Brevet FR3066114A1 — publié le 20181116

COMPOSITION COMPRENANT UN EXTRAIT AQUEUX D'ANETHUM GRAVEOLENS ENRICHI EN PETITS ARN ET SES UTILISATIONS COSMETIQUES L'invention concerne un procédé d'obtention d'un extrait d'Anethum graveolens aqueux enrichi en petits ARN (acides ribonucléiques) d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides (nt) ainsi que les extraits obtenus par le procédé et les compositions cosmétiques comprenant de tels extraits et leurs utilisations cosmétiques. La famille des Apiacées (Aplaceae), appelées aussi Ombellifères, est constituée de plantes dicotylédones et comprend près de 3000 espèces réparties en 420 genres surtout présentes dans les régions tempérées du monde. Cette famille inclut aussi des herbes comme le persil, la coriandre, le fenouil. Anethum graveolens, fait partie de la famille des Aplaceae. Son nom d'espèce admet plusieurs synonymes tels que Anethum sowa, Peucedanum graveolens et Peucedanum sowa (Janeen et al ; The Herb Society of America's Essential Guide to Dill. Kirtland, Ohio: The Herb Society of America, 2009). L'aneth odorant (Anethum graveolens) est largement répandue dans le monde et est une espèce très riche en différentes familles de molécules telles que des huiles essentielles, des acides gras, des protéines, des carbohydrates, de la furanocoumarine, des polyphénols, des minéraux et encore beaucoup d'autres molécules biologiquement actives. Elle est notamment très utilisée en médecine traditionnelle. Le nom de l'aneth dérive d'un mot grec «aneeson» ou « aneeton » et signifie « forte odeur ». Cette plante a une histoire longue et ancienne dans de nombreux pays comme une herbe culinaire et médicinale. Son utilisation est commune en médecine ayurvédique (médecines traditionnelles de l'Inde), principalement pour lutter contre l'inconfort abdominal et l'indigestion) (Jana et Shekhawat Shekhawat GS. Phytochemical Analysis and Antibacterial Screening of in vivo and in vitro Extracts of Indian Medicinal Herb: Anethum graveolens. Res. J. Med. Plant. 2010a; 4(4):206-212. 2010; Janeen et al., The Herb Society of America's Essential 3066114 2 Guide ta Dili. Kirtland, Ohio: The Herb Society of America, 2009). En France et dans plusieurs autres pays de l'Europe de l'ouest cette plante fait partie de nombreuses préparations médicinales traditionnelles pour ses propriétés digestives et 5 fortifiantes qui subsistent encore aujourd'hui. La littérature scientifique décrit notamment des effets antimicrobien, anti-inflammatoire, analgésique, une protection des muqueuses respiratoires et des effets comme relaxant musculaire. De nombreux extraits de graines d'aneth sont décrits dans la 10 littérature en partie pour l'utilisation de ses huiles essentielles, en revanche peu d'études ont été réalisées sur des extraits issus des parties aériennes de l'aneth. De plus la plupart des extractions décrites d'aneth sont effectuées avec des solvants organiques de type apolaire et peu sont issus 15 d'extraction avec un solvant polaire comme l'eau. De plus très peu de ces extraits sont revendiqués pour une utilisation cosmétique. Malgré les différents produits cosmétiques anti-âge sur le marché pour le traitement de la peau, il reste un besoin de 20 compositions cosmétiques efficaces appliquées topiquement qui présentent des effets anti-âges pour la peau et les cheveux en utilisant des ingrédients naturels comme agent actif. Les produits dits « non naturels » et synthétisés chimiquement peuvent être perçus comme dangereux pour l'environnement ainsi 25 que pour les personnes. En revanche, les produits naturels sont perçus comme supérieurs aux produits synthétisés chimiquement. De nombreux produits naturels extraits de plantes ou d'herbes sont connus pour contenir des agents antioxydants / radicaux libres qui peuvent neutraliser les effets des dégâts des radicaux 30 libres tels que les polyphénols. L'aneth est une plante très riche en composés phénoliques et d'autres familles de molécules reconnues pour leurs effets bénéfiques sur la peau. En particulier, le procédé d'extraction décrit dans l'invention 3066114 3 permet d'enrichir l'extrait final avec des ARN de petit poids moléculaire. Les protocoles d'extraction des acides ribonucléiques (ARN de petit poids moléculaire) classiquement décrits sont adaptés 5 aux pratiques de laboratoire, et donc réalisés à petite échelle. Ils utilisent des solvants qui ne sont pas considérés comme des solvants cosmétiques (Zumbo, P. 2014 "Phenol-chloroform Extraction", 2014). De plus, ces protocoles d'extraction et purification ne permettent d'obtenir que la fraction d'acides 10 nucléiques purifiée. Cette fraction d'acides nucléiques ARN ou ADN ou petits ARN est dépourvue de toute autre molécule d'intérêt telle que les métabolites secondaires, vitamines, sucres, peptides, etc. qui peuvent avoir des effets bénéfiques pour la peau et présentent donc un intérêt cosmétique. 15 L'invention a pour premier objet un procédé d'obtention d'un extrait aqueux d'Anethum graveolens enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides à partir d'une matière végétale comprenant les étapes suivantes : a) Solubilisation des parties aériennes d'aneth avec de 20 l'eau ; b) auquel on ajoute de l'acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA) tétrasodique dans le mélange obtenu en a), le pH du mélange étant compris entre 10,5 et 11 ; c) on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une 25 valeur comprise entre 6 et 8 ; d) on purifie le mélange obtenu en séparant la matière soluble de celle qui est insoluble c) de manière à récupérer un extrait brut aqueux ; et e) on réalise au moins une filtration de l'extrait brut 30 aqueux pour obtenir l'extrait aqueux enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides dont le pH est contrôlé et si nécessaire réajusté à une valeur comprise entre 6 et 8, préférentiellement entre 6 et 6,5. 3066114 4 De plus, l'invention a pour deuxième objet un extrait aqueux des parties aériennes d'Anethum graveolens enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides et dépourvu d'ADN, obtenu par le procédé selon l'invention, caractérisé en ce qu'il 5 comprend en poids du poids total de l'extrait, de 5 à 30 g/kg d'extrait sec, 0,5 à 10 g/kg de fragments protéiques, 0,5 à 10 g/kg de sucres, 0,1 à 3 g/kg d'acides aminés, 50 à 2000 mg/kg de composés phénoliques et 10 à 100 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. 10 L'invention a pour troisième objet une composition comprenant, en tant qu'agent actif anti-âge, un extrait selon l'invention, et un milieu physiologiquement acceptable. L'invention a plus particulièrement pour objet une composition cosmétique comprenant, en tant qu'agent actif, dans 15 un milieu physiologiquement acceptable, une quantité efficace d'un extrait aqueux des parties aériennes d'aneth (Anethum graveolens) enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides obtenu à partir d'une matière végétale suivant les étapes suivantes selon lesquelles : 20 a) on met en présence des parties aériennes d'Anethum graveolens avec de l'eau ; b) on ajoute de l'acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA) tétrasodique dans le mélange obtenu en a) à un pH compris entre 10,5 et 11 ; 25 c) on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une valeur comprise entre 6 et 8 ; d) on purifie le mélange obtenu en c) de manière à éliminer la matière végétale solide résiduelle et obtenir un extrait brut aqueux purifié ; et 30 e) on contrôle le pH et on le réajuste si nécessaire à une valeur comprise entre 6 et 8, préférentiellement entre 6 et 6,5. L'invention a également pour objet l'utilisation cosmétique d'une composition selon l'invention pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères. 3066114 5 L'invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la lecture de la description et des modes de réalisation non limitatifs qui suivent, au regard des dessins annexés dans lesquels : 5 - la Figure 1 est un graphique résultant d'une analyse au BioanalyseurED représentant la quantification des ARN d'un extrait d'aneth provenant de Chine d'Himalaya obtenu selon l'exemple 5 ; - la Figure 2 représente un graphique résultant d'une 10 analyse au BioanalyseurED représentant la quantification des ARN d'un extrait d'aneth provenant de Chine d'Himalaya obtenu après étape de précipitation des petits ARN selon l'exemple 6 ; - la Figure 3 représente un graphique résultant d'une analyse au BioanalyseurED représentant la quantification des ARN 15 d'un extrait d'aneth provenant de Chine d'Himalaya obtenu par extraction conventionnelle selon l'exemple 7 ; - la Figure 4 représente la quantification de la longueur des fibres après marquage immunofluorescent de l'élastine sur peau ex vivo traitée pendant 72h avec différents extraits d'aneth 20 à 1% ; - la Figure 5 représente la quantification du marquage de l'acide hyaluronique (HA) sur peau ex vivo traitée pendant 72h avec différents extraits d'aneth à 1% ; et - la Figure 6 représente la quantification du marquage de 25 p16 sur peau ex vivo traitée pendant 48h avec différents extraits d'aneth à 1%. L'invention concerne un procédé mis en oeuvre pour l'obtention d'un extrait aqueux enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides à partir des parties 30 aériennes séchées ou fraiches d'aneth. L'invention concerne plus particulièrement une composition cosmétique comprenant, en tant qu'agent actif, dans un milieu physiologiquement acceptable, une quantité efficace d'un extrait aqueux des parties aériennes d'aneth (Anethum graveolens) 3066114 6 enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides obtenu à partir d'une matière végétale suivant les étapes du procédé selon l'invention. Par aneth (Anethum graveolens), on entend par exemple les 5 espèces provenant d'Himalaya, d'Egypte et de Chine non himalayenne ; préférentiellement l'extrait est obtenu à partir d'aneth d'Himalaya. Par « parties aériennes » on entend les feuilles, tiges et fleurs de l'aneth. 10 Les graines ne sont pas comprises dans les « parties aériennes » au sens de l'invention. Dans le cours de la description les termes « aneth » et « Anethum graveolens » seront utilisées indifféremment, avec la même signification. 15 Par « petits ARN » ou « ARN de petit poids moléculaire », on entend des ARN (acides ribonucléiques) non codants de petit poids moléculaire, d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, tels que tous types de petits ARN non messager, simple et/ou double brins, par exemple les micro-ARN, les ARN interférents, 20 les introns, les petits ARN nucléaires ou encore tous fragments d' ARN. Dans une première étape a) du procédé selon l'invention, on met en présence la matière végétale soit les parties aériennes broyées séchées d'aneth avec de l'eau, préférentiellement dans 25 un rapport matière végétale / eau de 4 à 20% en poids/poids, plus préférentiellement dans un rapport de 5 à 10%, par exemple dans un rapport de 5,7 ou 10 en poids/poids. L'eau utilisée est une eau distillée, déminéralisée ou encore une eau riche en sels minéraux et/ou oligo-éléments, 30 préférentiellement une eau distillée. De préférence les parties aériennes de l'aneth sont sous forme sèche. Préférentiellement, la matière végétale est broyée avant d'être mise en présence d'eau dans l'étape a). Le broyage est 3066114 7 une action mécanique qui permet une meilleure extraction. Le broyage mécanique, suivi d'une lyse alcaline en présence d'EDTA favorise la complète déstructuration de la membrane cellulaire et notamment de la membrane nucléaire. 5 On ajoute ensuite dans une étape b) de l'EDTA tétrasodique dans le mélange obtenu en a). Le pH à cette étape est basique et doit être ajusté, si nécessaire, à une valeur comprise entre 10,5 et 11 par l'ajout de soude (NaOH) . Lors de l'étape b) il est essentiel de maintenir le pH basique entre 10,5 et 11. En 10 effet, ce niveau de pH, associé à l'action de l'EDTA, provoque la déstructuration de la membrane cellulaire, y compris la membrane nucléaire, la lyse des cellules et la dénaturation de l'ADN (les 2 brins de la double hélice sont séparés). Le contrôle du pH lors de l'étape b) montre que celui-ci reste basique et se 15 stabilise entre 9 et 11. La concentration en EDTA tétrasodique est préférentiellement comprise entre 2 et 15 mM, et plus préférentiellement de 10 mM. Cette concentration est choisie pour optimiser le rendement 20 d'extraction des ARN de petit poids moléculaire dans l'extrait final. L'EDTA tétrasodique va fragiliser, déstructurer les membranes pecto-cellulosiques des cellules végétales en séquestrant par complexation les ions divalents tels que les ions calcium qui forment des ponts ioniques entre les molécules 25 de pectines entourant les microfibrilles de cellulose. Ceci a pour conséquence de favoriser la libération du contenu cellulaire au cours de l'extraction. L'étape de traitement par EDTA est essentielle pour enrichir l'extrait en ARN de petit poids moléculaire. 