Brevet FR3064481A1 — publié le 20181005

UTILISATION D'UN EXTRAIT DE CHLORELLA SOROKINIANA EN COSMETIQUE ET EXTRAITS PARTICULIERS DE CHLORELLA SOROKINIANA La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'extraits de Chlorella sorokiniana comme agent cosmétique, en particulier pour raviver l'éclat du teint de la peau du visage, ainsi qu'à des extraits spécifiques de Chlorella sorokiniana. L'invention a également pour objet des compositions cosmétiques comprenant de tels extraits, et un procédé cosmétique de soin de la peau. Les actifs cosmétiques agissent sur différentes voies pour procurer leur efficacité et améliorer l'aspect esthétique de la peau. Parmi les différentes voies, l'action sur les mitochondries des cellules de la peau a récemment été étudiée. En effet, les cellules cutanées sont équipées de mitochondries, organites capables de produire de l'énergie sous forme d'adénosine triphosphate (ATP) et qui disposent de leur propre ADN, l'ADN mitochondrial (ADNmt). Les mitochondries sont capables de changer de morphologie en fonction des conditions auxquelles elles sont soumises. Ces modifications sont rendues possibles grâce à un équilibre finement régulé entre deux processus : la fission et la fusion mitochondriale. En fonction de leur état de santé, les mitochondries conditionnent le devenir des cellules et des tissus. Elles sont notamment connues pour influencer la prolifération et la différenciation épidermique (B Hamanaka R., Navdeep S. C. Mitochondrial metabolism as a regulator of keratinocyte differentiation. Cellular Logistics, 3, 1-5 (2013)). Lorsqu'elle est en bonne santé, la mitochondrie joue le rôle d'usine énergétique en produisant de l'ATP. Toutefois, étant particulièrement sensible aux stress notamment oxydatif, son fonctionnement peut être modifié en cas de dommages. La production d'énergie est alors compromise et la production de molécules toxiques tels que les radicaux libres est anormalement accrue. Ces radicaux libres endommagent l'ADN mitochondrial qui, contrairement à son homologue nucléaire, dispose de moyens limités de protection engendrant ainsi une aggravation du dysfonctionnement de l'organite. De plus, la mitochondrie étant le siège de protéines impliquées dans la mort cellulaire, en cas de stress 3064481 2 aigus, des protéines telles que le cytochrome C peuvent être libérées et provoquer la mort de la cellule. A long terme, un dysfonctionnement mitochondrial chronique conduit à un vieillissement cutané accéléré. En fonction du niveau de stress et des dommages mitochondriaux induits, trois systèmes de 5 défense vont entrer en action (Andreux P., Riekelt H. Houtkooper R., Auwerx J. Pharmacological approaches to restore mitochondrial function. Nature reviews, 12, 465-483 (2013)). En cas de faible stress, une première ligne de défense est mobilisée. Elle a pour mission d'empêcher, voir de réparer des dommages mitochondriaux mineurs. Elle fait intervenir des 10 protéines chaperonnes qui agissent sur les protéines endommagées et des systèmes antioxydants qui vont prévenir les dommages oxydatifs induits sur les protéines et l'ADNmt. Trois protéines participent activement à ce premier niveau de défense : la sirtuine 3 (SIRT3), l'aconitase et la HSP27. En cas de stress modéré, le niveau de dommages est plus important et compromet la 15 fonctionnalité de la mitochondrie. Une seconde ligne de défense se met alors en place. Les propriétés dynamiques de la mitochondrie sont sollicitées. Un mécanisme de fusion mitochondriale est initié afin que le contenu de mitochondries saines et faiblement endommagées puisse être mélangé. Il en résulte l'obtention d'un pool de mitochondries homogènes et de nouveau fonctionnelles. 20 En cas de stress aigu, les mitochondries subissent des dommages irréversibles et deviennent potentiellement dangereuses pour la cellule. Elles doivent alors être éliminées. Face à cette problématique, la troisième ligne de défense se met en action au travers du processus de mitophagie, une dégradation par autophagie spécifiquement dédiée aux mitochondries. En raison du vieillissement chronologique ou d'agressions environnementales (radiations 25 ultraviolettes, pollution, etc.), la peau est constamment en « état de stress ». A l'échelle cellulaire, les mitochondries sont les premières endommagées. Leur influence sur le tissu étant très importante, il existe un besoin important de fournir une solution cosmétique naturelle visant à préserver efficacement le fonctionnement de ces organites pour agir sur l'aspect esthétique de la peau et en particulier pour un effet énergisant permettant de raviver le teint. L'objectif de la présente invention est de répondre à ce besoin. A cet effet, l'invention propose d'utiliser un extrait d'une microalgue spécifique Chlorella sorokiniana. 3064481 3 Les microalgues sont à la base de la vie. Parmi les premiers organismes à apparaître sur terre, elles jouent un rôle capital dans les cycles biologiques et la biodiversité terrestre. Elles suscitent un grand intérêt car elles présentent de nombreux avantages : - une biodiversité extraordinaire : il existe 30 000 espèces décrites et entre 200 000 à 1 5 million estimées. De par leur grande capacité d'adaptation, ces organismes sont capables de modifier leur métabolisme et de développer des systèmes de défense qui leur permettent de survivre indépendamment de leur environnement ; - une richesse inépuisable en molécules actives très variées ; - cultivables industriellement, leur production n'a pas d'impact sur l'environnement. 