Brevet FR3061013A1 — publié le 20180629

La présente invention concerne l'utilisation par voie topique ou orale du digénéaside pour entretenir, la peau, le poil ou le cheveux chez l'homme ou l'animal, contre le vieillissement naturel ou induit. Cette fonction comprend l'effet anti-âge, l'effet dépigmentant et l'effet lipolytique conduisant à un entretien ou à une amélioration générale de l'état de la peau ou du système pileux. La présente invention concerne également la préparation du digénéaside. Les vieillissements naturel et induit se manifestent par diverses formes au niveau de la peau et du système pileux, comme par exemple l'apparition de rides, un amincissement de la peau, une perte d'hydratation de la peau, une perte d'élasticité de la peau, une perturbation du système circulatoire cutane, une diminution du système immunitaire, l'apparition de tissus adipeux sous cutanés ou encore l'apparition de taches pigmentaires brunes inesthétiques. Ces manifestations sont en relation avec les facteurs endogènes (vieillissement naturel) ou exogènes caractérisant le vieillissement induit (exposition solaire, stress oxydatifs, pollution, tabac, alcool, agressions microbiologiques, fongiques, dermatoses...). Les effets anti-âge du digénéaside sont particulièrement intéressants pour prévenir ou soigner les problématiques externes, comme les rides, les rougeurs, les taches pigmentaires, les capitons et autres imperfections résultant d'un vieillissement naturel ou induit par les agressions externes comme la pollution, le stress, la fumée de cigarette..., les peaux jeunes à titre préventif contre le vieillissement naturel ou prématuré ainsi que les peaux âgées. Un effet stimulant sur le système immunitaire de la peau viendra renforcer les défenses contre les agressions externes. La société déposante a découvert selon l'invention que le digénéaside permettait de constater les points suivants: (a) Sur mélanocytes 316 : effet inhibiteur significatif 35 de la synthèse de mélanine à toutes les concentrations testées). 3061013 2 (b) Effet inhibiteur de la production d'IL8 et de VEGF dans un modèle de stress osmotique dans des kératinocytes humains normaux (KHN). (c) Effet protecteur des réseaux lysosomaux et 5 mitochondriaux dans des KHN et fibroblastes humains normaux (FHN) irradiés avec des UVA (histochimie). Une stimulation de l'autophagie est observée dans les FHN (sonde spécifique, marqueur de l'autophagie) à 10pg/ml, 30pg/m1 et 100 pg/ml (+20% à 30 pg/ml, effet statistiquement significatif). Le traitement des 10 FHN en présence du composé à ces trois concentrations induit une stimulation de la concentration en ATP cellulaire (+46 % à 30 pg/ml, effet statistiquement significatif). Les résultats biochimiques sont corrélés à l'analyse histologique tant sur le réseau lysosomal que mitochondrial. 15 (d) Effet inhibiteur de la synthèse des triglycérides dans des adipocytes humains normaux à J4, de manière modérée mais statistiquement significative à 10pg/ml, 30 pg/ml et 100 pg/ml (inhibition de 16 %, 17 % et 24 % respectivement). 20 Ainsi, la société déposante a découvert que, le digénéaside présente un intérêt pour lutter contre les réactions cictanées liées à la peau sèche et/ou réactive, associées aux rc,ugeurs cutanées et à la stimulation excessive de la microcirculation (érythrose, couperose, dilatations excessives de vaisseaux). 25 Ce composé, en activant l'autophagie des cellules de la peau est destiné à lutter contre le vieillissement cutané et à détoxifier la peau en éliminant les cellules endommagées avec l'âge et la surexposition au soleil. L'autophagie permet en effet de réguler, réparer et éliminer les protéines de longue durée de vie dans les 30 cellules et constitue un mécanisme de recyclage et de détoxification. La présente invention vise précisément à offrir de nouvelles compositions cosmétiques, dermocosmétiques, vétérinaires ou nutraceutiques capables de prévenir ou réparer 35 les effets cités plus haut induits par le vieillissement naturel 3061013 3 ou induit. Ces compositions peuvent être administrées par voie orale ou topique. L'invention a pour objet une composition cosmétique, dermocosmétique, nutraceutique ou vétérinaire utilisable