Brevet FR3040177A1 — publié le 20170224

Méthode prédictive pour caractériser la sensibilité d'une tumeur en réponse à un traitement cassant l'ADN Domaine technique de l'invention L'invention concerne le domaine de la radiobiologie médicale, et plus particulièrement le domaine des méthodes de laboratoire radiobiologiques. L'invention concerne une nouvelle méthode prédictive de la radiosensibilité cellulaire, tissulaire et clinique, qui se base sur la détermination et le recoupement de plusieurs paramètres et critères cellulaires et enzymatiques appliqués à la réponse tumorale. Plus particulièrement l'invention concerne une méthode prédictive pour caractériser la sensibilité d'une tumeur en réponse à un traitement radiothérapique, chimiothérapique ou radio-chimiothérapique cassant l'ADN. Etat de la technique Les traitements anti-cancéreux non-chirurgicaux visent en règle générale à provoquer la mort cellulaire des cellules cancéreuses : la plupart de ces traitements provoquent des cassures de l'ADN qui provoque ensuite l'apoptose de ces cellules. Cela est vrai notamment pour les traitements d'une tumeur par rayonnement ionisant (radiothérapie), pour les traitements par chimiothérapie, ainsi que pour les traitements qui combinent la chimiothérapie avec la radiothérapie (radio-chimiothérapie). Il existe cependant peu de méthodes pour prédire la réponse d'une tumeur à un tel traitement anti-tumoral, et leur fiabilité n'est pas suffisante pour orienter la stratégie d'un traitement anti-tumoral dans la pratique clinique (pour la radiothérapie voir : « Radiation Biology, A Handbook for Teachers and Students », IAEA, 2010, p. 107/108). On sait que la question de la sensibilité des tissus au rayonnement ionisant est inséparable de celles des mécanismes de réparation des dommages de l'ADN. En effet, au niveau cellulaire, le rayonnement ionisant peut casser certains types de liaisons chimiques en générant des radicaux libres (en particulier par peroxydation) et d'autres espèces réactives à l'origine des dommages de l'ADN. L'endommagement de l'ADN par des agressions endogènes ou exogènes (telles que les radiations ionisantes et les radicaux libres), peut aboutir à différents types de dommages de l'ADN en fonction notamment de l'énergie déposée : les dommages de bases, les cassures simple-brin et les cassures double-brin (CDB). Les CDB non réparées sont associées à la mort cellulaire, la toxicité et plus spécifiquement la radiosensibilité. Les CDB mal réparées sont associées à l'instabilité génomique, aux phénomènes mutagènes et à la prédisposition au cancer. L'organisme dispose de systèmes de réparation spécifiques à chaque type de dommage de l'ADN. En ce qui concerne les CDB, les mammifères possèdent deux principaux modes de réparation : la réparation par suture (ligation des brins) et la réparation par recombinaison (insertion d'un brin homologue ou non-homologue). Cette dernière affirmation est valable quelle que soit la nature du tissu, qu'il soit normal ou tumoral. On sait également que la sensibilité des tissus au rayonnement ionisant est très variable d'un organe à l'autre et d'un individu à l'autre ; l'idée d'une « radiosensibilité intrinsèque » a 3040177 2 été conceptualisée par Fertil et Malaise (« lnherent cellular radiosensibility as a basic concept for human tumor radiotherapy », Int.J. Radiation Oncology Biol. Phys. 7, p.621-629 (1981) ; « Intrincsic radiosensitivity of human cell fines is correlated with radioresponsiveness of human tumors : Analysis of 101 published survival curves », Int.J. Radiation Oncology Biol. Phys. 11, p.1699-1707 (1985)). Ainsi, les diverses études sur les effets thérapeutiques et les effets secondaires de la radiothérapie ont montré qu'il existe des individus qui jouissent d'une radiorésistance particulièrement élevée, et des individus qui montrent au contraire une radiosensibilité qui peut aller d'un effet secondaire reconnu cliniquement mais sans conséquence jusqu'à un effet létal. Même en dehors de certains rares cas de radiosensibilité extrême, dont l'origine génétique semble avérée, on pense que la radiosensibilité découle d'une manière générale d'une