Brevet FR3049465A1 — publié le 20171006

Composition pharmaceutique préventive et curative à base de peroxométallate La présente invention concerne un mélange actif dans un traitement thérapeutique, ledit mélange comprenant un peroxométallate, comme par exemple un peroxomolybdate et/ou, comme par exemple un peroxolanthanate. En particulier, la présente invention concerne un mélange actif pour le traitement préventif et curatif des infections à Herpesviridae et, en particulier, les infections à Herpes simplex 1 (HSV-1 ou HHV-1) et à Herpes simplex 2 (HSV-2 ou HHV-2). La présente invention concerne aussi des compositions pharmaceutiques comprenant un tel mélange actif, des méthodes de préparation ainsi que ses utilisations, en particulier dans le cadre d'un traitement thérapeutique. État de la technique Parmi les pathologies infectieuses, celles dues aux virus, outre leurs gravités variables selon leurs types, pouvant aller jusqu'au décès du patient, et avec un taux de morbidité très inégal selon les populations et les époques, posent un problème thérapeutique majeur. Cet agent causal nécessite un hôte cellulaire dont il utilise le métabolisme et les constituants pour se multiplier, d'où la difficulté d'éradication par traitement respectueux du tissus sain par rapport à celui infecté, voire un traitement préventif. Parmi les infections virales pouvant affecter l'homme, celles à Herpesviridae sont courantes, très contagieuses et endémiques. Cette famille de virus à ADN est constituée de huit types de virus. Parmi eux, HHV-1 ou HSV-1 et HHV-2 ou HSV-2 sont responsables des herpès orofaciaux-labiaux et vaginaux-anaux. Tous les herpès-virus, partagent des propriétés structurales protéiques et génomiques, cliniques comme la latence, la récurrence ou l'activation lytique. Comme pour toutes les infections virales, les moyens thérapeutiques sont complexes et souvent limités. L'invention s'attache à résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutique permettant de lutter contre une infection virale, en particulier d'une infection virale impliquant les Herpesviridae et en particulier HSV-1 et HSV-2. Les infections à HSV-1 et HSV-2 sont très contagieuses (principalement par contact) et endémiques (Organisation Mondiale de la Santé (OMS), janvier 2016, "Le virus de l'herpès", aide mémoire N°400, http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs400/fr/#). Le réservoir est humain, sans zoonose ni vecteur. La prévalence des infections à HSV-1 responsables de l'herpès orofacial-labial, de certaines formes d'herpès génital et du panaris herpétique, est variable selon les continents, les méthodes et les possibilités de 3049465 2 diagnostics. Elle est estimée, en moyenne, de 84 à 99% en Afrique, de 50 à 100% en Asie, de 65 à 98% en Europe et de 57 à 68% en Amérique du Nord. La prévalence des infections à HSV-2, responsable de l'herpès génital et anal, est variable selon le sexe, le profil sociologique et ethnique, l'âge et le continent. Par exemple (d'après : Centers for 5 Disease Control and Prevention (CDC), 2010, MMW R Morb Mortal Wkly Rep., 59(15):456-459), la séroprévalence aux Etats-Unis pour la tranche d'âge de 40 à 49 ans est estimée à 32% chez les femmes et à 20% chez les hommes. En considérant le taux de morbidité, les infections à HSV-1 et HSV-2 ont un impact mondial certain. En effet, il n'existe aucun traitement curatif totalement efficace en termes 10 d'éradications, que l'administration d'antiviraux soit per os ou par voie parentérale, que ce soit d'un analogue de pyrophosphate (le foscarnet, par exemple), d'analogues de nucléosides non activables ou activables in situ (comme la fiacitabine, la vidarabine, l'aciclovir et sa prodrogue le valaciclovir, par exemple) ou d'un inhibiteur du complexe enzymatique hélicase-primase (le pritelivir). Ils aident à réduire la gravité et la fréquence 15 des symptômes mais ne peuvent pas éradiquer l'infection. Le plus souvent, en conséquence de la faible solubilité de ces molécules et en particulier celles de la famille des "ciclovir" (1.3 mg/mL dans l'eau à 25°C pour lâciclovir) ainsi que de leur absorption intestinale limitée (de l'ordre de 20% pour l'aciclovir per os), des doses conséquentes doivent être administrées aux patients. 20 Contrairement aux topiques ophtalmiques, les substances anti-HSV utilisées en dermatologie (comme le ciclofovir, l'ibacitabine, l'aciclovir, par exemple) ont une efficacité clinique qui reste modeste et inconstante. De plus, des formes de résistances acquises du virus de l'Herpes simplex aux traitements classiques per os ou par voie parentérale sont décrites en émergence. Elles sont le plus 25 souvent reliées à des mutations du génome viral (Bacon T.H. et al, 2003, Clin. Microbiol. Rev., 16(1), 114-128; Biswas S. et al, 2008, Antiviral Res., 80(1), 81-85). Outre les volets de contagiosité, d'algie et un aspect inesthétique récurrent du patient lors de la réactivation virale, ces infections peuvent se compliquer par des pathologies graves et complexes bien que demeurant assez rares, comme l'encéphalite herpétique ou la 30 kératite. La contamination néonatale maternelle peut être mortelle à 60% en absence de traitement. Les infections herpétiques et leur développement peuvent être associés à d'autres pathologies du fait d'immunodépression (induite ou pathologique) ou d'immunosuppression du patient comme par exemple, dans le cas de certains cancers ou après une greffe. HSV-2 fait partie des infections les plus courantes (de 60 à 90%) parmi 35 les personnes porteuses du VIH. Le risque de contracter une nouvelle infection à VIH est 3049465 3 multiplié par trois en présence d'une infection à HSV-2. Les porteurs des deux infections ont un risque plus élevé de transmettre le VIH. L'invention a donc pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'un procédé de préparation d'une telle composition pharmaceutique. 5 L'invention a également pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutiquement active qui soit topiquement acceptable. L'invention a également pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutiquement active qui soit aisément soluble dans 10 les solvants hydrophiles. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutique active lors du passage trans-épidermique. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutique qui se désactive lors du passage 15 transcutané. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutique dont la biophase est bien délimitée et atteinte. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la 20 fourniture d'une composition pharmaceutique dont la biodisponibilité est minimale. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutiquement active présentant un effet anti-réplicatif d'un virus, et en particulier de HSV. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la 25 fourniture d'une composition pharmaceutiquement active présentant une cytotoxicité élevée pour des cellules infectée par un virus, et en particulier par HSV. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutiquement active présentant peu de cytotoxicité pour des cellules saines. 30 L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutiquement active qui a une efficacité prophylactique et en particulier pour HSV. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutiquement active qui a une efficacité 35 prophylactique notamment lors de la phase prodromique de l'infection et en particulier pour HSV. 3049465 4 L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutiquement active qui a une efficacité prophylactique notamment par raccourcissement de la phase aiguë et en particulier pour HSV. 5 L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutiquement active qui peut prévenir ou limiter le processus infectieux et en particulier celui d'HSV. L'invention a encore pour but de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutiquement active présentant une bonne stabilité 10 lors de sa conservation à température ambiante et jusqu'à 45°C. Description de l'invention Les inventeurs ont découvert qu'il était possible de résoudre les problèmes techniques mentionnés ci-dessus par la fourniture d'un mélange pharmaceutiquement ou 15 thérapeutiquement actif comprenant au moins un peroxométallate. On entend par « pharmaceutiquement actif » le fait que le mélange ou la composition présente une activité bénéfique dans le cadre d'un traitement thérapeutique. Le terme « mélange » désigne une composition et ne limite pas la composition qu'il désigne à un procédé de préparation ou de fabrication particulier. Le terme 20 « mélange » permet ici de distinguer plus facilement d'un point de vue sémantique le « mélange » de la « composition » en particulier lorsque par exemple le « mélange » est intégré dans une « composition » laquelle comprend d'autres ingrédients. L'invention concerne plus particulièrement selon un premier aspect, une composition ou mélange, de préférence thérapeutiquement actif par voie topique, 25 comprenant : au moins un sel de métal, le métal étant choisi parmi le molybdène (Mo), le tungstène (W), le vanadium (V), l'or (Au), un lanthanide, en particulier le lanthane; au moins un agent chélatant; au moins une source de radicaux peroxydant; 30 au moins un agent tampon; ledit mélange ou ladite composition présentant un potentiel rédox de 300 à 420 millivolts. Le mélange selon la présente invention permet avantageusement de former un médicament, et plus particulièrement stable et actif in situ. 35 Le mélange selon la présente invention consiste en un équilibre des composés précités formant avantageusement un complexe peroxométallique y compris ses sels. 3049465 5 Selon les inventeurs, sans vouloir être lié par la théorie, le mélange selon la présente invention permet de former une structure supramoléculaire du type réseau en équilibre stable, non permanente, qui permet de fournir au niveau extracellulaire et in situ un catalyseur du type réactions de Fenton et d'Haber-Weiss. Ces réactions sont dites 5 « likes » quand elles ont lieu du fait du métal du mélange de l'invention ou d'un autre métal qui ne soit pas le fer. Une partie des substances réactives générées extemporanément par la substance active pénètre la cellule, et plus avantageusement la cellule infectée. 