Brevet FR3018448A1 — publié le 20150918

PRINCIPE ACTIF OBTENU A PARTIR DE L'ALGUE HYPNEA MUSCIFORMIS ET UTILISATIONS COSMETIQUES La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis. L'invention concerne également un principe actif particulier obtenu à partir de Hypnea musciformis, les compositions cosmétiques l'incluant et un procédé de traitement cosmétique. Depuis quelques années, des recherches ont démontré l'implication des produits de glycation dans le vieillissement cutané tant au niveau cellulaire qu'au niveau tissulaire. Les AGE (« Advanced Glycation End Products » ou « produits de glycation avancée »), produits de la glycation, s'accumulent dans les tissus au cours du vieillissement chronologique où ils s'associent aux protéines de la matrice extracellulaire. Le collagène glyqué peut être présent dans le derme dès l'âge de 20 ans et augmente jusqu'à représenter 30 à 50% du collagène chez les individus de 80 ans. Les collagènes, la fibronectine ou encore l'élastine constituent des cibles privilégiées et leur modification joue une part importante dans la perte d'élasticité et la rigidité tissulaire qui apparaît avec l'âge. De plus, les AGE peuvent être formés en intracellulaire où ils modifient les protéines, les lipides ou encore les acides nucléiques, si bien que les interactions enzymes-substrats et les fonctions physiologiques associées sont altérées. La glycation est ainsi à l'origine de nombreux signes du vieillissement cutané, tels que les rides, le relâchement cutané, les désordres dépigmentaires ou les troubles de la cicatrisation. Ce phénomène augmente avec l'âge et contribue de ce fait à l'accélération du vieillissement. L'objectif de la présente invention est de proposer un principe actif cosmétique capable de protéger la peau des effets délétères de la glycation cellulaire et de la glycation tissulaire. Pour y répondre, l'invention vise l'utilisation d'un actif obtenu à partir de l'algue Hypnea musciformis. Hypnea musciformis est une algue rouge de la famille des Cystocloniacées ou Hypneacées. Elle est cultivée commercialement pour la production de kappa carraghénanes. Du fait de ces propriétés gélifiantes, épaississantes et stbilisantes, l'hypnéa musciformis est utilisée dans la charcuterie et dans la plus part des desserts lactés industriels. L'extrait de Hypnéa riche en composés antioxydants a déjà été utilisé en cosmétique, notamment dans les colorants, les capillaires, les conditionneurs, les shampoings et les produits solaires, mais jamais pour le soin de la peau. L'invention vise donc un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis pour son application comme principe actif cosmétique dans une composition cosmétique destinée au soin de la peau en particulier pour protéger la peau des effets délétères de la glycation cellulaire et de la glycation tissulaire. L'utilisation d'un actif obtenu à partir de Hypnea musciformis comme principe actif cosmétique sur la peau permet en effet en particulier de réduire la production des AGE et de limiter ainsi les dégâts induits sur les fibroblastes dermiques et leur environnement. L'invention permet ainsi de préserver l'organisation des fibres du derme pour une peau ferme et élastique, et de lutter contre les phénomènes du vieillissement prématuré. L'invention vise aussi un procédé cosmétique de soin de la peau pour un effet raffermissant et/ou anti-âge comprenant l'application sur la peau d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea Musciformis. L'invention a également pour objet un principe actif cosmétique particulier à savoir un principe actif cosmétique obtenu à partir d'Hypnea Musciformis comprenant au moins 40% en poids de carbohydrates, en particulier un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis comprenant des galactanes, notamment des galactanes présentant un degré de polymérisation compris entre 20 et 430 soit un poids moléculaire compris 3600 et 77000 Da. L'invention concerne également les compositions incluant un tel principe actif. La présente invention est maintenant décrite en détail. Selon un premier aspect, l'invention vise donc l'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de l'algue Hypnea Musciformis comme principe actif cosmétique dans une composition cosmétique, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) au soin de la peau. En particulier le principe actif selon l'invention et/ou la composition l'incluant peuvent être utilisés pour : - protéger la peau des effets délétères de la glycation cellulaire et/ou de la glycation tissulaire, - à raffermir la peau, - à augmenter l'élasticité et la fermeté de la peau, - à préserver la fonctionnalité du derme, - à lutter contre le vieillissement cutané. Au niveau intracellulaire, la formation des AGE conduit à une modification profonde de la physiologie du fibroblaste tant d'un point de vue métabolique que fonctionnel. Parmi les cibles majeures des produits de glycation, on peut citer en particulier la vimentine. La vimentine est un filament intermédiaire du cytosquelette dont la présence est nécessaire à la fonctionnalité du fibroblaste et à l'exécution de fonctions vitales telles que la migration ou la cicatrisation. Sa déstructuration est associée à l'accélération du processus de vieillissement. Or, en présence d'AGE, la distribution de la vimentine est considérablement altérée et redistribuée en agrégats péri-nucléaires appelés « aggrésomes » qui vont réduire les propriétés de prolifération, de migration et de contraction des fibroblastes. Les enzymes, protéines intracellulaires, peuvent être également la cible des AGE. Sous l'effet des AGE, ces protéines sont inactivées et perdent leur action biologique. En particulier la glycation a des effets délétères sur l'activité enzymatique de la lysyl oxidase, enzyme clé de la synthèse du collagène qui permet l'assemblage en fibrilles et la formation d'une matrice fonctionnelle. L'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea Musciformis sur la peau permet de neutraliser la production des AGE dans les fibroblastes et de limiter leur accumulation, et ainsi : - de protéger le cytosquelette en maintenant l'organisation de la vimentine - de préserver les capacités de synthèse des protéines de la matrice extracellulaire en maintenant l'activité enzymatique de la lysyl oxidase. En plus de leur formation au niveau intracellulaire, la biogenèse des AGE s'effectue