Brevet FR3033715A1 — publié le 20160923

DISPOSITIF DE PREPARATION D'UNE COUCHE DE CELLULES BIOLOGIQUES SUR UNE LAME ET APPAREIL DE PREPARATION AUTOMATIQUE D'UNE COUCHE DE CELLULES UTILISANT LEDIT DISPOSITIF La présente invention concerne un dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques à partir d'une goutte de liquide biologique sur une lame de microscope. La présente invention concerne également un appareil de préparation automatique d'une couche de cellules biologiques utilisant un tel dispositif. Dans le cadre de l'invention, le terme "liquide biologique" désigne tout liquide naturel ou préparation biologique contenant des cellules, tel que le sang, la moelle osseuse, et le terme "cellule" signifie tout aussi bien une cellule dans son sens le plus classique, tels les globules rouges, les globules blancs et les plaquettes, que tout autre type cellulaire présent dans un liquide biologique. Il est bien connu de réaliser une couche avec un liquide biologique sur une lame, pour soumettre ensuite ce liquide à un examen au microscope. Cette technique permet, par exemple avec le sang, d'observer et d'identifier les cellules. La qualité de la couche est importante, par exemple pour les analyseurs différentiels automatiques des cellules sanguines dont la précision peut être affectée si la couche n'est pas uniforme et fine. Une telle couche de cellules sanguines est connue également sous le nom de frottis sanguin. La réalisation d'un frottis sanguin est souvent une opération manuelle qui consiste à prélever un peu de sang à l'intérieur d'un tube puis d'en déposer une goutte dont le volume est d'environ 5 mm3 sur une première lame de verre posée horizontalement sur un plan. En suivant, on place une deuxième lame inclinée à environ 300 et on la fait glisser jusqu'à ce qu'un bord entre en contact avec la goutte. La goutte de sang s'étale le long de l'arête par capillarité. On fait glisser la lame inclinée pour étaler le sang sur la surface de la première lame, afin de former une fine couche de cellules sanguines composée de globules rouges, globules blancs et de plaquettes. La couche de cellules sanguines est ensuite séchée, puis colorée par au moins un réactif approprié pour permettre une analyse ultérieure des cellules au microscope. Cette analyse permet notamment de déterminer la composition de 3033715 2 l'échantillon sanguin considéré, ce qui est primordial pour le diagnostic de certaines pathologies. Un tel frottis sanguin va ainsi comporter une zone de cellules disposées en monocouche, sur laquelle l'examen microscopique va se focaliser. Plus la zone monocouche 5 sera étendue, plus il sera possible d'examiner de cellules et ainsi, plus l'examen microscopique sera qualitatif. Une telle préparation manuelle d'étalement sanguin pose différents problèmes notamment en ce qui concerne l'étalement sanguin qui doit être parfaitement maîtrisé afin d'obtenir une répartition uniforme des cellules sur la lame, et cela quelle que soit la quantité 10 de cellules présentes dans le sang. Ainsi, une telle opération nécessite souvent un technicien de laboratoire ou biologiste bien formé pour pouvoir réaliser un frottis de qualité, c'est-à-dire une couche de cellules homogène, ni trop mince ni trop épaisse, avec des cellules non superposées. De plus, la reproductibilité est importante. Une telle opération manuelle présente également un risque de contact avec le sang 15 pour l'opérateur. Un autre problème est lié à la manipulation des lames qui sont en verre, relativement fragiles. Pour simplifier les étapes de prélèvement du sang et de la formation d'une goutte sur une lame et afin de diminuer le risque de contamination de l'opérateur par le sang, les 20 documents US 5 714 124 et US 5 163 583 décrivent un dispositif de prélèvement et de distribution de gouttes de sang sur une lame comprenant un canal de passage, une extrémité dudit canal étant munie d'un moyen de perçage pour percer le bouchon d'un tube de sang et l'extrémité opposée formant une pointe de distribution pour déposer la goutte. L'opération de perçage est faite manuellement par l'opérateur sur un tube de sang 25 positionné verticalement et avec le bouchon en position supérieure. Le tube est ensuite retourné. Pour déposer la goutte, l'opérateur doit appliquer une pression sur le tube. Le dispositif comporte une butée qui vient en appui sur le bouchon. Celui-ci, réalisé en matière souple, se déforme et met l'intérieur du tube de sang sous pression, forçant le sang à sortir du tube pour former une goutte sur