pour 5 préserver ou restaurer diverses manifestations cutanées liées à l'âge, caractérisée en ce qu'elle contient, dans un véhicule acceptable, une quantité efficace de digénéaside ou alpha-Dmannopyranosyl-(l->2)-D-glycérate répondant à la formule (I): 10 alpha-D-mannopyranosyl-(1,2)-D-glycérate (I) formule I formule dans laquelle ledit composé de formule (I) peut être sous forme de sels. Parmi les bases acceptables, on peut citer, à titre non limitatif, l'hydroxyde de sodium ou de potassium, la 15 triéthylamine et la tert-butylamine. Les composés de formule (I) possède plusieurs centre(s) asymétrique(s) et peuvent être isolés sous une forme optiquement pure ou sous forme de leur mélange racémique. Les méthodes permettant d'obtenir des formes optiquement actives, par exemple 20 par résolution d'une forme racémique ou par synthèse utilisant des produits de départ optiquement purs, sont bien connues de l'homme de l'art. Selon un aspect de l'invention, la composition comporte au 25 moins un agent actif autre que ceux de formule (I) pour exercer au moins une action complémentaire ou synergique. Selon un autre aspect de l'invention, les compositions ci-dessus comprennent, à titre de principe actif, au moins un extrait d'algue contenant un composé de formule (I). Préférentiellement, 30 l'extrait d'algue provient d'une algue rouge et plus précisément, de 3061013 4 l'ordre des Ceramiales, des Gelidiales ou des Gigartinales. Citons à titre d'exemple non limitatif les extraits de Solieria chordalis, Kappaphycus alvarezii, Polysiphonia lanosa, Delesseria sanguinea, Pikea robusta, Gigartina stellata, Chondrus crispus, Ceramium botryocarpum, 5 Acrochaetium moniliforme, Asparagopsis armata, Palmaria palmata, Hypnea muciformis, Grateloupia sp., Caloglossa leprieurii, Osmundea pinnatifida, Porphyridium sp., Porphyra sp., Eucheuma denticulatum, Mastocarpus stellatus, Gelidium sesguipedale ou encore de Gelidium cartilagineum. - 10 On entend par « extrait d'algue », un extrait ou un mélange d'extraits d'algues. Il s'agit plus spécialement d'un extrait ou d'un mélange d'extraits de cellules de ces algues. Ce matériel cellulaire peut être obtenu par culture in vitro ou in vivo. Par culture in vitro, on entend l'ensemble des techniques 15 connues de l'homme du métier qui permettent de manière artificielle l'obtention d'un végétal ou d'une partie d'un végétal. Ainsi, l'extrait peut être un extrait ou un mélange d'extraits d'organe, voire de cellules d'organe, d'au moins une algue, ou encore un extrait de cellules indifférenciées d'au 20 moins une telle algue. Un extrait selon l'invention peut être obtenu par toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'ho,nme du métier. On peut en particulier citer les procédés d'extraction solide-liquide en milieux alcooliques (notamment éthanoliques), 25 aqueux, ainsi qu'en milieux utilisant des solvants tels que les cétones, les esters, les éthers, les polyols, les solvants chlorés et les mélanges d'au moins deux des solvants précités, comme les milieux hydroalcooliques, neutres, acides ou basiques. Avantageusement, un extrait est obtenu par extraction 30 d'une algue précitée en milieu hydroalcoolique, notamment une solution aqueuse d'éthanol. Selon cette variante, la concentration de l'éthanol varie de préférence de 0 à environ 40% (v/v), mieux encore elle est d'environ 30% (v/v). Les méthodes alternatives aux solvants peuvent aussi 35 être envisagées comme le CO2 supercritique, les micro-ondes, l'eau subcritique... 3061013 5 Ces modes de préparation font partie intégrante de l'invention. Ces extraits peuvent être utilisés tels quels sous forme liquide ou en poudre, non purifiés ou purifiés. 