Brevet FR3031679A1 — publié le 20160722

La présente invention concerne en tant que produit industriel nouveau et utile, un extrait dérivé de la vigne comme agoniste du récepteur VDR et comme mimétique du récepteur VDR lié à son ligand. L'invention concerne un analogue singulier du calcitriol capable d'inhiber l'enzyme lipoxygénase de la cascade arachidonique. L'invention concerne également son procédé de préparation et son utilisation dans les compositions pharmaceutiques destinées à un usage en médecine humaine ou vétérinaire, ou bien également dans des compositions cosmétiques. L'extrait selon l'invention présente des propriétés de transactivation des éléments de réponse à la vitamine D, notamment l'amplification de la production de récepteurs spécifiques à la vitamine D appelés VDR. Cette propriété biologique analogue à la Vitamine D ou ses dérivés tels la vitamine D2 ou D3 et plus particulièrement la 1,25-dihydroxyvitamine D3, à savoir le calcitriol, résulte d'une activité agoniste sur le récepteur VDR. En effet, seul le ligand, calcitriol (ou ses analogues), lié au VDR forme un complexe apte à stimuler la synthèse de VDR. L'extrait selon l'invention par son activité agoniste sur le récepteur VDR agit sur ce paramètre comme un analogue à la vitamine D. La forme active de la vitamine D est un métabolite qualifié d'hormone sécostéroïde qui agit sur un récepteur spécifique, ce dernier se retrouve dans la majorité des tissus du corps humain. La vitamine D est une molécule lipophile apportée par l'alimentation à hauteur de 20% et synthétisée à 80% dans la peau sous l'induction de rayons ultraviolets B ([1] Holick M.F. et Al., 2007 ; [2] Adams JS et Al., 2010). La vitamine D, et plus précisément la vitamine D3 ou cholécalciférol subit ainsi deux hydroxylations successives, la première intervient dans le foie, elle conduit à former du calcifédiol (25-hydroxyvitamine D ou 25 OHD), la principale forme circulante de la vitamine D; et la seconde intervient dans les tissus dotés de 1-a-hydroxylase (principalement les cellules tubulaires rénales) au cours de laquelle le calcifédiol est a-hydroxylé en calcitriol (1,25 dihydroxyvitamine D ou 1, 25 OHD) qui est la forme active de la vitamine D. Le principal mode d'action de la 1, 25 OHD repose principalement sur la fixation au récepteur de la vitamine D (VDR). Historiquement, l'action endocrine de la vitamine D a d'abord été impliquée dans la régulation du métabolisme phosphocalcique ([3] Bischoff-Ferrari HA et Al., 2009 ; [4] Annweiler C. et Al., 2009). Des travaux récents ont permis d'élargir le champ d'intérêt de la vitamine D; une action « intracrine » a notamment été mise en évidence dans les organes qui regroupent de la 1-a-hydroxylase et du récepteur VDR (comme le système nerveux, les cellules de la paroi des vaisseaux sanguins, la peau, la prostate, les glandes mammaires, le côlon, le pancréas, ou encore les glandes parathyroïdes), la combinaison nécessaire et suffisante pour qu'un organe soit capable de synthétiser de manière autonome la forme active de la vitamine D de sorte à avoir une action très localisée ([5] Normann AW et Al., 2010). La forme active de la vitamine D3 contribue par son interaction avec les mécanismes de réparation de l'ADN, à combattre certaines maladies de la peau comme le psoriasis ([6] Mason AR et Al., 2009). La maturation de l'épiderme et la différenciation de ses strates cellulaires sont sous contrôle également de la forme active de la vitamine D3 ([6] Mason AR et Al., 2009), l'hyperprolifération des kératinocytes observée dans les cas de psoriasis est contrôlée et régulée par son action cellulaire ([7] Murphy G. et Al., 2011), les différenciations anormales sont également sous sa capacité de restauration ([8] Odland G.F.1991 ; [9] Freinkel R.K., 2001 ; [10] Bikle D.D., 2011). Les défenses immunitaires et le processus de cicatrisation sont renforcés par la forme active de la vitamine D3 ([11] Heilbom J.D. et Al., 2003). Plus récemment, des équipes de recherche ont publiés des travaux permettant de démontrer que la vitamine D et spécifiquement sa forme calcitriol et/ou ses analogues induisent une stimulation de l'expression et de l'activité de l'enzyme Lipoxygénase corrélée à une action pro-oxydante ([12] Somjem D. et Al., 2011). Cette activité spécifique de la vitamine D et de ses analogues, même si elle est parfois bénéfique, conduit à stimuler l'émission de radicaux libres et de ce fait peut présenter des effets secondaires néfastes, car les radicaux libres sont des molécules de stress qui peuvent détourner le métabolisme basal des cellules et les conduire dans les cas les plus extrêmes à l'apoptose. Un analogue de la vitamine D dépourvu de cet effet secondaire n'est pas décrit, ni répertorié, c'est en cela que l'extrait selon l'invention, analogue à la vitamine D, se singularise puisqu'il n'agit pas en tant qu'activateur de la Lipoxygénase, mais en tant qu'inhibiteur. L'inhibition de la lipoxygénase est une réponse anti-inflammatoire recherchée notamment lors des crises d'asthme et plus généralement lors de maux provoqués par la production de leucotriènes, à titre d'exemple et de manière non exhaustive en cas de rhinite allergique, mais aussi dans le syndrome de Widal, dans l'athérosclérose et dans diverses inflammations. Des analogues à la vitamine