Brevet FR3015280A1 — publié le 20150626

PRINCIPE ACTIF A APPLICATION CUTANEE OBTENU A PARTIR DE RESEDA LUTEOLA ET UTILISATION COSMETIQUE La présente invention se rapporte à un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola, et à son utilisation cosmétique en particulier pour améliorer et/ou restaurer l'éclat du teint. L'invention concerne également les compositions cosmétiques incluant ce principe actif. Les conditions de vie actuelles font subir à l'organisme toutes sortes d'agressions permanentes auxquelles il est difficile de se soustraire de façon continue et efficace, tels que la pollution atmosphérique, les gaz d'échappement, l'air climatisé, le stress, l'alcool ou le tabac. Ces stress environnementaux agressent la peau qui perd peu à peu sa capacité de régénération cellulaire et de défense. Le vieillissement environnemental en particulier met en jeu des radicaux libres de diverses sources qui peuvent être endogènes (activation du métabolisme de l'acide arachidonique, activation de la phagocytose ou accumulation de métabolites réduits) ou exogènes (radiations, rayons UV, pollution de l'air, fumée de cigarettes, pesticides, etc.). Ces radicaux ont une durée de vie très courte, mais sont très réactifs. En faibles quantités, les radicaux libres oxygénés (ROS) induisent une stimulation de la prolifération cellulaire et une surexpression d'enzymes antioxydantes capables de réagir face au stress. Produits en quantité excessive, les ROS s'attaquent à toute une série de substrats biologiques, et les systèmes de défense des cellules sont alors submergés. Les ROS provoquent alors des dégâts cellulaires souvent irréversibles, intenses et ciblés, en particulier l'oxydation des protéines, des cassures de l'ADN et la peroxydation des lipides. L'oxydation des acides aminés conduit à la formation de groupements hydroxyles sur les chaînes latérales des protéines qui peut aboutir à la fragmentation des chaines polypeptidiques ou à des réticulations intra- ou inter-moléculaires. Dans le cas d'oxydations plus franches, des dérivés carbonylés sont générés par oxydation catalysée de certains acides aminés par des métaux ou par clivage des protéines. Ces molécules modifiées tendent à s'accumuler et à s'agréger dans l'épiderme, en particulier avec l'âge et les stress photo-induits. Or, la présence de protéines carbonylées au niveau de la couche cornée affecte les propriétés mécaniques de la peau et dégrade la fonction barrière. Des études récentes ont en outre démontré que la carbonylation des protéines participait à la modification de la structure fibreuse de la kératine et à l'altération des propriétés optiques du stratum corneum. Par ailleurs, lorsque les systèmes de détoxification cellulaire sont débordés sous l'effet de stress récurrents, les composés protéiques altérés non éliminés s'agglomèrent et s'amassent en agrégats puis s'associent avec des résidus de lipides peroxydés ou d'organelles altérées pour former la lipofuscine. Celle-ci, également appelée "âge" pigment, correspond à un matériel insoluble, non dégradable, de couleur jaune-brun, constitué essentiellement de protéines et de lipides. La lipofuscine est une conséquence du vieillissement, mais elle contribue également à son accélération par ses effets cytotoxiques. En effet, la lipofuscine catalyse et favorise sa propre formation en augmentant le taux de radicaux libres intracellulaire et en limitant la dégradation des protéines nouvellement oxydées. Elle entrave ainsi le bon fonctionnement de la cellule, réduit ses capacités de détoxification et conduit à de nouveaux dommages cellulaires. Elle se propage et encrasse progressivement l'espace intracellulaire pour entraîner la mort de la cellule. De plus, au niveau du tissu cutané, les dépôts de lipofuscine contribuent également à l'apparition des tâches de vieillissement. Ces différentes altérations se traduisent par des manifestations visibles au niveau de la peau notamment par un trouble de l'hydratation, une perte de la souplesse de la peau, l'apparition d'une rugosité de la peau et une altération de l'éclat du teint. La peau s'intoxique, devient terne, irrégulière et sèche. L'objectif de la présente invention est de proposer un principe actif cosmétique qui soit capable d'améliorer l'état de la peau, en particulier l'éclat du teint, notamment : - en renforçant la protection naturelle de la peau en augmentant la viabilité cellulaire et en diminuant la production des ROS des cellules cutanées, - en limitant la production de protéines carbonylées dans les cellules cutanées, - en limitant l'accumulation des agrégats de lipofuscine induits dans les cellules cutanées. Pour répondre à cet objectif, la présente invention vise l'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola, au sein d'une composition cosmétique à application cutanée destinée au traitement de la peau. Reseda luteola, également appelée le réséda des teinturiers, est une plante appartenant à la famille des Resedaceae. Il s'agit d'une plante bisannuelle, qui atteint 50cm à 1m de hauteur, à tige robuste et anguleuse, et à feuilles simples et oblongues-lancéolées. La floraison a lieu de mai à septembre. Les fleurs sont de couleur jaune verdâtre, et sont disposées en grappes spiciformes très longues, denses et raides. Ses graines sont noires et luisantes. La plante se développe