Brevet FR3066920A1 — publié le 20181207

NOUVEAUX PROCEDES DE FABRICATION D'UN ADJUVANT La présente invention concerne des procédés de fabrication d'un adjuvant comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique et des aspects associés. Des adjuvants sont inclus dans les vaccins pour améliorer les réponses immunitaires humorales et cellulaires, particulièrement dans le cas des vaccins sous-unitaires faiblement immunogènes. De façon similaire à des infections naturelles par des pathogènes, les adjuvants reposent sur l'activation du système immunitaire inné pour favoriser une immunité adaptative de longue durée. Du fait que l'activation simultanée de multiples voies immunitaires innées une caractéristique des infections naturelles, adjuvants peuvent immunostimulants afin de favoriser les est les multiples réponses combiner de immunitaires adaptatives à la vaccination. Le système adjuvant 01 (AS01) est un adjuvant à base de liposomes qui contient deux immunostimulants, le 3-0-désacy1-4'-monophosphoryl-lipide A (3D-MPL) et le QS-21 (Garcon and Van Mechelen, 2011 ; Didierlaurent et al., 2017). L'agoniste des TLR4, le 3D-MPL, est un dérivé non toxique du lipopolysaccharide issu de Salmonella minnesota. Le QS-21 est une molécule de saponine naturelle extraite de l'écorce de l'arbre d'Amérique du Sud Quillaja saponaria Molina (Kensil et al., 1991 ; Ragupathi et al., 2011). L'AS01 est inclus dans le vaccin antipaludique RTS,S récemment développé (MosquirixTm) et le vaccin contre Herpes zoster HZ/su 3066920 2 (ShingrixTM) et dans de multiples vaccins candidats en développement dirigés contre des pathogènes tels que le virus de l'immunodéficience humaine et Mycobacterium tuberculosis. Durant l'évaluation préclinique et 5 clinique de ces vaccins candidats, il a été constamment observé une immunité due à la fois à des anticorps spécifiques de l'antigène et à des lymphocytes T CD4+. La capacité de l'AS01 à engendrer de façon constante des réponses immunitaires cellulaires à la vaccination 10 le distingue d'autres adjuvants qui généralement favorisent principalement les réponses humorales à la vaccination (Black et al., 2015 ; Garcon and Van Mechelen, 2011). Simultanément, les vaccins adjuvés avec l'AS01 ont été efficaces en favorisant 15 l'immunogénicité à la vaccination dans les populations problématiques, telles que les nourrissons (avec RTS,S) et les adultes plus âgés (avec HZ/su). L'injection d'AS01 produit une activation rapide et transitoire de l'immunité innée dans des modèles 20 animaux. Les neutrophiles et les monocytes sont rapidement recrutés vers le ganglion lymphatique drainant (GLD) lors de l'immunisation. En outre, 1'AS01 induit le recrutement et l'activation des cellules dendritiques (CD) MHCIIIlle, qui sont nécessaires à 25 l'activation des lymphocytes T (Didierlaurent A.M. et al., 2014). Certaines données sont également disponibles sur le mécanisme d'action des composants de l'AS01. Le 3D-MPL envoie des signaux par l'intermédiaire des TLR4, stimulant l'activité transcriptionnelle du NF-KB et la production de cytokines et active directement les cellules 3066920 3 présentatrices de l'antigène (CPA) à la fois chez les êtres humains et chez les souris (De Becker et al., 2000 ; Ismaili et al., 2002 ; Martin et al., 2003 ; Mata-Haro et al., 2007). Le QS-21 favorise les réponses 5 élevées en anticorps spécifiques de l'antigène et les réponses des lymphocytes T CD84- chez les souris (Kensil and Kammer, 1998 ; Newman et al., 1992 ; Soltysik et al., 1995) et les réponses en anticorps spécifiques de l'antigène chez les êtres humains (Livingston et al., 10 1994). A cause de ses propriétés physiques, on pense que le QS-21 pourrait agir comme un signal de danger in vivo (Lambrecht et al., 2009 ; Li et al., 2008). Bien qu'il ait été montré que le QS-21 active l'inflammasome ASC-NLRP3 et la libération subséquente 15 d'IL-113/IL-18 (Marty-Roix, R. et al., 2016), les voies moléculaires exactes impliquées dans l'effet adjuvant des saponines doivent être encore clairement définies. Il a été montré que le 3D-MPL et le QS-21 agissent de façon synergique dans l'induction des réponses 20 immunitaires. En outre, il a été montré que la façon selon laquelle les deux immunostimulants sont fournis est un facteur important qui influence la qualité des réponses induites, avec la présentation liposomiale dans l'AS01 fournissant une puissance supérieure l'AS02 25 à base d'une émulsion huile dans l'eau. (Dendouga et al. 2012) Les documents US 2010202928 et US 2015115488 décrivent la préparation de liposomes en utilisant la microfluidique. 30 Le document WO 2013/192310 divulgue des procédés pour la production en masse de nanoparticules à l'aide 3066920 4 de micro-vortex contrôlés. Les procédés sont indiqués comme étant utilisés dans la préparation de particules polymères ou non polymères et de particules hybrides. Kim et al. Nano Letters 2012 12(7): 3587-3591 5 divulguent également des procédés pour la production en masse de nanoparticules à l'aide de micro-vortex contrôlés. Hood et al. Small 2015 11 43: 5790-5799 décrivent des procédés pour la production de liposomes en 10 utilisant la microfluidique. Il demeure un besoin de nouvelles approches de fabrication qui permettent la production sans risque, pratique et rentable d'adjuvants liposomiaux sur une échelle commercialement viable tout en conservant les 15 performances immunologiques émanant d'approches classiques de fabrication. Il a été découvert de façon surprenante qu'un dispositif microfluidique peut être utilisé pour fabriquer un adjuvant liposomial comprenant une 20 saponine tout en conservant des performances immunologiques comparables à des approches classiques de fabrication. Par conséquent, il est fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une 25 saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde 30 solution comprenant de l'eau et la saponine ; et (b) l'élimination du solvant. 3066920 5 Il est également fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : 5 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et 10 (c) l'élimination du solvant. Il est en outre fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : 15 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'élimination du solvant ; et 20 (c) l'ajout de la saponine. La présente invention fournit également un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, 25 comprenant l'étape de mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine. Il est également fourni un procédé de fabrication 30 d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une 3066920 6 saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de 5 phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; et (b) l'ajout de la saponine. Il est fourni en outre un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial, 10 ledit concentré liposomial comprenant de l'eau, un solvant, un lipide de phosphatidylcholine, une saponine et du cholestérol. Par conséquent, il est fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une 15 saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau 20 et la saponine ; et (b) l'élimination du solvant. Il est également fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les 25 étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et 30 (c) l'élimination du solvant. 3066920 7 Il est en outre fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : 5 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'élimination du solvant ; et (c) l'ajout de la saponine. 10 La présente invention fournit également un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant l'étape de mélange dans le dispositif d'une 15 première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine. Il est également fourni un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la 20 préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un 25 stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; et (b) l'ajout de la saponine. Il est en outre fourni un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial, 30 ledit concentré liposomial comprenant de l'eau, un solvant, de la DOPC, une saponine et du cholestérol. 3066920 8 La présente invention fournit en outre une solution comprenant un solvant et 100 à 170 mg/m1 de lipide, dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique. De 5 telles solutions peuvent être utilisées dans la fabrication de liposomes, comme un adjuvant liposomial. Brève description des dessins Figure 1 - Schéma de puce microfluidique de 10 chambre de mélange simple Figure 2 - Puce microfluidique de huit chambres de mélange Figure 3 - Tubulure de distribution de liquide (un à seize) 15 Figure 4 - Arrangement opérationnel de deux puces microfluidiques de huit chambres de mélange avec tubulures de distribution et de collecte Figure 5 - Impact du procédé de préparation du stock sur la distribution des tailles des liposomes 20 Figure 6 - Dépendance de la stabilité du stock à la concentration et à la température Figure 7 - Impact de la composition du solvant et de la température sur la taille des liposomes Figure 8 - Détail des conditions opérationnelles 25 et des arrangements organisationnels de l'exemple 4 Figure 9 - Résumé visuel des conditions de test de l'exemple 4 Figure 10 - Résultats de l'exemple 4 Figure 11 - Relation entre le Zav et le PdI 30 Figure 12 - Prédiction de la taille à 100 mg/mi de DOPC et rapport de 5 (phases organique/aqueuse 1/4) 3066920 9 Figure 13 - Prédiction de la taille à 130 mg/mi de DOPC et rapport de 5 (phases organique/aqueuse 1/4) Figure 14 - Prédiction de la taille à 160 mg/m1 de DOPC et rapport de 5 (phases organique/aqueuse 1/4) 5 Figure 15 - Prédiction de la taille à 100 mg/m1 de DOPC et rapport de 4 (phases organique/aqueuse 1/3) Figure 16 - Prédiction de la taille à 100 mg/m1 de DOPC et rapport de 6 (phases organique/aqueuse 1/5) Figure 17 - Prédiction de la taille à 130 mg/m1 de 10 DOPC et rapport de 6 (phases organique/aqueuse 1/5) Figure 18 - Prédiction de la taille à 130 mg/mi de DOPC et rapport de 4 (phases organique/aqueuse 1/3) Figure 19 - Prédiction de la taille à 160 mg/mi de DOPC et rapport de 4 (phases organique/aqueuse 1/3) 15 Figure 20 - Prédiction de la taille à 160 mg/m1 de DOPC et rapport de 6 (phases organique/aqueuse 1/5) Figure 21 - Conditions de confirmation testées à 130 mg/mi de DOPC et un rapport de 5 (phases organique/aqueuse 1/4) 20 Figure 22 - Titre des IgG spécifiques de la gE Figure 23 - Pourcentage des lymphocytes T CD4+ spécifiques de la gE Figure 24 - Taille des liposomes produits par microfluidique et stabilité du PdI après stockage 25 Figure 25 - Schéma d'un procédé à chambres multiples à l'échelle commerciale Figure 26 - Schéma d'une conception de tubulure initiale Figure 27 - Photographie du montage pour tester la 30 tubulure initiale 3066920 10 Figure 28 - Variation de débit observée pour la tubulure initiale à 200 ml/min Figure 29 - Variation de débit observée pour la tubulure initiale à 50 ml/min 5 Figure 30 - Diagramme comparant les valeurs prédites et les valeurs mesurées de la distribution des débits Figure 31 - Schéma de la conception de tubulure améliorée 10 Figure 32 - Variation de débit à partir de la moyenne par chaque canal pour l'unité de tubulure améliorée 1 (« B1 ») Figure 33 - Variation de débit à partir de la pour l'unité de tubulure de débit à partir de la pour l'unité de tubulure de la distribution des 20 tailles entre les liposomes des 16 chambres de mélange et de la chambre de mélange simple Figure 36 - Comparaison des titres des IgG spécifiques de la gE entre les adjuvants liposomiaux produits par microfluidique et film mince 25 Figure 37 - Comparaison des lymphocytes T CD4+ spécifiques de la gE entre les adjuvants liposomiaux produits par microfluidique et film mince Figure 38 - Comparaison du RMG des IgG spécifiques de la gE entre les adjuvants liposomiaux produits par 30 microfluidique et film mince moyenne par chaque canal 15 améliorée 2 (« B2 ») Figure 34 - Variation moyenne par chaque canal améliorée 3 (« A2 ») Figure 35 - Comparaison 3066920 11 Figure 39 - Comparaison du RMG des lymphocytes T CD4+ spécifiques de la gE entre les adjuvants liposomiaux produits par microfluidique et film mince Figure 40 - Comparaison de la distribution des 5 tailles entre les liposomes avec une saponine (QS21) et un agoniste des TLR4 (3D-MPL) des 16 chambres de mélange et de la chambre de mélange simple Description des identifiants des séquences 10 SEQ ID NO : 1 - Séquence du polypeptide RTS SEQ ID NO : 2 - Séquence du polypeptide Rv1196 de la souche H37Rv de M. tuberculosis SEQ ID NO : 3 - Séquence du polypeptide Rv0125 de la souche H37Rv de M. tuberculosis 15 SEQ ID NO : 4 - Séquence du polypeptide de fusion M72 SEQ ID NO : 5 - Séquence du polypeptide de fusion M72-2his SEQ ID NO : 6 - Séquence polypeptidique de la gE 20 tronquée du virus varicelle zona SEQ ID NO : 7 - Séquence polypeptidique de l'antigène PreF du RSV conformationnellement contraint SEQ ID NO : 8 - Séquence polypeptidique de la gp120 du VIH TV1 25 SEQ ID NO : 9 - Séquence polypeptidique de la gp120 du VIH 1086.0 Description détaillée La présente invention fournit un procédé de 30 fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une 3066920 12 saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de 5 phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine ; et (b) l'élimination du solvant. Il est également fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en 10 utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde 15 solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et (c) l'élimination du solvant. Il est en outre fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en 20 utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde 25 solution comprenant de l'eau ; (b) l'élimination du solvant ; et (c) l'ajout de la saponine. La présente invention fournit également un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser 30 dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, 3066920 13 comprenant l'étape de mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine. 5 Il est également fourni un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : 10 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; et (b) l'ajout de la saponine. 15 Il est fourni en outre un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial, ledit concentré liposomial comprenant de l'eau, un solvant, un lipide de phosphatidylcholine, une saponine et du cholestérol. 20 La présente invention fournit également un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première 25 solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine ; et (b) l'élimination du solvant. Il est également fourni un procédé de fabrication 30 d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en 3066920 14 utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, 5 et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et (c) l'élimination du solvant. Il est en outre fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en 10 utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau 7 15 (b) l'élimination du solvant ; et (c) l'ajout de la saponine. La présente invention fournit également un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant 20 une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant l'étape de mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine. 25 Il est également fourni un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : 3066920 15 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; et (b) l'ajout de la saponine. 5 Il est en outre fourni un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial, ledit concentré liposomial comprenant de l'eau, un solvant, de la DOPC, une saponine et du cholestérol. La présente invention fournit en outre une 10 solution comprenant un solvant et 100 à 170 mg/m1 de lipide, dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique. De telles solutions peuvent être utilisées dans la fabrication de liposomes, comme un adjuvant liposomial. 15 Dispositifs microfluidiques Un dispositif microfluidique est un appareil manipulant des liquides dans lequel généralement au moins un aspect a une dimension à l'échelle sub-mm et 20 généralement le mélange se produit à l'aide d'un moyen passif (c'est-à-dire, à l'aide du contact de courants de liquides et sans parties mobiles au sein de la chambre de mélange). Le dispositif microfluidique comprendra une chambre de mélange au sein de laquelle 25 la première solution et la seconde solution sont mélangées. La chambre de mélange aura généralement une section transversale qui est de 25,6 mm2 ou inférieure, comme 12,8 mm2 ou inférieure, de façon appropriée 30 6,4 mm2 ou inférieure, spécialement 3,2 mm2 ou inférieure et en particulier 1,6 mm2 ou inférieure. La 3066920 16 chambre de mélange aura généralement une section transversale qui est de 0,1 mm2 ou supérieure, de façon appropriée 0,2 mm2 ou supérieure, spécialement 0,3 mm2 ou supérieure et en particulier 0,4 mm2 ou supérieure. 5 Dans certains modes de réalisation, la chambre de mélange aura une section transversale qui est de 0,2 à 3,2 mm2, comme 0,4 à 1,6 mm2, spécialement 0,6 à 1,2 mm2 et en particulier 0,7 à 1,0 mm2 (par exemple, 0,8 mm2). La coupe transversale de la chambre de mélange 10 peut être de toute forme, quoiqu'elle soit généralement symétrique. La coupe transversale peut être sensiblement rectangulaire (comme carrée). La coupe transversale peut être allongée en nature, avec la dimension plus grande étant au moins deux fois celle de 15 la dimension perpendiculaire, comme au moins trois fois ou au moins quatre fois. La dimension plus grande peut être pas plus de dix fois celle de la dimension perpendiculaire, comme pas plus de huit fois ou pas plus de six fois. La dimension plus grande sera 20 habituellement deux à dix fois celle de la dimension perpendiculaire, comme trois à huit fois, spécialement quatre à six fois, en particulier cinq fois. Une coupe transversale rectangulaire peut avoir un côté long de 1 à 8 mm, comme 1 à 4 mm, par exemple 1,4 25 à 3,2 mm, spécialement 1,6 à 2,4 mm, en particulier 1,8 à 2,2 mm (par exemple, 2 mm). Une coupe transversale rectangulaire peut avoir un côté court de 0,1 à 4 mm, par exemple, 0,1 à 2 mm, éventuellement 0,1 à 1,2 mm, comme 0,1 à 0,8 mm, spécialement 0,2 à 0,6 mm, en 30 particulier 0,3 à 0,5 mm (par exemple, 0,4 mm). 3066920 17 Le dispositif microfluidique comportera au moins une entrée (comme une entrée) dans la chambre de mélange pour l'administration de la première solution. Le dispositif peut comporter une pluralité d'entrées 5 dans la chambre de mélange pour l'administration de la première solution, comme deux entrées. De façon appropriée, le dispositif microfluidique comportera cinq entrées ou moins dans la chambre de mélange pour l'administration de la première solution, comme quatre 10 ou moins. Le dispositif microfluidique comportera au moins une entrée dans la chambre de mélange pour l'administration de la seconde solution. Le dispositif peut comporter une pluralité d'entrées dans la chambre 15 de mélange pour l'administration de la seconde solution, comme deux entrées. De façon appropriée, le dispositif microfluidique comportera cinq entrées ou moins dans la chambre de mélange pour l'administration de la seconde solution, comme quatre ou moins. 20 Pour faciliter un mélange adéquat, le nombre d'entrées pour la première solution et la seconde solution peut être augmenté pour des chambres de mélange avec des sections transversales plus grandes. La coupe transversale des entrées peut être de 25 toute forme, quoiqu'elle soit généralement symétrique. La coupe transversale peut être rectangulaire (comme carré). Chaque entrée aura généralement une coupe transversale qui est de 1,28 mm2 ou inférieure, de 30 façon appropriée 0,64 mm2 ou inférieure, spécialement 0,32 mm2 ou inférieure et en particulier 0,16 mm2 ou 3066920 18 inférieure. Chaque entrée aura généralement une section transversale qui est de 0,01 mm2 ou supérieure, de façon appropriée 0,02 mm2 ou supérieure, spécialement 0,03 mm2 ou supérieure et en particulier 0,04 mm2 ou 5 supérieur. Dans certains modes de réalisation, chaque entrée aura une section transversale qui est de 0,02 à 0,32 mm2, spécialement 0,06 à 0,12 mm2 et en particulier 0,07 à 0,10 mm2 (par exemple, 0,8 mm2). La section transversale totale de toutes les 10 entrées sera généralement inférieure à 70 % de la section transversale de la chambre de mélange, comme inférieure à 60 % et spécialement inférieure à 50 %. De façon pratique, les entrées peuvent couvrir la pleine longueur d'un côté de la chambre de mélange. 