l'extrémité de sortie du tube. L'opérateur arrête la pression lorsque la goutte, devenue assez grosse, tombe sur la surface de dépose de la lame. Même si un tel dispositif permet de faciliter le prélèvement de sang, il est difficile de contrôler la formation de la goutte de sang. 3033715 3 Pour tenter de remédier à cette problématique de contrôle de formation de la goutte de sang, les documents US 5 344 666, US 5 697 522 et US 2013/0228596 décrivent un dispositif de prélèvement et de distribution d'une goutte de sang sur une lame de microscope comprenant un corps de distribution comprenant un canal, une extrémité 5 comprenant un moyen de perçage et l'extrémité opposée comprenant une pointe de distribution et des surfaces d'appui. L'opérateur introduit le moyen de perçage dans le bouchon du tube de sang et retourne l'ensemble afin de mettre en contact les surfaces d'appui avec la surface de dépose de la lame. L'opérateur applique une force sur le tube par rapport à la surface de dépose afin de faire sortir une goutte de sang de la pointe de 10 distribution. La quantité de sang distribué est déterminée par la distance séparant la pointe de distribution et le plan délimité par les surfaces d'appui. Le document US 5 801 062 décrit également un dispositif de prélèvement de sang comprenant un canal, une extrémité du canal comprenant une aiguille pour prélever le sang dans un récipient et l'extrémité opposée comprenant une pointe de distribution pour 15 déposer une goutte de sang sur une lame et un moyen d'étalement servant à étaler la goutte de sang. Toutefois ce moyen d'étalement se présente sous la forme d'une lame reliée rigidement à une paroi périphérique de la pointe de distribution et disposée perpendiculairement à la paroi. Ainsi, une fois la goutte de sang déposée, l'opérateur doit positionner le dispositif horizontalement de manière à pouvoir utiliser la lame pour étaler le 20 sang. Ainsi l'étalement est effectué manuellement par l'opérateur et il n'est pas possible de contrôler la qualité de l'étalement, notamment l'uniformité de la couche. Selon un autre inconvénient important, dans tous ces dispositifs antérieurs, l'opérateur doit extraire le dispositif de distribution manuellement, ce qui ne permet pas de limiter le risque de contamination pour l'utilisateur. De plus, le moyen de perçage est formé 25 généralement par une aiguille métallique, ce qui présente un risque important pour l'opérateur. Le document US 4 151 915 propose un appareil qui permet d'automatiser l'étalement de la goutte de sang. Toutefois cet appareil est dépourvu de moyens qui permettent de prélever le sang et de déposer une goutte sur une lame. Un opérateur doit réaliser ses 30 étapes préalablement à la phase d'étalement réalisée par l'appareil. Aussi, la présente invention vise à remédier aux inconvénients de l'art antérieur en proposant un dispositif qui permet de déposer avec précision une goutte de liquide et de 3033715 4 contrôler l'étalement de la goutte. La présente invention propose également un appareil qui permet une automatisation de toutes les étapes d'une préparation de frottis sanguin. A cet effet, la présente invention a pour objet un dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques sur une surface de dépose d'une lame, ledit dispositif 5 comprenant un corps muni d'un canal, ledit corps comprenant une première extrémité formant une pointe d'entrée destinée à pénétrer à l'intérieur d'un récipient contenant un liquide biologique, fermé par un bouchon et une seconde extrémité formant une pointe de de dépôt destinée à déposer une goutte dudit liquide biologique sur la surface de dépose, ladite seconde extrémité comprenant des moyens d'appui destinés à venir en appui contre 10 la surface de dépose et un moyen d'étalement pour étaler la goutte de liquide pour former la couche de cellules biologiques, ledit dispositif étant caractérisé en ce que ledit moyen d'étalement comprend une lamelle disposée dans un plan formant un angle d'inclinaison a avec un plan de la surface de dépose et des moyens élastiques de rappel interposés entre ladite lamelle et ladite seconde extrémité. 