Brevet FR3058321A1 — publié le 20180511

GUIDE IMPLANTABLE POUR LA REGENE - TION TISSULAIRE [0001] La présente invention concerne les guides implantables, plus particulièrement, aux dispositifs médicaux d'origine biologique. La présente invention est notamment destinée à la régénération tissulaire de tissus sectionnés tels que des nerfs, des ligaments ou des tendons par pontage entre les deux extrémités tissulaires sectionnées. [0002] Lors d'un traumatisme de certains tissus biologiques, une déchirure ou section peut se produire, provoquant ainsi un éloignement spatial entre les deux extrémités du tissu lésé. Ceci arrive notamment lorsqu'un nerf du système nerveux périphérique, un tendon, ou un ligament est sectionné ou déchiré. [0003] Ce type de blessures est en général traité par des techniques de sutures consistant à rapprocher les deux extrémités (dites extrémité proximale et extrémité distale) du tissu lésé avant de les suturer bout à bout. Toutefois, ces techniques ne sont utilisables que lorsque la distance entre les extrémités distale et proximale n'est pas trop importante, afin de permettre la suture directe proximal-distale. Lorsque cette distance est trop importante pour permettre cette suture directe, une procédure d'autogreffe peut être utilisée. Cette technique présente comme inconvénient la nécessité de procéder à une opération chirurgicale invasive chez le patient, afin de prélever un greffon aux dimensions appropriées visant à réaliser le pontage entre les extrémités proximale et distale du tissu lésé. [0004] Un autre inconvénient est que la suture directe ou la suture par pontage d'autogreffe présente parfois des complications ne permettant pas la régénération des tissus, ou toutefois, une régénération indésirable. Il peut, par exemple, advenir que du tissu cicatriciel issu du site de l'intervention chirurgical interfère avec une régénération tissulaire satisfaisante entre les extrémités proximale et distale. Ceci est d'autant plus problématique dans le cas de la régénération d'un nerf. En effet, il arrive que la repousse des axones soit interrompue par ce phénomène, la conséquence étant que les fonctions sensorielles et/ou motrices ne sont pas restaurées. [0005] Ainsi, des stratégies destinées à protéger le site biologique de la lésion de toute forme d'infiltration par des tissus fibreux ont été développées. Par exemple, par utilisation de bandages ou de tubes biocompatibles pour envelopper les sutures. Dans le domaine de la régénération des nerfs, des solutions de guides implantables destinés tant à protéger qu'à guider la repousse du nerf sectionné ont été développées. [0006] Dans « Strategies for regeneration of components of nervous system: scaffolds, cella and biomolecules », Tian et al. retracent l'évolution de ces biomatériaux 3058321 2 d'origine synthétique. Le silicone fut à l'origine le matériau employé pour le développement de ces guides de régénération, celui-ci étant inerte, facilement disponible et, dans une certaine mesure, élastique. Mais, en conditions cliniques, de nombreux patients se plaignirent d'irritations au site d'intervention, nécessitant une 5 nouvelle opération pour ôter le dispositif. Le polytetrafluoroéthylène (PTFE) fut introduit comme polymère permettant de ponter des intervalles jusqu'à 40 mm entre les extrémités proximale et distale. Malheureusement, il a été remarqué que le PTFE compressait le nerf, conduisant à une altération de la régénération de celui-ci, tout en causant des irritations chez le patient. Enfin, le collagène, protéine structurelle 10 abondante dans de nombreux tissus chez l'animal, notamment prévalant dans les matrices extracellulaires, devint un polymère de choix pour réaliser des guides de régénération des nerfs. Ce polymère ne présentant pas les défauts de ses prédécesseurs. [0007] On peut citer par exemple le brevet US 5,019,087 divulguant un dispositif 15 tubulaire implantable dont la paroi est constituée d'une matrice de collagène de Type I et de laminine. La lumière de ce guide est exempte d'une quelconque matrice au sein de la lumière du canal. [0008] Le brevet US 6,716,225 divulgue un dispositif tubulaire implantable en matériaux biocompatibles et bio-résorbables tels que les collagènes, les 20 polysaccharides, ou d'autres protéines comme la fibrine ou l'élastine. La lumière du canal peut inclure des microtubes, des filaments, ou une matrice poreuse définissant un microsystènne de guidage permettant d'améliorer l'adhérence cellulaire et d'orienter la migration cellulaire au sein du guide. [0009] Des dispositifs à base de polymères synthétiques ont également été 25 développés. On peut citer en exemple le brevet EP 0 327 022 qui divulgue un dispositif tubulaire implantable, constitué par exemple d'acide polyglycolique ou d'un copolymère de glycolide et de carbonate de triméthylène. [00010] Tous ces dispositifs constitués de matériaux synthétiques ont comme inconvénient majeur de pouvoir présenter des problèmes de compatibilité biologique. 