15 La forme et la taille de chaque entrée peuvent varier indépendamment. Toutefois, généralement les entrées pour la première solution seront identiques en forme et en taille, et les entrées pour la seconde solution seront identiques en forme et -en taille. De 20 façon pratique, toutes les entrées sont identiques en forme et en taille. Chaque entrée peut être de 2 à 20 % de la largeur de la chambre de mélange, par exemple, 5 à 15 % comme 8 à 12 %, spécialement 10 %. Une conception d'entrée particulière est de forme 25 rectangulaire, large de 0,2 mm et couvre la pleine longueur de l'autre côté de la chambre de mélange (par exemple, haute de 0,4 mm). Les entrées seront généralement localisées de telle façon que la direction du flux de la première 30 solution et de la seconde solution dans la chambre de mélange est sensiblement parallèle (par exemple, à 3066920 19 15 degrés, comme à 10 degrés, en particulier à 5 degrés), comme parallèle, par rapport à la direction générale du flux à travers la chambre de mélange. Le dispositif microfluidique comportera au moins 5 une sortie de la chambre de mélange pour la récupération du matériau mélangé. Le dispositif peut comporter une pluralité de sorties de la chambre de mélange pour la récupération du matériau mélangé, comme deux ou trois sorties, qui sont ultérieurement 10 combinées. De façon appropriée, le dispositif comportera une seule sortie de la chambre de mélange pour la récupération du matériau mélangé. La coupe transversale des sorties peut être de toute forme, quoiqu'elle soit généralement symétrique. 15 La coupe transversale peut être rectangulaire (comme carrée), ayant généralement une surface de 0,2 à 1 mm2, comme 0,3 à 0,6 mm2, par exemple 0,4 à 0,5 mm2. Dans d'autres exemples, la sortie peut être de coupe transversale circulaire (par exemple, ayant un diamètre 20 de 0,5 à 1 mm, comme 0,6 à 0,8 mm, par exemple 0,75 mm). La section transversale totale de toutes les sorties sera généralement inférieure à 70 % de la section transversale de la chambre de mélange, comme inférieure à 60 % et spécialement inférieure à 50 %. 25 La chambre de mélange devra avoir une longueur adéquate pour permettre au mélange d'être sensiblement complet au moment où le liquide atteint la ou les sorties. Généralement, la chambre aura une longueur de 1 à 10 cm, comme 1,5 à 5 cm, spécialement 1,8 à 4 cm, 30 en particulier 2 à 3 cm, par exemple 2,5 cm. 3066920 20 Dans un mode de réalisation, le dispositif comprend une chambre de mélange qui a une coupe transversale rectangulaire, ayant une section transversale de 0,2 à 3,2 mm2 (par exemple, 0,6 à 5 1,0 mm2), un côté long de 1,4 à 3,2 mm (par exemple, 1,6 à 2,4 mm), un côté court de 0,1 à 1,2 mm (par exemple, 0,32 à 0,48 mm), une entrée pour la première solution et deux entrées pour la seconde solution qui sont disposées de façon symétrique à l'extrémité 10 proximale de la chambre de mélange, une longueur de chambre de mélange de 1,5 à 5 cm (par exemple, 2 à 3 cm) et une sortie localisée à l'extrémité distale de la chambre de mélange. De façon appropriée, les entrées ont une largeur de 0,16 à 0,24 mm et couvrent la pleine 15 longueur de l'autre côté de la chambre de mélange. Le dispositif microfluidique peut être formé de tout matériau approprié, à savoir un qui est tolérant aux composants utilisés dans la première solution et la seconde solution et qui se prête à une fabrication. Les 20 matériaux appropriés comprennent le silicium et le verre. L'acier inoxydable est un autre matériau approprié. Les dispositifs peuvent être préparés à partir de ces matériaux par gravure, par exemple, les dispositifs en silicium peuvent être préparés par 25 gravure ionique réactive profonde (DRIE, ou gravure au plasma) et les dispositifs en verre peuvent être préparés par gravure humide (gravure HF). Les matériaux choisis peuvent être soumis à un traitement de surface pour améliorer les caractéristiques de la surface. 30 Pour obtenir une durée de traitement des lots qui soit une période de temps gérable (par exemple, 3066920 21 240 minutes ou inférieure, spécialement 120 minutes ou inférieure), il est nécessaire que le système atteigne un niveau suffisant de productivité. En outre, pour aider l'homogénéité d'un lot à l'autre en réduisant 5 l'impact des effets de démarrage et d'arrêt, il est nécessaire que le temps de traitement soit d'une longueur adéquate (par exemple, au moins 30 minutes, spécialement au moins 60 minutes). 10 Augmentation de l'échelle du dispositif microfluidique Afin de faciliter la production de l'adjuvant liposomial à une échelle industrielle (par exemple, une échelle d'au moins 0,5 g de lipide de 15 phosphatidylcholine par minute, comme au moins 1 g par minute, en particulier au moins 2 g par minute et spécialement au moins 4 g par minute, comme une échelle d'au moins 0,5 g de DOPC par minute, comme au moins 1 g par minute, en particulier au moins 2 g par minute et 20 spécialement au moins 4 g par minute), de grandes chambres de mélange peuvent être utilisées ou une pluralité de chambres de mélange peuvent fonctionner en parallèle. Par exemple, 2 chambres de mélange ou plus, en particulier 4 ou plus, spécialement 8 ou plus, comme 25 16 ou plus (par exemple, 16). La pluralité des chambres de mélange qui fonctionnent en parallèle peut être de 128 ou moins, comme 64 ou moins, en particulier 32 ou moins. Par conséquent, dans certains modes de réalisation, la pluralité des chambres de mélange est 30 de 2 à 128, comme 4 à 64, par exemple 8 à 32. 3066920 22 Dans certaines circonstances, chaque chambre de mélange issue de la pluralité des chambres de mélange peut fonctionner indépendamment, avec la fourniture de la première solution et de la seconde solution à la 5 chambre de mélange par des pompes indépendantes (c'est-à-dire, chaque pompe ne fournissant pas simultanément la solution à une autre chambre de mélange quelconque). La première solution et/ou la seconde solution peuvent être stockées dans des récipients indépendants (c'est- 10 à-dire, des récipients ne fournissant pas simultanément la première solution et/ou la seconde solution à plus d'une chambre de mélange), ou la première solution et/ou la seconde solution peuvent être stockées dans un récipient à utiliser dans plus d'une chambre de mélange 15 (comme toutes les chambres de mélange). Le matériau mélangé issu de chaque chambre de mélange peut être récupéré individuellement et stocké/traité, étant éventuellement combiné à un stade ultérieur, ou il peut être combiné (par exemple, à partir de toutes les 20 chambres de mélange) avant un autre traitement et/ou stockage. De façon pratique, toutes les chambres de mélange dans la pluralité des chambres de mélange sont alimentées par les mêmes pompes et le matériau mélangé 25 issu de toutes les chambres de mélange est recueilli avant un autre traitement et/ou stockage. De façon appropriée, toutes les chambres de mélange et le flux de liquide au sein de toutes les chambres de mélange sont sensiblement identiques, de telle façon que le 30 matériau obtenu à partir de chaque chambre de mélange est sensiblement identique. De façon souhaitable, les 3066920 23 débits mesurés dans chaque chambre de mélange varient de moins de 5 % du débit souhaité. De façon optimale, les chambres de mélange, les entrées et les sorties, l'alimentation de la première 5 solution, de la seconde solution et le recueil du matériau mélangé des multiples chambres de mélange sont configurés de telle façon que, lors du fonctionnement, leurs performances sont sensiblement identiques. Chaque chambre de mélange issue de la pluralité 10 des chambres de mélange peut être configurée sous la forme d'une puce individuelle ou, pour des raisons pratiques, un certain nombre de chambres de mélange peuvent être combinées en une seule puce (par exemple, contenant 8 chambres de mélange). Un certain nombre de 15 ces puces peuvent être utilisées en parallèle pour fournir la pluralité de chambres (par exemple, deux puces contenant chacune 8 chambres de mélange pour fournir un total de 16 chambres de mélange qui fonctionnent en parallèle). 20 De façon appropriée, la pluralité des chambres de mélange est capable de produire le matériau mélangé à un taux total de 50 à 2000 ml/min, comme 100 à 1000 ml/min, en particulier 200 à 500 ml/min. Les dispositifs microfluidiques décrits ici sont 25 un aspect de la présente invention. Première solution La première solution (la phase « organique ») comprend un solvant, un lipide de phosphatidylcholine 30 et un stérol. De façon appropriée, la première solution comprend un solvant, de la DOPC et un stérol. 3066920 24 Le solvant devra solubiliser le lipide de phosphatidylcholine (tel que la DOPC), le stérol et tout autre composant présent pour fournir la première solution sous la forme d'une phase simple. En outre, le 5 solvant devra être miscible avec la solution aqueuse, de telle façon que le mélange de la première solution et de la seconde solution produise une phase liquide simple qui comprend une suspension de liposomes. Le solvant sera un solvant organique ou un mélange 10 en phase simple comprenant au moins un solvant organique. Le solvant peut comprendre un alcool organique à chaîne courte, tel que l'éthanol et/ou l'isopropanol. De façon appropriée, le solvant comprendra de 15 l'éthanol, comme à une concentration située entre 70 et 90 % v/v, de façon davantage appropriée entre 75 et 85 % v/v, ou entre 78 et 82 % v/v. De façon appropriée, le solvant comprendra de l'isopropanol, comme à une concentration située entre 20 10 et 30 % v/v, de façon davantage appropriée entre 15 et 25 % v/v, ou entre 18 et 22 % v/v. De façon appropriée, le solvant sera constitué essentiellement d'éthanol à une concentration située entre 70 et 90 % v/v et d'isopropanol à une 25 concentration située entre 10 et 30 % v/v, comme de l'éthanol à une concentration située entre 75 et 85 % v/v et de l'isopropanol à une concentration située entre 15 et 25 % v/v, spécialement de l'éthanol à une concentration située entre 78 et 82 % v/v et de 30 l'isopropanol à une concentration située entre 18 et 22 % v/v, en particulier de l'éthanol à une 3066920 25 concentration de 80 % v/v et de l'isopropanol à une concentration de 20 % v/v. A des concentrations supérieures en éthanol, comme supérieures à 90 % v/v d'éthanol, la capacité de solubilisation du solvant est 5 limitée (ce qui contraint finalement la capacité du système). A des concentrations inférieures d'éthanol, comme inférieures à 70 % v/v d'éthanol, le procédé peut être plus sensible aux paramètres opérationnels, tels que la température. 10 Comme il a été mentionné, la première solution comprendra un lipide de phosphatidylcholine. Le lipide de phosphatidylcholine contiendra des chaînes acyle non ramifiées comportant 12 à 20 atomes de carbone, éventuellement avec une double liaison, étant d'un 15 intérêt particulier ceux avec des chaînes acyle comportant 14 à 18 atomes de carbone, éventuellement avec une double liaison. Généralement, chacune des deux chaînes acyle dans une molécule de lipide est identique. Les lipides de phosphatidylcholine 20 particuliers d'intérêt comprennent : les lipides de phosphatidylcholine saturés la dilauroyl- phosphatidylcholine (DLPC), la dimyristoyl- phosphatidylcholine (DMPC), la dipalmitoyl- phosphatidylcholine (DPPC), la distéaroyl- 25 phosphatidylcholine (DSPC) et la diarachidoylphosphatidylcholine (DAPC) et des lipides de phosphatidylcholine insaturés - la dipalmitoléoylphosphatidylcholine et la dioléoyl-phosphatidylcholine (DOPC) ; et leurs mélanges. De façon appropriée, le 30 lipide de phosphatidylcholine est sensiblement purifié d'autres lipides. Généralement, le lipide de 3066920 26 phosphatidylcholine est au moins pur à 80 %, comme au moins pur à 90 %, spécialement au moins pur à 95 %, en particulier pur à 98 %, par exemple au moins pur à 99 % voire même au moins 99,8 %. 5 Par conséquent, l'invention fournit une solution comprenant un solvant et 100 à 170 mg/mi de lipide, dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique. De façon appropriée, le lipide est un lipide de 10 phosphatidylcholine, par conséquent de façon appropriée, la solution fournie est la première solution. Comme il a été susmentionné, la première solution comprend de façon appropriée de la DOPC (dioléoylphosphatidylcholine). De façon appropriée, la DOPC est 15 sensiblement purifiée d'autres lipides, à la fois d'autres types de chaîne acyle et d'autres types de groupe de tête. Généralement, la DOPC est au moins pure à 90 %, comme au moins pure à 95 %, spécialement au moins pure à 98 %, en particulie-r pure à 99 %, par 20 exemple au moins pure à 99,8 %. De façon appropriée, la première solution comprend 100 à 170 mg/mi de DOPC, comme 100 à 160 mg/mi de DOPC, spécialement 120 à 160 mg/ml. La première solution peut comprendre 120 à 150 mg/m1 de DOPC, comme 120 à 25 140 mg/m1 de DOPC. En particulier, la première solution peut comprendre autour de 130 mg/M1 de DOPC (par exemple, 125 à 135 mg/mi de DOPC, spécialement 130 mg/m1 de DOPC). Le stérol sera généralement du cholestérol. Le 30 cholestérol est divulgué dans le Merck Index, 13ème édition, page 381, comme un stérol existant l'état 3066920 27 naturel trouvé dans la graisse animale. Le cholestérol a la formule (C27H460) et est également connu comme le (3P)-cholest-5-én-3-ol. De façon appropriée, la première solution comprend 5 20 à 50 mg/m1 de stérol (par exemple, de cholestérol), comme 25 à 40 mg/ml, spécialement autour de 32,5 mg/m1 (par exemple, 30 à 35 mg/ml, en particulier 32,5 mg/mi). De façon appropriée, le poids sec de la première solution est de 100 à 250 mg/ml, comme 140 à 220 mg/ml, 10 spécialement 150 à 220 mg/ml. Par conséquent, l'invention fournit une solution comprenant un solvant et 100 à 170 mg/mi de lipide, dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique. De 15 façon appropriée, le lipide est la DOPC, par conséquent de façon appropriée, la solution fournie est la première solution. Les lipides à utiliser dans la présente invention seront généralement des lipides formant une membrane. 20 Les lipides formant une membrane comprennent une plage diversifiée de structures y compris des phospholipides (par exemple, la phosphatidylcholine, la phosphatidyléthanolamine, le phosphatidylglycérol, le phosphatidylinositol et la phosphatidylsérine), des 25 céramides et des sphingomyélines. Les lipides formant une membrane auront généralement un groupe de tête polaire (qui dans une membrane s'aligne par rapport à la phase aqueuse) et un ou plusieurs (deux) groupes de queue hydrophobes (qui dans une membrane s'associent 30 pour former un noyau hydrophobe). Les groupes de queue hydrophobes seront généralement sous la forme d'esters 3066920 28 d'acyle, lesquels peuvent varier à la fois en longueur (par exemple, de 8 à 26 atomes de carbone) et en degré d'insaturation (par exemple, une, deux ou trois doubles liaisons). 5 Les lipides à utiliser dans la présente invention peuvent être d'origine naturelle ou synthétique, et ils peuvent être un composant pur simple (par exemple, pur à 90 %, spécialement pur à 95 % et de façon appropriée pur à 99 % sur une base pondérale), une classe simple 10 de composants lipidiques (par exemple, un mélange de phosphatidylcholines, ou en variante, un mélange de lipides avec un type de chaîne acyle conservé) ou ils peuvent être un mélange de nombreux types de lipides différents. 15 Dans un mode de réalisation de l'invention, le lipide est un composant pur simple. Les lipides purs sont généralement d'origine synthétique ou semi-synthétique. Les exemples de lipides purs à utiliser dans la présente invention 20 comprennent des phosphatidylcholines (par exemple, DLPC, DMPC, DPPC, DSPC et DOPC ; en particulier DLPC, DMPC, DPPC et DOPC ; spécialement DOPC) et des phosphatidylglycérols (par exemple, DPPG), de façon appropriée des phosphatidylcholines. L'utilisation de lipides purs est 25 souhaitable en raison de leur composition définie, toutefois, ils sont généralement plus coûteux. Dans un mode de réalisation de l'invention, le lipide est un mélange de composants. Les mélanges de lipides à utiliser dans la 30 présente invention peuvent être d'origine naturelle, obtenus par extraction et purification par des moyens 3066920 29 connus de l'homme du métier. Les mélanges de lipides d'origine naturelle sont généralement significativement moins coûteux que les lipides synthétiques purs. Les lipides dérivés naturellement comprennent des extraits 5 lipidiques d'oeuf ou de soja, lesquels extraits contiendront généralement des lipides avec un mélange de longueurs de chaîne acyle, de degrés d'insaturation et de types de groupe de tête. On peut s'attendre à ce que les extraits lipidiques d'origine végétale 10 démontrent des taux supérieurs d'insaturation par rapport à ceux d'origine animale. Il faudra noter que, à cause de la variation dans la source, la composition des extraits lipidiques peut varier d'un lot à l'autre. Dans un mode de réalisation de l'invention, le 15 lipide est un extrait lipidique contenant au moins 50 %, spécialement au moins 75 % et de façon appropriée au moins 90 % en poids de phospholipides d'un seul type de groupe de tête (par exemple, des phosphatidylcholines). Dans un deuxième mode de réalisation de l'invention, 20 des extraits lipidiques particuliers peuvent être préférés en raison de leur coût relativement peu élevé. Dans un troisième mode de réalisation de l'invention, le lipide est un mélange de lipides ayant une longueur de chaîne acyle conservée (par exemple, au moins 50 %, 25 spécialement au moins 75 % et de façon appropriée au moins 90 % en poids), par exemple 12 (par exemple, lauryle), 14 (par exemple, myristyle), 16 (par exemple, palmityle) ou 18 (par exemple, stéaryle ou oléoyle) atomes de carbone en longueur. 30 De façon appropriée, un extrait lipidique à utiliser dans la présente invention comprendra au moins 3066920 30 50 % de phospholipides en poids (par exemple, des phosphatidylcholines et des phosphatidyléthanolamines), spécialement au moins 55 % de phospholipides en poids, en particulier au moins 60 % de phospholipides en poids 5 (comme 75 % ou 90 %). Des mélanges de lipides peuvent être également préparés par la combinaison de lipides purs, ou par la combinaison d'un extrait lipidique avec soit d'autres extraits lipidiques soit avec des lipides purs. 10 Le rapport du lipide (par exemple, la DOPC) sur le stérol est habituellement de 3/1 à 5/1 p/p, comme 3,5/1 à 4,5/1 p/p. Dans certains modes de réalisation, la première solution est constituée essentiellement d'un solvant et 15 de 100 à 160 mg/mi de lipide et de 30 à 40 mg/mi de cholestérol dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique, de façon souhaitable, le lipide est une phosphatidylcholine. De façon appropriée, le lipide est 20 la DOPC. Afin de préparer des adjuvants liposomiaux comprenant un agoniste des TLR4, l'agoniste des TLR4 peut être éventuellement inclus dans la première solution. La première solution peut contenir 1 à 25 25 mg/m1 de l'agoniste des TLR4, comme 2 à 16 mg/ml, spécialement 3 à 12 mg/mi et en particulier 4 à 10 mg/m1 (par exemple, autour de 6,5, comme 5,5 à 7,5 mg/ml, spécialement 6,5 mg/mi). La présente invention fournit également un procédé 30 pour la préparation d'une solution comprenant un 3066920 31 solvant, un lipide, du cholestérol et un agoniste des TLR4, ledit procédé comprenant les étapes : (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; 5 (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en suspension avec le lipide de phosphatidylcholine et le cholestérol ; (iii) l'ajout d'autre solvant ; (iv) le mélange. 10 La présente invention fournit également un procédé pour la préparation d'une solution comprenant un solvant, un lipide, du cholestérol et un agoniste des TLR4, ledit procédé comprenant les étapes : (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste 15 des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en suspension avec la DOPC et le cholestérol ; (iii) l'ajout d'autre solvant ; (iv) le mélange. 20 De façon appropriée, le mélange est entrepris à une température de 30 à 50 °C, spécialement 35 à 45, comme 40 °C. De façon appropriée, l'au moins une partie du solvant est d'au moins 25 % du solvant, spécialement d'au moins 35 % et en particulier d'au moins 45 %. De 25 façon appropriée, l'au moins une partie est de 90 % du solvant ou moins, comme 80 % ou moins, spécialement 70 % ou moins et en particulier 60 % ou moins. Dans certains exemples, l'au moins une partie est de 35 à 70 % du solvant, comme de 45 à 60 %. 