Brevet FR3061911A1 — publié le 20180720

PLAQUE POUR LA BIOLOGIE CELLULAIRE DOMAINE TECHNIQUE L'invention concerne le domaine des supports pour la biologie et notamment le domaine des plaques biocompatibles comprenant des trous appelés puits, dans lesquelles des cellules vivantes sont déposées pour les mettre en culture, pratiquer sur elles des analyses et des mesures, notamment impliquant leur culture et leur croissance en nombre. ARRIERE PLAN Les tests ou essais de migration et de cicatrisation de plaie sont un outil répandu en biologie cellulaire pour la caractérisation de cellules à la fois au laboratoire et pour le diagnostic. Ce type de test ou essai consiste à créer un écart ou fossé ou tranchée ou blessure ou plaie dans une monocouche de cellules et à caractériser par imagerie la vitesse et le mode de déplacement des cellules. C'est une approche très simple qui est par exemple utilisée pour caractériser des cellules épithéliales et/ou mésenchymateuses dans le diagnostic du cancer ainsi que pour estimer les effets des médicaments. Des essais de migration typiques requièrent quelques dizaines de millier de cellules fermant la plaie. Toutefois, les cellules primaires comme les lignées de cellules montrent de grandes variations de leur vitesse de migration qui proviennent de grandes variations dans leur expression des protéines, dans leur expression des gènes ou de facteurs épi-génétiques. Des essais courants ne permettent cependant pas dans l'art antérieur de prélever des populations de cellules sur le critère de leurs propriétés de migration pour appliquer une approche « omique » et tester la variabilité cellulaire et les différentes façons dont les médicaments influencent les propriétés de migration à l'intérieur d'une population donnée de cellules. Dans l'art antérieur, des essais impliquant une seule cellule peuvent être envisagés, mais ils sont délicats, onéreux, et nécessitent une approche radicalement différente par rapport à des essais routiniers de migration ou de cicatrisation. L'art antérieur utilise aussi couramment les chambres de «Boyden» pour étudier la migration stimulée de cellules à travers une couche épithéliale, mais ces chambres ne 3061911 2 sont pas sélectives en termes de vitesse de migration et la migration doit être induite par un chemoattractant. En conséquence, dans l'art antérieur, l'isolement de populations de cellules triées selon le critère de leur vitesse de migration est un problème difficile. 5 PRESENTATION GENERALE Dans la présente demande, on entendra par : PDMS : le matériau dit polydiméthylsiloxane -[0-Si(CH3)2]n. Pelage ou décollement : un mode de suppression d'une liaison mécanique entre un film et un autre film ou entre le film et un support, permettant de prélever ou séparer le film de 10 l'autre film ou du support, cette liaison est donc un type de liaison démontable entre deux surfaces obtenue par exemple par un laminage ou un encollage entre deux surfaces avec une colle ne se solidifiant pas ou réversible. Imperméable aux cellules : la propriété pour un matériau de ne pouvoir être traversé par les cellules vivantes. 15 Dans ce contexte, l'invention concerne une plaque pour la biologie cellulaire, comprenant un support biocompatible, un empilement sur le support de films souples biocompatibles, l'empilement comprenant un puits traversant l'empilement jusqu'au support, dans laquelle les films de l'empilement sont engagés, entre eux et avec le support, dans une liaison mécanique permettant le pelage. 20 Dans des variantes de la plaque : - l'empilement comprend un film de prélèvement et un film tampon, le film tampon étant disposé entre le film de prélèvement et le support. - l'empilement comprend un film sacrificiel, le film de prélèvement étant disposé entre le film sacrificiel et le film tampon. 