Brevet FR3036923A1 — publié le 20161209

DOMAINE TECHNIQUE AUQUEL SE RAPPORTE L'INVENTION La présente invention concerne, de manière générale, le domaine de la nutrition fonctionnelle animale. Elle concerne plus particulièrement une composition d'hydrolysat de protéines, ainsi que son utilisation pour lutter contre le stress chez l'animal. ARRIERE-PLAN TECHNOLOGIQUE Les protéines et les peptides sont des composants physiologiquement actifs de l'alimentation. Ainsi diverses protéines alimentaires peuvent être utilisées comme sources de peptides bioactifs. Etant inactifs à l'intérieur de la chaîne d'acides aminés, ces biopeptides doivent auparavant en être séparés pour pouvoir développer leur action biologique. Ces biopeptides peuvent être obtenus par une hydrolyse qui coupe les liaisons peptidiques des protéines et produit des peptides, des oligopeptides et des acides aminés. On parle alors d'hydrolysat protéique. La réaction d'hydrolyse peut être contrôlée de sorte que des hydrolysats, dont le profil moléculaire est caractérisé, peuvent être préparés de façon reproductible sous l'action de protéases spécifiques. En modifiant leur taille et leur charge, l'hydrolyse modifie les propriétés fonctionnelles et nutritionnelles des protéines (digestibilité, solubilité, allergénicité, développement d'activités biologiques, etc.). En effet, la composition spécifique en biopeptides d'un hydrolysat, ainsi que son profil moléculaire, sont susceptibles de modifier significativement l'activité biologique d'un hydrolysat de protéine. Des études ont ainsi démontré que les hydrolysats de protéines de poissons, de mollusques et/ou de crustacés présentent des propriétés biologiques intéressantes et peuvent donc être utilisés dans des applications pharmaceutiques et/ou nutritionnelles (Quaglia et al. 1987; Shahidi et al. 1995; Liceaga-Gesualdo et al. 1999; Kristinsson et Rasco 2000; Liaset et al. 2003). A cet égard, le demandeur a précédemment divulgué (EP 0 682 873) un hydrolysat de protéines d'animaux marins, obtenu par digestion enzymatique, dont le profil moléculaire de la fraction protéique présente la répartition suivante : - 15 à 40% de molécules de poids moléculaire compris entre 50 000 et 3036923 2 10 000 daltons, - 10 à 35% de molécules de poids moléculaire compris entre 10 000 et 1 800 daltons (Da), - 10 à 35% de molécules de poids moléculaire compris entre 1 800 et 5 600 daltons (Da), et - 10 à 35% de molécules de poids moléculaire inférieur à 600 daltons (Da) environ. Un tel hydrolysat présente une activité biologique s'exprimant par des propriétés ostéo-inductrices ou régénératrices de l'épiderme. 10 D'autres études ont montré que des hydrolysats de protéines de poissons, de crustacés et/ou de mollusques, pouvaient présenter une activité antistress (Bernet et al., 2000 ; Herault et al., 2012). En effet, il est connu que les acides aminés et les peptides peuvent jouer un rôle régulateur sur le système nerveux en tant que précurseurs de sérotonine, 15 de mélatonine et d'endorphines. Il a également été montré que des aliments fonctionnels comprenant des tripeptides particuliers (11e-Pro-Pro, Val-Pro-Pro) ont un effet anti-stress (EP1018341). De manière générale, le bien-être animal et en particulier la sensibilité au 20 stress, qu'il s'agisse d'animaux d'élevage ou d'animaux de compagnie, est une problématique récurrente. Il reste donc intéressant de développer et de proposer de nouveaux hydrolysats de protéines, en particulier des hydrolysats de protéines qui soient efficaces pour lutter contre le stress chez les animaux, permettant un traitement 25 sans contre-indications et sans accoutumance. OBJET DE L'INVENTION Afin de répondre au besoin précité, la présente invention propose un hydrolysat de protéines de poissons comprenant une fraction peptidique ayant le 30 profil moléculaire suivant, exprimé en ratio de poids par rapport au poids total de ladite fraction peptidique : - moins de 1 % des molécules ont un poids moléculaire supérieur à 10 000 daltons, - 60 à 99 % des molécules ont un poids moléculaire inférieur à 1 500 3036923 3 daltons ; et ladite fraction peptidique comprenant au moins un peptide choisi parmi les peptides suivants : IGP, LGP, VY, et RP. De préférence, la fraction peptidique est dépourvue de protéines. 