Brevet FR3046422A1 — publié le 20170707

La présente invention se rapporte au domaine de l'évaluation d'actif's cosmétiques, en partieu ier d'actik Elle repose plus s 'citiquern n ur rident -ation d'un nouveau type oc no )ulation de cellules dermiques papillaires regroupées an ii,cds dont les carac risilutte: ,voluent au cours du vieillissement de la neau. pouvant uiasi servir de marqueur vieii!isseiiient dermique ainsi présente invention a pour objet, un procédé polir :1:SUT I e1iet d'actifs sur ce marqueur et son utilisation pour le erl. e La peau est l'organe le plus lourd et le plus étendu de l'organisme. 10 Che/ I llommL no .11:- -a surface représente 2 nï :OLIr Line masse denviron ln Son épaisseur varie de Of)5 min au niveau des patnières ;i -1 min au ni cau de la paume jes trains ci .' la plante des pieds. Cependant. In peau n est rias qui une simple enveloppe c(!rpoi assure eu effet (le mi.iltiples fonet-loiis C proctiou s des agressions extérieures (stress mécaniques. chimiques. thermiques et infectieux), de 15 conservation S fluides. Lie tbermoréqulation. d- échanges. fonction (s\lni,e lamine D, es) lonctioi sensorielle (toueher, douleur) (...\lcxandre, M. & Christine. I.. La pcau 2a :(1.): Lavoisier. 12). I 'ensemble de ces fonctions et assuré par une structure comp associant des éléments tissu:aires tépithel i aux. conjoneti vaseu i 20 musculaires aï nerveux), organisés en trois compartiments distincts qui sont, de la surface vers la prolOndeur (auquel sont- rattachés les annexes épidermiques, les foI1cuies pilo-seh,:ieés. les ongles et los glandes suc:loi-4 os y - le cicrnic_ séparé de l'épiderme j ur la onction dermo-épidermit. Uc 25 Ir.podcrinc. Le derme est un tissu fibreux, élastique, beaucoup plus épais que "épiderme. Ces deux tissus, derme et cpdeme. sont reliés par une 2'niic dadherenee centrée autcur de la jonction derino-épidermique, véritable surface éch an ne entre les deux tissus. Le derme est un tissu c.onjonci i dense cpu constitue le supp(ui solide de la 30 peau et d'où proviennent les différentes alltiCNCS cutanées joue un 101e nutri thermorégulateur et inter\ i'..nt de façon active dans :a défense cc« rc les micro- organismes Pittliog.ènes. Dc plus, il renfemie le eine vasculaire cutané (l'épiderme 3046422 en est dépourvu). Le derme est composé de fibroblasIes. dc dendrocytes, de cellules du système inuranniairc et d'une matrice intracellulaire (MEC). li Lit l'objet d'un renodeIauu unniliTuel. réu1é par des mécanismes de contrôle de svnt-lesebroitenisc) et de la dérLn1ation -)rolvse dès. composants matriciels. Dans un derme 's.i1icteurs onctions oppesc'es sont mis en jeu des ,fac-..ours aiwboiirptc.r. tels 1-GF-01 Trantsorryiiliu Growth Factor-1; iirinecti'..e Tissue Gro\vth Factor ou meure Growth Factor-1 stimuiont façon autocrine ou paraerincsu othuse des composants matricielsnur lus aroillastes ou 10 opposert à leur dePradation enahi hant la sur thèse es MMIPst «i'vfairk MetalloPro:einascs et ou un nnt l'exprc.ssion de leurs inhibiteurs naturels. les TIMPs (« Tissue Inhibitors of Melal LUP toinases »). s que le TNF-a umoi Nec ,sis Factor-a. »), l'IL-1 (interleukine- ) (« »). oui inhibent. 15 l'expression des P° uiflSTs la matri dermique ut des TINIPs. ors qu'elles induisent la production (I Ci proté01.0;_gue, mmps et cystéinc-proteases't tifskuuclici. G,. bluot. N.. 11ii 0 tc iZenard. E., ..ireo, B.. Widom, IZ.. Domninartin-131anehere. 0,1chs, rai-t, F.X.. I)emoor, Bouincdiene. K.. & G eva. P. te p(5 subunit of NF-LappaB 20 inhibits COL1A1 _ mur tu iranscription in hoinan dermal ami scieroderma fibroblasis through ils recruitinow; 011 promoter bv prolcin interaction ,,vith transoriptional activa-tors (o-krox, Spi and 5p3). J. Bio/. Chi:./u.. 287 (5), 3462-3475 (2012)). Son épaisseur varie iArnsidérablernent en ibnction dusite anatomiQue 25 l. ut ,,11:c dans le dos, _minimale au n -au d, nelure raie quelque peu en fonction de la profondeur : denne superficiel ou papillaire et derme profond ou En surface. les papilles dermiques et le tissu immédiatement sous- jacent forment le donne papillaire ; lâche et très vascularisé, riche en ri brcs de collagène 30 entrelacées et orientées perpendiculairement à l'épiderme, le derme papillaire renferme les Lues connexions itxonalcs des terminaisons nervcdses lift-us sensitives de l'épiderme et, dans yones tués sensibles, les corpuscules encapsulés de 'Meissner. C'est dans 3046422 cette partie du derme que f.leetuent les échanges nutritifs avec les couches profondes de Yépidcine. La couche réticulaire, appelée ainsi en raison de Pagencemert entrelacé de ses fibres de e,-,1Ï- 7.e, constitue la majeu.re partie du derme. Tes H-,2s coll sont grossières , disposées en faisceaux épais et irré ilien,. Le dernc rénculaire est en contact avec l'hypoderme. fibroblaste cr le principa cellulaire lu derme, LrrihryologiLpaenlcnt. les fibroblastes sont issus du inésenehyvie qui donne _gaiement naissance chondroblastes et aux ostéoblastes. Ce sont de longues cellules -fusilOnn( ou stellaires avec des prolongements cytoplasmiques parfois rand fiés (Bernard "l003: klanitakis. 