Brevet FR3050615A1 — publié le 20171103

PROCEDE POUR ETABLIR UN MODELE D'ENTERITE DES POISSONS INDUITE PAR L'ACIDE ERUCIQUE Domaine de l'invention La présente invention concerne un procédé pour établir un modèle animal, et plus particulièrement un procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique. Arrière-plan de l'invention Avec le développement de l'aquaculture et de l'industrie alimentaire à usage animal, la pénurie de sources de protéines alimentaires à usage animal devient un problème global et l'un des facteurs entravant fortement le développement de l'aquaculture. Le colza est l'une des cultures oléagineuses principales en Chine. Le rendement en colza représente approximativement plus du tiers de celui des huiles végétales, et se classe en tête dans le monde. En raison de l'amélioration continue de la technologie pour planter le colza, la production de colza s'est considérablement développée. En particulier, la surface des plantations et le rendement par unité de surface ont continu à s'étendre. De plus, le colza peut être planté durant l'hiver sans qu'il soit nécessaire de s'occuper des terres pour faire pousser les cultures en plein champ. Un tel avantage permet au colza d'être planté au-delà des principales zones agricoles telles que la vallée du Yang-Tzé. En résumé, il est évident que le rendement en colza en Chine va continuer d'augmenter. Comme le tourteau de colza est un sous-produit du procédé de fabrication de l'huile de canola à partir du colza, le rendement en huile de canola et en tourteau de colza a également augmenté, conduisant à un rendement élevé et à un faible coût du tourteau de colza. De plus, le tourteau de colza peut comprendre plus de 32 % de protéines brutes, et moins de 12 % de fibres brutes. Le tourteau de colza est riche en lysine, en acides aminés soufrés, et en oligo-éléments. Comparé au tourteau de soja, le tourteau de colza a une plus forte teneur en calcium, sélénium, fer, magnésium, manganèse et zinc. La teneur en phosphore du tourteau de soja est le double de celle du tourteau de soja. Par conséquent, le tourteau de colza a été utilisé en tant que source protéique principale pour les 3050615 2 aliments destinés aux poissons, en réduisant la pénurie en sources de protéines dans l'aquaculture. L'huile de canola est riche en acides gras essentiels, en vitamines, en minéraux, et peut être efficacement absorbée par les poissons. Par 5 conséquent, l'huile de canola a été utilisée en tant que source lipidique principale pour les aliments destinés aux poissons. Toutefois, le colza et l'huile de canola contiennent des facteurs antinutritionnels tels que l'acide érucique qui peuvent nuire à la santé et à la croissance des poissons. 10 L'effet spécifique et le mécanisme de toxicité de l'acide érucique sont en cours d'exploration et restent obscurs. L'entérite des poissons est l'une des maladies les plus courantes et mortelles chez les poissons d'élevage tels que la carpe de roseau. Le taux de mortalité de l'entérite des 15 poissons est habituellement de 50 %, ou même va jusqu'à 90 %, en engendrant une perte économique désastreuse chaque année. Un modèle stable d'entérite des poissons établi en fonction des caractéristiques physiologiques des poissons d'élevage constituerait un outil efficace pour étudier le 20 mécanisme pathologique de l'entérite des poissons et développer des médicaments et des formules nutritives contre cette maladie. Néanmoins, s'il n'est pas établi de façon appropriée, le modèle d'entérite des poissons peut être instable, en conduisant à la mort de poissons d'élevage du fait de lésions 25 entériques graves et donc en limitant l'utilisation du modèle d'entérite des poissons. On a donc urgemment besoin d'établir un modèle d'entérite des poissons stable et approprié. Bref résumé de l'invention Par conséquent, la présente invention met à disposition un 30 procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique, afin d'établir un modèle stable d'entérite des poissons, présentant une manifestation pathologique appropriée. En d'autres termes, la manifestation pathologique n'est ni trop bénigne ni trop grave. 