Brevet FR3059237A1 — publié le 20180601

- 1 - Utilisation d'une composition bactérienne pour traiter des pathologies animales L'invention concerne l'utilisation d'une composition pour traiter les pathologies animales. Dans les élevages bovins, caprins et ovins modernes, les boiteries sont courantes et représentent le tiers des visites du vétérinaire praticien. Les maladies podales, responsables ou non de boiterie, sont de plus en plus fréquentes dans le contexte d'élevage intensif actuel. Elles sont d'étiologies diverses, et leur localisation sur l'appareil locomoteur est variable. L'environnement sale et abrasif au niveau des pieds est un facteur fréquemment incriminé comme favorisant l'apparition de maladies dont la conséquence est une boiterie de l'animal. En effet, les sols humides, sales, et les bétons abrasifs facilitent et entretiennent les inflammations de la peau qui sont à l'origine des boiteries observées et de la forte récurrence des maladies. L'ensemble de ces facteurs stressants contribuant à induire une souffrance et une boiterie chez l'animal est appelé « Stress Abiotique ». Ce stress abiotique induit une abrasion de l'espace interdigité ou des doigts eux-mêmes à l'origine des réactions inflammatoires favorisant l'entrée des bactéries, ou d'autres parasites, responsables des pododermatites et des boiteries. Il fragilise notamment la barrière cutanée et génère un terrain favorable à l'installation et au maintien des affections podales. Des produits antibiotiques, comme I'oxytétracycline, ainsi que des produits désinfectants pour application en pédiluve existent sur le marché, mais les rythmes et durées d'administration ne sont pas standardisés. Aucune indication n'est donnée quant à la nécessité de les utiliser en fonction du nombre de cas décelés et ces pédiluves ne sont pas toujours très pratiques à mettre en place. Parmi les produits de traitements, certains sont réputés efficaces (formol, sulfate de cuivre), mais risquent d'être prochainement interdits d'utilisation, car ils représentent un risque toxique pour l'homme ou l'environnement. De plus, l'usage des antibiotiques est également critiqué et restreint devant le risque d'apparition de résistance. On assiste donc à une limitation des moyens disponibles pour contrôler la maladie 30 alors que les mesures mises en oeuvre étaient déjà peu aptes à limiter l'expansion des pathologies dont la conséquence est l'apparition d'animaux boiteux. Aussi, existe-t-il un besoin de fournir des traitements efficaces pour traiter les animaux et préserver leur santé, tout en respectant l'environnement. Plusieurs approches ont été utilisées pour tenter de diminuer la boiterie des ongulés. 35 Par exemple, la demande française FR3026643A1 décrit l'utilisation d'extraits de plantes aromatiques en combinaison avec des minéraux pour traiter la maladie de Mortellaro chez la vache. Les animaux sont traités en ingérant un complément 3059237 - 2 - alimentaire comprenant lesdits extraits ce qui a pour effet de stimuler leurs défenses immunitaires. Un autre exemple est la demande internationale W01998047374 qui décrit l'utilisation de probiotiques pour la prévention d'infections bactériennes, fongiques ou virales, les probiotiques étant des souches de Bacillus choisies parmi : 5 Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, Bacillus laterosporus et Bacillus laevolacticus. Ces probiotiques sont utilisés pour le traitement de la dermatite et la dermatite de contact. Les probiotiques dont il est question sont appliqués directement sur la peau ou les muqueuses à traiter. Toutefois, aucune démonstration formelle de l'efficacité n'a été montrée. 10 Aussi, ces méthodes ne semblent pas des plus efficaces et ne montrent pas de solution plus générale aux problèmes de boiterie des ongulés. Aussi, l'invention vise à pallier ces inconvénients. Un des buts de l'invention est de proposer un moyen d'améliorer la qualité de vie des animaux atteints de boiterie. 15 Un autre but de l'invention est de fournir une composition remplissant ces propriétés. L'invention concerne une composition comprenant un mélange bactérien, pour la prévention et l'amélioration de l'état des ongulés atteints de pathologies impliquant une infection parasitaire ou bactérienne du pied, ladite composition comprenant : - au moins une souche de bactéries du genre Bacillus, notamment au moins un 20 Bacillus subtilis, - et au moins une souche de bactéries lactiques, notamment au moins un Lactococcus lactis et/ou au moins Pediococcus pentosaceus. L'invention repose sur la constatation surprenante faite par les inventeurs que la combinaison de bactéries du genre Bacillus et de bactéries lactiques améliore 25 significativement l'état des ongulés atteints de boiterie causée par une infection parasitaire ou bactérienne du pied. Dans l'invention, on entend par pathologies impliquant une infection parasitaire ou bactérienne du pied une pathologie dont les