Brevet FR3049060A1 — publié le 20170922

Dispositif de préparation d'un échantillon sanguin Domaine technique de l'invention La présente invention se rapporte à un dispositif de préparation d'un échantillon sanguin et à un système employant ledit dispositif pour la préparation d'un échantillon sanguin. L'invention se rapporte également à un procédé de préparation d'un échantillon sanguin mis en oeuvre avec ledit dispositif. Etat de la technique L'analyse protéomique basée sur la spectrométrie de masse pour détecter et doser des protéines dans des échantillons biologiques comme le plasma est de plus en plus répandue car particulièrement performante. Cependant, pour que cette analyse soit optimale et fiable, elle nécessite que l'échantillon sanguin analysé soit parfaitement stable. Or il s'avère par exemple que la durée qui s'écoule entre la collecte d'un échantillon sanguin, sa préparation (pour l'obtention de la fraction sérique ou plasmatique) et son transfert vers un laboratoire d'analyse est très variable, donnant ainsi des résultats d'analyse de qualités diverses. En effet, le processus naturel de dégradation des protéines d'intérêt présentes dans le plasma peut être plus ou moins avancé selon la durée qui s'écoule entre la collecte de l'échantillon et son transfert vers le laboratoire d'analyse, ce qui entraîne une certaine variabilité dans les résultats obtenus. Le but de l'invention est de proposer un dispositif qui est employé pour préparer et stabiliser un échantillon sanguin, ce dispositif permettant de traiter efficacement un échantillon sanguin en réduisant la durée qui s'écoule entre le prélèvement sanguin et la stabilisation de l'échantillon, de manière à obtenir des résultats de bonne qualité et parfaitement reproductibles. Exposé de l'invention Ce but est atteint par un dispositif de préparation d'un échantillon sanguin, comportant une carte micro-fluidique qui comporte : - Un canal d'injection par lequel peut être injecté ledit échantillon sanguin, 3049060 2 - Une première chambre dans laquelle débouche ledit canal d'injection, ladite première chambre étant dédiée à la mise en oeuvre d'une opération d'extraction de protéines à analyser présentes dans ledit échantillon sanguin, 5 - Une deuxième chambre reliée à ladite première chambre de manière à recevoir un premier échantillon comportant les protéines à analyser extraites dans ladite première chambre, ladite deuxième chambre étant dédiée à la mise en oeuvre d'une opération de digestion des protéines à analyser présentes en vue d'obtenir un deuxième échantillon incluant des 10 peptides digérés et des protéines non digérées, - Une troisième chambre reliée à ladite deuxième chambre de manière à recevoir ledit deuxième échantillon incluant les peptides digérés et les protéines non digérées, ladite troisième chambre étant dédiée à la mise en oeuvre d'une opération de purification et de stabilisation des peptides 15 digérés. Selon une première configuration, le dispositif comporte un support de déplétion présent dans la première chambre pour capturer des protéines majoritaires présentes dans ledit échantillon sanguin. Dans cette première configuration, trois variantes de réalisation peuvent être 20 envisagées, prises seule ou en combinaison : - Selon une première variante de réalisation, le support de déplétion comporte des billes présentes dans la première chambre et greffées avec un ou plusieurs composants de capture adaptés aux protéines majoritaires à capturer. 25 - Selon une deuxième variante de réalisation, le support de déplétion comporte des piliers positionnés dans la première chambre et greffées avec un ou plusieurs composants de capture adaptés aux protéines majoritaires à capturer. - Selon une troisième variante de réalisation, la première chambre est 30 réalisée sous la forme d'un serpentin dont les surfaces fonctionnalisées forment le support de déplétion. Selon une deuxième configuration, le dispositif comporte un support d'enrichissement présent dans la première chambre pour fixer et enrichir les protéines à 35 analyser présentes dans l'échantillon sanguin. 