Brevet FR3034196A1 — publié le 20160930

Procédé d'analyse de particules Description DOMAINE TECHNIQUE L'invention se situe dans le domaine du comptage et de l'identification de particules présentes dans un liquide et en particulier un fluide corporel, par exemple du sang. ART ANTERIEUR Les liquides corporels, en particulier le sang, peuvent comprendre des particules, par exemple des cellules, dont il est utile de connaître le nombre et le type. Dans le sang, par exemple, les analyses de type numération et formule sanguine, ou hémogrammes, sont des examens couramment pratiqués en laboratoire d'analyse. Ce type d'analyse permet de déterminer le nombre et d'identifier les principaux constituants du sang, en particulier des cellules de la lignée des globules rouges, des globules blancs, ou des plaquettes. Ces examens sont couramment pratiqués, à l'aide d'automates performants, mais on recherche des méthodes plus simples, moins onéreuses, permettant d'obtenir des performances comparables. Un des axes de recherche est l'utilisation de méthodes optiques simples, telle l'imagerie sans lentille. L'observation de particules biologiques par imagerie sans lentille connaît un certain développement depuis la fin des années 2000. Cette technique consiste à intercaler un échantillon entre une source de lumière et un photodétecteur matriciel. L'image recueillie sur le photodétecteur est formée par des interférences entre l'onde incidente, produite par la source de lumière et l'onde diffractée par les particules composant l'échantillon. Ainsi, pour chaque particule, on peut enregistrer au niveau du capteur un motif de diffraction, ou figure de diffraction, qui lui est propre. Appliquée à des échantillons biologiques, cette technique a été décrite dans le document W02008090330. Il est alors possible d'effectuer une analyse simple de chaque particule, en comparant la figure de diffraction qu'elle engendre avec des figures de diffraction préalablement établies, correspondant à des particules connues. Mais cette méthode peut trouver des limites lorsque la concentration des particules augmente. En effet, le comptage et l'identification de particules sur la seule base des figures de diffraction détectées par le photodétecteur montre une certaine limite lorsque la concentration de 3034196 2 particules dans l'échantillon augmente. En particulier, lorsque l'échantillon est du sang, et que les particules sont des globules rouges, au-delà de 100000 particules par pl, leur dénombrement n'est plus fiable, comme cela a été reporté dans la publication Seo Sungjyu, « High-throughput lensfree blood analysis on a chip », Anal Chem, 2010 June 1. 5 II est alors possible d'appliquer des traitements mathématiques dits de reconstruction holographique numérique afin d'établir une image, dite image complexe, de chaque particule présente dans l'échantillon. Cette méthode consiste à retro-propager l'onde lumineuse dans le plan objet, dans lequel sont situées les particules, ce dernier étant placé à une distance connue de l'imageur. La publication citée ci-dessus montre qu'une telle reconstruction holographique 10 permet d'effectuer un comptage de globules rouges, présents en concentration élevée dans un échantillon. Cette publication montre que, sur l'image complexe reconstruite, les globules blancs, ayant subi un marquage préalable, ont une signature différente de celle des globules rouges. 15 On recherche un procédé d'identification de particules, et en particulier de cellules sanguines, pouvant s'appliquer à des échantillons dans lesquels la concentration en particules est élevée. Le procédé doit par ailleurs présenter un champ d'observation étendu, et doit être simple à mettre en oeuvre, en évitant notamment un marquage préalable de particules. Par ailleurs, le procédé doit permettre de discriminer de façon fiable les particules susceptibles de se trouver 20 dans un fluide corporel, en particulier les cellules des lignées des globules rouges, des globules blancs et des plaquettes. Par ailleurs, on recherche une méthode ne nécessitant pas une connaissance précise de la distance entre les particules et le photodétecteur. 