Brevet FR3054546A1 — publié le 20180202

COMPOSES MULTIFONCTIONNELS, LEURS PROCEDES DE PREPARATION ET LEURS UTILISATIONS La présente invention concerne des composés multifonctionnels, 5 leurs procédés de préparation et leurs utilisations, notamment leurs utilisations dans des processus orthogonaux ou bioorthogonaux. Il existe une forte demande pour des composés réactifs permettant de réaliser des ligations chimiques multiples (bio)orthogonales. Une réaction chimique est bioorthogonale si elle n'interfère pas avec les processus lo biologiques. Dans ce contexte, la chimie click occupe une place importante (Beal et Jones, Angew. Chem. Int. Ed., 2012, 51, 6320). Une réaction sera considérée comme « click » si elle répond aux critères suivants : - rendement élevé - facilité de mise en oeuvre (milieu aqueux) 15 - absence de sous-produit (ou innocuité des sous-produits formés). Parmi les réactions de chimie click le plus souvent utilisées dans ce domaine figurent les cycloadditions, par exemple la réaction dipolaire 1,3 de Huisgen ou la cycloaddition de Diels-Alder, les réactions d'addition nucléophile par ouverture de cycle et les réactions d'hydrothiolation (thiol- 20 ène et thiol-yne). Si les réactifs de couplage hétérobifonctionnels sont très répandus, les composés hétéromultifonctionels renfermant plus de deux fonctionnalités distinctes sont rares dans l'art antérieur. Seuls 5 types de composés trifonctionnels sont décrits dans la troisième édition de l'ouvrage 25 « Bioconjugate Techniques » de G. T. Hermanson (Elsevier, 2013, pp 341349). De plus, dans un certain nombre de cas, les composés multifonctionnels disponibles à ce jour nécessitent pour leur mise en oeuvre des étapes de protection / déprotection (Valverde et al., Tetrahedron, 2009, 65, 7597). 30 La demande internationale W02014060357 et l'article de Neri et al., (Chem. Commun., 2015, 51, 4846) décrivent des composés renfermant deux fonctions orthogonales, c'est-à-dire adressables indépendamment l'une de l'autre : un cycle azlactone d'une part et une fonction apte à donner une réaction de cycloaddition 1,3-dipolaire ou [4+2] de type Diels-Alder d'autre 35 part. 3054546 2 Il existe par conséquent un besoin de mettre à disposition de nouveaux composés comportant plus de fonctions réactives utilisables dans des processus bioorthogonaux pour pallier le manque dans l'état de la technique. Dans la littérature, deux publications antérieures décrivent des 4,4-diallyloxazolones (Cotton et al., Int. J. Peptide Protein Res., 1986, 28, 230 ; Casabona et Cativiela, Synthesis, 2006, 2440). Ces composés comportant une azlactone et deux fonctions allyliques sont trifonctionnels. Leur préparation repose sur une réaction de substitution nucléophile en milieu basique (N,N-Diisopropyléthylamine ou DIPEA) des azlactones dérivées de la N-acétylglycine et de la N-benzoylglycine en présence de deux équivalents d'iodure d'allyle et bromure d'allyle respectivement dans le diméthylformamide (DMF). Après monoallylation, il a été décrit que certaines des 4-allyloxazolones subissent un réarrangement sigmatropique dépendant de la nature du groupement en position 2. Cet inconvénient limite donc la méthode de diallylation au dérivé de la N-benzoylglycine. Boukattaya et al. (Chem. Commun. 2012, 48, 8655-8657 et Synthesis 2016, 48, 906-916) décrivent une méthode de préparation des N-acyl-a,a-diallylglycines concernant la double addition de groupements alkyles, alcényles, aromatiques, ou thiophényles sur la fonction nitrile des acylcyanhydrines via l'utilisation des organomagnésiens. Cette méthode offre un accès direct à des a,a-diallylglycines présentant à la fois une fonction acide carboxylique et une fonction amine acylée. Cependant, la possibilité de l'obtention directe des diallyloxazolones par la cyclisation des a,a-diallylglycines n'est jamais envisagée dans l'art antérieur. Il y a donc toujours une nécessité de proposer un procédé plus simple permettant de produire des diallyloxazolones multifonctionnelles. L'un des buts de la présente invention est de proposer une famille de nouveaux composés réactifs comportant de multiples fonctions susceptibles d'être impliqués dans des processus (bio)orthogonaux et permettant une association par liaisons covalentes entre des molécules d'intérêt telles que des protéines, des anticorps, des peptides, de l'ADN, de l'ARN, des siARN, des miARN, des marqueurs biologiques, des hormones, des vitamines, des 3054546 3 lipides, des monosaccharides, des oligosaccharides, des polysaccharides, des glycanes, des molécules chimiques de synthèse, un polymère naturel ou synthétique. La présente invention vise également à proposer un procédé simple 5 et efficace de préparation de ces nouveaux composés. Un autre but de l'invention est de pallier les inconvénients de l'état de la technique en proposant de nouveaux composés de couplage : - permettant des associations par des processus bioorthogonaux, à la fois in vitro et in vivo, 10 - dont les fonctionnalités réactives sont également orthogonales entre elles, - dont la réactivité élevée est compatible avec les milieux biologiques, - présentant une résistance à l'hydrolyse en milieu aqueux, - sans formation de sous-produit toxique ou difficile à éliminer, - applicables à une large gamme de macromolécules biologiques ou 15 synthétiques, - conduisant à des liaisons chimiques robustes et compatibles avec une vaste gamme de fonctionnalités chimiques ainsi qu'avec les milieux biologiques et les organismes vivants, in vitro et in vivo. 20 Le premier objet de la présente invention concerne un composé tétrafonctionnel, de formule générale (I), Y, -A 0 N dans laquelle : 25 - Y est un groupement fonctionnel réactif choisi dans le groupe comprenant : (i) un groupe N3, (ii) un groupe alcényle en (C2-Cio), (iii) un groupe alcynyle en (C2-Cio), 3054546 4 (iv) un groupe cycloalcényle en (C3-Cio), notamment un groupe cycloalcényle en (C3-C7), (y) un groupe cycloalcynyle en (C7-Cio), plus particulièrement un groupe cyclooctynyle ou un dérivé de cyclooctyne, 5 (vi) un groupe anthracényle, éventuellement substitué par un halogène ou un alkyle en (Ci-C4) linaire ou ramifié, (vii) un groupe furanyle, éventuellement substitué par un halogène ou un alkyle en (Ci-C4) linaire ou ramifié, (viii) un groupe maléimidyle, éventuellement substitué par un 10 halogène ou un alkyle en (Ci-C4) linaire ou ramifié, (ix) un groupe tétrazinyle, éventuellement substitué par un halogène ou un alkyle en (Ci-C4) linaire ou ramifié, (x) un groupe apte à une cycloaddition, - A est un groupement choisi parmi : 15 (a) une chaîne alkylène -(CH2)m- linaire ou ramifiée, m étant un nombre entier de 0 à 20, (b) un groupe aromatique de 6 à 14 atomes de carbone, éventuellement substitué par au moins un substituant choisi dans le groupe comprenant les atomes d'halogènes et les groupes alkyles en 20 (Ci-C4) linaire ou ramifié, (c) un groupe cycloalkyle en (C3-Ci8), éventuellement substitué par au moins un substituant choisi dans le groupe comprenant les atomes d'halogènes et les groupes alkyles en (Ci-C4) linaire ou ramifié, 25 (d) un groupe hétérocyclique comprenant de 3 à 18 chaînons, éventuellement substitué par au moins un substituant choisi dans le groupe comprenant les atomes d'halogènes et les groupes alkyles en (Ci-C4) linaire ou ramifié, - Ri est un groupe alcényle en (C2-Cio) ou un groupe alcynyle en (C2-Cio) 30 - n est un nombre entier de 0 à 3. On entend par « alkyle » un groupe hydrocarboné saturé linéaire ou ramifié. Le terme « alkyle en (Ci-C4) » représente un groupe hydrocarboné saturé linéaire ou ramifié, ayant de 1 à 4 atomes de carbone. A titre 3054546 5 d'exemple, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle ou tert-butyle. Dans le cadre de la présente invention, le terme « alkyle en (Ci-C6) » représente un groupe hydrocarboné saturé linéaire ou ramifié, ayant de 1 5 à 6 atomes de carbone. A titre d'exemple, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle ou tert-butyle, pentyle, hexyle, Le terme « alkyle en (Ci-C8) » représente un groupe hydrocarboné saturé linéaire ou ramifié, ayant de 1 à 8 atomes de carbone. A titre 10 d'exemple, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle ou tert-butyle, pentyle, hexyle, heptyle, octyle. Par le terme « groupe alcényle en (C2-Cio) », on entend au sens de la présente invention tout groupe hydrocarboné de 2 à 10 atomes de carbones, linaire ou ramifié, éventuellement substitué par un groupe aryle 15 ou un groupe arylealkyle, comportant une ou plusieurs doubles liaisons carbone-carbone. A titre d'exemple, on peut citer les groupes vinyle, propényle, allyle, butényle, pentényle, hexényle, heptényle, octényle, nonényle, décényle. Ledit groupe alcényle peut comporter une double liaison terminale ou 20 un motif diényle (double liaison conjuguée). Par le terme « aryle » on entend les groupes phényle, naphtyle ou biphényle. Par le terme « arylealkyle », on entend un groupe aryle substitué par un groupe alkyle. 25 Le terme « motif diényle » représente des hydrocarbures linéaires ou cyclique possédant deux doubles liaisons séparées par une seule liaison simple. A titre d'exemple, on peut citer les motifs butadiènyle, isoprènyle, 2,3-diméthy1-1,3-butadiènyle, 1,3-pentadiènyle, 2-phény1-1,3-butadiènyle et furyle. 30 Par le terme « groupe alcynyle en (C2-Cio) », on entend au sens de la présente invention tout groupe hydrocarboné 2 à 10 atomes de carbones, linaire ou ramifié, substitué ou non, comportant une ou plusieurs triples liaisons carbone-carbone. Ledit groupe alcynyle peut notamment comporter une triple liaison terminale. On peut citer comme exemples des groupes 3054546 6 alcynyle le groupe éthynyle, prop-1-ynyle, but-1-ynyle, but-2-ynyle, pentynyle, hexynyle, heptynyle, octynyle, nonynyle, ou décynyle. On entend par « groupe cycloalcényle en (C3-Cio) » un groupe hydrocarboné cyclique de 3 à 10 atomes de carbones comportant une ou 5 plusieurs doubles liaisons carbone-carbone. On peut citer comme exemples des groupes cycloalcényle le groupe cyclopropényle, cyclobutényle, cyclopentényle, cyclohexényle, cycloheptényle, cyclooctényle, cyclononényle, ou cyclodécényle. On entend par « groupe cycloalcynyle en (C7-Cio) » un groupe 10 hydrocarboné cyclique de 7 à 10 atomes de carbones comportant une ou plusieurs triples liaisons carbone-carbone. On peut citer, à titre d'exemple, le groupe cycloheptynyle, cyclooctynyle, cyclononynyle, cyclodécynyle Un tel groupe cycloalcynyle peut être un groupe cyclooctynyle ou ses dérivés. On peut citer, à titre d'exemple de dérivé du groupe cyclooctynyle, 15 le biarylazacyclooctynone (BARAC), le dibenzocyclooctyne (DBCO), le cyclooctynyle monofluoré (MOFO), le cyclooctynyle difluoré (DIFO), le ALO (aryl-less octyne), diméthoxyazacyclooctyne (DIMAC), et le difluorobenzocyclooctyne (DI FBO). On entend par « halogène » : un atome d'iode, de brome, de chlore 20 ou de fluor. Par le terme « un groupe apte à participer à une cycloaddition », on entend au sens de la présente invention tout groupe chimique capable de mettre en oeuvre tout type de cycloaddition connue dans l'art, notamment une cycloaddition de Diels-Alder, une cycloaddition de Huisgen, une 25 cycloaddition [3+2], une cycloaddition de type « norbornene », une cycloaddition de type « oxanorbornadiene », une ligation de type « quadricyclane ». Les structures chimiques nécessaires permettant la mise en oeuvre de ces réactions sont connues de l'homme du métier. (M. B. Smith, J. March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and 30 Structure, 6th Edition, Copyright John Wiley & Sons, Inc., 2007). On entend par « groupe aromatique de 6 à 14 atomes de carbone » un composé organique cyclique respectant la règle d'aromaticité de Hückel, comprenant de 6 à 14 atomes de carbone. Ledit groupe aromatique peut être un groupe aromatique monocyclique ou polycyclique. A titre d'exemple, 3054546 7 on peut citer les groupes benzyle, phényle, naphtyle, anthracényle et tétracényle. Le terme « groupe cycloalkyle en (C3-C1.8) » désigne les alkyles dont la chaîne carbonée principale est fermée sur elle-même en formant un cycle 5 de de 3 à 18 atomes de carbone. On peut citer comme exemples le cyclopropyle, le cyclobutyle, l'éthylcyclobutyle, le cyclopentyle, le cyclohexyle, le cycloheptyle, le cyclooctyle, le cyclononyle, et le cyclodécyle. Le terme «groupe hétérocyclique comprenant de 3 à 18 chaînons » représente tout hétérocycle saturé ou insaturé, comprenant de 3 à 18 10 chaînons et contenant de 1 à 3 hétéroatomes choisis dans le groupe constitué par l'oxygène, l'azote et le soufre. On peut citer par exemple les groupes pipéridinyle, pyrrolidinyle, pipérazinyle, pyrazolyle, pyridyle, piridinyle, imidazolyle, furyle, morpholinyle, oxétanyle, tétrahydrofuranyle, tétrahydropyranyle, tétrahydrothiényle, thienyle et thiazolyle. 15 Dans un mode de réalisation particulier, le groupe Y représente un groupe -CH=CH-R2, R2 représentant : - soit un atome d'hydrogène, - soit un groupe alkyle en (CI.-C8) linaire ou ramifié, - soit un groupe aryle, éventuellement substitué par un 20 groupe alkyle en (CI.-C8) linaire ou ramifié. Dans un mode de réalisation plus particulier, le groupe Y est un groupe vinyle (-CH=CH2) ou un groupe allyle (-CH2-CH=CH2). Dans un autre mode de réalisation particulier, le groupe Y comporte un motif -CH=CH-CH=CHR4, R4 étant un hydrogène ou un groupe alkyle 25 linaire ou ramifié en Cl.-C6. Dans un mode de réalisation particulier, le groupe Y représente un groupe -CCR3, R3 représentant : - soit un atome d'hydrogène, - soit un groupe alkyle en (CI.-C8) linaire ou ramifié, 30 - soit un groupe aryle, éventuellement substitué par un groupe alkyle en (CI.