Brevet FR3074683A1 — publié le 20190614

Compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable comprenant du glucagon humain et un co-polyarninoacide [0001] Le glucagon humain est une hormone hyperglycémiante d'action brève qui permet d'augmenter la glycémie, corrigeant ainsi un niveau hypoglycémique pouvant résulter d'un excès d'insuline. Il permet la libération de glucose par stimulation de la glycogénolyse hépatique, et possède des propriétés antagonistes de l'insuline (hypoglycémiante). Le glucagon humain est normalement sécrété par les cellules alpha des ilots de Langerhans dans le pancréas lorsqu'une hypoglycémie est détectée. [0002] Le glucagon humain est utilisé à des fins thérapeutiques, comme le traitement d'urgence d'hypoglycémies sévères, encore appelé « rescue », mais également dans un cadre diagnostique lors de la réalisation d'examens médicaux, par exemple pour inhiber la motilité gastro-intestinale. D'autres applications sont également envisagées pour le glucagon humain, en particulier son utilisation dans un système de régulation bi-hormonal de la glycémie aussi appelé pancréas artificiel et dans l'hyperinsulinisme congénital qui est une maladie rare caractérisée par des niveaux très élevés d'insuline. [0003] L'utilisation clinique du glucagon humain a été limitée à cause de certaines de ses propriétés peu favorables pour développer un produit pharmaceutique stable à visée thérapeutique. En effet, le glucagon humain présente une très faible solubilité à pH physiologique, une forte instabilité physique, à cause de sa propension à former des fibrilles sur une large gamme de pH. C'est pour cette raison que les seuls produits commerciaux à base de glucagon humain (Glucagen®, NOVO NORDISK et Glucagon pour injection, ELI LILLY) sont des formes lyophilisées à reconstituer extemporanément. [0004] Les travaux d'Onoue et al. (Pharm. Res. 2004, 21(7), 1274-83) ont montré le caractère potentiellement dangereux de ces fibrilles : le glucagon humain fibrillé étant cytotoxique dans des cellules de mammifères en culture. [0005] Outre son instabilité physique, le glucagon humain subit divers types de dégradation chimique. En solution aqueuse, il se dégrade rapidement pour former plusieurs produits de dégradation. Au moins 16 produits de dégradation du glucagon humain ont été identifiés par Kirsh et al. (International Journal of Pharmaceutics, 2000, 203, 115-125). La dégradation chimique de ce glucagon humain est donc rapide et complexe. [0006] La mauvaise stabilité chimique et physique du glucagon humain en solution a conduit des sociétés pharmaceutiques comme NOVO NORDISK, EU I LILLY et plus récemment FRESENIUS KABI à commercialiser ce glucagon humain sous la forme d'un lyophilisat à reconstituer à pH acide (pH . [000152] On entend par « composition stable physiquement » des compositions qui après une certaine durée de stockage à une certaine température satisfont aux critères de l'inspection visuelle décrite dans la pharmacopée européenne, américaine et internationale, c'est-à-dire des compositions qui sont limpides et qui ne contiennent pas 30 de particules visibles, mais également incolores. [000153] On entend par « composition stable chimiquement » des compositions qui, après stockage un certain temps et à une certaine température, présentent une recouvrance minimum des principes actifs et sont conformes aux cahiers des charges applicables aux produits pharmaceutiques. 35 [000154] Une méthode classique pour mesurer les stabilités des protéines ou peptides consiste à mesurer la formation de fibrilles à l'aide de Thioflavine T, encore appelée ThT. Cette méthode permet de mesurer dans des conditions de température et d'agitation qui permettent une accélération du phénomène, le temps de latence avant 34 la formation de fibrilles par mesure de l'augmentation de la fluorescence. Les compositions selon l'invention ont un temps de latence avant la formation de fibrilles nettement supérieur à celui du glucagon au pH d'intérêt. 5 [000155] On entend par « solution aqueuse injectable » des solutions à base d'eau qui répondent aux conditions des pharmacopées EP et US, et qui sont suffisamment liquides pour être injectées. [000156] On entend par « co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques » des enchainements linéaires non cycliques d'unités acide glutamique 10 ou acide aspartique liées entre elles par des liaisons peptidiques, lesdits enchainements présentant une partie C terminale, correspondant à l'acide carboxylique d'une extrémité, et une partie N-terminale, correspondant à l'amine de l'autre extrémité de l'enchainement. 15 [000157] On entend par « radical alkyl » une chaine carbonée, linéaire ou ramifiée, qui ne comprend pas d'hétéroatome. [000158] Le co-polyaminoacide est un co-polyaminoacide statistique ou bloc. [000159] Le co-polyaminoacide est un co-polyaminoacide statistique dans l'enchaînement des unités glutamiques et/ou aspartiques. 20 [000160] Tous les rattachements entre les différents groupes GpR, GpA, GpL, GpG et GpC sont des fonctions amides. [000161] Les radicaux Hy, GpR, GpA, GpL, GpG et GpC, et D sont chacun indépendamment identiques ou différents d'une unité monomérique à l'autre. 25 [000162] Lorsque le co-polyaminoacide comprend une ou plusieurs d'unité(s) aspartique(s), celle(s)-ci peu(ven)t subir des réarrangements structuraux. [000163] Dans un mode de réalisation la composition selon l'invention est caractérisée en ce que les co-polyaminoacides peuvent en outre comprendre des unités nnonomériques de formule XXXI et/ou XXXI' : OX O H Formule XXXI 30 Formule XXXI' 35 [000164] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation. [000165] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est 5 caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation par ouverture de cycle d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique. [000166] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par 10 polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique comme décrit dans l'article de revue Adv. Polym. Sci. 2006, 202, 1-18 (Deming, T.1). [000167] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par 15 polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique. [000168] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique choisi dans le groupe constitué par le N-carboxyanhydride glutamate de méthyle (GluOMe-NCA), le N- 20 carboxyanhydride glutamate de benzyle (G1u0BzI-NCA) et le N-carboxyanhydride glutamate de t-butyle (GluOtBu-NCA). [000169] Dans un mode de réalisation, le dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique est le N-carboxyanhydride L-glutamate de méthyle (L-GluOMe-NCA). [000170] Dans un mode de réalisation, le dérivé de N-carboxyanhydride d'acide 25 glutamique est le N-carboxyanhydride L-glutamate de benzyle (L-G1u0BzI-NCA). [000171] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique en utilisant comme initiateur un complexe 30 organométallique d'un métal de transition comme décrit dans la publication Nature 1997, 390, 386-389 (Deming, [000172] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de 35 N-carboxyanhydride d'acide aspartique en utilisant comme initiateur l'ammoniaque ou une amine primaire comme décrit dans le brevet FR 2,801,226 (Touraud, F. ; et al.) et les références citées par ce brevet. 36 [000173] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique en utilisant comme initiateur 5 l'hexaméthyldisilazane comme décrit dands la publication J. Am. Chem. Soc. 2007, 129, 14114-14115 (Lu H. ; et al.) ou une amine silylée comme décrit dans la publication J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 12562-12563 (Lu H. ; et al.). [000174] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le procéde de synthèse du polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un 10 dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique dont est issu le co-polyaminoacide comprend une étape d'hydrolyse de fonctions ester. [000175] Dans un mode de réalisation, cette étape d'hydrolyse de fonctions ester peut consister en une hydrolyse en milieu acide ou une hydrolyse en milieu basique ou être 15 effectuée par hydrogénation. [000176] Dans un mode de réalisation, cette étape d'hydrolyse de groupements ester est une hydrolyse en milieu acide. [000177] Dans un mode de réalisation, cette étape d'hydrolyse de groupements ester est effectuée par hydrogénation. 20 [000178] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire. [000179] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée 25 en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation enzymatique d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire. [000180] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation chimique d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire. 30 [000181] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation enzymatique et chimique d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire. [000182] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée 35 en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire choisi dans le groupe constitué par le polyglutamate de sodium et le polyaspartate de sodium. 37 [000183] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation d'un polyglutamate de sodium de plus haut poids moléculaire. [000184] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est 5 caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation d'un polyaspartate de sodium de plus haut poids moléculaire. [000185] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est obtenu par greffage d'un groupe hydrophobe sur un poly-L-glutamique acide ou poly-L-aspartique acide en utilisant les 10 procédés de formation de liaison amide bien connus de l'homme de l'art. [000186] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est obtenu par greffage d'un groupe hydrophobe sur un poly-L-glutamique acide ou poly-L-aspartique acide en utilisant les procédés de formation de liaison amide utilisés pour la synthèse peptidique. 