Brevet FR3042121A1 — publié le 20170414

- 1 - Domaine technique La présente invention concerne une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une séquence d'acide nucléique nue codant au moins un néoantigène associé à une cellule cancéreuse, un poxvirus, et un inhibiteur de checkpoint immunitaire. La présente invention concerne également l'utilisation des compositions selon l'invention pour le traitement du cancer. 10 Technique antérieure Traditionnellement, dans le cadre des pathologies tumorales, les traitements consistent en l'utilisation de composés chimiques ou biologiques (chimiothérapie), de rayonnements (radiothérapie) et/ou de la chirurgie. Bien que 15 d'immenses progrès aient été observés dans les dernières années avec des thérapies ciblées mettant notamment en oeuvre des anticorps monoclonaux ou d'autres molécules ciblant des récepteurs spécifiques, on observe toujours une mortalité importante et d'autres voies thérapeutiques sont toujours 20 envisagées afin de faire diminuer la mortalité associée et/ou les effets secondaires liés à ces pathologies et à leurs traitements. Parmi les nouvelles voies thérapeutiques envisagées, on peut notamment citer la thérapie génique et l'immunothérapie. 25 L'idée d'immuniser de façon préventive ou contre des cellules cancéreuses préexistantes est basée sur tumeurs induites par une 30 infection virale, des protéines virales. Au sein de la tumeur l'expression de ces protéines n'entraine pas la production d'une réponse immunitaire efficace. En effet, la tumeur est l'observation que les cellules cancéreuses expriment des protéines mutées, des protéines glycosilées de façon aberrantes ou, dans le cas de 3042121 - 2 - notamment capable de créer un microenvironnement anergique dans lequel le système immunitaire est inhibé et ne réagit pas de façon optimale à l'encontre de ces antigènes et des cellules qui les expriment même si une réponse immunitaire 5 est induite, elle n'arrive pas à être efficace, dans la tumeur, en raison de l'anergie qui y règne. Il a donc été postulé que l'injection d'antigènes associés aux cellules tumorales en une zone où le système immunitaire est potentiellement actif pourrait entrainer une réaction 10 immunitaire à distance sur le site de la tumeur. Parmi les antigènes associés aux tumeurs, on peut également citer les néoantigènes tumoraux qui résultent de l'accumulation de mutations dans une population cellulaire ce qui conduit à la cancérisation. Ces mutations peuvent 15 résulter par exemple de l'exposition aux rayons ultra-violets ou bien des substances cancérigènes du tabac ou d'autre nature. Certaines sont directement impliquées dans la cancérogenèse, d'autres sont simplement en situation de « passager » mais toutes, du fait du changement d'acide aminé 20 dans la séquence d'une protéine ont le potentiel d'être considérées par le système immunitaire comme différentes du soi et donc antigéniques. Dans le cadre du traitement du cancer, la thérapie génique a été utilisée selon trois axes principaux. Le premier 25 a consisté à injecter sur le site de la tumeur des gènes codant des molécules immunostimulatrices aptes à lever l'inhibition locale du système immunitaire. Par exemple, des gènes codant des interleukines ont été injectés directement à l'intérieur des tumeurs. La production locale 30 d'interleukines était supposée permettre l'activité normale du système immunitaire et la destruction des cellules cancéreuses. Toutefois, les résultats obtenus avec ce type de stratégie ont été décevants. 