25 - le film de prélèvement, le film tampon et le support sont en polydiméthylsiloxane(PDMS). - le film sacrificiel est en plastique imperméable aux cellules vivantes. L'invention concerne aussi un procédé pour obtenir une plaque pour la biologie cellulaire comprenant les étapes suivantes: - disposer sur un support biocompatible un empilement de films souples biocompatibles ; 3061911 3 - laminer les films sur le support pour engager les films, entre eux et avec le support, dans une liaison mécanique permettant le pelage. L'invention concerne aussi un procédé pour la biologie cellulaire comprenant les étapes suivantes: 5 - déposer un mélange de premières cellules et de secondes cellules, sur une plaque pour la biologie cellulaire comprenant un support biocompatible et un empilement de films biocompatibles souples et comprenant un puits traversant l'empilement jusqu'au support, dans laquelle les films de l'empilement sont engagés, entre eux et avec le support, dans une liaison mécanique permettant le pelage; 10 - puis, nettoyer la plaque pour en enlever les cellules du mélange, en dehors de la surface du puits; - puis, laisser migrer les premières cellules du mélange, via la surface du puits, sur un film de prélèvement, le plus éloigné du support à ce stade du procédé; - puis, peler le film de prélèvement, pour obtenir, par rapport au mélange, sur le film de 15 prélèvement, une population purifiée de premières cellules. Dans des variantes du procédé: - le procédé comprend l'étape ultérieure suivante de peler les films de l'empilement restant sur le support, pour obtenir, par rapport au mélange, sur le support, une population purifiée de secondes cellules. 20 - le nettoyage est obtenu par rinçage du film de l'empilement le plus éloigné du support à ce stade du procédé. - le nettoyage est obtenu par pelage du film de l'empilement le plus éloigné du support à ce stade du procédé. Ci-dessus, les premières cellules et les secondes cellules présentent des propriétés 25 migratoires hétérogènes au sens que les premières cellules de la population initiale se déplacent ou migrent plus vite que les secondes cellules de la population initiale, d'une part sur la surface du puits, aussi bien sur le fonds du puits que sur ses parois, et d'autre part sur la surface du film de prélèvement, qui est supposée sans obstacle pour cette migration des premières cellules. 30 On obtient ainsi sur le film de prélèvement, d'abord les premières cellules, supposées à forte capacité migratoire comparées aux secondes cellules, puis les secondes cellules. En 3061911 4 adaptant, pour une population initiale de cellules l'intervalle de temps après lequel est enlevé le film de prélèvement, on obtient donc d'une part une population finale de cellules sur le film de prélèvement qui est plus riche en premières cellules qu'en secondes cellules et d'autre part une population finale de cellules sur le fonds du puits, s'étendant donc sur 5 le film support, qui est plus riche en secondes cellules qu'en premières cellules. La collecte ultérieure des cellules présentes sur le support, le film de prélèvement et les autres films de l'empilement comme le film tampon, est obtenue par leur détachement des différents films et du support, par des techniques classiques de dissociation cellulaire (par exemple par trypsinisation). 10 La présente demande concerne un dispositif qui adopte la même approche que des essais de migration mais qui permet la collecte ou le tri aisé de cellules qui ont migré à des vitesses différentes, permettant le tri ou la purification de populations de cellules selon le critère de la vitesse de migration. Plus de 100 000 cellules peuvent être collectées pour chaque utilisation du dispositif selon 15 la présente demande, ce qui permet d'appliquer subséquemment des caractérisations «omiques» des cellules triées. La présente demande fournit donc un outil de chromatographie ou de tri ou de séparation cellulaire fondé sur la vitesse de migration des cellules sur une surface. Les principes à la base de l'invention sont exposés ci-dessous. 