30 [00011] Des guides pour la régénération de nerfs créés à partir de structures biologiques tissulaires existent également. On peut citer le brevet US 6,241,981 qui divulgue un dispositif tubulaire implantable obtenu à partir du tissu d'une sous-muqueuse originaire d'un vertébré à sang chaud. De manière préférée, la sous-muqueuse est la sous-muqueuse de l'intestin. Celle-ci est une matrice naturelle de 35 collagène comprenant des molécules d'intérêt comme des glycoprotéines, des protéoglycanes, ou des glycosaminoglycanes dans leurs configurations et concentrations naturelles. Le dispositif peut être combiné avec des facteurs de croissance de types VEGF, NGF ou FGF. Une fois la sous-muqueuse mise en forme sous la forme d'un tube, 3058321 3 la structure peut également être remplie d'un extrait de tissu de sous-muqueuse fluidisé. Ce guide pour la régénération de nerfs peut être déshydraté par lyophilisation, et réhydraté avant implantation. [00012] Dans « Inverted human umbilical arteries with tunable wall thicknesses for 5 nerve regeneration », Crouzier et al. divulguent un guide nerveux tubulaire dérivé d'une artère du cordon ombilical dont la paroi est retournée. Ce retournement est décrit comme présentant les avantages d'éviter que le guide s'effondre sur lui-même, ainsi que de permettre l'exposition du neurone en croissance au sein du guide à une substance riche en collagène qui est la gelée de Wharton. 10 [00013] Un autre dispositif implantable, obtenu à partir d'un vaisseau issu du cordon ombilical de mammifère est également décrit dans le brevet US 7,294,144. Ledit vaisseau est séparé de la gelée de Wharton et est lyophilisé. La destination du canal obtenu selon ce procédé est la greffe vasculaire. La greffe nécessite une réhydratation du tissu avant implantation. 15 [00014] Les guides pour la régénération tissulaire, issus des tissus biologiques, présentent un risque de transmission d'une infection d'un donneur vers un receveur, ou d'un risque de contamination lors de la collecte du tissu à l'accouchement, lors des traitements préparatoires du tissu, ou lors du transport de ce tissu. De fait, un procédé efficace tant de désinfection que de conservation de ces tissus est vital pour la sécurité 20 des patients. [00015] Tous ces dispositifs présentent certains inconvénients et notamment des problèmes de compatibilité biologique, de conditionnement, de conservation et de mise à disposition des praticiens, de rigidité à la mise en place lors de l'intervention, et potentiellement de viro-inactivation. Soit que le traitement n'est pas suffisamment 25 efficace, soit qu'il est trop long et/ou destructeur vis-à-vis du matériau naturel. [00016] Un objectif de la présente invention est donc de proposer un guide implantable pour la régénération tissulaire, et son procédé de préparation, permettant de résoudre les problèmes présentés par les dispositifs ci-dessus décrits. 30 [00017] La présente invention consiste en un guide implantable pour la régénération tissulaire, constitué d'un segment d'artère ou de veine ombilicale dont la paroi est retournée, caractérisé en ce qu'il est viro-inactivé et lyophilisé, implantable sans réhydratation préalable, et permet de résoudre l'intégralité de ces problèmes. [00018] La présente invention concerne également un procédé de préparation dudit 35 guide implantable pour la régénération tissulaire. 3058321 4 [00019] Définitions utilisées dans la présente demande. [00020] Certaines expressions ou mots peuvent être utilisés dans la présente demande pour indiquer des éléments techniques, faits, propriétés ou caractéristiques. Leur signification est donnée ci-après : 5 [00021] - par « vaisseau issu du cordon ombilical », on entend un vaisseau sanguin, qui peut être la veine ou l'une des deux artères, les trois vaisseaux présents dans le cordon ombilical de mammifère étant exploitables selon l'invention. [00022] - par « vaisseau retourné » ou « paroi retournée », on entend que le tissu initial, qui est un vaisseau sanguin, est retourné sur lui-même de telle sorte que la paroi 10 constitutive de la lumière du vaisseau avant retournement devient la paroi externe du vaisseau, et que la paroi qui était la paroi externe du vaisseau avant retournement devient la nouvelle paroi de la nouvelle lumière du vaisseau. [0002]] - par « segment », on entend une fraction du tissu d'origine, qui est un vaisseau sanguin, et qui a été sectionné en deux extrémités de telle sorte que la fraction 15 présente la forme d'un cylindre. Ce cylindre est ainsi caractérisé par une paroi qui est la paroi du vaisseau sanguin, et de deux extrémités circulaires ouvertes permettant l'accès à la lumière dudit cylindre. [00024] - par « régénération », on entend la capacité des tissus vivants à se reconstituer après destruction. Par exemple après une blessure de type sectionnement, 20 écrasement ou déchirement. Dans la présente invention, les tissus considérés sont les nerfs du système nerveux périphérique, les ligaments et les tendons. [00025] - par « viro-inactivation », on entend une technique qui permet de réduire fortement ou totalement, et définitivement, la capacité d'action des virus. Ceux-ci, définis comme inactivés, perdent leurs capacités pathogéniques et de réplication par 25 une diminution de leur population de 4 log lors des titrages résiduels qui suivent une ou deux étapes chimiques indépendantes, que ce soit sur des virus enveloppés, ou non enveloppés, ADN ou ARN. [00026] - par « lyophilisation », on entend une technique visant à dessécher un produit préalablement surgelé par sublimation. Plus précisément, le liquide à ôter du ]0 produit est dans un premier temps transformé en glace par congélation ; puis par une dessiccation primaire, sous vide, la glace est sublimée ; enfin par une dessiccation secondaire, les molécules d'eau à la surface du produit sont extraites par désorption. [00027] - par « ne pas endommager l'intégrité structurelle, fonctionnelle et biologique du tissu », on entend que le guide