Brevet FR3063730A1 — publié le 20180914

COMPOSÉS-CLIPS SURFACTANTS POUR L'EXTRACTION ET LA STABILISATION EN SOLUTION DE PROTÉINES MEMBRANAIRES DESCRIPTION Domaine technique La présente invention se rapporte à des composés surfactants et leur utilisation pour l'extration et la stabilisation en solution de protéines membranaires extraites en solution aqueuse. La présente invention trouve une application industrielle dans le domaine de la biochimie ainsi que dans le domaine médical, et notamment dans le domaine de la conception de médicaments assistée par la structure des cibles. Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ([ ]) renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte. État de la technique La structure des protéine membranaires (PMs) est instable en dehors de la membrane lipidique qui les entoure. C'est le cas lorsqu'on les extrait des membranes à l'aide de détergents, pour ensuite les purifier et les cristalliser ou les utiliser comme antigènes. Il est cependant impératif que cette structure soit effectivement celle qu'adopte la PM dans sa membrane d'origine et ne soit pas plus ou moins altérée par le processus d'extraction qui est réalisé à l'aide de détergents. Plus d'une centaine de détergents sont proposés sur le marché pour extraire les PMs. Excellents compétiteurs des lipides dans lesquels sont enchâssées les PMs, ils extraient ces dernières avec une grande efficacité. Celle-ci tient en partie au fait que les détergents s'échangent très vite avec le milieu, contrairement aux lipides (lsraelachvili, J. N., Mitchell, D. J. & Ninham, B. W. Theory of self-assembly of lipid bilayers and vesicles. Biochimica et 3063730 2 Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes 470, 185-201 (1977) ([1])). Cette forte capacité d'échange entraîne par contre une déstabilisation du domaine membranaire des PMs qui, moins bien maintenu qu'avec des lipides, tend à se déstructurer dans le temps. On observe aussi une agrégation des PMs du 5 fait de l'exposition temporaire des régions hydrophobes des PMs qui s'associent entre-elles pour se protéger mutuellement du milieu aqueux. Sur le plan de la conception de médicaments, l'enjeu est majeur pour les industries qui adoptent une stratégie de conception de médicaments assistée par la structure des cibles (« Structure-Based Drug Design »). En 10 effet, parmi les 324 cibles pharmacologiques identifiées à ce jour, plus de 60% sont des PMs, et on estime que le nombre de cibles dépassera à terme les 3000 dont 80 % seront membranaires (Overington, J. P., Al-Lazikani, B. & Hopkins, A. L. How many drug targets are there? Nat Rev Drug Discov 5, 993-996 (2006) ([2])). Cette stratégie implique de connaitre la structure 3D 15 de la cible, apo ou associée à son ligand, pour développer une génération de modulateurs optimisés sur une base structurale (Mason, J. S., Bortolato, A., Congreve, M. & Marshall, F. H. New insights from structural biology into the druggability of G protein-coupled receptors. Trends in Pharmacological Sciences 33, 249-260 (2012) ([3]) ; Schaffhausen, J. Advances in structure- 20 based drug design. Trends in Pharmacological Sciences 33, 223 (2012) ([4]) ; Shoichet, B. K. & Kobilka, B. K. Structure-based drug screening for G-proteincoupled receptors. Trends in Pharmacological Sciences 33, 268-272 (2012) ([5])). Pour autant, il faut disposer de données structurales, effectivement représentatives de l'état natif de la protéine. C'est ce qui est nettement le 25 plus limitant quand la cible est membranaire, et dans ce contexte, de nouveaux outils qui lèvent cette limitation ont un impact majeur sur ce type d'approches. Sur le plan de la vaccination, les cibles sont majoritairement accessibles à la surface des pathogènes et donc ancrées ou enchâssées dans la 30 membrane plasmique. Extraire et maintenir des PMs cibles, quelquefois homo- et/ou hétéro-oligomériques, dans leur état natif le temps qu'elles 3063 730 3 soient prises en charge par le système immunitaire permet d'améliorer la qualité des anticorps, leur efficacité étant directement liée à l'intégrité structurale des protéines injectées. C'est également important sur le plan de la production des antigènes, qui correctement conformés peuvent être 5 injectés à plus faible dose, ce qui permet un gain d'échelle. Le design de détergents plus stabilisants est un champ de recherches très actif. Ainsi parmi les meilleurs détergents stabilisants, ont été récemment développés les lauryl maltoside néopentyl glycols (LMNG), comportant 2 chaines grasses courtes pour mimer les lipides (Chae, P. S. et al. Maltose- 10 neopentyl glycol (MNG) amphiphiles for solubilization, stabilization and crystallization of membrane proteins. Nat Meth 7, 1003-1008, (2010) ([6])). Des détergents basés sur des acides biliaires ont aussi été développés (Chae, P. S. et al. Tandem Facial Amphiphiles for Membrane Protein Stabilization. Journal of the American Chemical Society 132, 16750-16752 15 (2010) ([7]) ; Zhang, Q. et al. Designing Facial Amphiphiles for the Stabilization of Integral Membrane Proteins. Angewandte Chemie International Edition 46, 7023-7025 (2007) ([8]) ; Lee, S. C. et al. Steroidbased facial amphiphiles for stabilization and crystallization of membrane proteins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United 20 States of America 110, E1203-1211 (2013) ([9])). Le design de ces molécules est basé sur des concepts classiques tel que balance hydrophile-hydrophobe, ce qui limite leur potentiel. Une autre génération de détergents incorporant des fonctions acide faible a permis de gagner en stabilité, basés sur un squelette calix[4]arénique (Suwinska, K. et al. Tri-Anionic 25 Calix[4]arene Monoalkyl Derivatives: Synthesis, Solid-State Structures and Self-Assembly Properties. New Journal of Chemistry 32, 1988-1998, (2008) ([10]); Matar-Merheb, R. et al. Structuring detergents for extracting and stabilizing functional membrane proteins. PLoS One 6, e18036, (2011) ([11])). Ces fonctions acide favorisent la formation de ponts salins multiples 30 avec les acides aminés localisés à l'interface membrane-cytoplasme, en nombre plus important qu'ailleurs dans la protéine (von Heijne, G. The 3063 730 4 distribution of positively charged residues in bacterial inner membrane proteins correlates with the trans-membrane topology. Embo J 5, 3021-3027 (1986) ([12]) ; Nilsson, J., Persson, B. & von Heijne, G. Comparative analysis of amino acid distributions in integral membrane proteins from 107 genomes. 5 Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics 60, 606-616, (2005) ([13]) ; von Heijne, G. Membrane-protein topology. Nat Rev Mol Cell Biol 7, 909-918 (2006) ([14])). Ces détergents calix[4]aréniques absorbent fortement dans l'UV, notamment à 280 nm où les protéines sont le plus souvent détectées, et chélatent les métaux divalents, ce qui peut-être indésirable. 10 Il existe donc un réel besoin de nouveaux outils palliant ces défauts, inconvénients et obstacles de l'art antérieur, en particulier de nouveaux outils permettant d'extraire les protéines membranaires et d'augmenter leur stabilité en solution aqueuse. 15 Description de l'invention Aux termes d'importantes recherches, les Demandeurs ont conçu de nouveaux composés permettant de résoudre ce problème technique. Les composés de l'invention consistent en une série de surfactants amphiphiles permettant l'extraction de protéines membranaires (PMs), tout 20 en ayant un faible impact sur l'état natif et fonctionnel des PM. Avantageusement, les composés de l'invention augmentent significativement la stabilité des PMs extraites en solution aqueuse. Ces molécules présentent la propriété unique de ceinturer la région hydrophobe des PMs comme des clips par une triple capacité d'interaction : 25 1/ interaction hydrophobe entre les résidus de la région membranaire de la protéine et la chaine grasse des détergents, 2/ interaction de type Hydrogène, notamment renforcée par la présence d'osides ou chaine polyether et 3/ interaction ionique entre les fonctions de type acide faible de la tête polaire du détergent et les résidus basiques dont l'abondance est 30 particulièrement élevée à l'interface membrane-cytoplasme des PMs. 3063730 5 Les molécules de l'invention permettent en outre d'extraire et stabiliser à court et long termes (plusieurs dizaines de jours) les PM à 4°C. Ces molécules ont en outre la propriété de ne pas absorber dans l'UV et ne pas chélater les cations divalents. 5 Ainsi, un premier objet de l'invention se rapporte à des composés de formule (I): Formule (I) dans laquelle : - X représente -OH, -0(CH2)2SR1, -ocH2-e OR1 , -S(CH2)I-ICH3, -N /\,/ 0 N-E(CH2)pCO2R2 CO2R2 ,-0O2R2 ,_(....,0.')fe-- N ____..\ -OCH2-et..Nri ir % N=N 0 N N -Y - Y représente -(CH2)rICH3, HC-(CH2),-,CH3 (CH2)mCH3 H , -(CH2)20R1 ou H -C-(CH2)pCO2R2 -C -(CH2)pCO2R2 &02R2 CON HCH2002R2 - 10 15 OU H ; 3063730 6 o 11-1.1-1-(cH2),cH3 MILO (cH2),-,cy - Z représente -NHCO(CH2),-ICH3, (cH2),,cH3 -N-(CH2)pCO2R2 -HN-(CH2)pCO2R` (CH2)qCO2R2 , OU et dans laquelle : - R1 représente un monosaccharide, un disaccharide ou le polyéthylène 5 glycol ; - R2 représente H, Na ou K; - m est un nombre entier allant de 4 à 21 ; - n est un nombre entier allant de 4 à 21 ; - p est un nombre entier allant de 1 à 3; 10 - q est un nombre entier allant de 1 à 5; - r est un nombre entier allant de 1 à 10; - Cy représente le cyclohexyle ; ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. On entend par « monosaccharide », au sens de la présente invention, 15 un monomère de glucide comprenant de 3 à 14 atomes de carbone. Il peut s'agir par exemple d'un monosaccharide choisi parmi le glycéraldéhyde, la dihydroxyacétone, l'érythrose, le thréose, l'érythrulose, le désoxyribose, le ribose, l'arabinose, le xylose, le lyxose, le ribulose, le xylulose, l'allose, l'altrose, le galactose, le glucose, le gulose, l'idose, le mannose, le talose, le 20 fructose, le psicose, le sorbose, le tagatose, le fucose, le rhamnose, le sédoheptulose, le mannoheptulose, l'heptahydroxyoctanal, l'acide neuram inique et l'acide sialique, ainsi que leurs dérivés. De préférence, il peut s'agir du glucose. Il peut s'agir d'un monosaccharide cyclique ou acyclique. Parmi les monosaccharides cycliques, il peut s'agir d'un 25 monosaccharide de forme pyranique ou de forme furanique, par exemple le p-D-Glucopyranose. On entend par « disaccharide », au sens de la présente invention, un diholoside formé par deux monomères de glucide via une liaison osidique. Il O EN1 CO2R2 (CH2)pCO2R2 . 3063730 7 peut s'agir d'un homodiholoside ou d'un hétérodiholoside. S'il s'agit d'un homodiholoside, il peut s'agir par exemple d'un homodiholoside de fructose, comme l'inulobiose, ou de mannose, comme le 2alpha-mannobiose ou le 3alpha-mannobiose, ou de glucose, comme le tréhalose, le kojibiose, le 5 nigerose, le maltose, l'isomaltose, le sophorose, le laminaribiose, le cellobiose ou le gentiobiose, ou leurs dérivés. Il peut s'agir par exemple de l'éthylmaltoside. Alternativement, s'il s'agit d'un hétérodiholoside, il peut s'agir d'un hétérodiholoside de glucose-fructose, par exemple choisi parmi, comme par exemple le tréhalulose, le saccharose, le turanose, le maltulose, le 10 leucrose, l'isomaltulose et le gentiobiulose, ainsi que leurs dérivés, ou bien d'un hétérodiholoside choisi parmi le mélibiose, le lactulose, le lactose et le rutinose, ainsi que leurs dérivés. Dans le cadre de l'invention, m peut être choisi parmi les nombres entiers 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 et 21. 15 Dans le cadre de l'invention, n peut être choisi parmi les nombres entiers 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 et 21. Il peut s'agir par exemple des nombres 10, 12 ou 14. Dans le cadre de l'invention, p peut être choisi parmi les nombres entiers 1, 2 et 3. 20 Dans le cadre de l'invention, q peut être choisi parmi les nombres entiers 1, 2, 3, 4 et 5. Dans le cadre de l'invention, r peut être choisi parmi les nombres entiers 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8, 9 et 10. Les nombres entiers m, n, p, q et r sont indépendants les uns des 25 autres, et toutes les combinaisons de ces nombres entiers font partie de l'invention. Dans le cadre de la présente invention, le terme "sels pharmaceutiquement acceptables" comprend les sels préparés avec des acides ou bases, non toxiques, en fonction des substituants présents sur les 30 composés. Lorsque les composés de l'invention comportent des fonctions acides, les sels correspondants peuvent être obtenus par addition d'une base 3063730 8 organique ou inorganique sur le composé sous forme neutralisée en présence éventuellement dans un solvant de préférence inerte. Des exemples de sel d'addition d'une base peuvent être les sels de sodium, potassium, calcium, ammonium, amino (organique), ou magnésium. 5 Ainsi, l'invention s'entend par exemple d'un composé de formule (1) dans lequel : OR1 0 -OCH2 H Il N -E(CH2)pCO2R2 e- - X représente -0(CH2)2SR1 , NN ou CO2R2 H H -C -(CH2)pCO2R2 -C -(CH2)pCO2R2 - Y représente &02R2 ou CON HCH2CO2R2 - 10 o M-1.1-1-(cH2)cH3 - Z représente -NHCO(CH2)rICH3 ou (cH2),,cH3 - R1 représente un monosaccharide, par exemple le glucose, un disaccharide, par exemple le maltose, ou le polyéthylène glycol ; - R2 représente H, Na ou K; 15 - m est un nombre entier allant de 4 à 21, par exemple égal à 11 ; - n est un nombre entier allant de 4 à 21, par exemple égal à 8,10, 11, 12, 14 ou 17; - p est un nombre entier égal à 1 à 3, par exemple égal à 2; ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. 20 Dans ce cas, il peut s'agir par exemple des composés du groupe 3.7, par exemple 3.7b, 3.7c, 3.7e, 3.7g, 3.7j, 3.71, ou du groupe 3.6, par exemple 3.6c, ou du groupe 4.6, par exemple 4.6b ou 4.6d, tels que décrits dans la partie « Exemples » ci-dessous. Alternativement, l'invention s'entend par exemple d'un composé de 25 formule (1) dans lequel : - X représente -S(CH2)rICH3, - Y représente -(CH2)20R1; 3063730 9 o EN11.1-1- c02R2 - Z représente (cH2)pco2R2 - R1 représente un monosaccharide, un disaccharide, par exemple le matlose, ou le polyéthylène glycol ; - R2 représente H, Na ou K; 5 - n est un nombre entier allant de 4 à 21, par exemple égal à 11, 13, 15 ou 17, - p est un nombre entier égal à 1 à 3, par exemple égal à 2; ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. Dans ce cas, il peut s'agir par exemple des composés du groupe 5.3, 10 par exemple 5.3a, b, c ou d, et en particulier du composé 5.3a, tels que décrits dans la partie « Exemples » ci-dessous. D'une manière générale, chacun des composés répondant à la formule (I), et décrits dans la partie « Exemples », et notamment dans les tableaux 1 et 2 de la partie « Exemples » sont des molécules objet de l'invention. 15 Avantageusement, les molécules de la présente invention n'absorbent pas, ou de façon négligeable, de 220 à 500 nm (et au-delà), et n'empêchent donc pas la détection des protéines à 280 nm. Avantageusement, les molécules de l'invention ne forment pas un complexe insoluble avec des métaux divalents. Cette absence d'interaction 20 avec des métaux est par exemple très utile lors des étapes de chromatographie de type affinité-métal, qui utilisent du Nickel ou du Cobalt, et qui ne peuvent être mises en oeuvre avec des fortes concentrations de détergents classiques, contrairement aux molécules de l'invention. Elle est aussi très utile pour éviter la précipitation des complexes en présence de 25 calcium et magnésium qui sont des cofacteurs protéiques couramment rencontrés dans le vivant. Les inventeurs ont mis en évidence expérimentalement qu'il est possible de faire varier la CMC (concentration micellaire critique) des composés de l'invention en faisant varier leurs substituants, par exemple en 3063730 10 faisant varier la longueur de la chaine aliphatique et/ou la taille des têtes polaires, en fonction du but recherché, par exemple éliminer facilement par dialyse ou ultrafiltration un détergent à CMC élevée ou bien conserver celui-ci en utilisant des composés à CMC plus faible. 5 Les inventeurs ont mis en évidence expérimentalement qu'il est possible de réaliser des extractions sélectives, en fonction des protéines membranaires à extraires, au moyen des molécules de l'invention, en faisant varier leurs caractéristiques techniques, notamment leurs substituants, en particulier lorsque des protéines membranaires d'intérêt est généralement co- 10 purifié au moyen des techniques classiques avec un contaminant. Avantageusement, l'extraction de protéines membranaires au moyen des molécules de l'invention ne provoque pas une diminution de l'activité fonctionnelle des PM une fois celles-ci extraites. Facultativement, l'extraction au moyen des molécules de l'invention peut permettre une augmentation de 15 l'activité fonctionnelle de la PM extraite, ceci étant fonction de la nature de la PM à extraire. Les inventeurs ont en outre mis en évidence expérimentalement que les molécules de l'invention stabilisent en solution des protéines membranaires au moins 2 fois plus longtemps, par exemple 2 fois, 3 fois, 4 fois, 5 fois, voire 20 plus, qu'un détergent classique. Les composés de l'invention peuvent être préparés au moyen de toute méthode appropriée connue de l'homme du métier, incluant au moins une des méthodes comprenant le couplage peptidique, déprotection du groupement Fmoc (fluorénylméthoxycarbonyle), formation d'amides, 25 hydrogénation catalytique, déprotection du groupement tBu (tert-butyle), déprotection des esters de méthyle ou d'éthyle, déprotection des groupements Boc, couplage thiol-ène, cycloaddition de Huisgen, réaction de désacétylation, formation des sels de carboxylate (Na, K) et déprotection trityle et couplage thiol-ène. Des protocoles de synthèse de chacun des 30 composés de l'invention sont décrits par exemple dans la partie « Exemple » ci-après. 3063730 11 Un deuxième objet de l'invention se rapporte à un procédé d'extraction de protéines membranaires associées à une membrane biologique, comprenant une étape de mise en contact d'une solution aqueuse de protéines membranaires associées à la membrane biologique avec au moins 5 un composé de formule (I) tel que défini ci-avant. On entend par « membrane biologique », au sens de la présente invention, tout assemblage de molécules lipophiles en un double feuillet séparant une cellule de son environnement, composée d'une bicouche de lipides amphiphiles, notamment des phospholipides, chaque lipide 10 membranaire étant constitué d'une tête polaire hydrophile orientée vers l'extérieur de la membrane et d'une queue hydrophobe orientée vers l'intérieur. Il peut s'agir d'une membrane de cellule procaryote, de cellule eucaryote, animale - à l'exception des cellules souches embryonnaires humaines - ou végétale, ou d'un virus. S'il s'agit d'une cellule eucaryote, il 15 peut s'agir par exemple d'une membrane plasmique, d'une membrane intracellulaire, comme une membrane nucléaire, un lysosome, un exosome, un proteoliposome, une membrane du réticulum endoplasmique lisse ou rugueux, ou une membrane de l'appareil de Golgi, cette liste n'étant pas limitative. Il peut s'agir en outre d'une cellule-hôte isolée transgénique issue 20 d'une lignée cellulaire dans laquelle un ou plusieurs antigènes d'intérêts sont exprimés, par exemple par des techniques de génie génétique de l'ADN, ou de l'ARN recombinant, ou par infection d'une cellule par un vecteur viral exprimant un ou des antigènes vaccinaux d'intérêt. Toute technique de génie génétique connue de l'homme du métier permettant l'expression d'un 25 transgène dans une cellule peut être utilisée. Il peut s'agir d'une technique impliquant l'expression d'un ADN ou d'un ARN, par exemple un ARNm codant synthétique, introduit dans une cellule par transduction, par exemple par électroporation, micro-injection, ultra-sons, infection, transfection. L'expression peut être par exemple transitoire et/ou inductible et/ou 30 constitutive d'au moins un antigène d'intérêt, comme par exemple décrit dans le document W002090533 ([29]). La cellule peut en outre être toute cellule 3063730 12 isolée, notamment à l'exception des cellules souches embryonnaires humaines, par exemple une cellule humaine isolée - les cellules souches embryonnaires humaines étant par exemple exclues -, ou une cellule isolée animale - non-humaine- ou végétale. La cellule isolée peut être issue d'une 5 lignée cellulaire choisie parmi Vero (ATCC No. CCL-81) comme Vero 76 (ATCC No. CRL-1587), CHO comme CHO-KI (CCL 61, ATCC), BHK comme BHK-21 [C-13] (ATCC® CCL-10Tm), HELA, perCe (Crucell), HEK293 (ATCC® CRL-1573Tm), Sf9 (ATCC, CRL-1711), MDCK, par exemple MDCK (NBL-2) (ATCC® CCL-34Tm), cette liste n'étant pas limitative. 10 La membrane biologique peut être entière, c'est-à-dire intègre, ou être une fraction de membrane biologique, c'est-à-dire une partie d'une membrane biologique. On entend par " protéine membranaire " au sens de la présente invention, une protéine associée aux membranes biologiques, c'est-à-dire 15 soit ancrée, soit intégrale, et non libre de diffusion dans les milieux aqueux. Parmi les protéines membranaires, on peut citer par exemple les protéines de membranes plasmiques et les protéines de membranes intracellulaires, comme par exemple les protéines de membranes mitochondriales, nucléaires ou lysosomales. Il peut s'agir par exemple d'une protéine de transport, par 20 exemple un transporteur ABC, éventuellement choisi dans le groupe comprenant la glycoprotéines P (Pgp/ABCB1), MRP1/ABCC1, MRP2/ABCC2, BCRP/ABCG2 et BmrA. Alternativement, il peut s'agir d'une protéine d'intérêt exprimée de manière transgénique dans une membrane biologique, par exemple les protéines citées ci-dessus et exprimées dans des 25 cellules eucaryotes, comme décrit par Baiceanu et al. (Baiceanu E et al. : « 2-Indolylmethylenebenzofuranones as first effective inhibitors of ABCC2 », Eur J Med Chem. 2016 Oct 21;122:408-18 ([30])) pour ABCB1, Cl, C2 et G2, ou BmrA exprimé dans des bactéries (Matar-Merheb, R. et al. ([1 1 ])). La membrane biologique peut être mise en contact avec au moins un 30 composé de formule (I) tel que défini ci-avant, ou au moins deux, ou au moins trois de ces composés, voire plus. Avantageusement, la sélection de 3063730 13 plusieurs d'un ou de plusieurs composé(s) de l'invention peut permettre l'extraction sélective d'une protéine membranaire, par exemple pour s'affranchir des contaminants. Dans le cadre de l'invention, la membrane biologique peut être 5 préalablement mise en solution aqueuse, par exemple dans une solution tampon. L'étape de mise en contact d'une solution aqueuse comprenant la protéine membranaire à extraire avec au moins un composé de formule (I) peut être réalisée à un pH auquel les groupements carboxyliques des 10 molcules de l'invention sont ionisés, pour maximaliser l'effet clip des molécules. Avantageusemen, le pH est un pH compris entre 5,0 et 12, par exemple un pH de 5,0, ou 6,0, ou 7,0, ou 8,0, ou 9,0, ou 10,0, ou 11,0, ou 12,0. Le procédé d'extraction de l'invention peut en outre comprendre une 15 étape d'incubation de la protéine membranaire et du composé de l'invention. Le temps d'incubation peut être adapté pour que tout ou partie des protéines membranaires à extraire se retrouvent en solution. Le temps d'incubation peut être déterminé par l'homme du métier qui saura l'adapter en fonction de la membrane à solubiliser et/ou de la protéine à extraire et/ou du rendement 20 d'extraction souhaité. Le temps d'incubation peut être par exemple de 15 minutes, ou de 30 minutes, ou de 1 heure, ou de 2 heure, ou de 3 heures, voire être supérieur à 3 heures. L'étape d'incubation peut être réalisée à une température adaptée à la protéine à extraire, notamment pour éviter la dénaturation de celle-ci, 25 notamment à la chaleur. La température peut être adaptée en conséquence par l'homme du métier ; typiquement, pour des protéines non thermostables, elle peut être comprise entre 4 et 40°C et pour les protéines thermostables, 40-90°C. Le procédé d'extraction de l'invention peut en outre comprendre une 30 étape de séparation, pour obtenir la fraction contenant la protéine recherchée. Il peut s'agir de toute méthode connue de l'homme du métier, 3063 730 14 par exemple une centrifigation. A l'issue de l'étape de séparation, une fraction contenant la protéine extraite de la membrane est obtenue. Avantageusement, à l'issue de l'extraction, la protéine peut être conservée dans une solution comprenant au moins un composé de 5 l'invention. Avantageusement, les composé de l'invention permettent la stabilisation fonctionnelle des protéines, notamment après que celles-ci aient été extraites de leur membrane. Un autre objet de l'invention se rapporte ainsi à un procédé de stabilisation de protéines membranaires en solution, c'est-à-dire donc hors de 10 la membrane biologique dans laquelle elles se trouvaiten initialement, dans une solution aqueuse, comprenant une étape (i) consistant à mettre en contact une solution aqueuse d'une protéine membranaire en solution avec au moins un composé de formule (I) de l'invention. La stabilisation de la protéine peut être une conservation de tout ou 15 partie des propriétés fonctionnelles de celle-ci par rapport à son état natif. Il peut s'agir d'une conservation d'au moins 50% de l'activité de la protéine par rapport à son état natif, ou au moins 60%, ou au moins 70%, ou au moins 80%, ou au moins 90%, ou 100% de cette activité. Avantageusement, la protéine est ainsi stabilisée à une température 20 comprise de 0°C à 10°C, pendant une durée de temps supérieure à 1 journée, par exemple supérieure à 5 jours, ou supérieure à 10 jours, ou supérieure à 20 jours ou supérieure à 30 jours, ou supérieure à 40 jours. Les protéines membranaires peuvent avoir été mises en solution par une étape d'extraction au moyen d'un composé de l'invention, tel que défini 25 précédemment, ou au moyen d'une étape d'extraction par un autre détergent, c'est-à-dire un détergent commercial, par exemple le DDM, le LMNG, le Triton X100 ou le FA3. D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à 30 la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures annexées, donnés à titre illustratif. 