D sont connus dans l'art antérieur et sont commercialisés pour des applications pharmaceutiques notamment la Tacalcitol, le Calcitriol, le Calciprotriol, le Bétaméthasone dipropionate. Les analogues pharmaceutiques à la vitamine D sont souvent de synthèse (W00026167; EP1395538), ou dérivent des modèles biologiques extraits du récepteur VDR ou de la vitamine D (FR2801311 ; W09603994). Plus récemment, un extrait issu de la racine de chicorée présente, notamment, en application cosmétique, un effet analogue à la vitamine D (EP2662072). Ainsi à la connaissance de la demanderesse, il n'a jamais été décrit qu'un extrait issu de la vigne puisse être analogue à la vitamine D. Il n'a jamais été décrit non plus qu'un analogue à la vitamine D puisse être inhibiteur de l'enzyme Lipoxygénase. De manière non restrictive, l'objectif de la présente invention est principalement de proposer un principe actif issu de la vigne en tant qu'agoniste du récepteur VDR, et plus précisément un analogue de la forme active de la vitamine D3. L'action analogue de la forme active de la vitamine D, selon l'invention, vise notamment à stimuler la synthèse des récepteurs VDR. Un autre objectif de la présente invention est de proposer un principe actif issu de la vigne en tant que mimétique du complexe VDR-Calcitriol. Très récemment, une étude In Vitro basée sur un modèle de cellules endothéliales humaines confirme que la vitamine D possède une action antioxydante, mais aussi une action stimulatrice sur l'activité et l'expression des Sirtuines de type 1, en se liant à son récepteur VDR ([13] Polidoro L. et Al., 2013). Cette activation des Histones désacétylases de classe III et plus particulièrement de type I, à savoir l'enzyme Sirtuine 1 (Sirt 1), a bien été démontrée et décrite dans la publication de Beum Soo et Al en 2010 [14]. En présence de Calcitriol (forme active de la vitamine D) le récepteur VDR est ainsi capable de se lier et d'activer l'activité enzymatique des Sirt 1. La forme active de la vitamine D liée à son récepteur VDR régule la prolifération et la différenciation cellulaire. Cette forme active a également été identifiée comme agent chimiopréventif du cancer. De manière surprenante et inattendue, l'extrait selon l'invention, agoniste de la forme active de la vitamine D, est capable de produire la stimulation de l'activité enzymatique des Sirt 1. Cette découverte positionne l'extrait selon l'invention non seulement comme agoniste sur le récepteur VDR, mais aussi comme mimétique du complexe VDR-Calcitriol. Il est par conséquent envisageable d'employer l'extrait selon l'invention de manière adéquate par les Hommes de l'art afin de réguler la prolifération et la différenciation cellulaire et/ ou comme agent chimiopréventif du cancer. Encore une fois de manière non restrictive, l'objectif de la présente invention est principalement de proposer un principe actif issu de la vigne en tant qu'agoniste du récepteur VDR, et plus précisément en tant qu'analogue de la forme active de la vitamine D3, mais aussi en tant que mimétique du complexe Calcitriol- VDR. L'action mimétique de la forme active de la vitamine D liée à son récepteur VDR, selon l'invention, vise également à stimuler l'activité désacétylante des Histones désacétylases (HDACs) et notamment des Sirtuines de type I, enzymes anti-âge au niveau cellulaire, de manière similaire au couple Calcitriol-VDR. Ainsi, l'invention est destinée à être utilisée par les Hommes de l'art dans des formules et compositions visant à réguler la 303 16 79 5 prolifération et la différenciation cellulaire et/ ou comme agent chimio-préventif du cancer. Les extraits issus de la vigne sont connus dans l'art antérieur et parmi les principes actifs pour la cosmétique extraits de la vigne, on peut trouver des 5 extraits de sarments de vigne, de feuilles de vignes, de moues et autres sous-produits issus de la vinification (FR2804864) la plupart riches en polyphénols, notamment en Resvératrol, décrits pour leurs propriétés antivieillissement (FR2898493), utilisés en combinaison avec d'autres extraits ou agents actifs (FR2808682 ; FR2985906) ; ou huiles essentielles issues de la lie pour stimuler 10 la repousse des cheveux (EP0001860). D'autres extraits spécifiques issus de la vigne montrent une capacité à moduler la production d'endothéline à l'origine d'une action vasodilatatrice ou vasoconstrictrice (FR 2955771). A la connaissance de la demanderesse, il n'a jamais été décrit qu'un extrait issu 15 de la vigne puisse être un agoniste du récepteur VDR ou un mimétique du complexe Calcitriol-VDR. L'extrait selon l'invention est issu de la vigne, et plus particulièrement du jus de raisin fermenté communément appelé le vin, dans sa totalité n'ayant pas subi 20 d'opération de clarification et ou de filtration, c'est-à-dire contenant toujours après vinification, ses ferments alcooliques. Les pieds de décantation des cuves à vin et les lies pourront également être considérés comme matière première de la présente invention. 