Brevet FR3059236A1 — publié le 20180601

EXTRAITS DE PLANTES DU GENRE TAGETES ET LEURS UTILISATIONS DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention se situe dans le domaine des extraits végétaux et concerne un extrait de plantes du genre Tagetes enrichi en acide léontopodique B, un procédé de préparation d'un tel extrait ainsi qu'une composition cosmétique et une composition pharmaceutique ou nutraceutique, lesdites compositions comprenant en tant qu'agent actif au moins un extrait de plantes du genre Tagetes selon l'invention. L'invention a également pour objet l'utilisation d'un tel extrait de plantes du genre Tagetes, notamment en tant que médicament pour la prévention et/ou le traitement d'une maladie neurodégénérative, en particulier la maladie d'Alzheimer. ART ANTERIEUR La grande majorité des propriétés bénéfiques de l'Edelweiss (Leontopodium alpinum Cass., famille des Astéracées) a été attribuée aux métabolites secondaires polyphénoliques, et notamment à l'acide léontopodique identifié comme l'un des principaux composés des parties aériennes de l'Edelweiss (S. Schwaiger, et al., Leontopodic acid-a nove/ highly substituted glucaric acid derivative from Edelweiss (Leontopodium alpinum Cass.) and its antioxidative and DNA protecting properties, Tetrahedron, Volume 61, Issue 19, 2005, 4621-4630). L'acide léontopodique B a été retrouve en moindre quantité que l'acide léontopodique A dans les parties aériennes de l'Edelweiss (S. Schwaiger, et al. Development of an HPLC-PAD-MS assay for the identification and quantification of major phenolic edelweiss (Leontopodium alpium Cass.) constituents, Phytochemical Analysis, volume 17, no. 5, 2006, 291-298). Cette classe de métabolites secondaire dérivés de l'acide glucarique a rarement été trouvé en dehors du genre Leontopodium (S. Schwaiger et al., 2005). La demande CN101856347 décrit une composition pharmaceutique contenant de l'acide léontopodique extrait d'une plante du genre Edelweiss, utilisée dans la préparation de médicaments destinés à traiter l'hépatite. Costa et al. (2010) enseigne que le prétraitement de cellules avec de l'acide léontopodique isolé d'une plante du genre Edelweiss entraîne la diminution de 3059236 2 la production d'espèces réactives de l'oxygène (Reactive Oxygen Species, ou ROS) mais n'induit aucune amélioration de la survie cellulaire (S. Costa et al.; Free radicals and antioxidants in two oxidative-stress cell models exposed to ochratoxin A and amyloid unexpected results, World Mycotoxin journal , 5 August 2010, 3(3) : 257-261). L'effet anti-inflammatoire d'extraits éthanoliques d'Edelweiss comprenant de l'acide léontopodique a également été décrit (Lulli D. et al., Anti-inflammatory effects of concentrated ethanol extracts of Edelweiss (Leontopodim alpinum cass.) callus structures towards human keratinocytes and endothelial cells, Mediators of Inflammation, vol. 10 2012, article ID 498373). L'effet anti-oxydant exercé par des dérivés d'acide hexarique sur des neutrophiles est également connu (Dudek et al., Caffeic acid derivatives isolated from the aerial parts of Galinsoga parviflora and their effect on inhibiting oxidative burst in human neutrophils, Phytochemistry Letters 16 15 (2016), 303-310). L'Edelweiss est une plante clairsemée dans les hautes montagnes de l'Europe et de l'Asie à 1 800-3 000 mètres d'altitude, dans des zones inaccessibles, et elle est protégée dans de nombreux pays. Il est donc fortement souhaitable de disposer de nouvelles sources de ce puissant antioxydant. 20 Tagetes est un genre de plantes herbacées de la famille des Asteraceae selon la classification classique, originaire du Mexique, d'Amérique centrale et de l'ouest de l'Amérique du Sud. Ce genre est composé d'une trentaine d'espèces dont certaines sont cultivées comme ornementales (Tagetes erecta) ou médicinales (Tagetes patula) et sont utilisées en médecine traditionnelle pour 25 leurs propriétés antibactériennes, antifongiques et apaisantes. Les parties aériennes de plantes du genre Tagetes sont connues pour leurs vertus médicales ou cosmétiques, notamment via la présence de nombreux composés phénoliques. Cependant aucune des études publiées n'a reporté la présence d'acide léontopodique dans les plantes du genre Tagetes. 30 Les inventeurs ont maintenant développé un procédé permettant de préparer un extrait végétal de Tagetes enrichi en acide léontopodique B (ALB). Les inventeurs ont en effet montré que la culture de plantes du genre Tagetes, en particulier Tagetes patula et Tagetes erecta, dans des conditions particulières, 3059236 3 permet d'obtenir un extrait desdites plantes comprenant de manière inattendue une très forte teneur en acide léontopodique B (ALB), détecté pour la première fois dans le genre Tagetes. Un tel procédé permet la réalisation d'extractions successives sans détruire ni altérer la survie des plantes. Les 5 inventeurs ont également montré qu'un extrait végétal selon l'invention présente non seulement des bénéfices cosmétiques, notamment le traitement ou la prévention du vieillissement cutané et de l'inflammation de la peau, mais également une activité neuro-protectrice intéressante pour la prévention ou le traitement de maladies neurodégénératives, et tout particulièrement la 10 maladie d'Alzheimer. DESCRIPTION DES FIGURES La Figure 1 montre un chromatogramme de l'extrait racinaire de Tagetes erecta obtenu selon l'exemple 1. 15 La Figure 2 montre un chromatogramme de l'extrait racinaire de Tagetes patula obtenu selon l'exemple 2. La Figure 3 montre la survie, en pourcentage de neurones vivants par rapport au contrôle, de neurones corticaux primaires intoxiqués pendant 24h par le peptide A131-42 ajouté à une concentration finale de 20 pM, en présence d'un 20 extrait racinaire de Tagetes erecta à des concentrations variant de 10 ng/mL à 10 pg/ml, conformément à l'exemple 4. Les barres de l'histogramme représentent : témoin contrôle (1) ; + peptide A131-42 (2) ; peptide A131-42 + extrait racinaire de Tagetes erecta 10 nM (3) ; peptide A131-42 + extrait racinaire de Tagetes erecta 100 nM (4) ; peptide 25 A131-42 + extrait racinaire de Tagetes erecta 1 pM (5) ; peptide A131-42 + extrait racinaire de Tagetes erecta 10 pM (6). La Figure 4 montre la croissance du réseau de neurites intoxiqués pendant 24h par le peptide de A131-42 ajouté à une concentration finale de 20 pM, en présence en présence d'un extrait racinaire de Tagetes erecta à des 30 concentrations variant de 10 ng/mL à 10 pg/ml, conformément à l'exemple 4. Les barres de l'histogramme représentent : témoin contrôle (1), + peptide A131-42 (2), peptide A131-42 + extrait racinaire de Tagetes erecta 10 nM (3), peptide A131-42 + extrait racinaire de Tagetes erecta 100 nM (4), peptide A131- 3059236 4 42 + extrait racinaire de Tagetes erecta 1 pM (5), peptide A131-42 + extrait racinaire de Tagetes erecta 10 pM (6). DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION 5 La présente invention a pour premier objet un extrait de plantes du genre Tagetes caractérisé en ce qu'il est enrichi en acide léontopodique B et qu'il comprend au moins 2,5%, en particulier au moins 5,5%, plus particulièrement au moins 8% en poids d'acide léontopodique B, exprimé par rapport au poids total de l'extrait sec. 10 Plus particulièrement, la présente invention a pour objet un extrait de plantes du genre Tagetes enrichi en acide léontopodique B et comprenant au moins 2,5%, au moins 3%, au moins 3,5%, au moins 4%, au moins 4,5%, au moins 5%, au moins 5,5%, au moins 6%, au moins 6,5%, au moins 7%, au moins 7,5%, au moins 8%, au moins 8,5%, au moins 9%, au moins 9,5%, ou au 15 moins 10% en poids d'acide léontopodique B, exprimé par rapport au poids total de l'extrait sec. Par « extrait de plantes du genre Tagetes » on entend le produit obtenu par l'extraction de plantes, ou d'une plante, du genre Tagetes, ou « Tagettes ». 20 Par « enrichi en acide léontopodique B » on entend un extrait végétal comprenant une quantité supérieure d'acide léontopodique B, par rapport à un extrait végétal correspondant pouvant être trouvé dans la nature. Par « acide léontopodique » on entend un composé répondant à la formule 25 générale (I) suivante : HO 5 004 0 OH 3059236 5 dans laquelle trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène ou un groupe 3-hydroxybutanoyl de formule CH3-CH(OH)-CH2-CO-. 5 Par « acide léontopodique B », ou « ALB », on entend un composé répondant à la formule générale (I) dans laquelle trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène. 10 Par « acide léontopodique B1 » ou « ALBI. », on désigne un composé de formule (I) dans laquelle Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et Qi représente un atome d'hydrogène. Par « acide léontopodique B2 » ou « ALB2 », on désigne un composé de 15 formule (I) dans laquelle trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène, ledit composé étant caractérisé en ce que la masse m/z du produit ionisé (autrement appelé ion moléculaire) en spectrométrie de masse en mode négatif est de 695 et que son temps de rétention chromatographique 20 est supérieur à celui de l'acide léontopodique B1 dans les conditions expérimentales décrites dans l'exemple 1.1. Par « acide léontopodique B3 » ou « ALB3 », on désigne un composé de formule (I) dans laquelle trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 et Q4 25 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un atome d'hydrogène, ledit composé étant caractérisé en ce que la masse m/z du produit ionisé (autrement appelé ion moléculaire) en spectrométrie de masse en mode négatif est de 695 et que son temps de rétention chromatographique est supérieur à celui de l'acide léontopodique B2 dans les conditions 30 expérimentales décrites dans l'exemple 1.1. Par « acide léontopodique A », ou « ALA », on entend un composé répondant à la formule générale (I) dans laquelle trois quelconques des radicaux Qi, Q2, Q3 3059236 6 et Q4 représentent un groupe caféoyle et le quatrième radical représente un groupe 3-hydroxybutanoyl de formule CH3-CH(OH)-CH2-00- . Plus particulièrement, on entend par « acide léontopodique A » un composé de 5 formule (I) dans lequel Q2, Q3 et Q4 représentent un groupe caféoyle et Qi représente un groupe CH3-CH(OH)-CH2CO-. Les différents isomères de position de l'ALB, notamment ALBI., ALB2 et ALB3, et de l'ALA sont donc des acides de formule générale (I) substitués par 3 10 groupements caféoyles et par un radical R, avec R choisi parmi : un groupe 3- hydroxybutanoyl et un atome d'hydrogène, tels que représentés dans le Tableau 1 ci-dessous : Acide Léontopodique (ALA ou Q1 Q2 Q3 Q4 ALB) R Caféoyle Caféoyle Caféoyle Caféoyle R Caféoyle Caféoyle Caféoyle Caféoyle R Caféoyle Caféoyle Caféoyle Caféoyle R Tableau 1. Structure des acides léontopodiques 15 Par « extrait sec » on entend l'extrait obtenu par la mise en oeuvre du procédé suivie d'une étape de dessication de l'extrait, la dessication étant mise en oeuvre selon toute méthode bien connue de l'homme du métier, notamment de placer l'extrait en atmosphère chaude et sèche. Par « biomasse racinaire sèche » on entend la biomasse racinaire sèche déterminée avant de procéder 20 à l'étape d'extraction racinaire. Pour l'extraction solide / liquide à partir de racine fraîche, la biomasse racinaire sèche a été mesurée à 5 ± 1,5% de la biomasse racinaire fraîche. Selon un aspect avantageux, un extrait selon la présente invention peut être 25 également défini en ce qu'il comprend au moins 0,75% en poids d'acide léontopodique B, exprimé par rapport au poids total de biomasse sèche, plus préférentiellement au moins 1,5%, au moins 2%, au moins 2,5%, ou au moins 3% en poids d'acide léontopodique B. 3059236 7 Selon un aspect particulier, un extrait selon l'invention est caractérisé en ce que ledit acide léontopodique B comprend les isomères de position ALBI., ALB2 et ALB3, ledit isomère ALB2 étant présent dans une proportion d'au moins 5 50%, préférentiellement d'au moins 80% du poids total de l'acide léontopodique B présent dans ledit extrait. Selon un autre aspect particulier, un extrait selon l'invention est caractérisé en qu'il ne comprend pas d'acide léontopodique A en quantité détectable, ou qu'il 10 comprend une quantité faible ou très faible d'acide léontopodique A, et de préférence moins de 2%, de préférence moins de 1,5%, plus préférentiellement moins de 1% et encore plus préférentiellement moins de 0,5% d'acide léontopodique A, en pourcentage du poids total de l'acide léontopodique présent dans ledit extrait. 15 Selon un autre aspect avantageux, un extrait selon la présente invention comprend au moins 2,5% en poids d'acide léontopodique B, exprimé par rapport au poids total de l'extrait sec, plus préférentiellement au moins 5,5%, au moins 6,5%, au moins 7%, au moins 7,5%, au moins 8% et au moins 20 8,5% en poids d'acide léontopodique B exprimé par rapport au poids total de l'extrait sec, et comprend moins de 1,5%, de préférence moins de 1%, plus préférentiellement moins de 0,5% d'acide léontopodique A, en pourcentage du poids total de l'acide léontopodique présent dans ledit extrait. 25 Selon un autre aspect particulier, un extrait de plantes du genre Tagetes selon l'invention est un extrait d'une espèce de Tagetes choisie parmi Tagetes erecta et Tagetes patula. Selon un autre aspect particulier, un extrait de plantes du genre Tagetes selon 30 l'invention est un extrait d'une partie de la plante, c'est-à-dire une partie constitutive d'une plante telle que les racines, la tige, les feuilles, la fleur ou la graine. Avantageusement, l'invention a pour objet un extrait racinaire d'une plante du genre Tagetes. 3059236 8 Pour l'obtention d'un extrait des différentes parties aériennes, quand celles-ci sont jugées suffisamment développées, elles sont mises en contact avec un liquide de lessivage ou solvant par percolation, aspersion, immersion ou macération et ensuite ledit liquide de lessivage est récupéré et traité pour en 5 extraire les molécules d'intérêt qui ont été libérées par les parties aériennes desdites plantes. Pour l'obtention d'un extrait racinaire, quand les racines sont jugées suffisamment développées, celles-ci sont mises en contact avec un solvant par immersion ou macération, et ensuite ledit solvant est récupéré et traité pour en extraire les molécules d'intérêts qui ont été libérées par les 10 racines desdites plantes. Ce type de procédé correspond en partie au procédé développé par la société Plant Advanced Technologies (PAT) sous le nom de « PAT Plantes à Traire® » et décrit dans la demande internationale WO 01/33942. Le contenu de la demande internationale WO 01/33942 est incorporé par référence à la présente description. 15 Selon un aspect particulier, l'invention a pour objet un extrait de plantes du genre Tagetes, notamment un extrait racinaire, plus particulièrement choisi parmi Un extrait obtenu par exsudation racinaire dans un solvant, 20 Un extrait obtenu par macération racinaire dans un solvant, et Un mélange d'au moins un extrait obtenu par exsudation racinaire dans un premier solvant et d'au moins un extrait obtenu par macération racinaire dans un deuxième solvant ; 25 Dans un deuxième aspect, l'invention a pour objet un procédé de préparation d'un extrait de plantes du genre Tagetes selon l'invention comprenant : a) une étape de culture de Tagetes en conditions hors-sol, et particulièrement en aéroponie, b) optionnellement une étape de stimulation des plantes, 30 c) une étape d'extraction solide / liquide des plantes optionnellement stimulées lors de l'étape b), et d) la récupération de l'extrait obtenu lors de l'étape c). 3059236 9 Selon un mode de réalisation particulier de ce deuxième aspect, l'invention a pour objet un procédé de préparation d'un extrait de plantes du genre Tagetes selon l'invention comprenant : a) une étape de culture de Tagetes en conditions hors-sol, et 5 particulièrement en aéroponie, b) optionnellement une étape de stimulation des racines des plantes, c) une étape d'extraction solide / liquide des racines optionnellement stimulées lors de l'étape b), et d) la récupération de l'extrait obtenu lors de l'étape c) 10 Dans le cadre de l'invention, on entend par « culture des plantes en conditions hors sol », tout mode de culture dans lequel les racines de la plante ne sont pas dans de la terre. Plus précisément, la culture hors sol est une culture dans laquelle les racines des plantes reposent dans un milieu reconstitué, détaché 15 du sol. Ce milieu de culture est irrigué de façon régulière par des solutions nutritives appropriées à la plante cultivée. Il existe différentes techniques de culture hors sol tels que les systèmes sans substrat qui nécessitent une solution nutritive enrichie en oxygène, et les 20 systèmes avec substrat. Parmi les systèmes sans substrat, on peut citer l'aquiculture pour laquelle la solution nutritive est non circulante et est contenue dans un bac de culture, la Nutrient Film Technique (N.F.T.) pour laquelle la solution nutritive s'enrichit en oxygène dissous au cours de son déplacement par échange avec l'air, et l'aéroponie pour laquelle les racines 25 des plantes ne sont en contact ni avec un milieu solide, ni même avec un milieu liquide : elles sont alimentées par un brouillard nutritif obtenu par brumisation (via un brumisateur) de la solution nutritive dans un milieu fermé. Parmi les systèmes avec substrat, on retrouve la subirrigation dans laquelle la solution nutritive pénètre dans le substrat au niveau de sa partie inférieure et 30 la percolation dans laquelle la solution nutritive est distribuée par irrigation discontinue à la surface supérieure du système puis percole vers le bas du substrat. Le substrat, minéral ou organique, est neutre et inerte comme du sable, de l'argile ou de la laine de roche par exemple. Ce substrat peut être également d'origine industrielle. 3059236 10 On entend par « culture des plantes en aéroponie » un mode de culture hors sol pour lequel les racines des plantes ne sont en contact ni avec un milieu solide, ni même avec un milieu liquide. Selon un mode de réalisation 5 particulier, les plantes sont alimentées par un brouillard nutritif obtenu par brumisation, via un brumisateur, de la solution nutritive dans un milieu fermé. Typiquement, dans un procédé selon l'invention, on peut disposer des plantes sur des plateaux avec la partie aérienne de la plante au-dessus du plateau et 10 la partie racinaire en-dessous, on dispose les plateaux sur des tables formant zone de rétention pour collecter l'excédent d'un liquide diffusé vers les plantes, et on transfère les plateaux sur les tables à différents postes. Lors de l'étape a), les plantes cultivées en aéroponie sont alimentées par 15 pulvérisation racinaire d'une solution nutritive de sels minéraux essentiels (Azote - N, Phosphore - P, Potassium - K), afin d'obtenir un développement racinaire maximum et une concentration maximum en molécules d'intérêt, sans altérer la survie de la plante. L'homme du métier, à l'aide de ses connaissances générales, sait comment adapter les proportions et 20 concentrations des différents sels minéraux pour optimiser le développement racinaire et la concentration des molécules d'intérêt. Les concentrations en sels minéraux des solutions nutritives sont dans ce cas comprises dans une gamme d'électroconductivité faible s'étendant avantageusement entre 0,4 à 1,6 mS/cm, de préférence entre 0,6 à 0,8 mS, afin de favoriser une plus 25 grande diversité de molécules dans les extraits. Dans l'étape c) d'un procédé selon l'invention, on entend par « extraction solide/liquide » toute technique d'extraction par solvant qui consiste à extraire une espèce chimique se trouvant dans un solide et étant soluble dans ledit 30 solvant. Parmi ces techniques d'extraction, on peut citer la macération, l'exsudation, l'infusion, la décoction, l'extraction par extracteurs de Soxhlet et de Kumagawa, l'extraction assistée par micro-onde, l'extraction assistée par ultrason, l'extraction par voie enzymatique, l'extraction par fluide supercritique (CO2 +DPG). L'extraction conduit à la récupération des métabolites contenus 3059236 11 dans l'une ou l'autre partie des plantes, et notamment les racines, au moyen d'un liquide de lessivage, ou solvant, mis en contact avec les racines coupées et/ou encore accrochées à la plante, dans un solvant particulier et pendant une durée appropriée. 5 Selon un aspect particulier, dans un procédé selon l'invention, l'étape c) d'extraction solide/liquide des plantes ou d'une partie des plantes, est réalisée au moyen d'un procédé choisi parmi : une exsudation et une macération. 