Brevet FR3041638A1 — publié le 20170331

METHODE POUR AMELIORER LA CAPACITE D'UN COMPOSE A TRAVERSER LES MEMBRANES La présente invention concerne une méthode d'amélioration de la stabilité d'un composé portant au moins une fonction amine et de sa capacité à traverser les membranes cellulaires, ainsi les composés stabilisés ainsi obtenus présentent une meilleure stabilité et une meilleure capacité à traverser les membranes cellulaires. Les peptides sont des polymères d'acides aminés possédant de nombreuses fonctions biologiques et trouvant des applications biotechnologiques, en particulier dans les domaines pharmaceutiques et phytosanitaires. Les peptides présentent plusieurs avantages par rapport aux autres molécules traditionnellement utilisées, puisqu'ils sont généralement solubles dans l'eau, possèdent une efficacité et une sélectivité importante vis-à-vis de leurs cibles biologiques et sont associés à moins d'effets secondaires. Par exemple, depuis une décennie les peptaïbols ont montré de plus en plus d'intérêt pharmacologique, car ces peptides d'origines fongiques possèdent une activité antibactérienne. Cela fait de ces peptides, par exemple l'alaméthicine, de bons candidats antibiotiques. Malgré leurs nombreux avantages, l'utilisation thérapeutique des peptides est difficile car ils présentent une faible biodisponibilité par voie orale. Les peptides sont généralement dégradés par l'environnement gastrique très acide et par des protéases. Ainsi les peptides présentent dans l'organisme un temps de demi-vie trop court qui ne leur permet pas d'atteindre leur cible biologique. Leur mode d'administration nécessite d'avoir recours à une injection intraveineuse, ce qui constitue une contrainte pour les patients et affecte leur qualité de vie. L'enjeu actuel pour le développement de peptides tant pour la santé humaine que pour la protection des cultures repose sur l'augmentation de leur interaction avec les membranes cellulaires afin de faciliter leur absorption et sur leur protection contre la dégradation par les peptidases. Plusieurs techniques ont été développées pour proposer une solution à ces problèmes. 3041638 2 De nombreux médicaments peptidiques développés par l'industrie pharmaceutique présentent une protection au niveau de l'extrémité N-terminale qui permet de protéger ces peptides contre la dégradation et d'améliorer leur biodisponibilité et leur passage à travers les membranes 5 cellulaires. Ces modifications consistent souvent en une simple acétylation et ne permettent pas d'obtenir des résultats satisfaisants. Une autre approche consiste à associer simultanément à ces peptides un composé lipophile contribuant à une meilleure biodisponibilité et un PEG pour accroitre la résistance à la protéolyse. Des formes injectables 10 d'insuline ont été développées par cette approche. Cette méthode présente néanmoins l'inconvénient d'ajouter deux nouvelles entités sur la molécule parente ce qui peut réduire son affinité pour sa cible. Une troisième approche consiste à remplacer au moins une liaison amide par une fonction isostère. Ces isostères sont supposés avoir des 15 propriétés physicochimiques similaires à la fonction amide. Les atomes de la liaison amide n'intervenant pas nécessairement dans le phénomène de reconnaissance, les peptides modifiés conservent une bonne affinité avec la cible biologique tout en étant plus résistants vis à vis de la dégradation enzymatique et la conformation étendue du peptide est conservée. 20 Parmi les motifs considérés comme isostère de la liaison amide, l'hétérocycle 1,2,3-triazole-1,4-disubstitué s'est montré particulièrement intéressant. Valverde et Mindt (Chimia (Aarau). 2013 ; 67(4):262-6.) décrivent que l'hétérocycle 1, 2, 3-triazole possède une structure similaire à la liaison peptidique et est stable à l'égard de la dégradation enzymatique. 25 Valverde et al. (Angew. Chem. Int., 2013, 52, 8957 - 8960) ont décrit neuf analogues d'un peptide BBN (7-14), chacun comportant au moins un groupe 1, 2, 3-triazole dans la chaîne principale. Cependant, les études récentes ont montré que la présence de l'hétérocycle 1,2,3-triazole-1,4-disubstitué dans un peptide peut perturber la 30 structure hélicoïdale de ce peptide et affecter, par conséquent, son activité biologique. Afin d'améliorer les activités biologiques et la biodisponibilité des médicaments peptidiques, il y a toujours un besoin de développer une nouvelle technique permettant de minimiser le changement de conformation 3041638 3 de peptide, et d'améliorer à la fois la stabilité d'un peptide et sa capacité à traverser les membranes cellulaires. Le premier aspect de l'invention a donc pour objet de proposer une méthode pour améliorer la stabilité d'un composé portant au moins une 5 fonction amine et sa capacité à traverser les membranes cellulaires. Ladite méthode consiste à fixer sur au moins une fonction amine dudit composé, un motif de formule (I) : (I) dans laquelle : - Ri est choisi parmi : - un groupe phényle substitué par un à trois substituants identiques ou différents choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome de fluor et les groupes -CF3 ou -OCF3 et 15 - les groupes biphényle, pyrènyle, naphtyle et phénanthrènyle, - R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome d'hydrogène et les groupes (Ci-C4) alkyle, notamment un groupe méthyle. L'invention repose sur l'effet surprenant produit par le motif de 20 formule (I) qui permet d'augmenter significativement l'activité biologique d'un peptide. Par exemple, lorsque ce motif est fixé à l'alaméthicine, qui est un peptaïbol, il permet d'augmenter presque 10 fois l'activité antimicrobienne de ce peptide. En effet, il s'avère que le motif de formule (I) améliore à la fois la 25 résistance d'un peptide à la dégradation enzymatique et son intégration membranaire. Ces avantages pourraient être liés au fait que le motif de formule (I) ne perturbe pas la conformation de peptide, notamment la structure secondaire hélicoïdale du peptide, ce qui permet d'en préserver les activités biologiques. 