Brevet FR3068470A1 — publié le 20190104

PROCEDE DE MARQUAGE DE SEMENCES Le domaine de cette invention est celui des semences végétales, et en particulier des semences de céréales ou pseudo-céréales. Cette invention concerne notamment la mise au point d'un procédé de marquage et/ou de traçabilité des semences. L'invention concerne plus généralement un procédé de marquage de semences, ledit procédé comprenant la mise en contact d'une semence avec une solution aqueuse, huileuse, ou une émulsion, comprenant un traceur détectable par fluorescence en temps résolu, de sorte à obtenir la fixation dudit traceur sur la semence. ARRIERE PLAN TECHNOLOGIQUE En accord avec les lignes directrices pour les essais en parcelle de contrôle et l'inspection des cultures de semences (OCDE, 2012), la vérification de la description de la variété est réalisée en comparant « visuellement la parcelle de contrôle ensemencée avec un échantillon représentatif d'un lot de semences devant être prélevé par un échantillonneur officiel ou agréé, et une parcelle cultivée à partir d'un échantillon de référence ». Toutefois, le développement des marqueurs moléculaires permet de compléter le contrôle visuel et d'établir l'empreinte génétique d'un individu et de définir les variétés. Ce dernier critère est notamment utilisé pour la détermination de la propriété intellectuelle. Dans ce contexte, le respect de l'intégrité des semences est majoritairement assuré par l'utilisation d'emballages inviolables et de la présence sur ce dernier du certificat 20 garantissant l'identité de la variété et du lot de semences. Par ailleurs, durant les opérations de pelliculage des semences, des pigments (BASF Color CoatTm ; Bayer SeedGrowth° ; Clariant AgrocerTm ; Sensient SensiCoatTM) peuvent être incorporés de façon à pouvoir identifier par exemples les traitements incorporés (insecticides, fongicides ...). Toutefois, ces pigments ne sont pas destinés à un usage anti- 25 contrefaçon. Dans ce domaine, le brevet US 20150278757 Al décrit une méthode pour la gestion de la chaîne du cannabis à partir de produits traceurs déposés à la surface des semences ou de feuilles de cannabis. De même, le brevet WO 2009139631 Al, décrit un marqueur multi- 2 niveaux, comprenant au moins deux marqueurs, permettant d'identifier le produit marqué, en particulier des semences, des compositions d'enrobage de semences et des semences enrobées. Dans cette technique, le premier marqueur utilise la conversion ascendante de photon et le second marqueur est choisi parmi les marqueurs ultra-violets, marqueurs 5 visibles, les marqueurs proche infrarouges, les marqueurs phosphorescents et les combinaisons de ces derniers. Toutefois, ces différentes techniques, ne permettent pas d'identifier au champ l'origine des semences sorties des emballages. C'est pourquoi, il est indispensable de proposer des méthodes faciles à mettre en oeuvre pour garantir la traçabilité des semences. 10 PROBLE1VIE TECHNIQUE ET OBJECTIFS A ATTEINDRE Dans ce contexte, la présente invention vise à satisfaire au moins l'un des objectifs suivants: - proposer un nouveau procédé de marquage des semences, qui soit simple à mettre en oeuvre et économique ; 15 - proposer un procédé de marquage qui n'altère pas la qualité des semences et qui soit persistant dans le temps ; - proposer un procédé de marquage qui puisse être mis en oeuvre sur un lot de semences simultanément; - proposer un procédé de marquage qui permette un codage d'informations ; - proposer des semences marquées, identifiant leur obtenteur, leur année de production, leur qualité et/ou leur origine de production (traçage); - proposer un procédé de triage des semences ou graines marquées, facile à mettre en oeuvre, de préférence graine par graine ; - proposer un procédé d'analyse permettant une identification des semences marquées au champ. BREVE DESCRIPTION DE L'INVENTION Ces objectifs, parmi d'autres, sont atteints par l'invention qui concerne en premier lieu un procédé de marquage de semences, ledit procédé comprenant la mise en contact d'une 3 semence avec une solution aqueuse, huileuse, ou une émulsion, comprenant un traceur détectable par fluorescence en temps résolu, de sorte à obtenir la fixation dudit traceur sur la semences ou graine. Dans un mode de réalisation spécifique, lesdites semences sont des semences de céréales, 5 par exemple de blé, d'orge ou de maïs, ou des semences de pseudo-céréales. Dans un mode de réalisation spécifique, ladite solution aqueuse, huileuse ou émulsion est mise en oeuvre seule ou conjointement avec les solutions d'enrobage ou de pelliculage des semences comprenant des adjuvants (pelliculant, enrobants, colorants ....) et le cas échéant, des substances actives (fongicides, insecticides ...). Une pluralité de semences 10 peut être mise en contact simultanément avec lesdites solutions dans des procédés de traitement à débit continu, semi-continu ou en batch permettant le traitement de quelques kilos à plusieurs tonnes de semences à l'heure. De préférence, ledit traceur est un cation de terres rares ou complexe de terres rares, par exemple, de lanthanides. Ledit lanthanide peut être choisi en particulier parmi Gd, Dy, 15 Lu, Yb, Sm, Ho, Eu, Tb, Nd, Er ou leurs mélanges, par exemple du terbium ou de l' europium. Dans un mode de réalisation spécifique, le dit traceur est compris dans une solution choisie parmi les huiles végétales, les huiles blanches paraffiniques, les huiles essentielles, l'huile de colza estérifiée, et l'huile de soja époxydée. 