10 Toutes les espèces de microalgues sont différentes et présentent des compositions moléculaires distinctes qui leur confèrent leurs propriétés. Certaines d'entre elles, ou certains extraits de ces microalgues, présentent des propriétés cosmétiques mais les propriétés cosmétiques d'un extrait d'une microalgue particulière ne peuvent être appliquées au même extrait d'une autre microalgue. Ainsi, avec un procédé d'extraction 15 identique l'utilisation d'une autre espèce de Chlorella, ne permet pas d'obtenir un ingrédient cosmétique présentant l'efficacité cosmétique recherchée. Les algues du genre Chlorella sont des algues unicellulaires qui vivent isolées ou en petits groupes de cellules. La cellule est de forme globuleuse ou ellipsoïdale. La paroi cellulaire est lisse et contient une glucosamine (chitosane). Elle ne présente qu'un seul noyau et un seul 20 chloroplaste, généralement situés sur les bords de la cellule. Le chloroplaste ne contient qu'un seul pyrénoïde, recouvert d'une couche d'amidon. Il existe de nombreuses espèces différentes du genre Chlorella. La plus connue, Chlorella vulgaris, est utilisée pour de nombreuses applications, en particulier comme complément alimentaire, mais également en cosmétique. 25 Les extraits de Chlorella actuellement connus et utilisés en cosmétique sont des extraits comprenant essentiellement des protéines, comme cela est décrit notamment dans la demande de brevet FR3031985. Chlorella sorokiniana a une composition particulière et différente de celle de la Chlorella vulgaris. De façon surprenante et avantageuse, un extrait de Chlorella sorokiniana, lorsqu'il 30 est appliqué sur la peau, est capable d'agir sur les mitochondries des cellules de l'épiderme, en assurant leur protection, quel que soit le niveau de stress. Il permet aux mitochondries de s'adapter à leur environnement et favorise son métabolisme. En bonne santé, les 3064481 4 mitochondries participent alors au renouvellement efficace de la barrière pour l'obtention d'une peau éclatante. L'invention a par conséquent pour objet l'utilisation cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokiniana dans une composition cosmétique en tant qu'agent cosmétique, ainsi qu'un 5 procédé de traitement cosmétique pour améliorer l'aspect esthétique de la peau, comprenant l'application sur la peau d'au moins un extrait de Chlorella sorokiniana ou d'une composition en contenant. L'invention vise également un extrait spécifique de Chlorella sorokiniana comprenant au moins des carbohydrates et des protéines, les carbohydrates représentant au moins 36% en 10 poids de matière sèche de l'extrait, ainsi que des compositions cosmétiques contenant un tel extrait. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention, ressortiront de la description en détails de l'invention qui va suivre, en regard d'exemples, d'essais d'efficacité et des figures annexées sur lesquelles : 15 - la Figure 1 représente une photographie au microscope de la biomasse de Chlorella sorokiniana; - la Figure 2 représente une photographie au microscope, prise dans les mêmes conditions que la Figure1, après solubilisation et hydrolyse de la biomasse et avant séparation des phases soluble et insoluble ; 20 - la Figure 3 représente une photographie au microscope, prise dans les mêmes conditions que la Figure1, de l'extrait selon l'invention. DEFINITIONS Par « agent cosmétique» au sens de l'invention, on entend également un principe actif cosmétique ou un agent actif cosmétique, c'est à dire au moins une molécule, 25 préférentiellement un ensemble de plusieurs molécules présentant un effet sur les cellules de la peau. Par « contenant un « X » » ou « comprenant un « X ». », sauf indication contraire, au sens de l'invention on entend qui contient ou comprend au moins un « X ». Par « extrait » de Chlorella sorokiniana au sens de l'invention on entend toute molécule ou 30 mélange de molécules issue(s) de la structure et/ou du milieu intracellulaire de la microalgue Chlorella sorokiniana. Il peut s'agir de molécules natives de la microalgue ou de molécules 3064481 5 obtenues par tout type d'extraction et transformation des molécules natives de la microalgue par exemple par hydrolyse. Ce terme « extrait » exclut la biomasse de Chlorella sorokiniana, telle quelle. Par « hydrolysat » on entend tout extrait de Chlorella sorokiniana, obtenu avec un procédé 5 comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique ou chimique de Chlorella sorokiniana, préférentiellement au moins une étape d'hydrolyse enzymatique. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION L'invention a donc pour objet l'utilisation d'un extrait de Chlorella sorokiniana en cosmétique, non thérapeutique. 10 En effet, selon l'invention un extrait de Chlorella sorokiniana lorsqu'il est appliqué sur la peau, est capable d'améliorer l'aspect esthétique et la texture de la peau. Il est en effet capable d'agir sur les trois voies mécaniques qui conditionnent l'équilibre et le bon fonctionnement des mitochondries de cellules de l'épiderme, à savoir : - le contrôle et la régulation de la qualité mitochondriale, 15 - la dynamique mitochondriale, et - la mitophagie. Afin de maintenir les cellules et tissus dans un bon état de fonctionnement, la mitochondrie fait appel à différentes protéines qui vont assurer le contrôle qualité mitochondrial. Ces protéines ont différentes missions : protéger l'organite des stress radicalaires, favoriser son 20 métabolisme et l'empêcher d'émettre un signal de mort. Parmi ces protéines, on recense trois acteurs majeurs : - La sirtuine 3 (SIRT3) est un membre de la famille des sirtuines, une famille connue pour ses effets positifs sur le métabolisme cellulaire, le maintien de l'intégrité du génome et la résistance aux stress. Localisée au niveau mitochondrial, elle joue un rôle primordial de 25 protection. D'une part, elle permet de lutter contre le stress oxydatif en dé-acétylant ou en activant la production d'enzymes anti-radicalaires (superoxide dismutase ou catalase) (H.H.Tseng A., Shieh S.