pour la régénération tissulaire obtenu 35 selon le procédé présente une conservation suffisante des molécules biologiques assurant la structure mécanique du tissu, tels que le collagène de divers types, les protéoglycanes, et l'élastine, ainsi que des molécules biologiquement actives, comme par exemple les hormones, enzymes, facteurs de croissance, afin d'assurer une 3058321 5 utilisation ultérieure du produit. Ainsi, selon ces paramètres, le produit obtenu selon le procédé présente des propriétés biologiques similaires ou quasi-similaires au tissu initial avant traitement. Dans la présente invention, ces molécules sont par exemple le collagène IV et l'élastine ; ainsi que les facteurs de croissance de type N(SF (Nerve 5 Growth Factor), FGF (Fibroblast Growth Factor), TGF (Transforming Growth Factor). [00028] - par « conditionnement », on entend tout type d'action visant à placer le guide pour la régénération tissulaire dans une condition d'emballage permettant sa conservation à l'air libre et à température ambiante pendant au moins cinq ans. [00029] - par « alcools », on entend tout composé organique dont l'un des carbones 10 est lié à un groupe hydroxyle (-OH). [00030] - par « peroxydes », on entend tout composé chimique contenant un groupe fonctionnel de formule générale R-O-O-R' (deux atomes d'oxygène voisins liés entre eux) où R et R' sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alkyls quelconques. 15 [00031] Le guide implantable pour la régénération tissulaire selon l'invention est ci- après décrit. [000]2] Le guide implantable pour la régénération tissulaire, est constitué d'un segment d'artère ou de veine ombilicale dont la paroi est retournée, caractérisé en ce qu'il est viro-inactivé et lyophilisé, implantable sans réhydratation préalable. 20 [000]3] Le guide implantable est caractérisé en ce qu'il comprend dans sa lumière de la gelée de Wharton. [00034] Le guide implantable est caractérisé en ce que l'épaisseur de la gelée de Wharton est comprise entre 0,3 et 2 millimètres. [00035] Le guide implantable est caractérisé en ce que l'épaisseur de la gelée de 25 Wharton est comprise entre 0,] et 1 millimètre lorsqu'il est constitué d'un segment d'artère ombilicale. [00036] Le guide implantable est caractérisé en ce que l'épaisseur de la gelée de Wharton est comprise entre 1 et 2 millimètres, lorsqu'il est constitué d'un segment de veine ombilicale. 30 [000]7] Le guide implantable est caractérisé en ce que le diamètre de la lumière du segment est compris entre 1 et 7 millimètres. [00038] Le guide implantable est caractérisé en ce que le diamètre de la lumière du segment est compris entre 1 et 2 millimètres lorsqu'il est constitué d'un segment d'artère ombilicale. 35 [00039] Le guide implantable est caractérisé en ce que le diamètre de la lumière du segment est compris entre 2 et 7 millimètres lorsqu'il est constitué d'un segment de veine ombilicale. 3058321 6 [00040] Le guide implantable est caractérisé en ce que la longueur du segment est comprise entre 1 et 12 centimètres. [00041] Le guide implantable est caractérisé en ce que la longueur du segment est comprise entre 1 et 6 centimètres lorsqu'il est constitué d'un segment d'artère 5 ombilicale. [00042] Le guide implantable est caractérisé en ce que la longueur du segment est comprise entre 2 et 12 centimètres lorsqu'il est constitué d'un segment de veine ombilicale. [00043] Le guide implantable est caractérisé en ce qu'il est destiné à être utilisé 10 comme matériau d'allogreffe choisie dans le groupe constitué par la greffe de guide de régénération nerveuse, la greffe de guide de régénération tendineuse, la greffe de guide de régénération ligamentaire. [00044] Le guide implantable peut être utilisé en tant qu'allogreffe choisie dans le groupe constitué par la réparation d'un nerf du système nerveux périphérique, la 15 réparation du tendon, la réparation du ligament. [00045] La présente invention concerne également un procédé de préparation d'un guide implantable pour la régénération tissulaire, constitué d'un segment d'artère ou de veine ombilicale dont la paroi est retournée, caractérisé en ce qu'il est viro-inactivé et 20 lyophilisé, implantable sans réhydratation préalable. [00046] Le tissu biologique destiné à être traité selon le procédé décrit dans la présente invention, et destiné à former un guide pour la régénération tissulaire est un vaisseau issu d'un cordon ombilical. Ce cordon ombilical est obtenu après l'accouchement d'un donneur proprement informé et consentant en accord avec les 25 exigences des directives Européennes et la Loi Bioéthique. Par exigence sanitaire relative aux dons de tissus et de cellules d'origine humaine, une qualification socioclinique du donneur et biologique en amont du donneur est systématique. Cette qualification implique une recherche de virus HIV, hépatites B, C, HTLV et de la bactérie tréponème pâle responsable de la syphilis. Le cordon ombilical est avantageusement 30 placé dans une boîte stérile, comprenant une solution de NaCI à +4°C, et transporté à même température. Si les données cliniques du donneur sont conformes aux exigences relatives au don tissulaire, et que l'analyse sanguine de recherche de bactéries et virus se révèle négative, le tissu éligible peut subir le procédé de préparation. [00047] Les vaisseaux sanguins du cordon ombilical sont identifiés et séparés les 35 uns des autres par dissection. [00048] Les vaisseaux sont découpés en segments. La longueur des segments est comprise entre 1 et 12 centimètres. 