Brevet FR3033500A1 — publié le 20160916

DOMAINE TECHNIQUE AUQUEL SE RAPPORTE L'INVENTION La présente invention concerne le traitement de l'irritation des peaux sensibles, et une préparation adaptée à cet effet. ARRIERE-PLAN TECHNOLOGIQUE L'irritation des peaux sensibles est un problème courant qui affecte principalement la peau du visage, mais peut également affecter d'autres parties du corps. Les personnes qui ont la peau sensible se plaignent souvent d'une sensation d'inconfort qui se caractérise par des sensations désagréables de chaud, de picotements ou de démangeaisons, souvent accompagnées de rougeurs. Cela résulte d'une tolérance réduite aux stimuli physiques ou chimiques normalement tolérés, tels que les facteurs environnementaux (variations de température, soleil, pollution), les facteurs personnels (émotion, cycle menstruel) et l'application de certains produits topiques. Lorsque le seuil de tolérance critique est dépassé, la peau exposée à divers stimuli déclenche, par le biais de son système immuno-cutané, une réponse biologique et non spécifique. Cette réponse ou réaction inflammatoire est un processus complexe et critique : elle doit être à la fois efficace pour permettre à la peau de résister à l'agression externe et maintenir son intégrité, et mesurée pour éviter l'apparition de lésions tissulaires. Cet équilibre est assuré par l'action des médiateurs pro- et anti-inflammatoires. Lorsque le seuil de tolérance critique est dépassé, les kératinocytes, équipés de nocicepteur, perçoivent un stress. Les kératinocytes activés amorcent localement la réponse inflammatoire via la libération initiale de médiateurs comme les interleukines-la (IL1-a), et de neurokinines comme le facteur de croissance nerveuse (NGF, sigle anglais pour « Nerve Growth Factor »). La libération d'IL1a induit une réaction cellulaire immédiate, l'activation des enzymes de formation des médiateurs lipidiques de l'inflammation, les leucotriènes et les prostaglandines. Ces médiateurs provoquent une série d'effets autocrines et paracrines par l'intermédiaire de récepteurs spécifiques. Ils contribuent à la vasodilatation, à l'adhésion et à la migration cellulaire. En plus de cette réaction inflammatoire, il y a un mécanisme neurogène de sensibilité cutanée impliquant les nerfs sensitifs de l'épiderme. La libération de 3033500 2 NGF par les kératinocytes va provoquer une surexpression du récepteur neuronal TRPV1 (sigle anglais pour « Transient Receptor Potential Vanilloide 1 ») qui est un récepteur de la douleur. Ainsi, pour être efficace, un traitement cutané doit à la fois limiter 5 l'amplification de l'inflammation par l'inhibition de l'IL1-a et aussi agir sur l'inflammation neurogène en limitant la production de NGF. OBJET DE L'INVENTION On a découvert que l'on peut y parvenir grâce à l'application d'une composition comprenant un extrait particulier. Il est donc fourni un procédé de 10 traitement des peaux sensibles irritées, comprenant l'application, sur la zone de peau sensible, d'une composition comprenant un extrait de Rhodosorus marinus. Le Rhodosorus marinus est une algue marine découverte au départ dans les lies Canaries, mais qui a été trouvée ailleurs par la suite. Il a été décrit pour la première fois par Geitler dans « Ein grünes Filarplasmodium und andere neue 15 Protisten » (Archiv für Protistenkunde 69 (1930) : 614-636). On le trouve facilement dans le commerce. Un extrait approprié est préparé de la manière suivante : - Hydrolyse acide de la biomasse de Rhodosorus marinus pendant 2 heures à 80°C et à pH 2 par addition d'acide sulfurique. 