Brevet FR3045044A1 — publié le 20170616

COMPOSITION ET APPÂT RODONTICIDE COMPRENANT DU FLOCOUMAFÈNE, PROCÉDÉ DE LUTTE CONTRE DES RONGEURS CIBLES NUISIBLES L'invention concerne une composition comprenant du flocoumafène, un appât rodonticide comprenant une telle composition et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. L'invention concerne donc le domaine technique de la lutte contre le développement de populations de rongeurs cibles nuisibles. Il est connu d'utiliser des poisons sous forme d'appâts 10 rodonticides contre des rongeurs cibles nuisibles. On connait de W02005/072524 un appât rodonticide comprenant une proportion de flocoumafène de 50 ppm dans l'appât et une proportion de fipronil de 40 ppm. Un tel appât est susceptible d'être consommé par des animaux autres que des rongeurs cibles nuisibles lorsqu'il est mis à la disposition 15 de rongeurs cibles nuisibles. Il peut être consommé directement (consommation primaire) par des animaux domestiques ou des animaux de compagnie. Il peut aussi être consommé accidentellement par des humains. Une telle consommation peut induire chez ces animaux domestiques, chez ces animaux de compagnie ou chez ces humains un empoisonnement qui peut être létal. 20 En outre, une fraction du flocoumafène de ces appâts rodonticides peut être ingérée (consommation secondaire) par des animaux -notamment par des oiseaux, en particulier des rapaces- prédateurs ou charognards de rongeurs nuisibles et notamment de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide. Cette consommation 25 secondaire est susceptible d'entrainer à terme la mort de ces animaux prédateurs ou charognards qui peuvent être des animaux -notamment des oiseaux-appartenant à des espèces protégées. L'invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant une composition comprenant du flocoumafène, un appât rodonticide 30 comprenant une telle composition et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler des populations 3045044 2 de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d'empoisonnement d'espèces non cibles, par exemple des animaux domestiques ou des animaux de compagnie, ou encore des humains, susceptibles de consommer accidentellement de tels appâts rodonticides. 5 L'invention vise aussi à pallier ces inconvénients en proposant une composition comprenant du flocoumafène, un appât rodonticide comprenant une telle composition et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler des populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d'empoisonnement par consommation secondaire d'animaux domestiques (animaux de compagnie ou d'élevage) ou sauvages -par exemple des renards ou des oiseaux- prédateurs de rongeurs cibles nuisibles ayant consommé de l'appât rodonticide ou charognards de cadavres de rongeurs cibles nuisibles empoisonnés. L'invention vise aussi à proposer une composition comprenant du flocoumafène, un appât rodonticide comprenant une telle composition et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dont la mise en oeuvre est en accord avec les règles de bon usage -notamment vis à vis de la protection des oiseaux, et en particulier des rapaces-. L'invention vise aussi une composition comprenant du flocoumafène, un appât rodonticide comprenant une telle composition et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont respectueux de l'environnement, de la santé humaine et des animaux non cible. L'invention vise aussi à proposer une composition comprenant du flocoumafène, un appât rodonticide comprenant une telle composition et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont susceptibles de pouvoir être utilisés pour lutter contre des rongeurs cibles nuisibles résistants à des appâts connus de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. L'invention vise donc aussi à proposer une alternative à des appâts rodonticides connus. Pour ce faire, l'invention concerne une composition 3045044 3 comprenant du flocoumafène dont une quantité d'un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène, dit énantiomère E4, telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de flocoumafène dans la composition est inférieur à 10%, ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d'une 5 