Brevet FR3016169A1 — publié le 20150710

Procédé de détection, identification et énumération de micro- organismes dans un support poreux imprégné à sec par un milieu réactionnel déshydraté La présente invention concerne, de façon générale, le domaine de l'analyse microbiologique. Plus particulièrement, elle porte sur un procédé de détection, identification et/ou énumération de micro-organismes dans un support poreux imprégné à sec dans toute son épaisseur par un milieu réactionnel déshydraté. Dans les domaines du diagnostic clinique et du contrôle microbiologique industriel agroalimentaire, pharmaceutique ou cosmétique, les milieux de culture gélifiés en boite de Petri, le plus souvent géloses, constituent depuis la fin du XIXème siècle un outil indispensable à la détection et à l'identification des micro-organismes pathogènes. Plusieurs produits ont été proposés commercialement pour remplacer un milieu de culture en boite de Petri. L'un d'eux, le système PetrifilmTM, comprenant des nutriments réhydratables, est très largement utilisé. Un autre système développé par la société Nissui Pharmaceutical, le Compact DryTM, consiste également en un milieu déshydraté. Ces milieux de culture ont pour avantage de se conserver plus longtemps qu'un milieu de culture gélose prêt à l'emploi. Ils peuvent également, comme le pétrifilmTM présenter un faible encombrement et ainsi utiliser un faible espace d'incubation. Ainsi, il y a schématiquement deux façons pour obtenir un milieu de culture réhydratable : La première consiste à apporter le milieu de culture sous une forme liquide dans le support puis à sécher l'ensemble. La seconde consiste à coller le milieu de culture sous forme déshydraté à un support, afin d'obtenir d'emblée un milieu de culture réhydratable. La première méthode, à savoir l'obtention de milieux nutritifs réhydratables fabriqués en incluant un phase d'imprégnation humide des nutriments, a fait l'objet de plusieurs demandes de brevets. Ainsi, la demande de brevet CN102337324, décrit un procédé dans lequel le bouillon nutritif est mélangé à un composant chimique dont l'évaporation est rapide. Plus récemment, la demande de brevet US20130089887, décrit un support, à savoir une fine membrane imprégnée de substrats chromogéniques et/ou fluorogéniques, mis en contact avec un milieu gélose. Néanmoins, cette méthode est à minima plus consommatrice d'eau, d'énergie et de place que la deuxième méthode et de surcroit elle peut impacter négativement la durée de conservation du milieu de culture réhydratable. En effet, la mise en suspension de certains produits fragiles, tels que les enzymes, substrats enzymatiques ou métaboliques, antibiotiques, peut impacter sévèrement leur stabilité globale. Le chauffage nécessaire au séchage du milieu de culture peut également dénaturer et rendre inefficaces les composants thermosensibles du milieu réactionnel. Cette méthode en phase aqueuse ne permet pas non plus de pouvoir maitriser et faire varier la localisation du milieu réactionnel et/ou des différents additifs nécessaires à la révélation bactérienne. Afin de pallier les inconvénients des milieux de cultures obtenus par cette méthode, la deuxième méthode propose de déposer directement sur le support la poudre nutritive sans phase antérieure de mise en solution de cette dernière. Ainsi, la société 3M propose un milieu nutritif déshydraté collé et déposé sur un film sans passer par une phase préalable de solubilisation du milieu. Ce dispositif est constitué de deux parties, un film inférieur et un film supérieur recouverts en surface par certains composants du milieu de culture deshydraté. Au moment de l'analyse, l'échantillon est déposé entre ces deux films. Ce dispositif et la méthode de détection associée, présentent plusieurs inconvénients. Tout d'abord, ce dispositif nécessite pour sa fabrication une étape d'adhésion des nutriments deshydratés sur les films qui ont dû être préalablement encollés. Ensuite, le milieu de culture ne peut pas former de facto une structure tridimensionnelle dont on peut faire varier la hauteur, et la concentration par strates puisqu'il est collé à un film. Seule, une faible couche superficielle