Brevet FR3026009A1 — publié le 20160325

Nanocapsules lipidiques, compositions pharmaceutiques, procédé de préparation, et utilisations correspondants 1. Domaine de l'invention Le domaine de l'invention est celui des nanocapsules lipidiques destinées notamment à être administrées par voie injectable, par exemple dans le cadre d'un protocole de thérapie génique, notamment dans une stratégie génique d'inhibition. Plus précisément, l'invention concerne des nanocapsules lipidiques comprenant des acides ribonucléiques, ainsi qu'une composition pharmaceutique les comprenant, un procédé pour leur préparation, et leurs utilisations. 2. Art antérieur Différentes voies sont actuellement étudiées afin de prévenir et/ou traiter diverses pathologies, telles que les maladies infectieuses, les cancers et les maladies neurodégénératives. Certaines d'entre elles consistent notamment en la régulation de séquences géniques et/ou de leurs produits d'expression tels que les acides ribonucléiques (« ARN ») et les protéines. Deux voies font particulièrement l'objet de nombreuses études, à savoir la voie dite de l'interférence par ARN (« ARNi » ou « RNAi ») utilisant des petits ARN interférents (« pARNi » ou « siRNA ») et la voie utilisant des micro-ARN (« miARN » ou « miRNA »). Les pARNi sont des acides ribonucléiques, simple ou double-brin, dont l'interférence avec un ARN messager (« ARNm » ou « mRNA ») spécifique conduit à sa dégradation et à la diminution, voire l'inhibition, de la traduction en protéine correspondante. Pour être spécifique, dans le cytoplasme, les pARNi sont incorporés au sein d'un complexe multi-protéique comprenant une nucléase appelée RNA- induced silencing complex (« RISC »). Les miARN sont des acides ribonucléiques agissant comme des régulateurs post-transcriptionnels. Le mode d'action des miARN inclus également une incorporation au sein d'un complexe RISC. L'introduction d'ARN dans les cellules cibles se heurte à plusieurs difficultés. Premièrement, les ARN sont des molécules chargées négativement, rendant difficile le passage de la membrane plasmatique des cellules pour atteindre le cytoplasme. Deuxièmement, les ARN sont susceptibles d'être dégradés dans le plasma et le cytoplasme par les nucléases. Troisièmement, les ARN peuvent, après injection dans le sang, être la cible d'une réaction immunitaire, conduisant à leur dégradation. Diverses techniques de vectorisation des ARN ont été développées, utilisant des vecteurs viraux ou non-viraux. Les vecteurs viraux peuvent présenter un risque pathogène résiduel potentiel. Certains vecteurs non-viraux, du fait de la présence de solvants organiques et de certains polymères cationiques, peuvent avoir un profil toxicologique peu satisfaisant. Au vu de ces inconvénients, des techniques alternatives ont été testées, dans le domaine des nanoparticules. Il existe différents types de nanoparticules, en particulier les nanocapsules lipidiques (« NCL » ou « LNC »). FR2805761A1 divulgue notamment des nanocapsules lipidiques, obtenues notamment par un procédé de préparation par inversion de phase, et adaptées à la formulation de divers principes actifs pharmaceutiques, tels que le Soudan III, la progestérone, le busulfan. FR2916974A1 divulgue notamment un kit et un procédé de préparation extemporanée de nanocapsules lipidiques comprenant divers principes actifs, tels que l'étoposide, l'ibuprofène et la fluorescéine de sodium. W02008/096321A1 divulgue notamment des nanocapsules lipidiques comprenant des acides nucléiques, notamment des acides désoxyribonucléiques (« ADN » ou « DNA »). Ces nanocapsules lipidiques comprennent un coeur lipidique liquide et une écorce lipidique solide. Le coeur lipidique liquide comprend notamment un corps gras, tel que les triglycérides. L'écorce lipidique solide comprend notamment au moins un tensioactif lipophile et au moins un tensioactif hydrophile. Le tensioactif lipophile peut être choisi notamment parmi les phospholipides, tels que la phosphatidylcholine (lécithine), et les esters glycériques d'acides gras, tels que le polyglycéry1-6-dioléate. Bien que l'encapsulation d'ARN, notamment de pARNi, dans ces nanocapsules lipidiques ait été envisagée, les résultats obtenus n'ont pas été entièrement satisfaisants, tant du point de vue de la stabilité que de l'efficacité. Des technologies dédiées à l'encapsulation d'ARN ont été développées. EP2397123A1 divulgue notamment des nanoparticules comprenant un polysaccharide linéaire, à savoir du chitosan, pour l'encapsulation d'ARN, y inclus pARNi, mARN, et aptamères. Les résultats obtenus avec ces nanoparticules à base de chitosan ne sont pas entièrement satisfaisants, notamment du point de vue de leur toxicité potentielle. W02013/093648A2 divulgue notamment des nanoparticules lipidiques comprenant un lipide cationique, un lipide auxiliaire, et un lipide conjugué à un polyéthylène glycol, pour l'encapsulation d'ARN double-brin, tels que les pARNi. Autrement dit, ces nanoparticules correspondent à des lipoplexes à ARN. Les résultats obtenus avec ces lipoplexes à ARN ne sont pas entièrement satisfaisants, notamment en termes de stabilité dans le sérum et de temps de circulation. Messaoudi et al divulgue notamment des nanocapsules lipidiques dont la surface de l'écorce lipidique solide a été modifiée, par greffage par transacylation de molécules de chitosan à la surface de l'écorce. Les pARNi peuvent alors être adsorbés à la surface des nanocapsules par attraction électrostatique avec les molécules de chitosan qui sont chargées positivement (Messaoudi et al, International Journal of Nanomedicine 2014:9 1479- 1490). Cette technologie repose sur l'adsorption des ARN, au lieu de leur encapsulation. Griveau et al divulgue notamment une autre technique d'adsorption à la surface de nanocapsules lipidiques, par incorporation d'un lipopeptide dans l'écorce, lipopeptide à la surface duquel est adsorbé un acide nucléique bloquant (« LNA ») (Griveau et al., International Journal of Pharmaceutics 454 (2013) 765-774). Les résultats obtenus avec ces nanocapsules lipidiques à la surface desquelles l'ARN est adsorbé ne sont pas entièrement satisfaisants. L'adsorption des pARNi à la surface des nanoparticules ne permet pas une protection suffisante des pARNi pour une injection intraveineuse, ce sont donc des stratégies limitées à une injection locale. De plus, la surface étant déjà modifiée pour adsorber les pARNi, elle n'est plus totalement disponible pour effectuer des modifications de surface en vue d'un ciblage passif, actif ou intelligent. Les technologies détaillées ci-avant - bien qu'ayant démontré pour certaines leur capacité à charger des acides ribonucléiques par incorporation, encapsulation ou adsorption - ne présentent pas une stabilité, une efficacité et/ou un ciblage des cellules à traiter suffisants. 3. Objectifs de l'invention L'invention a notamment pour objectif de pallier ces inconvénients de l'art antérieur, notamment en protégeant les pARNi par rapport à un greffage en surface. Plus précisément, un objectif de l'invention est de fournir des nanocapsules lipidiques permettant l'encapsulation d'acides ribonucléiques et présentant une stabilité améliorée, notamment une stabilité in vitro et/ou une stabilité in vivo améliorées. L'invention a encore pour objectif de fournir des nanocapsules lipidiques permettant l'encapsulation d'acides ribonucléiques et présentant une efficacité améliorée, notamment une efficacité in vivo améliorée. L'invention a encore pour objectif de fournir des nanocapsules lipidiques permettant l'encapsulation d'acides ribonucléiques et présentant une structure simplifiée améliorée. L'invention a encore pour objectif de fournir des nanocapsules lipidiques permettant l'encapsulation d'acides ribonucléiques et présentant un profil toxicologique satisfaisant. L'invention a encore pour objectif de fournir des nanocapsules lipidiques permettant l'encapsulation de principes actifs additionnels, en sus de l'acide ribonucléique, afin d'accroitre le spectre des pathologies à traiter. L'invention a encore pour objectif de fournir des nanocapsules lipidiques permettant l'encapsulation d'acides ribonucléiques et présentant un ciblage accru des cellules. 