Brevet FR3071402A1 — publié le 20190329

PROCEDE DE TRAITEMENT D'UN EXTRAIT D'ALGINATES, PRODUIT CORRESPONDANT OBTENU, ET UTILISATIONS ASSOCIEES RE SUME DE L'INVENTION La présente invention concerne un procédé amélioré d'obtention d'un produit à partir d'alginate, ainsi que le produit obtenu à partir de ce procédé. Ledit produit présente des propriétés physicochimiques et biologiques améliorées. Ledit produit est destiné notamment à préserver l'activité énergétique des fibroblastes du derme et/ou à stimuler leur synthèse de protéines de la matrice extracellulaire. ART ANTERIEUR Dans le domaine de la cosmétologie et de la dermatologie, les consommateurs sont très attachés à l'utilisation de produits comprenant des extraits naturels, ou des dérivés de tels extraits. En effet, nombre d'extraits naturels, et leurs dérivés, ont des propriétés tout à fait intéressantes, notamment vis-à-vis de l'hydratation de la peau, de son vieillissement, de son teint, etc. En particulier, les propriétés cosmétiques et dermatologiques des extraits naturels d'alginate de sodium, et de leurs dérivés, sont connues. Les alginates dont des polysaccharides extraits d'une famille d'algues brunes (Pheophyceae), comprenant notamment les laminaires et les fucus. Afin de modifier les propriétés physicochimiques et/ou biologiques des alginates, différents procédés de traitement peuvent être mis en oeuvre. Parmi les procédés disponibles, la mise en oeuvre d'une dépolymérisation, généralement partielle, permet d'obtenir des oligosaccharides. Par exemple, la demande W098/13049 divulgue un procédé d'élaboration d'un produit obtenu par application d'un traitement de dépolymérisation d'un extrait naturel d'alginate de sodium par utilisation d'une alginate lyase, suivi d'une hydrolyse en milieu acide. Il est rapporté que le produit obtenu permettrait notamment de protéger les cellules de Langerhans de l'épiderme contre les rayonnements ultraviolets, d'augmenter la concentration épidermique de l'interleukine la, de présenter un effet anti-radicalaire, de protéger les cellules du derme de l'oxydation des protéines, et de la fragmentation de l'ADN, de présenter un effet inhibiteur vis-à-vis de l'activité de l'enzyme 5a réductase et de présenter un effet inhibiteur vis-à-vis de la souche bactérienne pathogène Proprionibactérium acnes. 1 Pour être spécifique, la demande W098/13049 divulgue un procédé comprenant les étapes suivantes : (1) solubilisation d'un extrait d'alginate de sodium pendant une heure à une concentration de 5%, puis (2) dépolymérisation à une température de 25°C, à un pH de 7,5 et pendant au moins 4 heures au moyen d'une alginate lyase présente dans un ratio massique enzyme/alginate de 0,01%, puis (3) une hydrolyse partielle en milieu acide à une température de 94°C, à un pH de 1,5 et pendant quatre heures par ajout d'acide sulfurique dans un ratio acide/alginate de 30% en poids sec, puis (4) refroidissement pendant une heure jusqu'à une température inférieure à 35°C. Ladite étape d'hydrolyse est une étape facultative. La demande FR2779953 divulgue un procédé similaire. Malgré les propriétés utiles, tant physicochimiques que biologiques, des produits divulgués dans les demandes W098/13049 et FR2779953, les formulateurs sont toujours à la recherche de produits aux propriétés augmentées et/ou additionnelles. De telles propriétés augmentées et/ou additionnelles peuvent être obtenues par exemple en modifiant les propriétés intrinsèques desdits produits. De telles propriétés intrinsèques peuvent être notamment le profil de solubilisation, le degré de pureté, le contenu en matière organique, l'aspect du produit obtenu, etc. Afin de modifier ces propriétés intrinsèques, il est nécessaire d'adapter le procédé d'obtention dudit produit. OBJECTIFS DE L'INVENTION La présente invention a pour objectif la mise en oeuvre d'un procédé amélioré d'obtention d'un produit à partir d'alginate. Un autre objectif de la présente invention, dans au moins un mode de réalisation, est la mise en oeuvre d'un procédé