Brevet FR3047179A1 — publié le 20170804

ULVANES SULFATES ET UTILISATION DANS LA REGULATION DES TROUBLES DE LA COAGULATION La présente invention concerne des ulvanes sulfatés chimiquement présentant un taux de sulfates plus élevé que celui des ulvanes naturels communes sur les côtes françaises. L'invention a également pour objet ces polysaccharides pour leur application dans le domaine de la santé, en particulier pour leurs propriétés anticoagulantes et antithrombotiques. La coagulation sanguine correspond à la formation d'un caillot (clou plaquettaire ou thrombus). C'est un processus indispensable à l'arrêt d'un saignement après une blessure dans un fonctionnement physiologique non pathologique. La cascade de coagulation est classiquement divisée en trois voies : la voie extrinsèque, la voie intrinsèque et la voie commune. La voie extrinsèque et la voie intrinsèque activent toutes les deux la voie commune finale du facteur Xa, de la thrombine (lla) et de la fibrine. Mais lorsque la coagulation sanguine survient à l'intérieur des vaisseaux sanguins, ce qui peut se produire spontanément, les caillots risquent de provoquer de graves problèmes, tels que l'interruption de l'apport vital de sang aux organes, ou de perturber les échanges dans les organes vitaux comme le poumon. Ces affections dites thromboemboliques, sont souvent dues à un dérèglement de la coagulation sanguine, provoquant la formation d'un thrombus (caillot sanguin) qui entraîne l'oblitération des vaisseaux et qui peut migrer en périphérie. Parmi les maladies thromboemboliques, on distingue : La maladie thromboembolique veineuse : qui concerne les veines (thrombose veineuse profonde) et les poumons (migration du thrombus au niveau des poumons entraînant une embolie pulmonaire) , La maladie thromboembolique artérielle : qui correspond à la formation d'un thrombus au niveau d'une artère ou du coeur. Ce thrombus peut migrer au niveau d'une artère du cerveau (accident vasculaire cérébral, AVC) ou au niveau des artères périphériques (membres inférieurs par exemple). La fibrillation auriculaire (trouble du rythme provoquant des contractions irrégulières des oreillettes) entraîne la formation 3047179 2 de thrombus au niveau du coeur, dont la principale complication est la survenue d'un AVC. Ces affections peuvent être évitées ou traitées par l'utilisation d'anti-thrombotiques, qui permettent ainsi de préserver l'intégrité des organes et prévenir toute lésion grave qui 5 pourrait se révéler irréversible dans certains cas. Il existe trois catégories d'anti-thrombotiques : Les antiagrégants plaquettaires qui empêchent l'agglutination des plaquettes et la formation de caillots sanguins, Les thrombolytiques, encore appelés fibrinolytiques, qui sont des médicaments qui 10 dissolvent les caillots (thrombus), et Les anticoagulants, qui empêchent le développement des caillots existants et la formation de nouveaux caillots dans les artères ou dans les veines. Les anticoagulants sont indispensables pour la prévention et le traitement de pathologies thromboemboliques. Ils présentent un rapport bénéfice/risque bien établi et sont utilisés 15 depuis plus de 60 ans dans de nombreuses situations cliniques. Il existe quatre grandes classes d'anticoagulants : Les antivitamines K, tels que la warfarine, Les inhibiteurs directs de la thrombine (médicaments anti-lia), tels que la bivaluridine ou le diabigatran étexilate (traitement oral) 20 Les inhibiteurs directs du facteur Xa non hépariniques (médicaments anti-Xa) tels que les xabans (traitement oral) qui agissent directement sur le facteur Xa, dans la cascade de la coagulation sans utiliser l'antithrombine comme médiateur, Les héparines comprenant l'héparine non fractionnée (NF) et les héparines de bas poids moléculaires (HBPM). 