30 Ladite méthode peut être appliquée à tout composé portant une fonction amine, car la fixation dudit motif sur un composé est effectuée par 3041638 4 la formation d'une liaison amide, entre le groupe -C=0 du motif de formule (I) et un groupe amine du composé à stabiliser. Par (Ci-C4)alkyle, on entend un radical alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 4 atomes de carbone, tel que les radicaux méthyle, éthyle, propyle, 5 isopropyle, n-butyle, isobutyle, sec-butyle et tert-butyle. Dans un mode de réalisation avantageux, le substituant Ri du motif de formule (I) est choisi parmi les groupes ci-après: CF3 10 CF3 O-CF3 3041638 5 , OU Dans un mode de réalisation plus avantageux, le motif fixé à un 5 composé répond à la formule (I') dans laquelle : - R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome 10 d'hydrogène et les groupes (Ci-C4) alkyle, notamment un groupe méthyle, - R4 et R5 : - soit représentent tous les deux un atome de fluor, - soit représentent tous les deux un groupe -CF3, 15 - soit l'un est choisi parmi l'atome de fluor et le groupe -CF3, l'autre étant un atome d'hydrogène Dans un mode de réalisation encore plus avantageux, le motif fixé à un composé répond à la formule (Ia) 3041638 6 ou à la formule (Ib) F3C 5 (Ib), dans lesquelles R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome d'hydrogène et les groupes (CI.-C4) alkyle, notamment un groupe méthyle. Lorsque les substituants R2 et R3 sont différents, le carbone qui les 10 porte est asymétrique et les composés peuvent être en configuration R ou S. Encore plus avantageusement, le motif fixé à un composé répond à la formule (Ic) (Ic), 15 ou à la formule (Id) F3C (Id) 3041638 7 Conformément à la présente invention, ledit composé portant au moins une fonction amine peut être un peptide, un pseudopeptide ou un composé à activité thérapeutique portant au moins une fonction amine, ledit susdit motif de formule (I), notamment de formule (I'), (Ia), (Ib), (Ic) ou 5 (Id), étant fixé sur : - au moins une fonction amine dudit composé à activité thérapeutique ou dudit pseudopeptide, ou - sur la fonction amine de l'acide aminé à l'extrémité N-terminal dudit peptide ou, lorsque ledit peptide comporte au moins une lysine, sur le 10 groupe amine de la chaîne latérale de ladite au moins une lysine. Dans le cadre de la présente invention, on entend par « peptide » un polymère ayant au maximum 50 acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidique. On entend par « pseudopeptide », une molécule synthétique 15 similaire en termes de fonctionnalité ou de configuration globale à un peptide ayant une activité biologique et pouvant interagir avec le(s) récepteur(s) ou le(s) cible(s) dudit peptide. Dans le cadre de la présente invention, un composé à activité thérapeutique portant au moins une fonction amine est préférentiellement zo un composé à activité thérapeutique dont le poids moléculaire ne dépasse pas 5000. Les termes « liaison peptidique » et « liaison amide » sont interchangeables au sens de la présente invention, lorsqu'il s'agit de la liaison -CONH- dans un peptide. 25 Ledit peptide peut comporter des acides aminés protéinogènes et/ou des acides aminés non protéinogènes et/ou des acides aminés non naturels. Les acides aminés sont les acides aminés incorporés dans les protéines lors de la traduction de l'ARN messager par les ribosomes. Il existe en tout 22 acides aminés protéinogènes, à savoir Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, 30 Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Pyl, Sel, Ser, Thr. Les acides aminés non protéinogènes sont les acides aminés qui ne peuvent pas être incorporé dans les protéines lors de la traduction de l'ARN messager par les ribosomes. Ces acides aminés peuvent être des acides aminés naturels. A titre d'exemple des acides aminés non protéinogènes, on peut notamment citer l'acide a-aminoisobutyrique (Aib), l'isovaline (Iva), 3041638 8 l'homosérine (Hse), l'acide dihydro-2-aminobutyrique (Dhb), l'acide- 2, 4- diaminobutyrique (Dab) ou la sarcosine (Sar). Les acides aminés non naturels sont les acides aminés qui ne peuvent pas être produits naturellement par un organisme vivant. 5 Ledit peptide peut être un peptide extrait d'un organisme biologique ou un peptide synthétisé artificiellement. Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne une méthode pour améliorer la stabilité d'un peptide et sa capacité à traverser la membrane cellulaire, dans laquelle le motif de formule I telle que décrit ci-dessus, notamment de formule (I'), (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id), est fixé à la fonction amine de l'acide aminé placé à l'extrémité N-terminale ou, lorsque ledit peptide comporte au moins une lysine, à la fonction amine de la chaîne latérale de ladite au moins une lysine. Dans un mode de réalisation plus avantageux, ledit motif remplace 15 l'acide aminé en position N-terminale dudit peptide. Un autre aspect de l'invention a pour objet des composés susceptibles d'être obtenus par la méthode de l'invention. Ces composés sont des analogues de composés portant au moins une fonction amine, zo notamment des analogues de peptides, de pseudopeptides ou de composés à activité thérapeutique. Ces analogues possèdent une meilleure stabilité et une meilleure capacité à traverser la membrane cellulaire par rapport aux molécules à partir desquels ils ont été préparés. Conformément à