3058321 7 [00049] De manière préférée, la longueur d'un segment est comprise entre 1 et 6 centimètres lorsqu'il est constitué d'un segment d'artère ombilicale. [00050] De manière préférée, la longueur d'un segment est comprise entre 3 et 12 centimètres lorsqu'il est constitué d'un segment de veine ombilicale. 5 [00051] Les segments de vaisseaux sont hydratés dans des bains d'eau purifiée, successifs, sous agitation douce, pendant environ 4 heures. [00052] A l'issue de cette hydratation, la gelée de Wharton présente une souplesse qui facilite sa découpe. [00053] Un mandrin, ou guide rigide, de diamètre adapté est introduit dans la 10 lumière du vaisseau destiné à former le guide pour la régénération tissulaire. Il est avantageusement utilisé comme mandrin, ou guide rigide, une aiguille à bout rond, avec un chas à une extrémité. Un diamètre adapté pour le mandrin, ou guide rigide, est d'environ 1,5 millimètre pour une artère, et d'environ 3 millimètres pour une veine. [00054] L'excès de gelée de Wharton entourant le vaisseau monté sur mandrin peut 15 être enlevé au scalpel, de telle sorte qu'une épaisseur de 0,3 à 1 millimètre de gelée de Wharton demeure autour de la paroi pour une artère, et d'environ 1 à 1,5 millimètre pour une veine. [00055] L'objet obtenu est défini comme un segment de veine ou artère ombilicale, hydraté à l'eau purifiée. 20 [00056] Le procédé de préparation d'un guide implantable est caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes : a) on dispose d'un segment de veine ou artère ombilicale, hydraté à l'eau purifiée ; b) on procède au retournement de la paroi du segment en conservant de la gelée 25 de Wharton pour obtenir un segment retourné ; c) on insère un guide rigide dans la lumière du segment retourné ; d) on procède à une congélation à sec du segment retourné avec le guide rigide ; e) on procède à une décongélation du segment retourné et au retrait du guide rigide ; 30 f) on effectue un traitement de viro-inactivation du segment retourné pour obtenir un segment viro-inactivé ; g) on insère un guide rigide dans la lumière du segment viro-inactivé ; h) on effectue une lyophilisation du segment viro-inactivé avec le guide rigide pour obtenir un segment viro-inactivé et lyophilisé ; 35 i) on retire le guide rigide du segment viro-inactivé et lyophilisé pour obtenir le guide implantable. 3058321 8 [00057] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce que les étapes a), b), c), e), f), g) et i) s'effectuent à température ambiante. [00058] Lors de l'étape b), le vaisseau est retourné après avoir suturé une extrémité 5 de celui-ci au mandrin, ou guide rigide. Il est avantageusement utilisé le chas d'une aiguille à bout rond pour suturer l'extrémité. [00059] Selon un mode de réalisation préféré, une aiguille à bout pointu, et montée d'un fil de suture, est introduite à travers le chas de l'aiguille à bout rond, en traversant la partie inférieure du segment de veine. La veine peut ainsi être suturée au niveau du 10 chas de l'aiguille. [00060] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce que le segment retourné comprend dans sa lumière de la gelée de Wharton. [00061] Selon un mode de réalisation préféré, le guide rigide utilisé lors de l'étape 15 c) est en PETG (polyéthylène téréphtalate glycolysé), ou en PET (polyéthylène téréphtalate), ou en PLGA (poly(lactic-co-glycolic acid)), ou en poly(a-hydroxy esters), notamment d'acide polylactique (PLA) et d'acide polyglycolique (PGA), ou différents polyéthylènes. [00062] Selon un mode de réalisation préféré, le guide rigide utilisé lors de l'étape 20 c) est caractérisé par un diamètre de 1 à 2 millimètres pour une artère. [0006]] Selon un mode de réalisation préféré, le guide rigide utilisé lors de l'étape c) est caractérisé par un diamètre de 1,75 millimètre pour une artère. [00064] Selon un mode de réalisation préféré, le guide rigide utilisé lors de l'étape c) est caractérisé par un diamètre de 3 ou 6 millimètres pour une veine, selon le 25 diamètre de la veine. [00065] Selon un mode de réalisation préféré, le guide rigide utilisé lors de l'étape c) est caractérisé par un diamètre de 3 millimètres pour une veine. [00066] Selon un mode de réalisation préféré, le guide rigide utilisé lors de l'étape c) est caractérisé par un diamètre de 6 millimètres pour une veine. 30 [00067] Les étapes d) et e) assurent une lyse des cellules présentes dans le segment retourné par effet de pression osmotique. [00068] Le guide rigide utilisé lors de l'étape c) est ôté entre les étapes e) et f). [00069] Afin de garantir l'innocuité du produit fini en tant que matériau implantable chez un patient, une première phase de traitement chimique f) est effectuée. En effet, ]5 le produit fini doit être exempt d'agents microbiologiques tels que bactéries, virus, parasites. [00070] L'un des avantages techniques de retourner la paroi du segment est de permettre une optimisation du traitement de viro-inactivation et d'éliminer plus 3058321 9 facilement les résidus de sang potentiel. En effet, le retournement de la paroi du segment a pour conséquence que la paroi qui était à l'origine au contact du sang circulant se retrouve désormais à l'extérieur du segment. Cette position permet un meilleur contact avec les solutions chimiques sous légère agitation de l'étape f). 