Brevet FR3031063A1 — publié le 20160701

La présente invention concerne le domaine du diagnostic moléculaire. Plus précisément, elle concerne des complexes magnétiques solides permettant l'extraction et/ou la purification d'acides nucléiques (ADN et/ou ARN) à partir d'échantillons biologiques ou de prélèvements environnementaux, ces complexes étant au moins pourvus de trois couches distinctes. L'essor de la biologie moléculaire a permis de faire d'immenses progrès dans le diagnostic. Ainsi, à partir d'un échantillon à tester, il est possible d'extraire et de détecter des acides nucléiques appartenant à l'hôte ou aux micro-organismes infectieux contenus dans l'échantillon. La détection, voire la quantification de ce matériel génétique permet d'établir un diagnostic par rapport à une infection microbienne ou à une présence d'oncogènes. Ceci se fait généralement en trois étapes décrites ci-dessous: 1) L'extraction d'acides nucléiques à partir d'échantillons biologiques complexes (sang, tumeur, aliments, etc..) qui consiste à une lyse chimique ou mécanique des cellules afin d'en libérer le contenu et particulièrement les acides nucléiques. Ces derniers vont être purifiés de manière sélective pour être ensuite amplifiés si leur quantité n'est pas suffisante pour une détection directe. 2) L'amplification des acides nucléiques purifiés par des techniques d'amplification de matériel génétique : NASBA, RT PCR, PCR... Cette étape est nécessaire quand la quantité d'acides nucléiques recueillie à partir d'un échantillon biologique est très faible ou que le test n'est pas suffisamment sensible pour une détection directe. 3) La détection des acides nucléiques amplifiés par des techniques dites en point final, en temps réel, par séquençage etc... Selon la technique de détection utilisée, cette étape peut permettre une quantification sélective des acides nucléiques cibles recherchés. Pour une détection sensible et spécifique des acides nucléiques et donc réaliser un diagnostic le plus juste possible, il apparaît essentiel d'extraire et/ou isoler de façon efficace les acides nucléiques (ADN et ARN) des cellules. Cette étape d'extraction et/ou de purification, appelée aussi « Sample Prep » (pour sample preparation : préparation de l'échantillon) est généralement critique car de cette première étape va découler toute la qualité d'une série d'évènements menant au résultat final du test de diagnostic. En effet, il est nécessaire d'avoir une extraction des acides nucléiques aussi spécifique et efficace (en quantité, en pureté et en temps) que possible afin de ne pas perdre de l'information, ce qui peut mener à un diagnostic erroné et être fatal pour un patient. 3031063 2 De nombreuses techniques ont été développées pour tenter d'extraire les acides nucléiques à partir de différents échantillons biologiques. Les méthodes les plus anciennes mettent en oeuvre une multitude d'étapes généralement consistant à enrichir les cellules contenant les acides nucléiques, à lyser ces cellules, à séparer et éliminer les 5 protéines, les membranes et autres constituants cellulaires, à purifier les acides nucléiques restants par précipitation dans des solvants organiques. Ces techniques sont coûteuses, demandent beaucoup de temps et elles sont souvent impossibles à automatiser. Elles ne sont donc plus adaptées aux pratiques actuelles où l'automatisation est nécessaire car elle permet d'obtenir les résultats le plus rapidement possible et évite 10 les problèmes de contamination et d'erreurs humaines, particulièrement dans les cas de sepsis « infection du sang » où le pronostic vital d'un patient est engagé. Les techniques les plus récentes d'extraction d'acides nucléiques utilisent des phases solides où les cellules sont lysées dans des conditions de réactions spécifiques et les acides nucléiques libérés se lient à la phase solide. Il est bien connu dans l'état de l'art que les techniques 15 actuelles d'extraction des acides nucléiques mettent très souvent en oeuvre des phases solides qui sont des particules enrobées de silice. En effet, la silice a la propriété d'adsorber, de façon réversible, les acides nucléiques dans certaines conditions de concentration en sels et de pH, ce qui en fait un matériau très adapté à cet usage. Ces techniques sont clairement décrites dans « Rapid and simple method for purification of 20 nucleic acids. », Boom, Journal of Clinical Microbiology, 1990 p495 et dans le brevet US 5 234 809 du même auteur. Il est également connu d'utiliser des particules magnétiques enrobées de silice. La partie magnétique des particules sert le plus souvent à faciliter et à automatiser les étapes de capture, de lavage et d'élution des acides nucléiques car un simple aimant permet le 25 déplacement des particules dans le tube et le prélèvement des surnageants pour des étapes de lavage. Les rendements d'extraction des acides nucléiques en sont nettement améliorés. Ces techniques sont bien décrites dans "Magnetic particles for the separation and purification of Nucleic acids", S. Berensmeier, Applied Microbial Biotechnology 2006 73 495-504; "The use of magnetic nanoparticles in the development of new molecular 30 detection systems", I. J. Bruce, Journal of Nanosciences and nanotechnology et dans "Optimization of influencing factors of nucleic acid adsorption onto silica-coated magnetic particles: Application to viral nucleic acid extraction from serum", Ning Sun and al., Journal of Chromatography A, 2014, 1325, 31- 39. Bien que ces particules magnétiques de silice puissent être d'une grande efficacité dans 35 l'extraction des acides nucléiques, leur protocole de fabrication est long, délicat et coûteux. En effet, les particules magnétiques enrobées de silice utilisées pour l'extraction 3031063 3 des acides nucléiques peuvent parfois être très complexes à fabriquer, particulièrement au niveau de la couche de silice qui nécessite d'être parfaitement stable et contrôlée en épaisseur et en homogénéité. La qualité et la nature de cette couche de silice a une importance fondamentale pour la qualité des acides nucléiques extraits ainsi que pour la 5 reproductibilité des résultats d'une extraction des acides nucléiques à l'autre. Ainsi, US 2010/0009375 Al décrit la fabrication de particules magnétiques recouvertes d'une couche continue et ultrafine de silice inférieure à 1 nm pour l'extraction des acides nucléiques. Cette couche est cependant très difficilement mesurable et reste difficile à contrôler au niveau du procédé. Ceci rend le contrôle de la qualité de ces particules très 10 complexe. Si la couche de silice est trop fine, les acides nucléiques peuvent s'adsorber sur la magnétite qui compose le coeur magnétique sans pouvoir être désorbés lors de l'étape d'élution. US 2005/0287583 Al et US 6924033 B2 décrivent également la fabrication de particules magnétiques recouvertes d'une couche très épaisse de silice (ratio oxyde de 15 silicium/oxyde de fer (Si02/Fe304) = 40/60) ce qui conduit à des agrégats dont la qualité et la reproductibilité d'un lot à l'autre peut sérieusement impacter la qualité de l'extraction. Ici également le procédé de fabrication est très complexe et implique un strict contrôle des ratios de réactifs Si02/magnétite/Na20. Par ailleurs, US 2011/0186524 Al décrit la fabrication de particules de silice magnétiques 20 pour l'extraction des acides nucléiques, impliquant une étape de chauffage à 200°C pendant 7h et l'utilisation de solvants organiques, autant d'inconvénients en termes de temps de préparation, de coût et d'utilisation ultérieure (amplification, détection) des acides nucléiques extraits car, en fonction des traitements reçus lors de l'extraction, les rendements d'amplification et de détection peuvent être affectés. 25 Pour faire face à cette complexité de fabrication et éviter des procédés complexes pour maîtriser l'épaisseur de la couche d'enrobage de la magnétite, certains inventeurs ont proposé d'utiliser seulement la magnétite pour faire de l'extraction d'acides nucléiques à partir de milieux complexes. Ainsi, EP 1674571, US 6936414 et US 2007 0148651 30 décrivent l'extraction d'acides nucléiques par des particules constituées uniquement de la magnétite en milieu acide afin de favoriser l'interaction entre l'oxyde métallique et les acides nucléiques. Cependant, la désorption des acides nucléiques est très difficile et nécessite un chauffage des particules dans un tampon phosphate pour favoriser la compétition avec les acides nucléiques adsorbés et éluer les acides nucléiques adsorbés, 35 ce qui impacte négativement le rendement d'extraction. Par ailleurs, l'utilisation d'agents dans le tampon d'élution qui favorise la désorption, comme le phosphate, peut entraîner 3031063 4 une inhibition ultérieure de la PCR ou d'autres techniques d'amplification du matériel génétique extrait. Par conséquent, l'extraction des acides nucléiques avec des particules d'oxydes métalliques « nues » n'est pas satisfaisante. 5 Par ailleurs, certains inventeurs ont modifié les propriétés de particules d'oxydes métalliques en y greffant divers composés organiques ou inorganiques. Généralement, lesdites particules sont stabilisées par la complexation avec des dérivés de phosphates, phosphonates, carboxylates ou d'autres composés organiques. Ceci est décrit dans le livre « Stability constants of metal-ion complexes" de Lars Gunnar Sillén et Arthur Earl Martell 10 édité en 1971 par la Chemical Society, dans US 5160725, par G. Pourroy dans Chem. Comm. 2010 46 985-987 ou dans Chem. Mater., 2008, 20 (18), pp 5869-5875. Ces complexes peuvent être utilisés en tant qu'agents de contraste en imagerie médicale, en tant que sonde pour détecter un brin d'ADN complémentaire in vivo ou en tant que ferro-fluides bio-compatibles. 