Brevet FR3042202A1 — publié le 20170414

PROCEDE DE CRIBLAGE DE COMPOSES A EFFET ANTI-INFLAMMATOIRE BASE SUR LA PROTEINE DACT3 ET NOUVELLES STRATEGIES THERAPEUTIQUES Domaine de l'invention La présente invention est relative au domaine de la médecine et en particulier de l'identification de composés anti-inflammatoires, notamment pour le traitement des maladies inflammatoires chroniques de l'intestin. Contexte de l'invention Les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI) sont des maladies caractérisées par une inflammation chronique qui touche les intestins. Le mécanisme physiopathologique commun aux MICI est une inflammation exacerbée de la muqueuse intestinale. Cette inflammation est créée par une activation du système immunitaire intestinal (entre autre) qui est déclenchée à la fois par des facteurs génétiques et par des facteurs environnementaux. Les MICI sont le plus souvent diagnostiquées chez des sujets jeunes âgés de 20 à 30 ans mais peuvent survenir à tout âge ; 15 % des cas concernent des enfants. Leur fréquence varie considérablement d'un pays à l'autre mais les taux les plus importants sont retrouvés dans les pays industrialisés et notamment en Europe du Nord-Ouest et aux Etats-Unis. En France, environ 5 nouveaux cas de maladie de Crohn (MC) et autant de rectocolites hémorragiques (RCH) (les 2 principales M ICI, cf. ci-dessus) sont diagnostiqués chaque année pour 100 000 habitants. Les MICI correspondent à deux maladies majoritaires qui sont chroniques et évoluent par poussées, perdurant toute la vie: - la MC qui peut toucher l'ensemble du tube digestif pratiquement de la bouche jusqu'à l'anus et préférentiellement sur la partie finale de l'intestin grêle et sur le début du colon. Le diagnostic est basé sur une diarrhée chronique, des douleurs abdominales, des fistules ou abcès péri-anaux, l'amaigrissement et la fièvre pendant les crises. L'inflammation dans la MC et la colite ulcérative est régulée entre autres par une sécrétion accrue de cytokines pro-inflammatoires; - la RCH qui est localisée uniquement au rectum et au colon. Face aux formes sévères de MICI, différents traitements permettent aujourd'hui aux patients de traiter les poussées symptomatiques et dans une moindre mesure de les espacer comme les and-inflammatoires; les corticoïdes; les immunosuppresseurs; les biothérapies et la chirurgie. Parmi les traitements anti-inflammatoires, on distingue les dérivés de salicylés, qui induisent le moins de 3042202 2 toxicité. La mésalazine est, selon une pratique courante, le traitement administré lors des premières poussées inflammatoires. Ensuite, des anti-inflammatoires plus puissants sont utilisés mais aussi plus toxiques comme la cortisone. Lorsque ces traitements se révèlent inefficaces, des thérapeutiques plus récentes comme les anticorps monoclonaux. Pour la MC, un nouveau traitement appelé le Remicade® 5 est un anticorps monoclonal visant le TNF-a (une cytokine pro-inflammatoire). C'est un médicament très ciblé pouvant traiter les patients résistants à la cortisone et les maintenir en rémission. Cependant ce traitement est aussi très couteux. Les salycilés et les immunosuppresseurs sont utilisés comme traitement d'entretien, pour éviter que le malade ne rechute. Il faut malheureusement souvent recourir à la chirurgie chez les malades : plus d'un patient sur deux atteint par la MC sera opéré après 10 huit à dix ans d'évolution, souvent parce qu'il apparait des rétrécissements dans l'intestin, parfois également des abcès qui peuvent être localisés autour de la région de l'anus dans 20 % des cas environ. En revanche, la chirurgie ne fait que traiter les complications mais n'empêche pas la maladie de réapparaitre après que le patient ait été opéré. Chez les patients atteints de RCH qui résistent au traitement, la chirurgie est également envisagée. Dans ce cas, le colon et le rectum sont retirés, cette 15 intervention étant relativement lourde. Le microbiote intestinal joue un rôle important mais mal connu dans l'apparition de l'inflammation. Plusieurs hypothèses ont été formulées : un dérèglement du système immunitaire, la présence d'un sous-groupe de bactéries non pathogènes qui le deviendraient sous l'influence de certains paramètres ou encore la présence de bactéries pathogènes inconnues à ce jour. Chez environ 40 % des patients, 20 on retrouve par exemple une nouvelle famille d'Escherichia Coli plus adhérente aux cellules épithéliales intestinales. En outre, d'autres travaux ont montré que certaines bactéries peuvent agir sur l'immunité de l'hôte en déclenchant l'expression de protéines impliquées dans l'inflammation. Il est aujourd'hui admis que le microbiote intestinal joue un rôle général dans la santé humaine. Une modification de sa composition et sa diversité peut entrainer l'apparition de certaines maladies dont 25 les M ICI. Faecalibacterium prausnitzii est une des bactéries commensales les plus abondantes dans le microbiote intestinal humain. La quantité de cette bactérie est diminuée dans les fèces et dans le microbiote associé à la muqueuse intestinale des patients atteints de M ICI. Ces observations suggèrent un rôle important de cette bactérie dans les M ICI. Ainsi, face à ce problème de santé, toute nouvelle stratégie thérapeutique est la bienvenue et peu 30 permettre de développer des médicaments plus efficaces, mieux adaptés aux traitements des M ICI et avec moins d'effets secondaires. 3042202 3 Résumé de l'invention Les inventeurs ont identifié DACT3 (Dapper homolog 3) comme une nouvelle cible pour le traitement des maladies inflammatoires du type M ICI. En effet, ils ont découvert que la bactérie F. prausnitzii a des propriétés anti-inflammatoires et que le gène DACT3 est surexprimé en présence du surnageant 5 de cette bactérie et que ce gène est nécessaire pour obtenir cet effet anti-inflammatoire. Il a également été constaté que ce gène à lui seul était un régulateur de l'inflammation puisque sa suppression dans une cellule conduit à une inflammation globale. Il s'agit aujourd'hui d'une nouvelle fonction découverte pour DACT3. La présente invention concerne donc une méthode de criblage permettant l'identification de 10 molécules présentant un effet anti-inflammatoire, la méthode comprenant : la mise en contact d'une molécule candidate avec la protéine DACT3 (Dapper homolog 3), une cellule exprimant DACT3 ou une cellule exprimant un gène rapporteur sous contrôle du promoteur de DACT3, la mesure de l'activité de DACT3 ou de l'expression de DACT3 ou du gène rapporteur, et 15 la sélection de la molécule candidate comme molécule présentant un effet anti-inflammatoire si l'activité ou l'expression de DACT3 ou du gène rapporteur est augmentée par comparaison à l'activité ou l'expression de DACT3 en absence de la molécule candidate. De préférence, la cellule est une cellule intestinale, de préférence une cellule épithéliale intestinale. Dans un mode de réalisation, l'expression de DACT3 est déterminée par la quantité de protéine DACT3. 20 De manière alternative, elle est déterminée par la quantité d'ARNm codant pour DACT3. Par ailleurs, l'activité de DACT3 peut être mesurée par l'activité de liaison de DACT3 à Dsh (« dishevelled »). En particulier, l'activité de DACT3 est mesurée par la quantité de complexe DACT3/Dsh (« dishevelled »). La méthode peut comprendre en outre la détermination de la capacité de la molécule sélectionnée à diminuer la production d'interleukine, en particulier IL-2, IL-6 ou IL-8, de préférence IL-8, par la cellule, 25 de préférence stimulée par le TNF-a. La présente invention est également relative à l'utilisation de DACT3 pour sélectionner des molécules présentant un effet anti-inflammatoire, en particulier un effet anti-inflammatoire utile dans le traitement des maladies inflammatoires chroniques de l'intestin. De préférence, les molécules augmentant l'activité ou l'expression de DACT3 sont sélectionnées comme molécules présentant un 30 effet anti-inflammatoire. La présente invention est également relative à une méthode de diagnostic de maladies inflammatoires chroniques de l'intestin comprenant la détermination de l'expression ou de l'activité de DACT3 dans un échantillon d'un sujet, une expression ou activité diminuée étant indicative d'une maladie 3042202 4 inflammatoire chronique de l'intestin ou d'une susceptibilité à développer une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. La présente invention est relative à une protéine DACT3, un fragment de celle-ci ou l'acide nucléique codant pour DACT3 ou un fragment de celui-ci pour son utilisation pour le traitement ou la prévention 5 d'une maladie inflammatoire, de préférence pour le traitement ou la prévention d'une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. Dans un mode de réalisation préféré, la protéine DACT3, un fragment de celle-ci ou l'acide nucléique codant pour DACT3 ou un fragment de celui-ci est délivré aux cellules intestinales par un micro-organisme probiotique, de préférence une bactérie probiotique, notamment une bactérie sélectionnée parmi Lactococcus lactis, Lactobacillus casei et Lactobacillus 10 plantarum. La présente invention concerne en outre une bactérie probiotique recombinante capable