-C8) linaire ou ramifié, - soit un groupe protecteur de la fonction alcyne. Les groupes protecteurs de la fonction alcyne sont bien connus de l'homme du métier. Comme exemples, on peut citer les trialkylsilyles, 35 notamment le triméthylsilyle, le triéthylsilyle, le tert-butyldiméthylsilyle et le 3054546 8 benzyldiméthylsilyle. (P. G. M. Wuts, T. W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Edn., John Wiley & Sons, Inc., 2007). Dans un mode de réalisation particulier, le groupe Y est un groupe cycloalcényle en C3-C7, à savoir un groupe hydrocarboné cyclique de 3 à 7 5 atomes de carbones comportant une ou plusieurs doubles liaisons carbone-carbone. On peut citer à titre d'exemple le cyclopropényle, le cyclobutényle, le cyclopentényle, le cyclohexényle, le cycloheptényle, le cylcohexa-1,3- diènyle, le cyclohexa-1,4-diènyle ou le cyclopentadiènyle. Dans un mode de réalisation particulier, le groupe A est un phényle, 10 éventuellement substitué par au moins un substituant choisi parmi les halogènes et les groupes alkyles en (Ci-C4) linaires ou ramifiés. Dans un autre mode de réalisation particulier, le groupe A est un groupe naphtyle, éventuellement substitué par au moins substituant choisi parmi les halogènes et les groupes alkyles en (Ci-C4) linaires ou ramifiés. 15 Le groupe Ri d'un composé de formule (I) de l'invention est un groupe alcényle en (C2-Cio) comportant de préférence une double liaison terminale ou un groupe alcynyle en (C2-Cio) comportant de préférence une triple liaison terminale. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, les composés 20 de formule (I) sont ceux pour lesquels : - Ri représente le groupe -CH=CH2; - n est égal à 1, ledit composé correspondant à la formule générale (Ia) Y%% ic' VL 0 ' N 25 (Ia) dans laquelle A et Y sont tels que définis précédemment. La présente invention concerne particulièrement les composés choisis dans le groupe comprenant : 3054546 9 (Ia1) ) 6 ON (Ia2) ) 2 0/\ N (Ia3) (Ia4) (Ia5) (Ia6) 5 Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, les composés de formule (I) sont ceux pour lesquels : - Ri représente le groupe -CCI-1 ; - n est égal à 1, 10 ledit composé correspondant à la formule générale (Ib) YNA 0/ N 0) // (Ib) dans laquelle A et Y sont tels que définis précédemment. 3054546 10 La présente invention a également pour objet un procédé de préparation des composés de formule (I) de l'invention tels que décrit ci-dessus. Ledit procédé comprend les étapes suivantes: 5 (i) réaction entre un composé de formule (II) YA-- 0 NON (II) dans laquelle Y et A sont tels que définis ci-dessus, et un composé de formule (IIIb) MgX 10 (IIIb) dans laquelle Ri et n sont tels que définis ci-dessus, pour obtenir un composé de formule (IVb) A Y )1 0 15 (IVb) dans laquelle Y, A, Ri et n sont tels que définis ci-dessus; (ii) oxydation du composé de formule (IVb) pour obtenir un composé de formule (Vb) 20 (Vb) dans laquelle Y, A, Ri et n sont tels que définis ci-dessus; (iii) cyclisation d'un composé de formule (Vb) pour obtenir un composé de formule (I). 3054546 11 Le susdit procédé se distingue des méthodes antérieures par deux aspects : i) il offre l'avantage de s'affranchir d'une étape supplémentaire de saponification de la fonction ester puisque les acides carboxyliques sont directement obtenus et ii) il permet d'installer dès le début de la synthèse 5 une variété de groupes Y susceptibles d'être utilisés dans des processus bioorthogonaux, lesdits groupes pouvant être difficiles à introduire par N-acylation des a,a-diallylaminoesters intermédiaires. En effet, ces derniers portent une fonction carbinamine tertiaire très encombrée et seule la réaction de N-acétylation a été validée dans l'art antérieur. 10 Ce procédé offre un accès efficace à des 4,4-diallyl-oxazol-5(4H)- ones multifonctionnelles substituées en position 2 par un groupement -A-Y à partir d'acylcyanhydrines de formule (II) préparées aisément avec des réactifs peu coûteux. 15 L'étape (ii) dudit procédé peut comprendre successivement l'étape (iia) et l'étape (iib). L'étape (iia) consiste en l'oxydation du composé de formule (IVb) pour obtenir un composé de formule (Vb') 20 (Vb') dans laquelle Y, A et n sont tels que définis ci-dessus. L'étape (iib) consiste en l'oxydation du composé de formule (Vb') pour obtenir un composé de formule (Vb). 25 Les conditions réactionnelles des étapes (i), (iia) et (iib) du procédé ci-dessus sont connues de l'homme du métier et décrites par exemples par Boukattaya et al. (Synthesis 2016, 48, 906-916). De préférence, lors de la mise en oeuvre de l'étape (i) du procédé ci- dessus, un solvant polaire tel que le tétrahydrofurane (THF) est utilisé en 30 tant que solvant. R1 R1 , Y"A 11-NH 0 CHO 3054546 12 A titre d'exemple, l'étape (iia) relative à l'oxydation d'alcool en aldéhyde peut être mise en oeuvre par la méthode de Ley, utilisant le mélange perruthénate de tétrapropylammonium/ N-Methylmorpholine-NOxide (TPAP/NMO) comme oxydant (Ley et al., Synthesis, 1994, 639-666). 5 De même, à titre d'exemple, l'étape (iib) relative à l'oxydation d'aldéhyde en acide carboxylique peut être effectuée par l'oxydation de Pinnick (Lindgren et al., Acta Che mica Scandhavica, 1973, 27: 888.) L'étape (iii) du procédé tel que décrit ci-dessus peut être mise en oeuvre par activation / déshydratation par exemple à l'aide d'un 10 chloroformiate. La présente invention porte également sur les composés intermédiaires de formules (IVb), (Vb'), (Vb), dans lesquelles Y, A, Ri, et n sont tels que définis auparavant. 15 Un autre objet de la présente invention concerne en particulier un nouveau procédé pour préparer un composé de formule (Ia) Y 0 N (Ia) dans laquelle Y et A sont tels que définis ci-dessus, ledit procédé 20 comprenant les étapes suivantes: (i) réaction entre un composé de formule (II) A 0 NON (II) dans laquelle Y et A sont tels que définis auparavant, et 25 un composé de formule (IIIa) 3054546 13 ZnX X étant choisi parmi F, Cl, Br et I, pour obtenir un composé de formule (IVa) OH 5 (IVa) dans laquelle Y et A sont tels que définis ci-dessus ; (ii) oxydation du composé de formule (IVa) pour obtenir un composé de formule (Va) OH 10 (Va) dans laquelle Y et A sont tels que définis auparavant ; (iii) cyclisation d'un composé de formule (Va) pour obtenir le composé de formule (Ia). 15 L'étape (i) de ce nouveau procédé de préparation des composés de formule (Ia) consiste à utiliser des organozinciques au lieu des organomagnésiens pour obtenir un composé de formule (IVa). Cette méthode présente un avantage technique notable par rapport à l'utilisation des organomagnésiens, comme par exemple le bromure d'allylmagnésium, 20 car aucune purification à la fin de l'étape (i) n'est nécessaire et le produit est obtenu de façon quantitative. L'utilisation des organozinciques dans l'étape (i) permet la formation rapide et efficace d'hydroxyamides a, a-disubstitués. Similairement au procédé utilisant des organomagnésiens, le susdit procédé permet également de construire de manière efficace des oxazolones 25 présentant une large gamme de substituants en position 2 : alcényles, alcynyles, cycloalcényles, cycloalcynyles et aryles, etc. 3054546 14 L'étape (ii) dudit procédé peut comprendre successivement l'étape (iia) et l'étape (iib). L'étape (iia) consiste en l'oxydation du composé de formule (IVa) pour obtenir un composé de formule (Va') 5 (Va') dans laquelle Y et A sont tels que définis auparavant ; l'étape (iib) consiste en l'oxydation du composé de formule (Va') pour obtenir un composé de formule (Va). 