ensuite un 20 agent alkylant comme par exemple l'acide monochloroacétique. Ensuite le chitosane substitué est purifié, récupéré, puis séché. Selon une variante, le procédé de préparation du chitosane carboxyalkylé selon l'invention comprend la préparation d'un chitosane, la carboxyalkylation du chitosane puis la réacétylation du chitosane carboxyalkylé. 25 Selon un mode de réalisation, l'étape de carboxyalkylation ne comprend pas d'étape d'alcalinisation. L'étape de réacétylation d'un carboxyalkyl chitosane peut par exemple comprendre un ou plusieurs ajouts d'anhydride acétique à la solution de carboxyalkyl chitosane. 30 Les étapes finales de purification, filtration et séchage pour récolter le carboxyalkyle chitosane purifié sont réalisées selon des méthodes connues en vue d'obtenir un carboxyalkyl chitosane selon le degré de pureté souhaité, qui dépend en général de l'application envisagée, comme par exemple par cycles de précipitation et solubilisation ou par dialyse. 35 Selon une variante, le ratio anhydride acétique/chitosane (volume/masse) varie entre 0,1 et 10, et de préférence de 0,1 à 2, lors de l'étape de réacétylation. 16 Selon une variante, le ratio massique agent carboxyalkylant/chitosane varie entre 1 et 50, et de préférence de 2,5 et 25, lors de l'étape de carboxyalkylation. Selon une variante, on utilise un ratio massique des réactifs apportant au chitosane le groupe carboxyalkyle (c'est-à-dire l'agent alkylant) par rapport à l'agent 5 basique nécessaire et suffisant pour obtenir le degré de substitution souhaité. Par exemple, le ratio massique de l'agent alkylant par rapport à l'agent basique est supérieur à 1 et inférieur à 10, et de préférence va de 1,4 à 3,3. L'invention concerne également un procédé de préparation d'une composition 10 selon l'invention. Selon une variante, le procédé comprend typiquement : - la dissolution d'un chitosane substitué dans une solution aqueuse, de préférence dans une solution tamponnée à pH de préférence compris entre 6,2 et 8,5 et de préférence entre 6,5 et 7,5; 15 - l'ajustement éventuel du pH à un pH désiré, en général au pH physiologique pour l'application visée, par exemple par ajout d'un agent tamponnant, d'un acide ou d'une base ; - l'ajout éventuel d'autres excipients, comme par exemple un sucre réducteur, par exemple le sorbitol ou le mannitol ; 20 - l'ajustement éventuel de l'osmolalité finale de la composition. Avantageusement, le procédé comprend également une étape ultérieure de remplissage d'un dispositif d'injection ou d'implantation, comme par exemple une seringue, avec le carboxyalkyl chitosane ou la composition le comprenant. 25 Avantageusement, le dispositif d'injection, comme par exemple une seringue, peut ensuite subir une stérilisation à la vapeur. Ce dispositif, par exemple une seringue, peut ensuite être emballé, de préférence de manière stérile. Ce peut être également une poche, une flapule, ou un flacon permettant l'instillation de la solution de carboxyalkyl chitosane. Il est avantageux d'utiliser un chitosane présentant un degré de pureté suffisant 30 pour l'application envisagée. Avantageusement, le procédé comprend également une étape ultérieure de remplissage d'un dispositif d'injection, d'implantation ou d'instillation, comme par exemple une seringue, avec la composition selon l'invention. Avantageusement, le dispositif d'injection, comme par exemple une seringue peut ensuite subir une stérilisation à la 35 vapeur. Ce dispositif, par exemple une seringue, peut ensuite être emballée, de préférence de manière stérile. 17 Selon une variante, le carboxyalkyl chitosane selon l'invention est stérilisé par filtration et/ou par stérilisation à la vapeur, avant remplissage d'un dispositif d'injection, d'implantation ou d'instillation, comme par exemple une seringue ou un flacon. Il est avantageux d'utiliser un chitosane présentant un degré de pureté suffisant 5 pour l'application envisagée. La présente invention concerne plus particulièrement une composition injectable comprenant le carboxyalkyl chitosane selon l'invention. L'invention concerne aussi une composition pharmaceutique comprenant au moins un carboxyalkyl chitosane défini selon l'invention. 