Brevet FR3041962A1 — publié le 20170407

Procédé d'enrichissement d'une préparation d'immunoglobulines en immunoglobulines anti-RSV et préparation ainsi enrichie La présente invention concerne l'enrichissement d'une préparation d'immunoglobulines (Ig) issues de plasma humain, en immunoglobulines capables de reconnaître, et avantageusement de neutraliser, le virus respiratoire syncytial (RSV). L'invention fournit également une composition d'Ig ainsi enrichie, utile dans le traitement d'une infection au RSV. Arrière-plan technologique : Le virus respiratoire syncytial (RSV) est un agent infectieux répandu des voies respiratoires. Le RSV provoque généralement une infection bénigne chez les personnes immunocompétentes, mais est la plus importante cause de bronchiolites et de pneumonies chez les nourrissons et les jeunes enfants. Actuellement, il n'existe pas de vaccin efficace disponible pour prévenir l'infection par le RSV. Bien que des médicaments anti-viraux soient proposés pour traiter les infections à RSV, leur efficacité chez les enfants est discutable. RespiGam®, une préparation de pools d'immunoglobulines normales hyperimmunes qui contient un titre élevé en immunoglobulines dirigées contre le RSV, a été utilisée comme une approche immunoprophylactique alternative. Néanmoins, RespiGam® est un concentré d'immunoglobulines hyperimmunes, il est donc préparé à partir de plasma de sujets sélectionnés pour leur haut titre en immunoglobulines anti-RSV, et en utilisant un procédé de fractionnement d'immunoglobulines classique. Ainsi, bien que comprenant plus d'immunoglobulines anti-RSV qu'un concentré classique d'immunoglobulines, RespiGam® ne comprend pas plus de 1% d'immunoglobulines anti-RSV. De plus, la sélection des donneurs limite le volume de production. L'émergence sur le marché d'un anticorps monoclonal hautement spécifique, le palivizumab, a conduit au retrait de la composition d'immunoglobulines hyperimmunes 3041962 2 RespiGam® du marché. Cependant, le coût et la trop grande spécificité des anticorps monoclonaux rendent également cette solution insatisfaisante. Dans ce contexte, Gupta et al, PLOS One, 2013, 8(7) :1-5 ont montré la présence d'immunoglobulines anti-RSV dans des préparations d'immunoglobulines G 5 intraveineuses (IgIV), obtenues à partir de pools de plasma de plusieurs milliers de donneurs de sang en bonne santé. Pour cela, Gupta et al ont retenu les immunoglobulines spécifiques du RSV, par passage sur des matrices d'affinité présentant la protéine G recombinante du RSV. La présence d'immunoglobulines anti-RSV dans ces préparations d'IgIV s'explique par la forte prévalence du virus à travers le monde. Néanmoins, Sastre 10 et al ont montré que de telles préparations d'IgIV possédaient un faible pouvoir neutralisant vis-à-vis du RSV. Résumé de l'invention: Les inventeurs proposent maintenant de soumettre des préparations d'immunoglobulines (Ig) issues de plasma humain ou de fractions de plasma sanguin à une chromatographie 15 d'affinité utilisant une protéine du RSV comme ligand d'affinité, pour obtenir des préparation d'immunoglobulines hyper-enrichies en immunoglobulines capables de reconnaître, et avantageusement de neutraliser, le virus respiratoire syncytial (RSV). De préférence la protéine F du virus RSV, avantageusement stabilisée en conformation pré-fusion ou post-fusion, est utilisée comme ligand de chromatographie d'affinité. 20 Les conformations particulières de la protéine F du RSV, et notamment la conformation pré-fusion, permettent avantageusement de retenir plus particulièrement les immunoglobulines anti-RSV au pouvoir neutralisant. Un objet de l'invention est plus précisément un procédé de préparation d'un concentré d'immunoglobulines (Ig) utile pour traiter une infection au RSV comprenant une étape 25 consistant à soumettre une composition d'Ig issue de plasma sanguin, à une chromatographie d'affinité mettant en oeuvre un ligand spécifique du RSV. 3041962 3 Ce ligand spécifique du RSV peut être une protéine du RSV, en particulier les protéines G, SH et F du RSV, ou un variant de ces protéines ou un fragment antigénique de ces protéines ou de leurs variants. Dans un mode de réalisation particulier le ligand spécifique du RSV est une protéine F du 5 RSV, préférentiellement en conformation pré-fusion, ou un variant, ou encore un fragment antigénique de celle-ci ou d'un de ses variants. Dans un mode de réalisation particulier, le ligand spécifique du RSV, par exemple la protéine F du virus RSV, de préférence en conformation pré-fusion, ou un fragment antigénique de celui-ci, est fixé à la matrice d'affinité par une liaison covalente, soit 10 directement, soit via un espaceur. Avantageusement la protéine du RSV peut être une protéine variante, par exemple il peut s'agir d'une protéine F du RSV qui porte les mutations S155C, S290C, S 190F et/ou V207L. Un autre objet de l'invention est un concentré d'Ig enrichi en Ig anti-RSV, obtenu par le procédé ci-dessus, particulièrement utile dans le traitement d'une infection par le virus 15 RSV. Brève description des figures La Figure 1 extraite de McLellan et al, présente un modèle de protéine F en conformation préfusion ; La Figure 2 également extraite de McLellan et al, illustre le passage de la conformation 20 préfusion (à gauche sur la figure) à la conformation postfusion (à droite sur la figure) du site antigénique 0 ; La Figure 3 représente une courbe du pourcentage d'infection en fonction du log de la concentration en anticorps ; La Figure 4 représente une courbe du pourcentage d'infection en fonction du log de la concentration 25 en anticorps ; La Figure 5 représente l'impact du ligand protéine F sur la séroneutralisation des IVIG 3041962 4 Description détaillée de l'invention Le RSV : Le virus respiratoire syncytial (RSV) est un agent infectieux répandu des voies respiratoires. Le RSV provoque généralement une infection bénigne, asymptomatique ou 5 avec des symptômes faibles (rhume) chez les personnes immunocompétentes, mais qui peut être responsable de plusieurs épisodes infectieux par an sur un même individu, pouvant être à l'origine d'absentéisme scolaire ou au travail. De plus, ce virus est un facteur important d'infections dans les hôpitaux chez les patients immunodéprimés, en attente ou en sortie de greffe, chez les nourrissons ou jeunes enfants 10 ou chez les personnes âgées. Le RSV est la plus importante cause de bronchiolites et de pneumonies chez les nourrissons et les jeunes enfants, et est largement responsable d'infections respiratoires dans les établissements pour personnes âgées. Par « RSV » ou « virus respiratoire syncytial » au sens de la présente invention, on entend aussi bien la particule virale libre présente dans les fluides biologiques du patient, que la 15 particule virale ayant fusionné avec une cellule hôte du patient et donnant lieu à la formation de syncitia. Les protéines du RSV : Le virus respiratoire syncytial est un virus à ARN comprenant 10 gènes codant 11 protéines parmi lesquelles : 20- la protéine M, protéine de la matrice nécessaire à l'assemblage de la particule virale ; la protéine M2, 2ème protéine de la matrice, également requise pour la transcription. M2 contient des épitopes CD8 ; la protéine P ; la protéine N de la nucléocapside qui va s'associer au génôme viral ; 25- la protéine L d'ARN polymérase ; les protéines de l'enveloppe : la protéine SH, la protéine G (glycoprotéine transmembranaire hautement glycosylée responsable de la liaison à la cellule hôte), la 3041962 5 protéine F (glycoprotéine transmembranaire