25 La présente invention vise spécifiquement l'utilisation d'un hydrolysat de jus de raisin vinifié contenant toujours ses ferments alcooliques et/ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification du jus de raisin et/ou un hydrolysat de lies à l'issue de la vinification du jus de raisin. L'un des objets principaux de l'invention est un hydrolysat de vin non clarifié, 30 non décanté et/ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, et/ou un hydrolysat de lie de vin qui s'utilise comme composition active ou comme principe actif dans les compositions pharmaceutiques destinées à un usage en médecine humaine ou vétérinaire, ou bien également dans des compositions cosmétiques, ledit principe actif et/ ou ladite composition étant destiné à agir de façon similaire à la vitamine D, et en particulier dans les cellules de l'épiderme pour un effet apaisant. Appliqués sur kératinocytes de la peau, le principe actif et/ ou la composition permettent notamment de stimuler la synthèse du récepteur à la vitamine D (VDR). L'activateur naturel de la VDR est la forme active de la vitamine D3, le calcitriol ([15] The Lancet Vol. 376, 2010). Le taux de VDR est un paramètre important dans la réponse biologique de la vitamine D. Plus il est élevé, plus l'expression des gènes cibles est élevée. Selon l'invention, l'utilisation sur kératinocytes cutanés d'un hydrolysat de vin non clarifié, non décanté et/ ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, et/ ou un hydrolysat de lie de vin comprenant au moins des oligopeptides permet de stimuler la synthèse de récepteurs spécifiques à la vitamine D, agissant ainsi de façon similaire à la forme active de la vitamine D3. S'il est admis, selon les travaux publié de Somjen et Al. (2011) [12], que la vitamine D et ses analogues induisent l'activation de la Lipoxygénase et de radicaux-libres, il est tout à fait singulier et surprenant de découvrir qu'un analogue à la vitamine D puisse non seulement éviter cette stimulation, mais au contraire inhiber l'activité de l'enzyme Lipoxygénase. Ainsi, l'invention vise également l'utilisation d'un hydrolysat de vin non clarifié, non décanté et/ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, et/ou un hydrolysat de lie de vin analogue à la vitamine D permettant d'éviter la stimulation de l'enzyme Lipoxygénase, mais au contraire d'inhiber la Lipoxygénase, enzyme clé de l'inflammation au niveau de la cascade arachidonique, comme composition active anti-inflammatoire ou apaisante ou comme principe actif anti-inflammatoire ou apaisant. L'invention vise également l'utilisation d'un hydrolysat de vin non clarifié, non 30 décanté et/ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, et/ou un hydrolysat de lie de vin mimétique du complexe Calcitriol-VDR ayant notamment la capacité de stimuler l'activité des Sirtuines de types I, enzymes clés anti-âges au niveau cellulaire. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l'invention vise l'utilisation d'un hydrolysat de vin non clarifié, non décanté et/ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, et/ou un hydrolysat de lie de vin analogue à la Vitamine D et mimétique du complexe Calcitriol-VDR tel que décrit suivant. Caractérisation de l'hvdrolvsat issu de la vigne selon l'invention : Profil spectrométrique : L'invention désigne un principe actif singulier constitué d'un hydrolysat de vin non clarifié, non décanté et/ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, et/ou un hydrolysat de lie de vin répondant à un profil Infra-15 rouge tel que suit : Dans le graphe ci-dessous l'hydrolysat selon l'invention est baptisé « VD3-like » 0,8 VD3like 0,6 o, o, 00 4000 35100 3000 2500 2000 1500 1000 Wavenumber (cm-1) Absorbance (A.U) Taux de Matières sèches : Le taux de matière sèche est obtenu par perte de masse à 100°C pendant une heure minimum jusqu'à obtention d'une masse constante. Selon cette méthode, le taux de matière sèche d'un principe actif selon l'invention est préférentiellement compris entre 10 et 20%, et préférentiellement entre 13 et 17%. PH: Le pH du principe actif selon l'invention est compris entre 4 et 5, et 10 préférentiellement entre 4,4 et 4,8. Densité : La densité d'un principe actif selon l'invention est comprise entre 1,020 et 1,200, et plus particulièrement entre 1,105 et 1,115. 15 Teneur en sucres totaux : Le dosage de la teneur en sucres totaux peut être réalisé par la méthode de DUBOIS (Dubois M. et Al., 1956), Analytical chemistry, 28, n°3 p. 350-356. En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs 20 donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. Selon cette méthode, la teneur en sucres totaux d'un principe actif selon l'invention peut être comprise entre 1 et 4%, préférentiellement entre 1,8% et 2,5%. 25 Teneur en Protéines : La teneur en azote totale est déterminée par la méthode de Bradford (Bradford, M. M. (1976) A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding. Anal. Biochem. 