35 Conformément à certains modes de réalisation de la présente invention, un procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique comprend les étapes consistant à : sélectionner des poissons d'élevage 3050615 3 en bonne santé en tant que sujets pour le modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique ; et alimenter les poissons d'élevage avec un aliment pour poissons expérimental comprenant 12 g/kg d'acide érucique afin d'établir le modèle 5 d'entérite des poissons induite par l'acide érucique. Ce procédé est avantageux parce que les poissons d'élevage n'ont besoin d'être nourris que pendant 60 jours pour établir un modèle stable d'entérite des poissons avec une manifestation pathologique appropriée. La croissance des poissons d'élevage 10 ne va pas être sévèrement affectée, même si la performance de croissance, l'immunité et la qualité de leur chair peuvent diminuer légèrement. Les inventeurs ont trouvé qu'alors que la performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, 15 l'immunité et la qualité de la chair des poissons d'élevage ne diminuent que légèrement quand la teneur en acide érucique est inférieure à 12 g/kg, la première manifestation pathologique de l'entérite des poissons est très bénigne. En outre, alors que la performance de croissance, la croissance et le développement 20 intestinaux, l'immunité et la qualité de la chair des poissons d'élevage diminuent significativement quand la teneur en acide érucique dépasse 12 g/kg, la manifestation pathologique de l'entérite des poissons devient très grave ; de plus, une formation de vacuoles dans l'épithélium intestinal, un 25 détachement de cellules en haut des plis intestinaux, et un endommagement structurel et fonctionnel de l'épithélium intestinal deviennent également sévères, en provoquant une augmentation significative de la morbidité, et même la mort des poissons d'élevage. Toutefois, quand la teneur en acide 30 érucique est de 12 g/kg, la manifestation pathologique appropriée de l'entérite des poissons, comprenant une formation évidente de vacuoles dans l'épithélium intestinal, un détachement de cellules en haut et sur les côtés des plis intestinaux, ainsi qu'un aplatissement du haut des plis 35 intestinaux ; de plus un déclin de la performance de croissance, de la croissance et du développement intestinaux, de l'immunité et de la qualité de la chair des poissons d'élevage, est relativement bénin. 3050615 4 Conformément à d'autres modes de réalisation de la présente invention, un procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique comprend les étapes consistant à : sélectionner des poissons d'élevage 5 jeunes en tant que sujets pour le modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique, le poids des poissons d'élevage étant situé dans la plage allant de 230 à 730 g ; mélanger de l'acide érucique avec de l'aliment pour poissons afin de préparer un aliment pour poissons expérimental 10 comprenant 12 g/kg d'acide érucique, l'aliment pour poissons comprenant de la farine de poissons, du concentré de protéine de soja, de la poudre de protéine de riz, de l'amidon de maïs et de l'a-amidon ; et alimenter les poissons d'élevage avec une certaine quantité d'aliment pour poissons expérimental 15 pendant 60 jours afin d'établir le modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique, la quantité de l'aliment pour poissons expérimental par jour représentant 3 % en poids du poids des poissons d'élevage. Après granulation, l'aliment pour poissons expérimental 20 est ensuite stocké à 4°C. Les poissons d'élevage comprennent, mais sans s'y limiter, les carpes de roseau. En comparaison avec la technique antérieure connue des inventeurs, la présente invention est avantageuse parce que le 25 procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique engendre un impact minimal sur la performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, l'immunité et la qualité de la chair des poissons d'élevage, mais génère la manifestation pathologique la plus 30 appropriée de l'entérite des poissons. De plus, le modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique est stable et fiable, et présente une bonne reproductibilité. Pour que les buts, caractéristiques et bénéfices ci- dessus, ainsi que d'autres, apparaissent de façon plus évidente 35 aux personnes ayant une connaissance ordinaire de la technique, les modes de réalisation préférés et les descriptions détaillées avec des dessins joints vont être proposés dans les descriptions qui suivent. 