20 Des cellules sont ensemencées au fond d'une cavité ou puits, comprenant plusieurs couches empilées sur un support et traversées par un trou jusqu'au support. Chaque couche a une épaisseur qui peut être variable et le nombre de couches peut être variable sans sortir de l'enseignement de la présente demande. Les cellules sont tout d'abord ensemencées au fond de la cavité. Comme les cellules 25 migrent et se divisent, elles « grimpent » aux murs de la cavité à partir du fond, d'abord sur la tranche du premier film puis sur les suivants jusqu'au dernier film, le plus éloigné du substrat, situé au sommet de la cavité, jusqu'à ce qu'elles débordent du sommet de la cavité (typiquement après 1 à 4 jours) et qu'elles envahissent ensuite la surface du dernier film qui est exposé à l'atmosphère environnant la plaque, constituée du support et 30 de son empilement. Quand la distance de migration ou profondeur de la cavité est suffisante, les cellules sont collectées en fonction de leur distance de migration en pelant les différentes couches de l'empilement une par une. Chaque couche contenant à un instant donné les cellules pour 3061911 5 lesquelles la distance de migration est égale à la vitesse de migration multipliée par le temps. Une fois les couches ou films prélevés, les cellules sélectionnées ou triées peuvent être détachées de chaque couche par des moyens connus de l'art antérieur, comme un bain 5 de trypsine et traitées par d'autres moyens (culture, lyse pour un criblage de leur ARN, Western Blot , ) De façon alternative, sur la dernière couche de l'empilement ou couche de prélèvement, on pourra pour une population comprenant deux types de cellules possédant deux vitesses de migration distinctes, recueillir au bout d'un temps donné, uniquement des 10 cellules d'un seul type, pourvu que, comme condition de séparation, le produit de la différence de vitesse multipliée par le temps écoulé depuis l'ensemencement soit supérieur à l'épaisseur de la couche de prélèvement. A cette fin, on pourra épaissir les autres couches de l'empilement qui constituent fonctionnellement une couche « tampon » pour augmenter le temps de débordement jusqu'à satisfaire la condition de séparation 15 des deux types de cellules. L'enseignement de la présente demande porte sur une plaque comprenant un support et un empilement de films, « pelable » du support. Par « pelable », on entend que les couches ou films constituant l'empilement, hormis le fait qu'elles sont traversées par un trou jusqu'au support pour former un puits, sont engagées entre elles et avec le support 20 dans une liaison mécanique permettant le pelage ou le prélèvement par décollement, soit notamment de chaque film individuellement pour laisser les autres , soit d'un groupe de films pour laisser un autre groupe de films, soit encore de l'ensemble des films pour ne conserver que le support. Le pelage étant une opération de séparation mécanique permettant, par exemple, de détacher sans destruction le dernier film de l'empilement des 25 autres, sans le détruire, par exemple en grattant le film et en le tirant avec une pince à épiler. On conçoit donc que si une couche est extraite par pelage et que des cellules d'un type sont présentes sur les bords du trou appartenant à la couche, elles pourront être prélevées en même temps que la couche. 30 On pourra notamment enlever la dernière couche de l'empilement, c'est-à-dire la plus éloignée du substrat ou support pour emporter préférentiellement des cellules rapides ayant la plus grande vitesse de migration puis peler tous les autres films en ne conservant que le support recouvert préférentiellement des cellules lentes ayant la plus faible vitesse de migration. 