Brevet FR3048505A1 — publié le 20170908

Comptage cellules photographies La présente invention concerne un procédé de préparation à l'analyse d'une suspension cellulaire du type comprenant au moins les étapes successives suivantes : (a) prévoir au moins un flacon comprenant une suspension cellulaire à analyser ; (b) prévoir au moins un contenant d'analyse ; (c) prélever un échantillon de la suspension cellulaire au moyen d'un dispositif de pipetage-distribution ; (d) déposer cet échantillon dans le contenant d'analyse. L'invention concerne également un appareil de préparation à l'analyse d'une suspension cellulaire apte à mettre en oeuvre un tel procédé. Le procédé et l'appareil de préparation selon l'invention sont par exemple destinés à préparer une lame d'analyse cellulaire dans le cadre d'un dépistage ou d'un diagnostic médical à partir de prélèvements cytologiques, tels que des frottis du col de l'utérus ou autres. Les cellules prélevées sont disposées dans un flacon de prélèvement où les cellules sont mises en solution. Une partie de la solution cellulaire est ensuite prélevée et disposée dans un contenant d'analyse en vue d'une analyse diagnostique du prélèvement. Le document WO-2011/117523 décrit par exemple un tel appareil de préparation. Cependant, le contenant d'analyse obtenu ne permet pas toujours d'obtenir un diagnostic pertinent et sûr, par exemple parce que l'échantillon prélevé ne contient pas suffisamment de cellules ou parce que les cellules intéressantes en vue d'un diagnostic ne sont pas visibles dans cet échantillon du fait d'une trop grande densité des cellules sans intérêt. Le contenant d'analyse obtenu est alors difficilement utilisable. Dans certaines applications comme le frottis de dépistage du cancer du col de l'utérus, des étalements cellulaires sont réalisés sur des lames d'analyse et chaque étalement doit contenir un nombre de cellules satisfaisant la classification de Bethesda, qui est une classification pour standardiser le résultat diagnostic des frottis. Chaque étalement doit ainsi comprendre plus de 5000 cellules. Dans le document FR-2 922 019, est divulgué un procédé de mesure de la densité cellulaire qui est réalisé dans le contenant d'analyse situé au-dessus de la lame d'analyse. La densité mesurée, par exemple par diffraction de lumière, est par la suite comparée par rapport à une densité seuil correspondant à la densité cellulaire minimale de l'étalement sur la lame d'analyse nécessaire pour réaliser un diagnostic pertinent. Ainsi, si la densité mesurée est inférieure à la densité seuil, le procédé comprend une étape additionnelle d'ajustement de la densité cellulaire de l'étalement par l'ajout dans la 3048505 2 chambre de décantation d'une quantité plus importante de suspension cellulaire prélevée dans le flacon que la quantité standard afin de réaliser une deuxième lame d'étalement représentative. Toutefois, ce type de mesure dans la chambre de décantation présente 5 l'inconvénient d'être réalisé après un premier dépôt de cellules. Effectivement, en cas d'insuffisance de cellules sur la lame d'analyse, il est nécessaire de prélever à nouveau de la suspension cellulaire pour réaliser un deuxième étalement. Il s'agit donc de réaliser une étape supplémentaire complète de dépôt de cellules sur lame. L'un des buts de l'invention est de pallier ces inconvénients en proposant un 10 procédé et un automate de préparation permettant d'ajuster la densité cellulaire et de réduire le temps de préparation de contenants d'analyse à une seule étape standardisée, tout en garantissant une qualité de ces contenants permettant l'obtention d'un diagnostic fiable. A cet effet, l'invention a pour objet le procédé d'analyse ou de contrôle pré- 15 analytique de préparation d'une suspension cellulaire du type précité, dans lequel, avant l'étape de prélèvement, le procédé comprend au moins une première étape de mesure de la densité cellulaire de la suspension cellulaire contenue dans le flacon à un premier instant, et au moins une deuxième étape de mesure de la densité cellulaire de la suspension cellulaire contenue dans le flacon, à un deuxième instant différent du premier 20 instant, ainsi qu'une étape de comparaison des deux étapes de mesure. Ce procédé permet de garantir la qualité des contenants en donnant l'information pré-analytique de la