Brevet FR3052636A1 — publié le 20171222

Utilisation de mutants du gène ASG2 pour accroître la quantité de lipides accumulés dans les graines de végétaux La présente invention concerne des méthodes d'augmentation de la quantité d'acides gras accumulés dans les graines d'une plante oléagineuse. La croissance très rapide de la demande mondiale en oléagineux et en produits dérivés repose sur le dynamisme de plusieurs demandes complémentaires : demande croissante en huiles végétales destinées à la consommation humaine ; besoins toujours plus importants en tourteaux pour les activités d'élevage, débouchés en expansion des huiles industrielles dont celles qui sont utilisées comme biocarburants dans les transports. Ainsi, d'après une étude commanditée par le groupe français Sofiprotéol et réalisée par la société BIPE, la consommation mondiale d'huiles végétales progressera de 39% d'ici 2030 et atteindra 172 millions de tonnes. Il existe donc un besoin important d'augmentation de la production d'acides gras végétaux. Un moyen d'augmenter cette production est d'augmenter la production d'acides gras par la plante oléagineuse. Pour ce faire, des plantes ont été sélectionnées sur la base du rendement et du contenu en huile de leur graine et des gènes spécifiques codant des enzymes ou autres protéines impliquées dans le flux de carbone en huile dans la graine ont été surexprimés ou réprimés par génie génétique. Il existe toutefois toujours un besoin important de nouvelles solutions pour augmenter la production d'acides gras par les plantes oléagineuses. La présente invention résulte de la découverte surprenante par les inventeurs que, lorsque le gène asg2 d'Arabidopsis thaliana comprenait une mutation "perte de fonction" de telle sorte que la protéine ASG2 n'était plus ou très peu exprimée, les graines des plants mutants accumulaient une quantité d'acides gras équivalente aux plants sauvages en conditions d'éclairage important mais une quantité d'acides gras supérieure de 43% aux plants sauvages en conditions d'éclairage restreint. De plus, cette accumulation d'acides gras est associée à une augmentation d'acides gras monoinsaturés dans la graine des mutants et une diminution de certains acides gras polyinsaturés. La présente invention a donc pour objet l'utilisation d'un acide nucléique comprenant une séquence nucléotidique mutée du gène asg2 (ALTERED SEED GERMINATION 2) pour l'obtention ou la sélection de plantes oléagineuses présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines, ladite séquence nucléotidique comprenant au moins une mutation perte de fonction du gène asg2. 3052636 2 Un autre objet de l'invention concerne un procédé d'augmentation de la quantité d'acides gras dans les graines d'une plante oléagineuse comprenant une étape de modification du génome d'une plante oléagineuse de manière à entrainer une perte de fonction du gène asg2 de ladite plante. 5 Un autre objet de l'invention concerne un procédé de sélection de plantes oléagineuses présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines comprenant une étape de modification du génome d'une plante oléagineuse de manière à entrainer une perte de fonction du gène asg2 de ladite plante. La présente invention a également pour objet un procédé de sélection de plantes 10 oléagineuses présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines comprenant une étape d'identification, dans une collection de plantes oléagineuses mutantes générée par mutagenèse chimique ou d'insertion, des plantes viables possédant au moins une mutation perte de fonction dans un gène asg2 de la plante et dont la quantité d'acides gras dans les graines est supérieure à celle de la plante sauvage en conditions 15 d'éclairage restreint. La présente invention concerne également une cellule végétale de plante oléagineuse comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au moins une mutation perte de fonction. L'invention a également pour objet une plante oléagineuse présentant une quantité 20 d'acides gras accrue dans les graines comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au moins une mutation perte de fonction. Un autre objet de l'invention concerne une graine de plante oléagineuse présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au moins une mutation perte de fonction. 25 La présente invention concerne également l'utilisation d'une plante oléagineuse transformée selon l'invention ou d'une graine transformée selon l'invention pour la production de biocarburant, d'huiles et compléments alimentaires, de lubrifiants et fluides hydrauliques, de revêtements et d'encres, de tensioactifs, de solvants et/ou de plastiques. Un autre objet de l'invention concerne un procédé de culture de plantes 30 oléagineuses transformées selon l'invention, comprenant les étapes consistant à planter des graines desdites plantes transformées selon l'invention dans une surface d'un champ approprié pour la culture desdites plantes à une densité plus élevée que la densité de semis conventionnellement utilisée pour la plante oléagineuse sauvage correspondante et/ou avec un écartement entre les rangs plus faible que l'écartement 35 conventionnellement utilisé pour la plante oléagineuse sauvage correspondante, et à récolter les plantes cultivées lorsqu'elles arrivent à la maturité souhaitée. 3052636 3 Description détaillée de l'invention Plantes oléagineuses 5 Par "plante oléagineuse", on entend ici des plantes dont les graines ou les fruits sont riches en matières grasses, et dont on extrait de préférence de l'huile à usage alimentaire, énergétique, cosmétique ou industriel. Dans le contexte de l'invention, les plantes oléagineuses incluent ainsi l'arabette (Arabidopsis thaliana), la cameline (Camelina sativa), le colza (Brassica napus), le cacoyer (Theobroma cacao), le ricin 10 (Ricinus communis), le cotonnier (Gossypium raimondit), le noyer (Juglans nigra), le soja (Glycine max), l'arachide (Arachis duranensis), le lin (Linum usitatissimum), le sésame (Sesamum indicum), le tournesol (Helianthus annuus) et le palmier à huile (Elaeis guineensis). De préférence, la plante oléagineuse est une plante de la famille des 15 Brassicacées. Comme il est bien connu de l'homme du métier, les Brassicacées (anciennement Crucifères) sont essentiellement des plantes herbacées surtout présentes dans l'hémisphère nord à l'état sauvage ou cultivé, entre autres pour la production d'huile (à usage alimentaire et industriel). De manière davantage préférée, la plante oléagineuse est une plante du genre Arabidopsis, Camelina ou Brassica. De manière encore préférée, 20 la plante oléagineuse est choisie parmi Arabidopsis thaliana, Camelina sativa et Brassica napus. Dans un mode de réalisation particulier, la plante oléagineuse n'est pas Arabidopsis thaliana. Dans un mode de réalisation plus particulier, la plante oléagineuse n'est pas le mutant Salk 040151 ou le mutant Salk 113565 du National Arabidopsis Stock Centre (Université de Nottingham, Royaume-Uni). 