Brevet FR3052066A1 — publié le 20171208

Formulation pharmaceutique de cinéol et d'amoxicilline La présente invention relève du domaine des formulations pharmaceutiques, et plus particulièrement de celui des formulations adaptées à un usage médical ou vétérinaire dans la lutte contre les infections bactériennes. Arrière-plan technologique de l'invention Les antibiotiques sont des substances naturelles ou synthétiques qui ont une activité bactéricide ou bactériostatique. Leur introduction généralisée après la Seconde Guerre mondiale a été l'un des progrès thérapeutiques les plus importants du XXe siècle. Les traitements antibiotiques ont fait progresser l'espérance de vie de plus de dix ans, soit plus qu'aucun autre traitement médical. Cependant, l'usage généralisé, voire abusif de certains antibiotiques, y compris en traitement préventif, curatif ou en complément alimentaire dans l'alimentation animale, dans les piscicultures, en médecine vétérinaire et humaine, ou encore comme pesticides pour le traitement des végétaux, a introduit une pression de sélection qui a conduit au développement de populations de micro-organismes résistants aux antibiotiques et à une baisse générale de l'efficacité thérapeutique. En milieu hospitalier, cela conduit à une augmentation du risque nosocomial, notamment faute de traitement adapté contre certains germes multi-résistants. Dans son dernier rapport (avril 2014) sur la résistance des bactéries aux antibiotiques, l'OMS souligne « qu'à moins que les nombreux acteurs concernés agissent d'urgence, de manière coordonnée, le monde s'achemine vers une ère post-antibiotiques, où des infections courantes et des blessures mineures qui ont été soignées depuis des décennies pourraient à nouveau tuer ». La résistance à certains traitements dits de derniers recours est déjà une réalité. Ainsi, la résistance aux traitements des infections potentiellement mortelles causées par une bactérie intestinale courante, Klebsiella pneumoniae, s'est propagée à toutes les régions du monde. Il en va de même pour la résistance à un des médicaments antibactériens les plus largement utilisés dans le traitement des infections des voies urinaires causées par E. coli - les fluoroquinolones. Récemment, l'échec du traitement de dernier recours contre la gonorrhée - les céphalosporines de troisième génération - a été confirmé en Afrique du Sud, en Australie, en Autriche, au Canada, en France, au Japon, en Norvège, au Royaume-Uni, en Slovénie et en Suède. 3052066 2 Pour faire face à ce péril, l'OMS en appelle notamment à la mise au point de nouveaux produits diagnostiques, de nouveaux antibiotiques et d'autres outils indispensables pour que les professionnels de santé puissent conserver leur avance sur la progression des résistances. L'amoxicilline est un antibiotique f3-lactamine bactéricide de la famille des 5 aminopénicillines, indiqué dans le traitement des infections bactériennes à germes sensibles. L'amoxicilline est l'antibiotique le plus couramment utilisé, notamment chez les enfants, car elle présente une bonne absorption par voie orale, un spectre d'action antimicrobien large et un coût faible. L'amoxicilline est utilisée dans le traitement de diverses maladies infectieuses, notamment celles des poumons, des bronches, du nez, de la gorge ou des oreilles, du sang, de 10 l'appareil digestif ou urinaire, des voies génitales, des gencives et des dents. L'amoxicilline est souvent utilisée en combinaison avec une autre molécule, l'acide clavulanique, un inhibiteur de la f3-lactamase. La f3-lactamase est une enzyme produite par des bactéries résistantes aux antibiotiques f3-lactamine. L'acide clavulanique, en inhibant les 13- lactamases, empêche l'inactivation de l'amoxicilline par les f3-lactamases, et lui permet ainsi de 15 conserver son activité sur les germes résistants producteurs de f3-lactamases. Cependant, on assiste ces dernières années à l'apparition de germes bactériens particulièrement résistants, notamment des bactéries à 13-lactamases à spectre étendu (BLSE), qui ne sont plus, ou partiellement, sensibles aux inhibiteurs classiques des 13-lactamases tel que l'acide clavulanique. 20 Par conséquent, il est indispensable de trouver des solutions permettant de restaurer l'efficacité de l'amoxicilline à l'encontre des bactéries résistantes, en particulier des bactéries productrices de 13-lactamases à spectre étendu (BLSE). Résumé de l'invention 25 Les inventeurs ont mis au point une formulation pharmaceutique permettant d'augmenter considérablement l'activité antibactérienne de l' amoxicilline, seule ou en association avec l'acide clavulanique, en particulier vis-à-vis de germes bactériens résistants à la combinaison d' amoxicilline et d'acide clavulanique. Ainsi, la présente invention concerne, dans un premier aspect, une formulation 30 pharmaceutique sous forme de poudre comprenant, ou consistant essentiellement en, du cinéol, de l'amoxicilline, et une huile pharmaceutiquement acceptable. 3052066 3 De préférence, la formulation selon l'invention comprend en outre de l' acide clavulanique. De préférence, l'huile pharmaceutiquement acceptable de la formulation selon l'invention est une huile végétale, minérale, synthétique ou animale, de préférence une huile 5 végétale, et de manière encore préférée de l'huile d' arachide. La formulation selon l'invention peut comprendre entre environ 5 mg et environ 100 mg, de préférence entre environ 10 mg et environ 50 mg, de cinéol par gramme de poudre ; et/ou entre environ 20 mg et environ 500 mg, de préférence entre environ 50 mg et environ 300 mg, d'amoxicilline par gramme de poudre ; et/ou entre environ 2 mg et environ 50 mg, de 10 préférence entre environ 10 mg et environ 25 mg, d'huile par gramme de poudre ; et/ou optionnellement entre environ 1 mg et environ 100 mg, de préférence entre environ 5 mg et environ 50 mg, d'acide clavulanique par gramme de poudre. De préférence, la formulation selon l'invention comprend entre environ 20 mg et environ 40 mg, de préférence environ 33 mg, de cinéol par gramme de poudre ; entre environ 15 150 mg et environ 200 mg, de préférence environ 167 mg, d'amoxicilline par gramme de poudre ; entre environ 15 mg et environ 20 mg, de préférence environ 17 mg, d'huile par gramme de poudre ; et/ou optionnellement entre environ 15 mg et environ 25 mg, de préférence environ 21 mg d'acide clavulanique par gramme de poudre. La formulation selon l'invention peut être destinée à une administration par voie orale, 20 de préférence après suspension dans un solvant aqueux. La formulation suivant l'invention peut être conditionnée dans un récipient unidose, de préférence un récipient unidose contenant entre environ 1 g et environ 150 g de poudre, de manière encore préférée entre environ 1 g et environ 50 g de poudre, de manière toujours préférée entre environ 1 g et environ 10 g de poudre, et de manière plus particulièrement 25 préférée environ 3 g de poudre. La formulation suivant l'invention peut en outre comprendre au moins un excipient ou support pharmaceutiquement acceptable, de préférence sélectionné dans le groupe consistant en un édulcorant, un aromatisant, un antiagglomérant, un lubrifiant, un désintégrant, et un mélange de ceux-ci. 3052066 4 Dans un deuxième aspect, la présente invention concerne également la formulation tel que décrite ci-dessus pour une utilisation dans le traitement d'une pathologie infectieuse chez un sujet, de préférence un animal ou un humain. De préférence, ladite pathologie infectieuse est une pathologie infectieuse d'origine 5 bactérienne, de manière encore préférée une pathologie infectieuse causée par une bactérie résistante aux antibiotiques de la famille des f3-lactamines. De préférence, la formulation est administrée au sujet durant une période allant de 1 jour à 4 semaines et à raison de 3 à 30 grammes par jour, en une seule ou plusieurs prises. La présente invention concerne encore, dans un troisième aspect, un procédé de 10 fabrication de la formulation pharmaceutique selon l'invention comprenant : - l'obtention d'une solution de mouillage par mélange de cinéol et d'une huile pharmaceutiquement acceptable ; et - le mouillage d'une poudre comprenant de l'amoxicilline par la solution de mouillage afin d'obtenir une préparation poudreuse comprenant l'amoxicilline, le cinéol et l'huile. 15 Optionnellement, le procédé peut comprendre en outre le mélange de la préparation poudreuse comprenant l'amoxicilline, le cinéol et l'huile avec une poudre comprenant un inhibiteur de f3-lactamase, de préférence de l'acide clavulanique ; et/ou - l'ajout d'édulcorant, d'aromatisant et/ou de lubrifiant, et le mélange de ceux-ci afin d'obtenir une poudre homogène ; et/ou 20 - le tamisage de la poudre ainsi obtenue; et/ou - le conditionnement de la poudre tamisée dans des récipients unidoses. De préférence, la poudre comprenant de l'amoxicilline et/ou la poudre comprenant un inhibiteur de f3-lactamase, de préférence de l'acide clavulanique, comprennent en outre un désintégrant et/ou un antiagglomérant. 25 Enfin, dans un quatrième aspect, la présente invention concerne également un complexe moléculaire comprenant plus de deux molécules d'amoxicilline organisées de façon linéaire ou en anneau et interagissant les unes avec les autres par des liaisons non-covalentes. De préférence, le complexe moléculaire selon l'invention est formé d'au moins trois molécules d'amoxicilline, de manière encore préférée de trois à six molécules d'amoxicilline, 30 et de manière tout particulièrement préférée de quatre molécules d' amoxicilline. 3052066 5 Le complexe moléculaire selon l'invention est obtenu ou peut être obtenu par la mise en solution d' amoxicilline en présence de cinéol dans un solvant aqueux et en absence de détergent. 5 Brève description des dessins Figure 1 : Etude de l'activité antibactérienne de sérum de lapin traité par une combinaison d' amoxicilline, d'acide clavulanique et de cinéol A (AMC sans cinéol) : après administration par voie orale d'une dose unique d'une composition comprenant de l'Amoxicilline (1.5 g) et de l'acide clavulanique (186.5 mg) chez 3 lapins, le 10 pourcentage d'inhibition du sérum aux temps To , Tin, T2h, T3h et T6h a été calculé vis-à-vis d'une souche d'Escherichia coli BLSE multirésistante. B (AMC avec cinéol) : après administration par voie orale d'une dose unique d'une composition comprenant de l'Amoxicilline (1.5g), de l'acide clavulanique (186.5 mg) et du cinéol (300 mg) chez 3 lapins, le pourcentage d'inhibition du sérum aux temps To , Tih, T2h, T3h et T6h a été calculé vis-à-vis d'une souche d'Escherichia 15 cou BLSE multirésistante. Figure 2 : Suivi des concentrations sériques moyennes de l'amoxicilline pendant 24 h. A (sans cinéol) : après administration par voie orale d'une dose unique (12 g) d'une composition comprenant de l'Amoxicilline (2 g) et de l'acide clavulanique (250 mg), la concentration 20 sérique en amoxicilline est suivie pendant 24 h chez 12 volontaires sains. B (avec cinéol) : après administration par voie orale d'une dose unique (12 g) d'une composition comprenant de l'Amoxicilline (2 g), de l'acide clavulanique (250 mg) et du cinéol (400 mg), la concentration sérique en amoxicilline est suivie pendant 24 h chez 12 volontaires sains. 25 Figure 3 : Suivi des concentrations plasmatiques moyennes de l'amoxicilline pendant 7 jours. A (sans cinéol) : après administration par voie orale d'une dose unique (12 g) d'une composition comprenant de l'amoxicilline (2 g) et de l'acide clavulanique (250 mg), les 12 volontaires reçoivent, 3 fois par jour pendant 7 jours, des doses d'entretien (3 g) de la même composition comprenant de l'amoxicilline (500 mg) et de l'acide clavulanique (62,5 mg). La concentration 30 plasmatique en amoxicilline est suivie pendant 7 jours chez les 12 volontaires sains. B (avec cinéol) : après administration par voie orale d'une dose unique (12 g) d'une composition comprenant de l'amoxicilline (2 g), de l'acide clavulanique (250 mg) et du cinéol (400 mg), les 3052066 6 12 volontaires reçoivent, 3 fois par jour pendant 7 jours, des doses d'entretien (3 g) de la même composition comprenant de l'amoxicilline (500 mg), de l'acide clavulanique (62,5 mg) et du cinéol (100 mg). La concentration plasmatique en amoxicilline est suivie pendant 7 jours chez les 12 volontaires sains. Figure 4 : Etude spectroscopique de la formation de complexes d'amoxicilline A (AMX seule) : Analyse par spectroscopie de masse d'Amoxicilline seule en solution dans de l'eau. B (AMX avec Cinéol) : Analyse par spectroscopie de masse d'Amoxicilline avec du Cinéol en solution dans de l'eau. Description détaillée de l'invention Les inventeurs ont mis au point une formulation pharmaceutique sous forme de poudre combinant du cinéol, de l'amoxicilline et de l'acide clavulanique. Ils ont observé que cette combinaison permettait d'augmenter considérablement l'activité antibactérienne de 15 l'amoxicilline et ainsi de traiter efficacement des patients atteints d'infections à germes résistants. Cette nouvelle formulation possède en outre d'excellentes propriétés de conservation. En particulier, l'utilisation d'huile dans la formulation permet de fixer très efficacement le cinéol, un agent hautement volatil, au support poudreux de cette formulation. Cela permet de 20 proposer une formulation unique pour l'administration des composés actifs qui, après suspension dans un solvant aqueux, peut facilement être administrée par voie orale. Disposer d'un médicament unique, qui plus est administré par voie oral, augmente grandement l'observance des traitements et par là même leur efficacité. Les inventeurs ont également mis en évidence que l'amoxicilline, en présence de cinéol, 25 forme un complexe d'au moins trois molécules d'amoxicilline. La formation de ce complexe rend les molécules d'amoxicilline moins accessibles aux f3-lactamases et augmente ainsi leur efficacité thérapeutique. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention concerne une formulation pharmaceutique sous forme de poudre comprenant, ou consistant essentiellement en, du cinéol, 30 de l'amoxicilline, et une huile pharmaceutiquement acceptable. 5 10 3052066 7 Définitions Dans le présent document, le terme « environ » se réfère à une gamme de valeurs de ± 10% de la valeur spécifiée. A titre d'exemple, « environ 50 » comprend les valeurs de ± 10 % de 50, c'est-à-dire les valeurs de la gamme 45 à 55. De préférence, le terme « environ » se réfère 5 à une gamme de valeurs de ± 5% de la valeur spécifiée. 11 est entendu que les valeurs précédées du terme « environ » doivent également être considérées comme spécifiquement décrites dans la présente demande. Le terme « consiste essentiellement en », tel qu'utilisé ici, se réfère à une formulation selon l'invention ne comprenant pas d'autre principe actif que ceux mentionnés dans ladite 10 formulation, en particulier pas d'autres antibiotiques ou inhibiteurs de f3-lactamases. Tel qu'utilisé ici, le terme « excipient ou support pharmaceutiquement acceptable » se réfère à toute substance autre qu'un principe actif présent dans une formulation pharmaceutique. Son addition est notamment destinée à conférer une consistance particulière, ou d'autres caractéristiques physiques ou gustatives particulières, au produit final, tout en 15 évitant toute interaction, notamment chimique, avec le ou les principes actifs. Tel qu'utilisé ici, le terme « principe actif » se réfère à une molécule présentant un effet thérapeutique. En particulier, le cinéol, l'amoxicilline et les inhibiteurs de f3-lactamases sont des principes actifs. Tel qu'utilisé ici, le terme « effet thérapeutique » se réfère à un effet induit par un 20 principe actif, une composition selon l'invention, ou par une combinaison selon l'invention, capable de prévenir ou de retarder l'apparition d'une infection bactérienne, ou de guérir ou de réduire les effets d'une infection bactérienne. Tel qu'utilisé ici, le terme « effet antibactérien » se réfère à un effet induit par un principe actif, une composition selon l'invention, ou par une combinaison selon l'invention, 25 capable de réduire chez un sujet la quantité et/ou la concentration des bactéries responsables de l'infection bactérienne. Tel qu'utilisé ici, le terme « effet synergique » se réfère à une composition selon l'invention ou à une combinaison selon l'invention ayant un effet thérapeutique et/ou un effet antibactérien supérieur à la somme des effets thérapeutiques et/ou à la somme des effets 30 antibactériens de tous les principes actifs présents dans ladite composition ou dans ladite combinaison, lorsqu'ils sont pris individuellement. La présence d'un tel effet peut être évaluée en calculant l'indice de fraction des concentrations inhibitrices (fic-index) comme illustré dans l'exemple 1. 3052066 8 Tel qu'utilisé ici, le terme « traitement » se réfère à tout acte visant à améliorer le statut médical d'une personne atteinte d'une infection bactérienne. Le traitement peut viser aussi bien à une amélioration de l'état du patient, c'est-à-dire à une régression de l'infection ou de certains de ses symptômes, qu'à une éradication de l'infection ou de certains de ses symptômes. Le 5 traitement peut également avoir pour effet d'empêcher ou de ralentir la progression d'une infection bactérienne. Le traitement peut encore avoir un effet prophylactique ou préventif, c'est-à-dire empêcher ou retarder l'apparition de l'infection bactérienne. Tel qu'utilisés ici, les termes de « quantité » et « dose » sont équivalents et peuvent être employés l'un pour l'autre. 10 Tel qu'utilisé ici, le terme « quantité thérapeutiquement efficace » se réfère à une quantité de principe actif, de composition selon l'invention, ou de combinaison selon l'invention suffisante pour induire un effet thérapeutique. Alternativement, le terme « quantité thérapeutiquement efficace » peut se référer à une quantité de principe actif, de composition selon l'invention, ou de combinaison selon l'invention suffisante pour induire un effet 15 antibactérien. 11 est évident que la quantité à administrer peut être adaptée par l'homme du métier, en fonction du sujet à traiter, de la nature de l'infection bactérienne, etc. En particulier, les doses et régimes d'administration dépendent de la nature, du stade de développement et de la sévérité de l'infection bactérienne à traiter, ainsi que du poids, de l'âge et de l'état de santé général du sujet à traiter, ou encore du jugement du médecin prescripteur. 20 Tel qu'utilisé ici, le terme « quantité sub-thérapeutique » se réfère à une quantité de principe actif insuffisante pour induire seule un effet thérapeutique. Alternativement, le terme « quantité sub-thérapeutique » peut se référer à une quantité de principe actif insuffisante pour induire seule un effet antibactérien. 25 Le cinéol Tel qu'utilisé ici, le terme « cinéol », « eucalyptol » ou « 1,8 cinéol » se réfère à un éther cyclique (N° CAS : 470-82-6) appartenant au groupe des monoterpènes, c'est-à-dire des terpénoïdes ayant dix atomes de carbones. Le cinéol est un composé naturel, organique et incolore pouvant être notamment extrait des huiles essentielles de certains eucalyptus (par 30 exemple Eucalyptus polybractea), du romarin (par exemple Rosmarinus officinales), de l'armoise (par exemple Artemisia vulgaris), mais également des huiles essentielles d'absinthe, de laurier, de sauge, du basilic, et des feuilles de camphrier (Cinnamomum camphora). Le cinéol peut être utilisé sous toute forme pharmaceutique acceptable. Tel qu'utilisé ici, le terme 3052066 9 pharmaceutiquement acceptable » se réfère à une molécule, à un composé ou à une composition adapté à une administration pharmaceutique. Il est de préférence utilisé sous forme purifiée. Sous sa forme purifiée, le cinéol est un liquide. 5 L'amoxicilline L'amoxicilline (N° CAS : 26787-78-0) est un antibiotique f3-lactamine bactéricide de la famille des aminopénicillines et qui est indiqué à ce jour dans le traitement des infections bactériennes à germes sensibles. Les f3-lactamines sont une large classe d'antibiotiques comprenant les dérivés de la pénicilline, les céphalosporines, les monobactames et les 10 carbapénèmes. Les f3-lactamines sont caractérisées par la présence d'un noyau f3-lactame dans leur structure moléculaire qui leur confère leur pouvoir bactéricide. Dans la formulation selon l'invention, l'amoxicilline peut être sous toute forme pharmaceutiquement acceptable. L'amoxicilline peut ainsi être sous la forme d'un sel pharmaceutiquement acceptable, en particulier un sel de sodium ou de potassium, sous une 15 forme anhydre ou hydratée, de préférence sous la forme d'un trihydrate, ou un mélange de ces formes. Dans un mode de réalisation préféré, la formulation selon l'invention comprend de l'amoxicilline trihydratée. Huile pharmaceutiquement acceptable 20 La formulation pharmaceutique selon l'invention comprend également une huile pharmaceutiquement acceptable. Tel qu'utilisé ici, le terme « huile » se réfère à une phase constituée de corps gras liquides à température ambiante et ne se mélangeant pas avec l'eau. L'huile utilisée dans la formulation selon l'invention peut être toute huile pharmaceutiquement acceptable, c'est-à-dire toute huile dont les données toxicologiques sont 25 compatibles avec l'administration par voie orale chez un sujet. L'huile est de préférence sélectionnée dans le groupe constitué des huiles animales, minérales, végétales, synthétiques et des mélanges de celles-ci. L'huile peut être utilisée dans la formulation selon l'invention pour ses propriétés adsorbantes. Tel qu'utilisé ici, le terme « adsorbant » se réfère à un excipient capable de fixer 30 des molécules liquides, par exemple des molécules de cinéol, sur un support solide, par exemple poudreux, dans une formulation pharmaceutique. 3052066 10 Dans un mode de réalisation particulier, la formulation selon l'invention comprend une huile minérale. Les huiles minérales sont obtenues par distillation de la houille, du pétrole ou de certains schistes bitumineux. Les huiles minérales comprennent notamment des hydrocarbures, des alcanes et des paraffines. En particulier, l'huile minérale peut être 5 sélectionnée dans le groupe constitué des paraffines raffinées, des cires microcristallines, des ozokérites, des ceresines, du pétrolatum, et un mélange de ceux-ci. Dans un autre mode de réalisation particulier, la formulation selon l'invention comprend une huile synthétique. En particulier, l'huile synthétique peut être sélectionnée dans le groupe constitué des huiles de silicone, des cires synthétiques, des mono-, di- et tri-glycérides 10 synthétiques, par exemple les triglycérides capryliques capriques, et un mélange de ceux-ci. Dans encore un mode de réalisation particulier, la formulation selon l'invention comprend une huile animale. Cette huile animale peut être par exemple sélectionnée dans le groupe constitué de l'huile de vison, de cachalot, de baleine, de phoque, d'émeu, de pieds de boeuf, des huiles de poissons, en particulier l'huile d'anchois, de sardine, de capelan, de hareng, 15 de saumon, de sprat, de morue, de merlan bleu, de pilchard, de thon, de requin, et un mélange de celles-ci. Dans un mode de réalisation préféré, la formulation selon l'invention comprend une huile végétale. Des exemples d'huiles végétales utilisables incluent, sans y être limité, des huiles de germe de blé, de maïs, de tournesol, de karité, de ricin, d'amandes douces, de 20 macadamia, d'abricot, de soja, de coton, de luzerne, de graines de pavot, de graines de potimarron, de sésame, de graines de courge, d'avocat, de noisette, de pépins de raisin, de pépins de cassis, d'onagre, de millet, d'orge, de quinoa, d'olive, d'arachide, de seigle, de carthame, de bancoulier, de passiflore, de rosier muscat, de coco, d' argan, de colza, de coprah, de lin, de noix, de noix de cajou, de margousier, de pistache, de riz, de cameline, de sacha inchi, de 25 bourrache, de chanvre, de pois, de jojoba, de neem, de cumin noir, de perilla, et un mélange de celles-ci. Dans un mode de réalisation tout particulièrement préférée, l'huile pharmaceutiquement acceptable comprise dans la formulation selon l'invention est une huile d'arachide. 30 3052066 11 Inhibiteur des 13-lactamases La formulation pharmaceutique selon l'invention peut en outre comprendre un ou plusieurs inhibiteurs des f3-lactamases. Ces inhibiteurs peuvent bloquer l'activité des 13- lactamases de différentes manières, par exemple en agissant comme un substrat suicide se fixant 5 de manière irréversible à ces enzymes comme c'est notamment le cas pour l'acide clavulanique et le sulbactam. L'inhibiteur des f3-lactamases peut être tout inhibiteur des f3-lactamases pharmaceutiquement acceptable. Cet inhibiteur est, de préférence, sélectionné dans le groupe constitué de l'acide clavulanique, du sulbactam, du tazobactam, de l'aztréonam, de l'avibactam, des sels 10 pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci, et des mélanges de ceux-ci. Dans un mode de réalisation préféré, la formulation selon l'invention comprend de l'acide clavulanique. L'acide clavulanique (N° CAS : 58001-44-8) est couramment utilisé en combinaison avec les antibiotiques f3-lactamines, notamment l'amoxicilline. Dans la formulation selon l'invention, l'acide clavulanique peut être sous toute forme 15 pharmaceutiquement acceptable, de préférence sous la forme d'un sel pharmaceutiquement acceptable, notamment sous la forme d'un sel potassique d'acide clavulanique. Formulation pharmaceutique La présente invention concerne une formulation pharmaceutique sous forme de poudre. 20 Tel qu'utilisé ici le terme de « poudre » se réfère à un état fractionné de la matière, il s'agit d'un état solide présent sous forme de petites particules. De préférence, les particules de poudre ont un diamètre inférieur ou égal à environ 5 mm, de manière encore préférée inférieur ou égal à environ 2,5 mm, et de manière tout particulièrement préférée inférieur ou égal à environ 1,25 mm. 25 La poudre de la formulation pharmaceutique selon l'invention est de préférence une poudre sèche. Tel qu'utilisé ici, le terme de « poudre sèche » se réfère à une poudre ayant un taux d'humidité inférieur ou égal à 20 %, de préférence inférieur ou égal à 15 %, de manière encore préférée inférieur ou égal à 10 %. La formulation pharmaceutique selon l'invention répond de préférence aux critères 30 d'exigence de la Pharmacopée Européenne (8ème édition), notamment en terme d'impuretés et/ou en terme de qualité microbiologique. 3052066 12 En particulier, le taux de bactéries présent dans la poudre de la formulation pharmaceutique selon l'invention est de préférence inférieur à 10 000 UFC (Unité Formant Colonie) par gramme de poudre, de manière préférée inférieur à 1000 UFC par gramme de poudre, et de manière tout particulièrement préférée inférieur à 100 UFC par gramme de poudre. 5 De préférence, la poudre de la formulation pharmaceutique selon l'invention ne contient pas d'Escherichia coll. Concernant les autres germes, le taux de champignons et levures est de préférence inférieur à 1000 UFC par gramme de poudre, de manière préférée inférieur à 100 UFC par gramme de poudre, et de manière tout particulièrement préférée inférieur à 50 UFC par gramme de poudre. 