3061911 6 On remarque aussi que si l'on laisse déborder sur le pourtour du puits, les cellules les plus rapides sur une surface de pourtour égale à celle de la surface du fonds du puits, on disposera facilement de populations de cellules rapides et lentes en nombre comparables, possiblement élevé et pouvant notamment atteindre aisément 100 000 cellules pour les 5 deux populations. Ce mode est le mode préféré pour l'invention. Pour réaliser la plaque ci-dessus, les films de l'empilement peuvent avoir notamment été laminés sur le support pour en faire disparaître les bulles d'air et provoquer une adhésion sous forme d'une liaison mécanique permettant le pelage ultérieur des films, cette liaison existant aussi bien entre les films de l'empilement qu'entre le film au contact du support et 10 le support. Pour obtenir cette liaison mécanique, on n'a pas écrasé les films avec une force trop grande pour les faire devenir un film homogène unique, mais on ne les a pas non plus simplement pressés avec une force insuffisante pour les faire tenir les uns sur les autres et sur le support. Un laminage contrôlé permet par exemple un tel résultat en ajustant la 15 force perpendiculaire aux films lors de leur laminage, ou pressage contre le support, par de simples opérations d'exécution pour chaque combinaison de films choisie pour constituer l'empilement. Le support sera préférentiellement rigide et les films seront souples dans la mesure à permettre leur pelage sans les casser. Un support sous forme d'un film, d'une couche ou 20 d'une feuille souple est cependant aussi dans l'enseignement de la présente demande. On peut noter pour la réalisation de la plaque, que le laminage des films ensemble et leur perçage pourrait être effectué dans une première étape, les films étant alors percés de trous traversant l'empilement de part en part, puis dans une seconde étape l'empilement pourrait être laminé sur le support. 25 De façon alternative, le perçage des films laminés sur le support peut être effectué en contrôlant la profondeur de perçage pour laisser le support constituer le fond du puits ou des puits, dont les parois sont constituées par l'empilement. Un perçage par poinçon ou par laser est envisageable dans les deux méthodes de réalisation. 30 Des films de PDMS de 125 microns sont particulièrement adaptés à la réalisation de l'empilement. Une dizaine de films permettra ainsi d'atteindre une épaisseur tampon de 1,25 mm pour l'empilement, cette dizaine de films étant alors constituée de neuf films 3061911 7 formant fonctionnellement une couche « tampon » pour la migration et d'un dernier film utilisé pour le prélèvement, qui est structurellement le film plus éloigné du support. Un support de plusieurs millimètres d'épaisseur est envisageable. Pour le diamètre des puits, il est fixé par la technologie de perçage et peut être adapté 5 aux caractéristiques de migration des cellules à trier. La présente demande permet donc de réaliser de façon routinière, sans équipement lourd ni personnel hautement qualifié, un tri de cellules en fonction de leur vitesse de migration sur une surface de puits, avec un nombre de cellule triées compatible avec des études « omiques » comme notamment la génomique. 10 Dans l'utilisation de l'invention, il pourra être disposé sur l'empilement un film sacrificiel, destiné à protéger le film situé sous lui. Par exemple ce film pourra être en un matériau comme le PDMS ou en un matériau plastique imperméable aux cellules vivantes et meilleur marché que le PDMS, pourvu qu'il soit comme tous les matériaux de la présente demande biocompatible ou compatible avec les cellules vivantes. 15 En effet, une fois les cellules ensemencées sur le fonds du puits, par une solution aqueuse contenant les cellules, il faudra nettoyer la surface extérieure de l'empilement, surface du dernier film exposée à la solution cellulaire. Pour ce faire ce nettoyage, on peut rincer la surface au moyen d'une solution aqueuse contenant de la trypsine, la solution ne pénétrant pas dans les puits si elle est écoulée 20 parallèlement à la surface extérieure de l'empilement, i.e. parallèlement au substrat pour des couches planes et à faces parallèles et un support plan et à faces parallèle. On laissera ainsi une face extérieure de l'empilement à ce stade du procédé, c'est-à-dire après rinçage de la plaque, vierge de cellule vivante. Pour faire ce nettoyage, on peut aussi peler le film sacrificiel, c'est-à-dire soit la dernière 25 couche de PDMS soit la dernière couche en plastique. On laissera ainsi une face extérieure de l'empilement à ce stade du procédé, c'est-à-dire après pelage du film sacrificiel, vierge de cellule vivante. Il est évidemment intéressant de multiplier le nombre de puits, par exemple 12 ou 24 pour paralléliser et multiplier les expériences ou tests, avec une seule plaque. 