15 Seuls les travaux de Rittich Bohuslav dans « Isolation of genomic DNA using magnetic cobalt ferrite and silica particles », B. Rittch, J. of Chromatography A, 2004, 43-48 et de David Horack dans « Ferrite supports for the isolation of DNA from complex samples and polymerase chain reaction amplification », D. Horak , J. of Chromatography A, 2005, 93-98 20 traitent de particules magnétiques recouvertes de ligands pour l'extraction d'acides nucléiques. En revanche, les conditions d'utilisation ne sont pas adaptées à la lyse cellulaire et à la dénaturation des nucléases car ils n'utilisent pas de sels chaotropiques pour l'extraction. Ainsi, les rendements d'extraction et/ou d'amplification puis de détection des acides nucléiques ne sont pas optimaux. De plus, des problèmes d'élution 25 des acides nucléiques sont observés. Au vu de l'exposé de l'art antérieur ci-dessus, il apparaît clair qu'il était nécessaire de développer des supports solides magnétiques innovants permettant l'extraction et la purification des acides nucléiques et qui : 30 soient faciles à synthétiser et peu coûteux, particulièrement au niveau de la couche recouvrant le composé magnétique, soient très performants en termes de rendement de capture et d'élution, d'extraction des acides nucléiques contenus dans des milieux biologiques complexes, en particulier le sang, 35 permettent d'obtenir rapidement des acides nucléiques de grande pureté sans co- élution d'inhibiteurs et qui soient à leur tour amplifiables avec efficacité, 3031063 5 soient efficaces pour pouvoir capturer de très faibles quantités d'acides nucléiques, permettent d'ajuster la sélectivité de capture des acides nucléiques double- brin versus simple-brin, 5 ne nécessitent pas l'utilisation de tampon d'élution pouvant inhiber ultérieurement les réactions d'amplification ou d'analyse en aval de l'extraction. Ainsi, l'objet de cette invention concerne le développement et la réalisation de nouveaux complexes solides permettant l'extraction et la purification d'acides nucléiques de façon 10 efficace et ce à partir d'échantillons, de préférence d'échantillons biologiques complexes. En premier lieu, la présente invention concerne un complexe tri-couches comprenant : - une première couche comprenant au moins un composé magnétique, - une deuxième couche recouvrant, au moins partiellement, la première couche et 15 comprenant au moins un composé inorganique silicaté, - une troisième couche recouvrant, au moins partiellement, la deuxième couche et comprenant au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté. 20 En second lieu, la présente invention concerne également l'utilisation de ce complexe tri- couches dans la purification de micro-organismes et/ou de biomolécules ou dans l'extraction de biomolécules, de préférence des acides nucléiques à partir d'un échantillon. 25 En troisième lieu, la présente invention concerne l'utilisation de ce complexe tri-couches dans la détection et/ou la quantification d'acides nucléiques cibles, à partir d'un échantillon susceptible de contenir lesdits acides nucléiques cibles, comprenant les étapes suivantes : 1. l'extraction des acides nucléiques d'un échantillon à l'aide de ce complexe tri- 30 couches, 2. la détection et/ou la quantification des acides nucléiques cibles par des techniques de détection et/ou de quantification classiques. En quatrième lieu, la présente invention concerne l'utilisation de ce complexe tri-couches 35 dans une méthode de lyse de micro-organismes et/ou de cellules, à partir d'un échantillon, caractérisée en ce qu'elle consiste à mettre en contact au moins un 3031063 6 échantillon avec au moins un complexe selon l'invention et dans lequel ledit au moins un composé inorganique silicaté et/ou ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté comprend au moins un agent de la famille des détergents permettant 5 la lyse. En cinquième lieu, la présente invention concerne des trousses de diagnostic moléculaire comprenant au moins le complexe tri-couche selon l'invention. 10 La présence invention se propose donc de fournir des complexes tri-couches particulièrement utiles dans le domaine du diagnostic moléculaire. Les complexes selon l'invention comprennent ou consistent en: - une première couche comprenant au moins un composé magnétique, - une deuxième couche recouvrant, au moins partiellement, la première couche et 15 comprenant au moins un composé inorganique silicaté, - une troisième couche recouvrant, au moins partiellement, la deuxième couche et comprenant au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté. 20 Par couche, on entend une épaisseur de matière ou d'une substance étendue de manière à former un film d'épaisseur variable. La couche peut être continue ou discontinue. La couche peut également être appelée revêtement. Par complexe tri-couches, on entend un ensemble solide et compact constitué d'au moins 25 trois couches distinctes physiquement et chimiquement. Dans le cadre d'un complexe multi-couches, les couches se superposent, la première couche est recouverte par la deuxième qui épouse la forme de la première couche, et la deuxième couche est elle-même recouverte par la troisième et ainsi de suite. La succession des trois couches se fait dans un ordre précis pour observer les propriétés du complexe. Lorsque la deuxième 30 couche est discontinue, la troisième couche recouvre et est en contact direct à la fois avec la deuxième couche et la première couche. Composé magnétique Par composé magnétique, on entend un composé susceptible de réagir à un champ 35 magnétique par une réaction d'orientation et/ou de déplacement dépendante de la force et de l'orientation. Cette force s'effectue par l'intermédiaire du champ magnétique, et est 3031063 7 produite par des charges en mouvement ou des aimants. Les composés magnétiques compris dans le complexe tri-couches selon l'invention sont choisis parmi des métaux et/ou des oxydes métalliques. Le ou les métaux doués de capacités magnétiques utilisables dans le complexe tri- 5 couches de la présente invention sont le fer, le cobalt, le nickel, les aciers, la fonte ainsi que les métaux réagissant plus faiblement au magnétisme comme le manganèse, le chrome, le platine et l'aluminium. Le ou les oxydes métalliques utilisables dans la présente invention sont choisis parmi la 10 magnétite, la maghémite et les ferrites de formule MFe2O4 avec M = Mn, Ni, Co, Zn ... ou tout autre métal classiquement utilisé dans les ferrites pouvant être dopés avec des atomes métalliques autres que le fer. De préférence, le composé magnétique du complexe de l'invention est de la magnétite ou de la maghémite, de façon encore plus préférentielle de la magnétite. 15 Ledit au moins un composé magnétique du complexe de l'invention peut être sous forme plane et former une membrane, une plaque. Il peut également être sous forme variable, par exemple sous forme cubique, sous forme de cristal, d'aiguille, de cône, de sphère, sous forme d'une particule qui peut elle-même être sphérique, multiédrique, par exemple 20 tétraédrique, octaédrique... La forme préférentielle du composé magnétique du complexe tri-couche de l'invention est la particule de dimension comprise entre 1 et 500nm, de préférence entre 2 et 400nm, plus préférentiellement entre 10 et 300 nm, plus préférentiellement encore entre 50 et 150nm. 25 Par particule, on entend une structure physique identifiable, distincte, isolée et non soluble dans un milieu aqueux ou un mélange de solvants organiques et aqueux ou dans un solvant organique et dont la taille peut être micrométrique ou nanométrique. De préférence, la particule est nanométrique et entre 1 et 400nm. Lorsque ledit au moins un composé magnétique du complexe ti-couches est sous forme 30 de particule alors l'ensemble du complexe tri-couche a la forme d'une particule car la couche de composé inorganique silicaté recouvrant ledit au moins un composé magnétique épouse la forme de ce dernier et il en est de même pour la troisième couche vis-à-vis de la deuxième couche. Dans le cas du complexe sous forme de particule, on peut dire que ledit au moins un composé magnétique forme le coeur de ladite particule 35 puisqu'il est placé au centre de celle-ci. 3031063 8 Cependant, étant donné que les couches peuvent ne se recouvrir que partiellement, la forme finale du complexe tri-couche n'est pas nécessairement identique à la forme initiale dudit au moins un composé magnétique. Ainsi, avec un composé magnétique sous forme de particule, il est possible d'obtenir un complexe tri-couches sous forme finale 5 aléatoire. Dans une variante préférée de l'invention, le complexe tri-couches a la forme d'une mûre, le composé magnétique constituant le coeur solide et la deuxième couche formant une couche discontinue formée de nano-sphères satellites autour du coeur. La couche de composé magnétique a une épaisseur micrométrique ou nanométrique. 10 Composé inorganique silicaté Par composé inorganique silicaté, on entend tout composé comprenant de la silice et étant de nature inorganique. Le ou les composés inorganiques silicatés utilisable(s) dans le complexe tri-couches selon l'invention sont les silicates, les silicates de magnésium, de 15 sodium, de potassium, de lithium ou de calcium, le talc, les alumino-silicates, le kaolin, la bentonite, les nanoparticules de silice, de préférence des nanoparticules de silice dont la taille est comprise entre 1 et 20 nm, les nanoparticules de silice mésoporeuses, les nanoparticules magnétiques recouvertes de silice, ainsi que les nanoparticules citées précédemment dont la silice est modifiée chimiquement avec des groupements 20 organiques ou inorganiques. Les groupements organiques ou inorganiques pouvant modifier la silice sont des composés ayant des groupements carbonés dotés de fonctions amines, carboxylique, thiol, alcool, acide phosphonique ou sulfonique, phosphonates et/ou phosphates, des 25 composés de la famille des détergent comme les saponines, des homopolymères ou des copolymères, les polymères de l'anhydride maléique, le N-vinylpyrrolidone, les polyéthylène, les propylènes et les ethers de méthyl vinyl (AMVE) greffés avec de l'anhydride maléïque, le N-vinylpyrrolidone (NVP)/N-acryloxysuccinimide (NAS), les polysaccharides, les latex aminés. 30 Dans une variante préférée de réalisation du complexe tri-couches selon l'invention, le composé inorganique silicaté est de la bentonite ou des nanoparticules de silice dont la taille est comprise entre 1 et 20nm. Ces composés donnent les meilleurs résultats en terme d'extraction des acides nucléiques. 3031063 9 Dans une variante de réalisation du complexe tri-couches selon l'invention, le composé inorganique silicaté est constitué par des nanoparticules de silice dont la silice est modifiée par liaison avec des saponines. Ces composés donnent de bons résultats en terme de lyse cellulaire qui permettront en 5 combinaison avec les complexes tri-couches préférés pour l'extraction d'acides nucléiques de permettre un diagnostic moléculaire efficace et précis. La liaison entre la première couche du complexe de l'invention comprenant au moins un composé magnétique et la deuxième couche comprenant au moins un composé 10 inorganique silicaté se fait par des liaisons électrostatiques ou covalentes, donnant lieu à une structure tridimensionnelle. Dans une forme de réalisation particulièrement avantageuse du complexe tri-couches selon l'invention, ledit au moins un composé inorganique silicaté est sous forme 15 particulaire tel qu'un grain, un feuillet, une aiguille, une fibre, une nanoparticule ... ou sous forme non-soluble dans un solvant aqueux, un mélange solvant aqueux-solvant organique ou un solvant organique. Par exemple, la silice peut se trouver sous forme de grain ou de particule, la bentonite se trouve généralement sous forme de feuillet. 