15 [000187] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est obtenu par greffage d'un groupe hydrophobe sur un poly-L-glutamique acide ou poly-L-aspartique acide comme décrit dans le brevet FR 2,840,614 (Chan, Y.P. ; et al.). 20 [000188] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 40 mg/mL. [000189] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 30 mg/mL. [000190] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide 25 porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 20 mg/mL. [000191] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 10 mg/mL. [000192] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 5 mg/mL. 30 [000193] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 2,5 mg/mL. [000194] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 1 mg/mL. [000195] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide 35 porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 0,5 mg/mL. 38 [000196] Dans un mode de réalisation, le ratio massique co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes sur glucagon est compris entre 1,5 et 25. [000197] Dans un mode de réalisation, le ratio massique co-polyaminoacide porteur 5 de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes sur glucagon est compris entre 2 et 20. [000198] Dans un mode de réalisation, le ratio massique co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes sur glucagon est compris entre 2,5 et 15. 10 [000199] Dans un mode de réalisation, le ratio massique co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes sur glucagon est compris entre 2 et 10. [000200] Dans un mode de réalisation, le ratio massique co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes sur glucagon est compris entre 2 15 et 7. [000201] Le glucagon humain est utilisé à des posologies qui varient en fonction des applications. [000202] En traitement d'urgence des hypoglycémies la posologie recommandée est 20 de 1 mg par voie intramusculaire ou intraveineuse (0,5 mg si la masse corporelle est inférieur à 25 kg). Cette administration est effectuée avec une solution de glucagon humain à la concentration de 1 mg/ml. [000203] Dans les pompes, la dose journalière envisagée est d'environ 0,5 mg, les solutions peuvent ainsi comprendre de 0,25 mg/mi à 5 mg/mi de glucagon humain. 25 [000204] Selon un mode de réalisation les solutions peuvent comprendre de 0,5 mg/mi à 3 mg/ml de glucagon humain. [000205] Dans le traitement de l'obésité la dose journalière envisagée est d'environ 0,5 mg, les solutions peuvent ainsi comprendre de 0,25 mg/mi à 5 mg/mi de glucagon humain. 30 [000206] Dans un mode de réalisation, la concentration en glucagon humain est comprise entre 0,25 et 5 mg/mL. [000207] Dans un mode de réalisation, la concentration en glucagon humain est comprise entre 0,5 et 4 mg/mL. [000208] Dans un mode de réalisation, la concentration en glucagon humain est 35 comprise entre 0,75 et 3 mg/mL. [000209] Dans un mode de réalisation, la concentration en glucagon humain est comprise entre 0,75 et 2,5 mg/mL. 39 [000210] Dans un mode de réalisation, la concentration en glucagon humain est comprise entre 0,75 et 2 mg/nnL. [000211] Dans un mode de réalisation, la concentration en glucagon humain est comprise entre 1 et 2 mg/mL. 5 [000212] Dans un mode de réalisation, hydrophobe]/[glucagon humain] est inférieur à 20. [000213] Dans un mode de réalisation, hydrophobe]/[glucagon humain] est inférieur à 15. 10 [000214] Dans un mode de réalisation, hydrophobe]/[glucagon humain] est inférieur à 10. [000215] Dans un mode de réalisation, hydrophobe]/[glucagon humain] est inférieur à 5. [000216] Dans un mode de réalisation, 15 hydrophobe]/[glucagon humain] est inférieur à 2,5. [000217] Dans un mode de réalisation, hydrophobe]/[glucagon humain] est inférieur à 1,5. le ratio molaire [radical le ratio molaire [radical le ratio molaire [radical le ratio molaire [radical le ratio molaire [radical le ratio molaire [radical [000218] de charges 20 inférieur à 2 [000219] de charges inférieur à 1 [000220] 25 de charges inférieur à 1 [000221] de charges inférieur à 5 30 [000222] de charges inférieur à 2 [000223] de charges 35 inférieur à 1 Dans un mode de réalisation, carboxylates et de radicaux 0. Dans un mode de réalisation, carboxylates et de radicaux 5. Dans un mode de réalisation, carboxylates et de radicaux 0. Dans un mode de réalisation, carboxylates et de radicaux Dans un mode de réalisation, carboxylates et de radicaux 5. Dans un mode de réalisation, carboxylates et de radicaux 5. le ratio molaire [co-polyaminoacide porteur hydrophobes Hy]/[glucagon humain] est le ratio molaire [co-polyaminoacide porteur hydrophobes Hy]/[glucagon humain] est le ratio molaire [co-polyaminoacide porteur hydrophobes Hy]/[glucagon humain] est le ratio molaire [co-polyaminoacide porteur hydrophobes Hy]/[glucagon humain] est le ratio molaire [co-polyaminoacide porteur hydrophobes Hy]/[glucagon humain] est le ratio molaire [co-polyaminoacide porteur hydrophobes Hy]/[glucagon humain] est [000224] Le glucagon humain est un polypeptide hautement conservé comprenant une chaîne simple de 29 résidus d'acides aminés présentant la séquence suivante HHis-Ser-Gln-Gly-Th r-Phe-Th r-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-GlnAsp-Phe-Val-Gln-Trp-L eu-Met-Asn-Thr-OH. 5 [000225] Il peut être obtenu de différentes manières, par synthèse peptidique par recombinaison. [000226] Le glucagon humain est disponible via de nombreuses sources. Par exemple il peut s'agir du glucagon humain produit par Bachem via synthèse peptidique, notamment sous la référence 407473. 10 [000227] Dans un mode de réalisation, la composition comprend en outre un composé nicotinique ou un de ses dérivés. [000228] Dans un mode de réalisation, la composition comprend de la nicotinamide. [000229] Dans un mode de réalisation, la concentration de nicotinamide va de 10 à 15 160 mM. [000230] Dans un mode de réalisation, la concentration de nicotinamide va de 20 à 150 mM. [000231] Dans un mode de réalisation, la concentration de nicotinamide va de 40 à 120 mM. 20 [000232] Dans un mode de réalisation, la concentration de nicotinamide va de 60 à 100 mM. [000233] Dans un mode de réalisation, la composition comprend en outre un composé polyanionique. 25 [000234] Dans un mode de réalisation, le composé polyanionique est choisie dans le groupe constitué des polyacides carboxyliques et leurs sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+. [000235] Dans un mode de réalisation, le polyacide carboxylique est choisi dans le groupe constitué par l'acide citrique, l'acide tartrique, et leurs sels de Na, K+, Ca2+ ou me. 30 [000236] Dans un mode de réalisation, le composé polyanionique est choisi dans le groupe constitué des polyacides phosphoriques et leurs sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+. [000237] Dans un mode de réalisation, le polyacide phosphorique est le triphosphate et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+. [000238] Dans un mode de réalisation, le composé polyanionique est l'acide citrique 35 et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+. [000239] Dans un mode de réalisation, le composé polyanionique est l'acide tartrique et ses sels de Na, e, Ca2+ ou Mg2+. 41 [000240] Dans un mode de réalisation, le composé polyanionique est l'acide triphosphorique et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+. [000241] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique 5 est comprise entre 1 et 20 mM. [000242] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique est comprise entre 2 et 15 mM. [000243] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique est comprise entre 3 et 12 mM. 10 [000244] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique est de 10 mM. [000245] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique est de 5 mM. 15 [000246] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique est de 10 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 0,5 mg/mi et 3 mg/ml. [000247] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique est de 10 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 0,5 mg/mi et 2 20 mg/ml. [000248] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique est de 10 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 1 mg/mi et 2 mg/ml. [000249] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique 25 est de 5 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 0,5 mg/m1 et 3 mg/ml. [000250] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique est de 5 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 0,5 mg/mi et 2 mg/ml. 30 [000251] Dans un mode de réalisation, la concentration en composé polyanionique est de 5 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 1 mg/m1 et 2 mg/ml. [000252] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+ est comprise entre 1 et 20 mM. 35 [000253] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+ est comprise entre 2 et 15 mM. [000254] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+ est comprise entre 3 et 12 mM. 42 [000255] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+ est de 10 mM. [000256] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+ est de 5 mM. 5 [000257] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+ est de 10 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 0,5 mg/mi et 3 mg/ml. [000258] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels 10 de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+ est de 10 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 0,5 mg/mi et 2 mg/ml. [000259] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+ est de 10 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 1 mg/m1 et 2 mg/ml. 15 [000260] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels de Na, e, Ca2+ ou Mg2+ est de 5 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 0,5 mg/mi et 3 mg/ml. [000261] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels 20 de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+ est de 5 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 0,5 mg/mi et 2 mg/mi. [000262] Dans un mode de réalisation, la concentration en acide citrique et ses sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg 2+ est de 5 mM pour des concentrations en glucagon comprises entre 1 mg/mi et 2 mg/ml. 25 [000263] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre une hormone gastrointestinale. [000264] On entend par « hormones gastrointestinales », les hormones choisies dans le groupe constitué par les GLP-1 RA pour agonistes du récepteur Glucagon 30 humain-Like Peptide-1 (Glucagon like peptide-1 receptor agonist)Glucagon like) et le GIP (Glucose-dependent insulinotropic peptide), l'oxyntonnoduline (un dérivé du proglucagon humain), le peptide YY, l'amyline, la cholecystokinine, le polypeptide pancréatique (PP), la ghreline et l'entérostatine, leurs analogues ou dérivés et/ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 35 [000265] Dans un mode de réalisation, les hormones gastro-intestinales sont des analogues ou dérivés de GLP-1 RA (Glucagon like peptide-1 receptor agonist) choisis dans le groupe constitué par l'exenatide ou Byetta® (ASTRA-ZENECA) le liraglutide ou 43 Victoza® (NOVO NORDISK), le lixisenatide ou Lyxumia® (SANOFI), l'albiglutide ou Tanzeum® (GSK) ou le dulaglutide ou Trulicity° (ELI LILLY 8i CO), leurs analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. [000266] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le pramlintide 5 ou Symline(ASTRA-ZENECA). [000267] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est l'exenatide ou Byetta® ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. [000268] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le liraglutide 10 ou Victoza® ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. [000269] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le lixisenatide ou Lyxumiae ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. [000270] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est l'albiglutide ou Tanzeume ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 15 [000271] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le dulaglutide ou Trulicitye ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. [000272] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le pramlintide ou Symline, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 20 [000273] On entend par « analogue », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, un peptide ou une protéine, dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été substitués par d'autres résidus d'acides aminés et/ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été supprimés et/ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été ajoutés. Le 25 pourcentage d'homologie admis pour la présente définition d'un analogue est de 50%. [000274] On entend par « dérivé », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, un peptide ou une protéine ou un analogue chimiquement modifié par un substituant qui n'est pas présent dans le peptide ou la protéine ou l'analogue de référence, c'est-à-dire un peptide ou une protéine qui a été modifié par création de 30 liaisons covalentes, pour introduire des substituants. [000275] Dans un mode de réalisation, le substituant est choisi dans le groupe constitué des chaînes grasses. [000276] Dans un mode de réalisation, la concentration en hormone gastrointestinale est comprise dans un intervalle de 0,01 à 10 mg/mL. 35 [000277] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,04 à 0,5 mg/mL. 44 [000278] Dans un mode de réalisation, la concentration en liraglutide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 1 à 10 mg/mL. [000279] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide, ses 5 analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,01 à 1 mg/mL. [000280] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramlintide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise entre 0,1 à 5 mg/mL. 10 [000281] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention sont réalisées par mélange de solutions de glucagon humain obtenues par reconstitution de lyophilisat et de solutions de GLP-1 RA (Glucagon like peptide-1 receptor agonist) GLP1 RA , d'analogue ou de dérivé de GLP-1 RA lesdites solutions de GLP-1 RA étant 15 commerciales ou reconstituées à partir de lyophilisat. [000282] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des tampons. [000283] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent des tampons à des concentrations comprises entre 0 et 100 mM. 20 [000284] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent des tampons à des concentrations comprises entre 15 et 50 mM. [000285] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent un tampon choisi dans le groupe constitué par un tampon phosphate, le Tris (trishydroxyméthylaminométhane) ou le citrate de sodium. 25 [000286] Dans un mode de réalisation, le tampon est le phosphate de sodium. [000287] Dans un mode de réalisation, le tampon est le Tris (trishydroxyméthylaminométhane). [000288] Dans un mode de réalisation, le tampon est le citrate de sodium. 30 [000289] Dans un mode de réalisation, la composition comprend en outre un sel de zinc, en particulier du chlorure de zinc. [000290] Dans un mode de réalisation, la concentration en sel de zinc est comprise entre 50 et 5000 pM. [000291] Dans un mode de réalisation, la concentration en sel de zinc est comprise 35 entre 100 et 2000 pM. [000292] Dans un mode de réalisation, la concentration en sel de zinc est comprise entre 200 et 1500 pM. [000293] Dans un mode de réalisation, la concentration en sel de zinc est comprise entre 200 et 1000 pM. [000294] Dans un mode de réalisation, la concentration en zinc est telle que le ratio molaire [zinc]/[glucagon] est compris entre 0,1 et 2,5. 5 [000295] Dans un mode de réalisation, la concentration en zinc est telle que le ratio molaire [zinc]/[glucagon] est compris entre 0,2 et 2. [000296] Dans un mode de réalisation, la concentration en zinc est telle que le ratio molaire [zinc]/[glucagon] est compris entre 0,5 et 1,5. [000297] Dans un mode de réalisation, la concentration en zinc est telle que le ratio 10 molaire [zinc]/[glucagon] est 1. [000298] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des conservateurs. [000299] Dans un mode de réalisation, les conservateurs sont choisis dans le groupe 15 constitué par le m-crésol et le phénol seuls ou en mélange. [000300] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des antioxydants. [000301] Dans un mode de réalisation, les antioxydants sont choisis parmi la méthionine. 20 [000302] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise entre 10 et 50 mM. [000303] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise entre 10 et 40 nnM. [000304] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention 25 comprennent en outre un tensioactif. [000305] Dans un mode de réalisation, le tensioactif est choisi dans le groupe constitué par le propylène glycol ou le polysorbate. [000306] Les compositions selon l'invention peuvent en outre comprendre des additifs tels que des agents de tonicité. 30 [000307] Dans un mode de réalisation, les agents de tonicité sont choisis dans le groupe constitué par le chlorure de sodium, le mannitol, du sucrose, du sobitol et le glycérol. [000308] Les compositions selon l'invention peuvent comprendre en outre tous les excipients conformes aux pharmacopées et compatibles avec le glucagon humain et les 35 hormones gastro-intestinales, notamment les GLP-1 RA, utilisés aux concentrations d'usage. [000309] L'invention concerne également une formulation pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par séchage et/ou lyophilisation. 46 [000310] Dans le cas des libérations locale et systémique, les modes d'administration envisagés sont par voie intraveineuse, sous-cutanée, intradermique ou intramusculaire. [000311] Les voies d'administration transdermique, orale, nasale, vaginale, oculaire, buccale, pulmonaire sont également envisagées. 5 [000312] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,8 comprenant du glucagon humain. [000313] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,8 comprenant du glucagon humain et une hormone gastrointestinale, 10 telle que définie précédemment. [000314] Dans un mode de réalisation les formulations unidoses comprennent en outre un co-polyaminoacide substitué tel que défini précédemment. [000315] Dans un mode de réalisation, les formulations sont sous forme d'une solution injectable. Dans un mode de réalisation, le GLP-1 RA, analogue ou dérivé de 15 GLP-1 RA est choisi dans le groupe comprenant exenatide (Byetta®), liraglutide (Victozan, lixisenatide (Lyxumia®), albiglutide (Tanzeum®), dulaglutide (Trulicity®) ou l'un de leurs dérivés. [000316] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est l'exenatide. [000317] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le liraglutide. 20 [000318] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le lixisenatide. [000319] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est l'albiglutide. [000320] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le dulaglutide. [000321] Par ailleurs et de façon toute aussi importante, la demanderesse a pu 25 vérifier que le glucagon humain en présence d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention conserve son action que ce soit seul ou en combinaison avec une hormone gastrointestinale. [000322] La préparation d'une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution de glucagon humain, d'une 30 solution de GLP-1 RA, d'un analogue ou un dérivé de GLP-1 RA, et d'un co- polyaminoacide porteurs de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention, en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à pH 7. [000323] Dans un mode de réalisation le mélange de glucagon humain et de co- 35 polyanninoacide substitué est concentré par ultrafiltration avant le mélange avec de GLP- 1 RA, d'un analogue ou un dérivé de GLP-1 RA en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. 