3042121 - 3 - Un deuxième axe de recherche consiste à injecter dans les cellules cancéreuses des gènes codant des molécules cytotoxiques ou entrainant la production directe ou indirecte de molécules cytotoxiques. Cette stratégie est censée permettre la destruction des cellules tumorales et éventuellement le relargage d'antigènes dans l'organisme permettant ainsi l'activation du système immunitaire. Le dernier axe de recherche a consisté à utiliser des acides nucléiques codant des antigènes associés aux tumeurs 10 pour vacciner les patients. En effet, la production de l'antigène par les cellules du patient, plutôt que leur injection in situ, permet d'envisager une meilleure présentation de l'antigène plus conforme à ce qui se passe au niveau des cellules cancéreuses. Ces séquences d'acides 15 nucléiques ont été également associées à des séquences codant des molécules immunostimulatrices agissant comme activateur de la vaccination. Toutefois, la réponse anti tumorale observée dans le cadre de ces différents traitements, n'est pas meilleure que 20 les réponses cliniques observées dans le cadre de traitements classiques. Il est par conséquent souhaitable de disposer de nouveaux produits et/ou de nouvelles méthodes permettant la mise en oeuvre de traitements anti tumoraux efficaces 25 permettant un contrôle prolongé du volume tumoral et l'augmentation du taux de survie des patients traités. Résumé de l'invention Ainsi la présente invention concerne une composition 30 pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une séquence d'acide nucléique nue codant au moins un néoantigène associé à une cellule cancéreuse , au moins un poxvirus, et un inhibiteur de checkpoint immunitaire. 3042121 - 4 - La combinaison spécifique de ces trois composants permet d'obtenir une réponse immunitaire ciblée et forte contre le ou les néoantigènes codés par la séquence d'acide nucléique nue. Le poxvirus et l'inhibiteur de checkpoint 5 immunitaire permettent d'augmenter la réponse immunitaire tandis que l'utilisation d'une séquence d'acide nucléique nue permet d'envisager une production rapide et personnalisée de cette séquence. En effet, les techniques actuelles permettent de séquencer intégralement le patrimoine génétique des cellules cancéreuses d'un patient et d'identifier les mutations spécifiques de ces cellules. Si ces mutations sont non-synonymes et appartiennent à des séquences codantes et exprimées par la tumeur, ces dernières peuvent être utilisées pour induire l'immunisation contre la tumeur. Les mutations dans le génome des tumeurs et les néoantigènes qui en résultent sont une combinatoire unique restreinte à la tumeur d'un patient donné, voire aux clones qui composent cette tumeur. L'utilisation des néoantigènes comme moyen d'immunisation d'un patient contre ses propres cellules tumorales est un concept nouveau. Sa mise en oeuvre est rendue compliquée par la nécessité de produire en un temps court une préparation pharmaceutique personnalisée correspondant aux néoantigènes portés par la tumeur. Jusqu'à ce jour l'immunisation thérapeutique en oncologie a fait appel à deux grandes catégories de produits. La première consiste à administrer, le plus souvent par injection, des peptides ou protéines supposés être des antigènes présents dans la tumeur, le tout en présence de substances adjuvantes dont l'emploi soulève parfois_ des réticences. La deuxième consiste en l'administration d'acides nucléiques codant pour des antigènes supposés être présents dans la tumeur. 3042121 - 5 - De ces deux classes de produits les immunothérapies par thérapie génique, en particulier celles reposant sur l'emploi de vecteurs viraux, ont montré de façon reproductible une efficacité significative dans le traitement des tumeurs. Les 5 immunothérapies par thérapie génétique, a fortiori celles à base virale, sont naturellement perçus par le système immunitaire comme un signal de danger. Elles sont plus immunogènes et ne nécessitent en principe pas l'emploi d'adjuvants. La composante virale, en particulier s'il s'agit 10 d'un poxvirus, est source d'une réponse immunitaire innée favorable au développement d'une réponse immunitaire adaptative contre les antigènes exprimés. La conception d'un virus génétiquement modifié exprimant les séquences codant pour un ou plusieurs 15 néoantigènes présents dans la tumeur d'un patient est une option techniquement faisable mais