de milieu est donc disponible. Le volume de l'échantillon liquide nécessaire à l'analyse microbiologique ne peut alors excéder 1 ou 2 ml ce qui impacte le seuil de sensibilité de détection. Ensuite, le packaging du petrifilmTM nécessite la fabrication conjointe du film inférieur et du film supérieur. Il ne permet pas non plus, d'avoir sur un même dispositif plusieurs milieux de cultures différents. De plus, ce dispositif reste limité dans ses applications et ne peut, par exemple, être utilisé en tant qu'écouvillonnages ou pansements. Et enfin, le PetrifilmTM nécessite obligatoirement l'aide d'un opérateur extérieur apportant l'échantillon aqueux. D'autre part, dans une demande de brevet antérieur FR1257047, la demanderesse propose une méthode d'isolement à partir d'un échantillon à analyser, sur un milieu de culture réhydratable in situ, qui permet d'obtenir, des colonies isolées. Ce milieu rehydratable est recouvert d'une membrane permettant la réalisation de l'isolement des colonies. Ainsi le milieu de culture reste stérile et les colonies se développent sur la membrane qui se trouve juste au dessus de lui. Or l'isolement de colonies sur un support gélose ou non, est parfois vu comme une contrainte et est souvent incompatible avec des expérimentations effectuées en dehors du laboratoire et/ou avec des personnes ayant peu de connaissance et de savoir-faire en microbiologie. Eu égard à la somme des problématiques développées supra, la présente invention propose un nouveau procédé de détection, identification et énumération de microorganismes susceptibles d'être compris dans un échantillon. Ainsi, un objectif de la présente invention est de fournir un dispositif comprenant un milieu deshydraté améliorant la sensibilité de détection. Un autre objectif de la présente invention est de fournir un procédé de détection, identification et énumération de micro-organismes sans recourir à l'isolement. Un autre objectif de la présente invention est de fournir un dispositif et un procédé permettant une multi détection, et ainsi obtenir à partir d'un même échantillon à analyser et sans réaliser d'isolement, des cultures isolées, identifiables, dénombrables sur différents milieux réactionnels présents sur un même dispositif L'invention a également comme objectif de fournir un dispositif et un procédé particulièrement flexibles. Le milieu réactionnel peut être un milieu plus ou moins complexe, chromogénique par exemple, ou très simple, c'est à dire contenant uniquement un nombre limité de substrats (antibiotiques, substrats métaboliques...). Le dispositif et le procédé peuvent également avoir des modalités d'utilisation très variées telles qu'un écouvillon ou un absorbant révélateur de contaminations microbiennes dans des pansements, des couches culottes, des conditionnements d'aliments. Un autre objectif de la présente invention est de fournir un dispositif dont l'utilisation est possible par des personnes ayant peu de savoir-faire en microbiologie. Ainsi le dispositif peut être rehydraté en une seule fois par l'opérateur au moment de l'analyse de l'échantillon. La réhydratation peut également être réalisée in situ sans l'aide de l'opérateur si notamment l'échantillon à tester est placé à proximité du milieu réactionnel réhydratable en permettant sa réhydratation progressive. L'échantillon à analyser peut par exemple être une plaie exsudative ou un morceau de viande et produire un liquide susceptible de contenir les micro-organismes à détecter. Un autre objectif de la présente invention est de fournir un dispositif qui sert lui même à la collecte de l'échantillon tels qu'un écouvillon. Un objectif de la présente invention est de fournir un dispositif dont la production et la commercialisation sont facilitées par le fait que le support poreux imprégné à sec par un milieu réactionnel est produit indépendamment de son packaging. Un autre objectif de la présente invention est de fournir un dispositif dans lequel un gradient de concentration des substrats réactionnels est effectué, permettant ainsi de limiter la quantité de ces substrats et de limiter le coût de production du dispositif D'autres objectifs apparaîtront à