3063 730 15 Brève description des figures - La Figure 1 représente la topologie du transporteur ABC BmrA et le cycle de transport de substrats à travers la membrane plasmique. S = 5 substrat ; NBD = nucleotide-binding domain ; ATP = adénosine triphosphate. - La Figure 2 représente les spectres d'absorption des détergents calix[4]aréniques (exemplifié avec le C4C7) comparés à ceux des molécules-clips de l'invention. Les longueurs d'ondes sont exprimées en nm. Panneau A: le spectre d'absorption du DDM (1 mM) est représenté en ligne continue ; 10 celui du C4C7 (1 mM) est représenté en pointillés. Panneau B: le spectre d'absorption du composé 2.3b (1 mM) est représenté en -- ; celui du composé 2.3c (1 mM) est représenté en ligne continue ; celui du composé 2.3d (1 mM) est représenté en . Panneau C: le spectre d'absorption du composé 3.7e (1 mM) est représenté en ; celui du composé 3.7f (1 15 mM) est représenté en - ; celui du composé 3.7g (1 mM) est représenté en - ; celui du composé 3.7h (1 mM) est représenté en -; celui du composé 3.7j (1 mM) est représenté en ligne continue. Panneau D : le spectre d'absorption du composé 4.6b (1 mM) est représenté en - ; celui du composé 4.6c (1 mM) est représenté en ligne continue ; celui du 20 composé 4.6d (1 mM) est représenté en Panneau E: le spectre d'absorption du composé 3.6a (1 mM) est représenté en ligne continue ; celui du composé 3.6b (1 mM) est représenté en . Panneau F: le spectre d'absorption du composé 3.9a (1 mM) est représenté en ligne continue. Panneau G : le spectre d'absorption du composé 3.7a (1 mM) est représenté 25 en ; celui du composé 3.7b (1 mM) est représenté en ; celui du composé 3.7k (1 mM) est représenté en ; celui du composé 3.71 (1 mM) est représenté en ligne continue; celui du composé 3.7c (1 mM) est représenté en ; celui du composé 3.7d (1 mM) est représenté en - La Figure 3 (A et B) représente l'interaction des cations divalents 30 avec les molécules de l'invention par opposition aux détergents calix[4]aréniques, ici exemplifié avec le C4C12, et montre l'absence 3063730 16 d'interaction des cations divalents avec les molécules de l'invention par opposition aux détergents calix[4]aréniques. L'absorbance est mesurée à 600 nm pour différentes concentrations en MgC12 (mM). Panneau A: absorption du composé 3.7b aux concentrations 0,45 mM (ronds), 1,5 mM (carrés) et 4,5 5 mM (triangles). Panneau B: absorption du composé 3.7c aux concentrations 0,2 mM (croix), 0,5 mM (ronds), 2 mM (carrés) et 6 mM (triangles). Panneau C: absorption du composé 3.7d aux concentrations 0,0045 mM (ronds), 0,0015 mM (carrés) et 0,045 mM (triangles). Panneau D: absorption du composé 3.7e aux concentrations 0,2 mM (croix), 0,5 mM (ronds), 2 mM 10 (carrés) et 6 mM (triangles). Panneau E: absorption du composé 3.7f aux concentrations 0,006 mM (ronds), 0,02 mM (carrés) et 0,06 mM (triangles). Panneau F: absorption du composé 3.7g aux concentrations 0,003 mM (ronds), 0,01 mM (carrés) et 0,03 mM (triangles). Panneau G: absorption du composé 3.7h aux concentrations 0,003 mM (ronds), 0,01 mM (carrés) et 15 0,05 mM (triangles). Panneau H: absorption du composé 3.7i aux concentrations 0,3 mM (ronds), 1 mM (carrés) et 3 mM (triangles). Panneau I : absorption du composé 3.7j aux concentrations 0,006 mM (ronds), 0,02 mM (carrés) et 0,06 mM (triangles). Panneau J: absorption du composé 3.7k aux concentrations 0,3 mM (ronds), 1 mM (carrés) et 3 mM (triangles). 20 Panneau K: absorption du composé 3.71 aux concentrations 0,3 mM (ronds), 1 mM (carrés) et 3 mM (triangles). Panneau L : absorption du composé 2.3f aux concentrations 0,24 mM (ronds), 0,8 mM (carrés) et 2,4 mM (triangles). Panneau M : absorption du composé 2.3g aux concentrations 0,03 mM (ronds), 0,1 mM (carrés) et 0,3 mM (triangles). Panneau N : absorption du 25 composé 2.3h aux concentrations 0,15 mM (ronds), 0,5 mM (carrés) et 1,5 mM (triangles). Panneau O: absorption du composé 4.5c aux concentrations 0,3 mM (ronds), 1 mM (carrés) et 3 mM (triangles). Panneau P : absorption du composé 4.5d aux concentrations 0,15 mM (ronds), 0,5 mM (carrés) et 1,5 mM (triangles). Panneau Q: absorption du composé 4.6c aux concentrations 30 1,5 mM (ronds), 5 mM (carrés) et 15 mM (triangles). Panneau R: absorption du composé 4.6d aux concentrations 1 mM (ronds), 3 mM (carrés) et 9 mM 3063730 17 (triangles). Panneau S : absorption du composé 3.6c aux concentrations 0,3 mM (ronds), 1 mM (carrés) et 3 mM (triangles). Panneau T : absorption du composé 3.9a aux concentrations 0,01 mM (ronds), 0,1 mM (carrés) et 1 mM (triangles). Panneau U : absorption du composé C4C12 (calixarène) aux 5 concentrations 0,03 mM (ronds), 0,1 mM (carrés) et 0,3 mM (triangles). - La Figure 4 représente la fluorescence (`)/0) du DPH (1,6-diphenyl1,3,5-hexatriene) en présence de concentrations croissantes (0,0001 mM, 0,001 mM, 0,01 mM, 0,1 mM, 1 mM et 10 mM) de clips (composés de l'invention), exemplifié avec les composés #3.7e (C13, points représentés par 10 des carrés) et 3.7f (C18, points représentés par des ronds). L'expérience est réalisée en triplicats. En accord avec Chattopadhyay, A. & London, E ([22]), la CMC correspond à la concentration à partir de laquelle la rupture de pente est constatée, ici 20 pM pour 3.7f et 2 mM pour 3.7e (symboles noirs). - La Figure 5 représente la diffusion de la lumière (DLS) de clips, en 15 Intensité (%, colonne A à gauche) et en nombre (%, colonne B à droite), en fonction de la longueur d'onde (nm). Les diamètres estimés sont indiqués sur chaque panneau (colonne A). Colonnes A et B, de haut en bas : composé 3.7c (10 mM, 5xCMC), composé 3.7d (10 mM, 5xCMC), composé 3.7e (2 mM, 5xCMC), composé 3.7f (10 mM, 500xCMC), composé 3.7h (1 mM, 20 100xCMC), composé 3.7j (2 mM, 100xCMC), composé 3.9a (1 mM, 50xCMC). - La Figure 6 représente l'extraction des protéines membranaires BmrA (panneaux A et C) et AcrB (panneaux B et D) à l'aide de détergents commerciaux et des molécules de l'invention (panneaux A et B, de gauche à 25 droite : SDS, DDM, FC12, TX100, composés de l'invention 1.4, 1.5, 2.3a, 2.3b, 2.3c, 2.3d, 2.3e, 2.3f, 2.3g, 2.3h, 2.3i, 3.6a, 3.6b, 3.6c, 3.7a, 3.7b; panneau C : composés de l'invention 3.7c 0,8%, 3.7d 0,16%, 3.7e 0,8%, 3.7f 0,3%, 3.7g 0,4%, 3.7h 0,2%, 3.7i 0,07%, 3.7j 0,09%, 3.7k, 3.71 0,25%, 3.9a, 4.5a, 4.5b, 4.5c, 4.5d 0,34%, 4.6a, 4.6b, 4.6c, 4.6d, 5.3a, 5.3b, 5.3c 0,3%, 30 5.3d 0,3%; panneau D: 3.7c, 3.7d, 3.7e, 3.7f, 3.7h, 3.7i 0,1%, 3.7j, 3.7k, 3.71, 3.9a, 4.5a, 4.5b, 4.5c, 4.5d, 4.6a, 4.6b, 4.6c, 4.6d . Les détergents sont 3063730 18 ajoutés à 10 g/L (1%) sauf indication. L'équivalent de 20 pg de protéines de la fraction extraite après centrifugation 100 000xg 30 min est déposé sur SDSPAGE 10%, coloré au bleu de Coomassie après migration. BmrA migre sous sa forme monomérique à hauteur de la bande de 55 kDa ; AcrB migre 5 sous forme monomérique à hauteur de 100 kDa. SDS = dodécyle sulfate de sodium ; DDM = p-D-dodécyle maltoside ; FC12= foscholine 12; TX100= triton X-100. - La Figure 7 représente l'effet des détergents de l'invention sur la fonctionnalité de BmrA (activité ATPasique, %). La fraction membranaire 10 enrichie en BmrA (-25%) diluée à 2 g/L est additionnée des composés aux concentrations (mM) indiquées (panneau A, de haut en bas : 3.7e 10,7 mM, 3.7e 8,6 mM, 3.7e 6,4 mM, 3.7e 4,3 mM, 3.7e 2,2 mM, 3.7e 1,1 mM, 3.7d 4 mM, 3.7d 3 mM, 3.7d 2 mM, 3.7d 1 mM, 3.7d 0,8 mM, 3.7d 0,6 mM, 3.7d 0,05 mM, 3.7d 0,03 mM, 3.7d 0,02 mM, 3.7c 13 mM, 3.7c 10,4 mM, 3.7c 10 15 mM, 3.7b 1,5 mM, 3.7b 0,7 mM, 3.7b 0,5 mM, 3.6c 12,5 mM, 3.6b 14,4 mM, 2.3gNa2 20,5 mM, 2.3gK2 19,3 mM, 2.3f 21,1 mM, 2.3e 22 mM, 2.3d 23,2 mM, 2.3a 3,2 mM, 1.5a 22 mM, DDM 20 mM, DDM 2mM, DDM 10 mM, DDM 2mM, DDM 1 mM, LMNG 10 mM, LMNG 1 mM, LMNG 0,1 mM, LMNG 0,01 mM, FA3 27 mM, FA3 9 mM, FA3 2 mM, FA3 1 mM, TX100 16 mM; 20 panneau B de haut en bas : composés de l'invention 5.3d 3,2 mM, 5.3c 3,3 mM, 5.3b 11,7 mM, 5.3b 2,9 mM, 5.3a 3 mM, 4.6c 14,6 mM, 4.6b 15,2 mM, 4.5c 18,6 mM, 4.5b 19,6 mM, 3.9a 8 mM, 3.9a 0,51 mM, 3.9a 0,31 mM, 3.9a 0,11 mM, 3.71 12,01 mM, 3.71 6,01 mM, 3.71 3mM, 3.71 1 mM, 3.7k 10 mM, 3.7k 3 mM, 3.7j 3 mM, 3.7j 2 mM, 3.7j 1 mM, 3.7j 0,6 mM, 3.7j 0,03 mM, 3.7j 25 0,02 mM, 3.7j 1 mM, 3.7i 0,3 mM, 3.7h 3 mM, 3.7h 2 mM, 3.7h 1 mM, 3.7h 0,6 mM, 3.7h 0,58 mM, 3.7h 0,5 mM, 3.7h 0,35 mM, 3.7h 0,1 mM, 3.7h 0,5 mM, 3.7h 0,35 mM, 3.7h 0,1 mM, 3.7h 0,05 mM, 3.7h 0,03 mM, 3.7h 0,02 mM, 3.7g 12,5 mM, 3.7g 9 mM, 3.7g 7,5 mM, 3.7g 5 mM, 3.7g 3 mM, 3.7g 1 mM, 3.7f 3,2 mM, 3.7f 2 mM, 3.7f 1 mM, 3.7f 0,061 mM, 3.7f 0,031 mM, 3.7f 30 0,015 mM). Après incubation 2 h à 4°C, l'activité ATPasique est mesurée. Les solutions sont ensuite centrifugées 1 h à 4°C, 100 000xg et les 3063 730 19 surnageants déposés sur SDS PAGE 10% (cf Figure 8). Les histogrammes gris et noirs correspondent aux concentrations auxquelles BmrA est partiellement (gris) ou complètement (noir) extrait d'après ces SDSPAGE. L'activité ATPasique est en % par rapport à celle de la protéine sans 5 composé, 0.7 pmol ATP hydrolysé/min/mg protéines. - La Figure 8 représente l'extraction de BmrA testée à différentes concentrations (exprimées en mM et en xCMC) de différents détergents (DDM, LMNG et FA3) et de molécules de l'invention (3.6c, 3.7b, 3.7c, 3.7d, 3.7e, 3.7f, 3.7h, 3.7g, 3.7j, 3.71, 3.9a, 4.3d, 5.3b) comme indiqué dans la 10 Figrure 7. Les fractions totales (T) et solubles (S) des solutions préparées dans la Figure 7 sont déposées sur SDSPAGE 10% après séparation par centrifugation à 100 000xg 30 min, 4°C. DDM = P-D-dodécyle maltoside ; LMNG : lauryl maltoside neopentyl glycol (Chae, P. S. et al. ([6])). FA3= facial amphiphile #3 (Lee, S. C. et al. ([9])). 15 - La Figure 9 représente la stabilité dans le temps de BmrA purifiée en DDM (points représentés par des ronds) et additionnée des composés de l'invention (3.7c, points représentés par des carrés et 3.7g, points représentés par des losanges), ou de FA3 (points représentés par des triangles). L'activité ATPasique (`)/0) est mesurée en fonction des jours 20 d'incubation post-purification, comme expliqué dan l'exemple 13. EXEMPLES Exemple 1 : Procédés de préparation des composés de l'invention 25 Les différents exemples des détergents appartenant à la formule (I) sont préparés selon les protocoles suivants : Protocole général A: couplage peptidique D'après Corzana et al, 2006 (Corzana, F. et al. New Insights into aGaINAc-Ser Motif: Influence of Hydrogen Bonding versus Solvent 30 Interactions on the Preferred Conformation. Journal of the American Chemical Society 128, 14640-14648 (2006) ([15])). A une solution de dérivé 3063 730 20 d'acide aminé possédant une fonction acide carboxylique libre (1 équiv.) dans le DMF anhydre (15 mL/mmol) sont ajoutés l'acide aminé possédant une fonction amine libre ou sous forme de sel de tosylate (2 équiv.), la DIEA (5 équiv.) et le TBTU (1,2 équiv.). Le mélange réactionnel est agité sous 5 atmosphère inerte et à TA pendant 3 h. Après ajout d'eau (15 mL/mmol), le milieu réactionnel est extrait à l'éther éthylique. Les phases organiques sont rassemblées, lavées par de l'eau distillée et une solution aqueuse saturée de NaCI, séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées sous vide. Le produit brut est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice. 10 Protocole général B1 : déprotection du groupement Fmoc A une solution d'amine protégée sous forme de Fmoc (1 équiv.) dans du CH2Cl2 anhydre (20 mL/mmol) est ajoutée la diéthylamine (20 équiv.). Après une nuit d'agitation à TA et sous N2, le milieu réactionnel est concentré sous vide. Le résidu est repris dans du CH2Cl2. Cette solution est lavée avec 15 une solution saturée de NaHCO3, séchée sur K2CO3 puis concentrée sous vide. Protocole général B2: déprotection du groupement Fmoc Protocole identique à B1, excepté la diéthylamine qui est remplacée par la pipéridine. 20 Protocole général C : formation d'amides A une solution d'amine déprotégée (1 équiv.) dans du CH2Cl2 anhydre (30 mL/mmol) sont ajoutés un chlorure d'acide (2 équiv.), la DMAP (0,5 équiv.) et la pyridine (34 équiv.). Après une nuit d'agitation à TA et sous N2, le milieu réactionnel est acidifié (pH = 3) par ajout d'une solution aqueuse de 25 HCI 10 %. Le milieu réactionnel est extrait au CH2Cl2. Les phases organiques sont rassemblées, lavées par une solution aqueuse saturée de NaCI, séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées sous vide. Le produit brut est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice. Protocole général Di: hydrogénation catalytique 30 A une solution d'ester de benzyle (1 équiv.) dans du Me0H (100 mL/mmol) est ajouté le Pd/C 10 % (200 mg/mmol). Après 4 h à une nuit 3 0 6 3 73 0 21 d'agitation sous H2 et à TA, le milieu réactionnel est filtré sur Célite® puis concentré sous vide. Le produit brut obtenu est directement utilisé dans l'étape suivante sans purification. Dans le cas des détergents PEGylés, le résidu est lavé par du cyclohexane et/ou CH2Cl2. 5 Protocole général D2: hydrogénation catalytique A une solution d'ester de benzyle (1 équiv.) dans du THF (30 mL/mmol) est ajouté le Pd/C 5 % (120 mg/mmol). Après une nuit d'agitation sous H2 et à TA, le milieu réactionnel est filtré sur Célite® puis concentré sous vide. Le produit brut obtenu est directement utilisé dans l'étape suivante sans 10 purification. Protocole général E : déprotection du groupement tert-butyl (tBu) D'après Christensen et al., 2005 (Christensen, C. A. & Meldal, M. Efficient solid-phase synthesis of peptide-based phosphine ligands: towards combinatorial libraries of selective transition metal catalysts. Chemistry 11, 15 4121-4131, doi:10.1002/chem.200500105 (2005) ([16])). A une solution d'alcool protégé sous forme d'éther t-butylique (1 équiv.) dans du CH2Cl2 (12 mL/mmol) est ajouté à 0°C l'acide trifluoroacétique TFA (4 mL/mmol). Après une nuit d'agitation à TA et sous N2, le milieu réactionnel est concentré sous vide. Le résidu est repris dans du CH2Cl2 puis une solution aqueuse de 20 NaOH 2 M est ajoutée (pH = 11-12). La phase aqueuse est lavée par de l'AcOEt puis acidifiée par une solution concentrée de HCI (pH = 1-2) avant d'être extraite par l'AcOEt. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide. Le résidu est lavé par du CH2Cl2 pour éliminer l'acide gras restant. 25 Protocole général F: déprotection des esters de méthyle ou d'éthyle A une solution d'acide protégé sous forme d'ester de méthyle ou d'éthyle (1 équiv.) dans du THF (10,4 mL/mmol) est ajoutée une solution de LiOH (5 équiv.) dans l'eau (10,4 mL/mmol). Le milieu réactionnel est agité 4 h à TA. Après ajout d'une solution aqueuse de H3PO4 5 % (pH = 1-2), le milieu 30 réactionnel est extrait à l'AcOEt (à moins que le composé souhaité précipite, dans ce cas, il est lavé avec de l'eau distillée préalablement refroidie). Les 3063730 22 phases organiques sont rassemblées, lavées par une solution aqueuse saturée de NaCI, séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées sous vide. Le produit brut est ensuite purifié par chromatographie sur colonne en phase inverse C18 (éluant : H20 puis Me0H). 5 Protocole général G: déprotection des groupements Boc A une solution d'amine protégée par un groupement Boc (1 équiv.) dans le CH2Cl2 anhydre (5 mL/g) est ajoutée, à 0°C, le TFA (2,5 mL/g). Après 4-5 h d'agitation à TA et sous N2, le milieu réactionnel est concentré sous vide. Le résidu est repris dans du CH2Cl2 et une solution aqueuse de NaOH (2 M) 10 est ajoutée (pH = 11-12). La phase aqueuse est lavée par AcOEt, acidifiée par une solution concentrée de HCI (pH = 1-2), lavée par du CH2Cl2 puis extraite par AcOEt. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées sous vide. Le produit brut obtenu est directement utilisé dans l'étape suivante sans purification. 15 Protocole général H : couplage thiol-ène D'après Boyère et al., 2013 (Boyere, C., Broze, G., Blecker, C., Jerome, C. & Debuigne, A. Monocatenary, branched, double-headed, and bolaform surface active carbohydrate esters via photochemical thiol-ene/-yne reactions. Carbohydr Res 380, 29-36 (2013) ([17])). Une solution d'alcène 20 terminal (1 équiv.), de thio-saccharide protégé sous forme d'acétate (1,2 équiv.) et de DMPA (0,2 équiv.) dans le THF (15 mL/mmol) est agitée sous N2 et sous irradiation UV à TA pendant 2 h. Après concentration sous vide, le produit brut est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice. Protocole général I : cycloaddition de Huisgen 25 D'après Munteanu et al., 2008 (Munteanu, M., Choi, S. & Ritter, H. Cyclodextrin Methacrylate via Microwave-Assisted Click Reaction. Macromolecules 41, 9619-9623 (2008) ([18])). A une solution d'alcyne (1 équiv.), d'azido-saccharide protégé sous forme d'acétate ou azido-PEG (11,5 équiv.), de CuSO4.5H20 (0,1 équiv.) et d'ascorbate de sodium (0,2 30 équiv.) dans le DMF (6 mL/mmol) sont ajoutées quelques gouttes d'eau. Le milieu réactionnel est agité sous irradiation micro-onde à 140°C pendant 1 h. 3063730 23 Après ajout d'eau, le milieu réactionnel est extrait à l'AcOEt. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées sous vide. Le produit brut est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice. 5 Protocole général J: réaction de désacétylation D'après Chae, P.S. et al., 2010 ([6]). A une solution de dérivé saccharidique protégé sous forme d'acétate (1 équiv.) dans du Me0H (16,7 mL/mmol) est ajouté Me0Na (0,2 équiv.). Après une nuit d'agitation à TA, la résine échangeuse de proton (Dowex-H+) est ajoutée et le milieu réactionnel 10 est agité 30 min. avant d'être filtré. Le filtrat est concentré sous vide et le produit brut obtenu est utilisé directement dans l'étape suivante sans purification. Protocole général K: formation des sels de carboxylate (Na, K) A une solution d'acide carboxylique (1 équiv.) dans un minimum de 15 Me0H est ajouté Me0Na ou MeOK (1 équiv. par fonction carboxylate à salifier). Après 5 min. d'agitation, le solvant est évaporé et le produit final est récupéré sous forme de solide. Protocole général L: déprotection trityle et couplage thiol-ène A une suspension de L-Fmoc-Cys(Trt)-OH (1 équiv.) dans du CH2Cl2 20 (10 mL/g) en présence de Et3SiH (1,5 équiv.), est ajouté à 0°C du TFA (5 mL/g). Après 3 h d'agitation, le milieu réactionnel est concentré sous vide pour donner un solide gris. Ce résidu, l'alcène (1,2 équiv.) et le photoinitiateur DMPA (0,5 équiv.) sont dissous dans du THF (7,5 mL/g). Le milieu est agité 3 h à TA et sous UV. Après concentration sous vide, le produit brut est purifié 25 par colonne chromatographique sur gel de silice. Exemple 2: Exemple de composés 1.1 à 1.5 3063730 24 OH 1.2 HN ) 2 CO2Et NH2 1.1 11 NHFmoc III iv 1.3 (rr2 il)2 CO2Bn CO2Et lir vii, v, vi 11 1.4 HN ) 2 CO2H HO 11 HO 1.5 11 CO2H CO2H j. CH3(CH2)iiNH2, TBTU, DIEA, DMF; ii. Pipéridine/DMF 20:80; iii. Acrylate d'éthyle, Me0H ; iv. Acrylate de benzyle, 70°C; y. Li0H, THF, H20, 5 TA; vi. TFA, CH2Cl2, TA; vii. H2, Pd/C 10%, Me0H. Composé 1.1 >Lo N 0 H NH2 A une solution de Fmoc-Ser(tBu)-OH (3,0 g, 7,82 mmol, 1 équiv.) dans le DMF (300 mL) sont ajoutés le dodécylamine (2,9 g, 15,64 mmol, 2 équiv.) 10 puis la DIEA (6,8 mL, 39,11 mmol, 5 équiv.) et le TBTU (3,01 g, 9,38 mmol, 1,2 équiv.). Après 4 h d'agitation à TA, le milieu réactionnel est concentré sous vide et dilué par l'éther. La phase organique est lavée successivement par une solution saturée de NaCI, une solution d'HCI (0,1 N) puis par une solution de NaHCO3 (5 %) avant d'être séchée sur Na2SO4, filtrée et 3063730 25 concentrée sous vide. Le résidu obtenu est repris dans un mélange pipéridine/DMF (20:80, 300 mL). Après 1 h d'agitation à TA, le milieu réactionnel est ensuite concentré sous vide. Le produit brut obtenu est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice (CH2C12/Me0H 98:2) pour 5 donner le composé attendu (2,44 g, 7,43 mmol, 95 %) sous forme d'une huile jaune. Rf = 0,45 (CH2C12/Me0H 95:5) ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,89 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 9H), 1,26-1,35 (m, 22H), 3,25 (q, J = 4,4 Hz, 2H), 3,42-3,51 (m, 2H), 3,62 (dd, J = 4,0, 4,0 Hz, 1H), 7,39 (m, 1H) ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,0 (CH2), 27,3 (CH2), 27,8 (3xCH3), 10 29,6 (2xCH2), 29,9 (3xCH2), 30,0 (CH2), 32,0 (CH2), 36,8 (CH2), 39,4 (CH2), 55,7 (CH), 64,3 (CH2), 73,7 (C), 173,2 (C) ; Masse (ESI+) : rniz (%) 329 [M+H] (100). Composé 1.2 HN1)2H CO2Et 15 A une solution d'intermédiaire 1.1 (1,06 g, 3,22 mmol, 1 équiv.) dans le méthanol (3,5 ml) est ajouté l'acrylate d'éthyle (1,37 ml, 12,9 mmol, 2,5 équiv.). Le mélange a été purgé à l'azote, couvert de papier aluminium et agité pendant 5 jours à TA. Le produit brut obtenu est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice (CH2C12/Me0H 95:5) pour donner le 20 composé attendu (1,24 g, 2,90 mmol, 83 %) sous forme d'une huile jaune. Rf = 0.56 (CH2C12/Me0H 98:2) ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,89 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,13 (s, 9H), 1,22-1,25 (m, 25H), 1,46-1,49 (m, 2H), 2,04 (m, 1H), 2,44 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,79-2,83 (m, 2H), 3,16 (dd, J = 4,0, 4,0 Hz, 1H), 3,20 (q, J = 6,8 Hz, 2H), 3,29 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 4,0, 4,0 Hz, 25 1H), 4,12 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 7,46 (t, J = 4,8 Hz, 1H) ; RMN 13C (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 14,4 (CH3), 22,8 (CH2), 27,1 (CH2), 27,7 (3xCH3), 29,5-29,8 (7xCH2), 32,1 (CH2), 35,0 (CH2), 39,2 (CH2), 44,0 (CH2), 60,7 3063730 26 (CH2), 62,6 (CH), 63,5 (CH2), 73,5 (C), 172,0 (C), 172,7 (C) ; Masse (ESI+) : m/z (%) 429 [M+H] (100) ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C24F149N204 429,3692, trouvée 429,3696. Composé 1.3 2((N1)2 5 BnO2C CO2Et Une solution d'intermédiaire 1.2 (1,40 g, 3,26 mmol, 1 équiv.) et d'acrylate de benzyle (1,32 g, 8,16 mmol, 2,5 équiv.) est agitée à 70°C pendant 7 jours puis le milieu réactionnel est concentré sous vide. Le produit brut obtenu est purifié par colonne chromatographique sur gel de silice 10 (CH2Cl2 100%) pour donner le composé attendu (640 mg, 1,07 mmol, 33 %) sous forme d'une huile jaune. Rf = 0,47 (CH2C12/Me0H 98:2) ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,80 (t, J= 6,8 Hz, 3H), 1,10 (s, 9H), 1,13-1,25 (m, 22H), 1,40 (m, 2H), 2,30-2,52 (m, 4H), 2,87-3,04 (m, 4H), 3,09 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 3,38 (dd, J = 8,8, 4,4 Hz, 1H), 3,57 (ddd, J = 19,2, 12,8, 3,2 Hz, 1H), 3,89 15 (dd, J = 6,0, 2,4 Hz, 1H), 4,04 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 5,04 (s, 2H), 7,23-7,33 (m, 5H), 7,51 (t, J = 6,0 Hz, 1H), ; RMN 13C (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,1 (CH3), 14,2 (CH3), 22,7 (CH2), 27,0 (CH2), 27,5 (3xCH3), 29,4-29,7 (7xCH2), 31,9 (2xCH2), 33,5 (CH2), 39,2 (CH2), 47,0 (2xCH2), 60,0 (CH2), 60,4 (CH2), 65,1 (CH), 66,3 (CH2), 73,3 (C), 128,3-128,6 (5xCH), 136,3 (C), 171,6 (C), 172,4 20 (C), 172,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 613 (46) [M+Na], 591 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C34H59N206 591,4373, trouvée 591,4384. 3063 730 Composé 1.4 HO HN,(1)2H CO2H Le composé 1.4 (huile jaune, 17 mg, 0,05 mmol, 38 %) a été obtenu à 5 partir du composé 1.2 (59 mg, 0,13 mmol) en suivant les protocoles généraux F puis K (sans toutefois effectuer les lavages acido-basiques) ; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,64 (t, J = 8,0 Hz, 3H), 1,06-1,07 (m, 18H), 1,27-1,31 (m, 2H), 2,55 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 3,00 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 3,04-3,05 (m, 2H), 3,60 (dd, J = 8,0, 8,0 Hz, 1H), 3,69-3,77 (m, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, 10 Me0D) 5 ppm 14,3 (CH3), 23,6 (CH2), 27,4 (CH2), 27,8 (CH2), 30,1 (CH2), 30,2 (CH2), 30,3 (CH2), 30,5 (CH2), 30,6 (3xCH2), 32,9 (CH2), 40,8 (CH2), 43,5 (CH2), 60,4 (CH), 60,9 (CH2), 167,0 (2xC) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 345 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C18H37N204 345,2747, trouvée 345,2746. 15 Composé 1.5 HO 10 H 1)2 Ho2c co2H 20 Le composé 1.5 (huile jaune, 147 mg, 0,35 mmol, 72 'Vo) a été obtenu à partir du composé 1.3 (300 mg, 0,50 mmol) en suivant les protocoles généraux D1, F puis K (sans toutefois effectuer les lavages acido-basiques) ; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,90 (t, 3H, J = 8,0 Hz), 1,22-1,37 (m, 22H), 1,53-1,57 (m, 2H), 2,90 (t, J = 8,0 Hz, 4H), 3,18-3,29 (m, 3H), 3,64 (m, 25 J = 8,0 Hz, 4H), 4,08 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 4,16-4,18 (m, 1H), 8,42 (t, J = 4,0 Hz, NH); RMN 13C (100 MHz, Me0D) 5 ppm 14,5 (CH3), 17,9 (CH2), 23,8 (CH2), 24,3 (CH2), 28,1 (CH2), 29,8 (CH2), 30,2 (CH2), 30,5 (CH2), 30,6 (CH2), 27 10 3063730 28 30,8 (2xCH2), 33,2 (2xCH2), 41,0 (CH2), 54,9 (2xCH2), 59,4 (CH), 69,2 (CH2), 173,8 (3xC) ; Masse (ESI+) m/z (%) 417 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C21 H41N206 417,2959, trouvée 417,2956. 5 Exemple 3: Composés 2.1 à 2.3 t-BuO FmocHN (CH2),CO2Bn N CO2Bn H 2.1 t-BuO (CH2)'CO2Bn OH + p-tosylateH2N' LCO2Bn NHFmoc iii ou iv HO 2.2 0 NH (CH2)'CO2Bn t-BuO rN CO2Bn H 0 NH (CH2)'CO2H '.