10 La formulation pharmaceutique selon l'invention comprend, ou consiste essentiellement en, du cinéol, de l' amoxicilline, et une huile pharmaceutiquement acceptable, tels que définis ci-dessus. De préférence, l' amoxicilline et le cinéol sont présents dans la formulation selon 15 l'invention à des concentrations permettant l'administration de doses suffisantes pour obtenir un effet thérapeutique et/ou un effet antibactérien, de préférence un effet synergique, tel qu'illustré dans les exemples ci-après. Pour obtenir un tel effet, l'amoxicilline et le cinéol peuvent être administrés en des quantités thérapeutiquement efficaces ou en des quantités subthérapeutiques. 20 Dans un mode de réalisation préféré, le cinéol et l'amoxicilline sont tous deux administrés en des quantités thérapeutiquement efficaces. Dans un autre mode de réalisation préféré, l'amoxicilline est administrée en une quantité thérapeutiquement efficace et le cinéol est administré en une quantité sub-thérapeutique. Dans encore un autre mode de réalisation préféré, l'amoxicilline est administrée en une 25 quantité sub-thérapeutique et le cinéol est administré en une quantité thérapeutiquement efficace. Dans encore un autre mode de réalisation préféré, l'amoxicilline et le cinéol sont tous deux administrés en des quantités sub-thérapeutiques. De préférence, l'huile est présente dans la formulation selon l'invention à une 30 concentration suffisante pour permettre l'adsorption du cinéol à la poudre de la formulation. Selon un mode de réalisation, l'invention comprend, ou consiste essentiellement en, entre environ 5 mg et environ 100 mg, de préférence entre environ 10 mg et environ 50 mg, de 3052066 13 manière encore préférée entre environ 20 mg et environ 40 mg, de cinéol par gramme de poudre ; et/ou entre environ 20 mg et environ 500 mg, de préférence entre environ 50 mg et environ 300 mg, de manière encore préférée entre environ 150 mg et environ 200 mg, d' amoxicilline par gramme de poudre ; et/ou entre environ 2 mg et environ 50 mg, de préférence 5 entre environ 10 mg et environ 25 mg, de manière encore préférée entre environ 15 mg et environ 20 mg, d'huile par gramme de poudre. De préférence, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend, ou consiste essentiellement, entre environ 5 mg et environ 100 mg de cinéol, entre environ 20 mg et environ 500 mg d'amoxicilline, et entre environ 2 mg et environ 50 mg d'huile par gramme de poudre. 10 De manière encore préférée, la formulation pharmaceutique suivant l'invention comprend, ou consiste essentiellement, entre environ 10 mg et environ 50 mg de cinéol, entre environ 50 mg et environ 300 mg d'amoxicilline, et entre environ 10 mg et environ 25 mg d'huile par gramme de poudre. De manière tout particulièrement préférée, la formulation pharmaceutique suivant 15 l'invention comprend, ou consiste essentiellement en, entre environ 20 mg et environ 40 mg, de préférence environ 33 mg, de cinéol par gramme de poudre, entre environ 150 mg et environ 200 mg, de préférence environ 167 mg, d' amoxicilline par gramme de poudre, entre environ 15 mg et environ 20 mg, de préférence environ 17 mg, d'huile par gramme de poudre. 20 Dans un mode de réalisation préféré, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend, ou consiste essentiellement en, du cinéol, de l'amoxicilline, une huile pharmaceutiquement acceptable et un inhibiteur de f3-lactamases, tels que définis ci-dessus. De préférence, l'inhibiteur de f3-lactamases est sélectionné parmi l'acide clavulanique, le sulbactam, le tazobactam et l'aztréonam. De manière encore préférée, l'inhibiteur de 13- 25 lactamases est l'acide clavulanique. Ainsi, la formulation pharmaceutique selon l'invention peut comprendre, ou consister essentiellement en, du cinéol, de l' amoxicilline et une huile pharmaceutiquement acceptable dans des proportions telles que décrites ci-dessus, et un inhibiteur de f3-lactamases présent à une concentration suffisante pour permettre son administration en une quantité thérapeutiquement 30 efficace ou en une quantité sub-thérapeutique. Selon un mode de réalisation, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend, ou consiste essentiellement en, du cinéol, de l'amoxicilline et une huile 3052066 14 pharmaceutiquement acceptable dans des proportions telles que décrites ci-dessus, et entre environ 1 mg et environ 100 mg, de préférence entre environ 5 mg et environ 50 mg, de manière encore préférée entre environ 15 mg et environ 25 mg, et de manière tout particulièrement préférée environ 20,8 mg, d'inhibiteur de f3-lactamases, de préférence de l'acide clavulanique, 5 par gramme de poudre. Dans un autre mode de réalisation particulier, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend, ou consiste essentiellement en, du cinéol, de l'amoxicilline et une huile pharmaceutiquement acceptable, dans laquelle la proportion de cinéol est comprise entre environ 0,02 mg et environ 0,5 mg, de préférence entre environ 0,1 mg et environ 0,3 mg, de 10 cinéol par gramme d' amoxicilline, et de manière encore préférée la proportion de cinéol est égale à environ 0,2 mg de cinéol par gramme d'amoxicilline ; et/ou la proportion d'huile est comprise entre environ 0,01 mg et environ 0,5 mg, de préférence entre environ 0,05 mg et environ 0,2 mg, d'huile par gramme d'amoxicilline, et de manière encore préférée la proportion d'huile est égale à environ 0,1 mg d'huile par gramme d'amoxicilline. De préférence, la 15 formulation pharmaceutique selon l'invention comprend en outre un inhibiteur de f3-lactamases, de préférence de l'acide clavulanique, la proportion d'inhibiteur de f3-lactamases étant comprise entre environ 0,01 mg et environ 0,5 mg, de préférence entre 0,1 mg et environ 0,2 mg, d'inhibiteur de f3-lactamases par gramme d' amoxicilline, et de manière encore préférée la proportion d'inhibiteur de f3-lactamases est égale à environ 0,125 mg d'inhibiteur de 13- 20 lactamases par gramme d' amoxicilline. La formulation pharmaceutique selon l'invention peut comprendre en outre au moins un autre principe actif. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, la formulation pharmaceutique selon 25 l'invention comprend, ou consiste essentiellement en, du cinéol, de l'amoxicilline, une huile pharmaceutiquement acceptable, éventuellement un inhibiteur de f3-lactamases, de préférence de l'acide clavulanique, tels que définis ci-dessus, et un autre principe actif. De préférence, le principe actif supplémentaire de la formulation selon l'invention est un autre antibiotique, en particulier un antibiotique f3-lactamine, et/ou un autre inhibiteur des f3-lactamases, et/ou un 30 antifongique, et/ou un antiparasitaire, et/ou un analgésique. La formulation pharmaceutique selon l'invention peut comprendre, ou consister essentiellement en, du cinéol, de l'amoxicilline, une huile pharmaceutiquement acceptable, et optionnellement un inhibiteur de f3-lactamases, de préférence de l'acide clavulanique, en des quantités telles que décrites ci-dessus et un autre principe actif présent à une concentration 3052066 15 suffisante pour permettre son administration en une quantité thérapeutiquement efficace ou en une quantité sub-thérapeutique. Excipients 5 La formulation pharmaceutique selon l'invention peut comprendre en outre au moins un excipient ou support pharmaceutiquement acceptable en plus de l'huile pharmaceutiquement acceptable. Cet excipient ou support pharmaceutiquement acceptable de la formulation selon l'invention est de préférence sélectionné dans le groupe consistant en un édulcorant, un 10 aromatisant, un antiagglomérant, un lubrifiant, un désintégrant, et un mélange de ceux-ci. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend en outre au moins un désintégrant. Tel qu'utilisé ici, le terme « désintégrant » se réfère à un excipient qui permet 15 d'améliorer la désintégration, c'est-à-dire la séparation des molécules présentes dans la formulation pharmaceutique en milieu liquide, de préférence un milieu aqueux, et leur suspension homogène. De préférence, le désintégrant est sélectionné dans le groupe constitué des celluloses microcristallines, des carboxyméthylamidons réticulés, des polyvinylpyrrolidones réticulés et 20 des carboxyméthylcelluloses réticulés. Tel qu'utilisés ici les termes de « carboxyméthylcellulose réticulé » et « croscarmellose » sont équivalents et peuvent être employés l'un pour l'autre. Dans un mode de réalisation préféré, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend entre environ 10 mg et environ 1000 mg, de préférence entre environ 100 mg et 25 environ 600 mg, de manière encore préférée entre environ 450 mg et environ 550 mg, par exemple environ 513,7 mg, de désintégrant par gramme de poudre. En particulier, la formulation peut comprendre une cellulose microcristalline, de préférence sous forme d'une poudre constituée de particules ayant un diamètre d'environ 20 à environ 200 pm, de manière encore préférée un diamètre d'environ 50 à environ 100 p.m. En 30 particulier, la cellulose microcristalline est sélectionnée parmi les celluloses microcristallines de type Avicel®, Emcocel® et Vitacel®, ou des mélanges de celles-ci, de préférence la 3052066 16 cellulose microcristalline est sélectionnée parmi les celluloses microcristallines Avicel PH 101,102, 103,104, 112,113, 301 et 302, et de manière tout particulièrement préférée la cellulose microcristalline est de type Avicel PH 112. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, la formulation pharmaceutique selon 5 l'invention comprend entre environ 100 mg et environ 800 mg, de préférence entre environ 300 mg et environ 500 mg, de manière encore préférée entre environ 400 mg et environ 420 mg, par exemple environ 413,7 mg, de cellulose microcristalline par gramme de poudre. Alternativement, la formulation peut comprendre une croscarmellose. En particulier, la croscarmellose peut être sous forme d'une poudre formée de particules ayant un diamètre 10 moyen inférieur à 36 pm. De préférence, la croscarmellose est une croscarmellose sodique. Dans un autre mode de réalisation particulier, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend entre environ 10 mg et environ 250 mg, de préférence entre environ 50 mg et environ 150 mg, de manière encore préférée entre environ 80 mg et 120 mg, par exemple environ 100 mg de croscarmellose par gramme de poudre. 15 Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend de la cellulose microcristalline et de la croscarmellose tel que définie ci-dessus. Ainsi, la formulation pharmaceutique selon l'invention peut comprendre entre environ 100 mg et environ 800 mg, de préférence entre environ 300 mg et environ 500 mg, de manière encore préférée entre environ 400 mg et environ 420 mg, par exemple environ 20 413,7 mg, de cellulose microcristalline par gramme de poudre ; et/ou entre environ 10 mg et environ 250 mg, de préférence entre environ 50 mg et environ 150 mg, de manière encore préférée entre environ 80 mg et 120 mg, par exemple environ 100 mg de croscarmellose par gramme de poudre. 25 La formulation pharmaceutique selon l'invention peut également comprendre au moins un excipient de type antiagglomérant. Tel qu'utilisé ici, le terme « antiagglomérant » se réfère à un excipient qui limite l'agglutination des particules dans un produit en poudre et ainsi assure sa fluidité. De préférence, l'antiagglomérant est sélectionné dans le groupe constitué du talc, de la 30 silice et de ses dérivés, du carbonate de sodium, du carbonate d'ammonium, du bicarbonate d'ammonium, du carbonate de magnésium, du ferrocyanure de sodium, du ferrocyanure de potassium, du ferrocyanure de calcium, ou des mélanges de ceux-ci. 3052066 17 De manière encore préférée, l'antiagglomérant est sélectionné dans le groupe constitué de la silice et de ses dérivés, en particulier la silice, la silice colloïdale, le dioxyde de silicium, le silicate de calcium, le silicate de magnésium, le silicate alumino-sodique, le silicate aluminopotassique, le silicate alumino-calcique, le silicate de zinc, le silicate d'aluminium, ou des 5 mélanges de ceux-ci. De manière tout particulièrement préférée, l'antiagglomérant est de la silice, de préférence de la silice synthétique amorphe, en particulier du syloid® Al-1 FP. Dans un mode de réalisation préféré, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend entre environ 20 mg et environ 500 mg, de préférence entre environ 50 mg et environ 10 300 mg, de manière encore préférée entre environ 150 mg et environ 200 mg, par exemple environ 180 mg d' antiagglomérant, de préférence de la silice, par gramme de poudre. La formulation pharmaceutique selon l'invention peut également comprendre au moins un excipient de type lubrifiant. 15 Tel qu'utilisé ici, le terme « lubrifiant » se réfère à un excipient destiné à faciliter les étapes de fabrication de la poudre, notamment grâce à ses effets glissant, anti-adhérent et antifriction. De préférence, le lubrifiant est sélectionné dans le groupe constitué du stéarate de magnésium, du stéarate d'aluminium, du stéarate de calcium, du stéarate de sodium, du stéarate 20 de zinc, du stéarylfumarate de sodium, du propylenglycol, du monostéarate de glycérol ou des mélanges de ceux-ci. De manière encore préférée, le lubrifiant est du stéarate de magnésium. Selon un mode de réalisation préféré, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend entre environ 1 mg et environ 40 mg, de préférence entre environ 2 mg et environ 15 mg, de manière encore préférée entre environ 4 mg et environ 10 mg, par exemple environ 6 25 mg de lubrifiant, de préférence du stéarate de magnésium, par gramme de poudre. La formulation pharmaceutique selon l'invention peut également comprendre au moins un excipient de type édulcorant. Tel qu'utilisé ici, le terme « édulcorant » se réfère à un excipient destiné à changer le 30 goût d'une formulation pharmaceutique en lui conférant une saveur sucrée. 