Brevet FR3038605A1 — publié le 20170113

DIAMINES PRIMAIRES VICINALES ASSOCIÉES À DES MOTIFS CHÉLATEURS DE MÉTAUX ET/OU DE RADICAUX LIBRES, ACTIVES CONTRE LES STRESS CARBONYLÉ ET OXYDANT ET LEUR UTILISATION La présente invention concerne de nouveaux dérivés diaminés piégeurs d'alpha-oxoaldéhydes (a-oxoaldéhydes) et d'aldéhydes alpha, bétainsaturés (aldéhydes a,(3-insaturés) et chélateurs de métaux ainsi que leurs utilisations, notamment dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections associées à une accumulation d'AGE (anglais : Advanced Glycation Endproducts) et/ou d'ALE (anglais : Advanced Lipid Peroxydation Endproducts). [ETAT DE LA TECHNIQUE] Lors de la glycolyse et de la peroxydation lipidique, des composés carbonylés sont formés et réagissent avec les groupements nucléophiles des proteines (lysine, arginine, cystéine...) pour donner les AGE ("Advanced Glycation Endproducts" en anglais) (Pathologie, Biologie, 2006, 54, 405-419) et les ALE ("Advanced Lipid Peroxidation Endproducts" en anglais) (Br. J. Pharm., 2008, 153, 6-20). Les AGE apparaissent donc comme des modifications délétères des protéines suite à la formation d'une base de Schiff, suivie d'un réarrangement d'Amadori, de leurs groupements amines libres avec différents dérivés a- oxoaldéhydes tels que par exemple le glyoxal (GO), le méthylglyoxal (MGO) et le déoxyglucosone (3-DG), issus du métabolisme oxydatif des glucides (Diabetes Res. Clin. Pract. 2013, 99, 261-271). De la même façon, les ALE se forment après addition 1,2 ou 1,4 de Michaël de ces groupements aminés des protéines sur des aldéhydes a,(3-insaturés tels que le malondialdéhyde (MDA), l' acroléine, le 4- hydroxynonénal (4-HNE) ou le 4-hydroxy-2-hexanal (4-HHE), issus de la dégradation des acides gras polyinsaturés sous l'effet du stress oxydant induit notamment par les métaux de transition (Cu2±, Fe3±) (Prog. Lipid Res., 2003, 42, 318-343). De plus, ces dérivés carbonylés toxiques peuvent aussi réagir selon un 3038605 2 processus non-enzymatique avec les bases de l'ADN pour donner des AGE/ALE ramifiés ou non. Des mécanismes de détoxification enzymatique existent comme le système glyoxalase glutathion (GSH)-dépendant (glyoxalases I et II) qui transforme les composés carbonylés réactifs en D-lactate, glycolate ou acétol, 5 mais leur dysfonctionnement pourra entraîner une accumulation des AGE. L'accumulation des AGE a deux conséquences biologiques majeures. Tout d'abord, ils peuvent être à l'origine d'une réticulation protéique observée surtout sur les protéines à longue durée de vie telles que par exemple le collagène, les protéines du cristallin, la fibronectine, l'albumine et l'hémoglobine. 10 Ce phénomène joue ainsi un rôle prépondérant dans l'apparition de divers dysfonctionnements (perte de l'élasticité du tissu cutané ou de l'endothélium vasculaire, pigmentation de la peau...) et pathologies liés à l'âge (cataracte, rhumatismes...). Puis, le stress oxydant favoriserait la survenue de réactions inflammatoires et thrombogènes, mais aussi de l'apoptose via une interaction 15 entre les AGE et leurs récepteurs spécifiques (RAGE). Ces mécanismes seraient ainsi notamment impliqués dans l'apparition de l'athérosclérose et de diverses complications notamment microangiopathiques liées au diabète tels que les troubles cardiovasculaires, néphropathies, rétinopathies, neuropathies etc. (Biofactors 2012, 38, 266-274 ; Int. J. Mol, Med., 2010, 26, 813-818 ; Mol. 20 Metabolism, 2014, 3, 94-108). Or, l'accumulation d'AGE associée au déséquilibre oxydatif induit par la surproduction d'espèces réactives de l'oxygène (ERO) et l'essoufflement des systèmes de défense cellulaires antioxydants retrouvé chez le diabétique, sera également à l'origine de l'exacerbation de la peroxydation lipidique (Chem. Biol. Interact., 2008, 171, 251-271). Cette cascade oxydative 25 engendrera donc en parallèle la formation d'ALE tels que le complexe entre l'apolipoprotéine B des LDL (Low Density Lipoproteins) natives et le MDA impliqué dans la génèse des LDL oxydées. Ces dernières seront alors absorbées par des macrophages qui une fois chargés en gouttelettes lipidiques, se transformeront en cellules spumeuses, constitutives de la plaque d'athérome (Int. J. Mol, Med., 2010, 26, 813-818). 3038605 3 De la même façon, suite à l'exacerbation du stress oxydant et de la peroxydation lipidique, on retrouve des taux importants d'ALE associés à des protéines neuronales chez les patients atteints de maladies neurodégénératives telles que par exemple la maladie d'Alzheimer et la maladie de Parkinson. Ainsi, 5 dans le cas de la maladie d'Alzheimer, le modèle physiopathologique de la cascade (3-amyloïde tendrait à prouver que l'accumulation des plaques (3-amyloïdes qui constituent l'un des marqueurs prédominants de la maladie, serait à l'origine d'une cascade oxydative néfaste (Trends Mol. Med. 2001, 7, 548-554 ; Free Radic. Biol. Med., 2002, 32, 1050-1060). En effet, sous l'influence de divers 10 facteurs génétiques et environnementaux, le clivage par la f3-sécrétase du peptide précurseur amyloïde (APP) devient préférentiel au détriment de la voie de dégradation impliquant l'a -sécrétase. Il se forme alors des monomères Af3 non toxiques qui, après agrégation induite par les ions métalliques, se transforment en oligomères toxiques, constitutifs des plaques (3-amyloïdes à l'origine d'une 15 exacerbation du stress oxydant (Chem. Eur. J., 2012, 18, 15910-15920 ; Neurochem. Int., 2013, 62, 367-378). Au final, la neurotoxicité des aldéhydes u,(3-insaturés alors issus de la peroxydation lipidique, sera largement impliquée dans la survenue de la démence (Curr. Alzheimer Res., 2011, 8, 452-469). Parmi ces derniers, on peut citer l'acroléine qui apparaît comme le composé le plus réactif 20 vis-à-vis des résidus cystéine, histidine et lysine des protéines ou le 4-HNE. L' acroléine entraînera ainsi la formation d'ALE à l'origine d'une altération du cytosquelette et de l'apparition de la dégénérescence neurofibrillaire, autre marqueur important de la maladie d'Alzheimer. Puis, le 4-HNE induira une déstabilisation au niveau de la membrane neuronale notamment après formation 25 d'ALE sur les canaux ioniques et finalement un déséquilibre calcique à l'origine de l'apoptose. De plus, des ALE issus de la condensation du MDA sur des résidus lysine des protéines ont pu être identifiés sous la forme de dérivés dihydropyridine et participeraient à la diminution de la résistance de la peau aux UV qui contribuerait au vieillissement cutané et éventuellement au développement de 30 cancers de la peau (Mech. Ageing Dey., 2001, 122, 735-755). Enfin, le MDA peut également se comporter comme un agent mutagène après réaction sur les 3038605 4 fonctions amines des bases de l'ADN et notamment la deoxyguanosine et favoriser ainsi le développement de certains cancers (Toxicology, 2002, 181-182, 219-222). Or, on peut noter que ce type de modification de l'ADN a aussi été décrit dans la littérature sous la forme d'adduits avec le MGO (Chem. Res. 5 Toxicol., 2005, 18, 1586-1592). Plusieurs agents anti-AGE/ALE ont précédemment été décrits dans la littérature. L'aminoguanidine (Pimagedine®) s'est ainsi révélée être un excellent piégeur de MGO in vitro et in vivo sur des modèles animaux du diabète (Arch. Biochem. Biophys., 2003, 419, 31-40 ; Diabetes, 2012, 61, 549-559). 10 Cependant, des études cliniques de phase III chez l'homme n'ont pas fourni de résultats concluants montrant de faibles propriétés antioxydantes vasoprotectrices et des effets secondaires hépatiques et gastro-intestinaux (Am. J. Nephrol., 2004, 4, 32-40). Les essais sur cette molécule ont ainsi été abandonnés. Plusieurs autres composés ont toutefois montré in vitro et in vivo 15 leur efficacité à ralentir la formation des AGE et des ALE. Nagai et al. (Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 2310-2320) rapportent par exemple les propriétés antiAGE de la pyridoxamine (Pyridorin®), de la 2,3-diaminophénazine, de la thiamine, de la benfotiamine, du TM-2002, du tenilsetam et des LR-9, 20, 59, 74 et 90 ainsi que le fait que le PTB ("Phenacyl Thiazolium Bromide") et l'ALT-711 2 0 se sont montrés capables de détruire les AGE et les ALE. Des effets antiAGE ont également été décrits pour la carnosine (Neurosci. Lett., 1997, 238, 135-13) et l'OPB-9195 (J. Am. Soc. Nephrol., 2000, 11, 1719-1725). On notera que les premiers essais cliniques sur l'OPB-9195 n'ont pas donné de résultats concluants et ont dû être suspendus du fait de la survenue d'importants effets secondaires 2 5 (Pathologie, Biologie, 2006, 54, 405-419). La plupart des études sur les autres molécules sont toujours au stade expérimental, sauf pour l'ALT-711 pour lequel les essais cliniques ont également été suspendus. Les demandes de brevets WO 2006/103274 Al et WO 2013/050721 Al décrivent des dérivés de l'acide 2,3-diaminopropionique 3038605 5 précédemment synthétisés par Sasaki et al. ainsi que leurs propriétés antiAGE/ALE. Il est important de remarquer que ces différents travaux se sont essentiellement concentrés sur l'élaboration d'agents anti-AGE. En effet, peu 5 d'études concernant le développement de potentiels agents anti-ALE ont jusqu'à présent été réalisées. La conception de composés multipotents à la fois antiAGE/ALE et chélateurs de métaux n'a à ce jour pas encore été décrite. Il existe ainsi toujours un besoin de nouveaux composés qui présentent des propriétés anti-AGE/ALE et qui sont de préférence également 10 chélateurs de métaux. [RESUME DE L'INVENTION] Les inventeurs ont maintenant réussi à mettre au point de nouveaux dérivés diaminés piégeurs d' alpha-oxoaldéhydes (a-oxoaldéhydes) et d'aldéhydes alpha, béta-insaturés (aldéhydes 43-insaturés) et chélateurs de métaux. Ces 15 composés multipotents présentent l'avantage d'associer aux propriétés piégeurs de composés carbonylés, des propriétés chélatrices de métaux et des propriétés antiradicalaires. L'invention concerne donc des composés de Formule I, leurs sels pharmaceutiquement acceptables ainsi que l'utilisation de ces composés ou leurs 2 0 sels pharmaceutiquement acceptables dans des compositions pharmaceutiques, agroalimentaires ou cosmétiques. Dans un premier aspect, l'invention concerne des composés de Formule I : H2N H2N 3038605 6 I et ses sels, notamment pharmaceutiquement acceptables, dans laquelle n est un nombre entier de 1 à 6 ; 5 X est CO ou CH2 ; Y est NR1R2 ou R2 ou / N N-R2 R1 est H ou alkyle en Cl à C4 ou alkyle en Cl à C4-aryle ; R2 est Z-L-R3 ; 10 Z est inexistant, CO ou CH2 ; L est inexistant, CH=CH ou (CE12)in ; m est un nombre entier de 1 à 6 ; R3 est phényle ou N-pyridinonyle, chacun substitué par au moins un groupe OH et éventuellement par un ou plusieurs substituants choisis parmi OH, alkoxy en C1 à 15 C4 et alkyle en Cl à C4. Les composés de Formule I comportant un atome de carbone asymétrique, ils existent sous forme de deux énantiomères. Ces énantiomères ainsi que leurs mélanges, y compris les mélanges racémiques, font partie de l'invention. Dans un autre aspect, l'invention concerne des compositions 20 pharmaceutiques, cosmétiques ou agroalimentaires comprenant au moins un composé selon l'invention ou un de ses sels, notamment pharmaceutiquement acceptables et au moins un excipient acceptable au niveau pharmaceutique, cosmétique et/ou agroalimentaire. Comme indiqué plus haut, les composés de l'invention ainsi que 25 leurs sels pharmaceutiquement acceptables trouvent une application particulière dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections associées à une accumulation d'AGE (anglais : Advanced Glycation Endproducts) et/ou d'ALE (anglais : Advanced Lipid Peroxydation Endproducts). 3038605 7 [DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION] Comme détaillé ci-dessus, l'invention concerne des composés de Formule I ainsi que leurs sels, notamment acceptables au niveau pharmaceutique, cosmétique et/ou agroalimentaire. 