Brevet FR3045834A1 — publié le 20170623

DILUANT DE REACTIFS POUR IMMUNOESSAI La présente invention concerne le domaine du diagnostic ou du pronostic. En particulier, elle concerne des compositions utiles lors de la mise en oeuvre d'immunoessais, notamment comme agent stabilisant et/ou bloquant. ETAT DE LA TECHNIQUE Les immunoessais sont utilisés couramment dans les domaines d'analyses cliniques, alimentaires, pharmaceutiques et chimiques. Ainsi, ils ont pour but de déterminer la présence d'un ou plusieurs analytes dans des échantillons susceptibles de les contenir. L'immunoessai est un test largement connu de _l'Homme du Métier qui implique des interactions spécifiques entre l'analyte à détecter et un ou des partenaire(s) de liaison à cet analyte. A titre d'exemple de tels immunoessais, on peut citer les méthodes telles qu'ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay), ELFA (Enzyme Linked Florescent Assay) et RIA (Radio Immuno Assay) qui peuvent fonctionner selon le principe du « sandwich », ou encore selon le principe de la « compétition », et les méthodes d' immunodétection comme l'immunohistochimie, 1'immunocytochimie, l'immunofluorescence, le Western-blot et le Dot-blot. Les méthodes en « compétition » sont habituellement utilisées pour des petites molécules telles que les haptènes, les méthodes « sandwich » étant utilisées pour les autres analytes. Les immunoessais comprennent la mise en contact de l'échantillon susceptible de contenir un analyte avec au moins un partenaire de liaison marqué ou un réactif de compétition à l'analyte marqué. Ledit partenaire de liaison ou réactif de compétition est par exemple formé d'un anticorps conjugué à un marqueur susceptible de délivrer un signal. Ces réactifs peuvent être mis en solution et conservés dans un diluant avant la mise en oeuvre de l'immunoessai. Quel que soit le type d'interactions détectées, l'adsorption sur la matrice solide, sur les partenaires de liaison ou sur le réactif de compétition, de réactifs qui ne doivent pas s'y attacher directement, peut contribuer à générer un bruit de fond. Il est donc essentiel de diminuer ces interactions non-spécifiques afin de diminuer autant que possible le bruit de fond. 3045834 2 On utilise pour cela un agent bloquant ou agent saturant qui a pour fonction de saturer les sites après l'adsorption. Les diluants de réactifs pour immunoessai peuvent ainsi comprendre des agents bloquants et/ou stabilisants, d'une part pour stabiliser les réactifs (conjugués, marqueurs) et d'autre 5 part pour réduire les interactions non-spécifiques du ou des réactifs, par exemple avec la matrice solide, les partenaires de liaison et/ou un réactif de compétition. Ces agents bloquants sont de préférence choisis parmi les protéines d'origine animale ou humaine, et notamment les sérums animaux, le lait écrémé, notamment en poudre, les caséines hydrolysées ou non, l'albumine bovine, humaine et les gélatines. 10 Ces produits d'origine biologique, et notamment animale ou humaine, ont l'inconvénient de présenter une composition variable selon les lots. En effet, pour les sérums animaux, leur composition peut varier en fonction de l'espèce, de la race, du sexe, ainsi que de leur alimentation (variation saisonnière). Pour les protéines purifiées comme l'albumine bovine par exemple, selon le procédé de purification utilisé qui est dépendant du fournisseur, la 15 qualité de ces albumines est variable. Des contaminations, comme la présence de protéases, d'immunoglobulines bovines ou autres molécules en quantités plus ou moins importantes, sont à l'origine des variations sur le bruit de fond. Ces matières premières d'origine humaine ou animale conservent leur pouvoir stabilisant mais le pouvoir bloquant est variable d'un lot à l'autre. De plus, leur mise en oeuvre doit suivre les normes de 20 sécurité relatives aux risques biologiques et présentent également des contraintes en termes d'approvisionnement, de stockage des produits sources et de leur manipulation. Par conséquent, pour remédier à ces inconvénients, il serait avantageux d'utiliser des agents stabilisants et/ou bloquants synthétiques, utiles dans des compositions pour immunoessais, et notamment dans des diluants de réactifs pour immunoessais, tels que des anticorps 25 marqués. Des copolymères amphotériques de 2-méthacryloyloxyéthyl phosphorylcholine, sont décrits comme agents stabilisants et/ou bloquants dans des immunoessais de type ELISA (Sakaki et al., 1999 J.Biomed.Mater.Res., 47, 523 ; Sakaki et al., 2000, Polymer Journal, Vol 32, No. 8, pp 637-641). Les copolymères de 2-méthacryloyloxyéthyl phosphorylcholine sont commercialisés par la société NOF Corporation sous le nom 3045834 3 commercial BiolipidureTM ou Lipidure®. Ils sont présentés comme une alternative à l'albumine bovine notamment pour diminuer les interactions non-spécifiques et/ou stabiliser les anticorps -marqués (EP1314982 A). Les demandes de brevet WO 98/27434 et W02008/058963 décrivent l'utilisation de 5 polymères amphiphiles comme solvant et agent stabilisant de protéines membranaires ou dans des applications de vectorisation. L'utilisation de ces composés, de la famille des amphipols, comme agent stabilisant d'anticorps thérapeutiques a également été décrite dans la demande W02010/073119. La Demanderesse a maintenant mis en évidence qu'une composition comprenant 10 l'association combinée d'un amphipol et d'un copolymère amphotérique de (méth)acrylate comprenant au moins un groupe phosphorylcholine peut être utilisée avantageusement comme agent stabilisant et/ou bloquant de réactifs, notamment en remplacement de certains agents stabilisants et/ou bloquants d'origine animale classiquement utilisés. En outre, et de manière tout à fait surprenante, la Demanderesse a mis en évidence que 15 l'utilisation de ces compositions selon l'invention dans un test d'immunoessai permet de diminuer sensiblement le signal de bruit de fond contribuant ainsi à augmenter la sensibilité du test, tout en maintenant la stabilité des réactifs dans le temps. RE SUIVIE Ainsi, la présente invention a pour objet une composition pour immunoessai, comprenant 20 au moins (i) un amphipol et (ii) un copolymère amphotérique à base de monomères de (méth)acrylate, une partie de ces monomères comprenant un groupe phosphorylcholine. En particulier, l'amphipol peut être un polymère amphiphile comprenant un homopolymère ou copolymère d'anhydride maléique ou de polyacrylate sur lesquels sont greffés au moins un groupe hydrophobe et un groupe hydrophile, et d'une masse 25 moléculaire moyenne comprise entre 1 000 et 100 000, de préférence entre 4 000 et 70 000 g.mo1-1. Dans un mode de réalisation spécifique, l'amphipol est choisi parmi les poly(anhydride-altl-octadécène maléiques), poly(anhydride-alt-l-tétradécène maléiques), poly(anhydride-alt- 3045834 4 1-décène maléiques), étant substitués par un groupe hydrophile, par exemple un ammonium alkyle, et notamment la 3-(diméthylamino)-1-propylamine. Dans un autre mode de réalisation spécifique, éventuellement combiné avec les précédents modes de réalisation spécifiques, la composition selon l'invention est caractérisée en ce 5 que le copolymère amphotérique est un copolymère amphotérique à base d'un monomère de 2-méthacryloyloxyéthyl phosphorylcholine (MPC) et d'un autre monomère de méthacrylate fonctionnalisé avec un groupe hydrophobe, un groupe anionique, un groupe cationique ou un groupe permettant de former une ou plusieurs liaisons hydrogène. Dans un mode de réalisation spécifique, le copolymère amphotérique est un copolymère 10 amphotérique à base de MPC et de méthacrylate fonctionnalisé avec un groupe hydrophobe choisi parmi - les alkyles linéaires ou ramifiés en C4 à C30 ; - les alkyles linéaires ou ramifiés en C4 à C30 comprenant au moins un cycloalkyle ; 15 - les chaînes hydrocarbonées en C4 à C30 comprenant au moins une double liaison ; - les chaînes hydrocarbonées en C4 à C30 comprenant au moins une triple liaison ; ou, - les chaînes hydrocarbonées en C4 à C30 comprenant au moins un cycle aromatique. Par exemple, il s'agit des BiolipiduresTM ou Lipidure®, par exemple le BiolipidureTM 206 commercialisé notamment par la société NOF Corporation. 20 L'invention vise également une solution aqueuse comprenant les compositions selon l'invention et au moins un réactif d'immunoessai. En particulier, dans un mode de réalisation préféré, la solution aqueuse selon l'invention est caractérisée en ce qu'elle ne comprend pas d'agent stabilisant et/ou d'agent bloquant d'origine humaine ou animale, par exemple choisi parmi les sérums animaux, le lait écrémé, notamment le lait écrémé en 25 poudre, les caséines hydrolysées ou non, l'albumine bovine ou humaine et les gélatines. L'invention vise en outre les trousses d'immunoessai comprenant au moins une solution aqueuse selon l'invention, et au moins un partenaire de liaison à un analyte à détecter ou quantifier par immunoessai et, le cas échéant, les composés nécessaires à la mise en évidence d'une interaction spécifique entre le ou les partenaires de liaison et l'analyte. 