30 L'étape de traitement par l'EDTA dure préférentiellement au moins lh, à une température comprise entre 20 et 80°C. Pendant cette étape, le mélange obtenu en a) est avantageusement mis sous agitation. 3066114 8 Dans une étape c), on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une valeur comprise entre 6 et 8. Par exemple, on ajuste le pH par ajout d'une solution d'acide chlorhydrique (HC1) ou encore n'importe quel acide 5 pouvant réguler le pH qui soit compatible avec une utilisation cosmétique tel que l'acide citrique ou lactique. Cette étape d'acidification provoque la renaturation brutale de l'ADN (réappariement des brins du duplex). Néanmoins l'ADN chromosomique, très long, ne parvient pas à se réapparier 10 complètement et forme des enchevêtrements insolubles. Au contraire, les petits ARN, beaucoup plus courts, restent en solution. L'ADN et les petits ARN sont ainsi séparés en deux phases distinctes ; une phase solide contenant entre autres l'ADN chromosomique, et une phase liquide contenant, entre 15 autres, les petits ARN. Dans une étape d) on purifie le mélange obtenu en c) de manière à éliminer la matière végétale et récupérer un extrait brut aqueux. Toute méthode connue par l'homme du métier pourra être utilisé. Préférentiellement le mélange obtenu en c) est 20 centrifugé à faible vitesse, par exemple pendant au moins 10 min à 4000 g, de manière à sédimenter la matière végétale résiduelle dans le culot et récupérer un extrait brut aqueux dans le surnageant. Dans une étape d) on contrôle le pH et on le réajuste à une 25 valeur comprise entre 6 et 8. Préférentiellement le pH est réajusté à une valeur comprise entre 6 et 6,5, encore plus préférentiellement à 6,5. Le pH est réajusté par l'ajout d'une solution d'acide chlorhydrique (HC1) ou de soude (NaOH) En effet, un pH inférieur à 6 peut entrainer la 30 précipitation des acides nucléiques en général, donc celle des ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. 3066114 9 L'étape d'ajustement du pH à l'étape d) du procédé selon l'invention est une étape indispensable à l'extraction optimale des ARN de petit poids moléculaire. Avantageusement le réajustement du pH de l'étape d) est 5 précédé par au moins une filtration de l'extrait brut aqueux obtenu en d). Préférentiellement des filtrations successives seront réalisées en abaissant le seuil de filtration de 50 à 20 pm jusqu'à 0,4, 0,3, 0,2, ou 0,1 pm. L'invention a pour deuxième objet un extrait aqueux d'aneth 10 enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides de l'invention obtenu par le procédé décrit ci-dessus. Cet extrait ne contient pas d'ADN (acide désoxyribonucléique). Un tel extrait aqueux enrichi en petits ARN d'une longueur 15 d'au maximum 150 nucléotides comprend, avant dilution, en poids du poids total de l'extrait, 10 à 30 g/kg d'extrait de poids sec, 2 à 10 g/kg de fragments protéiques, 2 à 10 g/kg de sucres, 0,2 à 3 g/kg d'acides aminés, 100 à 2000 mg/kg de composés phénoliques et 10 à 100 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire 20 d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. L'extrait ainsi obtenu est considéré comme concentré. Il peut être ensuite dilué dans un solvant physiologiquement acceptable pour un usage cosmétique, de telle sorte que la concentration de l'extrait est alors ajustée à un poids en extrait sec particulier d'intérêt. 25 A titre d'exemples illustratifs et non limitatifs de solvants physiologiquement acceptables, on peut citer l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propanediol ainsi que sa version naturelle appelée Zemea® issue du maïs, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les 30 polyols cycliques ou tout mélange de ces solvants. Préférentiellement, l'extrait obtenu par le procédé selon l'invention est dilué dans un solvant tel que 30% de glycérol et de l'eau, et comprend en poids du poids total de l'extrait. L'extrait obtenu par le procédé selon l'invention comprend en 3066114 10 outre de 5-15 g/kg d'extrait sec, de 50 à 1000 mg/kg de polyphénols 0,5-10 g/kg de fragments protéiques, 0,5-10 g/kg de sucres, de 0,1 à 1 g/kg d'acides aminés et 10-100 mg/kg de petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. 5 A titre illustratif, des exemples préférés de mode de réalisation du procédé selon l'invention sont décrits ci-dessous. Exemple 1 : Préparation d'un extrait d'aneth (Anethum 10 graveolens) de la famille des Aplaceae, enrichi en petits ARN Un extrait aqueux enrichi en ARN de petit poids moléculaire (d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides) est obtenu à partir d'aneth (Anethum graveolens) de la famille des Aplaceae. Dans une première étape, 5% de parties aériennes séchées 15 d'aneth sous forme de poudre sont placés dans de l'eau distillée et 10 mM d'EDTA tétrasodique sont ajoutés, soit 50 g de poudre d'aneth séchée dans 950 g d'eau distillée et 3,8 g d'EDTA tétrasodique. Le pH à cette étape doit être basique et compris entre 10,5 et 11 pour un enrichissement optimal de l'extrait en 20 ARN de petit poids moléculaire. Le mélange est ensuite chauffé 2h à 55°C sous agitation. Le mélange est ensuite centrifugé 10 min à 4000 g, pour ôter la matière solide. A l'issue de cette étape, le pH est contrôlé, avant dilution 25 éventuelle, afin de le placer si nécessaire entre 6 et 6,5 et préserver les petits ARN de l'extrait. Des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors réalisées afin de clarifier l'extrait végétal jusqu'à une filtration stérilisante à 0,2 pm. 30 Exemple 2 : Caractérisation de l'extrait d'aneth D'une manière générale, on obtient un extrait aqueux d'aneth de couleur vert clair titrant de 10 à 30 g/kg d'extrait de poids sec, 2 à 10 g/kg de fragments protéiques, 2 à 10 g/kg de sucres, 3066114 11 0,1 à 3 g/kg d'acides aminés, 300 à 750 mg/kg de composés phénoliques et 10 à 100 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. Néanmoins, pour des parties aériennes d'aneth de l'espèce 5 Anethum graveolens, les extraits obtenus peuvent présenter une variabilité importante en fonction de facteurs tels que le lieu de récolte, l'année de récolte, la saison, les conditions climatiques, etc. Dans l'extraction de l'exemple 1, on a obtenu un extrait 10 aqueux titrant 12 g/kg d'extrait de poids sec. L'analyse physico-chimique montre que cet extrait présente une concentration de 2,55 g/kg de fragments protéiques, 3 g/kg de sucres, 340 g/kg d'acides aminés, 650 mg/kg de composés phénoliques et 50 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une 15 longueur d'au maximum 150 nucléotides. L'extrait est ensuite dilué avec un solvant cosmétique notamment avec 30% de glycérine ou de butylène glycol ou propanediol. Après dilution l'extrait présente une concentration de 1,7 g/kg de fragments protéiques, 2 g/kg de sucres, 240 g/kg d'acides aminés, 455 mg/kg de composés 20 phénoliques et 35 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. Méthodes utilisées dans le dosage de spectrophotométrie pour déterminer la quantité de composés différents dans l'extrait d'aneth : 25 La teneur totale en protéines de l'extrait d'aneth a été déterminée par un dosage de protéines de Lowry (Lowry et al, 1951). L'absorbance de l'échantillon est lue sur le spectrophotomètre à 550 nm. La teneur en protéines est déterminée à l'aide d'une courbe standard de BSA. 30 La teneur en acides aminés de l'extrait a été déterminée à partir d'un protocole publié par Moore et al (1948), la teneur en acides aminés libre de l'extrait a été évaluée par la formation d'un complexe coloré, suite à la rupture des fonctions amine et carboxylique par le Réactif ninhydrine. L'absorbance du 3066114 12 complexe est lue sur le spectrophotomètre à 570 nm. La teneur totale en acide aminées est déterminée par rapport à un pool d'acide aminés comme standard. La teneur totale en sucres de l'extrait a été déterminée 5 par une adaptation du dosage décrit par Dubois et al. (1956) (Dubois et al., "Méthode colorimétrique pour la détermination des sucres et des substances apparentées", Anal. Chem., 1956, 28 (3), 350-356). Cette analyse consiste en la dissolution de la matière première dans l'acide sulfurique concentré puis en 10 réagissant avec du phénol pour former un complexe coloré. L'absorbance du complexe est lue sur le spectrophotomètre à 490 nm. La teneur en sucre est déterminée à l'aide d'une courbe standard de glucose. La teneur en polyphénols de l'extrait a été déterminée à 15 l'aide du dosage de Folin-Ciocalteu (Singleton et al., Analyse des phénols totaux et d'autres substrats d'oxydation et antioxydants au moyen du réactif folin-ciocalteu, 1999, 299: 152). Les composés de type polyphénols dans l'échantillon réagissent avec le réactif Folin-Ciocalteu, l'oxydation du 20 réactif donne une couleur bleue. L'absorbance de l'échantillon est lue sur le spectrophotomètre à 760 nm. Le contenu a été exprimé en équivalents d'acide gallique à l'aide d'une courbe standard d'acide gallique. La quantification des ARN de bas poids moléculaires au moyen 25 d'un BioanalyseurED (Agilent) qui permet de réaliser des électrophorèses miniaturisées grâce à des puces électroniques spécifiques de l'analyse des acides nucléiques telle que celle des ARN de petit poids moléculaire. Il permet de déterminer la taille et la concentration contenues dans un extrait à partir de 30 quelques microlitres. Le résultat se présente sous forme d'un graphique avec une unité arbitraire de fluorescence en ordonnée (FU) et en abscisse le nombre de nucléotides (nt). Un marqueur interne est ajouté à chaque analyse (pic à 25 nt sur la figure 3066114 13 1, 2 et 3), et sert de contrôle interne pour valider le bon déroulement de l'analyse. Exemple 3 : Préparation d'un extrait d'aneth provenant de 5 Chine région non himalayenne (Anethum graveolens) de la famille des Aplaceae, enrichi en petits ARN Un extrait aqueux enrichi en ARN de petit poids moléculaire (d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides) est obtenu à partir d'aneth (Anethum graveolens) de la famille des Aplaceae. 10 Dans une première étape, 5% de parties aériennes séchées d'aneth provenant de Chine région non himalayenne sous forme de poudre sont placés dans de l'eau distillée et 10 mM d'EDTA tétrasodique sont ajoutés, soit 50 g de poudre d'aneth séchée dans 950 g d'eau distillée et 3,8 g d'EDTA tétrasodique. Le pH 15 à cette étape doit être basique et compris entre 10,5 et 11 pour un enrichissement optimal de l'extrait en ARN de petit poids moléculaire. Le mélange est ensuite chauffé lh à 55°C sous agitation. Le mélange est ensuite centrifugé 10 min à 4000 g, pour 20 ôter la matière solide. A l'issue de cette étape, le pH est contrôlé, avant dilution éventuelle, afin de le placer si nécessaire entre 6 et 6,5 et préserver les petits ARN de l'extrait. Des filtrations séquentielles sur filtres de porosité 25 décroissante sont alors réalisées afin de clarifier l'extrait végétal jusqu'à une filtration de 0,2 pm. D'une manière générale, on obtient un extrait aqueux d'aneth de couleur vert clair titrant de 10 à 30 g/kg d'extrait de poids sec, 2 à 10 g/kg de fragments protéiques, 2 à 10 g/kg de sucres, 30 0,1 à 3 g/kg d'acides aminés, 300 à 750 mg/kg de composés phénoliques et 10 à 100 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. Néanmoins, pour des parties aériennes d'aneth de l'espèce Anethum graveolens, les extraits obtenus peuvent présenter une 3066114 14 variabilité importante en fonction de facteurs tels que le lieu de récolte, l'année de récolte, la saison, les conditions climatiques, etc. Dans cet exemple, on a obtenu un extrait aqueux titrant à 5 12 g/kg d'extrait de poids sec. L'analyse physico-chimique montre que cet extrait présente une concentration de 2,5 g/kg de fragments protéiques, 3 g/kg de sucres, 340 g/kg d'acides aminés, 650 mg/kg de composés phénoliques et 50 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une 10 longueur d'au maximum 150 nucléotides. L'extrait est ensuite dilué avec de l'eau ou un mélange eau et un solvant cosmétique notamment avec 30% de glycérine ou de butylène glycol ou propanediol pour obtenir un extrait à 8 g/Kg en poids sec. Après dilution, l'extrait présente une concentration de 1,7 g/kg de 15 fragments protéiques, 2 g/kg de sucres, 240 g/kg d'acides aminés, 455 mg/kg de composés phénoliques et 35 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. Méthodes utilisées dans le dosage de spectrophotométrie pour déterminer la quantité des différents composés dans l'extrait 20 d'aneth selon l'exemple 3 : La teneur totale en protéines de l'extrait d'aneth a été déterminée par un dosage de protéines de Lowry (Lowry et al, 1951). L'absorbance de l'échantillon est lue sur le spectrophotomètre à 550 nm. La teneur en protéines est déterminée 25 à l'aide d'une courbe standard de BSA. La teneur en acides aminés de l'extrait a été déterminée à partir d'un protocole publié par Moore et al (1948), la teneur en acides aminés libre de l'extrait a été évaluée par la formation d'un complexe coloré, suite à la rupture des fonctions 30 amine et carboxylique par le Réactif ninhydrine. L'absorbance du complexe est lue sur le spectrophotomètre à 570 nm. La teneur totale en acide aminées est déterminée par rapport à un pool d'acide aminés comme standard. 