30 De façon appropriée, l'autre solvant est tout solvant restant, bien qu'il puisse être une partie du 3066920 32 solvant restant avec du solvant supplémentaire ajouté ultérieurement. Par conséquent, la présente invention fournit également un procédé pour la préparation d'une solution comprenant un solvant, un lipide, du 5 cholestérol et un agoniste des TLR4, ledit procédé comprenant les étapes : (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en 10 suspension avec le lipide de phosphatidylcholine et le cholestérol ; (iii) l'ajout d'autre solvant ; (iv) le mélange ; (v) l'ajout de solvant supplémentaire_ 15 De façon appropriée, l'autre solvant est tout solvant restant, bien qu'il puisse être une partie du solvant restant avec du solvant supplémentaire ajouté ultérieurement. Par conséquent, la présente invention fournit également un procédé pour la préparation d'une 20 solution comprenant un solvant, un lipide, du cholestérol et un agoniste des TLR4, ledit procédé comprenant les étapes : (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; 25 (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en suspension avec la DOPC et le cholestérol ; (iii) l'ajout d'autre solvant ; (iv) le mélange ; (v)- l'ajout de solvant supplémentaire. 30 Le solvant supplémentaire peut être de 0 à 30 % du solvant, comme de 0 à 20 %. 3066920 33 La solution résultant de l'un quelconque des procédés susmentionnés peut être ensuite filtrée pour éliminer tout matériau particulaire avant utilisation dans l'appareil de microfluidique. 5 D'autres caractéristiques du procédé peuvent être telles que décrites pour la première solution, par exemple, la solution comprend 100 à 160 mg/mi de lipide et 30 à 40 mg/mi de cholestérol et dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol et 10 à 30 % 10 v/v d'alcool isopropylique. De façon souhaitable, le lipide est une phosphatidylcholine. De façon appropriée, le lipide est la DOPC. De façon appropriée, la solution comprend 4 à 10 mg/m1 d'agoniste des TLR4, en particulier de 3D-MPL. 15 De façon appropriée, l'invention fournit une solution constituée essentiellement de 100 à 160 mg/mi de lipide et de 30 à 40 mg/1 de cholestérol et dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique. De façon 20 souhaitable, le lipide est une phosphatidylcholine, de façon davantage appropriée le lipide est la DOPC. De façon appropriée, la solution comprend 4 à 10 mg/mi d'agoniste des TLR4, en particulier de 3D-MPL. 25 Seconde solution La seconde solution (la phase « aqueuse ») comprend de l'eau et dans certains procédés, elle peut comprendre une saponine. La seconde solution agit comme un contre-solvant, 30 provoquant la formation de liposomes lors du mélange avec la première solution. Plus la précipitation des 3066920 34 composants à partir de la première solution est rapide, généralement plus les liposomes obtenus sont petits. La seconde solution peut être sensiblement aqueuse et elle comprendra au moins 90 % v/v d'eau, comme au 5 moins 95 % d'eau, spécialement au moins 98 % d'eau et en particulier 100 % d'eau. Lorsqu'elle est présente dans la seconde solution, de façon appropriée, la saponine est présente à une concentration de 0,05 à 25 mg/ml, comme 0,2 à 10 mg/ml, /0 spécialement 0,5 à 5 mg/m1 et en particulier 0,8 à 3 mg/mi (par exemple, environ 1,625 mg/ml, comme 1,2 à 2 mg/ml, spécialement 1,625 mg/mi). Lorsque la saponine n'est pas présente dans la seconde solution, de façon appropriée, la seconde 15 solution est constituée essentiellement (comme est constituée) d'eau. Lorsque la saponine est présente dans la seconde solution, de façon appropriée, la seconde solution est constituée essentiellement (comme est constituée) d'eau 20 et de la saponine, par exemple la seconde solution peut être de la saponine (comme le QS-21) dans de l'eau pour injection. La force ionique de la seconde solution sera de façon appropriée de 150 nM ou inférieure, comme 100 nM 25 ou inférieure, en particulier 80 nM ou inférieure, spécialement 60 nM ou inférieure, par exemple 40 nM ou inférieure. La conductivité peut être un substitut pratique à la force ionique d'une solution aqueuse. La 30 conductivité de la seconde solution sera de façon appropriée de 12 mS/cm ou inférieure, par exemple 3066920 10 mS/cm ou inférieure, 8 mS/cm ou inférieure, 6 mS/cm ou inférieure, ou 4 mS/cm ou inférieure. De façon appropriée, la seconde solution est constituée essentiellement de saponine aqueuse. 5 Opération microfluidique Les conditions opérationnelles optimales dépendront de la configuration précise du dispositif et des caractéristiques souhaitées du produit. 10 De façon appropriée, le débit total dans la chambre de mélange est de 15 à 30 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange, comme 16 à 28 ml/min/mm2, spécialement 17,5 à 25 ml/min/mm2 et en particulier 19 à 21 (par exemple, 20 ml/min/mm2). 15 De façon appropriée, le rapport des débits pour les première et seconde solutions se situera dans la plage de 1/2 à 1/6, comme 1/3 à 1/5, spécialement 1/3,5 à 1/4,5 et en particulier 1/4. Des taux élevés de solvant dans le matériau mélangé peut avoir un impact 20 sur la stabilité des liposomes si bien que le rapport des débits qui produira des concentrations élevées de solvant est évité de façon souhaitable - des concentrations de solvant de 50 % résultent d'un rapport de 1/1, 33 % pour 1/2, 25 % pour un rapport de 25 1/3, 20 % pour un rapport de 1/4 et 16,6 % pour un rapport de 1/5. Un débit faible de la première solution réduit la productivité du système. Les rapports des débits qui produisent des volumes relativement grands de matériau mélangé sont moins souhaitables à cause des 30 protocoles de sécurité associés à la manipulation et à 3066920 36 l'utilisation de compositions contenant des solvants qui dépassent certains seuils (par exemple, 50 1). De façon appropriée, le débit de la première solution dans la chambre de mélange se situe dans la 5 plage de 2 à 7,5 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange, comme 2,5 à 7 ml/min/mm2, spécialement 3 à 6,5 ml/min/mm2 et en particulier 3,5 à 6 (par exemple, 5) ml/min/mm2. De façon appropriée, le débit de la seconde 10 solution dans la chambre de mélange se situe dans la plage de 11 à 25 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange, comme 12 à 20 ml/min/mm2, spécialement 14 à 18 ml/min/mm2 et en particulier 15 à 17 (par exemple, 16) ml/min/mm2. 15 La première solution et la seconde solution seront généralement fournies à une température dans la région de 10 à 30 °C, comme 15 à 25 °C, en particulier 18 à 22 °C, spécialement 20 °C, et elles peuvent être à des températures identiques ou différentes, de façon 20 appropriée à la même température et spécialement à 20 °C. La chambre de mélange peut être maintenue à une température dans la région de 10 à 30 °C, comme 15 à 25 °C, en particulier 18 à 22 °C, spécialement 20 °C. 25 Selon la conception du dispositif et des conditions environnementales, il peut être uniquement nécessaire de contrôler activement la température de la première solution et de la seconde solution, et de ne pas contrôler activement la température de la chambre de 30 mélange. Le mélange de la première solution et de la seconde solution peut être légèrement exothermique. Des 3066920 37 températures opérationnelles inférieures produisent la formation de liposomes plus petits. Le dispositif microfluidique peut fonctionner au sein d'un environnement de température contrôlé, par 5 exemple, où la température est maintenue dans la plage de 10 à 30 °C, comme 15 à 25 °C, en particulier environ 20 °C (comme 18 à 22 °C, spécialement 20 °C). La pression opérationnelle du système n'a pas besoin d'être contrôlée. 10 De façon appropriée, le nombre de Reynolds maximal au sein de la chambre de mélange est de 2100, en particulier 1800, comme 1500, spécialement 1000, par exemple 500. Le nombre de Reynolds maximal au sein de la chambre de mélange se situe de façon appropriée au 15 sein de la plage de 25 à 1500, de façon davantage appropriée entre 50 et 500, en particulier 75 à 300 et spécialement 100 à 200. Les procédés pour calculer le nombre de Reynolds sont connus de l'homme du métier et sont illustrés dans les exemples ici. 20 Liposomes Lors du mélange de la première solution et de la seconde solution, des liposomes se formeront. Le terme « liposome » est bien connu dans l'art et 25 définit une catégorie générale de vésicules qui comprennent une ou plusieurs bicouches lipidiques entourant un espace aqueux. Les liposomes sont ainsi constitués d'une ou de plusieurs bicouches lipidiques et/ou phospholipidiques et peuvent contenir d'autres 30 molécules, comme des protéines ou des glucides, dans leur structure. Parce que deux phases lipidique et 3066920 38 aqueuse sont présentes, les liposomes peuvent encapsuler ou emprisonner du matériau soluble dans l'eau, du matériau soluble dans les lipides, et/ou des composés amphiphiles 5 La taille des liposomes peut varier de 30 nm à plusieurs pm selon la composition phospholipidique et le procédé utilisé pour leur préparation. Les liposomes de la présente invention contiennent un lipide de phosphatidylcholine, ou, sont constitués 10 essentiellement d'un lipide de phosphatidylcholine et de stérol (avec une saponine et un agoniste des TLR4 le cas échéant). De façon appropriée, les liposomes de la présente invention contiennent de la DOPC, ou, sont constitués 15 essentiellement de DOPC de stérol (avec une saponine et un agoniste des TLR4 le cas échéant). Dans la présente invention, la taille des liposomes se situera dans la plage de 50 nm à 200 nm, spécialement 60 nm à 180 nm, comme 70 à 165 nm. De 20 façon optimale, les liposomes devront être stables et avoir un diamètre de -100 nm pour permettre une stérilisation par filtration pratique. L'intégrité structurale des liposomes peut être estimée par des procédés tels que la diffusion 25 dynamique de la lumière (DLS) mesurant la taille (diamètre Z moyen, Zav) et la polydispersité des liposomes, ou, par microscopie électronique pour l'analyse de la structure des liposomes. De façon appropriée, la taille moyenne des particules se situe 30 entre 95 et 120 nm, et/ou, l'indice de polydispersité (PdI) n'est pas plus de 0,35, en particulier pas plus 3066920 39 de 0,3, comme pas plus de 0,25. Dans un mode de réalisation, la taille moyenne des particules se situe entre 95 et 120 nm, et/ou, l'indice de polydispersité (PdI) n'est pas plus de 0,2. 5 Dans certaines circonstances, la présence de solvants et de certains composants supplémentaires peut avoir un impact sur la taille des liposomes. Par conséquent, la taille des liposomes est mesurée de façon appropriée après élimination du solvant et 10 incorporation de tous les composants supplémentaires. Elimination du solvant Le matériau mélangé récupéré comprendra des liposomes dans de l'eau et du solvant. Un tel matériau 15 est un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial, ledit concentré liposomial comprenant de l'eau, un solvant, un lipide de phosphatidylcholine, une saponine et du cholestérol, comme comprenant de l'eau, un solvant, de la DOPC, une 20 saponine et du cholestérol. Le matériau récupéré peut être stocké pour un usage ultérieur ou il peut être en outre traité pour éliminer une certaine partie ou la totalité du solvant. Pour faciliter l'utilisation des liposomes dans un 25 adjuvant, il est souhaitable d'éliminer sensiblement la totalité du solvant organique (par exemple, en laissant au moins 98 % p/p d'eau, comme au moins 99 % d'eau, spécialement au moins 99,5 % d'eau, en particulier au moins 99,9 % d'eau, comme au moins 99,99 %). 30 De façon appropriée, le solvant organique résiduel est à un taux qui équivaut à moins de 150 pg par dose 3066920 humaine, comme moins de 100 pg par dose humaine, comme moins de 50 pg par dose humaine et spécialement moins de 20 pg par dose humaine (par exemple, 10 pg ou moins par dose humaine). De façon souhaitable, le solvant 5 organique résiduel est à un taux qui est en conformité avec la directive du Conseil International pour l'Harmonisation des Exigences Techniques concernant les Produits Pharmaceutiques pour un Usage Humain pour les Solvants Résiduels Q3C(R6). 10 L'élimination du solvant peut être effectuée par tout un éventail de procédés, qui peuvent être utilisés individuellement ou en combinaison. Les procédés appropriés comprennent l'ultrafiltration et la dialyse, spécialement la diafiltration. 15 L'élimination d'au moins une partie du solvant, comme sensiblement la totalité du solvant, peut être effectuée par dialyse. La dialyse est l'utilisation d'une enceinte de confinement semiperméable qui est perméable sélectivement de telle façon que le solvant 20 passera à travers la partie semiperméable de l'enceinte et les liposomes (également la saponine et l'agoniste des TLR4 si présents) seront retenus lorsque le matériau récupéré sera introduit dans l'enceinte de confinement semiperméable. Par exemple, l'enceinte de 25 confinement semiperméable utilisée peut comprendre une membrane semiperméable unique et l'élimination du solvant peut être obtenue en immergeant l'enceinte de confinement semiperméable comprenant le matériau récupéré dans un milieu d'échange et en permettant aux 30 liquides séparés par la membrane d'atteindre l'équilibre par diffusion. La dialyse peut être 3066920 41 entreprise dans des modes opérationnels fermés ou continus. Par exemple, la dialyse peut être répétée de multiples fois avec un remplacement par lot du milieu d'échange pour obtenir un taux souhaité d'élimination 5 du solvant. La dialyse peut être également dans un procédé continu où le matériau récupéré et/ou le milieu d'échange subit en continu un remplacement. Les exemples de membranes de dialyse qui peuvent être utilisées dans les présents procédés comprennent des 10 membranes de 7 kDa. L'élimination d'au moins une partie du solvant, comme sensiblement la totalité du solvant, peut être effectuée par ultrafiltration. L'ultrafiltration est l'utilisation d'une enceinte de confinement comprenant 15 un premier compartiment et un second compartiment séparés par une membrane semiperméable. Le matériau récupéré peut être placé dans le premier compartiment de l'enceinte de confinement qui peut être ensuite soumis à une pression positive par rapport au second 20 compartiment de telle façon que le liquide est poussé de force à travers la partie semiperméable de l'enceinte de confinement. La diafiltration est une forme d'ultrafiltration dans laquelle au moins une partie du liquide restant peut être remplacée par un 25 milieu d'échange par ajout du milieu d'échange au premier compartiment de l'enceinte. Par conséquent, alors que l'ultrafiltration progresse, le liquide restant tendra vers la composition du milieu d'échange. La diafiltration peut être entreprise d'un certain 30 nombre de façons - continue (également connue comme volume constant) dans laquelle le milieu d'échange est 3066920 42 ajouté à un taux comparable à la filtration du liquide sur la membrane ; discontinue, dans laquelle le volume du liquide restant varie et du milieu d'échange est ajouté de façon discontinue (par exemple, par dilution 5 initiale et concentration subséquente jusqu'au volume d'origine ou par concentration initiale et dilution subséquente jusqu'au volume d'origine ou analogues). Le mode opérationnel optimal dépendra d'un certain nombre de facteurs comprenant : 1) le volume, la concentration 10 et la viscosité initial(e) de l'échantillon ; 2) la concentration finale exigée de l'échantillon ; 3) la stabilité de l'échantillon à diverses concentrations ; 4) le volume de tampon requis pour la diafiltration ; 5) le temps de traitement total ; 6) la taille de 15 réservoir disponible ; 7) le coût. Les exemples de membrane de diafiltration comprennent Hydrosart 30 kD. Le milieu d'échange utilisé durant l'élimination du solvant n'a pas besoin de correspondre au milieu de l'adjuvant liposomial final, pour des raisons pratiques, 20 le milieu d'échange est de façon appropriée le milieu de l'adjuvant liposomial final souhaité ou un concentré de celui-ci, par exemple, de la solution tampon phosphate ou une autre composition tamponnée, comme il est souhaité. 25 Dans certains procédés, la saponine peut être ajoutée au matériau mélangé récupéré avant l'élimination du solvant. Dans d'autres procédés, la saponine peut être ajoutée après l'élimination du solvant. 30 Saponines 3066920 43 Une saponine appropriée à utiliser dans la présente invention est le Quil A et ses dérivés. Le Quil A est une préparation de saponine isolée de l'arbre d'Amérique du Sud Quillaja saponaria Molina et 5 il a été décrit pour la première fois comme doté d'une activité d'adjuvant par Dalsgaard et a/. en 1974 (« Saponin adjuvants », Archiv. für die gesamte Virusforschung, Vol. 44, Springer Verlag, Berlin, p 243-254). Il a été isolé par CLHP des fractions 10 purifiées de Quil A qui conservent l'activité d'adjuvant sans la toxicité associée au Quil A (voir, par exemple, le document EP 0362278). Les fractions d'un intérêt général comprennent les QS7, QS17, QS18 et QS-21, par exemple les Q57 et QS-21 (également connus 15 sous le nom de QA7 et QA21). Le QS-21 est une saponine d'un intérêt particulier. Dans certains modes de réalisation de la présente invention, la saponine est un dérivé du Quil A de Quillaja saponaria Molina, de façon appropriée une 20 fraction immunologiquement active du Quil A, comme le QS7, QS17, QS18 ou QS-21, en particulier le QS-21. Généralement, la saponine, comme le Quil A et en particulier le QS-21, est au moins pure à 90 %, comme au moins pure à 95 %, spécialement au moins pure à 98 %, 25 en particulier pure à 99 %. Une caractéristique bénéfique de la présente invention est que la saponine est présentée dans une composition moins réactogène où elle est neutralisée avec un stérol exogène, comme le cholestérol. 30 Dans des procédés où la saponine est ajoutée après le mélange des première et seconde solutions, la 3066920 44 quantité de saponine sera généralement équivalente aux quantités qui seraient utilisées si elle avait été ajoutée plus tôt. 5 Agonistes des TLR4 Un exemple approprié d'un agoniste des TLR4 est un lipopolysaccharide, de façon appropriée un dérivé non toxique du lipide A, particulièrement un monophosphoryl-lipide A et plus particulièrement le 10 monophosphoryl-lipide A 3-dés-0-acylé (3D-MPL). Le 3D-MPL est vendu sous le nom de « MPL » par GlaxoSmithKline Biologicals N.A. et il est nommé dans tout le document 3D-MPL. Voir, par exemple, les brevets US No. 4 436 727 ; 4 877 611 ; 4 866 034 et 4 912 094. 15 Le 3D-MPL peut être produit selon les procédés décrits dans le document GB 2 220 211 A. D'un point de vue chimique, il s'agit d'un mélange de monophosphoryllipide A 3-désacylé avec 4, 5 ou 6 chaînes acylées. Dans le contexte de la présente invention, du 3D-MPL à 20 petites particules peut être utilisé pour préparer la composition d'adjuvant aqueux. Le 3D-MPL à petites particules a une taille de particule telle qu'il peut être stérilisé par filtration à travers un filtre de 0,22 pm. De telles préparations sont décrites dans le 25 document WO 94/21292. De façon appropriée, du 3D-MPL en poudre est utilisé pour préparer des compositions d'adjuvant aqueux à utiliser dans la présente invention. D'autres agonistes des TLR4 qui peuvent être utilisés sont des alkyl-glucosaminide phosphates (AGP) 30 tels que ceux décrits dans le document WO 98/50399 ou le brevet US No. 6 303 347 (des procédés de préparation 3066920 d'AGP sont également décrits). Certains AGP sont des agonistes des TLR4, et certains sont des antagonistes des TLR4. D'autres agonistes des TLR4 qui peuvent être 5 utilisés dans la présente invention comprennent l'adjuvant lipidique à base de glucopyranosyle (GLA) tel que décrit dans les documents WO 2008/153541 ou WO 2009/143457 ou les articles de la littérature Coler RN et al. (2011) Development and Characterization of 10 Synthetic Glucopyranosyl Lipid Adjuvant System as a Vaccine Adjuvant. PLoS ONE 6(1): e16333. doi:10.1371/journal.pone.0016333 et Arias MA et a/. (2012) Glucopyranosyl Lipid Adjuvant (GLA), a Synthetic TLR4 Agonist, Promotes Potent Systemic and Mucosal 15 Responses to Intranasal Immunization with HIVgp140. PLoS ONE 7(7): e41144. doi:10.1371/journal.pone.0041144. Les documents WO 2008/153541 ou WO 2009/143457 définissent des agonistes des TLR4 qui peuvent être utilisés dans la présente invention. 20 Généralement, l'agoniste des TLR4, tel que le lipopolysaccharide et en particulier le 3D-MPL, est au moins pur à 90 %, comme au moins pur à 95 %, spécialement au moins pur à 98 %, en particulier pur à 99 %. 