Brevet FR3026104A1 — publié le 20160325

PROCEDE D'OBTENTION DE LA L-HERCYNINE PURE La présente invention a pour objet un procédé d'obtention à l'échelle industrielle de la L-hercynine pure. Cette invention se rapporte à un nouveau procédé d'obtention de la L- hercynine pure sans aucune étape de purification par chromatographie. Plus particulièrement, cette invention concerne un nouveau procédé industriel d'obtention de L-hercynine pure qui inclut une étape de purification par électrodialyse, ainsi qu'un nouveau procédé de préparation de la L-hercynine à partir de L-histidine, ainsi qu'un nouveau composé la L-hercynine-d9. Etat de l'Art : Les composés de type béta'ine (ammonium quaternaire) sont parmi les plus abondantes molécules organiques azotées dans le sol après les acides aminés protéogéniques et non-protéogéniques. Parmi ces béta'ines, la glycine bétaine et l'hercynine en sont les principaux représentants. La L-hercynine est le dérivé béta'ine de la L-histidine. 0 G o / e N. NI-1 "---.' N'y / \ L-hercynine La L-hercynine est le précurseur direct de la L-ergothionéine (Y. Ishikawa et al., J. Biol. Chem.; 1974; 249; 4420 - 4427) chez certains champignons, mycobactéries et cyanobactéries (Pfeiffer, C. et aL ; Food Chemistry ; 2011; 129; 4; 1766-1769). Elle a donc été naturellement retrouvée chez ces microorganismes (Mahmood, Z.A. et al.; Pak. J. Pharm. Sci. ; 2010 ; 23 ; 349-357) mais aussi chez certains serpents (Ackermann, D. et al., ; Z. Physiol. Chem. Hoppe-Seyler's ; 1960; 318; 212-217). Très récemment, la L-hercynine a été mise en évidence, pour la première fois, dans des globules rouges humains (Chaleckis, R. et aL; Mol. Biosystems ; 2014 ; DOI 10.1039/c4mb00 346b). La L-hercynine fait partie des substances régulatrices de la croissance des champignons tels que Agaricus bisporus (Champavier, Y. et al.; Enz. and Microbial. Technologt ; 2000 ; 26 ; 2-4 ; 243-251). En tant que bétaïne, la L-hercynine pourrait jouer le rôle d'osmolyte, chez les plantes notamment (Velisek, J. ; Chemistry of Food ; J.Wiley & Sons Eds. ; 2013). En tant que tel, la L-hercynine exercerait une fonction cyto-protectrice en contribuant, notamment, au repliement correct des protéines dans les cellules. Bien que ses caractéristiques biologiques soient considérables, la Lhercynine a été très peu étudiée sur le plan biologique; et ceci probablement en raison du fait qu'elle n'est pas disponible commercialement (Warren, C.R.; New Physiologist ; 2013 ; 198 ; 476-485). Concernant sa préparation, que ce soit par voie directe (1 étape) ou indirecte (2 étapes), seuls 4 documents publiés à ce jour en font état, et ceci à l'échelle laboratoire. En 1968, Melville et son équipe rapporte la première synthèse de L- hercynine à partir de L-histidine en 2 étapes (Reinhold, V. et al., ; J. Med. Chem.; 1968 ; 11 ; 258-260). OH 0 0 HN , N N-CH N, H3CcCH33 L-hercynine OH HNN N , H3d CH3 N,N-diméthylhistidine HN N NH2 L-histidine Schéma 1: Synthèse de la L-hercynine en 2 étapes selon Melville et al. Au cours de la première étape, la L-histidine subit une méthylation en conditions réductrices à l'aide de formaldéhyde en présence de palladium sur charbon et d'hydrogène pour conduire à la L-N ,N'-di-méthyl-histidine. Après traitement à l'aide de solvants organiques, l'intermédiaire désiré est obtenu par recristallisation avec un rendement de 82%. La seconde étape consiste en une méthylation à l'aide d'iodure de méthyle à pH 9. La L-hercynine est obtenue après traitement et purification sur colonne échangeuse d'ions puis recristallisation avec un rendement de 89%. Il faut noter que les conditions utilisées par Melville ne sont pas racémisantes. Le rendement global de synthèse de la L-hercynine pure à partir de L-histidine selon cette procédure s'élève donc à 73%. Ayant testé la voie directe de triméthylation de la L-histidine, Melville fait état de «difficultés dans les essais de préparer la L-hercynine par méthylation directe de L-histidine notamment en raison de la méthylation concomitante du noyau imidazole qui se produit dans les conditions utilisées et du dérivé pentaméthylé correspondant qui se forme au cours de la réaction» (Reinhold, V. et al.; J. Med. Chem.; 1968 ; 11 ; 260). Plus récemment, un second document mentionne l'hercynine en tant qu'intermédiaire non isolé dans la préparation de l'acide urocanique, objectif désiré des auteurs de cette publication (Valeev, F.A. et al., Chemistry of Natural