3050615 5 Brève description des dessins La présente invention apparaîtra de façon plus évidente aux personnes ayant une connaissance ordinaire de la technique après examen de la description détaillée qui suit et des 5 dessins joints, dans lesquels : la Figure 1 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 0 g/kg d'acide érucique conformément au 10 premier mode de réalisation de la présente invention ; la Figure 2 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 4,0 g/kg d'acide érucique conformément 15 au deuxième mode de réalisation de la présente invention ; la Figure 3 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 8,0 g/kg d'acide érucique conformément 20 au troisième mode de réalisation de la présente invention ; la Figure 4 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 12,0 g/kg d'acide érucique conformément 25 au quatrième mode de réalisation de la présente invention ; la Figure 5 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 16,0 g/kg d'acide érucique conformément 30 au cinquième mode de réalisation de la présente invention ; et la Figure 6 est une image au microscope d'une section tissulaire montrant la morphologie de l'épithélium intestinal d'une carpe de roseau avec un aliment pour poissons expérimental contenant 66,0 g/kg d'acide érucique conformément 35 au sixième mode de réalisation de la présente invention. Description détaillée des modes de réalisation préférés La présente invention va maintenant être décrite de façon plus spécifique en référence aux modes de réalisation qui 3050615 6 suivent. Il convient de noter que les descriptions qui suivent de modes de réalisation préférés de cette invention sont présentées ici à des fins d'illustration et de description uniquement. Il n'est pas prévu qu'elles soient exhaustives ou 5 soient limitées à la forme précise divulguée. Conformément aux premier à sixième modes de réalisation, le procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique comprend les étapes suivantes : Etape 1. Sélection de 540 jeunes carpes de roseau en tant 10 que sujets pour le modèle d'entérite des poissons, le poids de chaque carpe de roseau étant situé dans la plage allant de 230 g à 730 g, et division au hasard de toutes les carpes de roseau en six groupes principaux, contenant chacun trois sous-groupes, chaque sous-groupe contenant 30 carpes de roseau. 15 Etape 2. Mélange d'acide érucique avec de l'aliment pour poissons comprenant de la farine de poissons, du concentré de protéine de soja, de la poudre de protéine de riz, de l'amidon de maïs et de l'a-amidon pour préparer des aliments pour poissons expérimentaux contenant 0 g/kg, 4,0 g/kg, 8,0 g/kg, 20 12,0 g/kg, 16,0 g/kg et 66,0 g/kg d'acide érucique. Ensuite, l'aliment pour poissons expérimental est granulé puis stocké à 4°C au réfrigérateur. Etape 3. Elevage des carpes de roseau sélectionnées dans des réservoirs, le volume de chaque réservoir étant d'un mètre 25 cube, et alimentation des carpes de roseau avec une certaine quantité de l'aliment pour poissons expérimental par jour pendant 60 jours pour établir le modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique, la quantité de l'aliment pour poissons expérimental représentant 3 % en poids des carpes de 30 roseau. 