10 Selon un aspect plus particulier, dans un procédé selon l'invention, l'étape c) d'extraction solide/liquide des plantes ou d'une partie des plantes, avantageusement les racines potentiellement stimulées lors de l'étape b), est réalisée au moyen d'un procédé choisi parmi : une exsudation racinaire et une macération racinaire. Cette étape consiste notamment en une étape de 15 « trempage », pendant laquelle on met les racines des plantes dans un bac de trempage contenant un liquide pendant une durée prédéterminée. Typiquement, les plantes sont disposées sur un plateau avec la partie aérienne de la plante au-dessus du plateau et la partie racinaire au-dessous, le plateau est remonté après le trempage, puis le liquide contenu dans le bac de 20 trempage est collecté. Selon un aspect particulier, l'étape de trempage est suivie d'une étape de coupe dans laquelle la partie aérienne ou la partie racinaire des plantes est partiellement coupée pour récolter la partie coupée. Il est possible d'extraire les substances des parties coupées, outre l'extraction des substances lors du trempage. 25 De préférence, dans un procédé selon l'invention, l'exsudation racinaire est réalisée sur des racines encore attachées à la plante. Selon un autre aspect préféré, la macération racinaire est réalisée sur des racines fraîchement coupées, c'est-à-dire coupées depuis moins de 24 heures, et de préférence le 30 plus tôt possible après coupage, idéalement juste après coupage, lesdites racines étant éventuellement séchées après leur section et avant macération. Le séchage des racines peut être réalisé par la mise en oeuvre de tout procédé de séchage adapté, connu de l'homme du métier, et notamment en plaçant les racines à une température comprise entre 40°C et 60°C pendant 4 heures, de 3059236 12 préférence dans un environnement sec. Le séchage des racines peut notamment être réalisé dans une étuve ventilée. Plus particulièrement, l'étape c) d'un procédé selon l'invention comprend la 5 mise en présence des racines avec un solvant choisi parmi : les alcools, les glycols et les solvants eutectiques. Ledit alcool est choisi de préférence parmi l'éthanol et le méthanol, utilisés purs ou sous la forme d'une solution aqueuse d'alcool, celle-ci comprenant de 10% à 99,9% d'alcool, plus particulièrement entre 40% et 90%, et encore plus particulièrement entre 50% et 85%. Ledit 10 glycol est un diol dans lequel les deux groupes hydroxyl sont portés par des carbones différents, et est choisi parmi : le dipropylène glycol, le propane 1,3 diol, le propane 1,2 diol et le butylène glycol, et est utilisé pur ou sous la forme d'une solution aqueuse de glycol, celle-ci comprenant de 10% à 99,9% de glycol, plus particulièrement entre 40% et 90%, et encore plus 15 particulièrement entre 50% et 85%. Ledit solvant eutectique est constitué de deux composants ou plus, qui peuvent être solides ou liquides et qui, dans une composition particulière, présentent une forte diminution de leur température de fusion, rendant ainsi le mélange liquide. Les solvants eutectiques naturels sont principalement constitués d'acides aminés, d'acides organiques, de sucres 20 et de dérivés de la choline. L'eau peut faire partie du solvant, mais est dans ce cas fortement retenu dans le liquide et ne peut être évaporée. Les combinaisons particulières des composants constituant ledit solvant eutectique sont choisies parmi notamment, et de manière non exhaustive, le chlorure de choline - glucose (ratio 1:1), le chlorure de choline - acide citrique (ratio 1:1), 25 le chlorure de choline - acide citrique (ratio 2:1), le chlorure de choline - saccharose (ratio 4:1), le chlorure de choline - saccharose (ratio 1:1), le chlorure de choline - acide tartrique (ratio 2:1), le chlorure de choline - xylose (ratio 2:1), le chlorure de choline - xylose (ratio 3:1), l'acide citrique saccharose (ratio 1:1), l'acide citrique - glucose (ratio 1:1), le glucose - acide 30 tartrique (ratio 1:1), le chlorure de choline - urée (ratio 1:2), le chlorure de choline - xylitol - eau (2 : 1 : 3) et l'acide lactique - glucose - eau (5 : 1 : 3). 3059236 13 Ces solvants permettent de favoriser l'extraction d'une forte teneur en acide léontopodique B (ALB) et ses isomères. Dans le cas d'un mélange d'extraits racinaires, lesdits premier et deuxième solvants peuvent être identiques ou différents. 5 Selon un aspect particulier de l'invention, le solvant est caractérisé par un pH acide, notamment lorsqu'il est utilisé lors de l'étape d'extraction solide/liquide. Selon un aspect particulier, ledit alcool ou ledit glycol utilisé lors d'une étape d'extraction solide/liquide est caractérisé par un pH compris entre 2 et 5, de 10 préférence entre 2 et 4, plus préférentiellement entre 2,5 et 3,5. Selon un autre aspect particulier, un extrait végétal selon l'invention est caractérisé par un pH compris entre 2,5 et 5, de préférence entre 2,5 et 4 et plus avantageusement entre 3 et 4. L'utilisation d'un solvant à pH acide favorise la solubilisation des composés d'intérêt dans ledit solvant et limite la dégradation 15 chimique ou enzymatique des métabolites secondaires dont ALB lors de l'extraction. Les acides utilisés pour l'ajustement du pH du solvant ou de l'extrait sont de préférence l'acide phosphorique, l'acide citrique ou l'acide chlorhydrique. 20 Plus particulièrement, ledit glycol est choisi dans le groupe suivant : le dipropylène glycol, le propane 1,3 diol, le propane 1, 2 diol et le butylène glycol. Le propane 1,3 diol, ou triméthylène glycol, peut être préparé par synthèse chimique selon des techniques connues de l'homme du métier et décrites dans 25 la littérature, il est aussi disponible commercialement. Ledit propane 1,3 diol peut également être produit par la mise en oeuvre d'un procédé de fermentation en conditions adaptées d'un organisme vivant, notamment une souche génétiquement modifiée d'Escherichia coli. Le propane 1,3 diol ainsi obtenu est désigné par le terme de « propane 1,3 diol biosourcé », un tel 30 produit est produit puis purifié comme décrit notamment dans la demande internationale WO 2004/101479 et commercialisé sous la marque Zéméa®. Par « butylène glycol » on entend le butane 1,2 diol, le butane 1,3 diol, le butane 2,3 diol et le butane 1,4 diol. 3059236 14 De façon encore plus particulière, dans un procédé selon l'invention, l'étape c) d'extraction solide/liquide comprend la mise en présence des racines avec du propane 1,2 diol ou avec du propane 1,3 diol, et notamment du propane 1,3 diol biosourcé. 5 Selon un aspect particulier, l'étape c) d'un procédé selon l'invention comprend la mise en présence des racines avec un solvant pendant une durée comprise entre 15 minutes et 30 minutes pour l'exsudation racinaire et pendant une durée comprise entre 1 heure et 96 heures, notamment entre 24 heures et 72 10 heures, plus particulièrement entre 36 heures et 48 heures pour la macération racinaire. Selon un autre aspect particulier, un procédé selon l'invention comprend une étape de section des racines puis de séchage des racines sectionnées, 15 préalablement à l'étape de macération desdites racines, la macération étant réalisée par la mise en présence des racines avec un solvant. Le procédé selon l'invention peut donc comprendre une première étape d'exsudation racinaire effectuée par immersion dans un solvant des racines 20 encore accrochées à la plante pendant une durée comprise entre 15 minutes à 30 minutes, suivie d'une étape de macération racinaire des racines coupées de la plante, puis éventuellement séchées. Les durées d'exsudation racinaire et/ou de macération racinaire sont choisies 25 de manière à favoriser l'extraction d'une forte quantité en composés d'intérêt tout en n'altérant pas la survie de la plante et sans mener à l'épuisement des ressources. Ainsi les plantes, après l'étape d'exsudation racinaire, sont remises en culture en aéroponie selon les étapes a) et optionnellement b) afin de recommencer leur développement racinaire et favoriser la production par 30 les racines de métabolites secondaires. Selon un aspect particulier, un procédé selon l'invention est un procédé de préparation d'un extrait racinaire de plantes du genre Tagetes. 3059236 15 Selon un aspect préféré, un procédé selon l'invention est un procédé de préparation d'un extrait racinaire de plantes du genre Tagetes erecta ou Tagetes Patula. 5 Selon un mode de réalisation préféré, l'invention a également pour objet un procédé de préparation d'un extrait de plantes du genre Tagetes selon l'invention comprenant : a) une étape de culture de Tagetes en conditions hors-sol, et particulièrement en aéroponie, 10 b) une étape de stimulation des racines des plantes, c) une étape d'extraction solide/liquide des racines stimulées lors de l'étape b), et d) la récupération de l'extrait obtenu lors de l'étape c). 15 Selon un autre aspect particulier, dans un procédé selon l'invention, l'étape b) de stimulation des racines des plantes comprend : - une étape d'élicitation dans laquelle les racines sont mises en présence d'une solution comprenant au moins un agent choisi parmi : un sel, un tensioactif, un solvant, un éliciteur d'origine fongique ou bactérienne, un 20 dérivé de l'acide jasmonique, en particulier le méthyl jasmonate, l'acide salicylique, un générateur d'éthylène, une chitine, des chitosans et/ou leur mélange, et/ou - une étape de mise en présence des racines avec une solution carencée en azote, c'est-à-dire une solution comprenant une proportion d'azote 25 inférieure à la proportion d'azote habituellement considérée comme optimale pour le développement de la plante et en particulier des racines, avantageusement moins de 15% d'azote, et avantageusement ne comprenant pas d'azote, lesdites étapes étant séquentielles ou simultanées. 30 Les racines peuvent également être stimulées par la mise en présence des plantes avec une solution nutritive carencée en azote. La mise en présence des plantes avec une solution nutritive carencée en azote provoque un « stress azoté » responsable de la stimulation. Selon un aspect particulier, une solution carencée en azote selon la présente invention est une solution 3059236 16 comprenant moins de 15% d'azote, de préférence moins de 10% d'azote, avantageusement moins de 8%, plus avantageusement moins de 6%, moins de 5%, moins de 4%, moins de 3%, moins de 2%, moins de 1% d'azote et encore plus avantageusement 0% d'azote. 