Brevet FR3022245A1 — publié le 20151218

La présente invention concerne de nouveaux dérivés de 3,5- dihydro-2H-pyrazolo[4,3-c[pyridin-3-one de Formule I et leur utilisation dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections associées à une modification (augmentation ou diminution) de l'activité du récepteur CB2, notamment des maladies auto-immunes. ETAT DE LA TECHNIQUE Le récepteur CB2 est principalement exprimé dans les cellules associées au système immunitaire, comme les leucocytes, les macrophages, les lymphocytes B et T. Ce récepteur est également présent au niveau de la rate, des amygdales et de la prostate, et sur les cellules gliales (microglies, astrocytes). La localisation du récepteur CB2 au niveau des cellules immunitaires met en évidence l'implication de ce récepteur dans les effets immunomodulateurs induits par les cannabinoïdes. Le récepteur cannabinoïde CB2 apparait comme un médiateur important de la libération de cytokines inflammatoires et plusieurs études in vitro et in vivo soulignent que les ligands des récepteurs CB2 constituent des agents thérapeutiques potentiels des maladies ou affections associées à une modification (augmentation ou diminution) de l'activité du récepteur CB2, notamment des maladies auto-immunes entraînant une inflammation chronique. Le récepteur CB1 est quant à lui responsable des effets psychotropes engendrés par les cannabinoïdes et notamment par le THC (3,-9- tétrahydrocannabinol), principal composé psychoactif retrouvé dans le cannabis. Ainsi, la localisation du récepteur CB2 suggère son rôle important dans le contrôle de l'homéostasie du système immunitaire (production de cytokines pro- et anti-inflammatoires, migration, prolifération et activation de cellules immunitaires) [Recent advances in the development of selective CB(2) agonists as promising anti-inflammatory agents. Leleu-Chavain N, Body-Malapel M, Spencer J, Chavatte P, Desreumaux P, Millet R. Curr Med Chem. 2012;19(21):3457-741 . L'absence d'immunomodulation induite par les cannabinoïdes chez des souris dépourvues de récepteurs CB2, souligne le rôle de CB2 dans de nombreuses maladies telles que les maladies inflammatoires, comme les maladies neurodégénératives (SEP, maladie d'Alzheimer, maladie de Parkinson ou troubles neurocognitifs associés au VIH-1) ou les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI), mais également dans l'athérosclérose, la douleur, les cancers, l'ostéoporose ou les maladies du foie par exemple [From cannabis to selective CB2R agonists: molecules with numerous therapeutical virtues. Leleu-Chavain N, Biot C, Chavatte P, Millet R. Med Sci (Paris). 2013 May;29(5):523-8]. Un grand nombre des agonistes de CB2 actuellement connus, ne sont pas sélectifs vis-à-vis du récepteur CB1 et présentent donc des effets secondaires indésirables au niveau du système nerveux central, tels qu'euphorie, sédation, hypothermie et catalepsie. La demande de brevet WO 2010/133973 Al décrit des dérivés de 1,4 dihydropyridine et leur utilisation comme modulateur du récepteur CB2. Certains de ces composés sont en effet des agonistes sélectifs de CB2. Il existe toutefois toujours un besoin de nouveaux agonistes de CB2 qui sont sélectifs vis-à-vis de CB1 RESUME DE L'INVENTION Les inventeurs ont maintenant réussi à mettre au point de nouveaux agonistes de CB2 qui sont sélectifs vis-à-vis de CB1. Ces agonistes présentent 2 0 l'avantage de ne pas présenter les effets secondaires indésirables associés à l'activation du récepteur CB1, tels qu'euphorie, sédation, hypothermie et catalepsie. L'invention concerne donc des composés de Formule I, leurs solvates pharmaceutiquement acceptables ainsi que l'utilisation de ces composés, 25 ou leurs solvates ou compositions en contenant comme agonistes de CB2. Dans un premier aspect, l'invention concerne des composés de Formule I: ou ses solvates pharmaceutiquement acceptables,dans laquelle R1 est alkyle linéaire en C4 à C6, haloalkyle linéaire en C4 à C6 ou tehtrahydropyranylalkyle en Cl à C2; et R2 est cycloalkyle, cycloalkylalkyle ou alkyle en C3 à C6. Dans un autre aspect, l'invention concerne des compositions 10 pharmaceutiques comprenant au moins un composé selon l'invention ou un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Comme indiqué plus haut, l'invention concerne également l'utilisation des composés selon l'invention ou un de ses solvates 15 pharmaceutiquement acceptables comme agonistes de CB2. Par conséquent, les composés de l'invention et leurs solvates pharmaceutiquement acceptables sont utiles dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections associées à une modification (augmentation ou diminution) de l'activité du récepteur CB2. L'invention concerne donc également les composés selon l'invention pour 20 utilisation en tant que médicament, notamment dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections médiées par CB2. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Comme détaillé ci-dessus, l'invention concerne des composés de Formule I ainsi que leurs solvates pharmaceutiquement acceptables. Des composés de Formule I et leurs solvates pharmaceutiquement acceptables préférés sont ceux dans lesquels R1 et/ou R2 sont définis de la manière suivante : R1 est alkyle linéaire en C4 à C6, trifluorométhylalkyle linéaire en C3 à C5 ou tehtrahydropyranylalkyle en Cl à C2; de préférence R1 est alkyle linéaire en C5 (n-pentyle), trifluorométhylalkyle linéaire en C3 (1,1,1-trifluoro-n-butyle) ou tehtrahydropyranylalkyle en Cl à C2; plus préférentiellement R1 est alkyle linéaire en C5 (n-pentyle) ; R2 est alkyle en C5 à C6, cycloalkyle en C5 à C12 ou cycloalkyle en C3 à C12- alkyle linéaire en Cl à C3, de préférence R2 est n-pentyle, n-hexyle, cycloalkyle en C5 à C12 ou cycloalkyle en C3 à C12-méthyle ou cycloalkyle en C3 à C12- 1 5 éthyle ; plus préférentiellement R2 est n-pentyle, n-hexyle, cycloalkyle en C5 à C10 ou cycloalkyle en C6 à C10-méthyle ou cycloalkyle en C6 à C10-éthyle, plus préférentiellement encore R2 est n-pentyle, n-hexyle, cyclohexyle, cyclopropylméthyle, cyclohexylméthyle, cyclohexyléthyle, adamantylméthyle, notamment adamant- 1-ylméthyle ou adamantyléthyle, notamment adamant- 1- 2 0 yléthyle, plus préférentiellement encore R2 est adamantylméthyle ou adamantyléthyle, notamment adamant- 1-ylméthyle et adamant- 1 -yléthyle, et de manière tout à fait préférée R2 est adamantylméthyle, notamment adamant- 1- ylméthyle. Dans un mode de réalisation particulier, les composés de Formule I 25 et leurs solvates pharmaceutiquement acceptables sont ceux dans lesquels R1 est tel que défini ci-dessus et R2 est choisi dans le groupe constitué par n-pentyle, nhexyle, cyclohexyle, cyclopropylméthyle, cyclohexylméthyle, cyclohexyléthyle, adamantylméthyle et adamantyléthyle, de préférence R2 est choisi dans le groupe constitué par n-pentyle, n-hexyle, cyclohexyle, cyclopropylméthyle, cyclohexylméthyle, cyclohexyléthyle, adamant-l-ylméthyle et adamant-lyléthyle. En fait et sans vouloir être lié par une quelconque théorie, les inventeurs pensent que la sélectivité des composés de l'invention pour CB2 versus CB1 est obtenue grâce au groupement encombrant hydrophobe R2. En même temps, ce groupement permet une bonne affinité des composés de l'invention pour CB2. De manière avantageuse les composés de l'invention présentent une affinité pour le récepteur CB2 de l'ordre du nanomolaire, notamment inférieure à 100 nM, de préférence inférieure à 50 nM et plus préférentiellement encore inférieure à 30 nM. Des composés particulièrement préférés de l'invention sont ceux listés dans le Tableau 1 ci-dessous : TABLEAU 1 Structures Nom 2 2-Cyclohexy1-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)- one. N_N - 1. N N-N 2,5-Dipenty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one. lel I 0 N / N-N 2-Hexy1-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one. iiiii 1 0 le N / r---" N-N 2-(Cyclopropylméthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3- Cl quinolin-3(5H)-one. . 0 N N-Nr-O 2-(Cyclohexylméthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin3(5H)-one. 0 1 N y N-N lel2-(2-Cyclohexyléthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin3(5H)-one. 0 1 N N-N 2-(1-Adamantylméthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3- c]quinolin-3(5H)-one. 0 40" N V N-N 2-(1-Adamantyléthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin3(5H)-one. 1$1 I 0 N Les composés de Formule I peuvent être préparés selon des réactions connues de l'Homme du métier. Les schémas réactionnels décrits dans la partie « Exemples » illustrent des approches de synthèse possibles. Dans un deuxième aspect, l'invention concerne l'utilisation des composés de l'invention ou leurs solvates pharmaceutiquement acceptables comme agonistes de CB2. Les composés de l'invention sont ainsi utiles dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections associées à une modification (augmentation ou diminution) de l'activité du récepteur CB2. L'invention concerne donc également les composés selon l'invention pour utilisation comme médicament, notamment pour utilisation dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections médiées par CB2. Ces maladies ou affections comprennent les maladies auto-immunes, les maladies neurodégénératives, les maladies inflammatoires, l'ostéoporose, la douleur et les cancers d'origine inflammatoire. Dans un mode de réalisation particulier, les maladies ou affections sont choisies parmi les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI), la sclérose en plaques (SEP), le lupus érythémateux, les thyroïdites auto-immunes, la polyarthrite rhumatoïde, la spondylarthrite ankylosante, la dermatite atopique, les hépatites, le syndrome de Goujerot-Sjijgren, la maladie d' Alzheimer, la sclérose latérale amyotrophique (SLA, également appelée maladie de Charcot), l'ostéoporose et la douleur. Les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin quant à elles regroupent la maladie de Crohn et la rectocolite hémorragique (RCH). Dans un mode