l'invention, un tel analogue comporte un motif de 25 formule I : (I) dans laquelle : - Ri est choisi parmi : 3041638 9 - un groupe phényle substitué par un à trois substituants identiques ou différents choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome de fluor et les groupes -CF3 ou -OCF3 et, - les groupes biphényle, pyrènyle, naphtyle, et phénanthrènyle, 5 - R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome d'hydrogène et les groupes (Ci-C4) alkyle, notamment un groupe méthyle, ledit motif étant fixé sur au moins une fonction amine dudit composé, notamment, ledit motif étant fixé sur : 10 - au moins une fonction amine dudit médicament ou dudit pseudopeptide, ou - sur la fonction amine de l'acide aminé à l'extrémité N-terminale dudit peptide ou, lorsque ledit peptide comporte au moins une lysine, sur une fonction amine de la chaîne latérale de ladite au moins une lysine. 15 Dans un mode de réalisation particulier, l'invention porte sur les analogues d'un peptide, représentés par la formule II peptide (II), dans laquelle les substituants Ri, R2, et R3 sont définis tels que ci-dessus. 20 Ledit peptide contenu dans ledit analogue de formule II est lié au groupement -CO du motif de formule I par la fonction amine de son acide aminé en position N-terminale ou, lorsqu'il comporte au moins une lysine, par une fonction amine de la chaîne latérale de ladite au moins une lysine Dans un mode de réalisation plus particulier, ledit peptide est un 25 peptaïbol. Le terme « peptaïbol » se réfère à une classe de peptides linéaires acétylés à l'extrémité N-terminale et possédant une activité antibactérienne et antifongique, les peptaïbols étant caractérisés, d'une part, par un nombre élevé d'acides aminés non protéionogènes essentiellement l'acide a- 30 aminoisobutyrique (Aib) ou l'isovaline (Iva) et, d'autre part, par la présence 3041638 10 du côté C-terminal d'un amino-alcool, le phénylalaninol et le leucinol étant les plus communs. Les peptaïbols se composent essentiellement de 7 à 21 acides aminés codés et non codés. A l'exception des résidus Aib et Gly qui ne 5 possèdent pas de carbone asymétrique, ces acides aminés sont de configuration (L) sauf l'isovaline qui peut être trouvée sous la forme (D). Parmi les peptaïbols, on peut citer à titre d'exemple l'alaméthicine ou la bergofungine D. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne les 10 analogues d'une alaméthicine. L'alaméthicine est une famille de plusieurs dizaines de peptides de 20 acides aminés classés en deux groupes principaux : les alaméthicines F30 et les alaméthicines F50, les deux groupes se distinguant par l'acide aminé en position 18, un acide glutamique (Glu) pour les alaméthicines F30 et une 15 glutamine (Gin) pour les alaméthicines F50. L'alaméthicine F30/5 est représenté par la séquence d'acides aminés ci-après : AcUPUAUAQUVUGLUPVUUEQFol (SEQ ID NO : 1). L'alaméthicine F50/5 est représenté par la séquence d'acides aminés : AcUPUAUAQUVUGLUPVUUQQFol (SEQ ID NO : 2). 20 Dans un mode de réalisation plus particulier, l'invention concerne les analogues de l'alaméthicine, répondant à la formule (IIa) F Pep1 ou la formule (IIb) 25 F3C Pep1 (IIb), dans lesquelles : 3041638 11 - R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi un hydrogène et un méthyle, et - Pepi est le peptide de séquence SEQ ID NO : 3 (PUAUAQUVUGLUPVUUEQFol) ou le peptide de séquence SEQ ID NO : 4 5 (PUAUAQUVUGLUPVUUQQFol). Le peptide Pepi est lié au groupement -CO du motif de formule (Ia) ou (Ib) par la fonction amine de l'acide aminé en position N-terminale. Plus particulièrement, l'invention concerne un analogue de l'alaméthicine F50/5 de formule (IIc) F F Pep1 10 ou de formule (IId) Pep1 F3C (IId) 15 dans lesquelles Pepi est tel que défini ci-dessus. Un autre objectif de l'invention est de proposer une méthode de préparation des susdits analogues, notamment des analogues d'un composé portant au moins une fonction amine, notamment des analogues d'un peptide, d'un pseudopeptide ou d'un composé à activité thérapeutique zo portant au moins une fonction amine. Ladite méthode comprend les étapes suivantes : (i) la formation par une réaction de cycloaddition azide-alcyne catalysée par du cuivre (copper(I)-catalyzed azide alkyne cycloaddition (CuAAC)) entre un composé de formule A 3041638 12 OH (A) dans laquelle R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome d'hydrogène et les groupes (Ci-C4) alkyle, notamment un groupe 5 méthyle, et un composé de formule B R1 (B) - dans laquelle Ri est choisi parmi : - un groupe phényle substitué par un à trois substituants 10 identiques ou différents choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome de fluor et les groupes -CF3 ou -OCF3 et, - les groupes biphényle, pyrènyle, naphtyle, et phénanthrènyle, pour obtenir un composé de formule III 15 (III) dans laquelle - Ri est choisi parmi : - un groupe phényle substitué par un à trois substituants identiques ou différents choisis indépendamment l'un de l'autre 20 parmi l'atome de fluor et les groupes -CF3 ou -OCF3 et, - les groupes biphényle, pyrènyle, naphtyle, et phénanthrènyle, - R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome d'hydrogène et les groupes (Ci-C4) alkyle, notamment un groupe méthyle, 25 - R6 est le groupe hydroxyle ou un chlore, 3041638 13 (ii) la réaction, éventuellement en présence d'au moins un agent de couplage, entre un composé de formule III obtenu à l'étape (i) et au moins un groupe amine d'un composé à stabiliser pour obtenir un analogue dudit composé. 