également dans les tissus. L'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea Musciformis sur la peau permet de contrôler la glycation, en particulier de diminuer la production des AGE et consécutivement la glycation du collagène, et ainsi : - de préserver le réseau matriciel en maintenant la formation de réseau des fibres de collagène et de fibrilline - de préserver les capacités de contraction des fibroblastes. Selon l'invention, un principe actif obtenu à partir de Hypnea Musciformis peut donc être utilisé pour protéger la peau contre les phénomènes de glycation : - au niveau cellulaire : o pour prévenir l'altération du cytosquelette o pour préserver l'activité métabolique - au niveau tissulaire : o pour soutenir la formation du réseau matriciel o pour empêcher la rigidification des fibres de la matrice. En diminuant les produits de glycation et en limitant les dommages cellulaires et tissulaires induits par ces derniers, l'utilisation d'un principe actif selon invention permet de préserver la fonctionnalité des fibroblastes et l'intégrité du derme en assurant la synthèse et la protection des protéines de la matrice dermique. La peau conserve son élasticité et sa fermeté. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l'invention vise l'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea Musciformis comprenant au moins 40% en poids de carbohydrates, en particulier comprenant des galactanes, et encore plus particulièrement un principe actif tel que décrit en suivant. Le principe actif cosmétique utile selon l'invention est préférentiellement un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis comprenant au moins 40% en poids de carbohydrates. Préférentiellement il comprend des galactanes et encore plus préférentiellement des galactanes présentant un degré de polymérisation compris entre 20 et 430. Ce degré de polymérisation correspond à un poids moléculaire des galactanes compris entre 3600 Da et 77000 Da. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif selon l'invention comprend au moins 40% de carbohydrates en poids par rapport au poids total de matières sèches. Préférentiellement, il s'agit d'un hydrolysat d'Hypnea Musciformis, encore plus préférentiellement un hydrolysat enzymatique, en particulier un hydrolysat obtenu par un procédé comprenant au moins une hydrolyse enzymatique des carbohydrates d'Hypnea 30 Musciformis. Le principe actif présente préférentiellement une couleur jaune très clair. Il peut se présenter sous forme liquide et peut être défini par au moins une des caractéristiques exposées ci-après, préférentiellement toutes. Matières sèches : Le taux de matières sèches d'un principe actif selon l'invention (mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant) peut être compris entre 10 et 150 g/I, préférentiellement entre 19 et 30 g/I. Mesure du pH : Le pH (mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante) peut être compris entre 3,0 et 5,0 préférentiellement entre 3,8 et 4,8. Teneur en cendres brutes : La teneur en cendres brutes est déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électrique (VULCAN®). La teneur en cendres brutes est déterminée en pourcentage de poids par rapport au poids total de la matière sèche du principe actif. Elle est comprise entre 15 et 29% en poids de matières sèches. Teneur en carbohydrates On utilise la méthode de DUBOIS. En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de carbohydrates d'un principe actif selon l'invention. Le taux de carbohydrates d'un principe actif selon l'invention mesuré par la méthode de DUBOIS est préférentiellement supérieur à 40% en poids de matières sèches, encore plus préférentiellement supérieur à 55%. Caractérisation des carbohydrates L'analyse par HPLC d'un principe actif selon l'invention permet de déterminer la répartition des poids moléculaires de la fraction glucidique. La caractérisation par chromatographie en phase gazeuse (CPG) de la fraction glucidique du principe actif selon l'invention montre qu'il se caractérise par une fraction carbohydrates composée majoritairement de galactanes de degré de polymérisation compris entre 20 et 430 et de poids moléculaire compris entre 3600 Da et 77 000 Da.30 Identification de la fraction active Afin de déterminer la fraction active, les espèces moléculaires d'un principe actif selon l'invention ont été fractionnées : - une fraction A contenant les cendres du principe actif : La fraction cendres est obtenue par resolubilisation des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électrique. Le résidu est repris dans 5 mL d'eau distillée. La solution grisâtre obtenue est filtrée. La fraction récupérée contient 100% des cendres du principe actif. - une fraction B contenant les carbohydrates neutres : Les carbohydrates neutres sont purifiés par adsorption successive des composés cationiques puis anioniques sur des résines ioniques. La composition de la fraction B est déterminée par dosages spectrophotométriques ; les sucres sont dosés selon la méthode de Dubois et les protéines selon la méthode de Lowry. La fraction B contient 90% des sucres du principe actif et pas de protéines. - une fraction C correspondant à l'hydrolyse acide du principe actif. Le principe actif est soumis à une hydrolyse acide. La solution est ensuite neutralisée. La fraction C est analysée par chromatographie liquide ionique et comparée au principe actif. Cette analyse permet de quantifier les sucres présents sous forme libre et sous forme liée. La fraction C ne contient que des sucres libres. A titre illustratif, les résultats d'analyse de la fraction C obtenus avec le principe actif de l'exemplel sont présentés dans le tableau 1 ci-dessous : Principe actif selon Fraction C du principe actif l'invention selon l'invention Sucres libres 8% 100% (Galactose libre majoritaire) Sucres liés 95% 0% (Galactose lié majoritaire) Tableau 1 L'efficacité de ces trois fractions A, B et C à limiter la réaction de glycation du collagène a été évaluée et comparée à celle du principe actif. Le protocole opératoire mis en oeuvre est celui décrit au point II.A.2.a. A titre d'exemple, les résultats d'efficacité pour les fractions A, B et C du principe actif de l'exemple 1 sont présentés dans le tableau 2 ci-après : Intensité de Efficacité / Témoin fluorescence (UA) « glyqué »(%) Témoin collagène non glyqué 436 Témoin collagène glyqué 23 814 Principe actif 