Brevet FR3059326A1 — publié le 20180601

DERIVES D'ACIDES HEXARIQUES SUBSTITUES ET LEURS UTILISATIONS DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne des dérivés d'acides hexariques polysubstitués, notamment des acides polycaféoylhexariques (PCH), et leurs dérivés ester. L'invention concerne également l'utilisation de ces composés en tant que médicament, notamment pour la prévention et/ou le traitement des maladies neurodégénératives, notamment de la maladie d'Alzheimer, et les compositions pharmaceutiques ou nutraceutiques les contenant. ART ANTERIEUR Un dérivé de l'acide glucarique entièrement substitué, appelé acide léontopodique, a été identifié comme l'un des principaux composés des parties aériennes de l'Edelweiss, il présente un pouvoir antioxydant prononcé, comparable à celui de l'acide caféique (S. Schwaiger et al., Leontopodic acida nove/ highly substituted glucaric acid derivative from Edelweiss (Leontopodium alpinum Cass.) and its antioxidative and DNA protecting properties. Tetrahedron, Volume 61, Issue 19, 2005, 4621-4630). Dans la demande CN101856347, l'acide léontopodique extrait d'une plante du genre Edelweiss et une composition pharmaceutique contenant ce composé présentent des effets sur la résistance au virus de l'hépatite, ont des propriétés anti-inflammatoires, protègent le foie, régulent l'immunité et ainsi peuvent- être utilisés pour traiter l'hépatite. L'article de Costa et al. (2010) décrit le rôle protecteur d'un prétraitement de cellules avec de l'acide léontopodique isolé d'une plante du genre Edelweiss : étonnamment, en présence de ce composé aucune amélioration de la survie cellulaire n'est observée bien que la production d'espèces réactives de l'oxygène (Reactive Oxygen Species, ou ROS) soit diminuée (S. Costa et al., Free radicals and antioxidants in two oxidative-stress cell models exposed to ochratoxin A and amyloid unexpected results. World Mycotoxin journal, August 2010, 3(3), 257-261). L'article de Lulli et al. (Lulli D. et al., Anti-inflammatory effects of concentrated ethanol extracts of Edelweiss (Leontopodim alpinum cass.) callus structures 3059326 2 towards human keratinocytes and endothelial celis. Mediators of Inflammation, vol. 2012, article ID 498373) décrit l'effet anti-inflammatoire d'extraits éthanoliques d'Edelweiss comprenant de l'acide léontopodique. L'article de Dudek et al. décrit l'effet anti-oxydatif exercé sur des neutrophiles 5 par des dérivés d'acide hexarique (Dudek et al., Caffeic acid derivatives isolated from the aerial parts of Galinsoga parviflora and their effect on inhibiting oxidative burst in human neutrophils. Phytochemistry Letters 16 (2016), 303-310). De manière surprenante, les inventeurs ont maintenant mis en évidence que 10 des acides hexariques polysubstitués, notamment des acides polycaféoylhexariques, en particulier l'acide léontopodique, et plus particulièrement l'acide léontopodique B et certains de ses dérivés esters, présentent des propriétés neuroprotectrices, et notamment des capacités significatives dans la prévention et/ou le traitement des maladies 15 neurodégénératives, en particulier de la maladie d'Alzheimer. DESCRIPTION DES FIGURES La Figure 1 montre la survie, en pourcentage de neurones vivants par rapport au contrôle, de neurones corticaux primaires intoxiqués pendant 24 heures par 20 le peptide A13 1-42 ajouté à une concentration finale de 20 pM, en présence d'acide léontopodique B1 (ALB1) à des concentrations variant de 10 nM à 10 pM conformément à l'exemple 1. Les barres de l'histogramme représentent : témoin contrôle (1), + peptide A13 1-42 (2), peptide A13 1-42 + ALBI 10 nM (3), peptide A13 1-42 + ALB1 100 nM (4), peptide A13 1-42 + ALB1 25 1 pM (5), peptide Ap 1-42 + ALB1 10 pM (6). La Figure 2 montre la croissance du réseau de neurites intoxiqués pendant 24 heures par le peptide A13 1-42 ajouté à une concentration finale de 20 pM, en présence d'acide léontopodique B1 à des concentrations variant de 10 nM à 30 10 pM conformément à l'exemple 1. Les barres de l'histogramme représentent: contrôle (1), + peptide A13 1-42 (2), peptide A13 1-42 + ALB1 10 nM (3), peptide A13 1-42 + ALB1 100 nM (4), peptide A13 1-42 + ALB1 1 pM (5), peptide A13 1-42 + ALB1 10 pM (6). 3059326 3 La Figure 3 montre le pourcentage de survie des astrocytes par rapport au contrôle dans une culture de neurones corticaux primaires intoxiqués pendant 24 heures par le peptide A13 1-42 ajouté à une concentration finale de 20 pM, en présence d'acide léontopodique B1 à des concentrations variant de 10 nM à 5 10 pM conformément à l'exemple 1. Les barres représentent, de gauche à droite : témoin contrôle (1), + peptide Ap 1-42 (2), peptide Ap 1-42 + ALBI. 10 nM (3), peptide Ap 1-42 + ALBI. 100 nM (4), peptide Ap 1-42 + ALBI. 1 pM (5), peptide Ap 1-42 + ALBI. 10 pM (6). 10 La Figure 4 montre le pourcentage de survie des astrocytes par rapport au contrôle dans une culture pure d'astrocytes sains et non intoxiqués par le peptide AP 1-42, en présence d'acide léontopodique B1 à des concentrations de 100 nM, 1 pM, 10 pM et 50 pM, conformément à l'exemple 2. Les barres représentent, de gauche à droite : contrôle sans ALBI. (1), avec ALBI. 100 nM 15 (2), avec ALBI. 1 pM (3), avec ALBI. 10 pM (4), avec ALBI. 50 pM (5). DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Dans un premier aspect, la présente invention est relative à des composés de formule générale (I) : 20 dans laquelle R1 et R2 sont identiques ou différents et représentent, chacun 25 indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-Cp linéaire ou ramifié, cyclique ou cyclique ramifié, saturé ou insaturé, pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe 3059326 4 comprenant : -0R3, - NR3R4, -NO2, -COR3, -COOR3, -CF3, -CR3F2, -CR3R4F, =0, -CN, halogène, -SR3, - SO2R3 et aryle, avec - p est un entier naturel compris entre 2 et 18, - R3 et R4 sont identiques ou différents et représentent, chacun 5 indépendamment l'un de l'autre, - Soit un groupe choisi dans le groupe comprenant : -H, -OH, - NH2, -NO2, -COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN, halogène, SH et - 502H, - Soit un groupe alkyle en C1-C6 linéaire ou ramifié, cyclique ou 10 cyclique ramifié, saturé ou insaturé, pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe comprenant : -H, -OH, -NF-I2, -NO2, -COOH, -CF3, -CF-IF2, -CF-I2F, =0, -CN, halogène, -SH et -502H, et 15 Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un radical choisi dans le groupe comprenant : un groupe caféoyle, un groupe CH3-CH(OH)-CH2-CO- et un atome d'hydrogène, sous réserve qu'au moins un de ces radicaux soit un groupe caféoyle ; leurs stéréoisomères et leurs sels pharmaceutiquement ou 20 nutraceutiquement acceptables, pour leur utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une maladie neurodégénérative. Les composés de formule générale (I) peuvent être utilisés seuls ou sous forme d'un mélange de composés de formule (I). Par « groupe alkyle en C1-Cp », on entend, au sens de la présente invention, une chaîne hydrocarbonée monovalente saturée ou insaturée, linéaire ou ramifiée, cyclique ou cyclique ramifiée, comportant de 1 à p atomes de carbone, p étant un entier naturel compris entre 2 