Brevet FR3043553A1 — publié le 20170519

PROCEDE D'EXTRACTION D'INSAPONIFIABLES La présente invention se rapporte à un procédé d'extraction des insaponifiables d'huile végétale ainsi qu'à des extraits riches en insaponifiables ainsi obtenus et particulièrement adaptés pour une utilisation dans les domaines alimentaires, pharmaceutiques et/ou cosmétiques. Les composés insaponifiables constituent la fraction d'un corps gras qui, après action prolongée d'une base, reste 10 insoluble dans l'eau et peut être extraite par un solvant organique. Cinq grands groupes de substances sont présents dans la plupart des insaponifiables d'huiles végétales hydrocarbures saturés ou insaturés, alcools aliphatiques ou 15 terpéniques, stérols, tocophérols, les pigments caroténoïdes et xanthophiles. Les stérols ou phytostérols de différentes structures constituent une part importante de la fraction insaponifiable, environ de de 30 à 60%. Parmi ceux-ci on 20 peut trouver le cholestanol, le cholesterol, le brassicasterol, le campesterol, le stigmasterol, le campestanol, le sitostanol, le citrostadienol, le betasitosterol par exemple dont les teneurs sont variables selon l'origine de l'huile végétale. 25 Les tocophérols sont des antioxydants liposolubles majeurs qui protègent les lipoprotéines et les acides gras insaturés des membranes cellulaires. Ils luttent contre les radicaux libres présents dans l'oxygène et l'environnement 3043553 2 et, ce faisant, réduisent le nombre d'attaques des radicaux libres sur les acides gras polyinsaturés dans les membranes phospholipidiques. Les tocophérols, en absence d'oxygène, sont stables à la chaleur et à la lumière, mais, en 5 présence d'oxygène, malgré leurs propriétés anti-oxydantes, ils s'oxydent pour former une quinone. Leur teneur est donc variable en fonction des conditions d'obtention de l'huile et de son stockage.Les caroténoïdes appartiennent à la famille des terpénoïdes et regroupent deux classes de composés : les carotènes dont le 13-carotène, le lycopène et les xanthophylles, dont la lutéine, zéaxanthine, violaxanthine. Les caroténoïdes ont un rôle de protection de la plante contre les radicaux libres, les UV et plus particulièrement, préviennent l'auto-oxydation de la chlorophylle. Une autre classe d'insaponifiables, les alcools gras sont présents dans les « beurres », comme l'huile d'avocat, le beurre de karité, beurre de mangue, etc, mais en quantité très limitée dans les huiles comme les huiles de colza, de tournesol, de pastel, d'olive, de sésame, de germe de blé, de cameline par exemple. Les composés insaponifiables sont recherchés pour leurs propriétés pharmacologiques, cosmétiques et nutritionnelles. Les procédés usuels d'obtention des insaponifiables des huiles végétales comprennent une étape de saponification de la matière grasse et une extraction du produit cible (l'insaponifiable) par un solvant organique. Généralement, les solvants les plus communément utilisés sont les 30 solvants des huiles, tels que les alcanes (hexane, cyclohexane, heptane,...) et les solvants chlorés 3043553 3 (dichloroéthane, trichloroéthane, tétrachlorure de carbone,...). Parmi ces derniers, le dichloroéthane (DCE) constitue souvent le meilleur candidat, de par son rendement effectif 5 d'extraction et sa sélectivité intrinsèque. Les insaponifiables sont en effet composés de nombreux constituants qu'il convient d'extraire en totalité et avec un rendement maximal. Cependant sur le plan industriel, la toxicité du solvant 10 mis en oeuvre, sa compatibilité avec les normes de qualité environnementale ainsi que sa stabilité chimique doivent être pris en compte. A ce titre, le dichloroéthane présente deux inconvénients majeurs : le DCE est en effet classé parmi les solvants les plus toxiques, et présente par 15 ailleurs un impact néfaste sur l'environnement. En outre, les solvants organiques classiques tels qu'évoqués ci-avant ne sont que peu compatibles avec une utilisation