20 Les particules ou formes non solubles dans un solvant aqueux ou mélange solvant aqueux-solvant organique ou un solvant organique du composé inorganique silicaté ont généralement une taille nanométrique pour permettre une bonne accroche du au moins un composé inorganique silicaté à la couche d'au moins un composé magnétique. De préférence, la taille de ces particules ou formes non-solubles est comprise entre 1 et 20 25 nm, de préférence entre 2 et 10 nm, plus préférentiellement entre 6 et 8 nm. La forme particulaire préférée du composé inorganique silicaté est la forme nanoparticulaire. Ainsi, la première couche du complexe tri-couches est revêtue, au moins partiellement, d'une deuxième couche constituée de nano-particules de silice, de 30 préférence de 1 à 20 nm, plus préférentiellement entre 2 et 10 nm et encore plus préférentiellement entre 6 et 8nm. Dans un mode préféré de réalisation de l'invention, on utilise comme composé inorganique silicaté les nanoparticules de silice commercialisées par la société Sigma-Aldrich, appelées Ludox®, tout particulièrement, on préfèrera les nanoparticules Ludox®SM 7nm. 35 3031063 10 Par forme non-soluble dans un solvant aqueux ou mélange solvant aqueux-solvant organique ou dans un solvant organique, on entend une structure qui ne se dissout pas ou partiellement dans ces solvants, quelle que soit la température du milieu. On peut aussi dire forme insoluble ou partiellement insoluble. Ainsi, même en conditions 5 aqueuses, cette forme reste bien matérialisée, sous forme de suspension, structurée et identifiable. Elle peut être observée au microscope électronique. La figure 3 illustre des particules de magnétite (composé magnétique) recouvertes de nanoparticules de silice Ludox SM 7 nm (composé inorganique silicaté). 10 La couche de composé inorganique silicaté a une épaisseur nanométrique. Composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté Par composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour 15 ledit au moins un composé inorganique silicaté, on entend un composé capable de se lier au composé magnétique ou capable de se lier au composé inorganique silicaté, quelles que soient leurs formes respectives. Plus précisément, ce sont des molécules ayant une affinité pour les oxydes métalliques comme décrit dans « Stability constants of metal-ion complexes" de Lars Gunnar Sillén et Arthur Earl Martell édité en 1971 par la Chemical 20 Society ». Ils peuvent être de nature organique ou inorganique. A titre d'exemple et façon non exhaustive, on peut citer l'acide citrique et ses sels, les ions phosphates, pyrophosphates, triphosphates, polyphosphates, les phosphonates et les acides phosphoniques, les phosphonates ou acides phosphoniques couplés à des molécules organiques, les composés de la famille des acides phosphoriques, des sulfonates, les 25 composés de la famille des détergents et/ou les composés de la famille des acides carboxyliques. Les molécules organiques couplées aux phosphonates ou acides phosphoniques peuvent être par exemple des riboses, des désoxyriboses, des acides aminés, des peptides,... Parmi les composés de la famille des détergents, on peut citer les saponines, les Tweens, 30 les Tritons,... On peut envisager d'avoir un complexe tri-couches selon l'invention dont la troisième couche est constituée par une combinaison de composés ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté cités ci-dessus, par exemple les ions phosphates, pyrophosphates ou 35 triphosphates en combinaison avec une saponine. Ces molécules offrent alors plusieurs propriétés complémentaires. Elles peuvent ainsi en même temps lyser les cellules 3031063 11 humaines de l'échantillon à tester et capturer/purifier des acides nucléiques de ces cellules humaines. Il peut être envisagé d'utiliser différentes fonctionnalisations des deuxième et/ou troisième couches du complexe de l'invention pour effectuer une lyse sélective des 5 cellules humaines et une capture sélective de bactéries, voire un enrichissement de micro-organismes cibles et/ou des acides nucléiques cibles. Lorsque la première couche est de la magnétite ou de la maghémite, ledit au moins composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté est un composé ayant une affinité pour le fer. 10 Dans les variantes préférées de réalisation du complexe tri-couche selon l'invention, ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté est constitué de monophosphates, de pyrophosphates, de triphosphates et/ou de saponine. 15 La liaison entre la deuxième couche du complexe de l'invention comprenant au moins un composé inorganique silicaté et la troisième couche comprenant au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté se fait par des liaisons électrostatiques ou covalentes ou de coordination donnant lieu à une structure tridimensionnelle. 20 Dans la forme de réalisation où la deuxième couche du complexe selon l'invention est constituée de particules ou de nanoparticules, de préférence de nanoparticules de silice, des interstices peuvent se produire entre lesdites particules ou nanoparticules et la troisième couche comprenant au moins un composé ayant une affinité pour au moins un composé magnétique adhère plus aisément et mieux à la deuxième couche car certains 25 atomes de métal et/ou d'oxydes métalliques de la première couche sont disponibles et plus accessibles pour former une réaction ou effectuer une liaison. La couche de composé ayant une affinité pour le au moins un composé magnétique et/ou le au moins un composé inorganique silicaté a une épaisseur nanométrique ou inférieure. 30 Dans une forme de réalisation particulière, le complexe tri-couches selon l'invention et tel que défini ci-dessus comprend en outre un support solide sous toute ou partie de la première couche constituée par le au moins un composé magnétique. Par support solide, on entend tout support capable de supporter la couche d'au moins un 35 matériau magnétique. Il peut s'agir d'au moins un support plan, un support creux, une 3031063 12 galette, une aiguille, une membrane, une plaque, une feuille, un cône, un tube, une bille, une particule... Le support est de préférence une bille ou une particule. La liaison du support avec la première couche d'au moins un composé magnétique se fait 5 par liaisons électrostatiques, par liaisons covalentes ou par tout autre moyen physique ou chimique. Par exemple, il est possible d'utiliser un adhésif pour fixer ledit au moins un composé magnétique au support ou une substance intermédiaire capable maintenir la liaison entre le support solide et le composé magnétique comme par exemple, une protéine, un polymère, un polymère hydrophile ou hydrophobe, une polydopamine, etc... 10 Dans une forme de réalisation particulière, le complexe tri-couches tel que défini ci-dessus, avec ou sans support, est sous forme de particule et ladite troisième couche comprenant au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté se situe à 15 l'extérieur de la particule. En quelques sortes, le coeur de la particule est constitué : 1) par le support qui est à son tour enrobé par le complexe tri-couche de l'invention avec la première couche au contact du support, la deuxième couche en contact avec la première couche et la troisième couche en contact avec la deuxième couche et constituant la pellicule externe de la particule finale, ou 20 2) par ledit au moins composé magnétique enrobé par les deuxième et troisième couches, la troisième couche constituant l'enveloppe externe de la particule finale. Dans cette variante de réalisation, la forme préférée est un complexe tri-couches ayant une forme de particule dont la première couche constitue le coeur de ladite particule et a 25 une taille comprise entre 2 et 400 nm, de préférence entre 50 et 100 nm. Les formes tout particulièrement préférées du complexe selon l'invention sont des complexes comprenant de la magnétite entre 50nm et 100nm (première couche), des nanoparticules de silice (Ludox SM 7nm tout préférentiellement) ou de la bentonite 30 (deuxième couche) et des ions monophosphates, pyrophosphates, triphosphates (troisième couche). Dans le complexe selon l'invention lorsqu'il est sous forme de particule, le ratio en poids par poids (ou w/w) entre ledit au moins un composé inorganique silicaté et ledit au moins 35 un composé magnétique représente entre 0,1% et 60%, de préférence entre 1% et 50%, plus préférentiellement entre 3% et 35%, plus préférentiellement encore entre 4 et 10%. 3031063 13 Dans les variantes préférentielles de réalisation de l'invention, le ratio en poids/poids de composé inorganique silicaté sur composé magnétique est plus élevé lorsque le composé inorganique silicaté est sous forme de feuillet, comme par exemple la bentonite, que lorsqu'il est sous forme de nanoparticules. Par exemple, lorsque la particule magnétite 5 est recouverte de bentonite, le ratio bentonite/magnétite se situe entre 25% et 55% alors que si elle est recouverte de nanoparticules Ludox, le ratio Ludox/magnétite est entre 1% et 10%. Dans le même contexte lorsque le complexe selon l'invention est sous forme de particule, 10 le ratio molaire dudit au moins un composé magnétique (de préférence le Fer)/au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé inorganique silicaté et/ou au moins un composé magnétique est compris entre 0,1% et 15%, de préférence entre 0,1 et 10%, plus préférentiellement entre 5% et 10% et plus préférentiellement encore entre 6% et 9 15 Méthode de production Le complexe tri-couches selon l'invention est produit par des méthodes de fabrication faciles à mettre en oeuvre et hautement reproductibles. Ceci permet d'avoir une fiabilité dans les performances du complexe produit ainsi qu'une uniformité, ou du moins très 20 peu de variations, d'un lot de complexe produit à un autre. De plus, les méthodes de production du complexe de l'invention mises en oeuvre sont bon marché et certaines variantes de production sont très rapides. Pour mettre en oeuvre les méthodes de production du complexe selon l'invention, il 25 convient tout d'abord de décrire les méthodes d'approvisionnement des différents constituants du complexe de l'invention. - Approvisionnement en composé magnétique porteur Ledit au moins un composé magnétique est soit trouvé à l'état naturel, soit il est 30 synthétisé selon des protocoles classiques décrits dans la littérature soit par co- précipitation comme décrit par R. Massart (IEEE Trans. Magn. 1981, 17, p1247-1248.), soit par oxydation partielle de sels métalliques comme décrit par T. Sugimoto et E. Matjevic (Journal of Colloids and Interface Science, 1980, 74, P227-243), soit par décomposition de précurseurs organométalliques comme décrit par Maity (Journal of 35 Magnetic Materials 321 1256 (2009)). L'avantage de ces techniques est que l'on peut facilement incorporer d'autres atomes métalliques comme le cobalt, le manganèse, le 3031063 14 zinc, etc. ; de façon à obtenir des ferrites qui peuvent également être utilisés en tant que composé magnétique comme décrit ci-dessus dans le complexe de l'invention. De façon alternative et préférée, ledit au moins composé magnétique peut être acheté dans le commerce. C'est le cas notamment des nanoparticules d'oxydes métalliques qui 5 peuvent être achetées chez des fournisseurs de pigments pour encre magnétiques comme décrit dans The Journal of Imaging Science and Technology November/December 2000, vol. 44, no. 6; p. 508-513 " The Influence of Particle Size, Shape and Particle Size Distribution on Properties of Magnetites for the Production of Toners"). 