Brevet FR3033332A1 — publié le 20160909

Utilisation d'un complément nutritionnel dans la fabrication d'acide lactique La présente invention concerne la fabrication d'acide lactique. Il est connu de produire de l'acide lactique à partir de matière première amylacée par un procédé enzymatique comprenant une étape de liquéfaction de l'amidon par une alpha-amylase visant à solubiliser et hydrolyser l'amidon en dextrines. Cette étape est classiquement suivie d'une étape de saccharification par une glucoamylase, visant à hydrolyser les dextrines en glucose. Le glucose est alors fermenté au cours d'une étape de fermentation pendant laquelle il est transformé en acide lactique par une bactérie lactique. Toutefois, les microorganismes habituellement utilisés des genres Lactobacillus, Bacillus et Sporolactobacillus ne peuvent croître et produire de l'acide lactique de manière industrielle sans l'ajout d'une source d'azote organique composée d'acide aminés libres ou liés sous forme d'oligopeptides et de peptides, que sa composition soit définie ou qu'il s'agisse d'un extrait naturel. Des exemples de telles sources d'azote organique conventionnellement utilisés sont les autolysats et hydrolysats de levure, les hydrolysats de protéines végétales et animales (peptone de caséine, ...) et également les sous-produits solubles de trempe de blé et de maïs. Néanmoins, ces sources d'azote organique sont vendues à des prix relativement élevés, ce qui grève fortement le coût de fabrication de l'acide lactique. Des sources d'azote organique définies, reconstituées à partir d'acides aminés, de vitamines et de promoteurs de croissance purifiés peuvent également être utilisées mais avec des coûts encore supérieurs. Des solutions ont été envisagées pour tenter de réduire l'apport exogène de source azotée, et ainsi limiter les coûts de production. Il a ainsi été proposé, dans la demande EP 1 205 557, de réaliser des traitements physique et enzymatique en amont de la fermentation de la matière première et de mettre en oeuvre des microorganismes nutritionnellement moins exigeants tels que Lactococcus lactis. Cependant, l'ajout d'étapes supplémentaires au procédé de production induit également un coût non négligeable et ne semble pas limiter l'ajout exogène de sources nutritionnelles. La demande EP 1 953 234 propose quant à elle de mettre en oeuvre une matière première spécifique (Jus de canne et dérivés) adaptée à certains microorganismes tels que les Bacillus sp. et Sporolactobacillus sp., mais restant inadaptée aux microorganismes appartenant à d'autres genres tels que les Lactobacilles. La demande US 2004/203122 propose de mettre en oeuvre des microorganismes thermophiles tels que les Bacillus sp, moins exigeants, mais pour lesquels l'ajout de compléments azotés reste nécessaire. La demande WO 2011/098843 propose quant à elle d'utiliser des bactéries lactiques exprimant des enzymes dégradant 3033332 2 l'amidon, évitant ainsi l'utilisation d'enzymes commerciales au cours des étapes de saccharification et fermentation, mais impliquant toujours l'ajout de compléments azotés. Il existe donc toujours un besoin important de procédés de production d'acide lactique moins coûteux, nécessitant l'utilisation de sources d'azote organique moins 5 coûteuses ou en quantité moins importantes. Les inventeurs ont constaté, de manière surprenante, que cet objectif pouvait être atteint par l'utilisation d'un complément nutritionnel pour milieu de saccharification-fermentation dans un procédé de fabrication de l'acide lactique par fermentation à partir d'une matière première amylacée comprenant, et de préférence étant constitué par, un 10 principe actif issu d'une fermentation avec une moisissure ou une bactérie, ceci en substitution totale ou partielle des sources azotées exogènes couteuses communément utilisées tels que les extraits de levure et peptones. Les inventeurs ont ainsi constaté que ce complément nutritionnel, lorsqu'il était ajouté, au cours du procédé de production d'acide lactique, dans le milieu de 15 saccharification, de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée, entrainait la libération, à partir de la matière première amylacée utilisée, d'une quantité et d'une variété importante d'acides aminés qui sont directement assimilables par les bactéries lactiques, permettant ainsi une augmentation de la production d'acide lactique. De plus, les inventeurs ont constaté qu'en utilisant ce complément nutritionnel, il 20 était possible, tout en augmentant la quantité d'acides aminés libérés au cours de la saccharification, de la fermentation ou de la saccharification-fermentation simultanée, de limiter la quantité d'azote aminé libre (ou FAN) en fin de fermentation, facilitant ainsi les étapes généralement mises en oeuvre en aval du procédé de production d'acide lactique, à savoir l'extraction et la purification d'acide lactique. 25 La présente invention a donc pour objet l'utilisation d'un complément nutritionnel comprenant un principe actif, sous forme brute ou extraite, issu d'une fermentation avec une moisissure ou une bactérie, pour la fabrication, par fermentation, de préférence en milieu liquide, d'acide lactique. La présente invention concerne en outre l'utilisation d'un complément nutritionnel 30 comprenant un principe actif, sous forme brute ou extraite, issu d'une fermentation en milieu solide avec une moisissure ou une bactérie, pour libérer, dans un milieu de fermentation en acide lactique, d'une matière première glucidique renouvelable, l'azote de ladite matière première, au cours de la fabrication, par fermentation, de préférence en milieu liquide, d'acide lactique à partir de ladite matière première. 35 La présente invention concerne également un procédé de fabrication d'acide lactique à partir d'une matière première glucidique renouvelable, comprenant une étape de 3033332 3 fermentation, de préférence en milieu liquide, par une bactérie lactique en présence d'un complément nutritionnel comprenant un principe actif, sous forme brute ou extraite, issu d'une fermentation en milieu solide avec une moisissure ou une bactérie. La présente invention a également pour objet une composition comprenant (i) une 5 source d'azote organique sélectionnée dans le groupe constitué des matières premières glucidiques renouvelables, des solutions nutritives exogènes, et des mélanges de celles-ci et (ii) un complément nutritionnel comprenant un principe actif, sous forme brute ou extraite, issu d'une fermentation en milieu solide avec une moisissure ou une bactérie. La présente invention a également pour objet un kit comprenant : 10 (i) une source d'azote organique sélectionnée dans le groupe constitué des matières premières glucidiques renouvelables, des solutions nutritives exogènes, et des mélanges de celles-ci, et (ii) un complément nutritionnel comportant un principe actif, sous forme brute ou extraite, issu d'une fermentation en milieu solide avec une moisissure ou une bactérie. 15 Description détaillée de l'invention Complément nutritionnel 20 Le complément nutritionnel utilisé dans le cadre de l'invention est un complément nutritionnel comprenant un principe actif, sous forme brute ou extraite, issu d'une fermentation en milieu solide avec une moisissure ou une bactérie. Par "fermentation en milieu solide", on entend ici la culture de microorganismes sur des supports solides humides, sur des supports inertes ou sur des substrats insolubles qui 25 peuvent être utilisés comme source de carbone et d'énergie. Le processus de fermentation a lieu en absence ou quasi-absence d'eau libre dans l'espace entre les particules de substrat. Substrat 30 Le substrat utilisé pour la production du complément nutritionnel est de préférence un coproduit agricole. Par "coproduit agricole", on entend ici un produit créé au cours du même processus de transformation et en même temps qu'un produit agricole principal. Le substrat utilisé pour la production du complément nutritionnel peut en particulier 35 être un coproduit céréalier, un coproduit de culture oléagineuse, un coproduit de culture oléaprotéagineuse, un coproduit de culture saccharifère ou un mélange de ceux-ci. 3033332 4 Des exemples de substrats pouvant être utilisés pour produire le complément nutritionnel utilisé dans le cadre de l'invention incluent le son de blé, le tourteau de colza, le tourteau de soja, la pulpe de betterave, la radicelle d'orge, la drêche soluble éthanolière de blé et des mélanges de ceux-ci. 5 De préférence, le substrat utilisé pour la production du complément nutritionnel est choisi dans le groupe constitué du son de blé, du tourteau de colza, la radicelle d'orge, la drèche soluble éthanolière de blé, et des mélanges de ceux-ci. De manière davantage préférée, le substrat utilisé pour la production du complément nutritionnel est du son de blé ou du tourteau de colza. De manière préférée entre toutes, le substrat utilisé pour la 10 production du complément nutritionnel est du tourteau de colza. Le substrat utilisé pour la production du complément nutritionnel peut être préalablement broyé. Le substrat utilisé pour la production du complément nutritionnel est de préférence humidifié et traité thermiquement en vue de le pasteuriser ou le stériliser. Le traitement 15 thermique peut consister en un chauffage, par exemple dans un autoclave, typiquement à 121 °C par exemple pendant 20 min ou à 105°C par exenple pendant 35 min, ou une pasteurisation, typiquement à 105°C par exemple perdant 15 min. Il est également possible d'opérer un traitement thermique du substrat utilisé pour la production du complément nutritionnel en y injectant de la vapeur d'eau, ce qui permet d'opérer 20 simultanément l'humidification du substrat. De préférence, le pH est réglé lors de l'humidification dans une gamme de 4 à 5,5, de préférence à 4,9 par exemple avec de l'acide nitrique ou de l'acide sulfurique, afin d'améliorer l'effet du traitement thermique et le démarrage de la fermentation en milieu solide. 25 L'humidification est de préférence déterminée de manière que la teneur en eau du substrat utilisé pour la production du complément nutritionnel soit comprise entre 40 et 60% de la masse totale du substrat et de l'eau. Moisissures et bactéries 30 Le microorganisme utilisé lors de la fermentation en milieu solide peut être une moisissure. La moisissure utilisée lors de la fermentation en milieu solide est de préférence une moisissure du genre Aspergillus, de manière davantage préférée de l'espèce Aspergillus piger, Aspergillus oryzae, Aspergillus tubingensis ou Aspergillus flavus. De manière 35 particulièrement préférée, la moisissure utilisée lors de la fermentation en milieu solide est de l'espèce Aspergillus oryzae ou de l'espèce Aspergillus flavus. De manière préférée entre 3033332 5 toutes, la moisissure utilisée lors de la fermentation en milieu solide est de l'espèce Aspergillus oryzae, en particulier la souche d'Aspergillus oryzae ATCC 12892 (disponible auprès de la Collection ATCC). Alternativement, le microorganisme utilisé lors de la fermentation en milieu solide 5 peut être une bactérie. La bactérie utilisée lors de la fermentation en milieu solide est de préférence une bactérie du genre Bacillus, de manière davantage préférée de l'espèce Bacillus subtilis ou Bacillus licheniformis. De manière particulièrement préférée, la bactérie utilisée lors de la fermentation en milieu solide est de l'espèce Bacillus subtilis. 10 Ainsi, la moisissure ou bactérie utilisée lors de la fermentation en milieu solide est de préférence sélectionnée dans le groupe constitué des moisissures du genre Aspergillus et des bactéries du genre Bacillus. De manière davantage préférée, la moisissure ou bactérie utilisée lors de la fermentation en milieu solide est sélectionnée dans le groupe constitué des souches d'Aspergillus flavus, des souches d'Aspergillus oryzae, des souches 15 d'Aspergillus piger, des souches d'Aspergillus tubingensis, et des souches de Bacillus sp. Les inventeurs ont démontré que l'utilisation de certaines moisissures ou bactéries permettait de fabriquer un complément nutritionnel particulièrement adapté à certaines bactéries lactiques. Ainsi, de manière particulièrement préférée, la moisissure ou bactérie utilisée lors de la fermentation en milieu solide est une moisissure de l'espèce Aspergillus 20 flavus ou de l'espèce Aspergillus oryzae ou une bactérie de l'espèce Bacillus subtilis. Les inventeurs ont également démontré que l'utilisation de certaines moisissures ou bactéries permettait de fabriquer un complément nutritionnel permettant de limiter plus fortement la présence d'azote aminé libre (FAN) en fin de procédé de production d'acide lactique par fermentation. 