Brevet FR3059330A1 — publié le 20180601

NOUVEAU PROCEDE DE DEPOLYMERISATION DU CHITOSAN La présente invention concerne un nouveau procédé de dépolymérisation du chitosan pour préparer un oligochitosan et l'oligochitosan obtenu par ce procédé. Le chitosan est un polysaccharide issu de la déacétylation de la chitine. En effet, lorsque le degré de déacétylation de la chitine, correspondant à la quantité relative de groupements acétyles retirés à la chitine lors de la préparation du chitosan, devient supérieur à 50 %, on parle alors de chitosan. La chitine est l'un des plus abondants polysaccharides naturels, présents notamment dans l'exosquelette des crustacés, dans l'endosquelette des céphalopodes ou bien encore dans les champignons. La masse moléculaire de la chitine peut atteindre des centaines voire des millions de kilodaltons (kDa). Le chitosan est donc un polymère biosourcé constitué d'unités glucosamines et d'unités N-acétylglucosamines liées par des liaisons glycosidiques P-1,4, présentant généralement une masse molaire élevée mais une faible solubilité dans les solvants aqueux, notamment pour des solutions aqueuses ayant un pH supérieur à 6, limitant ainsi ses applications possibles. Il est cependant soluble en solution acide mais on se retrouve alors avec des solutions acides très visqueuses qui ne sont pas utilisables en l'état. Afin d'augmenter sa solubilité, notamment en phase aqueuse, on procède classiquement à la dépolymérisation du chitosan afin d'obtenir des oligomères du chitosan ayant des masses molaires plus faibles et présentant une bonne solubilité dans l'eau. A cet effet, différentes méthodes de dépolymérisation peuvent être utilisées pour préparer des oligochitosans. Ainsi, il est connu de procéder à la dépolymérisation par hydrolyse acide en utilisant des acides forts (typiquement acides sulfuriques, chlorhydrique ou bien encore phosphorique). Cependant ces procédés sont peu respectueux de l'environnement, souvent très longs en terme de durée de réaction et peuvent conduire à la dépolymérisation totale du chitosan sous forme de glucosamine, ce qui n'est pas souhaitable. Il est également possible de mettre en oeuvre une hydrolyse enzymatique. Cependant, même si l'utilisation des enzymes permet d'obtenir efficacement des 3059330 2 oligochitosans en étant respectueux de l'environnement, leur coût élevé ne permet pas une utilisation à échelle industrielle. Par ailleurs, une autre méthode connue consiste à dépolymériser le chitosan via une méthode d'oxydation en utilisant au moins un composé oxydant. Cette 5 méthode de dépolymérisation est respectueuse de l'environnement mais ne permet pas toujours d'obtenir des oligochitosans de masse molaire relativement faible, notamment à partir de chitosans de très haute masse molaire. On peut citer notamment l'utilisation d'ozone, ou d'acide ascorbique avec un co-réactif métallique, de persulfate de potassium ou bien encore de peroxyde d'hydrogène 10 à titre d'oxydant connu pour dépolymériser le chitosan. Des méthodes de dépolymérisation par irradiation micro-ondes ou ultrasons ainsi que par voie thermique ont également été envisagées. Celles-ci sont de préférence couplées à une autre méthode de dépolymérisation citée ci-dessus, en particulier avec la méthode d'oxydation. 15 Le but de l'invention est de proposer un nouveau procédé de dépolymérisation du chitosan et de préparer ainsi des oligochitosans de masses molaires réduites et qui présentent en particulier une solubilité améliorée en phase aqueuse. 20 Ce procédé constitue une alternative aux procédés connus de dépolymérisation du chitosan, et qui, de manière avantageuse, peut permettre de remédier aux inconvénients mentionnés ci-dessus. Plus préférentiellement, l'un des buts de la présente invention consiste à fournir un procédé permettant une dépolymérisation du chitosan en une seule 25 étape, plus efficace et plus rapide tout en s'affranchissant de la nature du chitosan à dépolymériser, par rapport aux procédés de préparation de l'état de la technique mettant en oeuvre un oxydant. Un autre but de l'invention consiste préférentiellement à réduire la quantité d'oxydant employé lors de la dépolymérisation du chitosan par une méthode 30 oxydante, notamment par rapport à ces procédés de l'état de la technique. Notamment dans ces buts, l'un des objets de l'invention est un nouveau procédé de dépolymérisation d'au moins un chitosan, ledit procédé comprenant la mise en contact dudit chitosan avec un mélange Ox comprenant de l'acide 35 peracétique et du peroxyde d'hydrogène tel que le rapport % massique acide peracétique / % massique peroxyde d'hydrogène dans le milieu est compris entre 0,1 et 0,9 de préférence entre 0,2 et 0,8. 