-S., LingWang D. SIRT3 deacetylates FOX03 to protect mitochondria against oxidative damage. Free Radical Biology and Medicine, 63, 222-234 (2013)). D'autre part, elle joue un rôle favorable sur le métabolisme en boostant les protéines de la chaine 30 respiratoire (Kincaid B., Bossy-Wetzel E. Forever young: SIRT3 a shield against mitochondrial meltdown, aging, and neurodegeneration. Frontiers in Aging Neuroscience, 5, 1-13 (2013)) ; 3064481 6 - L'aconitase est décrite comme le garde du corps de la mitochondrie. La forme mitochondriale de cette enzyme est connue pour avoir une double fonction. D'une part, elle participe activement au métabolisme puisque c'est une des enzymes de la chaine respiratoire. D'autre part, elle préserve l'ADNmt en se liant à ce dernier et en régulant 5 l'expression des gènes mitochondriaux (S. Shadel G. Mitochondrial DNA, aconitase 'wraps' it up. Trends in Biochemical Sciences, 30, 294-296 (2005)) ; La protéine chaperonne H5P27 est localisée au niveau cytoplasmique et impliquée dans de nombreux processus cellulaires. Parmi les fonctions qui lui sont attribuées, elle maintient la fonctionnalité du protéome mitochondrial et favorise la survie cellulaire. En effet, la 10 mitochondrie renferme différentes protéines potentiellement dangereuses pour la cellule. En empêchant le relargage de ces protéines, la protéine H5P27 va protéger la mitochondrie et la cellule d'un processus de mort induite par un stress (Bakthisaran R., Ramakrishna T., Mohan Ch. R. Small heat shock proteins: Role in cellular functions and pathology. Journal of Inyestigatiye Dermatology, 291-319 (2015)). 15 Ces 3 protéines impliquées dans le bon état de fonctionnement mitochondrial sont dérégulées lors du vieillissement cutané et lorsque la peau est soumise à un faible stress. Ceci a été démontré notamment sur deux modèles mimant le vieillissement (voir point l). Selon l'invention, l'utilisation d'un extrait de Chlorella sorokianina sur la peau, en particulier sur une peau vieillie, permet d'augmenter la synthèse de SIRT3 et d'aconitase, et de 20 normaliser l'expression de la protéine chaperonne H5P27. Avantageusement, en boostant ces trois acteurs mitochondriaux majeurs, l'application d'un extrait de Chlorella sorokianina sur la peau permet de corriger la perte de qualité des mitochondries et de contrôler les défauts esthétiques qui apparaissent au cours du vieillissement ou lorsque la peau est soumise à un faible stress. 25 Par ailleurs, on sait que les mitochondries sont des organites extrêmement dynamiques, capables de se mouvoir le long des microtubules, changeant fréquemment de direction et interagissant les unes avec les autres. Le réseau mitochondrial adopte constamment différentes morphologies au travers de cycles (Westermann B. Mitochondrial fusion and fission in cell life and death. Molecular Cell Biology, 11, 872-884 (2010)) : 30 - fusion, caractérisée par la création d'un réseau mitochondrial tubulaire avec de grandes mitochondries allongées ; 3064481 7 - fission, caractérisée par la production de petites mitochondries ponctiformes et sphériques. Ces changements de forme influencent non seulement l'intégrité des mitochondries mais également de nombreuses fonctions cellulaires des mitochondries à savoir la production 5 d'énergie sous forme d'ATP ou le relargage de radicaux libres (Yu T., Robotham L.J., Yoon Y. Increased production of reactive oxygen species in hyperglycemic conditions requires dynamic change of mitochondrial morphology. PNAS, 103, 2653-2658 (2006)). Le nombre et la morphologie des mitochondries dépendent principalement de l'équilibre entre ces mécanismes de fission et de fusion mitochondriales et peuvent varier en fonction 10 des conditions physiologiques ou de l'environnement cellulaire (Jugé R., Breugnot J., Da Silva C., Bordes S., Closs B., Aouacheria A. Quantification and Characterization of UVB-Induced Mitochondrial Fragmentation in Normal Primary Human Keratinocytes. Scientific Reports, 6, 1-9 (2016)). La fusion mitochondriale permet à certaines mitochondries modérément endommagées de 15 mixer leur matériel avec des mitochondries saines, en particulier des protéines de la matrice et leur ADNmt. Ce processus permet d'assurer une homogénéité au sein de la population mitochondriale de la cellule. En cas de dommages plus importants, la fission mitochondriale permet à la mitochondrie de se diviser de façon asymétrique pour former une mitochondrie saine et une mitochondrie endommagée qui sera éliminée par un processus d'autophagie 20 sélective appelée mitophagie (Twig G., Elorza A., Molina JA. A., Mohamed H., Wikstrom D.J., Walzer G., Stiles L., Haigh E. S., Katz S., Las G., Alroy J., Wu M., Py F.B., Yuan J., Deeney T.J., Barbara E Corkey E.B., Orian S Shirihai S.O. Fission and selective fusion govern mitochondrial segregation and elimination by autophagy. The EMBO Journal, 27, 433-446 (2008)). Le vieillissement de la peau est associé à une augmentation du processus de fission 25 mitochondriale. Ceci a été démontré notamment sur des essais réalisés sur des kératinocytes issus de donneurs jeunes et âgés, tels que présentés dans la partie relative à l'évaluation de l'efficacité cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokianina au point I. Selon l'invention, l'utilisation d'un extrait de Chlorella sorokianina sur la peau, en particulier sur une peau vieillie, permet de restaurer la fusion mitochondriale. Avantageusement, 30 l'application d'un extrait de Chlorella sorokianina sur la peau permet ainsi d'obtenir et de maintenir une population mitochondriale homogène et fonctionnelle, au cours du vieillissement cutané ou en cas de stress modéré. 