25 Ainsi, de manière particulièrement préférée, la moisissure ou bactérie utilisée lors de la fermentation en milieu solide est une moisissure de l'espèce Aspergillus oryzae ou une bactérie de l'espèce Bacillus subtilis. En particulier, lorsque la bactérie lactique utilisée pour la production d'acide lactique est la souche L. coryniformis DSM 20004, la moisissure ou bactérie utilisée lors de la 30 fermentation en milieu solide est de préférence une moisissure de l'espèce Aspergillus oryzae. De même, lorsque la bactérie lactique utilisée pour la production d'acide lactique est la souche L. coryniformis DSM 20005, la moisissure ou bactérie utilisée lors de la fermentation en milieu solide est de préférence une bactérie de l'espèce Bacillus subtilis. L'inoculation du substrat utilisé pour la production du complément nutritionnel peut 35 être mise en oeuvre avec tout inoculum approprié. Les moisissures utilisées lors de la fermentation en milieu solide peuvent ainsi être préalablement soumises à une étape de 3033332 6 sporulation avant d'être inoculées sous forme de spores. La dose d'inoculum sera alors avantageusement d'au moins 106 spores/g de matière sèche initiale. Alternativement, les moisissures utilisées lors de la fermentation en milieu solide peuvent être inoculées sous forme de mycélium. La dose d'inoculum sera alors avantageusement comprise entre 100 et 5 300 g de milieu de culture liquide comprenant le mycélium par kg de matière sèche initiale. De préférence, les bactéries utilisées lors de la fermentation en milieu solide sont soumises à une étape de pré-culture afin d'être en phase exponentielle lors de l'inoculation. La dose d'inoculum sera alors avantageusement comprise entre 100 et 300 g de milieu de culture liquide comprenant les bactéries en phase exponentielle par kg de matière sèche 10 initiale. Fermentation en milieu solide La fermentation en milieu solide peut être conduite dans tout réacteur approprié. La fermentation en milieu solide est de préférence conduite pour un arrêt maitrisé 15 avant la sporulation de la souche de moisissure utilisée et/ou à l'atteinte de la phase stationnaire de la souche bactérienne utilisée. La fermentation en milieu solide est ainsi de préférence conduite pendant une période de 1 à 3 jours, de préférence entre 30 et 60 h, de manière particulièrement préférée pendant 48 h. La température du milieu est de préférence maintenue entre 28°C et 38°C, ce qui 20 correspond au domaine d'activité optimum des souches de moisissures et bactéries utilisées pour produire le complément nutritionnel. L'humidité est de préférence maintenue entre 40 et 60% au cours de la fermentation. Une aération, de préférence en continu, est de préférence mise en place pendant la 25 fermentation en milieu solide, afin d'apporter l'oxygène nécessaire à la fermentation et éviter l'accumulation excessive de dioxyde de carbone produit par la fermentation. Une agitation peut être conduite en vue d'éviter la formation de masses imperméables. L'agitation peut être mise en oeuvre au moyen de bras agitateurs, de lames ou spatules ou de vis sans fin. L'agitation reste toutefois de préférence modérée. 30 Conditionnement du produit fermenté Le complément nutritionnel obtenu suite à la fermentation en milieu solide ci-dessus peut être sous forme brute ou extraite. Par "forme brute", on entend ici que le complément nutritionnel comprend le principe 35 actif ainsi que le substrat mis en oeuvre lors de la fermentation en milieu solide avec la 3033332 7 moisissure ou bactérie, éventuellement broyé. Cette forme brute contient typiquement des particules ayant un diamètre comprise entre 50 lm et 5 mm selon le type de broyat généré. Le complément nutritionnel obtenu à l'issue de la fermentation en milieu solide peut en outre être séché ou congelé en vue de sa conservation. 5 Le séchage est de préférence réalisé à une température modérée pour ne pas affecter les activités enzymatiques, par exemple en étuve de préférence à 40°C. La congélation est de préférence réalisée sur le produit fermenté humide, par exemple à -20°C. Le complément nutritionnel obtenu à l'issue de la fermentation en milieu solide peut 10 également subir un nouveau broyage avant d'être conditionné. Par "forme extraite", on entend ici que le principe actif du complément nutritionnel est isolé du substrat mis en oeuvre lors de la fermentation en milieu solide avec la moisissure ou bactérie par des procédés d'extractions pouvant mettre en oeuvre toute technique bien connue de l'homme du métier, en particulier par extraction en solution 15 aqueuse, extraction en solution alcoolique, extraction par solvants, homogénéisation haute pression, extraction supercritique, extraction par lits fluidisés, broyage, broyage cryogénique, décompression, cavitation, bullage, extraction par ultrasons, adsorption sur résines ou zéolites. Le principe actif sous forme liquide peut être ensuite purifié par toute technique bien connue de l'homme du métier, en particulier par centrifugation, filtration, 20 ultrafiltration, chromatographie, utilisation de membranes ou précipitation. Utilisation pour la fabrication d'acide lactique La présente invention concerne l'utilisation d'un complément nutritionnel tel que 25 défini dans la section "Complément nutritionnel' ci-dessus, pour la fabrication, par fermentation, d'acide lactique. La présente invention a également pour objet un procédé de fabrication d'acide lactique à partir d'une matière première glucidique renouvelable, comprenant une étape de fermentation de la matière première glucidique renouvelable par une bactérie lactique en 30 présence d'un complément nutritionnel tel que défini à la section "Complément nutritionnel' ci-dessus. Acide lactique Par "acide lactique" ou "acide 2-hydroxypropanoïque", on entend ici l'acide alpha 35 hydroxyle de formule C3H603 ou son ion lactate. Dans le contexte de l'invention, le terme 3033332 8 "acide lactique" couvre l'énantiomère (R)-acide lactique ou D(-)-acide lactique et l'énantiomère (S)-acide lactique ou L(+)-acide lactique. Ainsi, l'acide lactique produit dans le cadre de l'invention peut être de l'acide D-lactique, de l'acide L-lactique ou un mélange de ceux-ci. De préférence, l'acide lactique 5 produit dans le cadre de l'invention est de l'acide D-lactique. Bactéries lactiques Comme il est bien connu de l'homme du métier, l'acide lactique peut être obtenu par fermentation d'un substrat par des bactéries lactiques. 10 Par "bactérie lactique", on entend ici une bactérie à Gram positif, anaérobie partiellement tolérante à l'oxygène, ne produisant pas en général de spores, se présentant sous formes de coques ou de bâtonnets et capable de fermenter les sucres en acide lactique. Comme il est bien connu de l'homme du métier, les bactéries lactiques appartiennent à l'ordre des Lactobacillales, de la classe des Bacilli du phylum des 15 Firmicutes, ainsi qu'à la famille des Bifidobacteriaceae de l'ordre des Bifidobacteriales. La bactérie lactique utilisée dans le cadre de l'invention est de préférence une bactérie lactique de l'ordre de Lactobacillales. Comme il est bien connu de l'homme du métier, l'ordre des Lactobacillales inclut les familles suivantes : Aerococcaceae, Carnobacteriaceae, Enterococcaceae, Lactobacillaceae, Leuconostocaceae et 20 Streptococcaceae. De préférence, la bactérie lactique utilisée dans le cadre de l'invention est de la famille des Lactobacillaceae. La famille des Lactobacillaceae inclut les bactéries du genre Lactobacillus, Paralactobacillus, Pediococcus et Sharpea. De préférence, la bactérie lactique utilisée dans le cadre de l'invention est du genre 25 Lactobacillus. En particulier, la bactérie lactique utilisée dans le cadre de l'invention peut être choisie dans le groupe constitué des espèces L. acetotolerans, L. acidifarinae, L. acidipiscis, L. acidophilus, L. agilis, L. algidus, L. alimentarius, L. amylolyticus, L. amylophilus, L. amylotrophicus, L. amylovorus, L. animalis, L. antri, L. apodemi, L. aquaticus, L. aviarius, L. bifermentans, L. brantae, L. brevis, L. buchneri, L. cacaonum, L. 30 camelliae, L. capillatus, L. casei, L. ceti, L. coleohominis, L. collinoides, L. composti, L. concavus, L. coryniformis, L. crispatus, L. crustorum, L. curieae, L. curvatus, L. delbrueckii subsp. delbrueckii, L. delbrueckii subsp. indicus, L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. delbrueckii subsp. lactis, L. delbrueckii subsp. sunkii, L. dextrinicus, L. diolivorans, L. equi, L. equicursoris, L. equigenerosi, L. fabifermentans, L. farraginis, L. farciminis, L. fermentum, 35 L. floricola, L. forum, L. fornicalis, L. fructivorans, L. frumenti, L. fuchuensis, L. fusaii, L. gallinarum, L. gasseri, L. gastricus, L. ghanensis, L. gigeriorum, L. graminis, L. hammesii, L. 3033332 9 hamsteri, L. harbinensis, L. hayakitensis, L. helveticus, L. hilgardii, L. hokkaidonensis, L. hominis, L. homohiochii, L. hordei, L. iners, L. ingluviei, L. intestinalis, L. jensenii, L. johnsonii, L. kalixensis, L. kefiranofaciens, L. kefiri, L. kimchicus, L. kimchiensis, L. kimchii, L. kisonensis, L. kitasatonis, L. koreensis, L. kunkeei, L. leichmannii, L. lindneri, L. 5 malefermentans, L. mali, L. manihotivorans, L. mindensis, L. mucosae, L. murinus, L. nagelii, L. namurensis, L. nantensis, L. nasuensis, L. odoratitofui, L. oeni, L. oligofermentans, L. oris, L. oryzae, L. otakiensis, L. ozensis, L. panis, L. pantheris, L. parabrevis, L. parabuchneri, L. paracasei, L. paracollinoides, L. parafarraginis, L. parakefiri, L. paralimentarius, L. paraplantarum, L. pasteurii, L. paucivorans, L. pentosus, L. perolens, 10 L. plantarum, L. pobuzihii, L. pontis, L. porcinae, L. psittaci, L. rapi, L. rennini, L. reuteri, L. rhamnosus, L. rimae, L. rogosae, L. rossiae, L. ruminis, L. saerimneri, L. sakei, L. salivarius, L. sanfranciscensis, L. saniviri, L. satsumensis, L. secaliphilus, L. selangorensis, L. senioris, L. sharpeae, L. siliginis, L. similis, L. sobrius, L. spicheri, L. sucicola, L. suebicus, L. sunkii, L. suntoryeus, L. taiwanensis, L. thailandensis, L. tucceti, L. uli, L. 15 ultunensis, L. uvarum, L. vaccinostercus, L. vaginalis, L. versmoldensis, L. vini, L. vitulinus, L. xiangfangensis, L. yonginensis, L. zeae et L. zymae. De préférence, la bactérie lactique utilisée dans le cadre de l'invention est sélectionnée dans le groupe consistant en les espèces L. mindensis, L. zeae et L. coryniformis. De manière encore préférée, la bactérie lactique utilisée dans le cadre de l'invention est sélectionnée dans le groupe consistant en 20 la souche L. mindensis LMG 21932 (disponible auprès de la Collection BCCM/LMG), la souche L. zeae LMG 17315 (disponible auprès de la Collection BCCM/LMG), la souche L. coryniformis ssp. torquens DSM 20004 (disponible auprès de la Collection DSMZ), et la souche L. coryniformis ssp. torquens DSM 20005 (disponible auprès de la Collection DSMZ). 25 Les bactéries lactiques capables de produire de l'acide D-lactique, de l'acide L- lactique ou un mélange d'acide D-lactique et L-lactique sont bien connues de l'homme du métier et sont par exemple décrites dans Connolly et Leinnerdal (2004) Nutrafoods 3:37-49. Ainsi, parmi les bactéries lactiques capables de produire de préférence de l'acide D-lactique, on peut citer les bactéries lactiques L. coryniformis, L. delbrueckki et L. jensenii. 30 Parmi les bactéries lactiques capables de produire de préférence de l'acide L-lactique, on peut citer les bactéries lactiques L. zeae, L. amylophilus, L. casei et L. rhamnosus. Parmi les bactéries capables de produire de l'acide D-lactique et L-lactique en proportion équivalente, on peut citer les bactéries lactiques L. mindensis, L. acidophilus, L. brevis, L. fermentum et L. plantarum. 35 Les inventeurs ont montré que le complément nutritionnel décrit ci-dessus était particulièrement efficace pour améliorer la production d'acide lactique par des bactéries 3033332 10 lactiques L. coryniformis. Par conséquent, dans un mode de réalisation particulièrement préféré, la bactérie lactique utilisée dans le cadre de l'invention est une bactérie lactique L. coryniformis, en particulier une souche de Lactobacillus coryniformis ssp. torquens, de préférence la souche L. coryniformis ssp. torquens DSM 20004 ou la souche L. 5 coryniformis ssp. torquens DSM 20005, en particulier la souche L. coryniformis ssp. torquens DSM 20005. Au cours du procédé de fabrication d'acide lactique, les bactéries lactiques sont introduites au cours de l'étape de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée. 10 De préférence, les bactéries lactiques sont inoculées dans le milieu de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée à une dose comprise entre 107 et 109 UFC/ml de milieu, de préférence à une dose de 108 UFC/ml de milieu. De préférence, les bactéries lactiques sont introduites dans le milieu de fermentation ou de saccarification-fermentation simultanée après avoir subi une étape de 15 propagation. Cette étape de propagation permet un développement des bactéries lactiques suffisant à l'inoculation du milieu de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée à la dose mentionnée ci-dessus. L'étape de propagation est typiquement mise en oeuvre par culture des bactéries lactiques dans un milieu conventionnel de culture des bactéries lactiques, tel que le milieu MRS (milieu de Man, Rogosa, Sharpe), de préférence 20 sous agitation, par exemple à 100 rpm, à une température adaptée à la croissance des bactéries lactiques, par exemple à 37°C, à pH préférentiellement ajusté par exemple de 6. Matière première glucidique renouvelable Par "matière première glucidique renouvelable", on entend ici les déchets des 25 industries alimentaires peu coûteux, non raffinés, généralement non toxiques et riches en sources de carbone et d'azote plus ou moins assimilable. La matière première glucidique renouvelable utilisée dans le cadre de l'invention peut en particulier être choisie parmi les coproduits de la filière céréalière, telle que la filière blé, maïs, orge ou seigle, les coproduits de la filière sucrière, telle que la filière betterave ou canne à sucre, les coproduits de la 30 filière des végétaux tubérisés riches en glucides, telle que la filière manioc ou pomme de terre, et les coproduits de la filière laitière. Ces matières premières glucidiques renouvelables contiennent à la fois de l'amidon ou du glucose comme source de carbone, et des protéines de haut poids moléculaire, en plus des peptides et acides aminés libres, comme source d'azote plus ou moins assimilable. 