prédisposition génétique : elle est donc propre à un individu. De même, les tumeurs montrent un large spectre de radiosensibilité qui dépend à la fois de l'individu mais aussi de la nature du tissu. Par exemple, les lymphomes sont généralement plus radiosensibles que les sarcomes, et ce généralement quel que soit le statut génétique de l'individu : pour les tumeurs, le « facteur individu » peut s'effacer derrière le facteur « tissu ». Afin d'évaluer le rapport bénéfice/risque d'un traitement anti-cancer, il serait donc désirable de disposer d'une méthode d'essai prédictive pour pouvoir déterminer la dose minimale cumulée qu'une tumeur doit recevoir pour être stérilisée. Cette question de pose en premier lieu en radiothérapie dans un contexte de fortes doses ionisantes, mais concerne également les associations radio-chimiothérapique, et les chimiothérapies seules. Toutefois, cette question est également susceptible de se poser pour toute autre exposition à de fortes doses ionisantes, équivalentes à celles utilisées en radiothérapie. Plusieurs critères cliniques sont utilisés par les praticiens pour quantifier la réponse tumorale à la suite d'un traitement anti-cancéreux. La plupart de ces critères sont relatifs à la diminution du volume tumoral (ou contrôle local) après le traitement ou à la dose de radiations pour diminuer ce volume. Pourtant aucun de ces critères n'est consensuel : Les critères TCD50 et TCD95 (Tumour Control Dose) représentent les doses pour lesquelles on a respectivement 50% et 95% de contrôle tumoral. Utilisé fréquemment dans les années 80 où les traitements standards permettaient une certaine uniformisation dans la délivrance de dose pour un type de tumeur donné, il n'est plus valable aujourd'hui pour les affections cancéreuses qui sont traitées de façon différente suivant les centres avec une grande variété dans l'étalement de la dose. Le critère TCP (Tumour Control Probability) permet de prédire théoriquement la probabilité de contrôler une tumeur. Ce critère est basé sur des études radiobiologiques qui ont pris en compte la survie clonogénique des cellules tumorales irradiées in vitro. Mathématiquement, la TCP est basée sur le modèle Linéaire-Quadratique : TCP = exp-Noexp(yT-aD-OD2) où a et r3 les paramètres du modèle linéaire quadratique, y la constante de prolifération des cellules et T la durée du traitement en jours. Le critère RECIST (Response Evaluation Criteria In Solid Tumors) est l'un des critères les plus utilisés actuellement pour décrire l'évolution de la tumeur solides après un traitement par radiothérapie. Il a été publié en février 2000 par une collaboration internationale et révisé 3040177 3 en 2009 (Eisenhauer et al., « New response evaluation criteria in solid tumours Revised RECIST guideline (version 1.1) », European J Cancer 45 (1009), p.228-247). Ce critère est basé sur la diminution de la somme des plus grands diamètres des tumeurs : - Complete Response (CR) : disparition totale des tumeurs Partial Response (PR) : au moins 30% de diminution de la somme des plus grands diamètres des tumeurs - Stable disease (SD) : pas de changement notable - Progressive Disease (PD) : au moins 20% d'augmentation de la somme des plus grands diamètres des tumeurs. De plus, deux critères d'imagerie sont utilisés par les cliniciens, en particulier les critères relatifs à la variation de l'intensité du signal après le traitement par radiothérapie. Cette intensité est généralement mesurée par PetScan ou IRM de perfusion. Cette intensité peut être corrélée à un nombre de cellules survivantes puisque seule la partie de la tumeur contenant des cellules vivantes va émettre un signal car cette partie sera toujours vascularisée. Par ailleurs, le critère de Choi permet de corréler le volume de la tumeur à l'intensité du signal (Choi et al 2007, «Correlation of Computed Tomography and Positron Emission Tomography in Patients With Metastatic Gastrointestinal Stromal Tumor Treated at a Single Institution With lmatinib Mesylate: Proposai of New Computed Tomography Response Critera » J Clin Oncol 25:1753-1759.). L'homme du métier connaît également des paramètres cellulaires permettant de