Brevet FR3051197A1 — publié le 20171117

La présente invention concerne un système rétroviral de transfert d'ARN non viraux dans des cellules cibles et plus particulièrement une particule rétrovirale capable de délivrer de multiples ARN. L'invention concerne également des compositions comportant ces particules rétrovirales, des kits de production de celles-ci, les procédés de fabrication afférents ainsi que les utilisations des particules et des compositions. Introduire des ARN multiples dans une cellule cible est en enjeu majeur en recherche et développement comme en thérapie génique. L'utilisation de vecteurs dérivés de virus est devenue une méthode cruciale de transfert de gènes. Les vecteurs viraux se répartissent aujourd'hui en deux catégories principales: - les vecteurs intégratifs, qui s'intègrent dans le génome receveur, et - les vecteurs non-intégratifs, qui forment habituellement un élément génétique extra-chromosomique. Les vecteurs intégratifs tels que les vecteurs gamma-rétroviraux (RV) et vecteurs lentiviraux (LV) sont intégrés de façon stable. Les vecteurs non-intégratifs, tels que les vecteurs adénoviraux (ADV) et les vecteurs adéno-associés (AAV) sont rapidement éliminés des cellules qui se divisent rapidement. Certains facteurs influençant le choix d'un vecteur particulier, comprennent sa capacitéd'enoapsidation, sa gamme de cellules cibles ou hôtes, son profil d'expression génique, son efficacité de transduction et sa capacité à induire une réponse immunitaire, ce qui est particulièrement problématique si des transductions répétées sont nécessaires. Certaines applications nécessitent l'utilisation de vecteurs non-intégratifs comme en thérapie génique ou dans de nombreuses applications in vitro, ex vivo et in vivo. A titre d'exemples, on peut citer : - l'induction de la reprogrammation de cellules spécialisées en cellules pluripotentes, ainsi que l'induction de la différenciation de cellules souches ou pluripotentes en cellules spécialisées, - l'expression d'antigènes ou de protéines (toxiques ou non) simultanément dans une cellule cible, 3051197 2 - l'expression de systèmes d'ingénierie du génome comme par exemple la protéine CRE. TALEN ou le système CRISPR, ou de toute autre système nécessitant une expression de protéine ou d'ARN. Un moyen d'introduire des ARN dans une cellule cible met en oeuvre des vecteurs 5 viraux basé sur des virus appartenant à la famille des Retroviridae (également désignée sous l'appellation famille des Rétrovirus ou virus à ARN). En effet, durant son cycle de réplication, un virus de la famille des Retroviridae possède la capacité de convertir son génome, constitué d'ARN, en ADN double brin qui sera intégré dans le génome de la cellule cible. Des exemples particuliers de cette famille de Rétrovirus 10 sont les gamma-rétrovirus et les lentivirus. Le cycle réplicatif d'un rétrovirus comporte une première phase de reconnaissance de la cellule cible (ou hôte) via la fixation à un récepteur membranaire. Cette phase de reconnaissance aboutit, après fusion membranaire, à l'entrée du rétrovirus dans la cellule hôte. L'ARN rétroviral est alors copié en ADN double brin par la transcriptase 15 inverse, codée par le rétrovirus, puis intégré au génome de la cellule hôte. Ce génome viral est alors transcrit par la cellule hôte comme tous les autres gènes de la cellule. Ce génome code l'ensemble des protéines et des séquences permettant la fabrication d'autres virus. Plus particulièrement, trois gènes sont communs à l'ensemble des rétrovirus : gag, 20 pal et env. Gag est un gène codant pour une polyprotéine, les protéines issues de cette polyprotéine par clivage, étant des protéines de structure impliquées dans l'assemblage des virus lors de la réplication. Ces protéines de structure sont plus spécifiquement la protéine de matrice (MA), la protéine de capside (CA) et la protéine 25 de nucléocapside (NC). Pol est un gène codant pour les enzymes intégrase, transcriptase inverse et protéase. Env est un gène codant pour des glycoprotéines