10 La présente invention porte également sur les composés intermédiaires de formules (IVa), (Va'), (Va), dans lesquelles Y et A sont tels que définis auparavant. La présente invention fournit des composés hétérotétrafonctionnels 15 dont les différentes fonctionnalités peuvent être mises en oeuvre sélectivement et indépendamment les unes des autres pour conduire à la ligation de deux à quatre molécules d'intérêt selon des réactions de chimie click. La première fonction chimique commune aux composés répondant à 20 la formule (I) est de type azlactone (5-(4H)-oxazolone). Ce groupement est connu pour réagir par ouverture de cycle avec les fonctions amine primaire pour former un lien amide robuste dans des conditions douces, notamment en solution aqueuse. Cette réaction qui ne nécessite pas de catalyseur, ni forme de sous-produit, est donc compatible avec les milieux biologiques. Les 25 fonctions amines primaires sont très répandues dans la plupart des molécules biologiques (protéines, acides nucléiques notamment) et des molécules d'intérêt biologique, ce qui assure un champ d'application très large aux réactifs de cette invention. La deuxième et la troisième fonctions chimiques des composés de 30 formule (I) de l'invention sont liées respectivement aux deux substituants Ri qui réagissent avec des thiols par réaction thiol-ène ou thiol-yne. 3054546 15 Dans le cadre de la présente invention, les deux groupes Ri présents dans un composé de formule (I) selon la présente invention sont identiques et peuvent réagir indépendamment ou successivement avec différentes molécules d'intérêt. 5 La quatrième fonction chimique des composés de formule (I) de l'invention est le groupe Y qui est une fonction apte à subir des réactions de cycloaddition, de polymérisation, ou d'hydrothiolation (thiol-ène ou thiolyne). Par une combinaison judicieuse de leurs différentes fonctions et de 10 l'ordre dans lequel elles sont soumises aux transformations chimiques, ces nouveaux composés permettent de réaliser des ligations bioorthogonales par adressage sélectif des différentes fonctions chimiques présentes, avec une économie totale d'atomes et sans nécessiter d'étapes de protection/déprotection. 15 Les composés de la présente invention sont applicables à une large gamme de (macro)molécules biologiques ou synthétiques, qu'il s'agisse de protéines, d'acides nucléiques, de polysaccharides, de marqueurs (biologiques ou synthétiques) et d'une manière générale de polymères et molécules d'intérêt biologiques. Les liaisons chimiques formées entre les 20 molécules d'intérêt et les composés de l'invention, telles que triazole, amide gem-disubstitué, thioéther, sont robustes et compatibles avec une vaste gamme de fonctionnalités chimiques ainsi qu'avec les milieux biologiques et les organismes vivants, tant in vitro que in vivo. Les quatre fonctions chimiques présentes dans les composés selon 25 l'invention peuvent réagir dans des conditions différentes, indépendamment les unes des autres. Il est ainsi possible de déclencher la réaction de l'un de ces quatre groupements sans que l'autre ne soit transformé, permettant ainsi des réactions successives chimiosélectives. Les composés hétérotétrafonctionnels de formules (I), (Ia), 30 (Ia2), (Ia3), (Ia4), (Ia5), (Ia6) et (Ib) constituent de nouveaux composés de ligation pour la bioconjugaison, le diagnostic, la thérapie et la fonctionnalisation de surfaces. La présente invention vise également à proposer un procédé de couplage entre, au maximum, quatre molécules d'intérêt différentes choisies 35 dans le groupe comprenant une molécule d'intérêt biologique, un polymère 3054546 16 naturel ou synthétique, lesdites molécules d'intérêt étant soit des molécules portant une amine primaire, soit des molécules portant un groupe sulfhydryle, soit des molécules portant une fonction réactive pour mettre en oeuvre une cycloaddition, une hydrothiolation, ou une polymérisation. 5 Ledit procédé comprend les étapes suivantes : (i) mise en contact d'un composé de formule (I), (Ia) ou (Ib) de l'invention tel que décrit auparavant avec une première molécule d'intérêt, (ii)éventuellement, mise en contact dudit composé obtenu à la fin de 10 l'étape (i) avec une deuxième molécule d'intérêt, (iii) éventuellement, mise en contact du composé obtenu à la fin de l'étape (ii) avec une troisième molécule d'intérêt, (iv) éventuellement, mise en contact du composé obtenu à la fin de l'étape (iii) avec une quatrième molécule d'intérêt. 15 Une molécule d'intérêt portant une amine primaire peut réagir avec la fonction azlactone d'un composé de formule (I), (Ia) ou (Ib) de l'invention par l'ouverture du cycle azlactone. Une molécule d'intérêt portant un groupe sulfhydryle peut réagir par hydrothiolation avec un groupe Ri d'un composé de formule (I), (Ia) ou (Ib) 20 de l'invention. Une molécule d'intérêt portant une fonction réactive pour mettre en oeuvre une cycloaddition, une hydrothiolation, ou une polymérisation peut réagir avec le groupe Y d'un composé de formule (I), (Ia) ou (Ib) de l'invention. 25 On entend par « une fonction réactive pour mettre en oeuvre une cycloaddition, une hydrothiolation, ou une polymérisation », toute fonction connue dans l'art antérieur apte à participer à une cycloaddition, une hydrothiolation, ou une polymérisation. (M. B. Smith, J. March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 6th 30 Edition, Copyright John Wiley & Sons, Inc., 2007). On peut citer à titre d'exemple de fonctions aptes à participer à une cycloaddition, les groupes azotures, alcynyles, cycloalcynyles et diènes conjugués. On peut citer à titre d'exemple de fonctions aptes à participer à une 35 hydrothiolation les groupes alcényles, cycloalcényles, alcynyles. 3054546 17 Un groupe alcényle peut également être impliqué dans une polymérisation. Conformément à la présente invention, les molécules d'intérêt biologiques sont choisies dans le groupe comprenant des protéines, des 5 anticorps, des peptides, de l'ADN, de l'ARN, des siARN, des miARN, des marqueurs biologiques, des hormones, des vitamines, des lipides, des monosaccharides, des oligosaccharides, des polysaccharides, des glycanes, des molécules chimiques de synthèse comme des anticancéreux, des antiviraux, ou des marqueurs fluorescents ou radioactifs. 