Brevet FR3049285A1 — publié le 20170929

La présente invention concerne l'utilisation de compositions détergentes enzymatiques pour le nettoyage automatique d'instruments et/ou appareils chirurgicaux et/ou médicaux. En milieu hospitalier, les instruments chirurgicaux sont en général soumis à un nettoyage automatique en laveur désinfecteur d'instruments (LDI) en utilisant des détergents fortement alcalins suivi d'une désinfection thermique ou chimique. Ces détergents ont généralement un pH supérieur à 12 ce qui les rends très corrosifs. Pour éviter les dommages causés par ces détergents alcalins, des détergents enzymatiques ont été proposés. On connaît par exemple le MEDICLEAN® forte de Dr. Weigert qui fait d'ailleurs l'objet du brevet européen EP 1 327 674 B 1. Ce détergent contient de la triéthanolamine, de l'acide nitrilotriacétique (NTA) comme agent chélatant, des phosphates et une protéase. La présence simultanée d'une alcanolamine et d'une enzyme dans une même composition pose des problèmes de stabilité pour l'enzyme, notamment lorsque la composition est très concentrée. C'est pourquoi Dr. Weigert a développé le neodisher® SYSTEM ALPHA qui est composé de deux composantes très concentrés distinctes, à savoir une composante enzymatique, le neodisher® SystemAct, et une composante 2 0 alcaline, le neodisher® SystemClean. La composante enzymatique contient une subtilisine tandis que la composante alcaline contient de la triéthanolamine et de l'acide méthylglycine diacétique (MGDA). Ce système fait d'ailleurs l'objet de la demande de brevet internationale W02015/043777. Même si ce système permet de résoudre les problèmes liés à 25 l'instabilité de l'enzyme en présence de fortes concentrations d'agents alcalins comme les alcanolamines, il présente un désavantage majeur en ce qu'il nécessite un équipement spécifique pour pouvoir alimenter le laveur désinfecteur d'instruments avec les deux composantes simultanément. Les laveurs 3049285 2 désinfecteurs d'instruments ne possèdent en effet qu'une alimentation de composition détergente. Il existe donc toujours un besoin d'un moyen pour nettoyer efficacement les instruments chirurgicaux et médicaux en machine sans présenter 5 les problèmes de stabilité des solutions proposées dans l'état de la technique et sans nécessiter un appareillage spécifique pour pouvoir alimenter les machines utilisées pour le nettoyage. Il est du mérite de la Demanderesse d'avoir trouvé au fruit de nombreuses recherches que ces inconvénients pouvaient être palliés en utilisant 10 une composition détergente concentrée qui repose sur la combinaison de trois enzymes et d'un agent chélatant puissant et qui ne contient pas d' alcanolamine. L'invention concerne donc l'utilisation d'une composition détergente aqueuse concentrée pour le nettoyage d'instruments chirurgicaux et/ou médicaux en laveur désinfecteur, ladite composition détergente aqueuse 15 concentrée comprenant : - une subtilisine, - une lipase, - une amylase, - un agent chélatant biodégradable choisi parmi l'acide 2 0 méthylglycine diacétique (MGDA) et un iminodisuccinate (ID S) et - de l'eau, ladite composition détergente concentrée étant exempte d'alcanolamine. De façon tout à fait surprenante, cette combinaison spécifique 2 5 d'une subtilisine, d'une lipase et d'une amylase avec du MGDA ou de l'IDS permet de s'affranchir de la nécessité de l'ajout d'alcanolamine tout en maintenant un nettoyage efficace d'instruments chirurgicaux et/ou médicaux souillés en 3049285 3 laveur désinfecteur. Ainsi, la composition détergente aqueuse concentrée de l'invention ne présente pas les problèmes de stabilité enzymatique rencontrés dans les compositions enzymatiques de l'art antérieur contenant des alcanolamines. De plus, étant donné que les principaux composants des tissus 5 biologiques qui constituent des souillures majeures des instruments chirurgicaux et médicaux sont protéines, lipides (triglycérides) et polymères glucidiques (glycogène), le cocktail tri-enzymatique de la composition détergente aqueuse concentrée de l'invention hydrolysera simultanément les trois cibles et donc en facilitera la détergence. 