5 L'étape b) de stimulation permet d'augmenter de manière significative la teneur en métabolites secondaires dans les racines et favoriser ainsi le flux des métabolites sortant des racines vers le solvant choisi pour l'extraction et ce, sans perte totale de la viabilité de la plante afin qu'elle puisse être remise 10 en culture puis réutilisée. En d'autres termes, l'étape de stimulation de la plante permet de favoriser la production et la sécrétion des molécules d'intérêt. Avantageusement, l'étape b) de stimulation des racines est réalisée par 15 pulvérisation ou macération de la plante avec une solution d'éliciteurs choisie parmi les dérivés d'acide jasmonique comme par exemple le méthyl jasmonate, l'acide salicylique et les chitosans ou par l'alimentation de la plante avec une solution nutritive N/P/K carencée en azote vaporisée sur les racines. 20 Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, l'étape b) est mise en oeuvre par pulvérisation ou macération de la plante avec une solution choisie parmi : - une solution de méthyl jasmonate à une concentration comprise entre 0,01 et 200 pM, avantageusement entre 0,1 et 20 pM, 25 - une solution d'acide salicylique à une concentration comprise entre 1 et 500 pM, avantageusement entre 10 et 50 pM, - une solution de chitosans à une concentration de 0,002 à 1 g/L, avantageusement de 0,05 à 0,1 g/L, et - une solution nutritive N/P/K comprenant moins de 6% d'azote, ladite 30 solution étant de préférence vaporisée sur les racines. En outre, l'étape b) de stimulation des racines avec une solution d'éliciteurs est avantageusement effectuée pendant une durée comprise entre 1 jour et 21 jours, de préférence entre 1 et 7 jours. 3059236 17 Selon un aspect particulier, l'étape b) de stimulation des racines par l'alimentation de la plante avec une solution nutritive N/P/K carencée en azote vaporisée sur les racines est avantageusement effectuée pendant une durée 5 comprise entre 10 jours et 8 semaines, de préférence 3 semaines. Lors de l'étape b), les concentrations en sels minéraux des solutions nutritives sont comprises dans une gamme d'électroconductivité faible s'étendant avantageusement entre 0,4 à 1,6 mS/cm, de préférence entre 0,6 à 0,8mS, afin de favoriser une plus grande diversité de molécules dans les extraits. 10 Selon un aspect particulier d'un procédé selon l'invention, l'étape b) est réalisée après l'étape a). Selon un autre aspect particulier d'un procédé selon l'invention, l'étape b) et l'étape a) sont effectuées de manière simultanée, la solution de stimulation est alors incorporée à la solution nutritive ou 15 administrée par tout autre mode d'administration connu de l'homme du métier. Selon un perfectionnement, l'étape de « trempage » est précédée d'une étape de lavage dans laquelle le liquide diffusé vers les plantes est de l'eau claire. On 20 limite ainsi l'apport des éléments contenus dans la solution nutritive ou dans l'éventuelle solution de stimulation lors de l'étape de trempage. Avantageusement, l'invention a pour objet un procédé comprenant les étapes suivantes : 25 a) une étape de culture de Tagetes en conditions hors-sol, et particulièrement en aéroponie, b) une étape de stimulation des racines des plantes, c) une étape d'extraction solide/liquide des racines stimulées lors de l'étape b), comprenant : 30 - une première phase de mise en présence des racines encore liées à la plante avec un solvant, en particulier pendant une durée comprise entre 15 minutes à 30 minutes, 3059236 18 - suivie d'une seconde phase comprenant la section desdites racines et la macération des racines sectionnées dans un solvant, ledit solvant, identique ou différent dans la première et la deuxième 5 phase, est choisi parmi les alcools, les glycols et les solvants eutectiques, et étant utilisé pur ou sous la forme d'une solution aqueuse d'alcool, de glycol ou de solvant eutectique, et d) la récupération des extraits obtenus lors de l'étape c). 10 Un procédé selon l'invention comprend avantageusement une étape supplémentaire de réajustement de la teneur en solvant de l'extrait, pour obtenir une teneur avantageuse d'au moins 50%, et/ou un ajustement du pH de l'extrait, pour obtenir un pH avantageusement compris entre 3 et 5, de préférence d'approximativement 3,5, en vue de la conservation de l'extrait. 15 Un procédé selon l'invention comprend avantageusement au moins une étape supplémentaire de purification et/ou de traitement de l'extrait végétal, une telle étape est notamment choisie parmi : - au moins une filtration, en particulier une nanofiltration et/ou une 20 filtration stérilisante et/ou une filtration clarifiante, - une extraction liquide/solide, - une purification, - une concentration et - une décoloration de l'extrait racinaire, 25 de telles méthodes de purification et/ou de traitement sont bien connues de l'homme du métier. Cette étape permet d'obtenir l'extrait final de Tagetes, de préférence de Tagetes patula et Tagetes erecta et en particulier de Tagetes erecta riche en polyphénols, notamment en léontopodique B (ALB) et ses isomères de position. 30 Le procédé selon l'invention permet d'obtenir un extrait de plantes du genre Tagetes de préférence Tagetes patula et Tagetes erecta, particulièrement riche en polyphénols, notamment en acide léontopodique B et ses isomères. En particulier, l'extrait de plantes obtenu par le procédé décrit ci-dessus, est riche 3059236 19 en un mélange des différents isomères de l'ALB, comme par exemple ALBI., ALB2 et ALB3. Un chromatogramme (Figure 1) de l'analyse d'un extrait racinaire de Tagetes erecta obtenu selon l'invention, montre que l'acide léontopodique B est présent dans cet extrait sous la forme d'au moins trois 5 isomères : ALB1, ALB2 et ALB3. ALB2 est l'isomère majoritairement présent. De préférence, au moins 50%, encore plus préférentiellement au moins 80% en poids desdits ALB sont sous la forme de l'isomère ALB2, par rapport au poids total d'acide léontopodique B. 10 La présente invention a également pour objet un extrait susceptible d'être obtenu par un procédé selon l'invention. La présente invention a pour troisième objet une composition cosmétique comprenant, en tant qu'agent actif, au moins un extrait selon l'invention ou un 15 extrait obtenu par un procédé selon l'invention, et au moins un excipient. Avantageusement, ledit extrait est un extrait de plantes du genre Tagetes, de préférence Tagetes patula et Tagetes erecta et notamment un extrait racinaire de plantes du genre Tagetes, en particulier un extrait racinaire de Tagetes patula ou de Tagetes erecta selon l'invention. 20 Les modes d'administration, les posologies et les formes galéniques optimales d'une composition cosmétique selon l'invention peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement cosmétique adapté à un sujet comme par exemple le type de peau. 25 La composition cosmétique selon l'invention est avantageusement destinée à une application topique. Elle peut notamment se présenter sous la forme d'une crème, d'un lait, d'une lotion, d'un gel, d'un sérum, d'un spray, d'une mousse, d'une solution, d'une pommade, d'une émulsion, d'un patch ou d'un masque. 30 Une composition cosmétique selon l'invention comprend au moins un excipient cosmétiquement acceptable choisi en fonction du type d'administration souhaitée. Une composition cosmétique selon la présente invention peut en outre comprendre au moins un adjuvant connu de l'homme du métier, choisi 3059236 20 parmi les épaississants, les conservateurs, les parfums, les colorants, des filtres chimiques ou minéraux, les agents hydratants, les eaux thermales, etc. Un excipient cosmétiquement acceptable peut être choisi parmi les polymères, 5 les composés silicones, les agents tensioactifs, les agents de rhéologie, les agents humectants, les agents de pénétration, les composants huileux, les cires, les émulsifiants, les agents filmogènes, les parfums, les électrolytes, les ajusteurs de pH, les agents antioxydants, les conservateurs, les colorants, les nacres, les pigments et leurs mélanges. 10 Une composition cosmétique selon l'invention peut en outre comprendre au moins un autre agent cosmétiquement actif, tels qu'un autre agent anti-âge, un agent hydratant, un agent ayant une activité calmante, apaisante ou relaxante, un agent stimulant la microcirculation cutanée, un agent sébo- 15 régulateur pour le soin des peaux grasses, un agent nettoyant ou purifiant, un agent anti-radicalaire, un agent anti-inflammatoire, un filtre solaire chimique ou minéral, etc. Avantageusement, une composition cosmétique selon l'invention comprend au 20 moins un extrait de Tagetes selon l'invention, et en particulier un extrait racinaire de Tagetes patula ou de Tagetes erecta selon l'invention, en une quantité comprise entre 0,01 et 10%, en particulier entre 0,05 et 5%, plus particulièrement entre 0,1 et 2%, en poids par rapport au poids total de la composition. 25 La présente invention a pour quatrième objet un extrait selon l'invention, un extrait obtenu par un procédé selon l'invention, ou une composition cosmétique selon l'invention, pour prévenir le vieillissement cutané, avoir un effet apaisant suite à la sensation d'irritation, stimuler la fonction barrière de 30 l'épiderme ainsi que l'hydratation de la peau. Une composition cosmétique selon l'invention peut notamment être destinée à prévenir ou ralentir le vieillissement cutané. Une composition cosmétique selon l'invention peut aussi notamment être destinée à avoir un effet apaisant 3059236 21 suite à la sensation d'irritation qui peut se développer après le rasage, la friction, ou le contact avec les allergènes. Une composition cosmétique selon l'invention peut notamment être destinée à favoriser l'intégrité et l'efficacité de la fonction barrière de l'épiderme. Une composition cosmétique selon 5 l'invention peut notamment être destinée à stimuler l'hydratation de la peau. La présente invention a pour cinquième objet une composition pharmaceutique comprenant, en tant qu'agent actif, au moins un extrait selon l'invention ou un extrait obtenu par un procédé selon l'invention, et au moins un excipient 10 pharmaceutiquement acceptable, et une composition nutraceutique comprenant, en tant qu'agent actif, au moins un extrait selon l'invention ou un extrait obtenu par un procédé selon l'invention, et au moins un excipient nutraceutiquement acceptable. 