Brevet FR3044312A1 — publié le 20170602

La présente invention concerne le domaine des infections par le virus de l'hépatite E (HEV). En particulier, l'invention concerne la détection des hépatites dues au virus de l'hépatite E. Les hépatites sont des lésions inflammatoires du foie dont les causes peuvent être multiples : infectieuses, médicamenteuses, auto-immunes, etc. Les atteintes hépatiques aigües d'origine virale sont fréquentes, souvent asymptomatiques. Elles sont dues soit à une action cytopathique directe du virus, soit, le plus souvent, à la réaction immunitaire dirigée contre les cellules hépatiques infectées. Les symptômes, quand ils existent, associent un ictère fébrile, prurigineux, une décoloration des selles, un brunissement des urines et une augmentation plus ou moins importante des transaminases, témoignant de la cytolyse et du dysfonctionnement hépatique. De nombreux virus sont capables d'entraîner des lésions hépatiques, par exemple le virus d'Epstein-Barr (EBV) ou le Cytomégalovirus (CMV), mais seuls six virus sont reconnus comme responsables de ce que l'on appelle communément les "hépatites virales". Ces virus sont les virus des hépatites A, B, C, Delta, E et G, lesquels sont des virus appartenant à des familles bien différentes. Le virus de l'hépatite G est très peu décrit. Le virus de l'hépatite A, ou VHA ou HAV, appartient à la famille des Picornaviridae et est le seul représentant du genre Hepatovirus. Il s'agit d'un virus nu à ARN. Le réservoir de virus est le sujet infecté, malade ou non. Les modes de transmission sont déterminés par l'exceptionnelle résistance du virus et sa concentration élevée dans les selles. Le principal mode de transmission est essentiellement fécal-oral. Un risque particulier est lié à la consommation de coquillages et de crudités souillées. Le virus de l'hépatite B, ou VHB ou HBV, appartient à la famille des hepadnaviridoe. Il s'agit d'un virus à ADN circulaire, bicaténaire sur les 3/4 de sa circonférence. Ce virus expose au risque d'hépatite fulminante, d'hépatite chronique active, de cirrhose et d'hépatocarcinome. Le principal vecteur du virus est le sang, mais il peut être transmis par voie sexuelle. Au niveau mondial, on estime à 350 millions le nombre de personnes infectées chroniquement par ce virus et qu'il est à l'origine de plus d'un million de décès annuellement. 3044312 2 Le virus de l'hépatite C, ou VHC ou HCV ou NANBH pour « Non-A, Non-B Hepatitis », virus à génome à ARN de polarité positive, a une organisation proche de celle des flavivirus avec 9500 nucléotides (9,5 kb), des extrémités 5' et 3' non codantes, et en partant de l'extrémité 5' des gènes de capside (C), d'enveloppe (El et E2) et de 5 protéines non structurales (NS1 à NS5). L'HCV est un virus strictement humain. Le mode de contamination se fait principalement par voie veineuse, par exemple par utilisation d'aiguilles non stérilisées, la contamination par transfusion de sang étant encore présente dans les pays en développement où il n'y a pas de dépistage des donneurs. L'élément le plus inquiétant de l'hépatite C est, qu'au-delà d'une primo- 10 infection généralement asymptomatique (90 % des cas), l'évolution se fait dans 70 à 80 % des cas vers la chronicité, avec chez 20 % des infectés chroniques un risque de cirrhose et de cancer primitif du foie après une incubation de 20 ans en moyenne pour la cirrhose et de 30 ans pour le cancer. Le virus de l'hépatite DELTA, ou VHD ou HDV, est un très petit virus à ARN, 15 incapable de se répliquer sans l'HBV qui lui prête son antigène de surface HBs. L'infection à virus DELTA ne survient qu'en même temps qu'une infection à HBV dont le pronostic s'en trouve aggravé : risque accru d'hépatite fulminante et de passage à l'hépatite chronique active. Le virus de l'hépatite E, ou VHE ou HEV ou ET-NANBH pour « Enterically 20 Transmitted Non-A, Non-B Hepatitis », est un petit virus nu non enveloppé dont le génome est un ARN simple brin de polarité positive. Initialement classé dans la famille des Caliciviridae dont il est proche, la connaissance de son génome entier conduit aujourd'hui à le classer à part, comme seul membre du genre Hepevirus, de la famille des Hepeviridce (Emerson, S. U., & Purcell, R. H., 2007). La transmission inter-humaine de 25 ce virus se fait principalement par voie fécale-orale (eau souillée, aliments). Les infections sont endémiques dans certaines régions d'Asie, d'Afrique et d'Amérique centrale et du Sud. Le virus de l'hépatite E est identifié comme l'agent principal d'épidémies d'hépatites aiguës dans les pays à faible niveau d'hygiène. Plus récemment, il a été clairement défini comme responsable de véritables cas sporadiques d'hépatites 30 aiguës dans les pays industrialisés chez des patients n'ayant jamais séjourné en zone 3044312 3 d'endémie. Il est actuellement clairement démontré que l'hépatite E est une zoonose et que de nombreuses espèces animales domestiquées et sauvages sont infectées par HEV, constituant le réservoir de virus. L'hépatite E, comme l'hépatite A, ne passe généralement pas à la chronicité, sauf pour certains groupes de patients comme ceux 5 ayant reçu un transplant d'organe solide. Il a toutefois une particularité mal expliquée : bien que généralement spontanément résolutive, il a été observé que, en Inde, la mortalité pouvait atteindre 20% chez les femmes enceintes, à mesure que l'âge gestationnel augmente, ce qui pourrait faire de l'infection à HEV l'hépatite la plus grave de toutes les hépatites virales pendant la grossesse. Il est donc fondamental de disposer 10 d'outils de détection de l'infection par HEV performants et fiables. Le génome du virus de l'hépatite E a une longueur approximative de 7,5 kb et présente 3 cadres de lectures (ORF1, ORF2 et ORF3) partiellement chevauchants encadrés à l'extrémité 5' d'une séquence non codante de 27 à 32 nucléotides et à l'extrémité 3' d'une séquence de 65 à 74 bases suivie par une extrémité polyadénylée de 15 longueur variable selon les virus. L'ORF1 code pour une polyprotéine de 186 kDa environ, appelée protéine p-ORF1, ultérieurement clivée en protéines non structurales dont une méthyl-transférase, démontrant que le virus est coiffé à son extrémité 5', et l'ARN polymérase ARN dépendante. L'ORF2 code pour la protéine de capside glycosylée, appelée protéine p-ORF2, ayant de 659 à 674 acides aminés selon les 20 variants décrits à ce jour, la majorité des protéines p-ORF2 des variants ayant 660 acides aminés. Cette protéine p-ORF2 présente plusieurs sites immunogènes dont un épitope immunodominant conformationnel entre les acides aminés 394 et 457, numérotés par rapport à la protéine de 660 acides aminés, et un épitope cible des anticorps neutralisants, également conformationnel, situé entre les acides aminés 452 et 617, avec 25 la même numérotation (Meng J, et al., 2001). Elle comporte également un autre épitope immunodominant, appelé épitope 406.3-2, lequel correspond aux acides aminés 613-654 d'un variant ORF2 de 660 acides aminés (W093/14116). La phosphoprotéine d'un poids moléculaire de 13 kDa, codée par l'ORF3, appelée protéine p-ORF3, est très variable selon les virus. Cette protéine dont le rôle reste à préciser, serait impliquée dans 3044312 4 les fonctions de régulation de la réplication virale ou dans l'assemblage de la nucl éocap si de. Le diagnostic actuel repose soit sur la détection du virus par amplification génique à partir d'échantillons de selles et de sérum, voire de bile ou de biopsie 5 hépatique, soit sur la détection de la réponse anticorps sérique anti-HEV. L'amplification génique est mise en oeuvre par RT-PCR, PCR nichée, ou PCR en temps réel en utilisant plusieurs couples d'amorces suivant les génotypes, à partir des régions les plus conservées du génome. Avec un seuil de détection de 10 à 103 molécules d'ADNc/réaction, suivant les techniques, l'excrétion virale dans les selles peut 10 atteindre 106 molécules d'ADNc. La caractérisation du génotype peut être réalisée dans un second temps. Ces techniques sont essentiellement utiles pour la détection de la virémie dans le sang de façon précoce par rapport à l'infection, avant apparition des symptômes et des anticorps. Toutefois, ces techniques visant la détection des acides nucléiques viraux ont pour inconvénients que la période de virémie est courte (1 à 2 15 semaines dans le sang, 3 à 4 semaines dans les selles) et qu'elles nécessitent un appareillage