Brevet FR3032882A1 — publié le 20160826

ARRIERE PLAN DE L'INVENTION Le cancer est une maladie extrêmement répandue. On estime l'incidence de cette pathologie à plus de 10 mil- lions de malades à travers le monde et à environ 365 000 nouveaux cas par an en France. La radiothérapie reste une thérapie incontournable pour la prise en charge de ces pathologies et concerne environ 60% des cas. L'exposition tissulaire aux rayonnements ionisants à des fins théra- peutiques produit des effets non seulement sur la tumeur mais peut aussi affecter les cellules et tissus sains environnants. Les effets produits sur les tissus sains suite à une exposition aux rayonnements ionisants que cette exposition soit accidentelle, ou volontaire et con- trôlée lors d'une exposition à des fins thérapeutiques, sont historiquement et schématiquement classés en fonction de la chronologie d'apparition des symptômes cliniques. Ainsi, on distingue les effets aigus quasi-immédiats des effets tardifs intervenant au-delà de 6 mois après l'exposition. Les effets aigus liés à une irradiation se manifestent notamment par des syndromes gastro-intestinaux qui se traduisent par des diarrhées, de la déshydratation, des infections entéro-bactériennes et dans les cas les plus sévères, un choc septique pouvant entrainer la mort. Les entéropathies et notamment l'entérite aiguë qui sont des manifestations du syndrome gastro-intestinal affectent les sujets irradiés accidentellement avec des doses moyennes à fortes et la plupart des patients trai- tés par radiothérapie abdominopelvienne et tout particu- lièrement les patients traités pour des tumeurs prostatiques. Bien que moins fréquente, seuls 5 à 10 % des patients irradiés au niveau abdomino-pelvien à des doses fractionnées comprises entre 45 et 55 Gy présentent des complications tardives cinq années après la fin de leur 3032882 2 radiothérapie [Rubin, P. and G. W. Casarett (1968). "Clinical radiation pathology as applied to curative radiotherapy." Cancer 22(4): 767-778.], la toxicité tardive de l'irradiation a un impact clinique bien plus important, à 5 cause de la chronicité, de la morbidité et mortalité as- sociés aux symptômes. Les effets tardifs vont notamment se manifester par une fibrose radio-induite ou radique, séquelle commune des traitements de cancer par radiothérapie retrouvée dans une majorité de tissus sains (peau, 10 poumon et foie) [Rodemann, H. P. and M. Bamberg (1995). "Cellular basis of radiation-induced fibrosis." Radiother Oncol 35(2): 83-90.]. Cette fibrose tissulaire est le plus souvent caractérisée par une dysmotilité, une malabsorbtion, une perte de flexibilité et de fonctionnalité 15 de la paroi intestinale qui peuvent conduire à des com- plications de type obstruction qui requière une intervention chirurgicale le plus souvent urgente. Ainsi, la prise en compte des effets secondaires liés à l'exposition aux rayons ionisants, en particulier 20 la prévention ou le traitement de ces effets secondaires est une problématique cruciale. A ce jour, il n'existe aucun traitement thérapeutique pharmacologique des entéropathies développées suite à une irradiation que l'entéropathie soit aigüe ou chronique. 25 Les seules solutions thérapeutiques existantes ré- sident pour les entéropathies aigues, dans le traitement des symptômes. Le traitement consiste en une simple supplémentation en eau et en électrolytes associée à une antibiothérapie. Pour les entéropathies chroniques de type 30 fibrose, le traitement consiste en la résection chirurgi- cale de la partie d'intestin lésée. Ces opérations sont lourdes et compliquées et souvent risquées à cause de l'état général du patient, souvent affaibli, du développement d'adhérences péritonéales, du risque de rupture de 3032882 3 sutures, et des retards de cicatrisation, ce qui conduit à une forte mortalité post-opératoire. En outre, la plupart des stratégies médicamenteuses testées à ce jour dans le traitement des complications 5 intestinales des radiothérapies s'avèrent être assez dé- cevantes contrairement à ce qui est observé en préclinique dans différents modèles animaux [Hauer-Jensen, M., J. Wang, et al. (2003). "Bowel injury: current and evolving management strategies." Semin Radiat Oncol 13(3): 10 357-371.]