3066114 15 La teneur totale en sucres de l'extrait a été déterminée par une adaptation du dosage décrit par Dubois et al. (1956) (Dubois et al., "Méthode colorimétrique pour la détermination des sucres et des substances apparentées", Anal. Chem., 1956, 28 5 (3), 350-356). Cette analyse consiste en la dissolution de la matière première dans l'acide sulfurique concentré puis en réagissant avec du phénol pour former un complexe coloré. L'absorbance du complexe est lue sur le spectrophotomètre à 490 nm. La teneur en sucre est déterminée à l'aide d'une courbe 10 standard de glucose. La teneur en polyphénols de l'extrait a été déterminée à l'aide du dosage de Folin-Ciocalteu (Singleton et al., Analyse des phénols totaux et d'autres substrats d'oxydation et antioxydants au moyen du réactif folin-ciocalteu, 1999, 299: 15 152). Les composés de type polyphénols dans l'échantillon réagissent avec le réactif Folin-Ciocalteu, l'oxydation du réactif donne une couleur bleue. L'absorbance de l'échantillon est lue sur le spectrophotomètre à 760 nm. Le contenu a été exprimé en équivalents d'acide gallique à l'aide d'une courbe 20 standard d'acide gallique. Exemple 4 : Préparation d'un extrait d'aneth (Anethum graveolens) de la famille des Aplaceae, enrichi en petits ARN provenant d'Egypte. 25 Le procédé d'extraction est le même que dans l'exemple 3, seule l'origine géographique de provenance de l'aneth est différente ici l'Egypte. Dans une première étape, 5% de parties aériennes séchées d'aneth d'Egypte sous forme de poudre sont placés dans de l'eau 30 distillée et 10 mM d'EDTA tétrasodique sont ajoutés, soit 50 g de poudre d'aneth séchée dans 950 g d'eau distillée et 3,8 g d'EDTA tétrasodique. Le pH à cette étape doit être basique et compris entre 10,5 et 11 pour un enrichissement optimal de l'extrait en ARN de petit poids moléculaire. 3066114 16 Le mélange est ensuite chauffé lh à 55°C sous agitation. Le mélange est ensuite centrifugé 10 min à 4000 g, pour ôter la matière solide. A l'issue de cette étape, le pH est contrôlé, avant dilution 5 éventuelle, afin de le placer si nécessaire entre 6 et 6,5 et préserver les petits ARN de l'extrait. Des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors réalisées afin de clarifier l'extrait végétal jusqu'à une filtration à 0,2 pm de porosité. 10 Dans cet exemple on a obtenu un extrait aqueux titrant 20,4 g/kg d'extrait de poids sec. L'analyse physico-chimique montre que cet extrait présente une concentration de 4,3 g/kg de fragments protéiques, 3,1 g/kg de sucres, 650 g/kg d'acides aminés, 720 mg/kg de composés 15 phénoliques et 46 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. L'extrait est ensuite dilué avec de l'eau ou un mélange d'eau et d'un solvant cosmétique notamment avec 30% de glycérine ou de butylène glycol ou propanediol. Après dilution l'extrait présente une 20 concentration de 1,8 g/kg de fragments protéiques, 1,5 g/kg de sucres, 360 g/kg d'acides aminés, 490 mg/kg de composés phénoliques et 32 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. 25 Exemple 5 : Préparation d'un extrait d'aneth (Anethum graveolens) de la famille des Aplaceae, enrichi en petits ARN provenant de Chine, région Himalayenne. Le procédé d'extraction est le même que dans l'exemple 3 (et 4) seule l'origine géographique de provenance de l'aneth est 30 différente ici la région Himalayenne. Dans une première étape, 5% de parties aériennes séchées d'aneth provenant de Chine, région Himalayenne, sous forme de poudre sont placées dans de l'eau distillée et 10 mM d'EDTA tétrasodique sont ajoutés, soit 50 g de poudre d'aneth séchée 3066114 17 dans 950 g d'eau distillée et 3,8 g d'EDTA tétrasodique. Le pH à cette étape doit être basique et compris entre 10,5 et 11 pour un enrichissement optimal de l'extrait en ARN de petit poids moléculaire. Le mélange est ensuite chauffé lh à 55°C sous 5 agitation. Le mélange est ensuite centrifugé 10 min à 4000 g, pour ôter la matière solide. A l'issue de cette étape, le pH est contrôlé, avant dilution éventuelle, afin de le placer si nécessaire entre 6 et 6,5 et 10 préserver les petits ARN de l'extrait. Des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors réalisées afin de clarifier l'extrait végétal jusqu'à une filtration à 0,2 pm de porosité. Dans cet exemple on a obtenu un extrait aqueux titrant 20 15 g/kg d'extrait de poids sec. L'analyse physico-chimique montre que cet extrait présente une concentration de 4,5 g/kg de fragments protéiques, 2,8 g/kg de sucres, 670 g/kg d'acides aminés, 650 mg/kg de composés phénoliques et 90 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une 20 longueur d'au maximum 150 nucléotides. L'extrait est ensuite dilué avec de l'eau ou un mélange eau et un solvant cosmétique notamment avec 30% de glycérine ou de butylène glycol ou propanediol. Après dilution l'extrait présente une concentration de 2,3 g/kg de fragments protéiques, 1,7 g/kg de sucres, 470 25 g/kg d'acides aminés, 455 mg/kg de composés phénoliques et 65 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. La quantification des ARN de bas poids moléculaires a été réalisée au moyen d'un BioanalyseurED (Agilent) qui permet de 30 réaliser des électrophorèses miniaturisées grâce à des puces électroniques spécifiques de l'analyse des acides nucléiques telle que celle des ARN de petit poids moléculaire. Il permet de déterminer la taille et la concentration contenues dans un extrait à partir de quelques microlitres. Le résultat se présente 3066114 18 sous forme d'un graphique avec une unité arbitraire de fluorescence en ordonnée (FU) et en abscisse le nombre de nucléotides (nt) tel qu'illustré par la Figure 1. Un marqueur interne est ajouté à chaque analyse (pic à 25 nt sur la Figure 5 1, 2 et 3), et sert de contrôle interne pour valider le bon déroulement de l'analyse. Exemple 6 : Etude de l'influence du pH final dans la préparation d'extraits d'aneth (Anethum graveolens) provenant de 10 Chine, région Himalayenne, afin d'obtenir un extrait d'aneth dépourvu de petits ARN Le procédé d'extraction est réalisé dans les mêmes conditions opératoires que l' exemple 3, 4 et 5, pour enrichir un extrait en ARN de petit poids moléculaire, hormis l'étape 15 finale d'ajustement du pH. Ce procédé d'extraction est réalisé avec une étape de traitement par EDTA tétrasodique, mais avec un ajustement final de l'extrait à un pH acide compris entre 4 et pH compris entre 6 et 8. 4,5 au lieu d'un 20 Ceci entraine la précipitation des ARN de petit poids au BioanalyseurED de petit poids moléculaire, résultats confirmés par l'analyse qui donne une concentration nulle en ARN moléculaire (tel qu'illustré à la Figure 2). 25 Exemple 7 : Réalisation d'un extrait conventionnel obtenu par macération d'aneth (Anethum graveolens) provenant de Chine, région Himalayenne. Mise en évidence du rôle d'une étape de traitement par EDTA pour la mise en oeuvre d'un procédé d'extraction de petits ARN. 30 Dans le but de mettre en évidence le rôle d'une étape de traitement par EDTA lors de l'extraction des ARN de petit poids moléculaire, un extrait d'aneth (Anethum graveolens) a également été obtenu, en modifiant certaines étapes essentielles du 3066114 19 procédé selon l'invention, ne permettant pas d'enrichir l'extrait en ARN de petit poids moléculaire. Dans une première étape, 5% d'aneth sont broyés puis de l'eau est ajoutée, soit 50 g d'aneth dans 950 g d'eau distillée. 5 Le pH est mesuré et est de 5,5, le mélange est mis sous agitation pendant lh à 55°C. Ensuite, l'extrait est centrifugé 10 min à 4000 g pour ôter la matière solide. Des filtrations séquentielles sont alors réalisées sur des 10 filtres de porosité décroissante de taille comprise entre 50 et 20 pm puis jusqu'à une porosité de 0,4 à 0,3 pm. On obtient alors un extrait aqueux de couleur vert clair titrant à 13 g/kg d'extrait de poids sec, contenant 3,3 g/kg de fragments protéiques, 2,2 g/kg de sucres, 380 mg/kg d'acides 15 aminés, et 410 mg/kg de composés phénoliques. L'extrait est alors dilué pour être à 8 g/Kg en poids sec, par seul ajout d'eau. L'analyse physico-chimique montre qu'après dilution l'extrait végétal présente une concentration en fragments 20 protéiques de 2,8 g/kg, et en sucres de 1,7 g/kg, en acides aminés de 240 mg/kg, et en composés phénoliques de 280 mg/kg. Dans ces conditions d'extraction dite conventionnelle (absence de traitement par EDTA), l'analyse au BioanalyseurED indique que la concentration en ARN de petit poids moléculaire est nulle 25 pour cet extrait (tel qu'illustré à la Figure 3). Ce résultat confirme qu'un extrait obtenu à partir d'un procédé d'extraction en l'absence de traitement par EDTA (à pH basique) ne contient pas d'ARN de petit poids moléculaire. L'étape de traitement par EDTA est essentielle pour obtenir un extrait riche en ARN de 30 petit poids moléculaire selon l'invention. Plus particulièrement, selon un troisième aspect de l'invention, les extraits aqueux enrichis en petits ARN obtenus selon l'invention sont avantageusement utilisés dans la 3066114 20 préparation de compositions cosmétiques comprenant, à titre d'agent actif, une quantité efficace d'un tel extrait de petits ARN selon l'invention, et un milieu physiologiquement acceptable. 5 Par quantité efficace, on désigne la quantité minimum d'extrait selon l'invention qui est nécessaire pour obtenir l'activité de l'extrait, en particulier cosmétique et plus particulièrement pour améliorer l'aspect de la peau, lutter contre les signes du vieillissement cutané ou pour 10 l'amélioration de l'hydratation de la peau, sans que cette quantité soit toxique. Avantageusement, l'extrait de petits ARN selon l'invention est utilisé, de préférence dilué dans un solvant cosmétique, à un poids sec compris entre 5 à 15 g/kg. 15 Avantageusement, l'extrait de petits ARN selon l'invention est présent dans la composition à une concentration de 0,1 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition, et de préférence à une concentration comprise entre 0,5% et 2,5% en poids par rapport au poids total de la composition. 20 Un milieu physiologiquement acceptable désigne un véhicule adapté pour une mise en contact avec les couches externes de la peau ou des muqueuses, sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire ou réaction d'intolérance, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable. 25 La composition utilisable selon l'invention pourra être appliquée par toute voie appropriée, notamment orale, ou topique externe, et la formulation des compositions sera adaptée par l'homme du métier. La composition selon l'invention peut être formulée pour 30 être administrée par voie orale. Les formes galéniques utilisées peuvent être sous forme solide ou liquide. Les formes orales solides sont généralement des comprimés, capsules dures (gélules), capsule molle, sachets comprenant une poudre ou des granulés. Les formes orales liquides sont généralement des 3066114 21 solutions buvables, sirops, élixirs, émulsions buvables, suspensions buvables, gouttes buvables. Préférentiellement, les compositions selon l'invention se présentent sous une forme adaptée à l'application par voie 5 topique. Ces compositions doivent donc contenir un milieu physiologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau et les phanères, sans risque d'inconfort lors de leur application et couvrent toutes les formes cosmétiques adaptées. Par application topique, on désigne le fait d'appliquer ou 10 d'étaler l'extrait aqueux enrichi en petits ARN selon l'invention, et plus particulièrement une composition le contenant, à la surface de la peau ou d'une muqueuse. « Peau » désigne la peau du visage, notamment le contour des yeux et la bouche, le nez, le front, le cou, les mains, mais 15 aussi la peau de l'ensemble du corps. Les compositions pour la mise en oeuvre de l'invention pourront notamment se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydro-alcoolique ou huileuse, d'une émulsion huiledans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ; elles peuvent 20 aussi se présenter sous forme de suspensions, ou encore poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou les cheveux. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir également l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un 25 sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. A titre de milieu physiologiquement acceptable communément utilisé dans le domaine d'application envisagé, on peut citer 30 par exemple des adjuvants nécessaires à la formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des antioxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des huiles essentielles, des vitamines, des 3066114 22 acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc. Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle 5 manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à 0,01 à 20% du poids total de la composition. Lorsque la composition selon l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80% en poids 10 et de préférence de 5 à 50% en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30% 15 en poids par rapport au poids total de la composition. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait aqueux enrichi en petits ARN selon l'invention peut être encapsulé ou inclus dans un vecteur cosmétique tels que les liposomes ou toute autre nanocapsule ou 20 microcapsule utilisée dans le domaine de la cosmétique ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites. Avantageusement, la composition selon l'invention peut comprendre, outre l'agent actif selon l'invention, au moins un 25 autre agent actif présentant des effets cosmétiques similaires et/ou complémentaires à ceux de l'invention. Selon l'invention, cet agent actif est défini comme un « agent actif additionnel ». Par exemple, le ou les agents actifs additionnels peuvent être choisis parmi : les agents anti-âge, raffermissants, 30 éclaircissants, hydratants, drainants, favorisant la microcirculation, exfoliants, desquamants, stimulant la matrice extracellulaire, activant le métabolisme énergétique, antibactériens, antifongiques, apaisants, anti-radicalaires, anti-UV, anti-acné, anti-inflammatoires, anesthésiques, 3066114 23 procurant une sensation de chaleur, procurant une sensation de fraicheur, amincissants. De tels agents actifs additionnels peuvent être choisis dans les groupes comprenant : 5 - la vitamine A et notamment l'acide rétinoïque, le rétinol, le rétinol proprionate, le rétinol palmitate ; - la vitamine B3 et plus particulièrement le niacinamide, le nicotinate de tocophérol ; - la vitamine B5, la vitamine B6, la vitamine B12, le 10 panthénol ; - la vitamine C, notamment l'acide ascorbique, l'ascorbyl glucoside, l'ascorbyl tétrapalmitate, magnésium et sodium ascorbyl phosphate ; - les vitamines E, F, H, K, PP, le coenzyme Q10 ; 15 - les inhibiteurs de métalloprotéinase, ou un activateur des TIMP ; - la DHEA, ses précurseurs et dérivés ; - les acides aminés tels que l'arginine, ornithine, hydroxyproline, hydroxyproline dipalmitate, palmitoylglycine, 20 hydroxylysine, méthionine et ses dérivés, composés acides aminés N-acylés ; - les peptides naturels ou de synthèse, incluant les di-, tri-, tetra-, penta- et hexapeptides et leurs dérivés lipophiles, isomères et complexés avec d'autres espèces telles 25 qu'un ion métal (par exemple cuivre, zinc, manganèse, magnésium, et autres). A titre d'exemples, on peut citer les peptides commercialement connus sous le nom de MATRIXYL® (SEDERMAM, ARGIRELINE® (LIPOTECED), CHRONOGENTM, LAMINIXYL ISTM, PEPTIDE Q1OTM, COLLAXYL TM (brevet FR2827170, ASHLANDM, PEPTIDE VINCI O1TM 30 (brevet FR2837098, ASHLANDM, PEPTIDE VINCI O2TM (brevet FR2841781, ASHLANDM, AlPeptideTM (brevet FR2846883, ASHLANDM ou encore le peptide de synthèse de séquence Arg-Gly-Ser-NH2, commercialisé sous le nom AlPeptideTM par ASHLANDED ; 3066114 24 - l'extrait d'Artémia sauna, commercialisé sous le nom GP4GTM (FR2817748, ASHLANDM ; - les extraits peptidiques végétaux tels que les extraits de lin (LipigénineTM, brevet FR2956818, ASHLANDM, les extraits 5 de soja, d'épeautre, de vigne, de colza, de lin, de riz, de maïs, de pois ; - les extraits de levures, par exemple le DynagenTM, (brevet FR2951946, ASHLANDM ou l'ActopontineTM (brevet FR2944526, ASHLANDM ; 10 - l'acide déhydroacétique (DHA) ; - les phystostérols d'origine synthétique ou naturelle ; - l'acide salicylique et ses dérivés, les alpha- et bêtahydroxyacides, les silanols ; - les sucres aminés, glucosamine, D-glucosamine, N-acetyl 15 glucosamine, N-acetyl-D-glucosamine, mannosamine, N-acetyl mannosamine, galactosamine, N-acetyl galactosamine ; - les extraits de polyphénols, isoflavones, flavonoïdes, tels que les extraits de raisin, les extraits de pin, les extraits d'olive ; 20 - les lipides tels que les céramides ou les phospholipides, les huiles d'origine animale, telles que le squalène ou le squalane ; les huiles végétales, telles que l'huile d'amande douce, de coprah, de ricin, de jojoba, d'olive, de colza, d'arachide, de tournesol, de germes de blé, de germes de maïs, 25 de soja, de coton, de luzerne, de pavot, de potiron, d'onagre, de millet, d'orge, de seigle, de carthame, de passiflore, de noisette, de palme, de noyau d'abricot, d'avocat, de calendula ; les huiles végétales éthoxylées, le beurre de karité ; - tous écrans UV et filtres solaires ; 30 - l'AMP cyclique et ses dérivés, les agents activateurs de l'enzyme adénylate cyclase et les agents inhibiteurs de l'enzyme phosphodiestérase, l'extrait de Centella asiatica, l'asiaticoside et l'acide asiatique, les méthyls xanthines, la théine, la caféine et ses dérivés, la théophylline, la 3066114 25 théobromine, la forskoline, l'esculine et l'esculoside, les inhibiteurs d'ACE, le peptide Val-Trp, l'inhibiteurs du neuropeptide Y, l'enkephaline, l'extrait de Ginkgo biloba, l'extrait de dioscorea, la rutine, l'extrait de yerba mate, 5 l'extrait de guarana, les oligosaccharides, les polysaccharides, la carnitine, l'extrait de lierre, l'extrait de fucus, l'extrait hydrolysé de Prunella vulgaris, l'extrait hydrolysé de Celosia cristata, l'extrait d'Anogeissus leiocarpus, l'extrait de feuilles de Manihot utilissima, la palmitoylcarnitine, la 10 carnosine, la taurine, l'extrait de sureau, les extraits d'algue tel que l'extrait de Palmaria Palmata. A titre d'illustration, il est mentionné ci-après des exemples de formulations d'une composition cosmétique contenant un extrait aqueux enrichi en petits ARN d'une longueur d'au 15 maximum 150 nucléotides obtenu selon l'invention : Exemple 8 : Baume pour le contour des yeux Ingrédients (Nom de marque) INCI % w/w 1,80 Sodium Polyacrylate RapiThixim A-100 polymer 3,00 Vegetable ou l (and) Hydrogenated vegetable ou l (and) Euphorbia Cerifera (Candelilla) Wax 1,00 DC 9701 Cosmetic Powder Dimethicone/Vinyl Dimethicone Crosspolymer (and) Silica 0,50 Optiphenim preservative Phenoxyethanol (and) Caprylyl Glycol Phase F Extrait selon l'exemple 1 Water/Aqua (and) Glycerin (and) (Dill) Peucedanum Graveolens extract Zemeae Propanediol Timiron Splendid Violet CI 77891 (Titanium Dioxide) (and) Mica (and) Silica Phase A Eau purifiée Qsp 100 Aqua EDTA tétrasodique Tetrasodium EDTA 0,01 Phase B Phase C Cegesoft VP Si-Tecim GF 3096 silicone Dimethicone (and) Dimethiconol 10,00 Phase D Phase E 1,00 5,00 1,00 3066114 26 Procédé de préparation: 1. Homogénéiser la phase A dans le récipient principal jusqu'à ce qu'elle soit claire ; 2. A 25°C, saupoudrer dans la Phase B et homogénéiser pendant 10 5 minutes jusqu'à homogénéité ; 3. A 25°C, préparer la phase C dans un bécher à part, mélanger jusqu'à homogénéité. Saupoudrer dans la phase D et bien mélanger jusqu'à homogénéité ; 4. A 25°C, ajouter la phase C + D dans le récipient principal 10 et mélanger jusqu'à homogénéité ; 5. À 25°C, ajouter la phase E dans le récipient principal et mélanger jusqu'à homogénéité ; 6. A 25°C, Prémélanger la phase F, l'ajouter dans le récipient principal et mélanger jusqu'à homogénéité ; 15 7. Arrêter à 25°C. La composition se présente ainsi sous forme d'un gel crème nacré violet, avec un pH compris entre 5,70 et 6,20 et une viscosité (DO) de 80000 - 130000 cps (Brookfield RVT/Spindle C/5 RPM/1 minute/25°C) 20 Exemple 9 : Crème riche Ingrédients (Nom de marque) INCI % w/w Phase A Eau purifiée Qsp 100 Aqua Optiphenim preservative Plus Phenoxyethanol (and) Caprylyl Glycol (and) Sorbic Acid 1,50 Phase B Stabilezelm QM polymer PVM/MA Decadiene Crosspolymer 0,15 Phase C Glyceryl Stearate (and) Behenyl Alcohol (and) Palmitic Acid (and) Stearic Acid (and) Lecithin (and) Lauryl Alcohol (and) 5,00 Myristyl Alcohol (and) Cetyl Alcohol ProLipidim 141 lamellar gel Ceraphylim 494 ester Isocetyl Stearate 4,00 Ceraphylim SLK ester Isodecyl Neopentanoate 4,00 DC 580 Wax Stearoxytrimethylsilane (and) Stearyl 2,00 Alcohol Emulsyntim GDL ester Glyceryl Dilaurate 3,00 3066114 27 Phase D Gransil DM-5 Dimethicone (and) Polysilicone-11 3,00 Phase E Hydroxyde de sodium Sodium Hydroxide 0,04 Eau purifiée Aqua 0,50 Phase F PF Bois Précieux Parfum/Fragrance 0,30 Unipure* Red LC 381 ADT-c CI 77491 (Iron oxides) (and) Isopropyl 0,03 Titanium Triisostearate (and) Bis- Hydroxyethoxypropyl Dimethicone (and) PEG-2-Soyamine (and) Isophorone Diisocyanate Phase G Extrait selon l'exemple 1 Water/Aqua (and) Glycerin (and) 3,00 Peucedanum Graveolens (Dill) extract Ronaflair Balance Gold CI 77891 (Titanium Dioxide) (and) Mica 0,30 (and) Tin Oxide Covabead Velvet 10 Polymethyl Methacrylate 1,00 Ronaflair Balance Red CI 77891 (Titanium Dioxide) (and) Mica 1,20 (and) Tin Oxide Phase H Eau purifiée Aqua 15,00 Natrosollm Plus 330 CS Cetyl Hydroxyethylcellulose 0,50 Procédé de préparation: 1. Homogénéiser la phase A dans le récipient principal et commencer à chauffer à 75-80°C ; 2. A 30°C, saupoudrer dans la Phase B et homogénéiser tout en 5 chauffant ; 3. Dans un bécher à part, préparer la phase C, chauffer à 7580°C jusqu'à homogénéité ; 4. A 75°C, ajouter la phase C dans le récipient principal et homogénéiser pendant 10 minutes ; 10 5. Laisser refroidir la température et ajouter la phase D à 65°C. Bien mélanger pour homogénéiser pendant 10 minutes ; 6. Prémélanger la phase E avant de l'ajouter dans le récipient principal ; 7. Ajouter la phase E à 60°C. Bien mélanger pour homogénéiser 15 pendant 10 minutes ; 8. A 35°C, prémélanger la phase F avant de l'ajouter et de bien mélanger ; 9. Prémélanger la phase G avant de l'ajouter dans le récipient principal ; 3066114 28 10. Ajouter la phase G à 35°C. Bien mélanger pour homogénéiser ; 11. Dans un bêcher à part, préparer la phase H: saupoudrer NatrosolTM dans l'eau à température ambiante et homogénéiser tout en chauffant à 60°C ; 5 12. Ajouter la phase H à 30°C. Bien mélanger pour homogénéiser ; 13. Arrêter à 25°C. La composition se présente ainsi sous forme d'une crème beurre rose, avec un pH compris entre 4,90 et 5,40 et une viscosité (DO) de 160000 - 210000 cps (Brookfield RVT/Spindle D/5 RPM/1 10 minute/25°C) Exemple 10: Sérum visage Ingrédients (Nom de marque) INCI % w/w Phase A Eau purifiée Qsp 100 Aqua Disodium EDTA 0,10 EDTA disodique Propylène Glycol Propylene Glycol 35,10 SD Alcohol 40B Absolute Alcohol 10,00 Butylène Glycol Butylene Glycol 5,00 Phase B Flexithixim polymer PVP 2,00 Phase C Gomme xanthane Xanthan Gum 0,25 Phase D Sodium Polyacrylate (and) Hydrogenated Polydecene (and) Trideceth-6 Rapithixim A-60 polymer 1,00 Rokonsallm/LiquaParim MEP preservative Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Propylparaben 0,70 Phase E Extrait selon l'exemple 1 Water/Aqua (and) Glycerin (and) 5,00 Peucedanum Graveolens (Dil) extract Phase F DM 350 Dimethicone 3,00 Cyclopentasiloxane Cyclopentasiloxane 6,00 Dimethicone (and) Cyclopentasiloxane (and) Polysilicone-11 Vinyl Dimethicone/Methicone Silsesquioxane Crosspolymer Gransil* DMCM-5 KSP* 100 1,50 1,00 Phase G Unicert* Yellow 08006-J Water/Aqua (and) CI 15985 (Yellow 6) 0,60 3066114 29 Procédé de préparation : 1. Dans un bécher à température ambiante, peser les ingrédients de la phase A et mélanger. Saupoudrer la phase B et homogénéiser ; 5 2. A température ambiante, saupoudrer dans la phase C et continuer à homogénéiser l'ensemble ; 3. A température ambiante, ajouter