Brevet FR3071512A1 — publié le 20190329

Signatures moléculaires de trois sous-populations de fibroblastes dermiques et équivalent de derme comprenant une de ces sous-populations La présente invention concerne l'identification de sous-populations de fibroblastes dermiques. La peau est constituée de deux compartiments liés, à savoir l'épiderme et le derme. L'épiderme est majoritairement constitué de trois types cellulaires, à savoir les kératinocytes, eux-mêmes majoritaires parmi les cellules de l'épiderme, les mélanocytes et les cellules de Langerhans. Ces cellules constituent un épithélium kératinisé qui se différencie en couches superposées surmontées d'une couche de cellules mortes formant le stratum corneum. Le derme fournit à l'épiderme un support solide. C'est également son élément nourricier. Il est principalement constitué de fibroblastes et d'une matrice extracellulaire. Le derme contient plus précisément deux couches distinctes : la couche superficielle papillaire (300-400 pm, qui est située au contact de l'épiderme) et la couche réticulaire sous-jacente (qui s'étend jusqu'à l'hypoderme). Des travées conjonctives de derme peuvent en outre s'étendre dans l'hypoderme. Le derme papillaire est caractérisé par une matrice extracellulaire relativement fine et une forte densité cellulaire, tandis que le derme réticulaire a un réseau très dense de fibres matricielles et une faible densité cellulaire. Les constituants de la matrice sont également différents dans les deux couches. Par ailleurs, quand les fibroblastes de ces couches distinctes, appelés respectivement fibroblastes papillaires et fibroblastes réticulaires, sont cultivés, ils présentent des caractéristiques morphologiques distinctes. Ainsi, les fibroblastes réticulaires ont une apparence étendue et plus carrée, tandis que les fibroblastes papillaires ont généralement une morphologie mince et fusiforme. De plus, on observe entre ces deux sous-populations cellulaires des différences de prolifération, de production de matrice en culture, de réponse aux facteurs de croissance et de production de facteurs de croissance. Ainsi, dans la peau normale, le derme est constitué d'au moins deux sous-populations de fibroblastes, ce qui ne peut qu'avoir des conséquences essentielles sur la peau elle-même. Dans le domaine des équivalents de peaux (ou peaux reconstruites in vitro), il est primordial de reproduire le plus précisément possible les caractéristiques et propriétés 2 des différents constituants de la peau normale afin de refléter le plus fidèlement possible les réactions d'une peau normale. Au vu des différences de propriétés entre les sous-populations- de fibroblastes dermiques, il est important qu'un équivalent de peau in vitro comprenne des sous- 5 populations de fibroblastes dermiques clairement identifiées au moyen de biomarqueurs. La présente invention répond à ce besoin. Janson et al. (2012) Journal of lnvestigative Dermatology 132:2565-2572 ont réalisé une étude transcriptomique pour identifier des signatures moléculaires des phénotypes papillaire et réticulaire. Ils ont identifié la protéine MGP comme étant 10 exclusivement exprimée dans le derme réticulaire, tandis que les gènes PDPN et NTN1 présentent une expression généralement plus élevée dans les fibroblastes papillaires. Nauroy et al. (2017) Journal of lnvestigative Dermatology ont identifié, à partir d'échantillons de peau provenant de donneurs jeunes uniquement, certains marqueurs différentiellement exprimés dans les fibroblastes réticulaires par rapport aux fibroblastes 15 papillaires. Ainsi, les gènes COLA 1A1, MGP, FGF18, COMP et ACAN ont été identifiés comme étant surexprimés dans les fibroblastes réticulaires. Toutefois, ces articles ne s'intéressent qu'aux fibroblastes papillaires et réticulaires. Or, les présents inventeurs ont montré qu'une autre sous-population de fibroblastes, des fibroblastes dits de la jonction dermo-hypodermique, pouvait être isolée 20 au niveau des travées conjonctives émises par le derme dans l'hypoderme. Les inventeurs ont en outre identifié des signatures moléculaires, impliquant un nombre réduit de biomarqueurs, permettant d'identifier et de distinguer les trois sous-populations de fibroblastes dermiques : les fibroblastes papillaires, les fibroblastes réticulaires et les fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique. 25 Les présents inventeurs ont en effet, outre isolé pour la première fois la sous- population de fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique, montré que les fibroblastes papillaires, réticulaires et de la jonction dermo-hypodermique pouvaient être identifiés en mesurant le niveau d'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes UCP2 et FGF9 et éventuellement COL11A1 et ACAN, et éventuellement le niveau d'expression du 30 gène KLF9. Ainsi le niveau d'expression du gène UCP2 est significativement plus élevé dans les fibroblastes papillaires par rapport aux fibroblastes réticulaires et aux fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique tandis que les niveaux d'expression des gènes COLI 1A1, ACAN et FGF9 sont significativement plus élevés dans les fibroblastes réticulaires et les 35 fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique par rapport aux fibroblastes papillaires. 3 Enfin, le niveau d'expression du gène KLF9 est significativement plus élevé dans les fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique par rapport aux fibroblastes réticulaires. La présente invention concerne ainsi une méthode in vitro d'identification d'un 5 fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH), comprenant les étapes suivantes : a) fournir un échantillon biologique comprenant au moins un fibroblaste dermique, b) mesurer le niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2 et FGF9 et éventuellement des gènes COL11A1 et 10 ACAN, et éventuellement le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9, et c) sur la base du ou des niveau(x) mesuré(s) à l'étape b), identifier le fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH). La présente invention a également pour objet l'utilisation d'un produit d'expression 15 d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2 et FGF9 et éventuellement des gènes COL11A1 et ACAN, éventuellement en combinaison avec un produit d'expression du gène KLF9, comme marqueur pour identifier in vitro un fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH). 