d'enveloppe. Ces trois gènes permettent donc de copier l'ARN rétroviral en ADN double brin, 30 d'intégrer cet ADN au génome de la cellule hôte puis de générer la structure des rétrovirus néo-synthétisés : protéines d'enveloppe, de capside et de nucléocapside. Toutefois, afin que les rétrovirus néo-synthétisés soient complets, il est nécessaire d'encapsider dans chacune de ces structures deux copies de l'ARN rétroviral. Cette encapsidation de deux copies de l'ARN rétroviral dans la structure s'effectue par la 3051197 3 reconnaissance par la protéine de nucléocapside, d'une séquence d'encapsidation appelée Psi (pour « Packaging Signal ») portée par la copie de l'ARN rétroviral. Lorsqu'un vecteur viral dérivé d'un rétrovirus est utilisé à des fins de thérapie génique, au moins une partie des régions codantes de gag, pol et/ou env est dissociée 5 entre le système d'encapsidation et le système d'expression de la séquence d'intérêt. Les séquences codantes gag et pol, par exemple, sont portées par le plasmide d'encapsidation apportant en trans les protéines nécessaires à la production de vecteurs viraux. La séquence d'encapsidation comme la séquence d'intérêt sont portée par des systèmes indépendants, afin de rendre le rétrovirus non réplicatif. 10 Toutefois, dans certains cas, l'intégration de la séquence d'ARN d'intérêt dans le génome de la cellule hôte de façon aléatoire peut interrompre une phase ouverte de lecture et bloquer l'expression de gènes importants. De plus, pour certaines applications, telles que la reprogrammation de cellules, l'édition des génomes ou la différenciation de cellules souches, il est recommandé que l'expression d'une 15 séquence d'intérêt soit réalisée de manière transitoire. La demande W02007/072056 décrit un système de vectorisation viral comprenant env, gag, optionnellement gag/po/ainsi qu'une séquence d'ARN contenant un signal d'encapsidation hétérologue qui est reconnu par un domaine de liaison à ARN correspondant associé à gag ou à gag/pol. Ce système est décrit dans la demande 20 comme étant non intégratif et permettant une expression transitoire. Toutefois, l'efficacité de tels systèmes reste limitée. En particulier, pour qu'une cellule cible exprime un ARN d'intérêt véhiculé par ces systèmes, il est généralement nécessaire d'introduire dans la cellule plusieurs copies de cet ARN d'intérêt et par conséquent, d'utiliser de fortes multiplicités d'infection (« multiplicity of infection » ou 25 M01). La MOI correspond au ratio du nombre de systèmes de vectorisation introduit sur le nombre de cellules à infecter. Une forte MOI permet en effet d'introduire dans les cellules plusieurs copies de l'ARN d'intérêt en permettant qu'une même cellule subisse plusieurs infections. Or, si elle permet d'améliorer le niveau d'expression de l'ARN d'intérêt véhiculé, l'utilisation de fortes MOI, du fait des multiples infections subies par 30 la cellule, engendre également une certaine toxicité. Ce type de système de transfert d'ARN présente également un intérêt pour l'immunothérapie, et notamment l'immunothérapie anti-tumorale L'immunothérapie anti-tumorale est une stratégie thérapeutique qui s'appuie sur le système immunitaire afin d'éradiquer les cellules tumorales. De nouvelles approches consistent à modifier génétiquement les cellules du patient pour induire une réponse 3051197 4 immunitaire et améliorer le ciblage. Pour que ces nouvelles thérapies géniques puissant être utilisées en clinique, une méthode de transfert de gènes sécurisée et efficace est nécessaire. La transfection d'ARN et l'utilisation de vecteurs lentiviraux ont respectivement émergé comme des technologies adaptées pour transférer soit un 5 récepteur spécifique des lymphocytes T dans des lymphocytes soit un antigène dans des cellules dendritiques. L'identification moléculaire d'antigènes spécifiques de cellules tumorales humaines est un élément clé du développement d'immunothérapie spécifique d'antigènes ciblés: - Une des approches qualifiée d'immunothérapie passive consiste à