72:248-254). Cette méthode détermine la teneur en protéines selon 30 une approche colorimétrique basée sur le changement d'absorbance autour de 595 nm. Le changement de couleur est engendré par le bleu de Coomassie qui se complexifie avec les acides aminés basiques et les résidus hydrophobes des acides aminés constituants les protéines. Selon cette méthode, la teneur en protéines d'un principe actif selon l'invention est préférentiellement comprise entre 0,10 mg/mi et 1,00 mg/ml, et préférentiellement entre 0,15 et 0,40 mg/ml. Teneur en Composés phénoliques : Le dosage des polyphénols totaux par la méthode colorimétrique utilisant le réactif de Folin-Ciocalteu a été décrit en 1965 par Singleton et Rossi. Le réactif de Folin Ciocalteau est un acide de couleur jaune constitué par un mélange d'acide phosphotungstique (H3PVV12040) et d'acide phosphomolybdique (H3PM012040). Il est réduit, lors de l'oxydation des phénols, en un mélange d'oxydes bleus de tungstène et de molybdène (Ribereau, 1968). La coloration produite, dont l'absorption maximale se situe à 760nm, est proportionnelle à la quantité de polyphénols présents dans les extraits végétaux (Ghazi et Sahraoui, 2005). Une courbe étalon est réalisée dans cette expérience à partir de la catéchine. Selon cette méthode, la teneur en polyphénols (catéchine équivalents) d'un principe actif selon l'invention est préférentiellement comprise entre 0,20 mg/mi et 0,70 mg/ml, et préférentiellement entre 0,25 mg/mi et 0,45 mg/ml. L'invention se caractérise par un hydrolysat de vin non clarifié, non décanté et/ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, et/ou un hydrolysat de lie de vin comprenant notamment de 0,1 à 1 mg/m1 de peptides et oligopeptides, de 0,2 à 0,7% de polyphénols et de 1 à 4% de sucres, et porte également sur un mode de réalisation particulièrement adapté tel que décrit suivant. Procédé d'obtention : A partir de vin non clarifié, non décanté et/ ou à partir de pied de sédimentation de vin et/ ou à partir de lie de vin, le produit de départ est concentré par 30 décantation et/ou centrifugation, puis par évaporation de l'alcool puis de l'eau jusqu'à l'obtention d'une pâte concentrée contenant un taux de matière sèche compris entre 40 et 80%, et préférentiellement entre 45 et 60%. L'évaporation de l'alcool est préférentiellement réalisée sous vide avec un dispositif condenseur, puis l'évaporation de l'eau est réalisée de manière 5 préférentielle en étuve ventilée ou en réacteur sous vide à une température modérée n'excédant pas 60°C et préférentiellement autour de 45°C. Le taux de matière sèche est déterminé par la prise de masse avant et après, lors d'un passage à l'étuve ventilée à 100°C pendant 1 h d'un échantillon représentatif. Le principe actif selon l'invention tel que décrit précédemment est obtenu par un 10 procédé comprenant une étape d'hydrolyse à partir de la pâte concentrée décrite ci-dessus. Pour cette étape l'hydrolyse peut être enzymatique et se séquencer comme suit : Solubilisation de la pâte concentrée, telle que décrite plus haut, dans de 15 l'eau de sorte à obtenir une solution entre 5 et 20% de matière sèche, et préférentiellement entre 8 et 15% de matière sèche. Les enzymes protéolytiques ajoutées sont, sans restriction, à titre d'exemple et de préférence la Papaïne, la Bromélaïne, la Protéase d'Aspergillus sp, la Protéase de Bacillus sp. Une ou plusieurs de ces 20 protéases sans restriction sont ajoutées dans la proportion de 0,1 à 1 pg/g de matière sèche et préférentiellement de 0,2 à 0,6 pg/g de matière sèche. L'hydrolyse enzymatique de type protéolytique via protéases ou peptidases dure 5 à 6 heures, elle est conduite dans les conditions de 25 pH et de température optimale des enzymes choisies, à titre d'exemple avec la Papaïne, le pH est préférentiellement entre 6 et 6,5 pour une température préférentielle entre 50°C et 55°C; comme autre exemple avec la Bromélaïne, le pH est compris préférentiellement entre 4,5 et 5,5 et pour une température préférentielle comprise entre 40 °C et 55°C. 30 L'inactivation enzymatique soit par incorporation d'inhibiteur de protéase tel que par exemple « E64 protease inhibitor » (Sigma Aldrich) comme avec la Papaïne ou la protéase d'Aspergillus ou de Bacillus, ou par traitement thermique avec les protéases thermolabiles comme avec la Bromélaïne. - Décantation et/ou centrifugation, puis filtration, enfin isolement du filtrat - Le filtrat est stabilisé par éventuel ajout d'acide, notamment par éventuel ajout d'acide faible et en ce cas préférentiellement par de l'acide citrique ou de l'acide lactique ou de l'acide acétique ou leur combinaison de sorte à obtenir un pH compris entre 4 et 7, et préférentiellement entre 4 et 5; la stabilité microbiologique du filtrat est assurée par ajout d'un conservateur hydrosoluble compatible avec les applications cosmétiques tel que les agents bactériostatiques listés par exemple dans le règlement européen N° 1223/2009. Dans ce premier exemple d'hydrolyse, le filtrat stabilisé obtenu est, selon l'invention, qualifié d'hydrolysat de vin non clarifié, non décanté et/ou un 15 hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, et/ou un hydrolysat de lie de vin. Dans un second exemple d'hydrolyse, pour la réalisation de l'hydrolysat selon l'invention, l'hydrolyse peut être chimique notamment par voie alcaline, la pâte concentrée décrite plus haut est alors incorporée à une base forte qui peut être, 20 à titre d'exemple, une solution de soude, de potasse ou de chaux ou leur combinaison à 1 molaire dans le ratio 1 : 10 ou tout autre molarité dans un ratio adapté. Le mélange est alors mis en agitation lente dans un réacteur ou une cuve fermée à température ambiante durant 5 à 8 heures, et préférentiellement durant 6 à 7 heures. La réaction d'hydrolyse est stoppée par neutralisation de la 25 charge alcaline avec un acide fort qui peut être, entre autre, une solution d'acide chlorhydrique ou un acide faible qui peut