25 Dans certains procédés, l'agoniste des TLR4 peut être ajouté au matériau mélangé récupéré avant l'élimination du solvant. Dans d'autres procédés, l'agoniste des TLR4 peut être ajouté après l'élimination du solvant (dans de telles circonstances, 30 la quantité de TLR4 sera généralement équivalente aux 3066920 46 quantités qui seraient utilisées s'il avait été ajouté plus tôt). Par conséquent, il est fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une 5 saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de 10 phosphatidylcholine, un stérol et l'agoniste des TLR4, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine ; et (b) l'élimination du solvant. Il est également fourni un procédé de fabrication 15 d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de 20 phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; (c) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; et (d) l'élimination du solvant ; 25 dans lequel les étapes (b) et (c) peuvent être dans un ordre ou dans l'autre, ou peuvent être effectuées dans une seule étape. Il est en outre fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un 30 agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : 3066920 47 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; 5 (b) l'élimination du solvant ; (c) l'ajout de la saponine ; et (d) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; dans lequel les étapes (c) et (d) peuvent être dans un ordre ou dans l'autre, ou peuvent être 10 effectuées dans une seule étape. En outre, il est fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : 15 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; 20 (c) l'élimination du solvant ; et (d) l'ajout de l'agoniste des TLR4. Il est en outre fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif 25 microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; 30 (b) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; (c) l'élimination du solvant ; et 3066920 48 (d) l'ajout de la saponine. Il est également fourni un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une 5 saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant l'étape de mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine, un stérol et l'agoniste des TLR4, et d'une seconde 10 solution comprenant de l'eau et la saponine. Il est également fourni un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un 15 dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde 20 solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et (c) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; dans lequel les étapes (b) et (c) peuvent être dans un ordre ou dans l'autre, ou peuvent être 25 effectuées dans une seule étape. Il est également fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : 30 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC, un stérol 3066920 49 et l'agoniste des TLR4, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine ; et (b) l'élimination du solvant. Il est également fourni un procédé de fabrication 5 d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, 10 et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; (c) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; et (d) l'élimination du solvant ; dans lequel les étapes (b) et (c) peuvent être 15 dans un ordre ou dans l'autre, ou peuvent être effectuées dans une seule étape. Il est en outre fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif 20 microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'élimination du solvant ; 25 (c) l'ajout de la saponine ; et (d) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; dans lequel les étapes (c) et (d) peuvent être dans un ordre ou dans l'autre, ou peuvent être effectuées dans une seule étape. 30 En outre, il est fourni un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un 3066920 agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, 5 et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; (c) l'élimination du solvant ; et (d) l'ajout de l'agoniste des TLR4. Il est en outre fourni un procédé de fabrication 10 d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, 15 et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; (c) l'élimination du solvant ; et (d) l'ajout de la saponine. Il est également fourni un procédé de fabrication 20 d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant l'étape de mélange dans le dispositif d'une première solution 25 comprenant un solvant, de la DOPC, un stérol et l'agoniste des TLR4, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine. Il est également fourni un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la 30 préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un 3066920 51 dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, 5 et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et (c) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; dans lequel les étapes (b) et (c) peuvent être dans un ordre ou dans l'autre, ou peuvent être 10 effectuées dans une seule étape. Par l'expression « effectuées dans une seule étape » telle qu'utilisée ici, il est signifié en même temps ou simultanément. La solution contenant des liposomes qui peut être 15 obtenue par (comme obtenue par) le mélange de la première solution et de la seconde solution selon l'un quelconque des procédés décrits ici forme un autre aspect de l'invention. 20 Autres excipients L'adjuvant liposomial résultant des procédés revendiqués peut être en outre modifié. Par exemple, il peut être dilué pour obtenir une concentration particulière des composants comme il est souhaité pour 25 des usages ultérieurs et/ou des composants supplémentaires ajoutés. De telles étapes peuvent être prises à un certain nombre de stades dans les procédés : avant l'élimination du solvant, durant l'élimination du solvant (par exemple, au moyen du milieu d'échange) ou 30 après l'élimination du solvant. 3066920 52 Dans un autre mode de réalisation, un tampon est ajouté à la composition. Le pH d'une préparation liquide est ajusté en vue des composants de la composition et d'une adéquation nécessaire pour une 5 administration au sujet. De façon appropriée, le pH d'un mélange liquide est d'au moins 4, d'au moins 5, d'au moins 5,5, d'au moins 5,8, d'au moins 6. Le pH du mélange liquide peut être inférieur à 9, inférieur à 8, inférieur à 7,5 ou inférieur à 7. Dans d'autres modes 10 de réalisation, le pH du mélange liquide se situe entre 4 et 9, entre 5 et 8, comme entre 5,5 et 8. Par conséquent, le pH se situera de façon appropriée entre 6 et 9, comme 6,5 à 8,5. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, le pH se situe entre 5,8 et 15 6,4. Un tampon approprié peut être choisi parmi les tampons acétate, citrate, histidine, maléate, phosphate, succinate, tartrate et TRIS. Dans un mode de réalisation, le tampon est un tampon phosphate comme 20 Na/Na2PO4, Na/K2PO4 ou K/K2PO4- Le tampon peut être présent dans le mélange liquide dans une quantité d'au moins 6 mM, d'au moins 10 mM ou d'au moins 40 mM. Le tampon peut être présent dans le mélange liquide dans une quantité inférieure à 25 100 mM, inférieure à 60 mM ou inférieure à 40 mM. Il est bien connu que pour une administration parentérale, les solutions devront avoir une osmolalité pharmaceutiquement acceptable pour éviter la distorsion ou la lyse cellulaire. Une osmolalité 30 pharmaceutiquement acceptable signifiera généralement que les solutions auront une osmolalité qui est 3066920 53 approximativement isotonique ou légèrement hypertonique. De façon appropriée, les compositions de la présente invention, lorsqu'elles sont reconstituées, auront une osmolalité située dans la plage de 250 à 750 mOsm/kg, 5 par exemple, l'osmolalité peut se situer dans la plage de 250 à 550 mOsm/kg, comme dans la plage de 280 à 500 mOsm/kg. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, l'osmolalité peut se situer dans la plage de 280 à 310 mOsm/kg. 10 L'osmolalité peut être mesurée selon des techniques connues dans l'art, comme par l'utilisation d'un osmomètre disponible dans le commerce, par exemple AdvancedTM Model 2020 disponible chez Advanced Instruments Inc. (USA). 15 Un « agent d'isotonicité » est un composé qui est physiologiquement toléré et qui confère une tonicité appropriée à une formulation pour empêcher le flux net d'eau à travers les membranes cellulaires qui sont en contact avec la formulation. Dans certains modes de 20 réalisation, l'agent d'isotonicité utilisé pour la composition est un sel (ou des mélanges de sels), de façon pratique, le sel est le chlorure de sodium, de façon appropriée à une concentration d'approximativement 150 nM. Toutefois, dans d'autres 25 modes de réalisation, la composition comprend un agent d'isotonicité non ionique et la concentration de chlorure de sodium dans la composition est inférieure à 100 mM, comme inférieure à 80 mM, par exemple, inférieure à 50 mM, comme inférieure à 40 mM, 30 inférieure à 30 mM et spécialement inférieure à 20 mM. La force ionique dans la composition peut être 3066920 54 inférieure à 100 mM, comme inférieure à 80 mM, par exemple, inférieure à 50 mM, comme inférieure à 40 mM ou inférieure à 30 mM. Dans un mode de réalisation particulier, l'agent 5 d'isotonicité non ionique est un polyol, tel que le saccharose et/ou le sorbitol. La concentration de sorbitol peut se situer, par exemple, entre environ 3 % et environ 15 % (p/v), comme entre environ 4 % et environ 10 % (p/v). Des adjuvants comprenant une 10 fraction de saponine immunologiquement active et un agoniste des TLR4 dans lequel l'agent d'isotonicité est un sel ou un polyol ont été décrits dans le document WO 2012/080369. De façon appropriée, un volume de dose humaine se 15 situe entre 0,05 ml et 1 ml, comme entre 0,1 et 0,5 ml, en particulier un volume de dose d'environ 0,5 ml, ou 0,7 ml. Les volumes des compositions utilisées peuvent dépendre de la voie et de l'emplacement de l'administration, avec des doses plus petites étant 20 données par la voie intradermique. Un récipient à dose unitaire peut contenir un excédent pour permettre une manipulation correcte des matériaux durant l'administration de la dose unitaire. La saponine, comme le QS-21, peut être utilisée à 25 des quantités situées entre 1 et 100 pg par dose humaine. Le QS-21 peut être utilisé à un taux d'environ 50 pg. Les exemples de plages appropriées sont de 40 à 60 pg, de façon appropriée 45 à 55 pg ou 49 à 51 pg, comme 50 pg. Dans un autre mode de réalisation, la dose 30 humaine comprend du QS-21 à un taux d'environ 25 pg. Les exemples de plages inférieures comprennent 20 à 3066920 30 pg, de façon appropriée 22 à 28 pg ou 24 à 26 pg, comme 25 pg. Les doses humaines prévues pour des enfants peuvent être réduites comparativement à celles prévues pour un adulte (par exemple, réduction de 50 %). 5 L'agoniste des TLR4 tel qu'un lipopolysaccharide, comme le 3D-MPL, peut être utilisé à des quantités situées entre 1 et 100 pg par dose humaine. Le 3D-MPL peut être utilisé à un taux d'environ 50 pg. Les exemples de plages appropriées sont de 40 à 60 pg, de 10 façon appropriée 45 à 55 pg ou 49 à 51 pg, comme 50 pg. Dans un autre mode de réalisation, la dose humaine comprend du 3D-MPL à un taux d'environ 25 pg. Les exemples de plages inférieures comprennent 20 à 30 pg, de façon appropriée 22 à 28 pg ou 24 à 26 pg, comme 15 25 pg. Les doses humaines prévues pour des enfants peuvent être réduites comparativement à celles prévues pour un adulte (par exemple, réduction de 50 %). Quand à la fois un agoniste des TLR4 et une saponine sont présents dans l'adjuvant, alors le 20 rapport pondéral de l'agoniste des TLR4 sur la saponine se situe de façon appropriée entre 1/5 et 5/1, de façon appropriée 1/1. Par exemple, où du 3D-MPL est présent à une quantité de 50 pg ou 25 pg, alors de façon appropriée du QS-21 peut être également présent à une 25 quantité de 50 pg ou 25 pg par dose humaine. Le rapport de saponine/DOPC sera généralement de l'ordre de 1/50 à 1/10 (p/p), de façon appropriée entre 1/25 et 1/15 (p/p), et de préférence 1/22 à 1/18 (p/p), comme 1/20 (p/p). 30 Antigènes 3066920 56 Les adjuvants liposomiaux préparés selon les procédés de l'invention peuvent être utilisés conjointement avec un immunogène ou un antigène. Dans certains modes de réalisation, il est fourni un 5 polynucléotide codant pour l'immunogène ou l'antigène. L'adjuvant liposomial peut être administré séparément d'un immunogène ou d'un antigène ou peut être combiné, soit durant la fabrication soit extemporanément, avec un immunogène ou un antigène sous 10 la forme d'une composition immunogène pour une administration combinée. Par conséquent, il est fourni un procédé pour la préparation d'une composition immunogène comprenant un immunogène ou un antigène, ou un polynucléotide codant 15 pour l'immunogène ou l'antigène, ledit procédé comprenant les étapes de : (i) préparation d'un adjuvant liposomial selon les procédés décrits ici ; (ii) mélange de l'adjuvant liposomial avec un 20 immunogène ou un antigène, ou un polynucléotide codant pour l'immunogène ou l'antigène. Il est également fourni l'utilisation d'un adjuvant liposomial préparé selon les procédés décrits ici dans la fabrication d'un médicament. De façon 25 appropriée, le médicament comprend un immunogène ou un antigène, ou un polynucléotide codant pour l'immunogène ou l'antigène. Il est fourni en outre un adjuvant liposomial préparé selon les procédés décrits ici pour une 30 utilisation en tant que médicament. De façon appropriée, le médicament comprend un immunogène ou un antigène, ou 3066920 57 un polynucléotide codant pour l'immunogène ou l'antigène. Par le terme immunogène, il est signifié un polypeptide qui est capable de déclencher une réponse 5 immunitaire. De façon appropriée, l'immunogène est un antigène qui comprend au moins un épitope de lymphocyte B ou T. La réponse immunitaire déclenchée peut être une réponse des lymphocytes B spécifiques de l'antigène, qui produit des anticorps neutralisants. La 10 réponse immunitaire déclenchée peut être une réponse des lymphocytes T spécifiques de l'antigène, qui peut être une réponse systémique et/ou locale. La réponse des lymphocytes T spécifiques de l'antigène peut comprendre une réponse des lymphocytes T CD4+, comme 15 une réponse impliquant des lymphocytes T CD4+ exprimant une pluralité de cytokines, par exemple, l'IFN-gamma, le TNF-alpha et/ou l'IL2. En variante, ou en outre, la réponse des lymphocytes T spécifiques de l'antigène comprend une réponse des lymphocytes T CD8+, comme une 20 réponse impliquant des lymphocytes T CD8+ exprimant une pluralité de cytokines, par exemple, l'IFN-gamma, le TNF-alpha et/ou l'IL2. L'antigène peut être dérivé (comme obtenu à partir) d'un pathogène humain ou non humain y compris, par 25 exemple, des bactéries, des champignons, des micro- organismes parasitaires ou des parasites multicellulaires qui infectent les vertébrés humains et non humains, ou à partir d'une cellule cancéreuse ou d'une cellule tumorale. 3066920 58 Dans un mode de réalisation, l'antigène est une protéine recombinante, comme une protéine procaryote recombinante. Dans un mode de réalisation, l'antigène est dérivé 5 de Plasmodium spp. (comme Plasmodium falciparum), Mycobacterium spp. (comme Mycobacterium tuberculosis (TB)), le virus de la varicelle zona (VZV), le virus respiratoire syncytial, le virus de l'immunodéficience humaine (VIH), Moraxella spp. (comme Moraxella 10 catarrhalis) ou Haemophilus influenzae non typable (ntHi). L'antigène peut comprendre ou être constitué de préparations dérivées de parasites qui provoquent le paludisme comme Plasmodium falciparum ou Plasmodium 15 vivax. Dans un mode de réalisation, l'antigène peut être la protéine circumsporozoïte (CS) de Plasmodium falciparum ou l'un de ses variants. Un variant approprié de la protéine CS peut être un variant dans 20 lequel des parties de la protéine CS sont sous la forme d'une protéine hybride avec l'antigène de surface S issu de l'hépatite B (Ag HBs). L'antigène variant CS peut être, par exemple, sous la forme d'une protéine hybride comprenant sensiblement la totalité de la 25 partie C-terminale de la protéine CS, quatre répétitions en tandem ou plus de la région immunodominante de la protéine CS, et l'Ag HBs. La protéine hybride peut comprendre une séquence qui contient au moins 160 acides aminés et qui est 30 sensiblement homologue à la partie C-terminale de la protéine CS, mais dépourvue de la séquence d'ancrage 3066920 59 hydrophobe. La protéine CS peut être dépourvue des 12 derniers acides aminés à partir de l'extrémité C-terminale. En outre, elle peut contenir 4 ou plus, par exemple, 10 motifs répétés du tétrapeptide Asn-Ala-Asn- 5 Pro (NANP) ou plus. La protéine hybride à utiliser dans l'invention peut être une protéine qui comprend une partie de la protéine CS de P. falciparum correspondant sensiblement aux acides aminés 207 à 395 du clone 3D7 de 10 P. falciparum, dérivé de la souche NF54 fusionnée dans le cadre par l'intermédiaire d'un lieur linéaire à l'extrémité N-terminale de l'Ag HBs. Le lieur peut comprendre une partie de preS2 provenant de l'Ag HBs. Des constructions de CS appropriées pour une 15 utilisation dans la présente invention sont présentées dans le document WO 93/10152, lequel octroyé aux Etats-Unis en tant que brevets US No. 5 928 902 et 6 169 171, décrivant des protéines appropriées pour une utilisation dans la présente invention. 20 Une protéine hybride particulière à utiliser dans l'invention est la protéine hybride connue sous le nom de RTS (SEQ ID NO : 1), également décrite dans les documents WO 2015/150568, WO 93/10152 (dans lesquels elle est indiquée par RTS*) et dans le document 25 WO 98/05355, laquelle est constituée de : - un résidu de méthionine - trois résidus d'acides aminés, Met Ala Pro - un tronçon de 189 acides aminés représentant les acides aminés 207 à 395 de la protéine CS de la souche 30 3D7 de P. falciparum 3066920 - un résidu de glycine - quatre résidus d'acides aminés, Pro Val Thr Asn, représentant les quatre résidus carboxy-terminaux de la protéine preS2 du virus de l'hépatite B (sérotype adw), 5 et - un tronçon de 226 acides aminés, codé par les nucléotides 1653 à 2330, et spécifiant la protéine S du virus de l'hépatite B (sérotype adw). La RIS peut être sous la forme de particules 10 mixtes RTS,S. Les particules RTS,S comprennent deux polypeptides, RTS et S, qui peuvent être synthétisés simultanément et former spontanément des structures particulaires composites (RTS,S). L'antigène peut comprendre ou être constitué de 15 préparations dérivées de Mycobacterium spp., comme Mycobacterium bovis ou Mycobacterium tuberculosis, en particulier Mycobacterium tuberculosis. Les antigènes d'intérêt dans le domaine de la tuberculose comprennent Rv1196 et Rv0125. Rv1196 20 (décrit, par exemple, par le nom de Mtb39a dans Dillon et al. Infection and Immunity 1999 67(6): 2941-2950) est hautement conservé, avec 100 % d'identité de séquence parmi les souches H37Rv, C, Haarlem, CDC1551, 94-M4241A, 98-R604INH-RIF-EM, KZN605, KZN1435, KZN4207, 25 KZNR506, la souche Fil comportant une mutation ponctuelle unique Q30K (la plupart des autres isolats cliniques présentent plus de 90 % d'identité avec H37Rv). Rv0125 (décrit, par exemple, par le nom de Mtb32a dans Skeiky et al. Infection and Immunity 1999 30 67(8): 3998-4007) est également hautement conservé, avec 100 % d'identité de séquence parmi de nombreuses 3066920 61 souches. Rv0125 pleine longueur comprend une séquence signal N-terminale qui est clivée pour fournir la protéine mature. Dans un mode de réalisation, l'antigène est dérivé 5 de Rv1196, comme comprend, comme est constitué de, une séquence présentant au moins 70 % d'identité avec SEQ ID NO : 2, comme au moins 80 %, en particulier au moins 90 %, spécialement au moins 95 %, par exemple au moins 98 %, comme au moins 99 %. Les antigènes 10 représentatifs apparentés à Rv1196 comprendront (comme seront constitués de) un dérivé de SEQ ID NO : 2 comportant un petit nombre de délétions, insertions et/ou substitutions. Les exemples sont ceux comportant des délétions de jusqu'à 5 résidus au niveau de 0 à 15 5 emplacements, des insertions de jusqu'à 5 résidus au niveau de 0 à 5 emplacements et une substitution de jusqu'à 20 résidus. D'autres dérivés de Rv1196 sont ceux comprenant (comme constitués de) un fragment de SEQ ID NO : 2 qui a une longueur d'au moins 200 acides 20 aminés, comme une longueur d'au moins 250 acides aminés, en particulier une longueur d'au moins 300 acides aminés, spécialement une longueur d'au moins 350 acides aminés. Dans un mode de réalisation, l'antigène est dérivé 25 de Rv0125, comme comprend, comme est constitué de, une séquence présentant au moins 70 % d'identité avec SEQ ID NO : 3, comme au moins 80 %, en particulier au moins 90 %, spécialement au moins 95 %, par exemple au moins 98 %, comme au moins 99 %. Les antigènes 30 représentatifs apparentés à Rv0125 comprendront (comme seront constitués de) un dérivé de SEQ ID NO : 3 3066920 62 comportant un petit nombre de délétions, insertions et/ou substitutions. Les exemples sont ceux comportant des délétions