Brevet FR3044870A1 — publié le 20170616

APPÂT RODONTICIDE COMPRENANT DU DIFÉNACOUM, PROCÉDÉ DE LUTTE CONTRE DES RONGEURS CIBLES NUISIBLES ET PROCÉDÉ D'OBTENTION L'invention concerne un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du difénacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on utilise un tel appât rodonticide. L'invention concerne aussi un procédé d'obtention de stéréo-isomères de configuration du difénacoum. L'invention concerne donc le domaine technique de la lutte contre le développement de populations de rongeurs cibles nuisibles. Il est connu d'utiliser des appâts rodonticides faisant office de poison pour des rongeurs cibles nuisibles. On sait de EP 2 090 164 que le difénacoum est un anticoagulant de deuxième génération agissant à simple dose. On connait aussi des appâts rodonticides et des procédés permettant de lutter contre des rongeurs nuisibles. Un tel appât rodonticide comprend par exemple du difénacoum dans une proportion massique de 50 mg par kilogramme (0,005 %, 50 ppm) d'appât. En particulier, W093/01712 décrit des appâts rodonticides comprenant du difénacoum à 0,0025 % ou 0,005 % (en poids) sous forme de granulés connus sous le nom "Klerat pellets" et conditionnés dans un sachet en papier et imprégné de benzoate de dénatonium à titre d'agent d'amertume. Un tel appât est cependant susceptible d'être consommé par des animaux autres que des rongeurs cibles nuisibles lorsqu'il est mis à la disposition de rongeurs cibles nuisibles. Il peut être consommé directement (consommation primaire) par des animaux domestiques ou des animaux de compagnie. Il peut aussi être consommé accidentellement par des humains susceptibles de débarrasser ledit appât de son sachet imprégné de benzoate de dénatonium. Une telle consommation peut produire chez ces animaux domestiques, chez ces animaux de compagnie ou chez des humains un empoisonnement qui peut être létal. En outre, une fraction du difénacoum de ces appâts 30 rodonticides peut être ingérée (consommation secondaire) par des animaux -notamment par des oiseaux- prédateurs de rongeurs nuisibles affaiblis ayant 3044870 2 consommé un tel appât rodonticide ou par des animaux charognards de rongeurs nuisibles morts d'avoir consommé un tel appât rodonticide. Cette consommation secondaire est susceptible d'entrainer à terme la mort de ces animaux prédateurs ou charognards qui peuvent être des animaux -notamment des oiseaux- 5 appartenant à des espèces protégées. L'invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du difénacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont efficaces pour contrôler les populations de rongeurs cibles et dont la mise en 10 oeuvre est en accord avec les règles de bon usage -notamment vis à vis de la protection des oiseaux, et en particulier des rapaces-. L'invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du difénacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont susceptibles de pouvoir être 15 utilisés à faible dose de difénacoum et qui sont respectueux de l'environnement, de la santé humaine et des animaux non cibles -notamment des oiseaux-. L'invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du difénacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont efficaces même à dose réduite 20 de difénacoum. L'invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant un stéréo-isomère de configuration du difénacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont susceptibles de pouvoir être utilisés pour lutter contre des rongeurs cibles nuisibles résistants à des appâts 25 rodonticides connus. L'invention vise aussi à proposer une alternative à des substances et des appâts rodonticides connus. Pour ce faire, l'invention concerne un appât rodonticide comprenant du difénacoum et au moins un excipient comestible pour des 30 rongeurs cibles nuisibles, caractérisé en ce qu'il comprend un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E1, du difénacoum, à l'exclusion d'un mélange 3044870 3 racémique dudit énantiomère El et d'un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, du difénacoum ; - ledit énantiomère El présentant par analyse chromatographique d'une composition de difénacoum comprenant quatre stéréo-isomères de 5 configuration du difénacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention t1 ; - ledit énantiomère E4 présentant par analyse chromatographique