Brevet FR3059550A1 — publié le 20180608

INTRODUCTION L'alcool est un tératogène responsable d'atteintes physiques et comportementales. Chez l'Homme, l'exposition prénatale à l'alcool peut conduire à des altérations du développement cérébral. Ainsi, la consommation d'alcool au cours de la grossesse (alcoolisation foetale) constitue la première cause de handicap et notamment de retard mental d'origine non génétique au monde et également en France. Les dommages varient selon la période où le foetus a été exposé, les taux d'alcoolémie, les facteurs génétiques et environnementaux, le mode de consommation (chronique, binge drinking). Le Syndrome d'Alcoolisation Foetale (SAF) constitue la manifestation la plus extrême et invalidante des troubles causés par l'alcoolisation foetale (TCAF). Son incidence est estimée en France à 1,5 % des naissances. Le SAF associe des anomalies physiques comme une hypotrophie (retard de croissance), une dysmorphie cranio-faciale et des anomalies neurocomportementales se traduisant par des troubles des fonctions cognitives (troubles de l'attention, de la motricité, de l'apprentissage ou encore de la mémorisation). Des séquelles neurologiques sont également présentes chez les enfants TCAF dont l'incidence est estimée en France à près de 1% des naissances. L'angiogenèse cérébrale est concomitante avec le processus de neurogenèse et contribue au bon développement cérébral en assurant aux cellules nerveuses un apport en nutriments, en oxygène et en facteurs trophiques. En particulier, l'angiogenèse cérébrale constitue un prérequis au bon développement du réseau neuronal. De plus, il a été récemment démontré un impact direct des vaisseaux cérébraux sur le processus de migration de populations neuronales et des oligodendrocytes. Il a également été établi précédemment par les inventeurs que l'alcoolisation in utero perturbe l'angiogenèse cérébrale et que cet effet concourt aux anomalies cérébrales de l'alcoolisation. Cibler les anomalies vasculaires de l'exposition in utero à l'alcool apparaît donc comme une stratégie thérapeutique afin de réduire les atteintes neurodéveloppementales de l'alcool et corriger les fonctions cérébrales altérées. En effet, la prise en charge actuelle des enfants TCAF vise, par une stimulation des fonctions motrices et cognitives, à réduire les troubles du langage, de l'apprentissage ou encore de l'attention qui sont diagnostiqués tardivement souvent entre 4 et 5 ans avec la scolarisation. Les résultats obtenus par un tel suivi sont 3059550 2 limités et les troubles de l'alcoolisation in utero vont impacter à long terme sur l'intégration sociale et professionnelle de ces futurs adultes. Il n'existe à ce jour aucun traitement à visée curative des effets neurodéveloppementaux de l'alcool chez les enfants TCAF. Il existe donc un besoin visant à développer une nouvelle thérapeutique des troubles liés à 5 l'alcoolisation in utero destinée à traiter en particulier une vascularisation cérébrale anormale, d'améliorer l'angiogenèse cérébrale ou encore les troubles du développement qui y sont associés. DESCRIPTION Les inventeurs ont précédemment démontré que le dosage placentaire du facteur de 10 croissance placentaire (PIGE) permet d'identifier, parmi les enfants exposés in utero à l'alcool, ceux qui ont subi des atteintes cérébrales. Ces enfants présentent notamment une diminution des taux de PIGE placentaire qui correspond à une angiogenèse cérébrale altérée. Par la suite, dans un modèle pré-clinique d'alcoolisation in utero, les inventeurs ont découvert qu'une supplémentation en PIGE placentaire corrige l'action de l'alcool sur des 15 paramètres morphométriques et anatomiques indicateurs de la croissance foetale tels que la taille du corps et de la tête à la naissance. De plus, les inventeurs ont démontré que l'augmentation de la quantité de PIGE permet de réduire fortement l'effet délétère de l'alcool sur la vascularisation cérébrale du foetus. Elle permet notamment d'améliorer l'angiogenèse cérébrale et de corriger la désorganisation des microvaisseaux induite par 20 l'alcool. Le facteur de croissance foetal (PIGE) a été décrit dans l'art antérieur comme une cible pour le traitement des maladies cardiovasculaires, des rétinopathies, des maladies cutanées ou encore de cancers (Lu et al., Discov Med, 2016 