Brevet FR3026105A1 — publié le 20160325

=MEM La présente invention concerne certains dérivés 5 inhibant les cytokines chimio-attractantes (généralement appelées chimiokines), leur préparation et leurs utilisations dans des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques. Plus précisément, elle se rapporte à de la théophylline chroniques ; inflammatoires (acné, dermatite rougeurs ... ) ou internes comme la maladie 15 et la rhinite allergique. La maladie de Crohn est une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. La publication de Grip O. et Janciauskiene S. (Atorvastatin reduces plasma levels of chemokine (CXCL10) in patients with Crohn's disease, PloS 20 One, 2009, 4(5):e5263) montre l'importance des chimiokines dans cette pathologie. La rhinite allergique est une maladie chronique souvent attachée aux dermatoses chroniques. Un article de Takeuchi S. et al (Changes in thymus- and activation -25 regulated chemokine (TARO) associated with allergen immunotherapy in patients with perennial allergic rhinitis. J Investig Allergol Clin Immunol, 2005, 15(3), 172-6) montre l'implication des chimiokines dans cette pathologie. Les dermatoses sont des affections de la peau et des 30 muqueuses, qui se caractérisent par des manifestations inesthétiques comme des rougeurs et des plaques de desquamation. Plusieurs pathologies sont regroupées sous la dénomination de dermatoses. On peut citer, à titre nouvelles applications desdits dérivés de 10 pour traiter des maladies inflammatoires peut citer à cet égard, les maladies chroniques externes comme les dermatoses atopique, psoriasis, eczéma, peau sèche à tendance atopique, de Crohn, l'asthme on d'exemples non limitatifs, l'eczéma, la dermatite atopique, le psoriasis, les dermites séborrhéiques ou encore l'acné. Ces dermatoses résultent bien souvent de phénomènes inflammatoires et de désordres immunitaires. Dans le cas de la dermatite atopique, les lésions se caractérisent par une sécheresse cutanée importante et par des lésions inflammatoires : éruptions érythémateuses papuleuses, vésiculeuses, squameuses et très prurigineuses (démangeaisons). Sur le plan histologique, la dermatite atopique se caractérise, comme bien des dermatoses, par une infiltration de lymphocytes, monocytes et de polynucléaires éosinophiles autour des petits vaisseaux et des capillaires. Sur le plan biochimique, il a été montré que les chimiokines sont fortement impliquées dans les dermatoses et dans les maladies inflammatoires chroniques en général. A titre d'exemple, la publication de Saeki et al (Thymus and activation regulated chemokine (TARC)/CCL17 and skin diseases, J Dermatol Sci, 2006, 43(2), 75-84) met en évidence l'importance de la chimiokine CCL17 dans la dermatite atopique. Une autre publication de Vestergaard et al (Overproduction of Th2-specific chemokines in NC/Nga mice exhibiting atopic dermatitis-like lesions, J Clin Invest, 1999, 104(8), 1097-105) met en évidence l'importance de la même chimiokine CCL17 dans les maladies de la peau. Les chimiokines sont une famille de petites protéines, majoritairement solubles, de 8-14 kD. Leur fonction la plus étudiée est l'attraction et le contrôle de l'état d'activation des cellules du système immunitaire. Certaines chimiokines s'avèrent être de bonnes cibles thérapeutiques pour traiter les maladies inflammatoires chroniques internes et externes chez l'homme ou l'animal. La présente invention met en évidence de nouvelles applications cosmétiques, pharmaceutiques et vétérinaires de certains agents efficaces pour inhiber directement les chimiokines et traiter les maladies inflammatoires chroniques chez l'homme ou l'animal. Dans cette demande de brevet, on utilise le terme générique « pharmaceutique » pour définir aussi bien un produit destiné à une application chez l'homme qu'un produit destiné à une application chez l'animal. L'invention a donc pour objet un nouveau composé chimique utilisable notamment pour traiter des maladies 10 inflammatoires de la peau humaine ou animale, caractérisé en ce qu'il répond à la formule (I) : (I) 15 formule dans laquelle : R représente un groupe (C1-C6)alkyle, (C3-C6)cycloalkyle, (C2- Cjalcényle, groupes dans lesquels un ou plusieurs groupements -CH2- peuvent être remplacés par -0- et peuvent 20 être substitués par un ou plusieurs radicaux choisis par les radicaux (C1-C6)alkyle, hydroxy et alcoxy, ledit composé de formule (I) pouvant être sous forme de sel. Le composé de formule (I) peut avantageusement être le 3,7-dihydro-1,3-dimethy1-7-(3-methy1-2-buteny1)-1H-purin- 25 2,6-dione. Le composé de formule (I) peut être sous la forme d'un sel d'addition basique ou acide. Lorsque, dans la composition selon l'invention, l'agent actif est sous la forme d'un sel d'addition basique, ladite base est choisie dans le groupe formé par l'hydroxyde de sodium ou de potassium, la triéthylamine ou la tertiobutylamine. Les composés de formule (I) peuvent posséder un ou plusieurs centre(s) asymétrique(s) et peuvent alors être isolés sous une forme optiquement active ou sous forme de leur mélange racémique. Les méthodes permettant d'obtenir des formes optiquement actives, par exemple par résolution d'une forme racémique ou par synthèse utilisant des produits de départ racémiques, sont bien connues de l'homme de l'art. Pour