10 Selon une variante, le carboxyalkyl chitosane ou la composition en comprenant est utilisé comme composition pharmaceutique injectable, implantable ou apte à l'instillation, ou dispositif médical injectable ou implantable ou apte à l'instillation. L'invention couvre encore un carboxyalkyl chitosane ou une composition le comprenant, sous une forme sèche, notamment sous une forme lyophilisée. On peut 15 notamment (re)disperser, et de préférence solubiliser, le produit lyophilisé avant usage. La présente invention concerne plus particulièrement une composition selon l'invention pour une utilisation pour un traitement thérapeutique, par exemple comprenant l'injection par voie sous-cutanée, intradermique, intraoculaire, ou intra-articulaire, de ladite composition, par exemple pour la réparation, la régénération ou le comblement d'au 20 moins un tissu corporel nécessitant une réparation ou un comblement. Avantageusement, selon un mode de réalisation, un carboxyalkyl chitosane selon l'invention présente une immunocompatibilité des formulations de carboxyméthyl chitosane d'origine fongique à l'aide du modèle de poche à air chez la souris, 24 heures après injection exprimée en nombre de globules blancs inférieure à 10x106 cellules/ mL, 25 et de préférence inférieure à 8 x106 cellules/ mL. Avantageusement, selon un mode de réalisation, un carboxyalkyl chitosane selon l'invention présente une immunocompatibilité des formulations de carboxyméthyl chitosane d'origine fongique à l'aide du modèle de poche à air chez la souris, 24 heures après injection exprimée en concentration de IL1-beta inférieure à 10x10-6g/mL, et de 30 préférence inférieur à 5x10-6g/mL. Avantageusement, selon un mode de réalisation, un carboxyalkyl chitosane selon l'invention présente une immunocompatibilité des formulations de carboxyméthyl chitosane d'origine fongique à l'aide du modèle de poche à air chez la souris, 24 heures après injection exprimée en concentration de KC/CXCL1 inférieure à 50x10-6g/mL, et de 35 préférence inférieur à 30x10-6g/mL. 18 Avantageusement, selon un mode de réalisation, un carboxyalkyl chitosane selon l'invention présente une immunocompatibilité des formulations de carboxyméthyl chitosane d'origine fongique à l'aide du modèle de poche à air chez la souris, 24 heures après injection exprimée en concentration de TNF-alpha inférieure à 150x10-9g/mL, et de 5 préférence inférieur à 125x10-9g/mL. Avantageusement, selon un mode de réalisation, un carboxyalkyl chitosane selon l'invention présente une immunocompatibilité des formulations de carboxyméthyl chitosane d'origine fongique à l'aide du modèle de poche à air chez la souris, 24 heures après injection exprimée en concentration de KC/CXCL1 inférieure à 50x10-9g/mL, et de 10 préférence inférieur à 30x10-9g/mL. Avantageusement, selon un mode de réalisation, un carboxyalkyl chitosane selon l'invention présente une immunocompatibilité des formulations de carboxyméthyl chitosane d'origine fongique à l'aide du modèle de poche à air chez la souris, 24 heures après injection, satisfaisant simultanément les limites maximales exprimés ci-dessus en 15 nombre de globules blanc et des concentrations en IL1-beta, KC/CXCL1 et TNF-alpha. Les mesures du nombre de globules blanc et des concentrations en IL1-beta, KC/CXCL1 et TNF-alpha sont réalisées selon les protocoles des exemples. Avantageusement, selon un mode de réalisation, un carboxyalkyl chitosane selon l'invention présente un temps de demi-vie en présence d'un mélange d'enzymes 20 lysozyme et hyaluronidase à 37°C supérieur à 500 mhutes, selon le protocole de mesure de l'exemple 6. Avantageusement, selon un mode de réalisation, en particulier en application intra-articulaire, un carboxyalkyl chitosane selon l'invention présente un coefficient de friction (00F0) inférieur à 5, et de préférence inférieur ou égal à 4 (selon le protocole de 25 l'exemple 9). La présente invention concerne notamment une composition selon l'invention pour une utilisation pour un traitement en rhumatologique, en ophtalmologique, en médecine esthétique, en chirurgie plastique, en chirurgie interne, par exemple pour la prévention des adhérences tissulaires post-chirurgicales, en dermatologique ou en cosmétique. 30 Selon une variante, le tissu corporel est choisi parmi les tissus appartenant aux cordes vocales, muscles, ligaments, tendons, cartilages, organes sexuels, os, articulations, yeux, derme, épiderme, une ou plusieurs couches de la peau, le mésoderme, ou l'une quelconque de leurs combinaisons, et plus particulièrement aux yeux, au derme et aux joints articulaires. 19 La présente invention concerne également une composition selon l'invention pour une utilisation pour un traitement thérapeutique d'un syndrome de l'oeil sec, d'une lésion de cornée ou d'une inflammation articulaire. La présente invention concerne en outre l'application d'une composition selon 5 l'invention par instillation sur la surface oculaire pour prévenir ou lutter contre une lésion de cornée, ou syndrome de l'oeil sec, en particulier dans le but de lubrifier ou régénérer la surface oculaire. Ainsi, l'invention concerne également une composition de gouttes ophtalmiques comprenant un carboxyalkyl chitosane défini selon la présente invention. 