25 Les anticoagulants oraux directs (médicaments anti-lla et anti-Xa) sont efficaces dans le traitement des maladies thromboemboliques mais présentent un risque hémorragique très supérieur aux héparines. Les HBPM sont obtenues par dépolymérisation chimique ou enzymatique des chaînes d'HNF issues de muqueuses porcines. Elles présentent des variations en composés pharmacologiquement actifs, des propriétés chimiques et physiques diverses conduisant à des effets biologiques particuliers, voire des différences d'efficacité qui constituent des obstacles à leur utilisation. 3047179 3 L'héparine non fractionnée (NF), est l'agent antithrombotique le plus utilisé dans la prévention et le traitement des pathologies thromboemboliques. Néanmoins, au cours des traitements par l'héparine NF, il peut survenir des effets secondaires tels qu'une réaction allergique ou une complication hémorragique due à sa forte activité anticoagulante, Xa- et lla-dépendante. 5 De plus, l'héparine NF se révèle peu active dans la prévention et le traitement de la thrombose artérielle. En outre, l'héparine présente une faible biodisponibilité et enfin elle présente l'inconvénient d'être extraite de muqueuses de mammifères (intestins de porcs en majorité ou poumons de boeuf) ce qui présente un risque potentiel de transmission d'agents non conventionnels lors de son utilisation. Aussi, pour toutes ces raisons, il convient de trouver 10 une alternative à l'héparine NF. Des dérivés de l'héparine NF ont été proposés, tels que le Lovenox®, mais ils ne sont pas aussi efficaces que l'héparine NF et présentent aussi des effets secondaires. L'héparine NF et ses dérivés agissent principalement sur l'une des deux enzymes clés de la coagulation : le facteur Xa et la thrombine (facteur lla), et ce d'une manière antithrombine-dépendante. 15 L'objectif de la présente invention est de proposer un actif anticoagulant d'origine non mammalienne, palliant les inconvénients des produits de l'art antérieur, et présentant : - une action sur la voie commune de la coagulation et une activité anti-Xa antithrombine-dépendante inférieures à celles de l'héparine NF et de ses dérivés, pour limiter fortement les effets secondaires, 20 - une activité sur les voies extrinsèque et intrinsèque de la coagulation proche de celle de l'héparine, pour une bonne efficacité anticoagulante, et - une activité sur les trois voies (intrinsèque, extrinsèque et commune) équivalente ou supérieure à celle du LOVENOX®. A cet effet l'invention vise des ulvanes sulfatés par sulfatation chimique. 25 Des ulvanes produits par fractionnement de l'algue Ulva sp. ont été décrites dans la demande FR2998894 et leurs propriétés antithrombotiques ont été mentionnées. Néanmoins leur efficacité n'est pas satisfaisante et éloignée de celle de l'héparine NF. Par ailleurs d'autres polysaccharides marins ont été décrits dans la littérature comme présentant une activité anticoagulante, en particulier : 30 - des polysaccharides d'origine bactérienne, mais ceux-ci présentent des coûts de production trop élevés, 3047179 4 - des polysaccharides d'origine macro-algale, dont l'efficacité anti coagulante est inférieure à celle de l'héparine et qui peuvent présenter une cytotoxicité. La présente invention vise spécifiquement des ulvanes sulfatés présentant un taux de sulfates supérieur ou égal à 15% en masse par rapport à la masse totale de l'ulvane, ou des extraits 5 d'Ulves comprenant ces ulvanes sulfatés. Avantageusement ces ulvanes sulfatés, d'origine algale, présentent une activité importante sur les voies extrinsèque et intrinsèque de la coagulation, au travers des tests TCA (temps de céphaline activée) et TP (temps de prothrombine) supérieure