47 [000324] Si nécessaire, la composition du mélange est ajustée en excipients tels que glycérol, m-crésol, et polysorbate (Tween®) par ajout de solutions concentrées de ces excipients au sein du mélange. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à 7. 5 Description de la Figure 1 : Par-H- Synthèse des radicaux hydrophobes A2 Me° C13 H27 O OMe Molécule Hydrophobe Al Structure 0 OH 1-12N HO C13 H27 48 Exemple Al molécule Al 5 Molécule 1 : Produit obtenu par la réaction entre le Fmoc-Lys(Fmoc)-OH et la résine 2- Cl-trityl chloride. À une suspension de Fmoc-Lys(Fmoc)-OH (7,32 g, 12,40 mmol) dans du dichlorométhane (60 mL) à température ambiante est ajoutée de la DIPEA (4,32 mL, 24,80 mmol). Après solubilisation complète (10 min), la solution obtenue est versée sur 10 de la résine 2-CI-trityl chloride préalablement lavée au dichlorométhane (100-200 mesh, 1 % DVB, 1,24 mmol/g) (4,00 g, 4,96 mmol), dans un réacteur adapté à la synthèse A3 HCI A7 C131-127 A4 HCI NH C111.123 OMe A5 HCI H2N )r..1 NH C131-127 N Na0 49 peptidique sur support solide. Après 2 h d'agitation à température ambiante, du méthanol grade HPLC (0,8 nnL/g résine, 3,2 mL) est ajouté et le milieu est agité à température ambiante pendant 15 min. La résine est filtrée, lavée successivement avec du dichlorométhane (3 x 60 mL), du DMF (2 x 60 mL), du dichlorométhane (2 x 60 mL), 5 de l'isopropanol (1 x 60 mL) et du dichlorométhane (3 x 60 mL). Molécule 2 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule 1 et un mélange DMF/pipéridine 80:20. La molécule 1, préalablement lavée au DMF, est traitée avec un mélange DMF/pipéridine 10 80:20 (60 mL). Après 30 min d'agitation à température ambiante, la résine est filtrée, lavée successivement avec du DMF (3 x 60 mL), de l'isopropanol (1 x 60 mL) et du dichlorométhane (3 x 60 mL). Molécule 3 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule 2 et le Fmoc-Glu(OtBu)- 15 OH. À une suspension de Fmoc-Glu(OtBu)-OH (10,55 g, 24,80 mmol) et de 1- [bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate (HATU, 9,43 g, 24,80 mmol) dans un mélange DMF/dichlorométhane 1:1 (60 mL) est ajoutée de la DIPEA (8,64 mL, 49,60 mmol). 20 Après solubilisation complète, la solution obtenue est versée sur la molécule 2. Après 2 h d'agitation à température ambiante, la résine est filtrée, lavée successivement avec du DMF (3 x 60 mL), de l'isopropanol (1 x 60 mL) et du dichlorométhane (3 x 60 mL). Molécule 4 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule 3 et un mélange 25 DMF/morpholine 50:50. La molécule 3, préalablement lavée au DMF, est traitée avec un mélange DMF/morpholine 50:50 (60 mL). Après 1 h 15 d'agitation à température ambiante, la résine est filtrée, lavée successivement avec du DMF (3 x 60 mL), de l'isopropanol (1 x 60 mL) et du dichlorométhane (3 x 60 mL). 30 Molécule 5 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule 4 et la molécule 11. Par un procédé similaire à celui utilisé pour la molécule 3 appliqué à la molécule 4 et à la molécule 11 (8,07 g, 24,80 mmol) dans du DMF (60 mL), la molécule 5 est obtenue. 35 Molécule 6 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule 5 et un mélange dichlorométhane/1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP) 80:20. La molécule 5 est traitée avec un mélange dichlorométhane/1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- propanol (HFIP) 80:20 (60 mL). Après 20 min d'agitation à température ambiante, la résine est filtrée et lavée avec du dichlorométhane (2 x 60 mL). Les solvants sont évaporés sous pression réduite. Deux co-évaporations sont ensuite effectuées sur le 5 résidu avec du dichlorométhane (60 mL) puis du dilsopropyléther (60 mL). Le produit est purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane, méthanol). Un solide blanc de molécule 6 est obtenu. Rendement : 2,92 g (52 % sur 6 étapes) RMN (CD30D, ppm) : 0,90 (6H) ; 1,22-2,47 (88H) ; 3,13-3,25 (2H) ; 3,45-3,76 (4H) 10 ; 4,24-4,55 (5H). LC/MS (ESI+) : 1131,9 (calculé ([M+H]) : 1131,8). Molécule 7 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule 6 et la N-Boc éthylènediamine. 15 À une solution de la molécule 6 (2,82 g, 2,49 mmol) dans le Me-THF (20 mL) à température ambiante sont ajoutés successivement du N-hydroxybenzotriazole (HOBt, 496 mg, 3,24 mmol) et de la N-Boc éthylènediamine (BocEDA, 440 mg, 2,74 mmol). Le mélange est refroidi à 0 °C puis du chlorhydrate de (3-diméthylaminopropyI)-N'- éthylcarbodiimide (EDC, 621 mg, 3,24 mmol) est ajouté. Le milieu réactionnel est agité 20 pendant 15 min à 0 °C puis 18 h à température ambiante. La phase organique est diluée avec du dichlorométhane (30 mL) et lavée par une solution aqueuse saturée en NH4CI (2 x 20 mL), une solution aqueuse saturée en NaHCO3 (2 x 20 mL), et une solution aqueuse saturée en NaCI (2 x 20 mL). La phase organique est séchée sur Na2SO4, filtrée et concentrée sous pression réduite. Un solide blanc de la molécule 7 est obtenu après 25 recristallisation dans l'acétonitrile. Rendement : 2,47 g (78 0/0) RMN (CDCI3, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,09-1,77 (77H) ; 1,84-2,49 (20H) ; 2,99-3,83 (10H) ; 4,16-4,25 (1H) ; 4,27-4,47 (4H) ; 5,68 (0,1H) ; 5,95-6,08 (0,9H) ; 6,91-7,14 (2H) ; 7,43-7,57 (1H) ; 7,68-7,78 (1H) ; 8,22-8,35 (1H). 30 LC/MS (ESI+) : 1273,9 (calculé ([M+H]1) : 1273,9). Molécule Al À une solution de la molécule 7 (2,47 g, 1,94 mmol) dans le dichlorométhane (20 mL) à température ambiante est ajoutée une solution de HCI 4 N dans le dioxane (7,27 mL) 35 puis le milieu est agité pendant 16 h à température ambiante. Après concentration sous pression réduite, co-évaporation et lavage au diisopropyléther, un solide blanc de la molécule Al sous forme sel de HCI est obtenu. Ce solide est solubilisé dans de l'eau 51 (100 mL) puis le pH est ajusté à 7 par ajout d'une solution aqueuse de NaOH 1 N. La solution est lyophilisée puis le lyophilisat est séché par co-évaporation au toluène. Un solide blanc de molécule Al est obtenu. Rendement : 1,64 g (80 °A3) 5 RMN 1H (D20, ppm) : 0,90 (6H) ; 1,15-2,59 (70H) ; 3,06-3,86 (10H) ; 4,19-4,43 (5H). LC/MS (ESI+) : 1061,8 (calculé ([M+H]) : 1061,8). Exemple A2 : molécule A2 Molécule 8 : Produit obtenu par le couplage entre l'acide myristique et le L-glutamate 10 de méthyle. À une solution d'acide myristique (35,0 g, 153,26 mmol) dans le tétrahydrofurane (THF, 315 mL) à 0 °C sont ajoutés successivement du N-hydroxysuccinimide (NHS, 17,81 g, 154,79 mmol) et du N,N-dicyclohexylcarboxydiimide (DCC, 31,94 g, 154,79 mmol). Le milieu est agité pendant 48 h tout en remontant la température à l'ambiante, filtré sur 15 fritté puis ajouté à une solution de L-glutamate de méthyle (24,95 g, 154,79 mmol) et de N,N-diisopropyléthylarnine (DIPEA, 99,0 g, 766,28 mmol) dans l'eau (30 mL). Le mélange réactionnel est agité à 20 °C pendant 48 h puis concentré sous pression réduite. De l'eau (200 mL) est ajoutée et le mélange obtenu est traitée par addition successive d'acétate d'éthyle (AcOEt, 100 mL) puis d'une solution aqueuse de Na2CO3 à 20 5 % (50 mL). La phase aqueuse est ensuite lavée une nouvelle fois à l'AcOEt (100 mL), acidifiée par ajout d'une solution aqueuse de HCI 10 % et le produit est extrait au dichlorométhane (DCM, 3 x 150 mL). La phase organique est séchée sur Na2SO4, filtrée et concentrée sous pression réduite. Un solide blanc de molécule 8 est obtenu. Rendement : 47,11 g (84 0/0) 25 LC/MS (ESI+) : 372,2 (calculé ([M+H]) : 372,3). Molécule 9 : Produit obtenu par le couplage entre la molécule 8 et le L-glutamate de 30 méthyle. Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 8 et appliqué à la molécule 8 (35,0 g, 94,21 mmol) et au L-glutamate de méthyle (15,33 g, 95,15 mmol), un solide blanc de la molécule 9 est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile. 35 Rendement : 24,0 g (49 %) RMN 11-I (CDCI3, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,07-1,66 (22H) ; 2,02-2,11 (1H) ; 2,18-2,36 (3H) ; 2,39-2,47 (1H) ; 2,50-2,58 (1H) ; 3,69 (3H) ; 4,54-4,59 (1H) ; 6,62 (1H) ; 8,26 (1H). 52 RMN 1H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,06-1,51 (22H) ; 1,70-1,94 (3H) ; 1,96-2,15 (3H) ; 2,29-2,40 (4H) ; 3,58 (3H) ; 3,58 (3H) ; 4,16-4,22 (1H) ; 4,25-4,32 (1H) ; 7,93 (1H) ; 8,16 (1H) ; 12,66 (1H). LC/MS (ESI+) : 515,3 (calculé ([M+H]) : 515,3). 5 Molécule 10 : Produit obtenu par le couplage entre la molécule 9 et la N-Boc éthylènediamine. A une suspension de la molécule 9 (24,0 g, 46,63 mmol) dans le DCM (285 mL) à 0 °C sont ajoutés successivement du N-hydroxybenzotriazole (HOBt, 714 mg, 46,66 mmol), 10 de la N-Boc éthylènediannine (BocEDA, 8,97 g, 55,96 mmol) en solution dans le DCM (25 mL) puis du chlorhydrate de (3-diméthylaminopropyI)-N'-éthylcarbodiimide (EDC, 9,83 g, 51,30 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 1 h à 0 °C puis 18 h à température ambiante. La phase organique est lavée par une solution aqueuse saturée en NaHCO3 (2 x 300 mL), une solution aqueuse de HCI 1 N (2 x 300 mL), une solution 15 aqueuse saturée en NaCI (500 mL). Du méthanol (40 mL) est ajouté, la phase organique est séchée sur Na2SO4, filtrée et concentrée sous pression réduite. Un solide blanc de la molécule 10 est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile. Rendement : 27,15 g (89 0/0) RMN 1H (CDCI3, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,07-1,68 (22H) ; 1,42 (9H) ; 1,97-2,18 (4H) ; 20 2,22-2,31 (2H) ; 2,35-2,55 (4H) ; 3,19-3,29 (2H) ; 3,30-3,38 (2H) ; 3,66 (3H) ; 3,68 (3H) ; 4,34-4,41 (1H) ; 4,42-4,48 (1H) ; 5,54 (1H) ; 6,99-7,18 (2H) ; 7,56 (1H). LC/MS (ESI+) : 657,4 (calculé ([M+H]) : 657,4). 