10 De préférence, le sel métallique est présent sous forme d'oxyde(s) ou de peroxyde(s) dans le mélange. Avantageusement, les oxydes métalliques du mélange de l'invention permettent de former un intermédiaire qui est un acide métallique, et plus particulièrement un acide de Lewis. Selon une variante, on préfère un composé métallique dont l'état d'oxydation du 15 métal est compatible avec la réaction de Fenton-Haber-Weiss et Fenton-Haber-Weiss "like" (réaction d'oxydoréduction qui fait intervenir d'autres ions métalliques que le Fer qui, dans notre cas, est dans un contexte de chélation) métastable, à savoir, principalement, les métaux de transition et particulièrement Mo (VI), W(IV) à (VI), V(III) à (V), Au (I) à (III). Selon une variante, on préfère un composé lanthanide pouvant former un 20 sesqioxide de type Ln03, dont l'état d'oxydation est compatible avec la réaction de Fenton-Haber-Weiss et Fenton-Haber-Weiss "like" métastable et particulièrement La(III), Ce (III) et (IV), Nd (III) et (IV), Sm (III) et (IV), Gd(IV).. Avantageusement, le métal du métallate ou du lanthanate est de valence maximale. 25 Avantageusement, le métal ou le lanthanide est oxydé à son degré d'oxydation maximal. Selon une variante, le sel métallique comprend du molybdène. Ainsi, selon une variante, le sel métallique est un sel de molybdène. Plus précisément, le mélange selon la présente invention comprend de préférence du molybdate de sodium. Selon l'invention, 30 on préfère utiliser un sel de molybdène dans lequel la valence du molybdène est de degré VI. Ce sel permet avantageusement de procurer une stabilité importante au mélange de la composition. Par ailleurs, le molybdène, notamment sous forme de sel et par exemple de sel de sodium, par sa valence réactive (VI), son électronégativité compatible, sa très faible cytotoxicité, sa possibilité de réaction Fenton-Haber-Weiss laquelle peut être "like", 35 est particulièrement préféré. 3049465 6 Selon une variante, le sel métallique formé comprend un peroxométallate, et plus particulièrement qui peut se retrouver sous la forme d'intermédiaire hydroperoxométallate. Avantageusement, le sel de molybdène est de préférence d'unité peroxo ou 5 hydroperoxo. Encore avantageusement, la substance active est de type Mo042- ou sa forme hydro-peroxo. Par exemple on peut retrouver un complexe intermédiaire de formule de type Na4[Mo206(chélatant)].10H20 dans le mélange de l'invention. Selon une variante, le métal ou son sel est un lanthanide ou son sel. Selon une variante, le sel métallique formé comprend un peroxolanthanate, et plus 10 particulièrement qui peut se retrouver sous la forme d'intermédiaire hydroperoxolanthanate. Par exemple, on peut retrouver un complexe intermédiaire de formule de type NaLn(chélatant).xH2O2.yH2O (avec x et y qui est fonction du type de lanthanide (Ln) utilisé dans le mélange de l'invention. Avantageusement, l'utilisation d'un sel de molybdène permet de limiter la 15 cytotoxicité du mélange selon l'invention, en particulier sur les hématies et lymphocytes, les épithélia, les fibroblastes, les ostéoblastes. Un avantage d'utilisation du molybdène réside dans sa présence naturelle comme cofacteurs enzymatiques (comme par exemple la xanthine oxydase, la glycéraldéhyde-3- phosphate déshydrogénase à ferrédoxine, etc.). 20 Avantageusement, l'utilisation d'un sel de lanthane permet de limiter la cytotoxicité du mélange selon l'invention. Selon une variante préférée, le métal sous sa forme de substance active joue un rôle de catalyseur de la production de substances réactives H02, et éventuellement HO" et 02. 25 Selon une variante, le mélange selon l'invention comprend de 0,1 à 500 pM, et de préférence de 1 à 200 pM, et encore de préférence de 5 à 150 ptM de sel métallique. Selon une variante, le mélange selon l'invention comprend de 0,1 à 100 pM, et de préférence de 1 à 50 pM, et encore de préférence de 5 à 30 ptM de sel métallique de molybdène. 30 Selon une variante, le mélange selon l'invention comprend de 0,1 à 100 pM, et de préférence de 1 à 50 pM, et encore de préférence de 5 à 30 ptM de sel métallique de lanthane. Les termes « agents chélatants » (ou « chélatants ») correspondent à des 35 composés chimiques aptes à former un complexe de coordination stable avec un ou plusieurs ions et plus particulièrement avec les formes ioniques du métal présent dans la 3049465 7 composition. Le métal peut être présent sous toute forme y compris sous forme peroxydée ou hydropéroxydée. Ce complexe est dit "chélate". Les agents chélatants pouvant convenir pour le mélange selon la présente invention doivent avantageusement catalyser extracellulairement, d'une part la production 5 in situ de radicaux réactifs H02*, principalement, mais aussi 02 et OH' et, d'autre part, permettre la chélation des ions calcium et métalliques dont les ions ferreux (Fe(II) ou Fe2±) et les ions ferriques (Fe(III) ou Fe3±) extracellulaires liés ou libres. La libération de ces réactifs est d'autant plus efficace que l'affinité des chélates pour les ions Ca2+ et Fe2±/Fe3+ extracellulaires est importante. Ces chélates sont des composés stables présents dans le 10 mélange pharmaceutiquement actif de l'invention et participe, outre la production préférentielle du radical HO;, à l'activité pharmaceutique ou thérapeutique du mélange selon la présente invention, notamment par chélation préférentielle in situ des ions calcium et fer. Cette chélation in situ permettrait aussi de réguler au niveau extracellulaire les influx calciques cellulaires, en particulier induit d'une part par une infection virale, 15 comme par exemple par Herpesviridae, et d'autre part, par le stress oxydatif dû à la présence de radicaux ou de peroxocomposés. Avantageusement, les agents chélatants ne pénètrent pas la cellule et demeurent extracellulaires. Selon une variante préférée, les agents chélatants stabilisent des complexes 20 peroxo et hydro-peroxomolybdates contenus dans la formulation. De tels peroxo- et hydro-peroxomolybdates peuvent être du type (Mo206)4+ et [Mo4012(02)2]4±. Avantageusement, selon une variante, l'agent chélatant permet la stabilisation par chélation de l'ion substance active Mo042- lequel sous sa forme sodique a un poids moléculaire de 205.937 g par mole ou peroxomolybdate (par exemple sous la forme 25 Mo03-BAPTAH22- et/ou Mo03-EGTAH22-). Selon une variante, le mélange selon l'invention comprend au moins deux agents chélatants. Avantageusement le ou les agents chélatants lie(nt) par coordination le métallate oxydé ou peroxydé en solution. 30 Selon une variante, l'agent chélatant se complexe avec le métallate oxydé ou peroxydé pour former un complexe dimérique intermédiaire [Mo206(chélatant)]4+.10H20 et/ou de la forme peroxotetramolybdate(VI) [M04012(02)2]4+-Chélatant, lorsque le sel métallique est un sel de molybdène. Selon une variante, l'agent chélatant se complexe avec le métallate oxydé ou 35 peroxydé pour former un complexe [W206(chélatant)]4+.8H20, lorsque le sel métallique est un sel de tungstène. 3049465 8 Selon une variante, l'agent chélatant se complexe avec un lanthanate oxydé ou peroxydé pour former notamment un complexe [La(02)-Chélatant]2±. 6H20 lorsque le sel de lanthanide est un sel de lanthane. Avantageusement, l'agent chélatant est compatible avec la capture stérique des 5 complexes oxydés et/ou peroxydés du métallate. Plus particulièrement, la taille de sa "poche" N---N qui sépare les résidus carboxyliques impliqués dans la coordination ainsi que le repliement stérique de la chaine carbonée de cette poche qui doit être avantageusement compatible avec la capture des complexes métalliques intermédiaires, notamment sous forme oxydée et/ou peroxydée. Avantageusement, l'agent chélatant est 10 compatible avec les charges électroniques du métallate et avec sa structure orbitale atomique externe. Selon un aspect, le ou les agents chélatants sont choisis parmi les polyacides organiques et leurs sels, notamment les polyacides amino-carboxyliques. Typiquement, les polyacides amino-carboxyliques comprennent un ou plusieurs atomes d'azote d'une 15 fonction amine de préférence secondaire ou tertiaire liés à au moins deux groupements acides carboxyliques, par l'intermédiaire d'atomes, en général de carbone et éventuellement d'oxygène. Selon une variante, le ou les agents chélatants présentent par exemple au moins trois groupements de coordination, de préférence des groupements acides carboxyliques, 20 à trois extrémités de la ou les molécules formant le ou les agents chélatants, lesdits groupements de coordination étant séparés par une chaine d'au moins trois atomes dont au moins un atome d'azote. Avantageusement, le ou les agents chélatants présentent cinq groupements de coordination, de préférence des groupements acides carboxyliques, à cinq extrémités de 25 la ou les molécules formant le ou les agents chélatants, lesdits groupements de coordination étant séparés par une chaine d'au moins six atomes et de préférence neuf atomes, dont un atome d'azote et de préférence deux atomes d'azotes séparés par au moins deux atomes. Selon une variante, le ou les agents chélatants présentent quatre groupements de 30 coordination, de préférence des groupements acides carboxyliques, à quatre extrémités de la ou les molécules formant le ou les agents chélatants, lesdits groupements de coordination étant séparés par une chaine d'au moins six atomes et de préférence douze atomes, dont deux atomes d'azote séparés par au moins huit atomes. Selon une variante, les atomes séparant lesdits groupements de coordination 35 et/ou les atomes d'azote du ou des agents chélatants sont choisis parmi les atomes de carbone, d'azote et d'oxygène. Certains des atomes séparant lesdits groupements de 3049465 9 coordination et/ou les atomes d'azote du ou des agents chélatants peuvent être inclus dans un ou plusieurs cycles atomiques identiques ou différents, comme par exemple les cycles non aromatiques, aromatiques ou hétéroaromatiques, par exemples un phényle ou un pyridyle. 