25 EXPOSE DE L'INVENTION L'invention répond à ce problème, en proposant un procédé pour identifier une particule présente dans un échantillon, par exemple un échantillon d'un liquide biologique, tel du sang, le procédé comportant les étapes suivantes : 30 illumination dudit échantillon à l'aide d'une source de lumière, la source de lumière produisant une onde lumineuse incidente se propageant vers l'échantillon selon un axe de propagation, 3034196 3 acquisition, à l'aide d'un photodétecteur matriciel, d'une image de l'échantillon, l'échantillon étant disposé entre ladite source de lumière et ledit photodétecteur, de telle sorte que le photodétecteur matriciel est exposé à une onde lumineuse comprenant des interférences entre l'onde lumineuse incidente et une onde de 5 diffraction produite par chaque particule, le procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend également les étapes suivantes : - détermination d'une position de ladite particule dans un plan parallèle à un plan selon lequel s'étend le photodétecteur matriciel, application d'un algorithme de reconstruction numérique à ladite image acquise, de 10 façon à estimer au moins une grandeur caractéristique de ladite onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur matriciel, à une pluralité de distances de reconstruction de ce dernier, détermination de l'évolution de ladite grandeur caractéristique en fonction de ladite distance de reconstruction, selon un axe parallèle audit axe de propagation et passant 15 par ladite position, - identification de la particule en fonction de ladite évolution. La grandeur caractéristique peut être obtenue en estimant, à chaque distance de reconstruction une expression complexe de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur matriciel. La grandeur caractéristique peut être déterminée à partir du module de ladite expression 20 complexe, auquel cas elle est représentative de l'amplitude de ladite onde lumineuse à laquelle est exposé le détecteur. La grandeur caractéristique peut être déterminée à partir de l'argument de ladite expression complexe, auquel cas elle est représentative de la phase de ladite onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur matriciel. 25 L'identification peut être élaborée en comparant l'évolution de la dite grandeur caractéristique à des profils types déterminés au cours d'une phase d'apprentissage. La position de chaque particule, dans un plan parallèle au plan du photodétecteur matriciel, peut être déterminée à l'aide de l'image acquise par le photodétecteur ou à l'aide de l'expression complexe de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur. 3034196 4 La source de lumière est de préférence une source spatialement cohérente, et par exemple une diode électroluminescente, auquel cas un filtre spatial est de préférence disposé entre la source de lumière et l'échantillon. La source de lumière peut être temporellement cohérente, en étant par exemple une diode laser. 5 Le photodétecteur matriciel comporte une matrice de pixels, aptes à collecter l'onde à laquelle est exposé le photodétecteur. La distance entre les pixels et l'échantillon peut varier entre 50 um et 2 cm, et de préference entre 100 um et 5 mm. De préférence l'échantillon n'est pas disposé au contact direct des pixels du photodétecteur. De préférence, aucune optique de grossissement n'est disposée entre l'échantillon et le 10 photodétecteur matriciel. L'échantillon peut notamment comporter des cellules sanguines. Dans ce cas, les particules peuvent être identifiées parmi les lignées cellulaires des globules blancs, des globules rouges ou plaquettes. 