d'exprimer la protéine DACT3 humaine ou un fragment de celle-ci ou comprenant une construction nucléique permettant d'exprimer la protéine DACT3 humaine ou un fragment de celui-ci. Elle concerne aussi une telle bactérie probiotique recombinante pour son utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire, 15 notamment pour son utilisation dans le traitement ou la prévention d'une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. Description détaillée de l'invention Des résultats obtenus par les inventeurs ont montré que la bactérie Faecalibacterium prausnitzii ainsi 20 que son surnageant (SN) de culture avait des effets protecteurs dans des modèles in vivo (modèles de colites aigue et chronique induites chimiquement chez la souris) et des propriétés anti-inflammatoires in vitro dans des modèles cellulaires HT-29 (cellules épithéliales intestinales humaines) et PBMC (Cellule Mononucléaire de Sang Périphérique). Les inventeurs ont utilisé un modèle in vitro avec la lignée cellulaire HT-29 dont l'inflammation est induite au TNF-a (cytokine humaine impliquée dans la 25 réponse inflammatoire). Le surnageant de culture de F. prausnitzii est mis en présence des cellules HT- 29 et la réponse des cellules est évaluée en dosant l'IL-8, une cytokine pro-inflammatoire. Le surnageant de F. prausnitzii a la capacité d'inhiber la production d'IL-8 par les cellules HT-29 stimulées. Les inventeurs ont donc cherché à déterminer les mécanismes moléculaires impliqués dans ces effets bénéfiques. In vitro, dans le modèle de co-incubation HT-29/ surnageant de F. prausnitzii, les 30 inventeurs ont analysé la réponse transcriptomique des cellules. Ils ont notamment observé une très forte surexpression du gène DACT3 dans les cellules suggérant que le surnageant de F. prausnitzii inhibe la voie JNK par la surexpression de DACT3. Afin de vérifier cette hypothèse, ils ont utilisé un inhibiteur de la voie JNK in vitro sur les cellules HT-29 stimulées au TNF-a. Ils ont ainsi observé une perte de la capacité du surnageant de F. prausnitzii à bloquer la production d'IL-8. 3042202 5 La présente invention réside donc dans la mise en évidence d'un gène impliqué dans les effets anti-inflammatoires du surnageant de la bactérie F. prausnitzii chez l'homme. Ce gène constitue donc une cible très intéressante pour identifier de nouvelles molécules anti-inflammatoires et notamment pour mettre en place de nouvelles thérapies dans le traitement des MICI. 5 Criblage La présente invention est donc relative à l'utilisation de DACT3 pour sélectionner des molécules présentant un effet anti-inflammatoire, utiles notamment pour le traitement des MICI. En effet, DACT3 est utilisé pour identifier et/ou sélectionner des molécules capables d'augmenter l'activité de DACT3 ou l'expression de DACT3. 10 En outre, la présente invention est relative à des méthodes de criblage permettant d'identifier des molécules permettant d'augmenter l'expression de DACT3 ou l'activité de la protéine DACT3 comme candidat médicament à effet anti-inflammatoire, notamment pour le traitement des MICI. Par « augmenter » est entendu une augmentation d'au moins 10%, 20%, 30%, 40% ou 50% par rapport à la valeur de référence (par exemple, valeur en absence de la molécule testée). 15 La protéine DACT3 correspond à Dapper homolog 3 ou encore « dishevelled-binding antagonist of beta-catenin 3 » (antagoniste de bêta caténine se liant à « dishevelled » 3). De préférence, il est fait référence dans la présente demande au gène, ARNm et protéine humaine. DACT3 est décrite dans la base UniProt sous le numéro Q96B18. Le gène codant cette protéine est décrit dans UniGene Hs.515490 et GenelD 147906. Il existe deux isoformes de la protéine DACT3 décrites dans GeneBank : 20 Isoforme 1 dont la séquence protéique est décrite dans N13_659493.2 (SEQ ID No 2) et la séquence de l'ARNm est décrite dans NM_145056.2 (SEQ ID No 1) ; Isoforme 2 dont la séquence protéique est décrite dans NP_001287975.1 (SEQ ID No 4) et la séquence de l'ARNm est décrite dans NM_001301046.1 (SEQ ID No 3). Il est entendu que, de manière préférée dans la présente demande, DACT3 désigne l'isoforme 1. La protéine DACT3 est impliquée dans la voie de signalisation Wnt/B- 25 caténine par son interaction avec Dsh (« dishevelled »), une phosphoprotéine cytoplasmique. DACT3 inhibe la capacité de Dsh à activer la voie de signalisation JNK, représentant ainsi un régulateur négatif de cette voie de signalisation. Les méthodes de la présente invention permettent d'identifier des molécules permettant d'augmenter l'activité ou l'expression de DACT3. La quantité de DACT3 peut être augmentée par l'intermédiaire 30 d'une expression augmentée ou d'une dégradation de DACT3 diminuée ou une combinaison des deux. En particulier, l'expression de DACT3 peut être augmentée par la stimulation de l'expression ou par la diminution ou l'abolition de l'inhibition de l'expression, notamment par la répression de l'expression par des modifications épigénétiques. 3042202 6 Dans un premier aspect, les molécules permettent d'augmenter l'expression de DACT3. Ces molécules peuvent être identifiées par des méthodes bien connues de l'homme du métier. Par exemple, dans une cellule, un gène rapporteur peut être placé sous le contrôle du promoteur du gène DACT3. La cellule est mise en contact avec la molécule candidate, l'expression du gène rapporteur est mesurée, 5 et la molécule candidate est sélectionnée si l'expression du gène rapporteur est augmentée par rapport à la même cellule en absence de la molécule candidate. Le gène rapporteur peut être choisi parmi les nombreux rapporteurs disponibles pour l'homme du métier comme un gène rapporteur codant pour une protéine colorée ou fluorescente telle que la GFP (Green Fluorescent Protein) ou pour une protéine dont l'activité peut être mesurée avec ou sans substrat comme la B-galactosidase, la 10 luciférase ou une phosphatase alcaline. L'expression est donc mesurée par l'intermédiaire de l'activité enzymatique du rapporteur ou de la mesure du signal du rapporteur. Ce mode de réalisation permet de réaliser un très grand nombre de test rapidement. La présente invention est donc également relative aux outils mis en oeuvre dans cette méthode de criblage tel qu'une construction d'acide nucléique comprenant la séquence codante pour un gène 15 rapporteur liée de manière fonctionnel au promoteur du gène DACT3, de sorte que l'expression du gène rapporteur soit contrôlée par ce promoteur. Elle concerne également une cellule hôte comprenant cette construction. De manière alternative, les molécules permettant d'augmenter l'expression de DACT3 sont directement identifiées avec une cellule exprimant DACT3. La cellule est mise en contact avec la 20 molécule candidate, l'expression du gène DACT3 est mesurée, et la molécule candidate est sélectionnée si l'expression du gène DACT3 est augmentée par rapport à la même cellule en absence de la molécule candidate. L'expression de DACT3 peut être mesurée au niveau protéique ou au niveau de l'ARNm. Les techniques permettant de mesurer le niveau de protéine DACT3 ou d'ARNm DACT3 sont bien connues de l'homme du métier. 25 Par exemple, la quantité de protéine DACT3 peut être déterminée à l'aide d'un anticorps spécifique de DACT3. De tels anticorps sont disponibles commercialement (par exemple par les sociétés Acris Antibodies, LsBio, Abcam, etc...). La détermination de la quantité de protéine DACT3 peut se faire in vivo ou ex vivo dans des cellules ou in vitro dans des extraits ou lysats cellulaires. Notamment, la détection des protéines DACT3 peut se faire par ELISA, Western Blot ou toute autre technique adaptée. 30 La quantité d'ARNm de DACT3 peut se faire avec des sondes et/ou des amorces spécifiques de DACT3. Par exemple, elle peut être déterminée par Northern Blot ou RT-PCR, notamment PCR quantitative (RTq-PCR). Des amorces spécifiques de DACT3 sont disponibles commercialement, par exemple auprès de Qiagen (France). 