et 18. Conformément à l'invention, R1 et R2 représentent, chacun indépendamment, un atome d'hydrogène ou une chaîne hydrocarbonée monovalente saturée ou insaturée, linéaire ou ramifiée, cyclique ou cyclique ramifiée de 1 à 18 atomes de carbones, de préférence de 1 à 17 atomes de carbone, et plus 25 30 3059326 5 préférentiellement de 1 à 16 atomes de carbone, de 1 à 15 atomes de carbone, de 1 à 14 atomes de carbone, de 1 à 13 atomes de carbone, de 1 à 12 atomes de carbone, de 1 à 11 atomes de carbone, de 1 à 10 atomes de carbone, de 1 à 9 atomes de carbone, de 1 à 8 atomes de carbone, de 1 à 7 5 atomes de carbone, de préférence de 2, 3, 4, 5 ou 6 atomes de carbone, et en particulier de 2, 5 ou 6 atomes de carbone. A titre d'exemple et de façon non exhaustive, on peut citer les groupes éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, isobuyle, tert-butyle, pentyle, hexyle, heptyle, 10 octyle, nonyle, décyle, undécyle, dodécyle, tridécyle, tétradécyle, pentadécyle, hexadécyle, heptadécyle, octadécyle, géranyle, farnésyle, cyclopropyle, cyclobutyle, cyclohexyle, éthylényle, propylényle, butylényle, cyclopropènyle, cyclobutènyle, cylcopentènyle, cyclohexènyle, cycloheptènyle, cyclohexa-1,3- diènyle, cyclohexa-1,4-diènyle, cyclohexa-1,5-diènyle, lesdits groupes pouvant 15 être linéaires ou ramifiés. Dans un mode de réalisation préférée de l'invention, les groupes alkyles sont linéaires. 20 Par « groupe aryle », on entend un cycle aromatique en C6, pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe comprenant : -H, -OH, -NH2, -NO2, -COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN, halogène, -SH et - SO2H. 25 Par « groupe caféoyle », on entend un radical de formule (II), issu de l'acide caféique : OH OH 3059326 6 Par « groupe CH3-CH(OH)-CH2-00- », on entend un radical 3-hydroxybutanoyl. Par « acide hexarique polysubstitué », on entend un composé répondant à la 5 formule générale (III) suivante : HO 5 004 0 OH dans laquelle Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un radical choisi dans le groupe comprenant : un groupe caféoyle, un 10 groupe 3-hydroxybutanoyl de formule CH3-CH(OH)-CH2-00- et un atome d'hydrogène, sous réserve qu'au moins un de ces radicaux soit un groupe caféoyle. Par « acide polycaféoylhexarique (PCH) » on entend un composé répondant à 15 la formule générale (III) ci-dessus, dans laquelle au moins deux quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle, et notamment on entend un composé répondant à la formule générale (III) ci-dessus dans laquelle trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle. 20 Par « acide glucarique » on entend un acide hexarique répondant à la formule générale (III) ci-dessus dans laquelle, respectivement, les substituant -OQi du carbone numéro 2, -0Q2 du carbone numéro 3 et -0Q3 du carbone numéro 4 sont situés au-dessus du plan et le substituant -0Q4 du carbone numéro 5 est 25 situé au-dessous du plan. 3059326 7 Par « acide altrarique » on entend un acide hexarique répondant à la formule générale (III) ci-dessus dans laquelle, respectivement, les substituants -OQi du carbone numéro 2, -0Q3 du carbone numéro 4 et -0Q4 du carbone numéro 5 sont situés au-dessus du plan et le substituant -0Q2 du carbone numéro 3 5 est situé au-dessous du plan. Par « acide léontopodique B » on entend un acide hexarique répondant à la formule générale (III) ci-dessus dans laquelle trois quelconques des substituants Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième 10 radical représente un atome d'hydrogène. Par « acide léontopodique B1 » on entend l'acide léontopodique B répondant à la formule générale (III) ci-dessus dans laquelle les substituants Qz, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le radical Qi représente un atome 15 d'hydrogène. L'acide léontopodique B1 a été identifié la première fois dans les parties aériennes de Leontopodium alpinum (Edelweiss) (S. Schwaiger et al. ; Development of an HPLC-PAD-MS assay for the identification and quantification of major phenolic edelweiss (Leontopodium alpium Cass.) constituents, Phytochemical Analysis, volume 17, no. 5, 2006, 291-298). 20 Parmi les composés de formule (I) pour leur utilisation selon la présente invention, on peut citer les acides suivants : - L'acide 2 caféoylhexarique (QI. = radical caféoyle, Q2 = Q3 = Q4 = H) - L'acide 3 caféoylhexarique (Q2 = radical caféoyle, QI. = Q3 = Q4 = H) 25 - L'acide 4 caféoylhexarique (Q3 = radical caféoyle, Qi = Q2 = Q3 = H) - L'acide 5 caféoylhexarique (Q4 = radical caféoyle, QI. = Q2 = Q3 = H) - L'acide 2,3 dicaféoylhexarique (Qi = Q2 = radical caféoyle, Q3 = Q4 = H) - L'acide 2,4 dicaféoylhexarique (Qi = Q3 = radical caféoyle, Q2 = Q4 = H) - L'acide 2,5 dicaféoylhexarique (Qi = Q4 = radical caféoyle, Q2 = Q3 = H) 30 - L'acide 3,4 dicaféoylhexarique (Q2 = Q3 = radical caféoyle, Qi = Q4 = H) - L'acide 3,5 dicaféoylhexarique (Q2 = Q4 = radical caféoyle, Qi = Q3 = H) L'acide 2,3,4- tricaféoylhexarique (Q4 = H et Qi = Q2 = Q3 = radical caféoyle) 3059326 8 L'acide 2,3,5- tricaféoylhexarique (Q3 = H et 0.d. = Q2 = Q4 = radical caféoyle) - L'acide léontopodique B (trois quelconques parmi Qi, Qz, Q3 ou Q4= radical caféoyle et le quatrième radical = H) 5 - L'acide 3,4,5- tricaféoylhexarique (Qi = H et Q2 = Q3 = Q4 = radical caféoyle), c'est à dire l'acide léontopodique B identifié pour la première fois dans les parties aériennes de Leontopodium alpinum (Edelweiss), également désigné par « acide léontopodique B1 » L'acide léontopodique A (trois quelconques parmi Qi, Qz, Q3 ou Q4= 10 radical caféoyle et le quatrième radical = groupe CH3-CH(OH)-C1-12-00-) Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, les composés pour leur utilisation selon l'invention répondent à la formule (I) dans laquelle trois quelconques des radicaux Qi, Qz, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et 15 le quatrième radical représente un groupe 3-hydroxybutanoyl de formule CH3- CH(OH)-C1-12-00-. Plus particulièrement selon ce dernier mode de réalisation, un composé pour son utilisation selon l'invention est l'acide léontopodique A, qui répond à la formule (I) dans laquelle R1 et R2 représentent chacun un atome d'hydrogène, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 20 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un groupe 3-hydroxybutanoyl de formule CH3-CH(OH)-C1-12-00-. Dans un autre mode de réalisation préféré, les composés pour leur utilisation selon l'invention répondent à la formule (I) dans laquelle trois quelconques 25 des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. Plus particulièrement selon ce mode de réalisation, un composé pour son utilisation selon l'invention est l'acide léontopodique B, qui répond à la formule (I) dans laquelle R1 et R2 représentent chacun un atome d'hydrogène, trois quelconques des radicaux 30 Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. Selon un aspect encore plus particulier, les composés pour leur utilisation selon l'invention répondent à la formule (I) dans laquelle les radicaux Q2, Q3 et 3059326 9 Q4 représentent un groupe caféoyle et le radical Qi représente un atome d'hydrogène. Plus particulièrement selon ce mode de réalisation, un composé pour son utilisation selon l'invention est l'acide léontopodique B1, qui répond à la formule (I) dans laquelle R1 et R2 représentent chacun un atome 5 d'hydrogène, les radicaux Qz, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le radical Qi représente un atome d'hydrogène. Dans la présente invention, on désigne par « pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptable » tout ingrédient qui est utile dans la 10 préparation d'une composition pharmaceutique ou nutraceutique, qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation vétérinaire ou chez l'Homme. 