15 Un autre objet de l'invention est un dispositif pour identifier une particule, la dite particule étant contenue dans un échantillon, le dispositif comprenant : une source de lumière agencée pour produire une onde lumineuse incidente, selon un axe de propagation, en direction dudit échantillon, un support, pour maintenir l'échantillon entre ladite source de lumière et un 20 photodétecteur matriciel, le photodétecteur matriciel, agencé pour acquérir une image de l'échantillon, le photodétecteur matriciel étant apte à être exposé à une onde lumineuse, résultant de l'interférence entre ladite onde lumineuse incidente et une onde de diffraction formée par ladite particule, 25 caractérisé en ce que le dispositif comporte un processeur, de type calculateur électronique ou microprocesseur, configuré pour mettre en oeuvre les opérations suivantes : - détermination d'une position de ladite particule dans un plan parallèle au plan du photodétecteur matriciel, - application d'un algorithme de reconstruction numérique à ladite image acquise, de 30 façon à estimer au moins une grandeur caractéristique de ladite onde lumineuse à 3034196 5 laquelle est exposé le photodétecteur matriciel, à une pluralité de distances de reconstruction de ce dernier, détermination de l'évolution de ladite grandeur caractéristique en fonction de ladite distance de reconstruction, selon un axe parallèle audit axe de propagation et passant 5 par ladite position, - identification de la particule en fonction de ladite évolution. De préférence, le dispositif ne comporte pas d'optique de grossissement entre le photodétecteur matriciel et l'échantillon analysé. Le processeur peut comporter ou être relié à une mémoire programmable, comprenant une 10 séquence d'instructions permettant la mise en oeuvre des étapes précédemment décrites. Il peut en particulier être apte à : déterminer, à chaque distance de reconstruction, l'expression complexe du rayonnement optique auquel est exposé le détecteur, - estimer la dite grandeur caractéristique, à chaque distance de reconstruction, en 15 déterminant le module ou l'argument de ladite amplitude complexe. FIGURES La figure 1 représente le dispositif selon un mode de réalisation de l'invention. La figure 2A représente une image acquise par le photodétecteur matriciel. 20 La figure 2B représente le profil d'une grandeur caractéristique, dite amplitude complémentaire, de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur, en fonction de la distance par rapport au photodétecteur, selon un premier exemple, pour différents types de particules. La figure 3A représente le profil d'une grandeur caractéristique, dite amplitude complémentaire, de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur, en fonction de la distance par 25 rapport au photodétecteur, pour différents globules blancs, selon ce premier exemple. La figure 3B représente le profil d'une grandeur caractéristique, dite amplitude complémentaire, de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur, en fonction de la distance par rapport au photodétecteur, pour différents globules rouges, selon ce premier exemple. La figure 4A représente une région d'intérêt de l'image acquise par le photodétecteur, centrée 30 sur un agrégat de plaquettes, selon ce premier exemple. 3034196 6 La figure 4B représente le profil d'une grandeur caractéristique, dite amplitude complémentaire, de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur, pour différentes plaquettes faisant partie de l'agrégat représenté sur la figure 4A. La figure 5A représente le profil d'une grandeur caractéristique, dite amplitude complémentaire, 5 de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur, en fonction de la distance par rapport au photodétecteur, pour différents types de particules, selon un deuxième exemple. La figure 5B représente le profil de la phase de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur, en fonction de la distance z par rapport au photodétecteur, pour différents types de particules, selon un deuxième exemple. 10 La figure 6A représente le profil d'une grandeur caractéristique, dite amplitude complémentaire, de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur, en fonction de la distance par rapport au photodétecteur, pour différents types de particules, selon un troisième exemple. La figure 6B représente le profil de la phase de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur, en fonction de la distance par rapport au photodétecteur, pour différents types 15 de particules, selon un troisième exemple. Les figures 7A, 7B et 7C représentent respectivement le profil d'une grandeur composite caractéristique de l'onde lumineuse à laquelle est exposé le photodétecteur, en fonction de la distance, selon les premier, deuxième et troisième exemples. 