20 - Neutralisation à pH = 7 avec de l'hydroxyde de sodium et refroidissement à 20°C. - Centrifugation pendant une période comprise entre 5 et 30 minutes pour séparer l'extrait de biomasse des microalgues. La centrifugation peut être réalisée à une vitesse de 2000-10000g, 4000-6000g étant un intervalle type. 25 - Filtration du surnageant sur une plaque de cellulose présentant des pores de diamètre compris entre 0,3 et 1,0 pm. - Décoloration du produit par passage sur des plaques de charbon actif. - Concentration du produit à environ 3% de matière sèche. - Ajout de 20% de propanediol afin de stabiliser le produit. 30 L'extrait ainsi obtenu est alors prêt à être utilisé dans une composition. L'extrait peut être incorporé dans n'importe quelle forme de composition adaptée à l'application sur la peau. Parmi les exemples typiques, on peut citer les lotions, les crèmes, les bâtonnets, les patchs et les vaporisations. L'extrait peut être incorporé dans une proportion souhaitée quelconque pour obtenir l'effet 3033500 3 désiré. Celle-ci variera naturellement en fonction de la nature du produit, mais une proportion type est voisine de 0,5-10% en poids de la composition, préférentiellement de 1-5%, plus préférentiellement encore de 1-3%. Les compositions de cette invention peuvent comporter n'importe quels 5 ingrédients habituels, normalement présents dans de telles compositions, en des quantités admises dans la technique. Parmi les exemples, on peut citer mais sans s'y limiter, les pigments, les colorants et les matières colorantes, les charges, les épaississants et les modificateurs de rhéologie, les tensioactifs et les émulsifiants, les conservateurs, les solvants et les agents solubilisants. 10 De plus, les compositions peuvent comporter d'autres substances connues pour avoir un effet apaisant sur la peau. Celles-ci englobent, mais sans s'y limiter, l'allantoïne, le bisabolol, l'extrait d'hamamélis, l'extrait de centella asiatica, l'extrait de glycyrrhiza glabra et l'extrait de boswellia serrata. On peut les utiliser dans des proportions inférieures à celles normalement utilisées en 15 l'absence de l'extrait de Rhodosorus marinus décrit ci-dessus, mais le choix d'une proportion appropriée pour chaque application entre dans les compétences de routine dans ce domaine. Une telle proportion variera naturellement en fonction de l'effet désiré et de l'utilisation spécifique, mais une proportion type, non limitative, oscille entre 0,1 et 10% en poids. 20 Les compositions comprenant l'extrait ont un effet apaisant et calmant sur une peau enflammée et sensible, entraînant un soulagement de la sensation d'inconfort et une cicatrisation rapide. EXEMPLES DE REALISATION L'invention est décrite plus en détails en se référant aux exemples 25 suivants, qui illustrent des modes de réalisation particuliers et qui ne sauraient en aucun cas être limitatifs. L'extrait de Rhodosorus marinus a été préparé selon le procédé décrit ci- dessus. Exemple 1 : Effet de l'extrait de Rhodosorus marinus sur les gènes 30 inflammatoires L'étude a nécessité la mesure des effets de l'extrait de Rhodosorus marinus sur l'expression des gènes inflammatoires impliqués dans la biologie épidermique par qRT-PCR sur des cartes microfluidiques TaqMan. 3033500 4 3% d'extrait de Rhodosorus mahnus ont été appliqués sur un milieu de culture de kératinocytes NHEK pendant 24h. De la vitamine D3 placée dans des conditions hypercalciques (concentration finale de CaCl2 0,8mM) a été utilisée comme molécule de référence. 5 L'extraction des ARN totaux a été réalisée au moyen du RNeasy Mini Kit après 24h de traitement. La concentration en ARN total a été déterminée par mesure spectrophotométrique. La qualité et l'intégrité des ARN ont été ensuite vérifiées par électrophorèse capillaire. 