symptômes sont liés à une bactérie, mais aussi un virus, un parasite (tel un acarien ou arthropode. Dans l'invention, comme en zootechnie, on entend par « pied » la partie terminale des quatre membres. Chaque pied comprend deux doigts fonctionnels ; le doigt III, externe ou latéral et le doigt IV, interne ou médial, ainsi que deux doigts accessoires, non fonctionnels, situés en face palmaire du pied, en regard de la deuxième phalange. Ils sont appelés ergots et sont les vestiges des doigts II pour l'interne et V pour l'externe. Le diagnostic différentiel des maladies du pied des bovins ne considèrera ici que les structures anatomiques comprises entre l'articulation métacarpo-phalangienne et l'extrémité des membres postérieurs et antérieurs. On peut aussi parler de région 3059237 - 3 - digitale. Dans l'invention on entend par ongulés les animaux possédant un ou plusieurs sabots à l'extrémité de leurs membres. Le sabot est alors une formation cornée très développée, et qui enveloppe le ou les doigts reposant sur le sol lors de la marche. Les 5 ongulés couverts par la présente invention sont notamment les ongulés domestiques et surtout d'élevage tels que les porcins, les bovins, les caprins, les ovins. Les ongulés préférés sont les porcs, les vaches et les veaux, les chèvres et les moutons, et dans une moindre mesure les chevaux. Les bactéries du genre Bacillus utilisées dans l'invention sont des bactéries à gram 10 positif appartenant à la famille des bacillacées (Bacillaceae), l'ordre des bacillales (Bacillales), la classe des bacilles (Bacillis), le phyllum des firmicutes (Firmicutes). Les bactéries lactiques de l'invention sont des bactéries à gram positif. Les inventeurs ont montré que l'utilisation d'une combinaison d'au moins un bacillus avec au moins une bactérie lactique avait pour effet d'améliorer les conditions e vie des 15 ongulés présentant une boiterie due à une infection podale. Avantageusement, l'invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la composition bactérienne comprend : - au moins l'une des quatre souches de Bacillus subtilis suivantes : NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04, lesdites souches étant respectivement déposées à la CNCM sous le 20 numéro CNCM 1- 4606, CNCM 1-5043, CNCM 1- 4607 et CNCM 1- 4608, et - au moins une bactérie lactique choisie parmi les bactéries lactiques suivantes : Lactococcus lactis spp lactis 1 souche NOL11 et Pediococcus pentosaceus 2 souche NOL12, lesdites souches étant respectivement déposées à la CNCM sous le numéro CNCM 1- 4609 et CNCM 1 - 4610. 25 Les différentes souches de l'invention, référencées par leur numéro de dépôt sont toutes été déposée à la Collection Nationale des Cultures de Microorganismes, à l'Institut Pasteur, de Paris (25,28 rue du Docteur Roux 75724 Paris CEDEX 15) selon le traité de Budapest : - La souche NOLO1 a été déposée sous le numéro CNCM 1-4606 le 14 mars 2012, 30 - La souche NOLO2 a été déposée sous le numéro CNCM 1-5043, le 21 janvier 2016, - La souche NOLO3 a été déposée sous le numéro CNCM 1-4607 le 14 mars 2012, - La souche NOLO4 a été déposée sous le numéro CNCM 1-4608 le 14 mars 2012, - La souche NOL11 a été déposée sous le numéro CNCM 1-4609 le 14 mars 2012, 35 et - La souche NOL12 a été déposée sous le numéro CNCM 1-4610 le 14 mars 2012. L'invention concerne l'utilisation d'au moins une souche choisie parmi les souches 3059237 - 4 - NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04, et au moins une souche choisie parmi les souches NOL11 et No112. Aussi, l'invention couvre les 45 combinaisons suivantes : - NOL01 et NOL11, - NOL01 et NOL 12, 5 - NOL01, NOL11 et NOL 12, - NOL02 et NOL11, - NOL02 et NOL 12, - NOL02, NOL11 et NOL 12, - NOLO3 et NOL11, 10 - NOLO3 et NOL 12, - NOL03, NOL11 et NOL 12, - NOLO4 et NOL11, - NOLO4 et NOL 12, - NOL04, NOL11 et NOL 12, 15 - NOL01, NOL02 et NOL11, - NOL01, NOL02 et NOL12, - NOL01, NOL02, NOL11 et NOL12, - NOL01, NOLO3 et NOL11, - NOL01, NOLO3 et NOL12, 20 - NOL01, NOL03, NOL11 et NOL12, - NOL01, NOLO4 et NOL11, - NOL01, NOLO4 et NOL12, - NOL01, NOL04, NOL11 et NOL12, - NOL02, NOLO3 et NOL11, 25 - NOL02, NOLO3 et NOL12, - NOL02, NOL03, NOL11 et NOL12, - NOL02, NOLO4 et NOL11, - NOL02, NOLO4 et NOL12, - NOL02, NOL04, NOL11 et NOL12, 30 - NOL03, NOLO4 et NOL11, - NOL03, NOLO4 et NOL12, - NOL03, NOL04, NOL11 et NOL12, - NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL11, - NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL12, 35 - NOL01, NOL02, NOL03, NOL11 et NOL12, - NOL01, NOL02, NOLO4 et NOL11, - NOL01, NOL02, NOLO4 et NOL12, 3059237 - 5 - - NOL01, NOL02, NOL04, NOL11 et NOL12, - NOL01, NOL03, NOLO4 et NOL11, - NOL01, NOL03, NOLO4 et NOL12, - NOL01, NOL03, NOL04, NOL11 et NOL12, 5 - NOL02, NOL03, NOLO4 et NOL11, - NOL02, NOL03, NOLO4 et NOL12, - NOL02, NOL03, NOL04, NOL11 et NOL12, - NOL01, NOL02, NOL03, NOLO4 et NOL11, - NOL01, NOL02, NOL03, NOLO4 et NOL12, et 10 - NOL01, NOL02, NOL03, NOL04, NOL11 et NOL12. De manière avantageuse, l'invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, ladite composition comprenant de 105 à 1011 colonies bactériennes par mL de Bacillus et de 105 à 1011 colonies bactériennes par mL de bactéries lactiques. 