à celle du Lovenox® et très proches de celle de l'héparine NF. Selon un autre avantage, ils présentent une activité sur la 10 voie commune de la coagulation ainsi qu'une activité anti-Xa antithrombine dépendante inférieure à celle de l'héparine NF et du Lovenox®. L'invention a donc également pour objet ces ulvanes sulfatés pour leur application comme médicament, en particulier comme anticoagulants et antithrombotiques. L'invention vise aussi un procédé d'obtention de ces ulvanes ainsi que des compositions en 15 contenant. L'invention est maintenant décrite en détails en regard des Figures annexées sur lesquelles : - la Figure 1A représente le spectre RMN 13C de l'extrait d'ulves contenant des ulvanes obtenu selon le procédé du brevet FR2998894, - la Figure 1B représente le spectre ESI-MS HR de l'extrait d'ulves contenant des 20 ulvanes obtenu selon le procédé du brevet FR2998894, - La Figure 2A représente le chromatogramme HPLC-SEC gamme de dextran - La Figure 2B représente la régression polynomiale gamme de dextran - La Figure 2C représente le chromatogramme HPLC-SEC de l'extrait d'ulves contenant des ulvanes obtenu selon le procédé du brevet FR2998894, 25 - la Figure 3A représente le spectre RMN 1H de l'extrait d'ulves contenant des ulvanes obtenu selon le procédé du brevet FR2998894, - la Figure 3B représente le spectre RMN 1H de l'extrait d'ulves contenant des ulvanes sulfatés obtenu selon l'invention de l'exemple 2, - la Figure 4 représente le chromatogramme HPLC de l'extrait d'ulves contenant des 30 ulvanes sulfatés obtenu selon l'invention de l'exemple 2, 3047179 5 - la Figure 5 représente les résultats de l'activité anti-Xa antithrombine-dépendante de l'héparine NF, du Lovenox® et de l'extrait d'ulves contenant des ulvanes sulfatés obtenu selon le procédé selon l'invention de l'exemple 2, - la Figure 6 représente les résultats de l'activité anti-lla anti-thrombine dépendante 5 de l'héparine NF, du Lovenox® et de l'extrait d'ulves contenant des ulvanes sulfatés obtenu selon le procédé selon l'invention de l'exemple 2, - la Figure 7 représente les résultats de l'analyse TCA de l'activité anticoagulante des différents extraits : héparine NF , Lovenox®, et de l'extrait d'ulves contenant des ulvanes obtenu selon le procédé du brevet FR2998894 et l'extrait d'ulves 10 contenant des ulvanes sulfatés obtenu selon le procédé selon l'invention de l'exemple 2, (avec un temps de coagulation du plasma en absence de principe actif de 38,2 s contrôle négatif), - la Figure 8 représente les résultats de l'analyse TP de l'activité anticoagulante des différents extraits : héparine NF , Lovenox®, et de l'extrait d'ulves contenant des 15 ulvanes obtenu selon le procédé du brevet FR2998894 et l'extrait d'ulves contenant des ulvanes sulfatés obtenu selon le procédé selon l'invention de l'exemple 2, (avec un temps de coagulation du plasma en absence de principe actif de 13,1 s contrôle négatif), - la Figure 9 représente les résultats de l'analyse TT de l'activité anticoagulante des 20 différents extraits : héparine NF , Lovenox®, de l'extrait d'ulves contenant des ulvanes obtenu selon le procédé du brevet FR2998894 et l'extrait d'ulves contenant des ulvanes sulfatés obtenu selon le procédé selon l'invention de l'exemple 2, (avec un temps de coagulation du plasma en absence de principe actif de 12,9 s contrôle négatif). 25 L'invention a donc pour objet des ulvanes sulfatés présentant un taux de sulfates supérieur ou égal à 15% en masse par rapport à la masse totale de l'ulvane. Les ulvanes sont des polysaccharides anioniques sulfatés solubles dans l'eau extraits d'algues vertes de type ulve ou entéromorphe. Leur structure chimique est basée sur la répétition de différentes unités di-osidique. 