être entre autre l'acide citrique. La neutralisation conduit à abaisser le pH global du mélange entre 4 et 7 et plus particulièrement en zone acide entre 4 et 5. L'extrait hydrolysé est alors filtré et stabilisé d'un point de vue microbiologique 30 par ajout d'un conservateur hydrosoluble compatible avec les applications cosmétiques tel que les agents bactériostatiques listés par exemple dans l'annexe V des substances autorisées en tant que conservateurs dans le règlement européen N° 1223/2009. Exemple de composition de l'hydrolysat selon l'invention : Ingrédients % Pâte concentrée selon l'invention 8,40 Hydroxyde de sodium 1 M 84,03 Acide Citrique 7,14 Benzoate de sodium 0,43 Total 100 Dans ce second exemple d'hydrolyse, l'extrait hydrolysé filtré stabilisé obtenu est, selon l'invention, qualifié d' hydrolysat de vin non clarifié, non décanté et/ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, et/ou un hydrolysat de lie de vin. L'hydrolysat selon l'invention a notamment pour but de moduler des voies métaboliques selon les activités biologiques suivantes : Description du potentiel d'activité biologique et/ou biochimique : L'hydrolat selon l'invention présente une action anti-oxydante selon le test In Tubo au DPPH (1,1-diphenyl 2-picrylhydrazyl). Ce composé 2,2-dipheny1-1- picrylhydrazyl (DPPH) est un radical stable qui présente une couleur caractéristique (violet). Il est sous forme oxydée. La réduction du radical par un donneur d'atome H (anti-oxydant - exemple : acide ascorbique) conduit au composé 2,2-dipheny1-1-picrylhydrazine incolore. Cette décoloration est mesurable par spectrophotométrie et estimée par absorbance à 490 nm et exprimée en Densité Optique (DO). Les points de mesures sont réalisés en triplicata et les résultats expriment la moyenne de ce triplicata, la significativité statistique des moyennes est évaluée par mesure des écart-types autour de la moyenne pour chaque triplicate, puis validée avec un seuil de tolérance pour la valeur de l'écart type inférieur à 10% de la valeur moyenne de DO (Valeur de Densité Optique) retenue. La DO retenue est calculée selon le principe suivant : La DO des hydrolats seuls sans DPPH est déduite de la DO observée en présence de DPPH de sorte à gommer l'impact de la couleur basale du produit à tester sur la DO. Echantillon Testé DO Moyenne 'Yo Anti-oxydant / acide ascorbique DPPH seul (Témoin -) 0,785 0 Acide Ascorbique 0,050 100 (Témoin + Hydrolysat selon 0,440 46,94 l'invention à 1% Hydrolysat selon 0,096 93,74 l'invention à 10 % Dosée à 1%, l'hydrolysat selon l'invention inhibe l'activité radicalaire de 46,94 %; Dosée à 10%, l'hydrolysat selon l'invention inhibe l'activité radicalaire de 93,74 %. Cette activité apparaît dose-reliée. L'hydrolysat selon l'invention présente In Vitro, sur un modèle de culture cellulaire de kératinocytes humains normaux, une action stimulatrice vis-à-vis de la production des récepteurs VDR spécifiques au calcitriol (forme active de la Vitamine D3) après 48H d'incubation. Les récepteurs protéiques VDR sont dosés par un kit ELISA, et les protéines totales sont calculées par la méthode de Bradford dans les lysats cellulaires. Les kératinocytes normaux en présence de l'hydrolysat selon l'invention ou en absence (témoin négatif ou 0% d'activation) sont lysés et les protéines dosées afin d'évaluer la modulation du ratio VDR/proté"ines totales. Système d'essai Les kératinocytes humains normaux sont isolés à partir de prépuces, les cellules sont mises en culture jusqu'à la confluence dans les puits de culture. Les produits à tester sont directement dilués dans le milieu de culture des kératinocytes, le témoin de référence est lui préalablement dilué dans du DMSO (50%VN) avant d'être dilué dans le milieu de culture des kératinocytes. Après 48 heures d'incubation, tous les puits de culture sont rincés, une solution conduisant à la lyse cellulaire, le tapis cellulaire est alors repris avec une solution d'élution. Les protéines totales des tapis cellulaires sont dosées selon la méthode colorimétrique de Bradford à partir d'une gamme étalon de BSA comprise entre 0 et 2000 pg/ml, les absorbances sont mesurées à 594 nm. Le dosage des VDR (Human Vitamin D Receptor) est réalisé à l'aide d'un kit ELISA spécifique. Les résultats sont donnés sous la forme de pourcentages qui expriment le taux de VDR excédentaire par rapport au taux basal. Le taux de VDR est lui-même proportionnel à la quantité de protéines totales. A partir des données en triplicata, la significativité statistique des différences observées entre les conditions « contrôle », c'est-à-dire « tapis cellulaires normaux en absence d'hydrolysat » et « tapis cellulaires en présence des hydrolysats » est évaluée par un test de Student (Student T test, p Système d'essai Une solution tamponnée de HDACs, contenant notamment des Sirtuines de Type I (extrait nucléaire de cellules « HeLa ») réagit avec un substrat pendant 20 minutes à 37°C et le transforme en un composé qui se colore en présence d'un développeur après incubation à 37°C pendant minutes. L'activité maximum de déacétylation des Sirtuines de type I peut ainsi être évaluée par mesure de l'absorbance à 405 nm. Les différentes concentrations de l'hydrolysat (produits à l'essai) selon l'invention ou le produit de référence « Inhibiteur » sont mis