3049060 3 De même, dans cette deuxième configuration, plusieurs variantes peuvent être envisagées, prises seule ou en combinaison : - Selon une première variante de réalisation, le support d'enrichissement comporte des billes présentes dans la première chambre et greffées avec 5 un ou plusieurs composants d'enrichissement adaptés aux protéines à enrichir. - Selon une deuxième variante de réalisation, le support d'enrichissement comporte des piliers positionnés dans la première chambre et greffées avec un ou plusieurs composants d'enrichissement adaptés aux protéines à 10 enrichir. - Selon une troisième variante de réalisation, la première chambre est réalisée sous la forme d'un serpentin dont les surfaces forment le support d'enrichissement. 15 Dans la deuxième chambre, plusieurs solutions peuvent être envisagées pour l'opération de digestion. Ces solutions sont les suivantes, prises seule ou en combinaison : - Le dispositif comporte un canal débouchant dans la deuxième chambre, destiné à une injection d'une enzyme ou d'un mélange d'enzymes pour la 20 mise en oeuvre de l'opération de digestion. - La deuxième chambre comporte une surface recouverte au moins partiellement d'une enzyme ou d'un mélange d'enzymes pour la mise en oeuvre de l'opération de digestion. - La deuxième chambre comporte un volume interne destiné à stocker une 25 enzyme ou un mélange d'enzymes sous forme lyophilisée pour la mise en oeuvre de l'opération de digestion. Selon une autre particularité, le dispositif comporte des moyens de séparation agencés pour séparer le plasma ou sérum des cellules sanguines présentes dans 30 l'échantillon sanguin. Selon une autre particularité, le dispositif comporte une colonne de chromatographie liquide en phase inverse logée dans la troisième chambre pour accrocher, stabiliser et/ou séparer les peptides digérés. Selon une autre particularité, le dispositif comporte : 35 - Une première vanne agencée sur le canal d'injection pour commander une ouverture ou une fermeture dudit canal, 3049060 4 - Une deuxième vanne agencée pour commander le transfert du premier échantillon de la première chambre vers la deuxième chambre, - Une troisième vanne agencée pour commander le transfert du deuxième échantillon de la deuxième chambre vers la troisième chambre. 5 L'invention concerne un système de préparation d'un échantillon sanguin comportant un automate programmable et un dispositif de préparation d'un échantillon sanguin tel que défini ci-dessus. L'automate programmable comporte une unité de traitement destinée à exécuter des modules logiciels adaptés pour générer des commandes à destination d'actionneurs selon une séquence déterminée en fonction des 10 différentes étapes de préparation de l'échantillon sanguin sur ledit dispositif. L'invention concerne également un procédé de préparation d'un échantillon sanguin, mis en oeuvre dans le dispositif tel que défini ci-dessus, le procédé comportant les étapes suivantes : 15 - Extraction dans la première chambre de protéines à analyser présentes dans ledit échantillon sanguin, - Digestion dans la deuxième chambre des protéines à analyser présentes dans un premier échantillon comportant les protéines à analyser extraites dans ladite première chambre en vue d'obtenir un deuxième échantillon 20 incluant des peptides digérés et des protéines non digérées, - Séparation dans la troisième chambre entre les peptides digérés et les protéines non digérées. Selon une particularité, l'étape d'extraction est réalisée par déplétion des protéines majoritaires ou enrichissement des protéines à analyser présentes dans 25 l'échantillon sanguin. Selon une autre particularité, l'étape de séparation est mise en oeuvre par chromatographie liquide sur une colonne de type phase inverse. 30 Brève description des figures D'autres caractéristiques et avantages vont apparaître dans la description détaillée qui suit faite en regard des dessins annexés dans lesquels : - La figure 1 représente de manière schématique un système de préparation d'un échantillon sanguin, incluant le dispositif de préparation de l'échantillon 35 sanguin selon l'invention. 3049060 5 - La figure 2 représente un diagramme montrant les différentes étapes du procédé de préparation d'un échantillon sanguin, mis en oeuvre à l'aide du dispositif de la figure 1. - Les figures 3A et 3B représentent deux chromatogrammes, issues d'une 5 analyse par spectrométrie de masse réalisée sur des protéines issues respectivement d'une préparation réalisée en partie sur le dispositif de l'invention et d'une préparation réalisée manuellement et de manière classique. 