Compounds; 2007; 43(2);143-148) selon : o OH L-histidine 66% acide urocanique o o OH Mel oc) 30% NaOH KOH Me0H boiling Schéma 2 : Synthèse de la L-hercynine par tri-méthylation selon Valeev et al. Les auteurs évoquent la méthylation « one-step » de la L-histidine pour obtenir intermédiairement l'hercynine qui, en milieu fortement basique et à chaud, conduit, après élimination de la triméthylamine, à l'acide urocanique désiré avec un rendement global de 66% à partir de la L-histidine. N'ayant pas isolé l'hercynine intermédiaire, ni mis en évidence la triméthylamine comme sous-produit, la formation de cette dernière n'est qu'hypothétique. De plus, à aucun moment, ils ne font état de sous-produits provenant de la méthylation du noyau imidazole comme l'évoquait Melville dans sa publication en 1968. Enfin, comme le centre chiral est détruit au cours de la séquence réactionnelle aboutissant à l'acide urocanique, aucune information n'est disponible afin de déterminer si cette triméthylation directe est réalisée avec ou sans racémisation. En 2012, la préparation (en solution et en mélange avec les produits de per-méthylation) de l'hercynine par méthylation directe pour des études analytiques a été réalisée en utilisant un très large excès (16 équivalents) d'agent méthylant (Chary V. N. et aL, J. Mass. Spectrom. 2012; 47; 79-88). Enfin Khonde décrit, dans une thèse de Master en chimie, également la préparation de la L-hercynine par méthylation directe de la L-histidine, sans toutefois purifier la L-hercynine désirée (Khonde, L.P. ; Synthesis of Mycobacterial Ergothioneine biosynthetic pathway metabolites ; University of Cape Town, South Africa ; 2013 ; page 61, schéma 3.19). /-N H N NH2 L-histidine Q 1. Na0H/ Me2SO4 (2,6 equivalents) OH 2. HCl/Iyophilisation 3. trituration éther O 0 /- 0 HNN N-CH N, H3cc,CH33 L-hercynine (utilisé dans la suite sans purification) Schéma 3 : Synthèse de la L-hercynine par tri-méthylation selon Khonde et 20 al. Khonde utilise le sulfate de diméthyle, comme agent méthylant, en milieu basique (NaOH 10%). Curieusement, seulement 2,6 équivalents de sulfate de diméthyle sont utilisés alors qu'au minimum 3 équivalents sont nécessaires théoriquement pour obtenir la L-hercynine à partir de la L- 25 histidine. Par ailleurs, aucune donnée structurale n'est fournie par l'auteur qui utilise le mélange réactionnel brut pour l'étape suivante. Alors qu'il existe plusieurs méthodes de synthèse chimiques de la Lhercynine en solution et en mélange avec des produits de perméthylation, comme nous l'avons vu ci-dessus, l'obtention de la L-hercynine pure est 3026 104 5 sérieusement limitée par les difficultés rencontrées lors de sa purification. En effet, la technique de purification la plus utilisée des acides aminés, bien connue de l'homme de l'art, à savoir la recristallisation s'avère très peu efficace voire totalement inutilisable en présence de quantité significative de 5 sels. Seules des méthodes de purification par chromatographie d'échanges d'ions permettent d'obtenir la L-hercynine avec une bonne pureté. Dans le cadre de la préparation en 2 étapes décrite par Melville et déjà cité dans ce document (Reinhold, V. et al., ; J. Med. Chem.; 1968; 11 ; 258-260), pour obtenir un kilogramme de L-hercynine pure il faudrait utiliser 13,2 kg de 10 résines échangeuses d'ions. A l'échelle industrielle cela représenterait des quantités considérables de résines qui doivent être éliminées dans le respect de la réglementation environnementale. Ce qui souligne l'importance de pouvoir disposer d'un procédé de purification qui évite l'utilisation de très grands volumes de résines. 15 Bien que son rôle physiologique soit encore mal défini, la L-hercynine est une molécule naturelle dont l'importance semble évidente. Il est donc essentiel de pouvoir disposer d'un procédé de préparation efficace de la Lhercynine pure aisément industrialisable, économiquement viable, nonracémisant et respectueux de l'environnement. Sachant que la recristallisation s'avère très peu efficace voire totalement inutilisable en présence de quantité significative de sels, plusieurs difficultés doivent être solutionnées au-delà du problème relatif à la stéréochimie du produit final, à savoir: 1. la séparation complète de la L-hercynine, molécule très hydrophile, et des sels inorganiques, sous-produits de la réaction de méthylation (directe ou indirecte) par une méthode économiquement viable et industrialisable, excluant la chromatographie d'échange d'ions ; 2. une mise en oeuvre limitant des pertes opérationnelles du produit désiré, c.