5 Le profil moléculaire de la fraction peptidique du présent hydrolysat est différent de l'hydrolysat de la demande antérieure EP 0 682 873. Le demandeur démontre ici que le nouvel hydrolysat objet de la présente invention permet, de manière surprenante et inattendue, de lutter contre le stress chez les animaux. Un tel effet anti-stress n'avait pas été identifié pour l'hydrolysat 10 décrit dans le document EP 0 682 873 précité. Sans être limité par une quelconque théorie, les effets biologiques d'un tel hydrolysat permettent donc de lutter contre le stress chez les animaux, notamment de limiter leur agressivité et de diminuer leur sensibilité au stress. Un tel hydrolysat selon l'invention peut être consommé sans contre- 15 indications et sans accoutumance, notamment en complément de produits médicamenteux classiques. D'autres caractéristiques non limitatives et avantageuses de la composition conforme à l'invention, prises individuellement ou selon toutes les combinaisons techniquement possibles, sont les suivantes : 20 De préférence, l'hydrolysat comprend : (i) la fraction peptidique, qui représente de 60 à 80 % en poids du poids total de matière sèche dudit hydrolysat, (ii) une fraction lipidique, qui représente de 5 à 17 % en poids du poids total de matière sèche dudit hydrolysat, et (iii) une fraction minérale qui représente de 5 à 23 % en poids du poids total dudit hydrolysat ; 25 Typiquement, un hydrolysat conforme à l'invention est caractérisé en ce que la fraction peptidique comprend les peptides IGP et/ou LGP, et VY et RP. Avantageusement, les protéines de poissons sont issues d'au moins un type de poissons choisi dans la famille des Gadidés. Typiquement, le profil moléculaire de la fraction peptidique dudit 30 hydrolysat présente la répartition suivante, exprimé en fonction du poids total de la fraction peptidique de l'hydrolysat : - 10 à 20 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 1 500 et 5 000 daltons - 35 à 45 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 500 3036923 4 et 1 500 daltons - 15 à 25 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 300 et 500 daltons. - 19 à 29 % des molécules ont un poids moléculaire inférieur à 300 5 daltons. Généralement, la fraction lipidique d'un hydrolysat conforme à l'invention comprend au moins 35 % en poids d'acides gras polyinsaturés (AGPI) par rapport au poids total de la fraction lipidique, dont au moins 30 % d'oméga-3. Typiquement, la fraction lipidique comprend au moins 10 % d'acide 10 éicosapentaénoïque (EPA) et au moins 13 % d'acide docosahexaénoïque (DHA). Un hydrolysat selon l'invention peut être obtenu par la mise en oeuvre d'un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - hydrolyse sous agitation de tissus de poissons, par apport de protéases naturelles de poissons, 15 - séparation, par filtration ou par centrifugation, - déshydratation du produit récupéré, - conditionnement de l'hydrolysat, de préférence sous forme de pâte, ou de poudre. L'invention se rapporte également à une composition nutritionnelle 20 comprenant un hydrolysat tel que précédemment décrit. De préférence, la composition nutritionnelle est administrable par voie orale. Typiquement, l'hydrolysat ou la composition nutritionnelle de l'invention est utilisé en tant que supplément nutritionnel. De préférence, l'hydrolysat de l'invention est destiné à être administré à 25 des animaux, notamment à des animaux de compagnie ou d'élevage, et de préférence au chien ou au chat. Un tel hydrolysat améliore de façon générale la vitalité, en particulier, le calme et le bien-être des animaux. Une telle composition anti-stress présente également un risque 30 allergique limité, du fait de l'hydrolyse enzymatique des protéines de poissons. De préférence, l'hydrolysat selon l'invention est destiné à être utilisé pour lutter contre le stress. L'invention se rapporte également à l'utilisation de l'hydrolysat ou de la composition nutritionnelle de l'invention, en tant que supplément nutritionnel ou 3036923 5 intégré dans des aliments, notamment pour lutter contre le stress et/ou pour améliorer le calme et le bien-être des animaux, de préférence des animaux de compagnie ou d'élevage, et de préférence encore du chien ou du chat. 5 DESCRIPTION DETAILLEE La description qui va suivre en regard des résultats fournis à titre d'exemples non limitatifs, fera bien comprendre en quoi consiste l'invention et comment elle peut être réalisée. 10 Hydrolysat de protéines de poissons La présente invention se rapporte à une composition d'hydrolysat de protéines de poissons qui comprend une fraction peptidique comprenant des peptides et des acides aminés. Par « fraction peptidique », on entend la partie de cette composition (c.