20 Un autre objet de l'invention concerne un équivalent de derme in vitro comprenant une sous-population de fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique (FJDH). La présente invention concerne également un équivalent de peau in vitro comprenant un équivalent de derme selon l'invention. La présente invention a également pour objet un kit pour identifier un fibroblaste 25 dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH), ledit kit comprenant : - au moins un moyen de mesure choisi dans le groupe constitué d'un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène UCP2, d'un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène FGF9, d'un moyen de mesure du niveau d'un 30 produit d'expression du gène COL11A1 et d'un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène ACAN, et - au moins un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène KLF9. 4 Un autre objet de l'invention concerne une puce à ADN pour identifier un fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH), ladite puce comprenant : - au moins une sonde choisie dans le groupe constitué d'une sonde détectant un 5 produit d'expression du gène UCP2, d'une sonde détectant un produit d'expression du gène FGF9, d'une sonde détectant un produit d'expression du gène COL11A1 et d'une sonde détectant un produit d'expression du gène ACAN, et - au moins une sonde détectant un produit d'expression du gène KLF9. 10 Description détaillée de l'invention Fibroblastes Par "fibroblaste dermique", on entend ici tout fibroblaste provenant du derme. Par "fibroblaste papillaire", on entend ici un fibroblaste du derme papillaire, le 15 derme papillaire étant caractérisé par une matrice extracellulaire relativement fine et une forte densité cellulaire. Les fibroblastes papillaires en culture ont typiquement une morphologie mince et fusiforme. Par "fibroblaste réticulaire", on entend ici un fibroblaste du derme réticulaire, le derme réticulaire étant caractérisé par un réseau très dense de fibres matricielles et une 20 faible densité cellulaire. Les fibroblastes réticulaires en culture ont typiquement une apparence étendue et plus carrée. Par "fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique" ou "fibroblaste FJDH", on entend ici un fibroblaste de la zone se trouvant au niveau des travées conjonctives émises par le derme dans l'hypoderme. Les fibroblastes FJDH en culture ont typiquement 25 une morphologie très hétérogène. Ainsi, des formes très diverses peuvent être observées dans le tapis cellulaire allant de toutes petites cellules tricuspides, à de très larges cellules multipolaires présentant un réseau trabéculaire intracellulaire fortement marqué (visible en microscopie optique). 30 Méthode d'identification L'étape (a) de la méthode d'identification selon l'invention comprend la fourniture d'un échantillon biologique comprenant au moins un fibroblaste dermique, tel que défini dans la section "Fibroblastes" ci-dessus. L'échantillon biologique peut en particulier être une culture in vitro de fibroblastes 35 dermiques ou d'un mélange de fibroblastes dermiques, un échantillon provenant d'une 5 biopsie de peau, ou un échantillon provenant d'un équivalent de derme ou de peau in vitro. L'étape (b) de la méthode d'identification selon l'invention comprenant la mesure du niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué 5 des gènes UCP2 et FGF9 et éventuellement des gènes COL11A1 et ACAN, et éventuellement le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9. Par "gène UCP2", on entend ici le gène codant la "mitochondriel uncoupling protein 2". Le gène UCP2 est aussi appelé gène SLC25A8 et la protéine UCP2 est aussi appelée UCPH ou "solute carrier family 25 member 8". Elle appartient à la famille des 10 protéines support anionique mitochondriales (MACP) et contrôle les espèces d'oxygène réactives dérivées des mitochondries. Elle est typiquement décrite dans Pecqueur et al. (1999) Biochemical and Biophysical Research Communications 255:40-46. La séquence de la protéine UCP2 humaine est typiquement référencée sous le numéro UniProt P55851. 15 Par "gène ACAN", on entend ici le gène codant Imaggrecan core protein". Le gène ACAN est aussi appelé gène AGC1, CSPG1 et MSK16 et la protéine ACAN est aussi appelée "aggrecan" ou "cartilage-specific proteoglycan core protein" ou CSPCP ou "chondroitin sulfate proteoglycan core protein 1" ou "chondroitin sulfate proteoglycan 1". Elle fait partie de la matrice extracellulaire dans le tissu cartilagineux. Il s'agit d'un 20 protéoglycane. Elle est typiquement décrite dans Doege et al. (1991) J. Biol. Chem. 15:894-902. La séquence de la protéine ACAN humaine est typiquement référencée sous le numéro UniProt P16112. Par "gène FGF9", on entend ici le gène codant le facteur de croissance de fibroblaste 9. La protéine FGF9 est aussi appelée "Glia-activating facto-" ou GAF ou 25 "heparin-binding growth factor 9" ou HBGF-9. Elle a un effet stimulateur de croissance sur les cellules gliales en culture. Elle est typiquement décrite dans Miyamoto et al. (1993) Molecular and Cellular Biology 13:4251-4259. La séquence de la protéine FGF9 humaine est typiquement référencée sous le numéro UniProt P31371. Par "gène COL11A1", on entend ici le gène codant la chaîne al (XI) du collagène. 