3042202 7 De préférence, les cellules mises en oeuvre dans ces méthodes sont des cellules épithéliales. Dans un mode de réalisation préféré, les cellules sont d'origine intestinale, en particulier colorectale, par exemple comme les lignées HT-29 (ATCC® HTB-38TM), Caco-2 (ATCC® HTB-37TM), CCD 841 CoN (ATCC® CRL-1790TM), SW480 (ATCC® CCL-228TM), MODE-K, FHC (ATCC® CRL-1831TM) ou IEC-6 (ATCC® CRL- 5 1592-1. Facultativement, la cellule est stimulée par le TNF-a ou l'IL-113 préalablement ou simultanément à la mise en contact avec la molécule candidate. De préférence, la cellule exprime DACT3 de manière endogène. Alternativement, la cellule n'exprime pas DACT3 de manière endogène (éventuellement suite à une inactivation du gène endogène DACT3) et exprime une séquence codante pour DACT3 exogène ou exprime un gène rapporteur sous contrôle du promoteur de DACT3. De 10 manière alternative, les cellules mises en oeuvre peuvent également être des cellules du système immunitaire présentes dans la paroi intestinale. Dans un second aspect, l'activité de DACT3 peut être augmentée. Comme la protéine DACT3 se lie à Dsh, la molécule à identifier peut être une molécule qui permet d'augmenter la liaison de DACT3 à Dsh. Cette augmentation peut se faire par l'intermédiaire d'une stabilisation de la liaison entre DACT3 15 et Dsh ou d'une augmentation de l'affinité entre DACT3 et Dsh. Ainsi, la méthode peut comprendre la mise en contact d'une molécule candidate avec DACT3 et Dsh, la mesure de la quantité de complexe DACT3-Dsh, et la sélection de la molécule candidate si la quantité de complexe DACT3-Dsh est augmentée en comparaison de la quantité de complexe en absence de la molécule candidate. La détermination de la quantité de complexe DACT3-Dsh en présence ou absence de molécules 20 candidates peut se faire in vitro avec des protéines purifiées ou des extraits cellulaires ou ex vivo dans des cellules. Facultativement, l'affinité de la liaison entre DACT3 et Dsh peut être mesurée. En outre ou en remplacement, le Kon et/ou Koff ou le Ki et/ou Kd peuvent être mesurés. La quantité de complexe DACT3-Dsh peut être mesurée par toute technique disponible pour l'homme du métier comme par exemple la co-immunoprécipitation, la BiFC (bimolecular fluorescence complementation), 25 l'électrophorèse par affinité, la PLA (Proximity ligation assay), la méthode TAP (Tandem affinity purification), les analyses « pull-down », le double hybride et la réticulation in vivo. Par la sélection d'une molécule est également entendue la sélection d'une combinaison de plusieurs molécules ou même la sélection de micro-organismes, en particulier de bactéries. En effet, les méthodes permettant d'identifier et sélectionner les molécules capables d'augmenter 30 l'expression ou l'activité de DACT3 peuvent également être utilisées pour identifier des micro- organismes, en particulier du microbiote intestinal, présentant des capacités anti-inflammatoires dont le mode d'action passe au moins partiellement par DACT3. De préférence, ce qui sera testé est le surnageant de culture de ces micro-organismes qui comprend les métabolites sécrétés par les microorganismes. 3042202 8 Les micro-organismes du microbiote intestinal peuvent être des bactéries, des champignons, des archées ou des protistes, de préférence des bactéries. Parmi les bactéries, on peut citer de manière non-exhaustive les Firmicutes incluant les genres Ruminococcus, Clostridium, Lactobacillus, Eubacterium, Faecalibacterium et Roseburia ; les Bacteroidetes incluant les Bacteroides, Prevotella et 5 Xylanibacter; les Actinobacteria incluant les genres Collinsella et Bifidobacterium ; les Proteobacteria de la famille des Enterobacteriaceae et des bactéries du groupe Desulfovibrio ; et les Verrucomicrobia. Parmi les champignons, on peut citer de manière non-exhaustive des Candida, des Saccharomyces, des Aspergillus et des Penicillium. Dans un mode de réalisation particulier, la bactérie est Faecalibacterium prausnitzii. Les micro-organismes peuvent également être des micro-organismes probiotiques, en 10 particulier des bactéries probiotiques. En outre, dans un autre aspect de la présente invention, la méthode de criblage peut avoir pour but d'identifier les composants, métabolites, molécules ou fractions du surnageant de micro-organismes du microbiote intestinal qui présentent la capacité d'augmenter l'expression ou l'activité de DACT3. Ainsi, des composants, des métabolites, des molécules ou des fractions du surnageant de bactérie sont 15 isolés puis testés par une des méthodes permettant d'identifier et sélectionner ceux capables d'augmenter l'expression ou l'activité de DACT3. Dans un mode de réalisation particulier, le microorganisme est F. prausnitzii. Ainsi, dans ce contexte, les molécules candidates peuvent être éventuellement des micro-organismes, notamment du microbiote intestinal, un surnageant de culture, ou des composants, métabolites, 20 molécules ou fractions du surnageant. Les molécules candidates peuvent être choisies parmi des peptides et protéines, des anticorps, des acides gras, des acides nucléiques (siARN, shARN, etc...), des aptamères, des composés chimiques de faible poids moléculaires. Par composés chimiques de faible poids moléculaires est entendu une molécule de moins de 1500 daltons, 100 daltons, 800 daltons et même de moins de 500 daltons. Cela 25 peut être des composés organiques ou inorganiques. Des banques de composés synthétiques sont disponibles commercialement auprès plusieurs sociétés incluant Maybridge Chemical Co. (Trevillet, Cornwall, UK), Comgenex (Princeton, N. J.), Brandon Associates (Merrimack, N.H.), et Microsource (New Milford, Conn.). De manière alternative, des banques de composés naturels d'origine bactérienne, fongique, et de plantes sont également disponibles. Dans un mode de réalisation 30 particulier, les composés ou molécules peuvent provenir ou être isolés à partir de bactéries du microbiote intestinal et notamment de la bactérie Faecalibacterium prausnitzii. La méthode peut comprendre en outre une étape dans laquelle la molécule candidate est testée pour sa capacité à modifier la production par la cellule d'interleukine, en particulier IL-2, IL-6 ou IL-8, de préférence IL-8. Ainsi, la molécule candidate est sélectionnée si la production d'interleukine, de 3042202 9 préférence IL-8, par la cellule est diminuée par rapport à la production d'IL-8 en absence de molécule candidate. Il peut également être envisagé d'effectuer une méthode de criblage comprenant, à l'inverse, une première étape de sélection basée sur la capacité de la molécule candidate à diminuer la production 5 d'interleukine, en particulier d'IL-8, par la cellule puis une deuxième étape de sélection basée sur la capacité de la molécule candidate à augmenter l'expression ou l'activité de DACT3 dans la cellule. Une dernière alternative est ces deux méthodes de criblage en parallèle. Les molécules ou micro-organismes ainsi identifiées pourront donc être utilisées pour prévenir, inhiber, ralentir ou traiter une maladie inflammatoire. De préférence, cette maladie inflammatoire est 10 choisie parmi les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin, et notamment la maladie de Crohn et la rectocolite hémorragique. Diagnostic de MICI Les inventeurs ont observé que l'expression de DACT3 était liée au processus inflammatoire. Ainsi, la 15 présente invention est également relative à l'utilisation de DACT3 comme marqueur de maladies inflammatoires, en particulier maladies inflammatoires chroniques de l'intestin. Elle est en outre relative à une méthode de diagnostic de maladies inflammatoires, en particulier maladies inflammatoires chroniques de l'intestin, comprenant la détermination de l'expression ou de l'activité de DACT3 dans un échantillon d'un sujet, une expression ou activité diminuée étant indicative d'une 20 maladie inflammatoire ou d'une susceptibilité à développer une maladie inflammatoire, en particulier une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. Le terme « maladie inflammatoire » a son sens général dans le domaine et désigne des maladie ou troubles associés à l'inflammation. De préférence, une maladie inflammatoire est une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. Les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin 25 comprennent de manière non-exhaustive la maladie de Crohn, la rectocolite hémorragique, l'iléite et une entérite. Dans un mode de réalisation préféré, la maladie inflammatoire chronique de l'intestin est la maladie de Crohn ou la rectocolite hémorragique. De préférence, l'échantillon est un échantillon intestinal. En particulier, l'échantillon est obtenu par une biopsie du patient. 30 L'expression ou l'activité de DACT3 peut être mesurée par tout moyen disponible pour l'homme du métier dans l'échantillon, par exemple par immuno-coloration. Le niveau d'expression ou d'activé de DACT3 est ensuite comparé au niveau observé chez un témoin sain ou échantillon témoin (c'est-à-dire 3042202 10 ne souffrant pas de maladies inflammatoires chroniques de l'intestin) dans des tissus histologiquement comparables. De manière alternative, un tissu histologiquement comparable mais sain provenant du même patient peut également être utilisé comme contrôle. Par « diminuer » est entendu une diminution d'au moins 10%, 20%, 30%, 40% ou 50% par rapport à la 5 valeur de référence (par exemple, valeur de l'échantillon témoin). La présente invention est également relative à l'utilisation d'un kit comprenant des moyens de détection de DACT3 pour le diagnostic d'une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. Ces moyens de détection peuvent être choisis parmi un anticorps spécifique de DACT3, une sonde et une amorce d'amplification spécifique de DACT3. Le kit peut comprendre en outre d'autres réactifs 10 permettant de détecter les moyens de détection et/ou une notice d'utilisation. Les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin incluent la maladie de Crohn et la rectocolite hémorragique. Traitement de MICI 15 Les inventeurs ont identifié DACT3 comme une cible permettant de diminuer ou de lutter contre l'inflammation, en particulier dans des cellules épithéliales intestinales. En effet, l'augmentation de l'expression de DACT3 diminue la production d'IL-8 par les cellules. Ainsi, la présente invention est également relative à l'utilisation de la protéine DACT3, d'un fragment de celle-ci ou d'un acide nucléique codant pour cette protéine ou ce fragment pour la fabrication d'un 20 médicament destiné à prévenir ou traiter une maladie inflammatoire, en particulier une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. Elle concerne également la protéine DACT3, d'un fragment de celle-ci ou d'un acide nucléique codant pour cette protéine ou ce fragment pour une utilisation en tant qu'anti-inflammatoire. Plus particulièrement, elle concerne la protéine DACT3, un fragment de celle-ci ou un acide nucléique codant pour cette protéine ou ce fragment pour une utilisation pour prévenir 25 ou traiter une maladie inflammatoire, en particulier une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. Elle concerne enfin une méthode de traitement d'une maladie inflammatoire chez un patient comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace de la protéine DACT3, d'un fragment de celle-ci ou d'un acide nucléique codant pour cette protéine ou ce fragment audit patient, obtenant ainsi une diminution de l'inflammation. 