3033332 11 Les matières premières glucidiques renouvelables issues de la filière céréalière incluent en particulier les farines liquéfiées et saccharifiées de blé, de maïs, d'orge et/ou de seigle, plus particulièrement des farines liquéfiées et saccharifiées de blé abrasé. Les matières premières glucidiques renouvelables issues de la filière sucrière 5 incluent en particulier les coproduits sucriers concentrés de glucides, plus particulièrement les mélasses de betterave ou de canne à sucre. Les matières premières glucidiques renouvelables issues de la filière des végétaux tubérisés riches en glucides incluent en particulier les farines liquéfiées de tubercules, plus particulièrement les farines liquéfiées de manioc ou de pomme de terre. 10 Les matières premières glucidiques renouvelables issues de la filière laitière incluent en particulier les coproduits laitiers riches en lactose, plus particulièrement le lactosérum. Les inventeurs ont démontré lorsque le complément nutritionnel tel que défini ci-dessus était utilisé dans les procédés de production d'acide lactique à partir de matière 15 première glucidique renouvelable issue de la filière céréalière blé ou maïs, ou de la filière sucrière canne à sucre, il permettait de diminuer l'ajout de solutions nutritives exogènes coûteuses, telles que définies dans la section "Solutions nutritives exogènes" ci-après, d'au moins 20-25% pour un même rendement en acide lactique. De préférence, la matière première glucidique renouvelable utilisée dans le cadre de 20 l'invention est donc choisie dans le groupe consistant en les matières premières glucidiques renouvelables issues de la filière céréalière blé, en particulier les farines liquéfiées saccharifiées (moûts) de blé abrasé, les matières premières glucidiques renouvelables issues de la filière céréalière maïs, en particulier les farines liquéfiées saccharifiées (moûts) de maïs et les matières premières glucidiques renouvelables issues 25 de la filière sucrière canne à sucre, en particulier la mélasse de canne à sucre. Les inventeurs ont plus particulièrement démontré qu'un même rendement d'acide lactique pouvait être obtenu, à partir d'une matière première glucidique renouvelable issue de la filière céréalière blé, quand une solution coûteuse riche en éléments azotés de type MRS était totalement remplacée par le complément nutritionnel tel que défini ci-dessus. 30 De manière particulièrement préférée, la matière première glucidique renouvelable utilisée dans le cadre de l'invention est donc une matière première glucidique renouvelable issue de la filière céréalière blé, en particulier du moût de blé abrasé. La matière première glucidique renouvelable utilisée dans le cadre de l'invention peut être préalablement conditionnée de manière à préparer une mouture. En particulier, 35 pour les matières premières glucidiques renouvelables issues de la filière céréalière blé, 3033332 12 maïs ou de la filière manioc, une étape de broyage, par exemple à l'aide d'un broyeur à marteau, permet d'obtenir une mouture, autrement dit une farine. Solutions nutritives exogènes 5 Des solutions nutritives exogènes peuvent être ajoutées au milieu de fermentation pour couvrir les besoins des bactéries lactiques, et notamment leurs besoins en éléments azotés assimilables. Les solutions nutritives pouvant être utilisées dans le cadre de la présente invention comprennent ou consistent en des éléments communément retrouvés dans le bouillon MRS (de Man, Rogosa, Sharpe), tels que les extraits de levure, les 10 peptones de caséine, les extraits de viande, du potassium phosphate dibasique, de l'acide de sodium, du citrate d'ammonium, du sulfate de magnésium, du sulfate de manganèse et du Tween et les mélanges de ceux-ci. Ces derniers peuvent varier en concentration, pour garantir des apports variés au milieu de fermentation. Les solutions nutritives exogènes de type MRS peuvent ainsi être 15 conventionnellement ajoutées comme source d'azote organique à une dose correspondant à 5 g d'extrait de levure, 10 g de peptones de caséine, 10 g d'extrait de viande, 2 g de potassium phosphate dibasique, 5 g d'acétate de sodium, 2 g de citrate d'ammonium, 0,2 g de sulfate de magnésium, 0,05 g de sulfate de manganèse et 1 g de Tween, par litre de mout de fermentation. 20 Les solutions nutritives exogènes pouvant être utilisées dans le cadre de l'invention peuvent en particulier être choisies dans le groupe constitué des solutions A, B, C, D, E, F et G, dont les compositions sont décrites dans le tableau 1. Tableau 1 : Composition des solutions nutritives exogènes A, B, C, D, E, F et G. Les 25 concentrations en éléments sont celles retrouvées dans le milieu de fermentation. Apport dans le milieu de Solution Solution Solution Solution Solution Solution Solution fermentation (g/1) A B C D E F G Extrait de levure Peptones de caséine 0 0,25 0,5 1,25 2,5 3,75 5 Extrait de viande Potassium phosphate dibasique Acétate de sodium Citrate d'ammonium Sulfate de magnésium Tween 0 0,5 1,0 2,5 5,0 7,5 10 0 0,5 1,0 2,5 5,0 7,5 10 0 0,1 0,2 0,5 1,0 1,5 2 0 0,25 0,5 1,25 2,5 3,75 5 0 0,1 0,2 0,5 1,0 1,5 2 0 0,01 0,02 0,05 0,1 0,15 0,2 0 0,05 0,1 0,25 0,5 0,75 1 3033332 13 Sulfate de manganèse 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 L'ajout de la solution G dans le milieu de fermentation garantira un apport en éléments nutritifs similaires à un bouillon MRS (hors source carbonée). 5 Procédé de fabrication L'étape de fermentation mise en oeuvre dans le procédé de fabrication d'acide lactique selon l'invention est de préférence une étape de saccharification-fermentation simultanée. L'étape de saccharification-fermentation simultanée consiste à mettre en présence 10 la matière première glucidique renouvelable, éventuellement liquéfiée et pré-saccharifiée, avec une bactérie lactique afin de produire le métabolisme d'intérêt, à savoir ici l'acide lactique. De préférence, les caractéristiques de l'étape de saccharification-fermentation simultanée du procédé selon l'invention sont les suivantes : maintien du milieu à une température constante tout au long de l'étape, de 15 préférence entre 30 et 37°C, de manière particulièrement préférée à 37°C ; maintien du pH de préférence entre 5,5 et 6, par exemple par ajout de NaOH pendant l'étape ou par ajout initial en tampon carbonate de calcium ; - agitation comprise entre 100 et 350 rpm ; - niveau de matière sèche du milieu compris entre 10 et 30%. 20 L'étape de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée est de préférence mise en oeuvre pendant 48 à 72 h, de manière particulièrement préférée pendant 48 h. Le complément nutritionnel utilisé dans le cadre de l'invention permet avantageusement de rendre assimilable l'azote présent dans la matière première 25 glucidique renouvelable, qui ne pourrait, en l'absence de ce complément nutritionnel, qu'être très peu et difficilement assimilé par les bactéries lactiques. Par conséquent, dans le cadre de l'invention, la matrice première glucidique renouvelable constitue une source d'azote organique pour les bactéries lactiques. Cette source d'azote organique peut être complétée par d'autres sources d'azote 30 organique "exogènes" (différentes de la matière première glucidique renouvelable telle que définie dans la section "Matière première glucidique" ci-dessus) conventionnellement utilisées en fermentation ou saccharification-fermentation simultanée. De telles sources d'azote organique "exogènes" sont bien connues de l'homme du métier et incluent 3033332 14 typiquement les solutions nutritives exogènes telles que décrites dans la section "Solutions nutritives exogènes" ci-dessus. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, l'étape de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée est mise en oeuvre en présence d'une source 5 d'azote organique issue d'une matière première glucidique renouvelable telle que définie à la section "Matière première glucidique renouvelable" ci-dessus et, éventuellement de solutions nutritives exogènes, telles que décrites dans la section "Solutions nutritives exogènes" ci-dessus. D'autres additifs conventionnellement utilisés dans les procédés de production 10 d'acide lactique peuvent en outre être introduits dans le milieu de saccharification, de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée afin d'améliorer le rendement de production d'acide lactique. Le complément nutritionnel tel que défini à la section "Complément nutritionnef' ci-dessus est de préférence introduit lors de l'étape de saccharification, de fermentation ou de 15 saccharification-fermentation simultanée. Le complément nutritionnel tel que défini à la section "Complément nutritionnef' ci-dessus est de préférence introduit lors de l'étape de pré-saccharification, de saccharification, de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée à une dose de 1,3 à 5 kg/t de matière première glucidique renouvelable, de manière davantage 20 préférée à une dose de 5 kg/t de matière première glucidique renouvelable. Les inventeurs ont démontré que l'utilisation du complément nutritionnel tel que défini ci-dessus permettait de substituer en partie, voire totalement, l'ajout de solutions nutritives exogènes telles que définies à la section "Solutions nutritives exogènes" ci-dessus, dans les procédés de production d'acide lactique à partir de matière première 25 glucidique renouvelable issue des filières céréalières amlylacées ou non, ou encore sucrière. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, l'étape de saccharification, de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée est mise en oeuvre en présence du complément nutritionnel tel que défini à la section "Complément nutritionnef' 30 ci-dessus, de préférence à une dose de 1,3 à 5 kg/t de matière première glucidique renouvelable, de manière davantage préférée à une dose de 5 kg/t de matière première glucidique renouvelable, et une source d'azote organique "exogène", de préférence une solution nutritive exogène telle que définie à la section "Solutions nutritives exogènes" ci-dessus, à une dose correspondant à des apports dans le mout de fermentation de 1 à 1,25 35 g d'extrait de levure, 2 à 2,5 g de peptones de caséine, 2 à 2,5 g d'extrait de viande, 0,4 à 0,5 g de potassium phosphate dibasique, 1 à 1,25 g d'acétate de sodium, 0,4 à 0,5 g de 3033332 15 citrate d'ammonium, 0,04 à 0,05 g de sulfate de magnésium, de 0,05 g de sulfate de manganèse et 0,2 à 0,25 g de Tween, par litre de mout. Les inventeurs ont également démontré qu'un même rendement d'acide lactique pouvait être obtenu, à partir d'une matière première glucidique renouvelable issue de la 5 filière blé, quand les solutions nutritives exogènes coûteuses, riches en éléments azotés étaient totalement remplacées par le complément nutritionnel tel que défini ci-dessus. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, l'étape de saccharification, de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée est mise en oeuvre en présence du complément nutritionnel tel que défini à la section "Complément nutritionne!' 