- 15 à-d.: les molécules) comprenant les composés azotés constitués d'acides aminés (incluant donc les peptides et les acides aminés libres). Ces composés sont des molécules solubles. Le terme « protéine » se rapporte à un polypeptide comprenant une ou plusieurs chaînes peptidiques et possédant une organisation tridimensionnelle 20 dans l'espace. Typiquement une protéine comprend au moins 120 acides aminés et possède un poids moléculaire supérieur à 15 000 Daltons (Da). Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les protéines représentent moins de 1 %, notamment moins de 0,5 % de la fraction peptidique de l'hydrolysat de l'invention. De préférence encore, l'hydrolysat selon l'invention, 25 est dépourvu de protéines résiduelles. Par « peptide », on entend un polymère comprenant au moins 2 acides aminés reliés entre eux par des liaisons peptidiques. Typiquement, un peptide comprend moins de 100 acides aminés et possède un poids moléculaire généralement inférieur à 11 000 Da, de préférence inférieur à 10 000 Da. 30 La fraction peptidique de la composition (exprimée en ratio de poids par rapport au poids total de la fraction peptidique) selon l'invention présente un profil moléculaire dont : - moins de 1 % des molécules ont un poids moléculaire supérieur à 10 000 Da, et 3036923 6 - 60 à 99 % des molécules ont un poids moléculaire inférieur à 1 500 Da. Ce profil moléculaire de la fraction peptidique est typiquement déterminé par chromatographie liquide à haute performance couplée à la spectrométrie de 5 masse, sur colonne séparative en gel de silice de type Shodex KW-802.5 préalablement étalonnée sur des molécules de référence. De préférence, le profil moléculaire de la fraction peptidique présente la répartition suivante (exprimée en ratio de poids par rapport au poids total de la fraction peptidique de l'hydrolysat) : 10 - 10 à 20 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 1 500 et 5 000 Da - 35 à 45 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 500 et 1 500 Da - 15 à 25 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 300 15 et 500 Da - 19 à 29 % des molécules ont un poids moléculaire inférieur à 300 Da. La composition selon l'invention comprend encore au moins un peptide (ou biopeptide) choisi parmi IGP (isoleucine-glycine-proline), LGP (leucine-glycine- 20 proline), VY (valine-tyrosine) et RP (arginine-proline). De préférence, la fraction peptidique comprend la combinaison des peptides IGP et/ou LGP, et VY et RP, et notamment la combinaison des quatre peptides IGP, LGP, VY et RP. Ces peptides IGP, LGP, VY et RP représentent avantageusement de 0,5 25 à 2 % des molécules ayant un poids moléculaire inférieur à 300 Da. De façon préférée, la composition de l'invention comprend jusqu'à 25 %, et notamment jusqu'à 20 %, d'acides aminés libres, par rapport au nombre d'acides aminés totaux. De préférence, les protéines de poissons (c'est-à-dire la matière 30 première brute), sont issues de tissus d'au moins un type de poisson de la famille des Gadidés (de préférence au moins deux types de poissons de la famille de Gadidés). De préférence, l'hydrolysat conforme à l'invention comprend : (i) la fraction peptidique, qui représente de 60 à 80 % en poids du poids 3036923 7 total d'extrait sec dudit hydrolysat, (ii) une fraction lipidique, qui représente de 5 à 17 % en poids du poids total d'extrait sec dudit hydrolysat, et (iii) une fraction minérale qui représente de 5 à 23 % en poids du poids 5 total d'extrait sec dudit hydrolysat. L'hydrolysat de l'invention comprend généralement une proportion d'humidité inférieure à 50 % et de préférence inférieure à 45 % par rapport au poids total de l'hydrolysat. Ainsi, dans certains modes de réalisation, l'hydrolysat comprend au moins 55 % d'extrait sec et par conséquent moins de 45 % 10 d'humidité par rapport au poids total de l'hydrolysat. Il se présente alors avantageusement sous forme d'une pâte, ou d'une poudre. Dans certains modes de réalisation, l'hydrolysat de l'invention comprend une humidité résiduelle inférieure ou égale à 15 %, notamment inférieure ou égale à 10 %%, par exemple variant de 5 à 10 %, et de préférence encore inférieure ou 15 égale à 5 % en poids, par rapport au poids total de l'hydrolysat. Dans ce mode de réalisation, l'hydrolysat se présente généralement sous forme d'une poudre. La fraction lipidique peut comprendre au moins 35 %, notamment au moins 40 % ou encore au moins 60 % en poids d'acides gras polyinsaturés (AGPI) par rapport au poids total de la fraction lipidique. 20 De préférence, les acides gras de type oméga-3 représentent au moins 30 % du poids total de la fraction lipidique. Typiquement, la fraction lipidique comprend : - au moins 10 % d'acide éicosapentaénoïque (EPA) et - au moins 13 % d'acide docosahexaénoïque (DHA). 