15 Dans l'invention, de 105 à 1011 colonies bactériennes signifie : environ 105, environ 5.105, environ 106, environ 5.106, environ 107, environ 5.107, environ 108, environ 5.108, environ 109, environ 5.109, environ 1010, environ 5.1010 ou environ 1011 colonies bactériennes par mL de culture de bactéries. L'homme du métier sait aisément comment déterminer ce nombre de bactéries, 20 notamment par comptage soit manuel (en utilisant une lame de Malassez) ou en utilisant un compteur de cellule automatique, ou par dilution puis ensemencement sur gélose et comptage des colonies. De manière encore plus avantageuse, l'invention concerne une composition pour son utilisation définie ci-dessus, où ladite au moins une souche de Bacillus et ladite au 25 moins une souche de bactérie lactique est sous forme sporulée et/ou sous forme végétative. Il est notamment particulièrement avantageux que les bactéries du genre Bacillus, et notamment les souches NOL01, NOL02, NOLO3 et NOLO4 définies ci-dessus soient sous forme sporulées et que les souches de bactéries lactiques soient sous forme 30 végétatives. De manière encore plus avantageuse, l'invention concerne une composition pour son utilisation susmentionnée, dans laquelle lesdites pathologies impliquant une infection parasitaire ou bactérienne du pied des ongulés sont choisies parmi les maladies de Motellaro ou de Fourchet ou encore Tyloma, les panaris ou la Fourbure. 35 La maladie de Montellaro, ou dermatite digitée, a été décrite pour la première fois en 1974 à Milan par Cheli et Mortellaro. Elle a été mise en évidence en France dans les années 1980. Cette maladie semble être de plus en plus fréquente dans les élevages 3059237 - 6 - français et pose de nombreuses questions sur sa gestion dans le long terme. On la considère comme la 3ème infection podale en termes de fréquence après l'érosion du talon (fourchet) et les hémorragies de la sole (Bleimes). La maladie de Montellaro est provoquée par Treponema et potentiellement par Fusobacterium necrophorum Une fois 5 introduite dans un élevage, elle est très rarement éradiquée et réapparaît sous forme de flambées successives. La dermatite digitée est une affection contagieuse caractérisée par une inflammation superficielle circonscrite de la peau de la couronne, qui entraîne des boiteries. Elle touche notamment les bovins. La maladie de Mortellaro est reconnaissable par un pied enflé et une nécrose interdigitée. 10 La maladie de Fourchet, aussi appelée Le Fourchet, est une infection bactérienne. Elle est causée par une bactérie (provoqué Dichelobacter nodosus et Fusobacterium necrophorum) qui se plait particulièrement dans un milieu chaud et humide. Le Fourchet, ou dermatite interdigitale, débute par une inflammation humide et malodorante de la peau interdigitale et s'étend à la corne du talon où elle affecte la 15 production cornée. La corne produite est de mauvaise qualité et des fissures apparaissent au niveau du bulbe du talon. Ces fissures provoquent une irritation du pododerme qui réagit en produisant davantage de corne. A partir de ce stade, la situation ne fait que s'aggraver. Tyloma, ou Limace, est une réaction inflammatoire proliférative de la peau entre les 20 onglons mais il est courant d'avoir des lésions de Mortellaro dessus. La pathologie est donc consécutive à des infections par Treponema et Fusobacterium necrophorum. Les panaris ou phlegmons interdigités sont des inflammations aigues des tissus mous caractérisés par une patte enflée et rosée. Ces maladies sont causées par des bactéries, notamment Arcanobacterium pyogenes et Fusobacterium necrophorum. 25 La Fourbure ou pododermatite aseptique diffuse est une lésion au niveau de la sole, qui donne une coloration jaune / rouge pouvant aller jusqu'au bleu, qui peut se développer en ulcère. La composition susmentionnée peut donc être utilisée comme décrit ci-dessus pour améliorer les conditions de vie des animaux atteints d'une boiterie causée par les 30 maladies susmentionnées. En effet, le mélange bactérien de l'invention aura un effet limitant la progression des bactéries responsables desdites pathologies. Le mélange bactérien aura également un effet préventif, en limitant la prolifération des bactéries pathogènes et donc préviendra la boiterie qui en résulte. Avantageusement, l'invention concerne une composition pour son utilisation telle 35 que définie ci-dessus, ladite composition étant sous forme liquide destinée à être pulvérisée ou à être utilisée dans un bassin. La composition selon l'invention est notamment proposée sous forme de poudre, 3059237 - 7 - mais peut également être proposée sous forme liquide afin d'être appliquée plus