Brevet FR3069246A1 — publié le 20190125

CONJUGUES DE PYROPHEOPHORBIDE ET LEURS UTILISATIONS La présente invention concerne le domaine des photosensibilisateurs et, plus particulièrement, leurs utilisations dans des protocoles de thérapie photodynamique pour traiter un cancer, notamment un cancer des ovaires. ARRIERE-PLAN TECHOLOGIQUE DE L'INVENTION Le cancer de l'ovaire représente 4500 nouveaux cas chaque année en France. Le mauvais pronostic de la maladie est lié au retard diagnostique puisque la majorité des cas sont diagnostiqués aux stades III et IV de la Fédération Internationale de Gynécologie Obstétrique (FIGO), et le taux de survie diminue avec l'avancement de la maladie. Le cancer ovarien est responsable de la majorité des décès par cancer gynécologique aux États-Unis et en Europe occidentale. Environ 3500 décès lui sont attribués chaque année en France. La maladie évolue fréquemment vers l'apparition de métastases sous la forme d'une carcinose péritonéale, ce qui correspond à la présence de nombreuses tumeurs à la surface des organes de la cavité abdomino-pelvienne. Le péritoine est une membrane séreuse continue (formée par une couche simple de cellules mésothéliales) qui tapisse l'abdomen, le pelvis et les viscères, délimitant l'espace virtuel de la cavité péritonéale. On distingue le péritoine viscéral (qui tapisse l'extérieur des organes) et le péritoine pariétal (qui tapisse la face interne des parois de l'abdomen). La prise en charge actuelle associe, lorsqu'elle est possible, une chirurgie à une chimiothérapie reposant sur l'utilisation de sels de platine, et dans certains cas à des thérapies ciblées. Il est admis que l'absence de lésions résiduelles après la chirurgie est le facteur principal de bon pronostic. La capacité du traitement chirurgical à éradiquer l'ensemble des implants tumoraux est donc décisive. La chimiothérapie systémique adjuvante ou néo-adjuvante a permis une amélioration des taux de survie à cinq ans, surtout dans les stades précoces : 81% pour les stades I et II après trois cycles de chimiothérapie associant carboplatine et paclitaxel. Dans le cadre d'une cytoréduction 2 maximale et en complément d'une chirurgie de réduction tumorale macroscopiquement complète, des stratégies thérapeutiques sont envisageables telles que la chimiothérapie intrapéritonéale et la thérapie photodynamique intrapéritonéale. Malgré de nombreux essais cliniques, le bénéfice de la chimiothérapie intrapéritonéale n'est pas démontré dans 5 cette indication et cette option n'est pas recommandée en dehors d'essai clinique. Contrairement à la chimiothérapie intrapéritonéale, avec ou sans hyperthermie, le recours à un photosensibilisateur ciblant de manière sélective les lésions précoces, et uniquement ces lésions, permettrait de réduire la toxicité du traitement, l'action de la lumière n'ayant 10 lieu qu'en présence de photosensibilisateurs au sein du tissu tumoral. Il pourrait également permettre de traiter les métastases microscopiques qui sont ignorées lors de la chirurgie. Ainsi, le recours à des photosensibilisateurs plus spécifiques ciblant des récepteurs surexprimés par les cellules tumorales ovariennes pourrait renforcer l'efficacité de la thérapie photodynamique (PDT). 15 Dans ce contexte, Schneider et al. (Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2005, 13, 27992808) ont synthétisé un photosensibilisateur comprenant un motif triphénylporphyrinyl conjugué avec l'acide folique (TPP-FA) présentant à la fois des propriétés fluorescentes et antiprolifératives intéressantes pour une application en thérapie photodynamique. Plus 20 particulièrement, Azaïs et al. (Photodiagnosis and Photodynamic Therapy, 2016, 13, 130- 138) ont démontré sur modèle animal que ce photosensibilisateur était notamment spécifique des métastases péritonéales des cancers