Brevet FR3070045A1 — publié le 20190215

Dispositif pouvant servir de modèle de barrière hémato-encéphalique La présente invention concerne un dispositif pouvant servir de modèle de barrière hémato-encéphalique (BHE) comprenant deux compartiments dans lesquels certains types cellulaires sont disposés. Le cerveau est isolé de la circulation sanguine par une structure particulière, la barrière hémato-encéphalique (BHE). Cette barrière est principalement composée de cellules endothéliales qui interagissent avec les cellules voisines, en particulier les péricytes et les astrocytes. Ces derniers interagissent avec la microglie et les neurones. La BHE maintient un environnement permettant aux neurones de fonctionner correctement en assurant différentes fonctions principales : en contrôlant finement le passage de molécules et d'ions, en délivrant instantanément les nutriments et l'oxygène selon les besoins des neurones et en protégeant le cerveau des toxines et des pathogènes. Afin que les médicaments destinés à agir sur le cerveau soient efficaces, ceux-ci doivent pouvoir passer facilement la BHE. Pour étudier le passage de molécules à travers la BHE et optimiser celui-ci, plusieurs modèles in vitro de cette barrière ont été développés à ce jour. Ces modèles comprennent le plus souvent la culture de plusieurs types cellulaires dans lesquels les cellules endothéliales sont séparées des autres types cellulaires par une membrane synthétique poreuse. Il y a toutefois encore le besoin de modèles de barrière encore plus proches de la BHE in vivo et pouvant être utilisés pour effectuer des études diverses comme l'étude de la physiopathologie de certaines maladies dégénératives, l'étude du vieillissement de la BHE et l'étude du passage de molécules notamment à visée thérapeutique ou diagnostique, etc. Les inventeurs ont cherché et réussi à mettre en contact direct des péricytes et des cellules endothéliales, ce qui a favorisé l'apparition de structures organisées en vaisseaux, et a donc permis d'obtenir un modèle étanche et très proche de la BHE in vivo. 30 Un objet de l'invention est donc un dispositif comprenant deux compartiments séparés par une membrane synthétique poreuse : un compartiment dit luminal comprenant des cellules endothéliales et des péricytes, et un compartiment dit abluminal comprenant des astrocytes et de la microglie. Par ailleurs, du côté luminal, des cellules 35 mononucléées du sang périphérique (PBMCs) peuvent être déposées. 2 Ce type de dispositif permet d'obtenir des modèles de BHE ayant une étanchéité et une fonctionnalité très similaires à ce qui est observé in vivo. Les inventeurs ont même observé que les cellules endothéliales s'organisent en vaisseaux dans ce dispositif. La membrane synthétique poreuse peut être tubulaire ou plane. 5 Par « compartiment luminal », on comprend le compartiment formé par la lumière d'un dispositif tubulaire ou le compartiment supérieur dans un dispositif plan. Par « compartiment abluminal », on comprend le compartiment à l'extérieur du compartiment luminal dans un dispositif tubulaire ou le compartiment inférieur dans un dispositif plan. 10 Ce dispositif comprenant les acteurs cellulaires majeurs de la BHE reproduit le microenvironnement neurovasculaire formant la BHE in vivo et permet de prendre en compte et de reproduire les multiples interactions cellulaires et moléculaires qui peuvent se produire in vivo. 15 Selon un mode de réalisation, les péricytes et les cellules endothéliales sont disposés en couches superposées dans le compartiment luminal. De manière préférée alors, les péricytes sont disposés sur ou au contact de la membrane synthétique poreuse et les cellules endothéliales sont disposées au-dessus des péricytes, ces derniers étant 20 donc en contact très étroit avec les cellules endothéliales. Le ratio d'ensemencement péricytes/cellules endothéliales peut varier, il peut notamment être choisi de manière à correspondre au ratio présent dans la BHE étudiée, par exemple la BHE humaine. De préférence, le ratio d'ensemencement péricytes/cellules endothéliales est compris environ entre 1/2 et 1/4 et est de manière préférée environ 1/3 (correspondant au ratio 25 péricytes/cellules endothéliales de la BHE humaine). Dans un mode