5 Avantageusement, l'agent chélatant est choisi parmi le BAPTA (1,2-bis(o- aminophenoxy)ethane-N,N,N',Artetraacetic acid), l'EGTA: (ethylene glycol-bis(2- aminoethylether)-N,N,N',N'-tetraacetic acid)), le DTPA (diethylenetriaminepentaacetic acid), et l'un quelconque de leurs mélanges Selon une variante, l'agent chélatant est choisi parmi BAPTA, EGTA et l'un 10 quelconque de leurs mélanges. Avantageusement, le BAPTA et/ou l'EGTA autorise une meilleure stabilité des précurseurs ainsi qu'un meilleur rendement de synthèse. Les pKa des 4 groupements carboxyliques de BAPTA sont: pK1 et pK2 (iv) => (v) => (vi) => (vii) => (viii) => (ix). Avantageusement, le procédé de préparation comprend un suivi par analyse 10 spectrale (par exemple par analyse des spectres IR, UV et/ou visible) à une ou plusieurs des étapes de préparation, et de préférence lors de toutes les étapes de préparation. Selon une variante, la première solution initiale Sil présente un premier potentiel rédox supérieur au potentiel rédox du mélange selon l'invention. De préférence, suite à l'étape (ix), il n'y a pas de dilution du volume du mélange de 15 manière à éviter les déplacements des équilibres chimiques du mélange selon la présente invention. Il est évidemment avantageux d'utiliser des substances ou composés de pureté suffisamment satisfaisante à titre de matières premières. Il faut notamment que les différentes substances ou composés présentent une compatibilité avec une utilisation 20 thérapeutique. Selon une variante, on peut réaliser une spectrométrie IR-FT, RMN-H et/ou de masse sur le mélange selon l'invention produit pour s'assurer de la conformité de la composition du mélange aux exigences industrielles, et en particulier pour une utilisation thérapeutique pharmaceutique. On réalise de préférence également une spectrométrie 25 IR-FT sur les composants précurseurs du mélange de l'invention. Selon une variante, on peut contrôler le pH à une ou plusieurs, voire l'ensemble des étapes de préparation. Selon une variante, on peut contrôler le potentiel rédox à une ou plusieurs, voire l'ensemble des étapes de préparation. 30 Selon une variante, on peut contrôler le mélange de l'invention par densimétrie, et/ou spectrophotométrie UV, à une ou plusieurs, voire l'ensemble des étapes de préparation. Selon une variante, on peut doser l'efficacité rédox du mélange de l'invention à l'aide de la méthode quercétine (dosage en spectrophotométrie UV de l'oxydation in vitro 35 de la quercétine par le Fe3+ présent ou produit in vitro). 3049465 14 Avantageusement, le peroxyde d'hydrogène est présent dans la solution Sil à une concentration allant de 200 à 600 mM, de préférence de 300 à 500 mM, et encore de préférence de 330 à 460 mM. Selon un mode de réalisation, le matériel utilisé est métallique et est de 5 préférence en inox, éventuellement passive. Selon un mode de réalisation, on peut re-passiver le matériel préalablement à la préparation du mélange de l'invention par exemple en mettant le matériel (qui sera en contact avec le mélange ou ses précurseurs) en contact avec une solution de peroxyde d'hydrogène. 10 Il est préférable de réaliser un dosage de la source de peroxyde d'hydrogène afin de s'assurer de la quantité de peroxyde d'hydrogène présent et à mettre en jeu dans la préparation du mélange de l'invention. Ce dosage peut se réaliser par exemple par titrimétrie ou par spectrophotométrie UV (en général à 240 nm). Avantageusement, le pH de la solution tampon ST est de 4,4 à 5,0, et de 15 préférence de 4,7 à 4,8. Avantageusement, l'agent tampon de la solution ST est un tampon acide carboxylique/carboxylate, et la solution ST présente un ratio peroxyde d'hydrogène/carboxylate compris entre 20/1 et 1/1, et de préférence d'environ 5/1. Avantageusement, le ratio de l'acide acétique (AcOH) avec son sel ajouté l'acétate 20 en quantité limitante, autorise la production la plus faible d'acide peracétique (AcOOH). Avantageusement, dans un procédé de préparation selon l'invention, la production d'acide peracétique est minimale et l'influence catalytique de celui-ci est très faible. La préparation de la première solution initiale Sil comprend la préparation d'une solution aqueuse d'acide carboxylique, et de préférence d'acide acétique puis l'ajout de 25 peroxyde d'hydrogène. De préférence, la première solution initiale Sil présente un pH de 2,5 à 4.6, et de préférence de 2,7 à 4.2. Avantageusement, la première solution initiale Sil présente un potentiel rédox de 400 à 550 mV, et de préférence de 420 à 500 mV. Avantageusement, le procédé comprend une mesure du potentiel rédox aux 30 étapes (iii) à (ix), et de préférence comprend également une mesure du pH aux étapes (iii) à (ix). Selon une variante, la seconde solution initiale Si2 présente un pH de 2,5 à 3,2, et de préférence d'environ 2,9. Selon une variante, la solution initiale Si2 présente un potentiel rédox supérieur au potentiel rédox de la première solution initiale Sil. Le 35 potentiel rédox de la seconde solution initiale Si2 peut-être de 420 à 570 mV, et de préférence de 440 à 520 mV. 3049465 15 Selon une variante, on introduit la solution tampon ST dans la première solution initiale Sil . Selon un mode de réalisation, la concentration en peroxyde d'hydrogène dans la seconde solution initiale Si2 va de 300 à 500 mM, et de préférence de 260 à 440 mM. 5 Avantageusement, dans l'étape (iv) le pH est maintenu en deçà de la limite admissible de pH pour la réaction catalytique de synthèse du mélange selon l'invention. On utilise avantageusement un agent tampon à l'étape (iv) Avantageusement, dans l'étape (iv) la production in situ de l'acide peracétique générée est minimale. 10 Avantageusement, dans l'étape (iv) le potentiel rédox de la solution Sil de l'étape (iii) est augmenté, par exemple en passant d'une valeur de 440 à 460mV à une valeur de 460 à 480mV de l'étape (iv). En suivant la concentration de peroxyde d'hydrogène présent lors de la préparation du mélange de l'invention, on observe une production peroxydique lors de 15 son introduction, à savoir la mise en contact du peroxyde d'hydrogène avec la solution tampon (étape (iv)). Avantageusement, l'ajout de peroxyde d'hydrogène est réalisé dans une solution aqueuse préalablement tamponnée à un pH acide. Ainsi, pour la préparation de la première solution initiale Sil le peroxyde d'hydrogène est ajouté dans une solution à pH acide, et par exemple à pH de 2,7 à 4,2. 20 Avantageusement, l'étape (iv) conduit à déplacer l'équilibre vers une production in situ d'H202 avec destruction de l'acide peracétique éventuellement généré par les équilibres chimiques. Selon une variante, on introduit la solution tampon SC dans la solution 51. Selon une variante, la solution 51 comprenant un complexe peroxométallique 25 présente un pH de 2,5 à 3,5, et de préférence de 2,8 à 3,0. Selon un mode de réalisation, le potentiel rédox de la solution 51 comprenant un complexe peroxométallique va de 400 à 550 mV, et de préférence de 440 à 500mV. Selon un mode de réalisation, la concentration de peroxyde d'hydrogène dans la solution 51 comprenant un complexe peroxométallique va de 250 à 500 mM, et de 30 préférence de 320 à 450 mM. A l'étape (v), le sel de molybdate ajouté est sous la forme de l'acide molybdique Mo03.H20 et Mo03.2H20. En conditions non inventive, la synthèse à l'équilibre de la substance active Mo042, à température ambiante, sans catalyseur et sans ajout d'acide fort (H2504, par 35 exemple) demanderait plusieurs jours. 3049465 16 Selon un mode de réalisation, le pH de la solution S2 est tamponné à une valeur de préférence comprise entre 4,4 et 5,0, et par exemple de 4,5 à 5.0. Avantageusement, à ce pH tamponné, c'est la forme instable Mo042- qui prédomine (état d'oxydation Mo(VI)) et le peroxyde d'hydrogène est stabilisé. Le peroxyde d'hydrogène est souvent stabilisé 5 industriellement par un tampon phosphate. Il peut se former un composé intermédiaire instable de phosphomolybdate (jaune) qui disparaît à l'équilibre, rendant H202 plus réactif. Selon une variante, le potentiel rédox de la solution S2 va de 300 à 450 mV, et de préférence de 360 à 410mV. Les oxydes de molybdène Mo(VI) en solution aqueuse et au pH de synthèse du 10 mélange de l'invention peuvent exister sous différentes structures moléculaires :Mo042- et [Mo062], [Mo203(02)4(H20)212-, mais aussi sous des formes polynucléaires réactives (comme des structures complexes binucléaires oxo-Mo(VI) (Dement'ev I.A. et al (2007)" Mononuclear, polynuclear, and cluster complexes of molybdenum and their reactions as models of biochemical systems and processes", Russ. J. Gen. Chem., 77(5), 822-843)). 