Brevet FR3072861A1 — publié le 20190503

Composition antimycotoxine L'invention concerne une composition antimycotoxine. Les mycotoxines sont des toxines élaborées par diverses espèces de champignons microscopiques telles que les moisissures (Aspergillus sp., Fusarium sp., Stachybotrys sp., Penicillium sp., etc.). Ce sont des molécules de faible poids moléculaire ( Dans l'Union européenne, les normes concernant les mycotoxines les plus courantes sont fixées par le Règlement 1881/2006 portant fixation de teneurs maximales pour certains contaminants dans les denrées alimentaires et la Directive 2002/32/CE sur les substances indésirables dans les aliments pour animaux. Parallèlement, la filière de l'élevage et notamment l'industrie des aliments pour animaux sont de plus en plus considérées comme ayant un rôle à jouer pour assurer l'utilisation responsable des antimicrobiens en production animale. Les décideurs demandent aux producteurs d'aliments pour animaux, aux agriculteurs, aux vétérinaires et aux organismes de réglementation de travailler ensemble pour déterminer les meilleures pratiques d'élevage et d'hygiène et des alternatives viables, afin de réduire l'utilisation d'antibiotiques chez les animaux d'élevage et améliorer le bien-être animal. La lutte contre les mycotoxines participe donc à ce projet de filière en luttant contre les pathologies liées aux mycotoxines et donc, indirectement à la baisse des volumes d'antimicrobiens utilisés pour traiter ces pathologies. Aussi existe-t-il un réel besoin de fournir un moyen d'éliminer les mycotoxines. En élevage, les pratiques actuelles d'atténuation du risque de mycotoxines sont multiples, et plusieurs solutions sont disponibles sur le marché, telles que les liants (binders). Certaines sont trop peu sélectives, et peuvent donc vite être saturées par les matrices alimentaires sur lesquelles elles sont appliquées. De même, celles-ci peuvent interagir 30 avec des nutriments ou composés autres que les mycotoxines cibles, en particulier des vitamines ou minéraux. Dans ce cas, la biodisponibilité de ces nutriments en est réduite. D'autres sont au contraire trop sélectives, et n'apportent une solution que pour une mycotoxine. Il faut donc employer des stratégies combinant plusieurs solutions pour éliminer plusieurs mycotoxines présentes dans un même aliment. 35 Peu de données sont disponibles à ce jour sur l'efficacité des solutions du marché sur des aliments contaminés en-dessous des niveaux réglementaires en mycotoxines. Les liants ont notamment pour inconvénient connu que les mycotoxines restent 3 toujours présentes dans l'aliment et donc dans le tube digestif de l'animal, même si liées, et peuvent donc se désorber avec la solution proposée. Les liants peuvent également relarguer des composés toxiques accumulés tels que métaux lourds, dioxines, ... Enfin, en présence d'une contamination importante en mycotoxines, la croissance de 5 certains microorganimes peut être altérée voire même inhibée, rallongeant ainsi le temps nécessaire pour atteindre un niveau de décontamination satisfaisant. Les stratégies actuelles de lutte contre les mycotoxines nécessitent donc de cumuler un panel de solutions pour éliminer les mycotoxines et pallier à ces inconvénients. On connaît de l'état de la technique la demande de brevet US2015306154, qui 10 enseigne l'utilisation de bactéries du genre Bacillus pour lutter contre les effets des mycotoxines. Toutefois, ce document enseigne la biotransformation de certaines mycotoxines testées et ne semble pas fournir des résultats satisfaisants sur toutes les mycotoxines. Aussi, le besoin de fournir une nouvelle méthode reste entier. 