amplifier 10 des cellules T spécifiques d'antigènes ex vivo et à les réimplanter chez les patients (Cellules T TOR & CAR). Le transfert de gènes est ici utilisé pour introduire des récepteurs chimériques d'antigènes synthétiques (CARs) ou des nouveaux récepteurs de cellules T (TCRs) dans ces cellules T avant de les réimplanter par transfert adoptif pour le traitement de cancers. Ici, 15 les vecteurs lentiviraux sont largement utilisés et des résultats très encourageants ont été obtenus au stade clinique. - L'autre approche qualifiée d'immunothérapie active est la vaccination. Les cellules dendritiques (DCs) sont des agents naturels de la présentation des antigènes. Les cellules dendritiques sont au centre de nombreuses 20 stratégies thérapeutiques anti-tumorales du fait de leur capacité à stimuler des cellules T naïves. En effet, les cellules dendritiques sont les "détecteurs" de l'environnement et transmettent les informations récoltées aux cellules T et B du système immunitaire. Ces cellules sont donc des cibles essentielles pour générer une immunité thérapeutique anti-tumorale 25 et sont, de ce fait, qualifiées de Cellules Présentatices d'Antigènes (CPAs) professionnelles. La finalité de la vaccination basée sur les cellules dendritiques est à la fois d'induire in vivo une réponse des cellules T effectrices pour réduire la masse tumorale spécifiquement et également d'installer une réponse mémoire. 30 Ces deux approches thérapeutiques impliquent deux spécificités pour obtenir une réponse immunitaire anti-tumorale efficace et reproductible. Premièrement, l'expression de séquences exogènes telles que les antigènes, dans les cellules cibles doit être contrôlée pour obtenir une réponse immunitaire sans induire de toxicité. La co-expression de plusieurs antigènes au même moment est une bonne opportunité 35 pour augmenter la réponse tumorale et éviter l'échappement de cellules tumorales. Le 3051197 5 second point est l'expression dans les cellules cibles d'agents immuno-modulateurs qui déclenchent la maturation ou l'activation des cellules immunitaires ainsi modifiées. Ces co-expressions multiples au sein des cellules immunitaires vont permettre de mimer les réponses immunes innées et adoptives. Ainsi ces procédés vont d'une part fournir des 5 cellules exprimant spécifiquement des antigènes et d'autre part induire leur maturation ou différenciation qui est essentielle à une réponse immunitaire complète et efficace. Ces deux approches basées respectivement sur des cellules T et des cellules dendritiques sont plus particulièrement ciblées par l'invention. Il existe donc toujours un besoin pour des systèmes de vectorisation viraux plus 10 efficaces, moins toxiques et plus spécifiquement adaptés à l'immunothérapie. Le travail des inventeurs a permis de réaliser un système de vectorisation capable de délivrer plusieurs ARN d'intérêt dans une même cellule en une seule infection. La présente invention se rapporte donc à une particule rétrovirale comportant une protéine issue de la polyprotéine Gag, une protéine d'enveloppe, optionnellement une 15 intégrase et au moins deux ARN non viraux encapsidés, les ARN non viraux encapsidés comportant chacun une séquence d'ARN d'intérêt liée à une séquence d'encapsidation, chaque séquence d'encapsidation étant reconnue par un domaine de liaison introduit dans la protéine issue de la polyprotéine Gag et/ou dans l'intégrase, et l'une au moins dédites séquences d'intérêt des ARN non viraux encapsidés comporte 20 une partie codant pour au moins un épitope et/ou au moins une structure moléculaire reconnaissant spécifiquement un épitope. La particule rétrovirale selon l'invention permet d'introduire au moins deux ARN non viraux, préférentiellement 3, dans une cellule par une seule infection. L'introduction de telles particules dans les cellules peut être effectuée par un procédé in vivo, in vitro 25 ou ex vivo. Par « protéine issue de la polyprotéine Gag », on entend toute protéine résultant du clivage de la polyprotéine Gag. Plus particulièrement, il