cependant il s'agit d'une opération longue et coûteuse très difficilement généraliàable. A l'inverse la production de plasmides ou d'acides 20 nucléiques linéaires fermés codant pour un ou plusieurs néoantigènes est une opération simple, relativement peu onéreuse, réalisable en quelques semaines tout au plus. Le principe de co-injection d'un acide nucléique nu (plasmide ou acides nucléiques linéaire fermé) codant pour 25 un ou plusieurs néoantigènes et d'un virus, en particulier d'un poxvirus, est de nature à permettre la production dans un temps court d'une préparation pharmaceutique personnalisée correspondant aux néoantigènes portés par la tumeur d'un patient tout en bénéficiant de la présence d'un virus 30 apportant le signal de danger utile au développement de la réponse immunitaire. De surcroît le poxvirus de par la présence d'une membrane phospholipidique est de nature à favoriser la 3042121 - 6 - pénétration de l'acide nucléique nu dans les cellules présentes au voisinage du point d'injection, et par conséquent l'expression des protéines antigéniques pour lesquelles code l'acide nucléique nu. L'utilisation combinée 5 d'au moins deux vecteurs à ADN double brins, le poxvirus et l'ADN nu, favorise la reconnaissance par des senseurs spécifiques de l'ADN double brin dans le cytoplasme des cellules dans lesquelles ces vecteurs ont pénétré. Cette reconnaissance est à l'origine d'une réponse biologique 10 favorable à la réponse immunitaire Un avantage supplémentaire du poxvirus réside dans sa capacité à être modifié pour exprimer des antigènes génériques qui peuvent être présents dans la tumeur en plus des néoantigènes. On peut citer à titre d'exemple les 1 5 protéines E6 et E7 d'HPV dans le cas d'une tumeur induite par ce virus, ou bien encore la protéine MUC1 dans les cas des adénocarcinomes. Les anticorps anti-CTLA4 sont des inhibiteurs d'un point de contrôle négatif de la réponse immunitaire. Ils ont 20 jusque-là été administrés par voie systémique, intraveineuse, avec une efficacité significative, tout au moins dans le traitement du mélanome malin cutané, mais au prix d'effets indésirables non négligeables. La co-administration d'un inhibiteur de checkpoint 25 immunitaire, en particulier de type anti-CTLA4, est de nature à renforcer la réponse immunitaire contre une immunothérapie, en particulier la combinaison d'un plasmide nu et d'un poxvirus. Pour cela des doses réduites à 1/20ème ou moins de la dose systémique usuelle sont supposées suffisantes. A ces 30 doses et après co-injection la concentration dans le ganglion de drainage est supposée plus élevée que par voie systémique alors que la concentration systémique est grandement réduite, le risque d'effet indésirable également. 3042121 - 7 - Dans le cadre de la présente invention, le terme « séquence d'acide nucléique nue » fait référence à une séquence d'acide nucléique qui n'est pas associée à des molécules favorisant sa pénétration dans des cellules 5 eucaryotes comme, par exemple, des polymères cationiques, des protéines virales, des lipides et/ou des liposomes. Selon un mode de réalisation de l'invention, ladite séquence d'acide nucléique nue est sélectionnée dans le groupe comprenant les plasmides et les vecteurs d'ADN ou 10 d'ARN linéaire. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, ladite séquence d'acide nucléique nue est un acide nucléique linéaire fermé. De plus, les acides nucléique linéaires fermés par leur mode de production s'accompagnent de très peu 15 de résidus de production, en particulier bactériens, ce qui permet d'éviter de lourdes étapes de purification et permet une utilisation plus rapide et moins onéreuse. Les acides nucléiques linéaires fermés sont bien connus de l'homme du métier, leur structure, leurs fonctions et les 20 procédés permettant leur production sont notamment décris dans les documents CN103080337, EP2601312, GB201013153, JP2013535210, US2013216562, W012017210, AU2010209532, CA2751130, CN102301010, DK2391731, EA021069, EA201101141, EP2391731, EP2612925, ES2400890, GB200901593, HK1159693, 