Brevet FR3017955A1 — publié le 20150828

RESUME Les présents inventeurs ont identifié des biomarqueurs plasmatiques qui, seuls ou en combinaison, permettent de diagnostiquer une cardiomyopathie du peripartum (CMPP) chez une patiente de façon certaine. Le dosage de ces biomarqueurs peut se faire facilement à partir d'une gouttelette de sang, par exemple prélevée au bout du doigt d'une patiente, ou de plasma sanguin. Ces biomarqueurs sont des molécules connues pour leur effet pro- ou anti-angiogénique, plus précisément la fms like tyrosine kinase 1 (sFlt-1), le P1GF, VEGF et la relaxine. DESCRIPTION DE L'ART ANTERIEUR La cardiomyopathie du peripartum (CMPP) est une insuffisance cardiaque aiguë, survenant dans le dernier mois d'une grossesse, ou dans les 6 mois qui suivent l'accouchement, chez une femme n'ayant préalablement aucun problème cardiaque. La CMPP a une incidence d'environ un cas pour 3 000 grossesses aux Etats-Unis, avec un risque doublé chez les femmes noires ; l'incidence semble très supérieure en Afrique du Sud (1/1000 grossesses) et à Haïti (de l'ordre d'un cas pour 300 grossesses) (Patten IS et al, Nature 2012). En revanche, l'incidence de cette maladie en Europe n'est pas connue. La gravité de cette maladie réside dans le fait que les patientes peuvent se présenter soit pour dyspnée (symptôme fréquent en cours de grossesse), soit dans un tableau 1 d'insuffisance cardiaque (difficile à diagnostiquer en fin de grossesse) ou plus rarement dans un tableau de choc cardiogénique. Le pronostic est variable avec une récupération sans rechute dans 23% des cas, une insuffisance cardiaque chronique dans 50% des cas et un décès dans 15% des cas (Sliwa K et al, Lancet 2006). Les complications de la CMPP sont fréquentes et graves : la persistance de la dysfonction cardiaque touche au moins un tiers des CMPP et la mortalité est proche de 5-10°A dans les mois qui suivent la découverte de la maladie. De plus, des données montrent que la mortalité est encore plus grande pour les femmes ayant présenté une CMPP, lors de la grossesse suivante. Il a récemment été proposé que cette maladie serait liée à la production d'une prolactine modifiée par les femmes allaitantes, car cette prolactine modifiée aurait un effet négatif sur le coeur (Hiliker-Kleiner D. et al, Cell 2007). Un article récent atten IS et al. Nature 2012) évoque par ailleurs un lien entre l'excès d'anti-angiogénèse et la dysfonction cardiaque de la CMPP. Cet article suggère que la CMPP serait causée par une élévation du taux circulant de sFlt-1 (facteur anti-angiogénique). Ces résultats ne sont pas fiables en raison des trois critiques majeures: 1) les patientes incluses dans cette étude souffraient d'une forte incidence de pré-éclampsie ; 2) la comparaison de sFlt-1 plasmatique s'est faite versus des patients contrôles, a priori pas dans la phase du péripartum et 3) seul le sFlt-1 a été dosé et pas l'ensemble de la balance angiogénique/antiangiogénique. Par ailleurs, la demande internationale WO 2012/106152 suggère qu'un taux élevé de facteurs anti-angiogéniques (et notamment le sFlt-1) dans le plasma sanguin est le signe d'un risque accru de développer une maladie cardiaque chronique comme la CMPP. 2 A l'inverse, les présents inventeurs ont mis en évidence que l'apparition de la CMPP résulte en fait d'une persistance anormale de l'angiogenèse et d'un effondrement de la relaxine et du sFlt-1 à la fin de la grossesse et après l'accouchement. En effet, la grossesse nécessite un développement massif de la circulation sanguine de la mère pour pouvoir nourrir le foetus. A la fin de la grossesse, un agent anti-angiogénique (sFlt-1) est sécrété pour que le système vasculaire revienne à l'état pré-grossesse. Les résultats des inventeurs démontrent que la CMPP n'est pas liée, comme le suggérait les précédentes études (Patten IS et WO 2012/106152), à une élévation du taux de facteurs antiangiogéniques circulants, mais elle est associée au contraire à des taux effondrés d'agents anti-angiogéniques (sFlt-1) et à la persistance d'une angiogénèse très active (taux plasmatiques élevés de P1GF et de VEGF) qui se poursuit des mois, malgré l'arrêt de la grossesse. De plus le taux de relaxine est effondré, voire indétectable chez les patientes souffrant de CMPP. Aujourd'hui, le diagnostic de la CMPP est un diagnostic clinique et échocardiographique d'exclusion, ce qui le rend peu fiable et couteux (Sliwa K et al, Lancet 2006). De plus, les échocardiographistes sont totalement absents des maternités voire des régions dans le monde où la CMPP est endémique. Enfin, il n'existe aucun biomarqueur diagnostic fiable pour détecter cette maladie. Dans ce contexte, les présents inventeurs ont cherché à identifier des biomarqueurs plasmatiques révélateurs de cette maladie, dont la mesure serait aisée dans des laboratoires de biologie (biomarqueurs dits « diagnostiques »). DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION 3 Dans ce but, les inventeurs ont étudié les concentrations plasmatiques de facteurs angiogéniques (pro et anti) et de relaxine dans des prélèvements de patientes saines dans la phase du péripartum (patientes enceintes ou après leur accouchement, toutes sans CMPP) et l'ont comparée aux taux mesurés chez des patients admises dans les hôpitaux pour CMPP. Les inventeurs ont alors pu confirmer que - contrairement à ce qui était décrit dans la littérature scientifique - la CMPP survient pendant ou après la grossesse 1) lorsque l'angiogénèse persiste de façon anormale (au lieu de diminuer), et que cette persistance est attestée par des niveaux anormalement élevés de facteurs pro-angiogéniques (tels que le VEGF et le P1GF),des niveaux anormalement faibles de facteurs anti-angiogéniques (tel que le sFlt-1) et 2) quand le taux circulant de relaxine, est effondré (il est même indétectable chez beaucoup de patientes souffrant de CMPP), ce qui induit des ratios [sFlt-1 /P1GF], [sFlt-1 /VEGF], [Relaxine/P1GF] et/ou [Relaxine/VEGF] mesurés anormalement bas. Description des biomarqueurs de l'invention Dans un premier aspect, la présente invention vise une méthode pour diagnostiquer une cardiomyopathie peripartum (CMPP) chez une femme, ladite méthode comprenant les étapes de: a) mesurer in vitro le taux de facteurs modulant l'angiogénèse dans un échantillon biologique de cette femme, et 4 b) comparer ce(s) taux à une (des) valeur(s) de référence. Cette méthode est de préférence caractérisée en ce que, si le taux de facteur proangiogénique mesuré à l'étape a) est supérieur à ladite valeur de référence et/ou si le taux de facteur anti-angiogénique ou de relaxine mesurés à l'étape a) est inférieur à ladite valeur de référence, alors ladite femme souffre d'une CMPP. Par « facteurs modulant l'angiogénèse », sont désignés dans la présente demande tous les facteurs pro-angiogéniques et anti-angiogéniques aujourd'hui connus, ainsi que tout autre facteur dont le rôle (activateur ou inhibiteur) sur l'angiogénèse viendrait à être révélé dans les années futures. La relaxine fait partie de ces facteurs. Son activité pro- angiogénique, décrite dans l'art antérieur (notamment dans Dschietzig T, Pharmacol. Ther. 2006), est en effet aujourd'hui remise en question par les résultats récemment obtenus par les présents inventeurs (cf. exemples ci-dessous). Si la relaxine module bien l'angiogénèse, sa nature pro- ou anti-angiogénique nécéssite donc aujourd'hui confirmation. Lesdits facteurs pro-angiogéniques sont par exemple choisis dans le groupe constitué par : P1GF et VEGF. Ledit facteur anti-angiogénique est par exemple le sFlt-1. Dans un mode de réalisation préféré, lesdits facteurs modulant l'angiogénèse sont choisis parmi les facteurs pro-angiogéniques (tels que le VEGF ou le P1GF) et les facteurs anti-angiogéniques (tel que le sFlt-1). Dans un autre mode de réalisation préféré, ledit facteur modulant l'angiogénèse est la relaxine. 5 Le « facteur de croissance placentaire humain » ou « P1GF » (pour « Placental Growth factor ») ou « PGF » est une protéine qui est codée par le gène PGF. Cette protéine est membre de la sous-famille du VEGF (Vascular Endothelial Growth factor), qui est impliquée dans l'angiogénèse et la vasculogénèse, notamment pendant l'embryogénèse. La principale source de P1GF pendant la grossesse est le trophoblaste placentaire. Chez l'être humain, cette protéine a pour séquence SEQ ID NO :1 (NP_001193941). Le dosage du P1GF circulant peut être effectué par n'importe quelle méthode classique connue de l'homme du métier. En particulier, il est possible d'obtenir une valeur très précise du taux de P1GF circulant en utilisant les tests commercialisés à cet effet (Roche, PerlinElmer). Ces tests sont classiquement utilisés pour diagnostiquer une pré-éclampsie chez les femmes enceintes. Le VEGF est protéine de signalisation importante impliquée à la fois dans la vasculogenèse (la formation de novo de l'appareil circulatoire embryonnaire) et l'angiogenèse (la croissance des vaisseaux sanguins à partir de vaisseaux préexistants). Le VEGF a, chez l'homme, plusieurs isoformes. Ces isoformes ont pour séquence NP_001020537 (isoforme A, SEQ ID NO :2), NP_003367.4 (isoforme B, SEQ ID NO :3), NP_001020538.2 (isoforme C, SEQ ID NO :4), NP_001020539.2 (isoforme D, SEQ ID NO :5), NP_001020540 (isoforme E, SEQ ID NO :6), etc. Ces isoformes du VEGF peuvent être dosés par n'importe quelle méthode classique connue de l'homme du métier, notamment par ELISA, par exemple au moyen de kits commercialisés (par exemple le kit ADI-900-080 chez Enzo Life Sciences ou 45-VEGHU-E01 chez Alpco immunoassays). 