20 EXPOSE DE MODES DE REALISATION PARTICULIERS La figure 1 représente un exemple de dispositif objet de l'invention. Une source de lumière 11 est apte à produire une onde lumineuse 12, dite onde lumineuse incidente, en direction d'un échantillon 14, selon un axe de propagation Z. L'échantillon 14 comporte un milieu 10, par exemple un liquide biologique, comportant des 25 particules 1, 2, 3, 4, 5,.., 9, que l'on souhaite identifier parmi des types de particules prédéterminés. Une particule peut être une cellule. En particulier, lorsque le milieu 10 est du sang, ou une solution comportant du sang, une particule peut être un globule rouge, un globule blanc ou une plaquette. 30 Une particule peut également être une microbille, organique ou inorganique, par exemple une microbille métallique, une microbille de polymère ou de verre, ce type de microbille étant 3034196 7 couramment mis en oeuvre dans la réalisation de protocoles biologiques. Une particule peut également être une gouttelette, par exemple une gouttelette lipidique, baignant dans le milieu 10. D'une façon générale, une particule a une taille avantageusement inférieure à 1 mm, voire inférieure à 500 um, et de préférence une taille comprise entre 0.5 um et 500 um. Ainsi, le terme 5 particule désigne à la fois des particules endogènes, initialement présentes dans l'échantillon examiné, et des particules exogènes, ajoutées à cet échantillon avant l'analyse. Le milieu 10 est le plus fréquemment un milieu liquide, et notamment un liquide corporel, mais il peut également d'agir d'une gélose, ou de l'air, ou le résidu sec d'un liquide. Le procédé objet de l'invention permet d'identifier chaque particule observée. Par identification, 10 on entend la classification de la particule dans une classe de particules prédéterminée. La distance 4 entre la source de lumière et l'échantillon est de préférence supérieure à 1 cm. Elle est de préférence comprise entre 2 et 30 cm. De préférence, la source de lumière, vue par l'échantillon, est considérée comme ponctuelle. Cela signifie que son diamètre (ou sa diagonale) est préférentiellement inférieure au dixième, mieux au centième de la distance entre 15 l'échantillon et la source de lumière. Ainsi, la lumière parvient à l'échantillon sous la forme d'ondes planes, ou pouvant être considérées comme telles. La source de lumière 11 peut être ponctuelle, ou être associée à un diaphragme, ou filtre spatial, non représenté sur la figure 1, de façon à apparaître ponctuelle. L'ouverture du diaphragme est typiquement comprise entre 5 um et 1mm, de préférence entre 50 um et 500 um. 20 Le diaphragme peut être remplacé par une fibre optique, dont une première extrémité est placée face à une source lumineuse, et dont une deuxième extrémité est placée face à l'échantillon. Dans ce cas, ladite deuxième extrémité peut être assimilée à une source de lumière ponctuelle 11. L'échantillon 14 est délimité par une enceinte, comportant un fond 15 et un couvercle 13. Les 25 parois latérales de l'enceinte ne sont pas représentées. Dans l'exemple considéré, l'enceinte est une chambre fluidique Neubauer C-chip. La distance entre le fond 15 et le couvercle 13 est de 100 um. D'une façon générale, l'épaisseur de l'enceinte, selon l'axe de propagation Z, est inférieure à quelques cm, par exemple inférieure à 1 cm, voire inférieure à 1 mm, par exemple comprise entre 50 um et 500 um. 30 La source de lumière 11 peut être temporellement cohérente mais cela n'est pas nécessaire. 