épithéliaux de l'ovaire et ont ainsi suggéré son utilisation dans le développement de protocoles de thérapie photodynamique intrapéritonéale non toxiques pour le patient. Toutefois, ce photosensibilisateur présente 25 d'une part une fluorescence très faible empêchant ainsi sa détection avec les dispositifs médicaux couramment utilisés par les gynécologues et d'autre part une faible stabilité. You et al. (Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2015, 23, 1453-1462) ont également développé des conjugués de phéophorbide-a, notamment un photosensibilisateur 30 comprenant un motif phéophorbide-a conjugué avec l'acide folique via un bras espaceur de type polyéthylène glycol (Pheo-PEG-FA). You et al. ont notamment montré que ce photosensibilisateur (Pheo-PEG-FA) ciblait les récepteurs aux folates, et pouvait être 3 ainsi utilisé dans des protocoles de thérapie photodynamique pour traiter les cancers surexprimant les récepteurs à l'acide folique au vu de ses propriétés fluorescentes. Toutefois ce photosensibilisateur présente une fluorescence relativement modérée. 5 Ainsi, il existe aujourd'hui un réel besoin de développer de nouveaux photosensibilisateurs pour être utilisés en thérapie photodynamique. Ces photosensibilisateurs doivent à la fois présenter une bonne efficacité thérapeutique et cibler de manière sélective les lésions pour ne pas endommager les tissus sains, et une fluorescence suffisante afin de visualiser ces lésions au moyen de dispositifs médicaux. 10 RESUME DE L'INVENTION Devant cette problématique, les inventeurs ont synthétisé à l'aide d'un procédé garantissant d'excellents rendements un nouveau photosensibilisateur comprenant un 15 motif pyrophéophorbide-a conjugué avec l'acide folique via un bras espaceur de type polyéthylène glycol (Pyro-PEG-FA). L'analyse de ce photosensibilisateur a permis de mettre en évidence des propriétés physicochimiques améliorées par rapport aux conjugués proches structurellement décrits ci-dessus ainsi qu'une bonne stabilité à la lumière. Les inventeurs ont également démontré que ce nouveau photosensibilisateur 20 permettait de cibler spécifiquement les métastases péritonéales microscopiques des cancers épithéliaux de l'ovaire sans altérer la qualité de la réponse immunitaire effectrice antitumorale. La présente invention concerne donc un composé de formule (I) : \--\ NH H NI\*NH2 I 0 N NN H N OH HO 0 et ses sels pharmaceutiquement acceptables. L'invention concerne également l'utilisation de ce composé de formule (I) en tant que 5 médicament. Selon un mode particulier de l'invention, le composé de formule (I) est utilisé pour le traitement d'un cancer, et notamment par thérapie photodynamique. Particulièrement, le composé de formule (I) de l'invention est utilisé pour réduire le risque de développer des 10 métastases. De préférence, le composé de formule (I) est utilisé pour le traitement d'un cancer choisi parmi un cancer des ovaires, des poumons, du rein, de l'endomètre, colorectal, du sein, cancer du pancréas, du cerveau, gastrique, du foie, de la prostate, des testicules, de la vessie, ou de la tête et du cou. Plus préférentiellement, le composé de formule (I) est utilisé pour le traitement d'un cancer des ovaires. 15 Selon un autre mode particulier, le composé de formule (I) est destiné à être administré par voie intrapéritonéale ou par voie intraveineuse. Un autre objet de l'invention concerne un procédé de préparation d'un composé de 20 formule (I) tel que représenté ci-dessus comprenant une étape de couplage entre un composé de formule (II) : 4 o 5 H Nc)0 N H 2 et l'acide folique. Un autre objet de l'invention concerne également une utilisation du composé de formule 5 (I) tel que représenté ci-dessus en tant que marqueur fluorescent. Un autre objet de l'invention concerne aussi une méthode d'imagerie chez un sujet comprenant la visualisation de la fluorescence émise par un composé de formule (I) préalablement administré audit sujet et photoactivé par une source lumineuse. 