15 Dans la présente nutraceutiquement préparation d'une généralement sûr, souhaitable et qui invention, on désigne par « pharmaceutiquement ou acceptable » tout ingrédient qui est utile dans la composition pharmaceutique ou nutraceutique, qui est non toxique et ni biologiquement ni autrement non est acceptable pour une utilisation vétérinaire ou chez 20 l'Homme. On désigne par « sels pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables » d'un composé, des sels qui sont pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables, comme défini ci-dessus, et qui possèdent 25 l'activité pharmacologique souhaitée du composé parent. De tels sels comprennent : (1) les hydrates et les solvates, (2) les sels d'addition d'acide pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables formés avec des acides inorganiques pharmaceutiquement ou 30 nutraceutiquement acceptables tels que l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique et similaires ; ou formés avec des acides organiques pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptables tels que l'acide acétique, l'acide benzènesulfonique, l'acide benzoïque, l'acide camphresulfonique, l'acide 3059236 22 citrique, l'acide éthane-sulfonique, l'acide fumarique, l'acide glucoheptonique, l'acide gluconique, l'acide glutamique, l'acide glycolique, l'acide hydroxynaphtoïque, l'acide 2-hydroxyéthanesulfonique, l'acide lactique, l'acide maléique, l'acide malique, l'acide mandélique, l'acide méthanesulfonique, 5 l'acide muconique, l'acide 2-naphtalènesulfonique, l'acide propionique, l'acide salicylique, l'acide succinique, l'acide dibenzoyl-L-tartrique, l'acide tartrique, l'acide p-toluènesulfonique, l'acide triméthylacétique, l'acide trifluoroacétique et similaires, ou (3) les sels d'addition de base pharmaceutiquement ou 10 nutraceutiquement acceptables formés lorsqu'un proton acide présent dans le composé parent est soit remplacé par un ion métallique, par exemple un ion de métal alcalin, un ion de métal alcalino-terreux ou un ion d'aluminium ; soit coordonné avec une base organique ou inorganique pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptable. Les bases organiques acceptables 15 comprennent la diéthanolamine, l'éthanolamine, N-méthylglucamine, la triéthanolamine, la trométhamine et similaires. Les bases inorganiques acceptables comprennent l'hydroxyde d'aluminium, l'hydroxyde de calcium, l'hydroxyde de potassium, le carbonate de sodium et l'hydroxyde de sodium. 20 Les modes d'administration, les posologies et les formes galéniques optimales d'une composition pharmaceutique selon l'invention peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement pharmaceutique adapté à un sujet comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au 25 traitement, les effets secondaires constatés, le type de peau. En fonction du type d'administration souhaitée, la composition pharmaceutique selon l'invention peut en outre comprendre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. La composition pharmaceutique selon la présente invention peut en outre comprendre au moins un adjuvant 30 pharmaceutiquement connu de l'homme du métier, choisi parmi les épaississants, les conservateurs, les parfums, les colorants, des filtres chimiques ou minéraux, les agents hydratants, les eaux thermales, etc. 3059236 23 Avantageusement, ladite composition pharmaceutique comprend au moins un extrait selon l'invention en une quantité comprise entre 0,01 et 10%, en particulier entre 0,05 et 5%, plus particulièrement entre 0,1 et 2%, en poids par rapport au poids total de la composition. 5 Une composition pharmaceutique est particulièrement adaptée pour une administration par voie orale, nasale, transdermique, parentérale, topique, rectale et mucosale. Elle peut se présenter sous forme sèche, telle que par exemple : capsule molle, gélule, comprimé, lyophilisat, poudre, granule, ou 10 patch, ou sous forme liquide, telle que : solution, suspension, spray, crème ou gel. L'excipient pharmaceutiquement acceptable est connu de l'Homme du Métier et est choisi selon le mode d'administration de la composition pharmaceutique. 15 A titre d'exemple, l'excipient pharmaceutiquement acceptable peut être choisi dans le groupe constitué par les agents diluants, liants, désintégrants, les colorants, les lubrifiants, les agents solubilisants, les agents promoteurs d'absorption, les filmogènes, les agents gélifiants, et leurs mélanges. 20 La composition pharmaceutique selon l'invention peut en outre comprendre au moins un composé choisi dans le groupe constitué par les émollients, les actifs hydratants, les activateurs de la synthèse de kératine, les kératorégulateurs, les kératolytiques, les agents restructurant de la barrière cutanée (activateurs de la synthèse des lipides cutanés, agonistes PPARs ou Peroxysome 25 Proliferator Activated Receptor), les activateurs de la différenciation des kératinocytes (rétinoïdes, calcidone®, le calcium), les antibiotiques, les agents anti-bactériens, les composés antifongiques, les agents anti-viraux, les séborégulateurs, les immunomodulateurs, tels que le tacrolimus, le pimécrolimus, les oxazolines, les conservateurs, les agents anti-irritants, les agents 30 apaisants, des filtres et écrans solaires, les agents anti-oxydants, les facteurs de croissance, les agents cicatrisants ou les molécules eutrophiques, les médicaments et les agents anti-inflammatoires, les médicaments et les agents anti-Alzheimer. 3059236 24 La présente invention a pour sixième objet un extrait selon l'invention ou une composition pharmaceutique selon l'invention, pour son utilisation en tant que médicament. 5 Plus particulièrement, la présente invention a également pour objet un extrait selon l'invention, un extrait obtenu par un procédé selon l'invention, ou une composition pharmaceutique selon l'invention ou une composition nutraceutique selon l'invention, pour son utilisation en tant que médicament pour atténuer ou traiter l'inflammation de la peau et/ou pour favoriser la 10 cicatrisation cutanée, en particulier dans le cas de la fermeture d'une plaie. Plus particulièrement, la présente invention a également pour objet un extrait selon l'invention, un extrait obtenu par un procédé selon l'invention, ou une composition pharmaceutique selon l'invention, pour son utilisation en tant que 15 médicament pour prévenir ou ralentir le vieillissement cutané, pour avoir un effet apaisant suite à la sensation d'irritation, pour stimuler la fonction barrière de l'épiderme ainsi que l'hydratation de la peau. Dans ce cas, ledit extrait sera avantageusement associé à un excipient pharmaceutiquement acceptable et adapté pour une application cutanée, et ladite composition pharmaceutique 20 contiendra avantageusement un excipient pharmaceutiquement acceptable et adapté pour une application cutanée. Selon un autre aspect particulier, la présente invention a également pour objet un extrait selon l'invention, un extrait obtenu par un procédé selon l'invention, 25 ou une composition pharmaceutique selon l'invention ou une composition nutraceutique selon l'invention, pour son utilisation en tant que médicament pour prévenir ou traiter une maladie neuro-dégénérative. Dans le cadre de la présente invention, on entend par « maladie 30 neurodégénérative » une maladie impliquant principalement une détérioration du fonctionnement, et éventuellement la mort, des cellules nerveuses, et en particulier des neurones. Ces maladies induisent des troubles d'ordre cognitivo-comportemental, sensoriel et moteur. 3059236 25 Selon un aspect particulier, ladite maladie neurodégénérative est choisie parmi : la maladie d'Alzheimer, l'ataxie spinocérébelleuse, l'atrophie multisystématisée, la maladie d'Alexander, la maladie d'Alpers, la maladie de Creutzfeldt-Jakob, la maladie de Huntington, la maladie de Parkinson, la 5 maladie de Pick, la myofasciite à macrophages, la paralysie supranucléaire progressive, la sclérose en plaques et la sclérose latérale amyotrophique. Dans le cadre de la présente invention, une maladie neurodégénérative peut être une maladie neurodégénérative due au stress oxydatif. 10 C'est le cas notamment de la maladie d'Alzheimer. On entend par « maladie d'Alzheimer » (MA) une maladie affectant principalement les personnes de plus de 65 ans, souffrant de différents symptômes cliniques tels que le déclin progressif de la mémoire, de la pensée, du langage et de la capacité 15 d'apprentissage. Le rôle toxique du peptide 13-amyloïde (A13) est maintenant passé de fibrilles A13 insolubles à des plus petits agrégats solubles d'oligomères de A13. Il a été prouvé que des oligomères solubles de A13 isolés de cortex de patients présentant la maladie d'Alzheimer induisent directement l'hyperphosphorylation de la protéine Tau (T) et la dégénérescence des neurites (Jin 20 M, et al., Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Apr 5;108(14):5819-24). Ainsi, toutes les substances ayant une propriété réductrice de la neurotoxicité du peptide A@ peuvent être utiles en tant que nouvel agent thérapeutique pour le traitement ou la 25 prévention de la maladie d'Alzheimer. Selon un aspect particulier, la présente invention a donc pour objet un extrait selon l'invention, un extrait obtenu par un procédé selon l'invention, ou une composition pharmaceutique selon l'invention, pour son utilisation en tant que 30 médicament pour prévenir ou traiter la maladie d'Alzheimer. La présente invention a également pour objet une méthode de soin cosmétique de la peau visant à prévenir ou retarder l'apparition des effets du vieillissement de la peau, avoir un effet apaisant suite à la sensation 3059236 26 d'irritation et/ou stimuler la fonction barrière de l'épiderme ainsi que l'hydratation de la peau, ladite méthode étant caractérisée en ce qu'elle comprend l'application, sur au moins une partie de la peau du corps ou du visage, d'une composition cosmétique selon l'invention. 5 Avantageusement, dans la méthode selon l'invention, la composition cosmétique est appliquée chez un sujet en ayant besoin, notamment en prévision de ou consécutivement à une exposition unique ou répétée de la peau à un stress oxydant. En effet, ce dernier peut générer un excès de 10 radicaux libres pouvant accélérer les signes de vieillissement cutané. L'invention a enfin pour objet une méthode de prévention et/ou de traitement d'une maladie neurodégénérative, notamment d'une des maladies citées ci-dessus, et particulièrement la maladie d'Alzheimer, comprenant 15 l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace d'au moins un composé d'un extrait selon l'invention, d'un extrait préparé par un procédé selon l'invention, d'une composition nutraceutique selon l'invention ou d'une composition pharmaceutique selon l'invention à un patient en ayant besoin. 