10 ci-dessus, de préférence à une dose de 1,3 à 5 kg/t de matière première glucidique renouvelable, de manière davantage préférée à une dose de 5 kg/t de matière première glucidique renouvelable, et en l'absence d'une source d'azote organique "exogène", en particulier en absence des solutions nutritives exogènes telles que définies à la section "Solutions nutritives exogènes" ci-dessus, contenant des éléments source d'azote 15 assimilable. Le procédé de fabrication d'acide lactique selon l'invention peut comprendre une étape de liquéfaction de la matière première glucidique renouvelable avant l'étape de saccharification, de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée. Une étape 20 de liquéfaction peut en particulier être mise en oeuvre lorsque la matière première glucidique renouvelable est une mouture d'amidon. L'étape de liquéfaction des moutures d'amidon permet en effet d'hydrolyser l'amidon en dextrines. L'étape de liquéfaction consiste à mélanger la mouture avec de l'eau, de l'acide et des enzymes de liquéfaction, de manière à former un moût empâté liquéfié. De préférence, 25 la mouture est incorporée dans l'eau de manière à obtenir un mélange, de préférence homogène, présentant un taux de matière sèche compris entre 20 et 30%. De préférence, le mout ainsi constitué est mis sous agitation entre 250 et 350 rpm. Selon l'enzyme de liquéfaction utilisée, le pH peut être ajusté avec une solution d'acide, par exemple d'acide sulfurique. Le pH peut classiquement être ajusté entre 5 et 6,5. Selon l'enzyme utilisée, un 30 sel de calcium peut également être ajouté. La liquéfaction est de préférence réalisée en appliquant la cinétique de température représentée dans la Figure 1. Cette cinétique inclut typiquement une phase de montée en température de préférence de 15 min permettant d'atteindre une température de 55°C, un palier d'une durée par exemple de 30 min à 55°C, ure deuxième phase de montée en 35 température de préférence de 15 min permettant d'atteindre une température de 85°C, un deuxième palier d'une durée par exemple de 2 h à 85°C, et une phase de refroidissement 3033332 16 du mout empâté liquéfié à température ambiante. Le palier à 55°C correspond typiquement à la phase de pré-liquéfaction et le palier à 85°C correspond typiquement à la phase de liquéfaction. Les enzymes de liquéfaction utilisées incluent de préférence une alpha-amylase, 5 telle que l'alpha-amylase Lyvanol Liquide Plus® commercialisée par Lyven, et éventuellement un complexe hémicellulolytique déviscosant, tel que le complexe Lyvanol Devisco Plus® commercialisé par Lyven. L'alpha-amylase est typiquement ajoutée entre 0,17 et 0,36 kg/t de matière sèche et le complexe hémicellulolytique déviscosant est typiquement ajouté entre 0,17 et 0,36 kg/t de matière sèche. Les enzymes de liquéfaction 10 sont de préférence ajoutées après la première phase de montée en température à 55°C. De préférence, à l'issue de l'étape de liquéfaction, le mout empâté liquéfié présente un taux de matière sèche de l'ordre de 20-25%, de préférence un pH compris entre 5,5 et 6, et de préférence une viscosité de l'ordre de 50 mPa.s-1, la viscosité étant typiquement mesurée à l'aide d'un rhéomètre rotationnel, par exemple de modèle Kinexus Pro® 15 commercialisé par Malvern, à une température de 35°C, la viscosité étant de préférence mesurée à 180 rpm pendant 5 min, après une première phase d'homogénéisation du produit par une vitesse d'agitation à 960 rpm pendant 15 s, la valeur prise en compte étant typiquement la moyenne des 30 dernières secondes de mesure. Le procédé de fabrication d'acide lactique selon l'invention peut comprendre en 20 outre une étape de pré-saccharification des mouts liquéfiés. Cette étape permet d'hydrolyser les dextrines en sucres fermentescibles. Lors de cette étape, le mout liquéfié est mis en présence d'une glucoamylase, telle que la glucoamylase Lyvanol GA 480® commercialisée par Lyven. La glucoamylase est typiquement ajoutée entre 0,89 et 1,45 kg/t de matière sèche. D'autres enzymes peuvent en outre être utilisées au cours de cette 25 étape de pré-saccharification selon la matière première glucidique renouvelable utilisée. Ainsi, l'invertase peut être utilisée pour hydrolyser le saccharose en fructose et glucose. Typiquement, les mélasses de canne à sucre et de betterave peuvent être mises en présence d'une invertase, telle que l'inverlyve P® commercialisée par Lyven. L'invertase est typiquement ajoutée à 50 g/t de matière première. De préférence, pendant l'étape de pré- 30 saccharification le mout liquéfié est mis sous agitation entre 250 et 350 rpm. Le pH peut également être ajusté avec une solution d'acide, par exemple d'acide sulfurique. Le pH peut classiquement être ajusté entre 4 et 5, de préférence entre 4,4 et 4,6. La pré-saccharification est de préférence mise en oeuvre par chauffage à une température comprise entre 50 et 60°C, de préférence à 55°C, pendant moins de 24 h, de 35 préférence pendant 1 h. 3033332 17 Lorsque le procédé de fabrication d'acide lactique selon l'invention comprend une étape de pré-saccharification, le complément nutritionnel tel que défini à la section "Complément nutritionnef' ci-dessus est de préférence ajouté au début de cette étape. De même, les additifs et sources d'azote organique exogènes définis à la section "Solutions 5 nutritives exogènes", ci-dessus peuvent être ajoutés lors de l'étape de pré-saccharification. Le complément nutritionnel peut toutefois également être introduit au cours de l'étape de saccharification, de fermentation ou de saccharification-fermentation. Après l'étape de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée, l'acide 10 lactique produit peut être séparé du milieu de fermentation ou de saccharification- fermentation simultanée par toute technique conventionnelle connue de séparation de l'acide lactique de solutions aqueuses. Les particules de matière première ou les bactéries lactiques peuvent être éliminées avec la séparation pour augmenter l'efficacité de la séparation. La séparation peut être mise en oeuvre par exemple par centrifugation, filtration, 15 floculation, flottation ou filtration sur membrane. Après séparation du milieu de fermentation ou de saccharification-fermentation simultanée, l'acide lactique produit par le procédé selon l'invention peut en outre être soumis à une ou plusieurs étapes de purification telles qu'une extraction, distillation, cristallisation, filtration, etc. 20 Les inventeurs ont démontré que l'utilisation du complément nutritionnel tel que défini ci-dessus au cours du procédé de production d'acide lactique permettait de réduire la présence d'azote aminé libre (FAN) en fin de fermentation ou saccharification-fermentation simultanée. Or, la présence de FAN en fin de fermentation peut poser des problèmes lors des étapes subséquentes d'extraction et de purification de l'acide lactique. 25 Par conséquent, l'utilisation du complément nutritionnel tel que défini à la section "Complément nutritionnef' ci-dessus permet avantageusement d'accroître les performances des étapes subséquentes d'extraction et de purification de l'acide lactique. Libération d'azote 30 Les inventeurs ont par ailleurs démontré que l'augmentation de la production d'acide lactique observée lors de l'utilisation du complément nutritionnel tel que défini ci-dessus était liée à l'amélioration de la source d'azote disponible dans le mout de fermentation pour la bactérie lactique. Les performances du complément nutritionnel selon l'invention peuvent donc être reliées à sa capacité à libérer l'azote soluble dans le milieu de fermentation ou de 35 saccharification-fermentation simultanée. 3033332 18 La présente invention concerne donc également l'utilisation du complément nutritionnel tel que défini à la section "Complément nutritionnef' ci-dessus, pour libérer, dans un milieu de fermentation en acide lactique d'une matière première glucidique renouvelable, telle que définie ci-dessus, l'azote de ladite matière première, au cours de la 5 fabrication, par fermentation, de préférence en milieu liquide, d'acide lactique à partir de ladite matière première. Composition et kit 10 Les inventeurs ont démontré qu'en ajoutant au mout de fermentation une combinaison constituée du complément nutritionnel selon l'invention et d'une quantité réduite d'une source d'azote organique exogène, en particulier d'une source d'azote organique exogène couteuse telle que les solutions nutritives exogènes définies à la section "Solutions nutritives exogènes" ci-dessus, il était possible d'obtenir la même 15 performance de production d'acide lactique qu'en utilisant seulement une quantité importante de source d'azote organique exogène couteuse. La présente invention concerne donc également une composition comprenant : (i) une source d'azote organique sélectionnée dans le groupe constitué des matières premières glucidiques renouvelables telles que définies à la section "Matière 20 première glucidique renouvelable" ci-dessus, des solutions nutritives exogènes telles que définies à la section "Solutions nutritives exogènes" et des mélanges de celles-ci, (ii) un complément nutritionnel tel que défini à la section "Complément nutritionnef' ci-dessus. La présente invention a également pour objet un kit comprenant : 25 (i) une source d'azote organique sélectionnée dans le groupe constitué des matières premières glucidiques renouvelables telles que définies à la section "Matière première glucidique renouvelable" ci-dessus, des solutions nutritives exogènes telles que définies à la section "Solutions nutritives exogènes", et des mélanges de celles-ci, (ii) un complément nutritionnel tel que défini à la section "Complément nutritionnef' 30 ci-dessus, et (iii) éventuellement un emballage. Les inventeurs ont en particulier démontré qu'en ajoutant au mout de fermentation une combinaison constituée du complément nutritionnel selon l'invention et de la solution nutritive exogène B telle que définie à la section "Solutions nutritives exogènes", il était 35 possible d'obtenir la même performance de production d'acide lactique qu'en utilisant la 3033332 19 solution nutritive exogène G seule (correspondant à un apport en source azotée similaire à celui d'un bouillon de culture type MRS). Ainsi, dans un mode de réalisation préféré, la source d'azote organique (i) de la composition selon l'invention ou du kit selon l'invention correspond à un apport dans le 5 mout de fermentation de 0,25 à 2,5 g/I d'extrait de levure, 0,5 à 5 g/I de peptones de caséine, 0,5 à 5 g/I d'extrait de viande, 0,1 à 1 g/I de potassium phosphate dibasique, 0,25 à 2,5 g/I d'acétate de sodium, 0,1 à 1 g/I de citrate d'ammonium, 0,01 à 0,1 g/I de sulfate de magnésium, 0,05 g/I de sulfate de manganèse, et 0,05 à 0,5 g/I de Tween 80. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, la source d'azote organique 10 (i) de la composition selon l'invention ou du kit selon l'invention correspond à un apport dans le mout de fermentation de 0,25 g/I d'extrait de levure, 0,5 g/I de peptones de caséine, 0,5 g/I d'extrait de viande, 0,1 g/I de potassium phosphate dibasique, 0,25 g/I d'acétate de sodium, 0,1 g/I de citrate d'ammonium, 0,01 g/I de sulfate de magnésium, 0,05 g/I de sulfate de manganèse, et 0,05 g/I de Tween 80. 15 La présente invention sera illustrée plus en détail par les figures et exemples ci-dessous. 20 Brève description des figures La Figure 1 représente la cinétique de température préférablement appliquée à l'étape de liquéfaction de la matière première glucidique renouvelable, en particulier au mout empâté de blé. A : ajout d'enzymes de liquéfaction ; B : premier palier de température à 55°C 25 correspondant à la pré-liquéfaction ; C : deuxième palier de température à 85°C correspondant à la liquéfaction du mout. La Figure 2 représente le profil granulométrique d'une mouture de blé abrasé obtenue après broyage au marteau sur grille 0,8 mm. 30 La Figure 3 représente l'impact de l'ajout de solutions nutritives exogènes ou du complément nutritionnel selon l'invention sur les rendements lactiques obtenus en fiole au terme de 48h de fermentation d'un mout de blé abrasé (A), de mélasses de canne à sucre (B), de maïs (C) ou de manioc (D), par la souche Lactobacillus coryniformis ssp. torquens 35 DSM 20005 inoculée à 108 UFC/ml dans l'exemple 2. 3033332 20 La Figure 4 représente l'impact de l'ajout de solutions nutritives exogènes ou du complément nutritionnel selon l'invention sur les rendements lactiques obtenus en fiole au terme de 48 h de fermentation d'un mout constitué d'un blé abrasé liquéfié saccharifié (13% MS), par une des 4 souches lactiques testées, à savoir la souche Lactobacillus coryniformis 5 ssp. torquens DSM 20004 (A), Lactobacillus coryniformis ssp. torquens 20005 (B), Lactobacillus mindensis LMG 21932 (C), ou Lactobacillus zeae LMG 17315 (D), inoculée à 107 UFC/ml dans l'exemple 3. La Figure 5 représente l'impact de la souche utilisée pour la production du complément 10 nutritionnel (CN) selon l'invention sur les rendements lactiques obtenus en fiole au terme des 72 h de fermentation d'un mout de blé liquéfié, saccharifié et additionné de la solution nutritive B, par L. coryniformis DSM 20004 inoculée à 1 x107 UFC/ml dans l'exemple 5. Bandeau pointillé : zone de rendements obtenus avec un mout additionné de la solution G. 15 La Figure 6 représente le positionnement de chaque complément nutritionnel (CN) testé dans l'exemple 5 en fonction des concentrations finales en FAN et acide lactique (après 72 h de fermentation d'un mout de blé liquéfié, saccharifié et additionné de la solution B, par L. coryniformis DSM 20004 inoculée à 1 x107 UFC/ml). La courbe tracée correspond à la régression linéaire. 