21:349-61, Aprile et al., Crit Rev Oncol Hematol, 2015 95:165-78 et Shibuya, Endocr Metab Immune Disord Drug Targets, 2015, 25 15:135-44). Plus spécifiquement, le PIGE a été décrit dans le traitement de rétinopathies chez l'adulte (US2015013359) et chez l'enfant (Hard et al., Fondation Act Paediatrica 2011 100, pp. 1063-1065). Néanmoins, aucune étude ne suggère l'effet thérapeutique de PIGE dans le traitement des troubles causés par l'alcoolisation foetale (TCAF). En outre, des traitements permettant de corriger l'effet néfaste de l'alcool sur la vascularisation cérébrale et la 30 croissance d'un sujet ayant été exposé in utero à l'alcool n'ont pas été mis en évidence. La présente invention ouvre ainsi une nouvelle voie dans la prévention et/ou le traitement des 3059550 3 TCAF et en particulier, dans la prévention et/ou le traitement des troubles neurologiques (tels que l'hyperactivité, perte de l'attention, dépression, anxiété, troubles émotionnels, irritabilité excessive, problèmes comportementaux, etc.) dus à des migrations neuronales et oligodendrocytaires vasculo-dépendantes anormales au niveau cérébral ou des troubles de 5 croissance (hypotrophie) suite à la consommation d'alcool pendant la grossesse. Dans un premier aspect, la présente invention concerne ainsi un facteur de croissance placentaire (PIGE) pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des troubles causés par l'alcoolisation foetale (TCAF) chez un sujet ayant été exposé à l'alcool in utero. On entend par - PIGE » ou - Placenta( growth factor » ou - facteur de croissance placentaire » 10 (tous ces termes sont synonymes) une protéine de la famille des facteurs de croissance de l'endothélium vasculaire (VEGF). Plus particulièrement, PIGE au sens de l'invention est une protéine de 149 acides aminés hautement similaire à VEGF-A qui est reconnue par le même récepteur que ce dernier, le VEGE-R1, mais qui n'est pas reconnue par le récepteur VEGF-R2. PIGE est fortement exprimé par le placenta, mais pas par le foetus et en particulier par le 15 cerveau foetal. PIGE glycosylé en N-terminal est sécrété et fonctionne en dimère pour contrôler l'angiogenèse. Le terme - PIGE » se réfère notamment à l'ensemble des 4 isoformes PIGEZ-4 : PIGE-1 et PIGE-3 sont des isoformes qui ne lient pas l'héparine tandis que PIGE-2 et PIGE-4 contiennent des domaines supplémentaires qui permettent de fixer l'héparine. Encore plus préférentiellement, on entend par PIGE une protéine humaine dont la séquence est 20 choisie parmi l'une quelconque des isoformes identifiées par les numéros d'accession Uniprot P49763-2 (PIGE-1 dont la séquences d'acides aminés correspond à la SEQ ID NO :1) ; P49763-3 (PIGE-2 dont la séquences d'acides aminés correspond à la SEQ ID NO :2) ; P49763-1 (PIGE-3 dont la séquences d'acides aminés correspond à la SEQ ID NO :3) ; P49763-4 (PIGE-4 dont la séquences d'acides aminés correspond à la SEQ ID NO :4) présentées dans le listage de 25 séquences annexé à la présente demande. Selon un mode de réalisation de la présente invention, du PIGE recombinant ou des analogues protéiques du PIGE humain peuvent être également utilisés dans la prévention et/ou le traitement d'un TCAF. Particulièrement, le PIGE de la présente invention est obtenu, en utilisant un système de 30 production de protéine recombinante procaryote ou eucaryote, notamment en i) cultivant un microorganisme ou des cellules eucaryotes transformé(es) à l'aide d'une séquence nucléotidique codant le PIGE humain (numéro d'accession NCBI du gène 5228; numéro 3059550 4 d'accession des transcrits NM_002632.5 (SEQ ID NO :5), NM001207012.1 (SEQ ID NO :6), NM_001293643.1 (SEQ ID NO :7)) et ii) isolant la protéine produite par ledit microorganisme ou lesdites cellules eucaryotes. Cette technique est bien connue de l'homme du métier. Pour plus de détails la concernant, on pourra se référer à l'ouvrage ci-après : Recombinant DNA 5 Technology I, Editors Ales Prokop, Raskesh K Bajpai ; Annals of the New-York Academy of Sciences, Volume 646, 1991. La protéine PIGE est de préférence purifiée / isolée à partir de lysats de cellules et/ou de surnageants de cellules par lesquelles elle est exprimée et/ou sécrétée. Cette purification peut se faire par tout moyen connu de l'homme du métier. De nombreuses techniques de purification sont décrites dans Voet D