s'agit d'une protéine de nucléocapside, d'une protéine de matrice (par exemple, dans des particules rétrovirales dérivées du virus murins de type MoMuLV) ou de la protéine p12, 30 spécifique aux gannmaretrovirus. Par « protéine d'enveloppe », on entend toute protéine d'enveloppe, y compris une protéine d'enveloppe de pseudotypage. A titre d'exemple, on peut citer la protéine d'enveloppe Ampho, la protéine d'enveloppe écotrope, la protéine d'enveloppe du virus Moloney de la leucémie murine (MoMuLV), la protéine d'enveloppe du virus de 35 l'Immunodéficience Féline (FIV), la protéine d'enveloppe du virus du sarcome murin 3051197 6 d'Harvey (HaMuSV), la protéine d'enveloppe du virus de la tumeur mammaire murine (MuMTV), la protéine d'enveloppe du virus du Sarcôme de Rous (RSV), la protéine d'enveloppe du virus de la rougeole (aussi MV pour measles virus), la protéine d'enveloppe du virus de la leucémie du Gibbon (GalV), la protéine du virus endogène 5 félin (RD114) ou la protéine d'enveloppe du virus de la stomatite vésiculaire (VSV-G). Plus particulièrement, la protéine d'enveloppe est la protéine d'enveloppe Annpho, la protéine d'enveloppe écotrope, la protéine d'enveloppe du virus Moloney de la leucémie murine (MoMuLV), la protéine d'enveloppe du virus de l'Immunodéficience Féline (FIV), la protéine d'enveloppe du virus du sarcome murin d'Harvey (HaMuSV), 10 la protéine d'enveloppe du virus de la tumeur mammaire murine (MuMTV), la protéine d'enveloppe du virus du Sarcôme de Rous (RSV), la protéine d'enveloppe du virus de la rougeole (aussi MV pour measles virus), la protéine d'enveloppe du virus de la leucémie du Gibbon (GalV) ou la protéine d'enveloppe du virus de la stomatite vésiculaire (VSV-G). La protéine d'enveloppe peut ainsi être modifiée pour cibler 15 certains types cellulaires ou certaines applications (utilisation de récepteurs de surface comme protéine d'enveloppe). Il est également possible de modifier la protéine d'enveloppe avec un anticorps, un glycolipide et/ou un ligand particulier afin de cibler un récepteur et/ou un type cellulaire particulier. 20 Préférentiellement, la protéine d'enveloppe est la protéine VSV-G. Par « intégrase », on entend la protéine enzymatique codée par le gène pol, qui permet l'intégration de l'ADN rétroviral dans l'ADN de la cellule infectée par le rétrovirus lors de la réplication dudit rétrovirus. Par «séquence d'encapsidation », on désigne un motif (séquence et structure 25 tridimensionnelle) ARN reconnu spécifiquement par un domaine de liaison. Préférentiellement, la séquence d'encapsidation est un motif tige-boucle. Plus préférentiellement encore, la séquence d'encapsidation de la particule rétrovirale est le motif tige-boucle de l'ARN du bactériophage MS2 ou du phage PP7 tel que par exemple, celui résultant de la séquence ctagaaaacatgaggatcacccatgtctgcag (SEQ ID 30 N°1) ou (ctagaaggagcagacgatatggcgtcgctccctgcag SEQ ID N°2) respectivement. Le motif tige-boucle et plus particulièrement le motif tige-boucle de l'ARN du bactériophage MS2 ou celui de l'ARN du phage PP7, peut être utilisé seul ou répété plusieurs fois, de préférence de 2 à 25 fois, plus préférentiellement de 2 à 18 fois, par exemple de 6 à 18 fois. 3051197 7 Par «domaine de liaison », on désigne tout ou partie d'une protéine se liant spécifiquement à la séquence d'encapsidation liée à la séquence d'ARN d'intérêt. Plus particulièrement, il s'agit d'une protéine mutante ou non, définie par une structure tridimensionnelle, se liant spécifiquement à la séquence d'encapsidation. 