5 Si l'extrait est en poudre, son séchage peut être conduit par toute technique bien connue de l'homme du métier. L'extrait peut être séché par atomisation, évaporation ou lyophilisation. La poudre ainsi obtenue peut être encapsulée dans des liposomes ou autres vecteurs et supports pour une meilleure 10 homogénéité de la composition et une meilleure diffusion du principe actif notamment sur la peau. Les applications selon l'invention s'étendent au traitement des phanères. Par phanères selon l'invention, on inclut notamment les ongles et le système pileux, en particulier 15 les cheveux. On parlera de peau en général pour désigner peau et phanères. Ainsi, la présente invention a pour objet une utilisation cosmétique, nutraceutique ou vétérinaire d'un composé de formule (I) pour protéger la peau et les phanères du 20 vieillissement naturel ou induit par des agents extérieurs physiques, chimiques ou biologiques et/ou pour améliorer et/ou renforcer l'état de la peau et des phanères. Elle a aussi pour objet un procédé de traitement nutraceutique de lutte contre le vieillissement d'une peau ou de 25 traitement cosmétique d'une peau « jeune ou âgée », ledit procédé comprenant une étape selon laquelle on applique au moins un composé de formule (I) par voie orale. L'invention porte aussi sur un procédé de traitement cosmétique anti-âge de la peau ou de traitement cosmétique d'une 30 peau âgée, comprenant une étape selon laquelle on applique au moins un composé de formule (I), synthétique ou extrait d'une algue sur la peau. Ce traitement permet de retarder les phénomènes de vieillissement de la peau, mais aussi de réparer une peau âgée. 3061013 6 Dans toute application cosmétique de l'invention, un composé de formule (I) peut être associé à un autre ou d'autres agents agissant en complémentarité ou en synergie comme les agents pro-différenciants de la peau (tel que calcium, vitamine D 5 et leurs dérivés...). Selon un autre aspect de l'invention, la composition selon l'invention se présente sous forme de gélules, crème, gel, lotion, lait, solution, onguent, huile corporelle, shampoing, savon, bâton protecteur des lèvres, crayon pour maquillage, 10 émulsion bi-phasique, huile dans eau ou eau dans huile, émulsion tri-phasique, huile corporelle, shampoing, masque, pommade, bâton, nanocapsules, liposomes ou patch transdermique pour applications topiques. Sous la forme de gel, la composition peut comprendre des 15 excipients appropriés, tels que les esters de cellulose, ou d'autres agents gélifiants, tels que le polymère carboxylique « Carbopor » et la gomme de guar, par exemple. Sous la forme d'émulsions, les compositions selon l'invention jouissent d'une bonne stabilité et peuvent être 20 conservées pendant le temps nécessaire pour l'utilisation à des températures comprises entre 0 et 50 °C, sans qu'il y ait sédimentation des constituants ou séparation des phases. Selon un autre aspect de l'invention, dans la composition, le digénéaside est mis en place dans des moyens d'encapsulation 25 choisis dans le groupe formé par des microsphères, des liposomes, des glycosphères, des chylomicrons, des macro- micro-, et nanoparticules, des macro-, micro- et nanocapsules. Selon un autre aspect de l'invention, dans la composition, le digénéaside est absorbé ou adsorbé sur des polymères 30 organiques poudreux, des talcs, de la bentonite ou d'autres supports minéraux en poudre. Selon un autre aspect de l'invention, dans la composition, l'agent actif de formule (I) constitue de 0,001% à 5% en poids par rapport au poids total de la composition. 3061013 7 Selon un autre aspect de l'invention, dans la composition, l'agent actif de formule (I) est sous forme encapsulée et constitue, de préférence de 0,001% à 5% en poids par rapport au poids total de la composition. 5 L'invention a aussi pour objet l'utilisation d'une composition selon l'invention pour prévenir les peaux saines des effets du temps et de l'environnement ou restaurer les peaux ayant subi l'effet d'un vieillissement naturel ou induit. L'invention a donc mis en évidence la possibilité 10 d'utiliser le composé de formule (I) comme agent actif. Ce composé présente de très bonnes propriétés anti-âges d'une manière générale. Ainsi, la présente invention a pour objet une utilisation cosmétique, dermocosmétique, nutraceutique ou 15 vétérinaire du digénéaside de formule (I) pour prévenir les peaux saines des effets du temps et de l'environnement ou restaurer les peaux ayant subi l'effet d'un vieillissement naturel ou induit. Le composé de formule (I) peut, dans les compositions 20 selon l'invention, être associé avec d'autres composés venant compléter l'effet voire engendrer une synergie de cet effet. L'activité protectrice des composés de formule (I) vis-à-vis des radicaux libres et des UV est intéressante dans le domaine capillaire, notamment dans le cas d'association avec des 25 substances facilitant le bon état du cuir chevelu et du cheveu. On peut citer les associations avec des mucopolysaccharides, des minéraux, des vitamines, des céramides, des huiles végétales, des substances antiradicalaires, des filtres U.V., des acides de fleurs ou de fruits. 