Brevet FR3054321A1 — publié le 20180126

Système et procédé de mesure d'un paramètre physique d'un milieu La présente invention est relative aux systèmes et 5 procédés de mesure de paramètre physique dans un milieu. L'invention peut notamment trouver une application dans le domaine de l'imagerie et de la microscopie optique super-résolue. D'autres domaines d'applications peuvent être 10 envisagés, notamment dans le domaine de l'acoustique et des ondes radiofréquences par exemple. Une technique de microscopie optique super-résolue, appelée microscopie optique de fluorescence super-résolue, consiste à mesurer la position et les caractéristiques 15 physiques de fluorophores intégrés dans le milieu observé. Les fluorophores sont des émetteurs de lumière nanoscopiques excitables qui, lorsqu'ils sont excités par une lumière incidente, émettent un certain nombre de photons avant de s'autodétruire. Les méthodes de super- 20 résolution optique ont pour objectif de capter ces photons de sorte à localiser et/ou caractériser les fluorophores avant que ces derniers ne s'autodétruisent. Des techniques connues de microscopie de super-localisation sont par exemple les méthodes « PALM » 25 (acronyme anglo-saxon pour « Photo-Activation Localization Microscopy ») ou « STORM » (acronyme anglo-saxon pour « Stochastic Optical Reconstruction Microscopy »). Ces techniques ont pour point commun d'activer un petit nombre de fluorophores dans le milieu de sorte à 30 pouvoir zoomer fortement sur un fluorophore unique et déterminer le centre de la tâche focale générée par ledit fluorophore. Ces techniques d'observations permettent ainsi d'observer les structures intracellulaires avec une 35 précision de l'ordre de la dizaine de nanomètres. 3054321 2 Ces techniques présentent toutefois des inconvénients. Ainsi la précision de la position obtenue par mesure du centre de la tâche focal est limitée et fonction 5 de la racine carrée du nombre de photons reçus du fluorophore. Par ailleurs, l'émission provenant d'un émetteur dipolaire immobile en rotation, comme certains fluorophore, est anisotrope et fonction de la polarisation de la lumière excitatrice. Ceci induit une incertitude sur 10 la position du fluorophore obtenue. Par ailleurs, la nécessité de zoomer sur le fluorophore pour visualiser la tâche focale limite de manière importante la taille du champ d'observation. La présente invention a pour but d'améliorer cette 15 situation. La présente invention est particulièrement intéressante dans le cas d'un milieu émettant un nombre limité de photons, notamment dans un temps très court, par exemple dans le cas d'émetteurs dit « uniques », c'est-à-dire d'émetteurs avec une durée de vie limitée suffisamment 20 espacés les uns des autres pour pouvoir être distingués optiquement les uns des autres. La présente invention permet en effet de collecter une portion importante des photons émis par le milieu et d'obtenir ainsi des informations précises sur les caractéristiques physiques du 25 milieu. La présente invention n'est toutefois par limitée au champ d'application de la microscopie optique super-résolue mais peut trouver une application dans de nombreux autres domaines comme par exemple l'acoustique ou les ondes radiofréquences par exemple. 30 A cette effet, l'invention a pour premier objet un procédé de mesure d'un paramètre physique d'une région cible d'un milieu, : on émet une onde d'excitation en au moins une région cible d'un milieu, de telle sorte que ladite onde 35 présente, à l'endroit de ladite région cible, une 3054321 3 modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique avec une période temporelle prédéfinie, on reçoit une onde de retour de ladite région 5 cible, émise en réponse à l'onde d'excitation, on défléchit périodiquement ladite onde de retour en une onde défléchie, au moyen d'un élément défléchissant contrôlable, de sorte à ce que ladite onde défléchie balaye un réseau de transducteurs à chaque période de la 10 modulation périodique, chaque transducteur du réseau de transducteurs étant associé à une plage de phase prédéfinie de ladite modulation périodique, on enregistre une image de phase comprenant des signaux générés par chaque transducteur du réseau de 15 transducteurs, en réponse à l'onde défléchie, pendant au moins une période de la modulation périodique, on détermine, à partir de ladite image de phase, un décalage de phase entre une modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique de l'onde de 20 retour et la modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique de l'onde d'excitation, on détermine un paramètre physique de ladite région cible à partir dudit décalage de phase. Dans des modes de réalisation préférés de 25 l'invention, on peut éventuellement avoir recours en outre à l'une et/ou à l'autre des dispositions suivantes : - les ondes sont des ondes électromagnétiques, notamment des ondes lumineuses; - les transducteurs sont des photodétecteurs, 30 notamment une caméra; - la modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique est une modulation périodique dans le temps de la polarisation de l'onde d'excitation et le paramètre