Brevet FR3056929A1 — publié le 20180406

Dispositif de nettoyage d'au moins un biofilm et procédé de nettoyage dudit au moins un biofilm Domaine de l'Invention [1] Le domaine de l'invention concerne les biofilms, et plus particulièrement le lavage de ces derniers en vue de permettre leur analyse pour, par exemple, étudier la réponse de médicaments utilisés pour attaquer lesdits biofilms. Etat de la technique [2] Les bactéries peuvent se retrouver dans l'environnement sous différentes formes. Une de ces formes est une forme planctonique, dite forme libre, pour laquelle les bactéries ont un métabolisme actif et une division très élevée. Un autre mode de vie est sous forme d'un biofilm qui au contraire provoque une diminution du métabolisme et une division ralentie. [3] Les biofilms comportent des micro-organismes, comme par exemple des bactéries. A titre d'exemple, un biofilm peut comporter la bactérie S. aureus qui est la plus pathogène de la famille des Staphylocoques. Cette bactérie est responsable d'infections communautaires et d'infections nosocomiales : S. aureus est en premier lieu un germe pyogène. Cette bactérie est notamment responsable d'infections suppurées superficielles de la peau et des muqueuses. On comprend donc qu'il est important de connaître le fonctionnement d'une telle bactérie, et de ses modes de protection, notamment lorsqu'elle s'intègre à un biofilm. [004] En effet, lorsque des bactéries sont enchâssées dans une matrice formant le biofilm, elles sont protégées par le biofilm et sont plus difficiles à atteindre. On dit alors que le biofilm comporte une matrice formant une véritable forteresse de protection des bactéries du biofilm. [5] En ce sens, il existe un besoin de permettre la culture de biofilms en vue d'analyser ces derniers, et par exemple d'effectuer des tests de nouveaux traitements médicaux dont le but est de cibler les bactéries protégées par le biofilm. [6] Il est connu qu'après formation d'un biofilm qu'il est préférable de le laver pour retirer par exemple les bactéries planctoniques non adhérentes en 3056929 2 suspensions dans le milieu de culture et qui peuvent s'être posées sur la surface du biofilm. A titre d'exemple, le document « An Electrostatic Net Model for the Role of Extracellular DNA in Biofilm Formation by Staphylococcus aureus » de Vanina Dengler et al. publié dans Journal of Bacteriology en Décembre 2015 5 volume 197 numéro 24 pages 3779 à 3787 décrit notamment un biofilm comportant la bactérie S. aureus. Après incubation et formation du biofilm, il est réalisé un lavage du biofilm par une solution tampon phosphate salin : on comprend ici qu'il est donc réalisé un lavage par bain de trempage. Le lavage par bain de trempage doit être réalisé de manière la plus douce possible car le flux de 10 liquide peut détériorer le biofilm. [7] Un autre document intéressant à citer est le document « Biofilm formation of the L. monocytogenes strain 15G01 is influenced by changes in environmental conditions » de Jessika Nowak et al. publié dans Journal of microbiological methods 119 (2015) 189-195. Ce document décrit la culture de biofilms et leur 15 lavage par une machine spécifique ELx50TM de la société Biotek qui permet de distribuer et d'aspirer un liquide de nettoyage. [8] De manière générale, il est connu de réaliser des cultures bactériennes d'où il résulte la formation de biofilms dans des puits creusés dans une plaque de support des biofilms. Chaque biofilm ainsi formé comporte des bactéries au sein 20 de la matrice du biofilm et des bactéries situées hors de la matrice. Pour les besoins de la future analyse, il faut récupérer seulement le biofilm. Pour cela, les biofilms sont nettoyés de sorte à retirer les bactéries qui ne seraient pas enchâssées dans les matrices correspondantes. Pour réaliser ce nettoyage, il est connu d'utiliser des bains de trempage ou encore un système utilisant une pipette 25 pour injecter un liquide de nettoyage et le retirer de manière robotisée. Ensuite, les biofilms lavés peuvent être analysés par exemple par une méthode dite en « crystal violet » notamment décrite dans le document « Biofilm formation of the L. monocytogenes strain 15G01 is influenced by changes in environmental conditions » évoqué ci-dessus. Le problème est que les lavages connus à l'heure 30 actuelle sont traumatiques pour les biofilms dans le sens où ils détériorent la matrice des biofilms : il est donc difficile de former de manière reproductible des biofilms à analyser. La non reproductibilité des biofilms et leurs dégradations dues au lavage rend difficile l'identification d'antibiotiques pertinents à partir 3056929 3 d'antiobiogrammes. Il existe donc un réel besoin de développer de nouvelles machines et techniques pour laver les biofilms. Objet de l'invention 5 [009] L'invention a pour but un dispositif permettant notamment de réaliser un lavage le moins traumatique possible pour un biofilm, et de préférence pour des biofilms et ce de manière simultanée. [0010] On tend vers ce but grâce à un dispositif de nettoyage d'au moins un biofilm, ledit dispositif de nettoyage comportant : 10 - un organe de maintien configuré pour maintenir, dans un emplacement de nettoyage, un élément comportant au moins un logement destiné à loger ledit au moins un biofilm à nettoyer, et - un système de génération de vapeur configuré pour générer de la vapeur en direction dudit emplacement de nettoyage en vue de réaliser le 15 nettoyage dudit au moins un biofilm. [0011] De préférence, le dispositif de nettoyage comporte un système de refroidissement destiné à être couplé thermiquement avec ledit élément. [0012] Le système de refroidissement peut être configuré pour être contact physique avec ledit élément, de préférence sur une face arrière dudit élément 20 opposée à une face avant dudit élément où est agencée une ouverture d'accès audit au moins un logement, lorsque ledit élément est maintenu par l'organe de maintien. [0013] L'emplacement de nettoyage peut être agencé au-dessus du système de génération de vapeur. 25 [0014] En particulier, le système de génération de vapeur comporte un organe de chauffage et un réservoir configuré pour recevoir un liquide, ledit organe de chauffage étant configuré de sorte à permettre le chauffage du liquide présent au sein du réservoir pour permettre sa vaporisation. [0015] Selon une réalisation, l'emplacement de nettoyage est agencé au-dessus 30 du réservoir. [0016] En particulier, le dispositif peut adopter une configuration dans laquelle il comporte ledit élément maintenu par l'organe de maintien et dans laquelle un fond de chaque logement dudit élément est orienté vers le bas du dispositif de nettoyage, par exemple en direction du système de génération de vapeur. Dans 3056929 4 ce cas, le système de refroidissement peut être couplé thermiquement avec l'élément maintenu par l'organe de maintien. [0017] Selon une mise en oeuvre, l'organe de maintien est configuré pour autoriser, d'une part, l'insertion dudit élément dans le dispositif, et, d'autre part, 5 pour autoriser le retrait dudit élément du dispositif. [0018] Le dispositif peut comporter un capot formant une enceinte dans laquelle la vapeur se propage, lorsque le système de génération de vapeur est activé, en direction de l'emplacement de nettoyage, l'enceinte étant ouverte au moins partiellement pour permettre à la vapeur de s'échapper hors de l'enceinte. 