10 Description détaillée d'au moins un mode de réalisation L'invention concerne un dispositif de préparation d'un échantillon sanguin, avant son analyse, par exemple par chromatographie liquide ou par spectrométrie de masse quantitative. Le dispositif de l'invention permettra notamment de préparer et de 15 stocker un échantillon stabilisé destiné à une analyse ultérieure, sans risque de dégradation de l'échantillon. Dans la suite de la description, de manière non limitative, le dispositif de l'invention sera décrit pour une préparation à partir d'un échantillon plasmatique issu de l'échantillon sanguin prélevé sur le patient, mais il faut comprendre qu'il pourrait être 20 employé pour une préparation à partir du sérum issu de l'échantillon. Dans la suite de la description, on entend par chambre un espace définissant un volume fermé non nul ou partiellement fermé dans lequel peut déboucher un ou plusieurs canaux. 25 Le dispositif comporte principalement une carte micro-fluidique qui inclut des canaux et plusieurs chambres contribuant chacune à la préparation de l'échantillon sanguin avant analyse. Ce dispositif pourra être employé dans un système plus global de préparation sanguin. Ce système comporte notamment un automate programmable 2 qui commande la préparation de l'échantillon sanguin sur la carte. 30 Comme décrit ci-dessus, le dispositif de l'invention comporte une carte micro- fluidique 1, ayant par exemple le format d'une carte de crédit, dans laquelle toutes les étapes menant à la préparation et à la stabilisation de l'échantillon avant son analyse peuvent être menées. 3049060 6 La carte 1 est par exemple placée dans un logement adapté de l'automate programmable. L'automate programmable 2 comporte une unité de traitement agencée pour commander toutes les étapes nécessaires à la préparation de l'échantillon sanguin sur ladite carte. L'unité de traitement 2 exécute des modules logiciels destinés chacun à 5 commander une ou plusieurs de ces étapes. Ces modules logiciels sont exécutés pour générer des commandes de sortie à destination de différents actionneurs. Ces actionneurs peuvent être par exemple des micro-pompes, des systèmes d'agitation magnétique, des systèmes de chauffage, des systèmes de refroidissement, des systèmes d'émission d'ultrasons ou micro-ondes, des vannes micro-fluidiques. Ces 10 différents actionneurs font par exemple partie du système de l'invention employé pour la préparation de l'échantillon sanguin dans la carte. Cette carte micro-fluidique 1 est par exemple réalisée à l'aide de deux plaques collées l'une sur l'autre et sur chacune desquelles sont formés les motifs formant les chambres et les chemins fluidiques de la carte. La carte 1 est par exemple réalisée dans 15 un matériau transparent de type PMMA, polycarbonate, COC (pour "Cylcic Olefin Copolymer"). En référence à la figure 1, la carte comporte principalement : - Un canal d'injection 10 par lequel peut être injecté ledit échantillon sanguin, 20 - Une première chambre 11 dans laquelle débouche ledit canal d'injection, - Une deuxième chambre 12 située en aval de la première chambre, - Une troisième chambre 13 située en aval de la deuxième chambre. Des vannes positionnées de manière adaptée sur la carte 1 sont commandées 25 par l'automate programmable 2 pour contrôler les différentes étapes de préparation de l'échantillon sanguin sur la carte. Le dispositif comporte ainsi par exemple au moins : - Une première vanne V1 positionnée sur le canal d'injection pour contrôler l'injection du flux de liquide formé par l'échantillon sanguin à préparer dans la première chambre. 30 - Une deuxième vanne V2 positionnée sur un canal reliant la première chambre à la deuxième chambre et destinée à contrôler le passage de liquide de la première chambre vers la deuxième chambre. 3049060 7 - Une troisième vanne V3 positionnée sur un canal reliant la deuxième chambre à la troisième chambre et destinée à contrôler le passage de liquide de la deuxième chambre vers la troisième chambre. - Une ou plusieurs autres vannes V4, V5, V6 destinées chacune à 5 commander l'injection vers l'une desdites chambres d'un composant nécessaire à la préparation de l'échantillon sanguin ou à évacuer des résidus. Par ailleurs, des micro-pompes (non représentées) sont également commandées par l'automate programmable 2 pour faire passer l'échantillon d'une 10 chambre à l'autre, par aspiration ou injection. L'automate programmable 2 comporte ainsi plusieurs modules de sortie destinés chacun à la commande d'un actionneur distinct, tel que chaque vanne ou chaque micro-pompe. 