- H CO2H 2.3 j. TBTU, DIEA, DMF ; ii. Et2NH, CH2Cl2 ; iii. RCOCI, DMAP, pyridine, 10 CH2C12; iv. RCOOH, TBTU, DIEA, DMF ; V. H2, Pd/C, Me0H ; vi. TFA, CF12Cl2. Exemple 2.1a t-BuO N (COOBn 15 FmocNH H Le composé 2.1a (solide blanc, 2,95 g, 4,34 mmol, 83%) a été obtenu à partir des composés commerciaux Fmoc-L-Ser(t-Bu)-OH (2,00 g, 5,22 mmol) et H-D-Asp(OBn)-0Bn.p-tosylate (5,07 g, 10,43 mmol) en suivant le protocole général A (purification : colonne chromatographique sur gel de silice, éluant : 20 cyclohexane/AcOEt 9:1 à 7:3). Rf = 0,32 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 115-117 °C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 1,15 (s, 9H), 2,82-2,96 (m, 1H), 3,06 (dd, J = 17,1, 4,6 Hz, 1H), 3063730 29 3,38 (dd, J = 8,3, 8,3 Hz, 1H), 3,74-3,77 (m, 1H), 4,19-4,26 (m, 2H), 4,354,37 (m, 2H), 4,88-4,93 (m, 1H), 5,01 (s, 2H), 5,12 (s, 2H), 5,74 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,25-7,34 (m, 12H, H3"), 7,38 (dd, J = 7,5, 7,5 Hz, 2H), 7,59-7,61 (m, 2H), 7,65 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 5 MHz, CDCI3) 5 ppm 27,5 (3xCH3), 36,6 (CH2), 47,3 (CH), 49,0 (CH), 54,8 (CH), 61,7 (CH2), 66,9 (CH2), 67,3 (CH2), 67,7 (CH2), 74,4 (C), 120,1 (2xCH), 125,3 (2xCH), 127,3 (2xCH), 127,9 (2xCH), 128,4 (CH), 128,5 (CH), 128,6 (CH), 128,6 (CH), 128,7 (CH), 135,3 (C), 135,5 (C), 141,5 (2xC), 143,9 (2xC), 156,2 (C), 170,3 (2xC), 170,6 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 426 (100), 701 (60) 10 [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C40H43N208 679,3019, trouvée 679,3013. Exemple 2.1b 15 COOBn t-BuO COOBn FmocNH Le composé 2.1b (solide blanc, 5,14 g, 7,42 mmol, 81%) a été obtenu à 20 partir des composés commerciaux Fmoc-L-Ser(t-Bu)-OH (3,5 g, 9,12 mmol) et H-D-Glu(OBn)-0Bn.p-tosylate (9 g, 18,24 mmol) en suivant le protocole général A (modification : après ajout d'eau, le composé souhaité précipite et a été purifié par recristallisation dans un mélange CH2C12/Et20). Rf = 0,50 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 126-128 °C ; RMN 1H (400 25 MHz, CDCI3) 5 ppm 1,19 (s, 9H), 1,99-2,11 (m, 1H), 2,22-2,35 (m, 1H), 2,32- 2,55 (m, 2H), 3,41 (dd, J = 8,3, 8,3 Hz, 1H), 3,75-3,87 (m, 1H), 4,23 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 4,24-4,33 (m, 1H), 4,40 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 4,68-4,76 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,17 (s, 2H), 5,78 (bs, 1H), 7,21-7,46 (m, 15H), 7,61 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 7,76 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 27,4 30 (3xCH3), 27,5 (CH2), 30,0 (CH2), 47,1 (CH), 51,8 (CH), 54,6 (CH), 61,7 (CH2), 66,5 (CH2), 67,2 (CH2), 67,4 (CH2), 74,3 (C), 120,0 (2xCH), 125,1 (2xCH), 3063730 30 127,1 (2xCH), 127,7 (2xCH), 128,2-128,7 (10xCH), 135,1 (C), 135,7 (C), 141,3 (2xC), 143,7 (2xC), 156,1 (C), 170,1 (C), 171,2 (C), 172,3 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 426 (100), 570 (3), 715 (1) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C41 H45N208693,3176, trouvée 693,3156. 5 Exemple 2.2a COOBn t-BuO COOBn Oy NH H 10 (C1-12)12C1-13 Le composé 2.2a (solide blanc, 105 mg, 0,16 mmol, 27%) a été obtenu à partir du composé 2.1a en suivant les protocoles généraux B puis C. Rf = 0,30 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 59-61°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,16 (s, 9H), 1,18-1,36 (m, 20H), 1,56- 15 1,67 (m, 2H), 2,20 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,89 (dd, J = 17,1, 4,7 Hz, 1H), 3,07 (dd, J = 17,1, 4,7 Hz, 1H), 3,27 (dd, J = 8,6, 8,6 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 8,6, 4,1 Hz, 1H), 4,43-4,50 (m, 1H), 4,87-4,93 (m, 1H), 5,06 (s, 2H), 5,13 (s, 2H), 6,36 (d, J = 6,3 Hz, 1H, NH), 7,26-7,38 (m, 10H), 7,60 (d, J = 8,1 Hz, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 25,6 (CH2), 27,4 20 (3xCH3), 29,4-29,8 (8xCH2), 32,0 (CH2), 36,5 (CH2), 36,7 (CH2), 48,9 (CH), 53,1 (CH), 61,3 (CH2), 66,9 (CH2), 67,6 (CH2), 74,3 (C), 128,5-128,8 (10xCH), 135,3 (C), 135,5 (C), 170,3 (C), 170,6 (C), 170,6 (C), 173,4 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 690 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C39H59N207 667,4322, trouvée 667,4318. 25 Exemple 2.2b t-Bu 0 O. NH /COOBn COOBn (CH2)6CH3 3063730 31 Le composé 2.2b (solide blanc, 67 mg, 0,11 mmol, 39 %) a été obtenu à partir du composé 2.1b en suivant les protocoles généraux B puis C. Rf = 0,35 (7:3 cyclohexane/AcOEt) ; Tf = 86°C ; RMN 1H (400 MHz, 5 CDCI3) 5 ppm 0,87 (t, 3H, J = 7,0 Hz), 1,17 (s, 9H), 1,23-1,38 (m, 8H), 1,57- 1,72 (m, 2H), 1,98-2,11 (m, 1H), 2,19-2,35 (m, 3H), 2,35-2,53 (m, 2H), 3,38 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 3,78 (dd, J = 8,8, 4,2 Hz, 1H), 4,53-4,60 (m, 1H), 4,67- 4,75 (m, 1H), 5,10 (s, 2H), 5,15 (s, 2H), 6,66 (d, J = 6,9 Hz, 1H, NH), 7,277,38 (m, 10H), 7,45 (d, J = 7,9 Hz, 1H, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 10 ppm 14,1 (CH3), 22,6 (2xCH2), 27,4 (3xCH3), 27,5 (CH2), 29.0-30.0 (3xCH2), 31,7 (CH2), 36,6 (CH2), 51,8 (CH), 53,0 (CH), 61,3 (CH2), 66,5 (CH2), 67,41 (CH2), 74,4 (3xCH3), 128,3-128,7 (10xCH), 135,1 (C), 135,8 (C), 170,36 (C), 171,23 (C), 172,34 (C), 173,34 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 597 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C34H49N207 597,3540, trouvée 597,3538. 15 Exemple 2.2c COOBn t-BuO COOBn 0 NH (CH2)7CH3 20 Le composé 2.2c (solide blanc, 69 mg, 0,11 mmol, 39 'Vo) a été obtenu à partir du composé 2.1b en suivant les protocoles généraux B puis C. Rf = 0,38 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 91°C; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,87 (t, J= 7,0 Hz, 3H), 1,17 (s, 9H), 1,22-1,38 (m, 10H), 1,56- 25 1,70 (m, 2H), 1,98-2,10 (m, 1H), 2,18-2,34 (m, 3H), 2,36-2,53 (m, 2H), 3,41 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 3,76 (dd, J = 8,9, 4,1 Hz, 1H), 4,57-4,64 (m, 1H), 4,684,76 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,14 (s, 2H), 6,75 (d, J = 6,9 Hz, 1H, NH), 7,267,38 (m, 10H), 7,53 (d, J = 7,9 Hz, 1H, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (2xCH2), 27,5 (3xCH3), 27,7 (CH2), 29.3-30.1 (4xCH2), 30 32,0 (CH2), 36,7 (CH2), 51,9 (CH), 53,1 (CH), 61,4 (CH2), 66,7 (CH2), 67,5 3063730 32 (CH2), 74,5 (C), 128,4-128,8 (10xCH), 135,2 (C), 135,9 (C), 170,5 (C), 171,3 (C), 172,5 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 633 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C35H51 N207 611,3696, trouvée 611,3681. Exemple 2.2d 5 COOBn t-BuO COOBn Oy NH (CH2)8CH3 Le composé 2.2d (solide blanc, 195 mg, 0,31 mmol, 45 'Vo) a été obtenu 10 à partir du composé 2.1b en suivant les protocoles généraux B puis C. Rf = 0,18 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 82-85 °C; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,87 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,16 (s, 9H), 1,19-1,35 (m, 12H), 1,551,66 (m, 2H), 1,96-2,07 (m, 1H), 2,21 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 2,21-2,30 (m, 1H), 2,32-2,50 (m, 2H), 3,31 (dd, J = 8,7, 8,7 Hz, 1H), 3,80 (dd, J = 8,7, 4,2 Hz, 15 1H), 4,44-4,50 (m, 1H), 4,65-4,72 (m, 1H), 5,08 (s, 2H), 5,15 (s, 2H), 6,40 (d, J = 6,4 Hz, 1H, NH), 7,27-7,36 (m, 11H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,1 (CH3), 22,7 (2xCH2), 25,6 (CH2), 27,4 (3xCH3), 27,5 (CH2), 29,3-29,44 (4xCH2), 30,0 (CH2), 31,9 (CH2), 36,6 (CH2), 51,8 (CH), 53,0 (CH), 61,3 (CH2), 66,5 (CH2), 67,3 (CH2), 74,3 (C), 128,3-128,7 (10xCH), 135,2 (C), 20 135,8 (C), 170,4 (C), 171,2 (C), 172,3 (C), 173,3 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 626 (30) [M+H], 648 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C36H53N207 625,3853, trouvée 625,3846. Exemple 2.2e COOBn 25 t-Bu 0 COOBn 0 NH (C1-12)1 0CH3 Le composé 2.2e (solide blanc, 182 mg, 0,28 mmol, 48 'Vo) a été obtenu à partir du composé 2.1b en suivant les protocoles généraux B puis C. 3063730 33 Rf = 0,12 (cyclohexane/AcOEt 8:2) ; Tf = 67-69°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,17 (s, 9H), 1,19-1,35 (m, 16H), 1,561,67 (m, 2H), 1,96-2,08 (m, 1H), 2,21 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,21-2,32 (m, 1H), 2,32-2,50 (m, 2H), 3,30 (dd, J = 8,7, 8,7 Hz, 1H), 3,81 (dd, J = 8,7, 4,2 Hz, 5 1H), 4,42-4,49 (m, 1H), 4,64-4,72 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,16 (s, 2H), 6,38 (d, J = 6,3 Hz, 1H, NH), 7,23-7,39 (m, 11H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 25,6 (CH2), 27,5 (3xCH3), 27,6 (CH2), 29,4-29,7 (6xCH2), 30,0 (CH2), 32,0 (CH2), 36,7 (CH2), 51,9 (CH), 53,1 (CH), 61,4 (CH2), 66,6 (CH2), 67,5 (CH2), 74,4 (C), 128,4-128,8 (10xCH), 135,2 (C), 10 135,9 (C), 170,4 (C), 171,3 (C), 172,4 (C), 173,4 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 131 (30), 199 (40), 654 (50) [M+H], 677 (100), 699 (20) ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C38H57N207 653,4166, trouvée 653,4158. Exemple 2.2f COOBn 15 t-BuO COOBn 0 NH H (O1-12)11 CH3 Le composé 2.2f (solide blanc, 233 mg, 0,35 mmol, 50 °/0) a été obtenu 20 à partir du composé 2.1b en suivant les protocoles généraux B puis C. Rf = 0,24 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 68-71 °C; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,17 (s, 9H), 1,20-1,36 (m, 18H), 1,551,67 (m, 2H), 1,96-2,08 (m, 1H), 2,21 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,21-2,32 (m, 1H), 2,32-2,50 (m, 2H), 3,31 (dd, J = 8,7, 8,7 Hz, 1H), 3,80 (dd, J = 8,7, 4,2 Hz, 25 1H), 4,44-4,50 (m, 1H), 4,63-4,73 (m, 1H), 5,08 (s, 2H), 5,15 (s, 2H), 6,41 (d, J = 6,4 Hz, 1H, NH), 7,25-7,37 (m, 11H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,1 (CH3), 22,7 (CH2), 25,5 (CH2), 27,4 (3xCH3), 27,5 (CH2), 29,3-29.7 (7xCH2), 29,9 (CH2), 31,9 (CH2), 36,5 (CH2), 51,8 (CH), 53,0 (CH), 61,3 (CH2), 66,5 (CH2), 67,3 (CH2), 74,2 (C), 128,3-128,6 (10xCH), 135,2 (C), 30 135,8 (C), 170,4 (C), 171,2 (C), 172,3 (C), 173,3 (C) ; Masse (ESI+) m/z 3063730 34 (°/0) 668 (20) [M+H], 690 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C39H59N207 667,4322, trouvée 667,4334. Exemple 2.2g COOBn 5 t-BuO COOBn OyNH H H2)12C H3 Le composé 2.2g (solide blanc, 187 mg, 0,27 mmol, 48 °/0) a été obtenu à partir du composé 2.1b en suivant les protocoles généraux B puis C. 10 Rf = 0,07 (cyclohexane/AcOEt 8:2) ; Tf = 71-73°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,17 (s, 9H), 1,20-1,36 (m, 20H), 1,561,67 (m, 2H), 1,97-2,08 (m, 1H), 2,21 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,23-2,50 (m, 3H), 3,29 (dd, J = 8,7, 8,7 Hz, 1H), 3,80 (dd, J = 8,7, 4,2 Hz, 1H), 4,41-4,49 (m, 1H), 4,63-4,72 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,14 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 15 12,3 Hz, 1H), 7,25-7,39 (m, 11H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 25,6 (CH2), 27,5 (3xCH3), 27,6 (CH2), 29,4-29,8 (8xCH2), 30,0 (CH2), 32,0 (CH2), 36,7 (CH2), 51,9 (CH), 53,1 (CH), 61,4 (CH2), 66,6 (CH2), 67,5 (CH2), 74,4 (C), 128,4-128,8 (10xCH), 135,2 (C), 135,8 (C), 170,5 (C), 171,3 (C), 172,4 (C), 173,4 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 131 (65), 199 20 (100), 682 (60) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C40H61N207 681,4479, trouvée 681,4447. Exemple 2.2h COOBn t-BuO COOBn OyNH H H2)14C H3 Le composé 2.2h (solide blanc, 93 mg, 0,13 mmol, 30 °/0) a été obtenu à 25 partir du composé 2.1b en suivant les protocoles généraux B puis C. Rf = 0,11 (cyclohexane/AcOEt 8:2) ; Tf = 69-71°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,86 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,15 (s, 9H), 1,19-1,31 (m, 24H), 1,56-1,63 (m, 3063730 2H), 1,96-2,05(m, 1H), 2,19(t, J= 7,6 Hz, 2H), 2,23-2,47 (m, 3H), 3,27 (dd, J = 8,7, 8,7 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 8,7, 4,2 Hz, 1H), 4,41-4,45 (m, 1H), 4,634,68 (m, 1H), 5,07 (s, 2H), 5,14 (s, 2H), 7,22-7,37 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 22,9 (CH2), 25,7 (CH2), 27,6 (3xCH3), 27,7 5 (CH2), 29,5-30,2 (11xCH2), 32,1 (CH2), 36,8 (CH2), 52,0 (CH), 53,2 (CH), 61,5 (CH2), 66,7 (CH2), 67,6 (CH2), 74,6 (C), 128,5-128,9 (10xCH), 135,3 (C), 136,0 (C), 170,5 (C), 171,4 (C), 172,5 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 199 (15), 710 (100) [M+H], 732 (15) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C42H65N207 709,4792, trouvée 709,4805. 10 Exemple 2.2i COOBn t-BuO COOBn OyNH H (CD2)10CD3 15 Le composé 2.2i (solide blanc, 162 mg, 0,24 mmol, 83 °/0) a été obtenu à partir du composé 2.1b en suivant le protocole général A (purification : colonne chromatographique sur gel de silice, éluant : cyclohexane/AcOEt 9:1 à 7:3) Rf = 0,28 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 70-72°C ; RMN 1H (400 MHz, 20 CDCI3) 5 ppm 1,15 (s, 9H), 1,94-2,06 (m, 1H), 2,17-2,29 (m, 1H), 2,29-2,48 (m, 2H), 3,29 (dd, J = 8,6, 8,6 Hz, 1H), 3,78 (dd, J = 8,6, 4,1 Hz, 1H), 4,394,48 (m, 1H), 4,60-4,71 (m, 1H), 5,06 (s, 2H), 5,13 (s, 2H), 6,36 (d, J = 6,4 Hz, 1H, NH), 7,22-7,35 (m, 11H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 13,1 (st, Jc,o = 18,6 Hz, CD3), 21,4 (qt, Jc,D = 18,4 Hz, CD2), 24,5 (qt, Jc,D = 19,2 25 Hz, CD2), 27,4 (3xCH3), 27,5 (CH2), 27,2-28,8 (6xCD2), 30,0 (CH2), 30,5 (qt, J = 18,7 Hz, CD2), 35,7 (qt, J = 19,5 Hz, CD2), 51,8 (CH), 53,0 (CH), 61,4 (CH2), 66,5 (CH2), 67,4 (CH2), 74,3 (C), 128,3-128,7 (10xCH), 135,2 (C), 135,8 (C), 170,4 (C), 171,2 (C), 172,3 (C), 173,4 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 199 (40), 265 (100), 677 (80) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour 30 C38H34D23N207 676,5610, trouvée 676,5610. 3063 730 36 Exemple 2.3a COOH HO LCOOH O. NH (CH2)12CH3 5 Le composé 2.3a (solide blanc, 55 mg, 0,13 mmol, 98 °/0) a été obtenu à partir du composé 2.2a en suivant les protocoles généraux D1 puis K. Tf = 125-135°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,2 Hz, 3H), 1,19-1,42 (m, 20H), 1,54-1,71 (m, 2H), 2,23-2,33 (m, 2H), 2,76-2,93 (m, 10 2H), 3,71-3,83 (m, 2H), 4,47 (dd, J = 5,4, 5,4 Hz, 1H), 4,74 (dd, J = 5,4, 5,4 Hz, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 30,4-30,9 (8xCH2), 33,1 (CH2), 36,9 (CH2), 37,0 (CH2), 50,3 (CH), 56,7 (CH), 63,0 (CH2), 172,2 (C), 174,3 (C), 176,5 (C), 176.5 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 429 (100) [M-H]; SMHR (ESI-) m/z calculée pour 15 C21H37N207 429,2601, trouvée 429,2591. Exemple 2.3b COOH HO COOH O. NH H (CH2)6CH3 20 Le composé 2.3b (solide incolore hygroscopique, 27 mg, 0,07 mmol, quantitatif) a été obtenu à partir du composé 2.2b en suivant les protocoles généraux D1 puis K. Tf = 39-40°C ; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,89 (t, J = 7,0 Hz, 25 3H), 1,23-1,39 (m, 8H), 1,57-1,67 (m, 2H), 1,90-2,02 (m, 1H), 2,16-2,32 (m, 3H), 2,40 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 3,72-3,84 (m, 2H), 4,42-4,50 (m, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, Me0D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,6 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 30,1-31,1 (3xCH2), 32,8 (CH2), 36,9 (CH2), 53,3 (CH), 56,7 (CH), 63,0 (CH2), 172,6 (C), 175,0 (C), 176,5 (C), 176,6 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 360 (100) 3063730 37 [M-H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C16H27N207 359,1818, trouvée 359,1803. Exemple 2.3c COOH 5 HO C001-1 0 NH (CH2)7CH3 Le composé 2.3c (solide incolore hygroscopique, 31 mg, 0,08 mmol, quantitatif) a été obtenu à partir du composé 2.2c en suivant les protocoles 10 généraux D1 puis K. Tf = 46°C ; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,89 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,22-1,40 (m, 10H), 1,56-1,68 (m, 2H), 1,90-2,02 (m, 1H), 2,15-2,32 (m, 3H), 2,40 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 3,73-3,83 (m, 2H), 4,43-4,50 (m, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, Me0D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 30,2- 15 31,1 (4xCH2), 33.0 (CH2), 36,9 (CH2), 53,3 (CH), 56,7 (CH), 63,0 (CH2), 172,6 (C), 175,1 (C), 176,5 (C), 176,6 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 373 (100) [M-H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C17H29N207 373,1975, trouvée 373,1992. Exemple 2.3d 20 COOH HO COOH Oy NH H (CH2)8CH3 Le composé 2.3d (solide blanc, 182 mg, 0,47 mmol, 94 °/0) a été obtenu 25 à partir du composé 2.2d en suivant les protocoles généraux D1 puis K. Tf = 53-57°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,89 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,22-1,38 (m, 12H), 1,56-1,69 (m, 2H), 1,90-2,03 (m, 1H), 2,14-2,26 (m, 1H), 2,29 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,36-2,43 (m, 2H), 3,73-3,84 (m, 2H), 4,42-4,52 (m, 2H). RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 3 0 6 3 73 0 38 (CH2), 27,9 (CH2), 30,3-30,5 (4xCH2), 31,1 (CH2), 33,0 (CH2), 36,9 (CH2), 53,3 (CH), 56,6 (CH), 63,1 (CH2), 172,5 (C), 174,9 (C), 176,5 (C), 176,5 (C) ; Masse (ESI-) m/z (%) 387 (100) [M-H], 404 (20) ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C18H31N207 387,2131, trouvée 387,2140. Exemple 2.3e COOH HO N' C001-1 0 NH H (C1-12)10C1-13 Le composé 2.3e (solide blanc, 1,683 g, 4,04 mmol, 70 °/0) a été obtenu à partir du composé 2.2e en suivant les protocoles généraux D1 puis K. Tf = 100-102°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,22-1,38 (m, 16H), 1,57-1,67 (m, 2H), 1,91-2,01 (m, 1H), 2,15-2,26 (m, 15 1H), 2,29 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,37-2,44 (m, 2H), 3,72-3,81 (m, 2H), 4,43-4,51 (m, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 30,4-30,7 (6xCH2), 31,0 (CH2), 33,1 (CH2), 36,9 (CH2), 53,1 (CH), 56,6 (CH), 63,1 (CH2), 172,6 (C), 174,6 (C), 176,4 (C), 176,5 (C) ; Masse (ESI-) m/z (%)157 (40), 199 (30), 387 (80), 415 (100) [M-H] ; SMHR 20 (ESI-) m/z calculée pour C20H35N207 415,2444, trouvée 415,2447. Exemple 2.3f COOH HO C001-1 O. NH 25 (cH2)11cH3 Le composé 2.3f (solide blanc, 115 mg, 0,27 mmol, 89 °/0) a été obtenu à partir du composé 2.2f en suivant les protocoles généraux D1 puis K. Tf = 58-63°C ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 30 3H), 1,21-1,41 (m, 16H), 1,54-1,68 (m, 2H), 1,90-2,04 (m, 1H), 2,14-2,27 (m, 5 10 3 0 6 3 73 0 39 1H), 2,29 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,36-2,48 (m, 2H), 3,71-3,83 (m, 2H), 4,43-4,53 (m, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,8 (CH2), 30,3-30,9 (7xCH2), 31,0 (CH2), 33,0 (CH2), 36,9 (CH2), 53,1 (CH), 56,6 (CH), 63,1 (CH2), 172,6 (C), 174,6 (C), 176,4 (C), 176,5 (C) ; 5 Masse (ESI-) m/z ((Vo) 429 (100) [M-H], 446; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C21H37N207 429,2601, trouvée 429,2599. Exemple 2.3g COOH HO C001-1 10 OyNH H (CI-12)12C1-13 Le composé 2.3g (solide blanc, 57 mg, 0,13 mmol, quantitatif) a été obtenu à partir du composé 2.2g en suivant les protocoles généraux D1 puis K. 15 Tf = 109-112°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J= 6,8 Hz, 3H), 1,19-1,39 (m, 20H), 1,57-1,67 (m, 2H), 1,90-2,02 (m, 1H), 2,16-2,26 (m, 3H), 2,29 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,36-2,45 (m, 2H), 3,71-3,84 (m, 2H), 4,43-4,52 (m, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 30,4-30,9 (8xCH2), 31,1 (CH2), 33,0 (CH2), 36,9 (CH2), 20 53,3 (CH), 56,6 (CH), 63,1 (CH2), 172,6 (C), 174,9 (C), 176,5 (C), 176,5 (C). Masse (ESI-) m/z ((Vo) 443 (100) [M-H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C22H39N207 443,2757, trouvée 443,2754. Exemple 2.3h COOH 25 HO N' COOH O. NH H (0H2)140H3 3 0 6 3 73 0 Le composé 2.3h (solide blanc, 36 mg, 0,08 mmol, 65 °/0) a été obtenu à partir du composé 2.2h en suivant les protocoles généraux D1 puis K. Tf = 111-113°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J= 6,8 Hz, 3H), 1,19-1,37 (m, 24H), 1,55-1,68 (m, 2H), 1,90-2,03 (m, 1H), 2,15-2,26 (m, 5 1H), 2,29 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,36-2,44 (m, 2H), 3,72-3,82 (m, 2H), 4,43-4,52 (m, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 30,4-30,8 (10xCH2), 31,1 (CH2), 33,1 (CH2), 36,9 (CH2), 53,2 (CH), 56,6 (CH), 63,1 (CH2), 172,6 (C), 174,7 (C), 176,5 (C), 176,5 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 471 (100) [M-H]; SMHR (ESI-) m/z calculée pour 10 C24H43N207 471,3070, trouvée 471,3057. Exemple 2.3i COOH HO C001-1 Oy NH H 15 (CD2)1 oCD3 Le composé 2.3i (solide blanc, 33 mg, 0,08 mmol, 75 °/0) a été obtenu à partir du composé 2.2i en suivant les protocoles généraux D1 puis K. Tf > 80 °C (décomposé) ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 1,90-2,03 (m, 1H), 2,14-2,27 (m, 1H), 2,33-2,48 (m, 2H), 3,72-3,84 (m, 2H), 4,41-4,54 20 (m, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 13,3 (st, Jc,D = 19,8 Hz, CD3), 22,4 (qt, Jc,D = 19,6, Hz, CD2), 25,7 (qt, Jc,D = 20,2 Hz, CD2), 27,9 (CH2), 28,6-29,9 (6xCD2), 31,1 (CH2), 31,7 (qt, Jc,D = 16,9 Hz, CD2), 36,1 (qt, JC,D = 21,1 Hz, CD2), 53,2 (CH), 56,6 (CH), 63,1 (CH2), 172,6 (C), 174,8 (C), 176,5 (C), 176,6 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 438 (100) [M-H] ; SMHR (ESI-) m/z 25 calculée pour C20H12D23N207 438,3888, trouvée 438,3889. Exemple 4: Composés 3.1 à 3.9 30 3063730 41 II HO BocHN CO2Bn Ne COR2 H 3.2 IV CO2Bn Ac-saccharide - COR2 H 0 NH 3.4 CO2Bn - COR2 H 3.5 VII, viii 0 Ac-saccharide VII, viii ou ix /*CO2H /*CO2H saccharide O N\'''COR2a H O NH 3.6 N\\''COR2a H 3.7 0 saccharide 3063 730 42 CO2Bn vi N\''' COR2 H 3.3 2 i. Bromure d'allyle ou de propargyle, NaH, DMF; ii. H-D-Glu(OBn)-0Bn.ptosylate, TBTU, DIEA, DMF; iii. TFA, CH2Cl2 ; iv. R3COCI, DMAP, pyridine, 5 CH2C12; y. tétraacétate de 1-thio-13-D-glucose, DMPA, THF, UV; vi. Azido- saccharide (acétate) ou PEG-N3, CuSO4.5H20, ascorbate de sodium, DMF, H20; vii. Me0Na, Me0H puis Dowex ; viii. Li0H, THF/H20 ; ix. H2,Pd/C, Me0H. Avec R1 = propargyle ou allyle ; R2 = -0Bn ou -NHCH2C00Bn ; R2a = -OH ou -NHCH2COOH ; R3 = -(CH2)nCH3, -CH[(CH2)nCH3]2 ou - 10 (CH2)ncyclohexyle. Composé 3.1a o t-BuO 15 A une solution de L-Boc-Serine (1,00 g, 4,87 mmol, 1 équiv.) dans le DMF anhydre est ajouté, à 0°C, le NaH (60%, 487 mg, 12,2 mmol, 2,2 équiv.). Après 30 min. d'agitation à 0 °C, le bromure d'allyle (6,09 mmol, 1,1 équiv.) est ajouté goutte à goutte. Le milieu réactionnel est agité 30 min. à 20 0°C puis une nuit à TA. La reaction est stoppée par ajout de H20 (5 mL) puis 3063 730 43 le milieu réactionnel est acidifié par ajout d'une solution aqueuse de HCI 10 % (pH = 1) avant d'être extrait par AcOEt (3x50 mL). Les phases organiques sont rassemblées, lavées à l'eau puis par une solution aqueuse saturée de NaCI, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide. Le produit brut 5 obtenu (huile incolore) est directement utilisé pour l'étape suivante. Composé 3.1b 0 OH HN t-BuO 10 Le produit 3.1b (huile jaunâtre, 915 mg, 3,76 mmol, 77%) a été obtenu en suivant le protocole ci-dessus (exemple 3.1a) en utilisant le bromure de propargyle. Le produit brut obtenu (huile incolore) est directement utilisé pour l'étape suivante. 15 Composé 3.2a COOBn 0 ss. COOBri O. NH t-Bu 0 20 Le composé 3.2a (huile incolore, 569 mg, 1,03 mmol, 50 % sur 2 étapes) a été obtenu à partir du composé 3.1a en suivant le protocole général A (purification : colonne chromatographique sur gel de silice, éluant : cyclohexane/AcOEt 8:2 à 7:3). Rf = 0,40 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 25 1,44 (s, 9H), 1,95-2,07 (m, 1H), 2,21-2,32 (m, 1H), 2,30-2,48 (m, 2H), 3,51 (dd, J = 9,3, 6,4 Hz, 1H), 3,80 (dd, J = 9,3, 3,5 Hz, 1H), 3,92-4,03 (m, 2H), 4,27 (s, 1H), 4,66-4,73 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,15 (ddd, J = 10,4, 3,0, 1,6 Hz, 1H), 5,16 (s, 2H), 5,23 (ddd, J = 17,2, 3,0, 1,6 Hz, 1H), 5,37 (s, 1H, NH), 5,83 (ddt, J = 17,2, 10,4, 5,9 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH), 7,27-7,40 (m, 3063730 44 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 27,5 (CH2), 28,4 (3xCH3), 30,0 (CH2), 51,8 (CH), 54,2 (CH), 66,6 (CH2), 67,5 (CH2), 69,5 (CH2), 72,3 (CH2), 80,4 (C), 117,8 (CH2), 128,4-128,8 (10xCH), 134,0 (CH), 135,3 (C), 135,9 (C), 155,6 (C), 170,3 (C), 171,4 (C), 172,5 (C) ; 5 Masse (ESI+) m/z ((Vo) 455 (30), 499 (40), 555 (100) [M+H], 577 (15) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C301-139N208 555,2706, trouvée 555,2711. Composé 3.2b COOBn 10 0 ' COOBn OINH t-BuO Le composé 3.2b (huile jaunâtre, 1,91 g, 3,45 mmol, 77 'Vo) a été obtenu à partir du composés 3.1a en suivant le protocole général A (purification : 15 colonne chromatographique sur gel de silice, éluant : cyclohexane/AcOEt 9:1 à 7:3) Rf = 0,33 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 1,44 (s, 9H), 1,95-2,08 (m, 1H), 2,22-2,32 (m, 1H), 2,32-2,53 (m, 3H), 3,66 (dd, J = 9,3, 6,1 Hz, 1H), 3,87 (dd, J = 9,3, 4,0 Hz, 1H), 4,08 (dd, J = 15,9, 20 2,4 Hz, 1H), 4,15 (dd, J = 15,9, 2,4 Hz, 1H), 4,25-4,38 (m, 1H), 4,66-4,74 (m, 1H), 5,08 (s, 2H), 5,15 (s, 2H), 5,38 (s, 1H, NH), 6,98 (d, J = 7,9 Hz, 1H, NH), 7,26-7,39 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 27,4 (CH2), 28,3 (3xCH3), 30,0 (CH2), 51,7 (CH), 54,0 (CH), 58,6 (CH2), 66,5 (CH2), 67,4 (CH2), 69,3 (CH2), 75,4 (CH), 79,0 (C), 80,4 (C), 128,3-128,7 (10xCH), 135,2 25 (C), 135,8 (C), 155,6 (C), 170,0 (C), 171,4 (C), 172,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 453 (40), 497 (35), 553 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C30H37N208 553,2550, trouvée 553,2528. Composé 3.2c ON t-BuO COOBn H 0 HN COOBn 3063 730 Le composé 3.2c (huile jaunâtre, 886 mg, 1,45 mmol, 65 %) a été 5 obtenu à partir du composés 3.1b et le H-L-Glu(OBn)-Gly-OBn (non décrit) en suivant le protocole général A (purification : colonne chromatographique sur gel de silice, éluant : cyclohexane/AcOEt 9:1 à 7:3). Rf = 0,28 (cyclohexane/AcOEt 5:5) ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 1,43 (s, 9H), 1,99-2,13 (m, 1H), 2,15-2,27 (m, 1H), 2,39 (t, J = 2,4 Hz, 1H), 10 2,42-2,54 (m, 1H), 2,54-2,66 (m, 1H), 3,69 (dd, J = 9,2, 5,6 Hz, 1H), 3,86 (dd, J = 9,3, 4,4 Hz, 1H), 3,95 (dd, J = 17,9, 5,1 Hz, 1H), 4,12 (dd, J = 17,9, 6,0 Hz, 1H), 4,09 (dd, J = 15,8, 2,4 Hz, 1H), 4,14 (dd, J = 15,8, 2,4 Hz, 1H), 4,22-4,32 (m, 1H), 4,52-4,61 (m, 1H), 5,11 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,12 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 5,41 (d, J = 15 5,3 Hz, 1H, NH), 7,15 (bs, 1H, NH), 7,28-7,43 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 26,9 (CH2), 28,4 (3xCH3), 30,5 (CH2), 52,9 (CH), 54,7 (CH), 58,8 (CH2), 66,8 (CH2), 67,2 (CH2), 69,5 (CH2), 75,6 (CH), 78,9 (C), 80,8 (C), 128,4-128,7 (10xCH), 135,4 (C), 135,8 (C), 155,9 (C), 169,5 (C), 170,3 (C), 171,2 (C), 174,0 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 610 (15) [M+H], 632 (100) 20 [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C32H40N309 610,2765, trouvée 610,2764. Composé 3.3a COOBn 0 N COOBn 25 O. NH H (CH2)8CH3 Le composé 3.3a (solide blanc, 562 mg, 0,92 mmol, 54 `)/0) a été obtenu à partir du composé 3.2a en suivant les protocoles généraux G puis C. 3063730 46 Rf = 0,21 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 96-97°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,87 (t, J= 6,9 Hz, 3H), 1,17-1,36 (m, 12H), 1,56-1,67 (m, 2H), 1,95-2,08 (m, 1H), 2,15-2,30 (m, 3H), 2,30-2,48 (m, 2H), 3,46 (dd, J = 9,3, 7,1 Hz, 1H), 3,82 (dd, J = 9,4, 4,1 Hz, 1H), 3,92-4,05 (m, 2H), 4,54-4,62 (m, 5 2H), 4,63-4,71 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,11-5,18 (m, 3H), 5,23 (ddd, J = 17,3, 3,1, 1,6 Hz, 1H), 5,80 (ddt, J = 17,3, 10,4, 5,7 Hz, 1H), 6,34 (d, J = 6,8 Hz, 1H, NH), 7,10 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH), 7,29-7,39 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 25,6 (CH2), 27,3 (CH2), 29,4-29,5 (4xCH2), 30,0 (CH2), 32,0 (CH2), 36,7 (CH2), 51,9 (CH), 52,5 (CH), 66,6 10 (CH2), 67,5 (CH2), 69,2 (CH2), 72,4 (CH2), 117,9 (CH2), 128,4-128,8 (10xCH), 134,0 (CH), 135,2 (C), 135,8 (C), 170,1 (C), 171,3 (C), 172,5 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 495 (30), 610 (10) [M+H], 632 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C35H49N207 609,3540, trouvée 609,3536. Composé 3.3b 15 COOBn COOBn O. NH (C1-12)10C1-13 Le composé 3.3b (solide blanc, 801 mg, 1,26 mmol, 87 °/0) a été obtenu 20 à partir du composé 3.2a en suivant les protocoles généraux G puis C. Rf = 0,28 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 101-102°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,15-1,35 (m, 16H), 1,55-1,68 (m, 2H), 1,95-2,08 (m, 1H), 2,15-2,30 (m, 3H), 2,30-2,48 (m, 2H), 3,46 (dd, J = 9,3, 7,1 Hz, 1H), 3,82 (dd, J = 9,4, 4,1 Hz, 1H), 3,92-4,05 (m, 2H), 4,55- 25 4,62 (m, 1H), 4,64-4,71 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,12-5,18 (m, 3H), 5,23 (ddd, J = 17,3, 3,1, 1,5 Hz, 1H), 5,83 (ddt, J = 17,3, 10,4, 5,7 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 6,8 Hz, 1H, NH), 7,10 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH), 7,28-7,39 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 25,7 (CH2), 27,3 (CH2), 29,4-29,7 (6xCH2), 30,0 (CH2), 32,0 (CH2), 36,7 (CH2), 51,9 (CH), 52,5 (CH), 30 66,6 (CH2), 67,5 (CH2), 69,2 (CH2), 72,4 (CH2), 117,9 (CH2), 128,4-128,8 3063730 47 (10xCH), 134,0 (CH), 135,2 (C), 135,8 (C), 170,1 (C), 171,3 (C), 172,5 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 307 (15), 638 (10) [M+H], 660 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C37H53N207 637,3853, trouvée 637,3837. 