3059330 3 Selon l'invention, le terme chitosan s'entend ici dans son acception normale, c'est-à-dire tout polysaccharide constitué d'unités glucosamines et d'unités Nacétylglucosamines liées par des liaisons glycosidiques p-1,4 issu de la déacétylation d'une chitine et présentant typiquement une masse molaire 5 moyenne en nombre Mn supérieure à 20 000 g/mol, en particulier pouvant aller de 30 000 à 2 000 000 g/mol. Ce chitosan peut ainsi présenter un degré de polymérisation compris par exemple entre 185 et 12 400. Il peut notamment avoir une taille moyenne supérieure ou égale à 1500 unités de répétition, et par exemple un degré de déacétylation compris entre 80 et 95 % par exemple de 10 l'ordre de 90 %. Le chitosan utilisé dans le procédé selon l'invention peut typiquement présenter une masse molaire comprise entre 20 000 et 2 000 000 g/mol, en particulier entre 30 000 et 1 000 000 g/mol, un degré de déacétylation de l'ordre de 90 %. 15 Par exemple, le chitosan employé peut se présenter sous forme solide, typiquement sous la forme d'une poudre. Le chitosan peut par exemple être préparé dans une étape de déacétylation de la chitine préalable au procédé de dépolymérisation selon l'invention. 20 Selon l'invention, le mélange Ox est un mélange à base d'oxydants comprenant de l'acide peracétique et du peroxyde d'hydrogène tel que le rapport % massique d'acide peracétique / % massique de peroxyde d'hydrogène dans le milieu est comprise entre 0,1 et 0,9, en particulier entre 0,2 et 0,8. Le mélange Ox peut en outre comprendre au moins un autre oxydant. 25 Cependant, de préférence, le mélange Ox est constitué uniquement d'acide peracétique et de peroxyde d'hydrogène, en particulier dans un rapport % massique d'acide peracétique / % massique de peroxyde d'hydrogène dans le milieu compris entre 0,2 et 0,8, notamment entre 0,4 et 0,7. 30 Selon l'invention, la quantité de mélange Ox employé est en général telle que le rapport % massique de mélange Ox / % massique de chitosan introduit est compris entre 0,2 et 20, en particulier entre 0,5 et 15. Le mélange Ox peut être employé dans un mélange M. Généralement, le 35 mélange M comprend en plus du mélange Ox, un coproduit tel que par exemple un acide faible, notamment de l'acide méthanoïque ou bien de l'acide acétique. Préférentiellement, le mélange M comprend de l'acide acétique. 3059330 4 De préférence, le mélange M se présente sous la forme d'une solution aqueuse. Selon l'invention, la quantité de mélange M utilisé est telle que le rapport quantité de mélange M / quantité de chitosan introduit est compris entre 60 et 5 1100 % en poids, en particulier entre 100 et 500 % en poids. Dans un mode de réalisation préféré, le chitosan est mis en contact avec une solution aqueuse de mélange M comprenant le mélange Ox à base d'acide peracétique et de peroxyde d'hydrogène. Selon une caractéristique particulière de ce mode de réalisation, la quantité 10 de chitosan lors de la mise en contact est inférieure à 4 % en poids. De préférence, cette concentration est comprise entre 1 et 2 % en poids . Dans ce cas, le mélange M est présent en quantité comprise entre 2 et 25 % en poids, en particulier entre 3 et 22 % en poids, de préférence entre 4 et 8 % en poids. En particulier, la quantité de mélange Ox est comprise entre 1 et 25 % en 15 poids, en particulier entre 2 et 22 % en poids, de préférence entre 2 et 5 % en poids. Dans une variante préférée de ce mode de réalisation, le mélange M est une solution aqueuse comprenant de l'acide acétique, de l'acide peracétique et du peroxide d'hydrogène. 