10 Selon une variante, le sujet est affecté par une pathologie inflammatoire (e.g. ostéoarth rose). La présente invention concerne plus particulièrement une composition selon l'invention pour le traitement d'une arthrose, d'une arthrite, ou la réparation d'un défaut de cartilage, par exemple par injection dans la cavité synoviale ou par implantation au niveau 15 du défaut de cartilage. La présente invention concerne plus particulièrement un dispositif médical, par exemple implant médical, caractérisé en ce qu'il comprend ou consiste en une composition selon l'invention. Selon une variante préférée, l'invention concerne donc un dispositif médical 20 comprenant une chambre contenant un carboxyalkyl chitosane sous une forme sèche, notamment sous une forme lyophilisée, et éventuellement une ou plusieurs autres chambres contenant un ou plusieurs produits actifs, additifs ou excipients. La composition selon la présente invention peut également comprendre un ou plusieurs additifs ou excipients permettant de moduler ses propriétés. 25 La présente invention concerne également une composition selon l'invention pour une utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique, par exemple comprenant l'instillation ou l'injection par voie sous-cutanée, intradermique, oculaire, intraoculaire, ou intra-articulaire, de ladite composition, par exemple pour la réparation ou le comblement d'au moins un tissu corporel nécessitant une réparation ou un comblement. 30 La présente invention concerne également une composition selon l'invention pour son utilisation dans une méthode de traitement d'une arthrose, ou la réparation d'un défaut de cartilage, par exemple par injection dans le fluide synovial ou après mélange avec le sang et implantation dans le cartilage. La présente invention concerne également une composition selon l'invention pour 35 une utilisation dans une méthode de traitement ou de soin esthétique par comblement du 20 derme (« dermal filling »). Il s'agit notamment par exemple d'injecter une composition selon l'invention en sous-cutané ou en intradermique. La présente invention concerne également une composition selon l'invention pour une utilisation dans une méthode de traitement superficiel de la peau par injection multiple 5 par voie intradermique. De telles compositions peuvent être typiquement utilisées en dermatologie, comme traitements à visée esthétique. Une telle méthode a par exemple pour but de regonfler la peau pour lui faire perdre un aspect fripé (traitement des rides et/ou ridules). Un tel traitement peut être adressé à un sujet souhaitant donner un aspect rajeuni à sa peau. 10 La présente invention concerne également une composition selon l'invention pour une utilisation dans une méthode de traitement dans laquelle la composition est un agent de viscosupplémentation. Il s'agit ici par exemple d'injecter au niveau intra-articulaire la composition de l'invention notamment pour limiter les frottements des surfaces de cartilage de l'articulation. 15 La présente invention concerne également une composition selon l'invention pour une utilisation comme vecteur cellulaire, d'un ou plusieurs types cellulaires, et/ou un ou plusieurs d'agents actifs. Il peut s'agir d'agents actifs d'un point de vue pharmaceutique ou biologique. La composition de l'invention peut en effet être compatible avec la présence de cellules, de préférence de cellules vivantes. Parmi les cellules vivantes 20 d'intérêt, on peut citer par exemple : chondrocytes (cartilage articulaire), fibrochondrocytes (ménisque), fibroblastes de ligament (ligament), fibroblastes de peau (peau), ténocytes (tendons), myofibroblastes (muscle), les cellules souches mésenchymales, les globules rouges (sang) et kératinocytes (peau). La composition de l'invention peut également être visée comme vecteur thérapeutique pour la délivrance 25 ciblée et/ou à libération contrôlée d'au moins un agent thérapeutique. Selon une variante, on ajoute du sang, ou du plasma, ou un lysat plaquettaire, ou du plasma riche en plaquettes, ou tout fluide biologique avec la composition de l'invention permettant par exemple d'augmenter les performances du produit. Selon une variante, la composition selon l'invention est formulée sous une forme 30 solide (par exemple un film ou une mousse poreuse), qui se solubilise une fois implantée. Selon une variante, la composition est formulée sous une forme d'une composition nébulisable (spray). La présente invention concerne également une composition selon l'invention pour une utilisation dans une méthode de traitement ou de soin esthétique d'un ou plusieurs 35 tissus ou organes affectés par une température excessive, comme dans le cas d'une brûlure. 21 La présente invention concerne également une composition selon l'invention pour une utilisation dans une méthode de traitement de réparation du cartilage (par exemple par implantation sur un défaut de cartilage en vue de promouvoir sa régénération. La présente invention concerne également une composition selon l'invention pour 5 une utilisation dans une méthode de traitement de prévention des adhérences tissulaires après chirurgie : le produit est appliqué sur les tissus en fin de chirurgie, par exemple gynécologique, abdominale, etc. La présente invention concerne également une composition à titre de fluide synovial artificiel comprenant un carboxyalkyl chitosane selon l'invention. 