physique de ladite région 35 cible est une information d'orientation d'un émetteur de 3054321 4 lumière présent dans ladite région cible, notamment un fluorophore; - la modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique est une modulation périodique dans le temps de l'amplitude de l'onde d'excitation et le paramètre physique de ladite région cible est une information de temps de vie ou une information de position d'un émetteur de lumière présent dans ladite région cible, notamment un fluorophore; - pour émettre l'onde d'excitation, on génère une onde modulée spatialement dans le milieu et on déplace ladite onde modulée spatialement dans le milieu, notamment avec une vitesse prédéfinie constante, en particulier on génère une onde électromagnétique 15 modulée spatialement dans le milieu en générant une figure d'interférence entre deux faisceaux laser dans le milieu; - on émet ladite onde d'excitation, de telle sorte que ladite onde présente, à l'endroit de ladite région cible, une pluralité de modulations périodique dans le 20 temps d'au moins caractéristique physique, avec une pluralité de périodes temporelle prédéfinies respectivement associées à chaque modulations périodique de ladite pluralité de modulations périodique, on défléchit périodiquement l'onde de retour en une 25 onde défléchie de sorte à ce que chaque transducteur du réseau de transducteurs soit associé à une plage de phase prédéfinie de chaque modulation périodique de ladite pluralité de modulations périodique, on détermine une pluralité de décalages de phase du 30 milieu, chaque décalage de phase de la pluralité de décalages de phase étant respectivement déterminé entre une modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique de l'onde de retour et une modulation périodique dans le temps d'au moins 35 caractéristique physique respective de l'onde d'excitation, 3054321 5 et on détermine une pluralité de paramètres physiques de ladite région cible à partir de ladite pluralité de décalages de phase; - ladite pluralité de paramètres physiques de 5 ladite région cible comprend au moins une information de position et/ou d'orientation et/ou de temps de vie d'un émetteur de lumière présent dans ladite région cible, notamment un fluorophore. L'invention a également pour objet un système de 10 mesure d'un paramètre physique d'une région cible d'un milieu comprenant : une source d'onde d'excitation apte à émettre une onde d'excitation en au moins une région cible d'un milieu, de telle sorte que ladite onde présente, à l'endroit de ladite région cible, une modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique avec une période temporelle prédéfinie, un réseau de transducteurs, un élément défléchissant contrôlable apte à 20 défléchir périodiquement, en une onde défléchie, une onde de retour de ladite région cible émise en réponse à l'onde d'excitation, de sorte à ce que ladite onde défléchie balaye le réseau de transducteurs à chaque période de la modulation 25 périodique, chaque transducteur du réseau de transducteurs étant associé à une plage de phase prédéfinie de ladite modulation périodique, un module de traitement comportant : une mémoire apte à enregistrer une image de phase 30 comprenant les signaux générés par chaque transducteur du réseau de transducteurs, en réponse à l'onde défléchie, pendant au moins une période de la modulation périodique, un processeur apte à déterminer, à partir de ladite image de phase, un décalage de phase de l'onde de retour 35 issue de ladite région cible par rapport à une phase de la 3054321 6 modulation périodique de l'onde d'excitation, et de déterminer un paramètre physique de ladite région cible à partir dudit décalage de phase. Dans des modes de réalisation préférés de 5 l'invention, on peut éventuellement avoir recours en outre à l'une et/ou à l'autre des dispositions suivantes : - l'élément défléchissant contrôlable est un miroir rotatif; - l'élément défléchissant contrôlable est un 10 système fixe comprenant au moins un élément de contrôle de polarisation, notamment un élément optique à biréfringence induite en particulier à biréfringence induite par un champ électrique, un champ magnétique ou une contrainte mécanique. 15 D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront au cours de la description suivante d'une de ses formes de réalisation, donnée à titre d'exemple non limitatif, en regard des dessins joints. Sur les dessins : - la figure 1 est une vue schématique d'un système de mesure d'un paramètre physique d'une région cible d'un milieu selon un mode de réalisation de l'invention, - la figure 2 est un organigramme illustrant un mode de réalisation d'un procédé de mesure d'un paramètre 25 physique d'une région cible d'un milieu selon un mode de réalisation de l'invention, - la figure 3 est une vue schématique d'une variante de réalisation du système de la figure 1. Sur les différentes figures, les mêmes références 30 désignent des éléments identiques ou similaires. La figure 1 illustre un système 1 de mesure d'un paramètre physique d'une région cible d'un milieu selon un mode de réalisation de l'invention. Suivant les modes de réalisation de l'invention, 35 les ondes mentionnés dans la présente description pourront 3054321 7 être des ondes optiques, acoustiques ou électromagnétiques. Les ondes optiques sont par exemple des ondes appartenant aux domaines du visible, de l'infrarouge et/ou de l'ultraviolet. 