10 De plus, l'absence d'alcanolamine permet de formuler la composition détergente utilisée conformément à l'invention de façon très concentrée. Ainsi, la teneur en eau de la composition détergente aqueuse concentrée peut être réduite jusqu'à 25 % en poids par rapport au poids total de composition sans pour autant devoir ajouter de quantités importantes de tiers- 15 solvant, impacter la stabilité des enzymes et nuire à l'efficacité de nettoyage. La composition utilisée conformément à l'invention a avantageusement une teneur en subtilisine de 0,5 à 15% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 1 à 10% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 1 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition, plus préférentiellement d'environ 3% en poids par rapport au poids total de la composition. La teneur en lipase est avantageusement de 0,05 à 2% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,5 à 1,5% en poids par rapport au poids total de la composition, plus préférentiellement d'environ 1% en poids par rapport au poids total de la composition. La teneur en amylase est avantageusement de 0,05 à 2% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,5 à 1,5% en poids par rapport au poids total de la composition, plus préférentiellement d'environ 1% en poids par rapport au poids total de la composition. 3049285 4 L'agent chélatant biodégradable est choisi parmi l'acide méthylglycine diacétique (MGDA) et un iminodisuccinate (IDS), notamment l'iminodisuccinate tétrasodique. De préférence, l'agent chélatant biodégradable est de l'acide méthylglycine diacétique (MGDA). Sans vouloir être lié par une 5 quelconque théorie, les inventeurs pensent que l'agent chélatant mis en oeuvre dans la présente invention ne sert pas uniquement à l'adoucissement de l'eau mais aussi à complexer de manière particulièrement efficace des ions métalliques bi- et trivalents, notamment Ca2+, Fe3+, Fe2+ et Cu2+, contenus dans les résidus protéiques retrouvés typiquement sur les instruments chirurgicaux et/ou médicaux. 10 Il semblerait que ces agents chélatants séquestrent ces ions métalliques ce qui déstabilise la structure tertiaire des protéines et les rends plus facilement hydrolysables. La composition utilisée conformément à l'invention a avantageusement une teneur en agent chélatant biodégradable de 10 à 50% en 15 poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 20 à 40% en poids par rapport au poids total de la composition, plus préférentiellement de 25 à 35% en poids par rapport au poids total de la composition, plus préférentiellement encore d'environ 30% en poids par rapport au poids total de la composition. La composition détergente aqueuse concentrée est 2 0 avantageusement exempte de tout agent chélatant non bio-dégradable, notamment d'acide éthylène-diamine-tétraacétique (EDTA), acide diéthylène-triaminepentaacétique (DTPA), phosphates et polyphosphates. Avantageusement, la composition détergente aqueuse concentrée est également exempte de tout agent chélatant classé réprotoxique tel que l'acide nitrilotriacétique et son sel de sodium 2 5 (NTA). Dans un mode de réalisation, la composition détergente aqueuse concentrée est également exempte d'hydroxydes alcalins et alcalinoterreux. La teneur en eau de la composition détergente concentrée utilisée 3049285 5 conformément à l'invention est avantageusement de 10 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 15 à 45 % en poids par rapport au poids total de la composition, plus préférentiellement de 20 à 40 % en poids par rapport au poids total de la composition et plus préférentiellement 5 encore de 25 à 40% en poids par rapport au poids total de la composition. En plus de l'eau, la composition détergente concentrée peut également contenir un tiers-solvant tel un polyol. Des exemples de polyols appropriés comprennent notamment les alkylènes glycols tels que l'éthylène glycol, le propylène glycol et la glycérine (1,2,3-propanetriol). De préférence, le tiers-solvant est la glycérine. 