la définition des composés de formule (I), le terme « alkyle » désigne un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié ayant avantageusement de 1 à 6 atomes de carbone, tels que méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tert-butyle, pentyle, néopentyle, n-hexyle. Les groupes alkyle peuvent être substitués par un ou plusieurs groupements hydroxyle et/ou par un ou plusieurs groupements alcoxy tel que défini ci-après. Le terme « cycloalkyle » désigne un système hydrocarboné cyclique, comprenant de 3 à 6 atomes de carbone et pouvant être mono- ou poly-cyclique. On peut citer notamment les radicaux cyclopropyle et cyclohexyle. Les groupes « alcoxy » correspondent aux groupes 25 alkyle linéaires ou ramifiés définis ci-dessus reliés par l'intermédiaire d'une liaison -0- (éther). On préfère tout particulièrement les groupes méthoxy, éthoxy, n-propyloxy, i-propyloxy, n-butoxy, s-butoxy, t-butoxy, n-pentoxy et spentoxy. Les groupes alcoxy peuvent être substitués par un 30 groupe alkyle comme défini ci-dessus ou par un autre group alcoxy. L'invention a aussi pour objet une composition dermocosmétique ou pharmaceutique destinée à traiter des maladies inflammatoires de la peau humaine ou animale, caractérisée en ce qu'elle contient, dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable, une quantité efficace d'au moins un agent actif constitué par un composé de formule (I) tel que ci-dessus défini. Lorsque dans la composition selon l'invention, l'agent actif est sous la forme d'un sel d'addition acide, ledit acide est choisi dans le groupe formé par les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique phosphorique, acétique, trifluoacétique, lactique, pyruvique, malonique, succinique, glutarique, fumarique, tartrique, maléique, citrique, ascorbique, méthane- ou éthane-sulfonique et camphorique. Parmi les composés de formule (I) utilisables comme agent actif dans les compositions selon l'invention, on peut notamment citer le composé de formule (I) suivant : 3,7-dihydro-1,3-dimethy1-7-(3-methy1-2-buteny1)-1H-purin- 2,6-dione également appelé prénylthéophylline(codé GPN279). L'invention concerne aussi un procédé de préparation des composés de formule (I), caractérisé en ce que, si R = alkyle ou alcényle dans la formule (I), on utilise la théophylline comme composé de départ. La théophylline, une 25 quantité appropriée d'halogénure d'alkyle ou d'alcényle et une quantité appropriée de base sont agitées dans un solvant organique à une température comprise entre 30°C et 50°C pour conduire au composé de formule (I). Selon un aspect de l'invention, le solvant organique 30 est le diméthylformamide. Selon un aspect de l'invention, la base est le carbonate de potassium (on peut utiliser environ 1,5 équivalents). Selon un autre aspect de l'invention, la température réactionnelle est de 40 °C environ. Comme précédemment indiqué, l'invention concerne aussi une composition comportant au moins un composé de formule 5 (I) comme agent actif pour traiter des maladies inflammatoires de la peau. Une telle composition peut aussi comporter au moins un agent actif autre que ceux de formule (I) pour exercer au moins une action complémentaire ou synergique. 10 Selon un autre aspect de l'invention, la composition selon l'invention se présente sous forme de gélules, crème, gel, lotion, lait,émulsion, émulsion biphasique, émulsion H/E ou E/H, pommade, solution, onguent, émulsions triphasiques, huile corporelle, shampoing, nano- 15 capsule, liposome, savon, bâton protecteur des lèvres, bâton et crayon pour maquillage, masques, patch transdermiques pour applications topiques. Sous la forme de gel, la composition peut comprendre des excipients appropriés, tels que les esters de 20 cellulose, ou d'autres agents gélifiants, tels que le polymère carboxylique « carbopol® » et la gomme de guar, par exemple. Sous la forme d'émulsions, les compositions selon 25 l'invention jouissent d'une bonne stabilité et peuvent être conservées pendant le temps nécessaire pour l'utilisation à des températures comprises entre 0 et 50 °C, sans qu'il y ait sédimentation des constituants ou séparation des phases. Selon un autre aspect de l'invention, dans la 30 composition, 1' (ou les) agent(s) actif(s) est (sont) mis en place dans des moyens d'encapsulation choisis dans le groupe formé par des microsphères, des liposomes, des glycosphères, des chylomicrons, des macro- micro-, et nanoparticules, des macro-, micro- et nanocapsules. Selon un autre aspect de l'invention, dans la composition, 1' (ou les) agent(s) actif(s) est (sont) absorbé(s) ou adsorbé(s) sur des polymères organiques poudreux, des talcs, de la bentonite ou d'autres supports minéraux en poudre. Selon un autre aspect de l'invention, dans la composition, 1' (ou les) agent(s) actif(s) de formule (I) 10 constitue(nt) de 0,01% à 5% en poids par rapport au poids total de la composition. Selon un autre aspect de l'invention, dans la composition, 1' (ou les) agent(s) actif(s) de formule (I) est (ou sont) sous forme encapsulée et constitue(nt), de 15 préférence de 0,5 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition. L'invention a aussi pour objet l'utilisation d'une composition selon l'invention pour prévenir et/ou traiter des maladies inflammatoires chroniques soit