5 Les ondes électromagnétiques sont par exemple des ondes radiofréquences ou térahertz, par exemple présentant une fréquence centrale comprise entre quelques mégahertz et quelques térahertz. Les ondes acoustiques peuvent par exemple être des 10 ondes ultrasonores, par exemple des ondes présentant une fréquence centrale pouvant être comprise entre 200kHz et 100 Mhz, par exemple entre 0.5 Mhz et 10 Mhz. Tous les éléments du dispositif 1 sont adaptés et choisis par l'homme du métier en fonction du type et de la 15 fréquence des ondes en question. Ainsi, par exemple, les éléments d'émission et de réception, les fenêtres de transmission, la cavité réfléchissante et autres éléments réfléchissants, le milieu diffuseurs et les diffuseurs, les lentilles et les éléments 20 de focalisation et tout autre élément employé dans le dispositif de focalisation d'impulsions 1 et le procédé de focalisation sont adaptés respectivement au type et à la fréquence des ondes et/ou des impulsions choisies par l'homme du métier. Le système 1 représenté sur la figure 1 comprend une source 2 d'onde d'excitation, un réseau de transducteurs 3, un élément défléchissant contrôlable 4 et un module de traitement 5. Le module de traitement 5 comporte par exemple un 30 processeur et une mémoire et est apte à contrôler la source 2, le réseau de transducteurs 3 et l'élément défléchissant contrôlable 4. Le système 1 est par exemple destiné par exemple à réaliser une imagerie optique à super-résolution d'un 35 fluorophore F présent dans une région cible R d'un milieu 3054321 8 M. Par « imagerie optique à super-résolution », on entend par exemple que le système 1 est apte à déterminer une information de position du fluorophore F dans la région 5 cible R avec une résolution supérieure à la limite de diffraction. Par « une information de position du fluorophore dans la région cible », on entend par exemple une information de position relative du fluorophore selon au 10 moins une direction spatiale, par exemple une quantité Ax indiquant une position relative du fluorophore par rapport à une référence de position selon une direction spatiale X. La source 2 d'onde d'excitation est apte à émettre une onde d'excitation dans la région cible R. 15 La source 2 est en particulier apte à émettre ladite onde d'excitation de telle sorte que ladite onde présente, à l'endroit de la région cible R, une modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique avec une période temporelle prédéfinie. 20 Dans un mode de réalisation de l'invention, les ondes, et notamment l'onde d'excitation, sont ainsi des ondes électromagnétiques et en particulier des ondes lumineuses. L'onde d'excitation est par exemple une onde cohérente issue d'au moins un laser. 25 La région cible R peut être de dimensions variables. Dans un mode de réalisation de l'invention, la région cible R peut par exemple présenter des dimensions proche de celles d'un fluorophore. Dans d'autres modes de réalisation de l'invention, la région cible R peut couvrir un champ plus important. Par « ladite onde présente, à l'endroit de la région cible, une modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique », on entend que, en chaque point P de la région cible R, ladite caractéristique physique de l'onde d'excitation est modulée périodiquement 3054321 9 dans le temps. Les modulations de la caractéristique physique de l'onde d'excitation en chaque point P de la région cible R peuvent être en phase ou présenter des décalages de phases de sorte par exemple à ce que l'onde 5 excitatrice présente également une périodicité spatiale. Ainsi dans un mode de réalisation de l'invention, pour émettre l'onde d'excitation, la source 2 peut par exemple générer une onde modulée spatialement dans le milieu et déplacer ladite onde modulée spatialement dans le 10 milieu avec une vitesse prédéfinie, par exemple une vitesse prédéfinie constante. La période temporelle prédéfinie peut alors être déterminée à partir de la vitesse de déplacement et de la période spatiale de l'onde électromagnétique modulée 15 spatialement. Dans un exemple de ce mode de réalisation, la source 2 peut par exemple générer une onde électromagnétique modulée spatialement dans le milieu en générant une figure d'interférence entre deux faisceaux 20 laser dans le milieu. Dans cet exemple de réalisation, la modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique est alors une modulation périodique dans le temps de l'amplitude de l'onde d'excitation. 