10 [0019] L'invention est aussi relative à un procédé de nettoyage d'au moins un biofilm, ce procédé comportant : - une étape de fourniture d'un élément comportant au moins un logement dans lequel ledit au moins un biofilm est formé et adhère, - une étape de positionnement dudit élément de sorte à le maintenir dans un 15 emplacement de nettoyage, et - une étape de génération de vapeur en direction dudit au moins un logement pour nettoyer ledit au moins un biofilm. [0020] L'étape de positionnement peut être telle que l'élément est maintenu de telle sorte qu'un fond dudit au moins un logement soit orienté vers le bas, et 20 l'étape de génération de vapeur en direction dudit au moins un logement provoque le nettoyage dudit au moins un biofilm par condensation de la vapeur générée à la surface dudit au moins un biofilm et par chute de gouttelettes issues de ladite condensation par effet de gravité. [0021] Notamment, le procédé de nettoyage peut comporter une étape de 25 récupération des gouttelettes, après leur chute, dans un réservoir comprenant un liquide à partir duquel la vapeur est générée par chauffage dudit liquide d'où il résulte une stérilisation de la matière contenue dans lesdites gouttelettes. [0022] Le procédé de nettoyage peut aussi comporter une étape d'utilisation d'un système de refroidissement pour maintenir la température dudit au moins un 30 biofilm dans une plage prédéterminée de températures au cours du nettoyage dudit au moins un biofilm. [0023] On comprend que le procédé de nettoyage peut comporter l'utilisation du dispositif de nettoyage tel que décrit, et l'étape de positionnement dudit élément est mise en oeuvre par coopération de l'élément avec l'organe de maintien, l'étape 3056929 5 de génération de vapeur est quant à elle mise en oeuvre par activation du système de génération de vapeur du dispositif de nettoyage. [0024] L'invention est aussi relative à un procédé d'étude d'au moins un biofilm ce procédé comporte les étapes suivantes : 5 - une étape de formation dudit au moins un biofilm dans un logement d'un élément comportant ledit logement, - une étape de nettoyage dudit au moins un biofilm mettant en oeuvre le procédé de nettoyage tel que décrit ou utilisant ledit dispositif de nettoyage tel que décrit, 10 - une étape d'étude dudit au moins un biofilm nettoyé permettant de récupérer au moins une information relative audit au moins un biofilm. [0025] Après l'étape de nettoyage, le procédé d'étude peut comporter une étape de décollement dudit au moins un biofilm, en utilisant une solution mère placée dans le logement, d'où il résulte la mise en suspension dudit au moins biofilm 15 dans la solution mère, l'étape d'étude comportant la récupération de la solution mère avec le biofilm en suspension et le filtrage de la solution mère récupérée par un filtre, formé par une membrane poreuse dont les pores présentent une dimension de 5i_tm, pour ne conserver que ledit au moins un biofilm dans le filtre, après filtrage l'étape d'étude comporte : 20 - une étape d'extraction des bactéries depuis ledit au moins un biofilm récupéré dans le filtre, puis - une étape de dénombrement des bactéries extraites dudit au moins un biofilm, notamment après incubation des bactéries extraites sur une gélose. 25 Description sommaire des figures [0026] L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui va suivre, donnée uniquement à titre d'exemple non limitatif et faite en se référant aux dessins sur lesquels : 30 - La figure 1 illustre schématiquement une vue en perspective d'un dispositif selon un mode d'exécution de l'invention, - La figure 2 illustre une vue en coupe du dispositif selon la figure 1, - La figure 3 illustre une variante de la figure 1 dans le sens où un capot est rajouté, 3056929 6 - La figure 4 illustre une vue en coupe de la figure 3, - La figure 5 illustre des étapes d'un procédé de nettoyage d'au moins un biofilm, - La figure 6 illustre des étapes d'un procédé d'étude d'au moins un biofilm, 5 [0027] Dans ces figures, les mêmes références sont utilisées pour désigner les mêmes éléments. [0028] Par ailleurs, les éléments représentés sur les figures ne sont pas à l'échelle. 10 Description de modes particuliers de réalisation [0029] Il est décrit ci-après un dispositif de nettoyage de biofilm(s) et un procédé de nettoyage de biofilm(s) qui diffèrent de l'art antérieur en ce que l'on utilise de la vapeur pour nettoyer le, ou les, biofilms. Par nettoyage d'un biofilm, on entend que l'on cherche à retirer tout ce qui n'est pas enchâssé/emprisonné dans la 15 matrice du biofilm tout en cherchant à conserver ledit biofilm sous une forme la moins détériorée possible. Préférentiellement, l'utilisation de la vapeur permet un nettoyage en douceur en formant dans un premier temps des gouttelettes à la surface du biofilm qui est disposé de telle manière que ces gouttelettes sont ensuite aptes de se détacher du biofilm par gravité, entraînant ainsi avec elles les 20 matières non enchâssées dans la matrice du biofilm. Le nettoyage du biofilm est le moins traumatique possible pour récupérer ce dernier dans les meilleures conditions. [0030] Un biofilm au sens de la présente description est un amas structuré composé d'une matrice polymérique enrobant des micro-organismes comme les 25 bactéries et qui peut adhérer à n'importe quelle surface (minérale, organique, industrielle ou médicale) tant qu'elle se trouve en milieu aqueux ou humide. On estime que les bactéries vivant sous forme de biofilm représentent environ 80% de la biomasse bactérienne de la Terre. Les micro-organismes présents dans un biofilm peuvent être tous de la même espèce : on parle alors de biofilm 30 homogène, ou d'espèces différentes : on parle alors de biofilm hétérogène. L'hétérogénéité confère au biofilm une plus forte résistance aux antibiotiques grâce aux interactions synergétiques entre espèces. De plus, la matrice du biofilm est composée d'exopolysaccharide, de lipide, de protéines, d'acides nucléiques, de différents cations et surtout d'eau. La matrice forme alors une véritable 3056929 7 forteresse qui entoure les micro-organismes (ici les bactéries) et se forme suivant des signaux extracellulaires, parfois en réponse à un stress bactérien pour permettre une protection contre le système immunitaire, les antibiotiques ou les différents désinfectants. 5 [0031] La formation d'un biofilm se divise en quatre grandes étapes, pouvant se répéter indéfiniment : l'adhérence, la prolifération, la maturation, et la dispersion. Concernant l'adhérence, l'adsorption ou l'adhésion des bactéries sur un support se crée grâce à des forces non covalentes comme les interactions de Van der Waals et électrostatiques. Ensuite, entrent en jeu des protéines de structure tel 10 que les pili accompagnés de la formation de macrostructures protéiques qui vont augmenter de façon importante et stable la force d'ancrage des micro-organismes avec le support. Concernant la prolifération, l'agglutination et la multiplication des bactéries permettent la formation de micro colonies. Ces dernières, en multicouches, forment le biofilm précoce. Concernant la maturation, les micro- 15 organismes continuent de se multiplier et sécrètent une matrice extracellulaire stable grâce à la synthèse d'exopolysaccharides et d'autres constituants qui vont varier d'un biofilm à l'autre en fonction de la flore bactérienne et de l'environnement. Le biofilm se développe jusqu'à devenir macroscopique et ainsi devenir mature. Concernant la dispersion, le vieillissement du biofilm, le stress, 20 une carence ou bien un phénomène mécanique, peut permettre à une partie des bactéries de se séparer du biofilm et de retrouver ainsi leur état planctonique. Cela permet la colonisation d'une nouvelle surface, et ainsi recommencer un nouveau cycle de biofilm. [0032] Une fois le biofilm formé sur un support, les bactéries - ou micro- 25 organismes - y sont donc protégées et vont être potentiellement plus tolérantes et/ou résistantes aux antibiotiques. Ces réservoirs bactériens vont donc favoriser l'apparition d'infections chroniques localisées et/ou plus profondes. Il est donc nécessaire de pouvoir estimer et quantifier de façon très précise la formation de biofilm pour une souche donnée, ainsi que de pouvoir estimer la meilleure 30 réponse antibiotique à apporter à un type d'infection donnée, et accessoirement faisant intervenir la présence de biofilm. [0033] Par exemple, pour former un biofilm, il est possible d'utiliser un bouillon en BHI (acronyme de l'anglais « Brain Heart Infusion » pour Bouillon Coeur Cerveau en français) que l'on prépare à l'avance pour que des bactéries puissent se 3056929 8 développer. Un bouillon en BHI est bien connu de l'homme du métier, il s'agit d'un milieu nutritif pour la culture de bactéries comprenant des glucides, des lipides et des protéines. Après développement des bactéries dans le bouillon en BHI, une culture standardisée va être formée en vue d'être utilisée pour former un ou 5 plusieurs biofilms. Pour cela, dans un premier temps le bouillon comprenant les bactéries est homogénéisé à l'aide d'un vortex, puis éventuellement d'une sonication, pour éviter la présence d'amas de bactéries au sein du bouillon. A partir de du bouillon, il est formé une solution présentant une D0600 = 1 -F/- 0.05 (D0600 représentant une densité optique à 600nm) en diluant la solution si 10 nécessaire dans du BHI