Brevet FR3034989A1 — publié le 20161021

La présente invention se rapporte au domaine technique général des produits cosmétiques à usage topique, utilisables notamment sur la peau. Plus précisément, la présente invention est relative à des compositions cosmétiques à application topique comprenant des oligomères d'acide 5 hyaluronique et des cellules végétales dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier encapsulant un extrait de safran. Elle se rapporte également à un procédé cosmétique non thérapeutique pour les soins de la peau mettant en oeuvre une telle composition ainsi qu'à l'utilisation non thérapeutique d'une telle composition cosmétique pour le soin de la peau, et notamment pour améliorer la 10 fermeté de la peau, notamment en favorisant la régénération du derme, et pour réduire les rides cutanées. La peau est un véritable organe comprenant plusieurs couches intégrées, allant de la couche superficielle, l'épiderme, jusqu'aux couches plus profondes, le derme et l'hypoderme, et chacune de ces couches possède des propriétés 15 spécifiques permettant à l'ensemble de réagir et de s'adapter aux conditions de son environnement et de conférer à la peau sa souplesse et sa résistance. L'épiderme, principalement composé de kératinocytes, de mélanocytes et des cellules de Langerhans, joue un rôle fondamental pour assurer la protection et le maintien d'une bonne trophicité. Les kératinocytes sont des cellules 20 extrêmement dynamiques qui subissent une prolifération et une différenciation permanentes aux termes desquelles elles se transforment en cellules mortes (cornéocytes), s'éliminant régulièrement par desquamation. Le derme se compose principalement de collagène, d'élastine et de protéoglycanes, molécules synthétisées par les fibroblastes dermiques. Les fibres 25 de collagène assurent la résistance mécanique et la texture de la peau, l'élastine est responsable de l'élasticité, et les protéoglycanes, combinant protéines et glycosaminoglycanes, jouent un rôle majeur de structure et d'hydratation de la peau. Les glycosaminoglycanes, tels que l'acide hyaluronique, sont des molécules très hygroscopiques qui sont capables de retenir des quantités importantes d'eau. 30 D'autres cellules comme les macrophages et les leucocytes sont également présentes dans la couche du derme. L'hypoderme, qui est la couche la plus profonde de la peau, contient les adipocytes qui produisent des lipides pour que le tissu sous-cutané fabrique une couche grasse protégeant les muscles, les os et les organes internes contre les 35 chocs. Le collagène est une protéine de structure majeure qui représente plus de 70% de la quantité de protéines de la peau. 14 types de collagène sont décrits 3034989 2 dans la peau humaine. Le collagène I est le principal et représente 90% du collagène total dans la peau. Au cours du temps, de profondes modifications se produisent au niveau du derme. La population de fibroblastes, cellules spécialisées dans la synthèse des fibres d'élastine et de collagène, va diminuer de moitié entre 20 et 80 ans. Ces fibroblastes assurent l'équilibre entre la synthèse, la maturation et la dégradation des fibres d'élastine et de collagène. Dans le temps, l'équilibre va se déplacer vers une dégradation de ces fibres avec pour résultats, une perte d'élasticité et de tonicité du derme et une flaccidité qui ne s'oppose plus aux effets de contraction des muscles sous-jacents, conduisant à l'apparition de rides. Ainsi, avec le vieillissement, le derme subit un amincissement et une rigidification : la peau est moins souple, moins ferme avec l'âge et des rides apparaissent. De plus, la peau doit continuellement faire face à de multiples agressions extérieures qui peuvent accélérer le processus naturel du vieillissement. Ainsi, de nouveaux actifs cosmétiques sont constamment recherchés afin de lutter contre les signes cutanés du vieillissement et, en particulier, contre l'atrophie du derme et l'apparition de rides. Les cellules élicitées et dédifférenciées de culture végétale de Bougainvillier sont décrites dans la demande de brevet FR 14 53647. Ces cellules permettent de véhiculer tout type d'ingrédient actif et de les libérer de façon progressive au coeur des différentes couches de l'épiderme, que ces ingrédients actifs soit hydrosolubles ou liposolubles. En effet, les cellules dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier se présentent sous la forme de vésicules comprenant une membrane végétale formée d'une bicouche lipidique