30 Les caractéristiques et avantages précités, ainsi que d'autres, apparaîtront à la lecture de la description détaillée qui suit, d'exemples de réalisation de l'invention. Cette description détaillée fait référence aux dessins annexés. 3061911 8 BREVE DESCRIPTION DES DESSINS Les dessins annexés sont schématiques et ne sont pas à l'échelle, ils visent avant tout à illustrer les principes de l'invention. La figure 1 représente une couche support, ou support, de PDMS recouverte d'une 5 couche tampon, ou tampon, elle-même recouverte d'une couche de prélèvement. La couche tampon s'étend entre le support et la couche de prélèvement. La couche tampon et la couche de prélèvement sont percées d'un trou qui aboutit à la couche support sans la traverser. DESCRIPTION DETAILLEE D'EXEMPLE(S) 10 Dans un premier mode de réalisation, en lien avec la figure 1, une plaque pour la biologie selon l'invention est réalisée par une couche support 1 en PDMS de 125 microns d'épaisseur et une couche tampon 2 ou tampon d'épaisseur réalisée à partir de trois couches de 125 microns d'épaisseur en PDMS soit une couche équivalente de 375 microns, dont les séparations en couches de 125 microns ne sont pas représentées, et 15 une couche de prélèvement 3 en PDMS de 125 microns d'épaisseur. Dans ce premier mode de réalisation, la couche tampon 2 est plus épaisse que la couche support 1 et la couche de prélèvement 3 est d'épaisseur sensiblement égale à la couche support. Cependant, l'enseignement de la présente demande s'applique aussi, à partir du premier mode décrit, à: une épaisseur de couche tampon qui est différente de l'épaisseur 20 de la couche de prélèvement ou d'un multiple de l'épaisseur de la couche de prélèvement; une épaisseur de couche tampon qui est différente de l'épaisseur du support ou d'un multiple de l'épaisseur du support; une épaisseur de la couche de prélèvement qui est différente de l'épaisseur du support ou d'un multiple de l'épaisseur du support; une couche tampon plus ou moins épaisse ou de même épaisseur que la couche de 25 prélèvement ; une couche tampon plus ou moins épaisse ou de même épaisseur que le support ou couche support; une couche de prélèvement plus ou moins épaisse ou de même épaisseur que la couche support ou support. La couche tampon 2 est disposée entre la couche de prélèvement 3 et la couche support 1. La couche tampon 2 et la couche de prélèvement 3 sont percées d'un trou qui les 30 traverse jusqu'à la couche support 1. Un puits est ainsi formé pour ses parois par la couche de prélèvement 3 et la couche tampon 2 et pour son fond par la couche support 1 ici souple. 3061911 9 Dans ce cas, il suffira de peler la couche de prélèvement 3 puis de l'autre côté de la couche tampon 2, la couche support 1, pour obtenir deux populations de cellules, pour un fonctionnement dit binaire de l'invention. Le support 1 pourra être plus épais, donc plus rigide, et constitué de plusieurs sous- 5 couches en PDMS de même épaisseur soit 125 microns pour chacune des sous-couches. Dans ce cas, on pèlera la couche tampon 2 après la couche de prélèvement, jusqu'à voir apparaitre une couche pelée sans trou, ce qui sera la première sous-couche du support correspondant au fond du puits. Sur cette sous-couche, on obtiendra une population de cellules tapissant le fond du puits sur la couche support. 