15 On désigne par « sels pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables » d'un composé, des sels qui sont pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables, comme défini ci-dessus, et qui possèdent l'activité pharmacologique souhaitée du composé parent. De tels sels comprennent : 20 (1) les hydrates et les solvates, (2) les sels d'addition d'acide pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables formés avec des acides inorganiques pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables tels que l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique et 25 similaires ; ou formés avec des acides organiques pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables tels que l'acide acétique, l'acide benzènesulfonique, l'acide benzoïque, l'acide camphresulfonique, l'acide citrique, l'acide éthane-sulfonique, l'acide fumarique, l'acide glucoheptonique, l'acide gluconique, l'acide glutamique, l'acide glycolique, l'acide 30 hydroxynaphtoïque, l'acide 2-hydroxyéthanesulfonique, l'acide lactique, l'acide maléique, l'acide malique, l'acide mandélique, l'acide méthanesulfonique, l'acide muconique, l'acide 2-naphtalènesulfonique, l'acide propionique, l'acide salicylique, l'acide succinique, l'acide dibenzoyl-L-tartrique, l'acide tartrique, 3059326 10 l'acide p-toluènesulfonique, l'acide triméthylacétique, l'acide trifluoroacétique et similaires, ou (3) les sels d'addition de base pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables formés lorsqu'un proton acide présent dans le 5 composé parent est soit remplacé par un ion métallique, par exemple un ion de métal alcalin, un ion de métal alcalino-terreux ou un ion d'aluminium ; soit coordonné avec une base organique ou inorganique pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptable. Les bases organiques acceptables comprennent la diéthanolamine, l'éthanolamine, N-méthylglucamine, la 10 triéthanolamine, la trométhamine et similaires. Les bases inorganiques acceptables comprennent l'hydroxyde d'aluminium, l'hydroxyde de calcium, l'hydroxyde de potassium, le carbonate de sodium et l'hydroxyde de sodium. Dans le cadre de la présente invention, on entend par « maladie 15 neurodégénérative » une maladie impliquant principalement une détérioration du fonctionnement, et éventuellement la mort, des cellules nerveuses, et en particulier des neurones. Ces maladies induisent des troubles d'ordre cognitivo-comportemental, sensoriel et moteur. 20 Selon un aspect particulier, ladite maladie neurodégénérative est choisie parmi : la maladie d'Alzheimer, l'ataxie spinocérébelleuse, l'atrophie multisystématisée, la maladie d'Alexander, la maladie d'Alpers, la maladie de Creutzfeldt-Jakob, la maladie de Huntington, la maladie de Parkinson, la maladie de Pick, la myofasciite à macrophages, la paralysie supranucléaire 25 progressive, la sclérose en plaques et la sclérose latérale amyotrophique. Dans le cadre de la présente invention, une maladie neurodégénérative peut être une maladie neurodégénérative due au stress oxydatif. C'est le cas notamment de la maladie d'Alzheimer. 30 On entend par « maladie d'Alzheimer » (MA) une maladie affectant principalement les personnes de plus de 65 ans, souffrant de différents symptômes cliniques tels que le déclin progressif de la mémoire, de la pensée, du langage et de la capacité d'apprentissage. Le rôle toxique du peptide 13- 3059326 11 amyloïde (A13) est maintenant passé de fibrilles A13 insolubles à des plus petits agrégats solubles d'oligomères de A13. Il a été prouvé que des oligomères solubles de A13 isolé de cortex de patients 5 présentant la maladie d'Alzheimer induisent directement l'hyperphosphorylation de la protéine Tau (T) et la dégénérescence des neurites (Jin M, et al., Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration. Proc Natl Acad Sci USA. 2011 Apr 5;108(14):5819-24). Ainsi, toutes les substances 10 ayant une propriété réductrice de la neurotoxicité du peptide A@ peuvent être utiles en tant que nouvel agent thérapeutique pour le traitement ou la prévention de la maladie d'Alzheimer. Selon un autre aspect particulier, les composés pour leur utilisation selon 15 l'invention sont caractérisés en ce que le radical R1 et le radical R2 représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C2-Cq avec q entier naturel compris entre 3 et 18, avantageusement un groupe alkyle en C2-C6 et encore plus avantageusement un groupe alkyle en C2-05, éventuellement substitué par un groupe -OH. 20 Selon un aspect plus particulier, les composés pour leur utilisation selon l'invention sont caractérisés en ce que le radical R1 et le radical R2 représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe choisi parmi les radicaux suivants : éthyle, isopropyle, hydroxy- 25 propyle notamment 2-hydroxy-propyle, hydroxy-pentyle notamment 2- hydroxy-pentyle, (diméthylamino)-éthyle et cinnamyle, et est de préférence un groupe éthyle ou 2-hydroxypentyle. Selon un aspect encore plus particulier, les composés pour leur utilisation 30 selon l'invention sont caractérisés en ce que : le radical R1 et le radical R2 représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C2-Cq avec q entier naturel compris entre 3 et 18, avantageusement un groupe alkyle en C2-C6 et encore plus avantageusement un groupe 3059326 12 alkyle en C2-05, éventuellement substitué par un groupe -OH, et de préférence un groupe choisi parmi les radicaux suivants : éthyle, isopropyle, hydroxy-propyle notamment 2-hydroxy-propyle, hydroxy-pentyle notamment 2-hydroxy-pentyle, (diméthylamino)- 5 éthyle et cinnamyle, - trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. 