5 Le principe de la réaction CuAAC (Copper-Catalyzed Azide-Alkyne Cycloaddition) est connu de l'homme du métier (Rostovstsev et al., Angew. Chem. Int. Ed.2002, 41(14), 2596-2599, Tornoe et al.,. J. Org. Chem. 2002, 67 (9), 3057-3064.) Cette réaction est effectuée entre un précurseur portant la fonction 10 alcyne et un précurseur portant la fonction azoture en présence d'un catalyseur. Elle permet de produire des 1,2,3-triazoles-1-4- disubstitués à température ambiante tout en augmentant la cinétique de réaction. Afin de réagir avec une amine, le groupe hydroxyle d'un composé de formule (III) peut former un ester activé par réactions avec différents 15 agents de couplage connus dans l'art antérieur ou être transformé en chlorure d'acyle. Toutes ces techniques sont connues de l'homme du métier. La présente invention est illustrée plus en détail par les figures et les exemples ci-après. 20 Figures Les figures 1A, 1B, 1C et 1D illustrent respectivement les résultats de HPLC analytique pour l'alaméthicine F50/5(figure 1A) et les analogues de 25 l'alaméthicine F50/5, à savoir le composé 5 (figure 1B), le composé 6 (figure 1C), et le composé 7 (composé 1D). Les figures 2A, 2B et 2C illustrent respectivement les spectres de ESI-MS obtenus par LC-MS pour le composé 5 (figure 2A), le composé 6 (figure 2B), et le composé 7 (figure 2C). 30 La figure 3 montre les déplacements chimiques de résonnances de protons amides pour chaque acide aminé entre le composé 6 ou 7 et l'alaméthicine. La figure 4 montre les spectres de dichroïsme circulaire de l'alaméthicine et des composés 6 et 7. 35 3041638 14 Exemples I. Matériels et méthode 5 Abréviations: DIC : N,N'-diisopropylcarbodiimide Oxyma : Ethyl cyano(hydroxyimino)acétate, Ethyl cyanoglyoxylate2-oxime DCM : Dichlorométhane 10 DMF : N,N'-diméthylformamide Me0H : méthanol cHex : Cyclohexane DIEA : Diisopropyléthylamine Ac20: Anhydride acétique 15 TFA: Acide trifluoroacétique TIS: Triisopropylsilane AF: Acide formique ACN: Acétonitrile HPLC: High-performance liquid chromatography (chromatographie 20 en phase liquide à haute performance) LC-MS: liquid chromatography mass spectrometry (chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse) ELSD: evaporative light scattering detector (détecteur à diffusion de lumière) 25 SPPS: solid phase peptide synthesis (synthèse peptidique en phase solide) 1.1. LC-MS: L'analyse est mise en oeuvre par le système Thermo Fisher 30 ScientificTM LC-MS Accela HPLC couplé à LCQ FleetTM équipé d'une source d'ionisation par électronébulisation (ESI) et une trappe à ions en 3D. L'analyse est effectuée sur une colonne PhenomenexKinetex C-18 (100 x 300 mm) en utilisant un gradient constitué d'un tampon A (Solution aqueuse A comprenant 0,1 % de AF) et d'un tampon B (ACN comprenant 0,1 % de 35 AF). L'élution est effectuée à un débit de 0,5mL/min avec 10% du tampon B 3041638 15 jusqu'à 100% du tampon B en 30 min suivi d'un retour à 10% du tampon B en 7 min. Ces conditions standards sont appliquées à toutes les analyses LCMS, sauf spécification contraire. 5 1.2. HPLC Analytique: HPLC analytique est effectué par le système Waters® 2695 HPLC avec une colonne Vydac® 218MS 5 pM C-18 (250 x 4,6 mm) de la société Grace et un détecteur à diffusion de lumière. Les éluants utilisés sont le tampon A (0,1% de FA dans l'eau) et le tampon B (0,1% de FA dans Me0H). 10 1.3. Purification par HPLC semi-préparative: La purification semi-préparative de peptides est effectuée par le système Waters® 1525 chromatographie équipé d'un détecteur d'absorbance Waters® 2487 pour une détection à 214 nm et à 254 nm. La 15 purification est mise en oeuvre en éluant le solvant A (d'eau) avec 0,1% de TFA et le solvant B (ACN) avec 0,1% de TFA sur une colonne Vydac® 218MS510 C-18 (250 x 10 mm 5um) de la société Grace à un débit de 3mL/min. 20 1.4. Préparation de l'acide 2-azido-2-méthylpropanoïque (composé 1): Le chlorhydrate d'azoture d'imidazole-l-sulfonyle (36mmol) est ajouté à l'acide a-aminoisobutyrique (Aib) (30mmol), K2CO3 (90mmol) et CuSO4.5H20 (0,3mmol) dans Me0H (300 ml). Le mélange est agité à 25 température ambiante pendant 12H. Le mélange est concentré et ensuite dilué par l'éther diéthylique (100 mL) et extrait par NaHCO3 saturé (3x 50 mL). La phase aqueuse restée est acidifiée à pH 1 par une solution HCI de 1M et est extraite trois fois par l'acétate d'éthyle (3 x 50 mL). L'extrait organique est lavé par une solution NaCI saturée (2 x 30 mL) et séché par 30 MgSO4, filtré et concentré sous une pression réduite pour obtenir un produit jaunâtre huileux. Ce produit est utilisé dans l'étape suivante sans purification supplémentaire. Les résultats analytiques obtenus sont identiques à ceux décrits dans littérature (2,5g, 65%).1H NMR (400 MHz, CDCI3) 15 1.53 (s, 6H).13C NMR 35 (100 MHz, CDCI3) 15 178.8, 62.9, 24.3. 3041638 16 1.5. Préparation des composes 2, 3, 4 Le composé 2 (PhLP[Tz]Aib-OH), le composé 3 (2,4-difluoro- PhLP[Tz]Aib-OH) et le composé 4 (p-CF3-PhLP[Tz]Aib-OH) sont synthétisés selon les étapes de réaction illustrées ci-après. Dans la formule (IIIa), soit R4 et R5 sont tous les deux l'atome d'hydrogène (composé 2); soit R4 et R5 sont tous les deux l'atome de fluor (composé 3) ; soit R4 est le groupe -CF3 et R5 est l'atome d'hydrogène. 10 Le compose 1 obtenu à l'étape 1.4. (1 mmol) et les alcynes respectifs (1 mmol) sont dissous dans l'acétonitrile dégazé (10 mL). La 2,6- lutidine (2 mmol) et la diisopropyléthylamine (2 mmol) sont ajoutés dans cette solution sous argon. L'iodure de cuivre (0,1 mmol) est ensuite ajouté dans cette solution. La réaction est effectuée sous agitation sous argon 15 pendant 6 h. Le mélange est dilué par EtOAc (150 mL). La solution est lavée par un mélange de NH4CI saturé et de NH4OH avec une proportion de 9:1. La solution est ensuite lavée par 1M de HCI (3x50mL), une solution de NaCI saturé (2x50mL) et séchée par MgSO4 et filtrée. Après évaporation du solvant, le produit brut est purifié sur une colonne de chromatographie 20 (50/50% cHex /EtOAc). PhLP[Tz]Aib-OH (composé 2): un solide de couleur blanche de 1,88 g (70%) est obtenu en faisant réagir 1,5 g (11,6 mmol) du composé 1 avec 1,18g (11,6 mmol) de phényléthyne. Rf0,5 (cHex /EtOAc/AcOH 4,9:4,9:0.2 (v/v).). 