30 De préférence, la maladie inflammatoire est une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. En particulier, la maladie peut être la maladie de Crohn ou la rectocolite hémorragique. 3042202 11 Par « traiter » ou « traitement » est entendu la prévention, le ralentissement de l'évolution, le soulagement ou la réduction, la guérison de la maladie ou de certains de ces symptômes. L'acide nucléique codant pour la protéine DACT3 comprend de préférence la séquence de l'ADNc codant pour cette protéine. L'acide nucléique peut être un ARN, un ADN ou un mélange des deux. 5 Par fragment de DACT3 est entendu ici un fragment capable d'inhiber Dsh, et donc la production d'IL- 8 par la cellule. Notamment, le fragment de DACT3 conserve la capacité de se lier à Dsh. Cette capacité de liaison et celle d'inhiber la production d'IL-8 est facilement mesurable par l'homme du métier avec les techniques disponibles. Dans un mode de réalisation préféré, le fragment conserve des capacités équivalentes à celle de la protéine DACT3. Par exemple, un fragment peut présenter une séquence 10 d'acides aminés d'au moins 10, 20, 30, 40, ou 50 acides aminés. De préférence, le fragment présente au maximum 300, 250, 200, 150 ou 100 acides aminés. La protéine DACT3 peut éventuellement comprendre quelques substitutions, additions ou délétions. De préférence, la protéine DACT3 comprend au maximum 30, 20 ou 10 acides aminés modifiés. Notamment, la protéine DACT3 présente une identité de séquence d'au moins 90, 95 ou 99 % avec la 15 séquence de la SEQ ID No 2 ou 4, de préférence la SEQ ID No 2. La protéine DACT3 peut également comprendre des modifications permettant de limiter sa dégradation, par exemple par des protéases. Eventuellement, la protéine DACT3 est conjuguée à une entité permettant d'augmenter sa demi-vie ou sa solubilité, de faciliter son entrée dans la cellule, notamment par endocytose. De préférence, la protéine DACT3 est attachée à cette entité sous forme de protéine de fusion. Dans un mode de 20 réalisation préféré, la protéine DACT3 est une protéine recombinante. L'acide nucléique codant pour la protéine DACT3 ou un fragment de celle-ci peut faire partie d'une construction nucléique dans laquelle il est inclus dans une cassette d'expression. Le terme « cassette d'expression » désigne une construction d'acide nucléique comprenant une région codante et une région régulatrice, liées de manière opérationnelle. L'expression "lié de manière 25 opérationnelle" indique que les éléments sont combinés de manière à ce que l'expression de la séquence codante soit sous le contrôle du promoteur transcriptionnel. Typiquement, la séquence du promoteur est placée en amont du gène d'intérêt, à une distance de celui-ci compatible avec le contrôle de son expression. Des séquences d'espacement peuvent être présentes, entre les éléments régulateurs et le gène, dès lors qu'elles n'empêchent pas l'expression. La cassette d'expression peut 30 également comprendre au moins une séquence activatrice « enhancer » liée de manière opérationnelle au promoteur. Le promoteur est choisi de sorte à être fonctionnel dans la cellule hôte qui exprimera la protéine DACT3 ou un fragment de celle-ci. Par ailleurs, la cassette d'expression peut 3042202 12 également inclure une séquence codant pour un peptide signal, par exemple celui de la protéine Usp45 de L. lactis. L'acide nucléique codant pour la protéine DACT3 ou un fragment de celle-ci ou la cassette d'expression le comprenant peut être incorporé dans un vecteur d'expression. 5 Avantageusement, le vecteur d'expression comprend des éléments régulateurs permettant l'expression de l'acide nucléique selon l'invention. Ces éléments peuvent comporter par exemple des promoteurs de transcription, des activateurs de transcription, des séquences terminatrices, des codons d'initiation et de terminaison. Les méthodes pour sélectionner ces éléments en fonction de la cellule hôte dans laquelle l'expression est souhaitée, sont bien connues de l'homme du métier. Le 10 vecteur peut être circulaire ou linéaire, simple- ou double-brin. Il est avantageusement choisi parmi les plasmides, phages, phagemides, virus, cosmides et chromosomes artificiels. De manière préférée, le vecteur est un plasmide. De préférence, le plasmide est réplicatif. Il peut être un plasmide haut nombre de copies ou bas nombre de copies. Les constructions d'acide nucléique, cassettes d'expression et vecteurs d'expression peuvent être 15 délivrés à la cellule par tout moyen disponible à l'homme du métier comme les microsphères, les liposomes, les nanoparticules, ainsi que des cellules hôtes. L'invention concerne en outre une cellule hôte comprenant un acide nucléique, une cassette d'expression ou un vecteur d'expression tel que décrit ci-dessous. De manière préféré, cette cellule hôte permet de délivrer la protéine DACT3 ou l'acide nucléique 20 codant in situ au niveau de l'intestin. Ainsi, cette cellule hôte est un micro-organisme reconnu comme sans danger (GRAS Generally Recognized as Safe), en particulier une bactérie probiotique ou un microorganisme commensal. Notamment, la bactérie peut être choisie parmi les Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus, Pediococcus, et Leuconostoc, de préférence parmi les Lactococcus et Lactobacillus. Dans un mode de réalisation préféré, la bactérie est choisie parmi Bacillus coagulons, Bifidobacterium 25 longum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus lactis, Lactococcus lactis, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus bifidus, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus reuteri Protectis, et Streptococcus thermophiles, de préférence parmi le groupe consistant en Lactobacillus casei, Lactococcus lactis, Lactobacillus plantarum, 30 Lactobacillus acidophilus et Lactobacillus helveticus. De manière plus spécifique, la bactérie Lactococcus lactis est préparée à partir d'une bactérie choisie parmi Lactococcus lactis subsp. cremoris (including A76, GE214, HP, 1BB477, KW2, MG1363, HB60, HB61, HB63, NBRC 100676, NZ9000, SK11, TIFN1, TIFN3, TIFN5, TIFN6, TIFN7, DSM14797, CNCM 1-2807, DN030066 (CNCM 1-1631), DN030087 3042202 13 (CNCM 1-2807), CNCM 1-1631, NCC2287 (CNCM 1-4157) ou UC509.9), Lactococcus lactis subsp. lactis (including 1AA59, Al2, CNCM 1-1631, CV56, Delphy 1, 111403, 10-1, DPC3901, LD61, TIFN2, TIFN4, JCM 5805 also called NBRC 100933, JCM 7638, K214, KF147, KLDS 4.0325, NCDO 2118 or YF11), Lactococcus lactis subsp. hordniae (such as NBRC 100931) ou Lactococcus lactis subsp. tructae. En particulier, la 5 bactérie Lactococcus lactis est sélectionnée parmi Lactococcus lactis subsp. cremoris et Lactococcus lactis subsp. lactis. Dans un mode de réalisation préféré, la cellule hôte est une souche de Lactococcus lactis, par exemple MG1363. Dans un autre mode de réalisation, la cellule hôte est une levure, par exemple Saccharomyces boulardii. Facultativement, la cellule hôte peut être défective pour un gène d'auxotrophie de sorte que la cellule 10 ne puisse survivre sans la présence de composés spécifiques. Par exemple, le gène d'auxotrophie peut être la thymidylate synthase ou l'alanine racémase. Ainsi, la cellule est capable de délivrer la protéine ou l'acide nucléique codant la protéine, mais pas de se disséminer. La cellule hôte peut également être modifiée par suppression de protéases endogènes de la cellule. Dans un premier mode de réalisation préféré, la cellule hôte est utilisée pour synthétiser et sécréter 15 la protéine DACT3 in situ et rendre cette protéine disponible aux cellules épithéliales de l'intestin. Dans ce contexte, la cassette d'expression est adaptée pour exprimer la protéine DACT3 dans la cellule hôte. Ce principe a déjà été mise en oeuvre par les inventeurs (Bermudez-Humaran et al, 2003, Infect Immun, 1887-96 ; Bermudez-Humaran et al, 2005, J Immunol, 7297-302 ; Bermudez-Humaran et al, 2013, Curr Opin Microbiol, 16, 278-283). Par exemple, le promoteur peut être celui de PGroESL de Lactococcus 20 lactis; (Benbouziane et al, 2013, J Biotechnol, 120-9.) Ce mode de réalisation a été détaillé dans la demande W02013/175358. Un des promoteurs constitutifs forts préféré est le promoteur P59 de L. lactis (van der Vossen et al, 1987, Appl Environ Microbiol, 53, 2452-2457). Le promoteur inductible peut permettre de contrôler l'expression par un inducteur, un répresseur ou un facteur environnemental tel que le pH, la température ou la concentration en ions. Plusieurs systèmes 25 d'expression inductibles sont disponibles dont le système NICE (Nisin-controlled Expression) décrit dans Mierau et Kleerebezem (2005, Appl Microbiol Biotechnol, 68, 705-717) où l'expression est contrôlée par la nisine ; le système SICE (Stress-Induced Controlled System) dans lequel l'expression est sous contrôle du promoteur de l'opéron GroESL (W02013/175358) et est induite par une élévation de la température. 