suspension cellulaire du prélèvement fait par le praticien, c'est-à-dire dans le flacon, au moyen de plusieurs mesures simples à mettre en oeuvre. En analysant l'échantillon prélevé, par exemple pour déterminer s'il contient suffisamment de cellules, 25 avant de réaliser le contenant d'analyse, on garantit que l'échantillon utilisé pour réaliser ce contenant est bien pertinent. Cette pré-analyse est réalisée avant l'étape de pipetagedistribution ce qui évite de réaliser un deuxième étalement d'analyse si la pré-analyse n'est pas satisfaisante. On évite ainsi la réalisation d'une seconde lame par le dispositif de pipetage-distribution et on garantit la réalisation de contenants d'analyse aptes à être 30 analysés ultérieurement de façon fiable dans une étape pré-analytique et non post- analytique. Suivant d'autres aspects de l'invention, le procédé comporte l'une ou plusieurs des caractéristiques suivantes, prise(s) isolément ou suivant toutes les combinaisons techniquement possibles : 35 - la densité cellulaire est mesurée en émettant de la lumière selon une première direction vers le flacon comprenant la suspension cellulaire à analyser et en 3048505 3 mesurant, selon une seconde direction différente de la première direction, l'atténuation ou la diffusion de la lumière ayant traversé la suspension cellulaire à analyser ; - la mesure, selon la seconde direction, de l'atténuation ou la diffusion de la 5 lumière ayant traversé la suspension cellulaire à analyser est réalisée par des moyens de réception d'un signal agencés sous le flacon comprenant la suspension cellulaire à analyser ; - la mesure de la densité comprend une prise d'images du signal lumineux ayant traversé la suspension cellulaire à analyser ; 10 - il comprend au moins une étape de remise en suspension du culot cellulaire grâce au dispositif de pipetage-distribution avant l'étape de prélèvement d'un échantillon, la première étape de mesure pré-analytique étant réalisée avant ladite étape de rupture et la deuxième étape de mesure pré-analytique étant réalisée après ladite étape de rupture ; 15 - il comprend une étape de décantation des cellules dans la suspension après l'étape de remise en suspension du culot cellulaire, le procédé comprenant en outre une troisième étape pré-analytique de mesure de la densité cellulaire de l'échantillon à prélever, ladite troisième étape de mesure étant effectuée après l'étape de décantation et avant l'étape de prélèvement, ainsi qu'une étape de 20 comparaison de la mesure de la troisième étape pré-analytique avec au moins la mesure de la première étape pré-analytique ou la mesure de la deuxième étape pré-analytique ; - il comprend en outre une étape de mesure post-analytique, c'est-à-dire après que la solution issue du prélèvement a été déposée dans le contenant d'analyse, 25 ainsi qu'une étape de comparaison de la mesure de l'étape post-analytique avec au moins l'une des trois mesures pré-analytiques. L'invention a également pour objet un appareil de préparation à l'analyse cellulaire du type comprenant : - au moins un flacon contenant une suspension cellulaire à analyser ; 30 - au moins un contenant d'analyse ; - au moins un plateau de réception du flacon et du contenant d'analyse ; - au moins un dispositif de pipetage-distribution apte à prélever un échantillon de la suspension cellulaire à analyser et à le verser dans le contenant d'analyse ; l'automate comprenant un dispositif de pré-analyse, ledit dispositif étant apte à 35 effectuer au moins une étape de mesure de la densité cellulaire de la suspension 3048505 4 cellulaire contenue dans le flacon et des moyens de comparaison des mesures obtenues lors desdites étapes de mesure. Selon d'autres caractéristiques du dispositif : - le dispositif de pré-analyse comprend des moyens d'émission d'un signal selon 5 une première direction au travers du flacon comprenant la suspension cellulaire à analyser, des moyens de réception, selon une seconde direction différente de la première direction, du signal modifié ayant traversé ledit flacon, et des moyens d'analyse dudit signal ; - le dispositif de pré-analyse comprend en outre une boîte diffusante propre à 10 recevoir le flacon comprenant la suspension cellulaire à analyser, et en ce que les moyens d'émission comprennent une source de lumière pour éclairer le flacon, ladite source de lumière étant agencée au sein de la boîte diffusante ; - il comprend un dispositif post analyse, ledit dispositif étant apte à effectuer une mesure de la densité cellulaire de la suspension cellulaire contenue dans le contenant 15 d'analyse et des moyens de comparaison avec les mesures obtenues lors des étapes de mesure pré-analytique. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée qui va suivre, donnée uniquement à titre d'exemple, faite en référence aux dessins annexés sur lesquels : 20 - la figure 1 est une vue en coupe schématique d'un automate de prélèvement et d'analyse comprenant un appareil de préparation à l'analyse selon l'invention, et - la figure 2 est une vue en coupe d'un flacon au cours d'une étape de prélèvement du procédé de préparation à l'analyse d'une suspension cellulaire selon l'invention. 25 Sur la Fig. 1, on a représenté un automate 1 de préparation et d'analyse d'au moins un flacon 4 contenant une suspension cellulaire 5 à analyser (Fig. 2), telle que par exemple une suspension cytologique fixée. Les suspensions cellulaires 5 sont obtenues par une mise en suspension de prélèvements cellulaires obtenus par exemple au cours d'une opération de dépistage par frottis du cancer du col de l'utérus ou par d'autres types 30 de prélèvements. La façon dont le prélèvement est mis en suspension et dont les cellules sont préservées est connue et ne sera pas décrite en détail ici. L'automate 1 comprend pour l'essentiel un plateau de réception 6 des flacons 4 et des contenants d'analyse 10 disposés au-dessus de lames d'analyse sur lesquelles des étalements cellulaires en couche mince doivent être réalisés à partir des suspensions 35 cellulaires 5, par l'intermédiaire d'un dispositif de pipetage-distribution 12, apte à prélever des échantillons des suspensions cellulaires 5 et à déposer ces échantillons dans les 3048505 5 contenants d'analyse 10, en passant éventuellement par des étapes de traitement intermédiaires. Dans la mesure où l'automate 1 et son fonctionnement ont été décrits dans le document WO-2011/117523, l'automate ne sera pas décrit plus en détail ici. L'homme du 5 métier peut se référer à ce document pour en connaître toutes les autres caractéristiques, détails et variantes de réalisation. Il est bien entendu que l'automate peut être adapté pour réaliser d'autres types de contenants d'analyse que des lames d'analyse. Par exemple, les contenants d'analyse de ce système de préparation et d'analyse peuvent comporter, selon le mode d'analyse choisi par le praticien, des lames d'étalement, des 10 tubes de prélèvement ou d'aliquotage et des puits d'analyse ou de décantation. Le dispositif de pipetage-distribution 12, ou encore dispositif de prélèvement, s'étend au-dessus du plateau de réception 6 et est apte à prélever, déplacer et à verser ou évacuer divers produits liquides, notamment des échantillons des suspensions cellulaires 5. Pour ce faire, le dispositif de pipetage-distribution 12 comprend une pluralité 15 d'aiguilles 14, ou pipettes, tubulaires et creuses, déplaçables entre les différents postes de l'automate 1 par un bras robotisé 16 et mobile verticalement pour permettre d'abaisser et de relever les aiguilles 14. Chaque aiguille 14 s'étend entre une extrémité amont 18 et une extrémité avale 20 en communication fluidique l'une avec l'autre. 20 Les opérations de prélèvement d'échantillons d'une suspension cellulaire 5 se font par aspiration par l'extrémité avale 20 de l'aiguille 14 et les opérations de versement ou d'évacuation se font par refoulement, ou dispense, par cette extrémité avale 20. Pour ce faire, l'extrémité amont 18 de l'aiguille est en communication fluidique avec des moyens d'aspiration et de refoulement 22 disposés en amont de l'aiguille 14 et agencés pour 25 permettre une aspiration de produits et le refoulement de ces produits par l'extrémité avale 20 de l'aiguille. Pour ce faire, les moyens d'aspiration et de refoulement 22 sont reliés à l'extrémité amont 18 de l'aiguille 14 par une tubulure 24, par exemple une tubulure souple permettant le déplacement de l'aiguille 14 par rapport aux moyens d'aspiration et de refoulement 22, comme représenté sur la Fig. 2. 