de jusqu'à 5 résidus au niveau de 0 à 5 emplacements, des insertions de jusqu'à 5 résidus au 5 niveau de 0 à 5 emplacements et une substitution de jusqu'à 20 résidus. D'autres dérivés de Rv0125 sont ceux comprenant (comme constitués de) un fragment de SEQ ID NO : 3 qui a une longueur d'au moins 150 acides aminés, comme une longueur d'au moins 200 acides aminés, 10 en particulier une longueur d'au moins 250 acides aminés, spécialement une longueur d'au moins 300 acides aminés. Les dérivés particuliers de Rv0125 sont ceux comprenant (comme constitués de) le fragment de SEQ ID NO : 3 correspondants aux résidus 1 à 195 de 15 SEQ ID NO : 3. D'autres dérivés immunogènes de Rv0125 sont ceux comprenant (comme constitués de) le fragment de SEQ ID NO : 3 correspondant aux résidus 192 à 323 de SEQ ID NO : 3. Les antigènes apparentés à Rv0125 particulièrement préférés sont des dérivés de 20 SEQ ID NO : 3 dans lesquels au moins l'un (par exemple, un, deux voire même les trois) de la triade catalytique a été substitué ou délété, de telle façon que l'activité protéase a été réduite et la protéine plus facilement produite - le résidu de sérine catalytique 25 peut être délété ou substitué (par exemple, substitué par l'alanine) et/ou le résidu d'histidine catalytique peut être délété et/ou le résidu d'acide aspartique catalytique peut être délété ou substitué. Sont d'un intérêt spécial, les dérivés de SEQ ID NO : 3 dans 30 lesquels le résidu de sérine catalytique a été substitué (par exemple, substitué par l'alanine). Sont 3066920 63 également d'intérêt, les antigènes apparentés à Rv0125 qui comprennent, comme sont constitués de, une séquence présentant au moins 70 % d'identité avec SEQ ID NO : 3, comme au moins 80 %, en particulier au moins 90 %, 5 spécialement au moins 95 %, par exemple au moins 98 %, comme au moins 99 % et dans lesquels au moins l'un de la triade catalytique a été substitué ou délété ou ceux comprenant, comme constitués de, un fragment de SEQ ID NO : 3 qui a une longueur d'au moins 150 acides 10 aminés, comme une longueur d'au moins 200 acides aminés, en particulier une longueur d'au moins 250 acides aminés, spécialement une longueur d'au moins 300 acides aminés et dans lesquels au moins l'un de la triade catalytique a été substitué ou délété. D'autres dérivés 15 immunogènes de Rv0125 sont ceux comprenant (comme constitués de) le fragment de SEQ ID NO : 3 correspondant aux résidus 192 à 323 de SEQ ID NO : 3 dans lesquels au moins l'un (par exemple, un, deux voire même les trois) de la triade catalytique a été 20 substitué ou délété. Des dérivés immunogènes particuliers de Rv0125 sont ceux comprenant (comme constitués de) le fragment de SEQ ID NO : 3 correspondant aux résidus 1 à 195 de SEQ ID NO : 3 dans lesquels le résidu de sérine catalytique (position 176 25 de SEQ ID NO : 3) a été substitué (par exemple, substitué par l'alanine). De façon appropriée, l'antigène comprendra, comme sera constitué de, une séquence présentant au moins 70 % d'identité avec SEQ ID NO : 4, comme au moins 80 %, en 30 particulier au moins 90 %, spécialement au moins 95 %, comme au moins 98 %, par exemple au moins 99 %. Les 3066920 64 antigènes représentatifs apparentés à 1'472 comprendront, comme seront constitués de, un dérivé de SEQ ID NO : 4 comportant un petit nombre de délétions, insertions et/ou substitutions. Les exemples sont ceux comportant 5 des délétions de jusqu'à 5 résidus au niveau de 0 à 5 emplacements, des insertions de jusqu'à 5 résidus au niveau de 0 à 5 emplacements et une substitution de jusqu'à 20 résidus. D'autres dérivés de M72 sont ceux comprenant, comme constitués de, un fragment de 10 SEQ ID NO : 4 qui a une longueur d'au moins 450 acides aminés, comme une longueur d'au moins 500 acides aminés, comme une longueur d'au moins 550 acides aminés, comme une longueur d'au moins 600 acides aminés, comme une longueur d'au moins 650 acides aminés ou une longueur 15 d'au moins 700 acides aminés. Du fait que M72 est une protéine de fusion dérivée des deux antigènes individuels Rv0125 et Rv1196, tout fragment d'au moins 450 résidus comprendra une pluralité d'épitopes issus de la séquence pleine longueur (Skeiky et al. J. 20 Immunol. 2004 172: 7618-7628 ; Skeiky Infect. Immun. 1999 67(8): 3998-4007 ; Dillon Infect. Immun. 1999 67(6): 2941-2950). Un antigène apparenté à M72 comprendra, comme sera constitué de, une séquence présentant au moins 70 % 25 d'identité avec SEQ ID NO : 4, comme au moins 80 %, en particulier au moins comme au moins 98 %, 90 %, spécialement au moins 95 %, M72 Les antigènes par exemple au moins 99 %. à représentatifs apparentés comprendront, comme seront constitués de, un dérivé de 30 SEQ ID NO : 4 comportant un petit nombre de délétions, insertions et/ou substitutions. Les exemples sont ceux 3066920 comportant des délétions de jusqu'à 5 résidus au niveau de 0 à 5 emplacements, des insertions de jusqu'à 5 résidus au niveau de 0 à 5 emplacements et une substitution de jusqu'à 20 résidus. 5 Dans des modes de réalisation particuliers, l'antigène apparenté à M72 comprendra les résidus 2 à 723 de SEQ ID NO : 4, par exemple comprendra (ou sera constitué de) SEQ ID NO : 4 ou comprendra (ou sera constitué de) SEQ ID NO : 5. 10 Un autre antigène qui peut être employé conformément à la présente invention est l'antigène de la tuberculose Rv1753 et ses variants, tels que décrits dans le document WO 2010010180, par exemple une séquence de Rv1753 choisie parmi SEQ ID NO : 1 et 2 à 7 15 du document WO 2010010180, en particulier SEQ ID NO : 1. Un autre antigène d'intérêt dans le domaine de la tuberculose est Rv2386 et ses variants, tels que décrits dans le document WO 2010010179, par exemple une séquence de Rv2386 choisie parmi SEQ ID NO : 1 et 2 à 7 20 du document WO 2010010179, en particulier SEQ ID NO : 1. D'autres antigènes d'intérêt dans le domaine de la tuberculose comprennent Rv3616 et ses variants, tels que décrits dans le document WO 2011092253, par exemple une séquence naturelle de Rv3616 choisie parmi 25 SEQ ID NO : 1 et 2 à 7 du document WO 2011092253 ou une séquence modifiée de Rv3616 telle que celles choisies parmi SEQ ID NO : 161 à 169, 179 et 180 du document WO 2011092253, en particulier SEQ ID NO : 167. Un antigène supplémentaire d'intérêt est HBHA, tel que 30 décrit dans les documents WO 97044463, WO 03044048 et WO 2010149657. Les demandes de brevet susmentionnées 3066920 66 WO 2010010180, WO 2010010179, WO 2011092253, WO 97044463, WO 03044048 et WO 2010149657 définissent des antigènes qui peuvent être utilisés dans la présente invention. 5 D'autres antigènes d'intérêt sont ceux comprenant (ou constitués de) : Rv1174, également connu sous le nom de DPV, tel que décrit par SEQ ID NO : 8 du document WO 2010010177 ; Rv1793, également connu sous le nom de MTI ou Mtb9.9, tel que décrit par 10 SEQ ID NO : 10 du document WO 2010010177 ; Rv2087, également connu sous le nom de MSL ou Mtb9.8, tel que décrit par SEQ ID NO : 9 du document WO 2010010177 ; Rv3616, également connu sous le nom de HTCC1 ou Mtb40, tel que décrit par SEQ ID NO : 1 et 2 à 7 du document 15 WO 2010010177 ou SEQ ID NO : 161 à 169, 179 ou 180 du document WO 2011092253 ; et/ou Rv3874, également connu sous le nom de CFP10 ou Tb38.1, tel que décrit par SEQ ID NO : 9 du document WO 2010010177 ; ou l'une de leurs parties immunogènes (comme au moins 20, 50, 75 ou 20 100 résidus en provenant) ou l'un de leurs variants (comme présentant au moins 70 %, 80 %, 90 % ou 95 % avec ceux-ci). (Les documents WO 2010010177 et WO 2011092253 définissent des antigènes qui peuvent être utilisés dans la présente invention). 25 Les antigènes de la tuberculose sont utilisés de la façon la plus appropriée sous la forme d'un polypeptide, mais ils peuvent être fournis, en variante, 3066920 67 sous la forme d'un polynucléotide codant pour ledit polypeptide. Un autre antigène qui peut être employé conformément à la présente invention est dérivé du 5 virus varicelle zona (VZV). L'antigène du VZV à utiliser dans l'invention peut être tout antigène approprié du VZV ou l'un de ses dérivés immunogènes, étant de façon appropriée un antigène purifié du VZV. Dans un mode de réalisation, l'antigène du VZV est 10 la glycoprotéine gE du VZV (également connue sous le nom de gpl) ou ses dérivés immunogènes. La protéine gE de type sauvage ou pleine longueur est constituée de 623 acides aminés comprenant un peptide signal, la partie principale de la protéine, une région d'ancrage 15 hydrophobe (résidus 546 à 558) et une queue C-terminale. Dans un aspect, une gE tronquée à l'extrémité C-terminale (également appelée gE tronquée ou forme tronquée de la gE) est utilisée selon laquelle la troncature élimine 4 à 20 pour cent des résidus 20 d'acides aminés totaux à l'extrémité carboxy-terminale. Dans un autre aspect, à la gE tronquée, il manque la région d'ancrage carboxy-terminale (de façon appropriée, approximativement les acides aminés 547 à 623 de la séquence de type sauvage). Dans un autre aspect, la gE 25 est une gE tronquée ayant la séquence de SEQ ID NO : 6. L'antigène gE, ses dérivés sans ancrage (qui sont également des dérivés immunogènes) et leur production sont décrits dans le document EP 0405867 et les références à l'intérieur (voir également Vafai A., 30 Antibody binding sites on truncated forms of varicallazoster virus gpI(gE) glycoprotein, Vaccine 1994 12: 3066920 68 1265-9). Le document EP 192902 décrit également la gE et sa production. La gE tronquée est également décrite par Haumont et a/. Virus Research (1996) vol 40, p199 - 204. Une composition adjuvée de gE du VZV pour une 5 utilisation conformément à la présente invention est décrite dans le document WO 2006/094756, c'est-à-dire, une gE du VZV tronquée à l'extrémité carboxy-terminale en combinaison avec un adjuvant comprenant du QS-21, du 3D-MPL et des liposomes contenant en outre du 10 cholestérol. Leroux-Roels I. et al. (J. Infect. Dis. 2012, 206: 1280-1290) ont rapporté un essai clinique en phase I/II évaluant le vaccin sous-unitaire adjuvé à base gE tronquée du VZV. L'antigène peut comprendre ou être constitué de 15 préparations dérivées du virus respiratoire syncytial humain (RSV). Dans certains modes de réalisation favorables, un antigène polypeptidique est un antigène polypeptidique de la protéine F issue du RSV. Sont particulièrement appropriés en tant que composant 20 d'antigène polypeptidique dans le contexte, des antigènes polypeptidiques F conformationnellement contraints. Des protéines F conformationnellement contraintes ont été décrites auparavant dans les conformations à la fois préfusion (PreF) et postfusion 25 (PostF). De telles protéines F conformationnellement contraintes comprennent généralement un ectodomaine modifié de la protéine F du RSV. Un polypeptide de l'ectodomaine de la protéine F est une partie de la protéine F du RSV qui comprend la totalité ou une 30 partie du domaine extracellulaire de la protéine F du 3066920 69 RSV et à laquelle il manque un domaine transmembranaire fonctionnel (par exemple, par délétion ou substitution), qui peut être exprimée, par exemple, sous forme soluble (non fixée à une membrane) en culture cellulaire. 5 Des exemples d'antigènes de la protéine conformationnellement contraints dans la conformation préfusion ont été décrits dans l'art et sont divulgués en détail, par exemple, dans le brevet US No. 8 563 002 (WO 2009079796) ; les demandes de brevet US publiées 10 No. US 2012/0093847 (WO 2010/149745) ; US 2011/0305727 (WO 2011/008974) ; US 2014/0141037, WO 2012/158613 et WO 2014/160463, illustrent des polypeptides F en préfusion (et les acides nucléiques), et des procédés pour leur production. Généralement, l'antigène est sous 15 la forme d'un trimère de polypeptides. D'autres publications fournissant des exemples de protéines F dans la conformation préfusion comprennent : McLellan et al., Science, Vol. 340: 1113-1117 ; McLellan et al., Science, Vol 342: 592-598, et Rigter et al., PLOS One, 20 Vol. 8: e71072, chacune d'entre elles peut être également utilisée dans le contexte des combinaisons immunogènes divulguées ici. Par exemple, un polypeptide de la protéine F stabilisé dans la conformation préfusion comprend 25 généralement un ectodomaine d'une protéine F (par exemple, un polypeptide soluble de la protéine F) comprenant au moins une modification qui a stabilisé la conformation préfusion de la protéine F. Par exemple, la modification peut être choisie parmi une addition 30 d'un domaine de trimérisation (généralement à 3066920 l'extrémité C-terminale), la délétion d'un ou de plusieurs des sites de clivage de la furine (au niveau des acides aminés -105 à 109 et -133 à 136), une délétion du domaine pep27, la substitution ou 5 l'addition d'un acide aminé hydrophile dans un domaine hydrophobe (par exemple, HRA et/ou HRB). Dans un mode de réalisation, l'antigène conformationnellement contraint PreF comprend un domaine F2 (par exemple, les acides aminés 1 à 105) et un domaine Fi (par exemple, 10 les acides aminés 137 à 516) d'un polypeptide de la protéine F du RSV sans aucun site de clivage de la furine intervenant dans lequel le polypeptide comprend en outre un domaine de trimérisation hétérologue en position C-terminale par rapport au domaine Fi. 15 Eventuellement, l'antigène PreF comprend également une modification qui change la glycosylation (par exemple, augmente la glycosylation), comme une substitution d'un ou de plusieurs acides aminés au niveau de positions correspondant aux acides aminés -500 à 502 d'une 20 protéine F du RSV. Lorsqu'une séquence d'oligomérisation est présente, il s'agit de préférence d'une séquence de trimérisation. Les séquences d'oligomérisation appropriées sont bien connues dans l'art et comprennent, par exemple, la superhélice de la 25 protéine leucine zipper du GCN4 de levure, la séquence de trimérisation de la fibritine du bactériophage T4 (« foldon »), et le domaine trimère de la HA du virus de la grippe. En outre ou en variante, le polypeptide F conformationnellement contraint dans la conformation 30 préfusion peut comprendre au moins deux résidus de cystéine introduits, qui sont en étroite proximité l'un 3066920 71 par rapport à l'autre et forment une liaison disulfure qui stabilise le polypeptide F du RSV en pré-fusion. Par exemple, les deux cystéines peuvent se situer à environ 10 Â l'une de l'autre. Par exemple, les 5 cystéines peuvent être introduites au niveau des positions 165 et 296 ou au niveau des positions 155 et 290. Un exemple d'antigène PreF est représenté par SEQ ID NO : 7. L'antigène peut comprendre ou être constitué de 10 préparations dérivées du VIH. L'antigène peut être une protéine du VIH comme une protéine de l'enveloppe du VIH. Par exemple, l'antigène peut être un polypeptide gp120 de l'enveloppe du VIH ou l'un de ses fragments immunogènes. 15 Un antigène approprié est le polypeptide gp120 du clade B du VIH de SEQ ID NO : 8 de la demande publiée WO 2008/107370 (ou un fragment immunogène de ce polypeptide). Les antigènes appropriés comprennent également un 20 polypeptide comprenant la région V1V2 de SEQ ID NO : 1 de la demande publiée WO 2015/036061, ou un dérivé ou fragment immunogène de la région V1V2 de SEQ ID NO : 1. En outre, un polypeptide comprenant la région V1V2 de SEQ ID NO : 5 du document WO 2015/036061 ou un dérivé 25 ou fragment immunogène de la région V1V2 de SEQ ID NO : 5 peut être utilisé en tant qu'antigène approprié. Dans un autre mode de réalisation, l'antigène peut comprendre deux antigènes polypeptidiques gp120 de 3066920 72 l'enveloppe du VIH différents ou plus (ou des fragments immunogènes de ces polypeptides). Les antigènes appropriés comprennent les antigènes polypeptidiques gp120 du clade C du VIH y compris gp120 du TV1 5 (SEQ ID NO : 8) et gp120 du 1086.0 (SEQ ID NO : 9). D'autres antigènes appropriés du VIH comprennent les protéines Nef, Gag et Pol du VIH et leurs fragments immunogènes. La composition peut comprendre un ou plusieurs 10 antigènes de Haemophilus influenzae non typable, par exemple, choisis parmi : la protéine fimbrine [(US 5766608 - Ohio State Research Foundation)] et des fusions comprenant des peptides qui en sont dérivés [par exemple, des fusions de peptides LB1(f) ; 15 US 5843464 (OSU) ou WO 99/64067] ; OMP26 [WO 97/01638 (Cortecs)] ; P6 [EP 281673 (State University of New York)] ; TbpA et/ou TbpB ; Hia ; Hsf ; Hin47 ; Hif ; Hmwl ; Hmw2 ; Hmw3 ; Hmw4 ; Hap ; D15 (WO 94/12641) ; la protéine D (EP 594610) ; P2 ; et P5 (WO 94/26304) 20 la protéine E (WO 07/084053) et/ou PilA (WO 05/063802). La composition peut comprendre un ou plusieurs antigènes protéiniques de Mbraxella catarrhalis, par exemple, choisis parmi : OMP106 [WO 97/41731 (Antex) et WO 96/34960 (PMC)] ; OMP21 ; LbpA et/ou LbpB 25 [WO 98/55606 (PMC)] ; TbpA et/ou TbpB [WO 97/13785 et WO 97/32980 (PMC)] ; CopB [Helminen ME, et al. (1993) Infect. Immun. 61: 2003-2010] ; UspAl et/ou UspA2 [WO 93/03761 (University of Texas)] ; OmpCD ; HasR (PCT/EP99/03824) ; PilQ (PCT/EP99/03823) ; OMP85 30 (PCT/EP00/01468) ; lipo06 (GB 9917977.2) ; lipol0 (GB 9918208.1) ; lipoll (GB 9918302.2) ; lipol8 3066920 73 (GB 9918038.2) ; P6 (PCT/EP99/03038) ; D15 (PCT/EP99/03822) ; OmplAl (PCT/EP99/06781) ; Hly3 (PCT/EP99/03257) ; et OmpE. Dans un mode de réalisation, la composition peut 5 comprendre un ou plusieurs antigènes protéiniques de H. influenzae non typable (NTHi) et/ou un ou plusieurs antigènes protéiniques de M. catarrhalis. La composition peut comprendre la protéine D (PD) issue de H. influenzae. La protéine D peut être telle que 10 décrite dans le document WO 91/18926. La composition peut comprendre en outre la protéine E (PE) et/ou la piline A (PilA) issues de H. Influenzae. La protéine E et la piline A peuvent être telles que décrites dans le document WO 2012/139225. La protéine E et la piline A 15 peuvent se présenter sous la forme d'une protéine de fusion ; par exemple, LVL735 telle que décrite dans le document WO 2012/139225. Par exemple, la composition peut comprendre trois antigènes de NTHi (PD, PE et PilA, avec les deux derniers combinés sous la forme d'une 20 protéine de fusion PEPilA). La composition peut comprendre en outre UspA2 issue de M. catarrhalis. UspA2 peut être telle que décrite dans le document WO 2015125118, par exemple MC-009 ((M)(UspA2 31- 564)(HH)) décrite dans le document WO 2015125118. Par 25 exemple, la composition peut comprendre trois antigènes de NTHi (PD, PE et PilA, avec les deux derniers combinés sous la forme d'une protéine de fusion PEPilA) et un antigène de M. catarrhalis (UspA2). Il peut être fourni une pluralité d'antigènes. Par 30 exemple, il peut être fourni une pluralité d'antigènes pour renforcer la réponse immunitaire déclenchée (par 3066920 -74 exemple, pour assurer une protection forte), il peut être fourni une pluralité d'antigènes pour élargir la réponse immunitaire (par exemple, pour assurer une protection contre tout un éventail de souches 5 pathogènes ou dans une grande proportion d'une population de sujets) ou il peut être fourni une pluralité d'antigènes pour déclencher actuellement des réponses immunitaires par rapport à un certain nombre de troubles (simplifiant de cette façon les protocoles 10 d'administration). Lorsqu'il est fourni une pluralité d'antigènes, ceux-ci peuvent être sous forme de protéines distinctes ou ils peuvent être sous la forme d'une ou de plusieurs protéines de fusion. L'antigène peut être fourni dans_ une quantité de 15 0,1 à 100 pg par dose humaine. La présente invention peut être appliquée pour une utilisation dans le traitement ou la prophylaxie d'une maladie ou d'un trouble associé à un ou plusieurs des antigènes décrits ci-dessus. Dans un mode de 20 réalisation, la maladie ou le trouble est choisi parmi le paludisme, la tuberculose, la BPCO, le VIH et l'herpès. L'adjuvant liposomial peut être administré séparément d'un immunogène ou d'un antigène, ou il peut 25 être combiné, soit durant la fabrication soit extemporanément, avec un immunogène ou un antigène sous la forme d'une composition immunogène pour une administration combinée. 30 Stérilisation 3066920 Pour une administration parentérale en particulier, les compositions devront être stériles. La stérilisation peut être effectuée par divers procédés bien qu'elle soit entreprise de façon pratique par 5 filtration à travers un filtre de qualité stérile. La stérilisation peut être effectuée un certain nombre de fois durant la préparation d'un adjuvant ou d'une composition immunogène, mais elle est généralement effectuée au moins à la fin de la fabrication. 