Brevet FR3034102A1 — publié le 20160930

NOUVEAU PROCEDE PERMETTANT DE FAVORISER LA NODULATION CHEZ LES PLANTES La présente invention concerne l'utilisation de micropeptides (peptides codés par des 5 microARNs ou « miPEPs ») pour favoriser la nodulation chez les plantes. Chez les plantes, l'acquisition des nutriments à partir du sol est d'une importance majeure et peut constituer une limite à leur développement. Certaines plantes ont ainsi développé la capacité d'établir des associations symbiotiques avec des micro-organismes du sol dans le 10 but d'améliorer l'acquisition des nutriments. Les plantes légumineuses sont par exemple capables d'établir une symbiose avec des bactéries de la famille Rhizobiaceae. La plante hôte et la bactérie vont ainsi se reconnaître par le biais d'un échange de signaux moléculaires. La plante va notamment produire des flavonoïdes qui vont induire l'expression de gènes spécifiques chez la bactérie, conduisant 15 à la production de composés lipochito-oligosaccharidiques, les facteurs Nod, à l'origine de nombreux changements développementaux chez la plante hôte. Les bactéries vont ensuite pénétrer dans les poils des racines des plantes, et induire la formation de nodules. Ce mécanisme de colonisation de la plante par la bactérie est appelé « la nodulation ». La plante fournit alors aux bactéries à la fois des nutriments et une source d'énergie sous 20 forme d'adénosine triphosphate (ATP) généré par la photosynthèse. En retour, les bactéries fixent l'azote atmosphérique sous forme d'ammonium, fournissant ainsi une importante source d'azote assimilable par la plante. L'azote est un nutriment dont l'apport s'avère bien souvent déterminant pour la croissance des plantes. De manière générale, plus la fixation de l'azote est élevée chez les plantes, plus 25 les récoltes sont importantes. En conséquence, le taux de nodulation des plantes est bien souvent associé à une récolte plus importante. Une nodulation efficace des plantes permet également de réduire les quantités d'engrais et de fertiliser les sols en composés azotés assimilables par les plantes. De plus, la teneur en protéines est également plus élevée dans les plantes légumineuses par rapport aux autres familles de plantes, en raison de la fixation 30 de l'azote par les bactéries. La teneur élevée en protéines rend ainsi les plantes légumineuses particulièrement importantes à la fois pour la consommation humaine et l'alimentation animale. L'inoculation des plantes avec des souches spécifiques de bactéries permet de favoriser la nodulation. Néanmoins, bien que différentes techniques soient disponibles, l'inoculation 3034102 2 s'avère bien souvent inefficace. Par conséquent, il est nécessaire de fournir un traitement simple pour améliorer la nodulation des plantes. Les microARNs (miRs) sont des petits ARNs non codants, d'environ 21 nucléotides après maturation, qui contrôlent l'expression de gènes cibles au niveau post-transcriptionnel, en dégradant l'ARNm cible ou en inhibant sa traduction. Les miRs sont notamment rencontrés chez les plantes, et les gènes ciblés par les miRs sont souvent des gènes clés de processus développementaux. La régulation de l'expression des miRs est très peu connue, mais il a été démontré que celle- ci fait intervenir, à l'instar de la plupart des gènes codants, une ARN polymerase II : cette enzyme produit un transcrit primaire, appelé « pri-miR », qui est ensuite maturé par un complexe protéique contenant notamment les enzymes type Dicer. Cette maturation conduit tout d'abord à la formation d'un précurseur de miR appelé «pre-miR », ayant une structure secondaire en forme tige-boucle contenant le miR et sa séquence miR * complémentaire. Puis le précurseur est maturé, ce qui conduit à la formation d'un ARN double brin plus court contenant le miR et le miR*. Le miR est ensuite pris en charge par le complexe RISC qui clive l'ARNm du gène cible ou bien inhibe sa traduction. En particulier, le miR172c a été identifié chez les plantes légumineuses telles que la luzerne, le lotier, le soja et le haricot (Lelandais-Brière et al., Genome-wide Medicago truncatula small RNA analysis revealed novel microRNAs and isoforms differentially regulated in roots and nodules, Plant Cell 21 : 2780-2796, 2009 ; Wang et al., Identification and expression analysis of rniRNAs from nitro gen-fixing soybean nodules, Biochem Biophys Res Commun 378 : 799-803, 2009 ; Valdes-Lôpez et aL, Essential role of MYB transcription factor : PvPHR1 and microRNA : PvmiR399 in phosphorus deficiency signaling in common bean roots, Plant Cell Environ 31 : 1834-1843, 2008 ; De Luis et al., Two microRNAs linked to nodule infection and nitrogen-fixing ability in the legume Lotus j aponicus, Plant Physiol 160 : 2137-2154, 2012). Récemment, il a été montré que le miR172c régule la formation des nodules en réduisant l'expression de son gène cible NNCI (Nodule Number Control 1), un facteur de transcription du gène AP2, qui réduit l'expression du gène NOD40, essentiel dans le processus de nodulation chez le soja (Wang et al., Soybean miR172c targets the repressive AP2 transcription factor NNC1 to activate ENOD40 expression and regulate module initiation, Plant Cell 26 : 47-82-4801). Une autre étude récente a également montré qu'une 3034102 3 augmentation de la quantité de miRl72c entraîne une augmentation de la nodulation et de la fixation d'azote chez le haricot (Nova-Franco et al., The miR172e-AP2-1 Node as a Key Regulator of the Common Bean Rhizobia Nitrogen Fixation Symbiosis, Plant Physiol. doi:10.1104/pp.114.255547, Mardi 2015). 5 Jusqu'à présent, les miRs, et par extension leur transcrit primaire, ont toujours été considérés, de par leur mode d'action particulier, comme des ARNs régulateurs non codants et ne produisant aucun peptide. Or, les Inventeurs ont récemment mis en évidence dans la demande de brevet FR 13/60727 l'existence de micropeptides (ou « miPEPs », microkNA encoded PEPlides) capables de moduler l'accumulation des miRs dans les cellules. 10 Dans ce contexte, la présente invention a pour but de proposer de nouveaux outils efficaces et écologiques pour favoriser la nodulation chez les plantes. L'un des aspects de l'invention est de proposer une nouvelle utilisation des miPEPs pour favoriser la nodulation entre une plante et une bactérie. 15 Un autre aspect de l'invention concerne un miPEP permettant de favoriser la nodulation des plantes. Un autre aspect de l'invention concerne également un nouveau procédé de culture de plantes en symbiose avec une bactérie. Un autre aspect de l'invention est de proposer une composition de miPEPs permettant de 20 favoriser la nodulation entre une plante et une bactérie. L'invention a également pour objet une plante transgénique et des parties de plantes transgéniques, leur procédé de production, ainsi que des organes, cellules et semences de plantes transgéniques, des plantes modifiées écologiquement, et des inocula de bactéries. 25 L'invention concerne donc l'utilisation d'un peptide pour favoriser la nodulation entre une plante et une bactérie, ledit peptide étant introduit dans la plante, ledit peptide ayant une séquence d'acides aminés comprenant ou consistant en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP naturellement présent dans ladite plante étant un peptide de 3 à 100 acides, 30 notamment de 4 à 100 acides aminés, dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante. 3034102 4 De manière surprenante et inattendue, les Inventeurs ont constaté que l'utilisation de peptides dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle de miPEPs codés sur les transcrits primaires de miRs, permet de favoriser la modulation entre une plante et une bactérie. 5 Dans l'invention, les termes « microARN », « microARN non codant » et « miR » sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent des petites molécules d'ARN d'environ 21 nucléotides, qui ne sont pas traduites et ne conduisent pas à un peptide ou une protéine. Cependant, sous cette forme mature, les miRs assurent une fonction de 10 régulation de certains gènes via des mécanismes post-transcriptionnels, comme par exemple par l'intermédiaire du complexe RISC. Le « transcrit primaire de miR » (ou « pri-miR ») correspond lui à la molécule d'ARN directement obtenue à partir de la transcription de la molécule d'ADN. Généralement, ce 15 transcrit primaire subit une ou plusieurs modifications post-transcriptionnelles, qui entraînent par exemple une structure particulière de l'ARN ou un clivage de certaines parties de l'ARN par des phénomènes d'épissage, et qui conduisent à la forme précurseur du miR ou (« pre-miR »), puis à la forme mature du miR 20 Les termes « micropeptides » et « miPEPs » (microRNA encoded PEPtides) sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent un peptide qui est codé par un cadre ouvert de lecture présent sur le transcrit primaire d'un miR, et qui est capable de moduler l'accumulation dudit miR. Les miPEPs au sens de la présente invention ne doivent être entendus comme étant nécessairement des peptides de petite taille, dans la mesure où 25 « micro » ne correspond pas à la taille du peptide. Comme indiqué dans la demande de brevet FR 13/60727, dont le contenu doit être considéré comme faisant partie de la présente demande, les miPEPs sont des peptides : - de 4 à 100 acides aminés, de préférence de 4 à 60 acides aminés, notamment de 4 à 59 30 acides aminés, - codés par un cadre ouvert de lecture contenu dans le transcrit primaire d'un miR, de préférence dans la partie 5' du transcrit primaire dudit miR, et capables de moduler l' accumulation dudit miR dans une cellule eucaryote. 3034102 5 Les termes « cadre ouvert de lecture » ou « ORF » (open readingframe) sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils correspondent à une séquence de nucléotides dans une molécule d'ADN ou d'ARN pouvant potentiellement coder un peptide ou une protéine: ledit cadre ouvert de lecture débute par un codon start (le codon start codant généralement 5 une méthionine), suivi d'une série de codons (chaque codon codant un acide aminé), et se termine par un codon stop (le codon stop n'étant pas traduit). Dans l'invention, les ORFs peuvent être dénommés de manière spécifique « miORFs » lorsque ceux-ci sont présents sur les transcrits primaires de miR. Les miORFs tels que définis dans l'invention peuvent avoir une taille de 15 à 303 10 nucléotides. Un acide aminé étant codé par un codon de 3 nucléotides, les miORFs de 15 à 303 nucléotides codent des miPEPS de 4 à 100 acides aminés. En particulier, les miORFs ont une taille de : 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 47, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93,96,99,102,105,108,111,114,117,120,123,126,129,132,135,138, 141, 144, 15 147, 150, 153, 156, 159, 162, 165, 168, 171, 174, 177, 180, 183, 186, 189, 192, 195, 198, 201, 204, 207, 210, 213, 216, 219, 222, 225, 228, 231, 234, 237, 240, 243, 246, 249, 252, 255, 258, 261, 264, 267, 270, 273, 276, 279, 282, 285, 288, 291, 294, 297, 300 ou 303 nucléotides, et codent respectivement des miPEPs ayant une taille de : 20 acides aminés. 25 Un miPEP peut également avoir une taille de 3 à 100 acides aminés. Compte tenu de la dégénérescence du code génétique, un même miPEP peut être codé par plusieurs séquences nucléotidiques. De telles séquences nucléotidiques, différentes entre elles d'au moins un nucléotide mais codant un même peptide, sont appelées « séquences 30 dégénérées ». Dans l'invention, le terme «plante » fait référence de manière générale à tout ou partie d'une plante quel que soit son stade de développement (y compris la plante sous forme de graine 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100 3034102 6 ou de jeune pousse), à un ou plusieurs organes de la plante (comme par exemple les feuilles, les racines, la tige, les fleurs), à une ou plusieurs cellules de la plante, ou encore à un amas de cellules de la plante. 5 L'expression « nodulation » fait référence à la colonisation d'une plante par une bactérie symbiote aboutissant à la formation de nodules sur les racines. De manière non limitative, les paramètres permettant de déterminer et quantifier la nodulation entre une plante et une bactérie peuvent être notamment : 10 la taille et le nombre des nodules, la teneur en azote dans tout ou partie de la plante, ou de manière indirecte, le développement de certaines parties de la plante, telles que les gousses ou les racines. 