. Le traitement par greffe de cellules souches donnent des résultats prometteurs tant en recherche qu'en application clinique compassionnelle dans le traitement des rectites radiques sévères de grade III et IV, mais 15 n'est pas à ce jour utilisable à grande échelle, compte tenu de leurs coûts, sur les patients traités par radiothérapie. De plus, l'effet des cellules souches est indéniables mais apparait comme loin d'être total. A ce jour, il n'existe donc aucun traitement pré- 20 ventif et/ou curatif des effets secondaires, notamment des entéropathies développées suite à une irradiation, simple à mettre en oeuvre, peu risqué et efficace. OBJET DE L'INVENTION La présente invention a pour objet de proposer un 25 traitement visant à atténuer voire à supprimer les effets secondaires consécutifs à une irradiation, en particu- lier, les effets secondaires de type entéropathies aigües et chroniques. RESUME DE L'INVENTION 30 Poursuivant cet objectif, les inventeurs ont cons- taté que le Dasatinib, molécule de la famille des inhibiteurs de tyrosine kinase, limite, réduit et/ou supprime les effets secondaires développés suite à une irradiation, qu'il s'agisse d'une irradiation accidentelle forte 35 dose ou d'une irradiation thérapeutique abdomino- 3032882 4 pelvienne. L'invention concerne donc l'utilisation de Dasatinib dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère exposé à une irradiation pour empêcher, limiter, réduire et/ou supprimer les effets secon- 5 daires radio-induits, qu'ils soient précoces ou tardifs, tels que les manifestations du syndrome gastro-intestinal. En particulier, l'utilisation de Dasatinib dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère, notamment d'un être humain, exposé à une 10 irradiation pour empêcher, limiter, réduire et/ou réduire drastiquement et/ou supprimer le développement d'entéropathies radio-induites aigües ou chroniques et des symptômes associés. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION 15 La présente invention concerne l'utilisation de Da- satinib dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère exposé à une irradiation pour empêcher, limiter, réduire et/ou supprimer les effets secondaires radio-induits, en particulier le syndrome gastro- 20 intestinal. L'irradiation peut-être volontaire à visée thérapeutique, dans le cas, par exemple, de traitement de cancers ou accidentelle. L'exposition accidentelle peut avoir lieu suite à une mauvaise manipulation d'appareil, 25 à un surdosage ou suite à un accident radiologique. L'exposition du tissu vivant à des rayonnements ionisants, induit une série d'altérations cellulaires et moléculaires complexes qui se traduisent quel que soit le site par des effets d'ordre cellulaire, structural et 30 fonctionnel. Leur gravité est fonction d'un grand nombre de facteurs tels que la nature du rayonnement, la dose délivrée, le débit de dose, la récurrence de l'irradiation (dose unique ou fractionnée), la nature et l'étendue du champ irradié, la radiosensibilité indivi- 35 duelle. La manifestation clinique temporelle des lésions 3032882 5 radio-induites dépend en plus de la dose reçue de l'organisation structurale du tissus exposé, des caractéristiques radio-biologiques des cellules lésées (radiosensibilité, capacité de réparation de l'ADN, taux de 5 prolifération...). L'exposition accidentelle à des doses moyennes à fortes peut conduire à des syndromes aigus d'irradiation susceptibles de causer la mort de l'irradié. On distingue classiquement quatre syndromes radio-induits : hémato- 10 poïétique (dès 1 Gy), gastro-intestinal (dès 6-10 Gy), neurovasculaire (dès 20 Gy) et cutané (dès 2-3 Gy). Il faut distinguer ces expositions de celles mise en oeuvre au cours des processus radio-thérapeutiques. La radiothérapie a pour objet de délivrer à la tumeur la dose maxi- 15 male nécessaire au contrôle tumoral tout en préservant au maximum les tissus sains adjacents. L'optimisation des configurations d'irradiation, de la balistique, de l'imagerie médicale et des protocoles de traitement ont permis de réduire au maximum les effets secondaires inhé- 20 rents à ce type de traitement cependant les doses élevées utilisées engendrent des phénomènes de toxicité aigüe et tardive. La toxicité aigüe est observée chez tous les patients