30 Le gène COLA 1A1 est aussi appelé gène COLLE. Cette chaine est une des deux chaines alpha du collagène de type XI, un collagène fibrillaire mineur. Elle est typiquement décrite dans Yoshioka et al. (1990) J. Biol. Chem. 15:6423-6426. La séquence de la protéine COLA 1A1 humaine est typiquement référencée sous le numéro UniProt P12107. Par "gène KLF9", on entend ici le gène codant le facteur Krueppel-like 9 (ou 35 "Krueppel-like factor 9"). Le gène KLF9 est aussi appelé gène BTEB ou gène BTEB1 et la protéine KLF9 est aussi appelée facteur de transcription BTEB1 ou protéine de liaison à la 6 GC-box 1 ("GC-box-binding protein 1") ou "basic transcription element-binding protein 1" ou protéine de liaison à BTE 1 ("BTE-binding protein 1"). Elle fait partie de la famille des facteurs de transcription à doigt de zinc de type Sp1 C2H2. Elle est typiquement décrite dans Sel et al. (2012) Proc. NatL Acad. Science USA 109:10903-10908. La séquence 5 de la protéine KLF9 humaine est typiquement référencée sous le numéro UniProt Q13886. Dans le contexte de l'invention, les références UniProt citées ci-dessus sont celles qui étaient disponibles au 31 juillet 2017. Dans un mode de réalisation particulier, l'étape (b) comprend la mesure du niveau 10 d'un produit d'expression d'au moins deux gènes choisis dans le groupe constitué des gènes UCP2 et FGF9, et éventuellement le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9, de préférence d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2 et FGF9 et d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes ACAN et COL11A1, et éventuellement le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9, de 15 préférence d'au moins 3 gènes choisis dans le groupe constitué des gènes UCP2, ACAN, FGF9 et COL11A1, et éventuellement le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9, de manière encore préférée d'au moins 4 gènes choisis dans le groupe constitué des gènes UCP2, ACAN, FGF9 et COL11A1, et éventuellement le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9. 20 Dans un mode de réalisation particulier, l'étape (b) comprend la mesure du niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène, en particulier au moins 2 gènes, choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2 et FGF9. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'étape (b) comprend la mesure du niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2 et FGF9, et d'au moins un gène 25 choisi dans le groupe constitué des gènes COL11A1 et ACAN. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'étape (b) comprend la mesure du niveau d'un produit d'expression d'au moins 3 gènes, en particulier au moins 4 gènes, choisis dans le groupe constitué des gènes UCP2, ACAN, FGF9 et COLI 1A1. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'étape (b) comprend la mesure du 30 niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène, en particulier au moins 2 gènes, 3 gènes ou 4 gènes, choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2, ACAN, FGF9 et COL11A1, et la mesure du niveau d'un produit d'expression du gène KLF9. Par "produit d'expression du gène X", on entend ici l'ARNm codé par ledit gène X ou la protéine codée par ledit gène X. Le niveau du produit d'expression du gène X peut 35 donc être mesuré en quantifiant l'ARNm ou la protéine correspondant(e). Dans un mode 7 de réalisation particulier, ledit produit d'expression du gène X est l'ARNm codé par ledit gène X. De préférence, le niveau du produit d'expression correspond à la concentration ou la quantité du produit d'expression. 5 Le niveau du produit d'expression d'un gène X peut être mesuré à l'étape (b) par toute technique bien connue de l'homme du métier. En particulier, lorsque le produit d'expression est une protéine, le niveau du produit d'expression peut être mesuré au moyens de dosages immunologiques tels que des dosages ELISA, des dosages immunofluorescents (IFA), des dosages radio-immunologiques (RIA), des tests de liaison 10 compétitive ou des Western Blot. Lorsque le produit d'expression est un ARNm, le niveau du produit d'expression peut être mesuré par RT-PCR, qRT-PCR, ddPCR (Droplet Digital PCR), par séquençage, par exemple par séquençage de type NGS (Next generation sequencing) ou par séquençage par ddSEQTM single cell isolator. L'étape (c) de la méthode d'identification selon l'invention comprend l'identification, 15 sur la base du ou des niveau(x) mesuré(s) à l'étape b), du fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH). Dans un mode de réalisation particulier, l'étape (c) de la méthode d'identification selon l'invention comprend la comparaison du ou des niveau(x) mesuré(s) à l'étape b) à 20 un ou des niveau(x) contrôle. Par "niveau contrôle", on entend ici une valeur de référence correspondant de préférence au niveau dudit produit d'expression dudit gène dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste dermique papillaire, réticulaire ou FJDH. Par "fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste dermique papillaire, 25 réticulaire ou FJDH", on entend ici un fibroblaste dermique dont le type (papillaire, réticulaire ou FJDH) a préalablement été déterminé au vu de sa morphologie, de sa provenance ou de biomarqueurs détectés. Dans un mode de réalisation particulier, le niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2 et FGF9 est de 30 préférence mesuré à l'étape b), et le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste papillaire quand : (i) le niveau du produit d'expression du gène UCP2 est augmenté par rapport à un niveau contrôle, et/ou (ii) le niveau du produit d'expression du gène FGF9 est diminué par rapport à un 35 niveau contrôle, 8 les niveaux contrôle de (i) et (ii) étant de préférence respectivement le niveau du produit d'expression des gènes UCP2 et FGF9 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste FJDH. Dans un autre mode de réalisation particulier, le niveau d'un produit d'expression 5 d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2 et FGF9, et