la phase D à la phase ABC et continuer à homogénéiser ; 4. A température ambiante, ajouter la phase E et homogénéiser ; 10 5. A température ambiante, ajouter la phase F et homogénéiser l'ensemble ; 6. A température ambiante, ajouter la phase G et mélanger jusqu'à homogénéité ; 7. Arrêter à 25°C. 15 La composition se présente ainsi sous forme d'un gel lisse, translucide, jaune crème, avec un pH compris entre 6,30 et 7,10 et une viscosité (DO) de 10000 - 15000 cps (Brookfield RVT/Spindle B/5 RPM/1 minute/25°C) 20 Exemple 11 : Masque anti-âge Ingrédients (Nom de marque) INCI % w/w Phase A Eau purifiée Qsp 100 Aqua EDTA tétrasodique Tetrasodium EDTA 0,05 Phase B N-Hancelm HP4OS guar Hydroxypropyl Guar 0,10 Phase C Lubrajelim DV Free hydrogel Glycerin (and) Glyceryl Acrylate/Acrylic Acid Copolymer 6,00 Phase D Si-Tecim GF 3096 silicone Dimethicone (and) Dimethiconol 12,00 Sodium Polyacrylate (and) Hydrogenated Polydecene (and) Trideceth-6 RapiThixlm A-60 polymer 2,40 Phase E Optiphenim preservative Plus Phenoxyethanol (and) Caprylyl Glycol (and) Sorbic Acid 1,50 Phase F 3066114 30 Procédé de préparation: 1. A 25°C, homogénéiser la phase A dans le récipient principal ; 2. A 25°C, saupoudrer dans la phase B et bien mélanger jusqu'à 5 homogénéité ; 3. A 25°C, ajouter la phase C et bien mélanger jusqu'à homogénéité ; 4. Prémélanger la phase D dans un bêcher à part et ajouter dans le récipient principal à 25°C ; 10 5. A 25°C, ajouter la phase E dans le récipient principal et bien mélanger ; 6. Prémélanger la phase F et l'ajouter lentement. Bien mélanger bien jusqu'à homogénéité ; 7. Prémélanger la phase G dans un bêcher à part et ajouter dans 15 le récipient principal jusqu'à homogénéité ; 8. Arrêter à 25°C. La composition se présente ainsi sous forme d'un gel crème avec des effets vert scintillant, avec un pH compris entre 5,30 et 5,80 et une viscosité (DO) de 70000 - 100000 cps (Brookfield 20 RVT/Spindle C/5 RPM/1 minute/25°C) Exemple 12 : Sérum Ingrédients (Nom de marque) INCI % w/w Surfin* 96 Alcohol Denat. 3,50 PF Cucumber & Aloe Parfum/ Fragrance 0,50 Phase G Water/Aqua (and) Glycerin (and) Peucedanum Graveolens (Dil) extract Extrait selon l'exemple 1 1,00 Achromaxyllm ISR biofunctional Water/Aqua (and) Glycerin (and) Hydrolyzed Brassica Napus Seedcake Extract 3,00 Mica (and) CI 77891 (Titanium Dioxide) (and) Silica (and) Tin Oxide Xirona Carribean Blue 1,00 Phase A Eau déminéralisée 87,40 Aqua Sodium Hyaluronate Sodium Hyaluronate 0,20 Sodium Polyacrylate (and) Hydrogenated Polydecene (and) 0,40 Trideceth-6 RapiThix A-60 polymer 3066114 31 Lubrajel DV hydrogel Glycerin (and) Glyceryl 6,00 Acrylate/Acrylic Acid Copolymer (and) Propylene Glycol Lubrajel' Oil hydrogel Glycerin (and) Glyceryl 1,00 Acrylate/Acrylic Acid Copolymer (and) Propylene Glycol (and) PVM/MA Copolymer Wacker-Belsil* DM 100 Dimethicone 2,00 Cyclopentasiloxane NF Cyclopentasiloxane 0,50 Extrait selon l'exemple 1 Water/Agua (and) Glycerin (and) 1,00 Peucedanum Graveolens (Dil) extract Optiphenlm preservative Phenoxyethanol (and) Caprylyl 1,50 Glycol Procédé de préparation : 1. Ajouter de l'eau dans le récipient principal et de commencer le mélange avec une pale d'hélice hi-1 ; 5 2. Ajouter le reste des ingrédients, un après l'autre tout en mélangeant entre chaque addition. La composition se présente ainsi sous forme d'un sérum lisse, semi-opaque, avec un pH compris entre 5,75 et 6,25 et une viscosité (DO) de 1,100 - 1,400 cps (Brookfield RVT/spindle 3/20 10 rpm/25° C/1 minute). Selon un quatrième aspect, l'invention concerne l'utilisation cosmétique d'une composition selon l'invention pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères. 15 L'invention concerne notamment l'utilisation cosmétique de la composition selon l'invention pour améliorer l'aspect de la peau, lutter contre les signes du vieillissement cutané ou améliorer l'hydratation cutanée. Par phanères, on entend des substances naturellement 20 présentes dans l'organisme humain ou l'organisme animal riches en kératine, et plus particulièrement les cheveux, les poils, les cils, les sourcils et les ongles. L'utilisation et les compositions selon la présente invention sont particulièrement destinées aux cheveux. 3066114 32 L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation cosmétique d'une composition selon l'invention pour améliorer l'hydratation de la peau et renforcer la fonction barrière. L'invention concerne également plus particulièrement 5 l'utilisation cosmétique d'une composition selon l'invention pour lutter contre les signes du vieillissement cutané et améliorer la fermeté et l'élasticité de la peau. Enfin, l'invention concerne aussi l'utilisation cosmétique d'une composition selon l'invention pour améliorer la santé du 10 cheveu. On entend par « améliorer l'aspect de la peau » que le grain de la peau apparait plus fin, la luminosité plus intense et le teint plus homogène. Par « signes du vieillissement cutané » on entend toutes 15 modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement comme, par exemple, les rides et ridules, les crevasses, les poches sous les yeux, les cernes, le flétrissement, la perte d'élasticité, de fermeté et/ou de tonus de la peau, mais également toutes modifications internes de la 20 peau qui ne se traduisent pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, l'amincissement de la peau, ou toutes dégradations internes de la peau consécutives à des stress environnementaux tels que la pollution et les rayonnements UV. 25 On entend par « amélioration de l'hydratation cutanée », toutes améliorations des modifications de l'aspect extérieur de la peau dues à la déshydratation comme, par exemple, la sécheresse, les tiraillements et l'inconfort. Par « améliorer la santé du cheveu » on entend un 30 renforcement de la structure du cheveu permettant d'améliorer leur apparence et de favoriser leur lissage et leur résistance. A ce titre, l'invention est illustrée ci-après, par des résultats de tests d'activité pour le soin de la peau et du cuir chevelu. 3066114 33 Exemple 13 : Evaluation des effets des extraits d'aneth selon les exemples 5, 6 et 7 sur la matrice extracellulaire du derme par l'étude du collagène I, de la dermatopontine et de 1' élastine 5 Le but de cette étude est de comparer les effets sur la matrice extracellulaire du derme de trois extraits d'aneth d'Himalaya. Le premier extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu selon l'exemple 5, le deuxième extrait ne contenant pas d'ARN de petit poids moléculaire, obtenu selon 10 l'exemple 6 et le dernier extrait obtenu après macération selon l'exemple 7. Le but de cette étude est d'évaluer les effets de ces trois extraits d'aneth sur l'expression des protéines collagène I, dermatopontine et élastine impliquées dans la structure de la 15 matrice extracellulaire. Le collagène et l'élastine sont très importants pour le maintien de l'élasticité et de la fermeté de la peau. La dermatopontine est localisée sur les fibres de collagène (Forbes EG, Cronshaw AD, MacBeath JRE, Hulmes DJS. Tyrosine-rich acidic matrix protein (TRAMP) is a tyrosine- 20 sulphated and widely distributed protein of the extracellular matrix. FEBS Lett. 1994 351(3):433-6). Elle facilite la fibrogénèse, stabilise les fibres de collagène et régule leur diamètre (Macbeath J, Shackleton D, and Hulmes D. Tyrosine-rich Acidic Matrix Protein (TRAMP) accelerates collagen fibril 25 formation in vitro. J. Biol. Chem. 1993 268:19826-32). Protocole: Des biopsies de peau humaine de 6 mm de diamètre sont maintenues en culture ex vivo en présence d'un milieu spécifique (DMEM 1 g/L, HAM'S F12, SVF et antibiotiques) sur des inserts. 30 Les biopsies sont cultivées pendant 48h (dermatopontine) ou 72h (collagène I et élastine) et reçoivent 2 applications par jour d'un extrait d'aneth selon les exemples 5, 6 et 7 dilué au 1/100eme dans du PBS, soit à la concentration finale de 1% volume/volume. La condition contrôle est réalisée à l'aide de 3066114 34 PBS 1X. Les applications sont réalisées sous forme d'une goutte de 10 pl déposée à la surface de la biopsie. Les biopsies sont ensuite fixées dans le formaldéhyde puis incluses dans la paraffine. Des coupes de peau de 4 pm d'épaisseur sont ensuite 5 réalisées. Les marquages du collagène I, de la dermatopontine et de l'élastine sont effectués après démasquage des sites spécifiques. Les immunomarquages sont réalisés à l'aide d'un anticorps polyclonal de lapin spécifique du collagène I (Rockland, Réf. 600-401-103-0.5), d'un anticorps monoclonal de 10 souris spécifique de la dermatopontine (Santa Cruz, Réf. Sc-376863), d'un anticorps polyclonal de lapin spécifique de l'élastine (Abcam, Réf. Ab21610), puis d'un anticorps secondaire anti-lapin ou anti-souris couplé à un fluorochrome (Invitrogen, Réf. A21206 et A21202). Les biopsies sont alors examinées au 15 microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M). Une quantification de l'intensité de la fluorescence obtenue après marquage du collagène I est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). Une quantification du contenu de dermatopontine dans le derme est réalisée, à l'aide du logiciel 20 Volocity® (Improvision). Une quantification de la longueur des fibres obtenues après marquage de l'élastine est réalisée, à l'aide du logiciel ImageJ. Résultats: Les résultats obtenus sont compilés dans le Tableau 1 ci- 25 après. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits ARN, obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant d'Himalaya à 1% pendant 48h (dermatopontine) ou 72h (collagène I et élastine) permettent d'observer une augmentation significative de l'expression de collagène I et de 30 dermatopontine et de la longueur des fibres d'élastine comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 1X et comparé aux traitements avec les extraits d'aneth obtenus selon les exemples 6 (absence d'ARN de petit poids moléculaire) et 7 (macération) à partir de plantes provenant d'Himalaya. Les résultats obtenus 3066114 35 sur la quantification de la longueur des fibres après marquage immunofluorescent de l'élastine sur peau ex vivo traitée pendant 72h avec les différents extraits d'aneth à 1% (Tableau 1) sont plus particulièrement illustrés dans la Figure 4, dans 5 laquelle : moyenne +/- sem ; n=3 ; ***: hautement significatif, *: significatif, ns: non significatif, avec le test t de Student. Tableau 1 : Expression Contenu en Longueur du col I DPT des fibres (%) (%) d'élastine (%) Contrôle 100 100 100 Extrait d'aneth d'Himalaya 164 165 166 selon l'exemple 5 Extrait d'aneth d'Himalaya 133 141 105 selon l'exemple 6 Extrait d'aneth d'Himalaya 128 139 108 selon l'exemple 7 Conclusion: L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 10 5) stimule davantage l'expression du collagène I, de la dermatopontine et de l'élastine dans la peau ex vivo humaine en comparaison des extraits d'aneth d'Himalaya non enrichis en petits ARN (exemples 6 et 7). Ces protéines sont impliquées dans la fermeté et l'élasticité de la peau, leur synthèse permet donc 15 un effet raffermissant. L'extrait d'aneth obtenu selon l'invention permet donc de lutter efficacement contre les signes du vieillissement cutané en améliorant la fermeté et l'élasticité de la peau. 20 Exemple 14 : Evaluation des effets des extraits d'aneth de différentes origines (Chine non himalayenne, Egypte, Chine Himalaya) respectivement selon les exemples 3, 4 et 5 sur la matrice extracellulaire du derme par l'étude du collagène I, de la dermatopontine et de l'élastine 25 Le but de cette étude est de comparer les effets sur la matrice extracellulaire du derme de trois extraits d'aneth 3066114 36 obtenus selon les exemples 3, 4 et 5 ayant des origines géographiques différentes. Le premier extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant de Chine non himalayenne, le deuxième extrait enrichi en ARN de 5 petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant d'Egypte et le troisième extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant de Chine d'Himalaya. Le but de cette étude est d'évaluer les effets de ces trois 10 extraits d'aneth sur l'expression des protéines collagène I, dermatopontine et élastine impliquées dans la structure de la matrice extracellulaire. Protocole: Des biopsies de peau humaine de 6 mm de diamètre sont 15 maintenues en culture ex vivo en présence d'un milieu spécifique (DMEM 1 g/L, HAM'S F12, SVF et antibiotiques) sur des inserts. Les biopsies sont cultivées pendant 48h (dermatopontine) ou 72h (collagène I et élastine) et reçoivent 2 applications par jour d'un extrait d'aneth de différentes origines géographiques, 20 dilué au 1/100eme dans du PBS, soit à la concentration finale de 1% volume/volume. La condition contrôle est réalisée à l'aide de PBS 1X. Les applications sont réalisées sous forme d'une goutte de 10 pl déposée à la surface de la biopsie. Les biopsies sont ensuite fixées dans le formaldéhyde puis incluses dans la 25 paraffine. Des coupes de peau de 4 pm d'épaisseur sont ensuite réalisées. Les marquages du collagène I, de la dermatopontine et de l'élastine sont effectués après démasquage des sites spécifiques. Les immunomarquages sont réalisés à l'aide d'un anticorps polyclonal de lapin spécifique du collagène I 30 (Rockland, Réf. 600-401-103-0.5), d'un anticorps monoclonal de souris spécifique de la dermatopontine (Santa Cruz, Réf. Sc-376863), d'un anticorps polyclonal de lapin spécifique de l'élastine (Abcam, Réf. Ab21610), puis d'un anticorps secondaire anti-lapin ou anti-souris couplé à un fluorochrome (Invitrogen, 3066114 37 Réf. A21206 et A21202). Les biopsies sont alors examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M). Une quantification de l'intensité de la fluorescence obtenue après marquage du collagène I est réalisée, à l'aide du logiciel 5 Volocity® (Improvision). Une quantification du contenu de dermatopontine dans le derme est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). Une quantification de la longueur des fibres obtenues après marquage de l'élastine est réalisée, à l'aide du logiciel ImageJ. 