10 LEGENDE DES FIGURES Figure 1 : Procédé de synthèse du composé Pyro-PEG-FA de formule (I). Figure 2: Photodégradation de l'acide folique (FA), du composé Pyro-PEG-FA de 15 formule (I) (Pyro-S-FA), du composé Pheo-PEG-FA (Pheo-S-FA), et du composé TPPFA (Pl-S-FA) au cours du temps (365 nm, 5mW/cm2, [0,45 mn dans le DMSO). Figure 3 : Mesure du taux relatif d'ATP dans les cellules tumorales ovariennes SKOV-3 (A) et OVCAR-3 (B) soumises à la PDT. Figure 4A: Photographie d'une image de coelioscopie chez un rat immunocompétent 20 ayant développé une carcinose péritonéale après injection du composé Pyro-PEG-FA de formule (I). Figure 4B : Photographie de la figure 4A en lumière blanche. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION 25 Tel qu'illustré et démontré par les inventeurs dans les exemples ci-dessous, la présente invention fournit un nouveau photosensibilisateur couplé à un folate de formule (I) : 6 i) permettant de cibler spécifiquement les métastases péritonéales microscopiques des cancers épithéliaux de l'ovaire, ii) ayant une bonne efficacité thérapeutique, iii) offrant une fluorescence suffisante pour visualiser les lésions à l'aide de 5 dispositifs médicaux conventionnels, iv) nécessitant peu d'étapes pour sa synthèse, et v) activant la prolifération des cellules immunitaires. Composé Pyro-PEG-FA de formule (I) 10 La présente invention porte donc sur un composé de formule (I) : NNyNH2 H N,N,,N OH H N HO 0 et ses sels pharmaceutiquement acceptables. 15 Ce composé de formule (I) est un composé conjugué comprenant un motif pyrophéophorbide-a conjugué avec l'acide folique via un bras espaceur de type polyéthylène glycol (Pyro-PEG-FA). Le motif pyrophéophorbide-a apporte au composé de formule (I) une fluorescence satisfaisante pour visualiser les lésions. Le bras espaceur de type polyéthylène glycol comprend deux monomères de polyéthylène glycol PEG2. Le 20 motif acide folique permet de cibler spécifiquement les récepteurs de l'acide folique. 7 Dans la présente description, le composé de formule (I) est représenté par « Pyro-PEGFA » ou « Pyro-PEG2-FA ». L'expression "sel(s) pharmaceutiquement acceptable(s)" désigne les sels du composé 5 d'intérêt de formule (I) qui possède l'activité biologique souhaitée. Les sels pharmaceutiquement acceptables comprennent des sels de groupes acides ou basiques présents dans le composé spécifié. Les sels d'addition acide pharmaceutiquement acceptables comprennent, mais ne sont pas limités à, des sels de chlorhydrate, bromhydrate, iodhydrate, nitrate, sulfate, bisulfate, phosphate, phosphate acide, 10 isonicotinate, acétate, lactate, salicylate, citrate, tartrate, pantothénate, bitartrate, ascorbate, succinate, maléate, gentisinate, fumarate, gluconate, glucaronate, saccharate, formate, benzoate, glutamate, méthanesulfonate, éthanesulfonate, benzènesulfonate, ptoluènesulfonate et le pamoate (c'est-à-dire, 1,1'- méthylène-bis-(2-hydroxy-3- naphtoate)). Des sels de base adaptés comprennent, mais ne sont pas limités à, des sels 15 d'aluminium, calcium, lithium, magnésium, potassium, sodium, zinc, et diéthanolamine. Une liste de sels pharmaceutiquement acceptables est notamment publiée dans la revue de Berge et al. (J. Pharm. Sci. 1977, 66(1), 1-19). Le composé de formule (I) peut être synthétisé à l'aide d'un procédé simple comprenant 20 une étape de couplage entre un composé de formule (II) : H N00 N H 2 et l'acide folique. Plus particulièrement, le composé de formule (I) peut être synthétisé à l'aide d'un procédé 25 comprenant trois étapes à partir du pyrophéophorbide-a de formule (IV) tel que commercialisé par la société Boc sciences. Selon un mode de réalisation