30 De même, l'activité réparatrice du digénéaside de formule (I) est particulièrement intéressante, quand il est associé avec des substances ayant un effet cicatrisant comme des protéines, l'acide hyaluronique, des acides aminés, ou avec des substances anti-inflammatoires, anti-âge, après-solaire anti-acné ou anti-dermatose. 3061013 8 Ainsi, les compositions de l'invention sont tout particulièrement adaptées à une application topique pour prévenir et/ou traiter de nombreuses altérations cutanées, notamment comme agent réparateur et/ou protecteur de la peau et du système pileux 5 comme les cheveux, pour lutter contre les agressions externes liées à la pollution, au soleil, au stress oxydatif, au vieillissement et aux pathologies cutanées entraînant un dysfonctionnement de l'homéostasie de l'épiderme ou des cheveux. Ces compositions cosmétiques peuvent aussi prendre la 10 forme de lotion ou solution dans laquelle les dérivés selon l'invention sont sous forme encapsulée, par exemple dans des microsphères. Ces microsphères peuvent, par exemple, être constituées de corps gras, d'agar et d'eau. Les agents actifs peuvent être aussi incorporés dans des vecteurs de type 15 liposomes, glycosphères, dans des chylomicrons, des macro-, micro-, nanoparticules ainsi que les macro-, micro- et nanocapsules et aussi être adsorbés sur des polymères organiques poudreux, les talcs, bentonites et autres supports minéraux. Pour la préparation des compositions selon l'invention, 20 le composé de formule (I) peut être mélangé aux excipients généralement employés en cosmétique. Les compositions cosmétiques de l'invention peuvent donc contenir des additifs ou des adjuvants usuels en cosmétologie, comme par exemple des agents antibactériens ou des parfums mais aussi des lipides d'extraction 25 et/ou de synthèse, des polymères gélifiants et viscosants, des tensio-actifs, des émulsifiants, des actifs hydro- ou liposolubles, des extraits de plantes, des extraits tissulaires, des extraits marins, ou des actifs de synthèse. L'utilisation dermocosmétique, vétérinaire ou 30 nutraceutique des composés de formule (I) comprend tous les produits de soin du corps et de la peau, y compris les produits solaires, protecteurs et bronzants, les produits anti-âge, antiséborrhéiques, toniques, les produits assurant l'amélioration de l'aspect de la peau y compris le traitement acnéique, le 35 traitement des rougeurs cutanées, le traitement du cuir chevelu et celui de la chute des cheveux. 3061013 9 Les compositions cosmétiques, dermocosmétiques, nutraceutiques ou vétérinaires de la présente invention peuvent aussi comprendre d'autres agents actifs complémentaires choisis pour leur action, par exemple pour la protection solaire, l'effet 5 anti-rides, l'activité antiradicalaire et antioxydante, l'activité anti-irritante, la nutrition cellulaire, la respiration cellulaire, l'hydratation (tréhalose ou autres sucres, les autres agents osmolytes, la glycérine...) et la régénération cellulaire, les traitements anti-séborrhéiques, 10 ainsi que d'autres agents actifs ayant une action sur la tonicité cutanée et la protection du cheveu. Les compositions cosmétiques de la présente invention sont, de préférence, à utiliser quotidiennement en les appliquant une ou plusieurs fois par jour. 15 Les compositions cosmétiques de la présente invention sont très bien tolérées, elles ne présentent aucune phototoxicité et leur application sur la peau, pour des périodes de temps prolongées, n'implique aucun effet systémique. En résumé, l'invention se rapporte donc à l'utilisation 20 des composés de formule (I) tel que le digénéaside pour la préparation d'une composition cosmétique, dermocosmetique, nutraceutique ou vétérinaire destinée à prévenir et/ou traiter les pathologies et désordres résultant du vieillissement naturel ou prématuré de la peau ou des cheveux tant sur l'aspect 25 éclat du teint, fragilité capillaire que sur les aspects pigmentaire, adipeux, circulatoire ou immunitaire. La présente invention est maintenant illustrée par les exemples donnés ci-après. 