5 Composé 3.3c COOBn 0 N COOBn O. NH H (CE-12)12C113 10 Le composé 3.3c (solide blanc, 208 mg, 0,31 mmol, 75 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.2a en suivant les protocoles généraux G puis C. Rf = 0,22 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 90-92°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J= 6,9 Hz, 3H), 1,16-1,37 (m, 20H), 1,54-1,68 (m, 2H), 1,95-2,08 (m, 1H), 2,19-2,31 (m, 3H), 2,31-2,49 (m, 2H), 3,48 (dd, J = 9,3, 15 7,0 Hz, 1H), 3,80 (dd, J = 9,3, 4,1 Hz, 1H), 3,91-4,04 (m, 2H), 4,58-4,72 (m, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,10-5,18 (m, 3H), 5,22 (ddd, J = 17,2, 3,1, 1,5 Hz, 1H), 5,82 (ddt, J = 17,2, 10,5, 5,7 Hz, 1H), 6,47 (d, J = 6,9 Hz, 1H, NH), 7,21 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH), 7,27-7,39 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,7 (CH2), 25,6 (CH2), 27,2 (CH2), 29,3-29,7 (8xCH2), 30,0 20 (CH2), 32,0 (CH2), 36,5 (CH2), 51,9 (CH), 52,4 (CH), 66,6 (CH2), 67,4 (CH2), 69,2 (CH2), 72,3 (CH2), 117,8 (CH2), 128,3-128,7 (10xCH), 133,9 (CH), 135,2 (C), 135,8 (C), 170,2 (C), 171,2 (C), 172,5 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%)131 (70), 199 (100), 666 (95) [M+H], 688 (30) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C39H57N207 665,4166, trouvée 665,4174. 25 Composé 3.3d 3063 730 48 COOBn C001311 O. NH (CH2)8CH3 Le composé 3.3d (solide blanc, 813 mg, 1,34 mmol, 67 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.2b en suivant les protocoles généraux G puis C. 5 Rf = 0,13 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 93-94°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,87 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,19-1,35 (m, 12H), 1,56-1,67 (m, 2H), 1,97-2,10 (m, 1H), 2,16-2,32 (m, 3H), 2,32-2,51 (m, 3H), 3,62 (dd, J = 9,2, 6,6 Hz, 1H), 3,88 (dd, J = 9,2, 4,0 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,18 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,58-4,72 (m, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,15 (s, 2H), 10 6,32 (d, J = 7,0 Hz, 1H, NH), 7,02 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH), 7,28-7,40 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 25,6 (CH2), 27,3 (CH2), 29,4-29,5 (4xCH2), 30,1 (CH2), 32,0 (CH2), 36,7 (CH2), 52,0 (CH), 52,4 (CH), 58,7 (CH2), 66,7 (CH2), 67,5 (CH2), 69,0 (CH2), 75,5 (CH), 79,0 (C), 128,4-128,8 (10xCH), 135,2 (C), 135,9 (C), 169,8 (C), 171,3 (C), 172,6 (C), 15 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 491 (100), 608 (20) [M+H], 630 (95) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C35H47N207 607,3383, trouvée 607,3373. Composé 3.3e COOBn 20 C001311 H Oy NH (CH2)1 0CH3 Le composé 3.3e (solide blanc, 651 mg, 1,03 mmol, 77 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.2b en suivant les protocoles généraux G puis C. 25 Rf = 0,16 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 99-100°C; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,19-1,35 (m, 16H), 1,56-1,67 (m, 2H), 1,96-2,09 (m, 1H), 2,16-2,31 (m, 3H), 2,32-2,50 (m, 3H), 3,62 (dd, J = 9,2, 6,6 Hz, 1H), 3,89 (dd, J = 9,2, 4,0 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,18 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,59-4,72 (m, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,15 (s, 2H), 30 6,32 (d, J = 7,0 Hz, 1H, NH), 7,02 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH), 7,27-7,39 (m, 10H) 3063730 49 ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 25,6 (CH2), 27,3 (CH2), 29,4-29,7 (6xCH2), 30,1 (CH2), 32,0 (CH2), 36,7 (CH2), 52,0 (CH), 52,4 (CH), 58,7 (CH2), 66,7 (CH2), 67,5 (CH2), 69,0 (CH2), 75,5 (CH), 79,0 (C), 128,4-128,8 (10xCH), 135,2 (C), 135,9 (C), 169,8 (C), 171,3 (C), 172,6 (C), 5 173,5 (C1') ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 636 (25) [M+H], 658 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C37H51 N207 635,3696, trouvée 635,3697. Composé 3.3f COOBn COOBn NH H (CH2)12CH3 Le composé 3.3f (solide blanc, 1,085 g, 1,64 mmol, 84 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.2b en suivant les protocoles généraux G puis C. Rf = 0,21 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 101-103°C ; RMN 1H (400 15 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,17-1,37 (m, 20H), 1,56-1,66 (m, 2H), 1,97-2,08 (m, 1H), 2,14-2,32 (m, 3H), 2,32-2,50 (m, 3H), 3,62 (dd, J = 9,2, 6,6 Hz, 1H), 3,89 (dd, J = 9,2, 4,1 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,62-4,72 (m, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,15 (s, 2H), 6,39 (d, J = 7,1 Hz, 1H, NH), 7,10 (d, J = 7,9 Hz, 1H, NH), 7,28-7,39 (m, 20 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 25,6 (CH2), 27,2 (CH2), 29,4-29,8 (8xCH2), 30,1 (CH2), 32,0 (CH2), 36,6 (CH2), 51,9 (CH), 52,4 (CH), 58,7 (CH2), 66,6 (CH2), 67,5 (CH2), 69,0 (CH2), 75,5 (CH), 79,0 (C), 128,4-128,8 (10xCH), 135,2 (C), 135,8 (C), 169,8 (C), 171,3 (C), 172,6 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 199 (15), 664 (100) [M+H], 686 (20) 25 [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C39H55N207 663,4009, trouvée 663,4006. Composé 3.3g 10 3063 730 COOBn N" COOBn H OINH (C1-12)17C1-13 Le composé 3.3g (solide blanc, 467 mg, 0,64 mmol, 47 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.2b en suivant les protocoles généraux G puis C. 5 Rf = 0,18 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 105-108°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,18-1,36 (m, 30H), 1,56-1,68 (m, 2H), 1,96-2,09 (m, 1H), 2,15-2,32 (m, 3H), 2,33-2,50 (m, 3H), 3,62 (dd, J = 9,2, 6,6 Hz, 1H), 3,89 (dd, J = 9,2, 4,0 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,60-4,72 (m, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,15 (s, 10 2H), 6,35 (d, J = 7,0 Hz, 1H, NH), 7,05 (d, J = 7,9 Hz, 1H, NH), 7,29-7,39 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 25,6 (CH2), 27,2 (CH2), 29,4-29,8 (13xCH2), 30,1 (CH2), 32,0 (CH2), 36,6 (CH2), 52,0 (CH), 52,4 (CH), 58,7 (CH2), 66,6 (CH2), 67,5 (CH2), 69,0 (CH2), 75,5 (CH), 79,0 (C) ; 128,4-128,8 (10xCH), 135,2 (C), 135,8 (C), 169,8 (C), 171,3 (C), 15 172,6 (C), 173,6 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 734 (55) [M+H], 756 (100) [M+Na]; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C44H64N207Na 755,4611, trouvée 755,4612. Composé 3.3h 20 COOBn N" COOBn H Le composé 3.3h (solide blanc, 206 mg, 0,32 mmol, 65 °/0) a été obtenu 25 à partir du composé 3.2b en suivant les protocoles généraux G puis C. Rf = 0,38 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 87-90°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,84 (t, J = 6,7 Hz, 3H), 0,86 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,15-1,32 (m, 12H), 1,32-1,46 (m, 2H), 1,51-1,67 (m, 2H), 1,94-2,14 (m, 2H), 2,37 (dd, J = 2,4, 2,4 Hz, 1H), 2,21-2,50 (m, 3H), 3,63 (dd, J = 9,2, 6,3 Hz, 1H), 3,89 (dd, J 30 = 9,2, 4,7 Hz, 1H), 4,09 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,14 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 3063730 51 1H), 4,65-4,77 (m, 2H), 5,08 (s, 2H), 5,11 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 5,15 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 6,44 (d, J = 7,1 Hz, 1H, NH), 7,16 (d, J = 8,0 Hz, 1H, NH), 7,247,37 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,0 (2xCH3), 22,4 (CH2), 22,5 (CH2), 27,2, 27,2 (2xCH2), 27,4 (CH2), 29,9 (CH2), 31,8 (CH2), 31,9 5 (CH2), 32,8 (CH2), 32,9 (CH2), 47,7 (CH), 51,6 (CH), 52,2 (CH), 58,5 (CH2), 66,4 (CH2), 67,3 (CH2), 69,1 (CH2), 75,4 (CH), 78,9 (C), 128,2-128,6 (10xCH), 135,1 (C), 135,8 (C), 169,6 (C), 171,1 (C), 172,3 (C), 176,3 (C). Masse (ESI+) m/z ((Vo) 413 (30), 635 (40) [M+H], 657 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C37H50N207Na 657,3516, trouvée 657,3532. 10 Composé 3.3i COOBn NP' COOBrI H 15 Le composé 3.3i (solide blanc, 361 mg, 0,43 mmol, 40 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.2b en suivant les protocoles généraux G puis C. Rf = 0,52 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 91-93°C ; RMN 1H (400 MHz, 20 CDCI3) 5 ppm 0,87 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 0,88 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,11-1,33 (m, 40H), 1,35-1,47 (m, 2H), 1,50-1,65 (m, 2H), 1,94-2,14 (m, 2H), 2,37 (dd, J = 2,4, 2,4 Hz, 1H), 2,21-2,50 (m, 3H), 3,62 (dd, J = 9,2, 6,6 Hz, 1H), 3,90 (dd, J = 9,2, 4,0 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,18 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,62-4,75 (m, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,15 (s, 2H), 6,34 (d, J = 7,0 Hz, 1H, 25 NH), 7,01 (d, J = 7,9 Hz, 1H, NH), 7,26-7,38 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (2xCH3), 22,8 (2xCH2), 27,5 (CH2), 27,7 (2xCH2), 29,530,0 (16xCH2), 32,0 (CH2), 32,9 (CH2), 33,1 (CH2), 47,9 (CH), 51,8 (CH), 52,2 (CH), 58,6 (CH2), 66,6 (CH2), 67,5 (CH2), 69,0 (CH2), 75,5 (CH), 79,0 (C), 128,4-128,7 (10xCH), 135,2 (C), 135,8 (C), 169,6 (C), 171,2 (C), 172,4 30 (C), 176,5 (C). Masse (ESI+) m/z ((Vo) 853 (100) [M+Na]; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C51H78N207Na 853,5707, trouvée 853,5693. 3063 730 52 Composé 3.3i 5 COOBn N". COOBn 0 N H H Le composé 3.3j (solide blanc, 337 mg, 0,54 mmol, 66 °/0) a été obtenu 10 à partir du composé 3.2b en suivant les protocoles généraux G puis C. Rf = 0,13 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 100-102°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,76-0,91 (m, 2H), 1,05-1,24 (m, 6H), 1,23-1,35 (m, 2H), 1,53-1,73 (m, 7H), 1,94-2,08 (m, 1H), 2,13-2,31 (m, 3H), 2,31-2,52 (m, 3H), 3,62 (dd, J = 9,2, 6,5 Hz, 1H), 3,89 (dd, J = 9,2, 4,1 Hz, 1H), 4,09 (dd, J = 15 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,16 (dd, J = 16,0, 2,4 Hz, 1H), 4,61-4,72 (m, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,13 (s, 2H), 6,38 (d, J = 7,1 Hz, 1H, NH), 7,11 (d, J = 7,9 Hz, 1H, NH), 7,28-7,39 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 25,9 (CH2), 26,5 (2xCH2), 26,6 (CH2), 26,8 (CH2), 27,2 (CH2), 30,1 (CH2), 33,4 (2xCH2), 36,6 (CH2), 37,2 (CH2), 37,5 (CH), 51,9 (CH), 52,3 (CH), 58,6 (CH2), 66,6 (CH2), 20 67,4 (CH2), 69,0 (CH2), 75,4 (CH), 79,0 (C), 128,3-128,7 (10xCH), 135,2 (C), 135,8 (C), 169,8 (C), 171,2 (C), 172,6 (C), 173,5 (C). Masse (ESI+) m/z ((Vo) 619 (60) [M+H], 641 (100) [M+Na]; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C36H46N207Na 641,3203, trouvée 641,3199. 25 Composé 3.3k COOBn 0 OyNH 1-1 HN COOBn (CH2)12CH3 Le composé 3.3k (solide blanc, 506 mg, 0,70 mmol, 72 °A) a été obtenu 30 à partir du composé 3.2c en suivant les protocoles généraux G puis C. 3063730 53 Rf = 0,19 (cyclohexane/AcOEt 5:5) ; Tf = 122-123°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,87 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,15-1,35 (m, 20H), 1,54-1,69 (m, 2H), 2,01-2,29 (m, 4H), 2,39 (dd, J = 2,4, 2,4 Hz, 1H), 2,43-2,66 (m, 2H), 3,67 (dd, J = 9,3, 6,0 Hz, 1H), 3,89 (dd, J = 9,3, 4,3 Hz, 1H), 3,96 (dd, J = 5 17,9, 5,4 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 15,8, 2,4 Hz, 1H), 4,14 (dd, J = 17,9, 6,2 Hz, 1H), 4,15 (dd, J = 15,8, 2,4 Hz, 1H), 4,54-4,63 (m, 2H), 5,11 (s, 2H), 5,12 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 6,45 (d, J = 6,8 Hz, 1H, NH), 7,21 (dd, J = 6,2, 5,4 Hz, 1H, NH), 7,28-7,38 (m, 10H), 7,57 (d, J = 7,7 Hz, 1H, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 25,6 (CH2), 10 26,7 (CH2), 29,4-29,8 (8xCH2), 30,5 (CH2), 32,0 (CH2), 36,5 (CH2), 41,4 (CH2), 53,0 (CH), 53,1 (CH), 58,8 (CH2), 66,8 (CH2), 67,2 (CH2), 69,4 (CH2), 75,6 (CH), 78,9 (C), 128,3-128,7 (10xCH), 135,4 (C), 135,7 (C), 169,6 (C), 170,0 (C), 171,1 (C), 173,9 (C), 174,2 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 720 (20) [M+H], 742 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C41H57N308Na 15 742,4043, trouvée 742,4042. Composé 3.4a Ac0 Ac0 OAc 0 OAc COOBn N COOBn 0 NH H (CH2)8CH3 Le composé 3.4a (huile incolore, 468 mg, 0,48 mmol, 73 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.3a en suivant le protocole général H. Rf = 0,21 (cyclohexane/AcOEt 1:1) ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 25 0,83 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,14-1,32 (m, 12H), 1,51-1,64 (m, 2H), 1,70-1,86 (m, 2H), 1,95 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,95-2,05 (m, 1H), 2,14-2,27 (m, 3H), 2,28-2,45 (m, 2H), 2,61-2,75 (m, 2H), 3,43 (dd, J = 9,4, 6,6 Hz, 1H), 3,48 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,70 (ddd, J = 9,3, 4,9, 2,4 Hz, 1H), 3,76 (dd, J = 9,4, 4,0 Hz, 1H), 4,09 (dd, J = 12,3, 2,4 Hz, 1H), 4,21 (dd, J = 12,3, 30 4,9 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,51-4,58 (m, 1H), 4,59-4,67 (m, 1H), 20 3063730 54 5,00 (dd, J = 10,0, 10,0 Hz, 1H), 5,00 (dd, J = 10,0, 10,0 Hz, 1H), 5,05 (s, 2H), 5,11 (s, 2H), 5,21 (dd, J =9,3, 9,3 Hz, 1H), 6,46 (d, J= 7,0 Hz, 1H, NH), 7,17 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH), 7,23-7,35 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,0 (CH3), 20,5 (2xCH3), 20,6 (CH3), 20,7 (CH3), 22,6 (CH2), 5 25,5 (CH2), 26,7 (CH2), 27,1 (CH2), 29,2-29,5 (4xCH2), 29,5 (CH2), 29,9 (CH2), 31,8 (CH2), 36,4 (CH2), 51,7 (CH), 52,4 (CH), 62,1 (CH2), 66,4 (CH2), 67,3 (CH2), 68,4 (CH), 69,5 (CH2), 69,8 (CH2), 69,8 (CH), 73,8 (CH), 75,7 (CH), 83,6 (CH), 128,2-128,6 (10xCH), 135,1 (C), 135,7 (C), 169,3 (2xC), 170,0 (2xC), 170,6 (C), 171,2 (C), 172,4 (C), 173,4 (C) ; Masse (ESI+) m/z 10 (%) 996 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C49H69N2016S 973,4368, trouvée 973,4379. Composé 3.4b OAc COOBn N COOBn NH H (C1-12)10C1-13 15 OAc Le composé 3.4b (huile incolore, 791 mg, 0,79 mmol, 71 'Vo) a été obtenu à partir du composé 3.3b en suivant le protocole général H. 20 Rf = 0,18 (cyclohexane/AcOEt 1:1) ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,85 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,14-1,34 (m, 16H), 1,52-1,65 (m, 2H), 1,71-1,90 (m, 2H), 1,97 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,95-2,05 (m, 1H), 2,14-2,29 (m, 3H), 2,29-2,47 (m, 2H), 2,62-2,77 (m, 2H), 3,44 (dd, J = 9,4, 7,2 Hz, 1H), 3,50 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,72 (ddd, J = 10,1,4,9, 2,4 Hz, 1H), 25 3,79 (dd, J = 9,4, 4,0 Hz, 1H), 4,11 (dd, J = 12,3, 2,4 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 12,3,4,9 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,51-4,58 (m, 1H), 4,59-4,68 (m, 1H), 5,02 (dd, J = 10,0, 9,4 Hz, 1H), 5,07 (dd, J = 10,1, 9,4 Hz, 1H), 5,07 (s, 2H), 5,14 (s, 2H), 5,22 (dd, J = 9,4, 9,4 Hz, 1H), 6,41 (d, J = 6,9 Hz, 1H, NH), 7,15 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH), 7,25-7,38 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, 30 CDCI3) 5 ppm 14,1 (CH3), 20,6 (2xCH3), 20,7 (CH3), 20,8 (CH3), 22,7 (CH2), 25,6 (CH2), 26,8 (CH2), 27,2 (CH2), 29,3-29,6 (7xCH2), 30,0 (CH2), 31,9 3063730 (CH2), 36,5 (CH2), 51,8 (CH), 52,5 (CH), 62,2 (CH2), 66,5 (CH2), 67,4 (CH2), 68,4 (CH), 69,6 (CH2), 69,8 (CH2), 69,8 (CH), 73,9 (CH), 75,8 (CH), 83,7 (CH), 128,3-128,7 (10xCH), 135,2 (C), 135,8 (C), 169,4 (2xC), 170,1 (2xC), 170,7 (C), 171,3 (C), 172,5 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1002 (20) 5 [M+H], 1024 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C511-173N2016S 1001,4681, trouvée 1001,4655. Composé 3.4c /COOBn N COOBn H OAc 10 (CH2)12CH3 Le composé 3.4c (solide blanc, 192 mg, 0,19 mmol, 70 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.3c en suivant le protocole général H 15 Le composé 3.4c (solide blanc, 192 mg, 0,19 mmol, 70 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.3c en suivant le protocole général H. Rf = 0,13 (cyclohexane/AcOEt 1:1) ; Tf = 48-50°C; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,86 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,15-1,34 (m, 20H), 1,54-1,67 (m, 2H), 1,74-1,89 (m, 2H), 1,97, 1,99, 2,02, 2,04 (s, 12H), 1,95-2,09 (m, 1H), 2,14- 20 2,29 (m, 3H), 2,30-2,47 (m, 2H), 2,63-2,77 (m, 2H), 3,44 (dd, J = 9,2, 6,8 Hz, 1H), 3,51 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,72 (ddd, J = 10,0, 4,8, 2,3 Hz, 1H), 3,80 (dd, J = 9,2, 3,9 Hz, 1H), 4,12 (dd, J = 12,3, 2,3 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 12,3, 4,8 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 10,0 Hz, 1H) ; 4,52-4,58 (m, 1H), 4,61-4,68 (m, 1H), 5,02 (dd, J = 10,0, 9,3 Hz, 1H), 5,07 (dd, J = 10,0, 9,3 Hz, 1H), 5,08 (s, 2H), 5,15 25 (s, 2H), 5,23 (dd, J = 9,3, 9,3 Hz, 1H), 6,42 (d, J = 6,8 Hz, 1H, NH), 7,14 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH), 7,27-7,38 (m, 10H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 20,6-20,8 (4xCH3), 22,7 (CH2), 25,6 (CH2), 26,8 (CH2), 27,2 (CH2), 29,4-29,7 (9xCH2), 30,0 (CH2), 32,0 (CH2), 36,5 (CH2), 51,9 (CH), 52,5 (CH), 62,2 (CH2), 66,6 (CH2), 67,4 (CH2), 68,5 (CH), 69,6 (CH2), 69,8 (CH2), 30 69,9 (CH), 73,9 (CH), 75,9 (CH), 83,7 (CH), 128,3-128,7 (10xCH), 135,2 (C), 135,8 (C), 169,5 (C), 169,5 (C), 170,1 (C), 170,2 (C), 170,7 (C), 171,3 (C), 3063730 56 172,5 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 131, 199, 1030 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C53H77N2016S 1029,4994, trouvée 1029,5011. 5 Composé 3.5a 10 Le composé 3.5a (huile jaunâtre, 541 mg, 0,53 mmol, 71 'Vo) a été obtenu à partir du composé 3.3d en suivant le protocole général I. Rf = 0,07 (CH2C12/AcOEt 1:1) ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,7 Hz, 3H), 1,20-1,36 (m, 12H), 1,54-1,65 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,96-2,09 (m, 1H), 2,15-2,30 (m, 3H), 2,34- 15 2,48 (m, 2H), 3,68 (dd, J = 9,5, 5,4 Hz, 1H), 3,77 (dd, J = 9,5, 5,1 Hz, 1H), 3,85 (ddd, J = 9,6, 4,7, 1,8 Hz, 1H), 3,90-3,99 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 12,5, 1,8 Hz, 1H), 4,12-4,20 (m, 1H), 4,26 (dd, J = 12,5, 4,7 Hz, 1H), 4,45-4,69 (m, 6H), 4,66 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,90 (dd, J = 9,5, 8,0 Hz, 1H), 5,01 (dd, J = 9,6, 9,6 Hz, 1H), 5,09(s, 2H), 5,12 (d, J= 12.5 Hz, 1H), 5,17 (d, J= 12.5 Hz, 1H), 20 5,23 (dd, J = 9,6, 9,6 Hz, 1H), 7,24-7,40 (m, 10H), 7,83 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,5 (CH3), 20,6 (2xCH3), 20,7 (2xCH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,6 (CH2), 30,3, 30,4, 30,5, 30,6 (4xCH2), 31,0 (CH2), 33,0 (CH2), 36,8 (CH2), 51,3 (CH2), 53,1 (CH), 54,5 (CH), 63,0 (CH2), 65,2 (CH2), 67,4 (CH2), 68,0 (CH2), 69,0 (CH2), 69,7 (CH), 70,9 (CH2), 72,5 (CH), 25 72,9 (CH), 74,0 (CH), 101,6 (CH), 125,8 (CH), 129,2-129,6 (10xCH), 137,1 (C), 137,5 (C), 145,4 (C), 171,1 (2xC), 171,5 (C), 172,2 (2xC), 172,6 (C), 174,0 (C), 176,2 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1047 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C51 H70N5017 1024,4767, trouvée 1024,4784. COOBn N COOBn O. NH H (CF12)8CF13 30 Composé 3.5b 3063 730 57 OAc OAc COOBn N''COOBn O. NH H (C1-12)10C1-13 0_2F-NN,N Le composé 3.5b (huile jaunâtre, 181 mg, 0,17 mmol, 72 %) a été 5 obtenu à partir du composé 3.3e en suivant le protocole général I. Rf = 0,11 (CH2C12/AcOEt 1:1) ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,20-1,36 (m, 12H), 1,54-1,65 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,94-2,06 (m, 1H), 2,15-2,31 (m, 3H), 2,362,44 (m, 2H), 3,65-3,73 (m, 1H), 3,73-3,81 (m, 1H), 3,85 (ddd, J = 10,0, 4,7, 10 2,4 Hz, 1H), 3,91-3,99 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 12,4, 2,4 Hz, 1H), 4,14-4,20 (m, 1H), 4,26 (dd, J = 12,4, 4,7 Hz, 1H), 4,48-4,64 (m, 6H), 4,66 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,89 (dd, J = 9,7, 8,0 Hz, 1H), 5,01 (dd, J = 10,1, 9,7 Hz, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,12 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,23 (dd, J= 9,7, 9,7 Hz, 1H), 7,26-7,37 (m, 10H), 7,83 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 15 ppm 14,5 (CH3), 20,6 (2xCH3), 20,7 (2xCH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,6 (CH2), 30,3-30,7 (6xCH2), 31.0 (CH2), 33,0 (CH2), 36,8 (CH2), 51,2 (CH2), 53,2 (CH), 54,5 (CH), 63,0 (CH2), 65,2 (CH2), 67,4 (CH2), 68,0 (CH2), 69,0 (CH2), 69,7 (CH), 70,9 (CH2), 72,5 (CH), 72,9 (CH), 74,0 (CH), 101,6 (CH), 125,8 (CH), 129,2-129,6 (10xCH), 137,1 (C), 137,5 (C), 145,3 (C), 171,1 (C), 20 171,2 (C), 171,5 (C), 172,2 (C), 172,6 (C), 174,0 (C), 176,2 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1075 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C53H74N5017 1052,5080, trouvée 1052,5117. Composé 3.5c 25 N COOBn Ac0 0 -7r-NWN 0 NH 0 H Ac0 OAc (CH2)12CH3 Le composé 3.5c (huile jaunâtre, 568 mg, 0,53 mmol, 77 'Vo) a été 30 obtenu à partir du composé 3.3f en suivant le protocole général I. 3063730 58 Rf = 0,08 (CH2C12/AcOEt 1:1) ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,21-1,34 (m, 20H), 1,53-1,65 (m, 2H) ; 1,91, 1,93, 1,99, 2,02 (s, 12H), 1,86-1,99 (m, 1H), 2,15-2,31 (m, 3H), 2,34-2,48 (m, 2H), 3,69 (dd, J = 9,6, 5,4 Hz, 1H), 3,77 (dd, J = 9,6, 5,1 Hz, 1H), 3,85 (ddd, J = 10,1, 5 4,7, 2,4 Hz, 1H), 3,92-3,99 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 12,3, 2,4 Hz, 1H), 4,13-4,20 (m, 1H), 4,26 (dd, J = 12,3, 4,7 Hz, 1H), 4,47-4,64 (m, 6H), 4,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,88 (dd, J = 9,5, 7,9 Hz, 1H), 5,01 (dd, J = 10,1, 9,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 5,11-5,20(m, 2H), 5,23 (dd, J= 9,5, 9,5 Hz, 1H), 7,27-7,37 (m, 10H), 7,84 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,5 (CH3), 20,6 (CH3), 10 20,7 (2xCH3), 20,9 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,6 (CH2), 30,4-30,8 (8xCH2), 33,1 (CH2), 31,0 (CH2), 36,8 (CH2), 51,3 (CH2), 53,2 (CH), 54,6 (CH), 61,5 (CH2), 65,2 (CH2), 67,4 (CH2), 68,0 (CH2), 69,0 (CH2), 69,7 (CH), 70,9 (CH2), 72,6 (CH), 72,9 (CH), 74,0 (CH), 101,6 (CH), 125,8 (CH), 129,2129,6 (10xCH), 137,2 (C), 137,5 (C), 145,4 (C), 171,1 (C), 171,2 (C), 171,5 15 (C), 172,3 (C), 172,6 (C), 173,0 (C), 174,1 (C), 176,3 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%)130 (35), 199 (40), 1081 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C55H78N5017 1080,5393, trouvée 1080,5375. Composé 3.5d COOBn COOBn 0--7-NN:N (30 NH 0 H ' OAc H2)17CH3 Le composé 3.5d (solide blanc, 160 mg, 0,14 mmol, 87 °/0) a été obtenu 25 à partir du composé 3.3f en suivant le protocole général I. Rf = 0,09 (CH2C12/AcOEt 1:1) ; Tf = 58-60°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,83 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,08-1,30 (m, 30H), 1,49-1,64 (m, 2H), 1,87, 1,93, 1,96, 2,02 (s, 12H), 1,86-1,99 (m, 1H), 2,11-2,85 (m, 3H), 2,26-2,45 (m, 2H), 3,51-3,60 (m, 1H), 3,66 (ddd, J = 10,1, 4,7, 1,9 Hz, 1H), 30 3,78-3,97 (m, 2H), 4,08 (dd, J = 12,4, 1,9 Hz, 1H), 4,11-4,18 (m, 1H), 4,21 (dd, J = 12,4, 4,7 Hz, 1H), 4,33-4,69 (m, 6H), 4,43 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,95 20 OAc Ac0 Ac0 3063730 59 (dd, J= 9,5, 8,0 Hz, 1H), 5,03 (dd, J= 10,1, 9,5 Hz, 1H), 5,03 (s, 2H), 5,10 (s, 2H), 5,13 (dd, J= 9,5, 9,5 Hz, 1H), 6,80 (bs, 1H), 7,18-7,35(m, 10H), 7,39(d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,1 (CH3), 20,5, 20,5, 20,5 (3xCH3), 20,6 (CH3), 22,6 (CH2), 25,5 (CH2), 26,9 5 (CH2), 29,3-29,6 (13xCH2), 30,0 (CH2), 31,8 (CH2), 36,3 (CH2), 49,9 (CH2), 51,8 (CH), 52,5 (CH), 61,7 (CH2), 64,6 (CH2), 66,4 (CH2), 67,1 (CH2), 67,7 (CH2), 68,1 (CH), 69,7 (CH2), 70,9 (CH), 71,9 (CH), 72,4 (CH), 100,4 (CH), 124,0 (CH), 128,1-128,5 (10xCH), 135,2 (C), 135,8 (C), 144,1 (C), 169,3 (C), 169,5 (C), 170,0 (C), 170,0 (C), 170,5 (C), 171,2 (C), 172,4 (C), 