coûteux et non utilisable au plus près du patient. Le diagnostic sérologique de l'infection par HEV repose sur la détection d'anticorps spécifiques anti-HEV de type IgM et/ou IgG dont la cible principale est pORF2. Plusieurs kits sont commercialisés. Ainsi, la société MP Diagnostic propose la 20 trousse ASSURE® HEV IgM qui est un dispositif de test immuno-chromatographique destiné à la détection rapide des anticorps IgM dirigés contre la protéine p-ORF2 du virus de l'hépatite E. Pour ce faire, le kit met en oeuvre un polypeptide recombinant, le polypeptide 394-660, numéroté par rapport à la séquence 1-660 de p-ORF2, autrement appelé polypeptide p-ORF2.1, correspondant aux 267 derniers acides aminés de la 25 protéine. Des anticorps de souris dirigés contre des IgM humains sont immobilisés sur la membrane d'immunochromatographie, ce qui permet de capturer les différents IgM humains présents dans l'échantillon. La présence d'IgM dirigés spécifiquement contre HEV est révélée en utilisant, comme partenaire de détection, le polypeptide recombinant 394-660 complexé à un anticorps monoclonal anti-HEV marqué à l'or. Les raisons de 30 l'utilisation du polypeptide recombinant 394-660 plutôt que de la protéine entière sont 3 044 3 1 2 5 divulguées dans la demande W095/08632. Selon les enseignements de cette demande de brevet, la réactivité immunologique de la protéine complète p-ORF2 exprimée dans E. coli n'est pas optimale, une partie de la molécule pouvant réduire voire inhiber l'immunoréactivité d'une autre partie de la molécule. Pour pallier à cet effet inhibiteur, 5 la demande de brevet W095/08632 a proposé d'utiliser des protéines p-ORF2 délétées ou tronquées. Parmi les différentes constructions testées, le polypeptide recombinant 394-660, délété des 393 premiers acides aminés, présentait la meilleure immunoréactivité. La caractérisation détaillée de la structure antigénique du polypeptide 394-660 et 10 sa comparaison avec celui des « virus-like particles » ou VLP, formés par auto- assemblage in vitro et proches antigéniquement de la particule virale HEV, sont décrites dans Riddell M.A., et al., 2000. L'inconvénient d'utiliser le polypeptide 394-660 est qu'il contient dans sa partie C-terminale un domaine qui inhibe, au moins partiellement, l'auto-assemblage du 15 polypeptide en oligomères et VLP. Ceci peut interférer avec la bonne présentation des épitopes conformationnels. Pour pallier ces inconvénients, la Société Wantai a modifié le polypeptide 394660 en supprimant les acides aminés 607-660 (numérotés par rapport à une séquence 1660 de p-ORF2) qui interfèrent avec l'oligomérisation et la capacité d'auto-assemblage. 20 Le polypeptide ainsi obtenu a été appelé polypeptide pE2, comme décrit dans la demande de brevet W001/22916. L'avantage de ce polypeptide pE2, de séquence 394606, est qu'il se dimérise naturellement et que l'immunoréactivité du pE2 dimérique est bien supérieure à celle du pE2 monomérique en favorisant la bonne présentation des épitopes conformationnels. L'inconvénient est qu'un tel polypeptide tronqué ne 25 comprend pas un épitope important, l'épitope 406.3-2 correspondant aux acides aminés 613-654 d'un variant ORF2 de 660 acides aminés, comme indiqué dans la demande de brevet W093/14116. Une telle délétion peut alors conduire à une diminution de la sensibilité d'un test de diagnostic mettant en oeuvre un tel polypeptide tronqué. La Demanderesse a découvert contre toute attente qu'il était possible de pallier 30 aux inconvénients des polypeptides de l'art antérieur en effectuant, dans le peptide 394- 3044312 6 660 de ORF2 de HEV, numéroté par rapport à une protéine p-ORF2 de 660 aminés, 3 mutations aux positions 627, 630 et 638, et ce en améliorant son antigénicité et son immunoréactivité. Ainsi, le peptide muté, qu'on peut appeler p-ORF2-MUT, possède tous les épitopes importants, se dimérise naturellement de façon non covalente, est 5 capable de s'oligomériser sans aucune agrégation et présente une immunoréactivité supérieure à celle du polypeptide recombinant 394-660 non muté. Aussi, l'invention concerne un polypeptide dérivé de la protéine p-ORF2 du virus de l'hépatite E comprenant (i) au moins la séquence d'acides aminés 394-660, numérotés par rapport à une protéine p-ORF2 de 660 acides aminés, dans laquelle les 10 trois cystéines en positions 627, 630 et 638 ont été mutées, ou (ii) pour une protéine p- ORF2 de longueur différente, au moins la séquence d'acides aminés correspondant aux acides aminés 394-660 de la protéine p-ORF2 de 660 acides aminés, dans laquelle les trois cystéines situées aux trois positions correspondant aux positions 627, 630 et 638 de la protéine p-ORF2 de 660 acides aminés ont été mutées. 