4. Exposé de l'invention Ces objectifs, ainsi que d'autres qui apparaîtront par la suite, sont atteints à l'aide d'une nanocapsule lipidique (« NCL » ou « LNC») comprenant un coeur lipidique liquide ; une écorce lipidique solide ; et au moins un complexe lipophile comprenant un acide ribonucléique (« ARN » ou « RNA »). Selon un premier aspect, la présente invention concerne une nanocapsule lipidique chargée comprenant un coeur lipidique liquide ; une écorce lipidique solide ; et, au moins un complexe lipophile comprenant un acide ribonucléique (ARN). Ladite écorce est essentiellement dépourvue de tensioactifs lipophiles choisis parmi la lécithine, les esters polyglycériques et leurs mélanges ; préférentiellement de tensioactifs lipophiles choisis parmi la lécithine, le polyglycéry1-6-dioléate, et leur mélange. Ainsi, les inventeurs ont mis en évidence que les nanocapsules lipidiques connues ne donnaient pas des résultats satisfaisants, notamment en termes de stabilité et/ou d'efficacité in vivo, pour la vectorisation des ARN. Ces nanocapsules comprennent généralement un coeur lipidique liquide comprenant un corps gras et une écorce lipidique solide comprenant un tensioactif lipophile et un tensioactif hydrophile. Ledit corps gras est choisi généralement parmi les triglycérides et les esters d'acides gras. Le tensioactif lipophile est constitué de la lécithine. Le tensioactif lipophile est aussi parfois choisi parmi les esters polyglycériques d'acides gras, tels que le polyglycéry1-6-dioléate. Le tensioactif hydrophile est choisi généralement parmi les alcools gras éthoxylés, les acides gras éthoxylés, les glycérides partiels d'acides gras éthoxylés, les triglycérides d'acides gras polyéthoxylés et leurs mélanges. Ce triptyque corps gras/tensioactif lipophile (lécithine et/ou esters polyglycériques d'acides gras)/tensioactif hydrophile constitue la pierre angulaire des technologies de vectorisation de principes actifs via des nanocapsules lipidiques. Bien que ces nanocapsules aient été utilisées comme vecteurs de différents types de principes actifs, y inclus les acides désoxyribonucléiques, les inventeurs ont constaté que ces nanocapsules ne permettaient pas la vectorisation d'ARN de manière satisfaisante. Or, les inventeurs ont démontré que la stabilité et/ou l'efficacité de la vectorisation des ARN étaient améliorées en procédant à deux modifications, à savoir : l'incorporation des ARN aux nanocapsules sous forme d'un complexe lipophile (appelé également lipoplexe à ARN) et non pas sous forme libre ; et la formulation des nanocapsules en l'absence de lécithine et/ou esters polyglycériques d'acides gras en guise de tensioactifs lipophiles dans l'écorce lipidique solide. De manière surprenante, il a été démontré que la lécithine et/ou les esters polyglycériques d'acides gras n'étaient pas indispensables à la stabilité des nanocapsules pour vectorisation des ARN, voire altéraient leur stabilité. De plus, il a été démontré qu'en l'absence de lécithine et/ou d'esters polyglycériques d'acides gras, les complexes lipidiques comprenant l'ARN s'incorporent/s'intercalent essentiellement dans l'écorce des nanocapsules, de telle sorte que le coeur lipidique est essentiellement dépourvu de complexes lipidiques comprenant des ARN. Une telle configuration a deux avantages. Premièrement, le coeur reste disponible pour l'incorporation de principes actifs supplémentaires tels que des agents anti-infectieux ou anti-cancéreux. Deuxièmement, la surface de l'écorce reste disponible pour la greffe et/ou l'adsorption de composés permettant un ciblage accru/facilité des cellules. Par conséquent, de manière surprenante, contrairement aux enseignements de l'art antérieur, les inventeurs ont démontré que les nanocapsules selon la présente invention permettaient une vectorisation améliorée des ARN, notamment des pARNi ; une stabilité améliorée ; et une possibilité accrue de ciblage. Ladite écorce lipidique solide peut comprendre en outre au moins un tensioactif hydrophile. Ledit coeur lipidique liquide peut comprendre au moins un corps gras, notamment un corps gras liquide ou semi-liquide à température ambiante. Ledit acide ribonucléique (ARN) peut être choisi parmi les ARN messager, les ARN transfert, les ARN ribosomaux, les petits ARN interférents, les petits ARN en épingle à cheveux, les micro-ARN, et leurs mélanges ; préférentiellement parmi les petits ARN interférents, les micro-ARN, et leurs mélanges. Lesdits complexes lipidiques peuvent comprendre en outre un lipide cationique, un lipide neutre et leurs mélanges. Lesdits complexes lipidiques peuvent être incorporés essentiellement dans ladite écorce, ledit coeur étant essentiellement dépourvu desdits complexes lipidiques. Ledit coeur comprend préférentiellement 10% ou moins, très préférentiellement 1% ou moins, de manière davantage préférée 0,1% ou moins, de manière plus préférée 0%, en poids des complexes lipidiques compris dans les nanocapsules. Par analogie, ladite écorce comprend préférentiellement 90% ou plus, très préférentiellement 99% ou plus, de manière davantage préférée 99,9% ou plus, de manière plus préférée 100%, en poids des complexes lipidiques compris dans les nanocapsules. Lesdites nanocapsules peuvent comprendre en outre au moins un principe actif additionnel, ledit principe additionnel étant essentiellement incorporé dans le coeur lipidique liquide. Ledit coeur comprend préférentiellement 90% ou plus, très préférentiellement 99% ou plus, de manière davantage préférée 99,9% ou plus, en poids d'un principe actif additionnel ; ladite écorce comprenant ledit principe actif respectivement dans des proportions inversement proportionnelles. Lesdites nanocapsules peuvent comprendre en outre au moins un composé de ciblage et/ou un composé de modulation pharmacocinétique, lesdits composés étant adsorbés à surface de l'écorce lipidique solide ou incorporés dans ladite écorce. Selon un autre aspect, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant au moins une nanocapsule lipidique chargée telle que définie présentement, et un milieu pharmaceutiquement acceptable. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de préparation de nanocapsules lipidiques chargées telles que définies présentement, comprenant les étapes suivantes : a) Préparer une émulsion huile-dans-eau (émulsion H/E) comprenant un corps gras et un tensioactif hydrophile solide à 20°C; b) Soumettre l'émulsion obtenue à l'étape (a) à un cycle de température comprenant une augmentation de température jusqu'à une température T2 supérieure à la température d'inversion de phase pour obtenir une émulsion eau-dans- huile (émulsion E/H), suivi d'un refroidissement jusqu'à une température T1 inférieure à la température d'inversion de phase, de telle sorte à induire une inversion de phase de ladite émulsion ; c) Réitérer le cycle de température selon l'étape (b) au moins une fois ; d) Soumettre la microémulsion obtenue à l'étape (c) à une étape de dilution et de refroidissement rapide avec une dispersion aqueuse de complexes lipophiles comprenant au moins un acide ribonucléique (ARN), ayant une température de 4°C+/-2°C, pour obtenir des nanocapsules lipidiques chargées en ARN dans l'eau. Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation des nanocapsules lipidiques chargées, ou d'une composition pharmaceutique les comprenant, telles que définies présentement, pour la mise en oeuvre d'une stratégie génique d'inhibition. Définitions Par « nanocapsule lipidique» ou « nanocapsule », on entend des particules constituées d'un coeur lipidique liquide à température ambiante, enrobé d'une écorce lipidique solide à température ambiante. Les nanocapsules se distinguent des nanosphères qui sont des particules matricielles, c'est-à-dire dont la totalité de la masse est solide. Par « température ambiante », on entend une température comprise entre 15°C et 25°C, particulièrement 20°C. Par « coeur lipidique liquide », on entend une phase huileuse liquide continue. Par « essentiellement dépourvu(e) » d'un composé, on entend 0,1% ou moins, préférentiellement 0,01% ou moins, très préférentiellement 0%, dudit composé par rapport au poids total des nanocapsules lipidiques, sauf mention contraire. Par « nanocapsule » chargée ou « nanocapsule lipidique» chargée, et sauf mention contraire, on entend la nanocapsule chargée en ARN (c'est-à-dire la nanocapsule comprenant au moins un lipoplexe à ARN) et non modifiée. Par « par rapport au poids total de la nanocapsule chargée », et sauf mention contraire, on entend le poids total de la nanocapsule chargée en ARN (c'est-à-dire la nanocapsule comprenant au moins un lipoplexe à ARN) et non modifiée (c'est-à-dire la nanocapsule chargée ne comprenant pas de modifications de surface, telle que l'adsorption de composés de ciblage/de modulation pharmacocinétique). Nanocapsules chargées en ARN Les nanocapsules lipidiques chargées ont avantageusement une taille moyenne (diamètre moyen) d'au moins 20 nm, préférentiellement une taille moyenne comprise entre 50nm et 200nm, très préférentiellement entre 55nm et 155nm, plus préférentiellement entre 60nm et 100nm. La taille des nanocapsules lipidiques diminue quand la proportion en tensioactif hydrophile augmente. En effet, le tensioactif hydrophile entraîne une diminution de la tension interfaciale et donc une stabilisation du système, ce qui favorise l'obtention de petites particules. Par ailleurs, la taille des particules augmente quand la proportion en corps gras augmente. Les nanocapsules lipidiques chargées ont avantageusement un potentiel zêta compris entre -10mV et 15mV, préférentiellement entre -5mV et 15mV, plus préférentiellement entre 5mV et 15mV, encore plus préférentiellement un potentiel zêta d'environ 13+/-2mV. Le potentiel zêta peut être mesuré par toute technique bien connue de l'homme du métier, notamment par interférométrie Doppler au laser (zeta sizer 3000 HSA) selon les instructions du fabricant. Les nanocapsules lipidiques chargées ayant une taille et un potentiel zêta tels qu'indiqués ci-avant sont particulièrement adaptées à une administration systémique, notamment à une administration par voie injectable, telle qu'une injection par voie 20 intraveineuse. Le rapport massique corps gras/tensioactif hydrophile est avantageusement compris entre 1 et 15, préférentiellement entre 1 et 10, plus préférentiellement entre 1 et 5, encore plus préférentiellement entre 1 et 3. L'indice de polydispersité des nanocapsules lipidiques chargées est 25 avantageusement compris entre 5 et 20%, préférentiellement entre 5% et 15%. L'épaisseur de l'écorce lipidique solide est avantageusement comprise entre mm et 15 nm. Les différents composants (notamment les complexes lipidiques) et composés (notamment les tensioactifs hydrophiles, les corps gras, les lipides cationiques, les 30 lipides neutres, les ARN, les principes actifs additionnels, les composés de ciblage/de modulation pharmacocinétique et autres composés) formant les nanocapsules lipidiques chargées selon la présente invention sont détaillés ci-après. Complexes lipidiques comprenant de l'ARN Les complexes lipidiques comprenant de l'ARN selon l'invention sont également dénommés lipoplexes à ARN. Par « lipoplexes à ARN », on entend un liposome associé avec au moins une séquence d'ARN. Avant incorporation dans les nanocapsules lipidiques, les lipoplexes à ARN sont dénommés lipoplexes à ARN non-encapsulés. Les lipoplexes à ARN non-encapsulés ont avantageusement un potentiel zêta compris entre 40mV et 60mV, préférentiellement entre 45mV et 55mV, plus préférentiellement entre 48mV et 52mV. Les lipoplexes à ARN ont avantageusement un ratio en charges positive/négative d'au moins 0,5:1, préférentiellement un ratio compris entre 0,5:1 et 10:1, très préférentiellement entre 1:1 et 5:1, plus préférentiellement un ratio d'environ 5:1. Les lipoplexes à ARN non-encapsulés ont avantageusement une taille moyenne comprise entre 400nm et 1 um, préférentiellement entre 600nm et 800nm, très préférentiellement une taille moyenne d'environ 700nm. Cependant, avant encapsulation, les lipoplexes à ARN sont généralement sous forme d'agrégats. Les lipoplexes à ARN peuvent représenter jusqu'à 5%, préférentiellement de 0,5% à 5%, très préférentiellement de 1% à 3%, en poids par rapport au poids total de la nanocapsule lipidique chargée. Le lipoplexe à ARN, selon la présente invention, comprend un lipide cationique. Le lipoplexe peut également comprendre un lipide neutre. De manière avantageuse, le lipoplexe comprend un lipide cationique, un lipide neutre, et leurs mélanges. Le ratio massique entre lipide cationique/lipide neutre/ARN est avantageusement compris entre 40:40:1 et 1:1:1, préférentiellement entre 20:20:1 et 1:1:1, très préférentiellement entre 15:15:1 et 5:5:1. Corps gras Selon la présente invention, le coeur lipidique liquide comprend au moins un corps gras liquide ou semi-liquide à température ambiante, particulièrement au moins un corps gras choisi parmi un triglycéride, un ester d'acide gras, et leur mélanges. Ledit corps gras peut représenter de 30% à 70%, préférentiellement de 40% à 60%, en poids par rapport au poids total de la nanocapsule lipidique chargée. Les esters d'acide gras correspondent notamment aux esters d'acides gras en C8 à C18 ; préférentiellement les esters d'acides gras en C8 à C12; très préférentiellement les esters d'acides gras en C8 et C10, encore plus préférentiellement les triglycérides capriques et capryliques. Les triglycérides correspondent notamment aux triglycérides de synthèse, aux triglycérides d'origine naturelle, et leurs mélanges. Les sources naturelles peuvent inclure les graisses animales ou les huiles végétales par exemple les huiles de soja ou les sources en triglycérides à longue chaîne (LCT). D'autres triglycérides d'intérêt sont composés principalement d'acides gras de longueurs moyennes encore appelés triglycérides à chaîne moyenne (MCT). Une huile à triglycérides à chaîne moyenne (MCT) est un triglycéride dans lequel la chaîne carbohydrate a de 8 à 12 atomes de carbone. De telles huiles MCT sont disponibles commercialement. SA titre d'exemple de ces huiles MCT, on peut citer les TCR (nom commercial de la société industrielle des oléagineux, France, pour un mélange de triglycérides dans lequel environ 95 % des chaînes d'acides gras possèdent 8 ou 10 atomes de carbone) et le Myglyol 812 (triglycéride commercialisé par la société Dynamit Nobel, Suède pour un mélange de triesters de glycérides d'acide caprylique et caprique). fil Les motifs d'acides gras de ces triglycérides peuvent être insaturés, monoinsaturés ou polyinsaturés. Les mélanges de triglycérides ayant des motifs d'acides gras variables sont également acceptables. Il est à noter que plus l'indice HLB du corps gras liquide ou semi-liquide est élevé, plus la température d'inversion de phase est élevée. En revanche, la valeur de l'indice HLB du corps gras ne semble pas avoir d'influence sur la taille des nanocapsules. Ainsi, lorsque la taille des groupements terminaux des triglycérides augmente, leur indice HLB diminue et la température d'inversion de phase diminue. L'indice HLB ou balance hydrophile-lipophile est tel que défini par C. Larpent dans le Traité K.342 des Editions TECHNIQUES DE L'INGENIEUR. tà De manière préférée, le corps gras est le triglycéride commercialisé sous la dénomination commerciale Labrafac WL 1349. Lécithine et esters polyglycériques Selon la présente invention, l'écorce lipidique solide des nanocapsules chargées est essentiellement dépourvue de tensioactif lipophile choisi parmi la lécithine, les esters polyglycériques, et leurs mélanges. Par extension, les nanocapsules chargées sont essentiellement dépourvues de tensioactif lipophile choisi parmi la lécithine, les esters polyglycériques, et leurs mélanges. Préférentiellement, l'écorce lipidique solide comprend 0% d'un tensioactif lipophile choisi parmi la lécithine, les esters polyglycériques, et leurs mélanges. En particulier, les nanocapsules chargées comprennent 0,1% ou moins, préférentiellement 0,01% ou moins, très préférentiellement 0% d'un tensioactif lipophile choisi parmi la lécithine, les esters polyglycériques, et leurs mélanges. Les esters polyglycériques d'acides gras correspondent aux esters polyglycériques obtenus à partir d'acides gras tels que les acides gras comprenant de 8 à 18 carbones ; particulièrement les acides gras comprenant de 12 à 16 carbones. Un exemple d'esters polyglycériques d'acide gras dont la présente invention est dépourvue est le polyglycéry1-6-dioléate. Le polyglycéry1-6-dioléate est notamment commercialisé sous le nom Oleic Plurol® par la