Brevet FR3034420A1 — publié le 20161007

DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention se situe dans le domaine des anticorps thérapeutiques, destinés au traitement ou à la prévention des tumeurs hématopoïétiques de phénotype CD4+CD56+ ou des maladies inflammatoires, notamment autoinnnnunes, impliquant les cellules dendritiques plasnnacytoïdes (pDC). Elle concerne 5 anticorps monoclonaux dirigés contre l'antigène CD303, ainsi que leurs fragments fonctionnels et dérivés, les acides nucléiques codant pour la chaine lourde et/ou la chaine légère de l'anticorps, des vecteurs d'expression, des cellules hôte, animaux non-humains transgéniques ou plantes transgéniques exprimant ces anticorps, ainsi que les utilisations thérapeutiques de ces anticorps. ART ANTERIEUR Les cellules dendritiques (appelées - DC » dans toute la présente description) sont des cellules du système immunitaire présentatrices d'antigènes (CPA). Sous certaines conditions, les DC présentent des prolongements cytoplasmiques similaires aux dendrites des neurones. Les cellules dendritiques ont deux fonctions principales : - le déclenchement de la réponse immunitaire adaptative dirigée contre des antigènes du "non-soi" (antigènes étrangers), par présentation de ces antigènes étrangers aux lymphocytes T; et - le maintien de la tolérance centrale au "soi", par éducation des lymphocytes T dans le thymus, par le processus dit de - sélection négative ». Les DC sont capables de se différencier en divers sous-populations, selon les stimuli qu'elles reçoivent. Il existe trois grands types de cellules DC: les cellules DC conventionnelles, les cellules DC plasnnacytoïdes (appelées - pDC ») et les cellules DC inflammatoires. Les DC conventionnelles présentent les antigènes du soi ou du non-soi dans les organes lymphoïdes ou en périphéries. Les DC inflammatoires, probablement dérivées des monocytes sanguins, n'apparaissent qu'en cas de stimulation suite à une inflammation ou une infection. 3034420 2 Les DC plasnnacytoïdes (pDC) sont circulantes, rondes et sans dendrites à l'état basal, mais acquièrent des dendrites après activation, généralement par un antigène viral. Elles produisent après stimulation une grande quantité d'interférons (IFN) de classe I, et sont principalement impliquées dans la réponse antivirale ou dans les maladies 5 autoinnnnunes. Sur le plan phénotypique, elles sont notamment caractérisées par les marqueurs suivants : CD4+, CD11c-, Lin-, CD303+, CD304+. Les pDC peuvent être à l'origine de tumeurs hématopoïétiques dans lesquelles elles acquièrent un marqueur supplémentaire (CD56). On parle alors de néoplasme de cellules dendritiques plasnnacytoïdes blastiques (abrégé en - BPDCN » pour - Blastic 10 plasnnacytoid dendritic cells neoplasnn »). On parle également de tumeurs hématopoïétiques CD4+CD56+. Ces tumeurs hématopoïétiques sont rares (1% des leucémies aiguës) et se présentent sous la forme de nodules cutanés associés à une lynnpho-adénopathie ou un gonflement de la rate et à une cytopénie fréquente. Les manifestations cutanées sont très rapidement suivies par une infiltration de la moelle 15 osseuse. Il est désormais admis que les cellules hématopoïétiques à l'origine de ces tumeurs sont les pDC. Les traitements actuels de ces néoplasmes de cellules dendritiques plasnnacytoïdes blastiques reposent sur une chimiothérapie. Bien que relativement efficace dans un premier temps, ce traitement est caractérisé par des rechutes fréquentes et précoces 20 (environ 9 mois), la médiane de survie globale n'étant que de 13 mois environ. Un autre traitement repose sur une allogreffe de cellules hématopoïétiques, mais ne permet pas non plus de survie à long terme. Il a été proposé dans W02012/080642 d'utiliser des anticorps anti-BDCA-2, c'est-à-dire anti-CD303, pour le traitement de ces néoplasmes par déplétion des cellules tumorales. 25 Les pDC sont également impliquées dans certaines maladies inflammatoires, et notamment dans certaines maladies autoinnnnunes, en particulier par le biais de leur sécrétion d'IFN de type I. Un traitement repose sur l'utilisation d'anticorps anti-IFNcr. Cependant, ce traitement conduit à neutraliser l'IFNcr de façon systémique, augmentant ainsi potentiellement le 30 risque d'infections opportunistes. Il a donc également été proposé dans W001/365487 et W02012/080642 d'utiliser des anticorps anti-BDCA-2 (anti-CD303, et notamment l'anticorps AC144) pour le traitement des maladies autoinnnnunes, par élimination des pDC responsables de l'inflammation locale. Cependant, afin que ces traitements soient efficaces, il est nécessaire de disposer d'anticorps monoclonaux adaptés et permettant chez l'homme une élimination la plus efficace possible des pDC. Pour cela, des anticorps chimériques ou humanisés avec une 3034420 3 forte affinité pour l'antigène CD303 et des capacités effectrices (ADCC, CDC, phagocytose, signalisation via cross-link de CD303 par les Récepteurs Fe, en particulier le récepteur FegannnnaR111 (également appelé CD16) et/ou apoptose) leur permettant d'éliminer les pDC en conditions physiologiques sont nécessaires. Ce n'est pas le cas des 5 anticorps anti-CD303 disponibles à ce jour et il existe donc un besoin pour de nouveaux anticorps anti-CD303 ayant les propriétés souhaitées. En outre, les pDC sont une population fortement minoritaire du sang total, et il existe donc également un besoin pour des modèles cellulaires exprimant CD303, permettant de caractériser des anticorps anti-CD303 in vitro ou in vivo. 10 RESUME DE L'INVENTION Dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont générés cinq anticorps monoclonaux possédant de telles propriétés. Dans un premier aspect, la présente invention concerne donc un anticorps monoclonal 15 dirigé contre l'ectodonnaine de l'antigène CD303 humain (SEQ ID NO :130), ou un fragment fonctionnel ou un dérivé de celui-ci, caractérisé en ce que : a) il entre en compétition pour la liaison à l'antigène CD303 humain avec au moins un anticorps choisi parmi : i) Un anticorps dont la région variable de chaine lourde comprend la 20 séquence SEQ ID NO: 43 et la région variable de chaine légère comprend la séquence SEQ ID NO :48; ii) Un anticorps dont la région variable de chaine lourde comprend la séquence SEQ ID NO: 44 et la région variable de chaine légère comprend la séquence SEQ ID NO :49; 25 iii) Un anticorps dont la région variable de chaine lourde comprend la séquence SEQ ID NO : 45 et la région variable de chaine légère comprend la séquence SEQ ID NO :50; iv) Un anticorps dont la région variable de chaine lourde comprend la séquence SEQ ID NO: 46 et la région variable de chaine légère comprend 30 la séquence SEQ ID NO :51 ; v) Un anticorps dont la région variable de chaine lourde comprend la séquence SEQ ID NO: 47 et la région variable de chaine légère comprend la séquence SEQ ID NO :52 ; et les régions constantes des chaînes légères et des chaînes lourdes sont des régions 35 constantes provenant d'une espèce non-nnurine. 3034420 4 La présente invention concerne également un anticorps monoclonal dirigé contre l'ectodonnaine de l'antigène CD303 humain (SEQ ID NO :130), ou un fragment fonctionnel ou un dérivé de celui-ci, caractérisé en ce que : 5 a) il possède une affinité pour le récepteur FcyRIlla (CD16a) améliorée par rapport à des anticorps dirigés contre l'ectodonnaine de l'antigène CD303 humain, produits dans la lignée cellulaire CHO ; et b) les régions constantes des chaînes légères et des chaînes lourdes sont des régions constantes provenant d'une espèce non-nnurine. 10 La présente invention concerne également un acide nucléique codant pour la chaine lourde et/ou la chaine légère d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention. La présente invention concerne également un vecteur comprenant un acide nucléique 15 selon l'invention. La présente invention concerne également une cellule hôte, un animal non-humain transgénique ou une plante transgénique comprenant au moins un acide nucléique selon l'invention ou un vecteur selon l'invention. La présente invention concerne également un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé 20 de celui-ci selon l'invention, pour son utilisation en tant que médicament. L'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention est avantageusement utilisé dans le traitement ou la prévention des tumeurs hématopoïétiques exprimant l'antigène CD303 ou dans le traitement ou la prévention des maladies inflammatoires, notamment des maladies autoinnnnunes. 25 Dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont également généré un nouveau modèle cellulaire exprimant CD303 et permettant de caractériser facilement in vitro et in vivo les anticorps anti-CD303. La présente invention concerne également une lignée cellulaire transfectée de façon stable par un vecteur d'expression comprenant une 30 première molécule d'acide nucléique codant pour l'antigène CD303 humain et une deuxième molécule d'acide nucléique codant pour la chaine gamma du récepteur FcERI humain, ou par deux vecteurs d'expressions comprenant chacun une molécule d'acide nucléique codant respectivement pour l'antigène CD303 humain et pour la chaine gamma du récepteur FcERI humain. 3034420 5 DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1. Cartes des vecteurs d'expression des anticorps chimériques 122A2 (A), 102E9 (B), 104C12 (C), 114D11 (D), et 104E10 (E). Figure 2. Liaison à l'antigène des anticorps selon l'invention. (A) Intensité de 5 fluorescence moyenne (MFI) de cellules Jurkat chaine Fc Gamma-CD303 marquées par les anticorps selon l'invention, à différentes concentrations d'anticorps (représenté en unité logarithmique). (B) Intensité de fluorescence moyenne (MFI) de cellules CAL-1 (lignée cellulaire de patients BPDCN) marquées par les anticorps selon l'invention, à différentes concentrations d'anticorps (représenté en unité logarithmique). 10 Figure 3. Liaison au récepteur FcyRIlla (CD16a). La fixation au récepteur CD16 des anticorps selon l'invention a été étudiée dans une expérience de compétition utilisant un anticorps anti-CD16 3G8 nnurin couplé à la phycoérythrine. La liaison de l'anti-CD16 3G8 au CD16 (valeurs de fluorescence MFI) est mesurée en fonction de la concentration croissante ajoutée des anticorps selon l'invention (pg/nnL). 15 Figure 4. Activités ADCC induites par les anticorps de l'invention vis-à-vis des cellules Jurkat chaine Fc Gamma-CD303. Le pourcentage de lyse par ADCC (% lyse, tel que défini à l'Exemple 2) de cellules cibles Jurkat chaine Fc Gamma-CD303 induit par les anticorps chimériques selon l'invention est représenté en fonction de la concentration en anticorps (ng/nnL, échelle logarithmique). 20 Figure 5. Inhibition induite par les anticorps de l'invention de la sécrétion d'IFN- apar les pDC. Quantité d'IFN-a (en pg/nnL) sécrétée par des pDC purifiées activées au CpG, en présence des anticorps chimériques de l'invention à 10 et 0.1 pg/nnl, et d'un anticorps chimérique contrôle irrelevant. Figure 6. Inhibition induite par les anticorps de l'invention de la sécrétion de TNF-a 25 par les pDC purifiées activées au CpG, en présence des anticorps chimériques (1Oug/ml) de l'invention et d'un anticorps chimérique contrôle irrelevant. Figure 7. Activités CDC induites par les anticorps de l'invention vis-à-vis des cellules Jurkat chaine Fc Gamma-CD303. Le pourcentage de lyse par CDC (% lyse, tel que défini à l'Exemple 2) de cellules cibles Jurkat chaine Fc Gamma-CD303 induit par les 30 anticorps chimériques selon l'invention est représenté en fonction de la concentration en anticorps (ng/nnL, échelle logarithmique). Figure 8. Expression de CD303 sur les cellules de l'ensemble 008-1 à jour 43. Les histogrammes montrent les cellules marquées avec un anticorps anti-CD303 conjugué PE (zone remplie) et avec un anticorps isotype contrôle conjugué PE (ligne). 35 Figure 9. Expression de CD303 sur les cellules de l'ensemble 008-1 après le 3ème tri cellulaire. Les histogrammes montrent les cellules colorées avec un anticorps anti- 3034420 6 CD303 conjugué PE (zone remplie) et avec un anticorps isotype contrôle conjugué PE (ligne pointillée). Figure 10. Expression de CD303 sur les cellules de l'ensemble 008-1 après le 3è" tri cellulaire et 2 mois de culture. Les histogrammes montrent les cellules colorées avec un 5 anticorps anti-CD303 conjugué PE (zone remplie) et avec un anticorps isotype contrôle conjugué PE (ligne). Figure 11. Expression de CD303 par des clones obtenus après clonage par dilution limite. Les histogrammes montrent les cellules marquées avec un anticorps anti-CD303 conjugué PE (à droite) et avec un anticorps isotype contrôle conjugué PE (à gauche). 10 DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé La présente invention concerne un anticorps monoclonal dirigé contre l'ectodonnaine de l'antigène CD303 humain (SEQ ID NO :130), ou un fragment fonctionnel ou un dérivé de celui-ci, caractérisé en ce que : 15 a) il entre en compétition pour la liaison à l'antigène CD303 humain avec au moins un anticorps choisi parmi : i) Un anticorps dont la région variable de chaine lourde comprend la séquence SEQ ID NO : 43 et la région variable de chaine légère comprend la séquence SEQ ID NO :48; 20 ii) Un anticorps dont la région variable de chaine lourde comprend la séquence SEQ ID NO : 44 et la région variable de chaine légère comprend la séquence SEQ ID NO :49; iii) Un anticorps dont la région variable de chaine lourde comprend la séquence SEQ ID NO : 45 et la région variable de chaine légère comprend 25 la séquence SEQ ID NO :50; iv) Un anticorps dont la région variable de chaine lourde comprend la séquence SEQ ID NO : 46 et la région variable de chaine légère comprend la séquence SEQ ID NO :51 ; v) Un anticorps dont la région variable de chaine lourde comprend la 30 séquence SEQ ID NO : 47 et la région variable de chaine légère comprend la séquence SEQ ID NO :52 ; et b) les régions constantes des chaînes légères et des chaînes lourdes sont des régions constantes provenant d'une espèce non-nnurine. 3034420 7 Avantageusement, les chaînes lourdes comprennent trois CDR-H (CDR de chaîne lourde selon la nomenclature IMGT) ayant les séquences d'acides aminés suivantes, ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences suivantes, et les chaînes légères comprennent trois CDR-L (CDR de chaîne légère selon la 5 nomenclature IMGT) ayant les séquences d'acides aminés suivantes, ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences suivantes : i) CDR1-H-famille 1: SEQ ID NO : 1, CDR2-H-famille 1: SEQ ID NO : 2, CDR3- H-famille 1: SEQ ID NO : 3, CDR1-L-famille 1: SEQ ID NO : 4, CDR2-Lfamille 1: SEQ ID NO : 5, CDR3-L-famille 1: SEQ ID NO : 6; ou 10 ii) CDR1-H-famille 2 : SEQ ID NO : 7, CDR2-H-famille 2: SEQ ID NO : 8, CDR3- H-famille 2: SEQ ID NO : 9, CDR1-L-famille 2: SEQ ID NO : 10, CDR2-L- famille 2: SEQ ID NO : 11, CDR3-L-famille 2: SEQ ID NO : 12. Le Tableau 1 ci-dessous résume les séquences d'acides aminés des CDR-IMGT des deux 15 familles d'anticorps selon l'invention : Famille 1 Famille 2 CDR1-H GYTFTDYS (SEQ ID NO :1) GYTFTDXS (SEQ ID NO :7) CDR2-H ISXYYGDX (SEQ ID NO :2) INTETGXP (SEQ ID NO :8) CDR3-H ARN)00(Y)00(Y (SEQ ID NO :3) XRNGYYVGYYAXDY (SEQ ID NO :9) CDR1-L QDIXNY (SEQ ID NO :4) SSVXY (SEQ ID NO :10) CDR2-L YTS (SEQ ID NO :5) STS (SEQ ID NO :11) CDR3-L QQGXTLPWT (SEQ ID NO :6) QQRRSYPXT (SEQ ID NO :12) Tableau 1. Séquences d'acides amines des CDR des deux familles d'anticorps selon l'invention selon la nomenclature IMGT. Dans chaque séquence, X peut représenter n'importe quel acide aminé. 