stérile. Le BHI stérile correspond à un BHI dépourvu de bactéries. Une DO600 = 1 correspond à 1,5x109UFC/ml, avec UFC signifiant Unité Formant Colonie. Cette solution est ensuite diluée au 1/100 en BHI stérile complémenté de glucose de telle sorte que la culture standardisée comporte 1 gramme de glucose pour 100m1 de culture standardisée. En ce sens, la 15 concentration bactérienne finale de la solution qui forme alors la culture standardisée est donc de 1,5x107 UFC/ml. Cette culture standardisée est distribuée dans des puits d'une plaque de 96 puits à fond plat de telle sorte que chaque puits comporte 100p1 de la culture standardisée. La plaque est couverte et incubée en statique en chambre humide durant 24 heures. Le surnageant est 20 enlevé par retournement, puis les biofilms formés dans chaque puits sont nettoyés à la manière qui sera décrite ci-après. Bien entendu, tout autre type de technique pour obtenir des biofilms peut aussi être utilisée. [0034] Au cours de la formation du biofilm dans un puits (aussi appelé logement dans la présente description), des bactéries planctoniques peuvent se 25 développer, ainsi que des bactéries adhérentes distinctes des micro-organismes directement impliquées dans le biofilm. Les bactéries planctoniques vont rester en suspension dans la solution de culture, alors que le biofilm et les bactéries adhérentes vont adhérer à la surface du logement. Le nettoyage d'un biofilm est une étape importante dans le sens où il permet de retirer le maximum de choses, 30 notamment les bactéries planctoniques, que l'on ne souhaite pas analyser/étudier. [0035] En ce sens, on comprend clairement que pour les besoins de l'analyse d'un biofilm, il est important de pouvoir analyser ce dernier sous sa forme la plus pure possible, et surtout la moins endommagée possible. Une analyse de biofilm 3056929 9 peut, par exemple, consister à quantifier la quantité/masse de ce dernier, ou à chercher des traitements capables de passer au travers de la forteresse évoquée précédemment pour attaquer les bactéries, ou micro-organismes, enchâssées dans le biofilm. Pour cela, la présente invention s'intéresse tout particulièrement 5 au nettoyage du biofilm. [0036] Sur les figures 1 à 4, il est représenté un référentiel XYZ d'axes orthogonaux lié au dispositif de nettoyage dont l'axe Z représente un axe vertical du dispositif de nettoyage permettant de définir les termes « au-dessus de » ou « orienté vers le bas » selon cet axe Z qui pointe vers le haut. En particulier, l'axe 10 Z est orienté dans une direction opposée au sol. Par ailleurs, on dit aussi que les axes X et Y définissent un plan horizontal du dispositif de nettoyage. [0037] Comme illustré en figures 1 à 4, de manière générale, le dispositif de nettoyage 1 d'au moins un biofilm 2 comporte un organe de maintien 3 configuré pour maintenir, dans un emplacement de nettoyage Z1, un élément 4 comportant 15 au moins un logement 5 destiné à loger ledit au moins un biofilm 2 à nettoyer. L'emplacement de nettoyage Z1 appartient au dispositif de nettoyage, et, plus généralement, on parle d'emplacement de nettoyage Z1 du dispositif. Dans la présente description, un emplacement de nettoyage est défini comme un espace tridimensionnel qui est destiné à recevoir l'élément 4 qui sera maintenu par 20 l'organe de maintien 3 ou dans lequel l'élément 4 est placé tout en étant maintenu par l'organe de maintien 3. De préférence, l'élément 4 comporte plusieurs logements 5 chacun destiné à loger un biofilm 2 à nettoyer. On comprend de la formulation « organe de maintien 3 configuré pour maintenir un élément 4 » que ledit élément 4 ne fait pas forcément partie du dispositif 1 puisqu'il peut s'agir d'un 25 consommable interchangeable. Selon une réalisation, on dit que le dispositif de nettoyage 1 comporte l'élément 4 qui est maintenu dans l'emplacement de nettoyage Z1 par l'organe de maintien 3. Par ailleurs, l'élément 4 est, de préférence, amovible du dispositif dans le sens où il peut être placé, au préalable de son insertion dans le dispositif de nettoyage, dans une enceinte de culture où 30 le, ou les, biofilms peuvent se former à la manière telle que décrite précédemment dans le ou les logements 5 de l'élément 4. Chaque logement 5 peut être formé par une cavité ouverte, lorsque l'élément 4 comporte une pluralité de logements 5, les cavités ouvertes correspondantes sont agencées sur une même face de l'élément 4. 3056929 10 [0038] Dans la présente description, tout ce qui s'applique audit au moins un biofilm peut s'appliquer à une pluralité de biofilms alors chacun logé dans un logement 5 correspondant dudit élément 4 qui comporte alors une pluralité de logements 5. Dans la présente description, lorsque l'on fait référence à un biofilm 5 formé sur l'élément 4, il s'agit notamment d'un biofilm logé dans un logement correspondant dudit élément 4, et notamment formé/adhérent sur un fond du logement 5. Notamment, pour le nettoyage, chaque biofilm 2 est un biofilm adhérent au logement 5, notamment au fond du logement 5. [0039] Dans la présente description, par élément 4 comportant au moins un ou 10 plusieurs logements 5, on entend un élément sur lequel le ou les biofilms peuvent se développer/former. En particulier, ledit élément 4 est une plaque comportant un ou des puits 5 formant le ou les logements évoqués précédemment. Les biofilms 2 sont aptes à se développer et à adhérer dans, et notamment au fond, de chaque puits. En particulier, l'élément 4 est une plaque en polystyrène, dont 15 les logements 5 sont formés, par exemple, par des puits 5 en particulier au nombre de 6 ou 24 ou 96 ou 384 : ceci n'étant que des exemples, l'homme du métier étant apte à adapter les dimensions du dispositif en fonction des dimensions de la plaque et du nombre de logements 5. [0040] L'avantage d'utiliser un élément 4 qui comporte des logements 5 est qu'un 20 biofilm est avantageusement formé dans chaque logement 5 ou dans plusieurs des logements 5 selon les besoins. Ces biofilms peuvent alors s'être formés de la même manière, et seront nettoyés de la même manière. Il en résultera l'obtention de biofilms nettoyés ayant des caractéristiques comparables et qui pourront, par exemple, subir l'application de différents traitements antibiotiques et être 25 comparés en fonction des résultats desdits traitements. [0041] En outre, le dispositif 1 comporte un système de génération de vapeur 6 configuré pour générer de la vapeur (c'est-à-dire par exemple un flux de vapeur) en direction l'emplacement de nettoyage Z1 en vue de réaliser le nettoyage dudit au moins un biofilm 2. On comprend alors que la vapeur générée est apte à 30 rentrer dans chaque logement 5, notamment pour se condenser à la surface du biofilm présent dans ledit logement. Par « flux de vapeur », on entend dans la présente description de la vapeur qui se déplace en direction de l'emplacement de nettoyage pour permettre le nettoyage de chaque biofilm. On dit que le système de génération de vapeur 6 est configuré pour générer de la vapeur de 3056929 11 telle manière que cette dernière se propage en direction de l'emplacement de nettoyage. Le dispositif de nettoyage 1 est notamment configuré de sorte que, lors de l'utilisation du dispositif de nettoyage : - l'élément 4 sur lequel au moins un biofilm est formé/adhère (notamment au 5 fond d'un logement 5 correspondant) est maintenu par l'organe de maintien 3, et - la vapeur générée (flèches F1 figures 2 et 4) par le système de génération de vapeur 6 puisse venir se condenser pour former des gouttelettes au niveau dudit au moins un biofilm (et notamment sur ledit au moins un 10 biofilm 2). [0042] Après condensation de la vapeur au niveau dudit au moins un biofilm, il reste une problématique de retrait de la vapeur condensée toujours en évitant d'être traumatique pour ledit au moins un biofilm. En ce sens, le dispositif peut adopter une configuration dans laquelle il comporte l'élément 4 maintenu par 15 l'organe de maintien 3 dans l'emplacement de nettoyage Z1, et dans laquelle le fond de chaque logement 5 est orienté vers le bas du dispositif de nettoyage 1 (notamment vers le sol), par exemple en direction du système de génération de vapeur 6 qui se situe donc à un niveau inférieur par rapport au niveau de l'élément 4. Cette orientation particulière permet aux gouttelettes de vapeur 20 condensée de retomber naturellement par gravité (flèches F2 