Brevet FR3041504A1 — publié le 20170331

La présente invention est du domaine des compositions pour des usages en tant que biocide et, en particulier, en tant que pesticide. Elle concerne, plus particulièrement, les compositions fongicides, permettant d'éradiquer les microorganismes tels que les champignons responsables de la détérioration des structures en bois comme les charpentes, les bardages ou les éléments de mobilier. Les produits fongicides sont généralement des formulations incorporant un agent bioactif contenant une molécule organique ayant une action préventive, visant à empêcher le développement des spores dans le bois, et/ou curative, visant à stopper la croissance des champignons parasitaires dans le bois. Ces agents bioactifs, qui sont ici des agents biocides, voire des agents pesticides, ont un spectre d'action relativement large, et pour en diminuer les effets néfastes sur les organismes vivants non ciblés, ils doivent être utilisés à une concentration qui soit la plus basse possible. Des adjuvants sont parfois ajoutés, leur rôle est d'améliorer le mode d'action de l'agent biocide, ou pesticide, qui peut alors être utilisé de manière efficace à de plus faibles concentrations. Par exemple, il est connu d'avoir recours, en combinaison avec des fongicides tels que le propiconazole, à un antioxydant, tel que l'hydroxytoluène butylé (en anglais « butylated hydroxytoluene », BHT) ou le propyle de gallate (PG), comme décrit dans l'article de Schultz et al. Wood and Fiber Science, 37(1), 2005, pp. 175-184. Cependant, l'utilisation de ces antioxydants, BHT et PG, est très controversée, étant donné qu'ils sont considérés comme des substances préoccupantes car toxiques, aussi bien par la réglementation de l'Union Européenne, que par la règlementation Nord-Américaine. Dans ce cadre, il est recherché l'utilisation de compositions contenant une substance biocide compatible avec les critères d'innocuités établis par le règlement européen (UE) n°528/2012, faisant suite àla directive européenne 3041504 2 98/8/CE et/ou une substance pesticide compatible avec les critères d'innocuités établis par le règlement européen (UE) n°1107/2009, faisant suite à la directive européenne 91/414/CEE. Pour ce faire, la teneur en substance biocide ou pesticide doit être abaissée au maximum dans la 5 composition, et les adjuvants utilisés en combinaison avec la substance biocide ou pesticide ne doivent pas être des produits chimiques de synthèse toxiques. La composition doit en particulier viser à l'éradication de champignons nuisibles pour les bois, sans pour autant être néfaste pour l'homme, pour les animaux autres que ceux détériorant le bois, ou 10 l'environnement. Pour pallier tout ou partie des inconvénients précités, la présente invention concerne, selon un premier aspect, une composition biocide, en particulier pour une action fongicide, comprenant une ou plusieurs 15 substances biocides et un adjuvant compris dans la catégorie des substances naturelles et des antioxydants, et qualifié d'antioxydant naturel. Les inventeurs ont montrés de manière fortuite la synergie d'action entre les antioxydants naturels et la substance biocide, choisie de préférence parmi les substances pesticides, ce qui permet d'abaisser la concentration utile en 20 substance biocide et/ou pesticide dans la composition. Le terme substance naturelle désigne soit une substance purifiée isolée de son milieu d'origine, soit une substance utilisée en combinaison avec tout ou partie de son milieu d'origine, comme par exemple une graine ou 25 un pépin contenant ladite substance. La composition selon l'invention comprend avantageusement un chélateur (en anglais « chelator »), de préférence sélectionné parmi au moins l'une des substances suivantes : l'acide éthylène