5 Des composés de Formule I et leurs sels préférés sont ceux dans lesquels un, plusieurs ou chacun de n, Y, R1, R2, Z, L, m et R3 sont définis de la manière suivante : n est un nombre entier de 1 à 4 ; de préférence n est 1, 2 ou 3 ; plus préférentiellement encore n est 2 ou 3 ; 10 Y est NR1R2 ou R2 ou / N N - R2 \ / - R1 est H, méthyle ou benzyle ; de préférence R1 est H ou méthyle, plus préferentiellement encore R1 est H ; R2 est Z-L-R3 ; 15 Z est CO ou CH2 ; L est absent, CH=CH ou (CH2)' ; de préférence L est absent, trans-CH=CH ou (CH2)m m est un nombre entier de 1 à 6 ; de préférence de 1 à 4, plus préférentiellement encore m est 1, 2 ou 3 ; 2 0 R3 est phényle ou N-pyridinonyle, chacun substitué par au moins un groupe OH et éventuellement par un ou plusieurs substituants choisis parmi OH, alkoxy en C1 à C2 et alkyle en Cl à C2, de préférence choisis parmi OH, méthoxy et méthyle, plus préférentiellement encore parmi OH et méthoxy ou OH et méthyle ou OH, plus préférentiellement encore R3 est choisi parmi : 3038605 8 OMe OH OH OH OH N / 0E1 0 ou Dans un mode de réalisation particulier, les composés de Formule I et leurs sels sont ceux dans lesquels R2 est choisi parmi : 3038605 9 OMe OH OH OH OH 0 ,,--, z (,,K N OH "m O Z étant CO ou CH2. En fait et sans vouloir être lié par une quelconque théorie, les 5 inventeurs pensent que la capacité à former des adduits avec le MGO et le MDA 3038605 10 et le pouvoir chélateur du cuivre des composés selon l'invention sont obtenus au niveau du groupement diamine. En parallèle, le pouvoir chélateur du fer et les propriétés antiradicalaires des composés selon l'invention sont obtenus grâce aux groupements dérivés de l'acide férulique (4-hydroxy-3-methoxyphényl), de 5 l'acide gallique (3,4,5-trihydroxybenzoyl) et des hydroxypyridinones. Dans un premier mode de réalisation, les composés de l'invention sont ceux de la Formule II : H2N H2N II 10 et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables, dans laquelle n et Y sont tels que définis ci-dessus par rapport à la Formule I. Dans un deuxième mode de réalisation, les composés de l'invention sont ceux de la Formule III H2N H2N 15 III et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables, dans laquelle n et Y sont tels que définis ci-dessus par rapport à la Formule I. Dans un troisième mode de réalisation, les composés de l'invention sont ceux de la Formule IV 3038605 11 R1 / X-N \ (n Z-L-R3 ( / H2N IV et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables, dans laquelle n, X, R1, Z, L et R3 sont tel que définis par rapport à la Formule I. 5 Des composés préférés de Formule IV sont ceux dans lesquels Z-L- R3 est choisi parmi : H2N R1° R11 R12 R15 R19 dans lesquels R4, R5, R6, R7, R8, R9, Rio, R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17, R18, R19, R2° et R21 sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi H, OH, alkoxy 10 en Cl à C4 et alkyle en Cl à C4, de préférence parmi H, OH, alkoxy en Cl à C2 3038605 12 et alkyle en C l à C2, préférentiellement parmi H, OH, méthoxy et méthyle, plus préférentiellement encore parmi H, OH et méthoxy ; H ou OH et H, méthyle ou OH ; à condition qu'au moins un de R4, R5, R6, R7 et R8, de R9, Rio, R11, R12 et R13, de R14, R15, R16 et R17, de R18, R19, R2° et R21 est OH. 5 Des composés particulièrement préférés de Formule IV sont ceux dans lesquels Z-L-R3 est choisi parmi : R10 R11 ,Z N R21 R16 R17 0 dans lesquels R5, R6, R9, Rio, R11, R16, R17 et R21 sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi OH, alkoxy en Cl à C4 et alkyle en C l à C4, de 10 préférence parmi OH, alkoxy en Cl à C2 et alkyle en Cl à C2, préférentiellement parmi OH, méthoxy et méthyle, plus préférentiellement encore parmi OH et méthoxy ou OH et méthyle ou OH ; à condition qu'au moins un de R5 et R6, de R9, R1° et R11, de R16 et R17 et de R21 est OH. Des composés particulièrement avantageux de Formule IV sont ceux dans lesquels 15 - R5 et R6 sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, parmi 3038605 13 OH et alkoxy en Cl à C4, de préférence parmi OH et alkoxy en Cl à C2, plus préférentiellement encore parmi OH et méthoxy ; avantageusement R5 est alkoxy en Cl à C4, de préférence alkoxy en Cl à C2, plus préférentiellement encore méthoxy et 5 R6 est OH ; R9, R1° et R11 sont OH ; R16 et R17 sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, parmi OH et alkyle en C 1 à C4, de préférence parmi OH et alkyle en Cl à C2, plus préférentiellement encore parmi OH et méthyle ; 10 avantageusement R16 est OH et R17 est alkyle en C1 à C4, de préférence alkyle en Cl à C2, plus préférentiellement encore méthyle ; R21 est OH. Dans un mode de réalisation, les composés de Formule IV sont 15 ceux dans lesquels Z-L-R3 est choisi parmi : R15 R19 R18 R2° o R17 Ris R16 Ris Ris R, R et -21 dans lesquels R1415 16 17 18 19 20 , K sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi H, OH et alkyle en Cl à C4, de préférence parmi H, OH et alkyle en C 1 à C2, préférentiellement parmi H, OH et méthyle ; à condition , , 2 0 qu'au moins un de R14 R15 R16 et R17 et de R18, R19, R2° et R21 est OH. Avantageusement Z-L-R3 est choisi parmi : 3038605 14 N R21 R16 R17 0 dans lesquels R16, R17 et R21 sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi OH et alkyle en C 1 à C4, de préférence parmi OH et alkyle en C 1 à C2, 5 plus préférentiellement encore parmi OH et méthyle ; à condition qu'au moins un de R16 et R17 et de R21 est OH. Des composés particulièrement avantageux sont ceux dans lesquels R16 et R17 sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, parmi OH et alkyle en C 1 à C4, de préférence parmi OH et alkyle en 10 Cl à C2, plus préférentiellement encore parmi OH et méthyle ; avantageusement R16 est OH et R17 est alkyle en C1 à C4, de préférence alkyle en Cl à C2, plus préférentiellement encore méthyle ; R21 est OH. 15 Dans un quatrième mode de réalisation, les composés de l'invention sont ceux de la Formule V H2N / \ X -N N-Z -L -R3 V H2N et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables, 3038605 15 dans laquelle n, X, Z, L et R3 sont tel que définis par rapport à la Formule I. Des composés préférés de Formule V sont ceux dans lesquels Z-LR3 est choisi parmi : R1° R11 R12 R15 R19 5 dans lesquels R4, R5, R6, R7, R8, R9, R1o, R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17, R18, R19, R2° et R21 sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi H, OH, alkoxy en Cl à C4 et alkyle en Cl à C4, de préférence parmi H, OH, alkoxy en Cl à C2 et alkyle en Cl à C2, préférentiellement parmi H, OH, méthoxy et méthyle, plus préférentiellement encore parmi H, OH et méthoxy ; H ou OH et H, méthyle ou 10 OH ; à condition qu'au moins l'un de R4, R5, R6, R7 et R8, au moins l'un de R9, Rio, R11, R12 et R13, au moins l'un de R14, R15, R16 et R17, et au moins l'un de R18, R19, R20 et R21 est OH. Des composés particulièrement préférés de Formule V sont ceux dans lesquels Z-L-R3 est choisi parmi : 3038605 16 R10 R11 ,Z (ri N R21 R16 R17 0 R, R, Rio R11 R, Ris et - K21 dans lesquels R56 9 10 11 16 17 , sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi OH, alkoxy en Cl à C4 et alkyle en Cl à C4, de préférence parmi OH, alkoxy en Cl à C2 et alkyle en Cl à C2, préférentiellement 5 parmi OH, méthoxy et méthyle, plus préférentiellement encore parmi OH et méthoxy ou OH et méthyle ou OH ; à condition qu'au moins l'un de R5 et R6, au moins l'un de R9, R1° et R11, au moins l'un de R16 et R17 est OH et R21 est OH. Des composés particulièrement avantageux de Formule IV sont ceux dans lesquels 10 R5 et R6 sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, parmi OH et alkoxy en Cl à C4, de préférence parmi OH et alkoxy en Cl à C2, plus préférentiellement encore parmi OH et méthoxy ; avantageusement R5 est alkoxy en Cl à C4, de préférence alkoxy en Cl à C2, plus préférentiellement encore méthoxy et 15 R6 est OH ; R9, R1° et R11 sont OH ; 3038605 17 R16 et R17 sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, parmi OH et alkyle en Cl à C4, de préférence parmi OH et alkyle en Cl à C2, plus préférentiellement encore parmi OH et méthyle ; avantageusement R16 est OH et R17 est alkyle en Cl à C4, de 5 préférence alkyle en Cl à C2, plus préférentiellement encore méthyle ; R21 est OH. Dans un mode de réalisation, les composés de Formule V sont ceux dans lesquels Z-L-R3 est choisi parmi : R19 R18 R2° Z H(n o 10 R21 dans lesquels R14, R15, R16, R17, R18, R19, R20 et K 21 sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi H, OH et alkyle en Cl à C4, de préférence parmi H, OH et alkyle en Cl à C2, préférentiellement parmi H, OH et méthyle ; à condition qu'au moins l'un de R14, R15, R16 et R17 et au moins l'un de R18, R19, R20 et R21 est 15 OH. Avantageusement Z-L-R3 est choisi parmi : N R 2 1 Z N R16 R17 0 dans lesquels R16, R17 et R21 sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi OH et alkyle en Cl à C4, de préférence parmi OH et alkyle en Cl à C2, 3038605 18 plus préférentiellement encore parmi OH et méthyle ; à condition qu'au moins l'un de R16 et R17 est OH et R21 est OH. Des composés particulièrement avantageux sont ceux dans lesquels R16 et R17 sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, parmi 5 OH et alkyle en C 1 à C4, de préférence parmi OH et alkyle en Cl à C2, plus préférentiellement encore parmi OH et méthyle ; avantageusement R16 est OH et R17 est alkyle en C1 à C4, de préférence alkyle en Cl à C2, plus préférentiellement encore méthyle ; 10 R21 est OH. Dans un cinquième mode de réalisation, les composés de l'invention sont ceux de la Formule VI H2N H2N VI 15 et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables, dans laquelle n, X, L et R3 sont tel que définis par rapport à la Formule I. Des composés préférés de Formule VI sont ceux dans lesquels n est 1 ou 2, X est CH2 et/ou L-R3 est 3038605 19 R15 R17 dans lequel R14, R15, R16 et R17 sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi H, OH et alkyle en C 1 à C4, de préférence parmi H, OH et alkyle en C 1 à C2, préférentiellement parmi H, OH et méthyle ; à condition qu'au moins l'un de 5 R14, R15, R16 et R17 est OH. Avantageusement L-R3 est choisi parmi : ..,y N R16 M R17 dans lesquels R16 et R17 sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi OH et alkyle en C 1 à C4, de préférence parmi OH et alkyle en C 1 à C2, plus préférentiellement encore parmi OH et méthyle ; à condition qu'au moins l'un de 10 R16 et R17 est OH. Des composés particulièrement avantageux sont ceux dans lesquels R16 est OH et R17 est alkyle en C 1 à C4, de préférence alkyle en C 1 à C2, plus préférentiellement encore méthyle. Des composés particulièrement préférés de l'invention sont ceux listés dans le Tableau 1 ci-dessous : 3038605 20 Tableau 1 Structure Nom H2N, o N (E)-4,5-diamino-1-(4-(3-(4- 'NN °Me hydroxy-3- o OH methoxyphenyl)acryloyl)piperazin- 1-yl)pentan-l-one H N OMe (E)-N-(5,6-diaminohexyl)-3-(4- 2 ,....... 0 hydroxy-3- 0 OH methoxyphenyl)acrylamide ,, W . ^2.Ki N H H2N,, o OH 4,5-diamino-1-(4-(3,4,5- N 11 01 trihydroxybenzoyl)piperazin-1- H2N ------) OH yl)pentan-l-one 0 OH I-12N 0 Ø OH N-(5,6-diaminohexyl)-3,4,5- H2NW OH trihydroxybenzamide OH H2N.,.... I N-(4,5-diaminopenty1)-3 -(3- H ,N -. 0 H hydroxy-2-oxopyridin-1(2H)- H2 N' N' o yl)propanamide 0 H2N.,,, o N N-(5,6-diaminohexyl)-3-(3 - H2 N W N o hydroxy-2-oxopyridin-1(2H)- H OH yl)propanamide H2N', I 4,5-diamino-N-(3 -(3-hydroxy-2- H ,, \./o H oxopyridin-1(2H)- H2NN \/'" o yl)propyl)pentanamide o Les composes de Formule I peuvent être préparés selon des réactions connues de l'Homme du métier. Les schémas réactionnels décrits dans la partie « Exemples » illustrent des approches de synthèse possibles. 5 Du fait de leur capacité à piéger des a-oxoaldéhydes et/ou des 3038605 21 aldéhydes 43-insaturés, leur capacité à chélater des métaux et leurs propriétés anti-oxydantes, les composés de l'invention et leurs sels, notamment acceptables au niveau pharmaceutique et/ou cosmétique, trouvent une application dans le domaine pharmaceutique et/ou cosmétique. 5 Dans un deuxième aspect, l'invention concerne donc les composés de l'invention pour utilisation comme médicament. Plus particulièrement, les composés de l'invention sont ainsi utiles dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections associées à une accumulation de produits de glycation avancés (AGE, en anglais : Advanced 10 Glycation Endproducts) et/ou de produits de peroxydation de lipides (ALE, en anglais : Advanced Lipid Peroxydation Endproducts). Ces maladies ou affections comprennent les maladies neurodégénératives, les micro- et macroangiopathies liées aux stress oxydant et carbonylé, les affections liées au diabète et les pathologies liées à l'âge. 15 Dans un mode de réalisation particulier, les maladies ou affections sont choisies parmi les maladies neurodégénératives, notamment parmi la maladie d'Alzheimer et la maladie de Parkinson. Dans un autre mode de réalisation particulier, les maladies ou affections sont choisies parmi les micro- et macroangiopathies liées aux stress 2 0 oxydant et carbonylé de type athérosclérose. Dans un autre mode de réalisation particulier, les maladies ou affections sont choisies parmi les affections liées au diabète, notamment parmi l'athérosclérose, la rétinopathie, la néphropathie, la neuropathie, les micro et macroangiopathies, la cataracte, l'amyloïdose, les troubles rhumatismaux et les 2 5 ulcères variqueux et artériels. Dans un autre mode de réalisation particulier, les maladies ou 3038605 22 affections sont choisies parmi les pathologies liées à l'âge telles que par exemple la cataracte et les rhumatismes. La présente invention, selon un autre de ses aspects, concerne également une méthode de traitement des maladies et affections ci-dessus 5 indiquées comprenant l'administration, à un patient, d'une dose efficace d'un composé selon l'invention, ou d'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables. De préférence, le patient est un animal à sang chaud, plus préférentiellement un humain. L'invention concerne également une composition pharmaceutique 10 comprenant au moins un composé de l'invention ou au moins un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé et un excipient pharmaceutiquement acceptable. Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité, parmi les excipients habituels qui sont connus de l'Homme du métier. 15 La composition pharmaceutique de la présente invention peut être choisie parmi les compositions pharmaceutiques pour administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intra-veineuse, topique, locale, intratrachéale, intranasale, transdermique ou rectale. Dans ces compositions, le principe actif de Formule I ci-dessus, ou son solvate pharmaceutiquement 20 acceptable, peut être administré sous forme unitaire d'administration, en mélange avec des excipients pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains pour le traitement et/ou la prévention des maladies ou affections ci-dessus indiquées. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules molles ou dures, les 25 poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, intratrachéale, intraoculaire, intranasale, par inhalation, les formes d'administration topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, les formes d'administration rectale et les implants. Pour l'application topique, on peut utiliser les composés selon 3038605 23 l'invention dans des crèmes, gels, pommades ou lotions. Dans un mode de réalisation préféré, il s'agit d'une composition pharmaceutique pour administration orale. De telles formes d'administration appropriées qui peuvent se présenter sous forme solide, semi-solide ou liquide en fonction du mode 5 d'administration, sont généralement connues de l'Homme du métier, référence étant faite à la dernière édition de l'ouvrage « Remington' s Pharmaceutical Sciences ». L'accumulation des AGE étant également liée à des dysfonctionnements ayant un impact cosmétique, tels que la perte de l'élasticité 10 du tissu cutané ou de l'endothélium vasculaire et la pigmentation de la peau (Dermatoendocrinol. 