6 La « tyrosine kinase-1 fms-like soluble » ou « sFlt-1» (pour « Soluble fms-like tyrosine kinase-1 ») ou « sVEGFR-1 » est une protéine tyrosine kinase anti-angiogénique, i.e., qui inhibe les protéines impliquées dans la croissance des vaisseaux sanguins. Cette kinase est un variant d'épissage du récepteur 1 de VEGF (Flt-1) qui est produite par divers tissus (Khalil A. et al, PLoS One 2008). Elle agit comme un récepteur du facteur de croissance endothélial vasculaire (VEGF) et réduit les taux circulants libres des facteurs pro-angiogéniques VEGF et P1GF. Les taux sériques de sFlt-1 sont élevés chez les femmes atteintes de pré-éclampsie avant même la présentation clinique et sFlt-1 serait associé à la gravité de cette maladie et à l'apparition de ses symptômes (Troisi R. et al, Am. J. Obstet. Gynecol. 2008). sFlt-1 baisse les concentrations plasmatiques et émousse ainsi les effets bénéfiques de ces facteurs pro-angiogéniques sur l'endothélium maternel ce qui générerait une hypertension maternelle importante et une protéinurie. En cas de grossesse normale, les niveaux du facteur anti-angiogénique sFlt-1 restent stables au cours des stades précoces et en milieu de gestation et augmentent progressivement jusqu'à terme. Chez les femmes qui développent une pré-eclampsie, les niveaux plasmatiques de sFlt-1 sont plus élevés que dans la grossesse normale (Maynard SE et al, J. Clin. Invest. 2003; Levine R.J., JAMA 2005; Lam C., Hypertension 2005) et le niveau plasmatique de P1GF est anormalement bas. Le rapport sFlt-1/P1GF est actuellement utilisé pour diagnostiquer la pré-éclampsie et prédire le moment de l'accouchement. Un rapport sFlt-1/P1GF > 85 indique une pré-éclampsie (Rana et al. Circulation. 2012;125:911-919). Le sFlt-1 a, chez l'homme, la séquence SEQ ID NO: 7 (NP_001153503.1, isoforme 4), SEQ ID NO :8 (NP_001153502.1,isoforme 3), SEQ ID NO :9 (NP_001153392.1, isoforme 2) ou SEQ ID NO :10 (NP_002010.2, isoforme 1). Le dosage du sFlt-1 circulant peut être effectué par n'importe quelle méthode classique 7 connue de l'homme du métier. En particulier, il est possible d'obtenir une valeur très précise du taux de sFlt-1 circulant en utilisant les tests commercialisés à cet effet (Roche). Toutes les isoformes de sFlt-1 sont reconnues par les anticorps distribués dans le commerce. La relaxine est une hormone polypeptidique de structure hétérodimérique appartenant à la superfamille de l'insuline qui contient aussi IGF-I et IGF-II (Insuline-like growth factors I et II) et RLF ou INSL3 (Relaxine-like factor) (Chartrel N. et al, MI S: médecine sciences 2002). Il existe chez l'homme, 3 isoformes de relaxine, d'action et de cibles différentes : les relaxine 1, 2 et 3. Seule la relaxine 2 est retrouvée sous forme circulante chez l'homme et serait la seule à avoir une action hormonale (Bathgate RA et al, J. Biol. Chem. 2002). Elle a pour séquence EAW58771.1 (SEQ ID NO :11). Ce facteur proangiogénique est impliqué dans divers phénomènes physiologiques tels que la régulation du tonus vasomoteur, l'osmolalité plasmatique, l'angiogenèse, la clairance du collagène et la fonction rénale (Dschietzig T, Pharmacol. Ther. 2006). Son effet thérapeutique a été testé très récemment au cours de l'insuffisance cardiaque aigue sans choc cardiogénique avec des résultats positifs très encourageants (Teerlink JR et al, Lancet 2009). Il a été montré qu'une dose de relaxine de 30 µg/kg par jour améliorait la dyspnée d'une manière significative à partir de la sixième heure après son administration et qu'elle avait un effet rémanent puisque cette amélioration se prolongeait jusqu'au 14ème jour. Le traitement par la relaxine permet aussi l'amélioration des signes d'insuffisance cardiaque, raccourcit la durée d'hospitalisation, réduit l'aggravation des symptômes au cours de l'hospitalisation, diminue le risque de décès de cause cardiovasculaire ou de réadmission à deux mois de suivi et enfin diminue la mortalité cardiovasculaire à trois mois ( Teerlink JR et al, Lancet 2009). La relaxine joue un rôle majeur dans le processus de reproduction 8 chez les mammifères comme le porc, le cobaye et le rat puisqu'il a été prouvé que sa sécrétion augmente et qu'elle agit directement sur la croissance et le remodelage des organes génitaux pendant la gestation et au moment de la partition en provoquant l'élongation des ligaments pelviens et le relâchement du col utérin (Sherwood OD, Endocr. Rev. 2004, April 25(2):205-34). Chez la femme, aucune des propriétés physiologiques de la relaxine n'a été confirmée, mais il a été montré que la relaxine jouerait un rôle lors de l'induction de la décidualisation. La relaxine est détectée dans le sang chez la femme pendant la phase lutéale à 6 pg/ml et augmente rapidement en cas de fécondation atteignant le pic de 1ng/m1 à la fin du premier trimestre, puis baisse et se maintient à 0,5 ng/ml jusqu'au terme. Chez la femme ménopausée, les taux circulants de relaxine sont effondrés (Sherwood OD, Endocr. Rev. 2004: April 25(2):205-34). La concentration plasmatique de relaxine a été décrite comme augmentée chez l'insuffisant cardiaque, en