3064481 8 En outre, lorsque les dommages deviennent critiques et se généralisent à de nombreuses mitochondries, ces dernières doivent être prises en charge pour être dégradées. Cette élimination est rendue possible grâce à un mécanisme d'autodigestion des composés cellulaires appelé autophagie et plus particulièrement par l'intermédiaire d'une de ses 5 formes spécifiques : la mitophagie. L'autophagie est caractérisée par la formation d'une double membrane lipidique, appelée autophagosome qui va encercler une partie du cytoplasme. Cet autophagosome fusionne ensuite avec un lysosome à l'intérieur duquel le contenu cytoplasmique va être dégradé. Ce processus permet à la cellule de se débarrasser des divers éléments endommagés présents 10 dans son cytoplasme tels que les protéines et les lipides oxydés (P Codogno, Al Meijer. Autophagy and signaling: their role in cell survival and cell death. Ce!! Death and Differentiation, 12, 1509-1518 (2005)). En assurant un contrôle qualité basal et non discriminant, l'autophagie est une première ligne de detoxification. La mitophagie correspond à une forme d'autophagie spécifique ciblant les mitochondries 15 endommagées. Différentes protéines sont impliquées dans ce processus : PINK1, Parkin, NIX ou BNIP3 (Youle J.R., Narendra P.D. Mechanisms of mitophagy. Molecular Ce!! Biology, 12, 914 (2011)). Elles permettent le recrutement spécifique des mitochondries endommagées par les autophagososmes et la formation de mitophagosomes. En éliminant les mitochondries 20 défectueuses productrices de radicaux libres, la mitophagie prévient les dommages oxydatifs aux protéines. C'est ainsi que contrairement à l'autophagie qui va éliminer les biomolécules endommagées, la mitophagie s'attaque à la source des déchets cellulaires, les radicaux libres (ROS), en ciblant les mitochondries dysfonctionnelles surproductrices de ROS. Ce « sous-système » autophagique spécialisé permet de détoxifier de façon discriminante. Elle 25 constitue une seconde ligne de détoxification plus puissante. Un stress mitochondrial aigu est associé à l'enclenchement d'un processus de mitophagie. Ceci a été démontré notamment sur des essais réalisés sur des kératinocytes, tels que présentés dans la partie relative à l'évaluation de l'efficacité cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokianina au point I. 30 Selon l'invention, l'utilisation d'un extrait de Chlorella sorokianina sur la peau, en particulier sur une peau ayant subi un stress mitochondrial aigu, permet d'aider à la dégradation des mitochondries endommagées en favorisant la mitophagie. Avantageusement, l'application 3064481 9 d'un extrait de Chlorella sorokianina sur la peau permet ainsi de favoriser l'homéostasie et le renouvellement du pool mitochondrial lorsque la peau est soumise à des agressions. Par contre, on sait qu'il existe de nombreux produits anti-radicalaires ou anti-oxydants qui permettent de limiter la présence des radicaux libres dans la peau, mais cette efficacité 5 cosmétique est différente de celle de l'invention. En effet, un produit anti-radicalaire ou anti-oxydant permettra de limiter la présence des ROS au niveau de la peau, mais n'aura aucune efficacité sur l'état et la qualité des mitochondries. Par effet inverse, un produit agissant sur l'état et la qualité des mitochondries ne sera pas obligatoirement un produit anti-radicalaire ou anti-oxydant, ces deux efficacités étant bien 10 distinctes. L'extrait de Chlorella sorokiniana selon l'invention n'est d'ailleurs pas un produit anti-radicalaire. Un extrait de Chlorella sorokianina sur la peau permet donc : - de contrôler et réguler la qualité mitochondriale, - de stimuler la dynamique mitochondriale, et 15 - d'augmenter la mitophagie. Ainsi, il peut être utilisé pour améliorer l'aspect esthétique et la texture de la peau, notamment pour lutter contre le vieillissement cutané, en particulier pour lutter contre les manifestations inesthétiques du vieillissement de la peau, le dysfonctionnement de la mitochondrie étant à l'origine d'un vieillissement accéléré. 20 II peut également être utilisé pour renforcer la fonction barrière et favoriser l'éclat du teint. En effet, le dysfonctionnement de la mitochondrie a aussi une influence sur la différenciation kératinocytaire (G. Feichtinger R., Sperl W., W. Bauer J., Kofler B. Mitochondrial dysfunction: a neglected component of skin diseases. Experimental Dermatology, 23, 607-614 (2014)). L'absence d'expression de certains gènes mitochondriaux entraîne une modification du 25 fonctionnement de l'organite qui présente alors une production d'ATP et de radicaux libres différente. A l'échelle de la peau, des répercussions ont été mises en évidence puisque la différenciation épidermique se trouve modifiée (Hamanaka et al., 2013). Une autre étude impute les défauts de cornification à une altération de la dynamique mitochondriale au niveau des cellules souches de l'épiderme. Ces données montrent que la dynamique 30 mitochondriale joue un rôle important et que la fusion et l'établissement d'une bonne distribution des mitochondries est essentielle à la différenciation (R. Bans O., Klose A., E. Kloepper J., Weiland D., Neuhaus J., Schauen M., Wille A., Müller A., Merkwirth C., Langert., 3064481 10 Larsson N.-G., Krieg T., J. Tobin D., Ralf Paus R., J. Wiesner R. The Mitochondrial Electron Transport Chain Is Dispensable for Proliferation and Differentiation of Epidermal Progenitor Cells. Stem Cells, 29, 1459-1468 (2011)). Au-delà de la différenciation épidermique, le dysfonctionnement mitochondrial modifie 5 également la qualité de la peau. La production massive de radicaux libres par les mitochondries va : - endommager les mitochondries elles-mêmes, aggravant ainsi la situation de stress ; - altérer les différents composants cellulaires dont les protéines. Ceci a des 10 conséquences importantes sur la peau puisque l'oxydation des protéines entraîne une altération des fibres de kératine et des propriétés optiques du stratum corneum (lwai I., Ikuta K., Murayama K., Hirao T. Change in optical properties of stratum corneum induced by protein carbonylation in vitro. International Journal of Cosmetic science, 30, 41-46 (2008)) - exercer des effets délétères sur l'activité des cellules cutanées. La peau perd 15 ainsi sa capacité à se régénérer. L'établissement d'un pool de mitochondries homogènes et en bonne santé est donc un paramètre incontournable pour l'obtention d'une peau de qualité. Il apparait indispensable de stimuler la production d'énergie cellulaire tout en limitant la production excessive de radicaux libres afin d'obtenir une fonction barrière efficace, un renouvellement cellulaire 20 constant et un teint éclatant. Avantageusement, l'application d'un extrait de Chlorella sorokianina sur la peau permet d'augmenter la production d'ATP par les kératinocytes de peaux âgées ou en conditions de stress. Ceci est corrélé à une augmentation de la régénération épidermique et de la différenciation épidermique. La peau est plus claire, lumineuse et homogène. 