d'une composition de difénacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du difénacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de 10 rétention t4 ; t1 et t4 étant de valeur telle que t1 293,1 avec une énergie de 3044870 8 collision à 37 eV et m/z 443,1 -> 135,1 avec une énergie de collision à 37 eV correspondant aux signaux du difénacoum. Les inventeurs ont observé que les diastéréoisomères du difénacoum n'ont pas la même rémanence hépatique chez des rongeurs cibles 5 nuisibles et que ledit diastéréoisomère D1,4 est le diastéréoisomère du difénacoum qui est le plus rémanent dans le foie de rongeurs cibles, notamment de rongeurs cibles nuisibles. Ils ont observé que ledit diastéréoisomère D1,4 d'un appât rodonticide selon l'invention, lorsqu'il est ingéré par un rongeur cible nuisible, disparait du foie du rongeur cible nuisible ayant consommé un tel appât selon 10 l'invention moins rapidement que ledit diastéréoisomère D2,3. Les inventeurs qui sont parvenus à séparer ledit énantiomère El et ledit énantiomère E4 et à isoler ledit énantiomère El ont aussi découvert que ledit énantiomère El présente : - une activité anticoagulante plus élevée que l'activité anticoagulante 15 dudit énantiomère E4, et aussi plus élevée que les activités anticoagulantes des deux énantiomères dudit diastéréoisomère D2,3, et ; - une rémanence dans le foie de rongeurs cibles nuisibles auxquels dudit énantiomère El a été administré, supérieure à la rémanence dans le foie de rongeurs cibles nuisibles dudit énantiomère E4 et supérieure à la rémanence dans 20 le foie de rongeurs cibles nuisibles de chaque énantiomère dudit diastéréoisomère D2,3. Ainsi, ledit énantiomère El permet la réalisation d'appâts rodonticides selon l'invention présentant une efficacité rodonticide élevée pour une quantité de difénacoum réduite. De tels appâts rodonticides sont donc plus 25 efficaces que des appâts connus à même quantité de difénacoum. De tels appâts rodonticides sont susceptibles de pouvoir être utilisés pour lutter contre des populations de rongeurs cibles nuisibles résistants à des traitements rodonticides connus. Avantageusement et selon l'invention, ledit énantiomère El 30 présente dans l'appât rodonticide une quantité supérieure à la quantité dudit énantiomère E4 dans l'appât rodonticide. Ledit diastéréoisomère D1,4 est 3044870 9 majoritairement sous forme dudit énantiomère El dans l'appât rodonticide. Avantageusement, un appât rodonticide selon l'invention comprend du diastéréoisomère D1,4 majoritairement sous forme dudit énantiomère El et un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles. 5 Dans tout le texte, l'expression « ledit diastéréoisomère D14 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E1» signifie que le rapport de la quantité (massique, molaire ou volumique) dudit énantiomère El sur la quantité (massique, molaire ou volumique correspondante) dudit diastéréoisomère D1,4 (sous toutes ses formes énantiomères) est supérieur à 50%. 10 Ainsi, en particulier dans un appât rodonticide selon l'invention : - le rapport de la quantité dudit énantiomère El sur la somme de la quantité dudit énantiomère El et de la quantité dudit énantiomère E4 est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %) ; 15 - le rapport de la concentration dudit énantiomère El sur la somme de la concentration dudit énantiomère El et de la concentration dudit énantiomère E4 est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %), et ; - la proportion dudit énantiomère El dans l'appât rodonticide est supérieure à la proportion de dudit énantiomère E4. 20 Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère El supérieure à la quantité dudit énantiomère E4. Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère El telle que le rapport de cette quantité 25 sur la somme de la quantité dudit énantiomère El et de la quantité dudit énantiomère E4 présents dans l'appât rodonticide est supérieur à 50%, notamment supérieur à 60%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, plus préférentiellement supérieur à 95%, particulièrement préférentiellement supérieur à 98%, encore plus 30 préférentiellement supérieur à 99% ou de l' ordre de 100%. Dans un mode particulier de réalisation, avantageusement 3044870 10 et selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère E1 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E1 et de la quantité dudit énantiomère E4 présents dans l'appât rodonticide est supérieur à 75 %, de préférence compris entre 85 % et 100 %, 5 plus préférentiellement compris entre 90 % et 98 %. Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère El telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E1 et de la quantité dudit énantiomère E4 présents dans l'appât 10 rodonticide est compris entre 98 % et 100 %. L'invention concerne donc un appât rodonticide dans laquelle ledit diastéréoisomère D1,4 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E1. L'appât rodonticide peut aussi comprendre une quantité 15 dudit énantiomère E4 telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère El et de la quantité dudit énantiomère E4 présents dans l'appât rodonticide est inférieur à 50 %, notamment inférieur à 25 %, préférentiellement compris entre 0 % et 25 %, en particulier inférieur à 10 %. L'appât rodonticide peut être sensiblement exempt dudit 20 énantiomère E4, c'est à dire que ledit énantiomère E4 peut éventuellement être présent dans la composition mais seulement à l'état de traces. L'appât rodonticide selon l'invention peut aussi être sensiblement exempt dudit diastéréoisomère D2,3, c'est à dire que ledit diastéréoisomère D2,3 peut éventuellement être présent dans la composition mais seulement à l'état de 25 traces. Avantageusement et selon l'invention, le difénacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère El dans l'appât rodonticide. L'appât rodonticide comprend donc une quantité dudit énantiomère El telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du difénacoum dans l'appât 30 rodonticide est supérieur au rapport de la quantité dudit énantiomère E4 sur la quantité du difénacoum dans l'appât rodonticide et supérieur au rapport de la 3044870 11 quantité de chaque énantiomère dudit diastéréoisomère D2,3 sur la quantité du difénacoum dans l'appât rodonticide. Ainsi, en particulier, dans un appât rodonticide selon l'invention : 5 - le rapport de la quantité dudit énantiomère El sur la quantité du difénacoum est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ; - le rapport de la quantité dudit énantiomère El sur la somme des quantités de chacun des énantiomères dudit diastéréoisomère D1,4 et de chacun des énantiomères dudit diastéréoisomère D2,3 est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ; 10 - le rapport de la concentration dudit énantiomère El dans l'appât rodonticide sur la concentration du difénacoum dans l'appât rodonticide est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ; - la proportion dudit énantiomère El dans l'appât rodonticide est supérieure à la proportion de chacun des énantiomères dudit diastéréoisomère 15 D2,3 dans l'appât rodonticide et dudit énantiomère E4 dans l'appât rodonticide. Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère El telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du difénacoum dans l'appât rodonticide est supérieur à 25%, notamment supérieur à 50%, en particulier supérieur à 70%, plus 20 particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l'ordre de 100%. Dans un mode particulier de réalisation, avantageusement 25 et selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère El telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du difénacoum dans l'appât rodonticide est supérieur à 70 %, de préférence compris entre 80 % et 100 %, plus préférentiellement compris entre 90 % et 100 %. Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et 30 selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère El telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du difénacoum dans l'appât 3044870 12 rodonticide est compris entre 95 % et 99 %. Dans un autre mode de réalisation particulier, avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère El telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du 5 difénacoum dans l'appât rodonticide est supérieur à 95%. Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère El telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du difénacoum dans l'appât rodonticide est compris entre 98% et 100 % -bornes incluses-. 