10 Par « filtre de qualité stérile », il est signifié un filtre qui produit un effluent stérile après une épreuve par des micro-organismes à un taux d'épreuve supérieur ou égal à 1 x 107/cm2 de surface de filtration efficace. Les filtres de qualité stérile 15 sont bien connus de l'homme du métier de l'invention. Pour l'objectif de la présente invention, les filtres de qualité stérile ont une taille de pore située entre 0,15 et 0,25 pm, de façon appropriée 0,18 à 0,22 pm, comme 0,2 ou 0,22 pm. 20 Les membranes du filtre de qualité stérile peuvent être faites de tout matériau approprié connu de l'homme du métier, par exemple, mais n'y étant pas limité, l'acétate de cellulose, la polyéthersulfone (PES), le fluorure de polyvinylidène (PVDF), le 25 polytétrafluoroéthylène (PTFE). Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, une OU plusieurs ou la totalité des membranes du filtre de la présente invention comprennent de la polyéthersulfone (PES), en particulier de la polyéthersulfone 30 hydrophile. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les filtres utilisés dans les procédés 3066920 76 décrits ici sont un filtre à double couche, en particulier un filtre stérile avec un préfiltre intégré ayant une taille de pore supérieure à la taille de pore du filtre final. Dans un mode de réalisation, le filtre 5 de stérilisation est un filtre à double couche dans lequel la couche de la membrane du préfiltre a une taille de pore située entre 0,3 et 0,5 nm, comme 0,35 ou 0,45 nm. Selon d'autres modes de réalisation, les filtres comprennent une ou plusieurs membranes de 10 filtre asymétriques, comme une ou plusieurs membranes de filtre asymétriques de PES hydrophile. En variante, la couche du filtre de stérilisation peut être faite de PVDF, par exemple, en combinaison avec une couche de membrane de préfiltre asymétrique de PES hydrophile. 15 A la lumière des utilisations médicales prévues, les matériaux devront être de qualité pharmaceutique (comme de qualité parentérale). Par le terme « sensiblement » en ce qui concerne un nombre entier, il est signifié fonctionnellement 20 comparable, de telle façon qu'une déviation peut être tolérée si la nature essentielle du nombre entier n'est pas changée. Par exemple, en ce qui concerne des valeurs spécifiques, le terme « sensiblement » signifiera généralement une valeur située à plus ou 25 moins 10 pour cent de la valeur indiquée. En résumé, la présente invention fournit : 1. Un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes 30 suivantes : 3066920 77 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine ; et 5 (b) l'élimination du solvant. 2. Un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : 10 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et 15 (c) l'élimination du solvant. 3. Un procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes: 20 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'élimination du solvant ; et 25 (c) l'ajout de la saponine. 4. Un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant l'étape de 30 mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine 3066920 78 et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine. 5. Un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant 5 liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de 10 phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; et (b) l'ajout de la saponine. 6. Un procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant 15 liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de 20 phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et (c) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; dans lequel les étapes (b) et (c) peuvent être 25 dans un ordre ou dans l'autre, ou peuvent être effectuées dans une seule étape. 7. Le procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique selon le point 1, comprenant 30 les étapes suivantes : 3066920 79 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine ; et 5 (b) l'élimination du solvant. 8. Le procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique selon le point 2, comprenant les étapes suivantes : 10 (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et (c) l'élimination du solvant. 15 9. Le procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique selon le point 3, comprenant les étapes suivantes (a) le mélange dans le dispositif d'une première 20 solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; l'élimination du solvant ; et l'ajout de la saponine. Le procédé de fabrication d'un concentré 25 liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique selon le point 4, comprenant l'étape de mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un 30 stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine. 3066920 11. Le procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique selon le point 5, comprenant 5 les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; et 10 (b) l'ajout de la saponine. 12. Le procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique selon le 15 point 6, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et 20 (c) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; dans lequel les étapes (b) et (c) peuvent être dans un ordre ou dans l'autre, ou peuvent être effectuées dans une seule étape. 13. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 25 à 5 ou 7 à 11, dans lequel la première solution comprend en outre un agoniste des TLR4. 14. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 3 ou 7 à 9, dans lequel un agoniste des TLR4 est ajouté avant l'élimination du solvant. 3066920 81 15. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 3 ou 7 à 9, dans lequel un agoniste des TLR4 est ajouté après l'élimination du solvant. 16. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 5 à 15, dans lequel le dispositif microfluidique comporte une entrée pour la première solution vers la chambre de mélange. 17. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 15, dans lequel le dispositif microfluidique comporte 10 deux entrées pour la première solution vers la chambre de mélange. 18. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 15, dans lequel le dispositif microfluidique comporte trois entrées ou plus pour la première solution vers la 15 chambre de mélange. 19. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 18, dans lequel le dispositif microfluidique comporte une entrée pour la seconde solution vers la chambre de mélange. 20 20. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 18, dans lequel le dispositif microfluidique comporte deux entrées pour la seconde solution'vers la chambre de mélange., 21. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 25 à 18, dans lequel le dispositif microfluidique comporte trois entrées ou plus pour la seconde solution vers la chambre de mélange. 22. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 21, dans lequel chaque entrée a une largeur de 0,2 mm 30 et couvre la pleine longueur de l'autre côté de la chambre de mélange. 3066920 82 23. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 22, dans lequel la section transversale de la chambre de mélange est de 25,6 mm2 ou inférieure. 24. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 5 à 23, dans lequel la section transversale de la chambre de mélange est de 0,1 mm2 ou supérieure. 25. Le procédé selon l'un quelconque des points 22 à 24, dans lequel la section transversale de la chambre de mélange est de 0,2 à 3,2 mm2. 10 26. Le procédé selon le point 25, dans lequel la section transversale de la chambre de mélange est de 0,6 à 1,2 mm2, comme autour de 0,8 utm2. 27. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 26, dans lequel la chambre de mélange est 15 sensiblement rectangulaire en coupe transversale. 28. Le procédé selon le point 27, dans lequel la coupe transversale de la chambre de mélange a un côté long de 1 à 8 mm. 29. Le procédé selon le point 28, dans lequel la 20 coupe transversale de la chambre de mélange a un côté long de 1,6 à 2,4 mm. 30. Le procédé selon le point 29, dans lequel la coupe transversale de la chambre de mélange a un côté long de 2 mm. 25 31. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 30, dans lequel la coupe transversale de la chambre de mélange a un côté court de 0,1 à 4 mm. 32. Le procédé selon le point 31, dans lequel la coupe transversale de la chambre de mélange a un côté 30 court de 0,2 à 0,6 mm. 3066920 83 33. Le procédé selon le point 32, dans lequel la coupe transversale de la chambre de mélange a un côté court de 0,4 mm. 34. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 5 à 33, dans lequel la chambre de mélange a une longueur de 1 à 10 cm. 35. Le procédé selon le point 34, dans lequel la chambre de mélange a une longueur de 2 à 3 cm. 36. Le procédé selon le point 35, dans lequel la 10 chambre de mélange a une longueur de 2,5 cm. 37. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 36, dans lequel le dispositif microfluidique comporte une sortie à partir de la chambre de mélange pour la récupération du matériau mélangé. 15 38. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 37, dans lequel le dispositif microfluidique comporte deux sorties ou plus à partir de la chambre de mélange pour la récupération du matériau mélangé. 39. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 20 à 38, dans lequel le dispositif microfluidique comprend une chambre de mélange qui est rectangulaire en coupe transversale, 'ayant une section transversale de 0,2 à 3,2 mm2, un côté long de 1,4 à 3,2 mm, un côté court de 0,1 à 1,2 mm, une entrée pour la première solution et 25 deux sorties pour la seconde solution qui sont disposées symétriquement à l'extrémité proximale de la chambre de mélange, une longueur de chambre de mélange de 1,5 à 5 cm et une sortie localisée à l'extrémité distale de la chambre de mélange. 30 40. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 39, dans lequel le débit total dans la chambre de 3066920 84 mélange est de 12 à 30 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange. 41. Le procédé selon le point 40, dans lequel le débit total dans la chambre de mélange est de 17,5 à 5 25 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange. 42. Le procédé selon le point 41, dans lequel le débit total dans la chambre de mélange est de 20 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de 10 mélange. 43. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 42, dans lequel le rapport des débits pour les première et seconde solutions se situe dans la plage de 1/2 à 1/6. 15 44. Le procédé selon le point 43, dans lequel le rapport des débits pour les première et seconde solutions se situe dans la plage de 1/3 à 1/5. 45. Le procédé selon le point 44, dans lequel le rapport des débits pour les première et seconde 20 solutions est de 1/4. 46. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 45, dans lequel le débit de la première solution dans la chambre de mélange est de 2 à 7,5 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange. 25 47. Le procédé selon le point 46, dans lequel le débit de la première solution dans la chambre de mélange est de 3 à 6,5 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange. 48. Le procédé selon le point 47, dans lequel le 30 débit de la première solution dans la chambre de 3066920 mélange est de 5 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange. 49. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 48, dans lequel le débit de la seconde solution dans 5 la chambre de mélange est de 11 à 25 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange. 50. Le procédé selon le point 49, dans lequel le débit de la seconde solution dans la chambre de mélange est de 14 à 20 ml/min/mm2 de coupe transversale de la 10 chambre de mélange. 51. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 50, dans lequel la première solution est fournie à une température de 10 à 30 °C. 52. Le procédé selon le point 51, dans lequel la 15 température de la première solution est fournie à une température de 15 à 25 °C. 53. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 52, dans lequel la température de la seconde solution est fournie à une température de 10 à 30 °C. 20 54. Le procédé selon le point 53, dans lequel la température de la seconde solution est fournie à une température de 15 à 25 °C. 55. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 54, dans lequel la température de la chambre de 25 mélange est de 10 à 30 °C. 56. Le procédé selon le point 55, dans lequel la température de la chambre de mélange est de 15 à 25 °C. 57. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 56, dans lequel le nombre de Reynolds maximal au sein 30 de la chambre de mélange est de 1500 ou inférieur. 3066920 86 58. Le procédé selon le point 57, dans lequel le nombre de Reynolds maximal au sein de la chambre de mélange est de 75 à 300, comme 100 à 200. 59. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 5 à 58, dans lequel le dispositif microfluidique comprend une pluralité de chambres de mélange. 60. Le procédé selon le point 59, dans lequel le dispositif comprend 2 à 128 chambres de mélange. 61. Le procédé selon le point 60, dans lequel le 10 dispositif comprend 4 à 32 chambres de mélange. 62. Le procédé selon le point 61, dans lequel le dispositif comprend 16 chambres de mélange. 63. Le procédé selon l'un quelconque des points 59 à 62, dans lequel toutes les chambres de mélange dans 15 la pluralité des chambres de mélange sont alimentées par les mêmes pompes et le matériau mélangé issu de toutes les chambres de mélange est recueilli avant un autre traitement et/ou stockage. 64. Le procédé selon l'un quelconque des points 59 20 à 63, dans lequel la pluralité des chambres de mélange est capable de produire le matériau mélangé à un taux de 50 à 2000 ml/min. 65. Le procédé selon l'un quelconque des points 59 à 64, dans lequel la pluralité des chambres de mélange 25 est capable de produire le matériau mélangé à un taux d'au moins 1 g de lipide de phosphatidylcholine par minute. 66. Le procédé selon l'un quelconque des points 59 à 65, dans lequel la pluralité des chambres de mélange 30 est capable de produire le matériau mélangé à un taux d'au moins 1 g de DOPC par minute. 3066920 87 67. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 66, dans lequel le solvant comprend un alcool organique. 68. Le procédé selon le point 67, dans lequel le 5 solvant comprend de l'éthanol. 69. Le procédé selon le point 68, dans lequel le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol. 70. Le procédé selon le point 69, dans lequel le solvant comprend 75 à 85 % v/v d'éthanol. 10 71. Le procédé selon le point 70 dans lequel le solvant comprend 80 % v/v d'éthanol. 72. Le procédé selon l'un quelconque des points 67 à 71, dans lequel le solvant comprend de l'isopropanol. 73. Le procédé selon le point 72, dans lequel le 15 solvant comprend 10 à 30 % v/v d'isopropanol. 74. Le procédé selon le point 73, dans lequel le solvant comprend 15 à 25 % v/v d'isopropanol. 75. Le procédé selon le point 74, dans lequel le solvant comprend 20 % v/v d'isopropanol. 20 76. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 75, dans lequel la première solution comprend 100 à 170 mg/mi de lipide de phosphatidylcholine. 77. Le procédé selon le point 76, dans lequel la première solution comprend 100 à 160 mg/mi de lipide de 25 phosphatidylcholine. 78. Le procédé selon le point 77, dans lequel la première solution comprend 130 mg/m1 de lipide de phosphatidylcholine. 79. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 30 à 78, dans lequel la première solution comprend 100 à 170 mg/m1 de DOPC. 3066920 88 80. Le procédé selon le point 79, dans lequel la première solution comprend 100 à 160 mg/m1 de DOPC. 81. Le procédé selon le point 80, dans lequel la première solution comprend 130 mg/m1 de DOPC. 5 82. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 81, dans laquelle la première solution comprend 20 à 50 mg/mi de stérol. 83. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 82, dans lequel la première solution comprend 30 à 10 35 mg/m1 de stérol. 84. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 83, dans lequel le stérol est le cholestérol. 85. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 84, dans lequel le poids sec de la première solution 15 est de 120 à 250 mg/ml. 86. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 85, dans lequel la seconde solution comprend au moins 90 % p/p d'eau. 87. Le procédé selon le point 86, dans lequel la 20 seconde solution comprend au moins 98 % p/p d'eau. 88. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 87, dans lequel la saponine est le Quil A ou l'un de ses dérivés. 89. Le procédé selon le point 88, dans lequel la 25 saponine est le QS-21. 90. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 89, dans lequel la seconde solution comprend 0,15 à 15 mg/m1 de saponine. 91. Le procédé selon le point 90, dans lequel la 30 seconde solution comprend 1 à 4 mg/m1 de saponine. 3066920 89 92. Le procédé selon l'un quelconque des points 6 ou 12 à 91, dans lequel l'agoniste des TLR4 est un lipopolysaccharide. 93. Le procédé selon le point 92, dans lequel le 5 lipopolysaccharide est le 3D-MPL. 94. Le procédé selon le point 13 ou 16 à 93, dans lequel la première solution comprend 4 à 10 mg/mi de l'agoniste des TLR4. 95. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 10 à 94, dans lequel la taille moyenne des liposomes est de 95 à 120 nm. 96. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 95, dans lequel la polydispersité des liposomes est de 0,3 ou inférieure. 15 97. Le procédé selon le point 96, dans lequel la polydispersité des liposomes est de 0,2 ou inférieure. 98. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 97, dans lequel le solvant est éliminé par diafiltration, ultrafiltration et/ou dialyse, en 20 particulier par diafiltration. 99. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 98, dans lequel l'élimination du solvant aboutit à une teneur en eau d'au moins 98 % p/p d'eau. 100. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 25 à 99, comprenant l'étape supplémentaire de dilution, comme jusqu'à une concentration finale souhaitée. 101. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 100, comprenant l'étape supplémentaire d'ajustement du pH à 5 à 9. 3066920 102. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 à 101, comprenant l'étape supplémentaire d'ajustement de l'osmolalité à 250 à 750 mOsm/kg. 103. Un procédé pour la préparation d'une 5 composition immunogène adjuvée comprenant un immunogène ou un antigène, ou un polynucléotide codant pour l'immunogène ou l'antigène, ledit procédé comprenant les étapes de : (i) fabrication d'un adjuvant liposomial selon le 10 procédé de l'un quelconque des points 1 à 102 ; (ii) mélange de l'adjuvant liposomial avec un immunogène ou un antigène, ou un polynucléotide codant pour l'immunogène ou l'antigène. 104. Un procédé pour la fabrication d'une 15 composition immunogène adjuvée, ledit procédé comprenant l'étape de combinaison d'un immunogène ou d'un antigène, ou d'un polynucléotide codant pour l'immunogène ou l'antigène, avec un adjuvant liposomial fabriqué selon le procédé de l'un quelconque des 20 points 1 à 102. 105. Le procédé selon le point 103 ou 104, dans lequel l'antigène est dérivé de Plasmodium spp. (comme Plasmodium falciparum), Mycobacterium spp. (comme Mycobacterium tuberculosis (TB)), du virus varicelle 25 zona (VZV), du virus respiratoire syncytial humain, du virus de l'immunodéficience humaine (HIV), Moraxella spp. (comme Moraxella catarrhalis) ou Haemophilus influenzae non typable (ntHi). 106. Le procédé selon l'un quelconque des points 1 30 à 105, comprenant l'étape supplémentaire de stérilisation par filtration. 3066920 91 107. Un adjuvant liposomial comprenant une saponine, un agoniste des TLR4, de la DOPC et du stérol produit selon le procédé de l'un quelconque des points 1 à 106. 5 108. Une composition immunogène adjuvée produite selon le procédé du point 104 ou 105. 109. L'adjuvant ou la composition immunogène selon le point 107 ou 108 comprenant une saponine, comme le QS-21, dans une quantité de 1 à 100 pg par dose 10 humaine. 110. L'adjuvant ou la composition immunogène selon l'un quelconque des points 107 à 109 comprenant un agoniste des TLR4, comme le 3D-MPL, dans une quantité de 1 à 100 pg par dose humaine. 15 111. Une solution comprenant un solvant et 100 à 170 mg/m1 de lipide, dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol, comme 75 à 85 % v/v d'éthanol, et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique comme 15 à 25 % v/v d'isopropanol. 20 112. La solution selon le point 111, dans laquelle le lipide est une phosphatidylcholine. 113. La solution selon le point 111, dans laquelle le lipide est la DOPC. 114. La solution selon l'un quelconque des 25 points 111 à 113, comprenant 100 à 160 mg/mi de lipide. 