20 La Figure 7 représente le positionnement de chaque complément nutritionnel testé dans l'exemple 5 en fonction des coefficients FAN par kg de complément nutritionnel et des rendements lactiques obtenus après 72 h de fermentation d'un mout de blé liquéfié, saccharifié et additionné de la solution B, par L. coryniformis DSM 20004 inoculée à lx 107 25 UFC/ml. La courbe tracée correspond à la régression linéaire. La Figure 8 représente l'impact du type de complément nutritionnel mis en oeuvre sur les rendements lactiques obtenus en réacteur au terme des 50 h de fermentation d'un mout de blé liquéfié saccharifié additionné de la solution nutritive B, par L. coryniformis DSM 20004 30 ou DSM 20005 inoculée à 109 UFC/ml, dans l'exemple 6. La Figure 9 représente la distribution relative des acides aminés libres (AAL) libérés par les compléments nutritionnels selon l'invention en fonction des genres et espèces des souches mises en oeuvre dans l'exemple 6. Le profil AAL est déterminé après 72 h d'incubation à 35 30°C d'un mout blé liquéfié et saccharifié à 13% de MS, ajusté à pH 5,5, en présence 3033332 21 d'azoture de sodium et d'un complément nutritionnel solubilisé et filtré à 0,2 pm, incorporé à la dose de 5 kg/t de matière première glucidique renouvelable. La Figure 10 représente le positionnement de chaque complément nutritionnel testé en 5 fonction des concentrations finales en FAN ou AAL et acide lactique, après 50 h de fermentation d'un mout de blé liquéfié saccharifié additionné de la solution B, par la souche L. coryniformis DSM 20004 ou DSM 20005 inoculée à 109 UFC/ml, dans l'exemple 6. La Figure 11 montre la comparaison d'enzymes commerciales (types, doses) et du 10 complément nutritionnel (CN) selon l'invention sur les rendements lactiques obtenus en réacteur au terme des 48 h de fermentation d'un mout de blé liquéfié saccharifié additionné de la solution B, par L. coryniformis DSM 20005 inoculée à 109 UFC/ml, dans l'exemple 6. La Figure 12 représente la distribution relative des acides aminés libres (AAL) libérés par 15 les enzymes Fermgen, Prolyve BS concentrée et le complément nutritionnel selon l'invention produit avec la souche 029 sur tourteau de colza, dans l'exemple 6. Le profil AAL est déterminé après 72 h d'incubation à 37°C dian mout blé liquéfié et saccharifié à 13% de MS, ajusté à pH 5,5, en présence d'azoture de sodium et d'un complément nutritionnel solubilisé et filtré à 0,2 pm, incorporé à la dose de 5 kg/t de matière première 20 glucidique renouvelable. La Figure 13 représente l'impact du type de complément nutritionnel mis en oeuvre en présence de solution nutritive (A ou B) sur la population de bactéries lactiques (traits discontinus) et la production d'acide lactique (traits continus) au cours des 50 h de 25 fermentation d'un moût de blé liquéfié et saccharifié à 20% MS par L. coryniformis DSM 20005 inoculée à 109 UFC/ml, comme décrit dans l'exemple 7. 30 3033332 22 Exemples Exemple 1: Fabrication du complément nutritionnel 5 Cet exemple décrit la production du complément nutritionnel utilisé dans le cadre de l'invention. Le procédé de fabrication du complément nutritionnel par fermentation solide comporte les différentes étapes suivantes : les coproduits céréaliers (son de blé, tourteau de colza, ...) utilisés comme matière première sont conditionnés et prétraités. En parallèle, 10 les moisissures ou bactéries qui seront utilisées pour la fermentation sont sporulées ou cultivées en vue de l'inoculation. Ces moisissures ou bactéries sont ensuite mises en contact avec les coproduits céréaliers prétraités dans une étape de fermentation en milieu solide. Le produit issu de la fermentation peut ensuite être ou non traité, par exemple être broyé ou être extrait. 15 Dans cet exemple, les inventeurs ont utilisé comme coproduit céréalier un tourteau de colza et comme moisissure une souche d'Aspergillus flavus. Le milieu nutritif était ainsi constitué par un tourteau de colza en farine pré-humidifié à 60% de matière sèche et autoclave pendant 35 min à 105°C. Après refroidissement, le milieu a été inoculé par une solution de spores d'Aspergillus flavus afin d'obtenir une 20 concentration de 1x107 spores par gramme de matière sèche et une humidité initiale de 45%. Le pH a été ajusté à 4,9 par ajout d'acide sulfurique. Le milieu de culture ainsi obtenu a été réparti dans des fioles d'erlenmeyer à raison de 10 g de matière sèche par fiole. Les fioles d'erlenmeyer ont ensuite été incubées à 33°C en conditions aérobies à l'obscurité pendant 48 h sans agitation. L'humidité est restée comprise entre 40 et 60% au cours de la 25 fermentation. Une aération a permis l'apport d'oxygène nécessaire à la fermentation et évité l'accumulation de dioxyde de carbone produit par la fermentation. La fermentation a été arrêtée à l'apparition des premières spores dans le milieu de culture. Le mélange obtenu en fin de fermentation peut être séché et utilisé tel quel, c'est-à-dire sous forme brute, dans le process de fabrication de l'acide lactique ou être extrait dans 30 du tampon acétate de sodium 0,1 M, (ratio 10% p/v complément nutritionnel/tampon) puis filtré à 0,2 lm pour être ajouté sous forme liquide. 35 3033332 23 Exemple 2: Effet du complément nutritionnel sur différentes matières premières utilisées pour produire de l'acide lactique Cet exemple montre que le complément nutritionnel selon l'invention peut être utilisé avec de nombreuses matières premières glucidiques renouvelables pour fabriquer de 5 l'acide lactique. Les inventeurs ont étudié de façon comparative la quantité d'acide lactique produite au cours d'un procédé de production d'acide lactique mettant en oeuvre une étape de saccharification-fermentation simultanée (SSF) de différentes matières premières 10 renouvelables (blé, maïs, manioc, canne à sucre) en introduisant soit une solution nutritive exogène plus ou moins concentrée en éléments tels que les extraits de viande, de levure et de peptones de caséine, soit le complément nutritionnel obtenu dans l'exemple 1. Matériel et méthodes 15 Description générale du procédé de production d'acide lactique Le procédé de production d'acide lactique mis en oeuvre comporte les étapes suivantes: la matière première renouvelable (blé, maïs, ...) est conditionnée puis liquéfiée avant d'être soumise à une étape de pré-saccharification. En parallèle, la bactérie lactique utilisée pour la fermentation lactique est pré-fermentée dans un pré-fermenteur. Cette 20 bactérie lactique est ensuite mise en contact avec la matière première dans une étape de SSF. L'acide lactique produit au cours de cette étape de SSF peut ensuite être extrait et purifié. Conditionnement de la matière première 25 La matière première a été conditionnée de manière à obtenir une mouture. Pour le blé, le maïs et le manioc, une étape de broyage a permis d'obtenir une mouture, autrement dit une farine. Pour le blé, les grains de blé abrasé ont été broyés à l'aide d'un broyeur à marteau (Electra). La taille de la grille utilisée a été fixée à 0,8 mm. La mouture obtenue présente un 30 taux d'humidité de 10% (± 2%) et un profil granulométrique tel que représenté sur la Figure 2. Selon ce même principe, des moutures de maïs ont été obtenues par broyage au marteau. Sous forme de farines, ces matières premières sont stockées à l'abri de la lumière dans un endroit sec à température ambiante. 35 3033332 24 Etape de liquéfaction L'étape de liquéfaction des moutures générées permet d'hydrolyser l'amidon en dextrines. Le principe est de mélanger la farine de blé (par exemple) avec de l'eau, de l'acide et des enzymes de liquéfaction, de manière à former un mout empâté liquéfié. 5 Le mout empâté a été préparé en incorporant la farine dans l'eau de manière à obtenir un mélange homogène présentant un taux de matière sèche de l'ordre de 20 à 30%. Ce mout ainsi constitué a été réparti en réacteur et mis sous agitation entre 250 et 350 rpm. La cinétique de température appliquée au mout de blé est présentée dans la Figure 1. 10 Au début de la montée en température, le pH du mout a été ajusté à 5,4 (par ajout de H2SO4) afin d'optimiser le travail des enzymes de liquéfaction ajoutées après atteinte de 55°C. Deux enzymes de liquéfaction ont été utilisée, l'une correspondant à une déviscosante (Lyvanol Devisco Plus® - LYVEN) ajoutée à 0,24 kg/t de matière sèche, l'autre correspondant à une alpha-amylase (Lyvanol Liquide Plus® - LYVEN) également 15 ajoutée à 0,24 kg/t de matière sèche. Après 30 min de pré-liquéfaction à 55°C, le mout a été liquéfié à 85°C pendant 2 h dans un réacteur ajté. Au terme de la liquéfaction, le mout a été refroidi à température ambiante. Les mouts de blé et de maïs présentaient alors un taux de matière sèche respectivement de 13 et 30%, un pH compris entre 5,5 et 6 et une viscosité de l'ordre de 50 mPa.s-1. 20 Etape de pré-saccharification L'étape de pré-saccharification des mouts liquéfiés permet d'hydrolyser les dextrines en sucres fermentescibles (glucose, maltose, maltotriose). Une enzyme de type amylo-glucosidase (Lyvanol GA 480® - LYVEN) a été utilisée à 0,890 kg/t de matière 25 sèche : les mouts liquéfiés de blé et de maïs ont été répartis en fioles bafflées de 250 ml agitées entre 250 et 350 rpm, contenant chacune 100 ml de mout, complétées en Lyvanol GA 480® à 0,890 kg/t de matière sèche et CaCO3 (à 30 g/I de mout). Une solution nutritive exogène, riche en éléments azotés, ou le complément nutritionnel obtenu selon l'exemple 1, ont en outre été ajoutés le cas échéant. Le pH a été ajusté à un pH acide (autour de 4,4 30 et 4,6) et les fioles ont été maintenues à une température de 50°C pendant 2 h. Etape de propagation des bactéries lactiques Au terme des 2 h de pré-saccharification, les mouts ont été ensemencés avec une bactérie lactique. La bactérie lactique utilisée est une bactérie du genre Lactobacillus, 35 productrice d'acide D-lactique, la souche Lactobacillus coryniformis ssp. torquens DSM 20005. 3033332 25 Cette souche a été introduite dans le milieu de saccharification-fermentation simultanée (SSF) après avoir été cultivée en milieu riche type bouillon Man, Rogosa et Sharpe (MRS). Cette étape de propagation permet un développement de la souche suffisant et nécessaire à l'inoculation du milieu de SSF à 108 UFC/ml de mout. Les 5 conditions de propagation ont été les suivantes : agitation de 100 rpm, température fixée à 37°C et maintien du pH à 6 par ajout de NaOH. Etape de saccharification-fermentation simultanée L'étape de SSF consiste à mettre en présence un mout pré-saccharifié avec une 10 bactérie lactique afin de produire le métabolisme d'intérêt : l'acide lactique. Pour ce faire, les mouts ont été ensemencés avec 108 UFC de bactérie lactique obtenue à l'étape de propagation par ml de mout. Le mout a été mis sous agitation à 100 rpm. La température a été maintenue constante au tout long de cette étape à 37°C. Le maintien du pH entre 5,5 et 6 a été assuré 15 grâce à l'ajout initial de tampon carbonate de calcium. La fermentation a ainsi duré 48 h. Mouts de fermentation Les mouts de fermentation sont composés d'une des matières glucidiques renouvelables liquéfiées, ou saccharifiées ou les deux, additionnée d'une des solutions 20 nutritives exogènes définies dans le tableau 2, ou du complément nutritionnel selon l'invention : - Mout + A : matière glucidique renouvelable avec ajout de la solution A - Mout + D : matière glucidique renouvelable avec ajout de la solution D - Mout + E : matière glucidique renouvelable avec ajout de la solution E 25 - Mout + F : matière glucidique renouvelable avec ajout de la solution F - Mout + G : matière glucidique renouvelable avec ajout de la solution G - Mout + A + complément nutritionnel : matière glucidique renouvelable avec ajout de la solution A et du complément nutritionnel obtenu à partir d'un tourteau de colza (TC) fermenté par la souche d'Aspergillus flavus, suivant le procédé décrit dans 30 l'exemple 1. Tableau 2 : Composition des solutions nutritives exogènes mises en oeuvre dans l'exemple 2 Concentration en g/l de mout Solution A Solution D Solution E Solution F Solution G Extrait de levure 0 1,25 2,5 3,75 5 Peptones de caséine 0 2,5 5 7,5 10 Extrait de viande 0 2,5 5 7,5 10 3033332 26 Concentration en g/l de mout Solution A Solution D Solution E Solution F Solution G Potassium phosphate dibasique 0 0,5 1 1,5 2 Acétate de sodium 0 1,25 2,5 3,75 5 Citrate d'ammonium 0 0,5 1 1,5 2 Sulfate de magnésium 0 0,05 0,1 0,15 0,2 Tween 0 0,25 0,5 0,75 1 Sulfate de manganèse 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 Potentiel glucose des mouts : entre 100 et 150 g/I de mout (variable selon la matière première). Apport du complément nutritionnel dans le mout de fermentation compris entre 1,3 et 5 kg/t de matière première) ; pH initial des mouts : entre 5,5 et 6. 5 Résultats Comme le montre la figure 3, la production d'acide lactique est améliorée par l'ajout de solutions nutritives exogènes plus ou moins concentrées en éléments azotés. Le gain de rendement est variable selon la matière glucidique renouvelable mise en oeuvre. 