10 Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité dudit énantiomère El telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du difénacoum dans l'appât rodonticide est sensiblement de l'ordre de 100 %. Avantageusement, un appât rodonticide selon l'invention 15 comprend une quantité massique de difénacoum telle que le rapport (proportion massique) de cette quantité massique de difénacoum sur la quantité massique de l'appât rodonticide est inférieur à 50 ppm -c'est-à-dire inférieur à 50 mg de difénacoum par kilogramme d'appât rodonticide-. Avantageusement, le rapport de cette quantité massique sur la quantité massique d'appât rodonticide est 20 supérieur à 1 ppm. Avantageusement, le rapport de cette quantité massique sur la quantité massique d'appât rodonticide est compris entre 1 ppm et 50 ppm (1 mg à 50 mg de difénacoum par kilogramme d'appât rodonticide), notamment compris entre 1 ppm et 40 ppm (1 mg à 40 mg de difénacoum par kilogramme d'appât rodonticide), en particulier compris entre 1 ppm et 25 ppm (1 mg à 25 mg de 25 difénacoum par kilogramme d'appât rodonticide), de préférence compris entre 1 ppm et 15 ppm (1 mg à 15 mg de difénacoum par kilogramme d'appât rodonticide). Avantageusement, un appât rodonticide selon l'invention comprend une quantité dudit énantiomère El telle que le rapport de cette quantité 30 sur la quantité du difénacoum dans l'appât est supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, 3044870 13 particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l'ordre de 100%, et du difénacoum en proportion massique inférieure à 30 ppm par rapport à l'appât. 5 Avantageusement et selon l'invention, l'excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles est choisi pour permettre une consommation de l'appât par des rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement et selon l'invention, chaque excipient comestible est non létal pour des rongeurs cibles nuisibles. L'excipient comestible n'est pas rodonticide en lui-même. 10 Avantageusement et selon l'invention, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des graines de céréale -notamment des graines de céréale décortiquées-, des moutures de graines de céréale, des farines de graines de céréale, des flocons de graines de céréale, du son de céréales et des graines non céréalières, par exemple des 15 graines de luzerne -notamment sous forme décortiquée, sous forme de mouture, sous forme de farine, sous forme de flocons ou de son-. L'excipient comestible peut comprendre tout support susceptible d'être consommé par des rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement, l'excipient comestible comprend au 20 moins un aliment choisi dans le groupe formé des aliments d'origine végétale et des aliments d'origine animale. Avantageusement, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi pour stimuler l'appétit des rongeurs cibles nuisibles. En particulier, cet aliment est choisi dans le groupe formé de graines d'une ou de plusieurs céréales, de graines décortiquées d'une ou de plusieurs 25 céréales, des moutures de graines d'une ou de plusieurs céréales, des flocons de graines d'une ou de plusieurs céréales, du son d'une ou de plusieurs céréales et des farines de graines d'une ou de plusieurs céréales. À titre d'exemple, on choisit les céréales dans le groupe formé de l'avoine, du blé, de l'orge, du maïs, du soja et du riz. 30 Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des aliments sucrés. Par exemple, il peut s'agir d'aliments comprenant au 3044870 14 moins un sucre choisi dans le groupe formé du saccharose, du lactose, du fructose et du glucose. Il peut s'agir d'un sirop de sucre -par exemple, d'un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de l'amidon- ou d'un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de saccharose (sirop de sucre inverti), ou d'un sirop de sucre de 5 betterave, ou d'un sirop d'érable ou d'un sirop de canne à sucre, ou d'un sirop obtenu à partir d'une plante du genre stevia. Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des flocons et de la farine de l'albumen de noix de coco (coprah). Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des noix, des 10 noisettes et des amandes -râpées et/ou en poudre-. Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des graisses végétales, des huiles végétales (par exemple huile de colza, graisse de soja, huile de tournesol, beurre de cacao, huile d'arachides, beurre d'arachides, huile de maïs, huile de palme), des graisses animales et des huiles 15 animales (beurre, saindoux, huile de poisson). Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des protéines d'origine végétale et des protéines d'origine animale. À titre d'exemple, on peut citer par exemple le lait en poudre -notamment le lait écrémé en poudre-, les oeufs -notamment les oeufs en poudre-, les hydrolysats de 20 protéines d'origine animale et les hydrolysats de protéines d'origine végétale. Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts solides comprenant du difénacoum et un excipient comestible solide. Avantageusement, l'appât rodonticide est un solide à l'état divisé, par exemple sous forme de boulettes ou de granulés. 25 Avantageusement, l'appât rodonticide peut être un solide sous forme de bloc ou de pâte susceptibles d'être consommés par les rongeurs cibles nuisibles ou d'un matériau solide susceptible d'être rongé par les rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement, l'appât rodonticide solide selon l'invention peut se présenter sous forme d'un bloc rigide, d'un bloc semi-rigide, d'une mousse, d'une poudre 30 ou d'un gel. Avantageusement, l'appât rodonticide se présentant sous 3044870 15 forme d'une poudre, sous forme d'une mousse ou sous forme d'un gel est adapté pour pouvoir souiller la fourrure du(de) rongeur(s) cible(s) nuisible(s) et pour pouvoir être ingérée par celui(ceux)-ci lors de son(leur) toilettage. Il peut s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant du 5 difénacoum, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomères E1 et dudit énantiomère E4. Il peut aussi s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant du difénacoum dans lequel la quantité dudit énantiomère El est supérieure à la quantité dudit énantiomères E4. Il peut aussi s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant du difénacoum et dans lequel le difénacoum est 10 majoritairement sous forme dudit énantiomère El. Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts liquides comprenant du difénacoum et un excipient comestible liquide. L'appât rodonticide est alors une boisson pour des rongeurs cibles nuisibles. Il peut s'agir d'une solution de difénacoum dans un 15 solvant du difénacoum, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère El et dudit énantiomère E4. Il peut aussi s'agir d'une solution de difénacoum dans un solvant du difénacoum et dans laquelle ledit diastéréoisomère D1,4 est majoritairement sous forme dudit énantiomère El. Il peut aussi s'agir d'une solution de difénacoum dans un solvant du difénacoum et dans laquelle le 20 difénacoum est majoritairement sous forme dudit énantiomère E1. Il peut aussi s'agir d'une suspension de difénacoum à l'état solide dans un milieu liquide. Il peut aussi s'agir d'une émulsion de difénacoum dans un milieu liquide. L'invention concerne donc aussi un appât rodonticide 25 comprenant dudit énantiomère E1, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère El et dudit énantiomère E4, le difénacoum de l'appât rodonticide étant optiquement actif. Il n'est cependant pas exclu que le difénacoum de l'appât rodonticide selon l'invention, comprenant dudit énantiomère E1, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère El et dudit énantiomère E4, soit lui- 30 même optiquement inactif. 3044870 16 Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un colorant. Un tel colorant permet en particulier de donner audit appât rodonticide une couleur aisément détectable et identifiable par une personne manipulant l'appât rodonticide. 5 Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un conservateur apte à assurer sa conservation lors de son stockage. Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un composé amérisant, par exemple du type benzoate de dénatonium -aussi connu sous le nom de « Bitrexe »- et destiné à réduire les risques de consommation accidentelle 10 par des organismes non-cible. Avantageusement, dans une variante particulière, l'appât rodonticide selon l'invention comprend exclusivement du difénacoum à titre de substance rodonticide. En particulier, l'appât rodonticide selon l'invention est exempt de toute autre substance anticoagulante à usage rodonticide distincte du 15 difénacoum. Cependant, dans cette variante selon l'invention, l'appât rodonticide peut comprendre toute substance anti-nuisible autre qu'un rodonticide, telle qu'une substance insecticide et/ou acaricide. Avantageusement, dans une autre variante particulière, l'appât rodonticide selon l'invention comprend du difénacoum à l'exclusion d'un 20 mélange racémique dudit énantiomère E1 et dudit énantiomère E4 et au moins une autre substance distincte du difénacoum à titre de substance rodonticide. Cette autre substance rodonticide distincte du difénacoum peut être une autre substance anticoagulante -notamment du type anti-vitamine K ou non- ou une autre substance rodonticide non anticoagulante. 