3034196 8 Dans ce premier exemple, la source de lumière est une diode Laser émettant à la longueur d'onde de 405 nm. Elle est située à une distance de 15 cm de l'échantillon. L'échantillon 14 est disposé entre la source de lumière 11 et un photodétecteur matriciel 16. Ce dernier s'étend de préférence parallèlement, ou sensiblement parallèlement au fond 15 de 5 l'enceinte délimitant l'échantillon. Le terme sensiblement parallèlement signifie que les deux éléments peuvent ne pas être rigoureusement parallèles, une tolérance angulaire de quelques degrés, inférieure à 10° étant admise. De préférence, la source de lumière est de faible largeur spectrale, par exemple inférieure à 100 10 nm, voire 20 nm et encore de préférence inférieure à 5 nm. Le terme largeur spectrale désigne la largeur à mi-hauteur du pic d'émission de la source de lumière. Le photodétecteur 16 peut être un photodétecteur matriciel, comportant une matrice de pixels, de type CCD ou un CMOS. Les CMOS sont les photodétecteurs préférés car la taille des pixels est plus faible, ce qui permet d'acquérir des images dont la résolution spatiale est plus favorable. 15 Dans cet exemple, le détecteur est un capteur 12 bits APTINA, référence MT9P031. Il s'agit d'un capteur CMOS RGB, dont le pas inter-pixels est de 2,2 um. La surface utile du photodétecteur est de 5,7 x 4,3 mm2. Le photodétecteur s'étend selon un plan de détection P, de préférence perpendiculaire à l'axe de propagation Z de l'onde lumineuse incidente 12. 20 De préférence, le photodétecteur comprend une matrice de pixels, au-dessus de laquelle est disposée une fenêtre de protection transparente. La distance entre la matrice de pixels et la fenêtre de protection est généralement comprise entre quelques dizaines de un à 150 ou 200 um. Les photodétecteurs dont le pas inter pixel est inférieur à 3 un sont préférés, afin d'améliorer 25 la résolution spatiale de l'image. La distance d entre les particules 1,2,...9 et la matrice de pixels du photodétecteur 16 est, dans cet exemple, égale à 1,5 mm. Mais elle peut fluctuer selon l'épaisseur de la chambre fluidique utilisée. D'une manière générale, et cela quel que soit le mode de réalisation, la distance d entre une 30 particule et les pixels du photodétecteur est préférentiellement comprise entre 50 um et 2 cm, de préférence comprise entre 100 um et 2 mm. 3034196 9 On remarque l'absence d'optique de grossissement entre le photodétecteur matriciel 16 et l'échantillon 14. Cela n'empêche pas la présence éventuelle de microlentilles de focalisation au niveau de chaque pixel du photodétecteur 16. Dans ce premier exemple, l'échantillon est du plasma enrichi en globules blancs, obtenu selon 5 un protocole usuel, après sédimentation des globules rouges en présence de Dextran (Sigma Aldrich référence D4876) 6% en solution Alsever, puis récupération du plasma riche globules blancs et en plaquettes. Le plasma obtenu est alors dilué dans un tampon PBS à pH physiologique (acronyme de l'anglais Phosphate Buffer Saline - Tampon Phosphate Salin). La déplétion des globules rouges n'est pas totale et le plasma enrichi obtenu comporte des globules 10 rouges résiduels. Les particules peuvent être classifiées parmi plusieurs types de particules, et notamment les globules rouges, les globules blancs ou les plaquettes. Les particules ne subissent aucun marquage préalable. La figure 2A représente une image obtenue par le photodétecteur 16. Cette image représente 15 une figure de diffraction globale, dans laquelle on distingue des figures de diffraction élémentaires, chaque figure de diffraction élémentaire étant respectivement associée aux particules. Chaque figure de diffraction élémentaire comprend une zone centrale en forme de disque, autour de laquelle s'étendent des anneaux concentriques, alternativement sombres et clairs. Une telle figure élémentaire permet la sélection d'une particule à identifier, ainsi que la 20 détermination des coordonnées (x,y) de ladite particule dans le plan de détection P. Ces coordonnées sont par exemple le centre de la figure de diffraction élémentaire correspondant à ladite particule. Chaque figure de diffraction élémentaire est formée par l'interférence entre l'onde lumineuse incidente 12 produite par la source 11, en amont de l'échantillon, et une onde résultant de la 25 diffraction de l'onde incidente par une particule. Ainsi, le photodétecteur 16 est exposé à une onde lumineuse 22 formée par la superposition : - de l'onde lumineuse 12 émis par la source 11, en amont de l'échantillon 14, - de l'onde lumineuse diffractée par chacune des particules ou autres éléments diffractants, présents dans l'échantillon 14. 