20 La présente divulgation porte également sur la semence marquée selon le procédé de marquage décrit ci-dessus. Un aspect de la présente divulgation concerne en particulier la semence marquée, comprenant au moins un traceur ou une combinaison de traceurs, détectable(s) par fluorescence en temps résolu. 25 Dans un mode de réalisation spécifique, la semence marquée est caractérisée en ce que ledit traceur est un cation de terres rares ou complexe de terres rares, de préférence de lanthanide, par exemple le terbium, l'europium ou leurs mélanges. 4 La présente divulgation décrit en outre un procédé d'identification d'une semence marquée, caractérisé en ce qu'il comprend la détection par fluorescence en temps résolu du ou des traceurs éventuellement présents sur la semence. De préférence, la détection peut se faire graine par graine. 5 Ainsi, le procédé d'identification peut comprendre en outre une étape de tri des semences selon la présence ou l'absence de détection du ou des traceurs sur chaque semence. Le dispositif de détection peut le cas échéant être transportable pour une détection en champ, par exemple avant ou après un semis. La divulgation vise également les solutions destinées à être appliquées sur les semences en 10 l'état ou après dilution, et comprenant un cation de terres rares ou complexe de terres rares et un ou plusieurs des composés suivants : - des substances actives, à action phytosanitaire, par exemple bactéricide, fongicide ou insecticide, - des formulants inertes, tels que des solvants organiques ou de l'eau, des dispersants, 15 des émulgateurs, des tensioactifs, des mouillants ou des colorants, - des adjuvants, tels que des pelliculants ou des enrobants. Elle vise encore une poudre soluble pour le traitement des semences, comprenant des sels de lanthanides et au moins un excipient apte à l'enrobage de semences après dilution dans une solution aqueuse ou huileuse. 20 LEGENDE DES FIGURES Figure 1 est un spectre d'émission acquis entre 450 et 650 nm. En trait plein : Blé marqué. En pointillé : Blé non traité Figure 2 est un spectre d'émission acquis entre 450 et 650 nm.. En trait plein : Maïs marqué. En pointillé : Maïs non traité 25 Figure 3 est un spectre d'émission acquis entre 450 et 650 nm. En trait plein : Maïs marqué. En pointillé : Maïs non traité 5 Figure 4 est un spectre d'émission acquis entre 450 et 650 nm. En trait plein : Orge marqué. En pointillé : Orge non traité Figure 5 est un spectre d'émission acquis entre 450 et 650 nm: En trait plein : Maïs marqué. En pointillé : Maïs non traité 5 Figure 6 est un spectre d'émission acquis entre 450 et 650 nm: En trait plein : Blé marqué. En pointillé : Blé non traité Figure 7 est un spectre d'émission acquis entre 450 et 650 nm. En trait plein : Orge marqué. En pointillé : Orge non marqué Figure 8 est un spectre d'émission acquis entre 450 et 650 nm. En trait plein : Blé marqué. 10 En pointillé : Blé non traité Figure 9 est un spectre d'émission acquis entre 450 et 650 nm. En trait plein : Maïs marqué. En pointillée : Maïs non traité Figure 10 est un spectre d'émission acquis entre 450 et 650 nm. En trait plein : Blé marqué. En pointillé : Blé non traité 15 DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Procédé de marquage de semences Dans un premier aspect, il est décrit un procédé de marquage de semences, ledit procédé comprenant la mise en contact d'une semence avec une solution aqueuse, huileuse, ou une émulsion, comprenant un traceur photoluminescent, par exemple détectable par 20 fluorescence en temps résolu, de sorte à obtenir la fixation dudit traceur sur la semence. Le procédé de marquage est applicable sur toute semence végétale, et en particulier les semences de céréales, de pseudo-céréales, de graminées, les semences potagères ou de plantes ornementales. De préférence, le procédé s'applique aux semences de céréales et pseudo-céréales. 6 Par pseudo-céréales, on entend des plantes dicotylédones dont les graines sont consommées, plus ou moins à la manière des céréales, mais qui ne sont pas des graminées. Les exemples de pseudo-céréales les plus courantes incluent : amarante, quinoa et sarrasin. A titre d'exemples de semences de céréales et pseudo-céréales, on peut citer les semences 5 de maïs, blé, orge, riz, sorgho, millet, avoine, seigle, triticale ou fonio, sarrasin et quinoa. Par « fixation », on entend la persistance dans le temps, d'une quantité de traceur suffisante pour sa détection par fluorescence en temps résolu, en particulier, dans des conditions normales de conditionnement et de stockage des semences avant leur emploi. Le traceur peut avantageusement persister après le semis, et jusqu'à la germination. 