173,5 (C) ; 10 Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1151 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C601-188N50171150,6175, trouvée 1150,6163. Composé 3.5e OAc COOBn N COOBn Ac0 0 0 0-7- N-N 0 NH H Ac0 OAc (CH2)12CH3 Le composé 3.5e (solide blanc, 302 mg, 0,22 mmol, 74 °/0) a été obtenu 20 à partir du composé 3.3f en suivant le protocole général I. Rf = 0,06 (CH2C12/AcOEt 1:1) ; Tf = 78-80°C ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,22-1,37 (m, 20H), 1,54-1,65 (m, 2H), 1,89, 1,96, 1,98, 2,00, 2,01, 2,05, 2,09 (s, 21H), 1,91-2,03 (m, 1H), 2,152,29 (m, 3H), 2,39-2,42 (m, 2H), 3,68 (dd, J = 9,6, 5,5 Hz, 1H), 3,76 (dd, J = 25 9,6, 5,1 Hz, 1H), 3,79-3,83 (m, 1H), 3,92-4,00 (m, 2H), 4,03-4,07 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 6,3, 2,5 Hz, 1H), 4,14-4,17 (m, 1H), 4,20-4,28 (m, 2H), 4,484,63 (m, 7H), 4,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,76 (dd, J = 9,1, 7,9 Hz, 1H) ; 4,814,85 (m, 1H), 5,04 (dd, J = 10,0, 10,0 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 5,11-5,20 (m, 2H), 5,27 (dd, J = 9,1, 9,1 Hz, 1H), 5,33-5,38 (m, 2H), 7,26-7,39 (m, 10H), 30 7,83 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,5 (CH3), 20,5-21,2 (7xCH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,6 (CH2), 30,3-30,8 (8xCH2), 31,0 (CH2), 15 3063730 33,1 (CH2), 36,8 (CH2), 51,3 (CH2), 53,1 (CH), 54,5 (CH), 63,0 (CH2), 64,1 (CH2), 65,2 (CH2), 67,4 (CH2), 68,0 (CH2), 69,0 (CH2) ; 69,6 (CH), 69,8 (CH), 70,7 (CH), 70,9 (CH2), 71,6 (CH), 73,3 (CH), 73,5 (CH), 74,7 (CH), 76,3 (CH), 97,1 (CH), 101,4 (CH), 125,8 (CH), 129,2-129,6 (10xCH), 145,5 (C), 137,2 5 (C), 137,6 (C), 171,1-172,2 (7xC), 172,2 (C), 172,6 (C), 174,1 (C), 176,3 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1369 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C67H94N5025 1368,6238, trouvée 1368,6237. Composé 3.5f 10 OAc COOBn COOBn NH OAc H2b7CH3 Le composé 3.5f (solide blanc, 192 mg, 0,13 mmol, 83 °/0) a été obtenu 15 à partir du composé 3.3f en suivant le protocole général I. Rf = 0,10 (CH2C12/AcOEt 4:6) ; Tf = 90-94°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,84 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,14-1,31 (m, 30H), 1,52-1,62 (m, 2H), 1,87, 1,94, 1,96, 1,98, 1,99, 2,05, 2,09 (s, 21H), 1,91-2,03 (m, 1H), 2,13-2,26 (m, 3H), 2,26-2,43 (m, 2H), 3,50-3,59 (m, 1H), 3,60-3,66 (m, 1H), 3,80-3,99 20 (m, 4H), 4,02 (dd, J = 12,4, 2,2 Hz, 1H), 4,09-4,25 (m, 3H), 4,33-4,70 (m, 7H), 4,46 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,75-4,85 (m, 2H), 5,02 (dd, J = 9,8, 9,8 Hz, 1H), 5,04 (s, 2H), 5,09 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,19 (dd, J = 9,2, 9,2 Hz, 1H), 5,32 (dd, J = 10,3, 9,8 Hz, 1H), 5,36 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 6,0 Hz, 1H, NH), 7,23-7,37 (m, 11H), 7,55 (s, 1H) ; RMN 13C 25 (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,1 (CH3), 20,5-20,8 (7xCH3), 22,7 (CH2), 25,5 (CH2), 27,0 (CH2), 29,3-29,7 (13xCH2), 30,0 (CH2), 31,9 (CH2), 36,4 (CH2), 49,9 (CH2), 51,9 (CH), 52,5 (CH), 61,5 (CH2), 62,5 (CH2), 64,6 (CH2), 66,4 (CH2), 67,2 (CH2), 67,8 (CH2), 68,0 (CH), 68,5 (CH), 69,3 (CH), 69,6 (CH2), 70,0 (CH), 71,8 (CH), 72,4 (CH), 72,5 (CH), 75,0 (CH), 95,6 (CH), 100,2 30 (CH), 123,9 (CH), 128,1-128,6 (CH of Ph), 135,3 (C), 135,8 (C), 144,3 (C), 169,4-170,5 (7xC), 170,0 (C), 171,2 (C), 172,5 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) 3063730 61 m/z ((Vo) 1439 (100) [M+H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C72H104N5025 1438,7020, trouvée 1438,7031. Composé 3.5g -ozzo-/-ozz COOBn N COOBn H (cH2)12cH3 5 o-zozz 10 Le composé 3.5g (cire blanc, 207 mg, 0,21 mmol, 85 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.3f en suivant le protocole général I (purification : colonne chromatographique sur gel de silice, éluant : CH2C12/Me0H 99 :1 à 97:3). Rf = 0,18 (CH2C12/Me0H 97:3) ; Tf = 50-52°C ; RMN 1H (500 MHz, CD30D) 5 ppm 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,22-1,36 (m, 20H), 1,53-1,65 (m, 15 2H), 1,91-2,01 (m, 1H), 2,15-2,29 (m, 3H), 2,34-2,46 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 3,49-3,53 (m, 2H), 3,54-3,64 (m, 18H), 3,64-3,70 (m, 1H), 3,71-3,77 (m, 1H), 3,85 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 4,49-4,63 (m, 6H), 5,09 (s, 2H), 5,12 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 7,25-7,37 (m, 10H), 7,96 (s, 1H) ; RMN 13C (125 MHz, CD30D) 5 ppm 14,5 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,6 (CH2), 20 30,3-30,8 (8xCH2), 31,0 (CH2), 33,1 (CH2), 36,8 (CH2), 51,5 (CH2), 53,1 (CH), 54,5 (CH), 59,1 (CH3), 65,1 (CH2), 67,4 (CH2), 68,0 (CH2), 70,2 (CH2), 70,8 (CH2), 71,3-71,5 (9xCH2), 73,0 (CH2), 125,9 (CH), 129,2-129,6 (10xCH), 137,1 (C), 137,5 (C), 145,4 (C), 172,5 (C), 174,0 (2xC), 176,2 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 985 (20) [M+H], 1007 (100) [M+Na]; SMHR (ESI+) m/z 25 calculée pour C52H82N5013 984,5909, trouvée 984,5892. Composé 3.5h COOBn N COOBn H 30 3063730 62 Le omposé 3.5h (solide blanc, 91 mg 0,09 mmol, 88 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.3g en suivant le protocole général I (purification : colonne chromatographique sur gel de silice, éluant : CH2C12/Me0H 99 :1 à 97:3). 5 Rf = 0,20 (CH2C12/Me0H 97:3) ; Tf = 61-63°C ; RMN 1H (500 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,85 (t, J= 6,9 Hz, 3H), 1,17-1,32 (m, 30H), 1,53-1,64 (m, 2H), 1,93-2,04 (m, 1H), 2,14-2,26 (m, 3H), 2,26-2,43 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 3,483,52 (m, 2H), 3,52-3,66 (m, 19H), 3,81 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 3,88-3,95 (m, 1H), 4,46 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 4,53-4,69 (m, 4H), 5,05 (s, 2H), 5,10 (d, J = 12,3 Hz, 10 1H), 5,13 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 5,9 Hz, 1H, NH), 7,24-7,35 (m, 10H), 7,42 (d, J = 7,7 Hz, 1H, NH), 7,71 (s, 1H) ; RMN 13C (125 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,1 (CH3), 22,7 (CH2), 25,5 (CH2), 26,9 (CH2), 29,3-29,7 (13xCH2), 30,0 (CH2), 31,9 (CH2), 36,4 (CH2), 50,3 (CH2), 51,9 (CH), 52,5 (CH), 59,0 (CH3), 65,1 (CH2), 66,4 (CH2), 67,2 (CH2), 70,2 (CH2), 70,8 (CH2), 70,5-70,6 15 (9xCH2), 71,9 (CH2), 123,8 (CH), 128,2-128,6 (10xCH), 135,3 (C), 135,8 (C), 144,1 (C), 170,1 (C), 171,2 (C), 172,5 (C), 173,6 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 892 (100), 1077 (70) [M+Na]; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C57H92N5013 1054,6692, trouvée 1054,6696. Composé 3.5i 20 NC) N=N1 ONH H OAc Ac0 0 Ac0 OAc COOBn !Vs' COOBn 25 Le composé 3.5i (cire jaunâtre, 115 mg, 0,11 mmol, 38%) a été obtenu à partir du composé 3.3h en suivant le protocole général I. Rf = 0,40 (CH2C12/AcOEt 1:1) ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,84, 0,87 (t, J = 6,9 Hz, 6H), 1,15-1,39 (m, 12H), 1,31-1,44 (m, 2H), 1,47-1,63 (m, 30 2H), 1,91, 1,93, 1,99, 2,02 (s, 12H), 1,89-2,05 (m, 1H), 2,14-2,25 (m, 1H), 2,26-2,35 (m, 1H), 2,34-2,46 (m, 2H), 3,68 (dd, J = 9,6, 5,7 Hz, 1H), 3,76 (dd, 3063730 63 J = 9,6, 5,3 Hz, 1H), 3,85 (ddd, J = 9,7, 4,7, 2,4 Hz, 1H), 3,90-3,99 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 12,4, 2,4 Hz, 1H), 4,13-4,20 (m, 1H), 4,26 (dd, J = 12,4, 4,7 Hz, 1H), 4,49-4,62 (m, 6H), 4,66 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,89 (dd, J = 9,7, 8,0 Hz, 1H), 5,02 (dd, J = 9,7, 9,5 Hz, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,13, 5,17 (d, J = 12,4 Hz, 5 2H), 5,23 (dd, J = 9,7, 9,5 Hz, 1H), 7,27-7,37 (m, 10H), 7,83 (s, 1H), 8,12 (d, J = 7,5 Hz, 1H, NH), 8,13 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 14,5 (CH3), 20,6 (CH3), 20,6 (CH3), 20,7 (CH3), 20,7 (CH3), 23,5 (CH2), 23,6 (CH2), 27,9 (CH2), 28,2 (CH2), 28,3 (CH2), 30,9 (CH2), 32,9 (CH2), 33,0 (CH2), 34,0 (CH2), 34,1 (CH2), 47,9 (CH), 51,3 (CH2), 10 53,0 (CH), 54,2 (CH), 63,0 (CH2), 65,2 (CH2), 67,4 (CH2), 68,0 (CH2), 69,0 (CH2), 69,7 (CH), 71,0 (CH2), 72,5 (CH), 72,9 (CH), 74,0 (CH), 101,6 (CH), 125,8 (CH), 129,2-129,6 (10xCH), 137,1 (C), 137,5 (C), 145,4 (C), 171,1 (C), 171,2 (C), 171,5 (C), 172,0 (C), 172,2 (C), 172,5 (C), 173,8 (C), 179,0 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 1075 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour 15 C53H73N5017Na 1074,4899, trouvée 1074,4904. Composé 3.5i COOBn 0 /NO COOBn NN ONH OAc Le composé 3.5j (solide blanc, 190 mg, 0,15 mmol, 90%) a été obtenu à partir du composé 3.3i en suivant le protocole général I. 25 Rf = 0,40 (CH2C12/AcOEt 1:1) ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,84, 0,85 (t, J = 6,9 Hz, 6H), 1,13-1,31 (m, 40H), 1,33-1,44 (m, 2H), 1,48-1,63 (m, 2H), 1,90, 1,95, 1,99, 2,04 (s, 12H), 1,93-2,03 (m, 1H), 2,06-2,15 (m, 1H), 2,16-2,45 (m, 3H), 3,50-3,60 (m, 1H), 3,67 (ddd, J = 9,7, 4,7, 2,2 Hz, 1H), 3,81-3,90 (m, 1H), 3,90-3,99 (m, 1H), 4,10 (dd, J = 12,3, 2,2 Hz, 1H), 4,14- 30 4,20 (m, 1H), 4,23 (dd, J = 12,3, 4,7 Hz, 1H), 4,35-4,71 (m, 6H), 4,44 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,97 (dd, J = 9,7, 7,9 Hz, 1H), 5,05 (dd, J = 9,7, 9,7 Hz, 1H), 20 Ac0 Ac0 OAc 3063730 64 5,05 (s, 2H), 5,13 (s, 2H), 5,15 (dd, J = 9,7, 9,7 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 6,0 Hz, 1H, NH), 7,23-7,40 (m, 11H), 7,57 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,1 (2xCH3), 20,5 (CH3), 20,6 (2xCH3), 20,7 (CH3), 22,7 (2xCH2), 27,3 (CH2), 27,7 (2xCH2), 29,4-30,3 (16xCH2), 31,9 (CH2), 32,9 (CH2), 33,0 (CH2), 5 47,7 (CH), 50,0 (CH2), 51,8 (CH), 52,4 (CH), 61,8 (CH2), 64,6 (CH2), 66,4 (CH2), 67,2 (CH2), 67,7 (CH2), 68,3 (CH), 69,8 (CH2), 71,0 (CH), 72,0 (CH), 72,5 (CH), 100,6 (CH), 124,0 (CH), 128,2-128,6 (10xCH), 135,3 (C), 135,9 (C), 144,4 (C), 169,4 (C), 169,5 (C), 170,0 (2xC), 170,6 (C), 171,2 (C), 172,3 (C), 176,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 1271 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) 10 Miz calculée pour C67H101N5017Na 1270,7090, trouvée 1270,7128. Composé 3.5k OAc 1 Ac0 5 Ac0 N-:-N 0 N OAc COOBn COOBn H Le composé 3.5k (gomme jaunâtre, 200 mg, 0,19 mmol, 80%) a été obtenu à partir du composé 3.3j en suivant le protocole général I. 20 Rf = 0,16 (CH2C12/Me0H 97,5:2,5) ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,77-0,92 (m, 2H), 1,10-1,25 (m, 6H), 1,25-1,37 (m, 2H), 1,51-1,73 (m, 7H), 1,91, 1,93, 1,98, 2,02 (s, 12H), 1,94-2,08 (m, 1H), 2,14-2,30 (m, 3H), 2,342,48 (m, 2H), 3,69 (dd, J = 9,6, 5,5 Hz, 1H), 3,78 (dd, J = 9,6, 5,2 Hz, 1H), 3,85 (ddd, J = 9,7, 4,6, 2,1 Hz, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 12,4, 2,1 Hz, 25 1H), 4,12-4,20 (m, 1H), 4,26 (dd, J = 12,4, 4,6 Hz, 1H), 4,48-4,64 (m, 6H), 4,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,89 (dd, J = 9,5, 7,9 Hz, 1H), 5,02 (dd, J = 9,7, 9,5 Hz, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,12 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,23 (dd, J = 9,5, 9,5 Hz, 1H), 7,25-7,38 (m, 10H), 7,82 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 20,6 (2xCH3), 20,7 (2xCH3), 27,0 (CH2), 27,4 30 (2xCH2), 27,5 (CH2), 27,6 (CH2), 27,7 (CH2), 31,0 (CH2), 34,5 (2xCH2), 36,8 (CH2), 38,3 (CH2), 38,7 (CH), 51,2 (CH2), 53,1 (CH), 54,4 (CH), 63,0 (CH2), 3063730 65,1 (CH2), 67,4 (CH2), 68,0 (CH2), 68,9 (CH2), 69,7 (CH), 70,9 (CH2), 72,5 (CH), 72,8 (CH), 73,9 (CH), 101,6 (CH), 125,7 (CH), 129,1-129,6 (10xCH), 137,1 (C), 137,5 (C), 145,3 (C), 171,1 (2xC), 171,4 (C), 172,1 (C), 172,2 (C), 172,5 (C), 174,0 (C), 176,1 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1059 (100) [M+Na] ; 5 SMHR (ESI+) m/z calculée pour C52H70N5017 1036,4767, trouvée 1036,4760. Composé 3.51 OAc 10 Ac0 0 /N'N Ac0 OAc COOBn 0 NH HN COOBn (CH2)12CH3 Le composé 3.51 (solide jaunâtre, 153 mg, 0,13 mmol, 61 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.3k en suivant le protocole général I. Rf = 0,21 (CH2C12/Me0H 97,5:2,5) ; Tf = 60-63°C; RMN 1H (400 MHz, 15 CD30D) 5 ppm 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,21-1,34 (m, 20H), 1,53-1,65 (m, 2H), 1,92, 1,94, 1,99, 2,02 (s, 12H), 1,93-2,10 (m, 1H), 2,15-2,31 (m, 3H), 2,42-2,52 (m, 2H), 3,71 (dd, J = 9,6, 5,2 Hz, 1H), 3,79-3,88 (m, 2H), 3,914,00 (m, 3H), 4,09-4,20 (m, 2H), 4,26 (dd, J = 12,4, 4,7 Hz, 1H), 4,47-4,64 (m, 6H), 4,66 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,88 (dd, J = 9,6, 8,0 Hz, 1H), 5,01 (dd, J = 20 9,6, 9,6 Hz, 1H), 5,11 (s, 2H), 5,15 (s, 2H), 5,23 (dd, J = 9,6, 9,6 Hz, 1H), 7,25-7,40 (m, 10H), 7,84 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CDC13) 5 ppm 14,6 (CH3), 20,7 (CH3), 20,7 (CH3), 20,8 (CH3), 20,8 (CH3), 23,8 (CH2), 26,8 (CH2), 28,1 (CH2), 30,5-30,9 (8xCH2), 31,2 (CH2), 33,1 (CH2), 36,8 (CH2), 42,2 (CH2), 51,3 (CH2), 53,7 (CH), 55,2 (CH), 63,1 (CH2), 65,3 (CH2), 67,4 (CH2), 25 68,0 (CH2), 69,0 (CH2), 69,8 (CH), 70,9 (CH2), 72,6 (CH), 73,0 (CH), 74,1 (CH), 101,7 (CH), 125,9 (CH), 129,3-129,7 (10xCH), 137,2 (C), 137,7 (C), 145,3 (C), 171,0 (C), 171,2 (C), 171,3 (C), 171,6 (C), 172,3 (C), 172,3 (C), 173,8 (C), 174,4 (C), 176,9 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1160 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C57H81 N6018 1137,5607, trouvée 1137,5610. 3063 730 66 Composé 3.6a HO HO OH OH COOH N COOH NH H (CH2)8CH3 5 Le composé 3.6a (solide blanc, 193 mg, 0,31 mmol, 64 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.4a en suivant les protocoles généraux J puis F. Tf = 63-70°C ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) : 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,22-1,41 (m, 12H), 1,55-1,68 (m, 2H), 1,82-2,01 (m, 3H), 2,15-2,26 (m, 10 1H), 2,29 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,35-2,45 (m, 2H), 2,69-2,87 (m, 2H), 3,20 (dd, J = 9,6, 8,6 Hz, 1H), 3,26-3,41 (m, 3H), 3,53-3,75 (m, 5H), 3,86 (dd, J = 12,0, 1,0 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 4,44-4,52 (m, 1H), 4,56-4,64 (m, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,6 (CH2), 27,9 (CH2), 30,3, 30,4, 30,4, 30,5 (4xCH2), 30,9 (2xCH2), 33,0 (CH2), 36,8 15 (CH2), 52,9 (CH), 54,5 (CH), 62,9 (CH2), 70,7 (CH), 71,3 (CH2), 71,4 (CH2), 74,3 (CH), 79,5 (CH), 81,8 (CH), 87,1 (CH), 172,2 (C), 174,5 (C), 176,4 (C), 176,4 (C); Masse (ESI-) m/z ((Vo) 623 (100) [M-H]; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C27H47N2012S 623,2850, trouvée 623,2833. 20 Composé 3.6b OH O COOH HO N COOH HO OH NH H (CH2)10C1-13 25 Le composé 3.6b (solide blanc, 150 mg, 0,23 mmol, 37 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.4b en suivant les protocoles généraux J puis F. Tf = 97-102°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,89 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,22-1,39 (m, 16H), 1,55-1,66 (m, 2H), 1,83-2,01 (m, 3H), 2,14-2,25 (m, 1H), 2,28 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,35-2,43 (m, 2H), 2,69-2,86 (m, 2H), 3,21 (dd, J 30 = 9,7, 8,7 Hz, 1H), 3,27-3,40 (m, 3H), 3,52-3,73 (m, 5H), 3,86 (dd, J = 11,9, 1,0 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 4,44-4.51 (m, 1H), 4,56-4,64 (m, 1H) ; 3063730 67 RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,7 (CH2), 27,9 (CH2), 30,3-30,7 (6xCH2), 31,0 (CH2), 33,0 (CH2), 36,8 (CH2), 53,0 (CH), 54,5 (CH), 62,9 (CH2), 70,7 (CH), 71,3 (CH2), 71,4 (CH2), 74,3 (CH), 79,5 (CH), 81,8 (CH), 87,1 (CH), 172,2 (C), 174,5 (C), 176,4 (2xC) ; 5 Masse (ESI-) m/z (%) 651 (100) [M-H]; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C29H51N2012S 651,3163, trouvée 651,3187. Composé 3.6c OH O COOH 10 HO 0 COOH HO OH 0 NH H (C1-12)12C1-13 Le composé 3.6c (solide blanc, 712 mg, 1,05 mmol, 62%) a été obtenu à partir du composé 3.4c en suivant les protocoles généraux J puis F. 15 Tf = 104-106°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,7 Hz, 3H), 1,23-1,38 (m, 20H), 1,57-1,68 (m, 2H), 1,83-2,01 (m, 3H), 2,15-2,25 (m, 1H), 2,29 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,37-2,44 (m, 2H), 2,70-2,86 (m, 2H), 3,21 (dd, J = 9,7, 9,1 Hz, 1H), 3,26-3,40 (m, 3H), 3,53-3,74 (m, 5H), 3,87 (dd, J = 11,9, 1,0 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 4,45-4,52 (m, 1H), 4,56-4,64 (m, 1H) ; 20 RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,7 (CH2), 28,0 (CH2), 30,3-30,8 (8xCH2), 31,0 (2xCH2), 33,0 (CH2), 36,8 (CH2), 53,0 (CH), 54,5 (CH), 63,0 (CH2), 70,7 (CH), 71,3 (CH2), 71,5 (CH2), 74,3 (CH), 79,5 (CH), 81,9 (CH), 87,2 (CH), 172,2 (C), 174,5 (C), 176,4 (2xC) ; Masse (ESI-) m/z (%) 679 (100) [M-H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour 25 C31H55N2012S 679,3476, trouvée 679,3497. Composé 3.7a OH OH NC) N Oy NH (C1-12)8C1-13 COOH COOH 30 3063730 68 Le composé 3.7a (solide blanc, 81 mg, 0,12 mmol, 70 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.5a en suivant les protocoles généraux J puis F. Tf = 72-75°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) : 5 ppm 0,89 (t, J = 6,2 Hz, 3H), 1,20-1,38 (m, 12H), 1,54-1,67 (m, 2H), 1,86-1,99 (m, 1H), 2,10-2,24 (m, 5 1H), 2,24-2,40 (m, 4H), 3,21 (dd, J = 8,9, 8,0 Hz, 1H), 3,25-3,41 (m, 3H), 3,62-3,75 (m, 2H), 3,80 (dd, J = 9,6, 5,2 Hz, 1H), 3,87 (dd, J = 11,8, 1,3 Hz, 1H), 3,94-4,06 (m, 1H), 4,20-4,29 (m, 1H), 4,32 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,45 (dd, J = 8,7, 4,6 Hz, 1H), 4,57-4,71 (m, 5H), 8,14 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) : 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,8 (CH2), 30,3, 30,4, 10 30,4, 30,5 (4xCH2), 30,9 (CH2), 33,0 (CH2), 36,8 (CH2), 51,6 (CH2), 53,0 (CH), 54,5 (CH), 62,6 (CH2), 65,0 (CH2), 69,0 (CH2), 70,8 (CH2), 71,5 (CH), 74,9 (CH), 77,9 (2xCH), 104,4 (CH), 126,2 (CH), 145,2 (C), 172,1 (C), 174,5 (C), 176,4 (2xC) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 674 (100) [M-H]; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C29H50N5013676,3405, trouvée 676,3409. 15 Composé 3.7b COOH OH NrYC) COOH N ONH (CH2)1001-13 OH 20 Le composé 3.7b (solide blanc, 108 mg, 0,15 mmol, 93 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.5b en suivant les protocoles généraux J puis F. Tf = 118-120°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) : 5 ppm 0,89 (t, J = 5,9 Hz, 3H), 1,16-1,38 (m, 16H), 1,52-1,67 (m, 2H), 1,85-2,00 (m, 1H), 2,10-2,25 25 (m, 1H), 2,22-2,42 (m, 4H), 3,21 (dd, J = 8,4, 7,8 Hz, 1H), 3,23-3,42 (m, 3H), 3,63-3,74 (m, 2H), 3,79 (dd, J = 9,6, 5,2 Hz, 1H), 3,87 (dd, J = 11,8, 1,3 Hz, 1H), 3,94-4,06 (m, 1H), 4,17-4,28 (m, 1H), 4,32 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 8,8, 4,6 Hz, 1H), 4,55-4,70 (m, 5H), 8,10 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) : 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 30,3-30,7 30 (6xCH2), 31,0 (CH2), 33,0 (CH2), 36,8 (CH2), 51,6 (CH2), 53,2 (CH), 54,5 (CH), 62,6 (CH2), 65,0 (CH2), 69,0 (CH2), 70,8 (CH2), 71,4 (CH), 74,9 (CH), 3063730 69 77,8 (CH), 77,9 (CH), 104,4 (CH), 126,2 (CH), 145,2 (C), 172,0 (C), 174,8 (C), 176,4 (C), 176,5 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 702 (100) [M-H]; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C31H54N5013704,3718, trouvée 704,3703. 5 Composé 3.7c Oy NH COOH F\r'. COOH H (OH2)12OH3 OH OH 10 Le composé 3.7c (solide blanc, 358 mg, 0,49 mmol, 75 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.5c en suivant les protocoles généraux J puis F Tf = 154-156°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,21-1,37 (m, 20H), 1,54-1,67 (m, 2H), 1,86-1,99 (m, 1H), 2,13-2,25 (m, 1H), 2,25-2,31 (m, 2H), 2,31-2,38 (m, 2H), 3,19 (dd, J = 9,7, 8,0 Hz, 1H), 15 3,24-3,38 (m, 3H), 3,62-3,68 (m, 1H), 3,71 (dd, J = 9,5, 5,4 Hz, 1H), 3,78 (dd, J = 9,5, 5,4 Hz, 1H), 3,87 (dd, J = 11,8, 1,5 Hz, 1H), 3,96-4,03 (m, 1H), 4,214,28 (m, 1H), 4,30 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 9,1, 4,7 Hz, 1H), 4,584,67 (m, 5H), 8,09 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,9 (CH2), 27,9 (CH2), 30,4-30,8 (8xCH2), 31,0 (CH2), 33,1 20 (CH2), 36,8 (CH2), 51,6 (CH2), 53,1 (CH), 54,5 (CH), 62,7 (CH2), 65,1 (CH2), 69,1 (CH2), 70,8 (CH2), 71,5 (CH), 74,9 (CH), 77,9 (CH), 78,1 (CH), 104,5 (CH), 126,2 (CH), 145,3 (C), 172,1 (2xC), 176,4 (C), 176,5 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 365 (30) [M-2H]2-, 550 (20), 730 (100) [M-H], 752 (20) ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C33H56N5013 730,3875, trouvée 730,3886. 25 Composé 3.7d OH OH NC) N Oy NH (C1-12)17C1-13 COOH COOH H 30 3063730 Le composé 3.7d (solide blanc, 74 mg, 0,09 mmol, 77 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.5d en suivant les protocoles généraux J puis F. (Li0H/Dioxane-H20). Tf = 175-185°C; RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 5 ppm 0,85 (t, J = 6,6 5 Hz, 3H), 1,11-1,32 (m, 30H), 1,39-1,51 (m, 2H), 1,68-1,83 (m, 1H), 1,90-2,04 (m, 1H), 2,07-2,16 (m, 2H), 2,18-2,29 (m, 2H), 2,96 (dd, J = 8,3, 8,3 Hz, 1H), 3,03 (dd, J = 8,8, 8,8 Hz, 1H), 3,08-3,17 (m, 2H), 3,34-3,46 (m, 1H), 3,513,60 (m, 2H), 3,64-3,70 (m, 1H), 3,85-3,93 (m, 1H), 4,03-4,12 (m, 1H), 4,174,28 (m, 2H), 4,44-4,63 (m, 5H), 7,93 (d, J = 8,1 Hz, 1H, NH), 8,09 (s, 10 1H), 8,20 (d, J = 7,8 Hz, 1H, NH) ; RMN 13C (125 MHz, DMSO-de) 5 ppm 14,0 (CH3), 22,1 (CH2), 25,2 (CH2), 26,5 (CH2), 28,7-29,1 (13xCH2), 29,8 (CH2), 31,3 (CH2), 35,1 (CH2), 49,6 (CH2), 51,1 (CH), 52,2 (CH), 61,1 (CH2), 63,6 (CH2), 67,3 (CH2), 69,9 (CH2), 70,0 (CH), 73,3 (CH), 76,6 (CH), 77,0 (CH), 102,9 (CH), 124,7 (CH), 143,5 (C), 169,6 (C), 172,3 (C), 173,0 (C), 15 173,8 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 399 (95) [M-2H]2, 620 (70), 638 (30), 800 (100) [M-H], 822 (85) [M+Na-2H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C38H66N5013800,4657, trouvée 800,4636. Composé 3.7e 20 OH COOH ".COOH 0 NH Y (cH2)12cH3 OH Le composé 3.7e (solide blanc, 163 mg, 0,18 mmol, 79 °/0) a été obtenu 25 à partir du composé 3.5d en suivant les protocoles généraux J puis F. Tf = 167-169°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,22-1,39 (m, 20H), 1,57-1,67 (m, 2H), 1,86-1,98 (m, 1H), 2,13-2,24 (m, 1H), 2,28 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,31-2,40 (m, 2H), 3,22-3,33 (m, 2H), 3,39 (ddd, J = 9,2, 4,7, 1,9 Hz, 1H), 3,44 (dd, J = 9,7, 3,8 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 9,2, 9,2 30 Hz, 1H), 3,56-3,73 (m, 5H), 3,74-3,92 (m, 4H), 3,95-4,03 (m, 1H), 4,19-4,29 (m, 1H), 4,33 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 9,0, 4,6 Hz, 1H), 4,56-4,68 (m, 3063730 71 5H), 5,16 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,09 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 28,0 (CH2), 30,3-30,8 (8xCH2), 31,0 (CH2), 33,1 (CH2), 36,8 (CH2), 51,6 (CH2), 53,2 (CH), 54,6 (CH), 62,1 (CH2), 62,8 (CH2), 65,1 (CH2), 69,1 (CH2), 70,8 (CH2), 71,5 (CH), 74,1 (CH), 74,5 5 (CH), 74,8 (CH), 75,0 (CH), 76,7 (CH), 77,7 (CH), 81,1 (CH), 102,9 (CH), 104,5 (CH), 126,2 (CH), 145,3 (C), 172,1 (C), 174,7 (C), 176,4 (C), 176,5 (C) ; Masse (ES1-) m/z ((Vo) 446 (100) [M-H]2-, 892 (100) [M-H]; SMHR (ES1+) m/z calculée pour C39H66N5018 892,4403, trouvée 892,4398. 