d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes COL11A1 et ACAN sont de préférence mesurés à l'étape b), et le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste papillaire quand : 1) (i) le niveau du produit d'expression du gène UCP2 est augmenté par 10 rapport à un niveau contrôle, et/ou (ii) le niveau du produit d'expression du gène FGF9 est diminué par rapport à un niveau contrôle, et 2) (iii) le niveau d'expression du produit d'expression du gène COL11A1 est 15 diminué par rapport à un niveau contrôle, et/ou (iv) le niveau du produit d'expression du gène ACAN est diminué par rapport à un niveau contrôle, et/ou les niveaux contrôle de (i), (ii), (iii) et (iv) étant de préférence respectivement le niveau du produit d'expression des gènes UCP2, FGF9, COL11A1 et ACAN dans un fibroblaste 20 dermique connu comme étant un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste FJDH. Dans un autre mode de réalisation particulier, le niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2, ACAN, FGF9 et COL11A1, et le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9 sont de préférence mesurés à l'étape b), et 25 le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste réticulaire quand : 1) (i) le niveau du produit d'expression du gène UCP2 est diminué par rapport à un niveau contrôle, (ii) le niveau du produit d'expression du gène ACAN est augmenté par rapport à un niveau contrôle, 30 (iii) le niveau du produit d'expression du gène FGF9 est augmenté par rapport à un niveau contrôle, et/ou (iv) le niveau du produit d'expression du gène COL11A1 est augmenté par rapport à un niveau contrôle, et 35 2) le niveau du produit d'expression du gène KLF9 est diminué par rapport à un niveau contrôle, 9 les niveaux contrôle de 1(i), 1(ii), 1(iii) et 1(iv) étant de préférence respectivement le niveau du produit d'expression des gènes UCP2, ACAN, FGF9 et COL11A1 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste papillaire et le niveau contrôle de 2) étant de préférence le niveau du produit d'expression du gène KLF9 dans un 5 fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste FJDH. Dans un autre mode de réalisation particulier, le niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2, ACAN, FGF9 et COL11A1, et le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9 sont de préférence mesurés à l'étape b), et 10 le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste de la jonction dermo- hypodermique quand : 1) (i) le niveau du produit d'expression du gène UCP2 est diminué par rapport à un niveau contrôle, (ii) le niveau du produit d'expression du gène ACAN est augmenté par 15 rapport à un niveau contrôle, (iii) le niveau du produit d'expression du gène FGF9 est augmenté par rapport à un niveau contrôle, et/ou (iv) le niveau du produit d'expression du gène COL11A1 est augmenté par rapport à un niveau contrôle, 20 et 2) le niveau du produit d'expression du gène KLF9 est augmenté par rapport à un niveau contrôle, les niveaux contrôle de 1(i), 1(ii), 1(iii) et 1(iv) étant de préférence respectivement le niveau du produit d'expression des gènes UCP2, ACAN, FGF9 et COL11A1 dans un 25 fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste papillaire et le niveau contrôle de 2) étant de préférence le niveau du produit d'expression du gène KLF9 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste réticulaire. Par "niveau augmenté", on entend ici un niveau statistiquement significativement augmenté par rapport au niveau contrôle. De préférence, le niveau augmenté est 30 augmenté d'au moins 1,5 fois, d'au moins 2 fois, d'au moins 2,06 fois, d'au moins 2,5 fois, d'au moins 3 fois, d'au moins 3,2 fois, d'au moins 3,5 fois, d'au moins 4 fois, d'au moins 4,2 fois, d'au moins 4,28 fois, d'au moins 4,5 fois, d'au moins 5 fois, d'au moins 5,5 fois, d'au moins 5,8 fois, d'au moins 5,83 fois, d'au moins 10 fois, d'au moins 15 fois, d'au moins 20 fois, d'au moins 25 fois, d'au moins 28 fois, d'au moins 28,5 fois ou d'au moins 35 28,6 fois par rapport au niveau contrôle tel que défini ci-dessus. 10 Par "niveau diminué", on entend ici un niveau statistiquement significativement diminué par rapport au contrôle. De préférence, le niveau diminué est diminué d'au moins 1,5 fois, d'au moins 2 fois, d'au moins 2,06 fois, d'au moins 2,5 fois, d'au moins 3 fois, d'au moins 3,2 fois, d'au moins 3,5 fois, d'au moins 4 fois, d'au moins 4,2 fois, d'au moins 5 4,28 fois, d'au moins 4,5 fois, d'au moins 5 fois, d'au moins 5,5 fois, d'au moins 5,8 fois, d'au moins 5,83 fois, d'au moins 10 fois, d'au moins 15 fois, d'au moins 20 fois, d'au moins 25 fois, d'au moins 28 fois, d'au moins 28,5 fois ou d'au moins 28,6 fois par rapport au niveau contrôle tel que défini ci-dessus. De préférence, le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste 10 papillaire quand : (i) le niveau du produit d'expression du gène UCP2 est augmenté d'au moins 5 fois, en particulier d'au moins 5,5 fois, d'au moins 5,8 fois ou d'au moins 5,83 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci-dessus, en particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène UCP2 dans un fibroblaste dermique connu comme étant 15 un fibroblaste réticulaire, et/ou (ii) le niveau du produit d'expression du gène FGF9 est diminué d'au moins 4 fois, en particulier d'au moins 4,2 fois ou d'au moins 4,28 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci-dessus, en particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène FGF9 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste réticulaire. 