3052066 18 De préférence, l'édulcorant est sélectionné dans le groupe constitué de l'acésulfame potassium (E950), l'alitame (E956), l'aspartame (E951), la cyclamate (E952), la néotame, la saccharine (E954), le sel d'aspartame-acésulfame (E962), le sucralose, la thaumatine, les polyols, la brazzéine, la curculine, la glycyrrhizine, un hydrolysat d'amidon hydrogéné, la 5 mabinline, la miraculine, la monelline, la pentadine, le stevia, le tagatose, le tréhalose, l'isomaltulose, l'érythritol, et des mélanges de ceux-ci. De manière particulièrement préférée, l'édulcorant est l'aspartame. Selon un mode de réalisation préféré, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend entre environ 1 mg et environ 60 mg, de préférence entre environ 3 mg et environ 20 10 mg, de manière encore préférée la formulation pharmaceutique de l'invention comprend entre environ 8 mg et environ 15 mg, par exemple environ 12 mg d'édulcorant, de préférence de l'aspartame, par gramme de poudre. La formulation pharmaceutique selon l'invention peut également comprendre au moins 15 un excipient de type aromatisant. Tel qu'utilisé ici, le terme « aromatisant » se réfère à un excipient destiné à changer le goût d'une formulation pharmaceutique en lui conférant un arôme. De préférence, l'aromatisant est sélectionné dans le groupe constitué de l'arôme de fraise, de framboise, de cerise, de banane, de citron, d'orange, de pêche, de pomme, de caramel, 20 ou des mélanges de ceux-ci. De manière encore préféré, l'aromatisant est un mélange d'arômes citron, fraise et pêche. Selon un mode de réalisation préféré, la formulation pharmaceutique selon l'invention comprend entre environ 1 mg et environ 100 mg, de préférence entre environ 10 mg et environ 50 mg, de manière encore préférée entre environ 20 mg et environ 40 mg, par exemple environ 25 30 mg, d'aromatisant par gramme de poudre. Afin de prévenir les risques de contamination microbiologique, la formulation pharmaceutique selon l'invention peut également comprendre un agent conservateur. Les agents conservateurs utilisables dans la formulation selon l'invention comprennent, 30 sans y être limités, l'acide benzoïque et ses sels sodiques ou potassique tels que le benzoate de sodium ; les parabènes tels que le méthylparabène, le propylparabène ou le butylparabène ; 3052066 19 l'acide sorbique et ses sels sodiques ou potassique tels que le sorbate de potassium ; des ammoniums quaternaires tels que le chlorure de benzalkonium ; des dérivés mercuriels tels que les sels de phénylmercure (acétate, borate ou nitrate) ou le thiomersal ; et une combinaison de ceux-ci. 5 La formulation pharmaceutique suivant l'invention peut également comprendre un excipient de type tampon pH, tels que différents acides et leurs sels, comme par exemple l'acide citrique, le citrate sodique et l'acide succinique. La formulation peut encore comprendre un colorant, notamment afin d'augmenter son acceptabilité vis-à-vis des enfants. De préférence, le colorant est utilisé pour renforcer la 10 crédibilité de l'arôme (par exemple un colorant rose pour un arôme fraise). Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, la formulation pharmaceutique suivant l'invention ne comprend pas de détergent. Le terme de « détergent » (ou « surfactant »), tel qu'employé ici se réfère à une molécule amphiphile dotée de propriétés tensioactives. Des 15 détergents couramment utilisés dans les formulations pharmaceutiques sont par exemple des détergents ioniques tel que le sodium dodecyl sulfate (SDS), le desoxycholate et le cholate, des détergents non-ionique tel que le triton X-100, le n-Dodecyl P-D-Maltopyranoside (DDM), la digitonine, le tween 20 et le tween 80, et des détergents amphotériques tel que le 34(3- cholamidopropyl)diméthylammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS) ou le 3- 20 [diméthylammonio]-1-propanesulfonate. Dans un autre mode de réalisation préféré, la formulation pharmaceutique selon l'invention est sous forme d'une poudre comprenant, ou consistant essentiellement en, ou consistant en, du cinéol, de l'amoxicilline, une huile pharmaceutiquement acceptable, et au 25 moins un édulcorant, un aromatisant, un antiagglomérant, un lubrifiant et/ou un désintégrant tels que définis ci-dessus et, optionnellement, un inhibiteur de f3-lactamases, de préférence de l'acide clavulanique, tel que défini ci-dessus. De préférence, la formulation pharmaceutique selon l'invention est sous forme d'une poudre comprenant, ou consistant essentiellement en, ou consistant en, du cinéol, de 30 l'amoxicilline, et de l'huile dans les proportions décrites ci-dessus, et entre environ 1 mg et environ 60 mg d'édulcorant, de préférence de l'aspartame, et/ou entre environ 1 mg et environ 60 mg d'aromatisant, et/ou entre environ 20 mg et environ 500 mg d' antiagglomérant, de préférence de la silice, et/ou entre environ 1 mg et environ 40 mg de lubrifiant, de préférence 3052066 20 du stéarate de magnésium, et/ou entre environ 10 mg et environ 1000 mg de désintégrant, de préférence un mélange de cellulose microcristalline et de croscarmellose, par gramme de poudre et, optionnellement, un inhibiteur de f3-lactamases, de préférence de l'acide clavulanique, dans les proportions décrites ci-dessus. 5 De manière encore préférée, la formulation pharmaceutique suivant l'invention est sous forme d'une poudre comprenant, ou consistant essentiellement en, ou consistant en, du cinéol, de l'amoxicilline, et de l'huile dans les proportions décrites ci-dessus, et entre environ 3 mg et environ 20 mg d'édulcorant, de préférence de l'aspartame, et/ou entre environ 10 mg et environ 50 mg d'aromatisant, et/ou entre environ 50 mg et environ 300 mg d' antiagglomérant, de 10 préférence de la silice, et/ou entre environ 2 mg et environ 15 mg de lubrifiant, de préférence du stéarate de magnésium, et/ou entre environ 100 mg et environ 600 mg de désintégrant, de préférence un mélange de cellulose microcristalline et de croscarmellose, par gramme de poudre, et, optionnellement, un inhibiteur de f3-lactamases, de préférence de l'acide clavulanique, dans les proportions décrites ci-dessus. 15 De manière tout particulièrement préférée, la formulation pharmaceutique suivant l'invention est sous forme d'une poudre comprenant, ou consistant essentiellement en, ou consistant en, du cinéol, de l'amoxicilline, et de l'huile dans les proportions décrites ci-dessus, et entre environ 8 mg et environ 15 mg, par exemple environ 12 mg, d'édulcorant, de préférence de l'aspartame, et/ou entre environ 20 mg et environ 40 mg, par exemple environ 30 mg, 20 d'aromatisant par gramme de poudre, et/ou entre environ 150 mg et environ 200 mg, par exemple environ 180 mg, d' antiagglomérant, de préférence de la silice, et/ou entre environ 4 mg et environ 8 mg, par exemple environ 6 mg de lubrifiant, de préférence du stéarate de magnésium, et/ou entre environ 450 mg et environ 550 mg, par exemple environ 513,7 mg, de désintégrant, par exemple environ 100 mg de croscarmellose et environ 413,7 mg de cellulose 25 microcristalline, et, optionnellement, un inhibiteur de f3-lactamases, de préférence de l'acide clavulanique, dans les proportions décrites ci-dessus. Conditionnement, stabilité et voie d'administration Les inventeurs ont démontré que la formulation pharmaceutique selon l'invention est 30 particulièrement stable. La stabilité d'un produit se caractérise par le fait que la qualité dudit produit ne varie pas pendant un intervalle de temps donné sous l'effet de divers facteurs environnementaux, en particulier de la température et de l'humidité (norme ICH). L'absence de variation peut être constatée pour un pourcentage final en amoxicilline, en cinéol, et 3052066 21 éventuellement en acide clavulanique n'ayant pas varié, de préférence, de plus de 5 % par rapport aux valeurs initiales. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, la formulation pharmaceutique selon l'invention est stable pendant au moins 18 mois, de préférence pendant au moins 24 mois, de 5 manière encore préférée pendant au moins 36 mois à une température d'environ 25°C et sous une humidité relative d'au moins environ 60 %. Dans un autre mode de réalisation particulier, la formulation pharmaceutique selon l'invention est stable pendant au moins 6 mois, de préférence pendant au moins 12 mois, de manière encore préférée pendant au moins 24 mois à une température d'environ 30°C et sous 10 une humidité relative d'au moins environ 65 %. Dans encore un autre mode de réalisation particulier, la formulation pharmaceutique selon l'invention est stable pendant au moins 3 mois, de préférence pendant au moins 6 mois, de manière encore préférée pendant au moins 12 mois à une température d'environ 40°C et sous une humidité relative d'au moins environ 75 %. 15 Des enceintes climatiques, bien connues de l'homme du métier, permettent de soumettre la formulation pharmaceutique selon l'invention aux conditions de température et d'humidité relative mentionnées ci-dessus. Tel qu'utilisé ici, le terme « humidité relative » se réfère au rapport de la pression partielle de la vapeur d'eau contenue dans l'air sur la pression de vapeur saturante (ou tension 20 de vapeur) à la même température. La formulation pharmaceutique selon l'invention est destinée à une administration par voie orale. De préférence, la formulation pharmaceutique est administrée après suspension dans 25 un solvant aqueux puis mélange, de préférence le solvant aqueux est de l'eau. De manière particulièrement préférée, la formulation pharmaceutique est mise en solution extemporanément. La formulation pharmaceutique selon l'invention est stable après suspension dans un milieu aqueux, pendant au moins 48 h, de préférence pendant au moins 72 h, de manière encore préférée pendant au moins 96 h à une température inférieure ou égale à environ 20°C et 30 sous une humidité relative inférieure ou égale à environ 15 %. 3052066 22 Après mise en suspension dans un solvant aqueux, de préférence de l'eau, la formulation pharmaceutique de l'invention peut former une solution au pH légèrement acide. De préférence, le pH de la solution formée par la suspension de la formulation pharmaceutique de l'invention dans un solvant aqueux est compris entre un pH d'environ 5 et un pH d'environ 7. 5 La formulation pharmaceutique selon l'invention peut être conditionnée dans un récipient unidose ou multi-dose, de préférence dans un récipient unidose. Dans un mode de réalisation préféré, la formulation pharmaceutique selon l'invention est conditionnée dans un récipient unidose contenant entre environ 1 g et environ 150 g de 10 poudre, de manière encore préférée entre environ 1 g et environ 50 g de poudre, de manière toujours préférée entre environ 1 g et environ 10 g de poudre, et de manière plus particulièrement préférée environ 3 g de poudre. Lorsque la formulation pharmaceutique est conditionnée dans un récipient unidose, lesdits récipients unidoses peuvent être secondairement conditionnés dans une boîte. Une boîte 15 peut contenir par exemple entre 3 et 31 récipients unidoses, de préférence entre 5 et 21 récipients unidoses, de manière encore préféré entre 7 et 14 récipients uni-doses. Dans un autre mode de réalisation, la formulation pharmaceutique selon l'invention est conditionnée dans un récipient multi-dose. Ledit récipient peut contenir par exemple entre environ 10 grammes et environ 500 grammes de poudre, de préférence entre environ 20 20 grammes et environ 200 grammes de poudre, de manière encore préférée entre environ 30 grammes de poudre et environ 100 grammes de poudre, et de manière tout particulièrement préférée environ 50 grammes de poudre. Lorsque la formulation pharmaceutique est conditionnée dans un récipient multi-dose, celui-ci peut être secondairement conditionné dans une boîte, éventuellement accompagné d'un 25 doseur, par exemple une cuillère, permettant de prélever une quantité déterminée de poudre, de préférence d'environ 1 mg à environ 30 mg de poudre, de manière encore préférée d'environ 2 mg à environ 20 mg de poudre, et de manière encore préférée d'environ 3 à environ 12 mg de poudre. En particulier, le doseur peut permettre de prélever environ 3 g, environ 6 g, environ 9 g, environ 12 g, environ 15 g et/ou environ 18 g de poudre. 30 3052066 23 Traitement d'une pathologie infectieuse Dans un deuxième aspect, la présente invention concerne également une formulation pharmaceutique selon l'invention pour une utilisation dans le traitement d'une pathologie infectieuse chez un sujet. Elle concerne aussi une formulation pharmaceutique selon l'invention 5 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement d'une pathologie infectieuse. Elle concerne également une méthode de traitement comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace de la formulation selon l'invention à un sujet en ayant besoin, en particulier un sujet souffrant d'une pathologie infectieuse. De préférence, la pathologie infectieuse est d'origine bactérienne, de manière encore 10 préférée la pathologie infectieuse est causée par une ou plusieurs bactéries résistantes aux antibiotiques, en particulier aux antibiotiques de la famille des f3-lactamines. Dans un mode de réalisation préféré, la pathologie infectieuse est causée par une bactérie résistante à l'amoxicilline. De préférence, la bactérie responsable de la pathologie infectieuse est au moins partiellement résistante à une combinaison d'amoxicilline et d'acide clavulanique. 15 Dans un autre mode de réalisation préféré, la bactérie responsable de la pathologie infectieuse est une bactérie productrice de 13-lactamases. Les 13-lactamases sont des enzymes d'inactivation dites à sérine active (classes A, C et D) ou des métalloenzymes (classe B) dont les substrats sont les antibiotiques 13-lactamines. On distingue des 13-lactamases à spectre étroit et des 13-lactamases à spectre étendu (BLSE) qui sont capables d'inhiber un grand nombre 20 d'antibiotiques 13-lactamines différents, en particulier les pénicillines, dont l'amoxicilline, les céphalosporines de 1ère, 2ème, Sème (ex. céfotaxime, ceftazidime) et 4ème (ex. céfépime) génération et les monobactames (ex. aztréonam). Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, la bactérie responsable de la pathologie infectieuse est une bactérie productrice de 13-lactamases à spectre étendu (BLSE). 25 En particulier, une bactérie productrice de BLSE insensibles à l'acide clavulanique. Alternativement, la bactérie produit des BLSE qui ne sont que partiellement inhibées par l'acide clavulanique. L'infection bactérienne traitée par la formulation pharmaceutique de l'invention peut être sélectionnée dans le groupe constitué des cystites, en particulier les cystites aiguës 30 récidivantes, des sinusites bactériennes, en particulier les sinusites maxillaires aiguës, des otites, en particulier les otites moyennes aiguës, des bronchites, en particulier les bronchites 3052066 24 chroniques et/ou aiguës, des bronchopneumopathies, en particulier les bronchopneumopathies chroniques et/ou aiguës, des pyélonéphrites, des infections gynécologiques hautes, des parodontites, des infections stomatologiques sévères, en particulier les abcès, les phlegmons et les cellulites, des morsures animales, des infections des os et des articulations, en particulier 5 l'ostéomyélite, des endocardites, des péricardites, des septicémies, et des infections dermiques. De préférence, ladite infection bactérienne est une cystite, de manière encore préférée une cystite résistante à l'amoxicilline, de manière tout particulièrement préférée, une cystite résistante à une combinaison d' amoxicilline et d'acide clavulanique 10 Les termes de « sujet » et de « patient » sont équivalents et peuvent indifféremment être employés l'un pour l'autre dans le cadre de la présente invention. Tels qu'utilisé ici, le terme de « sujet » fait référence à un animal, de préférence à un mammifère, de manière encore préférée le terme de « sujet » fait référence à un humain. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, le sujet auquel est administrée la 15 formulation selon l'invention est un humain. Il peut ainsi s'agir d'un nouveau-né, d'un enfant, d'un adolescent, d'un adulte ou d'une personne âgée. Tel qu'utilisé ici, le terme de « nouveau-né » se réfère à un être humain âgé de moins de 12 mois, de préférence âgé de moins de 6 mois, de manière encore préférée âgé de moins de 3 mois. Tel qu'utilisé dans la présente invention, le terme « d'enfant » se réfère à un être humain âgé de 1 à 12 ans, de préférence à un être humain 20 âgé de 1 à 8 ans, et de manière encore préférée à un être humain âgé de 1 à 5 ans. Tel qu'utilisé ici, le terme « d'adulte » se réfère à un être humain âgé de 12 à 60 ans, de préférence à un être humain âgé de 15 à 60 ans, de manière encore préférée à un être humain âgé de 18 à 60 ans. Tel qu'utilisé dans la présente invention, le terme de « personne âgée » se réfère à un être humain âgé de 60 ans ou plus, de préférence à un être humain âgé de 65 ans ou plus, et de 25 manière encore préférée à un être humain âgé de 70 ans ou plus. Dans un mode de réalisation préféré, le sujet auquel est administrée la formulation selon l'invention est un humain adulte. Dans le domaine des applications vétérinaires, le sujet de l'invention peut être un animal non-humain, de préférence un animal de compagnie ou d'élevage, de manière encore préféré 30 un animal sélectionné dans le groupe constitué des chiens, chats, bovins, ovins, lapins, porcs, caprins, équidés, rongeurs, en particulier hamsters et cochons d'inde, primates non-humains et 3052066 25 volailles, de préférence poulets de chair, poules pondeuses, coqs et poules reproducteurs, pintades, dindons, cailles, canards, oies et pigeons. Posologie 5 La formulation pharmaceutique selon l'invention, utilisée dans le traitement d'une pathologie infectieuse chez un sujet, peut être administrée à raison d'une dose unique, ou à raison de plusieurs doses en fonction du sujet, de son âge, de son état de santé et de l'infection à traiter. Lorsque plusieurs doses de la formulation pharmaceutique sont administrées, celles-ci peuvent être réparties sur un ou plusieurs jours. La formulation pharmaceutique selon 10 l'invention peut ainsi être administrée à raison d'une dose unique par jour d'administration du traitement. De préférence, le sujet reçoit plusieurs doses de la formulation pharmaceutique par jour d'administration du traitement. De manière encore préférée, le sujet reçoit trois doses de la formulation pharmaceutique par jour d'administration du traitement, de préférence matin, midi et soir. 15 Le nombre de doses reçues par le sujet par jour d'administration peut également varier au cours du temps. Ainsi, peuvent alterner des périodes où le sujet reçoit une dose unique par jour d'administration du traitement avec des périodes où le sujet reçoit plusieurs doses par jour d'administration du traitement, de préférence trois doses réparties matin, midi et soir. En particulier, le sujet peut recevoir une dose en général unique dite « dose de charge » le premier 20 jour du traitement avant de recevoir plusieurs doses dites « doses d'entretien » par jour de traitement les jours suivants, de préférence trois doses d'entretien par jour de traitement, de préférence matin, midi et soir. La dose de charge, en général administrée au sujet le premier jour du traitement, de préférence en une seule prise, est une dose de la formulation selon l'invention qui est de préférence supérieure ou égale aux doses d'entretien, de manière encore 25 préférée la dose de charge est supérieure ou égale à deux doses d'entretien lorsque le sujet reçoit au moins deux doses d'entretien par jour de traitement. De préférence, la dose de charge est comprise entre environ 5 g et environ 20 g, de manière encore préférée entre environ 10 g et environ 15 g, de manière tout particulièrement préférée la dose de charge est d'environ 12 g. De préférence, la dose d'entretien est comprise entre environ 1 g et environ 15 g, de manière 30 encore préférée entre environ 3 g et environ 6 g, de manière tout particulièrement préférée la dose d'entretien est d'environ 3 g ou d'environ 6 g. La formulation pharmaceutique selon l'invention peut être administrée tous les jours, tous les deux jours, ou une fois par semaine, de préférence tous les jours. La périodicité de prise 3052066 26 de la formulation dépend de différents paramètres et peut être aisément définie par l'homme du métier selon, par exemple, la durée globale prévue de prise de la formulation pharmaceutique, l'âge du sujet et/ou la gravité de l'infection à prévenir ou à traiter. La périodicité de prise de la formulation pharmaceutique peut également évoluer au cours du temps, chez un sujet donné, 5 notamment en fonction de l'évolution de son infection, et/ou de son état de santé global. En particulier, la formulation pharmaceutique selon l'invention peut être administrée au sujet pendant une période allant de 1 jour à environ 3 mois, 2 mois, 1 mois, 3 semaines, 2 semaines, 1 semaine, 5 jours, 3 jours, 2 jours, de préférence pendant une période d'environ 2 à environ 21 jours, de manière encore préférée pendant une période d'environ 7 à environ 14 10 jours. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, la formulation pharmaceutique selon l'invention est administrée au sujet pendant une période d'environ 7 jours. Alternativement, la formulation pharmaceutique selon l'invention peut être administrée pendant toute la durée de l'infection. Dans un mode de réalisation particulier, la formulation pharmaceutique selon 15 l'invention peut être administrée durant plusieurs mois, éventuellement durant plusieurs années, par exemple dans le cas d'infections bactériennes chroniques. La formulation pharmaceutique selon l'invention peut être administrée au sujet à raison d'environ 1 à environ 150 grammes, de préférence d'environ 1 à environ 50 grammes, de manière encore préférée d'environ 2 à environ 30 grammes, de manière tout particulièrement 20 préférée d'environ 3 à environ 20 grammes par jour de traitement. Par exemple, environ 9 grammes de la formulation pharmaceutique selon l'invention peuvent être administrés au sujet par jour de traitement. Dans un autre exemple, environ 18 grammes de la formulation suivant l'invention peuvent être administrés au sujet par jour de traitement. 25 Procédé de fabrication de la formulation pharmaceutique La présente invention concerne également, dans un troisième aspect, un procédé de fabrication de la composition pharmaceutique selon l'invention comprenant : - l'obtention d'une solution de mouillage par mélange de cinéol et d'une huile pharmaceutiquement acceptable ; 30 - le mouillage d'une poudre comprenant de l'amoxicilline par la solution de mouillage afin d'obtenir une préparation poudreuse comprenant de l'amoxicilline, du cinéol et de l'huile. 3052066 27 La présente invention concerne également la composition/formulation pharmaceutique obtenue par le procédé selon l'invention. Tel qu'utilisé ici, le terme « solution de mouillage » se réfère à solution destinée à mouiller ou humidifier une poudre sèche. L'opération de mouillage peut en particulier être 5 réalisée par pulvérisation de la solution de mouillage sur la poudre à mouiller. L'étape d'obtention d'une solution de mouillage du procédé selon l'invention peut être réalisée en mélangeant du cinéol et une huile pharmaceutiquement acceptable tels que décrits précédemment dans des proportions massiques huile sur cinéol comprises entre environ 0,1 et environ 1, de préférence entre environ 0,2 et environ 0,8, de manière encore préférée entre 10 environ 0,4 et environ 0,6. De manière tout particulièrement préférée la proportion massique huile sur cinéol est d'environ 0,5. Par exemple, environ 50 mg d'huile est mélangée avec environ 100 mg de cinéol, ou encore environ 16,7 mg d'huile est mélangée avec environ 33,3 mg de cinéol. De préférence, le mélange de cinéol et d'huile pour obtenir une solution de mouillage 15 est réalisé dans une enceinte fermée, de préférence à une température ne dépassant pas environ 20°C pour éviter l'évaporation du cinéol, mais suffisante maintenir le mélange à l'état liquide. Dans un mode de réalisation particulier, la poudre comprenant de l'amoxicilline et destinée à être mouillée par la solution de mouillage, comprend également un inhibiteur de f3- lactamase, de préférence sélectionné dans le groupe constitué de l'acide clavulanique, du 20 sulbactam, du tazobactam, de l'aztréonam et des sels pharmaceutiquement acceptables de ceux- ci, de manière encore préférée l'inhibiteur de f3-lactamase est l'acide clavulanique. De préférence, la poudre comprenant de l'amoxicilline et destinée à être mouillée par la solution de mouillage, comprend également au moins un excipient ou support pharmaceutiquement acceptable, de préférence sélectionné dans le groupe consistant en un 25 édulcorant, un aromatisant, un antiagglomérant, un lubrifiant, un désintégrant, et un mélange de ceux-ci. De manière encore préférée, la poudre comprenant de l'amoxicilline comprend au moins un édulcorant, un aromatisant, un antiagglomérant, un lubrifiant et un désintégrant tels que définis ci-dessus. Dans un autre mode de réalisation particulier, la poudre comprenant de l'amoxicilline 30 et destinée à être mouillée par la solution de mouillage, comprend également de l'acide clavulanique, de la silice, de la silice colloïdale, de l'aspartame, de la croscarmellose, de la 3052066 28 cellulose microcristalline, du stéarate de magnésium et un aromatisant tels que définis ci-dessus. De préférence, le procédé selon l'invention comprend encore une étape de compactage de la poudre comprenant de l'amoxicilline avant qu'elle ne soit mouillée par la solution de 5 mouillage. Les granulés obtenus par compactage sont de préférence calibrés puis fractionnés avant mouillage par la solution de mouillage. Dans un autre mode de réalisation, le procédé de fabrication de la composition pharmaceutique selon l'invention comprend : 10 - l'obtention d'une solution de mouillage par mélange de cinéol et d'une huile pharmaceutiquement acceptable ; - le mouillage d'une poudre comprenant de l'amoxicilline par la solution de mouillage afin d'obtenir une préparation poudreuse comprenant l'amoxicilline, le cinéol et l'huile ; - le mélange de la préparation obtenue à l'étape précédente avec une poudre comprenant un 15 inhibiteur de f3-lactamase, de préférence sélectionné dans le groupe constitué de l'acide clavulanique, du sulbactam, du tazobactam, de l'aztréonam et des sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci, de manière encore préférée l'inhibiteur de f3-lactamase est l'acide clavulanique ; - le tamisage de la poudre ainsi obtenue. 20 Dans ce procédé, la poudre comprenant de l'amoxicilline et/ou la poudre comprenant l'inhibiteur de f3-lactamase, de préférence de l'acide clavulanique, peuvent en outre comprendre un désintégrant tel que décrit ci-dessus. De préférence deux désintégrants, en particulier de la cellulose microcristalline et de la croscarmellose. Dans un mode de réalisation préféré, la poudre comprenant de l'amoxicilline et la poudre comprenant un inhibiteur de f3-lactamase, de 25 préférence de l'acide clavulanique, comprennent deux désintégrants, de la cellulose microcristalline et de la croscarmellose. La poudre comprenant de l'amoxicilline et/ou la poudre comprenant un inhibiteur de 13- lactamase, de préférence de l'acide clavulanique, peuvent en outre comprendre un antiagglomérant tel que décrit ci-dessus. Dans un mode de réalisation préféré, la poudre 30 comprenant de l'amoxicilline et la poudre comprenant un inhibiteur de f3-lactamase, de préférence de l'acide clavulanique, comprennent toutes deux un antiagglomérant, de préférence de la silice. 