30 Par « ulvanes sulfatés » au sens de l'invention, on entend des ulvanes qui possèdent un taux de sulfate supérieur aux taux de sulfates des ulvanes naturellement sulfatés présents dans les 3047179 6 Ulves, algues communément récoltées sur les côtes françaises, ce taux de sulfates étant obtenu par une sulfatation chimique. La taux de sulfates des ulvanes sulfatés selon l'invention est supérieur ou égale à 15%, préférentiellement supérieur ou égal à 20%. 5 Les ulvanes sulfatés selon l'invention, en plus des sulfates, sont constitués par des sucres neutres, en particulier rhamnose, xylose, glucose, et des acides uroniques. La quantité de chacun de ces constituants peut varier en fonction de l'espèce d'ulve, de la région d'origine et de la saison notamment. Ils présentent préférentiellement un poids moléculaire compris entre 50 000 et 60 000 Da. 10 Toutefois, les ulvanes sulfatés selon l'invention peuvent être dépolymérisés après extraction et avant sulfatation, et dans ce cas ils présentent préférentiellement un poids moléculaire compris entre 500 et 50 000 Da. La dépolymérisation peut être réalisée par des méthodes classiques telles que par exemple hydrolyse chimique par résine échangeuse d'ions ou acide libre, enzymatique, ultrasons, ou radicalaire. 15 Les ulvanes sulfatés selon l'invention sont donc extraits d'ulves par un procédé adapté puis sulfatés par un procédé de sulfatation chimique. Ils peuvent se présenter seuls ou sous forme d'un extrait d'Ulves comprenant des ulvanes sulfatés selon l'invention. Les extraits selon l'invention comprennent préférentiellement au moins 70% d'ulvanes sulfatés en masse par rapport au poids total des matières sèches de 20 l'extrait, préférentiellement au moins 80%. Ces extraits peuvent contenir éventuellement d'autres constituants. Préférentiellement ces extraits ne contiennent pas de lipides et contiennent très peu voir pas de protéines, de préférence moins de 1% de protéine en masse par rapport à la masse sèche de l'extrait, ce qui limite fortement les risques d'allergie. L'invention a aussi pour objet un procédé d'obtention d'ulvanes sulfatés selon le procédé qui 25 comprend au moins les étapes suivantes : - extraction d'au moins un ulvane à partir d'ulves, - sulfatation du ou des ulvane(s) extrait(s) de façon à obtenir un ou des ulvane(s) présentant un taux de sulfates d'au moins 15% par rapport à la masse totale de(s) ulvane(s). L'extraction d'ulvanes ou d'un extrait comprenant des ulvanes à partir d'ulve peut-être 30 réalisée par tout procédé adapté, préférentiellement par un procédé de fractionnement tel que décrit dans le brevet FR2998894, à savoir un procédé comprenant la mise en oeuvre des étapes suivantes : 3047179 7 - éventuellement dessalage des algues, et/ou broyage des algue(s). - diffusion à l'eau d'ulves, - filtration des pulpes récupérées après l'étape a) de façon à obtenir un jus de pressage d'une part et des pulpes de pressage d'autre part, 5 - ultrafiltration du jus de pressage de façon à obtenir un rétentat d'une part et un perméat d'autre part, - déminéralisation du rétentat d'ultrafiltration et décantation du rétentat déminéralisé, ou décantation du rétentat d'ultrafiltration et d) déminéralisation des produits issus de la décantation, 10 - récupération des protéines végétales présentes dans les algues d'une part et des polysaccharides sulfatés présents dans les algues d'autre part. Les ulvanes obtenus sont naturellement sulfatés et présentent un taux de sulfatation inférieur à 15%. Ils sont ensuite sulfatés. La sulfatation est préférentiellement réalisée à l'aide du complexe sulfure trioxyde pyridine 15 dans le DMF et la pyridine, en particulier par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - l'extrait