15 La présente invention concerne également un appareil de préparation automatique d'une couche de cellules biologiques utilisant le dispositif de préparation défini ci-dessus, ledit appareil étant caractérisé en ce qu'il comprend: - une unité de support destinée à recevoir une lame comprenant une surface de dépose; 20 - une unité de préparation comprenant des moyens de mise en oeuvre du dispositif de préparation pour prélever une goutte de liquide biologique à partir d'un récipient contenant un liquide biologique et étaler de manière contrôlée ladite goutte de liquide biologique pour réaliser une couche fine de cellules biologiques ; - des moyens de contrôle de présence de la goutte de liquide sur la surface de dépose 25 et - des moyens d'extraction du dispositif de distribution. La présente invention concerne également un procédé mettant en oeuvre un tel appareil de préparation automatique d'une couche de cellules biologiques, ledit procédé comprend les étapes suivantes : 30 - mettre en place une lame sur l'unité de support, ladite lame comprenant une surface de dépose orientée vers le haut ; 3033715 5 - fixer un récipient contenant un liquide biologique sur le support de fixation avec le bouchon du récipient orienté vers le haut ; - mettre en place le dispositif de préparation dans l'ouverture avec la pointe d'entrée orientée vers le bouchon; 5 - déplacer ledit récipient verticalement en direction du dispositif de préparation afin d'introduire la pointe d'entrée dans le récipient ; - placer ledit récipient et ledit dispositif de préparation afin que la pointe de dépôt soit orientée vers la surface de dépose de la lame ; - déplacer ledit récipient verticalement en direction de la surface de dépose de la lame de 10 manière à mettre en contact les moyens d'appui contre la surface de dépose et à appliquer le bouchon contre la surface d'appui, comprimant ainsi l'intérieur du récipient afin de faire sortir une goutte de liquide biologique au niveau de la pointe de dépôt, ladite goutte étant séparée de la pointe de dépôt sous l'effet de la tension superficielle et déposée sur la surface de dépose ; 15 - déplacer la lame selon une direction horizontale pour réaliser un déplacement relatif entre le moyen d'étalement et la surface de dépose afin d'étaler de manière contrôlée la goutte de liquide biologique pour réaliser une couche fine de cellules biologiques. Selon une forme avantageuse de réalisation, le procédé comprend une étape supplémentaire visant à détecter la présence de la goutte de liquide biologique par les 20 moyens de contrôle de présence avant de déplacer la lame pour étaler la goutte. De préférence, le procédé comprend une étape supplémentaire visant à agiter le récipient pour homogénéiser le liquide biologique avant de déposer la goutte sur la surface de dépose de la lame. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront de la description 25 suivante de modes particuliers de réalisation de l'invention, donnés à titre d'exemples non limitatifs, en référence aux dessins annexés, sur lesquels : - la figure 1 est une vue schématique en perspective d'un dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques selon l'invention ; - la figure 2A est une vue schématique de profil du dispositif de la figure 1; 30 - la figure 2B est une coupe de la figure 2A selon un axe AA ; 3033715 6 - la figure 3 est une vue du dispositif de la figure 2B illustrant un tube de sang mis en position sur le dispositif lors de la formation d'une goutte de sang sur la surface de dépose d'une lame ; - les figures 4A-4C sont des vues montrant la pointe de dépôt du dispositif de la figure 5 3 à différentes étapes de la préparation d'un frottis sanguin ; - la figure 5A est une vue schématique de profil d'une variante du dispositif de la figure 3 et la figure 5B est une vue de dessus de la figure 5A; - les figures 6A-6H sont des vues schématiques en perspective d'un appareil de préparation automatique utilisant le dispositif de préparation des figures précédentes à 10 différentes étapes de la préparation d'un frottis sanguin. Sur les figures 1 et 2, on a représenté un dispositif 10 pour préparer une couche de cellules biologiques selon l'invention. Ce dispositif 10 est particulièrement adapté pour préparer une couche de cellules sanguines. De manière conventionnelle et comme l'illustre la figure 3, le liquide biologique 5 ou 15 le sang est contenu dans un récipient 2 fermé par un bouchon 6. Le récipient est généralement un tube 2 et le bouchon 6 est en matériau souple du type élastomère. Le dispositif 10 comprend un corps 11 qui s'étend selon une direction verticale. Pour la suite de la description, une direction verticale est parallèle à la force gravitationnelle G et le sens haut-bas correspond au sens de la force gravitationnelle G. 20 Le corps 11 est muni d'une voie de passage formée par un canal 14 qui s'étend entre une première extrémité 18 et une seconde