10 La composition selon la présente invention permet de mimer un fluide synovial sain ou d'améliorer un fluide synovial sain ou défectueux en cherchant par exemple à améliorer sa capacité lubrifiante pour réduire les frictions dans l'articulation, et/ou ses propriétés d'absorption des chocs (identifiable par le module d'élasticité G'), tout en étant facilement injectable pour remplir une seringue par exemple ou être injectée dans le corps 15 humain ou animal. Pour indication, le module élastique G' du liquide synovial sain est compris entre 40 et 100Pa, et son module de perte G" est compris entre 1 et 10Pa. Selon une variante, le carboxyalkyl chitosane, ou la composition en comprenant, est injecté sous forme de solution. Avantageusement, selon cette variante, le carboxyalkyl chitosane, ou la composition en comprenant, est facilement injectable au travers d'une 20 aiguille fine, par exemple une aiguille de diamètre 21 Gauge, à température ambiante. Par injection « facile », on entend de préférence que la force à exercer sur une telle seringue est inférieure à 50 Newton pour faire écouler une composition selon l'invention au travers d'une aiguille de 21 Gauge, de préférence une force inférieure à 20 Newton. La présente invention concerne également une composition à titre de larmes 25 artificielles comprenant un carboxyalkyl chitosane selon l'invention. En général, les gammes de valeurs d'osmolalité et de pH recherchées dans les applications biomédicales sont proches des gammes suivantes : -Osmolalité : lso-osmolaire au plasma : 285 à 295 mosm/kg ; 30 lso-osmolaire au liquide synovial : 404 ± 57 mosml/kg, d'après « Clin Orthop Relat Res, 235, 289-95, 1988» et « Biochem Biophys Res Comm, 422, 455-461, 2012» ; De 280 à 350 mosm/kg. 35 Un pH physiologique est en général au-dessus de 6,8, en particulier au-dessus de 7,0, et en particulier de 7,4 (comme pour le plasma ou un liquide synovial). 22 Le pH du plasma est en général de 7,4. Le pH du liquide synovial est en général de 7,768 +/- 0,044 selon « J Bone Joint Surg Br, 41-B(2), 388-400, 1959 » ; ou de 7,3 selon « Acta Orthop Scand 634-641, 1969,», ou encore d'après « Clin Rheumatol 25, 886-888, 2006». 5 Le pH synovial dans les cas d'ostéoarthrose ou d'arthrite est considéré comme étant en général plus faible que celui du fluide synovial sain. Ainsi, la présente invention concerne un mélange d'un fluide synovial avec une composition selon la présente invention, par exemple selon un ratio volumique entre (i) le carboxyalkyl chitosane, ou la composition en comprenant, et (ii) le fluide synovial allant de 10 20/80 à 80/20 (v/v), et par exemple de 50/50 (v/v). Avantageusement, la composition selon la présente invention est stérile. Très avantageusement, la composition selon la présente invention est stérilisée par montée en température, de préférence sous autoclave. Selon une variante, les compositions de l'invention sont transparentes ou 15 translucides. Par « translucide » on entend que l'on peut distinguer un objet lorsqu'on place sa composition entre l'oeil de l'observateur et l'objet. Par « transparente » on entend que l'on peut distinguer des caractères alphanumériques lorsqu'on place la composition entre l'oeil de l'observateur et les caractères observés. En général on réalise cette évaluation avec 20 une épaisseur de composition d'environ 1cm. On peut également suivre la méthode de la monographie 2.9.20 de la Pharmacopée Européenne pour l'inspection visuelle. On peut également mesurer la densité optique de la composition, par exemple par spectrométrie UV-visible à 500nm et s'assurer que la densité optique est inférieure à 0,5, de préférence 0,2 par rapport à un solvant de référence. 25 Selon une variante, les compositions de l'invention ne sont pas ou peu opalescentes. Par « opalescent » on entend que la solution entraîne une diffraction de la lumière visible à l'oeil nu, par exemple par inspection visuelle selon une méthode telle que la monographie 2.9.20 de la Pharmacopée Européenne et par comparaison à des solutions 30 de référence de niveaux d'opalescence différents de la Pharmacopée Européenne. Selon une variante, la composition de l'invention est incolore, c'est-à-dire en particulier qu'un observateur à l'oeil nu n'attribue pas de couleur spécifique à la composition. Selon une variante, l'opalescence est inférieure au maximum toléré pour l'application envisagée. L'invention concerne en particulier des articles ou packaging, de préférence 35 stériles, comprenant un ou plusieurs dispositifs d'instillation ou d'injection pré-remplis 23 d'une composition selon l'invention. Il