responsable de la fusion à la membrane hôte, de l'entrée du virus dans la cellule et de la formation des syncitia). Par « protéine du RSV » au sens de la présente invention, on entend aussi bien l'une des 11 protéines encodées par le génome du virus dans sa forme native, que l'un de leurs variants 5 ou leurs fragments antigéniques. Parmi ces protéines, certaines sont avantageusement présentes à la surface du RSV, jouant un rôle dans les mécanismes d'infection, notamment au cours de la reconnaissance, de la liaison de la particule virale à sa cellule-hôte, de la fusion de la particule virale à sa cellule-hôte et de la propagation du virus de cellules hôte à cellule hôte. Ces protéines, présentant 10 l'avantage d'être accessibles au système immunitaire, sont en particulier : la protéine SH, la protéine G la protéine F L'accessibilité de ces protéines de surface peut être constitutionnelle ou induite. En 15 particulier, l'accessibilité de la protéine peut être modifiée par un changement de conformation, dévoilant tout ou une partie d'épitopes qui étaient jusque-là inaccessibles au système immunitaire. Par « protéines de surface du RSV » au sens de la présente invention, on entend une ou une combinaison des protéines accessibles au système immunitaire, dans leur forme native 20 quelle que soit leur conformation, l'un de leurs variants, ou de leurs fragments antigéniques. Les protéines de surface du RSV sont présentes sur la membrane du RSV, aussi bien sur la particule virale libre présente dans les fluides biologiques du patient, que sur la particule virale ayant fusionné avec une cellule hôte du patient et donnant lieu à la formation de syncitia. 25 Le terme « variant » comprend toute séquence soumise à une ou plusieurs substitutions, additions et/ou délétions, sans altération substantielle de la conformation de la protéine et/ou de la stabilité de la protéine. Les variants considérés présentent une identité de 3041962 6 séquence d'au moins 80%, de préférence d'au moins 85%, de préférence encore d'au moins 90%, de préférence encore d'au moins 95%. De manière avantageuse, les fragments antigéniques permettent la fixation d'immunoglobulines anti-RSV neutralisantes. De préférence, il s'agit de fragments d' au 5 moins 10 acides aminés, de préférence encore au moins 20, 30, 40, ou 50 acides aminés, qui comprennent un ou plusieurs épitopes d'une protéine du RSV. Les fragments antigéniques des protéines du RSV utilisés sont avantageusement des peptides proposant des épitopes linéaires, non contraints par la structure tridimensionnelle, qui peuvent être exposés lors de changements de la conformation de la protéine. Les fragments antigéniques 10 des protéines du RSV utilisés sont avantageusement également des peptides proposant des épitopes conformés, qui peuvent être exposés lors de changements de la conformation de la protéine. La protéine F du RSV : La protéine F du RSV est une glycoprotéine de surface qui médie le phénomène de fusion 15 du virion avec la membrane de la cellule qu'il infecte, permettant l'entrée du virus dans le cytoplasme de la cellule. La protéine F présente une diversité conformationnelle. La fusion procède de la différence d'énergie de repliement entre deux états : un état métastable adopté avant l'interaction virus-cellule (c'est l'état de « préfusion »), et un état stable formé après la fusion (c'est l'état de « postfusion »). De manière avantageuse, la protéine F du RSV 20 utilisée selon l'invention dévoile des épitopes permettant la fixation d'immunoglobulines neutralisantes anti-RSV. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la protéine F du RSV utilisée est en conformation pré-fusion. Cette conformation a été modélisée dans l'article McLellan et al, Science, 2013, 340 :1113-1117. Le site antigénique de la protéine F du RSV, reconnu 25 préférentiellement par des anticorps neutralisants, y est désigné « site antigénique 0 » (voir les figures 1 et 2). La séquence native de la protéine F du RSV (SEQ ID NO :1) est répertoriée sur la base Genbank, sous le numéro d'accès AHB33455. 3041962 7 SEQ ID NO :1 : mellihrssa ifltlainal yltssqnite efyqstcsav srgylsalrt gwytsvitielsniketkcn gtdtkvklik qeldkyknav telqllmqnt paannrarre apqymnytinttkninvsis kkrkrrflgf llgvgsaias giavskvlhl egevnkikna llstnkavvslsngvsvlts kvldlknyin nqllpivnqq scrisnietv iefqqknsrl 5 leitrefsvnagvttplsty mltnsellsl indmpitndq kklmssnvqi vrqqsysims iikeevlayvvqlpiygvid tpcwklhtsp lcttnikegs nicltrtdrg wycdnagsvs ffpqadtckvqsnrvfcdtm nsltlpsevs lcntdifnsk ydckimtskt disssvitsl gaivscygktkctasnknrg iiktfsngcd yvsnkgvdtv svgntlyyvn klegknlyvk gepiinyydplvfpsdefda sisqvnekin qslafirrsd ellhnvntgk sttnimitai iiviivvllsliaiglllyc kakttpvtls kdqlsginni afsk 10 Dans le contexte de la présente invention, le terme « protéine F du virus RSV » se réfère à la forme native de séquence SEQ ID NO :1, ou à un de ses variants. Le terme « variant » comprend toute séquence soumise à une ou plusieurs substitutions, additions et/ou délétions, sans altération substantielle de la conformation de la protéine et/ou de la stabilité de la protéine. Les variants considérés présentent une identité de 15 séquence d'au moins 80%, de préférence d'au moins 85%, de préférence encore d'au moins 90%, de préférence encore d'au moins 95% avec la séquence native. Des variants de la protéine F sont par exemple décrits sur la base Genbank, sous les numéros d'accès AAB59858 (SEQ ID NO :2) et P11209 (SEQ ID NO :3). SEQ ID NO :2 (AAB59858) : 20 mellilkana ittiltavtf cfasgqnite efyqstcsav skgylsalrt gwytsvitielsnikenkcn gtdakvklik qeldkyknav telqllmqst pptnnrarre lprfmnytlnnakktnvtls kkrkrrflgf llgvgsaias gvavskvlhl egevnkikna llstnkavvslsngvsvlts kvldlknyid kqllpivnkq scsisnietv iefqqknnrl leitrefsvnagvttpvsty mltnsellsl indmpitndq kklmsnnvqi vrqqsysims iikeevlayvvqlplygvid tpcwklhtsp lcttntkegs nicltrtdrg wycdnagsvs ffpqaetckvqsnrvfcdtm nsltlpsein lcnvdifnpk 25 ydckimtskt dvs ssvitsl gaivscygktkctasnknrg iiktfsngcd yvsnkgmdtv svgntlyyvn kqegkslyvk gepiinfydplvfpsdefda sisqvnekin qslafirksd ellhnvnagk sttnimitti iiviivillsliavglllyc karstpvtls kdqlsginni afsn 3041962 8 SEQ ID NO :3 (P11209) : melpilktna itailaavtl cfassqnite efyqstcsav skgylsalrt gwytsvitielsnikenkcn gtdakvklik qeldkyksav telqllmqst patnnrarre lprfmnytlnntkntnvtls kkrkrrflgf llgvgsaias giavskvlhl egevnkiks a lls tnkavv slsngv s vlts kvldlknyid kqllpivnkq scsisnietv iefqqknnrl 5 leitrefsvnagvttpvsty mltnsellsl indmpitndq kklmsnnvqi vrqqsysims iikeevlayvvqlplygvid tpcwklhtsp lcttntkegs nicltrtdrg wycdnagsvs ffplaetckvqsnrvfcdtm nsltlpsevn lcnidifnpk ydckimtskt dvsssvitsl gaivscygktkctasnkdrg iiktfsngcd yvsnkgvdtv svgntlyyvn kqegkslyvk gepiinfydplvfpsdefda sisqvnekin qslafirksd ellhnvnagk sttnimitti iiviivillsliavglllyc karstpvtls kdqlsginni afsn 10 En particulier, sont compris les variants désignés « DS » (portant la double mutation S155C, S290C), « Cav 1 » (portant la double mutation S190F, V207L), ou encore « DSCavl » (portant les quatre mutations S155C, S290C, S190F, V207L), tels que décrits dans l'article McLelland et al, 2013, SCIENCE, 342: 592-598. Dans un mode de réalisation préféré, on utilise le variant désigné « DS-Cavl » portant les 15 mutations S155C, S290C, S190F, V207L. Est également compris le variant désigné « FcN2c_c » (portant 4 mutations L481C, D489C, 5509C, D510C) tel que décrit dans l'article Magro et al, 2012, PNAS, vol109, n°8 : 30893094. La protéine F du RSV, sans sa conformation pré-fusion, peut être préparée par toutes les 20 techniques classiques de purification, par synthèse peptidique et