Brevet FR3044555A1 — publié le 20170609

Film comprenant un oligosaccharide polysulfaté et un polycation et son procédé de fabrication La présente invention a pour objet un film comprenant au moins un polycation et un actif. Cet actif est choisi parmi les oligosaccharides polysulfatés synthétiques ayant 1 à 4 unités oses, leurs sels, ou leurs complexes. La présente invention porte également sur les films susceptibles d'être obtenus par pulvérisation, simultanée ou en alternance, d'au moins une solution de polycation et d'au moins une solution d'oligosaccharide polysulfaté ainsi que l'utilisation de ces films sur la peau, les affections cutanées, la plaie ou les muqueuses. La cicatrisation d'une plaie est un phénomène biologique naturel, les tissus humains et animaux étant capables de réparer des lésions localisées par des processus de réparation et de régénération qui leur sont propres. La rapidité et la qualité de la cicatrisation d'une plaie dépendent de l'état général de l'organisme atteint, de l'étiologie de la plaie, de l'état et de la localisation de la plaie, et de la survenue ou non d'une infection, ainsi que des facteurs génétiques prédisposant ou non à des troubles de la cicatrisation. La cicatrisation naturelle d'une plaie se déroule principalement selon trois phases successives, chacune de ces phases étant caractérisée par des activités cellulaires spécifiques qui font progresser le processus de réparation selon des séquences chronologiques précises : la phase inflammatoire, la phase de granulation (ou phase proliférative), et la phase de formation de la cicatrice. La première phase, la phase inflammatoire, débute dès la rupture des vaisseaux sanguins qui déclenche la formation d'un caillot (coagulation du sang) principalement composé de fibrine et de fibronectine, et qui va constituer une matrice provisoire. Cette matrice comble en partie la lésion et va permettre la migration au sein de la zone lésée des cellules inflammatoires recrutées pour assurer la détersion de la plaie. Les plaquettes présentes vont également libérer des facteurs (par exemple cytokine, facteurs de croissance) permettant le recrutement des cellules de la cicatrisation comme les cellules inflammatoires (les polynucléaires neutrophiles et les macrophages), les fibroblastes et les cellules endothéliales. La seconde phase correspond au développement du tissu de granulation. On observe d'abord une colonisation de la blessure par prolifération des fibroblastes. Puis, la migration des cellules endothéliales à partir des vaisseaux sains va permettre la néovascularisation, ou angiogénèse, du tissu lésé. Dans le tissu de granulation, les fibroblastes sont activés et vont se 3044555 2 différencier en myofibroblastes présentant des propriétés contractiles importantes, générées par les microfilaments d'actine, permettant la contraction de la plaie. Ces microfilaments sont exprimés par une protéine : l'actine a-musculaire lisse. Ces myofibroblastes jouent donc un rôle majeur dans la formation et la maturation du tissu de granulation qui va conduire à la 5 cicatrisation de la lésion. Il y a ensuite migration des kératinocytes et reconstruction de l'épiderme. La troisième phase du processus de réparation, la formation de la cicatrice ou maturation, s'accompagne d'un remodelage du tissu de granulation. Une partie de la matrice extracellulaire est digérée par des protéases (essentiellement des métallo-protéases 10 matricielles (MMP) et des élastases), et on observe une réorganisation progressive de la matrice extracellulaire. Progressivement, le collagène de type III, majoritaire dans le tissu de granulation, est remplacé par le collagène de type I, principal composant matriciel du derme. A la fin de la phase de maturation, les fibroblastes, myofibroblastes et cellules vasculaires voient leur prolifération et/ou leur activité réduites. Puis les cellules excédentaires meurent 15 par apoptose. Parallèlement au remodelage de la matrice extracellulaire et à l'apoptose des cellules excédentaires, l'état inflammatoire diminue progressivement. Cette