fonction de la sévérité (Dschietzig T et al FASEB 15 :2187- 2195, 2001). La relaxine peut être dosée par n'importe quelle méthode classique connue de l'homme du métier, par exemple par ELISA. Les résultats des inventeurs montrent pour la première fois que, si le taux de P1GF plasmatique est élevé (par exemple supérieur à 60 pg/ml), ou si te taux de VEGF est élevé (par exemple supérieur à 120 pg/ml), ou si le taux de sFlt-1 plasmatique est faible (par exemple inférieur à 480 pg/ml), ou si le taux de relaxine plasmatique est faible (par exemple inférieur à 10 pg/mL) chez une femme dans les suites d'un accouchement, le diagnostic de CMPP est certain. Les inventeurs proposent donc de diagnostiquer la CMPP chez une patiente en dosant la quantité de P1GF, de sFlt-1, de VEGF ou de 9 relaxine dans un échantillon biologique de ladite femme. Les quatre biomarqueurs identifiés par les présents inventeurs (à savoir le P1GF, le sFlt-1, le VEGF et la relaxine) peuvent être utilisés indépendamment les uns des autres. Ils seront par la suite qualifiés de « biomarqueurs diagnostiques de l'invention ». Dans un mode de réalisation particulier, la présente demande vise donc une méthode pour diagnostiquer une cardiomyopathie peripartum (CMPP) chez une femme, ladite méthode comprenant les étapes de: a) mesurer in vitro, dans un échantillon biologique de cette femme, le taux de sFlt-1, de P1GF, de VEGF et/ou de relaxine, et b) comparer ces taux à des valeurs de référence. De préférence, ladite méthode est caractérisée en ce que : si le taux de P1GF mesuré à l'étape a) est supérieur à la valeur de référence pour ce marqueur, et/ou si le taux de VEGF est supérieur à la valeur de référence pour ce marqueur, et/ou si le taux de sFlt-1 mesuré à l'étape a) est inférieur à la valeur de référence pour ce marqueur, et/ou si le taux de relaxine mesuré à l'étape a) pour ce marqueur est supérieur à la valeur de référence pour ce marqueur, alors cette femme souffre d'une CMPP. Dans un mode de réalisation plus particulier, la présente demande vise une méthode comprenant les étapes : a) mesurer in vitro le taux de VEGF et/ou de P1GF dans un échantillon biologique de 20 cette femme, b) comparer ce(s) taux à une (des) valeur(s) de référence. 10 De préférence, dans une telle méthode, un taux de VEGF et/ou de P1GF mesuré à l'étape a) supérieur à ladite valeur de référence indique que cette femme souffre d'une CMPP. Dans un autre mode de réalisation plus particulier, la présente demande vise une méthode comprenant les étapes : a) mesurer in vitro le taux de relaxine et/ou de sFlt-1 dans un échantillon biologique de cette femme, b) comparer ce(s) taux à une (des) valeur(s) de référence. De préférence, dans une telle méthode, un taux de relaxine et/ou de sFlt-1 mesuré à l'étape a) inférieur à ladite valeur de référence indique que cette femme souffre d'une CMPP. Le dosage du sFlt-1 et du P1GF circulant peut être effectué par n'importe quelle méthode classique connue de l'homme du métier. En particulier, il est possible d'obtenir une valeur très précise du taux de ces marqueurs en utilisant les tests commercialisés à cet effet (Roche). Ces tests sont classiquement utilisés pour diagnostiquer une pré- éclampsie chez les femmes enceintes. De même, le dosage du VEGF et du P1GF peut être réalisé par n'importe quelle méthode (par ELISA par exemple). Par « diagnostiquer une CMPP», on entend ici détecter si une femme est en train de développer ou a déjà développé une CMPP au moment où l'échantillon biologique est 20 prélevé. 11 Par « CMPP » ou « cardiomyopathie du péri-partum », on entend ici désigner un tableau d'insuffisance cardiaque survenant typiquement en fin de grossesse et jusqu'à six mois après l'accouchement. La cardiomyopathie se manifeste par un tableau d'insuffisance cardiaque sans particularité : essoufflement, oedèmes des membres inférieurs. L'échocardiographie montre une dilatation plus ou moins importante du ventricule gauche avec une fraction d'éjection basse, signant la dysfonction systolique. Le taux de BNP ou de NT-proBNP dans le sang est élevé, comme dans toute insuffisance cardiaque. Il semble qu'un taux élevé de prolactine et d'interféron gamma soit corrélé avec une forme plus grave. La « valeur de référence du biomarqueur P1GF » en ce qui concerne le diagnostic de la CMPP est typiquement d'environ 60 pg/mL. De préférence, elle est de 80 pg/mL et, de manière encore plus préférée, de 90 pg/mL. D'autre part, la « valeur de référence du biomarqueur VEGF» en ce qui concerne le diagnostic de la CMPP est typiquement d'environ 120 pg/mL. De préférence, elle est d'environ 130 pg/mL et, de manière encore plus préférée, de 150 pg/mL. Dans le contexte de la présente invention, le taux de P1GF ou de VEGF dosé est dit « supérieur à la valeur de référence», si le ratio entre ce taux et ladite valeur de référence est supérieur à 1.4, de préférence supérieur