30 Les moyens d'aspiration et de refoulement 22 sont par exemple formés par une pompe d'aspiration-refoulement classique pour ce genre d'application. Alternativement, les moyens d'aspiration et de refoulement 22 pourraient être formés par un système de piston et/ou de valves, ou autre. Les moyens d'aspiration et de refoulement 22 permettent de mettre en oeuvre les étapes impliquant le dispositif de pipetage-distribution 12 dans le 35 fonctionnement de l'automate 1. 3048505 6 Le dispositif de pipetage-distribution 12 est couplé à des moyens de pré-analyse 26 de la suspension cellulaire 5, comme représentés sur la Fig. 2. Cette pré-analyse consiste en une mesure de la densité cellulaire de l'échantillon. Les moyens de pré-analyse 26 comprennent au moins des moyens d'émission 28 5 d'un signal F, par exemple une source de lumière, des moyens de réception 30 du signal F ayant traversé le flacon 4 et des moyens d'analyse 32 du signal reçu. Les moyens d'émission 28 et les moyens de réception 30 sont orientés de telle façon qu'un signal F émis par les moyens d'émission 28 traverse une fois le flacon 4 et son contenu et est intercepté par les moyens de réception 30. 10 Selon le mode de réalisation représenté sur la figure 2, les moyens d'émission 28 et les moyens de réception 30 sont disposés d'un même côté du flacon 4 et un miroir 34 est disposé du côté opposé du flacon 4. Les moyens de réception 30 sont par exemple disposés sous le flacon 4. Les moyens d'émission 28 et le miroir 34 sont orientés de telle façon que le signal émis traverse le flacon 4 et son contenu, est réfléchi par le miroir 34 15 vers les moyens de réception 30 et est reçu par les moyens de réception 30 sans retraverser le flacon 4, comme représenté par le trajet optique de la figure 2. En alternative, les moyens d'émission 28 et les moyens de réception 30 pourraient être disposés de part et d'autre du flacon. Cette alternative impose cependant des contraintes d'agencement et d'encombrement plus importantes que l'agencement décrit 20 en référence à la figure 2. Pour la mesure d'une densité cellulaire, les moyens d'émission 28 sont par exemple une source de lumière, telle qu'une ou plusieurs diodes électroluminescentes, laser (laser accordable, source de lumière polychromatique, etc.), agencée pour émettre un signal lumineux au travers du flacon. Les moyens de réception 30 sont par exemple un 25 capteur du signal lumineux F, tel qu'une photodiode (APD, barrette CCD, caméra CCD CMOS ou spectromètre), afin d'acquérir une image du signal obtenu. Les moyens d'analyse 32 permettent par exemple de mesurer l'absorption du signal lumineux reçu ou la diffraction de la lumière par la suspension cellulaire 5, à partir de l'image obtenue du signal ayant traversé le contenu du flacon 4 et de la comparaison 30 de cette image avec les caractéristiques du signal émis. De telles méthodes de mesure de la densité cellulaire, par mesure de l'absorption de la lumière ou de la diffraction, sont connues et ont été décrites plus en détails dans le document FR-2 922 019. Afin de mesurer la densité cellulaire de la suspension cellulaire 5, le signal F est mesuré par les moyens de mesure pour au moins les deux premiers des trois cas 35 successifs suivants : 3048505 7 (a) la suspension cellulaire a suffisamment décanté pour former un culot cellulaire au fond du flacon 4 ; (b) le culot cellulaire au fond du flacon 4 est rompu par pipetage-distribution, entraînant une remise en suspension des cellules ; 5 (c) la suspension cellulaire est à nouveau décantée. En effet, après l'étape de prélèvement de cellules par frottis, les cellules sont mises en solution dans le flacon 4. Elles sont laissées à décanter, et une prise d'image est alors effectuée par les moyens de réception 30 (cas (a)). Une étape de pipetage-distribution est ensuite réalisée pour remettre en suspension du culot cellulaire au fond du flacon, et une 10 prise d'image est effectuée juste à ce moment-là par les moyens de réception 30 (cas (b)). Enfin, après une nouvelle étape de décantation, une image est prise par les moyens de réception 30 (cas (c)). Pour plus de détails sur les différentes étapes de traitement du prélèvement avant prélèvement d'un échantillon, l'homme du métier pourra se référer au document FR-2 957 672, qui décrit plus en détails l'étape de pipetage-distribution. 