extrémité 17. La première extrémité 18 forme une pointe d'entrée 12 destinée à pénétrer à l'intérieur du tube de sang 2. Selon une forme préférée, la pointe d'entrée 12 est configurée pour former un 25 moyen de perçage. Comme dans l'exemple illustré sur les figures 1 à 3, le moyen de perçage est formé par une extrémité biseautée destinée à venir percer le bouchon 6. Selon une forme de réalisation, le corps 11 comprend en outre une surface d'appui 13 destinée à venir en appui contre une zone 7 du bouchon 6 du récipient afin de comprimer l'intérieur du récipient lorsque, une fois la pointe d'entrée 12 introduite à travers le 30 bouchon, on exerce une pression sur ledit bouchon 6. Cette surface d'appui 13 permet de définir la longueur du corps 11 pénétré dans le tube 2 et forme une butée. 3033715 7 Selon une forme de réalisation, cette surface d'appui 13 est formée par un épaulement annulaire 13 formé sur la paroi extérieure du corps 11. La seconde extrémité 17 forme une pointe de dépôt 15 destinée à venir déposer une goutte de liquide 3 sur la surface de dépose 4 d'une lame de microscope qui est 5 généralement en verre. Selon une caractéristique importante de l'invention illustrée sur la figure 2B et la figure 3, la seconde extrémité 17 comprend en outre un moyen d'étalement 20 pour étaler la goutte de liquide 3 pour former la couche de cellules biologiques. Ce moyen d'étalement 20 comprend une lamelle d'étalement 22 disposée dans un plan 28 qui forme un angle 10 d'inclinaison a avec un plan 24 de la surface de dépose 4 et des moyens élastiques de rappel 21 interposés entre la lamelle d'étalement 22 et la seconde extrémité 17. Pour la suite de la description, on désignera la lamelle d'étalement 22 par le terme "lamelle". Selon une forme particulièrement avantageuse de l'invention, ledit moyen 15 d'étalement 20 comprend une lamelle 22 ayant une forme sensiblement rectangulaire. Cette lamelle comprend un premier bord 27 supérieur, relié à la seconde extrémité 17 par les moyens élastiques de rappel 21 et un second bord 26 inférieur destiné à venir en contact avec la surface de dépose 4. De préférence, la largeur de la lamelle 22 L1 correspond à la dimension du frottis 20 sanguin et est inférieure à la dimension de la lame 1. De préférence, la forme du deuxième bord 26 inférieur est configurée pour être adaptée au profil de la surface de dépose 4 de la lame 1. En outre, les moyens élastiques de rappel 21 permettent de régler l'angle d'inclinaison a pour permettre l'ajustement de l'épaisseur de l'étalement. De préférence, cet 25 angle d'inclinaison est compris entre 25° et 350 . De préférence, les moyens élastiques de rappel 21 se présentent sous la forme d'une zone de liaison réalisée dans un matériau élastique. Selon une forme de réalisation illustrée sur la figure 2B, le dispositif de l'invention comprend en outre des moyens d'appui 23 destinés à venir en appui contre la surface de 30 dépose 4 lorsque l'on place le dispositif 10 en contact avec la surface de dépose 4 de la lame de manière à espacer la pointe de dépôt 15 d'une distance h1 définie par rapport à la surface de dépose 4. Ainsi la pointe de dépôt 15 est espacée d'un plan 24 délimité par les bords 3033715 8 inférieurs 29 des moyens d'appui d'une distance h1. Cette distance permet de déterminer la quantité de liquide biologique à déposer sur la surface de dépose 4. Lorsque le dispositif 10 est placé en contact avec la surface de dépose 4 pour déposer la goutte, le plan 24 délimité par les moyens d'appui 23 est confondu avec le plan formé par la surface de dépose 4. 5 Selon une forme de réalisation, les moyens d'appui 23 se présentent sous la forme d'une jupe entourant partiellement la pointe d'entrée 15, laissant une fenêtre 16. Selon une forme de réalisation, les moyens d'appui 23 et le moyen d'étalement 20 sont agencés par rapport à la pointe de dépôt 15 de manière à éviter tout contact avec la goutte de liquide 3 lorsqu'elle est déposée par la pointe de distribution 15. Le diamètre de la 10 jupe doit donc être suffisant en fonction de la nature du liquide. De fait, le second bord 26 inférieur de la lamelle 22 dépasse en dessous du plan 24 délimité par ces moyens d'appui 23 d'une distance h2 comme l'illustre la figure 2B, la distance h2 et les moyens élastiques de rappel 21 coopérant ensemble de façon à garantir un étalement contrôlé de la goutte de liquide biologique pour former la couche fine de cellules 15 biologiques, comme expliqué ci-après. Le fonctionnement manuel du dispositif 10 est le