de réalisation spécifique, le compartiment luminal comprend en outre des cellules sanguines, et de manière préférée des cellules mononucléées du sang périphérique (PBMCs). Celles-ci sont alors disposées au-dessus des cellules endothéliales. Par « membrane synthétique poreuse », on entend un support perméable, pouvant être traversé par des petites molécules ou des ions voire dans un mode de réalisation particulier pouvant être traversé par des extensions cellulaires ou des cellules suivant la taille des pores choisis. Ce support permet ainsi aux cellules de chaque compartiment d'interagir à distance. Autour de la membrane, une structure cellulaire similaire à une BHE se met progressivement en place, sous l'action combinée du 3 développement des cellules ensemencées, et cette structure une fois mature comprend en outre deux matrices extracellulaires : la membrane basale vasculaire et la membrane basale parenchymale. Cette membrane synthétique poreuse peut être en polyester (support clair 5 permettant une bonne visibilité des cellules au microscope) ou en polycarbonate (support translucide permettant une faible visibilité des cellules au microscope). Cette membrane peut être préalablement revêtue (« coating ») avec des constituants de la matrice extracellulaire, et en particulier par du collagène, de la laminine, de la fibronectine ou un mélange de ceux-ci suivant les applications souhaitées. La taille des pores doit être 10 choisie suivant les applications souhaitées. Si on souhaite mener des études de perméabilité, de transport de molécules, de polarité cellulaire, d'endocytose de protéines et de récepteurs et/ou d'interactions cellulaires, il est préférable de prendre des supports dont le diamètre des pores est compris entre environ 0,4 lm et environ 3 lm de diamètre et de préférence de 0,4 lm environ de diamètre. Donc, dans un mode de réalisation, le 15 support a un diamètre de pores compris entre environ 0,4 et environ 3 11m, de préférence environ 0,4 lm. Pour des études visant à étudier le passage de cellules à travers le support, comme les PBMCs par exemple, il sera préférable de prendre des supports de diamètre de pores compris entre environ 3 lm et environ 8 11m, de préférence entre environ 5 lm et environ 8 11m. Donc, dans un mode de réalisation, le support a un 20 diamètre de pores compris entre environ 3 lm et environ 8 11m, de préférence environ 5 pm à environ 8 11m. Dans un mode de réalisation spécifique, le compartiment abluminal comprenant des astrocytes comprend en outre de la microglie. Le ratio d'ensemencement 25 microglie/astrocytes peut varier, il peut notamment être choisi de manière à correspondre au ratio présent dans la BHE étudiée, par exemple la BHE humaine. Dans le mode de réalisation dans lequel les astrocytes et la microglie sont utilisés, de manière préférée le ratio d'ensemencement microglie/astrocyte est compris entre environ 1% et environ 10% et est de préférence d'environ 5%. De préférence, le compartiment abluminal comprenant 30 des astrocytes est exempt de péricytes. De manière préférée toutes les cellules du dispositif selon l'invention proviennent d'une même espèce animale, en particulier de mammifères. Selon un mode de l'invention, les cellules sont des cellules de rongeurs, de manière préférée des cellules de souris. 35 Selon un autre mode de l'invention, les cellules sont des cellules de primates, de manière préférée des cellules humaines. 4 Suivant un mode de réalisation, un ou plusieurs types cellulaires du dispositif selon l'invention sont issus de cultures de cellules immortelles, dans un mode de réalisation particulier tous les types cellulaires sont issus de cellules immortelles. 5 Par « cellules immortelles » on entend des cellules immortelles issues de tumeurs, des cellules spontanément immortelles et/ou des cellules rendues immortelles (« immortalisées ») par introduction d'au moins un oncogène viral ou cellulaire. Selon un mode de réalisation spécifique, un ou plusieurs types cellulaires du dispositif selon l'invention sont issus de cultures primaires de cellules rendues immortelles par 10 introduction d'au moins un oncogène viral ou cellulaire. Dans un mode préférentiel, un ou plusieurs types cellulaires du dispositif selon l'invention sont issus de cultures primaires, de manière préférée tous les types cellulaires sont issus de cultures primaires. 