15 La présence ou non de cellules sur le passage du signal lumineux F, selon que la suspension cellulaire a décanté ou non, induit en effet des modifications dudit signal. Les moyens d'analyse 32 déterminent la densité cellulaire de l'échantillon en comparant par exemple la mesure du signal F obtenue par les moyens de mesure 30 dans le cas (b) avec la mesure du signal F correspondant aux cas (a) et/ou (c). 20 En outre, les moyens d'analyse 32 comparent la densité mesurée à une densité dite de référence. La densité de référence est la densité cellulaire nécessaire à avoir pour obtenir une densité cellulaire et un nombre de cellules pertinents dans le contenant d'analyse 22 pour pouvoir réaliser un diagnostic. Il est, par exemple, nécessaire d'avoir au moins 5000 cellules sur la lame d'étalement pour pouvoir rendre un diagnostic fiable 25 dans le cadre des critères de Béthesda. De même, lorsque la densité cellulaire est trop importante, un trop grand nombre de cellules normales se superpose et obscurcit le champ de vision et donc gêne la visibilité des cellules d'intérêt. Si, dans un premier cas, la densité cellulaire mesurée est supérieure à la densité de référence, l'aiguille 14 prélève du flacon un volume de la suspension cellulaire inférieur 30 au volume standard, normalement prélevé lorsque la densité cellulaire correspond à la densité de référence. Puis, l'aiguille 14 se déplace, via le bras robotisé 16, au-dessus d'un des contenants d'analyse 10 ou d'autres parties de l'automate si des étapes de traitement de l'échantillon sont prévues. L'échantillon est versé dans un des contenants d'analyse 10 ou est traité, par exemple dans un puits ou tube de réception pour technique ou analyse 35 complémentaire ou autre. 3048505 8 Si dans un deuxième cas, la densité cellulaire mesurée est inférieure à la densité de référence, l'aiguille 14 prélève du flacon un volume de la suspension cellulaire supérieur au volume standard de sorte à augmenter le nombre de cellules prélevées et arriver à un seuil garantissant la pertinence de l'analyse. 5 L'appareil et le procédé de préparation à l'analyse de suspension cellulaire décrits ci-dessus permettent d'obtenir directement dans les contenants d'analyse des échantillons cellulaires optimisés pour réaliser une analyse pertinente menant à une interprétation du dépistage ou du diagnostic. L'échantillon est analysé immédiatement avant son prélèvement ou avant son traitement, ce qui évite ainsi la réalisation d'un 10 second étalement. La détermination de la densité cellulaire permet une caractérisation pré-analytique de la suspension cellulaire et l'établissement d'une information sur le volume de la suspension prélevé afin d'assurer une traçabilité des étapes de traitement de l'échantillon afin d'informer la personne ou les moyens en charge de l'analyse sur la représentativité 15 du prélèvement initial. De plus, l'appareil peut être adapté à une pluralité d'aiguilles, de sorte de pouvoir réaliser simultanément plusieurs pré-analyses, et donc en particulier, d'automatiser la préparation et l'analyse d'une pluralité de suspensions. Selon un mode de réalisation, l'automate comprend en outre des moyens de post 20 analyse 40. Ces moyens de post analyse 40 permettent de mesurer la densité cellulaire des échantillons déposés dans les puits de décantation, après séchage. Ce procédé de mesure post analytique a déjà été décrit dans le document FR-2 922 019, auquel l'homme du métier pourra se référer. Cette mesure est comparée avec au moins l'une des trois premières mesures pré-analytiques, ce qui permet d'assurer un suivi qualitatif du 25 prélèvement et de s'assurer que la lame obtenue est satisfaisante pour établir un diagnostic. REVENDICATIONS1.- Procédé de préparation à l'analyse d'une suspension cellulaire comprenant au moins les étapes successives suivantes : (a) prévoir au moins un flacon (4) comprenant une suspension cellulaire (5) à analyser ; (b) prévoir au moins un contenant d'analyse (10) ; (c). prélever un échantillon d'une suspension cellulaire (5) dans le flacon (4) au moyen d'un dispositif de pipetage-distribution (12) ; et (d) déposer cet échantillon dans un des contenants d'analyse (10) ; ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend, avant l'étape de prélèvement, une première étape pré-analytique, réalisée à un premier instant, de mesure de la densité cellulaire de la suspension cellulaire (5) contenue dans le flacon (4), et en ce qu'il comprend au moins une deuxième étape pré-analytique de mesure de la densité cellulaire de la suspension cellulaire (5) contenue dans le flacon (4), réalisée à un deuxième instant, ainsi qu'une étape de comparaison des deux étapes de mesure. 