alimentaire, pharmaceutique ou cosmétique des extraits insaponifiables obtenus. En effet on ne peut pas 20 garantir l'absence totale de résidus en ces solvants dans les extraits finaux. Une autre technique connue pour obtenir la fraction insaponifiable consiste à réaliser une distillation sous vide partiel. Cependant, une telle méthode est onéreuse, 25 lourde en investissement matériel et susceptible d'altérer les composés sensibles à la température. Le problème que se propose de résoudre la présente invention est de fournir un procédé évitant la mise en oeuvre de solvants d'extraction toxiques tant pour les 30 opérateurs que pour l'environnement. En outre, il convient 3043553 4 d'utiliser un solvant qui soit moins volatil et nocif que le DCE et qui permette d'extraire les insaponifiables avec un rendement et une sélectivité au moins comparables aux rendements et sélectivités obtenus en utilisant le DCE ou 5 tout autre solvant organique tel qu'évoqué plus avant. Enfin, afin de prévenir l'oxydation des tocophérols et caroténoïdes, il conviendra d'éviter toute élévation de température, usuellement observée lors de procédés classiques visant à éliminer le solvant employé. 10 La présente invention a ainsi pour objet un procédé d'extraction de la fraction insaponifiable contenue dans une huile végétale comprenant les étapes suivantes : a) Fourniture d'une huile végétale, b) Saponification de l'huile à l'aide d'une solution 15 alcoolique d'une base choisie dans le groupe constitué par les hydroxydes d'alcalins ou d'alcalino-terreux, c) Séparation solide-liquide, d) Récupération de la phase liquide alcoolique constituant le milieu réactionnel, 20 e) Acidification du milieu réactionnel jusqu'à un pH inférieur à 7, f) Séparation de la phase hydro-alcoolique et de la phase grasse, g) Récupération de la phase grasse riche en 25 insaponifiables. Le milieu réactionnel obtenu à l'étape d) représente, comme indiqué, la phase liquide alcoolique, particulièrement éthanolique et contient - outre la fraction insaponifiable - du glycérol ainsi que des sels d'acides gras solubles et qui n'ont pas précipités dans la phase solide constituant le savon. Son pH est de l'ordre de 12. 3043553 5 Ces sels d'acides gras peuvent être des sels de sodium ou de potassium par exemple selon si la saponification a été effectuée avec de la soude (NaOH) ou de la potasse (KOH) respectivement, par exemple. 5 La base mise en oeuvre lors de l'étape de saponification peut être choisie dans le groupe constitué par les hydroxydes de métal alcalin ou de métal alcalinoterreux. Le métal alcalin peut être choisi dans le groupe constitué par Li, Na et K. De manière préférée le métal alcalin est 10 choisi parmi Na et K et de manière encore préférée le métal alcalin est Na. Le métal alcalinoterreux peut être choisi dans le groupe constitué par Mg, Ca et Ba. En particulier la base peut être choisie parmi la soude 15 (NaOH) ou la potasse (KOH). Plus particulièrement la base est la soude (NaOH). La base est solubilisée dans un solvant alcoolique pour former la solution alcoolique. Le solvant alcoolique peut être choisi dans le groupe constitué par le méthanol, 20 l'éthanol, le propanol et le butanol ainsi que leurs mélanges. De manière avantageuse le solvant alcoolique est l'éthanol. La saponification peut être effectuée avec un ratio hydroxyde (mmol)/huile (g) compris entre 2.5 mmol 25 d'hydroxyde par gramme d'huile et 4 mmol d'hydroxyde par gramme d'huile, particulièrement 3.3 mmol d'hydroxyde par gramme d'huile. La concentration en hydroxyde dans la solution alcoolique pourra être comprise entre 1N et 1.5N, particulièrement 30 1.3N. 3043553 6 Ainsi typiquement on pourra avoir environ 100 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium 1.3N pour 30 g d'huile. En termes de ratio volumique huile/solution alcoolique ce ratio peut s'établir entre 2 et 5 volumes de solution 5 alcoolique pour un volume d'huile, plus particulièrement 