15 En référence à la figure 1 et à la figure 2, le dispositif de l'invention et son utilisation pour la mise en oeuvre d'un procédé de préparation d'un échantillon sanguin sont explicités ci-dessous. Les vannes V1, V2, V3, V4, V5, V6 sont toutes initialement à l'état fermé. De manière plus précise, le canal d'injection 10 est destiné à recevoir 20 l'échantillon sanguin prélevé sur le patient. Le tube renfermant l'échantillon sanguin sera par exemple connecté sur l'entrée 100 du canal d'injection. Cette entrée 100 pourra être réalisée selon différentes variantes de réalisation selon le type de connexion fluidique choisie. Différents types de connexion pourront en effet être envisagés, employant par exemple un module de type « Saf-T Wing » (marque déposée). L'injection de 25 l'échantillon sanguin dans le canal 10 sera par exemple contrôlée par la première vanne V1 commandée par l'automate et activée par une micro-pompe commandée par l'automate. L'échantillon sanguin initial prélevé au bras du patient sera par exemple de 2 à 10 millilitres. L'analyse sera effectuée sur quelques microlitres à 50 pl de plasma (ou de sérum) contenu dans cet échantillon. 30 Le canal d'injection 10 débouche dans la première chambre 11 formée sur la carte 1. Cette première chambre 11 est dédiée à l'extraction des protéines d'intérêt du plasma de l'échantillon sanguin. Cette extraction pourra être réalisée : 3049060 8 - Par déplétion des protéines majoritaires présentes dans le plasma, ou - Par enrichissement par affinité des protéines plasmatiques ciblées. Dans la première étape El définie sur la figure 2, pour effectuer la séparation 5 entre le plasma et les cellules sanguines dans l'échantillon sanguin, plusieurs solutions peuvent être envisagées : - Une première solution consiste à la réaliser dans la première chambre 11 en utilisant un polymère, par exemple un polymère de type Dacron (marque déposée) qui permet une séparation par filtration entre le plasma et les 10 cellules. - Une deuxième solution consiste à employer une membrane filtrante de type Vivid (marque déposée) placée sur le chemin du canal d'injection 10 ou directement sur la cartouche qui comporte initialement l'échantillon sanguin à analyser et qui est positionnée sur l'entrée 100 du canal lors de l'injection 15 de l'échantillon sanguin. - Une troisième solution consiste à employer un micro-canal capillaire 10 dans lequel l'échantillon sanguin est injecté. La deuxième étape E2 définie sur la figure 2 est mise en oeuvre dans la première chambre 11. Elle consiste à réaliser une déplétion des protéines majoritaires 20 présentes dans l'échantillon plasmatique pour les capturer ou un enrichissement des protéines à analyser présentes dans cet échantillon. Dans la première chambre 11, l'opération de déplétion des protéines majoritaires présentes dans le plasma est par exemple réalisée en employant un support permettant la capture d'une ou de plusieurs protéines majoritaires présentes dans 25 l'échantillon plasmatique, comme par exemple l'albumine. Comme représenté sur la figure 1, ce support sera par exemple des billes magnétiques 110 logées et maintenues dans la première chambre 11 ou injectées via un canal adapté à l'intérieur de la chambre par une commande envoyée par l'automate programmable 2. Les billes magnétiques 110 employées seront greffées avec des composants de capture des protéines 30 majoritaires afin de les piéger dans la première chambre. Il s'agira par exemple : - De billes magnétiques greffées avec du Cibacron Blue pour la capture de l'albumine, et/ou 3049060 9 - De billes magnétiques greffées avec de la protéine A pour la capture des immunoglobulines G, et/ou - De billes greffées avec des anticorps ou ligands pour la capture spécifique des protéines majoritaires du plasma. 