15 Les "nodules" peuvent également être appelées "nodosités" Il s'agit de boursouflures se formant sur les racines des plantes sous l'action de bactéries. Leur taille et leur nombre peuvent être mesurés à l'oeil nu ou par microscope, à l'aide de techniques connues de l'homme du métier. Leur taille est mesurée après une culture de longue durée (supérieure à 30 jours) en mesurant la taille de nodules sur des photographies, par exemple à l'aide de 20 logiciels type ImageJ. La "teneur en azote" correspond à la concentration d'azote dans la plante ou dans une partie de la plante. Par exemple, il peut s'agir de la concentration d'azote dans les parties aériennes en g d'azote par kg de poids sec de feuilles. Cette concentration d'azote peut être déterminée 25 par des techniques connues de l'homme du métier. Par exemple, une méthode consiste à brûler un échantillon de masse connue dans une température élevée (environ 900° C) en présence d'oxygène, conduisant à la libération de dioxyde de carbone, eau et azote. Les gaz sont ensuite passés sur des colonnes particulières (comme une solution aqueuse d'hydroxyde de potassium) qui absorbent le dioxyde de carbone et eau. Une colonne contenant un 30 détecteur de conductivité thermique à la fin est ensuite utilisé pour séparer l'azote de tout dioxyde de carbone résiduel et de l'eau et la teneur en azote résiduelle est quantifiée. 3034102 7 Le "développement de certaines parties de la plante" correspond à la croissance ou à la maturation de certaines parties de la plante. Le développement de certaines parties de la plante peut par exemple être déterminé en mesurant la vitesse de croissance ou la taille ou le poids de certaines parties de la plante. Ce paramètre peut être aisément mesuré en effectuant 5 par exemple des mesures de poids sec des racines, des gousses ou des parties aériennes. Par ailleurs, dans l'invention, l'expression « favoriser la nodulation», ou « améliorer la nodulation», indique : - soit une accélération de la nodulation (comme par exemple une formation plus rapide des 10 nodules chez une plante donnée par rapport à une plante de référence), - soit à un accroissement de la nodulation (comme par exemple un nombre plus important ou une taille plus importante des nodules chez une plante donnée par rapport à une plante de référence), - soit à une accélération et un accroissement de la nodulation. 15 Il est important de noter que l'utilisation selon l'invention possède l'avantage d'être écologique, car le miPEP est un peptide qui est présent naturellement chez la plante. L'invention concerne également l'utilisation d'un miPEP introduit par voie exogène dans 20 une plante pour favoriser la nodulation entre ladite plante et une bactérie, ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide comprenant, ou consistant en, une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante, lequel miPEP naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés, notamment de 4 à 100 acides aminés, dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' 25 sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante, la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement 30 présent. Dans l'invention, l'expression « miPEP introduit par voie exogène » fait référence à un miPEP introduit artificiellement dans la plante que celui-ci existe ou non naturellement dans la plante. 3034102 8 L'introduction d'un miPEP par voie exogène dans la plante implique donc une étape technique, laquelle étape n'est pas un phénomène naturel et ne correspond ni à un croisement, ni à une sélection. 5 Le miPEP introduit par voie exogène peut être soit un peptide produit hors de la plante (comme par exemple un peptide isolé et/ou purifié, un peptide synthétique ou un peptide recombinant), soit un peptide produit dans la plante suite à l'introduction non naturelle d'un acide nucléique codant ledit miPEP dans ladite plante. 10 Si le miPEP existe naturellement chez la plante, il s'agit d'un « iniPEP d'origine endogène ». Si le miPEP n'existe pas naturellement chez la plante, il s'agit d'un « miPEP d'origine exogène ». Lorsqu'il est introduit dans la plante un « miPEP d'origine exogène », il est alors nécessaire 15 d'introduire également le miR correspondant et son transcrit primaire. La plante dans laquelle le miPEP n'a pas été introduit possède une quantité basale dudit miPEP, qui correspond à celle dudit miPEP naturellement présent. L'utilisation d'un miPEP comprenant, ou consistant en, une séquence identique à celle dudit miPEP entraîne une 20 augmentation de la quantité totale de miPEP, ce qui module l'accumulation du miR dont le transcrit primaire contient la séquence codant ledit miPEP. Par ailleurs, le miPEP introduit se retrouve dans la plante et son introduction n'a pas d'impact sur la stabilité de celui-ci. 25 Dans l'invention, par « accumulation », on entend la production d'une molécule, telle qu'un miR ou un miPEP, dans la cellule. Ainsi, la « modulation de l'accumulation » d'une molécule dans une cellule correspond à une modification de la quantité de cette molécule dans la cellule. 30 Par ailleurs, l'effet d'un miPEP peut être observé via la modulation de l'accumulation du miR, mais également à travers la modulation de l'accumulation du pri-miR ou du pre-miR correspondant. 3034102 9 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumulation dudit miR est une diminution ou une augmentation de l'accumulation dudit miR, en particulier une augmentation. 5 Une « diminution de l'accumulation du miR» correspond à une baisse de la quantité de ladite molécule dans la cellule. A l'inverse, une « augmentation de l'accumulation du miR» correspond à une hausse de la quantité de ladite molécule dans la cellule. 10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus dans laquelle ledit gène impliqué dans la nodulation code un facteur de transcription de la famille AP2. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, 15 dans laquelle ledit gène, impliqué dans la nodulation, est le facteur de transcription NNCI. En particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miR172c possède une séquence nucléotidique présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 1. 20 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miARN est le miRl72c, en particulier, dans laquelle ledit miR172e possède une séquence nucléotidique comprenant ou consistant en SEQ ID NO : 1. 25 En particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEPl72c possède une séquence d'acides aminés présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, 30 dans laquelle ledit miPEP est le miPEPl72c, en particulier, dans laquelle ledit miPEPl72c possède une séquence d'acides aminés comprenant ou consistant en SEQ ID NO : 2. 3034102 10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est une plante légumineuse, telle que le Lotus (Lotus sp) le soja (Glycine max), l'arachide (Arachis hypogaea), le haricot (Phaseolus vulgaris), le pois (Pisum sativum), la lentille (Lens culinaris), le pois chiche (Citer arietinum), la fève et la féverolle 5 (Vicia faba), les vesces (Vicia sp.), les gesses (Lathyrus sp.), la luzerne (Medicago sp.), le trèfle (Trifoliurn sp.), le lupin (Lupinus sp.), le haricot mungo (Vigna radiata), la réglisse (Glycyrrhiza glatira), le palissandre (Dalbergia), le lotier corniculé (Lotus corniculatus), le sainfoin (Onobrychis viciifolia), le rooibos (Aspalathus linearis), le fenugrec (Trigonella foenum-graecum). 10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est la betterave sucrière (Beta vulgaris). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, 15 dans laquelle ladite plante est choisie palud Medicago truncatula, M saliva et Glycine max. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est Glycine max. 20 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite bactérie est une bactérie de la famille des Rhizobiaceae. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite bactérie est choisie parmi les genres Rhizobium, 25 Sinorhizobium, Mesorhizobium, Bradyrhizobium ou Azorhizobium. Dans l'invention, ladite bactérie peut également être choisie parmi : - Rhizobium alamii, Rhizobium alkalisoli, Rhizobium cellulosilyticum, Rhizobium daejeonense, Rhizobium endophyticum, Rhizobium etli, Rhizobium galegae, Rhizobium 30 gallicum, Rhizobium giardinii, Rhizobium hainanense, Rhizobium herbae, Rhizobium huautlense, Rhizobium indigoferae, Rhizobium leguminosarum, Rhizobium loessense, Rhizobium lusitanum, Rhizobium mesosinicum, Rhizobium miluonense, Rhizobium 3034102 11 mongolense, Rhizobium multihospitium, Rhizobium oryzae, Rhizobium phaseoli, Rhizobium pisi, Rhizobium tibeticum, Rhizobium sullae, Rhizobium tropici, Rhizobium tubonense, Rhizobium undicola, Rhizobium vignae, Rhizobium yanglingense, Mesorhizobium albiziae, Mesorhizobium alhagi, Mesorhizobium amorphae, 5 Mesorhizobium australicum, Mesorhizobium camelthorni, Mesorhizobium caraganae, Mesorhizobium chacoense, Mesorhizobium cicero, Mesorhizobium gobiense, Mesorhizobium huakuii, Mesorhizobium loti, Mesorhizobium mediterraneum, Mesorhizobium metallidurans, Mesorhizobium opportunistum, Mesorhizobium plurifarium, Mesorhizobium robiniae, Mesorhizobium shangrilense, Mesorhizobium septentrionale, 10 Mesorhizobium tarimense, Mesorhizobium temperatum, Mesorhizobium tianshanense - Ensifer abri, Sinorhizobium americanum, Ensiler arboris, Ensiler fredii, Ensiler garamanticus, Ensfer indiaense, Ensifer kostiensis, Ensifer kummerowiae, Ensifer medicae, Ensifer meliloti, Ensiler mexicanus, Sinorhizobium morelense, Ensiler adhaerens, Ensiler numidicus, Ensiler saheli, Ensfer sojae, Ensifer terangae, 15 - Bradyrhizobium canariense, Bradyrhizobium denitrificans, Bradyrhizobium elkanii, Bradyrhizobium iriomotense, Bradyrhizobium japonicum, Bradyrhizobium jicamae, Bradyrhizobium liaoningense, Bradyrhizobium pachyrhizi, Bradyrhizobium yuanmingense - Burkholderia caribensis, Burkholderia cepacia, Burkholderia mimosarum, Burkholderia nodosa, Burkholderia phymatum, Burkholderia sabiae, Burkholderia tuberum 20 - Phyllobacterium trifolii, Phyllobacterium ifriqiyense, Phyllobacterium leguminum Microvirga lupine, Microvirga lotononidis, Microvirga zambiensis - Azorhizobium caulinodans, Azorhizobium doebereinerae - Ochrobactrum cytisi, Ochrobactrum lupin! - Methylobacterium nodulans, 25 - Cupriavidus taiwanensis, Devosia neptuniae, - Shinella kummerowiae. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, 30 dans laquelle ladite bactérie est une bactérie choisie parmi Rhizobium leguminosarum, Rhizobium etli, Rhizobium tropici, Rhizobium galegae, Sinorhizobium sp. NGR234, Sinorhizobium meliloti, Sinorhizobium fredii, Sinorhizobium saheli, Sinorhizobium teranga, Mesorhizobium ciceri, Mesorhizobium huakuii, Mesorhizobium loti, Bradyrhizobium 3034102 12 elkanii, Bradyrhizobium japonicum, Bradyrhizobium lupini, Bradyrhizobium sp. "cowpea" et Azorhizobium caulinodans. En particulier, la bactérie Rhizobium elti permet la nodulation du haricot. 5 En particulier, la bactérie Rhizobium leguminosarum permet la nodulation du pois, de la Luzerne, de la betterave sucrière, de la vesce, de la lentille. En particulier, la bactérie Rhizobium pisi permet la nodulation du pois, du haricot, de la vesce. En particulier, la bactérie Rhizobium phaseoli permet la nodulation du haricot sec, du haricot. 10 En particulier, la bactérie Rhizobium fabae permet la nodulation de la fève. En particulier, la bactérie Rhizobium ciceri permet la nodulation du pois chiche. En particulier, la bactérie Rhizobium trifoli permet la nodulation du trèfle. En particulier, la bactérie Sinorhizobium meliloti permet la nodulation de la Luzerne, du fenugrec ou du mélilot. 15 En particulier, la bactérie Sinorhizobiumfredii pellnet la nodulation du soja. En particulier, la bactérie Mesorhizobium loti permet la nodulation du lotus, du trèfle, du lupin, ou du pois chiche. En particulier, la bactérie Bradyrhizobium japonicum permet la nodulation du soja. En particulier, la bactérie Bradyrhizobium sp. Vigna permet la nodulation de l'arachide. 20 En particulier, la bactérie Bradyrhizobium sp. Arachis permet la nodulation de l'arachide. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour favoriser la nodulation entre une plante Glycine max et une bactérie Bradyrhizobium japonicum, dans laquelle le miPEP172c est introduit par voie exogène dans ladite plante 25 Glycine max, ledit miPEP172c étant également naturellement présent dans ladite plante Glycine max, ledit miPEP172c introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP172c naturellement présent, ladite séquence du miPEP172e naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture 30 situé en 5' sur le transcrit primaire du miR172c, lequel miR172c régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez Glycine max, 3034102 13 la somme de la quantité dudit miPEP172c introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP172c naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP172c naturellement présent chez ladite plante Glycine max. 5 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation d'un miPEP pour favoriser la nodulation entre une plante Glycine max et une bactérie Bradirhizobium japonicum, dans laquelle le miPEP172c est introduit par voie exogène dans ladite plante Glycine max, ledit miPEPl72c étant également naturellement présent dans ladite plante Glycine max, ledit miPEP172c introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence présente au 10 moins 80% d'identité, de préférence au moins 90% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 2, ladite séquence du miPEP172c naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miRl72c, lequel miR172c régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez Glycine max, la somme de la quantité dudit miPEP172c introduit par voie exogène et de celle dudit 15 miPEP172c naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP172c naturellement présent chez ladite plante Glycine max. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation d'un miPEP pour favoriser la nodulation entre une plante Glycine max et une bactérie Bradirhizobium japonicum, dans 20 laquelle le miPEPl72c est introduit par voie exogène dans ladite plante Glycine max, ledit miPEP172e étant également naturellement présent dans ladite plante Glycine max, ledit miPEP172c introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence comprend ou consiste en SEQ ID NO : 2, ladite séquence du miPEP172c naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miRl72c, lequel 25 miRl72c régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez Glycine max, la somme de la quantité dudit miPEP172c introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP172c naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP172c naturellement présent chez ladite plante Glycine max. 30 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation d'un miPEP pour favoriser la nodulation entre une plante Glycine max et une bactérie Bradirhizobium japonicum, dans 3034102 14 laquelle le miPEP172c est introduit par voie exogène dans ladite plante Glycine max, ledit miPEP172c étant également naturellement présent dans ladite plante Glycine max, ledit miPEPl72c introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP172c naturellement présent, ladite 5 séquence du miPEPl72c naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miRl72c, lequel miR172c régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez Glycine max, lequel miR172c comprend ou consiste en SEQ ID NO : 1, la somme de la quantité dudit miPEPl72c introduit par voie exogène et de celle dudit 10 miPEP172c naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP172c naturellement présent chez ladite plante Glycine max. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par voie externe dans la plante, de préférence par 15 arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou à l'aide d'un support en contact avec la plante. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par voie externe dans une graine ou une semence, de 20 préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou à l'aide d'un support en contact avec la graine ou la semence. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est utilisé pour traiter la plante sous forme de graine. 25 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par arrosage, notamment par pulvérisation. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, 30 dans laquelle ledit miPEP est introduit par arrosage et par l'ajout d'un engrais. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par l'ajout d'un engrais. 3034102 15 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit, par arrosage, et par l'ajout d'un engrais. 5 Les Inventeurs ont en effet constaté de manière inattendue qu'il est possible d'appliquer directement une composition comprenant un miPEP sur la plante pour moduler l'accumulation du miR correspondant dans la plante, ce qui indique que le miPEP est capté par la plante. 10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la plante est traitée avec une composition comprenant 10-9 M à 10-4 M dudit miPEP, notamment 10-9 M, 10-8M, 10' M, 10.6 M, 10-5 M ou 10-4 M dudit miPEP. De préférence, les compositions ont une concentration de 10-8 M à 10-5 M pour une 15 application par arrosage ou par pulvérisation sur la plante. De manière complémentaire, des compositions plus ou moins concentrées peuvent être envisagées pour traiter la plante avec le miPEP. Par exemple, et de manière non limitative, des compositions plus concentrées comprenant 10-1 M à 10-3 M, notamment 10-2 M de 20 miPEP, peuvent être utilisées dans le cas où le miPEP introduit par voie exogène est administré à la plante par épandage. Les propriétés de solubilité des miPEPs sont déterminées notamment par leur composition en acides aminés. Les miPEPs hydrophiles peuvent être solubilisés et conditionnés dans des 25 solutions aqueuses, telles que l'eau. Les miPEPs hydrophobes peuvent être solubilisés et conditionnés dans des solvants, tels que les solvants organiques. Pour un traitement des plantes par les miPEPs, les solvants organiques sont des solvants non toxiques pour les plantes en faibles quantités, c'est-à-dire qu'ils n'ont pas d'effet délétères 30 sur le développement de la plante. De manière non limitative, les solvants organiques peuvent être choisis parmi l'acétonitrile et l'acide acétique. 3034102 16 Les miPEPs peuvent également être solubilisés et conditionnés dans des mélanges de solvants organiques, comme par exemple un mélange d'acétonitrile et d'acide acétique. En particulier, les miPEPs peuvent être solubilisés dans une solution comprenant 50 % d'acétonitrile, 10% d'acide acétique et 40% d'eau (volume/volume/volume). 5 En particulier, le miPEP172c est solubilisé dans une solution comprenant 40% eau, 50% acétonitrile, 10% acide acétique (volume/volume/volume). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, 10 dans laquelle ledit miPEP est introduit dans la plante par le biais d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le nombre de nodules est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit 15 ledit miPEP par- rapport au nombre de nodules d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de nodules d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, 20 dans laquelle la concentration d'azote est augmentée dans les parties aériennes de la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la concentration d'azote dans les parties aériennes d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la concentration d'azote dans les parties aériennes d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. 25 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le poids des gousses est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au poids des gousses d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au poids des gousses d'une plante 30 identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. L'augmentation des paramètres permettant de déterminer et de quantifier la modulation chez la plante dans laquelle a été introduit le miPEP (tels que le nombre de nodules, la 3034102 17 concentration d'azote ou encore le poids des gousses) est de préférence mis en évidence par comparaison avec une plante identique (c'est-à-dire une plante de la même espèce et/ou variété), de même âge et cultivée dans les mêmes conditions mais dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit. 5 L'invention concerne également l'utilisation d'un miPEP introduit par voie exogène dans une plante pour favoriser la nodulation entre ladite plante et une bactérie, ledit miPEP étant codé par le transcrit primaire, introduit artificiellement dans la plante, d'un miR, ledit transcrit primaire, ledit miR et ledit miPEP étant absents naturellement chez la plante, 10 ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante. Dans un mode de réalisation particulier, ledit transcrit primaire du miR, le miR et ledit miPEP sont introduits dans la plante à l'aide d'un vecteur. 15 Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé pour favoriser la nodulation entre une plante et une bactérie, comprenant une étape d'introduction d'un miPEP dans une plante par voie exogène, ledit miPEP étant également présent naturellement dans ladite plante, ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide de 3 à 100 acides aminés, notamment 20 de 4 à 100 acides aminés, dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP naturellement présent, laquelle séquence du miPEP naturellement présent est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante, 25 la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus dans 30 laquelle ledit gène impliqué dans la nodulation code un facteur de transcription de la famille 3034102 18 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène, impliqué dans la nodulation est le facteur de transcription NNC I. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans 5 lequel ledit miARN est le miRl72c, en particulier, dans laquelle ledit miR172c possède une séquence nucléotidique comprenant ou consistant en SEQ ID NO Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est le miPEP172c, en particulier, dans laquelle ledit rniPEP172c possède 10 une séquence d'acides aminés comprenant ou consistant en SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est une plante légumineuse, telle que le Lotus (Lotus sp.) le soja (Glycine max), l'arachide (Arachis hypogaea), le haricot (Phaseolus vulgaris), le pois (Pisum sativum), la lentille (Lens culinaris), le pois chiche (Citer arietinum), la fève et la féverolle 15 (Vicia faba), les vesces (Vicia sp.), les gesses (Lathyrus sp.), la luzerne (Medicago sp.), le trèfle (Trifolium sp.), le lupin (Lupinus sp.), le haricot mungo (Vigna radiata), la réglisse (Glycyrrhiza glatira), le palissandre (Dalbergia), le lotier corniculé (Lotus corniculatus), le sainfoin (Onobrychis viciifolia), le rooibos (Aspalathus linearis), le fenugrec (Trigonella foenum-graecum). 20 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle ladite plante est la betterave sucrière (Beta vulgaris). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans 25 laquelle ladite bactérie est une bactérie de la famille des Rhizobiaceae. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle ladite bactérie est choisie parmi les genres Rhizobium, Sinorhizobium, Mesorhizobium, Bradyrhizobium ou Azorhizobiurn. 30 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite bactérie est une bactérie choisie parmi Rhizobium leguminosarum, Rhizobium 3034102 19 etli, Rhizobium tropici, Rhizobium galegae, Sinorhizobium sp. NGR234, Sinorhizobium meliloti, Sinorhizobium fredii, Sinorhizobium saheli, Sinorhizobium teranga, Mesorhizobium ciceri, Mesorhizobium huakuii, Mesorhizobium loti, Bradyrhizobium elkanii, Bradyrhizobium japonicum, Bradyrhizobium lupini, Bradyrhizobium sp. "cowpea" 5 et Azorhizobium caulinodans. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, pour favoriser la nodulation entre une plante Glycine max et une bactérie Bradirhizobium japonicum, dans lequel le miPEPl72c est introduit par voie exogène dans ladite plante 10 Glycine max, ledit miPEP172c étant également naturellement présent dans ladite plante Glycine max, ledit miPEP172e introduit par voie exogène étant un peptide comprenant ou consistant en une séquence identique à celle dudit miPEP172c naturellement présent, lequel miPEP172c naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par 15 un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR172c, ledit miPEP172c étant capable d'augmenter l'accumulation dudit miR172c, lequel miR172c régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez Glycine max, la somme de la quantité dudit miPEP172c introduit par voie exogène et de celle dudit miPEPl72c naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit 20 miPEP172c naturellement présent. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit par voie externe dans la plante, de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou à l'aide 25 d'un support en contact avec la plante. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit par voie externe dans une graine ou une semence, de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un 30 substrat de culture ou à l'aide d'un support en contact avec la graine ou la semence. 3034102 20 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne le procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est utilisé pour traiter la plante sous forme de graine. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans 5 lequel ledit miPEP est administré à la plante sous la forme d'une composition comprenant 10-9M à 10-4 M dudit miPEP, en particulier 10-9, 10-8, 10-7, 10-6, 10' ou 104 M dudit miPEP. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit dans la plante par le biais d'un acide nucléique codant ledit 10 miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de nodules est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de nodules d'une plante identique et de même âge dans 15 laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de nodules d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle la concentration d'azote est augmentée dans les parties aériennes de la plante dans 20 laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la concentration d'azote dans les parties aériennes d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la concentration d'azote dans les parties aériennes d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. 25 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle le poids des gousses est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au poids des gousses d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au poids des gousses d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. 30 Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique comprenant: 3034102 21 a) une étape d'introduction d'un acide nucléique codant un miPEP de 3 à 100 acides aminés, notamment de 4 à 100 acides aminés, dans une plante, ou dans au moins une cellule de ladite plante, dans des conditions permettant l'expression dudit miPEP, ledit miPEP étant également naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP 5 naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans la plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation, et b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à 10 l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante transgénique. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante transgénique obtenue à l'étape b) est plus apte à la nodulation par rapport à une plante identique dans laquelle ledit acide 15 nucléique n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel l'expression dudit miPEP codé par l'acide nucléique introduit dans la plante entraîne une nodulation améliorée par rapport à une plante 20 identique dans laquelle ledit acide nucléique n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel l'étape a) est réalisée à l'aide d'un vecteur contenant ledit acide nucléique, de préférence un plasmide. 25 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit acide nucléique ne comprend pas la séquence complète dudit miR. 30 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel l'expression dudit acide nucléique de l'étape a) est placée sous le contrôle d'un promoteur fort, de préférence un promoteur fort constitutif tel que le promoteur 35S. 3034102 22 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène impliqué dans la nodulation code un facteur de transcription de la famille AP2. 5 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène impliqué dans la nodulation est un gène endogène et code un facteur de transcription de la famille AP2. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante 10 transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène impliqué dans la nodulation code le facteur de transcription NNC1. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène impliqué dans la nodulation est 15 un gène endogène et code le facteur de transcription NNC1. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miRl72c, en particulier, dans lequel ledit miR172c possède une séquence nucléotidique comprenant ou consistant en 20 SEQ ID NO : 1. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est le miPEP172c, en particulier, dans lequel ledit miPEP172c possède une séquence d'acides aminés comprenant 25 ou consistant en SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit acide nucléique introduit à l'étape a) comprend une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 3. 30 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est une plante légumineuse, telle que le Lotus (Lotus sp.) le soja (Glycine max), l'arachide (Arad-lis hypogaea), le haricot (Phaseolus vulgaris), le pois (Pisum 3034102 23 sativum), la lentille (Lens culinaris), le pois chiche (Citer arietinum), la fève et la féverolle (Vicia faba), les vesces (Vicia sp.), les gesses (Lathyrus sp.), la luzerne (Medicago sp.), le trèfle (Trifoliuin sp.), le lupin (Lupinus sp.), le haricot mungo (Vigna radiata), la réglisse (Glycyrrhiza glabra), le palissandre (Dalbergia), le lotier corniculé (Lotus corniculatus), le 5 sainfoin (Onobrychis viciifolia), le rooibos (Aspalathus linearis), le fenugrec (Trigonella foenum-graecurn). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle ladite plante est la betterave sucrière (Beta vulgaris). 10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle ladite bactérie est une bactérie de la famille des Rhizobiaceae. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-15 dessus, dans laquelle ladite bactérie est choisie parmi les genres Rhizobium, Sinorhizobium, Mesorhizobium, Bradyrhizobium ou Azorhizobium. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite bactérie est une bactérie choisie parmi Rhizobium leguminosarum, Rhizobium 20 etli, Rhizobium tropici, Rhizobium galegae, Sinorhizobium sp. NGR234, Sinorhizobium meliloti, Sinorhizobium fredii, Sinorhizobium saheli, Sinorhizobium teranga, Mesorhizobium ciceri, Mesorhizobium huakuii, Mesorhizobium loti, Bradyrhizobium elkanii, Bradyrhizobiumjaponicum, Bradyrhizobium lupini, Bradyrhizobium sp. "cowpea" et Azorhizobium caulinodans. 25 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, comprenant : a) une étape d'introduction d'un acide nucléique contenant la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 3, codant le miPEPl72c consistant en la séquence d'acides aminés SEQ ID 30 NO : 2, dans une plante Glycine max, ou dans au moins une cellule de ladite plante Glycine max, dans des conditions permettant l'expression du miPEPl72c, ledit miPEP172c étant également naturellement présent dans ladite plante Glycine max, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert 3034102 de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR172c, ledit miPEP172c étant capable de moduler l'accumulation dudit miR172c, lequel miR172c régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez Glycine max, et b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à 5 l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante Glycine max transgénique. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit dans la plante par le biais d'un acide 10 nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de nodules est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de nodules chez 15 une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de nodules d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante 20 transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle la concentration d'azote est augmentée dans les parties aériennes de la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la concentration d'azote dans les parties aériennes d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la concentration d'azote dans les parties aériennes d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP 25 n'a pas été introduit, Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle le poids des gousses est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au poids des gousses d'une 30 plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au poids des gousses d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. 3034102 25 Dans un aspect, l'invention concerne également une plante transgénique telle qu'obtenue par le procédé de production tel que défini ci-dessus. Dans un autre aspect, l'invention concerne une plante dans laquelle a été introduit un miPEP 5 selon l'utilisation ou le procédé pour favoriser la nodulation décrits ci-dessus. Dans un autre aspect, l'invention concerne un peptide ayant une séquence d'acides aminés présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2. 10 Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un peptide comprenant ou consistant de séquence SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation particulier, ledit peptide de séquence SEQ ID NO : 2 est un 15 peptide isolé et/ou purifié, un peptide synthétique ou un peptide recombinant. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition, en particulier une composition phytosanitaire, comprenant le miPEP172c en tant que substance active, ledit miPEP172c consistant de préférence en SEQ ID NO : 2. 20 Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP172c est à une concentration de 10-9M à 10-4M, en particulier 10-9, 10- 8, 10-7, 10-6, 10-$ ou 10-4M. 25 De préférence, une composition telle que définie ci-dessus a une concentration de 10-8 M à 10-5 M pour une application par arrosage ou par pulvérisation sur la plante ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou à l'aide d'un support en contact avec la plante. 30 De préférence, une composition telle que définie ci-dessus a une concentration de 10-8 M à 10-5 M pour une application par arrosage ou par pulvérisation sur la graine ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou à l'aide d'un support en contact avec la graine ou la semence. 3034102 26 De manière complémentaire, des compositions plus ou moins concentrées peuvent être envisagées pour traiter la plante avec le miPEP. Par exemple, et de manière non limitative, des compositions plus concentrées comprenant 10-1 M à 10-3 M, notamment 10-2 M de miPEP, peuvent être utilisées dans le cas où le miPEP introduit par voie exogène est 5 administré à la plante par épandage. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, comprenant de plus un excipient, un diluant ou un solvant. 10 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus formulée de façon à former un enrobé. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition comprenant en combinaison une quantité de semences d'une plante et une quantité d'un peptide dont la séquence comprend 15 ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent chez ladite plante. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant en combinaison une quantité de semences d'une plante, notamment Glycine max, et une 20 quantité d'un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle du miPEP172c. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, comprenant de plus un excipient, un diluant ou un solvant. 25 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus formulée de façon à former une semence enrobée ou une graine enrobée. L'enrobage peut être réalisé selon les procédés classiquement utilisés dans l'industrie 30 agroalimentaire et peut être obtenu en utilisant un matériau apte à se désagréger dans un solvant ou dans la terre, tel qu'un liant ou de l'argile. 3034102 27 La composition contenant ledit miPEP peut notamment être appliquée sur la semence, sous, dans ou sur la couche d'enrobage. Selon l'invention, l'enrobage peut être utilisé pour par exemple conférer des propriétés 5 particulières à une composition de miPEP, ou encore à une composition de semences en combinaison avec un miPEP. Dans un autre aspect, l'invention concerne un protocole de production d'un peptide recombinant, dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un 10 miPEP tel que défini ci-dessus, comprenant une étape de transformation d'un organisme avec un vecteur d'expression codant ledit peptide recombinant. Dans un mode de réalisation, ledit organisme est choisi parmi le groupe comprenant les bactéries, les levures, les champignons (autre que levures), les cellules animales, les 15 plantes et les animaux. Dans un mode de réalisation, ledit organisme est Escherichia cati. En particulier, l'invention concerne un protocole de production d'un peptide recombinant tel 20 que défini ci-dessus, comprenant les étapes suivantes : l'acide nucléique codant ledit peptide recombinant est lié à un acide nucléique codant une étiquette, telle que la GST, le vecteur d'expression contenant ledit acide nucléique codant ledit peptide recombinant est introduit dans la bactérie E. coli, 25 la bactérie E. coli contenant le vecteur d'expression est cultivée dans du milieu LB de préférence jusqu'à une DO comprise entre 0.2 et 0.4, la production du peptide recombinant est induite avec de l'IPTG, de préférence pendant 4 à 5 heures, les bactéries E. coli sont centrifugées et lysées, 30 - le surnageant est filtré, - ledit peptide recombinant est purifié sur une colonne d'affinité glutathion sepharose, si nécessaire, cliver la GST avec une protéase. 