de réalisation préféré, l'invention concerne les composés de formule I tels que décrits ci-dessus pour utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI), plus particulièrement de la maladie de Crohn et/ou de la rectocolite hémorragique (RCH). La présente invention, selon un autre de ses aspects, concerne également une méthode de traitement des maladies et affections ci-dessus indiquées comprenant l'administration, à un patient, d'une dose efficace d'un composé selon l'invention, ou d'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables. De préférence, le patient est un animal à sang chaud, plus préférentiellement un humain. Selon un autre aspect, l'invention porte sur une méthode de modulation de l'activité du récepteur CB2 chez un patient, de préférence un animal à sang chaud, plus préférentiellement un humain, en ayant besoin, ladite méthode comprenant l'administration à ce patient d'une dose efficace d'un composé selon l'invention, ou d'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables. L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de Formule I ou au moins un solvate pharmaceutiquement acceptable dudit composé et un excipient pharmaceutiquement acceptable. Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité, parmi les excipients habituels qui sont connus de l'Homme du métier. La composition pharmaceutique de la présente invention peut être choisie parmi les compositions pharmaceutiques pour administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, topique, locale, intratrachéale, intranasale, transdermique ou rectale. Dans ces compositions, le principe actif de Formule I ci-dessus, ou son solvate pharmaceutiquement acceptable, peut être administré sous forme unitaire d'administration, en mélange avec des excipients pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains pour le traitement et/ou la prévention des maladies ou affections ci- dessus indiquées. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules molles ou dures, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, intratrachéale, intraoculaire, intranasale, par inhalation, les formes d'administration topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, les formes d'administration rectale et les implants. Pour l'application topique, on peut utiliser les composés selon l'invention dans des crèmes, gels, pommades ou lotions. Dans un mode de réalisation préféré, il s'agit d'une composition pharmaceutique pour administration orale. De telles formes d'administration appropriées qui peuvent se présenter sous forme solide, semi-solide ou liquide en fonction du mode d'administration, sont généralement connues de l'homme du métier, référence étant faite à la dernière édition de l'ouvrage « Remington' s Pharmaceutical Sciences ». 1 0 Dans un mode de réalisation particulièrement intéressant, la composition pharmaceutique selon l'invention est une composition pharmaceutique pour administration orale. Les composés de l'invention sont en effet, à la connaissance des inventeurs les premiers agonistes de CB2 actifs par voie orale dans le cadre du traitement des maladies inflammatoires chroniques de 1 5 l'intestin (MICI). DEFINITIONS Les définitions et explications ci-dessous concernent les termes et expressions telles qu'utilisés dans la présente demande, comprenant la description ainsi que les revendications. 2 0 Pour la description des composés de l'invention, les termes et expressions utilisées doivent, sauf indication contraire, être interprétés selon les définitions ci-après. Le terme "halo", seul ou en tant que partie d'un autre groupement, désigne fluoro, chloro, bromo, ou iodo. Les groupements halo préférés sont chloro 25 et fluoro, fluoro étant particulièrement préféré. Le terme « alkyl(e) », seul ou en tant que partie d'un autre groupement, désigne un radical hydrocarbure de formule C'H2',1 dans lequel n est un nombre entier supérieur ou égal à 1. Le terme "haloalkyl(e)", seul ou en tant que partie d'un autre groupement, désigne un radical alkyle tel que defini ci-dessus dans lequel un ou plusieurs atomes d'hydrogène sont remplacés par un groupement halo tel que défini ci-dessus. Des radicaux haloalkyle linéaire en C4 à C6 préférés sont le 1,1,1-trifluoro-n-butyle, le 1,1,1-trifluoro-n-pentyle et le 1,1,1-trifluoro-n-héxyle, le 1,1,1-trifluoro-n-butyle étant particulièrement préféré. Le terme « cycloalkyl(e) », seul ou en tant que partie d'un autre groupement, désigne un radical hydrocarbure mono-, di- ou tri-cyclique saturé ayant 3 à 12 atomes de carbone, notamment 5 à 10 atomes de carbone, plus particulièrement 6 à 10 atomes de carbone. Des radicaux cycloalkyl appropriés comprennent, sans y être limités, cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle, cyclohexyle, cycloheptyle, cyclooctyle, norbornyle, adamantyle, notamment adamant- 1 -yle et adamant-2-yle, 1-décalinyle. Des groupements cycloalkyle préférés comprennent cyclopropyle, cyclohexyle, adamant- 1 -yle et adamant-2-yle. Les composés de Formule I peuvent exister sous forme de solvates, à savoir sous forme d'associations ou de combinaisons avec une ou plusieurs molécules de solvant, tel que par exemple de l'éthanol ou de l'eau. Lorsque le solvant est de l'eau, on utilise le terme « hydrate ». 