facilement sur le pied des ongulés. Cette application sous forme liquide pourra se faire par pulvérisation ou nébulisation directement sur les pieds déjà infectés, ou simplement en prophylaxie sur les pieds sains. Il est également possible de fournir des 5 compositions sous forme liquides placées dans des pédiluves au traverser desquelles les animaux passeront, ce qui mettra en contact la composition de l'invention avec le pied des ongulés. De manière plus avantageuse, l'invention concerne par ailleurs une composition pour son utilisation susmentionnée, où la dite composition est diluée dans au moins 1 10 litre de liquide mais au plus 5 litres de liquide pour 50 à 60 animaux. Il est avantageux, dans le cadre de l'invention, que la composition bactérienne susmentionnée soit diluée dans un volume de liquide de 1 à 5 litres pour traiter de 50 à 60 animaux par pulvérisation. Par « au moins 1 litre de liquide mais au plus 5 litres » ou « au moins 1 litre de 15 liquide mais au plus 5 litres » on définit dans l'invention que la composition peut être diluée dans 1L, 1,5L, 2L, 2,5L, 3L, 3,5L, 4L, 4,5L ou 5L, lorsque les animaux à traiter sont au nombre de 50 à 60 (soit de 100 à 120 pieds arrières, qui sont les pieds les plus atteints). Les volumes d'environ 1L sont particulièrement avantageux pour une application 20 notamment par pulvérisation sur le pied. Les volumes plus importants, et notamment 5L sont quant à eux plus appropriés pour des pédiluves. Toutefois, les volumes plus importants peuvent être utilisés en pulvérisation ou nébulisation. Pour 100 animaux, il est également possible de doubler les volumes susmentionnés de manière proportionnelle, l'homme du métier saura faire les conversions appropriées. 25 La composition selon l'invention, lorsqu'elle est diluée tel que mentionné ci-dessus, l'est notamment dans un liquide qui est soit de l'eau, soit de l'eau saline (sérum physiologique à 0,9 % en poids de sel par rapport au volume total) ou tout autre liquide physiologiquement acceptable pour une application cutanée ou sur la corne des sabots des animaux. 30 Le liquide utilisé peut également contenir des additifs physiologiquement acceptables, et notamment du thiosulfate lorsque le liquide est de l'eau. Le thiosulfate permet en effet de neutraliser le chlore contenu dans l'eau courante fournie par les différentes compagnies des eaux. Le liquide peut également contenir des sels et/ou des colorants. Il est important que les additifs n'aient aucune influence sur la vitalité des 35 bactéries contenues dans la composition de l'invention. Avantageusement, l'invention concerne une composition pour son utilisation susmentionnée, où ladite composition est appliquée sur le pied des ongulés de 1 fois 3059237 - 8 - tous les 3 jours à 1 fois tous les 15 jours. La posologie appropriée pour prévenir la boiterie des animaux ou pour améliorer leurs conditions de vie est une utilisation une fois tous les 3 jours à une fois toutes les deux semaines. 5 Par « de 1 fois tous les 3 jours à 1 fois tous les 15 jours » on entend dans l'invention une fois tous les 3 jours, une fois tous les 4 jours, une fois tous les 5 jours, une fois tous les 6 jours, une fois tous les 7 jours, une fois tous les 8 jours, une fois tous les 9 jours, une fois tous les 10 jours, une fois tous les 11 jours, une fois tous les 12 jours, une fois tous les 13 jours, une fois tous les 14 jours ou une fois tous les 15 jours. 10 Il est avantageux de traiter de façon permanente les élevages atteints par les pathologies susmentionnées. Le traitement peut toutefois être modulé à la baisse selon les saisons et l'activité des animaux (notamment si l'animal pâture). L'invention concerne par ailleurs une composition telle que définie ci-dessus, en association avec au moins un désinfectant, pour une utilisation dans le cadre du 15 traitement des pathologies impliquant une infection parasitaire ou bactérienne du pied des ongulés, ledit au moins un désinfectant étant utilisé au moins 48h avant l'utilisation de ladite composition. Dans l'invention, il est possible de traiter, préalablement à l'utilisation des compositions susmentionnées, les pieds des ongulés avec des désinfectants. Il est 20 alors impératif que le désinfectant soit arrêté au moins 48h avant l'utilisation de la composition selon l'invention, afin de ne pas tuer les bactéries qu'elle contient. Les désinfectants utilisés peuvent être ceux communément utilisés par l'homme du métier, à savoir, dans antibiotiques (par exemple l'oxytétracycline pour les vaches), le formol, du sulfate de Zn ou de Cu, ou encore de la chaux. D'autres désinfectants 25 connus de l'homme du métier peuvent être utilisés. L'invention sera mieux comprise à la lumière des trois exemples et des 11 figures suivantes : BREVE DESCRIPTION DES FIGURES La Figure 1 est un graphique montrant l'évolution de la note moyenne de l'état des 30 pattes des vaches référentes aux différentes dates de traitement avec la composition selon l'invention. La Figure 2 est un histogramme montrant l'évolution de la note moyenne de boiterie des vaches référentes aux différentes dates de traitement avec la composition selon l'invention. 