5 [00071] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce que le traitement de viro-inactivation comprend au moins deux étapes successives x et y de traitement par un agent de viro-inactivation chimique. [00072] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce que l'agent de viro-inactivation chimique est choisi dans le groupe 10 constitué par les alcools et/ou les peroxydes. [0007]] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce que la première étape de traitement x est effectuée par un agent de viro-inactivation choisi dans le groupe constitué par les alcools. [00074] Selon un mode préféré de réalisation, le premier agent de viro-inactivation 15 est l'éthanol à une teneur en alcool comprise entre 50 % et 80 90 v/v. [00075] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce que l'agent de viro-inactivation choisi dans le groupe constitué par les alcools est l'éthanol à 70 0/0 v/v. [00076] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, 20 caractérisé en ce que la première étape de traitement x est effectuée pendant une durée de 60 minutes. [00077] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce que le deuxième agent de viro-inactivation est le peroxyde d'hydrogène. 25 [00078] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce que le peroxyde d'hydrogène est sous une forme choisie parmi une solution aqueuse et un gaz. [00079] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce que le peroxyde d'hydrogène est sous forme aqueuse dans une ]0 concentration comprise entre 3 % et 30 0/0 w/v. [00080] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce que la deuxième étape de viro-inactivation chimique y comporte deux sous-étapes de traitement, q et r, par le peroxyde d'hydrogène : - une première sous-étape de traitement q s'effectuant avec une solution de 35 peroxyde d'hydrogène à 30 9/0 w/v pendant 15 minutes ; - une deuxième sous-étape de traitement r s'effectuant avec une solution de peroxyde d'hydrogène à 3 °/0 w/v pendant 60 minutes. 3058321 10 [00081] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce qu'il comporte en outre au moins une étape lors de laquelle le segment retourné est lavé à l'eau purifiée entre les étapes x et y de viro-inactivation chimique. [00082] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, 5 caractérisé en ce qu'il comporte en outre au moins une étape d'ajustement de pH de la solution dans laquelle se trouve le segment viro-inactivé entre les étapes f) et g). [00083] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce qu'il comporte en outre au moins une étape d'ajustement de pH à 8,5 de la solution dans laquelle se trouve le segment viro-inactivé entre les étapes f) et g). 10 [00084] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce qu'il comporte en outre au moins une étape d'ajustage de pH de la solution dans laquelle se trouve le segment viro-inactivé, suivie d'au moins une étape de mise en tampon du segment viro-inactivé entre les étapes f) et g). [00085] Selon un mode de réalisation préféré, cette au moins une étape de mise en 15 tampon est définie par deux bains successifs de solution tampon de PBS (tampon phosphate salin). [00086] Selon un mode de réalisation préféré, cette étape de mise en solution tampon est suivie de deux étapes de lavage en bains d'eau purifiée. [00087] Suite à cette première étape f) de traitements chimiques, le segment peut 20 être qualifié de viro-inactivé. [00088] Selon un mode de réalisation préféré, le guide rigide utilisé lors de l'étape g) est positionné dans la lumière du segment viro-inactivé. [00089] Selon un mode de réalisation préféré, le guide rigide utilisé lors de l'étape g) possède les mêmes caractéristiques que le guide rigide utilisé lors de l'étape c). 25 [00090] Le segment viro-inactivé subit une étape h) qui est une lyophilisation. Cette étape permet à la fois d'assurer la qualité de conservation sous vide du produit obtenu selon le procédé, et d'assurer une étape supplémentaire de désinfection et de décellularisation au segment viro-inactivé, enfin d'obtenir un segment lyophilisé. [00091] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, 30 caractérisé en ce que l'étape h) de lyophilisation est effectuée selon les étapes m et n suivantes : m) une congélation en deux étapes m' et m" : - la première étape de congélation, m', s'effectuant à une température d'acclimatation choisie pour ne pas endommager l'intégralité structurelle, 35 fonctionnelle et biologique du segment viro-inactivé ; la deuxième étape de congélation, m", s'effectuant à la température finale de congélation qui est inférieure à la température d'acclimatation ; 3058321 11 n) une lyophilisation en deux étapes principales, dites primaire, n', et secondaire, n" : - l'étape de lyophilisation primaire n' s'effectuant par application d'un vide à environ 200 microbars et d'un profil de température ascendant ; 5 l'étape de lyophilisation secondaire n" s'effectuant par application d'un vide à environ 50 microbars et d'un profil de température descendant. [00092] Le profil de température ascendant est avantageusement un profil selon lequel la température de lyophilisation est initialement réglée à une température initiale basse puis augmentée vers une température finale de lyophilisation primaire, en une ou 10 plusieurs étapes de températures ascendantes intermédiaires. Le profil de température descendant est avantageusement un profil selon lequel la température de lyophilisation est initialement réglée à une température supérieure à la température finale de l'étape de lyophilisation primaire, puis qui est ensuite descendue vers une température finale de lyophilisation secondaire supérieure à la température initiale de l'étape de 15 lyophilisation primaire. [00093] Ces conditions de lyophilisation permettent d'obtenir un produit, qui est un segment viro-inactivé et lyophilisé, qui est notamment caractérisé en ce qu'il présente une teneur en eau résiduelle à température ambiante inférieure à 5%. [00094] Selon un mode de réalisation préféré, le guide rigide utilisé lors de l'étape 20 g) est ôté pour obtenir le guide implantable. [00095] Selon un mode de réalisation préféré, le guide implantable est conditionné en conditions stériles. [00096] Selon un mode de réalisation préféré, le guide implantable est conditionné en conditions stériles, en double sachets. 