2 0 Toutes les références à des composés de Formule I désignent également les solvates de ceux-ci. Les composés de l'invention sont les composés de Formule I et leurs solvates tels que défini ci-dessus, y compris tous leurs polymorphes et formes cristallines, leurs prodrogues et les composés ou solvates portant un label 25 isotopique. Le terme « patient » désigne un animal à sang chaud, de préférence un humain, qui attend ou reçoit un traitement médical. Le terme « humain » désigne des sujets des deux sexes et à tout stade de développement (c'est-à-dire néonatal, infantile, juvénile, adolescent et adulte). Dans un mode de réalisation, il s'agit d'un adolescent ou d'un adulte, de préférence d'un adulte. Les termes « traiter » et « traitement » doivent être entendus dans leur signification générale et comprennent ainsi l'amélioration et l'abrogation d'un état pathologique. Les termes « prévenir » et « prévention » désignent le fait d'éviter ou de retarder l'apparition d'une maladie ou affection et des symptômes liés, ainsi excluant un patient de développer une maladie ou affection ou réduisant le risque d'un patient de développer une maladie ou affection. Le terme « dose thérapeutiquement efficace » ou « dose efficace » désigne la dose de principe actif (composé de Formule I) qui est suffisant pour atteindre le résultat thérapeutique ou prophylactique désiré chez le patient auquel il est administré. Le terme « pharmaceutiquement acceptable » désigne qu'un composé ou un composant n'est pas nocif pour le patient et que dans le cadre d'une composition pharmaceutique il est compatible avec les autres composants. Le terme « agoniste » désigne un ligand qui active une réponse 2 0 intracellulaire lorsqu'il se lie à un récepteur et couvre les agonistes entier ainsi que les agonistes partiels. La présente invention sera mieux comprise en référence aux exemples suivants. Ces exemples sont représentatifs de certains modes de réalisation de l'invention et ne limitent en aucun cas la portée de l'invention. Les 25 figures servent à illustrer les résultats expérimentaux. FIGURES Figure lA : Taux de survie dans un modèle de colite aigüe chez la souris pour le composé 26 en comparaison à un agoniste de CB2 de l'art antérieur. Figure 1B : Evaluation de la perte de poids corporel dans un modèle de colite aigüe chez la souris pour le composé 26 en comparaison à un agoniste de CB2 de l'art antérieur. Figure 2A-D: Score macroscopique (A), dommages histologiques (B), taux de TNFa et IL-113 (C,D) dans le colon après un colite causé par du TNBS et traitement avec le composé 26 ou un agoniste de CB2 de l'art antérieur. EXEMPLES Appareillages et techniques d'analyse La pureté des produits de synthèse a été contrôlée par chromatographie sur couche mince sur des plaques de gel de silice 60F254 d'épaisseur 0,2 mm (réf. 5735 Merck) (révélation : UV (254 et 366 nm) pour les produits avec liaisons conjuguées, ninhydrine pour les amines, iode dans tous les cas, réactif de Dragendorff pour les composés comportant un atome d'azote hétérocyclique). Les purifications par chromatographie sur colonne ont été réalisées sur gel de silice 60, granulométrie 0,040-0,063 mm (réf. 9385.5000 Merck). L'éluant a été choisi de façon à obtenir un Rf compris entre 0,20 et 0,25 sur plaques de CCM. Les points de fusion (Mp) ont été déterminés à l'aide d'un appareil Büchi SMP 20 et ne sont pas corrigés. Ils sont exprimés en degrés Celsius (°C). Les spectres infrarouge ont été réalisés sur un spectromètre à transformée de Fourier Bruker Vector 22. Les signaux caractéristiques sont repérés par leur nombre d'onde exprimé en cm-1. Les spectres de RMN 1H ont été enregistrés à 300 MHz sur un appareil à transformée de Fourier Bruker AC 300P, avec le TMS (triméthylsilane) comme référence interne. Chaque signal est repéré par son déplacement chimique (Ô en ppm), son intensité (nombre de H), sa multiplicité (s, singulet ; d, doublet ; t, triplet ; q, quadruplet ; m, massif ou multiplet) et éventuellement sa constante de couplage (J en Hertz). Dans le cas de massifs, celle-ci n'est pas mesurable. Tous les composés ont été caractérisés par LC-MS. Le chromatographe liquide haute performance (colonne ODS, phase mobile: eau/acétonitrile/acide formique en mode gradient) est couplé à un détecteur UV et à un détecteur de masse de type APCI± (Ionisation Chimique à Pression Atmosphérique). Les spectres ont enregistrés sur un appareil Thermo Electron Surveyor MSQ. Synthèse chimique Schéma 1. Réactifs et conditions. (i) Ethoxyméthylènemalonate de diéthyle, 100 °C, 1 h; (ii) Ph20, 240 °C, 2 h; (iii) NaH, R1-Br, DMF, 90 °C, 16 h; (1),) P4S10, Pyridine, reflux, 16 h ; H2NNH2H20, Et0H, reflux (vb) R2NHNH2.H20, Et0H, reflux, 16 h ; (vi) NaH bromure de cyclohexyle, DMF, 