la lecture de la présente demande. La présente invention vise donc à atteindre tout ou partie des objectifs précités. En conséquence, la présente invention a pour objet un procédé de détection et/ou identification et/ou énumération, d'au moins un microorganisme cible dans un échantillon susceptible de le contenir, comprenant les étapes suivantes : (a) fournir un dispositif pour la détection et/ou l'identification et/ou l'énumération de microorganismes comprenant un support poreux imprégné à sec dans toute son épaisseur par un milieu réactionnel déshydraté, (b) mettre en contact un échantillon avec le support poreux, (c) incuber le dispositif, (d) détecter et/ou identifier et/ou énumérer la ou les colonies de microorganismes au sein du support poreux, lorsque les microorganismes recherchés sont présents dans l' échantillon. Selon l'invention, le dispositif est imprégné à sec dans toute son épaisseur par un milieu réactionnel déshydraté. L'incorporation de matériaux pulvérulents dans des supports poreux peut être effectué selon au moins quatre techniques : - utilisation d'une pompe à vide telle que décrite dans le brevet US 5,213,843; - La mise en vibration mécanique du support poreux lui-même sur lequel on a déposé la poudre par un système vibrant quelconque, les secousses permettant de faire pénétrer plus ou moins profondément la poudre; - l'utilisation d'un champs électrostatique; - La mise en vibration ultrasonore, simultanément avec l'application de la poudre, en utilisant un générateur Ultra Sons qui fait vibrer une sonotrode telle que decrit dans la demande de brevet FR 2866578. Lorsque le produit poreux défile sous la sonotrode, l'action de celle-ci met les particules de poudre en vibration, et celles-ci pénètrent alors dans les cavités du corps poreux. De façon préférentielle, le procédé de fabrication du support poreux imprégné à sec dans toute son épaisseur comprend une étape de mise en vibration des particules de poudre par un champ électrique. Préférentiellement, ce champ électrique est alternatif Le brevet EP 1.028.836 décrit l'imprégnation de textiles (non tissés, tissus...) en appliquant un champ électrique alternatif entre deux systèmes d'électrodes entre lesquels se trouve le textile recouvert de poudre. Les particules de poudre qui se chargent électriquement entrent en vibration à la fréquence du champ alternatif Ainsi, de façon surprenante, cette technique peut être utilisée pour imprégner à sec un support poreux avec un milieu réactionnel déshydraté. Les déplacements des particules permettent donc leur pénétration dans les porosités du support. Les particules ont pénétré en profondeur le support poreux, dans toute l'épaisseur du support. Ainsi, les zones du support imprégnées de milieu sont imprégnées dans toute l'épaisseur du support. Certaines zones définie latéralement sur le support peuvent être néanmoins exempte de tout milieu comme par exemple le pourtour du support. Le degré d'imprégnation des particules dans l'épaisseur du support peut être maitrisé, par exemple homogène, localisé ou en gradient, en fonction des caractéristiques des matières en présence (supports et poudres) mais aussi des caractéristiques du procédé mis en jeu (intensité du champ électrique, temps de traitement, fréquence....). Le support peut être imprégné de façon séquentielle dans le temps ce qui peut permettre une meilleure imprégnation. Ainsi, l'imprégnation de gélifiant peut avoir lieu préalablement à l'imprégnation de milieu réactionnel. L'imprégnation à sec d'un milieu deshydraté dans toute l'épaisseur d'un support poreux ne nécessite pas d'utilisation d'eau et permet une maitrise de la localisation des particules. De plus, elle permet une flexibilité dans l'épaisseur de la couche imprégnée en permettant de définir différentes zones dans l'épaisseur de quantité et natures différentes. De façon avantageuse un gradient de concentration des substrats réactionnels est effectué dans le support poreux, permettant ainsi de limiter la quantité de ces substrats et de limiter le coût de production du dispositif. Il peut être choisi également d'avoir un support poreux comprenant un type de substrat réparti de façon