15 Par « culture primaire » on entend une culture de cellules issue directement du tissu et/ou de cellules d'un individu. Dans une variante, un ou plusieurs types cellulaires du dispositif selon l'invention sont issus de cultures primaires de tissus et/ou de cellules prélevées sur des individus de même espèce et de même âge, de manière préférée tous les types cellulaires sont issus de cultures primaires de tissus et/ou de cellules prélevés 20 sur des individus de même espèce et de même âge. Selon un mode de réalisation de l'invention, un ou plusieurs et de préférence tous les types cellulaires sont issus d'individus adultes. De cette manière le dispositif selon l'invention permet aussi d'étudier les variations dues à l'âge ou l'impact sur la BHE de maladies se développant au cours de la vie de l'individu. Les cellules issues de cultures primaires conservent l'inhibition de 25 contact contrairement aux cellules immortalisées, ainsi l'utilisation de ces cellules permet de limiter la prolifération cellulaire dans le dispositif. De plus l'utilisation de cultures primaires permet de se rapprocher davantage encore des conditions in vivo. Par « individu » on entend un sujet d'une espèce animale, en particulier de 30 mammifères. Selon un mode de l'invention, le ou les individus sont des rongeurs, de manière préférée des souris. Selon un autre mode de l'invention, les individus sont des primates, de manière préférée des humains. Dans une variante du dispositif selon l'invention les cellules endothéliales et les 35 péricytes sont issus de cultures primaires de cellules de souris et de manière préférée de souris adultes. 5 Lorsqu'un ou plusieurs types cellulaires du dispositif selon l'invention sont issus de cultures primaires, alors, selon un mode de réalisation particulier, un ou plusieurs de ces types cellulaires sont des types cellulaires modèles de pathologies. 5 Par « types cellulaires modèles de pathologies», on entend des types cellulaires issues de modèles animaux reproduisant des pathologies apparaissant spontanément ou induites par des méthodes de génie génétique (comme par exemple la transgenèse) ou avec des outils pharmacologiques afin de reproduire les caractéristiques de cellules des individus atteints par ces pathologies particulières. On peut à titre d'exemple citer des 10 types cellulaires issues des modèles murins APPswePS1dE9 pour la maladie d'Alzheimer, des modèles hémi-parkinsoniens ou parkinsoniens (injections toxiques MPTP, 6-0HDA) ou de souris transgéniques mutées pour l'a-synucléine pour la maladie de Parkinson, des modèles de souris transgéniques mutées pour le gène huntingtine pour la maladie de Huntington, de la mutation du gène C90RF72 pour la sclérose latérale 15 amyoptrophique (SLA). De préférence les pathologies selon l'invention sont des pathologies ayant ou étant suspectées d'avoir une influence sur la BHE telles que : les maladies neurodégénératives (Alzheimer, Parkinson, Huntington, SLA...), l'accident vasculaire cérébral et les cancers cérébraux. Selon un mode de réalisation possible, la membrane synthétique poreuse est en 20 forme de tube, dans lequel un fluide peut être introduit, renouvelé, mis en circulation. Selon un mode de réalisation préféré la membrane synthétique poreuse est une membrane plane disposée horizontalement. Dans ce mode de réalisation les compartiments sont l'un au-dessus de l'autre. 25 L'invention a aussi pour objet un procédé de préparation du dispositif selon l'invention. Selon un mode de réalisation de l'invention, ce procédé comprend les étapes suivantes : 30 a) ensemencement d'astrocytes sur une surface et/ou sur une face de la membrane synthétique poreuse (face qui deviendra la face abluminale), b) insertion ou dépôt de la membrane synthétique poreuse sur ladite surface, de telle sorte que si la membrane synthétique poreuse comprend des astrocytes, alors la face comprenant les astrocytes est en regard de la surface, 35 c) ensemencement de la face de la membrane synthétique poreuse luminale avec des péricytes et des cellules endothéliales. 6 L'étape b) permet de créer ainsi le compartiment abluminal entre la surface et la membrane synthétique poreuse. 