Brevet FR3031040A1 — publié le 20160701

La présente invention concerne un procédé d'obtention d'un extrait protéique concentré en superoxyde dismutase (SOD) ainsi que l'extrait obtenu par ce procédé et son utilisation. La présente invention concerne également une composition comprenant l'extrait obtenu par le procédé de l'invention. Les superoxyde dismutases (SOD) sont des protéines enzymatiques qui possèdent une puissante action antioxydante contre les espèces oxygénées réactives (EOR) générées chez les organismes vivants (animaux comme végétaux) par tout type de stress environnemental ou lors du vieillissement naturel. Catalysant l'élimination des premières espèces oxygénées formées (les superoxydes) suite à la réduction de l'oxygène, les SOD constituent donc la première ligne de défense contre ces EOR, lesquelles sont fortement impliquées dans diverses maladies neurodégénératives (maladie d'Alzheimer, de Parkinson), l'athérosclérose, l'arthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn et certains cancers (Campana et al., 2004 ; Valdivia et al., 2009). Les SOD sont des métalloprotéines, qui renferment dans leur site actif des atomes de Cu/Zn, de Mn ou de Fe. Ces métaux jouent un rôle important dans le mécanisme d'action des SOD. Par exemple, pour la SOD Cu/Zn, le Cu2+ est tout d'abord réduit par le radical superoxyde (021 qui est ainsi détoxifié en oxygène. Le cuivre réduit cède ensuite un électron à une nouvelle molécule de superoxyde qui, en présence de deux protons, génère H202, beaucoup moins toxique que Oz'. En raison de leur capacité anti-oxydante, les SOD sont très largement utilisées dans différents domaines : - En cosmétologie, les SOD permettent de protéger la peau et les cheveux en maintenant l'intégrité de la structure kératinique naturelle (FR 7331354). Des expériences conduites au Centre Hospitalier Universitaire de Besançon (France) ont démontré que la supplémentation en SOD prépare la peau de l'Homme à l'exposition au soleil (Annual Congress for Dermatological Research, Brest, France, May 2005). - Dans l'Industrie pharmaceutique, des formulations médicamenteuses à base d'extraits riches en SOD (exemple orgotéine) ont été proposées pour abaisser le 3031040 2 niveau des EOR fortement impliquées dans diverses maladies neurodégénératives ou inflammatoires. En outre, une formule végétale bioactive par voie orale, constituée d'un extrait 5 de melon (Cucumis melo) riche en SOD (Vouldoukis et al., 2004) couplé à une molécule de gliadine, protéine extraite du blé (Menvielle-Bourg, 2005), a été proposée : Superoxyde dismutase Gliadine (GliSODine) (FR 2729296). Ce complément alimentaire est particulièrement approprié pour lutter contre la surproduction de radicaux libres, notamment lorsque les défenses naturelles de 10 l'organisme sont affaiblies : sujets âgés, exposition solaire, tabagisme, stress, exercice physique intense, etc. Il permet de prévenir certaines affections chroniques impliquant un stress oxydatif ou de freiner leur évolution, améliorant ainsi les conditions de vie du patient. 15 Dans l'industrie alimentaire, des extraits végétaux riches en SOD (exemple PROMUTASETM 200, à base de melon) sont incorporés dans des aliments destinés aux animaux de sport comme les chevaux de course ou les pigeons voyageurs pour augmenter leur résistance aux efforts intenses. Les mêmes extraits sont incorporés à des aliments avant et au cours du transport de poissons et de 20 crustacés d'élevage (crevettes, alevins, truites, saumons, etc.) afin de réduire le taux de mortalité pendant ce transport. Pour améliorer la qualité du lait produit, des extraits riches en SOD (exemple PROMUTASETM R) sont introduits dans l'alimentation des femelles d'élevages 25 laitiers (vaches, chèvres, etc). Les extraits riches en SOD entrent dans certaines formulations alimentaires pour améliorer les performances de croissance des poulets et des dindes de chair, animaux souvent confrontés à des déséquilibres digestifs mal maîtrisés. 30 Les SOD peuvent être d'origines très diverses: animale (par exemple bovine ou porcine), humaine (par exemple placentaire ou sanguine), microbienne (par exemple bactéries ou levures), etc. Elles peuvent être également issues du génie génétique ou de la synthèse chimique. Plusieurs SOD sont d'origine végétale (champignons, algues, épinards, céréales, fruits et légumes, etc.). 