30 Dans un second mode de réalisation préféré, la cellule hôte est utilisée pour vectoriser un vecteur d'expression codant pour la protéine DACT3 ou un fragment de celle-ci et délivrer ce vecteur d'expression aux cellules épithéliales de l'intestin. Dans ce contexte, la cassette d'expression est adaptée pour exprimer la protéine DACT3 dans les cellules épithéliales de l'intestin. Par exemple, le promoteur contrôlant l'expression de la protéine DACT3 peut être le promoteur de DACT3 ou tout 3042202 14 autre promoteur hétérologue au gène DACT3. Ce promoteur peut éventuellement être un promoteur fort ou un promoteur inductible. Il peut être un promoteur humain comme celui de l'actine [3, de la phosphoglycerol kinase ou de GAPDH (glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase) ou un promoteur viral comme celui du gène précoce immédiat du cytomégalovirus humain, du gène précoce 5 de SV40, ou celui du virus de sarcome de Rous. Le vecteur d'expression peut facultativement comprendre des éléments permettant l'intégration de la cassette d'expression dans le chromosome de la cellule épithéliale intestinale. De manière alternative, la cassette d'expression peut être maintenue de manière épisomale. Dans un mode de réalisation préféré, le vecteur d'expression est un plasmide. Le promoteur peut par exemple être pCMV (promoteur du gène précoce immédiat du 10 cytomégalovirus humain). Ce principe a déjà été mise en oeuvre par les inventeurs (Quévrain et al, 2015, Gut ; Guimaraes et al, 2006, Appl Environ Microbiol, 72, 7091-7097 ; Bermudez-Humaran et al, 2013, Curr Opin Microbiol, 16, 278-283). Ainsi, la présente invention est relative à une cellule hôte, en particulier un microorganisme probiotique, de préférence une bactérie probiotique, qui comprend un acide nucléique codant pour la 15 protéine DACT3 ou un fragment de celle-ci, une cassette d'expression comprenant un tel acide nucléique, ou un vecteur d'expression comprenant une telle cassette, un tel vecteur, ou un tel acide nucléique. Elle concerne également une cellule hôte telle que définie en tant qu'agent anti-inflammatoire. Elle concerne aussi une cellule hôte telle que définie pour son utilisation dans le traitement ou la prévention d'une maladie inflammatoire, de préférence une maladie inflammatoire 20 chronique de l'intestin, en particulier la maladie de Crohn ou la rectocolite hémorragique. Elle concerne enfin une méthode de traitement d'une maladie inflammatoire chez un patient comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace de cellules hôtes audit patient, obtenant ainsi une diminution de l'inflammation. L'invention concerne en outre une composition pharmaceutique comprenant une cellule hôte telle 25 que définie ci-dessus. Cette composition peut comprendre en outre un support pharmaceutiquement acceptable. La quantité de cellules hôtes peut être par exemple comprise entre 1x108 et 1x1011 CFU (unité formant des colonies) De préférence, la protéine DACT3, l'acide nucléique, la cassette d'expression, le vecteur d'expression 30 ou la cellule hôte sont administrés par voie entérale, intramusculaire, intrapéritonéale, ou intranasale. Dans un premier mode de réalisation, l'administration se fait par voie orale. Par exemple, la composition pharmaceutique peut être sous forme liquide comme une émulsion, un sirop, une solution aqueuse, et d'autres formes adaptées à une administration orale comme des gélules, capsules, comprimés, granules ou poudres. La composition peut être formulée comme un alicament. 3042202 15 Dans un autre mode d'administration, l'administration se fait par voie rectale. Notamment, la composition pharmaceutique peut être formulée sous forme de suppositoire, de lavement ou de mousse. Notamment, les cellules hôtes probiotiques peuvent être sous forme liquide, sous forme lyophilisée ou incluses dans un gel. 5 L'invention est illustrée par les exemples suivants. Cependant les exemples et figures ne doivent pas être interprétés comme limitant l'objet et la portée de la présente invention. Description des Figures 10 Figure 1. Capacité d'immunomodulation de F. prausnitzii in vitro. (A) Production d'IL-8 dans des cellules HT-29 stimulées avec du TNF-a. Les expériences ont été réalisées au moins en triple. Les résultats sont exprimés en IL-8/protéines (pg/mg). (B) Dégradation du TNF-a ou (C) de l'IL-8. Les expériences ont été réalisées au moins en triple. Les résultats sont exprimés en concentration des cytokines (pg/ml). Test non paramétrique de Kruskal-Wallis *p 1,5). De façon notoire, la cytokine proinflammatoire IL-8 et 20 3 autres chimiokines sont régulées positivement. En effet, la régulation positive de l'IL-8 dans des cellules HT-29 est un trait spécifique des cellules stimulées avec du TNF-a. Les gènes qui ont été régulés par le TNF-a dans des cellules HT-29 sont cohérents avec d'autres études. L'analyse IPA révèle une activation de régulateurs en amont tels que le TNF-a, l'IFN-y et le NF-KB. L'IPA classe les gènes régulés positivement et régulés négativement qui sont en relation avec un déclencheur spécifique, comme un 25 gène ou un agent chimique. En outre, l'analyse IPA indique que le profil des gènes modulés correspond à une réponse inflammatoire. Ainsi, ces données confirment un état inflammatoire global des cellules. Effet du LYBHI contre des cellules HT-29 après une stimulation avec du TNF-a. Puisque des milieux bactériens riches peuvent afficher des propriétés anti-inflammatoires, les inventeurs ont analysé la réponse transcriptomique de cellules HT-29 stimulées avec du TNF-a et un traitement au LYBHI 30 comparativement à des cellules stimulées avec du TNF-a. Seulement 27 gènes ont été régulés positivement de façon différentielle et 54 régulés négativement après stimulation avec le LYBHI. Parmi ces gènes, seulement 15 étaient communs à ceux régulés avec le TNF-a, ce qui signifie que seulement 5 % des gènes régulés avec le TNF (15 sur 287) ont été également affectés par le LYBHI. Cet effet limité et faible du LYBHI sur la régulation des gènes semble n'avoir aucun effet dans la réduction de la voie 3042202 18 de l'inflammation. De façon spécifique, l'IL-8 a été régulée négativement par le LYBHI (rapport de -1,8) mais sans atteindre une chute significative de la production d'IL-8 comme il est confirmé par des tests ELISA. Effet du SN de F. prausnitzii SN contre l'effet du LYBHI après stimulation avec du TNF-a. Il a été montré 5 que le traitement par le SN de F. prausnitzii réduit grandement la quantité d'IL-8 habituellement induite avec le TNF-a. L'analyse transcriptomique a révélé un nombre important de gènes régulés dans cette comparaison : 913 gènes ont été régulés positivement et 585 ont été régulés négativement après stimulation avec du TNF-a et traitement avec du SN de F. prausnitzii. Parmi ce vaste nombre de gènes régulés, les inventeurs ont découvert que 25 % des gènes régulés par le TNF-a seul étaient également 10 contre-régulés par le SN de F. prausnitzii (70 sur 287). Dans cette comparaison, l'IL-8 a été également régulée négativement dans un rapport de -1.6 indiquant que le SN de F. prausnitzii produit une réduction même plus forte que celle réalisée par le LYBHI. L'effet du SN de F. prausnitzii a été suffisant pour mener à une chute significative de la production d'IL-8 détectée par un test ELISA. Pour obtenir d'autres indications, les inventeurs ont soumis cet ensemble de données à une analyse IPA. L'IPA a 15 révélé les mécanismes moléculaires du cancer et des voies antioxydantes régulés par le SN. De même, le cancer (avec 812 molécules régulées) représente la maladie la plus régulée. L'analyse des réseaux des effets régulateurs prédit la régulation négative d'une quantité de lymphocytes T (par la régulation négative de JUN). Par comparaison des gènes régulés par le LYBHI, ils ont observé une voie régulatrice différente pour la régulation des lymphocytes T. Parce que l'IPA est la plus documentée dans la voie 20 du cancer, l'analyse pourrait avoir été biaisée dans cette direction. Pour cette raison, ils ont effectué une analyse supplémentaire plus concentrée sur les gènes impliqués dans les voies inflammatoires. Nous avons étudié la régulation de la voie de JUN et d'autres MAPK par le SN de F. prausnitzii. Approximativement 7 % de tous les gènes régulés étaient corrélés avec ces voies. En particulier, ils ont sélectionné 14 gènes intéressants qui ont subi les plus fortes régulations : 10 régulés positivement et 25 10 régulés négativement. Parmi ceux-ci, l'IL-8 a été