diamine tétraacétique 30 (EDTA), le sel tétrasodique de l'acide N,N-dicarboxyméthyl glutamique (GLDA), l'acide diéthylène triamine penta acétique (DTPA), l'acide (2- Hydroxyéthyl) éthylène diamine triacétique (HEDTA), l'acide nitrilotriacétique (NTA), l'acide propylène diamine tétra acétique (PDTA), l'éthanol glycine (EDG), le glucoheptonate, le gluconate de sodium, et l'acide gluconique,... La 3041504 3 présence du chélateur dans le milieu permet d'améliorer la stabilité et donc l'efficacité de la composition fongicide en montrant une diminution de la perte de masse des échantillons de bois traités. De préférence, le chélateur, encore qualifié d'agent chélatant, est l'EDTA. 5 La teneur en chélateur, exprimée en pourcentage massique par rapport au poids total de la composition, est avantageusement de 0,5 à 5%. Avantageusement, la substance biocide est choisie parmi les triazoles, les ammoniums quaternaires, et les carbamates. 10 Avantageusement, la substance biocide est une substance fongicide sélectionnée parmi le propiconazole, le tébuconazole, le chlorure de didécyldiméthylammonium (en anglais « N, N-didécyl-N, N- dimethylammonium chloride », DDAC), le chlorure de benzalkonium (BKC), et le 3-iodo-2-propynyl-butylcarbamate (IPBC). La composition selon l'invention 15 pouvant comprendre avantageusement au moins deux des cinq substances biocides précitées dans le cadre de l'invention. Le propiconazole est un agent de protection du bois. L'efficacité du propiconazole est connue contre les champignons de discoloration du bois' les moississures, le bleuissement, les pourritures cubiques, fibreuses et la 20 pourriture sèche (mérule) en vue de la préservation des bois en classes d'emploi correspondant à des usages intérieur et extérieur et au contact du sol. Le tebuconazole, tout comme le propiconazole, est une substance fongicide efficace comme l'atteste notamment l'article de Buschhaus et al. 25 International Research Group on Wood Preservation, 1995. Le 3-iodo-2-propynyl-butylcarbamate est décrit comme substance fongicide présentant une toxicité acceptable pour le traitement préventif des bois dans l'article de Hansen, J. IPBC - A new fungicide for wood protection. IRG, Wood Preservation, 1984, Document Number 3295. 30 Le N, N- didécyl -N, N-diméthylammonium (DDAC) est un agent efficace en tant que fongicide et fongistatique. Des applications en tant qu'insecticide sont également connues. 3041504 4 La composition selon l'invention comporte avantageusement une teneur en substance biocide inférieure à 2000 g/m3, voire inférieure à 1200 g/m3. Selon des modes de réalisation préférés, la teneur en substance biocide est de 100 à 500 g/m3, et avantageusement elle est de 150 à 450 5 g/m3. De telles teneurs en substance biocide sont suffisamment faibles pour ne pas impacter l'environnement extérieur au bois, tout en garantissant une action efficace en combinaison avec l'antioxydant et/ou le chélateur. Avantageusement, la composition selon l'invention comporte deux 10 substances biocides sélectionnées parmi les substances biocides décrites dans le cadre de l'invention, prises dans une teneur totale en substance biocide de 100 à 150 g/m3. L'association d'au moins deux substances biocides, en synergie avec l'antioxydant, permet de réduire encore d'avantage la dose nécessaire en substance biocide. Par exemple : 15 - pour un mélange de propiconazole avec du tébuconazole (1:1), la dose efficace est à 200-250 g/m3 sans l'ajout de l'antioxydant et du sequestrant; et - avec ajout de l'antioxydant, cette dose efficace est réduite de moitié. 