et Voet JG, Techniques de 10 purification des protéines et des acides nucléiques. Les systèmes de production de protéine recombinante utilisent des vecteurs nucléotidiques comprenant des acides nucléiques codant les polypeptides à synthétiser, qui sont introduits dans des cellules hôtes qui produisent lesdits polypeptides (pour plus de détails, se référer à Recombinant DNA Technology I », Editors Ales Prokop, Raskesh K Bajpai ; Annals of the New- 15 York Academy of Sciences, Volume 646, 1991). De nombreux vecteurs dans lesquels on peut insérer une molécule d'acide nucléique d'intérêt afin de l'introduire et de la maintenir dans une cellule hôte eucaryote ou procaryote, sont connus; le choix d'un vecteur approprié dépend de l'utilisation envisagée pour ce vecteur (par exemple réplication de la séquence d'intérêt, expression de cette séquence, maintien de 20 cette séquence sous forme extrachromosomique ou bien intégration dans le matériel chromosomique de l'hôte), ainsi que de la nature de la cellule hôte (par exemple, les plasmides sont de préférence introduits dans des cellules bactériennes, tandis que les YACs sont de préférence utilisés dans des levures). Ces vecteurs d'expression peuvent être des plasmides, des YACs, des cosmides, des rétrovirus, des épisomes dérivés d'EBV, et tous les 25 vecteurs que l'homme du métier peut juger appropriés à l'expression desdites chaînes. Les vecteurs selon l'invention comprennent l'acide nucléique codant le PIGE, ou une séquence similaire, ainsi que les moyens nécessaires à son expression. On entend par - moyen nécessaire à l'expression d'un peptide », le terme peptide étant utilisé pour toute molécule peptidique, telle que protéine, polyprotéine, polypeptide, etc., tout moyen qui permet 30 d'obtenir le peptide, tel que notamment un promoteur, un terminateur de transcription, une origine de réplication et de préférence un marqueur de sélection. Les moyens nécessaires à l'expression d'un peptide sont liés de façon opérationnelle à la séquence d'acides nucléiques 3059550 5 codant pour le fragment polypeptidique de l'invention. Par - liés de façon opérationnelle », on entend une juxtaposition desdits éléments nécessaires à l'expression du gène codant pour le fragment polypeptidique de l'invention, lesquels sont en une relation telle que cela leur permet de fonctionner de façon attendue. Par exemple, il peut exister des bases 5 supplémentaires entre le promoteur et le gène codant le fragment polypeptidique de l'invention tant que leur relation fonctionnelle est préservée. Les moyens nécessaires à l'expression d'un peptide peuvent être des moyens homologues, c'est-à-dire naturellement compris dans le génome du vecteur utilisé, ou bien être hétérologues, c'est-à-dire rajouté de façon artificielle à partir d'un autre vecteur et/ou organisme. Dans ce dernier cas, lesdits 10 moyens sont clonés avec le fragment polypeptidique à exprimer. Des exemples de promoteurs hétérologues comprennent les promoteurs viraux tels que le promoteur SV40 (Virus simien 40), le promoteur du gène de la thymidine-kinase du virus simplex de l'Herpès (TK-HSV-1), le LTR du virus du sarcome de Rous (RSV), le promoteur premier immédiat du cytomégalovirus (CMV) et le promoteur dernier majeur adénoviral (MLP), ainsi que tout promoteur cellulaire qui 15 contrôle la transcription des gènes codant pour des peptides chez des eucaryotes supérieurs, tel que le promoteur du gène de phosphoglycérate-kinase (PGK) constitutif (Adra et al., Gene 1987), le promoteur des gènes spécifiques du foie alpha1-antitrypsine et FIX et le promoteur SM22 spécifique des cellules du muscle lisse (Moessler et al., Development 1996). Les méthodes de suppression et d'insertion de séquences d'ADN dans des vecteurs d'expression 20 sont largement connues de l'homme du métier et consistent notamment en des étapes de digestion enzymatique et ligature. Les vecteurs de l'invention peuvent également comprendre des séquences nécessaires au ciblage des peptides vers des compartiments cellulaires particuliers. Un exemple de ciblage peut être le ciblage vers le réticulum endoplasmique obtenu en utilisant des séquences d'adressage du type de la séquence leader issue de la 25 protéine E3 de l'adénovirus (Ciernik I. F., et al., The Journal of Immunology, 1999). Le terme - terminateur de transcription » désigne ici une séquence du génome qui marque la fin de la transcription d'un gène ou d'un opéron, en ARN messager. Le mécanisme de terminaison de la transcription est différent chez les procaryotes et chez les eucaryotes. L'homme du métier connait les signaux à utiliser en fonction des différents types cellulaires. 