notamment par synthèse chimique, par génie génétique, ou autre. De préférence, on utilise une protéine F recombinante, qui peut être obtenue par un procédé classique de production de protéines recombinantes, comprenant le transfert d'un vecteur d'expression dans une cellule hôte, dans des conditions permettant l'expression de la 25 protéine recombinante codée par le vecteur, et la récupération de la protéine ainsi produite. Le vecteur d'expression peut être préparé selon les méthodes couramment utilisées par l'homme du métier, et peut être introduit dans la cellule hôte, par des méthodes standard, telles que la lipofection, l'électroporation, le choc thermique ou autre. La cellule hôte peut 3041962 9 notamment être une bactérie, une levure, une mousse, un champignon, une cellule végétale ou une cellule de mammifère. Les fragments antigéniques de la protéine F du RSV peuvent être alternativement utilisés comme ligands de la chromatographie d'affinité. De manière avantageuse, les fragments 5 antigéniques permettent la fixation d'immunoglobulines anti-RSV neutralisantes. De préférence il s'agit de fragments d'au moins 10 acides aminés, de préférence encore au moins 20, 30, 40, ou 50 acides aminés, qui comprennent un ou plusieurs épitopes de la protéine F du RSV. Les fragments antigéniques de la protéine F du RSV utilisés sont avantageusement des 10 peptides proposant des épitopes linéaires, non contraints par la structure tridimensionnelle, qui sont normalement exposés sur la protéine F en conformation préfusion mais qui sont non exposés aux solvants en conformation postfusion. Les fragments antigéniques de la protéine F du RSV utilisés sont avantageusement également des peptides proposant des épitopes conformés, qui sont normalement exposés 15 sur la protéine F en conformation préfusion, mais qui sont non exposés aux solvants en conformation postfusion. En particulier sont compris les fragments désignés «F24-136 » (fragment F dérivé de la chaine F2), « F164-315 » (fragment 2/3 N-terminal de la chaine F1),« F283-402 » (segment central de la chaine F1) et «F403-524 » tels que décrits dans l'article Sastre et 20 al, Vaccine 23 (2004) 435-443. Sont également compris les fragments correspondants aux peptides désignés « F167-201 » (fragment heptad repeat A), « F235-275 » (fragment site antigénique II) et « F478-512 » (fragment heptad repeat B) tels que décrits dans l'article Sastre et al, Vaccine 23 (2004) 435-443. Dans un mode de réalisation préféré, on utilise les fragments désignés « F24-136 », « F164- 25 315 », « F283-402 », « F403-524 », « F167-201 », « F235-275 », et/ou « F478-512 ». Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, on utilise les fragments correspondants aux régions heptad repeat A et/ou heptad repeat B de la protéine F, seuls ou en combinaison. 3041962 10 Dans un autre mode de réalisation de l'invention, les fragments antigéniques de la protéine F du RSV utilisés sont une combinaison de plusieurs peptides proposant des épitopes linéaires, non contraints par la structure tridimensionnelle, qui sont normalement exposés sur le protéine F en conformation préfusion mais qui sont non exposés aux solvants en 5 conformation po stfu sion. Le support de chromatographie: Le procédé de l'invention met en oeuvre une chromatographie d'affinité. Cette chromatographie utilise une matrice comprenant un support à base de particules de polymère, et est de préférence sous forme d'un gel ou d'une résine. Ces particules de 10 polymère sont de préférence de forme sphérique ou oblongue, il peut s'agir notamment de billes. Le polymère peut être naturel ou non-naturel, organique ou inorganique, réticulé ou non réticulé. Le polymère est de préférence un polymère organique, de préférence réticulé. Dans un mode de réalisation préféré, le polymère est de la cellulose, et les particules sont de préférence des billes de cellulose poreuses. D'autres types de polymères possibles 15 incluent agarose, dextran, polyacrylates, polystyrène, polyacrylamide, polyméthacrylamide, des copolymères de styrène et divinylbenzène, ou des mélanges de ces polymères. Les particules peuvent fournir un milieu de chromatographie que l'on peut utiliser pour remplir une colonne par exemple. 20 Sur le support est greffé une protéine du RSV, ou un fragment antigénique de celle-ci, soit directement, soit via un espaceur, qui lie de manière covalente le ligand aux particules du support chromatographique. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la protéine greffée sur le support est une protéine de surface du RSV, par exemple la protéine F du RSV, ou un fragment 25 antigénique de celle-ci, soit directement, soit via un espaceur, qui lie de manière covalente le ligand aux particules du support chromatographique. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le support greffé présente plusieurs ligands différents. Le support peut alors être greffé avec plusieurs protéines différentes 3041962 11 et/ou plusieurs fragments antigéniques différents du RSV, avantageusement plusieurs protéines de surface du RSV ou leurs fragments, afin d'obtenir un concentré d'immunoglobulines anti-RSV présentant différentes cibles antigéniques. Le support peut également être greffé avec une ou plusieurs protéines du RSV et une ou 5 plusieurs protéines issues d'un ou plusieurs autres agents infectieux afin d'obtenir un concentré comprenant à la fois des immunoglobulines anti-RSV (éventuellement présentant différentes cibles antigéniques) et des immunoglobulines dirigées contre un autre agent infectieux. Avantageusement dans ce mode de réalisation, chaque protéine correspond à au moins 30% 10 en poids, ou au moins 50% en poids des antigènes greffés sur le support. Une particule peut porter plusieurs espaceurs. La liaison entre le ligand et l'espaceur peut être, par exemple, une liaison amide. L'espaceur comprend typiquement au moins un atome de C, O, N, ou S. Les ligands sont immobilisés chimiquement par des liaisons covalentes entre les particules 15 et l'espaceur, et entre l'espaceur et le ligand. Cette immobilisation peut être réalisée de manière classique par l'homme du métier. Dans un mode de réalisation préféré, la particule porte un bras -NH-R I -COOH. De préférence il s'agit d'acide -aminocaproïque (où RI est un groupe pentyle). De manière classique, la particule peut être activée en utilisant des réactifs bifonctionnels 20 tels que l'épichlorhydrine, l'épibromhydrine, dibromo-et dichloropropanol, dibromobutane, l'éthylène glycol diglycidyléther, le butanediol diglycidylether, divinylsulfone, allylglycidyléther, et le bromure d'allyle. Le réactif bifonctionnel est capable de réagir à la fois avec les particules et le bras -NH-RI-COOH. Les composés hétérofonctionnels allyle, tels que le bromure d'allyle, sont des réactifs bifonctionnels préférés et permettent d'obtenir 25 une matrice activée. Pour certains supports solides, tels que la cellulose, les composites contenant un hydrogel ou d'autres matériaux présentant des groupes hydroxyles, il est 3041962 12 avantageux de déprotoner les groupes hydroxyles avec une source d'hydroxyde, par exemple, avant la réaction avec un réactif bifonctionnel. La matrice sous forme de gel est préparée par addition classique d'un tampon sur les particules de polymère portant les ligands, comme cela est connu de l'homme du métier, 5 de manière à obtenir une matrice sous forme de gel, adaptée pour une chromatographie d'affinité. La matrice telle que définie ici est utile dans une chromatographie d' affinité liant des immunoglobulines anti-RSV. La matrice est particulièrement utile dans une chromatographie d'affinité à lit mélangé. Une telle matrice comprend avantageusement 10 plusieurs antigènes différents provenant du RSV et est donc capable de lier des immunoglobulines anti-RSV dirigées contre plusieurs épitopes différents. Une telle matrice peut également avantageusement comprendre plusieurs antigène différents issus de différents agents infectieux, et est donc capable de lier à la fois des immunoglobulines antiRSV et des immunoglobulines dirigées contre un autre agent infectieux choisi. 