25 La teneur en lipides et notamment en oméga-3 (EPA et DHA) peut être déterminée selon la méthode analytique de l'AOAC N°35.1.25. La fraction minérale correspond à la fraction non organique de la composition. L'hydrolysat selon l'invention contient avantageusement, dans sa fraction minérale, des minéraux, comme par exemples des sulfates, des 30 carbonates, des chlorures, des silicates, et des oligoéléments. De préférence, la fraction minérale comprend au moins un oligoélément choisi parmi le magnésium, le phosphore, le potassium, l'iode, le fer, le cuivre, le zinc et le sélénium. Typiquement, le calcium, le phosphore et/ou le potassium sont présents 3036923 8 dans l'hydrolysat à une teneur allant de 0,5 à 2 % en poids par rapport au poids total d'extrait sec dudit hydrolysat. Le magnésium peut être présent dans l'hydrolysat à une teneur allant de 0,05 à 0,2 % en poids par rapport au poids total d'extrait sec dudit hydrolysat. 5 Le fer, le cuivre et le zinc peuvent être présents à l'état de traces dans l'hydrolysat de l'invention. Généralement, un hydrolysat selon l'invention comporte de 5 à 15 mg de fer, de 2 à 8 mg de zinc et de 0,1 à 0,5 mg de cuivre et/ou de sélénium pour 100 g d'extrait sec d'hydrolysat. L'hydrolysat selon l'invention peut également présenter l'une au moins 10 des caractéristiques suivantes : - une teneur en matière azotée totale (estimée selon la formule N X 6,25) comprise entre 41 et 91 % en poids par rapport au poids total de l'extrait sec ; - un rapport azote aminé/azote total compris entre 25 et 40 %, 15 notamment entre 30 et 34 % ; - une teneur en acides aminés libres comprise entre 15 et 35 % de la matière azotée totale. De préférence, un hydrolysat conforme à l'invention comprend une teneur en glucide inférieure à 0,2 % et notamment inférieur à 0,1 %, notamment 20 inférieure à 0,05 % et de façon particulièrement préférée inférieure à 0,002 % en poids par rapport au poids total d'extrait sec de l'hydrolysat. Dans certains modes de réalisation, l'hydrolysat de l'invention est dépourvu de glucides. Procédé d'obtention de l'hydrolysat de poissons 25 La présente invention concerne encore un procédé permettant l'obtention d'un hydrolysat de protéines tel que défini précédemment. L'hydrolysat de protéines de poissons selon l'invention est obtenu par hydrolyse, avantageusement enzymatique, d'au moins une source de protéines d'au moins un type (ou d'au moins une espèce) de poissons. 30 De préférence, en tant que source de protéines de poissons (correspondant à la matière première brute), on utilise des tissus d'au moins un type de poissons de la famille des Gadidés (de préférence au moins deux types de poissons de la famille des Gadidés). On utilise des poissons entiers ou certains tissus de poissons. Il est 3036923 9 également possible d'utiliser en tant que matière première brute des coproduits issus de l'industrie du poisson. De préférence, les poissons sont éviscérés (ou vidés), c'est-à-dire que leur paroi abdominale a été ouverte longitudinalement, les viscères enlevés et la 5 cavité abdominale nettoyée. Les poissons peuvent être étêtés. Cette matière première brute est avantageusement additionnée d'eau à raison de 20 à 25 % environ en poids, par rapport au poids total de la matière première brute. De l'eau acidifiée, présentant un pH allant de 4,5 à 6, peut être utilisée. 10 L'hydrolysat selon l'invention est ainsi le résultat d'un traitement au cours duquel, certaines liaisons peptidiques des protéines sont rompues. Le procédé selon l'invention se caractérise en ce qu'il comprend : 1) Eventuellement, une étape de broyage de la dite au moins une source de protéines de poissons. 15 2) Une étape d'hydrolyse enzymatique de la source de protéines de poissons, de préférence à une température allant de 45 à 65°C. Cette étape est typiquement réalisée sous agitation. Avantageusement l'hydrolyse est réalisée à un pH constant allant de 4,5 à 6, généralement pour une durée allant de 2 à 6 heures. 20 L'hydrolyse est conduite par digestion enzymatique contrôlée (ou ménagée) sous l'action de protéases endogène(s) et exogène(s). Par « protéase endogène », on entend toute protéase existant naturellement dans la source de protéines de poissons utilisée (typiquement toute protéase qui est naturellement contenue dans la chair de poissons utilisée). 