30 Exemple 1 : Evaluation de l'effet sur la mélanogénèse dans des cellules B16 (dosage de mélanine) Le but est d'évaluer l'effet du digénéaside sur la mélanogénèse dans un modèle in vitro de mélanocytes murins B16, 35 cultivés en monocouche. Ce modèle est utile pour identifier des produits dépigmentants ou pour attenuer les taches pigmentaires liées à l'âge. 3061013 10 Le produit à tester est appliqué pendant 72 heures, puis la mélanine produite et libérée est dosée (dans les surnageants, la quantité totale de protéines est également dosée, dans les culots cellulaires). 5 Au préalable, il est vérifié que les doses à tester sont non cytotoxiques, en évaluant la viabilité cellulaire par un test XTT. Effet sur la viabilité cellulaire (mélanocytes B16) Des mélanocytes B16 sont ensemencés en microplaque 96 puits, 10 puis sont traités pendant 72h avec le produit, et enfin le test du XTT est réalisé. Un contrôle positif de cytotoxicité est utilisé, le Diméthylsulfoxyde à 10% (DMSO). Tableau 1 : viabilité cellulaire sur mélanocytes B16 Voir Figure 5 : Viabilité cellulaire sur mélanocytes B16 Le produit testé n'est pas cytotoxique pour les cellules B16 après 72h de traitement. 20 Effet sur la libération de mélanine (mélanocytes B16) Les cellules B16 sont ensemencées en plaques 24 puits, puis mises en contact avec l'actif pendant 72 heures, et enfin les dosages de mélanine et des protéines sont effectués. 25 Un contrôle positif inhibant la mélanogénèse (inhibiteur de tyrosinase) est utilisé, l'acide kojique à 1 mM. Tableau 2 : activité dépigmentante B16 après 72h de traitement 15 MMKOEM=MEMMIMM métanocytes 816 mél. (pglmt.} prot. (prip après 721t de traitement moy. moy. T#morMMEMMIIIMMEMMM terieememagkeim=ze. ettimermiemme, mJ egkee, 30 Voir Figure 6 :Activité dépigmentante Bctratt GreenPharma 3061013 11 Un effet dépigmentant aux 3 doses testées apparaît, après 72h de traitement dans ce modèle : -17%, -15% et -11% avec 30, 100 et 300 pg/mL respectivement (de manière très hautement significative *** ou hautement 5 significative **). Dans les conditions de cette étude, le digénéaside permet d'inhiber la mélanogénèse (après 72h d'application sur mélanocytes B16). Ainsi, ce produit est efficace pour réduire la synthèse et la libération de mélanine, et par conséquent est 10 potentiellement capable de prévenir les taches de pigmentation photo-induites, ou de favoriser l'éclat du teint. Exemple 2 : Evaluation de l'effet sur la libération de VEGF et ILS par des kératinocytes soumis à un stress osmotique 15 Le but est d'évaluer le potentiel effet protecteur du digénéaside vis-à-vis du relargage de médiateurs inflammatoires dans un modèle in vitro de kératinocytes humains normaux (KHN) soumis à un stress induit par le sorbitol, mimant des conditions 20 de stress osmotique. Dans ces conditions, les KHN libèrent des cytokines pro-inflammatoires, dont le VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor) et l'IL8 (interleukine 8). Le produit à tester est appliqué en préventif pendant 24 I eures, puis est ré-appliqué pour 24h pendant que les cellules sont 25 stressées au sorbitol. La cytokine IL8 et le facteur de croissance VEGF sont dosés dans les surnageants de culture (méthode ELISA, dosages rapportés à la quantité totale de protéines dans les culots cellulaires). Au préalable, les concentrations à tester non cytotoxiques sont 30 déterminées en vérifiant la viabilité cellulaire par un test XTT. > Effet sur la viabilité cellulaire (kératinocytes) Des kératinocytes sont ensemencés en microplaque 96 puits (à la même densité cellulaire que par la suite), puis sont traités pendant 48h avec le produit, et enfin le test du XTT est réalisé. 