10 Si le traceur est choisi judicieusement, les inventeurs ont constaté que de très faibles quantités de traceurs peuvent être avantageusement détectées de manière fiable sur une graine, par la technique de détection par fluorescence en temps résolu. Ainsi, la solution à appliquer sur la graine peut avantageusement comprendre une quantité inférieure à 100 ppm de traceur, de préférence inférieure ou égale à lppm de traceur, par exemple un 15 traceur détectable par fluorescence en temps résolu choisi parmi les cations de terre rare, notamment les lanthanides, ou des complexes de terre rare. Le procédé de marquage selon l'invention peut utiliser les techniques de pelliculages ou d'enrobages utilisées pour le traitement de graines. Dans ce cas, le traceur peut être incorporé directement dans une solution d'enrobage ou de pelliculage qui est appliquée sur 20 la graine. Dans un mode alternatif, une solution de marquage comprenant ledit traceur détectable par fluorescence en temps résolu est appliquée sur la graine, puis la graine est enrobée avec une solution d'enrobage ou de pelliculage. Ainsi, un autre avantage du procédé selon l'invention est qu'il permet de marquer 25 simultanément un grand nombre de semences, notamment par les techniques d'enrobage ou de pelliculage connues de l'homme du métier. Le traceur photoluminescent 7 Le choix du traceur photoluminescent est libre, mais guidé par les propriétés de photoluminescence pour sa détection. Par « traceur photoluminescent », on entend tout élément, petite molécule, macromolécule, complexe métallique ou organométallique, ou composition, permettant d'émettre 5 un signal photoluminescent. Le signal photoluminescent émis par le traceur après fixation sur la semence doit être détectable par rapport au « bruit de fond » éventuellement émis par la semence. Par « détectable », on entend pouvoir identifier leur présence ou non sur la semence au-delà d'une certaine concentration et même si possible, quantifier leur concentration. 10 Au sens de l'invention, le « traceur photoluminescent » possède la propriété d'absorber de l'énergie lumineuse (lumière d'excitation) et de la restituer lentement sous forme de lumière fluorescente ou phosphorescente (lumière d'émission) dans un délai de préférence supérieur à 100 ns, et de façon préférée, supérieur à 1 las. Avantageusement, le traceur, par exemple, un cation de terre rare ou un complexe de terre 15 rare, est détectable par fluorescence en temps résolu. La méthode de détection par fluorescence en temps résolu, c'est-à-dire enclenchée avec retard après excitation (i.e. quelques microsecondes), est par exemple décrite dans l'article « Ultrasensitive Bioanalytical Assays Using Time-Resolved Fluorescence Detection », Pharmac. Ther. Vol. 66, pp. 207-235, 1995. 20 Les traceurs photoluminescents utilisables dans le procédé de marquage peuvent être choisis parmi les semi-conducteurs, les oxydes, les fluorures ou les vanadates de terres rares, les molécules photoluminescentes organiques (par exemple la tétracycline ou la calcéine), les cations de métaux de transition, les cations de terres rares liés ou non à des ligands ou molécules complexantes et/ou à des molécules permettant d'améliorer leur 25 absorption et leurs mélanges et/ou alliages. Typiquement, il peut s'agir de cations métalliques de terres rares, par exemple, des lanthanides. 8 On désigne par « terres rares » l'ensemble constitué par le scandium, l'yttrium et les lanthanides. De façon préférée, la terre rare du complexe métallique est un métal de la série des lanthanides. Les métaux de la série des lanthanides sont les éléments de numéro atomique allant de 57 (lanthane) à 71 (lutécium). Par exemple, on choisira les lanthanides 5 dans le groupe constitué par : Pr, Nd, Sm, Eu, Gd, Tb, Dy, Ho, Er, Tm et Yb. Dans un mode de réalisation spécifique, ledit traceur photoluminescent est un lanthanide choisi parmi Gd, Dy, Lu, Yb, Sm, Ho, Eu, Tb, Nd, Er, ou leurs mélanges, par exemple du terbium ou de l'europium. Dans un mode de réalisation particulier, ledit traceur est un complexe de terre rare. 10 On désigne par « complexe de terre rare » un édifice polyatomique comprenant au moins les constituants suivants : (i) un cation métallique de terre rare et (ii) un ou plusieurs ligands, ledit cation métallique étant associé auxdits ligands par des liaisons non covalentes pour former le complexe de terre rare. Par « ligand », on entend toute molécule capable de former un complexe avec un cation 15 métallique. Un même cation métallique peut être complexé par un ou par plusieurs ligands. Lorsque le complexe métallique comprend plusieurs ligands, ceux-ci peuvent être identiques ou différents. Préférentiellement, le ligand est choisi de façon à ce que le complexe métallique ait une constante de dissociation Kd inférieure à 1x10-5 et de préférence inférieure à 1x10-1° 20 correspondant à un pKd supérieur à 5 et de préférence supérieur à 10. Au