30 Par exemple, si la cellule dans laquelle le vecteur va être introduit est une bactérie, il utilisera un terminateur Rho-indépendant (séquence répétée inversée suivie d'une série de T (uraciles sur l'ARN transcrit) ou un terminateur Rho-dépendant (constitué d'une séquence consensus reconnue par la protéine Rho). 3059550 6 Le terme - origine de réplication » (aussi appelée oh) est une séquence unique d'ADN permettant l'initiation de la réplication. C'est à partir de cette séquence que débute une réplication unidirectionnelle ou bidirectionnelle. L'homme du métier sait que la structure de l'origine de réplication varie d'une espèce à l'autre ; elle est donc spécifique d'une espèce 5 bien qu'elle ait certaines caractéristiques communes entre espèces. Un complexe protéique se forme au niveau de cette séquence et permet l'ouverture de l'ADN et le démarrage de la réplication. Les vecteurs comprenant la séquence génétique codant PIGE sont préparés par des méthodes couramment utilisées par l'homme du métier. Les clones résultant peuvent être introduits 10 dans un hôte approprié par des méthodes standards connues de l'homme du métier pour introduire des polynucléotides dans une cellule hôte. De telles méthodes peuvent être la transformation à l'aide de dextrane, la précipitation par du phosphate de calcium, la transfection à l'aide de polybrène, la fusion de protoplastes, l'électroporation, l'encapsulation des polynucléotides dans des liposomes, l'injection biolistique et la micro-injection directe 15 d'ADN dans le noyau. On peut également associer ladite séquence (isolée ou insérée dans un vecteur plasmidique) avec une substance lui permettant de franchir la membrane des cellules hôtes, telle qu'un transporteur comme un nanotransporteur ou une préparation de liposomes, ou de polymères cationiques. En outre, on peut avantageusement combiner ces méthodes, par exemple en utilisant l'électroporation associée à des liposomes. 20 A titre d'exemples de microorganismes qui conviennent aux fins de l'invention, on peut citer les levures (Buckholz RG, Current Opinion in Biotechnology 1993) et les bactéries (Olins et Lee, Current Opinion in Biotechnology 1993). A titre d'exemples de cellules eucaryotes, on peut citer les cellules provenant d'animaux tels que les mammifères (Edwards CP et Aruffo A, Current Opinion in Biotechnology 1993), les reptiles, et équivalent. On peut également 25 utiliser les cellules de plantes. Parmi les cellules de mammifère, on peut notamment utiliser les cellules d'ovaire de hamster chinois (CHO), du singe (cellules COS et Vero), du rein de hamster nain (cellules BHK), du rein de cochon (cellules PK 15) et du rein de lapin (cellules RK13, les lignées cellulaires humaines de l'ostéosarcome (cellules 143 B), les lignées cellulaires humaines HeLa et les lignées cellulaires humaines de l'hépatome (du type cellules 30 Hep G2). Il est également possible d'utiliser des cellules d'insectes dans lesquelles on peut utiliser des procédés mettant en oeuvre des baculovirus par exemple (Luckow VA, Journal of Virology 1993). Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la cellule hôte utilisée pour produire le fragment de l'invention est une bactérie, de préférence la bactérie E. coli. 3059550 7 L'homme du métier connait les conditions dans lesquelles cultiver ces cellules, ainsi que les conditions expérimentales nécessaires à l'expression des fragments polypeptidiques par ces cellules. Le procédé de production de PIGE recombinant peut comprendre les étapes suivantes : 5 a) la culture dans un milieu et conditions de culture appropriés d'une cellule hôte comprenant le vecteur codant pour PIGE ; et b) l'isolement du PIGE produit à l'étape a). Le PIGE peut être isolé (purifié) à partir de la cellule l'exprimant. Dans ce cas, une étape préalable de lyse desdites cellules pourra être nécessaire. 