25 ASG2 Par "gène", on entend ici les séquences codantes d'un gène contenant les séquences d'exons (ADNc), la phase ouverte de lecture (ORF) comprenant les séquences des introns, ou la combinaison de la phase ouverte de lecture et des 30 séquences promotrices, 5'-UTR, 3'-UTR et terminatrices adjacentes, nécessaires à l'initiation et la terminaison de la transcription et de la traduction. De préférence, le gène correspond à la phase ouverte de lecture. Par gène "asg21, "ALTERED SEED GERMINATION 2", "At5g10940" ou gène codant "WD and tetratricopeptide repeats protein 1", on entend ici le gène décrit dans 35 Dutilleul et al. (2016) Plant Cell Environ. 39:185-198 codant une protéine DWD farnésylée qui agit comme régulateur négatif de l'acide abscissique chez Arabidopsis. Ce gène code 3052636 4 pour une protéine conservée chez les plantes et présentant la caractéristique unique d'associer des domaines WD40 et des répétitions tétratricopeptide. Dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont montré de manière totalement inattendue que cette protéine agissait en outre dans l'accumulation des acides gras dans les graines. 5 Par protéine "ASG2", "ALTERED SEED GERMINATION 2" ou "WD and tetratricopeptide repeats protein 1", on entend ici la protéine codée par le gène asg2. Le gène asg2 d'Arabidopsis thaliana comprend typiquement 19 exons et 18 introns. Il est typiquement de séquence SEQ ID NO: 1. La séquence codante du gène asg2 d'Arabidopsis thaliana est constituée typiquement de 2274 nucléotides et est de 10 préférence de séquence SEQ ID NO: 2. La protéine ASG2 d'Arabidopsis thaliana est constituée typiquement de 757 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 3. Dans un mode de réalisation particulier, le gène asg2 est le gène asg2 d'Arabidopsis thaliana. 15 Les inventeurs ont identifié les séquences des homologues du gène asg2 d'Arabidopsis thaliana et des protéines correspondantes dans un certain nombre de plantes, en particulier de plantes oléagineuses. Ces protéines ont typiquement au moins 63% d'identité avec la protéine ASG2 d'Arabidopsis thaliana. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, le gène asg2 sauvage est un acide 20 nucléique codant pour une protéine ASG2 de séquence SEQ ID NO: 3 ou de séquence au moins 63% identique, de préférence au moins 64% identique, de préférence au moins 65% identique, au moins 66% identique, au moins 67% identique, au moins 68% identique, au moins 69% identique, au moins 70% identique, au moins 71% identique, au moins 72% identique, au moins 73% identique, au moins 74% identique, au moins 75% 25 identique, au moins 76% identique, au moins 77% identique, au moins 78% identique, au moins 79% identique, au moins 80% identique, au moins 81% identique, au moins 82% identique, au moins 83% identique, au moins 84% identique, au moins 85% identique, au moins 86% identique, au moins 87% identique, au moins 88% identique, au moins 89% identique, au moins 90% identique, au moins 91% identique, au moins 92% identique, au 30 moins 93% identique ou au moins 94% identique à la séquence SEQ ID NO: 3. Dans le contexte de la présente invention, le "pourcentage d'identité" est calculé en utilisant un alignement global (i.e. les deux séquences sont comparées sur leur séquence entière). Des méthodes pour comparer l'identité de deux séquences ou plus sont bien connues de l'homme du métier. Le programme "needle", qui utilise l'algorithme 35 d'alignement global Needleman-Wunsch (Needleman et Wunsch, 1970 J. Mol. Biol. 48:443-453) pour trouver l'alignement optimal (incluant les trous) entre deux séquences 3052636 5 en considérant leur séquence entière peut par exemple être utilisé. Le programme needle est par exemple disponible sur le site internet ebi.ac.uk. Le pourcentage d'identité selon l'invention est de préférence calculé, quand on se réfère aux séquences d'acides aminés, en utilisant le programme needle (global) EMBOSS avec un paramètre "Gap Open" égal à 5 10.0, un paramètre "Gap Extend" égal à 0.5, et une matrice BLOSUM62, ou, quand on se réfère aux séquences d'acides nucléiques, en utilisant le programme needle (global) EMBOSS avec un paramètre "Gap Open" égal à 10.0, un paramètre "Gap Extend" égal à 0.5, et une matrice DNAFULL. Les inventeurs ont plus particulièrement identifié les séquences des homologues 10 du gène asg2 d' Arabidopsis thaliana chez Camelina sativa, Brassica napus, Theobroma cacao, Ricinus communis, Gossypium raimondii, Juglans nigra, Glycine max, Arachis duranensis, Linum usitatissimum, Sesamum indicum, Helianthus annuus et Elaeis guineensis. La séquence codante du gène asg2 de Camelina sativa est constituée 15 typiquement de 2265 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 4. La protéine ASG2 de Camelina sativa est constituée typiquement de 754 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 5. Elle présente typiquement 94% d'identité et/ou 97% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 de Brassica napus est constituée typiquement 20 de 2262 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 6. La protéine ASG2 de Brassica napus est constituée typiquement de 753 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 7. Elle présente typiquement 90% d'identité et/ou 95% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 de Theobroma cacao est constituée 25 typiquement de 2280 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 8. La protéine ASG2 de Theobroma cacao est constituée typiquement de 759 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 9. Elle présente typiquement 73% d'identité et/ou 83% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 de Ricinus communis est constituée 