internes, comme 20 la maladie de Crohn, soit externes liées à des activités séborrhéiques, acnéiques, inflammatoires et immunologiques ; la composition selon l'invention peut notamment être utilisée pour prévenir et/ou traiter des dermatoses, le psoriasis, la dermatite atopique, ainsi que des états 25 inflammatoires des systèmes cutanés ou pileux induisant des démangeaisons, des irritations, des rougeurs chroniques ou des troubles fonctionnels de la fragilité capillaire. L'invention a donc mis en évidence la possibilité d'utiliser les composés de formule (I) comme agent(s) 30 actif(s). Ces composés présentent de très bonnes propriétés pour inhiber certains chimiokines, comme CCL22 et/ou CCL17. La présente invention vise donc précisément à proposer de nouvelles compositions pharmaceutiques, dermatologiques ou cosmétiques capables de traiter les maladies inflammatoires chroniques internes et externes comme les peaux irritées, lésées ou sensibilisées par des agressions externes ou internes, en général, et des dermatoses, en particulier. Ainsi, la présente invention a pour objet une utilisation cosmétique d'au moins un dérivé de formule (I) pour inhiber la chimiokine CCL22 et/ou CCL17, pour apaiser les peaux sèches à tendance atopique et/ou pour améliorer 10 et/ou renforcer l'hydratation de la peau. Elle concerne donc des applications pour soigner les pathologies chroniques inflammatoires comme la maladie de Crohn, la rhinite allergique, les dermatoses comme la dermatite atopique, l'eczéma et le psoriasis. 15 Dans la visée thérapeutique de l'invention, les dérivés de formule (I) capables d'inhiber la chimiokine C0L22 et/ou CCL17 peuvent être administrés par voie topique mais ils peuvent aussi être administrés par voie orale. Ces dérivés peuvent être utilisés tels quels sous forme liquide 20 ou en poudre, non purifiés ou purifiés. Les dérivés de formule (I) capables d'inhiber les chimiokines peuvent, dans les compositions selon l'invention, être associés entres eux ou avec d'autres composés venant compléter l'effet voire synergiser cet 25 effet. L'activité protectrice des dérivés de formule (I) vis-à-vis des radicaux libres et des UV est intéressante dans le domaine capillaire, notamment dans le cas d'association avec des substances facilitant le bon état du cuir chevelu et du cheveu. On peut citer les associations 30 avec des mucopolysaccharides, des minéraux, des vitamines, des céramides, des huiles végétales, des substances antiradicalaires, des filtres U.V., des acides de fleurs ou de fruits. De même, l'activité réparatrice des dérivés de formule (I) capable d'inhiber les chimiokines est particulièrement intéressante, quand ils sont associés avec des substances ayant un effet cicatrisant comme des protéines, l'acide hyaluronique, des acides aminés, ou avec des substances anti-inflammatoires, anti-âge, après-solaire anti-acné ou anti-dermatose. Ainsi, les compositions de l'invention sont tout particulièrement adaptées à une application topique pour prévenir et/ou traiter de nombreuses altérations cutanées, notamment comme agent réparateur et/ou protecteur de la peau et du système pileux comme les cheveux, pour lutter contre les agressions externes liées à la pollution, au soleil, au stress oxydatif, au vieillissement et aux pathologies cutanées entrainant un dysfonctionnement de l'homéostasie de l'épiderme ou des cheveux. Ces compositions cosmétiques peuvent aussi prendre la forme de lotion ou solution dans laquelle les dérivés selon l'invention sont sous forme encapsulée, par exemple dans des microsphères. Ces microsphères peuvent, par exemple, être constituées de corps gras, d'agar et d'eau. Les agents actifs peuvent être aussi incorporés dans des vecteurs de type liposomes, glycosphères, dans des chylomicrons, des macro-, micro-, nanoparticules ainsi que les macro-, micro- et nanocapsules et aussi être adsorbés sur des polymères organiques poudreux, les talcs, bentonites et autres supports minéraux. Pour la préparation des compositions selon l'invention, les dérivés de formule (I) peuvent être mélangés aux excipients généralement employés en cosmétique. Les compositions cosmétiques de l'invention peuvent donc contenir des additifs ou des adjuvants usuels en cosmétologie, comme par exemple des agents antibactériens ou des parfums mais aussi des lipides d'extraction et/ou de synthèse, des polymères gélifiants et viscosants, des tensio-actifs, des émulsifiants, des actifs hydro- ou liposolubles, des extraits de plantes, des extraits tissulaires, des extraits marins, ou des actifs de synthèse. L'utilisation dermocosmétique ou pharmaceutique de ces dérivés de formule (I) comprend tous les produits de soin du corps et de la peau, y compris les produits solaires, protecteurs et bronzants, les produits anti-âge, 10 anti-séborrhéiques, toniques, les produits assurant l'amélioration de l'aspect de la peau y compris le traitement acnéique, le traitement des rougeurs cutanées, le traitement du cuir chevelu et celui de la chute des cheveux. Les compositions cosmétiques de la présente 15 invention peuvent aussi comprendre d'autres agents actifs complémentaires choisis pour leur action, par exemple pour la protection solaire, l'effet anti-rides, l'activité antiradicalaire et antioxydante, l'activité anti-irritante, la nutrition