Brevet FR3050614A1 — publié le 20171103

PROCEDE POUR ETABLIR UN MODELE D'ENTERITE DES POISSONS INDUITE PAR LE GOSSYPOL Domaine de l'invention La présente invention concerne un procédé pour établir un modèle animal, et plus particulièrement un procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol. Arrière-plan de l'invention Le tourteau de graines de coton est un granule rougeâtre ou jaune obtenu à partir des graines de coton par exprimage des graines de coton en un pâté, et ensuite isolation de l'huile résiduelle à partir du pâté via un traitement de lixiviation. Le tourteau de graines de coton est la matière première principale pour le traitement et la fabrication d'aliments pour animaux, et la teneur en protéine brute des graines de coton est de 40 %, ou même allant jusqu'à 44 %, en égalant presque celle du tourteau de soja. Par ailleurs, comparé au tourteau de soja, le tourteau de graines de coton a un prix plus faible et un meilleur rendement, qui est de plus de 12 millions de tonnes par an en Chine. En raison de ses caractéristiques physiologiques spéciales, le tourteau de graines de coton constitue la source de protéine bon marché et de haute qualité principale pour les aliments destinés aux poissons. Toutefois, le gossypol dans le tourteau de graines de coton peut être néfaste aux poissons d'élevage, ce qui limite fortement l'utilisation de tourteau de graines de coton dans les aliments destinés aux poissons. L'effet spécifique et le mécanisme de toxicité du gossypol sont en cours d'exploration et restent obscurs. L'entérite est l'une des maladies les plus courantes et mortelles chez les poissons d'élevage tels que la carpe de roseau. Le taux de mortalité de l'entérite des poissons est habituellement de 50 %, ou même va jusqu'à 90 %, en engendrant une perte économique désastreuse chaque année. En fonction des caractéristiques physiologiques des 3050614 2 poissons d'élevage, l'établissement d'un modèle stable d'entérite des poissons constituerait un outil efficace pour étudier le mécanisme pathologique des poissons d'élevage et développer des médicaments et des formules nutritives contre 5 cette maladie. Néanmoins, s'il n'est pas établi de façon appropriée, le modèle d'entérite des poissons peut être instable, en conduisant à la mort de poissons d'élevage du fait de lésions entériques graves et donc en limitant l'utilisation du modèle d'entérite des poissons. On a donc urgemment besoin 10 d'établir un modèle d'entérite des poissons stable et approprié. Bref résumé de l'invention Par conséquent, la présente invention met à disposition un 15 procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol, afin d'établir un modèle stable d'entérite des poissons, présentant une manifestation pathologique appropriée, ni trop bénigne ni trop grave. Conformément à certains modes de réalisation de la 20 présente invention, un procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol comprend les étapes consistant à : sélectionner des poissons d'élevage en bonne santé en tant que sujets pour le modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol ; et alimenter les poissons 25 d'élevage avec un aliment pour poissons expérimental comprenant 250 mg/kg de gossypol afin d'établir le modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol. Dans un tel procédé, les poissons d'élevage n'ont besoin d'être nourris que pendant 60 jours pour établir un modèle 30 stable d'entérite des poissons avec une manifestation pathologique appropriée. De plus, la performance de croissance, l'immunité et la qualité de la chair du modèle stable d'entérite des poissons peuvent diminuer légèrement, mais ne vont pas affecter sévèrement la croissance des poissons 3050614 3 d'élevage. Les inventeurs ont trouvé qu'alors que la performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, l'immunité et la qualité de la chair des poissons d'élevage ne 5 diminuent que légèrement quand la teneur en gossypol est inférieure à 250 mg/kg, la première manifestation pathologique de l'entérite des poissons est très bénigne. En outre, alors que la performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, l'immunité et la qualité de la chair 10 des poissons d'élevage diminuent significativement quand la teneur en gossypol dépasse 250 mg/kg, la manifestation pathologique de l'entérite des poissons devient très grave ; de plus, une formation de vacuoles dans l'épithélium intestinal, un détachement de cellules en haut des plis intestinaux, et un 15 endommagement structurel et fonctionnel de l'épithélium intestinal deviennent également sévères, en provoquant une augmentation significative de la morbidité, et même la mort des poissons d'élevage. Toutefois, quand la teneur en gossypol est de 250 mg/kg, la manifestation pathologique appropriée de 20 l'entérite des poissons, comprenant une formation évidente de vacuoles dans l'épithélium intestinal, un