30 typiquement de 2286 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 10. La protéine ASG2 de Ricinus communis est constituée typiquement de 761 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 11. Elle présente typiquement 71% d'identité et/ou 82% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 de Gossypium raimondii est constituée 35 typiquement de 2277 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 12. La protéine ASG2 de Gossypium raimondii est constituée typiquement de 758 acides aminés 3052636 6 et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 13. Elle présente typiquement 70% d'identité et/ou 81% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 de Juglans nigra est constituée typiquement de 2280 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 14. La protéine ASG2 5 de Juglans nigra est constituée typiquement de 759 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 15. Elle présente typiquement 70% d'identité et/ou 80% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 de Glycine max est constituée typiquement de 2289 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 16. La protéine ASG2 de 10 Glycine max est constituée typiquement de 762 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 17. Elle présente typiquement 67% d'identité et/ou 80% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 d'Arachis duranensis est constituée typiquement de 2301 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 18. La 15 protéine ASG2 d'Arachis duranensis est constituée typiquement de 766 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 19. Elle présente typiquement 65% d'identité et/ou 77% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 de Linum usitatissimum est constituée typiquement de 2295 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 20. La 20 protéine ASG2 de Linum usitatissimum est constituée typiquement de 764 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 21. Elle présente typiquement 65% d'identité et/ou 79% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 de Sesamum indicum est constituée typiquement de 2280 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 22. La 25 protéine ASG2 de Sesamum indicum est constituée typiquement de 759 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 23. Elle présente typiquement 66% d'identité et/ou 79% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 de Helianthus annuus est constituée typiquement de 2265 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 24. La 30 protéine ASG2 de Helianthus annuus est constituée typiquement de 754 acides aminés et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 25. Elle présente typiquement 63% d'identité et/ou 78% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. La séquence codante du gène asg2 d'Elaeis guineensis est constituée typiquement de 2283 nucléotides et est de préférence de séquence SEQ ID NO: 26. La 35 protéine ASG2 d'Elaeis guineensis est constituée typiquement de 760 acides aminés et 3052636 7 est de préférence de séquence SEQ ID NO: 27. Elle présente typiquement 65% d'identité et/ou 79% d'homologie avec la séquence SEQ ID NO: 3. Dans un mode de réalisation particulier, le gène asg2 est le gène asg2 d'Arabidopsis thaliana, Camelina sativa, Brassica napus, Theobroma cacao, Ricinus 5 communis, Gossypium raimondii, Juglans nigra, Glycine max, Arachis duranensis, Linum usitatissimum, Sesamum indicum, Helianthus annuus ou Elaeis guineensis. Dans un mode de réalisation particulier, le gène asg2 est le gène asg2 d'Arabidopsis thaliana, Camelina sativa ou Brassica napus. Dans un mode de réalisation particulier, le gène asg2 sauvage est un acide 10 nucléique codant pour une protéine ASG2 de séquence SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25 ou 27. Dans un mode de réalisation particulier, le gène asg2 sauvage est un acide nucléique codant pour une protéine ASG2 de séquence SEQ ID NO: 3, 5, 7 ou 9 Comme il est bien connu de l'homme du métier, Arabidopsis thaliana est un 15 organisme modèle des végétaux, en particulier des plantes oléagineuses, plus particulièrement des Brassicacées. Par conséquent, il est clair pour l'homme du métier que les résultats observés par les inventeurs sur Arabidopsis thaliana peuvent facilement être extrapolés aux autres plantes oléagineuses, plus particulièrement aux autres Brassicacées. 20 Par "séquence mutée du gène asg2', on entend ici une séquence du gène asg2 qui diffère de la séquence sauvage correspondante du gène asg2 par au moins une mutation. Dans le cadre de l'invention, cette mutation du gène asg2 est une mutation perte de fonction. 25 Par "mutation perte de fonction", on entend ici une mutation entrainant une non- expression de la protéine codée par le gène ou une expression d'une protéine non-fonctionnelle par le gène. De préférence, la mutation perte de fonction du gène asg2 entraîne une non-expression de la protéine ASG2. 30 La mutation peut être une mutation ponctuelle (insertion, substitution non- conservative ou délétion) ou insertion. De préférence, la séquence du gène asg2 diffère de la séquence sauvage correspondante par une seule mutation perte de fonction, ladite une seule mutation perte de fonction pouvant être par exemple une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs, une insertion ou délétion entrainant un décalage du cadre de 35 lecture ou une substitution d'une ou plusieurs nucléotides d'un codon créant un codon- stop en amont du codon-stop du gène sauvage. De préférence, la séquence du gène 3052636 8 asg2 diffère de la séquence sauvage correspondante par une seule mutation perte de fonction, ladite une seule mutation perte de fonction étant une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs. La mutation du gène asg2 peut être localisée à n'importe quel emplacement dans 5 le gène dans la mesure où sa présence entraine une non-expression de la protéine ASG2 codée par ce gène ou l'expression d'une protéine ASG2 non-fonctionnelle telle qu'une protéine ASG2 tronquée. Dans le cadre d'Arabidopsis thaliana, les inventeurs ont montré qu'une mutation du gène asg2 qui est une insertion d'au moins 4485 nucléotides entre les exons 1 et 2 10 (autrement dit dans l'intron 1) ou dans l'exon 19 du gène asg2 permettait de supprimer l'expression de la protéine ASG2 normalement codée par ce gène, et d'obtenir des plantes accumulant des acides gras dans leurs graines. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, ladite au moins une mutation perte de fonction d'un gène asg2 est une insertion, en particulier une unique insertion, d'au 15 moins 3500 nucléotides, de préférence au moins 4000 nucléotides, 4100, 4200, 4300, 4400 ou 4485 nucléotides, de préférence dans la région du gène asg2 de la plante correspondant à l'intron 1 du gène asg2 d'Arabidopsis thaliana ou dans la région du gène asg2 de la plante correspondant à l'exon 19 du gène asg2 d'Arabidopsis thaliana. 20 Augmentation de la quantité d'acides gras Par "acide gras" on entend ici une catégorie de lipides qui comprend notamment les acides carboxyliques aliphatiques et leurs dérivés (acides gras méthyles, hydroxyles, hydroperoxylés, etc.) et les eicosanoïdes. Les acides gras peuvent être des acides gras saturés ou insaturés, en particulier des acides gras monoinsaturés ou polyinsaturés. Les 25 acides gras peuvent plus particulièrement être des acides gras C16:0, C18:0, C18:1, C18:2, C18:3, C20:0 et/ou C20:1. Les acides gras sont de manière plus préférée des acides gras C18:1, C18:2, C18:3 et/ou C20:1. Les inventeurs ont montré que les mutants d'Arabidopsis thaliana dont le gène asg2 est muté accumulent dans leurs graines une quantité d'acides gras équivalente aux 30 plantes sauvages, soit environ 7 pg/graine, lorsque les plantes sont cultivées en condition d'éclairage important à 300 pmoles.rn-2.s-1 et présentent dans leurs graines une quantité d'acides gras plus élevée que les plantes sauvages, soit environ 6 pg/graine contre 4,2 pg/graine pour les plantes sauvages, lorsque les plantes sont cultivées en condition d'éclairage faible à 25pmoles.rn-2.s-1. 35 Ainsi, la présente invention concerne l'utilisation d'un acide nucléique comprenant ou consistant en une séquence nucléotidique mutée du gène asg2 (ALTERED SEED 3052636 9 GERMINATION 2), tel que défini à la section "ASG2' ci-dessus pour l'obtention de plantes oléagineuses, telles que définies à la section "Plantes oléagineuses" ci-dessus, présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines, en particulier lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage faible, ladite séquence 5 nucléotidique mutée comprenant au moins une mutation perte de fonction, telle que définie à la section "ASG2' ci-dessus, du gène asg2. La présente invention concerne également l'utilisation d'un acide nucléique comprenant ou consistant une séquence nucléotidique mutée du gène asg2 (ALTERED SEED GERMINATION 2), tel que défini à la section "ASG2' ci-dessus pour augmenter la 10 quantité d'acides gras dans les graines d'une plante oléagineuse, telle que définie à la section "Plantes oléagineuses" ci-dessus, en particulier lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage faible, ladite séquence nucléotidique mutée comprenant au moins une mutation perte de fonction, telle que définie à la section "ASG2' ci-dessus, du gène asg2. 15 Par "augmentation de la quantité d'acides gras" ou "quantité d'acides gras accrue", on entend ici une augmentation par rapport à des plants sauvages, présentant un patrimoine génétique identique à l'exception de la mutation du gène asg2. De préférence, la quantité d'acides gras est augmentée d'au moins 30% par rapport aux plantes sauvages, de préférence d'au moins 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 20 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%; 42% ou 43% par rapport aux plantes sauvages, en particulier lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage faible. De manière encore préférée, la quantité d'acides gras est augmentée d'au moins d'au moins 30% par rapport aux plantes sauvages, de préférence d'au moins 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42% ou 43% par rapport aux plantes sauvages, 25 lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage faible et la quantité d'acides gras est équivalente à celle des plantes sauvages lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage normal. Par "quantité d'acides gras", on entend ici la quantité totale d'acides gras dans les graines. Dans certains modes de réalisation, il est donc possible que la quantité de 30 certains acides gras soit diminuée, mais que l'augmentation d'autres acides gras entraine néanmoins une augmentation globale de la quantité d'acides gras. Par "éclairage normal" ou "éclairage optimal", on entend ici un éclairage optimal pour satisfaire les besoins en lumière d'une plante donnée. Par "éclairage faible" ou "éclairage restreint", on entend ici un éclairage inférieur 35 aux besoins en lumière d'une plante donnée. 3052636 10 Comme il est bien connu de l'homme du métier, les besoins en lumière sont variables selon les plantes. Ces besoins sont bien connus de l'homme du métier. Ainsi, dans le cadre de la culture d'Arabidopsis thaliana, on entend par "éclairage normal" ou "éclairage optimal", un éclairage compris de préférence entre 100 et 500 5 pmol.rn-2s-1, de préférence compris entre 150 et 450 pmol.rn-2.s-1, entre 200 et 400 pmol.rn-2.s-1, entre 250 et 350 pmol.rn-2.s-1, de manière préférée entre toutes de 300 pmol.rn-2.s-1. De préférence, cet éclairage est appliqué sur une photopériode de 16 h. Dans le cadre de la culture d'Arabidopsis thaliana, on entend par "éclairage faible" ou "éclairage restreint", un éclairage compris de préférence entre 10 et 501.1mol.rn-2s-1, de 10 préférence compris entre 15 et 451.1mol.rn-2.s-1, entre 16 et 40 pmol.rn-2.s-1, entre 17 et 35 pmol.rn-2.s-1, entre 18 et 30 pmol.rn-2.s-1, entre 19 et 27 pmol.rn-2.s-1, de manière préférée entre toutes de 25 pmol.rn-2.s-1. De préférence, cet éclairage est appliqué sur une photopériode de 16 h. L'unité micromole par mètre carré par seconde (1..tmol.rn-2.s-1) correspond au 15 nombre de photons qui arrivent (ou passent) sur un mètre carré par seconde, une mole équivalant à 6,02 x 1023 (nombre d'Avogadro). Le "Einstein" (E) correspond à une mole par mètre carré par seconde. Par exemple, 400 pmol.rn-2.s-1 correspondent à 4001.1E. Procédé d'augmentation de la quantité d'acides gras et procédé de sélection 20 La présente invention a également pour objet un procédé d'augmentation de la quantité d'acides gras, telle que définie dans la section "Augmentation de la