10 - Approvisionnement en composé inorganique silicaté Ledit au moins un composé inorganique silicaté tel que décrit ci-dessus, par exemple du type magnésium ou sodium trisilicate, bentonite, kaolin, talc... peut être acheté facilement chez des fournisseurs de produits chimiques comme Sigma-Aldrich (Saint Louis, USA). Par ailleurs, de nombreux protocoles classiques et connus de l'homme du métier 15 décrivent la façon d'obtenir ces composés inorganiques silicatés. Par exemple, les nanoparticules inorganiques silicatées, utilisées dans le mode de réalisation préféré de l'invention, peuvent être synthétisées selon des protocoles classiques de condensation du tetraéthoxy silane (TEOS) en milieu aqueux et alcalin qui sont décrits dans la littérature par W. Stijber (Journal of Colloids and Interface Science 1968, 26, p62-69). De façon 20 alternative, les nanoparticules silicatées peuvent être obtenues chez des fournisseurs de produits chimiques comme la société Sigma-Aldrich (Saint Louis, USA.) fournissant par exemple les particules de la gamme LUDOX ou des équivalents de celles-ci ou comme la société NanoH (Lyon, France). Il est possible et facile d'introduire des groupements fonctionnels tels que amino, phosphonates, azido, alcyne etc... sur ces composés 25 inorganiques silicatés (de préférence les nanoparticules) par co-condensation des silanes correspondants avec le TEOS de manière à accroître la force d'interaction avec le au moins un composé magnétique (par exemple des nanoparticules phosphonates). - Approvisionnement en composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé 30 magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté Ces composés ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté sont en général des produits facilement disponibles chez des fournisseurs de produits chimiques. Sinon, ils sont aisément préparés chimiquement par des méthodes classiques et connues de l'homme du métier. 35 3031063 15 La présente invention concerne une méthode de préparation d'au moins un complexe tri-couches tel que défini ci-dessus, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins les étapes suivantes : a) mettre en contact au moins un composé magnétique tel que défini ci-dessus avec 5 au moins un composé inorganique silicaté tel que défini ci-dessus, de sorte qu'une interaction électrostatique et/ou une liaison covalente et/ou une liaison de coordination se fasse entre ledit au moins un composé magnétique et ledit au moins un composé inorganique silicaté et de sorte que la couche dudit au moins un composé inorganique silicaté recouvre, au moins partiellement, la couche dudit 10 au moins un composé magnétique, b) mettre en contact le complexe bi-couches constitué dudit au moins un composé magnétique/au moins un composé inorganique silicaté, obtenu à l'issue de l'étape a), avec au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté tel que 15 défini ci-dessus, de préférence en milieu aqueux, de sorte que ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté adhère et se positionne au-dessus de la couche dudit au moins un composé inorganique silicaté du complexe bi-couches ou au-dessus du composé magnétique lorsque la couche du au moins 20 un composé inorganique silicaté est discontinue. La liaison de la deuxième couche à la première couche se fait par adsorption et par liaison électrostatique et/ou par liaison covalente et/ou une liaison de coordination. Il en va de même pour la liaison de la troisième couche à la deuxième couche. 25 Dans une variante de réalisation, le complexe comprend un support sur lequel le complexe est fixé ou lié. Le support est tel que décrit ci-dessus. Dans ce cas, la méthode de fabrication du complexe sur le support peut se faire de plusieurs façons : soit le support est mis en contact avec le au moins un matériau magnétique de 30 sorte qu'une interaction se fasse entre les deux matériaux, soit par liaisons électrostatiques, soit par liaison covalente soit par liaison de coordination, puis la deuxième couche est ajoutée à la première couche fixée au support, la deuxième couche se fixant sur la première couche et non sur le support, soit le support est mis en contact avec un complexe bi-couches constitué de la 35 première couche liée à la deuxième couche, le support se fixant alors sur la 3031063 16 première couche du complexe bi-couches de la même façon que ce qui est décrit ci-dessus, soit le support est mis en contact avec le complexe tri-couches déjà constitué et il se fixe à la première couche du complexe tri-couches de la même façon que ce 5 qui est décrit ci-dessus. Le support a une épaisseur millimétrique à micrométrique. On peut également utiliser un matériau permettant de fixer physiquement ou 10 chimiquement la première couche du complexe au support. Il peut s'agir d'un adhésif ou de tout autre composé susceptible de remplir cette fonction, à savoir une substance intermédiaire capable maintenir la liaison entre le support solide et le composé magnétique comme par exemple, une protéine, un polymère, un polymère hydrophile ou hydrophobe, une polydopamine, etc... 15 Dans une variante préférée de réalisation de l'invention, le complexe final est sous forme de particule comprenant un coeur d'au moins un composé magnétique, lequel est recouvert au moins partiellement de deux couches : une couche d'au moins un composé inorganique silicaté et une couche de composé ayant une affinité pour ledit au moins un 20 composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté, cette dernière couche se situant à l'extérieur du complexe. Ainsi, la méthode de préparation du mode préféré de réalisation de l'invention comprend au moins les étapes suivantes : a) mettre en contact au moins un composé magnétique tel que défini ci-dessus avec au moins un composé inorganique silicaté tel que défini ci-dessus, ledit composé 25 inorganique silicaté se trouvant déjà sous forme particulaire, nano-particulaire ou sous forme non-soluble, de sorte qu'une interaction électrostatique et/ou une liaison covalente et/ou une liaison de coordination se fasse entre lesdits au moins deux composés et que les particules ou formes non-solubles recouvrent au moins partiellement la particule d'au moins un composé magnétique constituant le 30 coeur, b) mettre en contact la particule enrobée obtenue à l'issue de l'étape a) avec au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté tel que défini ci-dessus, de préférence en milieu aqueux, de sorte qu'une interaction électrostatique et/ou 35 une liaison covalente et/ou une liaison de coordination se fasse entre ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé inorganique 3031063 17 silicaté et/ou ledit au moins un composé magnétique et ledit au moins un composé inorganique silicaté du complexe bi-couches obtenu à l'issue de l'étape a) ou ledit au moins un composé magnétique et du complexe bi-couches obtenu à l'issue de l'étape a) et que ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit 5 au moins un composé inorganique silicaté et/ou ledit au moins composé magnétique adhère à la surface dudit au moins un composé inorganique silicaté ou au coeur de la particule finale. Le contact entre ledit au moins un composé magnétique et ledit au moins un composé 10 inorganique silicaté se fait généralement à un pH compris entre 2 et 7, de préférence entre 3 et 6, tout préférentiellement entre 3 et 4. De façon générale, le revêtement de la première couche dudit au moins un matériau magnétique est favorisé par des interactions électrostatiques opposées. Ainsi, le revêtement doit être réalisé dans une zone de pH où le au moins composé inorganique silicaté et ledit au moins un composé 15 magnétique ont des charges de surface contraires comme décrit US 4280918. Dans la forme préférée de réalisation du complexe de l'invention, la magnétite est utilisée comme composé magnétique et la silice est utilisée comme composé inorganique silicaté. Le point isoélectrique de la magnétite se situant à 6,8 et celui de la silice aux alentours de 2, le revêtement de la magnétite par la silice doit être effectué à un pH compris entre 2 et 20 6,8, de préférence à pH de 3,5. Pour la méthode de fabrication du complexe, les températures utilisées se situent entre 15°C et 65°C, de préférence entre 20°C et 60°C utilisées. Le mode de réalisation préféré de l'invention est très facile et rapide à synthétiser car il 25 utilise des composés commerciaux ou facilement synthétisables. Ainsi, dans un premier temps, ledit au moins un composé magnétique (de préférence les particules de magnétite) est mis à incuber entre pH 3 et 6 avec ledit au moins un composé inorganique silicaté (de préférence les nanoparticules inorganiques silicatées Ludox) afin de donner une charge positive audit au moins composé magnétique et une 30 charge négative audit au moins composé inorganique silicaté. De cette manière, les deux types de composés (sous forme de particules dans la forme préférentiellement choisie de l'invention) se lient entre elles de façon très solide en formant une structure tridimensionnelle (en forme de mûre dans le cas de l'utilisation de la magnétite et des particules de Ludox). 3031063 18 Généralement, la température utilisée à cette première étape est la température ambiante mais la température peut varier entre 20°C et 60°C. Les complexes composites obtenus, c'est-à-dire les complexes bi-couches (ou dans la forme préférentielles les particules recouvertes de Ludox) sont ensuite lavés par 5 aimantation ou par toute techniques appropriée connue permettant d'obtenir la même fonction. Dans un deuxième temps, on vient enrober au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté sur le complexe bi-couches constitué d'au moins un composé 10 magnétique recouvert d'au moins un composé inorganique silicaté. Ceci se fait par incubation dudit complexe bi-couches avec ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté en milieu aqueux pendant 30 secondes à 24h, de préférence 2h, à pH et température contrôlés. 