15 Avantageusement, les conditions de préparation permettent la formation in situ de peroxo- et d'hydro-peroxomolybdate lorsque le sel métallique utilisé est un sel de molybdène. Ces derniers sont de type: [Mo203(02)4(H20)2]2-. Selon une variante, on préfère un excès molaire de peroxyde d'hydrogène supérieur à 1000 fois, et de sel métallique, et en particulier de préférence supérieure à 10000 fois, et encore de 20 préférence à 15000, par rapport au Mo(VI). Avantageusement, le ou les agents chélatants ainsi que le pH de synthèse limitent les déplacements de la réaction du type « réducteur de Jones » consistant à la réduction de l'ion métallate, avantageusement à savoir le molybdate, à un état d'oxydation bas correspondant au métal molybdène. Selon une variante, ce déplacement est limité dans 25 un milieu aqueux faiblement acide, typiquement au pH compris entre 4,4 et 5,0, et par exemple de 4,5 à 4,7. De préférence, lorsque plusieurs agents chélatants sont présents, on prépare des solutions indépendantes d'agents chélatants, chaque solution comprenant un agent chélatant spécifique. 30 Selon une variante préférée, l'ajout des agents chélatants se réalise par ordre de pKa croissants. On peut par exemple préparer d'une part une solution comprenant un agent chélatant du type BAPTA et d'autre part une solution d'agent chélatant du type EGTA. On ajoute de préférence BAPTA puis EGTA. 3049465 17 Avantageusement, le ou les agents chélatants permettent in situ, c'est-à-dire après application topique notamment, la réaction de Fenton-Haber-Weiss avec notamment une constante de dissociation Kdchélate : Fe2±/Fe3+ > Ca2±. .Avantageusement, le ou les agents chélatants permettent extracellulairement in situ, 5 l'auto-entretien de la production radicalaire réactive HOO" principalement, et minoritairement 02 et HO". Selon une variante, on peut d'abord ajouter le BAPTA à la solution S2 pour obtenir une solution S3 résultante. La solution S3 présente par exemple un pH allant de 4,0 à 5,0, et de préférence de 4,3 à 4,8. La solution S3 présente par exemple un potentiel rédox 10 essentiellement identique à celui de la solution S2. En d'autres termes, le potentiel rédox ne varie pas lors de l'ajout de l'agent chélatant du type BAPTA. Selon une variante, le potentiel rédox de la solution S3 va de 250 à 450 mV, et de préférence de 300 à 400mV. Avantageusement, on réalise une dissolution préalable de BAPTA dans un faible volume de solution S2 avant mise en contact avec le reste de la solution S2. 15 De préférence, la concentration de BAPTA est dans un ratio molaire de 1/1 à 1/3 et de préférence de 1/2, par rapport au sel de molybdène. Par exemple, la solution S3 présente une concentration de peroxyde d'hydrogène de 250 à 500 mM, et de préférence de 320 à 440 mM. On peut avantageusement ajouter au moins un autre agent chélatant du type 20 EGTA dans la solution S3 pour obtenir une solution S4 résultante. Selon une variante, la solution S4 présente un pH allant de 4,0 à 5,0, et de préférence de 4,3 à 4,7. Selon une variante, le potentiel rédox de la solution va de 300 à 400 mV, et de préférence de 350 à 390 mV. De préférence, la concentration de l'EGTA est dans un ratio molaire de 10/1 à 50/1 25 et de préférence d'environ 25/1, par rapport au sel de molybdène. Par exemple, la solution S4 présente une concentration de peroxyde d'hydrogène de 250 à 550 mM, et de préférence de 320 à 470 mM. Selon une variante, le pH à l'étape (viii) est ajusté par une solution basique, par exemple du type hydroxyde de sodium, de préférence concentrée, par exemple à une 30 concentration de 8 à 15 M. Avantageusement, le pH à l'étape (viii) peut être ajusté à une valeur de 4,4 à 5.0, et de préférence d'environ 4,6. Selon une variante, le pH du mélange de l'invention va de 4,50 à 4,70. Avantageusement, le potentiel rédox du mélange de l'invention va de 320 à 390 mV. Selon une variante préférée, le procédé comprend une diminution du potentiel 35 rédox à l'étape (vi). Une diminution du potentiel rédox peut par exemple être de 50 à 150mV, et typiquement être d'environ 90mV. 3049465 18 De préférence, le potentiel rédox est sensiblement constant suite à la diminution du potentiel rédox de l'étape (vi). Avantageusement, le mélange selon la présente invention est stable dans le temps à la conservation, par exemple à température ambiante ou jusqu'à une 5 température de 45 °C pendant six mois. Il est recorrrnandé de conserver le mélange à l'obscurité et à l'abri de l'humidité. Le pH est mesuré à l'aide d'un pH mètre étalonné et à compensation de température, avec une électrode combinée KCI 4M / AgCI Le potentiel rédox est mesuré avec un pH mètre / rédox mètre combiné, équipé 10 d'une électrode Platine / calomel étalonnée. On évalue de préférence la concentration de peroxyde d'hydrogène dans les solutions précitées par spectroscopie UV selon l'équation dérivée de la loi de BeerLambert : A24onm = 43,6 x I x [H2O2] avec I en centimètre et [H2O2] en mole (Noble R.W. et al (1970) "The reaction of ferrous horseradish peroxidase with hydrogen peroxide", J. BioL 15 Chem., 245(9), 2409-2413). Selon une variante spécifique, le composé peroxo-métallique de la solution 51 est un composé peroxo-molybdique. Le mélange de l'invention comprend donc selon cette variante un composé peroxométallique. Selon une variante préférée, le mélange de l'invention comprend un 20 complexe peroxomolybdique. Selon une variante, la solution comprend du molybdate de sodium sous la forme Mo(VI). Avantageusement, au pH des solutions d'invention, le sel est sous la forme catalytique Mo03-BAPTA3- principalement et Mo03-EGTA3- principalement, les deux sources de la substance active Mo042-. 25 Selon un mode de réalisation particulier, le mélange selon l'invention comprend un sel, de préférence de sodium, de molybdène, un mélange de deux agents chélatants, de préférence du type BAPTA et EGTA, du peroxyde d'hydrogène et un agent tampon acétate (acide acétique/acétate de sodium, par exemple). 30 Selon une variante spécifique, le mélange selon la présente invention comprend : Molybdate de sodium; BAPTA; EGTA; H202; 35 CH3COOH/CH3CO0Na; Erédox 300 à 420mV; 3049465 19 - pH 4.4 - 5.0. Avantageusement, les composés du mélange sont en quantités et conditions de pH et potentiel rédox nécessaires pour former un complexe peroxomolybdate ou hydro- 5 peroxomolybdate où le molybdène est de valence VI. Selon un mode de réalisation particulier, le mélange de l'invention comprend au moins un agent chélatant et au mieux et au minimum deux, et de préférence de 5 à 201..1M et 200 à 700 pM, respectivement. Selon un mode de réalisation particulier, le mélange de l'invention comprend de 340 mM 10 à 450 mM de donneur principal de radicaux comme H202. L'invention concerne en particulier des compositions pharmaceutiques comprenant ou consistant du mélange selon l'invention. L'invention concerne ainsi une composition pharmaceutique à usage topique, caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange thérapeutiquement actif, tel que défini 15 selon l'invention, ou susceptible d'être obtenu selon un procédé tel que défini selon l'invention. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention comprend de 0,001 à 5 mM, de préférence de 0,01 à 2 mM, et encore de préférence de 0,02 à 1 mM du mélange pharmaceutiquement actif. 20 L'invention concerne en particulier une composition pharmaceutique à usage topique selon l'invention pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique d'une infection virale, et en particulier impliquant un virus de la famille Herpesviridae. L'invention concerne en particulier une composition pharmaceutique à usage 25 topique selon l'invention pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique d'une infection impliquant HSV-1 et/ou HSV-2. L'invention concerne en particulier une composition pharmaceutique à usage topique selon l'invention pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique anti-inflammatoire. 30 L'invention concerne en particulier une composition pharmaceutique à usage topique selon l'invention pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique préventif ou curatif. L'invention concerne aussi une composition pharmaceutique comprenant du molybdène, au moins un agent chélatant et une source de radicaux peroxydant pour son 35 utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique d'un herpès. Cette composition est définit selon l'un quelconque des modes de réalisation, variantes, avantages, 3049465 20 préférences, ou exemples de l'invention, pris seul ou selon l'une quelconque de leurs combinaisons. Le terme « selon l'invention » fait référence à l'un quelconque des modes de réalisation, variantes, avantages, préférences, ou exemples de l'invention, pris seul ou 5 selon l'une quelconque de leurs combinaisons. Typiquement, les compositions pharmaceutiques à usage topique selon l'invention contiennent des excipients et en particulier des excipients agréés par la pharmacopée. Par traitement thérapeutique anti-infectieux, on entend à la fois un traitement 10 thérapeutique préventif, un traitement prophylactique et un traitement curatif permettant de limiter par exemple l'infection en cas de contact contaminant, l'occurrence d'une maladie, sa phase aigüe avec, partiellement ou non éradication de l'agent causal et/ou limitation de sa dissémination. Avantageusement, le mélange actif ou la composition pharmaceutique selon la 15 présente invention est active in situ lors de son application. Avantageusement, le mélange actif ou la composition pharmaceutique selon la présente invention est actif lors du passage trans-épithélial et de préférence ne permet pas ou de façon limitée son passage transcutané. Avantageusement, le mélange actif ou la composition pharmaceutique selon la 20 présente invention est désactivé lors du passage transcutané. Selon une variante, le mélange selon l'invention ou une composition en comprenant est appliqué par voie topique au niveau orofacial. Selon une variante, le mélange selon l'invention ou une composition en comprenant est appliqué par voie topique au niveau génital ou anal. 25 Selon une variante, le mélange selon l'invention ou une composition en comprenant est appliqué par voie topique sur la peau. Selon une variante, le mélange selon l'invention ou une composition en comprenant est appliqué par voie topique sur une muqueuse. Selon une variante, des excipients agréés par les pharmacopées européenne (Ph. 30 Eur.), Nationales (USP, JP, IP, Ph. Hely., Ph.Belg., Ph Fr., BP, DAB, ()AB, notamment) et internationale (Ph. Int.; OMS), peuvent être introduits lors de la fabrication de l'invention et/ou dans le « mélange »noté « Mélange 1 ». Les mélanges et compostions de l'invention sont particulièrement adaptés pour une activité pharmaceutique chez l'être humain. 