20 Avantageusement l'antioxydant naturel est obtenu à partir de l'une des sources biologiques végétales suivantes: le pin maritime, le cacao, l'arachide, et le raisin. L'antioxydant naturel est avantageusement obtenu à partir d'un extrait de pépin de raisin riche en polyphénols, et en particulier riche en oligomères 25 procyanidoliques (OPCs). L'extrait de pépin de raisin utilisé dans ce cadre, et connu sous la dénomination anglo-saxonne "Grape seed extract", comporte au moins 99% d' OPCs. L'antioxydant naturel est avantageusement obtenu à partir d'un extrait d'écorce de pin maritime riche en polyphénols, et en particulier riche en 30 oligomères procyanidoliques (OPCs). L'extrait d'écorce de pin maritime utilisé dans ce cadre comporte au moins 90% d' OPCs. L'antioxydant naturel est avantageusement obtenu à partir d'un extrait de pellicule de graine d'arachide, ou de pellicule sèche de cacahuète, riche 3041504 5 en polyphénols, et en particulier riche en oligomères procyanidoliques (OPCs). Les termes flavonoïdes, procyanidols, proanthocyanidols, tanins catéchiques et oligomères flavanoliques totaux (OFT) sont utilisés 5 indifféremment pour désigner la même classe de molécules également connue sous le nom d'oligomères procyanidoliques (OPCs). Avantageusement, l'antioxydant naturel est un polyphénol susceptible d'être obtenu à partir d'une source biologique végétale. Parmi les polyphénols d'intérêt dans la cadre de l'invention on peut citer : 10 - les phénols simples, tels que le tyrosol extrait de l'olive ; - les acides hydroxycinnamiques, tels que l'acide chlorogénique extrait du café vert ; - les stylbénoïdes, tels que le resveratrol extrait du raisin ; - les tanins hydrolysables, tels que le tanin gallique extrait du châtaignier ; 15 - les tanins condensés, tels que les oligomères procyanidoliques extraits du pépin de raisin ou de l'écorce de pin ; et - les anthocyanes, tels que le cyanidol extrait des fruits rouges tels que la framboise. La composition selon l'invention pouvant comprendre avantageusement au 20 moins deux des antioxydants naturels susceptibles d'être obtenus à partir des sources précitées dans le cadre de l'invention. La composition selon l'invention comporte avantageusement une teneur en antioxidant naturel de 0.2 à 5%. 25 La présente invention concerne aussi une formulation fongicide comportant la composition selon l'invention diluée dans de l'eau et prête à l'emploi. Ainsi la composition est directement en phase à aqueuse dans les conditions prêtes à l'emploi. 30 Selon un autre aspect, la présente invention concerne une utilisation de la composition, ou de la formulation, telle que décrite précédemment dans le cadre de la présente invention pour le traitement préventif et curatif des pathologies fongiques du bois. 3041504 6 La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la partie expérimentale détaillée qui suit, dont les exemples de réalisation sont uniquement donnés à titre illustratif, et qui ne peuvent en aucune façon être 5 considérés comme limitatifs. PARTIE EXPERIMENTALE 10 Ingrédients entrant dans la préparation des compositions fongicides Les substances biocides utilisées sont le tébuconazole (97,4% de pureté), le propiconazole (97,4% de pureté), le 3-iodo-2-propynyl-butylcarbamate - IPBC (98% de pureté) et le chlorure de didécyldiméthylammonium - DDAC (79,6% 15 de pureté). Les extraits de plantes contenant l'antioxydant sont les suivants: - un extrait de pellicule de graine d'arachide riche en oligomères procyanidoliques (OPCs) ; 20 - un extrait d'écorce de pin comportant au moins 90% d' OPCs ; et - deux extraits de pépin de raisin ( Vitis vinifera), représenté par un extrait connu et un extrait comportant au moins 99% d' OPCs. Ces extraits sont obtenus et vendus par le Groupe BE RKEM®. 