25 L'invention a donc spécifiquement pour objet, l'utilisation cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokiniona dans une composition cosmétique en tant qu'agent cosmétique, en particulier en tant qu'agent cosmétique destiné à améliorer l'aspect esthétique et/ou la texture de la peau, notamment pour : - améliorer le fonctionnement des mitochondries des cellules de l'épiderme, 30 - améliorer l'éclat du teint, - stimuler le renouvellement des cellules de l'épiderme et/ou à renforcer la barrière cutanée. 3064481 11 L'invention vise également un procédé de traitement cosmétique, non thérapeutique, pour améliorer l'aspect esthétique et/ou la texture de la peau, comprenant l'application sur la peau d'au moins un extrait de Chlorella sorokiniana ou d'une composition en contenant, en particulier pour améliorer l'éclat du teint. 5 Les extraits de Chlorella sorokiniana utiles selon l'invention peuvent être de tout type. Préférentiellement, il s'agit d'un hydrolysat de Chlorella sorokiniana. Il peut s'agir d'un hydrolysat chimique (basique ou acide) ou/et d'un hydrolysat enzymatique. De façon préférée il s'agit d'un hydrolysat enzymatique. La biomasse de Chlorella sorokiniana utilisée comme matière première à l'origine des 10 extraits de Chlorella sorokiniana utiles selon l'invention, est constituée par des microalgues cultivées selon tout procédé connu par l'homme du métier. Actuellement, il existe plusieurs procédés de production de microalgues : - en présence de lumière et de dioxyde de carbone, la culture est dite photo-autotrophe. Elle implique les chloroplastes, siège de la photosynthèse ; 15 - en absence de lumière, on parle de culture hétérotrophe. Ce second type de culture se fait indépendamment de la photosynthèse. La microalgue se développe alors en consommant les sources carbonées qui lui sont amenées directement dans son milieu de culture. De par leurs propriétés d'adaptabilité, les microalgues sont capables de passer d'un 20 métabolisme à l'autre afin d'assurer leur survie et leur croissance indépendamment des conditions qui leur sont imposées. La biomasse de Chlorella sorokiniana utilisée comme matière première à l'origine des extraits de Chlorella sorokiniana utiles selon l'invention, est constituée par des microalgues pouvant être cultivées en hétérotrophie ou en autotrophie. 25 Préférentiellement, la biomasse de Chlorella sorokiniana utilisée comme matière première à l'origine des extraits de Chlorella sorokiniana utiles selon l'invention, est constituée par des microalgues cultivées en hétérotrophie. Avantageusement, la culture en hétérotrophie assure : - la maîtrise de la culture en bioréacteur qui se fait indépendamment des conditions 30 climatiques. Ces modalités confèrent au procédé d'obtention de l'extrait selon l'invention robustesse, reproductibilité et répétabilité ; 3064481 12 - la production en grande quantité de biomasse, un élément indispensable à l'élaboration industrielle d'extraits ; - la durabilité car il requiert un prélèvement unique de la souche d'intérêt et de ce fait est sans impact sur la biodiversité; 5 - la traçabilité de l'approvisionnement puisque la souche est issue d'une collection. De plus, d'un point de vue biologique, dans ce mode de culture hétérotrophe la microalgue développe un métabolisme atypique. En effet, cette culture se faisant à l'obscurité, la machinerie photosynthétique est inactivée et la microalgue utilise ses ressources pour produire des métabolites autres que les pigments ce qui est un avantage dans l'industrie de 10 la cosmétique blanche. Ce métabolisme fait uniquement appel à la mitochondrie. C'est grâce à une augmentation du nombre de mitochondries et un métabolisme 100% mitochondrial que la microalgue est capable de survivre et de proliférer. Le mode de culture hétérotrophe est donc préféré pour les extraits de Chlorella sorokiniana utiles selon l'invention. La biomasse de Chlorella sorokiniana cultivées en hétérotrophie, peut être caractérisée au 15 moyen des mêmes méthodes d'analyses que les extraits. Ainsi la biomasse de Chlorella sorokiniana cultivées en hétérotrophie comprend : - Protéines : entre 30 et 40% - Carbohydrates : entre 30 et 45% - Lipides : entre 5 et 10% 20 - Cendres minérales : 5% - Non identifié : 20% les pourcentages étant exprimés en poids (m/m). La biomasse de Chlorella sorokiniana présente des cellules entières de la microalgue. La Figure 1 représente une photographie au microscope d'une solution contenant 5% de 25 biomasse de Chlorella sorokiniana. On observe la présence de cellules entières nombreuses. Les extraits de Chlorella sorokiniana utiles selon l'invention sont préférentiellement les extraits tels que décrits ci-après. En effet, l'invention a également pour objet des extraits particuliers de Chlorella sorokiniana, à savoir des extraits de Chlorella sorokiniana, comprenant au moins des carbohydrates et 30 des protéines, caractérisée en ce que les carbohydrates représentent au moins 36% en poids de matière sèche de l'extrait. Les extraits de Chlorella sorokiniana peuvent aussi contenir des minéraux. 