25 L'invention concerne aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles, dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide comprenant du difénacoum et au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, caractérisé en ce qu'il comprend un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E1, du difénacoum, à l'exclusion d'un mélange 30 racémique dudit énantiomère El et d'un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, du difénacoum ; 3044870 17 - ledit énantiomère El présentant par analyse chromatographique d'une composition de difénacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du difénacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention t1 ; 5 - ledit énantiomère E4 présentant par analyse chromatographique d'une composition de difénacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du difénacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t4 ; t1 et t4 étant de valeur telle que t1 293,1 et m/z 443,1 -> 135,1 correspondants aux signaux du difénacoum. Un chromatogramme représentatif de la séparation des 10 quatre stéréo-isomères de configuration du difénacoum est représenté en figure 1A. Le chromatogramme dudit énantiomère El à l'état isolé selon l'invention est représenté en figure 1D, le chromatogramme dudit énantiomère E2 dudit diastéréoisomère D2,3 à l'état isolé est représenté en figure 1B, le chromatogramme dudit énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D2,3 à l'état isolé 15 est représenté en figure 1C et le chromatogramme dudit énantiomère E4 dudit diastéréoisomère D1,4 à l'état isolé est représenté en figure 1E. On obtient chaque stéréo-isomères de configuration du difénacoum par prélèvement successif de chaque fraction correspondant au temps d'élution de chaque stéréo-isomère de configuration du difénacoum en sortie de la colonne de chromatographie puis 20 élimination du solvant, par exemple par évaporation. B. Rémanence hépatique des diastéréoisomères du difénacoum chez le rat On réalise une étude comparative de la rémanence hépatique dudit diastéréoisomère D1,4 et dudit diastéréoisomère D2,3 chez le rat. On utilise cinq lots de 6 rats (OFA Sprague Dawley, Charles River, Saint 25 germain sur l'Arbresle, France) mâles et femelles d'une masse moyenne de 200 g. À Jo, on administre per os à chacun des rats un mélange de stéréo-isomères de configuration du difénacoum comprenant 44% dudit diastéréoisomère Dz3 et 56% dudit diastéréoisomère D1,4 en solution dans un mélange formé de 95 % d'huile végétale et de 5 % de diméthylsulfoxyde (DMSO). Ledit 30 diastéréoisomère D2,3 est un mélange racémique de l'énantiomère E2 et de l'énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D2,3 et ledit diastéréoisomère D1,4 est un 3044870 24 mélange racémique dudit énantiomère E1 et dudit énantiomère E4. La quantité totale de difénacoum administrée à chaque rat est de 3,4 mg de difénacoum par kilogramme de rat. À J1, J3, J5, J7 et J9 on euthanasie 6 rats (3 mâles et 3 femelles). On prélève et on pèse les foies prélevés. 5 B.1. Extraction du difénacoum des foies prélevés B.1.1. Homogénéisation de l'échantillon de foie On pèse avec précision de l'ordre de 0,525 g (±0,025 g) de foie des rats obtenus au point B.) que l'on place dans un tube en polypropylène de 50 mL On ajoute 10 mL d'acétone et on soumet la suspension à une 10 homogénéisation au moyen d'un homogénéisateur/disperseur Ultra-Turrax® pendant une durée de l'ordre de 30 secondes. On rince la tige de l'homogénéisateur/disperseur à l'eau chaude puis 2 fois avec 20 mL d'acétone dans un tube en polypropylène. On centrifuge l'homogénat pendant 5 min à une vitesse de centrifugation de 3000 rpm (rotation par minute). On collecte et on 15 transvase le surnageant dans un tube à essai. On soumet l'échantillon à une évaporation sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C de façon à former un extrait sec. B.1.2. Élimination des lipides Dans le tube contenant l'extrait sec, on