25 Pin L'extrait d'écorce de pin est fabriqué à partir de l'écorce de pin maritime 30 séchée et broyée, suivi d'une extraction solide/liquide initiale à l'eau, puis d'une récupération de la phase aqueuse par filtration. La purification est effectuée par extraction sélective liquide/liquide et séchage. Le procédé utilisé est décrit dans les demandes FR 2 092 743 et FR 2 722 498. Les principaux constituants dudit extrait sont quantifiés par chromatographie liquide haute performance en phase inverse avec détection par absorption 3041504 7 ultraviolette (voir le diagramme 1 qui donne le profil HPLC). Le taux de dérivés catéchiques totaux est supérieur ou égal à 30% de l'extrait. La somme de la catéchine et procyanidol dimère B3 (voir diagramme 2) ne doit pas être inférieure à 17%. Les acides phénoliques, hydroxycinnamiques et le 5 taxifoliol sont présents en quantités très faibles ne dépassant pas 3%. Pellicule de graine d'arachide Les pellicules sèches de cacahuètes (Arachis hypogaea L) sont traitées soit à 10 température ambiante ou à chaud avec les solvants suivants : l'eau, au moins un solvant organique (éthanol, acétone) ou des mélanges eau et solvants organiques dans des proportions variables. L'extrait liquide obtenu est concentré par des moyens appropriés (évaporation sous pression réduite) pour réduire et ou éliminer les solvants organiques. Le résidu est reconcentré 15 et on effectue un lavage et une extraction dans un mélange eau/acétate d'éthyle. L'extrait final est ensuite obtenu par nébulisation ou lyophilisation. L'extrait de pellicule de la graine d'arachide (Arachis hypogaea L) contient des polyphénols appartenant aux trois groupes ci-dessous : 20 -Acides phénoliques (acide gallique, acide caféique et acide chlorogénique) ; -Les hydroxystilbènes (trans-resveratrol) ; et -Les flavonoïdes (dont monomères et oligomères de flavan-3-ols). Les flavonoïdes contenus dans les OPCs de la pellicule de l'arachide sont 25 composés majoritairement d'oligomères appartenant à la série A (1 liaison interflavanique et 3 liaisons éthers par dimère, voir le diagramme 3.). Une liaison interflavanique est la liaison entre des unités monomériques telles que la catéchine. 30 Raisin L'extrait de pépin de raisin comportant au moins 99% d' OPCs est fabriqué à partir des pépins de raisin blancs séchés, débarrassés de la pulpe et non fermentés. Une extraction initiale à l'eau est effectuée, puis suivie d'une 35 récupération de la phase aqueuse par filtration. La purification est effectuée 3041504 8 par extraction sélective liquide/liquide et séchage. Le procédé utilisé est décrit dans les demandes FR 2 092 743 et FR 2 722 498. Les principaux constituants dudit extrait sont quantifiés par chromatographie 5 liquide haute performance en phase inverse avec détection par absorption ultraviolette (voir le diagramme 4 qui donne le profil HPLC). La somme des flavanols monomères se situe entre 18 et 32% de l'extrait, et celles des flavanols dimères est entre 30 et 40%. 10 Les exemples de formules chimiques des constituants dudit extrait de pépin de raisin sont rappelés au diagramme 5. Extrait de pépin de raisin connu 15 Cet extrait est obtenu à partir des mêmes matières premières que l'autre extrait, c'est-à-dire à partir de pépins de raisin blancs non fermentés. Le solvant d'extraction initiale solide/liquide est le même (eau). La phase aqueuse est directement séchée (atomisation ou lyophilisation) sans subir d'étapes de purification. 