5 Préférentiellement, le domaine de liaison est un domaine hétérologue. Plus préférentiellement, le domaine de liaison est la protéine Coat du bactériophage MS2, du phage PP7 ou du phage Q13, la protéine nun du prophage HK022, la protéine U1A ou encore la protéine hPum. Plus préférentiellement, le domaine de liaison est la protéine Coat du 10 bactériophage MS2 ou du phage PP7. Plus préférentiellement encore, lorsque le domaine de liaison est la protéine Coat du phage PP7, la séquence de celle-ci est déficiente pour l'auto-assemblage, grâce à une délétion des acides aminés 67 à 75 (PCPAFG) (Chao et al. 2008). Préférentiellement, la séquence de la protéine Coat du phage PP7 est codon-optimisée 15 pour les cellules humaines, c'est-à-dire que les bases de l'ADN sont choisies pour coder pour des acides aminés préférentiellement présents dans l'espèce humaine. Par «chaque séquence », on entend que les séquences d'encapsidation peuvent être identiques ou différentes, selon que ces séquences d'encapsidation sont reconnues par un domaine de liaison identique ou différent. En effet, la particule 20 rétrovirale selon l'invention peut comporter un ou plusieurs domaines de liaison. Lorsque plusieurs domaines de liaison sont introduits, ceux-ci peuvent l'être dans la polyprotéine Gag et/ou dans l'intégrase. Le domaine de liaison permet non seulement la reconnaissance de la séquence d'encapsidation mais également l'encapsidation des ARN portant la séquence 25 d'encapsidation dans la particule (ou dans le cas présent, d'un ARN non viral lié à une séquence d'encapsidation). Par « encapsidation », on entend l'empaquetage d'un ARN dans la capside virale d'une particule virale. On notera que dans la présente invention, l'encapsidation des ARN non viraux s'effectue par la reconnaissance d'un signal d'encapsidation non viral, 30 en particulier autre que Psi. Par «séquence d'intérêt », on vise une séquence codant pour une fonction présentant un intérêt pour l'utilisateur. Plus particulièrement, la séquence d'intérêt portée par chacun des deux ARN non viraux encapsidés peut être identique ou différente. 3051197 8 A l'aide des particules selon l'invention, il est possible de transférer dans des cellules cibles des ARN non viraux identiques ou différents. Les ARN encapsidés étant non viraux, ces ARN ne présentent pas les sites de reconnaissance des protéines codées par le gène pol. 5 En effet, ces ARN non viraux n'entrent pas dans les étapes précoces du cycle réplicatif des rétrovirus, à savoir : - La copie de l'ARN viral simple brin en ADN double brin par la transcriptase inverse ; - La maturation de l'ADN viral double brin par reconnaissance des extrémités 10 LTR par l'intégrase et maturation du complexe de pré-intégration cytoplasmique en complexe de pré-intégration nucléaire. Ces protéines virales (transcriptase inverse, intégrase), codées par le gène pol sont donc optionnelles dans la particule et le gène pol peut donc être soit présent, soit délété partiellement ou totalement. Préférentiellement, le gène pal est soit présent, soit 15 délété partiellement. On notera que les particules rétrovirales selon l'invention comportent un matériel génétique à la fois viral et non viral : - le gène gag, qui peut être viral ou chimérique. Plus particulièrement, le gène gag est chimérique lorsque le ou les domaine(s) de liaison est/sont 20 introduit(s) dans celui-ci. - Optionnellement, le gène pol, qui peut être viral ou chimérique. Le gène po/ codant pour plusieurs enzymes, les séquences afférentes à ces enzymes peuvent être délétées totalement ou partiellement, présentes et non fonctionnelles, ou présentes et fonctionnelles. Plus particulièrement, le gène 25 po/ est chimérique lorsque le ou les domaine(s) de liaison est/sont introduit(s) dans l'intégrase. - Au moins deux ARN non viraux, chaque ARN non viral étant porteur d'une séquence d'intérêt et d'une séquence d'encapsidation. Plus particulièrement, par 'Y\RN non viral", on entend un ARN dépourvu de toute 30 séquence rétrovirale (qui peut également être désigné par "ARN non rétroviral"). Plus spécifiquement, les particules rétrovirales selon l'invention permettent d'introduire dans des cellules cibles des ARN capables d'induire : - Le transfert d'une ou plusieurs séquences d'intérêt codantes endogènes ou 35 exogènes de la cellule cible, 3051197 9 - Le transfert d'un ou plusieurs ARN non codants comme des ARN capables d'induire un effet sur l'expression génétique, par exemple par le biais de shRNA, miRNA, sgRNA, LncRNA