homogène et un autre type de substrat réparti en gradient. De façon avantageuse, le support est imprégné dans toute son épaisseur par un milieu nutritif et superficiellement par des substrats chromogènes. Ainsi, le support poreux peut comprendre différents milieux réactionnels. Ces milieux réactionnels sont localisés en différentes zones du support. Ces zones peuvent correspondre à des zones verticales et donc à l'épaisseur du support et/ou correspondre à des zones horizontales du support. En pratique, plusieurs paramètres peuvent influencer la mise en oeuvre de ce procédé comme principalement : - la texture du réseau de fibres ou de filaments, ou d'une manière générale du support poreux utilisé ; - les caractéristiques physico-chimiques des poudres telles que la nature ou la granulométrie de la poudre ; - la durée de traitement, l'intensité du champs électrique ainsi que la fréquence du champ électrique ; Il conviendra donc d'adapter ces paramètres afin de permettre une imprégnation à sec satisfaisante du milieu réactionnel dans le support poreux. Préférentiellement, la quantité de milieu réactionnel imprégné dans le support poreux est comprise entre 0.10mg/cm3 et 0.1g/cm3 de préférence entre 0.01g/cm3 et 0.09g/cm3, plus préférentiellement entre 0,03g/cm3 et 0,06g/cm3. Préférentiellement, lorsque le milieu réactionnel comprend un milieu de culture et éventuellement un milieu de révélation, la quantité de milieu réactionnel imprégné est comprise entre 0.01g/cm3 et 0.09g/cm3, plus préférentiellement entre 0,03g/cm3 g et 0,06 g/cm3. Préférentiellement, lorsque le milieu réactionnel comprend un milieu de révélation sans milieu de culture, la quantité de milieu réactionnel imprégné est beaucoup plus faible et est comprise entre comprise 0.10mg/cm3 et 10mg/cm3. Selon l'invention, le support poreux est mis en contact avec l'échantillon. Dans un mode de réalisation de l'invention, l'échantillon est aqueux et va permettre la réhydratation du milieu réactionnel compris dans le support poreux. Selon un autre mode de réalisation, un volume approprié de liquide est ajouté à l'échantillon et/ou au support poreux afin de réhydrater le milieu réactionnel, lorsque l'échantillon n'est pas aqueux ou insuffisamment aqueux. En pratique, l'homme du métier choisira le volume approprié de liquide ou de l'échantillon aqueux en fonction de sa viscosité, du diamètre du support poreux, ceci afin de réhydrater le milieu et permettre la croissance des micro-organismes. Avantageusement, la réhydratation du support poreux nécessite un volume de liquide ou d'échantillon aqueux supérieur à 2m1, préférentiellement supérieur à 3m1, encore préférentiellement supérieur à 4m1, ce qui permet d'améliorer la sensibilité de détection lorsque les microorganismes sont en faible concentration dans l'échantillon. Selon la présente invention, l'échantillon peut comprendre une étape préalable de préparation, concentration ou dilution de l'échantillon. Selon l'invention, la réhydratation du support peut être réalisée avec ou sans l'intervention d'un opérateur. L'échantillon aqueux peut être ajouté manuellement à l'aide d'une pipette ou automatiquement dans le dispositif. Il peut également être contenu dans au moins un réservoir intégré au dispositif et/ou des canaux permettant la réhydratation du support poreux. Il se répand alors dans le support par simple pression du réservoir. Avantageusement, l'échantillon est mis en contact avec le support poreux en le plaçant en dessous du support poreux. Ainsi, la réhydratation a lieu par la partie inférieure et/ou latérale, de préférence par la partie inférieure. Ce mode opératoire permet une hydratation homogène de tout le support poreux et évite, notamment, aux nutriments et/ou substrats d'être entrainés par le liquide ou l'échantillon aqueux, dans la partie inférieure du dispositif. Avantageusement, ce mode opératoire permet au procédé selon l'invention d'être effectué dans l'espace en solutionnant le problème lié à l'absence de gravité de l'échantillon et/ou du liquide. Dans un mode de réalisation, il n'y a pas d'intervention humaine et l'échantillon aqueux provient directement d'une zone productrice du liquide