ajoute 1 mL 20 d'acétonitrile de façon à solubiliser l'extrait sec. On lave la solution d'acétonitrile 2 fois successivement avec 1 mL d'hexane. L'extrait débarrassé des lipides est séché sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C, puis repris avec 0,5 mL de méthanol et solubilisé par agitation sous vortex. On ajoute ensuite 0,5 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q). L'échantillon est homogénéisé sous 25 vortex. B.1.3. Extraction du difénacoum sur phase solide (« SPE, Solid Phase Extraction ») On fait passer 1 mL de dichlorométhane (CH2Ct2), puis 1 mL de méthanol (CH3OH), puis 1 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q) sur une 30 cartouche Oasis HLB 1cc (WAT094225, Waters). On dépose ensuite l'extrait de foie débarrassé des lipides (1mL CH3OH/H20 Milli-Q) et contenant le 3044870 25 difénacoum en tête de la cartouche préalablement conditionnée. L'extrait de foie pénètre dans la cartouche par gravité au contact de la phase solide de la cartouche. On dépose en tête de cartouche 1 mL de solution de lavage formée de méthanol (CH3OH) et d'eau ultra-pure (H2O) en proportion volumique de 90/10. 5 On sèche la cartouche par aspiration sous vide connectée en partie basse de la cartouche. On dépose ensuite en tête de cartouche 1 mL de solution d'élution formée de dichlorométhane (CH2C12) et de méthanol (CH3OH) en proportion volumique de 90/10 et on collecte en bas de cartouche un éluat comprenant le difénacoum. On évapore le solvant de l'éluat sous un flux d'azote (N2) à la 10 température de 40°C. On reprend l'échantillon dans 0,5 mL et on filtre la solution d'acétonitrile contenant le difénacoum sur filtre 0,2 ium. B.2. Analyse des diastéréoisomères du difénacoum On analyse la solution d' acétonitrile contenant le difénacoum par chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale 15 comme décrit au point A.) et on dose la quantité de chacun des stéréo-isomères de configuration du difénacoum dans le foie. Les résultats représentés en figure 2 sont exprimés en nanogramme de diastéréoisomère du difénacoum par gramme de foie et représentés en fonction du temps exprimé en jours. La concentration hépatique dudit 20 diastéréoisomère D1,4 est représentée par un carré (^) plein et la concentration hépatique dudit diastéréoisomère D2,3 est représentée par un cercle (0) ouvert. On observe que ledit diastéréoisomère D1,4 présente une rémanence hépatique plus élevée que la rémanence hépatique dudit diastéréoisomère D2,3 qui a sensiblement disparu du foie des rats dès 5 jours après ingestion. 25 B.3. Analyse des stéréo-isomères de configuration du difénacoum Les résultats sont présentés en figure 5 dans laquelle les valeurs correspondant audit énantiomère El sont représentées sous forme de losanges (-) pleins, les valeurs correspondant audit énantiomère E4 sont représentées sous forme de ronds (0) ouverts, les valeurs correspondant à 30 l'énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D2,3 sont représentées sous forme de triangles (A) ouverts et les valeurs correspondant à l'énantiomère E2 dudit 3044870 26 diastéréoisomère D2,3 sont représentées sous forme de losanges (0) ouverts. Dès J5, le seul stéréo-isomère de configuration résiduel dans le foie des rats est ledit énantiomère E1, les autres stéréo-isomères de configuration n'étant présents qu'à l'état de traces. 5 C. Traitement de rats avec chaque stéréo-isomère de configuration du difénacoum On utilise quatre lots équivalents de rats « OFA Sprague Dawley » mâles de masse comprise entre 180 et 220 g. À JO, on administre per os au moyen d'une sonde gastrique : 10 - à chacun des rats d'un premier lot, une quantité d'une solution dudit énantiomère El dissout dans un mélange formé de 95 % d'huile végétale et de 5 % de DMSO correspondant à une quantité de 1,5 mg de difénacoum par kilogramme de rat ; - à chacun des rats d'un deuxième lot, une quantité d'une solution dudit 15 énantiomère E4 dissout dans un mélange formé de 95 % d'huile végétale et de 5 % de DMSO correspondant à une quantité de 1,5 mg de difénacoum par kilogramme de rat ; - à chacun des rats d'un troisième lot, une quantité d'une solution de l'énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D2,3 dissout dans un mélange formé de 20 95 % d'huile végétale et de 5 % de DMSO correspondant à une quantité de 1,5 mg de difénacoum par kilogramme de rat ; - à