Brevet FR3039405A1 — publié le 20170203

Le secteur technique de la présente invention est celui des compositions destinées à traiter la peau des patients en modifiant les phénomènes d'interaction de nature glycobiologique. On sait que les interactions de nature glycobiologique fonctionnent par l'intermédiaire de protéines d'adhésion, les lectines, qui reconnaissent des ligands osidiques. Les lectines peuvent être libres (extra ou intracellulaire) ou transmembranaires. Les lectines 10 reconnaissent de manière spécifique des ligands mono- et oligosaccharides. Les lectines spécifiques pour des monosaccharides sont classifiées en cinq groupes, selon l'ose pour lequel elles présentent la plus forte affinité: le mannose (Man), le 15 fucose (Fuc), le galactose (Gal) et N-acétylgalactosamine (GalNAc), le N-acétylglucosamine (G1cNAc), et l'acide sialique (NeuAc, acide N-acétylneuraminique). Les similarités structurales entre monosaccharides sont déterminantes pour la spécificité des lectines. Par exemple, 20 la plupart des lectines qui reconnaissent le Gal se lient aussi au GalNAc. Certaines lectines de mammifères telles que DC-SIGN, MBL et LANGERINE peuvent reconnaître le mannose, ose présent à la surface de microorganismes pathogènes et absent chez les 25 mammifères. Les lectines sont des protéines ubiquitaires présentes dans tous les organismes vivants (eucaryotes ou procaryotes) et non vivants (dans l'enveloppe de certains virus). Il existe une grande variété de lectines qui présentent 30 une très grande diversité structurale. Le nombre de structures cristallographiques de lectines est toujours en croissance, et on connaît aujourd'hui la structure tridimensionnelle d'environ 770 lectines. Les lectines animales sont réparties dans des familles 35 très différentes. Les trois familles les plus étudiées sont les galectines, les lectines de type C et les siglecs : 3039405 2 - les Galectines reconnaissent les structures lactosaminiques. Elles ont par exemple un rôle dans la migration et la ré-épithélialisation. - Les lectines du type C présentent un domaine CRD 5 (Carbohydrate Recognition Domain) bien conservé qui implique un atome de calcium dans l'interaction protéine-sucre (Drickamer 1993). Les lectines de type-C sont soit circulantes, soit attachées aux surfaces cellulaires par la présence d'un segment transmembranaire. On y retrouve MBL, DC /0 SIGN, DECTIN-1 et LANGERINE. Elles ont un rôle par exemple dans l'immunité innée. - Les Siglecs, ou lectines de type I, constituent une famille de lectines qui reconnaissent l'acide sialique (Crocker 2002). Elles sont membres de la superfamille 15 immunoglobuline et adoptent un repliement de type immunoglobuline. Les lectines interviennent chez les individus dans les mécanismes de communication, de mobilité, de différenciation, de reconnaissance immune, de ré-épithélialisation. 20 Par exemple, un faible taux de « Mannose Binding Lectine » (MBL : lectine soluble) a été associé à certaines infections cutanées. MBL peut être également associé aux sérines protéase (MASPs) pour l'activation de la voie du complément et est essentiel pour la réponse immunitaire innée 25 et les premières défenses contre des pathogènes par opsonization. Egalement des lectines membranaires comme DC-SIGN ou DECTIN-1 participent aux réponses immunitaires innées par reconnaissance des ligands glycosylés en provenance de 30 bactéries, de virus, de cellules circulantes, de toxines, d'hormones. La LANGERINE est une lectine membranaire que l'on retrouve par exemple dans la peau sur les cellules de Langerhans. 35 Toute altération dans ces systèmes de reconnaissance par interaction glycobiologique peut induire par exemple une modification de la réponse immune innée et une immunodéficience face aux pathogènes. 