et peut être très sévère et nécessiter chez certains patients une modulation du protocole d'irradiation 25 mais elle n'est en général que transitoire et rétrocède à l'arrêt du traitement. La toxicité tardive est moins fréquente, on estime que 5 à 10 % des patients irradiés au niveau abdomino-pelvien à des doses comprises entre 45 et 55 Gy, présentent des complications tardives [Rubin 1968 30 déjà cité plus haut]. L'impact clinique de ces complica- tions tardives est très important de par leur chronicité, leur progressivité et par la morbidité et la mortalité qui leur sont associées. Ainsi, la présente invention a pour objet 35 l'utilisation de Dasatinib dans la préparation d'un médi- 3032882 6 cament pour le traitement d'un mammifère, notamment d'un être humain, exposé à une irradiation pour empêcher, limiter, réduire, réduire drastiquement et/ou supprimer le développement d'entéropathies radio-induites aigües ou 5 chroniques et des symptômes associés. Dans le cadre de la présente invention, les termes « irradiation », « irradié », « rayonnements ionisants » font référence à toute irradiation ou exposition à des rayonnements ionisants, qu'il s'agisse d'une irradiation 10 accidentelle à moyenne ou forte dose sur tout ou partie du corps, ou qu'il s'agisse d'une irradiation abdominopelvienne à visée thérapeutique, déclenchant chez le sujet irradié des effets secondaires tels que des syndromes gastro-intestinaux. 15 On entend par « entéropathie » toute pathologie du tractus digestif chez un sujet exposé à des rayonnements ionisant ayant développé consécutivement à l'irradiation des effets secondaires tels que des syndromes gastro-intestinaux. Ces pathologies peuvent se développer immé- 20 diatement après l'irradiation. Elles sont alors quali- fiées d'aigües. Ces pathologies peuvent également se développer plusieurs mois voire années après l'irradiation. Elles seront alors qualifiées d'entéropathies chroniques ou tardives. 25 Les symptômes de l'entéropathie aigüe radio-induite (diarrhées, déshydratation importante, perte de poids, translocation bactérienne...) sont engendrés essentielle- ment par la désorganisation de la barrière intestinale due à l'irradiation. Selon la gravité des symptômes, la 30 désorganisation de la barrière intestinale peut conduire à un syndrome létal. La mort du sujet irradié est provoquée par la conjonction de trois facteurs : la libération importante d'enzymes protéolytiques, la dénudation de la barrière épithéliale permet l'entrée de bactéries dans 35 l'organisme et la survenue d'une septicémie, le déséqui- 3032882 7 libre de la balance hydrominérale qui induit des pertes massives d'eau et d'électrolytes responsables de la déshydratation de l'organisme au cours de la diarrhée radio-induite [Gunter-Smith, P.J.(1995) Gamma radiation affect 5 active electrolyte transport by rabbit ileum : basal Na and Cl transport. Am J Physiol 250(4Ptl) :G540-5.]. Chacun de ces trois facteurs pris indépendamment ne provoquent pas la mort [Carr, K. E. (2001) Effects of radiation damage on intestinal morphology. Int Rev Cytol 208 : 10 1-119]. Ces symptômes peuvent aussi se manifester pour des doses d'irradiation infra-létales, sans que le sujet développe de syndrome gastro-intestinal, par exemple au cours d'une radiothérapie nécessitant une irradiation totale à une dose comprise entre 2 et 10 Gy [Feuvret, L. 15 (1994). Value of granesitron in the prevention of diges- tive disorders in total body irradiation. Bull Cancer Radiother 81(1): 41-4], ou dans le cadre de configurations partielles incluant tout ou partie du tractus digestif [Rubio, C.(1996) Dose-time dependent histological changes 20 following irradiation of the small intestine of rats. Di- gestive Disease and Sciences 41(2): 392-401]. Les inventeurs ont montré que l'utilisation du Da- satinib conformément à l'invention dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère, notam- 25 ment d'un être humain, exposé à une irradiation permet d'empêcher, de limiter, de réduire, de réduire drastique-ment et/ou de supprimer le développement d'entéropathies liées à une atteinte de l'intégrité de la paroi intestinale, en particulier les entéropathies aigües. 