à.d. Buts de l'invention : L'un des buts de la présente invention est de proposer un procédé simple et reproductible d'obtention de la L-hercynine pure, ou de son énantiomère la D-hercynine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement incluant notamment une étape de purification permettant de séparer aisément la L-hercynine des sels inorganiques formés, préalablement à l'élimination des sous-produits organiques; Ces buts sont atteints grâce à la présente invention qui repose sur un procédé de séparation de la L-hercynine des sels inorganiques, présents dans le milieu réactionnel, par électrodialyse; et cela quel que soit le mode de méthylation utilisé de la L-histidine ou de l'un de ses dérivés méthylés, suivie d'une purification par recristallisation. Ceci a été exemplifié dans la présente invention. Description de l'invention : La présente invention a donc pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture de la L-hercynine pure, ou de son énantiomère la D-hercynine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement selon une solution qui englobe une étape de purification de la L-hercynine autre que la chromatographie d'échanges d'ions; La Demanderesse a mis au point un nouveau procédé d'obtention de L-hercynine pure qui répond à tous ces critères, résolvant pour la première fois d'une manière simultanée tous les problèmes techniques énoncés, de façon très aisée et présentant de nombreux avantages sur les procédés existants. En particulier l'invention permet de fabriquer des grandes quantités permettant une utilisation du procédé à l'échelle industrielle. Par échelle industrielle, il est entendu une échelle 1 kg, en particulier supérieure à 5Kg, mieux supérieure à 10Kg. Ainsi dans son premier aspect, la présente invention concerne un procédé de purification de la L-hercynine, ou de son énantiomère D- hercynine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement à partir d'un mélange réactionnel résultant de la réaction de la L-histidine, ou de son énantiomère D-histidine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement ou de l'un de ses dérivés a-N-méthylés, dans des conditions de pH contrôlées, avec un agent de méthylation MeX dans un solvant polaire ou un mélange de solvants polaires, à température ambiante, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une étape de séparation des produits organiques des sels inorganiques formés au cours de la réaction par électrodialyse. Selon un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un procédé de purification caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire de recristallisation de la L-hercynine, ou de son énantiomère D-hercynine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement ou de l'un de ses dérivés méthylés, pour éliminer les impuretés organiques. Selon un deuxième aspect, l'invention concerne un procédé de préparation à l'échelle industrielle de la L-hercynine, ou de son énantiomère D-hercynine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement, ou de l'un de ses dérivés a-N-méthylés, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes de : - réaction de la L-histidine, ou de son énantiomère D-histidine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement ou de l'un de ses dérivés a-N-méthylés, dans des conditions de pH contrôlées, avec un agent de méthylation MeX dans un solvant polaire ou un mélange de solvants polaires, à température ambiante; suivie de - la séparation des produits organiques des sels inorganiques formés au cours de la réaction par électrodialyse ; suivie de - la recristallisation de la L-hercynine pour éliminer les impuretés organiques. Par dérivés a-N-méthylés de la L-histidine, il est entendu la L-N- monométhyl-histidine ou la L-N,N'diméthyhistidine ou l'un de leurs sels. Par température ambiante, on entend une température comprise entre 20°C et 35°C. Pour chaque aspect de l'invention, on peut mettre en oeuvre les modes de réalisation particuliers suivants : Selon une mise en oeuvre particulière, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'électrodialyse est conduite sur un milieu réactionnel ajusté à un pH compris entre 8,5 et 9,5, en particulier à environ 9, au démarrage de l'électrodialyse. L'ajustement du pH peut être réalisé de manière classique par