20 Avantageusement, les chaînes lourdes d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention comprennent trois CDR-H (CDR de chaîne lourde selon la nomenclature IMGT) ayant les séquences d'acides aminés suivantes, ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences suivantes, et les chaînes légères 25 comprennent trois CDR-L (CDR de chaîne légère selon la nomenclature IMGT) ayant les séquences d'acides aminés suivantes, ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences suivantes : 3034420 8 i) CDR1-H-122A2 : SEQ ID NO : 13, CDR2-H-122A2: SEQ ID NO : 14, CDR3-H- 122A2: SEQ ID NO : 15, CDR1-L-122A2: SEQ ID NO : 16, CDR2-L-122A2: SEQ ID NO : 17, CDR3-L-122A2: SEQ ID NO : 18; ii) CDR1-H-102E9 : SEQ ID NO : 19, CDR2-H-102E9: SEQ ID NO : 20, CDR3-H- 5 102E9: SEQ ID NO : 21, CDR1-L-102E9: SEQ ID NO : 22, CDR2-L-102E9: SEQ ID NO : 23, CDR3-L-102E9: SEQ ID NO : 24; iii) CDR1-H-104C12 : SEQ ID NO : 25, CDR2-H-104C12: SEQ ID NO : 26, CDR3- H-104C12: SEQ ID NO : 27, CDR1-L-104C12: SEQ ID NO : 28, CDR2-L104C12: SEQ ID NO : 29, CDR3-L-104C12: SEQ ID NO : 30; 10 iv) CDR1-H-114D11: SEQ ID NO : 31, CDR2-H-114D11 : SEQ ID NO : 32, CDR3- H-114D11: SEQ ID NO : 33, CDR1-L-114D11: SEQ ID NO : 34, CDR2-L- 114D11: SEQ ID NO : 35, CDR3-L-114D11: SEQ ID NO : 36; ou v) CDR1-H-104E10: SEQ ID NO : 37, CDR2-H-104E10: SEQ ID NO : 38, CDR3-H- 104E10 : SEQ ID NO : 39, CDR1-L-104E10: SEQ ID NO : 40, CDR2-L-104E10: 15 SEQ ID NO : 41, CDR3-L-104E10: SEQ ID NO : 42. Avantageusement, les chaines lourdes d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention comprennent une région variable ayant une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 43 à 47 ou une séquence ayant au moins 80% d'identité avec l'une de SEQ ID NO : 43 à 47. 20 En outre ou alternativement, les chaines légères d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention comprennent une région variable ayant une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 48 à 52 ou une séquence ayant au moins 80% d'identité avec l'une de SEQ ID NO : 48 à 52. Dans un mode de réalisation préféré, l'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de 25 celui-ci selon l'invention possède des chaînes lourdes et légères dont les régions variables ont les séquences d'acides aminés suivantes ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences suivantes : i) Anticorps 122A2: chaîne lourde : SEQ ID NO : 43, chaîne légère : SEQ ID NO : 48, ii) Anticorps 102E9: chaîne lourde : SEQ ID NO : 44, chaîne légère : SEQ ID NO : 49, 30 iii) Anticorps 104C12: chaîne lourde : SEQ ID NO : 45 chaîne légère : SEQ ID NO : 50, iv) Anticorps 114D11: chaîne lourde : SEQ ID NO : 46, chaîne légère : SEQ ID NO : 51, OU v) Anticorps 104E10: chaîne lourde : SEQ ID NO : 47, chaîne légère : SEQ ID NO : 52. 35 Le Tableau 2 ci-dessous résume les segments de gène VH, JH et VL et JL nnurins utilisés par les différents anticorps selon l'invention et le pourcentage d'identité. 3034420 9 Anticorps VH JH VL JL 122A2 IGHV1S137*01 IGHJ2*02 IGKV10- IGKJ1*01 (94.9%) (85%) 96*01 (100%) (98.9%) 102E9 IGHV9-2-1*01 IGHJ4*01 IGKV4- IGKJ1*02 (93.9%) (100%) 57*01 (100%) (95.7%) 104C12 IGHV1S137*01 IGHJ3*01 IGKV10- IGKJ1*02 (91.8%) (100%) 96*02 (100%) (89.5%) 114D11 IGHV9-2-1*01 IGHJ4*01 IGKV4- IGKJ1*02 (94.9%) (94.1%) 57*01 (100%) (97.9%) 104E10 IGHV9-2-1*01 IGHJ4*01 IGKV4- IGKJ1*02 (98%) (100%) 57*01 (100%) (96.8%) Tableau 2. Segments VH, JH et VL et JL nnurins utilisés par les différents anticorps selon l'invention, tels que définis par IMGT. Le Tableau 3 ci-dessous résume les séquences d'acides aminés des CDR et des régions 5 variables des chaînes lourdes et légères des anticorps anti-CD303 générés par les inventeurs : Anticorps 122A2 Chaîne lourde CDR1-H- GYTFTDYS (SEQ ID NO: 13) IMGT-122A2 CDR2-H- ISTYYGDS (SEQ ID NO: 14) IMGT-122A2 CDR3-H- ARNGNFYVMDY (SEQ ID NO: 15) IMGT-122A2 VH-122A2 QVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYSMHWVKQSHAKSLEWIGVISTYYGD SNYNQKFKGKATMTVDKSSTTAYMELARLTSEDSAIYYCARNGNFYVMDYWGQGTSV TVSS (SEQ ID NO : 43) Chaîne légère CDR1-L- QDISNY (SEQ ID NO: 16) 3034420 10 IMGT-122A2 CDR2-L- YTS (SEQ ID NO : 17) IMGT-122A2 CDR3-L- QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 18) IMGT-122A2 VL-122A2 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVP SRFSGSGSGTDYSLTISNLDQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO : 48) Anticorps 102E9 Chaîne lourde CDR1-H- GYTFTDYS (SEQ ID NO: 19) IMGT-102E9 CDR2-H- INTETGEP (SEQ ID NO : 20) IMGT-102E9 CDR3-H- TRNGYYVGYYAMDY (SEQ ID NO : 21) IMGT-102E9 VH-102E9 QINLVQSGPDLKKPGETVKISCKASGYTFTDYSMHWVKQAPGKGLKWMGWINTETG EPTYADDFKGRFAFSLESSASTAFLQINNLKNEDTSTYFCTRNGYYVGYYAMDYWGQ GTSVTVSS (SEQ ID NO : 44) Chaîne légère CDR1-L- SSVIY (SEQ ID NO : 22) IMGT-102E9 CDR2-L- STS (SEQ ID NO : 23) IMGT-102E9 CDR3-L- QQRRSYPFT (SEQ ID NO : 24) IMGT-102E9 VL-102E9 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSASSSVIYIHWFQQKPGTSPKLWIYSTSYLASGVPAR FSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRRSYPFTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO : 49) Anticorps 104C12 Chaîne lourde CDR1-H- GYTFTDYS (SEQ ID NO : 25) IMGT-104C12 CDR2-H- ISPYYGDT (SEQ ID NO : 26) IMGT-104C12 CDR3-H- ARNDDYYRFAY (SEQ ID NO : 27) IMGT-104C12 3034420 11 VH-104C12 QVQLQQSGAELVGPGVSVK ISCKGSGYTFTDYSMHWVKQSHAKSLEWIGVISPYYGD TNYNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMELASLTSEDSAIYFCARNDDYYRFAYWGQGTLV TVSA (SEQ ID NO : 45) Chaîne légère CDR1-L- QDINNY (SEQ ID NO : 28) IMGT-104C12 CDR2-L- YTS (SEQ ID NO : 29) IMGT-104C12 CDR3-L- QQGKTLPWT (SEQ ID NO : 30) IMGT-104C12 VL-104C12 DLQMTQTPSSLSASLGDRVTISCRASQDINNYLSWYQEKPDGTFKLLIYYTSRLHSGVP SRFSGSGSGTDYSLTVRNLEQEDIGTYFCQQGKTLPWTFGGGTKLEIR (SEQ ID NO : 50) Anticorps 114D11 Chaîne lourde CDR1-H- GYTFTDSS (SEQ ID NO : 31) IMGT-114D11 CDR2-H- INTETGGP (SEQ ID NO : 32) IMGT-114D11 CDR3-H- ARNGYYVGYYALDY (SEQ ID NO : 33) IMGT-114D11 VH-114D11 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDSSMHWVQQAPNKGLKWMGWINTETG GPTYADDFKGRFAFSLETSARTAYLQINNLKNEDTATYFCARNGYYVGYYALDYWGQ GTSVTVSS (SEQ ID NO : 46) Chaîne légère CDR1-L- SSVFY (SEQ ID NO : 34) IMGT-114D11 CDR2-L- STS (SEQ ID NO : 35) IMGT-114D11 CDR3-L- QQRRSYPYT (SEQ ID NO : 36) IMGT-114D11 VL-114D11 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSASSSVFYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPA RFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRRSYPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 51) Anticorps 104E10 Chaîne lourde 3034420 12 CDR1-H- GYTFTDYS (SEQ ID NO : 37) IMGT-104E10 CDR2-H- INTETGEP (SEQ ID NO : 38) IMGT-104E10 CDR3-H- ARNGYYVGYYAMDY (SEQ ID NO : 39) IMGT-104E10 VH-104E10 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSMHWVKQAPGKGLKWMGWINTETG EPTYADDFKGRFAFSLETSATTAYLQINNFKNEDTATYFCARNGYYVGYYAMDYWGQ GTSVTVSS (SEQ ID NO : 47) Chaîne légère CDR1-L- SSVIY (SEQ ID NO : 40) IMGT-104E10 CDR2-L- STS (SEQ ID NO :41) IMGT-104E10 CDR3-L- QQRRSYPYT (SEQ ID NO : 42) IMGT-104E10 VL-104E10 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVIYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPA RFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRRSYPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 52) Tableau 3. Séquences d'acides aminés des CDR1, CDR2, et CDR3 des chaines lourdes et légères selon la nomenclature IMGT, et des fragments VH et VL des anticorps selon l'invention. 5 L'antigène CD303 humain est le membre C de la 4è" famille de domaine lectine de type C et est également appelé CLEC4 (pour - C-type lectin donnain family 4, member C ») ; DLEC; HECL; BDCA2; CLECSF7; CLECSF11; ou PR034150 (voir le site EntrezGene pour le gène CLEC4). Il s'agit d'une glycoprotéine transnnennbranaire de type II de 213 acides aminés, comprenant un court domaine cytoplasmique sans motif de signalisation évident 10 (acides aminés 1-21), une région transnnennbranaire (acides aminés 22-41), un domaine cou (acides aminés 42-82), et un domaine extracellulaire de reconnaissance de carbohydrates (CRD pour - carbohydrate recognition donnain » ; acides aminés 83-213) (Dzionek et al-2001). La séquence de l'ARNnn codant pour cette protéine peut être trouvée sur la base de données Genbank dans sa version du 14 février 2002 sous le n° 15 d'accession AF293615.1 (SEQ ID NO :129), tandis que la séquence d'acides aminés est accessible sur la base de données Genbank dans sa version du 14 février 2002 sous le n° d'accession AAL37036.1 (SEQ ID NO :130). 3034420 13 Par - anticorps » ou - immunoglobuline », on entend une molécule comprenant au moins un domaine de liaison à un antigène donné et un domaine constant comprenant un fragment Fc capable de se lier aux récepteurs FcR. Chez la plupart des mammifères, 5 comme l'homme et la souris, un anticorps est composé de 4 chaînes polypeptidiques : 2 chaînes lourdes et 2 chaînes légères reliées entre elles par un nombre variable de ponts disulfures assurant une flexibilité à la molécule. Chaque chaîne légère est constituée d'un domaine constant (CL) et d'un domaine variable (VL); les chaînes lourdes étant composées d'un domaine variable (VH) et de 3 ou 4 domaines constants (CH1 à CH3 ou 10 CH1 à CH4) selon l'isotype de l'anticorps. Chez quelques rares mammifères, comme les chameaux et les lamas, les anticorps sont constitués de seulement deux chaines lourdes, chaque chaine lourde comprenant un domaine variable (VH) et une région constante. Les domaines variables sont impliqués dans la reconnaissance de l'antigène, tandis que 15 les domaines constants sont impliqués dans les propriétés biologiques, pharnnacocinétiques et effectrices, de l'anticorps. La région variable diffère d'un anticorps à un autre. En effet, les gènes codant pour les chaînes lourdes et légères des anticorps sont générés par recombinaison de respectivement trois et deux segments de gènes distincts appelés VH, DH et JH-CH pour 20 la chaîne lourde et VL et JL-CL pour la chaîne légère. Les segments CH et CL ne participent pas à la recombinaison et forment les régions constantes des chaînes lourdes et légères respectivement. Les recombinaisons des segments VH-DH-JH et VL-JL forment les régions variables des chaînes lourdes et légères respectivement. Les régions VH et VL possèdent chacune 3 zones hyper variables ou régions déterminant la 25 complémentarité (CDR), appelées CDR1, CDR2 et CDR3, la région CDR3 étant la plus variable, puisqu'elle se situe au niveau de la zone de recombinaison. Ces trois régions CDR, et particulièrement la région CDR3, se trouvent dans la partie de l'anticorps qui sera en contact avec l'antigène et sont donc très importantes pour la reconnaissance de l'antigène. Ainsi, les anticorps conservant les trois régions CDR et chacune des chaînes 30 lourde et légère d'un anticorps conservent en grande majorité la spécificité antigénique de l'anticorps d'origine. Dans un certain nombre de cas, un anticorps ne conservant que l'un des CDR, et notamment le CDR3, conserve également la spécificité de l'anticorps d'origine. Les régions CDR1, CDR2 et CDR3 sont chacune précédées des régions FR1, FR2 et FR3 respectivement, correspondant aux régions charpentes (frannework region FR) 35 qui varient le moins d'un segment VH ou VL à un autre. La région CDR3 est également suivie d'une région charpente FR4. 3034420 14 Les CDR d'un anticorps sont définis à partir de la séquence d'acides aminés de ses chaînes lourdes et légères par rapport à des critères connus de l'homme du métier. Différentes méthodes de détermination des CDR ont été proposées, et la portion de la séquence d'acides aminés d'une région variable de chaîne lourde ou légère d'un 5 anticorps définie comme un CDR varie en fonction de la méthode choisie. La première méthode de détermination est celle proposée par Kabat et al (Kabat et al-1991). Dans cette méthode, les CDR sont définis en recherchant les acides aminés responsables de la liaison à l'antigène de l'anticorps. Une 2è" méthode a été proposée par l'IMGT, fondée cette fois sur la détermination des régions hypervariables. Dans cette méthode, une 10 numérotation unique a été définie pour comparer les régions variables quels que soient le récepteur à l'antigène, le type de chaîne ou l'espèce (Lefranc et al. 2003). Cette numérotation fournit une délimitation standardisée des régions charpentes ((FR1-IMGT : positions 1 à 26, FR2-IMGT : 39 à 55, FR3-IMGT : 66 à 104 et FR4-IMGT : 118 à 128) et des régions déterminant la complémentarité (CDR1-IMGT : positions 27 à 38, CDR2-IMGT 15 : positions 56 à 65 and CDR3-IMGT : positions 105 à 117). Enfin, il existe également une numérotation dite commune », dans laquelle la séquence d'un CDR particulier correspond à la séquence commune entre la numérotation de Kabat et la numérotation IMGT. Dans toute la présente description, les séquences de CDR sont indiquées dans la numérotation IMGT. En particulier, les CDR ont été déterminés en utilisant le 20 programme IMGT/V-QUEST disponible sur http://www.inngt.org/IMGT_yquest/share/textes/ et décrit dans Brochet et al-2008. Contrairement aux domaines variables dont la séquence varie fortement d'un anticorps à un autre, les domaines constants sont caractérisés par une séquence en acides aminés très proche d'un anticorps à l'autre, caractéristique de l'espèce et de l'isotype, avec 25 éventuellement quelques mutations somatiques. Le fragment Fe est naturellement composé de la région constante de la chaine lourde à l'exclusion du domaine CH1, c'est-à-dire de la région charnière inférieure et des domaines constants CH2 et CH3 ou CH2 à CH4 (selon l'isotype). Chez les IgG1 humaines, le fragment Fe complet est composé de la partie C-terminale de la chaine lourde à partir du résidu cystéine en 30 position 226 (C226), la numérotation des résidus d'acides aminés dans le fragment Fe étant dans toute la présente description celle de l'index EU décrit dans Edelrnan et al-1969 et Kabat et al-1991. Les fragments Fe correspondants d'autres types d'immunoglobulines peuvent être identifiés aisément par l'homme du métier par des alignements de séquences. 3034420 15 Le fragment Fe est glycosylé au niveau du domaine CH2 avec la présence, sur chacune des 2 chaînes lourdes, d'un N-glycanne lié au résidu asparagine en position 297 (Asn 297). Les domaines de liaison suivants, situés dans le Fe, sont importants pour les propriétés 5 biologiques de l'anticorps : - domaine de liaison au récepteur FeRn, impliqué dans les propriétés pharnnacocinétiques (demi-vie in vivo) de l'anticorps : Différentes données suggèrent que certains résidus situés à l'interface des domaines CH2 et CH3 sont impliqués dans la liaison au récepteur FeRn. 10 - domaine de liaison à la protéine du complément C1q, impliqué dans la réponse CDC (pour - cytotoxicité dépendante du complément ») : situé dans le domaine CH2; - domaine de liaison aux récepteurs FeR, impliqué dans les réponses de type phagocytose ou ADCC (pour - cytotoxicité cellulaire dépendante de l'anticorps) : 15 situé dans le domaine CH2. Au sens de l'invention, le fragment Fe d'un anticorps peut être naturel, tel que défini ci-dessus, ou bien avoir été modifié de diverses façons, à condition de comprendre un domaine de liaison aux récepteurs FeR (récepteurs FeyR pour les IgG) fonctionnel, et de préférence un domaine de liaison au récepteur FeRn fonctionnel. Les modifications 20 peuvent inclure la délétion de certaines parties du fragment Fe, pourvu que celui-ci contienne un domaine de liaison aux récepteurs FeR (récepteurs FeyR pour les IgG) fonctionnel, et de préférence un domaine de liaison au récepteur FeRn fonctionnel. Les modifications peuvent également inclure différentes substitutions d'acides aminés susceptibles d'affecter les propriétés biologiques de l'anticorps, pourvu que celui-ci 25 contienne un domaine de liaison aux récepteurs FeR fonctionnel, et de préférence un domaine de liaison au récepteur FeRn fonctionnel. En particulier, lorsque l'anticorps est un IgG, il peut comprendre des mutations destinées à augmenter la liaison au récepteur FeyRIlla (CD16a), telles que décrites dans W000/42072, Shields et al-2001, Lazar et al-2006, W02004/029207, W02004/063351, W02004/074455. Des mutations permettant 30 d'augmenter la liaison au récepteur FcRn et donc la demi-vie in vivo peuvent également être présentes, comme décrit par exemple dans Shields et al-2001, Dall'Acqua et al-2002, Hinton et al-2004, Dall'Acqua et al-2006(a), W000/42072, W002/060919, W02010/045193, ou W02010/106180. D'autres mutations, comme celles permettant de diminuer ou d'augmenter la liaison aux protéines du complément et donc la réponse 35 CDC, peuvent ou non être présentes (voir W099/51642, W02004/074455, Idusogie et al- 2001, Dall'Acqua et al-2006(b), et Moore et al-2010). 