5 En variante de réalisation ou en complément aux billes 110 employées dans la première chambre 11, le support de capture peut comporter des piliers positionnés dans la première chambre 11, dont la surface est enduite d'un ou plusieurs des composants de capture évoqués ci-dessus. Les piliers sont fixes dans la chambre et positionnés de manière judicieuse pour que l'échantillon plasmatique s'écoule entre les piliers et 10 viennent au contact de ceux-ci pour capter un maximum des protéines majoritaires. En complément ou remplacement des billes 110 et/ou des piliers évoqués ci-dessus, les surfaces de la chambre peuvent être enduites de l'un des composants de capture évoqués ci-dessus afin de piéger les protéines majoritaires. La forme et la configuration de la première chambre 11 sont alors optimisées pour maximiser les 15 surfaces d'échange entre l'échantillon plasmatique et les parois qui définissent le volume interne de la chambre. Avantageusement, pour maximiser les surfaces d'échange, la première chambre est réalisée sous la forme d'un canal en serpentin. On comprend donc que les différents moyens et agencements prévus sur la carte et décrits ci-dessus pour piéger les protéines majoritaires peuvent être combinés 20 entre eux de manière judicieuse en vue d'obtenir un meilleur résultat. Il s'agira par exemple d'utiliser un canal en serpentin dont les surfaces sont enduites d'un ou plusieurs composants de capture des protéines majoritaires, ce canal débouchant dans la première chambre 11 dans laquelle sont placés des billes et/ou des piliers tels que décrits ci-dessus. 25 Dans le cas où une opération d'enrichissement des protéines minoritaires ciblées est réalisée en remplacement d'une opération de déplétion des protéines majoritaires présentes dans l'échantillon plasmatique, le support d'enrichissement est greffé avec des anticorps spécifiques. Comme pour la déplétion, le support peut être constitué et agencé selon l'une des variantes décrites ci-dessus pour l'opération de 30 déplétion. Après des lavages, la fraction fixée sur le support d'enrichissement employé sera éluée vers la deuxième chambre 12. Une fois l'opération de déplétion ou d'enrichissement effectuée, un échantillon plasmatique qui contient les protéines d'intérêt est ensuite transféré dans la deuxième 3049060 10 chambre de la carte, par une commande d'ouverture de la deuxième vanne V2 et une commande d'une micro-pompe pour aspirer ou injecter l'échantillon vers la deuxième chambre 12. Il s'agit alors de la troisième étape E3 de la préparation de l'échantillon sanguin qui consiste en une opération de digestion des protéines ciblées. 5 La deuxième chambre 12 est dédiée à la digestion des protéines ciblées contenues dans l'échantillon plasmatique présent. Pour effectuer cette digestion, l'automate programmable 2 commande la vanne V5 à l'ouverture et une micro-pompe pour injecter une enzyme ou un mélange d'enzymes protéolytiques via un canal 120 spécifique qui débouche dans ladite chambre 12. L'automate programmable commande 10 ensuite un système d'agitation magnétique et un système de chauffage pour chauffer la chambre à une température déterminée afin d'assurer la réaction de digestion des protéines. En variante de réalisation ou en complément, la surface de la deuxième chambre pourra être enduite de l'enzyme ou du mélange d'enzymes nécessaire à la digestion. Dans une autre variante de réalisation ou en complément, on peut imaginer 15 que l'enzyme ou le mélange d'enzymes soit présent dans l'espace formé par la deuxième chambre, par exemple sous une forme lyophilisée. Une fois l'opération de digestion terminée dans la deuxième chambre 12, l'échantillon plasmatique qui contient alors des peptides digérés et des protéines non 20 digérées est transféré dans la troisième chambre 13. L'automate 2 envoie une commande d'ouverture à la troisième vanne V3 et une commande à une micro-pompe pour transférer l'échantillon plasmatique vers la troisième chambre 13. Il s'agit alors de la quatrième étape E4 du procédé de préparation de l'échantillon sanguin. La troisième chambre est dédiée à l'accrochage des peptides digérés en vue 25 de les séparer et de les purifier. Pour cela, on utilise par exemple une colonne de chromatographie liquide, phase inverse, par exemple de type C4 ou C18 sur laquelle les peptides digérés sont retenus et peuvent être lavés puis stabilisés. Un liquide de lavage peut être injecté dans la troisième chambre 13 via un canal 130 formé sur la carte et contrôlé par une vanne V6. En complément ou en variante de réalisation, il est possible 30 de mettre en oeuvre une opération d'ultra-filtration qui permet de retenir les protéines non digérées et de ne sélectionner que les peptides digérés en vue de leur stabilisation. Ce filtre sera par exemple positionné en sortie de la deuxième chambre 12. L'établissement d'une pression pourra s'avérer nécessaire pour pousser l'échantillon à travers ce filtre. 