25 Par « protéase exogène » on entend selon l'invention toute enzyme exogène, c'est-à-dire ajoutée à la source de protéines de poissons, et capable d'hydrolyser les protéines des matières premières sélectionnées qui sont soumises au traitement d'hydrolyse. Les protéases utilisées doivent être compatibles avec une utilisation 30 alimentaire de l'hydrolysat chez l'animal et notamment chez le chien ou le chat. Il est notamment possible d'utiliser une ou plusieurs protéases d'origine marine ou bactérienne. De préférence on utilise en tant que protéase exogène au moins une enzyme, ou un mélange d'enzymes, naturelle(s) de poissons (c'est-à-dire existant 3036923 10 naturellement chez le poisson). Les enzymes ou les mélanges d'enzymes suivants peuvent être utilisés : extrait de muqueuse intestinale de poisson, extrait pancréatique de poisson, chymosine, trypsine, chymotrypsine, papaïne, seul(e)s ou en mélange(s). 5 Typiquement les enzymes (protéases) ou le mélange d'enzymes exogènes sont ajoutés après l'étape de chauffage. L'hydrolyse est poursuivie jusqu'à l'obtention de l'hydrolysat répondant au profil moléculaire tel que défini précédemment. L'arrêt de l'hydrolyse enzymatique peut être obtenu par inactivation des protéases par élévation de la 10 température du mélange réactionnel, à une température ne dépassant pas 100 °C, notamment comprise entre 85 et 95°C, de préférence de l'ordre de 90 °C. Cette opération est généralement conduite pendant une durée allant de 5 à 20 minutes. 3) Une étape de séparation de l'hydrolysat de protéines obtenu par rapport au reste du mélange réactionnel issu de l'étape 2). 15 Cette séparation peut être réalisée par filtration (par exemple sur un filtre de l'ordre de 400 pm) et/ou par centrifugation. La centrifugation peut être réalisée à une vitesse comprise entre 4000 et 7 000 tours par minutes (révolution per minute ou rpm). Le culot obtenu est ensuite éliminé. 20 Préférentiellement, la séparation de l'hydrolysat de protéines est réalisée par une filtration du mélange réactionnel suivie d'une centrifugation. La filtration du milieu réactionnel permet d'éliminer les matières solides. 4) Avantageusement, une étape de déshydratation de l'hydrolysat est mise en oeuvre après l'étape 3). Cette étape de déshydratation est généralement 25 réalisée par concentration sous vide. Elle permet typiquement d'obtenir une pâte, contenant de préférence au moins 55 % d'extrait sec. 5) Eventuellement une étape de séchage à basse température de l'hydrolysat, par lyophilisation ou par atomisation, peut être mise en oeuvre. L'hydrolysat est ainsi récupéré sous forme de poudre qui contient de 30 préférence 15 % ou moins, notamment 10 % au moins, par exemple entre 5 et 10 % et de préférence encore 5 % ou moins en poids d'humidité, par rapport au poids total de l'hydrolysat sous forme de poudre. De préférence, le séchage intervient par atomisation. L'hydrolysat de protéines est alors typiquement pulvérisé dans une enceinte dans laquelle l'air a 3036 923 11 été préalablement chauffé de façon à ce que l'eau s'évapore. La poudre obtenue est séparée de la vapeur d'eau et collectée à la fin de l'étape de séchage. 6) Eventuellement, une étape de conditionnement de l'hydrolysat de protéine, le cas échéant sous forme de pâte, ou de poudre, après mise en oeuvre 5 de l'étape 4) et/ou 5). L'hydrolysat peut être conditionné sous forme de pâte concentrée à au moins 55 % d'extrait sec. Il peut également être conditionné sous forme d'une poudre contenant 15 % ou moins, notamment 10 % ou moins, par exemple de 5 à 10 % et de 10 préférence 5 % ou moins en poids d'humidité résiduelle, vis-à-vis du poids total de l'hydrolysat sous forme de poudre. Ces hydrolysats peuvent être incorporés dans des produits alimentaires (notamment avant extrusion) ou dans des compositions nutritionnelles (c.-à-d. : des suppléments nutritionnels). 15 Composition nutritionnelle La présente invention concerne encore une composition ou un produit alimentaire fonctionnel (encore appelée alicament) comprenant un hydrolysat de protéines de poissons tel que décrit précédemment. 20 Dans certains modes de réalisation de l'invention, l'hydrolysat de protéines de poissons est formulé sous forme d'une composition nutritionnelle avantageusement destinée à une administration par voie orale. Pour cela, l'hydrolysat de protéines de poissons peut être associé avec un ou plusieurs composés supplémentaires, comestibles, choisis par exemple 25 parmi une huile (végétale et/ou de poisson), une vitamine (comme la vitamine B1), ou un élément minéral. Il est ainsi possible d'utiliser une huile de chair de poisson purifiée. On choisira de préférence une huile riche en oméga-3 contenant de préférence au moins 25 % d'oméga-3. 