phase est la plus longue : au bout d'un an environ, la cicatrice se remodèle, elle n'est plus rouge, ni rigide, et ne provoque plus douleur et elle s'aplanie. Les oligosaccharides polysulfatés sont connus et utilisés pour traiter diverses pathologies de la 20 peau, et notamment pour le traitement des plaies. A titre d'exemple, on peut citer les produits de la gamme « Cicalfate », commercialisés par les Laboratoires Pierre Fabre pour favoriser la réparation de l'épiderme qui contiennent un oligosaccharide polysulfaté, le sucralfate. Ces produits se présentent sous forme de crème. On peut également citer les produits « UrgoStart » commercialisés par les Laboratoires Urgo 25 pour le traitement des plaies qui contiennent un oligosaccharide polysulfaté, le sucrose octasulfate de potassium. Ces produits se présentent sous la forme de pansements. Le sucrose octasulfate de potassium est incorporé à la matrice lipido-colloïde. La présente invention porte sur un nouveau mode d'incorporation des oligosaccharides 30 polysulfatés sous forme de films permettant leur libération lorsqu'ils sont en contact avec la peau, la plaie ou les muqueuses. En particulier, l'invention a pour objet un film caractérisé en ce qu'il comprend au moins un polycation et un oligosaccharide polysulfaté ayant une à quatre unités ose. 3044555 3 Les films susceptibles d'être obtenus par pulvérisation d'au moins une solution de polycation et d'au moins une solution d'oligosaccharide polysulfaté se présentent de préférence sous forme de nanofilms. On entend par nanofilm au sens de la présente invention des films présentant une épaisseur 5 comprise entre 1 nm et 10 j.tm de préférence entre 10 nm et 1 iam. Le film selon l'invention est caractérisé en ce qu'il comprend au moins un polycation et au moins un oligosaccharide polysulfaté. Les films selon la présente invention sont susceptibles d'être obtenus par pulvérisation, simultanée ou en alternance, d'au moins une solution de polycation et d'au moins une 10 solution d'oligosaccharide polysulfaté. Ce type de formulation est particulièrement intéressant lorsqu'il est appliqué sur une plaie. En effet, au contact des exsudats, le film se solubilise rapidement permettant la libération des oligosaccharides polysulfatés. Ceci peut permettre une action immédiate au contact des exsudats, d'atteindre la dose efficace plus rapidement. 15 La présente invention s'intéresse plus particulièrement à l'utilisation des films, en particulier des nanofilms contenant le polycation et les oligosaccharides polysulfatés pour le traitement des plaies exsudatives. En effet, en présence des exsudats, les nanofilms se dissolvent et libèrent l'actif qu'ils contiennent. 20 Oligosaccharides polysulfatés Les oligosaccharides utilisés dans le cadre de la présente invention sont des oligomères synthétiques formés de 1 à 4 unités d'oses, et de préférence de 1 ou 2 unités d'oses, généralement liées entre elles par liaison glycosidique alpha ou bêta. En d'autres termes, il s'agit de mono, di, tri ou tétrasaccharides, et de préférence de mono ou disaccharides. 25 Il n'y a pas de limitation particulière concernant la nature des unités oses de ces polysaccharides. De préférence, il s'agira de pentoses ou d'hexoses. A titre d'exemple de monosaccharide, on peut citer le glucose, le galactose ou le mannose. A titre d'exemple de disaccharide, on peut citer le maltose, le lactose, le sucrose ou le tréhalose. A titre d'exemple de trisaccharide, on peut citer le mélézitose. A titre d'exemple de tétrasaccharide, on peut citer 30 le stachyo se. De préférence, l'oligosaccharide est un disaccharide, et de préférence encore le sucrose. 3044555 On entend par "oligosaccharide polysulfaté" au sens de la présente demande un oligosaccharide dont au moins deux, et de préférence tous les groupes hydroxyles de chaque ose ont été substitués par un groupe sulfate. De préférence, l'oligosaccharide polysulfaté utilisé dans le cadre de la présente demande est le 5 sucrose octasulfate. Les oligosaccharides polysulfatés utilisés dans le cadre de la présente invention peuvent se présenter sous forme de sels ou complexes. A titre d'exemple de sels, on peut citer les sels de métal alcalin tels que les sels de sodium, de calcium ou de potassium; les sels d'argent ; ou encore les sels d'acide aminé. 