sur les chemins, les berges des cours d'eau, les champs incultes, les murs et rochers. Elle est originaire du pourtour du bassin méditerranéen et d'Asie occidentale. Autrefois cultivée, elle est naturalisée dans certains pays. Aujourd'hui, le réséda est répandu en Europe centrale et méridionale, en Asie occidentale, en Afrique septentrionale, en Amérique du Nord et au Mexique. C'est une plante ornementale parfumée mais sa principale utilisation depuis le Moyen-âge est la production d'une teinture jaune d'or de grande qualité, à partir des tiges et des feuilles, cueillies avant floraison. Dans le domaine cosmétique et/ou dermo-pharmaceutique, cette plante a été utilisée pour ses capacités pigmentantes comme décrit dans la demande de brevet Japonais JP2003201208 Cette plante est aussi connue pour son action amincissante en combinaison avec d'autres plantes comme indiqué dans la demande de brevet français FR2786096. La publication Cassetti F, divulgue une efficacité anti-inflammatoire d'un extrait de Reseda luteola riche en lutéoline, qui est une molécule polyphénolique. - "Topical application of solubilized Reseda luteola reduces UVB-induced inflammation in vivo (2009) J Photochem Photobiol" - "A neutrophil multitarget functional bioassay to detect anti-inflammatory natural products (2002)J Nat Prod". De façon surprenante, selon l'invention, Reseda luteola présente des propriétés remarquables au niveau de la peau. En particulier, l'utilisation de Reseda luteola permet d'améliorer l'état de la peau, notamment de détoxifier la peau pour prévenir et/ou traiter une altération ou une perte de l'éclat du teint. Selon un avantage particulier, l'utilisation de Reseda luteola sur la peau, permet notamment de renforcer la protection naturelle de la peau en augmentant la viabilité cellulaire et diminuer la production des ROS des cellules cutanées, de limiter la production de protéines carbonylées dans les cellules cutanées, et de limiter l'accumulation des agrégats de lipofuscine induits dans les cellules cutanées. L'invention vise également les compositions cosmétiques comprenant un principe actif particulier obtenu à partir de Reseda luteola, ainsi qu'un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à prévenir et/ou traiter une altération ou une perte de l'éclat du teint, comprenant l'application topique d'une composition renfermant un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola . La présente invention est maintenant décrite en détail. Selon un premier aspect, l'invention vise donc l'utilisation dans une composition cosmétique destinée à une application topique sur la peau, d'un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola comme principe actif cosmétique pour améliorer l'état de la peau, en particulier : - pour détoxifier les cellules cutanées, et/ou - pour protéger les cellules cutanées des stress environnementaux, et/ou - pour améliorer et/ou restaurer l'éclat du teint de la peau. Appliqué sur la peau, un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola agit notamment : -en renforçant la protection naturelle de la peau, - en augmentant la viabilité cellulaire, - en diminuant la production de ROS, - en limitant la production de protéines carbonylées, - en limitant la formation d'agrégats de lipofuscine. Avantageusement, il permet d'améliorer l'état de la peau, notamment d'améliorer et/ou restaurer l'éclat du teint de la peau rendue terne et irrégulier par les agressions de l'environnement. Son utilisation sur la peau confère un teint lumineux, un grain de peau affiné et des traits du visage lissés, l'éclat des peaux intoxiquées et fatiguées est ravivé. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l'invention vise l'utilisation cosmétique d'un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola , tel que décrit en suivant. Le principe actif selon l'invention est un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola, comprenant des carbohydrates. Le principe actif selon l'invention comprend préférentiellement une teneur en carbohydrates d'au moins 20% du poids total de matière sèche, en particulier une teneur en carbohydrates comprise entre 20% et 80% du poids total de matière sèche, plus particulièrement 22% du poids total de matière sèche. Selon un mode de réalisation particulier, le principe actif est un hydrolysat de Reseda luteola. Par "hydrolysat" on entend tout extrait obtenu à partir de Reseda luteola, comprenant au moins une étape d'hydrolyse de Reseda luteola. Préférentiellement, il s'agit d'un hydrolysat enzymatique de Reseda luteola. Par "hydrolysat enzymatique" on entend tout extrait obtenu à partir de Reseda luteola, comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique de Reseda luteola. Selon un mode de réalisation adapté, le principe actif selon l'invention est obtenu à partir des parties aériennes de Reseda luteola. Le principe actif présente préférentiellement une couleur jaune. Il peut se présenter sous forme liquide limpide et peut être défini par au moins une des caractéristiques exposées ci-après, préférentiellement toutes. Matières sèches : Le taux de matières sèches d'un principe actif selon l'invention (mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant) peut être compris entre 10 et 60 g/I, préférentiellement entre 20 et 35 g/I. Mesure du pH : Le pH (mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante) peut être compris entre 3 et 5, préférentiellement entre 3 et 4. Détermination de la teneur en sucres totaux On utilise la méthode de DUBOIS. En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de carbohydrates d'un principe actif selon l'invention. Le taux de carbohydrates d'un principe actif selon l'invention mesuré par la méthode de DUBOIS est compris entre 28 et 40 g/I, préférentiellement entre 8 et 16 g/I. L'actif contient au moins 20% en poids de carbohydrates par rapport au poids total de matières sèches. Préférentiellement la teneur est comprise entre 20 et 80%. Caractérisation des carbohydrates L'analyse par HPLC d'un principe actif selon l'invention permet de déterminer la répartition des poids moléculaires de la fraction glucidique. Poids moléculaire (Da) Pourcentage de la fraction glucidique d'un principe actif selon l'invention (%) Monosaccharides La majorité des protéines a une masse molaire inférieure à 2 kDa. Préférentiellement plus de 90% des protéines a une masse molaire à 2 kDa. La concentration en protéines de masse molaire supérieure à 5 kDa est inférieure à 1.5 g/L. Teneur en cendres brutes : La teneur en cendres brutes est déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électrique (VULCAN®). La teneur en cendres brutes est déterminée en pourcentage de poids par rapport au poids total de la matière sèche du principe actif. Elle est comprise entre 10 et 35% en poids de matière sèche. Teneurs en Composés polyphénoliques Le dosage de composés polyphénoliques est réalisé par lecture de l'intensité de coloration en présence de ferricyanure de potassium, intensité détectable à 715 nm et comparée à une gamme étalon d'acide gallique. Le taux de polyphénols est inférieur à 1% de la matière sèche. Le principe actif selon l'invention ne contient qu'une très faible quantité de composés polyphénoliques, et donc très peu de flavonoïdes ou flavones. Le principe actif selon l'invention est obtenu par un procédé permettant de concentrer l'actif en termes de carbohydrates. Il est préférentiellement obtenu par un procédé comprenant une hydrolyse. Un procédé particulièrement adapté comprend au moins la succession des étapes suivantes : - solubilisation aqueuse de parties aériennes de Reseda luteola, - au moins une hydrolyse enzymatique, préférentiellement des carbohydrates en vue d'obtenir des oligosaccharides, - séparation des phases soluble et insoluble, - inactivation des activités enzymatiques par traitement thermique, - concentration de la phase soluble pour récupérer une fraction active comprenant des carbohydrates. Des étapes supplémentaires de filtration et filtration stérilisante peuvent être envisagées. Des étapes de désodorisation et de décoloration ou de concentration peuvent être ajoutées. Les paramètres des différentes étapes doivent être ajustés afin d'obtenir des principes actifs comprenant des oligosaccharides. Ces étapes sont usuelles dans le domaine des extractions d'actifs à partir de plantes, et l'homme du métier est à même d'en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales. La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola, dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Il peut s'agir de compositions comprenant entre 0,1 et 3% de principe(s) actif(s) obtenu(s) à partir de Reseda luteola selon la présente invention. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi : - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba ; - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ; - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ; - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ; - les filtres organiques, - les filtres inorganiques, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, - les séquestrants, - les parfums, - et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council). Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Ces compositions sont notamment destinées à favoriser à améliorer l'état de la peau, en particulier à prévenir et/ou traiter une altération et/ou une perte de l'éclat du teint. L'invention est à présent illustrée par des exemples et des résultats d'essais. EXEMPLES Un exemple non limitatif de procédé d'obtention, de principe actif obtenu à partir de Reseda luteola, est présenté en suivant, ainsi que des exemples de composition incluant un tel principe actif. Exemple 1 : procédé d'obtention du principe actif selon l'invention Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : - solubilisation des parties aériennes de Reseda luteola dans l'eau en milieu basique à raison de 20g/I, - hydrolyse enzymatique des carbohydrates, à l'aide d'au moins une ca rbohyd rase, - séparation des phases soluble et insoluble, - inactivation des activités enzymatiques par traitement thermique, - concentration de la phase soluble pour récupérer une fraction active comprenant des carbohydrates. Le principe actif obtenu présente les caractéristiques suivantes : - aspect : solution aqueuse limpide - couleur : jaune - teneur en matières sèches : 26,7g/I - teneur en sucres totaux : 11,3g/I, soit 42% de sucres par rapport à la matière sèche, - teneur en protéines de 16%, - teneur en cendres de 28% - teneur en polyphénols de 0,2% Exemple 2 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème de jour Phase A . Eau QSP 100% Glycérine 1% Phase B. DUB GMS AE (Stéarinerie DUBOIS) 1,3% DUB SEG (Stéarinerie DUBOIS) 1% Cetearyl alcool 1,3% DUB MCT 5545 (Stéarinerie DUBOIS) 6,2% Lanol 99 (Seppic) 4% Cetyl palmitate 0,8% Sophiderm MC30 (Sophim) 3,4% Huile de palme (Sictia) 1% Phase C. Principe actif selon l'invention (exemple 1 ) 3% Conservateur 0,7% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion onctueuse, fondante, blanche présente un pH de 5,5. En application topique sur la peau, elle présente une pénétration rapide avec un fini doux. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - mélanger B, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner B dans A sous rotor/stator à 1600 tours/min, - A 30°C, ajouter C, dans l'ordre indiqué, sous rotor/stator à 1500 tours/minute, et - laisser refroidir sous rotor/stator jusqu'à complète homogénéisation de l'émulsion. 30 Exemple 3 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème de nuit Phase A. Eau QSP 100 % Phase B. 11 5% DUB LAHE (Stéarinerie DUBOIS) DUB ZENOATE (Stéarinerie DUBOIS) 5% Montanov 202 (Seppic) 4% Montanov 14 (Seppic) 4% Montanov S (Seppic) 1% DUB 340 (Stéarinerie DUBOIS) 3% DUB Lilirose (Stéarinerie DUBOIS) 6% DUB PIS (Stéarinerie DUBOIS) 6% DUB PPH1 (Stéarinerie DUBOIS) 4% Phase C. Conservateur 0,7 % Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion compacte blanche présente un pH de 5,5. En application topique, elle présente une application douce, avec un fini sec et un effet filmogène. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - chauffer A au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - mélanger B, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner B dans A sous rotor sator à 3200 tours/min, - A 40°C, ajouter C, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 3000 tours/minute, - laisser refroidir sous agitation. Exemple 4 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une mousse couvrante Phase A. Eau QSP 100% Carbopol ETD2050 (Noveon) 0,7% Phase B. AAB2 (Aiglon) 2% Stéarine TP micronisée (Stéarinerie Dubois) 2% DUB GMS AE (Stéarinerie Dubois) 2% DUB RG AE (Stéarinerie Dubois) 2,7% DUB IPM (Stéarinerie Dubois) 3% Phase C. Conservateur 0,7% Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Phase D. Titanium dioxide 3,4% Kaolin 2% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel émulsionné, mousseux, blanc présente un pH de 5,8. En application topique, il présente un étalement confortable avec un fini cotonneux légèrement filmogène. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, chauffer au bain marie à 80°C, sous agitation mécanique en veillant à bien disperser le gel (environ 800 tours/minute), - mélanger B, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner B dans A sous rotor stator à 2200 tours/min, - ajouter C, aussitôt dans l'ordre indiqué sous rotor stator à 2200 tours/min, - laisser refroidir sous agitation, - mélanger la phase pulvérulente D à l'aide d'un mortier, - à 30°C, ajouter D, petit à petit et sous agitation mécanique à 2000 tours/min, en veillant à sa complète dispersion, - laisser la mousse obtenue sous agitation mécanique jusqu'à sa complète homogénéisation. Exemple 5 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un fluide régénérant Phase A. Eau QSP 100% Glycérine 4% Blanose 7M31CF (Hercules) 0,8% Phase B. DUB RG AE (Stéarinerie DUBOIS) 3% DUB PPH1 (Stéarinerie DUBOIS) 6,7% DUB MDIS (Stéarinerie DUBOIS) 6,7% DUB MCT5545 (Stéarinerie DUBOIS) 5,4% Phase C. Conservateur 0,7% Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel émulsionné, fluide, blanc présente un pH de 7,5. Il présente un étalement confortable, un fini doux et un effet hydraté. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, chauffer au bain marie à 80°C, sous agitation mécanique en veillant à bien disperser le gel (environ 1000 tours/minute), - mélanger B, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner B dans A sous rotor stator à 2500 tours/min, - à 30°C, ajouter C dans l'ordre toujours sous rotor sator à 2200 tours/min, - laisser refroidir sous agitation jusqu'à complète homogénéisation. Exemple 6 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une émulsion éclat du teint Phase A. Eau QSP 100% Phase B. Montanov 68 (Seppic) 2% Montanov 202 (Seppic) 3% Lanol 99 (Seppic) 5% Conservateur 0,7% Phase C. Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Phase D. Sepigel 305 (Seppic) 0,3% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion présente un pH de 6,8. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - chauffer A au bain marie à 80°C, - mélanger B, dans une marmite et chauffer au bain-marie à 80°C, - émulsionner A dans B sous rotor-stator entre 2000 et 5000 tours/minute, - à 50°C, ajouter C, puis D, toujours sous rotor stator, - laisser agiter jusqu'à complet refroidissement. EVALUATION DE L'EFFICACITE COSMETIQUE D'UN PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION A. Tests ex vivo A.I - Effet du principe actif issu de Reseda luteola sur l'activité anti-oxydante sur fibroblastes humains stressés. a. Effet sur la viabilité cellulaire suite à un stress chimique L'objectif de cette étude est de déterminer l'effet du principe actif selon l'invention sur la protection des fibroblastes exposés à un stress oxydatif H202. L'étude a été réalisée par la mesure de la viabilité cellulaire à l'aide d'une