des figures 2 et 4) tout en emmenant avec elles de la matière, notamment non adhérente, qui n'est pas enchâssée dans ledit au moins un biofilm formé dans le logement 5 et adhérent audit logement 5, en particulier dans la matrice dudit au moins biofilm. La matière qui n'est pas enchâssée/emprisonnée dans la matrice et qui retombe 25 avec les gouttelettes est notamment formée par des bactéries planctoniques non adhérentes. Grâce à cette opération, on retire par exemple les bactéries situées à la surface extérieure de chaque biofilm, c'est-à-dire non emprisonnées dans ledit biofilm. [0043] De préférence, l'emplacement de nettoyage Z1 est agencé au-dessus du 30 système de génération de vapeur 6, ceci permettant notamment à la vapeur lorsqu'elle est générée par le système de génération de vapeur 6 de monter naturellement (flèches F1 des figures 2 et 4) en direction de l'emplacement de nettoyage Z1. Cet agencement particulier permet une condensation la plus douce possible puisque la vapeur va monter naturellement sans être propulsée par un 3056929 12 système mécanique particulier, puis va se condenser sous la forme de gouttelettes à la surface dudit au moins un biofilm 2 logé dans un logement 5 correspondant de l'élément 4 maintenu par ledit organe de maintien 3, et enfin les gouttelettes retombent par gravité lorsqu'elles ont atteint une masse/un volume 5 suffisant comme indiqué ci-dessus du fait du positionnement adéquat de l'élément 4 qui oriente le fond de chaque logement vers le bas du dispositif (notamment vers le sol). [0044] Par ailleurs, le nettoyage dudit au moins un biofilm s'effectuant ici par utilisation de vapeur, il est clair que la distance de séparation entre la source de 10 vapeur - donc le système de génération de vapeur 6 - est adaptée de telle sorte que la quantité de vapeur soit suffisante pour obtenir une condensation adaptée, notamment apte à former des gouttelettes pouvant se détacher par gravité comme expliqué précédemment. L'homme du métier est à même de quantifier le flux de vapeur pour obtenir une condensation adaptée, en fonction du flux de 15 vapeur le temps de nettoyage peut être rallongé ou diminué. Plus particulièrement, le flux de vapeur est calibré pour éviter une montée en température trop importante au niveau du ou des biofilms qui risquerait de les détruire. [0045] En particulier, la vapeur décrite dans la présente description, et 20 notamment obtenue par utilisation du système de génération de vapeur 6, peut être obtenue par chauffage d'un liquide (par exemple à sa température d'ébullition ou à une température inférieure à sa température d'ébullition pour limiter les projections de liquide en direction de l'emplacement de nettoyage mais tout en autorisant la formation de vapeur). Le liquide évoqué ici est notamment de l'eau, 25 et plus particulièrement de l'eau déminéralisée. Cette eau peut aussi être stérile. L'utilisation d'eau déminéralisée est avantageuse dans le sens où elle permet de ne pas encrasser le dispositif avec des dépôts de minéraux. Ainsi, la vapeur utilisée pour nettoyer chaque biofilm formé sur l'élément 4 peut présenter une température élevée qui peut être néfaste à la viabilité des bactéries, ou micro- 30 organismes, contenues dans ledit biofilm : on dit que la chaleur liée à la vapeur peut être destructrice des caractéristiques d'un biofilm. En ce sens, pour éviter la destruction de chaque biofilm formé sur l'élément 4, le dispositif de nettoyage 1 peut comporter un système de refroidissement 7, en particulier agencé au niveau de l'emplacement de nettoyage Z1, destiné à être couplé thermiquement avec 3056929 13 ledit élément 4, notamment lors du nettoyage dudit au moins un biofilm, c'est à dire lorsque la vapeur est envoyée vers l'emplacement de nettoyage Z1 par le système de génération de vapeur 6. Par couplage thermique, on entend que le système de refroidissement 7 est configuré pour agir sur la température de 5 l'élément 4 par exemple en le refroidissant de sorte à permettre à chaque biofilm logé dans un logement 5 de l'élément 4 d'être maintenu à une température comprise dans une plage prédéterminée de températures, par exemple entre 1°C et 6°C. Par « système de refroidissement 7 agencé au niveau de l'emplacement de nettoyage Z1 », on entend que le système de refroidissement 7 est positionné 10 de telle sorte que, lors du fonctionnement du dispositif de nettoyage, il permet de refroidir ledit au moins un biofilm 2. Plus généralement, on dit que le système de refroidissement 7 est configuré pour refroidir l'élément 4 (en particulier au cours du nettoyage, c'est à dire lorsque la vapeur est générée par le système de génération de vapeur), par exemple de telle sorte à maintenir la température dudit 15 au moins un biofilm 2 formé sur l'élément 4 dans une plage prédéterminée de températures, par exemple entre 1°C et 6°C. En lien avec ce qui a été dit ci-dessus, la quantité de vapeur envoyée vers l'emplacement de nettoyage peut être calibrée en fonction du pouvoir de refroidissement du système de refroidissement 7 : il faut juste que le ou les biofilms 2 restent à une température comprise dans la 20 gamme de températures donnée ci-dessus. [0046] Ce système de refroidissement 7 peut présenter une double fonction à savoir de réaliser une protection thermique dudit au moins un biofilm 2, et de réaliser une amplification du phénomène de condensation de la vapeur issue du système de génération de vapeur 6 sur ledit au moins un biofilm 2, en particulier 25 au fond de chaque logement 5. [0047] En particulier, le système de refroidissement 7 est configuré pour venir/être en contact physique avec ledit élément 4 comportant ledit au moins un logement 5, de préférence sur une face arrière dudit élément 4 opposée à une face avant dudit élément 4 où est agencée une ouverture d'accès audit au moins 30 un logement 5, lorsque ledit élément 4 est maintenu par l'organe de maintien 3. La face avant est notamment celle orientée vers le système de génération de vapeur 6. Autrement dit, dans la configuration du dispositif où l'élément 4 est maintenu par l'organe de maintien 3 (c'est-à-dire dans la configuration où le dispositif comporte ledit élément 4 maintenu par l'organe de maintien 3), le 3056929 14 système de refroidissement 7 est couplé thermiquement (notamment par contact physique, et donc thermique) avec l'élément 4, notamment avec la face arrière dudit élément 4 à la manière de ce qui a été dit précédemment. [0048] Selon une mise en oeuvre du système de refroidissement 7, ce dernier 5 peut comporter un organe de transmission thermique 7a, comme par exemple une plaque à forte conductivité thermique. Cet organe de transmission thermique 7a est placé en, ou destiné à être placé en, contact avec la face arrière dudit élément 4. Par exemple, l'organe de transmission thermique 7a peut présenter une conductivité thermique adaptée pour maintenir, en coopération avec le reste 10 du système de refroidissement 7, chaque biofilm, et notamment la face arrière de la plaque (c'est-à-dire la face arrière de l'élément 4), à une température comprise entre 1°C et 6°C. Le système de refroidissement 7 peut comporter une poche de gel souple froide et, dans ce cas, la partie 7a n'est pas nécessaire car la poche de gel assure à la fois la fonction de refroidissement et de bonne conductivité 15 thermique. [0049] Par ailleurs, le système de refroidissement 7 peut aussi comporter un organe de refroidissement 7b couplé thermiquement, soit directement à l'élément 4, soit à l'organe de transmission thermique 7a. L'organe de refroidissement 7b peut, par exemple, être une poche de glace, ou de manière plus évoluée une 20 plaque munie de canaux dans lesquels circule un liquide de refroidissement de manière à appliquer un refroidissement homogène à chaque biofilm adhérent audit élément 4 au cours de l'utilisation du dispositif de nettoyage 1. L'homogénéité du refroidissement est préférée car elle permet d'améliorer la reproductibilité du nettoyage au niveau de chaque biofilm. Selon une mise en 25 oeuvre, l'organe de refroidissement 7b peut être à effet Peltier et être alimenté électriquement de sorte à permettre de réaliser le refroidissement. Cet organe de refroidissement 7b à effet Peltier peut être associé à une poche de gel (formant l'organe de transmission 7a) alors en contact avec l'élément 4 de manière à réfrigérer de manière efficace le fond des logements 5. Dans ce cas, la poche est 30 conformée de manière adaptée à la fonction de l'organe de transmission 7a et le gel est choisi pour réaliser la fonction de l'organe de transmission 7a. [0050] Bien entendu, les exemples donnés ci-dessus pour le système de refroidissement ne sont pas limitatifs et l'homme du métier pourra utiliser tout système de refroidissement permettant d'assurer la fonction recherchée. 