15 L'un des buts de l'invention est de pallier ces inconvénients. Un autre but de l'invention est de proposer une nouvelle composition capable de se débarrasser définitivement des mycotoxines contenues dans les denrées alimentaires et ainsi améliorer la santé animale. Aussi, l'invention propose-t-elle l'utilisation notamment in vitro ou ex vivo d'une 20 composition comprenant ou consistant essentiellement en - l'une au moins des souches NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04, et/ou - l'un au moins de leurs métabolites, lesdites souches étant déposées à la CNCM sous les numéros respectifs CNCM I 4606, CNCM 1-5043, CNCM 1- 4607 et CNCM 1- 4608, pour la dégradation d'au moins 25 une mycotoxine. L'invention repose sur la constatation surprenante faite par les inventeurs que des souches spécifiques de bactéries du genre Bacillus subtilis sont capables de dégrader plusieurs types de mycotoxines produites par les champignons dans le milieu, sans toutefois produire de résidus toxiques issus de cette dégradation 11 est également observé par les inventeurs que cette décontamination est effective sur une gamme large de pH, température, concentration en mycotoxines et aussi bien en condition aérobie qu'anaérobie. Dans l'invention il est donc utilisé soit l'une au moins des souches NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04, soit les métabolites de ces souches, c'est-à-dire des molécules sécrétées par les bactéries, par exemple des enzymes, soit l'une au moins de ces souches et leurs métabolites. Par souche de bactéries, on entend dans l'invention l'ensemble des individus (bactéries) issus de repiquages successifs d'une colonie bactérienne. 4 Les métabolites contenus dans la composition selon l'invention sont des substances sécrétées par ladite au moins une bactérie susmentionnée et notamment des enzymes. Dans l'invention, les métabolites susmentionnés peuvent être obtenus directement dans les milieux de cultures des souches de Bacillus subtilis NOL01, NOL02, NOLO3 et 5 NOL04. En d'autres termes, une souche est une partie d'une espèce bactérienne différente des autres bactéries de la même espèce par une différence mineure mais identifiable. Une souche est également définie comme une population de bactéries qui descend d'un seul organisme ou de la culture isolat pur. Les souches d'une même espèce peuvent 10 différer légèrement de l'autre à bien des égards. Dans l'invention, il est utilisé l'une au moins des souches NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04, pour dégrader les mycotoxines. Cela signifie que l'invention couvre l'utilisation des 15 combinaisons de souches suivantes : - NOL01, 15 - NOL02, - NOL03, - NOL04, - NOLO1 et NOL02, - NOLO1 et NOL03, 20 - NOLO1 et NOL04, - NOLO2 et NOL03, - NOLO2 et NOL04, - NOLO3 et NOL04, - NOL01, NOLO2 et NOL03, 25 - NOL01, NOLO2 et NOL04, - NOL01, NOLO3 et NOL04, - NOL02, NOLO3 et NOL04, et - NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04. Toutes ces souches ont été déposées à la collection nationale des microorganismes 30 (CNCM) à l'Institut Pasteur à Paris, selon le traité de Budapest. Il est également couvert par l'invention, l'utilisation d'un ou plusieurs métabolites suivants - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOL01, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOL02, 35 - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOL03, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOL04, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOLO1 et un ou plusieurs métabolites 5 de la souche NOL02, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOLO1 et un ou plusieurs métabolites de la souche NOL03, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOLO1 et un ou plusieurs métabolites 5 de la souche NOL04, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOLO2 et un ou plusieurs métabolites de la souche NOL03, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOLO2 et un ou plusieurs métabolites de la souche NOL04, 10 - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOLO3 et un ou plusieurs métabolites de la souche NOL04, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOL01, un ou plusieurs métabolites de la souche NOLO2 et un ou plusieurs métabolites de la souche