90 °C, 16 h. Le 2-((phénylamino)méthylène)malonate de diéthyle (1), le 4-oxo-1,4- dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (2) et le 4-oxo-1-penty1-1,4- 1 5 dihydroquinoline-3-carboxylate d'éthyle (4) (R1= n-pentyle) ont déjà été décrits dans un précédent article (Stern, E., Muccioli, G. G.; Millet, R.; Goossens, J. F.; Farce, A.; Chavatte, P.; Poupaert, J. H.; Lambert, D. M.; Depreux, P.; Hénichart, J. P. Novel 4-0xo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxamide Derivatives as New CB2 Cannabinoid Receptors Agonists: Synthesis, Pharmacological Properties and 20 Molecular Modeling. J. Med. Chem. 2006, 49, 70-79); les réactions de thionation intervenant dans la préparation du composé (6) ont également été décrits (Stern, E.; Muccioli, G. G.; Bosier, B.; Hamtiaux, L.; Millet, R.; Poupaert, J. H.; Hénichart, J. P.; Depreux, P.; Goossens, J. F.; Lambert, D. M. Pharmacomodulations Around the 4-0xo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxamides, a Class of Potent CB2-Selective Cannabinoid Receptor Ligands: Consequences in Receptor Affinity and Functionality. J. Med. Chem. 2007, 50, 5471-5484). Procédure générale pour la préparation des 2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin3(5H)-ones (8 et 16) à partir de la 4-thioxoquinoline (6). Le composé 6 (1 équiv.) et l'hydrazine monohydrate ou monosubstituée (3 équiv.) dans l'éthanol absolu sont mis à reflux pendant 14h. La di-iso-propyléthylamine (DIPEA) (3.2 équiv.) est également ajouté dans le cas où les hydrazines monosubstituées sont sous forme chlorhydrate. Après retour à température ambiante, le solvant est évaporé et le résidu est partagé par un mélange dichlorométhane-H20. La phase organique est lavée avec une solution d'eau saturée en NaC1, séchée sur Mg504 et évaporée pour donner une huile jaune qui est purifiée par chromatographie sur gel de silice (CH2C12/Me0H 95:5, v/v). Les solides jaunes obtenues sont recristallisées dans l'acétonitrile. 5-Penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (8). Rendement : 90%. mp > 250 °C. IR (cm-1) 1610. 1H NMR (DMSO-d6) Ô 11,42 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,14 (d, 1H, J= 7,9 Hz), 7,82 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,66 (t, 1H, J = 7,3 Hz), 7,52 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 4,38 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 1,82-1,68 (m, 2H), 1,38-1,25 (m, 4H), 0,84 (t, 3H, J= 6,4 Hz). LC-MS (APCI±) m/z 256.2 (MH±). 2-Cyclohexy1-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (16). Rendement : 77%. mp > 250 °C. IR (cm-1) 1634. 1H NMR (CDC13) Ô 8.43 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 8.39 (s, 1H), 7,63-7.48 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J= 7,2 Hz), 1.86-1.19 (m, 17H), 1.00 (t, 3H, J= 6.9 Hz). LC-MS (APCI±) m/z 338.2 (MH±). Procédure générale pour la préparation des 2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin3(5H)-ones (19, 21-27) à partir du composé (8). Le NaH (1.5 équiv., 60% dans l'huile minérale) est additionné par portions, à 0 °C, à une solution contenant le composé 8 (1 équiv.) dans du DMF anhydre (20 mL pour 1.2 mmol de 8 ou 9). Après 30 minutes, le dérivé halogéné approprié (1.5 équiv.) est ajouté et le mélange est chauffé à 90°C pendant 14h. Après retour à température ambiante, le milieu réactionnel est concentré sous vide, et le résidu est repris dans l'eau et extrait au CH2C12. L'huile obtenue est ensuite purifiée par chromatographie sur gel de silice (CH2C12/Me0H 95:5, v/v) puis recristallisée dans l' acétonitrile. 2-Benzy1-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (19). Rendement : 74%. mp > 250 °C. IR (cm-1) 1644. 1H NMR (CDC13) Ô 8,39 (s, 1H), 8,36 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,72 (t, 1H, J= 8,1 Hz), 7,64 (d, 1H, J= 8,4 Hz), 7,58-6,99 (m, 6H), 5,26 (s, 2H), 4,26 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 1,91-1,62 (m, 2H), 1,49-1,27 (m, 4H), 1,00 (t, 3H, J= 6,4 Hz). LC-MS (APCI±) m/z 346.2 (MH±). 2,5-Dipenty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (21). Rendement : 77%. mp 154 °C. IR (cm-1) 1630. 1H NMR (CDC13) Ô 8.41 (dd, 1H, J = 7,6 Hz, J= 1.5 Hz), 8.25 (s, 1H), 7,59-7.51 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 4.06 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 1.91 (m, 4H), 1.38 (m, 8H), 0.90 (m, 6H). LC-MS (APCI±) m/z 326.2 (MH±). 2-Hexy1-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (22). Rendement : 73%. mp 157 °C. IR (cm-1) 1632. 1H NMR (CDC13) Ô 8.40 (dd, 1H, J = 7,9 Hz, J = 1.2 Hz), 8.25 (s, 1H), 7,58-7.51 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 4.06 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 1.91 (m, 4H), 1.38 (m, 10H), 0.90 (m, 6H). LC-MS (APCI±) m/z 340.3 (MH±). 2-(Cyclopropylméthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (23). Rendement : 47%. mp 187 °C. IR (cm-1) 1632. 1H NMR (CDC13) Ô 8.41 (dd, 1H, J = 7,6 Hz), 8.25 (s, 1H), 7,58-7.48 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J=7,3 Hz), 3.89 (d, 2H, J= 7,3 Hz), 1.91 (m, 2H), 1.39 (m, 5H), 0.92 (t, 3H, J= 7,0 Hz), 0.47 (m, 4H). LC-MS (APCI±) m/z 310.1 (MH±). 