3045834 5 Les compositions et solutions aqueuses selon l'invention sont utiles en particulier pour réduire l'interaction non-spécifique entre i. au moins un partenaire de liaison destiné à détecter ou quantifier un analyte dans un échantillon biologique susceptible de le contenir, par 5 exemple un partenaire de liaison marqué, et ii. une phase solide. Ou encore, elles sont utiles pour réduire l'interaction non-spécifique entre i. un contrôle positif de l'immunoessai, un standard de l'immunoessai et/ou un ajusteur de l'immunoessai, et 10 ii. une phase solide. Enfin, l'invention vise un procédé par immunoessai de détermination de la présence ou de quantification d'un analyte cible, dans un échantillon biologique susceptible de le contenir, comprenant la mise en contact dudit échantillon avec au moins deux partenaires de liaison audit analyte, P1 et P2, séquentiellement ou simultanément, l'un des deux partenaires P2 15 étant marqué pour révéler la présence dudit analyte, s'il est présent, l'autre partenaire P1 étant de préférence immobilisé sur une phase solide, et ledit partenaire P2 marqué étant contenu dans au moins une composition ou solution aqueuse selon l'invention, pour former le cas échéant un complexe P1/analyte/P2, la révélation de la présence dudit complexe formé permettant de conclure à la présence ou à la quantité d'analyte dans l'échantillon. 20 Elle concerne également un procédé par immunoessai de détermination de la présence ou de quantification d'un analyte cible, dans un échantillon biologique susceptible de le contenir, comprenant la mise en contact dudit échantillon avec au moins un partenaire P1 de liaison audit analyte et un réactif R1 de compétition à l'analyte, ledit partenaire de liaison P1 étant de préférence immobilisé sur une phase solide, ledit réactif R1 étant 25 marqué pour révéler indirectement la présence dudit analyte, et ledit réactif R1 étant contenu dans au moins une composition ou solution aqueuse selon l'invention, pour former un complexe P 1/R1, la révélation de la présence dudit complexe formé permettant de conclure indirectement à l'absence ou à la quantité d'analyte dans l'échantillon. 3045834 6 DESCRIPTION DETAILLEE La Demanderesse a donc mis au point contre toute attente des compositions pour immunoessai permettant de remplacer les macromolécules d'origine animale classiquement utilisées dans les diluants de réactifs pour immunoessai. 5 Les compositions pour immunoessai selon l'invention comprennent (i) un amphipol et (ii) un copolymère amphotérique à base de monomères de (méth)acrylate, une partie de ces monomères comprenant un groupe phosphorylcholine ou plus généralement un groupe de formule (III) décrit plus loin, par exemple une partie de ce monomères étant le monomère de MPC (2- Méthacryloyloxyléthyl-PhosphorylCholine). 10 Les amphipols Au sens de l'invention, le terme « amphipol » fait référence à la famille de polymères amphiphiles courts et flexibles et décrits notamment dans les revues de Zoonens et Popot, 2014 (J. Membrane Biol. 2014, 247(0) : 759-796) et Zoonens et al, 2014 (I. Mus-Veteau (ed.), Membrane proteins Production for Structural Analysis, © Springer Science+ 15 business Media New York 2014, « Chapter 7 Amphipols : A General Introduction and Some Protocols », page 173-203). Dans un mode de réalisation particulier, les amphipols utilisables dans les compositions selon l'invention sont choisis parmi les polymères amphiphiles comprenant un homopolymère ou copolymère d'anhydride maléique ou de polyacrylate, sur lesquels sont 20 greffés au moins un groupe hydrophobe et un groupe hydrophile, et d'une masse moléculaire moyenne comprise entre 1 000 et 100 000 g/mol, de préférence entre 4 000 et 70 000 g/mol. Les premiers amphipols décrits dans l'état de la technique sont des polymères de polyacrylate où certaines fonctions carboxylates sont fonctionnalisées avec l'octylamine, 25 ou l'isopropylamine. Dans un mode de réalisation particulier, les amphipols utilisables dans les compositions selon l'invention sont les polymères amphiphiles, tels que décrits dans la demande WO 98/27434, et notamment l'amphipol de formule (I) suivante : 3045834 7 (I) dans laquelle - R4, R5, R6 identiques ou différents sont l'atome d'hydrogène ou le radical méthyle, 5 - R13, R14 identiques ou différents sont un radical alkyle ou alcényle linéaire ou ramifié de 6 à 12 atomes de carbone, et de plus l'un des deux peut correspondre à l'atome d'hydrogène, - R16, R17 sont un radical (C1 à C5) alkyle, et de plus l'un des deux peut correspondre à l'atome d'hydrogène, 10 x, y, z correspondent aux pourcentages respectifs des motifs, - x étant compris entre 20 et 90 % - y étant compris entre 10 et 80 % - z étant compris entre 0 et 60 %, la masse moléculaire moyenne étant comprise entre 500 et 100 000 g/mol, 15 avantageusement inférieure ou égale à 50 000 g/mol, de préférence entre 1 000 et 50 000 g/mol. Toutes les masses moléculaires sont données en poids. Parmi les radicaux alkyle R13 à R14, on cite notamment les radicaux n-hexyle, -n-heptyle, n-octyle, n-nonyle, n-décyle, n-undécyle, n-dodécyle, les radicaux en C6-C12 possédant un 20 carbone secondaire ou un carbone tertiaire. 3045834 8 Parmi les radicaux alcényle R13 à R14, on cite notamment les radicaux linéaires en C6-C12 mentionnés ci-dessus possédant une ou deux double liaisons ou les mêmes radicaux possédant un carbone secondaire ou un carbone tertiaire. Parmi les radicaux alkyle R16 à R17, on cite notamment l'éthyle, l'isopropyle, le n-propyle, le n-butyle, l'isobutyle, le sec-butyle, le t-butyle, le n-pentyle, le sec-pentyle, le t-pentyle, l'isopentyle. Les polymères acryliques à caractère amphiphile de formule (I) sont obtenus de manière connue à partir de polymères acryliques précurseurs, éventuellement disponibles dans le 10 commerce ou synthétisables par polymérisation de monomères d'acide acrylique ou d'acide méthacrylique ou d'un mélange de ces monomères. Dans ce dernier cas, l'on obtient des copolymères qui, par extension, sont inclus dans le terme générique "polymère". Les polymères acryliques à caractère amphiphile de formule (I) résultent de la réaction de 15 composés R13R14NH et éventuellement R16R17NH avec un polymère acrylique, ce qui conduit à une répartition aléatoire des amides tout au long de la chaîne. Le polymère est préalablement, ou dans une étape ultérieure, mis sous forme salifiée. Un tel mode de synthèse est décrit par exemple dans March, J. (1985 Advanced Organic Chemistry : Reactions, Mechanisms and Structure, pp. 372-374 (Wiley, New York) ; Wang, T.K., 20 Iliopoulos, 1. & Audebert, R. (1988) Polym. Bull 20, 577-582.) et également décrit dans la demande WO 98/27434. On indique ci-après des variantes de réalisation des amphipols de formule (I) ci-dessus : 25 - Selon une première variante, R13, R14 correspondent à un atome d'hydrogène ou à un radical alkyle linéaire de 6 à 12 atomes de carbone, R13, R14 ne pouvant être simultanément l'atome d'hydrogène, de préférence R13 ou R14 est un radical n-octyle, l'autre radical R14 ou R13 étant un atome d'hydrogène. 3045834 9 - Selon une seconde variante, R16, R17 correspondent à un radical alkyle choisi dans un groupe constitué par les radicaux isopropyle, isobutyle ou à un atome d'hydrogène, R16, R17 ne pouvant simultanément correspondre à l'atome d'hydrogène, - Selon une troisième variante 5 x est compris entre 30 et 80 % y est compris entre 20 et 70 % z est compris entre 0 et 50 %, - Selon une quatrième variante le polymère acrylique à caractère amphiphile est choisi dans le groupe constitué par les polymères dans lesquels 10 M+ est Na+ ou K+ R13 est un n-octyle, R14 est H x est compris entre 70 et 80 % y est compris entre 20 et 30 % z est 0 % 15 La masse moléculaire moyenne est comprise entre 2000 et 50000 g/mol. - Selon une cinquième variante, le polymère acrylique à caractère amphiphile est choisi dans le groupe constitué par les polymères dans lesquels M+ est Na+ ou K+ 20 R13 est un n-octyle, R14 est H R16 est un isopropyle, R17 est H x est compris entre 30 et 40 % y est compris entre 20 et 30 % z est compris entre 30 et 50 % 25 La masse moléculaire moyenne est comprise entre 2000 et 50000 g/mol. Dans un mode de réalisation particulier, l'amphipol est le polymère A8-35 de formule (Ia) suivante : 3045834 10 (Ia) x, y, z correspondent aux pourcentages respectifs des motifs, - x étant compris entre 34 et 36 %, de préférence environ 35%, - y étant compris entre 24 et 26 %, de préférence environ 25%, 5 - z étant compris entre 38 et 42 %, de préférence environ 40%, la masse moléculaire moyenne étant comprise entre 4 000 et 4 600 g/mol, de préférence environ 4 300 g/mol. Dans un autre mode de réalisation spécifique, l'amphipol utilisable dans les compositions selon l'invention est choisi parmi les poly(anhydride maléiques) sur lesquels sont greffés 10 au moins une chaine alkyle hydrophobe et au moins un groupe hydrophile. De préférence, il s'agit d'un polymère de formule (II) suivante R7 dans laquelle Z est un radical divalent, de préférence O, S ou NH, R7 est un groupe hydrophile, de préférence un ammonium alkyle, et R8 un groupe hydrophobe, par exemple 15 une chaîne carbonée linéaire. 