5 Dans ce mode de réalisation de l'invention, la surface est un support sur lequel repose le dispositif. Lorsque la membrane synthétique poreuse est plane, la surface peut être par exemple le fond d'une boite de culture. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, ce procédé comprend les 10 étapes suivantes : a) ensemencement d'astrocytes sur une face de la membrane synthétique poreuse, b) ensemencement de l'autre face de la membrane synthétique poreuse avec des cellules endothéliales et des péricytes et éventuellement, 15 c) dépôt de la membrane synthétique poreuse sur une surface de telle sorte que la face comprenant des astrocytes soit en regard de la surface. Selon un mode de réalisation, les péricytes et les cellules endothéliales sont disposées en couches superposées dans le compartiment luminal. De préférence dans 20 les procédés selon l'invention les péricytes sont ensemencées avant les cellules endothéliales. De manière préférée alors, les péricytes sont disposés sur ou au contact de la membrane synthétique poreuse et les cellules endothéliales sont disposées au-dessus des péricytes, ces derniers étant donc en contact étroit avec les cellules endothéliales. Le ratio d'ensemencement péricytes/cellules endothéliales peut varier, il peut notamment 25 être choisi de manière à correspondre au ratio présent dans la BHE étudiée, par exemple la BHE humaine. De préférence, le ratio d'ensemencement péricytes/cellules endothéliales est compris environ entre 1/2 et 1/4 et est de manière préférée environ 1/3 (correspondant au ratio dans la BHE humaine). 30 De préférence la membrane synthétique poreuse est en contact avec les cellules de chaque compartiment. Dans un mode de réalisation spécifique, l'étape d'ensemencement de la membrane synthétique poreuse avec des péricytes et des cellules endothéliales comprend en outre l'ajout de cellules sanguines, et de manière préférée des cellules 35 mononucléées du sang périphérique (PBMCs). De manière préférée l'ajout de cellules sanguines a lieu après l'ensemencement des péricytes et des cellules endothéliales. 7 Dans un mode de réalisation spécifique, la ou les étapes d'ensemencement avec des astrocytes comprennent aussi l'ensemencement de microglie. De préférence les astrocytes et la microglie sont cultivés ensemble avant d'être ensemencés dans le 5 dispositif. Le ratio d'ensemencement microglie/astrocytes peut varier, il peut notamment être choisi de manière à correspondre au ratio présent dans la BHE étudiée, par exemple la BHE humaine. De préférence, le ratio d'ensemencement microglie/astrocytes est d'environ 5% (correspondant au ratio dans la BHE humaine). De préférence, la ou les étapes d'ensemencement avec des astrocytes ne 10 comprennent pas d'ensemencement de péricytes. De manière préférée, toutes les cellules ensemencées selon le procédé de l'invention proviennent d'une même espèce animale, en particulier de mammifères. Selon un mode de l'invention, les cellules sont des cellules de rongeurs, de manière préférée 15 des cellules de souris. Selon un autre mode de l'invention, les cellules sont des cellules de primates, de manière préférée des cellules humaines. Suivant un mode de réalisation, un ou plusieurs types cellulaires du procédé selon l'invention sont issus de cultures de cellules immortelles. Dans un mode de réalisation 20 particulier, tous les types cellulaires sont issus de cellules immortelles. Dans un mode préférentiel, un ou plusieurs types cellulaires du procédé selon l'invention sont issus de cultures primaires de manière préférée tous les types cellulaires sont issus de cultures primaires. Dans une variante un ou plusieurs types cellulaires du 25 procédé selon l'invention sont issus de cultures primaires de tissus prélevés sur des individus de même âge, de manière préférée tous les types cellulaires sont issus de cultures primaires de tissus prélevés sur des individus de même âge. Selon un mode de réalisation de l'invention, un ou plusieurs et de préférence tous les types cellulaires sont issus d'individus adultes. 