addition d'une base inorganique telle que la soude, la potasse ou la lithine. Il a en effet été découvert de manière surprenante que les pertes en hercynine au cours de l'électrodialyse peuvent être réduites à L'électrodialyse selon l'invention permet aussi d'aboutir à un désalage complet. Par désalage complet, on entend la séparation des sels du produit organique en solution aqueuse jusqu'à obtenir une proportion en sels inférieure à 1% en poids, ce qui correspond généralement à une conductivité finale de Il est tout aussi surprenant pour un homme de l'art que la méthode de l'électrodialyse soit applicable à la séparation complète des sels inorganiques/minéraux obtenus lors de l'étape de purification ou de préparation de la L-hercynine, en tant que bétaine, ou de son énantiomère D- hercynine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement et ceci sans perte du produit significative ( D'une manière générale, ces pertes, causées par diffusion, électro- migration facilitée ou pression osmotique, sont d'autant plus importantes, si un dé-salage complet ( Selon une autre mise en oeuvre particulière du procédé selon l'invention, les conditions de pH contrôlées sont choisies pour aboutir directement à une triméthylation de la L-histidine ou de son énantiomère D-histidine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement ou de l'un de ses dérivés a-N-méthylés, ou indirectement à partir du dérivé diméthylé. Selon une autre mise en oeuvre particulière du procédé selon l'invention, les conditions de pH contrôlées sont choisies dans l'intervalle de pH = 9-13 par addition d'une base inorganique telle que la soude, la potasse ou la lithine. Il est important de noter qu'un pH plus faible, par exemple pH = 8,5, doit être évité sous peine d'une sélectivité nettement inférieure de la réaction ainsi que d'un rendement élevé en hercynine perméthylée 20%; Selon une autre mise en oeuvre particulière du procédé selon l'invention, le mélange de solvants polaires pourrait être un mélange méthanol/eau. Selon une autre mise en oeuvre avantageuse du procédé selon l'invention, l'électrodialyse est réalisée en utilisant différentes membranes telles que des membranes anion-selectives (par exemple PC SA) et cation- selectives (par exemple PC MV) disponibles notamment chez PC Cell (Allemagne). Les réactions subséquentes permettant de purifier et de recristalliser la L-hercynine pour la séparer des impuretés organiques, à partir du filtrat d'électrodialyse, sont effectuées dans des conditions classiques, connues de l'homme du métier. Selon une autre variante de réalisation le procédé selon l'invention est caractérisé en ce qu'il peut être préparé la L-hercynine-d9 à partir d'un mélange réactionnel résultant de la réaction de la L-histidine avec un agent de méthylation tri-deutéré (d3), tel que l'iodométhane-d3. 3026 104 11 Selon un troisième aspect, l'invention fournit un nouveau composé Lhercynine-d9 pure, en particulier tel qu'obtenu par le procédé défini dans la description précédente ou la description suivante incluant les exemples. 5 Le procédé selon la présente invention selon chacun de ses aspects, présente l'avantage de ne pas faire appel à des réactifs dangereux tels que l'hydrogène, ni à l'utilisation de quantités importantes de résines échangeuses d'ions, comme dans le procédé de l'art antérieur (Reinhold, V. et al. ; J. Med. Chem.; 1968; 11 ; 258-260). Il est de plus réalisable à 10 grande échelle, dans des solvants non toxiques comme par exemple l'eau ou un mélange eau/alcool. Outre l'aspect faisabilité, ces avantages réduisent considérablement non seulement les coûts de mise en oeuvre mais aussi les impacts négatifs sur l'environnement. 15 Les problèmes techniques énoncés ci-dessus sont résolus pour la première fois d'une manière simultanée par la présente invention, de façon très aisée et économique, le procédé de préparation desdits nouveaux composés étant très simple à mettre en oeuvre tout en fournissant de bons rendements. 