1,0% 13 414 -44% Fraction A 1,0`)/0 23 881 0% Fraction B 1,0% 14 133 -41% Fraction C 1,0`)/0 24 061 0% Tableau 2 La fraction B présente une efficacité comparable à celle du principe actif selon l'invention. La fraction B joue donc un rôle primordial dans l'efficacité du principe actif. D'autre part, la fraction C ne possède plus d'efficacité. Or cette fraction contient l'ensemble des sucres de l'actif mais uniquement sous forme libre. Ce sont les sucres présents dans le principe actif sous forme liée qui sont responsables de l'efficacité. Ce sont donc en particulier les galactanes de poids moléculaire compris entre 3600 Da (degré de polymérisation 20) et 77 000 Da (degré de polymérisation 430) qui jouent un rôle primordial dans l'efficacité du principe actif. Le principe actif selon l'invention est obtenu par un procédé permettant d'obtenir des galactanes de degré de polymérisation compris entre 20 et 430 à partir d'Hypnea Musciformis. II est préférentiellement obtenu par un procédé comprenant au moins une hydrolyse enzymatique des carbohydrates. Un procédé particulièrement adapté comprend au moins la succession des étapes suivantes : - solubilisation de poudre d'Hypnéa musciformis dans l'eau - séparation des phases solubles et insolubles par filtration - hydrolyse enzymatique des carbohydrates - traitement thermique - filtration. Des étapes supplémentaires de filtration et filtration stérilisante peuvent être envisagées. Des étapes de désodorisation et de décoloration ou de concentration peuvent être ajoutées. Les paramètres des différentes étapes doivent être ajustés afin d'obtenir des principes actifs présentant les caractéristiques de l'invention. Ces étapes sont usuelles dans le domaine des extractions d'actifs à partir de plantes ou de levures et l'homme du métier est à même d'en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales. La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis tel que décrit précédemment, dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Il peut s'agir de compositions comprenant entre 0,1 et 3% de principe(s) actif(s) obtenu(s) à partir d'Hypnea Musciformis selon la présente invention. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi : - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba ; - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ; - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ; - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ; - les filtres organiques, - les filtres inorganiques, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, - les séquestrants, - les parfums, - et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council). Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Ces compositions sont notamment destinées à être utilisées pour le soin de la peau humaine. En particulier, l'invention vise un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à un effet raffermissant et/ou antivieillissement de la peau, comprenant l'application topique au moins une fois par jour d'une composition renfermant un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis. Afin d'illustrer les effets cosmétiques sur la peau d'un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis, les exemples suivants avec leurs résultats d'essais sont présentés. I. EXEMPLES 1.1 Exemple 1 : Principe actif selon l'invention Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : - solubilisation de 50g de poudre d'Hypnéa musciformis dans 11 d'eau - séparation des phases solubles et insolubles par filtration - hydrolyse enzymatique des carbohydrates à l'aide d'une carbohydrase - traitement thermique à 80°C pendant 30mn - filtration afin de sélectionner les carbohydrates de taille entre 3600 et 77000Da. Un principe actif obtenu par ce procédé présente les caractéristiques suivantes : - aspect : liquide limpide - couleur : jaune très clair - teneur en matières sèches : 25,0 g/I - teneur en cendres : 22% - teneur en carbohydrates : 14,7 g/I soit 59% - pH : 4,3 1.2 Exemple 2 : Principe actif selon l'invention Un autre exemple de principe actif susceptible d'être obtenu selon l'invention présente les caractéristiques suivantes : - aspect : liquide limpide - couleur : jaune très clair - teneur en matières sèches : 28,3 g/I - teneur en cendres : 21% - teneur en carbohydrates : 18,7 g/I soit 66% - pH : 4,1 1.3 Exemple 3 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème fluide Phase A. Eau qsp 100% glycérine 10% Phase B. Montanov 202 (Seppic) 2% DUB 1632 (Stéarinerie Dubois) 3% DUB BA (Stéarinerie Dubois) 5,6% DUB MCT5545 (Stéarinerie Dubois) 5% Alcool Stéarilique 2% Phase C. Principe actif selon l'invention 3% Conservateur 0,7% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion, blanche, fluide et brillante, sans odeur présente un pH de 5. En application topique, elle présente une préhension aisée, un étalement souple et glissant, une pénétration assez rapide, une sensation douce, un fini doux et sec et un effet mat. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - Mélanger B. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique. - Emulsionner B dans A, sous rotor stator à 1500 tr/min. - A 30 °C, ajouter C, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 1500 tr/min. - Laisser agiter (à 1200 tr/min) jusqu'à refroidissement pour une homogénéisation complète. 1.4 Exemple 4 Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un baume nourrissant Phase A. Eau qsp 100% Propylene glycol 5% Phase B. DUB liquid 85 (Stéarinerie Dubois) 10% AAB2 (Aiglon) 2% DUB1632 (Stéarinerie Dubois) 5% lsopropyl palmitate 5% Phase C. Principe actif selon l'invention 3% Conservateur 0,7% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion blanche très ferme avec une odeur légère présente un pH de 6. En application topique, elle présente une préhension facile, une sensation fraîche, un étalement glissant et soyeux, une pénétration immédiate et un fini sec. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique. - Mélanger B. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique. - Emulsionner B dans A, sous rotor stator à 1200 tr/min. - A 30 °C, ajouter C, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 1000 tr/min. - Laisser agiter, en diminuant peu à peu la vitesse d'agitation, jusqu'à complète homogénéisation. 