3 volumes de solution alcoolique pour un volume d'huile. L'étape c) de séparation liquide/solide visant à écarter le savon peut être réalisée par toute technique adéquate connue de l'homme du métier. Il pourra s'agir de 10 décantation, de centrifugation, de filtration par exemple. De manière avantageuse il s'agira de décantation ou de centrifugation. Dans un mode de réalisation particulier, cette étape c) est réalisée par centrifugation. L'huile et la solution alcoolique n'étant pas miscibles, 15 l'étape de saponification peut être réalisée de manière préférentielle sous forte agitation par exemple à l'aide d'un Ultraturax® L'étape de saponification peut être effectuée à température ambiante, c'est-à-dire à une température de l'ordre de 20 20°C. La durée de mise en contact de l'huile avec la solution alcoolique pourra être de 30 à 60 minutes sous agitation avec une ou des périodes de repos. Dans un mode de réalisation la mise en contact se fait par 2 fois 15 min, 25 ou 3 fois 15 minutes ou 4 fois 15 minutes d'agitation en prévoyant 15 minutes de repos du milieu entre deux agitations. 3043553 7 La phase solide ainsi récupérée est constituée de savon, c'est-à-dire de sels d'acides gras non solubles. Une étape optionnelle de lavage de la phase solide comprenant le savon avec une solution alcoolique peut être 5 prévue après l'étape c) de séparation solide-liquide. La solution alcoolique pour le lavage pourra avantageusement être constituée du même alcool, ou mélange d'alcools, que celui utilisé pour la saponification. Il pourra s'agir en particulier l'éthanol. 10 Cette étape optionnelle de lavage du savon peut être répétée deux fois, trois fois, voire quatre fois par exemple et ce afin d'optimiser le transfert des composés insaponifiables vers le solvant alcoolique. La phase liquide alcoolique obtenue après cette ou ces étapes de 15 lavage du savon pourra avantageusement être récupérée et ajoutée au milieu réactionnel obtenu lors de l'étape d). Le ratio solution alcoolique/savon peut varier entre Une étape optionnelle de dilution à l'eau du milieu réactionnel avant l'étape d'acidification e) peut être 20 envisagée. Une telle dilution permet de diminuer la viscosité du milieu réactionnel et par là même de faciliter la séparation des phases, grasse d'une part et hydroalcoolique d'autre part. Cette dilution avec de l'eau permet aussi la solvatation 25 des ions alcalins ou alcalinoterreux (Na ou K en particulier) des sels d'acides gras libérés par l'acidification. Avantageusement lorsque cette étape de dilution est réalisée, le volume d'eau ajouté est limité afin de 30 minimiser les effluents et à titre d'exemple, pour un 3043553 8 volume de milieu réactionnel on pourra ajouter 1 volume d'eau. Cependant ce ratio eau/milieu réactionnel n'est pas critique et peut être compris entre 1/4 et 4/1, plus particulièrement 1/3 et 3/1, plus particulièrement encore 5 1/2 et 2/1 voire 1/1 comme évoqué ci-avant par exemple. En effet, l'étape d'acidification permet la transformation des savons solubles contenus dans le milieu réactionnel (phase hydro-alcoolique) qui sont des sels, sodiques ou potassiques par exemple, d'acides gras, en acides gras 10 libres lipophiles. La valeur de pH à atteindre correspond au point de déplacement d'équilibre entre la forme salifiée et la forme acide gras libre et est dépendante du pKa de chaque acide gras. En effet, au pH du milieu réactionnel de 12, les acides 15 gras sont sous forme carboxylate et présentent un caractère hydrophile. En baissant le pH vers des valeurs proches du pKa on augmente la nature lipophile en générant l'acide gras libre. Le pKa des acides gras est légérement variable selon la longueur de chaîne alkylée et s'établit en général 20 dans une gamme aux environ de 5. Aussi de manière avantageuse l'acidification correspond à une diminution du pH jusqu'à une valeur inférieure à 7, particulièrement de l'ordre de 6, voire 5. L'acidification pourra être réalisée à l'aide de tout acide 25 fort ou faible concentré ou dilué. On peut évoquer l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide chlorique, l'acide citrique, l'acide acétique, par exemple. De manière avantageuse il s'agira d'acide citrique. 