25 IL213930, IN05006CN2011, JP2012516147, KR20110107846, MX2011007937, NZ594004, 5G173102, US2012282283, 059109250, W010086626. Dans le cadre de la présente invention, le terme « néoantigène associé à une cellule cancéreuse » fait 30 référence à une protéine exprimée sous une forme mutée, une protéine exprimée uniquement par la cellule cancéreuse, une protéine dont la glycosylation est différente dans la cellule 3042121 - 8 - cancéreuse de celle présente sur la même protéine dans les cellules normales Dans le cadre de la présente invention, le terme « inhibiteur de checkpoint immunitaire » fait référence aux 5 molécules qui inhibent ou interfèrent avec la fonction d'une ou plusieurs protéines dites de « checkpoint ». Ces dernières régulent l'activation et/ou le fonctionnement des cellules T. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention ladite protéine de checkpoint est choisie dans le groupe comprenant 10 le CTLA-4 et ses ligands le CD 80 et le CD86, le PD1 et ses ligands PDL1 et PDL2. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, ledit inhibiteur de checkpoint immunitaire est un anticorps. Selon un mode de réalisation préféré ledit inhibiteur 15 de checkpoint immunitaire est un anticorps anti-CTLA-4 et encore plus préférentiellement choisi dans le groupe comprenant l'ipilimumab et le tremelimumab. Selon un autre mode de réalisation préféré ledit inhibiteur de checkpoint immunitaire est un antagoniste de 20 PD1, encore plus préférentiellement un anticorps anti-PD1 et tout à fait préférentiellement nivolumab ou lambrolizumab. Dans un autre mode de réalisation encore plus préféré l'antagoniste de PD1 est CT-011 ou AMP-224. Selon un autre mode de réalisation préféré ledit 25 inhibiteur de checkpoint immunitaire est un antagoniste de PD-LI, encore plus préférentiellement un anticorps anti-PDLl. Dans un autre mode de réalisation encore plus préféré l'antagoniste de PD-Ll est BMS-936559. Selon un autre mode de réalisation préféré ledit 30 inhibiteur de checkpoint immunitaire est un inhibiteur de LAG-3 et encore plus préférentiellement IMP321. 3042121 - 9 - Selon un autre mode de réalisation préféré ledit inhibiteur de checkpoint immunitaire est un inhibiteur de B7- H3 et encore plus préférentiellement MGA271. Selon un autre mode de réalisation préféré ledit 5 inhibiteur de checkpoint immunitaire est un inhibiteur de B7- H4 et préférentiellement un anticorps bloquant le B7-H4. Selon un autre mode de réalisation préféré ledit inhibiteur de checkpoint immunitaire est un inhibiteur de TIM3 et préférentiellement un anticorps bloquant le TIM-3. 10 Selon un mode de réalisation préféré, ladite séquence d'acide nucléique nue comprend en outre les éléments de régulation assurant l'expression dudit néoantigène associé à une cellule cancéreuse dans les cellules eucaryotes. Selon un mode de réalisation préféré, les éléments de 15 régulation assurant l'expression dudit néoantigène associé à une cellule cancéreuse dans les cellules eucaryotes comportent un promoteur de la transcription du gène et une région d'initiation de la traduction dans les cellules hôtes. Ladite séquence d'acide nucléique nue peut comprendre 20 plusieurs séquences codant chacune un néoantigène associé aux tumeurs identiques ou différents. Dans le cas d'une pluralité de néoantigènes, les séquences codant ces derniers peuvent être placées sous la dépendance d'éléments de régulation identiques ou différents. 25 Selon un mode de réalisation préféré, le poxvirus est vivant ou tué. Selon un mode de réalisation préféré, le poxvirus ne comprend pas de séquences hétérologues. Selon un mode de réalisation préféré, le poxvirus 30 dérive d'un virus de la vaccine, d'un canaripox ou d'un fowlpox. 