10 La glycérine a l'avantage de ne pas servir uniquement de tiers-solvant mais de stabiliser également les enzymes. La teneur en tiers-solvant est avantageusement de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 10 à 40 % en poids par rapport au poids total de la composition, plus préférentiellement de 13 à 15 25 % en poids par rapport au poids total de la composition. La composition détergente concentrée utilisée conformément à l'invention peut en outre comprendre un ou plusieurs tensioactifs non ioniques. Le ou les agents tensioactifs non ioniques peuvent notamment être choisis parmi les tensioactifs non ioniques alcoxylés et les alkylpolyglucosides. Les tensioactifs non 20 ioniques alcoxylés sont avantageusement choisis parmi les tensioactifs non ioniques alcoxylés, notamment parmi les alcools gras alcoxylés, notamment éthoxylés et/ou propoxylés, et les copolymères blocs EO-PO. Dans un mode de réalisation préféré, le ou les agents tensioactifs non ioniques sont choisis parmi les alkylpolyglucosides, de préférence il s'agit d'un alkylpolyglucoside en C7. Cet 25 alkylpolyglucoside apporte en effet le triple avantage de jouer un rôle de stabilisant, d'apporter un effet mouillant favorable à la détergence et un caractère non-moussant compatible avec une application en laveur désinfecteur. La teneur en tensioactif non ionique dans la composition détergente utilisée conformément à l'invention est avantageusement de 1 à 10 %, de 3049285 6 préférence de 2 à 5 %, plus préférentiellement d'environ 3 % en poids par rapport au poids total de la composition. La composition détergente utilisée conformément à l'invention peut en outre comprendre un acide ou un système de tampon pour ajuster le pH. 5 De préférence, on ajoute un acide organique, choisi parmi les acides en C2-C6 mono-, di- et tricarboxyliques, notamment choisi parmi l'acide citrique, l'acide tartrique, l'acide malique, l'acide lactique, l'acide glutarique, l'acide gluconique l'acide glycolique, l'acide succinique et l'acide adipique. L'acide citrique est particulièrement préféré. Elle présente l'avantage de servir en même temps 10 comme agent complexant comme également l'acide tartrique et l'acide gluconique. Avantageusement, la composition ne contiendra pas d'agent antimicrobien et n'aura donc aucune revendication d'activité antimicrobienne à la dose d'emploi. Celle-ci est à distinguer d'un effet bactériostatique qui par contre 15 pourra être recherché. A cet effet, la composition détergente utilisée conformément à l'invention peut également comprendre un agent conservateur. L'agent conservateur peut être choisi parmi les agents conservateurs habituellement utilisés, comme par exemple le 5-chloro-5-méthy1-4-isothiazoline3-one, le 2-méthyl-4-isothiazolin3-one, l'acide p-hydroxybenzoïque et ses esters 20 de méthyl, le 5-bromo-5-nitro-1,3-dioxane et l'acide salicylique, l'alcool benzylique et le benzoate de sodium. Ces agents conservateurs permettent d'éviter une contamination microbienne et fongique en apportant un effet bactériostatique et fongistatique. La composition détergente utilisée conformément à l'invention 25 peut également comprendre un agent hydrotrope. Cet agent hydrotrope peut par exemple être choisi parmi les xylènesulfonates, les toluènesulfonates, les cumènes sulfonates, l'urée, le méthylacétamide, du polyéthylèneglycol et du polypropylèneglycol. 3049285 7 La composition détergente concentrée utilisée conformément à l'invention peut en outre comprendre d'autres adjuvants tels que par exemple des agents dispersants et/ou des agents anti-mousse. Les agents dispersants peuvent par exemple être des acides des homo-, co- ou terpolymères à base d'acide 5 acrylique ou des sels de métaux alcalins de ceux-ci (polyacrylates). Dans l'utilisation selon l'invention, la composition détergente est mise en oeuvre dans un laveur désinfecteur (LD) tel qu'un laveur désinfecteur d'instruments (LDI) ou un laveur désinfecteur d'endoscope (LDE). Le terme « laveur désinfecteur » est à comprendre tel qu'il est défini dans la norme ISO 10 15883-1 :2006, à savoir une machine destinée à nettoyer et désinfecter des dispositifs médicaux et tous les autres articles utilisés dans les milieux médical, dentaire, pharmaceutique et vétérinaire. Aussi, le terme « instruments chirurgicaux et/ou médicaux » tels qu'utilisé dans la présente demande est à comprendre de façon large comme désignant les dispositifs médicaux et tous les 15 autres articles utilisés dans les milieux médical, dentaire, pharmaceutique et vétérinaire nécessitant un nettoyage avec des détergents aqueux