30 De préférence l'élément minéral est au moins un oligoélément comme par exemple le cuivre. Les composés supplémentaires éventuellement ajoutés à l'hydrolysat de l'invention sont avantageusement choisis parmi les composés comestibles par les animaux, notamment par les animaux de compagnie ou d'élevage, et de 3036923 12 préférence encore par le chien (typiquement Canis lupus familiaris) ou le chat (Felis silvestris catus). La composition nutritionnelle peut en outre inclure des ingrédients adaptés à une utilisation en tant que supplément nutritionnel tels que des liants, 5 des véhicules pulvérulents (comme la maltodextrine), des agents de saveurs, des conservateurs ou des colorants. Dans certains modes de réalisation, l'hydrolysat de protéines de poissons conforme à l'invention, éventuellement sous forme d'une composition nutritionnelle, peut être : 10 - incorporé dans des aliments pour former des aliments additionnés ou aliments fonctionnels, ou - conditionné pour une administration par voie orale. L'hydrolysat de protéines de poissons conforme à l'invention, éventuellement sous forme d'une composition nutritionnelle, peut se présenter 15 notamment sous différentes formulations galéniques administrables par voie orale, par exemple sous la forme de comprimés, granulés, capsules, gélules ou sachets doses. Par « aliment », on entend avantageusement des aliments pour animaux, de préférence pour les animaux de compagnie ou d'élevage, et de préférence 20 encore pour le chien ou le chat. Les aliments fonctionnels obtenus par incorporation de l'hydrolysat de protéines de poissons conforme à l'invention peuvent ensuite subir une étape d'extrusion pour leur mise en forme adaptée à la consommation animale. 25 Utilisation nutritionnelle de l'hydrolysat de protéines de poissons L'invention concerne notamment l'utilisation nutritionnelle, en tant que supplément nutritionnel, de l'hydrolysat de protéines de poissons tel que défini précédemment. Un tel hydrolysat est de préférence destiné à l'animal. Il est apte à être 30 utilisé notamment chez les animaux de compagnie ou domestiques, d'élevage ou de laboratoire ou encore chez les poissons élevés en pisciculture ou en aquaculture. Selon un mode de réalisation préféré, l'hydrolysat de l'invention est utilisé chez le chien (typiquement Canis lupus familiaris) ou le chat (Felis silvestris catus). 3036923 13 L'hydrolysat, tel que défini précédemment, est de préférence utilisé pour lutter contre le stress chez les animaux. Par « lutter contre le stress », on entend diminuer le stress provoqué ainsi que lutter contre son apparition (action préventive). 5 L'hydrolysat de l'invention peut être utilisé pour limiter la sensibilité au stress ainsi que l'agressivité des animaux. Egalement, un hydrolysat de protéines de poissons tel que défini précédemment peut être utilisé pour améliorer de façon générale la vitalité et/ou le calme et le bien-être des animaux. 10 L'invention concerne également un procédé pour lutter contre le stress chez l'animal (notamment chez le chien et le chat) comprenant l'administration (avantageusement orale) d'un hydrolysat de protéines de poisson tel que défini précédemment (directement ou via un aliment additionné). De préférence, un hydrolysat de protéines de poissons est administré 15 aux dosages quotidiens suivants chez des animaux (et notamment chez le chien) : - de 100 à 200 mg, en particulier de 150 mg pour de animaux dont le poids est inférieur à 10 kg ; - de 250 à 350 mg, et en particulier de 300 mg pour des animaux dont le poids est compris entre 10 et 20 kg ; 20 - de 600 à 700 mg, et notamment de 650 mg, pour des animaux dont le poids est supérieur à 20 kg. Les Exemples de consommation journalière décrits ci-après démontrent que l'hydrolysat de l'invention permet, de manière inattendue, de réduire le stress 25 et d'améliorer le calme et le bien-être des animaux. RESULTATS EXPERIMENTAUX 1) Analyse de la composition en peptides d'un hydrolysat de 30 poissons conforme à l'invention L'approche expérimentale est basée sur la mise en oeuvre d'un protocole d'extraction / prépurification / délipidation d'un échantillon complexe provenant d'une hydrolyse contrôlée de tissus de poissons marins. L'objectif de ces étapes préalables est d'accroître progressivement la 3036923 14 fraction peptidique de l'échantillon afin de pouvoir procéder à une recherche ciblée de séquences peptidiques par spectrométrie de masse. Les différentes étapes du protocole sont récapitulées ci-dessous : 5 1.1 Extraction : - 1g