25 [00097] Selon un mode de réalisation préféré, le guide implantable, qui est emballé, subit une dernière étape de stérilisation qui est une irradiation gamma. [00098] Le procédé de préparation d'un guide implantable est, de préférence, caractérisé en ce qu'il comporte en outre une étape de stérilisation du guide implantable viro-inactivé et lyophilisé, par exposition de ce dernier à des rayonnements gamma à 30 25-32 k(3y après l'étape i). [00099] Le procédé de préparation d'un guide implantable est caractérisé en ce que le taux des facteurs de croissance présents dans la gelée de Wharton (NGF, TGF, FGF) est préservé de préférence entre 70 et 80 °h. [000100] Le procédé de préparation d'un guide implantable est caractérisé en ce que 35 le taux des facteurs de croissance présents dans la gelée de Wharton (NGF, TGF, FGF) est préservé de préférence entre 60 et 7O96. 3058321 12 [000101] Le procédé de préparation d'un guide implantable est caractérisé en ce que le taux des facteurs de croissance présents dans la gelée de Wharton (NGF, TGF, FGF) est préservé de préférence entre 50 et 60 0/0. [000102] Le procédé de préparation d'un guide implantable est caractérisé en ce que 5 le taux des facteurs de croissance présents dans la gelée de Wharton (NGF, TGF, F(SF) est préservé de préférence entre 40 et 50 9/0. [000103] Le procédé de préparation d'un guide implantable est caractérisé en ce que le taux des facteurs de croissance présents dans la gelée de Wharton (NGF, TGF, FGF) est préservé de préférence entre 30 et 40 0/0. 10 [000104] Le procédé de préparation d'un guide implantable est caractérisé en ce que le taux des facteurs de croissance présents dans la gelée de Wharton (NGF, TGF, FGF) est préservé de préférence entre 20 et 30 °h. [000105] Le procédé de préparation d'un guide implantable est caractérisé en ce que le taux des facteurs de croissance présents dans la gelée de Wharton (NGF, TGF, FGF) 15 est préservé de préférence entre 10 et 20 90. [000106] Le procédé de préparation d'un guide implantable est caractérisé en ce que le taux des facteurs de croissance présents dans la gelée de Wharton (NGF, TGF, FGF) est préservé de préférence entre 5 et 1096. [000107] Le produit obtenu selon le procédé peut être défini comme un guide 20 implantable pour la régénération tissulaire, constitué d'un segment d'artère ou de veine ombilicale dont la paroi est retournée, caractérisé en ce qu'il est viro-inactivé et lyophilisé, implantable sans réhydratation préalable. [000108] Le procédé précédemment décrit permet l'obtention d'un matériau 25 d'allogreffe viro-inactivé et lyophilisé. [000109] Le matériau d'allogreffe est présenté sous une forme utilisable comme greffe choisie dans le groupe constitué par la greffe de guide de régénération nerveuse, la greffe de guide de régénération tendineuse, la greffe de guide de régénération ligamentaire. 30 [000110] Le matériau d'allogreffe viro-inactivé et lyophilisé peut être utilisé en tant que greffe choisie dans le groupe constitué par la réparation d'un nerf du système nerveux périphérique, la réparation du tendon, la réparation du ligament. [000111] Le matériau d'allogreffe viro-inactivé et lyophilisé peut être utilisé en 35 chirurgie en le sectionnant éventuellement à sec, de telle sorte que la longueur du matériau soit d'au moins environ 1 centimètre supérieure à la longueur de l'intervalle à ponter entre les extrémités proximale et distale du tissu à réparer, qui peut être un nerf 3058321 13 du système nerveux périphérique, un tendon ou un ligament. Le tissu à réparer est préparé de telle sorte que la section soit nette. [000112] Le matériau d'allogreffe viro-inactivé et lyophilisé est manipulé à sec. Une extrémité (proximale ou distale) du tissu à réparer est insérée à l'intérieur du matériau 5 d'allogreffe viro-inactivé et lyophilisé, et celui-ci est glissé sur l'extrémité du tissu. [00011]] Les deux extrémités du nerf, extrémité proximale et extrémité distale, sont suturées. [000114] En cas de perte de substance sévère, le tissu à réparer est introduit dans l'allogreffe à chaque extrémité et stabilisé par suture, l'allogreffe jouant le rôle de guide. 10 [000115] Le matériau d'allogreffe viro-inactivé et lyophilisé est glissé au-delà de la suture, en le positionnant de part et d'autre de celle-ci, avec les rebords équidistants de la ligne de suture. [000116] Le matériau d'allogreffe viro-inactivé et lyophilisé est naturellement réhydraté par les tissus organiques environnants et s'assouplit. 