25 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 15 8.79 (s, 1H), 7,91 - 7,85 (m, 1H), 7,45 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,33 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1,88 (s, 6H). 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) 15 173,52, 146,31, 131,32, 129,38, 128,35, 125,50, 121,20, OH (111a) 5 OH OH 3041638 17 64,55, 25,76. ESI-MS (C121-114N302) [M+H]+m/z obtenu : 232,0, calculé : 232,1). 2,4-difluoro-PhLP[Tz]Aib-OH (composé 3): un solide de couleur blanche de 5 2,5 g (80%) est obtenu par en en faisant réagir 1,5 g (11,6 mmol) du composé 1 et 1,6g (11,6 mmol) de 1-éthynyl-2,4-difluorobenzene. Rf0,5 (cHex /EtOAc/AcOH 4,9:4,9:0,2 (v/v).). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 15 8,52 (s, 1H), 8,13 (td, J = 8,8, 6,8 Hz, 1H), 7,46 - 7,39 (m, 1H), 7,23 (td, J = 8,5, 2,7 Hz, 1H), 1,91 (s, 6H). 13C NMR 10 (100 MHz, DMSO-d6) 15 173,38, 139,46, 129,40, 122,92, 115,88, 115,78, 112,94, 112,72, 105,16, 64,90, 25,76. ESI-MS (C121-112F2N302) [M+H]+m/z obtenu : 268.0, calculé : 268.1. p-CF3-PhLP[Tz]Aib-OH (composé 4): un solide de couleur blanche de 2,5g 15 (92%) est obtenu en faisant réagirl,5g (11,6 mmol) du composé 1 et 2,0g (11,6 mmol) de 4-éthynyl-a,a,a-trifluorotoluene. Rf0.5 (cHex /EtOAc/AcOH 4,9:4,9:0,2 (v/v).). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 15 8,99 (s, 1H), 8,11 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 1,90 (s, 6H).13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) 15 172.62, 20 144,93, 135,29, 128,57, 126,53, 126,19, 123,53, 122,69, 65,02, 25,72. ESI-MS (C1.31-113F3N302) [M+H]+m/z obtenu : 300.0, calculé : 300.1. 1.6. Préparation de l'alaméthicine F50/5 et ses analogues composés 5, 6 et 7 par SPPS: 25 La synthèse de peptide en phase solide (SPPS) est effectuée par un synthétiseur de peptides automatisé (CEM liberty one, Orsay, France) utilisant la chimie de Fmoc/O-tbutyl. Tous les acides aminés protégés par Fmoc, DIC, Oxyma, la résine chlorure de 2-chlorotrityle préchargée avec phénylalaninol (chargée 0,67 mmol/g ou 0,36mmol/g) proviennent de la 30 société Iris Biotech (Germany). DCM, DMF, cHex, DIEA, Ac20, TFA, TIS, FA, CAN et la pipéridine pour la synthèse de peptides sont obtenus de Aldrich (USA). La synthèse de peptides en phase solide est mise en oeuvre selon les méthodes connues (Ben Haj Salah et al., Org. Lett. 2014, 16, 1783-1785). L'alaméthicine F50/5 et ses analogues composés 5, 6 et 7 sont 35 synthétisés par cette méthode. 3041638 18 L'alméthicine F50/5 brute est purifiée par HPLC semi-préparative utilisant un gradient linéaire de 50% à 100% du tampon B dans le tampon A pendant 35 min avec un débit de 3 mL/min pour obtenir l'alaméthicine F50/5 purifiée (89 mg, 45% de rendement, >98% de pureté). 5 ESI-MS: C92H152N23024 [M+H+]; calculé : 1963,1, obtenu : 1963,4. Le composé 5 est un analogue de l'alaméthicine F 50/5 ayant la séquence ci-après: 10 PhLP[Tz]AibProAibAlaAibAlaGInAibValAibGlyLeuAibProValAibAibGInGInPhol. Le composé 5 brut est purifié par HPLC semi-préparative utilisant un gradient linéaire de 20% à 70% du tampon B dans le tampon A pendant 40 min avec un débit de 3 mL/min pour obtenir le composé 5 (89 mg, 43% de rendement, >98% de pureté). ESI-MS: C98H153N25NaO23 [M+Na+]; 15 calculé :2071,1, obtenu : 2071,6. Le composé 6 répond à la formule (IIc) et est représenté par la séquence ci-après: 2,4-F,F- 20 PhLP[Tz]AibProAibAlaAibAlaGInAibValAibGlyLeuAibProValAibAibGInGInPhol. Le composé 6 brut est purifié par HPLC semi-préparative utilisant un gradient linéaire de 20% à 70% du tampon B dans le tampon A pendant 40 min avec un débit de 3 mL/min pour obtenir le composé 6 (85 mg, 42% de rendement, >98% de pureté). 25 ESI-MS: C98H151F2N25NaO23 [M+Na+]; calculé : 2107,1, obtenu : 2107,7. Le composé 7 répond à la formule (IId) et est représenté par la séquence ci-après: 30 p-CF3- PhLP[Tz]AibProAibAlaAibAlaGInAibValAibGlyLeuAibProValAibAibGInGInPhol. Le composé 7 brut est purifié par HPLC semi-préparative en utilisant un gradient linéaire de 30% à 70% du tampon B dans le tampon A pendant 40 min avec un débit de 3 mL/min pour obtenir le composé 7 (86 mg, 40% 35 de rendement, >98% de pureté). 3041638 19 ESI-MS: C99H152F3N25NaO23 [M+Na+]; calculé : 2139,1, obtenu : 2139,7. L'alaméthicine et ses analogues 5, 6 et 7 sont tous analysés 5 respectivement par HPLC analytique selon le protocole décrit dans la partie 1.2. en utilisant un gradient de 10% à 100% du tampon B avec un débit de 0,9 mL/min pendant 50 min. 1.7. Expérience de résonance magnétique nucléaire (RMN) 10 5 mM d'alaméthicine F50/5 et des composés 6 et 7 sont dissous dans CD3OH pour préparer les échantillons pour RMN. Tous les spectres sont enregistrés par un spectromètre RMN Bruker AVANCE III de 600 MHz équipé d'une sonde quadruple de résonance (1H, 13C, 15N, 31P) de 5 mm. Les spectres 2-D homonucléaires DQF-COSY, TOCSY (DIPSI2) et ROESY sont 15 enregistrés. Les spectres hétéronucléaires 15N, 13C-HSQC et 13C-HMBC sont obtenus pour fixer les déplacements chimiques. Les spectres sont traités par Topspin (Bruker Biospin) et visualisés par Topspin ou NMRView sur un poste Linux. Les déplacements chimiques sont référencés au tetramethylsilane (TMS). Les expériences de RMN sont effectuées selon le protocole décrit 20 dans Ben Haj Slah et al. (Biopolymers. 2015 Mar 18. doi: 10.1002/bip.22641. [Epub ahead of print]). 1.8. Etudes par dichroïsme circulaire Les spectres de dichroïsme circulaire sont mesurés selon le protocole 25 décrit dans Biopolymers. 