3064481 13 La teneur en sucres dans l'extrait peut être déterminée par la méthode de DUBOIS (Dubois M. et al., Analytical chemistry, 28, 3, 350-356, 1956). Ces extraits comprennent donc une quantité importante de carbohydrates. Préférentiellement, la teneur en sucres de l'extrait selon l'invention est comprise entre 36% 5 et 94%, en poids de matière sèche de l'extrait. De façon préférée, les carbohydrates de l'extrait présentent les caractéristiques suivantes : - les carbohydrates contenus dans l'extrait sont des sucres de masse molaire inférieure à 8400 Da, et/ou - au moins 70% des carbohydrates sont des oligosaccharides et des polysaccharides de 10 glucose de masses molaires comprises entre 345 et 8400Da (degré de polymérisation compris entre 2 et 47), le pourcentage étant donné en poids par rapport au poids total des carbohydrates de l'extrait, - moins de 30% des carbohydrates sont des monosaccharides, le pourcentage étant donné en poids par rapport au poids total des carbohydrates de l'extrait. 15 Les sucres simples constituant les carbohydrates de l'extrait de Chlorella sorokiniana selon l'invention, sont préférentiellement le glucose et le galactose. Concernant les protéines, les extraits de Chlorella sorokiniana selon l'invention ont préférentiellement une teneur en protéines comprise entre 6% et 40% en poids par rapport au poids total de matière sèche de l'extrait. 20 La teneur en protéines est préférentiellement déterminée par la méthode de LOWRY (Lowry et al., Protein measurement with the folin reagent, J. Biol. Chem., 193, 265, 1951). Préférentiellement, au moins 90% des protéines contenues dans l'extrait selon l'invention, sont des protéines de masse molaire inférieure à 3500 Da, le pourcentage étant donné en poids par rapport au poids total des protéines de l'extrait. 25 Concernant les minéraux, les extraits de Chlorella sorokiniana selon l'invention ont préférentiellement une teneur en cendres minérales inférieure à 20% en poids par rapport au poids total de matière sèche de l'extrait. La teneur en cendres brutes peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération des échantillons de l'hydrolysat à 550°C dans un four à moufle électrique. 30 L'extrait selon l'invention ne comprend pas de biomasse de Chlorella sorokiniana, il ne contient pas de cellules entières, ni de fragments de cellules. La Figure 3 représente une photographie microscopique d'un extrait de Chlorella sorokiniana à 5% dans l'eau. La 3064481 14 photographie a été réalisée dans les mêmes conditions que la Figure 1. On n'observe pas une seule cellule, ni aucun fragment de cellules n'est présent dans l'extrait selon l'invention. Préférentiellement l'extrait selon l'invention est un hydrolysat de Chlorella sorokiniana. Il peut s'agir d'un hydrolysat chimique (acide ou basique) et/ou d'un hydrolysat enzymatique 5 de Chlorella sorokiniana. De façon préférée, l'extrait selon l'invention est un hydrolysat enzymatique c'est-à-dire obtenu par un procédé comprenant au moins une hydrolyse enzymatique. La ou les enzymes utilisée(s) peu(ven)t être toute(s) enzyme(s) connue(s) par l'homme du métier pour permettre d'obtenir un extrait présentant les caractéristiques de l'extrait selon l'invention. La ou les enzymes peuvent être notamment des protéases, qui 10 sont capables d'hydrolyser les protéines et les glycoprotéines constituant Chlorella sorokiniana ou des carbohydrases, qui sont capables d'hydrolyser les carbohydrates et les glycoprotéines constituant Chlorella sorokiniana. De façon préférée, la biomasse utilisée pour obtenir l'extrait selon l'invention est une biomasse cultivée en hétérotrophie. 15 L'extrait selon l'invention peut se présenter sous forme solide ou sous forme liquide, préférentiellement sous forme liquide. Lorsqu'il se présente sous forme liquide, il se présente de façon préférée sous forme d'un liquide limpide ou opalescent, avec une couleur jaune. L'extrait selon l'invention peut être obtenu par tout procédé permettant d'obtenir un extrait 20 de Chlorella sorokiniana présentant les caractéristiques revendiquées. Préférentiellement il s'agit d'un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse de Chlorella sorokiniana, en particulier au moins une étape d'hydrolyse des protéines et des glycoprotéines constituant la microalgue. Encore plus préférentiellement, il est obtenu par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique, en particulier d'hydrolyse enzymatique des 25 protéines et glycoprotéines c'est-à-dire une hydrolyse réalisée par voie enzymatique au moyen d'enzymes protéolytiques. Il peut s'agir par exemple de protéases, endoprotéases et exopeptidases d'origine végétale (papaïne, bromelaine, ficine) et d'origine bactérienne (Aspergillus, Rhizopus, Bacillus, etc.). Préférentiellement il s'agit d'un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse de Chlorella sorokiniana, en particulier au moins une étape 30 d'hydrolyse des carbohydrates et des glycoprotéines constituant la microalgue. Encore plus préférentiellement, il est obtenu par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique, en particulier d'hydrolyse enzymatique des carbohydrates et 3064481 15 glycoprotéines c'est-à-dire une hydrolyse réalisée par voie enzymatique au moyen d'enzymes comme les carbohydrases. L'extrait selon l'invention peut-être obtenu par un procédé combinant au moins une hydrolyse chimique et au moins une hydrolyse enzymatique. 