10 Composé 3.7f OH COOH W' COOH NH H OH (OH2)17OH3 15 Le composé 3.7f (solide blanc, 101 mg, 0,10 mmol, 92 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.5e en suivant les protocoles généraux J puis F (Li0H/Dioxane-H20). Tf = 214-216°C; RMN 1H (500 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,23-1,39 (m, 30H), 1,56-1,66 (m, 2H), 1,88-1,97 (m, 1H), 2,15-2,24 (m, 20 1H), 2,25-2,31 (m, 2H), 2,31-2,39 (m, 2H), 3,22-3,29 (m, 2H), 3,39 (ddd, J = 9,4, 4,7, 1,9 Hz, 1H), 3,44 (dd, J = 9,7, 3,8 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 9,4, 9,2 Hz, 1H), 3,57-3,74 (m, 5H), 3,75-3,85 (m, 3H), 3,89 (dd, J = 12,1, 1,9 Hz, 1H), 3,96-4,03 (m, 1H), 4,21-4,27 (m, 1H), 4,33 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 9,1, 4,7 Hz, 1H), 4,57-4,69 (m, 5H), 5,16 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,09 (s, 1H) ; 25 RMN 13C (125 MHz, CD30D) : 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,9 (CH2), 27,9 (CH2), 30,4-30,8 (13xCH2), 31,0 (CH2), 33,1 (CH2), 36,8 (CH2), 51,6 (CH2), 53,1 (CH), 54,5 (CH), 62,1 (CH2), 62,8 (CH2), 65,1 (CH2), 69,2 (CH2), 70,9 (CH2), 71,5 (CH), 74,2 (CH), 74,5 (CH), 74,8 (CH), 75,1 (CH), 76,7 (CH), 77,7 (CH), 81,2 (CH), 102,9 (CH), 104,5 (CH), 126,2 (CH), 145,3 (C), 172,2 30 (C), 174,5 (C), 176,4 (C), 176,5 (C) ; Masse (ES1-) m/z ((Vo) 481 (55) [M-2H]2-, 3063730 72 963 (100) [M-H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C44H76N5018 962,5185, trouvée 962,5211. Composé 3.7g 5 (CH2)12CH3 10 Le composé 3.7g (cire blanc, 41 mg, 0,05 mmol, quantitatif) a été obtenu à partir du composé 3.5g en suivant le protocole général Dl. Tf = 54-57°C; RMN 1H (500 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,23-1,37 (m, 20H), 1,55-1,66 (m, 2H), 1,88-1,98 (m, 1H), 2,13-2,22 (m, 1H), 2,23-2,39 (m, 4H), 3,35 (s, 3H), 3,51-3,55 (m, 2H), 3,56-3,66 (m, 18H), 15 3,71 (dd, J = 9,7, 5,2 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 9,7, 5,4 Hz, 1H), 3,90 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 4,40 (dd, J = 8,1, 4,7 Hz, 1H), 4,55-4,67 (m, 5H), 8,03 (s, 1H) ; RMN 13C (125 MHz, CD30D) : 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 28,4 (CH2), 30,4-30,8 (8xCH2), 31,2 (CH2), 33,1 (CH2), 36,8 (CH2), 51,4 (CH2), 53,9 (CH), 54,7 (CH), 59,1 (CH3), 65,1 (CH2), 70,3 (CH2), 70,8 (CH2), 71,1- 20 71,3 (9xCH2), 72,8 (CH2), 125,9 (CH), 145,5 (C), 171,7 (2xC), 176,4 (2xC) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 827 (100) [M+Na]; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C38H70N5013 804,4970, trouvée 804,4975. Composé 3.7h 25 /0(Dz/ N'N C)/z(D-Zo 30 Le composé 3.7h (solide blanc, 58 mg, 0,07 mmol, 89 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.5h en suivant le protocole général Dl. 3063730 73 Tf = 76-79°C; RMN 1H (500 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,23-1,38 (m, 30H), 1,56-1,66 (m, 2H), 1,88-1,98 (m, 1H), 2,13-2,22 (m, 1H), 2,23-2,39 (m, 4H), 3,35 (s, 3H), 3,50-3,55 (m, 2H), 3,56-3,67 (m, 18H), 3,71 (dd, J = 9,6, 5,3 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 9,6, 5,3 Hz, 1H), 3,90 (t, J = 5,1 5 Hz, 2H), 4,42 (dd, J = 8,5, 4,8 Hz, 1H), 4,55-4,67 (m, 5H), 8,03 (s, 1H) ; RMN 13C (125 MHz, CD30D) : 5 ppm 14,5 (CH3), 23,7 (CH2), 26,9 (CH2), 28,2 (CH2), 30,4-30,9 (13xCH2), 31,1 (CH2), 33,1 (CH2), 36,8 (CH2), 51,4 (CH2), 53,6 (CH), 54,6 (CH), 59,1 (CH3), 65,1 (CH2), 70,3 (CH2), 70,9 (CH2), 71,271,4 (9xCH2), 72,9 (CH2), 125,9 (CH), 145,4 (C), 171,8 (C), 175,1 (C), 176,4 10 (C), 176,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 231 (50), 897 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C43H80N5013 874,5753, trouvée 874,5761. Composé 3.7i OH NC) N=N C) NH H 15 COOH !Vs' COOH OH Le composé 3.7i (solide blanc, 31 mg, 0,04 mmol, 46 °/0) a été obtenu 20 à partir du composé 3.5i en suivant les protocoles généraux J puis F. Tf = 100-103°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,5 Hz, 6H), 1,18-1,36 (m, 12H), 1,33-1,46 (m, 2H), 1,47-1,68 (m, 2H), 1,86-1,97 (m, 1H), 2,13-2,24 (m, 1H), 2,24-2,40 (m, 3H), 3,20 (dd, J = 9,0, 7,9 Hz, 1H), 3,31-3,39 (m, 3H), 3,62-3,73 (m, 2H,), 3,79 (dd, J = 9,5, 5,3 Hz, 1H), 3,87 (d, 25 J = 11,5, 1,3 Hz, 1H), 3,96-4,04 (m, 1H), 4,21-4,28 (m, 1H), 4,32 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,42 (dd, J = 7,8, 4,7 Hz, 1H), 4,59-4,71 (m, 5H), 8,10 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) : 5 ppm 14,4 (2xCH3), 23,5 (CH2), 23,6 (CH2), 28,2 (CH2), 28,3 (CH2), 28,5 (CH2), 31,1 (CH2), 32,9 (CH2), 33,1 (CH2), 34,1 (CH2), 48,0 (CH), 51,6 (CH2), 53,5 (CH), 54,4 (CH), 62,7 (CH2), 65,1 (CH2), 69,0 30 (CH2), 70,9 (CH2), 71,5 (CH), 74,9 (CH), 77,9 (CH), 78,0 (CH), 104,5 (CH), 126,2 (CH), 145,3 (C), 171,7 (C), 175,1 (C), 176,5 (C), 179,2 (C) ; Masse 3063730 74 (ESI-) m/z ((Vo) 351 (25) [M-2H]2, 702 (100) [M-H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C31H52N5013 702,3562, trouvée 702,3550. Composé 3.7i OH HO HO OH COOH C001-1 H 5 10 Le composé 3.7j (solide blanc, 40 mg, 0,04 mmol, quantitatif) a été obtenu à partir du composé 3.5j en suivant les protocoles généraux J puis F (Li0H/Dioxane-H20). Tf > 160°C (avec décomposition) ; RMN 1H (500 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,9 Hz, 6H), 1,20-1,36 (m, 40H), 1,36-1,47 (m, 2H), 1,49-1,65 (m, 15 2H), 1,86-1,97 (m, 1H), 2,14-2,23 (m, 1H), 2,26-2,38 (m, 3H), 3,20 (dd, J = 9,1, 7,8 Hz, 1H), 3,26-3,39 (m, 3H), 3,64-3,69 (m, 1H), 3,70 (dd, J = 9,7, 5,7 Hz, 1H), 3,78 (dd, J = 9,7, 5,3 Hz, 1H), 3,87 (dd, J = 11,5, 1,3 Hz, 1H), 3,974,03 (m, 1H), 4,21-4,28 (m, 1H), 4,32 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,44 (dd, J = 8,3, 4,9 Hz, 1H), 4,61-4,70 (m, 5H), 8,10 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) : 5 20 ppm 14,5 (2xCH3), 23,7 (2xCH2), 28,5 (2xCH2), 28,6 (CH2), 30,5-30,8 (14xCH2), 31,1 (CH2), 33,1 (2X- CH2), 34,0 (2xCH2), 47,9 (CH), 51,6 (CH2), 53,5 (CH), 54,4 (CH), 62,7 (CH2), 65,1 (CH2), 69,0 (CH2), 70,9 (CH2), 71,5 (CH), 74,9 (CH), 77,9 (CH), 78,0 (CH), 104,5 (CH), 126,1 (CH), 145,3 (C), 171,7 (C), 175,0 (C), 176,5 (C), 179,2 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 449 (40) 25 [M-2H]2-, 899 (100) [M-H]; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C45H80N5013 898,5753, trouvée 898,5754. Composé 3.7k 30 OH OH 3063730 Le composé 3.7k (solide blanc, 60 mg, 0,09 mmol, 82 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.5k en suivant les protocoles généraux J puis F. 5 Tf = 114-116°C; RMN 1H (500 MHz, CD30D) 5 ppm 0,81-0,94 (m, 2H) ; 1,12-1,28 (m, 6H) ; 1,27-1,38 (m, 2H) ; 1,53-1,76 (m, 7H) ; 1,86-1,98 (m, 1H) ; 2,13-2,23 (m, 1H) ; 2,28 (t, J = 7,7 Hz, 2H) ; 2,31-2,39 (m, 2H) ; 3,20 (dd, J = 9,1, 7,8 Hz, 1H) ; 3,27-3,39 (m, 3H) ; 3,64-3,68 (m, 1H) ; 3,70 (dd, J = 9,6, 5,5 Hz, 1H) ; 3,79 (dd, J = 9,6, 5,3 Hz, 1H) ; 3,87 (dd, J = 11,7, 1,1 Hz, 1H) ; 10 3,96-4,04 (m, 1H) ; 4,21-4,28 (m, 1H) ; 4,32 (d, J = 7,8 Hz, 1H) ; 4,47 (dd, J = 9,1, 4,7 Hz) ; 4,61-4,69 (m, 5H) ; 8,09 (s, 1H) ; RMN 13C (125 MHz, CD30D) : 5 ppm 27,1 (CH2) ; 27,5 (CH2) ; 27,5 (CH2) ; 27,5 (CH2) ; 27,8 (CH2) ; 27,9 (CH2) ; 31,0 (CH2) ; 34,5 (CH2) ; 34,5 (CH2) ; 36,8 (CH2) ; 38,3 (CH2) ; 38,8 (CH) ; 51,6 (CH2) ; 53,0 (CH) ; 54,5 (CH) ; 62,7 (CH2) ; 65,0 (CH2) ; 69,0 15 (CH2) ; 70,8 (CH2) ; 71,5 (CH) ; 74,9 (CH) ; 77,9 (CH) ; 78,0 (CH) ; 104,5 (CH) ; 126,2 (CH) ; 145,3 (C) ; 172,1 (C) ; 174,5 (C) ; 176,4 (C) ; 176,4 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 343 (30) [M-2H]2, 506 (25), 686 (100) [M-H] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C30R48N5013 686,3249, trouvée 686,3229. 20 Composé 3.71 OH COOH NOYrFleY0 r\F-- N ONH 1 HN COOH (C H2)12CH3 OH 25 Le composé 3.71 (solide blanc, 70 mg, 0,09 mmol, 94 °/0) a été obtenu à partir du composé 3.51 en suivant les protocoles généraux J puis F. Tf > 170°C (avec décomposition) ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,23-1,38 (m, 20H), 1,54-1,67 (m, 2H), 1,86-2,03 (m, 1H), 2,13-2,43 (m, 5H), 3,19 (dd, J = 8,9, 7,9 Hz, 1H), 3,25-3,38 (m, 3H), 3063730 76 3,62-3,69 (m, 1H), 3,72 (dd, J = 9,7, 4,8 Hz, 1H), 3,82 (dd, J = 9,7, 5,3 Hz, 1H), 3,84-3,94 (m, 3H), 3,95-4,05 (m, 1H), 4,20-4,28 (m, 1H), 4,31 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,40-4,70 (m, 6H), 8,11 (s, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 28,6 (CH2), 30,4-30,8 (8xCH2), 32,8 5 (CH2), 33,1 (CH2), 36,8 (CH2), 41,9 (CH2), 51,6 (CH2), 53,2 (CH), 54,9 (CH), 62,7 (CH2), 65,1 (CH2), 69,0 (CH2), 70,8 (CH2), 71,5 (CH), 74,9 (CH), 78,0 (CH), 78,0 (CH), 104,5 (CH), 126,3 (CH), 145,3 (C), 172,2 (C), 173,1 (C), 174,5 (C), 175,4 (C), 176,6 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 393 (100) [M-H]2, 787 (80) [M-H]; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C35H61N6014 789,4246, trouvée 10 789,4238. Composé 3.8a COOBn N COOBn H (CH2)12CH3 o o 15 2 Le composé 3.8a (cire blanche, 162 mg, 0,10 mmol, 43 'Vo) a été obtenu à partir du composé 3.3f et du 1,17-diazido-3,6,9,12,15- pentaoxaheptadecane (non décrit) en suivant le protocole général I. Rf = 0,15 (CH2C12/Me0H 96:4) ; RMN 1H (500 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,87 20 (t, J = 6,9 Hz, 6H), 1,18-1,34 (m, 40H), 1,53-1,67 (m, 4H), 1,94-2,08 (m, 2H), 2,13-2,29 (m, 6H), 2,29-2,51 (m, 4H), 3,49-3,66 (m, 18H), 3,79-3,89 (m, 4H), 3,87-4,06 (m, 2H), 4,39-4,53 (m, 4H), 4,53-4,79 (m, 8H), 5,07 (s, 4H), 5,12 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 5,15 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 6,67 (bs, 2H, NH), 7,24-7,39 (m, 20H), 7,45 (s, 2H), 7,73 (bs, 2H, NH) ; RMN 13C (125 MHz, CDCI3) 5 ppm 25 14,2 (2xCH3), 22,8 (2xCH2), 25,7 (2xCH2), 27,1 (2xCH2), 29,4-29,8 (16xCH2), 30,1 (2xCH2), 32,0 (2xCH2), 36,6 (2xCH2), 50,5 (2xCH2), 52,0 (2xCH), 52,6 (2xCH), 64,5 (2xCH2), 66,6 (2xCH2), 67,3 (2xCH2), 69,4 (2xCH2), 69,6 (2xCH2), 70,6 (8xCH2), 123,9 (2xCH), 128,3-128,7 (20xCH), 135,4 (2xC), 135,9 (2xC), 144,2 (2xC), 170,2 (2xC), 171,3 (2xC), 172,6 (2xC), 173,7 (2xC) 3063730 77 ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 721 (30), 1072 (100), 1680 (75) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C901-1133N10019 1657,9748, trouvée 1657,9785. Composé 3.9a COOH C001-1 NH H (CE-12)12C113 2 5 o o Le composé 3.9a (solide blanc, 107 mg, 0,08 mmol, 95 °/0) a été obtenu 10 à partir du composé 3.8a en suivant le protocole général Dl. Tf = 74-76°C; RMN 1H (500 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,9 Hz, 6H), 1,22-1,37 (m, 40H), 1,56-1,66 (m, 4H), 1,85-2,00 (m, 2H), 2,13-2,25 (m, 2H), 2,24-2,32 (m, 4H), 2,29-2,42 (m, 4H), 3,53-3,66 (m, 16H), 3,68-3,75 (m, 2H), 3,75-3,83 (m, 2H), 3,89 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 4,37-4,51 (m, 2H), 4,57 (t, J = 15 4,9 Hz, 4H), 4,59-4,69 (m, 6H), 8,04 (s, 2H) ; RMN 13C (125 MHz, CD30D) 5 ppm 14,5 (2xCH3), 23,7 (2xCH2), 26,8 (2xCH2), 28,1 (2xCH2), 29,3-29,7 (16xCH2), 31,1 (2xCH2), 33,1 (2xCH2), 36,8 (2xCH2), 51,4 (2xCH2), 52,2 (2xCH), 54,6 (2xCH), 65,1 (2xCH2), 70,3 (2xCH2), 70,9 (2xCH2), 71,4-71,5 (8xCH2), 126,0 (2xCH), 145,4 (2xC), 171,9 (2xC), 174,9 (2xC), 176,4 (2xC), 20 176,4 (2xC) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 647 (100) [M-2H]2- ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C62H109N10019 1297,7870, trouvée 1297,7860. Exemple 5: Composés 4.1 à 4.6 3063730 78 CO2Bn BnO2C CO2Bn H BocHN H BnO2C.\ N BnO2C NHBoc CO2Bn e CO2Bn H 1 iii, iv CO2Bn N CO2Bn H BnO2C HN 4.3 HO2C 4.1 H BnO2C\ N BnO2C 4.2 j. H-D-Glu(OBn)-0Bn.p-tosylate (2 équiv.), TBTU (1,2 équiv.), DIEA (5 équiv.), DMF ; ii. H-D-Glu(OBn)-0Bn.p-tosylate (3 équiv.), TBTU (1,2 équiv.), 5 DIEA (10 équiv.), DMF ; iii. TFA, CH2Cl2 ; iv. CH3(CH2)rICOCI, DMAP, pyridine, CH2Cl2 ; y. Pd/C 5%, THF. Composé 4.1 10 3063730 79 0 COOBn BnO0C 1'1 COOBn H NHBoc L'ensemble des réactifs, acide N-Boc-L-aspartique 4-benzyl ester (2,00 g, 6,19 mmol), H-D-Glu(OBn)-0Bn.p-tosylate (6,18 g, 12,37 mmol, 2 équiv.), 5 TBTU (2,39 g, 7,43 mmol, 1,2 équiv.) et DIEA (4,0 g, 30,9 mmol, 5 équiv.), est solubilisé dans du DMF (80 mL). Après 16 h d'agitation à TA, le milieu réactionnel est dilué avec de l'eau et extrait à l'AcOEt. Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution saturée de NaHCO3, à l'eau, avec une solution aqueuse saturée de NaCI puis séchées sur MgSO4 10 et concentrées sous vide. Le résidu est dissous dans un minimum de CH2Cl2 et le produit est précipité avec de l'éther à froid. Le précipité est récupéré par filtration sur Buchner en utilisant un papier filtre pour donner 2,07 g d'un solide blanc avec 53% de rendement. Rf = 0,44 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 102 °C ; RMN 1H (400 MHz, 15 CDCI3) 5 ppm 1,44 (s, 9H), 1,95-2,06 (m, 1H), 2,18-2,47 (m, 3H), 2,72 (dd, J = 17,0, 5,9 Hz, 1H), 3,01 (dd, J = 17,1, 4,0 Hz, 1H), 4,50-4,59 (m, 1H), 4,59- 4,66 (m, 1H), 5,05-5,20(m, 6H), 5,63(d, J= 8,1 Hz, NH), 7,16(d, J= 7,3 Hz, NH), 7,28-7,41 (m, 15H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 27,2 (CH2), 28,2 (3xCH3), 30,0 (CH2), 35,8 (CH2), 50,6 (CH), 51,8 (CH), 66,5 (CH2), 66,8 20 (CH2), 67,3 (CH2), 80,7 (C), 128,1-128,7 (15xCH), 135,1 (C), 135,4 (C), 135,7 (C), 155,6(c), 170,7 (C), 171,1 (C), 171,5(c), 172,4 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 655 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C35H40N209Na 655,2632 [M+Na], trouvée 655,2624. 25 Composé 4.2 0 H COOBn BnO0C N NCOOBn H Bn00C 0 NHBoc 30 L'ensemble des réactifs, acide N-Boc-L-aspartique (1,00 g, 4,28 mmol), H-D-Glu(OBn)-0Bn.p-tosylate (6,22 g, 12,84 mmol, 3 équiv.), TBTU (3,3 g, 3063730 10,27 mmol, 1,2 équiv.) et DIPEA (5,54 g, 42,8 mmol, 10 équiv.), est solubilisé dans du DMF (60 mL). Après 16 h d'agitation à TA, le milieu réactionnel est dilué avec de l'eau et extrait à l'AcOEt. Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution saturée de NaHCO3, à 5 l'eau, avec une solution aqueuse saturée de NaCI puis séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide. Le résidu est dissous dans un minimum de CH2Cl2 et le produit est précipité avec de l'éther à froid. Le précipité est récupéré par filtration sur Buchner en utilisant un papier filtre pour donner 3,13 g d'un solide blanc avec 86% de rendement. 10 Rf = 0,56 (CH2C12/AcOEt 8:2) ; Tf = 89 °C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 1,43 (s, 9H), 1,93-2,05 (m, 2H), 2,15-2,28 (m, 2H), 2,29-2,45 (m, 4H), 2,47-2,56 (m, 1H), 2,79-2,89 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 4,54-4,62 (m, 2H), 5,07 (s, 4H), 5,11(s, 4H), 5,96 (d, J = 5,5 Hz, NH), 6,78 (d, J = 7,4 Hz, NH), 7,387,27 (m, 20H), 7,41 (d, J = 7,0 Hz, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 15 26,8 (CH2), 27,0 (CH2), 28,4 (3xCH3), 30,2 (CH2), 30,3 (CH2), 37,5 (CH2), 51,5 (CH), 52,0 (CH), 52,1 (CH), 66,6 (CH2), 66,7 (CH2), 67,4 (CH2), 67,6 (CH2), 80,6 (C), 128,3-128,8 (20xCH), 135,2 (C), 135,3 (C), 135,8 (C), 135,9 (C), 155,9 (C), 170,8 (2xC), 171,4 (C), 171,7 (C), 172,5 (C), 172,6 (C) ; Masse (ESI-) m/z (%) 850,4 [M-H], 886,4 (100) [M-FCI]- ; SMHR (ESI-) m/z 20 calculée pour C47H52N3012 850,3551 [M-H], trouvée 850,3510. Composé 4.3a 0 COOBn BnO0C N COOBn 25 O. NH H (CH2)8cH3 Le composé 4.3a (solide blanc, 431 mg, 0,63 mmol, 79 'Vo) a été obtenu à partir du composé 4.1 en suivant les protocoles généraux G puis C 30 Rf = 0,30 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 87 °C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J= 6,9 Hz, 3H), 1,15-1,36 (m, 12H), 1,50-1,64 (m, 2H), 3063730 81 1,94-2,05 (m, 1H), 2,14 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,14-2,45 (m, 3H), 2,76-2,92 (m, 2H, H3'), 4,59-4,67 (m, 1H), 4,96-5,02 (m, 1H), 5,03-5,16 (m, 6H), 7,13 (d, J = 7,7 Hz, NH), 7,20-7,36 (m, 15H), 7,60 (d, J = 7,5 Hz, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 13,9 (CH3), 22,5 (CH2), 25,3 (CH2), 26,7 (CH2), 29,8 5 (CH2), 29,0-29,3 (4xCH2), 31,7 (CH2), 35,8 (CH2), 36,0 (CH2), 49,0 (CH), 51,7 (CH), 66,2 (CH2), 66,4 (CH2), 66,9 (CH2), 127,9-128,4 (15xCH), 135,1 (C), 135,4 (C), 135,6 (C), 170,6 (C), 170,8 (C), 170,9 (C), 172,2 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 687 [M+H], 709 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C401-151N208Na 709,3465 [M+Na], trouvée 709,3461. 10 Composé 4.3b 0 COOBn BnO0C NCOOBn O. NH H 15 (CH2)10CH3 Le composé 4.3b (solide blanc, 424 mg, 0,59 mmol, 75 'Vo) a été obtenu à partir du composé 4.1 en suivant les protocoles généraux G puis C. Rf = 0,31 (cyclohexane/AcOEt7:3) ; Tf = 75 °C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J= 6,8 Hz, 3H), 1,15-1,36 (m, 16H), 1,50-1,64 (m, 2H), 20 1,93-2,04 (m, 1H), 2,13 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,14-2,45 (m, 3H), 2,73-2,93 (m, 2H), 4,57-4.66 (m, 1H), 4,91-5,00 (m, 1H), 5,01-5,16 (m, 6H), 7,01 (bs, NH), 7,22-7,36 (m, 15H), 7,50 (bs, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,0 (CH3), 22,5 (CH2), 25,4 (CH2), 26,8 (CH2), 29,0-29,6 (6xCH2), 29,9 (CH2), 31,8 (CH2), 35,7 (CH2), 36,1 (CH2), 49,1 (CH), 51,7 (CH), 66,3 (CH2), 66,6 25 (CH2), 67,0 (CH2), 127,9-128,5 (15xCH), 135,2 (C), 135,4 (C), 135,7 (C), 170,5 (C), 171,0 (2xC), 172,3 (C), 173,6 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 715 [M+H], 737 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C42H54N208Na 737.3778 [M+Na], trouvée 737,3781. 30 Composé 4.3c 3063 730 82 0 COOBn BnO0C N COOBn Oy NH H (CE-12)12C113 Le composé 4.3c (solide blanc, 523 mg, 0,71 mmol, 86 %) a été obtenu à partir du composé 4.1 en suivant les protocoles généraux G puis C. 5 Rf = 0,34 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 75 °C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,16-1,36 (m, 20H), 1,49-1,65 (m, 2H), 1,93-2,04 (m, 1H), 2,13 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 2,16-2,45 (m, 3H), 2,74-2,91 (m, 2H), 4,57-4,65 (m, 1H), 4,95-5,02 (m, 1H), 5,02-5,14 (m, 6H), 7,17 (d, J = 8,4 Hz, NH), 7,20-7,34 (m, 15H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, NH) ; RMN 13C (100 MHz, 10 CDCI3) 5 ppm 14,0 (CH3), 22,6 (CH2), 25,4 (CH2), 26,7 (CH2), 29,0-29,6 (8xCH2), 29,9 (CH2), 31,8 (CH2), 35,8 (CH2), 36,1 (CH2), 49,1 (CH), 51,8 (CH), 66,3 (CH2), 66,5 (CH2), 67,0 (CH2), 127,9-128,5 (15xCH), 135,2 (C), 135,4 (C), 135,7 (C), 170,7 (C), 170,9 (2xC), 172,3 (C), 173,7 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 743 [M+H], 765 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée 15 pour C44H58N208Na 765,4091 [M+Na], trouvée 765,4079. Composé 4.3d COOBn BnO0C N COOBn 20 O. NH H (cH2)14cH3 Le composé 4.3d (solide blanc, 523 mg, 0,68 mmol, 89 'Vo) a été obtenu à partir du composé 4.1 en suivant les protocoles généraux G puis C. Rf = 0,37 (cyclohexane/AcOEt 7:3) ; Tf = 85-86°C; RMN 1H (400 MHz, 25 CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J= 6,8 Hz, 3H), 1,15-1,35 (m, 24H), 1,49-1,63 (m, 2H), 1,92- 2,04 (m, 1H), 2,12 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,13-2,45 (m, 3H), 2,73-2,93 (m, 2H), 4,57-4,65 (m, 1H), 4,92-5,01 (m, 1H), 5,01-5,14 (m, 6H), 7,17 (bs, NH), 7,19-7,36 (m, 15H), 7,61 (bs, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,0 (CH3), 22,5 (CH2), 25,4 (CH2), 26,7 (CH2), 29,0-29,6 (11xCH2), 29,9 (CH2), 30 31,8 (CH2), 35,7 (CH2), 36,1 (CH2), 49,1 (CH), 51,7 (CH), 66,1 (CH2), 66,5 (CH2), 67,0 (CH2), 127,9-128,5 (15xCH), 135,2 (C), 135,4 (C), 135,7 (C), 3063730 83 170,6 (C), 171,0 (2xC), 172,2 (C), 173,5 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 793 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C46H62N208Na 793,4404 [M+Na], trouvée 793,4420. 5 Composé 4.4a H BnO0C N Bn00C 0 HN COOBn N COOBn H 0 (CE-12)8C1-13 10 Le composé 4.4a (solide blanc, 437 mg, 0,48 mmol, 82 'Vo) a été obtenu à partir du composé 4.2 en suivant les protocoles généraux G puis C. Rf = 0,27 (CH2C12/AcOEt 8:2) ; Tf = 130-133 °C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J= 6,8 Hz, 3H), 1,18-1,38 (m, 12H), 1,56-1,67 (m, 2H), 1,94-2,06 (m, 2H), 2,16-2,28 (m, 4H), 2,30-2,48 (m, 5H), 2,88 (dd, J = 14,9, 15 3,2 Hz, 1H), 4,52-4,63 (m, 2H), 4,73-4,80 (m, 1H), 5,04-5,17 (m, 8H), 6,93 (d, J = 7,5 Hz, NH), 7,13 (d, J = 7,5 Hz, NH), 7,27-7,38 (m, 10H), 7,51 (d, J = 7,6 Hz, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,1 (CH3), 22,7 (CH2), 25,5 (CH2), 26,6 (CH2), 26,8 (CH2), 29,2-29,5 (3xCH2), 30,1 (CH2), 30,2 (CH2), 31,9 (2xCH2), 36,4 (CH2), 37,1 (CH2), 49,9 (CH), 51,9 (CH), 52,1 (CH), 66,5 20 (2xCH2), 67,2 (CH2), 67,4 (CH2), 128,1-128,7 (20xCH), 135,2 (C), 135,3 (C), 135,8 (2xC), 170,0 (C), 171,1 (C), 171,3 (C), 171,8 (C), 172,3 (C), 172,5 (C), 174,1 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 907 [M+H] , 929 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C52H63N3011Na 928,4360 [M+Na], trouvée 928,4380. 25 Composé 4.4b H BnO0C N Bn00C 0 0 COOBn N7 COOBn H HN 0 30 ( H2)10CH3 3063730 84 Le composé 4.4b (solide blanc, 430 mg, 0,46 mmol, 78 %) a été obtenu à partir du composé 4.2 en suivant les protocoles généraux G puis C Rf = 0,33 (CH2C12/AcOEt 8:2) ; Tf = 112-114°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,87 (t, J= 6,9 Hz, 3H), 1,17-1,37 (m, 16H), 1,56-1,67 (m, 2H), 5 1,94-2,07 (m, 2H), 2,16-2,28 (m, 4H), 2,30-2,47 (m, 5H), 2,87 (dd, J = 14,9, 3,3 Hz, 1H), 4,52-4,63 (m, 2H), 4,74-4,80 (m, 1H), 5,04-5,17 (m, 8H), 6,96 (d, J = 7,5 Hz, NH), 7,14 (d, J = 7,5 Hz, NH), 7,27-7,38 (m, 10H), 7,52 (d, J = 7,6 Hz, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,1 (CH3), 22,6 (CH2), 25,5 (CH2), 26,7 (2xCH2), 29,2-29,7 (5xCH2), 30,0 (CH2), 30,2 (CH2), 31,8 10 (2xCH2), 36,3 (CH2), 37,1 (CH2), 49,9 (CH), 51,8 (CH), 52,0 (CH), 66,4 (2xCH2), 67,1 (CH2), 67,2 (CH2), 128,0-128,6 (20xCH), 135,1 (C), 135,2 (C), 135,7 (C), 135,8 (C), 170,9 (C), 171,0 (C), 171,3 (C), 171,7 (C), 172,3 (C), 172,4 (C), 174,0 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 935 [M+H], 957 (100) [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C54H67N3011Na 956,4673 [M+Na], trouvée 15 956,4682. Composé 4.4c H HN 0 COOBn BnO0C N COOBn 20 Bn00C 0 H 0 (cH2)12cH3 Le composé 4.4c (solide blanc, 437 mg, 0,45 mmol, 77 'Vo) a été obtenu à partir du composé 4.2 en suivant les protocoles généraux G puis C. Rf = 0,39 (CH2C12/AcOEt 8:2) ; Tf = 112-116 °C ; RMN 1H (400 MHz, 25 CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,16-1,35 (m, 20H), 1,56-1,65 (m, 2H), 1,93-2,06 (m, 2H), 2,15-2,28 (m, 4H), 2,30-2,47 (m, 5H), 2,87 (dd, J = 14,9, 3,0 Hz, 1H), 4,51-4,63 (m, 2H), 4,72-4,80 (m, 1H), 5,05-5,14 (m, 8H), 6,94 (d, J = 7,4 Hz, NH), 7,11 (d, J = 7,5 Hz, NH), 7,27-7,38 (m, 10H), 7,50 (d, J = 7,7 Hz, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 22,8 30 (CH2), 25,6 (CH2), 26,7 (CH2), 26,9 (CH2), 29,3-29,9 (7xCH2), 30,3 (CH2), 30,4 (CH2), 32,1 (2xCH2), 36,6 (CH2), 37,2 (CH2), 49,9 (CH), 52,2 (CH), 52,3 3063730 (CH), 66,7 (2xCH2), 67,4 (CH2), 67,6 (CH2), 128,3-128,9 (20xCH), 135,2 (C), 135,3 (C), 135,9 (2xC), 171,2 (2xC), 171,3 (C), 171,9 (C), 172,5 (C), 172,6 (C), 174,1 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 963 (100) [M+H], 985 [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C56H71N3011Na 984,4986 [M+Na], trouvée 5 984,4996. Composé 4.4d H O COOBn BnO0C N N COOBn Bn00C 0 HN 10 (CE-12)14C113 Le composé 4.4d (solide blanc, 436 mg, 0,44 mmol, 75 'Vo) a été obtenu à partir du composé 4.2 en suivant les protocoles généraux G puis C. 15 Rf = 0.42 (CH2C12/AcOEt 8:2) ; Tf = 120-124 °C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J= 7,0 Hz, 3H), 1,19-1,35 (m, 24H), 1,55-1,66 (m, 2H), 1,94-2,07 (m, 2H), 2,16-2,28 (m, 4H), 2,29-2,50 (m, 5H), 2,88 (dd, J = 14,9, 3,3 Hz, 1H), 4,52-4,64 (m, 2H), 4,73-4,81 (m, 1H), 5,04-5,17 (m, 8H), 6,99 (d, J = 7,5 Hz, NH), 7,16 (d, J = 7,5 Hz, NH), 7,27-7,38 (m, 20H), 7,53 (d, J = 7,6 20 Hz, NH) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 22,8 (CH2), 25,6 (CH2), 26,7 (CH2), 26,9 (CH2), 29,3-29,9 (11xCH2), 30,3 (CH2), 30,4 (CH2), 32,1 (2xCH2), 36,6 (CH2), 37,2 (CH2), 49,9 (CH), 52,2 (2xCH), 66,6 (CH2), 66,7 (CH2), 67,4 (CH2), 67,6 (CH2), 128,3-128,8 (20xCH), 135,2 (C), 135,3 (C), 135,8 (C), 135,9 (C), 171,2 (2xC), 171,3 (C), 171,9 (C), 172,5 (C), 172,6 25 (C), 174,2 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 991 (100) [M+H], 1013 [M+Na] ; SMHR (ESI+) m/z calculée pour C58H75N3011 Na 1012,5299 [M+Na], trouvée 1012,5296. Composé 4.5a 30 3 0 6 3 73 0 86 0 COOH HOOC N COOH H 0 NH (CH2)8CH3 Le composé 4.5a (solide blanc, 175 mg, 0,42 mmol, 72 %) a été obtenu à partir du composé 4.3a en suivant le protocole général D2. 5 Tf = 160-162°C; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,22-1,39 (m, 12H), 1,55-1,68 (m, 2H), 1,90-2,02 (m, 1H), 2,14-2,24 (m, 1H), 2,25 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,36-2,42 (m, 2H), 2,66 (dd, J = 16,7, 7,3 Hz, 1H), 2,85 (dd, J = 16,7, 6,4 Hz, 1H), 4,43 (dd, J = 8,8, 4,8 Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 7,3, 6,4 Hz, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, Me0D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 10 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 33,0 (CH2), 30,2-31,1 (4xCH2), 36,7 (CH2), 36,9 (CH2), 51,1 (CH), 53,2 (CH), 173,0 (C), 173,8 (C), 174,5 (C), 176,4 (C), 176,5 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 397 (100) [M-F], 415 [M-H], 437 [M+Na2H]- ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C19H31N208 415,2080 [M-H], trouvée 415,2093. 15 Composé 4.5b 0 COOH HOOC N 000H Oy NH H 20 (0H2)100H3 Le composé 4.5b (solide blanc, 190 mg, 0,43 mmol, 77 'Vo) a été obtenu à partir du composé 4.3b en suivant le protocole général D2. Tf = 151 °C; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,7 Hz, 3H), 1,20-1,41 (m, 16H), 1,55-1,68 (m, 2H), 1,90-2,02 (m, 1H), 2,14-2,24 (m, 1H), 25 2,25 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,36-2,42 (m, 2H), 2,66 (dd, J = 16,7, 7,2 Hz, 1H), 2,85 (dd, J = 16,7, 6,5 Hz, 1H), 4,43 (dd, J = 8,7, 4,8 Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 7,2, 6,5 Hz, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, Me0D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 30,2-31,1 (6xCH2), 33,06 (CH2), 36,7 (CH2), 36,9 (CH2), 51,1 (CH), 53,2 (CH), 173,0 (C), 173,8 (C), 174,5 (C), 176,5 (2xC) ; 30 Masse (ESI-) m/z ((Vo) 425 [M-F], 443 (100) [M-H], 465 [M+Na-2H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C21H35N208 443,2393 [M-H], trouvée 443,2396. 3063 730 87 Composé 4.5c 0 COOH HOOC(N COOH H 0 NH (cH2)12cH3 Le composé 4.5c (solide blanc, 194 mg, 0,41 mmol, 76 %) a été obtenu à partir du composé 4.3c en suivant le protocole général D2. Tf = 145-148°C; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 10 3H), 1,20-1,40 (m, 20H), 1,56-1,67 (m, 2H), 1,91-2,02 (m, 1H), 2,14-2,24 (m, 1H), 2,25 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,36-2,43 (m, 2H), 2,66 (dd, J = 16,7, 7,2 Hz, 1H), 2,85 (dd, J = 16,7, 6,4 Hz, 1H), 4,43 (dd, J = 8,8, 4,8 Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 7,2, 6,4 Hz, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, Me0D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 30,2-31,1 (10xCH2), 33,1 (CH2), 36,7 (CH2), 15 36,9 (CH2), 51,1 (CH), 53,2 (CH), 173,0 (C), 173,8 (C), 174,5 (C), 176,5 (2xC) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 453 [M-F], 471 (100) [M-H], 493 [M+Na-2H]; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C23H39N208 471,2706 [M-H], trouvée 471,2686. 20 Composé 4.5d 0 COOH HOOC N COOH H Oy NH (CH2)1 4CH3 25 Le composé 4.5d (solide blanc, 243 mg, 0,49 mmol, 93 'Vo) a été obtenu à partir du composé 4.3d en suivant le protocole général D2. Tf = 138-141°C; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,23-1,38 (m, 24H), 1,56-1,67 (m, 2H), 1,91-2,02 (m, 1H), 2,15-2,24 (m, 30 1H), 2,25 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,36-2,43 (m, 2H), 2,66 (dd, J = 16,6, 7,2 Hz, 1H), 2,86 (dd, J = 16,6, 6,3, 1H), 4,43 (dd, J = 8,8, 4,8, Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 5 3063730 88 7,2, 6,3 Hz, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, Me0D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 30,2-31,1 (12xCH2), 33,1 (CH2), 36,7 (CH2), 36,9 (CH2), 51,1 (CH), 53,2 (CH), 173,0 (C), 173,9 (C), 174,5 (C), 176,5 (2xC) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 481 [M-F], 499 (100) [M-H], 521 [M+Na-2H] ; SMHR 5 (ESI-) m/z calculée pour C25H43N208 499,3019 [M-H], trouvée 499,3027. Composé 4.6a H HN 0 COOH HOOC N EiN7 COOH 0 10 HOOC 0 (CE-12)8C1-13 Le composé 4.6a (solide blanc, 221 mg, 0,40 mmol, 93 'Vo) a été obtenu à partir du composé 4.4a en suivant le protocole général D2. 15 Tf = 170-175°C; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,21-1,37 (m, 12H), 1,54-1,66 (m, 2H), 1,87-2,02 (m, 2H), 2,13-2,28 (m, 4H), 2,35-2,44(m, 4H), 2,63 (dd, J= 15,1, 8,0 Hz, 1H), 2,80 (dd, J= 15,1, 6,1 Hz, 1H), 4,40-4,48 (m, 2H), 4,80 (dd, J = 8,0 6,1 1H) ; RMN 13C (100 MHz, Me0D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 28,0 (CH2), 20 30,4 (2xCH2), 30,5 (CH2), 30,6 (CH2), 31,1 (CH2), 31,2 (CH2), 33,0 (CH2), 36,9 (CH2), 38,4 (CH2), 51,6 (CH), 53,0 (CH), 53,2 (CH), 172,1 (C), 173,1 (C), 174,6 (C), 175,0 (C), 176,4 (C), 176,5 (2xC) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 544 (100) [M-H], 566 [M+Na-2H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C24H38N3011 544,2506 [M-H], trouvée 544,2514. 