3034102 28 Dans un autre aspect, l'invention concerne un anticorps reconnaissant spécifiquement le miPEP172c, en particulier ledit miPEP172c consistant en SEQ ID NO : 2. Un tel anticorps peut être obtenu à partir d'un procédé connu de l'homme du métier, comme 5 par exemple en injectant ledit miPEP172c à un animal non humain pour déclencher une réaction d'immunisation et la production d'anticorps par ledit animal. Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé d'immunolocalisation du miPEP172c comprenant une étape de marquage d'un échantillon biologique d'une plante avec un 10 anticorps reconnaissant spécifiquement ledit miPEP 172e. Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé de culture de bactéries, comprenant une étape de mise en contact desdites bactéries: - avec un mélange comprenant une plante ou une partie de plante, en particulier une 15 culture de racine, et un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel rniR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans 20 la nodulation chez ladite plante, ou - avec une plante transgénique telle que définie précédemment, la plante, la partie de plante, et la plante transgénique étant aptes à former une symbiose avec ladite bactérie. 25 Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne le procédé tel que défini ci-dessus dans lequel les bactéries cultivées appartiennent à la famille des Rhizobiaceae. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne le procédé tel que défini ci-dessus dans lequel lesdites bactéries sont choisies parmi les genres Rhizobium, 30 Sinorhizobium, Mesorhizobium, Bradyrhizobium ouAzorhizobium. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne le procédé tel que défini ci-dessus dans lequel lesdites bactéries sont choisies parmi Rhizobium leguminosarum, 3034102 29 Rhizobium etli, Rhizobium tropici, Rhizobium galegae, Sinorhizobium sp. NGR234, Sinorhizobium meliloti, Sinorhizobium fredii, Sinorhizobium saheli, Sinorhizobium teranga, Mesorhizobium ciceri, Mesorhizobium huakuii, Mesorhizobium loti, Bradyrhizobium elkanii, Bradyrhizobium japonicum, Bradyrhizobium lupini, Bradyrhizobium sp. "cowpea" 5 et Azorhizobium caulinodans. En particulier, le procédé de culture desdites bactéries tel que défini ci-dessus est réalisé dans des conditions de culture permettant la croissance, voire l'amélioration de la croissance de la plante, de la partie de plante, et de la plante transgénique, et celle des bactéries. 10 En particulier, le procédé de culture des bactéries tel que défini ci-dessus est réalisé dans des conditions de culture permettant la symbiose entre la bactérie et la plante, la partie de plante ou la plante transgénique. 15 Dans un mode de réalisation, le peptide présent dans le mélange est un peptide isolé, un peptide isolé et/ou purifié, un peptide synthétique ou un peptide recombinant. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de culture de bactéries tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miR est le miR172c, en particulier, dans laquelle ledit 20 miR172c possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de culture de bactéries tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est le miPEP172c, en particulier, dans laquelle ledit miPEPl72c possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2. 25 En particulier, l'invention concerne un procédé de culture de bactéries tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite partie de plante est une racine ou un fragment de racines. Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé pour produire de l'inoculum de 30 bactéries, en particulier des bactéries de la famille des Rhizobiaceae, comprenant : - une étape de co-culture de bactéries avec une matière végétale vivante, dite plante hôte, correspondant au moins en partie, à une partie constitutive de racine d'une plante apte à former une symbiose avec lesdites bactéries, et 3034102 30 - une étape de mise en contact d'une quantité d'un peptide avec la susdite co-culture, ledit peptide ayant une séquence comprenant ou consistant en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante hôte, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le 5 transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante hôte. L'invention concerne également un procédé pour produire de l'inoculum de bactéries, en 10 particulier des bactéries de la famille des Rhizobiaceae, comprenant une étape de co-culture des bactéries avec une matière végétale vivante, dite plante hôte, correspondant au moins en partie, à une partie constitutive de racine d'une plante apte à former une symbiose avec lesdites bactéries, et ladite plante hôte étant une plante transgénique ou une plante dans laquelle a été introduit un 15 peptide, ledit peptide ayant une séquence comprenant ou consistant en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante hôte, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, 20 lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante hôte. L'invention concerne également un procédé pour produire de l'inoculum de bactéries, en particulier des bactéries de la famille des Rhizobiaceae, comprenant une étape de 25 mélange rassemblant : - des bactéries, - une matière végétale vivante, dite plante hôte, correspondant au moins en partie, à une partie constitutive de racine d'une plante apte à former une symbiose avec lesdits champignons, et 30 - un peptide, ledit peptide ayant une séquence comprenant ou consistant en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante hôte, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le 3034102 31 transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante hôte. 5 Dans un autre aspect, l'invention concerne un inoculum de bactéries, en particulier un inoculum de bactéries de la famille des Rhizobiaceae, adapté à l'inoculation d'une plante hôte, comprenant au moins une bactérie et un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans la plante hôte, ledit miPEP naturellement présent dans la plante hôte étant un peptide dont la séquence est 10 codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante hôte. De préférence, ledit miPEP est le miPEP172c. 15 Le peptide utilisé pour produire de l'inoculum, ou le peptide présent dans l'inoculum, est notamment un peptide isolé, un peptide isolé etiou purifié, un peptide synthétique ou un peptide recombinant. De préférence, l'inoculum contient en plus une plante ou une partie de plante, en particulier 20 une racine, une culture de racine ou une partie de racine. Les séquences du miPEP172c, de son cadre ouvert de lecture, du miRl72c et du transcrit primaire du miR172e chez Glycine max est indiqué dans le tableau 1. miRI72c GGAAUCUUGAUGAUGCUGCAG SEQ ID NO : 1 miPEP172c MWVLCLFCWPTYTHGS SEQ ID NO : 2 miORF172c ATGTGGGTCTTGTGTTTGTTTTGTTGGCCTA CATATACACATGGGAGTTGA SEQ ID NO : 3 pri-miR172c CACTCTCTCATCTCTACTTGACCACTCTCTC TATATATACACCACTAAACCCTTTCTTCGTT CTCAGTTATCTTCTTTCACTTCACTTAACCT AGCCTCCTTCCCATTCTGATTTGAGTTCTTG CTTTGCCTCTTAATTTTATTTTTCCTCTTAGC TTTCTTCGATCTTAACCTTTGAACAGTAATT GCTTGCTTTGTATACATTAATTACTATAGGT SEQ ID NO : 4 3034102 32 GGTACTTTGGCAGCTTTTCTATTGTATAGAG ACTTATCAGTGAATAATACTACTATGTGGGT CTTGTGTTTGTTTTGTTGGCCTACATATACA CATGGGAGTTGAGGAGCCTTTTAGGCCTTA GCCTTACATTAGTTGTCCCTCTTTCCTTGCCT TTACTTTTGCTTCATATATTGGATTTGATTA GATTTAGGGTTAGGGTTAGGGCTGTTCTATT CTCCTCCTCCTCCTTTTCTACTTCCTGATATG CTTCAATTCCTCCTCTCTCTCTCTCTCTCTTG AAGTTTTATGTTTTATGGCCAAGTGATCTTA ATGGTGGTAACACAGAGAGACCTAATGAAG TCCTAAATAAACTAAAGAAATCAGTCACTG TTTGCCGGTGGAGCATCATCAAGATTCACA AGCTTTAGGGGCATTAATTTGTTTGAGGTGG TTCCTTATTGCTCCAAAACCAATTAGCCCTT TTGCTATGGGAATCTTGATGATGCTGCAGC AGCAATAAATGACTAATACTACTACCAGAT ATTGCTTGAGGAGGATCTCACTACTACACA ACTGTGCTACAAGGCCAGGAGCAAAGGAG GTTATTTAATTAACTAAATAATTATGTTATT AATTTGTTTTCTAAATATTCAAGAAATTGGA TTAGGTAATTACCAAGTTACAAGCCACTTTT GGATTTACCTTTATTAACTCTAGTAGCTGAT AAAT Tableau 1. 5 10 15 3034102 33 5 10 Les pages 34 à 51 correspondent à des extraits de la demande de brevet 15 français n° FR 13/60727 déposée le 31 octobre 2013 pour « Mieropeptides et leur utilisation pour moduler l'expression de gènes » 20 25 30 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 34 L 'objet de la demande FR 13 60727 concerne des micropeptides (peptides codés par des microARNs ou « miPEPs ») et leur utilisation pour moduler l'expression de gènes. Les microARNs (miRs) sont des petits ARNs non codants, d'environ 21 nucléotides après 5 maturation, qui contrôlent l'expression de gènes cibles au niveau post-transcriptionnel, en dégradant 1 'ARNin cible ou en inhibant sa traduction. Les miRs sont rencontrés chez les plantes et les animaux. Les gènes cibles sont souvent des gènes clés de processus développementaux. Ils codent par 10 exemple des facteurs de transcription ou des protéines du protéasome. La régulation de l'expression des miRs est très peu connue, mais on sait notamment que celle-ci fait intervenir, à l'instar de la plupart des gènes codants, une ARN polymerase II: cette enzyme produit un transcrit primaire, appelé « pri-miR », qui est ensuite maturé par 15 un complexe protéique contenant notamment les enzymes type Dicer. Cette maturation conduit tout d'abord à la formation d'un précurseur de miR appelé « pre-miR », ayant une structure secondaire en forme tige-boucle contenant le miR et sa séquence miR * complémentaire. Puis le précurseur est maturé, ce qui conduit à la formation d'un ARN double brin plus court contenant le miR et le miR*. Le miR est ensuite pris en charge par le 20 complexe RISC qui clive l'ARNm du gène cible ou bien inhibe sa traduction. Par ailleurs, il a été montré que la présence d'introns dans le transcrit primaire du microARN augmente l'expression du microARN mature (Schwab et al., EMBO Rep., 14(7): 615-21, 2013). Cependant, du fait de difficultés expérimentales, les transcrits 25 primaires de microARNs, ou pri-miRs, sont très peu étudiés. Environ 50% des gènes eucaryotes possèdent, au sein de leur région 5 'UTR (5' UnTranslated Region) en amont de la séquence codante, de petits cadres ouverts de lecture. Ces petits cadres ouverts de lecture (ou « uORFs » pour upstream ORFs) peuvent jouer un 30 rôle de régulateur de la traduction, principalement en cis, en modulant la fixation et la vitesse des ribosomes sur l'ARNrn, mais également en trans selon un mécanisme encore inconnu, par l'intermédiaire de peptides codés par lesdits uORFs (Gambier et al., Gene Dev, 22:1549-1559, 2008). Par définition, les uORFS sont présents en amont de gènes codants. 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 Récemment, il a également été découvert de petits ORFs dans de longs ARN non codants intergéniques (lincRNAs) dont la fonction putative, si elle existe, n'est pas connue (Ingolia et al., Cell, 147(4):789-802, 2011; Guttman & Rinn, Nature, 482(7385): 339-46, 2012). 5 Toutefois, aucun exemple n'a encore été rapporté concernant l'existence d 'ORFs codant des peptides au sein de microARNs non codants. Jusqu'à présent, les microARNs, et par extension leur transcrit primaire, ont toujours été considérés, de par leur mode d'action particulier, comme des ARNs régulateurs non codants ne produisant aucun peptide. 10 L'un des aspects de l'objet de la demande FR 13 60727 est de proposer des peptides capables de moduler l'expression des microARNs. Un autre aspect de l'objet de la demande FR 13 60727 est de proposer un moyen permettant de moduler l'expression d'un ou plusieurs gènes cibles d'un microARN. L'objet de la demande FR 13 60727 présente l'avantage de permettre un contrôle plus facile 15 et plus efficace de l'expression de gènes ciblés par les microARNs, à l'aide d'un moyen autre que le microARN. L'objet de la demande FR 13 60727 concerne ainsi un procédé de détection et d'identification d'un micropeptide (miPEP) codé par une séquence nucléotidique contenue 20 dans la séquence du transcrit primaire d'un microARN, comprenant : - a) une étape de détection d'un cadre ouvert de lecture de 15 à 303 nucléotides contenu dans la séquence du transcrit primaire dudit microARN, puis - b) une étape de comparaison entre : 25 - l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN, en présence d'un peptide codé par une séquence nucléotidique identique ou dégénérée par rapport à celle dudit cadre ouvert de lecture, ledit peptide étant présent dans la cellule indépendamment de la transcription du transcrit primaire dudit microARN, et 30 - l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN, en absence dudit peptide, 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 36 dans lequel, une modulation de l'accumulation dudit microARN en présence dudit peptide par rapport à l'accumulation dudit microARN en absence dudit peptide indique l'existence d'un micropeptide codé par ledit cadre ouvert de lecture. 