20 En outre, l'invention concerne une méthode pour prévenir ou ralentir le vieillissement cutané, pour atténuer l'inflammation de la peau, pour avoir un effet apaisant suite à la sensation d'irritation, pour stimuler la fonction barrière de l'épiderme ainsi que l'hydratation de la peau, et pour favoriser la cicatrisation cutanée, en particulier dans le cas de la fermeture d'une plaie, 25 chez un sujet en ayant besoin, comprenant l'administration au sujet d'une quantité thérapeutiquement efficace d'une composition nutraceutique selon l'invention ou d'une composition pharmaceutique selon l'invention. La présente invention concerne également une composition nutraceutique 30 comprenant un extrait selon l'invention, ou un extrait obtenu par un procédé selon l'invention, et un excipient nutraceutiquement acceptable, pour améliorer les fonctions cognitives chez un patient atteint d'une maladie neurodégénérative, et particulièrement la maladie d'Alzheimer. L'excipient nutraceutiquement acceptable est connu de l'Homme du Métier et est choisi 3059236 27 parmi les excipients conformes aux règlementations internationales applicables aux additifs alimentaires. Selon un aspect particulier, d'autres extraits botaniques connus de l'Homme 5 du Métier peuvent également être ajoutés à une composition nutraceutique selon l'invention pour améliorer les fonctions cognitives chez un patient atteint d'une maladie neurodégénérative, et particulièrement la maladie d'Alzheimer. Ces extraits botaniques peuvent être choisies parmi des extraits de plantes ou d'une partie de plantes (par exemple racine, tige, feuille, fleur, graine, 10 bourgeon, fruits) comme les citrus (orange, citron, pamplemousse), le genre Rosa (églantier, rosier), Panax ginseng, Bacopa monnieri, cassis, Ginkgo biloba, la vigne, la sarriette, le romarin, l'aulne, le noyer, l'olivier. Les exemples 1 à 4 qui suivent et les Figures 1 à 4 visent à illustrer la 15 présente invention, sans toutefois en limiter la portée. EXEMPLES Exemple 1 : Préparation et caractérisation d'extraits racinaires de 20 Tagetes erecta selon l'invention Les extraits Tagetes erecta sont préparés à partir de plantes originaires de Ille de la Réunion. Le fournisseur est la Société Horticole de Bassin Plat, EARL Bassin Plat 31, Chemin de la Croix Jubile 97410 Saint Pierre, Ile de la Réunion. 25 1.1 Extrait préparé à partir d'un solvant glycolé Un extrait racinaire polyphénolique de Tagetes erecta, riche en ALB, est obtenu selon le procédé suivant : - Culture de Tagetes erecta en aéroponie avec une solution nutritive définie, de composition N/P/K correspondant à 15/10/30 et à une 30 électroconductivité comprise entre 0,4 et 1,6 mS/cm, - Stimulation de la plante pendant une durée de 2 à 4 semaines par un stress azoté par l'utilisation d'une solution nutritive N/P/K comprenant : moins de 6% d'azote, 15% de phosphore et 40% de potassium, et d'une électroconductivité de 0,6 à 0,8 mS/cm, 3059236 28 - Extraction des molécules d'intérêt par immersion des racines encore accrochées à la plante pendant une durée de 15 à 30 minutes dans un mélange propane 1,2 diol/eau, selon un ratio compris entre 85/15 et 70/30, à température ambiante et à un pH de 3, 5 - Extraction des molécules d'intérêt par macération des racines coupées de la plante pendant une durée de 48 à 72 heures dans un mélange propane 1,2 diol/eau selon un ratio compris entre 85/15 et 70/30, à température ambiante et à un pH de 3, - Mélange des extraits obtenus aux deux étapes d'extraction précédentes, 10 - L'extrait est purifié (élimination des sels par nanofiltration), concentré par nanofiltration et clarifié par filtration clarifiante, et - Réajustement de la teneur en propane 1,2 diol de l'extrait (au moins 50%) ainsi que du pH (approximativement 3,5) de l'extrait en vue de sa conservation. 15 L'extrait racinaire de Tagetes erecta ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes : - Teneur en extrait sec : 13,3 g/L - Teneur estimée en ALBI. : 154 mg/L (soit 1,15% de l'extrait sec ou 0,6% de la biomasse racinaire sèche) 20 - Teneur déduite en ALB2 et ALB3 : 813 mg/L (soit 6,1% de l'extrait sec ou 3% de la biomasse racinaire sèche) - Teneur déduite en ALB totaux (ensemble des isomères) : 967 mg/L (soit 7,3% de l'extrait sec ou 3,6% de la biomasse racinaire sèche) - Solvant : 62% 25 - pH : 3,66 La quantification des ALB se fait grâce à une gamme étalon préparée à partir d'un standard d'ALBI. commercial fourni par Extrasynthèse (Genay, France) solubilisé dans le solvant d'extraction et acidifié au pH 3,5 avec de l'acide phosphorique. Les concentrations de tous les isomères d'ALB sont ainsi 30 exprimées en équivalents d'ALBI. dans chaque extrait. En Figure 1 est présenté un chromatogramme de l'extrait racinaire de Tagetes erecta obtenu selon l'exemple 1. L'appareil utilisé pour analyser l'extrait est une UPLC Shimadzu Nexera X2 (les pompes LC-30AD, passeur d'échantillon SIL-30AC, four CTO-20A, détecteurs à barrette de diodes SPD-M20A ; Kyoto, 3059236 29 Japon) fonctionnant en phase inverse avec une colonne Kinetex biphenyl (00E4622-AN, Phenomenex, Torrance, CA, USA) de dimensions 150 mm x 2.1 mm, 2.6 dam. La phase mobile est constituée d'un solvant A (Eau ultrapure Mili-Q, Merck Millipore +0.1% d'acide formique, Carlo Erba, Val-de-Reuil, France) et 5 d'un solvant B (Acetonitrile, Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Steinheim, Allemagne) dont le gradient a été programmé de la façon suivante : 5-20% B (0-3.5 min), 20-27.5% B (3.5-8 min), 27.5-90% B (8-8.1 min), 90% B (8.110 min), 90-5% B (10-10.1 min), 5% B (10.1-12 min). Le débit d'analyse est de 0,5 mL/min avec une température de four de 40°C. En sortie de colonne, 10 un détecteur à barrettes de diodes enregistre les spectres UV entre 220 et 370 nm. L'appareil est couplé à un spectromètre de masse (Shimadzu LCMS-2020) fonctionnant avec une ionisation par électrospray (4,5 kV) en mode positif et négatif dans une gamme de m/z entre 100 et 1000. Le logiciel LabSolutions (version 5.60 SP2) est utilisé pour exploiter le système. L'extrait à analyser 15 est filtré sur un filtre 0,2pm avant injection. 1.2 Extrait préparé à partir de solvant hydroéthanolique Des Tagetes erecta sont cultivées en aéroponie avec un milieu de culture 15/10/30 (azote/phosphore/potassium) ayant une électroconductivité de 0,4 à 20 1,6 mS/cm, puis les racines sont stimulées pendant une durée de 2 à 4 semaines par un stress azoté par l'utilisation d'une solution nutritive N/P/K comprenant : moins de 6% d'azote, 15% de phosphore et 40% de potassium, et d'une électroconductivité de 0,6 à 0,8 mS/cm. Les racines sont coupées puis sont séchées 48h dans une étuve ventilée à une température comprise 25 entre 40 et 50°C. 450 mg de racines séchée sont broyés à sec puis macérées pendant 3 heures sous agitation à température ambiante dans 45 mL d'une solution hydroéthanolique à 70/30 (éthanol/eau - v/v). Ensuite l'extrait à analyser est filtré sur un filtre 0,2pm avant injection en UPLC selon le matériel et les méthodes décrits ci-dessus dans l'exemple 1.1. 30 La quantification des ALB est réalisée selon le matériel et les méthodes décrits ci-dessus dans l'exemple 1.1. L'extrait racinaire de Tagetes erecta ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes : - Pas d'ALA identifié 3059236 30 - Teneur estimée en ALBI. : 0,5% de la biomasse racinaire sèche ou 2,5% de l'extrait sec - Teneur déduite en ALB2 et ALB3 : 2,2% de la biomasse racinaire sèche ou 11% de l'extrait sec 5 - Teneur déduite en ALB totaux (ensemble des isomères) : 2,7% de la biomasse sèche ou 13,5% de l'extrait sec. Exemple 2: Préparation d'un extrait racinaire et d'un extrait de feuilles de Tagetes patula cultivées en aéroponie sans étape de 10 stimulation et caractérisation de la teneur en ALB de ces extraits Les extraits de racines ou de feuilles sont préparés à partir de racines et de feuilles séchées de Tagetes patula, originaire de l'Ile de la Réunion. Le fournisseur est la Société Horticole de Bassin Plat, EARL Bassin Plat 31, Chemin de la Croix Jubile 97410 Saint Pierre, Ile de la Réunion. Les plantes au 15 stade 2 feuilles sont mises en culture en aéroponie avec un milieu de culture 6/10/36 (azote/phosphore/potassium) ayant une électroconductivité de 0,7 mS/cm. Après 2,5 semaines de culture en milieu aéroponique, des racines et des feuilles fraiches sont coupées, puis séchées 48h dans une étuve ventilée à une température comprise entre 40 et 50°C. 20 mg de tissus séchés (feuilles 20 ou racines) sont broyés à sec puis macérées pendant 3 heures sous agitation à température ambiante dans 2 mL d'une solution hydroéthanolique à 70/30 (éthanol/eau - v/v). Ensuite l'extrait est filtré sur un filtre 0,2 dam avant injection en UPLC selon le matériel et les méthodes utilisés pour l'exemple 1. L'extrait racinaire de Tagetes patula selon le chromatogramme présenté en 25 Figure 2 présente les caractéristiques suivantes : - Pas d'ALA identifié - Teneur estimée en ALBI. : 0,07% de la biomasse sèche ou 0,35% de l'extrait sec - Teneur déduite en ALB2 : 0,27% de la biomasse sèche ou 1,35% de 30 l'extrait sec - Teneur déduite en ALB totaux (ensemble des isomères) : 0,34% de la biomasse sèche ou 1,7% de l'extrait sec. La présence d'ALA ou d'ALB n'a pas été identifiée dans les extraits de feuilles de Tagetes patula. 3059236 31 La quantification des ALB se fait grâce à une gamme étalon préparée à partir d'un standard d'ALBI. commercial fourni par Extrasynthèse (Genay, France) solubilisé dans le solvant d'extraction et acidifié au pH=3,5 avec de l'acide phosphorique. Les concentrations de tous les isomères d'ALB sont ainsi 5 exprimées en équivalents d'ALBI. dans chaque extrait. En Figure 2 est présenté un chromatogramme de l'extrait racinaire de Tagetes patula obtenu selon l'exemple 2, le matériel et les méthodes utilisés pour réaliser la chromatographie sont identiques aux matériels et les méthodes de la chromatographie de l'exemple 1.1. 