20 Description des figures : Figure 1 : Chromatogramme (HPLC) de la L-hercynine obtenu dans l'exemple 2 à l'echelle industrielle après dé-salage et recristallisation 25 (detection universelle ELSD) Figure 2 : Chromatogramme (HPLC) de la L-hercynine-d9 obtenu dans l'exemple 3 après dé-salage et recristallisation (détection universelle ELSD) 30 Exemples Les exemples ci-après, de même que les figures, sont fournis simplement à titre d'illustration et ne sauraient, en aucune façon, limiter la portée de l'invention mais font cependant partie intégrante de l'invention, dans leurs moyens généraux.35 Dans les exemples, décrits ci-après, tous les pourcentages sont donnés en poids, la température est la température ambiante ou est donnée en degré Celsius, et la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire. Par température ambiante, on entend une température comprise entre 20°C et 35°C. Les réactifs utilisés sont disponibles commercialement chez des fournisseurs internationaux tel que Sigma-Aldrich France (France), Alfa Aesar , Fisher Scientific, TCI Europe, Bachem (Suisse) sauf les composés suivants, qui ont été préparés selon le protocole cité : N,N-Diméthyl-L- histidine chlorohydrate hydrate (Reinhold, V. et al. ; J. Med. Chem.; 1968; 11 ; 258-260). Le dé-salage a été réalisé par electrodialyse en utilisant des cellules constitué en alternance de membranes anion-selectives (par exemple PC SA) et cation-selectives (par exemple PC MV) disponibles notamment chez PC Cell (Allemagne), en utilisant des unités de desalination telles que l'unité ED 8002-001 (micro-unité pour l'echelle jusqu'à 10g), l'unité B-ED 1-3/ED 200 (jusqu'à 200g) et l'unité P20 (échelle industrielle), disponibles également chez PC Cell (Allemagne). Les analyses RMN-1H ont été enregistrées à 400 MHz dans le D20 ou un mélange D20/DCI, en utilisant le signal de HOD (4.79 ppm) comme référence interne. Les déplacements chimiques sont notés en ppm, et la multiplicité des signaux indiquée par des symboles suivants : s (singlet), d (doublet), t (triplet), q (quartet), et m (multiplet). Les constantes de couplages sont notées en hertz (Hz). Les analyses RMN-13C sont enregistrées à 75 MHz dans le D20. Les analyses de masse sont obtenues par ionisation chimique à pression atmosphérique (APCI-MS). Les points de fusion ont été mesurés avec un appareil de la société Stuart Scientific. Les analyses HPLC ont été effectuées sur un appareil Acquity (Waters), en utilisant une colonne C8 250x4,6 (511m). La phase mobile utilisée est un mélange eau/acétonitrile (98 :2) en 12 min et un débit de 0,6 ml/min. La détection s'effectue avec un détecteur universel ELSD (Sedere). L Exemples selon l'invention du procédé de préparation des composés purs 3026 104 13 Les exemples suivants illustrent un nouveau procédé simple et reproductible d'obtention de la L-hercynine pure, ou de son énantiomère la D-hercynine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement qui repose sur un procédé de séparation des sels 5 inorganiques, présents dans le milieu réactionnel, par électrodialyse d'une solution aqueuse ajustée à pH = 9; et cela quel que soit le mode de méthylation utilisé de la L-histidine ou de l'un de ses dérivés méthylés, suivie d'une purification par recristallisation. 10 Exemple 1 de l'invention : Isolation de la L-hercynine pure à partir d'un mélange réactionnel obtenu par triméthylation de la L-histidine o o ,_Ç yOH 1. KOH / Mel H N NH2 NN,' x HCI x H20 2. ED et recristallisation 275g (1,3 Moles) du chlorhydrate hydrate de la L-histidine sont solubilisés 15 dans 2,7 litres d'un mélange d'eau/méthanol (2 :1). Le pH est ajuste à 9-13 avec une solution d'hydroxyde de potassium 3M. Ensuite, 645g (4,55 Moles) d'iodométhane sont ajoutés sous agitation, et le mélange ainsi obtenu est agité pendant 18h à 25-35°C en maintenant le pH ente 9-13. Ensuite, le mélange est neutralisé en ajoutant de l'acide chlorhydrique aqueux à 37%. 20 Après évaporation du méthanol, le pH de la solution aqueuse, contenant le produit brut en mélange avec les sels de chlorure et d'iodure de potassium, est ajusté à 9 avec une solution de NaOH (30%), puis cette solution est dé-salée par électrodialyse jusqu'à obtenir une conductivité de 50-100pS. Un test de présence d'halogène avec le nitrate d'argent, effectué sur un 25 échantillon prélevé, confirme l'absence d'ions chlorure et iodure. La solution aqueuse, obtenue après électrodialyse, est évaporée à sec. Le produit brut est purifié par recristallisation dans l'isopropanol aqueux, et la Lhercynine est obtenue après filtration et séchage (192g ; 73%) sous forme d'une poudre blanche. e o HN , N N-CH N, 0,' 3 H3C 1/4-'1-13 30 [a]D = +44,5° (c = 1,0 ;5N HCI) pF : 238°C (dec.) RMN-1H (D20, 400 MHz) : Ô (ppm) = 3,24 (m+s, 11H), 3,90 (dd, J = 10Hz, J = 5Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,69 (s, 1H). RMN-1H (D20/DCI, 400 