cellulaire, la respiration cellulaire, 20 l'hydratation et la régénération cellulaire, les traitements anti-séborrhéïques, ainsi que d'autres agents actifs ayant une action sur la tonicité cutanée et la protection du cheveu. Les compositions cosmétiques de la présente 25 invention sont, de préférence, à utiliser quotidiennement en les appliquant une ou plusieurs fois par jour. Les compositions cosmétiques de la présente invention sont très bien tolérées, elles ne présentent aucune phototoxicité et leur application sur la peau, pour 30 des périodes de temps prolongées, n'implique aucun effet systémique. L'invention concerne aussi l'utilisation de dérivés selon l'invention pour la préparation de compositions pharmaceutiques présentant une activité anti-inflammatoire et/ou dermoprotectrice. Ces compositions sont utiles pour prévenir et/ou traiter notamment des maladies dermatologiques liées à des activités séborrhéiques, acnéiques, inflammatoires et immunologiques. En résumé, l'invention se rapporte donc à l'utilisation des dérivés de formule (I) capable d'inhiber certaines chimiokines, pour la préparation d'une composition pharmaceutique, dermatologique ou cosmétique destinée à prévenir et/ou traiter les pathologies et désordres résultant : du vieillissement naturel ou prématuré de la peau ou des cheveux ; de dermatoses, comme le psoriasis, l'acné et la dermatite atopique ; d'états inflammatoires et/ou immunitaires des systèmes cutanés ou pileux, induisant des démangeaisons, irritations, rougeurs chroniques, irritations et démangeaisons persistantes, et des troubles fonctionnels de la fragilité capillaire. La présente invention est maintenant illustrée par les exemples donnés ci-après. L'exemple 1 illustre un procédé de préparation de dérivés de formule (I) capable d'inhiber la chimiokine CCL17 25 selon l'invention. Les produits de départ sont disponibles dans le commerce ou peuvent être synthétisés par des méthodes classiques connues de l'homme du métier. Exemple 1 : 30 Synthèse du 3,7-dihydro-1,3-dimethy1-7-(3-methy1-2-buteny1)- 11I-purin-2,6-dione ou prénylthéophylline (codé GPN279) 12 o K2CO3, DMF 1 G PN000279 Dans un ballon sous argon, 2 g (0.0111 mol) de théophylline sont dissous dans 30 mL de diméthylformamide puis 2.3 g (1.5 éq.) de carbonate de potassium et 1.54 mL 5 (1.2 éq.) de bromure de prényle sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité 18 heures à 40 °C puis laissé revenir à température ambiante. Il est versé sur de l'eau glacée (environ 40 mL) puis extrait à l'acétate d'éthyle (3 fois 30 mL). Les phases organique rassemblées sont séchées sur 10 sulfate de magnésium, filtrées et évaporées sous pression réduite. Le brut est purifié par chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole / acétate d'éthyle : 5/5, 3/7 puis acétate d'éthyle pur) pour conduire à 2.6 g de GPN279 (rendement : 94%) sous forme d'un solide blanc. 15 RMN 'H (250 MHz, CDC13): 6 1.80 (s, 6H, 2 0H3); 3.42 (s, 3H, NCH3); 3.59 (s, 3H, NCH2); 4.92 (d, 2H, J = 7.25 Hz, 0H2); 5.44 (m, 1H, CH); 7.54 (s, 1H, CH). RMN '0 (62.5 MHz, CDC13: 6 18.3 (01-13) ; 25.8 (CH,) ; 28.1 (NCH3) ; 29.9 (NCH3) ; 44.7 (0H2) ; 107.2 (Cq) ; 117.9 (CH) ; 20 139.8 (Cq) ; 140.3 (CH) ; 148.9 (Cq) ; 151.8 (Cq) ; 155.5 (Cq). L'exemple 2 met en évidence le protocole technique permettant d'enregistrer les effets des produits selon l'invention sur les chimiokines. 25 Exemple 2: Propriétés inhibitrices des dérivés de formule (I) sur les chimiokines. Cellules exprimant le récepteur CCR4 des chimiokines Afin de permettre un enregistrement aisé des réponses associées au récepteur CCR4, le cDNA qui permet son expression est cloné dans le plasmide pIRES (ClonTech) en fusion avec la protéine GFP, selon Vollmer et al. (1999), ce qui permet de mesurer aisément l'expression du récepteur chimérique EGFP-CCR4. Les cellules HEK 293 (ATCC) sont cultivées dans le milieu minimum essentiel MEM (Invitrogen) en présence de 10% de sérum de veau foetal (Gibco-BRL), 100 U/mL penicilline (Invitrogen), 100 pg/mL streptomycine (Invitrogen) et 2 mM L-glutamine (Invitrogen) à 37°C dans atmosphère saturée en eau et contenant 5% CO2. Les cellules sont transfectées selon la méthode du précipité de phosphate de calcium de Chen et Okayama, 1986, et les cellules ayant incorporé le plasmide d'expression sont sélectionnées à l'aide de 600 pg/mL de geneticine G-418 (PAA) pendant 5 semaines. Les clones sont sélectionnés après avoir été caractérisés par microscopie de fluorescence et analyse cytometrique au FACS (fluorescence-assisted cell sorting). Construction de la protéine recombinante Gqi5 Afin de permettre un enregistrement aisé des réponses cellulaires associées au récepteur CCR4, on modifie son couplage naturel à l'inhibition de production d'AMPc vers un couplage à la phospholipase C qui permet des mesures de 25 calcium. On produit dans ce but la protéine chimérique Gqi5 par mutagénèse dirigée des 5 derniers acides aminés de Gq que l'on remplace par leurs homologues de Gi. Les cellules exprimant le récepteur CCR4 sont transfectées par le plasmide pCNA3.1 dans lequel le cDNA codant Gq15 a été 30 incorporé. Les enregistrements de réponses calciques sont réalisés le lendemain de la transfection. Enregistrement des réponses calciques cellulaires et de leur inhibition par les