3031040 3 Parmi les différents végétaux, une variété de melon (Cucumis melo) est riche en SOD (Vouldoukis et al., 2004). Cette variété de melon est caractérisée par des graines résistantes qui ont un pouvoir germinatif important, ainsi que par des fruits à vieillissement ralenti (protégés des effets des radicaux libres). 5 De ce qui précède, il apparaît clairement que le rôle des SOD dans la diminution du stress oxydatif est très important. En outre, vu sa large utilisation dans différents domaines de l'industrie, il y a un très grand intérêt à rechercher de nouvelles sources naturelles hyperproductrices de cette protéine ayant une forte activité spécifique. 10 La SOD étant une protéine très fragile, il est nécessaire de disposer de procédés permettant de l'obtenir en grande quantité ou mieux encore, en quantité moins importante mais avec une forte activité spécifique, sans pour autant augmenter l'utilisation de composés chimiques susceptibles d'altérer la fonctionnalité de cette protéine et de diminuer son activité spécifique. 15 La SOD peut être obtenue simplement par extraction protéique à partir des végétaux la comprenant en grande quantité et ayant une grande activité spécifique. Il est préférable que de tels procédés d'extraction de SOD n'impliquent pas l'utilisation d'une multitude de solvants, notamment des solvants organiques, qui nécessitent la mise en oeuvre d'étapes supplémentaires de purification et dégradent une partie de la SOD. 20 En outre, il est à noter que, dans la majorité des cas, l'extraction de SOD à partir des végétaux se fait par des procédés d'extraction qui comprennent une étape d'enrichissement en SOD. Les procédés d'extraction de SOD connus actuellement nécessitent la réalisation de plusieurs étapes avant l'obtention d'un extrait fortement concentré en SOD ayant une forte activité spécifique. 25 Ainsi, l'inconvénient principal de ces procédés en plusieurs étapes est leur coût élevé et leur durée de réalisation souvent longue. Il existe donc un besoin de disposer de nouveaux procédés d'obtention de SOD ayant une forte activité spécifique, dont la mise en oeuvre est simple et rapide et le coût est bas. 30 La présente invention a donc pour but de mettre en oeuvre un procédé d'extraction protéique de SOD ayant une très forte activité spécifique qui est simple, rapide, peu 3031040 4 coûteux et qui pallie ainsi les inconvénients des procédés d'extraction de SOD connus dans l'art antérieur. Les Inventeurs ont découvert de manière surprenante que les extraits protéiques obtenus à partir des espèces d'une famille de végétaux littoraux sont tellement riches en 5 activité SOD qu'une simple extraction, sans étapes de purification supplémentaires, est suffisante pour obtenir des extraits où l'activité spécifique de SOD est d'au moins 700 UI/mg de protéines. Ce niveau dépasse très largement le niveau le plus élevé (126 UI/mg) rapporté jusqu'à présent dans la littérature pour une variété de melon (Vouldoukis et al., 2004) considérée comme référence parmi les sources naturelles de SOD. 10 Ainsi, les Inventeurs ont mis en oeuvre un procédé simple d'extraction de SOD, dont le coût est bas et qui permet d'obtenir des extraits protéiques très actifs en SOD palliant ainsi les inconvénients des procédés d'extraction végétale de SOD de l'art antérieur. Un premier objet de la présente invention concerne donc un procédé d'obtention d'un extrait protéique concentré en superoxyde dismutase (SOD) ayant une activité 15 spécifique d'au moins 700 Ul/nng de protéine comprenant une seule étape d'extraction protéique à partir d'une plante choisie parmi l'une quelconque des espèces de la famille des Plombaginacées. De manière préférée, le procédé d'extraction protéique selon la présente invention ne comprend pas d'étapes de purification de la protéine SOD et/ou d'étapes 20 d'enrichissement en protéine SOD. Au sens de la présente demande, le terme « activité spécifique » désigne l'activité SOD rapportée à la quantité de protéines, c'est-à-dire l'activité des SOD dans l'extrait protéique. Les Inventeurs ont découvert qu'en moyenne, les extraits directement obtenus 25 (sans étapes de purification et/ou d'enrichissement) à partir des espèces de la famille des Plombaginacées, famille de plantes couramment représentée en milieu littoral, possèdent une activité spécifique d'au moins 700 Ul/nng de protéine (Unité enzymatique/mg protéine). En particulier, cette activité spécifique peut être d'au moins 1000 Ul/nng, plus particulièrement d'au moins 1200 Ul/nng et encore plus particulièrement d'au moins 1400 30 Ul/nng. Au sens de la présente invention, l'abréviation « UI » désigne l'unité enzymatique de SOD dans le système international. L'unité enzymatique de SOD est définie par Mc Cord et Fridovitch (1969). 