2015 Mar 18. doi: 10.1002/bip.22641. [Epub ahead of print]). 1.9. Tests biologiques 1.9.1. Test de cytotoxicité sur cellules KB. 30 Des cellules KB (carcinome épidermoïde oral humain ATCC CCL 17, American Type Culture Collection, Rockville, MD) ont été cultivées dans BME (Basal Medium de Eagle) additionné de 5% (y / y) de sérum de veau foetal, 1% (y / y) de la glutamine 200 mM et 1% (y / y) de la streptomycine (10 mg / mL) / de la pénicilline (10 000 U) (tous de Sigma-Aldrich). Les cellules 35 ont été cultivées dans des flacons en plastique (Greiner Bio One, F- 3041638 20 Courtaboeuf) à 37 °C dans une atmosphère enrichie à 5% de CO2. Après une période d'incubation de 48 h, les cellules trypsinisées ont été suspendues à 2x105 cellules / mL en suspension dans du BME supplémenté puis 50 uL de cette suspension ont été déposés dans chaque puits d'une 5 microplaque 96 puits, (Nunclon delta du sol, Thermo Scientific Nunc). Après une incubation de 48 h, 50 uL de chaque échantillon (l'alaméthicine F50/5, composés 5, 6 et 7) ont été ajoutés au 5 pL de suspension cellulaire initiale. Ces échantillons ont été testés à une teneur finale de 5% (y /v) de méthanol dans du BME supplémenté à des concentrations allant de 3 à 400 dag / mL. 10 Une solution méthanoïque à 5% (y / y) dans le BME a été utilisée comme témoin. Après 76 h d'incubation, la viabilité cellulaire a été évaluée par le test colorimétrique MTT colorimétrique (3- (4,5-diméthylthiazol-2-yl) -2,5- diphényltétrazolium, Sigma-Aldrich). Tous les essais techniques et biologiques in vitro ont été réalisés trois fois. 15 1.9.2. Test antibactérien sur Basci lus subtils et Staphylococus aureus Un essai en milieu de culture par dilution successive a été effectuée pour comparer l'activité des analogues de l'alaméthicine, à savoir les 20 composés 5, 6 et 7 à l'alaméthicine F50/5 en utilisant des concentrations de : 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.1, 1.5 dag/mL. Les souches bactériennes de Bacillus subtilis (CIP 103406) et Staphylococus aureus ont été cultivées et maintenues dans un milieu de culture LB et la gélose tryptique de soja à 28 °C. Une culture en phase exponentielle de croissance dans un milieu LB 25 (après 6 h d'incubation dans un milieu frais) a été diluée à 1x104 CFU / mL dans du milieu LB. 20 uL de solutions de peptaïbols à analyser dans du DMSO (20 mg / ml) ont été dilués avec 980 uL de milieu LB stérile. Ces solutions diluées (400 ug /mL) ont ensuite été diluées successivement par deux avec du 30 milieu stérile LB à 2% DMSO (v/v) puis ajoutées dans les puits d'une microplaque à 96 puits contenant 100 pL de solution de Bacillus subtilis. Un contrôle positif a été réalisé avec une solution de milieu de culture contenant Bacillus subtilis complétée avec 1% de DMSO et un contrôle négatif avec le milieu de culture seul à 1% DMSO. 3041638 21 Tous peptaïbols à analyser ont été testés trois fois. Microplaques ont été incubées à 28 °C sous agitation pendant une nuit. La densité optique (DO) a été lue à 600 nm et comparée au contrôle négatif utilisé en tant que blanc. Le pourcentage d'inhibition a été déterminé en utilisant la formule 5 suivante: I = 1- (0Dp / ODo), où ODp est la densité optique obtenue avec une solution de peptaïbols et ODo la densité optique du contrôle positif. II. Résultats 10 2.1. Purification de l'alaméthicine F50/5 et des analogues 5, 6 et 7 L'alaméthicine F50/5 et les analogues 5, 6 et 7 sont respectivement analysés par HPLC analytique selon le protocole décrit dans la partie 1.2. ci-dessus. Les résultats montrent que ces composés synthétisés sont purifiés à un niveau satisfaisant par HPLC semi-préparative. 15 2.2. Etudes structurales des analogues 5, 6 et 7 Les composés 5, 6 et 7 sont analysés par LC-MS (figures 2A, 2B, 2C). Ces résultats confirment que ces analogues de l'alaméthicine sont purs et présentent la masse moléculaire attendue. L'étude par dichroïsme circulaire zo des composés 6 et 7 a été entreprise pour déterminer l'impact de la substitution à l'extrémité N-terminale du résidu Aib par 2,4-F,F-PhLP[Tz]Aib ou p-CF3-PhLP[Tz]Aib. Dans le méthanol, les composés 6 et 7 montrent un spectre équivalent à celui de l'alaméthicine native caractéristique d'une hélice alpha avec un maximum à 190 nm et deux minima à 208 et 222 nm 25 (figure 4). Les tableaux 2, 3, 4, 5, 6 et 7 ci-après montrent respectivement les déplacements chimiques de 1H, 13C pour l'alaméthicine F50/5, le composé 6 et le composé 7. Ces résultats confirment la structure secondaire hélicoïdale des 30 composés 6 et 7. Le tableau 8 montre les constants de couplage 3J(HN,Ha) de l'alaméthicine, du composé 6 et du composé 7 dans Hz. Par ailleurs, les déplacements chimiques de résonnances de protons amides entre chaque acide aminé du composé 6 ou 7 et celui de 35 l'alaméthicine sont comparés (figure 3). 3041638 22 Les analyses par HPLC révèlent que les composés 6 et 7 ont des temps de rétention similaires et qu'ils sont une fois et demi plus hydrophobes que l'alaméthicine. Ainsi l'introduction du groupement phényltriazole ne modifie que légèrement la polarité de ces analogues par 5 comparaison avec l'alaméthicine. 