35 Les Figures 3A et 3B sont des diagrammes circulaires montrant la réparation des 4 catégories de boiterie sur les vaches référentes. Les différentes catégories sont les suivantes : en noir : catégorie 0, en blanc : catégorie 1, en gris catégorie 2 et en 3059237 - 9 - hachuré : catégorie 3. La figure 3A montre les proportions au début de l'essai. La figure 3B montre les proportions en fin d'essai. La Figure 4 est un graphique montrant l'évolution de la note moyenne de l'état des 5 pattes des vaches référentes aux différentes dates de traitement avec la composition selon l'invention. La Figure 5 est un histogramme montrant l'évolution de la note moyenne de boiterie des vaches référentes aux différentes dates de traitement avec la composition selon l'invention. 10 Les Figures 6A et 6B sont des diagrammes circulaires montrant la réparation des 4 catégories de boiterie sur les vaches référentes. Les différentes catégories sont les suivantes : en blanc : catégorie 0, en gris : catégorie 1, en hachuré : catégorie 2 et en noir : catégorie 3. La figure 6A montre les proportions au début de l'essai. 15 La figure 6B montre les proportions en fin d'essai. La Figure 7 est un graphique montrant l'évolution de la note moyenne de l'état des pattes des vaches référentes aux différentes dates de traitement avec la composition selon l'invention. La Figure 8 est un graphique montrant l'évolution de la note moyenne de l'état des 20 pattes des vaches du troupeau aux différentes dates de traitement avec la composition selon l'invention. La Figure 9 est un graphique montrant l'évolution de la note moyenne de l'état des pattes des vaches du troupeau aux différentes dates de traitement avec la composition selon l'invention. 25 La Figure 10 est un graphique montrant l'évolution de la note moyenne de l'état des pattes des vaches du troupeau aux différentes dates de traitement avec la composition selon l'invention. La Figure 11 est un graphique montrant l'évolution de la note moyenne de l'état des pattes des vaches référentes (courbe avec des triangles) et des vaches du troupeau 30 (courbe avec des carrés) aux différentes dates de traitement avec la composition selon l'invention. EXEMPLES : Exemple 1 : préparation des mélanges bactériens 35 Dans le cadre de l'invention, les inventeurs ont préalablement préparé des flacons renfermant les préparations suivantes : Préparation 1 = flacon de 20 mL 3059237 -10- - mélange de 4 Bacillus NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04, sous la forme sporulée, à une concentration de 105 à 1011 colonies/mL, pour chaque souche bactérienne. Les quatre souches sont mélangées à part égale, dans des proportions respectives 25 :25 :25 :25. 5 - Le mélange a été conservé à une température variant de -21°C à -80°C. Préparation 2 = flacon de 20 mL - des bactéries lactiques NOL11 à une concentration de 105 à 1011 colonies/mL Les bactéries ont été conservées à une température variant de -21°C à -80°C. 10 Les inventeurs ont ensuite préparé la composition utilisée pour la suite des expérimentations : - mélange : 1 flacon de préparation 1 + 1 flacon de préparation 2. Exemple 2: Etude de l'impact d'une application de la composition selon 15 l'invention sur un élevage bovin laitier atteint de Mortellaro Cet essai fait suite au pré-test qui avait mis en évidence une diminution des cas de Mortellaro dans un élevage suite à une application de la composition de l'invention sur les pattes arrière des vaches. L'objectif de ce nouvel essai est : - de confirmer les résultats sur 4 nouveaux élevages pour déterminer l'effet de la 20 composition de l'invention sur la problématique de Mortellaro - de comparer l'effet de la composition avec les traitements préventifs déjà présents dans les élevages - de mesurer quantitativement l'efficacité de ce traitement L'essai est réalisé dans 5 élevages de vaches Holstein où le produit a été pulvérisé 25 sur les pattes postérieures des animaux. L'effet de la composition de l'invention a été mesuré par un suivi sanitaire du troupeau (dénombrement et évolution des cas de Mortellaro, traitements vétérinaires). I- Caractéristiques des élevages Elevage 1 : Normandie (Calvados ; France) intérêt Nombre de vaches 160/170 Traite 3 robots Delaval Nombre de lots 2 Stabulation Logettes paillées Fréquence de paillage journalier Quantité de paille Fort Cornadis Oui mais pas pour toutes 3059237 Raclage Automatique 3 à 4 fois par jour Provenance eau Forage Traitement eau Non Traitement actuel Mortellaro Pédiluve antibiotique + pulvérisation désinfection au robot Elevage 2 : Normandie (Calvados ; France) Nombre de vaches 190 Traite Roto extérieur Nombre de lots 2 Stabulation Logettes paillées Fréquence de