molécules de la collection GPN : Les cellules sont chargées en indicateur fluorescent du calcium, INDO-1, selon le protocole fourni par le fournisseur (Molecular probes), distribuées dans des puits de microplaques et placées dans un lecteur-pipetteur de fluorescence (FlexStation, Molecular devices). L'élévation de calcium intracellulaire est mesurée par changement d'intensité de fluorescence à 401 et 475 nm (excitation 355 nm). Des points de mesures sont enregistrés chaques 5s pendant 150s pour chaque puits. Les molécules sont testées en présence de 5 nM de chimiokine CCL17 (commerciale) La figure 1 illustre de manière générale les résultats obtenus : l'addition de chimiokine (CK) à des cellules exprimant le récepteur de chimiokine (CKR) déclenche une libération de calcium intracellulaire recelée par le changement de fluorescence de la sonde calcique Indo-1. La réponse se développe en quelques secondes et s'atténue avec le temps pour atteindre le retour en 2 minutes environ pour une concentration de 5 à 10 nM de la chimiokine CCL17 sur des cellules HEK 293 exprimant CCR4. Si l'on préincube les molécules à tester avec la chimiokine [CK+N] et qu'on ajoute le mélange aux cellules, on observe une forte diminution de l'amplitude de la réponse si la molécule à tester est un neutraligand de la chimiokine. Inversement lorsqu'on préincube le neutraligand avec les cellules exprimant le récepteur [CKR + N] on observe une bien moindre diminution de l'amplitude de la réponse. Ce protocole a été employé pour identifier les neutraligands de CCL17 présentés dans le tableau 1. L'affinité apparente des molécules de GPN279 est déterminée par l'établissement d'une relation dose-effet de l'inhibition de la réponse calcique ainsi que présenté en figure 2 et les résultats obtenus sont reportés dans le tableau 1. Tableau 1 : relations structure/fonction des dérivés de 5 formule (I) TABLEAU 1: Co Réféirence Structure Inhibition des réponses calciques induites par CCL17 (%1 Inhibition des réponses calciques Induites par CCL22 (°e) 42±4 0 I GPN279 - 2 Theophylline f 0 0 . N'e 3 Caféine 1 0 0 Q.,--N --N, 1 , \ 0 4 GPN062 N _ 0 0 1 IBMX . ï 0 0 . ' Les molécules sont testées à la concentration de 10 pM. La concentration de CCL17 est de 5 nM. L'analyse de la sélectivité des molécules est réalisée par mesure d'inhibition (à la concentration de 10 pM) de la réponse évoquée par d'autres chimiokines (5 nM) sur leurs récepteurs respectifs. Ainsi, dans la figure 3, les molécules ont été testée sur les paires CCL2/CCR2, CCL3- 5/CCR5, CCL17/CCR4, CCL22/CCR4, CXCL8/CXCR8, CXCL10/CXCR2, CXCL11/CXCR3, CXCL12/CXCR4 La figure 3 donne la sélectivité du neutraligand de CCL17 20 (GPN279) sur les chimiokines indiquées et leurs récepteurs respectifs. Détermination de l'affinité d'interaction du neutraliaand de CCL17 par extinction de fluorescence des résidus de tryptophane. Cette mesure est réalisée comme décrit dans Hachet-Haas et al. (Small neutralizing molecules ta inhibit actions of the chemokine CXCL12, J Biol Chem, 2008, 283(34), 23189-99). Brièvement : les mesures de fluorescence sont réalisées sur un spectrofluorimètre Fluorolog 3 (JobinYvon/Spex) dans une cuvette en quartz. CCL17 (1,5 pM (tampon HEPES sans albumine) dans 1 mL volume final) est excitée à 285 nm and son spectre d'émission est enregistré entre 300 et 400 nm après chaque ajout d'un aliquot de molécule à tester (1 gL). Les mesures sont effectuées à 20°C et les solutions sont agitées à l'aide d'un barreau magnétique. Les spectres d'émission enregistré »s sont corrigés par soustraction du spectre d'émission du composés à tester seul. La figure 4 indique qu'une extinction de fluorescence de CCL17 est observée uniquement avec le neutraligand (GPN 279) et non pas avec l'antagoniste du récepteur CCR4 (molécule C021). L'allure de la courbe de titration de CCL17 (1,5 pM) par GPN 279 est biphasique, indiquant la présence vraisemblable de plusieurs sites de liaison pour GPN 279, dont un au moins est de haute affinité. L'ajustement des traces par l' équation (RL)2+(RL)x(-Ro-Lo-KD)+RoxLo=0 avec (RL)=((Ro+Lo+KD)±((-Ro-Lo-KD)2 -4xRoxLo)1/2)/2 permet d'estimer l'affinité pour chaque site : KD La figure 4a montre l'inhibition de la fluorescence intrinsèque de CCL17 par le neutraligand GPN 279 (cercles blancs). La figure 4b montre que l'antagoniste du récepteur CCR4, C-021, ne présente pas une diminution de fluorescence du tryptophane (cercles noirs). L'exemple 3 permet de montrer comment sont sélectionnés les candidats actifs non cytotoxiques. Exemple 3: Propriétés des dérivés sur la migration de kératinocytes et cytotoxicité L'activité de la molécule GPN 279 a été évaluée dans un essai de migration de kératinocytes humains réalisé selon un test de cicatrisation d'un tapis cellulaire. Il est effectivement connu que dans les pathologies chroniques une migration importante des cellules peut favoriser la formation de prurit, une des manifestations de la dermatose. Les kératinocytes humains immortalisés obtenus auprès du DKFZ (Heidelberg, Allemagne) sont cultivés dans du milieu de Dulbecco modifié par Eagle (DMEM, InVitrogen) complémenté par 10% de sérum de veau foetal (Gibco-BRL) et 100 U/ml de pénicilline (Invitrogen), 100 pg/ml de streptomycine (Invitrogen) et 2 mM L-glutamine(Invitrogen) à 37°C et 5% CO2. Les