5 Dans une première étape, le procédé de détection et d'identification d'un micropeptide consiste donc à détecter sur le transcrit primaire d'un microARN l'existence d'un cadre ouvert de lecture codant potentiellement un peptide. La deuxième étape permet, quant à elle, de caractériser ledit peptide, c 'est-à-dire de 10 déterminer si ledit peptide correspond a un peptide réellement produit dans la cellule, en recherchant un effet dudit peptide sur l'accumulation dudit microARN Pour mettre en évidence un effet du peptide sur l'accumulation du microARN, une quantité importante de peptide est introduite dans une première cellule exprimant ledit microARN. 15 L'accumulation du microARN dans cette première cellule est ensuite mesurée et comparée avec l'accumulation du microARN dans une deuxième cellule identique à la première, mais ne contenant pas ledit peptide. L'observation d'une variation des quantités de microARN entre les cellules en présence et 20 en absence du peptide indique ainsi (i) qu'il existe un peptide codé sur le transcrit primaire dudit microARN, (ii) que la séquence de ce peptide est codée par le cadre ouvert de lecture identifié sur le transcrit primaire dudit microARN, et (iii) que ledit peptide agit sur l'accumulation dudit microARN. 25 L'objet de la demande FR 13 60727 repose donc sur la double observation inattendue faite par les Inventeurs que d'une part, il existe des cadres ouverts de lecture susceptibles de coder des micropeptides présents sur les transcrits primaires de microARNs, et d'autre part que lesdits micropeptides sont capables de moduler l'accumulation desdits microARNs. 30 Dans la demande FR 13 60727, les termes « microARN », « microARN non codant » et « miR » sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent des petites molécules d'ARN d'environ 21 nucléotides, qui ne sont pas traduites et ne conduisent pas à un peptide ou une protéine. 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 37 Cependant, sous cette forme mature, les rnicroARNs assurent une fonction de régulation de certains gènes via des mécanismes post-transcriptionnels, comme par exemple par l'intermédiaire du complexe RISC. 5 Le transcrit primaire du microARN ou « pri-miR » correspond lui à la molécule d'ARN directement obtenue à partir de la transcription de la molécule d'ADN Généralement, ce transcrit primaire subit une ou plusieurs modifications post-transcriptionnelles, qui entraînent par exemple une structure particulière de l'ARN ou un clivage de certaines parties de l'ARN par des phénomènes d'épissage, et qui conduisent à la forme précurseur 10 du microARN ou « pre-miR », puis à la forme mature du microARN ou « miR ». Les termes « micropeptides » et « miPEPs » (microRNA encoded PEPtides) sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent un peptide qui est codé par un cadre ouvert de lecture présent sur le transcrit primaire d'un microARN, et qui est capable de 15 moduler l'accumulation dudit microARN. Les micropeptides au sens de la demande FR 13 60727 ne doivent être entendus comme étant nécessairement des peptides de petite taille, dans la mesure où « micro » ne correspond pas à la taille du peptide. Compte tenu de la dégénérescence du code génétique, un même micropeptide peut être codé 20 par plusieurs séquences nucléotidiques. De telles séquences nucléotidiques, différentes entre elles d'au moins un nucléotide mais codant un même peptide, sont appelées « séquences dégénérées ». Les termes « cadre ouvert de lecture » ou « ORF » (open readingframe) sont équivalents et 25 peuvent être utilisés l'un pour l'autre. ils correspondent à une séquence de nucléotides dans une molécule d'ADN ou d'ARN pouvant potentiellement coder un peptide ou une protéine: ledit cadre ouvert de lecture débute par un codon start, suivi d'une série de codons, et se termine par un codon stop. Dans la demande FR 13 60727, les ORFs peuvent être dénommés de manière spécifique 30 « miORFs » lorsque ceux-ci sont présents sur les transcrits primaires de microARN. Dans la demande FR 13 60727, par « accumulation », on entend la production d'une molécule, telle qu'un microARN ou un micropeptide, dans la cellule. 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 38 Ainsi, la « modulation » de l'accumulation d'une molécule dans une cellule correspond à une modification de la quantité de cette molécule présente dans la cellule. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 5 détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumulation dudit microARN est une diminution ou une augmentation de l'accumulation dudit microARN, en particulier une augmentation. Une « diminution de l'accumulation » correspond à une baisse de la quantité de ladite 10 molécule dans la cellule. A l 'inverse, une « augmentation de l'accumulation » correspond à une hausse de la quantité de ladite molécule dans la cellule. Dans un mode de réalisation avantageux, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un 15 procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumulation dudit microARN est une augmentation de l'accumulation dudit rnicroARN. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 20 détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel la présence dudit peptide dans la cellule résulte : - de l'introduction dans la cellule d'un acide nucléique codant ledit peptide, ou - de l'introduction dans la cellule dudit peptide 25 De manière à caractériser un miPEP, il est nécessaire de disposer d'un modèle cellulaire exprimant un microARN et dans lequel ledit peptide à tester est présent. Pour cela, il est possible d'introduire un peptide dans la cellule, soit en mettant la cellule en contact avec le dit peptide, soit en introduisant dans la cellule un acide nucléique codant ledit peptide, lequel acide nucléique sera alors traduit en peptide à l'intérieur de la cellule. 30 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel le dit cadre 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 39 ouvert de lecture de l'étape a) est contenu dans la partie 5' ou 3' dudit transcrit primaire du microARN, de préférence dans la partie 5'. Les parties 5' ou 3' du transcrit primaire du microARN correspondent aux parties 5 terminales de la molécule de l'AM qui sont clivées au cours de la maturation du microARN Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit microARN est présent dans une cellule végétale sauvage. 10 Dans la demande FR 13 60727, une cellule végétale sauvage correspond à une cellule végétale qui n'a pas été modifiée génétiquement par l'homme. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 15 détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite cellule eucaryote déterminée, et ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b, sont des cellules végétales, de préférence des cellules de Medicago truncatula ou d'Arabidopsis thaliana. 20 Dans le procédé de détection et d'identification d'un micropeptide tel que défini ci-dessus, après avoir identifié un ORF susceptible de coder un peptide sur le transcrit primaire d'un microARN, il est nécessaire de disposer d'un modèle cellulaire possédant ledit microARN et ledit peptide, pour pouvoir démontrer un effet éventuel du peptide sur ledit microARN. 25 Deux options sont donc envisageables - le modèle cellulaire dans lequel a été identifié le miORF et celui dans lequel est mis en évidence l'effet du peptide sur le miR sont identiques, ou - le modèle cellulaire dans lequel a été identifié le miORF et celui dans lequel est mis en évidence l'effet du peptide sur le miR sont différents. 30 Dans la première option, le modèle cellulaire utilisé pour observer un effet du peptide est le même que celui dans lequel le transcrit primaire dudit microARN a été isolé. Dans ce modèle cellulaire, les cellules eucaryotes déterminées contiennent naturellement ledit microARN et 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 seul le peptide à tester doit être introduit dans ces cellules. Dans ce contexte, ledit microARN est qualifié « d'origine endogène » car celui-ci existe naturellement dans les cellules. Néanmoins, dans une cellule, d'autres copies d'un microARN d'origine endogène peuvent être ajoutées, comme par exemple en introduisant dans la cellule un vecteur codant ledit 5 microARN d'origine endogène. Dans la deuxième option, le modèle cellulaire utilisé pour observer un effet du peptide est différent de celui dans lequel le transcrit primaire dudit microARN a été isolé. Dans ce modèle cellulaire, les cellules eucaryotes déterminées ne contiennent ni le microARN, ni le 10 peptide à tester. Ces deux éléments doivent donc être introduits dans ces cellules. Dans ce contexte, ledit microARN est qualifié « d'origine exogène » car celui-ci n'existe pas naturellement dans les cellules. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 15 détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit microARN est d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b). Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 20 détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus dans lequel ledit microARN est d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b), lesdites cellules eucaryotes contenant un vecteur permettant l'expression dudit microARN 25 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en oeuvre une RT-PCR quantitative ou un Northern blot. 30 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en oeuvre une puce à ADN ou à ARN. 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 41 L'accumulation dudit microARN peut être déterminée à l'aide des techniques de biologie moléculaire permettant le dosage de molécules d'acides nucléiques spécifiques. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également un procédé 5 de détection et d'identification d'un microARN dont la séquence du transcrit primaire contient une séquence nucléotidique codant un miPEP, comprenant : - a) une étape de détection d'un cadre ouvert de lecture de 15 à 303 nucléotides contenu dans la séquence du transcrit primaire dudit microARN, puis 10 - b) une étape de comparaison entre : - l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN, en présence d'un peptide codé par une séquence nucléotidique identique ou dégénérée par rapport à celle dudit cadre ouvert de lecture, ledit peptide étant présent dans la 15 cellule indépendamment de la transcription du transcrit primaire dudit microARN, et - l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote, de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN, en absence dudit peptide, dans lequel, une modulation de l'accumulation dudit microARN en présence dudit peptide 20 par rapport à l'accumulation dudit microARN en absence dudit peptide indique l'existence d'un microARN dont le transcrit primaire contient une séquence nucléotidique codant un micropeptide. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 25 détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumulation dudit microARN est une diminution ou une augmentation de l'accumulation dudit microARN, en particulier une augmentation. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 30 détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel la présence dudit peptide dans la cellule résulte - de l'introduction dans la cellule d'un acide nucléique codant ledit peptide, ou - de l'introduction dans la cellule de ledit peptide. 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 42 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel le dit cadre 5 ouvert de lecture de l'étape a) est contenu dans la partie 5' ou 3' dudit transcrit primaire du microARN, de préférence dans la partie 5'. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit 10 microARN est présent dans une cellule végétale sauvage. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite cellule eucaryote, et ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote 15 déterminée, utilisées à l'étape b) sont des cellules végétales, de préférence des cellules de Medicago truncatula. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit 20 microARN est d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b). Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus dans lequel ledit 25 microARN est d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b), lesdites cellules eucaryotes contenant un vecteur permettant l'expression dudit microARN. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 30 détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en oeuvre une RT-PCR quantitative ou un Northern blot. 