dont les conditions expérimentales sont optimisées. Un autre objectif de la présente invention, dans au moins un mode de réalisation, est la mise en oeuvre d'une réaction de dépolymérisation améliorée. Un autre objectif de la présente invention, dans au moins un mode de réalisation, est la mise en oeuvre d'un procédé permettant l'obtention d'un produit dérivé d'un extrait d'alginates présentant un rendement augmenté et/ou une qualité améliorée et/ou une plus grande pureté. Un autre objectif de la présente invention, dans au moins un mode de réalisation, est la fourniture d'un produit dérivé d'alginate présentant des propriétés biologiques particulières. DESCRIPTION DE L'INVENTION 2 Selon un premier aspect, la présente invention concerne un procédé d'obtention d'un produit à partir d'alginate, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : (1) solubilisation de l'alginate pendant au moins six heures à une concentration de 5,2%, puis (2) dépolymérisation enzymatique à une température de 22°C, à un pH de 7,5 et pendant au moins trois heures au moyen d'une mannuronate lyase présente dans un ratio massique enzyme/alginate de 0,01% ; puis (3) hydrolyse partielle en milieu acide à une température de 94°C, à un pH de 1,5 et pendant quatre heures par ajout d'acide sulfurique dans un ratio acide/alginate de 30% en poids sec ; puis (4) refroidissement pendant une heure jusqu'à une température inférieure à 35°C; puis (5) filtration sur filtre de cellulose. Le produit obtenu par le procédé selon l'invention comprend des oligosaccharides du type comprenant, des oligoalginates. Lesdits oligoalginates sont constitués de l'enchainement de deux acides uroniques : l'acide mannuronique et l'acide guluronique. Ce produit est dénommé ci-après « oligosaccharide(s) » ou « oligosaccharide(s) » selon l'invention ». Les inventeurs, en modifiant de manière sélective les conditions expérimentales du procédé d'obtention de produits - oligosaccharides - à partir d'alginates, ont démontré que lesdits oligosaccharides présentaient des propriétés physicochimiques et biologiques améliorées. Cela a été rendu possible notamment en optimisant des paramètres spécifiques dudit procédé. Notamment, en augmentant tant la concentration en alginates que le temps de réaction au cours de l'étape de solubilisation, il est obtenu un alginate dont l'homogénéisation est améliorée, ce qui facilite l'étape de dépolymérisation, l'enzyme ayant un meilleur accès à son substrat. La réduction de la température à 22°C au cours de l'étape de dépolymérisation enzymatique permet une mise en oeuvre à une température plus proche de la température d'activité optimale de l'alginate lyase, ce qui favorise donc la réaction de dépolymérisation. L'optimisation tant de la concentration et du temps de réaction au cours de l'étape de solubilisation que de la température au cours de l'étape de dépolymérisation permet de réduire le temps de réaction à trois heures. Enfin, la mise en oeuvre d'une étape de filtration sur cellulose, qui est un support inerte, limite les effets d'échanges d'ions, les changements de pH pendant le procédé de dépolymérisation et les pertes d'oligosaccharides pendant la filtration. En particulier, les inventeurs ont démontré que la mise en oeuvre d'une étape de filtration sur un filtre de cellulose, en remplacement d'une filtration aux terres de diatomées, permet une 3 optimisation du procédé, par évitement de l'ajustement du pH, des phénomènes d'échanges d'ions, et de la rétention d'une partie des oligosaccharides obtenus dans les terres de diatomées. En particulier, sans vouloir être tenu par aucune théorie, les inventeurs ont mis en avant que les oligosaccharides obtenus avec le procédé selon l'invention présentaient des propriétés physicochimiques améliorées. Ainsi, lesdits oligosaccharides sont moins colorés (indice de Gardner IG), caractéristique d'un produit de meilleure qualité. En outre, ledit produit a un contenu en matière organique plus élevé (rapport entre matière organique et matière minérale