20 De manière préférée, le mélange M utilisé dans l'invention comprend alors 0,5 à 3 % en poids d'acide peracétique, 1 à 6 % en poids de peroxyde d'hydrogène et 1 à 2,5 % en poids d'acide acétique. On peut notamment utiliser, à titre de mélange M un mélange contenant 13,5 à 15,5 % d'acide peracétique, 21 à 24 % de peroxyde d'hydrogène et 15 à 25 17 % d'acide acétique ou encore un mélange contenant 4,5 à 5,4 % d'acide peracétique, 21 à 23 % de peroxyde d'hydrogène et 8 à 10 % d'acide acétique. On peut par exemple utiliser à titre de mélange M les produits commerciaux de la gamme Proxitane®, en particulier le Proxitane® 15:23 qui contient 13,5 à 15,5 % d'acide peracétique, 21 à 24 % de peroxyde d'hydrogène et 15 à 17 % d'acide 30 acétique ou le Proxitane® 5:23 qui contient 4,5 à 5,4 % d'acide peracétique, 21 à 23 % de peroxyde d'hydrogène et 8 à 10 % d'acide acétique. De manière préférée, la mise en contact du chitosan et du mélange Ox est réalisée à un pH (pH du milieu réactionnel) compris entre 4 et 6. 35 La température à laquelle est réalisée cette étape de mise en contact peut être comprise entre 20 et 80 °C. 3059330 5 Cette mise en contact peut alors par exemple être mise en oeuvre sur une durée comprise allant de 20 minutes à 11 jours, en fonction de la température mise en oeuvre. 5 Dans une variante préférée de l'invention, on réalise la mise en contact du chitosan et du mélange Ox à une température comprise entre 50 et 80 °C, température qui est maintenue jusqu'à la fin de la dépolymérisation. Lorsque la mise en contact du chitosan et du mélange Ox est effectuée à un température comprise entre 50 et 80 °C, la dépolymérisation se fait plus 10 rapidement, entre 20 et 90 minutes. Ainsi, la dépolymérisation du chitosan par une méthode d'oxydation est associée à une dégradation par voie thermique permettant une réaction de dépolymérisation plus rapide. Avantageusement, la quantité de mélange Ox introduite est alors telle que le rapport % massique de mélange Ox / % massique de chitosan introduit est 15 abaissé et est préférentiellement compris entre 3 et 4. Le procédé selon l'invention peut également être mis en oeuvre sous irradiation micro-ondes. La dépolymérisation selon l'invention peut par exemple être réalisée sous une puissance constante, comprise notamment entre 100 et 20 1500 Watt (W), en fonction du volume de solution à dépolymériser, notamment variant de 20 à 2000 m I. Dans ce cas, la température à laquelle est réalisée l'étape de dépolymérisation du chitosan augmente généralement sous l'activation des micro-ondes et ce par exemple jusqu'à une température de 100 °C. 25 La durée de cette dépolymérisation est alors fortement diminuée, typiquement elle peut être comprise entre 200 et 500 secondes. Le procédé de dépolymérisation du chitosan selon l'invention permet de préparer un oligochitosan. 30 En effet, on obtient à l'issue de l'étape de mise en contact du mélange Ox et du chitosan qui vient d'être décrite, un oligochitosan. De préférence, l'oligochitosan obtenu se présente sous la forme d'une solution aqueuse de concentration en oligochitosan comprise entre 5 et 25 % en poids, en particulier entre 10 et 20 % en poids. 35 De manière avantageuse, l'oligochitosan obtenu par le procédé de dépolymérisation selon l'invention présente une masse molaire moyenne en nombre inférieure à 2 000 g/mol, en particulier inférieure à 1 500 g/mol. 3059330 6 Selon un mode de réalisation préférentiel de l'invention, on récupère l'oligochitosan obtenu à l'issue de la réaction de dépolymérisation du chitosan. La récupération de l'oligochitosan est réalisée par tout moyen connu en soi. 5 Selon une variante de ce mode de réalisation, l'oligochitosan peut être récupéré par lyophilisation. Selon une variante préférée de l'invention, l'oligochitosan est récupéré par précipitation, notamment par précipitation à partir de la solution aqueuse contenant l'oligochitosan obtenu à l'issue du procédé de dépolymérisation selon 10 l'invention. En général, une fois la précipitation effectuée, l'oligochitosan se présente alors sous forme d'une pâte gélifiée soluble dans l'eau à