3034420 16 Dans le cadre de la présente invention, des mutants préférés comprenant des mutations permettant d'augmenter la liaison au récepteur FeRn et donc la demi-vie in vivo sont les mutants comprenant les combinaisons de mutations suivantes dans leur fragment Fe, décrites dans W02010/106180 : 5 - N315D/A330V/N361D/A378V/N434Y, - P230S/N315D/M428L/N434Y, - E294del/T307P/N434Y, - T307A/N315D/A330V/E382V/N389T/N434Y, - V259I/N315D/N434Y, ou 10 - T256N /A378V/S383N /N434Y, où la numérotation des acides aminés dans le fragment Fe est celle de l'index EU décrit dans Kabat et al., Sequences of Proteins of Innnnunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), qui est ici incorporé par référence. L'- index EU » ou - index EU de Kabat » se réfère à la numérotation des 15 acides aminés de l'anticorps IgG1 humain. De manière alternative, de même que des fragments ou dérivés sans fragment Fe de l'anticorps peuvent être utiles dans le cadre de l'invention, notamment pour le traitement des maladies inflammatoires, notamment autoinnnnunes, impliquant les pDC, l'anticorps selon l'invention peut aussi posséder un fragment Fe muté dépourvu de 20 fonctions effectrices. Des exemples de mutations conduisant à un fragment Fe muté dépourvu de fonctions effectrices sont les délétions simples des acides aminés en position 293 (De1293) ou 294 (De1294) du fragment Fe, où la numérotation des acides aminés dans le fragment Fe est celle de l'index EU de Kabat (W02012/175751). 25 Par - anticorps monoclonal » ou - composition d'anticorps monoclonal », on entend une composition comprenant des molécules d'anticorps possédant une spécificité antigénique identique et unique. Les molécules d'anticorps présentes dans la composition sont susceptibles de varier au niveau de leurs modifications posttraductionnelles, et notamment au niveau de leurs structures de glycosylation ou de 30 leur point isoélectrique, mais ont toutes été codées par les mêmes séquences de chaines lourde et légère et ont donc, avant toute modification post-traductionnelle, la même séquence protéique. Certaines différences de séquences protéique, liées à des modifications post-traductionnelles (comme par exemple le clivage de la lysine C-terminale de la chaine lourde, la déannidation de résidus asparagine et/ou 35 l'isomérisation de résidus aspartate), peuvent néanmoins exister entre les différentes molécules d'anticorps présentes dans la composition. 3034420 17 Les pourcentages d'identité auxquels il est fait référence dans le cadre de l'exposé de la présente invention sont déterminés sur la base d'un alignement global des séquences à comparer, c'est-à-dire sur un alignement des séquences prises dans leur intégralité 5 sur toute la longueur en utilisant tout algorithme bien connu de l'homme du métier tel que l'algorithme de Needlernan et Wunsch-1970. Cette comparaison de séquences peut être effectuée à l'aide de tout logiciel bien connu de l'homme du métier, par exemple le logiciel needle en utilisant le paramètre - Gap open » égal à 10.0, le paramètre - Gap extend » égal à 0.5 et une matrice - Blosurn 62 ». Le logiciel needle est par 10 exemple disponible sur le site internet ebi.ac.uk world wide sous la dénomination - Align ». Lorsque le CDR ou la région variable d'un anticorps selon l'invention possède une séquence d'acides aminés qui n'est pas 100% identique à l'une de celles décrites ci-dessus et dans le listing de séquences (séquences de référence) mais qui possède au 15 moins 80%, de préférence au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, au moins 99% d'identité avec une telle séquence de référence, elle peut présenter des insertions, délétions ou substitutions par rapport à la séquence de référence. Lorsqu'il s'agit de substitutions, la substitution est de préférence réalisée par un acide aminé - équivalent », c'est-à-dire tout acide aminé 20 dont la structure est proche de celle de l'acide aminé d'origine et est donc peu probable de modifier les activités biologiques de l'anticorps. Des exemples de telles substitutions sont présentés dans le Tableau 4 suivant : Acide aminé d'origine Substitution(s) Ala (A) Val, Gly, Pro Arg (R) Lys, His Asn (N) Gln Asp (D) Glu Cys (C) Ser Gln (Q) Asn Glu (G) Asp Gly (G) Ala His (H) Arg Ile (I) Leu Leu (L) Ile, Val, Met Lys (K) Arg 3034420 18 Met (M) Leu Phe (F) Tyr Pro (P) Ala Ser (S) Thr, Cys Thr (T) Ser Trp (W) Tyr Tyr (Y) Phe, Trp Val (V) Leu, Ala Tableau 4. Substitutions par des acides aminés équivalents Les anticorps peuvent être de plusieurs isotypes, en fonction de la nature de leur région constante : les régions constantes y, a, p, e et Ô correspondent respectivement aux 5 immunoglobulines IgG, IgA, IgM, IgE et IgD. Avantageusement, l'anticorps monoclonal présent dans une composition utilisée en tant que médicament dans le cadre de l'invention est d'isotype IgG. En effet, cet isotype montre une capacité à engendrer une activité ADCC (- Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity », soit Cytotoxicité cellulaire dépendante de l'anticorps) chez le plus grand nombre d'individus (humains). Les régions 10 constantes y comprennent plusieurs sous-types : yl, y2, y3, ces trois types de régions constantes présentant la particularité de fixer le complément humain, et y4, créant ainsi les sous-isotypes IgG1, IgG2, IgG3, et IgG4. Avantageusement, l'anticorps monoclonal présent dans une composition utilisée en tant que médicament dans le cadre de l'invention est d'isotype IgG1 ou IgG3, de préférence IgG1. 15 L'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention est avantageusement un anticorps chimérique ou humanisé, en particulier un anticorps chimérique dont la région constante des chaines lourdes et légères est d'origine humaine. 20 Par anticorps - chimérique », on entend désigner un anticorps qui contient une région variable (chaîne légère et chaîne lourde) naturelle dérivée d'un anticorps d'une espèce donnée en association avec les régions constantes de chaîne légère et chaîne lourde d'un anticorps d'une espèce hétérologue à ladite espèce donnée. Avantageusement, si la composition d'anticorps monoclonal pour son utilisation en tant que médicament selon 25 l'invention comprend un anticorps monoclonal chimérique, celui-ci comprend des régions constantes humaines. Partant d'un anticorps non humain, un anticorps chimérique peut être préparé en utilisant les techniques de recombinaison génétique bien connues de l'homme du métier. Par exemple, l'anticorps chimérique pourra être 3034420 19 réalisé en clonant pour la chaine lourde et la chaine légère un ADN recombinant comportant un promoteur et une séquence codant pour la région variable de l'anticorps non humain, et une séquence codant pour la région constante d'un anticorps humain. Pour les méthodes de préparation d'anticorps chimériques, on pourra par exemple se 5 référer au document Verhoeyn et al-1988. Par anticorps - humanisé », on entend désigner un anticorps qui contient des régions CDRs dérivées d'un anticorps d'origine non humaine, les autres parties de la molécule d'anticorps étant dérivées d'un (ou de plusieurs) anticorps humains. En outre, certains des résidus des segments du squelette (dénommés FR) peuvent être modifiés pour 10 conserver l'affinité de liaison (Jones et al-1986 ; Verhoeyen et al- 1988 ; Riechnnann et al-1988). Les anticorps humanisés selon l'invention peuvent être préparés par des techniques connues de l'homme de l'art telles les technologies de - CDR grafting », de - resurfacing », de SuperHurnanisation, de - Hunan string content », de - FR libraries », de - Guided selection », de - FR shuffling » et de - Hurnaneering », comme résumé dans 15 la revue de Almagro et al-2008. Un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention, qui est chimérique avec des régions constantes humaines, ou bien humanisé, comprendra avantageusement une région constante de chaine lourde humaine ayant pour séquence d'acides aminés SEQ ID NO :53. De plus ou de manière alternative, un anticorps, 20 fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention, qui est chimérique avec des régions constantes humaines, ou bien humanisé, comprendra avantageusement une région constante de chaine légère humaine ayant pour séquence d'acides aminés SEQ ID NO :54. Les séquences préférées de région constante de chaine lourde ou légère humaine, SEQ ID NO :53 et SEQ ID NO :54, d'isotype IgG1, sont présentées dans le 25 Tableau 5 ci-dessous. ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP Région AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTC constante de PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD chaine lourde GVEVI-INAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE humaine KTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP préférée (IgG1) ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSPG (SEQ ID NO :53) Région RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQE constante de SVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC chaine légère (SEQ ID NO :54) 3034420 20 humaine préférée (IgG1) Tableau 5. Séquences préférées de région constante de chaine lourde ou légère humaine SEQ ID NO :53 et SEQ ID NO :54. Ainsi, les chaines lourdes et légères des anticorps, fragments fonctionnels ou dérivés de 5 ceux-ci selon l'invention comprennent avantageusement les séquences décrites dans le Tableau 6 ci-dessous. Anticorps Chaine lourde Chaine légère 122A2 Fusion SEQ ID NO : 43-SEQ ID NO:53 Fusion SEQ ID NO : 48-SEQ ID NO:54 (SEQ ID NO:55) (SEQ ID NO:60) 102E9 Fusion SEQ ID NO : 44-SEQ ID NO:53 Fusion SEQ ID NO : 49-SEQ ID NO:54 (SEQ ID NO:56) (SEQ ID NO:61) 104C12 Fusion SEQ ID NO : 45-SEQ ID NO:53 Fusion SEQ ID NO : 50-SEQ ID NO:54 (SEQ ID NO:57) (SEQ ID NO:62) 114D11 Fusion SEQ ID NO : 46-SEQ ID NO:53 Fusion SEQ ID NO : 51-SEQ ID NO:54 (SEQ ID NO:58) (SEQ ID NO:63) 104E10 Fusion SEQ ID NO : 47-SEQ ID NO:53 Fusion SEQ ID NO : 52-SEQ ID NO:54 (SEQ ID NO:59) (SEQ ID NO:64) Tableau 6. Séquences d'acides aminés des cha nes lourdes et légères des anticorps selon l'invention. 10 La chaine lourde et/ou la chaine légère de l'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention comprend avantageusement en outre au moins un peptide signal hétérologue de séquence SEQ ID NO :65 (MRWSWIFLLLLSITSANA, peptide signal MB7). En effet, ce peptide a été montré comme permettant d'améliorer l'expression et la sécrétion de protéines recombinantes dans des lignées cellulaires eucaryotes 15 supérieures (voir W02011/114063). Ainsi, les chaines lourdes des anticorps, fragments fonctionnels ou dérivés de ceux-ci selon l'invention comprennent avantageusement une séquence d'acides aminés choisie parmi les séquences SEQ ID NO : 66 à 70, constituées de la fusion de N- en C-terminal entre la séquence d'acides aminés du peptide signal MB7 (SEQ ID NO :65) et d'une des séquences d'acides aminés de la région VH des 20 anticorps selon l'invention (SEQ ID NO : 43 à 47). De plus ou de manière alternative, les chaines légères des anticorps, fragments fonctionnels ou dérivés de ceux-ci selon l'invention comprennent avantageusement une séquence d'acides aminés choisie parmi les séquences SEQ ID NO : 71 à 75, constituées de la fusion de N- en C-terminal entre la 3034420 21 séquence d'acides aminés du peptide signal MB7 (SEQ ID NO :65) et d'une des séquences d'acides aminés de la région VL des anticorps selon l'invention (SEQ ID NO : 48 à 52). En ajoutant les régions constantes de chaine lourde et de chaine légère préférées, on obtient des séquences d'acides aminés complètes préférées des anticorps selon 5 l'invention, tel que décrit dans le Tableau 7 ci-dessous. Anticorps Chaine lourde Chaine légère 122A2 Fusion SEQ ID NO :65-SEQ ID NO : Fusion SEQ ID NO :65-SEQ ID NO : 48- 43-SEQ ID NO:53 SEQ ID NO:54 (SEQ ID NO:76) (SEQ ID NO:81) 102E9 Fusion SEQ ID NO :65-SEQ ID NO : Fusion SEQ ID NO :65-SEQ ID NO : 49- 44-SEQ ID NO:53 SEQ ID NO:54 (SEQ ID NO:77) (SEQ ID NO:82) 104C12 Fusion SEQ ID NO :65-SEQ ID NO : Fusion SEQ ID NO :65-SEQ ID NO : 50- 45-SEQ ID NO:53 SEQ ID NO:54 (SEQ ID NO:78) (SEQ ID NO:83) 114D11 Fusion SEQ ID NO :65-SEQ ID NO : Fusion SEQ ID NO :65-SEQ ID NO : 51- 46-SEQ ID NO:53 SEQ ID NO:54 (SEQ ID NO:79) (SEQ ID NO:84) 104E10 Fusion SEQ ID NO :65-SEQ ID NO : Fusion SEQ ID NO :65-SEQ ID NO : 52- 47-SEQ ID NO:53 SEQ ID NO:54 (SEQ ID NO:80) (SEQ ID NO:85) Tableau 7. Séquences d'acides aminés des cha nes lourdes et légères des anticorps selon l'invention, avec le peptide signal MB7. L'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention peut être 10 produit à partir de toute cellule hôte, de tout animal non-humain transgénique ou de toute plante transgénique décrite dans la présente description, et notamment ci-dessous dans la partie concernant les acides nucléiques, vecteurs, cellules hôtes, animaux non-humains transgéniques et plantes transgéniques selon l'invention. 15 Par - fragment fonctionnel », on entend un fragment d'anticorps conservant le domaine de liaison à l'antigène et ayant donc la même spécificité antigénique que l'anticorps d'origine, tels que les fragments Fv, ScFv, Fab, F(ab')2, Fab', scFv-Fc ou les dianticorps (- diabodies »). Un fragment fonctionnel d'anticorps selon l'invention est donc avantageusement choisi parmi les fragments Fv, ScFv, Fab, F(ab')2, Fab', scFv-Fc ou les 20 dianticorps (- diabodies »). 3034420 22 Par - dérivé » d'un anticorps, on entend une protéine de fusion formée d'un peptide support et d'au moins un des CDR de l'anticorps d'origine permettant de préserver sa capacité à reconnaitre CD303. 5 L'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention possède avantageusement une faible teneur en fucose, inférieure ou égale à 65%. Par - teneur en fucose », on entend le pourcentage de formes fucosylées au sein des Nglycannes attachés au résidu Asn297 du fragment Fc de chaque chaine lourde de chaque anticorps. Par - faible teneur en fucose », on entend une teneur en fucose inférieure ou 10 égale à 65%. En effet, il est aujourd'hui connu que la teneur en fucose d'une composition d'anticorps joue un rôle crucial dans la capacité de cette composition à induire une forte réponse ADCC via le récepteur FcyRIII. Avantageusement, la teneur en fucose est inférieure ou égale à 65%, de préférence inférieure ou égale à 60%, à 55% ou à 50%, voire inférieure ou égale à 45%, à 40%, à 35%, à 30%, à 25% ou à 20%. Cependant, 15 il n'est pas nécessaire que la teneur en fucose soit nulle, et elle peut par exemple être supérieure ou égale à 5%, à 10%, à 15% ou à 20%. La teneur en fucose peut par exemple être comprise entre 5 et 65%, entre 5 et 60%, entre 5 et 55%, entre 5 et 50%, entre 5 et 45%, entre 5 et 40%, entre 5 et 35%, entre 5 et 30%, entre 5 et 25%, entre 5 et 20%, entre 10 et 65%, entre 10 et 60%, entre 10 et 55%, entre 10 et 50%, entre 10 et 45%, 20 entre 10 et 40%, entre 10 et 35%, entre 10 et 30%, entre 10 et 25%, entre 10 et 20%, entre 15 et 65%, entre 15 et 60%, entre 15 et 55%, entre 15 et 50%, entre 15 et 45%, entre 15 et 40%, entre 15 et 35%, entre 15 et 30%, entre 15 et 25%, entre 15 et 20%, entre 20 et 65%, entre 20 et 60%, entre 20 et 55%, entre 20 et 50%, entre 20 et 45%, entre 20 et 40%, entre 20 et 35%, entre 20 et 30%, entre 20 et 25%. 