société GATTEFOSSE SA, St Priest, France. La lécithine est notamment commercialisée sous la dénomination commerciale Lipoïd 575-3®, qui correspond à de la lécithine de soja et comprend approximativement 69% de phosphatidylcholine et 9% de phopshatidyléthanolamine. Tensioactifs hydrophiles Ladite écorce, selon la présente invention, comprend, au moins un tensioactif hydrophile. Ledit tensioactif hydrophile peut représenter de 10% à 50%, préférentiellement environ 42%, par rapport au poids total de la nanocapsule chargée. Par « tensioactif hydrophile », on entend notamment un tensioactif hydrophile non-ionique qui, grâce à sa structure amphiphile, se place à l'interface phase huileuse/phase aqueuse, et stabilise ainsi les gouttelettes d'huiles dispersées. Le tensioactif hydrophile amphiphile peut être un tensioactif hydrophile amphiphile ayant un HLB compris entre 8 et 18, préférentiellement un tensioactif hydrophile amphiphile ayant un HLB compris entre 10 et 16, très préférentiellement un moins un tensioactif choisi parmi les alcools gras éthoxylés, les acides gras éthoxylés, les glycérides partiels d'acides gras éthoxylés, les triglycérides d'acides gras polyéthoxylés et leurs mélanges. Ces tensioactifs correspondent à des tensioactifs émulsionnants du type huile-danseau. Les alcools gras éthoxylés peuvent être choisis parmi les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool laurylique, notamment ceux comportant de 9 à 50 groupes oxyéthylénés (Laureth-9 à La ureth-50) ; les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool béhénylique, notamment ceux comportant de 9 à 50 groupes oxyéthylénés (Beheneth-9 à Beheneth-50) ; les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool céto-stéarylique (mélange d'alcool cétylique et d'alcool stéarylique), notamment ceux comportant de 9 à 30 groupes oxyéthylénés (Ceteareth-9 à Ceteareth-30) ; les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool cétylique, notamment ceux comportant de 9 à 30 groupes oxyéthylénés (Ceteth-9 à Ceteth- 30); les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool stéarylique, notamment ceux comportant de 9 à 30 groupes oxyéthylénés (Steareth-9 à Steareth-30) ; les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool isostéarylique, notamment ceux comportant de 9 à 50 groupes oxyéthylénés (Isosteareth-9 à Isosteareth-50) ; et leurs mélanges.EiLes acides gras éthoxylés peuvent être choisis parmi les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec les acides laurique, palmitique, stéarique ou béhénique, et leurs mélanges, notamment ceux comportant de 9 à 50 groupes oxyéthylénés tels que les laurates de PEG-9 à PEG-50 ; les palmitates de PEG-9 à PEG-50 ; les stéarates de PEG-9 à PEG-50 ; les palmitostéa rates de PEG-9 à PEG-50 ; les béhénates de PEG-9 à PEG-50 ; et leurs mélanges. EIOn peut utiliser aussi des mélanges de ces dérivés oxyéthylénés d'alcools gras et d'acides gras. Ces tensioactifs peuvent également être soit des composés naturels à l'image des phospholipides écholates ou des composés synthétiques tels que les polysorbates qui sont des esters d'acide gras de sorbitol polyéthoxylé (Tween), les esters de polyéthylène glycol d'acide gras provenant par exemple de l'huile de ricin (Crémophor), des acides gras polyéthoxylés, par exemple de l'acide stéarique (Simulsol M-53), des éthers d'alcool gras polyoxyéthylénés (Brij), des éthers non phényles polyoxyéthylénés (Triton N), des éthers hydroxylphényle polyoxyéthylénés (Triton X). De manière préférée, le tensioactif hydrophile est un dérivé d'hydroxystéarate, préférentiellement 2-hydroxystéarate polyéthylène glycol. Le 2-hydroxystéarate polyéthylène glycol est commercialisé notamment sous la dénomination commerciale Kolliphor HS15® par la société BASF, Allemagne. Lipides cationiques Les lipoplexes à ARN, selon la présente invention, comprennent au moins un lipide cationique. Le lipide cationique peut être choisi parmi les lipides cationiques comprenant au moins un résidu ammonium et un résidu hydrocarboné. Les résidus hydrocarbonés peuvent être dérivés d'une chaine alkyle, d'un acide gras, d'un alcool gras, d'une amine grasse et peuvent être en C8-C20, préférentiellement en C12-C18, très préférentiellement en C16. Le lipide cationique peut être choisi parmi 1,2-dioleyloxy-3-triméthyl am monium chloride propane (DOTAP), (N-(l- (2,3-dioleyloxy)propyI)-N,N,N- trimethylammonium chloride (DOTMA), N-[I]-(2,3- dimyristyloxy)propyl] N,N-diméthylN-( 2 h yd roxyét h yl) ammonium chloride (DMRIE), 2,3-dioleyloxy-N-2- (carboxamidospermine) éthyl-N,N-diméthyl-l-propammonium chloride (DOSPA), dioctadécyl amidoglycinespermine (DOGS), 1,2-dioleoy1-3- (diméthylamino) propane (DODAP), dioctadécyldiméthyl ammonium bromide (DODAB), cétyl trimethyla mmonium bromide (CTAB), 1,2-dipalmitoyle phosphatidyle éthanolamidospermine (1 -DPPES), les dérivés d'aminoglycosides lipidiques, et leurs mélanges ; préférentiellement le lipide cationique est le 1,2-dioleyloxy-3-triméthyl ammonium chloride propane (DOTAP). Le lipide cationique peut représenter entre 30% et 60%, préférentiellement entre 40% et 50%, en poids par rapport au poids total des lipoplexes non-encapsulés. Le lipide cationique peut représenter entre 0,1% et 5%, préférentiellement entre 0,1% et 3%, très préférentiellement entre 0,5% et 1,5%, en poids par rapport au poids total des nanocapsules lipidiques chargées. Lipides neutres Les lipoplexes à ARN peuvent comprendre au moins un lipide neutre. Le lipide neutre peut être choisis parmi L-[alpha]- dioleylphosphatidylethanolamine (DOPE), dioleylphosphatidylcholine (DOPC), cholesterol ; préférentiellement L-[alpha]- dioleylphosphatidylethanolamine (DOPE). Le lipide neutre peut représenter entre 35% et 65%, préférentiellement entre 45% et 55%, en poids par rapport au poids total des lipoplexes non-encapsulés. Le lipide neutre peut représenter entre 0,1% et 5%, préférentiellement entre 0,1% et 3%, très préférentiellement entre 0,5% et 1,5% en poids par rapport au poids total des nanocapsules lipidiques chargées. Acides ribonucléiques Les lipoplexes comprennent au moins un acide ribonucléique (ARN), également dénommé une séquence d'acide ribonucléique. Les ARN peuvent être d'origine humaine, animale, végétale, bactérienne, virale ou d'origine synthétique. Les ARN peuvent être double-brin et/ou monobrin. Les ARN peuvent être obtenus par toute technique connue de l'homme du métier. L'ARN peut être choisi parmi les ARN messager (« ARNm » ou « mRNA »), les ARN transfert (« ARNt » ou « tRNA »), les ARN ribosomaux (« ARNr » ou « rRNA »), les petits ARN interférents (« pARNi » ou « siRNA »), les petits ARN en épingle à cheveux (« shRNA » pour short hairpin RNA), les micro-ARN (« miARN » ou « miRNA »), et leurs mélanges ; préférentiellement les petits ARN interférents (« pARNi » ou « siRNA »), les micro-ARN (« miARN » ou « miRNA »), et leurs mélanges. L'ARN peut comprendre 100 nucléotides ou moins, préférentiellement de 5 à 50 nucléotides, très préférentiellement de 10 à 30 nucléotides, plus préférentiellement de 15 à 25 nucléotides. Les pARNi peuvent être choisis parmi les pARNi susceptibles de réguler, voire d'inhiber, l'expression génique et/ou la transcription des ARNm et/ou la traduction des protéines. Les pARNi peuvent être choisis parmi les séquences d'ARNm traduisant des protéines impliquées dans les phénomènes pathologiques, notamment cancéreux, comme les protéines anti-apoptotiques Bd-2 ou de la pompe à sodium (sous-unité alpha 1). Les ARN peuvent représenter entre 1% et 10%, préférentiellement entre 3% et 7%, en poids par rapport au poids total des lipoplexes encapsulés. Les ARN peuvent représenter entre 0,01% et 1%, préférentiellement entre 0,01% et 0,15%, en poids par rapport au poids total des nanocapsules lipidiques chargées. Principes actifs additionnels Les nanocapsules peuvent comprendre, en plus des ARN contenus dans les complexes lipidiques, au moins un principe actif additionnel. Ledit principe actif additionnel peut être choisi parmi les composés pharmaceutiquement actifs, les composés radio-pharmaceutiques, les composés cosmétiquement actifs, les composés actifs à finalité phytosanitaire ou alimentaire, et leurs mélanges ; préférentiellement des composés actifs pharmaceutiquement actifs. Ledit principe