3061013 12 Un contrôle positif de cytotoxicité est utilisé, le Diméthylsulfoxyde à 10% (DMSO). Tableau 3 : viabilité cellulaire sur kératinocytes 5 Voir Figure 7 : viabilité cellulaire sur kératinocytes Le produit testé n'est pas cytotoxique aux conditions testées. > Effet sur la libération de cytokines (VEGF et IL8) suite à un 10 stress osmotique (kératinocytes) Les kératinocytes sont ensemencés en'plaque 96 puits, puis pré-traités avec l'extrait pendant 24 heures. L'actif est à nouveau appliqué pendant 24h, durant lesquelles les cellules subissent un stress osmotique au sorbitol. Enfin, les surngeants 15 sont prélevés afin de procéder aux dosages des médiateurs IL8 et VEGF (et les culots cellulaires sont prélevés pour doser les protéines totales). Tableau 4 : libération d'IL8 et de VEGF par les kératinocytes 20 Voir Figure 8 : libération d'ILS par les kératinocytes Voir Figure 9 : libération de VEGF par les kératinocytes En cas de stress osmotique, on observe un potentiel protecteur 25 avec la plus faible dose testée de 30pg/mL : baisse significative de la libération kératinocytaire de l'IL8 et du VEGF induites par smumeumummummammummummum Données test XTT KHN après 48h de traitement DO (45045C Moyenne Contrôle de .rolifération Extrait GreenPharma Dosage d'île tILSl fremL/mx tee) dans des sumnaeants de KHN Moyenne SD /témoin - sans stress avec stress osmotique maL Dosage de VEGF fVEGF1 (pg/mt./mg prot) dans des surnaaeants de KHN Moyenne SD 1111111111111111M11111 . . . . sans stress avec stress osmotique 3061013 13 le sorbitol, de -22% et -36% respectivement (significatif * ou à la limite de la significativité p=0,061). En conclusion, dans les conditions de cette étude, le produit d'intérêt à faible dose permet de lutter contre la libération de 5 médiateurs inflammatoires majeurs, 1'IL8 et le VEGF, dans un contexte de stress osmotique. Ce produit peut donc présenter des effets hydratant et/ou anti-âge et être efficace pour : lutter contre les réactions cutanées liées à la peau sèche (atopie, xérose, dermatose, psoriasis...), 10 réduire ou prévenir des phénomènes cutanés locaux comme l'hyperperméabilité vasculaire, la stimulation excessive de la micro-circulation ou de la néo-vascularisation (rougeurs de la peau...). 15 Exemple 3 : Effet sur les réseaux mitochondriaux et lysosomaux (kératinocytes ou fibroblastes), sur l'autophagie et la synthèse d'ATP (dans des fibroblastes) L'objectif est d'évaluer le potentiel effet protecteur du 20 digénéaside : - d'une part vis à vis des réseaux mitochondriaux et lysosomaux de kératinocytes ou de fibroblastes irradiés aux UV. Pour ce faire, le produit à tester est appliqué en preventif pendant 24 heures, puis les cellules sont irradiées, le produit 25 est ré-appliqué pour 24h et enfin les réseaux mitochodriaux ou lysosomaux sont marqués afin de visualiser les effets (marquages au MitoTracker ou au LysoTracker). - d'autre part sur l'activité autophagique (lysosomes) et la synthèse d'ATP de fibroblastes. 30 Pour ce faire, les fibroblastes sont traités avec le composé d'intérêt pendant 48h, puis l'ATP produit est dosé ou le marquage à la sonde MDC (monodansyl cadaverine) est réalisé (marquage des vésicules autophagiques, les lysosomes). Au préalable, avant ces expérimentations de dosages ou de 35 marquages, les doses de digénéaside à tester non cytotoxiques 3061013 14 sont déterminées en vérifiant la viabilité cellulaire par un test XTT (voir plus haut). 1 - Effet sur les réseaux mitochodriaux et lysosomaux (sur 5 kératinocytes ou fibroblastes irradiés) Les cellules, kératinocytes ou fibroblastes, sont ensemencées en boîtes de Pétri, puis pré-traitées avec l'extrait pendant 24 heures. Après irradiation UVA, l'actif est à nouveau appliqué - 10 pendant 24h et enfin les marquages des mitochondries ou des lysosomes sont effectués. Le contrôle positif utilisé, protégeant du stress oxydatif engendré par les UVA (effets délétères), est la vitamine C (acide ascorbique) à 500 pM. 15 Effet sur les mitochondries - Fibroblastes :voir Figure 1 - Kératinocytes : voir Figure 2 Avec le digénéaside, un effet protecteur du réseau cel. ulaire 20 mitochondrial vis-à-vis de l'irradiation apparaît aux 2 doses testées (de 30 et de 100 pg/mL), dans les deux modèles (kératinocytaire et fibroblastique). Effet sur les lysosomes 25 - Fibroblastes : voir Figure 3 - Kératinocytes : voir Figure 4 Avec le digénéaside, il apparaît aussi une limitation des effets néfastes de l'irradiation, aux 2 concentrations testées, sur kératinocytes et fibroblastes. 