d'ulve contenant l'ulvane est dissout à hauteur de 30 à 50 g/L dans un mélange DMF/pyridine (5 à 10 :1 (v/v)), - le mélange est chauffé à une température comprise entre 50 et 70°C, - la sulfatation est opérée par ajout progressif de 1.5 à 5 g de complexe S03-pyridine 20 pendant 1 à 3 heures à une température comprise entre 50 et 70°C sous agitation, - le mélange est ensuite laissé entre 1 et 3 heures à une température comprise entre 50 et 70°C sous agitation, - après refroidissement à température ambiante, le mélange est centrifugé entre 3000 et 7000g pendant 5 à 15 min à une température comprise entre 2 et 6°C, 25 - le surnageant est ensuite éliminé et le culot est dissout dans une solution de NaOH 2,5 M puis mélangé avec de l'éthanol absolu pour atteindre une concentration finale en éthanol de 70 à 90% (v/v), - après 10 à 14 heures à une température comprise entre 2 et 6°C sous agitation, le précipité obtenu est isolé par centrifugation (entre 8 000 et 12 000g, 5 à 15 min, 2 à 30 6°C) et dissout dans de l'eau ultrapure, - la solution contenant l'ulvane sulfaté est finalement dialysée pendant 6 à 8 jours contre de l'eau ultrapure (seuil de coupure entre 0,5 et 1,5 kDa) puis lyophilisée. 3047179 8 Les ulvanes sulfatés selon l'invention ou les extraits en contenant se présentent préférentiellement sous forme liquide mais peuvent être lyophilisés ou séchés pour se présenter sous forme de poudre. Les ulvanes sulfatés ou les extraits contenant ces ulvanes sulfatés sont préférentiellement 5 intégrés dans des compositions. L'invention vise en particulier des compositions comprenant au moins 1% d'ulvane ou d'extrait en masse par rapport à la masse totale de la composition. Ces compositions peuvent se présenter sous toute forme, préférentiellement sous forme liquide injectable. Les ulvanes sulfatés ou extraits en contenant présentent une forte activité anticoagulante, sur 10 les trois voies de la coagulation. L'activité anticoagulante des ulvanes sulfatés selon l'invention est supérieure à celle des ulvanes naturels avec un faible taux de sulfates, n'ayant pas subi de sulfatation. En outre, de façon étonnante la sulfatation ne confère pas de cytotoxicité élevée au produit selon l'invention contrairement à la sulfatation d'autres polysaccharides. 15 L'invention vise par conséquent les ulvanes sulfatés ou les extraits en contenant, seuls ou intégrés dans des compositions comme médicament, en particulier comme médicament anticoagulant et/ou antithrombotique. Les ulvanes sulfatés selon l'invention sont particulièrement utiles dans la prévention et/ou le traitement des troubles thromboemboliques, en particulier les maladies thromboemboliques veineuses ou artérielles, en 20 permettant ainsi de préserver l'intégrité des organes et prévenir toute lésion grave qui pourrait se révéler irréversible. L'invention est à présent illustrée par un exemple d'ulvane sulfaté selon l'invention, d'un extrait en contenant, de son procédé d'obtention et de résultats d'essais comparatifs avec des anticoagulants de référence et avec la même ulvane non sulfaté chimiquement. Exemple 1 : Ulvane non sulfatée chimiquement et extrait en contenant 25 Le procédé comprend les étapes suivantes : a) Lavage des algues à traiter, b) Broyage des algues lavées, c) Diffusion à l'eau des algues lavées, dans un volume d'eau réduit, d) Filtration des pulpes récupérées après l'étape a) de façon à obtenir un jus de pressage d'une 30 part et des pulpes de pressage d'autre part, 3047179 9 e) Ultrafiltration du jus de pressage de façon à obtenir un rétentat d'une part et un perméat d'autre part, f) Déminéralisation du rétentat d'ultrafiltration puis décantation du rétentat déminéralisé, g) Récupération des protéines végétales présentes dans les algues d'une part et des 5 polysaccharides sulfatés présents dans les algues d'autre part, h) Neutralisation de l'extrait de polysaccharides sulfatés et lyophilisation. Le protocole est décrit en suivant. 