10 Lorsqu'une molécule d'intérêt biologique ne comporte pas naturellement une amine primaire, ni un groupe sulfhydryle, ni une fonction réactive pour mettre en oeuvre une cycloaddition, une hydrothiolation, ou une polymérisation, ladite molécule peut subir préalablement une réaction de fonctionnalisation pour intégrer une amine primaire, un groupe 15 sulfhydryle ou une fonction réactive pour mettre en oeuvre une cycloaddition, une hydrothiolation, ou une polymérisation. Conformément à la présente invention, une molécule d'intérêt peut être aussi un polymère naturel ou synthétique. On peut citer par exemple, le polypropylène ou polyéthylène possédant des fonctions amine. 20 Ledit polymère naturel ou synthétique peut former une surface réactive, telle qu'un film, un tissu, la surface de contact d'une microplaque, etc. Dans un mode de réalisation particulier, le procédé de couplage de l'invention concerne un couplage entre trois molécules d'intérêt biologique 25 différentes et un polymère naturel ou synthétique. Ledit procédé peut, par exemple, coupler trois molécules d'intérêt biologique avec une surface en polymère, telle que celle d'une microplaque. Dans un autre mode de réalisation particulier, le procédé de couplage de l'invention concerne un couplage entre quatre molécules 30 d'intérêt biologiques différentes. Conformément au procédé de couplage de l'invention, il est possible d'introduire sélectivement différentes molécules d'intérêt sur la structure d'oxazolone du composé de formule (I) de l'invention en réalisant des réactions d'hydrothiolation d'alcène, d'addition nucléophile sur l'oxazolone 35 ou encore des réactions de cycloaddition. Ainsi, le procédé de couplage de la 3054546 18 présente invention peut être utilisé dans des procédés comme par exemple : - le greffage d'un anticorps par réaction d'hydrothiolation, - l'introduction d'une sonde fluorescente, 5 - la conjugaison avec un fragment radiomarqué, - l'introduction d'un groupe chimique induisant la formation d'un objet hydrosoluble (PEG,...). Dans un mode de réalisation particulier du procédé de couplage de l'invention, l'étape relative à la mise en contact d'un composé de formule 10 (I), (Ia) ou (Ib) avec une molécule d'intérêt portant une amine primaire a lieu avant l'étape relative à la mise en contact dudit composé avec une autre molécule d'intérêt portant une fonction sulfhydryle. Cette méthode particulière permet d'introduire une molécule d'intérêt portant une fonction sulfhydryle sur une seule fonction Ri. 15 Conformément à la présente invention, ledit procédé de couplage est un procédé (bio)orthogonal. On entend par "procédé (bio)orthogonal" (E. M. Sletten, C. R. Bertozzi, Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 48, 2-27) un procédé pouvant avoir lieu dans un milieu biologique complexe sans le dénaturer. 20 Les conditions de réaction pour les cycloadditions, l'ouverture de l'oxazolone, ou l'hydrothiolation sont bien connues de l'homme du métier. La présente invention concerne également un kit de couplage comprenant au moins un composé de formule (I), (Ia), (Ia2), (Ia3), (Ia4), (Ia5), (Ia6) ou (Ib) tel que décrit auparavant en tant que réactif de 25 couplage. La présente invention a également pour objet l'utilisation d'au moins un des composés de formule (I), (Ia), (Ia2), (Ia3), (Ia4), (Ia5), (Ia6) ou (Ib) tel que décrit auparavant comme réactif de diagnostic et une méthode de diagnostic in vitro mettant en oeuvre un composé de formule 30 (I), (Ia), (Ia2), (Ia3), (Ia4), (Ia5), (Ia6) ou (Ib) tel que décrit auparavant. En effet, les agents de couplage présentent une utilité dans le domaine du diagnostic, notamment dans la détection de réactions du type ligand-anti- ligand tel que antigène-anticorps ou protéine-protéine, car ils 35 permettent de coupler directement une molécule d'intérêt biologique, telle 3054546 19 qu'un antigène, à une molécule dite de révélation, telle qu'une enzyme. La liaison de la molécule biologique d'intérêt à une autre molécule, telle qu'un anticorps, est mise en évidence grâce à la molécule de révélation. Il peut être également utile de coupler une sonde fluorescente à une molécule 5 d'intérêt biologique pour sa détection par imagerie fonctionnelle. L'invention vise également à mettre à disposition une composition comprenant un composé de formule (I), (Ia) ou (Ib) tel que décrit auparavant en association avec un milieu aqueux ou organique. Comme milieu organique, on peut citer par exemple le 10 diméthylsulfoxyde (DMSO) compatible avec les cultures cellulaires. L'invention est illustrée plus en détail ci-après par les exemples et les figures. La figure 1 illustre le schéma du procédé de préparation d'un 15 composé de formule (Ia) de l'invention. La figure 2 illustre différents modes de couplage entre un composé de la présente invention et des molécules d'intérêt. Les différents types de molécules d'intérêt sont représentés par les symboles de forme ronde, ovale ou rectangulaire. La fonction Z portée par une molécule d'intérêt est une 20 fonction réactive pour mettre en oeuvre une cycloaddition, une hydrothiolation, ou une polymérisation. Les figures 3A et 3B montrent l'analyse par résonance magnétique nucléaire (RMN) du composé N-(4-(benzylcarbamoyl)hepta-1,6-dien-4-yI)-4- ethynylbenzamide (figure 3A) et du composé N-(4-(benzylcarbamoyl)hepta- 25 1,6-dien-4-y1)-4-(1-polyéthylèneglycolmonométhylether-1H-1,2,3-triazol-4- yl)benzamide (figure 3B). Exemple 1 : Protocole de préparation d'un composé de formule (1a) Il est illustré dans le schéma illustré dans la figure 1. 30 1.1 Synthèse du composé de formule IVa Dans un ballon bicol muni d'un réfrigérant sous argon, contenant du zinc (3,2 mmol, 209 mg) en suspension dans 20mL de THF et porté à reflux, est ajouté goutte à goutte du bromure d'allyle (3 mmol, 0,26 mL). Le mélange est agité à reflux 90 min puis une solution d'acylcyanhydrine de 35 formule (II) (1 mmol) dans 3mL de THF est ajoutée goutte à goutte. Le 3054546 20 mélange est agité à reflux 90 min puis est hydrolysé en ajoutant 10 mL d'HCI (1M) à température ambiante. La phase aqueuse est extraite avec de l'acétate d'éthyle (2 x 20mL). Les phases organiques sont rassemblées, basifiées avec NaOH 2M, et lavées avec NaClsat. Après séchage sur MgSO4, 5 filtration, et concentration sous pression réduite, le produit de formule (IVa) est obtenu pur. 1.2 Synthèse du composé de formule (Va'). Dans un ballon contenant le tamis moléculaire 4Â (760 mg) et 10 l'alcool de formule (IVa) (1 mmol) obtenu à l'étape 1, en suspension dans 10 mL de CH2Cl2, sont ajoutés le TPAP (0,05 mmol; 12 mg) et le NMO (3 mmol, 351 mg). Le mélange est agité 30 min sous argon et filtré sur gel de silice, puis la silice est lavée avec CH2Cl2. Après concentration du filtrat sous pression réduite, l'aldéhyde de formule (Va') est obtenu pur. 15 1.3 Synthèse du composé de formule (Va) Dans un ballon contenant l'aldéhyde de formule (Va') (1 mmol) obtenu à l'étape 2, dissous dans 10 mL d'acétonitrile refroidi dans un bain de glace, sont ajoutés NaH2PO4, 2H20 (0,5 mmol; 78 mg), H202 38% (2 20 mmol; 0,2 mL) et NaClO2à 80% (1.5 mmol; 170 mg). La solution est agitée 2 h à température ambiante puis du Na2SO3 (0,8 mmol; 101 mg) est ajouté. La réaction est laissée sous agitation 1 h et 2 mL de solution aqueuse de KHSO4 (1M) est introduit. La phase aqueuse est basifiée par ajout d'une solution de NaOH (2M) puis extraite avec de l'acétate d'éthyle (3 x 20mL). 