à 1.6, de manière plus préférée supérieur à 1.8. Par ailleurs, la « valeur de référence pour le sFlt-1 » en ce qui concerne le diagnostic de la CMPP est typiquement d'environ 480 pg/mL. De préférence, elle est d'environ 300 pg/mL et, de manière encore plus préférée, de 200 pg/mL. 12 Dans un autre mode de réalisation préféré entre tous, la présente demande vise une méthode comprenant les étapes : a) mesurer in vitro le taux de relaxine dans un échantillon biologique de cette femme, b) comparer ce taux à une valeur de référence. De préférence, dans une telle méthode, un taux de relaxine mesuré à l'étape a) inférieur à ladite valeur de référence indique que cette femme souffre d'une CMPP. De façon intéressante, il sera possible de traiter les patientes diagnostiquées comme souffrant d'une CMPP par cette méthode en leur administrant de la relaxine recombinante, tel que décrit dans l'insuffisance cardiaque aiguë hors du contexte de la grossesse (Teerlink et al. Lancet 2012). Un tel traitement sera en effet susceptible de rétablir la concentration de relaxine ; on peut donc imaginer adapter la posologie au taux plasmatique de relaxine initial et de répéter l'administration de la relaxine recombinante jusqu'à obtenir le taux plasmatique de relaxine adapté. Le rétablissement de taux de relaxine plasmatique peut possiblement rétablir l'équilibre des facteurs pro- et anti- angiogéniques chez la patiente, afin d'améliorer les fonctions cardiovasculaires et la fonction des organes tels que le rein et le foie (Metra et al. JACC 2013). La méthode de l'invention pourra alors avantageusement faire partie d'une méthode de traitement visant à soulager ces patientes. Les biomarqueurs de l'invention, et notamment la relaxine, représentent donc des outils de diagnostic compagnons prometteurs, permettant d'évaluer si et dans quelle mesure 13 un traitement à base de relaxine recombinante serait susceptible d'être efficace chez des femmes présentant les symptômes d'une CMPP. La « valeur de référence pour la relaxine » en ce qui concerne le diagnostic de la CMPP est typiquement d'environ 10 pg/mL. De préférence, elle est d'environ 5 pg/mL et, de manière encore plus préférée, de 2 pg/mL. Dans le contexte de la présente invention, le taux de sFlt-1 ou de relaxine dosé est dit « inférieur à la valeur de référence» si le ratio entre ce taux et ladite valeur de référence est inférieur à 1, de préférence inférieur à 0.8, de manière plus préférée inférieur à 0.6. De façon intéressante, le dosage de ces biomarqueurs peut se faire facilement à partir d'une gouttelette de sang, par exemple prélevée au bout du doigt d'une patiente. Par « échantillon biologique », on entend donc ici un échantillon de sang, et, plus particulièrement, un échantillon de sérum ou de plasma. Il est également possible de mettre en oeuvre la méthode de l'invention à partir d'un échantillon d'urine. Dans un mode de réalisation particulier, les biomarqueurs diagnostiques de l'invention peuvent être combinés les uns avec les autres. Dans le cadre de la méthode de l'invention, il est possible de mesurer le taux de n'importe quelle combinaison de ces marqueurs : P1GF et VEGF, P1GF et relaxine, P1GF et sFlt-1, sFlt-1 et relaxine, VEGF et sFlt-1, ou encore VEGF et relaxine. Une fois le taux de chaque marqueur mesuré, il est possible de calculer le ratio entre ces taux, afin de poser un diagnostic certain quant à la CMPP chez la femme à qui l'échantillon biologique a été prélevé. En effet, les résultats des inventeurs montrent pour la première fois que, chez les femmes souffrant de CMPP, 14 le ratio entre les taux de relaxine et de P1GF plasmatiques mesurés (ci-après décrit en tant que ratio [relaxine/P1GF]) est proche de zéro (0), le ratio entre les taux de relaxine et de VEGF plasmatiques mesurés (ci-après décrit en tant que ratio [relaxine/VEGF]) est proche de zéro (0) ; le ratio entre les taux de sFlt-1 et de P1GF plasmatiques mesurés (ci-après décrit en tant que ratio [sFlt-1/P1GF]) est très faible ; le ratio entre les taux de sFlt-1 et de VEGF plasmatiques mesurés (ci-après décrit en tant que ratio [sFlt-1/VEGF]) est très faible ; La mesure de ces ratios permet donc de diagnostiquer de façon certaine la maladie CMPP chez des femmes en fin de grossesse ou à la suite de leur accouchement.. Les inventeurs proposent donc de diagnostiquer la CMPP chez une patiente en dosant la quantité de VEGF ou de P1GF d'une part (facteurs pro-angiogéniques dont le taux est anormalement haut en cas de CMPP), et le taux de sFlt-1(facteur anti-angiogénique dont le taux est anormalement bas en cas de CMPP) ou de relaxine d'autre part (facteur modulant l'angiogénèse dont le taux est anormalement bas en cas de CMPP). Les quatre combinaisons préférées sont donc : P1GF et relaxine, P1GF et sFlt-1, VEGF et sFlt-1, ou encore VEGF et relaxine. Ainsi, la méthode diagnostique selon l'invention pourrait contenir les étapes : a) mesurer le taux de relaxine et le taux de VEGF dans un échantillon biologique de ladite femme, et b) calculer le ratio [relaxine/VEGF] et le comparer à une valeur de référence. 