10 Selon un aspect particulièrement préféré, les composés pour leur utilisation selon l'invention sont caractérisés en ce que le radical Ri et le radical R2, identiques ou différents, sont choisis parmi les radicaux suivants : éthyle, isopropyle, hydroxy-propyle notamment 2-hydroxy-propyle, hydroxy-pentyle notamment 2-hydroxy-pentyle, (diméthylamino)-éthyle et cinnamyle, et trois 15 quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. Selon un aspect plus particulièrement préféré, les composés pour leur utilisation selon l'invention sont choisis parmi : 20 - les composés dans lesquels Ri et R2 représentent un groupe éthyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène ; - les composés dans lesquels Ri et R2 représentent un groupe 2- 25 hydroxy-pentyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène ; - les composés dans lesquels Ri et R2 représentent un groupe 2- hydroxy-propyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 30 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène ; - les composés dans lesquels Ri et R2 représentent un groupe isopropyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 3059326 13 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène ; - les composés dans lesquels R1 et R2 représentent un groupe (diméthylamino)-éthyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et 5 Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène ; et - les composés dans lesquels R1 et R2 représentent un groupe cinnamyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente 10 un atome d'hydrogène. En particulier, parmi les composés de formule (I) avantageux pour leur utilisation selon la présente invention, on peut citer les dérivés esters de : - L'acide 2 caféoylhexarique (QI. = radical caféoyle, Q2 = Q3 = Q4 = H) 15 - L'acide 3 caféoylhexarique (Q2 = radical caféoyle, QI. = Q3 = Q4 = H) - L'acide 4 caféoylhexarique (Q3 = radical caféoyle, Qi = Q2 = Q3 = H) - L'acide 5 caféoylhexarique (Q4 = radical caféoyle, QI. = Q2 = Q3 = H) - L'acide 2,3 dicaféoylhexarique (Qi = Q2 = radical caféoyle, Q3 = Q4 = H) - L'acide 2,4 dicaféoylhexarique (Qi = Q3 = radical caféoyle, Q2 = Q4 = H) 20 - L'acide 2,5 dicaféoylhexarique (Qi = Q4 = radical caféoyle, Q2 = Q3 = H) - L'acide 3,4 dicaféoylhexarique (Q2 = Q3 = radical caféoyle, Qi = Q4 = H) - L'acide 3,5 dicaféoylhexarique (Q2 = Q4 = radical caféoyle, Qi = Q3 = H) - L'acide 2,3,4- tricaféoylhexarique (Q4 = H et Qi = Q2 = Q3 = radical caféoyle) 25 - L'acide 2,3,5- tricaféoylhexarique (Q3 = H et Qi = Q2 = Q4 = radical caféoyle) - L'acide léontopodique B (trois quelconques parmi Qi, Qz, Q3 ou Q4= radical caféoyle et le quatrième radical = H) - L'acide 3,4,5- tricaféoylhexarique (Qi = H et Q2 = Q3 = Q4 = radical 30 caféoyle), c'est à dire l'acide léontopodique B identifié pour la première fois dans les parties aériennes de Leontopodium alpinum (Edelweiss), également désigné par « acide léontopodique B1 » L'acide léontopodique A (trois quelconques parmi Qi, Qz, Q3 ou Q4= radical caféoyle et le quatrième radical = groupe CH3-CH(OH)-CH2-CO-) 3059326 14 Parmi les composés avantageux pour leur utilisation selon la présente invention, on peut citer les dérivés esters suivants : - L'éthyle diester de l'acide léontopodique B, et notamment l'éthyle diester de 5 l'acide léontopodique B1, - Le 2-hydroxy-pentyle diester de l'acide léontopodique B, et notamment le 2- hydroxy-pentyle diester de l'acide léontopodique B1. Selon un autre aspect plus particulier, l'invention a pour objet des composés 10 caractérisés en ce que Q2, Q3 et Q4 représentent chacun un radical caféoyle, représente un atome d'hydrogène, et en ce que le radical R1 et le radical R2 représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C2-C6, éventuellement substitué par un groupe -OH, notamment R1 et R2 représentent un groupe 2-hydroxy-pentyle, ou notamment R1 et R2 15 représentent un groupe 2-hydroxy-propyle, leurs stéréoisomères et leurs sels pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables, pour leur utilisation pour la prévention et/ou le traitement de la maladie d'Alzheimer. De manière particulièrement préférée, l'invention a pour objet un composé 20 choisi parmi : l'acide léontopodique B, l'éthyle ester de l'acide léontopodique B et le 2-hydroxy-pentyle ester de l'acide léontopodique B pour son utilisation pour la prévention et/ou le traitement de la maladie d'Alzheimer. Selon un aspect plus particulier, l'invention a pour objet l'acide léontopodique 25 B, répondant à la formule (I) dans laquelle trois quelconques des radicaux Q2, Q3 et Q4 représentent chacun un radical caféoyle, le quatrième radical représente un atome d'hydrogène, et en ce que R1 et R2 représentent un atome d'hydrogène, pour son utilisation pour la prévention et/ou le traitement de la maladie d'Alzheimer. 30 Selon un autre aspect plus particulier, l'invention a pour objet l'éthyle ester de l'acide léontopodique B, répondant à la formule (I) dans laquelle trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent chacun un radical caféoyle, le quatrième radical représente un atome d'hydrogène, et en ce que 3059326 15 R1 et R2 représentent un groupe éthyle, pour leur utilisation pour la prévention et/ou le traitement de la maladie d'Alzheimer. Selon un autre aspect plus particulier, l'invention a pour objet l'hydroxy- 5 pentyle ester de l'acide léontopodique B, répondant à la formule (I) dans laquelle trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent chacun un radical caféoyle, le quatrième radical représente un atome d'hydrogène, et en ce que R1 et R2 représentent un groupe hydroxy-pentyle, notamment un groupe 2-hydroxy-pentyle, pour leur utilisation pour la prévention et/ou le 10 traitement de la maladie d'Alzheimer. Selon un deuxième aspect, l'invention a pour objet des composés de formule générale (I) OR2 (1) 15 dans laquelle R1 et R2 sont identiques ou différents et représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-Cp linéaire ou ramifié, cyclique ou cyclique ramifié, saturé ou insaturé, 20 pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe comprenant : -0R3, - NR3R4, -NO2, -COR3, -COOR3, -CF3, -CR3F2, -CR3R4F, =0, -CN, halogène, -SR3, -SO2R3, aryle, avec - p est un entier naturel compris entre 2 et 18, - R3 et R4 sont identiques ou différents et représentent chacun 25 indépendamment l'un de l'autre, 3059326 16 - soit un groupe choisi dans le groupe comprenant : -H, -OH, - NHz, -NO2, -COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN, halogène, SH et - SO2H, - soit un groupe alkyle en C1-C6 linéaire ou ramifié, cyclique ou 5 cyclique ramifié, saturé ou insaturé, pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe comprenant : -H, -OH, -NHz, -NO2, -COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN, halogène, -SH et -SO2H, sous réserve qu'au moins un des radicaux R1 ou R2 ne soit pas un atome 10 d'hydrogène, et Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un radical choisi dans le groupe comprenant : un atome d'hydrogène, un groupe caféoyle et un groupe CH3- CH(OH)- CH2CO-, sous réserve qu'au moins un de 15 ces radicaux soit un groupe caféoyle, à l'exception des composés suivants : - 1-0-méthyle ester de 2,3,4-tricaféoyle d'acide altrarique - 1-0-méthyle ester de 2,3-dicaféoyle d'acide altrarique leurs stéréoisomères et leurs sels pharmaceutiquement ou nutraceutiquement 20 acceptables. Selon un mode avantageux de réalisation de cet aspect de l'invention, dans les composés de formule (I) trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle, et le quatrième radical représente un atome 25 d'hydrogène. Selon un mode plus avantageux de réalisation de cet aspect de l'invention, dans les composés de formule (I) Qz, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle. 30 Selon un mode encore plus avantageux de réalisation de cet aspect de l'invention, dans les composés de formule (I) Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et Qi représente un atome d'hydrogène. 3059326 17 Selon un autre mode avantageux de réalisation de cet aspect de l'invention, dans les composés de formule (I) Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et Qi représente un groupe CH3-CH(OH)-CH2CO-. 