25 L'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention peut par ailleurs posséder différents types de glycosylation (N-glycannes de type oligonnannose ou complexes biantennés, proportion variable de résidus N-acétylglucosannine (GlcNAc) intercalaires ou de résidus galactose dans le cas des N-glycannes de type complexes biantennés), à condition de posséder un faible teneur en fucose. Ainsi, des N-glycannes 30 de type oligonnannose peuvent être obtenus par culture en présence de différents inhibiteurs de glycosylation, tels que les inhibiteurs de a1,2-nnannosidase I (comme la Deoxymannojirimycine ou - DMM ») ou de l'a-glucosidase (comme la castanospernnine ou - Cs ») ; ou bien par production de l'anticorps dans la lignée CHO Lec 1. La production dans le lait de chèvres transgéniques conduit également à l'obtention 35 d'anticorps dont le N-glycanne majoritaire est de type oligonnannose, avec comme formes minoritaires des formes complexes biantennées fucosylées avec un ou deux 3034420 23 galactoses, sans GleNAc intercalaire et sans sialylation (G1F ou G2F) (voir W02007/048077). Des N-glycannes de type complexe biantenné peuvent être obtenus dans la plupart des cellules de mammifères, mais également dans des bactéries, levures ou plantes dont la machinerie de glycosylation a été modifiée. Pour limiter la teneur en 5 fucose, des lignées possédant naturellement une faible activité de l'enzyme FUT8 (1,6- fucosyltransférase) responsable de l'ajout du fucose sur le GleNAc lié au fragment Fe ; telles que la lignée YB2/0, la lignée de cellule embryonnaire de canard EB660, les lignées d'hépatonne de rat rat H4-II-E (DSM ACC3129), H4-II-Es (DSM ACC3130), ou les lignées NM-H9D8-E6 (DSM ACC 2807), et NM H9D8-E6Q12 (DSM ACC 2856) peuvent être 10 utilisées. Des lignées mutantes pour d'autres gènes et dont la sous-expression ou la surexpression conduit à une faible teneur en fucose peuvent également être utilisées, comme la lignée CHO Lec13, un mutant de la lignée CHO ayant une synthèse diminuée du GDP-fucose. Il est également possible de sélectionner une lignée d'intérêt et de diminuer ou abolir (notamment par utilisation d'ARN interférents ou par mutation ou 15 délétion du gène exprimant la protéine d'intérêt) l'expression d'une protéine impliquée dans la voie de fucosylation des N-glycannes (notamment FUT8, voir Yannane-Ohnuki et al-2004 ; mais également GMD, un gène impliqué dans le transport du GDP-fucose, voir Kanda et al-2007). Une autre alternative consiste à sélectionner une lignée d'intérêt et à surexprinner une protéine interférant d'une façon ou d'une autre avec la fucosylation 20 des N-glycannes, comme la protéine GnTIII (B(1,4)-N-acétylglucosanninetransférase III). En particulier, des anticorps possédant des N-glycannes faiblement fucosylés ont été notamment obtenus par : - Production dans YB2/0 (voir EP1176195A1, W001/77181, Shinkawa et al-2003) CHO Lec13 (voir Shields et al-2002), EB660 (Olivier et al-2010), les lignées 25 d'hépatonne de rat rat H4-II-E (DSM ACC3129), H4-II-Es (DSM ACC3130) (voir W02012/041768), et les lignées humaines NM-H9D8 (DSM ACC2806), NM-H9D8-E6 (DSM ACC 2807), et NM H9D8-E6Q12 (DSM ACC 2856) (voir W02008/028686). - Production dans une lignée CHO sauvage en présence de petits ARNs interférents dirigés contre FUT8 (Mon et al-2004, Suzuki et al-2007, Cardarelli et al-2009, 30 Cardarelli et al-2010, Herbst et al-2010), ou GMD (gène codant pour le transporteur du GDP-fucose dans le Golgi, voir Innai-Nishiya et al-2007) - Production dans une lignée CHO dont les deux allèles du gène FUT8 codant pour la 1,6-fucosyltransférase ont été délétés (Yannane-Ohnuki et al-2004), ou dont les deux allèles du gène GMD codant pour le transporteur du GDP-fucose dans le 35 Golgi ont été délétés (Kanda et al-2007), 3034420 24 - Production dans une lignée CHO dans laquelle le gène codant pour l'enzyme GnTIII (B(1,4)-N-acétylglucosanninetransférase III) a été surexprinné par transgénèse (Unnana et al-1999). Outre une faible fucosylation, les N-glycannes obtenus sont caractérisés par une forte teneur en GlcNAc intercalaire. 5 - Production dans des plantes (N. benthanniana) transgéniques, avec une forte diminution des teneurs en résidus131,2-xylose et a1,3-fucose grâce à l'utilisation de petits ARNs interférents (Forthal et al-2010). Les N-glycannes de type oligonnannose ont une demi-vie réduite in vivo par rapport aux N-glycannes de type complexe biantenné. Par conséquent, avantageusement, les 10 anticorps selon l'invention possèdent sur leurs sites de N-glycosylation du fragment Fc des structures glycanniques de type complexe biantenné, avec une faible teneur en fucose, comme défini ci-dessus. En particulier, l'anticorps monoclonal selon l'invention peut posséder une teneur en formes G0+G1+G0F+G1F supérieure à 60% et une faible teneur en fucose, telle que 15 définie ci-dessus. Elle peut également posséder teneur en formes G0+G1+G0F+G1F supérieure à 65% et une faible teneur en fucose, telle que définie ci-dessus. Elle peut également posséder teneur en formes G0+G1+G0F+G1F supérieure à 70% et une faible teneur en fucose, telle que définie d-dessus. Elle peut également posséder teneur en formes G0+G1+G0F+G1F supérieure à 75% et une faible teneur en fucose, telle que 20 définie ci-dessus. Elle peut également posséder teneur en formes G0+G1+G0F+G1F supérieure à 80% et une faible teneur en fucose, telle que définie ci-dessus. Elle peut également posséder teneur en formes G0+G1+G0F+G1F supérieure à 60%, à 65%, à 70%, à 75% ou à 80% et une teneur en formes G0F+G1F inférieure à 50%. Les formes GO, G1, GOF et G1F sont telles que définies ci-dessous : 25 GO GOF G1 al F III GIcNAc (D Mannose . Galactose 11.- Fuccse De telles compositions d'anticorps peuvent notamment être obtenues par production dans YB2/0, dans CHO Lec13, dans des lignées CHO sauvages cultivées en présence de petits ARNs interférents dirigés contre FUT8 ou GMD, dans des lignées CHO dont les 3034420 25 deux allèles du gène FUT8 codant pour la 1,6-fucosyltransférase ou les deux allèles du gène GMD codant pour le transporteur du GDP-fucose dans le Golgi ont été délétés. Cependant, dans un autre mode de réalisation, l'anticorps, fragment fonctionnel ou 5 dérivé de celui-ci selon l'invention possède une forte teneur en N-glycannes de type oligonnannose. Par N-glycannes de type oligonnannose », on entend des N-glycannes dont le coeur pentasaccharidique, constitué de deux résidus N-acétylglucosannine (GleNAc) (l'un d'eux étant lié au résidu Asn297 du fragment Fe de l'anticorps) et trois résidus nnannose, est 10 complété par un à six nnannoses additionnels fixés aux résidus nnannose terminaux du coeur pentasaccharidique. Les N-glycannes de type oligonnannose ne sont pas fucosylés. Par teneur en N-glycannes de type oligonnannose », on entend le pourcentage de formes oligonnannose au sein des N-glycannes attachés au résidu Asn297 du fragment Fe de chaque chaine lourde de chaque anticorps. Par forte teneur en N-glycannes de type 15 oligonnannose », on entend une teneur en N-glycannes de type oligonnannose supérieure ou égale à 30%, avantageusement supérieure ou égale à 35%, supérieure ou égale à 40%, supérieure ou égale à 45%, supérieure ou égale à 50%, supérieure ou égale à 55%, supérieure ou égale à 60%, supérieure ou égale à 65%, supérieure ou égale à 70%, supérieure ou égale à 75%, supérieure ou égale à 80%, supérieure ou égale à 85%, 20 supérieure ou égale à 90%, voire supérieure ou égale à 95%. En sus ou alternativement à une faible teneur en fucose, l'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention possède une forte teneur en galactose. 25 Par teneur en galactose » ou taux de galactosylation » de l'anticorps, on entend un pourcentage calculé à partir d'un chromatogramme d'analyse des N-glycannes libérés de l'anticorps, selon la formule suivante : X no E;2_ i(nombre de A) x (% surface relative) 30 dans laquelle : n » représente le nombre de pics N-glycannes analysés sur un chromatogramme, par exemple d'un spectre de chromatographie en phase liquide à haute performance en phase normale (NP HPLC), teneur en galactose = e_1(nombre de Gal) x (% surface relative) 3034420 26 - nombre de Gal » représente le nombre de galactoses sur l'antenne du glycanne correspondant au pic, - nombre de A» représente le nombre d'antennes N-acétyl-glucosannine de la forme glycannique correspondant au pic, et 5 - % surface relative » correspond au pourcentage de l'aire sous le pic correspondant. Par - forte teneur en galactose », on entend une teneur en galactose supérieure ou égale à 30%, avantageusement supérieure ou égale à 50%, avantageusement supérieure ou égale à 55%, supérieure ou égale à 60%, supérieure ou égale à 65%, supérieure ou 10 égale à 70%, supérieure ou égale à 75%, supérieure ou égale à 80%, supérieure ou égale à 85%, supérieure ou égale à 90%, supérieure ou égale à 95%, voire égale à 100%. La présente invention concerne également un anticorps monoclonal dirigé contre l'ectodonnaine de l'antigène CD303 humain (SEQ ID NO :130), ou un fragment 15 fonctionnel ou un dérivé de celui-ci, caractérisé en ce que : a) il possède une affinité pour le récepteur FeyRIlla (CD16a) améliorée par rapport à des anticorps dirigés contre l'ectodonnaine de l'antigène CD303 humain, produits dans la lignée cellulaire CHO ; et b) les régions constantes des chaînes légères et des chaînes lourdes sont des régions 20 constantes provenant d'une espèce non-nnurine. L'affinité du fragment Fe d'un anticorps pour le récepteur FeyRIlla (CD16a) peut être mesurée par plusieurs méthodes, dont la résonance plasnnonique de surface (RPS, notamment à l'aide d'un appareil type BlAcore 2000 - Pharmacia Biosensor, Upsala, 25 Suède) et l'analyse Scatchard. Huit gènes codant pour les FeyR ont été identifiés chez l'homme, mais seulement cinq codent pour des récepteurs exprimés (FeyRla, FeyRIla, FeyRIlb, FeyRIlla, FeyR111b). Tous sont des récepteurs activateurs des cellules effectrices, hormis le FeyRIlb qui lui est un récepteur inhibiteur de l'activation des cellules immunitaires. Les récepteurs FeyRla sont caractérisés par une forte affinité 30 pour les immunoglobulines (Kd de 5.10-7 à 10-1° M) tandis que les récepteurs FeyRIla, FeyRIlb, FeyRIlla, FeyRIllb sont caractéristiques des récepteurs de faible affinité (Kd inférieure à 10-7 M). Les anticorps selon l'invention qui ont une affinité pour le récepteur FeyRIlla (CD16a) améliorée par rapport à des anticorps dirigés contre l'ectodonnaine de l'antigène CD303 humain produits dans la lignée cellulaire CHO ont 35 l'avantage que cette affinité améliorée leur permet de ne pas être déplacés ou d'être moins déplacés du récepteur FeyRIlla (CD16a) par des anticorps IgG polyclonaux, 3034420 27 notamment les IgG présents dans le sérum sanguin. De tels anticorps ont avantageusement une forte affinité pour le récepteur FeyRIlla (CD16a), c'est-à-dire une affinité au moins égale à 2x106 M-1, au moins égale à 2x107 M-1, 2x108 M-1 ou 2x109 M-1, telle que déterminée par l'analyse Scatchard ou la technologie BlAcore (Label-free 5 surface plasnnon resonance based technology). Une forte affinité pour le récepteur FeyRIlla (CD16a), significativement améliorée par rapport à des anticorps produits dans la lignée cellulaire CHO, peut être obtenue de différentes façons décrites ci-dessus pour l'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de 10 celui-ci selon l'invention défini par sa capacité à entrer en compétition pour la liaison à l'ectodonnaine de CD303 avec les anticorps particuliers développés par les inventeurs et par le fait que les régions constantes de ses chaînes légères et de ses chaînes lourdes sont des régions constantes provenant d'une espèce non-nnurine. En particulier, une forte affinité pour le récepteur FeyRIlla (CD16a), significativement améliorée par 15 rapport à des anticorps produits dans la lignée cellulaire CHO, peut être obtenue par : - La présence de mutations dans le fragment Fe augmentant la liaison au récepteur FeyRIlla (CD16a), tel que décrit précédemment (notamment les mutations augmentant la liaison au récepteur FeyRIlla (CD16a) décrites dans telles que décrites dans W000/42072, Shields et al-2001, Lazar et al-2006, 20 W02004/029207, W02004/063351, W02004/074455) ; et/ou - Le contrôle de la glycosylation de l'anticorps, notamment : o Faible teneur en fucose, au sein de formes complexes biantennées et/ou via une forte teneur en N-glycannes de type oligonnannose, tel que décrit précédemment, et/ou 25 o Forte teneur en galactose, tel que décrit précédemment. Un tel anticorps selon l'invention peut par ailleurs posséder toute caractéristique ou combinaison de caractéristique décrite ci-dessus pour l'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention défini par sa capacité à entrer en compétition 30 pour la liaison à l'ectodonnaine de CD303 avec les anticorps particuliers développés par les inventeurs et par le fait que les régions constantes de ses chaînes légères et de ses chaînes lourdes sont des régions constantes provenant d'une espèce non-nnurine. 3034420 28 Acides nucléiques, vecteurs, cellules hôtes, animaux non-humains transgéniques et plantes transgéniques La présente invention concerne également un acide nucléique (encore appelé séquence nucléique ou nucléotidique) codant pour la chaine lourde et/ou la chaine légère d'un 5 anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention tel que décrit ci- dessus. Toutes les séquences nucléiques différentes, du fait de la dégénérescence du code génétique, codant pour une séquence d'acides aminés particulière sont dans la portée de l'invention. 10 En particulier, la séquence d'un acide nucléique selon l'invention peut avoir été optimisée pour favoriser son expression dans une cellule hôte, un animal non-humain transgénique ou une plante transgénique d'intérêt. En effet, il existe en général plusieurs combinaisons de trois nucléotides codant le même acide-aminé (sauf pour la méthionine et le tryptophane), appelés codons synonymes. Cependant, certaines de ces 15 combinaisons sont en général utilisées préférentiellement par une cellule ou un organisme donné (on parle alors de biais d'usage du code génétique). Cette préférence dépend notamment de l'organisme producteur ou dont est issue la cellule. Par conséquent, lorsqu'une protéine dérivée d'un ou plusieurs organismes est produite dans un organisme hétérologue ou dans une cellule d'un tel organisme hétérologue, il peut 20 être utile de modifier la séquence nucléique codant pour la protéine de façon à utiliser principalement les codons préférés de l'organisme hétérologue. Des données sont disponibles dans la littérature concernant l'usage des codons préféré par différentes espèces et l'homme du métier sait comment optimiser l'expression d'une protéine donnée dans un organisme ou une cellule d'un organisme hétérologue. 