actif additionnel peut être choisi parmi les composés hydrosolubles, composés hydrodispersibles, composés liposolubles, les composés lipodispersibles, et leurs mélanges. Ledit principe actif additionnel peut être choisi parmi les composés anti-infectieux, les composés anticancéreux, les composés immunosuppresseurs, les composés destinés au système nerveux central ; préférentiellement les composés anticancéreux. Les composés anti- infectieux peuvent être choisis parmi les composés antimycosiques, les composés antibiotiques, et leurs mélanges. Les composés destinés au système nerveux central peuvent être choisis parmi les composés susceptibles de passer la barrière hémato-encéphalique ; préférentiellement les antalgiques et les composés destinés au traitement des maladies neurodégénératives, tels que les composés antiparkinsoniens. Les composés anti-cancéreux comme les composés antimitotiques peuvent être choisis parmi les alkylants de l'ADN, les composés organométalliques comme les ferrocifènes, les composés agissant sur les microtubules ou les composés antioxydants. Dans un mode de réalisation particulier, ledit principe actif additionnel n'est pas un acide désoxyribonucléique, ou un complexe lipidique comprenant un acide désoxyribonucléique. Dans ce mode de réalisation, les nanocapsules lipidiques chargées sont essentiellement dépourvues d'acides désoxyribonucléiques, ou d'un complexe lipidique les comprenant. Ces principes actifs additionnels sont essentiellement incorporés dans le coeur lipidique liquide. Ledit coeur comprend préférentiellement 90% ou plus, très préférentiellement 99% ou plus, de manière davantage préférée 99,9% ou plus, en poids d'un principe actif additionnel ; ladite écorce comprenant ledit principe actif respectivement dans des proportions inversement proportionnelles. Si le principe actif additionnel est peu soluble dans le corps gras constituant le coeur lipidique liquide, notamment les composés hydrosolubles et les composés hydrodispersibles, ledit coeur peut comprendre un co-adjuvant, par exemple la N,N-diméthylacétamide, voire l'éthanol ou autres co-adjuvants. Alternativement, ces principes actifs additionnels peuvent être formulés sous la forme d'entités micellaires inverses dispersées dans le coeur lipidique liquide. Les inventeurs ont démontré de manière surprenante que, dans les nanocapsules selon l'invention, les lipoplexes à ARN n'étaient pas incorporés dans le coeur lipidique liquide, mais a contrario étant essentiellement incorporés dans l'écorce lipidique solide, de telle sorte que le coeur lipidique liquide est essentiellement dépourvu de ces lipoplexes. Il est alors possible d'incorporer un principe actif additionnel dans le coeur lipidique liquide. Cela permet d'administrer concomitamment au moins deux principes actifs différents, c'est-à-dire un ARN tel qu'un pARNi ou un miARN en combinaison avec un principe actif additionnel tel qu'un composé anticancéreux, de telle sorte à potentialiser l'efficacité du traitement et d'agir sur plusieurs leviers. Les principes actifs additionnels peuvent représenter entre 1% et 10%, préférentiellement entre 1% et 5%, en poids par rapport au poids total des nanocapsules lipidiques chargées. Composés de ciblage/de modulation pharmacocinétique Les nanocapsules peuvent comprendre en outre un composé de ciblage, un composé de modulation pharmacocinétique et leurs mélanges. Les composés de ciblage sont également dénommés les ligands de ciblage ou targeting ligands. Les composés de modulation pharmacocinétique sont également dénommés les résidus de modulation pharmacocinétique ou pharmacokinetic modulating moeities. Ces composés peuvent être adsorbés à la surface de l'écorce lipidique, par fonctionnalisation des tensioactifs hydrophiles formant l'écorce lipidique solide. Ces composés peuvent également être incorporés au sein de l'écorce lipidique solide. Le composé de ciblage peut être choisi parmi les anticorps ; les ligands, notamment les agonistes ou les antagonistes de récepteurs cellulaires de surface ; des molécules capables d'interagir avec des protéines et/ou des lipides cellulaires de surface, notamment le mannose, le galactose et l'annexine ; et leurs mélanges. Le composé de modulation pharmacocinétique peut-être choisi parmi les dérivés amphiphiles du polyéthylene glycol (« PEG »); préférentiellement parmi les dérivés phospholipidiques du PEG; très préférentiellement parmi phosphatidyléthanolamine-PEG ; plus préférentiellement DSPE-PEG (1,2-distéaroyl-n- glycero-3-phosphoéthanolamine-PEG), cholestérol-PEG, PEG à chaînes diacyle, un polymère triblock PEG-PPO-PEG (PPO signifiant polypropylène oxide), PEG-PDMS-PEG (PDMS signifiant polydiméthylsiloxane), PEG-PTHF-PEG (PTHF signifiant polytétrahydrofurane) or leurs tetra blocks correspondants telle que poloxamine ; encore plus préférentiellement parmi DSPE-PEG, un polymère triblock PEG-PPO-PEG, et leurs mélanges. Les composés de ciblage/de modulation pharmacocinétique peuvent représenter entre 1% et 15%, préférentiellement entre 3% et 7%, en poids par rapport au poids total des nanocapsules lipidiques chargées et modifiées. Autres composés Les nanocapsules lipidiques chargées sont avantageusement essentiellement dépourvues de composés choisis parmi les agents co-tensioactifs, les polysaccharides, les solvants organiques, et leurs mélanges. En particulier, les nanocapsules comprennent 0,1% ou moins, préférentiellement 0,01% ou moins, très préférentiellement 0%, de composés choisis parmi les agents co-tensioactifs, les polysaccharides, les solvants organiques, et leurs mélanges, en poids par rapport au poids total de la nanocapsule chargée. Les agents co-tensioactifs correspondent notamment aux alcools en C1-C4. Les polysaccharides correspondent notamment aux polysaccharides linéaires tels que le chitosan. Compositions pharmaceutiques Selon un autre aspect, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant au moins une nanocapsule lipidique chargée telle que définie ci-avant, et au moins un milieu pharmaceutiquement acceptable. La composition pharmaceutique peut être choisie parmi les compositions pharmaceutiques topiques, orales, nasales et/ou injectables ; préférentiellement la composition pharmaceutique est une composition pharmaceutique injectable ; préférentiellement une composition pharmaceutique injectable par voie intraveineuse. Par « milieu pharmaceutiquement acceptable », on entend un milieu aqueux comprenant de 0,5% à 1,5%, préférentiellement 0,9%, en poids de chlorure de sodium. La composition peut comprendre entre 1% et 40%, préférentiellement entre 10% et 35%, très préférentiellement entre 25% et 35%, de nanocapsules chargées en poids par rapport au poids total de la composition. La proportion en poids en milieu pharmaceutiquement acceptable, par rapport au poids total de la composition, est inversement proportionnelle au poids en nanocapsules chargées. Utilisation Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation des nanocapsules lipidiques chargées telles que définies ci-avant, ou d'une composition pharmaceutique les contenant, pour la mise en oeuvre d'une stratégie génique d'inhibition (également dénommé « silencing gene »). Mode d'administration Les nanocapsules lipidiques chargées, ou les compositions pharmaceutiques les comprenant, peuvent être administrées par voies injectable, orale, nasale, mucosale, topique, pulmonaire, intramusculaire, intradermique, intra-tumorale ou sous-cutanée ; préférentiellement par voie injectable ; très préférentiellement par voie intraveineuse ou carotidienne. Procédé de préparation des nanocapsules lipidiques chargées Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de préparation des nanocapsules lipidiques chargées. Un procédé adapté à été divulgué dans FR2805761 et demandes apparentées, dont les contenus sont incorporés présentement par référence. Dans ce procédé, les nanocapsules chargées en principe actif sont obtenues à partir d'une microémulsion, cette microémulsion étant préparée par la technique d'inversion de phase par effet thermique (« émulsion PIT »). Cette technique d'émulsion PIT repose sur la préparation d'une émulsion eau-dans-huile (« émulsion E/H ») à une température supérieure à la température d'inversion de phase du système, c'est-à-dire