10 Résultats: Les résultats obtenus sont compilés dans le Tableau 2 ci-après. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits ARN, obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant d'Himalaya à 1% pendant 48h (dermatopontine) ou 72h (collagène 15 I et élastine) permettent d'observer une augmentation significative de l'expression de collagène I et de dermatopontine et de la longueur des fibres d'élastine comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 1X et comparé aux traitements avec les extraits d'aneth obtenus selon les exemples 20 3 et 4 à partir de plantes provenant de Chine non himalayenne et d'Egypte. Les résultats obtenus sur la quantification de la longueur des fibres après marquage immunofluorescent de l'élastine sur peau ex vivo traitée pendant 72h avec les différents extraits d'aneth à 1% (Tableau 2) sont plus 25 particulièrement illustrés dans la Figure 4. Tableau 2 : Expression Contenu en Longueur du col I DPT des fibres d'élastine (%) (%) (%) Contrôle 100 100 100 Extrait d'aneth d'Egypte 139 119 134 selon l'exemple 4 Extrait d'aneth de Chine 81 115 125 non himalayenne selon l'exemple 3 3066114 38 Extrait d'aneth d'Himalaya 164 165 166 selon l'exemple 5 Conclusion: L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 5) stimule davantage l'expression du collagène I et de l'élastine dans la peau ex vivo humaine en comparaison des extraits d'aneth 5 enrichi en petits ARN (exemples 3 et 4) provenant de Chine non himalayenne et d'Egypte. Ces protéines sont impliquées dans la fermeté et l'élasticité de la peau, leur synthèse permet donc un effet raffermissant. L'extrait d'aneth, et notamment d'aneth provenant d'Himalaya, obtenu selon l'invention permet donc de 10 lutter efficacement contre les signes du vieillissement cutané en améliorant la fermeté et l'élasticité de la peau. Exemple 15 : Evaluation des effets des extraits d'aneth selon les exemples 5, 6 et 7 sur l'hydratation par l'étude de 15 l'acide hyaluronique Le but de cette étude est de comparer les effets sur la synthèse de l'acide hyaluronique de trois extraits d'aneth d'Himalaya. Le premier extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu selon l'exemple 5, le deuxième extrait ne 20 contenant pas d'ARN de petit poids moléculaire, obtenu selon l'exemple 6 et le dernier extrait obtenu après macération selon l'exemple 7. L'étude de l'expression de l'acide hyaluronique est un moyen de juger de l'effet hydratant de l'invention. En effet, l'acide 25 hyaluronique est un composant majoritaire de la matrice extracellulaire du derme, également présent dans l'épiderme, et est impliqué dans l'hydratation cutanée. Protocole: Des biopsies de peau humaine de 6 mm de diamètre sont 30 maintenues en culture ex vivo en présence d'un milieu spécifique (DMEM 1 g/L, HAM'S F12, SVF et antibiotiques) sur des inserts. Les biopsies sont cultivées pendant 72h et reçoivent 2 3066114 39 applications par jour d'un extrait d'aneth selon les exemples 5, 6 et 7 dilué au 1/100eme dans du PBS, soit à la concentration finale de 1% volume/volume. La condition contrôle est réalisée à l'aide de PBS 1X. Les applications sont réalisées sous forme 5 d'une goutte de 10 pl déposée à la surface de la biopsie. Les biopsies sont ensuite fixées dans le formaldéhyde puis incluses dans la paraffine. Des coupes de peau de 4 pm d'épaisseur sont ensuite réalisées. Le marquage de l'acide hyaluronique est réalisé à l'aide d'une protéine de liaison spécifique de l'acide 10 hyaluronique, biotinylé (Coger-Seikagaki, Réf. 400-763-1A), et de streptavidine couplé à un fluorochrome (Invitrogen, Réf. S32354). Les biopsies sont alors examinées au microscope à Epifluorescence (Zeiss Axiovert 200M). Une quantification de l'intensité de la fluorescence obtenue après marquage de l'acide 15 hyaluronique est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). Résultats: Les résultats obtenus sont compilés dans le Tableau 3 ci-après. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits ARN, 20 obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant d'Himalaya à 1% pendant 72h permettent d'observer une augmentation significative de la synthèse d'acide hyaluronique aussi bien dans le derme que dans l'épiderme, comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 1X et comparé aux traitements avec 25 les extraits d'aneth obtenus selon les exemples 6 (absence d'ARN de petit poids moléculaire) et 7 (macération) à partir de plantes provenant d'Himalaya. Les résultats obtenus sur la quantification du marquage de l'acide hyaluronique sur peau ex vivo traitée pendant 72h avec différents extraits d'aneth à 1% 30 (Tableau 3) sont plus particulièrement illustrés dans la Figure 5, dans laquelle : moyenne +/- sem ; n=3 ; ***: hautement significatif, **: très significatif, ns: non significatif, avec le test t de Student. 3066114 Tableau 3 : Synthèse Synthèse d'acide d'acide hyaluronique hyaluronique dans dans le l'épiderme (%) derme (%) Contrôle 100 100 Extrait d'aneth d'Himalaya 171 175 selon l'exemple 5 Extrait d'aneth d'Himalaya 133 134 selon l'exemple 6 Extrait d'aneth d'Himalaya 107 94 selon l'exemple 7 Conclusion: L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 5) stimule davantage la synthèse d'acide hyaluronique dans 5 l'épiderme et le derme de la peau ex vivo humaine en comparaison des extraits d'aneth d'Himalaya non enrichis en petits ARN (exemples 6 et 7). L'acide hyaluronique est impliqué dans l'hydratation de la peau. 10 Exemple 16 : Evaluation des effets des extraits d'aneth de diférentes origines (Chine non himalayenne, Egypte, Chine d'Himalaya) respectivement selon les exemples 3, 4 et 5 sur l'hydratation par l'étude de l'acide hyaluronique Le but de cette 15 synthèse de l'acide étude est de comparer les effets sur la hyaluronique de trois extraits d'aneth obtenus selon les exemples 3, 4 et 5 ayant des origines géographiques différentes. Le premier extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant de Chine non himalayenne, le deuxième extrait enrichi en ARN de 20 petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant d'Egypte et le troisième extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant d'Himalaya. L'étude de l'expression de l'acide hyaluronique est un moyen de juger de l'effet hydratant de l'invention. En effet, l'acide 25 hyaluronique est un composant majoritaire de la matrice 3066114 41 extracellulaire du derme, également présent dans l'épiderme, et est impliqué dans l'hydratation cutanée. Protocole: Des biopsies de peau humaine de 6 mm de diamètre sont 5 maintenues en culture ex vivo en présence d'un milieu spécifique (DMEM 1 g/L, HAM'S F12, SVF et antibiotiques) sur des inserts. Les biopsies sont cultivées pendant 72h et reçoivent 2 applications par jour d'un extrait d'aneth de différentes origines géographiques, dilué au 1/100eme dans du PBS, soit à la 10 concentration finale de 1% volume/volume. La condition contrôle est réalisée à l'aide de PBS 1X. Les applications sont réalisées sous forme d'une goutte de 10 pl déposée à la surface de la biopsie. Les biopsies sont ensuite fixées dans le formaldéhyde puis incluses dans la paraffine. Des coupes de peau de 4 pm 15 d'épaisseur sont ensuite réalisées. Le marquage de l'acide hyaluronique est réalisé à l'aide d'une protéine de liaison spécifique de l'acide hyaluronique, biotinylé (Coger-Seikagaki, Réf. 400-763-1A), et de streptavidine couplé à un fluorochrome (Invitrogen, Réf. S32354). Les biopsies sont alors examinées au 20 microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M). Une quantification de l'intensité de la fluorescence obtenue après marquage du collagène I est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). Résultats: 25 Les résultats obtenus sont compilés dans le Tableau 4 ci- après. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits ARN, obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant d'Himalaya à 1% pendant 72h permettent d'observer une augmentation significative de la synthèse d'acide hyaluronique 30 aussi bien dans le derme que dans l'épiderme, comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 1X et comparé aux traitements avec les extraits d'aneth obtenus selon les exemples 3 et 4 à partir de plantes provenant de Chine non himalayenne et d'Egypte. Les résultats obtenus sur la quantification du 3066114 42 marquage de l'acide hyaluronique sur peau ex vivo traitée pendant 72h avec différents extraits d'aneth à 1% (Tableau 4) sont plus particulièrement illustrés dans la Figure 5. Tableau 4 : Synthèse Synthèse d'acide d'acide hyaluronique hyaluronique dans dans le derme l'épiderme (%) (%) Contrôle 100 100 Extrait d'aneth d'Egypte 133 157 selon l'exemple 4 Extrait d'aneth de Chine non 89 109 himalayenne selon l'exemple 3 Extrait d'aneth d'Himalaya 171 175 selon l'exemple 5 5 Conclusion: L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 5) stimule davantage la synthèse d'acide hyaluronique dans l'épiderme et le derme de la peau ex vivo humaine en comparaison des extraits d'aneth enrichi en petits ARN (exemples 3 et 4) 10 provenant de Chine non himalayenne et d'Egypte. L'acide hyaluronique est impliqué dans l'hydratation de la peau. Exemple 17 : Evaluation des effets des extraits d'aneth selon les exemples 5, 6 et 7 sur le vieillissement de la peau 15 par l'étude de P16, de la kératine 14 et de la fibrilline 1 Le but de cette étude est de comparer les effets sur le vieillissement de la peau de trois extraits d'aneth d'Himalaya. Le premier extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu selon l'exemple 5, le deuxième extrait ne contenant pas 20 d'ARN de petit poids moléculaire, obtenu selon l'exemple 6 et le dernier extrait obtenu après macération selon l'exemple 7. Le but de cette étude est d'évaluer les effets de ces trois extraits d'aneth sur l'expression des protéines p16, kératine 14 (K14) et fibrilline 1, impliquées dans le vieillissement cutané. 25 p16 est un régulateur du cycle cellulaire qui augmente avec l'âge 3066114 43 (Ressler S, Bartkova J, Niederegger H, Bartek J, ScharffetterKochanek K, Jansen-Dürr P, Wlaschek M. p16INK4A is a robust in vivo biomarker of cellular aging in human skin. Aging Cell. 2006 5(5):379-89). La kératine 14 est un composant du cytosquelette 5 des kératinocytes de la lame basale de l'épiderme, qui disparait avec la différentiation de ces cellules. La fibrilline 1 est un composant des fibres élastiques particulièrement sensible au vieillissement photoinduit (Watson RE, Griffiths CE, Craven NM, Shuttleworth CA, Kielty CM. Fibrillin-rich microfibrils are 10 reduced in photoaged skin. Distribution at the dermal-epidermal junction. J Invest Dermatol. 