25 Un acide nucléique selon l'invention comprend avantageusement au moins une des séquences SEQ ID NO : 86 à 95, telles que décrites dans le Tableau 8 ci-dessous, qui codent pour les séquences d'acides aminés des régions VH et VL des anticorps selon l'invention et ont été optimisées pour une expression dans des cellules de l'espèce 30 Rattus norvegicus. Anticorps VH VL 122A2 CAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCT GAGCTGGTGAGGCCTGGGGTCTCAGTG AAGATTTCCTGCAAGGGTTCTGGCTACA CATTCACTGATTATTCTATGCACTGGGT GATATCCAGATGACACAGACTACAT CCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGA CAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCA AGTCAGGACATTAGCAATTATTTAA 3034420 29 GAAGCAGAGTCATGCAAAGAGTCTAGAG TGGATTGGAGTTATTAGTACTTACTATG GTGATTCTAACTATAACCAGAAGTTCAA GGGCAAGGCCACAATGACTGTAGACAAA TCCTCCACCACAGCCTATATGGAACTTG CCAGACTGACATCTGAGGATTCTGCCAT CTATTACTGTGCAAGAAATGGTAATTTC TATGTTATGGACTACTGGGGTCAAGGAA CCTCAGTCACCGTCTCCTCA(SWD NO :86) ACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGG AACTGTTAAACTCCTGATCTACTAC ACATCAAGATTACACTCAGGAGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CTGGAACAGATTATTCTCTCACCAT TAGCAACCTGGACCAAGAAGATATT GCCACTTAC I I I I GCCAACAGGGTA ATACGCTTCCTTGGACGTTCGGTGG AGGCACCAAGCTGGAAATCAAA (SEQ ID NO :91) 102E9 CAGATCCATTTGGTGCAGTCTGGACCTG ACCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAA GATCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTATACC TTCACAGACTATTCAATGCACTGGGTGA AGCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTAAAGTG GATGGGCTGGATAAACACTGAGACTGGT GAACCAACATATGCAGATGACTTCAAGG GACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAAGTTC CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAG CAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGA GAAGGTCACCATAACCTGCAGTGCC AGCTCAAGTGTAATTTACATTCACT GGTTCCAGCAGAAGCCAGGCACTTC TCCCAAACTCTGGATTTATAGCACA TCCTACCTGGCTTCTGGAGTCCCTG CTCGCTTCAGTGGCAGTGGATCTG GGACCTCTTACTCTCTCACAATCAG CCGAATGGAGGCTGAAGATGCTGC CACTTATTACTGCCAGCAGAGGAGA AGTTACCCGTTCACGTTCGGAGGG GGGACCAAGCTGGAAATAAAA(SEQ ID NO :92) TGCCAGCACTGCC 11111 GCAGATCAAC AACCTCAAAAATGAGGACACGTCTACAT ATTTCTGTACTAGAAATGGTTACTACGT GGGTTACTATGCTATGGACTACTGGGGT CAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO :87) 104C12 CAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCT GAGCTGGTGGGGCCTGGGGTCTCAGTG AAGATTTCCTGCAAGGGTTCTGGCTACA CATTCACTGATTATTCTATGCACTGGGT AAAGCAGAGTCATGCAAAGAGTCTAGAG TGGATTGGAGTTATTAGTCCTTACTATG GTGATACTAACTACAACCAGAAGTTCAA GGGCAAGGCCACAATGACTGTAGACAAA TCCTCCAGCACAGCCTATATGGAACTTG CCAGTCTGACATCTGAGGATTCTGCCAT CTATTTCTGTGCAAGAAATGATGATTAC TACAGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGA GATCTCCAGATGACACAGACTCCAT CCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGA CAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCA AGTCAGGACATTAACAATTATTTAA GCTGGTATCAGGAGAAACCAGATG GAAC I I I I AAACTCCTGATCTACTA CACATCAAGATTACACTCAGGAGTC CCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGG TCTGGAACAGATTATTCTCTCACCG TTCGCAACCTGGAACAGGAAGATAT TGGCACTTAC 1111 GCCAACAGGGT AAAACGCTTCCGTGGACGTTCGGTG 3034420 30 CTCTGGTCACTGTCTCTGC (SEQ ID NO :88) GAGGCACCAAGCTGGAAATCAG (SEQ ID NO :93) 114D11 CAGATCCAGTTGGTGCAGTCTGGACCTG AG CTGAAGAAG CCTGGAGAGACAGTCAA GATCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTATACC TTCACAGACTCTTCAATGCACTGGGTGC AGCAGGCTCCAAACAAGGGTTTAAAGTG GATGGGCTGGATAAACACTGAGACTGGT GGGCCAACGTATGCAGATGATTTCAAGG GACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTC TGCCAGAACTGCCTATTTGCAGATCAAC AACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACAT ATTTCTGTGCTAGAAATGGATACTACGT GGGGTACTATGCTCTGGACTACTGGGG TCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO :89) CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAG CAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGA GAAGGTCACCATAACCTGCAGTGCC AGCTCAAGTGTA I I I I ACATGCACT GGTTCCAGCAGAAGCCAGGCACTTC TCCCAAACTCTGGATTTATAGCACA TCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTG CTCGCTTCAGTGGCAGTGGATCTG GGACCTCTTACTCTCTCACAATCAG CCGAATGGAGGCTGAAGATGCTGC CACTTATTACTGCCAGCAAAGGAGA AGTTACCCGTACACGTTCGGAGGG GGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEQ ID NO :94) 104E10 CAGATCCAGTTGGTGCAGTCTGGACCTG AG CTGAAGAAG CCTGGAGAGACAGTCAA GATCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTATACC TTCACAGACTATTCAATGCACTGGGTGA AGCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTAAAGTG GATGGGCTGGATAAACACTGAGACTGGT GAGCCAACATATGCAGATGACTTCAAGG GACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTC TGCCACCACTGCCTATTTGCAGATCAAC AACTTCAAAAATGAGGACACGGCTACAT ATTTCTGTGCTAGAAATGGTTACTACGT GGGATATTATGCTATGGACTACTGGGGT CAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO :90) CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAG CAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGA GAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCC AGTTCAAGTGTAATTTACATGCACT GGTTCCAGCAGAAGCCAGGCACTTC TCCCAAACTCTGGATTTATAGCACA TCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTG CTCGCTTCAGTGGCAGTGGATCTG GGACATCTTACTCTCTCACAATCAG CCGAATGGAGGCTGAAGATGCTGC CACTTATTACTGCCAGCAAAGGAGA AGTTACCCGTACACGTTCGGAGGG GGGACCAAGCTGGAAATAAAA (SEQ ID NO :95) Tableau 8. Séquence nucléotidiques préférées, optimisées pour une expression dans des cellules de l'espèce Rattus norvegicus codant pour les régions VH et VL des anticorps, fragments fonctionnels ou dérivés de ceux-ci selon l'invention. 5 Les séquences nucléiques codant pour les régions constantes de chaine lourde ou légère préférées ont également été optimisées pour une expression dans des cellules de 3034420 31 l'espèce Rattus norvegicus et sont de préférence celles décrites dans le Tableau 9 ci-dessous. GCCTCCACCAAGGGCCCATCCGTGTTCCCCCTGGCCCCATCCAGCAAGTCT ACCTCCGGAGGCACAGCCGCCCTGGGCTGTCTGGTGAAGGACTACTTCCC CGAGCCAGTGACCGTGTCCTGGAACTCCGGAGCCCTGACATCCGGCGTGC ACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGTCCAGCGGCCTGTACTCTCTGTCTTCCG TGGTGACCGTGCCATCCAGCTCCCTGGGAACCCAGACATACATCTGCAACG TGAACCACAAGCCTAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAG AGCTGTGACAAGACACACACATGCCCTCCTTGTCCAGCCCCTGAGCTGCTG GGCGGCCCCTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGATACCCTGATG Région constante de ATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGA chaine lourde GGATCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACA humaine ACGCTAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACATACAGAGTG préférée GTGTCTGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTA CAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAGACCAT CTCTAAGGCTAAGGGGCAGCCCCGGGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCAC CCAGCCGCGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACATGCCTGGTG AAGGGATTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCA GCCCGAGAACAACTACAAGACAACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGATGGATC CTTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGG GAAACGTGTTCTCTTGTTCCGTGATGCACGAGGCTCTGCACAACCACTACA CCCAGAAGTCCCTGAGCCTGTCTCCAGGCAAG (SEQ ID NO :96) CGAACTGTGGCTGCACCAAGTGTCTTCATCTTTCCTCCGAGTGATGAGCAG Région CTGAAGAGCGGGACAGCTTCTGTGGTGTGTCTGCTGAATAACTTCTACCC constante de AAGAGAAGCAAAGGTCCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGTCTGGCA chaine légère ACTCACAGGAGTCTGTCACTGAGCAGGATTCCAAGGACAGCACTTACAGCC humaine TGTCCAGCACCCTCACTCTGTCCAAAGCCGACTACGAAAAGCATAAGGTGT préférée ATGCTTGTGAGGTGACCCACCAGGGACTGAGCAGCCCTGTGACGAAGTCC TTCAACCGGGGCGAGTGC (SEQ ID NO :97) Tableau 9. Séquences nucléotidiques préférées codant pour les régions constantes de chaine lourde ou légère humaine préférées. Ainsi, un acide nucléique codant pour la chaine lourde et/ou la chaine légère d'un anticorps selon l'invention comprend de préférence au moins une des séquences nucléiques décrites dans le Tableau 10 ci-dessous, constituées de la fusion de 5' en 3' : 3034420 32 - De l'une des séquences SEQ ID NO :86 à 90 codant pour la région VH des anticorps préférés selon l'invention et de la séquence SEQ DI NO :96 codant pour la région constante préférée de chaine lourde humaine ; ou - De l'une des séquences SEQ ID NO :91 à 95 codant pour la région VL des 5 anticorps préférés selon l'invention et de la séquence SEQ Dl NO :97 codant pour la région constante préférée de chaine légère humaine. Anticorps Chaine lourde Chaine légère 122A2 Fusion SEQ ID NO : 86-SEQ ID Fusion SEQ ID NO: 91-SEQ ID NO:97 N09684 (SEQ ID NO:103) (SEQ ID NO:98) 102E9 Fusion SEQ ID NO : 87-SEQ ID NO:96 Fusion SEQ ID NO : 92-SEQ ID NO:97 (SEQ ID NO:99) (SEQ ID NO:104) 104C12 Fusion SEQ ID NO : 88-SEQ ID NO:96 Fusion SEQ ID NO : 93-SEQ ID NO:97 (SEQ ID NO:100) (SEQ ID NO:105) 114D11 Fusion SEQ ID NO : 89-SEQ ID NO:96 Fusion SEQ ID NO : 94-SEQ ID NO:97 (SEQ ID NO:101) (SEQ ID NO:106) 104E10 Fusion SEQ ID NO : 90-SEQ ID NO:96 Fusion SEQ ID NO : 95-SEQ ID NO:97 (SEQ ID NO:102) (SEQ ID NO:107) Tableau 10. Séquences d'acides aminés des chaines lourdes et légères des anticorps selon l'invention. 10 Un acide nucléique codant pour la chaine lourde et/ou la chaine légère de l'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention comprend avantageusement une séquence nucléique codant pour le peptide signal hétérologue MB7 (MRWSWIFLLLLSITSANA, SEQ ID NO :65), et notamment la séquence nucléique SEQ ID NO :108 (ATGAG GTG GTCCTG GATCTTCCTG CTG CTG CTGAG CATCACCAG CG CCAAC G CC ) . En 15 effet, ce peptide a été montré comme permettant d'améliorer l'expression et la sécrétion de protéines recombinantes dans des lignées cellulaires eucaryotes supérieures (voir W02011/114063). Ainsi, un acide nucléique codant pour la chaine lourde des anticorps, fragments fonctionnels ou dérivés de ceux-ci selon l'invention comprend avantageusement une séquence nucléique choisie parmi les séquences SEQ ID 20 NO : 109 à 113, constituées de la fusion de 5' en 3' entre la séquence nucléique codant pour le peptide signal MB7 (SEQ ID NO :108) et une des séquences nucléiques codant pour la région VH des anticorps selon l'invention (SEQ ID NO : 86 à 90). De plus ou de manière alternative, un acide nucléique codant pour la chaine légère des anticorps, fragments fonctionnels ou dérivés de ceux-ci selon l'invention comprend 3034420 33 avantageusement une séquence nucléique choisie parmi les séquences SEQ ID NO : 114 à 118, constituées de la fusion de 5' en 3' entre la séquence nucléique codant pour le peptide signal MB7 (SEQ ID NO :108) et une des séquences d'acides aminés de la région VL des anticorps selon l'invention (SEQ ID NO : 91 à 95). En ajoutant les régions 5 constantes de chaine lourde et de chaine légère préférées, on obtient des séquences d'acides aminés complètes préférées des anticorps selon l'invention, tel que décrit dans le Tableau 11 ci-dessous. Anticorps Chaine lourde Chaine légère 122A2 Fusion SEQ ID NO :108-SEQ ID NO : Fusion SEQ ID NO :108-SEQ ID NO : 91- 86-SEQ ID NO:96 SEQ ID NO:97 (SEQ ID NO:119) (SEQ ID NO:124) 102E9 Fusion SEQ ID NO :108-SEQ ID NO : Fusion SEQ ID NO :108-SEQ ID NO : 92- 87-SEQ ID NO:96 SEQ ID NO:97 (SEQ ID NO:120) (SEQ ID NO:125) 104C12 Fusion SEQ ID NO :108-SEQ ID NO : Fusion SEQ ID NO :108-SEQ ID NO : 93- 88-SEQ ID NO:96 SEQ ID NO:97 (SEQ ID NO:121) (SEQ ID NO:126) 114D11 Fusion SEQ ID NO :108-SEQ ID NO : Fusion SEQ ID NO :108-SEQ ID NO : 94- 89-SEQ ID NO:96 SEQ ID NO:97 (SEQ ID NO:122) (SEQ ID NO:127) 104E10 Fusion SEQ ID NO :108-SEQ ID NO : Fusion SEQ ID NO :108-SEQ ID NO : 95- 90-SEQ ID NO:96 SEQ ID NO:97 (SEQ ID NO:123) (SEQ ID NO:128) Tableau 11. Séquences nucléiques codant pour les chaines lourdes et légères des 10 anticorps selon l'invention, avec le peptide signal MB7. La présente invention concerne également un vecteur comprenant un acide nucléique selon l'invention. Un tel vecteur comprend les éléments nécessaires à l'expression de ladite séquence nucléique, et notamment un promoteur, un codon d'initiation de la 15 transcription, des séquences de terminaison, et des séquences de régulation de la transcription appropriées. Ces éléments varient en fonction de l'hôte servant pour l'expression et sont choisis aisément par l'homme du métier au vu de ses connaissances générales. Le vecteur peut notamment être plasrnidique ou viral. Il est utilisé pour cloner ou exprimer les acides nucléiques selon l'invention. 20 3034420 34 La présente invention concerne également une cellule hôte, un animal non-humain transgénique ou une plante transgénique comprenant au moins un acide nucléique selon l'invention ou un vecteur selon l'invention. La cellule hôte peut être d'origine procaryote ou eucaryote, et peut notamment être 5 choisie parmi les cellules bactériennes, les cellules d'insecte, de plantes, de levure ou de mammifères. L'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé selon l'invention peut alors être produit en cultivant la cellule hôte dans des conditions appropriées. Une cellule hôte selon l'invention peut notamment être obtenue par transformation d'une lignée cellulaire par le(s) vecteur(s) d'expression des chaines lourde et légère d'un anticorps, 10 fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention, et séparation des différents clones cellulaires obtenus. La lignée cellulaire transformée est de préférence d'origine eucaryote, et peut notamment être choisie parmi les cellules d'insecte, de plantes, de levure ou de mammifères. Des lignées cellulaires appropriées pour la production d'anticorps incluent notamment les lignées choisies parmi : SP2/0 ; YB2/0 ; IR983F ; le 15 myélome humain Nannalwa ; PERC6 ; les lignées CHO, notamment CHO-K-1, CHO-Lec10, CHO-Lec1, CHO-Lec13, CHO Pro-5, CHO dhfr-, ou lignée CHO délétée pour les deux allèles codant pour le gène FUT8 et/ou le gène GMD ; Wil-2; Jurkat; Vero; Molt -4; COS-7; 293-HEK; BHK; K6H6; NSO; SP2/0-Ag 14, P3X63Ag8.653, lignée de cellule de canard embryonnaire EB660 (Valneva) ; les lignées d'hépatonne de rat H4-II-E (DSM ACC3129), 20 et H4-II-Es (DSM ACC3130) (voir W02012/041768), NM-H9D8 (DSM ACC2806), NM-H9D8-E6 (DSM ACC 2807), et NM H9D8-E6Q12 (DSM ACC 2856) (voir W02008/028686). Un animal non-humain transgénique selon l'invention peut être obtenu par injection directe du ou des gène(s) d'intérêt (ici, les gènes réarrangés codant pour les chaines lourde et légère de l'anticorps) dans un oeuf fertilisé (Gordon et al-1980). Un animal 25 non-humain transgénique peut également être obtenu par introduction du ou des gène(s) d'intérêt (ici, les gènes réarrangés codant pour les chaines lourde et légère de l'anticorps) dans une cellule souche embryonnaire et préparation de l'animal par une méthode d'agrégation de chimère ou une méthode d'injection de chimère (voir Manipulating the Mouse Ennbryo, A Laboratory Manual, Second edition, Cold Spring 30 Harbor Laboratory Press (1994); Gene Targeting, A Practical Approach, IRL Press at Oxford University Press (1993)). Un animal non-humain transgénique peut également être obtenu par une technique de clonage dans laquelle un noyau, dans lequel le ou les gène(s) d'intérêt (ici, les gènes réarrangés codant pour les chaines lourde et légère de l'anticorps) a été introduit, est transplanté dans un oeuf énucléé (Ryan et al-1997; 35 Cibelli et al-1998, W000/26357). Un animal non humain transgénique produisant un anticorps d'intérêt peut être préparé par les méthodes ci-dessus. L'anticorps peut alors 3034420 35 être accumulé dans l'animal transgénique et récolté, notamment à partir du lait ou des oeufs de l'animal. Pour la production d'anticorps dans le lait d'animaux non humains transgéniques, des procédés de préparation sont notamment décrits dans