3045834 11 Dans un mode de réalisation particulier, le groupe hydrophile R7 est choisi parmi les groupes fonctionnels tels que les amines, les alcools ou les cétones. La masse moléculaire moyenne de ces poly(anhydride maléiques) est de préférence comprise entre 1 000 et 70 000 g/mol, plus préférentiellement entre 10 000 et 5 20 000 g/mol. Dans un autre mode de réalisation spécifique, le groupe hydrophile est un groupe carboxylate ou un groupe chargé positivement, de préférence un ammonium, par exemple un ammonium alkylé de formule suivante : -(CH2).-NH(CH3)2 avec n étant compris entre 2 et 6, par exemple la 3-(diméthylamino)-1-propylamine. 10 L'ammonium alkylé est de préférence rattaché à l'anhydride maléique par une fonction amide, ester ou thioester, de préférence une fonction amide. La chaine alkyle hydrophobe est choisie de préférence parmi les chaines alkyles linéaires de formule -(CH2).- avec n supérieur ou égal à 4, de préférence supérieur ou égal à 6, de préférence supérieur ou égal à 8, et par exemple compris entre 4 et 16, de préférence entre 15 8 et 12. Ces polymères d'anhydrides maléiques peuvent être choisis en particulier parmi les poly(anhydride-alt-l-octadécène maléiques), les poly(anhydride-alt-l-tétradécène maléiques) et les poly(anhydride-alt-l-décène maléiques), substitués par un groupe hydrophile, de préférence un groupe chargé positivement tel que défini plus haut, et 20 notamment un ammonium alkylé, tel que la 3-(diméthylamino)-1-propylamine. Dans un mode de réalisation spécifique, l'amphipol utilisé selon l'invention est le poly(anhydride-alt-1-tétradécène maléique) substitué de formule (Ha) suivante : 3045834 12 et de masse moléculaire moyenne comprise entre 10 000 et 14 000 g/mol, par exemple environ 12 000 g/mol. Dans un autre mode de réalisation spécifique, l'amphipol utilisé selon l'invention est le 5 poly(anhydride-alt-1-décène maléique) substitué de formule (IIb) suivante : et de masse moléculaire moyenne comprise entre 16 000 et 20 000 g/mol, par exemple environ 18 500 g/mol. 10 Dans un autre mode de réalisation spécifique, l'amphipol utilisé selon l'invention est le poly(anhydride-alt-1-octadécène) substitué de formule (IIc) suivante : 3045834 13 et de masse moléculaire moyenne comprise entre 39 000 et 65 000 g/mol. Dans un mode préféré, l'amphipol est choisi parmi le PMAL C12 (n° CAS : [869857-147]), le PMAL C8 (n° CAS : [869856-84-8]) et le PMAL C16 (n° CAS : [869857-16-9]). Certains de ces polymères amphipols et notamment de la série PMAL (par exemple PMAL 5 C12, PMAL C8 et PMAL C16) sont fabriqués et commercialisées par la société Anatrace. Les polymères amphotériques Les compositions selon l'invention comprennent un amphipol tel que décrit ci-dessus, en combinaison avec un copolymère amphotérique à base de monomères de (méth)acrylate, une partie comprenant un groupe de formule (III) suivante : 0H: 10 çr (III) et dans lequel n est un entier de 1 à 6 (de préférence 2), R1, R2, R3 identiques ou différents, représentent indépendamment l'hydrogène ou un alkyle de 1 à 6 carbones, substitué ou non, de préférence R1, R2 et R3 sont des méthyles. Par exemple, R1, R2, et R3 selon la formule (IV) peuvent être le méthyle, éthyle, propyle, 15 butyle, isobutyle, pentyle, hexyle. Le nombre de substituants alkyles est de 1 à 3 et les substituants comprennent l' hydroxy ou l'aryle. L'aryle inclut le benzyle ou le naphtyle. La masse moléculaire moyenne des copolymères amphotériques utilisables selon l'invention est de préférence comprise entre 100 et 1 000 000 g/mol, par exemple entre 1 000 et 500 000 g/mol. 20 En outre, les copolymères amphotériques incluent un polymère préparé par polymérisation d'un monomère comprenant un groupe de formule (III) avec un autre monomère polymérisable. 3045834 14 Dans un mode de réalisation spécifique, le monomère comprenant un groupe de formule (III) est un monomère comprenant la phosphorylcholine et un groupe vinyle, notamment la 2-acryloyloxyéthyl phosphorylcholine, la 2-méthacryloyloxyéthyl phosphorylcholine (ci-après décrit sous l'abréviation MPC), la 2-(méth)acryloyloxyéthoxyéthyl 5 phosphorylcholine, la 6-méth(acryloyloxyhexyl phosphorylcholine, la 10- (méth)acryloyloxyéthoxynonyl phosphorylcholine, l'allyl phosphorylcholine, la butényl phosphorylcholine, l'hexényl phosphorylcholine, l'octényl phosphorylcholine, la décényl phosphorylcholine. Ces monomères peuvent être préparés selon des méthodes connues décrites notamment dans la demande de brevet japonaise No.6325/79, et No. 154591/83. 10 L'autre monomère polymérisable comprend le (méth)acrylate tel que le (méth)acrylate de méthyle, le (méth)acrylate d'éthyle, le (méth)acrylate de n-butyle, le (méth)acrylate d'isobutyle, le (méth)acrylate de pentyle, le (méth)acrylate d'hexyle, le (méth)acrylate d'heptyle, le (méth)acrylate d'octyle, le (méth)acrylate de tridécyle, le méthacrylate2- d'hydroxyéthyle; un monomère styrène tel que le styrène, le styrène d'alpha-méthyle, le 15 styrène ayant un groupe phényle substitué avec un (ou plusieurs) groupe(s) méthyle(s) et un styrène ayant un groupe phényle substitué par du chlore; de préférence il s'agit de méthacrylate fonctionnalisé. Ces polymères et leurs synthèses sont décrits également dans la demande de brevet EP 1 314 982 Al. 20 En particulier, dans un mode de réalisation spécifique, on utilisera des polymères amphotériques à base de monomères de (méth)acrylate, une partie de ces monomères comprenant un groupe phosphorylcholine. Le pourcentage de monomères comprenant le groupe phosphorylcholine est de préférence entre 1 et 100%, par exemple entre 1 et 50% ou entre 5 et 10%. 25 De préférence, il s'agit d'un copolymère amphotérique à base de 2-méthacryloyloxyéthyl phosphorylcholine (MPC), notamment un monomère de méthacrylate comprenant un groupe phosphorylcholine et un autre monomère de méthacrylate comprenant un groupe hydrophobe, un groupe anionique, un groupe cationique et/ou un groupe permettant la formation de liaisons hydrogène. 3045834 15 Un groupe hydrophobe est choisi parmi - les alkyles linéaires ou ramifiés en C4 à C30 ; - les alkyles linéaires ou ramifiés en C4 à Cm comprenant au moins un cycloalkyle ; - les chaînes hydrocarbonées en C4 à Cm comprenant au moins une double liaison ; 5 - les chaînes hydrocarbonées en C4 à Cm comprenant au moins une triple liaison ; ou, - les chaînes hydrocarbonées en C4 à Cm comprenant au moins un cycle aromatique. De préférence, le groupe hydrophobe est choisi parmi les chaines alkyles linéaires de formule -(CH2).- avec n supérieur ou égal à 4, de préférence supérieur ou égal à 6, de préférence supérieur ou égal à 8, et par exemple compris entre 4 et 16, de préférence entre 10 8 et 12. Un groupe anionique peut être choisi en particulier parmi ceux comprenant un radical carboxylate et en particulier les alkylcarboxylates en (C1-05), ceux comprenant un radical sulfonate, et en particulier les alkylsulfonates en (C1-05) et ceux comprenant un radical phosphonate, et en particulier les alkylphosphonates en (Ci-05). 15 Un groupe cationique peut être choisi en particulier parmi un radical (CH2).-NR9RioRii, n étant un nombre entier de 1 à 5 et R9, R10 et R11, identiques ou différents étant l'hydrogène ou une chaine alkyle (Ci-C4). Les composés permettent de former des liaisons hydrogène sont largement connue de l'Homme du Métier. Un exemple de groupe permettant la formation de liaisons hydrogène 20 comprend les amines, les alcools, les thiols, les aldéhydes, les acides ou les cétones. Des copolymères de MPC préférés sont commercialisés en particulier par la société NOF Corporation sous la dénomination commerciale de Lipidure® ou Biolipidure® et, notamment, de formule générale (IV) suivante : (IV) 3045834 16 dans laquelle R est un groupe hydrophobe comme défini plus haut, avec m et n correspondant aux pourcentages respectifs des deux monomères et m est compris entre 1 et 99%, par exemple entre 1 et 50% ou entre 1 et 10%, et n est compris entre 1 et 99%, par exemple entre 50 et 99% ou entre 90 et 99%. 