3042121 - 10 - Selon un mode de réalisation préféré, ledit poxvirus dérive d'un virus de la vaccine sélectionné parmi les souches Copenhague, Wyeth et Ankara modifiée (MVA). Selon un mode de réalisation préféré, ledit poxvirus 5 dérive d'un virus de la vaccine de la souche Copenhague. Selon un mode de réalisation préféré, ledit poxvirus dérive d'un virus de la vaccine de la souche MVA. Dans le cadre de la présente invention, le terme « dérive » entend signifier que ledit virus appartient à 10 ladite souche. Selon un autre mode de réalisation préféré, ledit poxvirus comporte une séquence d'ADN hétérologue codant au moins la région essentielle d'un antigène associé à une cellule cancéreuse. 15 Selon un mode de réalisation préféré, les séquences d'ADN codant au moins la région essentielle d'un antigène associé à une cellule cancéreuse sont sous le contrôle d'un promoteur d'un gène du poxvirus. Selon un mode de réalisation préféré, les séquences 20 codant au moins la région essentielle d'un antigène associé à une cellule cancéreuse sont placées sous le contrôle d'un promoteur d'un gène d'un virus de la vaccine et, notamment d'un promoteur sélectionné parmi les promoteurs des gènes thymidine kinase (TK), 7,5K, H5R et K1 L. 25 Selon un mode de réalisation encore plus préféré, ledit promoteur est le promoteur du gène de la protéine 7,5 K du virus de la vaccine. Selon un mode de réalisation préféré, les séquences d'ADN codant au moins la région essentielle d'un antigène 30 associé à une cellule cancéreuse sont insérées à l'intérieur d'une région non essentielle du virus utilisé. Selon un mode de réalisation préféré, la région non essentielle est le gène TK. 3042121 Dans le cas où ledit poxvirus dérive d'un virus de la vaccine de la souche Copenhague les séquences codant au moins la région essentielle d'un antigène associé à une cellule cancéreuse sont préférentiellement insérées au niveau du 5 locus TK et/ou KIL dudit virus de la vaccine. Dans le cas où ledit poxvirus dérive d'un virus de la vaccine de la souche MVA, les séquences codant au moins la région essentielle d'un antigène associé à une cellule cancéreuse sont préférentiellement insérées au niveau de 10 l'une au moins des zones d'excision I à VI dudit virus de la vaccine et, notamment II et/ou III La présente invention concerne également une composition selon l'invention comprenant en outre un support pharmaceutiquement acceptable permettant son administration 15 par injection à l'homme ou à l'animal. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, ledit support pharmaceutiquement acceptable permet l'injection de ladite composition via un dispositif d'injection sans aiguilles. 20 Dans le cadre de la présente invention, le terme "dispositif d'injection sans aiguilles" fait référence à un dispositif pour les injections intradermiques, sous-cutanées et intramusculaires, d'un principe actif liquide à usage thérapeutique en médecine humaine ou vétérinaire mettant en 25 oeuvre un jet de liquide sous pression pour pénétrer les tissus. Le liquide peut être plus ou moins visqueux, un mélange de liquide, ou un gel. L'administration d'acides nucléiques nus nécessite en général l'emploi d'une technique d'électroporation couplée à 30 l'injection. L'injection sous pression par un système sans aiguille est une autre solution. Elle a aussi l'avantage du fait de l'injection sous pression d'assurer une meilleure diffusion dans les espaces tissulaires. Son emploi autorise 3042121 - 12 - aussi si nécessaire la préparation extemporanée d'un mélange de produits à injecter. L'emploi d'un système d'injection sous pression sans aiguille est de nature à favoriser une meilleure pénétration tissulaire qu'avec une aiguille 5 classique et donc la transfection d'un plus grand nombre de cellules. L'objectif est de favoriser ainsi la réponse immunitaire contre les néoantigènes exprimés par la séquence d'acide nucléique nue. La présente invention concerne également un ensemble de 10 parties comprenant une séquence d'acide nucléique nue codant au moins un néoantigène associé à une cellule cancéreuse, au moins un poxvirus, et un inhibiteur de checkpoint immunitaire. Ledit ensemble de partie peut notamment être utilisé 15 pour préparer extemporanément une composition selon l'invention. La présente invention concerne également l'utilisation d'une composition selon l'invention pour le traitement ou la prévention d'un cancer ou d'une tumeur. 