3056929 15 [0051] Selon une implémentation, le système de génération de vapeur 6 peut comporter un organe de chauffage 8 et un réservoir 9 configuré pour recevoir un liquide. L'organe de chauffage 8 est notamment configuré de sorte à permettre le chauffage du liquide présent au sein du réservoir pour permettre sa vaporisation : 5 la vapeur permettant le nettoyage du biofilm est donc issue du liquide qui peut être de l'eau (notamment de l'eau déminéralisée, stérile ou non) comme évoqué précédemment. Tout type d'organe de chauffage peut être utilisé comme par exemple une résistance électrique. Pour les raisons évoquées précédemment permettant la formation de gouttelettes condensées à la surface dudit au moins 10 un biofilm 2, l'emplacement de nettoyage Z1 se situe préférentiellement au- dessus du réservoir 9 et notamment de la surface du liquide. Par ailleurs, cet agencement permet facilement aux gouttelettes de retomber dans le réservoir 9 pour y être stérilisées : on dit alors que le fond de chaque logement 5 est situé à l'aplomb du réservoir 9. En ce sens, on comprend que dans une configuration 15 d'utilisation du dispositif de nettoyage 1, le réservoir 9 peut comporter le liquide, et l'organe de chauffage 8 est activé pour permettre la formation de vapeur à partir du liquide. En particulier, lorsque le liquide est de l'eau déminéralisée, l'organe de chauffage 8 permet de monter l'eau présente dans le réservoir 9 à une température de 80°C d'où il résulte l'apparition de vapeur à la surface du liquide 20 cette vapeur montant en direction de l'emplacement de nettoyage Z1 pour se condenser à la surface dudit au moins un biofilm 2 présent dans un logement 5 correspondant de l'élément 4 maintenu par l'organe de maintien 3. [0052] Dans une configuration préférée, le dispositif de nettoyage comporte l'élément 4 muni d'une pluralité de logements 5, et maintenu par l'élément de 25 maintien 3 de telle sorte que les fonds des logements 5 soient tous orientés vers le bas du dispositif, notamment vers le réservoir 9. De préférence, le système de refroidissement 7 est alors couplé thermiquement à l'élément 4, et plus particulièrement avec la face arrière de l'élément 4 opposée à celle permettant l'accès aux logements 5. 30 [0053] En particulier, en cas d'utilisation du dispositif, la configuration préférée - ou l'utilisation du dispositif de nettoyage, peut être telle que : - des biofilms 2 adhèrent dans au moins une partie des, voire tous les, logements 5, 3056929 16 - le système de génération de vapeur 6 est activé et la vapeur résultante vient se condenser à la surface des biofilms 2, - de préférence le système de refroidissement 7 est activé et maintien les biofilms 2 à une température comprise entre 1°C et 6°C. 5 [0054] Selon une réalisation illustrée en figures 3 et 4, un capot 10 peut être placé autour de l'ensemble formé par l'organe de maintien 3 et l'élément 4. L'ensemble évoqué ci-avant peut éventuellement aussi comporter le système de refroidissement 7 et/ou le système de génération de vapeur 6. Le rôle de ce capot 10 est de contenir au moins une partie de la vapeur au sein du dispositif pour 10 améliorer la condensation, et de préférence en laisser une partie s'échapper pour limiter la montée en température au niveau de l'élément 4. Plus particulièrement, la vapeur est générée dans un environnement semi-clos afin d'optimiser la quantité de vapeur nécessaire au fonctionnement du dispositif de nettoyage, le but étant d'obtenir le plus de vapeur sans dégrader le ou les biofilms, par exemple 15 en les maintenant à une température comprise entre 1°C et 6°C via le système de refroidissement 7. Le capot 10 peut donc comporter une ouverture 10a (figure 3), préférentiellement à géométrie variable pour régler la taille de l'ouverture 10a et donc l'échappement de vapeur. [0055] Les figures 1 à 4 illustrent le dispositif de nettoyage selon un exemple 20 particulier dans la configuration d'utilisation où l'on retrouve du bas vers le haut : le système de génération de vapeur 6, l'organe de maintien 3, l'élément 4 formé par une plaque de 96 puits dont les fonds sont orientés vers le système de génération de vapeur 6, puis le système de refroidissement 7. En particulier, tout ou partie des fonds des puits sont liés à un biofilm 2 correspondant qui s'est 25 développé au niveau dudit fond et qui y adhère. En fait, ici le système de génération de vapeur 6 forme une base comportant le réservoir 9 comportant le liquide à vaporiser (notamment de l'eau déminéralisée) qui repose sur l'organe de chauffage 8. De cette base s'étend l'organe de maintien 3 qui adopte la forme d'un organe d'entretoisement sur lequel repose ladite plaque 4 de puits 5. De 30 manière générale applicable à toutes les réalisations, l'organe de maintien 3 peut être formé par tout type de support adapté, comme par exemple un cadre monté sur des pieds et sur lequel repose l'élément 4 comme cela est représenté aux figures 1 à 4. Le système de refroidissement 7 est en contact avec la plaque 4 de puits 5 et comporte un organe de transmission thermique 7a couplé 3056929 17 thermiquement à un organe de refroidissement 7b (par exemple dans lequel circule un fluide dont la température est contrôlée en vue de maintenir les biofilms dans la gamme de températures évoquée précédemment, permettant ainsi le maintien de leur intégrité et favorisant la condensation de la vapeur). Pour obtenir 5 la vapeur à partir du liquide à vaporiser, le réservoir 9 est ici porté à 80°C par l'organe de chauffage 8. De préférence, comme illustré aux figures 3 et 4, le capot 10 est placé autour de l'ensemble formé par l'organe de maintien 3, la plaque 4 de puits 5 et le système de refroidissement 7. Le rôle de ce capot 10 est de participer à la formation d'une enceinte permettant de confiner tout ou partie de la 10 vapeur issue du réservoir 9. Autrement dit, le dispositif de nettoyage peut être tel qu'il peut comporter une enceinte de nettoyage, dans laquelle l'élément 4 comportant au moins un ou plusieurs biofilms est placé lors du nettoyage du ou des biofilms. Cette enceinte est préférentiellement ouverte pour laisser s'échapper de la vapeur issue du système de génération de vapeur : ceci permet 15 de limiter l'échauffement dans l'enceinte, et donc de limiter la température dudit au moins un biofilm 2 en particulier en cohérence avec le système de refroidissement 7 pour rester dans la gamme de températures évoquée précédemment. En particulier, l'ouverture de l'enceinte pour laisser s'échapper la vapeur peut varier, notamment par positionnement adapté du capot évoqué 20 précédemment ou par réglage de l'ouverture 10a à géométrie variable. En ce sens, l'enceinte peut être partiellement fermée par le capot de sorte à contrôler précisément la quantité de vapeur au sein du dispositif de nettoyage pour optimiser le nettoyage des biofilms. En particulier, on dit que la quantité de vapeur est régulée de façon à ce que la température vue par le ou les biofilms lorsqu'ils 25 sont soumis à la vapeur reste dans une gamme empêchant la détérioration desdits biofilms (par exemple entre 1°C et 6°C). De préférence, dans cet exemple particulier, la hauteur dl du dispositif incluant le capot 10 (figure 4) selon l'axe Z est de 400mm, la largeur d2 de ce dernier est de 150mm. Vue de dessus, le dispositif de nettoyage adopte la forme générale d'un carré de 150mm par 30 150mm. Toujours selon l'exemple particulier de la figure 4, la distance de séparation d3 de la plaque 4 du système de génération de vapeur 6 est de 300mm. Bien entendu, ces dimensions sont données à titre d'exemple, et pourront être adaptées par l'homme du métier en fonction de la taille et des caractéristiques souhaitées du dispositif de nettoyage 1. 