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 43 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en oeuvre une puce à ADN ou à ARN. 5 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel qu'obtenu par la mise en oeuvre du procédé tel que défini ci-dessus. Un autre aspect de l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également un miPEP de 4 10 à 100 acides aminés, de préférence de 4 à 40 acides aminés, codé par une séquence nucléotidique contenue dans le transcrit primaire d'un microARN, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote. Par ailleurs, il convient de noter que plusieurs miORFS peuvent être identifiés sur le 15 transcrit primaire d'un microARN, indiquant qu'un transcrit primaire de microARN peut potentiellement coder plusieurs miPEPs. Il convient également de noter que l'effet d'un miPEP est généralement spécifique d'un seul microARN, à savoir celui résultant du transcrit primaire codant ledit miPEP. 20 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel que défini ci-dessus, ladite séquence nucléotidique étant contenue dans la partie ou 3' dudit transcrit primaire d'un microARN, de préférence dans la partie 5'. 25 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel que défini ci-dessus, ladite séquence nucléotidique correspondant au premier cadre ouvert de lecture présent sur ledit transcrit primaire d'un microARN. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel 30 que défini ci-dessus, ledit miPEP possédant un point isoélectrique basique, de préférence supérieur à 8. 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 44 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une molécule d'acide nucléique codant un miPEP tel que défini ci-dessus. Dans autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un vecteur comprenant au 5 moins une molécule d'acide nucléique tel que définie ci-dessus. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également l'utilisation d'au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, 10 - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique, pour moduler l'expression d'au moins un gène dans une cellule eucaryote déterminée, ladite cellule eucaryote déterminée étant capable d'exprimer un microARN, dont le transcrit primaire contient au moins une séquence nucléotidique codant ledit au moins un miPEP et 15 dont l'accumulation est modulée par ledit au moins un miPEP, l'expression dudit au moins un gène étant régulée par ledit microARN. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également l'utilisation d'au moins : 20 - un miPEP de 4 à 100 acides aminés, de préférence de 4 à 40 acides aminés, codé par une séquence nucléotidique contenue dans le transcrit primaire d'un microARN, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou 25 - un vecteur contenant ledit acide nucléique, pour moduler l'expression d'au moins un gène dans une cellule eucaryote déterminée, ladite cellule eucaryote déterminée étant capable d'exprimer un microARN, dont le transcrit primaire contient au moins une séquence nucléotidique codant ledit au moins un miPEP et dont l'accumulation est modulée par ledit au moins un miPEP, 30 l'expression dudit au moins un gène étant régulée par ledit microARN. 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 L'objet de la demande FR 13 60727 repose sur l'observation surprenante faite par les Inventeurs qu'il est possible de moduler l'expression d'un ou plusieurs gènes cibles d'un même microARN en modulant l'accumulation dudit microARN à l'aide d'un miPEP. 5 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus dans laquelle ladite cellule eucaryote déterminée est une cellule végétale. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation telle 10 que définie ci-dessus dans laquelle ledit microARN et ledit gène sont d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote déterminée. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus dans laquelle ledit microARN et ledit gène sont d'origine exogène dans 15 ladite cellule eucaryote déterminée, ladite cellule eucaryote déterminée contenant au moins un vecteur permettant l'expression dudit microARN et dudit gène. Dans la demande FR 13 60727, les expressions « d'origine endogène » et « d'origine exogène » sont utilisées pour distinguer lesdits microARNs et/ou les gènes d'espèces 20 différentes, étant donné la conservation des séquences entre espèces. Ainsi, le terme « d'origine endogène » indique que le microARN et/ou le gène peuvent être présents de manière naturelle dans la cellule en question. De manière artificielle, d'autres copies du microARN et/ou du gène d'origine endogène peuvent néanmoins être ajoutées dans la cellule en question, comme par exemple par clonage. 25 A l'inverse, le terme « d'origine exogène » indique que le microARN et/ou le gène ne sont jamais présents naturellement dans la cellule en question. Il s'agit d'un microARN et/ou d'un gène identifié dans un autre type cellulaire ou dans un organisme d'une autre espèce, ce microARN et/ou ce gène sont donc nécessairement introduits artificiellement dans la cellule en question. 30 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 46 Dans la demande FR 13 60727, une cellule transformée génétiquement peut donc contenir 2 groupes de microARNs et/ou de gènes potentiellement proches en termes de séquence, l'un d'origine endogène et l'autre d'origine exogène. 5 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène régulée par un microARN dans une cellule eucaryote, comprenant la mise en oeuvre d'une étape d'accumulation d'un miPEP dans ladite cellule eucaryote, ledit miPEP ayant : 10 une taille de 4 à 100 acides aminés, de préférence 4 à 20 acides aminés, et une séquence peptidique identique à celle codée par une séquence nucléotidique contenue dans le transcrit primaire d'un microARN régulant l'expression dudit gène, et étant capable de moduler l'accumulation dudit microARN, 15 dans lequel, l'accumulation dudit miPEP dans ladite cellule eucaryote induit une modulation de l'expression dudit gène par rapport à l'expression dudit gène sans accumulation dudit miPEP. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 20 modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit miPEP dans la cellule résulte - de l'introduction dans la cellule d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - de l'introduction dans la cellule dudit miPEP. 25 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus dans lequel ladite cellule eucaryote est une cellule végétale. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de 30 modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus dans lequel ledit microARN et ledit gène sont d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote. 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 47 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus dans lequel ledit microARN et ledit gène sont d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote, ladite cellule eucaryote contenant au moins un vecteur permettant l'expression dudit microARN et dudit gène. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule eucaryote modifiée contenant un peptide identique à un miPEP tel que défini ci-dessus, lequel peptide est présent dans ladite cellule eucaryote indépendamment de la transcription du transcrit primaire du microARN portant la séquence nucléotidique codant ledit miPEP. Dans la demande FR 13 60727, le terme « cellule eucaryote modifiée » signifie que ladite cellule eucaryote contient un miPEP introduit artificiellement dans la cellule, que ce soit en tant que peptide, ou par l'intermédiaire d'un vecteur codant ledit miPEP. 15 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit microARN est d'origine endogène. Dans un autre mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule 20 eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus dans laquelle ledit microARN est d'origine exogène, ladite cellule eucaryote modifiée contenant un vecteur permettant l'expression dudit microARN. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule 25 eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus, ladite cellule étant une cellule végétale. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une plante comprenant au moins une cellule eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus. 30 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition comprenant au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou 5 10 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 48 - un vecteur contenant ledit acide nucléique. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition pesticide comprenant au moins : 5 - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition 10 phytopharmaceutique comprenant au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique. 15 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition élicitrice comprenant au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique. 20 Par « composition élicitrice », on désigne une composition capable de conférer à la plante une meilleure aptitude à la symbiose ou une meilleure résistance à différents stress, qu'ils soient de nature thermiques, hydriques ou chimiques. A cet effet, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également des compositions 25 agissant sur la croissance (inhibition de la croissance ou au contraire augmentation de la croissance) et la physiologie (meilleure aptitude à mycorhizer, noduler, meilleure tolérance à différents stress) de la plante. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition 30 herbicide comprenant au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou - un vecteur contenant ledit acide nucléique. 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 49 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition insecticide comprenant au moins : - un miPEP tel que défini ci-dessus, - un acide nucléique codant ledit miPEP, ou 5 - un vecteur contenant ledit acide nucléique. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant qu'herbicide pour éliminer les plantes ou ralentir leur croissance, de préférence en tant qu'herbicide spécifique d'une espèce ou d'un 10 genre de plantes. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant qu'agent phytopharmaceutique, - pour favoriser la croissance et/ou le développement des plantes, 15 notamment pour la modulation des paramètres physiologiques d'une plante, en particulier la biomasse, la surface foliaire, la floraison, le calibre du fruit, la production et/ou la sélection de semence végétales, en particulier pour contrôler la parthénocarpie ou la monoecie d'une plante, ou pour la modification des paramètres physiologiques de semences végétales, en particulier la germination, l'implantation racinaire et la résistance au stress 20 hydrique, - ou pour prévenir ou traiter les maladies des plantes, en particulier pour favoriser la résistance aux maladies infectieuses. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une 25 composition telle que définie ci-dessus, pour moduler les paramètres physiologiques d'une plante, en particulier la biomasse, la surface foliaire, ou le calibre du fruit. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour l'éclaircissage de vergers afin 30 d'augmenter le calibre des fruits. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour la production et/ou la sélection de 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 semences végétales, ladite composition étant utilisée pour contrôler la parthénocarpie ou la monoecie d'une plante. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation 5 d'une composition telle que définie ci-dessus, ladite composition étant administrée à ladite plante par la voie foliaire ou par la voie racinaire. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour la production et/ou la sélection de 10 semences végétales. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite composition est utilisée pour modifier les paramètres physiologiques desdites semences végétales, en particulier 15 l'implantation racinaire, la germination et la résistance au stress hydrique. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite composition est appliquée par enrobage ou pelliculage sur lesdites semences végétales. 20 Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant que pesticide, pour éliminer les organismes nuisibles des plantes ou susceptibles d'être classés comme tels, notamment en tant qu'insecticide, arachnicide, limacide ou rodonticide. 25 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant qu'insecticide. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour éliminer les insectes ravageurs. 30 Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour éliminer les espèces animales classées 3034102 Extraits de la demande FR 13 60727 51 nuisibles ou susceptibles d'être classées comme telles, en particulier les muridae, notamment le rat. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une 5 composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite composition est appliquée sur une plante pour la protéger d'insectes ravageurs. 