30 Un processeur 20, par exemple un microprocesseur, reçoit les images du photodétecteur matriciel 16, et effectue une reconstruction de grandeurs caractéristiques de l'onde lumineuse 3034196 10 22 à laquelle est exposé le photodétecteur, le long de l'axe de propagation Z. La reconstruction est notamment réalisée entre le photodétecteur et l'échantillon observé. Le processeur 20 peut être apte à exécuter une séquence d'instructions stockées dans une mémoire, pour la mise en oeuvre des étapes du procédé d'identification. Le processeur peut- 5 être un microprocesseur, ou tout autre calculateur électronique apte à traiter les images fournies par le photodétecteur matriciel, pour executer une ou plusieurs étapes décrites dans cette description. L'image I représentée sur la figure 2A représente la distribution spatiale de l'intensité 1(x,y), de l'onde lumineuse 22, x et y désignant les coordonnées dans le plan du photodétecteur. 10 Selon les principes bien connus de la reconstruction holographique numérique, décrits dans la publication Ryle et al, « Digital in-line holography of biological specimens », Proc. Of SPIE Vol.6311 (2006), en effectuant un produit de convolution entre l'intensité 1(x,y) mesurée par le photodétecteur, et un opérateur de propagation h(x,y,z) , il est possible de reconstruire une expression complexe U(x,y,z) de l'onde lumineuse 22 en tout point de coordonnées (x,y,z) de 15 l'espace, et en particulier dans un plan situé à une distance 1z1 du photodétecteur. L'opérateur de propagation h(x,y,z) a pour fonction de décrire la propagation de la lumière entre le photodétecteur 16 et un point de coordonnées (x,y,z). Il est alors possible de déterminer l'amplitude u(x,y,z) et la phase cf:1 (x,y,z) de cette onde lumineuse à cette distance lzl, dite distance de reconstruction, avec : 20 - u(x,y,z)= abs [U(x,y,z)] , - (p(x,y,z) = arg [U(x,y,z)] Les opérateurs abs et arg désignent respectivement le module et l'argument. L'application de l'opérateur de propagation permet en particulier d'estimer l'expression complexe à une distance 1z1 du photodétecteur, en amont de ce dernier. On reconstruit alors 25 la valeur complexe de l'onde lumineuse 22 avant que cette dernière n'atteigne le détecteur. On parle alors de rétro-propagation. En attribuant la coordonnée z = 0 au plan de détection P, cette rétro-propagation est mise en oeuvre en appliquant un opérateur de propagation h(x,y,-1z1). Les termes en amont et en aval sont à comprendre selon le sens de propagation de l'onde incidente 12. 3034196 11 Si I(x,y) = I(x,y,z=0) correspond à l'intensité du signal mesuré par le photodétecteur, une relation entre l'intensité mesurée 1(x,y) et l'expression complexe de l'onde lumineuse U(x,y), au niveau du plan de détection P est donnée par : /(x, y) = I U(x, y)I 2. L'expression complexe de l'onde lumineuse (22), à une coordonnée (x,y,z) est donnée par 5 U(x, y, z) = ,1/(x, y) * h(x, y, z), le symbole * désignant un produit de convolution. avec : z 0 dans le demi-espace délimité par le plan de détection P et ne comprenant pas 10 l'échantillon 14. Dans le demi espace délimité par le plan de détection P et comprenant l'échantillon 14, l'expression complexe de l'onde lumineuse peut également s'écrire : U(x, y, z) = ,1/(x, y) * h(x, y, -1z1) De préférence un pré-traitement mathématique est préalablement appliqué à l'intensité 15 mesurée 1(x,y) avant la reconstruction holographique. Cela permet d'améliorer la qualité des résultats, notamment en réduisant les artéfacts lors de l'application de l'opérateur de propagation. Ainsi, on détermine une intensité f(x, y), dite intensité normalisée, telle que f(x, y) = (/ (x, y) - Average (I))/Average(I) 20 avec 1(x,y) = intensité mesurée par le photodétecteur à la coordonnée (x,y), Average (I) = moyenne de l'intensité mesurée dans une région d'intérêt de l'image I, incluant ladite coordonnée (x,y). Cette région d'intérêt peut correspondre à l'image entière formée par le photodétecteur. 