5 Selon un mode réalisation plus spécifique, le polymère amphotérique de 2- méthacryloyloxyéthyl phosphorylcholine (MPC) est un copolymère amphotérique de MPC et de méthacrylate fonctionnalisé avec une chaine alkyle linéaire de formule (-CH2).- avec n supérieur ou égal à 4, ou supérieur ou égal à 6, ou supérieur ou égal à 8, et par exemple compris entre 4 et 16, par exemple entre 8 et 12. 10 A titre d'exemple préféré, pour la réalisation des compositions pour immunoessai selon l'invention, on choisira le BiolipidureTM 206, le BiolipidureTM 203, le BiolipidureTM 802 ou encore le BiolipidureTM 1201, commercialisés par la société NOF Corporation. Utilisation des compositions selon l'invention Les compositions pour immunoessai selon l'invention décrites ci-dessus sont 15 avantageusement utilisées comme agent stabilisant et/ou bloquant. Au sens de l'invention, par « agent stabilisant », on entend un composé ou composition capable de favoriser la stabilité (thermique et dans le temps) du partenaire de liaison (qui peut être dénaturé après conservation à température ambiante par exemple), de réduire sa dégradation par hydrolyse, de prévenir son agrégation et/ou plus généralement de 20 contribuer au maintien de la conformation native du partenaire de liaison et de sa capacité à lier l'analyte à détecter. La stabilité thermique d'un réactif d'immunoessai peut être déterminée en comparant le signal de détection avant son stockage à température ambiante et après conservation à température ambiante pendant 30 jours. Un réactif est stable si le signal mesuré à 30 jours est dans des valeurs proches du signal mesuré à tO, par exemple 25 comprises entre 90% et 110% du signal mesuré à tO. Par « agent bloquant », on entend un composé ou composition susceptible de réduire les interactions non-spécifiques entre un partenaire de liaison et une molécule non-spécifique d'un immunoessai, et donc de réduire le signal obtenu en présence d'un contrôle négatif (« bruit de fond »). 3045834 17 En particulier, les compositions selon l'invention sont utiles pour réduire l'interaction non-spécifique entre au moins un réactif d'immunoessai, de préférence un partenaire de liaison, marqué ou pas, et une phase solide. Dans un autre mode de réalisation, les compositions aqueuses selon l'invention sont utiles 5 pour réduire l'interaction non-spécifique entre (i) un contrôle positif de l'immunoessai et/ou un standard de l'immunoessai et/ou un ajusteur de l'immunoessai, et (ii) une phase solide. Le terme « interaction non-spécifique » s'entend par opposition à l'interaction spécifique 10 du partenaire de liaison avec l'analyte. Par interaction spécifique, on entend une préférence de liaison (affinité) d'un partenaire de liaison envers l'analyte cible au moins 2 fois, de préférence au moins 5 fois, et plus préférentiellement au moins 10 ou 20 fois supérieure à celle mesurée envers une molécule non-spécifique (par exemple une ou plusieurs molécules arbitraires qui ne contiennent pas 15 a priori les sites spécifiques de reconnaissance au partenaire de liaison). Le terme « analyte » désigne ici une substance contenue dans un échantillon, qui doit être détectée, identifiée et/ou quantifiée par une analyse. Il doit donc être compris au sens large comme désignant une substance chimique, biologique ou biochimique. A titre d'exemple d'analytes, on peut citer une protéine, un peptide, un haptène, un polysaccharide ou un 20 oligosaccharide. Le terme « phase solide » au sens de l'invention fait référence à tout matériel insoluble. La phase solide dans un immunoessai est de préférence choisie pour attirer et immobiliser un réactif de capture. Dans une autre alternative, la phase solide comprend une substance chargée, de charge opposée au réactif de capture, ou à une substance conjuguée au réactif 25 de capture. La phase solide peut être par exemple du plastique, un métal, magnétique ou non-magnétique, du verre ou du silicone, et notamment, un tube à essai, une microplaque, des billes, des microparticules, une puce, un cône ou tout autre configuration connue de l'homme du métier pour la mise en oeuvre d'immunoessai. 3045834 18 Solutions aqueuses comprenant les compositions selon l'invention et un réactif d'immunoessai Les solutions aqueuses sont obtenues en diluant un réactif d'immunoessai dans un solvant comprenant de l'eau et les compositions selon l'invention contenant les polymères 5 amphipols et amphotériques, telles que décrites aux sections précédentes. Ainsi, un autre aspect de l'invention vise une solution aqueuse comprenant la composition selon l'invention telle que définie plus haut et au moins un réactif d'immunoessai. Au sens de l'invention, le terme « réactif d'immunoessai » vise tout réactif destiné à interagir spécifiquement avec un analyte ou un partenaire de liaison. 10 Bien entendu, le préfixe « immuno » dans le terme « immunoessai », par exemple, n'est pas à considérer dans la présente demande comme indiquant strictement que ledit partenaire de liaison est nécessairement un partenaire d'origine immunologique, tel qu'un anticorps ou un fragment d'anticorps. En effet, comme cela est bien connu de l'homme du métier, ce terme est plus largement utilisé pour désigner également des tests et procédés 15 dans lesquels le partenaire de liaison n'est pas un partenaire d'origine/de nature immunologique mais consiste, par exemple, en un récepteur de l'analyte que l'on souhaite détecter et/ou quantifier. La condition étant que le partenaire de liaison concerné soit capable de se lier à l'analyte recherché, de manière spécifique. Ainsi, il est connu de parler de test ELISA pour des tests qui utilisent des partenaires de liaison non immunologiques 20 stricto sensu, appelés plus largement en anglais « ligand binding assay », que l'on pourrait traduire en langue française par « test utilisant la liaison à un ligand », alors que le terme « immuno » est inclus dans l'intitulé in extenso correspondant à l'acronyme ELISA. Dans un souci de clarté et d'uniformité, le terme « immuno » est employé dans la présente demande pour désigner toute analyse biologique utilisant au moins un partenaire de liaison 25 adapté pour se lier à l'analyte recherché et détecter et/ou quantifier ce dernier, de préférence de manière spécifique, même quand ledit partenaire de liaison n'est pas de nature ou d'origine immunologique au sens strict. A titre d'exemple de réactif de type partenaire de liaison présent dans les solutions aqueuses selon l'invention, on peut citer les anticorps, les fragments d'anticorps, les 3045834 19 nanofitines, les récepteurs, les aptamères, les DARPins ou toute autre macromolécule choisie spécifiquement de manière à obtenir une interaction spécifique avec l'analyte, et de préférence une interaction à haute affinité avec l'analyte, d'un KD tel que mesuré par résonance plasmonique de surface, inférieure à liAM, notamment inférieur à 100nM et de 5 préférence inferieur à lOnM. Les anticorps polyclonaux peuvent être obtenus par immunisation d'un animal avec un immunogène, suivie de la récupération des anticorps recherchés sous forme purifiée, par prélèvement du sérum dudit animal, et séparation desdits anticorps des autres constituants du sérum, par exemple par chromatographie d'affinité sur une colonne sur laquelle est fixé 10 un antigène spécifiquement reconnu par les anticorps, notamment l'immunogène, ou à l'aide d'une protéine A ou G. Les anticorps monoclonaux peuvent être obtenus par la technique des hybridomes largement connue de l'homme du métier. Les anticorps monoclonaux peuvent être également des anticorps recombinants obtenus par génie génétique, par des techniques bien 15 connues de l'homme du métier. A titre d'exemple de fragments d'anticorps, on peut citer les fragments Fab, Fab', F(ab')2 ainsi que les scFv (Single chain variable fragment), dsFv (Double-stranded variable fragment). Ces fragments fonctionnels peuvent notamment être obtenus par génie génétique. 