régulée négativement, comme il a été observé au niveau protéine (résultat ELISA). Les gènes les plus modulés étaient Dact3 et Ltb qui ont été régulés positivement (rapport de 17,2) et régulés négativement (rapport de -4,8), respectivement. Dact3, un membre de la famille des gènes DACT, est un régulateur négatif de la voie de signalisation Wnt[INK ; ainsi, sa surexpression suggère que le SN de F. prausnitzii inhibe la voie de JNK par l'intermédiaire de 30 la régulation positive de Dact3. En effet, DACT3 se lie à la protéine DISHEVELLED et inhibe sa capacité à activer la voie de signalisation de JNK, ce qui à son tour mène à une régulation négative globale des gènes codant pour les cytokines proinflammatoires telles que l'IL-2, l'IL-6 et l'IL-8. La voie hypothétique est présentée sur la figure 4. La LTB (lymphotoxine-13), une protéine membranaire de type II de la famille des TNF, est connue pour l'ancrage de la lymphotoxine-a à la surface cellulaire et dont le 3042202 19 complexe est un inducteur du système de réponse inflammatoire ; ainsi, sa régulation négative pourrait être un autre mécanisme par lequel le SN de F. prausnitzii soulage l'inflammation. Effet du SN de F. prausnitzii contre l'effet du LYBHI sans stimulation avec le TNF-a. Les inventeurs ont également étudié l'effet du SN de F. prausnitzii sur des cellules HT-29 sans stimuli (c'est-à-dire, la 5 stimulation avec le TNF-a). L'analyse transcriptomique a révélé que 362 gènes ont été régulés positivement de façon différentielle et 300 régulés négativement. Le gène le plus régulé a été à nouveau Dact3 et de façon intéressante, celui-ci n'a pas été régulé par le milieu de culture LYBHI seul. Ces résultats confirment que la régulation positive de ce gène est spécifique du SN de F. prausnistzii. L'analyse IPA révèle également que le cancer (223 molécules régulées) fait partie des maladies les plus 10 régulées. L'IPA prédit l'inhibition d'une quantité de lymphocytes T et également l'inhibition de la transition de phase G1/S et la formation des lignées de cellules tumorales (par régulation négative de Myc et régulation positive de CEBPB, par exemple). Le SN de F. prausnitzii semble posséder des propriétés anti-prolifération sur les cellules HT-29. Validation des gènes exprimés de façon différentielle. Une qPCR en temps réel de 8 gènes sélectionnés 15 a été effectuée pour valider les données des micropuces. Les résultats sont cohérents avec ceux obtenus par les micropuces. De même, comme le gène hautement modulé était Dact3 (rapport de 17,2), les inventeurs ont ainsi décidé de se concentrer sur ce gène et sur ses voies de signalisation potentielles. Leur hypothèse a été que le SN de F. prausnitzii agit principalement sur la voie de JNK, par l'intermédiaire de la régulation 20 de Dact3. Pour confirmer cette hypothèse, l'effet d'une inhibition de p38, JNK et ERK dans des cellules HT-29 (figures 2A et 2C) ou HEK-293 (figures 2B et 2D) stimulées avec du TNF-a ou de l'IL-113 a été ensuite déterminé. De façon intéressante, l'utilisation de SP600125 (un inhibiteur spécifique de JNK) dans des cellules HT-29 (figure 2A) et HEK-293 (figure 2B) stimulées avec du TNF-a a entraîné la perte de la 25 capacité du SN de F. prausnitzii à bloquer la sécrétion d'IL-8, confirmant un rôle du SN de F. prausnitzii sur la voie de JNK. Un effet similaire a été observé en utilisant PD169316 (un inhibiteur spécifique de p-38). Ce résultat n'est pas surprenant en raison des interconnexions possibles des deux voies des MAPK p-38 et JNK, comme l'activation par la kinase MAPK double (MKK)-4 qui est capable d'activer à la fois JNK et p38 parmi d'autres inter-relations. En dehors de cela, l'utilisation d'un inhibiteur 30 spécifique de la voie d'ERK dans les deux modèles cellulaires (cellules HT-29 et HEK-293) amplifie les propriétés anti-inflammatoires du SN de F. prausnitzii suggérant un rôle proinflammatoire possible du SN dû à l'activation d'ERK (figures 2A et 2B). En effet, lorsque la voie d'ERK a été bloquée dans des cellules HT-29 (figure 2C) ou HEK-293 (figure 2D) stimulées avec de l'IL-113, le SN récupère sa capacité 3042202 20 à inhiber la production d'IL-8 alors qu'il n'a été observé aucune différence lorsque les autres voies ont été bloquées (figures 2C et 2D). JNK contribue aux cascades de signalisation intracellulaire se traduisant par des réponses inflammatoires qui peuvent être impliquées dans des lésions intestinales puisqu'il a été trouvé que le tissu du côlon chez les patients souffrant de MII contient une JNK 5 phosphorylée augmentée. En outre, l'inhibition de JNK par SP600125, le même inhibiteur que celui utilisé dans cette étude, a réduit significativement les scores cliniques et pathologiques chez des rats traités au DSS. Puisqu'il a été découvert auparavant que le SN de F. prausnitzii est capable de bloquer l'activation du NF-43 dans des cellules Caco-2, les inventeurs ont également utilisé dans cette étude MG-132, un 10 inhibiteur de cette voie. Leurs résultats ne montrent aucune perte d'effet du SN de F. prausnitzii à bloquer la production d'IL-8 en présence de MG-132 et dans aucun des modèles cellulaires testés (c'est-à-dire, cellules HT-29 ou HEK-293 stimulées avec du TNF-a ou de l'IL-113) (figures 2A à 2D). A noter, du fait que MG132 est un inhibiteur du protéasome, cette molécule ne peut pas bloquer un effet secondaire possible du SN de F. prausnitzii à un autre niveau de la voie du NF-43 comme la 15 phosphorylation d'Ikb. En effet, l'inhibition du protéasome dans les hépatocytes humains augmente la production d'IL-8 indépendamment de l'activation du NF-4(3 mais en association avec une augmentation de l'activité de JNK et AP-1. Les formes totales et phosphorylées d'ERK1/2, JNK et p-38 ont été détectées après 10 min de coincubation dans des cellules HT-29 stimulées ou pas avec du TNF-a (figure 4). Les résultats valident 20 ceux trouvés avec des inhibiteurs des voies : i) le SN de F. prausnitzii est capable de bloquer la phosphorylation de p-38 et JNK (figures 4A et 4B) et ii) amplifie la phosphorylation d'ERK (figure 4C). Le manque d'effet du TNF-a sur l'activation de p-38 peut expliquer pourquoi cette voie n'est pas présente dans l'analyse transcriptomique puisqu'elle semble moins importante dans les cellules HT-29 activées avec du TNF-a. En outre, les formes totales et phosphorylées d'h(f3 ont été également 25 déterminées. Le SN de F. prausnitzii semble également capable de bloquer la phosphorylation d'h(f3 (figure 4D). Toutefois, l'effet élevé du milieu de culture LYBHI sur cette voie rend difficile de statuer quant à cette protéine. De façon similaire, cet effet du LYBHI évite l'éviction de cette voie dans l'analyse transcriptomique. Analyse de l'activation de l'AP-1 et du NF-K13. Puisqu'il existe de multiples régulateurs de l'expression 30 du gène de l'IL-8, il a été étudié différent facteurs nucléaires au moyen d'une transfection transitoire de cellules HT-29 et HEK-293 avec des plasmides rapporteurs pour à la fois le NF-43 et l'AP-1 (figure 5). En premier, un plasmide rapporteur pour le gène de l'IL-8 a été utilisé comme témoin (figure 5). Ce plasmide contient des sites de liaison à la fois pour l'AP-1 et le 43 (32). Une co-incubation avec du SN de F. prausnitzii mène à une diminution de l'activation de l'IL-8 dans à la fois des cellules HT-29 et HEK- 3042202 21 293 stimulées avec du TNF-a (figure 5). Le LYBHI montre également un effet inhibiteur sur les cellules HT-29 (figure 5A). En ce qui concerne l'AP-1, le SN de F. prausnitzii a été également capable de diminuer son activation dans les deux modèles cellulaires. Bien qu'un effet inhibiteur du SN de F. prausnitzii ait été également observé dans le système rapporteur du NFK[3, l'effet du milieu LYBHI a été notoire 5 (figure 5). Ce résultat met en avant un effet spécifique possible du SN sur la voie de l'AP-1. Le site de liaison de l'AP-1 est localisé dans des régions promoteurs de nombreuses cytokines y compris l'IL-8 et son activité est affectée par la phosphorylation par les MAPK (ERK, JNK et p38). En fait, l'activation coordonnée des voies des MAPK NFK[3, JNK et p38 a été décrite comme induisant fortement la production d'IL-8, bien que la voie de p-38 ne soit pas essentielle, elle contribue à la 10 stabilisation des ARNm de l'IL-8. Analyse de la régulation positive de Dact3 sur la production d'IL-8. Les inventeurs ont observé dans l'analyse transcriptomique (et confirmé par qPCR) une régulation positive de Dact3 et une régulation négative globale de la voie de JNK par le SN de F. prausnitzii. Ils ont ainsi supposé que le SN de F. prausnitzii agit principalement sur la voie de JNK, par l'intermédiaire de la régulation de Dact3. Cette 15 hypothèse a été validée par l'analyse des protéines. A présent, ils ont cherché à étudier la régulation directe de Dact3 sur la production d'IL-8 par des cellules HT-29 stimulées avec du TNF-a. Ils ont utilisé la technologie des ARNsi pour réguler négativement l'expression de Dact3 sur des cellules HT-29. L'analyse par RT-qPCR confirme que l'ARNsi non ciblant (NT) n'a aucun effet sur la régulation positive de Dact3 par le SN de F. prausnitzii SN (figure 6A). De façon surprenante, l'ARNsi ciblant Dact3 réduit 20 