4.1. La performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, et la qualité de la chair des carpes de roseau de chacun des modes de réalisation sont examinés, et les résultats sont présentés dans le Tableau 1 qui suit. 35 3050615 7 Tableau 1 1er 2ème 3ème 4ème 5ème 6ème mode de mode de mode de mode de mode de mode de réalisation réalisation réalisation réalisation réalisation réalisation Teneur en acide 0 4,0 8,0 12,0 16,0 66,0 érucique (mg/kg) FE (%) 71 ± la 70 ± 0,1a 70 ± Oa 65 ± 0,1b 60 ± 0,1c 54 ± 0,1d PWG (%) 213,82 ± 209,42 ± 208,01 ± 181,50 ± 160,48 ± 142,76 ± 2,63a 2,50a 3,25a 4,17b 3,94c 1,88d ISI 1,97 ± 0,09a 1,97 ± 0,08a 1,96 ± 1,86 ± 1,84 ± 1,85 ± 0,16c 0,08ab 0,07bc 0,17c ILI 194,10± 191,65± 190,16± 179,76± 174,72± 171,29± 6,77a 6,61a 5,43a 9,81 b 10,06bc 8,24c Force de 1,215 ± 1,201 ± 1,176 ± 1,383 ± 1,403 ± 1,535 ± cisaillement (N) 0,10c 0,08c 0,12c 0,13b 0,08b 0,06a PH 7,05 ± 0,12a 6,99 ± 0,26a 6,85 ± 0,07a 6,60 ± 0,04b 6,50 ± 6,51 ± 0,07b 0,18b Dans le Tableau 1, FE se réfère à l'efficacité alimentaire et indique l'efficacité d'utilisation de l'aliment pour 5 poissons expérimental. PWG se réfère au pourcentage de gain de poids et indique le taux de croissance des carpes de roseau. ISI se réfère au rapport en poids de l'intestin sur le corps, et ILI se réfère à l'indice de longueur intestinale ; les ISI et ILI indiquent tous deux la performance de croissance des 10 intestins. La force de cisaillement et la valeur de pH indiquent la qualité de la chair. Les exposants "a", "b", "c", "d" et "e" expriment la signification dans des différences intergroupe par adoption du procédé d'annotation basé sur des comparaisons multiples, qui est un procédé courant utilisé par 15 les personnes ayant une connaissance ordinaire de la technique pour indiquer une signification dans des différences intergroupe. Conformément au Tableau 1, quand la teneur en acide érucique est supérieure à 12 g/kg, la performance de 20 croissance, la croissance et le développement intestinaux, et la qualité de la chair des carpes de roseau s'avèrent diminuer sévèrement, tandis que lorsque la teneur en acide érucique est 3050615 8 inférieure ou égale à 12 g/kg, la performance de croissance, la croissance et le développement intestinaux, et la qualité de la chair des carpes de roseau s'avèrent diminuer légèrement. 4.2. L'immunité et le potentiel antibactérien des voies 5 intestinales, de la rate, et du pronéphros de modèles d'entérite des poissons induite par l'acide érucique, établis conformément aux six modes de réalisation, sont examinés par injection intrapéritonéale d'Aeromonas hydrophila aux modèles d'entérite des poissons. Les résultats sont présentés dans le 10 Tableau 2 qui suit. Tableau 2 1er 2ème 3ème 4ème 5ème 6ème mode de mode de mode de mode de mode de mode de réalisation réalisation réalisation réalisation réalisation réalisation Morbidité (%) Teneur en acide érucique (g/kg) 0 4,0 8,0 12,0 16,0 66,0 Rougeur et gonflement des 13,33 ± 14,67 ± 17;33 ± 22,67 ± 24,00 ± 25,33 ± voies intestinales 2,31a 2,31a 2,31 ab 2,31bc 4,00c 4,62c Rougeur et gonflement de la 13,33 ± 14,67 ± 18,67 ± 21,33 ± 22,67 ± 28,00 ± rate 2,31a 2,31ab 2,31bc 2,310c 2,31c 4,00d Rougeur et gonflement du 14,67 ± 17,33 ± 21,33 ± 25,33 ± 28,00 ± 30,67 ± pronéphros 2,31a 2,31ab 2,31bc 4,62cd 4,00d 2,31d Dans le Tableau 2, les exposants "a", "b", "c", "d" et "e" 15 expriment la signification dans des différences intergroupe par adoption du procédé d'annotation basé sur des comparaisons multiples. Conformément au Tableau 2, quand la teneur en acide érucique est supérieure à 12 g/kg, l'immunité et le potentiel 20 antibactérien des voies intestinales, de la rate et du pronéphros des carpes de roseau diminuent significativement. L'apparition d'une rougeur et d'un gonflement des voies intestinales, de la rate et du pronéphros augmentent significativement. Quand la teneur en acide érucique est 25 inférieure ou égale à 12 g/kg, l'immunité et le potentiel antibactérien des voies intestinales, de la rate et du pronéphros des carpes de roseau diminuent légèrement. 4.3. Le changement morphologique de l'épithélium 3050615 9 intestinal du modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique conformément aux six modes de réalisation est observé sur des sections tissulaires de l'épithélium intestinal. Sur la Figure 1, quand la teneur en acide érucique 5 est de 0 g/kg, la structure de l'épithélium intestinal est intacte, et la morphologie de l'épithélium intestinal est normale. Sur les Figures 2 et 3, quand la teneur en acide érucique est supérieure à 0 g/kg mais inférieure à 12 g/kg, la formation de vacuoles apparaît très légèrement dans 10 l'épithélium intestinal. Sur la Figure 2, l'épithélium s'est