1999 112(5):782-7). Protocole: Des biopsies de peau humaine de 6 mm de diamètre sont maintenues en culture ex vivo en présence d'un milieu spécifique 15 (DMEM 1 g/L, HAM'S F12, SVF et antibiotiques) sur des inserts. Les biopsies sont cultivées pendant 48h (p16 et K14) ou 72h (fibrilline 1) et reçoivent 2 applications par jour d'un extrait d'aneth selon les exemples 5, 6 et 7 dilué au 1/100eme dans du PBS, soit à la concentration finale de 1% volume/volume. La 20 condition contrôle est réalisée à l'aide de PBS 1X. Les applications sont réalisées sous forme d'une goutte de 10 pl déposée à la surface de la biopsie. Les biopsies sont ensuite congelées (fibrilline 1) ou fixées dans le formaldéhyde puis incluses dans la paraffine (p16 et K14). Des coupes de peau de 25 4 pm sont ensuite réalisées. Les marquages p16, kératine 14 et fibrilline 1 sont effectués après un éventuel démasquage des sites spécifiques. Les immunomarquages sont réalisés à l'aide d'un anticorps monoclonal de souris spécifique de p16 (Abcam, Réf. Ab54210), d'un anticorps monoclonal de lapin spécifique de 30 la kératine 14 (Abcam, Réf. Ab51054), d'un anticorps monoclonal de souris spécifique de la fibrilline 1 (Abcam, Réf. Ab3090), puis d'un anticorps secondaire anti-souris ou anti-lapin couplé à un fluorochrome (Invitrogen, Réf. A21202 et A21206). Les biopsies sont alors examinées au microscope à Epi-fluorescence 3066114 44 (Zeiss Axiovert 200M). Une quantification de l'intensité de la fluorescence obtenue après marquage p16 et K14 est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). Une quantification de la longueur des fibres obtenues après marquage fibrilline 1 5 est réalisée, à l'aide du logiciel ImageJ. Résultats: Les résultats obtenus sont compilés dans le Tableau 5 ci-après. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits ARN, obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant d'Himalaya 10 à 1% pendant 48h permettent d'observer une diminution significative de l'expression de p16 et une augmentation significative de l'expression de la kératine 14 comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 1X et comparé aux traitements avec les extraits d'aneth obtenus selon les exemples 15 6 (absence d'ARN de petit poids moléculaire) et 7 (macération) à partir de plantes provenant d'Himalaya. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits ARN, obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant d'Himalaya à 1% pendant 72h permettent d'observer une augmentation significative de la 20 longueur des fibres comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 1X et comparé aux traitements avec l'extrait d'aneth obtenu selon l'exemple 7 (macération) à partir de plantes provenant d'Himalaya. Les résultats obtenus sur la quantification du marquage de p16 sur peau ex vivo traitée 25 pendant 48h avec différents extraits d'aneth à 1% (Tableau 5) sont plus particulièrement illustrés dans la Figure 6, dans laquelle : moyenne +/- sem ; n=3-6 ; ***: hautement significatif, **: très significatif, *: significatif, -: presque significatif (p=0.055), ns: non significatif, avec le test t de Student. 30 Tableau 5 : Expression Expression Longueur des de p16 (%) de K14 (%) fibres de fibrilline 1 (%) Contrôle 100 100 100 3066114 Extrait d'aneth d'Himalaya 65 122 138 selon l'exemple 5 Extrait d'aneth d'Himalaya 83 113 162 selon l'exemple 6 Extrait d'aneth d'Himalaya 89 108 98 selon l'exemple 7 Conclusion: L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 5) limite l'expression de p16 et stimule davantage l'expression de K14 dans la peau ex vivo humaine en comparaison des extraits 5 d'aneth d'Himalaya non enrichis en petits ARN (exemples 6 et 7). L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 5) stimule également davantage l'expression de la fibrilline 1 en comparaison de la macération, non enrichis en petits ARN, d'aneth d'Himalaya (exemple 7) mais pas en comparaison de l'extrait ne 10 contenant pas de petits ARN (exemple 6). Ces protéines sont impliquées dans le vieillissement de la peau. L'extrait d'aneth obtenu selon l'invention permet donc de lutter efficacement contre les signes du vieillissement cutané. 15 Exemple 18 : Evaluation des effets des extraits d'aneth de diférentes origines (Chine non himalayenne, Egypte, Chine d'Himalaya) respectivement selon les exemples 3, 4 et 5 sur le vieillissement de la peau par l'étude de P16, de la kératine 14 et de la fibrilline 1 20 Le but de cette étude est de comparer les effets sur le vieillissement de la peau de trois extraits d'aneth obtenus selon les exemples 3, 4 et 5 ayant des origines géographiques différentes. Le premier extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant de Chine non 25 himalayenne, le deuxième extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant d'Egypte et le troisième extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant d'Himalaya. 3066114 46 Le but de cette étude est d'évaluer les effets de ces trois extraits d'aneth sur l'expression des protéines p16, kératine 14 (K14) et fibrilline 1, impliquées dans le vieillissement cutané. Protocole: 5 Des biopsies de peau humaine de 6 mm de diamètre sont maintenues en culture ex vivo en présence d'un milieu spécifique (DMEM 1 g/L, HAM'S F12, SVF et antibiotiques) sur des inserts. Les biopsies sont cultivées pendant 48h (p16 et K14) ou 72h (fibrilline 1) et reçoivent 2 applications par jour d'un extrait 10 d'aneth de différentes origines géographiques, dilué au 1/100eme dans du PBS, soit à la concentration finale de 1% volume/volume. La condition contrôle est réalisée à l'aide de PBS 1X. Les applications sont réalisées sous forme d'une goutte de 10 pl déposée à la surface de la biopsie. Les biopsies sont ensuite 15 congelées (fibrilline 1) ou fixées dans le formaldéhyde puis incluses dans la paraffine (p16 et K14). Des coupes de peau sont ensuite réalisées. Les marquages p16, kératine 14 et fibrilline 1 sont effectués après un éventuel démasquage des sites spécifiques. Les immunomarquages sont réalisés à l'aide d'un 20 anticorps monoclonal de souris spécifique de p16 (Abcam, Réf. Ab54210), d'un anticorps monoclonal de lapin spécifique de la kératine 14 (Abcam, Réf. Ab51054), d'un anticorps monoclonal de souris spécifique de la fibrilline 1 (Abcam, Réf. Ab3090), puis d'un anticorps secondaire anti-souris ou anti-lapin couplé à un 25 fluorochrome (Invitrogen, Réf. A21202 et A21206). Les biopsies sont alors examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M). Une quantification de l'intensité de la fluorescence obtenue après marquage du collagène I est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). Une quantification 30 de l'intensité de la fluorescence obtenue après marquage p16 et K14 est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). Une quantification de la longueur des fibres obtenues après marquage fibrilline 1 est réalisée, à l'aide du logiciel ImageJ. 3066114 47 Résultats: Les résultats obtenus sont compilés dans le Tableau 6 ci-après. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits ARN, obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant 5 d'Himalaya à 1% pendant 48h (p16 et K14) ou 72h (fibrilline 1) permettent d'observer une diminution significative de l'expression de p16, une augmentation significative de l'expression de la kératine 14 et une augmentation de la longueur des fibres comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 10 1X et comparé aux traitements avec les extraits d'aneth obtenus selon les exemples 3 et 4 à partir de plantes provenant de Chine non himalayenne et d'Egypte. Les résultats obtenus sur la quantification du marquage de p16 sur peau ex vivo traitée pendant 48h avec différents extraits d'aneth à 1% (Tableau 6) 15 sont plus particulièrement illustrés dans la Figure 6. Tableau 6 : Expression Expression Longueur des de p16 (%) de K14 (%) fibres de fibrilline 1 (%) Contrôle 100 100 100 Extrait d'aneth d'Egypte 79 115 116 selon l'exemple 4 Extrait d'aneth de Chine 102 104 93 non himalayenne selon l'exemple 3 Extrait d'aneth d'Himalaya 65 122 138 selon l'exemple 5 Conclusion: L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 5) limite l'expression de p16 et stimule davantage l'expression 20 de K14 et de fibrilline 1 dans la peau ex vivo humaine en comparaison des extraits d'aneth enrichi en petits ARN (exemples 3 et 4) provenant de Chine non himalayenne et d'Egypte. Ces protéines sont impliquées dans le vieillissement de la peau. L'extrait d'aneth, et notamment d'aneth provenant d'Himalaya, 3066114 48 obtenu selon l'invention permet donc de lutter efficacement contre les signes du vieillissement cutané. Exemple 19 : Evaluation des effets des extraits d'aneth 5 selon les exemples 5, 6 et 7 sur la fonction barrière de la peau par l'étude de la pénétration du Lucifer Yellow dans des épidermes reconstruits (RHE) stressés Le but de cette étude est de comparer les effets de trois extraits d'aneth d'Himalaya sur le maintien de la fonction 10 barrière d'une peau reconstruite stréssée par du SDS et des particules grossières de pollution (PM10). Le premier extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu selon l'exemple 5, le deuxième extrait ne contenant pas d'ARN de petit poids moléculaire, obtenu selon l'exemple 6 et le dernier extrait 15 obtenu après macération selon l'exemple 7. L'étude de la pénétration du colorant fluorescent, Lucifer Yellow, est un moyen de juger de l'état de la barrière cutanée. Protocole: Des épidermes reconstruits de peau humaine (RHE) de 8 mm de 20 diamètre sont maintenues en culture en présence d'un milieu spécifique sur des inserts. Les biopsies sont cultivées pendant 72h. Elles reçoivent 2 applications par jour pendant 48h d'un extrait d'aneth selon les exemples 5, 6 et 7 dilué au 1/100eme dans du PBS, soit à la concentration finale de 1% volume/volume, 25 puis 1 application de SDS à 0,15% pendant 3h, puis 1 application de PM10 à 100 pg/ml pendant 24h. Deux conditions contrôles sont réalisées à l'aide de PBS 1X, suivi, ou non, de l'application de SDS et de PM10. Les applications sont réalisées sous forme d'une goutte de 150 pl déposée à la surface des RHE. Après les 30 traitements le Lucifer Yellow est appliqué sur les RHE à 0,5 mg/m1 pendant lh. Les RHE sont ensuite fixés dans le formaldéhyde puis incluses dans la paraffine. Des coupes de 4 pm d'épaisseur sont ensuite réalisées. Les RHE sont alors examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M). Une 3066114 49 quantification de la pénétration de la fluorescence obtenue après application du Lucifer Yellow est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). Résultats: 5 L'application des stress SDS et PM10 induit une perméabilisation de la barrière cutanée qui laisse pénétrer le Lucifer Yellow. Les résultats obtenus sont compilés dans le Tableau 7 ci-après. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits 10 ARN, obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant d'Himalaya à 1% pendant 48h avant stress SDS et PM10 permettent d'observer une pénétration du Lucifer Yellow moins profonde, comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 1X avant stress SDS et PM10 et comparé aux traitements avec les extraits 15 d'aneth obtenus selon les exemples 6 (absence d'ARN de petit poids moléculaire) et 7 (macération) à partir de plantes provenant d'Himalaya. L'extrait d'aneth obtenu selon l'invention permet donc de renforcer la fonction barrière de la peau. Tableau 7 : Pénétration du Lucifer Yellow (%) Contrôle stréssé 100 Extrait d'aneth d'Himalaya 77 selon l'exemple 5 + stress Extrait d'aneth d'Himalaya 103 selon l'exemple 6+ stress Extrait d'aneth d'Himalaya 112 selon l'exemple 7+ stress 20 Conclusion: L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 5) permet de limiter la pénétration du Lucifer Yellow, donc de renforcer la fonction barrière, dans des RHE stressés au SDS et PM10. Les extraits d'aneth d'Himalaya non enrichis en petits ARN 25 (exemples 6 et 7) ne permettent pas ce renforcement. 