25 Composé 4.6b H HOOC N HOOC COOH 1\1 COOH O H HN 0 30 (c1-12)10cl-13 3063730 89 Le composé 4.6b (solide blanc, 247 mg, 0,43 mmol, 98 %) a été obtenu à partir du composé 4.4b en suivant le protocole général D2. Tf = 165-170 °C ; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H) 1,20-1,38 (m, 16H), 1,54-1,66 (m, 2H), 1,88-2,02 (m, 2H), 2,13-2,28 (m, 5 4H), 2,35-2,44(m, 4H), 2,63 (dd, J= 15,1 8,1 Hz, 1H), 2,80 (dd, J= 15,1, 6,1 Hz, 1H), 4,39-4,48 (m, 2H), 4,79 (dd, J = 8,1, 6,1 1H) ; RMN 13C (100 MHz, Me0D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 28,0 (CH2), 28,1 (CH2), 30,3-31,3 (8xCH2), 33,1 (CH2), 36,9 (CH2), 38,4 (CH2), 51,7 (CH), 53,2 (CH), 53,3 (CH), 172,1 (C), 173,1 (C), 174,7 (C), 175,2 (C), 176,5 (C), 176,6 (C) ; 10 Masse (ESI-) m/z ((Vo) 572 [M-H], 594 (100) [M+Na-2H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C26H42N3011 572,2819 [M-H], trouvée 572,2817. Composé 4.6c 15 H 0 COOH HOOC N NC 00H HOOC O H HN 0 (CE-12)12C113 Le composé 4.6c (solide blanc, 208 mg, 0,35 mmol, 80 'Vo) a été obtenu à partir du composé 4.4c en suivant le protocole général D2. 20 Tf = 155-160 °C ; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,22-1,38 (m, 20H), 1,54-1,67 (m, 2H), 1,87-2,02 (m, 2H), 2,13-2,29 (m, 4H), 2,36-2,44(m, 4H), 2,63 (dd, J= 15,0, 8,0 Hz, 1H), 2,81 (dd, J= 15,0, 6,1 Hz, 1H), 4,40-4,48 (m, 2H), 4,77-4,83 (dd, J = 8,0, 6,1, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, Me0D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 28,0 25 (CH2), 31,3-30,3 (10xCH2), 33,1 (CH2), 36,9 (CH2), 38,4 (CH2), 51,6 (CH), 53,0 (CH), 53,2 (CH), 172,1 (C), 173,1 (C), 174,6 (C), 175,0 (C), 176,4 (C), 176,5 (2xC) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 600 (100) [M-H], 622 [M+Na-2H] ; SMHR (ESI-) m/z calculée pour C28H46N3011 600,3132 [M-H] ; trouvée 600,3108. 30 Composé 4.6d 3063 730 o H HOOC N HOOC 0 HN COOH N COOH H 0 (CE-12)14C113 Le composé 4.6d (solide blanc, 208 mg, 0,33 mmol, 75 %) a été obtenu 5 à partir du composé 4.4d en suivant le protocole général D2. Tf = 158-160 °C ; RMN 1H (400 MHz, Me0D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H) , 1,22-1,37 (m, 24H), 1,54-1,66 (m, 2H), 1,85-2,02 (m, 2H), 2,13-2,28 (m, 4H), 2,35-2,44(m, 4H), 2,63 (dd, J= 15,1, 8,0 Hz, 1H), 2,80 (dd, J= 15,1, 6,1 Hz, 1H), 4,42-4,48 (m, 2H), 4,79 (dd, J = 8,0, 6,1 1H) ; RMN 13C (100 MHz, 10 Me0D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (CH2), 26,8 (CH2), 27,9 (CH2), 28,0 (CH2), 30,3-31,3 (12xCH2), 33,1 (CH2), 36,9 (CH2), 38,4 (CH2), 51,7 (CH), 53,1 (CH), 53,2 (CH), 172,1 (C), 173,1 (C), 174,6 (C), 175,0 (C), 176,4 (C), 176,5 (2xC) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 628 (100) [M-H], 650 [M+Na-2H]; SMHR (ESI) m/z calculée pour C301150N3011 628,3445 [M-H]; trouvée 628,3448. 15 Exemple 6: Composés 5.1 à 5.3 o HO STrt NHFmoc 1 0 HOS NHFmoc 5.1 OAc II 11 NHFmoc 5.2 OH OH NH CO2H OH HO2C 3063 730 91 Et3SiH, TFA, CH2Cl2 puis CH3(CH2)n_2CHCH2, DMPA, THF ; Ethylaminomaltoside (acétate), TBTU, DIEA, DMF ; iii. Et2NH, CH2Cl2 ; iv. RCOOH (R = EtO2C(CH2)2CHCO2Me), TBTU, DIEA, DMF ; y. Me0Na, Me0H puis Dowex ; vi. Li0H, THF/H20. 5 Composé 5.1a HOV.\/\s NHFmoc 10 Le composé 5.1a (solide blanc, 1,051 g, 2,06 mmol, 60%) a été obtenu à partir de L-Fmoc-Cys(Trt)-OH et du dodécène en suivant le protocole général L. Rf = 0,16 (CH2C12/Me0H/AcOH 99:0,5:0,5) ; Tf = 66-68°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,17-1,40 (m, 18H), 1,57 15 (m, 2H), 2,56 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,03 (d, J = 4,7 Hz, 2H), 4,24 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 4,63 (m, 1H), 5,65 (d, J = 7,8 Hz, NHFmoc), 7,32 (m, 2H), 7,40 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,60 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 7,76 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 22,8 (CH2), 28,832,1 (9xCH2), 33,1 (CH2), 34,2 (CH2), 47,2 (CH), 53,6 (CH), 67,6 (CH2), 20 120,2 (2xCH), 125,3 (2xCH), 127,3 (2xCH), 127,9 (2xCH), 141,5 (2xC), 143,8 (C), 143,9 (C), 156,1 (C), 175,0 (C) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 512 (100) [M+H] ; HRMS (ESI+) m/z calculée pour C301-142N04S 512,2829, trouvée 512,2823. Composé 5.1b 25 0 HOV.\/\ NHFmoc 3063730 92 Le composé 5.1b (solide blanc, 1,050 g, 1,95 mmol, 57%) a été obtenu à partir de L-Fmoc-Cys(Trt)-OH et du tetradécène en suivant le protocole général L. Rf = 0,16 (CH2C12/Me0H/AcOH 99:0,5:0,5) ; Tf = 71-72°C; RMN 1H 5 (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,17-1,40 (m, 22H), 1,57 (m, 2H), 2,55 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,03 (d, J = 4,3 Hz, 2H), 4,24 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 4,63 (m, 1H), 5,65 (d, J = 7,8 Hz, NHFmoc), 7,31 (m, 2H), 7,40 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 7,60 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 7,76 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,2 (CH3), 22,8 (CH2), 28,8- 10 32,1 (11xCH2), 33,1 (CH2), 34,3 (CH2), 47,2 (CH), 53,6 (CH), 67,6 (CH2), 120,1 (2xCH), 125,2 (2xCH), 127,2 (2xCH), 127,9 (2xCH), 141,4 (2xC), 143,8 (C), 143,9 (C), 156,1 (C), 175,5 (C) ; Masse (ESI-) m/z (%) 316 (100), 538 (40) [M+H]- ; HRMS (ESI-) m/z calculée pour C32H44N04S 538,2991 [M-H], trouvée 538,2970. 15 Composé 5.1c 0 HOV.\/\ NHFmoc 20 Le composé 5.1c (solide blanc, 1,248 g, 2,20 mmol, 64%) a été obtenu à partir de L-Fmoc-Cys(Trt)-OH et de l'hexadécène en suivant le protocole général L. Rf = 0,16 (CH2C12/Me0H/AcOH 99:0,5:0,5) ; Tf = 70°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,14-1,40 (m, 26H), 1,57 (m, 25 2H), 2,56 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,03 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 4,24 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 4,62 (m, 1H), 5,65 (d, J = 7,7 Hz, NHFmoc), 7,31 (m, 2H,), 7,40 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 7,60 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 7,76 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 22,8 (CH2), 28,8-32,1 (13xCH2), 33,1 (CH2), 34,2 (CH2), 47,3 (CH), 53,6 (CH), 67,6 (CH2), 120,2 3063730 93 (2xCH), 125,3 (2xCH), 127,3 (2xCH), 127,9 (2xCH), 141,5 (2xC), 143,8 (C), 143,9 (C), 156,1 (C), 174,9 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 568 (100) [M+H] ; HRMS (ESI+) m/z calculée pour C34H50N04S 568,3455 [M+H], trouvée 568,3451. 5 Composé 5.1d o HO 17 NHFmoc 10 Le composé 5.1d (solide blanc, 1,230 g, 2,07 mmol, 60%) a été obtenu à partir de L-Fmoc-Cys(Trt)-OH et de l'octadécène en suivant le protocole général L. Rf = 0,16 (CH2C12/Me0H/AcOH 99:0,5:0,5) ; Tf = 74°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88(t, J= 6,8 Hz, 3H), 1,13-1,40 (m, 30H), 1,57 (m, 2H), 15 2,56 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 3,03 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 4,24 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 4,62 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,64 (d, J = 7,6 Hz, NHFmoc), 7,32 (m, 2H), 7,40 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,60 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,77 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 22,8 (CH2), 28,932,1 (15xCH2), 33,1 (CH2), 34,2 (CH2), 47,2 (CH), 53,6 (CH), 67,6 (CH2), 20 120,2 (2xCH), 125,3 (2xCH), 127,3 (2xCH), 127,9 (2xCH), 141,5 (2xC), 143,8 (C), 143,9 (C), 156,1 (C), 174,8 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 596 (100) [M+H] ; HRMS (ESI+) m/z calculée pour C36H54NO4S 596,3768 [M+H], trouvée 596,3762. 25 Composé 5.2a OAc OAc 3063730 94 Le composé 5.2a (solide incolore, 1,036 g, 0,87 mmol, 60 %) a été obtenu à partir du composé 5.1a et du 2'-aminoéthy1-4-0-(2,3,4,6-tetra-0- acétyl-a-D-glucopyranosyl)-2,3,6-tri-O-acétyl-13-D-glucopyranoside (non 5 décrit) en suivant le protocole général A. Rf = 0,29 (Cyclohexane/AcOEt 5:5) ; Tf = 84-85°C; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,86 (t, J= 7,0 Hz, 3H), 1,16-1,38 (m, 18H), 1,50-1,62 (m, 2H), 1,99, 1,99, 2,01, 2,01, 2,03, 2,08, 2,11 (s, 21H), 2,45-2,60 (m, 2H), 2,76-2,96 (m, 2H), 3,32-3,44 (m, 1H), 3,46-3,56 (m, 1H), 3,61-3,71 (m, 2H), 3,75-3,84 10 (M, 1H), 3,90-3,98(m, 2H), 4,03 (dd, J= 12,4, 2,2 Hz, 1H), 4,15 (dd, J= 12,2, 4,4 Hz, 1H), 4,18-4,28 (m, 3H), 4,34-4,47 (m, 2H), 4,51 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,52 (dd, J = 12,2, 2,5 Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 9,3, 7,8 Hz, 1H), 4,84 (dd, J = 10,4, 4,0 Hz, 1H), 5,05 (t, J = 9,7 Hz, 1H), 5,23 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 5,35 (dd, J = 10,4, 9,7 Hz, 1H), 5,39 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,77 (s, NH), 6,66 (s, NH), 7,27- 15 7,33 (m, 2H), 7,41-7,47 (m, 2H), 7,59 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,75 (d, J = 7,4 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 20,6-21,1 (7xCH3), 22,8 (CH2), 28,9-32,1 (9xCH2), 32,8 (CH2), 34,8 (CH2), 39,7 (CH2), 47,3 (CH), 54,5 (CH), 61,6 (CH2), 62,7 (CH2), 67,3 (CH2), 68,2 (CH), 68,6 (CH2), 68,7 (CH), 69,5 (CH), 70,2 (CH), 72,3 (CH), 72,6 (2xCH), 75,3 (CH), 95,7 (CH), 100,5 20 (CH), 120,2 (2xCH), 125,2 (CH), 125,3 (CH), 127,2 (2xCH), 127,9 (2xCH), 141,5 (2xC), 143,9 (2xC), 156,0 (C), 169,6 (C), 170,0 (C), 170,1 (C), 170,3 (C), 170,5 (C), 170,7 (3xC) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1196 (100) [M+Na] ; HRMS (ESI+) m/z calculée pour C58H81N2021S 1195,4872 [M+Na], trouvée 1195,4875. 25 Composé 5.2b OAc OAc 3063730 Le composé 5.2b (solide incolore, 708 mg, 0,60 mmol, 63 %) a été obtenu à partir du composé 5.1b et du 2'-aminoéthy1-4-0-(2,3,4,6-tetra-0- acétyl-a-D-glucopyranosyl)-2,3,6-tri-O-acétyl-13-D-glucopyranoside (non 5 décrit) en suivant le protocole général A. Rf = 0,29 (Cyclohexane/AcOEt 5:5) ; Tf = 90-91 °C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,87 (t, J= 7,0 Hz, 3H), 1,18-1,39 (m, 22H), 1,52-1.62 (m, 2H), 2,00, 2,00, 2,02, 2,02, 2,04, 2,09, 2,12 (s, 21H), 2,48-2,60 (m, 2H), 2,77-2,97 (m, 2H), 3,31-3,45 (m, 1H), 3,49-3,58 (m, 1H), 3,62-3,73 (m, 2H), 3,77-3,85 10 (M, 1H), 3,91-3,99(m, 2H), 4,04 (dd, J= 12,4, 2,2 Hz, 1H), 4,16 (dd, J= 12,1, 4,4 Hz, 1H), 4,20-4,28 (m, 3H), 4,35-4,48 (m, 2H), 4,53 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,54 (dd, J = 12,1, 2,5 Hz, 1H), 4,80 (dd, J = 9,3, 7,8 Hz, 1H), 4,85 (dd, J = 10,4, 4,0 Hz, 1H), 5,05 (t, J = 9,7 Hz, 1H), 5,25 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 5,35 (dd, J = 10,4, 9,7 Hz, 1H), 5,39 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,75 (s, NH), 6,66 (s, NH), 7,28- 15 7,34 (m, 2H), 7,3-7,43 (m, 2H), 7,60 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,77 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 20,6-21,1 (7xCH3), 22,8 (CH2), 28,9-32,1 (11xCH2), 32,8 (CH2), 34,7 (CH), 39,7 (CH), 47,3 (CH), 54,5 (CH), 61,6 (CH2), 62,7 (CH2), 67,3 (CH2), 68,1 (CH), 68,6 (CH2), 68,7 (CH), 69,5 (CH), 70,2 (CH), 72,3 (CH), 72,6 (2xCH), 75,3 (CH), 95,7 (CH), 20 100,5 (CH), 120,2 (2xCH), 125,2 (2xCH), 127,2 (2xCH), 127,9 (2xCH), 141,5 (2xC), 143,9 (2xC), 156,0 (C), 169,6 (C), 170,0 (C), 170,1 (C), 170,3 (C), 170,5 (C), 170,7 (3xC) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1201 (100) [M+H] ; HRMS (ESI+) m/z calculée pour C60H85N2021 S 1201.5360 [M+H], trouvée 1201.5359. 25 Composé 5.2c OAc OAc 3063730 96 Le composé 5.2c (solide incolore, 331 mg, 0,27 mmol, 31 %) a été obtenu à partir du composé 5.1c et du 2'-aminoéthy1-4-0-(2,3,4,6-tetra-0- 5 acétyl-a-D-glucopyranosyl)-2,3,6-tri-O-acétyl-13-D-glucopyranoside (non décrit) en suivant le protocole général A. Rf = 0,29 (Cyclohexane/AcOEt 5:5) ; Tf = 98-99°C; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,87 (t, J= 6,8 Hz, 3H), 1,16-1,40 (m, 26H), 1,52-1.62 (m, 2H), 2,00, 2,00, 2,02, 2,02, 2,04, 2,09, 2,12 (s, 21H), 2,49-2,59 (m, 2H), 2,77-2,97 10 (m, 2H), 3,34-3,45 (m, 1H), 3,47-3,58 (m, 1H), 3,62-3,73 (m, 2H), 3,77-3,85 (m, 1H), 3,91-3,99(m, 2H), 4,04 (dd, J= 12,4, 2,2 Hz, 1H), 4,15 (dd, J= 12,1, 4,4 Hz, 1H), 4,20-4,28 (m, 3H), 4,35-4,47 (m, 2H), 4,53 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,54 (dd, J = 12,1, 2,5 Hz, 1H), 4,80 (dd, J = 9,3, 7,9 Hz, 1H), 4,85 (dd, J = 10,4, 4,0 Hz, 1H), 5,05 (t, J = 9,6 Hz, 1H), 5,24 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 5,35 (dd, J 15 = 10,4, 9,6 Hz, 1H), 5,39 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,75 (s, NH), 6,66 (s, NH), 7,28- 7,34 (m, 2H), 7,37-7,43 (m, 2H), 7,60 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,76 (d, J = 7,4 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 20,6-21,1 (7xCH3), 22,8 (CH2), 28,9-32,1 (13xCH2), 32,8 (CH2), 34,7 (CH2), 39,6 (CH2), 47,3 (CH), 54,6 (CH), 61,6 (CH2), 62,6 (CH2), 67,3 (CH2), 68,1 (CH), 68,6 (CH2), 68,7 20 (CH), 69,5 (CH), 70,2 (CH), 72,3 (CH), 72,6 (2xCH), 75,3 (CH), 95,7 (CH), 100,5 (CH), 120,2 (2xCH), 125,2 (2xCH), 127,2 (2xCH), 127,9 (2xCH), 141,5 (2xC), 143,9 (2xC), 156,0 (C), 169,6 (C), 170,0 (C), 170,1 (C), 170,3 (C), 170,5 (C), 170,7 (3xC) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1230 (100) [M+Na] ; HRMS (ESI+) m/z calculée pour C62H89N2021S 1229,5673 [M+H], trouvée 25 1229,5680. Composé 5.2d OAc OAc 3063730 97 Le composé 5.2d (solide incolore, 679 mg, 0,54 mmol, 63 %) a été obtenu à partir du composé 5.1d et du 2'-aminoéthy1-4-0-(2,3,4,6-tetra-0- 5 acétyl-a-D-glucopyranosyl)-2,3,6-tri-O-acétyl-13-D-glucopyranoside (non décrit) en suivant le protocole général A. Rf = 0,29 (Cyclohexane/AcOEt 5:5) ; Tf = 100°C ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 0,88 (t, J= 6,8 Hz, 3H), 1,17-1,40 (m, 30H), 1,52-1.63 (m, 2H), 2,00, 2,00, 2,02, 2,02, 2,04, 2,09, 2,13 (s, 21H), 2,48-2,60 (m, 2H), 2,77-2,97 10 (m, 2H), 3,34-3,46 (m, 1H), 3,47-3,58 (m, 1H), 3,63-3,73 (m, 2H), 3,77-3,85 (m, 1H), 3,91-3,99(m, 2H), 4,04 (dd, J= 12,4, 2,2 Hz, 1H), 4,16 (dd, J= 12,2, 4,4 Hz, 1H), 4,20-4,29 (m, 3H), 4,36-4,48 (m, 2H), 4,52 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,54 (dd, J = 12,2, 2,6 Hz, 1H), 4,80 (dd, J = 9,3, 7,8 Hz, 1H), 4,85 (dd, J = 10,5, 4,0 Hz, 1H), 5,06 (t, J = 9,7 Hz, 1H), 5,25 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 5,36 (dd, J 15 = 10,5, 9,7 Hz, 1H), 5,39 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,75 (s, NH), 6,64 (s, NH), 7,29- 7,34 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,60 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,77 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 5 ppm 14,3 (CH3), 20,5-21,1 (7xCH3), 22,8 (CH2), 28,9-32,1 (15xCH2), 32,8 (CH2), 34,7 (CH2), 39,6 (CH2), 47,3 (CH), 54,6 (CH), 61,6 (CH2), 62,7 (CH2), 67,3 (CH2), 68,1 (CH), 68,6 (CH2), 68,7 20 (CH), 69,5 (CH), 70,2 (CH), 72,3 (CH), 72,6 (2xCH), 75,3 (CH), 95,7 (CH), 100,5 (CH), 120,2 (2xCH), 125,2 (2xCH), 127,2 (2xCH), 127,9 (2xCH), 141,5 (2xC), 143,9 (2xC), 156,0 (C), 169,6 (C), 170,0 (C), 170,1 (C), 170,3 (C), 170,5 (C), 170,7 (3xC) ; Masse (ESI+) m/z ((Vo) 1258 (100) [M+H] ; HRMS (ESI+) m/z calculée pour C64H93N2021S 1257,5986 [M+H], trouvée 25 1257,5984. Composé 5.3a OH OH HO2C 3063730 98 Le composé 5.3a (solide blanc, 50 mg, 0,06 mmol, 35 %) a été obtenu sous forme d'un mélange de diastéréoisomères à partir du composé 5.2a et 5 de l'acide 5-éthoxy-2-(méthoxycarbony1)-5-oxopentandique (non décrit) en suivant les protocoles généraux B, puis A, J et enfin F. Tf = 96-98°C; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,21-1,44 (m, 18H), 1,53-1,63 (m, 2H), 1,70-1,82 (m, 1H), 1,84-1,98 (m, 1H), 2,08-2,22 (m, 2H), 2,34-2,43 (m, 2H), 2,52-2,60 (m, 2H), 2,70-2,89 (m, 10 1H), 2,90-3,07 (m, 1H), 3,22-3,31 (m, 2H), 3,33-3,43 (m, 2H), 3,46 (dd, J = 9,8, 3,8 Hz, 1H), 3,48-3,58 (m, 2H), 3,58-3,73 (m, 5H), 3,77-3,95 (m, 4H), 4,29-4,35(m, 1H), 4,46-4,58(m, 1H), 5,16(d, J = 3,7 Hz, 1H) ; RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (2xCH2), 24,7-25,6 (CH2), 29,8-30,8 (9xCH2), 32,1-32,3 (CH2), 33,0 (CH2), 33,0-33,2 (CH2), 34,3-34,8 (CH2), 40,6- 15 40,8 (CH2), 52,0-52,5 (CH), 54,4-55,0 (CH), 62,0-62,2 (CH2), 62,7 (CH2), 69,1-69,4 (CH2), 71,4 (CH), 74,1 (CH), 74,6-74,7 (CH), 74,7 (CH), 75,0 (CH), 76,4-76,6 (CH), 77,5-77,7 (CH), 81,0-81,3 (CH), 102,8 (CH), 104,1-104,4 (CH), 171,3-171,6 (C), 172,6-172,8 (C), 172,9-173,2 (C), 176,3-176,5 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 384 (25) [M-CO2H]2-, 813 (100) [M-H] ; HRMS (ESI-) 20 m/z calculée pour C35H61N2017S 813,3686 [M-H], trouvée 813,3651. Composé 5.3b 25 HO2C Le composé 5.3b (solide blanc, 52 mg, 0,06 mmol, 26 `)/0) a été obtenu sous forme d'un mélange de diastéréoisomères à partir du composé 5.2b et OH OH 3063730 99 de l'acide 5-éthoxy-2-(méthoxycarbonyI)-5-oxopentanoïque (non décrit) en suivant les protocoles généraux B, puis A, J et enfin F. Tf > 130°C (décomposition) ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,21-1,44 (m, 22H), 1,53-1,63 (m, 2H), 1,72-1,83 (m, 1H), 5 1,82-2,00 (m, 1H), 2,07-2,23 (m, 2H), 2,35-2,45 (m, 2H), 2,52-2,61 (m, 2H), 2,70-2,90 (m, 1H), 2,90-3,07 (m, 1H), 3,22-3,30 (m, 2H), 3,33-3,43 (m, 2H), 3,43-3,48 (m, 1H), 3,48-3,58 (m, 2H), 3,58-3,73 (m, 5H), 3,77-3,95 (m, 4H), 4,29-4,35(m, 1H), 4,46-4,58(m, 1H), 5,16(d, J= 3,7 Hz, 1H). RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,4 (CH3), 23,7 (2xCH2), 24,7-25,6 (CH2), 29,8-30,8 10 (11xCH2), 32,1-32,3 (CH2), 33,0 (CH2), 33,0-33,2 (CH2), 34,3-34,8 (CH2), 40,6-40,8 (CH2), 52,0-52,5 (CH), 54,4-55,0 (CH), 62,0-62,2 (CH2), 62,7 (CH2), 69,1-69,4 (CH2), 71,5 (CH), 74,1 (CH), 74,6 (CH), 74,7 (CH), 75,0 (CH), 76,4-76,6 (CH), 77,6-77,7 (CH), 81,0-81,1 (CH), 102,9 (CH), 104,2104,4 (CH), 171,0-171,7 (C), 172,6-172,8 (C), 172,9-173,2 (C), 176,3-176,5 15 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 841 (100) [M-H]; HRMS (ESI-) m/z calculée pour C37H65N2017S 841,4004 [M-H], trouvée 841,4025. Composé 5.3c 20 HO2C OH OH Le composé 5.3c (solide blanc, 82 mg, 0,09 mmol, 41 'Vo) a été obtenu 25 sous forme d'un mélange de diastéréoisomères à partir du composé 5.2c et de l'acide 5-éthoxy-2-(méthoxycarbonyI)-5-oxopentanoïque (non décrit) en suivant les protocoles généraux B, puis A, J et enfin F. Tf > 145°C (décomposition) ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,21-1,44 (m, 26H), 1,53-1,63 (m, 2H), 1,72-1,82 (m, 1H), 3063 730 1,82-2,00 (m, 1H), 2,08-2,23 (m, 2H), 2,32-2,45 (m, 2H), 2,52-2,61 (m, 2H), 2,70-2,90 (m, 1H), 2,90-3,07 (m, 1H), 3,22-3,31 (m, 2H), 3,33-3,43 (m, 2H), 3,46 (dd, J = 9,7, 3,7 Hz, 1H), 3,48-3,58 (m, 2H), 3,58-3,74 (m, 5H), 3,783,95 (m, 4H), 4,30-4,35 (m, 1H), 4,46-4,57 (m, 1H), 5,16 (d, J = 3,7 Hz, 1H). 5 RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,5 (CH3), 23,7 (2xCH2), 24,7-25,6 (CH2), 29,8-30,9 (13xCH2), 32,1-32,3 (CH2), 33,0 (CH2), 33,0-33,2 (CH2), 34,2-34,7 (CH2), 40,6-40,9 (CH2), 52,0-52,5 (CH), 54,3-54,9 (CH), 61,9-62,1 (CH2), 62,7 (CH2), 69,0-69,4 (CH2), 71,4 (CH), 74,1 (CH), 74,6 (CH), 74,7 (CH), 75,0 (CH), 76,4-76,5 (CH), 77,6 (CH), 81,0-81,2 (CH), 102,8 (CH), 10 104,1-104,3 (CH), 171,0-171,7 (C), 172,6-172,8 (C), 172,9-173,2 (C), 176,3- 176,5 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 412 (25) [M-CO2H]2-, 869 (100) [M-H] ; HRMS (ESI-) m/z calculée pour C39H69N2017S 869,4317 [M-H], trouvée 869,4340. Composé 5.3d 15 HO2C OH OH 20 Le composé 5.3d (solide blanc, 81 mg, 0,09 mmol, 30 'Vo) a été obtenu sous forme d'un mélange de diastéréoisomères à partir du composé 5.2d et de l'acide 5-éthoxy-2-(méthoxycarbonyI)-5-oxopentanoïque (non décrit) en suivant les protocoles généraux B, puis A, J et enfin F. Tf > 155 °C (décomposition) ; RMN 1H (400 MHz, CD30D) 5 ppm 0,90 25 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,21-1,43 (m, 30H), 1,53-1,63 (m, 2H), 1,71-1,82 (m, 1H), 1,86-1,98 (m, 1H), 2,07-2,22 (m, 2H), 2,32-2,43 (m, 2H), 2,52-2,60 (m, 2H), 2,69-2,90 (m, 1H), 2,90-3,07 (m, 1H), 3,22-3,30 (m, 2H), 3,33-3,43 (m, 2H), 3,45 (dd, J = 9,7, 3,7 Hz, 1H), 3,48-3,58 (m, 2H), 3,58-3,74 (m, 5H), 3,773,95 (m, 4H), 4,29-4,35 (m, 1H), 4,46-4,57 (m, 1H), 5,17 (d, J = 3,5 Hz, 1H). 3063730 101 RMN 13C (100 MHz, CD30D) 5 ppm 14,5 (CH3), 23,7 (2xCH2), 24,7-25,6 (CH2), 29,8-30,9 (15xCH2), 32,1-32,3 (CH2), 33,0 (CH2), 33,0-33,2 (CH2), 34,3-34,7 (CH2), 40,6-40,9 (CH2), 52,0-52,5 (CH), 54,4-54,9 (CH), 61,9-62,2 (CH2), 62,7 (CH2), 69,0-69,4 (CH2), 71,5 (CH), 74,1 (CH), 74,6 (CH), 74,7 5 (CH), 75,0 (CH), 76,4-76,6 (CH), 77,6 (CH), 81,0-81,2 (CH), 102,7-102,9 (CH), 104,1-104,4 (CH), 171,1-171,7 (C), 172,6-172,8 (C), 172,9-173,2 (C), 176,3-176,5 (C) ; Masse (ESI-) m/z ((Vo) 426 (40) [M-CO2H]2-, 898 (100) [M-H]- ; HRMS (ESI-) m/z calculée pour C411-173N2017S 897,4630 [M-H], trouvée 897,4646. 10 Exemple 7: Tests d'absorbance à 280 nm des molécules de l'invention Les molécules de l'invention ont été testées et comparées en utilisant BmrA et AcrB, 2 protéines membranaires polytopiques bactériennes. BmrA 15 est caractérisée par une topologie fonctionnelle sensible à l'extraction avec des détergents. BmrA est une protéine membranaire polytopique organisée en 3 domaines, cytosolique, membranaire et extracellulaire (Figure 1). Le domaine cytosolique est formé de 2 parties appelées nucleotidebinding domains, NBD, qui lorsqu'elles sont réunies lient puis hydrolysent 20 l'ATP. Le domaine membranaire est lui aussi formé de 2 parties appelées trans-membrane domains, TMD, chacune connectée à un NBD. Les TMDs adoptent différentes conformations orientées vers l'intérieur ou l'extérieur de la cellule en fonction du cycle catalytique. Cela permet à BmrA de capter des substrats (S dans la Figure 1) présents dans l'espace intracellulaire (ou dans 25 la membrane plasmique) et les évacuer à l'extérieur. Ce type de pompe d'efflux est ubiquitaire. Elles appartiennent à la famille des transporteurs ABC que les cellules surexpriment en cas de stress chimiques occasionnés par les traitements antibiotiques, anticancéreux, antifongiques ou antiviraux. Ce transport est effectué par l'intermédiaire d'un changement de conformation 30 qui change l'orientation interne ou externe des sites de liaison des drogues situés dans la région membranaire de la protéine (Figure 1). Après transport, 3 06 3 73 0 102 la protéine reprend sa conformation initiale en utilisant l'énergie provenant de l'hydrolyse d'ATP (Ward, A. B. et al. Structures of P-glycoprotein reveal its conformational flexibility and an epitope on the nucleotide-binding domain. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of 5 America 110, 13386-13391 (2013) ([19]); Martinez, L. et al. Understanding polyspecificity within the substrate-binding cavity of the human multidrug resistance P-glycoprotein. FEBS Journal 281, 673-682 (2014) ([20])). L'hydrolyse d'ATP n'est possible qu'avec une protéine fonctionnelle dont la topologie, notamment au niveau de la région membranaire, est native. 10 L'extraction par des détergents est en général délétère, par exemple avec le dodecyl maltoside (Matar-Merheb, R. et al. ([11])). Certains tests ont aussi été réalisés avec la protéine AcrB, un trimère procaryotique de 3x100 kDa enchâssé dans la membrane interne des bactéries Gram- dont la structure 3D a été résolue (Seeger, M. A. et al. 15 Structural asymmetry of AcrB trimer suggests a peristaltic pump mechanism. Science 313, 1295-1298 (2006) ([21])). Mode opératoire. Les molécules de l'invention ainsi que le C4C7 (Matar-Merheb, R. et al. ([11])) (fourni par la société CALIXAR) ont été préparés aux concentrations indiquées dans la Figure 2, dans 50 mM Tris- 20 HCI, pH 8.0 et neutralisés à ce pH. Leur spectre d'absorption a été enregistré comme indiqué à l'aide d'un spectrophotomètre Xenius SAFAS. Résultats. Le concept des clips est dérivé de celui des calix[4]arènes aliphatiques, C4Cn, développé dans le document W02009144419 ([28]) et le document Matar-Merheb, R. et al. ([11]). Malgré leur intérêt, démontré dans 25 leur capacité à stabiliser les protéines membranaires, ces détergents absorbent fortement dans les basses longueurs d'onde, notamment de 220 à 330 nm. Ceci est illustré avec le C4C7 dans le 1 er panneau de la Figure 2. Leur coefficient d'absorption molaire à 280 nm est très élevé, 15 000 mol/L/cm. Tous les détergents C4Cn étant bâtis sur le même support 30 calix[4]arénique, ils présentent tous cette caractéristique. Dès lors, ils écrantent l'absorption des protéines que l'on détecte aussi à 280 nm et 3063 730 103 empêchent donc de les suivre ou de les quantifier par ce moyen très communément utilisé en biochimie, notamment dans un protocole de purification. En revanche, les molécules de la présente invention n'absorbent pas, 5 ou de façon négligeable, de 220 à 500 nm (et au-delà), comme mis en évidence à la Figure 2. Ils n'empêchent donc pas la détection des protéines à 280 nm. Exemple 8: Test de chélation des métaux divalents par les 10 molécules de l'invention La structure calix[4]arénique associée à 3 fonctions acide fait que les détergents correspondants chélatent très efficacement les métaux divalents. Le nouveau design des molécules de l'invention supprime cet effet. Mode opératoire. Les molécules de l'invention ainsi que le C4C12 15 (Matar-Merheb, R. et al. ([11])) ont été préparés aux concentrations indiquées dans la Figure 3, dans 50 mM Tris-HCI, pH 8.0 et neutralisées à ce pH. Une solution concentrée de MgC12 a été ensuite ajoutée jusqu'à 0, Set 10 mM. La turbidité de la solution résultante a été enregistrée à 600 nm. Résultats. La capacité de chélation des cations divalents des détergents 20 calix[4]aréniques précédemment développés est illustrée dans la Figure 3 ci- dessous. Elle montre que l'addition de concentration croissante de MgC12 en présence de C4C12 entraine une augmentation de la turbidité de la solution qui traduit une précipitation du complexe C4C12-magnésium. La précipitation est complète dès 5 mM de MgC12. Cette interaction peut être un inconvénient 25 pour les réactions enzymatiques qui requièrent la présence de métaux, calcium, magnésium, comme par exemple la mesure de l'activité ATPasique des ATPases telles que BmrA qui nécessite plus de 7 mM de MgC12. Les molécules de la présente invention, malgré le fait qu'elles possèdent de 2 à 4 fonctions carboxyliques, surmontent ce problème technique. En effet, comme 30 illustré dans la Figure 3, testées dans les mêmes conditions que le C4C12, 3063 730 104 elles ne forment pas un complexe insoluble avec le magnésium quand celui-ci est ajouté, même jusqu'à 10 mM. Cette absence d'interaction avec des métaux est aussi très utile lors des étapes de chromatographie de type affinité-métal, qui utilisent du Nickel 5 ou du Cobalt, et qui ne peuvent être mises en oeuvre avec des fortes concentrations de C4Cn, contrairement aux molécules de l'invention. Exemple 9: Mesure de la concentration micellaire critique (CMC) des molécules de l'invention. 