suivant et illustré sur la figure 3 et les figures 4A à 4C. Le dispositif 10 est introduit à travers le bouchon 6 par sa pointe d'entrée 12 jusqu'à ce que la surface d'appui 13 vienne au contact dudit bouchon 6. Selon une forme préférée 20 de l'invention, une cavité creuse 7 est aménagée au centre du bouchon, la surface d'appui 13 étant reçue dans cette cavité. La pointe d'entrée 12 se trouve dans le tube 2. Le tube muni du dispositif selon la présente invention est retourné, les moyens d'appui 23 viennent en contact avec la surface de dépose 4. Le tube de sang 2 est orienté verticalement avec le bouchon 6 orienté vers le bas. 25 La longueur du corps du dispositif qui peut pénétrer dans le tube est limitée par la surface d'appui 13 qui vient en appui contre le fond de la cavité 7. Afin de faire sortir une goutte de liquide au niveau de la pointe de dépôt 15, il faut appliquer une force verticale sur le tube 2, force qui se transmet contre la surface de dépose 4 par l'intermédiaire des bords inférieurs 29 de la jupe 23 de sorte que la surface d'appui 13 30 vient en appui contre le bouchon 6, le déforme et met en pression l'intérieur du tube 2. Comme le liquide 5 est sous pression dans ledit tube 2, une goutte de liquide se forme alors au niveau de la pointe de dépôt 15, en grossissant elle touche la surface de dépose 4, 3033715 9 provoquant par les forces de capillarité une séparation de la goutte de sa pointe de dépôt 15 qui l'a générée. La force appliquée sur le tube est alors relâchée et aucune autre goutte n'est générée. Comme l'illustre la figure 4A, les bords inférieurs 29 de la jupe des moyens d'appui 5 23 restent au contact de la surface de dépose 4. Parallèlement, la lamelle 22 est en appui également sur la surface de dépose 4. Pour réaliser une couche fine de cellules sanguines ou un frottis sanguin, le dispositif 10 est remonté, selon un axe parallèle à la force gravitationnelle G de sorte que les bords inférieurs 29 de la jupe 23 s'écartent de la surface de dépose 4 d'une distance sensiblement 10 inférieure à h2. Le déplacement est représenté par la flèche D1 sur la figure 4B. Parallèlement, la lamelle 22 reste toujours légèrement en appui sur la surface de dépose 4. Le second bord 26 inférieur est donc légèrement pressé sur ladite surface de dépose 4 avec une pression donnée, constante et reproductible lié aux caractéristiques des moyens élastiques de rappel 21 dont le degré d'élasticité ne se limite pas à la hauteur h2. En suivant, 15 on réalise un déplacement du dispositif 10 par rapport à la lame 1 en direction de la goutte 3. Le déplacement est représenté par la flèche D2 sur la figure 4B. Le second bord 26 du moyen d'étalement 20 vient en contact avec la goutte 3 qui s'étale immédiatement le long du second bord 26 par capillarité. La goutte est maintenue par capillarité entre le second bord 26 et la surface de dépose 4 de la lame 1. Enfin, on déplace le dispositif 10 dont le sens 20 de déplacement est indiqué par la flèche D3 de sorte que la lamelle 22 tire sur la goutte. On réalise alors un étalement de la goutte sur la largeur du second bord 26, le long de la lame 1. Pendant les différentes étapes, l'effort est adapté pour conserver uniquement le contact de la lamelle sur la surface de dépose 4 sans générer une seconde goutte. L'épaisseur et la longueur de l'étalement sont alors définis par la pression exercée 25 par les moyens élastiques de rappel 21, qui est constante puisque la lamelle est en appui glissant sur la surface de dépose 4. Cette épaisseur d'étalement diminue à mesure que le sang maintenu par capillarité entre le second bord 26 et la surface de dépose 4 pendant le mouvement est utilisé. On obtient ainsi en fin de frottis une fine couche de cellules propice à l'observation 30 microscopique. Selon une nouvelle forme de réalisation du dispositif 10 illustrée sur les figures 5A et 5B, le bord inférieur 29 du moyen d'appui 23 comprend une ouverture 30 positionnée à 3033715 10 l'opposé de la lamelle 22. La largeur L2 de l'ouverture est sensiblement supérieure à la largeur L1 du bord inférieur 26 de la lamelle 22. De cette façon, il n'est plus nécessaire de soulever le dispositif 10 de manière à former un espace entre les bords inférieurs 29 du moyen d'appui 23 et la surface de dépose 4 en vue du déplacement de la lamelle pour tirer 5 sur la goutte, l'ouverture 30 forme un pont au-dessus du frottis sanguin. Selon une forme de réalisation, le dispositif 10 peut être fait d'un matériau moulé, ce qui permet de réduire le coût de fabrication