115. La solution selon le point 114, comprenant 120 à 140 mg/m1 de lipide, comme 130 mg/ml. 116. La solution selon l'un quelconque des points 111 à 115, comprenant en outre 20 à 50 mg/m1 de 30 stérol. 3066920 92 117. La solution selon l'un quelconque des points 111 à 116, dans laquelle le rapport du lipide sur le stérol est de 3/1 à 5/1. 118. La solution selon le point soit 111 soit 117, 5 dans laquelle le stérol est le cholestérol. 119. La solution selon l'un quelconque des points 111 à 118, comprenant un agoniste des TLR4. 120. La solution selon le point 119, dans laquelle l'agoniste des TLR4 est présent à une concentration de 10 4 à 12 mg/ml. 121. La solution selon l'un quelconque des points 111 à 120 qui est constituée essentiellement d'un solvant et de 100 à 160 mg/m1 de DOPC et de 30 à 40 mg/m1 de cholestérol, de 4 à 10 mg/mi d'agoniste des 15 TLR4, et dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique. 122. La solution selon l'un quelconque des points 111 à 121 dans laquelle l'agoniste des TLR4 est un lipopolysaccharide, comme le 3D-MPL. 20 123. Un procédé pour la préparation d'une solution comprenant un solvant, un lipide, du cholestérol et un agoniste des TLR4, ledit procédé comprenant les étapes : (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste 25 des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en suspension avec le lipide de phosphatidylcholine et le cholestérol ; (iii) l'ajout d'autre solvant ; 30 (iv) le mélange. 3066920 93 124. Un procédé pour la préparation d'une solution comprenant un solvant, un lipide, du cholestérol et un agoniste des TLR4, ledit procédé comprenant les étapes : 5 (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en suspension avec le lipide de phosphatidylcholine et le cholestérol ; 10 (iii) l'ajout d'autre solvant ; (iv) le mélange ; (v) l'ajout de solvant supplémentaire. 125. Le procédé pour la préparation d'une solution comprenant un solvant, un lipide, du cholestérol et un 15 agoniste des TLR4 selon le point 123, ledit procédé comprenant les étapes : (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en 20 suspension avec la DOPC et le cholestérol ; (iii) l'ajout d'autre solvant ; (iv) le mélange. 126. Un procédé pour la préparation d'une solution comprenant un solvant, un lipide, du cholestérol et un 25 agoniste des TLR4 selon le point 124, ledit procédé comprenant les étapes : (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en 30 suspension avec la DOPC et le cholestérol ; (iii) l'ajout d'autre solvant ; 3066920 94 (iv) le mélange ; (v) l'ajout de solvant supplémentaire. 127. Le procédé selon l'un quelconque des points 123 à 126, dans lequel le mélange est à une 5 température de 30 à 50 °C. 128. Le procédé selon le point 127, dans lequel le mélange est à une température de 35 à 45 °C. 129. Le procédé selon le point 128, dans lequel le mélange est à une température de 40 °C. 10 130. Le procédé selon l'un quelconque des points 123 à 129, dans lequel l'au moins une partie du solvant est au moins 25 % du solvant. 131. Le procédé selon le point 130, dans lequel l'au moins une partie du solvant est au moins 35 % du 15 solvant. 132. Le procédé selon le point 131, dans lequel l'au moins une partie du solvant est au moins 45 % du solvant. 133. Le procédé selon l'un quelconque des 20 points 123 à 132, dans lequel l'au moins une partie du solvant est 90 % du solvant ou moins comme 80 % ou moins, spécialement 70 % ou moins et en particulier 60 % ou moins. 134. Le procédé selon l'un quelconque des 25 points 123 à 133, dans lequel d'autre solvant est tout solvant restant. 135. Le procédé selon l'un quelconque des points 123 à 134, dans lequel la solution comprend 100 à 160 mg/m1 de lipide et 30 à 40 mg/mi de 30 cholestérol, dans lequel le solvant comprend 70 à 90 % 3066920 v/v d'éthanol et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique, dans lequel le lipide est de façon appropriée la DOPC. 136. Le procédé selon l'un quelconque des points 123 à 135, dans lequel l'agoniste des TLR4 est 5 le 3D-MPL. 137. Le procédé selon le point 136, dans lequel la solution comprend 4 à 10 mg/m1 de 3D-MPL. 138. Le procédé selon l'un quelconque des points 124 à 137, dans lequel le solvant supplémentaire 10 est 0 à 30 % du solvant. 139. Une solution contenant des liposomes pouvant être obtenue par mélange de la première solution et de la seconde solution selon les procédés de l'un quelconque des points 1 à 139 avant l'élimination du 15 solvant. 140. Le procédé, l'adjuvant, la composition ou la solution selon l'un quelconque des points 1 à 139, dans lequel/laquelle le lipide de phosphatidylcholine contient des chaînes acyle non ramifiées saturées 20 comportant 12 à 20 atomes de carbone comme des chaînes acyle comportant 14 à 18 atomes de carbone. 141. Le procédé, l'adjuvant, la composition ou la solution selon l'un quelconque des points 1 à 139, dans lequel/laquelle le lipide de phosphatidylcholine 25 contient des chaînes acyle non ramifiées comportant 12 à 20 atomes de carbone et une double liaison, comme des chaînes acyle comportant 14 à 18 atomes de carbone et une double liaison. 142. Le procédé, l'adjuvant, la composition ou la 30 solution selon l'un quelconque des points 1 à 141, dans lequel/laquelle le lipide de phosphatidylcholine est 3066920 96 choisi parmi la dilauroyl-phosphatidylcholine (DLPC), la dimyristoyl-phosphatidylcholine (DMPC), la dipalmitoyl-phosphatidylcholine (DPPC), la distéaroylphosphatidylcholine (DSPC) et la diarachidoyl- 5 phosphatidylcholine (DAPC), la dipalmitoléoylphosphatidylcholine et la dioléoyl-phosphatidylcholine (DOPC) ; et leurs mélanges. Une composition ou une méthode ou un procédé défini (e) comme « comprenant » est compris (e) comme 10 englobant une composition, une méthode ou un procédé (respectivement) constitué(e) de ces éléments. Tel qu'utilisé ici, « constitué essentiellement de » être présents à 15 propriétés ou la L'invention aux exemples non peuvent condition qu'ils ne modifient pas les fonction globale. va être en outre décrite en référence limitatifs suivants. signifie que des composants supplémentaires 20 Exemples Détails expérimentaux généraux Dispositif microfluidique à chambre de mélange unique et fonctionnement général Dispositif 25 3066920 97 La figure 1 illustre la conception d'un exemple de dispositif microfluidique comportant une chambre de mélange sur une seule puce. Le dispositif comprend une chambre de mélange d'une longueur de 2,5 cm et présentant une coupe transversale allongée de 2 mm par 0,4 mm. La chambre de mélange comporte une entrée localisée au centre pour la fourniture de la première solution et deux entrées pour la fourniture de la seconde solution. Chacune des entrées a une largeur de 10 0,2 mm et couvre la pleine longueur de l'autre côté de la chambre de mélange. Une sortie unique est localisée à l'extrémité distale de la chambre de mélange. Fonctionnement 15 Pour effectuer des expériences microfluidiques, des pousses-seringues Cetoni neMesys à pression moyenne, des seringues en verre Cetoni et un support de puces Micronit contenant le dispositif ont été placés dans une zone à température contrôlée (Sartorius Certomat). 20 Avant toute série expérimentale, le système est nettoyé et laissé se stabiliser à la température fixée. Recueil des produits et élimination du solvant Les liposomes concentrés recueillis ont été 25 divisés en 2 parties : La première partie a été diluée avec de la solution tampon phosphate (PBS) pH 6,1 pour atteindre une concentration finale de 2 mg/mi de DOPC et filtrée sur une membrane de polyéthersulfone (PES) de 0,22 pin. 30 L'analyse de la composition (DOPC, cholestérol, 3D-MPL, QS-21) a été effectuée sur cet échantillon. 3066920 98 La seconde partie a été dialysée (dispositif 7000MWCO Thermo Slide-A-Lyser) avec de la solution tampon phosphate pH 6,1 pour éliminer le solvant organique. Le protocole utilisé a été : 2 x 15 min, 2 x 5 30 min et pendant une nuit (1 1 de tampon PBS pH 6,1 à chaque point de temps). Le rétentat a été ensuite dilué pour atteindre 2 mg/mi de DOPC et filtré sur une membrane de PES de 0,22 pm. Les mesures des tailles ont été entreprises sur cet échantillon. L'alcool résiduel 10 a été testé sur cet échantillon par chromatographie gazeuse. Dispositif microfluidique à chambres de mélange multiples et fonctionnement général 15 Dispositif La figure 2 illustre la conception d'un exemple de dispositif microfluidique à chambres de mélange multiples comportant huit chambres de mélange sur une 20 seule puce. Le dispositif comprend huit chambres de mélange d'une longueur de 2,5 cm et ayant une coupe transversale allongée de 2 mm par 0,4 mm. Chaque chambre de mélange comporte une entrée localisée au centre pour la fourniture de la première solution et 25 deux entrées pour la fourniture de la seconde solution. Chacune des entrées a une largeur de 0,2 mm et couvre la pleine longueur de l'autre côté de la chambre de mélange. Une sortie unique est localisée à l'extrémité distale de chacune des chambres de mélange. 30 La figure 3 illustre une conception de tubulure qui peut être utilisée conjointement avec une puce 3066920 99 microfluidique à chambres de mélange multiples, pour fournir la première solution ou la seconde solution aux entrées de seize chambres de mélange, ou pour recueillir le matériau mélangé à partir des sorties des 5 seize chambres de mélange. La figure 4 est une représentation d'un exemple de dispositif microfluidique à chambres de mélange multiples comportant un total de seize chambres de mélange basées sur deux puces du style représenté sur 10 la figure 2 (occupant les deux supports centraux), conjointement avec une tubulure de distribution fournissant les entrées de la première solution des seize chambres (support en bas à gauche), une tubulure de distribution fournissant les entrées de seconde 15 solution des seize chambres (support en haut à gauche) et une tubulure de collecte qui groupe les sorties des seize chambres (support à droite). Fonctionnement 20 Le dispositif à chambres de mélange multiples peut fonctionner d'une façon similaire au dispositif simple. Par exemple, le stock organique (par exemple, 4,9 1) peut être préparé en contenant de la DOPC à 130 mg/ml, du cholestérol à 32,5 mg/mi et du 3D-MPL à 6,5 mg/m1 25 dans de l'éthanol/IPA à 80/20. La phase aqueuse (par exemple, 19,7 1) peut être composée de QS -21 à 1,625 mg/m1 dilué dans de l'eau pour injection. Des pompes appropriées, telles que Isco 500D en tandem pour la phase organique et 1000D en tandem pour 30 la phase aqueuse, peuvent être utilisées en flux continu pour fournir les phases liquides dans les 3066920 tubulures divisant les flux en 16 flux qui pénètrent dans les 16 chambres de mélange disposées en parallèle. A l'extrémité des chambres de mélange, une autre tubulure peut être utilisée pour recueillir le matériau 5 mélangé contenant les liposomes concentrés dans un récipient. La diafiltration peut être utilisée pour éliminer le solvant organique à partir du matériau mélangé et remplacer l'eau pour injection par un tampon approprié 10 (comme le tampon PBS pH 6,1). Une autre dilution avec un tampon approprié (par exemple, PBS pH 6,1) permet d'obtenir la composition finale selon la concentration souhaitée des composants. Une stérilisation par filtration peut être alors 15 entreprise. Procédés analytiques - Mesure des tailles Les mesures des tailles font usage du principe de 20 la DLS avec un instrument Zetasizer de Malvern. Les échantillons ont été dilués dans le tampon correspondant (généralement du PBS pH 6,1) pour les mesures. - Teneur en 3D-MPL 25 Une HPLC couplée à une détection de fluorescence a été utilisée pour quantifier le composant 3D-MPL. La séparation a été réalisée sur une colonne C18. Les étalons ont été préparés à partir d'un mélange équimolaire de glucosamine HC1 et de glucosamine-6- 30 phosphate reconstitué dans la matrice liposomiale (DOPC, cholestérol). 3066920 101 Les échantillons et les étalons sont dérivatisés avec de l'acide dans des conditions réductrices fortes. - Teneur en QS-21 Une HPLC couplée à une détection UV a été utilisée 5 pour quantifier le composant QS-21. La séparation est réalisée sur une colonne C18. Les étalons sont préparés avec une référence de QS-21 diluée dans du DMSO de 25 à 75 pg/ml Les échantillons sont dilués dans du DSMO pour 10 l'analyse. - Teneur en DOPC-Chol 2 procédés ont été utilisés : Le premier procédé (étalons individuels) a utilisé une U-HPLC couplée à un détecteur UV. La séparation a 15 été réalisée sur une colonne C18. Les étalons ont été préparés avec de la DOPC/Chol dilués dans de l'IPA/CHC13 pour le stock et dilués dans le même tampon de 0 à 700 pg/ml pour la DOPC et de 0 à 175 pg/ml pour le cholestérol. 20 Les échantillons sont dilués dans de 1'IPA/CHC13. Le second procédé (relatif à une composition d'adjuvant caractérisée auparavant) a utilisé une HPLC couplée à un détecteur UV. La séparation est réalisée sur une colonne C18. 25 Les étalons sont préparés en utilisant une composition d'adjuvant caractérisée auparavant, préparés par des moyens classiques, dilués dans du méthanol de 0 à 500 pg/ml pour la DOPC et de 0 à 125 pg/ml pour le cholestérol. 30 Les échantillons sont dilués dans du méthanol. - Solvants résiduels 3066920 102 Procédé utilisant une chromatographie gazeuse couplée à un injecteur à espace de tête et un FID (détecteur à ionisation de flamme). La séparation est réalisée sur une colonne CP WAX52-CB Agilent. 5 Les étalons sont préparés pour chaque solvant organique spécifique (dans ce cas, IPA et éthanol) de 2 à 160 pg/ml. La LOQ est à 2 pg/ml. Les échantillons sont dilués afin de se situer dans la plage des étalons. 10 Exemple 1 - Etude des procédés de préparation et de la composition de la première solution Exemple lA - Composition du solvant 15 Procédé Pour étudier l'impact de la composition du solvant sur la production des liposomes, des solutions de DOPC, de cholestérol et de 3D-MPL ont été préparées dans 20 divers rapports d'éthanol/alcool isopropylique. La DOPC, le cholestérol et le 3D-MPL ont été solubilisés chacun individuellement (60 % en volume pour la DOPC, 20 % pour le cholestérol et 20 % pour le 3D-MPL) pendant 15 minutes à 55 °C. La solution de 3D25 MPL a été ensuite ajoutée à la solution de DOPC et ce mélange a été ajouté à la solution de cholestérol et en outre mélangé pendant encore 15 minutes pour fournir des compositions finales avec 150 mg/mi de DOPC (20/5/1, rapport pondéral de DOPC/cholestéro1/3D-MPL). 30 Le dispositif microfluidique à chambre unique a fonctionné avec un débit total de 14 ml/min, rapport 3066920 103 des débits de 20 (19/1) (1/19, organique/aqueux), en utilisant de l'eau pour injection en tant que phase aqueuse, avec des solutions de stock et un environnement à température ambiante. 5 Résultats Tableau 1 Impact de la composition du solvant sur la taille des 10 liposomes Rapport Taille des éthanol/IPA liposomes (nm) 100/0 80/20 124 70/30 139 60/40 154 50/50 174 Conclusions L'éthanol pur a été incapable de solubiliser les composants à la concentration cible. Bien que 15 l'isopropanol pur ait été capable de solubiliser les composants à la concentration cible, les liposomes produits dans une expérience similaire (160 mg/mi) étaient très gros avec un diamètre de 203 nm. Les mélanges d'éthanol et d'IPA, particulièrement 20 dans la plage de 90/10 à 70/30 fournissent une bonne capacité de solubilisation avec une viscosité basse. Exemple 1B - Préparation de la solution 3066920 104 Procédé L'ordre d'ajout des composants a été évalué en comparant les deux procédés suivants : 1. La DOPC, le cholestérol et le 3D-MPL ont été 5 solubilisés chacun individuellement (60 %, 20 %, 20 % en volume respectivement) dans un rapport éthanol/IPA de 80/20 pendant 15 minutes à 55 °C. La solution de 3D-MPL a été ensuite ajoutée à la solution de DOPC et en outre 10 mélangée pendant encore 15 minutes. Le mélange de 3D-MPL/DOPC a été ensuite ajouté à la solution de cholestérol et en outre mélangé pendant encore 1 h pour fournir une composition finale avec 120 mg/mi de DOPC (20/5/1, rapport 15 pondéral de DOPC/cholestéro1/3D-MPL). 2. Le 3D-MPL a été mis en suspension avec 50 % du solvant (éthanol/IPA, 80/20) et ensuite ajouté à des poudres de DOPC et de cholestérol. Le volume a été ensuite ajusté avec le reste du 20 solvant et le mélange a été chauffé jusqu'à 40 °C pendant 15 minutes pour fournir une composition finale avec 120 mg/mi de DOPC (20/5/1, rapport pondéral de DOPC/cholestérol/ 3D-MPL). 25 Le procédé 1 a nécessité que le mélange soit maintenu à 55 °C pendant 1 h pour une solubilisation complète des composants. Toutefois, s'il n'est pas maintenu sous une légère agitation pendant quelques minutes, une séparation des phases peut être observée. 30 Afin d'éviter ceci, une agitation continue est nécessaire jusqu'à la complétion de la solubilisation. 3066920 Le procédé 2 permet une solubilisation complète après moins de temps (15 min) et aucune séparation des phases ne peut être observée sans agitation. Le dispositif microfluidique à chambre de mélange 5 unique a fonctionné avec un débit total de 18 ml/min, rapport des débits de 20 (1/19, organique/aqueux) et à des températures de 15 à 25 °C en utilisant la première solution de stock préparée par les deux procédés. La seconde solution (aqueuse) était du QS-21 dans de l'eau 10 pour injection. Résultats Les résultats sont représentés sur la figure 5. 15 Conclusions Le procédé 1 est plus sensible à la température alors que le procédé 2 permet un fonctionnement microfluidique moins sensible à la température avec des échantillons de liposomes au sein d'une spécification 20 de taille de 95 à 120 nm sur la plage de 15 à 25 °C. Exemple 1C - Limites des concentrations des solutions L'impact de la concentration de la DOPC, du cholestérol et du 3D-MPL sur la stabilité et la 25 solubilité des stocks a été évalué. Les solutions de stock de la DOPC, du cholestérol et du 3D-MPL dans de l'éthanol/IPA à 80/20 ont été préparées à des concentrations de DOPC de 40, 60, 80, 100, 120, 140, 160 et 200 mg/mi (20/5/1, rapport 30 pondéral de DOPC/cholestéro1/3D-MPL) en suivant le procédé 2. La mesure a été d'abord faite à To (30 °C), 3066920 106 les échantillons ont été ensuite stockés à 25 °C pendant une heure, analysés et ensuite stockés à 20 °C pendant une heure, analysés et ensuite stockés à 15 °C pendant une heure et analysés. 5 Résultats Les résultats sont représentés sur la figure 6. La mesure néphélométrique par Nephelostar a révélé que les concentrations inférieures à 100 mg/m1 évoluent 10 et présentent une turbidité supérieure. De façon similaire, 200 mg/m1 évolue et présente une turbidité supérieure. Conclusions 15 Les concentrations situées entre 100 et 160 mg/m1 sont stables à des températures situées entre 15 °C et 30 °C. Ces résultats surprenants pourraient s'expliquer par des interactions spécifiques entre le lipide (DOPC), le stérol (cholestérol) et l'agoniste des TLR4 20 (3D-MPL) lorsqu'ils sont mélangés dans de l'éthanol/IPA au sein de cette plage de concentrations. Exemple 2 - Etude de l'impact de la composition du solvant et de la température sur la taille des 25 liposomes Procédé Les solutions de stock de la DOPC, du cholestérol et du 3D-MPL ont été préparées à une concentration de 30 DOPC de 120 mg/m1 (20/5/1, rapport pondéral de DOPC/ cholestéro1/3D-MPL) en suivant le procédé 2 dans de 3066920 107 l'éthanol/IPA à des rapports de 80/20 ; 70/30 et 60/40 et utilisées avec un stock aqueux de QS-21 à 1,5 mg/ml. Le procédé microfluidique a été exécuté à des températures de 15 °C, 20 °C et 25 °C à un débit total 5 de 18 ml/min et un rapport des débits de 5 (1/4, organique/aqueux). Dans cette expérience, les tailles des liposomes ont été mesurées avant la dialyse. 