15 Pour cela, la matrice peut être introduite dans une colonne de chromatographie. A l'échelle industrielle, la colonne peut contenir de 1 à 150 litres, voire 250 à 500 L, si nécessaire. Dans le cas d'une mise en oeuvre à l'échelle pilote, on peut utiliser des colonnes de 1 à 50 cm de hauteur, le diamètre est alors adapté à la hauteur de colonne utilisée. Le volume de matrice peut également être ajusté pour répondre aux contraintes d'un procédé industriel, 20 notamment être adapté aux volumes de produit à traiter. Les immunoglobulines anti-RSV présents dans le plasma ou la fraction plasmatique se fixent à la matrice, et le produit adsorbé est élué et récupéré, enrichi en immunoglobulines anti-RSV. Dans un mode de réalisation de l'invention, la protéine F du RSV reste et/ou revient dans 25 sa conformation préfusion lors de toutes les étapes de préparation et d'utilisation de la matrice : greffage, lavage, équilibrage, chargement, lavage, élution, régénération, sanitisation. 3041962 13 Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la protéine F du RSV est greffée sur la matrice dans sa conformation préfusion. La méthode de greffage et le choix éventuel de l'espaceur sont donc adaptés par l'homme du métier afin de maintenir la protéine F du RSV dans la conformation préfusion. 5 De manière avantageuse, les conditions de mise en oeuvre de la chromatographie d'affinité selon l'invention sont adaptées par l'homme du métier pour garantir la réutilisation de la matrice selon l'invention tout en maintenant des conditions d'élution non dégradantes pour le produit d'intérêt. Plasma ou fraction plasmatique: 10 Le plasma ou la fraction plasmatique de départ soumis au procédé d'enrichissement de l'invention consistent avantageusement en du plasma provenant de pools de plasmas sanguins de sujets humains normaux ou en une fraction de ce plasma, soit toute partie ou sous-partie du plasma, ayant fait l'objet d'une ou plusieurs étapes de purification. Les fractions plasmatiques utilisables incluent ainsi le surnageant de plasma cryoprécipité, 15 le cryoprécipité de plasma (remis en suspension), les fractions I à V obtenues par fractionnement éthanolique (selon la méthode de Cohn ou de Kistler & Nitschmann), le surnageant et le précipité obtenus après précipitation à l'acide caprylique et/ou caprylate, les éluats de chromatographies et les fractions non adsorbées des colonnes de chromatographie, et les filtrats. 20 De manière particulièrement avantageuse, le plasma ou la fraction plasmatique de départ soumis au procédé d'enrichissement de l'invention proviennent de pools de plasmas sanguins de sujets humains normaux, sans sélection préalable des donneurs, en particulier, sans sélection des donneurs sur la base de leur éventuel taux plasmatique en immunoglobulines anti-RSV. Le plasma ou la fraction plasmatique de départ soumis au 25 procédé d'enrichissement de l'invention comporte ainsi avantageusement un taux d'immunoglobulines anti-RSV similaire ou égal au taux d'immunoglobulines anti-RSV d'un plasma issu du pool d'au moins 1000 donneurs humains normaux aléatoirement choisis. Le plasma ou la fraction plasmatique de départ soumis au procédé d'enrichissement de l'invention est avantageusement non enrichi en immunoglobulines 3041962 14 anti-RSV comparé au taux d'immunoglobulines anti-RSV d'un plasma issu du pool d'au moins 1000 donneurs choisis de manière aléatoire. Le plasma ou la fraction plasmatique de départ soumis au procédé d'enrichissement de l'invention contient des immunoglobulines humaines polyvalentes qui peuvent être des 5 immunoglobulines A (IgA), des immunoglobulines E (IgE), des immunoglobulines M (IgM) ou des immunoglobulines G (IgG). Avantageusement, le plasma ou la fraction plasmatique de départ contient essentiellement des IgG quelle que soit leur sous-classe (IgGl, IgG2, IgG3 et IgG4) et/ou des IgM. Procédé de purification d'immunoglobulines hyper-enrichies en immunoglobulines anti10 RSV: Le procédé de l'invention utilise préférentiellement comme échantillon de départ un plasma ou une fraction plasmatique provenant de pools de plasmas sanguins de sujets humains normaux, sans sélection préalable des donneurs, en particulier, sans sélection des donneurs sur la base de leur éventuel taux plasmatique en immunoglobulines anti-RSV. 15 Le procédé de l'invention peut typiquement être un procédé indépendant, dédié à la purification d'immunoglobulines anti-RSV uniquement, et est alors avantageusement effectué à partir de plasma ou d'une fraction plasmatique. Dans ce mode de réalisation, le procédé selon l'invention comprend avantageusement les étapes suivantes : 20- fourniture d'un échantillon de plasma ou d'une fraction plasmatique, passage de l'échantillon de plasma ou d'une fraction plasmatique sur une chromatographie d'immunoaffinité sur la matrice de l'invention, récupération de la fraction adsorbée sur la matrice de l'invention correspondant à la composition d'immunoglobulines hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV 25 De manière avantageuse, le procédé selon l'invention peut comprendre en outre, après l'étape de capture sur chromatographie d'affinité anti-RSV, une étape dédiée de déplétion de certaines immunoglobulines, en particulier les immunoglobulines E (IgE) et/ou 3041962 15 immunoglobulines (IgM), qui peuvent être impliquées dans des mécanismes d'effets secondaires délétères chez les patients. Le procédé comprend avantageusement en outre une étape ultérieure consistant à soumettre la composition d'immunoglobulines hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV à au 5 moins une étape d'inactivation et/ou d'élimination virale. Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le procédé d'obtention des immunoglobulines anti-RSV est réalisé à partir d'une fraction plasmatique inutilisée provenant d'un procédé de purification d'une protéine plasmatique annexe. Dans ce mode de réalisation, le procédé selon l'invention comprend avantageusement les 10 étapes suivantes : fourniture d'un échantillon de plasma ou d'une fraction plasmatique non utilisée dans un procédé de purification d'une protéine plasmatique, passage de l'échantillon de plasma ou d'une fraction plasmatique sur une chromatographie d'immunoaffinité sur la matrice de l'invention, 15- récupération de la fraction adsorbée sur la matrice de l'invention correspondant à la composition d'immunoglobulines hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV De manière avantageuse, le procédé selon l'invention peut comprendre en outre, après l'étape de capture sur chromatographie d'affinité anti-RSV, une étape dédiée de déplétion de certaines immunoglobulines, en particulier les immunoglobulines E (IgE) et/ou 20 immunoglobulines (IgM), qui peuvent être impliquées dans des mécanismes d'effets secondaires délétères chez les patients. Le procédé comprend avantageusement en outre une étape ultérieure consistant à soumettre la composition d'immunoglobulines hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV à au moins une étape d'inactivation et/ou d'élimination virale. 