Brevet FR3074404A1 — publié le 20190607

La presente invention a pour objet un mélange antibacterien contenant du 4-(3-ethoxy-4- hydroxyphenyl)butan-2-one et une huile essentielle particuliere, ainsi qu'une composition cosmetique contenant un tel mélange. Le 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl)butan-2-one (compose cetonique) est une substance inte- ressante en tant que conservateur de compositions cosmetiques pour proteger les compositions de la contamination microbienne, comme decrit dans la demande WO 2011/039445. Toutefois, it est souhaitable de pouvoir incorporer ledit compose cetonique en concentration reduite dans des compositions, notamment cosmetiques ou dermatologiques, tout en con- servant une bonne performance de conservation antimicrobienne. II est donc recherché a cet effet des associations du compose cetonique avec d'autres composes presentant une efficacite antimicrobienne. Les inventeurs ont decouvert, de fawn inattendue, que l'association du 4-(3-ethoxy-4-hy- droxyphenyl)butan-2-one avec une huile essentielle choisie parmi les huiles essentielles de romarin, d'eucalyptus, d'origan vert, de geranium, de clou de girofle, de lemongrass, per-met d'obtenir un mélange antimicrobien presentant une synergie d'activite antimicrobienne, en particulier sur les moisissures, notamment sur Aspergillus niger, et sur les levures, en particulier sur Candida albicans. Les resultats de l'exemple 1 decrit ci-apres montrent l'ac- tivite antimicrobienne synergique obtenue avec les mesures de concentrations minimales inhibitrices (CM!) faites avec plusieurs mélanges. L'activite antimicrobienne est consideree comme etant synergique lorsque le mélange antimicrobien permet d'obtenir un pourcentage de croissance de la souche inferieur ou egal a 20 %. La demande FR-A-2962328 decrit une composition cosmetique pour traiter les odeurs cor- porelles liees a la transpiration humaine comprenant un compose 2-alcoxy-4-alkylcetonephenol, et une huile essentielle. La demande FR-A-2962333 decrit une composition cosmetique pour traiter la peau grasse comprenant un compose 2-alcoxy-4-alkylcetonephenol, et une huile essentielle. Ces documents ne decrivent pas specifiquement un mélange antimicrobien constitue de l'association du 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl)butan-2-one avec une huile essentielle choisi parmi celles citees precedemment, et ne suggerent pas non plus qu'un tel mélange presente une activite antimicrobienne synergique sur les moisissures, notamment sur Aspergillus niger, et sur les levures, en particulier sur Candida albicans. De fawn plus precise, ('invention a pour objet un mélange antimicrobien comprenant, ou consistue (ou consistant en), de la 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl)butan-2-one et une huile essentielle choisie parmi les huiles essentielles de romarin, d'eucalyptus, d'origan vert, de geranium, de clou de girofle, de lemongrass. L'invention a egalement pour objet une composition, notamment cosmetique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, le dit mélange decrit precedemment. 2 L'invention a encore pour objet un procede de traitement cosmetique non therapeutique des matieres keratiniques comprenant ('application sur les matieres keratiniques d'une composition telle que decrite precedemment. Le procede peut etre un procede cosmetique 5 de soin ou de maquillage ou de nettoyage des matieres keratiniques. La 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl)butan-2-one est un compose de formule HO /`0 10 L'huile essentielle presente dans le mélange antimicrobien selon l'invention est choisie parmi les huiles essentielles de romarin, d'eucalyptus, d'origan vert, de geranium, de clou de girofle, de lemongrass. 15 Les huiles essentielles se distinguent des huiles vegetales par le fait qu'elles ne peuvent pas etre decomposees par saponification en glycerol et savon d'acide gras. Par ailleurs, elles sont volatiles. Selon la definition donnee dans la norme internationale ISO 9235 et adoptee par la Commission de la Pharmacopee Europeenne, une huile essentielle est un produit generalement 20 de composition complexe, obtenu a partir d'une matiere premiere vegetale botaniquement definie, soit par entrainement a la vapeur d'eau, soit par distillation seche, soit par extraction au moyen de solvants liquides ou gazeux, soit par un procede mecanique approprie sans chauffage (expression a froid). L'huile essentielle est le plus souvent separee de la phase aqueuse par un procede physique n'entrainant pas de changement significatif de la com- 25 position. Ces huiles essentielles peuvent etre egalement preparees par synthese. L'huile essentielle utilisee selon l'invention peut etre obtenue a partir de tout materiel vegetal issu de la plante entiere ou de toute partie de ladite plante comme par exemple les feuilles, les tiges, les fleurs, les Wales, les graines, les fruits, les bourgeons, les racines, rameaux de plantes et/ou plantes entieres. 