W090/04036, W095/17085, W001/26455, W02004/050847, W02005/033281, W02007/048077. Des 5 procédés de purification de protéines d'intérêt à partir du lait sont également connus (voir W001/26455, W02007/106078). The animaux non humains transgéniques d'intérêt incluent notamment la souris, le lapin, le rat, la chèvre, les bovins (notamment la vache), et les volailles (notamment le poulet). Une plante transgénique selon l'invention peut être choisie parmi toute plante 10 permettant la production d'anticorps. De nombreux anticorps ont déjà été produits dans des plantes transgéniques et les technologies nécessaires à l'obtention d'une plante transgénique exprimant un anticorps d'intérêt et à la récupération de l'anticorps sont bien connues de l'homme du métier (voir Stoger et al-2002, Fisher et al-2003, Ma et al-2003, Schillberg et al-2005). Il est également possible d'influencer la glycosylation 15 obtenue dans les plantes pour obtenir une glycosylation proche de celle des anticorps humains naturels (sans xylose), mais avec en outre une faible fucosylation, par exemple à l'aide de petits ARNs interférents (Forthal et al-2010). Utilisations thérapeutiques des anticorps La présente invention concerne également un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé 20 de celui-ci selon l'invention, pour son utilisation en tant que médicament. Dans un premier mode de réalisation, l'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention est avantageusement utilisé dans le traitement ou la prévention des tumeurs hématopoïétiques exprimant l'antigène CD303. Il s'agit notamment des néoplasmes de cellules dendritiques plasnnacytoïdes blastiques (BPDCN), 25 de phénotype CD4+, CD11c-, Lin-, CD303+, CD304+, CD56+. Dans un deuxième mode de réalisation, l'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention est avantageusement utilisé dans le traitement ou la prévention des maladies inflammatoires, notamment des maladies autoinnnnunes. L'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention est 30 avantageusement utilisé dans le traitement ou la prévention des maladies impliquant les pDC, et plus particulièrement des maladies impliquant une sécrétion d'IFN-a par les pDC. En particulier, l'anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention est avantageusement utilisé dans le traitement ou la prévention des maladies suivantes, pour lesquelles un rôle des pDC a été établi (voir Wollenberg et al- 35 2002 et Cao-2014) : la dermatite atopique, la dermatite de contact, le psoriasis, le lupus érythémateux disséminé, la dernnatonnyosite, le syndrome de Sjôgren, le diabète 3034420 36 de type 1 b, la thronnbocytopénie (ou thrombopénie) autoinnnnune (notamment le purpura thronnbopénique idiopathique ou PTI), la sclérodermie systémique (encore appelée sclérodermie systémique progressive ou sclérose systémique), la polyarthrite rhumatoïde. 5 La présente invention concerne également : - l'utilisation d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention pour la préparation d'un médicament destiné au traitement ou à la prévention des tumeurs hématopoïétiques exprimant l'antigène CD303, et notamment des néoplasmes de cellules dendritiques plasnnacytoïdes blastiques 10 (BPDCN), de phénotype CD4+, CD11c-, Lin-, CD303+, CD304+, CD56+. - l'utilisation d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention pour la préparation d'un médicament destiné au traitement ou à la prévention des maladies inflammatoires, notamment des maladies autoinnnnunes, et en particulier des maladies mentionnées ci-dessus. 15 La présente invention concerne également : - l'utilisation d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention dans le traitement ou la prévention des tumeurs hématopoïétiques exprimant l'antigène CD303, et notamment des néoplasmes de cellules 20 dendritiques plasnnacytoïdes blastiques (BPDCN), de phénotype CD4+, CD11c-, Lin-, CD303+, CD304+, CD56+. - l'utilisation d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention dans le traitement ou la prévention des maladies inflammatoires, notamment des maladies autoinnnnunes, et en particulier des maladies 25 mentionnées ci-dessus. La présente invention concerne également : - une méthode de traitement ou de prévention chez un patient d'une tumeur hématopoïétique exprimant l'antigène CD303, et notamment d'un néoplasme de 30 cellules dendritiques plasnnacytoïdes blastiques (BPDCN), de phénotype CD4+, CD11c-, Lin-, CD303+, CD304+, CD56+, comprenant l'administration audit patient d'une quantité efficace d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention. - une méthode de traitement ou de prévention chez un patient d'une maladie 35 inflammatoire, notamment d'une maladie autoinnnnune, et en particulier d'une des maladies mentionnées ci-dessus, comprenant l'administration audit patient 3034420 37 d'une quantité efficace d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'invention. Par - traitement », on entend une amélioration constatée au niveau clinique ou 5 biochimique de la pathologie du patient. Par - prévention », on entend le fait d'empêcher ou de retarder la survenue ou de diminuer l'intensité des manifestations cliniques ou biochimiques associées à la maladie. L'homme du métier sait, sur la base de ses connaissances générales, déterminer quelles 10 sont les manifestations cliniques ou biochimiques associées à une maladie donnée et qui sont susceptibles d'être améliorées (traitement) ou bien empêchées, retardées ou diminuées en intensité (prévention). Dans le cadre des tumeurs hématopoïétiques exprimant l'antigène CD303, et notamment des néoplasmes de cellules dendritiques plasrnacytoïdes blastiques (BPDCN), un paramètre biologique d'intérêt peut être le 15 nombre de blastes. Dans le cadre des maladies inflammatoires, un paramètre biologique d'intérêt peut être le nombre de pDC ou la quantité présente localement ou de façon systémique de molécules contribuant à l'inflammation (cytokines inflammatoires et notamment l' INFO. Lignée cellulaire exprimant de façon stable le CD303 humain et la chaine gamma du 20 récepteur FcERI humain Dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont également généré un nouveau modèle cellulaire exprimant CD303 et permettant de caractériser facilement in vitro et in vivo les anticorps anti-CD303. La présente invention concerne également une lignée cellulaire transfectée de façon stable par un vecteur d'expression comprenant une 25 première molécule d'acide nucléique codant pour l'antigène CD303 humain et une deuxième molécule d'acide nucléique codant pour la chaine gamma du récepteur FcERI humain, ou par deux vecteurs d'expressions comprenant chacun une molécule d'acide nucléique codant respectivement pour l'antigène CD303 humain et pour la chaine gamma du récepteur FcERI humain. 30 La lignée cellulaire transfectée de façon stable par un ou plusieurs vecteurs permettant l'expression de l'antigène CD303 humain et de la chaine gamma du récepteur FcERI humain peut être toute lignée cellulaire appropriée, en particulier une lignée de cellules de mammifères, en particulier une lignée humaine. La lignée choisie est de préférence facile à cultiver. La lignée cellulaire peut notamment être une lignée Jurkat 35 (Clone E6-1 : ATCCO TIB 152TM, ECACC 88042803 ; Neo Jurkat : ATCCO CRL-2898TM 3034420 38 exprimant un gène de résistance à la néomycine). On peut également utiliser une lignée humaine de pDC, par exemple les cellules CAL-1 : Maeda T et al., Int J Hernatol. 2005 Feb ; 81(2) :148-54. La lignée selon l'invention (en particulier une lignée Jurkat ou une lignée humaine de 5 pDC) est transfectée de façon stable : - Soit par un vecteur d'expression comprenant une première molécule d'acide nucléique codant pour l'antigène CD303 humain et une deuxième molécule d'acide nucléique codant pour la chaine gamma du récepteur FcERI humain. - Soit par deux vecteurs d'expressions comprenant chacun une molécule d'acide 10 nucléique codant respectivement pour l'antigène CD303 humain et pour la chaine gamma du récepteur FcERI humain. En effet, les inventeurs ont d'abord cherché à transfecter des lignées cellulaires uniquement avec un vecteur d'expression comprenant une molécule d'acide nucléique 15 codant pour l'antigène CD303 humain. Cependant, si les cellules transfectées exprimaient initialement l'antigène CD303 humain à leur surface, cette expression n'était pas stable dans le temps. Les inventeurs ont ensuite constaté que la cotransfection de la lignée cellulaire par un autre vecteur d'expression comprenant une molécule d'acide nucléique codant pour la chaine gamma du récepteur FcERI humain 20 permettait d'obtenir une lignée cellulaire exprimant de façon stable l'antigène CD303 humain à sa surface. La séquence codant pour l'antigène CD303 humain est connue de l'homme du métier. Notamment, la séquence de l'ARNrn codant pour cette protéine peut être trouvée sur la 25 base de données Genbank dans sa version du 14 février 2002 sous le n° d'accession AF293615.1 (SEQ ID NO :129), tandis que la séquence d'acides aminés est accessible sur la base de données Genbank dans sa version du 14 février 2002 sous le n° d'accession AAL37036.1 (SEQ ID NO :130). Sur cette base, l'homme du métier sait concevoir des séquences nucléiques codant pour l'antigène CD303 humain susceptibles d'être insérées 30 dans un vecteur d'expression approprié pour la transfection d'une lignée cellulaire. De même, la séquence codant pour la chaine gamma du récepteur FcERI humain est connue de l'homme du métier. Notamment, la séquence de l'ARNrn codant pour cette protéine peut être trouvée sur la base de données Genbank dans sa version du 3 mai 2014 sous le n° d'accession NM_004106.1 (SEQ ID NO :131), tandis que la séquence 35 d'acides aminés est accessible sur la base de données Genbank dans sa version du 3 mai 2014 sous le n° d'accession NP_004097.1 (SEQ ID NO :132). Sur cette base, l'homme du 3034420 39 métier sait concevoir des séquences nucléiques codant pour la chaine gamma du récepteur FcERI. humain susceptibles d'être insérées dans un vecteur d'expression approprié pour la transfection d'une lignée cellulaire. 5 Tout vecteur d'expression approprié pour une expression dans la lignée cellulaire choisie peut être utilisé, et notamment -dans le cas d'une lignée de cellules de mammifères ou d'une lignée humaine comme la ligné Jurkat ou une lignée humaine de pDC - tout vecteur d'expression permettant une expression dans les cellules de mammifères. Des exemples de tels vecteurs incluent le vecteur pcDNA4/TO (Invitrogen) 10 utilisé pour exprimer la chaine gamma du récepteur FcERI humain dans une lignée Jurkat E6-1 (ATCCO TIB 152TM, ECACC 88042803) , ou le vecteur pcDNA3.1 (-) utilisé dans l'Exemple 3 pour exprimer l'antigène CD303 humain. Le ou les vecteurs d'expression peuvent ensuite être transfectés dans la lignée 15 cellulaire d'intérêt (notamment une lignée de cellules de mammifères ou d'une lignée humaine comme la lignée Jurkat ou une lignée humaine de pDC) par toute technologie appropriée connue de l'homme du métier, et notamment par nucléofection tel que décrit dans l'Exemple 3, ou par toute autre technologie appropriée, par exemple en utilisant des liposomes, des polymères cationiques, des lipides cationiques, ou par 20 biolistique. Après transfection d'un ensemble de cellules, les cellules exprimant effectivement l'antigène CD303 peuvent être triées par cytonnétrie en flux. Avantageusement, le vecteur d'expression comprenant une molécule d'acide nucléique codant pour 25 l'antigène CD303 humain comprend également une molécule d'acide nucléique codant pour un marqueur de sélection (par exemple, un gène de résistance à un antibiotique), permettant ainsi de garantir le maintien de l'expression de l'antigène CD303 humain par la lignée cellulaire au cours du temps par culture dans un milieu sélectionnant les cellules exprimant le marqueur de sélection (milieu avec antibiotique dans le cas d'un 30 gène de résistance aux antibiotiques). Après une ou plusieurs périodes de sélection dans un milieu sélectionnant les cellules exprimant le marqueur de sélection et un ou plusieurs tris cellulaires, des clones exprimant l'antigène CD303 humain et la chaine gamma du récepteur FcERI humain peuvent être obtenus par clonage par dilution limite. Dans ce qui précède, la sélection est fondée uniquement sur l'expression de l'antigène 35 CD303 humain. Cela est lié au fait que la chaine gamma du récepteur FcERI humain semble nécessaire pour le maintien de l'expression de l'antigène CD303 humain à la 3034420 surface des cellules. Cependant, une sélection sur la base d'un autre marqueur de sélection présent dans la molécule d'acide nucléique codant pour la chaine gamma du récepteur FeERI humain peut être ajoutée pour garantir la co-expression des deux protéines dans la lignée cellulaire transfectée. 5 De façon avantageuse, les transfectants sélectionnés ont une expression de CD303 représentative du CD303 exprimé sur les pDC normales et/ou de patients atteints de maladies auto-immunes ou de leucémie des cellules pDC (BPDCN). Il est possible d'utiliser une lignée cellulaire déjà transfectée de façon stable par un 10 vecteur d'expression (peDNA4/TO par exemple) de la chaine gamma du récepteur FeERI humain appelée lignée Fe chaine y », et de la transfecter par un autre vecteur d'expression comprenant une molécule d'acide nucléique codant pour l'antigène CD303 humain. Ceci s'applique de toute évidence à la lignée Jurkat dont la forme transfectée chaine FeERI est appelé Jurkat Fe chaine y ». 15 Les exemples qui suivent visent à illustrer la présente invention. EXEMPLES Exemple 1 : Obtention et structure de 5 anticorps chimériques 5 anticorps monoclonaux chimériques, avec des régions variables nnurines et des régions 20 constantes humaines de type IgG1 ont été générés et leurs structures caractérisées. Matériels et méthodes Séquençage des chaines lourdes et légères à partir d'hybridomes nnurins Les ARN totaux de chaque hybridome ont été extraits à l'aide du kit Macherey nagel ; Nucleospin RNAII (purification sur colonne). 25 Les ARNnn ont été convertis en ADNe et les chaines lourdes et légères de l'anticorps ont été amplifiées à l'aide du kit Generacer (invitrogen) et clonées dans un vecteur M13. Des bactéries ont ensuite été transformées par le vecteur M13 et des clones positifs pour les séquences M13 ont été séquences. 3034420 41 Détermination des segments VH, DH, JH des chaines lourdes et des segments VL et JL des chaines légères La partie variable, les segments V et J utilisés par les chaines lourdes et légères et les séquences des CDR des chaines lourdes et légères ont été déterminés en utilisant l'outil 5 Domaine Gapalign d'IMGT (voir Ehrennnann et al-2010 et Ehrennnann et al-2011) disponible à l'adresse suivante : http://www.inngt.org/3Dstructure- DB/cgi/DonnainGapAlign.cgi. Construction de vecteurs d'expression pour les anticorps chimériques Les séquences des régions variables VH et VL des 5 anticorps nnurins ont été optimisées 10 pour un usage préférentiel des codons de l'espèce Rattus norvegicus. Une séquence codant pour le peptide signal hétérologue MB7 a en outre été introduite en 5' de la séquence codant pour la région variable VH ou VL de chaque anticorps. Les séquences des parties constantes humaines ont été extraites du vecteur CHK622-21 d'expression d'un anticorps humain anti-Rhésus D (T125) par digestion Apal/Ascl pour la 15 chaine H (IgG1 nn1.17) et DraIII/Xbal pour la chaine Kappa. Enfin, les parties variable et constante d'une même chaine ont été introduites en simultané dans le vecteur générique HKgenEFss par ligation avec la KAPA T4 ligase. Résultats Les données concernant les segments VH, DH, JH des chaines lourdes et des segments 20 VL et JL des chaines légères des 5 anticorps sont présentées au Tableau 2 présenté ci- dessus. On note que : - Les 2 anticorps de la famille 1 (122A2 et 104C12) partagent l'utilisation du même segment VH (IGHV1S137*01), ainsi que l'utilisation de segments VL (IGKV10- 96*01/IGKV10-96*02) et JL (IGKJ1*01/IGKJ1*02) de la même famille, comme 25 illustré dans le Tableau 12 ci-dessous. Ces deux anticorps ont donc une structure proche. - Les 3 anticorps de la famille 2 (102E9, 114D11 et 104E10) partagent l'utilisation des mêmes segments VH, JH, VL et JL, comme illustré dans le Tableau 12 ci-dessous. Ces trois anticorps ont donc une structure proche. 