Brevet FR3065214A1 — publié le 20181019

I MATRICE POUR LA DÉTECTION SPÉCIFIQUE DES ALCALOÏDES PAR SPECTROMÉTRIE DE MASSE MALDI-TOF DESCRIPTION Domaine technique La présente invention concerne (i) un nouveau composé utilisé comme matrice dans une méthode d'analyse de molécules de faible masse pouvant être inférieure à 800 Da, en particulier des alcaloïdes, par spectrométrie de masse (MS) de type MALDI-TOF, ladite méthode étant généralement désignée sous l'acronyme MALDI-TOF-MS pour méthode d'analyse par spectrométrie de masse (Mass Spectrometry) à temps de vol (Time-Of-Flight) à désorption-ionisation sous laser assistée par matrice ou MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption Ionisation), (ii) le procédé de fabrication dudit composé, (iii) son utilisation en tant que matrice en MALDI-TOF-MS, et (iv) ladite méthode d'analyse en MALDI-TOF-MS utilisant ledit composé comme matrice. La présente invention trouve en particulier une application dans le domaine pharmacologique. Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ([]) renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte. État de la technique Les alcaloïdes représentent une classe de métabolites végétaux secondaires intéressants présentant un large éventail d'activités biologiques. Bases de Lewis, ils font très généralement l'objet d'un long et coûteux procédé d'extraction, exploitant leurs solubilités différentielles selon le pH du milieu et conduisant à un extrait brut désigné sous le terme de totum alcaloïdique (AT). Etant utilisés en médecine traditionnelle depuis très longtemps, les alcaloïdes sont également de précieux composés dans les produits pharmaceutiques modernes bien que nombre d'entre eux tels que l'aconitine ou la strychnine soient également connus pour présenter de graves effets toxiques [1-3]. 3065214 2 Pour ces raisons, des méthodes facilitant une détection rapide et fiable des alcaloïdes sont essentielles pour de nombreuses applications en toxicologie clinique et médico-légale [4], de même que pour le contrôle qualité de compléments alimentaires et produits pharmaceutiques [4-8]. Fournissant un maximum 5 d'informations, la spectrométrie de masse (MS) et en particulier l'ionisation par électrospray (ESI) est devenue une technique standard pour l'analyse de petites molécules y compris les alcaloïdes. L'ESI est généralement liée avec la chromatographie liquide (LC) fournissant ainsi un outil plus puissant pour l'analyse de mélanges complexes. Toutefois, la LC-MS nécessite une longue préparation des 10 échantillons et des procédures d'optimisation expérimentale pour obtenir les meilleurs résultats. En outre, l'utilisation de tampons non volatils, qui est souvent nécessaire pour obtenir une séparation suffisante des alcaloïdes, limite les applications de la LC-MS. Tout comme le MALDI, l'ES! représente une technique d'ionisation douce, qui 15 est couramment appliquée à l'analyse de grandes molécules telles que peptides, protéines ou oligosaccharides. Cependant, par rapport à l'ESI, la spectrométrie de masse de type MALDI ou MALDI-TOF ne nécessite pratiquement aucune préparation d'échantillon et fournit des résultats presque instantanés. Par ailleurs, contrairement à l'ESI qui ne produit que des ions quasi-moléculaires (M+H)+, la 20 technique MALDI ou MALDI-TOF produit à la fois des ions radicaux (M)et quasi-moléculaires (M+H)+ [9, 10]. Cela élargit considérablement la gamme de composés détectables directement [11]. Comme la simplicité et le temps nécessaire au développement d'une méthode sont des facteurs importants pour l'analyse en routine, la technique MALDI pourrait de ce fait fournir un complément utile aux 25 approches classiques de LC-MS pour l'analyse de petites molécules, typiquement de masse moléculaire inférieure à 800 Da, tels que les alcaloïdes. Toutefois en spectrométrie de masse de type MALDI ou MALDI-TOF, si la matrice joue un rôle essentiel lors du processus de désorption/ionisation, elle représente également un facteur limitant de la technique dans la mesure où elle 30 génère très souvent et en quantités importantes des ions « parasites » de la matrice (bruit matriciel) dans la gamme des bas rapports de masse sur charge (m/z). Ce phénomène rend ainsi la caractérisation des petites molécules, typiquement REVENDICATIONS1 Utilisation du composé PFPT3P de formule (I) : PFPT3P Exact mass: 462.96 comme matrice dans un dispositif de spectrométrie de masse à désorption/ionisation sous laser assistée par matrice ou MALDI. 2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle ledit dispositif MALDI est couplé à un analyseur à temps de vol. 3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, pour analyser qualitativement et quantitativement un mélange de molécules comprenant au moins une molécule de masse 4. Utilisation selon la revendication 3, dans laquelle ladite molécule de masse 5. Utilisation selon la revendication 4, dans laquelle les alcaloïdes sont choisis parmi : - Le groupe des Azolidines ; - Le groupe des Azines ; - Le groupe des Tropanes ; - Le groupe des Quinoléines ; - Le groupe des lsoquinolines ; - Le groupe des lndoles ; - Le groupe des Terpénoïdes ; - Le groupe des Bétaïnes ; 3065214 - Le groupe des Pyrazoles. 