3031040 5 Particulièrement, les extraits obtenus par le procédé de la présente invention sont concentrés en SOD ayant une activité spécifique comprise entre 700 et 2000 UI/mg de protéines, plus particulièrement entre 1000 et 1800 UI/mg de protéines, encore plus particulièrement entre 1200 et 1600 UI/mg de protéines et de manière encore plus 5 particulière entre 1300 et 1500 UI/mg de protéines. Les Inventeurs ont réalisé des tests comparatifs (cf. exemples comparatifs) qui démontrent que d'autres espèces littorales appartenant aux familles des Apiacées, Brassicacées, Aizoacées et Chénopodiacées, présentent une activité spécifique de SOD comprise entre 20 et 400 UI/mg, soit très inférieure à celle des espèces de la famille des 10 Plombaginacées. Au sens de la présente demande, le terme « activité catalytique » désigne l'activité SOD rapportée à la biomasse végétale source. Cette activité catalytique est, chez les espèces de la famille des Plombaginacées, dans une plage comprise entre 3000 et 14000 UI/g MS (unités d'activité/g de matière 15 sèche), particulièrement entre 5000 et 13000 UI/g MS et encore plus particulièrement entre 7000 et 12000 UI/g MS. Les Inventeurs ont réalisé également des tests comparatifs (cf. exemples comparatifs) qui démontrent que les espèces des familles Apiacées, Aizoacées, Brassicacées et Chénopodiacées présentent une activité catalytique de SOD comprise entre 20 120 et 1250 UI/g MS, soit très inférieure à celle des espèces de la famille des Plombaginacées. La famille des Plombaginacées est une famille cosmopolite de plantes dicotylédones. Les espèces de cette famille sont présentes partout, particulièrement dans des milieux salins et froids où leurs capacités d'adaptation leur confèrent un avantage 25 sélectif. En France, Limonium et Armeria sont les genres les plus fréquemment rencontrés de cette famille. On les trouve sur l'ensemble du littoral, de la Manche à la Méditerranée, en passant par les côtes Atlantiques. Ainsi, selon un mode de réalisation préféré du procédé de l'invention, la plante à 30 partir de laquelle la SOD est extraite est choisie dans le groupe consistant en les genres Limonium et Armeria. 3031040 6 Avantageusement, le procédé de l'invention est réalisé à partir des espèces de genres Limonium et Armeria rencontrées sur l'ensemble du littoral français, de préférence sur le littoral français atlantique. Le genre Limonium comprend des plantes herbacées vivaces à fleurs violettes qui 5 poussent sur les sols sableux ou pauvres du littoral Atlantique et dans les marais salants. Les espèces du genre Armeria sont des plantes vivaces des dunes ou rochers littoraux, dont la floraison dure de juillet à septembre. Selon un mode de réalisation encore plus préféré du procédé de la présente invention, l'extraction de SOD est réalisée à partir des plantes choisies dans le groupe 10 consistant en les espèces Limonium latifolium, Limonium normannicum, Limonium vulgare, Limonium tunetanum, Limonium densiflorum, Limonium pruinosum, Limonium delicatulum, Limonium spathulatum, Limonium boitardii et Armeria maritima. Toutes ces espèces sont très riches en SOD, ayant une activité spécifique très élevée qui est supérieure à celle des SOD extraites des organismes utilisés en tant que 15 source de SOD jusqu'à présent. Avantageusement, le procédé d'extraction de SOD est réalisé à partir de l'espèce Limonium latifolium qui est facilement cultivable ou accessible dans la région où la présente invention a été mise en oeuvre. En effet, Limonium latifolium ou lavande de mer (encore appelée statice) est une 20 plante herbacée vivace qui pousse sur les sols sableux ou pauvres du littoral Atlantique et dans les marais salants. Cette lavande de mer possède des propriétés antioxydantes dues à ses composés phénoliques et contient des agents colorants (fleurs et racines). L'espèce Limonium latifolium est beaucoup plus riche en activité spécifique SOD que les espèces végétales jusqu'alors exploitées dans l'industrie agroalimentaire comme 25 sources de SOD. Ceci signifie qu'il n'est pas nécessaire de disposer d'une grande quantité de la plante pour obtenir une SOD très active enzymatiquement, d'où un coût inférieur de production d'un produit fini enrichi en SOD. En effet, l'activité spécifique de SOD dans les extraits obtenus à partir de cette espèce dépasse 1200 unités/mg protéines, soit un niveau beaucoup plus élvevé que 30 l'activité spécifique de SOD dans l'extrait obtenu à partir du melon, espèce considérée jusqu'à présent comme la plus riche en SOD (Vouldoukis et al., 2004). 