en contact 10 avec la solution de HDACs, contenant notamment des Sirtuines de Type I en même temps que le substrat de l'enzyme pendant 20 minutes à 37°C, le substrat transformé par l'enzyme est coloré par l'ajout d'un développeur. L'activité désacétylante des HDACSs et notamment des Sirtuines de type I en présence du principe actif selon l'invention est alors évaluée par mesure de l'absorbance à 405 nm. La modulation de cette activité est exprimée en pourcentage d'inhibition ou d'activation de l'activité basale des HDACs, contenant notamment des Sirtuines de Type I en absence d'actif, c'est-à-dire uniquement en présence du substrat des enzymes Sirtuines HDACs, contenant notamment des Sirtuines de Type I. Produit de référence Dans ce test, le produit de référence est un Inhibiteur à savoir le Trichostatin A (TSA) 1pM Evaluation des effets inhibiteurs ou activateurs A la fin de la période d'incubation, l'activité des enzymes HDACS et notamment des Sirtuines de type I avec et sans produit à l'essai ou de référence est révélée par coloration à l'aide d'une solution de développeur (10 minutes à 37°C) et évaluée par mesure de l'absorbance des milieux réactionnels à 405 nm (DO 405). Pour chaque concentration testée, la modulation de l'activité désacétylante des enzymes HDACs et notamment des Sirtuines de type I par le produit à l'essai est calculée selon la formule suivante : Pourcentage de modulation de l'activité des enzymes HDACs = 100 x RD0405 produit à l'essai ou de référence) - (D0405 HDACs)] D0405 HDACs Si le résultat est négatif, le pourcentage est exprimé en inhibition de la réaction enzymatique ; si le résultat est positif, le pourcentage est exprimé en activation de la réaction enzymatique. Les résultats sont donnés sous la forme de pourcentages d'activation ou d'inhibition des HDACs, notamment des Sirtuines de type I. A partir des données en triplicata, la significativité statistique des différences observées entre les conditions « contrôle », c'est-à-dire les témoins et « produit de référence » est évaluée par un test de Student (Student T test, p Echantillons Moyenne Moyenne-blanc % activité enzymatique T- 0,054 0,003 0,00 Blanc (tampon) 0,051 T 0,113 0,062 100,00 VD3-like 10% 0,136 0,097 156,45 VD3-like 1% 0,122 0,091 146,77 VD3-like 0,1% 0,101 0,061 98,39 T- [T-] TSA 1 pM (inhibiteur de référence) et [T] Activité basale de l'enzyme Dans ce modèle acellulaire In Tubo, dès la dose de 1% l'hydrolysat selon l'invention augmente l'activité désacétylase des HDACs et notamment des Sirtuines de type I de 46,77%; à la dose de 10% VD3-Like augmente l'activité 5 désacétylase des HADACs et notamment des Sirtuines de type I de 56,45%. L'hydrolysat selon l'invention s'apparente à un analogue de la vitamine D, de manière imprévisible et singulière, cet analogue présente In Tubo une action inhibitrice sur la Lipoxygénase. Cette enzyme agit au coeur de la cascade arachidonique, c'est une enzyme clé du processus inflammatoire. 10 Le but de cette étude est d'évaluer la modulation par l'hydrolysat selon l'invention de l'activité sur l'enzyme Lipoxygénase, dans un modèle In Vitro acellulaire. La Lipoxygénase est une enzyme clé du processus inflammatoire qui intervient en aval de la Phospholipase A2 en transformant l'acide arachidonique en Leucotriènes. 15 Système d'essai Une solution tamponnée de Lipoxygénase réagit avec un substrat spécifique (acide arachidonique) pendant 5 minutes sous agitation orbitale à environ 22°C et le transforme pour former un composé qui se 20 lie à un chromogène sous agitation orbitale et à température ambiante pendant 5 minutes à nouveau. L'activité de la Lipoxygénase peut ainsi être évaluée par mesure de l'absorbance à 490 nm. L'hydrolysat selon l'invention ou le produit de référence inhibiteur « Nordihydroguaiaretic acid» (NDGA) sont mis en contact avec la 25 solution de Lipoxygénase en même temps que le substrat de l'enzyme pendant 5 minutes à 22°C sous agitation orbitale, le substrat transformé par l'enzyme est coloré à l'aide d'un chromogène par agitation orbitale durant 5 minutes à température ambiante. L'activité de la Lipoxygénase en présence/absence de l'actif, ou du produit de référence est alors évaluée par mesure de l'absorbance à 490 nm. La modulation de cette activité est exprimée en pourcentage d'inhibition ou d'activation de l'activité de la Lipoxygénase en absence d'actif, c'est- à-dire uniquement en présence du substrat de l'enzyme (acide arachidonique). Produit de référence Dans ce test, le produit de référence est un Inhibiteur à savoir le Nordihydroguaiaretic acid (NDGA) 0,16 Mm, Evaluation des effets inhibiteurs ou activateurs A la fin de la période d'incubation, l'activité de l'enzyme Lipoxygénase avec et sans produit à l'essai ou de référence a été évaluée par mesure de l'absorbance (DO) des milieux réactionnels à 490 nm. Pour chaque concentration testée, la modulation de l'activité de l'enzyme Lipoxygénase par le produit à l'essai est calculée selon la formule suivante : Modulation de l'activité de l'enzyme Lipoxygénase = 100 x[(DO produit testé ou de référence) - (DO lipoxygénase seule)] DO lipoxygénase seule L'absorbance (DO) est mesurée à 490 nm dans ce test. Si le résultat est négatif, le pourcentage est exprimé en inhibition de l'enzyme ; si le résultat est positif, le pourcentage