délimitant un volume interne renfermant une phase encapsulée. Les constituants de la membrane sont identiques aux lipides inter-cornéocytaires de la couche supérieure de l'épiderme et aux lipides intercellulaires (acides gras, céramides, cholestérol). Ainsi, après application des cellules dédifférenciées et élicitées, le contenu cellulaire va diffuser par simple cisaillement de la peau ; le ou les ingrédients actifs bénéficient d'une encapsulation naturelle et d'une libération par bio-mimétisme. Ainsi, après application sur la peau, l'action des cellules s'effectue en 3 temps qui sont 1) la fragmentation des membranes lipidiques des cellules entières, 2) l'insertion dans les lipides inter-cornéocytaires et 3) la libération progressive du ou des ingrédients actifs par bio-mimétisme au sein même de l'épiderme. Il a ainsi été démontré, que l'encapsulation d'un extrait de safran, en tant qu'ingrédient actif, par les cellules dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier a un effet positif sur la prolifération des cellules du derme et de l'épiderme de la peau, favorisant ainsi leur régénération. 3034989 3 Toutefois, si cette composition a un effet favorable sur l'abondance du collagène I et la régénération du derme, la nécessité de proposer de nouveaux ingrédients actifs permettant de lutter plus efficacement contre les signes du vieillissement cutané et, en particulier, contre la perte de fermeté de la peau et 5 l'apparition de rides, demeure. L'acide hyaluronique est un glycosaminoglycane présent chez tous les vertébrés, principalement dans les tissus conjonctifs, épithéliaux et nerveux. C'est l'un des principaux composants de la matrice extracellulaire. L'acide hyaluronique est un constituant naturel du derme possédant un rôle important 10 dans l'hydratation, la tonicité et l'élasticité de la peau. C'est dans les organismes jeunes qu'on le trouve en plus grande quantité. En effet, avec le temps, sa présence diminue, en particulier parce que les radicaux libres auxquels nous sommes exposés (soleil, pollution...) le détruisent. En cosmétique, les oligomères d'acide hyaluronique de bas poids 15 moléculaire (i.e. généralement inférieur à 10 kDa) jouent un rôle important dans la migration et la prolifération des cellules, deux processus qui interviennent lors de toute régénération, reconstruction, ou cicatrisation des plaies. Les capacités régénérantes des oligomères de bas poids moléculaire peuvent donc être efficacement utilisées, pour traiter le vieillissement de la peau. 20 Les travaux réalisés par la Demanderesse ont montré que des oligomères d'acide hyaluronique de bas poids moléculaire, i.e. inférieur à 10 kDa potentialisaient l'effet des cellules dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier encapsulant un extrait de safran sur la prolifération des cellules du derme, plus particulièrement sur la synthèse du collagène I, favorisant ainsi sa régénération ; 25 L'association d'oligomères d'acide hyaluronique de bas poids moléculaire, i.e. inférieur à 10 kDa et de cellules dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier encapsulant un extrait de safran peut donc avantageusement être mise à profit pour le soin de la peau, et en particulier pour favoriser la régénération du derme. De plus, aux doses utilisées, les essais effectués ont montré que les compositions 30 cométiques à base de cellules dédifférenciées de Bougainvillier utilisées dans la présente invention ne présentent aucune cytotoxicité. La présente invention a donc pour premier objet une composition cosmétique comprenant des cellules végétales dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier se présentant sous forme de vésicules, lesdites vésicules 35 comprenant une membrane végétale formée d'une bicouche lipidique délimitant un volume interne renfermant une phase encapsulée, ladite composition étant caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un oligomère d'acide hyaluronique de poids moléculaire inférieur à 10 kDa et en ce qu'un extrait de safran est présent dans la phase encapsulée des vésicules. 