3031040 7 De plus, l'espèce L. latifolium est une espèce facilement cultivable, à cycle de développement plus rapide que le melon, sans prédateur connu, d'où la possibilité de produire cette plante dans des conditions correspondant à la réglementation sur les cultures biologiques. 5 Enfin, étant donné que Limonium latifolium est une espèce halophyte, donc résistante au sel, et que la contrainte saline est connue pour stimuler la synthèse des composés antioxydants dont les enzymes (Jithesh et al., 2006 ; Ben Hamed et al., 2007, Li et al., 2008), il est envisageable d'amplifier encore l'activité SOD dans les organes de cette plante par une culture en conditions contrôlées en présence de sel. Ainsi, il sera 10 possible de produire celle-ci dans des conditions peu onéreuses en empêchant tout développement d'organismes nuisibles (mauvaises herbes, pathogènes, etc.) sensibles au sel. Les Inventeurs ont ainsi réalisé des tests complémentaires qui démontrent que l'activité SOD peut être augmentée de 10 à 20% dans les plantes de l'espèce L. latifolium 15 cultivées en présence de sel à une concentration de 20 g/L de NaCl (soit 2/3 de la concentration du sel dans l'eau de mer). Selon un mode de réalisation préféré du procédé de la présente invention, l'extraction est réalisée à partir des parties aériennes de la plante, de préférence à partir des feuilles qui sont les organes les plus charnus et les plus riches en SOD. 20 En outre, dans le procédé de l'invention, l'extraction est réalisée en présence d'un agent fixant les phénols, par exemple le polyvinyl polypyrrolidone. Des inhibiteurs de protéases tels que la leupeptine, le 4-(2-aminoethyl) benzènesulfonyle fluoride, la pepstatine A, la bestatine, l'E-64, le 1,10-phenanthroline etc. peuvent être également utilisés peuvent être également utilisés pour augmenter la 25 durée de conservation de l'extrait si nécessaire, au-delà de quelques semaines. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, dans le procédé de la présente invention, l'extraction est réalisée en présence d'un tampon aqueux de type tampon phosphate, donc en l'absence de solvants organiques toxiques de type alcool (ex : l'éthanol, le méthanol, le propanol, l'isopropanol, ou encore le butanol), solvants 30 aromatiques (ex : pyridine, toluène, chlorobenzène ou xylène), solvants carbonylés (ex : acétone, diméthyl formamide ou méthyl pyrrolidone), esters (ex : acétate d'éthyle), sulfoxydes (ex : diméthyl sulfoxyde), nitriles (ex : acétonitrile), solvant halogénés (ex : 3031040 8 dichloronnéthane, dichloroéthane, chloroforme, tétrachlorure de carbone, chlorobenzène), éther-oxydes (ex : diéthylène glycol, tétrahydrofurane, éther éthylique). Dans certains cas, lors de l'extraction, on ajoute de la glycérine, qui joue le rôle de stabilisateur. 5 Préalablement à l'étape d'extraction, ladite plante peut être lavée, broyée, coupée, écrasée et/ou séchée. Un deuxième objet de la présente invention concerne un extrait protéique de plante concentré en SOD ayant une activité spécifique d'au moins 700 UI/mg (UI/mg de protéines), l'extrait étant obtenu par le procédé de l'invention tel que défini ci-dessus. 10 L'extrait obtenu selon le procédé de l'invention possède toutes ou partie des caractéristiques dudit procédé telles que décrites ci-dessous. Un troisième objet de la présente invention concerne une composition cosmétique ou pharmaceutique comprenant l'extrait obtenu selon le procédé de la présente invention et un véhicule cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable, respectivement. 15 On entend par - véhicule pharmaceutiquement acceptable » au sens de la présente invention, toute matière appropriée à une utilisation dans un produit pharmaceutique. A titre d'exemple de véhicule pharmaceutiquement acceptable, on peut citer le lactose, l'amidon éventuellement modifié, la cellulose, l'hydroxypropylméthyl cellulose, le mannitol, le sorbitol, le xylitol, le dextrose, le sulfate de calcium, le 20 phosphate de calcium, le lactate de calcium, les dextrates, l'inositol, le carbonate de calcium, la glycine, la bentonite et leurs mélanges. De préférence, les véhicules pharmaceutiquement acceptables sont choisis dans le groupe constitué des prolamines, c'est-à-dire des protéines de réserve accumulées par les plantes de la famille des Poacées comme les céréales. 