préféré, le composé de formule (I) est préparé par un procédé comprenant les étapes suivantes : 8 (a) une étape de couplage entre un composé de formule (IV) : (IV), avec du N-Boc-2,2'-(éthylènedioxy)diéthylamine, pour obtenir un composé de formule (III) : H N ()/\°NHBoc 5 0 b) une étape de déprotection du composé de formule (III) obtenu à l'étape a) pour obtenir un composé de formule (II) : H N 0 0 NH2 0 (II), et c) une étape de couplage entre le composé de formule (II) obtenu à l'étape b) et l'acide 10 folique pour obtenir un composé de formule (I) : 9 H N HO 0 Ce procédé simple qui ne nécessite que trois étapes permet d'obtenir le composé de formule (I) avec des rendements très satisfaisants, qui sont notamment supérieurs par rapport aux rendements obtenus par le procédé mettant en oeuvre le composé de You et 5 al. (Pheo-PEG-FA). Ce procédé est donc plus avantageux et est en adéquation avec une application industrielle. Application 10 Le composé de formule (I) tel que décrit ci-dessus peut être utilisé en tant que médicament, de préférence dans le traitement du cancer. Au sens de la présente invention, les termes « traitement » et « traiter » désignent une amélioration, la prophylaxie ou l'inversion d'une maladie ou d'un trouble, en 15 l'occurrence un cancer. Par « traitement d'un cancer », on entend également la réduction du nombre des métastases et/ou la réduction du risque de développer des métastases. Dans le cadre du traitement des métastases, l'objectif est notamment de diminuer le taux de récidive ou de rechute pour le patient de développer un cancer. Par « traitement d'un cancer », on entend aussi l'inhibition de la prolifération des cellules cancéreuses. 20 10 Sans vouloir être lié à un mécanisme d'action particulier, le composé de formule (I) permet d'activer le système immunitaire, participant ainsi à la lutte contre le cancer. Ainsi, il est proposé d'utiliser le composé de formule (I) selon l'invention dans le traitement du cancer par immunothérapie, notamment par activation du système 5 immunitaire après traitement photodynamique. Plus particulièrement, le composé de formule (I) est utilisé dans le traitement du cancer par thérapie photodynamique. 10 La thérapie photodynamique, communément désignée par l'acronyme PDT consiste à mettre en contact un tissu pathologique avec une molécule photoactivable (nommée photosensibilisateur ou agent photosensibilisant), en l'occurrence le composé de formule (I) dans le cadre de la présente invention, puis à illuminer ce tissu avec une lumière de longueur d'onde (couleur) en adéquation avec les caractéristiques d'activation du 15 photosensibilisateur. Après activation de la molécule par la lumière et réaction avec l'oxygène du tissu, des espèces très toxiques sont produites localement pour induire in fine la destruction de la lésion cancéreuse. L'avantage majeur de la PDT est sa sélectivité. En effet, la lumière utilisée, seule n'est pas nocive, le photosensibilisateur sans lumière n'est pas toxique. Pour induire la réaction, il faut une action conjointe de la lumière, du 20 photosensibilisateur et de l'oxygène. Ainsi, en optimisant la concentration du photosensibilisateur et la dose de lumière, il est possible de détruire sélectivement des cellules. Ainsi, l'invention concerne aussi un composé de formule (I) tel que décrit ci-dessus pour 25 son utilisation dans le traitement du cancer, dans laquelle une dose efficace du composé de formule (I) est mise au contact des cellules cancéreuses et/ou des métastases qui sont ensuite exposées à une source lumineuse. L'invention concerne également une méthode pour traiter un cancer comprenant les 30 étapes de mise en contact des cellules cancéreuses avec une dose efficace du composé de formule (I) tel que décrit ci-dessus, et d'exposition des cellules cancéreuses à une source lumineuse. 