10 Résultats Les résultats sont représentés sur la figure 7. Conclusions La température dirige partiellement la solubilité 15 des composants (DOPC, cholestérol et 3D-MPL). Le stock préparé à 40 °C peut être refroidi à 15 °C sans précipitation. Toutefois, l'opération à des températures inférieures induit une précipitation plus rapide et de cette façon produit des liposomes plus 20 petits. La taille des liposomes est impactée par la composition de la première solution à des températures différentes avec la plus grande variation avec un rapport de 60/40 > 70/30 > 80/20. Cette expérience 25 confirme également le choix d'un rapport de 80/20 comme présentant la sensibilité la plus faible à la température. Exemple 4 - Analyse détaillée des conditions du 30 fonctionnement microfIuidique et de leur impact sur la taille des liposomes 3066920 108 En se basant sur les limites générales déterminées auparavant, une conception d'expérience (DOE) composée centrale a été construite pour déterminer la réponse du procédé en termes de taille (Zav) et pour détecter 5 toutes les interactions croisées entre la température, le débit total, le rapport des débits et la concentration des stocks. Procédé 10 Tableau 2 Résumé des conditions étudiées Paramètre Plage d'évaluation (limites supérieure et inférieure) Concentration de DOPC 100 pg/ml dans la première solution 160 pg/ml Débit total 14 ml/min 20 ml/min Rapport des débits 4 (1/3, organique/ aqueux) 6 (1/5, organique/ aqueux) Température 15 °C 25 °C Un tableau des conditions des tests est fourni sur 15 la figure 8 avec un résumé visuel des conditions des tests sur la figure 9. Les expériences ont été entreprises sur quatre jours. Les premières solutions ont été préparées selon le procédé 2 tel que décrit auparavant. En bref, la DOPC 20 (Lipoid) a été pesée, suivie du cholestérol (Sigma). Dans un flacon séparé, le 3D-MPL (GSK Hamilton) a été 3066920 109 pesé. 50 % de la phase organique (80 % d'éthanol (Merck) et 20 % d'isopropanol) a été ajoutée au 3D-MPL. Le MPL en suspension a été ensuite ajouté à la poudre de DOPC/cholestérol et placé à 40 °C sous mélange. 5 Après la solubilisation des trois composants (solution limpide), le stock organique est laissé pendant encore 15 minutes à 40 °C. Le volume est ensuite ajusté pour fournir la concentration cible (20/5/1, rapport pondéral de DOPC/cholestéro1/3D-MPL). 10 Pour la seconde solution, du QS-21 liquide concentré en vrac a été dilué dans de l'eau pour injection pour atteindre la concentration finale requise. L'analyse statistique a été effectuée en utilisant 15 SAS 9.2 et Design Expert 9 en se basant sur une conception composée centrale à faces centrées pour l'estimation de la surface de réponse, avec 6 points centraux et 24 points de modèle. Les nombres de Reynolds ont été calculés selon 20 l'équation : Re = pu 2wh p 2Q p w + h ii w + h Par exemple, dans les conditions : Phase organique Phase aqueuse Densité 0,829 g/cm3 à 22,4 °C 1,002 g/cm3 à 21,7 °C Viscosité 3,345 Cp à 19,8 °C 1,09 Cp à 20 °C Débit 3,2 ml/min 12,8 ml/min T° de travail 20 °C 20 °C 3066920 En se basant sur les densités et les viscosités moyennes des liquides selon leurs proportions : Densité : (12,8 x 1,002 + 3,2 x 0,829)/16 5 = 0,9674 g/cm3 Viscosité : (12,8 x 1,09 + 3,2 x 3,345)/16 = 1,541 Cp, si 1 Pa = 1 kg.m-1.s 2 et 1 Cp = 1 mPa.s alors la viscosité = 1,541 = 0,01541 g.cm-l.s-1 Les dimensions de chambre de mélange sont : 10 2000 pm (1) x 400 pm (h). 2Q = 2 x 16 = 32 ml/min = 0,53 cm3/s l+h = 400 pm (hauteur) + 2000 pm (largeur) = 2400 pm - 0,24 cm Le tout à l'intérieur de l'équation : (0,9674 x 15 0,53)/(0,01541 x 0,24) = 138,6 Une approche équivalente peut être prise pour tous les débits et rapports des débits. Résultats 20 La figure 10 fournit les résultats de l'expérience. - Modélisation de la PdI Le tableau 3 présente l'écart-type (ET) et le coefficient de variance (CV) pour le Zav et la PdI. 25 Tableau 3 Analyse de la reproductibilité au point central de la DOE Zav PdI Reproductibilité de l'ET 1,17 0,01 3066920 111 Fidélité intermédiaire de l'ET 5,53 0,03 Reproductibilité du CV 1,05 % 4,24 % Fidélité intermédiaire du CV 4,97 % 16,89 % Aucun modèle fiable de prédiction de la PdI n'a pu être adapté aux données, sauf une corrélation significative avec le Zav (coefficient de corrélation 5 de 0,75). Un Zav 5 %) Tableau 4 Valeur p pour les paramètres étudiés et effet croisé Facteur Valeur p Concentration (A) 0,008308 Rapport des débits (B) 0,000998 Température (C) REVENDICATIONS1. Procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif 5 microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine ; et 10 (b) l'élimination du solvant. 2. Procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première 15 solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et (c) l'élimination du solvant. 20 3. Procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de 25 phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'élimination du solvant ; et (c) l'ajout de la saponine. 4. Procédé de fabrication d'un concentré 30 liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un 3066920 135 dispositif microfluidique, comprenant l'étape de mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine. 5. Procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; et (b) l'ajout de la saponine. 6. Procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique, 20 comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, un lipide de phosphatidylcholine et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; 25 (b) l'ajout de la saponine ; et (c) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; dans lequel les étapes (b) et (c) peuvent être dans un ordre ou dans l'autre, ou peuvent être effectuées dans une seule étape. 30 7. Procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif 3066920 136 microfluidique selon la revendication 1, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un 5 stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine ; et (b) l'élimination du solvant. 8. Procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif 10 microfluidique selon la revendication 2, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; 15 (b) l'ajout de la saponine ; et (c) l'élimination du solvant. 9. Procédé de fabrication d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique selon la revendication 3, comprenant les 20 étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'élimination du solvant ; et 25 (c) l'ajout de la saponine. 10. Procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique selon la revendication 4, 30 comprenant l'étape de mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et 3066920 137 un stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau et la saponine. 11. Procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant 5 liposomial comprenant une saponine en utilisant un dispositif microfluidique selon la revendication 5, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un 10 stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; et (b) l'ajout de la saponine. 12. Procédé de fabrication d'un concentré liposomial à utiliser dans la préparation d'un adjuvant 15 liposomial comprenant une saponine et un agoniste des TLR4 en utilisant un dispositif microfluidique selon la revendication 6, comprenant les étapes suivantes : (a) le mélange dans le dispositif d'une première solution comprenant un solvant, de la DOPC et un 20 stérol, et d'une seconde solution comprenant de l'eau ; (b) l'ajout de la saponine ; et (c) l'ajout de l'agoniste des TLR4 ; dans lequel les étapes (b) et (c) peuvent être dans un ordre ou dans l'autre, ou peuvent être 25 effectuées dans une seule étape. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou 7 à 11, dans lequel la première solution comprend en outre un agoniste des TLR4. 14. Procédé selon l'une quelconque des 30 revendications 1 à 3 ou 7 à 9, dans lequel un agoniste des TLR4 est ajouté avant l'élimination du solvant. 3066920 138 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 ou 7 à 9, dans lequel un agoniste des TLR4 est ajouté après l'élimination du solvant. 16. Procédé selon l'une quelconque des 5 revendications 1 à 15, dans lequel le dispositif microfluidique comporte une entrée pour la première solution vers la chambre de mélange. 17. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, dans lequel le dispositif 10 microfluidique comporte deux entrées pour la seconde solution vers la chambre de mélange. 18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, dans lequel le dispositif microfluidique a des entrées telles que chaque entrée a 15 une largeur de 0,2 mm et couvre la pleine longueur de l'autre côté de la chambre de mélange dispositif microfluidique. 19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 18, dans lequel dispositif microfluidique a une chambre de mélange ayant la section transversale de la chambre de mélange est de 0,6 à 1,2 mm2, comme autour de 0,8 mm2. 20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, dans lequel dispositif microfluidique a une chambre de mélange sensiblement rectangulaire en coupe transversale. 21. Procédé selon la revendication 20, dans lequel la coupe transversale de la chambre de mélange a un côté long de 1,6 à 2,4 mm. 3066920 139 22. Procédé selon la revendication 20 ou 21, dans lequel la coupe transversale de la chambre de mélange a un côté court de 0,2 à 0,6 mm. 23. Procédé selon l'une quelconque des 5 revendications 1 à 22, dans lequel dispositif microfluidique a une chambre de mélange ayant une longueur de 2 à 3 cm. 24. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 23, dans lequel le dispositif 10 microfluidique comporte une sortie à partir de la chambre de mélange pour la récupération du matériau mélangé. 25. Procédé selon l'une des revendications 1 à 24, dans lequel dispositif microfluidique a une chambre de 15 mélange telle que le débit total dans la chambre de mélange est de 17,5 à 25 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange. 26. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 25, dans lequel le rapport des 20 débits pour les première et seconde solutions dans le dispositif microfluidique se situe dans la plage de 1/2 à 1/6. 27. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 26, dans lequel le débit de la 25 première solution dans la chambre de mélange du dispositif microfluidique est de 3 à 6,5 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange. 28. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 27, dans lequel le débit de la 30 seconde solution dans la chambre de mélange du 3066920 140 dispositif microfluidique est de 14 à 20 ml/min/mm2 de coupe transversale de la chambre de mélange. 29. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 28, dans lequel la température de la 5 première solution est fournie à une température de 15 à 25°C. 30. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 29, dans lequel la température de la seconde solution est fournie à une température de 15 à 10 25°C. 31. Procédé selon l'une des revendications 1 à 30, dans lequel la température de la chambre de mélange du dispositif microfluidique est de 15 à 25°C. 32. Procédé selon l'une quelconque des 15 revendications 1 à 31, dans lequel le nombre de Reynolds maximal au sein de la chambre de mélange du dispositif microfluidique est de 1500 ou inférieur. 33. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 32, dans lequel le dispositif 20 microfluidique comprend une pluralité de chambres de mélange. 34. Procédé selon la revendication 33, dans lequel le dispositif comprend 4 à 32 chambres de mélange. 35. Procédé selon la revendication 33 ou 34, dans 25 lequel toutes les chambres de mélange dans la pluralité des chambres de mélange sont alimentées par les mêmes pompes et le matériau mélangé issu de toutes les chambres de mélange est recueilli avant un autre traitement et/ou stockage. 36. Procédé selon l'une quelconque des revendications 33 à 35, dans lequel la pluralité des 3066920 141 chambres de mélange est capable de produire le matériau mélangé à un taux de 50 à 2000 ml/min. 37. Procédé selon l'une quelconque des revendications 33 à 36, dans lequel la pluralité des 5 chambres de mélange est capable de produire le matériau mélangé à un taux d'au moins 1 g de lipide de phosphatidylcholine par minute. 38. Procédé selon l'une quelconque des revendications 33 à 37, dans lequel la pluralité des 10 chambres de mélange est capable de produire le matériau mélangé à un taux d'au moins 1 g de DOPC par minute. 39. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 38, dans lequel le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol. 15 40. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 39, dans lequel le solvant comprend 10 à 30 96 v/v d'isopropanol. 41. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 40, dans lequel la première solution 20 comprend 100 à 170 mg/m1 de lipide de phosphatidylcholine. 42. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 41, dans lequel la première solution comprend 100 à 170 mg/ml de DOPC. 25 43. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 42, dans lequel la première solution comprend 20 à 50 mg/ml de stérol. 44. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 43, dans lequel le stérol est le 30 cholestérol. 3066920 142 45. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 44, dans lequel le poids sec de la première solution est de 120 à 250 mg/ml. 46. Procédé selon l'une quelconque des 5 revendications 1 à 45, dans lequel la seconde solution comprend au moins 90 % p/p d'eau. 47. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 46, dans lequel la saponine est le QS-21. 10 48. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 47, dans lequel la seconde solution comprend 1 à 4 mg/m1 de saponine. 49. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6, 12 à 48, dans lequel l'agoniste TLR4 15 est le 3D-MPL. 50. Procédé selon la revendication 6, 12 à 49, dans lequel la première solution comprend 4 à 10 mg/m1 de l'agoniste des TLR4. 51. Procédé selon l'une quelconque des 20 revendications 1 à 50, dans lequel la taille moyenne des liposomes est de 95 à 120 nm. 52. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 51, dans lequel la polydispersion des liposomes est de 0,3 ou inférieure. 25 53. Procédé selon la revendication 52, dans lequel la polydispersion des liposomes est de 0,2 ou inférieure. 54. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 53, dans lequel le solvant est 30 éliminé par diafiltration, ultrafiltration et/ou dialyse, en particulier par diafiltration. 3066920 143 55. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 54, dans lequel l'élimination du solvant aboutit à une teneur en eau d'au moins 98 % p/p d'eau. 5 56. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 55, comprenant l'étape supplémentaire de dilution, jusqu'à une concentration finale souhaitée. 57. Procédé selon l'une quelconque des 10 revendications 1 à 56, comprenant l'étape supplémentaire d'ajustement du pH entre 5 à 9. 58. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 57, comprenant l'étape supplémentaire d'ajustement de l'osmolalité à 250 à 15 750 mOsm/kg. 59. Procédé de préparation d'une composition immunogène adjuvée comprenant un immunogène ou un antigène, ou un polynucléotide codant pour l'immunogène ou l'antigène, ledit procédé comprenant les étapes de : 20 (i) fabrication d'un adjuvant liposomial selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 58 ; (ii) mélange de l'adjuvant liposomial avec un immunogène ou un antigène, ou un polynucléotide codant pour l'immunogène ou l'antigène. 25 60. Procédé de fabrication d'une composition immunogène adjuvée, ledit procédé comprenant l'étape de combinaison d'un immunogène ou d'un antigène, ou d'un polynucléotide codant pour l'immunogène ou l'antigène, avec un adjuvant liposomial fabriqué selon le procédé 30 de l'une quelconque des revendications 1 à 58. 3066920 144 61. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 60, comprenant l'étape supplémentaire de stérilisation par filtration. 62. Adjuvant liposomial comprenant une saponine, 5 un agoniste des TLR4, de la DOPC et un stérol, produit selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 61. 63. Composition immunogène adjuvée produite selon le procédé de la revendication 60 ou 61. 10 64. Solution comprenant un solvant et 100 à 170 mg/ml de lipide, dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol, comme 75 à 85 96 v/v d'éthanol, et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique comme 15 à 25 % v/v d'isopropanol. 15 65. Solution selon la revendication 64, dans laquelle le lipide est une phosphatidylcholine. 66. Solution selon la revendication 64, dans laquelle le lipide est la DOPC. 67. Solution selon l'une quelconque des 20 revendications 64 à 66, comprenant en outre 20 à 50 mg/mi de stérol. 68. Solution selon l'une ou l'autre de la revendication 64 ou 67, dans laquelle le stérol est le cholestérol. 25 69. Solution selon l'une quelconque des revendications 64 à 68, comprenant un agoniste des TLR4. 70. Solution selon la revendication 69, dans laquelle l'agoniste des TLR4 est présent à une 30 concentration de 4 à 12 mg/ml. 3066920 145 71. Solution selon l'une quelconque des revendications 64 à 70 qui est constituée essentiellement d'un solvant et de 100 à 160 mg/ml de DOPC et de 30 à 40 mg/ml de cholestérol, de 4 à 5 10 mg/m1 d'agoniste des TLR4, et dans laquelle le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique. 72. Solution selon l'une quelconque des revendications 64 à 71 dans laquelle l'agoniste des 10 TLR4 est un lipopolysaccharide, comme le 3D-MPL. 73. Procédé de préparation d'une solution comprenant un solvant, un lipide, du cholestérol et un agoniste des TLR4, ledit procédé comprenant les étapes de : 15 (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en suspension avec le lipide de phosphatidylcholine et le cholestérol ; 20 (iii) l'ajout de solvant ; (iv) le mélange. 74. Procédé de préparation d'une solution comprenant un solvant, un lipide, du cholestérol et un agoniste des TLR4, ledit procédé comprenant les étapes 25 de : (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en suspension avec le lipide de phosphatidylcholine et le 30 cholestérol ; (iii) l'ajout de solvant ; 3066920 146 (iv) le mélange ; (v) l'ajout de solvant supplémentaire. 75. Procédé de préparation d'une solution comprenant un solvant, un lipide, du cholestérol et un 5 agoniste des TLR4, ledit procédé comprenant les étapes de : (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en 10 suspension avec la DOPC et le cholestérol ; (iii) l'ajout de solvant ; (iv) le mélange. 76. Procédé de préparation d'une solution comprenant un solvant, un lipide, du cholestérol et un 15 agoniste des TLR4, ledit procédé comprenant les étapes de : (i) la préparation d'une suspension de l'agoniste des TLR4 dans au moins une partie du solvant ; (ii) la combinaison de l'agoniste des TLR4 en 20 suspension avec la DOPC et le cholestérol ; (iii) l'ajout de solvant ; (iv) le mélange ; (v) l'ajout de solvant supplémentaire. 77. Procédé selon l'une des revendications 73 à 25 76, dans lequel le mélange est à une température de 30 à 50°C. 78. Procédé selon l'une quelconque des revendications 73 à 77, dans lequel l'au moins une partie du solvant est au moins 35 % du solvant. 30 79. Procédé selon l'une quelconque des revendications 73 à 78, dans lequel l'au moins une 3066920 147 partie du solvant est 90 % du solvant ou moins comme 80 % ou moins, spécialement 70 % ou moins et en particulier 60 % ou moins. 80. Procédé selon l'une quelconque des 5 revendications 73 à 79, dans lequel le solvant ajouté est le solvant restant. 81. Procédé selon l'une quelconque des revendications 73 à 80, dans lequel la solution comprend 100 à 160 mg/ml de lipide et 30 à 40 mg/ml de 10 cholestérol, dans lequel le solvant comprend 70 à 90 % v/v d'éthanol et 10 à 30 % v/v d'alcool isopropylique, dans lequel le lipide est de façon appropriée la DOPC. 82. Procédé selon l'une quelconque des revendications 73 à 81, dans lequel l'agoniste des TLR4 15 est le 3D-MPL. 83. Procédé selon la revendication 82, dans lequel la solution comprend 4 à 10 mg/ml de 3D-MPL. 84. Procédé selon l'une quelconque des revendications 73 à 83, dans lequel le solvant 20 supplémentaire est 0 à 30 % du solvant. 85. Solution contenant des liposomes pouvant être obtenue par mélange de la première solution et de la seconde solution selon les procédés de l'une quelconque des revendications 1 à 53 avant l'élimination du 25 solvant. 86. Procédé, adjuvant, composition ou solution selon l'une quelconque des revendications 1 à 85, dans lequel/laquelle le lipide de phosphatidylcholine contient des chaînes acyle non ramifiées saturées 30 comportant 12 à 20 atomes de carbone comme des chaînes acyle comportant 14 à 1B atomes de carbone. 3066920 148 87. Procédé, adjuvant, composition ou solution selon l'une quelconque des revendications 1 à 85, dans lequel/laquelle le lipide de phosphatidylcholine contient des chaînes acyle non ramifiées comportant 12 5 à 20 atomes de carbone et une double liaison, comme des chaînes acyle comportant 14 à 18 atomes de carbone et une double liaison. 88. Procédé, adjuvant, composition ou solution selon l'une quelconque des revendications 1 à 85, dans 10 lequel/laquelle le lipide de phosphatidylcholine est choisi parmi la dilauroyl-phosphatidylcholine (DLPC), la dimyristoyl-phosphatidylcholine (DMPC), la dipalmitoyl-phosphatidylcholine (DPPC), la distéaroylphosphatidylcholine (DSPC) et la diarachidoyl- 15 phosphatidylcholine (DAPC), la dipalmitoléoylphosphatidylcholine et la dioléoyl-phosphatidylcholine (DOPC) ; et leurs mélanges.