10 Les milieux et conditions de culture associées à chaque type cellulaire utilisé pour la production de protéines recombinantes sont bien connus de l'homme du métier. L'isolement (ou la purification) de PIGE peut se faire par tout moyen connu de l'homme du métier. On citera par exemple la précipitation différentielle ou l'ultracentrifugation. Il peut être également avantageux de purifier le PIGE par chromatographie d'échange ionique, par 15 chromatographie d'affinité, par tamisage moléculaire, ou par isofocalisation. Toutes ces techniques sont décrites dans Voet D et Voet JG, Techniques de purification des protéines et des acides nucléiques, chapitre 6, Biochimie, 2nde édition. Plus précisément, dans une première étape, le matériel dont on veut extraire la protéine (tissu animal ou végétal, bactéries, etc) est généralement broyé. Divers appareils ("Waring 20 Blender", appareil Potter-Eveljhem, "Polytron", etc) peuvent être employés à cette fin. Cette homogénéisation se fait dans un tampon de composition appropriée, bien connue de l'homme du métier. L'homogénat ainsi obtenu est ensuite clarifié, le plus souvent par centrifugation, pour éliminer les grosses particules peu ou mal broyées ou encore pour obtenir la fraction cellulaire contenant la protéine recherchée. Si la protéine est justement dans un 25 compartiment cellulaire, on utilise généralement un détergent doux (Triton X-100, Tween 20, Désoxycholate de sodium, etc) pour la libérer en dissolvant les membranes de ce compartiment. L'emploi de détergent doit souvent être fait de façon contrôlée car ils peuvent briser les lysosomes, ce qui libère des enzymes hydrolytiques (protéases, nucléases, etc.) qui peuvent attaquer et détruire les protéines ou autres molécules qu'on veut isoler. Des 30 précautions particulières doivent être prises si on travaille avec des protéines sensibles à la dégradation ou peu nombreuses. Une solution fréquente à ce problème est l'inclusion dans les solutions d'inhibiteurs de protéases qui sont physiologiques (inhibiteurs de trypsine, antipaïne, 3059550 8 leupeptine, etc) ou artificiels (E64, PMSF, etc). Ensuite diverses techniques existent pour isoler la protéine recherchée. Une des méthodes se prêtant le mieux à de gros volumes est la précipitation différentielle au sulfate d'ammonium. Les chromatographies d'échange ionique ou les chromatographies 5 d'affinité, applicables aussi à de gros volumes d'échantillon mais ayant un assez bon pouvoir de séparation, constituent de bonnes méthodes intermédiaires. Pour finaliser la purification, le tamisage moléculaire ou l'isofocalisation sont souvent utilisés. Ces techniques permettent de raffiner la pureté, mais nécessitent de très petits volumes de protéines concentrées. Il est souvent avantageux, entre ces étapes, d'éliminer les sels ou produits utilisés dans ces 10 chromatographies. Ceci peut être obtenu par dialyse ou par ultrafiltration. Il peut aussi être avantageux d'utiliser un vecteur portant une séquence permettant d'identifier le PIGE de l'invention. De plus, il peut être avantageux de faciliter la sécrétion dans un système procaryote ou eucaryote. En effet, dans ce cas, la protéine recombinante d'intérêt sera présente dans le surnageant de la culture cellulaire plutôt qu'à l'intérieur des 15 cellules hôtes. Le PIGE peut être produit à des taux atteignant au moins lmg par litre, de préférence 2 mg par litre, de manière encore plus préférée, 5mg par litre de culture cellulaire. De manière alternative, il est possible de préparer le PIGE par synthèse chimique. L'homme du métier connaît les procédés de synthèse chimique, par exemple les techniques mettant en 20 oeuvre des phases solides ou utilisant des phases solides partielles, par condensation de la protéine ou par une synthèse en solution classique. Les fragments de l'invention peuvent par exemple être synthétisés par les techniques de la chimie de synthèse, telles que la synthèse de type Merrifield qui est avantageuse pour des raisons de pureté, de spécificité antigénique, d'absence de produits secondaires non désirés et pour sa facilité de production. Cette 25 synthèse chimique peut être couplée à une approche de génie génétique ou par génie génétique seul en utilisant les techniques bien connues de l'homme du métier et décrites par exemple dans Sambrook J. et a]., Molecular Cloning : A Laboratory Manual, 1989. Les réactifs et produits de départ sont commercialement disponibles, ou peuvent être synthétisés par des techniques conventionnelles bien connues (voir par exemple, WO 00/12508, WO 30 2005/085260). En particulier des analogues de PIGE peuvent être synthétisés en utilisant la technique décrite par Zheng et al. (Acta Ophthalmologica 2012 90(7) : e512 - e523). 