sens de l'invention, on entend par « constante de dissociation » la valeur de la constante d'équilibre entre le cation métallique à l'état complexé par l'agent complexant, et le cation métallique et l'agent complexant libres dissociés dans le solvant (Kd). Précisément, le pKd est l'opposé du logarithme de base 10 de la constante de dissociation 25 (-log(Kd)), définie comme la constante d'équilibre de la réaction qui traduit le passage de l'état complexé à l'état ionique. Le ligand est de préférence un ligand polydenté comprenant au moins 3, de préférence au moins 4, sites de coordination. De préférence, le ligand est choisi parmi les molécules de 9 type polyamine et/ou polyacide carboxylique et leurs dérivés, parmi lesquels on peut citer les esters et les amides. Il s'agit de préférence d'une molécule cyclique. Selon un mode de réalisation particulier, le ligand polydenté comprend un hétérocycle et au moins 3, de préférence 4, sites de coordination dudit ligand polydenté forment, avec 5 d'autres atomes, ledit hétérocycle. Dans un mode de réalisation plus spécifique, le ligand du complexe de terre rare est choisi parmi : - l'acide 2,2',2",2"-(1,4,7,10-tétraazacyclododécane-1,4,7,10-tétrayl) tétraacétique (DOTA), de formule (I) 10 et ses dérivés, parmi lesquels on peut citer le DOTA-GA (acide 2,2',2"-(10-(2,6- dioxotétrahydro-2H-pyran-3 -y1)-1,4,7,10-tétraazacy cl ododécane-1,4, 7-triy1)triaceti que), le DOTAEt (2,2',2",2"-(1,4,7,10-tétraazacyclododécane-1,4,7,10-tétrayl) tétraacétate de tétraéthyle), le DOTAM (2,2',2",2"-(1,4,7,10-Tétraazacyclododécane-1,4,7,10- 15 tétrayl)tetraacétamide) et le DO3A-pyridine de formule (II) ; - l'acide 2,2',2"43,6,9,15-tétraazabicyclo[9.3.1]pentadéca-1(15),11,13-triène-3, 6,9- triylitriacétique (PCTA), de formule (III) 10 H (III) et ses dérivés, parmi lesquels on peut citer les esters et les amides ; - le tetra-6-(methylene) picolinic acid cyclen (TMPAC) de formule (IV) 5 (IV) et ses dérivés, parmi lesquels on peut citer les esters et les amides ; - l'acide 2,2',2"-(1,4,7-triazonane-1,4,7-triy1)triacétique (NOTA), de formule (V), H (V) et ses dérivés, parmi lesquels on peut citer les esters et les amides. 11 l'acide 1,4,8,11- tétraazacyclotétradécane-1,4,8,11-tétraacétique (TETA ou cyclam) et ses dérivés parmi lesquels on peut citer le tetra-6-(methylene) picolinic acid cyclam (VI) HO (VI) 5 Parmi les autres ligands utilisables, on peut citer les dendrimères, l'éthylène diamine tétraacétique (EDTA), l'acide nitriloacétique (NTA), l'acide glutamique diacétique (GLDA), les phosphonates, les cyclodextrines et leurs dérivés, le chitosan et les polysaccharides bactériens ou d'algues. 10 Selon un mode de réalisation, le ligand comprend un cycle aromatique comprenant au moins un atome d'azote ou de soufre ou plusieurs cycles aromatiques conjugués qui font effet d'antenne, c'est-à-dire qu'ils amplifient le signal fluorescent émis par le marqueur. La solution de marquage Pour la mise en oeuvre du procédé de marquage, un ou plusieurs traceurs 15 photoluminescents sont compris dans une solution de marquage. La solution de marquage comprend au moins un traceur photoluminescent tel que décrit au paragraphe précédent, ou une combinaison d'au moins deux traceurs photoluminescents, avec des concentrations identiques ou différentes. 12 Le produit ainsi marqué, par exemple, la semence ainsi marquée, émettra un signal spécifique, dépendant du type de traceur photoluminescent utilisé, de sa concentration dans la solution, et de son procédé d'application sur la semence. Cette signature spécifique, le cas échéant en combinaison avec le signal d'autres traceurs utilisés, peut être utilisée par 5 exemple pour coder certaines informations liées à la semence, notamment son obtenteur, son année de production, sa qualité et/ou son lieu d'origine de production. Dans un mode de réalisation spécifique, la solution de marquage peut être une solution aqueuse, organique ou une émulsion. Par exemple, la solution de marquage comprend un cation de terre rare, de préférence de 10 lanthanide, dans une concentration de préférence comprise entre 10-7 et 101 M, par exemple entre 10-6 et 10-4M dans une solution aqueuse. Dans un autre mode de réalisation, la solution de marquage est une solution organique, de préférence une huile végétale, par exemple une huile de tournesol, de lin, de colza, de soja, d'olive ou tout autre huile ou mélanges d'huiles appropriées pour son utilisation dans 15 l'enrobage de semences et notamment les huiles blanches paraffiniques, les huiles essentielles, l'huile de colza estérifiée, l'huile de soja époxydée, ladite solution organique comprenant un complexe de terres rares, dans une concentration de préférence comprise entre 10-7 et 10-3M, par exemple entre 10-6 et 10-4M. Dans un autre mode de réalisation, la solution de marquage est une émulsion, par exemple, 20 une émulsion préparée en ajoutant une huile végétale, à une solution aqueuse comprenant un cation de terres rares, de préférence de lanthanides. Dans un mode de réalisation