NOL03, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOL01, un ou plusieurs métabolites 15 de la souche NOLO2 et un ou plusieurs métabolites de la souche NOL04, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOL01, un ou plusieurs métabolites de la souche NOLO3 et un ou plusieurs métabolites de la souche NOL04, - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOL02, un ou plusieurs métabolites de la souche NOLO3 et un ou plusieurs métabolites de la souche NOL04, et 20 - Un ou plusieurs métabolites de la souche NOL01, un ou plusieurs métabolites de la souche NOL02, un ou plusieurs métabolites de la souche NOLO3 et un ou plusieurs métabolites de la souche NOL04. Si l'on prend en considération les souches et leurs métabolites l'invention couvre donc les 80 combinaisons suivantes : Souche NOL1 met NOLO1 Souche NOL2 met NOLO2 Souche NOL3 met NOLO3 Souche NOL4 met NOL04 + 1 + 2 + 3 + 4 + 5 + 6 + 7 + 8 + + 9 6 Souche NOL1 met NOLO1 Souche NOL2 met NOLO2 Souche NOL3 met NOLO3 Souche NOL4 met NOLO4 10 + + 11 + + 12 + + 13 + + 14 + + 15 + + 16 + + 17 + + 18 + + 19 + + 20 + + 21 + + 22 + + 23 + + 24 + + 25 + + 26 + + 27 + + 28 + + 29 + + 30 + + 31 + + 32 + + 33 + + + 34 + + + 35 + + + 36 + + + 37 + + + 38 + + + 39 + + + 7 Souche NOL1 met NOLO1 Souche NOL2 met NOLO2 Souche NOL3 met NOLO3 Souche NOL4 met NOLO4 + + + 41 + + + 42 + + + 43 + + + 44 + + + + + + 46 + + + 47 + + + 48 + + + 49 + + + + + + 51 + + + 52 + + + 53 + + + 54 + + + + + + 56 + + + 57 + + + 58 + + + 59 + + + + + + 61 + + + 62 + + + 63 + + + 64 + + + + + + + 66 + + + + 67 + + + + 68 + + + + 69 + + + + 8 Souche NOL1 met NOLO1 Souche NOL2 met NOLO2 Souche NOL3 met NOLO3 Souche NOL4 met NOLO4 + + + + 71 + + + + 72 + + + + 73 + + + + 74 + + + + + + + + 76 + + + + 77 + + + + 78 + + + + 79 + + + + + + + + met : métabolites Comme décrit ci-dessus dans le tableau, l'invention couvre donc de nombreuses compositions, les souches pouvant être associées à leurs métabolites. Par dégradation, on entend dans l'invention la destruction des mycotoxines, c'est à 5 dire leur destructuration par rupture des liaisons covalentes entre tout ou partie des atomes qui les constituent de sorte que le produit final de la dégradation est une ou plusieurs autres molécules ne possédant plus ou substantiellement plus les propriétés toxiques pour les animaux des mycotoxines dont elles sont issues. L'avantage de la composition selon l'invention est qu'elle est capable d'une part de 10 dégrader et non capter les mycotoxines, mais elle est également capable de dégrader plusieurs mycotoxines de nature différente, c'est-à-dire ayant une structure ou une formule chimique différente. Dans l'invention on entend par in vitro et ex vivo une utilisation qui n'a pas lieu au sein d'un organisme animal supérieur (comme les oiseaux, les mammifères ou les poissons) 15 ou humain, mais n'exclut pas la possibilité d'une utilisation sur des microorganismes, des végétaux ou des champignons. Avantageusement, l'invention concerne l'utilisation susmentionnée, pour la dégradation d'au moins deux mycotoxines de structures différentes. L'objectif de la composition selon l'invention est de permettre en une seule utilisation 20 de pouvoir éliminer d'un environnement déterminé non pas une seule mycotoxine, mais deux, voire 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou, 9 ou 10 ou plus, mycotoxines de structures ou de formules chimiques différentes. 9 Plus avantageusement, l'invention concerne l'utilisation susmentionnée, où ladite composition comprend de 104 à 1011 colonies bactériennes, les colonies bactériennes étant par mL ou g de composition. En d'autres termes, dans ce mode de réalisation avantageux, si la composition selon 5 l'invention est sous forme liquide, ladite composition comprendra de 104 à 1011 colonies bactériennes de Bacillus par mL de composition, et cela pour chacune des souches lorsque la composition comprend au moins deux souches. Dans l'invention, de 104 à 1011 colonies bactériennes signifie : environ 104, environ 5. 