ou circRNA. - Le transfert d'ARN cellulaires, de type ARN messagers ou autres (miRNA...), 5 des réplicons sous génomique de virus à ARN (VHC, etc...) ou de génomes complets de virus à ARN, - l'expression simultanée de séquences codantes ou non codantes endogènes, exogènes de la cellule cible. Plus particulièrement, les particules virales selon l'invention permettent d'introduire 10 dans des cellules cibles des acides nucléiques capables d'induire : L'expression d'un ou plusieurs épitope(s) et notamment d'un ou plusieurs antigène(s) dans des cellules impliquées dans la réponse immune (cellules dendritiques ou autres cellules présentatrices d'antigènes) ; L'activation des cellules transduites pour déclencher leur maturation ou leur 15 activation ou celle de cellules avec lesquelles elles pourront interagir et contrecarrer par exemple les mécanismes d'immunosuppression induits par des mécanismes variés et complexes. Une telle activation peut être effectuée par des agents immuno-modulateurs. Ce type d'approche peut créer un micro-environnement favorable au déclenchement d'une réponse 20 immune contre les cellules tumorales. Il est à noter que cette méthode peut être appliquée à d'autres types de systèmes d'induction de réponse immunitaire. Par « épitope », on entend une structure qui peut être reconnue spécifiquement par un anticorps ou un récepteur lymphocytaire. 25 Avantageusement, la séquence d'intérêt code pour plusieurs épitopes, notamment pour un antigène. Par « antigène », on entend une substance étrangère à l'organisme capable de déclencher une réponse immunitaire visant à l'éliminer. Ils peuvent être naturels ou synthétiques. Un antigène est généralement une macromolécule naturelle ou 30 synthétique, généralement des protéines, des polysaccharides et leurs dérivés lipidiques. C'est la reconnaissance de l'antigène par les cellules imnnunocompétentes, directement ou via les cellules présentatrices d'antigène (CPA), qui active l'immunité spécifique. Un même antigène peut comporter plusieurs épitopes (identiques ou différents) et ainsi induire une réponse immunitaire variée. La reconnaissance de 35 l'antigène par les lymphocytes dépend de la nature de l'épitope. Les lymphocytes B se 3051197 10 lient directement aux épitopes conformationnels grâce aux immunoglobulines de leur membrane. Les lymphocytes T reconnaissent les épitopes séquentiels, correspondant à une séquence d'acides aminés, présentés par les cellules présentatrices d'antigènes. Préférentiellement, l'épitope ou l'antigène provient d'un agent pathogène, 5 notamment d'un virus, d'une bactérie, d'un parasite, d'une cellule tumorale, etc. L'épitope ou l'antigène peut être déduit à partir des biomarqueurs identifiés comme exprimés en grande quantité sur les cellules tumorales ou à partir de virus ou de toxine. Sa taille peut être variable. En général, un criblage est réalisé pour sélectionner le meilleur épitope ou antigène. A partir de la séquence protéique de l'épitope ou de 10 l'antigène, la séquence des acides désoxyribonucléiques et des acides ribonucléiques peut être déduite. L'épitope est de préférence choisi parmi les peptides. Plus préférentiellement, l'épitope est un épitope peptidique comportant de 1 à 50 acides aminés (AA), de préférence moins de 30 AA, préférentiellement de 3 à 12 acides aminés. 15 L'antigène est de préférence choisi parmi les peptides, les protéines, les glycoprotéines. En effet, la machinerie cellulaire de la cellule (hôte) pouvant traduire l'ARN encapsidé, elle peut également réaliser une ou plusieurs étapes supplémentaires de modifications post traductionnelles telles qu'une glycosylation. En effet, lorsque la production de l'antigène a lieu dans des cellules dendritiques, 20 l'antigène peut être maturé comme le biomarqueur qui a permis son obtention. La particule selon l'invention permettant l'introduction d'ARN présentant une taille allant jusqu'à 10kb, il est possible d'introduire dans celle-ci des séquences antigéniques de taille conséquente. Toutefois, la taille de la séquence antigénique est variable. De façon générale, plus une molécule est de grande taille et plus elle est 25 immunogène. Par «séquence antigénique », on vise une séquence d'ADN codant pour un épitope ou un antigène. Avantageusement, l'épitope ou l'antigène est immunogène, c'est-à-dire qu'il peut initier une réponse immunitaire. 