du dispositif. Sur les figures 6A à 6H, on a représenté un appareil de préparation automatique 100 d'une couche de cellules biologiques selon l'invention, utilisant le dispositif 10 qui vient 10 d'être décrit. Cet appareil comprend un bâti 101 comprenant une unité de préparation d'une couche de cellules biologiques 110 et une unité de support 102 de lame. L'unité de préparation 110 est équipée de moyens pour automatiser le fonctionnement du dispositif de préparation 10 qui est décrit ci-dessus en référence à la figure 3 et aux figures 4A-4C. Ce bâti 15 comprend un repère X, Y, Z, l'axe Z étant orienté selon la direction verticale, le plan X, Y correspondant à un plan horizontal. Pour la suite de la description de l'appareil, l'appareil est décrit dans le cadre d'une préparation d'une couche de cellules sanguines, appelée également frottis sanguin. L'unité de support de lame 102 comprend un support horizontal 103 destiné à 20 recevoir une lame 1. Cette lame est en verre sensiblement rectangulaire et comprend une surface de dépose 4 sur laquelle on prépare le frottis sanguin. L'appareil comprend des moyens de déplacement en translation pour déplacer le support horizontal 103 selon une direction horizontale Y entre une position dans laquelle le support est entièrement accessible pour l'opérateur pour la mise en place ou l'enlèvement 25 de la lame sur le support et une position dans laquelle la lame est positionnée dans l'unité de préparation 110 qui est prévue pour former une goutte de sang sur la lame 1 et pour étaler la goutte de sang pour former de manière contrôlée un frottis sanguin. Le terme "contrôlée" désigne d'une part le volume contrôlé de la goutte de sang, et d'autre part l'épaisseur contrôlée du frottis sanguin. 30 Le dépôt de la goutte de sang s'effectue en un emplacement défini de la lame, le support étant immobilisé en translation. Le déplacement du support s'effectue par l'intermédiaire de moyens de déplacement en translation appropriés. 3033715 11 Comme on peut le voir sur la figure 6B, la lame 1 comporte une zone de préhension 9 de la lame pour l'opérateur et une zone réservée comprenant une surface de dépose 4 pour le frottis sanguin. Lorsque la lame est placée dans l'unité de préparation 110, seule la zone de préhension 9 est visible pour l'opérateur et l'emplacement défini de la goutte de sang est 5 situé à proximité de la zone réservée. L'unité de préparation 110 comprend un plateau 107 monté rotatif autour d'un axe 112 qui s'étend parallèlement à l'axe YY et un support de fixation 104 qui est destiné à recevoir le tube de sang 2. Le support de fixation 104 est agencé diamétralement par rapport au plateau 107. Le support de fixation 104 est d'une part mobile selon une direction 10 verticale Z et d'autre part, porté par le plateau rotatif 107. L'appareil comprend un moyen moteur adapté pour entraîner en rotation dans un sens ou dans l'autre le plateau 107 de manière séquentielle, en différentes positions. Ainsi le plateau peut se positionner à différentes positions angulaires. Le support de fixation 104 du tube de sang a une forme tubulaire et est muni d'une 15 ouverture latérale 109 qui s'étend selon la direction Z. Les deux bords en vis-à-vis de l'ouverture latérale sont munis de pattes de fixation 108 réalisées dans une matière élastique deformable. La dimension de cette ouverture axiale est inférieure à la dimension du tube 2. Pour la mise en place du tube sur le support de fixation, le tube est inséré par clipsage via l'ouverture axiale et est maintenu en position dans le support. 20 Lorsque le plateau est dans une position dite position initiale ou position de repos qui correspond à la position illustrée sur la figure 6A, le support de fixation 104 est dirigé verticalement selon l'axe Z. Lorsque le tube de sang est fixé sur le support de fixation 104 par clipsage comme l'illustre la figure 6B, le tube de sang 2 est agencé avec le bouchon 6 orienté vers le haut et le fond du tube orienté vers le bas. La fixation du tube 2 sur le support 25 de fixation 104 est effectuée manuellement. Il n'y a là aucun risque pour l'opérateur. Le bâti 101 comprend une ouverture 106 aménagée sur une surface frontale du bâti 101 et est configurée pour recevoir le dispositif de préparation d'un frottis sanguin désigné dans son ensemble par la référence 10 et illustré sur la figure 1. Comme l'illustre la figure 6B, lorsque le dispositif de préparation 10 est mis en place 30 dans l'ouverture 106, le dispositif est agencé verticalement, avec la pointe