25 La composition pharmaceutique et les médicaments selon l'invention peuvent se présenter sous différentes formes, en particulier sous une forme choisie dans le groupe consistant en les solutions injectables, les comprimés, les gélules, les dragées, les sirops, les suspensions, les solutions, les poudres, les granulés, les émulsions, les microsphères. En outre, des formes pharmaceutiques à libération prolongée telles que des gélules, ou des 30 comprimés éventuellement enrobé pour libération prolongée seront préférées. La composition pharmaceutique et les médicaments selon l'invention sont administrables par différentes voies. A titre d'exemples de voies d'administration utilisables pour la composition pharmaceutique et les médicaments selon l'invention on 3031040 9 peut citer la voie orale, la voie rectale, la voie cutanée, la voie nasale, la voie sublinguale, la voie parentérale notamment intradermique, la voie sous-cutanée, la voie intramusculaire, la voie intraveineuse, la voie intra-artérielle, la voie intra-articulaire, la voie intra-pleurale et la voie intra-péritonéale. 5 La composition pharmaceutique et les médicaments selon l'invention peuvent être administrés en une ou plusieurs fois ou en libération continue. De manière préférée, la composition pharmaceutique ou les médicaments selon l'invention sont administrés en libération continue, telle que sous la forme d'une perfusion ou par le biais d'une forme pharmaceutique, telle qu'une gélule ou un comprimé éventuellement enrobé, à libération 10 prolongée et/ou retardée. Au sens de la présente invention, on entend par « véhicule cosmétiquement acceptable», un véhicule adapté pour une utilisation en contact avec des cellules humaines et animales, en particulier les cellules de l'épiderme, sans toxicité, irritation, réponse allergique et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable. 15 La composition cosmétique selon l'invention peut comprendre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs d'usage connus et classiques dans les compositions cosmétiques et dermatologiques tels que, à titre d'exemples et de façon non limitative, des adoucissants, des colorants, des actifs filnnogènes, des tensioactifs, des parfums, des conservateurs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, des vitamines comme la 20 vitamine E, des filtres UV, etc. Grâce à ses connaissances en matière de cosmétique et/ou en dermatologie, l'homme du métier saura quels agents de formulation ajouter aux compositions de l'invention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. La composition cosmétique selon l'invention peut se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans le domaine de la cosmétologie et de la dermatologie 25 sans autre restriction galénique que l'application sur le visage et sur le corps. De façon avantageuse, les compositions selon l'invention se présentent sous la forme d'un gel, d'une crème, d'une lotion, d'une huile, d'un lait, d'un spray, etc. Quel que soit l'objectif, on peut proposer une application quotidienne, une ou deux fois par jour, pour une durée de quelques jours à plusieurs mois. 30 En outre, la présente invention concerne une composition alimentaire ou nutraceutique comprenant un extrait protéique obtenu selon le procédé de l'invention et un additif alimentaire ou un véhicule nutraceutiquement acceptable, respectivement. 3031040 10 Les additifs alimentaires peuvent être choisis parmi tous les additifs alimentaires bien connus de l'Homme du métier, par exemple, dans le groupe comprenant des conservateurs, des colorants alimentaires, des antioxydants, des lactates, des citrates, des orthophosphates, des malates, des adipates, des alginates, des gommes, des di- et 5 triphosphates, etc. On entend par - composition nutraceutique » au sens de la présente invention une composition relative à un produit fabriqué à partir d'aliments et commercialisée sous forme de comprimé, de poudre ou de potion ayant un effet physiologique bénéfique contre des maladies chroniques. 