3052066 29 Dans un mode de réalisation tout particulièrement préféré, la poudre comprenant de l'amoxicilline et la poudre comprenant un inhibiteur de f3-lactamase, de préférence de l'acide clavulanique, comprennent toutes deux de la cellulose microcristalline, de la croscarmellose et de la silice. 5 Ainsi, le procédé selon l'invention peut comprendre une étape de tamisage puis de mélange du ou des désintégrants et de l'antiagglomérant. Alternativement, le ou les désintégrants et l'antiagglomérant peuvent être mélangés avant que le mélange ne soit tamisé. En particulier, la cellulose microcristalline, la croscarmellose et la silice peuvent être mélangés dans des proportions d'environ 1000 mg à environ 1500 mg, de préférence environ 1241 mg, 10 de cellulose microcristalline pour d'environ 200 mg à environ 400 mg, de préférence environ 300 mg, de croscarmellose et d'environ 400 mg à environ 600 mg, de préférence environ 540 mg, de silice. Le procédé selon l'invention peut également comprendre une étape de mélange de ces excipients avec la poudre comprenant de l'amoxicilline et/ou avec la poudre comprenant de 15 l'acide clavulanique, de préférence une partie de ces excipients est mélangé avec la poudre comprenant de l'amoxicilline et l'autre partie de ces excipients avec la poudre comprenant de l'acide clavulanique. Dans un autre mode de réalisation préféré, la poudre comprenant un inhibiteur de 13- lactamase, de préférence de l'acide clavulanique, comprend encore de la silice colloïdale, de 20 préférence dans une proportion massique par rapport à l'acide clavulanique comprise entre environ 0,7 et environ 1,3, de préférence entre environ 0,9 et environ 1,1, de manière encore préférée d'environ 1. De préférence, le mélange d'acide clavulanique et de silice colloïdale est réalisée avant l'ajout de tout autre excipient ou mélange avec la poudre comprenant de l' amoxicilline. 25 De préférence, le procédé selon l'invention comprend encore une étape de compactage de la poudre comprenant de l'amoxicilline avant qu'elle ne soit mouillée par la solution de mouillage. Les granulés obtenus par compactage sont de préférence calibrés puis fractionnés avant mouillage par la solution de mouillage. De même, le procédé selon l'invention comprend de préférence une étape de 30 compactage de la poudre comprenant un inhibiteur de f3-lactamase, de préférence de l'acide clavulanique, avant qu'elle ne soit mélangée au mélange de la poudre d' amoxicilline mouillée 3052066 30 par la solution de mouillage. Les granulés obtenus par compactage sont de préférence calibrés puis fractionnés avant mouillage par la solution de mouillage. Au cours de l'étape de mouillage de la poudre comprenant de l' amoxicilline par la 5 solution de mouillage, la solution de mouillage peut être est utilisée à raison d'environ 100 à environ 200 mg, de préférence environ 150 mg, de solution de mouillage pour une poudre comprenant d'environ 400 à environ 600 mg, de préférence environ 500 mg, d' amoxicilline Au cours de l'étape de mélange de la préparation d' amoxicilline, cinéol et huile avec la 10 poudre comprenant un inhibiteur de f3-lactamase, de préférence de l'acide clavulanique, la préparation d' amoxicilline, cinéol et huile est mélangée avec une poudre comprenant d'environ 550 mg à environ 750 mg, de préférence environ 650 mg, d'inhibiteur de f3-lactamase. Optionnellement, le procédé de l'invention peut comprendre, après l'étape de mélange 15 de la préparation d' amoxicilline cinéol et huile avec la poudre comprenant l'acide clavulanique, une étape supplémentaire d'ajout d'un édulcorant, d'un aromatisant et/ou d'un lubrifiant tels que décrits ci-dessus. De préférence, un édulcorant, un aromatisant et un lubrifiant sont ajoutés. De préférence, l'édulcorant est l'aspartame et le lubrifiant est le stéarate de magnésium. Au cours de cette étape, ces excipients supplémentaires peuvent être ajoutés dans des 20 proportions d'environ 30 mg à environ 50 mg, de préférence environ 36 mg, d'édulcorant, de préférence de l'aspartame, d'environ 15 mg à environ 25 mg, de préférence environ 18 mg, de lubrifiant, de préférence du magnésium stéarate, et/ou d'environ 70 mg à environ 110 mg, de préférence 90 mg, d'aromatisant pour 3 grammes de formulation pharmaceutique. Après l'étape d'ajout d'un édulcorant, d'un aromatisant et/ou d'un lubrifiant, la 25 préparation obtenue est mélangée jusqu'à obtention d'une poudre homogène. Dans un mode de réalisation préférée, l'étape de tamisage finale est réalisée avec une grille de tamis ayant des ouvertures d'un diamètre d'au plus 5 mm, de préférence d'au plus 2,5 mm, de manière encore préféré d'au plus 1,25 mm. 30 Optionnellement, le procédé de l'invention peut comprendre une étape supplémentaire de conditionnement de la poudre tamisée obtenue par le procédé de l'invention dans un récipient unidose ou multi-dose, de préférence dans un récipient unidose. 3052066 31 Dans un mode de réalisation préféré, la poudre tamisée obtenue par le procédé de l'invention est conditionnée dans un récipient unidose contenant entre environ 1 g et environ 150 g de poudre, de manière encore préférée entre environ 1 g et environ 50 g de poudre, de manière toujours préférée entre environ 1 g et environ 10 g de poudre, et de manière plus 5 particulièrement préférée environ 3 g de poudre. Dans un autre mode de réalisation, la poudre tamisée obtenue par le procédé de l'invention est conditionnée dans un récipient multi-dose comprenant par exemple entre environ 10 grammes et environ 500 grammes de poudre, de préférence entre environ 20 grammes et environ 200 grammes de poudre, de manière encore préférée entre environ 30 grammes et 10 environ 100 grammes de poudre, et de manière tout particulièrement préférée environ 50 grammes de poudre. Optionnellement, le procédé de l'invention peut comprendre une étape supplémentaire de conditionnement secondaire du conditionnement primaire de la poudre tamisée obtenue par 15 le procédé de l'invention. Dans un mode de réalisation préféré, lesdits récipients unidoses contenant la poudre tamisée sont secondairement conditionnés dans une boîte. En particulier, Une boîte peut contenir, par exemple, entre 3 et 31 récipients unidoses, de préférence entre 5 et 21 récipients unidoses, de manière encore préféré entre 7 et 14 récipients unidoses. 20 Dans un autre mode de réalisation, ledit récipient multi-dose contenant la poudre tamisée est secondairement conditionné dans une boîte, éventuellement accompagné d'un doseur, par exemple une cuillère, permettant de prélever une quantité déterminée de poudre, de préférence d'environ 1 mg à environ 30 mg de poudre, de manière encore préférée d'environ 2 mg à environ 20 mg de poudre, et de manière tout particulièrement préférée d'environ 3 à 25 environ 12 mg de poudre. En particulier, le doseur peut permettre de prélever environ 3 g, environ 6 g, environ 9 g, environ 12 g, environ 15 g et/ou environ 18 g de poudre. Complexe moléculaire L'amoxicilline est un antibiotique sensible aux f3-lactamases. Les f3-lactamases, 30 produites par les bactéries résistantes à l'amoxicilline, reconnaissent et inactivent le noyau 13- lactame de l'amoxicilline. Lorsqu'elle est mise en solution, de préférence dans un solvent 3052066 32 aqueux, l'amoxicilline peut former transitoirement des complexes de deux molécules d'amoxicilline. La formation de ces complexes est trop transitoire pour avoir un quelconque effet protecteur contre les f3-lactamases. Par contre, lorsque la formulation pharmaceutique de l'invention est mise en solution, des complexes d'amoxicillines stables comprenant au moins 5 trois molécules d'amoxicilline se forment et protègent l'antibiotique de l'action des 13- lactamases. La formation de ces complexes peut également être obtenue par la mise en solution de l'amoxicilline en présence de cinéol. Ainsi, dans un quatrième aspect, l'invention concerne encore un complexe moléculaire comprenant plus de deux molécules d'amoxicilline organisées de façon linéaire ou en anneau 10 et interagissant les unes avec les autres par des liaisons non-covalentes. De préférence, le complexe moléculaire de l'invention est formé uniquement de molécules d' amoxicilline. Le complexe moléculaire de l'invention est formé d'au moins trois molécules d' amoxicilline, de préférence de trois à six molécules d' amoxicilline, de manière encore 15 préférée de trois ou quatre molécules d' amoxicilline et de manière tout particulièrement préférée de quatre molécules d' amoxicilline. Les molécules d'amoxicilline du complexe moléculaire de l'invention peuvent être organisées de façon linéaire ou en anneau. De préférence, elles sont organisées en anneau de sorte que chaque molécule d'amoxicilline interagit avec deux autres molécules d'amoxicilline. 20 Dans un mode de réalisation particulier, les molécules d' amoxicilline peuvent librement passer d'une organisation en complexe linéaire à une organisation en complexe en anneau par rupture ou formation de liaisons non-covalentes. Le complexe moléculaire de l'invention peut être obtenu par la mise en solution d'amoxicilline en présence de cinéol dans un solvant aqueux. De préférence, le complexe 25 moléculaire de l'invention est obtenu par la mise en solution d'amoxicilline en présence de cinéol dans un solvant aqueux en l'absence de détergent. Dans un mode de réalisation particulier, le complexe moléculaire de l'invention est obtenu par la mise en solution de la formulation pharmaceutique de l'invention dans un solvant aqueux. 3052066 33 De préférence, les molécules d'amoxicilline du complexe moléculaire de l'invention ne sont pas reconnues par les f3-lactamases. Ainsi, le complexe moléculaire de l'invention peut être utilisé dans le traitement des bactéries considérées comme résistantes à l'amoxicilline. Dans un mode de réalisation particulier, le complexe moléculaire de l'invention peut 5 être obtenu en milieu aqueux lorsque le ratio massique de l'amoxicilline sur le cinéol est compris entre environ 0,01 et environ 1000, de préférence entre environ 0,1 et environ 100, de manière encore préférée entre environ 1 et environ 10, et de manière tout particulièrement préférée lorsque le ratio massique de l'amoxicilline sur le cinéol est d'environ 5. 10 Toutes les références citées dans cette demande, y compris les articles de journaux ou les résumés, les demandes de brevets publiées, les brevets délivrés ou tout autre référence, sont entièrement incorporées ici par référence, ce qui inclus tous les résultats, tables, figures et textes présentés dans ces références. Bien qu'ayant des sens différents, les termes « comprenant », « ayant », « contenant » 15 et « consistant en » peuvent être remplacés l'un par l'autre dans toute la description de l'invention. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples suivants donnés à titre illustratif et non limitatif. zo Exemples Exemple 1 - Etude in vitro de l'activité antibactérienne de la combinaison d'amoxicilline et de cinéol Matériel et méthodes 25 Matériel biologique, milieu de culture et agents antimicrobiens Les six souches testées lors de cette étude sont des isolats cliniques purifiés et identifiés au laboratoire de bactériologie du centre hospitalier universitaire Hassan II (CHU, Fès, Maroc).Trois des six souches bactériennes testées sont des souches d'Escherichia coli BLSE (P956, P933 et P7847) et les trois autres souches bactériennes testées sont des souches de 30 Klebsiella pneumonioe BLSE (H1878, H2001 et H1893). Pour chaque test effectué, des précultures des souches bactériennes (auparavant congelées à -20°C) de 24h à 37°C ont été préparées. A partir de ces précultures, des inoculums 3052066 34 bactériens à 2x107 UFC (Unité formant une colonie)/m1 ont été préparés en ajustant la densité optique à 540 nm. Des milieux de culture Mueller Hinton (MH) gélosés et liquides ont été fournis par BIOKAR (France). Le premier a été utilisé pour la croissance des souches et le deuxième, 5 additionné de 20% (v/v) de glycérol, a été utilisé pour la conservation des souches. La préparation des deux milieux a été effectuée, selon les instructions du fournisseur. L'amoxicilline (AMX) et le cinéol ont été fournis par Sigma Aldrich (France). Une solution mère d'AMX (400 µg/m1) a été réalisée après mise en solution de 40 mg d'antibiotique dans 100 ml d'eau distillée stérile. À partir de cette solution mère, des séries de dilutions ont 10 été effectuées. Les concentrations de cinéol utilisées ont été préparées par émulsion de cinéol pur dans 0,2 % (v/v) d'agar agar selon la méthode décrite par Remmal A et al (J. Essent. Oil. Res [Book], 1993, 5 : pp. 1179-1184). Evaluation des pourcentages d'inhibition de l'association de l'AMX avec le cinéol 15 Les concentrations inhibitrices partielles (CIP) sont les concentrations d'agents antibactériens inhibant la croissance d'un pourcentage donné (90%, 75%, 50%, 40%...) de la population bactérienne étudiée. Les CIP de l'AMX et du cinéol vis-à-vis des six souches bactériennes utilisées ont été déterminées par une technique de microdilution en microplaque se basant sur la surveillance de la croissance bactérienne par mesure de la densité optique 20 (Casey JT et al, J Microbiol Meth [Book], 2004, 58 : pp. 327- 334 ; Patton T et al, J Microbiol Meth [Book], 2006, 64 : pp. 84- 95). Des microplaques stériles à fond en U de 96 cupules et d'une capacité de 200 pl ont été utilisées. Pour chaque microplaque, deux rangées témoins ont été réalisées: > Une rangée contenant 200 pl du milieu liquide MH (Témoin de stérilité et témoin 25 négatif). > Une rangée contenant 150 pl du milieu liquide MH et 50 pl de l'inoculum bactérien à 2x107 UFC/m1 (Témoin positif). Pour l'AMX et le cinéol, deux rangées ont été réalisées contenant 100 pl de milieu liquide MH, 50 pl de l'inoculum bactérien à 2x107 UFC/ml et 50 pl de concentrations décroissantes 30 d'agents antimicrobiens. Les concentrations d'AMX utilisées sont de : 50-25-12,5-6,25-3,1- 1,6-0,8-0,4-0,20-0,10-0,05-0,025 µg/ml. Les concentrations de cinéol utilisées sont de : 10050-25-12,5-6,25-3,1-1,6-0,8-0,4-0,20-0,10-0,05 1..11/ml. Les densités optiques (DO) ont été déterminées à 540 nm à l'aide d'un spectrophotomètre pour microplaques (Versamax, 3052066 Molecular devices, USA). La DO a été mesurée au temps t=0 et après 22 heures d'incubation à 30°C. Le pourcentage d'inhibition des agents antimicrobiens vis-à-vis de chacune des six souches a été calculé d'après Casey JT et al (J Microbiol Meth [Book], 2004, 58 : pp. 327- 334) selon la formule suivante: DO r22-DOTo % d'inhibition = 1 - X 100 D0c22-DOco 5 Avec DOTO=DO de la cupule test au temps t=0, DOT22= DO de la cupule test après 22h d'incubation, DOco= DO de la cupule du témoin positif au temps t=0, D0c22= DO de la cupule du témoin positif après 22h d'incubation. Après avoir déterminé les CIP de l'AMX et du cinéol seuls, le pouvoir antibactérien de l'association d'AMX et de cinéol a été évalué. La même technique de microdilution en 10 microplaque a été utilisée. Les associations AMX-cinéol ont été préparées dans des tubes stériles comme suit : > AMX CIP 50% + cinéol CIP 40% > AMX CIP 50% + cinéol CIP 30% > AMX CIP 50% + cinéol CIP 20% 15 > AMX CIP 25% + cinéol CIP 40% > AMX CIP 25% + cinéol CIP 30% > AMX CIP 25% + cinéol CIP 20% L'indice de fraction des concentrations inhibitrices (FIC-index) exprimant le degré de synergie de l'association AMX-cinéol a été calculé selon la formule suivante (Odds FC et al, J 20 Antimicrob Chemoth [Book], 2003, 52 : p. 1). CIP AMX+Cinéol CIP AlVIX+Cinéol FIC-index = + CIP AMX seule CIP Cinéol seul L'association AMX-cinéol est considérée : > Synergique quand le FIC-index est Additive quand 0.5 Indifférente quand 1 Antagoniste quand FIC-index > 2. 