1 kg d'algues sèches de type Ulva sp. est trempé dans 20 L d'eau brute pendant 10 min à température ambiante. Les algues sont ensuite essorées et pressées à l'aide d'un cône en tissu 10 afin de retirer le plus d'eau possible. Les algues lavées sont ensuite broyées dans 5 L d'eau déminéralisée à 80°C à l'aide d'un broyeur à couteau jusqu'à l'obtention de particules de moins de 2 mm de diamètre. Les 5 L de broyat sont transférés dans une cuve thermostatée à 80°C contenant 10 L d'eau déminéralisée chaude. L'extraction est réalisée sous agitation constante à l'aide d'un agitateur à pales à une vitesse de rotation de 10 tours/min pendant 15 2h. Les pulpes sont ensuite soutirées de la cuve, filtrées et pressées à l'aide d'un cône en tissu afin d'extraire le plus de jus possible. Environ 13 litres de jus d'extraction sont récupérés puis filtrés via une unité d'ultrafiltration équipée d'une membrane de type Kerasep KBW 15 kDa de Novasep Process. La filtration est réalisée à 80°C, 5 bars et à un débit de circulation de 450 L/h, soit une vitesse de circulation de 5 m/s. La filtration est poursuivie jusqu'à obtenir un 20 rétentat qui est alors soutiré de l'unité. Un volume de 1,5 L de ce rétentat est ensuite déminéralisés par passage sur une colonne contenant 100 mL de résine anionique forte de type Amberlite FPA 98 sous forme OH-, montée en série avec une colonne contenant 200 mL de résine cationique forte de type Amberlite IR 120 Na sous forme H. La circulation s'effectue à l'aide d'une pompe péristaltique à un débit de 2 BV/h. Le produit désionisé est ensuite laissé 25 à décanter dans une éprouvette plongée dans un bain marie à 180°C pendant 1,5 h. Le surnageant purifié riche en polysaccharides sulfatés est alors séparé du culot protéique précipité par centrifugation à 5000 g pendant 15 min. L'extrait est enfin neutralisé par ajout de NaOH jusqu'à l'obtention d'un pH de 7 puis lyophilisé, ce qui permet d'obtenir le produit tel que décrit ci-dessous. La composition de la solution obtenue est présentée dans le tableau ci-dessous : 3047179 10 L'extrait obtenu présente une masse molaire moyenne en masse (Mw) comprise entre 50 000 et 60 000 Da et un degré de polymérisation de 140 (tableau 2). L'indice de polydispersité est assez faible. Masses molaire moyennes, degré de polymérisation (DP) et indice de polydispersité du 5 produit obtenu : Mn (a) Mw (b) DP (c) 1 (d) = li(Nieni) / liNi = li(Nieni2) / li(NiXNA;) = Mn / MO = Mw / Mn 33 241 Da 57 365 Da 139,7 1,73 (a) Masse molaire moyenne en nombre : moyenne des masses molaires pondérée par le nombre de chaînes de chaque longueur. N,: nombre de moles d'espèces polymériques. M,: masse molaire des espèces polymériques. (b) Masse molaire moyenne en masse : moyenne des masses molaires pondérée par la 10 masse de chaînes de chaque longueur. (c) Degré de polymérisation. Mo: masse molaire moyenne des unîtes monomériques. (d) Indice de polydispersité : distribution des masses molaires des différents polysaccharides au sein du polymère. Le spectre RMN 13C de l'extrait est présenté sur le Figure 1A, et le spectre ESI-MS HR est présenté sur la Figure 1B. La masse molaire a été identifiée par HPLC d'exclusion sérique (SEC) avec deux colonnes en série (Figures 2A à 2B). La gamme utilisée est une gamme dextran. Le chromatogramme HPLCSEC est présenté sur la Figure 2C. Le spectre RMN 1F1 est présenté sur la Figure 3A. Exemple 2 : Ulvane sulfaté selon l'invention et extrait en contenant 15 L'extrait d'Ulve contenant les polysaccharides de