10 On entend par « véhicule nutraceutiquement acceptable - au sens de la présente invention, toute matière qui est appropriée à une utilisation dans un produit nutraceutique. A titre de véhicule nutraceutiquement acceptable, on peut citer le phosphate dicalcique, l'alginate de calcium, la carbonate de magnésium, le stéarate de magnésium, le dioxyde de silicium, le chlorure de calcium, etc. 15 La composition nutraceutique selon l'invention est administrable notamment par voie orale, par exemple, sous forme de comprimés sécables ou non, pelliculés ou non, de granules, de capsules, de gélules, ou sous forme de poudres libres conditionnées de préférence en sachets unitaires, ou de poudre compressée. Lorsque l'extrait obtenu par le procédé de l'invention est destiné à une utilisation 20 dans une composition alimentaire et/ou nutraceutique, il est préférable de ne pas utiliser, lors de l'extraction, des réactifs susceptibles de provoquer un désagrément et/ou une trouble d'ordre digestif tels que par exemple, les inhibiteurs des protéases et/ou des agents fixant les phénols. Selon un mode de réalisation, ledit extrait comprend de l'ordre de 50000 à 200000 25 UI/g, de préférence de l'ordre de 100000 à 150000 UI/g d'extrait sec, ou, en poids, environ 1 à 4%, de préférence 2 à 3% de superoxyde dismutase dans l'extrait sec. On entend par - extrait sec » au sens de la présente invention, la matière sèche qui subsiste après dessiccation d'un extrait, par exemple sous vide à 40°C pendant 15 mn ou dans une étuve à 120°C pendant 2 heures ou après lyophilisation. 30 En outre, la composition selon l'invention peut comprendre de 0,1% à 20%, plus particulièrement de 0,1% à 10% ou de 0,5% à 5%, en particulier de 1 à 3% de superoxyde dismutase en poids par rapport au poids total de la composition. 3031040 11 Selon un mode de réalisation, la composition pharmaceutique selon l'invention comprend de 5% à 20%, particulièrement de 5% à 15% et plus particulièrement de 5 à 10% de superoxyde dismutase en poids par rapport au poids total de la composition. Selon un mode de réalisation particulier, la composition alimentaire et/ou la 5 composition nutraceutique selon l'invention peut comprendre de 0,1% à 5%, particulièrement de 0,5% à 3% et plus particulièrement de 1 à 2% de superoxyde dismutase en poids par rapport au poids total de la composition. Un quatrième aspect de la présente invention concerne une utilisation cosmétique d'un extrait protéique tel que défini selon l'invention en tant qu'agent cosmétique 10 antioxydant, en particulier pour lutter contre le vieillissement de la peau et/ou des phanères, contre les rayons U.V., etc. Un cinquième aspect de l'invention concerne l'utilisation d'un extrait protéique de SOD tel que défini ci-dessus pour la préparation de fromages et/ou la conservation de produits laitiers. 15 Dans la production de fromages, la SOD peut se coupler à la catalase et de cette manière inhiber efficacement l'oxydation anarchique des lipides dans les produits laitiers, permettant le stockage prolongé du lait. Un sixième aspect de la présente invention concerne l'extrait protéique de SOD tel que défini ci-dessus en tant que médicament. 20 En particulier, l'invention concerne un extrait protéique de SOD selon l'invention pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des maladies choisies dans le groupe comprenant : les maladies psychiatriques, de préférence la schizophrénie ; les maladies neurodégénératives, de préférence la maladie d'Alzheimer ou la 25 maladie de Parkinson ; les maladies cardiovasculaires, de préférence l'infarctus du myocarde ou l'athérosclérose ; les maladies inflammatoires, de préférence la maladie de Crohn ou l'arthrite rhumatoïde ; 30 les maladies chroniques, de préférence le diabète ; les maladies cancéreuses, de préférence choisies dans le groupe comprenant le cancer de la peau, le cancer du sein, le cancer de l'cesophage, le cancer de l'estomac, le cancer du foie, le cancer du côlon et le cancer des poumons. 3031040 12 La présente invention est illustrée d'avantage par les exemples décrits ci-dessous. EXEMPLES 1. Matériel et méthodes 5 1.1 Matériel végétal Les espèces étudiées sont habituellement trouvées sur le sable dunaire, les rochers ou les marais salants le long du littoral breton. Les espèces étudiées sont Limonium normannicum, L. vulgare, L. latifolium, L. tunetanum, L. densiflorum, L. pruinosum, L. delicatulum, L. spathulatum et Armeria 10 maritima. 1.2 Conduite des cultures Des échantillons de parties aériennes de toutes ces espèces ont été prélevés en fin de printemps dans leur habitat naturel. En outre, des plantes de l'espèce L. latifolium ont été cultivées dans les conditions 15 contrôlées suivantes : Photopériode : 8h/16h ; Température : 14/23°C ; Humidité relative : 50-70% ; Salinité : 0, 5, 10, 20 g/L de NaCl. L'extraction des protéines SOD est réalisée immédiatement après le prélèvement des feuilles sur les plantes mères ou après conservation de celles-ci à -80°C. Les feuilles sont homogénéisées dans un tampon phosphate 100 mM de pH 7,8 en présence de 20 polyvinylpyrrolidone (PVP) 4% (p/v), EDTA 5 mM, DTT 2 mM et d'inhibiteurs de protéases (leupeptine 10 pM, 4-(2-aminoethyl)benzenesulfonyl fluoride 0,2 mM, pepstatine A 1 mM, bestatine 1 mM, E-64 1pM, 1,10-phenanthroline 1 mM). Après centrifugation à 14 000 g pendant 30 mn à 4°C, le surnageant est collecté. La teneur en protéines solubles ainsi que les activités enzymatiques sont déterminées à partir du surnageant. 