3052066 36 Résultats Détermination des CIP de l'amoxicilline et du cinéol L'activité antibactérienne de l'AMX vis-à-vis des trois souches d'E. coli et des trois 5 souches de K. pneumoniae est comparable (cf. tableau 1). Les concentrations minimales inhibitrices (CMI, concentration minimale permettant d'obtenir une inhibition de 100 %) sont de l'ordre de 501..tg/m1(p>0,05). Le cinéol a également une activité antibactérienne comparable vis-à-vis des trois souches d'E. coli et des trois souches de K. pneumoniae (cf. tableau 2). Les CMI sont de l'ordre de 1000/m1 (p>0,05). Souches CIP 50% (pg/m1) CIP 25% (pg/m1) Escherichia con P956 1,1±0,25 0,7±0,14 P933 1,3±0,24 0,5±0,10 P7847 1,5±0,13 0,8±0,17 Klebsiella pneumoniae H1878 1,6±0,17 0,9±0,09 H2001 1,3±0,12 0,6±0,14 H1893 1,7±0,09 0,8±0,12 10 Tableau 1: Concentrations inhibitrices partielles de l'Amoxicilline Souches CIP 40% (pl/m1) CIP 30% (pl/m1) CIP 20% (pl/m1) Escherichia con P956 6,2±0,20 2,6±0,12 1,2±0,16 P933 6,8±0,14 2,3±0,09 1,3±0,24 P7847 6,5±0,10 2,7±0,12 1,2±0,11 Klebsiella pneumoniae H1878 7,1±0,12 2,9±0,12 0,4±0,12 H2001 6,9±0,12 3,1±0,10 0,7±0,09 H1893 6,8±0,09 2,7±0,09 0,6±0,12 Tableau 2: Concentrations inhibitrices partielles du cinéol 15 Evaluation des pourcentages d'inhibition de l'association d'amoxicilline et de cinéol L'association d'AMX et de cinéol donne des pourcentages d'inhibition supérieurs à l'addition des deux (cf. tableaux 3 et 4). En effet, la CIP 50% de l'AMX (1,1-1,7 µg/m1) associée à la CIP 40% du cinéol (6,2-7,10/m1) donnent 100% d'inhibition de croissance pour toutes les souches testées. 20 3052066 37 Souches AMX + Cinéol AMX + Cinéol AMX + Cinéol CIP 50 % + CIP 50 % + CIP 50 % + CIP 40 % CIP 30 % CIP 20 % Escherichia con P956 100,0±0,0 92,5±0,56 80,4±0,69 P933 100,0±0,0 95,2±0,75 81,5±0,59 P7847 100,0±0,0 90,8±1,29 79,4±0,47 Klebsiella pneumoniae H1878 100,0±0,0 90,2±0,68 82,8±0,94 H2001 100,0±00 93,7±0,80 81,2±0,46 H1893 100,0±0,0 90,5±0,25 85,2±0,41 Tableau 3: Pourcentages d'inhibition des associations de l'AMX (CIP 50%) avec le cinéol (CIP 40%, CIP 30% et CIP 20%) Souches AMX + Cinéol AMX + Cinéol AMX + Cinéol CIP 25 % + CIP 25 % + CIP 25 % + CIP 40 % CIP 30 % CIP 20 % Escherichia con P956 72,0±0,38 62,1±0,22 55,3±0,75 P933 73,1±0,45 59,4±0,32 51,2±0,48 P7847 70,1±0,46 63,3±0,36 53,4±0,60 Klebsiella pneumoniae H1878 74,4±0,28 61,2±0,26 56,3±0,38 H2001 72,4±0,25 60,2±0,77 53,9±0,67 H1893 71,1±0,29 64,4±0,34 52,6±0,35 Tableau 4 : Pourcentages d'inhibition des associations de l'AMX (CI 25%) avec le cinéol 5 (CIP 40%, CIP 30% et CIP 20%) Cette puissante synergie a été confirmée par le calcul des indices de fraction (FIC-index, cf. tableau 5) pour les CMI de l'amoxicilline et du cinéol. Pour les 6 souches bactériennes 10 testées, ils varient entre 0,08 et 0,10. Ces résultats, inférieurs à 0,5, témoignent d'une forte synergie d'action entre l'AMX et le cinéol. Souches CMI 100% FIC-Index Résultat Seuls Combinés E. con P956 50-100 1,1-6,2 0,08 Synergie E. con P933 50-100 1,3-6,8 0,09 Synergie E. con P7847 50-100 1,5-6,5 0,10 Synergie K. pneumoniae H1878 50-100 1,6-7,1 0,10 Synergie 3052066 38 K. pneumoniae H2001 50-100 1,3-6,9 0,10 Synergie K. pneumoniae H1893 50-100 1,7-6,8 0,10 Synergie Tableau 5 : FIC-index de l'association amoxicilline et cinéol Discussion Les résultats obtenus montrent clairement que les souches testées, très résistantes à 5 l'AMX, deviennent sensibles à des concentrations minimes d'AMX lorsque l'AMX est associée à du cinéol. Ainsi, une inhibition de 100% de croissance de toutes les souches bactériennes testées a été obtenue avec l'association AMX-cinéol (CI 50% + CI 40%). Cette association permet d'obtenir un pouvoir antibactérien similaire à celui de l'AMX seule ou au cinéol seul avec des concentrations largement inférieures à la CMI de l'AMX ou du cinéol. En 10 effet, en comparant les concentrations utilisées pour une inhibition de 100 %, on remarque que la concentration d'AMX utilisée en association avec le cinéol est 25 fois inférieure à celle de l'AMX seule et celle du cinéol utilisée en association avec l'AMX est 15 fois inférieure à celle du cinéol seul. L'activité bactéricide de cette association d'AMX et de cinéol résulte d'une forte 15 synergie d'action, ainsi que démontrée par le calcul de l'indice de fraction (indice inférieur ou égal à 0,1). L'ensemble de ces essais démontre l'efficacité de l'association d'AMX et de cinéol contre des bactéries résistantes BLSE et son intérêt dans la lutte pour endiguer les résistances bactériennes. 20 Exemple 2 - Etude in vitro de l'effet du cinéol sur l'inhibition de l'amoxicilline par les 13- lactamases Cette étude repose sur un test enzymatique mettant tout d'abord en contact de l'AMX associée à du cinéol avec des 13-lactamases. L'activité antibactérienne de cet antibiotique a 25 ensuite été vérifiée sur une souche d'Escherichia coli sensible à l'AMX. Matériel et Méthodes Matériel biologique, milieu de culture et agents antimicrobiens Une souche bactérienne d'Escherichia .coli (ATCC 8739) sensible à l'amoxicilline a 30 été fournie par l'institut national d'hygiène (INH-Rabat). 3052066 39 Pour chaque test effectué, des précultures de cette souche d'E. cou de 24h à 37°C ont été préparées à partir de cette souche bactérienne (auparavant congelée à -20°C). A partir de ces précultures, des inoculums bactériens de 3,3x106 UFC/ml ont été préparés en ajustant la densité optique à 540 nm. 5 Les milieux de culture Mueller Hinton gélosé et liquide ont été fournis par BIOKAR (France). La composition de ce milieu a été décrite précédemment. La préparation des deux milieux a été effectuée, selon les instructions du fournisseur. Des Disques chargés d'antibiotiques (Diamètre 0 = 6 mm) ont été utilisés pour le test enzymatique en milieu gélosé (AMX : Amoxicilline et AMC : Amoxicilline + acide 10 clavulanique). Ils ont été fournis par l'institut national d'hygiène (INH-Rabat). L'AMX utilisée pour le test enzymatique en milieu liquide a été fournie par Sigma Aldrich (France). Le cinéol a été fourni par Sigma Aldrich (France). Sa préparation a été réalisée par émulsion dans 0,2% (v/v) d'agar agar selon la méthode décrite par Remmal et al (J. Essent. Oil. Res [Book], 1993, 5 : pp. 1179-1184). 15 La poudre de 13-lactamase a été fournie par Sigma Aldrich (France). Elle a été solubilisée, selon les instructions du fournisseur, à 10 mg/ml dans 0,1 M de Tris HC1 à pH 7, contenant 0,1 % de gélatine. La 13-lactamase (0,03 U/ml) ainsi préparée a été conservée entre 2 et 8° C. Protocol expérimental en milieu gélosé 20 En milieu gélosé, la concentration infra-inhibitrice du cinéol (concentration la plus élevée pour laquelle le cinéol n'induit pas d'inhibition) a été déterminée par la méthode de microdilution décrite précédemment. Elle est de l'ordre de 0,0020/m1. A partir d'une préculture d'E. cou sensible de 24h, dix-huit boites de Pétri du milieu MH gélosé ont été inoculées par étalement en surface. Six boites témoins et deux boites tests 25 ont été préparées comme suit : Les boites n°1 et 2 correspondent aux témoins de sensibilité de la souche aux antibiotiques : - Témoin 1 : Trois disques chargés de l'AMX seule à 20 µg/ml ont été déposés aseptiquement à la surface de la boite n°1. 30 - Témoin 2 : Trois disques chargés de l'AMC seule à 30 µg/ml ont été déposés aseptiquement à la surface de la boite n°2. 3052066 Les boites n°3 et 4 correspondent aux témoins de l'activité de la f3-lactamase sur les antibiotiques : - Témoin 3 : Trois disques chargés de l'AMX à 20 µg/ml ont été déposés aseptiquement à la surface de la boite n°3. A la surface de chacun de ces trois disques, 5 100 de la f3-lactamase à 0,03 U/ml ont été ajoutés. - Témoin 4 : Trois disques chargés de l'AMC à 30 µg/ml ont été déposés aseptiquement à la surface de la boite n°4. A la surface de chacun de ces trois disques, 100 de la f3-lactamase à 0,03 U/ml ont été ajoutés. Les boites n°5 et 6 correspondent aux témoins de l'activité antibactérienne des 10 antibiotiques associés au cinéol (concentration infra-inhibitrice) : - Témoin 5 : Trois disques chargés de l'AMX à 20 µg/ml ont été déposés aseptiquement à la surface de la boite n°5. A la surface de chacun de ces trois disques, 10 pl du cinéol à 0,0020/m1 ont été ajoutés. - Témoin 6 : Trois disques chargés de l'AMC à 30 µg/ml ont été déposés 15 aseptiquement à la surface de la boite n°6. A la surface de chacun de ces trois disques, 10 pl du cinéol à 0,0020/m1 ont été ajoutés. Les boites n°7 et 8 correspondent aux tests de l'effet du cinéol sur l'inhibition de l'amoxicilline par les f3-lactamases : - Test 1 : Trois disques chargés de l'AMX à 201..tg/m1 ont été déposés aseptiquement 20 à la surface de la boite n°7. A la surface de chacun de ces trois disques, 100 de la 13- lactamase à 0,03 U/ml et 10 pl de cinéol à 0,002 µl/ml ont été ajoutés. - Test 2 : Trois disques chargés de l'AMC à 301..tg/m1 ont été déposés aseptiquement à la surface de la boite n°8. A la surface de chacun de ces trois disques, 100 de la 13lactamase à 0,03 U/ml et 10 pl de cinéol à 0,002 µl/ml ont été ajoutés. 25 Après incubation des 8 boites de Pétri pendant 18h à 37°C, les diamètres des halos d'inhibition ont été mesurés. Protocol expérimental en milieu liquide La CMI de l'AMX à 100% vis-à-vis de la souche d'Escherichia coli sensible, 30 déterminée par la méthode de microdilution décrite précédemment, est de l'ordre de 6 µg/ml. A partir d'une préculture de 24h de la souche d'E cou sensible, des inoculums bactériens à 3,3x106 UFC/m1 ont été préparés en ajustant la densité optique à 540 nm. 3052066 41 Cinq tubes témoins et un tube test ont été préparés comme décrit dans le tableau 6 (cf. ci-dessous). Le tube n°1 correspond au témoin de stérilité du milieu. Le tube n°2 correspond au témoin positif de viabilité de la souche bactérienne. Le tube n°3 correspond au témoin de 5 sensibilité de la souche à l'AMX. Le tube n°4 correspond au témoin de la non inhibition de la croissance bactérienne par une concentration infra-inhibitrice de cinéol. Le tube n°5 correspond au témoin de dégradation de l'AMX en présence de la 13-lactamase. Le tube n°6 correspond au test de l'effet du cinéol sur l'inhibition de l'amoxicilline par les f3-lactamases. Tubes Milieu Liquide MH Inoculum bactérien AMX Cinéol 13 (3.3 106 UFC/ml) (6 (0,002 lactamase µg/ml) enii) (0.03 U/ml) Tube n° 1: 1000 pl - - - Tube n° 2: 970 pl 30 pl - - - Tube n° 3: 940 pl 30 pl 30 pl - - Tube n° 4: 940 pl 30 pl - 30 pl - Tube n° 5: 930 pl 30 pl 30 pl - 10 pl Tube n°6: 900 pl 30 pl 30 pl 30 pl 10 pl 10 Tableau 6: Contenu des tubes témoins et tests pour l'étude en milieu liquide La DO a été mesurée au temps t=0, et après 22 heures d'incubation à 30°C. Le pourcentage d'inhibition a ensuite été calculé selon la formule décrite précédemment : DO r22-DOTo % d'inhibition = 1 - X 100 D0c22-DOco Avec DOTO=DO du tube test au temps t=0, DO 1-22= DO du tube test après 22h 15 d'incubation, DOco= DO du tube du témoin positif au temps t=0, D0c22= DO du tube du témoin positif après 22h d'incubation. Résultats En milieu gélosé (cf. tableau 7 ci-dessous) 3052066 42 Traitement Diamètres des Traitement Diamètres des halos (mm) * halos (mm) * Témoin 1 : AMX seule 15 ± 1.0 Témoin 2 : AMC seule 16 ± 0.4 Témoin 3 : AMX + 13-lactamase 6 ± 0.0 Témoin 4 : AMC + 13-lactamase 13 ± 0.5 Témoin 5 : AMX + Cinéol 17 ± 0.3 Témoin 6 : AMC + Cinéol 18 ± 0.9 Test 1 : AMX+ 13-lactamase+ 12 ± 1.0 Test 2 : AMC + 13-lactamase + 15 ± 0.9 Cinéol Cinéol Tableau 7: Diamètres des halos d'inhibition d'Escherichia. Coli sensible (en mm). * Moyenne de trois valeurs de halos d'inhibitions 5 La mesure des diamètres des halos d'inhibition montrent que : - La souche d'E. cou utilisée est bien sensible à l'AMX (20 1..1g) et à la combinaison d'AMX et d'acide clavulanique (AMC 301..1g) avec des diamètres de halos de 15 et 16 