2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la densité cellulaire est mesurée en émettant de la lumière selon une première direction vers le flacon (4) comprenant la suspension cellulaire (5) à analyser et en mesurant, selon une seconde direction différente de la première direction, l'atténuation ou la diffusion de la lumière ayant traversé la suspension cellulaire (5) à analyser. 3.- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que la mesure, selon la seconde direction, de l'atténuation ou la diffusion de la lumière ayant traversé la suspension cellulaire à analyser est réalisée par des moyens de réception (30) d'un signal agencés sous le flacon (4) comprenant la suspension cellulaire (5) à analyser. 4.- Procédé selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que la mesure de la densité comprend une prise d'images du signal lumineux (F) ayant traversé la suspension cellulaire (5) à analyser. 5.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la suspension cellulaire (5) décante pour former un culot cellulaire au fond du flacon, le procédé comprenant au moins une étape de remise en suspension du culot cellulaire 3048505 10 grâce au dispositif de pipetage-distribution (12) avant l'étape de prélèvement d'un échantillon, la première étape de mesure pré-analytique étant réalisée avant ladite étape de remise en suspension et la deuxième étape de mesure pré-analytique étant réalisée après ladite étape de remise en suspension. 6.- Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape de décantation des cellules dans la suspension après l'étape de remise en suspension du culot cellulaire, le procédé comprenant en outre une troisième étape pré-analytique de mesure de la densité cellulaire de l'échantillon à prélever, ladite troisième 10 étape de mesure étant effectuée après l'étape de décantation et avant l'étape de prélèvement, ainsi qu'une étape de comparaison de la mesure de la troisième étape pré-analytique avec au moins la mesure de la première étape pré-analytique ou la mesure de la deuxième étape pré-analytique. 15 7.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape de mesure post-analytique (40), c'est-à-dire après que l'échantillon de la suspension cellulaire a été déposé dans le contenant d'analyse, ainsi qu'une étape de comparaison de la mesure de l'étape post-analytique avec au moins l'une des trois mesures pré-analytiques. 20 8.- Automate (1) de réalisation d'au moins une lame d'analyse cellulaire apte à mettre en oeuvre un procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, ledit automate comprenant : - au moins un flacon (4) contenant une suspension cellulaire (5) à analyser ; 25 - au moins un contenant d'analyse (10) ; - au moins un plateau de réception (6) du flacon (4) et du contenant d'analyse (10); - au moins un dispositif de pipetage-distribution (12) apte à prélever un échantillon de la suspension cellulaire (5) à analyser et à le verser dans le contenant d'analyse (10); 30 l'automate étant caractérisé en ce qu'il comprend un dispositif de pré-analyse (26), ledit dispositif étant apte à effectuer au moins une étape de mesure de la densité cellulaire de la suspension cellulaire (5) contenue dans le flacon (4) et des moyens de comparaison des mesures obtenues lors desdites étapes de mesure. 35 9.- Automate (1) selon la revendication 8, caractérisé en ce que le dispoéitif de pré-analyse comprend des moyens d'émission d'un signal (F) selon une première 3048505 11 direction au travers du flacon comprenant la suspension cellulaire (5) à analyser, des moyens de réception (30), selon une seconde direction différente de la première direction, du signal modifié ayant traversé ledit flacon, et des moyens d'analyse (32) dudit signal. 10.- Automate (1) selon la revendication 9, caractérisé en ce que le dispositif de pré-analyse comprend en outre une boîte diffusante propre à recevoir le flacon (4) comprenant la suspension cellulaire (5) à analyser, et en ce que les moyens d'émission (28) comprennent une source de lumière pour éclairer le flacon, ladite source de lumière étant agencée au sein de la boîte diffusante. 10