coloration au M.T.T. Le protocole opératoire de l'étude est le suivant : A JO, des fibroblastes humains sont ensemencés dans du milieu de culture adéquat. A J2, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu de culture contenant le principe actif de l'exemple 1 à 0.5% ou 1%. A J3, les cellules sont traitées avec une solution H202 pendant 1h en présence ou non du principe actif de l'exemple 1. A J4, l'étude de la viabilité cellulaire est réalisée par la mesure de coloration au M.T.T. (DO à 540nm). Le pourcentage de viabilité cellulaire est calculé selon la formule suivante : Fibroblastes stressés traités - Fibroblastes stressés témoins Pourcentage de viabilité cellulaire Fibroblastes normaux témoins- Fibroblastes stressés témoins Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 1 : Tableau 1 DO (UA) Viabilité cellulaire / fibroblastes stressés témoins (%) Fibroblastes non stressés Témoin 0.582 Principe actif de l'exemple 1 à 1% 0.529 Fibroblastes stressés Témoin 0.377 Principe actif de l'exemple 1 à 0.5% 0.478 +49% Principe actif de l'exemple 1 à 1% 0.511 +65% Après un stress H202, la viabilité cellulaire des fibroblastes humains est réduite. Dans les conditions de l'étude elle est réduite de 35%. De plus, on constate qu'un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola permet de maintenir la viabilité cellulaire des cellules cutanées. En particulier, testé à 1% sur fibroblastes humains stressés, le principe actif de l'exemple 1 maintient significativement la viabilité cellulaire à 65%. b. Effet sur la production des ROS suite à un stress chimique L'objectif de cette étude est de déterminer l'effet du principe actif selon l'invention (exemple 1) sur la protection cellulaire face à un stress oxydatif H202. Cette étude a été réalisée par quantification des ROS par cytométrie en flux sur fibroblastes humains normaux soumis à une agression H202. Le protocole opératoire est décrit en suivant. A J0, les fibroblastes humains sont ensemencés dans du milieu de culture adéquat. A J2, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu de culture contenant du principe actif de l'exemple là 0,5% et 1% (V/V). A J3, les cellules sont traitées avec une solution H202 en présence ou non du principe actif de l'exemple 1 0,5% et 1% (V/V). Après une heure, les cellules sont trypsinées puis incubées avec une sonde H2DCFDA. Une analyse par cytométrie de flux est ensuite réalisée. Le pourcentage de production des ROS est calculé selon la formule suivante : Pourcentage de production de ROS = Fibroblastes stressés traités - Fibroblastes stressés témoins Fibroblastes stressés témoins Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 2. Tableau 2 Moyenne d'intensité Production des ROS / fluorescence (UA) Fibroblastes stressés témoins (%) Fibroblastes non stressés Témoins 1,55 Extrait de Reseda luteola 1% 1,10 Fibroblastes stressés Témoins 8,62 Extrait de Reseda luteola 0,5% 4,64 -46% Extrait de Reseda luteola 1% 3,39 -61% Après un stress H202, la production de ROS est augmentée. Dans les conditions de l'étude en particulier, elle est augmentée de 456%. On constate qu'un principe actif issu de Reseda luteola diminue la production de ROS. Testé à 1% sur fibroblastes humains stressés, le principe actif de l'exemple 1 diminue la production 15 de ROS de 61%. A.II - Effet du principe actif issu de Reseda luteola sur l'activité détoxifiante sur fibroblastes humains stressés. a. Effet sur l'accumulation d'agrégats de lipofuscine suite à un stress chimique L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité du principe actif selon l'invention (exemple 1) à limiter la formation d'agrégats de lipofuscine qui altèrent le fonctionnement cellulaire. La lipofuscine est un composé autofluorescent non dégradable qui s'accumule progressivement lors de stress répétés ou avec l'âge. Son accumulation est associée à une réduction de la longévité cellulaire. L'étude a été réalisée par microscopie confocale sur des fibroblastes humains normaux soumis à des traitements modérés et répétés avec d'H202. Le protocole est décrit en suivant. A J0, les fibroblastes humains normaux sont ensemencés dans du milieu adéquat. A J3, J4, J5, J6, les cellules sont traitées : - Fibroblastes non stressés : Les fibroblastes humains sont cultivés dans du milieu adéquat en présence ou non du principe actif de l'exemple 1 à 1% (V/V) - Fibroblastes stressés - Témoins : Les fibroblastes humains sont cultivés dans du milieu adéquat puis traités avec une solution H202, 2 fois par jour. - Traités : Les fibroblastes humains sont cultivés dans du milieu adéquat en présence du principe actif de l'exemple 1 à 0,5% et 1% (V/V). Ils sont ensuite traités avec une solution H202 à 401.J.M pendant 2h, 2 fois par jour. A J11, la visualisation de la lipofuscine est réalisée sur microscope, couplé à un logiciel d'analyse d'images. La lipofuscine se matérialise par l'apparition de grains autofluorescents dans le cytoplasme des cellules. La quantité de lipofuscine est proportionnelle à l'intensité d'autofluorescence des cellules. Une analyse quantitative des images a été réalisée à l'aide du logiciel Matlab®. Les résultats sont exprimés en intensité de fluorescence / nombre de cellules (UA). Ils sont donnés dans le tableau 3 : Tableau 3 Formation de lipofuscine Efficacité / Fibroblastes (x103 UA) stressés témoins (%) Fibroblastes non stressés Témoin 391 Principe actif exemple 1 à 1% 323 Fibroblastes stressés Témoin 977 Principe actif exemple 1 à 0,5% 881 -10% Principe actif exemple 1 à 1% 725 -26% L'accumulation cytoplasmique des agrégats de lipofuscine est augmentée lorsque des fibroblastes humains normaux sont soumis à un stress H202 modéré et répété. Dans les conditions de l'étude elle est augmentée de 150%. On constate qu'un principe actif selon l'invention permet de réduire significativement l'accumulation de lipofuscine dans les cellules cutanées. En particulier, testé à 1% sur fibroblastes humains stressés, le principe actif de l'exemple 1 réduit l'accumulation de lipofuscine de 26%. b. Effet sur les protéines carbonylées Le but de cette étude est de quantifier ex vivo, sur des prélèvements réalisés sur volontaires, l'effet du principe actif de l'exemple 1 sur la formation de protéines oxydées sous l'action des UV artificiels. L'étude a été réalisée à partir de prélèvements de stratum corneum de volontaires sains, de sexe féminin présentant une peau normale au niveau des avant-bras. L'étude a été réalisée sur 6 volontaires sains de sexe féminin d'âge moyen de 31 ans. Les échantillons de stratum corneum ont été prélevés à l'aide d'adhésifs adaptés au niveau des avant-bras. Les prélèvements ont été mis en contact avec le principe actif de l'exemple 1 à 3% en solution aqueuse ou de l'eau distillée (véhicule) dans une boite de pétri pendant 24 H. Pour le principe actif de l'exemple 1 à tester, les prélèvements suivants ont été étudiés : - un prélèvement traité avec le principe actif, à 3% en solution aqueuse, soumis à une irradiation pendant 24H - un prélèvement traité avec le véhicule soumis à une irradiation pendant 24H - un prélèvement traité avec le principe actif, à 3% en solution aqueuse, et maintenu à l'abri de la lumière pendant 24H - un prélèvement traité avec le véhicule et maintenu à l'abri de la lumière pendant 24H. Chaque résultat est une moyenne de 6 prélèvements. Les échantillons ainsi préparés ont été soumis à une irradiation artificielle à l'aide d'un simulateur solaire permettant d'obtenir une quantité d'énergie supérieure à 500J/cm2. Les échantillons témoins, non irradiés, ont été maintenus à l'abri de la lumière. Les protéines oxydées ont été directement marquées à l'aide d'une solution de fluoresceine- 5-thiosemicarbazide (FTZ), marqueur spécifique des groupements carbonyles. Plus le taux de protéines oxydées de l'échantillon de stratum corneum est important et plus la fluorescence sera importante dans la longueur d'onde verte. La fluorescence de chaque échantillon est observée grâce à un microscope à fluorescence équipé d'une caméra CCD couplé à un logiciel d'analyse d'image. Une technique d'imagerie permettant de séparer les cornéocytes du fond de la plaque a été développée spécifiquement pour ce type d'images. A l'aide de 2 images exposées différemment au moment de la prise de vue et de leur histogramme, on quantifie uniquement l'information des cornéocytes. En effet, les valeurs du fond, qui biaisent le résultat dans une analyse classique où l'image entière est examinée, ne sont ainsi pas prises en compte. La valeur d'intensité de fluorescence était observée pour chaque pixel détecté, et exprimée en niveau de gris. La moyenne de ces valeurs ramenée à la surface mise en évidence, donne le résultat, exprimé en niveau de gris par pixel. La variation de la quantité de protéines oxydées créées sous l'influence de l'irradiation est calculée de la manière suivante : (VMExp - VM non exp) Variation Exp / non exp (%) - VM non exp Avec : VMExp : valeur moyenne de niveau de gris sur l'échantillon exposé VM non exp : valeur moyenne de niveau de gris sur l'échantillon non exposé Le pourcentage de variation observé sous l'effet d'un actif par rapport à un véhicule est calculé de la manière suivante : (VM actif - VM véhicule) 4 (%) - VM véhicule Avec : VM actif : valeur moyenne de niveau de gris mesurée sur l'échantillon traité par l'actif, VM véhicule : valeur moyenne de niveau de gris mesurée sur l'échantillon traité par le véhicule. Les résultats sont présentés dans le tableau 4. Tableau 4 Variation traité / non traité Principe actif de l'exemple 1 -71% Ces résultats montrent bien qu'un principe actif issu de Reseda luteola permet de limiter la quantité de protéines carbonylées engendrée par une irradiation UV. B. Tests ex vivo : Evaluation du principe actif sur l'effet sur l'éclat du teint L'objectif de cette étude était de quantifier in vivo, sur volontaires, l'influence du principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion (exemple 6) sur des paramètres cutanés impliqués dans la notion d'éclat du teint en comparaison à un placebo. L'effet de cet actif a été étudié selon les méthodes suivantes : - Une étude de l'effet lissant sur le microrelief cutané de la patte d'oie par projection de franges - Une évaluation visuelle de l'éclat du teint par un panel d'experts - Une évaluation subjective par les volontaires Les différentes méthodes ont été réalisées avant et après 28 jours d'applications biquotidiennes de l'actif et du placebo en hémi-visage. L'étude a été réalisée sur 20 volontaires sains, de sexe féminin, d'âge moyen 47 ans présentant un teint terne. Le protocole de l'étude est le suivant : Entre J-14 et JO, les volontaires