10 Sur blé abrasé, le rendement maximal en fioles est atteint avec l'ajout de la solution G (0,64 g/g de glucose), soit avec un apport en éléments azotés pour la souche lactique similaire à celui qu'elle peut avoir dans un bouillon de culture type MRS. Sur mélasses de canne à sucre, la souche lactique est incapable de produire de l'acide lactique sans ajout d'une solution nutritive riche en éléments azotés. Le rendement maximal en fioles de 0,4 15 g/g de glucose est obtenu avec un ajout de la solution F. Sur maïs, l'ajout de la solution D permet d'améliorer le rendement de production d'acide lactique en fioles d'un facteur 5 (0,28 g/g contre 0.05 g/g sur mout + A). L'ajout de solutions nutritives plus concentrées permet d'augmenter le rendement jusqu'à un maximum en fiole de 0.36 g/g. Enfin sur manioc, le rendement maximal en fioles peut être atteint avec l'ajout de la solution D (0,33 20 g/g de glucose), soit avec un apport en éléments azotés pour la souche lactique similaire à celui qu'elle pourrait avoir dans un bouillon de culture type MRS dilué au quart. L'ajout du complément nutritionnel selon l'invention permet au même titre que les solutions nutritives, mais à moindres couts, d'améliorer les rendements de production de l'acide lactique par la souche Lactobacillus coryniformis ssp. torquens DSM 20005. Son 25 effet est également variable selon la matière glucidique renouvelable mise en oeuvre. Ainsi, sur le blé abrasé, le complément nutritionnel peut substituer totalement l'ajout de solutions nutritives dites couteuses (ex : solution G) et garantir le maintien du rendement lactique. Sur les autres matières glucidiques renouvelables, le complément nutritionnel peut substituer en partie l'ajout de solutions nutritives. Sur mélasses de canne à sucre et maïs, 30 le complément nutritionnel permet d'atteindre le même rendement qu'avec l'ajout de la solution D. En permettant une meilleure assimilation du potentiel azoté des matières 3033332 27 glucidiques renouvelables par la souche, le complément peut substituer un apport couteux en extrait de levure, d'extrait de viande et de peptones de 1.25, 2.5 et 2.5 g/I respectivement. Sur manioc, le complément nutritionnel permet d'améliorer le rendement lactique de 30% par rapport au mout seul. 5 Exemple 3: Effet du complément nutritionnel sur différentes souches de bactéries lactiques utilisées pour produire de l'acide lactique Cet exemple montre que le complément nutritionnel peut être utilisé avec différents 10 types de bactéries lactiques conventionnellement utilisées pour produire de l'acide lactique. Les inventeurs ont étudié de façon comparative la quantité d'acide lactique produite au cours de la SSF de mout de blé par différentes souches de bactéries lactiques, productrices de D- et/ou de L-lactate, en introduisant soit une solution nutritive exogène 15 plus ou moins concentrée en éléments tels que les extraits de viande, de levure et de peptones de caséine, soit le complément nutritionnel obtenu dans l'exemple 1, soit un mélange des deux. Matériel et méthodes 20 Dans ces essais, les inventeurs ont réalisé au préalable une liquéfaction de mout de blé abrasé, pendant 2 heures à 85°C dans un réacteu agité présentant un taux de matière sèche final de 13%. Le mout liquéfié de blé a été réparti en fioles bafflées de 250 ml agitées, contenant chacune 100 ml de moût, complétées en Lyvanol GA 480® (amyloglucosidase à 0.890 kg/t 25 de matière sèche), et CaCO3 (à 30 g/I de mout). Mouts de fermentation Les mouts de fermentation sont composés de blé abrasé liquéfié, additionnés d'une des solutions nutritives exogènes définies dans le tableau 3 ou du complément nutritionnel 30 selon l'invention, ou les deux : Mout + A : blé abrasé liquéfié avec ajout de la solution A Mout + C : blé abrasé liquéfié avec ajout de la solution C Mout + D : blé abrasé liquéfié avec ajout de la solution D Mout + E : blé abrasé liquéfié avec ajout de la solution E 35 Mout + G : blé abrasé liquéfié avec ajout de la solution G 3033332 28 Mout + A + complément nutritionnel : blé abrasé liquéfié avec ajout de la solution A et du complément nutritionnel obtenu à partir de tourteau de colza (TC) fermenté par la souche d'Aspergillus flavus, suivant le procédé décrit dans l'exemple 1 Mout + B + complément nutritionnel : blé abrasé liquéfié avec ajout de la solution B 5 et du complément nutritionnel obtenu à partir de tourteau de colza (TC) fermenté par la souche d'Aspergillus flavus, suivant le procédé décrit dans l'exemple 1. Tableau 3 : Composition des solutions nutritives exogènes mises en oeuvre dans l'exemple 3 Concentration en g/l de mout Solution Solution Solution Solution Solution Solution A B C D E G Extrait de levure 0 0,25 0,5 1,25 2,5 5 Peptones de caséine 0 0,5 1 0 2,5 5 10 Extrait de viande 0 0,5 1,0 2,5 5 10 Potassium phosphate dibasique 0 0,1 0,2 0,5 1 2 Acétate de sodium 0 0,25 0,5 1,25 2,5 5 Citrate 0 0,1 0,2 0,5 1 2 d'ammonium Sulfate de magnésium 0 0,01 0,02 0,05 0,1 0,2 Tween 0 0,05 0,1 0,25 0,5 1 Sulfate de manganèse 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 10 L'apport du complément nutritionnel est de 5 kg/t de matière première. pH initial du mout : entre 5,5 et 6. Les fioles ainsi constituées ont été incubées à 50°C pendant 2 h. Ces dernières présentent un potentiel glucose de 100 g/I de mout. Au terme de ces 2 h de pré- 15 saccharification, les mouts ont été ensemencés avec 107 UFC de bactérie lactique par ml de mout. Les souches bactériennes utilisées dans cet exemple sont : Lactobacillus mindensis LMG 21932 (productrice L&D-lactate) Lactobacillus zeae LMG 17315 (productrice L-lactate) Lactobacillus coryniformis ssp. torquens DSM 20004 (productrice D-lactate) 20 Lactobacillus coryniformis ssp. torquens DSM 20005 (productrice D-lactate) La fermentation a été conduite pendant 48 h à 37°Csous agitation (100 rpm). 25 3033332 29 Résultats Comme le montre la figure 4, la production d'acide lactique est améliorée par l'ajout du complément nutritionnel, et ce quelle que soit la souche mise en oeuvre. Les rendements lactiques obtenus avec les souches Lactobacillus coryniformis ssp. 5 torquens DSM 20004 et DSM 20005, inoculées initialement à 1x107 UFC/ml dans le mout de fermentation (condition mout + A), ne dépassent pas les 5%. Par l'ajout du complément nutritionnel à 5 kg/t de blé, l'accessibilité à la source azotée intrinsèque à la matière première mise en oeuvre est améliorée, ce qui permet d'augmenter les rendements lactiques. Ainsi, les rendements en fioles atteignent les 55% avec la souche DSM 20004, 10 45% avec la souche DSM 20005. Comparés aux rendements obtenus avec l'ajout de solutions nutritives (solutions C, G), le complément nutritionnel peut, en partie ou totalement, se substituer à ces intrants couteux (dont extraits de levure, peptones, extraits de viande, ...). Pour la souche DSM 20005, le rendement lactique obtenu avec ajout de la solution nutritive la plus riche en éléments azotés (solution G) peut être dépassé en 15 associant le complément nutritionnel à une solution nutritive dont la concentration en éléments azotés est réduite de 95% (solution B). Ainsi, les quantités et donc les couts d'intrants peuvent être réduits par la mise en oeuvre du complément nutritionnel. Pour les souches Lactobacillus mindensis LMG 21932 et Lactobacillus zeae LMG 17315, les rendements lactiques après 48h de fermentation sur mout liquéfié saccharifié de 20 blé abrasé sont plutôt faibles avec 6.6% et 17% respectivement. L'ajout de solutions nutritives riches en éléments azotés permet d'améliorer ces rendements (ici solutions C, D et E). Pour atteindre les 50% de rendement en fioles, il faut apporter une source azotée correspondant à la solution D pour la souche LMG 21932, correspondant à la solution C pour la souche LMG 17315. De par son action sur la matière première mise en oeuvre, 25 l'ajout du complément nutritionnel permet de réduire l'apport nutritif exogène nécessaire à la souche tout en maintenant les rendements à 50%. En combinaison avec le complément nutritionnel, l'ajout d'une source azotée moins couteuse, correspondant dans cet exemple à la solution B, peut alors suffire pour répondre aux besoins des souches lactiques. 30 35 3033332 30 Exemple 4: Effet du complément nutritionnel en conduite de procédé de production d'acide lactique en réacteur type batch Cet exemple montre que le complément nutritionnel peut être utilisé de manière efficace en conduite de procédé de production d'acide lactique à différentes échelles. 5 Les inventeurs ont étudié de façon comparative la quantité d'acide lactique produite au cours de la SSF de mout de blé par la souche L. coryniformis DSM 20004, en introduisant soit une solution nutritive exogène concentrée en éléments tels que les extraits de viande, de levure et de peptones de caséine, soit le complément nutritionnel obtenu 10 dans l'exemple 1, et en faisant varier la conduite de fermentation, à savoir soit une conduite de fermentation en fiole pour laquelle le contrôle du pH n'est pas optimal, soit une conduite en réacteur type batch avec maintien du pH en continu. Matériel et méthodes 15 Dans ces essais, les inventeurs ont réalisé au préalable une liquéfaction de mout de blé abrasé, pendant 2 h à 85°C dans un réacteur agté présentant un taux de matière sèche final de 13% pour la condition fiole, de 20% pour la condition réacteur de type batch. Le mout liquéfié de blé 13% de matière sèche (MS) a été réparti en fioles bafflées de 250 ml agitées, contenant chacune 100 ml de moût, complétées en Lyvanol GA 480® 20 (amyloglucosidase à 0.890 kg/t de matière sèche) et CaCO3 (à 30 g/I de mout). Le mout liquéfié de blé 20% MS a été réparti en réacteurs, contenant chacun 3000 ml de moût, complétés en Lyvanol GA 480® (amyloglucosidase à 0.890 Kg/t de MS) et mis sous contrôle du pH par l'ajout d'acide sulfurique 5 N et de soude 7 N pour une consigne de maintien du pH à 6 tout le long de la fermentation. 25 Mouts de fermentation Les mouts de fermentation sont composés de blé abrasé liquéfié, additionnés d'une des solutions nutritives exogènes définies dans le tableau 4 ou du complément nutritionnel selon l'invention : 30 Mout + G : blé abrasé liquéfié avec ajout de la solution G Mout + A + complément nutritionnel : blé abrasé liquéfié avec ajout de la solution A et du complément nutritionnel obtenu à partir de tourteau de colza (TC) fermenté par la souche d'Aspergillus flavus, suivant le procédé décrit dans l'exemple 1, pour une concentration à 5 kg/t de blé. 35 3033332 31 Tableau 4 : Composition des solutions nutritives exogènes mises en oeuvre dans l'exemple 4 Concentration en g/I de mout Solution A Solution G Extrait de levure 0 5 Peptones de caséine 0 10 Extrait de viande 0 10 Potassium phosphate dibasique 0 2 Acétate de sodium 0 5 Citrate d'ammonium 0 2 Sulfate de magnésium 0 0,2 Tween 0 1 Sulfate de manganèse 0,05 0,05 pH initial du mout : entre 5,5 et 6. Les fioles ainsi constituées ont été incubées à 50°C pendant 2 h. Ces dernières 5 présentent un potentiel glucose de 100 g/I de mout. Au terme de ces 2 h de pré- saccharification, les mouts ont été ensemencés avec au moins 108 UFC de bactérie lactique par ml de mout. La souche bactérienne utilisée dans cet exemple est Lactobacillus coryniformis ssp. torquens DSM 20004. La fermentation a été conduite pendant 48 h à 37°C sous agitation (100 rpm). 10 En réacteur, la pré-saccharification a été effectuée à 60°C pendant 1 h. Le potentiel glucose est de 135-145 g/I de mout. Les mouts ont été ensemencés avec au moins 108 UFC de bactérie lactique par ml de mout. La souche bactérienne utilisée dans cet exemple est Lactobacillus coryniformis ssp. torquens DSM 20004. La fermentation a été conduite pendant 48 h à 30°C sous agitation (300 rpm). 15 Résultats Comme le montre le tableau 5, le changement d'échelle (scale-up) de la fiole au réacteur type batch permet d'améliorer les performances de la souche : la meilleure maitrise des paramètres de fermentation (température/agitation) ainsi que la régulation du 20 pH en continu permettent d'augmenter les rendements de production de l'acide lactique par la souche L. coryniformis DSM 20004, quelle que soit l'origine de la source en éléments azotés disponibles pour la souche (exogène avec la solution nutritive G ou intrinsèque sous l'action du complément nutritionnel). Le gain de rendement observé en scale-up pour la condition mout additionné de la solution nutritive G est de 18% (amélioration du rendement 25 de 78.8% à 93.4%). Ce gain est de 71% pour la condition mout additionné du complément nutritionnel. 3033332 32 Tableau 5 : Rendements lactiques obtenus en fiole et en réacteur type batch au terme de 48h de fermentation d'un mout liquéfié saccharifié de blé abrasé, par Lactobacillus coryniformis DSM 20004 inoculé à 1x108 UFC/ml Rendement lactique en % Gain de rendement au (sur potentiel glucose) scale-up (%) Conduite en Conduite en fiole réacteur type batch Mout + G 78.8 93.4 18.5 Mout + A + complément nutritionnel 42.8 73.3 71.3 5 Le changement d'échelle, via une meilleure maitrise des paramètres de saccharification et fermentation, permet d'amplifier l'impact du complément nutritionnel sur le rendement lactique. 10 Exemple 5: Effet de compléments nutritionnels produits avec différents substrats et différentes moisissures et bactéries Cet exemple montre que le complément nutritionnel peut être obtenu au moyen de différents substrats et différentes moisissures et bactéries. 