2.3. Analyse des propriétés biologiques des composés 6 et 7 Les composés 6 et 7 ont ensuite été testés sur les cellules KB et sur deux lignées de bactéries à gram positif, à savoir Bacillus subtilis et 10 Staphylococcus aureus. Le composé 5 portant uniquement sur le noyau triazole un groupement phényle est analysé en tant que témoin négatif. Il présente une CI50 comparable à celle de l'alaméthicine. En revanche, l'introduction de groupement(s) fluoré(s) sur le noyau phényle s'accompagne d'un gain d'efficacité d'un facteur 7 pour la valeur CI50 du 15 composé 7 vis-à-vis de Bacillus subtilis et d'un facteur 4,5 pour la valeur CI50 du composé 6 vis-à-vis de cette bactérie (Tableau 1). Les résultats du tableau ci-après montrent que les composés 6 et 7 permettent d'améliorer significativement les propriétés biologiques de l'alaméthicine. Cette amélioration est liée à l'augmentation de l'intégration 20 de peptide dans la membrane cellulaire. Tableau 1: Résultats des tests des composés 5, 6 et 7 sur la croissance cellulaire des cellules KB et de deux bactéries à gram positif. Composé Alam F50/5 5 6 7 (C150) (C150) (C150) (C150) Bacillus subtilis 5 7 1,5 0,7 Staphylococcus aureus 9 5 2,3 2,3 Cellules KB 18 6,3 3,9 2,9 25 3041638 23 Tableau 2:Déplacements chimiques de 11-1 pour l'alaméthicine dans CD3OH à 298K Résidus HN Ha Hfl Hr Autre Ac CH3 2,05 Aib 1 8,59 1,46 ; 1,54 Pro 2 4,25 1,78 ; 2,34 1,96 ; 2,08 HÔ 3,49 ; 3,94 Aib 3 7,62 1,53 Ala 4 7,56 4,09 1,49 Aib 5 7,92 1,55 Ala 6 7,89 4,02 1,53 Gln 7 7,99 3,92 2,14; 2,28 2,34; 2,53 NH2 6,74; 7,41 Aib 8 8,06 1,51; 1,58 Val 9 7,48 3,59 2,23 1,00; 1,12 Aib 10 8,20 1,55 Gly 11 8,32 3,67; 3,94 Leu 12 8,08 4,46 1,58; 1,94 1,92 Hô 0,92 Aib 13 8,38 1,54; 1,61 Pro 14 4,38 1,81; 2,32 1,99; 2,07 HÔ 3,73; 3,87 Val 15 7,63 3,73 2,33 0,98; 1,06 Aib 16 7,59 1,54 Aib 17 7,80 1,54 Gln 18 7,78 4,02 2,25 2,42; 2,61 NH2 6,75; 7,41 Gln 19 7,86 4,16 2,02 2,19; 2,33 NH2 6,59 ; 7,31 Pho 20 7,30 4,15 2,73 ; 2,93 CH2 3,61 ; OH 7,42 3041638 24 Tableau 3: Déplacements chimiques de '3C pour l'alaméthicine dans CD3OH à 298K Résidus N Ca Cfl Cr Autre Ac CH3 21,0; CO 171,1 Aib 1 137,1 56,0 22,5 ; 25,2 CO 174,2 Pro 2 64,4 28,4 25,7 C6 48,6; CO 174,2 Aib 3 124,4 56,0 21,8 ; 25,8 CO 177,2 Ala 4 117,2 52,7 15,7 CO 175,9 Aib 5 127,6 55,9 21,6 ; 25,6 CO 176,6 Ala 6 115,3 52,5 15,7 CO 176,7 Gln 7 115,3? 56,8 25,9 31,2 NH2106,1; CO(I) 176,0; CO 174,5 Aib 8 127,6 56,2 21,7; 25,9 CO 176,9 Val 9 113,7 64,4 29,2 18,2, CO 174,0 19,5 Aib 10 129,7 56,2 21,7; 25,5 CO 177,7 Gly 11 100,1 43,7 CO 171,7 Leu 12 117,7 52,7 40,2 24,3 C6 19,9; 22,0 Aib 13 132,9 56,7 21,8; 25,2 CO 174,5 Pro 14 63,3 28,7 25,7 C6 49,2; CO 175,1 Val 15 115,3 62,9 29,1 18,0, CO 174,1 18,8 Aib 16 129,1 56,1 21,8; 25,9 CO 176,4 Aib 17 124,1 56,2 21,8; 26,0 CO 177,5 Gln 18 113,2 55,6 26,7 31,9 NH2106,1; CO 174,4 Gln 19 115,2 54,4 26,7 31,6 NH2105,8 ; CO 172,7 Pho 20 119,2 53,1 36,7 CH2 63,4 3041638 25 Tableau 4: Déplacements chimiques de 1H pour le composé 6 dans CD3OH à 298K Résidus HN Ha Hfl Hr autre SD12 Chitrazole 8,85 Aib 1 1,98; 2,08 Pro 2 4,45 1,88; 2,27 1,88 Hô 2,62; 3,26 Aib 3 7,98 1,58 Ala 4 7,61 4,12 1,49 Aib 5 7,76 1,54 Ala 6 7,76 4,05 1,52 Gln 7 7,98 3,95 2,25; 2,14 2,34; 2,49 NH2 6,75; 7,43 Aib 8 7,96 1,58 Val 9 7,43 3,62 2,25 1,01; 1,13 Aib 10 8,15 1,56 Gly 11 8,31 3,66, 3,94 Leu 12 8,08 4,46 1,59; 1,94 1,60 HÔ 0,93 Aib 13 8,35 1,54; 1,61 Pro 14 4,38 1,81; 2,32 1,98; 2,07 HÔ 3,73; 3,88 Val 15 7,64 3,74 2,33 0,98; 1,07 Aib 16 7,60 1,51 Aib 17 7,80 1,54 Gln 18 7,78 4,02 2,25 2,43; 2,65 NH2 6,75; 7,43 Gln 19 7,88 4,18 2,02 2,19; 2,32 NH2 6,60 ; 7,32 Pho 20 7,31 4,15 2,73; 2,93 CH2 3,61; 3041638 26 Tableau 5: Déplacements chimiques de '3C pour le composé 6 dans CD3OH à 298K Résidus N Ca Cfl Cr Autre SD12 Ctrazole 121,3 Aib 1 22,9 ; 27,6 CO 173,4 Pro 2 64,0 27,8 25,3 C6 47,2; CO 173,4 Aib 3 127,4 52,4 22,1; 25,9 CO 176,3 Ala 4 116,5 52,5 15,7 CO 175,5 Aib 5 127,5 56,0 21,7; 25,7 CO 176,5 Ala 6 115,2 52,4 15,7 CO 173,4 Gln 7 116,6 56,6 25,9 31,3 NH2106,0; CO(I) 176,0; CO 174,3 Aib 8 127,4 56,1 21,7; 25,9 CO 176,8 Val 9 113,6 64,2 29,3 18,2; CO 173,9 19,4 Aib 10 129,7 56,2 21,7; 25,5 CO 177,7 Gly 11 100,0 43,7 CO 171,4 Leu 12 117,9 52,6 40,3 24,3 C6 19,9, 22,2; CO 173,7 Aib 13 132,8 56,7 21,8; 25,2 CO 174,5 Pro 14 63,3 28,7 25,7 C6 49,2; CO 175,2 Val 15 115,2 62,9 29,2 18,0; CO 174,1 18,8 Aib 16 129,1 56,1 21,8; 25,9 CO 176,3 Aib 17 124,3 56,3 21,8; 26,0 CO 177,4 Gln 18 113,3 55,6 26,7 31,9 NH2 106,0; CO 174,2 Gln 19 115,3 54,3 26,8 31,6 NH2106,0; CO 172,7 Pho 20 119,4 53,2 36,8 CH2 63,5 3041638 27 Tableau 6: Déplacements chimiques de 11-I pour le composé 7 dans CD3OH à 298K Résidus HN Ha Hfl Hr Autre SD13 Chitrazole 8,51 Aib 1 1,91; 2,08 Pro 2 4,44 2,27 1,88 HÔ 2,58, 3,26 Aib 3 7,99 1,60 Ala 4 7,64 1,48 Aib 5 7,72 1,53 Ala 6 7,74 4,06 1,53 Gln 7 7,98 2,14, 2,35;2,49 NH26,75; 7,43 2,26 Aib 8 7,96 1,58 Val 9 7,42 3,61 2,24 1,01; 1,13 Aib 10 8,15 1,55 Gly 11 8,31 3,66, 3,94 Leu 12 8,07 4,45 1,59; 1,94 1,59 Hô 0,94 Aib 13 8,36 1,54, 1,62 Pro 14 4,39 1,81; 2,32 1,99; 2,06 HÔ 3,73; 3,87 Val 15 7,63 3,73 2,34 0,98, 1,07 Aib 16 7,59 1,54 Aib 17 7,80 1,54 Gln 18 7,78 4,02 2,25 2,43; 2,62 NH2 6,75; 7,43 Gln 19 7,87 4,17 2,02 2,20; 2,33 NH2 6,60 ; 7,32 Pho 20 7,31 4,15 2,73; 2,94 CH2 3,61 3041638 28 Tableau 7: Déplacements chimiques de '3C pour le composé 7 dans CD3OH à 298 K Résidus N Ca Cfl Cr Autre SD13 Aib 1 22,8; 27,6 CO Pro 2 63,9 27,7 25,4 C6 47,2; CO 173,2 Aib 3 129,9 57,7 22,1; 25,9 CO 176,2 Ala 4 116,4 52,6 15,7 CO 176,5 Aib 5 127,4 56,0 21,7; 25,7 CO 176,5 Ala 6 115,2 52,4 15,7 CO 173,4 Gln 7 116,5 56,7 25,9 31,3 NH2106,0; CO(I) 176,0; CO 174,3 Aib 8 127,2 56,1 21,7; 25,9 CO 176,8 Val 9 113,5 64,2 29,2 18,3; 19,4 CO 173,9 Aib 10 129,8 56,2 21,7; 25,5 CO 177,7 Gly 11 99,8 43,7 CO 171,4 Leu 12 117,8 52,6 40,2 24,3 C6 19,9, 22,0 CO 173,7 Aib 13 132,9 56,7 21,8; 25,2 CO 174,5 Pro 14 63,3 28,7 25,7 C6 49,2; CO 175,2 Val 15 115,2 63,0 29,2 18,1; 18,9 CO 174,1 Aib 16 129,2 56,1 21,8; 25,9 CO 176,3 Aib 17 124,3 56,3 21,8; 26,0 CO 177,4 Gln 18 113,2 55,6 26,7 31,9 NH2 106,0; CO 174,2 Gln 19 115,2 54,3 26,7 31,6 NH2 106,0; CO 172,7 Pho 20 119,2 53,1 36,7 CH2 63,5 Tableau 8 : Constantes de couplage 3J(HN,Ha) de l'alaméthicine, du composé 6 et du composé 7 dans Hz (o: chevauchement) Résidus Alaméthicine 6 7 Ala 4 5,6 5,0 5,3 Ala 6 4,4 4,2 3,8 Gln 7 4,9 5,3 0 Val 9 5,4 0 5,4 Leu 12 7,7 7,8 7,7 Val 15 7,9 8,0 7,6 Gln 18 5,5 5,7 5,4 Gln 19 7,2 7,3 7,2 Pho 20 9,1 9,0 9,0 5 REVENDICATIONS1. Méthode pour améliorer la stabilité d'un composé portant au moins une fonction amine et sa capacité à traverser les membranes cellulaires, ladite méthode consistant à fixer sur au moins une fonction amine dudit composé, un motif de formule (I) : dans laquelle : - Ri est choisi parmi : - un groupe phényle substitué par un à trois substituants identiques ou différents choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome de fluor et les groupes -CF3 ou -OCF3 et - les groupes biphényle, pyrènyle, naphtyle, et phénanthrènyle, - R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome d'hydrogène et les groupes (Ci-C4) alkyle, notamment un groupe méthyle. 