25 1.3 Dosage des protéines solubles La teneur en protéines solubles est déterminée dans le surnageant de chaque extrait enzymatique selon la méthode de Bradford (1976). 3031040 13 1.4 Mesure des activités SOD Les superoxyde dismutases catalysent la réaction : 2 02 (anion superoxyde) + 2 H+ 02 + H202 Le substrat des SOD est très instable et a une durée de vie très courte (10-9 s), les 5 méthodes de dosage sont donc très indirectes. La méthode proposée par Beauchamp et Fridovich (1969), modifiée par Scebba et al., (1999), évalue la SOD par sa capacité à inhiber un flux d'anion superoxyde généré par la riboflavine illuminée. Les radicaux superoxyde produits par ce système réduisent le nitrobleu de tétrazolium (NBT) en bleu de formazan. 10 Deux séries de tubes ont été préparées. Les premiers sont des témoins, maintenus à l'obscurité et contenant un mélange dans le tampon phosphate 50 mM pH 7,8 composé d'EDTA 0,1 mM, méthionine (13 mM), NBT (75 pM), riboflavine (2 pM) et l'extrait enzymatique. La deuxième série de tubes est destinée à la détermination de l'activité SOD. Ces tubes contiennent le même mélange réactionnel mais ils sont maintenus pendant 15 15 mn sous un éclairage de 15 W. La mesure de l'absorbance est réalisée à 560 nm. Une unité enzymatique de SOD correspond à la quantité d'extrait végétal susceptible d'induire une inhibition de 50% de la réaction de réduction du nitrobleu de tétrazolium. L'activité catalytique de l'enzyme est alors rapportée à la masse de tissus ayant fait l'objet de l'extraction alors que l'activité spécifique, elle, est rapportée à la quantité de 20 protéines dans l'extrait. 2. Résultats Les résultats obtenus par les mesures de l'activité catalytique et l'activité spécifique de SOD dans les extraits obtenus à partir des plantes de la famille Plombaginacées par le procédé de l'invention sont montrés dans le tableau 1 ci-dessous : 25 3031040 14 Espèce Activité Catalytique Activité Spécifique (Unité /g MS) (Unité /ring Prot). Famille Plombaginacées Limonium normannicum 12709,40 1588,68 L. vulgare 10945,94 1368,24 L. latifolium 7812,50 1228,38 L. tunetanum 8051,61 1006,45 L. densiflorum 8836,72 1104,59 L. pruinosum 8027,38 1003,42 L. delicatulum 3703,70 752,78 L. spathulatum 4743,72 705,91 Armeria mari tima 9280,74 1784,76 Tableau 1 : Résultats des mesures de l'activité catalytique et de l'activité spécifique des SOD chez les espèces des Plombaginacées. Ces résultats montrent clairement que le procédé d'extraction protéique de SOD à 5 partir des espèces de Plombaginacées, selon la présente invention, permet d'obtenir de manière simple et rapide des extraits protéiques concentrés en SOD ayant une activité spécifique d'au moins 700 UI/mg de protéines et une activité catalytique d'au moins 3000 UI/g de matière sèche. EXEMPLES COMPARATIFS 10 Des exemples comparatifs ont été réalisés dans les mêmes conditions d'extraction protéique que celle décrites précédemment à partir des plantes halophytes des familles Apiacées, Aizoacées, Brassicacées et Chénopodiacées. Les résultats obtenus sont exposés dans le tableau 2 ci-dessous. 3031040 15 Espèce Activité Activité Catalytique Spécifique (Unité /g MS) (Unité /ring prot.) Famille Plombaginacées Limonium normannicum 12709,40 1588,68 L. vulgare 10945,94 1368,24 L. latifolium 7812,50 1228,38 L. tunetanum 8051,61 1006,45 L. densiflorum 8836,72 1104,59 L. pruinosum 8027,38 1003,42 L. delicatulum 3703,70 752,78 L. spathulatum 4743,72 705,91 Armeria maritima 9280,74 1784,76 Famille Apiacées Crithmum maritimum 1216,55 405,52 Eryngium maritimum 687,62 172,56 Famille Brassicacées Cakile maritima 879,31 314,04 Crambe maritima 1250 155 Famille Ai zoacées Mesembryanthemum crystallinum 160 20 Famille Chénopodiacées Suaeda fruticosa 144 18 Arthrocnemum indicum 176 22 Halocnemum strobilaceum 160 20 Tableau 2 : Résultats de tests comparatifs de l'activité catalytique et de l'activité spécifique des SOD chez des espèces de différentes familles de plantes halophytes. 