25 Les phases organiques sont rassemblées puis lavées avec NaHCO3sat (3 x 20mL). Les phases aqueuses sont réunies, acidifiées avec HCI concentré jusqu'à pH=3, puis extraites à l'acétate d'éthyle (3 x 20mL). Après séchage sur MgSO4, filtration, et concentration sous pression réduite, l'acide de formule (Va) est obtenu pur. 30 1.4 Synthèse du composé de formule (Ia) Dans un ballon, sous atmosphère d'argon, l'acide de formule (Va) (1 mmol) est dissous dans la triéthylamine (1,5 mmol; 0,21 mL) et 5 mL d'acétone. Le mélange est refroidi par un bain de glace, puis du 35 chloroformiate d'éthyle (1 mmol; 0,1 mL) est ajouté goutte à goutte et la 3054546 21 solution est agité 3 h à 0 °C. Le mélange est filtré sur gel de silice puis la silice est lavée avec Et20. Après concentration du filtrat sous pression réduite, l'azlactone de formule (Ia) est obtenue pure. 5 Exemple 2 : Synthèse du 4,4-Diallyl-2-(4-vinylphénypoxazol-5(4H)one (composé (lai)) Le composé est synthétisé selon la méthode décrite dans l'exemple 1. 2.1/Synthèse de N-(4-(Hydroxyméthyl)hepta-1,6-dién-4-yl)-4- 10 vinylbenzamide Ce composé répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.1 de l'exemple 1 sous forme d'une huile ayant une couleur marron (Rdt = quantitatif.). 0 6 4 ' FIN 3 OH t 15 RMN 1H (CDCI3, 400MHz) : 15=7,67 (m, 2 H, Ar) ; 7,44 (m, 2 H, Ar) ; 6,73 (dd, 1 H, J = 17,6 Hz, J = 11,0 Hz, H2) ; 6,41 (s, 1 H, NH) ; 5,9 (m, 2 H, H5, H'5) ; 5,83 (dd, 1 H, J = 0,7 Hz, J = 17,6 Hz, H1) ; 5,35(dd, 1 H, J = 0,7 Hz, J = 11,0 Hz, H1'), 5.22 (m, 4 H, H6, H6') ; 3,76 (s, 2 H, H3) ; 2,64 (m, 2 H, H4a, H4'a), 2,4 (m, 2 H, H4b, H4'b) ppm. 20 RMN 13C (CDCI3, 100MHz) : 15=167,9 ; 141,1 ; 135,9 ; 133,7 ; 133,1 ; 127,3 ; 126,5 ; 119,9 ; 116,3 ; 67,9 ; 60,2 ; 38,9 ppm. IR (film): û = 3395, 2928, 1737, 1638, 1499, 914, 856, 780 cm-1. HRMS (ESI+) : m/z [M + Na] calculé pour C17H21NNa02: 294,1470 ; trouvé : 294,1464. 25 2.2/ Synthèse de N-(4-Formylhepta-1,6-dién-4-y1)-4-vinylbenzamide Ce composé répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.2 de l'exemple 1 sous forme d' un solide de couleur marron (Rdt =68%). 3054546 22 2 RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) : 15=9,46 (s, 1 H, H3), 7,73 (m, 2 H, Ar) ; 7,44 (m, 2 H, Ar) ; 6,91 (s, 1 H, NH) ; 6,73 (dd, 1 H, J = 17,6 Hz, J = 10,7 Hz, H1) ; 5 ;82 (d, 1 H, J = 17,7Hz, H2) ; 5,66 (m, 2 H, H5) ; 5,35(d, 1 H, J = 5 11 ; 0 Hz, H1'), 5,13 (m, 4 H, H6) ; 3,01 (dd, 2 H, J = 14,3 Hz, J = 7,3 Hz, H4a, H4'a) ; 2,66 (dd, 2 H, J = 14,3 Hz, J = 7,3 Hz, H4b, H4'b) ppm. RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) : b= 200,0 ; 166,6 ; 141,1 ; 135,9 ; 133,1 ; 131,5 ; 127,3 ; 126,5 ; 120,1 ; 116,6 ; 65,7 ; 37,0 ppm. IR (film): û = 3293, 2920, 2160, 1635, 1547, 1251, 925, 842, 763 cm-1. 10 2.3/ Synthèse de Acide 2-allyI-2-(4-vinylbenzamido)pent-4-énoïque Ce composé répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.3 de l'exemple 1 sous forme d'un solide blanc (Rdt = 58%). 5 H 1' 2 15 RMN 1H (DMSO, 400 MHz): b= 12,6 (sl, 1H, COOH) ; 8,11 (s, 1 H, NH) ; 7,80 (m, 2 H, Ar) ; 7,57 (m, 2 H, Ar) ; 6,80 (m, 1 H, H2) ; 5,95 (dd, 1 H, J = 17,7 Hz, J = 0,8 Hz, H1) ; 5,71 (m, 2 H, H4) ; 5,37 (dd, 1 H, J = 10,8 Hz, J = 0,8 Hz, H1') ; 5,08 (m, 4 H, H5) ; 2,75 (dd, 2 H, J = 14,0 Hz, J = 7,4 Hz, H3a, H3'a), 2,64 (dd, 1 H, J = 14,0 Hz, J = 7,4 Hz, H3b, H3'b) ppm. 20 RMN 13C (DMSO, 100 MHz): b= 173,4 ; 165,3 ; 139,9; 135,9; 133,5; 132,8; 127,6; 125,9; 118,6; 116,2; 61,4; 37,5 ppm. IR (film): û = 3365, 2924, 1713, 1600, 1525, 1333, 1220, 991, 916, 855 cm* HRMS (ESI±) : m/z [M + H] + calculé pour C17H20NO3: 286.1443 ; trouvé : 25 286.1429. 2.4/ Synthèse 4,4-Dially1-2-(4-vinylphényl)oxazol-5(4H)-one 3054546 23 Le composé final (composé (Ia1)) répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.4 de l'exemple 1 sous forme d'une huile jaune clair avec un rendement de 95 %. 1 1' 2 5 RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) : b= 7,95 (m, 2H, Ar); 7,48 (3, 2H, Ar); 6,74 (dd, 1H, J = 17,6 Hz, J = 10,8 Hz, H2); 5,87 (d, 1H, J = 17,6 Hz, H1); 5,66 (m, 2H, H4); 5,39 (d, 1H, J = 17;6 Hz, H1'); 5,13 (m, 4H, H5); 2,7 (dd, 2H, J = 13.6 Hz, J = 6,9 Hz, H3a, H3'a); 2,59 (dd, 2H, J = 13,6 Hz, J = 7,8 Hz, H3b, H3'b) ppm. RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) : b= 179,1; 159,9; 141,9; 135,9; 130,9; 128,3; 126,5; 124,9; 120,5; 116,7; 73,7; 41,1 ppm. IR (film): û =3082, 2983, 1816, 1650, 1408, 1317, 1292, 1041, 972, 922, 890, 853, 709 cm-1. 15 Exemple 3: Synthèse du 4,4-Diallyl-2-(4-(éthynyl)phényl)oxazol5(4H)-one (composé (Ia2)) Le composé est synthétisé selon la méthode décrite dans l'exemple 1. 20 3.1/ Synthèse de N-(4-(Hydroxymethyl)hepta-1,6-dién-4-y1)-4- ((trimethylsilyOéthynyObenzamide Ce composé répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.1 de l'exemple 1 sous forme d'un solide de une couleur jaune (Rdt = quantitatif). 25 5 TMS 3054546 24 RMN 1H (CDCI3, 400MHz) : 15= 7,63 (m, 2 H, Ar) ; 7,51 (m, 2 H, Ar) ; 6,37 (s, 1 H, NH) ; 5,90 (m, 2 H, H2) ; 5,23 (m, 2 H, H4) ; 3,76 (s, 2 H, H4) ; 2,65 (dd, 2 H, J = 13,8 Hz , J = 6,5 Hz , H3a, H3'a') ; 2,38 (dd, 2 H, J = 13,8 Hz , J = 8,5 Hz , H3b, H3'b) 0,25 (m, 9 H, H5) ppm. 5 RMN 13C (CDCI3, 100MHz) : 15= 167,6 ; 134,3 ; 133,0 ; 132,3 ; 126,9 ; 126,8 ; 120,1 ; 104,0 ; 97,5 ; 68,1 ; 60,5 ; 39,1 ; 0,3ppm. HRMS (ESI+) : m/z [M + H]+ calculé pour C2oH28NO2Si : 342,1889 ; trouvé : 342,1889. 10 3.2/ Synthèse de N-(4-Formylhepta-1,6-dién-4-y1)-4- ((triméthylsilyOéthynyObenzamide Ce composé répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.2 de l'exemple 1 sous forme d'une huile marron (Rdt = 61%). TMS 1 15 RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) : 15= 9,30 (s, 1 H, CHO) ; 7 ;73 (m, 2 H, Ar) ; 7,53 (m, 2 H, Ar) ; 5,64 (m, 2 H, H4) ; 5,14 (m, 4 H, H5) ; 3,07 (dd, 2 H, J = 14,2 Hz, J = 7,5 Hz, H3a, H3'a) ; 2,66 (dd, 2 H, J = 14,2 Hz, J = 7,5 Hz, H3b, H3'b') 0,3 (s, 9H, CH3) ppm. RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) : 15= 166,6 ; 133,2 ; 132,6 ; 131,2 ; 131,9 ; 20 128,0 ; 127,2 ; 120,5 ; 104,0 ; 66,3 ; 41,2 ; 35,9 ; 0,6 ppm. HRMS (ESI+) : m/z [M + H]+ calculé pour C201-126NO2: 340,1733; trouvé : 340,1707. IR (film): û = 3293, 2158, 1741, 1629, 1525, 1251, 922, 842, 760 cm-1 25 3.3/ Synthèse de Acide 2-ally1-2-(4-(éthynyObenzamido)pent-4-enoïque Ce composé répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.3 de l'exemple 1 sous forme d'un solide jaune (Rdt = 50%). 