chacun des rats d'un quatrième lot, une quantité d'une solution dudit énantiomère E2 dudit diastéréoisomère D2,3 dissout dans un mélange formé de 95 % d'huile végétale et de 5 % de DMSO correspondant à une quantité de 1,5 25 mg de difénacoum par kilogramme de rat. C.1. Efficacité anticoagulante de chaque énantiomère des diastéréoisomères du difénacoum A J+1, J+3, J+7 et J+14 après administration de la solution d'énantiomère, on prélève, dans des tubes de prélèvement comprenant du citrate 30 (3,2 %), 3 mL du sang d'un rat anesthésié à l'isoflurane puis euthanasié. On centrifuge les tubes à 2000 g pendant 10 minutes et on récupère la fraction 3044870 27 plasmatique. On analyse le temps de coagulation (temps de Quick) du plasma au moyen du kit "Neoplastine CI Determination of Prothrombin Time" (Diagnostica Stago, Asnières, France) par mesure sur un Thrombotimer option 2 plus (Behnk Electronik, Norderstedt, Allemagne). 5 Les résultats sont représentés en figure 3 dans laquelle les valeurs correspondant audit énantiomère E1 dudit sont représentées par des colonnes à hachures horizontales, les valeurs correspondant à l'énantiomère E2 dudit diastéréoisomère D2,3 sont représentées en colonnes blanches, les valeurs correspondant audit énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D2,3 sont représentées 10 en colonnes noires et les valeurs correspondant audit énantiomère E4 sont représentées en colonnes hachurées verticalement. Il est à noter que la valeur normale du temps de coagulation de rats non traités est de 10 à 20 secondes. L'administration (JO) per os de chaque énantiomère à raison de 1,5 mg par kilogramme de rat provoque une augmentation du temps de 15 quick des rats à J1 (de l'ordre de 100 sec). Le temps de quick du sang de rats traités avec une posologie de 1,5 mg dudit énantiomère El selon l'invention par kilogramme de rat atteint la valeur de 300 sec à J3 pour redescendre à 70,2 à J7. Les temps de quick des rats traités avec une dose de 1.5 mg d'énantiomère E2, ou avec une dose de 1.5 mg d'énantiomère E3, ou avec une dose de 1.5 mg 20 d'énantiomère E4 retrouvent une valeur normale dès J3. C.2. Rémanence hépatique de chaque énantiomère des diastéréoisomères chez le rat On prélève le foie des rats et on extrait le difénacoum comme décrit au point A.) ci-dessus. On quantifie chaque stéréo-isomère de 25 configuration du difénacoum contenu dans le foie selon la méthode décrite au point A.2.) ci-dessus. Les quantités de chaque stéréo-isomères de configuration du difénacoum retenu dans le foie sont exprimées en microgramme d'énantiomère par gramme de foie et sont représentées figure 4 dans laquelle les valeurs correspondant audit énantiomère E1 sont représentées en colonnes à 30 hachures horizontales, les valeurs correspondant audit énantiomère E4 sont représentées en colonnes à hachures verticales, les valeurs correspondant à 3044870 28 l'énantiomère E2 dudit diastéréoisomère D2,3 sont représentées en colonnes blanches et les valeurs correspondant audit énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D2,3 sont représentées en colonnes noires. L'énantiomère El est le stéréo-isomère de configuration du difénacoum le plus rémanent dans le foie 5 de rats. Il va de soi que l'invention peut faire l'objet de nombreuses variantes de réalisation et applications. En particulier, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles sont sujets à des infinités de variantes tant dans la formulation de l'appât que dans les modes de mise en 10 oeuvre du procédé. REVENDICATIONS1/ - Appât rodonticide comprenant du difénacoum et au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, caractérisé en ce qu'il comprend un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E1, du difénacoum, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E1 et d'un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E4, du difénacoum ; - ledit énantiomère E1 présentant par analyse chromatographique d'une composition de difénacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du difénacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après, un 10 temps de rétention t1 ; - ledit énantiomère E4 présentant par analyse chromatographique d'une composition de difénacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du difénacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t4 ; 15 t1 et t4 étant de valeur telle que t1