Orn/M.,), caractéristique d'un produit plus pur comprenant moins de contaminants d'origine minérale, c'est à dire qu'il y a une meilleure purification du produit au cours des étapes d'hydrolyse et de filtration. Enfin, ledit produit est plus pur (chromatographie d'exclusion ionique). En outre, sans vouloir être tenu par aucune théorie, les inventeurs ont mis en avant que les oligosaccharides obtenus avec le procédé selon l'invention présentaient des propriétés biologiques améliorées. Ainsi, ledit produit à un effet positif sur l'activité énergétique des fibroblastes (stimulation de l' ATP). En outre, ledit produit à un effet positif sur la synthèse de protéines de la matrice extra-cellulaire, en particulier des collagènes par les fibroblastes du derme, (stimulation de la synthèse de collagène de type 1). Enfin, ledit produit à un effet positif sur la senescence des fibroblastes. Selon un mode préféré de réalisation, l'alginate est un extrait naturel d'alginate, préférentiellement un extrait naturel d'alginate obtenu à partir d'algues brunes (Pheophyceae), très préférentiellement un extrait naturel d'alginate obtenu à partir de l'espèce d'algues brunes Laminaria digitata. Ledit extrait peut être notamment un extrait d'alginate de sodium. L'étape de dépolymérisation peut être mise en oeuvre au moyen d'une mannuronase lyase étant une alginate lyase. Cette enzyme, obtenue par fermentation bactérienne, permet de dépolymériser par B-élimination les blocs alternés de la molécule d'alginate de sodium, qui sont constitués d'enchainements d'a-L-guluronate de sodium et de B-D-mannuronate de sodium liés en 1,4. De plus, ladite enzyme permet de réduire très rapidement la viscosité de la solution d'alginate de sodium au terme de ladite étape de dépolymérisation. Selon un second aspect, la présente invention concerne un produit obtenu par le procédé selon la présente invention. Ledit produit selon l'invention présente des propriétés 4 physicochimiques et biologiques améliorées en comparaison des produits obtenus par les procédés conventionnels. Ledit produit peut comprendre en outre, par addition, au moins un oligo-élément. Ledit oligo-élément peut former un complexe stable appelé chélate avec l'oligosaccharide selon l'invention. Les oligo-éléments peuvent être des éléments minéraux cationiques, par exemple des éléments minéraux choisis parmi le groupe constitué de Zn2+, Mn2+, Mg2+ et leurs mélanges. Le degré de polymérisation de l'oligosaccharide selon l'invention peut être mesuré par toute méthode conventionnelle, notamment celle dite du « dosage des doubles liaisons conjuguées ». La masse moléculaire moyenne en nombre peut être mesurée par toute méthode conventionnelle, notamment la méthode de Somogyi-Nelson dite du « dosage des sucres réducteurs ». Dans un mode de réalisation particulier, ledit produit est destiné à préserver l'activité énergétique des fibroblastes du derme. En particulier, ledit produit est destiné à prévenir ou limiter la diminution de la production d'ATP par les fibroblastes induite par le stress et/ou la senescence. Dans un autre mode de réalisation, ledit produit est destiné à stimuler la synthèse de protéines de la matrice extracellulaire, notamment de collagène, par les fibroblastes. Les caractéristiques de la présente invention apparaitront plus clairement à la lecture de la description ci-contre et des exemples ci-dessous. DESCRIPTIF DES FIGURES La figure 1 est une représentation graphique de la couleur (indice de Gardner) de produits obtenus à partir d'alginate. La figure 2 est une représentation graphique du contenu en matière organique de produits obtenus à partir d'alginate. La figure 3 est une représentation graphique de la mesure de l'aire sous la courbe caractéristique de produits obtenus à partir d'alginate. La figure 4 est une représentation graphique de l'effet protecteur du produit selon l'invention contre la chute d'ATP induite par un stress. La figure 5 est une représentation graphique de l'effet protecteur du produit selon l'invention