à tester. Il peut s'agir par exemple d'une plaie exsudative, de denrées alimentaires relarguant des liquides pendant leur stockage. L'échantillon, de par sa nature, va libérer une partie de ses liquides constitutifs qui vont au cours du temps imbiber le support poreux. La zone productrice de l' échantillon à tester peut également être une zone périnéale des humains ou animaux excrétant de l'urine. Le support poreux est alors mis à proximité de cette zone et est imprégné progressivement par l'échantillon aqueux produit. Dans un autre mode de réalisation, la mise en contact de l'échantillon avec le support poreux se fait par prélèvement de l'échantillon à l'aide du support poreux. Le support poreux est alors utilisé comme écouvillon et l'opérateur devra placer ce dernier dans un tube contenant la quantité adéquat de liquide si l'échantillon n'est pas aqueux ou insuffisamment aqueux. Le dispositif est ensuite incubé in situ (cas du pansements, de la couche culotte..) ou en incubateur durant un laps de temps suffisant pour permettre la détection des colonies microbiennes au sein de du support poreux. Selon un mode de réalisation préféré, le procédé selon l'invention est un procédé de détection qui peut être mis en oeuvre par lecture visuelle ou optique du support poreux. L'invention porte également sur un dispositif comprenant un support poreux imprégné à sec dans toute son épaisseur par un milieu réactionnel déshydraté permettant la révélation de colonies de microorganismes à l'intérieur dudit support, ledit support poreux étant calandré. Le support poreux a été imprégné à sec dans toute son épaisseur, c'est-à-dire en profondeur dans une zone du support définie latéralement c'est-à-dire horizontalement. Le support poreux a subi une opération de calandrage. Le calandrage, par la pression et la température de chauffe générées, permet la rétention et le maintien stable dans le temps du milieu réactionnel déshydraté dans le support poreux, en assurant la rétention des différents éléments tels que les éléments nutritifs dans le support poreux. Il permet également l'obtention d'une surface supérieure rigoureusement lisse et plane du support poreux. Préférentiellement le calandrage se fait à une température supérieure à la température ambiante, préférentiellement à une température comprise entre 30°C et 60°C. Une température inférieure à 60°C permet de ne pas dénaturer les composés thermolabiles. Le calandrage permet, outre l'accélération de la réhydratation du support poreux par rapport à support poreux non-calandré, une compression des fibres constituant le support poreux. Cette compression, associée à la présence du milieu déshydraté au sein du support poreux permet une rehydratation simultanée dans toutes les zones du support placées horizontalement et préserve ainsi la répartition choisie (homogène ou en gradient) des substances. Le calandrage permet ainsi de maintenir le milieu réactionnel à l'intérieur du support et sa manipulation aisée. De façon préférentielle, le dispositif comprend une couche supérieure protectrice. La couche protectrice est disposée sur le support poreux et aucune autre couche n'est disposée entre le support poreux et la couche protectrice. De préférence la couche protectrice est placée directement sur le support poreux. La couche protectrice peut être translucide ou transparente permettant la visibilité des colonies au travers de cette couche. Elle permet également d'éviter les contaminations au cours de l'incubation. Elle est imperméable aux bactéries et limite la perte de vapeur d'eau. En effet, le dispositif est incubé pendant un temps et à une température prédéterminés permettant la croissance des micro-organismes indépendamment des conditions d'humidité ambiante. Ainsi, la nature de la couche supérieure est choisie de façon à permettre les échanges gazeux nécessaires à la croissance des micro-organismes tout en permettant une hydratation locale. Préférentiellement, le dispositif comprend un réceptacle pour contenir l'échantillon aqueux et/ou le liquide. De préférence, le réceptacle comprend également le support poreux qui est alors préférentiellement réhydraté par sa partie