Brevet FR3051115A1 — publié le 20171117

Utilisation de l'Acide Propionique, de l'Acide Butyrique et de leurs Dérivés dans le Traitement des Insuffisances en Hepcidine et de leurs Conséquences Domaine de l'Invention La présente invention concerne l'utilisation de l'acide propionique, de l'acide butyrique et de leurs dérivés (en particulier du propionate de sodium et du butyrate de sodium) pour traiter les hepcidino-déficiences et leurs conséquences. Contexte de l'Invention Le métabolisme du fer doit être parfaitement contrôlé pour éviter l'apparition de situations délétères : accumulation anormale de fer dans l'organisme, ou bien carence en fer. Chez l'homme, l'accumulation anormale de fer peut être diffuse, ayant comme cibles dominantes : le foie, le coeur et le pancréas. Ces situations pathologiques entraînent des complications ayant un impact sur l'espérance de vie (cirrhose, cancer du foie, myocardiopathies, diabète) et sur la qualité de vie (fatigue chronique, ostéoporose, rhumatisme hémochromatosique, hypogonadisme, etc...) (Pietrangelo, N. Engl. J. Med., 2004, 350: 2383-2397). Ces pathologies de surcharge en fer mettent en jeu l'hepcidine (Ganz, Blood, 2011, 117: 4425-4433), un peptide synthétisé au niveau du foie par les hépatocytes et secrété dans le plasma. Ce peptide circulant interagit avec la ferroportine, protéine exportatrice de fer exprimée sur la membrane des cellules (macrophages, entérocytes), provoquent sa dégradation, et limite donc la sortie du fer des cellules vers le plasma qui est médiée par la ferroportine. Ainsi, le contenu cellulaire en fer et la concentration de fer dans le plasma sont contrôlés. Des taux anormalement bas d'hepcidine favorisent la sortie du fer des cellules, en particulier des macrophages, des entérocytes et des hépatocytes, induisant ainsi une augmentation du fer dans le plasma qui, elle-même, entraîne une surcharge en fer cellulaire touchant en particulier le foie, le coeur, le pancréas et les os. C'est la situation observée au cours des hémochromatoses génétiques liées aux mutations des gènes HFE, TRF2, hémojuvéline et/ou hepcidine (Pietrangelo, Hepatology, 2007, 46: 11291-11301). D'autres surcharges en fer peuvent présenter un tableau similaire sans que la cause ne soit aujourd'hui identifiée. Ainsi, chez la souris, une invalidation du gène BMP6 provoque une déficience en hepcidine, BMP6 induisant l'expression de l'hepcidine lors des 1 3051115 surcharges en fer hépatiques. Chez l'homme, des mutations de ce gène concoureraient au développement de surcharges en fer. Au cours des hémochromatoses génétiques, le taux d'hepcidine est anormalement bas en raison d'une anomalie de la régulation transcriptionnelle de l'expression de l'hepcidine, elle-même en rapport avec l'atténuation 5 de la signalisation de la voie activatrice BMP/SMAD (Meynard et al., Nature Genet., 2009, 41: 478-481). De plus, au cours de certaines anémies d'origine hématologique, une baisse du niveau d'hepcidine, consécutive à l'intensité de l'érythropoïèse, peut conduire à la constitution/majoration d'une surcharge en fer. Augmenter le niveau d'hepcidine dans ces situations représenterait donc une approche étiologique de ces surcharges en fer. 10 Aujourd'hui, le traitement des surcharges en fer génétiques est symptomatique, visant à réduire ou éliminer l'excès de fer (Brissot et al., Trends Mol. Med., 2011, 17: 707-713). Il est le plus souvent réalisé par des soustractions sanguines (saignées) régulières qui permettent de retirer le fer présent dans les hématies. Le fer en excès dans les autres organes est alors mobilisé pour reconstituer le stock d'hématies au cours de 15 l'érythropoïèse. Les saignées favorisent une aggravation du déficit en hepcidine (van Dijk et al., Br. J. Haematol., 2008, 142(6): 979-985). Ce déficit est probablement lié, au moins en partie, à la production par les érythroblastes de facteurs solubles, dont l'un d'entre eux, récemment identifié, limite la production hépatique d'hepcidine (l'érythroferrone) (Kautz et al., Nature Genetics, 2014, 46(7): 678-684). Dès lors, la 20 saignée "encourage" paradoxalement l'absorption digestive du fer, ce qui n'est pas le but recherché. Dans ces indications, l'utilisation de molécules chélatrices du fer est limitée du fait du risque d'effets secondaires sur les cellules non surchargées en fer (balance bénéfice/risque), les chélateurs pouvant extraire le fer de l'ensemble des cellules. Il faut noter que le traitement déplétif, quel que soit son mode de réalisation, n'est pas curatif 25 car, s'il permet de retirer le fer en excès, il ne cible pas la cause de l'excès de fer. Il faut souligner qu'au cours du rhumatisme lié à l'hémochromatose génétique, la déplétion en fer ne guérit pas les manifestations articulaires. Cette situation pourrait en particulier être liée au fait que les soustractions sanguines entraînent une mobilisation du fer, dont certaines formes pourraient avoir des conséquences articulaires, ou bien au déficit en 30 hepcidine lui-même par un mécanisme inconnu. Le traitement des surcharges en fer secondaires aux maladies hématologiques ne peut faire appel aux saignées, car il existe une anémie et/ou des risques d'intolérance aux saignées. Dans ce cas, l'utilisation de chélateurs du fer est la règle. 2 3051115 Des études sont actuellement réalisées pour générer des hepcidines de synthèse administrables à l'homme ou pour identifier des molécules capables de réguler l'expression d'hepcidine (Gaun et al., Blood Cells, Mol. Dis., 2014, 53 : 231-240; Ruchala and Nemeth, Trends in Pharm. Sci., 2004, 155-161). Cependant, ces études 5 n'ont pas encore abouti. Il existe donc toujours, dans l'art, un besoin de disposer de nouveaux outils pour le traitement des déficiences en hepcidine et leurs conséquences sur la santé humaine. Résumé de l'Invention D'une façon générale, la présente invention repose sur la mise en évidence que 10 l'acide propionique et l'acide butyrique, deux acides gras à chaîne courte (AGCC), affectent l'expression de l'hepcidine sans induire de toxicité cellulaire. En effet, de manière surprenante et inattendue, les présents Inventeurs ont montré que le propionate de sodium et le butyrate de sodium induisent l'expression de l'hepcidine dans une lignée d'origine hépatocytaire humaine (HepG2) de façon dose-dépendante. Les concentrations 15 testées pour obtenir cet effet sont de 0,5 à 2 mM (les concentrations en propionate et butyrate dans le sérum de l'organisme humain sont beaucoup plus faibles: 2-3 iiM pour le propionate et 1 iiM pour le butyrate). En revanche, aucun impact sur l'expression de l'ARNm de l'hepcidine dans les cellules HepG2 n'a été observé dans le cas de deux autres acides à chaîne courte : l'acétate de sodium ou l'acide pentanoïque. 20 En conséquence, dans un premier aspect, la présente invention concerne l'acide propionique ou l'acide butyrique, ou l'un de leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables pour une utilisation dans le traitement des insuffisances en hepcidine. Dans certains modes de réalisation, le dérivé pharmaceutiquement acceptable est choisi parmi les sels de l'acide propionique et les sels de l'acide de l'acide butyrique (par 25 exemple le propionate de sodium, le butyrate de sodium, propionate de calcium, et le butyrate de calcium), les esters de l'acide propionique ou de l'acide butyrique, les thioesters de l'acide propionique et les thioesters de l'acide butyrique, les amides de l'acide propionique et les amides de l'acide butyrique, les thioamides de l'acide propionique et les thioamides de l'acide butyrique, et les oligomères de l'acide 30 propionique et les oligomères de l'acide butyrique, ainsi que leurs combinaisons. Dans certains modes de réalisation particuliers, le dérivé pharmaceutiquement acceptable est le propionate de sodium ou le butyrate de sodium. 3 3051115 Dans certains modes de réalisation, l'acide propionique, ou l'acide butyrique ou l'un des leurs dérivés se trouve sous la forme d'une composition pharmaceutique. Dans d'autres modes de réalisation, l'acide propionique, ou l'acide butyrique ou l'un de leurs dérivés se trouve sous la forme d'un complément alimentaire. 5 Dans certains modes de réalisation, l'insuffisance en hepcidine est associée à une hémochromatose génétique ou à une anémie chronique. L'anémie chronique peut être une anémie sidéroblastique, ou peut être due à un syndrome myélodysplasique, à hémoglobinopathie (par exemple les thalassémies, qu'elles soient dépendantes ou non des transfusions) ou à d'autres formes rares d'anémies hémolytiques. 