25 Dans un autre mode de réalisation, la modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique peut être une modulation périodique dans le temps de la polarisation de l'onde d'excitation. Pour cela, la source 2 peut par exemple comporter un polariseur rotatif 30 pivotant avec une fréquence de rotation correspondant à ladite période temporelle prédéfinie. La source 2 peut ainsi par exemple comporter un ou plusieurs lasers et, le cas échéant, des actionneurs et/ou composant optiques contrôlables permettant de mettre en 35 forme l'onde d'excitation et contrôler la modulation 3054321 10 périodique de l'onde d'excitation. Les composants optiques peuvent notamment comprendre des moyens de générer une figure d'interférence à partir de deux faisceaux lasers tels que des lentilles et/ou des miroirs notamment. Les 5 actionneurs peuvent notamment comprendre des moyens de déplacer une telle figure d'interférence dans le milieu avec une vitesse prédéfinie, par exemple des miroirs et/ou des lentilles motorisés en translation et/ou en rotation, ou encore des miroirs déformables. 10 Le réseau de transducteurs 3 comporte une pluralité de transducteurs 6, par exemple alignés selon un axe ou une direction de réseau. Dans des variantes de réalisation, le réseau de transducteurs 3 peut être une matrice bidimensionnelle de 15 transducteurs 6. Dans le mode de réalisation dans lequel les ondes sont des ondes lumineuses, les transducteurs 6 peuvent par exemple être des photodétecteurs. Le réseau de transducteur 3 peut par exemple prendre la forme d'une caméra, notamment 20 une caméra CCD ou CMOS. Par ailleurs, le système 1 comporte un élément défléchissant contrôlable 4 qui est apte à défléchir périodiquement, en une onde défléchie, une onde de retour de la région cible R, émise en réponse à l'onde 25 d'excitation. Dans un premier mode de réalisation illustré sur la figure 1, l'élément défléchissant contrôlable 4 est par exemple un miroir rotatif. Un exemple de miroir rotatif est un miroir galvanométrique. 30 Dans une variante de réalisation illustrée sur la figure 3, l'élément défléchissant contrôlable 4 est un système fixe 7. Par « l'élément défléchissant contrôlable est un système fixe », on entend que l'élément défléchissant 35 contrôlable ne comporte pas de pièces en mouvement. 3054321 11 De cette manière, il est possible de défléchir périodiquement l'onde de retour avec des fréquences encore plus élevée que dans le cas d'un miroir rotatif, par exemple avec des fréquences de déflexion périodique allant 5 jusqu'à plusieurs MHz. Dans l'exemple de réalisation illustré sur la figure 3, le système fixe 7 comporte un élément de contrôle de polarisation 8 et des éléments de séparation de faisceau en fonction de la polarisation 9. 10 L'élément de contrôle de polarisation 8 est un élément optique à biréfringence induite. Dans un tel élément, la biréfringence peut être contrôlée par une action externe. L'élément de contrôle de polarisation 8 peut être 15 un élément à biréfringence induite par un champ électrique tel qu'une cellule de Pockels ou Kerr, un élément à biréfringence induite par un champ magnétique comme un modulateur magnéto-optique utilisant l'effet Faraday, l'effet Cotton-Mouton ou l'effet Kerr magnéto-optique, ou 20 encore un élément à biréfringence induite par une contrainte mécanique par exemple utilisant un cristal photo-élastique. Des exemples d'éléments de séparation de faisceau en fonction de la polarisation 9 sont illustrés sur la 25 figure 3 et comprennent deux cubes séparateurs. Ces cubes permettent de séparer l'onde de retour en plusieurs faisceaux polarisés avec une perte minimal de photons. On comprend donc qu'une modulation de la polarisation appliquée par l'élément de contrôle de 30 polarisation 8 permet de défléchir le faisceau résultat sur les transducteurs 6. De manière générale, l'un des intérêts du procédé et système selon l'invention est de permettre la récupération, par les transducteurs de la quasi-totalité 35 des photons de l'onde de retour de la région cible R. 3054321 12 De cette manière, il est possible d'observer des fluorophores uniques dans la région cible R qui ont une durée de vie très limitée. Les différents modes de réalisation de l'élément 5 défléchissant contrôlable 4 détaillés ci-dessus permettent une perte minimal de photons lors de la déflexion périodique de l'onde de retour en une onde défléchie. Le fonctionnement du système 1 va maintenant être expliqué plus en détail en se référant par ailleurs 10 également à la figure 2 qui illustre un procédé de mesure d'un paramètre physique d'une région cible selon un mode de réalisation de l'invention. Au cours d'une première étape du procédé selon l'invention, on émet ainsi une onde d'excitation en au 15 moins une région cible d'un milieu, de telle sorte que ladite onde présente, à l'endroit de ladite région cible, une modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique avec une période temporelle prédéfinie. 