appliquent deux fois par jour une crème placebo sur l'ensemble du visage. A JO : - on réalise des acquisitions de chaque patte d'oie par projection de franges et - on évalue l'éclat du teint. Entre JO et J27, on applique deux fois par jour la composition de l'exemple 6 et un placebo en hémi visage A J28 : - on réalise des acquisitions de chaque patte d'oie par projection de franges - on évalue l'éclat du teint, et - on récupère les questionnaires d'auto-évaluation. a. Evaluation de l'effet lissant sur le microrelief cutané de la patte d'oie Les acquisitions ont été réalisées à l'aide d'un appareil de projection de franges dédié à la mesure 3D du relief cutané. Ce système comprend un capteur de mesure associant un projecteur de franges lumineuses et une caméra CCD haute résolution reliée à un logiciel d'acquisition Optocat. Un système de repositionnement de la tête du volontaire selon les 3 axes de déplacement permet de retrouver la même zone de mesure aux différents temps de l'étude. L'effet du produit est mesuré sur une région d'intérêt découpée automatiquement sur l'acquisition originale. Le microrelief de la peau est étudié par deux paramètres de rugosité en 3D > Sa : moyenne arithmétique de rugosité de surface > Sq : moyenne quadratique de rugosité de surface Une diminution de ces différents paramètres est caractéristique d'un lissage du microrelief de la surface étudiée. Le pourcentage de variation observé sous l'effet du principe actif contre placebo est calculé de la manière suivante : (Pdt j28 - Pdt JO) - (PI J28 - Pl ,o) 4 (%) = X100 Pdt jo + (PI J28 - Pl Jo) Avec : Pdt,28: valeur moyenne du côté traité par l'actif, après 28 jours d'applications Pdt,0 : valeur moyenne du côté traité par l'actif à JO Pli28 : valeur moyenne du côté traité par le placebo, après 28 jours d'applications P1,0 : valeur moyenne du côté traité par le placebo à JO Un résumé des résultats correspondant à l'effet du principe actif selon l'invention testé comparé au placebo sur le microrelief cutané au niveau des pattes d'oie étudié par projection de franges, est présenté dans le tableau 5. Tableau 5 Variation / Placebo (%) Paramètre Sa -5.9% Paramètre Sq -5.7% Dans les conditions de cette étude, après 28 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, la formule contenant le principe actif obtenu à partir de Reseda luteola réduit la rugosité du relief cutané au niveau des pattes d'oie. La formule contenant le principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion (exemple 6) diminue le paramètre Sa de 5,9% (p=0,0036) ainsi que le paramètre Sq de 5,7% 15 (p=0,0066). b. Evaluation de l'éclat du teint L'évaluation de l'éclat du teint a été réalisée en aveugle par deux experts préalablement entraînés à juger différents paramètres représentatifs de l'éclat du teint. L'évaluation de l'éclat du teint se fait à partir d'échelles de scores (de 1 à 10) pour les 20 paramètres suivants : - le grain de peau, l'irrégularité de la surface cutanée est corrélée à l'aspect terne de la peau, - la transparence de la peau, qui permet d'apercevoir les veinules à travers la peau : plus la peau est fine, plus elle laisse passer la lumière ce qui donne un effet bonne 25 mine, - le rayonnement de la peau, caractéristique d'un teint éclatant : plus l'intensité des accroches de lumière sur les zones saillantes du visage est importante, plus la peau est lumineuse, - la couleur rose claire, qui permet de caractériser un teint éclatant : plus le teint est rosé, plus il est perçu comme frais. L'évaluation ces paramètres se fait sur les zones suivantes : pommettes, front, menton et yeux. Le pourcentage de variation observé sous l'effet du principe actif contre placebo est calculé de la manière suivante : (Pdt j28 - Pdt JO) - (PI J28 - Pl ,o) 4 (%) - X100 Pdt jo + (Pl j28 - Pl ,o) Avec : Pdt,28: valeur moyenne du côté traité par l'actif, après 28 jours d'applications Pdt,0 : valeur moyenne du côté traité par l'actif à JO Pli28 : valeur moyenne du côté traité par le placebo, après 28 jours d'applications P1,0 : valeur moyenne du côté traité par le placebo à JO Un résumé des résultats correspondant à l'effet du principe actif selon l'invention comparé au placebo sur l'éclat du teint évalué visuellement par expert, est présenté dans le tableau 6. Tableau 6 Variation / Placebo (%) Grain de peau +8,0% Transparence +10,4% Rayonnement +11,5% Couleur rose +10,2% Dans les conditions de cette étude, après 28 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, le principe actif selon l'invention favorise une amélioration des paramètres caractéristiques de l'éclat du teint. En effet : - le grain de peau est affiné (+8,0%), - la transparence de la peau est augmentée (+ 10,4%) ainsi que le rayonnement (+11,5%), donnant ainsi un effet bonne mine et une peau plus lumineuse, - le teint plus rosé et plus frais, mesuré par une augmentation du paramètre couleur rose (+10,2%). c. Evaluation subjective Les sensations ressenties par chacun des volontaires ayant utilisé le principe actif de l'exemple 1 formulé à 3% en émulsion (exemple 6) ainsi que la formule placebo pendant 28 jours d'applications biquotidiennes ont été évaluées à l'aide de questionnaires d'auto- évaluation. Le traitement des données de l'évaluation subjective est réalisé par cumul des réponses "plutôt d'accord" et "d'accord" est effectué. Les