3049465 21 Avantageusement, le mélange actif de l'invention permet de mettre en oeuvre des réactions de type Fenton-Haber-Weiss et Fenton-Haber-Weiss "like", et de générer préférentiellement le radical HO; et minoritairement les radicaux 02*, HO". Selon les inventeurs, la perméation de la substance réactive HOOE, est suffisante 5 pour induire de façon limitée et contrôlée l'apoptose cellulaire. Selon les inventeurs, la perméation de la substance réactive HOOE, est suffisante pour avoir de façon efficace et contrôlée un effet antiréplicatif viral. Selon l'invention, de préférence on utilise le potentiel rédox du mélange de l'invention pour limiter dans un cadre étroit les concentrations des précurseurs des 10 substances actives radicalaires de façon à générer un juste équilibre entre : un effet anti- réplicatif / une cytotoxicité modérée pour la cellule saine / une cytotoxicité importante pour la cellule infectée / un effet préventif à l'infection. Avantageusement, le mélange thérapeutiquement ou pharmaceutiquement actif selon l'invention permet de générer principalement et préférentiellement l'espèce 15 radicalaire réactive HOOE, Ainsi, selon la présente invention le calcium extracellulaire in vivo est le principal facteur déclencheur de la production d'HOC:Y. Il s'agit par exemple principalement d'une action au niveau du complexe 2Mo(vp-BAPTA2(H202) lorsque le sel de molybdène et le BAPTA sont mis en jeu dans le mélange de l'invention. Il s'agit par exemple 20 principalement d'une action au niveau du complexe 2Mo(vp-EGTA2(H202) lorsque le sel de molybdène et I'EGTA sont mis en jeu dans le mélange de l'invention. Avantageusement, la production dans le milieu extracellulaire d'HOC,' autorise des modifications extracellulaires (oxydations de résidus aminoacides extra membranaires, par exemple) pouvant ainsi limiter l'infection virale par modification de la reconnaissance 25 cellulaire. Avantageusement, la production dans le milieu extracellulaire d'HOC,' ainsi que sa perméation cellulaire sont compatibles avec sa une durée de vie longue 1 sec.) et sa grande pénétration cellulaire vs. OH' ou 02 (1msec. et pénétration de l'ordre du nm). Avantageusement, cette substance HOO" intervient dans la réaction d'Haber Weiss et de 30 la réaction de Fenton ("like" ou non) au niveau extracellulaire et intracellulaire et permet un auto-entretien de celles-ci. Avantageusement, le mélange contenant Mo(IV) selon la présente invention présente un pH de 4,4 à 5.0. Cela permet notamment d'optimiser la constante de vitesse kobs (M-1.s-1) de la décomposition H02702. 35 Avantageusement, la modification du potentiel rédox intracellulaire par la mise en contact avec la composition selon l'invention permet un équilibre apoptotique/anti- 3049465 22 apoptotique. Plus particulièrement, cet équilibre apoptotique/anti-apoptotique est fonction notamment de l'existence d'une infection par HSV et principalement par HSV-1 et -2. Selon une variante, le mélange de l'invention est actif sélectivement sur les cellules infectées par HSV et principalement par HSV-1 et -2. 5 Ainsi, Il existe un étroit équilibre entre les voies du stress induites par l'infection à HSV, dont l'influx calcique, et la régulation de l'apoptose. Cet équilibre est perturbé par la présence de radicaux intra-cytoplasmiques et des modifications du potentiel rédox cellulaire. Ceci induit les mêmes voies de stress cellulaire qu'une infection par HSV, les mêmes influx calciques et les mêmes inductions de voies 10 métaboliques, ces mêmes voies étant rétro-régulées vers un autre équilibre anti- apoptotique. Ceci supporte l'effet thérapeutique du mélange selon l'invention ou des compositions le comprenant. Selon une variante, la composition pharmaceutique ou le mélange de l'invention est utilisé dans une méthode de traitement thérapeutique d'un herpès labial et orofacial. 15 Selon une variante, la composition pharmaceutique ou le mélange selon l'invention est utilisé dans une méthode de traitement thérapeutique d'un herpès génital et anal. Selon un mode de réalisation, le mélange actif selon l'invention a une efficacité anti-infectieuse (action directe modérée à faible sur le virus, récepteur viraux à la cellule 20 comme candidats possibles), anti-reconnaissance et internalisation (action importante, récepteurs cellulaires au virus). Ces efficacités sont externes à la cellule et limitent l'infectivité virale. Ainsi, le mélange actif selon l'invention présente une action prophylactique. Ainsi encore, le mélange actif selon l'invention présente une efficacité anti-infectieuse. 25 Selon une variante, la composition pharmaceutique ou le mélange selon l'invention est utilisé dans un traitement thérapeutique d'une population exprimant HSV sous sa forme enveloppée, réplicative ou infectante. Selon une variante, la composition pharmaceutique selon l'invention ou le mélange est utilisé dans un traitement thérapeutique d'une population cellulaire ou d'un 30 tissu exprimant HSV-1 (Kessler H.H. et al (2000) "Detection of Herpes Simplex Virus DNA by real-time PCR", J Clin Microbiol., 38(7), 2638-2642). Selon une variante, la composition pharmaceutique selon l'invention ou le mélange est utilisé dans un traitement thérapeutique d'une population cellulaire ou d'un tissu exprimant HSV-2 (Kessler H.H. et al (2000) "Detection of Herpes Simplex Virus DNA 35 by real-time PCR", J Clin Microbiol., 38(7), 2638-2642). 3049465 23 Avantageusement, le mélange actif selon l'invention a une efficacité antiréplicative induite du fait d'un contact préalable à l'infection avec une cellule ou un tissu sain. Le mélange actif selon l'invention peut être utilisé pour prévenir une infection en limitant la réplication virale intracellulaire et/ou en limitant la pénétration du virus dans la 5 cellule. Avantageusement, le mélange actif selon l'invention a une efficacité antiréplicative préférentielle sur le métabolisme cellulaire de la cellule infectée (voies du stress oxydatif et des canaux calciques). Le mélange actif selon l'invention peut être utilisé spécifiquement pour lutter directement contre la réplication virale intracellulaire et 10 contre une surinfection cellulaire par HSV-1 et/ou HSV-2 du même tissu infecté et/ou d'un tissu sain voisin du précédent. Selon une variante, le mélange actif selon l'invention induit de façon hétérogène une inhibition de la production d'interleukine-6 (IL-6) d'un lambeau cutané humain et a ainsi une efficacité anti-inflammatoire. 15 Sur les figures : La figure 1 représente les variations du potentiel rédox et de la concentration en H202 lors de la préparation du Mélange 1. La figure 2 représente un abaque de Fe3+ servant au dosage de l'efficacité rédox 20 du Mélange 1. La figure 3 est une représentation de l'efficacité rédox du Mélange 1 à différentes concentration de celui-ci (absorbance de la quercétine par le Fe(III) en milieu plasmatique humain après contact (2 min.) avec le Mélange 1 (en nM MoO42 ). La figure 4 représente un abaque de l'efficacité rédox du Mélange 1 à différentes 25 concentration de celui-ci. La figure 5 représente l'influence du Mélange 1 à différentes concentration de Mo042- sur la production in situ en plasma humain de Fe3+, i) issu du complexe transferrine-Fe3+ après mise en contact avec la formulation, ii) sur l'équilibre Fe2±/Fe3+ et, iii) sur l'oxydation de la quercétine. 30 La figure 6 représente la production d'interleukine-6 (IL-6) dans les surnageants de culture de biopsies non-pathologiques de peau humaine stimulées (2 min.) par le Mélange 1 (24.3 ptM de la substance active) ou NaCI (100mM) comme témoin. (D1-5: donneur 1 à 5, B1 ou 2: biopsie 1 ou 2). La figure 7 représente la moyenne de la production à 6h et 24h post-contact 35 d'interleukine-6 (IL-6) dans les surnageants de culture de biopsie non-pathologique de 3049465 24 peau humaine stimulée (2 min.) par le Mélange 1 (24.3 1..1M de la substance active) ou NaCI (100mM) comme témoin. 