20 En réponse à l'onde d'excitation, ladite région cible R émet une onde de retour. Avantageusement, l'onde de retour présente également une modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique avec la même période 25 temporelle prédéfinie. La modulation périodique de l'onde de retour peut toutefois présenter un décalage de phase avec la modulation périodique de l'onde excitatrice comme cela sera détaillé plus loin. Si on considère par exemple le mode de réalisation 30 dans lequel la région cible comporte un fluorophore et dans lequel la caractéristique physique de l'onde excitatrice modulée périodiquement est la polarisation de l'onde d'excitation. Si le fluorophore se comporte comme un émetteur dipolaire immobile, il émettra une onde de retour 35 dont l'intensité sera fonction de la polarisation de l'onde 3054321 13 excitatrice reçue et de l'orientation du fluorophore. L'onde de retour présentera donc une modulation périodique dans le temps de son intensité, avec la période temporelle prédéfinie. Cette modulation périodique 5 présentera par ailleurs un décalage de phase avec la modulation de la polarisation de l'onde incidente qui sera fonction de l'orientation du fluorophore. Dans ce mode de réalisation, si l'on est à même de mesurer le décalage de phase entre la modulation périodique 10 de l'onde de retour et la modulation périodique de l'onde excitatrice, il est alors possible de déterminer une information d'orientation de l'émetteur de lumière présent dans la région cible R, c'est-à-dire le fluorophore. Considérons à présent un autre mode de réalisation 15 dans lequel la région cible comporte également un fluorophore mais dans lequel la caractéristique physique de l'onde excitatrice modulée périodiquement est l'intensité de l'onde d'excitation. Plus particulièrement, considérons le mode de 20 réalisation dans lequel l'onde d'excitation est une onde modulée spatialement, déplacée dans le milieu avec une vitesse prédéfinie, par exemple une vitesse constante. Du fait de la modulation périodique de l'intensité de l'onde excitatrice à l'endroit du fluorophore F dans la 25 région cible R, le fluorophore F émet une onde de retour dont l'intensité est également modulée dans le temps. L'onde d'excitation étant par ailleurs modulée spatialement, le décalage de phase entre la modulation périodique de l'onde de retour et la modulation périodique 30 de l'onde excitatrice sera fonction de la position du fluorophore F dans la région cible R modulo la périodicité spatiale de l'onde d'excitation. Ainsi, dans ce mode de réalisation, si l'on est à même de mesurer le décalage de phase entre la modulation 35 périodique de l'onde de retour et la modulation périodique 3054321 14 de l'onde excitatrice, il est alors possible de déterminer une information de position de l'émetteur de lumière présent dans la région cible R, c'est-à-dire le fluorophore. 5 Le procédé selon l'invention comporte ainsi des étapes permettant de déterminer ledit décalage de phase avec une précision importante. Pour cela, l'élément défléchissant contrôlable 4 défléchit périodiquement l'onde de retour de la région 10 cible R, formant une onde défléchie. Cette déflexion périodique est telle que ladite onde défléchie balaye le réseau de transducteurs 3 à chaque période de la modulation périodique c'est-à-dire avec la période temporelle prédéfinie appliquée à l'onde 15 d'excitation par la source 2. Chaque transducteur 6 du réseau de transducteurs 3 est ainsi associé à une plage de phase prédéfinie de la modulation périodique de l'onde excitatrice. A titre d'exemple non limitatif, considérons un 20 réseau de quatre transducteurs 6, juxtaposés les uns aux autres et balayé par l'onde défléchie à chaque période de la modulation périodique. Le premier transducteur est alors par exemple associé à une plage de phase allant de 0 degrés à 90 degrés de la modulation périodique, le second 25 transducteur est par exemple associé à une plage de phase allant de 90 degrés à 180 degrés de la modulation périodique, le troisième transducteur est par exemple associé à une plage de phase allant de 180 degrés à 270 degrés de la modulation périodique et le quatrième 30 transducteur est par exemple associé à une plage de phase allant de 270 degrés à 360 degrés de la modulation périodique. Les quatre transducteurs couvrent l'ensemble d'une période de la modulation périodique. En particulier, l'onde défléchie peut balayer 35 intégralement le réseau de transducteurs 3 à chaque période 3054321 15 de la modulation périodique, ou seulement balayée un sous-ensemble du réseau 3 comme cela sera notamment détaillé plus bas. On peut ensuite enregistrer, pendant au moins une 5 période de la modulation périodique, une image de phase comprenant les signaux générés par chaque transducteur du réseau de transducteurs en réponse à l'onde défléchie. Ladite image de phase peut en particulier être enregistrée dans une mémoire du module de traitement 5. 