3049060 11 Lors de cette quatrième étape E4, les peptides digérés sont stabilisés dans la carte. La stabilisation peut être réalisée par différentes méthodes, par exemple par fixation sur la résine type C4 ou C18, par séchage, par congélation... Pour les stabiliser, l'automate programmable 2 envoie une commande à un système de refroidissement ou 5 à un système de séchage par chauffage ou par passage d'air, agencé pour agir sur la troisième chambre en vue de stabiliser les peptides présents. Une fois les peptides stabilisés, ceux-ci peuvent être conservées dans la carte, dans la troisième chambre 13 ou dans une chambre de stockage spécifique. 10 Pour leur analyse, par exemple par spectrométrie de masse, les peptides qui ont été stabilisés (par séchage, congélation ou toute autre méthode adaptée...) sont élues de la carte 1 ou sont directement chargés sur une résine ou une colonne de chromatographie liquide en phase inverse de type C4 ou C18 présente dans la troisième chambre. 15 Le principe de l'invention qui consiste à employer une même carte pour effectuer toutes les étapes de préparation de l'échantillon sanguin présente de nombreux avantages et permet d'obtenir des résultats particulièrement probants. On a en effet constaté que la quantité éluée et analysable des différents peptides issus de la digestion 20 des protéines d'intérêt ciblés est bien plus importante lorsque la préparation a été effectuée de manière automatique sur un seul dispositif conforme à l'invention qu'à la suite de différentes étapes réalisées successivement manuellement. Les figures 4A et 4B permettent de se rendre compte de la qualité des résultats obtenus. L'intensité des pics de chromatographie sont bien plus importants pour les peptides analysés après une 25 stabilisation sur le dispositif de l'invention (figure 4A) que pour des peptides analysés après une préparation manuelle classique. REVENDICATIONS1. Dispositif de préparation d'un échantillon sanguin, caractérisé en ce qu'il comporte une carte (1) micro-fluidique qui comporte : - Un canal d'injection (10) par lequel peut être injecté ledit échantillon sanguin, - Une première chambre (11) dans laquelle débouche ledit canal d'injection, ladite première chambre étant dédiée à la mise en oeuvre d'une opération d'extraction de protéines à analyser présentes dans ledit échantillon sanguin, - Une deuxième chambre (12) reliée à ladite première chambre de manière à recevoir un premier échantillon comportant les protéines à analyser extraites dans ladite première chambre, ladite deuxième chambre étant dédiée à la mise en oeuvre d'une opération de digestion des protéines à analyser présentes en vue d'obtenir un deuxième échantillon incluant des peptides digérés et des protéines non digérées, - Une troisième chambre (13) reliée à ladite deuxième chambre de manière à recevoir ledit deuxième échantillon incluant les peptides digérés et les protéines non digérées, ladite troisième chambre étant dédiée à la mise en oeuvre d'une opération de purification et de stabilisation des peptides digérés. 2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte un support de déplétion présent dans la première chambre (11) pour capturer des protéines majoritaires présentes dans ledit échantillon sanguin. 3. Dispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que le support de déplétion comporte des billes (110) présentes dans la première chambre et greffées avec un ou plusieurs composants de capture adaptés aux protéines majoritaires à capturer. 4. Dispositif selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que le support de déplétion comporte des piliers positionnés dans la première chambre (11) et greffées avec un ou plusieurs composants de capture adaptés aux protéines majoritaires à capturer. 