5 Ces résultats montrent clairement que l'activité catalytique et l'activité spécifique de SOD des espèces de la famille des Plombaginacées sont nettement supérieures à celles des espèces étudiées des autres familles. 3031040 16 Bibliographie : Alscher RG, Erturk N, Heath SH (2002) Rote of superoxide dismutases (SODs) in controlling oxidative stress in plants. Journal of Experimental Botany 372: 1331-1341; Bannister JV, Bannister WH, Rotilio G (1987) Aspects of the structure, function and 5 applications of superoxide dismutase. Critical Review of Biochemistry 22: 111-180; Beauchamp C, Fridovich I. (1971) Superoxide dismutase: improved assays and an assay applicable to acrylamide gels. Analytical Biochemistry 44(1): 276-287; Ben Hamed K, Castagna A, Elkahoui S, Ranieri A, Abdelly C (2007) Sea fennel (Crithmum maritimum L.) under salinity conditions: a comparison of leaf and root antioxidant 10 responses. Plant Growth Regulation 53: 185-194; Campana F (2004) Topical superoxide dismutase reduces post-irradiation breast cancer fibrosis. Journal of Cellular Et Molecular Medicine 8 (1): 109-116; Fox PF, Kelly AL (2006) Indigenous enzymes in milk: overview and historical aspects - Part 2. 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Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel la plante est choisie dans le groupe consistant en les espèces Limonium latifo(ium, Limonium normannicum, Limonium vulgare, Limonium tunetanum , Limonium densiflorum, Limonium pruinosum, Limonium delicatulum, Limonium spathulatum, Limonium boitardii et Armeria maritima. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel l'extraction est réalisée à partir des parties aériennes de ta plante, de préférence à partir des feuilles. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel l'extraction est réalisée en absence de solvants organiques choisis dans le groupe comprenant les alcools, les solvants aromatiques, tes solvants carbonylés, les esters, les nitriles, les solvant halogénés et les solvants éther-oxydes. 6. Extrait protéique de plante concentré en SOD ayant une activité spécifique d'au moins 700 UI/mg de protéines, caractérisé en ce qu'il est obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5. 7. Extrait protéique selon la revendication 6 comprenant de l'ordre de 50000 à 200000 UI/g, de préférence de l'ordre de 100000 à 150000 Ul/g d'extrait sec, ou, en poids, environ 1 à 4%, de préférence 2 à 3% de superoxyde dismutase dans l'extrait sec. 8. Composition cosmétique ou pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait selon la revendication 6 ou 7 et un véhicule cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable, respectivement. 3031040 19 9. 5 10. 10 11. 15 12. 2013. 14. 25 Composition alimentaire ou nutraceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait protéique selon la revendication 6 ou 7 et un additif alimentaire ou un véhicule nutraceutiquement acceptable, respectivement. Composition selon l'une quelconque des revendication 8 ou 9 comprenant de 0,1% à 20%, plus particulièrement de 0,1% à 10%, encore plus particulièrement de 0,5% à 5%, en particulier de 1 à 3% de superoxyde dismutase en poids par rapport au poids total de la composition. Utilisation cosmétique d'un extrait protéique selon la revendication 6 ou 7 ou d'une composition selon la revendication 8 ou 10 en tant qu'agent cosmétique antioxydant, en particulier pour lutter contre le vieillissement de la peau et/ou des phanères et/ou la protection anti-UV. Utilisation d'un extrait protéique selon la revendication 6 ou 7 ou d'une composition selon la revendication 9 ou 10 pour la préparation de fromages et/ou la conservation de produits laitiers. Extrait protéique selon la revendication 6 ou 7 ou composition selon la revendication 8 ou 10 en tant que médicament. Extrait protéique ou composition selon la revendication 13 pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des maladies choisi dans le groupe comprenant : les maladies psychiatriques, de préférence la schizophrénie ; les maladies neurodégénératives, de préférence la maladie d'Alzheimer ou la maladie de Parkinson ; les maladies cardiovasculaires, de préférence l'infarctus du myocarde ou 30 l'athérosclérose ; les maladies inflammatoires, de préférence la maladie de Crohn ou l'arthrite rhumatoïde ; les maladies chroniques, de préférence le diabète, et les maladies cancéreuses, de préférence choisies dans le groupe comprenant le 35 cancer de la peau, le cancer du sein, le cancer de l'oesophage, le cancer de l'estomac, le cancer du foie, le cancer du côlon et le cancer des poumons.