résultats des questions fermées correspondant à l'évaluation subjective du principe actif selon l'invention comparé au placebo après 28 jours d'applications biquotidiennes, sont présentés dans le tableau 7. Tableau 7 Cumul des réponses "plutôt d'accord" et "d'accord" (%) Côté traité par Côté traité par Placebo le principe actif selon l'invention Avec cette émulsion, ma peau paraît plus lumineuse 75% 95% Avec cette émulsion, mon 75% 95% teint est plus éclatant Avec cette émulsion, mon 75% 95% grain de peau est affiné Avec cette émulsion, mes 60% 85% rides et ridules sont lissées Avec cette émulsion, mon 45% 75% teint paraît plus frais (effet rosé sur les pommettes) Ces résultats montrent que : - 95% des volontaires trouvent que la formule contenant le principe actif issu de Reseda luteola rend la peau plus lumineuse et le teint plus éclatant, contre 75% pour le placebo, - 95% des volontaires trouve que la formule contenant le principe actif issu de Reseda luteola affine le grain de peau, contre 75% pour le placebo, - 85% des volontaires trouvent que la formule contenant le principe actif issu de Reseda luteola lisse les rides et ridules, contre 60% pour le placebo, - 75% des volontaires trouvent que leur teint paraît plus frais avec la formule contenant le principe actif issu de Reseda luteola, contre 45% pour le placebo. Dans les conditions de cette étude, après 28 jours d'applications biquotidiennes, et en comparaison au placebo, le principe actif selon l'invention permet donc : - de lisser le microrelief cutané de la patte d'oie, et - d'améliorer de façon significative les paramètres importants entrant en jeu dans la perception de l'éclat du teint. De plus, d'une manière générale, l'évaluation subjective a permis de mettre en évidence une efficacité supérieure du principe actif selon l'invention par rapport à la formule placebo. L'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola favorise ainsi l'amélioration des paramètres importants intervenants dans l'appréciation de l'éclat du teint. Ces différents essais montrent donc bien les effets cosmétiques d'un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola et d'une composition cosmétique l'incluant, sur la protection des cellules face à un stress, la détoxification des cellules, et visuellement, sur l'état de surface de la peau. REVENDICATIONS1. Principe actif cosmétique obtenu à partir de Reseda luteola comprenant au moins 20% de carbohydrates en poids par rapport au poids total de matières sèches. 2. Principe actif cosmétique obtenu à partir de Reseda luteola selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend entre 20 et 80% de carbohydrates en poids par rapport au poids total de matières sèches. 3. Principe actif cosmétique selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'une partie des carbohydrates se présente sous forme d'oligosaccharides. 4. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il comprend des protéines. 5. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat de Reseda luteola. 6. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat enzymatique de Reseda luteola . 7. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il se présente sous forme liquide et qu'il présente un taux de matières sèches compris entre 10 et 60g/I. 8. Principe actif cosmétique selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il se présente sous forme liquide et qu'il présente un taux de matières sèches compris entre 20 et 35g/I. 9. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il comprend une quantité de composés polyphénoliques inférieure à 1% de la matière sèche. 10. Utilisation dans une composition cosmétique destinée à une application topique sur la peau, d'un principe actif selon l'une des revendications 1 à 9, comme principe actif cosmétique pour améliorer l'état de la peau. 11. Utilisation dans une composition cosmétique destinée à une application topique sur la peau, d'un principe actif obtenu à partir de Reseda luteola comme principe actif cosmétique détoxifiant des cellules cutanées. 12. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que le principe actif est un principe actif selon l'une des revendications 1 à 9. 13. Utilisation selon l'une des revendications 10 à 12, caractérisée en ce que le principe cosmétique est destiné à limiter l'accumulation des agrégats de lipofuscine dans les cellules cutanées. 14. Utilisation selon l'une des revendications 10 à 13, caractérisée en ce que le principe actif cosmétique est destiné à limiter la production de protéines carbonylées dans les cellules cutanées. 15. Utilisation selon l'une des revendications 10 à 14, caractérisée en ce que le principe actif cosmétique est destiné à renforcer la protection naturelle de la peau. 16. Utilisation selon l'une des revendications 10 à 15, caractérisée en ce que le principe actif cosmétique est destiné à augmenter la viabilité cellulaire des cellules cutanées. 17. Utilisation selon l'une des revendications 10 à 16, caractérisée en ce que le principe actif cosmétique est destiné à diminuer la production des espèces réactives oxygénées (ROS) dans les cellules cutanées. 18. Composition cosmétique pour application topique, caractérisée en ce qu'elle comprend un principe actif selon l'une des revendications 1 à 9, présent entre 0,1 et 3% en poids total de la composition.