30 En effet, les inventeurs ont montré que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention permet d'obtenir un effet trophique de la muqueuse intestinale, notamment en favorisant le renouvellement cellulaire. L'épaisseur de la paroi intestinale est augmentée 35 chez un sujet traité conformément à l'invention par rap- 3032882 8 port à un sujet non traité. Le traitement par le Dasatanib conformément à l'invention permet en outre d'observer chez les sujets traités un renforcement des jonctions entre les entérocytes et la forte diminution de l'hyper- 5 perméabilité radioinduite de la barrière intestinale, di- minuant ainsi fortement le passage des bactéries du tube digestif dans le sang. Les sujets irradiés traités par le Dasatinib selon l'invention subissent une perte de poids beaucoup plus faible par rapport à des sujets irradiés 10 non traités. Ainsi, le traitement par le Dasatinib a un effet thérapeuthique sur les entéropathies aigües. Outre les effets du traitement par le Dasatinib sur les entéropathies aigües et les symptômes associés, les inventeurs ont également constaté que l'utilisation du 15 Dasatinib conformément à l'invention permet de limiter, de réduire et/ou de de réduire drastiquement le développement d' entéropathies chroniques. Comme précédemment indiqué, la présente invention a pour objet l'utilisation du Dasatinib dans la préparation 20 d'un médicament pour le traitement d'un mammifère exposé à une irradiation pour maintenir et/ou restaurer l'intégrité de l'épithélium intestinal dudit mammifère irradié. L'utilisation selon l'invention a également pour objet de diminuer l'hyperperméabilité de l'épithélium in- 25 testinal du mammifère irradié par rapport à celui du mam- mifère irradié non traité. Le maintien et/ou la restauration de l'intégrité de l'épithélium intestinal tout comme la diminution de son hyperperméabilité sont obtenus par le traitement conforme à l'invention des entéropathies 30 radio-induites que ces dernières soient aigües ou chro- niques. Les inventeurs ont également montré que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention avait de façon étonnante une action anti-fibrotique. Le 35 processus fibrotique mis en place lors des entéropathies 3032882 9 chroniques évolue au cours de temps pour aboutir, s'il n'est pas interrompu, à une obstruction nécessitant une intervention chirurgicale en extrême urgence. Ce phénomène de fibrose développée suite à une irradiation, en 5 particulier suite à une irradiation abdomino-pelvienne implique toutes les cellules et tous les compartiments du tissu digestif [ Followill, D. S., D. Rester, et al. (1993). "Histological changes in mouse colon after single- and split-dose irradiation." Radiat Res 136(2): 280- 10 288.]. Il est caractérisé par une augmentation de la syn- thèse des constituants de la matrice extra cellulaire (MEC) (principalement des collagènes) et se traduit non seulement par une altération du remodelage matriciel dans laquelle les metalloprotéinases matricielles (MMP) et 15 leurs inhibiteurs (TIMP) jouent un rôle important [Strup- Perrot, C., M. C. Vozenin-Brotons, et al. (2005). "Expression of matrix metalloproteinases and tissue inhibitor metalloproteinases increases in X-irradiated rat ileum despite the disappearance of CD8a T cells." World J 20 Gastroenterol 11(40): 6312-6321. Strup-Perrot, C., M. C. Vozenin-Brotons, et al. (2006). "Expression and activation of MMP -2, -3, -9, -14 are induced in rat colon after abdominal X-irradiation." Scand J Gastroenterol 41(1): 60-70.; Strup-Perrot, C., D. Mathe, et al. (2004). 25 "Global gene expression profiles reveal an increase in mRNA levels of collagens, MMPs, and TIMPs in late radiation enteritis." Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 287(4): G875-885. #925; Antalis, T. M., T. Shea-Donohue, et al. (2007). "Mechanisms of disease: protease functions 30 in intestinal mucosal pathobiology." Nat Clin Pract Gas- troenterol Hepatol 4(7): 393-402.] mais également par une altération de l'activité séquentielle des facteurs de croissance fibrogéniques tels que le TGF-P et le CTGF et des cytokines inflammatoires [Skwarchuk, M. W. and E. L. 35 Travis (1998). "Changes in histology and fibrogenic cyto- 3032882 10 kines in irradiated colorectum of two murine strains." Int J Radiat Oncol Biol Phys 42(1): 169-178.].La quantité de composés extra-cellulaires tels que les collagènes est régulée en continu par l'équilibre entre la synthèse des 5 collagènes et leur catabolisme. Le déséquilibre entre ces deux processus aboutit au développement d'une fibrose. Le remplacement des collagènes et des autres protéines de la matrice extra-cellulaire est contrôlé par les metalloprotéinases matricielles (MMP) et leurs inhibiteurs (TIMP). 