inférieure. Avantageusement, le dispositif comprend une couche inférieure imperméable à l'eau. De préférence cette couche inferieure est rigide, permettant une meilleure prise au main du dispositif. Elle est fabriquée à partir de composés tels que le polyester, polypropylènes, polystyrène. De préférence, elle est fabriquée à partir de cellulose. Il peut s'agir de carton ou de papier associé à un film imperméable à l'eau. Elle peut contenir des canaux thermoformés qui serviront à la bonne réhydratation du support poreux. De façon avantageuse, les différentes couches du dispositif sont fabriqués à partir de matériaux recyclables. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la couche inférieure est translucide ou transparente. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, le dispositif comprend également un code d'identification tels que les code-barres ou les étiquettes RFID. Selon la présente invention, il est aussi possible d'associer au sein d'un même dispositif différents milieux réactionnels disposés les uns à côté des autres et qui seront réhydratés simultanément avec le même échantillon à tester. Dans un mode de réalisation, le dispositif comprend une tige à l'extrémité de laquelle le support poreux, imprégné à sec par un milieu réactionnel déshydraté, est fixé. La fixation peut être réalisée par tout moyen connu de l'homme du métier comme par exemple le collage ou encore thermosoudage. Le support poreux fixé à une tige peut ainsi jouer le rôle d'écouvillon. Avantageusement, le dispositif comprend également un tube transparent imperméable à l'eau pouvant recueillir l'écouvillon et un bouchon hermétique du tube. Après réalisation du prélèvement par l'écouvillon, celui-ci est placé dans le tube qui contient l'eau nécessaire à la réhydratation du support poreux placé à sa partie apicale. Le tube est ensuite bouché et incubé. Dans un autre mode de réalisation, le support poreux est intégré dans un pansement, un bandage, une couche culotte ou un emballage alimentaire. Préférentiellement, le dispositif comprend sous le support poreux une couche inferieure poreuse qui est mise en contact avec l'échantillon à analyser. Encore préférentiellement, le dispositif comprend également une couche supérieure imperméable transparente sur au moins un partie. L'invention concerne également l'utilisation d'un dispositif selon l'invention pour détecter et/ou identifier et/ou énumérer au moins un microorganisme cible dans un échantillon susceptible de le contenir. Avantageusement, l'invention concerne l'utilisation d'un dispositif comprenant une tige à l'extrémité de laquelle ledit support poreux est fixé, en tant qu'écouvillon. Dans un autre mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation d'un dispositif selon l'invention en tant que pansement. Suivant un autre mode de réalisation, l'invention concerne également l'utilisation d'un dispositif selon l'invention en tant que couche culotte. Encore dans un autre mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation d'un dispositif selon l'invention en tant que conditionnement de denrées alimentaires. On entend par échantillon une petite partie ou petite quantité séparée d'une entité par un acte soustractif dénommé habituellement prélèvement, à des fins d'analyse. L'échantillon peut être d'origine biologique, humaine, animale, végétale ou environnementale. Il peut concerner un produit au cours d'un process industriel ou un produit fini, par exemple alimentaire. Il peut donc correspondre à un prélèvement de fluide biologique (sang total, sérum, plasma, urine, liquide céphalo-rachidien, sécrétion organique), un prélèvement tissulaire ou des cellules isolées. Il peut être d'origine industrielle, soit, selon une liste non exhaustive un prélèvement d'air, un prélèvement d'eau, un prélèvement effectué sur une surface, une pièce ou un produit en cours de traitement ou manufacturé, un produit d'origine alimentaire. Parmi les échantillons d'origine alimentaire, on peut citer de façon non exhaustive un échantillon de produits lactés (yaourts, fromages...), de viande, de poisson, d'oeufs, de fruits, de légumes, d'eau, de boisson (lait, jus de fruits, soda, etc) et