à la température à laquelle l'équilibre entre les propriétés hydrophile et lipophile du système tensioactif mis en oeuvre est atteint. A température élevée (température supérieure à la température d'inversion de phase), l'émulsion est de type eau-dans-huile, et, au cours du refroidissement, cette émulsion s'inverse à la température d'inversion de phase, pour devenir une émulsion de type huile-dans-eau (« émulsion H/E »), et ceci en étant passé auparavant par un état de microémulsion. Le procédé, selon l'invention, peut comprendre au moins les étapes suivantes : a) Préparer une émulsion huile-dans-eau (émulsion H/E) comprenant un corps gras (phase huileuse), un tensioactif hydrophile solide à 20°C; b) Soumettre l'émulsion obtenue à l'étape (a) à un cycle de température comprenant une augmentation de température jusqu'à une température T2 supérieure à la température d'inversion de phase pour obtenir une émulsion eau-dans- huile (émulsion E/H), suivi d'un refroidissement jusqu'à une température T1 inférieure à la température d'inversion de phase, de telle sorte à induire une inversion de phase de ladite émulsion ; c) Réitérer le cycle de température selon l'étape (b) au moins une fois ; d) Soumettre la microémulsion obtenue à l'étape (c) à une étape de dilution et de refroidissement rapide avec une dispersion aqueuse comprenant des complexes lipophiles à ARN, ayant une température de 4°C+/-2°C, pour obtenir des nanocapsules chargées en ARN dans l'eau. Le nombre de cycles de température dépend de la quantité d'énergie nécessaire à la formation des nanocapsules. Le nombre de cycles de température peut être compris entre 1 et 10, préférentiellement entre 1 et 7, très préférentiellement 3. La phase d'inversion entre l'émulsion H/E et l'émulsion E/H est reflétée par la réduction de la conductivité quand la température augmente jusqu'à atteindre une absence de conductivité. La température moyenne de la zone d'inversion de phase correspond à la température d'inversion de phase (« TIP »). L'organisation du système sous la forme de nanocapsules lipidiques est reflétée visuellement par changement dans l'apparence d'un système initial, avec un changement d'un blanc opaque à un blanc translucide. T1 est la température à laquelle la conductivité est au moins égale de 90% à 95% de la conductivité mesurée à 20°C. T2 est la température à laquelle la conductivité est quasi-nulle. L'étape (d) - comprenant une étape de refroidissement soudain/brutal de la microémulsion à une température située dans la région de la TIP, préférentiellement à une température de plus ou moins 2°C autour de la TIP - peut être mise en oeuvre sous agitation magnétique, en diluant ladite émulsion de 1 à 3 fois, préférentiellement environ 1,5 fois, avec une dispersion aqueuse de complexes lipophiles à ARN ayant une température de 4°C+/-2°C, préférentiellement de 4°C+/-1°C. Les particules obtenues sont alors agitées pendant 1 à 15 minutes, préférentiellement de 2 à 8 minutes, très préférentiellement environ 5 minutes. Dans un mode de réalisation avantageux, la phase huileuse comprend un triglycéride, et le tensioactif hydrophile est le 2-hydroxystéarate polyéthylène glycol. Les lipoplexes peuvent être obtenus par toutes techniques connues de l'homme de l'art. Par exemple, les lipides cationiques et les lipides neutres sont formulés selon les techniques connues, et la structure supramoléculaire obtenue peut être mélangée aux ARN à charger. La phase aqueuse de l'émulsion H/E peut comprendre en outre entre 1% à 4% d'un sel, notamment de chlorure de sodium. Une variation de la concentration en sel peut impacter la zone d'inversion de phase. Plus la concentration en sel est élevée, plus la TIP est basse. La présente invention concerne également un procédé de modification des nanocapsules lipidiques chargées, notamment par post-insertion de composés de ciblage et/ou de composés de modulation pharmacocinétique. Ce procédé peut comprendre au moins les étapes suivantes : (a) Préparer des nanocapsules lipidiques chargées selon le procédé détaillé ci-avant ; (b) Incuber des composés de ciblage et/ou des composés de modulation pharmacocinétique avec lesdites nanocapsules obtenues à l'étape (a) ; (c) Refroidir le mélange obtenu à l'étape (b) jusqu'à une température comprise entre 0°C et 5°C. Dans un mode de réalisation, le composé de modulation pharmacocinétique est choisi parmi les dérivés PEG amphiphiles, préférentiellement le DSPE-PEG2000- méthoxy. La température selon l'étape (b) peut être comprise entre 25°C et 37°C. Le temps d'incubation selon l'étape (b) peut être compris entre 2 et 6 heures. De manière préférée, l'étape (b) est mise en oeuvre à une température de 37°C pendant 4h. Les composés de ciblage et/ou des composés de modulation pharmacocinétique peuvent être ajoutés à l'étape (b) à une concentration comprise entre 2 et 10mM. L'étape (b) peut être mise en oeuvre sous agitation continue, ou par agitation intermittente chaque 10min à 20min, préférentiellement chaque 15min. Le refroidissement à l'étape (c) peut être mis en oeuvre rapidement, préférentiellement en moins d'une minute, très préférentiellement en moins de 30sec, plus préférentiellement en moins de 10sec. Ce procédé de modification des nanocapsules lipidiques peut comprendre en outre une étape de collecte et de purification des nanocapsules lipidiques chargées et modifiées obtenues. Liste des figures D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront plus clairement à la lecture de la description suivante d'un mode de réalisation préférentiel, donné à titre de simple exemple illustratif et non limitatif ; des exemples ; et des dessins annexés, parmi lesquels : - la figure 1 est une représentation schématique et simplifiée des nanocapsules chargées selon l'invention ; - la figure 2 est une représentation schématique et simplifiée des nanocapsules chargées et modifiées selon l'invention ; - la figure 3 présente un graphique concernant la stabilité (en jours) des nanocapsules lipidiques chargées comprenant des tensioactifs lipophiles choisis parmi la lécithine et/ou les esters polyglycériques (comparaison), suivie par l'évolution de leur potentiel zêta (mV) et de leur taille (nm) en fonction du temps ; - la figure 4 présente un graphique concernant la stabilité (en semaines) des nanocapsules lipidiques chargées dépourvues de tensioactifs lipophiles choisis parmi la lécithine et/ou les esters polyglycériques (invention), suivie par l'évolution de leur potentiel zêta (mV) et de leur taille (nm) en fonction du temps ; - la figure 5 présente un graphique concernant la stabilité (en jours) des nanocapsules lipidiques chargées et modifiées (dépourvues de tensioactifs lipophiles choisis parmi la lécithine et/ou les esters polyglycériques - invention), suivie par l'évolution de leur potentiel zêta (mV) et de leur taille (nm) en fonction du temps ; - la figure 6 présente une étude de tensiométrie à goutte sous la forme d'un graphique représentant la tension de surface (N/cm) en fonction de la masse de lipides par rapport à la masse de Labrafac (mg/g) 5. Description d'un mode de réalisation de l'invention Selon un mode de réalisation préféré, les nanocapsules lipidiques sont constituées essentiellement d'un coeur lipidique liquide constitué de triglycérides d'acide caprique et d'acide caprylique (corps gras) ; d'une écorce lipidique solide constituée de polyéthylène glycol-660 2-hydroxystéarate (tensioactif hydrophile) et dépourvue de tensioactifs lipophiles choisis parmi la lécithine et les esters polyglycériques ; et d'au moins un complexe lipophile constitué de 1,2-dioleyloxy-3- triméthyl ammonium chloride propane (DOTAP - lipide cationique), de L-[alpha]- dioléylphosphatidyl-éthanolamine (DOPE - lipide neutre), et d'ARN ; lesdits complexes lipophiles étant essentiellement incorporés dans ladite écorce, de telle sorte à ce que ledit coeur en soit essentiellement dépourvu. Le corps gras est commercialisé notamment sous la dénomination commerciale La brafac® WL1349 par la société Gattefossé (Saint-Priest, France), Labrafac® WL1349 correspond à une huile composée de triglycérides à chaîne moyenne des acides capryliques (C8) et capriques (C10), ayant une densité de 0,930 à 0,960 à 20°C, et ayant un indice HLB de l'ordre de 1. Le tensioactif hydrophile est commercialisé notamment sous la dénomination commerciale Kolliphor® HS15 par la société BASF (Ludwigshafen, France), et correspond au 2-hydroxystéarate de polyéhylèneglycol-600. 