significativement les taux d'ARNm de Dact3 (figure 6A). Le traitement des cellules HT-29 avec l'ARNsi NT n'a aucun impact sur la production d'IL-8 : le SN de F. prausnitzii SN conserve ses effets bloquants de l'IL-8 dans des cellules HT-29 stimulées avec du TNF-a (figure 6B). Après le traitement des cellules HT-29 avec l'ARNsi de Dact3, le SN de F. prausnitzii ne parvient pas à bloquer la production d'IL-8 (figure 6B). Globalement, ces résultats démontrent clairement que l'inhibition de l'IL-8 par le SN de F. 25 prausnitzii est médiée par la régulation positive de Dact3. Conclusions et perspectives Le SN de F. prausnitzii bloque la production d'IL-8 par des cellules HT-29 stimulées avec du TNF-a. Dans ce contexte, la présente analyse transcriptomique a révélé plusieurs gènes régulés et impliqués dans les voies inflammatoires, et plus particulièrement dans la voie de signalisation Wnt/JNK. Les inventeurs 30 ont ainsi concentré leurs études sur 3 groupes différents de MAPK : ERK, p38 et JNK. Dans ce contexte, le SN de F. prausnitzii semble inhiber spécifiquement la voie de JNK par l'intermédiaire de la régulation positive de Dact3, ce qui mènera à une régulation négative globale des gènes impliqués dans la voie de JNK. Cette approche transcriptomique a été complétée par une approche d'analyse des protéines. Par exemple, l'inhibition de JNK par le SN de F. prausnitzii a été confirmée i) par des dosages des formes 3042202 22 phosphorylées et non phosphorylées des protéines de la voie des MAPK et de la voie du NF-kB et ii) par quantification de l'IL-8 en utilisant des inhibiteurs des voies des MAPK et du NF-kB. Matériaux et procédés 5 Souches bactériennes, culture cellulaire et conditions de croissance. La souche de Faecalibacterium prausnitzii A2-165 (collection DSMZ, Braunschweig, Allemagne) (DSM N°17677) a été cultivée dans du milieu LYBHI (milieu d'infusion cerveau-coeur avec 0,5 % d'extrait de levure) (Difco, Detroit, Etats-Unis) complémenté avec 1 mg/ml de cellobiose (Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Buchs, Suisse), 1 mg/ml de maltose (Sigma-Aldrich), et 0,5 mg/ml de cystéine (Sigma-Aldrich) à 37 °C dans une chambre 10 anaérobie. Le surnageant (SN) de F. prausnitzii a été récupéré par centrifugation, filtré avec des filtres de 0,45 um (VWR, Haasrode, Belgique) et stocké à -80 °C jusqu'à utilisation future. Lignées cellulaires HT-29/HEK-293 et co-incubations. Les lignées cellulaires du carcinome du côlon humain HT-29 (ATCC HTB-38) et du rein embryonnaire humain HEK-293 (CRL-1573) (LGC-Standards) ont été cultivées dans du milieu essentiel minimal de Eagle modifié par Dulbecco avec 4,5 g/I de glucose 15 (DMEM) (Sigma-Aldrich), complémenté avec 10 % (p/v) de sérum de veau foetal inactivé à la chaleur (FCS) (GibcoBRL, Eragny, France), 4 mM de L-glutamine et avec de la pénicilline G/streptomycine (5000 Ul/ml, 5000 µg/m1) (Sigma-Aldrich). Les cultures HEK-293 ont été également complémentées avec 1 mM de pyruvate de sodium (GibcoBRL). Les cultures ont été incubées dans des flacons de culture tissulaire de 25 cm2 (Nunc, Roskilde, Danemark) à 37 (2C dans une atmosphère de 10 % (v/v) de CO2 20 jusqu'à la confluence. Les cellules HT-29 ou HEK-293 ont été ensemencées dans des plaques de culture de 24 puits (Nunc) dans du DMEM complémenté avec 10 % de FCS inactivé à la chaleur-1 % de glutamine à 37 °C dans une atmosphère de 10 % de CO2-air. Les cultures HEK-293 ont été également complémentées avec 1 mM de pyruvate de sodium. Le milieu a été changé tous les jours. Les expériences ont été initiées au 25 jour 7 après l'ensemencement, lorsque les cellules étaient à la confluence (approximativement 1,83 X 106 cellules/puits). Vingt-quatre h avant la co-culture avec le SN de F. prausnitzii (jour 6), le milieu de culture a été changé pour un milieu avec 5 % de FCS inactivé à la chaleur et 1 % de glutamine (et 1 mM de pyruvate de sodium pour les cellules HEK-293). Le jour de la co-culture, soit du SN soit du milieu LYBHI a été ajouté à une concentration de 10 % (v/v) dans un volume total de 500111. Les cellules 30 ont été stimulées simultanément avec du TNF-a ou de l'IL-113 humain(e) recombinant(e) (5 ng/ml ; Peprotech, Ni, Etats-Unis) pendant 6 h à 37 °C dans 10 % de CO2. Tous les échantillons ont été analysés en triple. 3042202 23 Validation de l'inhibition de la production d'IL-8 par le SN de F. prausnitzii. Les surnageants de cellules HT-29 témoins non stimulées et de cellules HT-29 stimulées avec du TNF-a utilisés pour l'analyse transcriptomique ont été d'abord testés pour la validation des protéines par des tests ELISA. Les surnageants pour les tests ELISA et les cellules HT-29 pour les extractions d'ARN et l'analyse 5 transcriptomique ont été recueillis en même temps des mêmes plaques de culture. Les concentrations de l'IL-8 ont été déterminées en utilisant un kit ELISA disponible dans le commerce (Biolegend, San Diego, CA), selon les instructions du fabricant. Les résultats ont été rapportés en valeurs moyennes des puits ELISA en double. Le TNF-a (5 ng/ml) ou l'IL-8 (50 ng/ml) (Biolegend) a été incubé dans du PBS, du LYBHI ou du SN de F. prausnitzii durant 6 h pour estimer leur stabilité dans ces milieux. Après cette 10 période, les concentrations de TNF-a ou d'IL-8 ont été déterminées par des tests ELISA en suivant les instructions du fabricant (Biolegend). Isolement de l'ARN, contrôle de la qualité et de la quantité. Après co-incubation avec du LYBHI ou du SN de F. prausnitzii, les cellules HT-29 ont été recueillies et l'ARN a été purifié pour l'hybridation sur des micropuces d'ADN. L'ARN total a été extrait des cellules en utilisant le kit RNeasy Mini (Qiagen, 15 Etats-Unis) et purifiés par digestion sur colonne de l'ADN avec de la DNase I comme il est recommandé par le fabricant pour éliminer l'ADN génomique résiduel. La concentration de l'ARN a été déterminée par quantification Nanodrop (Thermo Fisher Scientific Inc., France). La qualité de l'ARN a été vérifiée sur un bioanalyseur Agilent 2100 Expert (Agilent Technologies, France). Seuls les ARN avec un RIN supérieur à 8 ont été utilisés pour les expériences sur les micropuces et de qRT-PCR. 20 Préparation des micropuces. Une conception de référence avec complet échange de colorants comprenant deux répliquats biologiques a été utilisée pour comparer des cellules HT-29 soumises à différents traitements pour un total de 6 micropuces du génome humain entier Agilent 4x44K (Agilent Technologies, France). Pour le marquage, 100 ng d'ARN total ont été transcrits en inverse et ensuite colorés avec Cy3 ou Cy5 25 en utilisant le kit Two Color Low Input Quick Amp Gene Expression Labeling (Agilent Technologies, France) selon les instructions du fabricant. Les ARNc marqués par un colorant Cy ont été ensuite purifiés en utilisant le kit RNeasy Mini (Qiagen, France). La quantité d'ARNc a été déterminée par Nanodrop et la qualité a été vérifiée sur un bioanalyseur Agilent 2100 Expert. Le rendement et l'activité spécifique ont été déterminés en se rapportant aux instructions du fabricant. 825 ng d'ARNc marqué 30 au Cy3 issu d'un traitement spécifique ont été mélangés avec la même quantité d'ARNc marqué au Cy5 issu d'un autre traitement. Les ARNc ont été hybridés à la micropuce du génome humain entier Agilent 4x44K (Agilent Technologies, France) à 65 °C, pendant 17 heures dans un incubateur rotatif. Après l'hybridation, les lames ont été lavées et ensuite scannées en utilisant un scanner Agilent G2565CA 3042202 24 (Agilent Technologies, France). Les données brutes ont été ensuite extraites en utilisant le logiciel Feature Extraction version 10.5.1.1 (Agilent Technologies, France). Analyse des micropuces. Le logiciel R 3.0.2 et le progiciel LIM MA (18) ont été utilisés pour analyser les données des micropuces (normalisation intra-puce par le procédé au loess suivi d'une normalisation 5 inter-puces par le procédé des quantiles) et pour générer des listes de gènes exprimés de façon différentielle. Les listes de gènes ont été créées par filtration sur la valeur p ajustée en utilisant un seuil de 0,05 avec le taux de fausse découverte de Benjamini et Hochberg (19) comme correction d'analyse multiple, suivie d'une filtration sur le taux d'expression ( I rapport I > 1,5 en tant que valeur seuil). L'ensemble complet des données est disponible par l'intermédiaire du Gene Expression Omnibus. Les 10 listes de gènes sélectionnés (données de rapport log et de valeur p) ont été chargées dans Ingenuity Pathway Analysis (IPA) et MeV (Multiarray Experiment Viewer) (20) pour analyser la voie et générer une présentation des données. PCR quantitative en temps réel (qRT-PCR). Trois lig d'ARN total traité à la DNase I ont été transcrits en inverse en utilisant des amorces Oligo(dT) et 1 pl de transcriptase inverse SuperScript III (Invitrogen, 15 France). Les ADNc ont été quantifiés en utilisant un Nanodrop (Thermo Fisher Scientific Inc., France) et dilués jusqu'à une concentration de travail de 100 ng/µl. Les réactions ont été effectuées dans un volume final de 25 pl avec 500 ng d'ADNc, 10 pM des amorces et le mélange maître SYBR Green PCR (Applied Biosystems, Etats-Unis), en utilisant un Mastercycler Realplex (Eppendorf, France). Les