20 La présente invention concerne également l'utilisation d'une composition selon l'invention pour le traitement ou la prévention d'un cancer du col de l'utérus, de la sphère ORL ou de toute autre tumeur induite par le virus HPV, d'un cancer du foie lié au virus de l'hépatite chronique C, ou 25 d'un cancer exprimant la protéine MUC1. Description des modes de réalisation Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, 30 les cellules cancéreuses d'un patient à traiter sont prélevées soit à partir d'une classique biopsie ou bien à partir d'une simple prise de sang de laquelle l'ADN tumoral circulant et/ou les cellules tumorales circulantes sont 3042121 - 13 - isolées. L'ADN et/ou l'ARN des cellules cancéreuses et saines sont ensuite extraits et séquencés. La séquence ADN des cellules saines est comparée à la séquence ADN des cellules cancéreuses et les mutations 5 somatiques comprises dans des régions codantes et exprimées sont identifiées. Les séquences mutées codantes et exprimées sont traitées à l'aide d'algorithmes permettant de définir pour chaque patients quelles mutations sont le plus antigéniques 10 et peuvent servir de cible. Ces séquences mutées, codantes, exprimées, spécifiques des cellules cancéreuses du patient sont ensuite synthétisées puis mises sous la forme d'un plasmide ou d'un acide nucléique linéaire fermé en utilisant la méthode décrite dans la demande de brevet EP2391731. La 15 séquence d'acide nucléique codant un antigène associé à la tumeur du patient est placée, à l'intérieur de l'acide nucléique linéaire fermé, sous la dépendance des séquences nécessaires à son expression en cellules eucaryotes. Ainsi, ladite séquence est préférentiellement placée en aval d'un 20 promoteur d'expression eucaryote et en amont d'une séquence de terminaison de la transcription. II peut s'agir d'un promoteur eucaryote fort et en particulier d'un promoteur précoce du CMV. Le promoteur est soit d'origine virale, soit d'origine cellulaire. Comme promoteur viral autre que CMV on 25 peut citer le promoteur précoce ou tardif du virus SV40 ou le promoteur LTR du virus du Sarcome de Rous. Comme promoteur cellulaire, on peut citer le promoteur d'un gène du cytosquelette, tel que par exemple le promoteur de la desmine, ou encore le promoteur de l'actine. Préférentiellement, un 30 intron pourra être intégré à l'intérieur de ladite séquence codant l'antigène associé à la tumeur du patient. En effet, certains introns sont connus pour augmenter la transcription des séquences d'acides nucléiques. 3042121 - 14 - Le Poxvirus utilisé dans la composition est préférentiellement un virus MVA. Ce dernier dérive de la souche Ankara du virus de la vaccine par passages successifs sur des cellules d'embryons de poulet. Ces différents 5 passages ont entrainé l'atténuation de ce virus qui a ainsi pu être utilisé dans les dernières campagnes de vaccination contre la variole. 10 La description des différentes souches de MVA, les méthodes permettant d'insérer éventuellement des gènes exogènes dans son génome ainsi que les méthodes de production, et de purification de ce virus sont notamment accessibles dans les documents W00168820, W00242480, W003008533, W003048184, W003053463, W003054175, W003088994, W003097675, W003097844, W003097845, W003097846, W004048582, W004048606, 15 W005054484, W006089690, W008028665, W008045346, W008131926, W008131927, W008138533, W009052328, W009152969, W010057650, W010060632, W010102822, W011042180, W011092029, W012010280, W012048817, W012059243, W013083254, W013189611, W014019718, W014037124, W014062778, W014063832, W09813500, W09915692. 