3059550 9 Comme indiqué précédemment, la présente invention a pour objet un PIGE pour son utilisation dans la prévention et le traitement des TCAF. On entend par - Troubles Causés par l'Alcoolisation Foetale (TCAF) » l'ensemble des troubles chez l'enfant résultant de l'exposition à l'alcool durant la gestation. Ce terme comprend entre autres l'ensemble des troubles 5 comportementaux qui vont se révéler progressivement avec l'âge. Les enfants présentant ces troubles sont appelés des - enfants TCAF. » Dans leur version la plus sévère, les TCAF correspondent au syndrome d'alcoolisation foetale (SAF). Celui-ci se traduit par une dysmorphie craniofaciale (comprenant des fentes palpébrales raccourcies, un sillon naso-labial lisse, allongé, effacé et une lèvre supérieure mince) ; un retard de croissance non spécifique 10 (taille ou poids ou périmètre crânien) prénatal ou postnatal ou les deux ; des malformations diversement associées (cardiopathies, malformations uro-génitales, malformations digestives ou troubles de l'architecture cérébrale) et des troubles du développement neurologique s'exprimant parfois par un retard mental et plus souvent par des difficultés d'apprentissage. Les enfants atteints de SAF sont appelés des - enfants SAF ». 15 La majorité des enfants TCAF présente des troubles d'inadaptation et du comportement qui se révèlent progressivement avec l'âge (comprenant des difficultés d'allaitement et d'alimentation, des troubles du sommeil puis, à l'âge scolaire, des anomalies du comportement, des troubles cognitifs retentissant sur l'apprentissage, des déficits intellectuels avec un QI abaissé de 20 points (1 à 2 écarts type), des difficultés 20 d'apprentissage de la lecture (dyslexie) et plus encore du calcul (dyscalculie), des troubles de l'attention accompagnés d'hyperactivité ou d'hypercinésie. Ils sont connus sous le nom de Syndrome Déficitaire de l'Attention avec hyper kinésie (SDAH) (ou Attention Deficit Hyperactivity Desorder (ADHD) en anglais). Le terme TCAF est parfois substitué par le terme TSAF (Troubles du Spectre de l'Alcoolisation Foetale) correspondant (ou Fetal Alcohol 25 Spectrum Discorder (FASD) en anglais). Une définition complète des TCAF est donnée dans le Rapport de l'Académie Nationale Française de Médecine relatif à l'alcoolisation foetale (adopté le 22 mars 2016). Les inventeurs ont précédemment montré que l'exposition à l'alcool cause des atteintes vasculaires cérébrales. Par - atteinte vasculaire cérébrale », on entend ici toute altération du 30 système vasculaire cérébral, notamment une altération entrainant un fonctionnement altéré, voire défectueux dudit système. Une atteinte vasculaire cérébrale dans le contexte de l'invention peut notamment être une désorganisation du système vasculaire cérébral. Plus particulièrement, l'alcoolisation foetale induit une orientation aléatoire des vaisseaux 3059550 10 cérébraux. Selon un mode de réalisation particulier, le trouble de l'alcoolisation foetale est lié à une atteinte vasculaire cérébrale. Encore plus particulièrement, ledit trouble de l'alcoolisation foetale est lié à une désorganisation du système vasculaire cérébral. Les inventeurs ont également démontré par leurs travaux précédents que l'alcoolisation 5 foetale provoque une défaillance dans l'angiogenèse cérébrale. L'angiogenèse cérébrale est le processus de formation de vaisseaux sanguins dans le cerveau. Selon un mode de réalisation de la présente invention, le PIGE est utilisé pour stimuler l'angiogenèse cérébrale et ainsi améliorer le fonctionnement cérébral. Selon encore un autre mode de réalisation de l'invention, le PIGE peut être utilisé pour 10 prévenir et/ou traiter au moins un TCAF choisi parmi un quelconque des troubles de l'inadaptation et du comportement cités ci-dessus. Le PIGE peut aussi être utilisé pour prévenir et/ou traiter le syndrome d'alcoolisation foetale (SAF), notamment lorsque le SAF se manifeste sous forme d'une hypotrophie. Dans le contexte de la présente invention, le terme - Syndrome d'Alcoolisation Foetale (SAF) » 15 désigne