3043553 9 Comme évoqué précédemment, l'étape optionnelle de dilution permet une diminution de la viscosité du milieu et ainsi une séparation des phases (grasse et hydroalcoolique) plus aisée. Aussi, dans un mode de réalisation particulier de 5 réalisation de l'invention, la dilution du milieu peut être concomitante à l'acidification à partir du moment où cette acidification est réalisée avec une solution acide diluée. Ainsi, dans un tel cas de figure la quantité de solution acide sera plus importante et contribuera, en même temps 10 qu'à l'acidification, à diluer le milieu et à faire diminuer la viscosité. Cette acidification libère, comme évoqué, des acides gras libres dans le milieu. Ces acides gras libres, contrairement à la forme salifiée, sont lipophiles et 15 liposolubles et vont pouvoir jouer le rôle de solvant et de véhicule de la fraction insaponifiable elle-même lipophile et contribuer à enrichir la phase grasse du milieu réactionnel une fois acidifié. C'est ainsi que l'invention permet la génération in situ 20 d'acides gras libres à partir des sels d'acides gras solubilisés dans la phase alcoolique qui n'ont pas précipité sous forme de savon. En effet la réaction de saponification n'est pas complète à 100% et plutôt de l'ordre de 85% ou 90% ou encore 95 % ce qui permet de 25 laisser substituer des sels d'acides gras solubles dans le milieu réactionnel. Ces acides gras libres générés par l'acidification vont ainsi pouvoir jouer le rôle de véhicule et de solvant des composés insaponifiables lipophiles et liposolubles. 30 Le procédé selon l'invention permet ainsi de s'affranchir de tout solvant organique afin de récupérer les 3043553 10 insaponifiables. Ces derniers sont entraînés par les acides gras libres ainsi générés. Une agitation par tout moyen adéquat est possible pour faciliter la génération des acides gras libres et pour 5 faciliter l'entraînement des insaponifiables. L'agitation peut être réalisée par barreau magnétique par exemple. Après acidification, des gouttelettes d'huile apparaissent sur les parois du récipient et dans le milieu réactionnel et, par différence de densité, finissent par former une 10 phase huileuse en partie supérieure qui emprisonne les composés lipophiles et en particulier les insaponifiables. L'étape f) de séparation de la phase grasse et de la phase hydroalcoolique peut être réalisée par tout moyen connu de séparation liquide/liquide connu de l'homme du métier. 15 Ainsi cette séparation des phases pourra être réalisée par décantation ou par centrifugation par exemple. La phase grasse récupérée contient ainsi les acides gras libres ainsi que la fraction insaponifiable de l'huile mise 20 en oeuvre. A ce titre, l'huile mise en oeuvre à l'étape a) peut être toute huile végétale contenant des composés insaponifiables que l'on souhaite extraire. L'huile pourra donc être choisie parmi les huiles 25 alimentaires ou non alimentaires, cosmétiques ou médicamenteuses. A titre d'exemple, l'huile végétale pourra être choisie dans le groupe constitué par l'huile de colza, l'huile de maïs, l'huile de tournesol, l'huile d'olive, l'huile de 3043553 11 noix, l'huile d'argan, l'huile de germe de blé, l'huile de cameline, l'huile de pastel, de chanvre, de lin, de pépins de raisins, d'avocat, de noisette, d'amande ou d'arachide ainsi que leurs mélanges. 5 De manière avantageuse l'huile végétale est choisie parmi le groupe constitué par l'huile de colza, l'huile de tournesol, l'huile d'olive, l'huile de cameline et l'huile de pastel. 