s'agit typiquement de de dispositifs permettant d'instiller le produit sous forme de gouttes ou de seringues pré-remplies La composition de l'invention peut avantageusement être stérilisée. Ainsi, l'invention concerne un carboxyalkyl chitosane stérilisé. Le carboxyalkyl chitosane est 5 donc ainsi stérile, notamment pour des applications le nécessitant. Selon une variante, la composition de l'invention est stérilisée à la vapeur, par exemple par une élévation de la température à une température supérieure à 100°C, et de préférence supérieure à 120°C, par exemple entre 121 et 138°C, sous autoclave, pendant une durée suffisante à la stérilisation, par exemple en général de 15 à 20 10 minutes. Selon une autre variante, la composition peut être stérilisée par filtration à l'aide de filtres prévus à cet effet, par exemple des filtres de porosité inférieure ou égale à 0,211m. Avantageusement, selon un mode de réalisation préféré, la perte en viscosité intrinsèque du carboxyalkyl chitosane lors d'une stérilisation à la vapeur est inférieure à 15 40%. L'invention couvre encore une composition de l'invention sous une forme sèche, notamment sous une forme lyophilisée. On peut notamment (re)disperser cette composition lyophilisée avant usage. La présente invention couvre également une méthode de traitement thérapeutique 20 comprenant l'injection d'une composition selon l'invention. La présente invention couvre également l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la préparation d'une composition pharmaceutique, en particulier pour un traitement thérapeutique, par exemple comme défini plus spécifiquement par l'invention. La présente invention couvre également une méthode de soin esthétique, en 25 d'autres termes non-thérapeutique, comprenant l'injection d'une composition selon l'invention. Il s'agit par exemple du comblement de rides ou du comblement d'une ou plusieurs zones de tissu visible endommagées, par exemple suite à un accident ou une intervention chirurgicale, dans un but esthétique. Un tissu est un ensemble de cellules semblables et de même origine, regroupées 30 en ensemble fonctionnel, c'est-à-dire concourant à une même fonction. Parmi les tissus on peut citer : le tissu épithélial, le tissu conjonctif, le tissu musculaire, et le tissu nerveux. On entend par « composition selon l'invention » ou des termes équivalents, une composition définie telle que dans la présente invention, y compris selon l'une quelconques des variantes, modes de réalisation particuliers ou spécifiques, 35 indépendamment ou selon l'une quelconque de leurs combinaisons, y compris selon les caractéristiques préférées. 24 D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à l'homme de l'art suite à la lecture de la description explicative qui fait référence à des exemples qui sont donnés seulement à titre d'illustration et qui ne sauraient en aucune façon limiter la portée de l'invention. 5 Les exemples font partie intégrante de la présente invention et toute caractéristique apparaissant nouvelle par rapport à un état de la technique antérieure quelconque à partir de la description prise dans son ensemble, incluant les exemples, fait partie intégrante de l'invention dans sa fonction et dans sa généralité. Ainsi, chaque exemple a une portée générale. 10 D'autre part, dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en masse, sauf indication contraire, et la température est exprimée en degré Celsius sauf indication contraire, et la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire. 25 Exemples Les chitosanes précurseurs des chitosanes substitués selon l'invention présentent une masse moléculaire moyenne en viscosité (déterminée par viscosimétrie capillaire) et un degré d'acétylation (DA, proportion d'unité N-acétyl-D-glucosamine, déterminée par 5 titrage potentiométrique) compris dans les gammes du Tableau 1. La masse moléculaire d'un chitosane peut également être définie par la viscosité dynamique d'une solution de concentration 1% (m/m) en chitosane dans l'acide acétique de concentration 1% (v/v), mesurée par viscosimétrie à mobile tournant, par exemple un viscosimètre Brookfield, comme décrit dans le Tableau 1. 10 Tableau 1. Caractéristiques des chitosanes précurseurs Gamme Gamme de masse moléculaire moyenne (viscosimétrie capillaire) Gamme de viscosité à 1% (mPa.$) Gamme de DA (mol%) « Ultra low » environ 20 000 - 60 000 5 - 20 5 - 20% « Low » environ 60 000 - 120 000 20 - 50 15 - 25% « Medium » environ 120 000 - 150 000 50 - 80 20 - 30% « High » environ 150 000 - 220 000 80 - 120 25 - 40% « Ultra-high » environ 220 000 to 300 000 120 - 200 25 - 40% « 400k» environ 300,000 - 500 000 200 - 600 35 - 50% Les méthodes suivantes sont utilisées dans la présente invention, sauf mention contraire : 15 Méthode de mesure du potentiel zeta La formulation à analyser est diluée dans un tampon phosphate pour obtenir une concentration finale en polymère de 0,05%, puis légèrement agitée jusqu'à homogénéisation. La solution est ensuite séparée en différentes fractions, et le pH de chacune des fractions est ajusté à la valeur désirée, entre pH 4 et 8, soit par ajout 20 d'hydroxyde de sodium à 0,1N soit par ajout d'acide chlorhydrique à 0,1N. Le potentiel zeta de chaque fraction est mesuré à l'aide d'un appareil « Nano-Z » (gamme Zeta-Sizer, Malvern Instruments). 