104, environ 108, environ 5.108, environ 106, environ 5.106, environ 107, environ 5.107, 10 environ 108, environ 5.108, environ 109, environ 5.109, environ 1010, environ 5.1010 ou environ 1011 colonies bactériennes. L'homme du métier sait aisément comment déterminer ce nombre de bactéries, notamment par comptage soit manuel (en utilisant une lame de Malassez) ou en utilisant un compteur de cellule automatique, ou par dilution puis ensemencement sur gélose et 15 comptage des colonies. Encore plus avantageusement, l'invention concerne l'utilisation telle que définie précédemment, où les souches de Bacillus subtilis sont sous forme sporulée et/ou sous forme végétative. Cela signifie que si la composition comprend une seule souche, cette souche peut 20 être sous forme sporulée ou sous forme végétative ou un mélange de forme sporulée et de forme végétative. Par contre si la composition comprend au moins deux souches, ces souches peuvent être toutes les deux sous forme sporulées, ou sous forme végétative, ou l'un d'entre elle est sous forme végétative et l'autre est sous forme sporulée, ou les deux sont présentes sous les deux formes végétative et sporulée. Il en va de même 25 lorsque la composition comprend 3 ou 4 souches susmentionnées. Avantageusement, l'invention concerne l'utilisation susmentionnée, où ladite mycotoxine est produite par un champignon appartenant au groupe constitué des champignons des genres Alternaria, Aspergillus, Byssochkamys, Claviceps, Fusarium, Gibberella, Halosarpheia, Penicillium, Phoma, Pyricularia, et Verticillium. 30 Les champignons susmentionnés, sans être limitatifs, sont capables de produire des mycotoxines qui peuvent être dégradées par la composition selon l'invention, c'est-à-dire par les au moins quatre souches distinctes de Bacillus subtilis. L'un des avantages de la composition selon l'invention par rapport à l'art antérieur, est que la composition n'est pas limitée à une mycotoxine, mais est capable de dégrader quasiment toutes ou toutes 35 les mycotoxines. De manière avantageuse, l'invention concerne l'utilisation susmentionnée, où ladite mycotoxine est choisie parmi les aflatoxines B1, B2, M1, G1 et G2, la toxine T-2, la toxine 10 HT-2, le déoxynivalénol (ou nivalénol), la zéaralénone, la fumonisine B1, et l'ochratoxine A. Les aflatoxines constituent un groupe de 18 composés structurellement proches (un assemblage d'une coumarine et de 3 furannes). Elles sont produites par Aspergillus 5 flavus, Aspergillus parasiticus et Aspergillus nomius. Parmi les plus courantes, on trouve l'AFB1, l'AFB2, l'AFM1, l'AFG1 et l'AFG2. La toxine T-2 (4,15-diacétate-8-(3-méthylbutyrate) de (3a,48,8a)-12,13- époxytrichothec-9-ène-3,4,8,15-tetrol) est une mycotoxine de la famille des trichothécènes. Elle est toxique pour l'homme et les animaux. Elle est produite 10 notamment par Fusarium sporotrichioides, Fusarium langsethiae et Fusarium poae. La toxine HT-2 est une mycotoxine de la famille des trichothécènes. Elle est toxique pour l'homme et les animaux. Elle est produite notamment par Fusarium sporotrichioides, F. langsethiae et F poae. Les DON (déoxinivalénol) sont produits par différents contaminants fongiques du 15 genre Fusarium (F graminearum, F. culmorum, F. roseum, ) qui contaminent les grains de blé, d'orge, d'avoine ou de maïs et même du riz lors de la floraison. Le zéaralénone est une mycotoxine produite par certaines espèces de champignons du sol, les Fusarium, qui peuvent coloniser certains végétaux (notamment les graminées) en y produisant une maladie, la fusariose. 