30 Ainsi selon une variante du procédé selon l'invention les cellules endothéliales et les péricytes sont issus de cultures primaires de cellules de souris et de manière préférée de souris adultes. Lorsqu'un ou plusieurs types cellulaires du procédé selon l'invention sont issus de cultures primaires, alors, selon un mode de réalisation particulier, un ou plusieurs de ces 35 types cellulaires sont des types cellulaires modèles de pathologies. 8 L'invention a aussi pour objet l'utilisation du dispositif selon l'invention et en particulier son utilisation comme modèle de la BHE. L'invention a aussi pour objet l'utilisation du dispositif selon l'invention comme modèle de BHE pathologique. 5 En particulier le dispositif peut être utilisé pour tester la perméabilité du modèle. En effet, ce dispositif peut être utilisé pour étudier sa perméabilité à: - des molécules, notamment thérapeutiques (notamment des petites molécules biologiques ou de synthèse, des anticorps, des psychotropes, etc.), 10 - des virus (notamment VIH), - des spores (comme les spores bactériens, les spores de champignons, les spores de végétaux, etc..., par exemple pour l'étude des infections fongiques telle que certaines méningites), ou encore - des exosomes (notamment pour l'étude de la propagation des cancers), 15 - des liposomes ou des nanoparticules, - des acides nucléiques nus ou vectorisés, - des cellules (notamment PBMCs, cellules cancéreuses, bactéries etc...) ; ci-après dénommés « composés ». 20 Ainsi l'invention concerne l'utilisation du dispositif selon l'invention pour tester la perméabilité du modèle à un composé comprenant les étapes : a) ajout dudit composé dans un des compartiments du dispositif, b) incubation du dispositif, c) détection et analyse de la présence du dit composé et/ou de ses métabolites 25 dans le compartiment où l'ajout dudit composé n'a pas eu lieu, et éventuellement d) en déduire la perméabilité du modèle vis-à-vis de ce composé. Avantageusement, lors de l'étape a), une quantité connue du composé est ajoutée et l'étape c) permet de mesurer la quantité de composé ou de ses métabolites dans le 30 compartiment où l'ajout n'a pas eu lieu. En outre il est également possible de détecter et analyser la présence du dit composé ou de ses métabolites dans le compartiment où l'ajout a eu lieu, notamment afin de déterminer la quantité restante de ce composé dans ledit compartiment. 35 Des techniques de détection et d'analyse de la présence du composé (ou de ses métabolites) mentionné ci-dessus sont bien connues dans la technique. Par exemple, la 9 détection ou l'analyse de la présence de composé peut être effectuée par diverses techniques de chimie analytique suivant le composé étudié dont l'HPLC couplée à une, voire deux spectrométries de masse. 5 Avantageusement le composé pourra être marqué afin de faciliter sa détection. En effet si on dispose de composés fluorescents ou radiomarqués (en particulier des traceurs qui seraient utilisés en diagnostic et radiomarqués, par exemple au Fluor 18 ou Carbone 11), des lecteurs de l'intensité de fluorescence ou des compteurs de la radioactivité respectivement, peuvent être utilisés pour quantifier le composé marqué ou ses 10 métabolites marqués dans les compartiments luminal et abluminal. L'invention concerne en outre l'utilisation du dispositif selon l'invention pour étudier la physiopathologie d'une maladie, tester des molécules à visée préventive, thérapeutique ou diagnostique ciblant les acteurs cellulaires et moléculaires de la BHE ou tester des 15 conditions physiques ou tester des protocoles. Par « étudier la physiopathologie d'une maladie » on entend étudier l'impact de maladies sur les caractéristiques la BHE, telles que la perméabilité, la sélectivité, la résistance électrique, la morphologie des cellules etc.... Dans ce mode de réalisation, le dispositif comprend alors au moins un type cellulaire modèle de la pathologie étudiée. 