25 Dans encore un autre mode de réalisation particulier de l'invention, le procédé d'obtention des immunoglobulines anti-RSV est couplé à un procédé d'immunoglobulines G polyvalentes afin d'obtenir, à partir d'un même pool de plasma de départ, à la fois un 3041962 16 concentré d'immunoglobulines G polyvalentes et un concentré d'immunoglobulines hyper-enrichies en anti-RSV. Le procédé de l'invention comprend alors typiquement une étape préalable d'obtention de la fraction plasmatique, par fractionnement éthanolique et/ou fractionnement caprylique 5 et/ou séparation chromatographique. Dans ce mode de réalisation, le procédé selon l'invention comprend avantageusement les étapes suivantes : fourniture d'un échantillon d'une fraction plasmatique prépurifiée obtenue par fractionnement éthanolique et/ou fractionnement caprylique et/ou séparation 10 chromatographique passage de la fraction plasmatique prépurifiée sur une chromatographie d'immunoaffinité sur la matrice de l'invention, récupération de la fraction adsorbée sur la matrice de l'invention correspondant à la composition d'immunoglobulines hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV 15 Par « séparation chromatographique » selon l'invention, on entend toute étape de chromatographie, qu'il s'agisse de chromatographie échangeuse d'ions (échangeuse d'anions et/ou échangeuse de cations), mixed mode, affinité (utilisant des ligands de type chimiques, anticorps, fragments d'anticorps, aptamères). Par séparation chromatographique selon l'invention, on entend aussi bien une seule et 20 unique colonne de chromatographie, ou un ensemble de colonnes de chromatographie, utilisant ou non le même type de support, en série (mode multicolonnes par exemple) ou en parallèle. Plus précisément, la fraction plasmatique peut être obtenue par un fractionnement éthanolique développé à l'origine par Cohn et al (Cohn et al, 1946. J. Am. Chem. Soc. 68, 25 459 ; Oncley et al, 1949, J. Am. Chem. Soc. 71, 541), ou bien par une séparation chromatographique, telle que décrite par exemple dans EP 0 703 922 et WO 99/64462, ou encore par un fractionnement caprylique tel que décrit par Steinbuch et al 1969, Arch Biochem Biophys. 134(2):279-84). On préfère tout particulièrement les procédés mis au 3041962 17 point par la Demanderesse dans les demandes de brevet WO 94/29334 et WO 02/092632, et tout particulièrement celui décrit dans WO 02/092632. Dans ce cas, on soumet un plasma sanguin, ou une fraction de plasma sanguin enrichie en Ig, à un fractionnement caprylique (prépurification par précipitation de contaminants non immunoglobulines), et une 5 chromatographie unique sur un support de résine échangeuse d'anions effectuée à pH alcalin. Un traitement d'inactivation virale peut être réalisé, de préférence effectué par solvant-détergent, comme décrit par Horowitz dans le brevet US 4 764 369, éventuellement complété par une étape d'élimination virale par nanofiltration sur filtre de taille de pores 75N, 35N, 20N et/ou 15N. 10 La fraction d'Ig ainsi récoltée est déjà concentrée, mais peut ensuite subir des étapes de concentration supplémentaire par ultrafiltration, et de filtration stérilisante. Ce concentré est ensuite soumis à une étape chromatographique d'immunoaffinité sur la matrice de l'invention. De manière avantageuse, le procédé selon l'invention peut comprendre en outre, de 15 préférence après l'étape de capture sur chromatographie d'affinité anti-RSV, une étape dédiée de déplétion de certaines immunoglobulines, en particulier les immunoglobulines A (IgA), et/ou immunoglobulines E (IgE) et/ou immunoglobulines M (IgM), qui peuvent être impliquées dans des mécanismes d'effets secondaires délétères chez les patients. Les immunoglobulines à dépléter sont avantageusement sélectionnées en particulier selon la 20 voie d'administration choisie pour le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV et/ou selon le contenu de l'échantillon de plasma ou de la fraction plasmatique de départ. Dans un mode de réalisation particulier, le procédé selon l'invention comprend une étape de chromatographie échangeuse d'anions, avantageusement utilisant une chromatographie 25 de type TMAE, afin de dépléter les immunoglobulines M (IgM) de la composition d'immunoglobulines hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RS V. Le procédé comprend avantageusement en outre une étape ultérieure consistant à soumettre la composition d'immunoglobulines hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV à au moins une étape d'inactivation et/ou d'élimination virale. L'étape d'inactivation et/ou 3041962 18 d'élimination virale peut consister en un traitement à pH acide, un traitement par solvant-détergent, une pasteurisation, un chauffage à sec, une nanofiltration et/ou une filtration stérilisante. Avantageusement le procédé comprend une étape d'inactivation par solvant-détergent et une étape d'élimination virale par nanofiltration. 5 Le procédé peut en outre comprendre les étapes ultérieures consistant à additionner un ou plusieurs stabilisants pharmaceutiquement acceptables ; et éventuellement congeler ou lyophiliser le concentré ainsi obtenu. Composition d'immunoglobulines hyper-enrichies : La composition d'immunoglobulines hyper-enrichies obtenue selon le procédé 10 d'enrichissement de l'invention contient essentiellement des immunoglobulines humaines polyvalentes qui peuvent être des immunoglobulines A (IgA), des immunoglobulines E (IgE), des immunoglobulines M (IgM) ou des immunoglobulines G (IgG). Avantageusement, la composition d'immunoglobulines contient essentiellement des IgG et/ou des IgM et/ou des IgA. 15 Dans un mode de réalisation particulier, la composition d'immunoglobulines selon l'invention comprend essentiellement des IgG, quelle que soit leur sous-classe (IgGl, IgG2, IgG3 et IgG4). La composition peut être adaptée par l'homme du métier selon la voie d'administration retenue et/ou le mécanisme d'action recherché. Pour une administration par voie 20 intraveineuse par exemple, la composition contient préférentiellement essentiellement des IgG et/ou des IgM, et est avantageusement déplétée en IgA. En revanche, dans d'autres voies d'administration telle que la voie locale, la composition contient préférentiellement essentiellement des IgG et/ou des IgA, les IgA permettant le recrutement de cellules telles que des cellules mucosales présentant des alfa récepteurs. 25 La composition d'immunoglobulines obtenue selon le procédé d'enrichissement de l'invention est une composition d'immunoglobulines hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV qui présente une action neutralisante vis-à-vis du RSV et présente une efficacité thérapeutique pour le patient. 3041962 19 Par « composition hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV » on entend une composition d'immunoglobulines comprenant au moins 10%, au moins 20%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins75%, au moins 80% ; au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, au moins 96%, 5 au moins 97%, au moins 98%, au moins 99% en poids d'immunoglobulines neutralisantes vis-à-vis du RSV. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV selon l'invention comprend avantageusement 10% à 100% en poids d'immunoglobulines neutralisantes vis-à-vis du RSV, encore plus 10 avantageusement 30% à 100% en poids d'immunoglobulines neutralisantes vis-à-vis du RSV, préférentiellement 60% à 100% en poids d'immunoglobulines neutralisantes vis-à-vis du RSV. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition d'immunoglobulines anti-RSV présente avantageusement un pouvoir neutralisant vis-à-vis du virus RSV 15 supérieur à celui du plasma sanguin de sujets humains normaux, supérieur à celui du plasma de sujets humains sélectionnés pour leur titre en immunoglobulines anti-RSV, supérieur à celui des immunoglobulines hyper-immunes RSV (RSV-IVIG) telles que Respigam® ou RI-002 d'Adma Biologics, et/ou supérieur à celui des anticorps monoclonaux anti-RSV tel que palivizumab (Synagis C)). 20 Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition d'immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 10%, au moins 20%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins75%, au moins 80% ; au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, au moins 99% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un 25 épitope de la protéine F. La composition hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV selon l'invention comprend avantageusement 10% à 100% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un épitope de la protéine F, encore plus avantageusement 30% à 100% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un 3041962 20 épitope de la protéine F, préférentiellement 60% à 100% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un épitope de la protéine F. Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la composition d'immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 10%, au moins 20%, au moins 30%, 5 au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins75%, au moins 80% ; au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, au moins 99% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un épitope de la protéine F en conformation préfusion. La composition hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV selon l'invention 10 comprend avantageusement 10% à 100% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un épitope de la protéine F en conformation préfusion, encore plus avantageusement 30% à 100% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un épitope de la protéine F en conformation préfusion, préférentiellement 60% à 100% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement 15 contre au moins un épitope de la protéine F en conformation préfusion. La composition hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV selon l'invention comporte avantageusement des immunoglobulines hyperneutralisantes dirigées contre une pluralité d' épitopes du RSV. Avantageusement, la composition hyper-enrichie en immunoglobulines anti-RSV selon l'invention comprend des immunoglobulines anti-RSV 20 dirigées contre au moins 2 épitopes, au moins 3 épitopes, au moins 5 épitopes, au moins 10 épitopes différents du RSV. Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la composition enrichie en immunoglobulines anti-RSV comprend un mélange d'immunoglobulines anti-RSV et d'immunoglobulines dirigées contre au moins un autre agent infectieux. Avantageusement 25 la composition enrichie en immunoglobulines anti-RSV comprend alors au moins 30% en poids d'immunoglobulines anti-RSV, et au plus 70% en poids d'immunoglobulines dirigées contre au moins un autre agent infectieux. La composition enrichie en immunoglobulines anti-RSV peut ainsi avantageusement comprendre au moins 30% d'immunoglobulines anti-RSV, et au plus 70% d'immunoglobulines anti-tétanos et anti- hépatite B. Dans un autre mode de réalisation avantageux, la composition enrichie en 3041962 21 immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 50% en poids d'immunoglobulines antiRSV et au plus 50% en poids d'immunoglobulines dirigées contre au moins un autre agent infectieux. Avantageusement, la composition enrichie en immunoglobulines anti-RSV ne comprend 5 pas plus de 10, pas plus de 7, pas plus de 5, pas plus de 3, pas plus de 2 spécificités infectieuses différentes. Produits finaux : Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV à usage thérapeutique peut être administré 10 par toute voie d'administration : oculaire, nasale, intra-auriculaire, orale, sublinguale, pulmonaire, intrapéritonéale, intraveineuse, percutanée, sous-cutanée, intramusculaire, transmuqueuse, vaginale, rectale. Les concentrés d'Ig à usage thérapeutique sont généralement à des concentrations comprises entre 50 et 100 g/1. Ces concentrés sont destinés à un usage clinique et peuvent 15 en particulier être injectés par voie intraveineuse. A cet effet, ils doivent être sécurisés et, le cas échéant, contenir des excipients, tels que des stabilisants, compatibles avec cet usage clinique. Les concentrés d'Ig à usage thérapeutique peuvent également être administrés par voie sous-cutanée. Dans ce cas, la concentration des produits est supérieure ou égale à 100g/1, 20 avantageusement supérieure ou égale à 150 g/nes concentrés d'Ig à usage thérapeutique peuvent aussi être administrés par voie intramusculaire. De manière avantageuse, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 10%, au moins 20%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins75%, 25 au moins 80%, au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, au moins 99% en poids d'immunoglobulines polyvalentes capables de reconnaître et/ou de neutraliser le virus RSV ou l'une de ses parties. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en 3041962 22 immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 30% en poids d'immunoglobulines polyvalentes capables de reconnaître et/ou de neutraliser le virus RSV ou l'une de ses parties. Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 5 60% en poids d'immunoglobulines polyvalentes capables de reconnaître et/ou de neutraliser le virus RSV ou l'une de ses parties. De manière avantageuse, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend avantageusement au moins 10%, au moins 20%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 10 70%, au moins75%, au moins 80% ; au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, au moins 99% en poids d'immunoglobulines neutralisantes vis-à-vis du RSV. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 30% en poids d'immunoglobulines neutralisantes vis-à-vis du RSV. Dans un 15 mode de réalisation particulier de l'invention, le concentré d'immunoglobulines hyper- enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 60% en poids d'immunoglobulines neutralisantes vis-à-vis du RSV. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition d'immunoglobulines anti-RSV présente avantageusement un pouvoir neutralisant vis-à-vis du virus RSV 20 supérieur à celui du plasma sanguin de sujets humains normaux, supérieur à celui du plasma de sujets humains sélectionnés pour leur titre en immunoglobulines anti-RSV, supérieur à celui des immunoglobulines hyper-immunes RSV (RSV-IVIG) telles que Respigam® ou RI-002 d'Adma Biologics, et/ou supérieur à celui des anticorps monoclonaux anti-RSV tel que palivizumab (Synagis®). 25 De manière avantageuse, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 10%, au moins 20%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins75%, au moins 80% ; au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, au moins 99% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement 30 contre au moins un épitope de la protéine F en conformation préfusion. 3041962 23 Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 30% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un épitope de la protéine F en conformation préfusion. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le 5 concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 60% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un épitope de la protéine F en conformation préfusion. Le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV selon l'invention comporte avantageusement des immunoglobulines hyperneutralisantes dirigées 10 contre une pluralité d' épitopes du RSV. Avantageusement, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV selon l'invention comprend des immunoglobulines anti-RSV dirigées contre au moins 2 épitopes, au moins 3 épitopes, au moins 5 épitopes, au moins 10 épitopes différents du RSV. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le concentré d'immunoglobulines 15 hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend un mélange d'immunoglobulines anti-RSV et d'immunoglobulines dirigées contre au moins un autre agent infectieux. Avantageusement le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend alors au moins 30% en poids d'immunoglobulines anti-RSV, et au plus 70% en poids d'immunoglobulines dirigées contre au moins un autre agent infectieux. 20 Le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV peut ainsi avantageusement comprendre au moins 30% d'immunoglobulines anti-RSV, et au plus 70% d'immunoglobulines anti-tétanos et anti-hépatite B. Dans un autre mode de réalisation avantageux, le concentré d'immunoglobulines hyperenrichi en immunoglobulines anti-RSV comprend au moins 50% en poids 25 d'immunoglobulines anti-RSV et au plus 50% en poids d'immunoglobulines dirigées contre au moins un autre agent infectieux. Avantageusement, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV ne comprend pas plus de 10, pas plus de 7, pas plus de 5, pas plus de 3, pas plus de 2 spécificités infectieuses différentes. 3041962 24 Les concentrés d'Ig enrichis en Ig anti-RSV selon l'invention sont utiles pour le traitement d'une infection au RSV. Ils peuvent en particulier être utilisés pour l'immunoprophylaxie chez des patients non infectés mais à risque : enfants, nourrissons, personnes hospitalisées, personnes 5 immunodéprimées, personnes âgées. Ils peuvent également être utilisés en traitement curatif par administration précoce. De manière avantageuse, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV selon l'invention permet alors de ralentir et/ou d'empêcher la diffusion de l'infection des voies respiratoires hautes vers les voies respiratoires basses. 10 Dans un autre mode de réalisation avantageux, le concentré d'Ig enrichi en Ig anti-RSV selon l'invention permet de ralentir et/ou d'empêcher la propagation du RSV de cellules à cellules et/ou de ralentir et/ou d'empêcher la formation de syncitia. Avantageusement, le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV selon l'invention permet la réduction significative de la charge virale, normée 15 par rapport à une référence connue, chez le patient traité. Le concentré d'immunoglobulines hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV selon l'invention permet en outre avantageusement la destruction des cellules infectées via le recrutement de cellules effectrices grâce aux fonctions ADCC des immunoglobulines de la composition. 20 Le patient traité est de préférence un être humain, quels que soient son âge et son sexe. Le traitement thérapeutique des enfants et nourrissons est particulièrement envisagé, ainsi que celui des personnes âgées, hospitalisées ou immunodéprimées. 3041962 25 EXEMPLES EXEMPLE 1 : chromatographie d'affinité utilisant le ligand protéine hRSV-F 11049- VO8B Préparation de la matrice de chromatographie d'affinité anti-RSV 5 On utilise comme ligand d'affinité la protéine RSV-F 11049-VO8B (Sino Biological Inc), protéine synthétique issue d'une séquence ADN du hRSV (RSS-2) de la Met 1 à la Thr 529, contenant 518 acides aminés après clivage du propeptide et dont la ma masse moléculaire prédite est de 58kDa. En analyse SDS-PAGE et conditions de réduction, les masses moléculaires apparentes sont 45-55 kDa et 18 kDa. Le ligand RSV-F 11049-VO8B utilisé pour le greffage est en 10 conformation post-fusion. 2mL de gel NHS-activated sepharoselm 4 Fast Flow sont mis en place dans une colonne de chromatographie de diamètre 1.1cm et les tampons utilisés sont ceux recommandés par le fournisseur du gel. Après lavage (1mM HCL à 4°C) et équilibrage en tampon de couplage, 1,98 mg de protéine F à greffer sont ajoutées au gel et l'ensemble est mis en agitation. Le blocage des groupements réactifs 15 sur le gel est réalisé en ajoutant 6 mL de tampon 0.5M ethanolamine, 0.5M NaC1, pH 8.3 (6mL), et le gel est mis en agitation pendant 12h. Le gel couplé est lavé avec une alternance de 3 volumes de tampons basique puis acide : 0.1M Tris-HC1 pH 8.4 et 0.1M acétate, 0.5M NaC1 pH 4, ce cycle étant répété trois fois. Le gel est ensuite stocké en tampon 10mM citrate, 0.5M NaC1, 0.1g/L azide de sodium pH 6.6 20 Le couplage a été évalué à 98%, correspondant à une densité de ligand de 0,89mg/mL de gel greffé. Tableau 1 : Rendement de couplage Protéine F initiale Protéine F désalée Surnageant de pour couplage couplage Volume initial (mL) 3 mL 4.5 5.0 Concentration de 0.66 0.44 0.039 l'échantillon déposé (mg/mL) Quantité déposée (mg) 1.98 1.98 0.195 Rendement de couplage NA NA 98% 3041962 26 Afm de tester sa fonctionnalité, le gel subit en cycle de chromatographie avec un échantillon d'immunoglobulines polyvalentes (22,4 mL d'échantillon ILP10, pureté 98% IgG, concentration 9.45g IgG /L, titré 0.0107 mg/mL anti-RSV). Le temps de contact est de 3.3min. Les tampons utilisés sont les suivants : 5 o fixation/lavage 10mM Citrate, pH7, 0.5M NaC1; o Elution 100mM Glycine-HC1, pH 2.57 ; On observe lors du premier mn sur ce gel un pic bien défmi en élution. Le gel est donc fonctionnel et fixe bien une partie des immunoglobulines injectées. Réalisation de la chromatographie d'affinité anti-RSV 10 L'échantillon utilisé est une fraction plasmatique (ILP10) issue du procédé de purification d'immunoglobulines tel que décrit dans la demande de brevet W002092632 de la demanderesse. Le procédé de purification comprend les étapes suivantes : Récupération d'une fraction I+11+111, obtenue à partir de plasma sanguin traité à l'éthanol Précipitation à l'acide caprylique 15- Traitement solvant-détergent (Triton/TnBP) Chromatographie échangeuse d'anions (r-r MAE) à pH basique L'éluat de la chromatographie échangeuse d'anions à pH basique constitue l'échantillon II_,P10 n°13606/10L02032 à 9,45 g/L d'IgG (pureté de 99% en IgG) et contenant 0,11% d'immunoglobulines anti-RSV (107 pg/mL). 20 L'échantillon est équilibré dans le tampon d'injection en y ajoutant une solution concentrée de tampon de NaC1 et de citrate trisodique qsp 0,05M NaC1 et 0,01M Citrate trisodique. Le produit est ensuite passé sur la colonne durant 3.3min (temps de contact). Après lavage, l'élution est réalisée en tampon 0,1M glycine, 30% propylène glycol à pH 2,57. L'éluat est immédiatement neutralisé par du tampon 1M Tris-HC1pH 9 pour en remonter le pH à environ 6. Le gel est alors passé en régénération 25 afm de décrocher les 1g non éluées avec un tampon 6M guanidine pH 6. La fraction récupérée est aussi neutralisée par l'ajout de 1M Tris-HC1 pH9 pour en remonter le pH à 6. 