20 La fumonisine est une famille de mycotoxines émises par certaines espèces de champignons du sol, les Fusarium, (principalement F verticillioides et F proliferatum) qui peuvent coloniser certains végétaux (graminées notamment) en y produisant une maladie dite fusariose. On en connaît plusieurs variantes, dont la fumonisine B, très toxique, plutôt trouvée dans le maïs. Les fumonisines de type B, peuvent induire un 25 oedème pulmonaire chez le porc, la leucoencéphalomalacie mortelle chez le cheval et une hypothèse est qu'elle pourrait aussi être une des causes de cancer de l'oesophage chez l'homme. L'ochratoxine A est une mycotoxine produite par plusieurs champignons (genres Penicillium et Aspergillus) et naturellement présente dans de nombreux produits 30 végétaux, tels que les céréales, les grains de café, le cacao et les fruits séchés. L'ochratoxine A est cancérigène, néphrotoxique, tératogène, immunotoxique et éventuellement neurotoxique. Elle a également été associée à la néphropathie chez les humains. L'invention concerne avantageusement une méthode de dégradation des mycotoxines 35 contenues dans un aliment destiné à la consommation animale comprenant une étape de mise en contact avec une composition comprenant ou consistant essentiellement en l'une au moins des souches NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04, et/ou l'un au moins de 11 leur métabolites (molécules sécrétées par les bactéries, par exemple des enzymes), lesdites souches étant déposées à la CNCM sous les numéros respectifs CNCM 1- 4606, CNCM 1-5043, CNCM I - 4607 et CNCM I - 4608, et éventuellement une étape d'inactivation après incubation, desdites souches de Bacilllus subtilis, notamment par la 5 chaleur. L'invention concerne en outre une méthode de décontamination d'aliment, de matière première ou de fourrage contaminé par au moins une mycotoxine, ladite méthode comprenant une étape de mise en contact de ladite denrée alimentaire ou dudit fourrage avec une composition comprenant ou consistant essentiellement en 10 - l'une au moins des souches NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04, et/ou - l'un au moins de leur métabolites, lesdites souches étant déposées à la CNCM sous les numéros respectifs CNCM 1- 4606, CNCM 1-5043, CNCM 1- 4607 et CNCM 1- 4608. Cette méthode permet de décontaminer des produits alimentaires notamment en 15 exposant, dans des conditions appropriées, des aliments, des matières premières ou des fourrages contaminés par une ou plusieurs mycotoxines avec la composition susmentionnée. Les toxines seront alors, à l'issue de cette décontamination, dégradées, rendant aptes à la consommation sans risques lesdits aliments, matières premières et fourrages. 20 Avantageusement, l'invention concerne la méthode susmentionnée où ledit aliment, ladite matière première ou ledit fourrage est contaminé par au moins deux mycotoxines de structures différentes. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition comprenant ou consistant essentiellement en 25 - l'une au moins des souches NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04, et/ou - l'un au moins de leurs métabolites, lesdites souches étant déposées à la CNCM sous les numéros respectifs CNCM 1 4606, CNCM 1-5043, CNCM 1- 4607 et CNCM 1- 4608, pour son utilisation dans le cadre du traitement des animaux atteints d'une pathologie 30 liée à l'ingestion d'au moins une mycotoxine, ou la prévention desdites pathologies. Du fait de la capacité de dégradation des mycotoxines, la composition susmentionnée peut être utilisée à titre préventif contre les maladies ou symptômes développés suite à l'ingestion de mycotoxines. De la même manière, la composition selon l'invention peut être administrée à titre curatif chez des animaux intoxiqués par ladite mycotoxine. 35 Les effets qui sont susceptibles d'être développées suite à l'ingestion de mycotoxines sont multiples et sont par exemple des effets hépatotoxiques, neurotoxiques, mutagènes, tératogènes, cancérigènes, immunodépresseurs et/ou des perturbations endocriniennes. 