15 [000117] Exemple 1 : Exemple d'un mode de réalisation de l'invention selon lequel un segment d'artère ombilicale est traité selon le procédé pour obtenir un guide implantable pour la régénération tissulaire. [000118] Un donneur proprement informé et consentant en accord avec les 20 exigences de la Déclaration d'Helsinki offre en don le cordon ombilical issu d'un accouchement. Par exigence sanitaire relative aux dons de tissus et de cellules d'origine humaine, une qualification en amont du donneur est systématique. Cette qualification implique une recherche de virus HIV, hépatites B, C, HTLV et de la bactérie tréponème pâle responsable de la syphilis. 25 [000119] Le cordon ombilical est récupéré le plus tôt possible en salle d'accouchement. Il est avantageusement placé dans une boite stérile, comprenant une solution de NaCI à +4°C. [000120] Au laboratoire, en salle stérile, la procédure suivante est appliquée : [000121] Les vaisseaux sanguins du cordon ombilical sont identifiés et séparés les 30 uns des autres par dissection. [000122] Une artère est découpée en un segment d'une longueur de 3 centimètres. [00012]] Le segment est rincé et hydraté dans des bains d'eau purifiée successifs, sous agitation douce, pendant 4 heures. [000124] Une aiguille rigide à bout rond, d'un diamètre de 1,5 millimètre, disposant 35 d'un chas à une extrémité, est insérée dans la lumière du segment de l'artère. [000125] L'excès de gelée de Wharton entourant l'artère montée sur l'aiguille est enlevé au scalpel, de telle sorte qu'une épaisseur d'environ 0,3 millimètre de gelée de Wharton demeure autour de la paroi. 3058321 14 [000126] Une aiguille à bout pointu, et montée d'un fil de suture, est introduite à travers le chas de l'aiguille à bout rond, en traversant la partie inférieure du segment d'artère. L'artère est ainsi suturée au niveau du chas de l'aiguille. [000127] Le segment fixé est retourné sur lui-même, de telle sorte que la paroi du 5 segment où demeure la gelée de Wharton est désormais dans la lumière du segment obtenu. Le fil maintenant le segment à l'aiguille est ôté. [000128] Un guide rigide en PETG de 1,75 millimètre de diamètre, selon le diamètre de la veine, est positionné dans la lumière du segment retourné. [000129] Le segment retourné et monté sur le guide rigide est congelé à sec à une ]0 température de -80°C. [000130] Lors du traitement chimique, le segment retourné et monté sur le guide rigide est décongelé à l'air libre, à température ambiante, pendant une durée de 5 minutes. Le guide rigide en PETG est ôté. Cette étape de congélation, suivie d'une décongélation, assure une décellularisation importante du tissu biologique. 15 [0001]1] Le segment retourné subit une succession de bains assurant un traitement chimique de celui-ci. Ce traitement a pour objectif une désinfection de l'artère et de la gelée de Wharton, et tout particulièrement sa viro-inactivation. Une agitation linéaire douce du milieu liquide est appliquée lors de chaque bain afin d'assurer une pénétration homogène des solvants dans les tissus. 20 [000132] Dans un premier temps, le segment retourné est déposé dans un bain d'eau purifiée à température ambiante pendant environ 3 heures. Cette étape assure tant la fin de la décongélation du tissu physiologique, qu'une étape de lyse cellulaire par pression osmotique. [000133] Puis, le segment retourné est transféré dans un bain décontaminant 25 composé d'éthanol 70 0/0 v/v à température ambiante pendant environ 1 heure. [0001]4] Un lavage est effectué dans de l'eau purifiée pendant environ 15 minutes à température ambiante pour retirer l'éthanol. [000135] Afin d'assurer la seconde étape de traitement décontaminant, le segment retourné est transféré dans un bain composé de peroxyde d'hydrogène à 30 9/0 w/v à 30 température ambiante pendant environ 15 minutes. [0001]6] Puis, le segment retourné est transféré dans un bain décontaminant composé de peroxyde d'hydrogène à 3 °/0 w/v à température ambiante pendant environ 1 heure. Le segment obtenu est viro-inactivé. [000137] L'action chimique appliquée au segment viro-inactivé est ensuite 35 neutralisée, dans au moins un bain comportant de l'hydroxyde de sodium dilué autour d'un pH de 8,5. Le traitement d'au moins un bain de neutralisation s'effectue à température ambiante pendant environ 15 minutes. 3058321 15 [0001]8] Afin d'assurer un rééquilibrage du pH et pour éliminer au mieux les résidus organiques se détachant du tissu d'intérêt, le segment viro-inactivé est transféré dans au moins un bain de tampon physiologique (PBS), afin d'assurer son rééquilibrage physiologique. Le au moins un bain s'effectue à température ambiante pendant environ 5 15 minutes. [000139] Enfin, le segment viro-inactivé est transféré dans deux bains successifs à l'eau purifiée, à température ambiante, pendant au moins 15 minutes et jusqu'à environ 1 heure. [000140] A cette étape du procédé, on peut considérer que le segment obtenu selon 10 ce traitement chimique est un segment en grande partie désinfecté, notamment viro- inactivé, et décellularisé. [000141] Suite à cette partie relative aux traitements chimiques, le segment viro- inactivé subit une lyophilisation. [000142] Un guide rigide en PETG stérile est inséré dans la lumière du segment viro- 15 inactivé. Ce dernier est placé sur un plateau en inox. [000143] L'ensemble est transféré dans un lyophilisateur, où une étape de congélation suivie d'une étape de lyophilisation sont effectuées selon les modalités suivantes: - Congélation : 20 - La première étape de congélation s'effectue à une température d'acclimatation choisie pour ne pas endommager l'intégrité structurelle, fonctionnelle et biologique du segment viro-inactivé ; la deuxième étape de congélation s'effectue à la température finale de congélation qui est inférieure à la température d'acclimatation ; 25 Lyophilisation : - Une étape de lyophilisation primaire s'effectue par application d'un vide à environ 200 microbars et par application d'un profil de température ascendant ; - Une étape secondaire de lyophilisation s'effectue par application d'un vide à environ 50 microbars et par application d'un profil de température descendant. 