25 Molécule A2 A une solution de la molécule 10 (27,15 g, 41,33 mmol) dans un mélange DCM/méthanol (410 mL) à 0 °C est ajoutée une solution de HCI 4 N dans le dioxane (51,7 mL) et le milieu est agité pendant 2 h à 0 °C puis 16 h à température ambiante. Après concentration sous pression réduite et co-évaporation au méthanol (2 x 150 mL), 30 un solide blanc de la molécule A2 sous la forme d'un sel de chlorhydrate est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile. Rendement : 23,2 g (95 %) 35 LC/MS (ESI+) : 557,3 (calculé ([M+H]) : 557,4). RMN 1H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,05-1,52 (22H) ; 1,71-1,85 (2H) ; 1,87-2,03 (2H) ; 2,07-2,18 (2H) ; 2,24-2,37 (4H) ; 2,84 (2H) ; 3,24-3,38 (2H) ; 3,58 (3H) ; 3,58 (3H) ; 4,17-4,24 (2H) ; 7,95-8,08 (5H) ; 8,14 (1H). 53 Exemple A3 : molécule A3 Molécule 11 : Produit obtenu par la réaction entre le chlorure de myristoyle et la Lproline. A une solution de L-proline (300,40 g, 2,61 mol) dans de la soude aqueuse 2 N (1,63 5 L) à 0 °C est ajouté lentement sur 1 h du chlorure de rnyristoyle (322 g, 1,30 mol) en solution dans du dichlorométhane (DCM, 1,63 L). A la fin de l'ajout, le milieu réactionnel est remonté à 20 °C en 3 h, puis agité 2 h supplémentaires. Le mélange est refroidi à 0 °C puis une solution aqueuse de HCI à 37 % (215 mL) est ajoutée en 15 min. Le milieu réactionnel est agité pendant 1 h entre 0 °C et 20 °C. La phase organique est séparée, 10 lavée avec une solution aqueuse de HCI 10 % (3 x 430 mL), une solution aqueuse saturée en NaCI (430 mL), séchée sur Na2SO4, filtrée sur coton puis concentrée sous pression réduite. Le résidu est solubilisé dans de l'heptane (1,31 L) à 50 °C, puis la solution est ramenée progressivement à température ambiante. Après amorçage de la cristallisation à l'aide d'une tige en verre, le milieu est à nouveau chauffé à 40 °C 15 pendant 30 min puis ramené à température ambiante pendant 4 h. Un solide blanc est obtenu après filtration sur fritté, lavage à l'heptane (2 x 350 mL) et séchage sous pression réduite. Rendement : 410 g (97 %) RMN 1H (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,28 (20H) ; 1,70 (2H) ; 1,90-2,10 (3H) ; 2,36 20 (2H) ; 2,51 (1H) ; 3,47 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,61 (1H). LC/MS (ESI) : 326,4 ; 651,7 ; (calculé ([M+H]) : 326,3 ; ([2M+H]) : 651,6). Molécule 12 : Produit obtenu par le couplage entre la molécule 11 et le L-glutamate de méthyle. 25 Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 8 et appliqué à la molécule 11 (30,0 g, 92,17 mmol) et au L-glutamate de méthyle (15,60 g, 96,78 mmol), un solide blanc de la molécule 12 est obtenu après solubilisation dans l'acétone au reflux, refroidissement à température ambiante et filtration sur fritté. Le filtrat est évaporé et le résidu est précipité dans l'acétone comme précédemment, cette opération 30 étant répétée 3 fois. Rendement : 15,5 g (36 °/0) RMN 1H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,07-1,37 (20H) ; 1,40-1,50 (2H) ; 1,71-2,27 (8H) ; 2,30-2,40 (2H) ; 3,28-3,54 (2H) ; 3,58 (1,3H) ; 3,59 (1,7H); 4,14-4,28 (1H); 4,28-4,37 (1H) ; 8,06 (0,55H) ; 8,33 (0,45H) ; 12,64 (1H). 35 LC/MS (ESI+) : 469,2 (calculé ([M+H]) : 469,3). Molécule 13 : Produit obtenu par le couplage entre la molécule 12 et la N-Boc éthylènediamine. 54 Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 10 et appliqué à la molécule 12 (15,5 g, 33,05 mmol) et à la BocEDA (5,83 g, 36,36 mmol), un solide blanc de la molécule 13 est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile. Rendement : 19,8 g (83 0/0) 5 RMN 1H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,07-1,55 (22H) ; 1,37 (9H) ; 1,69-2,19 (7H) ; 2,22-2,36 (3H) ; 2,91-3,17 (4H) ; 3,28-3,60 (5H) ; 4,11-4,18 (0,7H) ; 4,20-4,28 (1H) ; 4,38-4,42 (0,3H) ; 6,74 (1H) ; 7,64 (0,7H) ; 7,87 (0,7H) ; 7,98 (0,3H) ; 8,22 (0,3H). LC/MS (ESI+) : 611,4 (calculé ([M+H]) : 611,4). 10 Molécule A3 Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 et appliqué à la molécule 13 (16,8 g, 27,50 mol), un solide blanc de la molécule A3 sous la forme d'un sel de chlorhydrate est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile. Rendement : 13,5 g (90 %) 15 RMN 1H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,08-1,52 (22H) ; 1,70-2,37 (10H) ; 2,80-2,90 (2H) ; 3,22-3,62 (4H) ; 3,57 (3H) ; 4,15-4,28 (1,75H) ; 4,41-4,44 (0,25H) ; 7,81-8,13 (4,5H) ; 8,24-8,29 (0,25H) ; 8,33-8,39 (0,25H). LC/MS (ESI+) : 511,3 (calculé ([M+H]) : 511,4). 20 Exemple A4 : Molécule A4 Molécule 14 : Produit obtenu par la réaction entre le chlorure de lauroyle et la L-proline Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 11 et appliqué à au chlorure de lauroyle (27,42 g, 685,67 mmol) et à la L-proline (60,0 g, 247,27 mmol), un solide blanc de la molécule 14 est obtenu. 25 Rendement : 78,35 g (96 %) RMN 1H (CDCI3, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,26 (16H) ; 1,70 (2H) ; 1,90-2,10 (3H) ; 2,35 (2H) ; 2,49 (1H) ; 3,48 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,60 (1H). LC/MS (ESI+) : 298,1 (calculé ([M+H]) : 298,2). 30 Molécule 15 : Produit obtenu par le couplage entre la molécule 14 et le L-glutamate de méthyle. Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 8 et appliqué à la molécule 14 (34,64 g, 116,46 mmol) et au L-glutamate de méthyle (19,14 g, 118,79 mmol), un solide blanc de la molécule 15 est obtenu après recristallisation dans 35 l'acétonitrile. Rendement : 37,28 g (73 0/0) RMN 1H (CDCI3, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,08-1,42 (16H) ; 1,54-1,06 (2H) ; 1,80-2,47 (10H) ; 3,42-3,80 (2H) ; 3,65 (2,55H) ; 3,67 (0,45H) ; 4,37-4,40 (0,15H) ; 4,51-4,58 (0,85H) ; 4,58-4,67 (1H) ; 7,26 (0,15H) ; 7,65 (0,85H) ; 8,06 (1H). LC/MS (ESI+) : 441,1 (calculé ([M+H]) : 441,3). 5 Molécule 16 : Produit obtenu par le couplage entre la molécule 15 et la N-Boc éthylènediamine. Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 10 et appliqué à la molécule 15 (37,30 g, 84,66 mmol) et à la BocEDA (14,92 g, 93,13 mmol), un 10 solide blanc de la molécule 16 est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile. Rendement : 43,10 g (87 °/0) RMN 1H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,08-1,53 (18H) ; 1,37 (9H) ; 1,70-2,36 (10H) ; 2,91-3,60 (9H) ; 4,11-4,18 (0,7H) ; 4,21-4,28 (1H) ; 4,38-4,42 (0,3H) ; 6,38 (0,1H) ; 6,74 (0,9H) ; 7,65 (0,7H) ; 7,87 (0,7H) ; 7,99 (0,3H) ; 8,22 (0,3H). 15 LC/MS (ESI+) : 583,4 (calculé ([M+H]-4-) : 583,4). Molécule A4 Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 et appliqué à la molécule 16 (43,10 g, 73,96 mmol), un solide blanc de la molécule A4 sous la forme 20 d'un sel de chlorhydrate est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile. Rendement : 31,90 g (83 °Al) RMN 1H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,05-1,37 (16H) ; 1,39-1,52 (2H) ; 1,70-2,37 (10H) ; 2,29-2,91 (2H) ; 3,20-3,62 (7H) ; 4,16-4,29 (1,7H) ; 4,42-4,46 (0,3H) ; 7,868,18 (4,6H) ; 8,32 (0,3H) ; 8,40 (0,3H). 25 LC/MS (ESI+) : 483,2 (calculé ([M+H]) : 483,3). Exemple A5 : molécule A5 Molécule 17 : Produit obtenu par la réaction entre la 1-annino-4,7,10-trioxa-13- tridécane amine et le tert-butyl phénylcarbonate. 30 À une solution de 1-amino-4,7,10-trioxa-13-tridécane amine (112,29 g, 509,71 mmol) dans l'éthanol (510 mL) à 80 °C est ajouté au goutte à goutte du tert-butyl phénylcarbonate (49,50 g, 254,86 mmol). Le milieu réactionnel est agité à 80 °C pendant 3 h 30 puis concentré sous pression réduite. Le résidu est solubilisé dans de l'eau (250 mL), le pH est ajusté à 2,3 avec une solution de HCI 37 % et le mélange est 35 extrait au méthyl tert-butyléther (MTBE, 2 x 150 mL). La phase aqueuse est basifiée à pH 12,6 par addition d'une solution de NaOH 2 N et extraite au DCM (3 x 250 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse de NaOH 1 N (1 x 100 mL), une 56 solution aqueuse saturée en NaCI (100 mL), séchée sur Na2SO4, filtrée et concentrée sous pression réduite. Une huile jaune de molécule 17 est obtenue. Rendement : 54,4 g (67 0/0) RMN 1H (CDCI3, ppnn) : 1,40-1,58 (11H) ; 1,73-1,81 (4H) ; 2,80-2,84 (2H) ; 3,20-3,70 5 (14H) ; 5,11 (1H). LC/MS (ESI+) : 321,2 (calculé ([M+H]) : 321,2). Molécule 18 : Produit obtenu par le couplage entre la molécule 12 et la molécule 17. Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 10 et appliqué 10 à la molécule 12 (20,46 g, 43,66 mmol) et à la molécule 17 (16,79 g, 52,39 mmol), une cire blanche de la molécule 18 est obtenue après purification par chromatographie flash (éluant DCM, méthanol), solubilisation du résidu dans le DCM (300 mL), lavages de la phase organique avec une solution aqueuse de NaHCO3 (2 x 150 mL), une solution aqueuse de HCI 10 % (2 x 150 mL), une solution aqueuse saturée en NaCl (2 x 150 15 mL), séchage sur Na2SO4 et concentration sous pression réduite. Rendement : 30,15 g (90 0/0) RMN 1H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,09-1,52 (31H) ; 1,55-1,67 (4H) ; 1,69-2,36 20 LC/MS (ESI+) : 771,4 (calculé ([M+H]) : 771,5). Molécule AS Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 et appliqué 25 à la molécule 18 (30,0 g, 38,91 mmol), un solide blanc de la molécule A5 sous la forme d'un sel de chlorhydrate est obtenu après solubilisation du résidu dans l'eau (500 mL) et lyophilisation. Rendement : 25,2 g (91 °/0) RMN 1H (DMSO-d6, ppnn) : 0,85 (3H) ; 1,06-1,37 (20H) ; 1,39-1,52 (2H) ; 1,58-1,66 30 (2H) ; 1,70-2,37 (12H) ; 2,78-2,85 (2H) ; 3,01-3,15 (2H) ; 3,31-3,62 (17H) ; 4,11- 4,17 (0,7H) ; 4,19-4,27 (1H) ; 4,41-4,44 (0,3H) ; 7,63-7,71 (0,7H) ; 7,90-8,24 (4H) ; 8,28-8,35 (0,3H). LC/MS (ESI+) : 671,4 (calculé ([M+H]) : 671,5). 35 Exemple A7 : molécule A7 Molécule 21 : Produit obtenu par couplage entre la molécule 11 et la L-lysine. (10H) ; 2,91-2,98 (2H) ; 3,02-3,17 (2H) ; 3,28-3,61 (17H) ; 4,12-4,17 (0,7H) ; 4,20- 4,28 (1H) ; 4,39-4,42 (0,3H) ; 6,37 (0,1H) ; 6,71 (0,9H) ; 7,59 (0,7H) ; 7,85 (0,7H) ; 7,94 (0,3H) ; 8,21 (0,3H). 