11 Par « dose efficace », on entend une dose suffisante pour obtenir une fluorescence satisfaisante et obtenir ainsi l'effet thérapeutique désiré. L'homme du métier est capable d'adapter cette dose en fonction de la sévérité et du type de cancer à traiter. Néanmoins, une dose efficace du composé de formule (I) peut être comprise entre 0,1 mg/kg et 100 5 mg/kg, entre 0,1 mg/kg et 50 mg/kg, entre 0,1 mg/kg et 10 mg/kg, de préférence entre 0,1 mg/kg et 5 mg/kg, et de manière encore plus préférée entre 0,1 mg/kg et 3 mg/kg. La photoactivation du photosensibilisateur, en l'occurrence le composé de formule (I) dans le contexte de la présente invention, peut être obtenue par toute sorte de source 10 lumineuse connue de l'homme du métier. En particulier, la photoactivation peut être réalisée par lumière artificielle (lampes, lasers) avec des radiations telles que des radiations de type ultra-violet, infrarouge, ou par lumière visible ou naturelle. Le mode d'illumination à l'aide de dispositifs lumineux placés dans la cavité du corps humain adéquate est choisi par l'homme du métier en fonction du type de cancer à traiter. Par 15 exemple, pour un cancer du foie, le dispositif lumineux est placé dans la cavité péritonéale. Pour un cancer des ovaires, le dispositif lumineux est placé dans la cavité pelvienne ; etc. Comme exemples non-limitatifs de dispositifs lumineux, on peut citer un ballon lumineux tel que décrit par Munck et al. (Photodiagnosis and Photodynamic Therapy, 2016, 16, 23-26) ou un textile lumineux (LEF) tel que décrit par Guyon et al. 20 (Journal of Biomedical Optics, 2012, 17(3)). La longueur d'onde de la lumière utilisée est choisie de manière à obtenir un effet photosensibilisateur le plus efficace. En particulier, une longueur d'onde comprise entre 300 et 800 nm, de préférence entre 400 et 700 nm, et de manière plus préférée autour de 25 668 nm est utilisée. L'irradiation est généralement appliquée à une dose comprise entre 1 et 200 joules/cm2, de préférence entre 1 et 150 joules/cm2, et de manière encore plus préférée autour de 150 joules/cm2. Sur des cellules, une dose comprise entre 1 et 10 joules/cm2 est généralement 30 appliquée. 12 De préférence, une source lumineuse avec une intensité lumineuse de 1 à 150 mW/cm2, de 1 à 100 mW/cm2, de 30 à 70 mW/ cm2, de préférence autour de 50 mW/ cm2 est utilisée. Sur des cellules, une source lumineuse avec une intensité lumineuse de 1 à 10 mW/cm2, ou encore mieux d'environ 5 mW/cm2 est utilisée. La photoactivation du photosensibilisateur et l'exposition des cellules cancéreuses à une source lumineuse peut être réalisée pendant une période allant de 1 minute à 3 heures, 10 minutes à 2 heures, 30 minutes à 90 minutes, de préférence pendant une durée d'une heure ou 60 minutes. L'invention décrite dans la présente demande est préférentiellement mise en oeuvre chez les êtres humains. Le composé de formule (I) présente un motif folate et peut donc être utilisé dans le cadre 15 de traitement par thérapie photodynamique pour tout type de cancer exprimant des récepteurs folate. Une liste de ces cancers exprimant des récepteurs folate est décrite par Assaraf et al. (Drug resistance Updates, 2014, 17, 89-95) et inclue notamment le cancer des ovaires, des poumons, du rein, de l'endomètre, colorectal, du sein, cancer du pancréas, du cerveau, gastrique, du foie, de la prostate, des testicules, de la vessie, ou de la tête et 20 du cou. Selon un mode préféré de l'invention, le cancer est choisi parmi un cancer des ovaires, des poumons, du rein, de l'endomètre, colorectal, du sein, cancer du pancréas, du cerveau, gastrique, du foie, de la prostate, des testicules, de la vessie, ou de la tête et du cou. Selon 25 un mode encore plus préféré, le cancer est un cancer des ovaires. Le composé de formule (I) peut être administré au patient par tout type de voies connues de l'homme du métier en fonction du type de cancer à traiter. Par exemple, la voie intrapéritonéale ou la voie par intraveineuse peuvent être utilisées pour traiter le cancer 30 des ovaires. Selon un mode préféré de l'invention, le composé de formule (I) est destiné à être administré par voie intrapéritonéale ou par voie intraveineuse, de préférence par voie intraveineuse. 