5 Préalablement au procédé d'obtention de l'hydrolysat en tant que tel, il convient de produire la biomasse de Chlorella sorokiniana. Cette étape est réalisée selon le mode de culture des levures dans un milieu adapté à leur développement, de manière classique pour l'homme de métier. Préférentiellement, la culture est réalisée en hétérotrophie. Une fois la biomasse obtenue, il convient de mettre en oeuvre le procédé d'extraction. Selon 10 un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif est obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - solubilisation de la biomasse de Chlorella sorokiniana, préférentiellement entre 20 et 200g/L dans l'eau (la Figure 1 a été réalisée à ce stade), - hydrolyse chimique, 15 - hydrolyse(s) enzymatique(s) : o les conditions d'hydrolyse sont choisies pour hydrolyser les protéines et les glycoprotéines ; préférentiellement l'hydrolyse enzymatique est réalisée au moyen d'une protéase, et/ou o les conditions d'hydrolyse sont choisies pour hydrolyser les carbohydrates et 20 les glycoprotéines ; préférentiellement l'hydrolyse enzymatique est réalisée au moyen de d'une carbohydrase, - inactivation de(s) l'enzyme(s) préférentiellement par traitement thermique : cette inactivation est réalisée selon la préconisation technique du(des) fournisseur(s) de(s) l'enzyme(s) (la Figure 2 a été réalisée à ce stade ; on observe la présence des 25 quelques cellules de microalgues entières, mais surtout la présence de fragments cellulaires), - séparation des phases soluble et insoluble préférentiellement par centrifugation, et récupération de la phase soluble contenant entre autres les sucres, les protéines et éventuellement des minéraux solubles ; 30 - filtration pour éliminer les particules encore en suspension, et récupération du filtrat ; 3064481 16 - purification par filtration afin d'éliminer les molécules de haut poids moléculaire, préférentiellement les molécules de poids moléculaire supérieur à 10kDa ; cette étape est de façon préférée réalisée par nanofiltration membranaire ; - obtention d'un filtrat, qui constitue l'extrait selon l'invention, qui se présente sous 5 forme liquide (la Figure 3 a été réalisée à ce stade). L'hydrolysat obtenu à ce stade peut être encore concentré et/ou purifié afin de sélectionner les fractions de bas poids moléculaires, préférentiellement inférieures à 5kDa, par des étapes de filtrations et filtration stérilisante successives à travers des filtres de porosité différente, en conservant les filtrats à chaque étape et/ou par une méthode de type 10 chromatographique, afin, par exemple d'enrichir spécifiquement l'hydrolysat en ces molécules. Le procédé peut aussi comprendre une étape de décoloration et/ou désodorisation. Les étapes des procédés décrites ci-avant, prises individuellement sont usuelles dans le domaine des extractions d'actifs à partir de matières premières naturelles et l'homme du 15 métier est à même d'en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales. L'extrait selon l'invention est préférentiellement utilisé comme agent cosmétique dans des compositions, ces compositions comprenant un milieu cosmétiquement acceptable. Il s'agit de compositions dans différentes formes galéniques, adaptées à une application sur la peau, 20 en particulier la peau du visage. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou 25 moins fluides et avoir l'aspect de lotion, shampoing, crème ou mousse. Il peut s'agir de compositions comprenant au moins 0.5% d'un extrait de Chlorella sorokiniana selon l'invention, préférentiellement entre 0.5 et 5%, les pourcentages étant donnés en poids par rapport au poids de la composition. Ces compositions comprennent, outre l'extrait de Chlorella sorokiniana, un milieu 30 physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements. 3064481 17 Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi : - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; 5 - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba, - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères, 10 - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires, - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, 15 - les séquestrants, - les parfums, - et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care 20 Product Council). Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Ces compositions sont notamment destinées à être utilisées sur la peau pour améliorer 25 l'aspect esthétique de la peau, en particulier pour hydrater la peau et/ou améliorer l'éclat du teint. Afin d'illustrer les effets cosmétiques d'un extrait de Chlorella sorokiniana, les exemples suivants avec leurs résultats d'essais sont présentés. 3064481 18 EXEMPLES Exemples d'extraits Plusieurs extraits selon l'invention ont été réalisés en faisant varier les étapes d'hydrolyse, de concentration, de décoloration/désodorisation. 5 Les étapes générales sont les suivantes : - solubilisation dans l'eau de la biomasse de Chlorella sorokiniana, - hydrolyse(s) chimique(s) et/ou hydrolyse(s) enzymatique(s). Les conditions d'utilisation optimale des enzymes sont celles préconisées par les fournisseurs. - Inactivation par traitement thermique, selon les préconisations des fournisseurs 10 d'enzymes - Séparation des phases soluble et insoluble par centrifugation et récupération de la phase soluble - Filtration sur 10kDa et récupération du filtrat - Filtration et filtration stérilisante sur filtre 0.22u.m. 15 Les conditions variables du procédé pour les différents extraits des exemples sont décrits dans les Tableau1A et 1B : Conditions Solubilisation A 20g/I B 50g/I C 100g/I D 150g/I E 200g/I Conditions Hydrolyse(s) a Basique et protéase b Basique et carbohydrase c Basique et protéase et carbohydrase d Acide et protéase e Acide et carbohydrase f Acide et protéase et carbohydrase Tableau lA Tableau 18 Tableau lA et 18 : Conditions des procédés pour l'obtention des différents exemples d'extraits selon l'invention 20 Les extraits selon l'invention obtenus sont caractérisés comme suit : - Les protéines sont déterminées en poids de matière sèche, par la méthode de LOWRY, 3064481 19 - Les carbohydrates sont déterminés en poids de matière sèche, par la méthode de DU BOIS, - Les cendres sont déterminées en poids de matière sèche, par la pesée des résidus issus de l'incinération des échantillons de l'hydrolysat à 550°C dans un four à moufle 5 électrique. Les caractéristiques obtenues pour plusieurs exemples sont présentées dans le Tableau 2 ci-dessous : Exemples Matières sèches Teneur en Teneur en Teneur en protéines carbohydrates cendres minérales Exemple 1 31.4g/I 24% 60% 11% Exemple 2 48.7g/I 23% 57% 20% Exemple 3 48.3g/I 34% 57% 9% Exemple 4 36.3g/I 25% 63% 12% Exemple 5 33.7g/I 29.4% 52% 18.6% Exemple 6 71.1g/I 27% 53% 20% Tableau 2: Caractérisation de différents exemples d'extraits selon l'invention Le procédé d'extraction de l'exemple 1 a été appliqué sur la biomasse de Chlorella vulgaris. 