tout pH et à température ambiante. L'oligochitosan est alors séparé. Cette séparation peut comprendre une filtration, suivie d'un lavage si 15 nécessaire. La filtration s'effectue selon toute méthode convenable, par exemple au moyen d'un filtre presse, d'un filtre à bande, d'un filtre sous vide. La mise en oeuvre du procédé de dépolymérisation selon l'invention en utilisant un mélange Ox spécfique d'acide peracétique et de peroxyde 20 d'hydrogène permet notamment d'obtenir en une seule étape et plus rapidement, des oligochitosans présentant une masse molaire et un degré de polymérisation plus faibles que celle d'oligochitosans obtenus par des procédés ne mettant pas en oeuvre ce mélange particulier, tout en s'affranchissant de la nature du chitosan à dépolymériser, et notamment de sa masse molaire, et sans obtenir de 25 glucosamide. De manière générale, les oligochitosans obtenus par le procédé selon l'invention présentent préférentiellement des propriétés, caractéristiques des polysaccharides, améliorées. De manière avantageuse, le procédé selon l'invention permet de diminuer la quantité d'oxydants nécessaire à la dépolymérisation d'un chitosan tout en 30 maintenant une bonne efficacité oxydative et obtenant des oligochitosans sans altérer leurs propriétés. La mise en oeuvre du procédé selon l'invention permet d'obtenir un oligochitosan possédant des caractéristiques particulières, et notamment une 35 masse molaire en nombre relativement faible. Ainsi, l'oligochitosan préparé par le procédé selon l'invention possède de préférence une masse molaire moyenne en nombre Mn inférieure à 2 000 g/mol, 3059330 7 en particulier comprise entre 600 et 1 500 g/mol, notamment entre 800 et 900 g/mol. Cette masse molaire moyenne en nombre Mn correspond à la masse molaire de l'oligosaccharide. De même, l'oligochitosan préparé par le procédé selon l'invention a de 5 préférence une masse molaire moyenne en poids M, comprise entre 800 et 2 000 g/mol L'oligochitosan obtenu par le procédé selon l'invention présente de manière avantageuse un degré de polymérisation moyen en nombre inférieur à 12, de 10 préférence inférieur à 10, en particulier inférieur à 8, par exemple compris entre 4 et 6. En général, les oligochitosans préparés par le procédé selon l'invention possèdent une faible polymolécularité ou polydispersité, c'est-à-dire que la 15 population des oligochitosans obtenus par la dépolymérisation du chitosan selon le procédé est relativement homogène. La polydispersité peut être déterminée par l'indice de polymolécularité I qui dépend de la largeur de la courbe de distribution. L'indice de polymolécularité I correspond au rapport de la masse molaire moyenne en poids M, sur la masse molaire moyenne en nombre Mn. Cet indice I 20 donne une indication de l'étendue de la distribution des masses molaires des différents oligochitosans. Pour des oligochitosans présentant tous la même longueur et donc la même masse molaire, cet indice I serait égal à 1. De préférence, les oligochitosans préparés par le procédé selon l'invention ont un indice de polymolécularité I compris entre 1,2 et 2, de préférence de l'ordre 25 de 1,6. L'oligochitosan obtenu par le procédé de dépolymérisation selon l'invention présente de manière avantageuse la même structure chimique que le chitosan natif mis en oeuvre dans le procédé selon invention. En effet, le procédé de 30 dépolymérisation selon l'invention n'a pas d'influence significative sur la structure chimique du chitosan et donc permet d'obtenir un oligochitosan de même structure. De même, l'oligochitosan préparé par le procédé selon l'invention présente préférentiellement le même degré de déacétylation que le chitosan natif mis en 35 oeuvre au cours de la dépolymérisation selon l'invention. En effet, le procédé selon l'invention n'a pas d'influence significative sur le degré de déacétylation du chitosan et donc sur celui de l'oligochitosan obtenu. 