5 Selon un autre aspect particulier, un composé selon l'invention est caractérisé en ce que R1 et R2 représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C15, avantageusement un groupe alkyle en C1-C12, plus avantageusement un groupe alkyle en C2-C6, et encore plus avantageusement un groupe alkyle en C2, C5 ou C6, sous réserve 10 qu'au moins un des radicaux R1 ou R2 ne soit pas un atome d'hydrogène. Selon un aspect plus particulier, un composé selon l'invention est caractérisé en ce que trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle, et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène, et 15 R1 et R2 représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C2- C6 substitué par un groupe -OH, notamment un groupe 2- hydroxy-pentyle ou un groupe 2-hydroxy-propyle, sous réserve qu'au moins un des radicaux R1 ou R2 ne soit pas un atome d'hydrogène. 20 Parmi les composés avantageux selon la présente invention, on peut citer les dérivés esters suivants : - L'éthyle diester de l'acide léontopodique B, et notamment l'éthyle diester de l'acide léontopodique B1, - Le 2-hydroxy-pentyle diester de l'acide léontopodique B, et notamment le 2- 25 hydroxy-pentyle diester de l'acide léontopodique B1. Les composés de formule générale (I) selon l'invention sont préparés par la mise en oeuvre d'un procédé d'estérification d'une fonction acide avec un alcool approprié selon les méthodes connues de l'homme du métier. Ledit 30 procédé comprend de préférence une étape durant laquelle un acide glucarique ou un acide altrarique polysubstitué réagit avec un alcool de formule R-OH. 3059326 18 Selon ce procédé, ledit acide glucarique polysubstitué est l'acide léontopodique, et notamment l'acide léontopodique B. Les inventeurs ont développé un procédé de préparation des dérivés ester de 5 PCH en une étape par hémisynthèse à partir d'un acide glucarique ou d'un acide altrarique particulier permettant l'obtention de dérivés esters d'un acide glucarique ou d'un acide altrarique sous la forme d'un seul régioisomère. Ce procédé de préparation utilisé correspond à la réaction d'estérification décrite dans l'article de Hanessian et al. (2001) (Stephen Hanessian, Hoan K Huynh, 10 Gurijala V Reddy, Rudolph O Duthaler, Andreas Katopodis, Markus B Streiff, Willy Kinzy, Reinhold Oehrlein. Synthesis of Gal determinant epitopes, their glycomimetic variants, and trimeric clusters-relevance to tumor associated antigens and to discordant xenografts. Tetrahedron, 16 April 2001, Volume 57, Issue 16, Pages 3281-3290). 15 L'alcool est choisi parmi les alcools de formule R-OH, dans laquelle R représente un groupe alkyle en C1-Cp linéaire ou ramifié, cyclique ou cyclique ramifié, saturé ou insaturé, où p est un entier naturel compris entre 2 et 18, ledit groupe pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis 20 dans le groupe comprenant : -NR1R2, -NO2, -CF3, -CR1R2F, =0, -CN, halogène, -5R1, -502R1, aryle, où R1 et R2 sont identiques ou différents et représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, soit un groupe alkyle en C1-C6 linéaire ou ramifié, cyclique ou cyclique ramifié, saturé ou insaturé, pouvant être substitué par un ou plusieurs 25 substituants choisis dans le groupe comprenant : -H, -OH, -NH2, -NO2, - COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN halogène, -SH, -502H, soit un substituant choisi dans le groupe comprenant : - H, -OH, -NH2, -NO2, -COOH, CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN, halogène, -SH, -502H. 30 Plus particulièrement, l'alcool est choisi parmi les alcools de formule R-OH, dans laquelle R représente un groupe alkyle en C2-C15, avantageusement un groupe alkyle en C2-C12, plus avantageusement un groupe alkyle en C2-C6, et encore plus avantageusement un groupe alkyle en C2, C5 OU C6. 3059326 19 Encore plus particulièrement, l'alcool est choisi parmi les alcools de formule R-OH, dans laquelle R est un groupe alkyle en C2-C6 substitué par un groupe -OH, et notamment R est un groupe 2-hydroxy-pentyle ou un groupe 2- hydroxy-propyle. 5 De manière encore plus préférée, l'alcool est choisi parmi : l'éthanol, le 2- hydroxy-pentan-1-ol et le 2-hydroxy-propan-1-ol. Dans un mode de réalisation de l'invention, l'étape du procédé durant laquelle 10 un acide glucarique ou un acide altrarique polysubstitué, avantageusement l'acide léontopodique, et plus avantageusement l'acide léontopodique B, réagit avec un composé alcool de formule R-OH est éventuellement précédée d'une étape d'activation du groupe carboxyle d'un acide glucarique ou un acide altrarique polysubstitué, avantageusement l'acide léontopodique, et plus 15 avantageusement l'acide léontopodique B, notamment par un agent d'activation des groupes carboxyles, tel que le 1-(3-dimethylaminopropyI)-3- ethylcarbodiimide en combinaison avec l'hydrate 1-hydroxybenzotriazole. Par « agent d'activation du groupe carboxyle », on entend selon la présente 20 invention tout réactif ou combinaison de réactifs permettant d'activer la fonction acide carboxylique pour permettre son couplage avec un nucléophile dans des conditions réactionnelles douces. A titre d'exemple et de façon non exhaustive, on peut citer les agents d'activation de la famille des carbodiimides comme le dicyclohexylcarbodiimide (DCC), le 25 diisopropylcarbodiimide (DIC), le N-éthyle-N(3- dimethylaminopropyl)carbodiimide (EDCI) seul ou en combinaison avec des alcools permettant la formation transitoire d'esters activés comme, par exemple, le 1-hydroxybenzotriazole (HOBT), le 1-hydroxy-7-azabenzotriazole (HOAt), le 1-hydroxysuccinimide (HOSu) ou encore l'éthyle 30 (hydroxyimino)cyanoacetate. L'agent d'activation utilisable peut également faire partie de la famille des sels de phosphoniums, d'uronium et/ou de guanidinium. A titre d'exemple, on peut citer le benzotriazol-1- yloxy)tris(dimethylamino)phosphonium hexafluorophosphate (BOP), le benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBOP), 3059326 20 le (1-Cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidenaminooxy)dimethylamino-morpholino- carbenium hexafluorophosphate (COMU), N,N,N',N'-Tetramethy1-0-(1 Hbenzotriazol- 1 -ypuronium hexafluorophosphate (H BTU), (0-(6-Chloro- 1 - hydrocibenzotriazol- 1 -y1)- 1,1,3,3 -tetramethyluroniu m tetrafluoroborate) 5 (TCTU), ( 2 -(7-Aza- 1 H-benzotriazole- 1 -y1)- 1,1,3,3 -tetra methyluron ium hexafluorophosphate) (HATU). Plus particulièrement, l'agent d'activation des groupes carboxyles est choisi parmi le diisopropylcarbodiimide (DIC) et le 1-hydroxybenzotriazole (HOBT). 