amorces ont été choisies (tableau 1) soit avec le logiciel Primer 3, soit manuellement soit achetées 20 chez Qiagen (France) pour les amorces pour Dact3 (tests de qPCR RT2). Le gène GAPDH a été choisi en tant que gène de référence interne et le procédé 2' a été utilisé pour calculer le rapport dans l'expression des gènes. Tableau 1 Gène Amorce Sens (5'-3') Amorce antisens (5'-3') Dact3 RT2 qPCR Primer Assay (Qiagen, France) NFKB1 GCAGATGGCCCATACCTTCA (SEQ ID No 5) TGCTGGTCCCACATAGTTGC (SEQ ID No 6) JNK1 TCTGGTATGATCCTTCTGAAGCA (SEQ ID No 7) TCCTCCAAGTCCATAACTTCCTT (SEQ ID No 8) c-Jun GTGCCGAAAAAGGAAGCTGG (SEQ ID No 9) CTGCGTTAGCATGAGTTGGC (SEQ ID No 10) Jung GTCACCGAGGAGCAGGAGG (SEQ ID No 11) TCTTGTGCAGATCGTCCAGG (SEQ ID No 12) 3042202 25 c-Fos TGTCTGTGGCTTCCCTTGATCTGA (SEQ ID No 13) TGGATGATGCTGGGAACAGGAAGT (SEQ ID No 14) IL» CAGAGAGTCCTGTGCTGAAT (SEQ ID No 15) GTAGGAGAGGTCAGAGAGGC (SEQ ID No 16) IL -8 GGTGCAGTTTTGCCAAGGAG (SEQ ID No 17) TTCCTTGGGGTCCAGACAGA (SEQ ID No 18) Test d'inhibition. Les co-incubations des cellules HT-29 ou HEK ont été effectuées comme il a été décrit auparavant en présence de différents inhibiteurs : MG-132 (inhibiteur du NF-1((3) (10 p.M) (Santa Cruz), SP600125 (inhibiteur de JNK) (0,5 p.M) (Sigma-Aldrich), PD 169316 (inhibiteur de p-38) (1 p.M) (Sigma- 5 Aldrich) et chlorhydrate de 3-(2-aminoéthyl)-5-((4-éthoxyphényl)méthylène)-2,4-thiazolidinedione (inhibiteur d'ERK) (10 p.M) (Sigma-Aldrich). Antérieurement, les cellules HT-29 ou HEK ont été prétraitées pendant 1 h avec les différents inhibiteurs à la même concentration que dans la coincubation. Après la co-incubation, les surnageants des cellules ont été recueillis et stockés à -80 °C jusqu'à une future analyse des concentrations d'IL-8 par un test ELISA (Biolegend). Les protéines totales 10 ont été déterminées par le test Bradford Reagent (Sigma-Aldrich). Les expériences ont été réalisées au moins en triple. Les résultats sont exprimés en IL-8/protéines (pg/mg). Transfection transitoire des cellules HT-29 et HEK-293. Des cellules HT-29 et HEK-293 ont été ensemencés dans des plaques de culture de 96 puits (Nunc) (0,1 X 105 cellules/puits) et transfectées avec 0,5 ou 1 p.g des plasmides pxp-546 (plasmide rapporteur de l'IL-8) ou pGL2-AP1 (plasmide 15 rapporteur de l'API) pour les cellules HT-29 et HEK-293 respectivement ou 0,5 p.g de plasmide rapporteur du NE-KB avec le réactif TransFast Transfection (Promega) en suivant les instructions du fabricant (rapport ADN/produit, 1/1). Pour effectuer une correction pour l'efficacité de transfection, les cellules ont été transfectées en même temps avec 0,005 ng de plasmide rapporteur de la luciférase de Renilla. Après la transfection, les cellules ont été incubées pendant 48 h avant d'être soumises à 20 une co-incubation pendant une nuit avec 10 % de SN, de LYBHI ou de PBS dans du DMEM avec 5 % de FCS inactivé à la chaleur et 1 % de glutamine. Les luciférases de la luciole et de Renilla ont été déterminées après les co-incubations par le Dual-Glo Luciferase Assay System (Promega) selon les instructions du fabricant. Toutes les expériences ont été effectuées au moins en triple. Les résultats sont exprimés en rapport des activités luciférases de luciole/Renilla. 25 Détection des protéines totales et phosphorylées. Les formes totales et phosphorylées des ERK1/2, JNK, ixf3 et p-38 ont été détectées après co-incubation par le test ELISA InstantOne (eBioscience) en suivant les instructions du fabricant. Extinstion de Dact3 dans des cellules HT-29. Des cellules HT-29 ont été cultivées comme il a été décrit auparavant. Les réactifs ARNsi utilisés provenaient de Dharmacon (une partie de GE Healthcare, Etats- 3042202 26 Unis). Les réactifs siGENOME® Human Dact3 siRNA - SMARTpool®, Dact3 siRNA D-015690-01, D-015690-02, D-015690-03, D-015690-17, l'ARNsi témoin (ARNsi non ciblant D001136-01-05 et cyclophiline B D-001210-02-05), le réactif de transfection Dharmafect 1 et le tampon ARNsi 5X ont été achetés. Ces ARNsi ont été transfectés dans des cellules .11 avec le réactif de transfection Dharmafect 5 1 en suivant les instructions du fabricant avec certaines modifications. En bref, au total, 1 x 105 cellules ont été déposées dans des plaques de 12 puits et transfectées en utilisant 30 nmol d'ARNsi et 2 pi de réactif de transfection Dharmafect 1 par puits dans du DM EM + 5 % de SVF et 1 % de L-Glutamine. Après 24 heures d'incubation, le milieu a été prélevé et 1 ml de milieu frais a été ajouté aux cellules. Après 24 heures d'incubation, la co-culture a été effectuée, soit du milieu témoin, soit du SN de 10 F. prausnitzii soit du milieu LYBHI a été ajouté à une concentration de 10 % (v/v) dans un volume total de 1 ml. Les cellules ont été stimulées simultanément avec du TNF-a humain recombinant (5 ng/ml ; Peprotech, Ni, Etats-Unis) pendant 6 h à 37 °C dans 10 % de CO2. Après 6 h, les surnageants de la coculture ont été testés par un test ELISA pour la production d'IL-8 et l'ARN des cellules a été extrait pour l'analyse de l'expression de Dact3. Tous les échantillons ont été effectués en triple. 15 Analyse statistique. L'analyse statistique autre que celle pour l'analyse transcriptomique a été complétée en utilisant le logiciel GraphPad (GraphPad Sofware, La Jolla, CA, Etats-Unis). Une valeur p inférieure à 0,05 a été considérée comme significative. REVENDICATIONS1- Méthode in vitro ou ex vivo de criblage permettant l'identification de molécules présentant un effet anti-inflammatoire comprenant la mise en contact d'une molécule candidate avec la protéine DACT3 (Dapper homolog 3), une cellule exprimant DACT3 ou une cellule exprimant un gène rapporteur sous contrôle du promoteur de DACT3, la mesure de l'activité de DACT3 ou de l'expression de DACT3 ou du gène rapporteur, et la sélection de la molécule candidate comme molécule présentant un effet anti-inflammatoire si l'activité ou l'expression de DACT3 ou du gène rapporteur est augmentée en comparaison à l'activité ou l'expression de DACT3 en absence de la molécule candidate. 2- Méthode selon la revendication 1, dans laquelle la cellule est une cellule intestinale, de préférence une cellule épithéliale intestinale. 3- Méthode selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l'expression de DACT3 est déterminée par la quantité de protéine DACT3. 4- Méthode selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l'expression de DACT3 est déterminée par la quantité d'ARNm codant pour DACT3. 5- Méthode selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l'activité de DACT3 est mesurée par l'activité de liaison de DACT3 à Dsh (cc dishevelled »), de préférence par la quantité de complexe DACT3/Dsh (« dishevelled »). 6- Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle la méthode comprend en outre la détermination de la capacité de la molécule candidate ou sélectionnée à diminuer la production d'interleukine 8 par la cellule, de préférence stimulée par le TNF-a. 7- Utilisation in vitro ou ex vivo de DACT3 pour sélectionner des molécules présentant un effet anti-inflammatoire, en particulier un effet anti-inflammatoire utile dans le traitement des maladies inflammatoires chroniques de l'intestin, les molécules augmentant l'activité ou l'expression de DACT3 étant sélectionnées comme molécules présentant un effet anti-inflammatoire. 8- Méthode de diagnostic de maladies inflammatoires chroniques de l'intestin comprenant la détermination de l'expression ou de l'activité de DACT3 dans un échantillon d'un sujet, une expression ou activité diminuée étant indicative d'une maladie inflammatoire chronique de l'intestin ou d'une susceptibilité à développer une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. 3042202 9- Protéine DACT3, un fragment de celle-ci ou acide nucléique codant pour DACT3 ou un fragment de celle-ci pour son utilisation pour le traitement ou la prévention d'une maladie inflammatoire. 10- Protéine DACT3, un fragment de celle-ci ou acide nucléique codant pour DACT3 ou un fragment de celle-ci pour son utilisation selon la revendication 9, pour le traitement ou la prévention d'une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. 11- Protéine DACT3, un fragment de celle-ci ou acide nucléique codant pour DACT3 ou un fragment de celle-ci pour son utilisation selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce que la protéine DACT3, un fragment de celle-ci ou l'acide nucléique codant pour DACT3 ou un fragment de celle-ci est délivré aux cellules intestinales par un micro-organisme probiotique, de préférence une bactérie probiotique, notamment une bactérie sélectionnée parmi Lactococcus lactis, Lactobacillus casei et Lactobadllus plantarum. 12- Bactérie probiotique recombinante capable d'exprimer la protéine DACT3 humaine ou un fragment de celle-ci ou comprenant une construction nucléique permettant d'exprimer la protéine DACT3 humaine ou un fragment de celle-ci. 13- Bactérie probiotique recombinante selon la revendication 12 pour son utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire. 14- Bactérie probiotique recombinante selon la revendication 12 pour son utilisation dans le traitement ou la prévention d'une maladie inflammatoire chronique de l'intestin.