30 L'huile essentielle utilisee selon l'invention peut etre preparee selon les techniques men- tionnees ci-dessus et sera de preference obtenue selon la technique classique de l'entrainement a la vapeur d'eau. L'entrainement a la vapeur correspond a la vaporisation, en presence de vapeur d'eau, d'une substance peu miscible a l'eau. La matiere premiere est mise en presence d'eau 35 portee a ebullition ou de vapeur d'eau dans un alambic. La vapeur d'eau entraine la vapeur d'huile essentielle qui est condensee dans le refrigerant pour etre recuperee en phase liguide dans un vase florentin (ou essencier) oia l'huile essentielle est separee de l'eau par decantation. On appelle « eau aromatique » ou « hydrolat » ou « eau distillee florale », le 3 distillat aqueux qui subsiste a l'entrainement a la vapeur d'eau, une fois la separation de l'huile essentielle effectuee. Dans ('expose qui suit, les teneurs indiquees pour les composants des huiles essentielles 5 sont donnees par rapport au poids total de l'huile essentielle consideree. Une huile essentielle de romarin (Rosmarinum Officinalis Chemotype Oink)le ou Rosmarinum Officinalis pyramidalis) convenant a l'invention peut etre obtenue par extraction par distillation a la vapeur d'eau a partir des feuilles. 10 L'huile essentielle de romarin a notamment pour nom INCI : ROSMARINUS OFFICINALIS LEAF OIL. Selon un mode de realisation prefer& l'huile essentielle de Romarin selon l'invention peut etre une huile essentielle de Romarin chemotype cineole de type Afrique du Nord. L'huile essentielle de romarin comprend comme composants principaux le para-cymene, 15 le 1-8- cineole, l'a-pinene, le camphre, le 8-pinene. Une huile essentielle de Romarin Chemotype Cineole type Afrique du Nord comprend, avantageusement, un mélange de : para-cymene, notamment en une teneur de 0,5 a 2,5 %, 20 1-8- cineole, notamment en une teneur de 35 a 55 %, a-pinene, notamment en une teneur de 9 a 14 %, camphre, notamment en une teneur de 5 a 15 % , 8-pinene, notamment en une teneur de 4 a 9 %, camphene, notamment en une teneur de 2,5 a 6 %, 25 d-limonene, notamment en une teneur de 1,5 a 4 %, 8-caryophyllene, notamment en une teneur de 1 a 6 %, borneol, notamment en une teneur de 1 a 5 %, a-terpineol, notamment en une teneur de 1 a 2,5 %, myrcene, notamment en une teneur de 1 a 2 %, 30 para-cymene , notamment en une teneur de 0,5 a 2,5 %, acetate de bornyle, notamment en une teneur de 0.1 a 1,6 %. On peut par exemple utiliser l'huile essentielle de romarin vendue sous la denomination HE ROMARIN A CINEOLE BIO par la societe Elixens. 35 Une huile essentielle d'Eucalyptus (Eucalyptus radiata Sieb.) convenant pour l'invention peut etre obtenue par extraction par distillation a la vapeur d'eau a partir des feuilles. L'huile essentielle d'eucalyptus a notamment pour nom INCI : EUCALYPTUS RADIATA LEAF OIL 40 L'huile essentielle d'eucalyptus comprend comme composants principaux le 1,8-cineole et l'a-terpineol. En particulier, une huile essentielle d'Eucalyptus comprend avantageusement un mélange de : 4 1,8-cineole, notamment en une teneur de 60 a 75 % a-terpineol, notamment en une teneur de 4 a 11 % limonene, notamment en une teneur de 2,5 a 8 %. 5 On peut par exemple utiliser l'huile essentielle d'eucalyptus vendue sous la denomination HE EUCALYPTUS RADIATA BIO par la societe Elixens. Une huile essentielle d'origan vert (Origanum Heracleoticum) convenant pour ('invention peut etre obtenue par extraction des fleurs par distillation complete par entraine- 10 ment a la vapeur d'eau. L'huile essentielle d'origan vert a notamment pour nom INCI: ORIGANUM HERACLEOTICUM FLOWER OIL L'huile essentielle d'origan vert comprend comme composants principaux le carvacrol, le 15 para-cymene, le gamma-terpinene et le thymol. En particulier, une huile essentielle d'Origan vert comprend, avantageusement, un mé- lange de : carvacrol, notamment en une teneur de 45 a 65 %, 20 para-cymene, notamment en une teneur de 6 a 25 %, gamma-terpinene, notamment en une teneur de 7 a 18 %, thymol, notamment en une teneur de 0,001 a 10 %, myrcene, notamment en une teneur de 1 a 4%, alpha-terpinene, notamment en une teneur de 0,1 a 3 %, 25 alpha-pinene, notamment en une teneur de 0,3 a 2 %, alpha thuyene, notamment en une teneur de 0,5 a 3 %, 8-caryophyllene, notamment en une teneur de 0 a 4 %, linalol, notamment en une teneur de 0 a 2 %, terpinene-4-ol, notamment en une teneur de 0 a 2 %. 