d'entrée 12 introduite dans le logement et orientée vers le bouchon du tube de sang et la pointe de 3033715 12 dépôt 15 située à l'extérieure de l'ouverture et orientée vers le haut. La mise en place du dispositif de préparation 10 dans l'unité de préparation 110 est effectuée manuellement. De préférence, l'ouverture 106 est fermée par une porte 105 qui a également pour fonction de maintenir en position verticale le dispositif de préparation 10 pendant toutes les 5 étapes de préparation du frottis sanguin. Le support de fixation 104 sur lequel est fixé le tube de sang 2 est mobile par rapport au plateau le long de l'axe vertical Z. L'appareil comprend un moyen moteur approprié pour entraîner le déplacement vertical du support 104. Le déplacement du support 104 qui est représenté par une flèche F sur la figure 6B permet de commander le déplacement du tube 10 verticalement de manière ascendante en direction de la pointe d'entrée 12 du dispositif de préparation pour percer le bouchon 6. La pointe d'entrée 12 traverse alors le bouchon et est introduite dans le tube 2. Avantageusement, la course du déplacement du tube est une course fixe REVENDICATIONS1. Dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques (10) sur une surface de dépose (4) d'une lame (1), ledit dispositif comprenant un corps (11) muni d'un canal (14), ledit corps comprenant une première extrémité (18) formant une pointe d'entrée (12) destinée à pénétrer à l'intérieur d'un récipient (2) contenant un liquide biologique (5), fermé par un bouchon (6) et une seconde extrémité (17) formant une pointe de dépôt (15) destinée à venir déposer une goutte dudit liquide biologique (3) sur la surface de dépose (4), ladite seconde extrémité (17) comprenant des moyens d'appui (23) destinés à venir en appui contre la surface de dépose (4) et un moyen d'étalement (20) pour étaler la goutte de liquide pour former la couche de cellules biologiques, caractérisé en ce que ledit moyen d'étalement (20) comprend une lamelle (22) disposée dans un plan (28) formant un angle d'inclinaison a avec un plan (24) de la surface de dépose (4) et des moyens élastiques de rappel (21) interposés entre ladite lamelle et ladite seconde extrémité (17). 2. Dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques (10) selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit moyen d'étalement (20) comprend une lamelle (22) ayant une forme sensiblement rectangulaire, ladite lamelle comprenant un premier bord (27) relié à la seconde extrémité (17) par les moyens élastiques de rappel (21) et un second bord (26) qui dépasse un plan (24) délimité par les moyens d'appui (23) d'une distance h2, la distance h2 et les moyens élastiques de rappel (21) coopérant ensemble de façon à garantir un étalement contrôlé de la goutte de liquide biologique pour former la couche de cellules biologiques. 3. Dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques (10) selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ladite pointe de dépôt (15) est espacée d'un plan (24) délimité par les moyens d'appui (23) d'une distance h1 définie de façon à déterminer la quantité de liquide biologique à déposer sur la surface de dépose (4). 4. Dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques (10) selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la forme du deuxième bord (26) est configurée pour être adaptée au profil de la surface de dépose (4). 5. Dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques (10) selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le corps (11) comprend une surface d'appui (13) destinée à venir en appui contre une zone (7) du bouchon du récipient (6). 3033715 17 6. Dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques (10) selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la pointe d'entrée (12) présente une extrémité biseautée destinée à venir percer le bouchon (6) dudit récipient. 7. Dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques (10) selon l'une 5 des revendications précédentes, caractérisé en ce que lesdits moyens d'appui (23) et le moyen d'étalement (20) sont agencés par rapport à la pointe de dépôt (15) de manière à éviter tout contact avec la goutte de liquide (3) lorsqu'elle est déposée par la pointe de distribution (15) sur la surface de dépose (4). 