20 De préférence encore, le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste papillaire quand : 1) (i) le niveau du produit d'expression du gène UCP2 est augmenté d'au moins 5 fois, en particulier d'au moins 5,5 fois, d'au moins 5,8 fois ou d'au moins 5,83 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci-dessus, en 25 particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène UCP2 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste réticulaire, et/ou (ii) le niveau du produit d'expression du gène FGF9 est diminué d'au moins 4 fois, en particulier d'au moins 4,2 fois ou d'au moins 4,28 fois par rapport 30 à un niveau contrôle tel que défini ci-dessus, en particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène FGF9 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste réticulaire, et 2) (iii) le niveau du produit d'expression du gène COL11A1 est diminué d'au 35 moins 25 fois, en particulier d'au moins 28 fois, d'au moins 28,5 fois ou d'au moins 28,6 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci-dessus, en 11 particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène COL11A1 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste réticulaire, et/ou (iv) le niveau du produit d'expression du gène ACAN est diminué d'au 5 moins 3 fois, en particulier d'au moins 3,2 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci-dessus, en particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène ACAN dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste réticulaire. De préférence, le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste 10 réticulaire ou un fibroblaste FJDH quand : 1) (i) le niveau du produit d'expression du gène UCP2 est diminué d'au moins 5 fois, en particulier d'au moins 5,5 fois, d'au moins 5,8 fois ou d'au moins 5,83 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci-dessus, en particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène UCP2 15 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste papillaire, (ii) le niveau du produit d'expression du gène ACAN est augmenté d'au moins 3 fois, en particulier d'au moins 3,2 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci-dessus, en particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène ACAN dans un fibroblaste dermique connu 20 comme étant un fibroblaste papillaire, (iii) le niveau du produit d'expression du gène FGF9 est augmenté d'au moins 4 fois, en particulier d'au moins 4,2 fois ou d'au moins 4,28 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci-dessus, en particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène FGF9 dans un 25 fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste papillaire, et/ou (iv) le niveau du produit d'expression du gène COL11A1 est augmenté d'au moins 25 fois, en particulier d'au moins 28 fois, d'au moins 28,5 fois ou d'au moins 28,6 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci-dessus, en particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène COL11M 30 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste papillaire. De préférence, le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste FJDH quand en outre : 2) le niveau du produit d'expression du gène KLF9 est augmenté d'au moins 2 fois, en particulier d'au moins 2,06 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci- 35 dessus, en particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène KLF9 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste réticulaire. 12 De préférence, le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste réticulaire quand en outre : 2) le niveau du produit d'expression du gène KLF9 est diminué d'au moins 2 fois, en particulier d'au moins 2,06 fois par rapport à un niveau contrôle tel que défini ci- 5 dessus, en particulier par rapport au niveau du produit d'expression du gène KLF9 dans un fibroblaste dermique connu comme étant un fibroblaste FJDH. La présente invention concerne également l'utilisation d'un produit d'expression, tel que défini ci-dessus, d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2 10 et FGF9 et éventuellement des gènes COL11A1 et ACAN, éventuellement en combinaison avec un produit d'expression du gène KLF9, comme marqueur pour identifier in vitro un fibroblaste dermique, tel que défini dans la section "Fibroblastes" ci-dessus, comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH). 15 Kit et puce La présente invention a également pour objet un kit pour identifier un fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH), ledit kit comprenant : 20 - au moins un moyen de mesure choisi dans le groupe constitué d'un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène UCP2, d'un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène FGF9, d'un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène COL11A1 et d'un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène ACAN, 25 et - au moins un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène KLF9. Le kit peut en particulier comprendre, comme composants séparés, des anticorps reconnaissant les protéines codées par lesdits gènes dans un échantillon biologique tel 30 que défini ci-dessus. Le kit peut comprendre, comme composants séparés, des amorces et/ou sondes s'hybridant spécifiquement aux ARNm codés par lesdits gènes. Le kit peut en outre comprendre des composants additionnels optionnels pour mettre en oeuvre la méthode d'identification selon l'invention. De tels composants optionnels sont par exemple des conteneurs, mélangeurs, tampons, instructions pour 35 mettre en oeuvre la méthode, marqueurs ou supports. 13 Le kit selon l'invention peut en outre comprendre un contrôle ou plusieurs contrôles à partir du(des)quel(s) le niveau contrôle, tel que défini à la section "Méthode d'identification" ci-dessus, peut être obtenu. 