15 Les inventeurs ont étudié de façon comparative la quantité d'acide lactique produite au cours de la SSF de mout de blé par la souche L. coryniformis DSM 20004, en introduisant soit une solution nutritive exogène concentrée en éléments tels que les extraits de viande, de levure et de peptones de caséine, soit le complément nutritionnel selon l'invention, en faisant varier la souche et le substrat utilisés pour la fabrication du 20 complément nutritionnel. Matériel et méthodes Dans ces essais, les inventeurs ont réalisé au préalable une liquéfaction de mout de blé abrasé, pendant 2 h à 85°C dans un réacteur agté présentant un taux de matière sèche 25 (MS) final de 13%. Le mout liquéfié de blé a été réparti en fioles bafflées de 250 ml agitées, contenant chacune 100 ml de moût, complétées en Lyvanol GA 480® (amyloglucosidase à 0,890 kg/t de MS) et CaCO3 (à 30 g/I de mout). 30 3033332 33 Mouts de fermentation Les mouts de fermentation sont composés de blé abrasé liquéfié additionné de la solution nutritive B avec ou sans ajout d'un des compléments nutritionnels selon l'invention listés dans le tableau 6. 5 Tableau 6 : Liste des différents compléments nutritionnels (CN) mis en oeuvre en fermentation à valeur de 5 kg/t de blé pH initial du mout : entre 5,5 et 6. La souche d'Aspergillus oryzae 044 est la souche d'Aspergillus oryzae ATCC 12892. 10 Les fioles ainsi constituées ont été incubées à 50°C pendant 2 h. Ces dernières présentent un potentiel glucose de 100 g/I de mout. Au terme de ces 2 h de pré-saccharification, les mouts ont été ensemencés avec 107 UFC de bactérie lactique par ml de mout. La souche bactérienne utilisée dans cet exemple est Lactobacillus coryniformis 15 ssp. torquens DSM 20004. La fermentation a été conduite pendant 72 h à 30°C sous agitation (100 rpm). Résultats La figure 5 illustre le fait que des compléments nutritionnels produits par 20 fermentation en milieu solide (FMS) à partir de différents substrats et différentes souches permettent d'accroitre le rendement lactique d'une fermentation en milieu liquide par une souche du genre Lactobacillus par rapport à la condition Mout + solution B. Les compléments nutritionnels obtenus par FMS permettent d'augmenter le rendement lactique de la fermentation d'un facteur 1,6 à 2 par rapport au simple ajout d'une 25 solution nutritive B (correspondant entre-autres à un ajout en extrait de levure de 0.25 g/I de mout, en extrait de viande de 0.5 g/I de mout et en peptones de 0.5 g/I de mout). Souche Genre, espèce Codification Substrat Aspergillus flavus 0248 Aspergillus flavus 029 Aspergillus flavus 046 Aspergillus oryzae 030 Aspergillus oryzae 044 Aspergillus oryzae CL228 Aspergillus niger 043 Aspergillus 027 tubigensis Bacillus subtilis CL260 Bacillus licheniformis 0B62 Tourteau de Colza Tourteau de Colza Son de blé et radicelles d'orge Tourteau de Colza Tourteau de Colza Tourteau de Colza Tourteau de Colza Drèche soluble éthanolière de blé Son de blé Tourteau de Colza CN 1 CN 2 CN 3 CN 4 CN 5 CN 6 CN 7 CN 8 CN 9 CN 10 3033332 34 Ce résultat démontre qu'il est possible de produire des compléments nutritionnels efficaces pour la production d'acide lactique à partir de différents types de microorganismes, des bactéries sporulantes telles que Bacillus sp. ou encore des champignons tels qu'Aspergillus sp. 5 Par ailleurs, comme le montre la figure 6, les concentrations en FAN (Free Amino Nitrogen) présents en fin de fermentation dans les mouts, représentatives de l'azote soluble (acides aminés et petits peptides), peuvent être reliées à celles de l'acide lactique produit. D'après la régression linéaire tracée avec l'ensemble des compléments nutritionnels 10 produits par FMS testés ici, l'augmentation de la production d'acide lactique, rendue possible par l'action des compléments nutritionnels, est liée à l'amélioration de la disponibilité de la source azotée intrinsèque au mout de fermentation pour la bactérie lactique (r2= 88,5%). Les performances des compléments nutritionnels en saccharification-fermentation 15 simultanée (SSF) peuvent donc être reliées à leur capacité à libérer de l'azote soluble dans le milieu de fermentation. Ainsi, la figure 7 montre le lien qui existe entre la capacité du complément nutritionnel à libérer des FAN dans le mout de fermentation (en absence de la souche lactique), autrement appelé coefficient FAN (déterminé après 24 h d'incubation à 35°C d'un mout de blé liquéfié et saccharifié à 13%de MS, ajusté à pH 5,5, en présence 20 d'azoture de sodium, pour une incorporation de complément nutritionnel solubilisé et filtré à 0,2 lm de 5 kg/t de matière première), et les rendements lactiques obtenus en SSF avec la souche L. coryniformis DSM 20004 sous l'action du même complément nutritionnel (r2 = 70,5%). En analysant les performances des compléments nutritionnels testés (figure 7), les 25 inventeurs ont pu former trois groupes distincts, dans les conditions testées : un premier groupe représenté par le cercle en tirets comprenant les 4 compléments nutritionnels aux performances les plus basales, un deuxième groupe représenté par le cercle en pointillés constitué de 4 compléments nutritionnels aux performances plus avantageuses, et un troisième groupe représenté par le cercle en trait plein avec les 2 compléments 30 nutritionnels les plus performants. Le groupe « trait plein » est constitué de 2 des 3 souches d'Aspergillus flavus, le groupe « pointillés » est constitué des souches d'Aspergillus oryzae, et le groupe « tirets » comprend les souches d'Aspergillus niger et A. tubigensis, deux espèces proches, ainsi que les deux souches de Bacillus sp. Dans cet exemple, les souches d'Aspergillus flavus 029 et 046 testées sont les deux souches les plus 35 performantes pour répondre aux besoins azotés de la souche lactique mise en oeuvre en saccharification-fermentation simultanée. 3033332 35 Exemple 6: Avantages spécifiques de certains compléments nutritionnels Cet exemple montre que l'utilisation de certaines souches de moisissures ou bactéries pour la fabrication du complément nutritionnel peut être particulièrement 5 avantageuse pour la production d'acide lactique par certaines souches de bactéries lactiques. Les inventeurs ont étudié de façon comparative la quantité d'acide lactique produite au cours de la saccharification-fermentation simultanée de mout de blé par les souches L. 10 coryniformis DSM 20004 ou L. coryniformis DSM 20005, en introduisant soit une solution de protéase de concentration variable, soit le complément nutritionnel selon l'invention en faisant varier la souche utilisée pour la fermentation en milieu solide. Au regard des profils d'acides aminés libérés et des concentrations en azote solubles en fin de fermentation, les inventeurs ont évalué les avantages spécifiques que pouvait conférer le complément 15 nutritionnel pour différentes souches de bactéries lactiques, en réponse à leurs besoins nutritionnels, en les comparant à des protéases commerciales. Matériel et méthodes Dans ces essais, les inventeurs ont réalisé au préalable une liquéfaction de mout de 20 blé abrasé, pendant 2 h à 85°C dans un réacteur agté présentant un taux de matière sèche final de 20%. Ce mout liquéfié a été réparti en réacteurs, contenant chacun 3000 ml de moût, complétés en Lyvanol GA 480 (amyloglucosidase à 0,890 kg/t de matière sèche), et mis sous contrôle du pH par l'ajout d'acide sulfurique 5 N et de soude 7 N pour une consigne de maintien du pH à 6 tout le long de la fermentation. Ainsi, les mouts de 25 fermentation étaient composés de blé abrasé liquéfié, saccharifié, additionné de la solution nutritive B avec l'ajout soit d'un des compléments nutritionnels selon l'invention listés dans les tableaux 7 et 8, soit d'une des solutions de protéases commerciales listées dans le tableau 8. Tableau 7 : Conditions de fermentation pour l'essai 1 Réacteur R1 R2 R3 R4 R5 R6 R7 R8 Complément nutritionnel Souche Concentration (kg/t blé) A. flavus 029 20.0 B. subtilis CL260 20.0 A. flavus 046 20.0 A. orizae 044 20.0 A. flavus 029 20.0 B. subtilis CL260 20.0 A. flavus 046 20.0 A. orizae 044 20.0 Type CN CN CN CN CN CN CN CN Bactérie lactique Souche DSM 20004 DSM 20004 DSM 20004 DSM 20004 DSM 20005 DSM 20005 DSM 20005 DSM 20005 3033332 36 CN : complément nutritionnel obtenu par le procédé décrit dans l'exemple 1 en utilisant la souche de moisissure ou de bactérie mentionnée dans le tableau 5 Tableau 8 : Conditions de fermentation pour l'essai 2 Réacteur Complément nutritionnel / enzyme Bactérie lactique Type Souche Concentration Souche (kg/t blé) R1 Enz Fermgenl Trichoderma sp 0.10 DSM 20004 R1 Enz Prolyve BS conc.2 B. subtilis 0.12 DSM 20004 R2 Enz Prolyve BS conc.2 B. subtilis 0.20 DSM 20004 R3 Enz Prolyve BS conc.2 B. subtilis 0.40 DSM 20004 R4 Enz Prolyve BS conc.2 B. subtilis 0.60 DSM 20004 R5 Enz Prolyve BS conc.2 B. subtilis 0.80 DSM 20004 R6 Enz Prolyve BS conc.2 B. subtilis 1.00 DSM 20004 R7 CN A. flavus 029 5.00 DSM 20004 protéase commercialisée par Genencor International; 2 protéase commercialisée par Lyven CN : complément nutritionnel obtenu par le procédé décrit dans l'exemple 1 en utilisant la souche de moisissure ou de bactérie mentionnée dans le tableau 10 Les CN ont pu être testés en excès (20 kg/t de blé) dans l'essai 1 pour une meilleure détermination des profils en acides aminés. Différentes concentrations de protéases commerciales ont pu être testées dans l'essai 2 pour une meilleure évaluation de leur potentiel et comparaison avec le complément nutritionnel. 15 Après 1h30 de pré-saccharification à 60°C, les mout présentent un potentiel glucose de 150 g/I. Ces derniers ont été ensemencés avec 109 UFC de bactérie lactique par ml de mout. Les souches bactériennes utilisées dans les essais 1 et 2 sont Lactobacillus coryniformis ssp. torquens DSM 20004 et DSM 20005. La fermentation a été 20 conduite pendant 50 h à 30°C sous agitation (300 rp-n) et maintien du pH à 6 par ajout de soude 7 N. Résultats Essai 1 25 La figure 8 montre que les 4 compléments nutritionnels selon l'invention peuvent répondre de manière optimale et analogue aux besoins des deux souches lactiques en fermentation (lorsque ces dernières présentent les mêmes rendements, comme par exemple pour les compléments nutritionnels obtenus avec les souches 029 ou 046), mais aussi répondre de manière particulièrement plus avantageuse aux besoins de l'une ou 30 l'autre des souches lactiques. Par exemple le complément nutritionnel obtenu avec la souche CL260 permet un rendement lactique plus élevé avec la souche de bactérie 3033332 37 lactique DSM 20005 ; le complément nutritionnel obtenu avec la souche 044 permet un rendement lactique plus élevé avec la souche de bactérie lactique DSM 20004. La Figure 9 montre par ailleurs que selon le type de souche utilisé pour la fabrication du complément nutritionnel, le profil d'acides aminés libres (AAL) libérés par ce 5 dernier dans le mout de fermentation peut être différent et donc répondre de façon spécifique particulièrement avantageuse aux besoins des souches lactiques mises en oeuvre dans le procédé de production de l'acide lactique. Ainsi, le profil des AAL pour le type A. piger traduit une libération d'AAL très diversifiés, principalement de la glutamine (13% des AAL libérés), mais également de 10 l'Alanine, Glycine, Leucine, Valine, etc., dans des proportions comprises entre 2 et 5% des AAL. Au regard des résultats présentés dans la Figure 8, ce type de profil semble convenir de manière intéressante aux deux souches lactiques testées puisque les deux compléments nutritionnels 029 et 046 (souches d'A. flavus, espèce proche d'A. piger) présentent des performances similaires sur la production d'acide lactique en 15 saccharification-fermentation simultanée. Le profil des AAL pour le type A. oryzae traduit également une grande diversité des AAL libérés dans le mout de fermentation, la glutamine en majorité (plus de 20% des AAL), de la Tyrosine (6%), Proline, Leucine, etc. En fermentation, ce profil retrouvé avec le complément nutritionnel obtenu avec la souche 044 semble répondre de manière 20 particulièrement avantageuse aux besoins de la souche lactique DSM 20004. Enfin, le profil des AAL pour le type Bacillus subtilis traduit une libération d'AAL moins diversifiés, principalement de la Tyrosine (+ de 20% des AAL), Acide aspartique, Méthionine, Glutamine et Asparagine dans des proportions inférieures à 10% des AAL libérés. En fermentation, ce profil retrouvé avec le complément nutritionnel obtenu avec la 25 souche CL260 semble répondre de manière particulièrement avantageuse aux besoins de la souche lactique DSM 20005. La diversité des profils des AAL libérés dans les substrats de fermentation par les différents types de compléments nutritionnels est un avantage pour la fermentation car elle permet d'apporter aux différentes souches lactiques, potentiellement mises en oeuvre pour 30 la fabrication d'acide lactique, de la source azotée assimilable