décrire les tumeurs. Un de ce paramètres est la survie cellulaire : En 1956, Puck et Marcus proposèrent d'utiliser le test in vitro des colonies pour quantifier la radiosensibilité : après ensemencement d'un nombre connu de cellules irradiées, la mesure du nombre de colonies (amas macroscopique de cellules survivantes prolifératives après 5-6 générations) formées par les cellules que l'irradiation n'avait pas stérilisées devint la méthode de référence pour évaluer la fraction survivante des cellules irradiées in vitro. Les courbes de survie sont établies en représentant dans un graphe semi-logarithmique la relation dose (abscisse) - survie (ordonnée logarithmique) par une série de tests à différentes doses, chacune délivrée en générale en une seule fraction. Ces courbes sont décrites par le modèle Linéaire-Quadratique : SF(D) = exp(-aD - f3D2) où a et [3. sont des paramètres d'ajustements. Dans le cas d'un fractionnement de dose, la survie sera décrite par la formule suivante : SF (d, D) = exp(-aD - fidD ) Ou : d est la dose en Gy par fraction La fraction survivante à 2 Gy (SF2) est souvent utilisée pour prédire la radiosensibilité d'une tumeur. Une relation linéaire a été trouvée entre la TCD95 et la SF2 par Fertil et Malaise en 1981 (voir la publication citée ci-dessus): TCD95 = 142.8 x SF2 + 8.57 Plusieurs groupes de recherche ont tenté de relier la SF2 aux différents critères cliniques de réponse tumorale précitées, mais cela n'a pas abouti à un modèle général et assez simple pour développer des tests prédictifs. 3040177 4 Un autre paramètre est le nombre de cellules survivantes : Le nombre de cellules survivantes après une irradiation est un paramètre quantifiable permettant de définir le contrôle tumoral et la réduction du volume. Il va être directement corrélé à la survie cellulaire et le nombre de cellules initiales dans la tumeur No: N = NoSF(d, D) Au niveau moléculaire, l'état de la technique fait état d'analyses utilisant le marqueur H2AX pour prédire l'efficacité de la radiothérapie. Ainsi Mahrhofer et al. ("Radiation induced DNA damage and damage repair in human tumour and fibroblast cell fines assessed by histone HAX phosphotylation", Int J Oncol Biol Phys, 2006. 64(2): p. 573-80) ont montré sur cinq lignées cancéreuses qu'il n'existait pas de corrélation entre le marqueur H2AX et une radiosensibilité de la tumeur déterminée par la survie clonogénique à 2 Gy (SF2). Cependant, leur étude ne prend pas en compte le nombre de foci de H2AX réel (normalisation des résultats) et elle se base uniquement sur la SF2. De la même façon, Koch et al. (« Residual yH2AX foci predict local tumour control after radiotherapy", Radiotherapy and Oncology, 2013, 108. p. 434-9) ont proposé un modèle basé sur la corrélation entre le nombre de foci de H2AX normalisés et la TCD50. Cependant cette étude a été menée sur des xénogreffes ce qui ne reflète pas la réalité physiologique de la tumeur. La demande de brevet EP 2 466 310 Al (Helmholtz Zentrum München) décrit la réparation de ruptures de l'ADN de type double brin en présence de la forme phosphorylée de l'histone H2AX (appelée gamma-H2AX ou g-H2AX). Les demandes de brevet US 2008/234946 et US 2012/041908 (University of South Florida et al.) décrivent une méthode pour la prédiction de la radiosensibilité de cellules cancéreuses, et non pas de cellules saines ; elle est en plus basée sur des données génomiques et non des tests fonctionnels. La demande de brevet W02014/154854 (Centre Hospitalier Universitaire de Montpellier) décrit une méthode pour la prédiction de la radiosensibilité d'un sujet via l'utilisation d'au moins un biomarqueur de radiosensibilité. Cette méthode ne détecte pas des marqueurs directement reliés à l'endommagement ou à la réparation de l'ADN ; elle est en plus basée sur des données protéomiques. De plus, cette demande de brevet ne décrit pas de relation quantitative entre les données radiobiologiques et la sévérité des réactions tissulaires. La demande de brevet WO 2013/187973 (University of California) décrit des systèmes et des méthodes de détermination de la radiosensibilité de cellules et/ou d'un sujet au regard d'une population