10 Mode opératoire. Les molécules de l'invention ont été préparées dans une gamme de concentrations allant de 0.1 pM à 10 mM dans 50 mM TrisHCI, pH 8.0 et neutralisées à ce pH. A 80 pL de chaque solution (triplicat) est ajouté le même volume de 10 pM 1,6-diphény1-1,3,5-hexatriene (DPH, Sigma, D208000), préparé à 100 pM dans du tétrahydrofurane puis dilué 10x 15 dans H20. L'augmentation de la fluorescence du DPH survient quand celui-ci trouve des micelles de clips dans lesquelles s'insérer (Chattopadhyay, A. & London, E. Fluorimetric determination of critical micelle concentration avoiding interference from detergent charge. Anal Biochem 139, 408-412 (1984) ([22])). La lecture de la fluorescence est réalisée avec un fluorimètre 20 Xenius SAFAS en excitant à 358 nm et en enregistrant l'émission de fluorescence à 430 nm, avec des fentes de 9 à 10 nm pour l'excitation et l'émission et un gain de 100 à 150, selon les cas. Résultats. La CMC des détergents est la concentration à partir de laquelle ils s'associent pour former des micelles, dans lesquelles, en solution 25 aqueuse, les parties hydrophobes sont regroupées au centre et les régions hydrophiles exposées au solvant. Cette CMC a été mesurée ici en suivant l'augmentation de fluorescence d'un composé, le DPH, dont la fluorescence augmente significativement lorsqu'il s'insère dans les micelles (Chattopadhyay, A. & London, E. ([22])). Un résultat typique obtenu avec un 30 composé 3.7 doté d'une chaine aliphatique en C13 (3.7e) ou en C18 (3.7h) 3063730 est illustré dans la Figure 4. Le tableau 1 qui suit résume les valeurs obtenues pour les molécules de l'invention. Tableau 1 Clip (CF12)n CMC, 0, Clip (CF12)n CMC, 0, mM nm mM nm 1.5 Cl 1 2.5 3.7g 013 1 - 2.3a 013 2 3.7h 018 0.01 3-4 2.3b 07 5 - 3.7i 0(05)2 1 - 2.3c 08 3.5 - 3.7j 0(012)2 0.02 60 2.3d 09 2 - 3.7k C4Hex 1 - 2.3e C11 1 - 3.71 013 1 - 2.3f 012 0.8 - 3.9a (013)2 0.01 3 2.3g Na2 013 1 - 4.5a 09 3 - 2.3g K2 013 1 - 4.5b C11 2 - 2.3h 015 0.5 - 4.5c 013 1.5 - 3.6a 09 3 - 4.5d 015 1 - 3.6b C11 2 - 4.6a 09 1 - 3.6c 013 1 - 4.6b C11 1 - 3.7a 09 2 - 4.6c 013 1 - 3.7b C11 1.5 - 4.6d 015 1 - 3.7c 013 1 3.8 5.3a 012 0.1 - 3.7d 018 0.02 5.5 5.3b 014 0.05 - 3.7e 013 2 3.5 5.3c 016 0.01 - 3.7f 018 0.02 4.0 5.3d 018 0.005 - 5 On observe, classiquement, que la CMC diminue avec la longueur de la chaine aliphatique pour les composés 2.3b-g, 3.6a-c et 3.7a-d. C'est moins vrai pour les composés de la série 4 dont la CMC est élevée et varie peu (#4.5-4.6), suggérant que leur tête polaire contribue trop à l'hydrophilicité de 10 l'ensemble. Ces composés portent en effet 3 à 4 fonctions carboxyliques. Compte tenu de la grande taille des têtes polaires, ces CMC sont relativement élevées. Ainsi, l'utilisateur pourra faire varier la longueur de la chaine en fonction du but recherché, par exemple éliminer facilement par dialyse ou ultrafiltration un détergent à CMC élevée ou bien conserver celui-ci 15 en utilisant des composés à CMC plus faible. 3063 730 106 Exemple 10: Diamètre des molécules de l'invention Un autre paramètre physico-chimique des micelles de détergents est leur diamètre, assumant que celles-ci sont sphériques. Cette grandeur est obtenue par la technique de diffusion de la lumière (DLS). 5 Mode opératoire. Les molécules de l'invention testées ont été préparées dans une gamme de concentrations allant de 0.1 à 1000 xCMC dans 30 mM Tris-HCI, pH 8.0 et neutralisées à ce pH. Les solutions sont filtrées sur 0,22 pm. La mesure est faite sur 100 pL, en triplicat sur un Zetasizer Nano-S de Malvern Instruments. 10 Résultats. Les diamètres estimés des clips testés sont, à l'exception du composé 3.7j, de l'ordre de 3 à 5 nm, soit des objets de taille relativement petite pour des détergents. Les micelles ont donc des tailles réduites, indépendamment de leur CMC, qui varie pour les composés testés, de 20 pM à 2 mM. Le composé 3.7j est une exception, formant des objets de très 15 grande taille, de l'ordre de 60 nm. Il est probable qu'il se comporte comme les lauryl maltosides néopentyl glycols (Chae, P. S. et al. ([6]) ; Chaptal, V. et al. Quantification of detergents complexed with membrane proteins. Scientific Reports in press (2017) ([23])). Des résultats sont illutrés en Figure 5. Exemple 11 : Extraction de BmrA et AcrB avec les molécules de 20 l'invention. La capacité d'extraction des détergents de la série est testée sur des membranes dans lesquelles BmrA ou AcrB sont fortement exprimées. L'extraction avec les clips (molécules de l'invention) est comparée à celle obtenue avec des détergents du commerce, utilisés comme référence. 25 Mode opératoire. BmrA représente 25% des protéines présentes dans le système de surexpression utilisé (E. coli, C41DE3). Ces membranes sont préparées comme décrit précédemment (Matar-Merheb, R. et al. ([11])). Les membranes contenant AcrB (environ 20% des protéines membranaires, même système d'expression que BmrA) ont été préparées comme décrit 30 précédemment (Seeger, M. A. et al. ([21])). Les détergents sont utilisés à 10 3063730 107 g/L sauf indication différente et les protéines diluées à 2 g/L dans un tampon 20 mM Tris-HCI, pH 8.0, 100 mM NaCI, 15 % glycérol, additionné d'antiprotéases (Roche) à raison d'une tablette/100 mL. L'ensemble (T) est incubé 2 h à 4°C puis centrifugé 1 h à 4°C à 100 000xg pour séparer la 5 fraction extraite (surnageant, S) de celle qui ne l'est pas (culot). Les surnageants sont déposés sur SDSPAGE de 10 %, colorés après migration au bleu de Coomassie. La foscholine 12, le DDM et le LMNG proviennent de chez Anatrace, le SDS et le Triton X100 proviennent de chez Sigma-Aldrich. Résultats. En absence de détergent, BmrA et AcrB sédimentent 10 lorsqu'ils sont centrifugés à haute vitesse (puits « T- » vs « S- ») ; une petite fraction résiste néanmoins à ce traitement et demeure en suspension, elle correspond à l'essai négatif (puits « S- »). En présence de SDS ou FC12, les détergents de référence utilisés pour extraire toutes les protéines membranaires, BmrA et AcrB sont efficacement extraites et se retrouvent 15 dans les surnageants correspondants, « SDS » ou « FC12 », utilisé ici comme témoin positif d'extraction. DDM, TX100 et FC12, utilisés ici comme références commerciales, permettent de solubiliser les 2 protéines (Figure 6). Parmi les molécules de l'invention, certaines extraient les 2 protéines, d'autres partiellement et enfin d'autres pas du tout comme résumé dans le 20 Tableau 2. Pour BmrA, les composés extractants sont 1.4, 2.3[a, d, f, g, h, i], 3.6c, 3.7[c, f, g, h, l], 4.5[d], 4.6d, 5.3[a-d]. Dans le groupe des partiellement extractants on trouve 1.5, 3.6b, 3.7[d, j], 4.5[b, c], et dans celui des nonextractants 2.3[b, c], 3.6a, 3.7[a, b, e, i, k], 3.9a, 4.5a et 4.6a. Pour AcrB, les composés extractants sont 1.5, 2.3[a, b, c, d, e, f, g, h, i], 3.6[a, b], 3.7[c, d, e, 25 f, h, j, l], 4.5[b, c, d], 4.6[c, d] ceux qui extraient partiellement, 3.6c, 4.5a, 4.6d, et ceux qui n'extraient pas, 3.7[a, b, i, k] et 4.6a. Tableau 2 # BmrA AcrB # BmrA AcrB # BmrA AcrB 1.4 +++ +++ 3.6c +++ + 3.9a - +++ 1.5 + +++ 3.7a - - 4.5a - + 3063 730 108 2.3a +++ ++ 3.7b ++ - 4.5b ++ ++ 2.3b - ++ 3.7c +++ +++ 4.5c ++ +++ 2.3c - ++ 3.7d ++ +++ 4.5d +++ +++ 2.3d +++ ++ 3.7e + ++ 4.6a - - 2.3e +++ +++ 3.7f +++ +++ 4.6b +++ + 2.3f +++ +++ 3.7g +++ / 4.6c +++ +++ 2.3g +++ +++ 3.7h +++ +++ 4.6d +++ + 2.3h +++ +++ 3.7i - - 5.3a +++ / 2.3i +++ +++ 3.7j ++ +++ 5.3b +++ / 3.6a - ++ 3.7k - - 5.3c +++ / 3.6b ++ +++ 3.71 +++ +++ 5.3d +++ / Extraction sélective. AcrB est un contaminant de cristallisation bien connu dans le domaine des protéines membranaires. Co-purifié, il cristallise 5 à l'état de trace conduisant à de nombreux artefacts (Psakis, G., Polaczek, J. & Essen, L.-0. AcrB et al.: Obstinate contaminants in a picogram scale. One more bottleneck in the membrane protein structure pipeline. Journal of Structural Biology 166, 107-111 (2009) ([24])). Développer un détergent qui limite cette contamination en extrayant pas ou peu cette protéine est donc 10 d'une grande aide, d'autant plus que les détergents disponibles sur le marché ne sont pas sélectifs. Dans ce contexte, les composés 3.6c, 4.6b et 4.6d sont remarquables par leur capacité à ne pas ou peu extraire AcrB contrairement à BmrA. A l'inverse, les composés 1.5 et 3.9a extraient plus efficacement AcrB. 15 Exemple 12: Stabilisation fonctionnelle des protéines membranaires après extraction avec des détergents Les molécules de l'invention qui extraient BmrA dans l'exemple précédent ont été testées à différentes concentrations sub-solubilisantes et 20 solubilisantes, pour évaluer leur impact sur l'état natif et fonctionnel de la protéine. Ce dernier est monitoré par l'hydrolyse d'ATP que la protéine effectue au cours du cycle de transport, couplé à la translocation de soluté. Comme reporté précédemment (Matar-Merheb, R. et al. ([11])), l'activité 3063 730 109 ATPasique de BmrA est un marqueur très sensible de l'état de la protéine, cette dernière étant particulièrement sensible aux détergents utilisés lors de l'étape d'extraction où ceux-ci remplacent les lipides au contact de la protéine mem brana ire. 5 Mode opératoire. BmrA produit et enrichi dans la membrane plasmique de E. cou C41DE3 est préparé comme décrit précédemment (Matar-Merheb, R. et al. ([11])). Les membranes sont diluées à 2 g/L dans un tampon 20 mM Tris-HCI, pH 8.0, 100 mM NaCI, 15 % glycérol, additionné d'antiprotéases (Roche) à raison d'une tablette/100 mL. Les détergents sont ajoutés aux 10 concentrations indiquées dans la Figure 7. L'ensemble (T) est incubé 2 h à 4°C et l'activité ATPasique est mesurée à l'aide du système d'enzymes couplées, en retranchant l'activité Vanadate-insensible de l'activité totale Centeno, F. et al. Expression of the sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase in yeast. FEBS Lett 354, 117-122 (1994) ([25])). Les solutions sont ensuite 15 centrifugées 1 h à 4°C à 100 000xg pour séparer la fraction extraite (surnageant, S) de celle qui ne l'est pas (culot). Les surnageants sont déposés sur SDSPAGE de 10%, colorés après migration au bleu de Coomassie (Figure 8). Le DDM, LMNG (Chae, P. S. et al. ([6])), TritonX100 et FA3 (Lee, S. C. et al. (2013) ([9])) sont testés comme détergents de 20 référence. Le DDM et le LMNG proviennent de chez Anatrace, le Triton X100 provient de chez Sigma-Aldrich et le FA3 de chez Avanti-Polars. Résultats. Comme illustré dans la Figure 7, l'addition de détergent, à une concentration sub-solubilisante ou solubilisante induit des changements de structure de BmrA qui impactent sa fonctionnalité. Ainsi, parmi les 25 détergents de référence, le LMNG, récemment développé avec succès pour résoudre la structure d'un récepteur à G-protéine (Rasmussen, S. G. et al. Crystal structure of the beta2 adrenergic receptor-Gs protein complex. Nature 477, 549-555 (2011) ([26])), impacte peu l'activité de BmrA jusqu'à 1 mM mais la réduit à 25% à 10 mM, une concentration nécessaire pour solubiliser 30 la protéine. Le DDM, très largement utilisé dans le domaine, induit les mêmes effets, diminuant l'activité ATPasique de BmrA de 50 à 15% aux 3063730 concentrations qui permettent son extraction, au-delà de 5 mM. Le FA3, correspondant à 1 dimaltoside couplé à un stéroïde, récemment développé (Lee, S. C. et al. (2013) ([9])), produit le même effet en inactivant 75% et 80% de l'activité ATPasqiue de BmrA aux concentrations qui extraient la protéine. 5 Les composés les plus efficaces sont regroupés dans la série 3.7, dont les meilleurs sont 3.7[b,c,e,g,j,I]. Ceux-ci extraient BmrA tout en préservant (3.7j,I), ou en augmentant 1,5x (3.7b,c,g) ou 2x (3 .7e) l'activité ATPasique de la protéine. A noter que cette augmentation d'activité est une caractéristique des transporteurs ABC, dont l'activité basale peut être multipliée jusqu'à 2,5 10 fois en présence de solutés ; elle témoigne d'un parfait état fonctionnel. Les composés 3.7b et 3.7c partagent le même design, incluant un ose couplé à la molécule via un triazole, 2 fonctions carboxyliques et une chaine aliphatique en Cl 1 et C13. Les composés 3.7e et 3.7g sont une variante de 3.7c avec soit un maltoside soit une chaine péguylée à la place de l'oside. 15 Exemple 13: Etude de la stabilité dans le temps des protéines membranaires en présence des composés de l'invention Deux des meilleurs composés de l'invention issus du test précédent, 3.7c et 3.7g, ont été évalués pour leur capacité à stabiliser une forme active de BmrA sur une très longue période de temps, après purification et stockage 20 à 4°C. Ces 2 détergents ont été comparés au DDM, très largement utilisé pour ces étapes de purification, ainsi que le FA3 récemment développé et très prometteur sur le plan de la stabilité fonctionnelle (Lee, S. C. et al. (2013) ([9])). Pour permettre leur comparaison, les détergents ont été ajoutés à une solution de BmrA purifiée en DDM, stockée ensuite à 4°C pendant 40 jours. 25 L'activité ATPasique de BmrA a été mesurée au cours du temps comme illustré dans la Figure 9. Mode opératoire. BmrA produit et enrichi dans la membrane plasmique de E. cou C41DE3 est préparé comme décrit précédemment (Matar-Merheb, R. et al. ([11])). Vingt milligrammes de cette fraction membranaire sont dilués 30 à 4°C à 1 g/L dans 100 mM NaPi pH 8.0, 15 % glycérol, 100 mM NaCI, 10 3063 730 111 mM imidazole, 1 mM DTT. La suspension est additionnée d'antiprotéases (Roche, 1 tablette/50 mL) et benzonase (Sigma, 30 U/mL)/ Les protéines membranaires sont ensuite extraites en ajoutant 1`)/0 DDM (20 mM), pendant 1h à 4°C. La solution est centrifugée 1 h à 100 000xg, 4°C (Optima XPN-80, 5 50.2Ti). Le surnageant est chargé à 2 mL/min sur une résine Ni-NTA de 5 mL (GE healthcare, HiTrap chelating HP) équilibrée en tampon A, 100 mM NaPi pH 8.0, 10% glycérol, 100 mM NaCI, 10 mM imidazole, 0.05 % DDM (1 mM, 5xCMC). La résine est lavée une 1 ère fois avec 25 mL de tampon A, puis une 2ème fois avec 25 mL de tampon B (= A avec 500 mM NaCI et 15 mM 10 imidazole) et enfin une 3ème fois avec 20 mL de tampon A. BmrA est éluée avec un gradient de tampon A et tampon C (100 mM NaPi, 10% glycérol, 100 mM NaCI, 250 mM imidazole, 0.05% DDM (1 mM, 5xCMC)) étalé sur 10 mL et collecté par fraction de 1 mL à 3 mL/min. Les fractions du pic sont réunies (3 mL) et l'ensemble est dialysé dans un boudin de cut-off 12-14000 daltons 15 contre 400 mL de tampon D froid (50 mM Hepes-HCI, pH 8.0), 10 % glycérol, 100 mM NaCI, 0.05% DDM (1 mM, 5xCMC) pendant 2 h 30 min à 4°C, puis contre 600 mL dans les mêmes conditions pendant 1 nuit. Le contenu protéique (0.8 g/L) du dialysat est quantifié par dosage avec l'acide bicinchoninique Smith, P. K. et al. Measurement of protein using 20 bicinchoninic acid. Analytical Biochemistry 150, 76-85 (1985) ([27])). La solution est séparée en 4 fractions diluées à 0.2 g/L de protéines avec du tampon A sans imidazole et DDM. La [DDM] finale est de 0.25 mM. Chaque aliquot est additionné de 0.087 mM de DDM, FA3, 3.7c ou 3.7g et stocké à 4°C pendant 40 jours. L'activité ATPasique Vanadate-sensible Centeno, F. et 25 al. ([25])) est mesurée aux temps indiqués dans la Figure 9 en duplicat. Résultats. Comme le montre la Figure 9, BmrA une fois purifiée et en présence de faible concentration de détergent est stable pendant au moins 20 jours à 4°C. Au-delà, elle perd en activité quand elle est seulement en présence de DDM ou additionnée de FA3. Ces 2 détergents n'ont donc pas 30 la capacité de stabiliser à long terme une protéine membranaire comme BmrA. En revanche, l'addition de 3.7c ou 3.7g dans des conditions identiques 3063730 112 permet d'aller au-delà de ces 20 jours, stabilisant BmrA au moins 2 fois plus longtemps, 40 jours. Ces 2 composés démontrent donc une propriété remarquable de stabilisation à long terme, la meilleure reportée à ce jour pour une protéine membranaire. 5 3063 730 113 Listes des références 1. lsraelachvili, J. N., Mitchell, D. J. & Ninham, B. W. Theory of selfassembly of lipid bilayers and vesicles. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes 470, 185-201 (1977). 5 2. Overington, J. P., Al-Lazikani, B. & Hopkins, A. L. How many drug targets are there? Nat Rev Drug Discov 5, 993-996 (2006). 3. Mason, J. S., Bortolato, A., Congreve, M. & Marshall, F. H. New insights from structural biology into the druggability of G protein-coupled receptors. Trends in Pharmacological Sciences 33, 249-260, 10 doi:10.1016/j.tips.2012.02.005 (2012). 4. Schaffhausen, J. Advances in structure-based drug design. Trends in Pharmacological Sciences 33, 223, doi:10.1016/j.tips.2012.03.011 (2012). 5. Shoichet, B. K. & Kobilka, B. K. Structure-based drug screening for Gprotein-coupled receptors. Trends in Pharmacological Sciences 33, 268- 15 272, doi:10.1016/j.tips.2012.03.007 (2012). 6. Chae, P. S. et al. Maltose-neopentyl glycol (MNG) amphiphiles for solubilization, stabilization and crystallization of membrane proteins. Nat Meth 7, 1003-1008, doi:http://www. nature. com/nm eth/journal/vaop/ncurrent/abs/nm eth.1526. ht 20 ml#supplementary-information (2010). 7. Chae, P. S. et al. Tandem Facial Amphiphiles for Membrane Protein Stabilization. Journal of the American Chemical Society 132, 16750-16752, doi:10.1021/ja1072959 (2010). 8. Zhang, Q. et al. Designing Facial Amphiphiles for the Stabilization of 25 Integral Membrane Proteins. Angewandte Chemie International Edition 46, 7023-7025 (2007). 9. Lee, S. C. et al. Steroid-based facial amphiphiles for stabilization and crystallization of membrane proteins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 110, E1203-1211, 30 doi:10.1073/pnas.1221442110 (2013). 3063730 114 10. Suwinska, K. et al. Tri-Anionic Calix[4]arene Monoalkyl Derivatives: Synthesis, Solid-State Structures and Self-Assembly Properties. New Journal of Chemistry 32, 1988-1998, doi: 10. 1039/b806342g (2008). 11 Matar-Merheb, R. et al. Structuring detergents for extracting and 5 stabilizing functional membrane proteins. PLoS One 6, e18036, doi: 10. 1371/journal. pone.0018036 (2011). 12. von Heijne, G. The distribution of positively charged residues in bacterial inner membrane proteins correlates with the trans-membrane topology. Embo J 5, 3021-3027 (1986). 10 13. Nilsson, J., Persson, B. & von Heijne, G. Comparative analysis of amino acid distributions in integral membrane proteins from 107 genomes. Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics 60, 606-616, doi: 10. 1002/prot.20583 (2005). 14. von Heijne, G. Membrane-protein topology. Nat Rev Mol Cell Biol 7, 15 909-918(2006). 15. Corzana, F. et al. New Insights into a-GaINAc-Ser Motif: Influence of Hydrogen Bonding versus Solvent Interactions on the Preferred Conformation. Journal of the American Chemical Society 128, 1464014648, doi: 10.1021/j a064539u (2006). 20 16. Christensen, C. A. & Meldal, M. Efficient solid-phase synthesis of peptide-based phosphine ligands: towards combinatorial libraries of selective transition metal catalysts. Chemistry 11, 4121-4131, doi: 10. 1002/chem .200500105 (2005). 17. Boyere, C., Broze, G., Blecker, C., Jerome, C. & Debuigne, A. 25 Monocatenary, branched, double-headed, and bolaform surface active carbohydrate esters via photochemical thiol-ene/-yne reactions. Carbohydr Res 380, 29-36, doi: 10.1016/j.carres.2013.07. 003 (2013). 18. Munteanu, M., Choi, S. & Ritter, H. Cyclodextrin Methacrylate via Microwave-Assisted Click Reaction. Macromolecules 41, 9619-9623, 30 doi:10.1021/ma8018975 (2008). 3063730 19. Ward, A. B. et al. Structures of P-glycoprotein reveal its conformational flexibility and an epitope on the nucleotide-binding domain. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 110, 13386-13391, doi:10.1073/pnas.1309275110 (2013). 5 20. Martinez, L. et al. Understanding polyspecificity within the substrate- binding cavity of the human multidrug resistance P-glycoprotein. FEBS Journal 281, 673-682, doi:10.1111/febs.12613 (2014). 21. Seeger, M. A. et al. Structural asymmetry of AcrB trimer suggests a peristaltic pump mechanism. Science 313, 1295-1298, 10 doi:10.1126/science.1131542 (2006). 22. Chattopadhyay, A. & London, E. Fluorimetric determination of critical micelle concentration avoiding interference from detergent charge. Anal Biochem 139, 408-412 (1984). 23. Chaptal, V. et al. Quantification of detergents complexed with 15 membrane proteins. Scientific Reports 8;7:41751 (2017). 24. Psakis, G., Polaczek, J. & Essen, L.-0. AcrB et al.: Obstinate contaminants in a picogram scale. One more bottleneck in the membrane protein structure pipeline. Journal of Structural Biology 166, 107-111, doi:http://dx.doi.org/10.1016/j.jsb.2008.12.007 (2009). 20 25. Centeno, F. et al. Expression of the sarcoplasmic reticulum Ca(2+)- ATPase in yeast. FEBS Lett 354, 117-122 (1994). 26. Rasmussen, S. G. et al. Crystal structure of the beta2 adrenergic receptor-Gs protein complex. Nature 477, 549-555, doi:10.1038/nature10361 (2011). 25 27. Smith, P. K. et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Analytical Biochemistry 150, 76-85, doi: http://dx.doi. org/10.1016/0003- 2697(85)90442-7 (1985). 28. W02009144419. 29. W002090533. 3063730 116 30. Baiceanu E et al. : « 2-Indolylmethylenebenzofuranones as first effective inhibitors of ABCC2 », Eur J Med Chem. 2016 Oct 21;122:40818. REVENDICATIONS1 Composé de formule (I) : 10 dans laquelle : (I) -0cH2_ey N ,-CO2R2 - X représente -OH, -0(CH2)2SR1, o Il H N -1-(CH2)pCO2R2 CO2R2 , -S(CH2)nCH3, OU 0N - OCH2 Ni\11 N=N 0 N H ; HC -(CH2),CH3 H , -(CH2)20R1 ou - Y représente -(CF12)nCF13, (0H2),,0H3 -C -(CH2)pCO2R2 H &02R2 -C -(CH2)pCO2R2 15 CON HCH2CO2R2 - o 11-1.1-1-(cH2)cH3 MILO (cH2),-,cy - Z représente -NHCO(CH2)nCH3, (cH2),,cH3 H 0 -N -(CH2)pCO2R2 N -1.1 H -1-CO2R2 -N -(CH2)pCO2R` (CH2)qCO2R2 OU (CH2)pCO2R2 et dans laquelle : 3063730 118 - R1 représente un monosaccharide, un disaccharide ou le polyéthylène glycol ; - R2 représente H, Na ou K; - m est un nombre entier allant de 4 à 21 ; 5 - n est un nombre entier allant de 4 à 21; - p est un nombre entier allant de 1 à 3; - q est un nombre entier allant de 1 à 5; - r est un nombre entier allant de 1 à 10; - Cy représente le cyclohexyle ; ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. 2. Composé selon la revendication 1, dans lequel : °Ri Il H -OCH2-e N -1-(CH2)pCO2R2 N - X représente -0(CH2)2SR1 , N ou CO2R2 H H -C -(CH2)pCO2R2 -C -(CH2)pCO2R2 - Y représente &02R2 ou CON HCH2CO2R2 - o M-1.1-1-(cH2)cH3 - Z représente -NHCO(CH2)rICH3ou (cH2),,cH3 - R1 représente un monosaccharide, un disaccharide ou le polyéthylène glycol ; - R2 représente H, Na ou K; - m est un nombre entier allant de 4 à 21 - n est un nombre entier allant de 4 à 21 ; - p est un nombre entier allant de 1 à 3; ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. 3. Composé selon la revendication 2, choisi parmi : 3063730 119 COOH OH COOH N ONH H (CH2)1001-13 OH 5 OH COOH NC) COOH H Oy NH (CH2)1 2CH3 OH 10 OH COOH C001-1 N O. NH (C1-12)12C1-13 OH 15 20 OH COOH "COOH N ONH O COOH 25 OH _7NO HeY0 O-" 'N N %.,NH 1 HN COOH -..',..-- (C H2)12C1-13 OH (CH2)12CH3 COOH N COOH O. NH H HO HO OH OH 3063730 120 H HOOC N HOOC COOH 1\1 COOH O H HN 0 (c1-12)10c1-13 o H HOOC N HOOC 0 HN COOH N COOH H 0 5 (CE-12)14C113 10 4. Composé selon la revendication 1, dans lequel : - X représente -S(CH2)rICH3, - Y représente -(CH2)20R1 ; H 0 N-1.1-1-CO2R2 - Z représente (CH2)pCO2R2 15 - R1 représente un monosaccharide, un disaccharide ou le polyéthylène glycol ; - R2 représente H, Na ou K; - n est un nombre entier allant de 4 à 21 ; - p est un nombre entier allant de 1 à 3; 20 ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. 5. Composé selon la revendication 2, ledit composé étant le composé de formule : 25 OH OH HO __L-NH NH O\ 0 0 HO OH CO2H HO2C 3063730 121 6. Procédé d'extraction de protéines membranaires associées à une membrane biologique, comprenant une étape de mise en contact d'une solution aqueuse de protéines membranaires associées à la membrane 5 biologique avec au moins un composé de formule (I) tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5. 7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel la protéine membranaire est présente dans une fraction membranaire biologique issue d'organisme 10 procaryotique ou eucaryotique, sain ou altéré. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7, dans lequel la protéine membranaire est une protéine de transport. 15 9. Procédé selon la revendication 8, dans lequel la protéine de transport est un transporteur ABC, choisi dans le groupe comprenant la glycoprotéines P (Pgp/ABCB1), MRP1/ABCC1, MRP2/ABCC2, BCRP/ABCG2 et BmrA. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 9, dans lequel 20 l'étape de mise en contact d'une solution aqueuse comprenant la protéine membranaire à extraire avec au moins un composé de formule (I) est réalisée à un pH allant de 5.5 à 10. 11. Procédé de stabilisation de protéines membranaires en solution dans une 25 solution aqueuse, comprenant une étape (i) consistant à mettre en contact une solution aqueuse d'une protéine membranaire en solution avec au moins un composé de formule (I) tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 3. 30 12. Procédé selon la revendication 11, dans lequel les protéines membranaires sont mises en solution au moyen d'une étape d'extraction telle 3063730 122 que définie dans l'une quelconque des revendications 6 à 10, ou au moyen d'une étape d'extraction par un autre détergent. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 11 ou 12, dans lequel 5 ladite protéine en solution est stabilisée à une température comprise de 0°C à 10°C pendant une durée de temps supérieure à 1 jour.