30 On peut par exemple utiliser l'huile essentielle d'origan vert vendue sous la denomination HE ORIGAN VERT BIO SICA par la societe Elixens. L'Huile essentielle de geranium (Pelargonium roseum asperum CV Afrique du Nord - 35 Egypte) convenant pour ('invention peut etre obtenue par extraction des feuilles, des tiges et des fleurs par distillation complete par entrainement a la vapeur d'eau. L'huile essentielle de geranium a notamment pour nom INCI: PELARGONIUM GRAVEOLENS FLOWER OIL 40 L'huile essentielle de geranium comprend comme composants principaux le citronnellol, le geraniol, le formate de citronnellyle, le linalol, le formate de geranyle, l'eudesmol, l'isomenthone. 5 En particulier, une huile essentielle de geranium comprend, avantageusement, un mélange de citronellol, notamment en une teneur de 25 a 36 %, geraniol, notamment en une teneur de 10 a 18 %, 5 linalol, notamment en une teneur de 4 a 8,5 %, citronnellyl formate, notamment en une teneur de 5 a 8 %, isomenthone, notamment en une teneur de 4 a 8 %, gamma-10 epi-eudesmol (ou eudesmol), notamment en une teneur de 3 a 6 %, geranyl formate, notamment en une teneur de 2 a 7 %, 10 geranyle tiglate, notamment en une teneur de 0,9 a 2 %, cis-rose oxyde, notamment en une teneur de 0,7 a 1,5 %, geranyle butyrate, notamment en une teneur de 0,7 a 2 %, phenyl-ethyl tiglate, notamment en une teneur de 0,5 a 1,2 %, trans-rose oxyde, notamment en une teneur de 0,3 a 0,6 %, 15 alpha-terpineol, notamment en une teneur de 0,3 a 0,6 %. A titre d'exemple d'huile essentielle de geranium selon la presente invention, on peut citer celle commercialisee par Elixens sous la denomination HE GERANIUM EGYPTE BIO. 20 Une huile essentielle de clou de girofle (Eugenia caryophyllus) convenant pour ('inven- tion peut etre obtenue par extraction par distillation a la vapeur d'eau a partir du Clou (bouton floral). L'huile essentielle de clou de girofle a notamment pour nom INCI : EUGENIA CARYOPHYLLUS FLOWER OIL 25 L'huile essentielle de clou de girofle comprend comme composants principaux l'eugenol, ('acetate d'eugenyle et le 8-caryophyllene. En particulier, une huile essentielle de clou de girofle peut comprendre : eugenol, notamment en une teneur de 75-87 %, acetate d'eugenyle, notamment en une teneur de 8-15 %, 30 8-caryophyllene, notamment en une teneur de 2-8 %. On peut par exemple utiliser l'huile essentielle de clou de girofle vendue sous la denomination HE GIROFLE CLOU BIO par la societe Elixens. 35 Une huile essentielle de lemongrass (Cymbopogon flexuosus ou Cymbopogon citratus) convenant pour ('invention peut etre obtenue par extraction par distillation a la vapeur d'eau des feuilles, preferentiellement recoltees de novembre a mai. L'huile essentielle de lemongrass a notamment pour nom INCI : CYMBOPOGON SCHOENANTHUS OIL 40 L'huile essentielle de lemongrass comprend comme composants principaux le geranial et le neral. En particulier, une huile essentielle de Lemongrass (Cymbopogon flexuosus) comprend, avantageusement, un mélange de : 6 geranial, notamment en une teneur de 35 a 47 %, neral, notamment en une teneur de 25 a 35 %, geraniol, notamment en une teneur de 1,5 a 8 %, limonene, notamment en une teneur de 0,5 a 3,5 %, 5 acetate de geranyl, notamment en une teneur de 0,5 a 6 %, 13-caryophyllene, notamment en une teneur de 0,2 a 3,5 %, methyl-heptenone, notamment en une teneur de 0,1 a 2 %. On peut par exemple utiliser l'huile essentielle de lemongrass vendue sous la denomi- 10 nation HE LEMONGRASS BIO par la societe Elixens. Selon un premier mode de realisation de l'invention, on utilise l'huile essentielle de romarin (denommee HE romarin). 15 Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) bu- tan-2-one / HE romarin allant de 0,35 a 1,5, de preference allant de 0,7 a 1,3. Un tel mélange presente une activite antimicrobienne synergique sur les levures, notamment sur Candida Albican. 20 Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) bu- tan-2-one / HE romarin allant de 0,1 a 0,4, de preference allant de 0,2 a 0,3. Un tel mélange presente une bonne activite antimicrobienne synergique sur les moisissures, notamment sur Aspergillus niger. 25 Selon un deuxieme mode de realisation de l'invention, on utilise l'huile essentielle d'euca- lyptus (denommee HE eucalyptus). Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / HE eucalyptus allant de 0,15 a 3, de preference allant de 0,15 a 1,5. Un tel 30 mélange presente une bonne activite antimicrobienne synergique sur les levures, notam- ment sur Candida Albican. Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / HE eucalyptus allant de 0,1 a 0,8, de preference allant de 0,15 a 0,4, et prefe- 35 rentiellement allant de 0,18 a 0,35. Un tel mélange presente une bonne activite antimicro- bienne synergique sur les moisissures, notamment sur Aspergillus niger. Selon un troisieme mode de realisation de l'invention, on utilise l'huile essentielle d'origan vert (denommee HE origan vert). 40 7 Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / HE origan vert allant de 3 a 15, de preference allant de 3 a 8, preferentiellement allant de 4 a 6. Un tel mélange presente une bonne activite antimicrobienne synergique sur les moisissures, notamment sur Aspergillus niger. Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / HE origan vert allant de 3 a 8, de preference allant de 4 a 6. Un tel mélange presente une bonne activite antimicrobienne synergique sur les levures, notamment sur Candida Albican. Selon un quatrierne mode de realisation de l'invention, on utilise l'huile essentielle de geranium (denommee HE geranium). Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) bu- 15 tan-2-one / HE geranium allant de 3 a 15, de preference allant de 7 a 13. Un tel mélange presente une bonne activite antimicrobienne synergique sur les levures, notamment sur Candida Albican. Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) bu- 20 tan-2-one / HE geranium allant de 1,5 a 4, de preference allant de 2 a 3. Un tel mélange presente une bonne activite antimicrobienne synergique sur les moisissures, notamment sur Aspergillus niger. Selon un cinquierne mode de realisation de l'invention, on utilise l'huile essentielle de clou 25 de girofle (denommee HE girofle). Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / HE girofle allant de 0,5 a 4, de preference allant de 1 a 3, preferentiellement allant de 1,5 a 3. Un tel mélange presente une bonne activite antimicrobienne synergique 30 sur les levures, notamment sur Candida Albican. Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / HE girofle allant de 2,4 a 4, de preference allant de 2,45 a 3,5, et preferentiellement allant de 2,45 a 3. Un tel mélange presente une bonne activite antimicrobienne sy- 35 nergique sur les moisissures, notamment sur Aspergillus niger. Selon un sixierne mode de realisation de l'invention, on utilise l'huile essentielle de lemon-grass (denommee HE lemongrass). 40 Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) bu- tan-2-one / HE lemongrass allant de 4 a 10, de preference allant de 5 a 8. Un tel mélange presente une bonne activite antimicrobienne synergique sur les levures, notamment sur Candida Albican. Le mélange antimicrobien peut avoir un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) bu- tan-2-one / HE lemongrass allant de 30 a 150, de preference allant de 30 a 70, preferentiellement allant de 40 a 60. Un tel mélange presente une bonne activite antimicrobienne synergique sur les moisissures, notamment sur Aspergillus niger. 5 10 Le compose 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl)butan-2-one peut etre present dans la composi- tion selon l'invention, en une teneur allant de 0,01 % a 5 % en poids, par rapport au poids 8 total de la composition, de preference allant de 0,01 % a 3 % en poids, preferentiellement allant de 0,01 a 2, 5 % en poids, et plus preferentiellement allant de 0,01 a 2 % en poids. L'invention a aussi pour objet une composition comprenant, dans un milieu 5 physiologiquement acceptable, le mélange antimicrobien decrit precedemment. On entend par milieu physiologiquement acceptable, un milieu compatible avec les matieres keratiniques d'etres humains tels que la peau, le cuir chevelu, les cheveux, les ongles. Le dit milieu peut comprendre un ou plusieurs ingredients additionnels, distinct du compose 10 cetonique et de ladite huile essentielle. La composition peut comprendre au moins un ingredient additionnel choisi parmi l'eau, les huiles, les polyols ayant de 2 a 10 atomes de carbone, les gelifiants, les tensioactifs, les polymeres filmogenes, les matieres colorantes, les parfums, les charges, les filtres UV, les 15 extraits vegetaux, les actifs cosmetiques et dermatologiques, et les sets. La composition selon l'invention peut comprendre une phase aqueuse. La composition peut comprendre de l'eau qui peut etre presente en une teneur allant de 20 5 % a 90 % en poids, par rapport au poids total de la composition, et de preference allant de 35 % a 75% en poids. La composition peut comprendre en outre un polyol miscible a l'eau a Ia temperature ambiante (25 °C) notamment choisi parmi les polyols ayant notamment de 2 a 10 atomes de 25 carbones, de preference ayant de 2 a 6 atomes de carbone, tels que Ia glycerine, le propy- lene glycol, le 1,3-propanediol, le butylene