20 Les nanofitines (nom commercial) sont de petites protéines qui, comme les anticorps, sont capables de se lier à une cible biologique permettant ainsi de la détecter, de la capturer ou tout simplement de la cibler au sein d'un organisme. Les aptamères sont des oligonucléotides, généralement ARN ou ADN, identifiés dans des banques contenant jusqu'à 1015 séquences différentes, par une méthode combinatoire de 25 sélection in vitro appelée SELEX pour « Systematic Evolution of Ligands by Exponentiel Enrichment » (Ellington AD et Szostak JW., 1990, Nature, 346 : 818-822). La plupart des aptamères sont composés d'ARN, en raison de la capacité de l'ARN à adopter des structures variées et complexes, ce qui permet de créer à sa surface des cavités de géométries variées, permettant de fixer des ligands divers. Il s'agit d'outils biochimiques 3045834 20 d'intérêt qui peuvent être utilisés dans des applications biotechnologiques, diagnostiques ou thérapeutiques. Leur sélectivité et leurs propriétés de fixation de ligands sont comparables à celle des anticorps. Les « DARPins » pour Designed Ankyrin Repeat ProteINS (Boersma YL et Plütckthun A, 5 2011, Curr. Opin. Biotechnol, 22 : 849-857) sont une autre classe de protéines permettant de mimer les anticorps et de pouvoir se fixer avec une affinité et une sélectivité élevées sur des protéines cibles. Ils dérivent de la famille des protéines ankyrines qui sont des protéines adaptatrices permettant de fixer les protéines de membrane intégrales au réseau spectrine/actine qui constitue « la colonne vertébrale » de la membrane plasmatique 10 cellulaire. La structure des ankyrines est basée sur la répétition d'un motif d'environ 33 acides aminés et il en est de même des DARPins. Chaque motif a une structure secondaire de type hélice-coude-hélice (« helix-turn-helix »). Les DARPins contiennent au moins trois, de préférence quatre à cinq motifs répétés et sont obtenus par screening de banques combinatoires. 15 Dans un mode de réalisation particulier, le réactif d'immunoessai compris dans les solutions aqueuses selon l'invention est choisi parmi un partenaire de liaison destiné à détecter ou quantifier un analyte dans un échantillon biologique susceptible de le contenir, ledit partenaire de liaison pouvant être marqué (par exemple un anticorps marqué) ou non, un contrôle positif, un standard ou un ajusteur d'un immunoessai. 20 Par « contrôle positif », on entend un composé susceptible de produire un signal conforme au signal attendu par le test d'immunoessai en présence d'un échantillon contenant l'analyte à détecter. Par « standard », on entend un composé utilisé pour produire une gamme étalon, étape nécessaire pour pouvoir effectuer une quantification d'un analyte. La relation entre les 25 concentrations ou les quantités connues du standard et le signal obtenu par immunoessai est exprimée mathématiquement : c'est la courbe de calibration. Par « ajusteur », on entend un composé utilisé pour ajuster la mesure de l'immunoessai de l'analyte. Dans ce cas, le signal généré par l'ajusteur et sa concentration est connue. 3045834 21 L'ajusteur sert à ajuster une courbe de calibration générée au préalable en tenant compte du vieillissement des réactifs de l'immunoessai ou encore de ces conditions de mise en oeuvre. Le partenaire de liaison présent dans les solutions aqueuses selon l'invention peut être marqué, c'est-à-dire lié, de préférence de manière covalente, directement ou indirectement 5 à un marqueur. Très souvent, le marquage se fait par couplage chimique en utilisant un bras de conjugaison (« cross-linker »). On parle alors de partenaire de liaison conjugué. Un exemple de partenaire de liaison marqué fréquemment utilisé est un anticorps conjugué à une enzyme, appelé aussi anticorps conjugué. Par marqueur, on entend, notamment, toute molécule capable de générer directement ou 10 indirectement un signal détectable. Une liste non limitative de ces marqueurs de détection consiste en : les enzymes qui produisent un signal détectable par exemple par colorimétrie, fluorescence, luminescence, comme la peroxydase de raifort, la phosphatase alcaline, la bêta-galactosidase, la glucose-6-phosphate déshydrogénase, 15 - les chromophores comme les composés fluorescents, luminescents, colorants, les molécules radioactives comme le 32P, le 35S ou le 1251, les molécules fluorescentes telles que les Alexa ou les phycocyanines, et les sels électrochimiluminescents tels que des dérivés organo-métalliques à base d' acridinium ou de ruthénium. 20 Ainsi, dans un mode particulier de réalisation, la solution aqueuse selon l'invention comprend, outre les polymères décrits aux sections précédentes, un anticorps conjugué à un marqueur, encore appelé « anticorps de détection ». Des systèmes indirects de détection peuvent aussi être utilisés, comme par exemple des ligands capables de réagir avec un anti-ligand. Le ligand correspond alors au marqueur 25 pour constituer, avec le partenaire de liaison, le conjugué. 3045834 22 Les couples ligand/anti-ligand sont bien connus de l'Homme du Métier, ce qui est le cas par exemple des couples suivants : biotine/streptavidine, haptène/anticorps, antigène/anticorps, peptide/anticorps, sucre/lectine, polynucléotide/complémentaire du polynucléotide. 5 L'anti-ligand peut alors être détectable directement par les marqueurs de détection directe décrits ou être lui-même détectable par un autre couple ligand/anti-ligand, et ainsi de suite. La quantité de réactifs d'immunoessai présente dans la solution aqueuse selon l'invention dépend de son utilisation finale. Dans un mode de réalisation particulier, le réactif d'immunoessai est un anticorps marqué présent à raison de 100 pg/mL à 20 i_tg/mL, par 10 exemple de 20 ng/mL à 3 i_tg/mL. Les compositions de polymères selon l'invention sont avantageusement utilisées en remplacement des molécules habituellement ajoutées avec les réactifs comme agent stabilisant et/ou agent bloquant, notamment les macromolécules d'origine animale. Par conséquent, dans un mode de réalisation particulier, la solution aqueuse selon 15 l'invention est caractérisée en ce qu'elle ne comprend pas d'agent stabilisant et/ou d'agent bloquant d'origine animale choisi parmi les sérums animaux, les caséines hydrolysées ou non, le lait écrémé, notamment le lait écrémé en poudre, l'albumine bovine ou humaine et les gélatines, encore appelés de façon générique « protéine de charge » même si des macromolécules autres que des protéines sont utilisées. 20 La solution aqueuse comprend de préférence l'amphipol et le copolymère amphotérique comme décrits aux précédents paragraphes dans des concentrations efficaces pour agir comme agent bloquant dans un test d'immunessai. Ces concentrations efficaces seront déterminées par l'homme du métier, en particulier en fonction de la concentration de réactifs utilisés, de la nature des réactifs, de l'effet stabilisant et/ou bloquant recherché 25 et/ou du type d'immunoessai. Typiquement, on utilisera des concentrations finales d'amphipols dans la solution aqueuse comprises entre 0,01% et 0,2% (poids/volume), de préférence entre 0,02% et 0,05%, par exemple 0,02%, et des concentrations finales de polymères amphotériques dans la solution 3045834 23 aqueuse comprises entre 0,01% et 0,3% (poids/volume), de préférence entre 0,03% et 0,08%, par exemple 0,05%. La solution aqueuse peut en outre contenir d'autres constituants et en particulier, un tampon, un détergent, des sels, un colorant, un émollient, un conservateur, etc. 5 Trousse d'immunoessai selon l'invention Les solutions aqueuses de l'invention sont particulièrement utiles pour un procédé de détection d'un analyte, dans un échantillon biologique susceptible de le contenir, comprenant un test d'immunoessai par mise en contact dudit échantillon avec au moins un partenaire de liaison à l'analyte. 10 Aussi, les trousses d'immunoessai comprenant les solutions aqueuses selon l'invention constituent un autre objet de l'invention. Les trousses d'immunoessai contiennent un ou plusieurs composés nécessaires à la mise en oeuvre d'un test d'immunoessai et en particulier un ou des partenaires de liaison à l'analyte, marqué ou pas, et tous les composés nécessaires à la mise en évidence d'une 15 interaction spécifique entre le ou les partenaires de liaison à l'analyte. Lorsqu'il s'agit d'un test d'immunoessai de type sandwich, la trousse d'immunoessai comprend alors deux partenaires de liaison, l'un des deux partenaires de liaison étant marqué, pour former le « traceur » ou « partenaire de détection », et l'autre partenaire étant capturé sur une phase solide, encore appelé « partenaire de capture ». 