2. Méthode selon la revendication 1, dans laquelle Ri est choisi parmi les groupes : 3041638 30 CF3 CF3 O-CF3 , OU 3. Méthode selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le motif fixé répond à la formule (Ia) (Ia) ou à la formule (Ib) 5 10 3041638 31 (Ib) dans lesquelles R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome d'hydrogène et les groupes (CI.-C4) alkyle, notamment un groupe 5 méthyle. 4. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle ledit composé portant au moins une fonction amine est choisi parmi un peptide, un pseudopeptide ou un composé à activité thérapeutique portant 10 au moins une fonction amine, ledit motif étant fixé sur : - au moins une fonction amine dudit composé à activité thérapeutique ou dudit pseudopeptide, ou - sur la fonction amine de l'acide aminé à l'extrémité N-terminale dudit 15 peptide ou, lorsque ledit peptide comporte au moins une lysine, sur une fonction amine de la chaîne latérale de ladite au moins une lysine. 5. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 pour améliorer la stabilité d'un peptide et sa capacité à traverser la membrane cellulaire, 20 caractérisée en ce que le motif de formule I ou de formule (Ia) ou (Ib) est fixé à la fonction amine de l'acide aminé placé à l'extrémité N-terminale ou, lorsque ledit peptide comporte au moins une lysine, à la fonction amine de la chaîne latérale de ladite au moins une lysine. 6. Méthode selon la revendication 5, dans laquelle ledit motif remplace l'acide aminé en position N-terminale. 7. Analogue d'un composé portant au moins une fonction amine, notamment d'un peptide, d'un pseudopeptide ou d'un composé à activité thérapeutique portant au moins une fonction amine, ledit analogue comportant au moins un motif de formule I : 3041638 32 (I) dans laquelle : - Ri est choisi parmi : 5 - un groupe phényle substitué par un à trois substituants identiques ou différents choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome de fluor et les groupes -CF3 ou -OCF3 et, - les groupes biphényle, pyrènyle, naphtyle, et phénanthrènyle, - R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome d'hydrogène et les groupes (Ci-C4) alkyle, notamment un groupe méthyle, ledit motif étant fixé sur au moins une fonction amine dudit composé, notamment, ledit motif étant fixé sur : - au moins une fonction amine dudit composé à activité thérapeutique 15 ou dudit pseudopeptide, ou - sur la fonction amine de l'acide aminé à l'extrémité N-terminale dudit peptide ou, lorsque ledit peptide comporte au moins une lysine, sur une fonction amine de la chaîne latérale de ladite au moins une lysine. 20 8. Analogue selon la revendication 7 d'un peptide, représenté par la formule II peptide (II) dans laquelle les substituants Ri, R2, et R3 sont respectivement définis tels 25 que la revendication 7. 9. Analogue selon la revendication 8 caractérisé en ce que le peptide est un peptaïbol. 3041638 33 10. Analogue selon la revendication 9 caractérisé en ce que le peptaïbol est une alaméthicine. 5 11. Analogue de l'alaméthicine selon la revendication 10, répondant à la formule (IIa) Pep1 ou la formule (IIb) Pep1 F3C 10 (IIb) dans lesquelles : - R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi un hydrogène et un méthyle, et 15 - Pep1 est le peptide de séquence SEQ ID NO : 3 PUAUAQUVUGLUPVUUEQFol ou le peptide de séquence SEQ ID NO : 4 PUAUAQUVUGLUPVUUQQFol. 12. Méthode de préparation d'un analogue d'un composé portant au moins 20 une fonction amine selon l'une quelconque des revendications 7 à 11, comprenant : (i) la formation par une réaction de cycloaddition azide-alcyne catalysée par du cuivre entre un composé de formule A 3041638 34 OH (A) dans laquelle R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome d'hydrogène et les groupes (Ci-C4) alkyle, notamment un groupe 5 méthyle, et un composé de formule B R1 (B) - dans laquelle Ri est choisi parmi : - un groupe phényle substitué par un à trois substituants 10 identiques ou différents choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome de fluor et les groupes -CF3 ou -OCF3 et, - les groupes biphényle, pyrènyle, naphtyle, et phénanthrènyle, pour obtenir un composé de formule III 15 (III) dans laquelle - Ri est choisi parmi : - un groupe phényle substitué par un à trois substituants identiques ou différents choisis indépendamment l'un de l'autre 20 parmi l'atome de fluor et les groupes -CF3 ou -OCF3 et, - les groupes biphényle, pyrènyle, naphtyle, et phénanthrènyle, - R2 et R3 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'atome d'hydrogène et les groupes (Ci-C4) alkyle, notamment un groupe méthyle, 25 - R6 est le groupe hydroxyle ou un chlore, 3041638 (ii) la réaction, éventuellement en présence d'au moins un agent de couplage, entre un composé de formule III obtenue dans l'étape (i) et une fonction amine dudit composé pour obtenir un analogue dudit composé. 5