12 La ou les bactéries contenues dans la composition selon l'invention peuvent être sous forme sporulée et/ou végétative. Sous cette forme, elles peuvent être administrées par voie orale (per os) directement via l'aliment, l'eau de boisson ou encore drogage (incorporation directement dans la bouche des animaux via une seringue) 5 Plus avantageusement, l'invention la composition pour son utilisation susmentionnée, où ladite composition comprend de 104 à 1011 colonies bactériennes par mL ou par gramme de composition. Avantageusement, l'invention concerne la composition susmentionnée pour son utilisation susmentionnée où lesdites pathologies sont liées à l'ingestion d'au moins deux 10 mycotoxines de structures différentes. L'invention sera mieux comprise à la lecture de l'exemple et des figures qui suivent. Brève description des figures. La figure 1 représente un graphique de la croissance de NOLO1 en fonction de différentes concentrations de ZEA dans le milieu (0, 0,1, 0,5 ,1 et 10 ppm). L'abscisse 15 représentant le temps en heure et l'ordonnée l'absorbance de la solution corrélée à la croissance des bactéries. La figure 2 représente un graphique de la croissance de NOLO2 en fonction de différentes concentrations de ZEA dans le milieu (0, 0,1, 0,5, 1, 5 et 10 ppm). L'abscisse représentant le temps en heure et l'ordonnée l'absorbance de la solution corrélée à la 20 croissance des bactéries. La figure 3 représente un graphique de la croissance de NOLO3 en fonction de différentes concentrations de ZEA dans le milieu (0, 0,1, 0,5, 1, 5 et 10 ppm). L'abscisse représentant le temps en heure et l'ordonnée l'absorbance de la solution corrélée à la croissance des bactéries. 25 La figure 4 représente le pourcentage de dégradation de la ZEA par les souches NOLO1 (noir), NOLO2 (blanc) et NOLO3 (gris) en fonction de la température en degrés Celsius. La figure 5 représente le pourcentage de dégradation de la ZEA par les souches NOLO1 (noir), NOLO2 (blanc) et NOLO3 (gris) en fonction du pH du milieu. 30 La figure 6 représente un histogramme montrant le nombre de bactéries (log CFU/mL) en fonction du temps (0, 16 et 72h) de bactéries NOLO1 (barre noire), NOLO2 (barre gris foncé), NOLO3 (barre gris clair) et NOLO4 (barre blanche) cultivées sans toxine ZEA, et de bactéries NOLO1 (barre avec hachures diagonales), NOLO2 (barre avec hachures horizontales), NOLO3 (barre avec hachures verticales) et NOLO4 (barre avec 35 points) cultivées avec 1 pg/ML de toxine ZEA. La figure 7 est un graphique montrant le pourcentage de réduction de toxine ZEA au cours du temps (en heures) pour les souches NOLO1 (losanges), NOLO2 (carrés), NOLO3 13 (triangles) et NOL04 (croix). EXEMPLE Les inventeurs ont testé les propriétés de réduction de la concentration en mycotoxine des souches bactériennes NOL01, NOL02 et NOL03 et NOL04 sur la ZEA (zéaralénone). 5 1- Effet de la présence de toxines sur la croissance des cellules Les toxines ZEA utilisées pour cet essai sont fournies par Sigma-Aldrich (Milan, Italie) dont la pureté est supérieure à 99%. Les toxines sont dissoutes dans de l'acétonitrile à lmg/mL puis filtrées sur un tube de filtration à membrane de cellulose (RC/G) de 0,2pm (LABOCHEM Science S.r.l., ITALY). Un volume approprié de solution standard de ZEA 10 est ajouté à du milieu TBS pour obtenir la concentration finale souhaitée (1 pg/mL). Les différentes souches bactériennes ont été cultivées dans un milieu de culture TSB en présence ou non de 1 pg/mL de ZEA à 30°C, avec une agitation à 150 rpm, en conditions aérobies. Les données de culture sont représentées sur la figure 6. Ces résultats montrent que 15 les souches NOL01, NOL02, NOLO3 et NOLO4 se développent aussi bien voire plus rapidement en présence de ZEA à une concentration de 1 pg/mL de milieu. Ensuite, différentes concentrations de ZEA dans le milieu ont été testées et les résultats ont montré que les souches NOL01, NOLO2 et NOLO3 se sont développées de manière équivalente dans toutes les concentrations de ZEA testées comme le montrent 20 les figures 1 à 3. Enfin, différentes conditions de pH et de température ont également été testées. Les résultats obtenus montrent que NOL01, NOLO2 et NOLO3 ont une activité de réduction de la ZEA à 10, 20 et 30°C (Figure 4) ainsi qu'aux pH 5, 7 et 8 (Figure 5). Ces résultats montrent que les souches de Bacillus subtilis de l'invention ont la 25 capacité de se développer en présence de fortes concentrations de mycotoxines, et que leur propriété de réduction de la concentration en mycotoxine est conservée dans de nombreuses conditions notamment de pH et température. 