1.5 Exemple Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un sérum gel Phase A. Eau qsp 100% Easynov (Seppic) 3% Glycérine 5,5% Carbopol Ultrez 10 (Novéon) 1,2% Montanox 60 (Seppic) 3,5% Phase B. Beurre de karité 1% Phase C. DC5200 (Dow Corning) 5% DC200 (Dow Corning) 10% Phase D. Principe actif selon l'invention 3% Conservateur 0,7% Micropearl M100 (Seppic) 1,6% Phase E. NaOH qsp pH 5,3 Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel émulsionné, écru, onctueux et brillant, sans odeur présente un pH de 5,3. En application topique il présente une préhension légère, une application souple, un étalement agréable et glissant, une pénétration rapide, un effet « eau » et un fini doux. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique. - Chauffer B, au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique. - Emulsionner B dans A, sous rotor stator à 2000 tr/min. - A 60°C, ajouter C, continuer à émulsionner sous rotor stator à 1800 tr/min. - A 30 °C, ajouter D, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 1500 tr/min, et ajuster aussitôt le pH avec E. - Laisser refroidir sous agitation (1500 tr/min), en vérifiant l'homogénéisation. 1.6 Exemple Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un gel douceur Phase A. Eau qsp 100% Satialgine US551 (Degussa) 0,6% Phase B. Sophiderm (Sophim) 2% Montanov 202 (Seppic) 2% Montanov 68 (Seppic) 3% Montanov 82 (Seppic) 1% Alcool cétéarylique 1% DUB PIS (Stéarinerie Dubois) 1% Patlac IL (Rita) 1% Phase C. Principe actif selon l'invention 3% Conservateur 0,7% MGESVPH (FACI) 2% Phase D. TiO2 1% Kaolin and iron oxide (Cl R102) (Sensient) 0,4% Cl 77492 (Sensient) 1% Cl 77491 (Laboratoires Hytech) 0,24% Cl 77499 (Terres de Sienne) 0,05% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette Emulsion (gel, rose - orangée) est épaisse et onctueuse, sans odeur et présente un pH de 5,8. En application topique elle présente une préhension facile, une application agréable, un étalement aisé, une pénétration immédiate, une couvrance légère, un effet « bonne mine », une sensation poudrée, et un fini sec et mat. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A, dans un bécher en veillant à bien disperser le gel sous agitation mécanique. - Mélanger B, dans un autre bécher. - Mélanger D, au mortier. - Chauffer A et B, séparément au bain-marie à 80°C, sous agitation mécanique ou magnétique selon la phase concernée. - Emulsionner B dans A, sous rotor stator à 2100 tr/min. - A 30 °C, ajouter C, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 1800 tr/min. - Puis ajouter D, petit à petit en évitant la coagulation des poudres. - Laisser refroidir en abaissant régulièrement la vitesse d'agitation jusqu'à complète homogénéisation. II. ÉVALUATION DE L'EFFICACITE COSMETIQUE D'UN PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION Il. A. Tests in vitro Il. A.1 - Sur la limitation de la glycation cellulaire a) Quantification des AGE L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à neutraliser la production des AGE. L'étude est réalisée par immunocytologie sur des fibroblastes normaux et sur des fibroblastes « glyqués » par le méthylglyoxal. Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant. A JO des fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C. A J1, J2 et J3 les fibroblastes sont traités comme suit : o fibroblastes humains normaux (FN) : les fibroblastes sont traités en présence ou en absence du principe actif de l'exemplel à 0,25% (V/V) o fibroblastes « glyqués » (FG), c'est-à-dire des fibroblastes normaux traités avec du méthyglyoxal : les fibroblastes humains sont traités avec une solution de méthyglyoxal à 300 uM en présence ou non du principe actif de l'exemplel à 0,1 et 0,25% (V/V) ou de l'aminoguanidine à 1mM (témoin positif) On réalise ensuite un marquage immunologique des AGE et une coloration. Les résultats sont visualisés à l'aide d'un microscope et une analyse quantitative des images est réalisée à l'aide d'un logiciel dédié permettant de mesurer une intensité de fluorescence ramenée à un nombre de cellules. Les résultats de cette quantification exprimée en Unité Arbitraire sont présentés dans le tableau 3 ci-après : Synthèse des AGE Efficacité / Témoin (x 104 UA) « glyqué »(%) Fibroblastes normaux Témoin 76 Principe actif exemple 1 0,25% 79 Fibroblastes « glyqués » Témoin 730* Aminoguanidine 1mM 155 -79% Principe actif exemple 1 0,10% 575 -21% Principe actif exemple 1 0,25% 334 -54% Tableau 3 : Effet du principe actif selon l'invention sur la production des AGE dans des fibroblastes normaux ou « qlyqués » Ces résultats montrent que la quantité d'AGE dans les fibroblastes est augmentée lors d'un traitement répété par le méthyglyoxal, témoignant d'un phénomène de glycation cellulaire. On constate par ailleurs que le principe actif selon l'invention permet de réduire la formation des AGE. En particulier testé à 0,25% sur fibroblastes « glyqués » le principe actif selon l'invention réduit la formation des AGE de 54%. Cet effet est dose-dépendant. Un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis peut donc être utilisé pour limiter la glycation cellulaire. b) Visualisation de l'organisation des fibres de vimentine La vimentine, filament intermédiaire du cytosquelette constitue une cible majeure des AGE. L'accumulation des AGE dans les cellules de la peau provoque une désorganisation du cytosquelette et la formation d'«aggresomes ». L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à limiter la formation d' « aggresomes ». L'étude est réalisée par immunocytologie sur des fibroblastes normaux et sur des fibroblastes « glyqués » par le methylglyoxal. Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant. A JO des fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C. A J1, J2 et J3 les fibroblastes sont traités comme suit : o fibroblastes humains normaux (FN) : les fibroblastes sont traités en présence ou en absence du principe actif de l'exemple 1.à 0,25% (V/V) o fibroblastes « glyqués » (FG), c'est-à-dire des fibroblastes normaux traités avec du méthyglyoxal : les fibroblastes humains sont traités avec une solution de méthyglyoxal à 300 I.J.M en présence ou non du principe actif de l'exemplel.