10 Avantageusement, ladite image de phase peut être enregistrée pendant une pluralité de période de la modulation périodique, notamment si la période prédéfinie est inférieure au temps d'intégration des transducteurs. Dans un mode de réalisation, les transducteurs ont 15 par exemple un temps d'intégration de 50 millisecondes. La période prédéfinie de la modulation peut par exemple être inférieure à 5 millisecondes. L'image de phase peut alors être enregistrée avec une durée d'acquisition correspondant à au moins une dizaine de périodes de modulation de l'onde 20 excitatrice. Ainsi dans un mode de réalisation de l'invention, les transducteurs présentent un temps d'intégration supérieur à la période temporelle prédéfinie, en particulier supérieur à 5 fois la période temporelle 25 prédéfinie, de préférence supérieure à 10 fois la période temporelle prédéfinie. Chaque transducteur 6 du réseau de transducteurs 3 étant associé à une plage de phase prédéfinie de la modulation périodique de l'onde excitatrice, il est ainsi 30 possible de déterminer, à partir de l'image de phase, un décalage de phase entre la modulation périodique de l'onde de retour et la modulation périodique de l'onde d'excitation. Pour prendre un exemple, on peut considérer à 35 nouveau l'exemple non limitatif détaillé ci-dessus dans 3054321 16 lequel le réseau 3 comporte quatre transducteurs 6, juxtaposés les uns aux autres, et associés respectivement à des plages de phase de la modulation périodique de 0 à 90 degrés, 90 à 180 degrés, 180 à 270 degrés et 270 à 360 5 degrés. Considérons également, à titre d'exemple, qu'un signal maximum mesuré sur les quatre transducteurs est issus du premier transducteur, c'est-à-dire associé à la plage de phase de 0 à 90 degrés de la modulation de l'onde 10 excitatrice. Si par ailleurs la plage de phase de 0 à 90 degrés de la modulation de l'onde excitatrice correspond à un minimum de ladite modulation, on peut alors déterminer que la modulation de l'onde de retour est inversée par rapport à la modulation de l'onde excitatrice, c'est-à-dire 15 que le décalage de phase entre la modulation périodique de l'onde de retour et la modulation périodique de l'onde d'excitation est de 180 degrés avec une marge d'erreur fonction de la largeur des plages de phase associé à chaque transducteur 6. 20 Cet exemple, donné pour quatre transducteurs 6, est bien évidemment généralisable à un nombre arbitraire de transducteurs, plus les plages de phase associé à chaque transducteur étant réduite, plus la précision de la mesure du décalage de phase étant élevée mais moins chaque 25 transducteur recevant de portion de l'onde de retour, par exemple de photons. Il existe donc un optimum entre le rapport signal sur bruit du signal issu des transducteurs et la précision de la détermination du décalage de phase. Un avantage de l'invention est toutefois de 30 garantir une mesure de l'intégralité de l'onde de retour issue du milieu (aux pertes liées à la déflexion par l'élément défléchissant près). Ainsi, dans le cas d'une onde lumineuse, la quasi-totalité des photons issus du milieu est reçu par le réseau de transducteurs (aux pertes 35 liées à la réflexion par le miroir rotatif près). Dans 3054321 17 l'application aux fluorophores, qui émettent un faible nombre de photons avant de s'autodétruire, ceci permet de garantir la mesure des signaux très faibles. Enfin, dans une dernière étape du procédé, on peut 5 alors déterminer un paramètre physique de la région cible R à partir dudit décalage de phase comme cela a été détaillé ci-avant. Ainsi par exemple dans le mode de réalisation dans lequel la caractéristique physique de l'onde excitatrice 10 modulée périodiquement est la polarisation de l'onde d'excitation, on détermine une information d'orientation de l'émetteur de lumière présent dans la région cible R comme détaillé ci-avant. Ainsi encore, dans le mode de réalisation dans 15 lequel la caractéristique physique de l'onde excitatrice modulée périodiquement est l'intensité de l'onde d'excitation et dans lequel l'onde d'excitation est une onde modulée spatialement déplacée dans le milieu avec une vitesse prédéfinie, on détermine une information de 20 position de l'émetteur de lumière présent dans la région cible R comme détaillé ci-avant. Dans une variante de réalisation, on émet l'onde d'excitation de telle sorte que ladite onde présente, à l'endroit de ladite région cible, une pluralité de 25 modulations périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique, avec une pluralité de périodes temporelle prédéfinies respectivement associées à chaque modulations périodique de ladite pluralité de modulations périodique. 30 Dans ce mode de réalisation, on peut alors avantageusement défléchir périodiquement l'onde de retour en une onde défléchie de sorte à ce que chaque transducteur du réseau de transducteurs soit associé à une plage de phase prédéfinie de chaque modulation périodique de ladite 35 pluralité de modulations périodique. 3054321 18 A nouveau, on peut enregistrer, sur une durée s'étendant sur au moins une période de chacune des modulations périodique, une image de phase comprenant les signaux générés par chaque transducteur du réseau de 5 transducteurs en réponse à l'onde défléchie. On détermine alors une pluralité de décalages de phase du milieu, chaque décalage de phase de la pluralité de décalages de phase étant respectivement déterminé relativement à une phase d'une modulation périodique 10 respective de la pluralité de modulations périodique, Enfin, on détermine une pluralité de paramètres physiques de ladite région cible à partir de ladite pluralité de décalages de phase de manière similaire à ce qui a été décrit ci-avant. 