quantité d'acides gras" ci-dessus, dans les graines d'une plante oléagineuse, comprenant une étape de modification du génome d'une plante oléagineuse, telle que définie dans la section "Plantes oléagineuses" ci-dessus, ou d'une partie de plante oléagineuse, de 25 manière à entrainer une perte de fonction du gène asg2 , tel que défini à la section "ASG2' ci-dessus, de ladite plante. La présente invention a également pour objet un procédé de sélection de plantes oléagineuses présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines, telle que définie dans la section "Augmentation de la quantité d'acides gras" ci-dessus, comprenant 30 une étape de modification du génome d'une plante oléagineuse, telle que définie dans la section "Plantes oléagineuses" ci-dessus, ou partie de plante oléagineuse de manière à entrainer une perte de fonction du gène asg2, tel que défini à la section "ASG2' ci-dessus, de ladite plante. Par "partie de plante", on entend ici une cellule végétale ou une graine. 3052636 11 Par "perte de fonction du gène asg2', on entend ici l'inhibition de l'expression de la protéine ASG2 codée par le gène asg2 ou l'expression d'une protéine ASG2 non-fonctionnelle par le gène asg2. Par "inhibition de l'expression de la protéine ASG2", on entend ici une inhibition 5 complète ou partielle, de préférence complète, de l'expression de la protéine ASG2 à partir du gène asg2. Préférentiellement, les procédés selon l'invention comprennent en outre une étape d'identification, parmi les plantes mutantes ainsi obtenues, des plantes mutantes viables et fertiles, et dont la quantité d'acides gras dans les graines est supérieure à celle de la 10 plante sauvage en conditions d'éclairage faible, et est de préférence équivalente à celle des plantes sauvages lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage normal. Cette étape d'identification des plantes mutantes dont la quantité d'acides gras dans les graines est supérieure à celle de la plante sauvage en conditions d'éclairage 15 faible, et est de préférence équivalente à celle des plantes sauvages lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage normal peut être réalisée en utilisant les techniques classiques de dosage des acides gras dans les graines. Ce dosage peut par exemple être réalisé, de préférence après extraction, par les techniques classiques de chromatographie. Typiquement, les acides gras présents dans les graines peuvent être 20 extraits, après broyage des graines, par incubation de préférence pendant 2 h à 80°C, dans du méthanol-HCI 1 N, de préférence avec un standard interne tel que le C17:0. Les esters méthyliques d'acides gras peuvent typiquement être extraits après ajout de NaCI 0.9% et d'hexane, et récupération de la phase aqueuse. Le dosage par chromatographie peut ensuite typiquement être mis en oeuvre par chromatographie en phase gazeuse, par 25 exemple sur une colonne capillaire BPX-70 SGE, à flux constant de gaz vecteur, en appliquant par exemple le programme suivant: 5 min à 160°C, augmentation de la température jusqu'à 185°C à 2°C/min, puis 7 min à 85°C. Les procédés selon l'invention permettent avantageusement, pour une plante donnée, d'obtenir des plantes mutantes dans lesquelles la protéine ASG2 n'est pas 30 exprimée ou est exprimée sous forme non-fonctionnelle et dont la quantité d'acides gras dans les graines est supérieure à celle de la plante sauvage en conditions d'éclairage faible, et est de préférence équivalente à celle des plantes sauvages lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage normal. La modification du génome de la plante est de préférence réalisée de manière à 35 inhiber complètement l'expression de la protéine ASG2. 3052636 12 Dans un mode de réalisation particulier, la modification du génome de la plante est au moins une mutation, en particulier au moins une mutation perte de fonction, en particulier au moins une mutation perte de fonction d'un gène asg2, tel que défini à la section "Asg2' ci-dessus, de la plante. 5 Ladite au moins une mutation peut être une mutation ponctuelle (insertion, substitution non-conservative ou délétion) ou d'insertion. Cette mutation est de préférence une mutation perte de fonction choisie de manière à empêcher l'expression de la protéine ASG2 ou à induire l'expression d'une protéine ASG2 non-fonctionnelle, de manière davantage préférée de manière à empêcher l'expression de la protéine ASG2. 10 De préférence, la modification du génome de la plante est une mutation perte de fonction unique dans le gène asg2, ladite unique mutation perte de fonction pouvant être par exemple une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs, une insertion ou délétion entrainant un décalage du cadre de lecture ou une substitution d'une ou plusieurs nucléotides d'un codon créant un codon-stop en amont du codon-stop du gène sauvage. 15 De préférence, la modification du génome de la plante est une mutation perte de fonction unique dans le gène asg2, ladite unique mutation perte de fonction étant une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs. De façon générale, les techniques de manipulation des plantes mises en oeuvre dans le cadre de la présente invention sont des techniques conventionnelles bien 20 connues de l'homme du métier. En particulier, la au moins une mutation perte de fonction, en particulier la au moins une mutation perte de fonction du gène asg2, peut être réalisée par toute technique conventionnelle bien connue de l'homme du métier. Par exemple, des mutants comprenant la au moins une mutation perte de fonction, en particulier du gène asg2, 25 peuvent être obtenus par insertion d'ADN de transfert (ADN-T) dans le gène, et sélection parmi les mutants défectifs ainsi obtenus, pour lesquelles on observe une non-expression de la protéine ASG2 ou l'expression d'une protéine ASG2 non-fonctionnelle, des mutants présentant une quantité d'acides gras dans les graines supérieure à celle de la plante sauvage en conditions d'éclairage faible, et de préférence équivalente à celle des plantes 30 sauvages lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage normal. Ces mutants peuvent alternativement être obtenus par mutagenèse aléatoire de l'ADN de la plante, en particulier par mutagenèse chimique. La mutagenèse peut être réalisée selon des techniques bien connues de l'homme du métier, telles que celles décrites dans Mac Callum et aL (2000) Plant Physiology 123:439-442. En particulier, la 35 mutagenèse peut être mise en oeuvre en utilisant du méthanesulphonate d'éthyle (EMS). 