10 Plus particulièrement, l'huile végétale est une huile de pastel, plus particulièrement une huile de graines de pastel, ou Isatis tinctoria. Isatis tinctoria, est une plante herbacée de la famille des Brassicaceae. Cette dicotylédone bisannuelle mesure jusqu'à 15 120 cm de haut. Ses feuilles présentent une surface légèrement cireuse et couverte de duvet. Les fleurs de couleur jaune sont réunies par grappe. Les fruits sont des silicules ailées, de 1-2 cm de long et 3-5 mm de large, pendantes à l'extrémité de pédicules. Ils prennent une 20 coloration violette à maturité, et renferment une graine unique de 2,5 mm sur 1 mm. La période de floraison a lieu de mars à avril. Isatis Tinctoria est connue depuis l'antiquité pour son utilisation en tant qu'agent colorant. Les feuilles de la 25 plante, coupées au moment où elles commencent un peu à jaunir, sont réduites en pâte, macérées, et produisent, après fermentation, une matière colorante bleue. On y trouve de l'indicane, glucoside de l'indigotine. La substance extraite desséchée, se vend sous le nom de « 30 coques de pastel ». Les graines d'Isatis Tinctoria ont 3043553 12 aussi été utilisées pour en extraire l'huile, riche en polyphénols et insaponifiables. C'est cette huile qui peut servir de produit de départ au procédé selon l'invention. 5 L'invention concerne aussi un extrait riche en insaponifiables susceptible d'être obtenu par le procédé ici décrit. En particulier un extrait riche en insaponifiables d'huile de pastel, susceptible d'être obtenu par le procédé selon la présente invention. 10 L'extrait selon l'invention présente en effet la caractéristique de concentrer non seulement les insaponifiables mais est aussi caractérisé par une forte quantité d'acides gras libres qui ont été générés par l'acidification et ont migré dans la phase grasse. 15 L'extrait selon l'invention peut ainsi présenter une teneur en acides gras libres comprise entre 60 et 80% en poids, plus particulièrement entre 70 et 75% en poids et plus particulièrement encore aux environs de 75 % en poids. L'extrait selon l'invention peut ainsi présenter une teneur 20 en insaponifiables comprise entre 20 et 40% en poids, plus particulièrement entre 25 et 30% en poids et plus particulièrement encore aux environs de 25% en poids. L'invention concerne aussi l'extrait selon l'invention pour son utilisation cosmétique, pharmaceutique ou alimentaire. 25 L'invention concerne enfin une composition cosmétique comprenant un extrait selon la présente invention. L'invention sera mieux comprise à la lecture des exemples détaillés ci-après. 3043553 13 EXEMPLE 1 : SAPONIFICATION D'UNE HUILE DE GRAINES DE PASTEL L'huile végétale est une huile de graines de pastel fournie par la société Graine de PASTEL (Toulouse, France). La 5 saponification nécessite un ratio de 3.3 mmol d'hydroxyde (équivalent à 0.1g NaOH) pour 1 g d'huile. 31.5g d'huile est mis en contact avec 104 mL d'une solution d'hydroxyde de sodium dissous dans de l'éthanol à une concentration de 1.3N. L'éthanol et l'huile ne sont pas miscibles, pour 10 augmenter le contact entre ces deux phases et favoriser la réaction, le milieu est agité fortement avec une sonde Ultraturax. La durée de mise en contact est de 2x 15 min avec 15 min d'arrêt entre les deux à 25°C. Après décantation pendant 2h à température ambiante, le milieu 15 est additionné de 70 mL d'éthanol, homogénéisé et centrifugé pour séparer le savon solide formé. Un second ajout de 40mL d'éthanol sur le savon solide et les deux phases liquides éthanoliques sont rassemblées et additionnées de 150 mL d'eau déminéralisée. Le pH de cette 20 solution de 12 est ensuite abaissé par ajout d'une solution aqueuse d'acide citrique (500g/L). Environ 4 mL de solution d'acide citrique sont ajoutés progressivement pendant lh, au milieu éthanolique sous agitation magnétique. Le milieu est à nouveau dilué avec 130 mL 25 supplémentaires d'eau. Le pH restant stable à 6.5, la solution est placé à l'abri de la lumière à 4°C pour décantation pendant 12h. La phase huileuse superficielle est prélevée, et constitue la « fraction lipidique », de 4.8g avec un rendement de 15% 30 en masse sur l'huile. 