3034989 4 Selon l'invention, la composition cosmétique est de préférence une composition cosmétique à application topique. L'invention a également pour autre objet un procédé cosmétique non thérapeutique pour les soins de la peau, en particulier pour améliorer la fermeté 5 de la peau, en favorisant la régénération du derme, et pour réduire les rides cutanées, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer sur les zones de la peau concernées au moins une composition cosmétique telle que définie ci-dessus, c'est-à-dire une composition cosmétique comprenant au moins un oligomère d'acide hyaluronique de poids moléculaire inférieur à 10 kDa et des cellules 10 végétales dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier se présentant sous forme de vésicules dont la phase encapsulée comprend au moins un extrait de safran. Enfin, l'invention a pour objet l'utilisation non thérapeutique d'une composition cosmétique à application topique comprenant au moins un oligomère d'acide hyaluronique de poids moléculaire inférieur à 10 kDa et des cellules végétales 15 dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier encapsulant un extrait de safran, pour les soins de la peau, en particulier pour améliorer la fermeté de la peau, notamment en favorisant la régénération du derme de la peau, et pour réduire les rides cutanées. Toutes les espèces de Bougainvillier peuvent être utilisées selon la 20 présente invention, mais on peut plus particulièrement mentionner Bougainvillea glabra, Bougainvillea alba, Bougainvillea spectabilis, Bougainvillea infesta, et Bougainvillea buttiana. Par cellules végétales dédifférenciées de Bougainvillier, on entend toute cellule végétale issue d'une culture in vitro de cellules de Bougainvillier, lesdites 25 cellules ne présentant aucun des caractères d'une spécialisation particulière et étant capables de vivre par elles-mêmes et non en dépendance avec d'autres cellules. Les cellules dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier utilisables selon la présente invention peuvent être obtenues par des techniques connues de 30 croissance ou multiplication cellulaire, en milieu liquide ou solide, de cellules de Bougainvillier cultivées in vitro dans un environnement contrôlé, dans des conditions aseptiques en l'absence de micro-organismes. La technique de culture végétale présente l'avantage de produire des cellules cultivées dans des conditions environnementales bien définies et 35 reproductibles, en ce qui concerne notamment la température, la lumière et le milieu de culture et de produire des cellules non différencies se trouvant au même stade physiologique à un instant donné (dédifférenciées). Un autre avantage est la formation de métabolites secondaires en un temps plus court, de 303 4 9 89 5 l'ordre de une à trois semaines, que chez la plante où ce délai est de plusieurs mois. Par exemple, on peut préparer des cellules dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier à partir d'explants de feuilles, de fleurs, de la tige ou de la racine. 5 Les cellules dédifférenciées et élicitées utilisables selon l'invention peuvent être obtenues par toute méthode connue de l'art antérieur telle que par exemple selon les méthodes décrites par E. F. George et P. D. Sherrington dans Plant Propagation by tissue culture, Handbook and Directory of Commercial Laboratories (Exegetics Ltd, 1984). 10 Les milieux de culture utilisables selon l'invention sont ceux généralement connus de l'homme du métier. On peut notamment citer à titre d'exemple les milieux de Gamborg, de Murashige Skoog, de Heller, de White, etc... et dont la description complète peut être trouvée dans « Plant Culture Media : formulations and uses », E. F. George, DJM Puttock et H. J. George (Exegetics Ltd 1987, 15 Tomes 1 & 2). On entend par « élicitation », la mise en oeuvre d'un stress ou d'une agression (biologique, chimique ou physique) sur les cellules végétales dans leur milieu de culture afin de provoquer un ou plusieurs mécanismes de défense se concrétisant notamment, mais non uniquement, par la synthèse de métabolites 20 secondaires d'intérêt tels que les phytoalexines. Selon l'invention, 1 ' élicitation des cellules dédifférenciées de Bougainvillier en milieu de culture peut être réalisée par application d'agents chimiques ou de stresses divers tels que pression, dépression, vide, variation de pression, présence d'un gaz, atmosphère variable, chaleur, froid, lumière, cycles 25 de luminosité, radiations, toxines, agitation, contamination par des microorganismes (bactéries, levures, virus), ultrasons, rayonnement infrarouge ou ultraviolet, asphyxie, etc ... Suivant la présente invention, on peut plus particulièrement utiliser des cellules dédifférenciées, élicitées et lyophilisées de Bougainvilliers. La 30 lyophilisation des cellules permet d'améliorer leur conservation et, par suite, de faciliter leur incorporation dans les compositions cosmétiques. Les éléments dosés dans les cellules lyophilisées sont les suivants (pour 100 g de cellules lyophilisées) : Protéines (déterminée selon la méthode décrite dans l'Arrêté du 8 35 septembre 1977 relatif aux méthodes officielles d'analyse des produits diététiques et de régime) : 13,56 g 3034989 6 5 10 15 20 Lipides (déterminés selon la méthode décrite dans l'Arrêté du 8 25 septembre 1977 relatif aux méthodes officielles d'analyse des produits diététiques et de régime) : 1,08 g, se composant notamment de 73 % en masse environ d'acides gras saturés et insaturés en C18 et de 21 % en masse environ d'acides gras saturés en C16. 