10 On a procédé aux transcriptions inverses (RT) des ARN. Les ADN complémentaires synthétisés à la fin ont fait l'objet de (40) cycles de PCR quantitatives (qPCR) selon le profil suivant : - 95°C pendant 10 secondes (dénaturation de l'ADNc) - 60°C pendant 1 minute (hybridation des amorces sélectionnées sur 15 les brins d'élongation d'ADNc des amplicons*) Le nombre d'amplicons synthétisés a été calculé en temps réel (à chaque cycle) en mesurant l'absorption à 260 nm. Les résultats sont présentés dans le Tableau 1. Tableau 1 20 L'analyse de l'expression génique des kératinocytes indiquait une surexpression importante des gènes impliqués dans le processus inflammatoire : IL-la, NRG, NGF R. Exemple 2: Effet de l'extrait de Rhodosorus marinus sur la synthèse d'IL-la (test in vitro) 25 L'étude a été réalisée sur une monocouche de kératinocytes humains (NHEK) dans un milieu EpilifeTM. Un état inflammatoire des NHEK a été induit par Gène Nombre de fois Valeur de p IL-la : Interleukine 1 alpha -11,5 X >0,01 NGF: Facteur de croissance nerveuse bêta - 4,2 X >0,01 NGF R: membre 16 de la superfamille des récepteurs du facteur de nécrose des tumeurs -3,2 X >0,05 3033500 5 traitement des cultures avec de l'acétate myristate de phorbol (PMA) combiné avec un ionophore de calcium pendant 48h, précédées de 2h de prétraitement avec les formules contenant 1% et 3% d'extrait de Rhodosorus marinus ou de la dexaméthasone comme molécule anti-inflammatoire de référence. A la fin de 5 l'incubation, les surnageants ont été ensuite utilisés pour l'analyse de la sécrétion d'IL-1 a par dosage ELISA. Les résultats (Tableau 2) sont exprimés en pourcentage par rapport à la condition induite par le traitement au PMA combiné avec l'ionophore de calcium. Tableau 2 10 On observe une augmentation significative de la sécrétion d'IL1-a dans les conditions d'inflammation (PMA). Le traitement avec un anti-inflammatoire de référence, la dexaméthasone, réduit significativement cette augmentation. L'extrait de Rhodosorus marinus à 1% et 3% inhibe les effets du PMA sur la production d'IL1-a de manière tout à fait similaire à la Dexaméthasone. 15 Exemple 3: Effet de l'extrait de Rhodosorus marinus sur la production de NGF (test in vitro) Des kératinocytes ont été inoculés sur une plaque à 12 puits. Après 72 heures de culture, les cellules ont été pré-stimulées avec de la dexaméthasone 10pM, ou de l'extrait de Rhodosorus marinus à 1% et 3% pendant 2 heures à 20 37°C. Les cellules ont été ensuite stimulées avec du PMA à 10 ng/ml pendant 48 heures à 37°C. A la fin de l'incubation, les surnageants ont été ensuite utilisés pour l'analyse de la sécrétion de NGF par dosage ELISA. Les résultats (Tableau 3) sont exprimés en pourcentage par rapport à la Condition Valeur de p par rapport au témoin Témoin 65 PMA 100 PMA + Dexaméthasone 65 >0,001 PMA + 1% d'extrait de Rhodosorus 69 >0,01 marinus PMA + 3% d'extrait de Rhodosorus 61 >0,001 marinus 3033500 6 condition induite par le traitement au PMA combiné avec l'ionophore de calcium. Tableau 3 On a observé une augmentation significative de la sécrétion de NGF dans les conditions d'inflammation (PMA). Le traitement avec un anti- 5 inflammatoire de référence, la dexaméthasone, réduisait significativement cette augmentation. L'extrait de Rhodosorus marinus à 1% et 3% inhibe les effets du PMA sur la production de NGF de manière tout à fait similaire à la Dexaméthasone. Exemple 4: Effet de l'extrait de Rhodosorus marinus sur 10 l'expression de TRPV1 (test in vitro) Des