mm, respectivement. - L'ajout de cinéol à une concentration infra-inhibitrice (0,002 1..11/m1) augmente 10 légèrement la taille des halos d'inhibition, à 17 mm pour l'AMX (20 1..1g) et à 18 mm pour l'AMC (301..1g). - L'ajout de 13-lactamases (0,03 U/ml), supprime le halo d'inhibition de l'AMX (20 1..1g) (6 mm étant le diamètre du disque) et réduit celui de l'AMC (301..1g) à environ 13 mm. - L'ajout de 13-lactamases (0,03 U/ml) et de cinéol (0,002 1..11/m1), réduit 15 considérablement l'inhibition induite par les 13-lactamases avec des diamètres de halo de l'ordre de 12 mm pour l'AMX (201..1g) et de 15 mm pour l'AMC (301..1g). En milieu liquide (cf. tableau 8 ci-dessous) Traitement % d'inhibition Témoin 4 : Cinéol seul 0 % ± 0,0 Témoin 3 : AMX seule 100 % ± 0,0 3052066 43 Tableau 8 : Pourcentages d'inhibition de la croissance de la souche d'Escherichia. Coli sensible. Le tableau 8 montre que : - La concentration de cinéol utilisée (0,0020/m1) est bien infra-inhibitrice, il n'y a pas 5 eu d'inhibition de croissance (Témoin 4). - En présence de 13-lactamases (0,03 U/ml), le pourcentage d'inhibition de la croissance de la souche sensible par l'AMX (6 µg/ml) est nul (Témoin 5). - En présence de la 13-lactamase (0,03 U/ml) et de cinéol (0,002 0/m1), le pourcentage d'inhibition de la croissance de la souche sensible par l'AMX (6 µg/ml) est de l'ordre de 10 83,4% (Test 1). Discussion L'étude réalisée en milieu gélosé a permis de montrer que : - En présence de cinéol, à une concentration infra-inhibitrice, l'activité antibactérienne 15 de l'AMX et de l'AMC a été améliorée (diamètres des halos d'inhibition supérieurs à ceux obtenus avec les antibiotiques seuls). Ainsi l'activité de l'AMX et de l'AMC sont augmentées en présence de cinéol (à des concentrations infra-inhibitrices). - En présence de 13-lactamases, l'inhibition induite par l'AMX (20 1..1g) a été nulle et celle induite par l'AMC (301..1g) a été largement réduite. Cela est dû à l'hydrolyse du 20 cycle 13-lactame de l'amoxicilline. La 13-lactamase n'est que partiellement inhibée par l'acide clavulanique. - En présence de 13-lactamases et de cinéol, l'activité antibactérienne de l'AMX et de l'AMC a été augmentée (diamètres des halos d'inhibition obtenus comparables à ceux obtenus avec les antibiotiques seuls). Dans la mesure où le cinéol a été utilisé à 25 une concentration infra-inhibitrice, l'augmentation d'activité antibactérienne pourrait s'expliquer par une moindre efficacité des f3-lactamases sur l'amoxicilline en présence de cinéol. L'étude réalisée en milieu liquide a permis de montrer que : Témoin 5 : AMX + 13-lactamase 0 % ± 0,0 Test 1 : AMX + 13-lactamase+ Cinéol 83,4 % ± 1,1 3052066 44 - En présence de la 13-lactamase, l'AMX perd totalement son activité antibactérienne, ce qui prouve la dégradation complète de cet antibiotique par hydrolyse du cycle 13-lactame. - En présence de 13-lactamases et de cinéol, le pourcentage d'inhibition 5 de l'AMX est de l'ordre de 83,4 %. Ces résultats montrent qu'en présence de cinéol à une concentration infra-inhibitrice, l'AMX acquiert une protection contre la f3-lactamase qui n'arrive plus à maintenir son activité. L'activité antibactérienne de l'AMX est ainsi préservée. 10 L'ensemble de ces résultats montre que l'amoxicilline associée au cinéol n'est que faiblement sensible aux 13-lactamases. Sans être liée par cette théorie, cela pourrait être dû à une complexation des molécules d'amoxicilline en présence de cinéol qui empêcherait les f3-lactamases d'attaquer le cycle f3-lactame de l'AMX. 15 Exemple 3 - Etude de l'activité antibactérienne de sérum de lapin traité par une combinaison d'amoxicilline, d'acide clavulanique et de cinéol Matériel et Méthodes Matériel biologique, milieu de culture et agents antimicrobiens Une souche bactérienne d' Escherichia coli BLSE multirésistante a été fournie par 20 l'institut national d'hygiène (INH-Rabat). Des précultures de 24h à 37°C ont été préparées à partir de la souche bactérienne (auparavant congelée à -20°C). A partir de ces précultures, des inoculums bactériens de 2x107 UFC/ml ont été préparés en ajustant la densité optique à 540 nm. Les milieux Mueller Hinton (MH) gélosés et liquides ont été fournis par BIOKAR 25 (France). La composition de ces milieux a été décrite précédemment. La préparation des deux milieux a été effectuée, selon les instructions du fournisseur. Les six lapins utilisés dans cette étude sont des lapins femelles de race néo-zélandaise, fournis par un éleveur de spécialité. Ils sont âgés de 70 à 75 jours et pèsent environ 2kg. Ils ont été répartis au hasard en 2 lots de 3 lapins et ont été nourris ad libitum avec un aliment industriel 30 de type engraissement. 3052066 Protocol expérimental Les lapins du 1" lot ont reçu une seule dose d'AMC comprenant 1,5 g d' amoxicilline et 186,5 mg d'acide clavulanique. Les lapins du 2ème lot ont reçu une seule dose d'AMC combiné à du cinéol comprenant 1,5 g d' amoxicilline, 186,5 mg d'acide clavulanique et 300 mg de 5 cinéol. Les solutions des deux traitements, reconstituées avec de l'eau purifiée, ont été administrées aux lapins par gavage stomacal. Après administration du traitement, les lapins ont été immobilisés par contention à l'aide d'un dispositif approprié. Leurs oreilles ont été exposées à une lampe à infrarouge afin de dilater 10 les veines auriculaires marginales et centrales. Des prélèvements sanguins de 0,5 ml ont été ensuite effectués au niveau de la veine auriculaire centrale au temps T=0 (To) (avant l'administration), au temps Ti (après une heure), au temps T2 (après deux heures), au temps T3 (après trois heures) et au temps T6 (après six heures). La méthode de microdilution, décrite précédemment, a été utilisée pour déterminer le 15 pourcentage d'inhibition des échantillons de sérum. Des microplaques stériles à fond en U de 96 cupules et d'une capacité de 2000 ont été utilisées. Le témoin négatif consiste en 200 pl de milieu liquide MH et le témoin positif en 150 pl de milieu liquide MH et 50 pl d'inoculum bactérien à 2x107 UFC/ml. Pour chaque échantillon de sérum prélevé à un temps donné, deux cupules ont été réalisées contenant 20 chacune 100 pl du milieu liquide MH, 50 pl de l'inoculum bactérien à 2x107 UFC/ml et 50 pl de sérum. Pour chaque échantillon, une lecture de DO est réalisée à t=0 et après incubation des microplaques pendant 22 heures à 30°C. Le pourcentage d'inhibition des différents échantillons de sérum a été calculé selon la formule décrite précédemment : DO r22-DOTo % d'inhibition = 1 - X 100 D0c22-DOco 25 Avec DOTO=DO de la cupule test au temps TO, DOT22= DO de la cupule test après 22h d'incubation, DOco= DO de la cupule du témoin positif au temps t=0, D0c22= DO de la cupule du témoin positif après 22h d'incubation. 3052066 46 Résultats La figure 1 présente le suivi des pourcentages d'inhibition de la croissance bactérienne par les échantillons de sérums de lapins du lot traité par l'AMC seul (combinaison amoxicilline/acide clavulanique) et du lot traité par l'AMC boosté par le cinéol au cours du 5 temps. Avant administration du traitement (temps To), l'activité antibactérienne des échantillons de sérums de lapin des deux est quasi nulle. Une heure après administration du traitement (Ti), l'inhibition induite par le sérum des lapins traités par l'AMC seule est de l'ordre de 40 % ± 1,2 alors que celle induite par le sérum de lapins traités par l'AMC et le cinéol est 10 de l'ordre de 47 % ± 2,1. Après deux heures de traitement, les pourcentages d'inhibition sont de 50 % ± 2,5 pour les sérums de lapins traités par l'AMC seule et de 54 % ± 2,9 pour ceux traités par l'AMC boostée par le cinéol. Après trois heures de traitement, les pourcentages d'inhibition diminuent à 41 % ± 3,2 pour les lapins traités avec l'AMC seule et à 48 % ± 1,6 pour les lapins traités avec l'AMC boostée par le cinéol. Enfin après six heures de traitement, 15 les pourcentages d'inhibition chutent à 16 % ± 1,3 pour les sérums de lapins traités avec l'AMC seul alors qu'ils sont encore de l'ordre de 44 % ± 1,5 pour les lapins traités avec l'AMC boostée au cinéol. Ainsi, les pourcentages d'inhibition obtenus avec les échantillons de sérum des lapins du lot traité par la combinaison d' amoxicilline, d'acide clavulanique et de cinéol sont 20 significativement supérieurs à ceux obtenus avec les échantillons de sérums des lapins du lot de référence traité par la combinaison d' amoxicilline et d'acide clavulanique (p REVENDICATIONS1. Formulation pharmaceutique sous forme de poudre comprenant, ou consistant essentiellement en, du cinéol, de l'amoxicilline, et une huile pharmaceutiquement acceptable. 2. Formulation selon la revendication 1, dans laquelle ladite formulation comprend en outre de l'acide clavulanique. 3. Formulation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ladite huile pharmaceutiquement acceptable est une huile végétale, minérale, synthétique ou animale, de préférence une huile végétale, et de manière encore préférée de l'huile d'arachide. 4. Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite formulation comprend entre environ 5 mg et environ 100 mg de cinéol par gramme de poudre, de préférence entre environ 10 mg et environ 50 mg de cinéol par gramme de poudre ; et/ou entre environ 20 mg et environ 500 mg d'amoxicilline par gramme de poudre, de préférence entre environ 50 mg et environ 300 mg d'amoxicilline par gramme de poudre ; et/ou entre environ 2 mg et environ 50 mg d'huile par gramme de poudre, de préférence entre environ 10 mg et environ 25 mg d'huile par gramme de poudre ; et/ou optionnellement entre environ 1 mg et environ 100 mg d'acide clavulanique par gramme de poudre, de préférence entre environ 5 mg et environ 50 mg d'acide clavulanique par gramme de poudre. 5. Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite formulation comprend entre environ 20 mg et environ 40 mg, de préférence environ 33 mg, de cinéol par gramme de poudre, entre environ 150 mg et environ 200 mg, de préférence environ 167 mg, d'amoxicilline par gramme de poudre, entre environ 15 mg et environ 20 mg, de préférence environ 17 mg, d'huile par gramme de poudre, et optionnellement entre environ 15 mg et environ 25 mg, de préférence environ 21 mg, d'acide clavulanique par gramme de poudre. 3052066 6. Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite formulation est destinée à une administration par voie orale, de préférence après suspension dans un solvant aqueux. 5 7. Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite formulation est conditionnée dans un récipient unidose, de préférence un récipient unidose contenant entre environ 1 g et environ 150 g de poudre, de manière encore préférée entre environ 1 g et environ 50 g de poudre, de manière toujours préférée entre environ 1 g et environ 10 g de poudre, et de manière plus particulièrement préférée environ 3 g de poudre. 10 8. Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite formulation comprend en outre au moins un excipient ou support pharmaceutiquement acceptable, de préférence sélectionné dans le groupe consistant en un édulcorant, un aromatisant, un antiagglomérant, un lubrifiant, un désintégrant, et un mélange de ceux-ci. 15 9. Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes pour une utilisation dans le traitement d'une pathologie infectieuse chez un sujet, de préférence un animal ou un humain. 20 10. Formulation pour une utilisation selon la revendication 9, dans laquelle ladite pathologie est une pathologie infectieuse d'origine bactérienne, de manière encore préférée une pathologie infectieuse causée par une bactérie résistante aux antibiotiques de la famille des 13- lactamines. 25 11. Formulation pour une utilisation selon la revendication 9 ou 10, dans laquelle la formulation est destinée à être administrée au sujet durant une période allant de 1 jour à 4 semaines et à raison de 3 à 30 grammes par jour, en une seule ou plusieurs prises. 12. Procédé de fabrication de la formulation pharmaceutique selon l'une quelconque des 30 revendications 1 à 8 comprenant : - l'obtention d'une solution de mouillage par mélange de cinéol et d'une huile pharmaceutiquement acceptable ; - le mouillage d'une poudre comprenant de l'amoxicilline par la solution de mouillage afin d'obtenir une préparation poudreuse comprenant l'arnoxicilline, le cinéol et l'huile ; 3052066 - optionnellement, le procédé peut comprendre en outre le mélange de la préparation poudreuse comprenant l'amoxicilline, le cinéol et l'huile avec une poudre comprenant un inhibiteur de 13-lactamase, de préférence de l'acide clavulanique ; et/ou - optionnellement, l'ajout d'édulcorant, d'aromatisant et/ou de lubrifiant, et le mélange de 5 ceux-ci afin d'obtenir une poudre homogène ; et/ou - optionnellement, le tamisage de la poudre ainsi obtenue; et/ou - optionnellement, le conditionnement de la poudre tamisée dans des récipients unidoses. 13. Procédé de fabrication selon la revendication 12, dans lequel la poudre comprenant de 10 l'amoxicilline et/ou la poudre comprenant un inhibiteur de f3-lactamase, de préférence de l'acide clavulanique, comprennent en outre un désintégrant et/ou un antiagglomérant. 14. Complexe moléculaire comprenant plus de deux molécules d'amoxicilline organisées de façon linéaire ou en anneau et interagissant les unes avec les autres par des liaisons non- 15 covalentes. 15. Complexe moléculaire selon la revendication 14, dans lequel ledit complexe est formé d'au moins trois molécules d'amoxicilline, de préférence de trois à six molécules d'amoxicilline, de manière encore préférée de quatre molécules d' amoxicilline. 20 16. Complexe moléculaire selon la revendication 14 ou 15 obtenu ou pouvant être obtenu par la mise en solution d'amoxicilline en présence de cinéol dans un solvant aqueux et en absence de détergent.