à 0,1 et 0,25% (V/V) ou de l'aminoguanidine à 1mM (témoin positif) On réalise ensuite un marquage immunologique de la vimentine et une coloration. Les résultats sont visualisés à l'aide d'un microscope. Les résultats étant qualitatifs, ils sont présentés dans le tableau 4 ci-après selon 3 niveaux d'organisation : - organisation normale +++ - organisation faiblement altérée + - organisation altérée - Organisation de la vimentine Fibroblastes normaux Témoin +++ Principe actif de l'exemple 1 0,25% +++ Fibroblastes « glyqués » Témoin - Aminoguanidine 1mM +++ Principe actif de l' exemple 1 0,10% + Principe actif de l' exemple 1 0,25% +++ Tableau 4: Effet du principe actif selon l'invention sur l'organisation des fibres de vimentine dans des fibroblastes normaux ou « glyqués » Ces résultats montrent que l'organisation de la vimentine est profondément altérée lorsque les fibroblastes humains normaux sont « glyqués » . On constate par ailleurs que le principe actif selon l'invention permet de maintenir l'organisation des fibres de vimentine et préserve ainsi l'intégrité du cytosquelette Un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis peut donc être utilisé pour protéger la peau contre les effets délétères de la glycation cellulaire. c) Evaluation de l'activité lysyl oxidase L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à préserver l'activité de la lysyl oxydase. L'étude est réalisée par un dosage spectrofluorimétrique sur des fibroblastes normaux et sur des fibroblastes « glyqués » par le methylglyoxal. Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant. A JO des fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C. A J1, J2 et J3 les fibroblastes sont traités comme suit : o fibroblastes humains normaux (FN) : les fibroblastes sont traités en présence ou en absence du principe actif de l'exemple 1.à 0,25% (V/V) o fibroblastes « glyqués » (FG), c'est-à-dire des fibroblastes normaux traités avec du méthyglyoxal : les fibroblastes humains sont traités avec une solution de méthyglyoxal à 300 I.J.M en présence ou non du principe actif de l'exemple 1 à 0,1 et 0,25% (V/V) ou de l'aminoguanidine à 1mM (témoin positif) A J4 les surnageants sont récupérés. L'activité lysyl oxydase est dosée par spectrofluorimétrie. Les résultats de cette activité exprimée en Unité Arbitraire et en pourcentage de capacité à limiter la perte d'activité de Lysyl oxydase, sont présentés dans le tableau 5 ci-après. La capacité à limiter la perte d'activité de la lysyl oxydase est calculée selon la formule suivante : Capacité à limiter la perte d'activité de = Fibroblastes « glyqués » traités » - Fibroblastes « glyqués » témoin x100 LOX Fibroblastes normaux témoin- Fibroblastes « glyqués » témoin Activité lysyl oxydase Capacité à limiter la perte d'activité de lysyl oxydase (%) (UA) Fibroblastes normaux Témoin 35 806 Principe actif de l'exemple 1 0,25% 34 150 Fibroblastes « glyqués » Témoin 28 541 Aminoguanidine 1mM 30 398 +26 % Principe actif de l'exemple 1 0,10% 30 019 +20% Principe actif de l'exemple 1 0,25% 32 227 +51% Tableau 5: Effet du principe actif selon l'invention sur l'activité de la lysyl oxydase dans des fibroblastes normaux ou « glyqués » Ces résultats montrent que l'activité lysyl oxydase est réduite lorsque les fibroblastes humains normaux sont « glyqués ». On constate par ailleurs que le principe actif selon l'invention permet de maintenir l'activité de la lysyl oxydase. En particulier testé à 0,25% sur fibroblastes « glyqués » le principe actif selon l'invention présente une capacité à limiter la perte d'activité de la lysyl oxydase de 51%. Cet effet est dose-dépendant. Un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis peut donc être utilisé pour protéger la peau contre les effets délétères de la glycation cellulaire et préserve ainsi le métabolisme cellulaire. Il. A.2 - Sur la protection de la glycation tissulaire a) Etude de la glycation du collagène L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à limiter la réaction de glycation du collagène. Le protocole opératoire de l'étude est le suivant. A J0, les échantillons à tester sont préparés dans des tubes à hémolyse stérile : o témoin collagène normal (CN) : 1mIde collagène de queue de rat 3 mg/ml o témoin collagène glyqué (CG) : 1 ml de collagène de queue de rat 3 mg/ml + 0,3 ml d'une solution de glycolaldéhyde (Le glycolaldéhyde induit la réaction de glycation) o témoin positif = Aminioguanidine à 1M : 1 ml de collagène de queue de rat 3 mg/ml + 0,3 ml d'une solution de glycolaldéhyde + 32 1.J.L aminoguanidine (L'aminoguanidine est un inhibiteur de la réaction de glycation). o Principe actif selon l'invention : 1m1 de collagène de queue de rat 3 mg/ml + 0,3m1 d'une solution de glycolaldéhyde + principe actif de l'exemple 1 à 0,5% 1,0% et 2,5% Les échantillons sont incubés dans une étuve à 37°C et à l'abri de la lumière. A J7 la fluorescence émise par les produits de glycation formés est mesurée à l'aide d'un spectrofluorimètre. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 6. Intensité de Efficacité / Témoin fluorescence (UA) « glyqué »(%) Collagène normal Témoin 436 Collagène glyqué Témoin 23 814 Aminoguanidine 1 M 1 074 -95% Principe actif de l'exemple 1 0,5% 18 927 -21% Principe actif de l'exemple 1 1,0% 13 414 -44% Principe actif de l'exemple 1 2,5% 3 260 -86% Tableau 6 : Effet du principe selon l'invention sur la glycation du collagène Ces résultats montrent que le principe actif selon l'invention inhibe la glycation du collagène. En particulier testé à 2,5% il inhibe la glycation du collagène de 86%. Cet effet est dose-dépendant. b) Visualisation des réseaux matriciels : collagène I, fibrilline Les réseaux de collagène I et de fibrilline sont altérés par la réaction de glycation. L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à maintenir un réseau matriciel fonctionnel. Cette étude est réalisée par immunocytologie sur des fibroblastes normaux et sur des fibroblastes « glyqués » par le methylglyoxal. Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant. A JO des fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C. A J1, J2, J3 et J4 les fibroblastes sont traités comme suit : o fibroblastes humains normaux (FN) : les fibroblastes sont traités en présence ou en absence du principe actif de l'exemple 1 à 0,25% (V/V) o fibroblastes « glyqués » (FG), c'est-à-dire des fibroblastes normaux traités avec du méthyglyoxal : les fibroblastes humains sont traités avec une solution de méthyglyoxal à 300 I.J.M en présence ou non du principe actif de l'exemple 1 à 0,1 et 0,25% (V/V) ou de l'aminoguanidine à 1mM (témoin positif) On réalise ensuite un marquage immunologique du collagène I d'une part et de la fibrilline d'autre part. Les résultats sont visualisés à l'aide d'un microscope et une analyse quantitative des images est réalisée à l'aide d'un logiciel dédié permettant de mesurer une intensité de fluorescence ramenée. Les résultats de cette intensité pour le collagène et la fibrilline et du pourcentage de capacité à maintenir le réseau de collagène, sont présentés dans les tableaux 7 et 8 ci-après. La capacité à maintenir le réseau matriciel est calculée selon la formule suivante : Capacité à maintenir Fibroblastes « glyqués » traités » - Fibroblastes « glyqués » témoin le réseau matriciel = x100 Fibroblastes normaux témoin- Fibroblastes « glyqués » témoin30 Intensité de fluorescence Capacité à maintenir le du réseau de collagène I réseau de collagène (x 105 UA) (%) Fibroblastes normaux Témoin 460 Principe actif de l'exemple 1 0,25% 498 Fibroblastes « glyqués » Témoin 36 Aminoguanidine 1mM 162 +30% Principe actif de l'exemple 1 0,10% 121 +20% Principe actif de l'exemple 1 0,25% 461 +100% Tableau 7: Effet du principe selon l'invention sur la synthèse de réseau de collagène I dans des fibroblastes normaux ou « glyqués » Intensité de fluorescence Capacité à maintenir le du réseau de fibrilline réseau de fibrilline (x 105 UA) (%) Fibroblastes normaux Témoin 331 Principe actif de l'exemple 1 0,25% 341 Fibroblastes « glyqués » Témoin 38 Aminoguanidine 1mM 211 +59% Principe actif de l'exemple 1 0,10% 167 +44% Principe actif de l'exemple 1 0,25% 215 +60% Tableau 8: Effet du principe selon l'invention sur la synthèse de fibrilline dans des fibroblastes normaux ou « glyqués » Ces résultats montrent que les réesaux matriciels de collagène 1 et fibrilline sont altérés lorsque les fibroblastes humains normaux sont « glyqués ». On constate également que le principe actif selon l'invention préserve le réseau de collagène I et de fibrilline. En particulier testé à 0,25% il permet de préserver le réseau de collagène I de 100% et de fibrilline de 60%. Un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis peut donc être utilisé pour préserver l'intégrité de l'environnement matriciel et ainsi protéger la peau de la glycation tissulaire. c) Evaluation du pouvoir contractile des fibroblastes Le but de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à stimuler le pouvoir contractile des fibroblastes humains et à préserver l'organisation du cytosquelette : élément indispensable à la contraction. L'étude a été réalisée par analyse du diamètre des lattices couplée à un immunomarquage de la vimentine sur des lattices de collagène normales et glyquées. Le protocole opératoire est décrit en suivant. A JO on réalise des lattices de collagène : les fibroblastes normaux sont ajoutés dans un gel de collagène réalisé à partir de collagène I de queue de rat contenant ou non le principe actif de l'exemple 1 à 0,1% et 0,25% ou l'aminoguanidine à 1mM. L'incubation se fait dans une étuve à 37°C, contenant 5% de CO2. Après 6 heures d'incubation, les lattices de collagène sont traitées ou non avec du méthylglyoxal (MGO) : - Lattices non traitées MGO = Lattices normales (LN) - Lattices traitées MGO = Lattices glyquées (LG) A J1 on mesure le diamètre des lattices de collagène à l'aide d'un décimètre. En parallèle on réalise le marquage immunocytologique de la vimentine. Les résultats sont visualisés à l'aide d'un microscope confocal couplé à un système d'analyse d'image. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 9. La capacité de récupération de la contraction est calculée selon la formule suivante : Capacité de Lattices « glyquées » traitées » - Lattices « glyquées » témoin x100 récupération de la = contraction Lattices normales témoin- Lattices « glyquées » témoin Diamètre à J1 Différence du diamètre diamètre JO-J1 (cm) Capacité de (cm) de la contraction (%) Lattices normales 1,82 1,78 Témoin Principe actif de l'exemple 1 0,25% 1,72 1,88 Lattices glyquées Témoin «glyqué » 2,51 1,09 Aminoguanidine 1mM 1,90 1,70 +88% Principe actif de l'exemple 1 0,10% 2,27 1,33 +35% Principe actif de l'exemple 1 0,25% 2,16 1,44 +51% Tableau 9: Effet du principe selon l'invention sur le pouvoir contractile des fibroblastes dans des lattices normales ou « qlyqués » Pour l'organisation dendritique de la vimentine, les résultats étant qualitatifs, 3 niveaux d'organisation ont été définis: - organisation dendritique normale ++ - organisation dendritique faiblement altérée + - organisation dendritique fortement altérée Les résultats sont présentés dans le tableau 10. Organisation dendritique de la vimentine Lattices normales Témoin ++ Principe actif de l'exemple 1 0,50% ++ Lattices glyquées Témoin - Aminoguanidine 1mM +++ Principe actif de l'exemple 1 0,10% + Principe actif de l'exemple 1 0,25% ++ Tableau 10 : Effet du principe actif de l'exemple 1 sur l'organisation dentritigue des fibres de vimentine dans des lattices normales ou glyguées. Ces résultats montrent que dans des lattices glyquées, les fibroblastes présentent des capacités de contraction réduites et des fibres de vimentine désorganisées. On constate également que le principe actif selon l'invention est capable de restaurer les capacités de contraction des fibroblastes et de maintenir l'organisation des fibres de vimentine. En particulier, testé à 0,25%, il restaure les capacités de contraction des fibroblastes de 51% et permet également le maintien de l'organisation des fibres de vimentine. Un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis peut donc être utilisé pour protéger le cytosquelette et préserver la fonctionnalité des fibroblastes et ainsi protéger la peau de la glycation tissulaire. Il. B. Tests in vivo Il. B.1 - Description du panel et des études réalisées L'objectif des études réalisées in vivo a été dans un premier temps d'examiner l'impact des AGE sur différents paramètres cutanés en comparant un groupe de volontaires présentant un taux d'AGE élevé et un groupe présentant un taux de produits d'AGE faible. Dans un deuxième temps, l'effet du principe actif selon l'invention formulé en émulsion sur l'amélioration des paramètres cutanés de chacun des deux groupes a été évalué. Enfin, des essais ont été réalisées sur l'effet d'un principe actif selon l'invention sur la réduction des différences observées entre les deux groupes dans la première partie des 20 tests. Les volontaires pour ces études ont été sélectionnés selon un croisement de plusieurs critères et