10 La résultante de la balance entre ces deux processus op- posés (biosynthèse vs catabolisme) conduit à une augmentation nette ou à une diminution nette des collagènes. Les inventeurs ont montré que le Dasatinib agit sur la fibrose et sur son développement selon ces trois axes : 15 la production de matériel matriciel, notamment de colla- gènes, des enzymes de dégradation de la matrice cellulaire (MMP) et de leurs inhibiteurs tissulaires (TIMP). Les inventeurs ont ainsi montré qu'une utilisation du Dasatinib selon l'invention et ce quelle que soit la durée 20 du traitement du sujet irradié réduisait considérablement l'accumulation nette des composés matriciels, notamment des collagènes. L'utilisation du Dasatinib conforme à l'invention dans le traitement d'un sujet irradié (traitement préventif ou curatif du développement de la fi- 25 brose) diminue l'accumulation des composés matriciels. Le traitement conforme à l'invention diminue également l'expression des collagènes. Les inventeurs ont en outre montré que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention augmente l'expression et l'activité des né- 30 talloprotéinases matricielles, diminue l'expression des TIMP mais aussi celle des cytokines pro-fibrogéniques telles que CTGF et TGF-pl, sans doute via la modulation de l'inflammation radio-induite et ce par rapport à un sujet non irradié. 35 3032882 11 Les inventeurs proposent l'explication suivante aux effets de l'utilisation du Dasatinib selon l'invention : l'exposition à une irradiation provoque l'activation d'une voie de signalisation impliquant une glycoprotéine, 5 la PrPc, protéine du prion, qui dans sa forme altérée est responsable des encéphalopathies spongiformes. Les inventeurs ont préalablement montré que cette protéine essentiellement membranaire intervient dans la prolifération cellulaire et l'apoptose et qu'elle joue un rôle clef 10 dans l'homéostasie tissulaire, plus spécifiquement dans le renouvellement de l'épithélium intestinal [Morel, E., S. Fouquet, et al. (2004). "The cellular prion protein PrPc is expressed in human enterocytes in cell-cell junctional domains." J Biol Chem 279(2): 1499-1505 ; Morel, 15 E., S. Fouquet, et al. (2008). "The cellular prion pro- tein PrP(c) is involved in the proliferation of epithelial cells and in the distribution of junction-associated proteins." PLoS One 3(8): e3000]. Elle intervient de ce fait dans la régulation de la fonction de barrière qu'est 20 l'épithelium intestinal. L'irradiation d'un sujet a pour conséquence d'augmenter la concentration nucléaire de la PrPc, probablement par néosynthèse, ce qui a pour conséquence de modifier l'homéostasie de l'épithélium intestinal. Les inventeurs ont montré dans des expériences com- 25 plémentaires sur des souris KO pour le gène codant pour la PrPc que l'inhibition de l'expression de la PrPc chez un sujet irradié a pour conséquence de favoriser la prolifération et le renouvellement cellulaire, d'augmenter l'épaisseur de l'épithélium intestinal, de préserver son 30 imperméabilité et d'augmenter la survie du sujet par rap- port à des sujets irradiés exprimant la PrPc. Par ailleurs, il a été montré que la PrPc intera- gissait avec des tyrosines kinases de la famille SRC et que l'expression des SRC était induite par une irradia- 35 tion [Kharbanda, S., Z. M. Yuan, et al. (1994). "Activa- 3032882 12 tion of Src-like p56/p53lyn tyrosine kinase by ionizing radiation." J Biol Chem 269(32): 20739-20743. Dittmann, K., C. Mayer, et al. (2009). "Radiation-induced lipid peroxidation activates src kinase and triggers nuclear EGFR 5 transport." Radiother Oncol 92(3): 379-382]. L'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention permet probablement d'inhiber la voie de signalisation impliquant la PrPc via l'inhibition de la tyrosine kinase Src et de reproduire les effets obtenus 10 chez les souris KO n'exprimant pas la PrPc. Il est connu que le Dasatinib agit comme inhibiteur des tyrosines kinases de la famille Src à des concentrations subnanomolaires de l'ordre de 0,6 à 0,8 nM. De manière évidente, l'homme du métier saura adap- 15 ter le conditionnement et le dosage du Dasatinib au sujet à traiter. A titre d'exemple les posologies actuellement recommandées et pouvant être utilisées dans le cadre de la présente invention sont de 100 mg à 140 mg par jour pour un être humain adulte. 