3039405 3 Le demandeur a découvert de manière totalement fortuite et avec surprise qu'une eau minérale ou minéralisée pouvait moduler les interactions de nature glycobiologique. Le but de la présente invention est de mettre à la 5 disposition de l'homme de l'art une composition apte à assurer et développer les défenses immunitaires des patients. L'invention a donc pour objet une composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou thérapeutique pour la stimulation et/ou régulation du système humain de reconnaissance 10 immunitaire de la peau et des muqueuses, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de principe actif une eau ou minéralisée comprenant au moins : - entre 40 mg/1 et 600 mg/1 de calcium, et/ou de sels et/ou de dérivés de celui-ci, 15 - entre 12,5 mg/1 et 125 mg/1 de magnésium, et/ou de sels et/ou de dérivés de celui-ci, - entre 4 mg/1 et 42 mg/1 de silicium, et/ou de sels et/ou de dérivés de celui-ci, les autres ingrédients étant constitués par des composés 20 admissibles dans les domaines cosmétique et/ou dermatologique et/ou thérapeutique, et ladite composition assurant une interaction des molécules glycosylées avec des lectines. Selon une caractéristique de l'invention, le calcium et le magnésium et/ou les sels et/ou les dérivés de ceux-ci 25 présents dans l'eau minérale ou minéralisée se trouvent dans un rapport massique Ca/Mg compris entre 1 et 10. Selon une autre caractéristique de l'invention, le calcium et le silicium et/ou les sels et/ou les dérivés de ceux-ci présents dans l'eau minérale ou minéralisée se 30 trouvent dans un rapport massique Ca/Si compris entre 1 et 20 Selon encore une autre caractéristique de l'invention, l'eau minérale ou minéralisée est présente dans une proportion massique de 1 à 15% pour la stimulation du système 35 humain de reconnaissance immunitaire. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, l'eau minérale ou minéralisée est présente dans une proportion massique supérieure ou égale à 30% pour la 3039405 4 régulation inflammatoire du système humain de reconnaissance immunitaire. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, l'eau minérale ou minéralisée se trouve dans une proportion 5 massique de 10%. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, l'eau minérale ou minéralisée se trouve dans une proportion massique de 30%. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, le 10 calcium et le magnésium et le silicium et/ou leurs sels et/ou dérivés sont présents dans l'eau minérale ou minéralisée selon des concentrations respectives de 42,7 mg/l, 21,2 mg/1 et 14 mg/l. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, le 15 calcium et le silicium et/ou ses sels et/ou ses dérivés est présent dans l'eau minérale ou minéralisée selon des concentrations de 140 mg/1 et de 30 mg/l. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, l'eau minérale est constituée par l'Eau Thermale d'Uriage. 20 Selon encore une autre caractéristique de l'invention, la composition selon l'invention se présente sous la forme d'un spray aérosol nasal ou pour le visage et des doses unitaires nasales ou oculaires. Un tout premier avantage de la composition selon 25 l'invention réside dans l'effet surprenant de l'augmentation de l'intensité des interactions de néoglycoprotéines sur les récepteurs osidiques à la surface de kératinocytes (NHEK) et à la surface de bactéries (S.aureus, S.epidermidis, P.acnes). Un autre avantage de la présente invention réside dans 30 l'augmentation de l'interaction de ligands spécifiques pour des lectines humaines recombinantes de type C (DC-SIGN, DECTIN-1, LANGERINE). Un autre avantage encore de la présente invention réside dans l'augmentation progressive de l'intensité d'interaction 35 de ligands spécifiques pour les lectines DECTIN-1 et LANGERINE qui diminue à 15% pour s'annuler à 20%. Un autre avantage encore de la présente invention réside dans le renforcement des défenses de l'organisme. Cette 3039405 5 propriété nouvelle peut être utilisée avantageusement dans des compositions cosmétiques et/ou dermatologiques et/ou thérapeutiques comprenant à titre d'actifs une eau thermale. Un autre avantage de l'invention réside dans la 5 possibilité de faire varier l'action de l'eau minérale ou minéralisée en fonction du pourcentage de celle-ci dans la composition. Ainsi, un pourcentage faible, par exemple inférieur ou égal à 15% en masse, stimule des défenses immunitaires tandis qu'un pourcentage supérieur ou égal à 30% 10 régule ces défenses immunitaires. D'autres caractéristiques, détails et avantages de l'invention seront mieux compris à la lecture du complément de description qui va suivre de modes de réalisation donnés à titre d'illustration. 