les produits constitutifs ou annexes du produit fini. Un échantillon alimentaire peut enfin être issu d'une alimentation destinée aux animaux, telle que notamment des farines animales. Ce prélèvement peut subir préalablement à son analyse une préparation de type enrichissement, extraction, concentration, purification, selon des méthodes connues de l'homme du métier. Au sens de la présente invention, le terme micro-organisme recouvre les bactéries à Gram positif ou Gram négatif, les levures, les moisissures, les amibes et plus généralement, les organismes unicellulaires, invisibles à l'oeil nu, qui peuvent être manipulés et multipliés en laboratoire. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, le micro-organisme est une bactérie, gram négative ou positive, ou une levure. A titre de bactéries Gram positives, on peut citer les bactéries des genres suivants : Enterococcus, Streptococcus, Lactobacillus, Bifidobacterium, Staphylococcus, Bacillus, Listeria, Clostridium, Mycobacteria, Nocardia, Corynebacteria, Micrococcus et Deinococcus. A titre de bactéries Gram négatives on peut citer les bactéries des genres suivants : 10 Salmonella, Escherichia coli et Pseudomonas. A titre de levures, on peut citer les levures des genres suivants : Candida, Cryptococcus, Saccharomyces et Trichosporon. A titre de moisissures, on peut citer les moisissures des genres suivants : Aspergillus, Penicillium , Cladosporium 15 On entend par support poreux, un volume à porosité adaptée, sous forme de tissus ou de non-tissé présentant un réseau fibreux ou filamenteux, de mousse à porosité ouverte. Il s'agit d'un support tridimensionnel dans lequel les particules du milieu réactionnel ont pénétré dans une zone donnée du support poreux dans toute son épaisseur. 20 Le support peut être à base de divers composés absorbants à très fort pouvoir de rétention d'eau tels que la viscose, rayonne, le coton, les fibres cellulosiques naturelles ou modifiées chimiquement comme la carboxy-méthyl cellulose, les polymères chimiques absorbants ou super-absorbants tels que sels de polyacrylate, copolymère acrylate/acrylamide. De façon préférentielle, le support poreux aura une masse 25 surfacique comprise entre 50g/m2 et 150g/m2, préférentiellement entre 90g/m2 et 110g/m2. Préférentiellement, le support poreux a une épaisseur de 0,5 à 2 mm, préférentiellement de 0,8 à 1,5mm. Le support poreux est apte à retenir un volume d'eau supérieur à 2m1, préférentiellement 30 supérieur à 3m1. Par milieu réactionnel, on entend un milieu comprenant tous les éléments nécessaires à la survie et/ou à la croissance des microorganismes. Ce milieu réactionnel peut soit servir uniquement de milieu de révélation, soit servir de milieu de culture et de révélation. Dans le premier cas, la culture des microorganismes a lieu préalablement, et, dans le second cas, le milieu réactionnel constitue également le milieu de culture. Ainsi, le milieu réactionnel du dispositif selon l'invention est un milieu de révélation et/ou un milieu de culture. On entend par milieu de révélation, tout milieu contenant une molécule capable de se coupler avec les micro-organismes ou les partenaires de liaison desdits micro- organismes et permettant, par leurs propriétés de transduction (fluorescence, coloration, radioactivité, etc.) de révéler la présence desdits micro-organismes. Cette révélation de la présence des micro-organismes cibles peut être notamment obtenue par visualisation (à l'oeil nu) ou lecture optique d'une coloration ou d'une fluorescence sur tout ou partie du support. On entend par milieu de culture, un milieu comprenant tous les éléments nécessaires à la survie et/ou à la croissance de micro-organismes. En pratique, l'homme du métier choisira le milieu de culture en fonction des micro-organismes cibles, selon des critères parfaitement connus et à la portée de cet homme de l'art. Le milieu réactionnel selon l'invention peut contenir d'éventuels additifs comme par exemple : des peptones, un ou plusieurs facteurs de croissance, des hydrates de carbone, un ou plusieurs agents sélectifs, des tampons, colorants, un ou plusieurs gélifiants, des hydrogels, agent