2- Mesure de la quantité de toxines après culture Suite aux différentes cultures susmentionnées, les inventeurs ont testé la présence 30 de toxines. Afin de mesurer la quantité de toxine, les inventeurs ont utilisé les kits d'absorption DonTestTM et ZearalaTestTM (VICAM/Waters Corporation, Milford, MA, USA). 0,5 mL de surnageant de chaque culture est mélangé avec 1,5 mL de tampon phosphate (PBS) et appliqué sur les colonnes correspondantes pour adsorption de la 35 toxine, à la vitesse d'une goutte par seconde. Les colonnes sont ensuite lavées avec 5mL d'eau distillée à la même vitesse. Les toxines sont ensuite éluées avec 2mL de méthanol, et les éluats sont séchés à 14 50°C. Les produits secs sont ensuite repris dans un mélange de 250 pL H20:Me0H 85:15, avant analyse par spectrométrie de masse LC. Pour la détection de la toxine ZEA, les inventeurs ont utilisé le dispositif Agilent 1100 HPLC system. Les conditions sont les suivantes : 5 - colonne analytique : Phenomenex ® PFP, (100 mm x 4,6 mm, 2,6 pm), 40°C ; - phase mobile : Eau+Méthanol+Acétonitrile 50+25+25 (v/v/v) ISOCRATIC ; - débit : 0,800 mL/min ; - temps de rétention : 6,7 min ; - Fluorescence 274 nm À(ex) et 440 nm À(em). 10 Les résultats obtenus pour la toxine ZEA sont représentés dans le tableau suivant, et à la figure 3 : temps (h) Pourcentage de réduction de ZEA NOLO1 NOLO2 NOLO3 NOLO4 6 8,7±4,6 6,0±0,0 33,5±1,9 2,2±0,1 16 95,5±1,5 57,0±3,1 96,1±4,2 93,2±1,7 24 97,7±0,6 53,6±3,0 96,6±1,9 94,4±4,9 72 96,9±0,6 64,8±2,1 99,4±1,1 95,5±1,0 Ces résultats montrent une réduction de la ZEA presque totale (plus de 94%) au bout de 24h avec NOL01, NOLO3 et NOLO4 et à plus de 50% pour NOL02. 15 Pour confirmer ces résultats, les inventeurs ont répété les expériences pour la toxine ZEA. Les résultats sont indiqués dans le tableau suivant : Pourcentage de réduction de ZEA temps (h) NOLO1 NOLO2 NOLO3 NOLO4 24* 97,7±0,6 53,6±3,0 96,6±1,9 94,4±4,9 24** 95,7±2,5 56,5±2,5 91,3±1,4 91,8±0,8 Valeur P 0,238 0,264 0,415 0,090 Dans la mesure où la valeur P est supérieure à 0,05, les résultats sont considérés comme répétables. * : première série de tests, ** : seconde série de tests. 3- Test d'adsorption sur les bactéries 20 Les inventeurs ont ensuite testé si les toxines sont adsorbées sur les bactéries. Pour ce faire, les cultures de bactéries après 24h en présence de ZEA ont été traitées de la manière suivante : Les culots bactériens sont repris dans 1mL d'un mélange acétonitrile:eau (90 :10 ; v/v), et les mélanges sont agités vigoureusement à l'aide d'un vortex, et enfin centrifugés 25 pendant 20 min à 14000g. Les surnageants obtenus sont ensuite séchés à 50°C et les 15 résidus secs sont repris dans 1mL d'un mélange eau :méthanol 85 :15 v/v pour une analyse par spectrométrie comme détaillé ci-dessus. Les résultats de désorption de ZEA sont indiqués dans le tableau suivant : Souche Pourcentage de ZEA désorbée (NOL01) 3.2 (NOL02) 11.9 (NOL03) 4.0 (NOL04) 4.4 Ces résultats suggèrent que, au vu de la faible quantité de ZEA désorbée, que la 5 toxine est soit internalisée dans les bactéries, soit dégradée par lesdites bactéries. 