MHz) : Ô (ppm) = 3,31 (s, 9H), 3,44 (dd, J = 14Hz, J = 12Hz, 1H), 3,55 (dd, J = 14Hz, J = 4 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 12Hz, J = 4Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 8,66 (s, 1H). RMN-13C (D20, 75 MHz) : Ô (ppm) = 25,7; 52,4; 78,9; 116,7; 132,3; 136,5; 171,2. HPLC-MS (AP+) : m/z = 198 (MH+) Pureté par HPLC (détection ELSD): 100% Exemple 2 de l'invention: Isolation de la L-Hercynine pure à partir d'un mélange réactionnel obtenu par triméthylation de la L-histidine à l'échelle industrielle 0 0 HN , N N-CH HN NH2 N, (:), 3 2. ED et recristallisation H3C CH3 x HCI x H20 48,0 kg (229 Moles) du chlorhydrate hydrate de la L-histidine sont solubilisés dans 475 litres d'un mélange d'eau/méthanol (2 :1). Le pH est ajusté à 9-13 avec une solution d'hydroxyde de sodium à 10%. Ensuite, 113,8 kg (801 Moles) d'iodométhane sont ajoutés sous agitation, et le mélange ainsi obtenu est agité pendant 18h à 25-35°C en maintenant le pH entre 9-13. Ensuite, le mélange est neutralisé en ajoutant de l'acide chlorhydrique aqueux à 37%. Après évaporation du méthanol, le pH de la solution aqueuse, contenant le produit brut en mélange avec les sels de chlorure et d'iodure de sodium, est ajusté à 9 avec une solution de NaOH (30%), puis cette solution est dé-salée par électrodialyse jusqu'à obtenir une conductivité de 50-100uS. Un test de présence d'halogène avec le nitrate d'argent, effectué sur un échantillon prélevé, confirme l'absence d'ions chlorure et iodure. 0 OH 1. NaOH / Mel La solution aqueuse dé-salée, obtenue après électrodialyse, est concentrée. Après recristallisation dans l'isopropanol aqueux, la L-hercynine est obtenue après filtration et séchage (32,2 kg ; 72%) sous forme d'une poudre blanche. [a]D : + 44° (c = 1,0 ;5N HCI) pF : 242°C (dec.) Les spectres RMN-1H et RMN-13C et de masse sont identiques à ceux de la L-hercynine obtenus dans l'exemple 1. Pureté par HPLC (détection ELSD): 99,2% (voir Figure 1). Exemple 3 de l'invention: Isolation de la L-Hercynine-d9 pure à partir d'un mélange réactionnel obtenu par triméthylation de la L-histidine 0 1. NaOH / CD31 HNN NH2 2. ED et recristallisation x HCI x H20 31,4g (150mmoles) du chlorhydrate hydrate de la L-histidine sont solubilisés dans 300 mL d'un mélange d'eau/méthanol (2 :1). Le pH est ajusté à 9-13 avec une solution d'hydroxyde de sodium 3M. Ensuite, 86,9g (600mmoles) d'iodométhane-d3 sont ajoutés progressivement sous agitation, en maintenant le pH entre 9-13. Après 18h d'agitation à 30°C, le mélange ainsi obtenu est neutralisé en ajoutant de l'acide chlorhydrique aqueux à 37%. Après évaporation du méthanol, le pH de la solution aqueuse, contenant le produit brut en mélange avec les sels de chlorure et iodure de sodium, est ajusté à 9 avec une solution de NaOH (30%), puis cette solution est désalée par électrodialyse jusqu'à obtenir une conductivité de 50-100pS. Un test de présence d'halogène avec le nitrate d'argent, effectué sur un échantillon prélevé, confirme l'absence de ions chlorure et iodure. La solution aqueuse, obtenue après électrodialyse, est évaporée à sec. Le produit brut obtenu est purifié par recristallisation dans l'isopropanol aqueux, 0 OH e O HN , N N-CD Nv ,o,' 3 D3C L11-)3 et la L-Hercynine-d9 est obtenue après filtration et séchage (23,8g ; 77%) sous forme d'une poudre blanche. RMN-1H (D20, 400 MHz) : (ppm) = 3,14 (m, 2H) ; 3.83 (dd, J = 10Hz, J = 5 Hz, 1H) ; 6,92 (s, 1H) ; 7,62 (s, 1H). HPLC-MS (AP+) : m/z = 207 (MH+). Pureté par HPLC (détection ELSD): 100% (voir Figure 2). Exemple 4 de l'invention: Isolation de la L-Hercynine pure à partir d'un mélange réactionnel obtenu par quaternisation de la N,N-diméthy1- 10 histidine avec l'iodométhane 0 1. NH4OH 2. CH3I 3. ED et recristallisation 15 0 0 HNN N-CH N, 3 H3C L'F13 OH HN H3CI 013 x HCI x H20 On procède pour la quaternisation de la N,N-diméthyl-histidine comme décrit par Reinhold, V. et al., ; J. Med. Chem.; 1968 ; 11 ; 258-260. Brièvement, 48,5g (200 mmoles) du chlorhydrate hydrate de la N,N-diméthyl-histidine 20 sont solubilisés dans 1 litre de méthanol. Le pH est ajusté à 9 avec une solution aqueuse d'ammoniaque à 20%. Ensuite, 37,3g (16 mL, 1,3 équivalents) d'iodométhane sont ajoutés sous agitation. La solution ainsi obtenue est agitée pendant 18h à 30°C (température ambiante). Après évaporation du méthanol, le produit brut, dans le mélange réactionnel 25 contenant les sels de chlorure et iodure d'ammonium (88g), est solubilisé dans 500mL d'eau, le pH est ajusté à 9 avec une solution de NaOH (30%), puis la solution est dé-salée par électrodialyse jusqu'à obtenir une conductivité de 43 micro-siemens (1IS). Un test au nitrate d'argent, permettant d'estimer la présence d'ions halogénures, effectué sur un 30 échantillon prélevé dans la solution aqueuse, confirme l'absence d'ions chlorure et iodure. La solution aqueuse, obtenue après électrodialyse, est évaporée à sec. Le produit brut obtenu est purifié par recristallisation, et la L-hercynine est obtenue après filtration et séchage (36,6 g ; 93 °/0) sous forme d'une poudre blanche. [a]D = +440 (c = 1,0 ; 5N HCI) pF : 241°C (dec.) RMN-1H (D20, 400 MHz) : Ô (ppm) = 3,16 (m+s, 11H), 3,85 (dd, J = 10Hz, J = 5 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 7,64 (s, 1H). RMN-13C (D20, 75 MHz) : Ô (ppm) = 25,7; 52,4; 78,9; 116,7; 132,3; 136,5; 171,2. HPLC-MS (AP+) : m/z = 198 (MH+) Exemple 5 de l'invention: Isolation de la D-Hercynine pure à partir d'un mélange réactionnel obtenu par quaternisation de la D-N,N-diméthylhistidine avec l'iodométhane OH HN , N N Nr , ,' H3C L'113 x HCI x H20 1. NH4OH 2. CH3I 3. ED et recristallisation 0 0 0 HN ,N N-CH N, ,s, 3 H3C CH3 On procède pour la quaternisation de la D-N,N-diméthyl-histidine par analogie avec l'exemple 4 décrivant la synthèse et la purification de la Lhercynine. Brièvement, 21,3g (90mmoles) du chlorhydrate hydrate de la D- N,N-diméthyl-histidine sont solubilisés dans 0,45 litre de méthanol. Le pH est ajusté à 9 avec une solution aqueuse d'ammoniaque à 20%. Ensuite, 15,3g (6,7mL, 1,2 équivalents) d'iodométhane sont ajoutés sous agitation. La solution ainsi obtenue est agitée pendant 18h à 25-30°C. Après évaporation du méthanol, le produit brut, dans le mélange réactionnel contenant les sels de chlorure et iodure d'ammonium, est solubilisé dans 300mL d'eau. Après ajustement du pH de la solution à 9 avec une solution de NaOH (30%), le mélange est dé-salé par électrodialyse jusqu'à obtenir une conductivité de 7011S. Un test au nitrate d'argent, permettant d'estimer la présence d'ions 3026 104 18 halogénures, effectué sur un échantillon prélevé dans la solution aqueuse, confirme l'absence d'ions chlorure et iodure. La solution aqueuse, obtenue après électrodialyse, est évaporée à sec. Le produit brut obtenu est purifié par recristallisation avec un mélange 5 méthanol/acétate d'éthyle, et la L-hercynine est obtenue après filtration et séchage (16,7 g ; 93 %) sous forme d'une poudre blanche. [a]D : - 44° (c = 1,0 ;5N HCI) Les spectres RMN-1H et RMN-13C et de masse sont identiques à ceux de la 10 L-hercynine obtenus dans l'exemple 1. Exemple 6 de l'invention: Isolation de la L-Hercynine pure à partir d'un mélange réactionnel obtenu par quaternisation de la N,N-diméthylhistidine avec le sulfate de méthyle OH HN N, H3C/ CH3 15 x HCI x H20 1. NH4OH 2. CH3OSO3CH3 3. ED et recristallisation 0 0 0 HN ,N N-CH N H3C0,CH33 On procède pour la quaternisation de la N,N-diméthyl-histidine par analogie avec la procédure décrite par Reinhold, V. et al., ; J. Med. Chem.; 1968; 11 ; 258-260, en remplaçant l'iodométhane par le sulfate de méthyle. Brièvement 20 4,85g (20mmoles) du chlorhydrate hydrate de la N,N-diméthyl-histidine sont solubilisés dans 100mL de méthanol. Le pH est ajuste à 9 avec une solution aqueuse d'ammoniaque à 20%. Ensuite, 3,03g (2,28mL, 24mmoles, 1,2 équivalents) de sulfate de méthyle sont ajoutés sous agitation. La solution ainsi obtenue est agitée pendant 18h à 30°C. L'anayse par RMN-1H d'un 25 échantillon indique que la conversion n'est pas complète. 1,0g (0,75mL, 8mmoles, 0,4 équivalents) de sulfate de méthyle est ajouté au mélange réactionnel. Après agitation pendant 3h, le solvant est évaporé, et le produit brut, dans le mélange réactionnel contenant les sels de chlorure et iodure d'ammonium, est solubilisé dans 50mL d'eau. Après ajustement du pH à 9, un dé-salage par électrodialyse est réalisé jusqu'à obtenir une conductivité de 5011S, un test au nitrate d'argent, permettant d'estimer la présence d'ions halogénures, effectué sur un échantillon prélevé dans la solution aqueuse, ainsi qu'une analyse par HPLC-ELSD confirme l'absence de sels. La solution aqueuse, obtenue après électrodialyse, est évaporée à sec. Après recristallisation du produit brut avec un mélange méthanol/acétate d'éthyle, la L-hercynine est obtenue après filtration et séchage (3,0 g ; 76 °/0) sous forme d'un poudre blanche. Le spectre RMN-1H et le pouvoir rotatoire sont identiques à ceux obtenus pour le produit isolé dans l'exemple 1. Il. Exemples comparatifs du procédé d'électrodialyse Exemple comparatif 1: Evaluation de la séparation des sels inorganiques de la L-hercynine à pH 7 et pH 8 A) 2000 mL d'une solution aqueuse contenant 113g (0,57 mol) L-hercynine, 300g (3,5 équiv.) d'iodure de sodium et 33 g (1 équiv.) de chlorure de sodium (1,3 Moles) à pH 7 et une conductivité de 70 mS/cm sont placés dans le compartiment « diluât » d'un appareil d'électrodialyse, tel que par exemple l'unité B-ED 1-3/ED 200, équipé avec une cellule ED 200. 