spécifique, ladite solution de marquage comprend une combinaison de lanthanides distincts. Dans un mode de réalisation spécifique, ledit traceur est incorporé dans une solution 25 d'enrobage ou de pelliculage de semences et ladite solution d'enrobage ou de pelliculage est appliquée sur la semence. Par solution d'enrobage ou de pelliculage, on entend les solutions destinées à être appliquées sur la semence pour le traitement de la semence, et en particulier pour son 13 traitement à action phytosanitaire chimique ou biologique, par exemple fongicide, bactéricide, insecticide ou répulsifs aux oiseaux ou encore pour favoriser sa germination ou la croissance des plantes notamment par l'incorporation d'engrais, d'agent antidéshydratation ou de régulateurs de croissance. 5 Ainsi, la présente divulgation vise également une solution destinée à être appliquée sur les semences, en l'état ou après dilution, comprenant un cation de terre rare ou complexe de terre rare et un ou plusieurs des composés suivants : - des substances actives, à action phytosanitaire, par exemple, bactéricide, fongicide ou insecticide, 10 - des formulants inertes, tels que des solvants organiques ou de l'eau, des dispersants, des émulgateurs, des tensioactifs, des mouillants ou des colorants, - des adjuvants, tels que des pelliculants ou des enrobants. Sont également décrits ici les poudres solubles pour le traitement des semences, comprenant des sels de terre rare, notamment des sels de lanthanides, et au moins un 15 adjuvant, tel qu'un pelliculant ou un enrobant, apte à l'enrobage de semences après dilution dans une solution aqueuse ou huileuse. De telles solutions, ou poudres solubles et leurs compositions sont bien connues de l'homme du métier et choisies en fonction de la semence à traiter et du traitement souhaité. La solution de marquage peut comprendre en outre d'autres marqueurs de traçabilité et 20 notamment : - des molécules d'acides nucléiques artificielles (dont la séquence se distingue des séquences des génomes ou transcriptomes de la semence), identifiables par exemple par la technique d'amplification PCR ou autres techniques de séquençage, - des polymères synthétiques contenant de l'information binaire, ternaire ou autres 25 associés à une lecture par exemple en spectrométrie de masse en tandem, - des molécules émettant un signal ultraviolet (traceur UV), un signal dans la lumière visible (traceur dye), ou un signal dans le domaine proche de l'infra-rouge (traceur « NIR »). 14 A titre d'exemples de traceurs UV, on peut citer les fluorescéines, les rhodamines, le rouge Texas, BODIPY, les coumarines, les colorants cyanine (thiazole orange, oxazole yellow, TOTO, YOYO, Cy3, Cy5) et les colorants Alexa. A titre d'exemples de traceurs dans le domaine de la lumière visible, on peut citer les 5 dérivés de fluorescéines, les dérivés de rhodamine, les colorants anthraquinone, benzodifuranone, carbonyle polycyclique aromatique, indigoïdes, polyméthine, azacarbocyanine, hémicyanine, barbituates, diazahémicyanine, stryrle, diaryle carbonium, triaryle carbonium, phthalocyanine, quinophthalone, triphénodioxazine, formazane, phénothiazine, tel que le bleu de méthylène, azure A, azure B, and azure C, oxazine, 10 thiazine, naphtholactame, diazahémicyanine, azopyridone, azobenzène, mordant, xanthène. Des exemples de solutions de marquage et de mise en oeuvre du procédé de marquage sont décrits ci-après, sans être limitatifs. Semence marquée tel qu'obtenu après mise en oeuvre du procédé de marquage Les semences obtenues après mise en oeuvre du procédé de marquage selon l'invention 15 sont caractérisées par la présence de traceurs photoluminescents, d'origine non naturelle. L'invention vise donc de tels produits et notamment, les semences marquées au moyen du procédé de marquage décrit ci-dessus, par exemple des semences enrobées, comprenant des cations de terres rares ou complexes de terres rares dans l'enrobage, lesdits cations de terres rares ou complexes de terres rares étant détectables par fluorescence en temps résolu. 20 Ladite semence selon l'invention, comprend en particulier un traceur photoluminescent qui peut être choisi parmi un cation de terre rare ou complexe de terre rare, de préférence un lanthanide, par exemple le terbium ou l'europium ou leurs mélanges. Dans un mode préféré, la semence marquée comprend moins d' 1 ppm de traceur photoluminescent. 