astrocytes humains normaux (NHA) ont été inoculés et cultivés pendant 48h. Les cellules ont été ensuite prétraitées pendant 2h à 37°C avec de la Dexaméthasone (10 pM) utilisée comme anti-inflammatoire de référence ou de l'extrait de Rhodosorus marinus à 1% et 3%. Les astrocytes ont été ensuite 15 stimulés avec du PMA (Acétate Myristate de Phorbol), une molécule pro-inflammatoire, pendant 24h à 37°C. On a ensuite procédé au marquage du récepteur TRPV1 avec un anticorps anti-TRPV1, suivi d'un anticorps secondaire marqué. Les marquages ont été analysés au microscope à fluorescence et quantifiés par analyse d'images. 20 Les résultats (Tableau 4) sont exprimés en pourcentage par rapport à la condition témoin. Tableau 4 Condition % Valeur de p par rapport au témoin Témoin 35 PMA 100 PMA + Dexaméthasone 29 >0,01 PMA + 1`)/0 d'extrait de Rhodosorus 38 >0,05 marinus PMA + 3% d'extrait de Rhodosorus 29 >0,01 marinus 3033500 7 Le traitement au PMA a provoqué une augmentation significative de l'expression de TRPV1 dans les astrocytes humains normaux. Cette augmentation est nettement réduite par l'addition de dexaméthasone qui possède des propriétés anti-inflammatoires connues. 5 Dans des conditions inflammatoires, 1% et 3% d'extrait de Rhodosorus marinus réduisaient significativement l'expression de TRPV1 après 24h d'incubation de manière tout à fait similaire à la Dexaméthasone, la molécule anti-inflammatoire de référence. En réduisant l'expression de TRPV1, l'extrait de Rhodosorus marinus 10 réduit la sensibilité cutanée. Exemple 5: Effet de l'extrait de Rhodosorus marinus sur la neurosensibilité de la peau (test in vitro) Ce test a été réalisé sur un panel de 46 individus, hommes et femmes de plus de 18 ans, ayant une peau sensible ou réactive. Ces sujets ont fait l'objet, le 15 Jour 0, d'un premier test avec de la capsaïcine, l'ingrédient actif du piment rouge, qui est très irritante pour la peau. Seuls les sujets qui réagissent à de très faibles quantités de capsaïcine ont été sélectionnés (3,16x10-5%, 1,10x10-4%, 3,16x10-4%) pour l'étude. Dans un premier temps, les plis nasogéniens du visage des panélistes 20 ont été lavés 5 fois à l'aide de coton hydrophile trempé dans une solution à base d'eau/alcool à 10%. Trois minutes plus tard, on a répété l'opération 10 fois sur la même zone en utilisant un coton-tige. Au bout de 3 minutes supplémentaires, une solution de capsaïcine à 3,16x10-5% a été appliquée sur un côté du visage, à Condition % Valeur de p par rapport au témoin Témoin 100 PMA 155 PMA + Dexaméthasone 94 >0,01 PMA + 1% d'extrait de Rhodosorus 109 >0,05 marinus PMA + 3% d'extrait de Rhodosorus 103 >0,001 marinus 3033500 8 nouveau dans le pli, en répétant l'opération 10 fois. Au cours des 3 minutes qui suivent, chaque panéliste a analysé les sensations induites par l'application de capsaïcine sur l'échelle de 0 à 5 points ci-dessous : 0 : Aucune sensation 5 1 : Très peu perceptible 2: Légèrement perceptible 3: Perceptible 4: Très perceptible 5: Douloureuse 10 Si aucune sensation n'a été ressentie (0), la totalité du test a été répétée avec une concentration plus élevée de capsaïcine : -1,0x10-4, -3,16x10-4... Pendant 28 jours, le panel a appliqué deux fois par jour une crème contenant 3% d'extrait de Rhodosorus marinus ou une crème placebo sur le pli nasogénien prédéterminé aléatoirement. L'autre côté servait de contrôle. 