2000 mL d'eau déminéralisée sont placés dans le compartiment « concentrât ». 8000 mL d'une solution aqueuse de sulfate de sodium (0,5-1%) sont utilisés comme électrolyte. Le débit de circulation de toutes les solutions est de 100-1201/h, en appliquant une tension de 10-15V, jusqu'à ce que la conductivité du « diluât » soit REVENDICATIONS1. Procédé de purification de la L-hercynine, ou de son énantiomère D- hercynine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement à partir d'un mélange réactionnel résultant de la réaction de la L-histidine, ou de son énantiomère D-histidine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement ou de l'un de ses dérivés a-N-méthylés, dans des conditions de pH contrôlées, avec un agent de méthylation MeX dans un solvant polaire ou un mélange de solvants polaires, à température ambiante, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une étape de séparation des produits organiques des sels inorganiques formés au cours de la réaction par électrodialyse. 2. Procédé de purification selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire de recristallisation de la L-hercynine, ou de son énantiomère D-hercynine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement ou de l'un de ses dérivés méthylés, pour éliminer les impuretés organiques. 3. Procédé de préparation à l'échelle industrielle de la L-hercynine, ou de son énantiomère D-hercynine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement ou de l'un de ses dérivés a-N-méthylés, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes de : - réaction de la L-histidine, ou de son énantiomère D-histidine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement ou de l'un de ses dérivés a-N-méthylés, dans des conditions de pH contrôlées, avec un agent de méthylation MeX dans un solvant polaire ou un mélange de solvants polaires, à température ambiante; suivie de - la séparation des produits organiques des sels inorganiques formés au cours de la réaction par électrodialyse; suivie de - la recristallisation de la L-hercynine pour éliminer les impuretés organiques. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'électrodialyse est conduite sur un milieu réactionnel ajusté à un pH compris entre 8,5 et 9,5, en particulier à environ 9, au démarrage de l'electrodialyse. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'agent méthylant MeX est choisi parmi les halogénures de méthyle, le sulfate de méthyle, le carbonate de méthyle ou encore le sulfonate de méthyle ou de trifluorométhyle ou de tosyle. 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le solvant polaire ou le mélange de solvants polaires est choisi parmi l'eau; un alcool en C1-C6 par exemple méthanol, éthanol, propanol ou propanol-2, butanol; l'acétate d'éthyle; et un mélange eau/alcool, eau/propanol ou propanol-2 ; ou méthanol/acétate d'éthyle. 7. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les conditions de pH contrôlées sont choisies pour aboutir directement à une triméthylation de la L-histidine ou de son énantiomère D-histidine ou de son mélange racémique, ou de l'un de ses dérivés marqués isotopiquement ou de l'un de ses dérivés a-N-méthylés, ou indirectement à partir du dérivé diméthylé. 8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que les conditions de pH contrôlées sont choisies dans l'intervalle de pH = 9-13 par addition d'une base inorganique telle que la soude, la potasse ou la lithine. 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que l'on prépare la L-Hercynine-d9 à partir d'un mélange réactionnel résultant de la réaction de la L-Histidine avec un agent de méthylation-d3, en particulier 30 l'iodométhane-d3. 10. L-Hercynine-d9, en particulier telle qu'obtenue par le procédé selon l'une des revendications 1 à 9.