est exprimé en activation de l'enzyme. Les résultats sont donnés sous la forme de pourcentages d'activation ou d'inhibition de la Lipoxygénase. A partir des données en triplicata, la significativité statistique des différences observées entre les conditions « contrôle », c'est-à-dire les témoins et « produit de référence » est évaluée par un test de Student (Student T test, p Echantillons Moyenne % Inhibition BLANC 0,239 0 T+ 0,139 100 T- 0,124 VD3 0,1% 0,237 60,9 VD3 0,01% 0,237 58,6 VD3 0,001% 0,241 63,5 [r] Lipoxygénase seule avec son substrat (activité basale) [T- ]Lipoxygénase en présence de Nordihydroguaiaretic acid (NDGA) 0,16 mM (Inhibition max de référence) L'hydrolysat selon l'invention présente une action inhibitrice sur l'enzyme Lipoxygénase détectable et significative dès la dose de 0,001%. L'hydrolysat montre une activité fortement inhibitrice à faible concentration avec un effet plateau autour de 60% d'inhibition de l'activité enzymatique entre 0,1% et 0,001% (l'effet plateau supporte donc une dilution au 1/100). Selon un autre aspect, la présente invention couvre également les compositions, notamment les compositions cosmétiques et dermo-cosmétiques qui incluent un hydrolysat de vin non clarifié, non décanté et/ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, et/ou un hydrolysat de lie de vin comprenant notamment de 0,1 à 1 mg/mi de peptides et oligopeptides, de 0,2 à 0,7% de polyphénols et de 1 à 4% de sucres. Dans une quelconque composition cosmétique, dermo-cosmétique ou vétérinaire, on peut utiliser l'hydrolysat selon l'invention à l'état pur de 0,0001% à 100% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,001% à 10% du poids total de la composition. La préparation d'une composition incluant l'invention peut être sous toutes formes galéniques, adaptées aussi bien à une application topique sur la peau et/ou les muqueuses et/ou les cheveux. La composition incluant l'invention est une composition cosmétique, dermocosmétique ou vétérinaire car elle est destinée à améliorer l'aspect cutané 10 général de l'individu ou de l'animal qui en fait usage. Pour une administration par application topique sur la peau, les poils, les cheveux et/ou les muqueuses, la composition incluant l'invention comprend un support cosmétiquement acceptable, compatible avec la peau, les muqueuses, les ongles, les poils, les cheveux et peut se présenter sous toutes les formes 15 galéniques, notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile dans eau, d'une émulsion eau dans huile, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide. Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, 20 d'une mousse. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide, par exemple sous forme de stick. Des exemples de formulations, ci-dessous, permettent d'illustrer les 25 compositions incluant l'invention sans toutefois en limiter la portée. Exemple 1 : Formule cosmétique - Crème de soin visage NOM COMMERCIAL % NOM INCI HUILE DE TOURNESOL 10,00 Helianthus annuus seed oul HUILE DE DATTIER DU DESERT 5,00 Balanites roxburghii seed oul EXTRAIT CRAJIRU G 4,00 Glycerin & Arrabidaea chica leaf extract CUTINA GMS-SE 7,00 Glyceryl stearate SE GLYCERINE 3,00 Glycerin & Aqua LANETTE 0 OR 1,70 Cetearyl alcohol ALCOOL BENZYLIQUE 1,00 Benzyl alcohol GEOGARD ULTRA 1,00 Gluconolactone & Sodium benzoate & Calcium gluconate BEURRE DE KARITE 1,00 Butyrospermum parkii butter SENSITEAM ET 1,00 Alcohol & Lannea microcarpa fruit extract HYDROLYSAT SELON L'INVENTION 1,00 BIOXAN SFT 50 0,20 Tocopherol mixed CUTINA CBS 0,50 Glyceryl stearate & Cetearyl alcohol & Cetyl palmitate & Cocoglycerides PARFUM DOUCEUR NATCO 0809210 0,20 Parfum EXPRESSIONS PARFUMEES SATIAXANE UCX 911 0,20 Xanthan gum EAU QSP Aqua Exemple 2: Formule cosmétique - Crème corporelle hydratante NOM COMMERCIAL % NOM INCI HUILE DE TOURNESOL 10,00 Helianthus annuus seed oul CUTINA GMS-SE 6,00 Glyceryl stearate SE GLYCERINE 5,00 Glycerin & Aqua HUILE DE ROSIER MUSCAT 5,00 Rosa canina fruit oil EXTRAIT CRAJIRU G 4,00 Glycerin & Arrabidaea chica leaf extract LANETTE 0 OR 2,00 Cetearyl alcohol HYDROLYSAT SELON L'INVENTION 2,00 XYLIANCE 2,00 Cetearyl wheat straw glycosides & Cetearyl alcohol ALCOOL BENZYLIQUE 1,00 Benzyl alcohol GEOGARD ULTRA 1,00 Gluconolactone & Sodium benzoate & Calcium gluconate CIRE D'ABEILLE NATURELLE 1,00 Cera alba BEURRE DE KARITE BIO 1,00 Butyrospermum parkii butter* LEAFDERM ET 1,00 Alcohol & Aqua & Balanites aegyptiaca leaf extract PARFUM ENFANT EN SUCRE NATCO 0,20 Parfum 0808329 EXPRESSIONS PARFUMEES BIOXAN SFT50 0,20 Tocopherol mixed SATIAXANE UCX911 0,20 Xanthan gum ACIDE CITRIQUE MONOHYDRATE 0,01 Citric acid EAU OSMOSEE DYNAMYSEE QSP Aqua5 Exemple 3: Formule cosmétique - Crème raffermissante pour le buste NOM COMMERCIAL % NOM INCI EAU OSMOSEE 46,18 Aqua HUILE DE TOURNESOL RAFFINEE BIO 13,50 Helianthus annuus seed oil GLYCERINE NATURELLE 10,00 Glycerin & Aqua HTR1 8,50 Helianthus annuus seed oil & Protium heptaphyllum resin extract CUTINA GMS-SE 5,00 Glyceryl stearate SE EXTRAIT GLYCERINE BAOBAB 3,00 Glycerin & Adansonia digitata pulp extract HUILE DE DATTIER DU DESERT BIO 3,00 Balanites roxburghii seed oil* BIORCAL 2,50 Aqua & Calcium carbonate & Silica BEURRE DE KARITE BIO 2,00 Butyrospermum parkii butter* ALCOOL BENZYLIQUE 1,00 Benzyl alcohol GEOGARD