30 3034420 42 Famille 1 Anticorps VH JH VL JL 122A2 IGHV1S137*01 IGHJ2*02 IGKV10-96*01 IGKJ1*01 104C12 IGHV1S137*01 IGHJ3*01 IGKV10-96*02 IGKJ1*02 Famille 2 Anticorps VH JH VL JL 102E9 IGHV9-2-1*01 IGHJ4*01 IGKV4-57*01 IGKJ1*02 114D11 IGHV9-2-1*01 IGHJ4*01 IGKV4-57*01 IGKJ1*02 104E10 IGHV9-2-1*01 IGHJ4*01 IGKV4-57*01 IGKJ1*02 Tableau 12. Segments VH, JH, VL et JL utilisés par les différents anticorps. Les segments identiques au sein d'une même famille sont en gras. Par ailleurs, les données concernant les séquences d'acides aminés des CDRs et des 5 régions variables des 5 anticorps sont présentées au Tableau 3 présenté ci-dessus. On note que : - Les 2 anticorps de la famille 1 (122A2 et 104C12) possèdent les mêmes séquences de CDR1-H et de CDR2-L, et ont par ailleurs des séquences de CDR2-H, CDR1-L et CDR3-L extrêmement proches (1 seul ou 2 acides aminés de 10 différence). Même les séquences de CDR3-H présentent une forte homologie (5/11 acides aminés communs), comme illustré dans le Tableau 13 ci-dessous. Cela confirme que ces deux anticorps ont une structure très proche. - Les 3 anticorps de la famille 2 (102E9, 114D11 et 104E10) possèdent les mêmes séquences de CDR2-L, et ont par ailleurs des séquences de CDR1-H, CDR2-H, 15 CDR1-L et CDR3-L extrêmement proches (1 seul acide aminé de différence). Même les séquences de CDR3-H présentent une forte homologie (12/14 acides aminés communs), comme illustré dans le Tableau 13 ci-dessous. Cela confirme que ces trois anticorps ont une structure vraiment très proche. Famille 1 Anticorps CDR1 -H CDR2-H CDR3-H CDR1-L CDR2-L CDR3-L 122A2 GYTFTDYS ISTYYGDS ARNGNFYVMDY QDISNY YTS QQGNTLPWT 104C12 GYTFTDYS ISPYYGDT ARNDDYYRFAY QDINNY YTS QQGKTLPWT 3034420 43 Famille 2 Anticorps CDR1-H CDR2-H CDR3-H CDR1-L CDR2-L CDR3-L 102E9 GYTFTDYS INTETGEP TRNGYYVGYYAMDY SSVIY STS QQRRSYPFT 114D11 GYTFTDSS I NTETGGP ARNGYYVGYYALDY SSVFY STS QQRRSYPYT 104E10 GYTFTDYS I NTETGEP ARNGYYVGYYAMDY SSVIY STS QQRRSYPYT Tableau 13. Homologie de séquence entre les CDRs des anticorps d'une même famille. Les acides aminés identiques au sein d'une même famille sont en gras. Les données concernant les séquences d'acides aminés des régions constantes des 5 5 anticorps sont présentées au Tableau 5 présenté ci-dessus. De plus, les séquences d'acides nucléiques des régions variables VH et VL et des régions constantes de chaque anticorps sont présentées aux Tableaux 8 et 9 présentés ci-dessus. Enfin, les cartes des vecteurs d'expression des 5 anticorps sont présentées sur les 10 Figures 1A à 1E. Conclusions 5 anticorps monoclonaux chimériques, avec des régions variables nnurines et des régions constantes humaines de type IgG1, et dirigés contre l'antigène CD303 ont été générés et leurs structures caractérisées. Il s'avère que deux anticorps (122A2 et 104C12) ont des 15 structures proches et forment une sous-famille d'anticorps (famille 1), et que les trois autres anticorps (102E9, 114D11 et 104E10) sont également très proches sur le plan structural et forment une autre sous-famille d'anticorps (famille 2). Ces anticorps ont ensuite été caractérisés au niveau de leurs propriétés biologiques (voir Exemple 2). 20 Exemple 2: Propriétés biologiques des 5 anticorps Les 5 anticorps monoclonaux chimériques, avec des régions variables nnurines et des régions constantes humaines de type IgG1, et dirigés contre l'antigène CD303 générés à l'Exemple 1 ont été testés pour différentes propriétés biologiques. 3034420 44 Matériels et méthodes Liaison à l'antigène Liaison aux cellules CD303+ (Jurkat chaine Fc Gamma-CD303 et CAL-1) Des cellules Jurkat chaine Fe Gamma-CD303 (ou des cellules CAL-1 : Maeda T et al., Int 5 J Hennatol. 2005 Feb ; 81(2) :148-54) et les anticorps sont préparés dans du diluant (PBS + 1% SVF). 1 x 105 cellules sont incubées à 4°C pendant 30 minutes avec 100 pL d'anticorps (antiCD303 ou contrôle négatif) à différentes concentrations (0-40 pg/nnL, concentration finale). 10 Après lavage avec le diluant, les anticorps sont visualisés par ajout d'un fragment F(ab')2 d'IgG de chèvre anti-souris couplé à la phycoérythrine (PE) (100 pL à une dilution de 1:100 dans le diluant) pendant 45 minutes à 4°C. Les cellules sont ensuite lavées et analysées par cytonnétrie en flux (FC500, Becknnan Coulter). Liaison au récepteur FeERIlla (CD16a) 15 Les cellules NK ont été isolées des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC), puis incubées avec des concentrations variables des anticorps testés (0 à 100 pg/nnl) simultanément incubées avec l'anticorps nnurin couplé à la phycoérythrine (3G8-PE, Becknnan Coulter) à 10pl/test. Après lavage, la fixation de 3G8-PE au CD16 exprimé par les cellules NK a été évaluée 20 par cytonnétrie de flux. Les valeurs de fluorescence moyenne (MFI) sont exprimées en pourcentage, 100 % étant la valeur obtenue avec l'anticorps 3G8-PE seul, et 0% la valeur obtenue en l'absence de 3G8-PE. Les valeurs IC50 (concentration d'anticorps anti-CD303 requise pour induire une inhibition de fixation de 3G8 de 50%) sont calculées à l'aide du logiciel PRISM. 25 ADCC Des cellules Jurkat chaine Fe Gamma-CD303 (35000 cellules/puits) sont incubées dans une plaque 96 puits à fond plat avec des cellules NK et des concentrations croissantes d'anticorps anti-CD303 pendant 4 heures à 37°C. Après incubation, le surnageant est collecté. La lyse des cellules cibles induite par les anticorps anti-CD303 est mesurée de 30 façon chronnogénique en quantifiant l'enzyme intracellulaires lactate déshydrogénase (LDH) relarguée dans le surnageant par les cellules cibles lysées (Roche Diagnostics - Cytotoxicity Detection Kit LDH). 3034420 Le pourcentage de lyse est calculé selon la formule suivante : % lyse = [(ER - SR) / (100 - SR)] - [(NC - SR) / (100 - SR)] Où ER et SR représentent respectivement les relargages expérimental (ER) et spontané 5 (SR) de LDH, et NC représente la cytotoxicité naturelle des cellules NK. Les résultats (% lyse) sont exprimés en fonction du facteur de dilution de l'anticorps. Pour chaque anticorps, la valeur d'- activité 50% » correspond au facteur de dilution de l'anticorps nécessaire pour induire 50% de la valeur plateau obtenue pour cet anticorps. Cette valeur a été calculée avec le logiciel PRISM. 10 Inhibition de la sécrétion d'IFN-a Préparation des cellules Des cellules nnononuclées du sang périphérique (PBMC) sont isolées à partir du sang périphérique de donneurs sains par gradient de densité sur ficoll. Les pDC sont purifiées par déplétion négative (Miltenyi Biotec - Plasnnacytoid Dendritic Cell isolation kit, 15 hunnan). Les cellules sont comptées et resuspendues à 2 x 105 cellules/ml dans un diluant (RPMI 1640 + 10% sérum de veau fcetal(SVF)). Sécrétion d'IFN-cc par les pDC purifiées 205 pL/puit de cette suspension sont ensuite transférés dans une plaque de culture 24 puits à fond plat. 20 50 pL de CPG ODN à 10 pM, 50 pL d'IL-3 à 100 ng/nnL, 50 pL d'anticorps à 100 pg/nnL et 100 pL de diluant sont ajoutés. La plaque est ensuite incubée sur la nuit à 37°C, 7% CO2. Dosage du taux d'IFN-a Les surnageants de culture de chaque puit sont collectés et dosés par cytonnétrie en flux en utilisant le kit Hunnan IFN-a Flowcytonnix (Bender Medsystenns BMS216FF + Basic kit 25 BMS842OFF). Le pourcentage d'inhibition de chaque échantillon est évalué par rapport au contrôle négatif (pDC CPG-activées sans anticorps monoclonal anti-CD303). Les échantillons conduisant à moins de 20% d'inhibition sont considérés non-inhibiteurs, ceux conduisant à une inhibition entre 20 et 75% sont considérés faiblement inhibiteurs, 30 ceux conduisant à une inhibition supérieure à 75% sont considérés fortement inhibiteurs. 3034420 46 Inhibition de la sécrétion de TNF-a Préparation des cellules Des cellules nnononuclées du sang périphérique (PBMC) sont isolées à partir du sang périphérique de donneurs sains par gradient de densité sur ficoll. Les pDC sont purifiées 5 par déplétion négative (Miltenyi Biotec - Plasnnacytoid Dendritic Cell isolation kit, hunnan). Les cellules sont comptées et resuspendues à 2 x 105 cellules/ml dans un diluant (RPMI 1640 + 10% sérum de veau fcetal(SVF)). Sécrétion de TNF-a par les pDC purifiées 205 pL/puit de cette suspension sont ensuite transférés dans une plaque de culture 24 10 puits à fond plat. pL de CPG ODN à 10 pM, 50 pL d'IL-3 à 100 ng/nnL, 50 pL d'anticorps à 100 pg/nnL et 100 pL de diluant sont ajoutés. La plaque est ensuite incubée sur la nuit à 37°C, 7% CO2. Dosage du taux du TNF-a Les surnageants de culture de chaque puit sont collectés et dosés par cytonnétrie en flux 15 en utilisant le kit Hunnan IFN-a Flowcytonnix (Bender Medsystenns BMS216FF + Basic kit BMS842OFF). Le pourcentage d'inhibition de chaque échantillon est évalué par rapport au contrôle négatif (pDC CPG-activées sans anticorps monoclonal anti-CD303). Les échantillons conduisant à moins de 20% d'inhibition sont considérés non-inhibiteurs, 20 ceux conduisant à une inhibition entre 20 et 75% sont considérés faiblement inhibiteurs, ceux conduisant à une inhibition supérieure à 75% sont considérés fortement inhibiteurs. Mesure de l'activité comblement (CDC) Des cellules Jurkat chaine Fc Gamma-CD303 sont incubées avec des concentrations croissantes d'anticorps anti-CD303 (0 to 5000 ng/nnl) et en présence de sérum de jeunes 25 lapins comme source de (dilution au 1/10). Après 2h d'incubation à 37°C, la quantité d'enzyme intracellulaires lactate déshydrogénase (LDH) relarguée dans le surnageant par les cellules cibles lysées est mesurée avec le kit - Cytotoxicity Detection LDH » (Roche Diagnostics réf 11644793001). 3034420 47 Résultats Liaison à l'antigène Liaison aux cellules Jurkat chaine Fc Gamma-CD303 Les résultats des tests de liaison des anticorps selon l'invention à leur antigène CD303 5 sur les cellules Jurkat chaine Fe Gamma-CD303 sont présentés à la Figure 2A et dans le Tableau 14 ci-dessous. 104C12 122A2 114D11 102C9 104E10 Bnnax (MFI) 27,74 26,21 24,69 24,95 23,73 EC50 0,1781 0,1284 3,980 3,870 6,064 (ug/nnL) Tableau 14. Liaison des anticorps selon l'invention à leur antigène CD303 sur les cellules Jurkat chaine Fe Gamma-CD303. Bnnax : Liaison maximale exprimée en intensité moyenne de fluorescence (MFI). EC50 (ug/nnL) : concentration d'anticorps en ug/nnL 10 permettant d'obtenir 50% de la liaison maximale obtenue pour cet anticorps. Ces résultats de Kd relatifs et les valeurs de Bnnax calculés après modélisation de la courbe dose réponse, permettent de classer les anticorps en 2 groupes :Un premier groupe qui contient les anticorps 104C12 (Bnnax : MFI= 27.7; Kd=0.17 ug/nnl) and 122A2 15 (Bnnax : MFI= 26.2 Kd=0.13 ug/nnl) qui sont comparables et présentent une meilleure affinité relative que les anticorps du deuxième groupe : 114D11(Bnnax : MFI= 24.7; Kd=3.9 ug/nnl), 104E10 (Bnnax : MFI= 23.7; Kd= 6 ug/nnl) et 102E9 (Bnnax : MFI= 24.9; Kd=3.8 ug/nnl). 20 Ces résultats montrent que l'ensemble des anticorps chimériques générés lient efficacement l'antigène CD303 exprimé à la surface des cellules Jurkat, pour lequel ils sont spécifiques. Liaison aux cellules CAL-1 Les résultats des tests de liaison des anticorps selon l'invention à leur antigène CD303 25 sur les cellules CAL-1 sont présentés à la Figure 2B et dans le Tableau 15 ci-dessous. 104C12 122A2 114D11 102C9 104E10 Bnnax (MFI) 29.02 25.22 30.14 30.47 29.2 EC50 0.3447 0.2075 1.704 1.813 1.932 (ug/nnL) 3034420 48 Tableau 15. Liaison des anticorps selon l'invention à leur antigène CD303 sur les cellules CAL-1. Bnnax : Liaison maximale exprimée en intensité moyenne de fluorescence (MFI). EC50 (pg/nnL) : concentration d'anticorps en pg/nnL permettant d'obtenir 50% de la liaison maximale obtenue pour cet anticorps. 5 Ces résultats de Kd relatifs et les valeurs de Bnnax calculés après modélisation de la courbe dose réponse, permettent de classer les anticorps en 2 groupes :Un premier groupe qui contient les anticorps 104C12 (Bnnax : MFI= 29.02 Kd=0.34 pg/nnl) and 122A2 (Bnnax : MFI= 25.2 Kd=0.20 pg/nnl) qui sont comparables et présentent une meilleure 10 affinité relative que les anticorps du deuxième groupe : 114D11(Bnnax : MFI=30.1 ; Kd=1.7 pg/nnl), 104E10 (Bnnax : MFI=29.2 ; Kd= 1.93 pg/nnl) et 102E9 (Bnnax : MFI=30.47 ; Kd=1.81 pg/nnl). Ces résultats corrèlent notamment avec les résultats de liaison aux cellules Jurkat- 15 CD303. Liaison au récepteur FcyRIlla (CD16a) Les résultats des tests de liaison au récepteur FcyRIlla (CD16a) sont présentés sur la Figure 3, et montrent que les anticorps chimériques selon l'invention sont tous capables de lier efficacement le CD16a, avec une affinité de liaison optimisée. Ils 20 possèdent une valeur d'IC50 inférieure à celle de l'anticorps produit dans les cellules CHO (Rituxan) dans une gamme de 18,08 à 45,02 pg/nnl, voire inférieure à 18 pg/nnl, comme illustré dans le Tableau 16 ci-dessous. RITUXAN 104C12 122A2 114D11 102E9 104E10 1050 (pg/nnl) > 80 26,75 40,44 45,02 36,99 18,08 Tableau 16. Valeurs d'IC50 (concentration d'anticorps anti-CD303 requise pour induire 25 une inhibition de fixation de 3G8 de 50%) du contrôle Rituxan et des anticorps chimériques de l'invention ADCC Les résultats des tests ADCC sont présentés sur la Figure 4 et dans le Tableau 17 ci-dessous. 30 3034420 49 104C12 122A2 114D11 102C9 104E10 Ennax (% 41,81 42,35 37,44 38,92 40,54 lyse) EC50 0,2143 0,1592 3,612 3,424 8,280 (ng/nnL) Tableau 17. ADCC induite par les anticorps selon l'invention sur des cellules cibles Jurkat chaine Fe Gamma-CD303. Ennax : lyse maximale obtenue avec cet anticorps, exprimée en pourcentage de lyse. EC50 (ng/nnL) : concentration d'anticorps en ng/nnL permettant d'obtenir 50% de la lyse maximale obtenue pour cet anticorps. 