avant réutilisation. Dans la présente invention, ce nettoyage est avantageusement mise en oeuvre à une température de 20 à 60 °C, de préférence de 45 à 55 °C, plus 20 préférentiellement de 50 à 55 °C. La durée de nettoyage est avantageusement comprise entre 20 s et 10 min, de préférence entre 30 s et 5 min. La présente invention porte également sur la composition détergente aqueuse concentrée mise en oeuvre dans l'utilisation selon l'invention telle que décrite ci-dessus. Cette composition est à diluer avec de l'eau, 2 5 préférentiellement adoucie, déminéralisée ou osmosée, avant emploi. La dilution est généralement de 0,03% à 1% (v/v), de préférence de 0,1% à 0.6% (v/v), plus préférentiellement de 0,2 à 0,4% (v/v). Le pH de la composition diluée prête à l'emploi est avantageusement de 8 à 11, de préférence de 8,5 à 9,5, plus préférentiellement de 8,8 à 9,2 et plus préférentiellement encore d'environ 9. Pour 3049285 8 la détermination du pH de la composition diluée, de l'eau adoucie est utilisée (degré de dureté d'environ 5°f). L'invention sera maintenant décrite à l'aide d'exemples non limitatifs de réalisation de l'invention. 5 FIGURES Figure 1 : Photos des tests de détergence embarqué pour les compositions Cl, C2 et C3. Figure 2 : Evaluation de l'activité de la subtilisine par électrophorèse sur gel. Figure 3 : Evaluation de l'activité de la lipase par chromatographie sur couche 10 mince. Figure 4 : Evaluation de l'activité de l'amylase par chromatographie sur couche mince. EXEMPLES Les trois compositions détergentes concentrées suivantes (tableau 15 1) ont été évaluées pour leur capacité à nettoyer efficacement des résidus typiquement retrouvé sur des instruments chirurgicaux et médicaux. Tableau 1 Composition (% en Cl C2 C3 poids/poids total) Eau déminéralisée 38,91 35,2 45,5 Acide citrique 2,5 2,5 2,5 Glycérine technique 20 20 20 Alcool gras éthoxylé 3 3 3 Chlorure de dioctyl 0,5 0,5 0,5 diméthyl ammonium Méthylisothiazolinone et 0,09 0,09 0,09 3049285 9 méthylchloroisothiazolinone MGDA 30 - - IDS - 35 15 Polyacrylate - - 10 Savinase® Ultra 16 XL 3 3 3 (subtilisine) Lipolase 1 1 1 Amylase 1 1 1 pH (concentré, 20°C) 9 9 9 pH (dilution à 0,5 % (v/v) dans de l'eau adoucie (5°f, 20°C) 8.9 8.5 8.2 EXEMPLE 1 : Essais de détergence embarqués en laveur désinfecteur MIELE G7836CD 1) Déroulement du cycle Injection du détergent à 35°C, dilution de 0,3% (v/v) en eau adoucie 5 Lavage avec de l'eau adoucie pendant 3mn à 55°C Rinçage avec de l'eau de réseau froide Séchage 2) Les différents tests embarqués utilisés Simicon (SIMICON PET-K-10 de SIMICON GmbH, Munich, 10 Allemagne) Wash check H (Getinge, Sweden) Load Check Browne (Stens, USA) Les différents tests ont été utilisés selon les modes d'emplois fournit par le fabricant respectif 15 3) Résultats des essais Les essais de performance ont montré que les trois compositions Cl, C2 et C3 donnent des résultats tout à fait satisfaisants dans les conditions de 3049285 10 tests. Les meilleurs résultats sont toutefois obtenus avec la composition Cl. Avec cette composition, on ne détecte en effet aucune trace sur les trois tests utilisés (Figure 1). Les essais ont été répétés à une température de nettoyage de 40°C 5 et une dilution des compositions à 0,5 % (v/v). Les résultats obtenus sont comparables à ceux obtenus à 40°C et confirment donc l'efficacité des compositions selon l'invention. EXEMPLE 2: Essais de détergence comparatifs en laveur désinfecteur MIELE PG 8528 10 La performance de la composition Cl a été comparée à celle de l'Anisoyme ® DLM Maxi (Laboratoires Anios, Hellemmes, France), un détergent trienzymatique contenant une protéase, une lipase, une amylase et l'agent chélatant EDTA. Le test embarqué utilisé était le TOSI AMCOR (référence 35002577). 