25 Ce pré-traitement s'apparente à une normalisation de l'intensité mesurée par l'intensité de l'onde lumineuse incidente (12), cette dernière étant estimée par l'opérateur Average (I). Puis on détermine l'expression complexe de l'onde (22) à partir de l'intensité normalisée f(x, y) selon l'équation U(x, y, z) = /Î (x, y) * h(x, y, z) comme préalablement explicité. 3034196 12 La reconstruction numérique peut notamment reposer sur le modèle de diffraction de Fresnel. Dans cet exemple, l'opérateur de propagation est la fonction de Fresnel-Helmholtz, telle que : h(x, y, z) = 1 eJ27Âexp un- xAz ). jAz où X désigne la longueur d'onde. 2 ( -Xi)+("i2))dXidYi j2rc ff f- (- iuc y j expun- 5 Ainsi, U(x, y, z) = z e j Az où x' et y' désignent les coordonnées dans le plan du photodétecteur, x et y désignent les coordonnées dans le plan de reconstruction, ce dernier étant situé à une distance Izi du photodétecteur, 10 z désigne la coordonnée de l'image reconstruite selon l'axe de propagation Z de l'onde lumineuse incidente (12). A partir des valeurs de l'expression complexe U(x,y,z), il est possible d'extraire des grandeurs caractéristiques de l'onde lumineuse 22 résultant de la diffraction, par les particules (1,2..9), du de l'onde lumineuse incidente 12 émise par la source 11. Comme précédemment évoqué, on 15 peut évaluer l'amplitude u(x,y,z) ou la phase (p(x,y,z), mais il est également possible d'évaluer toute fonction de l'amplitude ou de la phase. On peut, par exemple, évaluer une grandeur caractéristique, dite amplitude complémentaire, ft(x, y, z) telle que : ft(x, y, z) = abs(1 - U(x,y,z)) 20 A partir de chaque expression complexe reconstruite U(x,y,z), il est possible de constituer : une image uz de l'amplitude de l'onde 22, selon un plan parallèle au plan du détecteur, à une distance I z I de ce dernier, avec uz(x,y) = abs [U(x,y,z)], une image (pz de la phase de l'onde 22, selon un plan parallèle au plan du détecteur, à une distance I z I de ce dernier, avec (1)z (x,y) = arg [U(x,y,z)], 25 une image ri; de l'amplitude complémentaire, telle que précédemment définie, de l'onde 22, selon un plan parallèle au plan du détecteur, à une distance I z I de ce dernier, avec ii;(x, y, z)= abs [1- U(x,y,z)]. Dans ce premier exemple, 3034196 13 - on reconstruit une image Ti; de l'amplitude complémentaire à une pluralité de coordonnées zi...zm, selon l'axe de propagation Z, M étant ici égal à 21, - à partir de chaque image1-77', , avec ISnSM , on extrait la valeur ft (xn,yn, zm), (xn,yn) représentant les coordonnées de la particule n dans un plan parallèle au plan du 5 photodétecteur 16, - on obtient différentes valeurs de ft (xn,yn,z), avec zn, REVENDICATIONS1. Procédé pour identifier une particule (1, 2,...9, 101...104) contenue dans un échantillon (14), le procédé comportant les étapes suivantes : illumination dudit échantillon à l'aide d'une source de lumière (11), la source de lumière produisant une onde lumineuse incidente (12) se propageant vers l'échantillon (14) selon un axe de propagation (Z), acquisition, à l'aide d'un photodétecteur matriciel (16), d'une image de l'échantillon, l'échantillon étant disposé entre ladite source de lumière et le photodétecteur matriciel, de telle sorte que le photodétecteur matriciel est exposé à une onde lumineuse (22) comprenant des interférences entre l'onde lumineuse incidente (12) et une onde de diffraction produite par chaque particule, le procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend également les étapes suivantes : détermination d'une position de ladite particule dans un plan parallèle (x,y) à un plan (P) selon lequel s'étend le photodétecteur matriciel (16), application d'un algorithme de reconstruction numérique à ladite image acquise, de façon à estimer au moins une grandeur caractéristique (u, ft, cp, k) de ladite onde lumineuse (22) à laquelle est exposé le photodétecteur matriciel (16), à une pluralité de distances (I z I) de reconstruction de ce dernier, détermination de l'évolution (u(z), il(z), (p(z), k(z)) de ladite grandeur caractéristique en fonction de ladite distance, selon un axe parallèle audit axe de propagation (Z) et passant par ladite position (x,y), - identification de la particule en fonction de ladite évolution. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel la dite grandeur caractéristique est obtenue en estimant, à chaque distance de reconstruction, une expression complexe U(x,y,z) de l'onde lumineuse (22) à laquelle est exposé le photodétecteur matriciel. 3. Procédé selon la revendication 2, dans lequel la grandeur caractéristique est déterminée à partir du module ou de l'argument de ladite expression complexe U(x,y,z). 3034196 21 4. Procédé selon la revendication l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'identification est élaborée en comparant l'évolution de la dite grandeur caractéristique à des profils types déterminés au cours d'une phase d'apprentissage. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel la position de chaque particule, dans un plan parallèle au plan du photodétecteur matriciel, est déterminée à l'aide de l'image acquise par le photodétecteur ou à l'aide de l'expression complexe U(x,y,z) de l'onde lumineuse (22) à laquelle est exposé le photodétecteur matriciel. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la source de lumière est une source spatialement cohérente. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la source de 15 lumière est une diode électroluminescente ou une diode laser. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel aucune optique de grossissement n'est disposée entre l'échantillon et le photodétecteur matriciel. 20 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'échantillon comporte des cellules sanguines. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, les particules étant identifiées parmi les lignées cellulaires des globules blancs, des globules rouges ou des 25 plaquettes. 11. Dispositif pour identifier une particule, la dite particule étant contenue dans un échantillon (14), le dispositif comprenant : une source de lumière (11) agencée pour produire une onde lumineuse incidente (12), 30 selon un axe de propagation (Z), en direction dudit échantillon (14), un support, pour maintenir l'échantillon (14) entre ladite source de lumière (11) et un photodétecteur matriciel (16), 5 10 3034196 22 le photodétecteur matriciel (16) étant agencé pour acquérir une image de l'échantillon, en étant exposé à une onde lumineuse (22), résultant de l'interférence entre ladite onde lumineuse incidente (12) et une onde de diffraction formée par ladite particule, le dispositif étant caractérisé en ce qu'il comporte processeur (20), et notamment un 5 microprocesseur configuré pour mettre en oeuvre les étapes suivantes : détermination d'une position de ladite particule dans un plan parallèle (x,y) à un plan (P) selon lequel s'étend le photodétecteur matriciel (16), application d'un algorithme de reconstruction numérique à ladite image acquise, de façon à estimer au moins une grandeur caractéristique (u, ft, cp, k) de ladite onde 10 lumineuse (22) à laquelle est exposé le photodétecteur matriciel (16), à une pluralité de distances (I z I) de reconstruction de ce dernier, détermination de l'évolution (u(z), ft(z), (p(z), k(z)) de ladite grandeur caractéristique en fonction de ladite distance de reconstruction, selon un axe parallèle audit axe de propagation et passant par ladite position (x,y), 15 - identification de la particule en fonction de ladite évolution. 12. Dispositif selon la revendication 11, dans lequel le dispositif ne comporte pas d'optique de grossissement entre le photodétecteur matriciel et l'échantillon analysé. 13. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 11 ou 12, dans lequel le processeur est apte à: 20 déterminer, à chaque distance de reconstruction, l'expression complexe U(x,y,z) du rayonnement optique auquel est exposé le détecteur, estimer la dite grandeur caractéristique, à chaque distance de reconstruction, en déterminant le module ou l'argument de ladite amplitude complexe U(x,y,z). 25