10 Les procédés de préparation des composés selon l'invention peuvent éventuellement comprendre des étapes supplémentaires de protection et/ou déprotection afin d'éviter des réactions secondaires bien connues de l'homme du métier, ou afin d'éviter la formation de plusieurs régioisomères des 15 composés selon l'invention. Les composés obtenus par les procédés selon l'invention peuvent en outre être purifiés par des méthodes connues de l'homme du métier. On peut citer, par exemple, les méthodes de purification par cristallisation, par chromatographie 20 ou par extraction. Dans un troisième aspect, l'invention concerne donc des composés de formule générale (I) : OR2 (I) 25 dans laquelle 3059326 21 R1 et R2 sont identiques ou différents et représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-Cp linéaire ou ramifié, cyclique ou cyclique ramifié, saturé ou insaturé, pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe 5 comprenant : -0R3, - NR3R4, -NO2, -COR3, -COOR3, -CF3, -CR3F2, -CR3R4F, =0, -CN, halogène, -SR3, -SO2R3, aryle, avec - p est un entier naturel compris entre 2 et 18, - R3 et R4 sont identiques ou différents et représentent chacun indépendamment l'un de l'autre, 10 - soit un groupe choisi dans le groupe comprenant : -H, -OH, - NH2, -NO2, -COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN, halogène, SH et - SO2H, - soit un groupe alkyle en C1-C6 linéaire ou ramifié, cyclique ou cyclique ramifié, saturé ou insaturé, pouvant être substitué par 15 un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe comprenant : -H, -OH, -NH2, -NO2, -COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN, halogène, -SH et -SO2H, sous réserve qu'au moins un des radicaux R1 ou R2 ne soit pas un atome d'hydrogène, 20 et Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un radical choisi dans le groupe comprenant : un atome d'hydrogène, un groupe caféoyle et un groupe CH3- CH(OH)- CH2CO-, sous réserve qu'au moins un de ces radicaux soit un groupe caféoyle, 25 leurs stéréoisomères et leurs sels pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables, pour leur utilisation en tant que médicament. Selon un aspect plus particulier, la présente invention concerne des composés de formule générale (I) : 3059326 22 OR2 (i), dans laquelle Ri, R2, Qi, Q2, Q3 et Q4 sont tels que définis ci-dessus, ou leurs sels et stéréoisomères pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables, pour leur utilisation en tant que médicament pour la prévention 5 et/ou le traitement d'une maladie neurodégénérative, en particulier la maladie d'Alzheimer. Plus particulièrement, la présente invention concerne l'acide léontopodique B, l'acide léontopodique B1, l'éthyle diester de l'acide léontopodique B, le 2- 10 hydroxy-pentyle diester de l'acide léontopodique B et le 2-hydroxy-propyle diester de l'acide léontopodique B pour leur utilisation en tant que médicament, notamment pour la prévention et/ou le traitement d'une maladie neurodégénérative, en particulier la maladie d'Alzheimer. 15 L'invention concerne aussi une méthode de prévention et/ou de traitement d'une maladie neurodégénérative, notamment d'une des maladies citées ci-dessus, comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace d'au moins un composé de formule (I) selon l'invention à un patient en ayant besoin. Plus particulièrement, l'invention a pour objet une méthode 20 de prévention et/ou de traitement de la maladie d'Alzheimer, comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace d'au moins un composé de formule (I) selon l'invention à un patient en ayant besoin, et comprenant notamment l'administration d'un composé choisi parmi : l'acide léontopodique B, l'acide léontopodique B1, l'éthyle diester de l'acide 25 léontopodique B et le 2-hydroxy-pentyle diester de l'acide léontopodique B. 3059326 23 Selon un quatrième aspect, la présente invention est également relative à une composition pharmaceutique comprenant en tant qu'agent actif au moins un composé ou un mélange de composés de formule générale (I) dans laquelle R1, R2, Qi, Q2, Q3 et Q4 sont tels que définis ci-dessus, ou ses sels et 5 stéréoisomères pharmaceutiquement acceptables, et avantageusement un excipient pharmaceutiquement acceptable. Les modes d'administration, les posologies et les formes galéniques optimales d'une composition pharmaceutique selon l'invention peuvent être déterminés 10 selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement pharmaceutique adapté à un sujet comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au traitement, les effets secondaires constatés, le type de peau. En fonction du type d'administration souhaitée, la composition pharmaceutique selon 15 l'invention peut en outre comprendre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. La composition pharmaceutique selon la présente invention peut en outre comprendre au moins un adjuvant pharmaceutiquement connu de l'homme du métier, choisi parmi les épaississants, les conservateurs, les parfums, les colorants, des filtres 20 chimiques ou minéraux, les agents hydratants, les eaux thermales, etc. Avantageusement, la composition pharmaceutique comprend au moins un composé de formule générale (I) selon l'invention en une quantité comprise entre 0,01 et 10%, en particulier entre 0,05 et 5%, plus particulièrement 25 entre 0,1 et 2%, en poids par rapport au poids total de la composition. La composition pharmaceutique est particulièrement adaptée pour une administration par voie orale, nasale, transdermique, parentérale, topique, rectale, et mucosale. Elle peut se présenter sous forme sèche, telle que par 30 exemple : capsule molle, gélule, comprimé, lyophilisat, poudre, granule, ou patch, ou sous forme liquide, telle que : solution, suspension, spray, crème ou gel. 3059326 24 L'excipient pharmaceutiquement acceptable est connu de l'Homme du Métier et est choisi selon le mode d'administration de la composition pharmaceutique. A titre d'exemple, l'excipient pharmaceutiquement acceptable peut être choisi dans le groupe constitué par les agents diluants, liants, désintégrants, les 5 colorants, les lubrifiants, les agents solubilisants, les agents promoteurs d'absorption, les filmogènes, les agents gélifiants, et leurs mélanges. La composition pharmaceutique selon l'invention peut en outre comprendre au moins un composé choisi dans le groupe constitué par les émollients, les actifs 10 hydratants, les activateurs de la synthèse de kératine, les kératorégulateurs, les kératolytiques, les agents restructurant de la barrière cutanée (activateurs de la synthèse des lipides cutanés, agonistes PPARs ou Peroxysome Proliferator Activated Receptor), les activateurs de la différenciation des kératinocytes (rétinoïdes, calcidone®, le calcium), les antibiotiques, les agents 15 anti-bactériens, les composés antifongiques, les agents anti-viraux, les sébo- régulateurs, les immunomodulateurs, tels que le tacrolimus, le pimécrolimus, les oxazolines, les conservateurs, les agents anti-irritants, les agents apaisants, des filtres et écrans solaires, les agents anti-oxydants, les facteurs de croissance, les agents cicatrisants ou les molécules eutrophiques, les 20 médicaments et les agents anti-Alzheimer. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique selon l'invention pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement de maladies neurodégénératives, en particulier la maladie d'Alzheimer. 