20 Le poxvirus pourra également comprendre des séquences codant d'autres antigènes spécifiques de la tumeur dont est atteint le patient. Par exemple, les séquences codant les antigènes E6 et E7d'HPV ou les séquences codant les antigènes NS3, NS4, NS5B, de HCV, ou la protéine Mucl anormalement 25 glycosilée dans les tumeurs. Enfin, la composition selon l'invention comprendra préférentiellement un anti-CTLA4, encore plus préférentiellement de l'ipilimumab. De façon préférée, la composition selon l'invention 30 comprend en outre un support pharmaceutiquement acceptable. Dans le cadre de la présente invention, le terme "support pharmaceutiquement acceptable" entend désigner tous les supports, solvants, diluants, excipients, adjuvants, milieux 3042121 - 15 - de dispersion, et analogues, compatibles avec une administration pharmaceutique. La composition à utiliser dans l'invention est convenablement tamponnée afin d'être appropriée pour une 5 utilisation humaine à un pH physiologique ou légèrement basique. La composition selon l'invention peut être administrée au patient par une variété de modes d'administration comme par exemple les voies sous-cutanée, intradermique, 10 intramusculaire, intraveineuse, intrapéritonéale, intratumorale, intravasculaire, intra-artérielle. Les injections peuvent être faites avec des seringues et des aiguilles conventionnelles, mais préférentiellement via un dispositif d'injection sans aiguilles de types bioject 15 (r). L'administration peut avoir lieu en dose unique ou répétée après un certain intervalle de temps allant d'un jour à un an. Préférentiellement l'administration aura lieu de façon hebdomadaire sept fois de suite puis ensuite une fois 20 toutes les trois semaines. Le dosage approprié peut être adapté en fonction de divers paramètres, en particulier le mode d'administration, la composition utilisée, l'âge, la santé, et le poids de l'organisme hôte, la nature et l'étendue des symptômes, le 25 type de traitement associé, la fréquence du traitement. L'homme du métier est capable de déterminer les quantités adaptées de chaque élément à l'intérieur de la composition selon l'invention. A titre d'exemple, le poxvirus peut être utilisé à une quantité comprise entre 104 à 109 pfu, 30 la séquence d'acide nucléique nue en une quantité comprise entre 10 pg et 20 mg, et l'inhibiteur de checkpoint immunitaire en une quantité comprise entre 10 ng et 20 mg par injection. 3042121 - 16 - De façon préférentielle, la composition selon l'invention peut être utilisée en conjonction avec la radiothérapie, la chimiothérapie la chirurgie et/ou d'autres produits d'immunothérapie tels les anticorps anti PD1 et 5 anti-PDL1, ou la combinaison de plusieurs de ces traitements à la fois. REVENDICATIONS1 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une séquence d'acide nucléique nue codant au moins un néoantigène associé à une cellule cancéreuse, au moins un poxvirus, et un inhibiteur de checkpoint immunitaire. 2 - Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite séquence d'acide nucléique nue comprend en outre les éléments de régulation assurant l'expression dudit antigène associé à une cellule cancéreuse dans les cellules eucaryotes. 3 - Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite séquence d'acide 15 nucléique nue est choisie dans le groupe comprenant les plasmides et les vecteurs d'ADN ou d'ARN linéaire. 4 - Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite séquence d'acide 20 nucléique nue est un acide nucléique linéaire fermé. 5 - Composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce que les éléments de régulation assurant l'expression dudit antigène associé à une cellule cancéreuse 25 dans les cellules eucaryotes comportent un promoteur de la transcription du gène et une région d'initiation de la traduction dans les cellules hôtes. 6 - Composition selon l'une des revendications 30 précédentes, caractérisée en ce que ledit poxvirus comporte une séquence d'ADN hétérologue codant au moins la région 3042121 - 18 - essentielle d'un antigène associé à une cellule cancéreuse. 