15 Généralement, la température utilisée à cette étape est la température ambiante mais la température peut varier entre 20°C et -60°C. Le complexe tri-couches est à nouveau lavé par aimantation ou toute autre technique connue ayant la même fonction, puis il peut être repris dans l'eau afin de déterminer la concentration par mesure de l'extrait sec. 20 Les lavages sont généralement effectués dans de l'eau ou au moins dans un milieu aqueux. Cette méthode de revêtement de la couche d'au moins un composé magnétique avec au moins un composé inorganique silicaté et en particulier avec des formes non-solubles 25 dans un solvant aqueux (particules inorganiques silicatées) est décrite dans US 4280918. De façon originale, rapide et fiable, une des méthodes de fabrication du complexe selon l'invention particulièrement avantageuse est de mettre en oeuvre au moins un composé magnétique, de préférence au moins une particule de magnétite ou de maghémite, et d'y déposer sur ce dernier ou de recouvrir au moins partiellement ce dernier d'au moins un 30 composé inorganique silicaté, de préférence un composé inorganique silicaté de nature non soluble et déjà structuré comme des particules (par exemple des nanoparticules de silice) ou des feuillets (par exemple de la bentonite). Par exemple, comme composé inorganique silicaté, de préférence, on utilisera des nanoparticules de silices entre 1 et 20 nm et encore plus préférentiellement des particules Ludox® SM de 7nm. Lorsque l'on 35 utilise ces types de composés, la fabrication du complexe est simplifiée car ces composés 3031063 19 inorganiques silicatés sont disponibles dans le commerce. De plus, leur taille est parfaitement maîtrisée et donc la fabrication du complexe est très reproductible et standardisable. Dans cette variante de réalisation du complexe, une simple adsorption dudit au moins un composé inorganique silicaté sur ledit au moins un composé 5 magnétique dans les bonnes conditions de pH suffit donc à générer un couche de silice de l'épaisseur désirée, réglée par la taille des nanoparticules inorganiques silicatées. Ensuite, lors du revêtement par la troisième couche, les manques entre les nanoparticules de matériau inorganique silicaté sont comblés, ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé 10 inorganique silicaté. Ceci est généralement le cas, lorsque ledit au moins un composé formant la troisième couche a une affinité pour ledit au moins un composé magnétique préférentiellement. Lorsque le composé formant la troisième couche du complexe a une affinité pour ledit au moins un composé inorganique silicaté, il n'est pas indispensable qu'il y ait des manques dans la deuxième couche du complexe. 15 Il est à noter que de ce mode de réalisation du complexe implique une augmentation de la surface développée du complexe et donc un accroissement de la capacité d'extraction/purification des acides nucléiques. De plus, en choisissant judicieusement des particules inorganiques silicatées dotées de fonctions remarquables (amines, acides carboxyliques, etc...), on peut facilement 20 fonctionnaliser le composé magnétique avec ces fonctions sans avoir besoin de faire intervenir des processus complexes à maîtriser de condensation de silanes sur de la magnétite en présence de solvant organiques. Afin d'offrir de très bonnes capacités de capture et d'extraction et/ou purification 25 d'acides nucléiques, il est préférable que ledit au moins un composé magnétique soit entièrement revêtu par ledit au moins un composé inorganique silicaté. Il peut être ainsi compris qu'un des avantages du complexe tri-couches selon l'invention réside dans la simplicité de mise en oeuvre et de fabrication de celui-ci. Cependant, les 30 avantages de ce complexe ne se limitent pas à sa fabrication, les avantages dans son utilisation sont multiples. En effet, de façon surprenante, il a été remarqué que le complexe selon l'invention offre des propriétés remarquables et particulièrement intéressantes dans la capture et l'élution d'acides nucléiques et en particulier dans des milieux ou échantillons biologiques complexes. 35 3031063 20 Les complexes tri-couches de l'invention ont été évalués pour leur capacité à extraire les acides nucléiques à partir de cellules ou de bactéries contenues dans un milieu ou échantillon complexe comme le sang. Par échantillon, on entend un échantillon ayant diverses origines comme les échantillons 5 d'origine alimentaire, environnementale, humaine, vétérinaire ou cosmétique. Parmi les échantillons d'origine alimentaire, on peut citer, de façon non-exhaustive, un échantillon de produits lactés (yaourts, fromages, etc.), de viande, de poisson, d'oeuf, de fruit, de légume, de boisson (lait, jus de fruits, soda, etc.). Bien évidemment, ces échantillons d'origine alimentaire peuvent aussi provenir de sauces ou de plats plus 10 élaborés ou des matières premières non transformées ou partiellement transformées. Un échantillon alimentaire peut également être issu d'une alimentation destinée aux animaux, telle que des tourteaux, des farines animales. Tous ces échantillons, s'ils ne sont pas liquides, sont préalablement traités pour être sous forme liquide. Tel qu'indiqué précédemment, l'échantillon peut être d'origine environnementale et peut 15 consister, par exemple, en un prélèvement de surface, d'eau, etc. L'échantillon peut également consister en un échantillon biologique, d'origine humaine ou animale, pouvant correspondre à des prélèvements de fluide biologique (urine, sang total ou dérivés tels que sérum ou plasma, crachat ou salive, pus, liquide céphalorachidien, etc.), de selles (par exemple diarrhées cholériques), de prélèvements de nez, 20 de gorge, de peau, de plaies, d'organes, de tissus ou de cellules isolées, d'échantillons d'écouvillonnage, des prélèvements ou lavages broncho-alvéolaires, des biopsies. Cette liste n'est évidemment pas exhaustive. D'une manière générale, le terme « échantillon » se réfère à une partie ou à une quantité, plus particulièrement une petite partie ou une petite quantité, prélevée à partir d'une ou 25 plusieurs entités aux fins d'analyse. Cet échantillon peut éventuellement avoir subi un traitement préalable, impliquant par exemple des étapes de mélange, de dilution ou encore de broyage, en particulier si l'entité de départ est à l'état solide. L'échantillon analysé est, en général, susceptible de - ou suspecté de - contenir au moins une biomolécule représentative de la présence de microorganismes ou d'une maladie à 30 détecter, caractériser ou suivre. Par biomolécule, on entend un composé ou une entité chimique pouvant être un acide nucléique (ADN ou ARN de tout type ADN génomique, ADN complémentaire, ARN messager, ARN complémentaire, ARN de transfert, ARN mitochondrial, ADN de 35 chloroplaste, ARN ribosomal, ADN plasmidique, ADN ou ARN viral, microARN, snoARN, siARN, ARNi, sous forme monocaténaire ou bicaténaire) ou une protéine. 3031063 21 Par un micro-organisme, on entend tout ou partie d'une bactérie, d'un champignon, d'une levure ou d'un virus. 5 Ainsi, la présente invention concerne également une méthode de purification de micro- organismes et/ou biomolécules ou d'extraction de biomolécules, de préférence d'acides nucléiques, à partir d'un échantillon, de préférence biologique, dans laquelle on met en oeuvre au moins un complexe tel que défini ci-dessus. 10 Par extraction, on entend une technique permettant d'isoler des biomolécules à partir d'un échantillon quel qu'il soit, par exemple, l'isolement d'ADN ou d'ARN à partir de cellules eucaryotes, procaryotes, animales humaines, de micro-organismes ou d'un tissu. Ainsi, l'extraction au sens de l'invention inclut la lyse et la purification des biomolécules. La purification comprend elle-même l'adsorption ou capture, le lavage et l'élution des 15 biomolécules et/ou des micro-organismes. La capture consiste à adsorber les biomolécules et/ou micro-organismes sur le complexe et l'élution à la désorption ou libération de ces derniers du complexe selon l'invention. Lorsque l'on parle de la purification de micro-organismes, il n'y a pas de lyse de ces derniers, il peut s'agir alors d'un enrichissement en micro-organismes. 20 De préférence, les tests du complexe sont réalisés en conditions chaotropiques qui sont des conditions où les structures tridimensionnelles des macromolécules biologiques, comme les protéines, l'ADN ou l'ARN sont dénaturées. Les agents chaotropiques interfèrent avec les interactions intramoléculaires faibles (non-covalentes), comme les 25 liaisons hydrogène, les forces de van der Waals et les forces hydrophobes. Parmi les agents chaotropiques, on peut citer l'urée, les sels de guanidine comme le chlorure ou le thiocyanate de guanidinium et le perchlorate de lithium. Ils sont généralement utilisés en concentration allant de 1 à 6 M, en particulier pour le GuSCN et le GuHCI. Généralement on ajoute aussi un détergent qui aide à la lyse des cellules, ce dernier peut 30 être choisi parmi les Tween, les tritons, le SDS et autres détergents communément utilisés à des concentrations comprises entre 0,05 et 5%. Ainsi, les protéines capables de dénaturer ou endommager les acides nucléiques comme les nucléases sont inhibées ou détruites dans les conditions chaotropiques et ceci offre des conditions des plus favorables pour extraire de façon efficace des acides nucléiques. 35 De préférence, pour la capture des acides nucléiques dans la présente invention, on utilise le chlorure de guanidinium ou le thiocyanate de guanidinium et/ou l'acide 3031063 22 chlorhydrique (HCI) en milieu tamponné à pH 7 et un détergent, de préférence le triton X100. Le complexe selon l'invention offre des propriétés hautement performantes dans la 5 purification et/ou l'extraction des biomolécules et/ou micro-organismes et en particulier dans l'extraction des acides nucléiques. Les bonnes propriétés de capture des acides nucléiques via des particules magnétiques enrobées de silice sont largement connues. Il est montré dans la présente demande que le fait d'ajouter un composé ayant une forte affinité pour ledit au moins un composé 10 magnétique à une particule de composé magnétique affecte la capture des ADN. En revanche et de façon très surprenante, dans le complexe selon l'invention dans lequel nous avons un composé magnétique recouvert d'au moins un composé inorganique silicaté, lui-même recouvert par au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé inorganique silicaté et/ou pour le au moins composé magnétique, soit 15 une combinaison des deux types de particules déjà connues et décrites ci-dessus, la capture des acides nucléiques et en particulier des ADN n'est pas du tout affectée, elle en est même potentialisée. Cet effet synergique n'était absolument pas prévisible. Il était plutôt prévisible que ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé inorganique silicaté et/ou pour le au moins composé magnétique déplacent 20 totalement le revêtement de composé inorganique silicaté et fasse chuter le rendement d'extraction de l'ADN. De même, il ne pouvait pas être envisagé des types de particules décrites précédemment que le