20 Dans un mode de réalisation l'expression de protéines et/ou la fonctionnalité de transporteurs de la BHE comme par exemple de la P-gp ou du transporteur au glucose GLUT1 sont comparées dans des dispositifs comprenant au moins un type cellulaire modèle de la pathologie étudiée et des dispositifs ne comprenant aucun type cellulaire modèle de cette pathologie. L'expression de protéines peut être évaluée par Western 25 Blot, ELISA, ou expression de gènes (RTqPCR). Par « tester des molécules à visée préventive, thérapeutique ou diagnostique ciblant les acteurs cellulaires et moléculaires de la BHE » on entend étudier l'impact de ces molécules sur la BHE et éventuellement leur passage à travers la BHE. Dans ce 30 mode de réalisation, au moins une molécule à tester est appliquée au dispositif selon l'invention, et après un temps d'exposition ou d'incubation, le dispositif est analysé afin de déterminer les changements qui ont été provoqués par ladite au moins une molécule testée. Ces changements peuvent en particulier concerner la perméabilité, la sélectivité, la résistance électrique, la morphologie des cellules etc.. .On peut notamment étudier le 35 résultat de l'ajout de la molécule sur la cible en comparant la fonctionnalité et/ou l'expression de cette cible dans des dispositifs dans lesquels la molécule à tester a été 10 appliquée à des dispositifs dans lesquels elle n'a pas été appliquée. On peut également étudier le passage à travers la BHE de la molécule dans un dispositif selon l'invention et en particulier en ajoutant en outre au moins un inhibiteur de transporteurs de la BHE ou une condition physique. 5 Par « tester des conditions physiques », on entend étudier l'impact de ces conditions sur la BHE et éventuellement leur influence sur le passage de composés à travers la BHE. Dans ce mode de réalisation, au moins une condition physique est appliquée au dispositif selon l'invention. Après un temps d'exposition ou d'incubation, le 10 dispositif est analysé afin de déterminer les changements qui ont été provoqués par ladite au moins une condition physique testée. Ces changements peuvent en particulier concerner la perméabilité, la sélectivité, la résistance électrique, la morphologie des cellules etc.. .On peut notamment étudier le résultat de l'ajout de la condition physique en la comparant à un dispositif sur lequel la condition physique n'a pas été appliquée. Par 15 « condition physique », on entend en particulier l'utilisation d'ondes telles que des ondes magnétiques, électromagnétiques ou encore des ultrasons. Par « tester des protocoles » on entend étudier l'impact d'un traitement au niveau de la BHE. Dans ce mode de réalisation, au moins un traitement, c'est-à-dire une condition physique ou une molécule, est appliqué à un composé tel que définis ci-dessus, 20 ce composé est ensuite mis en contact avec la BHE. Après un temps d'exposition ou d'incubation, le dispositif est analysé afin de déterminer les changements qui ont été provoqués par ledit traitement. Ces changements peuvent en particulier concerner la perméabilité, la sélectivité, la résistance électrique, la morphologie des cellules etc.. .On peut notamment étudier le résultat du traitement en le comparant à un dispositif mis en 25 contact avec un composé qui n'a pas été traité. L'invention va être maintenant décrite plus en détail à l'aide d'exemples pris à titre non limitatif. 30 Figures : Figure 1 : Schéma de préparation d'un dispositif comprenant des cultures de cellules primaires selon l'invention. 11 À J1, les astrocytes et la microglie sont décongelés et les cellules endothéliales et les péricytes sont purifiés à partir de cerveaux de souris. Les PBMCs sont extraits du sang périphérique de souris. À J3, le milieu de culture des cellules est renouvelé avec arrêt de l'effet de la puromycine 5 dans le milieu des cellules endothéliales. À J5, le milieu de culture des cellules est à nouveau renouvelé. À J8, des astrocytes et de la microglie, représentés par des points « . », sont ensemencés dans une boîte de culture. Les milieux de culture des autres cellules sont renouvelés. À J10, les cellules de microglie sont observables. 