dans 20 mL HCI 0.1N 100 °C 3 minutes - centrifugation 30 000 g 15 minutes +4°C - regroupement des surnageants - réfrigération 15h à 4 °C 10 - filtration sur filtre 0.2 pm - aliquotage : 10 x 30 mg - évaporation centrifuge sous vide - stockage à 4 °C jusqu'à utilisation 15 1.2 Prépurification par chromatographie par perméation de gel (GPC) - reprise d'un aliquot dans 100 pl de phase mobile : 32 % d'acétonitrile (ACN HPLC)) / 68 % d'EPPI / 0.1% d'acide acétique (HPLC) - sonication - centrifugation 3 minutes à 30000g : absence de culot 20 Conditions chromatographiques : - chaîne HPLC VARIAN - colonne HPLC TSK 2500 - débit : 0.5 ml/min 25 - injection : 25 pl (7,5 mg) - détection à 214 nm (liaison peptidique) - collecte : minute par minute 1.3 Analyse en spectrométrie de masse : 30 - microLC SURVEYOR on-line with a DECA XP+ Thermoscientific - colonne ACE C18 50x0.5 5 pm - débit : 10 pl/min - gradient : 1,6 % d'ACN/min - détection en mode positif 3036923 15 - peptides recherchés sur la base de leur m/z monochargée - fragmentation : spectres MS/MS - identification : analyse des spectres MS/MS par le logiciel TURBO SEQUEST 5 1.4 Résultats Les fractions d'HPLC ont été regroupées par pools pour les analyses en spectrométrie de masse. Le profil moléculaire de la fraction peptidique présente la répartition 10 suivante : - 10 à 20 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 1 500 et 5 000 Da - 35 à 45 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 500 et 1 500 Da 15 - 15 à 25 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 300 et 500 Da. - 19 à 29 % des molécules ont un poids moléculaire inférieur à 300 Da. Un tripeptide IGP et/ou LGP et deux dipeptides, RP et VY ont également 20 été détectés. Le tripeptide I/LGP détecté dans deux pools de fractions HPLC peut correspondre indifféremment aux séquences LGP ou IGP, le mode d'analyse par fragmentation en MS/MS ne pouvant discriminer la leucine et l'isoleucine dont les masses respectives sont absolument identiques. 25 2) Essais chez le chien 2.1 Hydrolysat de poissons : L'hydrolysat est obtenu par une hydrolyse ménagée d'une sélection de 30 poissons de la famille des Gadidés. Composition en peptides par poids moléculaire (PM) (± 5%) PM 10 000 Da : 95% Azote aminé/azote total 31 % ± 2 15 Chlorure de sodium 3 g Matière minérales 12 g Humidité 5 g 2.2 Une expérimentation a été menée sur des chiens de race berger 20 allemand traités avec un hydrolysat de poisson selon l'invention. Les animaux ont reçu un complément alimentaire (ou supplément nutritionnel) sous forme de capsules comprenant 160 mg d'hydrolysat de poisson selon l'invention et de l'huile vierge de Tournesol. Le protocole d'administration est le suivant : 25 - 2 capsules matin et soir pendant 21 jours - 3 capsules matin et soir pendant 14 jours Test d'effort 2,7 km à petite foulée avec le maître-chien 30 1 mn d'arrêt - possibilité d'abreuvement 2,5 km à 20 km/h derrière une voiture 0,2 km à 35 km/h (sprint) derrière une voiture Innocuité 3036923 17 Aucune réaction pathologique n'a été observée à l'ingestion des capsules d'hydrolysat. Hématocrite 5 Comparaison par rapport aux normes usuelles : Les hématocrites mesurés à JO avant la course sur l'ensemble des chiens sont en général élevés et correspondent aux tranches supérieures des normes usuelles (Réf. 1.). Evolution des hématocrites avant départ au cours des essais : Entre JO 10 et J35, les hématocrites mesurés avant la course n'ont pas varié aussi bien chez les traités que les témoins. Evolution pendant et après la course : pour les courses JO et J21, on note généralement une augmentation de l'hématocrite en fin de course et un retour à la normale sur les chiens traités et témoins. 15 A l'inverse, à J35, les chiens ont une réponse hématocrite aplanie entre le départ et la fin de course Etude simultanée des températures et de l'appréciation de la course : Un facteur de récupération a été déterminé à 15 minutes et à 1heure 20 après la course. Ce facteur est défini par le ratio suivant : Variation thermique entre fin de course et temps de mesure Variation thermique entre début de course et fin de course. 25 Malgré quelques irrégularités, le facteur de récupération est meilleur à J35 qu'à JO pour les chiens traités. Analyse du comportement Aucun effet négatif sur le comportement n'a été constaté. 30 Au contraire, aucune tendance à l'agressivité n'est notée. On observe que les animaux traités sont plus calmes et moins sensibles au stress. On note également une amélioration globale de l'effort de concentration et de l'enthousiasme au travail chez les chiens traités. 