contrôle. Plus particulièrement cette méthode inclut l'irradiation d'un échantillon biologique, la détection et la quantification de foci radioinduits au sein de cellules erythrocytes, lymphocytes ou de cellules primaires, résultant d'un prélèvement sanguin via l'utilisation d'un ou plusieurs marqueurs de détection parmi un ensemble de marqueurs dont l'anti-pH2AX, l'anti-MRE1 1 et l'anti-ATM. La quantification des foci radioinduits à différents temps d'observation post-irradiation inférieurs à 2 h permet de déterminer leur cinétique de réparation qui est corrélée de manière empirique à la radiosensibilité du sujet. Toutefois, l'analyse des foci dans des cellules de type lymphocyte est très difficile du fait de leur petit noyau. De plus, cette méthode ne permet cependant pas au praticien de prendre des décisions quant au traitement du patient. La demande de brevet WO 2010/88650 (University of Texas) décrit des méthodes et compositions pour identifier les cellules cancéreuses qui sont soit sensibles soit résistantes à 3040177 un traitement de radiothérapie particulier ; elle n'est donc pas applicable à tout traitement radiothérapeutique. La demande de brevet WO 2010/109357 décrit un procédé et un appareil pour la planification de protocole de radiothérapie adaptative basée sur l'optimisation de la probabilité de complication des tissus normaux et la probabilité de contrôle tumoral selon des marqueurs spécifiques à chaque patient. Les valeurs des marqueurs associées à des tissus normaux comprennent des valeurs de tests in vitro, les signatures par spectrométrie de masse des protéines, des données de l'anamnèse et les antécédents du patient. Les valeurs d'essai in vitro peuvent être d'origine cellulaire, protéomique et génétique tel que, mais sans s'y limiter, divers comptages de cellules, HB, CRP, PSA, TNF-alpha, ferritine, transferrine, LDH, IL-6, l'hepcidine, créatinine, glucose, HbAlc, et la longueur des télomères. Les marqueurs de l'anamnèse et des antécédents du patient incluent la chirurgie abdominale antérieure, les médicaments hormonaux ou de anticoagulants, le diabète, l'âge, et les mesures liées à la croissance tumorale. Les biomarqueurs non liés à la radiotoxicité sont également envisagés, tels que les biomarqueurs associés à diverses formes d'ablation ou agents chimiothérapeutiques. Toutefois, la radiosensibilité individuelle n'y est pas prise en compte. Malgré ce vaste état de la technique, la demanderesse constate que les brevets décrits ci-dessus ne décrivent pas une méthode de quantification de la sensibilité tumorale à un traitement cassant l'ADN permettant d'évaluer quantitativement l'efficacité d'un traitement anti-cancer, qui puisse être employé pour tout patient et tout type de traitement susceptible d'induire des CDB, et notamment pour tout type de rayonnement ionisant, pour la chimiothérapie et pour la combinaison des deux. Le problème de fournir une méthode prédictive de la sensibilité des tumeurs et de prévoir le contrôle tumoral quel que soit les paramètres cliniques utilisés reste donc sans solution opérationnelle. La présente invention vise à proposer une nouvelle méthode prédictive de la sensibilité tumorale à un traitement cassant l'ADN. Objet de l'invention Les inventeurs ont trouvé une corrélation entre la survie cellulaire à une dose D et un fractionnement de dose d et le nombre de foci de H2AX soit : SF(d, D) = e (n xNH2Ax(d,24h)-1-flelD) Où: NH2AX représente le nombre de foci de H2AX dans cellules tumorales survivantes à 24h post-irradiation, 0 représente la tolérance de la cellule (unité : nombre de cassures double-brin), D est la dose en Gy, d est la dose en Gy par fraction, n est le nombre de fractions, 13 : paramètre en Gy-2 du modèle linéaire quadratique relatif au type de tissu tumoral. 