26 Méthode de mesure de la plage de solubilité des polymères de chitosane La plage de solubilité est établie en préparant une solution du polymère à tester à une concentration de 1% et un pH de 9, en le fractionnant en plusieurs fractions dont le 5 pH est ajusté à différents pH sur une gamme de 9 à 1. On vérifie pour chaque fraction que le polymère est soluble, c'est-à-dire qu'il ne forme pas de trouble, selon la méthode d'inspection visuelle de la monographie 2.9.20 de la Pharmacopée Européenne. On note la plage de pH sur laquelle le polymère est soluble ou insoluble. 10 Modèle de poche à air sous-cutanée chez la souris Un modèle de poche à air sous-cutanée chez la souris a été utilisé pour évaluer la réaction à corps étranger et l'immunocompatibilité de différents polymères dérivés de chitosan d'origine fongique. Dans ce modèle, une cavité de poche d'air est produite par des injections sous-cutanées répétées d'air stérile dans le dos d'une souris. La poche 15 générée par le gonflement de l'air imite la cavité synoviale, fournissant un environnement localisé dans lequel il est possible d'étudier la stimulation d'une réponse inflammatoire dans le liquide prélevé de la poche d'air et les tissus environnants, tel que décrit par Segwick et al. (in : J Pathol 141, 483, 1983) et Sin et al. (in : Ann Rheum Dis 45, 873, 1986). La cavité de la poche d'air permet d'injecter jusqu'à 1 mL de produit chez un 20 animal d'environ 30 g. Selon le protocole décrit par Dawson et al. (in : Int J Tiss Reac 8, 171, 1991), la poche d'air est établie chez des souris CD-1 Swiss albinos mâles non consanguines (exemptes de pathogènes, poids corporel à la réception 25 à 35 g) aux délais Jour 0 et Jour 4 par l'injection répétée de 5 mL puis 3 mL d'air stérile. Au Jour 7, une injection sous-cutanée unique de 1 mL de produit est effectuée directement dans la 25 cavité de la poche à air. Des injections de 1 mL de salin et d'une solution à 1% de carraghénane servent respectivement de contrôle négatif et positif. Les animaux sont suivis régulièrement dans les heures suivant l'injection pour détecter d'éventuels signes cliniques de toxicité systémique ou locale, et une prise de poids corporel et de température est réalisée au moment de l'injection et du sacrifice. Les animaux sont 30 euthanasiés après une période de contact avec le produit de 24 heures (3 animaux par produit). Les évaluations immunologiques du fluide de lavage récupéré de la poche incluent l'analyse cytologique (comptage et distribution en globules blancs et rouges) et la quantification des principaux médiateurs inflammatoires (IL-1-beta, TNF-alpha et KC/CXCL1) au moyen de kits 'ELISA' (AbCam), réalisées selon les instructions. L'analyse 35 macroscopique et l'histopathologie par coloration hématoxyline/éosine des tissus cutanés 27 environnants est réalisée. Une attention particulière est accordée à la localisation du produit sur les tissus environnants ainsi qu'à sa résorption dans le fluide. Modèle d'évaluation de la tolérance locale intra-articulaire dans un modèle ovin Selon la littérature et les recommandations de l'OARSI, le mouton est reconnu 5 comme un modèle bien caractérisé pour évaluer les effets de l'injection intra-articulaire de traitements innovants (Little et al. in : Osteoarthritis Cartilage 18, S80, 2010 ; Edouard et al. in : Phys Ther Sport 14, 116, 2013; McCoy et al. in : Vet Pathol 52, 803, 2015). Le modèle mouton permet d'injecter par voie intra-articulaire un volume de formulation qui simule l'utilisation clinique de la viscosupplémentation chez l'homme (Fraser et al. in : 10 Semin Arthritis Rheum 22, 9, 1993). Les mesures de tolérabilité locale comprennent les signes cliniques d'inflammation synoviale (effusion, boiterie, confort) au moyen d'échelles cliniques semi-quantitatives validées, décrites par Shafford et al. (in : Vet Anaesth Analg 31, 20, 2004) et Kaler et al. (in : Vet J 180, 189, 2009), ainsi que l'évaluation cytologique du fluide synovial. Dans certains cas, ces analyses peuvent être complétées par 15 l'évaluation anatomique et histologique du membre injecté. Un volume de 2mL de formulation est injecté dans l'articulation (grasset) de brebis en bonne santé (âge 2 à 6 ans ; poids 60 à 80 kg). Après injection, les signes cliniques des animaux sont consignés quotidiennement durant une période de 15 jours, selon une échelle semi-quantitative de 0 à 4 