complexe tri-couches améliorerait les capacités d'élution de l'ARN et offrirait ainsi des propriétés de purification et d'extraction des acides nucléiques ADN et ARN nettement améliorées par rapport à l'art antérieur. Les exemples 25 illustrent très clairement ce phénomène et bien que les exemples soient limités à quelques composés magnétiques, composés inorganiques silicatés et composés ayant une affinité pour ledit au moins un composé inorganique silicaté et/ou pour ledit au moins composé magnétique, il est tout à fait possible pour l'homme du métier de généraliser les effets obtenus aux différentes combinaisons possibles et envisageables de 30 ces trois composés listés ci-dessus pour former un complexe tri-couches selon l'invention. Comme il a été précisé plus haut, la forme particulièrement préférée de composé inorganique silicaté est constituée par les nanoparticules de silice comprise entre 1 et 20 nm. Il faut noter que plus la taille des nanoparticules de composé inorganique silicaté 35 liées à la première couche magnétique du complexe de l'invention est petite, plus l'extraction des acides nucléiques avec les complexes selon l'invention est importante et 3031063 23 efficace. En quelques sortes, la taille de particules influent sur le rendement d'extraction des acides nucléiques et plus la surface spécifique des nanoparticules de composé inorganique silicaté est importante, plus l'extraction des acides nucléiques est bonne: un complexe ayant de la magnétite recouverte par des nanoparticules de composé 5 inorganique silicaté Ludox® HS 40 captera moins d'acides nucléiques qu'un complexe ayant de la magnétite recouverte par des nanoparticules de composé inorganique silicaté Ludox® SM 7nm. Pour obtenir de bons résultats dans la purification des micro-organismes et/ou des 10 biomolécules ou l'extraction des biomolécules, en particulier des acides nucléiques, les ratios en poids par poids de composé inorganique silicaté / composé magnétique sont compris entre 0,1% et 60%, de préférence entre 0,5% et 30%, plus préférentiellement entre 1% et 20%, plus préférentiellement encore entre 2% et 15%, tout particulièrement préféré entre 3% et 10%. 15 Pour obtenir de bons résultats dans la purification des micro-organismes et/ou des biomolécules ou l'extraction des biomolécules, en particulier des acides nucléiques, les ratios en poids par poids de composé magnétique/ composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique 20 silicaté sont compris entre 0,1% et 20%, de préférence entre 0,1% et 10%., plus préférentiellement entre 4% et 8%. Dans un autre de ses aspects, la présente invention concerne une méthode de détection et/ou de quantification des biomolécules, en particulier des acides nucléiques cibles, à 25 partir d'un échantillon susceptible de contenir lesdits acides nucléiques cibles, comprenant les étapes suivantes : 1) l'extraction des acides nucléiques d'un échantillon par la mise en oeuvre de la méthode telle que décrite ci-dessus, 2) la détection et/ou la quantification des acides nucléiques cibles par des 30 techniques de détection et/ou de quantification classiques. En effet, une fois que les biomolécules ont été extraites avec le complexe selon l'invention, il est intéressant de détecter les acides nucléiques cibles, voire de les quantifier afin de poser un diagnostic précis. Ces acides nucléiques cibles sont ceux 35 suspectés ou susceptibles d'être présents dans l'échantillon testé. 3031063 24 Les méthodes de détection classiques utilisables sont toutes celles largement connues de l'homme du métier. Par exemple, on peut citer de façon non exhaustive des marquages radio-actifs; des marquages froids: colorimetrie, fluorescence, chimioluminescence ; des hybridations moléculaires ; des Southern Blot ; des Northern 5 Blot ; des Dot Blot ou de l'hybridation in situ. De façon préférentielle, on utilise une détection avec une sonde détection. Par sonde de détection ou sonde, on entend une séquence nucléique d'un enchaînement nucléotidique de quatre bases de types différents choisis parmi le groupe d'adénine, thymine, guanine, uracile, cytosine, qui est capable de s'hybrider spécifiquement sur un amplicon et comportant au moins un 10 marqueur. La sonde peut être une sonde de forme arrondie (appelée 0-probe, voir demande de brevet de la Demanderesse FR08/54549 déposée le 4 juillet 2008), une balise moléculaire (autrement appelée Molecular Beacon), une sonde Taqman® ou une sonde FRET. Ces trois derniers types de sondes étant bien connus de l'homme du métier. Ces sondes peuvent éventuellement être constituées en tout ou partie de 15 nucléotides modifiés. Chaque sonde comporte un marqueur et éventuellement un quencher. Parmi ces sondes, préférentiellement, on utilise des sondes émettant une fluorescence lorsqu'elles s'hybrident à la séquence complémentaire, des sondes décrites par Tyagi & Kramer (Nature Biotech, 1996, 14 :303-308), communément connues sous le nom de « molecular beacons » ou des kits commerciaux comme par 20 exemple des kits de la gamme R-gene de chez Argene (bioMérieux, Verniolle, France). Il est possible de faire la détection en temps réel ou à la fin de la réaction. A compléter avec une liste des sondes envisageables et des techniques envisageables si ce n'est pas assez précis 25 Les méthodes de quantification utilisées sont les méthodes de quantification standards et classiquement utilisées par l'homme du métier. Par exemple, il est possible d'utiliser des kits de quantification de gamme R-gene® de chez Argene (bioMérieux, Verniolle, France). Ces méthodes font classiquement intervenir des gammes de quantification standards (QS) permettant d'évaluer la quantité réelle d'un acide nucléique donné ou d'acides 30 nucléiques dans l'échantillon testé. Dans une variante de réalisation, la présente invention concerne une méthode de détection et/ou de quantification d'acides nucléiques cibles telle que décrite ci-dessus dans laquelle entre l'étape d'extraction et l'étape de détection des acides nucléiques, il y 35 a une étape d'élution des acides nucléiques du complexe mis en oeuvre dans l'étape 3031063 25 d'extraction et/ou une étape d'amplification des acides nucléiques par des techniques classiques. L'étape d'élution se fait généralement à l'aide d'une solution à pH légérement alcalin et 5 de faible force ionique à une température comprise entre 50°C et 70°C. De façon générale, on préfère utiliser les produits commerciaux tels que les produits de la gamme d'extraction NucIiSENS easyMAG (bioMerieux, France). Ces conditions sont des conditions classiques permettant de conserver l'intégrité des acides nucléiques et sont des conditions standards. 10 Par amplification ou réaction d'amplification, on entend toute technique d'amplification d'acides nucléiques bien connue par l'homme du métier L'étape d'amplification se fait généralement car la quantité des acides nucléiques à détecter et/ou quantifier est très faible et qu'il est nécessaire de passer par une phase 15 d'amplification de ces derniers pour les détecter et/ou les quantifier afin de donner un diagnostic précis. Sans phase d'amplification, il est tout à fait possible d'obtenir des résultats erronés concluant à l'absence d'un acide nucléique cible dans un échantillon alors qu'en réalité il est présent dans ce dernier mais en quantité tellement faible que les techniques utilisées ne permettent pas de le détecter. Ainsi de nombreuses méthodes 20 d'amplification peuvent être utilisées telles que PCR, RT-PCR, LCR, RCR, 3SR, RCA, NASBA, TMA, SDA ou toutes techniques d'amplification des acides nucléiques connues de l'homme du métier. Les tests réalisés de détection et/ou amplification d'acides nucléiques cibles avec les 25 complexes selon l'invention donnent d'excellents résultats. Dans un autre de ses aspects, la présente invention concerne une méthode de lyse de micro-organismes et/ou de cellules et/ou de tissus, à partir d'un échantillon, caractérisée en ce qu'elle consiste à mettre en contact au moins un échantillon avec au moins un 30 complexe tri-couches tel que décrit ci-dessus et dans lequel ledit au moins un composé inorganique silicaté et/ou ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté comprend au moins un agent de la famille des détergents permettant la lyse. 35 Dans certaines situations d'analyse, il peut être intéressant de lyser de façon ciblée des cellules, les cellules d'un tissu et/ou des micro-organismes. Ainsi, l'utilisation de ce 3031063 26 complexe peut être intéressante lorsqu'il s'agit de cibler un certain type cellulaire ou de micro-organisme. Par exemple, dans le cadre du sepsis, il peut être nécessaire de lyser, de façon ciblée et sélective, les membranes et les acides nucléiques des cellules sanguine humaines présentes en grande quantité dans un échantillon. Ceci peut être réalisé avec 5 de la saponine qui pénètre et fragilise les membranes et les enveloppes contenant du cholestérol. Il peut être nécessaire de faire cette lyse sélective en vue de pouvoir sélectionner et extraire les micro-organismes pathogènes présents en très faibles quantités dans l'échantillon testé. Après une lyse de ces micro-organismes très faiblement représentés, il sera possible de purifier leurs acides nucléiques et de les 10 amplifier de façon sélective avec une très haute sensibilité malgré le fait qu'ils soient présents en très petite quantité dans l'échantillon initial. Le complexe tri-couches selon l'invention pourrait aider en ce sens. Comme il a été décrit ci-dessus, les composés constituant la deuxième et/ou la troisième couche du complexe de l'invention peuvent être fonctionnalisés avec des composés de la famille des détergents, comme les 15 saponines par exemple. Ainsi, ces complexes ainsi fonctionnalisés peuvent avoir un rôle dans la lyse sélective de cellules humaines. Ainsi, le complexe tri-couches pourrait être utilisé pour faire une première étape de lyse et capture sélective des acides nucléiques non ciblés et faciliter en quelques sorte une étape d'enrichissement ciblé de microorganismes présents dans l'échantillon mais non captés par les complexes de l'invention. 20 Il peut également être envisagé d'avoir un complexe tri-couches selon l'invention dont ledit au moins un composé inorganique silicaté et/ou ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté soient fonctionnalisés de façons différentes et complémentaires et permettent de capter et/ou lyser différents types de biomolécules 25 et/ou micro-organismes. Dans le mode de réalisation préféré de l'invention selon cette méthode, ledit au moins un composé inorganique silicaté comprend des nanoparticules de silice entre 1 nm et 20 nm dont la silice est liée avec des saponines et/ou le composé ayant une affinité pour ledit au 30 moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté couplés à une saponine. La fonctionnalisation peut ne pas être complète, c'est-à-dire que les composés ainsi fonctionnalisés peuvent ne recouvrir que partiellement ledit au moins un composé magnétique. 