15 Une composition comprenant à titre de principe actif une eau minérale ou minéralisée riche en oligo-éléments et sels minéraux permet d'agir potentiellement sur l'interaction de molécules glycosylées (ligands) avec des lectines (récepteurs osidiques) impliquées dans les mécanismes d'immunité innée, 20 particulièrement au niveau des kératinocytes et des bactéries. Par eau minérale ou minéralisée riche en oligo-éléments et sels minéraux, on entend une eau comprenant au moins, relativement à de l'eau commune (robinet ou même bouteille), 25 de hautes proportions notamment des éléments suivants : calcium, magnésium, silicium ainsi que les sels et les dérivés de ceux-ci et en oligoéléments. Dans la présente invention, on a effectué les essais avec une eau thermale à titre de principe actif, à savoir l'Eau 30 Thermale d'Uriage (ETU) présentant la composition suivante pour un résidu sec de 11 000 mg/1 : - Calcium : 600 mg/1, - Magnésium : 125 mg/l, - Potassium : 45,5 mg/l, 35 - Sodium : 2360 mg/1, - Sulfates : 2860 mg/l, - Chlorures : 3500 mg/l, - Bicarbonates : 390 mg/l, 3039405 6 - Silicium : 42 mg/l, - Zn : 160 pg/l, - Mn : 154 pg/l, - Cu : 75 pg/l, 5 - Fe : 15 pg/l. L'ETU est reconnue comme l'une des eaux thermales minéralisées les plus équilibrées en oligoéléments et sels minéraux. Elle présente avant une action hydratante efficace lorsqu'elle est appliquée en spray de façon locale. Il va de soi qu'on peut utiliser n'importe quelle autre eau minérale ou de source d'origine naturelle, comme les eaux thermales, ou une eau minéralisée d'origine non naturelle pourvue que cette dernière présente une composition analogue ou qu'on ait ajouté les minéraux et oligoéléments en proportions voisines de celles d'une eau thermale. Il est évident pour l'homme de l'art que des eaux minérales naturelles ou minéralisées non naturelles équivalentes sont possibles si elles sont utilisées dans des proportions adéquates pour les éléments importants soulignés ci-dessus ou les sels et dérivés de ceux-ci ainsi que les oligoéléments. Ainsi, on peut très bien utiliser dans des proportions adéquates l'Eau Thermale d'Avene qui comprend 42,7 mg/1 de calcium, 21,2 mg/1 de magnésium et 14 mg/1 de silicates, ou l'Eau Thermale de La Roche-Posay qui comprend 140 mg/1 de calcium et 30 mg/1 de silicates, ou encore l'Eau Thermale de Saint-Gervais qui comprend 236 mg/1 de calcium, 28,1 mg/1 de magnésium et 44 mg/1 de silicium. Typiquement, le calcium et le magnésium sont naturellement présents dans les eaux thermales selon 30 l'invention selon un rapport massique respectif Ca/Mg compris entre 1 à 10. Typiquement, le calcium et le silicium sont naturellement présents dans les eaux thermales selon l'invention selon un rapport massique respectif Ca/Si compris entre 1 à 20. 35 Les essais suivants ont été effectués avec l'eau thermale d'Uriage (ETU). Pour effectuer les essais, on a utilisé des cellules humaines qui sont des kératinocytes normaux à partir de 3039405 7 cellules fournies en cryotubes. Ces cellules sont cultivées et multipliées en plaques de 96 puits de manière à obtenir un tapis de cellules à confluence ayant 8 à 10 générations à celles des cellules de départ. Les cellules sont lavées 5 plusieurs fois avec une solution tampon classique (PBS) à 4 °C. Puis chaque néoglycoprotéine, diluée en tampon PBS contenant 0,025% de sérum albumine bovine (BSA), est déposée sur les puits de cellules. Les plaques sont incubées pendant 4 heures à +4°C. Après incubation, les puits sont lavés /0 doucement avec du PBS (200 pl, 3 lavages) puis les intensités de fluorescence sont lues après ajout de 100 pl de PBS dans