1997). Les Iibrobla.stes pr(.-,dui sent et organisent la De plus, lis communique] t entre eux et avec les autres types cellulaires résidents, jouant ainsi LII rCc primordial dans la reLtudtion dc hysiologie dc a neau (Somme & :101 . 1. Fibroblast heterogeneit): more Man skin deep, J Cd/ .Slci 117, 667-675 15 ('20041). Dans un derme said distingue deux prineipa sous-popidations de fibroblastes : - les fibroblastes dk.Tniques papillaires localisés dans le derme superficiel - les fibroblastes dermiques retici res, ioealisés (Lins le derme profond. 20 Il a etc remarqué qu en culture in vitro, es fityroblastes papillaires proliRraktit plus rapidement que les fibroblastes réticulaires (Sorra ci 1. 2004). De plus. ces derniers possèdent des propriétés. contractiles s n celles des fibroblastes papillaires lorsqu ils sont cultivés dans des gels de collagène dc type 1 Sch:fer. 1. A., Pandv, 1\.L. Fercuson, R. & Da\ k. B. R. C enuxtraWve obser\at ion of 25 fibroblasts deri\ cd from the papillary and reticular dermis of infants and adults: erowth kincties, nacking ;lens!n ut confluence and s,,ntace morphology. Mech. Ageing Dey, 31, 275-3 ,l 9:m. Il a éuzaiciienl été mis en évidence sur des cultures en raonocouche que les fibroblastes papillaires altcignent une )1 us haute densitc cellulaire que les fibroblastes réticulaires. notamment parce qu'ils ne subissent pas complètement 30 l'inhibition de contact (Sorrel I et of et Schafer et (IL). Par ailleurs. les dermes papillaire (Ifierelit par la coumosinon et l'organisation de leur MEC (voir tableau I ci-après ipérieures 3046422 4 Composant matriciel Derme papillaire Derme réticulaire Follicule pilieux Composant matriciel Fibroblastes papillaires Fibroblastes réticulaires labicau I : [A] Distriinition des composants i,:-.-/Tricicis dans . compartuncnts [I;',/ Expression Élcs composants; nuaric nrOblaSieS c'11 CH/!i'i' 11101WCWICIIC ifi)rès. Sorrel c,t C'apion, .70()J. 5 Les fibroblastes élani les cellules responsables de la régulation de l'homéostasie de la MEC dermique. les observai ions présentées ci-dessus suggèrent (lue différents .vpes fibroblastiques sont localisés de .1(i.otl précise afin d' r à chaque con-Tari i7uent dermique une struetuae. qui seie onipatible avec ses fonctions biologiques ses propriétés bioritéuititiuLiCS. Dans L cadre (I étitues :tppro fimdies de la biolo REVENDICATIONS1. Procédé d'évaluation de l'activité protectrice des cellules dermiques ni a rcs rcgroupées d une substance. comprenant les étapes suivantes mise en survie d'expiant de peau pendant 2 à 10 jours sur une grille et de telle sorte que la hase de l'explant est en cornac, avec un milieu ne culture pour explmt eomurenant ou non ladite substance a tester ; b- fixation des expiants, coupe des expiants fixés et. niarquage des noyaux cellulaires ; 10 c- photographie des eoupes ie peau à grossissement identique et traici-icitt. in Ibrimnique dc I inaec obtenue par calcul de in surfirice dc noyaux des cellules denniquespnuillaircs regroupées : 1Z./vaux marqués sont considérés comme apptr main à des cellules derinr qires papi taire egroupees S S-ont esoaces U'tU plus itin et sils ont une surface iuhaie dau moins ,3 fois celle de la suril.,ce moyenne 15 d'un noyau ; et comparaison des surfaces mesuré. 1 partir e coupes de peau traitées avec ladite substance avec celles de coupes de puna traitées sans ladite substance afin e determiner 1 ladite substance produit ou non un effet sur le nombre de cellules dermiques :1: pilaires regroupées. 20 2. Kit dévaluation de capacité d'une substance ri il-(..1 er cellules dermiques papillaires reiroupces comprenant un expiant de peau un dispositif et un milieu de culture pour eN : lcs réaCtl:: et ustensiles nécessalres à la fixation, à la coupe et au marquage ues noyau\ de l'expia:d ci un dispositif infl-wmaiique 25 comprenant un ,1 orithinc rie trai 1(21n eni image capable d'ideruitier les noyaux cellules dermiques papillaires regroupées et d ra. calculer la surface. 3. 1.. tilisation (. un Rit selon lu revendication 2 pour l'identification d'actifs capables de prévenir la disparition ct;oa drrtugmetiter le nombre de cellules 30 dermiques vapillaires regroupées.