35 Tous les composés inorganiques silicatés et tous les composés ayant une affinité pour le au moins composé magnétique et/ou pour le composé inorganique silicaté listés ci- 3031063 27 dessus sont « fonctionnalisables » par un détergent de type saponine. Dans une forme de réalisation préférée pour l'utilisation de lyse cellulaire ou de micro-organismes sélective, le composé inorganique silicaté est une nanoparticules de silice Ludox® 7nm et le composé ayant une affinité pour le au moins composé magnétique et/ou le au moins un 5 composé inorganique silicaté est choisi parmi la dopamine et ses dérivés, les catechols et leurs dérivés, les acides phosphoniques, les phosphonates, les phosphates et les composé de la famille des acides carboxyliques. Enfin dans un dernier aspect, la présente invention concerne une trousse de diagnostic 10 moléculaire comprenant au moins un complexe tri-couche selon l'invention définie ci- dessus. Cette dernière peut inclure également des réactifs permettant l'amplification spécifique des acides nucléiques susceptibles ou suspectés d'être contenus dans l'échantillon à 15 tester, et/ou des réactifs permettant la détection et/ou la quantification des acides nucléiques susceptibles ou suspectés d'être contenus dans l'échantillon à tester Ces trousses permettront de mettre en oeuvre les différentes méthodes d'extraction et/ou de détection et/ou quantification décrites ci-dessus. 20 Les exemples et figures ci-joints représentent des modes de réalisation particuliers de l'invention et ne peuvent être considérés comme limitant la portée de la présente invention. 25 Figures : Les différentes figures aident à la compréhension de l'invention et illustrent les résultats et performances obtenues avec le complexe selon l'invention. - La figure 1 est un schéma du complexe selon l'invention dans une forme de réalisation possible, les hachures représentant le support solide, les étoiles représentant le au moins 30 un composé magnétique, les cercles représentant ledit au moins un composé inorganique silicaté et la lettre L représentant ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté. - La figure 2 est un schéma de la formation du complexe selon l'invention dans une forme 35 de réalisation préférée. 3031063 28 - La figure 3 correspond à une image au microscope électronique de complexes selon l'invention : particules de magnétite recouvertes quasiment entièrement de nanoparticules inorganiques silicatées Ludox® SM 7 nm. - La figure 4 représente le rendement de capture (noir) et d'élution (quadrillé) de l'ADN 5 pour des particules de magnétite recouvertes de composés inorganiques silicatés. - FSC 419 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite de 100nm ; - AL1001 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite de 100nm recouvertes de Ludox® 6% (poids/poids) à pH 3,5 10 - AL1018 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite de 100nm recouvertes de MgSiO4 50% (poids/poids) à pH 3,5 - AL 1024 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite recouvertes de NaSiO4 50% (poids/poids) à pH 3,5 - AL 1014 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite 15 recouvertes de bentonite 30% (poids/poids) à pH 3,5. - La figure 5 représente le rendement de capture (gris) et d'élution (quadrillé) de l'ARN pour des particules de magnétite recouvertes de composés inorganiques silicatés. Les mêmes particules que celles de la figure 4 ont été testées. - La figure 6 représente le rendement global d'extraction de l'ADN (noir) et de l'ARN (gris) 20 pour des particules de magnétite recouvertes de composés inorganiques silicatés décrites dans la figure 4. - La figure 7 A représente le rendement de capture (noir) et d'élution (quadrillé) de l'ADN et de l'ARN pour des particules de magnétite enrobées par un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé 25 inorganique silicaté. - AB 930 correspond à des particules de magnétite seules - KE54a correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite recouvertes d'ions phosphates à 6% molaire. Par % molaire dans les figures et exemples, on entend ratio molaire Fer/ Composé ayant une affinité pour le 30 composé inorganique silicaté et/ou le composé magnétique (qu'on peut appelé aussi ligand) - KE220 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite recouvertes d'ions pyrophosphates à 6% molaire - KE351 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite 35 recouvertes d'ions triphosphates à 6% molaire 3031063 29 - KE225 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite recouvertes d'H EEPA acide(2-(2-(2-Hydroxyethoxy(ethoxy)ethyl-phosphonique) (Sikemia, Montpellier, France) à 10% molaire - KE231 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite 5 recouvertes de NTPA acde(Nitrilotris(methylène) triphosphonique(Acros, Geel, Belgique) à 0,1% molaire. - La figure 7 B représente le rendement de capture (gris) et d'élution (quadrillé) de l'ARN pour les mêmes particules que celles de la figures 7A. - La figure 8 représente le rendement global d'extraction de l'ADN (noir) et de l'ARN (gris) 10 pour des particules des figures 7A et 7B. - La figure 9 représente le rendement de capture (noir) et d'élution (quadrillé) de l'ADN pour des particules de magnétite recouvertes de composés inorganiques silicatés et de composés ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté. 15 - FSC 419 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite de 100nm ; - AL1001 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite de 100nm recouvertes de Ludox® 6% (poids/poids) à pH 3,5 - AL1013 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite de 20 100nm recouvertes de Ludox® 6% (poids/poids) et d'ion pyrophosphate à 6,8% molaire - AL 1014 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite recouvertes de bentonite 30% (poids/poids) à pH 3,5. - AL1015 correspond aux résultats obtenus avec des particules de magnétite de 25 100nm recouvertes de bentonite 30% (poids/poids) et d'ion pyrophosphate à 6,8% molaire. - La figure 10 représente le rendement de capture (gris) et d'élution (quadrillé) de l'ARN pour des particules de magnétite recouvertes de composés inorganiques silicatés et de composés ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour 30 ledit au moins un composé inorganique silicaté (en comparaison avec les références). Certaines particules de la figure 9 ont été testées vis-à-vis des ARN et les résultats figurent en figure 10. Les autres particules testées sont listées dans le tableau 3 de l'exemple 3 ci-dessous. - La figure 11 représente le rendement global d'extraction de l'ADN (noir) et de l'ARN (gris) 35 pour des particules de magnétite recouvertes de composés inorganiques silicatés et de 3031063 30 composés ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté (en comparaison avec les références) des figures 9 et 10. - La figure 12 représente l'efficacité d'extraction des acides nucléiques dans le sang avec 5 des complexes tri-couches selon l'invention comprenant un type de magnétite (AB 930 de 100 nm) comme décrit dans l'invention (dosage UV au Nanodrop (ThermoScientific, Waltham, USA)). - La figure 12 A représente l'absorbance de 3 types de particules en fonction de la longueur d'onde 10 - AB930 : magnétite pure - courbe avec les triangles - AB1760 : magnétite recouverte de Ludox® SM 6% poids/poids - courbe avec les croix, et - AB1773 : magnétite recouverte de Ludox® SM 6% puis d'ions pyrophosphate à 6,8% molaire -courbe avec les losanges. 15 - La figure 12B représente la quantité d'acides nucléiques capturés dans le sang en fonction de trois types différents de particules ; les mêmes que celles de la figure 12A. - La figure 13 illustre l'efficacité d'extraction des acides nucléiques dans le sang avec des complexes tri-couches selon l'invention comprenant un autre type de magnétite AB 1757 50 nm comme décrit dans l'invention (dosage UV au Nanodrop (ThermoScientific, 20 Waltham, USA )). Les 4 types de particules testés sont les suivant KE220 : magnétite enrobée d'ions pyrophosphates à 6,8% molaire ; AB1761 : magnétite enrobée de 6% poids/poids de Ludox® ; AB 1774: magnétite enrobée de Ludox 6% poids/poids et d'ions pyrophosphates à 6,8% molaire et AB1777 : magnétite enrobée de Ludox® à 6% poids/poids et d'ions triphosphates à 6,8% molaire. 25 - La figure 14 illustre l'efficacité d'extraction des acides nucléiques dans le sang avec des complexes tri-couches selon l'invention comprenant un autre type de magnétite FSC 419 100 nm comme décrit dans l'invention (dosage UV au Nanodrop (ThermoScientific, Waltham, USA )). - La figure 14 A représente l'absorbance de 2 types de particules en fonction de la 30 longueur d'onde : - AL1001 : magnétite recouverte de Ludox® 6% poids/poids -courbe avec tirets, et - AL1013 : magnétite recouverte de Ludox® 6% puis d'ions pyrophosphate à 6,8% molaire - courbe pleine - La figure 14B représente la quantité d'acides nucléiques capturés dans le sang en 35 fonction de trois types différents de particules : KE220 : magnétite enrobée d'ions 3031063 31 pyrophosphates à 6,8% molaire ; les 2 mêmes types de particules que celles de la figure 14A. - La figure 15 illustre l'efficacité d'extraction des acides nucléiques dans le sang avec des complexes tri-couches selon l'invention comprenant d'un autre type de composé 5 inorganique silicaté : la bentonite comme décrit dans l'invention (dosage UV au Nanodrop (ThermoScientific, Waltham, USA )). - La figure 15 A représente l'absorbance de 2 types de particules en fonction de la longueur d'onde : - AL1014 : magnétite recouverte de bentonite 30% poids/poids -courbe avec tirets, 10 et - AL1015 : magnétite recouverte de bentonite 30% puis d'ions pyrophosphate à 6,8% molaire -courbe pleine. - La figure 15B représente la quantité d'acides nucléiques capturés dans le sang en fonction de trois types différents de particules : KE220 : magnétite enrobée d'ions 15 pyrophosphates à 6,8% molaire ; les 2 mêmes types de particules que celles de la figure 15A. - La figure 16 illustre les résultats d'une amplification par PCR de l'ADN du virus CMV extrait par différent types différents de particules magnétiques simplement (complexes bi-couches) ou doublement enrobées (complexe tri-couches selon l'invention) 20 - AL1001 : magnétite enrobée de Ludox 6% - AL1013 : magnétite enrobée de Ludox 6% poids/poids et d »'ions pyrophosphates à 6,8% molaire - AL1014 : magnétite enrobé de bentonite au ratio 30% poids/poids - AL1015 : magnétite enrobée de bentonite au ratio 30% poids/poids puis d'ions 25 pyrophosphates à 6,8% molaire. Exemples Exemplel : Enrobage de particules de magnétite par des composés inorganiques 30 silicatés (magnétite/composés inorganiques silicatés) Des enrobages de particules de magnétite de 100nm environ, par des composés inorganiques silicatés commerciaux, ont été réalisés avec différents ratios magnétite/silice. Dans les exemples ci-dessous nous avons utilisé des Ludox SM®de 7 nm, de la bentonite, du silicate de magnésium ou de sodium, de la silice « fumée » ou du 35 dioxyde de silicium. 