30 [000144] Suite à cette étape de lyophilisation, le segment retourné est un segment désinfecté, notamment viro-inactivé, décellularisé et lyophilisé. [000145] Le guide rigide en PETG est ôté pour obtenir le guide implantable. [000146] Le guide implantable est conditionné en conditions stériles, par exemple en double sachets. 35 [000147] Une dernière étape de stérilisation du guide implantable est effectuée par exposition de celui-ci à des rayonnements gamma à 25-32 kGrays. 3058321 16 [000148] Le produit ainsi obtenu est utilisé comme matériau d'allogreffe, par exemples la greffe de guide de régénération nerveuse, la greffe de guide de régénération tendineuse, la greffe de guide de régénération ligamentaire. [000149] Quelques utilisations envisageables du produit obtenu selon le procédé sont 5 donc la réparation d'un nerf du système nerveux périphérique, la réparation du tendon, la réparation du ligament. [000150] Exemple 2 : Exemple d'un mode d'utilisation d'un guide implantable pour la régénération tissulaire selon l'invention. 10 [000151] On utilise comme modèle expérimental un rat de la lignée Sprague Dawley, âgé de 13 semaines. [000152] On effectue une anesthésie générale de l'animal, et la procédure analgésique est délivrée 30 minutes à 1 heure avant chirurgie. [00015]] Après dissection du septum intermusculaire entre le muscle fessier 15 maximal et le biceps fémoral, afin d'exposer et dissocier le nerf sciatique, on procède à une transsection de ce nerf chez l'animal. [000154] Cette transsection est réalisée de telle sorte qu'un segment de 1 cm du nerf sciatique exposé est enlevé sous grossissement de 4x en utilisant des micros-ciseaux. 20 [000155] Un guide implantable pour la régénération tissulaire selon l'invention est coupé pour atteindre une longueur de 2 centimètres. [000156] Le guide implantable est manipulé à sec, on insère le moignon de l'extrémité proximal du nerf dans la lumière du guide. [000157] On suture le nerf par deux points épi-périneuraux, puis le guide est glissé 25 au-delà de la suture nerveuse, en le positionnant de part et d'autre de celle-ci, avec un débord équidistant de la ligne de suture. [000158] Après la procédure chirurgicale, le nerf sciatique est replacé entre les deux muscles, et la plaie cutanée est suturée à l'aide d'agrafes chirurgicales. REVENDICATIONS1. Guide implantable pour la régénération tissulaire, constitué d'un segment d'artère ou de veine ombilicale dont la paroi est retournée, caractérisé en ce qu'il est viro-inactivé et lyophilisé, implantable sans réhydratation préalable. 2. Guide implantable selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend dans sa lumière de la gelée de Wharton. 3. Guide implantable selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le diamètre de la lumière du segment est compris entre 1 et 7 millimètres. 4. Guide implantable selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la longueur du segment est comprise entre 1 et 12 centimètres. 5. Guide implantable selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est destiné à être utilisé comme matériau d'allogreffe choisie dans le groupe constitué par la greffe de guide de régénération nerveuse, la greffe de guide de régénération tendineuse, la greffe de guide de régénération ligamentaire. 6. Procédé de préparation d'un guide implantable selon l'une quiconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes : a) on dispose d'un segment de veine ou artère ombilicale, hydraté à l'eau purifiée ; b)on procède au retournement de la paroi du segment en conservant de la gelée de Wharton pour obtenir un segment retourné ; c) on insère un guide rigide dans la lumière du segment retourné ; d)on procède à une congélation à sec du segment retourné avec le guide rigide ; e)on procède à une décongélation du segment retourné et au retrait du guide rigide ; f) on effectue un traitement de viro-inactivation du segment retourné pour obtenir un segment viro-inactivé ; g) on insère un guide rigide dans la lumière du segment viro-inactivé ; h)on effectue une lyophilisation du segment viro-inactivé avec le guide rigide pour obtenir un segment viro-inactivé et lyophilisé ; 3058321 18 i) on retire le guide rigide du segment viro-inactivé et lyophilisé pour obtenir le guide implantable. 7. Procédé de préparation d'un guide implantable selori la revendication 6, caractérisé en ce que le segment retourné comprend dans sa lumière de la gelée de Wharton. 8. Procédé de préparation d'un guide implantable selon l'une quelconque des revendications 6 et 7, caractérisé en ce que le traitement de viro-inactivation comprend au moins deux étapes successives x et y de traitement par un agent de viro-inactivation chimique. 9. Matériau d'allogreffe viro-inactivé et lyophilisé, susceptible d'être obtenu selon le procédé de l'une quelconque des revendications 6 à 8 précédentes. 10. Matériau d'allogreffe selon la revendication 9 présenté sous une forme utilisable comme greffe choisie dans le groupe constitué par la greffe de guide de régénération nerveuse, la greffe de guide de régénération tendineuse, la greffe de guide de régénération ligamentaire.