20 L'extrait obtenu contient le même type de polyphénols que l'extrait comportant au moins 99% d' OPCs, mais en quantités moins importantes. La somme de flavanols des monomères se situe entre 5 et 7% de l'extrait (soit une moyenne d'environ 6%). Comparé à l'extrait comportant au moins 25 99% d' OPCs, (valeur moyenne en flavanols monomères d'environ 25%), cet extrait de pépin de raisin est en moyenne quatre fois moins riche en monomères que l'autre extrait. Quant au total des flavanols dimères il est entre 5 et 7% (environ 6% en moyenne). Il est d'environ 5 à 7 fois moins élevé que dans le cas de l'extrait 30 comportant au moins 99% d' OPCs. L'acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA) a été choisi pour l'étude comme chélateur. Il ne contient pas d'eau cristalline et est hygroscopique, il 3041504 9 est partiellement soluble dans l'eau, l'éthanol, l'acétone et le phénol. L'EDTA est soluble dans les acides minéraux et le formamide chaud. Le sel disodique de l'acide éthylène diamine tétraacétique technique (EDTA) et l'éthanol (99% de pureté) utilisés ont été obtenus notamment auprès de VWR®. 5 Conditions expérimentales pour les tests d'efficacité des compositions fongicides 10 Méthode pour évaluer l'efficacité fongicide : Le champignon utilisé pour les essais est un champignon de pourriture brune Postia placenta FPRL 280. Les tests ont été réalisés en suivant les informations des articles de Gao et al. Antifungal activities of heartwood extracts of Port-Orford cedar extractives, 2008, Holzforschung 62, pp 620- 15 623. et de Chang, et al. 1999. Antifungal compounds in the ethyl acetate soluble fraction of the extractives of Taiwania (Taiwania cryptomerioides Hayata) heartwood., 1999, Holzforschung 53, pp. 487-490. Les extraits de plantes et/ou l'EDTA ont été dissous dans de l'eau distillée, tandis que le tébuconazole a été dissous séparément dans de l'éthanol. Des solutions tests 20 de différentes concentrations ont été mélangés avec du malt-agar stérilisé et introduites dans des boîtes de Pétri. Le milieu a été préparé avec 2,5% d'extrait de malt et 1,5% de gélose et stérilisé pendant 23 min. Les prélèvements fongiques effectués à partir du bord de cultures en croissance active ont été transférés sur le centre des boites de Pétri et incubés dans une 25 pièce sombre à 25°C et 75% d'humidité relative. Tots les essais ont été effectués en trois fois. Lorsque les mycéliums des champignons ont atteint les bords des boîtes de Pétri, le diamètre de toutes les boîtes expérimentales ayant été mesurée, l'indice antifongique exprimée en % d'inhibition a été calculé comme suit : 30 Indice antifongique % = (1 - D1 / D2) x 100 Où D1 est le diamètre de la croissance dans les boîtes de Pétri, et D2 est le diamètre de la croissance dans les boîtes témoins qui contenaient un milieu de culture seulement. 3041504 10 Tests d'efficacité (« screening test ») : Quatre extraits de plantes à trois concentrations définies et un chélateur métallique à une concentration constante ont été testés (tableau 1). Des échantillons d'aubier de pin sylvestre (Pinus sylvestris L.) avec des 5 dimensions de 40 x 15 x 4 mm (dans le sens de la fibre) ont été utilisés tout au long de l'étude. Les échantillons ont été imprégnés dans un autoclave dans lequel un vide de 60% a été créé pendant 30 minutes puis laissé dans la solution pendant 2h, assurant ainsi une imprégnation complète des cellules du bois. Les échantillons de bois ont été ensuite retirés de la solution de 10 traitement, essuyés doucement pour éliminer la solution résiduelle à la surface du bois, et pesés. Le poids enregistré a été utilisé pour calculer la rétention. Les tests ont été effectués dans des conditions identiques à celles de l'essai 15 décrit dans la norme européenne EN 113. Après séchage à la température ambiante et conditionnement à 20°C et 65% d'humidië relative, les échantillons ont été stérilisés et exposés au champignon basidiomycète Postia placenta FPRL 280. Quatre échantillons traités et trois échantillons témoins non traités ont été placés dans chaque flacon Kolli. Il convient de 20 souligner qu'aucune lixiviation des échantillons traités n'a été appliquée avant l'exposition. L'évaluation du test a été basée sur la perte de masse enregistrée (ML) après une période d'exposition (16 semaines). Selon la norme EN 113, la protection prévue pour le bois est considérée comme suffisante si la perte moyenne en masse des échantillons est inférieure à 3% 25 de leur masse sèche initiale. Ce principe a été adopté pour évaluer l'efficacité des formulations testées. Les variables étudiées sont présentées dans le tableau 1. 