6. Utilisation selon la revendication 4, dans laquelle les alcaloïdes sont choisis parmi (i) l'Aniracetam, la Anisomycin, le CX614, le Dextromoramide, le 5 Diphenyl prolinol, l'Acide Domoique, la Histapyrrodine, l'Acide Kainique, la Methdilazine, l'Oxaceprol, le Prolintane, la Pyrrobutamine, l'Hygrine, la Cuscohygrine ; (ii) la Pipéridine, la Conicine, la Trigonelline, l'Arecaidine, la Guvacine, la Pilocarpine, la Cytisine, la Nicotine, la Spartéine, la Pelletierine ; (iii), l'atropine, la L-Hyoscyamine, la Cocaïne, l'Ecgonine, la Scopolamine ; (iv) 10 l'Acridine, l'Acide bicinchoninique, la Broxyquinoline, le Chlorquinaldol, le Cinchophen, le Clioquinol, le Dequalinium, la Dihydroquinine, la Dihydroquinidine, l'Hydroxychloroquine, la 8-Hydroxyquinoline, l'Iodoquinol, l'Acide Kynurenique, la Mefloquine, la Nitroxoline, l'Oxycinchophen, la Primaquine, la Quinine, la Quinidine, le TSQ, le Topotecan, l'Acide Xanthurenique, la Strychnine, la Brucine, la Veratrine, 15 la Cevadine, l'Echinopsine, les Aminoquinoléines tels que la Chloroquine, l'Hydroxychloroquine, la Primaquine, les 8-Am inoquinoléines tels que la Tafenoquine, la Rhodoquine, la Pamaquine ; (y) la Dimethisoquine, le Quinapril, le Quinapirilat, le Debrisoquine, le 2,2'-Hexadecaméthylènediisoquinolinium dichlorure, le N-Laurylisoquinolinium bromure, le Narcéine, l'Hydrastine, la 20 Berbérine, les alcaloïdes de l'opium naturels tels que la Morphine, la Codéine, la Thébaïne, la Papavérine, la Narcotine, la Noscapine, les alcaloïdes de l'opium semisynthétiques tels que l'Hydromorphone, l'Hydrocodone, l'Héroïne, les alcaloïdes de l'opium synthétiques tels que le Fentanyl, la Pethidine, la Methadone, le Propoxyphène ; (vi) les Ergolines tels que les alcaloïdes de l'ergot de seigle tels que 25 l'Ergométrine, l'Ergotamine, l'Ergosine, l'Ergovaline, l'Ergokryptine, l'Ergocornine, l'Ergocristine, l'Acide lysergique, l'Ergine, le LSD, (vii) les Bêta-carbolines tels que l'Harmine, la Yohimbine, la Réserpine, l'Emétine ; (viii) les alcaloïdes de l'aconit napel tel que l'Aconitine, la Solanidine, (ix) la Solasodine, la Batrachotoxine, la Delphinine, (x) les stéroïdes tels que la Solanine, la Samandarin ; (xi) la Muscarine, 30 la Choline, la Neurine. 3065214 31 7. Utilisation selon la revendication 3, dans laquelle ledit mélange est un mélange choisi parmi des extraits organiques bruts, ou toute fraction obtenue à partir desdits extraits organiques bruts, ou des liquides biologiques, d'origine humaine ou animale. 5 8. Utilisation selon la revendication 7, dans laquelle le liquide biologique est choisi parmi le sang et le plasma, les liquides des muqueuses génitales, les liquides de la peau, les liquides des phanères, les liquides d'épanchement et des cavités closes, les liquides du système digestif et urinaire. 10 9. Composé PFPT3P de formule : PFPT3P Exact mass: 462.96 10. Utilisation d'un composé selon la revendication 9 pour fabriquer une 15 matrice destinée à être utilisée dans un dispositif de spectrométrie de masse à désorption/ionisation sous laser assistée par matrice ou MALDI. 11. Procédé de fabrication d'une matrice destinée à être utilisée dans un dispositif de spectrométrie de masse à désorption/ionisation sous laser assistée par 20 matrice ou MALDI consistant à cristalliser un composé selon la revendication 9. 12. Procédé selon la revendication 11, dans lequel ledit dispositif MALDI est un spectromètre de masse couplant une source d'ionisation laser assistée par une matrice et un analyseur à temps de vol. 25 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 11 ou 12, caractérisé en ce que ledit composé selon la revendication 9 cristallisé est ensuite dissout dans un solvant organique ou de l'eau comprenant un échantillon à 3065214 32 analyser, ledit solvant ou l'eau étant ensuite vaporisé formant au final une matrice cristallisée de composé selon la revendication 9 comprenant l'échantillon à analyser. 5 14. Procédé selon la revendication 13, dans lequel l'échantillon est choisi parmi les extraits organiques bruts et les liquides biologiques. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 13 ou 14, dans lequel le rapport molaire (molécules à analyser)/(molécules de matrice) est de 10 1 :33333 à 1 :105715. 16. Procédé de caractérisation et/ou de quantification de molécules, ayant avantageusement une masse 17. Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'échantillon est un liquide biologique choisi parmi le sang, le plasma, les liquides des muqueuses génitales, les liquides de la peau, les liquides des phanères, les liquides 30 d'épanchement ou des cavités closes, les liquides du système digestif ou urinaire.