15 Cette méthode est caractérisée en ce que, si le ratio calculé à l'étape b) est inférieur à la valeur de référence pour ce ratio, ou si ce ratio est nul ou quasiment nul (i.e., inférieur à 0.01), alors cette femme souffre d'une CMPP. La « valeur de référence pour le ratio [relaxine/VEGF] » en ce qui concerne le diagnostic de la CMPP est typiquement d'environ 0.2, et, de manière encore plus préférée, d'environ 0.1. Dans le contexte de la présente invention, le ratio [relaxine/VEGF] est dit « inférieur à la valeur de référence» si le ratio entre le ratio [relaxine/VEGF] et ladite valeur de référence est inférieur à 0.8, de préférence inférieur à 0.6, de manière plus préférée inférieur à 0.4. Dans un autre mode de réalisation, la méthode diagnostique selon l'invention pourrait contenir les étapes : a) mesurer le taux de sFlt-1 et le taux de VEGF dans un échantillon biologique de ladite femme, et b) calculer le ratio [sFlt-1/VEGF] et le comparer à une valeur de référence. Cette méthode est caractérisée en ce que, si le ratio calculé à l'étape b) est inférieur à la valeur de référence pour ce ratio, alors cette femme souffre d'une CMPP. La « valeur de référence pour le ratio [sFlt-1/VEGF] » en ce qui concerne le diagnostic de la CMPP est typiquement d'environ 2, et, de manière encore plus préférée, d'environ 1. 16 Dans le contexte de la présente invention, le ratio [sFlt-1/VEGF] est dit « inférieur à la valeur de référence» si le ratio entre le ratio [sFlt-1/VEGF] et ladite valeur de référence est inférieur à 0.8, de préférence inférieur à 0.6, de manière plus préférée inférieur à 0.4. Dans un autre mode de réalisation, la méthode diagnostique selon l'invention pourrait contenir les étapes : a) mesurer le taux de sFlt-1 et le taux de P1GF dans un échantillon biologique de ladite femme, et b) calculer le ratio [sFlt-1/P1GF] et le comparer à une valeur de référence. Cette méthode est caractérisée en ce que, si le ratio calculé à l'étape b) est inférieur à la valeur de référence pour ce ratio, alors cette femme souffre d'une CMPP. La « valeur de référence pour le ratio [sFlt-1/P1GF] » en ce qui concerne le diagnostic de la CMPP est typiquement d'environ 5, et, de manière encore plus préférée, d'environ 3. Dans le contexte de la présente invention, le ratio [sFlt-1/P1GF] est dit « inférieur à la valeur de référence» si le ratio entre le ratio [sFlt-1/P1GF] et ladite valeur de référence est inférieur à 0.8, de préférence inférieur à 0.6, de manière plus préférée inférieur à 0.4. Dans un autre mode de réalisation, la méthode diagnostique selon l'invention pourrait contenir les étapes : a) mesurer le taux de relaxine et le taux de P1GF dans un échantillon biologique de ladite femme, et b) calculer le ratio [relaxine /P1GF] et le comparer à une valeur de référence. 17 Cette méthode est caractérisée en ce que, si le ratio calculé à l'étape b) est inférieur à la valeur de référence pour ce ratio ou si ce ratio est nul ou quasiment nul (i.e., inférieur à 0.01), alors cette femme souffre d'une CMPP. La « valeur de référence pour le ratio [relaxine/P1GF] » en ce qui concerne le diagnostic de la CMPP est typiquement d'environ 0.2, et, de manière encore plus préférée, d'environ 0.1. Dans le contexte de la présente invention, le ratio [relaxine/P1GF] est dit « inférieur à la valeur de référence» si le ratio entre le ratio [relaxine/P1GF] et ladite valeur de référence est inférieur à 0.8, de préférence inférieur à 0.6, de manière plus préférée inférieur à 0.4. Il est possible, pour réaliser ces méthodes diagnostiques, de doser les différents marqueurs dans un seul et même échantillon ou dans différents échantillons prélevés chez la même patiente. Dans ce deuxième cas, les prélèvements ne doivent pas avoir été espacés dans le temps de plus de 1 jour (il est même préférable de les prélever à moins d'une heure d'écart). La méthode diagnostique de l'invention est destinée à détecter la CMPP chez n'importe quelle femme en âge de procréer (typiquement, âgée de 16 à 55 ans). Les résultats des inventeurs montrent par ailleurs que l'origine de la patiente (caucasienne, africaine, etc.) n'a pas d'importance. La CMPP étant une maladie survenant en fin ou après une grossesse, cette méthode est plus particulièrement destinée à diagnostiquer la CMPP chez une femme qui est enceinte au moment où l'échantillon a été prélevé, ou chez une femme qui a accouché dans les six mois précédent le prélèvement de l'échantillon. De manière encore plus 18 préférée, cette méthode est destinée aux femmes en fin de grossesse (typiquement, dans le troisième trimestre de grossesse) au moment où l'échantillon a été prélevé, ou ayant accouché dans les mois (notamment dans