30 Par « immunogène » on entend le potentiel d'un antigène à un induire une réponse immune. Une substance peut être antigénique sans être immunogène. Ce potentiel dépend de l'espèce, du degré de similitude entre l'antigène et les molécules de l'hôte, des caractéristiques physico-chimiques de l'antigène (taille, forme, rigidité) et de la dose d'antigène reçue. 35 3051197 11 De préférence, l'épitope est choisi parmi la liste constituée par des molécules qui sont identifiées comme reconnues par la partie variable d'un anticorps ou d'un récepteur membranaire des lymphocytes T (TCR). Ces derniers sont identifiés et sélectionnés selon leur potentiel immunogène. 5 De préférence, l'antigène est un antigène tumoral c'est-à-dire une molécule spécifiquement présente à la surface des cellules tumorales, absente ou peu abondante sur les cellules normales environnantes. Plus préférentiellement, l'antigène est choisi parmi le groupe constitué par les antigènes du groupe « cancer testis » (Ex Mage-Al2, MAGE-A3, MAGE-A10, MAGE-A2, MAGE-A1, CT7/MAGE-C1, CT10, 10 SSX4, BRDT, NY-ES01, SS) REVENDICATIONS1. Particule rétrovirale comportant une protéine issue de la polyprotéine Gag, une protéine d'enveloppe, optionnellement une intégrase et au moins deux ARN non viraux encapsidés, les ARN non viraux encapsidés comportant chacun une séquence d'ARN d'intérêt liée à une séquence d'encapsidation, chaque séquence d'encapsidation étant reconnue par un domaine de liaison introduit dans la protéine issue de la polyprotéine Gag et/ou dans l'intégrase, et l'une au moins dédites séquences d'intérêt des ARN non viraux encapsidés comporte une partie codant pour au moins un épitope et/ou au moins une structure moléculaire reconnaissant spécifiquement un épitope. 2. Particule rétrovirale selon la revendication 1, comportant une protéine de nucléocapside, une protéine d'enveloppe, optionnellement une intégrase et au moins deux ARN non viraux encapsidés, les ARN non viraux encapsidés comportant chacun une séquence d'ARN d'intérêt liée à une séquence d'encapsidation, chaque séquence d'encapsidation étant reconnue par un domaine de liaison introduit dans la protéine de nucléocapside et/ou dans l'intégrase. 3. Particule rétrovirale selon la revendication 2, dans laquelle les séquences d'intérêt des au moins deux ARN non viraux encapsidés sont identiques. 4. Particule rétrovirale selon la revendication 2, dans laquelle les au moins deux ARN non viraux encapsidés se distinguent par leur séquence d'ARN. 5. Particule selon la revendication 4, dans laquelle la séquence d'intérêt de l'autre ARN non viral encapsidé code pour une protéine immunomodulatrice. 6. Particule rétrovirale selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, comportant en outre un troisième ARN non viral encapsidé. 7. Particule rétrovirale selon l'une quelconque des revendications 2 à 6, dans laquelle le domaine de liaison est introduit dans la protéine de nucléocapside, un second domaine de liaison pouvant être introduit dans la nucléocapside et/ou dans l'intégrase. 8. Particule rétrovirale selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans laquelle le domaine de liaison est introduit dans l'intégrase, un second domaine de liaison pouvant être introduit dans la nucléocapside et/ou dans l'intégrase. 9. Particule rétrovirale selon l'une quelconque des revendications 2 à 8, 3051197 58 laquelle est une particule lentivirale. 10. Particule lentivirale selon la revendication 9, dans laquelle : le domaine de liaison est la séquence de la protéine « Coat » du bactériophage MS2, 5 la séquence d'encapsidation des ARN non viraux est une séquence tige- boucle de MS2, la protéine de nucléocapside est la protéine de nucléocapside (NC) de HIV appartenant à la polyprotéine Gag, laquelle NC est mutée au niveau du second doigt de zinc afin d'insérer la séquence de la protéine « Coat » du 10 bactériophage MS2. 11. Particule lentivirale selon la revendication 9, dans laquelle : le domaine de liaison est la séquence de la protéine « Coat » du phage PP7, la séquence d'encapsidation des ARN non viraux est une séquence tige- 15 boucle de PP7, la protéine de nucléocapside est la protéine de nucléocapside (NC) de HIV appartenant à la polyprotéine Gag, laquelle NC est mutée au niveau du second doigt de zinc afin d'insérer la séquence de la protéine « Coat » du bactériophage PP7. 20 12. Composition comportant des particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 11. 13. Kit de production de particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, comportant : (i) un plasmide d'expression comportant au moins une séquence d'intérêt, 25 pour laquelle en amont ou en aval de cette séquence est insérée une séquence d'encapsidation, (ii) un plasmide d'encapsidation codant pour une protéine issue de la polyprotéine Gag et/ou une intégrase, chimérique, comportant un domaine de liaison permettant de reconnaître une séquence 30 d'encapsidation, et, (iii) un plasmide d'enveloppe codant pour une protéine d'enveloppe. 14. Procédé de fabrication d'un kit selon la revendication 13, comportant : (i) la préparation d'un plasmide d'expression comportant au moins une séquence d'intérêt, pour laquelle en amont ou en aval de cette 35 séquence est insérée une séquence d'encapsidation 3051197 59 (ii) la préparation d'un plasmide d'encapsidation codant pour une protéine issue de la polyprotéine Gag et/ou une intégrase chimérique comportant un domaine de liaison permettant de reconnaître une séquence d'encapsidation, et 5 (iii) la préparation d'un plasmide d'enveloppe codant pour une protéine d'enveloppe. 15. Procédé de fabrication des particules selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, comportant une étape de co-transfection de cellules avec : (i) un plasmide d'expression comportant au moins une séquence d'intérêt, 10 pour laquelle en amont ou en aval de cette séquence est insérée une séquence d'encapsidation, (ii) un plasmide d'encapsidation codant pour une protéine issue de la polyprotéine Gag et/ou une intégrase chimérique comportant un domaine de liaison permettant de reconnaître une séquence 15 d'encapsidation, et, (iii) un plasmide d'enveloppe codant pour une protéine d'enveloppe. et la récupération du surnageant des cellules transfectées comportant les particules. 16. Procédé de fabrication des particules selon l'une quelconque des revendications 4 à 11, comportant une étape de co-transfection de cellules avec : 20 (i) un plasmide d'expression comportant au moins deux séquences d'ARN non virales différentes, chaque séquence d'ARN comportant une séquence d'intérêt pour laquelle en amont ou en aval de cette séquence d'intérêt est insérée une séquence d'encapsidation, ou alternativement un premier et un second plasmide d'expression comportant chacun une 25 séquence d'intérêt en amont ou en aval de laquelle est insérée une séquence d'encapsidation, (ii) un plasmide d'encapsidation codant pour une protéine de nucléocapside chimérique comportant un domaine de liaison permettant de reconnaître la séquence d'encapsidation, et, 30 (iii) un plasmide d'enveloppe codant pour une protéine d'enveloppe, et la récupération du surnageant des cellules transfectées comportant les particules. 17. Procédé de fabrication selon la revendication 16, dans lequel le surnageant est clarifié, puis éventuellement concentré et/ou purifié. 18. Composition de particules susceptible d'être obtenue par le procédé 35 de fabrication des particules selon l'une des revendications 16 ou 17. 3051197 60 19. Utilisation d'une particule selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, ou d'une composition selon la revendication 12 ou 18 pour transduire in vitro des cellules du système immunitaire.