25 Procédé d'identification d'une semence marquée 15 L'invention porte également sur un procédé d'identification d'une semence marquée selon le procédé de marquage de l'invention, caractérisée en ce qu'il comprend la détection par fluorescence en temps résolu du ou des traceurs photoluminescents. Le procédé de détection doit permettre d'identifier le signal photoluminescent spécifique 5 du ou des traceur(s) utilisé(s) pour le marquage. Le procédé peut permettre de détecter la présence d'une combinaison de traceurs photoluminescents présents sur la semence marquée (par exemple dans l'enrobage), et le cas échéant, leurs quantités absolues ou relatives. Le procédé consiste notamment à 10 a) émettre une lumière pulsée sur la semence marquée (de préférence dans l'UV) par exemple avec une fréquence inférieure à 1 kHz, b) détecter la lumière émise par la semence marqué, après au moins 100 nanoseconde, de préférence après au moins 1 microseconde après la fin du pulse d'excitation, 15 c) trier les longueurs d'onde ou sélectionner les longueurs d'onde attendues en fonction du ou des traceurs photoluminescents susceptibles d'être fixés sur la semence, d) détecter la lumière spécifique du ou des traceurs photoluminescents susceptibles d'être fixés sur la semence, 20 e) éventuellement, mesurer également l'intensité du signal pour en déduire la concentration absolue ou relative de chaque traceur dans la semence marquée. L'invention repose sur l'utilisation de traceurs photoluminescents capables d'émettre (seuls ou en combinaison avec d'autres éléments) un signal après au moins 100 ns, de préférence au moins 1 i_ts après la fin du pulse d'excitation. La collecte de la lumière après 25 au moins 100 ns, de préférence au moins 1 i_ts après la fin du pulse d'excitation, permet ainsi de discriminer entre la lumière naturellement émise par la semence et les traceurs photoluminescents fixés sur la semence, par exemple dans l'enrobage. 16 Un des avantages de la présente invention est de permettre une détection fiable et simple du traceur, semence par semence, par exemple, intégré dans un dispositif de triage des semences. Ainsi, le dispositif de détection du signal comprend par exemple 5 - un dispositif émetteur permettant d'envoyer de la lumière pulsée sur la semence marquée, (de préférence dans l'UV) par exemple avec une fréquence inférieure à 1 kHz, - un dispositif récepteur permettant de détecter la lumière émise par la semence marquée, 10 - un réceptacle ou support pour positionner la ou les semence(s), la ou les semence(s) étant positionnées de préférence de manière à ce que l'angle formée entre la source d'excitation, la ou les semence(s) et le détecteur est un angle inférieur ou égal à 900, - un dispositif de tri en longueur d'onde ou de sélection pour identifier la lumière 15 émise d'intérêt (par exemple par filtres, par monochromateur (type Czerny-Turner ou autre) ou par réseau), - le cas échéant une interface indiquant le résultat de la détection, par exemple, « positif» ou « négatif». Un tel dispositif est par exemple ajouté à un dispositif de triage des semences, 20 classiquement utilisé pour le tri des semences notamment pour s'assurer que le lot de semences répond aux normes de certification ou de qualité requises. Le dispositif de triage peut comprendre, outre le dispositif de détection par fluorescence en temps résolu, une table densimétrique, un trieur alvéolaire, un nettoyeur-séparateur, ou un trieur optique. 25 Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, le procédé d'identification tel que décrit plus haut comprend en outre une étape de tri (par sélection ou élimination) des semences selon la présence ou l'absence de détection du ou des traceurs sur chaque semence. 17 Dans un autre mode de réalisation, le procédé d'identification comprend un dispositif de détection transportable, pour une détection au champ, par exemple avant ou après un semis. Le procédé d'identification et les dispositifs décrits plus haut peuvent être utilisés 5 avantageusement pour identifier par exemple l'origine de production et/ou la qualité d'une semence. A titre d'exemple, l'invention pourrait être mise en oeuvre pour certifier l'obtenteur, l'origine, ou encore l'année d'obtention. D'autres applications pourraient être envisagées et les exemples ci-après ne sont pas 10 limitatifs. DESCRIPTION DES FIGURES EXEMPLES Exemple 1 : Préparation de la solution A, une solution aqueuse On prépare une solution de marquage à base de Terbium en ajoutant 4 grammes de TbC13 à 15 1 litre d'eau distillée. Exemple 2 : Préparation de la solution B, une solution aqueuse On prépare une solution de marquage à base d'Europium en ajoutant 10 mg d'EuC13 et 10 mg de copolymère sulphonate et carboxylate (Versa-TL3) dans 1 litre d'eau distillée. Le pH de cette solution est fixé à 6. 20 Exemple 3 : Préparation de la solution C, une solution aqueuse On prépare une solution de marquage à base de Terbium en ajoutant 10 mg de polymère EOR (copolymère acrylamide et acrylate de sodium) dans un litre d'eau distillée. On prélève ensuite 900 mL de cette solution et on y ajoute 100 mL de la solution A. Exemple 4 : Préparation de la solution D, une solution aqueuse 18 On prépare une solution de marquage à base de Terbium en ajoutant 10 grammes de saccharose et 0.2 gramme d'amidon à 5 mL de la solution A. Exemple 5 : Préparation de la solution E, une solution aqueuse On prépare une solution de marquage à base de Terbium en prélevant 100 mL de la 5 solution A et en y ajoutant 900 mL d'eau distillée. Exemple 6 : Préparation de la solution F, une solution aqueuse On prépare une solution de marquage à base de Terbium en ajoutant 12,62 grammes de TbC13 à 990 mL d'eau distillée et 10 mL de Mexagri (distribué par Mexel Industries, route de Compiègne, 60410 Verberie France). 