détachement de cellules en haut des plis intestinaux, de plus un déclin de la performance de croissance, de la croissance et du développement intestinaux, de l'immunité et de la qualité de la chair des 25 poissons d'élevage, est relativement bénin. Conformément à d'autres modes de réalisation de la présente invention, un procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol comprend les étapes consistant à : sélectionner des poissons d'élevage 30 jeunes en tant que sujets pour le modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol ; le poids des poissons d'élevage étant situé dans la plage allant de 230 à 727 g ; mélanger du gossypol avec de l'aliment pour poissons afin de préparer un aliment pour poissons expérimental comprenant 250 3050614 4 mg/kg de gossypol, l'aliment pour poissons comprenant de la farine de poissons, du concentré de protéine de soja, de la poudre de protéine de riz, de l'amidon de maïs et de l'a-amidon ; alimenter les poissons d'élevage avec une certaine 5 quantité d'aliment pour poissons expérimental pendant 60 jours afin d'établir le modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol, la quantité de l'aliment pour poissons expérimental par jour représentant 3 % en poids du poids des poissons d'élevage. 10 Après granulation, l'aliment pour poissons expérimental est ensuite stocké à 4°C. Les poissons d'élevage comprennent, mais sans s'y limiter, les carpes de roseau. En comparaison avec la technique antérieure connue des 15 inventeurs, la présente invention met à disposition un procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol afin d'établir un modèle d'entérite des poissons engendrant un impact minimal sur la performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, l'immunité et la 20 qualité de la chair des poissons d'élevage, mais générant la manifestation pathologique la plus appropriée de l'entérite des poissons. De plus, le modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol est stable et fiable, et présente une bonne reproductibilité. 25 Pour que les buts, caractéristiques et bénéfices ci- dessus, ainsi que d'autres, apparaissent de façon plus évidente aux personnes ayant une connaissance ordinaire de la technique, les modes de réalisation préférés et les descriptions détaillées avec des dessins joints vont être proposés dans les 30 descriptions qui suivent. 3050614 5 Brève description des dessins La présente invention apparaîtra de façon plus évidente 5 aux personnes ayant une connaissance ordinaire de la technique après examen de la description détaillée qui suit et des dessins joints, dans lesquels : la Figure 1 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal 10 d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 0 mg/kg de gossypol conformément au premier mode de réalisation de la présente invention ; la Figure 2 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal 15 d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 125 mg/kg de gossypol conformément au deuxième mode de réalisation de la présente invention ; la Figure 3 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal 20 d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 250 mg/kg de gossypol conformément au troisième mode de réalisation de la présente invention ; la Figure 4 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal 25 d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 375 mg/kg de gossypol conformément au quatrième mode de réalisation de la présente invention ; la Figure 5 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal 30 d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 775 mg/kg de gossypol conformément au cinquième mode de réalisation de la présente invention ; et la Figure 6 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal 3050614 6 d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 1175 mg/kg de gossypol conformément au sixième mode de réalisation de la présente invention. 5 Description détaillée des modes de réalisation préférés La présente invention va maintenant être décrite de façon plus spécifique en référence aux modes de réalisation qui suivent. Il convient de noter que les descriptions qui suivent de modes de réalisation préférés de cette invention sont 10 présentées ici à des fins d'illustration et de description uniquement. Il n'est pas prévu qu'elles soient exhaustives ou soient limitées à la forme précise divulguée. Conformément aux premier à sixième modes de réalisation, le procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons 15 induite par le gossypol comprend les étapes suivantes. Etape 1. Sélection de 540 jeunes carpes de roseau en tant que sujets pour le modèle d'entérite des poissons, le poids de chaque carpe de roseau étant situé dans la plage allant de 230 g à 727 g, et division au hasard de toutes les carpes de roseau 20 en six groupes principaux, contenant chacun trois sous-groupes, chaque sous-groupe contenant 30 carpes de roseau. Etape 2. Mélange de gossypol avec de l'aliment pour poissons comprenant de la farine de poissons, du concentré de protéine de soja, de la poudre de protéine de riz, de l'amidon 25 de maïs et de l'a-amidon pour préparer des aliments pour poissons expérimentaux contenant 0 mg/kg, 125 mg/kg, 250 mg/kg, 375 mg/kg, 775 mg/kg et 1175 mg/kg de gossypol. Ensuite, l'aliment pour poissons expérimental est granulé puis stocké à 4°C au réfrigérateur. 