25 Selon un cinquième aspect, l'invention a aussi pour objet une méthode de prévention et/ou de traitement, notamment de maladies neurodégénératives, notamment d'une des maladies citées ci-dessus, et particulièrement la maladie d'Alzheimer, comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement 30 efficace d'une composition pharmaceutique selon l'invention à un patient en ayant besoin. La présente invention concerne également une composition nutraceutique comprenant un composé de formule (I) selon l'invention, et avantageusement 3059326 25 un excipient nutraceutiquement acceptable, pour améliorer les fonctions cognitives chez un patient atteint d'une maladie neurodégénérative, et particulièrement la maladie d'Alzheimer. L'excipient nutraceutiquement acceptable est connu de l'Homme du Métier et est choisi parmi les excipients 5 conformes aux règlementations internationales applicables aux additifs alimentaires. Les exemples qui suivent et les figures 1, 2, 3 et 4 visent à illustrer la présente invention, sans toutefois en limiter la portée. 10 EXEMPLES Exemple 1 : Effet de l'acide léontopodique B1 sur la survie de neurones corticaux primaires blessés par le peptide Al3 (20 pg, 24 15 heures) et sur un réseau de neurites de neurones corticaux primaires blessés par le peptide Al3 (20 pg, 24 heures). Le but de cette étude est d'évaluer les effets de l'acide léontopodique B1 sur des neurones corticaux primaires de rat, intoxiqués par le peptide A13 selon le modèle in vitro de la maladie d'Alzheimer décrit dans Callizot et al., 2013 20 (Callizot N. et al., Operational dissection of P-amyloid cytopathic effects on cultured neurons. J Neurosci Res. 2013, 91: 706-16). La survie des neurones et des astrocytes ainsi que l'intégrité du réseau de neurites sont évaluées. 1.1. Matériels et méthodes 25 Acide léontopodique Bl. Fournisseur : EXTRASYNTHESE (Code d'identification # 6026 S ; CAS [933063-22-0] ; Formule C33H28017 ; Poids moléculaire 696.58 ; Degrés de pureté (selon le chromatogramme HPLC) 198°/0 ; extrait de Leontopodium 30 alpinum (Edelweiss)). Quatre concentrations sont testées : 10 nM, 100 nM, 1 pM et 10 pM Le véhicule utilisé est le milieu de culture (voir la section ci-dessous) contenant 0,1% de DMSO (Pan Biotech, Batch: H130813). 3059326 26 Culture cellulaire de neurones corticaux Des neurones corticaux de rat sont cultivés comme décrit dans Singer et al., 1999 (Singer C. et al., Mitogen-activated protein kinase pathway mediates estrogen neuroprotection after glutamate toxicity in primary cortical neurons. 5 J Neurosci. 1999, 19: 2455-2463) et Callizot et al. (2013). En résumé, des rats femelles gravides sont tuées par dislocation cervicale après 15 jours de gestation. Les foetus sont collectés et immédiatement placés dans un milieu glacé L15 Leibovitz (Pan Biotech, Batch: 8810315) additionné de 2% pénicilline (10,000 U/mL) et d'une solution de streptomycine 10 (10 mg/mL) (PS; Pan Biotech, batch: 1451013) et 1% de albumine de serum de bovin (BSA; Pan Biotech, batch: K180713). Le cortex est traité pendant 20 min à 37°C avec une solution de trypsine- EDTA (Pan Biotech, Batch: 3330914) à une concentration finale de 0,05% trypsine et 0,02% EDTA. La dissociation est stoppée par l'ajout du milieu DMEM (Dulbecco's modified 15 Eagle's medium) avec 4,5 g/L de glucose (Pan Biotech, Batch: 8530315), contenant de la DNase I grade II (concentration finale 0.5 mg/mL; Pan Biotech, Batch: H140508) et 10% sérum de veau foetal (FCS; Invitrogen, Batch: 41Q1613K). Les cellules sont mécaniquement dissociées par trois passages forcés à travers des cônes de pipette de 10 mL. Les cellules sont 20 ensuite centrifugées à 515g pendant 10 min à 4°C. Le surnageant est jeté, et le culot est suspendu dans un milieu de culture défini consistant en un milieu Neurobasal (Invitrogen, batch: 1715722) avec une solution à 2% de supplément B27 (Invitrogen, lot: 1709534), 2 mmol/L de L-glutamine (Pan Biotech, lot: 6620314), 2% de solution de PS, et 10 ng/mL de facteur 25 neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF; Pan Biotech, Batch: H140108). Les cellules viables sont comptées avec un cytomètre Neubauer, en utilisant le test d'exclusion du bleu trypan. Les cellules sont ensemencées à une densité de 30,000 par puits d'une plaque de 96 puits préenduits de poly-L-lysine (Biocoat, Batch: 21614030) et sont cultivées à 37°C dans un incubateur 30 contenant 95% d'air et 5% de CO2. Le milieu est changé tous les jours. Après 11 jours de culture, les neurones corticaux sont intoxiqués par une solution de peptides A13 (voir ci-dessous). 3059326 27 Préparation du peptide Al3 1-42 et exposition des neurones corticaux audit peptide en présence d'acide léontopodique B1 La préparation du peptide A13 1-42 est réalisée selon la procédure décrite dans Callizot et al. (2013). En résumé, le peptide A13 1-42 (Bachem, Batch: 5 1014012) est dissous dans le milieu de culture défini mentionné ci-dessus, dépourvu de sérum, à une concentration initiale de 40 pmoles/L. Cette solution est doucement agitée pendant 3 jours à 37°C dans le noir et immédiatement utilisée après avoir été diluée dans le milieu de culture à la concentration testée (20 pM). 10 Au onzième jour de culture, l'acide léontopodique B1 testé aux 4 différentes concentrations est dissous dans le milieu de culture et est ensuite préincubé avec les neurones corticaux primaires pendant 1 heure avant l'application du peptide A13 1-42. La solution de peptide A13 1-42 est ajoutée à une concentration finale de 20 pM diluée dans le milieu de culture en présence de 15 l'acide léontopodique B1 et le tout est laissé pendant 24 heures. Evaluation de la survie des neurones et des astrocytes ainsi que de l'intégrité du réseau de neurites 24 heures après intoxication par le peptide A13 1-42, le surnageant de la 20 culture cellulaire a été enlevé et les cultures de neurones corticaux ont été fixées par une solution froide d'éthanol (95%, Sigma, Batch: SZBD3080V) et d'acide acétique (5%, Sigma, Batch: SZBD1760V) pendant 5 min à -20°C. Après perméabilisation avec 0,1% de saponine (Sigma, Batch: BCBJ8417V), les cellules sont incubées pendant 2 heures : 25 a) avec un anticorps de souris monoclonal anti microtubule-associated- protein 2 (MAP-2, Callizot N. et al., A new long term in vitro mode) of myelination. Experimental Cell Research, October 2011. Volume 317, Issue 16, Pages 2374-2383), Sigma, batch: 063M4802) dilué à 1/400 dans du PBS (PAN, Batch: 1870415) contenant 1% de sérum de veau 30 foetal (FCS) et 0,1% de saponine (cet anticorps spécifique des corps cellulaires et des neurites permet l'étude de la mort des cellules neuronales ainsi que l'effet de l'acide léontopodique B1 sur la croissance des neurites) pendant 2 heures à température ambiante, 3059326 28 b) avec un anticorps polyclonal de lapin anti-protéine acide fibrillaire gliale (GFAP, Sigma, Batch: 083M4830) à une dilution de 1/400 dans du PBS contenant 1% FCS, 0.1 % saponine, pendant 2 heures à température ambiante. Cet anticorps est spécifique des astrocytes. 5 Ces anticorps sont révélés par un IgG de chèvre anti-souris marqué par un Alexa Fluor 488 (Molecular Probe, Batch: 1664729) et un IgG de chèvre antilapin marqué par un Alexa Fluor 568 (Molecular Probe, Batch: 1386541) à une dilution de 1/400 dans du PBS contenant 1% FCS, 0,1% saponine, pendant 1 heure à température ambiante. 