contre la chute d'ATP induite par un peptide lié à la senescence avec traitement pendant le stress. La figure 6 est une représentation graphique de l'effet protecteur du produit selon l'invention contre la chute d'ATP induite par un peptide lié à la senescence avec prétraitement. La figure 7 est une représentation graphique de l'effet protecteur du produit selon l'invention sur la synthèse de collagène de type 1 dans des fibroblastes de derme humain. Les figures 8a, 8b, 8c et 8d sont des photographies de fibroblastes permettant d'observer l'effet protecteur du produit selon l'invention sur la chute de collagène de type I induite par un peptide liée à la senescence. Les figures 9a, 9b, 9c et 9d sont des photographies de fibroblastes permettant d'observer la présence de SA-beta galactosidase. La figure 10 est une représentation graphique de la quantification de la SA-beta galactosidase dans des fibroblastes. Les figures 11a, 11b, 11c et 11d sont des photographies de fibroblastes permettant d'observer la présence de SA-beta galactosidase. EXEMPLES Exemple 1 - Procédé d'obtention d'un produit à partir d'alginate Un extrait d'alginate est obtenu à partir de Laminaria digitata. Cet extrait d'alginate est solubilisé pendant au moins six heures à une concentration de 5,2%. L'extrait d'alginate solubilisé est ensuite soumis à une dépolymérisation enzymatique à une température de 22°C, à un pH de 7,5 et pendant au moins 3 heures au moyen d'une alginate lyase présente dans un ratio massique enzyme/alginate de 0,01%. L'extrait d'alginate dépolymérisé est ensuite soumis à une hydrolyse partielle en milieu acide à une température de 94°C, à un pH de 1,5 et pendant quatre heures par ajout d'acide sulfurique dans un ratio acide/alginate de 30% en poids sec. L'extrait d'alginate hydrolysé est ensuite soumis à un refroidissement pendant une heure jusqu'à une température inférieure à 35°C. L'extrait d'alginate hydrolysé refroidi est ensuite filtré sur filtre de cellulose. Un procédé alternatif comparatif a également été mis en oeuvre. Toutes les étapes ci-dessus ont été mises en oeuvre à l'identique, à l'exception de l'étape de filtration qui a été mise en oeuvre au moyen d'un filtre en terres de diatomées. Le degré de polymérisation du produit obtenu par le procédé selon l'invention - à savoir un extrait d'alginate dépolymérisé, hydrolysé, refroidi et filtré - est d'environ entre 7 et 11. 6 La masse moléculaire moyenne en nombre du produit obtenu par le procédé selon l'invention - à savoir un extrait d'alginate dépolymérisé, hydrolysé, refroidi et filtré - est d'environ 4500 Daltons. Le produit (selon l'invention) et le produit (comparaison) ont été caractérisés. Notamment, la couleur desdits produits a été déterminée par mesure de l'indice de Gardner. Les résultats obtenus sont illustrés en figure 1. Le produit selon l'invention présente une valeur d'indice de Gardner inférieure et est donc moins coloré, ce qui traduit une amélioration du produit. Le contenu en matière organique desdits produits a également été déterminé, par mesure du rapport entre matière organique et matière minérale. Les résultats sont illustrés en figure 2. Le contenu en matière organique du produit selon l'invention est de 25% supérieur à celui du produit (comparaison), ce qui traduit un produit plus pur, comprenant moins de contaminants d'origine minérale, et ce qui traduit donc une meilleure purification du produit au cours des étapes d'hydrolyse et de filtration. La pureté a également été analysée par mesure de la taille par chromatographie d'exclusion ionique. Les résultats sont illustrés en figure 3. La taille moyenne (masse moléculaire moyenne) est la même entre le produit selon l'invention et le produit (comparaison), mais l'aire sous la courbe caractéristique est plus élevée pour le produit selon 1 ' invention. Les activités biologiques présentées ci-après sont évaluées à partir d'une solution contenant 5% de l'oligoalginate obtenu selon l'invention. Les pourcentages sont donc des pourcentages de cette