3056929 18 [0056] De manière générale, le dispositif de nettoyage peut comporter le capot 10 formant une enceinte dans laquelle la vapeur se propage, lorsque le système de génération de vapeur 6 est activé, en direction de l'emplacement de nettoyage Zl. L'enceinte est ouverte au moins partiellement pour permettre à la vapeur de 5 s'échapper hors de l'enceinte. Ceci permet de réguler la quantité de vapeur et la chaleur au sein de l'enceinte. L'ouverture de l'enceinte peut être réalisée comme évoqué précédemment, par exemple via une ouverture 10a ménagée dans le capot 10 et qui peut être variable. [0057] Il a été évoqué précédemment que l'élément 4 était amovible du dispositif 10 de nettoyage 1. En ce sens, l'organe de maintien 3 peut être configuré pour autoriser, d'une part, l'insertion dudit élément 4 dans le dispositif de nettoyage, et, d'autre part, pour autoriser le retrait dudit élément 4 du dispositif de nettoyage. Pour cela, l'organe de maintien 3 peut par exemple comporter des glissières de guidage autorisant l'insertion de l'élément 4 dans l'emplacement de nettoyage Z1, 15 et le retrait de l'élément 4 depuis l'emplacement de nettoyage hors du dispositif de nettoyage. [0058] L'invention est aussi relative à un procédé de nettoyage d'au moins un biofilm 2, et notamment d'une pluralité de biofilms et ce de manière simultanée. Comme illustré en figure 5, un tel procédé de nettoyage peut comporter une 20 étape de fourniture El de l'élément 4 comportant au moins un logement 5 dans lequel ledit au moins un biofilm 2 est formé et adhère audit au moins un logement 5 (notamment au fond du logement 5). De préférence, l'étape de fourniture El est telle que l'élément 4 comporte une pluralité de logements dans lesquels adhèrent des biofilms. Le procédé comporte une étape de positionnement E2 dudit élément 25 4 fourni de sorte à le maintenir dans un emplacement de nettoyage Z1, notamment de telle sorte que les logements soient situés au niveau de l'emplacement de nettoyage. Par ailleurs, le procédé de nettoyage comporte en outre une étape de génération E3 de vapeur en direction dudit au moins un logement 5 (et donc en direction de l'emplacement de nettoyage Z1), pour 30 nettoyer ledit au moins un biofilm 2 en utilisant ladite vapeur générée, notamment alors que l'élément 4 est maintenu dans l'emplacement de nettoyage Z1. En particulier, l'étape de génération E3 de vapeur permet de générer la vapeur en direction de l'ensemble des logements 5 d'où il résulte un nettoyage simultané de l'ensemble des biofilms présents dans les logements 5 en utilisant ladite vapeur 3056929 19 générée. On dit alors que la vapeur est générée pour se propager en direction de l'emplacement de nettoyage Z1 où est maintenu l'élément 4. [0059] Selon une réalisation, l'étape de positionnement E2 de l'élément 4 est telle que l'élément 4 est maintenu de telle sorte que le fond dudit au moins un 5 logement 5 soit orienté vers le bas. Par ailleurs, selon cette réalisation, l'étape de génération E3 de vapeur en direction dudit au moins un logement 5 provoque le nettoyage dudit au moins un biofilm 2 par condensation de ladite vapeur générée à la surface dudit au moins un biofilm 2 (la condensation forme alors des gouttelettes à la surface dudit au moins un biofilm 2) et par décrochage/chute de 10 gouttelettes issues de ladite condensation par effet de gravité. Plus particulièrement, l'étape de génération E3 de vapeur en direction dudit au moins un logement 5 provoque le nettoyage simultané de chaque biofilm 2 par condensation de la vapeur générée à la surface de chaque biofilm et par décrochage/chute de gouttelettes issues de ladite condensation par effet de 15 gravité. [0060] Avantageusement, le procédé comporte une étape de récupération E4 des gouttelettes, après leur chute, dans le réservoir 9 comprenant le liquide à partir duquel la vapeur est générée par chauffage dudit liquide d'où il résulte une stérilisation (ou destruction par dénaturation thermique) de la matière contenue 20 dans lesdites gouttelettes. De plus, une telle stérilisation permet que la vapeur formée soit dépourvue de contaminants. Notamment, la matière contenue dans lesdites gouttelettes correspond à des bactéries ne faisant pas partie du ou des biofilms. [0061] Comme évoqué précédemment en lien avec le dispositif de nettoyage 1, 25 le procédé de nettoyage peut comporter une étape d'utilisation E5 d'un système de refroidissement 7 pour maintenir la température dudit au moins un biofilm 2 dans une plage prédéterminée de températures, notamment entre 1°C et 6°C, au cours du nettoyage dudit au moins un biofilm 2. En particulier, pour assurer la meilleure viabilité des bactéries, ou micro-organismes, du biofilm, l'étape 30 d'utilisation du système de refroidissement 7 est telle que le système de refroidissement 7 est activé avant de déclencher l'étape de génération de vapeur et que le système de refroidissement 7 est désactivé après que l'étape de génération de vapeur E3 se soit arrêtée. Autrement dit, tout au long du nettoyage par condensation de vapeur sur ledit au moins un biofilm 2, le système de 3056929 20 refroidissement 7 est utilisé pour refroidir ledit au moins un biofilm 2, et de préférence l'ensemble des biofilms 2 qui adhèrent à l'élément 4. Notamment, lorsque plusieurs biofilms 2 sont nettoyés simultanément, le système de refroidissement 7 est configuré pour que la température de chacun des biofilms 2 5 soit homogène : on dit que les températures des biofilms sont identiques nonobstant une certaine tolérance. Par exemple, l'étape E5 d'utilisation du système de refroidissement 7 permet le maintien de l'ensemble des biofilms dans la plage prédéterminée de températures décrite ci-dessus au cours du nettoyage. [0062] Bien entendu, le procédé peut comporter l'utilisation du dispositif de 10 nettoyage 1 tel que décrit et l'étape de positionnement E2 dudit élément 4 est mise en oeuvre par coopération de l'élément 4 avec l'organe de maintien 3, et l'étape de génération de vapeur E3 est mise en oeuvre par activation du système de génération de vapeur 6 du dispositif de nettoyage 1. [0063] Typiquement, le temps de nettoyage, c'est-à-dire le temps pendant lequel 15 le ou les biofilms sont soumis à la vapeur générée peut être de 30 minutes en fonction de la quantité de vapeur qui atteint le ou les biofilms. On comprend de ce qui a été dit précédemment que la durée est fonction de la quantité de vapeur. [0064] De manière générale, tout ce qui a été dit en relation avec le dispositif de nettoyage peut s'appliquer au procédé de nettoyage et inversement. 20 [0065] Par ailleurs, on comprend de tout ce qui a été dit précédemment que la vapeur est préférentiellement de la vapeur d'eau, notamment déminéralisée. [0066] Pour valider le bon fonctionnement du dispositif de nettoyage 1 et du procédé de nettoyage le protocole suivant a été utilisé : - formation de biofilms adhérant en utilisant des première et deuxième 25 plaques à puits dans des conditions identiques pendant une incubation de 24 heures, - retournement des première et deuxième plaques pour éliminer le surnageant, - nettoyage des biofilms de la première plaque par le dispositif de nettoyage 30 selon l'invention, - après nettoyage des biofilms de la première plaque, on réalise un remplissage des puits avec 200g d'une solution tampon phosphate salin aussi connue dans le domaine sous l'acronyme PBS1X ( avec en anglais PBS l'acronyme de « Phosphate Buffered Saline », ce qui correspond à 3056929 21 une solution Tampon Phosphate Saline 1X comportant NaCI 137 mM, KCI 2,7 mM, Na2PO4 10 mM, KH2PO4 1,76 mM - avec mM une unité de concentration en chimie égale à 1mmol/L), puis chaque puits est gratté avec un cône pour décoller les biofilms de manière à ce qu'ils se retrouvent 5 en suspension dans les puits pour que l'on puisse en disposer pour étude, - lavage des biofilms de la deuxième plaque à la pipette selon les techniques de l'art antérieur par injection délicate de 200IAL d'une solution tampon phosphate salin dans chaque puits avant de retourner la plaque pour évacuer la solution (ceci étant réalisé à trois reprises), après ce lavage, on 10 réalise un remplissage des puits avec 200IAL d'une solution tampon phosphate salin aussi connue dans le domaine sous l'acronyme PBS1X, puis chaque puits de la deuxième plaque est gratté avec un cône pour décoller les biofilms de manière à ce qu'ils se retrouvent en suspension dans les puits pour que l'on puisse en disposer pour étude. 