6. Exemples Exemple 1 - Nanocapsules lipidiques chargées, dépourvues de tensioactifs lipophiles choisis parmi la lécithine et/ou les esters polyglycériques (invention) Le procédé mis en oeuvre pour obtenir les nanocapsules chargées selon l'invention est similaire au procédé divulgué dans FR2805761 et demandes apparentées. Dans une étape (a), une émulsion huile-dans-eau (émulsion H/E) est préparée comprenant 20,85% d'un corps gras (phase huileuse), 17,16% d'un tensioactif hydrophile solide à 20°C, 1,8 % de NaCI et 60,19 % d'eau, par rapport au poids total de l'émulsion H/E. Le corps gras est le produit commercialisé sous la dénomination commerciale Labrafac® WL1349 (triglycérides). Le tensioactif hydrophile est le produit commercialisé sous la dénomination commerciale Kolliphor® HS15 (2-hydroxystéarate polyéthylène glycol). Le rapport massique corps gras/tensioactif hydrophile est d'environ 1,21. Dans une étape (b), ladite l'émulsion obtenue à l'étape (a) est soumise à un cycle de température comprenant une augmentation de température jusqu'à 90°C, cette température étant supérieure à la température d'inversion de phase pour obtenir une émulsion eau-dans-huile (émulsion E/H) à savoir une température de 75°C, suivi d'un refroidissement jusqu'à 50°C, de telle sorte à induire une inversion de phase de ladite émulsion. Dans une étape (c), le cycle de température selon l'étape (b) est répété 3 fois. Dans une étape (d), la microémulsion obtenue à l'étape (c) est soumise à une étape de dilution et de refroidissement rapide avec une dispersion aqueuse comprenant 1,95 % de complexes lipophiles à ARN, en poids par rapport au poids total de la dispersion aqueuse, et ayant une température de 4°C+/-1°C, pour obtenir des nanocapsules chargées en ARN dans l'eau. Ladite microémulsion est diluée environ 1,5 fois avec ladite dispersion aqueuse. Les particules obtenues sont alors agitées environ 5 minutes. La suspension finale de nanocapsules comprend environ 12,12% de tensioactif hydrophile, environ 14,73% de corps gras, environ 71,31% d'une dispersion aqueuse, environ 1,27% d'un sel et 0,58 % de lipoplexes à ARN, par rapport au poids total de la suspension finale. Les lipoplexes à ARN sont obtenus par une technique bien connue de l'homme de l'art, telle que divulguée dans la publication suivante : Resnier P, David S, Lautram N, Delcroix GJ, Clavreul A, Benoit JP, Passirani C - EGFR siRNA lipid nanocapsules efficiently transfect glioma cells in vitro - International Journal of Pharmaceutics, 454(2):748-55, 2013. Par exemple, pour préparer un liposome, un lipide cationique DOTAP (Avanti ® Polar Lipids Inc., Alabaster, AL, USA) est dissous dans du chloroforme et combiné dans un ratio molaire 1:1 avec un lipide neutre DOPE (Avanti® Polar Lipids Inc., Alabaster, AL, USA). Les concentrations finales de DOTAP et DOPE dans le chloroforme sont respectivement de 13mg/mL et 12mg/mL. Après évaporation du chloroforme sous vide, de l'eau déminéralisée est ajoutée afin de réhydrater le film lipidique sur la nuit à 4°C. Le film lipidique est alors soumis à sonication pendant 30min. Les lipoplexes sont formulés comme un simple mélange équivolume de pARNi et de liposomes. Les lipoplexes se caractérisent par leur ratio de charge, c'est-à-dire le ratio entre les charges positives des lipides et les charges négatives des acides nucéliques (ratio +/-), lequel ratio étant compris entre 5 et 15. Le lipide cationique est le 1,2-dioley1-3-triméthyl ammonium chloride propane (DOTAP). Il représente 46% en poids par rapport au point total des lipoplexes non- encapsulés, et 0,9% en poids par rapport au poids total des nanocapsules lipidiques chargées. Le lipide neutre est le LgalphaFdioleylphosphatidyléthanolamine (DOPE). Le lipide neutre représente 49,3% en poids par rapport au poids total des lipoplexes non- encapsulés, et 1% en poids par rapport au poids total des nanocapsules lipidiques chargées. L'ARN est par exemple un pARNi ciblant la sous-unité alpha 1 de la pompe à sodium NaK ATPase de séquence sens : 5'- GGGCAGUGUUUCAGGCUAATT -3' (SEQ-ID1) et antisens : 5'- UUAGCCUGAAACACUGCCCTT -3' (SEQ-ID2) ; (Eurogentec, Seraing, Belgium). L'ARN représente 4,4% en poids par rapport au poids total des lipoplexes non-encapsulés, et 0,04% en poids par rapport au poids total des nanocapsules lipidiques chargées. Le ratio massique entre lipide cationique/lipide neutre/ARN est d'environ 10,56:11,25:1. De plus, les lipoplexes à ARN ont un ratio en charges positive/négative d'environ 5:1, une taille moyenne d'environ 700nm, et ils représentent environ 1,95% en poids par rapport au poids total de la nanocapsule lipidique chargée. Les nanocapsules lipidiques chargées selon l'invention sont schématisées dans la figure 1. Dans cette figure 1, il est schématisé une nanocapsule chargée 1, comprenant un coeur lipidique liquide 2 de triglycérides (non représentés) et une écorce lipidique solide composée de 2-hydroxystéarate polyéthylène glycol 3, de DOTAP / DOPE (non représentés de manière individuelle) 4 et de pARNi 5. Exemple 2 - Nanocapsules lipidiques chargées comprenant des tensioactifs lipophiles choisis parmi la lécithine et/ou les esters polyglycériques (comparaison) Le procédé mis en oeuvre pour obtenir les nanocapsules chargées (comparaison) selon l'invention est similaire au procédé divulgué dans FR2805761 et demandes apparentées, et donc au procédé mis en oeuvre pour obtenir les nanocapsules lipidiques chargées selon l'exemple 1 ci-dessus (invention). Cependant, le procédé selon l'exemple 2 diffère en ce que : Dans une étape (a), une émulsion huile-dans-eau (émulsion H/E) est préparée comprenant 20,5 % d'un corps gras (phase huileuse), 16,87 % d'un tensioactif hydrophile solide à 20°C, 1,68% d'un tensioactif lipophile (Lécithine), 1,77 % de NaCI et 59,18 % d'eau, par rapport au poids total de l'émulsion H/E. La suspension finale de nanocapsules comprend environ 11,97 % de tensioactif hydrophile, 1,19% d'un tensio actif lipophile (Lécithine), environ 14,55 % de corps gras, environ 70,46 % d'une dispersion aqueuse, environ 1,26 % d'un sel et 0,56 % de lipoplexes à ARN, par rapport au poids total de la suspension finale. Exemple 3 - Nanocapsules lipidiques chargées et modifiées (invention) Le procédé suivant est mis en oeuvre pour modifier les nanocapsules chargées selon l'invention (cf. exemple 1), par post-insertion de composés d 'un composé de ciblage et/ou de composés de modulation pharmacocinétique. Dans une étape (a), des nanocapsules lipidiques chargées sont préparées telles qu'indiqué à l'exemple 2. Dans une étape (b), le composé de ciblage et/ou de modulation pharmacocinétique est ajouté à une concentration de 10 mM et incubé avec lesdites nanocapsules obtenues à l'étape (a) pendant 4h à 37°C. Ledit composé est le DSPE-PEG2000-méthoxy. L'étape (b) est mise en oeuvre sous agitation intermittente chaque 15min. Dans une étape (c), le mélange obtenu à l'étape (b) est refroidi jusqu'à une température de 4°C. Le refroidissement à l'étape (c) est mis en oeuvre en moins de 10sec. Une étape de collecte et de purification des nanocapsules lipidiques modifiées obtenues est alors mise en oeuvre à l'aide de colonne de Sephadex® (méthode de gel filtration permettant de séparer les molécules en fonction du poids moléculaire). Suite à la purification sur colonne qui entraine une dilution des échantillons, une re-concentration des nanocapsules chargées et modifiées peut être obtenue via l'utilisation de filtre Amicon® (seuil de coupure 100 kDa). Les nanocapsules lipidiques chargées et modifiées selon l'invention sont schématisées dans la figure 2. Dans cette figure 2, il est schématisé une nanocapsule chargée et modifiée 7, comprenant un coeur lipidique liquide 2 de triglycérides (non représentés) et une écorce lipidique solide composée de 2-hydroxystéarate polyéthylène glycol 3, de DOTAP / DOPE (non représentés de manière individuelle) 4 et de pARNi 5. Ladite écorce est de plus modifiée en surface par du DSPE-PEG2000- méthoxy 6.30 Exemple 4 - Etude de la stabilité des nanocapsules chargées (invention - exemple 1) et des