3066114 Exemple 20 : Evaluation des effets des extraits d'aneth de diférentes origines (Chine non himalayenne, Egypte, Chine d'Himalaya) respectivement selon les exemples 3, 4 et 5 sur la fonction barrière de la peau par l'étude de la pénétration du 5 Lucifer Yellow dans des épidermes reconstruits (RHE) stressés Le but de cette étude est de comparer, sur le maintien de la fonction barrière d'une peau reconstruite stréssée par du SDS et des particules grossières de pollution (PM10), les effets de trois extraits d'aneth obtenu selon les exemples 3, 4 et 5 ayant 10 des origines géographiques différentes. Le premier extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant de Chine non himalayenne, le deuxième extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant d'Egypte et le troisième extrait enrichi en 15 ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant d'Himalaya. L'étude de la pénétration du colorant fluorescent, Lucifer Yellow, est un moyen de juger de l'état de la barrière cutanée. Protocole: 20 Des épidermes reconstruits de peau humaine (RHE) de 8 mm de diamètre sont maintenues en culture en présence d'un milieu spécifique sur des inserts. Les biopsies sont cultivées pendant 72h. Elles reçoivent 2 applications par jour pendant 48h d'un extrait d'aneth de différentes origines géographiques dilué au 25 1/100eme dans du PBS, soit à la concentration finale de 1% volume/volume, puis 1 application de SDS à 0,15% pendant 3h, puis 1 application de PM10 à 100 pg/ml pendant 24h. Deux conditions contrôles sont réalisées à l'aide de PBS 1X, suivi, ou non, de l'application de SDS et de PM10. Les applications 30 sont réalisées sous forme d'une goutte de 150 pl déposée à la surface des RHE. Après les traitements le Lucifer Yellow est appliqué sur les RHE à 0,5 mg/m1 pendant lh. Les RHE sont ensuite fixés dans le formaldéhyde puis incluses dans la paraffine. Des coupes de 4 pm d'épaisseur sont ensuite réalisées. Les RHE sont 3066114 51 alors examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M). Une quantification de la pénétration de la fluorescence obtenue après application du Lucifer Yellow est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). 5 Résultats: L'application des stress SDS et PM10 induit une perméabilisation de la barrière cutanée qui laisse pénétrer le Lucifer Yellow. Les résultats obtenus sont compilés dans le Tableau 8 ci- 10 après. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits ARN, obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant d'Himalaya à 1% pendant 48h avant stress SDS et PM10 permettent d'observer une pénétration du Lucifer Yellow moins profonde, comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 1X avant 15 stress SDS et PM10 et comparé aux traitements avec les extraits d'aneth obtenus selon les exemples 3 et 4 à partir de plantes provenant de Chine non himalayenne et d'Egypte. Tableau 8 : Pénétration du Lucifer Yellow (%) Contrôle stréssé 100 Extrait d'aneth d'Egypte 108 selon l'exemple 4 + stress Extrait d'aneth de Chine non 87 himalayenne selon l'exemple 3 + stress Extrait d'aneth d'Himalaya 77 selon l'exemple 5 + stress Conclusion: 20 L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 5) permet de limiter la pénétration du Lucifer Yellow, donc de renforcer la fonction barrière, dans des RHE stressés au SDS et PM10. Les extraits d'aneth enrichi en petits ARN (exemples 3 et 4) provenant de Chine non himalayenne et d'Egypte ne permettent 25 pas ou moins ce renforcement. L'extrait d'aneth, et notamment 3066114 52 d'aneth provenant d'Himalaya, obtenu selon l'invention permet donc de renforcer la fonction barrière de la peau. Exemple 21 : Evaluation des effets des extraits d'aneth 5 selon les exemples 5, 6 et 7 sur le cuir chevelu Le but de cette étude est de comparer les effets de trois extraits d'aneth d'Himalaya sur le cuir chevelu. Le premier extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu selon l'exemple 5, le deuxième extrait ne contenant pas d'ARN de petit 10 poids moléculaire, obtenu selon l'exemple 6 et le dernier extrait obtenu après macération selon l'exemple 7. Le but de cette étude est d'évaluer les effets de ces trois extraits d'aneth sur l'expression de la kératine 14 (K14) qui est exprimée dans l'épiderme et dans les cheveux. Cette protéine 15 est remplacée par d'autres kératines avec la différentiation des cellules de l'épiderme. Dans les cheveux, elle est exprimée dans la gaine externe (Coulombe PA, Kopan R, Fuchs E. Expression of keratin K14 in the epidermis and hair follicle: insights into complex programs of differentiation. JCB 1989 109(5): 2295-312) 20 et est un marqueur de bonne santé du cheveux. Protocole: Des biopsies de cuir chevelu humain de 6 mm de diamètre sont maintenues en culture ex vivo en présence d'un milieu spécifique (DMEM 1 g/L, HAM'S F12, SVF et antibiotiques) sur des 25 inserts. Les biopsies sont cultivées pendant 48h et reçoivent 2 applications par jour d'un extrait d'aneth selon les exemples 5, 6 et 7 dilué au 1/100eme dans du PBS, soit à la concentration finale de 1% volume/volume. La condition contrôle est réalisée à l'aide de PBS 1X. Les applications sont réalisées sous forme 30 d'une goutte de 10 pl déposée à la surface de la biopsie. Les biopsies sont ensuite fixées dans le formaldéhyde puis incluses dans la paraffine. Des coupes de peau de 4 pm sont ensuite réalisées. Le marquage de la kératine 14 est effectués après démasquage des sites spécifiques. L'immunomarquages est réalisé 3066114 53 à l'aide d'un anticorps monoclonal de lapin spécifique de la kératine 14 (Abcam, Réf. Ab51054), puis d'un anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorochrome (Invitrogen, Réf. A21206). Les biopsies sont alors examinées au microscope à Epi- 5 fluorescence (Zeiss Axiovert 200M). Une quantification de l'intensité de la fluorescence obtenue après marquage K14 est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). Résultats: Les résultats obtenus sont compilés dans le Tableau 9 ci-10 après. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits ARN, obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant d'Himalaya à 1% pendant 48h permettent d'observer une augmentation significative de l'expression de la kératine 14 comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 1X et comparé 15 aux traitements avec les extraits d'aneth obtenus selon les exemples 6 (absence d'ARN de petit poids moléculaire) et 7 (macération) à partir de plantes provenant d'Himalaya. Tableau 9 : Expression de K14 (%) Contrôle 100 Extrait d'aneth d'Himalaya 123 selon l'exemple 5 Extrait d'aneth d'Himalaya 104 selon l'exemple 6 Extrait d'aneth d'Himalaya 93 selon l'exemple 7 Conclusion: 20 L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 5) stimule davantage l'expression de K14 dans la peau ex vivo humaine en comparaison des extraits d'aneth d'Himalaya non enrichis en petits ARN (exemples 6 et 7). La kératine 14 est impliquée dans la bonne santé des cheveux. L'extrait d'aneth 25 obtenu selon l'invention permet donc de renforcer la structure du cheveu, d'améliorer leur apparence et de favoriser leur lissage et leur résistance. 3066114 54 Exemple 22 : Evaluation des effets des extraits d'aneth de diférentes origines (Chine non himalayenne, Egypte, Chine d'Himalaya) respectivement selon les exemples 3, 4 et 5 sur le cuir chevelu 5 Le but de cette étude est de comparer les effets sur le cuir chevelu de trois extraits d'aneth obtenus selon les exemples 3, 4 et 5 ayant des origines géographiques différentes. Le premier extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant de Chine non himalayenne, le deuxième 10 extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant d'Egypte et le troisième extrait enrichi en ARN de petit poids moléculaire, obtenu à partir d'aneth provenant d'Himalaya. Le but de cette étude est d'évaluer les effets de ces trois 15 extraits d'aneth sur l'expression de la kératine 14 (K14) qui est exprimée dans l'épiderme et dans les cheveux. Protocole: Des biopsies de cuir chevelu humain de 6 mm de diamètre sont maintenues en culture ex vivo en présence d'un milieu 20 spécifique (DMEM 1 g/L, HAM'S F12, SVF et antibiotiques) sur des inserts. Les biopsies sont cultivées pendant 48h et reçoivent 2 applications par jour d'un extrait d'aneth de différentes origines géographiques, dilué au 1/100eme dans du PBS, soit à la concentration finale de 1% volume/volume. La condition contrôle 25 est réalisée à l'aide de PBS 1X. Les applications sont réalisées sous forme d'une goutte de 10 pl déposée à la surface de la biopsie. Les biopsies sont ensuite fixées dans le formaldéhyde puis incluses dans la paraffine. Des coupes de peau de 4 pm sont ensuite réalisées. Le marquage de la kératine 14 est effectués 30 après démasquage des sites spécifiques. L'immunomarquages est réalisé à l'aide d'un anticorps monoclonal de lapin spécifique de la kératine 14 (Abcam, Réf. Ab51054), puis d'un anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorochrome (Invitrogen, Réf. A21206). Les biopsies sont alors examinées au microscope à Epi- 3066114 fluorescence (Zeiss Axiovert 200M). Une quantification de l'intensité de la fluorescence obtenue après marquage K14 est réalisée, à l'aide du logiciel Volocity® (Improvision). Résultats: 5 Les résultats obtenus sont compilés dans le Tableau 10 ci- après. Les traitements avec l'extrait d'aneth enrichi en petits ARN, obtenu selon l'exemple 5 à partir d'aneth provenant d'Himalaya à 1% pendant 48h permettent d'observer une augmentation significative de l'expression de la kératine 14 10 comparé à la condition contrôle traitée avec du PBS 1X et comparé aux traitements avec les extraits d'aneth obtenus selon les exemples 3 et 4 à partir de plantes provenant de Chine non himalayenne et d'Egypte. Tableau 10 Expression de K14 (%) Contrôle 100 Extrait d'aneth d'Egypte 121 selon l'exemple 4 Extrait d'aneth de Chine 117 non himalayenne selon l'exemple 3 Extrait d'aneth d'Himalaya 123 selon l'exemple 5 15 Conclusion: L'extrait d'aneth d'Himalaya enrichi en petits ARN (exemple 5) stimule davantage l'expression de K14 dans la peau ex vivo humaine en comparaison des extraits d'aneth enrichi en petits ARN (exemples 3 et 4) provenant de Chine non himalayenne et 20 d'Egypte. La kératine 14 est impliquée dans la bonne santé des cheveux. L'extrait d'aneth, et notamment provenant d'aneth d'Himalaya, obtenu selon l'invention permet donc de renforcer la structure du cheveu, d'améliorer leur apparence et de favoriser leur lissage et leur résistance. REVENDICATIONS1. Composition cosmétique caractérisée en ce qu'elle comprend, en tant qu'agent actif, dans un milieu physiologiquement acceptable, une quantité efficace d'un extrait aqueux des parties aériennes d'aneth (Anethum graveolens) enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides obtenu à partir d'une matière végétale suivant les étapes suivantes selon lesquelles : a) on met en présence des parties aériennes d'Anethum graveolens avec de l'eau ; b) on ajoute de l'acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA) tétrasodique dans le mélange obtenu en a) à un pH compris entre 10,5 et 11 ; c) on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une valeur comprise entre 6 et 8 ; d) on purifie le mélange obtenu en c) de manière à éliminer la matière végétale solide résiduelle et obtenir un extrait brut aqueux purifié ; et e) on contrôle le pH et on le réajuste si nécessaire à une valeur comprise entre 6 et 8, préférentiellement entre 6 et 6,5. 2. Composition cosmétique selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'extrait aqueux de partie aérienne d'aneth enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides et dépourvu d'ADN, comprend en poids du poids total de l'extrait, 10 à 30 g/kg d'extrait de poids sec, 2 à 10 g/kg de fragments protéiques, 2 à 10 g/kg de sucres, 0,2 à 3 g/kg d'acides aminés, 100 à 2000 mg/kg de composés phénoliques et 10 à 100 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides et ne comprend pas d'ADN. 3. Composition cosmétique selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'extrait est dilué dans un solvant et comprend en poids du poids total de l'extrait, 5-15 g/kg 3066114 57 d'extrait sec, de 50 à 1000 mg/kg de polyphénols 0,5-10 g/kg de fragments protéiques, 0,5-10 g/kg de sucres, de 0,1 à 1 g/kg d'acides aminés et 10-100 mg/kg de petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. 5 4. Composition cosmétique selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'extrait est obtenu à partir d'aneth d'Himalaya. 5. Composition cosmétique selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait est présent à une 10 concentration comprise entre 0,1 et 5% en poids du poids total de la composition. 6. Composition cosmétique selon la revendication 5, caractérisée en ce que l'extrait est présent à une concentration comprise entre 0,5 et 2,5% en poids du poids total de la 15 composition. 7. Composition cosmétique selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle est formulée pour être administrée par voie orale ou être appliquée topiquement sur la peau. 20 8. Utilisation cosmétique d'une composition selon l'une des revendications 1 à 7 pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères. 9. Utilisation cosmétique selon la revendication 8, pour améliorer l'hydratation de la peau et renforcer la fonction 25 barrière. 10. Utilisation cosmétique selon la revendication 8, pour lutter contre les signes du vieillissement cutané et améliorer la fermeté et l'élasticité de la peau. 11. Utilisation cosmétique selon la revendication 8, pour 30 améliorer la santé du cheveu.