4- Test de dégradation par les bactéries Afin de tester l'hypothèse de la dégradation des bactéries, les inventeurs ont testé la présence de toxine directement dans les bactéries. Pour cela, à partir de bactéries cultivées pendant 24h avec 1 pg/mL de ZEA, les culots 10 bactériens ont été repris dans 1mL d'un mélange acétonitrile:eau (90 :10 ; v/v) et lysées par sonication. Les conditions de sonication sont les suivantes : diamètre de la sonde : 3,175 mm, fréquence : 20 kHz, amplitude: 50%, sonication : 15 sec puis arrêt 15 sec (6 fois), durée de sonication 90 sec au total (sans les temps de pause), température 4°C. Après sonication, les échantillons sont centrifugés 20min à 14000g. Les surnageants 15 obtenus sont ensuite séchés à 50°C et les résidus secs sont repris dans 1mL d'un mélange eau :méthanol 85 :15 v/v pour une analyse par spectrométrie comme détaillé ci-après. Dispositif : Aquity UPLC® BEH C18 (100 mm x 2,1 mm, 1,7 pm) - 50°C ; Absorbance UV à 220 nm ; Fluorescence : 274 nm À(ex) et 440 nm À(em). Le temps de rétention de la ZEA était de 11,5 min. 20 Les résultats de ZEA extraite des différents culots sont les suivants : Souche Pourcentage d'extraction de ZEA (NOL01) 2,7 (NOL02) 0,1 (NOL03) 0,0 (NOL04) 1,4 Ces résultats montrent que la ZEA n'est pas détectable, même lorsque les bactéries sont lysées, signifiant que la mycotoxine est dégradée par les bactéries. 5- Culture en conditions anaérobies Les Inventeurs ont également testé les conditions de croissance bactériennes selon 25 le 1- mais en absence d'oxygène. Ils ont ensuite mesuré la dégradation de la mycotoxine ZEA dans ces conditions, selon 16 les protocoles décrits ci-dessus. Les résultats sont regroupés dans le tableau suivant : Type d' Pourcentage de réduction de ZEA incubation NOLO1 NOLO2 NOLO3 NOLO4 aerobie* 97,7±0,6 53,6±3,0 96,6±1,9 94,4±4,9 anaerobie* 92,9±1,4 44,5±5,0 92,6±2,8 90,3±0,5 Valeur P 0,259 0,080 0,530 0,121 * les tests ont été réalisés après 24h de culture en présence de 1 pg/mL de mycotoxine. Ces résultats montrent que, quelle que soit la condition de culture (présence ou 5 absence d'oxygène), les bactéries sont capables de dégrader les mycotoxines. L'invention n'est pas limitée aux modes de réalisation présentés et d'autres modes de réalisation apparaîtront clairement à l'homme REVENDICATIONS1. Utilisation in vitro ou ex vivo d'une composition comprenant ou consistant essentiellement en au moins la souche NOL03, ladite souche étant déposée à la CNCM sous le numéro CNCM I - 4607, pour la dégradation d'au moins une mycotoxine. 2. Utilisation selon la revendication 1, pour la dégradation d'au moins deux mycotoxines de structures différentes. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 2, où ladite composition comprend de 104 à 10" colonies bactériennes, les colonies bactériennes étant par mL ou g de composition. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, où ladite au moins une mycotoxine est produite par un champignon appartenant au groupe constitué des champignons des genres Alternaria, Aspergillus, Byssochkamys, Claviceps, Fusarium, Gibberella, Halosarpheia, Penicillium, Phoma, Pyricularia, et Verticillium. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, où ladite au moins une mycotoxine est choisie parmi les aflatoxines B1, B2, M1, G1 et G2, la toxine T-2, la toxine HT-2, le déoxynivalénol (ou nivalénol), la zéaralénone, la fumonisine B1, et l'ochratoxine A. 6. Méthode de décontamination d'aliment, de matière première ou de fourrage contaminé par au moins une mycotoxine, ladite méthode comprenant une étape de mise en contact de ladite denrée alimentaire ou dudit fourrage avec une composition comprenant ou consistant essentiellement en au moins la souche NOL03, ladite souche étant déposée à la CNCM sous le numéro CNCM I - 4607. 7. Méthode selon la revendication 6, où ledit aliment, ladite matière première ou ledit fourrage est contaminé par au moins deux mycotoxines de structures différentes. 8. Composition comprenant ou consistant essentiellement en au moins la souche NOL03, ladite souche étant déposée à la CNCM sous le numéro CNCM I - 4607, pour son utilisation dans le cadre du traitement des animaux atteints d'une 18 pathologie liée à l'ingestion d'au moins une mycotoxine, ou la prévention desdites pathologies. 9. Composition pour son utilisation selon la revendication 8, où lesdites pathologies 5 sont liées à l'ingestion d'au moins deux mycotoxines de structures différentes.