la manifestation la plus extrême et invalidante des troubles causés par l'alcoolisation foetale (TCAF). Elle associe des anomalies physiques comme une hypotrophie (retard de croissance), une dysmorphie cranio-faciale et des anomalies neurocomportementales se traduisant par des troubles des fonctions cognitives (troubles de l'attention, de la motricité, de l'apprentissage ou encore de la mémorisation). On parle de SAF partiel lorsque l'enfant ne 20 présente qu'une partie des symptômes SAF. Les enfants SAF partiels présentent toutefois toujours une ou des anomalies neurocomportementales. Dans le contexte de l'invention, un enfant SAF, en particulier un nouveau-né, est considéré comme "hypotrophique" si son poids et sa taille sont en dessous du 10e percentile des courbes de référence. C'est souvent le cas des nouveau-nés prématurés et des nouveau-nés exposés in 25 utero à l'alcool. L'hypotrophie peut aussi être diagnostiquée avant terme, par échographie : on parle alors d'hypotrophie foetale ou de retard de croissance intra-utérin. Les inventeurs ont en outre démontré que l'augmentation de la quantité de PIGE permet d'augmenter la taille du corps entier d'un foetus ou de l'une ou plusieurs de ses parties, en particulier la taille du crâne, la taille du corps, la taille d'abdomen et sa profondeur. Cela 30 permet ainsi le rétablissement partiel ou complet de l'aspect morphométrique normal. 3059550 11 L'administration de PIGE permet donc de compenser l'hypotrophie des sujets SAF qui représentent les formes les plus graves de TCAF. Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne ainsi un PIGE pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement du SAF, notamment lorsque le SAF se 5 manifeste sous forme d'une hypotrophie due à l'exposition intra-utérine à l'alcool. En particulier, il s'agit d'une hypotrophie du corps entier d'un sujet ou de l'une ou plusieurs de ses parties choisies parmi le torse (ou encore appelé le corps), l'abdomen et le crâne. En particulier le sujet est un foetus ou un enfant, en particulier un prématuré. Selon un mode de réalisation de la présente invention le sujet ayant été exposé in utero à 10 l'alcool est choisi parmi un embryon, un foetus ou un enfant, de préférence un foetus ou un enfant, en particulier, un enfant prématuré. La période entre la 30ème semaine gestationnelle et le terme de la grossesse est celle pendant laquelle l'angiogenèse cérébrale est la plus importante. Il est ainsi particulièrement préféré d'administrer le PIGE à un foetus exposé in utero à l'alcool à cette période précisément. 15 Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, lorsque le sujet TCAF est un enfant prématuré, le traitement consistera à supplémenter en PIGE ce sujet sur la période ex utero correspondante aux semaines de vie intra-utérines perdues. De préférence, la fenêtre de traitement peut s'étendre de la 30ème semaine gestationnelle au terme théorique (40 semaines gestationnelles), période durant laquelle l'angiogenèse cérébrale chez l'Homme est 20 particulièrement intense. On entend par « sujet » selon l'invention un humain, et de préférence un embryon, un foetus ou un enfant. Un « embryon », tel qu'on l'entend ici, correspond à un ovocyte fécondé de moins de trois mois. Par « foetus », on entend ici un individu pris avant la naissance et dont l'âge gestationnel est compris entre 3 et 9 mois. Après l'accouchement, le sujet devient un 25 enfant. Par « enfant », on entend selon l'invention un individu dont l'âge est inférieur à 3 ans. Sont ainsi compris dans la catégorie des enfants selon l'invention, les nouveau-nés, dont l'âge est compris entre 0 et 1 mois, les nourrissons, qui ont entre 1 mois et 2 ans, et les enfants proprement dits, qui sont âgés d'au moins 2 ans. Un « nouveau-né », comme on l'entend ici, peut aussi bien être né à terme qu'être prématuré. Dans le contexte de la présente demande 30 le terme « prématuré » désigne un enfant né vivant avant 37 semaines d'aménorrhée. Ce terme recouvre trois sous-catégories : la prématurité extrême ( REVENDICATIONS1. Facteur de croissance placentaire (PIGF) pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des troubles causés par l'alcoolisation foetale (TCAF) chez un sujet ayant été exposé à l'alcool in utero. 