paillage -- Quantité de paille Faible (paille ensilée) Cornadis Non Raclage Tracteur 2 fois par jour Provenance eau Réseau de distribution Traitement eau -- Traitement actuel Mortellaro Pédiluve antibiobiotique après lavage des pattes pendant la traite Elevage 3 : Normandie (Seine Maritime ; France) Nombre de vaches 190 + taries Traite 3 robots Delaval Nombre de lots 2 (130 vaches pour 2 robots et 60 vaches pour 1 robot) Stabulation 1er lot en logettes paillées 2nd lot en aire paillée Quantité de paille Faible moyennement Cornadis oui Raclage Automatique Provenance eau -- Traitement de l'eau -- Traitement actuel Mortellaro Pédiluve au formol Elevage 4 : Normandie (Calvados ; France) intérêt Nombre de vaches 100 3059237 -12- Traite 2 robots Nombre de lots -- Stabulation en logettes paillées Quantité de paille moyennement Cornadis oui Raclage Automatique Provenance eau -- Traitement de l'eau Traitement contre le chlore Traitement actuel Mortellaro Pédiluve sec Elevage 5 : Normandie (Calvados ; France) Nombre de vaches 47+7 taries Traite 1 robot Delaval Nombre de lots 1 Stabulation aires paillées Quantité de paille -- Cornadis oui Raclage -- Provenance eau Forage Traitement de l'eau Traitement contre le chlore Traitement actuel Mortellaro Antibiotiques pulvérisés à la bombe Produit utilisé et matériel 5 Une dose de composition selon l'invention a été préparée à partir de deux flacons distincts de 20 mL - Le flacon 1 contenant les Bacillus NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL04, - Le flacon 2 contenant les Lactococcus NOL11, tels que décrits à l'exemple 1. 10 Les flacons contiennent les bactéries vivantes dans leur milieu de culture. Ils sont apportés congelés en élevage et doivent être conservés au congélateur dès réception. Le produit est décongelé et dilué dans de l'eau avant nébulisation puis pulvérisé par nébulisation. L'eau utilisée lors de la nébulisation, ne doit pas contenir de chlore, un traitement préalable de l'eau au thiosulfate de sodium peut donc être nécessaire. 15 L'essai a duré 2 mois avec un traitement réalisé une fois par semaine. 3059237 -13- Les traitements des pattes réalisés par les éleveurs avec des composés antibiotiques, ou incompatibles avec les bactéries de la composition selon l'invention, ont été arrêtés au moins 3 jours avant la première application de la composition selon l'invention (fin de semaine 00). La première application du produit sera réalisée en 5 première semaine (début février). Un état des lieux de l'état sanitaire du troupeau avant le début de l'essai a été réalisé avec l'éleveur. Ce bilan représente le point de départ, référence à partir de laquelle les évolutions sont évaluées. L'état sanitaire du troupeau étant, dans la majorité des élevages de l'essai, stabilisé par un traitement antibiotique ou autre, celui- 10 ci est arrêté dès le début de l'essai. L'éleveur renseigne ses observations sur l'état sanitaire du troupeau et des relevés qualitatifs seront réalisés par le technicien lors de ses déplacements. Fin des applications du produit en gème semaine. III- Traitement Mode d'emploi : à appliquer sous forme liquide. Une dose de produit (constituée des 15 flacons B et L) est nécessaire pour chaque traitement hebdomadaire. Le traitement se base sur une dose diluée dans 5L d'eau pour traiter les pattes arrière des vaches. La quantité de produit pulvérisé est de l'ordre de 25 mL (soit environ 3 secondes de pulvérisation) par patte soit environ 5L de produit pour traiter les pattes arrières des 100 vaches laitières. 20 Procédure de préparation de la solution : - Laisser décongeler le produit à température ambiante entre 15 et 25 °C jusqu'à liquéfaction complète (env. 1h ± 15 minutes) - Préparer 5L d'eau dans le réservoir du nébulisateur et ajouter 80mg de thiosulfate de sodium ou 10mL si solution liquide (Si l'eau est traitée au peroxyde d'hydrogène, 25 utiliser impérativement de l'eau minérale ou de l'eau non traitée). - Enlever la capsule et retirer le bouchon des flacons - Verser les deux flacons du produit dans l'eau traitée et ajouter environ 10 mL de colorant E 133 (colorant bleu brillant de qualité alimentaire). - Mélanger pour homogénéiser le produit puis laisser reposer pendant 15 minutes 30 - Pulvériser les pattes arrière des vaches de l'ordre de 25mLI par patte - Ce traitement est à renouveler toutes les semaines de l'essai (9 traitements au total). Elevage 1 Elevage 2 Elevage 3 Elevage 4 Elevage 5 Nombre de 2 2 2 1 1 doses par application Quantité d'eau 10L 10L 10L 5L 5L (seul 3059237 -14- 2,5L sont pulvérisés) Quantité de 160mg 160mg 160mg 80mg 80mg thiosulfate ajouté (2 doses) (2 doses) (2 doses) (1 dose) (1 dose) Quantité de 8mL Pas de 8mL 4mL 4mL colorant ajouté colorant Pour l'élevage 5, une solution d'une dose diluée dans 5L normalement prévue pour 100 vaches est préparée, mais seule la moitié est utilisée pour l'application, le reste est jeté. IV- Description des mesures et des analyses 5 1- Mesures communes pour l'ensemble des élevages Notation de l'état de chaque vache référence : Le premier jour de l'essai, une dizaine de vaches identifiées par l'éleveur comme très atteintes ou particulièrement vulnérables à la problématique Mortellaro seront 10 suivies plus précisément. Une notation indicative de l'état de chaque vache sera donnée par l'éleveur sur une échelle de 0 à 10 : 0 représentant une vache saine et 10 une vache gravement atteinte. 