5 La présente invention a également pour objet une puce à ADN pour identifier un fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH), ladite puce comprenant : - au moins une sonde choisie dans le groupe constitué d'une sonde détectant un produit d'expression du gène UCP2, une sonde détectant un produit d'expression du gène 10 FGF9, une sonde détectant un produit d'expression du gène COL11A1 et une sonde détectant un produit d'expression du gène ACAN, et - au moins une sonde détectant un produit d'expression du gène KLF9. Par "puce à ADN", on entend ici un arrangement ordonné d'au moins deux sondes 15 sur un substrat. De préférence, la puce à ADN selon l'invention comprend en outre une sonde contrôle ou standard. Par "sonde", on entend ici un oligonucléotide ou polynucléotide, ARN ou ADN, qui existe naturellement comme dans un produit de digestion purifié d'une enzyme de restriction ou qui est produit de manière synthétique, et qui est capable de s'hybrider 20 spécifiquement avec un polynucléotide portant une séquence complémentaire de celle de la sonde. La sonde peut être simple brin ou double brin. De préférence, la sonde comprend ou consiste en 10 à 100 nucléotides, de préférence 15 à 50 nucléotides ou 15 à 25 nucléotides. 25 Equivalents de derme et de peau Les inventeurs ont identifié pour la première fois une nouvelle sous-population de fibroblastes dermiques : les fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique. L'utilisation de ces nouveaux fibroblastes dans des équivalents de derme permet donc de mimer encore plus précisément un derme normal. 30 La présente invention a donc également pour objet un équivalent de derme in vitro comprenant une sous-population de fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique (FJDH), tels que définis à la section "Fibroblastes" ci-dessus. L'équivalent de derme selon l'invention comprend en outre de préférence une sous-population de fibroblastes papillaires et/ou une sous-population de fibroblastes 35 réticulaires, tels que définis à la section "Fibroblastes" ci-dessus. 14 L'équivalent de derme selon l'invention comprend de préférence en outre du collagène. Le collagène présent dans l'équivalent de derme selon l'invention peut être tout type de collagène de toute origine. De préférence, le collagène est choisi parmi les 5 collagènes fibrillaires de type I, III ou V. De préférence, le collagène est du collagène de type I. De préférence, le collagène est d'origine animale, en particulier d'origine bovine. De manière particulièrement préférée, le collagène est du collagène bovin de type I. Alternativement, le collagène peut être un mélange de collagène de différents types en toute proportion et/ou de différentes origines. 10 Les fibroblastes présents dans l'équivalent de derme selon l'invention peuvent provenir de toute origine, mais sont de préférence des fibroblastes d'origine humaine. Les fibroblastes présents dans l'équivalent de derme selon l'invention proviennent de préférence d'une culture de fibroblastes dont une partie a été utilisée pour mettre en oeuvre la méthode d'identification selon l'invention, permettant ainsi d'identifier l'ensemble 15 de la culture comme étant une culture de fibroblastes papillaires, réticulaires ou FJDH. L'équivalent de derme selon l'invention peut également contenir tout autre composant pouvant être présent constitutivement dans la peau comme des cellules endothéliales, des macrophages, des monocytes, des précurseurs de macrophages, des 20 précurseurs de cellules dendritiques ou des cellules nerveuses. La présente invention concerne également un procédé de préparation d'un équivalent de derme tel que défini ci-dessus comprenant une étape initiale d'identification de fibroblastes dermiques comme étant des fibroblastes FJDH, comprenant les étapes 25 suivantes : A) la fourniture d'une culture homogène de fibroblastes dermiques, B) le prélèvement d'une partie de la culture de fibroblastes dermiques fournie à l'étape A), C) l'identification de la partie de la culture de fibroblastes dermiques prélevée à 30 l'étape B) comme étant une culture de fibroblastes FJDH en mettant en oeuvre la méthode d'identification telle que définie à la section "Méthode d'identification" ci-dessus, et D) l'utilisation de la partie de la culture de fibroblastes dermiques non prélevée à l'étape B) pour préparer un équivalent de derme. 35 La préparation de l'équivalent de derme à l'étape D) peut être mise en oeuvre par toute technique bien connue de l'homme du métier. 15 La préparation de l'équivalent de derme à l'étape D) peut ainsi comprendre une étape de préparation d'une lattice comprenant du collagène et une suspension cellulaire de fibroblastes FJDH, et éventuellement une suspension cellulaire de fibroblastes papillaires et/ou réticulaires. 5 Comme indiqué précédemment, le collagène utilisé peut être tout type de collagène, de toute origine, seul ou en mélange. De préférence, la lattice comprend des fibroblastes à une concentration de 1x105 à 5x106 cellules / ml, de préférence à une concentration de 2x105 à 2x106 cellules / ml. La lattice peut être préparée par toute technique bien connue de l'homme du 10 métier. En particulier, une solution comprenant du collagène et les fibroblastes dermiques peut être préparée et déposée sur un support. De préférence, la solution est incubée de manière à permettre la gélification du collagène, par exemple pendant 10 à 30 min, puis maintenue à incuber pour permettre 15 contraction de la lattice. De préférence, la lattice est ainsi maintenue à incuber pendant 1 à 7 jours, de manière encore préférée pendant 3 ou 4 jours. Dans la mesure où le contenu dermique influence le compartiment épidermique, 20 l'équivalent de derme selon l'invention peut servir de support pour la formation d'un équivalent de peau. La présente invention concerne ainsi également un équivalent de peau in vitro comprenant un équivalent de derme tel que défini ci-dessus. L'équivalent de peau selon l'invention comprend, sur l'équivalent de derme, un 25 équivalent d'épiderme comprenant au moins des kératinocytes. Les kératinocytes peuvent provenir de toute origine mais sont préférentiellement des kératinocytes d'origine humaine. Ils peuvent être préparés par n'importe quelle méthode bien connue de l'homme du métier. Ainsi, les kératinocytes peuvent être préparés par culture d'épiderme dissocié provenant de prélèvement de peau normale ou 30 par culture de kératinocytes issus de la gaine du follicule pileux. De préférence, les kératinocytes sont des kératinocytes de peau humaine normale. De manière encore préférée, les kératinocytes sont préparés à partir d'épiderme humain dissocié provenant de prélèvement de peau humaine normale selon la méthode 35 décrite dans Régnier et al., Frontier of Matrix Biology, Vol. 9, 4-35 (Karger, Basel, 1981). 