30 Etape 3. Elevage des carpes de roseau sélectionnées dans des réservoirs, le volume de chaque réservoir étant d'un mètre cube, et alimentation des carpes de roseau avec une certaine quantité de l'aliment pour poissons expérimental par jour pendant 60 jours pour établir le modèle d'entérite des poissons 3050614 7 induite par le gossypol, la quantité de l'aliment pour poissons expérimental représentant 3 % en poids des carpes de roseau. 4.1. La performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, et la qualité de la chair des carpes 5 de roseau de chacun des modes de réalisation sont examinés, et les résultats sont présentés dans le Tableau 1 qui suit. Tableau 1 ler 2ème 3ème 4ème 5ème 6ème mode de mode de mode de mode de mode de mode de réalisation réalisation réalisation réalisation réalisation réalisation Teneur en 0 125 250 375 775 1175 gossypol (mg/kg) FE (%) 7,1 ± 0,70 ± 0,69 ± 0,65 ± 0,01c 0,62 ± 0,61 ± 0,01d 0,01a 0,01ab 0,0b 0,01d SGR (% jour) 1,87 ± 0,01a 1,85 ± 0,02a 1,80 ± 0,02b 1,69 ± 0,01c 1,60 ± 1,54 ± 0,02e 0,02d ISI 1,96 ± 0,13a 1,97 ± 0,13a 1,86 ± 0,11ab 1,77 ± 0,13b 1,83± 1,76 ± 0,16b 0,17b ILI 190,06 ± 186,60 ± 181,27 ± 172,96 ± 175,11 ± 164,86 ± 8,59a 7,98a 5,44ab 9,05bc 11,74bc 8,64c Force de 1,206 ± 1,191 ± 1,170 ± 1,141 ± 1,073 ± 1,040 ± cisaillement (N) 0,04a 0,10a 0,1 Oab 0, l2abc 0,08bc 0,08c PH 6,21 ±0,14a 6,11 ± 5,97 ± 0,11bc 5,87 ± 0,09c 5,86± 5,81 ±0,18c 0,15ab 0,16c Dans le Tableau 1, FE se réfère à l'efficacité alimentaire 10 et indique l'efficacité d'utilisation de l'aliment pour poissons expérimental. SGR se réfère au taux de croissance spécifique et indique le taux de croissance des carpes de roseau. ISI se réfère au rapport en poids de l'intestin sur le corps, et ILI se réfère à l'indice de longueur intestinale ; 15 les ISI et ILI indiquent tous deux la performance de croissance des intestins. La force de cisaillement et la valeur de pH indiquent la qualité de la chair. Les exposants "a", "b", "c", "d" et "e" expriment la signification dans des différences 3050614 8 intergroupe par adoption du procédé d'annotation basé sur des comparaisons multiples, qui est un procédé courant utilisé par les personnes ayant une connaissance ordinaire de la technique pour indiquer une signification dans des différences 5 intergroupe. Conformément au Tableau 1, quand la teneur en gossypol est supérieure à 250 mg/kg, la performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, et la qualité de la chair des carpes de roseau s'avèrent diminuer sévèrement, 10 tandis que lorsque la teneur en gossypol est inférieure ou égale à 250 mg/kg, la performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, et la qualité de la chair des carpes de roseau s'avèrent diminuer légèrement. 4.2. L'immunité et le potentiel antibactérien des voies 15 intestinales, de la rate, et du pronéphros de modèles d'entérite des poissons induite par le gossypol, établis conformément aux six modes de réalisation, sont examinés par injection intrapéritonéale d'Aeromonas hydrophila aux modèles d'entérite des poissons. Les résultats sont présentés dans le 20 Tableau 2 qui suit. 3050614 9 Tableau 2 Morbidité (%) 1er 2ème 3ème 4ème 5ème 6ème mode de mode de mode de mode de mode de mode de réalisation réalisation réalisation réalisation réalisation réalisation Teneur en gossypol (mg/kg) 0 125 250 375 775 1175 Rougeur et gonflement de 18,67 ± 17,33 ± 21,33 ± 24,00 ± 29,33 ± 30,67 ± l'intestin antérieur 2,31a 2,31a 2,31ab 4,00b 2,31c 2,31c Rougeur et gonflement de 16,00 ± 17,33 ± 22,67 ± 24,00 ± 28,00 ± 32,00 ± l'intestin moyen 4,00a 2,31ab 2,31bc 4,00c 4,00cd 4,00d Rougeur et gonflement de 13,33 ± 14,67 ± 18,67 ± 22,67 ± 26,67 ± 30,67 ± l'intestin postérieur 2,31a 2,31ab 4,62bc 2,31 cd 2,31de 2,31c Rougeur et gonflement de la 16,00 ± 17,33 ± 21,33 ± 24,00 ± 29,33 ± 33,33 ± rate 4,00a 2,31a 2,31ab 4,00bc 4,62cd 2,31d Rougeur et gonflement du 16,00 ± 17,33 ± 26,67 ± 29,33 ± 32,00 ± 36,00 ± pronéphros 4,00a 6,11ab 6,11 lx 2,31 cd 4,00cd 4,00d Dans le Tableau 2, les exposants "a", "b", "c", "d" et "e" expriment la signification dans des différences intergroupe par 5 adoption du procédé d'annotation basé sur des comparaisons multiples. Conformément au Tableau 2, quand la teneur en gossypol est supérieure 250 mg/kg, l'immunité et le potentiel antibactérien des voies intestinales, de la rate et du 10 pronéphros des carpes de roseau diminuent significativement. L'apparition d'une rougeur et d'un gonflement de l'intestin antérieur, de l'intestin moyen, de l'intestin postérieur, de la rate et du pronéphros augmentent significativement. Quand la teneur en gossypol est inférieure ou égale à 250 mg/kg, 15 l'immunité et le potentiel antibactérien des voies intestinales, de la rate et du pronéphros des carpes de roseau diminuent légèrement. 