3041962 27 Résultats Le dosage analytique des fractions est réalisé en méthode MSD (Mesoscale DiscoveryTM) La veille du dosage, la plaque est coatée avec la protéine F en ajoutant 30111/puits à 1.5µg/mL de protéine F en tampon PBS, et le mélange est incubé pendant une nuit à 4°C. La plaque est ensuite 5 lavée trois fois avec 2001..11_, de tampon PBS, 0.1% Tween. Une saturation est alors réalisée en ajoutant 1501..11_, par puits de PBS, 3% BSA, en incubant lh à température ambiante sous agitation. La plaque est à nouveau lavée trois fois avec 2001..11_, de tampon PBS, 0.1% Tween. Les échantillons à doser sont ajouter à raison de 251..1L par puits, et incubés 2h à température ambiante sous agitation. Un nouveau cycle de lavage identique aux précédents est réalisé. Le conjugué Sulfo-Tag anti-Human IgG est alors 10 ajouté à raison de 251..1L dans chacun des puits, et incubés pendant 2h à température ambiante sous agitation. Un nouveau cycle de lavage est effectué, puis 1501..11_, par puits de tampon de lecture dilué au demi en eau sont ajoutés. La plaque est agitée modérément et lue immédiatement après. On obtient les résultats présentés dans le tableau 2 ci-dessous : 15 Tableau 2 : Quantité d'Ig anti-RSV au cours du procédé de purification Qté IgG Qté IgG Ratio IgG Facteur d'enrichisse ment Rendement fixation (%) Rendement élué/fixé (%) Bilan Totales (mg) anti-RSV (mg) anti-RSV en Ig antiRSV (%) /IgG Total (%) Matière départ IgIV 212 0,241 0,11% 1,0 100% FNA 177 0,055 0,03% 0,3 69% 23% (166 iig) Lavage 22 0,020 0,09% 0,8 8% Eluat 0,268 0,092 34,1% 301 55% 38% Régénération 0,060 0,003 5,5% 49 1.8% 1.2% Une forte proportion des immunoglobulines anti-RSV se fixe au support de chromatographie par affinité à la protéine hRSV-F (-70%) ce qui représente dans cet essai 1661..tg d' d'immunoglobulines anti-RSV par mL de gel. La fraction non adsorbée et la fraction de lavage sont appauvries en 20 d'immunoglobulines anti-RSV. La fraction d'immunoglobulines éluées du support à pH acide et en présence de Propylene glycol montre un enrichissement de 301 fois en d'immunoglobulines antiRSV et la proportion éluée représente 55% de la proportion fixée au support. 3041962 28 On note que la fraction de régénération comprend une faible quantité d'immunoglobulines mais comporte également une forte proportion d'immunoglobulines anti-RSV qui pourront être récupérées soit en modifiant les conditions d'élution de la chromatographie (composition du tampon, pH...) soit en repassant la fraction de régénération sur la colonne afm de récupérer les immunoglobulines anti- 5 RSV. L'essai montre que la chromatographie d' affmité utilisant un ligand protéine F en conformation post-fusion greffé via une chimie NHS permet la purification d'immunoglobulines anti-RSV avec un rendement de 38% dans les conditions testées (55% des immunoglobulines fixées au support), correspondant à un facteur d'enrichissement de 301. 10 La composition obtenue après chromatographie d'affinité sur ligand protéine F en conformation post-fusion comprend donc au moins 30% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un épitope de la protéine F. Cette composition est utile pour la préparation d'un concentré d'immunoglobulines hyper- enrichi en immunoglobulines anti-RSV comprenant au moins 30% en poids 15 d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un épitope de la protéine F. Les fractions obtenues ont par ailleurs été analysées pour déterminer la répartition des différentes sous-classes d'IgG. Les résultats sont présentés dans le tableau 3 ci-dessous : Tableau 3 : Répartition des sous-classes d'IgG IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 Fraction « éluat concentré » 73% 25% 0.4% 0.8% Fraction 75% 25% REVENDICATIONS1. Procédé de préparation d'un concentré d'immunoglobulines (Ig) utile pour traiter une infection au virus syncytial respiratoire (RSV) comprenant une étape consistant à soumettre une composition d'Ig issue de plasma sanguin, à une chromatographie d'affinité mettant en oeuvre un ligand spécifique du virus RSV, caractérisé en ce que le ligand spécifique du virus RSV est une protéine du virus RSV, ou un variant de celle-ci ou un fragment antigénique de celle-ci. 2. Procédé de préparation d'un concentré d'immunoglobulines (Ig) syncytial selon la revendication 1, caractérisé en ce que la protéine du virus RSV est une protéine de surface du virus RSV, ou un variant de celle-ci ou un fragment antigénique de celle-ci. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le ligand spécifique du virus RSV est 15 une protéine SH et/ou une protéine G et/ou une protéine F du virus RSV, ou un variant de celles-ci ou un fragment antigénique de celles-ci. 4. Procédé selon l'une des revendications précédentes, dans lequel le ligand spécifique du virus RSV est une protéine F du virus RSV, en conformation pré-fusion, ou un variant de 20 celle-ci ou un fragment antigénique de celle-ci. 5. Procédé selon la revendication 3 ou 4, dans lequel la protéine F du virus RSV porte les mutations S155C, S290C, S 190F et V207L. 25 6. Procédé selon l'une des revendications 3 à 5, dans lequel la protéine F du virus RSV comprend les fragments F24-136, F164-315, F283-402, F403-524, F167-201, F235-275, et/ou F478-512. 7. Procédé selon l'une des revendications précédentes, dans lequel le plasma sanguin utilisé 30 consiste en un pool de plasmas sanguins de sujets humains normaux, sans sélection préalable des donneurs. 3041962 32 8. Procédé selon l'une des revendications précédentes, dans lequel la matrice d'affinité est formée d'un gel de polymère, de préférence un polymère organique. 9. Procédé selon l'une des revendications précédentes, comprenant une étape préalable 5 d'obtention de la composition d'Ig à partir de plasma sanguin, par fractionnement éthanolique et/ou fractionnement caprylique et/ou séparation chromatographique. 10. Procédé selon l'une des revendications précédentes, comprenant l'étape ultérieure consistant à récupérer la fraction adsorbée sur la matrice d'affinité et la soumettre à au 10 moins une étape d'inactivation et/ou d'élimination virale. 11. Procédé selon l'une des revendications précédentes, comprenant les étapes ultérieures consistant à additionner un ou plusieurs stabilisants pharmaceutiquement acceptables ; et éventuellement congeler ou lyophiliser le concentré ainsi obtenu. 12. Concentré d'immunoglobulines (Ig) hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une des revendications 1 à 11. 13. Concentré d'immunoglobulines (Ig) hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV, caractérisé en ce qu'il comprend au moins 10%, au moins 20%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins75%, au moins 80%, au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, au moins 99% d'immunoglobulines polyvalentes capables de reconnaître et/ou de neutraliser le virus RSV ou l'une de ses parties. 14. Concentré d'immunoglobulines (Ig) hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV caractérisé en ce qu'il comprend au moins 10%, au moins 20%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins75%, au moins 80% ; au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, au moins 99% en poids d'immunoglobulines neutralisantes vis-à-vis du RSV. 3041962 33 15. Concentré d'immunoglobulines (1g) hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV caractérisé en ce qu'il comprend au moins 10%, au moins 20%, au moins 30%, au moins 40%, au moins 50%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins75%, au moins 80% ; au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au 5 moins 98%, au moins 99% en poids d'immunoglobulines dirigées spécifiquement contre au moins un épitope de la protéine F en conformation préfusion. 16. Concentré d'immunoglobulines (1g) hyper-enrichi en immunoglobulines anti-RSV selon l'une des revendications 12 à 15, pour une utilisation dans le traitement d'une 10 infection par le RSV.