les six mois) précédent le prélèvement du (ou des) échantillon(s). Dans un second aspect, la présente invention vise également des kits contenant les moyens de détecter et/ou de quantifier les biomarqueurs pronostics et diagnostiques de l'invention. Ces kits permettent d'évaluer si une patiente souffre d'une CMPP, afin de lui procurer un traitement adapté. En particulier, ces kits peuvent contenir les moyens de détecter le P1GF, le sFlt-1, le VEGF et/ou la relaxine, dans un échantillon biologique tel qu'un échantillon sanguin. De manière préférée, ce kit contient les moyens de détection et/ou de mesure i) du taux de P1GF et de relaxine, ii) du taux de VEGF et de relaxine, iii) du taux de P1GF et de sFlt-1 ou iv) du taux de sFlt-1 et de VEGF dans un échantillon biologique tel qu'un échantillon sanguin. Ces moyens de détection sont par exemple des anticorps reconnaissants spécifiquement le P1GF humain, le VEGF humain, le sFlt-lhumain ou la relaxine humaine. Ces anticorps sont largement connus et disponibles commercialement. La présente invention vise également l'utilisation d'un kit comprenant les moyens de détecter et/ou de quantifier le taux de relaxine dans un échantillon biologique pour diagnostiquer une cardiomyopathie peripartum (CMPP) chez une femme. Avantageusement, ce kit pourra servir à la mise en oeuvre de la méthode de diagnostic de l'invention décrite ci-dessus (comprenant la mesure du taux de relaxine. 19 La présente invention vise par ailleurs l'utilisation d'un kit comprenant les moyens de détecter et/ou de quantifier les taux de relaxine et de P1GF dans un échantillon biologique pour diagnostiquer une cardiomyopathie peripartum (CMPP) chez une femme. Avantageusement, ce kit pourra servir à la mise en oeuvre de la méthode de diagnostic de l'invention décrite ci-dessus (comprenant la mesure du ratio [relaxine/P1GF]). La présente invention vise enfin l'utilisation d'un kit comprenant les moyens de détecter et/ou de quantifier les taux de relaxine et de VEGF dans un échantillon biologique pour diagnostiquer une cardiomyopathie peripartum (CMPP) chez une femme. Avantageusement, ce kit pourra servir à la mise en oeuvre de la méthode de diagnostic de l'invention décrite ci-dessus (comprenant la mesure du ratio [relaxine/VEGF]). La présente invention vise enfin l'utilisation d'un kit comprenant les moyens de détecter et/ou de quantifier les taux de sFlt-1 et de P1GF dans un échantillon biologique pour diagnostiquer une cardiomyopathie peripartum (CMPP) chez une femme. Avantageusement, ce kit pourra servir à la mise en oeuvre de la méthode de diagnostic de l'invention décrite ci-dessus (comprenant la mesure du ratio [sFlt-1/P1GF]). Ces kits peuvent également contenir des instructions pour mettre en oeuvre les méthodes de l'invention, et/ou des échantillons de référence permettant d'étalonner les valeurs de référence utilisées aux étapes de comparaison. 20 LEGENDES DES FIGURES La Figure 1 décrit les concentrations plasmatiques des biomarqueurs de l'invention pour des patientes souffrant de CMPP et des patientes non atteintes de CMPP, en particulier pour des femmes enceintes, au moment de l'accouchement, ou après l'accouchement pendant la période d'allaitement (allaitante). Les biomarqueurs dosés sont le P1GF (A), le sFlt-1 (B), la Relaxine (C) et le VEGF (D). La Figure 2 décrit les rapports de concentrations plasmatiques des biomarqueurs de l'invention pour des patientes souffrant de CMPP et des patientes non atteintes de CMPP, en particulier pour des femmes enceintes, au moment de l'accouchement, ou après l'accouchement pendant la période d'allaitement (allaitante). Les ratios représentés sont : le ratio sFlt-1/P1GF (A), le ratio Relaxine /P1GF (B), le ratio sFlt-1 / VEGF (C), et le ratio Relaxine / VEGF (D). EXEMPLES 1. Matériel et Méthodes. La présente étude est une étude observationnelle prospective multicentrique regroupant des patientes d'Afrique du Sud (Chris Hani Baragwanath Hospital (CHB), Soweto) et de France (Hôpital Bichat et Hôpital Lariboisière, Paris). Cette étude a inclus de 2009 à ce jour, un total de 133 patientes réparties comme suit : 58 patientes ayant une cardiomyopathie du péri-partum dont 25 suivies à 3-9 mois après le diagnostic. Ces patientes ont été comparées à 75 femmes dans la phase du péri-partum appartenant à 21 plusieurs sous-groupes : des femmes en fin de grossesse (n=10) ; des accouchées saines (40 patientes) ; des allaitantes saines (25 patientes) Les critères d'inclusion des patientes ayant une CMPP étaient les suivants : âge 18 ans, symptômes d'insuffisance cardiaque aiguë dans le dernier mois de grossesse jusqu'au Sème mois du post-partum, absence d'autre cause identifiable d'insuffisance cardiaque, fraction d'éjection du ventricule gauche (FEVG) 45% mesurée par échocardiographie trans-thoracique. Les critères d'inclusion des accouchées étaient les suivants : âge 18 