3059330 8 Ces caractéristiques particulières peuvent notamment être confirmées par infra-rouge ou par spectroscopie RMN 1H en comparant les spectres obtenus. Les masses molaires moyennes en nombre et en poids Mn et Mw, le degré 5 de polymérisation ainsi que l'indice de polymolécularité du chitosan et de l'oligochitosan peuvent généralement être déterminées par chromatographie d'exclusion stérique. La chromatographie d'exclusion stérique (CES) peut être réalisée de la manière suivante : cette chromatographie d'exclusion stérique produite par un 10 système Agilent PL-GPC 50 plus est réalisée sur des deux colonnes analytiques PL-aquagel-OH (avec une gamme de séparation entre 2M à 400 g/mol) couplées avec un détecteur à indice de réfraction. Les échantillons de chitosans et d'oligochitosans sont solubilisés dans un mélange tampon (30 ml d'acide acétique, 16,5 ml d'cacétate de sodium, 15 0,2 gramme d'azoture de sodium, 1 gramme de bromure de lithium pour 1 litre d'eau) à une concentration de 5 mg/ml, puis filtrés à travers des pores de 0,20 pm de diamètre avant injection. Les analyses se font à 25°C avec un débit d'éluant de 1,0 ml/min. Le mélange tampon cité ci-avant sert d'éluant. Les résultats sont exploités à l'aide du logiciel Cirrus GPC. Le calcul des masses molaires est fait à 20 partir d'une courbe d'étalonnage réalisée avec une gamme de pullulan. Les chitosans et oligochitosans peuvent être identifiés et caractérisés par spectroscopie de masse, notamment en utilisant un spectromètre de masse MALDI-TOF (désorption-ionisation laser assistée par matrice et temps de vol - 25 Matrix-assisted laser-desorption ionization time-of-flight). L'analyse par spectrométrie de masse est réalisée sur un spectromètre MALDI-TOF du type Bruker UltraFlex III qui utilise un laser d'azote avec une longueur d'ondes de 337 nm. En mode ion positif, les mesures ont été réalisées 30 avec un voltage compris entre 25 et 26.3 kV. Un mélange de peptides a été utilisé pour la calibration externe. Les échantillons de chitosans et d'oligochitosans sont solubilisés dans un mélange tampon (30 ml d'acide.acétique, 16,5 ml d'acétate de sodium, 0,2 gramme d'azoture de sodium, 1 gramme de bromure de lithium pour 1 litre d'eau) à une concentration de 5 mg/ml, puis filtrés à travers des pores de 35 0,20 pm de diamètre avant injection. La matrice utilisée est l'acide 2 ,5- hydroxybenzoïque. 3059330 9 L'oligochitosan préparé par le procédé selon l'invention peut être utilisé dans de nombreuses applications. Il peut être notamment employé dans le domaine pharmaceutique, par exemple dans des dispositifs médicaux ou bien encore dans le domaine 5 cosmétique, en particulier du fait de ses propriétés biodégradables, biorésorbables, biocompatibles et non toxiques. Cependant, il trouve des applications particulièrement intéressantes notamment lorsqu'il est fonctionnalisé 10 Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. EXEMPLES 15 EXEMPLE 1 Dépolymérisation selon l'invention d'un chitosan de masse molaire moyenne en nombre 30 000 g/mol avec micro-ondes 20 On réalise la dépolymérisation du chitosan de la manière suivante. 2 grammes de chitosan ayant une masse molaire moyenne en nombre de 30 000 g/mol sont dissous dans 100 ml d'une solution aqueuse contenant 2 % en poids d'acide acétique, 5 % en poids de peroxyde d'hydrogène et 1,2 % en poids d'acide peracétique. 25 La solution est agitée pendant 2 heures à température ambiante, puis est mis dans un four micro-ondes à 400 W pendant 350 secondes. Le mélange est ensuite analysé par chromatographie d'exclusion stérique. L'oligochitosan obtenu présente une masse molaire moyenne en nombre Mn de 1 000 g/mol, un degré de polymérisation DP, égal à 6 et un indice de 30 polymolécularité de 1,8. EXEMPLE 2 (comparatif) Dépolymérisation avec peroxyde d'hydrogène d'un chitosan de masse molaire 30 000 g/mol avec micro-ondes 35 De la même manière, 2 grammes de chitosan ayant une masse molaire moyenne en nombre de 30 000 g/mol sont dissous dans 100 ml d'une solution 3059330 10 aqueuse contenant 2 % en poids d'acide acétique et 5 % en poids de peroxyde d'hydrogène. La solution est agitée pendant 2 heures à température ambiante, puis est mis dans un four micro-ondes à 400 W pendant 350 secondes. 