2. PIGF pour son utilisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que le TCAF est lié à une atteinte vasculaire cérébrale. 3. PIGF pour son utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que ledit PIGF stimule l'angiogenèse cérébrale. 4. PIGF pour son utilisation selon ta revendication 1, caractérisé en ce que le TCAF est le syndrome d'alcoolisation foetale (SAF), notamment lorsqu'il se manifeste sous forme d'une hypotrophie chez un sujet ayant été exposé à l'alcool in utero. 5. PIGF pour son utilisation selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'hypotrophie est une hypotrophie du sujet entier ou d'une de ses parties choisies parmi le torse, l'abdomen et te crâne. 6. PIGF pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que ledit KGF possède ta séquence représentée par une parmi SEQ ID NO : 1 à SEQ ID NO :4. 7. PIGF pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il est obtenu par génie génétique ou par synthèse chimique. 8. PLGF pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le sujet ayant été exposé à l'alcool in utero est choisi parmi un embryon, un foetus et un enfant, en particulier un enfant prématuré. 9. PIGF pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que l'enfant est un enfant prématuré. 10. Composition pharmaceutique pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des troubles causés par l'alcoolisation foetale (TCAF) comprenant un PIGF tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 9 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 34 3059550 11. PLGF pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 ou composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 10, caractérisés en ce que ladite utilisation comprend une étape préalable d'identification du sujet, ladite identification comprenant les étapes suivantes : 5 a) mesure de la quantité de PIGF dans un échantillon biologique dudit sujet, de préférence provenant du placenta ou du sang du cordon ombilical ; b) comparaison de la quantité de PIGF de l'étape a) avec une référence qui est une mesure de la quantité de KGF chez un sujet sain, et c) détermination d'un TCAF ou d'un risque de développer un TCAF chez ledit sujet. 10 12. KGF ou composition pour leur utilisation selon ta revendication 11 caractérisés en ce que le sujet souffre d'un TCAF ou a été identifié à risque de développer un TCAF si la quantité mesurée de PLGF à l'étape a) est inférieure à la référence de l'étape b). 13. KGF ou composition pour leur utilisation selon la revendication 11, caractérisés en ce que la quantité de PIGF est déterminée en mesurant la quantité d'acide nucléique 15 KGF ou ta quantité du polypeptide PIGF. 14. PIGF ou composition pour leur utilisation selon l'une queldonque des revendications 11 à 13 caractérisés en ce que la quantité de KGF est mesurée par une méthode sélectionnée parmi te Northern blot, le Southern btot, la PCR, la RT-PCR, la RT-PCR quantitative, te SAGE et ses dérivés, les puces d'acides nucléiques, notamment les 20 puces à ADNc, tes puces à oligonucléotides et tes puces à ARNm, les puces à tissu et le RNA-Seq et/ou par une méthode sélectionnée parmi l'immunohistologie, l'immunoprécipitation, le western blot, te dot blot, l'ELISA ou l'ELISPOT, les puces à protéines, tes puces à anticorps, ou tes puces à tissu couplées à l'immunohistochimie, les techniques de FRET ou de BRET, les méthodes de microscopie ou d'histochimie, 25 dont notamment les méthodes de microscopie confocale et de microscopie électronique, les méthodes basées sur l'utilisation d'une ou plusieurs longueurs d'onde d'excitation et d'une méthode optique adaptée, comme une méthode électrochimique (les techniques voltamétrie et d'ampérométrie), le microscope à force atomique, et les méthodes de radiofréquence, comme la spectroscopie résonance multipolaire, confocale et non-confocale, détection de fluorescence, luminescence, chemiluminescence, absorbance, réflectance, transmittance, and biréfringence ou index de réfraction (par exemple, par résonance des ptasmons de surface, par ellipsométrie, par méthode de miroir résonnant, etc), cytométrie de 3059550 flux, imagerie par résonance radioisotopique ou magnétique, analyse par électrophorèse en gel de polyacrylamide (SDS-PAGE); par spectrophotométrie HPLCMass, par chromatographie liquide/spectrophotométrie de masse/spectrométrie de masse (LC-MS/MS). 5