3049465 25 Exemples Exemple 1 - Exemple de mélange actif selon l'invention 5 Le présent exemple est réalisé avec un sel de molybdène. On prépare une composition de formule selon le tableau 1, exprimée en concentration initiale des constituants : Tableau 1 Composants Mélange selon l'invention Molybdate de sodium 24.3uM BAPTA 12.6uM EGTA 526uM H202 353mM CH3COOH/CH3COONa 70mM pH (par NaOH) 4.4 - 5.0 E°rédox 300 à 420mV 10 La composition est dite "initiale" car correspondant aux concentrations des réactifs ajoutés sans tenir compte du process catalytique mis en oeuvre. Tous les constituants servant à la synthèse ainsi que le produit fini sont validés par spectre IR-FT. Tableau 1 bis Produit Pureté Formule brute CAS Molybdate de sodium dihydrate 98-103% Na2Mo04.2H20 10102-40-6 BAPTA : (1,2-bis(o- k98`)/0 C22H241\12010 85233-19-8 aminophenoxy)ethane-N,N,N',N' tetraacetic acid) EGTA: (ethylene glycol-bis(2- k 9 9 % Ci4H24N2010 67-42-5 aminoethylether)-N,N,N',Artetraacetic acid) Peroxyde d'hydrogène 29-31% H202 722-84-1 Acide acétique glacial 99.8-100.5% CH3COOH 64-19-7 Acétate de sodium trihydrate 99-101% C2H3Na02.3H20 5010524 Sodium hydroxyde 10N NaOH 1310-73-2 Eau déminéralisée 1uS H2O 7732-18-5 3049465 26 Les données chiffrées des mesures effectuées durant et après la synthèse sont les moyennes issues de 3 productions. Les quantités indiquées ci-dessous sont pour la préparation d'un litre de Mélange 5 1. A - ETAPE (i) : préparation de la solution tampon (solution ST) CH3COOH (100%; 8: 1.05g.cm-3 (liquide, 20 °C)) 4.0m1 (70mM final) CH3COONa.3H20 (100%) 8g (59mM final) 10 Eau qsp Vérification du pH : 4.7-4.8 Température ambiante (20°C) B - ETAPE (ii) : préparation de la solution de complexe métallique 15 (solution SC) Na2Mo04.2H20 (source de Mo(VI); 100%) 200mg (2.4mM final) Eau qsp 340m1 Agitation douce, température ambiante 20 C - ETAPE(iii) : préparation de la solution initiale (Sil) Eau 900mL CH3COOH (100%) 4mL (70mM) Ajouter très doucement et sous agitation très douce (25Orpm), pH : 2.9-3.8 25 Eredox: 470-490mV puis, H202 (30%) qsp pour 1.2% final en poids et selon les dosages préliminaires (Solution Sil) À 45 min. : 30 pH : 2.70-2.90 Erédox: 440-460mV Par l'équation de Noble : [H202] = 380-410mM D - ETAPE (iv) : préparation de la solution initiale (Si2) 35 Introduire la "solution ST" dans la solution Sil 12mL (gel mM acétate) Ajouter sous agitation douce. 3049465 5 27 (Solution Si2) À 45 min. : pH : 2.90 Erédox : 460-480mV Par l'équation de Noble : [H2O2] = 360-410mM E - ETAPE (v) : préparation de la solution peroxomolybdigue Si Introduire la "solution SC" dans la solution Si2 10mL À 45 min. : pH : 2.80-3.00 10 Erédox : 450-480mV Par l'équation de Noble : [H2O2] = 370-400mM (Solution 51) F - ETAPE (vi) : préparation de la solution S2 Ajustement du pH sous agitation douce : 15 NaOH 9,9-10,1M 3.6 mL pour = 0.9L du mélange 1 pH 4,5-5,0 À 45 min. : pH : 4.60 Erédox : 380-390mV (Solution S2) 20 G - ETAPE (vii) : Ajout des agents chélatants - Préparation de la solution S4 Introduction BAPTA (98.8%) 6mg/L, après dissolution très lente du BAPTA sous agitation douce dans un aliquote de la 25 formulation S2 (1.4L) préalablement équilibrée à 25°C (solution dite « S3.1 »). Pool de la solution S3.1 avec la solution S2 pour former la solution S3.2. À 45 min. : pH : 4.40-4.70 30 Erédox : 380-390mV Par l'équation de Noble : [H2O2] = 370-390mM Introduction EGTA (99.1%) solution S4 35 Dissoudre sous agitation douce. À 45 min. : 200mg/L dans la solution S3.2 pour former la 3049465 28 pH : 4.40-4.60 Eredox : 380-390mV Par l'équation de Noble : [H2O2] = 370-420mM 5 H - ETAPE (viii): ajustement du pH Ajustement du pH (NaOH 9,9-10,1M, c à d "::--400g/L) => pH : 4.60 ± 0.2 I - ETAPE (ix) : ajustement du volume pour la solution finale (SF) Ajustement du volume par eau déminéralisée qsp 1 litre 10 À 12-18 heures : pH : 4.50-4.70 Erédox : 380-390mV Par l'équation de Noble : [H2O2] = 350-380mM 15 Par titrimétrie : [H2O2] = 400-430mM Densité : 8 = 1.004g/m1 Le mélange selon l'invention, prêt à l'emploi, est stable à l'obscurité plus de 6 mois à température ambiante ou à 45°C. 20 Exemple 2 - Signature par variation de potentiel rédox On évalue la signature du mélange actif selon la présente invention par la variation du potentiel rédox lors de la synthèse d'une composition préparée selon l'exemple 1. D'après la Fig. 1, par rapport à la solution initiale (g--470mV; étape 3), diminution du 25 potentiel rédox de "::--90mV (ge380mV) à l'étape 6 (ajustement du pH par la soude). Le potentiel rédox reste constant jusqu'à la fin de la synthèse (étape 9). Il en est de même lors du vieillissement des formulations du mélange de l'invention selon l'exemple 1 sur 6 mois à température ambiante (389mV ± 5mV) et à 45°C (389mV ± 8mV) pour un pH de 4,56 ± 0,40 et 4.53 ± 0.41, respectivement. 30 Exemple 3 - Signature par consommation et production d'H202 - création de l'équilibre peroxo-réactif et du potentiel rédox du Mélange 1. On évalue la signature du mélange actif selon la présente invention par consommation et production d'H202 lors de la synthèse d'une composition préparée selon 35 l'exemple 1. 3049465 29 D'après la Fig. 1, par rapport à la concentration en H202 de solution initiale (353mM; étape 3 à tO), il est observée une brusque production peroxydique (g--42mM; dont une faible part d'acide peracétique) du fait de l'ajout de l'H202 dans la solution tampon (acide acétique/acétate). Si l'ajout d'H202 n'est pas réalisé dans une solution aqueuse 5 préalablement tamponnée acide (étape 3; pH = 2.84 ± 0.1), il s'en suivrait sa dégradation spontanée et rapide du fait d'un pH (eau) trop élevé (pKaHO2--/O2--: 4.8). Il est observé à partir de l'étape 4 jusqu'à l'étape 7, une consommation limitée d'H202 (10mM ± 6mM), jusqu'à sa stabilisation à 381mM ± 5mM (étape 7; +BAPTA). 10 L'ajout de I'EGTA déplace l'équilibre peroxydique (réaction Fenton "like") par une dégradation peroxydique, c'est-à-dire de 393mM ± 29mM à l'étape 7, à 357mM ± 26mM à l'étape 9, et 365mM ± 15mM à l'étape 9 + 12 heures. A l'étape 6, il est observé une chute brutale du potentiel rédox (de 463mV ± 15 mV à 392mV ± 17mV) par l'ajustement du pH. L'ajout (étape 7) des agents chélatants BAPTA 15 puis EGTA contribue successivement à une stabilisation du potentiel rédox (386mV ± 5mV et 383mV ±6mV) par stabilisation des équilibres chimiques. Exemple 4 - Dosage de l'efficacité rédox du mélange de l'invention: méthodes quercétine 20 A - Les solutions réactives 1 - Quercétine Une solution de quercétine dihydrate (2-(3,4-dihydroxyphenyI)-3,5,7-trihydroxy-4H- 1-benzopyran-4-one dihydrate, 3,3',4',5,7-pentahydroxyflavone dihydrate; (Cl5H10072H20) à 10-3 mol/L est préparée en méthanol. 25 2 - Solution chlorhydrique Une première solution d'acide chlorhydrique 1M est préparée en méthanol. Une seconde solution est préparée à 0.3 M en méthanol. La solution réactive est préparée en ajoutant 343µl de la solution 1M à 13571.11 de la solution 0.3 M. 30 3 - Solutions de Fe3+ (abaque de référence) Une solution de Fe3+ (Fe2(SO4)3.xH20) à 2 mg/ml est préparée en eau HPLC. Elle est ensuite diluée pour obtenir huit solutions de référence à : 20, 100, 200, 300, 400, 500, 1000 et 1500 pg/ml. Ces solutions sont finalement diluées 20 fois en plasma humain ou 35 en eau HPLC pour obtenir en final des concentrations de : 0, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 50 et 75 pg/m I. 3049465 30 4 - Solutions de Fe2+ (abaque de référence, contrôle d'activité) Une solution de Fe2+ (FeSO4.7H20) à 89 mg/ml est préparée en eau HPLC. Elle est ensuite diluée pour obtenir trois solutions de référence à : 0.445, 4.45 et 44.5 mg/ml. 5 Ces solutions sont finalement diluées 10 fois en eau HPLC pour obtenir en final des concentrations de : 0, 0.0445, 0.445 et 4.45 mg/ml. B - Dosages par la méthode quercétine La présence de Fe3+ (abaque) ou sa production (abaque Fe2+ et efficacité du 10 mélange de l'invention après 2 min. de contact) sont quantifiées par la méthode quercétine. Selon les conditions d'analyse ou d'utilisation du Mélange 1 : « mélangeox » fait référence au mélange de selon l'invention à titre d'oxydant. « mélangeréd » fait référence au mélange de selon l'invention à titre de réducteur. 15 Les productions de Fe3+ sont selon les équations: Transferrine-2Fe3+ + mélangered + 3H+-> Transferrinered + 2Fe3+(aq) + mélangeox (1) Fe3+(aq) + mélangered + e- Fe2+(aq) + mélangeox (2) Fe3+(aq) + quercétinered quercétineox + Fe2+(aq) (3) La réaction (1) est en milieu plasmatique. 20 La réaction (2) est en milieu plasmatique ou en eau HPLC et correspond à l'équilibre de la réaction de Fenton-Haber-Weiss. La réaction (3) est la réaction d'oxydation de la quercétine pour évaluer le pouvoir rédox du Mélange 1. 25 En milieu acide et à 70°C, la quercétine est oxydée spécifiquement par le fer ferrique (Fe3+; El Hajji et al 2006 et Balcerzak et al, 2008) porté par la transferrine en milieu plasmatique et non par le fer ferreux (Fe2+). L'ion Fe3+ est soluble dans ces conditions. 301.11 de la solution quercétine sont ajoutés à 1700 de la solution réactive 30 chlorhydrique. Après homogénéisation, 501.11 de l'échantillon (Fe3+ en plasma humain ou en eau HPLC, Fe2+ en eau HPLC, le mélange de l'invention après 2 min. de contact avec le plasma humain) sont ajoutés. Les solutions sont agitées fortement et brièvement puis incubée 1h à 70°C. Après incubation, les échantillcns sont centrifugés 15 min. à 14.000 tpm et température ambiante. 1000 de surnageants sont prélevés. Le spectre UV de 35 chaque échantillon est acquis de 230 à 500nm. Les blancs : eau, Fe2+, Fe3+, plasma sont soustraits selon le type d'expérimentation. Le pic d'absorption de la quercétine oxydée par 3049465 31 le Fe3+ produit à partir de la transferrine plasmatique et la réaction de Fenton-HaberWeiss in situ est conservé (de 285-305 nm). L'apex de la courbe est centré vers 292 nm quand l'expérience est réalisée dans de l'eau HPLC ou du plasma. Il peut se déplacer d'un maximum de 10 nm quand les blancs 5 expérimentaux sont soustraits. 