20 Ces trousses d'immunoessai selon l'invention peuvent comprendre en outre un ou plusieurs des éléments suivants : - une phase solide, par exemple une microplaque ou des cônes, sensibilisés avec des partenaires de capture, par exemple un anticorps de capture, - une solution de lavage, 25 - un partenaire de liaison marqué, par exemple un anticorps conjugué, - une composition selon l'invention sans réactif d'immunoessai, 3045834 24 - une composition selon l'invention ou solution aqueuse selon l'invention comprenant un réactif à titre de contrôle positif, - une composition selon l'invention ou solution aqueuse selon l'invention comprenant un ou plusieurs réactifs de concentration connue à titre de standard, 5 - une composition selon l'invention ou solution aqueuse selon l'invention comprenant un réactif de concentration connue à titre d'ajusteur, - une notice d'instructions pour la mise en oeuvre de l'immunoessai. Dans un mode particulier de réalisation pour un immunoessai mis en oeuvre par un automate, par exemple de type Vidas®, la trousse d'immunoessai selon l'invention est un 10 coffret comprenant les éléments séparés suivants : - des cônes sensibilisés par des partenaires de liaison, par exemple des anticorps spécifiques de l'analyte à détecter, - une cartouche, c'est-à-dire une phase solide comprenant une pluralité de puits, par exemple de 4 à 20, dont certains sont de préférence scellés, au moins un des puits 15 comprenant une solution aqueuse selon l'invention, par exemple, une solution aqueuse contenant un réactif, de préférence un anticorps marqué spécifique de l'analyte à détecter, - le cas échéant, une composition selon l'invention sans réactif d'immunoessai, - le cas échéant, une composition selon l'invention ou solution aqueuse selon 20 l'invention comprenant un réactif à titre de contrôle positif, - le cas échéant, une composition selon l'invention ou solution aqueuse selon l'invention comprenant un réactif, de concentration connue, à titre d'ajusteur. La phase solide et la cartouche en tant que telle, telles que décrites dans les trousses ci-dessus, font également partie de l'invention. 25 Procédé de mise en oeuvre d'un immunoessai selon l'invention L'invention vise également tout procédé par immunoessai de détermination de la présence ou de quantification d'un analyte, dans un échantillon biologique susceptible de le contenir, comprenant l'utilisation d'une composition ou solution aqueuse de l'invention notamment comme agent bloquant et/ou stabilisant. 3045834 25 Aussi, un autre objet de l'invention concerne un procédé de détection d'un analyte dans un échantillon biologique susceptible de le contenir, comprenant i. un test d'immunoessai par mise en contact dudit échantillon avec au moins un partenaire de liaison à l'analyte, 5 ii. le cas échéant, un test de contrôle de la validité du test d'immunoessai par mise en contact d'un contrôle positif avec lesdits un ou plusieurs partenaires de liaison à l'analyte, iii. la lecture du test d'immunoessai, iv. la détermination de la présence dudit analyte dans l'échantillon de test lorsque le 10 signal obtenu par le test d'immunoessai de l'étape i est supérieur à une valeur seuil du test d'immunoessai, ledit procédé comprenant l'utilisation d'une composition ou solution aqueuse selon l'invention. Dans un mode de réalisation du procédé de détection ci-dessus, le test d'immunoessai mis 15 en oeuvre à l'étape (i) utilise une composition ou solution aqueuse selon l'invention. Dans un autre mode de réalisation du procédé de détection ci-dessus, le test de contrôle mis en oeuvre à l'étape (ii) est obtenu en utilisant une solution aqueuse selon l'invention dans laquelle le réactif est un contrôle. Naturellement, les deux modes de réalisation précédents peuvent être combinés. 20 L'échantillon de test dans le cadre de l'invention peut être de diverses origines, par exemple d'origine alimentaire, environnementale, biologique, vétérinaire, clinique, pharmaceutique ou cosmétique. Parmi les échantillons d'origine alimentaire, on peut citer, de façon non-exhaustive, un échantillon de produits lactés (yaourts, fromages, etc.), de viande, de poisson, d'oeuf, de 25 fruit, de légume, d'eau, de boisson (lait, jus de fruits, soda, etc.). Bien évidemment, ces échantillons d'origine alimentaire peuvent aussi provenir de sauces ou de plats plus 3045834 26 élaborés ou des matières premières non transformées ou partiellement transformées. Un échantillon alimentaire peut également être issu d'une alimentation destinée aux animaux, telle que des tourteaux, des farines animales. Tous ces échantillons, s'ils ne sont pas liquides, sont préalablement traités pour être sous forme liquide. 5 Tel qu'indiqué précédemment, l'échantillon peut être d'origine environnementale et peut consister, par exemple, en un prélèvement de surface, d'eau, etc. L'échantillon peut également consister en un échantillon biologique, d'origine humaine ou animale, pouvant correspondre à des prélèvements de fluide biologique (urine, sang total ou dérivés tels que sérum ou plasma, salive, pus, liquide céphalo-rachidien, etc.), de selles 10 (par exemple diarrhées cholériques), de prélèvements de nez, de gorge, de peau, de plaies, d'organes, de tissus ou de cellules isolées, d'échantillons d'écouvillonnage. Cette liste n'est évidemment pas exhaustive. D'une manière générale, le terme « échantillon » se réfère à une partie ou à une quantité, plus particulièrement une petite partie ou une petite quantité, prélevée à partir d'une ou 15 plusieurs entités aux fins d'analyse. Cet échantillon peut éventuellement avoir subi un traitement préalable, impliquant par exemple des étapes de mélange, de dilution ou encore de broyage, en particulier si l'entité de départ est à l'état solide. L'échantillon analysé est, en général, susceptible de - ou suspecté de - contenir au moins un analyte représentatif de la présence de microorganismes, d'une maladie, ou d'un état 20 physiologique, à détecter, à caractériser ou à suivre. Les étapes de ce procédé de détection d'un analyte par immunoessai sont des étapes largement connues de l'Homme du Métier qui ont été décrites précédemment. Notamment, la première étape consiste en la mise en contact de l'échantillon de test avec un ou plusieurs partenaires de liaison à l'analyte, de préférence au moins deux partenaires de 25 liaison pour un test sandwich. Comme décrit précédemment, l'un des deux partenaires peut être couplé à un marqueur pour former un conjugué ou un traceur. L'autre partenaire de liaison peut être capturé sur un support solide comme connu de l'Homme du Métier. Le signal mesuré émis par le conjugué est alors proportionnel à la quantité d'analyte de l'échantillon biologique. 3045834 27 Le test d'immunoessai i) et le test de contrôle ii) peuvent être mis en oeuvre dans n'importe quel ordre, simultanément ou successivement, sur le même support solide ou non. La lecture du test d'immunoessai est également une étape largement connue de l'Homme du Métier qui dépend du test utilisé. 5 Enfin, la dernière étape consiste en la détermination de la présence dudit analyte dans l'échantillon de test lorsque le signal obtenu par le test d'immunoessai de l'étape i) est supérieur au seuil de détection du test d'immunoessai. Cette étape est également largement connue de l'Homme du Métier. Un autre objet de l'invention porte sur un procédé de quantification d'un analyte cible par 10 immunoessai dans un échantillon biologique susceptible de contenir ledit analyte, comprenant i. un test d'immunoessai par mise en contact dudit échantillon avec au moins un partenaire de liaison à l'analyte, ii. le cas échéant, un test de contrôle de la validité de l'immunoessai par mise en 15 contact d'un contrôle positif avec lesdits un ou plusieurs partenaires de liaison à l'analyte, iii. la lecture du test d'immunoessai si le test de contrôle de validité est positif, et iv. la détermination de la quantité dudit analyte dans l'échantillon de test par comparaison du signal du test d'immunoessai avec une courbe étalon, dans 20 laquelle le réactif est un ajusteur de l'immunoessai, ledit procédé comprenant l'utilisation d'une composition ou solution aqueuse selon l'invention. Dans un mode de réalisation du procédé de détection ci-dessus, le test d'immunoessai mis en oeuvre à l'étape (i) utilise une composition ou solution aqueuse selon l'invention. 25 Dans un autre mode de réalisation du procédé de quantification ci-dessus, le test de contrôle mis en oeuvre à l'étape (ii) est obtenu en utilisant une solution aqueuse selon l'invention dans laquelle le réactif est un contrôle. 3045834 28 Dans encore un autre mode de réalisation du procédé de quantification ci-dessus, la courbe étalon utilisée à l'étape (iv) est obtenue en utilisant une solution aqueuse selon l'invention dans laquelle le réactif est un ajusteur de l'immunoessai. Naturellement, les trois modes de réalisation précédents peuvent être combinés. 