nanocapsules chargées et modifiées (invention - exemple 3), lesdites nanocapsules étant dépourvues de lécithine et d'esters polyglycériques, en comparaison de nanocapsules chargées comprenant de la lécithine et/ou des esters polyglycériques (comparaison - exemple 2). La stabilité des nanocapsules chargées (et modifiées) a été déterminée en mesurant le potentiel zéta (mV) et en mesurant la taille des nanocapsules (nm) en fonction du nombre de jours après leur préparation. Le potentiel zéta est mesuré en utilisant une technique connue de l'homme du métier, telle que divulguée dans la publication suivante : Vonarbourg A, Saulnier P, Passirani C, Benoît JP - Electrokinetic properties of non charged lipid nanocapsules : influence of the dipolar distribution at the interface - Electrophoresis 26(11):2066-75, 2005 La taille mesurée en utilisant une technique connue de l'homme du métier, telle que divulguée dans la publication suivante : The influence of lipid nanocapsule composition on their size distribution - Heurtault B, Saulnier P, Pech B, Venier-Julienne MC, Proust JE, Phan-Tan-Luu R, Benoît JP - EurJ Pharm Sci. 2003 Jan;18(1):55-61. Comme illustré dans le graphique selon la figure 3, il apparaît que la taille des nanocapsules comprenant une lécithine et/ou un ester polyglycérique (comparaison) commence à diminuer de manière significative à partir du 8ème jour. De même, le potentiel zéta augmente de manière significative à compter du 8ème. Ces nanocapsules chargées (comparaison) ont donc une stabilité très courte, de l'ordre d'une semaine, démontrant ainsi l'inaptitude des nanocapsules connues de l'homme du métier à encapsuler de manière suffisamment stables les molécules chargées négativement, telles que les ARN, en particuliers les pARNi. Comme illustré dans le graphique selon la figure 4, et à l'inverse des observations précédentes, la taille des nanocapsules chargées (invention) ne diminue pas de manière significative avec le temps, aucune diminution significative n'ayant été observée pendant 12 semaines. De même, le potentiel zéta des nanocapsules chargées (invention) n'augmente pas de manière significative avec le temps, aucune augmentation significative n'ayant été observée pendant 12 semaines. Ces nanocapsules chargées (invention) ont donc une stabilité considérablement augmentée, en comparaison des nanocapsules chargées (comparaison), avec une taille et une surface de charge stable au minimum pendant environ trois mois, et une efficacité d'encapsulation inchangée. Comme illustré dans le graphique selon la figure 5, les résultats observés pour les nanocapsules chargées (invention) sont corrélés à ceux observés pour les nanocapsules chargées et modifiées (invention). En effet, aucune diminution significative de la taille et aucune augmentation significative du potentiel zéta des nanocapsules chargées et modifiées (invention) n'ont été observées pendant les 13 jours d'observation. Une telle modification a pour but de prolonger le temps de demi-vie des nanocapsules dans le sang, et ainsi pouvoir espérer obtenir un ciblage tumoral passif par effet EPR. Après post-insertion, il apparaît que la taille des nanocapsules est augmentée et que la charge de surface devient négative. Cependant, la méthode de dosage n'a démontré aucune modification de l'encapsulation avant et après insertion. Exemple 5 - Etude de la tension de surface (N/cm) en fonction du ratio massique lipides / labrafac (mg/g) Comme illustré à la figure 6, on étudie la tension à l'interface entre une goutte d'eau et une phase la contenant, phase constituée du corps gras Labrafac. Dans cette goutte d'eau, on ajoute des concentrations croissantes de lipides DOTAP et DOPE (liposomes) ou de DOTAP/DOPE/ARN (c'est-à-dire les lipoplexes à ARN). La tension initiale entre la goutte d'eau et l'huile est élevée (25 N/cm) car les deux milieux sont incompatibles. L'ajout de liposomes et de lipoplexes, même à faible concentration, fait chuter cette tension interfaciale, démontrant ainsi le déplacement de ces structures du milieu hydrophile vers l'interface eau/huile, représentant l'écorce de la nanocapsule. Cette étude de tensiométrie à goutte a été réalisée afin de déterminer et comprendre le positionnement des lipoplexes au sein des nanocapsules. Il a été mis en évidence les propriétés tensioactives des lipoplexes, de sorte qu'ils se placent préférentiellement dans ladite écorce. REVENDICATIONS1. Nenocapsule lipidique chargée comprenant : - un coeur lipidique liquide ; une écorce lipidique solide ; et, - au moins un complexe lipophile comprenant un acide ribonucléique (ARN) ; caractérisé en ce que ladite écorce est essentiellement dépourvue de tensioactif lipophile choisi parmi la lécithine, les esters polyglycériques et leurs mélanges. 2. Nanocapsule chargée, selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite écorce est essentiellement dépourvue de tensioactif lipophile choisi parmi la lécithine, le polyglycéry1-6-dioléate, et leur mélange. 3. Nanocapsule chargée selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite écorce comprend au moins un tensioactif hydrophile. 4. Nanocapsule chargée selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ledit coeur lipidique liquide comprend au moins un corps gras liquide ou semi-liquide à température ambiante. 5. Nanocapsule chargée selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'acide ribonucléique (ARN) est choisi parmi les ARN messager, les ARN transfert, les ARN ribosomaux, les petits ARN interférents, les petits ARN en épingle à cheveux, les micro-ARN, et leurs mélanges. 6. Nanocapsule chargée selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'acide ribonucléique (ARN) est choisi parmi les petits ARN interférents, les micro-ARN, et leurs mélanges. 25 30 7. Nanocapsule chargée selon l'une quelconque des revendications précédentes,caractérisée en ce que les complexes lipidiques comprennent en outre un lipide cationique, un lipide neutre et leurs mélanges. 8. Nanocapsule chargée selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les complexes lipidiques sont incorporés essentiellement dans ladite écorce, ledit coeur étant essentiellement dépourvu desdits complexes lipidiques. 9. Nanocapsule chargée selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un principe actif additionnel, ledit principe additionnel étant essentiellement incorporé dans le coeur lipidique liquide. 10. Nanocapsule chargée selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de ciblage et/ou un composé de modulation pharmacocinétique, lesdits composés étant adsorbés à surface de l'écorce lipidique solide ou incorporés dans ladite écorce. 11. Composition pharmaceutique comprenant une nanocapsule lipidique chargée telle que définie selon l'une quelconque des revendications précédentes, et un milieu pharmaceutiquement acceptable. 12. Procédé de préparation de nanocapsules lipidiques chargées telles que définies aux revendications 1 à 10, comprenant les étapes suivantes : a) Préparer une émulsion huile-dans-eau (émulsion H/E) comprenant un corps gras, un tensioactif hydrophile solide à 20°C; b) Soumettre l'émulsion obtenue à l'étape (a) à un cycle de température comprenant une augmentation de température jusqu'à une température T2 supérieure à la température d'inversion de phase pour obtenir une émulsion eau-danshuile (émulsion E/H), suivi d'un refroidissement jusqu'à une température Ti inférieure à la température d'inversion de phase, de telle sorte à induire une inversion de phase de ladite émulsion ;c) Réitérer le cycle de température selon l'étape (b) au moins une fois ; d) Soumettre la microémulsion obtenue à l'étape (c) à une étape de dilution et de refroidissement rapide avec une dispersion aqueuse de complexes lipophiles comprenant au moins un acide ribonucléique (ARN), ayant une température de 4°C-11-2°C, pour obtenir des nanocapsules chargées en ARN dans l'eau. 13. Nanocapsules lipidiques chargées, telles que définies aux revendications 1 à 10, destinées à être utilisées pour la mise en oeuvre d'une stratégie génique d'inhibition. 10 14. Composition pharmaceutique comprenant des nanocapsules lipidiques chargées, telle que définie à la revendication 11, destinée à être utilisée pour la mise en oeuvre d'une stratégie génique d'inhibition.