10 Un second mode de réalisation est décrit ci-dessous pour le dispositif et le procédé selon l'invention. Pour la fabrication, on utilise pour ce mode des feuilles de PDMS (d'origine SMI) de 250 microns d'épaisseur empilées les unes sur les autres (2 à 5 feuilles ou films de format A4). Les feuilles sont ensuite découpées par un dispositif commercial de découpe au 15 laser (par exemple celui d'une compagnie de conception de d'autocollants) pour percer un réseau de trous (typiquement de 500 microns de diamètre espacés de 1,5mm) à travers l'empilement. On obtient ainsi un réseau au format A4 qui est ensuite découpé en morceaux. On prendra par exemple des morceaux de 1 cm par 1 cm, ce qui pour des puits de 500 20 microns permet d'obtenir 30 à 40 puits pour être adapté à une boîte de Pétri d'un pouce soit 21,5mm ou à des boîtes prévues pour six puits de l'art antérieur. Le morceau de système découpé est soigneusement rincé et passé aux ultrasons dans de l'éthanol pour retirer la poussière provoquée par la découpe et pour le stériliser. Il est ensuite placé dans une boîte de Pétri ou sur une boîte pour multi-puits de l'art 25 antérieur, recouvertes de protéines ECM (en anglais « extra cellular matrix proteins ») pour empêcher l'adhésion des cellules vivantes. Pour l'ensemencement, des cellules sont alors ensemencées dans chaque puits par une goutte de deux microlitres de milieu contenant des cellules à une densité de 3 000 000 de cellules par ml, ce qui donne 6000 cellules par puits. Les cellules tombent dans les puits 30 et s'attachent au fond exclusivement, les parois verticales ne permettant pas l'adhésion aisée des cellules. Un angle faible préservant cette propriété de non-adhésion serait dans l'enseignement de la présente demande, par équivalence. Après une heure, le milieu est retiré et remplacé par un milieu de culture dépourvu de cellules, pour enlever les cellules 3061911 10 flottant dans le milieu. Le milieu peut aussi être rincé mais dans ce mode, on pèle la couche la plus éloignée du fonds du puits, en présence du milieu de culture, avec une pince à épiler pour retirer toutes les cellules qui ne seraient pas tombées dans les cavités mais auraient adhéré à la surface de l'empilement en dehors des puits. 5 Cette procédure est très similaire à la procédure standard d'ensemencement utilisée pour une boîte de Pétri. Pour la migration, le système est laissé en culture dans un milieu adaptée contenant des protéines ECM pour le temps nécessaire aux cellules pour sortir des cavités (typiquement 1,5 à 3 jours). 10 Pour la récolte ou collecte, on utilise une pince à épiler pour soit peler les différentes couches de l'empilement une à une, soit peler la dernière couche puis peler d'un seul coup toutes les autres et ne laisser que le support ou la dernière couche. Chaque couche utile est traitée une fois détachée avec un milieu pour détacher les cellules (contenant par exemple de la trypsine) pour une culture ultérieure classique, pour une lyse en vue d'un 15 séquençage ARN/ADN. Aucun outil spécifique ou appareil de détection particulier additionnel n'est nécessaire pour obtenir des cellules purifiées sur le critère de leur vitesse de migration. Le processus décrit ci-dessus peut être répété pour purifier encore par migration différentielle, les populations de cellules obtenues. 20 Avec des boîtes de Pétri on obtient ainsi aisément 400 000 cellules par boîte, i.e. 1 à 2 microgrammes d'ARN. Pour une population de cellules mélangée à dans une proportion de 50%-50% de cellules MDA-MB et MCF7 (qui possèdent une large différence de vitesse de migration) , l'efficacité de séparation est de 90% par cycle. 25 Pour une population de cellules de lignée A549, on obtient une efficacité de séparation de 90% du phénotype mésenchymateux par rapport au phénotype épithélial. On comprendra de la présente demande que l'invention est un système constitué de membranes qui peuvent être pelées pour prélever sur ces membranes des cellules qui ont migré à une certaine distance en plus ou moins grande quantité, du fait de différences 30 dans leur vitesse de migration sur une surface. L'enseignement de la présente demande s'applique aussi à partir du premier mode décrit, a: 3061911 11 - des changements de matériau, de dimensions ou de forme des puits, d'épaisseur des couches ou de densité ou de nombre de puits ; - une inclinaison des parois des puits autre que perpendiculaire au plan des couches, pour permettre une meilleure visualisation du processus de migration ; 5 - un usage en tant que tel, plutôt que à des