2012, 4, 259-270), les composés de l'invention sont utiles comme principe actif dans des compositions cosmétiques. [DEFINITIONS] Les définitions et explications ci-dessous concernent les termes et 15 expressions telles qu'utilisés dans la présente demande, comprenant la description ainsi que les revendications. Pour la description des composés de l'invention, les termes et expressions utilisées doivent, sauf indication contraire, être interprétés selon les définitions ci-après. 2 0 Le terme « alkyl(e) », seul ou en tant que partie d'un autre groupement, désigne un radical hydrocarbure de formule C'H2',1 dans lequel n est un nombre entier supérieur ou égal à 1. Le terme « sel » désigne les sels d'addition d'acides des composés de Formule I. Il englobe les sels avec des acides inorganiques et organiques, tels 2 5 que l'acide chlorhydrique, l'acide nitrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique, l'acide citrique, l'acide formique, l'acide fumarique, l'acide maléique, l'acide acétique, l'acide succinique, l'acide tartrique, l'acide méthanesulfonique, l'acide p- 3038605 24 toluènesulfonique, l'acide oxalique et analogues. Toutes les références à des composés de Formule I désignent également les sels de ceux-ci. Le terme « patient » désigne un animal à sang chaud, de préférence 5 un humain, qui attend ou reçoit un traitement médical. Le terme « humain » désigne des sujets des deux sexes et à tout stade de développement (c'est-à-dire néonatal, infantile, juvénile, adolescent et adulte). Dans un mode de réalisation, il s'agit d'un adolescent ou d'un adulte, de préférence d'un adulte. 10 Les termes « traiter » et « traitement » doivent être entendus dans leur signification générale et comprennent ainsi l'amélioration et l'abrogation d'un état pathologique. Les termes « prévenir » et « prévention » désignent le fait d'éviter ou de retarder l'apparition d'une maladie ou affection et des symptômes liés, ainsi 15 excluant un patient de développer une maladie ou affection ou réduisant le risque d'un patient de développer une maladie ou affection. Le terme « dose thérapeutiquement efficace » ou « dose efficace » désigne la dose de principe actif (composé de Formule I) qui est suffisant pour atteindre le résultat thérapeutique ou prophylactique désiré chez le patient auquel 2 0 il est administré. Le terme « pharmaceutiquement acceptable » ou « acceptable au niveau pharmaceutique » désigne qu'un composé ou un composant n'est pas nocif pour le patient et que dans le cadre d'une composition pharmaceutique il est compatible avec les autres composants. 2 5 Le terme « acceptable au niveau cosmétique » désigne qu'un 3038605 25 composé ou un composant n'est pas nocif pour l'utilisateur, notamment un humain, et que dans le cadre d'une composition cosmétique il est compatible avec les autres composants. Le terme « acceptable au niveau agroalimentaire » désigne qu'un 5 composé ou un composant n'est pas nocif pour un animal à sang chaud, notamment pour un humain lors de son ingestion et que dans le cadre d'une composition agroalimentaire il est compatible avec les autres composants. La présente invention sera mieux comprise en référence aux 10 exemples suivants. Ces exemples sont représentatifs de certains modes de réalisation de l'invention et ne limitent en aucun cas la portée de l'invention. Les figures servent à illustrer les résultats expérimentaux. 3038605 26 FIGURES Figure 1 : Structure des différents composés étudiés Figure 2 : Étude cinétique de la formation d'adduits entre le MGO et les composés selon l'invention 5 Figure 3 : Spectre de masse attestant de la formation d'au moins trois types d'adduits entre le MGO et le composé 37a après 15 min d'incubation à 37°C Figure 4 : Étude cinétique de la formation d'adduits entre le MDA et les composés selon l'invention Figure 5 : Spectre de masse attestant de la formation d'au moins un adduit entre 10 le MDA et le composé 37a après 5h d'incubation à 37°C Figure 6 : Courbe de calibration réalisée dans du tampon Hexamine 0,01 M / KC1 0,01 M (pH = 5) Figure 7 : Courbe de calibration réalisée dans un mélange de tampon Hexamine 0,01 M / KC1 0,01 M (pH = 5) et de Me0H 75/25 15 Figure 8 : Comparaison des % de complexation du Cu2+ de différents composés selon l'invention en fonction de leur concentration Figure 9: Deux composés apparentés au composé 37b testés pour leurs propriétés chélatrices du Cu2+ Figure 10 : Comparaison des % de complexation du Cu2+ du composé 37b et de 2 0 deux composés apparentés présentant seulement une extrémité chélatrice du Cu2+ libre en fonction de leur concentration Figure 11 : Évaluation des propriétés antiradicalaires du Dap-Pip, composé de 2ème génération 3038605 27 Figure 12: Évaluation des propriétés antiradicalaires du composé 29a selon l'invention Figure 13 : Évaluation des propriétés antiradicalaires du composé 29b selon l'invention 5 Figure 14: Évaluation des propriétés antiradicalaires du composé 30b selon l'invention Figure 15 : Évaluation des propriétés antiradicalaires du composé 37a selon l'invention Figure 16 : Évaluation des propriétés antiradicalaires du composé 37c selon 10 l'invention Figure 17 : Comparaison des propriétés antiradicalaires de la vitamine E, du DapPip de 2ème génération et des différents composés selon l'invention à une concentration de 10 p.M Figure 18 : Comparaison des propriétés antiradicalaires de la vitamine E, du Dap- 1 5 Pip de 2ème génération et des différents composés selon l'invention à une concentration de 1 p.M Figure 19 : Étude de la cytotoxicité des composés selon l'invention sur des cellules endothéliales cérébrales murines (bEnd.3) après 24h de traitement. La viabilité des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. (a) 2 0 composés 29a, 29b, 30b, 37a et 37c ; (b) composés 30a et 37b. Figure 20 : Étude de la cytotoxicité des composés selon l'invention sur des cellules de phéochromocytome de rat, assimilées à des cellules neuronales (PC12) après 24h de traitement. La viabilité des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. (a) composés 29a, 29b, 30b, 37a et 37c ; (b) composés 2 5 30a et 37b. 3038605 28 Figure 21 : Étude de la cytotoxicité des composés selon l'invention sur des fibroblastes humains (MRC-5) après 24h de traitement. La viabilité des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. (a) composés 29a, 29b, 30b, 37a et 37c ; (b) composés 30a et 37b. 5 Figure 22 : Étude de la cytotoxicité des composés selon l'invention sur des cellules endothéliales cérébrales murines (bEnd.3) après 48h de traitement. La viabilité des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. (a) composés 29a, 29b, 30b, 37a et 37c ; (b) composés 30a et 37b. Figure 23 : Étude de la cytotoxicité des composés selon l'invention sur des 10 cellules de phéochromocytome de rat, assimilées à des cellules neuronales (PC12) après 48h de traitement. La viabilité des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. (a) composés 29a, 29b, 30b, 37a et 37c ; (b) composés 30a et 37b. Figure 24 : Étude de la cytotoxicité des composés selon l'invention sur des 15 fibroblastes humains (MRC-5) après 48h de traitement. La viabilité des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. (a) composés 29a, 29b, 30b, 37a et 37c ; (b) composés 30a et 37b. Figure 25 : Évaluation des propriétés antiapoptotiques du composé 30b sur des cellules endothéliales cérébrales murines (bEnd.3). Les cellules bEnd.3 ont été 20 prétraitées 30 min avec 10 p.M ou 100 p.M de 30b avant l'ajout de 2 mM de MGO, puis incubées pendant 24h. L'apoptose des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. Figure 26 : Évaluation des propriétés antiapoptotiques du composé 37c sur des cellules endothéliales cérébrales murines (bEnd.3). Les cellules bEnd.3 ont été 2 5 prétraitées 30 min avec 10 p.M ou 100 p.M de 37c avant l'ajout de 2 mM de MGO, puis incubées pendant 24h. L'apoptose des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. 3038605 29 Figure 27 : Évaluation des propriétés antiapoptotiques du composé 30b sur des cellules de phéochromocytome de rat, assimilées à des cellules neuronales (PC12). Les cellules PC12 ont été prétraitées 30 min avec 10 1..1M ou 100 1..1M de 30b avant l'ajout de 1 mM de MGO, puis incubées pendant 24h. L'apoptose des 5 cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. Figure 28 : Évaluation des propriétés antiapoptotiques du composé 37c sur des cellules de phéochromocytome de rat, assimilées à des cellules neuronales (PC12). Les cellules PC12 ont été prétraitées 30 min avec 10 1..1M ou 100 1..1M de 37c avant l'ajout de 1 mM de MGO, puis incubées pendant 24h. L'apoptose des 10 cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. Figure 29 : Évaluation des propriétés antiapoptotiques du composé 37b sur des fibroblastes humains (MRC-5). Les cellules MRC5 ont été prétraitées pendant lh avec 10 1..1M ou 100 1..1M de 37b avant l'ajout de 2 mM de MGO, puis incubées pendant 24h. L'apoptose des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type 15 des triplicatas. Figure 30 : Évaluation des propriétés antiapoptotiques du composé 37c sur des fibroblastes humains (MRC-5). Les cellules MRC5 ont été prétraitées pendant lh avec 10 1..1M ou 100 1..1M de 37c avant l'ajout de 2 mM de MGO, puis incubées pendant 24h. L'apoptose des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type 2 0 des triplicatas. EXEMPLES A. SYNTHÈSE I) Matériel et méthodes Les différents produits réactionnels ont été achetés chez Acros, 2 5 Sigma-Aldrich et VWR, et sont utilisés sans purifications additionnelles. Les CCM ont été réalisées sur plaques de silice Merck 60F254, observées dans 3038605 30 l'ultraviolet (X, = 254 nm) avant d'être révélées à l'acide phosphomolybdique dans l'éthanol à 95 % suivi d'un chauffage jusqu'à coloration maximale. Les chromatographies préparatives sur colonne ont été réalisées par la technique chromatographique sur gel de silice Kielselgel 60 (40-63 !am) (Merck) ou à l'aide 5 d'un système de chromatographie flash Reveleris® (Grace) en phase normale. Les analyses RMN ont été réalisées sur un appareil Bruker 300 ou 600. Les déplacements chimiques sont exprimés en partie par million (ppm) par rapport au solvant deutéré utilisé comme référence interne. Les constantes de couplage (J) sont exprimée en Hertz (Hz) et la multiplicité des signaux est 10 symbolisée comme suit : s (singulet), d (doublet), t (triplet), q (quadruplet) et m (multiplet). Les spectres de masse ont été obtenus sur un appareil Shimadzu LCMS-2020 pour les MS et un appareil Micromass Q-TOF Ultima pour les HRMS, en mode d'ionisation électrospray positif (ESI +). II) Synthèse des composés selon l'invention 15 1- Synthèse des synthons diaminés de départ a) Dérivés de l'acide aspartique et de l'acide glutamique (Schéma 1) AcCI--Me0H / 0°C / 1h HO 0 0 HO 0 HCI méthanolique ----- Boc20 / NaHCO3 HO HzN Me0H / 0°C / 3h, H2NOMe puis TA / 1h à 1h30 .HCI Dioxane/H20 2:1BocHN M OMe Asp-OH (ni = 1) ou Rdt = 100% TA/ 18 à 24h Glu-OH (n1 = 2) 1 (ni = 1) ou 2 (ni = 2) Rdt = 74% 3 (ni = 1) ou 4 (ni = 2) 1) NaBH4 / NiC12.6H20 Boc20 TFAA / TEA Me0H / 0°C, puis TA / 3h OMe BocHN OMe 2) LiOH 4N BocHN OH THF / -10°C / 2h30 Rdt = 60 à 74% THF/H20 1:1 / TA / 1h à 1h30 5 (n1 = 1) ou 6 (n1 = 2) 7 (ni = 1) ou 8 (ni = 2) Rdt = 50 à 67% 9 (ni = 1) ou 10 (ni = 2) 1) CICOOEt / TEA THF / -15°C, puis TA / 30 min sous Ar 2) NH3 aqueux 25% -15°C, puis TA / 18h Rdt = 68 à 77% 3038605 31 Schéma 1 : Elaboration des synthons dérivés des acides aspartique et glutamique * Composés 1 et 2 (décrits dans la littérature) : 5 La première étape de synthèse (Schéma 1) permettant l'obtention d'un ester de méthyle au départ de l'acide aspartique fût précédemment mise au point par Wojciechowski et al. (Bioconjugate Chem., 2007, 18, 1625-1636) et a été dans le présent cas, transposée à l'acide glutamique. 10 * Composés 3 (commercial) et 4 (décrit dans la littérature) : 011ivier et al (Tetrahedron Lett., 2010, 51, 4147-4149) et More et al. (J. Med. Chem., 2009, 52, 4650-4656) ont respectivement décrit les conditions de protection utilisées du groupement aminé des esters de méthyle 1 et 2 par un groupement t-butyloxycarbonyle. 15 * Composés 5 et 6 (J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1999, 2057-2060) : A une solution du composé 3 ou 4 (1 eq) dans du THF anhydre (3,7 à 3,9 mL/mmol), placée sous agitation à -15°C et sous Ar, sont additionnés successivement de la triéthylamine (1,1 eq) et du chloroformate d'éthyle (1,4 eq) 2 0 dissout dans du THF anhydre (0,9 mL/mmol) en goutte à goutte. Après agitation pendant 30 min à -15°C, une solution d'ammoniaque à 25% (0,4 mL/mmol) est introduite dans le milieu réactionnel qui est alors encore placé sous agitation à 15°C, puis à température ambiante pendant 18h. Le THF est ensuite évaporé sous pression réduite et le produit souhaité est extrait à l'aide d'acétate d'éthyle. La 2 5 phase organique est lavée avec une solution de KHSO4 1N, puis de NaHCO3 10% et une solution saturée de NaC1, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour donner respectivement le dérivé 5 ou 6 sous la forme d'une poudre blanche (68 ou 77%). 3038605 32 Composé 5 : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 6,61-6,57 (bs, 1H); 6,226,18 (bs, 1H); 5,79-5,76 (bs, 1H); 4,52-4,48 (m, 1H); 3,65 (s, 3H); 2,91 (dd, J= 16,9 Hz et J' = 4,8 Hz, 1H); 2,66 (dd, J = 18,7 Hz et J' = 5,7 Hz, 1H); 1,40 (s, 9H). 5 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 173,2; 171,9 ; 155,1; 80,1; 51,7; 49,9; 35,6; 27,9 (3C). MS (ESI +): m/z = [M + H] 247,1; [M + Na] 269,1 ; [M + MeCN + Na] 310,1. HRMS (ESI +): m/z calculée pour CioHi8N205 [M + Na] = 269,1113; trouvée = 269,1103. 