15 De cette manière, il est par exemple possible de déterminer en même temps des informations de position d'un émetteur de lumière selon plusieurs directions spatiales, par exemple X, Y, Z, on bien encore à la fois des informations de position et des informations d'orientation 20 dudit émetteur de lumière. Considérons enfin un mode de réalisation de l'invention dans lequel on met en oeuvre une microscopie optique super-résolue d'un champ d'observation comportant plusieurs fluorophores F. 25 Dans ce mode de réalisation, on peut avantageusement combiner une localisation super-résolue des fluorophores avec une localisation normalement résolue, de sorte à obtenir une information de positionnement absolu des fluorophores comme cela va maintenant être décrit. 30 Pour cela, le procédé selon l'invention peut tout d'abord être mis en oeuvre de sorte à ce que les fluorophores excités simultanément par l'onde d'excitation soient espacés les uns des autres dans le champ d'observation d'une distance minimale prédéfinie. 35 Un mode de réalisation permettant d'obtenir ceci 3054321 19 peut consister à fournir un milieu comportant une densité suffisamment faible de fluorophores. Dans un autre mode de réalisation, on peut générer l'onde d'excitation de telle sorte qu'elle excite 5 uniquement une portion des fluorophores présents dans la région cible R, par exemple par effet stochastique. Des procédés permettant d'obtenir des fluorophores simultanément excités qui soient espacés les uns des autres dans le champ d'observation sont connus, par exemple des 10 méthodes « PALM » ou « STORM » mentionnées ci-avant. Par ailleurs, le réseau de transducteurs 3 peut être une matrice bidimensionnelle de transducteurs 6 s'étendant sur une longueur et une largeur prédéfinies. Par « longueur » et « largeur », on entend des 15 dimensions de la matrice respectivement selon un axe longitudinal X et un axe transversal Y, perpendiculaires entre eux. L'élément défléchissant contrôlable peut être contrôlé de sorte à balayer le réseau de transducteurs 20 selon l'axe transversal Y à chaque période de la modulation périodique. En particulier, l'onde défléchie peut être déplacée sur le réseau de transducteurs, à chaque balayage, d'une distance de balayage inférieure à la largeur du réseau de 25 transducteurs, en particulier inférieure à un cinquième de la largeur du réseau de transducteurs. Ladite distance de balayage peut notamment être inférieure à la distance minimale prédéfinie séparant les fluorophores excités simultanément dans le champ 30 d'observation. De cette manière, les tâches focales formées par chaque fluorophore sur le réseau de transducteurs sont séparées les unes des autres. Il est alors possible de déterminer une information 35 de position normalement résolue par la localisation 3054321 20 générale des tâches focales formées par chaque fluorophore sur le réseau de transducteurs. Il est par ailleurs possible de déterminer une information de position super-résolue, modulo la 5 périodicité spatiale de l'onde d'excitation, par une détermination d'une différence de phase comme indiqué ci-avant. En combinant l'information de position normalement résolue et l'information de position super-résolue, il est 10 possible d'obtenir une information de positionnement absolu des fluorophores dans le champ d'observation avec une précision supérieure à la limite de diffraction. Le mode de réalisation détaillé ci-avant permet d'obtenir une information de positionnement absolu des 15 fluorophores selon la direction transversale. Ce mode de réalisation peut être étendu au cas où l'onde d'excitation comporte une pluralité de modulations, comme détaillé ci-avant. Il est alors possible d'obtenir des informations de positionnement absolu des fluorophores 20 selon la direction transversale, la direction longitudinale et même, le cas échéant, la direction d'épaisseur, perpendiculaire aux directions transversale et longitudinale, ou encore l'orientation des fluorophores. De manière générale, les différents modes de 25 réalisation décrits ci-dessus peuvent ainsi être combinés entre eux. REVENDICATIONS1. Procédé de mesure d'un paramètre physique d'une région cible d'un milieu, dans lequel: - on émet une onde d'excitation en au moins une région cible d'un milieu, de telle sorte que ladite onde présente, à l'endroit de ladite région cible, une modulation périodique dans le temps d'au moins une caractéristique physique avec une période temporelle prédéfinie, - on reçoit une onde de retour de ladite région cible, émise en réponse à l'onde d'excitation, - on défléchit périodiquement ladite onde de retour en une onde défléchie, au moyen d'un élément défléchissant contrôlable (4), de sorte à ce que ladite onde défléchie balaye un réseau de transducteurs (3) à chaque période de la modulation périodique, chaque transducteur (6) du réseau de transducteurs (3) étant associé à une plage de phase prédéfinie de ladite modulation périodique, - on enregistre une image de phase comprenant des signaux générés par chaque transducteur (6) du réseau de transducteurs (3), en réponse à l'onde défléchie, pendant au moins une période de la modulation périodique, - on détermine, à partir de ladite image de phase, un décalage de phase entre une modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique de l'onde de retour et la modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique de l'onde d'excitation, - on détermine un paramètre physique de ladite 30 région cible à partir dudit décalage de phase. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel les ondes sont des ondes électromagnétiques, notamment des ondes lumineuses. 3. Procédé selon la revendication 2, dans lequel 35 les transducteurs (6) sont des photodétecteurs, notamment 3054321 22 une caméra. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel la modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique est une 5 modulation périodique dans le temps de la polarisation de l'onde d'excitation et dans lequel le paramètre physique de ladite région cible est une information d'orientation d'un émetteur de lumière présent dans ladite région cible, notamment un fluorophore. 10 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel la modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique est une modulation périodique dans le temps de l'amplitude de l'onde d'excitation et dans lequel le paramètre physique de 15 ladite région cible est une information de temps de vie ou une information de position d'un émetteur de lumière présent dans ladite région cible, notamment un fluorophore. 6. Procédé selon la revendication 5, dans lequel, pour émettre l'onde d'excitation, on génère une onde 20 modulée spatialement dans le milieu et on déplace ladite onde modulée spatialement dans le milieu, notamment avec une vitesse prédéfinie constante, en particulier dans lequel on génère une onde électromagnétique modulée spatialement dans le milieu en 25 générant une figure d'interférence entre deux faisceaux laser dans le milieu. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel on émet ladite onde d'excitation, de 30 telle sorte que ladite onde présente, à l'endroit de ladite région cible, une pluralité de modulations périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique, avec une pluralité de périodes temporelle prédéfinies respectivement associées à chaque modulations périodique de ladite 35 pluralité de modulations périodique, 3054321 23 dans lequel on défléchit périodiquement l'onde de retour en une onde défléchie de sorte à ce que chaque transducteur (6) du réseau de transducteurs (3) soit associé à une plage de phase prédéfinie de chaque 5 modulation périodique de ladite pluralité de modulations périodique, dans lequel on détermine une pluralité de décalages de phase du milieu, chaque décalage de phase de la pluralité de décalages de phase étant respectivement 10 déterminé entre une modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique de l'onde de retour et une modulation périodique dans le temps d'au moins caractéristique physique respective de l'onde d'excitation, et dans lequel on détermine une pluralité de 15 paramètres physiques de ladite région cible à partir de ladite pluralité de décalages de phase. 8. Procédé selon la revendication 7, dans lequel ladite pluralité de paramètres physiques de ladite région cible comprend au moins une information de position et/ou 20 d'orientation et/ou de temps de vie d'un émetteur de lumière présent dans ladite région cible, notamment un fluorophore. 9. Système (1) de mesure d'un paramètre physique d'une région cible d'un milieu comprenant : 25 - une source (2) d'onde d'excitation apte à émettre une onde d'excitation en au moins une région cible d'un milieu, de telle sorte que ladite onde présente, à l'endroit de ladite région cible, une modulation périodique dans le temps d'au moins une caractéristique physique avec une période temporelle prédéfinie, - un réseau de transducteurs (3), - un élément défléchissant contrôlable (4) apte à défléchir périodiquement, en une onde défléchie, une onde de retour de ladite région cible émise en réponse à l'onde 35 d'excitation, 3054321 24 de sorte à ce que ladite onde défléchie balaye le réseau de transducteurs (3) à chaque période de la modulation périodique, chaque transducteur (6) du réseau de transducteurs (3) étant associé à une plage de phase 5 prédéfinie de ladite modulation périodique, - un module de traitement (5) comportant : une mémoire apte à enregistrer une image de phase comprenant les signaux générés par chaque transducteur (6) du réseau de transducteurs (3), en réponse à l'onde 10 défléchie, pendant au moins une période de la modulation périodique, un processeur apte à déterminer, à partir de ladite image de phase, un décalage de phase de l'onde de retour issue de ladite région cible par rapport à une phase de la 15 modulation périodique de l'onde d'excitation, et de déterminer un paramètre physique de ladite région cible à partir dudit décalage de phase. 10. Système (1) de mesure selon la revendication 9, dans lequel l'élément défléchissant contrôlable (4) est un 20 miroir rotatif. 11. Système (1) de mesure selon la revendication 9, dans lequel l'élément défléchissant contrôlable (4) est un système fixe (7) comprenant au moins un élément de contrôle de polarisation (8), notamment un élément optique à 25 biréfringence induite en particulier à biréfringence induite par un champ électrique, un champ magnétique ou une contrainte mécanique.