3034102 52 Les figures et les exemples suivants illustreront mieux l'invention, sans pour autant en limiter sa portée. 5 LEGENDES DES FIGURES FIGURE 1. Effets d'un traitement avec le miPEP172c sur l'expression du miR172c chez Glycine max L'axe des ordonnées indique l'expression relative du rniR172e chez une plante contrôle 10 (colonne de gauche)) ou chez une plante arrosée avec le miPEP172c à 0,1 1.t1VI (colonne de droite). La barre d'erreur correspond à l'erreur standard à la moyenne (nombre d'individus = 9). FIGURE 2. Effets du miPEP172c sur le nombre de nodules chez Glycine max 15 L'axe des ordonnées indique le nombre de nodules par gramme de poids frais de racine de Glycine max traitée par un solvant (contrôle, barre de gauche) ou par un solvant contenant 0,1 uM de miPEP172c (miPEP172c, barre de droite). La barre d'erreur correspond à l'erreur standard à la moyenne (nombre d'individus = 9). Cette expérience a été répétée de manière indépendante et a abouti à des résultats similaires. 20 FIGURE 3. Effets du miPEP172e sur la concentration d'azote dans les parties aériennes chez Glycine max L'axe des ordonnées indique la concentration d'azote par poids sec de feuilles de Glycine max (en g/kg), traitée par un solvant (contrôle, barre de gauche) ou par un solvant contenant 25 0,1 uM de miPEP172c (miPEP172e, barre de droite). La barre d'erreur correspond à l'erreur standard à la moyenne (nombre d'individus - 9). FIGURE 4. Effets du miPEP172c sur le poids frais des gousses chez Glycine max L'axe des ordonnées indique le poids frais sec des gousses chez Glycine max (en g), traitée 30 par un solvant (contrôle, barre de gauche) ou par un solvant contenant 0,1 de miPEP172c (miPEP172c, barre de droite). La barre d'erreur correspond à l'erreur standard à la moyenne (nombre d'individus - 9). 3034102 53 EXEMPLES L'arrosage de plantes de soja (Glycine max) par de faibles concentrations de miPEP (0,1 ILLM) spécifique du miR172c augmente significativement le nombre de nodules (Figure 1) et 5 la teneur en azote de parties aériennes (Figure 2), ainsi que le poids frais des gousses (Figure 3). Matériel et méthodes 10 - Mesure de l'expression du miR172e chez Glycine max L'ARN total des racines de soja a été extrait en utilisant le kit d'extraction RNeasy Plant Mini Kit (Qiagen). La transcription inverse a été réalisée en utilisant la transcriptase inverse SuperScript 11 (Invitrogen) à partir de 500 lig d'ARN total. Trois répétitions (n=3) ont été réalisées avec deux répétitions techniques chacune. Chaque expérience a été répétée de deux 15 à trois fois. Les amplifications par qPCR ont été réalisées en utilisant un thermocycleur LightCycler 480 System (Roche Diagnostics) selon la méthode décrite dans Lauressergues et al. (Plant 72(3):512-22, 2012). - Germination des graines de G. max : 20 Après stérilisation des graines pendant 3 min dans de la javel dilué au 1/4, puis rinçage avec de l'eau stérile, les graines sont incubées 2 heures dans de l'eau. Enfin, les graines sont placées dans une boite de pétri avec du papier humide à 28°C. Une fois les graines germées elles sont placées dans un petit pot contenant du milieu oil dry® sous cloche. Après quelques jours de croissance, les plantes dont le développement est uniforme sont sélectionnées pour 25 l'expérience et transférées dans un pot plus grand. - Inoculation des plantules germées avec Bradirbizobium japonieum : Les bactéries sont mises en culture dans du milieu liquide Campbel (K2PO4 : 0,5g/1, MgSO4 7H20 : 0,2g/1, NaCl : 0,1g/1, Mannitol: 10g/I, Extrait de levure: 2,5g/l, Casamino acid: 0,5g/1) 30 (5 ml) à 28°C, puis transférées dans un Erlenmeyer contenant 100m1 de milieu Campbel. Après quelques jours de culture, lorsque la DO est 0,3 à 595 nm, les 100 ml de culture de B. japonictun ont été centrifugés pendant 30 min à 4000rpm. Le surnageant a été jeté et le culot resuspendu dans du milieu de culture « caisson » (Lullien et al., Plant gene expression in 3034102 54 effective and ineffective root nodules of alfalfa (Medicago saliva). Plant Mol Biol 9: 469478, 1987) pour atteindre la DO de 0,05 à 595 mn. Chaque plante est inoculée avec 20m1 de cette solution. Les plantes sont régulièrement arrosées avec du milieu « caisson ». 5 - Traitements des plantes avec les miPEP : Le traitement s'effectue par arrosage des plantes avec la solution concentrée de miPEP ou l'équivalent de solution de solvant pour le traitement contrôle. Les traitements sont réalisés tous les deux jours. REVENDICATIONS1. Utilisation d'un miPEP introduit par voie exogène dans une plante pour favoriser la nodulation, entre ladite plante et une bactérie, ledit miPEP étant également naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide comprenant, ou consistant, en une séquence identique à celle dudit miPEP naturellement présent, lequel miPEP naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante, la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent. 2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle ledit miARN est le miRl72c, en particulier, dans laquelle ledit miR172c possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1. 3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit miPEP est le miPEP172c, en particulier, dans laquelle ledit miPEP172c possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite plante est : - une plante légumineuse, notamment choisie parmi : le Lotus (Lotus sp.) le soja (Glycine max), l'arachide (Avachis hypogaea), le haricot (Phaseolus vulgaris), le pois (Pisum sativum), la lentille (Lens culinaris), le pois chiche (Cicer arietinum), la fève et la féverolle (Vicia faba), les vesces (Vicia sp.), les gesses (Lathyrus sp.), la luzerne (Medicago sp.), le trèfle (Trifolium sp.), le lupin (Lupinus sp.), le haricot mungo (Vigna FR 15 524671034102 56 radiata), la réglisse (Glycyrrhiza glabra), le palissandre (Dalbergia), le lotier corniculé (Lotus corniculatus), le sainfoin (Onobrychis viciifolia), le rooibos (Aspalathus linearis), le fenugrec (Trigonella foenum-graecum), ou - la betterave sucrée (Beta vulgaris). 5 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit champignon est une bactérie de la famille des Rhizobiaceae, notamment choisie parmi les genres Rhizobium, Sinorhizobium, Mesorhizobium, Bradyrhizobium ou Azorhizobium. 10 6. Procédé pour favoriser la nodulation entre une plante et une bactérie, comprenant une étape d'introduction d'un miPEP dans une plante par voie exogène, ledit miPEP étant également présent naturellement dans ladite plante, ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide de 3 à 100 acides aminés dont 15 la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP naturellement présent, laquelle séquence du miPEP naturellement présent est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante, 20 la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent. 7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel ledit miR est le miR172c, ledit miR172c 25 possédant en particulier une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1, ledit miPEP étant notamment le miPEP172c, ledit miPEP172c possédant en particulier une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2, ladite bactérie étant notamment une bactérie de la famille des Rhizobiaceae, ladite plante étant notamment une plante légumineuse. 30 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 7, pour favoriser la nodulation entre une plante Glycine max et une bactérie Bradirhizobium japonicum, dans lequel le FR 15524e1034102 57 miPEP172c est introduit par voie exogène dans ladite plante Glycine max, ledit miPEP172c étant également naturellement présent dans ladite plante Glycine max, ledit miPEP172c introduit par voie exogène étant un peptide comprenant ou consistant en une séquence identique à celle dudit miPEP172c naturellement présent, lequel 5 miPEP172c naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR172c, ledit miPEP172c étant capable de moduler l'accumulation dudit miR172c, lequel miR172c régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez 10 Glycine max, la somme de la quantité dudit miPEP172c introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP 1 72c naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP172c naturellement présent. 15 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, dans lequel ledit miPEP est introduit dans la plante : - par voie externe, de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou à l'aide d'un support en contact avec la plante, ledit miPEP étant notamment administré à la plante sous la forme d'une 20 composition comprenant 10-9 M à 10-4 M dudit miPEP, en particulier 10-9, 10-8, 10-7, 10- 6, 0-5 ou 104 M dudit miPEP, - par voie externe, de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou à l'aide d'un support en contact avec une graine ou une semence, ledit miPEP étant notamment administré à la graine ou à la 25 semence sous la forme d'une composition comprenant 10-9 M à 104 M dudit miPEP, en particulier 10-9, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 ou 10-4 M dudit miPEP, ou - par le biais d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante. 30 10. Procédé de production d'une plante transgénique comprenant: a) une étape d'introduction d'un acide nucléique codant un miPEP de 3 à 100 acides aminés dans une plante, ou dans au moins une cellule de ladite plante, dans des conditions permettant l'expression dudit miPEP, FR 15 52464034102 58 ledit miPEP étant également naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans la plante, lequel miR régule l'expression d'au 5 moins un gène impliqué dans la nodulation, et b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante transgénique, ledit miR étant notamment le miR172c, ledit miR172c possédant en particulier une 10 séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1, ledit miPEP étant notamment le miPEP172c, ledit miPEP172c possédant en particulier une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2. 11. Plante transgénique telle qu'obtenue par le procédé tel que défini selon la revendication 15 10. 12. Peptide ayant une séquence d'acides aminés présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2, de préférence ledit peptide comprenant ou consistant en SEQ ID NO : 2. 20 13. Composition phytosanitaire comprenant le miPEP172c en tant que substance active, ledit miPEP172c comprenant ou consistant de préférence en SEQ ID NO : 2, ledit miPEP172c étant notamment à une concentration de 10-9M à 10-4M, en particulier 10-9, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 ou 10-4M, 25 en particulier, ladite composition comprenant de plus un excipient, un diluant ou un solvant, en particulier, ladite composition étant formulée de façon à former un enrobé. 14. Composition comprenant en combinaison une quantité de semences d'une plante et une 30 quantité d'un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent chez ladite plante, ledit peptide ayant notamment une séquence comprenant ou consistant en une séquence identique à celle du miPEP172c, FR 15 52461034102 59 en particulier, ladite composition étant formulée de façon à former une semence enrobée. 15. Procédé de culture de bactéries, en particulier de bactéries de la famille des 5 Rhizobiaceae, comprenant une étape de mise en contact desdites bactéries avec : - un mélange comprenant une plante ou une partie de plante, en particulier une culture de racine, et un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de 10 lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante, ou - avec une plante transgénique telle que définie précédemment, la plante, la partie de plante, et la plante transgénique étant aptes à la nodulation avec 15 ladite bactérie. 16. Procédé pour produire de l'inoculum de bactéries, en particulier de l'inoculum de bactéries de la famille des Rhizobiaceae, comprenant : - une étape de co-culture de bactéries avec une matière végétale vivante, dite plante 20 hôte, correspondant au moins en partie, à une partie constitutive de racine d'une plante apte à former une nodulation avec lesdites bactéries, et - une étape de mise en contact d'une quantité d'un peptide avec la susdite co- culture, ledit peptide ayant une séquence comprenant ou consistant en une séquence identique à 25 celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante. 30 17. Inoculum de bactéries, en particulier un inoculum de bactéries de la famille des Rhizobiaceae, adapté à l'inoculation d'une plante hôte, comprenant au moins : une FR 15 52461034102 60 bactérie et un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans la plante hôte, ledit miPEP naturellement présent dans la plante hôte étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, 5 ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans la nodulation chez ladite plante hôte.