2- Notation globale de l'état du troupeau : L'éleveur donnera également une note globale de l'état de son troupeau sur une 15 échelle de 0 à 10 avec : 0 pour un troupeau totalement sain et 10 pour 100% des animaux atteints. 3- Photos des pattes des vaches, application : Des photos des pattes arrière des vaches seront réalisées pour donner un visuel des observations possibles en élevage et des signes cliniques des cas de Mortellaro sans 20 lever les pattes. Des photos de la préparation et de l'application seront également prises. 4- Notation boiterie des vaches références : Une notation de boiterie est réalisée sur les vaches références selon la grille suivante : 25 0 : Bonne mobilité - Marche avec une répartition uniforme du poids et du rythme sur les quatre pattes avec un dos plat. La vache peut réaliser des foulées longues et fluides. 1 : Mobilité imparfaite - Marche non homogène (sur la répartition du poids ou du rythme) ou réduite ; affecte une ou plusieurs pattes, difficilement identifiable. 30 2 : Mobilité réduite - Marche non homogène sur une patte facilement identifiable et/ou des foulées nettement réduites (en général associée à un dos arqué). 3059237 -15- 3 : Mobilité sévèrement réduite - Incapable de marcher aussi vite qu'un homme à vive allure (ne peut pas suivre le troupeau en bonne santé) et présente des signes du score 2 ci-dessus. 5- Mesure spécifique pour l'élevage 2 5 Notation de la réaction des vaches lors du lavage : Une notation de la réaction des vaches sera réalisée lors du lavage des pattes. Les lésions présentes lors d'un stade aigu de Mortellaro sont très sensibles, le jet d'eau lors du lavage des pattes atteintes provoque donc souvent une réaction des vaches qui lèvent ou bougent leurs pattes. Cette réaction sera donc relevée pour chacune des 10 pattes arrières par la notation suivante : Absence de réaction Réaction faible - Réaction forte 6- Mesure spécifique pour l'élevage 5 Photos des pattes arrière de l'ensemble des vaches : Dans cet élevage, l'ensemble du troupeau passera dans une cage de parage (louée 15 ou intervention d'un pareur) et une photo de chaque patte arrière sera réalisée. A l'aide de ces photos, une notation de chaque patte sera réalisée selon la grille de notation suivante : MO : sain. Vache saine sans lésion de dermatite digitée M1 : stade débutant. Lésion bien circonscrite, aspect « peau de fraise », rose 20 ou gris, inférieure à 2 cm. Généralement douloureuse. M2 : stade aigu. Lésions qui font boiter les vaches car hyper sensibles et douloureuses. Ulcérations de la peau localisées au bord de la corne du sabot (1) ou autour des onglons (2). Evolution : inflammation chronique et prolifération de la peau en petits nodules surélevés (3) ou en filaments (poils géants) (4). Souvent 25 recouvertes de pus à l'odeur fétide. M3 : stade de cicatrisation. Apparaît après un traitement efficace, la lésion se recouvre d'une croûte noire et devient insensible. La guérison peut être total (retour au stade MO) ou partielle (stade M4) M4 : réservoir de la maladie. Lésion chronique non active, sèche et peu sensible. 30 Peau épaisse avec prolifération de poils géants M4-1 : Forme M1 active sur lésion M4, souvent sans rebords nets 7- Relevés réalisés par l'éleveur Si l'éleveur réalise déjà des relevés sur des problématiques de boiteries de manière régulière, elles seront récupérées et utilisées pour évaluer l'effet du produit (ex : 35 nombre de vaches boiteuses, traitement individuel, réforme de vache pour cette cause...). Le ressenti de l'éleveur sur l'effet global du traitement et toute observation ou 3059237 -16- remarques sont également relevés. De même, si l'éleveur possède un historique des fréquences de Mortellaro / boiteries ou des traitements vétérinaires, ces données sont utilisées pour avoir un point de comparaison avec la période de l'essai. 5 V- Résultats Elevage 2 Résultat pour l'élevage 2 : notation de l'état de la patte Notation état des pattes sur une échelle de 0 à 10 (0 = RAS, 10 = très gros soucis de pattes) N° de la 03/02/16 10/02/1617/02/1624/02/1602/03/1609/03/1616/03/1623/03/1630/03/16 vache 8480 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6264 7 7 6 5 5 5 5 4 2 5959 4 4 3 3 2,5 2 2 1 1 6300 9 9 9 8 7 6 6 5 5 6271 9 9 9 8 8 8 8 8 8 6367 4 4 3 3 3 4 5 5 4,5 6244 7 7 7 6 6 6 5 5 5 6209 4 4 4 3 2 1 1 1 0 6242 9 9 9 8,5 7 7 7 7 7 4834 8 6 5 5 4 5 5 4 2 8535 4 4 4 3 2 2 2 1,5 1 6010 4 5 5 5 4 4 3 2 2 0750 4 4 3 3 2 2 1 1 1 6289 6 5 5 4 4,5 4 4 4,5 4 4837 4 4 4 3 2 2 2 1 1 6232 4 3 3 2 2 2 2 2 0 5993 4 4 3 2 2 1 1 1 0 6416 4 4 6 6 5 4 3 3 2,5 10 On observe une amélioration moyenne de 2,7 points pour les vaches à problème, avec 16 vaches sur 18 qui ont baissé en boiteries. Les 2 autres ont un état stabilisé L'évolution de la note moyenne au cours de l'essai est représentée en Figure 1. 