10 Exemple 7 : Préparation de la solution G, une émulsion On prépare une solution de marquage à base de Terbium en prélevant 2 mL de la solution F et en y ajoutant 8 mL d'huile de Tournesol. Exemple 8 : Préparation de la solution H, une solution organique On prépare une solution de marquage à base d'Europium en diluant 1 mL de ChelRed 15 (distribué par la société GLINCS) dans 9 mL d'huile de Tournesol. Exemple 9 : Marquage et détection des semences par la solution aqueuse A On prélève une masse de 50 grammes de semences (blé, maïs ou orge) dans laquelle on introduit 1 millilitre de la solution A (exemple 1) à l'aide d'une pipette. On agite vigoureusement pendant 5 minutes. Après séchage sous air sec pendant 12 heures, le 20 processus de marquage est terminé. Quelques graines de semences sont placées sur un porte échantillon. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. La fente d'excitation est fixée à 20 nm et la fente d'émission est fixée à 10 nm. Le délai est fixé à 0.2 ms et le temps d'acquisition est fixé à 2 ms. La longueur d'onde d'excitation est de 285 nm. Le spectre d'émission est acquis entre 450 et 650 nm. 19 Exemple 10 : Marquage et détection des semences par la solution aqueuse B On prélève une masse de 50 grammes de semences (blé, maïs ou orge) dans laquelle on introduit 1 millilitre de la solution B (exemple 2) à l'aide d'une pipette. On agite vigoureusement pendant 5 minutes. Après séchage sous air sec pendant 12 heures, le 5 processus de marquage est terminé. Quelques graines de semences sont placées sur un porte échantillon. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. Les fentes d'excitation et d'émission sont fixées à 20 nm. Le délai est fixé à 0.1 ms et le temps d'acquisition est fixé à 2 ms. La longueur d'onde d'excitation est de 230 nm. Le spectre d'émission est acquis entre 550 et 750 nm. 10 Exemple 11 : Marquage et détection des semences par la solution aqueuse C On prélève une masse de 50 grammes de semences (blé, maïs ou orge) dans laquelle on introduit 2 millilitres de la solution C (exemple 3) à l'aide d'une pipette. On agite vigoureusement pendant 5 minutes. Après séchage sous air sec pendant 12 heures, le processus de marquage est terminé. Quelques graines de semences sont placées sur un 15 porte échantillon. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. La fente d'excitation est fixée à 20 nm et la fente d'émission est fixée à 10 nm. Le délai est fixé à 0.2 ms et le temps d'acquisition est fixé à 2 ms. La longueur d'onde d'excitation est de 285 nm. Le spectre d'émission est acquis entre 450 et 650 nm. Exemple 12 : Marquage et détection des semences par la solution aqueuse D 20 On prélève une masse de 50 grammes de semences (blé, maïs ou orge) dans laquelle on introduit 1 millilitre de la solution D (exemple 4) à l'aide d'une pipette. On agite vigoureusement pendant 5 minutes. Après séchage sous air sec pendant 12 heures, le processus de marquage est terminé. Quelques graines de semences sont placées sur un porte échantillon. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. 25 La fente d'excitation est fixée à 5 nm et la fente d'émission est fixée à 5 nm. Le délai est fixé à 0.1 ms et le temps d'acquisition est fixé à 2 ms. La longueur d'onde d'excitation est de 285 nm. Le spectre d'émission est acquis entre 450 et 650 nm. Exemple 13 : Marquage et détection des semences par la solution aqueuse E 20 On prélève une masse de 50 grammes de semences (blé, maïs ou orge) dans laquelle on introduit 1 millilitre de la solution E (exemple 5) à l'aide d'une pipette. On agite vigoureusement pendant 5 minutes. Après séchage sous air sec pendant 12 heures, le processus de marquage est terminé. Quelques graines de semences sont placées sur un 5 porte échantillon. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. La fente d'excitation est fixée à 20 nm et la fente d'émission est fixée à 10 nm. Le délai est fixé à 0.2 ms et le temps d'acquisition est fixé à 2 ms. La longueur d'onde d'excitation est de 285 nm. Le spectre d'émission est acquis entre 450 et 650 nm. 10 Exemple 14 : Marquage et détection des semences par la solution aqueuse F On prélève une masse de 1000 grammes de semences (blé, maïs ou orge) dans laquelle on introduit 10 millilitres de la solution F (exemple 6) à l'aide d'une pipette. On agite vigoureusement pendant 5 minutes. Après séchage sous air sec pendant 12 heures, le processus de marquage est terminé. Quelques graines de semences sont placées sur un 15 porte échantillon. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. La fente d'excitation est fixée à 10 nm et la fente d'émission est fixée à 10 nm. Le délai est fixé à 0.2 ms et le temps d'acquisition est fixé à 2 ms. La longueur d'onde d'excitation est de 285 nm. Le spectre d'émission est acquis entre 450 et 650 nm. 20 Exemple 15 : Marquage et détection des semences par l'émulsion G On prélève une masse de 1000 grammes de semences (blé, maïs ou orge) dans laquelle on introduit 10 millilitres de la solution G (exemple 7) à l'aide d'une pipette. On agite vigoureusement pendant 5 minutes. Après séchage sous air sec pendant 12 heures, le processus de marquage est terminé. Quelques graines de semences sont placées sur un 25 porte échantillon. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. La fente d'excitation est fixée à 20 nm et la fente d'émission est fixée à 10 nm. Le délai est fixé à 0.1 ms et le temps d'acquisition est fixé à 2 ms. La longueur d'onde d'excitation est de 285 nm. Le spectre d'émission est acquis entre 450 et 650 nm. 21 Exemple 16 : Marquage et détection des semences par la solution organique H On prélève une masse de 1000 grammes de semences (blé, maïs ou orge) dans laquelle on introduit 10 millilitres de la solution H (exemple 8) à l'aide d'une pipette. On agite vigoureusement pendant 5 minutes. Après séchage sous air sec pendant 12 heures, le 5 processus de marquage est terminé. Quelques graines de semences sont placées sur un porte échantillon. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. L'émission est analysée spectralement à l'aide d'un spectrophotomètre. La fente d'excitation est fixée à 20 nm et la fente d'émission est fixée à 10 nm. Le délai est fixé à 0.1 ms et le temps d'acquisition est fixé à 2 ms. La longueur d'onde d'excitation est de 285 10 nm. Le spectre d'émission REVENDICATIONS1. Procédé de marquage de semences, ledit procédé comprenant la mise en contact d'une semence avec une solution aqueuse, huileuse, ou une émulsion comprenant un traceur détectable par fluorescence en temps résolu. 2. Procédé de marquage selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdites semences sont des semences de céréales, par exemple de blé, de maïs, d'orge, de graminées ou de pseudo-céréales. 3. Procédé de marquage selon les revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que ladite solution aqueuse, huileuse ou émulsion est mise en oeuvre conjointement avec des solutions d'enrobage ou de pelliculage des semences comprenant des adjuvants, tels que des pelliculants, enrobants ou colorants, et le cas échéant, des substances actives telles que des fongicides ou insecticides. 4. Procédé de marquage selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ledit traceur est incorporé dans une solution d'enrobage ou de pelliculage de semences et ladite solution d'enrobage ou de pelliculage est appliquée sur la semence. 5. Procédé de marquage selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que ledit traceur est un cation de terre rare, ou un complexe de terre rare. 6. Procédé de marquage selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que ledit traceur est un cation de terre rare ou complexe de terre rare, lesdites terres rares étant choisies parmi les lanthanides, par exemple choisi parmi Gd, Dy, Lu, Yb, Sm, Ho, Eu, Tb, Nd, Er ou leurs mélanges, par exemple du terbium ou de l'europium. 7. Procédé de marquage selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel ladite solution huileuse est choisie parmi les huiles végétales, les huiles blanches paraffiniques, les huiles essentielles, l'huile de colza estérifiée, et l'huile de soja époxydée. 8. Semence marquée selon le procédé de marquage de l'une quelconque des revendications 1 à 7. 9. Semence marquée, comprenant au moins un traceur ou une combinaison de traceurs, détectable(s) par fluorescence en temps résolu, par exemple dans un enrobage. 10. Semence marquée, selon la revendication 9, caractérisée en ce que ledit traceur est un cation de terre rare ou complexe de terre rare, de préférence un lanthanide, par exemple le terbium, l'europium ou leurs mélanges. 23 11. Procédé d'identification d'une semence marquée selon l'une quelconque des revendications 9 ou 10, caractérisé en ce qu'il comprend la détection par fluorescence en temps résolu du ou des traceurs éventuellement présents sur la semence. 12. Procédé d'identification selon la revendication 11, caractérisé en ce que la détection se 5 fait semence par semence. 13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape de tri des semences selon la présence ou l'absence de détection du ou des traceurs sur chaque semence. 14. Solution destinée à être appliquée sur les semences en l'état ou après dilution, 10 comprenant un cation de terre rare ou complexe de terre rare et un ou plusieurs des composés suivants : - des substances actives, à action phytosanitaire, par exemple bactéricide, fongicide ou insecticide, régulateur de croissance, agent de germination - des formulants inertes, tels que des solvants organiques ou de l'eau, des dispersants, 15 des émulgateurs, des tensioactifs, des mouillants ou des colorants, agent anti- déshydratations - des adjuvants, tels que des pelliculants ou des enrobants. 15. Poudre soluble pour le traitement des semences, comprenant des sels de lanthanides et au moins un adjuvant, tel qu'un pelliculant ou un enrobant, apte à l'enrobage de 20 semences après dilution dans une solution aqueuse ou huileuse.