fins «omiques» ; - à l'automatisation du procédé à l'aide de robots ; - une préparation adaptée à une plaque multi-puits, une boîte de Pétri, ou une lame de microscope ; - une utilisation avec des populations de cellules ayant des scores 10 mésenchymatewdépithélial différents des cellules citées dans la demande. L'invention est susceptible d'application industrielle ou utile dans le domaine de la biologie cellulaire. Il est entendu, au sens de la présente demande, que les mots "efficacité de séparation" sont synonymes des mots "efficacité de purification" ou des mots "efficacité 15 d'enrichissement". Enfin, les différentes caractéristiques des modes ou exemples de réalisation décrits dans le présent exposé peuvent être considérées isolément ou être combinées entre elles. Lorsqu'elles sont combinées, ces caractéristiques peuvent l'être comme décrit ci-dessus ou différemment, l'invention ne se limitant pas aux combinaisons spécifiques 20 précédemment décrites. En particulier, sauf précision contraire ou incompatibilité technique, une caractéristique décrite en relation avec un mode ou exemple de réalisation peut être appliquée de manière analogue à un autre mode ou exemple de réalisation. 25 REVENDICATIONS1. Plaque pour la biologie cellulaire, comprenant un support (1) biocompatible, un empilement sur le support de films souples biocompatibles, l'empilement comprenant un puits traversant l'empilement jusqu'au support, dans laquelle les films de l'empilement sont engagés, entre eux et avec le support, dans une liaison mécanique permettant le pelage. 2. Plaque selon la revendication 1, dans laquelle l'empilement comprend un film de prélèvement (3) et un film tampon (2), le film tampon étant disposé entre le film de prélèvement et le support (1). 3. Plaque selon la revendication 2, dans laquelle l'empilement comprend un film sacrificiel, le film de prélèvement (3) étant disposé entre le film sacrificiel et le film tampon (2). 4. Plaque selon la revendication 2 ou 3, dans laquelle le film de prélèvement (3), le film tampon (2) et le support (1) sont en polydiméthylsiloxane (PDMS). 5. Plaque selon la revendication 3, dans laquelle le film sacrificiel est en plastique imperméable aux cellules vivantes. 6. Procédé pour obtenir une plaque pour la biologie cellulaire comprenant les étapes suivantes : - disposer sur un support biocompatible un empilement de films souples biocompatibles; - laminer les films sur le support pour engager les films, entre eux et avec le support, dans une liaison mécanique permettant le pelage. 7. Procédé pour trier des cellules pour la biologie cellulaire comprenant les étapes suivantes: - déposer un mélange de premières cellules et de secondes cellules, sur une plaque pour la biologie cellulaire comprenant un support (1) biocompatible et un empilement de films biocompatibles souples et comprenant un puits traversant l'empilement jusqu'au support, dans laquelle les films de l'empilement sont engagés, entre eux et avec le support, dans une liaison mécanique permettant le pelage; - puis, nettoyer la plaque pour en enlever les cellules du mélange, en dehors de la surface du puits; 3061911 2 - puis, laisser migrer les premières cellules du mélange, via la surface du puits, sur un film de prélèvement (3), le plus éloigné du support (1) à ce stade du procédé; - puis, peler le film de prélèvement, pour obtenir, par rapport au mélange, sur le film de prélèvement (3), une population purifiée de premières cellules. 5 8. Procédé selon la revendication 7, comprenant l'étape ultérieure suivante: - peler les films de l'empilement restant sur le support (1), pour obtenir, par rapport au mélange, sur le support, une population purifiée de secondes cellules. 9. Procédé selon la revendication 7 ou 8, dans lequel le nettoyage est obtenu par rinçage du film de l'empilement le plus éloigné du support à ce stade du procédé. 10 10. Procédé selon la revendication 7 ou 8, dans lequel le nettoyage est obtenu par pelage du film de l'empilement le plus éloigné du support à ce stade du procédé.