5 Ces résultats montrent que les cinq anticorps chimériques anti-CD303 induisent la lyse de la cellule Jurkat-CD303 (Ennax environ 40%). Les valeurs d'EC50 pour 104C12 (EC50 : 0.21 ng/nnl), 122A2 (EC50 : 0.16 ng/nnl), 114D11 (EC50 : 3.6 ng/nnl), 102C9 (EC50 : 3.4 ng/nnl) et 104E10 (EC50 : 8.3 ng/nnl) suggèrent que les anticorps ayant une forte affinité 10 sont plus efficace en ADCC que les anticorps de plus faible affinité. Inhibition de la sécrétion d' IFN-a Les résultats des tests d'inhibition de la sécrétion d'IFN-a par des pDC activées sont présentés sur la Figure 5. Ces résultats montrent que les cinq anticorps chimériques anti-CD303 induisent 15 l'inhibition de IFN-a sécrétée par les pDC activées par CpG et ceci aux deux concentrations testées (10 et 0.1 pg/nnl). A la concentration de 0.1 pg/nnl, les dosages d' IFN-a montrent un avantage pour les anticorps 104C12 et 122A2 comparé aux 3 autres anticorps (114D11, 102E9, 104E10). Inhibition de la sécrétion de TNF-a 20 Les résultats des tests d'inhibition de la sécrétion de TNF-a par des pDC activéesont présentés sur la Figure 6. Ces résultats montrent que les cinq anticorps chimériques anti-CD303 à 10 pg/nnl induisent l'inhibition du TFN-a sécrétée par les pDC activées par CpG. Activité complément (CDC) 25 Les résultats des tests de CDC sont présentés sur la Figure 7, et montrent que les 5 anticorps chimériques possèdent bien une activité CDC. 3034420 50 Exemple 3. Préparation et caractérisation d'une lignée cellulaire exprimant de façon stable le CD303 humain et la chaine gamma du récepteur FcERI humain Matériels et méthodes Cellules et conditions de culture 5 La lignée cellulaire Jurkat Fc chaine y (lignée Jurkat Clone E6-1 (ATCCO TIB-152') transfectée de façon stable par un vecteur d'expression (peDNA4/TO) de la chaine gamma du récepteur FeERI humain) a été cultivée dans du milieu RPMI 1640 avec de la glutamine supplénnenté avec 10% de sérum de veau foetal (SVF) à 37°C sous 7% de CO2 dans l'air. Les cellules ont été ensemencées à 0,5x105 cellules/ml trois jours avant 10 Nucleofectione. Construction du vecteur L'ADNe pleine longueur codant pour l'antigène CD303 humain (GenBank / EMBL / DDBL, AF293615.1) a été sous-cloné dans le vecteur peDNA3.1 (-). Transfection des cellules Jurkat Fe chaine y 15 Les transfections ont été effectuées suivant les procédures établies des systèmes de transfection Annaxa (Annaxa Biosystenns, Cologne, Allemagne). Pour la nucléofection, 2 x 106 cellules et 3 pg de vecteur peDNA3.1 linéarisé (-) CD303 ont été remis en suspension dans 100 pL de solution Nucleofector (Kits Nucleofector TM pour Jurkat, Annaxa) selon le programme X-001. Comme témoin, 1 pg d'ADN plasnnidique EGFP (Enhanced Green 20 Fluorescent Protein) (pnnaxGFP, Annaxa) a été utilisé avec le même protocole de nucléofection. Après la transfection, les cellules ont été étalées dans des plaques à 6 puits sans antibiotique avec du milieu de culture. Le milieu sélectif a été en partie renouvelé (environ un demi-volume) deux fois par semaine avec un intervalle de 3-4 jours. 25 Après 24h, les cellules transfectées avec pnnaxGFP ont été recueillies pour mesures. Les efficacités de transfection ont été déterminées par FACS après transfection de pnnaxGFP (Lonza, Allendale, NJ, USA). Après 48h de culture, les cellules transfectées ont été analysées en cytonnétrie de flux et les cellules exprimant CD303 à leur surface ont été purifiées par tri cellulaire par 30 FACS. 3034420 51 Tri cellulaire activé par fluorescence Brièvement, l'ensemble des cellules transfectées ont été marquées avec des anticorps anti-CD303 marqués PE (Miltenyi Biotec). Des anticorps monoclonaux de souris de même isotype PE (phycoérythrine) ont servi de témoins. Les cellules marquées par 5 fluorescence ont été analysées sur un trieur FACS EPICS ALTRA cellulaire (Becknnan). La sélection par généticine a été démarrée 24 heures après le tri cellulaire, par application de 1 mg / ml de G418 (Sigma) dans du milieu de culture. Clonage par dilution limite Les cellules ont ensuite ensemencées à 1.105 cellules / ml pendant 48 heures avant le 10 clonage. Le jour du clonage, les cellules ont été comptées, la viabilité doit être supérieure à 80% pour continuer. Les cellules ont été remises en suspension dans du RPMI + 10% de SVF (2 cellules / ml) et ensemencées dans des plaques à 96 puits (200 pl / puits correspondant à 0,4 cellule/puits). Les cellules ont été incubées à 37°C, 7% CO2 pendant 10 à 12 jours. 15 Le milieu a été renouvelé en partie (environ un demi-volume) deux fois par semaine avec un intervalle de 3-4 jours. Résultats Sélection par FACS de cellules Jurkat Fc chaine y transfectées par CD303 Avant le tri cellulaire, près de 0,4% des cellules exprimaient CD303 (données non 20 montrées). Les cellules CD303 positives ont été isolées par FACS (20 767 cellules, ensemble 008-2) et ensemencées dans du milieu RPMI + 10% de SVF. Malheureusement, ces cellules ne poussent pas dans ces conditions de culture. Les cellules CD303 négatives ont été ensemencées sous sélection généticine (Jour 3). Au 25 jour 25, 35% de ces cellules exprimaient CD303. Après un deuxième tri cellulaire, presque 73% des cellules étaient positives pour CD303 et après encore 18 jours sous sélection à la généticine, plus de 88% de cellules exprimaient CD303 (Figure 8). Au jour 44, après un troisième tri cellulaire, presque 93% des cellules exprimaient CD303 (Figure 9). 30 Stabilité de l'expression de CD303 : après deux mois de la culture sous sélection généticine, plus de 77% des cellules exprimaient encore CD303 (Figure 10). 3034420 52 Clonage par dilution limite de cellules CD303 + En outre, nous avons effectué un clonage par dilution limite des cellules Jurkat Fe chaine y transfectants stables exprimant CD303. 27 clones ont été isolés et testés par coloration avec un anticorps anti- CD303-PE. Seuls 5 quatre clones ont été sélectionnés et décongelés, plus de 80% des cellules exprimaient CD303 (Figure 11). Conclusion Après la transfection avec un vecteur peDNA3.1 (-) CD303, la sélection de généticine et le tri cellulaire activé par fluorescence, un pool stable de cellules Jurkat Fe chaine y 10 CD303+ (plus de 80% de cellules positives) est maintenant disponible et représente un outil intéressant pour la caractérisation in vitro d'anticorps anti- CD303. 3034420 53 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Almagro et al. Frontiers in Bioscience 13, 1619-1633, January 1, 2008. Brochet, X. et al. Nucl. Acids Res. 36, W503-508 (2008). Cao W. J Clin Cell Immunol. 2014 Apr 22;5(2):212. 5 Cardarelli et al. Clin Cancer Res 2009 April 28;15:3376-3383. Cardarelli et al. Cancer Immunol Innnnunother. 2010. 59. 257-265, Cibelli et al., 1998 Science, 280 : 1256-1258. Dall'Acqua et al. 2002, J lnnnnunol.;169:5171 -80. Dall'Acqua et al. 2006, J. Biol. Chenn.;281 :23514-24. (a). 10 Dall'Acqua et al. J Immunol 2006; 177:1129-1138. (b). Dzionek A., et al. (2001) J. Exp. Med. 194, 1823-1834. Edelnnan, G.M. et al., Proc. 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Anticorps monoclonal dirigé contre l'ectodomaine de l'antigène CD303 humain (SEQ ID NO :130), ou un fragment fonctionnel ou un dérivé de celui-ci, caractérisé en ce que : a) ses chaînes lourdes comprennent trois CDR-H (CDR de chaîne lourde selon la nomenclature IMGT) ayant les séquences d'acides aminés suivantes, ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec tes séquences suivantes, et ses chaînes légères comprennent trois CDR-L (CDR de chaîne légère selon la nomenclature IMGT) ayant tes séquences d'acides aminés suivantes, ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences suivantes : i) CDR1-H-famille 1: SEQ ID NO: 1, CDR2-H-famille 1: SEQ ID NO: 2, CDR3- H-famille 1: SEQ ID NO : 3, CDR1-L-famille 1: SEQ ID NO : 4, CDR2-L- famille 1: SEQ ID NO: 5, CDR3-L-famille 1: SEQ ID NO : 6; ou ii) CDR1-H-famille 2 : SEQ ID NO: 7, CDR2-H-famille 2: SEQ ID NO: 8, CDR3- H-famille 2: SEQ ID NO : 9, CDR1-L-famille 2: SEQ ID NO :10, CDR2-Lfamille 2: SEQ ID NO: 11, CDR3-L-famille 2: SEQ ID NO : 12; et b) tes régions constantes des chaînes légères et des chaînes lourdes sont des régions constantes provenant d'une espèce non-mutine. 2. Anticorps monoclonal dirigé contre l'ectodomaine de l'antigène, CD303 humain (SEQ ID NO :130), ou un fragment fonctionnel ou un dérivé de celui-ci, caractérisé en ce 25 que : a) il possède une affinité pour te récepteur FcyRIlla (CD16a) améliorée par rapport à des anticorps dirigés contre l'ectodomaine de l'antigène CD303 humain, produits dans la lignée cellulaire CHO ; et b) les régions constantes des chaînes légères et des chaînes lourdes sont des régions 30 constantes provenant d'une espèce non-mutine. 3. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon ta revendication 2, caractérisé en ce que ses chaînes lourdes comprennent trois CDR-H (CDR de chaîne lourde selon la nomenclature IMGT) ayant les séquences d'acides aminés suivantes, ou 35 des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences suivantes, et ses 3034420 56 chaînes légères comprennent trois CDR-L (CDR de chaîne légère selon la nomenclature IMGT) ayant les séquences d'acides aminés suivantes, ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences suivantes : I) CDR1-H-famille 1: SEQ ID NO: 1, CDR2-H-famille 1: SEQ ID NO: 2, CDR3- 5 H-famille 1: SEQ ID NO : 3, CDR1-L-famille 1: SEQ ID NO : 4, CDR2-L- famille 1: SEQ ID NO: 5, CDR3-L-famille 1: SEQ ID NO: 6; ou ii) CDR1-H-famille 2: SEQ ID NO: 7, CDR2-H-famille 2: SEQ ID NO: 8, CDR3- H-famille 2: SEQ ID NO : 9, CDR1-L-famille 2: SEQ ID NO : 10, CDR2-Lfamille 2: SEQ ID NO : 11, CDR3-L-famille 2: SEQ ID NO: 12. 10 4. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon la revendication 1 ou ta revendication 3, caractérisé en ce que les chaînes lourdes comprennent trois CDR-H (CDR de chaîne lourde selon la nomenclature IMGT) ayant les séquences d'acides aminés suivantes, ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences 15 suivantes, et les chaînes légères comprennent trois CDR-L (CDR de chaîne légère selon la nomenclature IMGT) ayant les séquences d'acides aminés suivantes, ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences suivantes : i) CDR1-H-122A2 : SEQ ID NO: 13, CDR2-H-122A2: SEQ ID NO : 14, CDR3-H122A2: SEQ ID NO : 15, CDR1-L-122A2: SEQ ID NO: 16, CDR2-L-122A2: SEQ 20 ID NO : 17, CDR3-L-122A2: SEQ ID NO : 18; ii) CDR1-H-102E9 : SEQ ID NO : 19, CDR2-H-102E9: SEQ ID NO: 20, CDR3-H102E9: SEQ ID NO: 21, CDR1-L-102E9: SEQ ID NO: 22, CDR2-L-102E9: SEQ ID NO: 23, CDR3-L-102E9: SEQ ID NO: 24; iii) CDR1-H-104C12 : SEQ ID NO: 25, CDR2-H-104C12: SEQ ID NO: 26, CDR3- H-104C12: SEQ ID NO : 27, CDR1-L-104C12: SEQ ID NO : 28, CDR2-L- 104C12: SEQ ID NO : 29, CDR3-L-104C12: SEQ ID NO: 30; iv) CDR1-H-114D11: SEQ ID NO: 31, CDR2-H-114D11 : SEQ ID NO: 32, CDR3- H-114D11: SEQ ID NO : 33, CDR1-L-114D11: SEQ ID NO : 34, CDR2-L114D11: SEQ ID NO :35, CDR3-L-114D11: SEQ ID NO: 36; ou y) CDR1-H-104E10: SEQ ID NO: 37, CDR2-H-104E10: SEQ ID NO: 38, CDR3-H- 104E10 : SEQ ID NO: 39, CDR1-L-104E10: SEQ ID NO : 40, CDR2-L-104E10: SEQ ID NO :41, CDR3-L-104E10: SEQ ID NO :42. 5. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des 35 revendications 1 à 4, caractérisé en ce que ses chaines lourdes comprennent une région 3034420 57 variable ayant une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 43 à 47 ou une séquence ayant au moins 80% d'identité avec l'une de SEQ ID NO: 43 à 47. 6. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des 5 revendications 1 à 5, caractérisé en ce que ses chaines légères comprennent une région variable ayant une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 48 à 52 ou une séquence ayant au moins 80% d'identité avec l'une de SEQ ID NO: 48 à 52. 7. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des 10 revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il possède des chaînes lourdes et légères dont les régions variables ont tes séquences d'acides aminés suivantes ou des séquences ayant au moins 80% d'identité avec les séquences suivantes : i) Anticorps 122A2: chaîne lourde : SEQ ID NO: 55, chaîne légère : SEQ ID NO: 60, ii) Anticorps 102E9: chaîne Lourde: SEQ ID NO: 56, chaîne légère : SEQ ID NO : 61, 15 iii) Anticorps 104C12: chaîne Lourde: SEQ ID NO: 57, chaîne Légère: SEQ ID NO: 62, iv) Anticorps 114D11: chaîne lourde : SEQ ID NO: 58, chaîne légère : SEQ ID NO: 63, OU V) Anticorps 104E10: chaîne lourde : SEQ ID NO: 59, chaîne légère : SEQ ID NO: 64. 20 8. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il est d'isotype IgG, en particulier IgG1. 9. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un anticorps chimérique ou 25 humanisé, avantageusement d'un anticorps chimérique dont la région constante des chaines lourdes et légères est d'origine humaine. 10. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que sa chaine lourde et/ou sa chaine légère 30 comprend en outre un peptide signal hétérologue de séquence SEQ ID NO :65. 11. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce qu'il est produit dans une lignée cellulaire choisie parmi : SP2/0 ; YB2/0 ; IR983F ; le myélome humain Namalwa ; PERC6 ; les lignées CHO, notamment CHO-K-1, CHO-Lec10, CHO-Lec1, CHO-Lec13, CHO Pro-5, CHO dhfr-, ou lignée CHO délétée pour les deux allèles codant pour le gène FUT8 et/ou le 3034420 58 gène GMD ; Wil-2; Jurkat; Vero; Molt-4; COS-7; 293-HEK; BHK; K6H6; NSO; SP2/0-Ag 14, P3X63Ag8.653, lignée de cellule de canard embryonnaire EB66® (Valneva) ; les lignées d'hépatome de rat H4-II-E (DSM ACC3129), et H4-11-Es (DSM ACC3130), NM-H9D8 (DSM ACC2806), NM-H9D8-E6 (DSM ACC 2807), et NM H9D8-E6Q12 (DSM ACC 2856). 5 12. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce qu'il possède une faible teneur en fucose, inférieure ou égale à 65%. 10 13. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce qu'il possède une teneur en N-glycannes de type oligomannose supérieure ou égale à 30%. 14. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des 15 revendications 1 à 11, caractérisé en ce qu'il possède une teneur en galactose supérieure ou égale à 50%. 15. Anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que le fragment Fc possède les mutations ou combinaisons de mutations suivantes dans leur 20 fragment Fc: - N315D/A330V/N361D/A378V/N434Y, - P230S/N315D/M428L/ N434Y, - E294de1/T307P/N434Y, - T307A/N315D/A330V/E382V/N389T/N434Y, 25 - V2591/N315D/N434Y, ou - T256N/A378V/S383N/N434Y, où la numérotation des acides aminés dans le fragment Fc est celle de l'index EU de Kabat. 30 16. Anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, caractérisé en ce qu'il possède une délétion de l'acide aminé en position 293 (De1293) ou 294 (Del294) du fragment Fc, où la numérotation des acides aminés dans te fragment Fc est celle de l'index EU de Kabat. 3034420 59 17. Fragment fonctionnel d'anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les fragments Fv, ScFv, Fab, F(ab')2, Fab', scFvFc ou les dianticorps (« diabodies »). 5 18. Acide nucléique codant pour la chaine lourde et/ou la chaine légère d'un anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 17. 19. Acide nucléique selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il comprend au 10 moins une des séquences SEQ ID NO: 86 à 95. 20. Vecteur comprenant un acide nucléique selon la revendication 18 ou la revendication 19. 15 21. Cellule hôte, animal non-humain transgénique ou plante transgénique comprenant au moins un acide nucléique selon la revendication 18 ou la revendication 19 ou un vecteur selon la revendication 20. 22. Cellule hôte selon la revendication 21, choisie parmi les lignées suivantes : SP2/0 ; 20 YB2/0 ; IR983F ; le myélome humain Namalwa ; PERC6 ; les lignées CHO, notamment CHO-K-1, CHO-Lec10, CHO-Lec1, CHO-Lec13, CHO Pro-5, CHO dhfr-, ou lignée CHO délétée pour les deux allèles codant pour le gène FUT8 et/ou te gène GMD ; Wil-2; Jurkat; Vero; Molt -4; COS-7; 293-HEK; BHK; K6H6; NSO; SP2/0-Ag 14, P3X63Ag8.653, Lignée de cellule de canard embryonnaire EB660 (Valneva) ; les lignées d'hépatome de 25 rat H4-II-E (DSM ACC3129), et H4-II-Es (DSM ACC3130), NM-H9D8 (DSM ACC2806), NM- H9D8-E6 (DSM ACC 2807), et NM H9D8-E6Q12 (DSM ACC 2856). 23. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, pour son utilisation en tant que médicament. 30 24. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des tumeurs hématopoïetiques exprimant l'antigène CD303, notamment les néoplasmes de cellules dendritiques plasmacytoïdes blastiques. 35 3034420 60 25. Anticorps, fragment fonctionnel ou dérivé de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies inflammatoires, notamment des maladies autoimmunes.