1 - Abaque Fe3+ On réalise un abaque pour l'ion Fe(III) par exemple en mesurant l'absorbance en UV (sur la gamme 250-330nm) de la quercétine oxydée pour différentes concentrations 10 de Fe3+ (cf. la gamme Fe3+ ci-dessus) en plasma humain, et en reportant la densité optique en fonction de la longueur d'onde. A partir du spectre de la région 250-330nm, l'aire sous la courbe (AUC, pour Area Under the Curve) entre 285 et 305nm est calculée par la formule : f285ntn 285nrn AUC285nin = f(x)dx = Absorbance . d(2) En conséquence, chaque aire de la surface du pic 285-305nm pour chaque point de la gamme de Fe3+ est portée pour représentation graphique. La courbe de tendance est 20 tracée (Excel), l'équation (le coefficient de corrélation R2 dont la valeur la plus proche de 1 valide l'expérimentation) est déduite (Excel). Elle peut être d'une forme linéaire ou polynomiale de type: y = ax2 + bx +c. Par expérience cette relation peut être du type y = -0,0021x2 + 0,4819x + 0,4521 ; R2 = 0,9966 (Fig. 2). (4) 25 Pour un mélange selon l'invention, la concentration en équivalent Fe3+ produit en milieu plasmatique ou à partir de Fe2+ est le reflet du pouvoir oxydant de l'invention et est calculé à partir de l'équation (4). Il s'agit d'une méthode indirecte de mesure de l'efficacité rédox du Mélange 1 par dosage en UV de la quercétine oxydée par le Fe3±. En conséquence il est évoqué une concentration en "équivalent" Fe3±. De même, il est 30 possible de comparer le pouvoir rédox d'une solution selon l'invention à tester, par rapport à une solution de référence selon l'invention, autrement dit, faire une comparaison avec quantification de l'efficacité rédox d'un mélange selon l'invention. 305nnt 2 - Abaque Fe2+ 35 De la même manière que pour l'ion Fer(III), on réalise un abaque pour l'ion Fer(II). On mesure par exemple l'absorbance en UV (230-500nm) du pic quercétine oxydée par le 15 305ntn 305tnn 3049465 32 Fe3+ obtenu à partir du mélange de l'invention à 1.22bM de substance active (250 pg/L) et 2 min. de contact avec Fe2+ pour la gamme décrite ci-dessus. Les mêmes analyses mathématiques en AUC telles que décrites pour l'ion Fer(III) peuvent être réalisées. 5 3 - Dosage de l'efficacité rédox du mélange de l'invention par exemple à 1.22 ptM (250 ug/L) en substance active Mo042-. Selon le protocole décrit en B-, l'efficacité rédox d'un mélange selon l'invention (1.22 ptM Mo042- en plasma humain) est testée pour: i) évaluer son vieillissement à température ambiante et à 45°C, ii) valider sa production et évaluer comparativement les 10 formulations, iii) quantifier son passage transcutané, iv) sa biodisponibilité et, v) sa biophase. Selon l'équation (4), on calcule l'aire spécifique du pic de l'absorbance en UV (en AUC) entre 285 et 305 nm du pic quercétine oxydée par le Fe3+ libre produit après contact plasmatique 2 min. du mélange de l'invention (équations (1), (2) et (3)) à une 15 concentration finale de 1.22 ptM avec le complexe transferrine-Fe3±. En moyenne, la production d'équivalent Fe3+ (Fe3±,q) est de l'ordre de 30 à 50 pg/mIde plasma. 4 - Abaque d'estimation en milieu plasmatique de la concentration efficace du mélange selon l'invention 20 Le fer plasmatique n'est pas libre. Il est lié à la transferrine (ou sidérophiline) sous sa forme ferrique (Fe3±) à raison de 1 à 2 résidus par molécule. Le fer sous sa forme ferreuse (Fe2±) n'est pas circulant en dehors de sa complexation à l'hémoglobine. Il est considéré que le plasma humain utilisé n'est pas hémolyse. La réaction quercétine du mélange inventif avec le cuivre plasmatique est considérée comme négligeable. 25 Une gamme de concentrations du mélange de l'invention (15.2, 7.6, 3.8 et 1.9 nM Mo042- final) a été incubée en plasma humain. La réaction avec la quercétine a été réalisée comme décrit en B-. Le pic d'absorption spécifique (soustraction du blanc plasma + quercétine) a été intégré comme décrit en B-1 (Fig. 3). L'abaque a été tracé (Excel) en échelle polynomiale et l'équation de tendance 30 calculée (y = 0,0144x2 + 0,5863x + 0,4511 avec R2= 0,9934 (5); Fig. 4). Une relation de proportionnalité (équation 5) est constatée entre la quantité de l'invention en concentration ajoutée au plasma humain et la quantité en équivalent de Fe3+ (équation 4) détectée par la réaction d'oxydation de la quercétine, à savoir 28.95, 12.19, 3.97, 3.12 pg Fe3±,q/mL de plasma humain, selon la gamme du mélange de l'invention 35 décrite ci-dessus. 3049465 33 Exemple 5 - Evaluation de l'efficacité oxydoréductrice de l'invention sur plasma humain Après un ajout de l'invention à du plasma humain et après un temps de contact de 2 min., jusqu'à une concentration de 0.03038 1..1M Mo042-, la réaction d'oxydation de la 5 quercétine par la production de Fe3+ issu du complexe transferrine-Fe3+ plasmatique et la réaction de Fenton-Haber-Weiss est optimale et linéaire (cf. exemple 4). Après soustraction des blancs expérimentaux, une augmentation de la concentration de l'invention génère une diminution de la production in situ de quercétine oxydée par Fe3+ du fait du déplacement des équilibres de la réaction de Fenton-Haber- 10 Weiss (Fe3+ = Fe2±). Les concentrations finales de Mo042- testées étaient alors de 0.00, 1.22, 4.05, 12.15, 24.30 et 30.381.1M (Fig. 5). Exemple 7 - Efficacité anti-réplicative A - Les modèles 15 - Quatre modèles de contact du mélange selon l'exemple 1 (« Mélange 1 ») ont été testés. Ils représentent les quatre possibilités physiologiques que le Mélange 1 peut rencontrer lors d'une application thérapeutique topique, à savoir : Modèle 1 : Mélange 1 sur cellules infectées par HSV-1, Modèle 2 : Mélange 1 sur cellules non encore infectées par HSV-1, 20 Modèle 3 : Mélange 1 sur cellules non encore infectées et Mélange 1 sur HSV- 1 libre (non encore infectant), Modèle 4 : Mélange 1 sur HSV-1 avant infection. - Deux temps de contact du Mélange 1 ont été testés, à savoir 2 min. ou 1.5 min., 25 puis élimination du Mélange 1. - Deux concentrations du Mélange 1 ont été testées : 0,81 et 2,03 1..1M en substance active, c'est-à-dire 167 et 417 pg/L, respectivement. - La méthode de quantification des efficacités est la qPCR (quantitative Polymerase Chain Reaction ; Mullis K. et al (1986) "Specific Enzymatic Amplification of 30 DNA In Vitro: The Polymerase Chain Reaction", Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 51 (Pt 1), 263-273.) - L'efficacité anti-réplicative (EA) du Mélange 1 sur HSV 1 a été évaluée en qPCR avec des primers spécifiques du génome viral (Kessler H.H. et al (2000) "Detection of Herpes simplex virus DNA by real-time PCR" J. Clin. Microbiol., 38(7), 2638-2642). 3049465 34 - La cytotoxicité du Mélange 1 (C) sur la lignée BHK-21 a été évaluée en qPCR avec des primers spécifiques du gène de la petite sous-unité ribosomale 18S (Texcell - Evry, France). - La multiplicité d'infection (MOI) : 1, c'est-à-dire 5.105 TCID50 (Tissue Culture 5 Infective Dose 50%). - Les expériences de qPCR ont été réalisées à t0h (2h après contact entre BHK-21 et HSV-1, puis élimination d'HSV-1), t2h- , t4h- et t8h-post-infection. - Le rapport EA/C nous indique l'Index d'Efficacité in vitro (1E) du Mélange 1 correspondant à un modèle d'étude. 10 Modèle 1 : BHK-21 + HSV-1 (2h ; infection) => lavage (PBS) pour élimination virale => prélèvements t0h => + Mélange 1 (2 min.) => lavage (milieu de culture) pour élimination du Mélange 1 => incubation cellulaire 37°C => prélèvements t2h-, t4h- et t8h-post- 15 infection. Modèle 2 : BHK-21 + Mélange 1 (1.5 et 2 min.) => lavage (PBS) pour élimination du Mélange 1 => cellules + HSV-1 (2h ; infection) => lavage (milieu de culture) pour élimination 20 d'HSV-1 => prélèvements t0h => incubation cellulaire 37°C => prélèvements t2h-, t4h- et t8h-post-infection. Modèle 3 : BHK-21 + Mélange 1 (1.5 et 2 min.) => lavage (PBS) pour élimination du Mélange 25 1. HSV-1 + Mélange 1 (1.5 et 2 min.) => lavage (PBS) pour élimination du Mélange Pool des cellules et des virus ayant été en contact préalable avec Mélange 1 (2h ; infection) => lavage (milieu de culture) pour élimination d'HSV-1 => prélèvements t0h => 30 incubation cellulaire 37°C => prélèvements t2h-, t4i- et t8h-post-infection. Modèle 4 : HSV-1 + Mélange 1 (2 min.) => lavage (PBS) pour élimination du Mélange 1 => + BHK-21 (2h ; infection) => lavage (milieu de culture) pour élimination d'HSV-1 => 35 prélèvements t0h => incubation cellulaire 37°C => p-élèvements t2h-, t4h- et t8h-post- infection. 3049465 35 B - Résultats Tableau 2 : Réduction à 8 heures de la multiplication d'HSV-1 dans les cellules BHK-21 après contact avec Mélange 1 (en pg/L de substance active) ou de l'aciclovir 5 (ACV); Index d'Efficacité in vitro (1E). Réduction réplication HSV-1 à t8h (`)/o)* IE à t8h / modèle** Substance Mélange 1 ACV Mélange 1 Mélange 1 ACV Mélange 1 Temps de contact (min.) 1.5 1.5 2 2 2 1.5 1.5 Concentration (p.g/L) 167 417 103 167 417 167 417 103 167 417 Modèle 1 -97 -98 -12 NT NT 37 48 2 NT NT Modèle 2 -72 -96 -1 -70 -86 4 23 1 3 7 Modèle 3 -93 -97 -6 -78 -90 14 35 1 4 10 Modèle 4 -56 -69 -52' NT NT 2 3 2# NT NT * La réduction de la réplication d'HSV (RR) par les substances testées (Mélange 1, aciclovir témoin) est exprimée en pourcentage et correspond au rapport de quantifications 10 qPCR des génomes HSV-1 et de la cytotoxicité laquelle est évaluée par quantification de la sous-unité 18S de la cellule hôte: RR = {(100 x ([HSV-1]test/[18S]t't)) / ([HSV- 1 ]témoin+/[18S]témoin+)} 1 00. ** L'Index d'Efficacité anti-réplicative in vitro (1E) des substances testées est représenté par le rapport ([HSV-1] / [18S] évalué en qPCR spécifiques) du contrôle positif infecté par 15 HSV ([HSV-11 Jtémoin+/[1 8S1 Jtémoin+) vs. celui des substances testées (Mélange 1, aciclovir témoin) : IE = ([HSV-11 Jtémoin+/[18S]témoin+) ([HSV-1]t't/[18S]t't). # [ACV]: 1 g/L - Les meilleurs IE (Tab. 2) sont obtenus après 2 minutes de contact du mélange 1 20 et une concentration à 417 pg/L. Nous notons une influence significative du temps de contact sur les IE (1.5 min. et 2 min.; modèles 2 et 3). Les IE obtenus avec les modèles 1 et 3 avec 2 min. de contact et une concentration du mélange 1 de 167 pg/L, sont particulièrement significatifs. 25 - Quel que soit le modèle, les IE obtenus avec l'aciclovir (« ACV ») ne sont pas significatifs (Tab. 2). 