détaché du haut des plis intestinaux, tandis que la structure latérale de l'épithélium intestinale est intacte. Sur la Figure 3, l'épithélium s'est détaché du haut et des côtés des plis intestinaux, mais la forme des plis intestinaux reste inchangée 15 ; la manifestation pathologique est par conséquent trop légère. Sur la Figure 4, quand la teneur en acide érucique est de 12 g/kg, une augmentation de la formation de vacuoles dans l'épithélium intestinal, un détachement évident de cellules en haut et sur les côtés des plis intestinaux, et un aplatissement 20 du haut des plis intestinaux sont observés ; la manifestation pathologique est par conséquent la plus appropriée. Sur les Figures 5 et 6, quand la teneur en acide érucique est supérieure à 12 g/kg, la formation de vacuoles cellulaires dans l'épithélium intestinal, le détachement de cellules en haut des 25 plis intestinaux, et un endommagement structurel et fonctionnel de l'épithélium intestinal deviennent sévères ; ainsi, la manifestation pathologique de ce modèle d'entérite des poissons est si sévère qu'une inhibition de la croissance, une augmentation significative de la morbidité, et même la mort des 30 poissons d'élevage sont observées. En résumé, le procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par 12 g/kg d'acide érucique conformément aux modes de réalisation de la présente invention engendre un impact minimal sur la performance de croissance, la croissance 35 et le développement intestinaux, l'immunité et la qualité de la chair des poissons d'élevage, et génère la manifestation pathologique la plus appropriée de l'entérite des poissons. De plus, le modèle d'entérite des poissons induite par l'acide 3050615 10 érucique est stable et fiable, et présente une bonne reproductibilité. De plus, les poissons d'élevage comprennent, mais sans s'y limiter, les carpes de roseau. Bien que l'invention ait été décrite en termes de ce que 5 l'on considère actuellement comme étant les modes de réalisation les plus pratiques et préférés, il convient de comprendre que l'invention n'a pas besoin d'être limitée au mode de réalisation divulgué. Au contraire, elle est destinée à couvrir diverses modifications et des agencements similaires 10 inclus à l'intérieur de l'esprit et de la portée des revendications annexées auxquelles doit être accordée l'interprétation la plus large de façon à englober toutes ces modifications et des structures similaires. REVENDICATIONS1. Procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique, comprenant : la sélection de poissons d'élevage en bonne santé en tant que sujets pour le modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique ; et l'alimentation des poissons d'élevage avec un aliment pour poissons expérimental comprenant 12 g/kg d'acide érucique afin d'établir le modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique. 2. Procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique, comprenant : la sélection de poissons d'élevage jeunes en tant que sujets pour le modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique, le poids des poissons d'élevage étant situé dans la plage allant de 230 à 730 g ; le mélange d'acide érucique avec de l'aliment pour poissons afin de préparer un aliment pour poissons expérimental comprenant 12 g/kg d'acide érucique, l'aliment pour poissons comprenant de la farine de poissons, du concentré de protéine de soja, de la poudre de protéine de riz, de l'amidon de maïs et de l'a-amidon ; l'alimentation des poissons d'élevage avec une certaine quantité d'aliment pour poissons expérimental pendant 60 jours afin d'établir le modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique, la quantité de l'aliment pour poissons expérimental par jour représentant 3 % en poids du poids des poissons d'élevage. 3. Procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique selon la revendication 2, dans lequel l'aliment pour poissons expérimental est granulé et ensuite stocké à 4°C. 4. Procédé pour établir un modèle d'entérite des poissons induite par l'acide érucique selon la revendication 2, 3050615 12 dans lequel les poissons d'élevage comprennent des carpes de roseau.