glycol, le pentylene glycol, l'hexylene glycol, le dipropylene glycol, le diethylene glycol, Ia diglycerine. Les compositions selon l'invention peuvent se presenter sous forme d'emulsions huile- 30 dans-eau (H/E) ou eau-dans-huile (E/H) ou multiple (triple : E/H/E ou H/E/H), de solutions huileuses, de gels huileux, de solutions aqueuses, de gels aqueux, de compositions solides. Ces compositions sont preparees selon les methodes usuelles. Les compositions selon l'invention peuvent etre plus ou moins fluides et avoir ('aspect d'une 35 crème blanche ou coloree, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un serum, d'une pate, d'une mousse. Elles peuvent etre eventuellement appliquees sur la peau sous forme d'aerosol. Elles peuvent aussi se presenter sous forme solide, et par exemple sous forme de stick ou de poudre compacte. 40 La composition selon l'invention peut notamment se presenter sous la forme : - d'un produit de maquillage, notamment de la peau du visage, du corps ou des levres ou des cils ; - d'un gel ou lotion apres-rasage; de produit de rasage ; 9 - d'un deodorant (stick, roll-on, aerosol) - d'une crème depilatoire; - sous la forme d'une composition d'hygiene corporelle telle qu'un gel douche ou un shampooing; 5 - d'une composition pharmaceutique; - d'une composition solide telle qu'un savon ou un pain de nettoyage; - d'une composition aerosol comprenant egalement un agent propulseur sous pression.; - d'une lotion de mise en plis, d'une crème ou d'un gel coiffant, d'une composition de teinture, d'une composition de permanente, d'une lotion ou d'un gel antichute, d'un apres sham- 10 pooing ; - d'une composition de soin ou de nettoyage de la peau. L'invention a aussi pour objet un procede de preparation d'une composition, notamment cosmetique ou dermatologique, comprenant une etape de mélange du 4-(3-ethoxy-4- 15 hydroxyphenyl)butan-2-one, de l'huile essentielle et d'un ou plusieurs ingredients additionnels, notamment cosmetiques ou dermatologiques, tels que ceux decrits precedemment. L'invention est illustree plus en detail dans I' exemple suivant. Les teneurs des ingredients 20 sont exprimees en pourcentage ponderal. Exemple 1 : determination de la synergie d'activite antimicrobienne en CMI La demonstration d'un effet de synergie d'activite antimicrobienne avec un mélange de 4- 25 (3-ethoxy-4-hydroxyphenyl)butan-2-one (appelee substance A) et d'huile essentielle (ap- pelee substance B) est realisee par le calcul de l'indice de synergie (ou FIC index) selon la formule suivante : FIC Index = (CMIa avec B/CMIa) + (CMIb avec A/CMIb) 30 avec : - CMIa avec B : concentration minimale en produit A dans l'association A + B permettant d'obtenir un effet inhibiteur - CMIb avec A : concentration minimale en produit B dans l'association A + B permet- 35 tant d'obtenir l'effet inhibiteur. - CMIa : concentration minimale inhibitrice du produit A seul. - CMIb : concentration minimale inhibitrice du produit B seul. Cette formule a ete decrite pour la premiere fois dans ('article de F.C. Kull, P.C. Eisman, H.D. Sylwestrowka, and R.L. Mayer, Applied Microbiology 9:538-541, 1961. 40 Pour chaque compose teste seul, la CMI est consideree comme la premiere concentration permettant l'obtention d'un pourcentage de croissance microbienne inferieur ou egal a 20%. 10 Concernant les associations testees, CMIa avec b et CM! b avec a sont les concentrations respectives de A et de B dans les associations permettant l'obtention d'un pourcentage de croissance microbienne inferieur ou egal a 20%. 5 Interpretation du FIC Index : Lorsque la valeur du FIC index est inferieure ou egale a 1, on considere que ('association des composes testes presente un effet synergique. La synthese des resultats obtenus est presentee dans les tableaux suivants. L'association des composes A et B ont ete testees sur les souches suivantes : Aspergillus 10 niger et Candida albicans. On a utilise la souche microbienne Aspergillus niger ATCC 6275, et un milieu de culture liquide bouillon Sabouraud additionne de monopalmitate de sorbitane polyoxyethylene (20 OE) (Tween 40 de chez Croda) et de Phytagel© BioReagent, a double concentration. 15 On a utilise la souche microbienne Candida albicans ATCC 10231 et un milieu de culture liquide bouillon Sabouraud a double concentration. .