3052636 13 Les mutants peuvent être sélectionnés après identification des mutants portant une mutation sur le gène asg2, par application de la technique dite de TILLING ("Targeting lnduced Local Lesions in Genome") décrite par exemple dans Mac Callum et al. (2000) Plant Physiology 123:439-442 ou Henikoff et al. (2004) Plant Physiology 5 135:630-636. Le TILLING est une technique de génétique inverse mettant à profit la capacité d'une endonucléase à détecter les mésappariements dans un double brin d'ADN et à réaliser une coupure au niveau des bases non appariées, pour détecter des points de mutation générés par le traitement d'une plante par un agent chimique mutagène. Cette technique est particulièrement adaptée à la mise en oeuvre de procédés de criblage à 10 haut débit permettant la sélection de plantes présentant dans un gène cible une mutation induite par mutagenèse chimique. Dans un mode de réalisation particulier, les procédés selon l'invention comprennent ainsi une étape de sélection des plantes mutées viables possédant au moins une mutation perte de fonction dans ledit gène asg2 de la plante et dont la quantité 15 d'acides gras dans les graines est supérieure à celle de la plante sauvage en conditions d'éclairage restreint et est de préférence équivalente à celle des plantes sauvages lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage normal. Les procédés selon l'invention comprennent de préférence, après l'étape de modification du génome d'une partie de plante, une étape de régénération de la plante à 20 partir de la partie de plante dont le génome a été modifié. La régénération des plantes à partir de parties de plantes, telles que des cellules, peut être mise en oeuvre selon des méthodes bien connues de l'homme du métier, telles que celles décrites dans Herman (2005) "Media and Techniques for Growth, Regeneration and Storage" 2002-2005 Volume 9 de Recent Advances in Plant Tissue 25 Culture. Rapport Agricell. Alternativement, la présente invention concerne un procédé de sélection de plantes oléagineuses présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines comprenant une étape d'identification, dans une collection de plantes oléagineuses mutantes générée par mutagenèse chimique ou d'insertion, des plantes viables 30 possédant au moins une mutation perte de fonction dans un gène asg2 de la plante et dont la quantité d'acides gras dans les graines est supérieure à celle de la plante sauvage en conditions d'éclairage restreint et est de préférence équivalente à celle des plantes sauvages lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage normal. L'expression du gène asg2 peut être vérifiée par toute technique connue de 35 l'homme du métier, par exemple par détection des ARNm correspondants par exemple 3052636 14 par PCR quantitative, ou par détection des protéines ASG2 produites, par exemple par Western Blot au moyen d'anticorps reconnaissant la protéine ASG2. Selon l'invention, les mutants possédant au moins une mutation perte de fonction dans ledit gène asg2 sont de préférence homozygotes. 5 Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la au moins une mutation perte de fonction dans le gène asg2, en particulier lorsque cette mutation est une insertion, est introduite dans un exon ou un intron du gène asg2. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention, la au moins une mutation perte de mutation dans le gène asg2 est une insertion d'au moins 3500 10 nucléotides, de préférence d'au moins 4000 nucléotides, 4100, 4200, 4300, 4400 ou 4485 nucléotides, dans un exon ou un intron du gène asg2, en particulier dans la région du gène asg2 de la plante correspondant à l'intron 1 du gène asg2 d'Arabidopsis thaliana ou dans la région du gène asg2 de la plante correspondant à l'exon 19 du gène asg2 d'Arabidopsis thaliana. 15 Avantageusement, le procédé comprend en outre de préférence une étape supplémentaire de sélection, parmi les plantes dont la quantité d'acides gras dans les graines est supérieure à celle de la plante sauvage en conditions d'éclairage faible, et est de préférence équivalente à celle des plantes sauvages lorsque lesdites plantes sont cultivées en condition d'éclairage normal, des plantes mutantes qui, en plus d'être viables 20 et fertiles, présentent une capacité de croissance permettant leur mise en culture dans des conditions économiquement rentables. Cellule végétale, plante oléagineuse et graine La présente invention a également pour objet une cellule végétale de plante 25 oléagineuse, telle que définie à la section "Plante oléagineuse" ci-dessus comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au moins une mutation perte de fonction, telle que définie à la section "ASG2' ci-dessus. De préférence, ladite au moins une mutation perte de fonction est telle que la protéine ASG2 codée par ce gène n'est pas exprimée par la cellule. 30 La cellule végétale de plante oléagineuse selon l'invention peut provenir d'une plante oléagineuse obtenue ou sélectionnée par les procédés selon l'invention. De préférence, la cellule végétale n'est pas une cellule végétale d'Arabidopsis thaliana. De manière davantage préférée, la cellule végétale n'est pas une cellule végétale du mutant Salk 040151 ou du mutant Salk 113565 du National Arabidopsis 35 Stock Centre (Université de Nottingham, Royaume-Uni). 3052636 15 La présente invention a également pour objet une plante oléagineuse, telle que définie à la section "Plantes oléagineuses" ci-dessus présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines, telle que définie à la section "Augmentation de la quantité d'acides gras" ci-dessus, comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au 5 moins une mutation perte de fonction, telle que définie à la section "ASG2' ci-dessus. De préférence, ladite au moins une mutation perte de fonction est telle que la protéine ASG2 codée par ce gène n'est pas exprimée par la plante. La plante oléagineuse selon l'invention peut être obtenue ou sélectionnée par les procédés selon l'invention. 