ans, JO d'accouchement. Les critères d'inclusion des allaitantes étaient les suivants : âge 18 ans, allaitement en cours, dosage effectué un mois après l'accouchement. Les critères d'exclusion des patientes ayant une cardiomyopathie du péri-partum étaient les suivants : antécédents cardiovasculaires, pré-eclampsie ou éclampsie en cours de grossesse, PAS > 160 mmHg ou PAD > 100 mmHg, autres conditions que la cardiomyopathie qui pourraient augmenter les marqueurs de l'inflammation, anémie sévère avec hémoglobine en début de grossesse Le rapport sFlt-1/P1GF est de 1,32 (0.93 - 2,78) chez les CMPP, plus bas que les rapports sFlt-1/P1GF chez des femmes enceintes, des accouchées ou des allaitantes saines (tableaux 2 et 3). Ce résultat démontre la prédominance de l'angiogenèse chez les CMPP. Cette prédominance est particulièrement confirmée par le rapport sFlt-1/P1GF très bas dans les CMPP. En effet l'AUC (facteur de discrimination) des CMPP par rapport aux femmes saines dans la phase du péripartum est de 0,956 [0,918-0,957] (Tableau 4). De plus le rapport sFlt-1/P1GF a une spécificité et une sensibilité pour le diagnostic de CMPP, tous les 2 supérieurs à 0,90 (Tableau 4). La prédominance de l'angiogenèse est également confirmée par le rapport sFlt- 1/VEGF, également très bas chez les CMPP et l'AUC, la spécificité et la sensibilité très élevées du rapport sFlt-1/VEGF chez les CMPP (Tableaux 3 et 4). 2.2.3. Relaxine La concentration plasmatique de relaxine est très bas voire indétectable chez les CMPP : 0 (0 - 3,6) pg/ml) exprimée en médiane (25ème -75ème). Elle est nettement inférieure à celle des femmes enceintes, des accouchées et des allaitantes saines, respectivement de 27 1 pg/ml (121 pg/ml - 347 pg/ml), 1242 pg/ml (490 pg/ml - 2556 pg/ml, p REVENDICATIONS1. Méthode pour diagnostiquer une cardiomyopathie du peripartum (CMPP) chez une femme, ladite méthode comprenant les étapes de: a) mesurer in vitro le taux de facteurs modulant l'angiogénèse présents dans un échantillon biologique de cette femme, b) comparer ce(s) taux à une (des) valeur(s) de référence, dans laquelle : un taux de facteurs pro-angiogéniques mesurés à l'étape a) supérieur à ladite valeur de référence et/ou un taux de facteurs anti-angiogéniques et/ou de relaxine inférieurs à ladite valeur de référence indique que ladite femme souffre d'une CMPP. 2. Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdits facteurs proangiogéniques sont choisis parmi le VEGF et le P1GF et en ce que ledit facteur antiangiogénique est le sFlt-1. 3. Méthode selon les revendications 1 ou 2, comprenant les étapes : a) mesurer in vitro le taux de VEGF et/ou de P1GF dans un échantillon biologique de cette femme, b) comparer ce(s) taux à une (des) valeur(s) de référence, dans laquelle : 30un taux de VEGF et/ou de P1GF mesuré à l'étape a) supérieur à ladite valeur de référence indique que cette femme souffre d'une CMPP. 4. Méthode selon les revendications 1 ou 2, comprenant les étapes : a) mesurer in vitro le taux de relaxine et/ou de sFlt-1 dans un échantillon biologique de 5 cette femme, b) comparer ce(s) taux à une (des) valeur(s) de référence, dans laquelle : un taux de relaxine et/ou de sFlt-1 mesuré à l'étape a) inférieur à ladite valeur de référence indique que cette femme souffre d'une CMPP. 10 5. Méthode selon les revendications 1 ou 2, comprenant les étapes : a) mesurer in vitro les taux de VEGF et de relaxine dans un échantillon biologique de cette femme, b) calculer le ratio [relaxine/VEGF] et le comparer à une valeur de référence. 6. Méthode selon les revendications 1 ou 2, comprenant les étapes : 15 a) mesurer in vitro les taux de P1GF et de relaxine dans un échantillon biologique de cette femme, b) calculer le ratio [relaxine/P1GF] et le comparer à une valeur de référence. 7. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que ladite femme est enceinte, de préférence dans le troisième trimestre de sa grossesse. 31. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que ladite femme a accouché dans les mois précédent le prélèvement de l'échantillon. 9. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que ledit échantillon biologique est un échantillon de sang, de préférence du plasma sanguin ou du sérum sanguin. 10. Utilisation d'un kit comprenant les moyens de détecter et/ou de quantifier le taux de relaxine dans un échantillon biologique, pour diagnostiquer une cardiomyopathie peripartum (CMPP) chez une femme. 11. Kit comprenant les moyens de détecter et/ou de quantifier le taux de relaxine et de VEGF dans un échantillon biologique. 12. Kit comprenant les moyens de détecter et/ou de quantifier le taux de relaxine et de P1GF dans un échantillon biologique. 13. Utilisation des kits selon les revendications 11 et 12, pour diagnostiquer une cardiomyopathie peripartum (CMPP) chez une femme dans les méthodes décrites aux revendications 5 et 6 respectivement. 32