(soit un mélange de 5 g de Phytagel +0,6 g tween 40 + 60g bouillon Sabouraud). On utilise une microplaque 96 puits a une temperature d'incubation de 32,5 °C. La duree d'incubation de la microplaque est : 20 - de 24 a 48h en aerobiose pour Aspergillus niger; - de 18 a 24h en aerobiose pour Candida albicans. Essais Pour cheque compose : A = compose 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl)butan-2-one 25 B = huile essentielle avec : B1 = huile essentielle de romarin vendue sous la denomination HE ROMARIN A CI NEOLE BIO par la societe Elixens B2 = huile essentielle d'eucalyptus vendue sous la denomination HE EUCALYPTUS RADIATA BIO par la societe Elixens 30 B3 = huile essentielle d'origan vent vendue sous la denomination HE ORIGAN VERT BIO SICA par la societe Elixens B4 = huile essentielle de geranium vendue sous la denomination HE GERANIUM EGYPTE BIO par la societe Elixens B5 = huile essentielle de clou de girofle vendue sous la denomination 35 HE GIROFLE CLOU BIO par la societe Elixens. B6 = huile essentielle de lemongrass vendue sous la denomination HE LEMONGRASS BIO par la societe Elixens 40 On a prepare une solution mere a 10 % (poids/volume) en melangeant 1 g de compose dans 9 ml de solution aqueuse d'agar a 1%0 . des dilutions successives ont ete effectuees avec la solution d'agar a 1%0 - Essais des composes A, B seul 11 50pL de chacune des solutions filles obtenues contenant le compose A ou B est ajoute dans les puits de la microplaque. On y ajoute egalement 100p1 de bouillon nutritif liquide de Sabouraud ensemence par la souche Aspergillus nigeret 50pL de solution aqueuse d'agar a 1%0 . 5 - Essais des composes A + B en mélange 50pL de chacune des solutions filles obtenues contenant le compose A et 50pL de chacune des solutions filles obtenues contenant le compose B sont ajoutees dans les puits de la microplaque. On y ajoute egalement 100p1 de bouillon nutritif liquide de Sabouraud ensemence a double concentration par la souche Aspergillus niger. 10 Temoin de croissance microbienne On a egalement realise un temoin positif de croissance microbienne. Le temoin positif de croissance microbienne correspond au mélange de 100p1 d'une solution aqueuse d'agar 1%0 avec 100p1 de bouillon nutritif liquide de Sabouraud ensemence a double concentration par la souche Aspergillus niger en ('absence des composes A et B. 15 Temoin d'absorbance des composes A, B seul On a realise parallelement un temoin d'absorbance des composes A et B seul. Ce temoin correspond a 100p1 de bouillon nutritif liquide de Sabouraud sterile a double concentration + 100p1 du compose A ou B a double concentration. Dans les trois cas (temoin absorbance, temoin de croissance et essai) le volume final pre- 20 sent dans chacun des puits de la microplaque est de 200pL. Dans les deux cas (essai et temoin), l'inoculum represente la concentration de la souche Aspergillus niger presente dans le volume final des puits (200pL) et est compris entre 2 et 6.105 ufc/ml en Aspergillus niger. La concentration minimale inhibitrice (CM!) de chaque compose A et B seul et en associa- 25 tion a ete determinee de fawn connue a l'aide des mesures de densite optique a la longueur d'onde 620 nm. Le test tel que decrit ci-dessus (essais, temoins absorbance et temoin de croissance) a de nouveau ete realise pour tester les associations A + B sur la souche Candida albicans. 30 Les resultats obtenus decrits ci-apres pour le compose A teste seul peuvent varier selon le souchier de preparation (contenant la souche microbienne) utilise et dont la resistance aux composes ajoutes peut varier selon les variations normales de la methode de test utilise. 35 On a obtenu les resultats suivants : (pourcentage massiques en matiere active) A) Mélanges avec le compose B1 : huile essentielle de romarin a cineole Candida albicans concentra- 0 A 0,0313 A 0,0625 A 0,125 A 0,25 A tions testees (en % poids) 0 B1 57 59 24 0 0,125 B1 63 28 9 1 0 12 (FIC 0,75) (FIC 1) 0,25 B1 2 0 1 0 -1 CMI de A seul en % CMI de B1 seul en % CMI de compose chaque en mélange FIC Index A% B1 % 0,25 0,25 0,0625 0,125 0,75 Ratio A/B1 = 0,5 Les resultats obtenus montrent une synergie de I'activite inhibitrice pour les mélanges : i) 0,0625 % de A et 0,125 % de B1 soit ratio A/B1 = 0,5 5 ii) 0,125 % de A et 0,125 % de B1 soit ratio A/B1 = 1 Aspergillus niger concentra- tions testees (en % poids) 0 A 0,0313 A 0,0625 A 0,125 A 0 B1 35 29 12 0,125 B1 52 30 29 11 0,25 B1 28 19 15 2 (FIC 0,75) (FIC 1) 0,5 B1 18 5 2 0 CMI de A seul en % CMI de B1 seul en % CMI de compose chaque en me-lange B1 % FIC Index A% 0,125 0,25 0,0313 0,25 0,75 Ratio A/B1 = 0,125 Les resultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour les mélanges : i) 0,0313 % de A et 0,25 % de B1 soit ratio A/B1 = 0,125 ii) 0,0625 % de A et 0,25 % de B1 soit ratio A/B1 = 0,25 B) Mélanges avec le compose B2 : huile essentielle d'eucalyptus Candida albicans concentra- tions testees (en % poids) 0 A 0,0313 A 0,0625 A 0,125 A 0,25 A 0 B2 58 52 34 20 0,625 B2 76 60 41 11 2 (FIC 0,75) 0,125 B2 31 7 1 1 1 (FIC 0,63) (FIC 