3059237 -17- Résultats sur la boiterie : notation de la boiterie Notation de boiterie entre 0 et 3 (cf grille) N° de la 03/02/16 24/02/16 30/03/16 vache 8480 0 0 0 6264 2 1 1 5959 1 0 0 6300 2,5 3 2,5 6271 3 2 2 6367 1 1 1 6244 2 1 2 6209 1 0 0 6242 3 3 2 4834 3 2 0 8535 1 1 1 6010 1 2 1 0750 1 1 0 6289 2 2 2 4837 1 2 0 6232 1 0 0 5993 1 1 0 6416 1 2 1 A la fin de l'essai, 11 vaches sur 18 ont baissé de catégorie de boiterie, et aucune 5 aggravation sur les vaches suivies n'a été observée. Les résultats sont montrés en Figures 2 et 3A à 3B. Les résultats sur cet élevage sont très favorables. Avant le traitement avec la composition selon l'invention, les vaches recevaient une 10 fois par semaine le traitement suivant : 1. Lavage des pattes des vaches en salle de traite 2. Pédiluves de formol, sulfate de Cu et sulfate de Zn avec un changement du pédiluve entre les 2 lots 3059237 -18- Pendant l'essai, les animaux ont été traités de la manière suivante une fois par semaine : 1- Lavage des pattes des vaches en salle de traite (seulement la 1ère moitié de l'essai) 5 2- Application de la composition selon l'invention en salle de traite au pulvérisateur. Le traitement selon l'invention a permis de passer de 7 à 8 traitements à l'oxytétracycline par semaine à un traitement de 1 ou trois durant la même période. Alors que l'odeur d'infection des vaches était très présente avant l'essai, cette odeur a été largement diminuée. 10 Selon l'éleveur, sans le lavage des pattes en salle de traite, l'application des flores avec le matériel utilisé est moins contraignante que le système pédiluve Concernant le parage, l'ensemble du troupeau a subi un parage 2 semaines avant la fin de l'essai sans informer les pareurs de l'essai. Les pareurs ont conclu que c'était la première année où ils n'ont pas mentionné de problèmes de dermatites (contamination 15 REVENDICATIONS1. Composition comprenant un mélange bactérien, pour son utilisation dans le cadre de la prévention et l'amélioration de l'état des ongulés atteints de pathologies 5 impliquant une infection parasitaire ou bactérienne du pied, ladite composition comprenant : - au moins une souche de bactéries du genre Bacillus, notamment au moins un Bacillus subtilis, - et au moins une souche de bactéries lactiques, notamment au moins un 10 Lactococcus lactis ou au moins Pediococcus pentosaceus. 2. Composition pour son utilisation selon la revendication 1, dans laquelle la composition bactérienne comprend : - au moins l'une des quatre souches de Bacillus subtilis suivantes : NOL01, NOL02, 15 NOLO3 et NOL04, lesdites souches étant respectivement déposées à la CNCM sous le numéro CNCM I - 4606, CNCM 1-5043, CNCM I - 4607, CNCM I - et CNCM I - 4608, et - au moins une bactérie lactique choisie parmi les bactéries lactiques suivantes : Lactococcus lactis spp lactis 1 souche NOL11 et Pediococcus pentosaceus 2 souche NOL12, lesdites souches étant respectivement déposées à la CNCM sous le numéro 20 CNCM I - 4609 et CNCM 1- 4610. 3. Composition pour son utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 2, ladite composition comprenant de 105 à 1011 colonies bactériennes par mL de Bacillus et de 105 à 1011 colonies bactériennes par mL de bactéries lactiques. 25 4. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, où ladite au moins une souche de Bacillus et ladite au moins une souche de bactérie lactique est sous forme sporulée et/ou sous forme végétative. 30 5. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle lesdites pathologies impliquant une infection parasitaire ou bactérienne du pied des ongulés sont choisies parmi les maladies de Motellaro ou de Fourchet ou encore Tyloma, les panaris ou la Fourbure. 35 6. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, ladite composition étant sous forme liquide destinée à être pulvérisée ou à être utilisée dans un bassin. 3059237 26 7. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, où la dite composition est diluée dans au moins 1litre à au plus 5 litres de liquide pour 50 à 60 animaux. 8. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, où ladite composition est appliquée sur le pied des ongulés de 1 fois tous les 3 jours à 1 fois tous les 15 jours. 9. Composition telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 8, en association avec au moins un désinfectant, pour une utilisation dans le cadre du traitement des pathologies impliquant une infection parasitaire ou bactérienne du pied des ongulé, ledit au moins un désinfectant étant utilisé au moins 48h avant l'utilisation de ladite 15 composition.