composition de flocoumafène comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du flocoumafène, un temps de rétention t4 de valeur telle que t1 382,1 et m/z 3045044 22 541,1 -> 161 correspondants au signal du flocoumafène. Les valeurs des temps de rétention de chacun des énantiomères du flocoumafène sont, dans les conditions décrites, de : - t1 = 4,5 min pour ledit énantiomère El dudit diastéréoisomère D1,4 ; 5 - t2 = 6,2 min pour ledit énantiomère E2 dudit diastéréoisomère D2,3 ; - t3 = 6,7 min pour ledit énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D2,3, et ; - t4 = 9,3 min pour ledit énantiomère E4 dudit diastéréoisomère D1,4. Les valeurs des temps de rétention t1, t2, t3 et t4 sont susceptibles de varier, notamment avec la température de la colonne de 10 chromatographie. Cependant, dans ces conditions chromatographiques, l'ordre d'élution des énantiomères du flocoumafène reste inchangé. À titre indicatif, la valeur du temps de rétention (t1) de l'énantiomère El dudit diastéréoisomère D1,4 peut varier entre 4,4 min et 4,6 min. La valeur du temps de rétention (t2) de l'énantiomère E2 dudit diastéréoisomère D2,3 peut varier entre 5,9 min et 6,4 min. 15 La valeur du temps de rétention (t3) de l'énantiomère E3 dudit diastéréoisomère D2,3 peut varier entre 6,4 min et 6,9 min. La valeur du temps de rétention (t4) dudit énantiomère E4 selon l'invention peut varier entre 8,9 min et 9,4 min. Extraction du flocoumafène de foies de rats gavés avec du flocoumafène 20 Homogénéisation de l'échantillon de foie On pèse avec précision de l'ordre de 0,525 g (±0,025 g) de foie de rat que l'on place dans un tube en polypropylène de 50 mL On ajoute 10 mL d'acétone et on soumet la suspension à une homogénéisation au moyen d'un homogénéisateur/disperseur Ultra-Turrax® pendant une durée de l'ordre de 25 30 sec. On rince la tige de l'homogénéisateur/disperseur à l'eau chaude puis 2 fois avec 20 mL d'acétone dans un tube en polypropylène. On centrifuge l'homogénat pendant 5 min à une vitesse de centrifugation de 3000 rpm (rotation par minute). On collecte et on transvase le surnageant dans un tube à essai. On soumet l'échantillon à une évaporation sous un flux d'azote (N2) à la température 30 de 40°C de façon à former un extrait sec. 3045044 23 Élimination des lipides Dans le tube contenant l'extrait sec, on ajoute 1 mL d'acétonitrile de façon à solubiliser l'extrait sec. On lave la solution d'acétonitrile 2 fois successivement avec 1 mL d'hexane. L'extrait débarrassé 5 des lipides est séché sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C, puis repris avec 0,5 mL de méthanol et solubilisé par agitation sous vortex. On ajoute ensuite 0,5 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q). L'échantillon est homogénéisé sous vortex. Extraction du flocoumafène sur phase solide (« SPE, Solid 10 Phase Extraction ») On fait passer 1 mL de dichlorométhane (CH2Ct2), puis 1 mL de méthanol (CH3OH), puis 1 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q) sur une cartouche Oasis HLB 1cc (WAT094225, Waters). On dépose ensuite l'extrait de foie débarrassé des lipides (1mL Me0H/H20 Milli-Q) et contenant le 15 flocoumafène en tête de la cartouche préalablement. L'extrait de foie pénètre dans la cartouche par gravité au contact de la phase solide de la cartouche. On dépose en tête de cartouche 1 mL de solution de lavage formée de méthanol (CH3OH) et d'eau ultra-pure (H2O) en proportion volumique de 90/10. On sèche la cartouche par aspiration sous vide connectée en partie basse de la cartouche. 20 On dépose ensuite en tête de cartouche 1 mL de solution d'élution formée de dichlorométhane (CH2C 12) et de méthanol (CH3OH) en proportion volumique de 90/10 et on collecte en bas de cartouche un éluat comprenant le flocoumafène. On évapore le solvant de l'éluat sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C. On reprend l'échantillon dans avec 0,5 mL d'acétonitrile (NC-CH3) et on 25 filtre la solution d'acétonitrile contenant le flocoumafène sur filtre de porosité 0,2 ium. Rémanence hépatique des stéréo-isomères de configuration OEi, E2, E3 et E4) du flocoumafène chez le rat On administre par voie orale (« peros ») à des rats de 30 laboratoire (rats Sprague Dawley, Charles