ULTRA 1,00 Gluconolactone & Sodium benzoate & Calcium gluconate HYDROLYSAT SELON L'INVENTION 1,00 REVERTEAM ET 1 Alcohol & Aqua & Borojoa patinoi pulp extract ALCOOL ETHYLIQUE DE BLE 96°C BIO 0,92 Alcohol* AMINAT G 0,50 Glycerin & Ethyl lauroyl arginate HCI PARFUM COTON SENSUL NATCO 0,40 Parfum 0914128 SATIAXANE UCX911 0,30 Xanthan gum BIOXAN SFT50 0,20 Tocopherol mixed Exemple 4: Formule cosmétique - BB Crème - Crème teintante NOM COMMERCIAL % NOM INCI HUILE DE TOURNESOL RAFFINEE BIO 12,50 Helianthus annuus seed oil* GLYCERINE 10,00 Glycerin & Aqua CUTINA GMS-SE 5,00 Glyceryl stearate SE UNIPURE WHITE LC987 4,65 CI77891 HUILE DE DATTIER DU DESERT BIO 4,00 Balanites roxburghii seed oil* BIORCAL 2,50 Aqua & Calcium carbonate & Silica SATIAXANE UCX 911 0,25 Xanthan gum BEURRE DE KARITE BIO 2,00 Butyrospermum parkii butter* ALCOOL BENZYLIQUE 1,00 Benzyl alcohol HYDROLYSAT SELON L'INVENTION 1,00 COVAPEARL SATIN 931 0,60 CI77891 & Mica PARFUM ENFANT EN SUCRE 0,40 Parfum NATC0808329 BIOXAN SFT 50 0,20 Tocopherol mixed BENZOATE DE SODIUM 0,30 Sodium benzoate UNIPURE RED LC388 0,12 CI77491 UNIPURE YELLOW LC188 0,25 CI77492 ACIDE CITRIQUE MONOHYDRATE 0,045 Citric acid EAU QSP Aqua Exemple 4: Formule cosmétique - Eau démaquillante NOM COMMERCIAL % NOM INCI HYDROLYSAT SELON L'INVENTION 1,00 GLYCERINE 10.00 Glycerin PLANTACARE 2000 2.00 Decyl glucoside & Aqua BENZOATE DE SODIUM 0.30 Sodium benzoate GEOGARD ULTRA 1.00 Gluconolactone & Sodium benzoate & Calcium gluconate EAU 85.20 Aqua Exemple 5: Formule cosmétique - Sérum anti-âge NOM COMMERCIAL % NOM INCI ACIDE HYALURONIQUE L2MW 0.1 Sodium hyaluronate SENSITEAM Et 1 Alcohol & Lannea microcarpa fruit extract HYDROLYSAT SELON L'INVENTION 1,00 REVERTEAM ET 1 Alcohol & Aqua & Borojoa patinoi pulp extract BENZOATE DE SODIUM 0.3 Sodium benzoate GEOGARD ULTRA 1 Gluconolactone & Sodium benzoate & Calcium gluconate ALCOOL BENZYLIQUE 0.3 Benzyl alcohol ALGINATE DE SODIUM 0.4 Algin GOMME DE XANTHANE 0.6 Xanthan gum EAU QSP Aqua Exemple 6: Formule cosmétique - Gommage visage NOM COMMERCIAL % NOM INCI HUILE DE TOURNESOL RAFFINEE 6.00 Helianthus annuus seed oil HUILE DE DATTIER DU DESERT 5.00 Balanites roxburghii seed oi BEURRE DE KARITE 1.00 Butyrospermum parkii butter BENTONITE C 15.00 Bentonite FRAMETIME CXG 5 Bentonite & Xanthan gum & Sodium stearoyl glutamate & Citric acid GOMME DE XANTHANE 0.20 Xanthan gum HYDROLYSAT SELON L'INVENTION 1,00 GEOGARD ULTRA 1.00 Gluconolactone & Sodium benzoate & Calcium gluconate BENZOATE DE SODIUM 0.30 Sodium benzoate AE C8G 0.50 Capryloyl glycine ALCOOL BENZYLIQUE 0.35 Benzyl alcohol BIOXAN SFT50 0.1 Tocopherol (mixed) ACIDE SALICYLIQUE 0.1 Salicylic acid ABRICOT GREENEXFOLIATOR 1000 2.00 Prunus armeniaca seed powder ABRICOT BIOEXFOLIATOR 500 1.40 Prunus armeniaca seed powder EAU QSP Aqua Références Bibliographiques [1] Holick M.F. , N Engl J Med, 2007, 19:266 [2] Adams JS et Al., J Clin Endocrinol Metab, 2010, 95:471 5 [3] Bischoff-Ferrari HA et Al., Arch Intern Me, 2009, 23:551 [4] Annweiler C. et Al., Eur J Neurol 2009, 16:1083 [5] Normann AW et Al., Exp Biol Med 2010, 235:1034 [6] Mason AR et Al., Cochrane Database Syst Rev. 2009 [7] Murphy G. et Al., J Eur Acad Dermatol Venereo1.2011, 4:3 10 [8] Odland G.F.,1991, Structure of the skin. In: Goldsmith LA, ed. Physiology, biochemistry, and molecular biology of the skin. 2nd ed. Oxford University Press, New York [9] Freinkel R.K. et Al. , The biology of the skin . New York : Parthenon Pub. Group ; 2001 15 [10] Bikle D.D., Vitam Horm., 2011, 86 [11] Heilbom et al, J Invest Dernaatol 2003, 120:379-89 [12] Somjem D et Al., J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 2011, 123, 1-2, 85-89 [13] Polidoro L. et Al., J. Cardiovasc. Transi. Res., 2013, 6(2), 221-31 [14] Beum-Soo An et Al., Mol. Cell Biol., 2010, 4890-4900 20 [15] The Lancet Vol. 376, 2010 25 26 REVENDICATIONS1. Principe actif destiné à une utilisation dans une composition topique caractérisé en ce qu'il s'agit d'un extrait de vigne sous la forme d'hydrolysat de vin non clarifié, non décanté ou un hydrolysat de pieds de décantation à l'issue de la vinification, ou un hydrolysat de lie de vin comprenant notamment de 0,1 à 1 mg/mi de peptides et oligopeptides, de 0,2 à 0,7% de polyphénols et de 1 à 4% de sucres. 2. Procédé d'obtention du Principe actif selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes de concentration par décantation et/ou centrifugation d'un hydrolysat obtenu à partir de vin non clarifié, non décanté et/ou à partir de pied de sédimentation de vin et/ou à partir de lie de vin, puis par évaporation de l'alcool puis de l'eau jusqu'à l'obtention d'une pâte concentrée contenant un taux de matière sèche compris entre 40 et 80%, et préférentiellement entre 45 et 60%. 3. Procédé selon la revendication précédente caractérisé en ce qu'il comporte l'étape d'hydrolyse enzymatique par protéase ou peptidase telles que Papaine, Bromélaine, Protéase d'Aspergillus sp, Protéase de Bacillus sp ou d'un procédé d'hydrolyse alcaline pour produire un hydrolysat agoniste du récepteur VDR. 4. Composition d'application topique, caractérisée en ce qu'elle comprend un principe actif selon l'une des revendications 1 à 3 présent entre 0,0001% à 100% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,001% à 10% du poids total de la composition.