5 10 13 Au vu de ses propriétés d'absorption et de fluorescence améliorées, le composé de formule (I) peut être utilisé en tant que marqueur fluorescent. Par exemple, le composé de formule (I) en tant que marqueur fluorescent peut être utilisé dans le traitement du cancer par chirurgie guidée par la fluorescence, et/ou dans des méthodes d'imagerie ou 5 de diagnostic. Il est ainsi décrit une méthode d'imagerie ou de diagnostic d'un cancer chez un sujet, comprenant l'administration et l'irradiation ou la photoactivation d'un composé de formule (I) audit sujet, et la visualisation de la fluorescence émise. Cette méthode permet 10 de visualiser les récepteurs de l'acide folique qui sont surexprimés dans les cellules cancéreuses. Cette imagerie permet ainsi de délimiter la zone cancéreuse et, également, de guider un geste chirurgical de type ablation, le cas échéant. Un objet de l'invention est donc une méthode d'imagerie chez un sujet comprenant la 15 visualisation de la fluorescence émise par un composé de formule (I) préalablement administré audit sujet et photoactivé par une source lumineuse. Au vu de ses mêmes propriétés, le composé de formule (I) peut aussi être utilisé en tant que photosensibilisateur dans des applications cosmétiques et dermatologiques telles que 20 le photorajeunissement, le traitement de l'acné vulgaire ou le vieillissement cutané. La présente invention porte donc également sur une utilisation non-thérapeutique du composé de formule (I) décrit ci-dessus en tant que photosensibilisateur. 25 D'autres aspects et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. 30 14 EXEMPLES Exemple 1 : Synthèse du conjugué Pyro-PEG-FA de formule (I) selon l'invention et du conjugué Pheo-PEG-FA de You et al. 5 Le procédé de synthèse du conjugué Pyro-PEG-FA comprenant trois étapes est décrit ci-dessous et est également illustré par la figure 1. Etape a) Synthèse de Pyro-PEG-NHBoc (Formule III) 10 100 mg de pyropheophorbide a (0,19 mmol), 46,4 mg de N-Boc-2,2'- (éthylènedioxy)diéthylamine (0,19 mmol), 71,7 mg (0,38 mmol) d'EDC et 30,5 mg (0,25 mmol) de DMAP ont été solubilisés dans 30 mL de THF. Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante, sous atmosphère d'azote et dans l'obscurité pendant 24 heures. Le solvant a ensuite été évaporé. La purification du matériau brut a été réalisée 15 sur colonne chromatographique de gel de silice avec 5% d'Et0H dans CH2C12. Le composé Pyro-PEG-NHBoc est obtenu sous la forme d'un solide vert foncé avec un rendement de 92 % (132 mg). Rf = 0.27 (CH2C12/Et0H = 95/5, v/v). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): Ô (ppm) = -2.01 (s, 2H, NH, Pyro(a)-COOH), 1.30 (s, 9H, Boc), 1.60 (t, 3H, CH3, Pyro(a)-COOH), 1.79 (d, 3H, CH3, Pyro(a)-COOH), 2.98 (q, 2H, CH2), 3.15, 3.35, 20 3.59 (3 x s, 3H x 3, CH3, Pyro(a)-COOH), 3.46 (q, 2H, CH2), 3.60 (m, 8H, CH2), 3.65 (m, 2H, CH2, Pyro(a)-COOH), 4.31, 4.56 (2 x d, 1H x 2, CH, Pyro(a)-COOH), 5.16 (q, 2H, CH2, Pyro(a)-COOH), 6.34, 6.40 (2 x d, 1H x 2, =CH2, Pyro(a)-COOH), 6.66 (s, 1H, NH-spacer), 7.83 (t, 1H, NH-spacer), 8.19 (q, 1H, -CH=, Pyro(a)-COOH), 8.88, 9.38, 9.65 (3x s, 1H x 3, CH, Pyro(a)-COOH). HRMS (ESI+): m/z calc. Pour C44H56N606 25 [M+I-1]+ 765.4334; trouvée 765.4304. Etape b) Synthèse de Pyro-PEG-NfIg_(Formule II) Le composé Pyro-PEG-NHBoc a été solubilisé dans 2 mL de TFA. La solution a été agitée pendant 2 heures à température ambiante dans l'obscurité et sous azote puis 30 lyophilisée afin d'éliminer le TFA. Le résidu coloré a été solubilisé dans du CH2C12 (10 mL), et du carbonate de potassium anhydre a été ajouté jusqu'à ce que la couleur change de bleu en vert. Après filtration, la phase organique a été concentrée. La purification du 15 matériau brut a été réalisée sur colonne chromatographique de gel de silice avec CH2C12 / Et0H (de 90:10 à 50:50, v / v), donnant Pyro-PEG-NH2 (103 mg, 90%) sous la forme d'un solide vert. Rf = 0.17 (CH2C12/Et0H = 1:1, v/v). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): Ô (ppm) = -1.94 (s, 2H, NH, Pyro(a)-COOH), 1.63 (t, 3H, CH3, Pyro(a)-COOH), 1.79 (d, 5 3H, CH3, Pyro(a)-COOH), 2.87 (t, 2H, CH2), 3.17 (q, 2H, CH2), 3.23-3.62 (3 x s, 3H x 3, CH3, Pyro(a)-COOH), 3.50 (s, 8H, CH2), 3.71 (m, 2H, CH2, Pyro(a)-COOH), 4.30, 4.58 (2 x d, 1H x 2, CH, Pyro(a)-COOH), 5.17 (q, 2H, CH2, Pyro(a)-COOH), 6.22, 6.39 (2 x d, 1H x 2, =CH2, Pyro(a)-COOH), 7.98 (t, 1H, NH), 8.18 (s, 2H, NH2), 8.24 (q, 1H, - CH=, Pyro(a)-COOH), 8.90, 9.45, 9.73 (3x s, 1H x 3, C20-10-5, Pyro(a)-COOH). HRMS 10 (ESI+): m/z calc. pour C39H48N604 [M+FI]F 665.3810; trouvée 665.3801. Etape c) Synthèse de Pyro-PEG-FA (Formule I) De l'acide folique (0,95 eq. 63 mg) et du DCC (1 éq., 31 mg) ont été solubilisés dans un mélange de DMSO anhydre (5 mL) et de pyridine (2 mL). Le mélange a été agité pendant 15 15 min à température ambiante, à l'obscurité et sous azote. Pyro-PEG-NH2 (0,9 éq.) a ensuite été ajouté et le mélange réactionnel a été agité pendant 24h à température ambiante. La solution a lentement été versée dans de l'éther diéthylique froid vigoureusement agité (45 mL). Par centrifugation, le précipité obtenu a été recueilli et lavé avec de l'éther diéthylique (50 mL). La poudre de Pyro-PEG-FA a été séchée sous 20 vide (107 mg, 69%). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): -1.97 (s, 2H, NH, Pyro(a)-COOH), 1.62 (t, 3H, C8 : CH3, Pyro(a)-COOH), 1.76 (d, 3H, C18 : CH3, Pyro(a)-COOH), 4.32 (2H, CH+C17, FA+Pyro(a)-COOH), 4.40 (d, 2H, CH2, FA), 4.56 (d, 1H, C18, Pyro(a)- COOH), 5.17 (q, 2H, C13 : CH2, Pyro(a)-COOH), 6.21, 6.50 (2 x d, 1H x 2, C3 : =CH2, Pyro(a)-COOH), 6.60 (d, 2H, CHarom., FA), 7.29 (br, 3H, NH + NH2), 7.61 (d, 25 2H, CHarom., FA), 7.81 (s, 2H, NH2), 7.92 (d, 1H, NH, FA), 8.20 (q, 1H, C3 : -CH=, Pyro(a)-COOH), 8.59 (d, 1H, CHarom., FA), 8.88, 9.42, 9.68 (3x s, 1H x 3, C20-10-5, Pyro(a)-COOH). HRMS (ESI+): m/z calc. for C58H651\4309 [M+Na]+ 1110.4920; trouvé 1110.4872. 30 Le conjugué de You et al. (Pheo-PEG-FA) a été synthétisé selon le même procédé de trois étapes décrit ci-dessus. Les rendements obtenus pour chacune des 3 étapes sont décrites dans le tableau 1 ci-dessous. 16 Tableau 1: Composé Prix Rdt Rdt Rdt Rdt étape a) étape b) étape e) Total Pheo-PEG-FA (You et al.) 1240E / lg 63 % 100 % 49 % 31 % (Inochem) Pyro-PEG-FA (Formule I) 1280 E / lg 92 % 90 % 69 % 57 % (Boc Sciences) De manière surprenante, le procédé de synthèse décrit ci-dessus a permis d'obtenir le composé de formule (I) avec un rendement total deux fois supérieur par rapport au 5 composé de You et al. La synthèse du composé de formule (I) est donc plus avantageuse au niveau industriel que le la synthèse du composé de You et al., notamment d'un point de vue économique. Exemple 2: Propriétés photophysiques du conjugué Pyro-PEG-FA de formule (I) 10 selon l'invention, du conjugué Pheo-PEG-FA de You et al., et du conjugué TPP-FA de Schneider et al. Matériel et méthode Les spectres d'absorption ont été mesurés avec un spectrophotomètre UV-visible double 15 faisceaux UV-3600 (SHIMADZU, MARNE LA VALLEE, France). Les spectres de fluorescence ont été mesurés avec un spectrofluorimètre Fluorolog FL3-222 (HORIBA Jobin Yvon, LONGJUMEAU, France) équipé d'une lampe à arc xénon de 450 W, d'un compartiment porte-cuve thermostaté (25°C), d'un photomultiplicateur UV-visible R928 (HAMAMATSU Japon) et d'un détecteur infrarouge InGaAs refroidi à l'azote liquide 20 (DSS-16A020L Electro-Optical System Inc, Phoenixville, PA, USA). Le faisceau d'excitation est diffracté par un monochromateur double réseaux SPEX (1200 traits/mm blasé à 330 nm). La fluorescence a été mesurée par le détecteur UV-Visible via le monochromateur d'émission double réseaux SPEX (1200 traits/mm blasé à 500 nm). La production d'oxygène singulet a été mesurée par le détecteur infrarouge via le 25 monochromateur d'émission double réseaux SPEX (600 traits/mm blasé à 1 !lm) et un filtre passe haut à 780 nm. Tous les spectres ont été mesurés en utilisant des cuves quartz à 4 faces. Tous les spectres d'émission (fluorescence et luminescence de l'oxygène 17 singulet) ont été rapportés à la même absorbance (inférieure à 0,2) avec les corrections de lampe et de photomultiplicateur. Le rendement quantique en fluorescence a été déterminé par l'équation (1) : (1) 5 où gief et (Dfo, If et Ifo, DO et DOO, n et no sont les rendements quantiques, les intensités de fluorescence, les densités optiques, les indices de réfraction de l'échantillon et de la référence respectivement. La référence utilisée pour le calcul du rendement quantique de fluorescence est la tétraphénylporphyrine dans le toluène avec un (fo de 0,11. 10 Le rendement quantique de production d'oxygène singulet est déterminé par l'équation (2) : (2) où (DA et (DAO, I et Io, DO et DOO sont les rendements quantiques de production d'oxygène singulet, les intensités de production d'oxygène singulet et les densités optiques de 15 l'échantillon et de la référence respectivement. La référence utilisée pour le calcul du rendement quantique de production d'oxygène singulet est le Rose de Bengale dans l'éthanol avec un (pAo de 0,68 Les expériences de durées de vie de fluorescence ont été réalisées en utilisant pour l'excitation une diode laser pulsée émettant à 407 nm (LDH-P-C-400M, FWHM REVENDICATIONS1. Composé de formule (I) : (4, et ses sels pharmaceutiquement acceptables. 2. Composé selon la revendication 1, pour son utilisation en tant que médicament. 3. Composé selon la revendication 1, pour son utilisation dans le traitement du cancer. 10 4. Composé pour son utilisation selon la revendication 3, dans le traitement du cancer par thérapie photodynamique. 5. Composé pour son utilisation selon les revendications 3 ou 4, dans la réduction du 15 risque de développer des métastases. 6. Composé pour son utilisation selon la revendication 3 ou 4, dans laquelle le cancer est choisi parmi un cancer des ovaires, des poumons, du rein, de l'endomètre, colorectal, du sein, cancer du pancréas, du cerveau, gastrique, du foie, de la prostate, des testicules, de 20 la vessie, ou de la tête et du cou. 33 7. Composé pour son utilisation selon la revendication 6, dans laquelle le cancer est un cancer des ovaires. 8. Composé pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 2 à 7, dans 5 laquelle ledit composé est destiné à être administré par voie intrapéritonéale ou par voie intraveineuse. 9. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) : HO O (1), caractérisé en ce que le procédé comprend une étape de couplage entre un composé de formule (II) : H N 0() NH2 (l), et l'acide folique. 0 NH o 34 10. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : (a) une étape de couplage entre un composé de formule (IV) : 5 avec du N-Boc-2,2'-(éthylènedioxy)diéthylamine, pour obtenir un composé de formule (III) : H " /`0'°`NHBoc 0 b) une étape de déprotection du composé de formule (III) obtenu à l'étape a) pour obtenir un composé de formule (II) : H I' `''' NH2 10 0 (1), et c) une étape de couplage entre le composé de formule (II) obtenu à l'étape b) et l'acide folique pour obtenir un composé de formule (I) : 35