correspondant plus spécifiquement à leurs besoins nutritionnels. Par ailleurs, en considérant à la fois les concentrations finales en acide lactique et en FAN dans le mout de fermentation (figure 10), les inventeurs ont pu montrer que, selon la souche lactique mise en oeuvre pour la production d'acide lactique par saccharification- 35 fermentation simultanée, les compléments nutritionnels obtenus avec certaines souches de moisissure ou de bactéries se révélaient particulièrement avantageux, aussi bien du point 3033332 38 de vue de la capacité du complément nutritionnel à libérer des FAN dans le milieu qu'à favoriser la production d'acide lactique. Par exemple avec le complément nutritionnel obtenu avec la souche 029, pour une même concentration d'acide lactique obtenue avec la souche lactique DSM 20004 et DSM 5 20005, il y a moins de FAN libérés dans le mout en fin de fermentation avec la souche lactique DSM 20004. Par conséquent, l'utilisation spécifique du complément nutritionnel obtenu avec la souche 029 dans la production d'acide lactique par la souche lactique DSM 20004 présente un avantage supplémentaire. Comme la présence de FAN en fin de fermentation peut poser des problèmes sur 10 les étapes en aval du procédé de fabrication de l'acide lactique, à savoir l'extraction et la purification de l'acide lactique, un complément nutritionnel permettant de limiter la présence de FAN en fin de fermentation présente donc un avantage supplémentaire, pour un même effet sur la production d'acide lactique. Dans l'exemple avec la souche L. coryniformis DSM 20004, le complément 15 nutritionnel produit avec la souche 044 a donc un avantage supplémentaire par rapport au complément nutritionnel produit avec la souche 029. De même avec la souche L. coryniformis DSM 20005, le complément nutritionnel produit avec la souche CL260 présente un avantage supplémentaire par rapport au complément nutritionnel produit avec la souche 044 à FAN équivalent. 20 Essai 2 Comme le montre la figure 11, les performances du complément nutritionnel ajouté à 5 kg/t de matière première renouvelable sur la production d'acide lactique par saccharification-fermentation simultanée sont supérieures à celles des deux protéases 25 commerciales testées ici. On peut noter l'effet saturant de la protéase Prolyve BS conc qui, ajoutée à plus de 600 g/t de matière première renouvelable, ne permet plus d'améliorer le rendement lactique. La figure 12 présente le profil des AAL libérés dans le mout de fermentation sous l'action du complément nutritionnel produit avec la souche 029 ou sous l'action de chacune 30 des deux protéases commerciales Prolyve BS conc. (commercialisée par Lyven) et Fermgen (commercialisée par Genencor International). Les inventeurs ont observé que la diversité des AAL libérés en présence du complément nutritionnel selon l'invention est plus importante qu'avec les protéases commerciales. Pour le complément nutritionnel, on observe la libération de 19 acides aminés différents, dont la Glutamine en plus forte 35 proportion, la Proline et la Leucine autour des 5% des AAL libérés. Sous l'action de la protéase Fermgen, le profil des AAL libérés dans le milieu se restreint à 8 acides aminés 3033332 39 dont la Glutamine et l'acide aspartique. Pour la protéase Prolyve BS conc., le profil des AAL libérés est plutôt diversifié avec 16 acides aminés différents mais dans des proportions autres que celles retrouvées avec le complément nutritionnel. Avec la protéase Prolyve BS conc., sont principalement retrouvées la Tyrosine et la Méthionine. 5 L'avantage de l'ajout d'un complément nutritionnel selon l'invention par rapport à des protéases commerciales dans le procédé de fabrication de l'acide lactique peut ainsi être relié à la diversité des AAL (qualité et quantité relative) potentiellement libérés dans le substrat de fermentation, ce qui permet l'apport d'une source azotée assimilable répondant plus spécifiquement aux besoins nutritionnels des souches lactiques mises en oeuvre en 10 fermentation. Exemple 7: Effet du complément nutritionnel sur la croissance bactérienne Cet exemple démontre que l'effet du complément nutritionnel sur l'augmentation de 15 la production ou du rendement de production d'acide lactique n'est pas lié à une augmentation de la population bactérienne dans le mout de fermentation. Les inventeurs ont étudié de façon comparative la quantité d'acide lactique produite au cours de la saccharification-fermentation simultanée de mout de blé par les souches L. 20 coryniformis DSM 20004 ou L. coryniformis DSM 20005, en introduisant le complément nutritionnel selon l'invention en faisant varier la souche utilisée pour la production du complément nutritionnel, additionnée d'une des deux solutions nutritives A ou B définies ci-dessus. Au regard des concentrations et rendements en acide lactique et des concentrations en bactéries lactiques, ils ont évalué la spécificité des effets des 25 compléments nutritionnels. Matériel et méthodes Dans cet essai, les inventeurs ont réalisé au préalable une liquéfaction de mout de blé abrasé, pendant 2 heures à 85°C dans un réacteu agité présentant un taux de matière 30 sèche final de 20%. Ce mout liquéfié a été réparti en réacteurs, contenant chacun 3000 ml de moût, complétés en Lyvanol GA 480® (amyloglucosidase à 0.890 kg/t MS), et mis sous contrôle du pH par l'ajout d'acide sulfurique 5N et de soude 7N pour une consigne de maintien du pH à 6 tout le long de la fermentation. Les conditions de fermentation sont respectivement présentées dans le tableau 9, les compléments nutritionnels ayant été 35 préparés comme dans l'exemple 5. 3033332 Tableau 9 : Conditions de fermentation de l'exemple 7 Réacteur Complément nutritionnel Solution Bactérie nutritive lactique Type Souche Concentration Souche (kg/t blé) R1 CN A. flavus 029 5.0 OJ OJ I> OJ OJ I> OJ DSM 20004 R2 CN A. flavus 029 5.0 DSM 20004 R3 CN A. flavus 0248 5.0 DSM 20004 R4 CN A. flavus 029 5.0 DSM 20005 R5 CN A. flavus 029 5.0 DSM 20005 R6 CN A. flavus 0248 5.0 DSM 20005 R7 CN B. subtilis CL260 5.0 DSM 20005 Après 1,5 h de pré-saccharification à 60°C, les mous présentent un potentiel glucose de 150 g/1. Ces derniers sont ensemencés avec 109 UFC de bactérie lactique par 5 ml de mout. Les souches bactériennes utilisées dans cet essai sont Lactobacillus coryniformis ssp. torquens DSM 20004 et DSM 20005. La fermentation a été conduite pendant 50 h à 30°C sous agitation (300 rpm) et mahtien du pH à 6 par ajout de soude 7N. La population bactérienne a été déterminée en cours de fermentation par la réalisation de comptage sur cellule de Thoma. 10 Résultats Les dynamiques de croissance bactérienne et de production d'acide lactique sont illustrées dans la figure 13 au travers de résultats obtenus avec la souche DSM 20005, respectivement en pointillés et en traits pleins. L'évolution de la population bactérienne, 15 inoculée initialement à 109 UFC/ml, au cours de la saccharification-fermentation simultanée (SSF) est similaire quels que soient les compléments nutritionnels mis en oeuvre, en combinaison ou non avec une source d'azote exogène (ici apportée par la solution B en combinaison avec le CN 029 TC). Après 24 h de SSF, la population bactérienne se stabilise autour de 101° 20 bactéries/ml de mout. Au terme des 50 h de fermentation, les concentrations en bactéries dans les mouts sont très proches pour toutes les conditions testées. Si les conditions d'ajout de complément nutritionnel et de solutions nutritives exogènes n'impactent pas la dynamique de population bactérienne, en revanche, elles impactent les capacités des bactéries lactiques à produire de l'acide lactique. 25 Comme le montre la Figure 13, la production d'acide lactique par la bactérie lactique DSM 20005 est favorisée par la mise en oeuvre du complément nutritionnel obtenu avec la souche CL260 ou encore par le complément nutritionnel obtenu avec la souche 029 associé à la solution B. 3033332 41 Il en est de même avec la bactérie lactique DSM 20004 : la production d'acide lactique est plus importante par la mise en oeuvre du complément nutritionnel obtenu avec la souche 029 par rapport au complément nutritionnel obtenu avec la souche 0248, sans que ce gain ne soit relié à une augmentation de la population de bactéries lactiques 5 (tableau 10). Tableau 10 : Impact du type de complément nutritionnel mis en oeuvre en combinaison de solutions nutritives sur la bactérie lactique L. coryniformis DSM 20004 au terme des 50 h de fermentation d'un mout de blé liquéfié et saccharifié à 20% MS. souche lactique CN solution population (b/ml) acide lactique produit (g/l) nutritive DSM 20004 0248 TC B 1,79x1010 52,49 DSM 20004 029 TC B 1,79x1010 98,52 DSM 20004 029 TC A 2,15x1010 79,74 Ainsi, l'effet avantageux de l'ajout d'un complément nutritionnel selon l'invention dans le procédé de fabrication d'acide lactique ne peut pas être relié à une simple augmentation de la biomasse lactique mais bien à une amélioration des capacités de production de l'acide lactique par les souches lactiques mises en oeuvre en fermentation. 10 15 REVENDICATIONS1. Utilisation d'un complément nutritionnel sous forme brute ou extraite, comprenant un principe actif et issu d'une fermentation en milieu solide d'un substrat choisi dans le groupe constitué du son de blé, du tourteau de colza, le tourteau de soja, la pulpe de betterave, la radicelle d'orge, la drèche soluble éthanolière de blé, et des mélanges de ceux-ci, avec une moisissure de l'espèce Aspergillus flavus ou de l'espèce Aspergillus oryzae ou avec une bactérie de l'espèce Bacillus subtilis, pour la fabrication, par fermentation, d'acide lactique. 2. Utilisation d'un complément nutritionnel sous forme brute ou extraite, comprenant un principe actif et issu d'une fermentation en milieu solide d'un substrat choisi dans le groupe constitué du son de blé, du tourteau de colza, le tourteau de soja, la pulpe de betterave, la radicelle d'orge, la drèche soluble éthanolière de blé, et des mélanges de ceux-ci, avec une moisissure de l'espèce Aspergillus flavus ou de l'espèce Aspergillus oryzae ou avec une bactérie de l'espèce Bacillus subtilis, pour libérer, dans un milieu de fermentation en acide lactique d'une matière première glucidique renouvelable, l'azote de ladite matière première, au cours de la fabrication, par fermentation, d'acide lactique à partir de ladite matière première. 3. Procédé de fabrication d'acide lactique à partir d'une matière première glucidique renouvelable, comprenant une étape de fermentation de la matière première glucidique renouvelable par une bactérie lactique en présence d'un complément nutritionnel sous forme brute ou extraite, comportant un principe actif, et issu d'une fermentation en milieu solide d'un substrat choisi dans le groupe constitué du son de blé, du tourteau de colza, le tourteau de soja, la pulpe de betterave, la radicelle d'orge, la drèche soluble éthanolière de blé, et des mélanges de ceux-ci, avec une moisissure de l'espèce Aspergillus flavus ou de l'espèce Aspergillus oryzae ou avec une bactérie de l'espèce Bacillus subtilis. 4. Procédé selon la revendication 3, dans lequel l'étape de fermentation est une étape de saccharification-fermentation simultanée. 5. Procédé selon la revendication 3 ou 4, dans lequel la bactérie lactique est sélectionnée dans le groupe consistant en les espèces L. mindensis, L. zeae et L. coryniformis. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, dans lequel l'étape de fermentation est mise en oeuvre en présence d'une source d'azote organique issue de la 3033332 43 matière première glucidique renouvelable et, éventuellement de solutions nutritives exogènes. 7. Composition comprenant (i) une source d'azote organique sélectionnée dans le groupe 5 constitué des matières premières glucidiques renouvelables, des solutions nutritives exogènes, et des mélanges de celles-ci et (ii) un complément nutritionnel sous forme brute ou extraite, comportant un principe actif, et issu d'une fermentation en milieu solide d'un substrat choisi dans le groupe constitué du son de blé, du tourteau de colza, le tourteau de soja, la pulpe de betterave, la radicelle d'orge, la drèche soluble éthanolière de blé, et des 10 mélanges de ceux-ci, avec une moisissure de l'espèce Aspergillus flavus ou de l'espèce Aspergillus oryzae ou avec une bactérie de l'espèce Bacillus subtilis. 8. Kit comprenant : (i) une source d'azote organique sélectionnée dans le groupe constitué des 15 matières premières glucidiques renouvelables, des solutions nutritives exogènes, et des mélanges de ceux-ci, et (ii) un complément nutritionnel sous forme brute ou extraite, comportant un principe actif, et issu d'une fermentation en milieu solide d'un substrat choisi dans le groupe constitué du son de blé, du tourteau de colza, le tourteau de soja, la pulpe de betterave, la 20 radicelle d'orge, la drèche soluble éthanolière de blé, et des mélanges de ceux-ci, avec une moisissure de l'espèce Aspergillus flavus ou de l'espèce Aspergillus oryzae ou avec une bactérie de l'espèce Bacillus subtilis.