10 A titre d'exemple de complexes, on peut citer les complexes d'hydroxyaluminium. Dans le cadre de la présente invention, des composés particulièrement préférés sont les suivants : - le sel de potassium du sucrose octasulfaté (ou sucrose octasulfate de potassium) ; - le sel d'argent du sucrose octasulfaté ; et 15 - le complexe hydroxyaluminium du sucrose octasulfate, appelé communément sucralfate. Le sucrose octasulfate de potassium (ou KSOS) est particulièrement préféré. Il se présente sous la forme d'une molécule multichargée qui présente des propriétés inhibitrices des Métallo Protéases Matricielles. Il se présente sous forme de petite chaîne polymérique chargée 20 négativement (polyanion). Dans le cadre de la présente invention, les oligosaccharides polysulfatés sont utilisés dans des quantités allant de 10 % à 90% en poids, de préférence de 30 à 70 %. En particulier, dans le cadre de la présente invention, les oligosaccharides polysulfatés utilisés 25 sont de préférence les sels de potassium. Les oligosaccharides polysulfatés utilisés dans le cadre de la présente invention peuvent se présenter sous forme de poudre micronisée ou sous forme solubilisée. Le sel de potassium du sucrose octasulfate est connu depuis 25 ans pour le traitement des 30 plaies lors de la phase de bourgeonnement grâce à son action sur les fibroblastes. Cette action est par exemple décrite dans les demandes de brevet EP 230 023, WO 89/05645 ou WO 98/22114. Comme il est précisé dans ces documents, ce composé est utilisé après avoir réalisé une détersion assistée de la plaie et donc après avoir éliminé les tissus nécrotiques et/ou 3044555 5 fibrineux (voir EP 230 023, WO 89/05645, WO 98/22114). On l'utilise donc sur une plaie propre et détergée. Dans la demande de brevet internationale WO 89/05645, il est précisé que les polysaccharides polysulfatés tels que le sucralfate sont des inhibiteurs de protéases, notamment les 5 hyaluronidases, qui sont des enzymes capables de dégrader l'acide hyaluronique et les glycosaminoglycanes. Un des développements actuels des biomatériaux s'oriente vers la réalisation de matériaux bioactifs intelligents. Différentes techniques de traitement de surface ont été développées dans 10 ce but. Polycation Une voie de fonctionnalisation, basée sur le dépôt couche par couche de polyélectrolytes (alternativement un polycation et un polyanion), a été proposée au début des années 1990. 15 L'épaisseur des films obtenus peut être contrôlée en faisant varier plusieurs paramètres (nombre de couches, masses moléculaires, concentrations et nature des polyélectrolytes, pH, force ionique). Leur intérêt se révèle dans le domaine des biomatériaux par la possibilité de leur conférer une fonctionnalité biologique par insertion de protéines, de peptides ou de médicaments. Les films multicouches sont obtenus principalement par deux techniques : par 20 trempages alternés dans les solutions de polyélectrolytes ou par pulvérisations alternées ou simultanées de ces solutions. La cohésion de ces films est basée principalement sur les interactions électrostatiques entre les charges positives et négatives des chaînes de polycation et de polyanion mais également entre polyélectrolytes et petites molécules multichargées. 25 Dans le cadre de la présente invention, le film, en particulier le nanofilm, comprend au moins un polycation, c'est-à-dire un polymère ionique chargé positivement. Les films de l'invention sont obtenus en combinant l'oligosaccharide polysulfaté à des polycations à grandes chaînes. 30 De préférence les polycations mis en oeuvre peuvent être choisis parmi la poly(L-lysine), le chitosan et le collagène. La cohésion de ces films, en particulier des nanofilms, est basée sur des interactions électrostatiques entre les charges positives des chaînes de polycation et les charges négatives du polyanion oligosaccharide polysulfaté. 