4.3. Comme le montrent les Figures 1 à 6, le changement morphologique de l'épithélium intestinal du modèle d'entérite 20 des poissons induite par le gossypol conformément aux six modes 3050614 10 de réalisation est observé sur des sections tissulaires de l'épithélium intestinal. Sur la Figure 1, quand la teneur en gossypol est de 0 mg/kg, la structure et la morphologie de l'épithélium intestinal sont normales. Sur la Figure 2, quand 5 la teneur en gossypol est supérieure à 0 mg/kg mais inférieure à 250 mg/kg, la formation de vacuoles dans l'épithélium intestinal, le détachement de cellules sur les côtés des plis intestinaux sont légers, et certaines parties du haut des plis intestinaux deviennent plates ; la manifestation pathologique 10 est par conséquent trop bénigne. Sur la Figure 3, quand la teneur en gossypol est de 250 mg/kg, une augmentation de la formation de vacuoles dans l'épithélium intestinal, un détachement évident de cellules en haut des plis intestinaux, sont observés ; la manifestation pathologique est par 15 conséquent la plus appropriée. Sur les Figures 4 à 6, quand la teneur en gossypol est supérieure à 250 mg/kg, la formation de vacuoles dans l'épithélium intestinal, le détachement de cellules en haut des plis intestinaux, et un endommagement structurel et fonctionnel de l'épithélium intestinal deviennent 20 sévères ; ainsi, la manifestation pathologique de ce modèle d'entérite des poissons est si sévère qu'une inhibition de la croissance, une augmentation significative de la morbidité, et même la mort des poissons d'élevage sont observées. En résumé, le procédé pour établir un modèle d'entérite 25 des poissons induite par 250 mg/kg de gossypol conformément aux modes de réalisation de la présente invention engendre un impact minimal sur la performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, l'immunité et la qualité de la chair des poissons d'élevage, et génère la manifestation 30 pathologique la plus appropriée de l'entérite des poissons. De plus, le modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol est stable et fiable, et présente une bonne reproductibilité. De plus, les poissons d'élevage comprennent, mais sans s'y limiter, les carpes de roseau. 3050614 11 Bien que l'invention ait été décrite en termes de ce que l'on considère actuellement comme étant les modes de réalisation les plus pratiques et préférés, il convient de comprendre que l'invention n'a pas besoin d'être limitée au 5 mode de réalisation divulgué. Au contraire, elle est destinée à couvrir diverses modifications et des agencements similaires inclus à l'intérieur de l'esprit et de la portée des revendications annexées auxquelles doit être accordée l'interprétation la plus large de façon à englober toutes ces 10 modifications et des structures similaires. REVENDICATIONS1. Procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol, comprenant : la sélection de poissons d'élevage en bonne santé en tant que sujets pour le modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol ; et l'alimentation des poissons d'élevage avec un aliment pour poissons expérimental comprenant 250 mg/kg de gossypol afin 10 d'établir le modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol. 2. Procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol, comprenant : 15 la sélection de poissons d'élevage jeunes en tant que sujets pour le modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol, le poids des poissons d'élevage étant situé dans la plage allant de 230 à 727 g ; le mélange de gossypol avec de l'aliment pour poissons 20 afin de préparer un aliment pour poissons expérimental comprenant 250 mg/kg de gossypol, l'aliment pour poissons comprenant de la farine de poissons, du concentré de protéine de soja, de la poudre de protéine de riz, de l'amidon de maïs et de l'a-amidon ; 25 l'alimentation des poissons d'élevage avec une certaine quantité d'aliment pour poissons expérimental pendant 60 jours afin d'établir le modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol, la quantité de l'aliment pour poissons expérimental par jour représentant 3 % en poids du poids des poissons 30 d'élevage. 3. Procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol selon la revendication 2, dans lequel l'aliment pour poissons expérimental est granulé et 3050614 13 ensuite stocké à 4°C. 4. Procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par le gossypol selon la revendication 2, dans 5 lequel les poissons d'élevage comprennent des carpes de roseau.