10 L'acide léontopodique B1 est testé pour une culture. Pour chaque concentration d'acide léontopodique B1 et les contrôles, 6 puits sont évalués, 30 photos par plaque sont prises en utilisant ImageXpress (Molecular Devices) avec un grossissement 20x, pour évaluer le réseau de neurites, le nombre de neurones et le nombre d'astrocytes. L'analyse des photos est réalisée en 15 utilisant Custom Module Editor (Molecular Devices). Les résultats sont présentés en termes de nombre de cellules positives ou de réseau de neurite marqués par marqueur donné (MAP-2, GFAP). Chaque ligne de la plaque est organisée de la façon suivante : - Pas de traitement (contrôle négatif) / 0.1% DMSO 20 - Peptide A13 1-42 20 pM / 0,1% DMSO - Peptide A13 1-42 20 pM / acide léontopodique B1 10 nM / 0,1% DMSO - Peptide A13 1-42 20 pM / acide léontopodique B1 100 nM / 0,1% DMSO - Peptide A13 1-42 20 pM / acide léontopodique B1 1 pM / 0,1% DMSO - Peptide A13 1-42 20 pM / acide léontopodique B1 10 pM / 0,1% DMSO 25 Chaque ligne est répétée 6 fois. Analyse statistique Toutes les données sont exprimées en pourcentage du contrôle des conditions (contrôle = 100 %). Toutes les valeurs sont exprimées en moyenne +/- 30 l'erreur standard de la moyenne (Standard Error of the Mean SEM) (s.e.mean) de n = 6 puits par condition. Les analyses statistiques réalisées pour les différentes conditions sont des analyses de variances ou ANOVA suivie par le test PLSD de Fischer ou le test de Dunnett en utilisant le logiciel GraphPad Prism (* p REVENDICATIONS1. Composés de formule générale (I) OR2 dans laquelle R1 et R2 sont identiques ou différents et représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-Cp linéaire ou ramifié, cyclique ou cyclique ramifié, saturé ou insaturé, pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe comprenant : -0R3, -NR3R4, -NO2, -COR3, -COOR3, -CF3, -CR3F2, -CR3R4F, =0, -CN, halogène, -SR3, -SO2R3 et aryle, avec - p est un entier naturel compris entre 2 et 18, - R3 et R4 sont identiques ou différents et représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, - Soit un groupe choisi dans le groupe comprenant : -H, -OH, NH2, -NO2, -COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN, halogène, -SH et - 502H, - Soit un groupe alkyle en C1-C6 linéaire ou ramifié, cyclique ou cyclique ramifié, saturé ou insaturé, pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe comprenant : -H, -OH, -NH2, -NO2, -COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN, halogène, -SH et -502H, et Q1/ Q2, Q3 et Q4 représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un radical choisi dans le groupe comprenant : 3059326 34 un groupe caféoyle, un groupe CH3-CH(OH)-CH2-CO- et un atome d'hydrogène, sous réserve qu'au moins un de ces radicaux soit un groupe caféoyle, leurs stéréoisomères et leurs sels pharmaceutiquement ou nutraceutiquement 5 acceptables, pour leur utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une maladie neurodégénérative. 2. Composés pour leur utilisation selon la revendication 1, caractérisés en 10 ce que trois quelconques des radicaux Qi, Qz, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et en ce que le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. 3. Composés pour leur utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisés en ce que : 15 - le radical R1 et le radical R2 représentent, chacun indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C2-Cq avec q entier naturel compris entre 3 et 18, avantageusement un groupe alkyle en C2-C6 et encore plus avantageusement un groupe alkyle en C2-05, éventuellement substitué par un groupe -OH, et 20 - trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. 4. Composés pour leur utilisation selon l'une quelconque des 25 revendications 1 à 3, choisis parmi : - les composés dans lesquels R1 et R2 représentent un groupe éthyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène ; et - les composés dans lesquels R1 et R2 représentent un groupe 2- hydroxy-pentyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. 3059326 - les composés dans lesquels R1 et R2 représentent un groupe 2- hydroxy-propyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. 5 - les composés dans lesquels R1 et R2 représentent un groupe isopropyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. - les composés dans lesquels R1 et R2 représentent un groupe 10 (diméthylamino)-éthyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. - les composés dans lesquels R1 et R2 représentent un groupe cinnamyle, trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 15 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. 5. Composés pour leur utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que ladite maladie neurodégénérative 20 est choisie parmi : la maladie d'Alzheimer, l'ataxie spinocérébelleuse, l'atrophie multisystématisée, la maladie d'Alexander, la maladie d'Alpers, la maladie de Creutzfeldt-Jakob, la maladie de Huntington, la maladie de Parkinson, la maladie de Pick, la myofasciite à macrophages, la paralysie supranucléaire progressive, la sclérose en plaques et la sclérose latérale 25 amyotrophique. 6. Composés de formule générale (I) 3059326 36 o OR2 dans laquelle R1 et R2 sont identiques ou différents et représentent, chacun 5 indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-Cp linéaire ou ramifié, cyclique ou cyclique ramifié, saturé ou insaturé, pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe comprenant : -0R3, - NR3R4, -NO2, -COR3, -COOR3, -CF3, -CR3F2, -CR3R4F, =0, -CN, halogène, -SR3, - SO2R3, aryle, avec 10 - p est un entier naturel compris entre 2 et 18, - R3 et R4 sont identiques ou différents et représentent chacun indépendamment l'un de l'autre, - soit un groupe choisi dans le groupe comprenant : -H, -OH, NH2, -NO2, -COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, =0, -CN, halogène, - 15 SH et - SO2H, - soit un groupe alkyle en C1-C6 linéaire ou ramifié, cyclique ou cyclique ramifié, saturé ou insaturé, pouvant être substitué par un ou plusieurs substituants choisis dans le groupe comprenant : -H, -OH, -NH2, -NO2, -COOH, -CF3, -CHF2, -CH2F, 20 =0, -CN, halogène, -SH et -SO2H, sous réserve qu'au moins un des radicaux R1 ou R2 ne soit pas un atome d'hydrogène, et Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un 25 radical choisi dans le groupe comprenant : un atome d'hydrogène, un groupe caféoyle et un groupe CH3- CH(OH)- CH2CO-, sous réserve qu'au moins un de ces radicaux soit un groupe caféoyle, à l'exception des composés suivants : 3059326 37 - 1-0-méthyle ester de 2,3,4-tricaféoyle d'acide altrarique - 1-0-méthyle ester de 2,3-dicaféoyle d'acide altrarique leurs stéréoisomères et leurs sels pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables. 5 7. Composés selon la revendication 6, caractérisés en ce que trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et en ce que le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. 10 8. Composés selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7, destinés à être utilisés comme médicament. 9. Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7, et au moins un excipient 15 pharmaceutiquement acceptable, ou composition nutraceutique comprenant au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7, et au moins un excipient nutraceutiquement acceptable. 10. Composition pharmaceutique selon la revendication 9 pour son 20 utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une maladie neurodégénérative, notamment la maladie d'Alzheimer.