pour l'effusion (par palpation du grasset) et la boiterie. On rapporte le nombre de 20 signes rencontrés pour chacun des scores sur toute la durée d'observation. Afin d'évaluer les effets d'une injection répétée d'une même formulation, on réalise une deuxième injection après 1 mois dans l'articulation des mêmes animaux, et on suit les animaux selon le même protocole que pour la première injection. De plus, une ponction du liquide synovial est réalisée au jour 15, et les paramètres macroscopiques (couleur, viscosité), 25 cytologiques (comptage et distribution en globules blancs et rouges), ainsi que la quantité en protéines sériques totales sont déterminés selon des méthodes classiques. Le liquide synovial est considéré comme normal si son aspect est clair, visqueux et légèrement jaunâtre, et que l'analyse cytologique indique que le nombre de globules blancs est inférieur à 1x105 cellules/mL et que la concentration en protéines totales est d'environ 25 30 mg/mL. Exemple 1 - N-succinyl-chitosanes Des N-succinyl chitosanes de différentes masse moléculaire et structure moléculaire (degré d'acétylation (DA), et degré de substitution par le groupe succinyl 35 (DS)) ont été préparés et caractérisés selon le procédé général décrit dans la demande WO 2016/016463 ou WO 2016/016464 (brevet EP 3016663). Une première étape 28 d'acétylation par addition d'anhydride acétique a été réalisée afin d'augmenter le degré d'acétylation, sauf pour le polymère CSS-1 (Tableau la). Des formulations ont été préparées avec ces N-succinyl chitosanes (CSS) à une concentration de 2% à pH et osmolarité physiologiques, et conditionnées dans une 5 seringue en verre. Les seringues sont stérilisées par autoclave avec un cycle standard (15 minutes à 121°C). On vérifie que les formulaticns ne présentent pas d'insolubles ou de trouble sur une large gamme de pH autour du pH physiologique (pH 6,5 à 7,5), par inspection visuelle selon la méthode EP 2.9.20. On contrôle que le niveau d'endotoxines bactériennes des formulations est inférieur à 20 EU/mL selon la méthode de la 10 monographie 2.6.14(D) de la Pharmacopée Européenne et que la charge microbiologique est inférieure à 100 cfu/g selon la méthode 2.6.12 de la Pharmacopée Européenne, avant de réaliser une évaluation de leur immunocompatibilité in vivo. Tableau la - Caractéristiques des N-succinyl chitosanes No Gamme de masse moléculaire* DA** (mol %) DS** (mol %) CSS-1 Medium 12 62 CSS-6 Low 50 34 CSS-8 Low 49 32 CSS-10 High 61 37 *masse moléculaire du chitosane précurseur, selon Tableau 1 ; **DA et DS 15 mesurés par RMN du proton selon la méthode décrite dans le brevet EP 3016663. L'immunocompatibilité des formulations de CSS est évaluée à l'aide du modèle de la poche à air sous-cutanée chez la souris (Tableau lb). La réaction observée est comparée à celle observée après injection d'une solution de salin (contrôle négatif), d'un 20 contrôle positif très réactif (solution à 1% de carraghénane et d'un produit commercial à base de Hylan GF-20, un acide hyaluronique partiellement réticulé (Synvisce, Sanofi).). 29 Tableau lb - lmmunocompatibilité des formulations de N-succinyl chitosane à l'aide du modèle de poche à air chez la souris, 24 heures après injection* No Nbe de Conc. en IL1-beta Conc. en KC/CXCL1 (10-6g/mL) Conc. en TNF-alpha (10-6g/mL)** globules blancs (106 cell/ mL) (10-6 g/mL)** CSS-1 1,5 / / / CSS-6 0,7 700 700 767 Synvisc® (Hylan GF20) 0,7 4 46 3,1 Oui -22 CC-10 (2%) 46 167 Soluble à tout pH Oui -24,5 CC-11 (2%) 23 130 Soluble à pH > 3,5 Oui -26 *DA et DS déterminés par 13C-RMN ; **considéré comme stérilisable si la perte de viscosité intrinsèque avant/après stérilisation est inférieure à 40%. 5 Les CC obtenus sont tous solubles sur une large gamme de pH, en particulier sur la gamme de pH de 4,0 à 8,5, sans opalescence. Les formulations sont préparées à une concentration en CC de 1,5 ou 2%, conditionnées dans une seringue en verre, puis stérilisées par autoclave selon un cycle standard de 15 minutes à 121°C. Afin d'évaluer si bs formulations sont stérilisables par 10 autoclave, on mesure la viscosité intrinsèque des polymères avant et après autoclave par viscosimétrie capillaire, après dilution d'un facteur de 25 par un tampon phosphate. La perte en viscosité intrinsèque des CC est inférieure à 40%, ce qui traduit une résistance acceptable, contrairement à la formulation CC-3 de l'Exemple 2 (qui a subi une perte d'environ 60% de sa viscosité intrinsèque). 15 L'inspection visuelle des formulations stérilisées du Tableau 3c indique qu'elles sont transparentes et non opalescentes. Elles sont alors contrôlées pour vérifier que le niveau d'endotoxines et la charge microbiologiques sont inférieurs à 20 EU/mL et 100 37 cfu/g, puis on évalue leur immunocompatibilité à l'aide du modèle de poche à air chez la souris. Tableau 3d - lmmunocompatibilité des formulations de carboxyméthyl chitosane d'origine fongique à l'aide du modèle de poche à air chez la souris, 24 heures après injection* No Nbe de globules blancs (x106 cellules/ mL) Conc. en IL1-beta Conc. en KC/CXCL1 Conc. en TNF-alpha (x1 0-6g/m L)** (x1 0-6g/m L) (x1 0-6g/m L)** CC-5 1,9 6 28 391 CC-6 17 12 20 700 767 Synvisc® (Hylan GF20) 0,7 4 46 REVENDICATIONS1.