57 Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 8 appliqué à la molécule 11 (133,00 g, 408,61 mmol) et à la L-lysine (31,36 g, 214,52 mmol), un solide blanc de molécule 21 est obtenu après cristallisation 2 fois dans l'acétone. Rendement : 106,50 g (68 %) 5 RMN 1+1 (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,26 (40H) ; 1,35-1,50 (6H) ; 1,50-2,10 (10H) ; 2,10-2,25 (4H) ; 3,01 (2H) ; 3,31-3,55 (4H) ; 4,10-4,40 (3H) ; 7,68 (0,6H) ; 7,97 (1H) ; 8,27 (0,4H) ; 12,50 (1H). LC/MS (ESI): 761,8 ; (calculé ([M+H]): 762,1). 10 Molécule 22 : Produit obtenu par couplage entre la molécule 21 et la L-lysinate de méthyle. Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 10 appliqué à la molécule 21 (43,00 g, 56,50 mmol) en solution dans le THF et au chlorhydrate de Llysinate de méthyle (20,12 g, 67,79 mmol), un solide transparent de molécule 22 est 15 obtenu et utilisé sans purification complémentaire. Rendement : 55,80 g (98 0/0) RMN 11-1 (DMSO-d6, ppm) : 0,86 (6H) ; 1,08-2,03 (64H) ; 1,37 (9H) ; 2,07-2,30 (4H) ; 2,84-3,09 (4H) ; 3,29-3,57 (4H) ; 3,58-3,65 (3H) ; 4,14-4,43 (4H) ; 6,40 (0,1H) ; 6,74 (0,9H) ; 7,69 (0,6H) ; 7,82 (0,6H) ; 7,95-8,06 (1H) ; 8,11-8,20 (0,4H) ; 8,26 (0,4H). 20 LC/MS (ESI) : 1003,8 (calculé ([M-FH]) : 1003,8). Molécule 23 : Produit obtenu par saponification de la molécule 23. Une solution de molécule 22 (55,80 g, 55,61 mmol) dans un mélange THF/eau 1:1 (370 mL) à 0 °C est traitée par addition lente d'une solution de LiOH (2,00 g, 83,41 mmol) 25 dans l'eau (185 mL). Après 16 h d'agitation à 0 °C, le milieu est concentré sous pression réduite et le résidu est repris dans l'eau (500 mL). Du DCM (500 mL) est ajouté, le mélange hétérogène est refroidi à 10 °C et acidifié par ajout d'une solution aqueuse de HCI 10 % jusqu'à pH 1. La phase aqueuse est extraite au DCM (2 x 300 mL), les phases organiques combinées sont lavées par une solution aqueuse saturée en NaCI (2 x 300 30 mL), séchées sur Na2SO4, filtrées et concentrées sous pression réduite. Un solide blanc de molécule 23 est obtenu après cristallisation dans l'acétone. Rendement : 46,10 g (84 %) RMN 11-1 (pyridine-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,05-2,03 (67H) ; 2,07-2,61 (10H) ; 3,12- 3,93 (8H) ; 4,54-4,93 (2H) ; 4,98-5,16 (2H) ; 7,35-7,45 (1H) ; 8,34-8,63 (1H) ; 8,94- 35 9,41 (2H). LC/MS (ESI) : 989,8 (calculé ([M+H]) : 989,8). 58 Molécule A7 À une solution de la molécule 23 (12,00 g, 12,13 mmol) dans le dichlorométhane (40 mL) à 0 °C est ajoutée une solution de HCI 4 N dans le dioxane (15,20 mL) puis le milieu est agité pendant 15 h à 0 °C et 5 h température ambiante. Le mélange réactionnel est 5 concentré sous pression réduite, le résidu est solubilisé dans un mélange de DCM (120 mL) et de NaOH 2 N (60 mL). Après séparation des phases, la phase organique est lavée par une solution de NaOH 2 N (60 mL), séchée sur Na2SO4 et concentrée sous pression réduite. Rendement : 10,90 g (98 °/0) 10 RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,86 (6H) ; 1,05-2,27 (70H) ; 2,45-2,52 (2H) ; 2,90-3,58 (6H) ; 3,67-3,76 (1H) ; 4,02-4,10 (0,6H) ; 4,11-4,17 (0,4H) ; 4,20-4,26 (0,6H) ; 4,304,39 (1H) ; 4,42-4,46 (0,4H) ; 7,29-7,42 (1H) ; 7,71-7,80 (0,6H) ; 7,97-8,05 (0,6H) ; 8,10-8,24 (0,4H) ; 8,33-8,45 (0,4H). LC/MS (ESI) : 887,7 (calculé ([M-1-1]-) : 887,7) 15 Partie B - Synthèse des co-oolvaminoacides hydrop obes CO- polyaminoacide B1 structure i = 0,038, DP = 26 = H ou pyroglutamate Na0 ^7. 0 ON R1 o B2 59 0 roNa o = 0,15, DP (m + n) = 40 Hy = O ONa Ri = H ou pyroglutamate B3 ONa H Hy i= 0,15, DP (m + n) = 40 Hy = o NH 'Cl3H27 1--= 0,15, DP (m + n) = 40 Hy = Ri = H ou pyroglutamate R C 11E-123 Ri = H ou pyroglutamate B5 ONA R1 i= 0,15, DP (m + n) = 40 Hy = 61 0 Ri = H ou pyroglutamate B7 C13 H27 i = 0,038, DP = 26 Ri = H ou pyroglutamate Co-polyaminoacide Bi: poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule Al et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 gjmol 5 Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (8,95 g, 34 mmol) est solubilisé dans du DMF anhydre (34 mL). Le mélange est refroidi à 4 °C, puis une solution de molécule Al (1,64 g, 1,55 mmol) dans le chloroforme (6,6 mL) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4°C et température ambiante pendant 68 h, puis chauffé à 65°C pendant 2 h. La moitié du 10 solvant est distillé sous pression réduite puis le milieu réactionnel est refroidi à température ambiante et versé goutte à goutte dans du diisopropyléther (300 mL) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (5 x 50 mL) puis séché sous pression réduite à 30 °C pour obtenir un solide blanc. Le solide (7,9 g) est dilué dans du TFA (30 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 15 % dans de l'acide acétique (21 mL, 120 mmol) est alors ajoutée au goutte à goutte à 0 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther/eau sous agitation (360 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec de l'IPE (2 x 30 mL) puis 20 avec de l'eau (2 x 30 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (200 mL) en 62 ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 1 N. De l'eau (65 mL) est ajoutée. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à 5 environ 25 g/L théorique, le pH est ajusté à 7 et la solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm. Cette solution est diluée avec de l'eau et de l'acétone afin d'obtenir une solution à 12 g/L contenant 30 % massique d'acétone, puis elle est filtrée sur filtre de charbon actif (3M R53SLP). L'acétone est distillée (40°C, 100 mbar) et la solution est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCl 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la 10 conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée et le pH est ajusté à 7. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4°C. Extrait sec : 17,8 mg/g DP (estimé d'après la RMN 1H) : 26 15 D'après la RMN 1H : i = 0,038 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide B1 est de 4994 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/mol Co-polyaminoacide B2 : poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule 20 A2 dont les esters sont saponifiés et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 5200 g/mol Co-polyaminoacide E2-1 : acide poly-L-glutamique issu de la polymérisation du ybenzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride initiée par l'hexylamine Dans un réacteur à double enveloppe, du y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride 25 (500 g, 1,90 mol) est solubilisé dans du DMF anhydre (1100 mL). Le mélange est alors agité jusqu'à complète dissolution, refroidi à 0 °C, puis de l'hexylamine (6,27 mL, 47,5 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité à 0 °C pendant 5 h, entre 0 °C et 20 °C pendant 7 h, puis à 20 °C pendant 7 h. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 65 °C pendant 2 h, refroidi à 55 °C et du méthanol (3300 mL) est introduit en 1 h 30. 30 Le mélange réactionnel est alors refroidi à 0 °C et laissé sous agitation pendant 18 h. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé au diisopropyléther (2 x 800 mL) puis séché sous pression réduite à 30 °C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-Lglutamique) (PBLG). A une solution de PBLG (180 g) dans du N,N-diméthylacétamide (DMAc, 450 mL) est 35 ajouté du Pd/A1203 (36 g) sous atmosphère d'argon. Le mélange est placé sous atmosphère d'hydrogène (10 bar) et agité à 60 °C pendant 24 h. Après refroidissement à température ambiante et filtration du catalyseur sur fritté P4 puis sur membrane Omnipore 0,2 pm PTFE hydrophile, une solution d'eau à pH 2 (2700 mL) est coulée 63 goutte à goutte sur la solution de DMAc, sur une période de 45 min et sous agitation. Après 18 h sous agitation, le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec de l'eau (4 x 225 mL) puis séché sous pression réduite à 30 °C 5 Co-polyaminoacide B2 Le co-polyaminoacide B2-1 (15,0 g) est solubilisé dans du DMF (230 mL) à 40 °C puis de la N-méthylmorpholine (NMM, 11,57 g, 114,4 mmol) est ajoutée. En parallèle, la molécule A2 sous forme de sel de chlorhydrate (10,17 g, 17,2 mmol) est mise en suspension dans du DMF (250 mL) et de la triéthylamine (2,39 mL, 17,2 mmol) est 10 ajoutée, puis le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. À la solution de co-polyaminoacide, refroidie à 25 °C, sont successivement ajoutés la solution de molécule A2, de la N-oxyde de 2-hydroxypyridine (HOPO, 3,81 g, 34,3 mmol) puis du N-(3-dimethylaminopropyI)-N'-ethylcarbodiinnide (EDC, 6,58 g, 34,3 mmol). Le milieu réactionnel est agité à 25 °C pendant 2 h, filtré sur filtre tissé 0,2 15 mm et coulé au goutte-à-goutte sur 2,6 L d'eau contenant du NaCl à 15 % massique et du HCI (pH 2) sous agitation. A la fin de l'ajout, le pH est réajusté à 2 avec une solution de HCI 1 N, et la suspension est laissée reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, puis rincé par 2 x 100 mL d'eau. Le solide blanc obtenu est solubilisé dans 1,2 L d'eau par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N jusqu'à pH 7 sous agitation, 20 puis la solution est filtrée sur filtre 0,45 pm. De l'éthanol (30 % massique) est ajouté puis la solution est filtrée sur filtre de charbon actif (3M R53SLP). Une solution de NaOH 10 N est lentement ajoutée sous agitation jusqu'à pH 13 puis le mélange est laissé sous agitation pendant 2 h. Après neutralisation à pH 7 par ajout d'une solution de HCI 37 0/0, la solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCl 25 0,9 % puis de l'eau, jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cnn. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée et le pH est ajusté à 7. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C. Extrait sec : 22,6 mg/g DP (estimé d'après la RMN 11-1) : 40 30 D'après la RMN 11-1 : i = 0,15 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide B2 est de 9301 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 5200 g/mol. Co-polyaminoacide B3 : poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule 35 A3 dont l'ester est saponifié et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4900 g/mol Le co-polyaminoacide B2-1 (12,0 g) est solubilisé dans du DMF (92 mL) à 40 °C puis de la N-méthylmorpholine (NMM, 9,25 g, 91,5 mmol) est ajoutée. En parallèle, une solution 64 de la molécule A3 sous forme de sel de chlorhydrate (7,51 g, 13,7 mmol) et de N,Ndiisopropylethylamine (DIPEA, 2,39 mL, 13,7 mmol) dans du DMF (27 mL) est préparée. À la solution de co-polyaminoacide refroidie à 25 °C, sont successivement ajoutés la solution de molécule A3 et de la N-oxyde de 2-hydroxypyridine (HOPO, 3,05 g, 27,4 5 mmol). Le mélange est refroidi à 0 °C puis du EDC (5,26 g, 27,4 mmol) est ajouté. Après 5 min à 0 °C, le milieu réactionnel est agité à 25 °C pendant 2 h, filtré sur filtre tissé 0,2 mm et coulé au goutte-à-goutte sur 950 mL d'eau contenant du NaCI à 15 % massique et du HCI (pH 2) sous agitation. A la fin de l'ajout, le pH est réajusté à 2 avec une solution de HCI 1 N, et la suspension est laissée reposer une nuit. Le précipité est 10 collecté par filtration, puis rincé par 3 x 100 mL d'eau. Le solide obtenu est solubilisé dans 1 L d'eau par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N jusqu'à pH 7 sous agitation. Une fois la solubilisation complète, le pH est ajusté à pH 12 pendant 2 h puis à pH 13 pendant 1 h par ajout d'une solution de NaOH 10 N. Après neutralisation à pH 7 par ajout d'une solution de HO 37 °/0, cette solution est diluée avec de l'eau et de 15 l'acétone afin d'obtenir une solution à 12 g/L contenant 30 °h massique d'acétone, puis elle est filtrée sur filtre de charbon actif (3M R53SLP). La solution obtenue est filtrée sur 0,45 pm et purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductirnétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée et le pH est ajusté à 7. La solution aqueuse 20 est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C. Extrait sec : 20,6 mg/g DP (estimé d'après la RMN 1I-1) : 40 D'après la RMN : i = 0,15 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide B3 est de 8977 g/mol. 25 HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4900 g/mol. Co-polyaminoacide B4 : poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule A4 dont l'ester est saponifié et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4700 g/mol 30 Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide B3 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule A4 (7,12 g, 13,7 mmol) et au copolyaminoacide B2-1 (12,0 g), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule A4 dont l'ester est saponifié est obtenu. Extrait sec : 19,4 nng/g 35 DP (estimé d'après la RMN 1H) : 40 D'après la RMN : i = 0,15 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide B4 est de 8809 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4700 g/mol. Co-polyaminoacide B5 : poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AS dont l'ester est saponifié et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 5400 g/mol 5 Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide B3 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AS (9,71 g, 13,7 mmol) et au copolyaminoacide B2-1 (12,0 g), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule A5 dont l'ester est saponifié est obtenu. Extrait sec : 20,8 mg/g 10 DP (estimé d'après la RMN 1H) : 40 D'après la RMN 1+1 : i = 0,15 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide B5 est de 9939 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 5400 g/mol. 15 Co-polyaminoacide B7 : poly-L-glutamate de sodium modifié à l'une de ses extrémités par la molécule A7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2500 g/mol Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide B1 20 appliqué à la molécule A7 (2,50 g, 2,74 mmol) et à du y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (15,89 g, 60,4 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à l'une de ses extrémités par la molécule A7 est obtenu. Extrait sec : 20,3 mg/g DP (estimé d'après la RMN 11-1) : 26 25 D'après la RMN 11-1 : i = 0,038 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide B7 est de 3893 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2500 g/mol 30 PAPTHE C CC» _ DSITIONS Le glucagon utilisé est du glucagon humain issu d'un processus de synthèse peptidique. Il provient de la société Bachem (référence 4074733). Exemple Cl : SolutIon de Cilucaoon à 2 mo/mL 35 Dans un tube Falcon de 50 mL est introduit 94,7 mg de glucagon DS en poudre suivi de 45 mL d'une solution d'acide chlorhydrique à 0,003 N contenant 2 mg/mL de L-méthionine. La poudre de glucagon est mélangée par des inversions répétées du tube 66 jusqu'à complète dissolution du glucagon. La solution de glucagon à 2 mg/mL est alors filtrée sur membrane (0,22 pm). Exemple C2 : Solut[on de Gluc,71gon à 4 niginit 5 Du glucagon (160 mg) en poudre est introduit dans un tube falcon de 45 ml puis 40 mL de la solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 0,006 N contenant 2 mg/mL de L-méthionine est ajoutée. La poudre de glucagon est mélangée par des inversions répétées du tube jusqu'à complète dissolution du glucagon. La solution de glucagon à 4 mg/m1 est alors filtrée sur membrane (0,22 pm). 10 EXEMPLE CAO : PRÉPARATION D'UNE SOLUTION DE GLUCAGON À 1 MG/ML ET CONTENANT DIFFÉRENTS CO-POLYAMINOACIDES DE L'INVENTION, UN TAMPON PHOSPHATE (2 MM) ET DE LA GLYCÉRINE À PH 7,2 Dans un flacon contenant des solutions concentrées d'excipients (phosphate, glycérol (pour obtenir 300 mOsmole/kg dans la formulation finale)) et potentiellement des 15 additifs (m-crésol, citrate), est ajoutée une solution de co-polyaminoacide. La composition est brièvement agitée jusqu'à dissolution du co-polyaminoacide, puis la solution est filtrée sur membrane (0,22 pm). Le mélange équivolumique de cette solution avec la solution de glucagon fraichement préparée, telle que décrite à l'exemple Cl, conduit aux compositions finales CA1 à CA20 20 contenant 1 mg/mL de glucagon. Le pH de la solution est ajusté à pH 7,2 ± 0,1 par ajout de Na0H/HCI 1 N puis filtrée sur membrane (0,22pm). Le détail des compositions est récapitulé dans le tableau ci-dessous. Une inspection visuelle est effectuée pour déterminer si l'on obtient ou non une solution limpide (Par comparaison, la solution de glucagon à pH neutre n'est pas soluble au-delà 25 de 0,2 mg/mL). L'inspection visuelle des échantillons est effectuée afin de détecter les particules visibles, ou une turbidité. Cette inspection est réalisée selon les recommandations de la Pharmacopée Européenne (EP 2.9.20) : les échantillons sont soumis à un éclairage d'au moins 2000 Lux et sont observés face à un fond blanc et un fond noir. Quand des particules sont visibles dans la moitié des échantillons la 30 composition est estimée non limpide. Composition BC Concentration Ratio Additifs Glycérol (mM) Aspect de co- molaire visuel polyaminoacides BC/Glu de la (mg/mL) solution CA1 B3 3,43 1,33 290 limpide CA2 4,02 1,56 290 limpide CA3 3,61 1,4 10 mM 250 limpide citrate CA4 4,13 1,6 10 mM 250 limpide citrate Tableau 1 : Compositions et aspect visuel des solutions de glucagon à 1 mg/mL à pH 7,2 à différentes concentrations en co-polyaminoacide contenant 2 mM de tampon phosphate et 1 mg/mL de L-méthionine. 5 EXEMPLE CBO : PREPARATION D'UNE SOLUTION DE CO-POLYAMINOACIDE ET DE GLUCAGON A 2 MG/ML À PH 7,2 De manière analogue à l'exemple CAO, des compositions de glucagon à 2 mg/mL contenant différents co-polyaminoacides, du glycérol (pour obtenir 300 mOsmol/kg 10 dans la formulation finale), un tampon phosphate (2 mM) et des additifs sont préparées. Elles sont présentées dans le tableau xx suivant : Composition BC Concentration Ratio co- Additif Glycérole (mM) Aspect de co- polyaminoacide/Glucagon visuel polyaminoacides Lni g/ m de la solution CB1 B3 6,9 1,33 290 limpide CB2 10,3 2 10 mM 250 limpide citrate CB3 B2 16 10 mM 250 limpide 3 citrate 67 294 limpide 294 limpide 294 27 mM 3 m- crésol 259 limpide 5 253 27 mM m- crésol limpide 250 limpide 10 mM citrate 250 limpide 10 mM citrate 2,6 2,9 2.9 3,2 3,6 7,75 7,75 8,55 4,3 Bi 7,2 260 10 mM citrate 10 mM citrate 10 mM citrate Additifs Glycerin 290 290 260 1,2 260 0,8 10 mM citrate 300 1 300 limpide 260 B2 2,14 2,67 3,20 Composition BC CA12 CA13 CA14 CA15 CA16 CA17 CA18 CA19 CA20 Concentration de co- polyaminoacides (mg/mL) 2,58 3,09 2,58 Ratio BC/Glu 1 1,2 1 1,2 1 Aspect visuel de la solution limpide limpide limpide limpide limpide limpide Nmpide limpide B3 1,2 300 3,09 2,67 3,20 68 CB4 I I 16 3 294 limpide Tableau 1 : Compositions et aspect visuel des solutions de glucagon à 2 mg/mL à pH 7,2 à différentes concentrations en co-polyaminoacide contenant 2 mM de tampon phosphate et 1 mg/mL de L-méthionine. 5 Stabilité physique des compositions [000325] Les compositions précédemment préparées ont été transférées dans des cartouches (easy-to-fill de OMPI de 3 ml - Ref P4084100.3250) à raison de 1 mL par cartouche et placées en conditions statiques à 37 °C. 10 L'inspection visuelle des échantillons placés en conditions statiques à 37 °C est effectuée à 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 semaines à 37 °C afin de détecter l'apparition de particules visibles, de fibrilles ou d'une turbidité. Cette inspection est réalisée selon les recommandations de la Pharmacopée Européenne (EP 2.9.20) : les échantillons sont soumis à un éclairage d'au moins 2000 Lux et sont observés face à un fond blanc et un fond noir pour respecter 15 les recommandations de la pharmacopée Européenne. Quand des particules sont visibles dans la moitié des échantillons la composition est estimée non stable. Stable signifie donc qu'au jour de l'inspection au moins la moitié des échantillons étaient dépourvus de particules, de fibrilles ou d'une turbidité. 