l'exemple 1 est dissout dans un mélange composé de 10 mL de DMF et 1,4 mL de pyridine. Le mélange est chauffé à 60°C. La sulfatation est opérée par ajout progressif de 3 g de complexe 503-pyridine pendant 2 h à 60°C sous agitation. Le mélange est ensuite laissé 2 h à 60°C sous agitation. Après refroidissement à Sucres Taux de Sulfates Acides Protéine Lipides 23 0 4 à 7 11 34 41 neutres uroniques cendres s % (Minlextrai sec) 3047179 11 température ambiante, le mélange est centrifugé à 5000 g pendant 10 min à 4°C. Le surnageant est ensuite éliminé et le culot est dissout dans 5 mL de solution de NaOH 2,5 M puis mélangé avec 45 mL d'éthanol absolu pour atteindre une concentration finale en éthanol de 90% (v/v). Après 12 h à 4°C sous agitation, le précipité obtenu est isolé par centrifugation 5 (10 000 g, 10 min, 4°C) et dissout dans 60 mL d'eau ultrapure. La solution contenant les ulvanes sulfatés selon l'invention est finalement dialysée pendant 7 jours contre de l'eau ultrapure (seuil de coupure 1 kDa) puis lyophilisée. La composition de la solution obtenue est présentée dans le tableau ci-dessous : Le poids moléculaire des ulvanes sulfatés obtenus est de 50000 à 60000 Da. 10 Le chromatogramme HPLC-SEC (même gamme étalon que pour l'exemple 1 - Figures 2A et 2B) est présenté sur la Figure 4. La masse molaire et le degré de polymérisation sont identiques à ceux de l'exemple 1 (Figure 2C). Le spectre RMN I-H est représenté sur la Figure 3B. Le spectre RMN 1H de l'exemple 2 (invention) sur la Figure 3B présente des pics correspondant 15 à des déplacements chimiques de 2,69, 2,80 et 2,96 ppm qui n'apparaissent pas sur le spectre de l'exemple 1 (art antérieur) sur la Figure 3A. Ces pics correspondent à des hydrogènes de type H-CR2-0-503- et confirment bien une modification de la sulfatation. Efficacité anticoagulante des ulvanes sulfatés selon l'invention Deux types de tests ont été réalisés sur l'exemple 1 correspondant à l'art antérieur (identifié 20 par POL-01-SEPROSYS) et l'exemple 2 correspondant à l'invention (identifié par POL-02-ULR) afin de déterminer leur activité anticoagulante : Des tests enzymatiques ciblant précisément l'activité des extraits sur les deux enzymes centrales de la coagulation : le facteur Xa et la thrombine (facteur lla) (Figure 8). La grande majorité des anticoagulants commerciaux actuels sont des inhibiteurs de ces 25 facteurs de la coagulation ; soit par inhibition directe (exemples : le Pradaxa®, REVENDICATIONS1. Ulvane sulfaté présentant un taux de sulfates supérieur ou égal à 15% en poids par rapport au poids total de l'ulvane. 2. Ulvane sulfaté selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est obtenu par sulfatation d'un ulvane extrait d'ulve. 3. Ulvane sulfaté selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il présente un poids moléculaire compris entre 50 000 et 60 000 Da. 4. Ulvane selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il est dépolymérisé après extraction et sulfatation, et en ce qu'il présente un poids moléculaire compris entre 500 et 50 000 Da. 5. Ulvane selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il présente un taux de sulfates supérieur ou égal à 20% en poids par rapport au poids total de l'ulvane. 6. Ulvane selon l'une des revendications 1 à 5 ou extrait d'ulve en contenant, pour son application comme médicament. 7. Ulvane selon l'une des revendications 1 à 5 ou extrait d'ulve en contenant, pour son application comme médicament anticoagulant et/ou anti-thrombotique. 8. Ulvane selon l'une des revendications 1 à 5 ou extrait d'ulve en contenant, pour son application dans la prévention ou le traitement des troubles thrombo-emboliques. 9. Extrait d'ulve comprenant un ulvane sulfaté selon l'une des précédentes revendications. 