3044555 6 Ces polycations sont de préférence présents dans les films de l'invention, en particulier dans les nanofilms, dans des quantités allant de 10 à 90 % en poids, de préférence de 30 à 70%. 5 Milieu pharmaceutiquement acceptable Le film (ou nanofilm) de l'invention est en particulier susceptible d'être obtenu par pulvérisation (ou sprayage), simultanée ou en alternance, d'au moins une solution de polycation et d'au moins une solution d'oligosaccharide polysulfaté. En particulier, le film peut être obtenu par une succession de pulvérisations alternant, à plusieurs reprises, la 10 pulvérisation d'une solution de polycation et la pulvérisation d'une solution d'oligosaccharide polysulfaté. Le polycation et l'oligosaccharide polysulfaté sont tels que décrits précédemment. Le film (ou nanofilm) de l'invention est en particulier susceptible d'être obtenu par 1 à 500 15 étapes de pulvérisation de la solution de polycation et de la solution d'oligosaccharide polysulfaté, les deux solutions étant pulvérisées de manière simultanée ou en alternance. De préférence, le film est obtenu par 5 à 200 étapes de pulvérisation, et plus préférentiellement par 20 à 100 étapes de pulvérisation. Les solutions liquides comprenant le polycation ou l'oligosaccharide polysulfaté comprennent 20 notamment un milieu pharmaceutiquement acceptable pouvant contenir de l'eau. Par milieu pharmaceutiquement acceptable, on entend, au sens de la présente demande, un milieu compatible avec les polycations et/ou les oligosaccharides polysulfatés. L'eau peut notamment être présente dans les solutions liquides comprenant le polycation ou 23 l'oligosaccharide polysulfaté en une teneur supérieure à 70%, de préférence supérieure à 95%. En particulier, les solutions liquides comprenant le polycation ou l'oligosaccharide polysulfaté peuvent comprendre un mélange d'eau (i.e. à titre de milieu pharmaceutiquement acceptable) et de chlorure de sodium (NaC1), « sel de fond », de préférence à une 30 concentration de150 mM. Chaque étape de pulvérisation peut être conduite pendant une durée allant d' 1 s à lmin, de préférence de 5 à 10s. Le débit de pulvérisation peut, par exemple, être compris entre 0.1 et 1 mL/s, de préférence entre 0.2 et 0.5 mL/s. 3044555 7 Chaque étape de pulvérisation est de préférence suivie d'une étape de rinçage et/ou d'une étape de séchage. Chaque étape de rinçage et chaque étape de séchage est de préférence conduite pendant une durée allant d'ls à lmin, de préférence de 5 à 10s. 5 L'invention a également pour objet la combinaison de compositions liquides caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une solution de polycation et au moins une solution d'oligosaccharide polysulfaté précédemment décrites. 10 L'invention est illustrée plus en détails dans les exemples non limitatifs suivants. Exemples de nanofilms selon l'invention : Les polycations qui ont été utilisés sont d'origine synthétique, comme la poly(L-lysine) 15 (polypeptide) ou d'origine naturelle, comme le collagène (COL, protéine). Les solutions de sucrose octasulfate de potassium (ou KSOS) et de polycations ont été préparées dans de l'eau ultra-pure (de résistivité 18.2 Macm, système Milli-Q-plus, Millipore). 20 La construction des nanofilms a été réalisée sur des substrats en silicium (Wafernet INC, USA), préalablement découpés à l'aide d'une pointe diamant en rectangles d'environ 2x2 cm2. Avant utilisation, les substrats ont été traités au plasma cleaner (Harrick Plasma, USA) afin d'éliminer les impuretés et de les rendre hydrophiles. Le gaz utilisé est l'oxygène contenu dans l'air. 25 Quel que soit le système étudié, une première couche de poly(éthylène imine) branché (BPEI) a été déposée par trempage (5 minutes) du substrat dans une solution aqueuse de BPEI suivi par deux rinçages à l'eau (d'une minute chacun) et un séchage à l'azote. Cette première couche sert de couche d'accroche favorisant la construction des nanofilms. 