20 Les résultats des inspections visuelles sont reportés dans le tableau suivant. L'étude des stabilités physiques des compositions décrites dans le tableau ci-dessous a été menée sur des volumes de 1 mL de composition dans des cartouches de contenance de 3 mL (OMPI - ref : P4084100.3250). Par comparaison, la solution de glucagon à pH acide à 1 mg/mL n'est stable que 2 jours à 37 °C. Composition BC Concentration de Additifs Stabilité B3 co- (semaines) polyaminoacides (mq/mL) CA2 4,02 >2 CA3 3,61 10 mM citrate >2 CA4 4,13 10 mM citrate >2 CA5 B2 6,95 10 mM citrate >2 CA6 7,75 10 mM citrate >2 CA7 7,75 >2 CA8 8,55 >2 CA9 9,62 >2 25 La composition CA11 a été transféré dans un vial de 3 mL (Adelphi - ref :VCDIN2RDLS1) à raison de 1 mL par vial et placées en conditions statiques à 37 °C. Les résultats des inspections visuelles sont reportés dans le tableau suivant. 69 Les solutions selon l'invention présentent une stabilité physique à 37 °C en conditions statiques en cartouche supérieure à deux semaines à 37 °C. L'addition de copolyaminoacide permet de solubiliser et de stabiliser le glucagon à pH neutre alors que 5 le glucagon en solution a pH acide n'est stable que quelques jours à 37°C (2 jours). RESULTATS DES OBSERVATIONS VISUELLES AU MELANGE ET DES MESURES DE FIBRILLATION PAR THT 10 [000326] Les compositions précédemment préparées ont été aliquoté dans une plaque 96 puits en triplicat (3*150pL) et placées en conditions statiques à 37 °C. Principe La mauvaise stabilité d'un peptide peut conduire à la formation de fibrilles amyloïdes, 15 définies comme des structures macromoléculaires ordonnées. Celles-ci peuvent éventuellement résulter à la formation de gel au sein de l'échantillon. L'essai de suivi de la fluorescence de la Thioflavine T (ThT) est utilisé pour analyser la stabilité physique des solutions. La thioflavine est une petite molécule sonde ayant une signature de fluorescence caractéristique lorsqu'elle se lie à des fibrilles de type 20 amyloïdes (Naiki et al. (1989) Anal. BioChem. 177, 244-249 ; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274-284). Cette méthode permet de suivre la formation de fibrilles pour de faibles concentrations de ThT au sein de solutions non diluées. Ce suivi est réalisé dans des conditions de stabilité accélérées : sous agitation et à 37°C. 25 Conditions expérimentales Les échantillons ont été préparés juste avant le début de la mesure. La préparation de chaque composition est décrite dans l'exemple associé. La Thioflavine T a été ajoutée dans la composition à partir d'une solution mère concentrée de manière à induire une 30 dilution négligeable de la composition. La concentration de Thioflavine T dans la composition est de 40 pM. Concentration de co- polyaminoacides (mg/mL) BC Stabilité 37 °C (semaines) Additifs Composition CA11 7,2 B1 >2 27 mM m-crésol Un volume de 150 pL de la composition a été introduit au sein d'un puit d'une plaque 96 puits puis 2,7 pL de solution concentrée de ThT a été introduite. Chaque composition a été analysée en trois essais (triplicat) au sein d'une même plaque. La plaque a été scellée par du film transparent afin d'éviter l'évaporation de la composition. Cette plaque a ensuite été placée dans l'enceinte d'un lecteur de plaques (Xenius XC, SAFAS). La température est réglée à 37°C, et une agitation latérale de 960 rpm avec 1 5 mm d'amplitude est imposée. Une lecture de l'intensité de fluorescence dans chaque puit est réalisée avec une longueur d'onde d'excitation de 442 nm, et une longueur d'onde d'émission de 482 nm au cours du temps. Le processus de fibrillation se manifeste par une forte augmentation de la fluorescence 10 après un délai appelé temps de latence. Le lag time est déterminé graphiquement, en prennant le temps où la tangente à la phase linéaire de croissance coupe l'axe des abscisses. La valeur de temps de latence reportée correspond à la moyenne des mesures de temps de latence faites sur trois puits. 15 [000327] Un exemple de détermination graphique est représenté à la figure 1. [000328] Sur cette figure est représentée de façon graphique la détermination du temps de latence ou « lag time » (LT) par suivi de la fluorescence de la Thioflavine T, sur une courbe ayant en ordonnées la valeur de la fluorescence (en u.a. unités arbitraires) et en abscisses le temps en minutes. 20 Les résultats de temps de latence obtenus sont présentés dans le tableau ci-dessous. Par comparaison, le glucagon seul est insoluble en solution à pH physiologique et la solution de glucagon à pH acide à 1 mgimL montre un temps de fibrillation de 0,5 h environ. 25 Composition BC Concentration de co- Additifs Temps de polyaminoacides fibrillation (h) (mg/mL) CA12 B3 2,58 >60 CA13 3,09 >90 CA14 2,58 10 mM >60 citrate CA15 3,09 10 mM >60 citrate CA16 B2 2,67 10 mM >10 citrate CA17 3,20 10 mM >20 citrate CA18 2,14 >9 CA19 2,67 >10 CA20 3,20 >10 71 Les compositions contenant des co-polyaminoacides permet d'augmenter le temps de latence par rapport à la solution de glucagon seul à pH acide qui n'est REVENDICATIONS1. Composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins : a) du glucagon humain ; b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule X suivante : *--(GpR) (GpG)g (GpA) a (GpL )1 GpC I 1 I' a' Formule X dans laquelle GpR est choisi parmi les radicaux de formules VII, VII' ou VIr : 0 H H *-N-R-N-* Formule VII ou Il R N * Formule VII' ou 0 0 *-1-1-R-1-1-* Formule VII"; GpG et GpH identiques ou différents sont choisis parmi les radicaux de formules XI ou XI': 0 li H *- NH-G- NH * G N * Formule XI Formule XI' GpA est choisi parmi les radicaux de formule VIII * NH- ' --ENH Formule VIII Dans laquelle A' est choisi parmi les radicaux de formule VIII',VIII" ou VIII" F1/41-N A2 A1-N_---- A2 - N- A3 Formule VIII' Formule VIII" Formule VIII- -GpL est choisi parmi les radicaux de formule XII O HN-* Il A/ HN-* Formule XII, GpC est un radical de formule IX : Formule IX; - les * indiquent les sites de rattachement des différents groupes liés par des fonctions amides ; - a est un entier égal à 0 ou à 1 et a' = 1 si a = 0 et a' =, 1, 2 ou 3 si a = 1 ; - a' est un entier égal à 1,à 2 ou à 3 b est un entier égal à 0 ou à 1 ; - c est un entier égal à 0 ou à 1, et si c est égal à 0 alors d est égal à 1 ou à 2; - d est un entier égal à 0, à 1 ou à 2 ; - e est un entier égal à 0 ou à 1 ; - g est un entier égal à 0, à 1, à 2, à 3 à 4 à 5 ou à 6; h est un entier égal à 0, à 1,à 2, à 3 à4 à 5 ou à 6, et au moins un des g, h ou I est différent de 0; I est un entier égal à 0 ou 1 et l' = 1 si I = 0 et l' = 2 si I = 1; r est un entier égal à 0 ou à 1, et s' est un entier égal à 0 ou 1 ; - A, Ai, A2 et A3 identiques ou différents sont des radicaux alkyles linéaires ou ramifiés comprenant de 1 à 6 atomes de carbone; - B est un radical alkyle linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant un noyau aromatique, comprenant de 1 à 9 atomes de carbone ; - Cx est un radical alkyl monovalent linéaire ou ramifié, dans lequel x indique le nombre d'atomes de carbone et : - Lorsque le radical hydrophobe Hy porte 1 -GpC, alors 9 _5 x 25, - Lorsque le radical hydrophobe Hy porte 2 -GpC, alors 9 5 x 5 15, - Lorsque le radical hydrophobe Hy porte 3 -GpC, alors 7 5 x 5 13, - Lorsque le radical hydrophobe Hy porte 4 -GpC, alors 7 5 x 11, - Lorsque le radical hydrophobe Hy porte au moins 5 -GpC alors, 6 x 11, - G est un radical alkyle ramifié de 1 à 8 atomes de carbone ledit radical alkyle portant une ou plusieurs fonction(s) acide carboxylique libre. H est un radical alkyle ramifié de 1 à 8 atomes de carbone ledit radical alkyle portant une ou plusieurs fonction(s) acide carboxylique libre., - R est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant une ou plusieurs fonctions -CONH2 ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbon-e et de 1 à 5 atomes d'oxygène : - Le ou les radicaux hydrophobes Hy de formule X étant liés au PLG: o via une liaison covalente entre un carbonyle du radical hydrophobe Hy et un atome d'azote porté par le PLG formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine portée par le PLG et une fonction acide portée par le précurseur Hy' du radical hydrophobe Hy, et o via une liaison covalente entre un atome d'azote du radical hydrophobe Hy et un carbonyle porté par le PLG formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine du précurseur Hy' du radical hydrophobe Hy et une fonction acide portée par le PLG, le ratio M entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques étant compris entre 0 6. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules XXX, XXXb dans lesquels le au moins un co-polyaminoacide est choisi parmi les co-polyaminoacides dans lesquels le groupe D est un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique). 7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 40 mg/mL. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en glucagon humain est comprise entre 0,25 et 5 mg/mL. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le ratio molaire [radical hydrophobe]/[glucagon humain] est inférieur à 15. 10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un composé polyanionique. 1-1. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un sel de zinc. 12. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une hormone gastrointestinale. 13. Composition selon la revendication 12, caractérisée en ce que l'hormone gastrointestinale est choisie dans le groupe constitué par l'exenatide, le liraglutide, le lixisenatide, l'albiglutide et le dulaglutide, leurs analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 14. Composition selon l'une quelconque des revendications 12 et 13, caractérisée en ce que la concentration en hormone gastrointestinale est comprise dans un intervalle de 0,01 à 10 mg/mL.