3054546 25 RMN 1H (DMSO, 400 MHz) :15= 12,6 (sl, 1 H, COOH) ; 8,23 (s, 1 H, NH) ; 7,82 (m, 2 H, Ar) ; 7,58 (m, 2 H, Ar) ; 5,71 (m, 2 H, H3) ; 5,07 (m, 4 H, H4) ; 4,37 (s, 1 H, H1) ; 2,74 (dd, 2 H, J = 14,0 Hz, J = 7,3 Hz, H3a, H3'a) ; 5 2,61 (dd, 2 H, J = 14,0 Hz, J = 7,3 Hz, H3b, H3'b) ppm. RMN 13C (DMSO, 100 MHz) :15= 173,3; 165,0; 134,3; 132,7; 131,6; 124,9; 118,7; 82,8; 81,5; 61,4; 37,4 ppm. 3.4/ Synthèse de 4,4-DiallyI-2-(4-(éthynyl)phényl)oxazol-5(4H)-one 10 (composé (Ia2)) Le composé final (composé (Ia2)) répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.4 de l'exemple 1 sous forme d'une huile marron avec un rendement de 98%. 1 15 RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) : 15=7,73 (m, 2H, Ar) ; 7,55 (m, 2H, Ar) ; 5,64 (m, 2H, H3) ; 5,13 (m, 4H, H4) ; 3,27 (dd, 2H, J = 14,1 Hz, J = 7,7 Hz, H2a, H2'a), 3,22 (s, 1H, H1) ; 2,70 (dd, 2H, J = 14,1 Hz, J = 7,0 Hz, H2b, H2'b) ppm RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) : 15= 176,6 ; 168,4 ; 133,7 ; 135,5 ; 131,5 ; 20 127,1 ; 126,3 ; 120,1 ; 82,6 ; 80,0 ; 66,0 ; 38,9 ppm. IR (film): û =3283, 2980, 1721, 1609, 1531, 1499, 1235, 1097, 927, 855, 769 cm-1. Exemple 4 : Synthèse du 4,4-Diallyl-2-(anthracèn-9-yl)oxazol25 5(4H)-one (composé (Ia3)) 3054546 26 Le composé est synthétisé selon la méthode décrite dans l'exemple 1. 4.1/ Synthèse de N-(4-(Hydroxyméthyl)hepta-1,6-dién-4-y0anthracène-9- carboxamide 5 Ce composé répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.1 de l'exemple 1 sous forme d'un solide de couleur jaune (Rdt = 96%). RMN 1H (CDCI3, 400 MHz): 15=8,47 (s, 1 H, Ar) ; 8,10 (dd, 2 H, Ar) ; 8,00 10 (dd, 2 H, Ar) ; 7,5 (m, 4 H, Ar) ; 6,23 (s, 1 H, NH) ; 5,9 (m, 2 H, H3, H3') ; 5,15(m, 4 H, H4, H4') ; 5,97 (s, 2 H, H1) ; 2,72 (dd, 2 H, J =13,7 Hz, J = 6,9 Hz, H2a, H2'a) ; 2,50 (dd, 2 H, J = 13,7 Hz, J = 8,2 Hz, H2b, H2'b') ppm. RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) : 15=170,7 ; 132,3 ; 131,4 ; 131,1 ; 128,7 ; 128,6 ; 127,9 ; 127,0 ; 125,6 ; 124,8 ; 120,3 ; 67,8 ; 61,8 ; 39,5 ppm. 15 HRMS (ESI±) : m/z [M + H]+ calculé pour C23H24NO2 :346,1807 ; trouvé : 346,1798. IR (film): û = 2961, 2162, 1734, 1601, 1251, 1093, 842, 700 cm* 4.2/ Synthèse de N-(4-Formylhepta-1,6-dién-4-y0anthracène-9- 20 carboxamide Ce composé répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.2 de l'exemple 1 sous forme d'un solide jaune (Rdt = 64%). RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) : 15= 9,67 (s, 1 H, CHO) ; 8,45 (s, 1 H, Ar) ; 8,14 25 (m, 2 H, Ar) ; 7,98 (m, 2 H, Ar) ; 7,47 (m, 4 H, Ar) ; 6,66 (s, 1 H, NH) ; 3054546 27 5,77 (m, 2 H, H2) ; 5,22 (m, 4 H, H1) ; 3,1 (dd, 2 H, J = 14,5 Hz, J = 7,6 Hz, H3a, H3'a) ; 2,79 (dd, 2 H, J = 14,6 Hz, J = 7,0 Hz, H3b, H3'b) ppm. RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) : b= 199,5 ; 169,1 ; 131,2 ; 131,1 ; 130,7 ; 128,7 ; 128,6 ; 128,2 ; 126,8 ; 125,6 ; 124,8 ; 120,6 ; 66,0 ; 39,5ppm. 5 HRMS (ESI±) : m/z [M + H]+ calculé pour C23H22NO2 :344,1651 ; trouvé : 344,1654. IR (film): û = 3200, 3034, 2922, 1737, 1616, 1525, 1439, 994, 924, 735 cm-1. 10 4.3/ Synthèse de Acide 2-allyI-2-(anthracène-9-carboxamido)pent-4- enoïque Ce composé répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.3 de l'exemple 1 sous forme d'un solide jaune (Rdt = 35%). 1 15 RMN 1H (DMSO, 400 MHz) : b= 13,0 (sl, 1H, COOH) ; 9,03 (s, 1 H, Ar) ; 8,24 (m, 2 H, Ar) ; 8,10 (m, 2 H, Ar) ; 7,56 (m, 4 H, Ar) ; 5,88 (m, 2 H, H2) ; 5,20 (m, 4 H, H1) ; 2,91 (dd, 2 H, J = 14,4 Hz, J = 7,0 Hz, H3a, H3'a) ; 2,60 (dd, 2 H, J = 14,4 Hz, J = 7,3 Hz, H3b, H3'b) ppm. RMN 13C (DMSO, 100 MHz) : b= 173,4; 167,8; 132,7; 132,5; 130,6; 128,2; 20 127,7; 127,2; 126,1; 125,5; 125,4; 119,0; 61,3; 37,7 ppm. IR (film): û = 3380, 2918, 1721, 1611, 1510, 1443, 1205, 1130, 909, 732 cm-1. HRMS (ESI±) : m/z [M + H]+ calculé pour C23H22NO3 : 360,1600 ; trouvé : 360,1598. 25 4.4/ Synthèse de 4,4-Dially1-2-(anthracèn-9-y0oxazol-5(4H)-one (composé (Ia3)) 3054546 28 Le composé (Ia3) répondant à la formule ci-dessous est obtenu par le protocole de l'étape 1.4 de l'exemple 1 sous forme d'un solide jaune avec un rendement de 90%. 5 RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) : 15= 8,61 (s, 1H, Ar); 8,30 (m, 2H, Ar); 8,05 (m, 2H, Ar); 7,52 (m, 4H, Ar); 5,96 (m, 2H, H2); 5,37 (m, 4H, H3); 2,86 (m, 4H, H1) ppm. RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) : 15= 179,6; 160,3; 131,5; 131,2; 130,9; 130,4; 128,9; 127,5; 125,6; 125,2; 121,3; 121,1; 119,9; 41,5 ppm. 10 IR (film): û =2924, 2853, 1816, 1657, 1302, 1197, 1054, 994, 922, 734 cm-1. Exemple 5 : Procédé de couplage Trois types de couplage peuvent être mis en oeuvre par un composé 15 de formule I de la présente invention (figure 2). 5.1 Ouverture de cycle azlactone Dans un ballon est introduit 0,1 mmol d'un composé de formule composé (Ia2) avec 0,6 mL du DMSO. La benzylamine est ensuite introduite 20 dans le ballon (11 pL, 0,1 mmol) et le mélange est chauffé à 40 °C pendant 24 h. De l'HCI 3M est ajouté en faible quantité puis le mélange est extrait à l'éther diéthylique (3 x 10 mL). Le produit répondant à la formule ci-dessous (N-(4-(benzylcarbamoyphepta-1,6-dien-4-y1)-4-ethynylbenzam ide) est récupéré après passage à l'évaporateur rotatif. II 30 7 25 5 0 3. O 1 3054546 29 RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) : 6 =7,68 (m, 2 H, Ar) ; 7,48 (m, 3 H, Ar) ; 7,29 (m, 4 H, Ar) ; 5,67 (m, 2 H, H4) ; 5,08 (m, 4 H, H5) ; 4,15 (s, 2 H, H1) ; 3,27 (dd, 2 H, J = 13,7 Hz, J = 7,7 Hz, H3a, H3'a) ; 3,19 (s, 1H, H7) ; 2,65 (dd ; 2 H ; J = 13,7 Hz ; J = 6,9 Hz ; H3b ; H3'b) ppm. 5 RMN 13C (CDCI3, 100MHz) : 6 =176,4 ; 165,7 ; 135,3 ; 132,9 ; 132,2 ; 129,3 ; 129,0 ; 128,7 ; 127,9 ; 126,9 ; 125,1 ; 118,8 ; 82,8 ; 79,4 ; 64,6 ; 44,1 ; 39,3 ppm. IR : v = 3376; 3071; 2928; 2259; 1639; 1525; 1490; 1026 cm-1 10 5.2 Protocole de cycloaddition Dans un Schlenk sous argon contenant 1mmol du composé A obtenu dans l'étape 5.1 précédent, 1 mmol d'un azoture B, le pentaméthyldiéthylènetriamine (PMDETA, 1,2mmol) en suspension dans 10mL de DMF dégazé est ajouté le CuBr (0,32 mmol). Le mélange est laissé 15 agiter 24h à température ambiante. La réaction est illustrée ci-après. 1-13C0. N3 1/41 n CuBr/PMDETA/DMF 24h, TA A Après la réaction, le mélange est dilué dans 50mL du dichlorométhane (DCM) et lavé avec une solution aqueuse 20 d'éthylènediaminetétraacétate (0,03mol/L). Après séchage sur MgSO4, filtration, et concentration sous pression réduite, le produit (N-(4- (benzylcarbamoyphepta-1,6-dien-4-y1)-4-(1- polyéthylèneglycol monométhylether-1H-1,2,3-triazol-4-yl)benzam ide) est obtenu sous forme d'un solide jaune. 25 Le produit de cycloaddition obtenu est également caractérisé par résonance magnétique nucléaire du proton (figures 3A et 3B) qui montre qu'après réaction le pic de l'hydrogène de l'alcyne correspondant au composé A (N-(4-(benzylcarbamoyphepta-1,6-dien-4-y1)-4- ethynylbenzamide) (figure 3A) a disparu au profit d'un nouveau pic 30 correspondant au proton du cycle triazole du produit de cycloaddition obtenu (figure 3B). 