30 Dans les conditions de cette étude, le traitement des cellules durant 48h (préventif et curatif) avec le digénéaside permet de protéger les réseaux mitochondriaux et lysosomaux. Ainsi, ce produit est efficace pour réduire les effets d'un 35 stress oxydatif comme les radiations UVA, et par conséquent est 3061013 15 potentiellement capable de promouvoir l'activité mitochondriale ou lysosomale (autophagie). 2 - Effet sur l'autophagie et la synthèse d'ATP (sur fibroblastes 5 non irradiés) Les fibroblastes sont ensemencés en plaques 96 puits, puis traités avec le digénéaside pendant 48 heures et enfin le marquage des lysosomes (sonde MDC) ou le dosage d'ATP sont effectués. 10 Un contrôle positif est utilisé pour le marquage MDC, à 10, 25 ou 40 uM. Tableau 5 : activité autophagique dans les fibroblastes 15 Voir Figure 10 : Activité autophagigue dans les fibroblastes Le traitement avec le digénéaside (48h) permet de favoriser le processus basal d'autophagie dans des fibroblastes, aux doses de 10 à 100 pg/mL. Tableau 6 : effet sur la synthèse d'ATP dans les fibroblastes Voir Figure 11 : effet sur la synthèse d'ATP dans les fibroblastes Suite à l'application du composé d'intérêt pendant 48h, il apparaît une stimulation de la synthèse basale d'ATP dans des fibroblastes, aux doses de 10 à 100 pg/mL. mmommummellimmm FHN traités 48h (mov. RLU) Moyenne SD ».1.i...tr ta---,4:3,.....r. .1., - D. brutes Dosage de l'ATP (nIVI) 20 25 3061013 16 Ces résultats confortent les effets observés sur les réseaux de mitochondries et de lysosomes. Exemple 4 : Effet sur la synthèse de triglycérides par des 5 adipocytes blancs en cours de différenciation Le but est d'évaluer in vitro le potentiel effet amincissant du digénéaside dans un modèle d'adipocytes blancs humains en différenciation (extraits du tissu adipeux sous-cutané). 10 Le produit à tester est appliqué pendant 72 heures, durant lesquelles les pré-adipocytes commencent à se différencier en adipocytes et à synthétiser des triglycérides, puis l'extrait est à nouveau appliqué pendant la nutrition (maturation). La synthèse de triglycérides est évaluée par test Adipored. 15 La viabilité est vérifiée (test alamar blue) tout au long de l'expérience. Effet sur la synthèse de triglycérides (adipocytes) Les pré-adipocytes sont ensemencés en plaques 24 puits, puis 20 mis en contact avec le composé pendant 72 heures (de JO à J3) en condition différenciante et à nouveau les jours suivant en condition de nutrition (maturation, à partir de J4). Le dosage des triglycérides est effectué chaque jour (de JO à J4). Un contrôle positif d'inhibition est utilisé, la caféine à 1 mM. 25 Tableau 7 : effet sur la synthèse des triglycérides Voir Figure 12 : effet sur la synthèse des triglycérides Le composé testé inhibe la synthèse de triglycérides par les 30 pré-adipocytes en cours de différenciation en adipocytes, surtout en début de phase de nutrition/maturation : à J4 la diminution est de -16%, -17% et -24% de manière significative (* ou **) avec 10, 30 et 100 pg/mL respectivement. En conclusion, le composé d'intérêt présente un potentiel amincissant. Ceci est particulièrement intéressant pour 35 atténuer les capitons ou restaurer l'ovale du visage ; événements marquant liés à l'âge. Dosage des triglycérides d.brutes AdipoRed (RFU) % / t à .14 (adiaocvtes blancs) Moyenne SD T-Test MovennE Temoin Iffl1111111111111 111111-fflis âmorm ummilimm eeU rnimeeme--.z REVENDICATIONS1. Composition cosmétique, vétérinaire ou nutracétique caractérisée en ce qu'elle contient, dans un véhicule acceptable, au moins un composé de formule (I) : OH (1) ledit composé de formule (I) pouvant être sous forme de sel(s), ladite composition permettant d'exercer un effet anti-âge sur la peau ou les phanères humains ou animaux, en restorant une peau ayant subi un vieillissement naturel ou induit et/ou en protégeant une peau saine des effets du temps et/ou en hyGratant une peau saine ou atopique et/ou en dépigmentant partiellement la peau et/ou en retirant les imperfections liées à l'accumulation locale d'amas graisseux. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que, lorsque le composé de formule (I) est présent sous forme de sel(s), il constitue un sel d'addition basique, ladite base étant choisie dans le groupe formé par l'hydroxyde de sodium ou de potassium, la triéthylamine ou la tertiobutylamine. 3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le(s) composé(s) de formule (I) est 25 contenu dans un extrait d'algue(s). 4. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que l'extrait d'algue(s) provient d'une algue rouge de l'ordre des Ceramiales, des Gelidiales ou des Gigartinales. 5. Composition selon l'une des revendications 3 ou 4, 30 caractérisée en ce que l'extrait d'algue(s) est un extrait de 3061013 18 Solieria chordalis, Kappaphycus alvarezii, Polysiphonia lanosa, Delesseria sanguinea, Pikea robusta, Gigartina stellata, Chondrus cri spus, Ceramium botryocafpum, Acrochaetium moniliforme, Asparagopsis armata, Palmaria palmata, Hypnea muciformis, 5 Grateloupia sp., Caloglossa leprieurii, Osmundea pinnatifida, Porphyridium sp. , Porphyra sp. , Eucheuma denticulatum, Mastocarpus stellatus, Gelidium sesquipedale ou encore de Gelidium cartilagineum. 6. Composition selon l'une des revendications 1 à 5, 10 caractérisée en ce qu'elle contient de 0,01 à 5% en poids de composé(s) de formule (I) par rapport au poids total de la composition. 7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le(s) composé(s) de formule (I) est sous 15 forme de poudre. 8. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce le(s) composé(s) de formule (I) est absorbé sur des polymères organiques poudreux, notamment des talcs ou des bentonites. 9. Composition selon l'une des revendications 7 ou 8, 20 caractérisée en ce que le(s) composé(s) de formule (I) est sous forme encapsulée, le moyen d'encapsulation étant choisis dans le groupe formé par des microsphères, des liposomes des glycosphères, des chylomicrons, des macro-, et nanoparticules et des macro-, micro- et nanocapsules. 10. Composition selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un agent actif autre qu'un composé de formule (I) pris dans le groupe formé par les agents de protection solaire, les agents antirides à activité antiradicalaire, antioxydante, anti-irritante, les agents favorisant la nutrition cellulaire, la respiration cellulaire, l'hydratation cellulaire, la régénération cellulaire, les traitements anti-séborrhéiques, la tonicité cutanée, la protection des cheveux, les agents cicatrisants, l'acide hyaluronique, les acides aminés, les agents anti-âge, les agents ayant une action sur la pigmentation et les agents après-soleil. 3061013 19 11. Composition selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce qu'elle est formulée sous forme de gélules, crème, gel, lotion, lait, solution, onguent, huile corporelle, shampoing, savon, bâton protecteur des lèvres, crayon pour 5 maquillage, émulsion bi-phasique, huile dans eau ou eau dans huile, émulsion tri-phasique, huile corporelle, shampoing, masque, pommade, bâton, nanocapsules, liposomes ou patch transdermique pour applications topiques. 12. Composition selon l'une des revendications 1 à 11, 10 caractérisée en ce qu'elle contient des mucopolysaccharides, des vitamines, des céramides, des huiles végétales et des agents efficaces dans le domaine de l'anti-âge. 13. Composition selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisée en ce qu'elle contient des agents antibactériens, 15 des parfums, des lipides d'extraction et/ou de synthèse, des polymères gélifiants et viscosants, des tensio-actifs, des émulsifiants, des extraits de plantes, des extraits tissulaires, des extraits marins, des actifs hydro- ou lipo-solubles, des actifs de synthèse. 20 14. Composition selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisée en ce qu'elle est administrable par voie topique ou orale. 15. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) utilisé dans une composition selon l'une des revendications 3 à 25 5, caractérisé en ce que l'on traite la (ou les) algue(s) utilisée(s) par extraction solide-liquide en milieu hydroalcoolique. 16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que le milieu hydroalcoolique utilisé est une solution aqueuse 30 d'éthanol à une concentration choisie entre 0 et 40% en volume.