chaque puits. Pour étudier l'inhibition par l'eau thermale, on mélange cette eau avec les néoglycoprotéines de manière à obtenir des 15 concentrations finales en eau de 10, 20 et 30% en masse. Pour évaluer l'action potentielle de l'eau thermale sur l'expression des récepteurs osidiques à la surface des cellules, l'eau thermale est ajoutée directement au milieu de culture de manière à obtenir une concentration finale en eau 20 thermale de 10, 20 et 30% en masse 48 heures avant l'examen. Les résultats obtenus montrent que l'eau thermale entraîne un renforcement des intensités d'interaction des néoglycoprotéines (ligands) avec les récepteurs osidiques des kératinocytes exprimés à la surface des cellules en fonction 25 de la concentration d'eau. On obtient également un renforcement des intensités d'interaction des néoglycoprotéines avec les récepteurs osidiques des bactéries. Ainsi, les bactéries Staphylococcus aureus et 30 Propiobacterium acnes présentent une augmentation de l'interaction uniquement de la néoglycoprotéine mannosylée alors que Staphylococcus epidermidis montre une augmentation d'interaction avec toutes les néoglycoprotéines. L'eau thermale permet donc d'entretenir et de renforcer 35 les interactions de nature glycobiologiques dans la matrice extracellulaire, mais également entre la matrice et les cellules. En effet, les glycosaminoglycanes (GAG) interagissent avec des « GAG binding proteins » au sein de la 3039405 8 matrice elle-même mais également avec les cellules environnantes permettant ainsi le maintien des tissus. L'eau thermale permet ce maintien et le renforce. Il en est de même des autres eaux thermales citées auparavant. 5 On a effectué des essais analogues avec une eau minéralisée et obtient les résultats conformes aux précédents. Pour déterminer l'activité d'interaction procurée par l'eau minérale ou minéralisée, on a effectué les essais 10 suivants. Les études effectuées sont menées avec des lectines recombinantes humaines sélectionnées en fonction de leur action dans l'immunité et/ou l'homéostasie cutanée. DC-SIGN : cette lectine est impliquée dans l'immunité innée ; c'est un marqueur des cellules dendritiques 15 (lesquelles n'expriment pas la tangerine). Dectine-1 : c'est un récepteur de béta-glucanes, composant majeur de la paroi cellulaire des levures et mycobactéries. Dectin-1 est exprimé au niveau des cellules monocytaires et des lymphocytes T et B. Cette lectine est 20 connue pour des fonctions d'interaction vis-à-vis des pathogènes. Langerine, CD207 : c'est un marqueur des cellules de Langerhans qui reconnaît les motifs mannose, N-acétylglucosamine et fucose. 25 Galectine 3 : au niveau de la peau, Gal 3 est exprimée par les cellules dendritiques, les kératinocytes, les mélanocytes, les fibroblastes et les cellules épithéliales. Ficoline 2 : cette lectine est exprimée à la surface cellulaire sous forme soluble. Cette famille de lectines possède une affinité pour les motifs acétylés et présente des propriétés en terme de reconnaissance de micro-organismes et d'activation de la cascade du complément pour conduire à leur destruction. On a comparé le comportement d'interaction directe entre chaque couple respectif de ligand-lectine, en présence ou non de différentes concentrations d'eau thermale. A cette fin, chaque ligand a été déposé à une concentration correspondant à 50% du maximum de fixation sur la lectine respective. 3039405 9 Les résultats obtenus montrent que l'interaction de ligands avec les lectines recombinantes humaines évolue de manière différente selon les lectines en présente d'eau thermale. Dans la majorité des cas, ces interactions sont 5 sensibles à des concentrations de 20 et 30% d'eau thermale. En revanche, la présence d'eau thermale à 10% renforce nettement l'interaction des lectines DC-SIGN, Langerine et Dectine-1. L'eau thermale ou minéralisée présente donc une action 10 générale de contribution et de renforcement des interactions glycobiologiques avec toutefois certaines spécificités en fonction de la lectine considérée.