15 Les résultats sont présentés dans le Tableau 5. Tableau 5 Ingrédients Crème placebo (%) Crème au Rhodosorus marinus (°/0) Xyliance 4,00 4,00 Diméthicone 0,3 0,3 MiglyolTM 812 N* 4,5 4,5 PhenonipTm XB** 0,4 0,4 Eau QSP QSP Extrait de Rhodosorus 0 3 marinus Parfum 0,1 0,1 *triglycéride caprique **agent antibactérien Afin d'évaluer l'efficacité de l'extrait de Rhodosorus marinus pour la 20 désensibilisation de la peau, un test à la capsaïcine (tel que décrit ci-dessus) a été répété entre le Jour 14 et le Jour 28. Les sensations provoquées par cet ingrédient irritant ont été ensuite 3033500 9 mesurées par chaque panéliste. Tous les résultats ont fait l'objet d'une analyse statistique (test t). Les résultats sont présentés dans le Tableau 6. Tableau 6 % d'augmentation du seuil de capsaïcine par rapport au Jour 0 Crème placebo Crème au Rhodosorus Valeur de par rapport au placebo J14 39 52 ns J28 54 89 >0,08 5 3% d'extrait de Rhodosorus marinus dans une crème a augmenté significativement le seuil de sensibilité de la peau à la capsaïcine. REVENDICATIONS1. Procédé de traitement des peaux sensibles irritées, comprenant l'application sur la zone de peau sensible d'une composition comprenant un extrait de Rhodosorus marinus. 2. Procédé de traitement selon la revendication 1, selon lequel l'extrait de Rhodosorus marinus est obtenu par le procédé suivant : - Hydrolyse acide d'une biomasse de Rhodosorus marinus pendant 2 heures à 80°C et à pH 2 par addition d'acide sulfurique ; - Neutralisation à pH = 7 avec de l'hydroxyde de sodium et refroidissement à 20°C; - Centrifugation pendant une période comprise entre 5 et 30 minutes pour séparer l'extrait de biomasse des microalgues ; - Filtration du surnageant sur une plaque de cellulose présentant des pores de diamètre compris entre 0,3 et 1,0 pm ; - Décoloration du produit par passage sur des plaques de charbon actif ; - Concentration du produit à environ 3% de matière sèche ; et - Ajout de 20% de propanediol afin de stabiliser le produit. 3. Procédé de traitement selon la revendication 1, selon lequel l'extrait est incorporé dans une composition adaptée à l'application sur la peau, de préférence, choisie parmi une lotion, une crème, un patch ou une vaporisation. 4. Procédé de traitement selon la revendication 3, selon lequel l'extrait est présent dans la composition à raison de 0,5-10%, préférentiellement de 1-5%, plus préférentiellement encore de 1-3%, en poids de la composition. 5. Procédé de traitement selon la revendication 3, selon lequel la composition contient en outre des substances connues pour avoir un effet apaisant sur la peau. 6. Procédé de traitement selon la revendication 5, selon lequel les substances supplémentaires sont choisies parmi l'allantoïne, le bisabolol, l'extrait d'hamamélis, l'extrait de centella asiatica, l'extrait de glycyrrhiza glabra et l'extrait de boswellia serata. 7. Procédé de traitement selon la revendication 5 ou la revendication 6, selon lequel la proportion des substances supplémentaires est comprise entre 0,1 3033500 11 et 10% en poids de la composition. 8. Procédé de préparation d'un extrait de Rhodosorus marinus utilisable dans le traitement des peaux sensibles irritées, comprenant les étapes de : - Hydrolyse acide d'une biomasse de Rhodosorus marinus pendant 2 5 heures à 80°C et à pH 2 par addition d'acide sulfurique ; - Neutralisation à pH = 7 avec de l'hydroxyde de sodium et refroidissement à 20°C; - Centrifugation pendant une période comprise entre 5 et 30 minutes pour séparer l'extrait de biomasse des microalgues ; 10 - Filtration du surnageant sur une plaque de cellulose présentant des pores de diamètre compris entre 0,3 et 1,0 pm ; - Décoloration du produit par passage sur des plaques de charbon actif ; - Concentration du produit à environ 3% de matière sèche ; et - Ajout de 20% de propanediol afin de stabiliser le produit. 15