16 L'équivalent d'épiderme peut comprendre tout autre type cellulaire, tel que des cellules de Langerhans et/ou des précurseurs de cellules de Langerhans et/ou des mélanocytes. De manière avantageuse, l'équivalent d'épiderme comprend en outre des 5 mélanocytes, et/ou des cellules de Langerhans et/ou des précurseurs de cellules de Langerhans. Les mélanocytes peuvent être isolés à partir de tout organe en contenant tel que la peau normale ou le follicule de cheveu. Préférentiellement, les mélanocytes sont isolés à partir de peau normale. Toute méthode de préparation des mélanocytes connue de 10 l'homme du métier peut être utilisée, telle que la méthode décrite dans Olsson et aL (1994) Acta. Derm. Venereol. 74:226-268. Les cellules de Langerhans et/ou les précurseurs de cellules de Langerhans peuvent être tels que décrits dans la demande de brevet européen EP 789074. 15 La présente invention concerne également un procédé de préparation d'un équivalent de peau tel que défini ci-dessus comprenant une étape de préparation d'un équivalent de derme par le procédé de préparation d'équivalent de derme tel que défini ci-dessus. De préférence, le procédé de préparation d'un équivalent de peau comprend, 20 après l'étape de préparation de l'équivalent de derme, une étape de reconstitution, sur l'équivalent de derme, d'un équivalent d'épiderme comprenant au moins des kératinocytes. Cette étape de reconstitution d'un équivalent d'épiderme peut être réalisée par toute technique bien connue de l'homme du métier, telle que les techniques décrites dans 25 les demandes de brevet EP 285471, EP285474, EP789074, EP502172, EP418035, W091/16010, EP197090, EP20753, FR2665175, FR2689904 ou celle décrite dans Asselineau et aL (1985) Exp. Cell. Res. 159:536-539, dans Asselineau et aL (1987), Models in dermato., col III, Ed. Lowe&Mailbach, 1-7 ou dans Asselineau et aL (1984) Br J Dermatol. 111 Suppl 27:219-22. 30 Cette étape de reconstitution peut être avantageusement précédée d'une étape de collage, dans une boite de culture, de l'équivalent de derme préparé, par exemple avec une solution de colle comprenant du milieu MEM 1,76X, du SVF, du NaOH 0,1N et du MEM 25 mM Hepes 10% SVF. De préférence, l'étape de reconstitution est mise en oeuvre par ensemencement 35 de kératinocytes sur l'équivalent de derme, de préférence dans un anneau d'ensemencement. 17 Avantageusement, après ensemencement des kératinocytes sur l'équivalent de derme, la culture peut être maintenue immergée dans un milieu nutritif qui peut être par exemple le milieu décrit par Rheinwald et Green (1975) Cell 6:317-330, milieu qui permet la prolifération des kératinocytes. 5 Après un temps d'incubation de préférence de 3 à 15 jours, de manière davantage préférée de 7 à 9 jours, l'équivalent de peau est de préférence maintenu à l'interface air/liquide par exemple par dépôt sur une grille métallique. Le liquide est alors préférentiellement constitué du même milieu nutritif que précédemment. L'incubation se poursuit alors ensuite de préférence jusqu'à l'obtention d'un 10 équivalent de peau présentant les caractéristiques d'une peau, à savoir un équivalent de derme recouvert d'un équivalent d'épiderme présentant les quatre types de couches cellulaires classiques, à savoir les couches basale, suprabasale, granuleuse et cornée. Ainsi, l'incubation se poursuit de préférence pendant une durée comprise entre 5 et 30 jours, de préférence entre 7 et 10 jours. 15 Utilisations La présente invention concerne également l'utilisation d'un équivalent de derme tel que défini à la section "Equivalent de derme et de peau" ci-dessus ou d'un équivalent de peau tel que défini à la section "Equivalent de derme et de peau" ci-dessus, pour étudier 20 les fonctions de la peau. La présente invention concerne également un procédé de criblage d'un composé présentant une activité cosmétique après application topique sur la peau, en particulier dans le domaine de l'anti-âge comme pour le traitement des rides et ridules, et/ou dans le domaine de l'inflammation et/ou dans le domaine de la pigmentation comme par exemple 25 pour le traitement des taches pigmentaires, ledit procédé de criblage comprenant l'application d'un composé candidat sur l'équivalent de derme selon l'invention ou l'équivalent de peau selon l'invention. Dans toute la description ci-dessus, sauf mention contraire, le terme "compris(e) 30 entre x et y" ou "allant de x à y" correspond à une gamme inclusive, c'est-à-dire que les valeurs x et y sont incluses dans la gamme. La présente invention sera illustrée plus en détail par l'exemple ci-dessous. 35 Exemple 18 L'exemple ci-dessous montre l'isolement de la nouvelle sous-population de fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique par les inventeurs et l'identification de signatures moléculaires pour les sous-populations de fibroblastes existant dans le derme. 5 Matériel et méthodes Préparation des cellules Les fibroblastes papillaire (Fp), réticulaire (Fr) et de la jonction dermohypodermique (F-JDH) ont été isolés à partir de peau humaine non dégraissée. Ces prélèvements sont collectés après réduction mammaires pour cause esthétique. Six 10 femmes ont été incluses. L'isolement des F-JDH se fait à partir des travées conjonctives présentes à la jonction dermo-hypodermique. Ces dernières sont prélevées à l'aide d'une pince et de ciseaux. L'isolement des Fr s'effectue sur la partie de tissu ainsi déplétée de sa jonction 15 dermo-hypodermique. Le tissu est alors dermatomé à hauteur de 700 pm. Seule la partie inférieure du tissu est conservée. L'isolement des Fp s'effectue sur tissu dermatomé à 300 pm puis dé-épidermisé après action de dispase (Roche - 2,4 Unité/ml) pendant 16h à 4°C. 20 Après dilacération, les fragments de derme sont digérés sous l'action de collagénase de type II à 0,2% (Gibco) à 37°C. Les cellules sont ensuite amplifiées en milieu MEM - 10% sérum de veau foetal complémenté en Glutamine, sodium pyruvate, acide-aminés non essentiel, penicilline, streptomycine et fungizone, sous atmosphère humide, à 37°C et 5% de CO2. 