3054546 30 Le produit de cycloaddition obtenu peut également être analysé par spectrométrie de masse à temps de vol (MALDI-TOF-MS) qui montre une distribution des signaux séparés par la masse d'une unité oxyde d'éthylène, soit 44 Da. 5 5.3 Protocole d'hydrothiolation Dans un ballon sous argon contenant 1 mmol d'un composé de formule I en suspension dans 0,5 du dimethylformamide (DMF) est ajouté le benzylmercaptan (2 mmol) et le diméthoxyphenylacétophénone (0,1 mmol). 10 Le mélange est laissé agiter 1h à température ambiante sous UV puis concentré sous pression réduite. Ensuite une purification sur gel de silice est effectuée. REVENDICATIONS1 Composé de formule générale (I) Y, -A VL 0 - N dans laquelle : - Y est un groupement fonctionnel réactif choisi dans le groupe comprenant : (i) un groupe N3, (ii) un groupe alcényle en C2-Cio, (iii) un groupe alcynyle en C2-Cio, (iv) un groupe cycloalcényle en (C3-Cio), notamment un groupe cycloalcényle en (C3-C7), (y) un groupe cycloalcynyle en (C7-Cio), plus particulièrement un groupe cyclooctynyle ou un dérivé de cyclooctyne, (vi) un groupe anthracényle, éventuellement substitué par un halogène ou un alkyle en (C1-C4) linaire ou ramifié, (vii) un groupe furanyle, éventuellement substitué par un halogène ou un alkyle en (C1-C4) linaire ou ramifié, (viii) un groupe maléimidyle, éventuellement substitué par un halogène ou un alkyle en (C1-C4) linaire ou ramifié, (ix) un groupe tétrazinyle, éventuellement substitué par un halogène ou un alkyle en (C1-C4) linaire ou ramifié, (x) un groupe apte à une cycloaddition, - A est un groupement choisi parmi : (a) une chaîne alkylène -(CH2)m- linaire ou ramifiée, m étant un nombre entier de 0 à 20, (b) un groupe aromatique de 6 à 14 atomes de carbone éventuellement substitué par au moins un substituant choisi dans le groupe comprenant les atomes d'halogènes et les groupes alkyles en (C1-C4) linaire ou ramifié, 3054546 32 (c) un groupe cycloalkyle en (C3-Ci8), éventuellement substitué par au moins un substituant choisi dans le groupe comprenant les atomes d'halogènes et les groupes alkyles en (Ci-C4) linaire ou ramifié, 5 (d) un groupe hétérocyclique comprenant de 3 à 18 chaînons, éventuellement substitué par au moins un substituant choisi dans le groupe comprenant les atomes d'halogènes et les groupes alkyles en (Ci-C4) linaire ou ramifié - Ri est un groupe alcényle en C2-Cio ou un groupe alcynyle en C2-Cio 10 - n est un nombre entier de 0 à 3. 2. Composé selon la revendication 1, dans lequel : - Ri représente le groupe -CH=CH2; - n est égal à 1, 15 ledit composé correspondant à la formule générale (Ia) Y ic' VL 0 ' N (Ia) dans laquelle A et Y sont tels que définis dans la revendication 1. 20 3. Composé selon la revendication 2, ledit composé étant choisi dans le groupe comprenant : 3054546 33 (Ia2) (Ia3) (Ia4) (Ia5) (Ia6) 5 4. Composé selon la revendication 1, dans lequel : - Ri représente le groupe -CCI-1 ; - n est égal à 1, ledit composé correspondant à la formule générale (Ib) YNA 0 N O (Ib) dans laquelle A et Y sont tels que définis dans la revendication 1. 10 3054546 34 5. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1-4, comprenant : (i) réaction entre un composé de formule (II) A 0 Y-- NCNI 5 (II) dans laquelle Y et A sont tels que définis dans la revendication 1, et un composé de formule (IIIb) MgX (IIIb) 10 dans laquelle Ri et n sont tels que définis dans la revendication 1, pour obtenir un composé de formule (IVb) A Y )1 0 (IVb) dans laquelle Y, A, Ri et n sont tels que définis dans la revendication 1; 15 (ii) oxydation du composé de formule (IVb) pour obtenir un composé de formule (Vb) (Vb) dans laquelle Y, A, Ri et n sont tels que définis dans la revendication 1; 20 (iii) cyclisation d'un composé de formule (Vb) pour obtenir un composé de formule (I). 6. Procédé de préparation d'un composé de formule (Ia) 3054546 35 YNA OVN (Ia) dans laquelle Y et A sont tels que définis dans la revendication 1, ledit procédé comprenant les étapes suivantes: 5 (i) réaction entre un composé de formule (II) A 0 Y-- NCNI (II) dans laquelle Y et A sont tels que définis dans la revendication 1, et un composé de formule (IIIa) ZnX X étant choisi parmi F, Cl, Br et I, pour obtenir un composé de formule (IVa) 10 OH 15 (IVa) dans laquelle Y et A sont tels que définis dans la revendication 1 ; (ii) oxydation du composé de formule (IVa) pour obtenir un composé de formule (Va) 3054546 36 OH (Va) dans laquelle Y et A sont tels que définis dans la revendication 1 ; (iii) cyclisation d'un composé de formule (Va) pour obtenir un composé de 5 formule (Ia). 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'étape (ii) dudit procédé comprend successivement l'étape (iia) et l'étape (iib), l'étape (iia) consistant en l'oxydation du composé de formule (IVa) pour 10 obtenir un composé de formule (Va') (Va') dans laquelle Y et A sont tels que définis dans la revendication 1 ; l'étape (iib) consistant en l'oxydation du composé de formule (Va') pour 15 obtenir un composé de formule (Va). 8. Procédé de couplage entre, au maximum, quatre molécules d'intérêt différentes choisies dans le groupe comprenant une molécule d'intérêt biologique, un polymère naturel ou synthétique, lesdites molécules d'intérêt 20 étant des soit des molécules portant une amine primaire, soit des molécules portant un groupe sulfhydryle, soit des molécules portant une fonction réactive pour mettre en oeuvre une cycloaddition ou une polymérisation, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : (i) mise en contact d'un composé de formule (I), (Ia) ou (Ib) selon l'une 25 quelconque des revendications 1-4 avec une première molécule d'intérêt, (ii)éventuellement, mise en contact dudit composé obtenu à la fin de l'étape (i) avec une deuxième molécule d'intérêt, 3054546 37 (iii) éventuellement, mise en contact du composé obtenu à la fin de l'étape (ii) avec une troisième molécule d'intérêt, (iv) éventuellement, mise en contact du composé obtenu à la fin de l'étape (iii) avec une quatrième molécule d'intérêt. 5 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que les molécules d'intérêt sont choisies dans le groupe comprenant des protéines, des anticorps, des peptides, de l'ADN, de l'ARN, des siARN, des miARN, des marqueurs biologiques, des hormones, des vitamines, des lipides, des 10 monosaccharides, des oligosaccharides, des polysaccharides, des glycanes, des molécules chimiques de synthèse. 10. Procédé selon la revendication 8 ou 9, caractérisé en ce que ledit procédé est un procédé (bio)orthogonal. 15 11. Kit de couplage comprenant au moins un composé de formule (I), (Ia) ou (Ib) selon l'une quelconque des revendications 1-4 en tant que réactif de couplage. 20 12. Composition comprenant un composé de formule (I), (Ia) ou (Ib) selon l'une quelconque des revendications 1-4 en association avec un milieu aqueux ou organique. 13. Méthode de diagnostic in vitro mettant en oeuvre un composé de formule 25 (I), (Ia) ou (Ib) selon l'une quelconque des revendications 1-4.