10. Extrait d'ulve selon la précédente revendication, caractérisé en ce qu'il comprend au moins 70% en poids de l'ulvane sulfaté selon l'une des revendications 1 à 8 par rapport au poids total de l'extrait sec. 11. Extrait d'ulve selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce qu'il comprend moins de 1% en poids de protéines par rapport au poids total de l'extrait sec. 12. Composition comprenant au moins un ulvane selon l'une des revendications 1 à 8 ou un extrait selon l'une des revendications 9 à 11. 13. Composition selon la précédente revendication, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins 1% d'ulvane ou d'extrait en masse par rapport à la masse totale de la composition. 3047179 18 14. Composition selon l'une des revendications 12 ou 13 caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de solution injectable. 15. Procédé d'obtention d'un ulvane selon l'une des revendications 1 à 8, comprenant au moins les étapes suivantes : 5 - Extraction d'au moins un ulvane à partir d'ulves - Sulfatation des ulvanes de façon à obtenir des ulvanes présentant un taux de sulfates d'au moins 15% par rapport à la masse totale des ulvanes. 16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que la sulfatation est réalisée à l'aide du complexe sulfure pyridine dans le DMF et la pyridine. 10 17. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que la sulfatation est réalisée par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - l'extrait d'ulve contenant l'ulvane est dissout à hauteur de 30 à 50 g/L dans un mélange DMF/pyridine (5 à 10 :1 (v/v)), - le mélange est chauffé à une température comprise entre 50 et 70°C, 15 - la sulfatation est opérée par ajout progressif de 1.5 à 5 g de complexe S03-pyridine pendant 1 à 3 heures à une température comprise entre 50 et 70°C sous agitation, - le mélange est ensuite laissé entre 1 et 3 heures à une température comprise entre 50 et 70°C sous agitation, - après refroidissement à température ambiante, le mélange est centrifugé entre 3000 20 et 7000g pendant 5 à 15 min à une température comprise entre 2 et 6°C, - le surnageant est ensuite éliminé et le culot est dissout dans une solution de NaOH 2,5 M puis mélangé avec de l'éthanol absolu pour atteindre une concentration finale en éthanol de 70 à 90% (v/v) - après 10 à 14 heures à une température comprise entre 2 et 6°C sous agitation, le 25 précipité obtenu est isolé par centrifugation (entre 8 000 et 12 000g, 5 à 15 min, 2 à 6°C) et dissout dans de l'eau ultrapure, - la solution contenant l'ulvane sulfaté est finalement dialysée pendant 6 à 8 jours contre de l'eau ultrapure (seuil de coupure entre 0,5 et 1,5 kDa) puis lyophilisée. 18. Procédé selon l'une des revendications 15 à 17, caractérisé en ce que l'extraction à partir d'ulve est réalisée par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - diffusion à l'eau d'ulves, 3047179 19 - filtration des pulpes récupérées après l'étape a) de façon à obtenir un jus de pressage d'une part et des pulpes de pressage d'autre part, - ultrafiltration du jus de pressage de façon à obtenir un rétentat d'une part et un permeat d'autre part, 5 - déminéralisation du rétentat d'ultrafiltration et décantation du rétentat déminéralisé, ou décantation du rétentat d'ultrafiltration et d) déminéralisation des produits issus de la décantation, - récupération des protéines végétales présentes dans les algues d'une part et des polysaccharides sulfatés présents dans les algues d'autre part, 10 19. Procédé selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'avant l'étape de diffusion à l'eau il comprend également l'une et/ou l'autre des étapes suivantes : - dessalage des algues, et/ou - broyage des algue(s).