5 Bien entendu, la description des échantillons et des diverses étapes de procédé décrites dans le cadre du procédé de détection d'un analyte cible s'applique au procédé de quantification d'un analyte cible. La seule différence consiste en la dernière étape qui consiste à déterminer la quantité d'analyte par comparaison à une courbe étalon, comme expliqué précédemment. 10 Dans un mode de réalisation spécifique des procédés décrits ci-dessus, le procédé par immunoessai selon l'invention comprend la mise en contact dudit échantillon avec au moins deux partenaires de liaison audit analyte, P1 et P2, séquentiellement ou simultanément, l'un des deux partenaires P2 étant marqué pour révéler la présence dudit analyte, s'il est présent, l'autre partenaire P1 étant de préférence immobilisé sur une phase 15 solide, et ledit partenaire P2 marqué étant contenu dans au moins une composition selon l'invention ou au moins une solution aqueuse selon l'invention, comme décrit précédemment, pour former le cas échéant un complexe P1/analyte/P2, la révélation de la présence dudit complexe formé permettant de conclure à la présence ou à la quantité d' analyte dans l' échantillon. 20 Dans un autre mode de réalisation, le procédé par immunoessai comprend la mise en contact dudit échantillon avec au moins un partenaire P1 de liaison audit analyte et un réactif R1 de compétition à l'analyte, ledit partenaire de liaison P1 étant de préférence immobilisé sur une phase solide, ledit réactif R1 étant marqué pour révéler indirectement la présence dudit analyte, et ledit réactif R1 étant contenu dans au moins une composition 25 selon l'invention ou au moins une solution aqueuse selon l'invention, pour former un complexe P1/R1, la révélation de la présence dudit complexe formé permettant de conclure indirectement à l'absence ou à la quantité d'analyte dans l'échantillon. Les mêmes caractéristiques et préférences décrites dans les sections précédentes, notamment quant au choix des polymères et des composés particuliers aux différentes 3045834 29 étapes de l'immunoessai s'appliquent également aux procédés de détection et quantification de l'invention. Les procédés d'immunoessai de l'invention comprennent en particulier la mise en oeuvre des trousses d'immunoessai de l'invention décrites précédemment. 5 L'invention sera mieux comprise à l'aide des exemples suivants qui sont donnés à titre illustratif et non limitatif. EXEMPLES Comparaison de différentes formulations de diluant de réactifs selon l'invention, pour le dosage de la Troponine I cardiaque 10 L'étude de diluant d'anticorps conjugués pour un immunodosage de la Troponine I cardiaque a été réalisée avec l'automate d'immunoanalyse VIDAS® (bioMérieux). Le cône à usage unique sert à la fois de phase solide pour la réaction et de système de pipetage. La cartouche de l'automate est composée de 10 puits (XO à X9) recouverts d'une feuille d'aluminium scellée et étiquetée. Le premier puits (X0) comporte une partie 15 prédécoupée pour faciliter l'introduction de l'échantillon. Le dernier puits (X9) est une cuvette optique dans laquelle la fluorescence du substrat est mesurée. Les différents réactifs nécessaires à l'analyse sont contenus dans les puits intermédiaires. Toutes les étapes du test sont ainsi réalisées automatiquement par l'instrument. Elles sont constituées d'une succession de cycles d'aspiration/refoulement du milieu réactionnel. 20 L'immunodosage de la Troponine I cardiaque a été réalisé par un test sandwich en une étape. a) Sensibilisation et passivation des cônes Les caractéristiques et les fournisseurs des anticorps utilisés sont présentés dans le Tableau 1 ci-dessous. Les cônes ont été sensibilisés avec 300 !IL d'une solution des anticorps 25 monoclonaux 19C7 et B90 dilués chacun à 2,5 i.tg/mL dans un tampon PBS pH 6,2. Après environ 20h d'incubation à +18/25°C avec la solution de sensibilisation, les cônes ont été vidés. Ensuite, 300 !IL de cette même solution contenant 10 g/L d'albumine bovine sont 3045834 30 ajoutés. La passivation se poursuit à +18/25°C sur la nuit. Les cônes sont vidés, séchés, puis conservés à +4°C jusqu'à utilisation, à l'abri de l'humidité. Tableau 1. Anticorps utilisés pour l'immunodosage de la Troponine I cardiaque. Nom de Cible Fournisseur (Cat. No.) l'anticorps 19C7 TnI Hytest (4T21-19C7) B90 TnI SDIX (B9085MA06-MA) 3D5F7 TnI bioMérieux (non commercial) 7B9 TnC Hytest (4T27-7B9) L'abréviation TnI correspond à la troponine I cardiaque et l'abréviation TnC correspond à 5 la troponine C cardiaque. L'abréviation Cat. No. correspond à la référence catalogue du fournisseur. b) Préparation de diluants pour anticorps conjugués et solutions de conjugués Différentes solutions de diluant pour anticorps conjugués sont préparées selon le Tableau 2. 10 3045834 31 Tableau 2. Composition des différents diluants anticorps conjugués. Composé Diluant REF Diluant 1 Diluant 2 Diluant 3 Diluant de l'invention PBS pH 6.4 X X X X Sérum de cheval 5% X X Biolipidure 2061 X X 0,05% PMAL C122 0,02% X X X indique que le composé est présent dans le diluant. Commercialisé par la société NOF Corporation ref Biolipidure-206. 2 CAS No 869857-14-7 commercialisé par la société Anatrace ref P5012. 5 Les diluants REF et 1 à 3 ont été utilisés pour préparer différentes solutions de conjugués. Chaque solution de conjugué contient les 2 anticorps monoclonaux de détection, le 3D5F7 et le 7B9 (décrits au Tableau 1), sous forme de fragments Fab' couplés à la phosphatase alcaline. Ces anticorps conjugués ont été dilués à environ 0,5 .ig/mL chacun dans les différents diluants décrits dans le Tableau 2 ci-dessus. 10 c) Mode opératoire de l'immunodosage Les solutions de conjugués ont été testées avec des échantillons naturels (points A, B, C, E et G dont les concentrations en Troponine I sont connues) ou un tampon PB S-BSA comme échantillon blanc (point O). Dès que le cône VIDAS® est en contact avec l'échantillon, la réaction immunologique 15 commence car les anticorps de capture sont immobilisés sur ce cône. L'automate mélange l'échantillon à tester (135 1.1L) avec 270 !IL de la solution de conjugué. 3045834 32 L'incubation dure environ 9 minutes à 37°C et permet la liaison spécifique de la Troponine I cardiaque aux anticorps adsorbés sur le cône d'une part et aux anticorps conjugués (anticorps de détection) d'autre part. Ensuite, les composants non liés sont éliminés par 3 lavages avec un tampon Tris 200 mM pH 7,8, NaC1 300 mM, Triton X-100 0,2%. Lors de 5 l'étape finale de révélation, le substrat 4-méthylombelliferyl phosphate est aspiré puis refoulé dans le cône ; l'enzyme des anticorps conjugués catalyse la réaction d'hydrolyse de ce substrat en 4-méthylombelliferone dont la fluorescence émise est mesurée à 450 nm. La valeur du signal de fluorescence (RFV=relative fluorescence value) est proportionnelle à la concentration de l'antigène présent dans l'échantillon. 10 d) Résultats Le Tableau 3 récapitule les signaux de fluorescence (RFV=relative fluorescence value) déterminés par l'automate VIDAS® lorsque l'on compare les signaux obtenus avec les anticorps conjugués dilués dans le diluant REF (l'art antérieur), et les différentes formulations de diluants (Tableau 2). 15 Tableau 3. Résultats obtenus avec les différentes formulations de diluant. Item Diluant REF Diluant 1 Diluant 2 Diluant 3 Diluant de l'invention Signal RFV point O (blanc) 7,5 9,8 7,0 4,5 Signal RFV point A (4.0 ng/L) 13 13 18 18 RFV A / RFV 0 1,7 1,3 2,6 4,0 RFV A - RFV 0 5,5 3,3 11,0 13,5 Signal RFV point B (10.2 ng/L) 26,0 25,0 31,5 33,5 RFVB/RFVO 3,5 2,6 4,5 7,4 RFV B - RFV 0 18,5 15,3 24,5 29,0 3045834 33 Comme observé sur le Tableau 3, l'ajout de PMAL C12 au diluant REF (Diluant 1) n'a quasiment pas d'impact sur les signaux observés. En revanche, le remplacement du sérum de cheval par le Biolipidure 206 (Diluant 2) améliore la dynamique en bas de gamme (signaux des points A et B plus élevés), mais ne permet pas de réduire le bruit de fond 5 (signaux des points O autour de 7 RFV). C'est l'ajout de PMAL C12 à ce diluant (Diluant 3, diluant de l'invention) qui permet de diminuer significativement le bruit de fond qui passe de 7 à 4,5 RFV. Il en résulte une augmentation significative des rapports RFV A / RFV O et RFV B / RFV O. Ainsi, l'association du Biolipidure 206 et du PMAL C12 a un effet synergique inattendu. 