10 À J11, des astrocytes et de la microglie sont ensemencés sur la membrane synthétique poreuse. À J12, la membrane synthétique poreuse est déposée dans la boite de culture de sorte que les deux cultures d'astrocytes soient en contact, formant ainsi le compartiment abluminal. Puis les péricytes et les cellules endothéliales, représentés par des carrés et 15 des ronds (« E », >) sont ensemencés sur la face supérieure de la membrane synthétique poreuse, formant ainsi le compartiment luminal. Le traitement du dispositif à l'hydrocortisone débute. À J15, le traitement du dispositif à l'hydrocortisone est terminé, les PBMCs, représentés par des croix « + », sont ensemencés dans le compartiment luminal. Le modèle est prêt à 20 être utilisé. Figure 2: Perméabilité paracellulaire du dextran-FITC sur un dispositif selon l'invention comprenant des cultures de cellules primaires issues de souris modèles 25 pour Alzheimer (AD) ou de souris sauvages (Wild Type, WT). Le test de perméabilité des dispositifs est réalisé avec du dextran-FITC 4kD. Les milieux de culture sont remplacés par 1 mL d'HBSS Ca2±/Mg2+ dans le compartiment abluminal et 500 pL de dextran-FITC dans le compartiment luminal (soit 2.10-6 moles). Des prélèvements de 50 pL dans les compartiments luminal et abluminal sont réalisés à 0 30 min, 10 min, 20 min, 30 min, 1h et 1h30 et déposés dans des puits d'une plaque noire de 96 puits, lue sur le lecteur Varioskan (Thermo Scientific). La longueur d'onde d'excitation (Àex) du dextran-FITC est de 485 nm et la longueur d'émission (Àem) est de 515 nm. La figure 2 représente les résultats obtenus pour le compartiment abluminal sous forme de courbe. *p REVENDICATIONS1.- Dispositif comprenant deux compartiments séparés par une membrane synthétique poreuse, un compartiment luminal comprenant des cellules endothéliales et des péricytes, et un compartiment abluminal comprenant des astrocytes. 2.- Dispositif selon la revendication 1, dans lequel le compartiment comprenant des astrocytes comprend en outre de la microglie. 3.- Dispositif selon l'une des revendications 1 à 2, dans lequel toutes les cellules proviennent d'une même espèce animale. 4.- Dispositif selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel un ou plusieurs types cellulaires sont issus de cultures primaires. 5.- Dispositif selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel un ou plusieurs types cellulaires sont issus de cultures de cellules immortelles. 6.- Dispositif selon la revendication 4, dans lequel les cellules endothéliales et les péricytes sont issus de cultures primaires d'individu du même âge. 7.- Dispositif selon l'une des revendications 4 et 6, dans lequel un ou plusieurs dudit ou desdits type(s) cellulaire(s) issus de cultures primaires sont des types cellulaires modèles de pathologies. 8.- Procédé de préparation d'un dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, comprenant les étapes suivantes : a) ensemencement d'astrocytes sur une surface et/ou sur une face de la membrane synthétique poreuse, b) insertion ou dépôt de la membrane synthétique poreuse sur ladite surface, de telle sorte que si la membrane synthétique poreuse comprend des astrocytes alors la face comprenant les astrocytes est en regard de la surface, c) ensemencement de la face de la membrane synthétique poreuse luminale avec des cellules endothéliales et des péricytes. 19 9.- Procédé de préparation d'un dispositif selon la revendication 1, comprenant les étapes suivantes : a) ensemencement d'astrocytes sur une face de la membrane synthétique poreuse, 5 b) ensemencement de l'autre face de la membrane synthétique poreuse avec des cellules endothéliales et des péricytes, et éventuellement c) dépôt de la membrane synthétique poreuse sur une surface de telle sorte que la face comprenant des astrocytes soit en regard de la surface. 10 10.- Utilisation du dispositif selon l'une des revendications 1 à 7 comme modèle de la BHE. 11.- Utilisation selon la revendication 10 pour tester la perméabilité du modèle. 15 12.- Utilisation selon la revendication 10 pour tester la perméabilité du modèle à un composé comprenant les étapes : a) ajout dudit composé dans un des compartiments du dispositif, b) incubation du dispositif, c) détection et analyse de la présence du dit composé et/ou de ses métabolites 20 dans le compartiment où l'ajout dudit composé n'a pas eu lieu. 13 - Utilisation selon la revendication 10 pour étudier la physiopathologie d'une maladie. 25 14 - Utilisation selon la revendication 10 pour tester des molécules à visée préventive, thérapeutique ou diagnostique ciblant les acteurs cellulaires et moléculaires de la BHE. 15 - Utilisation selon la revendication 10 pour tester des conditions physiques. 30 16 - Utilisation selon la revendication 10 pour tester des protocoles. 35