3036923 18 Conclusions Le chien idéal au cours de l'effort devrait présenter un hématocrite invariable au cours du temps et de l'effort. Cet effet est obtenu sur les chiens traités avec l'hydrolysat de poisson de l'invention. 5 L'augmentation de l'hématocrite habituellement observée au cours d'un effort est un phénomène connu, bien que partiellement expliqué (chasse splénique, hémoconcentration, etc.). L'absence de variation suppose donc une adaptation à l'effort. Cette adaptation est confirmée par l'étude de la température rectale et 10 l'appréciation globale et notée des courses. Finalement, le traitement à base d'hydrolysat de poisson selon l'invention permet une amélioration de la récupération suite à l'effort sans entraver le caractère du chien. De manière générale, le traitement selon l'invention permet d'améliorer le 15 comportement général des chiens, avec une augmentation du calme et moins de sensibilité au stress, accompagnée d'une amélioration globale de l'effort de concentration et de l'enthousiasme au travail. REVENDICATIONS1. Hydrolysat de protéines de poissons comprenant une fraction peptidique dépourvue de protéines et ayant le profil moléculaire suivant, exprimé en fonction du poids total de ladite fraction peptidique : - moins de 1 % des molécules ont un poids moléculaire supérieur à 10 000 Da - 60 à 99 % des molécules ont un poids moléculaire inférieur à 1 500 Da ; et laquelle fraction peptidique comprend au moins un peptide choisi parmi IGP, LGP, VY, RP. 2. Hydrolysat selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend : (i) la fraction peptidique, qui représente de 60 à 80 % en poids du poids total dudit hydrolysat, (ii) une fraction lipidique, qui représente de 5 à 17 % en poids du poids total dudit hydrolysat, et (iii) une fraction minérale qui représente de 5 à 23 % en poids du poids total dudit hydrolysat. 3. Hydrolysat selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que ladite fraction peptidique comprend les peptides IGP et/ou LGP, et W et RP 4. Hydrolysat selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les protéines de poissons sont issues d'au moins un type de poissons choisi dans la famille des Gadidés. 5. Hydrolysat selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le profil moléculaire de la fraction peptidique dudit hydrolysat présente la répartition suivante, exprimée en fonction du poids total de ladite fraction peptidique : 10 à 20 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 1 500 et 5 000 Da 35 à 45 `)/0 des molécules ont un poids moléculaire compris entre 500 et 1 500 Da 15 à 25 % des molécules ont un poids moléculaire compris entre 300 et 500 Da. 19 à 29 % des molécules ont un poids moléculaire inférieur à 300 3036923 20 Da. 6. Hydrolysat selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que la fraction lipidique comprend au moins 35 % en poids d'acides gras polyinsaturés (AGPI) par rapport au poids total de la fraction lipidique, dont au moins 30 % d'oméga-3. 7. Hydrolysat selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la fraction lipidique comprend au moins 10 % d'acide éicosapentaénoïque (EPA) et au moins 13 % d'acide docosahexaénoïque (DHA) par rapport au poids total de la fraction lipidique. 8. Procédé d'obtention d'un hydrolysat selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes hydrolyse sous agitation de tissus de poissons, par apport de protéases naturelles de poissons, séparation, par filtration et/ou par centrifugation, déshydratation du produit récupéré par filtration et/ou centrifugation, conditionnement de l'hydrolysat, de préférence sous forme de pâte ou de poudre. 9. Composition nutritionnelle administrable par voie orale, comprenant un hydrolysat de protéines de poissons selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, ou obtenu selon la revendication 8, 10. Utilisation d'un hydrolysat de protéines de poissons selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 ou d'une composition nutritionnelle selon la revendication 9, en tant que supplément nutritionnel destiné aux animaux, de préférence aux animaux de compagnie ou d'élevage, et de préférence encore au chien ou au chat. 11. Utilisation d'un hydrolysat de protéines de poissons selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 ou d'une composition nutritionnelle selon la revendication 9, pour lutter contre le stress et/ou pour améliorer le calme et le bien-être des animaux, de préférence des animaux de compagnie ou d'élevage, et de préférence encore du chien ou du chat.