solution. Exemple 2 - Evaluation in vitro de l'effet sur le niveau énergétique des cellules par la mesure d'ATP - Effet sur la baisse d'ATP induite par un stress L'effet des oligosaccharides selon l'invention sur la baisse d'ATP induite par un stress a été évalué dans des fibroblastes de derme humain issus d'un donneur de 50 ans, utilisés au Sème repiquage. Les cellules ont été ensemencées dans un milieu pour la culture des fibroblastes contenant 10% de sérum de veau foetal (SVF) et cultivées pendant un jour. Ensuite, les cellules ont été stressées ou non (contrôle) pendant quatre heures. Les conditions de stress ont été générées par exposition à un gaz d'échappement automobile. Des conditions alternatives de stress peuvent être utilisées. 7 La production d'ATP (en % par rapport au témoin sans stress) a été mesurée à l'aide du kit Mitochondrial TOX-GLO (Promega). Les résultats obtenus sont illustrés dans la figure 4. L'exposition des fibroblastes au stress a induit une diminution significative de la production d'ATP par rapport au contrôle non traité de -43%. Ledit produit testé à 0,05%, 0,1% et 0,25% a protégé les cellules de 45%, 55% et 71%, respectivement, contre la diminution de la production d'ATP induite par l'exposition au stress. Exemple 3a - Evaluation in vitro de l'effet sur le niveau énergétique des cellules par la mesure d'ATP - Effet sur la baisse d'ATP due à un peptide induisant la sénescence (traitement pendant le stress) L'effet a été évalué dans des fibroblastes de derme humain issus d'un donneur de 51 ans. Les cellules ont été ensemencées dans du milieu contenant 10% de sérum de veau foetal (SVF) puis incubées pendant 5 jours. Elles ont ensuite été traitées avec le peptide à 201.1M et avec et sans le produit obtenu par le procédé selon l'invention à 0,15%. Après 4h à 37°C, un dosage de l'ATP a été réalisé à l'aide du kit Mito Tox Glo (Promega). Les résultats exprimés en % par rapport au témoin obtenus sont illustrés dans la figure 5. Les oligosaccharides selon l'invention protègent significativement les fibroblastes d'une baisse d'ATP induite par le peptide: +82% d'ATP avec ledit produit à 0,15% (Figure 5 en annexe). Exemple 3b - Evaluation in vitro de l'effet sur le niveau énergétique des cellules par la mesure d'ATP - Effet sur la baisse d'ATP due à un peptide induisant la sénescence (prétraitement avant le stress) L'effet a été évalué dans des fibroblastes de derme humain issus d'un donneur de 39 ans. Les cellules ont été ensemencées dans du milieu contenant 10% de sérum de veau foetal (SVF) puis incubées pendant 4 jours. Elles ont ensuite été prétraitées ou non avec le produit obtenu par le procédé selon l'invention à 0,15% pendant 18h puis traitées avec le peptide à 201.1M en présence ou non dudit produit à 0,15%. Après 4h à 37°C, un dosage de l'ATP a été réalisé à l'aide du kit Mito Tox Glo (Promega). Les résultats exprimés en % par rapport au témoin sont illustrés dans la figure 6. 8 Le prétraitement par les oligosaccharides selon l'invention seul protège les fibroblastes d'une baisse d'ATP induite par l'ajout ultérieur du peptide (+23%). Cet effet protecteur est encore plus important lorsque le prétraitement est suivi d'un traitement avec lesdits oligosaccharides pendant le stress avec le peptide (+65%). Exemple 4 - Evaluation de l'effet sur l'activité des cellules par la mesure de la synthèse de collagène L'effet sur la synthèse de collagène a été évalué dans des fibroblastes de derme humain issus d'un donneur de 39 ans, utilisés au 12ème repiquage. Les cellules ont été ensemencées à raison de 5000 cellules par puits et cultivées en présence de milieu contenant 10% de SVF (sérum de veau foetal) pendant 4 jours. Au bout de ces 4 jours, les cellules ont été traitées ou non (contrôle) par le produit obtenu par le procédé selon l'invention à 0,005%, 0,01% ou 0,1%, respectivement, en présence de milieu contenant 2% de SVF puis incubées pendant 3 jours. Le traitement a été renouvelé, puis les cellules ont été incubées pendant 3 jours. Au bout