15 Pour chaque essai, le cycle de traitement se déroule comme suit : - Prélavage : eau de réseau froide, 1 min, - Lavage : eau adoucie (5°f), 5 min, température et dosage selon tableau 2 ci-dessous, - Rinçage : eau de réseau froide, 1 min, 2 0 - Rinçage final : eau osmosée à 90°C, 1 min avec de l'Anios RDA à 0,05 % (v/v). Le tableau 2 ci-dessous récapitule les conditions d'essais et les résultats. Tableau 2 Détergent : Cl Cl Aniosyme DLM Maxi Aniosyme DLM Maxi Dosage (% v/v) 0,2 0,1 0,2 0,1 Température de lavage 45°C 50°C 45°C 50°C 3049285 11 Résulat aucune trace aucune trace traces de traces de fibrine fibrine Ces essais montrent que la composition selon l'invention permet un nettoyage plus efficace à des températures et dosage faibles. Ceci est d'autant plus surprenant que l'activité chélatant de l'EDTA est à la base supérieure à celle du MGDA ce qui laisserait attendre une efficacité de nettoyage supérieure pour 5 l'Aniosyme® DLM Maxi. EXEMPLE 3: Evaluation de l'activité des enzymes dans la composition Cl Les stabilités respectives de la subtilisine, de la lipase et de l'amylase dans la composition Cl ont été évaluées par les tests suivants. 10 1) Activité de la subtilisine L'activité de la subtilisine contenue dans le détergent est suivie par la technique de l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide, le substrat utilisé est une solution de sérum albumine humaine à 0,3% (salissure représentative d'une application en établissement de santé). 15 Après migration, les protéines et peptides sont révélés par exposition dans une solution colorante au bleu de Coomassie suivie d'une décoloration. Une révélation au bleu de Coomassie permet de révéler les produits de dégradation issus de l'hydrolyse du sérum albumine humaine. La Figure 2 montre quatre pistes d'électrophorèse : la piste 1 2 0 correspond au témoin (sérum albumine humaine (0,3%) non dégradé), les pistes 2, 3 et 4 à la composition Cl après fabrication, 3 semaines de stockage dans un contenant hermétiquement fermé à 30°C et 7 semaine de stockage dans un contenant hermétiquement fermé à 30°C respectivement. On constate que l'activité enzymatique de la subtilisine ne se dégrade pas pendant au moins 7 2 5 semaines. 2) Activité de la lipase 3049285 12 L'activité de la lipase a été suivie par la technique de Chromatographie sur Couche Mince (CCM), le substrat utilisé est un triglycéride et l'éluant un mélange de 50 mL d'heptane, de 20 mL d'éther diéthylique, de 0,5 mL d'acide acétique et de 1.5mL d'éthanol. 5 La lipase dégradant les triglycérides, l'absence de triglycérides, et la présence de diglycérides et de monglycérides met en évidence l'activité enzymatique de la lipase. La Figure 3 montre six pistes de CCM : les pistes 1, 2, 3 correspondent aux témoins (1 : triglycérides, 2 : diglycérides, 3 : monoglycérides), 10 les pistes 4, 5 et 6 à la composition Cl après fabrication, après 3 semaines de stockage dans un contenant hermétiquement fermé à 30°C et après 7 semaine de stockage dans un contenant hermétiquement fermé à 30°C respectivement. On constate que l'activité enzymatique de la lipase ne se dégrade pas pendant au moins 7 semaines. 15 3) Activité de l'amylase L'activité de l'amylase a été suivie par la technique de Chromatographie sur Couche Mince (CCM), le substrat utilisé est du glycogène et l'éluant un mélange de 70 mL d'éthanol, de 1 mL d'acide acétique et de 29 mL d'eau déminéralisée. 2 0 L' amylase dégradant le glycogène, l'absence de glycogène et la présence de glucose mettent en évidence l'activité enzymatique de l'amylase. La Figure 4 montre cinq pistes de CCM : les pistes 1 et 2 correspondent aux témoins (1 : glycogène, 2 : glucose), les pistes 3, 4 et 5 à la composition Cl après fabrication, après 3 semaines de stockage dans un contenant 2 5 hermétiquement fermé à 30°C et après 7 semaine de stockage dans un contenant hermétiquement fermé à 30°C respectivement. On constate que l'activité enzymatique de l'amylase ne se dégrade pas pendant au moins 7 semaines. EXEMPLE 4 : Influence des enzymes sur le pouvoir nettoyant dégraissant 3049285 13 L'influence de la présence des trois enzymes subtilisine, lipase et amylase dans la composition détergente a été évaluée en comparant la composition Cl à des compositions sans enzymes (C4), avec subtilisine (C5) et avec lipase et amylase (C6). Composition (% en Cl C4 C5 C6 poids/poids total) Eau déminéralisée 38,91 43,91 40,91 41,91 Acide citrique 2,5 2,5 2,5 2,5 Glycérine technique 20 20 20 20 Alcool gras éthoxylé 3 3 3 3 Chlorure de dioctyl 0,5 0,5 0,5 0,5 diméthyl ammonium Méthylisothiazolinone et 0,09 0,09 0,09 0,09 méthylchloroisothiazolinone MGDA 30 30 30 30 Savinase® Ultra 16 XL 3 - 3 - (subtilisine) Lipolase 1 - - 1 Amylase 1 - - 