visqueux, etc... Préférentiellement, le milieu réactionnel du dispositif selon l'invention comprend au moins un gélifiant dont la quantité est comprise entre lmg/cm2 et 2mg /cm2. L'agent gélifiant peut être choisi parmi les gélifiants bien connus de l'homme du métier tels que l'agar, l'agarose, les poloxamères, la gomme guar, le xanthane. Ainsi, le support poreux et les gélifiants permettent de limiter la diffusion des substrats et des micro-organismes et participent à la formation de colonies microbiennes isolées. Par «au moins un micro-organisme cible», l'on entend, au sens de la présente invention, au moins un micro-organisme que l'on souhaite détecter et/ou identifier et/ou dénombrer. Au sens de la présente invention, la définition de la « sensibilité de détection » est identique à celle communément admise dans l'état de la technique, à savoir la capacité à donner un résultat positif (apparition d'une réaction colorée et/ou fluorescente) lorsque la souche bactérienne cible est présente dans l'échantillon. 15 REVENDICATIONS1 Procédé de détection et/ou identification et/ou énumération, d'au moins un microorganisme cible dans un échantillon susceptible dé le contenir, comprenant les étapes suivantes : (a) fournir un dispositif pour la détection et/ou l'identification et/ou l'énumération de microorganismes comprenant un support poreux imprégné à sec dans toute son épaisseur par un milieu réactionnel déshydraté, (b) mettre en contact un échantillon avec le support poreux, (c) incuber le dispositif, (d) détecter et/ou identifier et/ou énumérer la ou les colonies de microorganismes ail sein du support poreux, lorsque les microorganismes recherchés sont présents dans l'échantillon. 2 Procédé selon la revendication 1 comprenant une étape préalable de préparation, dilution ou concentration de l'échantillon. 3 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, dans lequel l'étape b) est effectuée en plaçant l'échantillon en dessous du support poreux. 4 Procédé selon l'une quelconque des revendications lyou 2, dans lequel l'étape b) se fait par prélèvement de l'échantillon à l'aide du support poreux. 5 Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel, lorsque l'échantillon n'est 'pas aqueux ou insuffisamment aqueux, un volume approprié de liquide est ajouté à l'échantillon et/ou au support poreux afin de réhydrater le milieu réactionnel. 6 Dispositif comprenant un support poreux imprégné à sec dans toute son épaisseur par un milieu réactionnel déshydraté permettant la révélation de colonies de microorganismes à l'intérieur dudit support, ledit support poreux étant calandré. 7 Dispositif selon la revendication 6 dans lequel le milieu réactionnel est un milieu de révélation et/ou un milieu de culture. 8 Dispositif selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7 dans lequel le milieu réactionnel comprend au moins un gélifiant dont la quantité est comprise entre 1 mg/ cm2 et 2mg/ cm2. 9 Dispositif selon l'une quelconque des revendications 6 à 8 dans lequel la quantité de milieu réactionnel imprégné dans le support poreux est comprise entre 0.10mg/cm3 et 10 0.1g/cm3 de préférence entre 0.01 g/cm3 et 0.09 g/cm3. 10 Dispositif comprenant une pluralité de milieux réactionnels selon la revendication 6 à 9. 15 11 Dispositif selon l'une quelconque des revendications 6 à 10 dans lequel le support poreux est intégré dans un pansement, un bandage, une couche culotte ou un emballage alimentaire. 12 Dispositif selon l'une quelconque des revendications 6 à 10 comprenant une tige 20 à l'extrémité de laquelle ledit support poreux, est fixé. 13 Utilisation d'un dispositif selon l'une quelconque des revendications 6 à 12 pour détecter et/ou identifier et/ou énumérer au moins un microorganisme cible dans un échantillon susceptible de le contenir. 25 14 Utilisation d'un dispositif selon la revendication 11 intégré dans un pansement. 15 Utilisation d'un dispositif selon la revendication 11 intégré dans une couche culotte. 30 16 Utilisation d'un dispositif selon la revendication 11 intégré dans un conditionnement de denrées alimentaires.17 Utilisation d'un dispositif selon la revendication 12 intégré dans un écouvillon. 10 15 20 25 30