puits d'une plaque de culture 24 puits sont ensemencés avec 200.000 cellules et la culture est maintenue jusqu'à formation d'un tapis confluent. Le tapis est alors endommagé en effectuant un grattage linéaire à l'aide pointe de pipette stérile de 0.1-10pL. Le milieu est alors remplacé pour éliminer les cellules et leurs débris et la culture est poursuivie dans différentes conditions expérimentales : (i) sans aucun ajout, (ii) ajout de 100 ng/ml de CCL17 et (iii) ajout d'un mélange contenant 100 ng/ml de CCL17 et la molécule à tester, par exemple GPN 279. L'effet des molécules seules est aussi enregistré dans des puits différents. Afin de bloquer la prolifération cellulaire, chaque puits reçoit une dose de lpg/ml de mytomycine (Sigma- Aldrich). Les plaques de culture sont disposées dans l'appareil IncuCyte (Essen Bioscience) qui enregistre la croissance du tapis cellulaire par imagerie transmise en conditions de culture cellulaire (37°C, 5%CO2, atmosphère saturée d'eau) pendant 72h. Des images en contraste de phase sont acquises chaque 2 heures. La cicatrisation est définie (quantifiée) comme le rapport de largeur de la cicatrice au temps t par rapport au temps O. L'expérience est répétée trois fois par condition. Les résultats obtenus sont rapportés dans la figure 5 La figure 5 montre la migration de kératinocytes humains sous l'effet de GPN279 La figure 5 montre des photographies des tapis de cellules Hacat humaine après blessure au temps 0 et après 72h de culture en présence d'excipient seul (DMSO, panneau 1), de CCL17 et d'excipient (CCL17 + DMSO, panneau 2) et de CCL17 et GPN 279 (CCL17 + GPN279, panneau 3) La figure indique que la migration cellulaire est fortement 25 accélérée par la chimiokine CCL17 qui agit sur les récepteurs CCR4 présents dans les cellules Hacat. Cet effet de la chimiokine CCL17 est aboli par la molécule GPN279. La figure 6 montre la relation effet-dose de GPN279 sur la 30 cicatrisation du tapis de cellules HaCat , la molécule GPN279 n'a pas d'effet lorsqu'elle est appliquée seule et son effet est dépendant de la dose (0.3 pM colonne rose ; 1 pM colonne violette ; 10 pM colonne bleue). Mesure de cytotoxicité Le test d'activité métabolique est un test calorimétrique (WST-1 assay - Ozyme) reposant sur la mesure de l'activité de l'enzyme mitochondriale succinate-tetrazolium reductase clivant le sel de tétrazolium WST-1 ((4-[3-(4-Iodopheny1)-2- (4-nitropheny1)-2H-5-tetrazolio]-1,3 benzene disulfonate)) en un dérivé hydrosoluble, le formazan qui est un colorant absorbant la lumière dans la fenêtre 420-480 nm. Les cellules HaCat sont distribuées à raison de 200.000 cellules par puits dans une plaque de culture à 24 puits, dans un volume final de 500 pL. Elles sont cultivées pendant 24h avant d'ajouter de la mitomycine C (1 pg/ml) et le composé à tester. La plaque de culture est incubée pendant 72h à 37°C, 5%CO2, en atmosphère saturée d'eau. Le milieu est ensuite remplacé par du milieu frais complémenté de réactif WST-1 puis incubé pendant 2 heures à 37°C. Les plaques sont agitées pour homogénéiser la couleur dans les puits et l'absorbance est mesurée à 450 nm dans un lecteur de plaques multipuits. Les mesures sont réalisées en triplicats. L'activité enzymatique requérant l'intégrité cellulaire, l'absorbance sera d'autant plus forte que l'état métabolique des cellules est bon. Activité cytotoxique in vitro: les cultures de cellules HaCat sont traitées avec différentes concentrations de molécule:0,3pM (barres gris sombre), 10 pM (barres gris clair) ou 30 pM (barres blanches) de la molécule GPN279. L'activité de l'enzyme formazan-reductase mitochondiale est enregistrée à l'aide du substrat chromogène WST-1 qui se transforme en produit coloré, le formazan, détecté à 450 nm. Comme le montre la figure 7, la molécule GPN 279 n'affecte pas l'activité enzymatique. Exemple 4: cytotoxicité de GPN279 sur des monocytes humains Les monocytes sont ensemencés dans des plaques 96 puits (approx 5000 cellules/puit de 200 pl) pour le test à l'alamar blue. Les cellules sont incubées avec du LPS (lipopolysaccharide) et avec GPN279 à 5 concentrations. Après 24h, la fluorescence de l'alamar blue est dosée. La figure 8 montre la mesure de la cytotoxicité par l'Alamar Blue et indique que GPN279 n'est pas cytotoxique. Exemple 5: absence d'inhibition des cyclooxygénases par GPN279 La ressemblance de GPN279 avec des composés inhibant les cyclooxygenases suggère que le mécanisme possible pourrait 15 passer par leur inhibition. Nous montrons ici que ce n'est pas le cas. Détermination de l'activité des cyclooxygénases COX 1 et COX 2 sur des monocytes humains en culture. COX-1 : la libération de prostaglandine E2 (PGE2) médiée par 20 COX-1 est déterminée par la méthode de l'acide arachidonique. Les monocytes sont traités avec l'acide arachidonique (AA) en présence de GPN279 à 5 concentrations qui sont ajoutées 15 min avant l'acide arachidonique. Après 15 minutes de stimulation, l'activité de COX-1 est mesurée 25 par détermination de la production de PGE2. L'aspirine (ASS) un inhibiteur connu de COX-1 est utilisée comme inhibiteur contrôle. La figure 9 indique que GPN279 n'est pas un inhibiteur de COX-1 à une concentration allant jusqu'à 250 uM. 30 COX-2 : les monocytes sont incubés avec le LPS (10 U/ml) pendant 24h