10 De préférence, la plante oléagineuse n'est pas Arabidopsis thaliana. De manière davantage préférée, la plante oléagineuse n'est pas le mutant Salk_040151 ou le mutant Salk_113565 du National Arabidopsis Stock Centre (Université de Nottingham, Royaume-Uni). La présente invention a également pour objet une graine de plante oléagineuse, 15 telle que définie à la section "Plantes oléagineuses" ci-dessus, présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines, telle que définie à la section "Augmentation de la quantité d'acides gras" ci-dessus, comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au moins une mutation perte de fonction, telle que définie à la section "ASG2' ci-dessus. 20 De préférence, ladite au moins une mutation perte de fonction est telle que la protéine ASG2 codée par ce gène n'est pas exprimée par les cellules de la graine. De préférence, la graine selon l'invention provient d'une plante oléagineuse selon l'invention. De préférence, la graine selon l'invention n'est pas une graine d'Arabidopsis 25 thaliana. De manière davantage préférée, la graine n'est pas une cellule végétale du mutant Salk_040151 ou du mutant Salk_113565 du National Arabidopsis Stock Centre (Université de Nottingham, Royaume-Uni). Applications 30 Les plantes oléagineuses et graines selon l'invention présentant une quantité d'acides gras accrue, elles sont particulièrement utiles pour les applications visant à utiliser ces acides gras. La présente invention a donc également pour objet l'utilisation d'une plante oléagineuse telle que définie à la section "Cellule végétale, plante oléagineuse et graine" 35 ci-dessus ou d'une graine telle que définie à la section "Cellule végétale, plante oléagineuse et graine" ci-dessus pour la production de biocarburant, d'huiles et 3052636 16 compléments alimentaires, de lubrifiants et fluides hydrauliques, de revêtements et d'encres, de tensioactifs, de solvants et/ou de plastiques. Les plantes oléagineuses selon l'invention ont de plus la particularité de présenter une quantité accrue d'acides gras lorsqu'elles sont cultivées en conditions d'éclairage 5 restreint. Comme il est bien connu de l'homme du métier, la densité de semis d'une culture influe sur l'éclairage disponible pour les plantes. Une densité de semis trop important aura tendance à limiter l'éclairage reçu par une plante donnée. Les plantes oléagineuses selon l'invention sont donc particulièrement avantageuses lorsqu'elles sont semées à une densité plus élevée que les densités conventionnellement utilisées. 10 Ainsi la présente invention a également pour objet un procédé de culture de plantes oléagineuses telles que définies à la section "Cellule végétale, plante oléagineuse et graine" , comprenant les étapes consistant à semer des graines desdites plantes dans une surface d'un champ approprié pour la culture desdites plantes à une densité plus élevée que la densité de semis conventionnellement utilisée pour la plante oléagineuse 15 sauvage correspondante et/ou avec un écartement entre les rangs plus faible que l'écartement conventionnellement utilisé pour la plante oléagineuse sauvage correspondante, et à récolter les plantes cultivées lorsqu'elles arrivent à la maturité souhaitée. Les densités de semis conventionnellement utilisées dépendent des plantes 20 oléagineuses considérées et sont bien connues de l'homme du métier. Ainsi, le colza est conventionnellement semé à une densité de 30 à 60 graines/m2, la caméline est conventionnellement semée à une densité de 1000 à 3000 graines/ha, le lin est conventionnellement semé à une densité de 350 à 400 graines/m2, le tournesol est conventionnellement semé à une densité de 60 000 à 70 000 graines/ha et le soja est 25 conventionnellement semé à une densité de 330 000 à 750 000 graines/ha. Les écartements entre les rangs conventionnellement utilisés dépendent des plantes oléagineuses considérées et sont bien connues de l'homme du métier. Ainsi, l'écartement entre les rangs de plants de colza est conventionnellement compris entre 17 et 55 cm, l'écartement entre les rangs de plants de caméline est conventionnellement 30 compris entre 10 et 20 cm, l'écartement entre les rangs des plants de lin est conventionnellement compris entre 50 et 60 cm, l'écartement entre les rangs des plants de tournesol est conventionnellement compris entre 50 et 60 cm et l'écartement entre les rangs des plants de soja est conventionnellement compris entre 18 et 60 cm. 35 La présente invention sera illustrée plus en détail par les figures et exemples ci- dessous. 3052636 17 Description des séquences SEQ ID NO: Description 1 Séquence nucléotidique du gène asg2 sauvage d'Arabidopsis thaliana 2 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage d'Arabidopsis thaliana 3 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage d'Arabidopsis thaliana 4 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage de Camelina sativa 5 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage de Camelina sativa 6 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage de Brassica napus 7 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage de Brassica napus 8 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage de Theobroma cacao 9 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage de Theobroma cacao 10 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage de Ricinus communis 11 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage de Ricinus communis 12 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage de Gossypium raimondii 13 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage de Gossypium raimondii 14 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage de Juglans nigra 15 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage de Juglans nigra 16 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage de Glycine max 17 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage de Glycine max 18 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage d'Arachis duranensis 19 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage d'Arachis duranensis 20 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage de Linum usitatissimum 21 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage de Linum usitatissimum 22 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage de Sesamum indicum 23 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage de Sesamum indicum 24 