3040177 6 Sur la base de ce constat, les inventeurs ont trouvé des corrélations entre des paramètres cliniques et certains paramètres moléculaires et/ou cellulaires Pour le paramètre TCD95 : 1) En fonction du nombre de cellules survivantes : TCD95 = 142.8 x N(2Gy) + 8.57 No 2) En fonction du nombre de foci yH2AX TCD95 = 142.8 x e (NH2Ax(20Gy,24h)+4fl) + 8.57 Pour le paramètre TCP : 1) En fonction du nombre de cellules survivantes après traitement avec une dose D : TCP(D) = e-N(D) sachant que cette corrélation est déduite de la corrélation connue suivante (Zaider and Minerbo, « Tumour control probability: a formulation applicable to any temporal protocol of dose delivery », Phys Med Biol. 2000 Feb;45(2):279-93): TCP(D) = e -NoSF(D) 2) En fonction du nombre de foci yH2AX TCP(D) = e-Noxe (n xNH2Ax(d,24h)+PdD) Les inventeurs ont constaté que ces paramètres de la TCD95 et de la TCP tels que déterminés selon l'invention donnent certes une description prédictive plus précise que les méthodes selon l'état de la technique, mais que la description prédictive sur la base des paramètres cellulaires et/ou moléculaires peut être améliorée de manière significative si l'on caractérise la sensibilité de la tumeur en réponse à un traitement cassant l'ADN par l'évaluation de la fraction cellulaire survivante à une dose D et un fractionnement de dose d, ou par le volume de la tumeur. Ce mode de réalisation présente aussi l'avantage que : La SF(d,D) peut être aisément déterminée à partir du nombre de foci de H2AX le volume étant un facteur géométrique, il peut être corrélé à tous les autres critères cliniques utilisés par les praticiens selon l'état de la technique pour décrire l'état et l'évolution d'une tumeur, tel que le critère RECIST, mentionné ci-dessus. Pour la fraction cellulaire survivante à une dose D Les inventeurs ont également trouvé une corrélation entre le nombre de foci yH2AX à 24h et la survie cellulaire. Pour une dose de 2Gy, la survie cellulaire est : 3040177 7 SF 2AX(2GY,24h)+4,3) (2Gy) = e ou pour une dose D et un fractionnement de dose d: SF(d,D) = e (nxNH2Ax(d,24h)+13dD) où : NH2AX représente le nombre de foci de H2AX dans cellules tumorales survivantes à 24h post-irradiation, 8 représente la tolérance de la cellule (unité : nombre de cassures double-brin), D est la dose en Gy, d est la dose en Gy par fraction, n est le nombre de fractions, représente le paramètre en Gy-2 du modèle linéaire quadratique relatif au type de tissu tumoral. Pour le volume de la tumeur : 1) En fonction de la survie : V(D) = 1 + e-a.No(sFe-sF(D5o)) sachant que V(D) exprime le volume de la tumeur qui survit à une dose D. 2) En fonction du nombre de cellules survivantes : Vo Vo V (D) = 1 + e-a(N(D)-N(D50)) 3) En fonction du nombre de foci yH2AX V(d,D) = N H2AX(d,24h) (n50 x NH2Ax(d,24h) -1-13dD + dDsoy, 1 + e -a.No(e -e Vo Dans ces formules reliées au volume de la tumeur: No représente le nombre de cellules tumorales initiales, e représente la tolérance de la cellule (unité : nombre de cassures double-brin), 050 est la dose pour laquelle on trouve éduction du volume de la tumeur de 50%, n50 est le nombre de fractions pour lequel on trouve réduction du volume de la tumeur de 50%, a est une constante de variation du volume par nombre de cassures, est un paramètre (en Gy 2) du modèle linéaire quadratique relatif au type de tissu tumoral. 3040177 8 De plus cette fraction survivante à une dose D (fractionnée en n doses d) est proportionnelle au rapport d'intensités des signaux recueillis par imagerie avant et après le traitement par radiothérapie selon la formule : I e ,n xN H2Ax(d,24h)+13 dD) li = c> REVENDICATIONS1. Procédé d'évaluation de la réponse d'une tumeur à un traitement cassant l'ADN à partir d'un prélèvement de cellules de ladite tumeur (de préférence par biopsie), dans lequel : (a) On prépare un échantillon cellulaire à partir des cellules prélevées sur ladite tumeur ; (b) On soumet ledit échantillon cellulaire à un traitement cassant l'ADN caractérisé par une dose D, (c) on détermine sur ledit échantillon cellulaire le nombre moyen de foci nucléaires obtenus avec un marqueur pH2AX aux temps d'observation t (ces nombres moyens étant appelé respectivement NPH2AX(t)), lesdits temps d'observation t étant le temps t=0 min (appelé tO, état avant administration de ladite dose D) et au moins un temps d'observation sélectionné parmi t = t1, t2, t3 et t4 après administration de ladite dose D; (d) on détermine au moins un paramètre ou score permettant de caractériser la réponse de