20 Le Dasatinib est actuellement commercialisé sous forme de comprimé pelliculé administré oralement. Dans le cadre de l'invention, le Dasatinib peut être administré par voie orale mais aussi par toute autre voie connue de l'homme du métier, comme par exemple par injection. 25 L'homme du métier sera à même d'adapter la durée du trai- tement, les doses et la façon de les administrer au sujet traité et selon qu'il s'agit d'un traitement préventif ou d'un traitement curatif. Les exemples ci-après permettent d'illustrer les 30 effets du Dasatinib utilisé selon la présente invention. EXEMPLES Exemple 1 : Effet de l'utilisation du Datasinib pour le traitement des entéropathies. Les analyses sont réalisées sur des souris adultes 35 d'environ 30 g élevées en conditions normales de labora- 3032882 13 toire avec un accès libre à la nourriture et à l'eau. Les doses d'irradiation appliquées sont de 8 Gy à raison de 0,62 Gy / min (Phillips, 250 MeV, 0,2-mm filtre Cu). Le Dasatinib est dilué dans du DMSO à 10% et admi- 5 nistré per os avec une dose quotidienne de lmg/kg, dès 2 jours avant l'irradiation. 2 jours et 4 jours après irradiation, la perméabilité intestinale est évaluée, des mesures morphométriques de l'intestin sont réalisées. La lipopolysascharidémie est déterminée 4 jours après irra- 10 diation. 1.1 Effet du Datasinib sur l'épaisseur de la muqueuse intestinale La figure 1 montre qu'une administration quoti- 15 dienne per os à raison de lmg/kg/jour de Dasatinib aug- mente l'épaisseur de la muqueuse intestinale. L'utilisation du traitement par le Dasatinib conformément à l'invention augmente l'épaisseur de la muqueuse intestinale. A DO (c'est-à-dire avant irradiation), 20 l'épaisseur de la muqueuse intestinale est de 289 pm pour les souris ayant reçu du Dasatinib contre 268 pm pour les souris témoins (non traitées). A D2 (c'est-à-dire 2 jours après irradiation), l'épaisseur de la muqueuse intestinale est de 300 pm pour les souris traités au Dasatinib 25 et 258 pm pour les souris témoins (non traitées au Da- satinib). A D4 (c'est-à-dire 4 jours après irradiation), l'épaisseur de la muqueuse intestinale est de 314 pm pour les souris traités au Dasatinib et 253 pm pour les souris témoins (non traitées). 3032882 14 Figure 1 : Effet de l'administration du Dasatinib sur l'épaisseur de la muqueuse intestinale irradiée de souris 5 1.2 Effet du Dasatinib sur la perméabilité de l'intestin après exposition aux irradiations La figure 2 montre que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention réduit l'hyperperméabilité ra- 10 dio-induite de l'intestin des souris irradiées traitées par le Dasatinib (WT + Dasatinib en gris) par rapport aux souris irradiées non traitées (WT en noir). L'hyperméabilité est mesurée en quantifiant le passage dans le sang, d'un traceur fluorescent (FD-4) auquel la 15 barrière intestinale est imperméable dans les conditions physiologiques normales. WT 340- LJ D a satine DO D2 1,14 3032882 15 Figure 2 : Effet de l'administration du Dasatinib sur l'hyperperméabilité intestinale radio-induite. 5 1,3 Effet du Dasatinib sur la lipopolysacchari° déraie. La fonctionnalité de la barrière intestinale peut être évaluée en mesurant la lipopolysaccharidémie (taux de lipoloplysaccharide bactérien dans le sang). Le taux 10 de LPS a ici été déterminé dans un échantillon de plasma sanguin à l'aide du kit d'analyse « Limulus Amebocyte Lysate chromogenic endpoint » (réf H1T302, Hycult Biotech, CliniSciences, Nanterre, France) utilisé conformément aux recommandations du fabricant. 15 La figure 3 montre que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention réduit de façon drastique la concentration de LPS dans le plasma sanguin chez les souris irradiées traitées au Dasatinib (Wt + Dasatinib en gris) par rapport aux souris irradiées non traitées (Wt 20 en noir) que ce soit avant irradiation (DO) ou 4 jours après (D4) . DO D2 WT LII Wr+DE.sztinAL 3032882 16 Figure 3 : Effet de l'administration du Dasatinib sur la lipopolysaccharidémie radio-induite. 5 1.4 Effet du Dasatinib sur la perte de poids. Les souris irradiées traitées au Dasatinib (Wt + Dasatinib - trait plein) et les souris irradiées non traitées (Wt - trait pointillé) sont pesées quotidiennement. 10 La figure 4 montre que 4 jours après irradiation (D4) la perte de poids des souris irradiées traitées au Dasatinib est minime (perte de 8% par rapport à leur poids initial) par rapport aux souris irradiées non traitées qui accusent une perte de poids de près de 15 % par 15 rapport à leur poids initial. 3032882 17 Figure 4 : Effet de l'administration du Dasatinib sur l'évolution du poids après irradiation. 5 Exemple 2 - Effet de l'utilisation du Datasinib pour le traitement des fibroses. Selon Sandler et al. [Sandler, N. G. (2003) Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles of Thl and 10 Th2 responses in tissues repair. J. Immuno1171(7) :3655- 67], la mise en place et le développement d'une fibrose est la résultante nette de l'équilibre dynamique existant entre la production des protéines matricielles (notamment les collagènes), des enzymes de dégradation de la matrice 15 (MMP) et de leurs inhibiteurs tissulaires (TIMP). Fort de ces résultats, Sandler a mis au point un indice prenant en compte ces trois éléments. L'indice ayant pour valeur 1 est l'indice de référence, lorsque l'indice est inférieur à 1, l'équilibre est déplacé vers une dégradation 20 du matériel matriciel (fibrolyse), si l'indice est supé- rieur à 1, l'équilibre est déplacé vers une accumulation de matériel matriciel (fibrogénèse). L'indice de réfé- D s a d n b c o = 3032882 18 rence 1 est affecté aux mesures obtenues pour les souris n'ayant subi aucune irradiation ni aucun traitement (groupe contrôle). Les analyses sont réalisées sur des souris adultes 5 d'environ 30g élevées en conditions normales de labora- toire avec un accès libre à la nourriture et à l'eau. L'irradiation est faite sur une portion de l'intestin comme précédemment décrit par Milliat F et al. Am J Pathol 2008). Ainsi, les souris sont anesthésiées et 10 une anse intestinale de 3 cm de longueur est externalisée et exposée à une seule dose de rayons y pour les souris irradiées. Après exposition aux rayonnements ionisants (ou non pour les souris témoins), l'anse intestinale est réinsérée dans la cavité abdominale qui est ensuite sutu- 15 rée. La dose d'irradiation appliquée est de 19Gy. Le Dasatinib est dilué dans du DMSO à 10% et admi- nistré à l'aide d'une mini-pompe osmotique (Alzet implan- tée sous la peau qui délivre une dose de 1,0 pL par heure 20 pendant 7 jours ou 0,15 pL par heure pendant 42 jours). Les effets du Dasatinib sont mesurés à un stade précoce, 3 et 7 jours (stade aigu) après irradiation et également à un stade tardif 42 jours (stade fibrose jeune - D42) ou 105 jours (stade fibrose avancée - D105) après 25 irradiation avec soit un traitement préventif court au Dasatinib du jour de l'irradiation au 7ème jour après irradiation (d0-d7), soit un traitement préventif long au Dasatinib du jour de l'irradiation au 42ème ou 105ème jour après irradiation (d0-d42, dO-d105), soit un traitement 30 curatif long au Dasatinib du 42ème jour au 105ème jour après irradiation (d42-d105). 35 3032882 19 Figure 5 : Effets de l'administration du Dasatinib 5 sur le processus fibrotique, donné par la représentation dite de Sandler. A la lecture de la figure 5, on constate que le groupe de souris témoins (souris dont une anse intestinale est irradiée) le jour de l'irradiation présente un 10 indice de 1 (barres « témoin »). 42 jours après irradiation, les souris n'ayant reçu aucun traitement (barres D42) présentent un indice très élevé compris entre 3,5 et 6,5 démontrant que le processus fibrogénique est en cours. 15 105 jours après irradiation, les souris n'ayant re- çu aucun traitement (barres D 105) présentent un indice élevé compris entre 1,8 et 4,2 démontrant que le processus fibrogénique se poursuit même s'il se ralentit puisque la fibrose est installée. 