30 Afin d'élaborer les nanofilms polycation/KSOS, le mode de dépôt par pulvérisation a été privilégié. Un appareil de pulvérisation comprenant quatre aérographes, reliés à une arrivée d'air comprimé et placés à une distance de 25 cm du substrat a été utilisé. Deux aérographes 3044555 8 permettent de pulvériser les deux composés en solution (KSOS et le polycation choisi). Deux autres permettent d'effectuer les étapes de rinçage et de séchage des dépôts. Afin d'évaluer la quantité de composés pulvérisés, les débits de pulvérisations sont mesurés lors de chaque manipulation et sont de l'ordre de 0,3 mL/s. 5 Le substrat est mis en rotation pendant la durée des pulvérisations à environ 1000 tours/min afin d'obtenir des dépôts homogènes. Plusieurs paramètres ont été étudiés : - le type de pulvérisation (alternée ou simultanée) - la concentration en sel de fond NaCl (0 et 150 mM) 10 - le type de polycations (d'origine synthétique ou naturelle) - le rapport KSOS/polycation pulvérisé Afin de mesurer l'épaisseur des dépôts successifs sur les substrats de silicium, l'ellipsométrie a été utilisée. 15 Les tests de stabilité des nanofilms ont été réalisés en mettant un substrat de 2 X 2 cm2 au contact de 20 mL de milieu physiologique et de milieu simulant la plaie pendant 45 min. Le milieu physiologique est modélisé par un tampon phosphate à pH 7.4 ± 0.1 (phosphate buffer saline, PBS) obtenu par dilution d'une solution concentré PBS 10x contenant du Ca2+ et du Mg2+. 20 Le milieu de la plaie est modélisé par une solution aqueuse 5% massique NaC1 et 5% massique de CaC12 dihydraté. Exemple 1 selon l'invention : nanofilms de Poly(L-lysine)/KSOS Les nanofilms de PLL/KSOS ont été obtenus après 25 étapes de pulvérisation simultanée. 25 Les durées de pulvérisations sont les suivantes : 10 s pour les composés pulvérisés ; 5 s pour le rinçage, 5 s pour le séchage. Les deux composés sont utilisés en solution aqueuse avec 150 mM NaC1 en sel de fond. L'optimisation de la construction a été obtenue en faisant varier la concentration en KSOS de 0,05 à 12 mg/mL pour une concentration en PLL de 0,2 mg/mL. 30 L'optimum de construction est obtenu avec 0,2 mg/mL en KSOS. Après l'élaboration des nanofilms PLL/KSOS, leur stabilité a été testée au contact du milieu physiologique et au contact du milieu de la plaie. Pour ce faire, chaque nanofilm d'une taille 3044555 9 de 2 x 2 cm2 a été mis au contact de 750 µL de milieu physiologique ou de milieu de la plaie pendant 45 min suivi d'une étape de rinçage à l'eau Milli Q pendant 45 min. Les nanofilms PLL/KSOS présentent une faible perte d'épaisseur ( REVENDICATIONS1. Film caractérisé en ce qu'il comprend au moins un polycation et un oligosaccharide polysulfaté ayant une à quatre unités ose. 2. Film selon la revendication 1, caractérisé en ce que le polycation est présent dans une quantité de 10 à 90 % en poids, de préférence 30 à 70% et l'oligosaccharide polysulfaté dans une quantité del° à 90 % en poids de préférence 30 à 70%. 3. Film selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le polycation est choisi parmi la poly(L-lysine), le chitosan ou le collagène. 4. Film selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'oligosaccharide polysulfaté est choisi parmi les sucroses octasulfate, de préférence, le sucrose octasulfate de potassium. 5. Film selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il présente une épaisseur de 1 nm à 10 ium, de préférence 10 nm à 1 pm. 6. Film caractérisé en ce qu'il est susceptible d'être obtenu par pulvérisation, simultanée ou en 15 alternance, d'au moins une solution de polycation et d'au moins une solution d'oligosaccharide polysulfaté. 7. Film selon la revendication précédente, caractérisé en ce que les solutions pulvérisées comprennent un milieu pharmaceutiquement acceptable, de préférence l'eau. 8. Combinaison de compositions liquides caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une 20 solution de polycation et au moins une solution d'oligosaccharide polysulfaté. 9. Utilisation du film selon les revendications 1 à 6 dans un dispositif destiné à protéger la peau, la plaie ou les muqueuses.