River, Saint germain sur l'Arbresle, France) mâles et femelles, âgés de 8 semaines et pesant entre 180 et 200 g, une 3045044 24 solution comprenant du flocoumafène dans un mélange d'huile végétale et de DMSO à 5 % de façon que la quantité de flocoumafène ingérée par chaque rat soit de l' ordre de 2,3 mg par kilogramme de rat. Les rats gavés sont traités quotidiennement par administration par voie sous cutanée d'une dose de vitamine 5 K1 à raison de 1U par rat de façon à maintenir en vie les rats tout au long de l'expérience. Le rapport de la somme des quantités dudit énantiomère E2 et dudit énantiomère E3 (diastéréoisomère D2,3) sur la quantité de flocoumafène dans la solution de gavage est de 59% et le rapport de la somme des quantités 10 dudit énantiomère El et dudit énantiomère E4 (diastéréoisomère D14) sur la quantité de flocoumafène dans la solution de gavage est de 41%. À 1 jour (J+1), 3 jours (J+3) et 7 jours (J+7) après le gavage, on euthanasie 3 rats mâles et 3 rats femelles préalablement anesthésiés à l'isoflurane, on prélève le foie des rats sacrifiés puis on extrait du foie et on dose 15 les quantités de chacun des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène présents dans le foie des rats mâles et femelles gavés. Les résultats obtenus sur les rats mâles sont donnés au tableau 1 ci-après et les résultats obtenus sur les rats femelles sont donnés au tableau 2 ci-après dans lesquels les valeurs de la concentration de chacun des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène 20 dans le foie sont la moyenne des valeurs mesurées sur 3 rats et exprimées en nanogramme (ng) par gramme de foie. Concentration hépatique, ng/g J+1 J+3 J+7 Énantiomère El 196 47 0 Énantiomère E2 3904 1962 319 Énantiomère E3 3301 1862 647 Énantiomère E4 8143 9906 2623 Tableau 1 (rats mâles) 3045044 25 Concentration hépatique, ng/g J+1 J+3 J+7 Énantiomère Ei 4585 2692 1196 Énantiomère E2 5396 2522 469 Énantiomère E3 5478 2734 1228 Énantiomère E4 10342 7765 5054 Tableau 2 (rats femelles) La figure 2 représente l'évolution du pourcentage de la quantité massique de chaque énantiomère (E1 et E4) du diastéréoisomère D1,4 et de chaque énantiomère (E2 et E3) du diastéréoisomère D2,3 par rapport à la 5 quantité de flocoumafène retenue dans le foie des rats (mâles et femelles) gavés et sacrifiés à J+1, J+3 et J+7. Le pourcentage dudit énantiomère El est représenté par des colonnes à hachures obliques, le pourcentage dudit énantiomère E4 est représenté par des colonnes à hachures horizontales, le pourcentage dudit énantiomère E2 est représenté par des colonnes noires et le pourcentage dudit 10 énantiomère E3 est représenté par des colonnes blanches. Les proportions respectives de chacun des énantiomères (E1 et E4) du diastéréoisomère D1,4 et des énantiomères (E2 et E3) du diastéréoisomère D2,3 dans le flocoumafène de la composition de gavage sont représentées en colonne « X » figure 2 et sont de 20,5% pour l'énantiomère El dudit diastéréoisomère D1,4 et de 20,5% pour 15 l'énantiomère E4 dudit diastéréoisomère D1,4 et de 29,5% pour ledit énantiomère E2 et de 29,5% pour ledit énantiomère E3. Ledit énantiomère E4 est l'énantiomère du flocoumafène qui est le plus rémanent dans le foie des rats et le plus toxique pour l'environnement. L'invention vise donc une composition, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisible comprenant 20 une teneur faible en énantiomère E4. Il va de soi que l'invention peut faire l'objet de nombreuses variantes de réalisation et applications. En particulier, une composition, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles sont sujets à des infinités de variantes tant dans la formulation de l'appât rodonticide que 25 dans les modes de mise en oeuvre du procédé. REVENDICATIONS1/ - Composition comprenant du flocoumafène dont une quantité d'un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène, dit énantiomère 5 E4, telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de flocoumafène dans la composition est inférieur à 10%, ledit énantiomère E4 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de flocoumafène comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du flocoumafène, un temps de rétention t4 de valeur telle que t1