3049465 36 Tableau 3 : Pourcentages en quantification par qPCR (gène 18S ou HSV; à 8h post contact de 2 min.) : i) de la multiplication de la lignée BHK-21 (témoin: lignée non-infectée) et, ii) de la réplication de HSV-1 (témoin: lignée infectée). Gène/génome 18S (%) HSV (% Témoin Lignée + (PBS - HSV) Lignée + (PBS + HSV) Substance test Mélange 1 ACV Mélange 1 ACV Mélange 1 (mg/I-) (mg/L) [substance active] 167 pg/L 417 pg/L 167 pg/L 417 pg/L 167 pg/L 417 4/1 Modèle 1 45 27 108 (1) 49 30 118 (1) 1 25 7 S3 2.5 >25 8 S3 1.25 "::--25 Tableau 8 20 La désactivation de la formulation S1 à 5 minutes de contact avec CaCl2 2.5mM (concentration physiologique) correspond à une décroissance peroxydique d'un facteur 1500 (Test 4), à savoir de 12g/L à 8mg/L en traceur et 5.00 mg/L à 3.33 pg/L en substance active). 25 Conclusions comparatives concernant les formulations S2 et S3 La solution S2, quel que soit le métal utilisé, n'est pas compatible avec une application thérapeutique, par: - son pH non tamponnable pour conserver ses potentialités, - son potentiel rédox cytotoxique, 3049465 53 - sa relative indépendance à la catalyse calcique, - sa cytotoxicité aux conditions physiologique due à l'H202 et l'acide peracétique (outre la présence d'ions Ag+, par exemple, présentant une cytotoxicité irréversible), - dans les conditions expérimentales utilisées il n'y a pas de catalyse Fenton- 5 Haber-Weiss like donc il n'y a pas de production radicalaire réactive à utilisation thérapeutique. La solution S3, quel que soit le métal utilisé et le couple chélatants décrit dans la demande de brevet W02010/004161, n'est pas compatible avec une application 10 thérapeutique, par: - son pH non compatible avec le BAPTA, - son potentiel rédox cytotoxique, - sa relative indépendance à la catalyse calcique, - sa cytotoxicité aux conditions physiologique due à l'H202 et l'acide peracétique, 15 - dans les conditions expérimentales utilisées, il n'y a pas de catalyse Fenton- Haber-Weiss like, donc il n'y a pas de production radicalaire réactive à utilisation thérapeutique. Au contraire, le modèle chimique réactionnel de la formulation S1 conforme à 20 l'invention, est correct du fait de sa déstabilisation par le calcium. Pour la formulation S1, les choix : - du pH, - du couple tampon (ajout d'un seul élément du couple: l'acide acétique, puisque l'acide peracétique est faiblement produit in situ), 25 - du métal de transition et ses valences compatibles avec les réactions de Fenton- Haber-Weiss like ou non, - du couple des chélatants (compatibilité entre eux avec des Kdca2+ et Kdmo, KdFe2+/Fe3+ en "cascade"), - la non pénétration cellulaire des chélatants, 30 - de l'activation du complexe de la solution S1 par le calcium ou d'autres ions métalliques existants in situ, à des doses et pH physiologiques (importance du choix des chélatants), à un potentiel rédox limitant les oxydations lipidiques notamment (peu de production de Fe(III)) et la génération instantanée de radicaux réactifs perméants à courte distance, sans accumulation, rendent cette formulation compatible avec une utilisation 35 thérapeutique. 3049465 54 La solution S1 est très fortement dégradée aux concentrations physiologiques de calcium avec un minimum à 2.5mM. Une diminution (1.25mM) ou une augmentation (de 10 à 50mM) de cette concentration calcique non physiologique altère fortement cette dégradation des peroxydes due aux réactions de Fenton-Haber-Weiss like par 5 déplacement des équilibres (loi d'action de masse). Le complexe chimique correspondant à la solution S1 est totalement adapté à une réaction spécifique dans la constante calcique cellulaire et plasmatique. REVENDICATIONS1. Composition ou mélange, de préférence thérapeutiquement actif par voie topique, comprenant : - au moins un sel de métal, le métal étant choisi parmi le molybdène (Mo), le tungstène (W), le vanadium (V), l'or (Au), un lanthanide, en particulier le lanthane; - au moins un agent chélatant; au moins une source de radicaux peroxydant; au moins un agent tampon; ledit mélange ou ladite composition présentant un potentiel rédox de 300 à 420 millivolts. 2. Composition ou Mélange, selon la revendication 1, caractérisé en ce que le métal du métallate est de valence maximale. 3. Composition ou mélange, selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le métal est oxydé à son degré d'oxydation maximal. 4. Composition ou mélange e, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le sel métallique est un sel de molybdène. 5. Composition ou mélange, selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le sel de molybdène est de préférence d'unité peroxo ou hydroperoxo. 6. Composition ou mélange, selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que la substance active est de type Mo042- ou sa forme hydroperoxo. 7. Composition ou mélange, selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé le métal ou son sel est un lanthanide ou son sel. 8. Composition ou mélange, selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il comprend au moins deux agents chélatants. 3049465 56 9. Composition ou mélange, selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le ou les agents chélatants présentent au moins trois groupements de coordination, de préférence des groupements acides carboxyliques, à trois extrémités de la ou des molécules formant le ou les agents 5 chélatants, lesdits groupements de coordination étant séparés par une chaine d'au moins trois atomes dont au moins un atome d'azote. 10. Composition ou mélange, selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que l'agent chélatant est choisi parmi BAPTA, EGTA et l'un 10 quelconque de leurs mélanges. 11 Composition ou mélange, selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que la source principale de radicaux peroxydant est présente à une concentration allant de 200 à 600 mM, de préférence de 300 à 500 mM, et 15 encore de préférence de 340 à 450 mM. 12. Composition ou mélange, selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que le mélange comprend comme agent tampon autorisant un pH 4,0 à 5,2, préférentiellement de 4,4 à 5,0, par exemple un acide carboxylique, 20 et de préférence l'acide acétique. 13. Composition ou mélange, selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que le mélange présente un potentiel rédox de 350 à 420 millivolts 25 14. Procédé de préparation d'un mélange ou d'une composition tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisé en ce qu'il comprend (i) la préparation d'une solution tampon (ST) comprenant un agent tampon présentant un pH acide, (ii) la préparation d'une solution d'un complexe métallique (SC) 30 comprenant un sel d'oxyde métallique, (iii) la préparation d'une première solution initiale (Sil) ) comprenant du peroxyde d'hydrogène, (iv) la préparation d'une seconde solution initiale (Si2) par mélange de la solution ST avec la solution Sil, (v) la préparation d'une solution (51) comprenant un composé peroxo-métallique par mélange de la solution SC avec la solution Si2, (vi) la préparation d'une 35 solution S2 par ajustement du pH de la solution 51 avec une base, le pH de la solution S2 étant plus basique que le pH de la solution ST, (vii) l'ajout à la solution S2 d'un ou plusieurs agents chélatants, (viii) l'ajustement éventuel du pH, (ix) 3049465 57 l'ajustement éventuel du volume de la solution finale, l'obtention d'un mélange ou d'une composition tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 13 présentant un potentiel rédox compris de 300 à 420 millivolts. 5 15. Procédé, selon la revendication 14, caractérisé en ce que le peroxyde d'hydrogène est présent dans la solution Sil à une concentration allant de 200 à 600 mM, de préférence de 300 à 500 mM, et encore de préférence de 330 à 460 mM. 10 16. Procédé, selon la revendication 14 ou 15, caractérisé en ce que l'agent tampon de la solution ST est un tampon acide carboxylique/carboxylate, et la solution ST présente un ratio peroxyde d'hydrogène/carboxylate compris entre 20/1 et 1/1, et de préférence d'environ 5/1. 15 17. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 14 à 16, caractérisé en ce que le procédé comprend une mesure du potentiel rédox aux étapes (iii) à (ix), et de préférence comprend également une mesure du pH aux étapes (iii) à (ix). 18. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 14 à 17, caractérisée en ce 20 que le composé peroxo-métallique de la solution 51 est un composé peroxo- molybdique. 19. Composition pharmaceutique à usage topique, caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange ou composition thérapeutiquement actif, tel que défini selon 25 l'une quelconque des revendications 1 à 13, ou susceptible d'être obtenu selon un procédé tel que défini à l'une quelconque des revendications 14 à 18. 20. Composition pharmaceutique à usage topique selon la revendication 19, caractérisée en ce qu'elle comprend de 0,001 à 5 mM, de préférence de 0,01 à 2 30 mM, et encore de préférence de 0,02 à 1 mM du mélange pharmaceutiquement actif. 21. Composition pharmaceutique à usage topique selon la revendication 19 ou 20, pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique d'une infection 35 virale, et en particulier impliquant un virus de la famille Herpesviridae. 3049465 58 22. Composition pharmaceutique, selon l'une quelconque des revendications 19 à 21, pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique d'une infection impliquant HSV-1 et/ou HSV-2. 5 23. Composition pharmaceutique, selon l'une quelconque des revendications 19 à 21, pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique anti-inflammatoire. 24. Composition pharmaceutique, selon l'une quelconque des revendications 19 à 23 10 pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique préventif ou curatif. 25. Composition pharmaceutique comprenant du molybdène, au moins un agent chélatant et une source de radicaux peroxydant pour son utilisation dans une 15 méthode de traitement thérapeutique d'un herpès.