15 Un autre objet de l'invention concerne les acides nucléiques isolés comprenant une séquence de nucléotides codant pour les polypeptides de l'invention ou une séquence complémentaire à ladite séquence codante, ainsi que les vecteurs d'expression comprenant ces séquences. Encore un autre objet concerne les cellules hôtes comprenant ces mêmes 20 séquences nucléiques, directement insérées ou par l'intermédiaire des vecteurs d' expression. Elle concerne de plus l'utilisation des polypeptides de l'invention pour la détermination de la présence d'une réponse anticorps dirigée contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E ou bien pour la détermination du taux de ces anticorps. 25 Ainsi, un autre objet de l'invention concerne un procédé de détermination par immunoessai de la présence d'une réponse anticorps dirigée contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E dans un échantillon biologique issu d'un sujet, susceptible de contenir les anticorps de ladite réponse, lequel comprend les étapes suivantes : - mettre en contact ledit échantillon biologique avec un polypeptide de l'invention, 30 - détecter un signal émis par la liaison entre ledit polypeptide et lesdits anticorps, s'ils 3044312 7 sont présents, en utilisant un marqueur capable d'émettre un signal détectable, - comparer le signal ainsi obtenu avec un signal de référence S préalablement déterminé avec deux populations de témoins, l'une ayant développé lesdits anticorps et l'autre n'ayant pas développé lesdits anticorps, 5 - un signal inférieur audit signal de référence S signifiant que l'échantillon ne contient pas lesdits anticorps, et - un signal supérieur audit signal de référence S signifiant que l'échantillon contient lesdits anticorps. Un autre objet concerne également un procédé de détermination par 10 immunoessai du taux d'anticorps dirigés contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E dans un échantillon biologique issu d'un sujet, susceptible de contenir lesdits anticorps, lequel comprend les étapes suivantes : - mettre en contact ledit échantillon biologique avec un polypeptide de l'invention, - détecter un signal émis par la liaison entre ledit polypeptide et lesdits anticorps, s'ils 15 sont présents, en utilisant un marqueur capable d'émettre un signal détectable, - transformer le signal détecté en un taux d'anticorps. Encore un autre objet concerne l'utilisation de ces procédés pour l'aide au diagnostic in vitro, pour le diagnostic in vitro d'une infection au virus de l'hépatite E chez un sujet susceptible d'être infecté, pour le suivi thérapeutique d'un sujet infecté par 20 le virus de l'hépatite E, pour faire des études épidémiologiques de la séroprévalence des anticorps anti-HEV dans une population ou dans un territoire géographique donné ou pour déterminer si un sujet a besoin d'être vacciné ou revacciné contre le virus de l'hépatite E. Enfin, un dernier objet concerne les trousses pour la détermination par 25 immunoessai de la présence de la réponse humorale ou du taux d'anticorps dirigés contre la protéine p-ORF2 du virus de l'hépatite E chez un sujet susceptible d'avoir produit ces anticorps, comprenant un polypeptide de l'invention. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description non limitative qui suit et des figures 1 à 6 annexées, dans lesquelles : 30 - La Figure 1 donne un alignement de séquences en acides aminés de différentes 3044312 8 protéines p-ORF2 des principaux variants de virus HEV obtenus à partir de la base de données Uniprot, la première colonne correspondant à la référence UNIPROT, la deuxième colonne correspondant au nom de la souche de HEV et la dernière colonne correspondant à l'alignement des séquences. L'alignement de séquences a été réalisé par 5 le programme Clustal Omega accessible sur le site web d'UNIPROT. Les différentes parties de l'alignement sont réparties des Figures lA à 1L. La séquence du variant Q81871, de 660 acides aminés, est soulignée comme référence. Les flèches sur la Figure 1G indiquent le premier acide aminé de la séquence minimale des polypeptides de l'invention et le rectangle sur la Figure 1K montre la séquence de 12 acides aminés du 10 variant Q81871 dans laquelle se trouvent les 3 Cystéines à muter. La dernière ligne sous chaque alignement de séquences montre l'identité d'acides aminés ou non entre chaque variant, « * » indiquant une position totalement conservée, avec les acides aminés identiques chez tous les variants, « : » indiquant une position bien conservée, avec des acides aminés ayant des propriétés fortement similaires et un score >0,5 dans la matrice 15 Gonnet PAM 250, « . » indiquant une position assez conservée, avec des acides aminés ayant des propriétés faiblement similaires et un score = = 1) IgM ORF2-REF IgM ORF2-MUT (Pos si RFV >= 70) (Pos si RFV >= 70) Identifiant échantillo n Indice Interpréta Signal Interpréta Signal Interpréta tion (RFV) tion (RFV) tion 155118 0,0 Neg 50 Neg 76 Pos 136997 0,5 Neg 64 Neg 122 Pos 123971 0,5 Neg 98 Pos 145 Pos 143289 0,4 Neg 115 Pos 159 Pos 136360 1,5 Pos 156 Pos 225 Pos 130162 2,2 Pos 209 Pos 236 Pos 144054 0,0 Neg 217 Pos 252 Pos 39417 0,4 Neg 291 Pos 536 Pos 9264883 7,5 Pos 646 Pos 785 Pos 9264884 5,7 Pos 753 Pos 1014 Pos 155798 4,6 Pos 821 Pos 1025 Pos 155795 5,6 Pos 484 Pos 1072 Pos 155799 8,3 Pos 934 Pos 1191 Pos 155797 3,5 Pos 394 Pos 1737 Pos 154183 1,8 Pos 843 Pos 1820 Pos 154050 10,1 Pos 1596 Pos 2705 Pos 155796 8,5 Pos 2237 Pos 2916 Pos 154053 13,6 Pos 3200 Pos 4503 Pos 5 Neg = Négatif et Pos = Positif Spécificité diagnostique. Sur le panel d'échantillons négatifs analysés (Tableau 2), le test IgM ORF2-REF présente deux faux-positifs (échantillons 129534 et 137163), ce qui correspond à une spécificité de 88,9% seulement alors que le test IgM 10 ORF2-MUT n'a aucun faux-positif ce qui se traduit par une spécificité augmentée à 100%. Il faut noter que la sensibilité améliorée du test IgM ORF2-MUT ne se fait pas au dépend de sa spécificité. 3044312 39 Tableau 2. Recherche des IgM anti-ORF2 dans les sérums des patients n'ayant pas d'infection hépatite E de manière certaine. Etude de spécificité sur échantillons négatifs confirmés. Immunoessai VIDAS IgM Immunoessai VIDAS IgM ORF2-REF (Neg si RFV REVENDICATIONS1. Polypeptide dérivé de la protéine p-ORF2 du virus de l'hépatite E comprenant au moins la séquence d'acides aminés 394-660, numérotés par rapport à une protéine p- ORF2 de 660 acides aminés, dans laquelle les trois cystéines en positions 627, 630 et 638 ont été mutées ou, pour une protéine p-ORF2 de longueur différente, au moins la séquence d'acides aminés correspondant aux acides aminés 394-660 de la protéine pORF2 de 660 acides aminés, dans laquelle les trois cystéines situées aux trois positions correspondant aux positions 627, 630 et 638 de la protéine p-ORF2 de 660 acides aminés ont été mutées. 2. Polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce que les mutations sont mises en oeuvre en remplaçant les trois cystéines par tout acide aminé à l'exception de la proline, des acides aminés dont les chaînes latérales sont chargées et des acides aminés dont les chaînes latérales comportent un cycle aromatique benzénique. 3. Polypeptide selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que les mutations sont mises en oeuvre en remplaçant les trois cystéines par un acide aminé choisi parmi l'alanine, la glycine, la thréonine, la valine et la sérine. 4. Polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les mutations consistent à substituer les cystéines par le même acide aminé. 5. Polypeptide selon la revendication 4, caractérisé en ce que les mutations sont mises en oeuvre en remplaçant les trois cystéines par de la sérine. 6. Polypeptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il consiste en le polypeptide de séquence d'acides aminés 394-660, numérotés par rapport à une protéine p-ORF2 de 660 acides aminés, dans laquelle les trois cystéines en positions 627, 630 et 638 ont été mutées ou, pour une protéine p-ORF2 de longueur 3044312 44 différente, de séquence d'acides aminés correspondant aux acides aminés 394-660 de la protéine p-ORF2 de 660 acides aminés, dans laquelle les trois cystéines situées aux trois positions correspondant aux positions 627, 630 et 638 de la protéine p-ORF2 de 660 acides aminés ont été mutées. 5 7. Polypeptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comporte également un ou plusieurs acides aminés n'appartenant pas à la protéine p-ORF2 ou en ce qu'il est marqué. 10 8. Acide nucléique isolé comprenant une séquence de nucléotides codant pour le polypeptide tel que défini dans l'une des revendications 1 à 7 ou une séquence complémentaire à ladite séquence codante. 9. Vecteur d'expression comprenant une séquence d'acide nucléique telle que définie 15 dans la revendication 8. 10. Cellule hôte comprenant une séquence de nucléotides codant pour le polypeptide tel que défini dans l'une des revendications 1 à 7 ou une séquence complémentaire à ladite séquence codante ou un vecteur d'expression tel que défini dans la revendication 9. 20 11. Procédé de détermination par immunoessai de la présence d'une réponse anticorps dirigée contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E dans un échantillon biologique issu d'un sujet, susceptible de contenir les anticorps de ladite réponse, lequel comprend les étapes suivantes : 25 - mettre en contact ledit échantillon biologique avec un polypeptide tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 7, - détecter un signal émis par la liaison entre ledit polypeptide et lesdits anticorps, s'ils sont présents, en utilisant un marqueur capable d'émettre un signal détectable, - comparer le signal ainsi obtenu avec un signal de référence S préalablement déterminé 30 avec deux populations de témoins, l'une ayant développé lesdits anticorps et l'autre 3044312 45 n'ayant pas développé lesdits anticorps, - un signal inférieur audit signal de référence S signifiant que l'échantillon ne contient pas lesdits anticorps, et - un signal supérieur audit signal de référence S signifiant que l'échantillon contient 5 lesdits anticorps. 12. Procédé de détermination par immunoessai du taux d'anticorps dirigés contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E dans un échantillon biologique issu d'un sujet, susceptible de contenir lesdits anticorps, lequel comprend les étapes suivantes : 10 - mettre en contact ledit échantillon biologique avec un polypeptide tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 7, - détecter un signal émis par la liaison entre ledit polypeptide et lesdits anticorps, s'ils sont présents, en utilisant un marqueur capable d'émettre un signal détectable, - transformer le signal détecté en un taux d'anticorps. 15 13. Procédé selon l'une des revendications 11 ou 12, caractérisé en ce que les anticorps recherchés sont des IgM ou des IgG. 14. Utilisation d'un procédé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 11 à 20 13 pour l'aide au diagnostic in vitro, pour le diagnostic in vitro d'une infection au virus de l'hépatite E chez un sujet susceptible d'être infecté, pour le suivi thérapeutique d'un sujet infecté par le virus de l'hépatite E ou pour faire des études épidémiologiques de la séroprévalence des anticorps anti-HEV dans une population ou dans un territoire géographique donné. 25 15. Utilisation d'un procédé tel que défini dans la revendication 11 ou 12 pour déterminer si un sujet a besoin d'être vacciné ou revacciné contre le virus de l'hépatite E, dans laquelle les anticorps recherchés sont des IgG. 30 16. Trousse pour la détermination par immunoessai de la présence de la réponse 3044312 46 anticorps ou du taux d'anticorps dirigés contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E chez un sujet susceptible d'avoir produit ces anticorps, comprenant un polypeptide tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 7. 5 17. Trousse selon la revendication 16, comprenant également au moins un échantillon contrôle positif qui est un échantillon contenant un taux donné d'anticorps dirigés contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E.