des 3 jours de traitement, un marquage du collagène de type I en immunofluorescence a été réalisé suivi d'une observation microscopique et d'une évaluation semi-quantitative du marquage. Les résultats exprimés en % de fluorescence ramené à 100 noyaux sont illustrés dans la figure 7. La référence positive testée (mélange TGF-beta/vitamine C) stimule significativement la synthèse de collagène de type I de +184%. Ce résultat était attendu et valide l'étude. Les oligosaccharides selon l'invention stimulent significativement la synthèse de collagène aux trois concentrations testées. Exemple 5a - Evaluation de l'effet protecteur vis-à-vis d'un peptide induisant la sénescence, mis en évidence par la mesure du collagène de type 1, diminué par le vieillissement - Effet protecteur vis-à-vis de la chute du collagène L'effet protecteur a été évalué dans des fibroblastes de derme humain issus d'un donneur de 51 ans. Les cellules ont été ensemencées puis incubées pendant 5 jours selon quatre conditions : 1) sans le peptide (témoin négatif), 2) avec le peptide et sans les oligosaccharides selon l'invention (témoin positif), 3) avec les oligosaccharides selon l'invention à 0,15% pendant 24h seul puis le peptide seul (= prétraitement), 4) avec les oligosaccharides selon l'invention à 9 0,15% pendant 24h seul puis le peptide + les oligosaccharides selon l'invention à 0,15% (= prétraitement+ pendant le stress). A la fin de l'incubation, un marquage en immunofluorescence du collagène de type I a été réalisé. Des photos ont été prises pour observation du collagène. Ces photos sont rapportées en figures 8a, 8b, 8c et 8d. La figure 8a correspond aux fibroblastes non traités. La figure 8b correspond aux fibroblastes traités par le peptide (1µM). La figure 8c correspond aux fibroblastes prétraités par le produit selon l'invention (0,15%) puis traités par le peptide (luM) sans le produit selon l'invention. La figure 8d correspond aux fibroblastes prétraités par le produit selon l'invention (0,15%) puis traités par le peptide (luM) + le produit selon l'invention (0,15%). On observe une diminution de la synthèse de fibres de collagène de type 1 avec le traitement par le peptide (cf. figures 8a versus figure 8b). Le prétraitement par le produit obtenu selon l'invention à 0,15% avant le stress prévient la chute de cette synthèse (cf. figure 8c versus figure 8b), et le prétraitement suivi d'un traitement pendant le stress protège le collagène (cf. figure 8d versus figure 8b), et le stimule même plus que le témoin négatif (cf figure 8d versus figure 8a). Exemple 5b - Evaluation de l'effet protecteur vis-à-vis d'un peptide induisant la sénescence, mis en évidence par la mesure de l'activité SA-beta galactosidase (effet sur des fibroblastes issus d'un donneur de 55 ans) Cet effet a été évalué par le marquage de la beta galactosidase associée à la sénescence des cellules (SA-Beta-gal) dans des fibroblastes de derme humain provenant d'un donneur de 55 ans utilisés au Sème repiquage. Des fibroblastes d'un donneur de 70 ans ont également été utilisés comme témoin positif. Les cellules ont été traitées pendant 11 jours avec ou sans le peptide induisant la sénescence à 0,1uM et avec ou sans les oligosaccharides selon l'invention à 0,15%. Le marquage de la SA-beta galactosidase a ensuite été réalisé par colorimétrie en utilisant un kit spécifique. Des photographies ont été prises pour observation de la SA-beta galactosidase en bleu vert. Celles-ci sont rapportées en figures 9a, 9b, 9c et 9d. La figure 9a correspond aux fibroblastes du donneur de 70 ans non traités (contrôle positif). La figure 9b correspond aux fibroblastes du donneur de 55 ans non traités. La figure 9c correspond aux fibroblastes du donneur de 55 ans traités avec le peptide (luM). La figure 9d correspond aux fibroblastes du donneur de 55 ans traités avec le peptide (luM) et les oligosaccharides selon l'invention (0,15%). Une analyse d'images a également été réalisée afin de la quantifier par mesure de la SomIntensité Seuillage. Celle-ci