ont été répartis en deux groupes de la façon suivante : - Groupe A - AGE Elevé : groupe de 21 volontaires d'âge compris entre 54 et 74 ans, présentant un taux d'AGE moyen de 2,4 UA 25 - Groupe B - AGE Faible : groupe de 20 volontaires d'âge compris entre 52 et 70 ans, présentant un taux d'AGE moyen de 1,9 UA. Pour la mise en oeuvre des différentes études, les paramètres cutanés suivants ont été étudiés : o Niveau d'AGE mesuré à l'aide du système AGE ReaderTM (mesures réalisées au niveau de l'avant-bras interne sur une zone équivalente à 1 cm2) qui mesure l'autofluorescence cutanée o Aspect de la matrice dermique étudiée à l'aide du Vivascope 1500 trialser, microscope confocal laser in vivo ; l'aspect est évalué par un jury entraîné composé de trois experts selon l'échelle suivant : Aspect de la matrice Aspect des fibres Réseau Réseau Fibres allongées Fibres en toile grossier et fragmentées d'araignée spongieux Stade 4 ++ - ++ - Stade 3 + +/- + +/- Stade 2 +/- + +/- + Stade 1 - ++ - ++ Altération du derme 1 o Propriétés biomécaniques mesurées à l'aide d'un Cutomètre® : parmi les paramètres calculés à partir des courbes obtenues, le paramètre élasticité est retenu pour quantifier l'évolution des propriétés biomécaniques au niveau des avant-bras internes. L'élasticité de la peau est appréciée par le paramètre R5 (Elasticité nette) R5 = Ur/ Ue Si R5 augmente, l'élasticité de la peau augmente. Pour la mise en oeuvre des essais, le principe actif de l'exemple 2 est utilisé formulé en émulsion. Deux formules sont utilisés : - une formule jour lsononyl isononanoate (Dub lnin, Stérineries Dubois) 5,0% Principe actif de l'exemple 2 2,0% Cetearyl alcohol / Cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 1,5% Behenyl alcohol / Arachidyl glucoside / Arachidyl alcohol (Montanov 202, Seppic) 1,0% Butylen glycol (BG) 1,0% Conservateurs 0,7% Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 (Sepigel 305, Seppic) 0,3% Eau Qsp 100% - une formule nuit Isononyl isononanoate (Dub Inin, Stérineries Dubois) 5,0% Principe actif de l'exemple 2 3,0% Cetearyl alcohol / Cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 2,0% Behenyl alcohol / Arachidyl glucoside / Arachidyl alcohol (Montanov 202, Seppic) 2,0% Butylen glycol (BG) 2,0% Conservateurs 0,7% Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 (Sepigel 305, Seppic) 0,3% Eau Qsp 100% Il. B.2 Etude de l'impact du niveau d'AGE sur différents paramètres cutanés L'objectif de l'étude est d'évaluer, in vivo, sur des volontaires d'âge comparable, l'impact d'un niveau différent d'AGE sur les paramètres cutanés suivants : - Aspect des fibres de la matrice extracellulaire - Elasticité de la peau Les méthodes du point 11.6.1 ont été utilisées. L'étude a été réalisée sur le Groupe A et sur le Groupe B. Les résultats sont résumés dans les tableau 11 et 12. Aspect de la matrice dermique (UA) Groupe A - AGE élevé 2,2 Groupe B - AGE faible 2,6 A Groupe A / Groupe B (%) -16,8% Tableau 11 : Comparaison de l'aspect de la matrice dermique entre le groupe A et le groupe B Elasticité de la peau (mm) Groupe A - AGE élevé 0,545 Groupe B - AGE faible 0,583 A Groupe A / Groupe B (%) -6,5% Tableau 12 : Comparaison de l'élasticité de la peau (paramètre R5) entre le groupe A et le groupe B Ces résultats montrent qu'il existe une différence d'organisation du réseau matriciel et du paramètre R5 caractéristique de l'élasticité de la peau, entre un groupe de volontaires présentant un taux d'AGE élevé et un groupe de volontaires présentant un taux d'AGE faible. En effet, le groupe de volontaires ayant un taux d'AGE élevé présente une élasticité de la peau significativement moins importante que celle du groupe de volontaires ayant un taux d'AGE faible. Il. B.3 Etude de l'effet du principe actif L'objectif de cette étude a été d'investiguer l'effet d'un principe actif selon l'invention, formulé en émulsion, sur la réduction du taux d'AGE. Le niveau global d'AGE cutané a été évalué ainsi que celui du niveau de collagène glyqué et de pentosidine, marqueur spécifique des AGE. Ces derniers ont été étudiés grâce à la corrélation positive existante entre la quantité de pentosidine et de collagène glyqué et le niveau d'autofluorescence cutanée (Meerwaldt et al., 2004). Cette étude a été réalisée uniquement sur le groupe de volontaires présentant un taux élevé d'AGE. Dans un second temps, l'effet du principe actif selon l'invention sur la matrice dermique et l'élasticité de la peau, a été évalué à la fois, sur le groupe de volontaires présentant un taux d'AGE élevé (groupe A - AGE élevé) et le groupe de volontaires présentant un taux d'AGE faible (groupe B - AGE faible). Des acquisitions du réseau des fibres par microscopie confocale laser in vivo ainsi que des mesures d'élasticité de la peau à l'aide d'un Cutomètre® ont été réalisées avant et après 28 jours de traitement biquotidien. Le protocole opératoire de l'étude est le suivant : Entre J-14 et JO : aucune application de crème au niveau des avant-bras. A JO Localisation des zones de mesures sur les avant-bras internes Réalisation de mesures d'AGE à l'aide d'un AGE ReaderTM sur chaque zone Réalisation des mesures au Cutomètre® sur chaque zone Réalisation d'acquisitions par microscopie confocale sur chaque zone Entre JO et J27 : applications biquotidiennes des produits sur les avants bras de façon randomisée en légers massages jusqu'à pénétration * le matin : la formule placebo et la formule jour contenant le principe actif * le soir : la formule placebo et la formule nuit contenant le principe actif - A J28 : Localisation des zones de mesures sur les avant-bras internes Réalisation de mesures d'AGE à l'aide d'un AGE ReaderTM sur chaque zone Réalisation des mesures au Cutomètre® sur chaque zone Réalisation d'acquisitions par microscopie confocale sur chaque zone Les résultats obtenus sont présentés dans les tableaux 12, 13 et 14. Variation / Placebo (%) Taux d'AGE -4,5% Niveau de collagène glyqué -10,4% Niveau de Pentosidine -7,7% Tableau 13 : Effet du principe actif selon l'invention formulé en émulsion sur le taux d'AGE, de collagène glygué et de pentosidine du groupe A après 28 jours de traitement en comparaison au placebo Variation / Placebo (%) Groupe A - AGE élevé +25,2% Groupe B - AGE faible +11,8% Tableau 14 : Effet du principe actif selon l'invention formulé en émulsion sur l'aspect de la matrice dermique du groupe A et du