3043553 14 EXEMPLE 2 : METHODES ANALYTIQUES Analyses des acides gras 20 mg est reprise dans 1 ml de TBME (Tert Butyl Metyl Ether). Les acides gras sont ensuite dérivatisés en leur 5 methyl ester (FAMEs) par ajout de 50 pl TMSH (Triméthyl Sulphonium Hydroxide) à 0.5M dans le méthanol. Les analyses sont faites sur CPG Varian. L'injection en split 1:100 a lieu à 250°C. La colonne utilisée est Select CB FAME fused silica WCOT (50 m x 0.25 mm; film thickness 0.251Am). 10 Conditions d'analyse : Le gradient de température est de 185°C pendant 40 min, puis une rampe de 15°C/min jusqu'à 250°C, et 250°C maintenus pendant 10 min. La durée de l'analyse est de 55 min. Le détecteur à ionisation de flamme FID est fixé à 250°C. Le débit du gaz vecteur, 15 hélium, est de 1.2 mL/min. L'identification des pics est effectuée par comparaison à des standards commerciaux. Dosage des stérols La préparation de l'échantillon en vue de l'analyse suit ce 20 protocole : 100mg d'huile, additionnés de 100pg d'étalon interne (cholestanol), sont saponifiés avec 2 ml KOH 1M dans l'éthanol à 70°C pendant 20 min. Après refroidissement, 1 mL d'eau est ajouté, agité au vortex puis 6 mL de cyclohexane, agité de nouveau au vortex. Les 25 phases décantent puis 160 pL d'extrait insaponifiable de la phase organique, additionné de 40pL de réactif de silylation, sont chauffés 3 min à 103°C. L'analyse des stérols se fait sur un chromatographe en phase gazeuse muni d'un détecteur FID. L'appareil utilisé 3043553 15 est Perkin Elmer. Les conditions d'analyses sont les suivantes : Colonne CPSil 8CB (Varian) long. 30m, 0,25 mm i.d., 0,25 pm ep.f. 5 m Gaz vecteur : Helium. Pression en tête de colonne : 100 KPa. Injection on-column : 1 pl. Injecteur : 55°C pendant 0,5 min, 200°C/min jusqu'à 340°C, et 340°C pendant 30 min. 10 m Four : 160°C (0,5min), 20°C/min jusqu'à 260°C (5,5 min), 2°C/min jusqu'à 300°C (10min), 45°C/min jusqu'à 350°C (3 min). Température détecteur FID 365°C. 15 Analyses des tocophérols La préparation de l'échantillon nécessite une dilution dans le cyclohexane à hauteur de 10mg/mL. L'appareil utilisé est une chaîne HPLC DIONEX munie d'un détecteur de fluorescence. 20 Paramètres d'analyse Détails des tocophérols Dimensions 200 x 4.6 mm ; Colonne Chromasil Pression : 71 bar Séparation Volume d'injection 20 pL 3043553 16 Température : 32°C Longueur d'onde d'excitation : Détection 290nm Emission : 317nm 83°C jusqu'à 69 min Eluants Débit 1.1 mL.min-1 Iso octane/Iso Isocratique propanol 99.5 :0.5 Dosage des caroténoïdes Sur un lecteur BMG Labtech, l'absorbance à 450 nm est relevée pour une gamme de 13-carotène dans le cyclohexane, 5 et sert de calibration. Chaque échantillon dilué dans le cyclohexane a été analysé par UV (triplicats à 450nm) ; le résultat donné est exprimé en pourcentage de 13-carotène. Les huiles sont diluées au 50ième, et les extraits au 30ième. 10 EXAMPLE 3 : CARACTERISATION DE LA FRACTION LIPIDIQUE RICHE EN INSAPONIFIABLES 1. Teneur et répartition en acides gras 15 La teneur en acides gras libres est de 77.16 g/100g dans la fraction lipidique, et de 0.008 g/100g dans l'huile. Le profil reste très semblable entre l'huile de départ et la fraction lipidique ; il ne semble pas que des acides 3043553 17 gras aient été modifiés au cours de la saponification et la conversion. La répartition est donnée dans le tableau suivant. Nomenclature des acides gras Huile de graines Pastel de Fraction lipidique selon l'invention Acides Gras Saturés -?,- Moyen -?,- Moyen C14:0 A. Myristique 0,10 0,00 C16:0 A. Palmitique 5,63 3,19 C18:0 A. Stearique 1,97 0,94 C20:0 A. Arachidique 1,72 0,73 C22:0 A. Behenique 0,57 0.00 Total 9,99 4,86 Acides Gras Monoinsaturés C16:1 A. Palmitoléique 0,17 0,18 C18:19c A. Oléique 13,61 11,59 C18:17c 1,53 1,12 C20:1 A. Gadoléique 8,48 8,48 C22:1 A. Erucique 8,77 8,77 C24:1 A. Nervonique 0,74 0,74 3043553 18 Total 33,30 30,88 Acides Gras Polyinsaturés C18:2 