30 3041504 11 Tableau 1. Conc. Min. Appr. 50% Nombre Conc. Chelateur efficace, conc., d'antioxi. antiox., EDTA, % (g/m3 ) (g/m3 ) testé Tébuconazole 450 200 4 0.5 - 2 - 4 3 Propiconazole 390 200 4 0.5 - 2 - 4 3 IPBC 300 150 4 0.5 - 2 - 4 3 DDAC 1800 1000 4 0.5 - 2 - 4 3 Les concentrations sont données par rapport à la masse totale de la 5 composition. La première colonne du tableau 1 définit la substance biocide testée, la deuxième colonne donne sa concentration efficace, la troisième colonne donne la dose évaluée correspondant sensiblement à 50% de la concentration efficace, la quatrième colonne donne le nombre d'antioxydant testés par substance biocide, la cinquième colonne définit les trois 10 concentrations en antioxydant évaluées et la sixième colonne donne la concentration en EDTA. Tests modifiés pour l'étude de la synergie : Sur la base des résultats du « screening test » présenté ci-dessus, un 15 nouveau test standard en s'inspirant de la norme EN 113 (1996) avec les fongicides sélectionnés et les antioxydants (AO) a été mis au point. Des blocs d'aubier de pin sylvestre de 15 x 25 x 50 mm de dimension (dans le sens de la fibre) ont été traités par un procédé d'imprégnation à cellules pleines. Le tébuconazole a été testé à des teneurs de 150 et 250 g/m3 et l'IPBC à 100 et 20 200 g/m3. Ils ont été dissous dans de l'éthanol comme solvant, éventuellement en présence de l'antioxydant (pépin de raisin ou d'écorce de pin) à une concentration de 0,2 à 1,5 % et de 3 % de chélateur (EDTA). Les tests ont été reproduits dix fois. Après traitement, les échantillons ont été pesés et séchés à température ambiante. Avant l'exposition au champignon, 25 les échantillons ont été lessivés pendant deux semaines, puis conditionnés selon la norme EN 84. L'efficacité du traitement a été évaluée par la perte de masse après 16 semaines d'exposition au champignon de pourriture brune Postia placenta FPRL 280. 3041504 12 Conditions expérimentales pour les mesures par spectroscopie infrarouge : Les spectres d'absorption infrarouge ont été obtenus en utilisant la technique de la pastille de KBr sur un spectromètre FTIR Perkin - Elmer Paragon 1000 5 PCTM (résolution de 4 cm - 1, 50 balayages). Des échantillons de bois pour l'analyse FTIR ont été préparés en découpant les blocs traités en petits morceaux et en broyant ensuite les morceaux dans un broyeur WileyTM pour obtenir des particules fines. Dans chaque cas, 1 % (p/p) de composé sec est dispersé dans une matrice de KBr et pressée pour former une pastille. 10 Résultats expérimentaux Les tests ont été effectués en utilisant les petits échantillons de dimension 40 x 15 x 5 mm pour tester la synergie de la combinaison : biocide / antioxydant / 15 chélateur. Les quatre substances biocides (tébuconazole, propiconazole, IPBC et DDAC) à deux niveaux, avec ou sans antioxydants naturels à 0.5, 2 et 4 % et / ou 3 % de l'agent chélatant (EDTA) ont été testés. Au cours de ces essais préliminaires, dans lequel les échantillons traités n'ont pas été lessivés, l'efficacité de chaque traitement a été évaluée par la perte de masse 20 après 16 semaines d'exposition au champignon de pourriture brune P. placenta. Les tests (tableau 2.) indiquent que l'EDTA seul a eu peu d'effet de protection contre le champignon de pourriture brune P. placenta (7,7% de perte de masse). Les résultats ont montré aussi que, à l'exception du DDAC, tous les biocides étudiés fournis ont montré un niveau de protection élevé 25 contre P. placenta à la concentration minimale efficace. Lorsque les concentrations de biocides ont été réduites de moitié (50% de la concentration efficace), uniquement le tébuconazole était toujours suffisamment actif. L'addition de 3 % d'EDTA a augmenté l'efficacité de tous les biocides, sauf pour le tébuconazole, pour lequel l'efficacité a été 30 légèrement diminué. 