3031063 32 L'enrobage est favorisé par des interactions électrostatiques opposées. Ainsi, ce dernier doit être réalisé dans une zone de pH où les nanoparticules inorganiques silicatées et la magnétite ont des charges de surface contraires. Le point isoélectrique de la magnétite se situant à 6,8 et celui de la silice aux alentours de 5 2. L'enrobage doit être effectué à un pH compris entre 2 et 6,8 soit un pH retenu de 3,5 comme décrit ci-dessous. A- Protocole d'enrobage de la magnétite : 10 1- De 1 à 400 mg de magnétite (11-814 III à 92.1 mg/ml) sont lavés et repris dans le même volume avec une solution d'HCI à 1 mM pH 3 afin d'ajuster le pH de la suspension. Le volume de la solution de lavage dépend de la quantité de magnétite (entre 2 ml (1-75 mg de magnétite) et 10 ml (400 mg de magnétite)). 2- Les solutions de composés inorganiques silicatés indiqués ci-dessus sont préparées dans l'eau et leur pH est ajusté aux environs de 3 par addition de quelques gouttes de HCL à 1M avant d'ajuster leurs concentrations entre 30 et 300 mg/ml. On mélange les suspensions de magnétite et de composés inorganiques silicatés dans les ratios indiqués dans le Tableau 1 ci-dessous et on mélange par vortex immédiatement avant d'ajuster le volume, avec une solution d'HCI à 1 mM pH 3, entre 2 ml et 10 ml selon la quantité de magnétite engagée. On trouvera dans le Tableau 1 quelques exemples d'enrobage de la magnétite par des nanoparticules inorganiques silicatées réalisés avec des ratios magnétite/silice (poids/poids) compris entre 1% et 50% afin d'obtenir des nanocomposites possédant des taux de recouvrement différents. Le pH de la suspension finale est vérifié et doit être autour de 3-3,5 et selon le type de composé silicaté inorganique, on peut être amené à ajuster le pH avec quelques III de NaOH ou de HCI à 1M. La suspension est agitée sur un agitateur à rouleaux pendant 1 à 2 heures à température ambiante. Un contrôle négatif peut être réalisé de la même manière mais avec une solution de soude à pH = 9-11 (100 pi.M - 1, 5 mM de NaOH) et sans ajuster le pH des composés inorganiques silicatés. A ce pH, les nanoparticules de silice et de magnétite sont toutes les deux chargées négativement et la silice n'enrobe pas la magnétite. 15 3- 20 25 4- 5- 30 6- 35 3031063 33 B- Protocole de lavage de la suspension de particules magnetite/composés inorganiques silicatés 1. Le surnageant est éliminé par aimantation des particules composites 5 magnetite/nanoparticules silicatées nouvellement formées. La suspension est lavée d'abord à l'eau par aimantation puis à l'aide d'une solution de soude à 100 pM, pH 9 puis reprise dans la même solution et de façon facultative est soumise à des ultrasons pendant 10 min à 100% de la puissance (Vibra-cell 75042, Bioblock Scientific, Illkirch, France). La solution de soude est éliminée de la solution par 10 aimantation. Ces étapes sont réalisées trois fois voire plus jusqu'à atteindre un pH de 9. 2. La solution de particules est lavée à l'eau par aimantation successives 3 fois jusqu'à pH 7 puis concentrée à 50 mg/ml. Un extrait sec est réalisé afin de vérifier cette concentration. Particule de Composés inorganiques silicatés Ratio pH IEP magnétite porteuse silice/ma Greff (Poi age nt Isoél ectri que) Type de Masse Type de Nanoparticules Masse gnétite magnétite utilisée utilisée poids/po ids) AL Magnétite 75 mg ludox SM 7 nm (Sigma Aldrich, ref. 420794) en solution dans l'eau à 30% à pH 9,5 15 pl 6% 11 7.5 1001- FSC 419 (4,5mg) CTRLE) 100 nm 92.1 mg/ml . 814 pl KE 59 Magnétite 75 mg ludox SM 7 nm Sigma 0.75 mg 1% 3-4 5.2 AB 930/ Aldrich, référence 420794) 100 nm en solution dans l'eau à 30% à pH 9,5 KE 58 Magnétite AB 930 75 mg idem 2.25 mg 3% 3-4 3.8 3031063 34 100 nm AB 1760 Magnétite 400 mg idem 29 mg 6% 3-4 2 AB 930 100 nm AL 1001 Magnétite 75 mg idem 15 pl 6% 3-4 4 FSC 419 (4,5mg) 100 nm AB 1761 Magnétite 400 mg idem 29 mg 6% 3-4 nd AB 1757 50 nm AL 1009 Magnétite 5 mg bentonite (Aldrich 285234) 50 mg/ml dans l'eau à pH 6µl 6% 3-4 REVENDICATIONS1- Complexe tri-couches comprenant : - une première couche comprenant au moins un composé magnétique, - une deuxième couche recouvrant, au moins partiellement, la première couche et comprenant au moins un composé inorganique silicaté, - une troisième couche recouvrant, au moins partiellement, la deuxième couche et comprenant au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté. 2- Complexe tri-couches selon revendication 1, caractérisé en ce que ledit au moins un composé magnétique est choisi parmi les métaux et les oxydes métalliques. 3. Complexe tri-couches selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ledit composé magnétique est choisi parmi la magnétite, la maghémite et les ferrites. 4. Complexe tri-couches selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ledit au moins un composé inorganique silicaté est choisi parmi les silicates, les silicates de magnésium ou de sodium ou de potassium ou de lithium ou de calcium, le talc, les alumino-silicates, le kaolin, la bentonite, les nanoparticules de silice entre 1 et 20 nm, les nanoparticules de silice mésoporeuses, les nanoparticules magnétiques recouvertes de silice, les nanoparticules de silice citées précédemment dont la silice est liée à des groupements organiques ou inorganiques. 5. Complexe tri-couches selon la revendication 4, caractérisée en ce que ledit au moins un composé inorganique silicaté est constitué de bentonite ou de nanoparticules de silice entre 1 nm et 20 nm. 6. Complexe tri-couches selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit au moins un composé inorganique silicaté est sous forme particulaire tel qu'un grain, un feuillet, une fibre, une aiguille, une nano-particule..., de préférence sous forme nano-particulaire, ou sous forme non-soluble dans un solvant aqueux, un mélange solvant aqueux-solvant organique ou un solvant organique. 3031063 52 7. Complexe tri-couches selon la revendication 6, caractérisé en ce que les particules ou formes non solubles du composé inorganique silicaté ont une taille comprise entre 1 5 et 20 nm, de préférence entre 2 et 10 nm, plus préférentiellement entre 6 et 8 nm. 8. Complexe tri-couches selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique 10 silicaté est de nature organique ou inorganique. 9. Complexe tri-couches selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique 15 silicaté est choisi parmi l'acide citrique et ses sels, les ions phosphates, pyrophosphates, triphosphates, polyphosphates, les acides phosphoniques, les phosphonates, les phosphonates ou les acides phosphoniques couplés à des molécules organiques, les composés de la famille des acides phosphoriques, les composés de la famille des détergents et/ou les composés de la famille des acides 20 carboxyliques. 10. Complexe tri-couches selon la revendication 9, caractérisé en ce que ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté est constitué de 25 monophosphates, de pyrophosphates et/ou de triphosphates. 11. Complexe tri-couches selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend en outre un support solide sous toute ou partie de la première couche. 30 12. Complexe selon la revendication 11, caractérisé en ce que le support est un support plan, un support creux, une galette, une aiguille, une membrane, une plaque, un cône, un tube, une bille, une particule, de préférence une particule. 3031063 53 13. Complexe tri-couches selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le complexe est sous forme de particule et en ce que ladite troisième couche se situe à l'extérieur de la particule. 5 14. Complexe selon la revendication 13, caractérisé en ce que la première couche constitue le coeur de la particule et a une taille comprise entre 2 et 400 nm, de préférence entre 50 et 100 nm. 15. Méthode de purification de micro-organismes et/ou biomolécules ou d'extraction 10 biomolécules, de préférence d'acides nucléiques, à partir d'un échantillon, dans laquelle on met en oeuvre au moins un complexe tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 14. 16. Méthode de détection et/ou de quantification d'acides nucléiques cibles, à partir 15 d'un échantillon susceptible de contenir lesdits acides nucléiques cibles, comprenant les étapes suivantes : 1. l'extraction des acides nucléiques d'un échantillon par la mise en oeuvre de la méthode telle que définie dans la revendication 15, 2. la détection et/ou la quantification des acides nucléiques cibles par des 20 techniques de détection et/ou de quantification classiques. 17. Méthode de détection et/ou de quantification d'acides nucléiques cibles selon la revendication 16, caractérisée en ce qu'entre l'étape d'extraction et l'étape de détection des acides nucléiques, il y ait une étape d'élution des acides nucléiques du 25 complexe mis en oeuvre dans l'étape 1) et/ou une étape d'amplification des acides nucléiques par des techniques classiques. 18. Méthode de lyse de micro-organismes et/ou de cellules et/ou de tissus, à partir d'un échantillon, caractérisée en ce qu'elle consiste à mettre en contact au moins un 30 échantillon avec au moins un complexe tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 14 et dans lequel ledit au moins un composé inorganique silicaté et/ou ledit au moins un composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé inorganique silicaté comprend au moins un agent de la famille des détergents permettant la lyse. 3031063 54 19. Méthode selon la revendication 18, dans laquelle ledit au moins un composé inorganique silicaté comprend des nanoparticules de silice entre 1 nm et 20 nm dont la silice est liée à au moins une saponine et/ou le composé ayant une affinité pour ledit au moins un composé magnétique et/ou pour ledit au moins un composé 5 inorganique silicaté est choisi parmi la dopamine et ses dérivés, les catechols et leurs dérivés, les phosphonates, les phosphates et les composé de la famille de acides carboxyliques couplés à une saponine 20. Trousse de diagnostic moléculaire comprenant au moins un complexe tel que défini 10 dans l'une quelconque des revendications 1 à 14. 21. Trousse de diagnostic moléculaire selon la revendication 20 comprenant en outre : des réactifs permettant l'amplification spécifique des acides nucléiques susceptibles ou suspectés d'être contenus dans l'échantillon à tester, et/ou 15 des réactifs permettant la détection et/ou la quantification des acides nucléiques susceptibles ou suspectés d'être contenus dans l'échantillon à tester.