10 Exemple 3 : Caractérisation d'un extrait racinaire de Tagetes erecta vis-à-vis d'un bénéfice cosmétique - Identification de cibles par analyse des modifications d'expression de gènes par qRT-PCR sur cartes TaqMan 15 L'étude consiste à mesurer les effets de l'extrait de Tagetes erecta par qRT- PCR sur cartes TaqMan microfluidiques, d'une part, sur l'expression de 94 gènes impliqués dans la biologie du derme, le remodelage des tissus conjonctifs et le vieillissement (carte « Dermal Benefits » définie par StratiCELL) et, d'autre part, sur l'expression de 94 gènes impliqués dans les 20 fonctions clés de l'épiderme, telles que la fonction barrière en lien direct avec l'hydratation, la réponse antioxydante, ou encore la pigmentation par les mélanocytes (carte « Epidermal Benefits » définie par StratiCELL). Le protocole a consisté à ajouter de l'extrait de Tagetes erecta dans le milieu de culture de fibroblastes humains NHDFs (Normal Human Dermal Fibroblasts) 25 en monocouche et d'épidermes humains mélanisés reconstitués (RHE/MEL/001), et, après 24 h, à analyser les différentes populations d'ARN pour identifier les gènes différentiellement exprimés par qRT-PCR. Une étude préalable de cytotoxicité a permis de définir la concentration de travail de l'extrait de Tagetes erecta pour l'étude d'expression génique. 30 Le TGF-131 (Transforming Growth Factor-beta-1) et la vitamine D3 (113,25- dihydroxyvitamin D3), dont les effets sont documentés dans la littérature, ont été utilisés comme molécules de référence afin de valider les systèmes d'essai et la méthode d'analyse. 3059236 32 3.1. Matériels et méthodes Extrait Les plantes Tagetes erecta sont cultivées en aéroponie selon l'exemple 1. Les 5 racines fraiches sont coupées puis macérées à température ambiante pendant 24 heures dans une solution hydroéthanolique à 70/30 (éthanol/eau - v/v). Ensuite l'extrait est filtré. Le solvant est éliminé en utilisant un évaporateur rotatif et la poudre séchée au dessiccateur. Une analyse par chromatographie en phase liquide couplée à une spectrographie de masse (Agilent 1200 series) 10 a permis de vérifier la présence d'acide léontopodique B dans l'extrait. Culture Cellulaire La première partie de l'étude a été réalisée sur des fibroblastes de derme humains NHDFs (ATCC, CRL-2522, origine : prépuce) cultivés en monocouche 15 en milieu DMEM (Invitrogen, 31885-049) contenant des antibiotiques (Pénicilline/Streptomycine, Invitrogen, 15140-122) mais ne contenant pas de sérum. Ces cellules ont été maintenues dans une atmosphère humide à 37°C contenant 5% de CO2. La seconde partie de l'étude a été réalisée sur des épidermes reconstitués 20 (StratiCELL®, RHE/MEL/001) contenant ou non des mélanocytes humains primaires NHEMs (Normal Human Epidermal Melanocytes) provenant d'un donneur de phototype foncé (phototype IV à V) (Invitrogen, C2025C, lot n°439684). Les tissus ont été cultivés à l'interface air-liquide durant 14 jours dans un milieu de culture approprié, et une atmosphère humide à 37°C 25 contenant 5% de CO2. Détermination de la gamme de concentrations d'étude de l'extrait de Tagetes erecta par une étude préliminaire de cytotoxicité Afin de déterminer la concentration d'analyse optimale pour l'extrait de 30 Tagetes erecta, une expérience préliminaire a été réalisée sur fibroblastes NHDFs, sur mélanocytes humains NHEMs et sur épidermes reconstitués. Les fibroblastes NHDFs ont effectué 30,1 et 30,7 doublements de population et les mélanocytes NHEMs ont été ensemencés en plaques 24 puits 24 h avant l'application des actifs. 3059236 33 Les épidermes reconstitués (RHE/001 ; lot CB0314/2) ont été transférés dans une plaque 12 puits avant d'être traités avec l'extrait. L'extrait a été dilué dans le milieu de culture, puis ajouté, sans filtration préalable, dans le milieu de culture des fibroblastes humains NHDFs ne 5 contenant pas de sérum, dans le milieu des mélanocytes humains primaires NHEMs, ou dans le milieu de culture des épidermes différenciés. Cette étude a consisté à évaluer la viabilité des cellules et des épidermes au MTS (3-(4,5-dimethythiazol-2-y1)-5-(3-carboxy-methoxypheny1)-2-(4- sulfophenyI)-2H-tetrazolium) (Promega,G3581), 24 heures après l'ajout 10 d'extrait de Tagetes erecta et ce, à 5 concentrations et 3 répétions (n=3) pour les fibroblastes NHDFs et les mélanocytes NHEMs, et à 2 concentrations et 3 répétitions (n=3) pour les épidermes reconstitués. Les 2 concentrations testées pour les épidermes reconstitués ont été choisies sur la base des résultats de cytotoxicité obtenus pour les mélanocytes NHEMs. 15 Le SDS (sodium dodécyl sulfate) est toxique pour les cellules et a été utilisé en tant que contrôle positif afin de valider l'expérience. Au terme de cette expérience, une concentration non cytotoxique a été définie afin de procéder à la mesure des modifications d'expression des gènes cibles. Les concentrations suivantes, en dag d'extrait sec/ml, ont été testées : 20 Fibroblastes NHDFs et les mélanocytes NHEMs: 0,16 pg/ml, 0,8 pg/ml, 4 pg/ml, 20 pg/ml, 100pg/m1; - Epidermes reconstitués : 4 pg/ml et 20 pg/ml. Analyse des modifications d'expression génique 25 L'extrait a été ajouté, à une concentration choisie, dans le milieu de culture des fibroblastes humains NHDFs (ayant effectué 30,5 et 30,8 doublements de population) en absence de sérum ou dans le milieu de culture des épidermes différenciés mélanisés (RHE/MEL/001, lots CB0314/3 et CB0314/4), sans filtration préalable à la mise en contact des cellules/épidermes. 30 Des molécules de référence ont été étudiées en parallèle, à savoir, le TGF-131 pour les fibroblastes NHDFs et la vitamine D3 (VD3) pour les épidermes reconstitués. Extraction de l'ARN total 3059236 34 L'extraction des ARNs totaux a été réalisée à l'aide du kit RNeasy Mini (Qiagen, 74106). 24 h après l'ajout de l'extrait, les cellules ont été rincées au PBS et lysées dans le tampon de lyse ad hoc, alors que les épidermes ont été directement plongés dans ce tampon (des triples de culture ont été réalisés 5 pour chaque condition). L'extraction et la purification des ARNs ont été réalisées selon les instructions du fournisseur. Les ARNs totaux ont ensuite été conservés à -80°C. Qualification des ARNs par spectrophotométrie et électrophorèse 10 capillaire La concentration des ARNs totaux a été déterminée par mesure spectrophotométrique. La qualité et l'intégrité des ARNs ont ensuite été vérifiées par électrophorèse capillaire (plate-forme Agilent Bioanalyzer 2100 Agilent RNA 6000Nano Kit, 5067-1511). 15 Quantification des ARN par mesure spectrophotométrique : un aliquot de chaque ARN a été dilué dans de l'eau RNase-free et sa concentration a été déterminée à l'aide d'un spectrophotomètre Ultrospec 1100 Pro (Amersham). Intégrité des ARN par électrophorèse capillaire sur Bioanalyseur Agilent : l'intégrité de l'ARN total a été évaluée par la visualisation des pics 20 d'électrophorèse correspondant aux ARNs ribosomiaux. Pour les ARN totaux d'eucaryotes supérieurs, la taille des bandes ribosomales doit être de 1,9 kb pour le 18S-ARN et de 4,7 kb pour le 28S-ARN. L'intensité de la bande correspondant au 28S-ARN doit être supérieure à l'intensité de la bande correspondant au 18S-ARN. Des petites bandes diffuses représentant des 25 ARNs de poids moléculaire plus faible (ARNt et l'ARN ribosomique 5S) peuvent être présentes. Lorsque l'ARN est dégradé, on observe un étalement des bandes de l'ARN ribosomal ainsi qu'un bruit de fond des ARN de poids moléculaire plus élevé. 30 Synthèse des ADNs complémentaires ou ADNc Les transcriptions inverses (RT) ont été réalisées à l'aide du kit « High Capacity RNA-to-cDNA Kit » (Applied Biosystems, 4387406). Pour la synthèse des ADNc, un mix a été préparé selon les instructions du fournisseur, avec 2 dag d'ARN total, le tampon ad hoc fourni dans le kit et l'enzyme transcriptase 3059236 inverse. Cette réaction a été réalisée à 37°C pendant 1 heure, puis 5 minutes à 95°C et finalement les échantillons d'ADNc ont mis sur glace et stockés à 20°C. 5 Validation des systèmes d'essai - qPCR en temps réel à l'aide de sondes fluorescentes de type TaqMan La méthode de qPCR en temps réel a été utilisée pour quantifier l'expression de différentes cibles spécifiques dans les populations d'ARNs issues des fibroblastes NHDF traités par le TGF-81 (20ng/m1) ainsi que des épidermes 10 mélanisés traités par la vitamine D3 (100nM) et par le solvant éthanol (EtOH 0,1%), utilisé pour solubiliser la VD3. Les séquences cibles des gènes d'intérêt ont été amplifiées par PCR en utilisant les « TaqMan Gene Expression Assays » (Applied Biosystems). Ces kits comprennent une sonde TaqMan et 2 amorces spécifiques, qui ont été 15 pré-mélangées à une concentration de 18 pM pour chaque amorce et de 5 pM pour la sonde. Ce mélange est concentré 20 fois. Les sondes TaqMan ont été greffées avec un fluorophore (FAM) à l'extrémité 5' de la séquence et avec un «quencher» de fluorescence en 3'. Les PCRs ont été réalisées à l'aide du système 7900HT Fast Real-Time PCR 20 (Applied Biosystems). Les réactions ont été réalisées dans un volume de 20 pL. Le mélange réactionnel contient 10 pL de TaqMan Fast Universal Master Mix (Applied Biosystems), 1 pL de TaqMan Gene Expression Assay et 5 pL d'eau RNase-free. Dans chaque puits d'une microplaque 96 puits, 16 pL du mélange et 4 pL 25 d'ADNc (4 ng) ont été ajoutés. A des fins de normalisation, des mélanges réactionnels avec des sondes et amorces correspondant à la glycéraldehyde-3- phosphate déshydrogénase (GAPDH) pour les fibroblastes et à la 82- microglobuline (B2M) pour les épidermes mélanisés ont également été préparés avec les mêmes échantillons d'ADNc. Un contrôle sans ADNc a servi 30 de contrôle négatif d'amplification. Les cycles thermiques ont été programmés avec une étape d'incubation à 50°C pendant 2 min, suivie d'une première étape de dénaturation à 95°C pendant 10 min. Le protocole d'amplification PCR s'est poursuivi avec 40 cycles de 15 sec à 95°C suivi d'une min à 60°C. 3059236 36 Les niveaux d'expression ont été quantifiés selon la méthode de calcul de l'expression relative par rapport à un gène de ménage (2-Act), dérivée du calcul des AACt (Pfaffl, A new mathematical mode/ for relative quantification in realtime RT-PCR, Nucleic Acids Res, 29 (9), 2001, 2002-2007; Livak and 5 Schmittgen, Analysis of relative gene expression data using Real-Time Quantitative PCR and the 2-Act method, Methods, 25 (4), 2001, 402-408) décrite ci-après : La