3041504 13 Tableau 2. Perte de masse moyenne mesurée sur les échantillons de bois non lessivés traités avec les quatre biocides et l'EDTA après l'exposition au champignon de la pourriture brune P. placenta pendant 16 semaines. Concentration EDTA Tébuconazole Propiconazole IPBC DDAC 3% 7.7 (0.2) 100% -5.9 (2.6) -4.1 (2.4) -1.1 (1.9) 4.8 (0.9) 50% 0.0 (1.2) 6.1 (9.0) 31.8 (18.3) 5.5 (4.2) 50% + 3% d'EDTA 3.2 (0.6) 3.6 (3.7) 9.0 (1.2) 4.0 (1.3) 5 Les antioxydants ont également été étudiés séparément et en combinaison avec de l'EDTA. Parmi les quatre extraits de plantes étudiés (Tableau 3), seul l'extrait d'arachide à 2 et 4 % a présenté de puissants effets inhibiteurs contre les champignons, probablement en raison de la solubilité limitée de cet extrait 10 (taille de particules relativement grande) qui reste en surface après l'imprégnation des échantillons. Après l'ajout de 3% d'EDTA, une efficacité accrue a été observée pour tous les extraits, mais la perte de masse est toujours supérieure à 3%. 15 Tableau 3. Perte de masse moyenne mesurée sur les échantillons de bois non lessivés traités avec des extraits de plantes et de l'EDTA, après l'exposition au champignon de la pourriture brune P. placenta pendant 16 semaines. Extraits 0.5% 2% 4% 0.5% 2% 4% 3% EDTA 3% EDTA 3% EDTA Pin maritime 31.5 (2.5) 30.9 (5.5) 29.5 (13.7) 5.5 (4.9) 4.0 (0.4) 3.8 (0.9) arachide 43.8 (19.1) 2.1 (0.3) -0.8 (2.6) -0.9 (0.5) 2.2 (1.1) 0.8 (2.2) Pépin de raisin (extrait connu) 29.0 (11.9) 37.2 (12.0) 26.8 (19.6) 5.7 (9.7) 6.4 (3.4) 3.3 (0.3) Extrait de 27.2 (13.1) 36.4 (11.8) 31.0 (14.8) 4.0 (2.2) 3.3 (1.4) 0.5 (1.2) pépin à 99% d'OPCs 3041504 14 Des tests ont également été effectués avec les extraits de plantes mélangés avec chacun des quatre biocides (à 50 % de leur concentration efficace). Il a été observé une bonne efficacité du tébuconazole et du propiconazole (plus de 3% de perte de masse), tandis que l'IPBC et DDAC ne sont pas efficaces 5 (voir tableau 4, 5 et 6). Tableau 4. Perte de masse moyenne mesurée sur les échantillons de bois non lessivés traités avec les quatre biocides (50% de la concentration efficace), et des extraits de plantes à 0,5% de concentration après l'exposition au champignon de la pourriture brune P. placenta 10 pendant 16 semaines. 0.5% Tébuconazole Propiconazole IPBC DDAC Pin maritime 1.3 (0.2) 28.0 (9.6) 3.7 (1.4) 13.4 (5.9) Arachide 0.8 (0.2) 0.5 (0.3) 11.9 (9.1) 2.9 (0.4) Pépin de raisin (extrait connu) 1.0 (0.2) 0.8 (0.1) 13.0 (20.6) 4.3 (1.5) Extrait de pépin à 99% d'OPCs 1.3 (0.2) 0.9 (0.2) 3.5 (2.0) 22.9 (2.9) Tableau 5. Perte de masse moyenne mesurée sur les échantillons de bois non lessivés 15 traités avec les quatre biocides (50% de la concentration efficace), et des extraits de plantes à 2% de concentration après l'exposition au champignon de la pourriture brune P. placenta pendant 16 semaines. 2% Tébuconazole Propiconazole IPBC DDAC Pin maritime 0.7 (0.3) 1.7 (1.4) 45.7 (9.6) 21.0 (2.5) Arachide 0.9 (0.2) 2.5 (2.3) 0.8 (0.5) 2.6 (0.2) Pépin de raisin (extrait connu) 1.4 (0.2) 1.5 (0.3) 3.5 (7.2) 4.7 (3.9) Extrait de pépin à 99% d'OPCs 0.6 (0.3) 2.9 (3.6) 0.9 (1.1) 9.6 (5.8) 20 3041504 15 Tableau 6. Perte de masse moyenne mesurée sur les échantillons de bois non lessivés traités avec les quatre biocides (50% de la concentration efficace), et des extraits de plantes à 4% de concentration après l'exposition au champignon de la pourriture brune P. placenta 5 pendant 16 semaines. 