2-(Cyclohexylméthy1)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (24). Rendement : 37%. mp 200 °C. IR (cm-1) 1631. 1H NMR (CDC13) Ô 8.41 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 8.38 (s, 1H), 7,63-7.48 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 3.88 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 1.91-1.19 (m, 17H), 0.92 (t, 3H, J = 7,0 Hz). LC-MS (APCI±) m/z 352.2 (MH±). 2-(2-Cyclohexyléthy1)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (25). Rendement : 57%. mp 160 °C. IR (cm-1) 1621. 1H NMR (CDC13) Ô 8.41 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 8.24 (s, 1H), 7,60-7.48 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 4.06 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 1.91-1.19 (m, 17H), 0.92 (m, 5H). LC-MS (APCI±) m/z 366.2 (MH±). 2-(1-Adamantylméthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (26). Rendement : 32%. mp 225 °C. IR (cm-1) 1629. 1H NMR (CDC13) Ô 8.39 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 8.36 (s, 1H), 7.63-7.47 (m, 3H), 4.23 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 3.73 (s, 2H), 1.97-1.39 (m, 21H), 0.93 (t, 3H, J= 7.0 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 404.2 (MH+). 2-(1-Adamantyléthy1)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one (27). Rendement : 35%. mp 237 °C. IR (cm-1) 1625. 1H NMR (CDC13) Ô 8.40 (d, 1H, J = 7.9 Hz), 8,26 (s, 1H), 7.63-7.47 (m, 3H), 4.24 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 4.06 (m, 2H), 3.73 (s, 2H), 2.01-1.33 (m, 23H), 0.93 (t, 3H, J = 7.0 Hz). LC-MS (APCI+) m/z 418.2 (MH+). Etudes pharmacologiques in vitro Mesure d'affinité. Les études de binding ont été réalisées selon les protocoles décrits par El Bakali et al. (El Bakali, J.; Muccioli, G. G.; Renault, N.; Pradal, D.; Body-Malapel, M.; Djouina, M.; Hamtiaux, L.; Andrzejak, V.; Desreumaux, P.; Chavatte, P.; Lambert, D. M.; Millet, R. 4-0xo-1,4-Dihydropyridines as Selective CB2 Cannabinoid Receptor Ligands: Structural Insights into the Design of a Novel Inverse Agonist Series. J. Med. Chem. 2010, 53, 7918-7931) mais en appliquant une petite modification. Brièvement, le [3H]-CP-55,940 (0.5 nM) choisi comme radioligand pour les récepteurs humains CB1 et CB2, est additionné à 6 [tg de membranes resuspendues dans 550 1..IL (volume final) de tampon (20 mM Hepes, 5 mM MgC12, 1 mM EDTA, 0.3% sérum albumine bovine, pH 7.4). Après 1 h à 30 °C, l'incubation est stoppée et la solution est rapidement filtrée sur Harvester, à travers le filtre « Unifilter 96 (PerkinElmer) » préalablement saturé avec du tampon de liaison (20 mM Hepes, 5 mM MgC12, 1 mM EDTA, 0.3% sérum albumine bovine, pH 7.4). puis lavée 20 fois avec du tampon de liaison glacé sans albumine de sérum. La radioactivité des filtres a été mesurée à l'aide du « TopCount NXT Microplate Scintillation Counter (PerkinElmer) » après addition de 60 !IL de liquide scintillant « MicroScint 40 (PerkinElmer) ». Les expériences ont été réalisées en « triplicate ». La liaison non spécifique a été déterminée en présence de 5 !AM (R)-(+)-WIN 55,212-2 (Sigma). Dosage du [35S]-GTPyS. Les études ont été réalisées à 30°C dans des tubes contenant 10 [tg de protéine dans 0.5 mL (volume final) de tampon (20 mM Hepes, 10 mM MgC12, 100 mM NaC1, 0.1% sérum albumine bovine, pH 7.4) complétés avec 30 !AM de GDP. Le dosage a été initié par l'addition de [355] - GTPyS (0.1 nM, concentration finale). Après 1 h à 30 °C, l'incubation a été stoppée et la solution a été rapidement filtrée sur le filtre « Unifilter-96 GF/B» et lavée 20 fois avec du tampon de liaison glacé. La radioactivité sur les filtres a été comptée comme mentionné ci-dessus. La liaison non spécifique a été mesurée en présence de 100 !AM de Gpp(NH)p. Les résultats ont été exprimés en EC50 (nM) et 2 0 l'Emax (%). Analyse des données. Les valeurs de Ki et EC50 ont été déterminées par régression non linéaire réalisée par le programme « GraphPad prism 5.0 program (GraphPad Software, San Diego). » L'analyse statistique des résultats du dosage [355]-GTPyS a été effectuée grâce au test « Student ». 25 Le Tableau 2 ci-dessous résume les affinités de liaison pour CB1 et CB2. Tableau 2 : affinités de liaison Affinité de liaison Affinité de liaison hCB2 hCB1 Ki (nM) Ki (nM) >3000 >3000 18.8 ± 3.3 >3000 >3000 >3000 4.3 ± 0.3 >3000 7.7 ± 0.3 >3000 10.4 ± 3.1 >3000 0.62 ± 0.03 >3000 8.0 ± 0.4 >3000 0.39 ±0.03 >3000 26.1 ± 3.8 >3000 Composé 8 16 19 21 22 23 24 n-05Hii n-C61-113 R2 H 25 ICO 26 27 Les résultats obtenus pour le composé 19 qui constitue un exemple comparatif d'un composé de Formule I dans laquelle R2 est un groupement aromatique (benzyle) démontrent que la présence d'un groupement aliphatique hydrophobe non aromatique en position N-2 (groupement R2) est cruciale pour l'affinité pour CB2. En effet, contrairement au composé 19, les composés de l'invention qui présentent tous un groupement