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage de Helianthus annuus 25 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage de Helianthus annuus 26 Séquence codante nucléotidique du gène asg2 sauvage d'Elaeis guineensis 27 Séquence en acides aminés de la protéine ASG2 sauvage d'Elaeis guineensis Brève description des figures 5 Figure 1: Quantités totales d'acides gras (en pg d'acides gras (FA).graines-1) dans les graines des plants d'Arabidopsis thaliana sauvage (WT) et mutants (asg2-1 et asg2-2) sous éclairage normal (300 umoles.rn-2.s-1) ou faible (25 umoles.rn-2.s-1). Les données représentent la moyenne de 7 mesures. Les astérisques indiquent les différences 10 significatives entre les plantes sauvages et les mutants (*: p REVENDICATIONS1. Procédé d'augmentation de la quantité d'acides gras dans les graines d'une plante oléagineuse comprenant une étape de modification du génome d'une plante oléagineuse ou partie de plante oléagineuse de manière à entrainer une perte de fonction du gène asg2 de ladite plante, ladite modification du génome étant une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs dans le gène asg2, une insertion ou délétion dans le gène asg2 entrainant un décalage du cadre de lecture ou une substitution d'un ou plusieurs nucléotides d'un codon du gène asg2 créant un codon-stop en amont du codon-stop du gène sauvage, et ladite étape de modification du génome étant mise en oeuvre par insertion d'ADN de transfert dans le gène, par mutagenèse aléatoire ou par application de la technique dite de TILLING. 2. Procédé de sélection de plantes oléagineuses présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines comprenant une étape de modification du génome d'une plante oléagineuse ou partie de plante oléagineuse de manière à entrainer une perte de fonction du gène asg2 de ladite plante, ladite modification du génome étant une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs dans le gène asg2, une insertion ou délétion dans le gène asg2 entrainant un décalage du cadre de lecture ou une substitution d'un ou plusieurs nucléotides d'un codon du gène asg2 créant un codon-stop en amont du codon-stop du gène sauvage, et ladite étape de modification du génome étant mise en oeuvre par insertion d'ADN de transfert dans le gène, par mutagenèse aléatoire ou par application de la technique dite de TILLING. 3. Procédé de sélection de plantes oléagineuses présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines comprenant une étape d'identification, dans une collection de plantes oléagineuses mutantes générée par mutagenèse chimique ou d'insertion, des plantes viables possédant au moins une mutation perte de fonction dans un gène asg2 de la plante et dont la quantité d'acides gras dans les graines est supérieure à celle de la plante sauvage en conditions d'éclairage restreint, ladite mutation perte de fonction étant une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs dans le gène asg2, une insertion ou délétion dans le gène asg2 entrainant un décalage du cadre de lecture ou une substitution d'un ou plusieurs nucléotides d'un codon du gène asg2 créant un codon-stop en amont du codon-stop du gène sauvage. 3052636 23 4. Cellule végétale de plante oléagineuse comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au moins une mutation perte de fonction, ladite mutation perte de fonction étant une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs dans le gène asg2, une insertion ou délétion dans le gène asg2 entrainant un décalage du cadre de lecture ou une substitution d'un ou plusieurs nucléotides d'un codon du gène asg2 créant un codon-stop en amont du codon-stop du gène sauvage; et ladite cellule végétale provenant d'une plante oléagineuse obtenue par le procédé selon la revendication 1 ou sélectionnée par le procédé selon la revendication 2 ou 3. 10 5. Graine de plante oléagineuse présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au moins une mutation perte de fonction, ladite mutation perte de fonction étant une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs 15 dans le gène asg2, une insertion ou délétion dans le gène asg2 entrainant un décalage du cadre de lecture ou une substitution d'un ou plusieurs nucléotides d'un codon du gène asg2 créant un codon-stop en amont du codon-stop du gène sauvage; et ladite graine provenant d'une plante oléagineuse obtenue par le procédé selon la revendication 1 ou sélectionnée par le procédé selon la revendication 2 ou 3. 20 6. Utilisation d'une plante oléagineuse présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au moins une mutation perte de fonction, ou d'une graine présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au moins 25 une mutation perte de fonction pour la production de biocarburant, d'huiles et compléments alimentaires, de lubrifiants et fluides hydrauliques, de revêtements et d'encres, de tensioactifs, de solvants et/ou de plastiques, ladite mutation perte de fonction étant une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs dans le gène asg2, une insertion ou délétion dans le gène asg2 entrainant un décalage du 30 cadre de lecture ou une substitution d'un ou plusieurs nucléotides d'un codon du gène asg2 créant un codon-stop en amont du codon-stop du gène sauvage. 7. Procédé de culture de plantes oléagineuses présentant une quantité d'acides gras accrue dans les graines comprenant au moins une copie d'un gène asg2 comprenant au 35 moins une mutation perte de fonction, ladite mutation perte de fonction étant une insertion de plusieurs nucléotides consécutifs dans le gène asg2, une insertion ou délétion dans le 3052636 24 gène asg2 entrainant un décalage du cadre de lecture ou une substitution d'un ou plusieurs nucléotides d'un codon du gène asg2 créant un codon-stop en amont du codon-stop du gène sauvage, ledit procédé comprenant les étapes consistant à planter des graines desdites plantes dans une surface d'un champ approprié pour la culture desdites 5 plantes à une densité plus élevée que la densité de semis conventionnellement utilisée pour la plante oléagineuse sauvage correspondante et/ou avec un écartement entre les rangs plus faible que l'écartement conventionnellement utilisé pour la plante oléagineuse sauvage correspondante, et à récolter les plantes cultivées lorsqu'elles arrivent à la maturité souhaitée. 10 15