4% Tébuconazole Propiconazole IPBC DDAC Pin maritime 0.8 (0.1) 11.2 (17.7) 5.6 (4.0) 9.8 (5.9) Arachide 0.5 (0.4) 1.4 (0.2) 1.4 (0.2) 2.9 (2.0) Pépin de raisin 2.3 (5.0) 1.6 (0.2) 5.0 (7.4) 3.4 (3.9) (extrait connu) Extrait de pépin à 99% d'OPCs 0.5 (0.3) - 2.1 (0.3) 1.9 (0.4) L'efficacité a été encore améliorée par l'addition de 3% d'EDTA (tableau 7, 8 10 et 9). Ceci est particulièrement illustré avec IPBC comme biocide où l'amélioration a été constatée dans tous les cas. 15 Tableau 7. Perte de masse moyenne mesurée sur les échantillons de bois non lessivés traités avec les quatre biocides (50% de la concentration efficace), des extraits de plantes à 0,5% de concentration, et 3% d'EDTA, après l'exposition au champignon de la pourriture brune P. placenta pendant 16 semaines. 0.5% Tebuconazole Propiconazole IPBC DDAC 3% EDTA Pin maritime 0.8 (0.5) 2.0 (1.4) 0.5 (0.6) - Arachide -0.2 (1.3) 1.9 (1.0) 1.6 (1.3) - Pépin de raisin (extrait connu) 1.4 (0.8) 1.5 (0.9) 1.6 (0.7) - Extrait de pépin à 99% d'OPCs 0.5 (0.7) 1.0 (1.4) 1.2 (1.4) - 20 3041504 16 Tableau 8. Perte de masse moyenne mesurée sur les échantillons de bois non lessivés traités avec les quatre biocides (50% de la concentration efficace), des extraits de plantes à 2% de concentration, et 3% d'EDTA, après l'exposition au champignon de la pourriture brune 5 P. placenta pendant 16 semaines. 2% Tebuconazole Propiconazole IPBC DDAC 3% EDTA Pin maritime 2.0 (1.3) 1.4 (1.3) 0.9 (0.3) - Arachide 2.1 (1.0) 2.4 (1.2) 1.2 (0.3) - Pépin de raisin (extrait connu) 1.8 (2.1) 1.2 (1.2) 0.7 (0.1) - Extrait de pépin à 99% d'OPCs 2.1 (1.1) 2.0 (1.3) 1.7 (0.5) - Tableau 9. Perte de masse moyenne mesurée sur les échantillons de bois non lessivés 10 traités avec les quatre biocides (50% de la concentration efficace), des extraits de plantes à 4% de concentration, et 3% d'EDTA, après l'exposition au champignon de la pourriture brune P. placenta pendant 16 semaines. 4% Tebuconazole Propiconazole IPBC DDAC 3% EDTA Pin maritime 0.1 (2.2) 1.2 (0.9) 1.1 (0.2) - Arachide 1.2 (1.1) 2.2 (1.2) 0.4 (1.1) - Pépin de raisin (extrait connu) 2.1 (0.5) 1.8 (1.5) 0.8 (0.7) - Extrait de pépin à 99% d'OPCs 1.1 (0.2) 1.6 (0.7) 0.6 (0.2) - 15 REVENDICATIONS1. Composition biocide comprenant une substance biocide et un antioxydant naturel. 2. Composition selon la revendication 1, comprenant un chélateur tel que l'acide éthylène diamine tétra acétique. 3. Composition selon la revendication 2, dans laquelle la teneur en chélateur est de 0,5 à 5%. 4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3, dans laquelle la substance biocide est une substance fongicide sélectionnée parmi le propiconazole, le tébuconazole, le chlorure de didécyldiméthylammonium, le chlorure de benzalkonium et le 3-iodo-2- propynyl-butylcarbamate. 5. Composition selon l'une des revendications 1 à 4, dans laquelle la teneur en substance biocide est inférieure à 2000 g/m3. 6. Composition selon l'une des revendications 1 à 5, dans laquelle l'antioxydant naturel est obtenu à partir de l'une des sources suivantes: le pin maritime, le cacao, l'arachide et le raisin. 7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6, dans laquelle l'antioxydant naturel est un polyphénol susceptible d'être obtenu à partir d'une source biologique. 8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, dans laquelle la teneur en antioxidant naturel est de 0.2 à 5%. 9. Formulation fongicide comprenant la composition selon l'une des revendications 1 à 8 diluée dans de l'eau. 3041504 18 10. Utilisation de la composition biocide, ou de la formulation fongicide, selon l'une des revendications 1 à 9 pour le traitement préventif et curatif des pathologies fongiques du bois. 5