A. Linoléique 17,49 21,55 C18:3 A. a Linolénique 34,71 43,22 C20:3 n3 A. dihomo-y- 0,93 0,78 linolénique Total 53,13 65,55 Répartition des acides gras 2. Teneur en stérols 5 Les teneurs en stérols de l'huile et de la fraction obtenue sont données dans le tableau ci-après. (mg/100g huile) Huile de graines de Pastel Fraction lipidique selon l'invention Squalène 3.4 8.4 Cholesterol 63.8 226.9 Brassicasterol 12.1 46.4 Campesterol 156.3 499.8 Stigmasterol 7.4 33.2 3043553 19 0 sitosterol 513.2 1661.4 85 Avenasterol 58.4 186.4 Total 814.6 2662.5 3. Teneur en tocophérols Le dosage des tocophérols dans les huiles de pastel montre 5 une différence entre l'huile et la fraction lipidique et est illustré dans le tableau suivant. Le procédé permet de concentrer les tocophérols dans la fraction lipidique selon l'invention. Concernant cette analyse, il faut noter que les huiles réceptionnées et les échantillons produits sont 10 conservés à 4°C et à l'abri de la lumière pour éviter d'affecter les teneurs en tocophérols. Ces composés sont particulièrement sensibles et leur teneur peut varier rapidement. Total Répartition Huile (mg/100g ( % ) huile) cc y Ô Huile de graines de Pastel 62.5 3 88 9 Fraction 110.9 1.2 74 24.5 lipidique 3043553 20 4. Teneur en caroténoides La teneur en caroténoïdes de la fraction lipidique est de 8.49% +/- 0.22 équivalent 13-carotène 5 REVENDICATIONS1. Procédé d'extraction de la fraction insaponifiable contenue dans une huile végétale comprenant les étapes suivantes : a) Fourniture d'une huile végétale, b) Saponification de l'huile à l'aide d'une solution alcoolique d'une base choisie dans le groupe constitué par les hydroxydes d'alcalins ou d'alcalino-terreux, c) Séparation solide-liquide, d) Récupération de la phase liquide alcoolique constituant le milieu réactionnel, e) Acidification du milieu réactionnel jusqu'à un pH inférieur à 7, f) Séparation de la phase hydro-alcoolique et de la phase grasse, g) Récupération de la phase grasse riche en insaponifiables. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'une étape optionnelle de lavage de la phase solide 20 comprenant du savon avec une solution alcoolique peut être prévue après l'étape c) de séparation solide-liquide. 3. Procédé selon l'une des revendications 1 à 2, caractérisé en ce que la base est choisie dans le groupe constitué par la soude (NaOH) et la potasse (KOH), plus 25 particulièrement la soude (NaOH). 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que saponification est effectuée avec un ratio hydroxyde (mmol)/huile (g) compris entre 2.5 mmol d'hydroxyde par gramme d'huile et 4 mmol d'hydroxyde par 30 gramme d'huile. 3043553 22 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend une étape optionnelle de dilution à l'eau du milieu réactionnel avant l'étape d'acidification e). 5 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que le ratio eau/milieu réactionnel est compris entre 1/4 et 4/1. 7. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'étape d'acidification e) correspond 10 à une diminution du pH jusqu'à une valeur inférieure à 7, particulièrement de l'ordre de 6, voire 5. 8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que l'huile végétale est choisie dans le groupe constitué par l'huile de colza, l'huile de maïs, 15 l'huile de tournesol, l'huile d'olive, l'huile de noix, l'huile d'argan, l'huile de germe de blé, l'huile de cameline, l'huile de pastel, de chanvre, de lin, de pépins de raisins, d'avocat, de noisette, d'amande ou d'arachide ainsi que leurs mélanges. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'huile végétale est une huile de pastel, Isatis tinctoria. 10. Extrait riche en insaponifiables susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une des revendications 1 à 9. 11. Extrait selon la revendication 10 pour son utilisation 25 cosmétique, pharmaceutique ou alimentaire. 12. Composition cosmétique comprenant un extrait selon la revendication 10.