0,75) (FIC 1) 0,25 B2 3 2 1 1 1 10 15 13 CMI de A seul en % CMI de B2 seul en % CMI de compose chaque en mélange FIC Index A% B2% 0,25 0,25 0,0313 0,125 0,63 Ratio A/B2 = 0,5 Les resultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour les mélanges : i) 0,0313 % de A et 0,125 % de B2 soit ratio A/B2 = 0,25 ii) 0,0625 % de A et 0,125 % de B2 soit ratio A/B2 = 0,5 5 iii) 0,125 % de A et 0,125 % de B2 soit ratio A/B2 = 1 iv) 0,125 % de A et 0,0625 % de B2 soit ratio A/B2 = 2 Aspergillus niger concentra- tions testees (en % poids) 0 A 0,0313 A 0,0625 A 0,125 A 0 B2 48 34 17 0,0625 B2 56 40 29 12 0,125 B2 39 28 20 6 (FIC 0,75) 0,25 B2 24 15 12 3 (FIC 0,75) (FIC 1) 0,5 B2 11 4 4 3 10 CMI de A seul en % CMI de B2 seul en % CMI de compose chaque en mélange FIC Index A% B2% 0,125 0,25 0,0313 0,25 0,75 Ratio A/B2 = 0,125 Les résultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour les mélanges : i) 0,0313 % de A et 0,25 % de B2 soit ratio A/B2 = 0,125 ii) 0,0625 % de A et 0,25 % de B2 soit ratio A/B2 = 0,25 15 iii) 0,0625 % de A et 0,125 % de B2 soit ratio A/B2 = 0,5 C) Mélanges avec le compose B3 : huile essentielle d'origan vent 20 Candida albicans concentra- 0 A 0,0625 A 0,125 A tions testees (en % poids) 0 B3 47 12 0,0125 B3 59 15 2 (FIC 1) 0,025 B3 2 1 0 14 CMI de A seul en % CMI de B3 seul en % CMI de compose chaque en mélange FIC Index A% B3% 0,125 0,025 0,0625 0,0125 1 Ratio A/B3 = 5 Les resultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour le mélange : 0,0625 % de A et 0,0125 % de B3 soit ratio A/B3 = 5 5 Aspergillus niger concentra- tions testees (en % poids) 0 A 0,0625 A 0,125 A 0 B3 46 12 0,00625 B3 72 18 9 (FIC 0,75) 0,0125 B3 42 15 7 (FIC 1) 0,025 B3 13 7 5 CMI de A seul en % CMI de CMI de compose chaque en mélange FIC Index B3 seul en % A% B3% 0,125 0,025 0,0625 0,0125 1 Ratio A/B3 = 5 10 Les resultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour les mélanges : i) 0,0625 % de A et 0,0125 % de B3 soit ratio A/B3 = 5 ii) 0,0625 % de A et 0,00625 % de B3 soit ratio A/B3 = 10 D) Mélanges avec le compose B4 : huile essentielle de geranium 15 Candida albicans concentra- 0 A 0,0313 A 0,0625 A 0,125 A 0,25 A tions testees (en % poids) 0 B4 53 39 33 2 0,0625 B4 55 46 42 22 1 0,0125 B4 25 23 11 1 0 (FIC 0,75) (FIC 1) 0,025 B4 0 1 0 0 1 CMI de CMI de CMI de chaque FIC Index A seul en % B4 seul en % compose en mélange 15 A% B4% 0,25 0,025 0,0625 0,0125 0,75 Ratio A/B4 = 5 Les resultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour les mélanges : i) 0,0625 % de A et 0,0125 % de B4 soit ratio A/B4 = 5 ii) 0,125 % de A et 0,0125 % de B4 soit ratio A/B4 = 10 5 Aspergillus niger concentrations tes- tees (en % poids) 0 A 0,0313 A 0,0625 A 0,125 A 0 B4 48 44 13 0,0125 B4 57 40 36 11 0,025 B4 43 30 18 3 (FIC 1) 0,05 B4 9 7 4 2 CMI de A seul en % CMI de CMI de compose chaque en mélange FIC Index B4 seul en % A% B4% 0,125 0,05 0,0625 0,025 1 Ratio A/B4 = 2,5 10 Les resultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour le mélange : 0,0625 % de A et 0,025 % de B4 soit ratio A/B4 = 2,5 E) Mélanges avec le compose B5 : huile essentielle de clou de girofle 15 Candida albicans concentra- tions testees (en % poids) 0 A 0,0313 A 0,0625 A 0,125 A 0,25 A 0 B5 58 52 34 20 0,625 B5 76 60 41 11 2 (FIC 0,75) 0,125 B5 31 7 1 1 1 (FIC 0,63) (FIC 0,75) (FIC 1) 0,25 B5 3 2 1 1 1 CMI de A seul en % CMI de CMI de compose chaque en mélange FIC Index B5 seul en % A% B5% 0,25 0,25 0,0313 0,125 0,63 Ratio A/B5 = 0,5 Les resultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour les mélanges : 16 i) 0,0313 % de A et 0,125 % de B5 soit ratio A/B5 = 0,25 ii) 0,0625 % de A et 0,125 % de B5 soit ratio A/B5 = 0,5 iii) 0,125 % de A et 0,125 % de B5 soit ratio A/B5 = 1 iv) 0,125 % de A et 0,0625 % de B5 soit ratio A/B5 = 2 5 Aspergillus niger concentra- tions testees (en % poids) 0 A 0,0313 A 0,0625 A 0,125 A 0 B5 70 42 20 0,0125 B5 77 50 36 19 0,025 B5 56 29 20 3 0,05 B5 5 3 3 2 CMI de A seul en % CMI de CMI de compose chaque en mélange FIC Index B5 seul en % A% B5% 0,125 0,05 0,0625 0,025 1 Ratio A/B5 = 2,5 10 Les resultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour le mélange : 0,0625 % de A et 0,025 % de B5 soit ratio A/B5 = 2,5 F) Mélanges avec le compose B6 : huile essentielle de lemongrass 15 Candida albicans concentra- tions testees (en % poids) 0 A 0,0625 A 0,125 A 0 B6 50 18 0,0025 B6 65 42 11 0,005 B6 41 23 4 0,01 B6 34 13 1 (FIC 1) 0,02 B6 10 0 0 CMI de A seul en % CMI de CMI de compose chaque en mélange FIC Index B6 seul en % A% B6% 0,125 0,02 0,0625 0,01 1 Ratio A/B6 = 6,25 Les resultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour le mélange : 0,0625 % de A et 0,01 % de B6 soit