groupe 8 après 28 jours de traitement. Comparaison au placebo respectif de chaque groupe. Variation / Placebo (%) Groupe A - AGE élevé +7,2% Groupe B - AGE faible +5,3% Tableau 15 : Effet du principe actif selon l'invention formulé en émulsion sur l'élasticité de la peau (paramètre R5) du groupe A et du groupe 8 après 28 jours de traitement. Comparaison au placebo respectif de chaque groupe. Ces résultats montrent que dans les conditions de cette étude, après 28 jours de traitement biquotidien et en comparaison au placebo, un principe actif selon l'invention formulé en émulsion et étudié : - sur des volontaires présentant un taux d'AGE élevé o diminue le niveau d'AGE, le niveau de collagène glyqué et le niveau de pentosidine, o améliore l'aspect de la matrice dermique (+25,2%) o améliore l'élasticité de la peau (+7,2%) - sur des volontaires présentant un niveau d'AGE faible et comparable à celui de personnes jeunes o tend à augmenter le stade d'organisation de la matrice dermique (+11,8%) o améliore l'élasticité de la peau (+5,3%). Il. B.4 Etude de l'effet du principe actif sur l'amélioration des paramètres cutanés L'objectif de cette étude est d'étudier l'effet d'un principe actif selon l'invention sur la réduction des différences observées entre le groupe A présentant un niveau d'AGE élevé et 15 le groupe B présentant un niveau d'AGE faible. Les résultats obtenus sont présentés dans les tableaux 16 et 17. Aspect de la matrice dermique (UA) JO J28 Groupe A - AGE élevé zone principe actif selon l'invention 2,2 2,8 Groupe B - AGE faible zone placebo 2,6 2,5 p Groupe A / Groupe B 0,0075 0,8751 Tableau 16 : Evolution de l'aspect de la matrice dermique entre JO et J28 pour le groupe A, coté traité et le groupe 8 côté traité placebo. 10 Elasticité de la peau (mm) JO J28 Groupe A - AGE élevé zone principe actif selon l'invention 0,545 0,595 Groupe B - AGE faible zone placebo 0,583 0,597 p Groupe A / Groupe B 0,0034 0,4692 Tableau 17: Evolution de l'élasticité de la peau (paramètre R5) entre JO et J28 pour le groupe A, coté traité et le groupe 8 côté traité placebo. Ces résultats montrent que dans les conditions de l'étude après 28 jours de traitement biquotidien et comparé à un placebo, le principe actif selon l'invention augmente - le stade d'organisation des fibres - le paramètre R5 caractéristique de l'élasticité de la peau permettant ainsi au groupe de volontaires présentant un taux d'AGE élevé de retrouver des caractéristiques cutanées comparables à celles de personnes ayant un taux d'AGE plus faible proche de celui de personnes jeunes. Le principe actif selon l'invention permet ainsi de redonner souplesse et élasticité aux peaux altérées par l'accumulation d'AGE. Ces différents essais montrent donc bien les effets cosmétiques d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis d'une composition cosmétique l'incluant, en particulier en ce qui concerne la protection de la peau contre les effets délétères de la glycation cellulaire et/ou de la glycation tissulaire, le raffermissement de la peau et le maintien de la fonctionnalité du derme. REVENDICATIONS1. Principe actif cosmétique obtenu à partir d'Hypnea Musciformis caractérisé en ce qu'il comprend au moins 40% de carbohydrates en poids par rapport au poids total de matières sèches. 2. Principe actif cosmétique selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comprend des galactanes. 3. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il comprend des galactanes présentant un poids moléculaire compris entre 3600 et 77000 Da. 4. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat d'Hypnea Musciformis. 5. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il est obtenu par un procédé comprenant au moins une hydrolyse enzymatique des carbohydrates d'Hypnea Musciformis. 6. Utilisation d'un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis comme principe actif cosmétique dans une composition cosmétique, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) au soin de la peau. 7. Utilisation selon la revendication 6, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à protéger la peau contre les effets délétères de la glycation cellulaire et/ou de la glycation tissulaire. 8. Utilisation selon la revendication 6 ou 7, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à raffermir la peau. 9. Utilisation selon l'une des revendications 6 à 8, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à augmenter l'élasticité et la fermeté de la peau. 10. Utilisation selon l'une des revendications 6 à 9 ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à préserver la fonctionnalité du derme. 11. Utilisation selon l'une des revendications 6 à 10 ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à lutter contre le vieillissement cutané. 12. Utilisation selon l'une des revendications 6 à 11, caractérisée en ce que le principe actif est un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis comprenant des galactanes. 13. Utilisation selon la revendication 12, caractérisée en ce que le principe actif est un principe actif selon l'une des revendications 1 à 5. 14. Composition cosmétique pour application topique, caractérisée en ce qu'elle comprend un principe actif selon l'une des revendications 1 à 5, présent entre 0,1 et 3% en poids total de la composition. 15. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à un effet raffermissant, comprenant l'application topique au moins une fois par jour d'une composition renfermant un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis. 16. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à un effet antivieillissement de la peau, comprenant l'application topique au moins une fois par jour d'une composition renfermant un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis. 17. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine selon l'une des revendications 15 ou 16, caractérisé en ce que le principe actif est un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis comprenant des ga lacta nes. 18. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine selon l'une des revendications 15 à 17, caractérisé en ce que le principe actif est un principe actif selon l'une des revendications 1 à 5. 19. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine selon l'une des revendications 15 à 18, caractérisé en ce que la composition est une composition selon la revendication 14.