10 La présente invention concerne aussi une composition pharmaceutique comprenant de l'acide propionique, ou de l'acide butyrique, ou l'un de leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables ou l'une de leurs combinaisons et au moins un véhicule ou excipient physiologiquement acceptable, pour une utilisation dans le traitement des insuffisances en hepcidine. Le dérivé pharmaceutiquement acceptable présent dans la 15 composition pharmaceutique peut être n'importe quel dérivé de l'acide propionique ou de l'acide butyrique, en particulier ceux décrits ici. La présente invention concerne aussi un complément alimentaire comprenant de l'acide propionique, ou de l'acide butyrique, ou l'un de leurs dérivés ou l'une de leurs combinaisons et au moins un excipient, pour une utilisation dans le traitement des 20 insuffisances en hepcidine. Le dérivé pharmaceutiquement acceptable présent dans le complément alimentaire peut être n'importe quel dérivé de l'acide propionique ou de l'acide butyrique, en particulier ceux décrits ici. Dans le même aspect, la présente invention concerne l'utilisation de l'acide propionique, ou de l'acide butyrique, ou l'un de leurs dérivés pharmaceutiquement 25 acceptables ou l'une de leurs combinaisons, pour la fabrication d'un médicament utile pour le traitement des insuffisances en hepcidine. Le dérivé pharmaceutiquement acceptable présent dans le complément alimentaire peut être n'importe quel dérivé de l'acide propionique ou de l'acide butyrique, en particulier ceux décrits ici. Toujours dans le même aspect, la présente invention concerne une méthode de 30 traitement d'une insuffisance en hepcidine chez un sujet, comprenant l'administration au sujet d'une quantité thérapeutiquement efficace d'acide propionique ou d'acide butyrique ou de l'un de leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables ou l'une de leurs 4 3051115 combinaisons. Le dérivé pharmaceutiquement acceptable utilisé dans la méthode de traitement peut être n'importe quel dérivé de l'acide propionique ou de l'acide butyrique, en particulier ceux décrits ici. Dans certains modes de réalisation préférés, le sujet atteint d'insuffisance en 5 hepcidine est un être humain. Chez le sujet atteint d'insuffisance en hepcidine, celle-ci peut être associée à une hémochromatose génétique ou à une anémie chronique. L'anémie chronique peut être une anémie sidéroblastique, ou peut être due à un syndrome myélodysplasique, une hémoglobinopathie (par exemple les thalassémies, qu'elles soient dépendantes ou non des transfusions) ou à d'autres formes rares d'anémies hémolytiques. 10 Dans un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation de l'acide propionique ou de l'acide butyrique ou de l'un de leurs dérivés ou de l'une de leurs combinaisons pour augmenter l'expression d'hepcidine dans une cellule. Dans certains modes de réalisation, la cellule est une cellule in vitro ou ex vivo. Dans d'autres modes de réalisation, la cellule est une cellule in vivo, par exemple une 15 cellule in vivo chez un humain ou un animal. Dans certains modes de réalisation, la cellule est une cellule hépatique, un adipocyte, un macrophage ou un myocyte. Dans ce même aspect, la présente invention concerne aussi un procédé pour augmenter l'expression d'hepcidine dans une cellule comprenant la mise en contact de la 20 cellule avec une quantité efficace d'acide propionique, ou d'acide butyrique ou d'un de leurs dérivés ou de l'une de leurs combinaisons. Le dérivé utilisé dans ce procédé peut être n'importe quel dérivé de l'acide propionique ou de l'acide butyrique, en particulier ceux décrits ici. Dans certains modes de réalisation, la cellule est une cellule in vitro ou ex vivo. 25 Dans d'autres modes de réalisation, la cellule est une cellule in vivo, par exemple une cellule in vivo chez un humain ou un animal. Dans certains modes de réalisation, la cellule est une cellule hépatique, un adipocyte, un macrophage ou un myocyte. Les acides gras à chaîne courte (AGCC), en particulier, l'acide acétique, l'acide 30 propionique et l'acide butyrique, sont produits par les bactéries du tube digestif (den Besten et al., Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 2013, 305: G900-910). Ils 5 3051115 résultent de la fermentation du microbiote au sein du côlon (Guilloteau et al., Nutr. Res. Rev., 2010, 23: 366-384) et jouent le rôle de substrats pour le métabolisme énergétique des hôtes (Kasubuchi et al., Nutrients, 2015, 7: 2839-2849). Il est possible de modifier le microbiote intestinal humain et d'augmenter la production des AGCC par utilisation de 5 suppléments prébiotiques et/ou probiotiques. En conséquence, la présente invention concerne également un supplément d'au moins un prébiotique, ou d'au moins un probiotique ou d'au moins un symbiotique, pour son utilisation dans le traitement d'une insuffisance en hepcidine. Le supplément peut être sous la forme d'une composition pharmaceutique, d'un supplément nutritionnel, d'un 10 aliment ou d'un substitut de repas. Un symbiotique est composé d'au moins un prébiotique et d'au moins un probiotique. Dans certains modes de réalisation, le prébiotique est sélectionné dans le groupe constitué de l'inuline, des fructanes de type inuline, des fructo-oligosaccharides, des galacto-oligosaccharides (GOS), des xylo-oligosaccharides, des arabinogalactanes, des 15 gommes arabiques, des dextrines, et de leurs combinaisons. Dans certains modes de réalisation, le probiotique est sélectionné dans le groupe constitué des bactéries intestinales butyrogènes, des bactéries intestinales propionogènes, des bifidobactéries, des lactobacillus, et des bactéries des espèces: Propionibacterium, Propionibacterium thoenii, Propionibacterium jensenii, Propionibacterium shermanii, et 20 Propionibacterium acidipropionici. Une description plus détaillée de certains modes de réalisation préférés de l'invention est donnée ci-dessous. Description Détaillée de l'Invention Comme mentionné ci-dessus, la présente invention concerne l'utilisation de l'acide 25 propionique et de l'acide butyrique pour traiter les déficiences en hepcidine qui causent, ou bien favorisent, le développement de surcharges en fer. L'utilisation peut se faire soit par administration directe de l'acide propionique et de l'acide butyrique, ou de l'un de leurs dérivés, soit par modulation, nutritionnelle ou médicamenteuse, du microbiote intestinal afin de booster ou de favoriser l'émergence de populations microbiennes 30 particulièrement productrices de ces composés. 6 3051115 I - L'acide Propionique, l'Acide Butyrique et leurs Dérivés L'Acide Propionique et l'Acide Butyrique Par "acide propionique" on entend le composé de formule (I) encore appelé acide propanoïque (C3H602 - numéro CAS 79-09-4). o 5 OH (I) En médecine vétérinaire, le propionate est une source énergétique particulièrement recherchée lors d'absence ou de diminution de motricité du rumen. Il est utilisé chez les bovins, ovins et caprins pour le traitement des troubles digestifs (météorisation et iléus entre autres). 10 Par "acide butyrique" on entend le composé de formule (II) encore appelé acide butanoïque (C4H802 - numéro CAS 107-92-6). H H H 0 H--e, HHH0-H (II) Le butyrate est connu pour ses capacités à inhiber la prolifération cellulaire de cellules épithéliales digestives malignes en culture et à stimuler la différenciation 15 cellulaire et l'apoptose (Coradini et al., Cell Prolif., 2000, 33: 139-146; Siavoshian et al., Gut, 2000, 46: 507-514; Heerdt et al., Cancer Res., 1994, 54: 3288-3293). Le rôle antitumoral du butyrate a été démontré in vivo chez le rat dans un modèle de cancer colique développé après induction d'une colite expérimentale (D'Argenio et al., Gastroenterology, 1996, 110: 1727-137). Inversement, le butyrate a des effets trophiques 20 sur la muqueuse colique saine (Scheppach et al., Gut, 1994, 35(Suppl): S35-8), stimulant la prolifération cellulaire, l'expression des mucines et la sécrétion du mucus. Le butyrate module l'expression de différents gènes, en inhibant l'activité histone déacétylase (Siavoshian et al., Gut, 2000, 46: 507-514). Le butyrate possède également des propriétés anti-inflammatoires, notamment en inhibant le principale médiateur de la 25 réponse cellulaire inflammatoire, le facteur de transcription NFKB (Segain et al., Gut, 2000, 47: 397-403). Au cours des dernières décennies, l'hypothèse a été émise que les AGCC pourraient jouer un rôle clé dans la prévention et le traitement, notamment dans la prise en charge, du syndrome métabolique, des troubles de l'intestin et du cancer (Donohoe et al., Cell Metab., 2011, 13: 517-526; Harig et al., N. Engl. J. Med., 1989, 30 320: 23-28; Fukuda et al., Nature, 2011, 436: 543-547). Il a été démontré que le butyrate 7 3051115 et le propionate ont un effet de protection contre l'obésité induite par le régime alimentaire et régulent les hormones du tube digestif (Lin et al., PLoS One, 2012, 7: e35240). Des études cliniques ont montré que l'administration d'AGCC a un effet positif sur le traitement de la colite ulcéreuse, de la maladie de Crohn, de la diarrhée associée 5 aux antibiotiques et de l'obésité (Yamashita et al., Biosc. Biotechn. Biochem., 2007, 71: 1236-1243; Binder et al., Annu. Rev. Physiol., 2010, 72: 297-313; Di Sabatino et al., Aliment. Pharmacol. Ther., 2005, 22: 789-794; Chambers et al., Gut, 2015, 64: 17441754). Dérivés de l'Acide Propionique et de l'Acide Butyrique 10 Le terme "dérivé de l'acide propionique ou de l'acide butyrique", tel qu'utilisé ici, désigne une substance chimique dérivée de l'acide propionique ou de l'acide butyrique soit directement soit par modification ou substitution partielle. Ainsi, par exemple, un dérivé de l'acide propionique/butyrique peut être un sel de l'acide propionique/butyrique pharmaceutiquement acceptable. L'expression "sel 15 pharmaceutiquement acceptable" de l'acide propionique/butyrique est un sel qui peut être administré aux mammifères, y compris aux êtres humains, et qui possède l'activité pharmacologique désirée de l'acide propionique/butyrique. Dans certains cas, un "sel pharmaceutiquement acceptable" de l'acide propionique/butyrique peut aussi conférer initialement une propriété pharmacocinétique avantageuse à l'acide 20 propionique/butyrique, qui était absente dans la forme non salifiée, et peut même avoir un effet positif sur la pharmacodynamique de l'acide propionique/butyrique en ce qui concerne son activité thérapeutique dans le corps. En raison de la présence d'une fonction acide, l'acide propionique/butyrique peut former un sel avec une base minérale ou organique. A titre d'exemple de sels avec des 25 bases organiques ou minérales, on peut citer les sels formés avec des métaux et notamment des métaux alcalins, alcalino-terreux et de transition (tels que le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium, l'aluminium), ou avec des bases comme l'ammoniac ou des amines secondaires ou tertiaires (telles que le diéthylamine, la triéthylamine, la pipéridine, la pipérazine, la morpholine) ou avec des acides aminés 30 basiques, ou avec des osamines (telles que la méglumine) ou bien encore avec des amino alcools (tels que le 3-amino-butanol et le 2-aminoéthanol). Ainsi, dans certains modes de réalisation, le sel de l'acide propionique utilisé selon l'invention est le propionate (ou 8 3051115 propanoate) de sodium, le propionate de potassium, le propionate de calcium ou le propionate sodique. Dans d'autres modes de réalisation, le sel de l'acide butyrique utilisé selon l'invention est le butyrate (ou butanoate) de sodium, le butyrate de potassium, le butyrate de calcium ou le butyrate sodique. 5 L'expression "sel pharmaceutiquement acceptable" englobe également toutes les formes d'addition de solvants (solvates et hydrates) ou les formes cristallines (polymorphes) de ce même sel. Le terme "solvate" désigne les adduits des composés avec des molécules de solvant inerte qui se forment en raison de leur force d'attraction mutuelle. Lorsque le solvant est l'eau, on parle d'"hydrates". Les solvates sont, par 10 exemple, les monohydrates, dihydrates et alcoholates. Alternativement, un dérivé de l'acide propionique/butyrique à utiliser selon l'invention peut être un ester de l'acide propionique/butyrique, un thioester de l'acide propionique/butyrique, un amide de l'acide propionique/butyrique, ou un thioamide de l'acide propionique/butyrique. 15 Ainsi, par exemple, dans certains modes de réalisation, un dérivé de l'acide propionique utilisé selon l'invention est le propionate de butyle, le propionate d'amyle, le propionate d'isobutyle, le propionate de benzyle, le propionate de méthylbenzyle, le propionate d'héxyle, le propionate d'heptyle, le propionate de pentyle, et le propionate de méthyle. Dans d'autres modes de réalisation, un dérivé de l'acide butyrique utilisé selon 20 l'invention est le butyrate de butyle, le butyrate d'amyle, le butyrate d'isobutyle, le butyrate de benzyle, le butyrate de méthylbenzyle, le butyrate d'héxyle, le butyrate d'heptyle, le butyrate de pentyle, le butyrate de méthyle, et l'acide 2-hydroxy-3- méthylbutyrique. L'expression "dérivé de l'acide propionique/butyrique " englobe également les 25 composés désignés comme ou "prodrogues" ("prodrugs" en anglais). Le terme "prodrogue" désigne tout composé destiné à l'usage thérapeutique qui doit subir une biotransformation, après administration à un organisme, pour que s'exerce une activité biologique. C'est une forme d'optimisation par modulation moléculaire où la chimie intervient pour modifier non pas les propriétés pharmacodynamiques intrinsèques de la 30 molécule considérée (ici l'acide propionique ou l'acide butyrique), mais pour changer ses propriétés pharmacocinétiques (parfois galéniques). Les prodrogues de l'acide propionique et de l'acide butyrique comprennent les composés selon la formule (I) ou la 9 3051115 formule (II) qui ont été modifiés par exemple avec des groupes alkyle ou acyle, des sucres, des oligopeptides ou d'autres groupements et qui sont clivés plus ou moins rapidement dans l'organisme pour libérer l'acide propionique/propionate ou l'acide butyrique/butyrate. 5 Ainsi, par exemple, dans certains modes de réalisation, une prodrogue de l'acide butyrique est le tributyrate de glycéryle (également appelé la butyrine ou tributyrine) qui est hydrolysé en butyrate dans l'intestin. Le tributyrate de glycéryle a été suggéré comme un agent thérapeutique utile dans la prévention du cancer du côlon (Conley et al., Cancer Res., 1998, 4: 629-634) et des maladies inflammatoires de l'intestin (Wâchterschâuser et 10 al., Eur. J. Nutr., 2000, 39: 164-171). Un autre exemple de prodrogue de l'acide butyrique est le butyryl-L-carnitine (Srinivas et al., Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 2007, 293: G1046-G1053). L'expression "dérivé de l'acide propionique/butyrique" englobe aussi les oligomères de l'acide propionique/butyrique. Le terme "oligomère" désigne une 15 molécule formée par liaison covalente entre au moins deux molécules. En particulier, un oligomère de l'acide propionique/butyrique peut être formée par liaison covalente entre l'acide propionique/butyrique et un de ses dérivées, comme par exemple un de ses sels. L'homme du métier sait déterminer si un dérivé de l'acide propionique/butyrique peut être utilisé dans le traitement des insuffisances en hepcidine selon l'invention, par 20 exemple en vérifiant tout d'abord que le dérivé en question induit une augmentation de l'expression de l'ARNm endogène de l'hepcidine dans des cellules hépatiques (comme décrit dans les Exemples ci-dessous). Préparation de l'Acide Propionique, de l'Acide Butyrique ou de leurs Dérivés L'acide propionique, l'acide butyrique et leurs dérivés destinés à être utilisés selon 25 la présente invention peuvent être préparés par n'importe quelle méthode de synthèse chimique, la méthode de préparation n'étant pas un facteur limitant de l'invention. De nombreuses méthodes de préparation de l'acide propionique, de l'acide butyrique et de leurs dérivés ont été décrites. Compositions Pharmaceutiques 30 Dans le contexte de l'invention, l'acide propionique, l'acide butyrique et leurs dérivés peuvent être administrés comme tels ou sous forme d'une composition - 10- 3051115 pharmaceutique. Une telle composition pharmaceutique comprend de l'acide propionique, de l'acide butyrique, l'un de leurs dérivés, ou encore une de leurs combinaisons, et au moins un véhicule ou excipient physiologiquement acceptable. Dans le contexte de la présente invention, on entend par "véhicule ou excipient 5 physiologiquement acceptable" tout milieu ou additif qui n'interfère pas avec l'efficacité de l'activité biologique du principe actif et qui n'est pas excessivement toxique pour le patient ou sujet, aux concentrations auxquelles il est administré. Préférablement, le véhicule ou excipient physiologiquement acceptable est approprié pour l'utilisation vétérinaire ou pour l'utilisation pharmaceutique humaine. 10 La formulation d'une composition pharmaceutique à utiliser selon l'invention peut varier en fonction de la voie d'administration et du dosage pour lesquels la composition est destinée à être utilisée. Après formulation avec au moins un véhicule ou excipient physiologiquement acceptable, une composition pharmaceutique peut se trouver sous toute forme appropriée pour l'administration à un mammifère, y compris l'homme. 15 L'acide propionique, l'acide butyrique et leurs dérivés peuvent être formulés en une grande variété de formes galéniques et de supports pour l'administration orale. L'administration orale peut s'effectuer par exemple sous forme de comprimés, de comprimés enrobés, de capsules de gélatine dure ou molle, de solutions, d'émulsions, de sirops ou de suspensions. L'acide propionique, l'acide butyrique et leurs dérivés peuvent 20 être efficaces lorsqu'ils sont administrés par d'autres voies d'administration comme l'administration parentérale continue (perfusion intraveineuse), intramusculaire, intraveineuse, par suppositoires, entre autres voies d'administration. La voie d'administration préférée est en général l'administration orale, utilisant un schéma posologique journalier pratique qui peut être ajusté selon le degré de l'affection et la 25 réponse du patient à l'ingrédient actif. 11 est possible de mettre un ou plusieurs ingrédients actifs, et un ou plusieurs véhicules, excipients, supports ou diluants classiques, sous forme de compositions pharmaceutiques et d'unités de prise. Les compositions pharmaceutiques et les formes d'unités de prise peuvent comprendre, en plus de l'acide propionique/butyrique ou de 30 l'un de leurs dérivés, des ingrédients classiques en des proportions classiques, avec ou sans autres composés ou principes actifs, et les formes d'unités de prise peuvent contenir une quantité efficace appropriée quelconque de l'ingrédient actif, proportionnée à la posologie journalière à utiliser. Les compositions pharmaceutiques peuvent être utilisées 3051115 sous forme de produits solides, comme des comprimés ou des capsules chargées, de produits semi-solides, de poudres, de formulations à libération prolongée, ou de liquides comme des solutions, des suspensions, des émulsions, des élixirs, ou des capsules chargées à usage oral; ou sous forme de suppositoires pour l'administration rectale; ou 5 sous forme de solutions injectables stériles à usage parentéral. Une préparation typique contiendra d'environ 5% à environ 95% de composé(s) actif(s) tifs (en masse). L'expression "préparation" ou "forme galénique" est censée comprendre les formulations aussi bien solides que liquides du composé actif et l'homme de l'art se rendra compte qu'un ingrédient actif peut exister dans différentes préparations selon l'organe ou le tissu 10 cible, la dose désirée et les paramètres pharmacocinétiques. Les préparations sous forme solide comprennent des poudres, des comprimés, des pilules, des capsules, des cachets, des suppositoires, et des granulés à disperser. Un support solide peut être une ou plusieurs substances qui peuvent aussi jouer le rôle de diluants, agents aromatisants, solubilisants, lubrifiants, agents de suspension, liants, 15 conservateurs, agents de désintégration des comprimés, ou un produit d'encapsulation. Dans les poudres, le support est en général un solide finement divisé qui est mélangé avec le constituant actif finement divisé. Dans les comprimés, le constituant actif est en général mélangé avec le support ayant la capacité de liaison nécessaire dans des proportions appropriées, et compacté sous la forme et aux dimensions désirées. Des 20 supports appropriés comprennent, mais sans y être limités, le carbonate de magnésium, le stéarate de magnésium, le talc, le sucre, le lactose, la pectine, la dextrine, l'amidon, la gélatine, la gomme adragante, la méthylcellulose, le carboxyméthylcellulose sodique, une cire de faible point de fusion, du beurre de cacao, et analogues. Les préparations sous forme solide peuvent contenir, en plus du constituant actif, des colorants, des arômes, des 25 stabilisants, des tampons, des édulcorants artificiels et naturels, des dispersants, des agents épaississants, des agents solubilisants, et analogues. Les formulations liquides conviennent aussi pour l'administration orale et comprennent une formulation liquide comprenant des émulsions, des sirops, des élixirs, des solutions aqueuses, et des suspensions aqueuses. Elles peuvent comprendre des 30 préparations sous forme solide qui doivent être converties en préparations sous forme liquide peu avant l'emploi. Les émulsions peuvent être préparées dans des solutions, par exemple dans des solutions aqueuses de propylèneglycol, ou peuvent contenir des agents émulsionnants comme la lécithine, le monooléate de sorbitane ou la gomme arabique. On - 12- 3051115 peut préparer des solutions aqueuses en dissolvant le constituant actif dans de l'eau et en ajoutant des colorants, des arômes, des stabilisants et des agents épaississants appropriés. On peut préparer des suspensions aqueuses en dispersant le constituant actif finement divisé dans de l'eau avec un produit visqueux, comme une gomme naturelle ou 5 synthétique, une résine, la méthylcellulose, la carboxyméthylcellulose sodique, et d'autres agents de suspension bien connus. L'acide propionique, l'acide butyrique et leurs dérivés peuvent être formulés pour l'administration parentérale (par exemple par injection, par injection de bolus, ou par perfusion continue) et peuvent se présenter sous forme d'unités de prise dans des 10 ampoules, des seringues pré-remplies, des perfusions de petit volume ou dans des récipients multi-doses avec un conservateur ajouté. Les compositions peuvent prendre la forme de suspensions, de solutions ou d'émulsions dans des véhicules huileux ou aqueux, par exemple des solutions dans du polyéthylèneglycol aqueux. Des exemples de supports, diluants, solvants ou véhicules huileux ou non aqueux comprennent le 15 propylèneglycol, le polyéthylèneglycol, des huiles végétales, et des esters organiques injectables (par exemple l'oléate d'éthyle), et peuvent contenir des agents de formulation comme des conservateurs, des agents mouillants, des émulsionnants ou des agents de suspension, des stabilisants et/ou des dispersants. L'acide propionique, l'acide butyrique et leurs dérivés peuvent aussi être sous forme de poudre, obtenue par isolement aseptique 20 du produit solide stérile ou par lyophilisation à partir d'une solution pour la reconstitution avant l'emploi avec un véhicule approprié, par exemple de l'eau apyrogène stérile. L'acide propionique, l'acide butyrique et leurs dérivés peuvent être formulés pour l'administration sous forme de suppositoires. En général, pour la préparation de suppositoires, on fait d'abord fondre une cire de faible point de fusion, comme un 25 mélange de glycérides d'acides gras ou du beurre de cacao, et on disperse le constituant actif de manière homogène, par exemple en agitant. On verse ensuite le mélange homogène obtenu dans des moules de taille appropriée, et on le laisse refroidir et se solidifier. Si désiré, il est possible de préparer des formulations avec des enrobages entériques 30 adaptés pour l'administration à libération prolongée ou régulée de l'ingrédient actif. Par exemple, l'acide butyrique a été formulé par encapsulation dans une matrice de triglycérides, résultant en une libération lente lors de son transport dans le système digestif. On peut aussi envisager de formuler l'acide propionique, l'acide butyrique ou - 13 - 3051115 l'un de leurs dérivés, dans des dispositifs de délivrance de médicaments transdermiques ou sous-cutanés. Ces systèmes de délivrance sont avantageux lorsque la libération prolongée du principe actif est nécessaire et lorsque l'acceptation du régime de traitement par le patient est cruciale. Dans les systèmes de délivrance transdermique, les ingrédients 5 actifs sont souvent fixés sur un support solide adhérant à la peau. L'acide propionique, l'acide butyrique et leurs dérivés peuvent aussi être combinés avec un agent favorisant la pénétration, par exemple l'Azone (1-dodécylazacycloheptan-2-one). Des systèmes de délivrance à libération prolongée par voie sous-cutanée sont insérés dans la couche subdermale par une procédure chirurgicale ou par injection. Les implants subdermaux 10 encapsulent le composé dans une membrane soluble dans les lipides, par exemple du caoutchouc silicone, ou dans un polymère biodégradable, par exemple du poly(acide lactique). Des formulations appropriées et des véhicules, supports, diluants et excipients pharmaceutiques sont décrits dans Remington: The Science and Practice of Pharmacy 15 1995, édité par E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19ème édition, Easton, Pennsylvanie. L'homme du métier dans le domaine de la formulation peut modifier les formulations dans les limites de l'enseignement de la description pour fournir de nombreuses formulations destinées à une voie d'administration particulière sans compromettre l'activité thérapeutique du ou des principes actifs. 20 11 est à la portée de l'homme du métier de modifier la voie d'administration et le schéma posologique d'un composé particulier (acide propionique, acide butyrique ou l'un de leurs dérivés) pour exploiter la pharmacocinétique du composé en vue d'un effet bénéfique maximum chez le patient. Les compositions pharmaceutiques à utiliser selon la présente invention peuvent, en 25 outre, contenir au moins un principe actif pharmaceutique supplémentaire (c'est-à-dire, en plus de l'acide propionique, l'acide butyrique ou l'un de leurs dérivés). On entend par "principe actif pharmaceutique", tout composé ou substance dont l'administration a un effet thérapeutique ou un effet bénéfique à la santé ou à la condition générale d'un patient ou d'un sujet auquel il est administré. Ainsi, un principe actif pharmaceutique peut être 30 actif contre l'insuffisance en hepcidine que l'on veut contrecarrer par administration de la composition pharmaceutique ; peut être actif contre une condition ou un symptôme associé à l'insuffisance en hepcidine (par exemple, l'accumulation de fer elle-même ou les manifestations ostéo-articulaires qui ne sont pas forcément liées à l'excès du stock en - 14 - 3051115 fer) ; ou peut accroître la disponibilité et/ou l'activité du ou des principes actifs de la composition pharmaceutique. Par exemple, un principe actif pharmaceutique supplémentaire peut être une molécule chélatrice du fer ou bien un autre agent potentiellement inducteur de l'hepcidine qu'il soit peptidique (ex. BMP6, IL-6), chimique 5 ou bien de toute autre nature. Les compositions pharmaceutiques sont de préférence sous des formes d'unités de prise. Sous cette forme, la préparation subdivisée en doses unitaires contenant des quantités appropriées du constituant actif (acide propionique, acide butyrique ou un de leurs dérivés). La forme d'unité de prise peut être une préparation emballée, l'emballage 10 contenant des quantités discrètes de préparation, comme des capsules ou des comprimés emballés, des poudres dans des fioles ou des ampoules. La forme d'unité de prise peut aussi être une capsule, un comprimé, un cachet ou une pastille en soi, ou peut être le nombre approprié de ceux-ci sous forme emballée. Des exemples de formulation de compositions pharmaceutiques comprenant du 15 butyrate ou l'un de ses dérivés sont décrits dans : WO 1999/009972 ; CA 2,301,723 ; WO 2012/175714 ; Perrine et al., Blood, 1989, 74: 454-459 ; Atweh et al., Blood, 1999, 93: 1790-1797 ; Vianello et al., FASEB J., 2013, 27: 2256-2269. Compléments Alimentaires Dans certains modes de réalisation, l'acide propionique, l'acide butyrique et leurs 20 dérivés sont administrés sous forme d'un complément alimentaire. Le concept de "complément alimentaire" a été défini par la Directive Européenne 2002/46/CE comme suit : "on entend par compléments alimentaires les denrées alimentaires dont le but est de compléter le régime alimentaire normal et qui constituent une source concentrée de nutriments ou d'autres substances ayant un effet nutritionnel ou physiologique seuls ou 25 combinés, commercialisés sous forme de doses. Par dose, on entend toutes les formes classiques: gélules, pastilles, comprimés, ampoules, ou encore sachets.". Un complément alimentaire selon l'invention comprend généralement une quantité suffisante d'acide propionique ou d'acide butyrique ou de l'un de leurs dérivés ou de l'un de leurs combinaisons et au moins un excipient utilisé dans le domaine de la nutrition 30 pour la formulation de compléments alimentaires et produits diététiques. Les excipients utiles dans la formulation des compléments alimentaires et les méthodes de formulation des compléments alimentaires sont connus dans l'art. - 15 - 3051115 Des exemples de formulation de compléments alimentaires comprenant du butyrate ou l'un de ses dérivés et destinés aux animaux sont décrits dans : EP 06 305 579 et Hesta et al., Veterinarni Medicina, 2008, 53: 147-152. Des exemples de formulation de compléments alimentaires comprenant du butyrate ou l'un de ses dérivés et destinés aux 5 humains sont décrits dans le site internet butyrose.it/home.html. II - Agents de Modulation du Microbiote Intestinal Comme indiqué plus haut, l'acide propionique et l'acide butyrique sont, avec l'acide acétique, les principaux acides gras à chaîne courte produits par les bactéries du système digestif par fermentation de fibres alimentaires. Les acides butyrique et 10 propionique représentent environ 83% des AGCC générés dans le côlon humain (Rechkemmer et al., Comp. Biochem. Physiol., 198, 90: 563-568). La concentration totale de ces acides dans la lumière intestinale varie de 60 mmol/kg à 150 mmol/kg (Topping et al., Physiol. Rev., 2001, 82: 31-64), et le rapport entre les concentrations d'acétate-propionate-butyrate est relativement constant, avec un rapport moyen de 15 65:25:10 (Scheppach et al., J. Parent. Enteral. Nutr., 1992, 16: 43-48). On sait aujourd'hui qu'il est possible de modifier le microbiote intestinal humain, en particulier la population bactérienne, et de moduler la production des AGCC par une alimentation riche en fibres ou par utilisation de suppléments prébiotiques et/ou probiotiques (Chung et al., BMC Biol., 2016, 14(1): 3; Roberfroid et al., Br. J. Nutr., 2010, 104(Suppl 2): S1- 20 63, Louis et al., J. Appl. Microbiol., 2007, 102(5): 1197-1208; Flint et al., Gut Microbes, 2012, 3(4): 289-306). En conséquence, la présente invention concerne un supplément d'au moins un prébiotique, d'au moins un probiotique ou d'au moins un symbiotique, pour son utilisation dans le traitement des insuffisances en hepcidine. Le supplément de 25 prébiotique, probiotique ou symbiotique peut être administré sous la forme d'un complément alimentaire, et/ou être ajouté à un supplément nutritionnel, à un substitut de repas ou encore à un aliment. Suppléments de Prébiotiques Le terme "prébiotique", tel qu'utilisé ici, désigne des oligosaccharides ou des 30 polysaccharides à courte chaîne constitués approximativement de deux à vingt unités de sucre, qui échappent à la digestion dans l'intestin grêle et sont des substrats potentiels pour l'hydrolyse et la fermentation par les bactéries intestinales. Le terme "supplément - 16 - 3051115 de prébiotique", tel qu'utilisé ici, désigne un probiotique qui n'est pas partie intégrante d'un aliment ingéré, c'est-à-dire qui n'est pas naturellement contenu dans un aliment (ex. fruit, légume, légumineuse, ou céréale) lors de l'ingestion, mais qui est synthétisé et/ou sciemment formulé par l'homme en une composition, ou sciemment ajouté par l'homme 5 à un aliment, un supplément nutritionnel ou un substitut de repas dans le but d'une administration/ingestion humaine. Préférablement, les suppléments de prébiotiques stimulent de manière sélective au niveau du côlon, la multiplication ou l'activité d'un ou d'un nombre limité de populations bactériennes susceptibles d'améliorer la santé de l'hôte. En particulier, dans le contexte de la présente invention, le supplément de 10 prébiotique est préférablement choisi pour sa capacité à augmenter la production en butyrate et/ou propionate par les bactéries du système digestif et/ou à favoriser, directement ou indirectement, la croissance des bactéries productrices de propionate et/ou de butyrate. Par exemple, il a été démontré que la dextrine de blé est capable d'augmenter le 15 pourcentage en bactéries du tube digestif (Clostridium et Roseburia) qui produisent le butyrate (Hobden et al., PLoS one, 2013, 8: e77128). La supplémentation en inuline modifie la flore intestinale chez des volontaires sains, favorisant la croissance des bactéries Bifidobacterium adolescentis et des bactéries Faecalibacterium prausnitzii productrices de butyrate (Ramirez-Farias et al., Br. J. Nutr., 2009, 101: 541-550). Les 20 résultats d'études in vitro ainsi qu'in vivo ont montré que l'administration de fructanes de type inuline augmente la production d'AGCC et notamment la quantité et/ou le rapport molaire de butyrate. Il a été démontré dans un modèle simulé de côlon humain que les xylo-oligosaccharides favorisent la croissance des bifidobactéries en général et de l'espèce Bifidobacterium lactis en particulier (Mâkelâinen et al., Benef. Microbes, 2010, 25 1(1): 81-91). La supplémentation en galactooligosaccharides (GOS) chez des volontaires accroît le nombre de bifidobactéries (qui appartiennent à la famille des bactéries lactiques) et conduit à une forte augmentation de la production en butyrate (Walton et al., Br. J. Nutr., 2012, 107: 1466-1475). De même, les fructo-oligosaccharides sont connus pour stimuler la croissance des bifidobactéries chez l'homme (Bornet et al., Digest. Liver 30 Ms., 2002, 341: S111-140; Roberfroid et al., J. Nutr., 1998, 128: 11-19). Les bifidobactéries ne sont pas productrices de butyrate ou de propionate mais sont principalement impliquées dans la génération d'acétate et de lactate. Cependant, par un mécanisme de cross-feeding, le lactate ou l'acétate produit par les bifidobactéries est - 17 - 3051115 utilisé par des bactéries anaérobiques appartenant au cluster XVIa des Clostridium pour la production de butyrate et/ou de propionate (Louis et al., FEMS Microbiol. Lett., 2009, 294: 1-8; Belenguer et al., Appl. Environ. Microbiol., 2006, 72: 3593-3599; Falony et al., Appl. Environ. Microbiol., 2006, 72: 7835-7841; Rios-Covian et al., FEMS Microbiol. 5 Lett., 2015, Nov;362(21). pii: fnv176. doi: 10.1093/femsle/fnv176; Scott et al., FEMS Microbiol. Ecol., 2014, 87(1): 30-40). Ainsi, les prébiotiques utiles dans le contexte de la présente invention incluent, sans limitation, l'inuline (extraite des racines de chicorée), les fructanes de type inuline, les fructo-oligosaccharides (FOS ou courte chaîne de sucre principalement constituée de 10 fructose), les galacto-oligosaccharides (GOS) en particulier les trans-galactooligosaccharides (TOS), les xylo-oligosaccharides, les arabinogalactanes, les gommes arabiques, les dextrines (par exemple, les dextrines de blé ou d'amidon) et le lactose. Suppléments de Probiotiques Le terme "probiotique", tel qu'utilisé ici, désigne des microorganismes vivants qui, 15 lorsqu'ils sont intégrés en quantité suffisante, exercent des effets positifs sur la santé, au- delà des effets nutritionnels traditionnels. Le terme "supplément de probiotique", tel qu'utilisé ici, désigne un probiotique que n'est pas naturellement présent dans un aliment (par exemple lait fermenté, choucroute ou olives) mais qui a été isolé et/ou sciemment formulé en une composition ou sciemment ajouté par l'homme à un aliment, un 20 supplément nutritionnel ou un substitut de repas dans le but d'une administration/ingestion humaine. Il existe de nombreuses souches de ces microorganismes vivants dont les plus connues appartiennent aux genres Lactobacillus, Bifidobacterium et Saccharomyces. Dans le contexte de la présente invention, le supplément de probiotique est préférablement choisi parmi les microorganismes capables 25 de produire de l'acide butyrique/butyrate (en particulier les bactéries butyrogènes), les microorganismes capables de produire de l'acide propionique/propionate (en particulier les bactéries propioniques) et les microorganismes capables de booster ou de favoriser la production en acide butyrique/butyrate et/ou en acide propionique/propionate par les bactéries du système digestif (par exemple par un mécanisme de cross-feeding). 30 Dans tous les cas, les bactéries probiotiques sont sélectionnées en fonction de leur caractère peu autolytique et de leur aptitude à résister aux sels biliaires pour l'obtention d'une composition alimentaire courante ou d'une composition diététique ou - 18 - 3051115 médicamenteuse absorbable par l'homme, élaborée pour que les bactéries soient protégées au moins partiellement vis-à-vis de l'acidité gastrique. Plusieurs études ont montré que la majorité des bactéries produisant du butyrate et se retrouvant dans les excréments humains sont des bactéries très sensibles à l'oxygène 5 qui appartiennent au clusters IV et XIVa des Clostridium (Louis et al., FEMS Microbiol. Lett., 2009, 294: 1-8). Les espèces de bactéries intestinales identifiées comme étant productrices d'acide butyrique/butyrate (bactéries butyrogènes) et qui peuvent être utiles dans le contexte de la présente invention incluent, sans limitation, Clostridium spp., Eubacterium spp., Fusobacterium spp., Butyrivibrio spp., Coprococcus eutactus, 10 Anaerostipes hadrus, Anaerostipes caccae, Megasphaera elsdenii, Mitsuokella multiacida, Roseburia intestinalis, Roseburia inulinivorans, et Faecalibacterium prausnitzii (Tap et al., Environ. Microbiol., 2009, 11(10): 2574-2584; Ducan et al., Int. J. Syst. E. vol. Microbiol., 2002, 52 : 1615-1620; Hold et al., Appl. Environ. Microbiol., 2003, 69: 4320-4324). 15 Les espèces de bactéries intestinales identifiées comme étant productrices d'acide propionique/propionate (bactéries propionogènes) et qui peuvent être utiles dans le contexte de la présente invention incluent Roseburia intestinalis, Corpococcus catus, Bacteriodies thetaiotaomicron (Van der Meulen et al., Appl. Environ. Microbiol., 2006, 72(2): 1006-1012). Il existe également des bactéries propioniques d'origine laitière par 20 exemple qui peuvent être utilisées comme probiotiques dans le contexte de la présente invention. Lorsqu'elles sont ingérées, elles survivent dans le tractus digestif et sont accompagnées par une augmentation des bifidobacteria; elles restent vivantes lors du transit intestinal et adhèrent aux cellules épithéliales de l'intestin. Les espèces de ces bactéries propioniques incluent, sans limitation, Propionibacterium freudenreichii (ou P. 25 freudenreichii), Propionibacterium thoenii, Propionibacterium jensenii, Propionibacterium shermanii, et Propionibacterium acidipropionici, ainsi que les bactéries comensables : Propionibacterium acnes, Propionibacterium granulosum, Propionibacterium avidum, and Propionibacterium lymphophilium. Les bactéries capables de booster ou de favoriser la production en acide 30 butyrique/butyrate et/ou en acide propionique/propionate par les bactéries du système digestif (par exemple par un mécanisme de cross-feeding) et qui sont utiles dans le contexte de la présent invention, incluent, sans limitation, les bifidobactéries en particulier les espèces Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium - 19 - 3051115 longuet, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium angulatum, et Bifidobacterium pseudocatenulatum) et les lactobacillus (en particulier les espèces Lactobacillus reuteri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus plantarum, et Lactobacillus rhamnosus). 5 Suppléments de Symbiotiques Le terme "supplément de symbiotique", tel qu'utilisé ici, désigne une combinaison ou association d'au moins un prébiotique et d'au moins un probiotique. Généralement, la combinaison ou association est telle qu'elle améliore la survie du ou des probiotique(s) dans la partie supérieure du système digestif et/ou favorise une colonisation efficace dans 10 le côlon et/ou augmente l'activité du ou des probiotique(s) dans le côlon. Dans le contexte de la présente invention, l'amélioration de la survie du ou des probiotique(s) dans la partie supérieure du système digestif, une colonisation efficace dans le côlon et/ou l'augmentation de l'activité du ou des probiotique(s) dans le côlon résultent en une augmentation de la croissance ou de l'activité des bactéries productrices de propionate 15 et/ou de butyrate (conduisant à augmentation de la production en butyrate et/ou propionate). Un supplément de symbiotique peut être obtenu en combinant au moins un prébiotique, tel que ceux décrits plus haut, et au moins un probiotique tel que ceux décrits plus haut. L'homme du métier sait sélectionner les prébiotiques et probiotiques pour développer des combinaisons symbiotiques. 20 III - Utilisation de l'Acide Propionique, de l'Acide Butyrique ou de leurs Dérivés dans le Traitement des Insuffisances d'Hepcidine L'invention concerne principalement l'acide propionique, l'acide butyrique, et leurs dérivés, pour leur utilisation dans le traitement d'une insuffisance en hepcidine chez un sujet. 11 est entendu ici que l'utilisation peut se faire soit par administration directe de 25 l'acide propionique/propionate et de l'acide butyrique/butyrate, ou de l'un de leurs dérivés, soit par modulation, nutritionnelle ou médicamenteuse, du microbiote intestinal afin de booster ou de favoriser l'émergence de populations microbiennes particulièrement productrices de ces composés, comme décrit plus haut. De la manière utilisée ici, le terme "sujet" désigne un être humain ou un animal, en 30 particulier un mammifère (par exemple un primate, un chien, un chat, une chèvre, un cheval, un porc, une souris, un rat, un lapin...) qui peut développer une maladie ou une condition associée à une insuffisance en hepcidine, mais qui peut ou non avoir la maladie -20- 3051115 ou la condition. Dans de nombreux modes de réalisation de la présente invention, le sujet est un être humain. Dans ces modes de réalisation, le sujet est souvent appelé "individu". Le terme "individu" ne désigne pas un âge particulier, et englobe donc les enfants, les adolescents et les adultes. Le terme "patient" est plus particulièrement utilisé lorsque 5 l'individu présente des conséquences pathologiques d'une insuffisance en hepcidine. Dans le contexte de la présente invention, on entend par "traitement" une méthode qui a pour but (1) de retarder ou prévenir le début d'une maladie ou d'une condition clinique; (2) de ralentir ou d'arrêter la progression, l'aggravation ou la détérioration des symptômes de la maladie; (3) d'apporter des améliorations des symptômes de la maladie; 10 et/ou (4) de guérir la maladie. Un traitement peut être administré avant le début de la maladie pour une action préventive, ou il peut être administré après initiation de la maladie, pour une action thérapeutique. Il peut être réalisé en association ou non avec d'autres thérapeutiques (notamment phlébotomies et médications) visant à réduire le stock en fer ou bien à corriger l'anomalie du métabolisme du fer. 15 Une méthode de traitement selon l'invention comprend l'administration au sujet ou au patient d'une quantité thérapeutiquement efficace d'acide propionique, d'acide butyrique, ou de l'un de leurs dérivés, ou d'un agent de modulation du microbiote intestinal (suppléments de prébiotique, de probiotique ou de symbiotique décrits ici). L'expression "quantité thérapeutiquement efficace", telle qu'utilisée ici, désigne une 20 quantité qui est suffisante pour atteindre le ou les objectifs prévus, comme par exemple une réponse biologique ou médicale désirée dans une cellule, un tissu, un système ou un sujet. Par exemple, dans certains modes de réalisation de la présente invention, le ou les objectifs peuvent être: augmenter l'expression d'hepcidine et/ou diminuer la concentration en fer dans le plasma et/ou diminuer la surcharge en fer dans les cellules du 25 foie, du coeur, du pancréas, de l'hypophyse, et/ou des os, et/ou prévenir ou traiter une maladie associée à une insuffisance en hepcidine. La dose sera ajustée aux besoins individuels dans chaque cas particulier. Cette dose peut varier dans de larges limites en fonction de nombreux facteurs comme la gravité de la maladie à traiter, l'âge et l'état de santé général du patient, les autres médicaments avec lesquels est traité le patient, la voie 30 et la forme d'administration, et les préférences et l'expérience du médecin traitant impliqué. La dose journalière peut être administrée sous forme d'une seule dose ou en des doses divisées, de façon typique entre 1 et 5 doses par jour, par exemple 2 à 3 prises par jour. En général, le traitement est commencé avec de petites doses qui sont - 21 - 3051115 inférieures à la dose optimale du composé. Ensuite, la dose est augmentée par paliers jusqu'à ce que l'effet optimal soit atteint pour le patient individuel. L'homme du métier sera capable, sans expérimentation exagérée et en se basant sur ses connaissances personnelles, sur l'expérience et sur la description de cette demande de brevet, de 5 déterminer une quantité thérapeutiquement efficace pour une maladie et un patient donnés. Comme indiqué plus haut, l'acide propionique, l'acide butyrique, et leurs dérivés (comme tels ou sous forme d'agents de modulation du microbiote intestinal) peuvent être utilisés pour le traitement de maladies associées à une insuffisance en hepcidine. 10 Telle qu'utilisée ici, l'expression "insuffisance en hepcidine" désigne un taux d'expression d'hepcidine qui est, en tenant compte du stock en fer de l'organisme, inférieure à la moyenne mesurée pour un sujet sain (ou un groupe de sujets sains) de même âge, de même sexe, de poids corporel sensiblement identique et présentant un statut martial comparable. L'homme du métier connaît ces données ou sait comment les 15 déterminer. Une insuffisance en hepcidine est présente (dans presque la totalité des cas) chez les patients souffrant d'une hémochromatose génétique. L'hémochromatose génétique (ou hémochromatose héréditaire ou primitive) est un trouble génétique du métabolisme du fer, lors duquel une surcharge ferrique des cellules du foie, du pancréas, du coeur, des 20 articulations ou d'autres organes provoque des lésions fonctionnelles et anatomiques. C'est une maladie fréquente dans sa forme liée à la mutation du gène HFE, une personne sur 200 ou 300 étant génétiquement prédisposée, mais rare dans d'autres formes, notamment celles liées aux mutations dans les gènes hémojuvéline et récepteur de la transferrine. Les manifestations ostéoarticulaires de la maladie sont au premier plan tant 25 au moment du diagnostic qu'à la phase d'état par leur retentissement sur la qualité de vie. Il s'agit, d'une part, du rhumatisme hémochromatosique qui constitue une des principales plaintes des patients et, d'autre part, de l'ostéoporose qui augmente le risque fracturaire. Toutes les anémies chroniques par insuffisance de production ou par destruction excessive des globules rouges conduisent à une suppression de la sécrétion d'hepcidine 30 résultant en une surcharge en fer. Les maladies concernées sont diverses, certaines étant fréquentes, tels les syndromes myélodysplasiques et les thalassémies. A elles-seules, les -22- 3051115 thalassémies affectent des millions de personnes à travers le monde surtout dans les pays méditerranéens, au Moyen-Orient et en Asie du Sud-Est. Les méthodes de traitement selon l'invention peuvent donc être utilisées pour le traitement de l'hémochromatose génétique, y compris le rhumatisme 5 hémochromatosique, et les anémies chroniques comme les anémies sidéroblastiques, syndromes myélodysplasiques, les thalassémies et les anémies hémolytiques rares, lorsqu'ils sont associés à une déficience en hepcidine. L'effet d'un traitement selon l'invention peut être évalué par dosage du fer et/ou de l'hepcidine dans un échantillon biologique du patient traité. Le dosage du fer peut être 10 effectué par n'importe quelle méthode connue dans l'art. Les méthodes de dosage du fer incluent, sans limitation, le dosage de la ferritine sérique, de l'UIBC (unsaturated iton binding capacity), du fer lié à la transferrine (ou non-transferrin bound iron: NTBI) et du fer plasmique labile (ou labile plasma iron: LPI), la mesure de la concentration hépatique en fer (CHF) (dosage biochimique sur une biopsie du foie, par imagerie en résonance 15 magnétique (IRM) hépatique et splénique, biomagnétométrie (SQUID), la mesure de la concentration cardiaque en fer par IRM cardiaque, l'évaluation histologique (biopsie hépatique) de la répartition du fer dans le foie (hépatocytes, cellules sinusoidales, espaces vascularies, cellules biliaires) par coloration spécifique révélant le fer en excès. Le dosage de l'hepcidine peut être effectué par n'importe quelle méthode connue dans l'art. 20 Les méthodes de dosage de l'hepcidine incluent, sans limitation, le dosage de l'hepcidine dans le plasma ou l'urine par spectrométrie de masse (Seldi-TOF MS, MALDI-TOF MS), chromatographie liquide, ELISA ou par dosage radioimmunologique. L'homme du métier comprendra qu'une méthode selon l'invention peut être utilisée dans n'importe quelle condition clinique où une augmentation de l'expression 25 d'hepcidine est désirable. IV - Autres Utilisations de l'Acide Propionique, de l'Acide Butyrique et de leurs Dérivés L'invention concerne également l'utilisation de l'acide propionique, de l'acide butyrique, ou de l'un de leurs dérivées ou de l'un de leurs mélanges, pour augmenter 30 l'expression d'hepcidine dans une cellule. L'invention concerne aussi un procédé pour augmenter l'expression d'hepcidine dans une cellule, comprenant une étape de mise en - 23 - 3051115 contact de la cellule avec une quantité efficace d'acide propionique, d'acide butyrique, ou de l'un de leurs dérivées ou de l'un de leurs mélanges. Dans certains modes de réalisation, la cellule est une cellule in vitro. Par exemple, la cellule peut être une cellule hépatique provenant d'une lignée cellulaire établie, comme 5 par exemple les lignées Huh7, Hep3b, HepG2, PLC/PRF/5, et SkHepI ou être isolée d'un sujet sain ou d'un malade. La cellule peut également être un adipocyte, un macrophage ou un myocyte. Dans d'autres modes de réalisation, la cellule est une cellule in vivo, par exemple une cellule dans un animal (ex. un modèle animal). Dans ce cas, la mise en contact de la 10 cellule avec une quantité efficace l'acide propionique, de l'acide butyrique, ou de l'un de leurs dérivés ou de l'un de leurs mélanges se fait par administration à l'animal. De telles applications peuvent notamment servir à préciser les mécanismes d'action de l'acide propionique, de l'acide butyrique, ou de l'un de leurs dérivés ou de l'un de leurs mélanges, ou bien à rechercher des effets thérapeutiques bénéfiques en association 15 avec d'autres thérapeutiques visant à moduler le métabolisme du fer ou le stock en fer de l'organisme. A moins qu'ils ne soient définis d'une autre manière, tous les termes techniques et scientifiques utilisés ici ont la même signification que celle couramment comprise par un spécialiste ordinaire du domaine auquel appartient cette invention. De même, toutes les 20 publications, demandes de brevet, tous les brevets et toutes autres références mentionnés ici sont incorporés par référence. Les exemples suivants et les figures sont présentés pour illustrer certains modes de réalisation des procédures décrites ci-dessus et ne doivent en aucun cas être considérés comme une limite à la portée de l'invention. 25 Exemples Les exemples suivants décrivent certains modes de réalisation de la présente invention. Cependant, il est entendu que les exemples ne sont présentés qu'à titre illustratif seulement et ne limitent en aucun cas la portée de l'invention. -24- 3051115 Légendes des Figures Figure 1: Effets de l'Acétate du Sodium, du Propionate du Sodium et du Butyrate de Sodium sur le Niveau d'Expression de l'ARNm de l'Hepcidine. Le niveau d'ARNm a été quantifié par RT-PCR quantitative dans des cellules HepG2 5 traitées à l'acétate, au propionate et au butyrate de sodium pendant 24 heures. Le niveau d'ARNm est exprimé en pourcentage par rapport au niveau d'ARNm observé dans les cultures contrôle. Figure 2: Test de Toxicité Cellulaire du Propionate du Sodium et du Butyrate de Sodium dans les Cellules HepG2. L'activité de la LDH libérée dans le milieu de 10 culture a été rapportée à la quantité de protéines totales de la couche cellulaire et est exprimée en pourcentage. Matériels et Méthodes Cultures cellulaires. Des cellules de la lignée humaine HepG2, d'origine hépatocytaire, ont été cultivées dans du milieu essentiel minimum alpha (Medium 15 essential medium, Life Technologies) supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal (Hyclone, de Life Technologies), 1% de pénicilline et de streptomycine, 1% de glutamine, 1% de pyruvate de sodium et 1% d'acides aminés non essentiels pour l'entretien de la lignée. Le repiquage des cellules a été réalisé tous les 7 jours dans des boites de Pétri de culture cellulaire de 10 cm de diamètre au nombre de 2,5.106 cellules. 20 Pour les différents traitements, les cellules ont été ensemencées dans des plaques 12 puits à une densité de 7.105 cellules par puits. Les cellules ont été traitées 24 heures après l'ensemencement, à une confluence d'au moins 60%. Chaque condition a été effectuée en triplicat et a été testée pendant au moins trois semaines. Le milieu de culture a été renouvelé tous les 2 jours, et les cellules ont été maintenues dans un incubateur à 37°C 25 dans une atmosphère comprenant 5% de CO2. Lyse des Cellules et Extraction d'ADN. Les cellules ont été lysées 24 heures après le traitement avec du RNA lysis buffer et du P-mercaptéthanol (kit SV Total RNA Isolation System, Promega). L'ARN a été extrait en utilisant ce même kit selon les instructions du fournisseur. La quantité totale d'ARN obtenue a été mesurée par 30 nanodrop via spectrophotométrie UV à 260 nm. Les ARNs ont été conservés à une température de -80°C. -25- 3051115 PCR Quantitative en Temps Réel. La transcription inverse a été réalisée à l'aide du kit MMLV-RT (Proméga) sur 1 [tg d'ARN pour chacune des conditions. Les amorces nucléotidiques aléatoires (Random Primers, Proméga) ont été utilisées. Les ARNs, les amorces et une quantité suffisante d'eau stérile pour 12 pt ont été incubés ensemble 5 pendant 5 minutes à 70°C puis ont été placés sur de la glace pendant 5 minutes. L'ajout des dNTP à 25 mM pour la synthèse du brin complémentaire, d'inhibiteurs de dégradation de l'ARN (RNasin Ribonuclease Inhibitor, Proméga), de l'enzyme transcriptase inverse M-MLV-RT (Moloney Murine Leukemia Virus Reverse transcriptase, Proméga) associée à son tampon (M-MLV-RT 5X buffer, Proméga) dans 10 chaque échantillon à 37°C pendant 1 heure a permis la rétro-transcription. Un contrôle sans enzyme RT a été réalisé afin de vérifier l'absence d'ADN génomique. L'activité de l'enzyme rétro-transcriptase est arrêtée par une incubation à 94°C pendant 5 minutes. Les ADN complémentaires obtenus sont dilués au 1/6ème en ajoutant 100 [IL d'eau stérile, puis sont stockés à -20°C. 15 La transcription inverse a généré des ADN complémentaires qui ont ensuite été amplifiés avec différentes amorces selon le gène HAMP codant l'hepcidine ou le gène normalisateur (TBP - TATA-binding protein) en utilisant le kit qPCR MasterMix Plus et l'usage de l'automate de lecture de plaques qPCR Step One Plus (Applied Biosystems). Les échantillons ont été déposés sur une plaque de 96 puits en triplicat. Chaque puits 20 contenant 2 pt d'ADN cible et 8 [IL de mix constitué d'l pt d'amorce forward, 1 pt d'amorce reverse du gène d'intérêt à 10 !AM, 1 pt d'H20 DNAse-free et 5 pt de SYBRGreen I Master Mix (Eurogentec). Le gène normalisateur TBP a été utilisé car son expression n'est pas régulée par les traitements réalisés. Les résultats de PCR quantitatives ont été analysés grâce au logiciel StepOne Software v2.3. 25 Test de Cytotoxicité (LDH). Après 24 heures de traitement, les milieux des cellules ont été prélevés. L'activité de la lacticodéshydrogénase (LDH) a été quantifiée avec le kit Cytotoxicity Detection Kit LDH (Roche Applied Science). Les concentrations en LDH ont été déterminées par rapport à une gamme de LDH (0 - 4000 mU/ mL) préparée à partir d'une solution de référence LDH (Sigma, 826-6, 1000 U/mL). Dans une plaque 30 NUNC de 96 puits, 20 pt d'échantillon et 100 [IL de réactif ont été déposés. Après 30 minutes d'incubation à l'abri de la lumière et à température ambiante, les absorbances ont été lues au lecteur de microplaques (FusionTM Packard) à 485 nm. L'activité de l'enzyme LDH augmente de manière proportionnelle à la quantité de cellules endommagées. -26- 3051115 Résultats Etude de l'effet d'acides gras à chaîne courte sur l'expression d'ARNm de l'hepcidine in liver cells. Les résultats obtenus sont présentés sur la Figure 1. Dans les cellules de la lignée HepG2 traitées avec l'acétate de sodium, il ne se produit pas de 5 changement du taux de l'ARNm de l'hepcidine. Par contre, les cellules traitées avec du propionate de sodium ou avec du butyrate de sodium présentent une augmentation significative de l'expression de l'ARNm de l'hepcidine. L'augmentation due au propionate est dose-dépendante. En revanche, pour les cellules traitées avec 500 iiM d'acide valérique (ou acide pentanoïque), il n'y a pas de changement significatif de 10 l'expression de l'ARNm de l'hepcidine comparé aux cellules non traitées. Evaluation de la toxicité du propionate et du butyrate. Afin d'évaluer la toxicité cellulaire du propionate et du butyrate, qui modulent l'expression de l'ARNm de l'hepcidine, il a été effectué un test de cytotoxicité cellulaire sur des cellules de la lignée HepG2, basé sur la mesure de l'activité lactate déshydrogénase libérée dans le milieu de 15 culture. L'activité a été normalisée avec la quantité de protéines totales. Les résultats obtenus sont présentés sur la Figure 2. Dans le cas du butyrate de sodium, on note une tendance à une augmentation dose-dépendante sur la gamme de concentrations testées (0.5 mM à 2 mM). En revanche, l'incubation en présence de propionate de sodium ne se traduit pas par une toxicité détectable par ce test. REVENDICATIONS1. Acide propionique ou un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables, pour une utilisation dans le traitement d'une insuffisance en hepcidine. 2. Acide propionique ou un de ses dérivés pour l'utilisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que le dérivé pharmaceutiquement acceptable est choisi parmi les sels de l'acide propionique, les esters de l'acide propionique, les thioesters de l'acide propionique, les amides de l'acide propionique, les thioamides de l'acide propionique, et les oligomères de l'acide propionique. 3. Acide propionique ou un de ses dérivés pour l'utilisation selon la revendication 2, caractérisé en ce que le dérivé est le propionate de sodium. 4. Acide propionique ou un de ses dérivés pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'acide propionique ou un de ses dérivés se trouve sous la forme d'une composition pharmaceutique ou d'un complément alimentaire. 5. Acide propionique ou un de ses dérivés pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'insuffisance en hepcidine est associée à une hémochromatose génétique ou à une anémie chronique. 6. Acide propionique ou un de ses dérivés pour l'utilisation selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'insuffisance en hepcidine est associée à une hémochromatose génétique ou à une anémie chronique choisie parmi les anémies sidéroblastiques, les syndromes myélodysplasiques, les thalassémies, et les anémies hémolytiques. 7. Composition pharmaceutique pour utilisation dans le traitement d'une insuffisance en hepcidine, la composition pharmaceutique comprenant au moins un véhicule ou excipient physiologiquement acceptable et une quantité thérapeutiquement efficace d'acide propionique ou de l'un de ses dérivés tels que définis dans la revendication 2 ou la revendication 3. 8. Composition pharmaceutique pour l'utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que l'insuffisance en hepcidine est associée à une hémochromatose génétique ou à une anémie chronique. - 28 - 3051115 9. Complément alimentaire pour utilisation dans le traitement d'une insuffisance en hepcidine, le complément alimentaire comprenant au moins un excipient et une quantité efficace d'acide propionique ou de l'un de ses dérivés tels que définis dans la revendication 2 ou la revendication 3. 5 10. Complément alimentaire pour l'utilisation selon la revendication 9, caractérisé en ce que l'insuffisance en hepcidine est associée à une hémochromatose génétique ou à une anémie chronique. 11. Utilisation de l'acide propionique ou de l'un de ses dérivés, tels que définis dans la revendication 2 ou la revendication 3, pour augmenter l'expression d'hepcidine dans 10 une cellule in vitro ou ex vivo. 12. Procédé pour augmenter l'expression en hepcidine dans une cellule in vitro ou ex vivo comprenant la mise en contact de la cellule avec de l'acide propionique ou l'un de ses dérivés tels que définis dans la revendication 2 ou la revendication 3. 13. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que la cellule est une cellule 15 hépatique, un adipocyte, un macrophage ou un myocyte. 14. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que la cellule est une cellule hépatique, un adipocyte, un macrophage ou un myocyte. - 29 -