Brevet FR3039555A1 — publié le 20170203

PP001364FR 1 La présente invention est relative à un procédé de préparation d'une matrice polymère tridimensionnelle poreuse biocompatible et biodégradable, à la matrice polymère poreuse obtenue par un tel procédé, ainsi qu'à ses utilisations, notamment comme support et pour la culture de cellules ou en médecine régénérative, en particulier pour la thérapie cellulaire cardiaque. La thérapie cellulaire est une stratégie thérapeutique prometteuse des syndromes ischémiques cardiaques. En effet, ces derniers sont d'ores et déjà traités chez les patients par greffe autologue de cellules souches mésenchymateuses (CSM) directement injectées dans l'organe lésé, mais le faible taux de survie cellulaire ( REVENDICATIONS1. Procédé de préparation d'une matrice polymère biocompatible et biodégradable comportant un réseau de pores ouverts et interconnectés, ledit procédé comportant au moins les étapes suivantes : 1) la préparation d'une solution aqueuse comprenant au moins un polysaccharide anionique biocompatible et au moins un polymère cationique biocompatible, 2) l'agitation mécanique de ladite solution obtenue ci-dessus à l'étape précédente en présence d'un agent moussant ou d'un gaz sous pression, pour 10 former une mousse, 3) la congélation de la mousse obtenue ci-dessus à l'étape précédente, pour obtenir une mousse congelée, 4) la gélification de la mousse congelée obtenue ci-dessus à l'étape précédente, par ajout à ladite mousse d'au moins un agent gélifiant en solution dans 15 un solvant, pour obtenir une mousse gélifiée, 5) la déshydratation de la mousse gélifiée obtenue ci-dessus à l'étape précédente, pour obtenir une mousse gélifiée déshydratée, puis 6) le séchage de la mousse gélifiée déshydratée obtenue ci-dessus à l'étape précédente, par traitement au CO2 supercritique, pour obtenir ladite matrice 20 polymère. 2. Procédé selon la revendicationl, caractérisé en ce que le ou les polysaccharides anioniques biocompatibles ont une masse moléculaire moyenne (MwA) supérieure ou égale à 75 000 Daltons. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le ou les 25 polysaccharides anioniques biocompatibles sont choisis parmi les alginates et les alginates modifiés. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la quantité de polysaccharides anioniques présents au sein de la solution aqueuse de l'étape 1) varie de 0,5 à 8 % en masse par rapport à la masse 30 totale de ladite solution aqueuse. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le ou les polymères cationiques biocompatibles ont une masse moléculaire moyenne (Mwc) supérieure ou égale à 100 000 Daltons. 3039555 PP001364FR 23 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que les polymères cationiques sont choisis parmi le chitosan et les dérivés du chitosan. 7 Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la quantité de polymères cationiques présents au sein de la 5 solution aqueuse de l'étape 1) varie de 0,5 à 15 % en masse par rapport à la masse totale de ladite solution aqueuse. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le rapport en masse polysaccharides anioniques (MpA) polymères cationiques (Mpc) présents dans la solution aqueuse de l'étape 1) varie 10 de 20/80 à 80/20. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la solution aqueuse préparée lors de l'étape 1) comprend en outre au moins un tensioactif hydrophile. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, 15 caractérisé en ce que le ou les tensioactifs hydrophiles représentent de 0,01 à 5 % en masse par rapport à la masse totale de la solution aqueuse de l'étape 1). 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la mousse est formée en présence d'un agent moussant qui est alors ajouté à la solution préparée à l'étape 1) juste avant la réalisation de l'étape 20 2). 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que lors de l'étape 2), la mousse est formée par introduction d'un gaz sous pression dans la solution aqueuse préparée à l'étape 1). 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, 25 caractérisé en ce que l'étape 3) de congélation est suivie d'une étape 3bis) de lyophilisation de la mousse obtenue à l'issue de l'étape 3). 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'agent gélifiant utilisé lors de l'étape 4) de gélification de la mousse congelée est une solution d'au moins un sel d'un cation divalent ou 30 trivalent dans un solvant. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape 6) de séchage au CO2 supercritique de la mousse 3039555 PP001364FR 24 déshydratée obtenue à l'issue de l'étape 5) est réalisé à une température allant de 35 à 50°C, et à une pression allant de 45 à 95 bars. 16. Matrice polymère biocompatible et biodégradable susceptible d'être obtenue par la mise en oeuvre du procédé tel que défini à l'une quelconque des 5 revendications précédentes, ladite matrice étant caractérisée en qu'elle se présente sous la forme d'un matériau alvéolaire constitué d'une matrice polymère poreuse résultant de la gélification d'une mousse d'au moins un polysaccharide anionique biocompatible et d'au moins un polymère cationique biocompatible, et en ce que ladite matrice : - comprend des pores ouverts et interconnectés ayant une dimension moyenne dA allant de 0,2 !am à 400 !am ; - présente un volume poreux allant de 60 à 98 % du volume total de la matrice ; - présente un module d'élasticité à 50 % de déformation (E50%) variant de 1 à 15 100 kPa. 17. Utilisation d'une matrice polymère biocompatible et biodégradable telle qu'obtenue selon le procédé défini à l'une quelconque des revendications 1 à 15 ou telle que définie à la revendication 16, comme support de cellules animales ou humaines et/ou pour la culture de cellules animales ou humaines in vitro. 20 18. Utilisation selon la revendication 17, caractérisée en ce que lesdites cellules sont des cellules indifférenciées de mammifères. 19. Support de cellules comprenant une matrice polymère poreuse renfermant des cellules animales, ledit support étant caractérisé en ce que la matrice polymère poreuse est une matrice telle qu'obtenue selon le procédé tel que défini à 25 l'une quelconque des revendications 1 à 15 ou telle que définie à la revendication 16, et en ce que lesdites cellules sont majoritairement présentes dans les pores de ladite matrice. 20. Support de cellules selon la revendication 19, pour une utilisation en médecine régénérative. 30 21. Support de cellules selon la revendication 19, pour une utilisation en thérapie cellulaire, en particulier en thérapie cellulaire cardiaque.