afin d'induire la synthèse de COX-2. Après remplacement du milieu de culture (sans sérum), les cellules sont traitées avec GPN279 à 5 concentrations et le diclofenac (10 pM) est utilisé comme inhibiteur contrôle de cox-2. L'acide arachidonique est ajouté 15 minutes après les composés à tester, et 15 minutes plus tard, la production de PGE2 est déterminée. La figure 10 montre que GPN279 est sans effet jusqu'à la dose de 100 pM, et induit une légère augmentation d'activité de COX-2 au-delà. Exemple 6: Cet exemple présente une formulation de la composition selon l'invention. NOM COMMERCIAL NOM INCI % DANS LA FORMULE Simulsol 165 PEG-100 Stearate/ Glyceryl Stearate 3 Montanov L C14-22 Alcohol/ C12-20 Alkyl Glucoside 2 Huile de carthame Carthamus Tinctorius Seed Oil 2 Beurre de karité Butyrospermum Parkii Butter 4 Céramidone Octyldodecyl PCA 3 Phytosqualane Squalane 5 DUB MOT 5545 Caprylic/ Capric Triglycerides 7 Cire d'abeille Cera Alba 1 Acide sorbique Sorbic acid 0.1 Glycérine Glycerin 2 Sorbitol Sorbitol 3 Aristoflex AVC Ammonium 1.3 Acryloyldimethyltaurate / VP copolymer Gomme xanthane Xanthan gum 0.2 Nicotinamide Niacinamide 1 Lipacide 08G Capryloyl glycine 0.5 Eau purifié Aqua Qsp pour 100 GPN279 - 3 On applique cette composition tous les jours pendant 1 mois sur la peau du visage d'un homme de 20 ans souffrant de dermatite atopique sur l'ensemble du visage; cette application est faite à raison d'environ 2 g/jour pour le visage complet. On constate la disparition progressive totale des zones d'inflammation à la fin du traitement. On a proposé ci-après des ingrédients pouvant être associés avec les compositions pour application topique afin d'amplifier l'effet ou atteindre des synergies d'action, notamment avec la formulation du présent exemple 6 (les quantités sont données en pourcentage en poids) : a) des ingrédients ayant des propriétés anti- inflammatoires couramment utilisés dans les produits cosmétiques notamment le nicotinamide (1 à 4%), l'acide 18 béta glycyrrhétinique (0.01 à 1%), l'alpha bisabolol (0.1 à 1%) ; b) la glycine ayant un effet apaisant (de 1 à 3%) ; c) les micro-particules d'argent (0.1%) qui permettent de réguler, stabiliser la flore microbienne et éviter la surinfection ; d) un agent anti-adhésion bactérienne pour limiter l'adhésion et la prolifération de Staphylococcus aureus comme le Téflose® de Solabia composé de propanediol, rhamnose, glucose et acide glucuronique (2 à 4%) ; e) les insaponifiables de beurre de karité et de tournesol pour renforcer la barrière cutanée et améliorer l'hydratation de la peau. (0.5 à 2%). f)un extrait de chicorée de 1 à 3% (comme la Védérine® de Silab) pour le renforcement et la récupération de la barrière cutanée ; g) un dérivé d'huile de pépins de framboise et de succinate de vitamine E (Raspberry seed oil/ Tocopheryl succinate/ Aminopropanediol esters) à 1% comme le Vitaskine E de Solabia ; h) l'octyldodecyl PCA dosé de 0.5 à 5% pour stimuler la synthèse des lipides épidermiques ; i)une huile végétale de carthame ou onagre stabilisée sous une forme céramide-like comme l' »Omega 6 Ceramide® Safflower » et l' »Omega 6 Ceramide® Evening primrose » de Solabia pour améliorer la cohésion cellulaire (0.1 à1%) ; j)un mélange optimisé d'huile d'argan, de beurre de karité et de cire d'orge, comme dans le « Stimutexe AS » de DSM, pour une action anti-inflammatoire et pour diminuer la libération d'histamine (2 à 5%); k) un mélange d'extrait d'écorce de bouleau blanc et de Scrophularia nodosa, comme dans le Protectol® de Greentech, pour ses propriétés anti-inflammatoires du fait de la présence d'acide bétulinique (1 et 3%); I) un mélange de lactose et de protéine de lait à 0.5% comme dans le Modukine de CLR pour ses propriétés anti-inflammatoires.20 REVENDICATIONS1. Composé répondant à la formule générale (I) Formule dans laquelle : R représente un groupe (C1-C6) alkyle, (C3-C6)cycloalkyle, (C2- C6)alcényle, groupes dans lesquels un ou plusieurs groupements -CH2- peuvent être remplacés par -0- et peuvent être substitués par un ou plusieurs radicaux choisis par les radicaux (C1-C6)alkyle, hydroxy et alcoxy, ledit composé de formule (I) pouvant être sous forme de sel. 2. Composé selon' la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est le 3,7-dihydro-1,3-diméthy1-7-(3-méthy1-2- 15 butény1)-11I-purin-2,6-dione. 3. Composé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il est sous la forme d'un sel d'addition basique ou acide. 4. Composé selon l'une des revendications 1 à 3, 20 caractérisé en ce que, dans la formule (I), le (ou les) radical(aux) alkyle est (sont) choisi(s) dans le groupe formé par les radicaux méthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tertiobutyle, pentyle, néopentyle, n-hexyle substitué(s) ou non par un ou plusieurs groupements 25 hydroxyle ou par un ou plusieurs groupements alcoxy. 5. Composé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que, lorsqu'il comporte un radical R cycloalkyle, ledit radical est mono ou polycyclique,notamment cyclopropyle ou cyclohexyle. 6. Composé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que, lorsqu'il contient dans sa formule au moins un radical alcoxy, ledit radical alcoxy est choisi dans le groupe formé par les groupes méthoxy, éthoxy, npropyloxy, i-propyloxy, n-butoxy, s-butoxy, t-butoxy, npentoxy et s-pentoxy, chaque groupe alcoxy pouvant être substitué par un groupe alkyle tel revendication 4. 