5. Dispositif selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que la première chambre (11) est réalisée sous la forme d'un serpentin dont les surfaces fonctionnalisées forment le support de déplétion. 3049060 13 6. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte un support d'enrichissement présent dans la première chambre (11) pour fixer et enrichir les protéines à analyser présentes dans l'échantillon sanguin. 7. Dispositif selon la revendication 6, caractérisé en ce que le support 5 d'enrichissement comporte des billes présentes dans la première chambre et greffées avec un ou plusieurs composants d'enrichissement adaptés aux protéines à enrichir. 8. Dispositif selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que le support d'enrichissement comporte des piliers positionnés dans la première 10 chambre et greffées avec un ou plusieurs composants d'enrichissement adaptés aux protéines à enrichir. 9. Dispositif selon l'une des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que la première chambre (11) est réalisée sous la forme d'un serpentin dont les surfaces forment le support d'enrichissement. 15 10. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il comporte un canal (120) débouchant dans la deuxième chambre (12), destiné à une injection d'une enzyme ou d'un mélange d'enzymes pour la mise en oeuvre de l'opération de digestion. 11. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que la 20 deuxième chambre comporte une surface recouverte au moins partiellement d'une enzyme ou d'un mélange d'enzymes pour la mise en oeuvre de l'opération de digestion. 12. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que la deuxième chambre comporte un volume interne destiné à stocker une 25 enzyme ou un mélange d'enzymes sous forme lyophilisée pour la mise en oeuvre de l'opération de digestion. 13. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce qu'il comporte des moyens de séparation agencés pour séparer le plasma et les cellules sanguines présentes dans l'échantillon sanguin. 30 14. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce qu'il comporte une colonne de chromatographie liquide en phase inverse logée dans la troisième chambre pour accrocher, stabiliser et/ou séparer les peptides digérés. 15. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé en ce qu'il comporte : 3049060 14 - Une première vanne (V1) agencée sur le canal d'injection pour commander une ouverture ou une fermeture dudit canal, - Une deuxième vanne (V2) agencée pour commander le transfert du premier échantillon de la première chambre vers la deuxième chambre, 5 - Une troisième vanne (V3) agencée pour commander le transfert du deuxième échantillon de la deuxième chambre vers la troisième chambre. 16. Système de préparation d'un échantillon sanguin comportant un automate programmable, caractérisé en ce qu'il comporte un dispositif de préparation d'un échantillon sanguin conforme à l'une des revendications 1 à 15 et en 10 ce que l'automate programmable comporte une unité de traitement destinée à exécuter des modules logiciels adaptés pour générer des commandes à destination d'actionneurs selon une séquence déterminée en fonction des différentes étapes de préparation de l'échantillon sanguin sur ledit dispositif. 17. Procédé de préparation d'un échantillon sanguin, caractérisé en ce qu'il est 15 mis en oeuvre dans le dispositif tel que défini dans l'une des revendications 1 à 15 et en ce qu'il comporte les étapes suivantes : - Extraction dans la première chambre de protéines à analyser présentes dans ledit échantillon sanguin, - Digestion dans la deuxième chambre des protéines à analyser présentes 20 dans un premier échantillon comportant les protéines à analyser extraites dans ladite première chambre en vue d'obtenir un deuxième échantillon incluant des peptides digérés et des protéines non digérées, - Séparation dans la troisième chambre entre les peptides digérés et les protéines non digérées. 25 18. Procédé selon la revendication 17, caractérisé en ce que l'étape d'extraction est réalisée par déplétion des protéines majoritaires du plasma ou enrichissement des protéines à analyser. 19. Procédé selon la revendication 17 ou 18, caractérisé en ce que l'étape de séparation est mise en oeuvre par chromatographie liquide sur une colonne 30 de type phase inverse.