10 * Composés 7 (Synth. Commun., 2009, 39, 395-406) et 8 : A une solution du composé 5 ou 6 (1 eq) dans du THF (3,5 à 3,8 mL/mmol), placée sous agitation à -10°C, sont additionnés de l'anhydride trifluoroacétique (1,5 eq) et de la triéthylamine (3 eq). Le milieu réactionnel est alors placé sous 15 agitation à cette même température pendant 2h30. Le THF est ensuite évaporé sous pression réduite et le produit souhaité est extrait à l'aide d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec une solution de KHSO4 1N, puis de NaHCO3 10% et une solution saturée de NaC1, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour donner respectivement le dérivé 7 ou 8 sous la forme 2 0 d'un solide jaune (60 ou 74%) après purification sur colonne de silice à l'aide d'un mélange CH2C12/MeOH 98:2 ou par chromatographie flash en phase normale à l'aide d'un gradient CH2C12/MeOH 100 :0 à 90 :10. Composé 8 : 1H RMN (CDC13, 600 MHz): Ô (ppm) 5,46-5,42 (bs, 1H); 4,674,63 (m, 1H); 3,68 (s, 3H); 2,58-2,41 (m, 2H); 2,18-2,09 (m, 2H); 1,33 (s, 9H). 25 13C RMN (CDC13, 150 MHz): Ô (ppm) 172,6; 154,5; 118,8; 81,1; 52,0; 41,6; 29,7; 28,2 (3C); 27,4. MS (ESI +): m/z = [M + H] 243,1; [M + Na] 265,0; [M + K] 281,0; [M + MeCN + Na] 306,1. HRMS (ESI +): m/z calculée pour CiiHi8N204 [M + Na] = 265,1164; trouvée = 3 0 265,1159. 3038605 33 * Composés 9 et 10 (J. Chem. Soc., Perkin Trans. I : Organic and BioOrganic Chemistry (1972-1999), 1989, 10, 1781-1786) : A une solution du composé 7 ou 8 (1 eq) dans du méthanol (7,6 à 9,8 5 mL/mmol), placée sous agitation à 0°C, sont additionnés du dicarbonate de di-t- butyle (2 eq) et du NiC12.6H20 (0,1 eq). Du borohydrure de sodium (8 eq) est ensuite introduit par petites portions sur une période de 30 min et le mélange est placé sous agitation à température ambiante pendant 3h. Après addition de diéthylènetriamine (2 eq) et agitation à nouveau pendant 30 min à lh, le 10 méthanol est évaporé sous pression réduite et le produit souhaité est extrait à l'aide d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec une solution saturée de NaHCO3, puis de NaC1, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite. Le composé intermédiaire obtenu est alors dissout dans un mélange THF/H20 1:1 et une solution aqueuse de LiOH (4 eq) 4N est ensuite 15 introduite dans le milieu qui est maintenu sous agitation pendant lh à 1h30. Le THF est évaporé sous pression réduite, puis le mélange est repris dans de l'éther diéthylique ou de l'AcOEt et alcalinisé avec une solution de Na2CO3 10% afin d'éliminer l'ester de méthyle et le dicarbonate de di-t-butyle restant dans la phase organique. La phase aqueuse est ensuite acidifiée à l'aide d'une solution 20 de HC1 6N et le produit souhaité est alors extrait à l'aide d'éther diéthylique ou d'AcOEt. Après lavage avec une solution saturée de NaC1, la phase organique est finalement séchée sur Na2SO4 et évaporée sous pression réduite pour donner respectivement le dérivé 9 ou 10 sous la forme d'une poudre blanche (50 ou 67%). 25 Composé 9 : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,88-7,85 (bs, 1H); 5,515,16 (bs, 1H); 3,97-3,94 (m, 1H); 3,27-3,23 (m, 2H); 2,55-2,53 (m, 2H); 1,40 (s, 18H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 174,7; 146,2 (2C); 79,8 (2C); 48,0; 43,4; 3 0 36,4; 28,1 (6C). MS (ESI +): m/z = [M + H] 319,2; [M + Na] 341,2; [M + MeCN + Na] 382,2. HRMS (ESI +): m/z calculée pour Ci4H26N206 [M + Na] = 341,1689; trouvée = 341,1676. 3038605 34 b) Dérivés de l'ornithine et de la lysine (Schéma 2) H2 Pd / C 2NH Me0H / TA / 3 à 48h BccEINn 19 (n = 1) ou 20 (n = 2) 1) CICOOEt / NMM THF / -10°C, puis TA / 20 min H2N NHCbz 2) NH3 25% BocHN n THF ou DCM -10°C ou TA / 4h 11 (n = 1) ou 12 (n = 2) Rdt = 80 à 91% 13 (n = 1) ou 14 (n = 2) HO 0 H2NNHCbz Orn(Z)-OH (n = 1) OU Lys(Z)-OH (n = 2) Boc20 / TEA HO THF ou DMF/H20 1:1 BocHN TA / 24h Rdt = 89% CN NaBH4/ NiC12.6H20 BocHN TFAA / Pyridine BocHNrn NHCbz _),.. NHCbz THF /-10°C /2 à 3h Boc20 BocHN-----...'""....s.1n Me0H / 0°C, puis TA / 1h Rdt = 95 à 99% Rdt = 92 à 100% 15 (n = 1) ou 16 (n = 2) Rdt = 89 à 92% 17 (n = 1) ou 18 (n = 2) 5 Schéma 2 : Elaboration des synthons dérivés de l'ornithine et de la lysine * Composé& 12 (commercial) : A une solution de Lys(Z)-OH (1 eq) dans de l'eau (5,3 mL/mmol), placée sous 10 agitation à 0°C, sont additionnés successivement de la triéthylamine (1 eq) et du dicarbonate de di-t-butyle (1,2 eq) préalablement dissout dans du DMF (5,3 mL/mmol). Le milieu réactionnel est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 24h. Le DMF est ensuite évaporé sous pression réduite et la phase aqueuse obtenue est acidifiée à l'aide d'une solution d'HCl 1N. Le 15 produit souhaité est alors extrait à l'aide d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec une solution saturée de NaC1, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour donner le dérivé 12 sous la forme d'une huile incolore (89%). 2 0 * Composés 13 et 14 (Eur. J. Org. Chem,. 2002, 1397-1406) : A une solution du composé 11 (commercial) ou 12 (1 eq) (commercial ou synthétisé comme ci-dessus) dans du THF (5 mL/mmol), placée sous agitation à -10°C, sont additionnés successivement de la N-méthylmorpholine (1,1 eq) et du chloroformate d'éthyle (1,1 eq). Après agitation pendant 20 min à -10°C, 25 une solution d'ammoniaque à 25% (0,4 mL/mmol) est introduite dans le milieu réactionnel qui est alors encore placé sous agitation pendant 4h. Le THF est ensuite évaporé sous pression réduite et le produit souhaité est extrait à l'aide d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec une solution de KHSO4 3038605 1N, puis une solution saturée de NaC1, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour donner respectivement le dérivé 13 ou 14 sous la forme d'une poudre blanche (91 ou 80%) après recristallisation à l'aide d'un mélange AcOEt/Cyclohexane 20:80. 5 Composé 13 : 1H RMN (CDC13, 600 MHz): Ô (ppm) 7,34-7,29 (m, 5H); 7,257,23 (bs, 2H); 6,95-6,93 (bs, 1H); 6,70-6,68 (bs, 1H); 5,01 (s, 2H); 3,85-3,83 (m, 1H); 3,00-2,97 (m, 2H); 1,61-1,42 (m, 4H); 1,41 (s, 9H). 13C RMN (CDC13, 150 MHz): Ô (ppm) 174,2; 156,2; 155,4; 137,3; 128,5 (2C); 128,4 (2C); 127,8; 78,0; 65,2; 53,9; 40,1; 29,5; 28,3 (3C); 26,2. 10 MS (ESI +): m/z = [M + H] 366,2; [M + Na] 388,2; [2M + Na] 753,4. HRMS (ESI +): m/z calculée pour Ci8H27N305 [M + Na] = 388,1848; trouvée = 388,1849. * Composés 15 et 16 (décrit dans WO 2000/64865 Al) : 15 A une solution du composé 13 ou 14 (1 eq) dans du THF (5 mL/mmol), placée sous agitation à -10°C, sont additionnés de l'anhydride trifluoroacétique (1,5 eq) et de la pyridine (3 eq). Le milieu réactionnel est alors placé sous agitation à cette même température pendant 2h. Le THF est ensuite évaporé sous pression réduite et le produit souhaité est extrait à l'aide d'acétate d'éthyle. La phase 20 organique est lavée avec une solution de KHSO4 1N, puis une solution saturée de NaC1, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour donner respectivement le dérivé 15 ou 16 sous la forme d'une poudre blanche (99 ou 95%) après recristallisation à l'aide d'un mélange AcOEt/Cyclohexane 20:80. 25 Composé 15 : 1H RMN (CDC13, 600 MHz): Ô (ppm) 7,36-7,25 (m, 5H); 5,125,10 (bs, 1H); 5,08 (s, 2H); 4,97-4,95 (bs, 1H); 4,56-4,54 (m, 1H); 3,24-3,22 (m, 2H); 1,81-1,79 (m, 2H); 1,68-1,65 (m, 2H); 1,44 (s, 9H). 13C RMN (CDC13, 150 MHz): Ô (ppm) 156,6 (2C); 136,4; 128,6 (2C); 128,5 (2C); 128,2; 118,7; 79,9; 66,8; 42,0; 40,0; 29,7; 28,2 (3C); 26,2. 30 MS (ESI +): m/z = [M + Na] 370,2; [2M + Na] 717,3. HRMS (ESI +): m/z calculée pour Ci8H25N304 [M + Na] = 370,1743; trouvée = 370,1749. 3038605 36 * Composés 17 et 18 : A une solution du composé 15 ou 16 (1 eq) dans du méthanol (7,5 à 8 mL/mmol), placée sous agitation à 0°C, sont additionnés du dicarbonate de di-tbutyle (2 eq) et du NiC12.6H20 (0,1 eq). Du borohydrure de sodium (7 eq) est 5 ensuite introduit par petites portions sur une période de 30 min à lh et le mélange est placé sous agitation à température ambiante pendant lh. Après addition de diéthylènetriamine (1 eq) et agitation à nouveau pendant 30 min à lh, le méthanol est évaporé sous pression réduite et le produit souhaité est extrait à l'aide d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec une 10 solution saturée de NaHCO3, puis de NaC1, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour donner respectivement le dérivé 17 ou 18 sous la forme d'une poudre blanche (92 ou 89%). Composé 17 : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,34-7,28 (m, 5H); 5,07 (s, 15 2H); 4,94-4,77 (bs, 2H); 3,60-4,56 (m, 1H); 3,21-3,12 (m, 4H); 1,57-1,51 (m, 2H); 1,50-1,43 (m, 2H); 1,41 (s, 9H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 156,0; 155,7; 136,2; 128,1; 128,0 (2C); 127,6; 127,5 (2C); 78,9 (2C); 66,1; 50,7; 44,0; 40,3; 29,5; 27,9 (6C); 25,8. MS (ESI +): m/z = [M + H] 452,1; [M + Na] 474,0. 2 0 HRMS (ESI +): m/z calculée pour C23H37N306 [M + Na] = 474,2580; trouvée = 474,2560. Composé 18 : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,34-7,29 (m, 5H); 5,07 (s, 2H); 4,98-4,91 (bs, 2H); 4,73-4,71 (bs, 1H); 3,58-3,54 (m, 1H); 3,17-3,13 (m, 25 4H); 1,46-1,36 (m, 24H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 176,3; 155,8 (2C); 135,9; 127,7 (2C); 127,3 (2C); 127,3; 78,6 (2C); 65,8; 50,5; 43,9; 39,8; 31,6; 29,1; 27,7 (6C); 22,0. MS (ESI +): m/z = [M + H] 466,3; [M + Na] 488,3. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C24H39N306 [M + Na] = 488,2737; trouvée = 3 0 488,2730. * Composés 19 et 20 : 3038605 37 A une solution du composé 17 ou 18 (1 eq) dans du méthanol (7 à 13,4 mL/mmol), est additionné du Pd/C (10% m/m). Le milieu réactionnel est placé sous vide et sous agitation à température ambiante pendant 30 min, puis maintenu sous un flux d'H2 pendant 3 à 48h. Il est ensuite filtré sur papier et le 5 méthanol est évaporé sous pression réduite pour donner respectivement le dérivé 19 ou 20 sous la forme d'une poudre blanche (92 ou 100%). Composé 19 : 1H RMN (CDC13, 600 MHz): Ô (ppm) 5,09-5,07 (bs, 1H); 4,974,95 (bs, 1H); 3,57-3,53 (m, 1H); 3,12-3,10 (m, 2H); 2,70-2,66 (m, 4H); 1,501,44 (m, 2H); 1,37 (s, 18H). 10 13C RMN (CDC13, 150 MHz): Ô (ppm) 156,2 (2C); 79,2 (2C); 51,0; 44,5; 41,3 (2C); 29,9; 28,7 (6C). MS (ESI +): m/z = [M + H] 318,2; [M + Na] 340,2. HRMS (ESI +): m/z calculée pour Ci5H3iN304 [M + H] = 318,2393; trouvée = 318,2379. 15 Composé 20 : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 5,01-4,98 (bs, 2H); 4,76- 4,73 (bs, 2H); 3,57-3,53 (m, 1H); 3,11-3,09 (m, 2H); 2,61-2,59 (m, 2H); 1,591,55 (m, 2H); 1,40-1,34 (m, 22H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 167,9 (2C); 78,9 (2C); 50,9; 44,4; 41,5; 33,1; 32,4; 28,0 (6C); 22,7. 20 MS (ESI +): m/z = [M + H] 332,2; [M + Na] 354,2. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C16H33N304 [M + H] = 332,2549; trouvée = 332,2564. 2- Couplage du groupement R_ ou NR'alb a) Modes opératoires généraux 25 a- Méthode A (Schéma 3) 3038605 R',-OH 38 1) NHS / DCC DCM ou dioxane / TA / 24 à 40h R', BocHN \ X--`ç / / ('/n R n1 H 2)BocHN \ / / ( in Rb X--`Ç BocHN BocHN 20 et 27 TEA DCM / TA / 20 à 48h Rdt = 40 à 81% X = CO ou CH2 Y'= N ou N/ N \ / Rb =Hou inexistant si Y' = N/--\\__/ N n1= 2 ou 3 R'a= 21-22 OMe OBn OH OU OBn OBn ou BocHN BocHN 10 n1=2 Rb = H R'a = 1) NHS / DCC DCM / TA / 24h OH > BocHN 2) R',-NHRb / TEA DCM / TA / 24h BocHN 23c Rdt = 68% R', N/ \ Rb --'-'" OBn n2 0 n2= 2 Schéma 3 : Couplage pseudo-peptique du groupement R'a ou NR'aRb (Méthode A) 5 * el' étape : A une solution du dérivé porteur de la fonction acide (1 eq) dans du dichlorométhane ou du dioxane (5,8 à 13,2 mL/mmol), sont additionnés 3038605 39 successivement de la N-hydroxysuccinimide (1,2 à 1,5 eq) et du DCC (1,1 à 1,2 eq). Le milieu réactionnel est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 24 à 40h, puis filtré sous vide. Le filtrat est ensuite évaporé sous pression réduite pour donner l'intermédiaire activé de l'acide. 5 * 2ème étape : L'intermédiaire activé de l'acide (1 eq) et le dérivé aminé (1 à 1,2 eq) sont dissous dans du dichlorométhane (9,8 à 22,9 mL/mmol) et mis à réagir avec de la triéthylamine (0 à 4 eq) à température ambiante pendant 20 à 48h. La phase organique est ensuite lavée avec une solution de HC1 1N, puis de NaHCO3 et de NaC1 saturée, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous 10 pression réduite pour donner les composés 21a, 21b, 22a, 22b et 23c (40 à 71%) après purification sur colonne de silice (CH2C12/MeOH 98:2 à 95:5) (Tableau 2). II- Méthode B (Schéma 4) H / BocHN Mn Rb BocHN b BocHN 19-20 R'a BocHN \ X-Y'\ EDC / HOBt i (ni Rb TEA BocHN DCM ou THF / 0°C, puis TA / 4h Rdt = 86 à 92% 23a-b X = CO ou CH2 R'a = 0 Y' = N -----N OBn nz Rb = H o n1 = 2 ou 3 n2 = 2 15 R'a-OH Schéma 4 : Couplage pseudo-peptique du groupement R'a (Méthode B) A une solution du dérivé porteur de la fonction acide (1 eq) dans du 2 0 dichlorométhane ou du THF (12 à 15 mL/mmol), placée sous agitation à 0°C, sont additionnés successivement du chlorhydrate de 1-éthy1-3-(3- diméthylaminopropy1)-carbodiimide (1,2 eq), du 1-hydroxybenzotriazole monohydrate (1,1 eq). Après 30 min d'agitation à 0°C, le dérivé aminé (1 eq) est introduit dans le milieu réactionnel avec de la tréthylamine (1,1 eq) qui est 3038605 alors maintenu sous agitation à température ambiante pendant 4h pour donner après purification sur colonne de silice (AcOEt/Cyclohexane 2:1) les composés 23a et 23b (92 ou 86%) (Tableau 2). Tableau 2 : Composés 21-23 5 Composé ni X Y' R'a Rb Rdt (%) Aspect (Méthode) 21a 2 CO r-\N N OMe - 55 (A) Poudre \___/ . 0 OH blanche o 21b 3 CH N OMe H 71(A) Poudre 2 ' 0 OH blanche 0 22a 2 2___ Nr--\N OBn - Huile CO \ / .. os OBn 81 (A) incolore OBn o 22b 3 CH N OBn H 58 (A) Poudre jaune 2 OBn ' os OBn o 23a 2 CH N rl H 92 (B) Poudre 2 ' brune 0OBn 0 23b 3 CH N r-1 H 86 (B) Poudre 2 ' OBn brune 0 0 23c 2 CO N OBn H 68 (A) Poudre 0 blanche Composé 21a : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): 8 (ppm) 7,63 (d, J = 15,0 Hz, 1H); 7,09 (dd, JI = 8,4 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H); 6,99 (d, J = 1,8 Hz, 1H); 6,91 (d, J = 8,1 Hz, 1H); 6,67 (d, J = 15,3 Hz, 1H); 6,09-6,07 (bs, 1H); 4,95-4,91 (bs, 10 2H); 3,92 (s, 3H); 3,87-3,18 (m, 9H); 3,20 (t, J = 5,4 Hz, 2H); 2,45-2,39 (m, 2H); 1,88-1,75 (m, 2H); 1,42 (s, 18H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): 8 (ppm) 170,8; 170,5 ; 165,5 (2C); 147,2; 146,3; 143,4; 127,1; 121,7; 114,4; 113,3; 109,5; 77,5 (2C); 55,6; 51,0; 44,8; 44,2 (2C); 3038605 41 41,3 (2C); 29,1; 27,9 (6C); 27,5. MS (ESI +): nilz = [M + H] 577,3; [M + Na] 599,3. HRMS (ESI +): nilz calculée pour C29H44N408 [M + Na] = 599,3057; trouvée = 599,3043. 5 Composé 21b : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,52 (d, J = 15,0 Hz, 1H); 7,02 (dd, ,f/ = 8,1 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H); 6,96 (d, J = 2,1 Hz, 1H); 6,87 (d, J = 8,1 Hz, 1H); 6,31 (d, J = 15,6 Hz, 1H); 6,28-6,25 (bs, 1H); 5,00-4,82 (bs, 2H); 3,86 (s, 3H); 3,60-3,57 (m, 1H); 3,35 (t, J = 5,4 Hz, 2H); 3,17-3,15 (m, 2H); 1,57-1,55 (m, 2H); 1,45-1,40 (m, 22H). 10 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 167,4 (2C); 157,3; 148,3; 147,8; 141,6; 128,4; 122,9; 119,5; 115,8; 110,8; 80,4 (2C); 56,8; 52,2; 45,2; 39,9; 33,1; 30,6; 29,3 (6C); 23,7. MS (ESI +): nilz = [M + H] 508,2; [M + Na] 530,2. HRMS (ESI +): nilz calculée pour C26H4iN307 [M + Na] = 530,2842; trouvée = 15 530,2856. Composé 22a : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,40-7,33 (m, 12H); 7,28-7,26 (m, 3H); 6,65 (s, 2H); 5,12 (s, 4H); 5,10 (s, 2H); 3,65-3,18 (m, 11H); 2,42-2,38 (m, 2H); 1,90-1,64 (m, 2H); 1,43 (s, 18H). 20 MS (ESI +): nilz = [M + Na] 845,2. HRMS (ESI +): nilz calculée pour C47H58N409 [M + Na] = 845,4101; trouvée 25 =845,4138. Composé 22b : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,44-7,33 (m, 12H); 7,28-7,26 (m, 3H); 7,17 (s, 2H); 6,63-6,61 (bs, 1H); 5,13 (s, 4H); 5,09 (s, 2H); 4,98-4,96 (bs, 1H); 4,78-4,75 (bs, 1H); 3,62-3,58 (m, 1H); 3,42-3,38 (m, 2H); 30 MS (ESI +): nilz = [M + Na] 777,2. 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 171,0; 169,9; 156,5; 156,2; 152,5 (2C); 139,7; 137,3; 137,4 (2C); 129,9; 128,4 (6C); 128,0; 127,8 (2C); 127,1 (6C); 107,1 (2C); 79,2 (2C); 75,0; 71,0 (2C); 51,2; 44,4 (4C); 41,5; 29,3; 28,2 (6C); 27,7. 3,18-3,20 (m, 2H); 1,63-1,61 (m, 2H); 1,47-1,41 (m, 22H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 167,2; 156,2 (2C); 152,8 (2C); 141,1; 137,6; 136,9 (2C); 130,3; 128,6 (6C); 128,3; 128,1 (2C); 127,7 (6C); 107,0 (2C); 79,6 (2C); 75,3 (2C); 71,4; 51,4; 44,2; 39,5; 32,0; 29,2; 28,5 (6C); 22,8. 3038605 42 HRMS (ESI +): nilz calculée pour C44H55N308 [M + Na] = 776,3887; trouvée = 776,3905. Composé 23a : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,38-7,28 (m, 5H); 7,227,18 (bs, 1H); 7,08 (dd, ,f/ = 6,9 Hz, J2 = 1,5 Hz, 1H); 6,70 (dd, ,f/ = 7,5 Hz, J2 5 = 1,2 Hz, 1H); 6,03 (t, J = 7,2 Hz, 1H); 5,07 (s, 2H); 4,93-4,90 (bs, 1H); 4,28- 4,17 (m, 2H); 3,51-3,46 (m, 1H); 3,10-2,98 (m, 4H); 2,63 (t, J = 6,0 Hz, 2H); 2,28-2,23 (bs, 1H); 1,40 (s, 9H) 1,38 (s, 9H); 1,32-1,17 (m, 4H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 169,7 (2C); 157,6 (2C); 148,1; 135,4; 130,0; 128,1 (2C); 127,7; 127,2 (2C); 115,1; 104,4; 78,7 (2C); 70,3; 50,5; 46,5; 10 44,6; 38,6; 34,5; 29,4; 27,9 (6C); 25,0. MS (ESI +): nilz = [M + H] 573,2; [M + Na] 595,1. HRMS (ESI +): nilz calculée pour C30H44N407 [M + Na] = 595,3108; trouvée = 595,3098. Composé 23b : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,36-7,25 (m, 5H); 7,06 15 (dd, ,f/ = 6,9 Hz, J2 = 1,5 Hz, 1H); 7,00-6,98 (bs, 1H); 6,66 (dd, ,f/ = 7,5 Hz, J2 = 1,5 Hz, 1H); 6,00 (t, J = 7,2 Hz, 1H); 5,00 (s, 2H); 4,83-4,80 (bs, 2H); 4,21 (t, J = 6,3 Hz, 2H); 3,50-3,48 (m, 1H); 3,07-3,00 (m, 4H); 2,65 (t, J = 6,0 Hz, 2H); 1,38-1,23 (m, 24H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 170,1 (2C); 158,0 (2C); 148,5; 135,9; 20 130,3; 128,5 (2C); 128,1; 127,4 (2C); 115,5; 104,7; 79,2 (2C); 70,6; 51,1; 47,0; 44,6; 38,8; 35,0; 32,0; 28,9; 28,3 (6C); 22,7. MS (ESI +): rniz = [M + H] 587,5; [M + Na] 610,3. HRMS (ESI +): nilz calculée pour C3iH46N407 [M + Na] = 609,3264; trouvée = 609,3254. 25 Composé 23c : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,42-7,38 (bs, 1H); 7,38- 7,31 (m, 5H); 6,95 (d, J = 6,0 Hz, 1H); 6,67 (d, J = 6,7 Hz, 1H); 6,10 (t, J = 7,2 Hz, 1H); 5,40-5,29 (bs, 2H); 5,03 (s, 2H); 4,01-3,97 (m, 2H); 3,61-3,58 (m, 1H); 3,14-3,08 (m, 4H); 2,35-2,25 (m, 2H); 1,88-1,59 (m, 4H); 1,35 (s, 18H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 172,3 (2C); 156,4 (2C); 148,2; 135.6; 30 128,5; 128,2 (2C); 128,0; 127,7 (2C); 115,5; 105,8; 79,0 (2C); 70,4; 50,9; 46,8; 44,2; 35,7; 32,6; 30,3; 28,8; 28,0 (6C). MS (ESI +): nilz = [M + H] 573,5; [M + Na] 594,4. HRMS (ESI +): nilz calculée pour C30H44N407 [M + Na] = 595,3108; trouvée = 3038605 43 595,3078. b) Composés porteurs d'un groupement dérivé de l'acide férulique ou de l'acide gallique 5 a- Préparation du synthon R' '-OH issu de l'acide gallique La triple O-benzylation des groupements phénoliques de l'acide gallique est décrite dans la littérature (Carbohydr. Res., 2007, 342, 1510-1513). II- Couplage des synthons issus des acides aspartique et glutamique 10 avec la pipérazine (Schéma 5) 1) NHS / DCC BocHN.' n DCM / TA / 1h30 à 24h BocHN --^- BocHN /\ 'OH BocHN 9 (ni = 1) ou 10 (ni = 2) TEA 24 (n1 = 1) ou 25 (ni = 2) DCM / TA / 15 à 24h Rdt = 77% ni H2 26 (n1 = 1) ou 27 (n1 = 2) Pd/C BocHN NCbz Me0H / TA / 24 à 48h Rdt = 96 à 100% Schéma 5 : Couplage des dérivés des acides aspartique et glutamique avec 15 la pipérazine 2)HNNCbz Le pipérazine-l-carboxylate de benzyle a été synthétisé en adaptant une méthode mise au point par Dener et al (WO 1998/04537 Al) en passant par le 4-benzyloxycarbonylpipérazine-l-carboxylate de t-butyle. Ainsi, le pipérazine- 2 0 1-carboxylate de t-butyle est obtenu selon une procédure décrite par Moussa et al. (J. Med. Chem., 2010, 53, 6228-6239). Puis, il est mis à réagir (1 eq) avec de la triéthylamine (1,1 eq) dans du dichlorométhane (2,7 mL/mmol) à 0°C pendant 10 min. Une solution de chloroformate de benzyle dans du dichlorométhane (1,6 mL/mmol) est ensuite introduite dans le milieu qui est 2 5 placé sous agitation à température ambiante pendant 18h. Le dichlorométhane est alors évaporé sous pression réduite et le résidu est repris dans de l'acétate d'éthyle. La phase organique est finalement lavée avec une solution de KHSO4 1M et de NaHCO3 5%, puis une solution saturée de NaC1, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour donner le 4- 3038605 44 benzyloxycarbonylpipérazine-l-carboxylate de t-butyle sous la forme d'une poudre blanche (87%) après purification sur colonne de silice (CH2C12/MeOH 99:1). Cet intermédiaire (1 eq) est finalement dissous dans une solution de HC1 4N dans du dioxane (6 mL/mmol). Le milieu réactionnel est alors placé sous 5 agitation à température ambiante pendant 2h. Le dioxane est évaporé sous pression réduite et le résidu est trituré dans de l'éther. Après filtration sous vide, le précipité obtenu est une nouvelle fois lavé avec de l'éther pour donner le pipérazine- 1-carboxylate de benzyle sous la forme d'une poudre blanche (92%). * Composés 24 et 25 : 10 el' étape : A une solution du composé 9 ou 10 (1 eq) dans du dichlorométhane (8 mL/mmol), sont additionnés successivement de la N-hydroxysuccinimide (1,2 eq) et du DCC (1,1 eq). Le milieu réactionnel est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 1h30 à 24h, puis filtré sous vide. Le filtrat est ensuite évaporé sous pression réduite pour donner l'intermédiaire activé de 15 l' acide. 2ème étape : Le dérivé de la pipérazine (1 à 1,2 eq) est dissous dans du dichlorométhane (11,1 à 14,7 mL/mmol) et mis à réagir avec de la triéthylamine (1 à 3 eq) à température ambiante pendant 30 min. L'intermédiaire de l'acide (1 eq) est ensuite introduit dans le milieu réactionnel qui est alors placé sous 2 0 agitation à température ambiante pendant 15 à 24h. La phase organique est ensuite lavée avec une solution de HC1 1N, puis de NaHCO3 et de NaC1 saturée, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour donner le composé 24 ou 25 sous la forme d'une poudre blanche (77%) éventuellement après purification sur colonne de silice (CH2C12/MeOH 98:2). 2 5 Composé 24 : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,33-7,31 (m, 5H); 5,69- 5,65 (bs, 1H); 5,12 (s, 2H); 5,03-4,98 (bs, 1H); 5,89-5,86 (m, 1H); 3,63-3,45 (m, 10H); 2,67-2,41 (m, 2H); 1,39 (s, 18H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 173,3; 169,2; 169,1; 147,1; 131,9; 128,3 (2C); 127,9; 127,8 (2C); 79,3 (2C); 67,2; 48,9; 45,4; 43,4 (2C); 41,0 (2C); 34,9; 3 0 28,1 (6C). MS (ESI +): m/z = [M + H] 521,4; [M + Na] 543,4. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C26H40N4O7 [M + Na] = 543,2795; trouvée = 543,2794. 3038605 Composé 25 : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,32-7,30 (m, 5H); 5,12 (s, 2H); 4,99-4,97 (bs, 2H); 3,58-3,56 (m, 4H); 3,47-3,42 (m, 7H); 3,17-3,14 (m, 2H); 2,42-2,34 (m, 2H); 1,38 (s, 18H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 170,8; 164,0; 163,8; 154,7; 136,0; 128,2 5 (2C); 127,8; 127,6 (2C); 79,0 (2C); 67,1; 51,1; 44,8 (2C); 44,2; 43,4; 41,1 (2C); 29,2; 28,0 (6C). MS (ESI +): m/z = [M + H] 535,3; [M + Na] 557,3. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C27H42N407 [M + Na] = 557,2951; trouvée = 557,2945. 10 * Composés 26 et 27 : A une solution du composé 24 ou 25 (1 eq) dans du méthanol (11,2 à 12,2 mL/mmol), est additionné du Pd/C (10% m/m). Le milieu réactionnel est placé sous vide et sous agitation à température ambiante pendant 30 min, puis 15 maintenu sous un flux d'H2 pendant 24 à 48h. Il est ensuite filtré sur papier et le méthanol est évaporé sous pression réduite pour donner respectivement le dérivé 26 ou 27 sous la forme d'une poudre blanche (100 ou 96%). Composé 26 : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 5,72-5,68 (bs, 1H); 4,994,97 (bs, 1H); 3,90-3,86 (m, 1H); 3,65-3,43 (m, 4H); 3,32-3,20 (m, 2H); 2,86- 2 0 2,59 (m, 2H); 2,47-2,27 (m, 4H); 1,39 (s, 18H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 167,1; 157,5 (2C); 79,1 (2C); 48,6 ; 45,9; 44,9; 43,1; 40,9; 34,8; 27,9 (6C). MS (ESI +): m/z = [M + H] 387,3; [M + Na] 409,3. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C18H34N405 [M + Na] = 409,2427; trouvée = 2 5 409,2418. Composé 27 : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 4,99-4,97 (bs, 2H); 3,603,56 (m, 4H); 3,47-3,40 (m, 4H); 3,21-3,17 (m, 2H); 2,84-2,80 (m, 4H); 2,402,35 (m, 2H); 1,42 (s, 18H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 170,8; 156,5; 156,2; 80,2; 79,1; 51,2; 46,0 3 0 (2C); 45,6 (2C); 42,6; 41,5; 24,4; 28,2 (6C). MS (ESI +): m/z = [M + H] 401,2; [M + Na] 423,2. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C19H36N405 [M + Na] = 423,2583; trouvée = 3038605 46 423,2573. y- Débenzylation du groupement R'a issu de l'acide gallique (Schéma 6) R a / BocHN X-Y' ( ni \Rb BocHN H2 Pd/C ).- Me0H / TA / 24 à 48h Rdt = 99-100% Ra BocHN \ / X - y\ Mn Rb BocHN 22a-b OBn R'a = Ra = 28a-b OH X= CO ou CH2 Y' = N ou N\ /N Rb = H ou inexistant si Y' = N/ \ \ nl= 2 ou 3 5 Schéma 6 : Débenzylation du groupement R'a issu de l'acide gallique A une suspension du composé 22a ou 22b (1 eq) dans du méthanol (37,7 à 41,1 mL/mmol), est additionné du Pd/C (10 à 50% m/m). Le milieu réactionnel est placé sous vide et sous agitation à température ambiante pendant 30 min, puis 10 maintenu sous un flux d'H2 pendant 24 à 48h. Il est ensuite filtré sur papier et le méthanol est évaporé sous pression réduite pour donner le dérivé 28a ou 28b (soluble dans le méthanol, contrairement au produit de départ) sous la forme respectivement d'une poudre blanche ou d'une huile orangée (99 ou 100%). Composé 28a : 1H RMN (CD3OD, 400 MHz): Ô (ppm) 6,45 (s, 2H); 3,62-3,54 15 (m, 8H); 3,46-3,42 (m, 1H); 3,15-3,11 (m, 2H); 2,48-2,43 (m, 2H); 1,87-1,59 (m, 2H); 1,43 (s, 18H). 13C RMN (CD3OD, 100 MHz): Ô (ppm) 172,4; 171,9; 157,3 (2C); 145,8 (2C); 135,3; 125,0; 106,3 (2C); 78,7 (2C); 50,5; 45,1 (2C); 43,8; 42,3 (2C); 29,1; 27,5; 27,4 (6C). 3038605 47 MS (ESI +): m/z = [M + H] 553,1; [M + Na] 575,1. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C26H40N409 [M + Na] = 575,2693; trouvée = 575,2719. Composé 28b : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): 8 (ppm) 7,25-7,20 (bs, 3H); 6,84 5 (s, 2H); 5,44-5,42 (bs, 1H); 5,28-5,21 (bs, 2H); 3,15-3,00 (m, 5H); 1,41-1,34 (m, 22H); 1,23-1,16 (m, 2H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): 8 (ppm) 168,4; 156,7; 156,4; 144,3 (2C); 135,7; 124,6; 106,9 (2C); 79,0 (2C); 50,7; 44,2; 39,5; 31,9; 29,2; 27,9 (6C); 22,6. MS (ESI +): m/z = [M + H] 484,2; [M + Na] 506,3. 10 HRMS (ESI +): m/z calculée pour C23H37N308 [M + Na] = 506,2478; trouvée = 506,2501. ô- Déprotection finale du groupement diamine (Schéma 7) / / Re HCI 4N dans dioxane Ra BocHN X-1' H2N X-Y'' Rb TA / 45 min à 6h /Sn Rb n .2HCI BocHN Rdt = 57 à 100% H2N 21 ou 28 29-30 OH X = CO ou CH2 Re = Y' = N ou N N OU Rb = H ou inexistant si Y' = N N n1= 2 ou 3 15 Schéma 7 : Déprotection finale du groupement diamine Le composé 21a, 21b, 28a ou 28b (1 eq) est dissous dans une solution de HC1 4N dans du dioxane (27,6 à 50,4 mL/mmol). Le milieu réactionnel est alors 20 placé sous agitation à température ambiante pendant 45 min à 6h. Le dioxane est évaporé sous pression réduite et le résidu est trituré dans de l'éther. Après filtration sous vide ou de préférence élimination de l'éther par aspiration à l'aide d'une pipette Pasteur et évaporation sous vide car il s'agit de produits très hygroscopiques, le précipité obtenu est lyophilisé pour donner respectivement le 25 dérivé 29a, 29b, 30a ou 30b sous la forme d'une poudre jaune ou beige (75, 66, 100 ou 57%). 3038605 48 Composé 29a : 1H RMN (d6-DMSO, 300 MHz): Ô (ppm) 8,63-8,61 (bs, 1H); 7,68-7,56 (bs, 4H); 6,54 (d, J = 15,3 Hz, 1H); 6,44 (s, 1H); 6,21-6,17 (m, 2H); 5,89 (d, J = 8,1 Hz, 1H); 2,93 (s, 3H); 2,82-2,56 (m, 9H); 2,24-2,20 (m, 2H); 1,74-1,68 (m, 2H); 1,03-0,97 (m, 2H). 5 13C RMN (d6-DMSO, 75 MHz): Ô (ppm) 169,7; 165,0; 162,9; 148,5; 142,4; 126,4; 122,6; 115,3; 114,2; 111,1; 55,7; 48,7; 39,7 (5C); 28,1; 25,3. MS (ESI +): nilz = [M + H] 377,1. HRMS (ESI +): nilz calculée pour Ci9H28N404.2HC1 [M + H] = 377,2189; trouvée = 377,2198. 10 Composé 29b : 1H RMN (d6-DMSO, 300 MHz): Ô (ppm) 8,51-8,47 (bs, 4H); 8,13-8,09 (bs, 1H); 7,30 (d, J = 15,9 Hz, 1H); 7,10 (s, 1H); 6,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 6,79 (d, J = 8,1 Hz, 1H); 6,49 (d, J = 15,9 Hz, 1H); 3,78 (s, 3H); 3,42-3,38 (m, 1H); 3,17-3,05 (m, 4H); 1,66-1,62 (m, 2H); 1,46-1,40 (m, 4H). 13C RMN (d6-DMSO, 75 MHz): Ô (ppm) 165,6; 148,2; 138,8; 138,7; 126,3; 15 121,4; 119,0; 115,6; 110,7; 55,4; 48,8; 38,1 (2C); 29,5; 28,6; 21,7. MS (ESI +): nilz = [M + H] 308,1. HRMS (ESI +): nilz calculée pour Ci6H25N303.2HC1 [M + H] = 308,1974; trouvée = 308,1986. Composé 30a : 1H RMN (d6-DMSO, 300 MHz): Ô (ppm) 8,66-8,53 (bs, 4H); 20 6,37 (s, 2H); 3,55-3,45 (m, 9H); 3,14-3,10 (m, 2H); 2,60-2,56 (m, 2H); 1,92- 1,88 (m, 2H). 13C RMN (d6-DMSO, 75 MHz): Ô (ppm) 169,5; 169,3; 145,3; 134,4; 124,9; 106,3 (2C); 66,0 (2C); 48,5; 40,0 (2C); 38,3; 27,8; 25,0. MS (ESI +): nilz = [M + H] 352,9. 25 HRMS (ESI +): nilz calculée pour Ci6H24N405.2HC1 [M + H] = 353,1825; trouvée = 353,1813. Composé 30b : 1H RMN (d6-DMSO, 300 MHz): Ô (ppm) 8,52-8,45 (bs, 4H); 8,13-8,10 (bs, 1H); 6,82 (s, 2H); 3,24-3,07 (m, 5H); 1,48-1,35 (m, 6H). 13C RMN (d6-DMSO, 75 MHz): Ô (ppm) 166,5; 145,5; 136,1; 125,0; 106,8 30 (2C); 49,0; 40,4 (2C); 29,6; 28,7; 21,8. MS (ESI +): nilz = [M + H] 284,2. HRMS (ESI +): nilz calculée pour Ci3H21N304.2HC1 [M + Na] = 284,1610; trouvée = 284,1612. 3038605 49 c) Composés porteurs d'un groupement hydroxypyridinone a- Préparation des synthons R'a-OH et IV a-NHRb (Schéma 7) 5 'OH BnBr CsF N/0 K2CO3 N/0 MeCN / Reflux / 16h MeCN / Reflux / 18h Rdt = 90% 32 Rdt = 93% CN 31 NaOH NaBH4 / NiC12.6H20 H2O / Reflux / 1h Rdt = 65% Boc2O Me0H / 0°C, puis TA / 1h Rdt = 84% ,OBn 35 HCI 4N dans dioxane H 33 COOH TA / 18h Rdt = 100% 34 .HCI Schéma 7 : Préparation des synthons R'a-OH et R'a-NHRb 10 * Composé 31 (Synthesis, 2011, 57-64) : A une solution de 2,3-dihydroxypyridine (1 eq) dans de l'acétonitrile (0,9 mL/mmol), sont additionnés du fluorure de césium (0,1 eq) et de l'acrylonitrile (3 eq) (Tetrahedron Lett., 2002, 43, 7379-7383, Synthesis, 2011, 57-64). Le milieu réactionnel est chauffé à reflux pendant 16h. L'acétonitrile est alors 15 évaporé sous pression réduite et le produit souhaité est extrait à l'aide d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec une solution de Na2CO3 10%, puis une solution saturée de NaC1, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour donner le dérivé 39 sous la forme d'une poudre blanche 2 0 (93%) après recristallisation dans un mélange AcOEt/Cyclohexane 50:50). * Composé 32 (Synthesis, 2011, 57-64) : Le dérivé 32 a été préparé selon la synthèse décrite par Arumugam et al. (Synthesis, 2011, 57-64) en 2011. 3038605 * Composé 33 : A une solution du composé 32 (1 eq) dans de l'eau (20 mL/mmol), est additionné de l'hydroxyde de sodium (12,5 eq). Le milieu réactionnel est alors 5 chauffé au reflux pendant lh, puis extrait à l'aide d'acétate d'éthyle afin d'éliminer la matière première restante. La phase aqueuse est ensuite acidifiée à l'aide d'une solution d'HC1 6N et le composé souhaité est extrait à l'aide d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée à l'aide d'une solution de NaC1 saturée, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour 10 donner le dérivé 33 sous la forme d'une poudre jaunâtre (65%). Composé 33 : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,46-7,32 (m, 5H); 7,25 (dd, J = 6,9 Hz et J' = 1,5 Hz, 1H); 6,87 (dd, J = 7,3 Hz et J' = 1,8 Hz, 1H); 6,09 (t, J = 7,2 Hz, 1H); 4,99 (s, 2H); 4,07 (t, J = 6,9 Hz, 2H); 2,65 (t, J = 6,9 Hz, 2H). 15 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 171,9; 156,5; 147,5; 136,2; 130,1; 128,0 (2C); 127,5; 127,4 (2C); 115,1; 103,4; 69,4; 45,0; 32,5. MS (ESI +): m/z = [M + H] 273,8. HRMS (ESI +): m/z calculée pour CisHi5N04 [M + Na] = 296,0899; trouvée = 296,0893. 20 * Composé 34 : A une solution du composé 32 (1 eq) dans du méthanol (7,5 mL/mmol), placée sous agitation à 0°C, sont additionnés du dicarbonate de di-t-butyle (2 eq) et du NiC12.6H20 (0,1 eq). Du borohydrure de sodium (7 eq) est ensuite introduit par 2 5 petites portions sur une période de 30 min et le mélange est placé sous agitation à température ambiante pendant lh. Après addition de diéthylènetriamine (1 eq) et agitation à nouveau pendant lh, le méthanol est évaporé sous pression réduite et le produit souhaité est extrait à l'aide d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec une solution saturée de NaHCO3, puis de NaC1, séchée sur 3 0 Na2SO4 et finalement évaporée sous pression réduite pour donner le dérivé 34 sous la forme d'une poudre blanchâtre (84%). Composé 34 : 1H RMN (CDC13, 400 MHz): 8 (ppm) 7,32 (d, J = 8,2 Hz, 2H); 3038605 51 7,24 (t, J = 8,3 Hz, 2H); 7,18 (t, J = 5,0 Hz, 1H); 6,80 (d, J = 6,3 Hz, 1H); 6,55 (d, J = 7,4 Hz, 1H); 5,95 (t, J = 7,3 Hz, 1H); 5,50-5,48 (bs, 1H); 5,00 (s, 2H); 3,95 (t, J = 6,3 Hz, 2H); 3,01-2,96 (m, 2H); 1,78 (qt, J = 6,3 Hz, 2H); 1,33 (s, 9H). 5 13C RMN (CDC13, 100 MHz): Ô (ppm) 158,6; 156,2; 148,8; 136,1; 128,7; 128,6 (2C); 128,1; 128,0 (2C); 115,4; 105,3; 77,4; 70,8; 46,3; 36,6; 29,3; 28,2 (3C). MS (ESI +): m/z = [M + H] 358,9; [M + Na] 380,9. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C20H26N204 [M + Na] = 381,1790; trouvée = 381,1782. 10 * Composé 35 : Le composé 34 (1 eq) est dissous dans une solution de HC1 4N dans du dioxane (3,6 mL/mmol). Le milieu réactionnel est alors placé sous agitation à 15 température ambiante pendant 18h. Le dioxane est évaporé sous pression réduite et le résidu est trituré dans de l'éther. Après filtration sous vide, le précipité obtenu est une nouvelle fois lavé avec de l'éther pour donner le dérivé 35 sous la forme d'une poudre beige (100%). Composé 35 : 1H RMN (d6-DMSO, 300 MHz): Ô (ppm) 8,30-8,26 (bs, 2H); 2 0 7,43-7,30 (m, 6H); 6,91 (d, J = 7,5 Hz, 1H); 6,15 (t, J = 6,9 Hz, 1H); 5,00 (s, 2H); 4,01 (t, J = 6,6 Hz, 2H); 2,73 (t, J = 6,0 Hz, 2H); 2,00-1,95 (m, 2H). 13C RMN (d6-DMSO, 75 MHz): Ô (ppm) 156,7; 142,9; 136,1; 129,5; 128,0 (2C); 127,6; 127,5 (2C); 115,3; 104,1; 69,4; 45,4; 35,8; 26,5. MS (ESI +): m/z = [M + H] 259,1; [M + H + MeCN] 300,2. 25 HRMS (ESI +): m/z calculée pour CisHi8N202 [M + H] = 259,1447; trouvée = 259,1436. II- Débenzylation du groupement R' ' (Schéma 8) 3038605 52 R'a H2 Ra BocHN ,(X -Y' Pd/C BocHN X-Y' (ni \Rb Yini \Rb BocHN BocHN Me0H / TA / 2h Rdt = 90 à 100% 23a-c 36a-c R'a = Ra = 0 Z = CO ou CH2 n2 = 2 X = CO ou CH2 Y' = N ou N \N 0 Z = CO ou CH2 n2 = 2 Rb= H ou inexistant si Y' = N\ /N n1 = 2 ou 3 Schéma 8 : Débenzylation du groupement R'a A une solution du composé 23a, 23b ou 23c (1 eq) dans du méthanol (15,1 à 5 20,2 mL/mmol), est additionné du Pd/C (10% m/m). Le milieu réactionnel est placé sous vide et sous agitation à température ambiante pendant 30 min, puis maintenu sous un flux d'H2 pendant 48h. Il est ensuite filtré sur papier et le méthanol est évaporé sous pression réduite pour donner respectivement le dérivé 36a, 36b ou 36c sous la forme d'une huile brune (90, 96 ou 100%). 10 Composé 36a : 1H RMN (CDC13, 600 MHz): 8 (ppm) 6,95 (d, J = 6,8 Hz, 1H); 6,93-6,89 (bs, 1H); 6,81 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 6,13 (t, J = 7,0 Hz, 1H); 5,18-5,16 (bs, 1H); 5,03-5,01 (bs, 1H); 4,25-4,23 (m, 2H); 3,54-3,50 (m, 1H); 3,18-3,07 (m, 4H); 2,67 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 1,52-1,45 (m, 4H); 1,39 (s, 18H). 13C RMN (CDC13, 150 MHz): 8 (ppm) 170,1 (2C); 158,8; 156,7; 146,4; 128,6; 15 115,5; 107,2; 79,7 (2C); 51,1; 46,9; 44,6; 39,2; 35,6; 29,9; 28,4 (6C); 25,5. MS (ESI +): m/z = [M + H] 483,3; [M + Na] 505,3. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C23H38N407 [M + Na] = 505,2638; trouvée = 505,2644. Composé 36b : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): 8 (ppm) 7,38-7,32 (bs, 1H); 6,95 2 0 (d, J = 6,9 Hz, 1H); 6,79 (d, J = 7,3 Hz, 1H); 6,53-6,49 (bs, 1H); 6,10 (t, J = 6,9 3038605 53 Hz, 1H); 5,08-4,88 (bs, 2H); 4,25 (t, J = 6,3 Hz, 2H); 3,54-3,51 (m, 1H); 3,143,10 (m, 4H); 2,67 (t, J= 6,0 Hz, 2H); 1,39 (s, 18H); 1,32-1,19 (m, 6H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 170,0; 158,7 (2C); 156,4; 146,6; 128,6; 114,9; 106,9; 79,6 (2C); 51,3; 47,2; 44,6; 39,1; 35,4; 32,2; 29,1; 28,5 (6C); 5 22,9. MS (ESI +): m/z = [M + H] 497,1; [M + Na] 519,1. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C24H40N407 [M + Na] = 519,2795; trouvée = 519,2801. Composé 36c : 1H RMN (CDC13, 300 MHz): Ô (ppm) 7,36-7,32 (bs, 1H); 6,88 10 (d, J = 6,9 Hz, 1H); 6,83 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 6,19 (t, J= 6,9 Hz, 1H); 5,33-5,23 (bs, 2H); 4,06 (t, J= 5,2 Hz, 2H); 3,67-3,64 (m, 1H); 3,29-3,16 (m, 4H); 2,29 (t, J= 7,2 Hz, 2H); 1,93 (t, J= 6,3 Hz, 2H); 1,95-1,60 (m, 2H); 1,40 (s, 18H). 13C RMN (CDC13, 75 MHz): Ô (ppm) 173,3; 158,6 (2C); 156,8; 146,5; 127,0; 114,6; 107,6; 79,4 (2C); 51,2; 47,1; 44,5; 35,8; 33,0; 29,3; 28,2 (6C); 25,4. 15 MS (ESI +): m/z = [M + H] 483,4; [M + Na] 505,3. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C23H38N407 [M + Na] = 505,2638; trouvée = 505,2652. y- Déprotection finale du groupement diamine (Schéma 9) 20 R/a ou Ra / a Ra ou R HCI 4N dans dioxane BocHN \ X- H2N \ X-Y ) Mni Rb TA / 45 min à 16h ) ('/n1 Rb BocHN H2N Rdt = 93 à 100% 36a-c et 23b 37a-c et 38 X = CO ou CH2 Ra = ou Ra = Rb = H ou Me ou inexistant si Y' = Y' = N ou i\\ > rl OBn II \ 7 / \ ,,,.Z1...rnNoH Z ,,N I 2 0 n2 0 n2= P12 Z = CO ou n1 = 2 ou 3 Schéma 9 : Déprotection finale du groupement diamine Le composé 36a, 36b, 36c ou 23b (1 eq) est dissous dans une solution de HC1 4N dans du dioxane (3,5 à 7,2 mL/mmol ou 20 eq si dissolution dans 19,9 25 mL/mmol de dioxane). Le milieu réactionnel est alors placé sous agitation à 3038605 54 température ambiante pendant 45 min à 16h. Le dioxane est évaporé sous pression réduite et le résidu est trituré dans de l'éther. Après filtration sous vide ou de préférence élimination de l'éther par aspiration à l'aide d'une pipette Pasteur et évaporation sous vide car il s'agit de produits très hygroscopiques, le 5 précipité obtenu est lyophilisé pour donner respectivement le dérivé 37a, 37b, 37c ou 38 sous la forme d'une poudre beige, blanche ou orangée (100, 100, 93% ou 100%). Composé 37a : 1H RMN (D20, 400 MHz): Ô (ppm) 7,16 (d, J = 6,8 Hz, 1H); 7,05 (d, J = 7,5 Hz, 1H); 6,41 (t, J = 7,1 Hz, 1H); 4,30 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 3,67- 10 3,64 (m, 1H); 3,35-3,33 (m, 2H); 3,18 (t, J = 6,7 Hz, 2H); 2,72 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 1,76-1,56 (m, 4H). 13C RMN (D20, 100 MHz): Ô (ppm) 173,3; 158,5; 145,5; 129,4; 118,8; 108,5; 49,0; 47,4; 40,9; 38,7; 35,3; 27,5; 24,1. MS (ESI +): m/z = [M + H] 283,1. 15 HRMS (ESI +): m/z calculée pour C13H22N403.2HC1 [M + H] = 283,1770; trouvée = 283.1765. Composé 37b : 1H RMN (d6-DMSO, 300 MHz): Ô (ppm) 8,65-8,59 (bs, 5H); 8,11-8,07 (bs, 1H); 7,07 (d, J = 6,7 Hz, 1H); 6,69 (d, J = 7,3 Hz, 1H); 6,06 (t, J = 6,9 Hz, 1H); 4,07 (t, J = 6,9 Hz, 2H); 3,40-3,35 (m, 1H); 3,10-2,98 (m, 4H); 2 0 2,49-2,46 (m, 2H); 1,82-1,76 (m, 2H); 1,35-1,30 (m, 4H). 13C RMN (d6-DMSO, 75 MHz): Ô (ppm) 169,9; 157,8; 146,8; 128,6; 115,0; 105,4; 49,1; 45,9; 40,6; 38,2; 34,8; 29,7; 28,6; 21,9. MS (ESI +): m/z = [M + H] 296,9. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C14H24N403.2HC1 [M + H] = 297,1927; 2 5 trouvée = 297.1914. Composé 37c : 1H RMN (d6-DMSO, 300 MHz): Ô (ppm) 8,62-8,54 (bs, 5H); 8,31-8,27 (bs, 1H); 7,20 (d, J = 6,7 Hz, 1H); 6,72 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 6,11 (t, J = 6,9 Hz, 1H); 3,89-3,85 (m, 2H); 3,50-3,46 (m, 1H); 3,11-3,04 (m, 4H); 2,322,28 (m, 2H); 1,90-1,75 (m, 4H). 3 0 13C RMN (d6-DMSO, 75 MHz): Ô (ppm) 171,2; 157,6; 146,6; 128,2; 114,8; 105,5; 48,7; 46,6; 35,8; 30,8; 28,7; 26,1; 25,2. MS (ESI +): m/z = [M + H] 283,1. HRMS (ESI +): m/z calculée pour C13H22N403.2HC1 [M + H] = 283,1810; 3038605 trouvée = 283,1800. Composé 38 : 1H RMN (CD3OD, 400 MHz): Ô (ppm) 7,46-7,27 (m, 8H); 6,606,56 (m, 1H); 5,21 (s, 2H); 4,42-4,38 (m, 2H); 3,65-3,61 (m, 1H); 3,35-3,31 (m, 2H); 3,21-3,17 (m, 2H); 2,79-2,75 (m, 2H); 1,82-1,78 (m, 2H); 1,55-1,51 (m, 5 4H). 13C RMN (CD3OD, 100 MHz): Ô (ppm) 171,4; 171,2; 147,2; 135,7; 130,3; 128,6; 128,2; 127,8; 119,3; 109,5; 71,0; 49,5; 40,8; 38,5; 34,6; 32,4; 29,7; 28,3; 29,8. MS (ESI +): m/z = [M + H] 387,2. 10 HRMS (ESI +): m/z calculée pour C21H30N403.2HC1 [M + H] = 387,2396; trouvée = 387,2382. B. ÉTUDES PHYSICOCHIMIQUES I) Évaluation de la formation d'adduits entre les composés selon l'invention 15 (29a, 29b, 30a, 30b ; 37a, 37b, 37c) et des a-oxoaldéhydes ou des aldéhydes a,(3-insaturés par analyse HPLC 1- Principe Les composés à tester sont mis à incuber à 37°C en présence de MGO ou de MDA. Une étude cinétique visant à rendre compte de la formation d'adduits avec 20 le MGO ou le MDA est alors réalisée par analyse HPLC. 2- Méthode a) Préparation des solutions Les composés à tester (30 pmol) sont dissous dans du PBS (1,5 mL). Une solution aqueuse (qsp 1,25 mL) de MGO à 40% dans l'eau (250 pmol) est ensuite préparée 25 et en parallèle, du MDA bis-(diOEt)-acétal (250 pmol) est mis à réagir avec une solution de HC1 1N (2 eq) dans l'eau (qsp 1,25 mL) pendant lh à température 3038605 56 ambiante. Une solution aqueuse de NaOH 0,05N est également nécessaire pour neutraliser le milieu réactionnel (5 mL). b) Incubation des mélanges à 37°C La solution de composé à tester (625 !IL - concentration finale dans le milieu = 10 5 mM) est ensuite mise à réagir avec la solution de MGO ou de MDA préparé extemporanément (125 !IL - concentration finale dans le milieu = 20 mM) en présence de NaOH 0,05 N (0,5 mL). Les différents mélanges sont ensuite mis à incuber à l'étuve à 37°C pendant 24h. c) Analyse par HPLC 10 Un prélèvement de chaque mélange (25 à 501.1E) est réalisé à intervalles de temps réguliers (0,25; 0,5; 1; 5 et 24h) et éventuellement dilué au 1/4ème dans un mélange MeCN/H20 98:2 (75 1..IL). L'analyse HPLC est réalisée parfois après congélation de l'échantillon sur un appareil Shimadzu LCMS-2020 après séparation sur une colonne Waters Acquity à l'aide d'un gradient de solvants H2O 15 + HCOOH 0,1% / MeCN + HCOOH 0,1% (98/2 pendant 2 min, puis 55/45 pendant 2 min et 45/55 pendant 3 min) avec un débit de 0,3 mL/min à 40°C. On réalise tout d'abord un blanc à l'aide d'une solution contenant le milieu réactionnel sans piégeur. Puis, on utilise une solution de piégeur libre à 10 mM comme témoin négatif et l'hydralazine comme référence de la littérature. La 2 0 proportion d'adduits formés avec le MGO (tR = 4,5 à 5,2 min) ou le MDA (tR = 4,2 à 6,4 min sauf rares exceptions) est ensuite mesurée par rapport à la quantité de piégeur libre restant (tR = 0,8 à 1,8 min sauf rares exceptions) après intégration des pics correspondants sur le spectre UV (n = 1). 3- Résultats et discussion 25 a) Évaluation de la formation d'adduits avec le MGO (Figure 2) 3038605 57 Tout d'abord, on observe une disparition du piégeur libre au profit des différents adduits avec le MGO beaucoup plus rapide avec les nouveaux composés selon l'invention qu'avec les dérivés de 2ème génération (Dap-Pip et Dap-nBuPip) (Figure 2). L'efficacité accrue de cette nouvelle série de dérivés diaminés en tant 5 que piégeurs de MGO a donc pu être démontrée. Les composés 37a, 37b et 37c porteurs d'un groupement hydroxypyridinone apparaissent de plus comme les plus réactifs avec une activité comparable à celle de l'hydralazine et une disparition presque totale du piégeur libre dès 15 min d'incubation. Nous avons également pu identifier trois types d'adduits possibles avec le MGO (Adduit A (AdA) de type 10 1:1 soit une molécule de piégeur pour deux molécules de MGO ; Adduit B (AdB) de type 1:2; Adduit C (AdC) de type 2:1) avec une évolution fréquente vers l'observation d'un adduit majoritaire de type 1:2, porteur d'un cycle pyrazine (AdB) (Figure 3). Enfin, il faut noter que les résultats obtenus avec le composé 29a n'ont pas pu être représentés graphiquement car il n'a pas été possible 15 d'obtenir de séparation entre le piégeur libre et les adduits avec le MGO dans ce cas lors de l'analyse HPLC. Toutefois, une tendance vers une présence majoritaire de AdB vis-à-vis du piégeur libre semble se dégager après 5h de réaction. b) Évaluation de la formation d'adduits avec le MDA (Figure 4) On observe notamment la formation d'un adduit porteur d'un cycle 2,3-dihydro- 20 1H-1,4-diazépine (Adduit D (AdD)) avec l'ensemble des composés selon l'invention (Figure 4 et Figure 5). Les dérivés 30a, 30b, 37b et 37c se sont révélés être les plus réactifs avec une disparition du piégeur testé conséquente au profit des adduits avec le MDA au bout de 15 min (> 60% d'adduits). Notons que les résultats obtenus avec le composé 29a n'ont une nouvelle fois pas pu être 25 représentés graphiquement car comme avec le MGO, nous n'avons pas pu retrouver de séparation entre le piégeur libre et les adduits avec le MDA lors de l'analyse HPLC. Dans ce cas, une tendance vers une présence majoritaire de AdD vis-à-vis du piégeur libre semble se dégager seulement après 24h de réaction. 3038605 58 II) Évaluation des propriétés chélatrices du Cu2+ des composés selon l'invention ((29a, 29b, 30a, 30b ; 37a, 37b, 37c) par spectrophotométrie UV/Visible 1- Principe : 5 Les composés à tester sont mis à incuber à TA en présence de Cu2+ pendant 10 min. La quantité de Cu2+ libre restante est déterminée après complexation par le murexide (Int. J. Mol. Sci., 2009, 10, 5485-5497 ; Molecules, 2012, 17, 1345713472). Une mesure de l'absorbance à 485 nm (A485) du complexe Cu2±/murexide (orangé) et de l'absorbance à 520 nm (A520) du murexide libre (rose) est en effet 10 réalisée par spectrophotométrie UV/Visible. La quantité de Cu2+ libre restante est alors évaluée à l'aide de l'équation de la droite de calibration donnant le rapport A485/A520 en fonction de la concentration en Cu2+ préalablement obtenue. On en déduit au final le pourcentage de complexation du Cu2+ par les composés testés. 2- Méthode : 15 a) Préparation des solutions Un tampon Hexamine 0,01 M / KC1 0,01 M (qsp 200 mL) dont le pH est ajusté à 5 à l'aide d'une solution d'HC1 1N est tout d'abord préparé. Des solutions de CuSO4.5H20 à 0,5 mM (20 mL) et 0,25 mM (100 mL) sont ensuite réalisées dans ce tampon, la première étant utilisée pour l'obtention de la courbe de calibration. 2 0 Une solution aqueuse de murexide à 1 mM doit également être préparée extemporanément (10 mL) ainsi qu'une solution mère des composés à tester à 4,2 mM dans du tampon Hexamine 0,01 M / KC1 0,01 M ou dans un mélange de tampon et de Me0H 75/25 (6,2 mL). b) Incubation des mélanges à TA 2 5 Différentes concentrations des composés à tester (n = 3) sont réparties dans du tampon Hexamine 0,O1M / KC1 0,O1M (pH = 5) (Erreur ! Source du renvoi 3038605 59 introuvable.) ou dans un mélange de tampon et de Me0H 75/25 dans des tubes à hémolyse (Erreur ! Source du renvoi introuvable.). On ajoute ensuite la solution de CuSO4.5H20 à 0,25 mM (1 mL) et on laisse incuber à TA pendant 10 min. Enfin, on introduit la solution aqueuse de murexide à 1 mM (0,1 mL) et on 5 laisse à nouveau incuber à TA pendant 1 min. On mesure alors les absorbances à 485 nm (A485) et 520 nm (A520) par spectrophotométrie UV/Visible (Spectromètre V-650 JASCO). On utilise un blanc contenant du tampon Hexamine 0,01 M / KC1 0,01 M (pH = 5) (2 mL) et de l'eau (0,1 mL), et l'éthylènediamine (EDA) comme référence de la littérature en tant que chélateur du Cu2±. 10 Tableau 3 : Préparation des différentes concentrations de composé à tester dans du tampon Hexamine 0,01M / KC1 0,01M (pH = 5) Concentration finale de Volume de solution mère Volume de tampon composé à tester (mM) de composé à tester (1..1L) Hexamine 0,01M / KC1 0,01M (pH = 5) (1..1L) 0 0 1000 0,02 10 990 0,05 25 975 0,08 40 960 0,10 50 950 0,20 100 900 0,50 250 750 1 500 500 2 1000 0 3038605 Tableau 4 : Préparation des différentes concentrations de composé à tester dans un mélange de tampon Hexamine 0,01 M / KC1 0,01 M (pH = 5) et de Me0H 75/25 Concentration Volume de solution Volume de tampon Volume de finale de composé à mère de composé à Hexamine 0,01 M / KC1 Me0H (pL) tester (mM) tester (pL) 0,01M (pH = 5) (pL) 0 0 750 250 0,02 10 743 247 0,05 25 731 244 0,08 40 720 240 0,10 50 713 237 0,20 100 675 225 0,50 250 563 187 1 500 375 125 2 1000 0 0 Des courbes de calibration sont préalablement réalisées après répartition de 5 différentes concentrations de CuSO4.5H20 (n = 3) dans du tampon Hexamine 0,01 M / KC1 0,01 M (pH = 5) (Erreur ! Source du renvoi introuvable.) ou dans un mélange de tampon et de Me0H 75/25 (Erreur ! Source du renvoi introuvable.) dans des tubes à hémolyse. Après introduction de la solution aqueuse de murexide à 1 mM (0,1 mL), on laisse incuber à TA pendant 1 min et on mesure finalement 10 les absorbances à 485 nm (A485) et 520 nm (A520) par spectrophotométrie UV/Visible. 3038605 61 Tableau 5 : Préparation des différentes concentrations de CuSO4.5H20 dans du tampon Hexamine 0,01M / KC1 0,01M (pH = 5) pour la réalisation des courbes de calibration Concentration finale de Volume de solution de Volume de tampon CuSO4.5H20 (mM) CuSO4.5H20 à 0,5 mM Hexamine 0,01 M / KC1 (1.4.L) 0,01 M (pH = 5) (1.41_,) 0 0 2000 0,025 105 1895 0,050 210 1790 0,075 315 1685 0,100 420 1580 0,125 525 1475 Tableau 6 : Préparation des différentes concentrations de CuSO4.5H20 dans 5 un mélange de tampon Hexamine 0,01 M / KC1 0,01 M (pH = 5) et de Me0H 75/25 pour la réalisation des courbes de calibration Concentration finale Volume de solution Volume de Volume de de CuSO4.5H20 de CuSO4.5H20 à tampon Hexamine Me0H (1.41_,) (mM) 0,5 mM (1.41_,) 0,01 M / KC1 0,01 M (pH = 5) (1.41_,) 0 0 1750 0,250 0,025 105 1645 0,250 0,050 210 1540 0,250 0,075 315 1435 0,250 0,100 420 1330 0,250 0,125 525 1225 0,250 3- Résultats et discussion : a) Courbes de calibration 3038605 62 On obtient des droites (Figure 6, Figure 7) dont les équations permettront de déterminer la quantité de Cu2+ libre restante, après complexation par les composés à tester et d'évaluer au final leur pouvoir de complexation du Cu2±. b) Comparaison des propriétés chélatrices du Cu2+ des composés testés 5 Tout d'abord, les nouveaux composés selon l'invention apparaissent comme de meilleurs chélateurs du Cu2+ que les dérivés de 2ème génération (Dap-Pip et DapnBuPip) (Figure 8). Les composés 30b et 37b se sont ainsi révélés les plus actifs avec un pouvoir complexant proche, surtout pour le composé 30b, de celui de l'EDA utilisée comme référence de la littérature. Au sein d'une même série, la 10 comparaison des propriétés chélatrices du Cu2+ des composés 37a et 37b (composé 37b meilleur complexant que le composé 37a) montre que l'allongement de la chaîne carbonée porteuse du groupement diamine terminal semble comme attendu améliorer l'activité. L'éloignement de la fonction carbonyle permet donc bien une potentialisation de la capacité chélatrice du 15 groupement diamine. Toutefois, le mauvais résultat obtenu avec le composé 29b par rapport à ceux obtenus avec les composés 30b et 37b dont la chaîne carbonée est également dérivée de la lysine, suggère une intervention associée à celle du groupement diamine dans la complexation du Cu2+ du groupement dérivé de l'acide férulique, de l'acide gallique ou hydroxypyridinone introduit à l'extrémité 20 opposée de la molécule. Afin de valider cette hypothèse, nous avons donc comparé les propriétés chélatrices du Cu2+ du composés 37b et de deux composés apparentés présentant seulement une extrémité chélatrice du Cu2+ libre (composés 36b et 38) (Figure 9 et Figure 10). Ainsi, la perte du groupement diamine (composé 36b) se révèle presque sans conséquence contrairement à celle du 25 groupement hydroxypyridinone (composé 38) qui apparaît donc bien essentiel à l'activité chélatrice du Cu2+ des nouveaux composés selon l'invention. Finalement, compte tenu des mauvais résultats obtenus avec les composés 29a et 29b, le groupement dérivé de l'acide férulique semble présenter le pouvoir complexant du Cu2+ le moins intéressant. 3038605 63 C. ÉVALUATION BIOLOGIQUE IN VITRO I) Évaluation in vitro des propriétés antiradicalaires des composés selon l'invention (29a, 29b, 30a, 30b ; 37a, 37b, 37c) 1- Principe : 5 Les propriétés antiradicalaires des différents composés sont déterminées par inhibition de la peroxydation lipidique dans le modèle in vitro de l'oxydation des lipoprotéines de basse densité (LDL) (Free Radic. Biol. Med., 1992, 13, 341390). La peroxydation lipidique est initiée par l'attaque par des radicaux libres d'une double liaison d'un acide gras polyinsaturé présent dans les LDL. Ceci 10 résulte en l'élimination d'un atome d'hydrogène d'un groupement CH2. Ce radical instable se réarrange pour aboutir alors à une configuration plus stable à savoir un diène conjugué. Une fois initiée, l'oxydation des LDL est une réaction en chaîne de peroxydation lipidique engendrée par les radicaux libres. L'oxydation in vitro des LDL est induite à 37°C par addition du composé hydrosoluble 2,2'-Azobis(2- 15 methylpropionamidine)dihydrochloride, (AAPH), qui génère des radicaux libres lors de sa décomposition thermique spontanée. 2- Méthode : Brièvement, l'oxydation, réalisée en plaque de 96 puits, est induite à 37°C en ajoutant 20 !IL d'une solution d'AAPH à 2 mM dans du PBS à 160 !IL de LDL 20 (100 1..tg/mL) en présence ou absence de 20 !IL des différentes solutions des composés à tester dissous dans du PBS (0,1 à 100 1..1M en concentrations finales). Les LDL seules sans ajout d'AAPH sont utilisées comme contrôle négatif. Chaque oxydation est réalisée en double. Pendant l'oxydation, la formation des diènes conjugués est suivie par la mesure de la densité optique à 234 nm toutes les 25 10 minutes pendant 8h à 37°C à l'aide d'un spectrophotomètre thermostaté TECAN. La vitamine E (a-tocophérol) qui est un puissant antioxydant reconnu dans ce modèle in vitro est utilisée comme molécule de référence (J. Nutr. Biochem., 2012, 23, 845-51). 3038605 64 3- Résultats et discussion : Le dérivé Dap-Pip de 2ème génération ne montre aucun effet antiradicalaire même à forte concentration (100 p.M) (Figure 11). Les composés 29a et 29b, dérivés de l'acide férulique se comportent de façon 5 similaire (Figure 12 et Figure 13). En effet, les résultats montrent que ces produits sont antioxydants pour des concentrations allant de 25 à 100 p.M, mais deviennent pro-oxydants à des concentrations plus faibles (de 0,1 à 10 p.M). Le composé 30b, dérivé de l'acide gallique est très pro-oxydant pour des concentrations allant de 50 à 100 p.M, mais devient fortement antioxydant aux 10 concentrations les plus faibles (0,1 à 10 p.M) (Figure 14). Les composés 37a et 37c, porteurs d'un groupement hydroxypyridinone se comportent de façon similaire. Ils ont un effet antioxydant croissant pour des concentrations allant de 1 à 100 p.M (Figure 15 et Figure 16). A des concentrations faibles de 1 à 10 p.M, les composés 30b, 37a et 37c selon 15 l'invention présentent des propriétés anti-radicalaires supérieures à celles du dérivé Dap-Pip de 2ème génération, et même à celles de la vitamine E (Figure 17 et Figure 18). L'efficacité de cette 3ème génération de composés antioxydants vis-à-vis à la fois de dérivés apparentés antérieurs, mais aussi d'un produit de référence, a donc pu être démontrée. 2 0 Le comportement assez atypique du composé 30b (antioxydant à faibles concentrations et pro-oxydant à fortes concentrations) reste encore à étudier. Au contraire, le profil des composés 29a et 29b (pro-oxydants à faibles concentrations et antioxydants à fortes concentrations) peut trouver des échos dans certains travaux récents décrits dans la littérature (J. Agric. Food Chem., 2 5 2000, 48, 3597-3604 ; J. Agric. Food Chem., 2010, 58, 9273-9280). 