ratio A/B6 = 6,25 20 17 Aspergillus niger concentra- tions testees (en % poids) 0 A 0,0625 A 0,125 A 0 B6 23 8 0,00625 B6 52 14 7 (FIC 0,75) 0,0125 B6 26 8 5 (FIC 1) 0,025 B6 3 5 4 CMI de A seul en % CMI de B6 seul en % CMI de compose chaque en mélange FIC Index A% B6% 0,125 0,025 0,0625 0,0125 1 Ratio A/B6 = 5 5 Les resultats obtenus montrent une synergie de l'activite inhibitrice pour les mélanges : i) 0,0625 % de A et 0,0125 % de B6 soit ratio A/B6 = 5 ii) 0,0625 % de A et 0,00625 % de B6 soit ratio A/B6 = REVENDICATIONS1. Mélange antimicrobien comprenant de la 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl)butan-2-one et une huile essentielle choisie parmi les huiles essentielles de romarin, d'eucalyptus, d'origan vert, de geranium, de clou de girofle, de lemongrass. 2. Mélange selon la revendication precedente, caracterise en ce qu'il presente une activite antimicrobienne sur les moisissures, notamment sur Aspergillus niger, et/ou sur les levures, en particulier sur Candida albicans. 3. Mélange selon l'une des revendications precedentes, caracterise en ce qu'il comprend de l'huile essentielle de romarin. 4. Mélange selon la revendication precedente, caracterise en ce qu'il a un ratio ponderal 4- (3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / huile essentielle de romarin allant de 0,35 a 1,5, de preference allant de 0,7 a 1,3 ; ou allant de 0,1 a 0,4, de preference allant de 0,2 a 0,3. 5. Mélange selon la revendication 1 ou 2, caracterise en ce qu'il comprend une huile essentielle d'eucalyptus. 6. Mélange selon la revendication precedente, caracterise en ce qu'il a un ratio ponderal 4- (3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / huile essentielle d'eucalyptus allant de 0,15 a 3, de preference allant de 0,15 a 1,5 ; ou allant de 0,1 a 0,8, de preference allant de 0,15 a 0,4, et preferentiellement allant de 0,18 a 0,35. 7. Mélange selon la revendication 1 ou 2 , caracterise en ce qu'il comprend une huile essentielle d'origan vert. 8. Mélange selon la revendication precedente, caracterise en ce qu'il a un ratio ponderal 30 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / huile essentielle d'origan vert allant de 3 a 15, de preference allant de 3 a 8, preferentiellement allant de 4 a 6. 9. Mélange selon la revendication 1 ou 2, caracterise en ce qu'il comprend une huile essentielle de geranium. 35 10. Mélange selon la revendication precedente, caracterise en ce qu'il a un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / huile essentielle de geranium allant de 3 a 15, de preference allant de 7 a 13 ; ou allant de 1,5 a 4, de preference allant de 2 a 3. 25 40 11. Mélange selon la revendication 1 ou 2, caracterise en ce qu'il comprend une huile es- sentielle de clou de girofle. 19 12. Mélange selon la revendication precedente, caracterise en ce qu'il a un ratio ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / huile essentielle de clou de girofle allant de 0,5 a 4, de preference allant de 1 a 3, preferentiellement allant de 1,5 a 3 ; ou allant de 2,4 a 4, de preference allant de 2,45 a 3,5, et preferentiellement allant de 2,45 a 3. 5 13. Mélange selon la revendication 1 ou 2, caracterise en ce qu'il comprend une huile essentielle de lemongrass. 14. Mélange selon la revendication precedente, caracterise en ce qu'il a un ratio 10 ponderal 4-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) butan-2-one / HE lemongrass allant de 4 a 10, de preference allant de 5 a 8 ; ou allant de 3 a 17, de preference allant de 3 a 7, preferentiellement allant de 4 a 6. 15. Composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, un mélange 15 antimicrobien selon l'une des revendications 1 a 14. 16. Composition selon la revendication precedente, caracterisee en ce qu'elle comprend au moins un ingredient additionnel choisi parmi l'eau, les huiles, les polyols ayant de 2 a 10 atomes de carbone, les gelifiants, les tensioactifs, les polymeres filmogenes, les matieres 20 colorantes, les parfums, les charges, les filtres UV, les extraits vegetaux, les actifs cosme- tiques et dermatologiques, et les sets. 17. Composition selon l'une des revendication 15 ou 16, caracterisee en ce que la 4-(3- ethoxy-4-hydroxyphenyl)butan-2-one est presente en une teneur allant de 0,01 % a 5 % en poids, par rapport au poids total de la composition, de preference allant de 0,01 % a 3 % en poids, et preferentiellement allant de 0,01 a 2,5 % en poids. 18. Procede de traitement cosmetique non therapeutique de soin et/ou de maquillage et/ou de nettoyage des matieres keratiniques comprenant ('application sur lesdites matieres ratiniques d'une composition selon l'une quelconque des revendications 15 a 17.