15 Il a résulté de ce protocole qu'une observation optique montre que les biofilms lavés selon l'invention présentent une masse homogène alors que ceux lavés par utilisation d'une pipette sont dégradés. Ce premier point amène à la conclusion que l'étude des biofilms nettoyés selon la présente invention sera plus pertinente car basée sur un meilleur état des biofilms qui se rapproche de l'état naturel dans 20 lequel se trouvent ces derniers. [0067] Chaque biofilm 2 nettoyé selon le procédé de nettoyage ou en utilisant le dispositif de nettoyage peut être repris pour quantifier la matrice bactérienne par mesure directe de la densité optique en tampon phosphate salin ou après coloration au crystal violet, ou pour évaluer l'inoculum bactérien après étalement 25 et dénombrement des bactéries présentes dans le biofilm lavé sur boîte de pétrie. [0068] La présente invention permet de nettoyer tout type de biofilms, notamment des biofilms produits en faible quantité ou particulièrement fragiles. Après nettoyage, il est possible de quantifier la matrice composant le biofilm ainsi que de quantifier toutes les bactéries, ou micro-organismes, composant le biofilm. 30 [0069] De plus, du fait de la douceur du nettoyage selon la présente invention, il est même possible de nettoyer des biofilms néoformés qui sont donc très précoces (c'est-à-dire obtenus de préférence dès 8 heures de culture) et/ou fragiles et/ou produits en faible quantité tout en améliorant la qualité et la quantité de biofilm récupéré au terme du nettoyage de ce dernier. En particulier, les 3056929 22 biofilms nettoyés selon l'invention pourront aussi l'être lorsque la quantité du biofilm est maximale, par exemple après 24 heures d'incubation. En particulier, la méthode « crystal violet » évoquée précédemment est une méthode applicable à l'analyse de biofilms tardifs (c'est à dire obtenues entre 24 heures et 48 heures 5 d'incubation) et à des bactéries formant une grande quantité de biofilms. [0070] Le nettoyage de biofilms est une étape clé pour l'étude du biofilm bactérien, fongiques, et algale et de préférence dans le cadre de l'étude de l'activité de différents composés sur celui-ci. Le domaine d'application industrielle est large puisque la présente invention peut intéresser l'industrie agroalimentaire, 10 l'industrie pharmaceutique, la bactériologie médicale, ainsi que la recherche académique. [0071] En complément, la présente invention peut aussi s'appliquer à l'étude de la formation de biofilms sur des matériaux chirurgicaux, par exemple des prototypes. Dans ce cas, le fond des logements au niveau duquel ledit au moins 15 un biofilm s'accroche lors de sa formation peut être formé en matériau chirurgical à étudier, par exemple se présentant sous la forme d'une couche de l'ordre du dixième de millimètre pour permettre le cas échéant d'assurer un refroidissement adapté du biofilm se formant sur cette couche. Le nettoyage permet alors d'étudier les biofilms en vue d'identifier si le matériau est propice à l'accroche des 20 biofilms, et si oui savoir comment se débarrasser d'un tel biofilm lorsqu'il s'est accroché dans le corps, notamment humain, sur une prothèse formée par ledit matériau. [0072] On comprend alors que de manière générale, l'invention est aussi relative à un procédé d'étude (figure 6) d'au moins un biofilm 2. Ce procédé d'étude 25 comporte alors les étapes suivantes : une étape de formation E100 dudit au moins un biofilm 2 dans un logement 5 d'un élément 4 comportant ledit logement 5 (notamment le biofilm formé adhère au fond du logement), une étape de nettoyage E101 dudit au moins un biofilm 2 mettant en oeuvre le procédé de nettoyage tel que décrit ou utilisant ledit dispositif de nettoyage tel que décrit, et 30 une étape d'étude E102 dudit au moins un biofilm 2 nettoyé permettant de récupérer au moins une information relative audit au moins un biofilm 2. [0073] Ladite au moins une information relative audit au moins un biofilm nettoyé peut par exemple être une quantification par mesure de densité optique ou une quantification indirecte du biofilm, ou de plusieurs biofilms, par dénombrement 3056929 23 des bactéries, ou micro-organismes, le constituant et retenues par filtration sélective ou encore la concentration minimale d'antibiotique qui permet l'éradication totale des bactéries du biofilm. [0074] On a expliqué ci-avant que la technique de nettoyage selon la présente 5 invention permettait avantageusement d'obtenir des biofilms intacts de bonne qualité. En ce sens, cela ouvre de nouvelles perspectives comme le filtrage du biofilm pour le séparer par exemple de bactéries adhérentes qui sont distinctes des bactéries présentes et composant le biofilm. Ainsi, après l'étape de nettoyage E100, le procédé d'étude peut comporter une étape de décollement E103 dudit 10 au moins un biofilm 2 en utilisant une solution mère placée dans ledit logement 5 (notamment formée par du PBS1X) - l'étape de décollement pouvant être alors mise en oeuvre par grattage avec un cône comme décrit ci-avant - d'où il résulte la mise en suspension dudit au moins un biofilm 2 dans la solution mère. L'étape d'étude E102 comporte alors la récupération de la solution mère avec le biofilm 2 15 en suspension et le filtrage de la solution mère récupérée par un filtre, formé par une membrane poreuse dont les pores présentent une dimension de (notamment de l'ordre de) 5i_tm, pour ne conserver que ledit au moins un biofilm 2 dans le filtre. Après filtrage l'étape d'étude E102 comporte une étape d'extraction E102-1 des bactéries (ou micro-organismes) depuis ledit au moins un biofilm 2 récupéré 20 dans le filtre, puis une étape de dénombrement E102-2 des bactéries (ou microorganismes) extraites dudit au moins un biofilm 2, notamment après incubation des bactéries extraites sur une gélose. [0075] Il résulte du filtrage que le biofilm 2 reste dans le filtre alors que le filtrat peut comporter des bactéries adhérentes distinctes du biofilm et qui se sont 25 décrochées au cours de l'étape de décollement du biofilm du logement. L'étape d'extraction des bactéries du biofilm peut être mise en oeuvre en plaçant le biofilm récupéré dans de l'eau physiologique pour former un mélange à la manière d'un vortex et réaliser une sonication pour permettre de libérer les bactéries prisonnières de la matrice du biofilm, et enfin permettre le dénombrement des 30 bactéries après étalement sur gélose. Selon une réalisation préférée liée à cet exemple utilisant un filtre, les contenus de six logements après décollement des biofilms correspondant dans une solution mère de PBS1X sont assemblés dans un tube eppendorf. Une lecture par densité optique à 492nm est effectuée afin d'estimer la quantité des biofilms, de bactéries des biofilms et d'autres bactéries 3056929 24 s'étant décrochées concomitamment au décrochage des biofilms. 500p1 de la suspension issue du tube est filtrée en utilisant une membrane dont les pores présentent des dimensions de 5pm, puis est rincée avec 50m1 d'eau physiologique stérile. Le filtre qui a retenu les biofilms est placé dans un flacon de 5 50 ml en présence de 5m1 d'eau physiologique pour former une première suspension, cette première suspension est agitée à la manière d'un vortex et subit une sonication. Le filtrat est quant à lui récupéré dans un flacon de 50m1 pour former une deuxième suspension. Trois dilutions de chaque suspension (de la première et de la deuxième suspension) sont étalées sur géloses TSA de 10 l'anglais « Trypticase Soy Agar » pour le français « gélose trypticase soja ». Les géloses sont mises à incuber 24h à 37°C puis le dénombrement des bactéries peut être réalisé à partir des géloses. En appliquant le filtrage après un nettoyage selon l'art antérieur, il est possible d'observer, pour un biofilm formé et correspondant à une souche « staphylocoque aureus », que le filtre ne retient rien 15 de visible au contraire du nettoyage selon la présente invention, ceci tendant à montrer que les lavages selon l'art antérieur détériorent trop les biofilms d'où il résulte que les bactéries sont libérées de leur matrice lors du lavage. [0076] En ce sens, on comprend de tout ce qui a été dit ci-dessus que les techniques de lavage de l'art antérieur appliquées aux biofilms avant de 20 déterminer une concentration minimale d'antibiotiques pour éradiquer la totalité des bactéries ne sont pas adaptées dans le sens où le biofilm a été dénaturé. Avec la présente invention il est possible de disposer d'un biofilm de bonne qualité, intact ou quasi intact pour déterminer