30 35 Les cellules élicitées et dédifférenciées de Bougainvillier selon la présente invention encapsulent un extrait de fleurs de safran (Crocus sativus) à titre d'ingrédient actif L'extrait de safran peut être obtenu à partir de fleurs de safran, L'aminogramme de l'extrait protéique a mis en évidence les principaux les teneurs en acides aminés sont acides aminés suivants. Dans ce qui suit, indiquées en grammes pour 100 g de cellules lyophilisées. Acide aspartique 10,61 Acide glutamique 10,15 Proline 6,75 Lysine 6,38 Valine 5,79 Alanine 5,29 Sérine 5,27 Glycine 4,82 Arginine 4,72 Glutamine 4,63 Isoleucine 4,61 Leucine 4,60 Phénylalanine 4,25 Thréonine 4,01 Tyrosine 3,70 Asparagine 3,29 Tryptophane 3,02 Méthionine 2,58 Cystéine 1,89 Ornithine 0,24 Sucres (déterminés par Chromatographie ionique - Détection ampérométrique pulsée (PAD)) : - Glucose 11,23 g - Fructose 13,10 g - Lactose REVENDICATIONS1. Composition cosmétique comprenant des cellules végétales dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier se présentant sous forme de 5 vésicules, lesdites vésicules comprenant une membrane végétale formée d'une bicouche lipidique délimitant un volume interne renfermant une phase encapsulée, ladite composition étant caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un oligomère d'acide hyaluronique de poids moléculaire inférieur à 10 kDa et en ce qu'un extrait de safran est présent dans la phase encapsulée des 10 vésicules. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est une composition cosmétique à application topique. 3. Composition cosmétique selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que la quantité d'extrait de safran présente dans la phase encapsulée varie 15 de 0,01 à 5% en masse par rapport à la masse totale des cellules dédifférenciées et élicitées de Bougainvillier. 4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend de 0,01 % à 10 % en masse d'une suspension de cellules végétales dédifférenciées et élicitées de 20 Bougainvillier encapsulant un extrait de safran dans la glycérine, par rapport à la masse totale de ladite composition. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le ou les oligomères d'acide hyaluronique de poids moléculaire inférieur à 10 kDA répondent à la formule (C14H21N0ii)11, dans 25 laquelle n est un nombre entier inférieur à 25 désignant le degré de polymérisation. 6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en oligomères d'acide hyaluronique de poids moléculaire inférieur à 10 kDa varie de 0,01% à 1% en 30 masse par rapport à la masse totale de ladite composition. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un ou plusieurs ingrédients actifs choisis parmi les extraits de plancton, un extrait de maca, un extrait de pétales de coquelicot, une combinaison d'extraits d'anchuse, de coquelicot et de passiflore, 35 un extrait de graines de mimosa, un extrait de pétales de souci, un extrait de barbitamao, un extrait de kigelia africana, et un extrait d'avoine. 3034989 21 8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédente, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme de gel, d'émulsion, d'émulsion biphasique huile-dans-eau ou eau-dans-huile, d'huile corporelle, de masque, de pommade, d'onguent ou de solution concentrée. 9. Procédé cosmétique non thérapeutique pour les soins de la peau, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer sur les zones de la peau concernées au moins une composition cosmétique telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 9. 10. Utilisation non thérapeutique d'une composition cosmétique telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 9, pour les soins de la peau. 11. Utilisation non thérapeutique d'une composition cosmétique telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 9, pour améliorer la fermeté de la peau et réduire les rides cutanées.