est rapportée en figure 10. Le niveau d'activité de la SA-beta galactosidase est significativement plus élevé de +56% dans les fibroblastes 70 ans par rapport à celui des cellules de 55 ans. Le traitement des fibroblastes de 55 ans par le peptide à 0,1jt M stimule significativement de +59% l'activité de la SA-beta galactosidase par rapport aux cellules non traitées. Le niveau est proche de celui mesuré dans les cellules de 70 ans. Le traitement par les oligosaccharides selon l'invention 0.15% permet de contrer cette augmentation de la SA-beta galactosidase de -24% (soit 65% de protection). Les oligosaccharides selon l'invention protègent les fibroblastes de la sénescence induite par le peptide. Exemple 5c - Evaluation de l'effet protecteur vis-à-vis d'un peptide induisant la sénescence, mis en évidence par la mesure de l'activité SA-beta galactosidase (effet sur des fibroblastes issus d'un donneur de 70 ans) Cet effet a été évalué par marquage de la SA-beta galactosidase dans des fibroblastes de derme humain provenant d'un donneur de 70 ans. Les cellules ont été traitées pendant 11 jours avec ou sans le peptide induisant la sénescence à 0,1uM et avec ou sans les oligosaccharides selon l'invention à 0,15%. Le marquage de la SA-beta galactosidase a ensuite été réalisé par colorimétrie en utilisant un kit spécifique. Des photographies ont été prises pour observation de la SA-beta galactosidase en bleu vert. Celles-ci sont rapportées en figures 11a, 11b, 11c et 11d. La figure 1 la correspond aux fibroblastes du donneur de 70 ans non traités. La figure 1 lb correspond aux fibroblastes du donneur de 70 ans traités avec le peptide (l µM). La figure 11c correspond aux fibroblastes du donneur de 70 ans traités avec les oligosaccharides selon l'invention (0,15%). La figure 1 ld correspond aux fibroblastes du donneur de 70 ans traités avec les oligosaccharides selon l'invention (0 ,15%) et le peptide (l µM). Le niveau d'activité de la SA-beta galactosidase est assez élevé dans les cellules du donneur de 70 ans avec ou sans le peptide. Le traitement avec l'oligosaccharide de l'invention à 0,15% diminue le niveau de SA-beta galactosidase des cellules, qu'elles soient traitées ou non par le peptide. Ceci montre un effet anti-âge de l'oligosaccharide sur des cellules âgées même en absence d'un REVENDICATIONS1. Un procédé d'obtention d'un produit à partir d'alginate, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : (1) solubilisation de l'alginate pendant au moins six heures à une concentration de 5,2% ; puis (2) dépolymérisation enzymatique à une température de 22°C, à un pH de 7,5 et pendant au moins trois heures au moyen d'une mannuronate lyase présente dans un ratio massique enzyme/alginate de 0,01% ; puis (3) hydrolyse partielle en milieu acide à une température de 94°C, à un pH de 1,5 et pendant trois heures par ajout d'acide sulfurique dans un ratio acide/alginate de 30% en poids sec; puis (4) refroidissement pendant une heure jusqu'à une température inférieure à 35° ; puis (5) filtration sur filtre de cellulose. 2. Procédé d'obtention selon la revendication 2, caractérisé en ce que la mannuronate lyase est une alginate lyase. 3. Produit obtenu à partir d'alginate par le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes. 4. Produit obtenu à partir d'alginate selon la revendication 3, ledit produit étant destiné à préserver l'activité énergétique des fibroblastes du derme. 5. Produit obtenu à partir d'alginate selon la revendication 4, ledit produit étant destiné à prévenir ou limiter la diminution de la production d'ATP par les fibroblastes induite par le stress. 6. Produit obtenu à partir d'alginate selon la revendication 4, ledit produit étant destiné à prévenir ou limiter la diminution de la production d'ATP par les fibroblastes induite par la senescence. 12 7 Produit obtenu à partir d'alginate selon la revendication 3, ledit produit étant destiné à stimuler la synthèse de protéines de la matrice extracellulaire, notamment de collagène, par les fibroblastes. 13