quantification relative des transcrits a été réalisée par l'utilisation d'une méthode de calcul qui consiste à comparer la moyenne des valeurs de contrôle 10 (Ct) obtenues pour les conditions TGF-131 (20ng/m1) et VD3 (100nM) avec les conditions témoins respectives (CTL non traité et CTL Ethanol 0,1%). Ces Ct représentent le seuil de détection à partir duquel la quantité d'ADN est telle que le signal se distingue significativement du bruit de fond. Cette valeur moyenne de Ct a été normalisée par rapport à un gène de ménage, à savoir la 15 Glycéraldehyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH) pour les fibroblastes NHDF et la 132-microglobuline (B2M) pour les épidermes mélanisés reconstitués. Ainsi, la différence de niveau d'expression (RQ) a été obtenue par utilisation de la formule : RQ=2 (ACt condition traitée - ACt condition de référence) 20 où ACt = Ct (gène cible) - Ct (gène de ménage) au sein d'un même échantillon d'ADNc. Préparation des cartes microfluidiques Taqman, réalisation de la PCR quantitative et analyse des Ct 25 Les mélanges réactionnels pour PCR sur cartes microfluidiques TaqMan, produites à façon par Applied Biosystems, ont été préparés en suivant les instructions détaillées du guide Applied Biosystems Micro Fluidic Card Getting Started Guide. En résumé, 100 ng d'ADNc ont été ajoutés à un mélange spécifique pour PCR (Taqman Universal PCR Master Mix, 4364338, Applied 30 Biosystems) avant d'être injectés dans la carte et dispersés par capillarité. Après avoir centrifugé la carte, celle-ci a été scellée avant la réalisation de la PCR quantitative et l'analyse avec le système 7900HT d'Applied Biosystems, à l'aide du software ABI PRISM® 7900 Sequence Detection System, SDS2.4. 3059236 37 Les cycles seuil (Ct) ont été obtenus pour tous les gènes représentés sur les cartes et exprimés par les fibroblastes NHDF et par épidermes reconstruits mélanisés. Les résultats ont été exportés à partir du dispositif de qPCR en temps réel en 5 utilisant le logiciel SDS RQ Manager (v1.2.1, Applied Biosystems) et l'analyse des modifications d'expression a été réalisée à l'aide du logiciel Data Assist (V3.0., Applied Biosystems) conçu pour réaliser la quantification relative de l'expression génique en utilisant la méthode de comparaison des Ct (3.3,Ct) (Pfaffl, 2001 et Livak and Shmittgen, 2001) décrite dans le paragraphe ci- 10 dessus et une combinaison d'analyses statistiques. Comme précisé plus haut, la méthode de calcul des 3.3,Ct consiste en la comparaison des valeurs de Ct obtenues pour les conditions traitées par l'extrait avec la condition de référence (contrôle DMSO). Ces valeurs de Ct ont elles-mêmes été normalisées par rapport au gène de ménage GAPDH (glycéraldéhyde-3- 15 phosphate déshydrogénase) pour les fibroblastes NHDF et B2M ([3-2 microglobulin) pour les épidermes reconstruits mélanisés. La valeur de Ct maximale admissible utilisée comme seuil de détection a été fixée à 36 cycles. 3.2. Résultats 20 3.2.1. Détermination de la concentration d'analyse de l'extrait par une étude de cytotoxicité L'étude préalable de cytotoxicité sur les fibroblastes NHDF, sur les mélanocytes humains NHEM et sur les épidermes reconstitués a permis de 25 définir une concentration de travail (préparé dans du DMSO) pour l'étude d'expression génique. Le solvant présent dans l'extrait a été testé en parallèle. Le SDS à 0,08% (pour NHDF) et à 0,05% (pour NHEM) a été utilisé comme contrôle positif de cytotoxicité afin de valider l'expérience. Sur la base de ces résultats (données non montrées), les concentrations suivantes ont été 30 choisies pour la suite de l'étude : 100 pg d'extrait sec /ml (pour les fibroblastes NHDF) et 20 pg d'extrait sec/ml (pour les épidermes mélanisés reconstitués). 3.2.2. Qualification des ARNs par électrophorèse capillaire 3059236 38 Les différentes populations d'ARN démontrent bien la présence de pics étroits, correspondant aux ARNs ribosomiaux 18S et 28S, et un rapport équilibré entre les deux pics. L'absence de pics intermédiaires et étalés, caractéristiques de produits de dégradation des ARNs témoigne de l'intégrité des différentes 5 populations (données non montrées). La qualité et l'intégrité des ARNs extraits étant démontrée, ceux-ci ont dès lors été utilisés pour la poursuite du protocole et engagés dans les réactions de synthèse des ADNs complémentaires. 10 3.2.3. Effets de l'extrait sur 94 gènes cibles au sein des fibroblastes NHDF L'extrait a été ajouté dans le milieu de culture des fibroblastes NHDF (n=3). Des contrôles traités seulement par le solvant DMSO à 1% (véhicule de l'extrait) ont également été analysés. En parallèle, le TGF-131 (20 ng/ml) a été 15 étudié en tant que contrôle de validation. Après 24 heures de culture des fibroblastes NHDF, les populations d'ARNs totaux ont été extraites, leur intégrité a été analysée par électrophorèse capillaire, et les différences d'expression géniques ont été analysées par qRT-PCR à l'aide de cartes TaqMan 96-puits, ciblant les fonctions clés du derme. 20 Les résultats sont présentés de manière récapitulative sous la forme d'un tableau (Tableau 2) indiquant des gènes représentatifs d'un effet cosmétique bénéfique, variant significativement, 24 heures après l'application de l'extrait sur des fibroblastes de derme humains NHDF. Symbole- n° essai Nom du gène Extrait RQ p-value SOD2-Hs00167309 m1 Superoxide dismutase 2, mitochondrial 13,58 0 CCL5-Hs00982282 m1 Chemokine (C-C motif) ligand 5 2,24 0,0368 HMOX1-Hs01110250 m1 Hème oxygènase (decycling) 1 2,05 0,0197 DCN-Hs00754870 s1 Décorine (PGS2) 1,77 0,0396 SOX2-Hs01053049 s1 Transcription facteur SOX-2 1,71 0,0361 HPSE-Hs00935036 m1 Héparanase 1,66 0,0017 TXNRD1-Hs00917067 m1 Thiorédoxine réductase 1 1,56 0,0199 NQ01-Hs02512143 s1 NAD(H)déshydrogénase, quinone 1 1,51 0,0025 MT2A-Hs02379661 g1 Métallothionéine 2A 1,51 0,0208 3059236 39 COL3A1-Hs00943809 m1 Collagène 3 alpha 1 subunit (COL3A1) 1,43 0,002 CYR61-Hs00998500 g1 Protéine CYR61 1,43 0,0293 COL16A1-Hs00156876 m1 Collagène sous-unité 16 alpha 1 1,42 0,034 (COL16A1) NGF-Hs00171458 m1 « Beta-nerve growth factor » 1,32 0,0036 FBLN5-Hs00197064 m1 Fibuline-5 1,29 0,0062 MYC-Hs00153408 m1 Myc proto-oncogène protéine 1,26 0,039 G6PD-Hs00166169 m1 Glucose-6-phosphate déshydrogénase 1,18 0,0411 NTRK2-Hs00178811 m1 BDNF/NT-3 Facteurs de croissance 0,56 0,0078 récepteur MKI67-Hs01032443 m1 Antigène Ki-67 0,48 0,0111 NGFR-Hs00609977 m1 Membre 16 de la superfamille des 0,06 0,0006 récepteurs au facteur de nécrose tumorale (p75NTR) Tableau 2 : Liste des gènes qui varient de manière significative 24 heures après l'application de l'extrait racinaire de Tagetes erecta (à 100 dag ES/mi) sur des fibroblastes de derme humains NHDFs. Le symbole des gènes et le numéro d'essai, le nom des gènes, l'expression relative (RQ) par rapport au 5 véhicule DMSO à 1% (RQ > 1 : augmentation - RQ 1 : augmentation - RQ REVENDICATIONS1. Extrait de plantes du genre Tagetes caractérisé en ce qu'il est enrichi en acide léontopodique B et qu'il comprend au moins 2,5%, en particulier au moins 5,5%, plus particulièrement au moins 8% en poids d'acide léontopodique B, exprimé par rapport au poids total de l'extrait sec. 2. Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite plante du genre Tagetes est choisie dans le groupe constitué par Tagetes erecta et Tagetes patula. 3. Procédé de préparation d'un extrait de plantes du genre Tagetes selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, comprenant : a) une étape de culture de Tagetes en conditions hors-sol, et particulièrement en aéroponie, b) optionnellement une étape de stimulation des racines des plantes, c) une étape d'extraction solide/liquide des racines optionnellement stimulées lors de l'étape b), et d) la récupération de l'extrait obtenu lors de l'étape c). 4. Procédé selon la revendication 3, dans lequel l'étape c) comprend une première phase de mise en présence des racines encore liées à la plante avec un solvant, en particulier pendant une durée comprise entre 15 minutes à 30 minutes, suivie d'une seconde phase comprenant la section desdites racines et la macération des racines sectionnées dans un solvant, ledit solvant, identique ou différent dans la première et la deuxième phase, étant choisi parmi les alcools, les glycols et les solvants eutectiques, et étant utilisé pur ou sous la forme d'une solution aqueuse d'alcool, de glycol ou de solvant eutectique. 5. Composition cosmétique comprenant, en tant qu'agent actif, au moins un extrait selon la revendication 1 ou 2, ou un extrait obtenu par un procédé selon la revendication 3 ou 4, et au moins un excipient. 3059236 52 6. Extrait selon la revendication 1 ou 2, extrait obtenu par un procédé selon la revendication 3 ou 4, ou composition cosmétique selon la revendication 5, pour prévenir le vieillissement cutané, avoir un effet apaisant suite à la sensation d'irritation et stimuler la fonction barrière 5 de l'épiderme ainsi que l'hydratation de la peau. 7. Composition pharmaceutique ou composition nutraceutique comprenant, en tant qu'agent actif, au moins un extrait selon la revendication 1 ou 2, ou un extrait obtenu par un procédé selon la 10 revendication 3 ou 4, et au moins un excipient pharmaceutiquement ou nutraceutiquement acceptable. 8. Extrait selon la revendication 1 ou 2, extrait obtenu par un procédé selon la revendication 3 ou 4, composition pharmaceutique ou 15 composition nutraceutique selon la revendication 7, pour son utilisation en tant que médicament pour prévenir ou traiter une maladie neurodégénérative, en particulier la maladie d'Alzheimer. 9. Extrait selon la revendication 1 ou 2, extrait obtenu par un procédé 20 selon la revendication 3 ou 4, composition pharmaceutique ou composition nutraceutique selon la revendication 7, pour son utilisation en tant que médicament pour atténuer ou traiter l'inflammation de la peau et/ou pour favoriser la cicatrisation cutanée, en particulier dans le cas de la fermeture d'une plaie. 25 10. Utilisation d'un extrait selon la revendication 1 ou 2 ou d'un extrait obtenu par un procédé selon la revendication 3 ou 4 pour la préparation d'une composition cosmétique visant à prévenir ou retarder l'apparition des effets du vieillissement de la peau, avoir un effet apaisant suite à la 30 sensation d'irritation et/ou stimuler la fonction barrière de l'épiderme ainsi que l'hydratation de la peau.