10 d) Stabilité des anticorps conjugués dilués dans les différentes formulations de diluant Les anticorps conjugués (anticorps de détection) sont dilués à 0,5 1.1g/mL dans les différentes formulations de diluant présentées en Tableau 2 et sont utilisées tout de suite pour doser les échantillons (A, B, C, E et G). Les résultats obtenus correspondent aux 15 résultats du temps TO. Les anticorps de détection dilués dans les différents diluants sont ensuite conservés pendant 1 mois, soit à +2/8°C (condition normale), soit à +18/25°C (condition de stabilité accélérée). Au bout d'un mois, les mêmes échantillons sont redosés sur VIDAS dans les mêmes conditions avec les solutions diluées d'anticorps de détection stockées pendant 1 mois. Pour chaque condition, le rapport entre le signal RFV obtenu au 20 bout d'un mois sur le signal RFV obtenu à TO est calculé. Les résultats sont présentés en Tableau 4. Tableau 4. Stabilité des anticorps conjugués dans les différentes formulations de diluant. Point cone. de Signal mois / Signal RFV 1 RFV TO Diluant REF Diluant 1 Diluant 2 Diluant 3 troponine) 2/8'-' C I 8/2 5 2/8°C T 2/8°C 18/25' 2/8°C 18/25' C 18/25' Point A 1,08 1,12 1,15 0,96 1,14 0,97 1,06 1,03 (4,0 ng/L) Point B 1,10 1,08 1,06 0,96 0,97 0,89 0,99 0,91 3045834 34 (10,2 ng/L) Point C 0,98 1,00 1,04 0,98 0,94 0,81 1,00 0,89 (18,3 ng/L) Point E 0 97 1,12 1,01 0,98 0,98 0,86 1,00 0,92 (93,6 ng/L) Point G 1,01 0,93 1,03 0,99 1,02 0,87 1,02 0,93 (590 ng/L) Les rapports >=1,10 ou= REVENDICATIONS1. Composition pour immunoessai, comprenant au moins (i) un amphipol et (ii) un copolymère amphotérique à base de monomères de (méth)acrylate, une partie de ces monomères comprenant un groupe phosphorylcholine. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'amphipol est un polymère amphiphile comprenant un homopolymère ou copolymère d'anhydride maléique ou de polyacrylate, sur lesquels sont greffés au moins un groupe hydrophobe et un groupe hydrophile, et de masse moléculaire moyenne comprise entre 1 000 et 100 000 g/mol, de préférence entre 4 000 et 70 000 g/mol. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'amphipol est choisi parmi les poly(anhydride maléiques) sur lesquels sont greffés au moins une chaine alkyle hydrophobe et au moins un groupe hydrophile. 4. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que ladite chaine alkyle hydrophobe est une chaine alkyle linéaire de formule (-CH2).- avec n est un entier supérieur ou égal à 4, de préférence supérieur ou égal à 6, de préférence supérieur ou égal à 8, et par exemple compris entre 4 et 16, de préférence entre 8 et 12. 5. Composition selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisée en ce que le groupe hydrophile est un groupe carboxylate ou un groupe chargé positivement, en particulier un ammonium alkyle, par exemple la 3-(diméthylamino)-1-propylamine. 25 6. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'amphipol est choisi parmi les poly(anhydride-alt-1-octadécène maléiques), poly(anhydride-alt-1-tétradécène maléiques), poly(anhydride-alt-l-décène maléiques), substitués par un groupe hydrophile, notamment substitués par un ammonium alkyle, par exemple la 3-(diméthylamino)-1-propylamine. 30 20 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l'amphipol est choisi parmi 3045834 38 - le polymère amphiphile de formule suivante (Ia) suivante : respectifs préférence préférence préférence de masse moléculaire moyenne étant comprise entre 4 000 et 4 600 g/mol, de 10 préférence environ 4 300 g/mol, - le poly(anhydride-alt-1-tétradécène maléique) substitué de formule (IIa) suivante : 15 l (IIa) et de masse moléculaire moyenne comprise entre 10 000 et 14 000 g/mol, par exemple environ 12 000 g/mol, - le poly(anhydride-alt-1-décène maléique) substitué de formule (IIb) suivante : x, y, z correspondent aux pourcentages x étant compris entre 34 et 36 %, de y étant compris entre 24 et 26 %, de z étant compris entre 38 et 42 %, de 5 des motifs, environ 35%, environ 25%, environ 40%, 3045834 39 (IIb) et de masse moléculaire moyenne comprise entre 16 000 et 20 000 g/mol, par exemple environ 18 500 g/mol, et le poly(anhydride-alt-1-octadécène maléique) substitué de formule (IIc) 5 suivante : (IIc) et de masse moléculaire moyenne comprise entre 39 000 et 65 000 g/mol. 10 8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le copolymère amphotérique est un copolymère amphotérique à base d'un monomère de 2-methacryloyloxyéthyl phosphorylcholine (MPC) et d'un autre monomère de méthacrylate fonctionnalisé avec un groupe hydrophobe, un groupe anionique, un groupe cationique ou un groupe permettant la formation de liaisons hydrogène. 15 9. Composition selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que le copolymère amphotérique est un copolymère amphotérique à base de MPC et de méthacrylate fonctionnalisé avec un groupe hydrophobe choisi parmi 20 - les alkyles linéaires ou ramifiés en C4 à C30 ; - les alkyles linéaires ou ramifiés en C4 à C30 comprenant au moins un cycloalkyle ; 3045834 40 - les chaînes hydrocarbonées en C4 à C30 comprenant au moins une double liaison ; - les chaînes hydrocarbonées en C4 à C30 comprenant au moins une triple liaison ; et, - les chaînes hydrocarbonées en C4 à C30 comprenant au moins un cycle aromatique. 510. 11. 10 12. 15 13. 20 14. 15. 16. Composition selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que le copolymère amphotérique est le BiolipidureTM 206 commercialisé par la société NOF CORPORATION. Solution aqueuse comprenant la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 et au moins un réactif d'immunoessai. Solution aqueuse selon la revendication 11, dans laquelle le réactif d'immunoessai est choisi parmi un partenaire de liaison destiné à détecter ou quantifier un analyte dans un échantillon biologique susceptible de le contenir, ledit partenaire pouvant être marqué ou non, un contrôle positif, un standard et un ajusteur d'un immunoessai. Solution aqueuse selon la revendication 11 ou 12, caractérisée en ce qu'elle ne comprend pas d'agent stabilisant et/ou d'agent bloquant d'origine humaine ou animale, par exemple choisi parmi les sérums animaux, le lait écrémé, les caséines hydrolysées ou non, l'albumine bovine ou humaine, et les gélatines. Trousse d'immunoessai comprenant au moins une solution aqueuse selon l'une des revendications 11 à 13, et au moins un partenaire de liaison à un analyte à détecter ou quantifier par immunoessai et, le cas échéant, les composés nécessaires à la mise en évidence d'une interaction spécifique entre le ou les partenaires de liaison et l' analyte. Utilisation d'une composition telle que définie dans l'une des revendications 1 à 10 ou d'une solution aqueuse telle que définie dans l'une des revendications 11 à 13, dans un procédé par immunoessai, comme agent stabilisant et/ou bloquant. Utilisation selon la revendication 15, pour réduire l'interaction non-spécifique entre (i) au moins un partenaire de liaison destiné à détecter ou quantifier un analyte dans 3045834 41 un échantillon biologique susceptible de le contenir, par exemple un partenaire de liaison marqué, et, (ii) une phase solide. 17. Utilisation selon la revendication 15 ou 16, pour réduire l'interaction non-spécifique 5 entre (i) un contrôle positif de l'immunoessai, un standard de l'immunoessai et/ou un ajusteur de l'immunoessai, et, (ii) une phase solide. 18. Procédé par immunoessai de détermination de la présence ou de quantification d'un analyte cible, dans un échantillon biologique susceptible de le contenir, comprenant 10 la mise en contact dudit échantillon avec au moins deux partenaires de liaison audit analyte, P1 et P2, séquentiellement ou simultanément, l'un des deux partenaires P2 étant marqué pour révéler la présence dudit analyte, s'il est présent, l'autre partenaire P1 étant de préférence immobilisé sur une phase solide, et ledit partenaire P2 marqué étant contenu dans au moins une composition telle que définie dans l'une des 15 revendications 1 à 10 ou au moins une solution aqueuse telle que définie dans l'une des revendications 11 à 13, pour former le cas échéant un complexe P1/analyte/P2, la révélation de la présence dudit complexe formé permettant de conclure à la présence ou à la quantité d'analyte dans l'échantillon. 20 19. Procédé par immunoessai de détermination de la présence ou de quantification d'un analyte cible, dans un échantillon biologique susceptible de le contenir, comprenant la mise en contact dudit échantillon avec au moins un partenaire P1 de liaison audit analyte et un réactif R1 de compétition à l'analyte, ledit partenaire de liaison P1 étant de préférence immobilisé sur une phase solide, ledit réactif R1 étant marqué pour 25 révéler indirectement la présence dudit analyte, et ledit réactif R1 étant contenu dans au moins une composition telle que définie dans l'une des revendications 1 à 10 ou au moins une solution aqueuse telle que définie dans l'une des revendications 11 à 13, pour former un complexe P 1/R1, la révélation de la présence dudit complexe formé permettant de conclure indirectement à l'absence ou à la quantité d'analyte 30 dans l'échantillon.