- Carboxyalkyl chitosane présentant des unités glucosamine, des unités Nacétyl- glucosamine et des unités glucosamine substituées par un groupe carboxyalkyl, ledit carboxyalkyl chitosane présentant un potentiel zeta, mesuré à pH 7,5, inférieur ou égal à -10 mV, et de préférence inférieur ou égal à -18 mV. 2.- Carboxyalkyl chitosane selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit carboxyalkyl chitosane présente un potentiel zeta, mesuré à pH 7,5, est inférieur ou égal à -20 mV, et de préférence inférieur ou égal à -22 mV. 3.- Carboxyalkyl chitosane chitosane selon la revendication 1 ou 2, ledit carboxyalkyl chitosane présentant un degré de substitution par un groupe carboxyalkyl supérieur à 20%, par exemple supérieur à 50%, par exemple inférieur à 200%, exprimé en nombre de mole du substituant par rapport au nombre de mole d'unités totales. 4.- Carboxyalkyl chitosane selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le chitosane est issu du mycélium d'un champignon du type Ascomycète, et en particulier d'Aspergillus figer, et/ou d'un champignon Basidiomycète, et en particulier Lentinula edodes (shiitake) et/ou Agaricus bisporus (champignon de Paris). De préférence, le chitosane est issu d'Agaricus bisporus. 5.- Carboxyalkyl chitosane selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le carboxyalkyl chitosane présente un degré d'acétylation compris entre 40 et 80%, exprimé en nombre de mole unités N-acétyl- glucosamine par rapport au nombre de mole d'unités totales. 6.- Carboxyalkyl chitosane selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le carboxyalkyl chitosane est réacétylé. 7.- Carboxyalkyl chitosane selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il est stérilisé. 8.- Composition caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un carboxyalkyl chitosane défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 7. 50 9.- Composition injectable caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un carboxyalkyl chitosane défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 7. 10.- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins 5 un carboxyalkyl chitosane défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 7. 11.- Composition, selon la revendication 9 ou 10, caractérisée en ce que la composition est une composition pharmaceutique injectable, implantable ou apte à l'instillation, ou un dispositif médical injectable ou implantable ou apte à l'instillation. 10 12.-Composition selon la revendication 11, pour une utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique, par exemple formulée pour une administration comprenant l'instillation ou l'injection par voie sous-cutanée, intradermique, oculaire, intraoculaire, ou intra-articulaire, de ladite composition, par exemple pour la réparation ou le comblement 15 d'au moins un tissu corporel nécessitant une réparation ou un comblement. 13.- Composition, selon la revendication 12, caractérisée en ce que le tissu corporel est choisi parmi les tissus appartenant aux cordes vocales, muscles, ligaments, tendons, cartilages, organes sexuels, os, articulations, yeux, derme, ou l'une quelconque 20 de leurs combinaisons, et plus particulièrement aux joints articulaires. 14.-Composition selon la revendication 12 ou 13, pour son utilisation dans une méthode de traitement d'une arthrose, ou la réparation d'un défaut de cartilage, par exemple formulée pour une administration par injection dans le fluide synovial ou après 25 mélange avec le sang et implantation dans le cartilage. 15.- Dispositif médical, par exemple implant médical, caractérisé en ce qu'il comprend ou consiste en une composition telle que définie à l'une quelconque des revendications 8 à 14. 30 16.- Procédé de préparation d'une composition comprenant un carboxyalkyl chitosane défini selon l'une quelconque des revendications 8 à 14, ledit procédé comprenant : - la dissolution d'un carboxyalkyl chitosane défini selon l'une quelconque des 35 revendications 1 à 9 dans une solution aqueuse, de préférence de l'eau, éventuellement 51 tamponnée, de préférence à pH compris entre 6,2 et 8,5 et de préférence entre 6,5 et 7,5; - l'ajustement éventuel du pH à un pH désiré, en général au pH physiologique pour l'application visée, par exemple par ajout d'un agent tamponnant, d'une base ou d'un 5 acide ; - l'ajout éventuel d'autres excipients, comme par exemple un sucre réducteur, par exemple le sorbitol ou le mannitol ; - l'ajustement éventuel de l'osmolalité de la composition.