8. Dispositif de préparation d'une couche de cellules biologiques (10) selon l'une 10 des revendications précédentes, caractérisé en ce que lesdits moyens d'appui (23) comprennent une jupe munie d'une fenêtre F. 9. Appareil de préparation automatique (100) d'une couche de cellules biologiques utilisant le dispositif de préparation (10) défini selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que ledit appareil comprend: 15 - une unité de support (102) destinée à recevoir une lame (1) comprenant une surface de dépose (4) ; - une unité de préparation (110) comprenant des moyens de mise en oeuvre du dispositif de préparation (10) pour prélever une goutte de liquide biologique à partir d'un récipient contenant un liquide biologique (2) et étaler de manière contrôlée 20 ladite goutte pour réaliser une couche fine de cellules biologiques ; - des moyens de contrôle de présence de la goutte de liquide biologique sur la surface de dépose (4) et - des moyens d'extraction du dispositif de distribution. 10. Appareil de préparation automatique (100) d'une couche de cellules biologiques 25 selon la revendication 9, caractérisé en ce que l'unité de préparation (110) comprend un support de fixation (104) destiné à recevoir le récipient (2), ledit support de fixation (104) étant d'une part déplaçable selon une direction verticale Z et d'autre part porté par un plateau (107) monté rotatif autour d'un axe (112). 11. Appareil de préparation automatique (100) d'une couche de cellules biologiques 30 selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce que les moyens de contrôle de présence de la goutte de sang comprennent un émetteur et un récepteur de lumière. 3033715 18 12. Appareil de préparation automatique (100) d'une couche de cellules biologiques selon l'une des revendications 9 à 11, caractérisé en ce qu'il comprend une ouverture (106) pour permettre l'introduction du dispositif (10). 13. Appareil de préparation automatique (100) d'une couche de cellules biologiques 5 selon l'une des revendications 9 à 12, caractérisé en ce qu'il comprend des moyens de déplacement en translation selon une direction horizontale pour déplacer l'unité de support (102) entre une position de mise en place ou d'enlèvement de la lame (1) et une position dans laquelle la lame est placée dans l'unité de préparation (110). 14. Procédé de préparation d'une couche de cellules biologiques, notamment de 10 cellules sanguines, mettant en oeuvre un appareil de préparation (100) défini selon les revendications 9 à 13, caractérisé en ce que ledit procédé comprend les étapes suivantes : - mettre en place une lame (1) sur l'unité de support (102), ladite lame comprenant une surface de dépose (4) orientée vers le haut ; - fixer un récipient contenant un liquide biologique (2) sur le support de fixation (104) avec le 15 bouchon (6) du récipient orienté vers le haut ; - mettre en place le dispositif de préparation (10) dans l'ouverture (106) avec la pointe d'entrée (12) orientée vers le bouchon (6); - déplacer ledit récipient (2) verticalement en direction du dispositif de préparation (10) afin d'introduire la pointe d'entrée (12) dans le récipient (2) ; 20 - placer ledit récipient (2) et ledit dispositif de préparation (10) afin que la pointe de dépôt (15) soit orientée vers la surface de dépose (4) de la lame ; - déplacer ledit récipient (2) verticalement en direction de la surface de dépose (4) de la lame (1) de manière à mettre en contact les moyens d'appui (23) contre la surface de dépose (4) et à appliquer le bouchon (6) contre la surface d'appui (13), comprimant ainsi 25 l'intérieur du récipient (2) afin de faire sortir une goutte (3) de liquide biologique au niveau de la pointe de dépôt (15), ladite goutte étant séparée de la pointe de dépôt (15) sous l'effet de la tension superficielle et déposée sur la surface de dépose (4) ; - déplacer la lame selon une direction horizontale pour réaliser un déplacement relatif entre le moyen d'étalement (20) et la surface de dépose (4) afin d'étaler de manière contrôlée la 30 goutte de liquide biologique pour réaliser une couche fine de cellules biologiques. 15. Procédé de préparation d'une couche de cellules biologiques selon la revendication 14, caractérisé en ce que le procédé comprend une étape supplémentaire 3033715 19 visant à détecter la présence de la goutte de liquide biologique par les moyens de contrôle de présence avant de déplacer la lame pour étaler la goutte. 16. Procédé de préparation d'une couche de cellules biologiques selon la revendication 14 ou 15, caractérisé en ce que le procédé comprend une étape 5 supplémentaire visant à agiter le récipient (2) pour homogénéiser le liquide biologique avant de déposer la goutte (3) sur la surface de dépose (4) de la lame.