7 - Composition selon l'une des revendications précédente caractérisée en ce que le poxvirus est vivant ou tué. 8 - Composition selon l'une des revendications 6 ou 7 caractérisée en ce que les séquences d'ADN codant au moins la région essentielle d'un antigène associé à une cellule 10 cancéreuse sont sous le contrôle d'un promoteur d'un gène du poxvirus utilisé. 9 - Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que le poxvirus dérive d'un 15 virus de la vaccine, d'un canaripox ou d'un fowlpox. 10 - Composition selon la revendication 8 caractérisée en ce que le promoteur est le promoteur du gène de la protéine 7,5 K du virus de la vaccine. 20 11 - Composition selon l'une des revendications 6 à 10 caractérisée en ce que les séquences d'ADN codant au moins la région essentielle d'un antigène associé à une cellule cancéreuse sont insérées à l'intérieur d'une région non 25 essentielle du virus utilisé. 12 - Composition selon la revendication 11 caractérisée en ce que la région non essentielle est le gène TK. 30 13 - Composition selon l'une des revendications 1 à 6 caractérisée en ce que ledit poxvirus dérive d'un virus de la vaccine sélectionné parmi les souches Copenhague, Wyeth et Ankara modifiée (MVA). 3042121 - 19 - 14 - Composition selon la revendication 11, dans laquelle ledit poxvirus dérive d'un virus de la vaccine de la souche Copenhague et les séquences codant au moins la région essentielle d'un antigène associé à une cellule 5 cancéreuse sont insérées au niveau du locus TK et/ou_ KIL dudit virus de la vaccine. - Composition selon la revendication 11, dans laquelle le vecteur recombinant dérive d'un virus de la 10 vaccine de la souche MVA et les séquences codant au moins la région essentielle d'un antigène associé à une cellule cancéreuse sont insérées au niveau de l'une au moins des zones d'excision I à VI dudit virus de la vaccine et, notamment II et/ou III. 15 16 - Composition selon l'une des revendications 11 à 14, dans laquelle les séquences codant au moins la région essentielle d'un antigène associé à une cellule cancéreuse sont placées sous le contrôle d'un promoteur d'un gène d'un virus de la vaccine et, notamment d'un promoteur sélectionné parmi les promoteurs des gènes thymidine kinase (TK), 7,5K, H5R et K1 L. 17 - Composition selon l'une des revendications 25 précédentes caractérisée en ce qu'elle comporte un support pharmaceutiquement acceptable permettant son administration par injection à l'homme ou à l'animal. 18 - Composition selon la revendication précédente 30 caractérisée en ce que ledit support pharmaceutiquement acceptable permet l'injection de ladite composition via un dispositif d'injection sans aiguilles. 19 - Composition selon l'une des revendications 3042121 - 20 - précédentes, caractérisée en ce que ledit inhibiteur de checkpoint immunitaire est choisi dans le groupe comprenant les molécules qui inhibent ou interfèrent avec la fonction d'une ou plusieurs protéines choisies dans le groupe 5 comprenant le CTLA-4 et ses ligands le CD 80 et le CD86, le PD1 et ses ligands PDL1 et PDL2. 20 - Composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce que ledit inhibiteur de checkpoint 10 immunitaire est choisi dans le groupe comprenant l'ipilimumab, le tremelimumab, le nivolumab, le lambrolizumab, le CT-011, l'AMP-224, le BMS-936559, l'IMP321, le MGA271, les anticorps bloquant le B7-H4 et les anticorps bloquant le TIM3. 15 21 - Composition selon l'une des revendications précédentes, destiné à être utilisée pour le traitement ou la prévention d'un cancer ou d'une tumeur. 20 22 - Composition selon la revendication 21, destiné à être utilisée pour le traitement ou la prévention d'un cancer du col de l'utérus, de la sphère ORL ou de toute autre tumeur induite par le virus HPV, d'un cancer du foie lié au virus de l'hépatite chronique C, ou d'un cancer exprimant la protéine MUC1.