l'échantillon audit traitement cassant l'ADN, en utilisant au moins les nombres moyens NPH2AX(t), et dans lequel procédé - t4 est une valeur fixe qui représente le temps pour lequel le taux de cassures ADN atteint sa valeur résiduelle, et qui est avantageusement choisie entre 6 fois t3 et 8 fois t3, mais doit être dans ce cas être au moins de 12 heures, et de préférence comprise entre 12h et 48h, et qui est encore plus préférentiellement d'environ 24 heures ; - t3 est une valeur fixe qui représente le temps au bout duquel environ 25% des cassures double-brin (CDB) sont réparées dans des cellules témoins issues de patients radiorésistants, et qui est avantageusement choisie entre 3 fois t2 et 5 fois t2, mais doit dans ce cas être au moins de 2,5 heures et au plus de 6 heures, et est de préférence comprise entre 3 heures et 5 heures, et est encore plus préférentiellement environ 4 heures ; - t2 est une valeur fixe qui représente le temps au bout duquel environ 50% des CDB sont réparées dans des cellules témoins issues de patients radiorésistants, et qui est avantageusement choisie entre 5 fois t1 et 7 fois t1, mais qui doit dans ce cas être au moins de 35 minutes et au plus de 90 minutes, et est de préférence compris entre 45 minutes et 75 minutes, et est encore plus préférentiellement environ 60 minutes ; - t1 est une valeur fixe qui représente le temps au bout duquel le nombre de CDB reconnues atteint son maximum dans des cellules témoins issues de patients radiorésistants, et qui est avantageusement choisie entre 5 minutes et 15 minutes après l'arrêt de l'irradiation, de préférence entre 7,5 minutes et 12,5 minutes, et encore plus préférentiellement à environ 10 minutes. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel ledit traitement cassant l'ADN est sélectionné dans le groupe formé par : 3040177 18 - une irradiation avec un rayonnement ionisant ; - un traitement avec au moins un principe actif pharmaceutique, un traitement qui combine une irradiation avec un rayonnement ionisant et un traitement avec au moins un principe actif pharmaceutique. 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, dans lequel ladite tumeur est une tumeur solide ou liquide. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel on détermine les nombres moyens Np1-12AX(t) à t= tO, t1, t2, t3 et t4. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel on détermine comme paramètre ou score de la réponse de la tumeur à un traitement cassant l'ADN au moins un paramètre sélectionné dans le groupe formé par : la fraction cellulaire survivante après une dose D fractionnée en n doses d (SF(d,D)) le paramètre TCD50, le paramètre TCD95, le paramètre TCP, le volume de la tumeur. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel on établit le paramètre TCD95 à partir du nombre de cellules survivantes au traitement cassant l'ADN avec une dose D, de préférence par la relation 2 G y) TCD95 = 142.8 x N ( + 8.57 No où No représente le nombre de cellules tumorales initiales, N(2 Gy) représente le nombre de cellules survivantes à t4 après irradiation avec un rayonnement ionisant d'une dose de 2 Gy de traitement cassant l'ADN, ladite dose étant de préférence une dose de rayonnement ionisant comprise entre 0,5 Gt et 5 Gy, de préférence entre 1 Gy et 3 Gy, et encore plus préférentiellement de 2 Gy. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 ou 6, dans lequel on établit le paramètre TCD95 à partir du nombre de foci yH2AX de cellules survivantes au traitement cassant l'ADN avec une dose D, de préférence par la relation TCD95 = 142.8 x e (NH2Ax(2eGy,24h)+413) + 8.57 où NH2AX(2Gy,24h) représente le nombre de foci H2AX au temps t4 après une dose D de traitement cassant l'ADN, ladite dose étant de préférence une dose de rayonnement ionisant de 2 Gy, 0 représente la tolérance de la cellule (exprimée en nombre de cassures double-brin) et fi le paramètre en Gy-2 du modèle linéaire quadratique relatif au type de tissu tumoral. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, dans lequel on établit le paramètre TCP à partir du nombre de cellules survivantes après traitement cassant l'ADN avec une dose D, de préférence par la relation TCP(D) = e-N(D) 3040177 19 où N représente le nombre de cellules survivantes après une dose D de traitement cassant l'ADN, ladite dose étant de préférence une dose de rayonnement ionisant de 2 Gy. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 8 dans lequel on établit le paramètre TCP à partir du nombre de nombre de foci yH2AX de cellules survivantes au traitement cassant l'ADN avec une dose D de traitement cassant l'ADN, de préférence par la relation (n xN H2Ax(d,24h) + (3dD) T p (D) = e-Noie e où NH2Ax(d, 24h) représente le nombre de foci de H2AX dans les cellules survivantes au temps t4 après une dose d de traitement cassant l'ADN, ladite dose étant de préférence une dose de rayonnement ionisant de 2 Gy. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel on établit la survie des cellules de la tumeur après un traitement cassant l'ADN avec une dose D fractionnée en n doses d de préférence par la relation : S F (d, D) = e (n xN H2A9x(d,24h) + dD) où : NH2AX représente le nombre de foci de H2AX dans cellules tumorales survivantes à 24h post-irradiation, e représente la tolérance de la cellule (unité : nombre de cassures double-brin), D est la dose en Gy d est la dose en Gy par fraction, n est le nombre de fractions, /3 est le paramètre en Gy-2 du modèle linéaire quadratique relatif au type de tissu tumoral. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 10, dans lequel on établit la proportionnalité de ladite fraction cellulaire survivante après une dose D fractionnée en n doses d avec le rapport d'intensités des signaux recueillis par imagerie avant et après le traitement par radiothérapie, de préférence selon la formule : e n XNH2Ax(d,24h) f3dD) = cXSF(d,D)=cxe e où : If est l'intensité du signal dans le volume traité à la fin du traitement, est l'intensité du signal dans le volume traité avant le traitement, C est une constante de proportionnalité. Ii 3040177 20 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 11, dans lequel on établit le volume de la tumeur après un traitement cassant l'ADN avec une dose D (ce volume étant exprimé par le paramètre V(D)) à partir de la survie des cellules de la tumeur, de préférence par la relation V(D) = 1 + e-a.No(SF(D)-SF(D50)) où : - N est de nombre de cellules survivantes après une irradiation avec une dose D, - VO est le volume initial de la tumeur, - SF(D) est la fraction de cellules survivantes à une dose D, - a est la constante de variation du volume par nombre de cassures de l'ADN, - D50 est la dose en Gy pour laquelle il est observé une réduction de 50% du volume de la tumeur. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 12, dans lequel on établit le volume de la tumeur après un traitement cassant l'ADN avec une dose D (ce volume étant exprimé par le paramètre V(D)) à partir du nombre de cellules survivantes, de préférence par la relation V(D) = 1 + e-a(N(D)-N(D50)) où : - N est de nombre de cellules survivantes après une irradiation avec une dose D, - VO est le volume initial de la tumeur, - N(D) est le nombre de cellules survivantes à une dose D, - a est la constante de variation du volume par nombre de cassures de l'ADN, - D50 est la dose en Gy pour laquelle il est observé une réduction de 50% du volume de la tumeur. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 12, dans lequel on établit le volume de la tumeur après un traitement cassant l'ADN à une dose D fractionnée en n doses d et ce à partir du nombre de foci yH2AX de cellules survivantes au traitement cassant l'ADN, de préférence par la relation Vo Vo V (d, D) = Vo NH2AX(d,24h) .\ (n50 x NH2Ax(d,24h +13dD )1- pdD5o), 1 + e-a.No(e -e 3040177 21 où : No représente le nombre de cellules tumorales initiales, e représente la tolérance de la cellule (unité : nombre de cassures double-brin), 050 est la dose pour laquelle on trouve une réduction du volume de la tumeur de 50%, n50 est le nombre de fractions pour lequel on trouve une réduction du volume de la tumeur de 50% a est une constante de variation du volume par nombre de cassures, fl représente le paramètre en Gy-2 du modèle linéaire quadratique relatif au type de tissu tumoral.