une concentration minimale d'antibiotiques pour éradiquer la totalité des bactéries qui soit la plus juste 25 possible. [0077] Dans le cadre de l'étude d'un biofilm en vue de déterminer une concentration minimale d'antibiotiques pour éradiquer la totalité des bactéries dans le biofilm (aussi connue sous l'acronyme MBEC dans le domaine pour l'anglais « Minimal Biofilm Eradication Concentration »), l'étape d'étude E102 30 dudit au moins un biofilm peut comporter, après son nettoyage, une étape de dépôt, au fond du logement 5 comportant ledit au moins un biofilm 2, d'une solution comportant un antibiotique selon une dilution prédéterminée. Après application de la solution, ledit au moins un biofilm est incubé à une température déterminée et pendant un temps déterminé. Au terme du temps déterminé un 3056929 25 nouveau nettoyage en utilisant le procédé de nettoyage et/ou le dispositif de nettoyage selon la présente invention est réalisé pour retirer la solution comportant l'antibiotique. Après ce nouveau nettoyage, une solution mère va être introduite dans le logement et le biofilm va être décroché du logement de sorte à 5 se retrouver en suspension dans la solution mère. Les bactéries sont ensuite dissociées du biofilm par exemple par sonication de l'élément 4 comportant le logement dans lequel le biofilm est en suspension dans la solution mère. Une partie de liquide contenu dans le logement et comportant les bactéries du biofilm libérées est prélevée et déposée sur gélose avant d'être incubée. Au terme de 10 l'incubation, on observe la gélose de telle sorte que l'étape d'étude permet de connaître l'information suivante : la dilution de l'antibiotique est suffisante pour tuer les bactéries du biofilm ou la dilution de l'antibiotique est insuffisante pour tuer les bactéries du biofilm. Une étude comparative en utilisant le protocole décrit ci-dessus permet de montrer que la concentration minimale pour éradiquer 15 l'ensemble des bactéries est beaucoup plus importante dans le cadre du nettoyage selon l'invention en comparaison au nettoyage selon l'art antérieur : on en conclu donc que les concentration minimales déterminées à partir des techniques de l'art antérieur ne sont pas représentatives de celles nécessaires pour l'éradication de bactéries réellement emprisonnées dans un biofilm. La 20 présente invention permet donc de déterminer des concentrations minimales plus adaptées pour cibler, par type de biofilm et par type d'antibiotique, les posologies efficaces à utiliser. Plus particulièrement, pour évaluer le MBEC, la plaque comportant une pluralité de logements dans lesquels se sont formés et accrochés des biofilms est nettoyée selon l'invention puis retournée sur du papier absorbant 25 afin d'éliminer les gouttelettes d'eau résiduelles, puis les biofilms sont mis à sécher 15 minutes à l'air libre. Une gamme de dilution de chaque antibiotique est préparée puis 100p1 de dilution antibiotique est déposée délicatement au fond d'un logement correspondant. La plaque est ensuite incubée 24 heures à 37°C. Un nouveau nettoyage à l'aide de vapeur selon l'invention va permettre d'éliminer 30 la solution d'antibiotique restante dans chaque logement. Pour chaque logement, le biofilm restant va ensuite être repris dans 200p1 de PBS 1X et le logement va être gratté avec un cône concomitamment à des mouvements d'aspiration et refoulement de la solution PBS 1X afin de bien décoller le biofilm. Une sonication de la plaque est réalisée pour permettre de dissocier chaque biofilm et de libérer 3056929 26 les bactéries qui le forment. 10p1 de chaque logement est déposé sous forme de spot sur une gélose COS (la gélose COS est une gélose Columbia -F5% de sang de mouton, avec +5% de sang de mouton correspondant à 5g/100m1) puis incubé à 37°C pendant 24 heures. Le MBEC est déterminé par la plus petite 5 concentration d'antibiotique pour laquelle aucune colonie n'est observée sur gélose après incubation. REVENDICATIONS1. Dispositif de nettoyage (1) d'au moins un biofilm (2), caractérisé en ce qu'il comporte : - un organe de maintien (3) configuré pour maintenir, dans un emplacement de nettoyage (Z1), un élément (4) comportant au moins un logement (5) destiné à loger ledit au moins un biofilm (2) à nettoyer, - un système de génération de vapeur (6) configuré pour générer de la vapeur en direction dudit emplacement de nettoyage (Z1) en vue de réaliser le nettoyage dudit au moins un biofilm (2). 2. Dispositif selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'il comporte un système de refroidissement (7) destiné à être couplé thermiquement avec ledit élément (4). 3. Dispositif selon la revendication précédente, caractérisé en ce que le système de refroidissement (7) est configuré pour être contact physique avec ledit élément (4), de préférence sur une face arrière dudit élément (4) opposée à une face avant dudit élément (4) où est agencée une ouverture d'accès audit au moins un logement (5), lorsque ledit élément (4) est maintenu par l'organe de maintien (3). 4. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'emplacement de nettoyage (Z1) est agencé au-dessus du système de génération de vapeur (6). 5. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le système de génération de vapeur (6) comporte un organe de chauffage (8) et un réservoir (9) configuré pour recevoir un liquide, ledit organe de chauffage (8) étant configuré de sorte à permettre le chauffage du liquide présent au sein du réservoir (9) pour permettre sa vaporisation. 3056929 28 6. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il adopte une configuration dans laquelle il comporte ledit élément (4) maintenu par l'organe de maintien (3) et dans laquelle un fond de chaque logement (5) dudit élément (4) est orienté vers le bas du dispositif de 5 nettoyage (1), par exemple en direction du système de génération de vapeur (6). 7. Dispositif selon la revendication précédente et la revendication 2, caractérisé en ce que le système de refroidissement (7) est couplé thermiquement avec l'élément (4) maintenu par l'organe de maintien (3). 10 8. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comporte un capot (10) formant une enceinte dans laquelle la vapeur se propage, lorsque le système de génération de vapeur (6) est activé, en direction de l'emplacement de nettoyage (Z1), l'enceinte étant ouverte au 15 moins partiellement pour permettre à la vapeur de s'échapper hors de l'enceinte. 9. Procédé de nettoyage d'au moins un biofilm (2), caractérisé en ce qu'il comporte : - une étape de fourniture (El) d'un élément (4) comportant au moins un 20 logement (5) dans lequel ledit au moins un biofilm (2) est formé et adhère, - une étape (E2) de positionnement dudit élément (4) de sorte à le maintenir dans un emplacement de nettoyage (Z1), et - une étape de génération (E3) de vapeur en direction dudit au moins un logement pour nettoyer ledit au moins un biofilm (2). 25 10. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que l'étape de positionnement (E2) est telle que l'élément (4) est maintenu de telle sorte qu'un fond dudit au moins un logement (5) soit orienté vers le bas, et en ce que l'étape de génération (E3) de vapeur en direction dudit au moins un logement (5) 30 provoque le nettoyage dudit au moins un biofilm (2) par condensation de la vapeur générée à la surface dudit au moins un biofilm (2) et par chute de gouttelettes issues de ladite condensation par effet de gravité. 3056929 29 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 9 ou 10, caractérisé en qu'il comporte une étape d'utilisation (E5) d'un système de refroidissement (7) pour maintenir la température dudit au moins un biofilm (2) dans une plage prédéterminée de températures au cours du nettoyage dudit au moins un biofilm 5 (2). 12. Procédé d'étude d'au moins un biofilm (2), caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes : - une étape de formation (E100) dudit au moins un biofilm (2) dans un 10 logement (5) d'un élément (4) comportant ledit logement (5), - une étape de nettoyage (E101) dudit au moins un biofilm (2) mettant en oeuvre le procédé de nettoyage selon l'une quelconque des revendications 9 à 11 ou utilisant ledit dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, 15 - une étape d'étude (E102) dudit au moins un biofilm (2) nettoyé permettant de récupérer au moins une information relative audit au moins un biofilm (2). 20