20 Le traitement au Dasatinib (barres indiquant le D inlb d42-d 105 Rapport de Sandler (UA) J105+Daseit in lb do-d 105 J 105+Dasat ln lb do-d 7 j105 J42+L asé7,-n-11-J c10-d42 J42+Dasatln lb dO-d7 J42 Te t o il:Ms/1M P-13--.T1M P-1) cd13/(IVIMP-3:TIMP-1) coLl( l'AMP--15: Tri, I co;1/1:1"VIMP-2:7MP-11 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 3032882 20 nombre de jours après irradiation (D42 ou D105) + Dasat précisant la période de traitement (d0-d7 ; dO-d42 ; d0- d105 ; d42-d105) qu'il soit préventif court, préventif long ou curatif permet d'obtenir un indice inférieur à 1 5 et de passer d'un processus fibrogénique à un processus fibrolytique. Il est ainsi clairement démontré que le Dasatinib permet d'empêcher, limiter, réduire ou réduire drastiquement la formation de fibrose développée suite à l'irradiation. Les traitements préventifs quel que soit 10 leur durée sont très efficaces. Le traitement curatif long, même si l'efficacité semble moindre que les traitements préventifs, montre quand même un effet significatif sur la fibrose permettant de passer d'un processus fibrogénique (D42, D105) à un processus fibrolytique 15 (D105+Dasat d42-d105). Le tableau 1 ci-dessous présente les résultats des analyses histochimiques d'une section longitudinale de l'intestin colorée au PicroSirius (Llewellyn méthode modifiée de 1970) et examinée en microscopie photonique 20 (microscope Zeiss Axiophot muni d'une caméra couleurs JVC KY-F750). Les mesures d'accumulation des composés de la matrice extra-cellulaire sont réalisées à l'aide d'un logiciel d'analyse d'images (Histolab, Instruments Microvision, Evry, France).En outre, l'expression des metallo25 protéinases matricielles (MMP) et leurs inhibiteurs (TIMP) est également mesurée de manière standard par isolement de leur ARN, reverse transcription et PCR en temps réel. Le tableau 1 ci-dessous résume l'ensemble de ces 30 résultats. Il apparait clairement que le traitement par le Dasatinib diminue le dépôt net de collagènes après l'irradiation en diminuant l'expression des gènes impliqués dans la synthèse desdits collagènes, en favorisant l'activité de la MMP-2 et l'expression des gènes codant 35 pour la MMP-7, en inhibant l'expression de TIMP-1 (forte- 3032882 21 ment augmentée par l'irradiation) et en réduisant fortement l'expression des cytokines pro-fibrogéniques telles que CTGF et TGF-pl. Témoin Irradié Irradié+Dmeinl (10-d7 a& +Dosn t'eh d0- d4 7 Picro Sirius (analyse densitant etriqu e: UA-iotas) 0,236±0f1-1 REVENDICATIONS1. Utilisation de Dasatinib dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère exposé à une irradiation pour empêcher, limiter, réduire et/ou supprimer le syndrome gastro-intestinal. 2. Utilisation de Dasatinib dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère exposé à une irradiation selon la revendication 1 pour empêcher, limiter, réduire et/ou supprimer le développement d'entéropathies radio-induites et des symptômes associés. 3. Utilisation selon la revendication 2, dans laquelle les entéropathies traitées sont des entéropathies algues. 4. Utilisation selon la revendication 3, dans la- quelle les entéropathies aigües sont liées à une atteinte de l'intégrité de l'épithélium intestinal. 5. Utilisation selon la revendication 2, dans laquelle les entéropathies traitées sont des entéropathies chroniques. 6. Utilisation selon la revendication 5, dans la- quelle l'entéropathie chronique est une fibrose. 7. Utilisation selon les revendications 2 à 6 dans laquelle le traitement comprend le maintien de l'intégrité de l'épithélium intestinal du mammifère irra- dié. 8. Utilisation selon les revendications 2 à 6 dans laquelle le traitement comprend la restauration de l'intégrité de l'épithélium intestinal du mammifère irradié. 9. Utilisation selon les revendications 2 à 6 dans laquelle le traitement diminue l'hyperperméabilité de l'épithélium intestinal du mammifère irradié. 10. Utilisation selon les revendications 1, 2, 5 ou 6, dans laquelle le traitement comprend la diminution de l'accumulation de composants matriciels. 3032882 23 11. Utilisation selon les revendications 1, 2, 5 ou 6, dans laquelle le traitement comprend la diminution de l'expression des collagènes. 12. Utilisation selon les revendications 1 à 8, 5 dans laquelle le mammifère est un humain. 10 15