7. Composition utilisable pour que défini dans la traiter des maladies inflammatoires de la peau humaine ou animale, caractérisée en ce qu'elle contient, dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable, une quantité efficace d'au moins un agent actif constitué par un composé selon l'une des revendications 1 à 3. 8. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que l'agent actif est un sel d'addition acide, ledit acide étant choisi dans le groupe formé par les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphorique, acétique, trifluoacétique, lactique, pyruvique, malonique, succinique, glutarique, fumarique, tartrique, maléique, citrique, ascorbique, méthane- ou éthane-sulfonique et camphorique. 9. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que, lorsque le composé de formule (I) est présent sous forme de sel, il constitue un sel d'addition basique, ladite base étant choisie dans le groupe formé par l'hydroxyde de sodium ou de potassium, la triéthylamine ou la tertiobutylamine. 10. Composition selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisée en ce qu'elle contient comme agent actif, le 7- (3-methy1-2-buten-l-y1)-1,3-dimethyl-3,7-dihydro-1H-purin2,6-dione. 11. Composition selon l'une des revendications 7 à 10, caractérisée en ce qu'elle contient de 0,01 à 5% en poids de composé(s) de formule (I) par rapport au poids total de la composition. 12. Composition selon l'une des revendications 7 à 11, caractérisée en ce que le (ou les) agent(s) actif(s) de formule (I) est (sont) sous forme de poudre, ou sont absorbés sur des polymères organiques poudreux, notamment talcs ou bentonites, ou sont sous forme encapsulée. 13. Composition selon la revendication 12, caractérisée en ce que les moyens d'encapsulation de l'agent (ou des agents) actif(s) de formule (I) est (ou sont) choisi(s) dans le groupe formé par des microsphères, des liposomes, des glycosphères, des chylomicrons, des macro- micro-, et nano-particules, des macro-, micro- et nanocapsules. 14. Composition selon l'une des revendications 7 à 13, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un agent actif autre qu'un composé de formule (I) pris dans le groupe formé 20 par les agents de protection solaire, les agents antirides à activité antiradicalaire, antioxydante, anti-irritante, les agents favorisant la nutrition cellulaire, la respiration cellulaire, l'hydratation cellulaire, la régénération cellulaire, les traitements anti-séborrhéiques, la tonicité 25 cutanée, la protection des cheveux, les agents cicatrisants, l'acide hyaluronique, les acides aminés, les agents anti-âge et les agents après-soleil. 15. Composition selon l'une des revendications 7 à 14, caractérisée en ce qu'elle est formulée sous forme de 30 lotion, gel, émulsion, crème ou lait, émulsion bi-phasique huile dans eau ou eau dans huile, émulsion tri-phasique, huile corporelle, shampoing, masque, onguent, pommade, bâton et crayon pour maquillage, nano-capsule, liposome ou patchtransdermique pour applications topiques. 16. Composition selon l'une des revendications 7 à 15, caractérisée en ce qu'elle contient des mucopolysaccharides, des vitamines, des céramides, des huiles végétales et des 5 agents efficaces dans les dermatoses. 17. Composition selon l'une des revendications 7 à 16, caractérisée en ce qu'elle contient des agents antibactériens, des parfums, des lipides d'extraction et/ou de synthèse, des polymères gélifiants et viscosants, des 10 tensio-actifs, des émulsifiants, des extraits de plantes, des extraits tissulaires, des extraits marins, des actifs hydro- ou lipo-solubles, des actifs de synthèse. 18. Composition selon l'une des revendications 7 à 17, caractérisée en ce qu'elle est administrable par voie 15 topique ou orale. 19. Composition selon l'une des revendications 7 à 18, pour une utilisation sur un sujet animal ou humain,dans le traitement des maladies dermatologiques liées à des activités séborrhéiques, acnéiques, inflammatoires et 20 immunologiques. 20. Composition selon la revendication 19, pour une utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires chroniques soit externes, notamment les dermatoses, l'acné, la dermatite atopique, le psoriasis, l'eczéma, la sécheresse 25 de peau à tendance atopique, les rougeurs de la peau, soit internes, notamment la maladie de Crohn, l'asthme et la rhinite allergique. 21. Procédé de préparation d'un composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que, si R est un radical 30 alkyle ou alcényle, on utilise la théophylline comme composé de départ ; on agite dans un solvant organique à une température comprise entre 30°C et 50°C, la théophylline, une quantité appropriée d'halogénure d'alkyle ou d'alcényleet une quantité appropriée de base ; et l'on obtient un composé de formule (I). 22. Procédé selon la revendication 21, caractérisé en ce que le solvant organique est le dimethylformamide. 23. Procédé selon l'une des revendications 21 ou 22, caractérisé en ce que la base utilisée est le carbonate de potassium. 24. Procédé selon l'une des revendications 21 à 23, caractérisé en ce que la température réactionnelle est 10 maintenue à environ 40 °C. 15 20 25 30