25 Analyse transcriptomique et RT-qPCR Après expansion des cellules (entre 7 et 10 doublements de population), les ARNm sont extraits sur colonne QIAgen selon les consignes données par le fournisseur. Les échantillons ont été divisés en 2 : une partie a été réservée à l'analyse 30 transcriptomique, l'autre partie a été utilisée pour la validation de biomarqueurs par PCR. L'étude transcriptomique a été réalisé sur puce Affymetrix de type GeneChip HG-U133 Plus 2.0. Les probes sets considérés comme différentiellement exprimés devaient présenter un fold change > à 2 pour une p-value non-ajusté REVENDICATIONS1. Méthode in vitro d'identification d'un fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH), comprenant les étapes suivantes : a) fournir un échantillon biologique comprenant au moins un fibroblaste dermique, b) mesurer le niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2 et FGF9 et éventuellement des gènes COL11A1 et ACAN, et éventuellement le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9, et c) sur la base du ou des niveau(x) mesuré(s) à l'étape b), identifier le fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH). 2. Méthode selon la revendication 1, dans lequel le niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2 et FGF9 est mesuré à l'étape b), et dans lequel le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste papillaire quand : (i) le niveau du produit d'expression du gène UCP2 est augmenté par rapport à un niveau contrôle, et/ou (ii) le niveau du produit d'expression du gène FGF9 est diminué par rapport à un niveau contrôle. 3. Méthode selon la revendication 1, dans lequel le niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2, ACAN, FGF9 et COL11A1, et le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9 sont mesurés à l'étape b), et dans lequel le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste réticulaire quand : 1) (i) le niveau du produit d'expression du gène UCP2 est diminué par rapport à un niveau contrôle, (ii) le niveau du produit d'expression du gène ACAN est augmenté par rapport à un niveau contrôle, (iii) le niveau du produit d'expression du gène FGF9 est augmenté par rapport à un niveau contrôle, et/ou 22 (iv) le niveau du produit d'expression du gène COL11A1 est augmenté par rapport à un niveau contrôle, et 2) le niveau du produit d'expression du gène KLF9 est diminué par rapport à un 5 niveau contrôle. 4. Méthode selon la revendication 1, dans lequel le niveau d'un produit d'expression d'au moins un gène choisi dans le groupe constitué des gènes UCP2, ACAN, FGF9 et COL11A1, et le niveau d'un produit d'expression du gène KLF9 sont mesurés à l'étape b), 10 et dans lequel le fibroblaste dermique est identifié comme étant un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique quand : 1) (i) le niveau du produit d'expression du gène UCP2 est diminué par_ rapport à un niveau contrôle, 15 (ii) le niveau du produit d'expression du gène ACAN est augmenté par rapport à un niveau contrôle, (iii) le niveau du produit d'expression du gène FGF9 est augmenté par rapport à un niveau contrôle, et/ou (iv) le niveau du produit d'expression du gène COL11A1 est augmenté par 20 rapport à un niveau contrôle, et 2) le niveau du produit d'expression du gène KLF9 est augmenté par rapport à un niveau contrôle. 25 5. Procédé de préparation d'un équivalent de derme in vitro comprenant une sous-population de fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique (FJDH) ledit procédé comprenant une étape initiale d'identification de fibroblastes dermiques comme étant des fibroblastes FJDI-1, comprenant les étapes suivantes : 30 A) la fourniture d'une culture homogène de fibroblastes dermiques, B) le prélèvement d'une partie de la culture de fibroblastes dermiques fournie à l'étape A), C) l'identification de la partie de la culture de fibroblastes dermiques prélevée à l'étape B) comme étant une culture de fibroblastes FJDH en mettant en oeuvre la 35 méthode d'identification telle que définie selon les revendications 1 ou 4, et 23 D) l'utilisation de la partie de la culture de fibroblastes dermiques non prélevée à l'étape B) pour préparer un équivalent de derme. 6. Kit pour identifier un fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un 5 fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH), ledit kit comprenant : - au moins un moyen de mesure choisi dans le groupe constitué d'un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène UCP2, un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène FGF9, un moyen de mesure du niveau d'un 10 produit d'expression du gène COL11A1 et un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène ACAN, et - au moins un moyen de mesure du niveau d'un produit d'expression du gène KLF9. 15 7. Puce à ADN pour identifier un fibroblaste dermique comme étant un fibroblaste papillaire, un fibroblaste réticulaire ou un fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique (FJDH), ladite puce comprenant : - au moins une sonde choisie dans le groupe constitué d'une sonde détectant un 20 produit d'expression du gène UCP2, une sonde détectant un produit d'expression du gène FGF9, une sonde détectant un produit d'expression du gène COL11A1 et une sonde détectant un produit d'expression du gène ACAN, et - au moins une sonde détectant un produit d'expression du gène KLF9.