1 5 Pour ces essais le pouvoir nettoyant dégraissant des différentes compositions a été évalué par rapport à de la salissure anglaise selon la norme ISO 15883 qui a été appliquée au pinceau sur des lames en inox (une lame par composition testée) et laissée sécher pendant une heure à température ambiante. Ensuite chaque lame a été trempée sous agitation (agitateur tridimensionnel, 50 10 rpm) pendant 15 min à température ambiante dans l'une des quatre compositions détergente diluée à 0,3 % (v/v) dans de l'eau adoucie (5°f). Les meilleurs résultats ont été obtenus pour la composition Cl. Les lames traitées avec les compositions C4, C5 et C6 présentaient en effet d'importants résidus de salissure anglaise visible à l'oeil nu. Le dosage des 15 protéines résiduelles par la technique MicroBCA (kit INTERCHIM UPTIMA MicroBC Assay, référence UP75860A) confirme ces observations. REVENDICATIONS1. Utilisation d'une composition détergente aqueuse concentrée pour le nettoyage d'instruments chirurgicaux et/ou médicaux en laveur désinfecteur, ladite composition détergente aqueuse concentrée comprenant : - une subtilisine, - une lipase, une amylase, - un agent chélatant biodégradable choisi parmi l'acide méthylglycine diacétique et un iminodisuccinate et de l'eau, ladite composition détergente concentrée étant exempte d' alcanolamine. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition détergente a une teneur en subtilisine de 0,5 à 15% en poids par rapport au poids total de la composition. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que la composition détergente a une teneur en lipase de 0,05 à 2% en poids par rapport au poids total de la composition. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition détergente a une teneur en 2 0 amylase de 0,05 à 2% en poids par rapport au poids total de la composition. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'agent chélatant biodégradable est de l'acide méthylglycine diacétique. 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 2 5 précédentes, caractérisée en ce que la composition détergente a une teneur en agent chélatant biodégradable de 10 à 50% en poids par rapport au poids total de 3049285 15 la composition. 7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition détergente comprend également de la glycérine. 5 8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition détergente comprend également un ou plusieurs tensioactifs non ioniques. 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le nettoyage est effectué à une température de 10 20 à 60 °C. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la durée de nettoyage comprise entre 20 s et 10 min 11. Composition détergente aqueuse concentrée comprenant : 15 - une subtilisine, - une lipase, - une amylase, - un agent chélatant biodégradable choisi parmi l'acide méthylglycine diacétique et un iminodisuccinate et 2 0 - de l'eau, ladite composition détergente concentrée étant exempte d'alcanolamine. 12. Composition détergente selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle a une teneur en subtilisine de 0,5 à 15% en poids par rapport au poids total de la composition. 2 5 13. Composition détergente selon la revendication 11 ou 12, 3049285 16 caractérisée en ce qu'elle a une teneur en lipase de 0,05 à 2% en poids par rapport au poids total de la composition. 14. Composition détergente selon l'une quelconque des revendications 11 à 13, caractérisée en ce qu'elle a une teneur en amylase de 0,05 5 à 2% en poids par rapport au poids total de la composition. 15. Composition détergente selon l'une quelconque des revendications 11 à 14, caractérisée en ce que l'agent chélatant biodégradable est de l'acide méthylglycine diacétique. 16. Composition détergente selon l'une quelconque des 10 revendications 11 à 15, caractérisée en ce qu'elle a une teneur en agent chélatant biodégradable de 10 à 50% en poids par rapport au poids total de la composition. 17. Composition détergente selon l'une quelconque des revendications 11 à 16, caractérisée en ce qu'elle comprend également de la glycérine. 15 18. Composition détergente selon l'une quelconque des revendications 11 à 17, caractérisée en ce qu'elle comprend également un ou plusieurs tensioactifs non ioniques.