3038605 Au final, les composés 37a et 37c, porteurs d'un groupement hydroxypyridinone semblent avoir les meilleures propriétés antioxydantes et ce à des concentrations faibles de l'ordre de 11..IM. II) Étude de la cytotoxicité des composés selon l'invention 5 Les lignées cellulaires utilisées aussi bien pour l'étude de la cytotoxicité des composés selon l'invention que pour l'évaluation de leurs propriétés antiapoptotiques ont été sélectionnées compte tenu des revendications précédemment exposées, en vue d'une utilisation en cosmétique ou dans le traitement et/ou la prévention notamment de l'athérosclérose et des maladies 10 neurodégénératives des composés selon l'invention. Ainsi, ces différentes études ont pu être réalisées sur des fibroblastes humains (MRC-5), des cellules endothéliales cérébrales murines (bEnd.3) et des cellules de phéochromocytome de rat, assimilées à des cellules neuronales (PC12) (Eur. J. Med. Chem., 2014, 83, 355-365 ; Chem. Biol. Interact., 2014, 224, 108-116 ; Neurochem. Int., 2013, 62, 15 620-625). 1- Principe : La viabilité cellulaire est évaluée par une méthode colorimétrique basée sur la détection de la conversion d'un sel du tétrazolium (WST-8) par les cellules métaboliquement actives (kit CCK-8, Sigma, Saint-Quentin Fallavier, France) 20 (Molecules, 2014, 19(8), 12048-12064 ; J. Pharmacol. Toxicol. Methods., 2007, 56(1), 58-62). Les cellules vivantes possèdent des déshydrogénases mitochondriales qui réduisent le WST-8 (2-(2-methoxy-4-nitropheny1)-3-(4- nitropheny1)-5-(2,4-disulfopheny1)-2H-tetrazolium), monosodium salt) en formazan de couleur orangée, qui se dissout directement dans le milieu de culture. 25 Après une incubation de lh à 37°C, l'absorbance du formazan est mesurée à 450 nm. L'absorbance est directement proportionnelle au nombre de cellules vivantes. 2- Méthode : 3038605 66 Brièvement, les cellules sont ensemencées en plaques 96 puits à raison de 5.103 cellules par puits dans 100 1.1,L du milieu adéquat jusqu'à subconfluence. Les cellules sont ensuite lavées au PBS, puis traitées avec différentes concentrations (10 1..1M, 100 1..1M) des produits à tester en triplicatas pendant 24 et 48h. Un 5 contrôle positif est réalisé avec 10% de DMSO. La solution WST-8 (10 1..IL) est ensuite ajoutée dans chaque puits pour une incubation de lh à 37°C. La mesure de l'absorbance est effectuée à 450 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques Envision (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, USA). La viabilité des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. 10 3- Résultats et discussion : Tableau 7 : Étude de la cytotoxicité des composés selon l'invention sur trois lignées cellulaires (cellules endothéliales cérébrales murines (bEnd.3), cellules de phéochromocytome de rat, assimilées à des cellules neuronales (PC12) et fibroblastes humains (MRC-5)) après 24h de traitement. La viabilité des 15 cellules est exprimée en pourcentage des cellules non traitées (100% conditions contrôle). Lignée cellulaire bEnd.3 PC12 MRC-5 Concentration 10 100 10 100 10 100 (PM) Contrôle 100 100 100 100 100 100 Dap-Pip 123 103 114 120 125 128 Composé 29a 98 87 100 120 103 99 Composé 29b 92 86 108 112 106 102 Composé 30a 117 96 116 140 115 112 Composé 30b 93 99 110 82 98 101 Composé 37a 97 103 93 112 112 124 Composé 37b 126 115 138 124 113 113 Composé 37c 99 85 110 102 97 89 3038605 67 Tableau 8 : Étude de la cytotoxicité des composés selon l'invention sur trois lignées cellulaires (cellules endothéliales cérébrales murines (bEnd.3), cellules de phéochromocytome de rat, assimilées à des cellules neuronales (PC12) et fibroblastes humains (MRC-5)) après 48h de traitement. La viabilité des 5 cellules est exprimée en pourcentage des cellules non traitées (100% conditions contrôle). Lignée cellulaire bEnd.3 PC12 MRC-5 Concentration 10 100 10 100 10 100 (PM) Contrôle 100 100 100 100 100 100 Dap-Pip 131 142 110 102 113 111 Composé 29a 90 83 94 87 104 103 Composé 29b 92 90 95 97 95 100 Composé 30a 95 108 96 113 101 103 Composé 30b 92 87 95 67 92 100 Composé 37a 99 93 96 99 107 105 Composé 37b 101 100 115 107 103 101 Composé 37c 86 84 91 94 94 90 La tendance générale qui se dégage de ces premiers résultats (n = 1) révèle a priori une faible cytotoxicité voire une absence de cytotoxicité des composés selon l'invention sur les trois lignées cellulaires testées à 10 et 100 1..1M après 24h 10 (Erreur ! Source du renvoi introuvable., Figure 19, Figure 20, Figure 21) ou 48h de traitement (Erreur ! Source du renvoi introuvable., Figure 22, Figure 23, Figure 24). Quelques données moins satisfaisantes apparaissent toutefois surtout pour une concentration élevée de 100 1..1M pour notamment les composés 29a, 30b et 37c. Le composé 30b est ainsi à l'origine d'une diminution non 15 négligeable de la viabilité cellulaire à 100 1..1M et après 48h de traitement sur les cellules PC12 (67% contrôle). Toutefois, cette cytotoxicité pourrait s'expliquer par son caractère pro-oxydant déjà observé à forte concentration lors de l'évaluation in vitro de ses propriétés antiradicalaires (Figure 14). Au final, une activité antiradicalaire supérieure à celle de la vitamine E ayant été retrouvée pour 3038605 68 les dérivés les plus intéressants pour des concentrations inférieures ou égales à 10 1..1M (Figure 17, Figure 18), ces premiers résultats sur la cytotoxicité des composés selon l'invention apparaissent très encourageants. III) Évaluation des propriétés antiapoptotiques des composés selon 5 l'invention sur différentes lignées cellulaires (29a, 29b, 30a, 30b ; 37a, 37b, 37c) 1- Principe : L'apoptose est un mécanisme cellulaire intrinsèquement programmé de mort cellulaire, hautement régulé, qui constitue une réponse de l'organisme à des 10 stimuli physiologiques ou pathologiques provoquant un déséquilibre entre la production et l'élimination de cellules. Ce mécanisme de mort programmée permet de maintenir l'homéostasie des tissus. Morphologiquement, l'apoptose correspond à une rétraction progressive de la cellule, avec condensation de la chromatine et du cytoplasme, suivie d'une fragmentation caractéristique régulière 15 de l'ADN aboutissant à la formation de fragments cellulaires (fragmentation internucléosomale) ou corps apoptotiques. Une régulation inappropriée de l'apoptose joue un rôle important dans de nombreuses conditions pathologiques comme le cancer, l'autoimmunité, la maladie d'Alzheimer... (The Lancet, 1993, 381, 1251-1254 ; Toxicol Pathol., 2007, 35(4), 495-516). 20 Diverses études ont montré que le méthyglyoxal (MGO) induit l'apoptose dans de nombreux types cellulaires (Int. J. Mol, Med., 2010, 26, 813-818). L'apoptose des cellules est évaluée par une méthode ELISA utilisant deux anticorps monoclonaux murins dirigés l'un contre l'ADN et l'autre contre les histones (kit Cell Death Detection ELISAPLUS, Roche, Mannheim, Allemagne). 25 Cette technique permet de mesurer spécifiquement les mono- et oligonucléosomes dans la fraction cytoplasmique des lysats cellulaires. 2- Méthode : 3038605 69 Brièvement, les cellules sont ensemencées en plaques 96 puits ou 24 puits à raison de 5.103 cellules/puits pour les Bend.3 et PC12 et 75.103 cellules/puits pour les MRC5 dans le milieu adéquat jusqu'à subconfluence. Les cellules sont ensuite lavées au PBS, puis traitées avec différentes concentrations (10 µM, 100 µM) des 5 produits à tester en triplicate pendant 30 min (cellules PC12 et Bend.3) ou lh (cellules MRC5) à 37°C. La solution de MGO (1 mM pour les cellules PC12, 2 mM pour les cellules Bend.3 et MRC5) est ensuite ajoutée pour une incubation de 24h. Les concentrations de MGO pour chaque type cellulaire ont été choisies selon la littérature et un test de cytotoxicité (CCK8) que nous avons réalisé. La 10 solution de lyse est ensuite ajoutée dans chaque puits pendant 30 min à température ambiante. Les lysats cellulaires sont ensuite centrifugés à 200 g pendant 10 min. Vingt microlitres de ce lysat cellulaire est alors utilisé pour l'ELISA selon la procédure décrite par le fournisseur. La mesure de l'absorbance est effectuée à 405 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques Envision 15 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, USA). L'apoptose des cellules est exprimée par la moyenne ± écart-type des triplicatas. 3- Résultats et discussion : Les composés 30b et 37c ont montré des propriétés antiapoptotiques très intéressantes dès 10 1..1M suite à l'induction de l'apoptose par le MGO sur des 20 cellules endothéliales cérébrales murines (bEnd.3) (Figure 25, Figure 26). Ils apparaissent donc capables de ralentir la cascade cellulaire néfaste liée aux stress oxydant et carbonylé en vue de l'utilisation des composés selon l'invention dans le traitement et/ou la prévention de l'athérosclérose. Le composé 37c a révélé des propriétés antiapoptotiques très intéressantes dès 10 25 1..1M suite à l'induction de l'apoptose par le MGO sur des cellules de phéochromocytome de rat, assimilées à des cellules neuronales (PC12) (Figure 27, Figure 28). Il apparaît donc capable de ralentir la cascade cellulaire néfaste liée aux stress oxydant et carbonylé en vue de l'utilisation des composés selon 3038605 l'invention dans le traitement et/ou la prévention des maladies neurodégénératives. Pour le composé 30b, cette tendance se confirme à 100 µM. Les composés 37b et 37c présentent des propriétés antiapoptotiques prometteuses à 100 1..1M suite à l'induction de l'apoptose par le MGO sur des fibroblastes 5 humains (MRC-5) (Erreur ! Source du renvoi introuvable., Erreur ! Source du renvoi introuvable.). Ils apparaissent donc capables de ralentir la cascade cellulaire néfaste liée aux stress oxydant et carbonylé en vue d'une application des composés selon l'invention dans le domaine cosmétique pour une prévention du vieillissement prématuré de la peau. 10 REVENDICATIONS1. Composé de Formule I: H2N H2N I et ses sels, dans laquelle n est un nombre entier de 1 à 6 ; X est CO ou CH2 ; Y est NR1R2 ou R2 ou / \ N N - R2 \ / RI- est H ou alkyle en Cl à C4 ou alkyle en Cl à C4-aryle ; R2 est Z-L-R3 ; Z est inexistant, CO ou CH2 ; L est inexistant, CH=CH ou (CH2)in ; 15 m est un nombre entier de 1 à 6 ; R3 est phényle ou N-pyridinonyle, chacun substitué par au moins un groupe OH et éventuellement par un ou plusieurs substituants choisis parmi OH, alkoxy en C1 à C4 et alkyle en Cl à C4. 2. Composé ou sel selon la revendication 1, ayant la Formule II H2N 20 H2N 3038605 72 II. 3. Composé ou sel selon la revendication 1, ayant la Formule III H2N H2N 5 4. Composé ou sel selon la revendication 1, ayant la Formule IV R1 / X-N \ 41 -L -R3 ( H2N H2N IV. 5. Composé ou sel selon la revendication 1, ayant la Formule V / \ X -N N -Z -L -R3 H2N H2N 10 V. 6. Composé ou sel selon la revendication 4 ou 5, dans lequel Z-L-R3 est choisi parmi : 3038605 73 R10 R11 ,Z N R21 (-n R16 R17 0 dans lesquels R5, R6, R9, Rio, R11, R16, R17 et R21 sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi OH, alkoxy en Cl à C4 et alkyle en C 1 à C4 7. Composé ou sel selon la revendication 1, ayant la Formule VI H2N 5 H2N VI. 8. Composé ou solvate selon la revendication 1 choisi parmi: (E)-4,5-diamino-1-(4-(3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acryloyl)piperazin-lyl) pentan-l-one, 10 (E)-N-(5,6-diaminohexyl)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylamide, 3038605 74 4,5-diamino-1-(4-(3,4,5-trihydroxybenzoyl)piperazin-l-yl)pentan-l-one, N-(5,6-diaminohexyl)-3,4,5-trihydroxybenzamide, N-(4,5-diaminopenty1)-3-(3-hydroxy-2-oxopyridin-1(2H)-yl)propanamide, N-(5,6-diaminohexyl)-3-(3-hydroxy-2-oxopyridin-1(2H)-yl)propanamide, 5 4,5-diamino-N-(3-(3-hydroxy-2-oxopyridin-1(2H)-yl)propyl)pentanamide. 9. Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé ou l'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. 10. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 ou l'un de ses sels 10 pharmaceutiquement acceptables pour utilisation en tant que médicament. 11. Composé ou sel pharmaceutiquement acceptable pour utilisation selon la revendication 10 dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections associées à une accumulation de produits de glycation avancé et/ou de produits de peroxydation de lipides. 12. Composé ou sel pharmaceutiquement acceptable pour utilisation selon la revendication 11 dans le traitement et/ou la prévention des maladies neurodégénératives, des pathologies liées à l'âge, des affections liées au diabète et du cancer. 13. Composé ou sel pharmaceutiquement acceptable pour utilisation selon la 2 0 revendication 12 dans le traitement et/ou la prévention des maladies neurodégénératives, notamment parmi la maladie d'Alzheimer et la maladie de Parkinson. 14. Composé ou sel pharmaceutiquement acceptable pour utilisation selon la revendication 13 dans le traitement et/ou la prévention de la maladie d'Alzheimer 3038605 75 ou de la maladie de Parkinson. 15. Composé ou sel pharmaceutiquement acceptable pour utilisation selon la revendication 12 dans le traitement et/ou la prévention des maladies les pathologies liées à l'âge. 5 16. Composé ou sel pharmaceutiquement acceptable pour utilisation selon la revendication 12 dans le traitement et/ou la prévention des affections liées au diabète. 17. Composé ou sel pharmaceutiquement acceptable pour utilisation selon la revendication 16 dans le traitement et/ou la prévention de l'athérosclerose, de la 10 rétinopathie, de la nephropathie, de la neuropathie, des micro et macroangiopathies, de la cataracte, l'amyloïdose, des troubles rhumatismaux et des ulcères variqueux et artériels. 18. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 en tant que principe actif cosmétique ou ingrédient agroalimentaire. 15 19. Composition cosmétique comprenant un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9. 20. Composition agroalimentaire comprenant un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9.