5 Le mélange est ensuite analysé par chromatographie d'exclusion stérique. L'oligochitosan obtenu a une masse molaire moyenne en nombre Mn égale à 11000 g/mol, un degré de polymérisation DP, de 68 et un indice de polymolécularité de 2,7. 10 La différence importante des masses molaires entre l'oligochitosan obtenu par le procédé selon l'invention (exemple 1) et l'oligochitosan de l'exemple comparatif 2 est clairement visible sur le spectre obtenu par chromatographie d'exclusion stérique présenté à la Figure 1. 15 EXEMPLE 3 Dépolymérisation selon l'invention d'un chitosan de masse molaire 250 000 g/mol par voie thermique 20 On réalise la dépolymérisation du chitosan de la manière suivante. 20 grammes de chitosan ayant une masse molaire moyenne en nombre de 250 000 g/mol sont dissous dans 11 d'une solution aqueuse contenant 4 % en poids d'acide acétique, 5 % en poids de peroxyde d'hydrogène et 3,4 % en poids d'acide peracétique. 25 La solution est agitée pendant 2 heures à température ambiante, puis chauffée à 80 °C pendant 30 minutes. Le mélange est ensuite analysé par chromatographie d'exclusion stérique. L'oligochitosan obtenu présente une masse molaire moyenne en nombre Mn de 900 g/mol, un degré de polymérisation DP, d'environ 5,5 et un indice de 30 polymolécularité de 1,5. EXEMPLE 4 (comparatif) Dépolymérisation avec peroxyde d'hydrogène d'un chitosan de masse molaire 250 000 g/mol par voie thermique 35 De la même manière, 20 grammes de chitosan ayant une masse molaire moyenne en nombre de 250 000 g/mol sont dissous dans 11 d'une solution 3059330 11 aqueuse contenant 2 % en poids d'acide acétique et 5 % en poids de peroxyde d'hydrogène. La solution est agitée pendant 2 heures à température ambiante, puis chauffée à 80 °C pendant 30 minutes. 5 Le mélange est ensuite analysé par chromatographie d'exclusion stérique. L'oligochitosan obtenu a une masse molaire moyenne en nombre Mn égale à 139 000 g/mol, un degré de polymérisation Dl', de 860 et un indice de polymolécularité de 2,9. 10 La différence importante des masses molaires entre l'oligochitosan obtenu par le procédé selon l'invention (exemple 3) et l'oligochitosan de l'exemple comparatif 4 est clairement visible sur le spectre obtenu par chromatographie d'exclusion stérique présenté à la Figure 2. 15 REVENDICATIONS1- Procédé de dépolymérisation d'au moins un chitosan, caractérisé en ce que le procédé comprend la mise en contact dudit chitosan avec un mélange Ox comprenant de l'acide peracétique et du peroxyde d'hydrogène tel que le rapport % massique acide peracétique / % massique peroxyde d'hydrogène est compris entre 0,1 et 0,9, de préférence entre 0,2 et 0,8. 2- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le mélange Ox est constitué d'acide peracétique et de peroxyde d'hydrogène. 3- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le rapport % massique 15 acide peracétique / % massique peroxyde d'hydrogène est compris entre 0,2 et 0,8, en particulier entre 0,4 et 0,7. 4- Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le rapport % massique mélange Ox / % massique chitosan est compris entre 0,2 et 20, en 20 particulier entre 0,5 et 15. 5- Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le mélange Ox est compris dans un mélange M comprenant de l'acide acétique. 25 6- Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que le mélange M comprend 0,5 à 3 % en poids d'acide peracétique, 1 à 6 % en poids de peroxyde d'hydrogène et 1 à 2,5 % en poids d'acide acétique. 7- Procédé selon l'une des revendications 1 à 6 pour préparer un oligochitosan, 30 caractérisé en ce que l'on récupère l'oligochitosan obtenu à l'issu de l'étape de mise en contact. 8- Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'oligochitosan présente une masse molaire moyenne en nombre inférieure à 2000 g/mol, en 35 particulier comprise entre 600 et 1500 g/mol. 3059330 13 9- Procédé selon l'une des revendications 7 et 8, caractérisé en ce que l'oligochitosan présente un degré de polymérisation moyen en nombre inférieur à 12, de préférence inférieur à 10. 5 10- Procédé selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisé en ce que l'oligochitosan présente un indice de polymolécularité compris en 1,2 et 2. 10