10 La caractérisation analytique de l'extrait obtenu est présenté dans le Tableau 3 : Exemples Matières sèches Teneur en Teneur en Teneur en protéines carbohydrates cendres minérales Exemple 7 49.1g/I 48% 28% 10% Sur Chlorella vulgaris Tableau 3: Caractérisation d'un extrait de Chlorella vulgaris obtenu par le même procédé que celui mis en oeuvre pour obtenir un extrait de Chlorella sorokiniana selon l'exemple 1 Les peptides ont été caractérisés de façon à déterminer leurs poids moléculaires et à quantifier les différentes fractions protéiques par chromatographie FPLC d'exclusion stérique. 15 L'extrait est analysé selon les conditions suivantes : - Pompe : FPLC AKTA (Pharmacia) - Colonne : Superdex Peptides TRICORN 10/300 GL (Pharmacia) - Phase Mobile : tampon phosphate de potassium 20 mM, pH 7,2 avec 0,25 M NaCI. - Détecteur : UV à 280 nm 20 - Débit : 0,5 mL/min 3064481 20 - Volume d'injection : 200 u.1_ Une courbe de calibration des temps de rétention des marqueurs en fonction de leur masse molaire est construite (fit logarithmique). Le Tableau 4 résume les temps de rétention obtenus pour les différents marqueurs. Molécules Poids moléculaire (Da) Temps de rétention (min) Cytochrome C 12 500 20,0 Aprotinine 6 512 23,5 Vitamine B12 1 355 33,4 Cytidine 243 41,4 5 Tableau 4. Temps de rétention des différents marqueurs. Grâce à la courbe de calibration, les temps de rétention suivants ont pu être estimés : - protéine de 10 000 Da : tr = 21,4 mn - protéine de 3 500 Da : tr = 25,2 mn - protéine de 2 000 Da : tr = 30,3 mn 10 Ensuite, un programme de fractionnement est construit, en fonction des temps de rétention, dans le but de collecter les fractions suivantes (MM = poids moléculaire) : o fraction 1 : 10 000 Da REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokiniana dans une composition cosmétique en tant qu'agent cosmétique. 2. Utilisation cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokiniana selon la revendication 1, en tant qu'agent cosmétique améliorant l'aspect esthétique et/ou la texture de la peau. 3. Utilisation cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokiniana selon la revendication 1 ou 2, en tant qu'agent cosmétique améliorant l'éclat du teint. 4. Utilisation cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokiniana selon l'une des précédentes revendications, en tant qu'agent cosmétique stimulant le renouvellement des cellules de l'épiderme et/ou à renforcer la barrière cutanée. 5. Utilisation cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokiniana selon l'une des précédentes revendications, en tant qu'agent cosmétique améliorant le fonctionnement des mitochondries des cellules de l'épiderme. 6. Utilisation cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokiniana selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que ledit extrait est un hydrolysat de Chlorella 15 sorokiniana. 7. Extrait de Chlorella sorokiniana, comprenant au moins des carbohydrates, des protéines et des minéraux, caractérisé en ce que les carbohydrates représentent au moins 36% en poids de matière sèche de l'extrait. 8. Extrait de Chlorella sorokiniana selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est 20 caractérisé par : une teneur en carbohydrates comprise entre 36 et 94% une teneur en protéines comprise entre 6 et 40% les pourcentages étant donnés en poids par rapport au poids total de matière sèche de l'extrait. 25 9. Extrait de Chlorella sorokiniana selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce qu'au moins 70% des carbohydrates sont des oligosaccharides et des polysaccharides de glucose de masses molaires comprises entre 345 et 8400Da, le pourcentage étant donné en poids par rapport au poids total des carbohydrates de l'extrait. 3064481 49 10. Extrait de Chlorella sorokiniana selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisé en ce qu'au moins 90% des protéines ont une masse molaire inférieure à 3500 Da, le pourcentage étant donné en poids par rapport au poids total des protéines de l'extrait. 11. Extrait de Chlorella sorokiniana selon l'une des revendications 7 à 10, caractérisé en 5 ce qu'il s'agit d'un hydrolysat de Chlorella sorokiniana. 12. Extrait de Chlorella sorokiniana selon l'une des revendications 7 à 11, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat enzymatique de Chlorella sorokiniana. 13. Utilisation cosmétique d'un extrait de Chlorella sorokiniana selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que ledit extrait est un extrait selon l'une des 10 revendications 7 à 12. 14. Composition cosmétique comprenant au moins 0,5% en poids d'un extrait de de Chlorella sorokiniana. 15. Composition cosmétique selon la revendication 14, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de crème, lotion, lait, sérum, pommade, gel, pâte, mousse, ou sous forme solide. 16. Procédé de traitement cosmétique pour améliorer l'aspect esthétique de la peau, caractérisé en ce qu'il comprend l'application sur la peau d'au moins un extrait de Chlorella sorokiniana ou d'une composition en contenant. 17. Procédé de traitement cosmétique selon la revendication 16, pour améliorer l'éclat du teint de la peau. 18. Procédé de traitement cosmétique selon la revendication 16 ou 17, caractérisé en ce que l'extrait de Chlorella sorokiniana est un extrait selon l'une des revendications 7 à 12.