alkyle, cycloalkyle ou cycloalkylalkyle en position N-2 (groupement R2) sont tous actifs au niveau nanomolaire. La comparaison des composés 16, 24 et 25 indique que, dans le cas d'un groupement cycloalkyle ou cycloalkylalkyle, le choix d'un groupement cycloalkylméthyle donne les meilleurs résultats au niveau de l'affinité pour CB2 tout en restant sélectif pour CB2 vis-à-vis de CBi. Cette observation est également confirmée pour les composés 26 (R2 =1-adamanthylméthyl) et 27 (R2 =1- adamanthyléthyl). De plus, dans le cas de l'utilisation d'un groupement cycloalkyle ou cycloalkylalkyle en position N-2 (groupement R2), la taille du cycle semble également impacter l'affinité du composé pour CB2. Par exemple, la comparaison des composés 23, 24 et 26 indique que plus le cycle est grand (adamantyle > cyclohexyle > cyclopropyle), meilleure est l'affinité pour CB2. Des chaines alkyles linéaires en position N-2 (groupement R2) résultent également dans des affinités élevées à un niveau nanomolaire pour CB2. 11 est également important de noter et comme indiqué ci-dessus, que le remplacement du groupement alkyle, cycloalkyle ou cycloalkylalkyle en position N-2 (groupement R2) par un résidu aromatique (groupent benzyle) induit une perte drastique d'activité (composés 21, 24, 26 vs. 19). De manière surprenante, aucun des composés ne possède une affinité pour CB1 (hCB1 ; Ki > 3000), démontrant que ces composés sont en effet très sélectifs (CB2 vs CB1). Le Tableau 3 ci-dessous résume les activités fonctionnelles de certains composés de l'invention pour le récepteur cannabinoïde hCB2 Tableau 3 : activités fonctionnelles Composé [35M-GTPTS (h CB 2) EC50 (nM) Emax (%) 16 204 ± 41 160±3 24 14.3 ± 4.0 149 ± 4 25 5.4 ± 1.1 141±3 26 64 ± 10 163 ± 4 En ce qui concerne les activités fonctionnelles, les composés 16 et 24-26 sont tous des agonistes avec un EC50 allant de 5.4 nM à 204 nM et un Emax aux environs de 150%. Pharmacologie in vivo. Les souris mâles C57B16 (n=10 par groupe) ont un accès libre à la nourriture et à l'eau. Pour l'induction de la colite, les souris sont anesthésiées pour 90-120 min par administration sous-cutanée de zylasine-kétamine (50 mg/kg) diluées dans du sérum physiologique, puis reçoivent une administration intrarectale de TNBS (40 1..IL' 150 mg/kg) dilué dans un mélange 1:1 de NaC1 0.9% et d'éthanol 100%. Les nouveaux agonistes CB2 sont dilués dans de la carboxyméthylcellulose 0.5% (Sigma-Aldrich, Saint Quentin Fallavier, France) pour une dose administrée par gavage de 0.1, 1 et 10 mg/ kg poids corporel/j. Le JWH133, agoniste CB2 connu (Kimball ES, Schneider CR, Wallace NH, Hornby PJ. Agonists of cannabinoid receptor 1 and 2 inhibit experimental colitis induced by oil of mustard and by dextran sulfate sodium. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 2006, 291, G364-71.), est administré par voie intrapéritonéale à la dose de 0.1 mg/kg pc/j. Les animaux sont euthanasiés 5 jours après l'administration de TNBS. L'intensité de la colite aux niveaux macroscopiques et histologiques est évaluée dans chaque colon à l'aveugle par 2 investigateurs. L'échelle des scores macroscopiques des lésions va de 0 à 10 selon des caractéristiques reflétant l'inflammation, telle que l'hyperémie, l'épaississement de la paroi intestinale, l'étendue des ulcérations. Une biopsie de colon localisée précisément 2 cm au-dessus du canal anal est utilisée pour l'analyse histologique suite à une coloration May-Grunwald Giemsa. Le score histologique varie entre 0 et 6 et prend en compte le degré d'infiltrat inflammatoire, la présence d'érosion, d'ulcérations ou de nécrose de la muqueuse, et le niveau d'extension des lésions en profondeur et en surface atteinte. Deux autres biopsies du côlon sont congelées et utilisées pour analyser les taux d'ARNm de cytokines inflammatoires par PCR en temps réel. Les ARNm totaux du côlon sont extraits en utilisant le kit Nucleospin RNAII (Macherey Nagel, Hoerdt, France) puis rétro-transcripts en utilisant le high-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, USA). La PCR en temps réel 1 0 est réalisée avec du SYBR Green (Applied Biosystems, Foster City, USA). Les amorces spécifiques pour TNF alpha (TNF alpha F et TNF alpha R), IL-1 beta (IL1 beta F et IL1 beta R) et POLR2A (POLR2A F et POLR2A R) en tant que gène de référence ont été choisis en utilisant le logiciel Primer Express 2 (Applied Biosystems, Foster City, USA). Pour la représentation graphique des données 15 quantitatives de PCR, les valeurs de Ct obtenues pour les gènes cibles sont rapportées à celles du gène de référence, en utilisant la méthode du AACt c'est-à-dire : AACt= (Ct du gène cible - Ct du gène de référence) souris traitée - (Ct du gène cible - Ct du gène de référence) souris non traitée, et les données finales sont dérivées du 2-AACt. 20 Le composé 26 a été évalué chez la souris dans un modèle de colite induite au TNBS selon un protocole décrit (Desreumaux, P.; Dubuquoy, L.; Nutten, S.; Peuchmaur, M.; Englaro, W.; Schoonjans, K.; Derijard, B.; Desvergne, B.; Wahli, W.; Chambon, P.; Leibowitz, M. D.; Colombel, J. F.; Auwerx, J. Attenuation of Colon Inflammation Through Activators of the Retinoid X Receptor 25 (RXR)/Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma (PPARgamma) Heterodimer. A Basis for New Therapeutic Strategies. J. Exp. Med. 2001, 193, 827-838). Ainsi, le composé 26 a été administré oralement dans de la carboxyméthylcellulose (CMC) chaque jour à la dose de 0.1, 1 et 10 mg/kg pendant sept jours, et deux jours avant l'induction de la colite. Un contrôle avec 30 une administration de CMC seul a été effectué. Tout d'abord les taux de survie tout au long de l'étude ont été examinés et la perte de poids avant l'euthanasie des souris évaluée (cinq jours après l'administration du TNBS). Une diminution de la mortalité pour les souris traitées avec le composé 26 par rapport aux souris non traitées (Figure 1A) a été notée. De plus, le traitement journalier atténue de manière dose-dépendante la perte de poids généralement observée lors d'une colite induite au TNBS (Figure 2B). Après l'euthanasie des différents groupes, les côlons de chaque groupe ont été examinés et les dommages ont été mesurés. Les résultats ont montré que le composé 26 diminue les scores macroscopiques (Figure 2A) de manière dose dépendante avec un effet puissant quand il est administré par voie orale à la dose de 10 mg/kg (1.7 vs 4.9). Cet effet protecteur a été confirmé par l'évaluation histologique. Ainsi, le composé 26 atténue les scores histologiques de 65% (figure 2B). Les niveaux de TNFa et d'Il-113, deux cytokines largement impliquées dans la réponse inflammatoire ont également été quantifiés. Le composé 26. Ainsi, l'ensemble des données montre que le composé 26 est efficace chez la souris contre la colite de manière dose dépendante après une administration par voie orale. REVENDICATIONS1. DERIVES DE 3,5-DIHYDRO-2H-PYRAZOLO[4,3-c]PYRIDIN-3-ONE ET LEUR UTILISATION 1. Composé de Formule I: ou ses solvates pharmaceutiquement acceptables, dans laquelle R1 est alkyle linéaire en C4 à C6, haloalkyle linéaire en C4 à C6 ou tehtrahydropyranylalkyle en Cl à C2; et 1 0 R2 est cycloalkyle, cycloalkylalkyle ou alkyle en C3 à C6. 2. Composé ou solvate selon la dans lequel R1 est alkyle linéaire en C4 à C6, trifluorométhylalkyle linéaire en C3 à C5 ou tehtrahydropyranylalkyle en Cl à C2. 3. Composé ou solvate selon la revendication 1 ou 2, dans lequel 15 R2 est alkyle en C5 à C6, cycloalkyle en C5 à C12 ou cycloalkyle en C3 à C12- alkyle linéaire en Cl à C3. 3. Composé ou solvate selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel R2 est choisi dans le groupe constitué par n-pentyle, n-hexyle,cyclohexyle, cyclopropylméthyle, cyclohexylméthyle, cyclohexyléthyle, adamantylméthyle et adamantyléthyle. 4. Composé ou solvate selon la revendication 1 choisi parmi: 2-Cyclohexy1-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one; 2,5-Dipenty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one; 2-Hexy1-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one; 2-(Cyclopropylméthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one; 2-(Cyclohexylméthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one; 2-(2-Cyclohexyléthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one; 2-(1-Adamantylméthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one; 2-(1-Adamantyléthyl)-5-penty1-2H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3(5H)-one. 5. Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé ou l'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. 6. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou l'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables pour utilisation en tant que médicament. 7. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou l'un de ses solvates pharmaceutiquement acceptables pour utilisation dans le traitement et/ou la prévention de maladies ou affections médiées par CB2. 8. Composé ou solvate pour utilisation selon la revendication 7 caractérisé en ce que les maladies ou affections médiées par CB2 sont choisies dans le groupe constitué par les maladies auto-immunes, les maladies neurodégénératives, les maladies inflammatoires, l'ostéoporose, la douleur et les cancers d'origine inflammatoire. 9. Composé ou solvate pour utilisation selon la revendication 8 en ce que les maladies ou affections sont choisies dans le groupe constitué par les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI), la sclérose en plaques (SEP), le lupus érythémateux, les thyroïdites auto-immunes, la polyarthrite rhumatoïde, la spondylarthrite ankylosante, la dermatite atopique, les hépatites, le syndrome de Goujerot-Sj45gren, la maladie d'Alzheimer, la sclérose latérale amyotrophique (SLA, également appelée maladie de Charcot), l'ostéoporose et la douleur. 10. Composé ou solvate pour utilisation selon la revendication 9 1 0 caractérisé en ce que les maladies ou affections choisies parmi les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI).