Brevet FR3022739A1 — publié le 20160101

GRANULES DE FARINE DE BIOMASSE DE MICROALGUES RICHES EN PROTEINES ET LEUR PROCEDE DE PREPARATION La présente invention est relative à des granules de farine de biomasse de microalgues riches en protéines, biomasse de microalgues intactes (non broyées). Plus particulièrement, la présente invention est relative à des granules de farine de biomasse de microalgues présentant une distribution granulométrique, des propriétés de compressibilité et de densité aérée tout à fait remarquables. La présente invention porte sur des granules de farine de biomasse de microalgues présentant des propriétés d'écoulement et de mouillabilité tout à fait satisfaisants. La présente invention concerne également le procédé de préparation de ces granules de farine de biomasse de microalgues riches en protéines. La présente invention porte enfin sur l'utilisation des granules de farine de biomasse de microalgues en alimentations humaine et animale (animaux de compagnie, aquaculture...), ou pour des applications dans l'industrie pharmaceutique et cosmétique. Il existe plusieurs espèces d'algues qui peuvent être utilisées en Alimentaire, la plupart étant des « macroalgues » comme le varech, la laitue de mer (Ulva lactuca) et les algues rouges alimentaires de type Porphyra (cultivées au Japon) ou « dulse » (algue rouge Palmaria 20 palmata). Mais à côté de ces macroalgues, on trouve également de nombreuses sources d'algues que sont les « microalgues », notamment les algues microscopiques unicellulaires, photosynthétiques ou non, d'origine marine ou non, cultivées pour leurs applications en Biocarburant ou Alimentaire. 25 Par exemple, la spiruline (Arthrospira platensis) est cultivée dans des lagunes ouvertes (en phototrophie) pour une utilisation comme complément alimentaire ou incorporée en petites quantités dans des confiseries ou des boissons (généralement moins de 0,5 % p/p). D'autres microalgues, y compris certaines espèces de Chlorelle, sont également très populaires dans les pays asiatiques comme compléments alimentaires. 30 La présente invention est ainsi relative à la biomasse de microalgues propre (ou adaptée) à la consommation humaine qui est riche en nutriments, notamment en protéines. L'invention se rapporte à une farine de biomasse de microalgues riches en protéines qui peut être incorporée dans les produits alimentaires dans lesquels la teneur en protéines de la farine de microalgues peut se substituer en tout ou partie des protéines présentes dans les produits alimentaires conventionnels. La farine de biomasse de microalgues fournit également d'autres bénéfices, comme des micronutriments, des fibres alimentaires (glucides solubles et insolubles), des triglycérides, des phospholipides, des glycoprotéines, des phytostérols, tocophérols, tocotriénols, et du sélénium. Au sens de l'invention, les microalgues considérées sont les espèces qui produisent des protéines à haute richesse. La biomasse de microalgues comprend au moins 50 % en poids sec de protéines, de préférence entre 50 et 70 % en poids sec de protéines. Les microalgues préférées de l'invention peuvent, quant à elles, croître en conditions hétérotrophiques (sur sucres comme source carbonée et en l'absence de lumière). La société Demanderesse recommande de choisir des microalgues du genre Chlorella riches en protéines. La Chlorelle est une microalgue unicellulaire verte, appartenant à l'embranchement des Chlorophytes. De manière préférée, les microalgues utilisées selon l'invention sont de type Chlorella sorokiniana ou Chlorella protothecoides. Les microalgues sont cultivées en milieu liquide pour produire la biomasse en tant que telle. Selon l'invention, les microalgues sont cultivées dans un milieu contenant une source de carbone et une source d'azote en absence de lumière (conditions hétérotrophiques). Les milieux de croissance solides et liquides sont généralement disponibles dans la littérature, et les recommandations pour la préparation des milieux particuliers qui conviennent à une grande variété de souches de microorganismes peuvent être aisément trouvées, par exemple, en ligne à http:// www.utex.org/, un site maintenu par l'Université du Texas à Austin pour sa collection de culture d'algues (UTEX). La production de biomasse est réalisée en fermenteurs (ou bioréacteurs). Les exemples spécifiques de bioréacteurs, les conditions de culture, et la croissance hétérotrophe et les méthodes de propagation peuvent être combinés de toute manière appropriée pour améliorer l'efficacité de la croissance microbienne et la production de protéines. Pour préparer la biomasse pour une utilisation en alimentaire, la biomasse obtenue en fin de fermentation est concentrée ou récoltée du milieu de fermentation. Au moment de la récolte de la biomasse de microalgues du milieu de fermentation, la biomasse comprend des cellules intactes pour l'essentiel en suspension dans un milieu de culture aqueux. Pour concentrer la biomasse, on procède alors à une étape de séparation solide-liquide par filtration ou par centrifugation, prise seule ou en combinaison, par tout moyen connu par ailleurs de l'homme du métier. Après concentration, la biomasse de microalgues peut être traitée afin de produire des gâteaux emballés sous vide, des paillettes d'algues, des homogénats d'algues, de la poudre d'algues, de la farine d'algues. Conformément à l'invention, on procède au séchage de la biomasse de microalgues pour faciliter le traitement ultérieur ou pour une utilisation de la biomasse dans ses différentes applications. Différentes textures et saveurs peuvent être conférées à des produits alimentaires, selon que la biomasse algale est séchée, et si oui, en fonction de la méthode de séchage mise en oeuvre. Par exemple, le brevet US 6,607,900 décrit le séchage de la biomasse de microalgues en utilisant un séchoir à tambour sans centrifugation préalable, pour préparer des flocons (« flakes ») de microalgues. De la poudre de microalgues peut être préparée à partir de la biomasse de microalgues concentrée à l'aide d'un sécheur pneumatique ou par atomisation, comme décrit dans le brevet US 6,372,460. Dans un atomiseur, une suspension liquide est alors pulvérisée sous la forme d'une dispersion de fines gouttelettes dans un courant d'air chauffé. Le matériel entraîné est rapidement séché et forme une poudre sèche. Dans certains cas, un séchoir à combustion pulsé peut également être utilisé pour obtenir une texture poudreuse dans le matériau final séché. Dans d'autres cas encore, une combinaison d'un séchage par atomisation suivi de l'utilisation d'un séchoir à lit fluidisé est mise en oeuvre pour atteindre les conditions optimales d'obtention d'une biomasse microbienne séchée (voir, par exemple, le brevet US 6,255,505). Dans le domaine technique auquel s'adresse l'invention, on recherche à préparer une farine de biomasse d'algues à partir de la biomasse de microalgues concentrée puis atomisée ou flash-séchée. Après séchage, la teneur en eau ou l'humidité de la poudre est généralement inférieure à 10 % en poids. Cependant, dans les procédés classiques de récupération de la biomasse de microalgues riches en protéines, on peut déplorer l'obtention d'une poudre sèche de faible compressibilité et de faible densité aérée. Il existe donc encore un besoin non satisfait pour de nouvelles formes de farine de biomasse de microalgues riches en protéines afin de permettre leur incorporation aisée, à grande échelle, dans des produits alimentaires qui doivent rester savoureux et nutritifs. La société Demanderesse a donc trouvé que ce besoin pouvait être satisfait en proposant des granules de farine de biomasse de microalgues présentant une distribution granulométrique, des propriétés de compressibilité et de densité aérée tout à fait remarquables. Les granules de farine de biomasse de microalgues conformes à l'invention sont ainsi caractérisés en ce qu'ils présentent : - une distribution granulométrique, mesurée sur un granulomètre laser LS de marque COULTER®, présentant un Dmode compris entre 60 et 300 lm et un D4,3 entre 70 et 420 lm, une densité aérée, mesurée sur Powder Characteristics Tester HOSOKAWA, comprise entre 0,60 et 0,70 %, une compressibilité, mesurée sur Powder Characteristics Tester HOSOKAWA, comprise entre 15 et 25 %, de préférence entre 18 et 21 %. Les granules de farine de biomasse de microalgues selon l'invention sont d'abord caractérisés par leur distribution granulométrique. Cette mesure est réalisée sur un granulomètre laser LS de marque COULTER®, muni de son module de dispersion petit volume ou SVM (125 ml) en suivant les spécifications du constructeur (dans les « Small Volume Module Operating instructions »). Les répartitions granulométriques sont illustrées par les valeurs de Dmode (diamètre de la population principale) et celles de D4,3 (diamètre moyen arithmétique). Les granules de farine de biomasse de microalgues conformes à l'invention ont alors une distribution granulométrique monomodale, caractérisée par un Dmode compris entre 60 et 300 lm et un D4,3 entre 70 et 420 lm. Plus particulièrement, les granules de farine de biomasse de microalgues selon l'invention peuvent être classées entre deux familles, en fonction de leur origine microalgale : - la première famille de granules de farine de biomasse de Chlorella sorokiniana, présente un Dmode compris entre 70 et 130 lm et un D4,3 entre 75 et 140 lm ; - la seconde famille de granules de farine de biomasse de Chlorella protothecoides, présente un Dmode compris entre 200 et 280 lm et un D4,3 entre 300 et 420 lm. Les granules de farine de biomasse de microalgues conformes à l'invention présentent également une densité aérée, mesurée sur Powder Characteristics Tester HOSOKAWA, comprise entre 0,60 et 0,70 % et une compressibilité, mesurée sur Powder Characteristics Tester HOSOKAWA, comprise entre 15 et 25 %, de préférence entre 18 et 21 %. Les valeurs de densité tassée et aérée, et de compressibilité des granules de farine de biomasse de microalgues selon l'invention sont déterminées en utilisant l'appareil Powder Characteristics Tester type PTE commercialisé par la société HOSOKAWA, en suivant les spécifications du constructeur. Cet appareil permet de mesurer, dans des conditions standardisées et reproductibles, l'aptitude à l'écoulement d'une poudre en mesurant notamment la densité aérée vrac et la densité tassée vrac et ensuite de calculer, à partir de ces données, les valeurs de compressibilité par la formule suivante : (densité tassée - densité aérée) Compressibilité (%) - x 100 densité tassée Les mesures de densité tassée et de densité aérée sont réalisées sur l'appareil Powder Characteristics Tester de type PTE, comme mentionné ci-avant, selon la méthode préconisée dans le mode d'emploi dudit POWDER TESTER (réglage par défaut sur 180 secousses pour la mesure de la densité tassée). Cette valeur de densité aérée est d'autant plus remarquable que les granules de farine de biomasse de microalgues conformes à l'invention présentent une densité aérée plus élevée que la farine de microalgues séchées par voie classique. En effet, il est admis que la densité d'un produit sera d'autant plus faible qu'il sera granulé par atomisation. Or, quoique granulés, les produits conformes à l'invention présentent une densité aérée plus élevée qu'attendue : à titre de comparaison, comme il sera exemplifié ci-après, les densités aérées des poudres de farine de microalgues atomisée par voie classique présentent une densité aérée plus faible, comprise entre 0,35 et 0,50 g/ml. Les granules de farine de biomasse de microalgues selon l'invention présentent également des propriétés d'écoulement tout à fait satisfaisantes, selon un test A. Le test A consiste à mesurer le degré de cohésion des granules de farine de microalgues selon l'invention. Ce test de cohésion est inspiré du test de cohésion également décrit dans les « Operating Instructions » du Powder Characteristics Tester type PTE commercialisé par la 35 société HOSOKAWA. Le test A consiste tout d'abord à tamiser les granules de farine de biomasse de microalgues selon l'invention sur un tamis d'ouverture de maille de 800 lm. Les granules présentant une taille inférieure à 800 lm sont ensuite récupérés, introduits dans un récipient fermé et subissent un mélange par mouvement épicycloïdal à l'aide d'un mélangeur de laboratoire de marque TURBULA type T2C. Par ce mélange, selon leurs propres caractéristiques, les granules de farine de biomasse de microalgues conformes à l'invention exprimeront leurs propensions à s'agglomérer ou à se repousser. Les granules ainsi mélangés sont ensuite déposés sur une colonne de 3 tamis (2000 lm ; 1400 lm ; 800 lm) pour un nouveau tamisage. Le tamisage terminé, le refus sur chaque tamis est quantifié et le résultat donne une illustration du caractère « cohésif » ou « collant » des granules de farine de biomasse de microalgues. Ainsi, une poudre de granules à écoulement libre, donc peu cohésive, ne sera pratiquement pas arrêtée par les tamis de grande ouverture, mais le sera d'autant plus que les mailles desdits tamis seront resserrées. Le protocole est le suivant : tamiser la quantité de produit nécessaire sur un tamis de 800 lm pour récupérer 50 g de produit de taille inférieure à 800 lm, introduire ces 50 g de granules de taille inférieure à 800 lm dans un bocal en verre de contenance de 1 litre (Ref. BVBL Verrerie Villeurbannaise-Villeurbanne France) et refermer le couvercle, disposer ce bocal dans le mélangeur TURBULA modèle T2C réglé sur la vitesse de 42 t/mn (Willy A. Bachofen Sarl-Sausheim-France) et mélanger pendant 5 minutes, préparer une colonne de 3 tamis (de marque Saulas -Diamètre 200 mm ; Paisy Cosdon - France) qui seront placés sur un tamiseur de marque Fritsch modèle Pulverisette type 00.502 ; détail du montage en partant du bas vers le haut : tamiseur, fond de tamis, tamis de 800 lm, tamis de 1400 lm, tamis de 2000 lm, couvercle du tamiseur. déposer la poudre issue du mélange sur le haut de la colonne (tamis de 2000 lm), fermer avec le couvercle du tamiseur et tamiser pendant 5 minutes sur le tamiseur FRITSCH, avec une amplitude 5 en position permanente, peser le refus sur chaque tamis. Les granules de farine de biomasse de microalgues selon l'invention ne présentent alors aucun refus sur chacun de ces tamis, traduisant un écoulement libre tout à fait conforme à ce qui est obtenu pour les poudres de microalgues riches en protéines de l'état de l'art. Les granules de farine de biomasse de microalgues selon l'invention sont enfin caractérisés par un degré de mouillabilité satisfaisant, mesuré selon un test B. La mouillabilité est une propriété technologique très souvent utilisée pour caractériser une poudre remise en suspension dans l'eau, par exemple en Industries Laitières. Elle traduit l'aptitude d'une poudre à s'immerger après avoir été déposée à la surface de l'eau (Haugaard Sorensen et al., 1978, « Méthodes d'analyse des produits laitiers déshydratés », Niro A/S (ed.), Copenhagen, Denmark), et reflète ainsi la capacité de la poudre à absorber de l'eau à sa surface (Cayot et Lorient, 1998, « Structures et technofonctions des protéines du lait ». Paris : Airlait Recherches: Tec et Doc, Lavoisier). La détermination de cet indice consiste à mesurer le temps nécessaire à une certaine quantité de poudre pour pénétrer dans l'eau à travers sa surface libre au repos. Il faut également associer à la mouillabilité, l'aptitude au gonflement de la poudre. En effet, lorsqu'une poudre absorbe de l'eau, elle gonfle progressivement. Puis, la structure de la poudre disparaît lorsque les divers constituants sont solubilisés ou dispersés. Parmi les facteurs influençant la mouillabilité, il y a la présence de grosses particules primaires, la réintroduction des fines, la masse volumique de la poudre, la porosité et la capillarité des particules de poudre ainsi que la présence d'air, la présence de matières grasses à la surface des particules de poudre et les conditions de reconstitution. Le test B, mis au point par la société Demanderesse, consiste ici à considérer plus particulièrement le comportement de la poudre de farine de microalgue lors de la mise en contact de l'eau, par la mesure, après un certain temps de contact, de la hauteur de la poudre qui décante lorsque placée à la surface de l'eau. Le protocole de ce test est le suivant : dans un bécher de forme basse de 600 ml (bécher FISCHERBRAND FB 33114), introduire 500 ml d'eau déminéralisée à 20°C, placer uniformément 25 g de la poudre de farine de microalgues à la surface de l'eau, sans mélanger, observer le comportement de la poudre après 3 h de contact, mesurer la hauteur du produit décanté au fond du bécher. Une poudre très cohésive, collante, de faible mouillabilité demeurera à la surface du liquide, tandis qu'une poudre de meilleure mouillabilité, moins collante, décantera plus aisément. Les granules de farine de biomasse de microalgues selon l'invention présentent alors un degré de mouillabilité, exprimé selon ce test B, par la hauteur du produit décanté dans un bécher, à une valeur comprise entre 5 et 25 mm. Plus particulièrement : la première famille présente une hauteur de produit décanté comprise entre 5 et 15 mm, la seconde famille présente une hauteur de produit décanté comprise entre 15 et 25 mm. Les granules de farine de biomasse de microalgues selon l'invention sont également caractérisés par leur surface spécifique. On détermine la surface spécifique sur l'ensemble de la distribution granulométrique des granules de farine de biomasse de microalgues grâce à un analyseur de surface spécifique Quantachrome basé sur un test d'absorption de l'azote sur la surface du produit soumis à l'analyse, réalisé sur appareil SA3100 de chez Beckmann Coulter, en suivant la technique décrite dans l'article BET Surface Area by Nitrogen Absorption de S. BRUNAUER et al. (Journal of American Chemical Society, 60, 309, 1938). Les granules de farine de biomasse de microalgues conformes à l'invention, après dégazage 30 minutes à 30°C sous vide, présentent abrs une surface spécifique comprise entre 0,45 et 0,70 m2/g. Plus particulièrement, la première famille de granules de farine de biomasse de microalgues présente une surface spécifique selon la méthode BET, comprise entre 0,45 et 0,50 m2/g. Quant à la deuxième famille de granules de farine de biomasse de microalgues, elle présente une surface spécifique selon la méthode BET, comprise entre 0,60 et 0,70 m2/g. Les granules de farine de biomasse de microalgues de l'invention se différencient des farines de microalgues obtenues par atomisation classique. Les granules de farine de biomasse de microalgues conformes à l'invention sont susceptibles d'être obtenus par un procédé d'atomisation particulier, qui met en oeuvre des buses de pulvérisation à haute pression dans une tour à flux parallèles qui dirige les particules semi-sèches vers le bas, vers une bande mobile. La matière est ensuite transportée comme une couche poreuse à travers des zones de post-séchage et de refroidissement, qui lui donnent une structure craquante, comme celle d'un gâteau qui se brise à l'extrémité de la bande et est déchargée, le plus souvent via un système de contrôle final de la taille des particules. Pour procéder à la granulation de la farine de biomasse d'algues, en suivant ce principe d'atomisation, on peut employer par exemple un atomiseur FILTERMATTM commercialisé par la société GEA NIRO ou un système de séchage TETRA MAGNA PROLAC DRYERTM commercialisé par la société TETRA PAK. De manière surprenante et inattendue, la société Demanderesse a ainsi constaté que la granulation de la farine de biomasse de microalgues par la mise en oeuvre par exemple de ce procédé FILTERMATTM, permettait de préparer avec un haut rendement un produit conforme à l'invention sur le plan de la distribution granulométrique, de sa densité aérée et de sa compressibilité. En effet, les procédés décrits antérieurement (telle l'atomisation simple effet ou multiple effet - tour MSD) ne permettent pas d'obtenir l'ensemble des caractéristiques souhaitées. Le procédé de préparation des granules de farine de biomasse de microalgues conformes à l'invention comprend alors les étapes suivantes : 1) préparer une suspension de biomasse de microalgues riche en protéines dans de l'eau à une matière sèche comprise entre 10 et 35 % en poids sec, 2) la pulvériser dans un atomiseur vertical équipé d'une bande mobile à sa base, et d'une buse haute pression à sa partie supérieure, tout en réglant : - la première température de l'air primaire à une valeur comprise entre 160 et 220°C, - la seconde température de l'air primaire à une valeur comprise entre 90 et 150°C - la pression de pulvérisation à une valeur comprise entre 50 et 250 bar, de préférence entre 80 et 150 bar, 3) régler la température d'entrée de la zone de post séchage sur la bande mobile à une valeur comprise entre 70 et 90°C, et régler h température de la zone de refroidissement à une valeur comprise entre 15 et 25°C, 4) collecter les granules de farine de biomasse de microalgues ainsi obtenus. La première étape du procédé de l'invention consiste à préparer une suspension de biomasse de microalgues riche en protéines dans de l'eau à une matière sèche comprise entre 10 et 35 % en poids sec. Les microalgues choisies pour illustrer le procédé conforme à l'invention sont : Chlorelle sorokiniana (souche UTEX 1663 - The Culture Collection of Algae at the University of Texas at Austin - USA), Chlorelle protothecoides (souche UTEX 250 - The Culture Collection of Algae at the University of Texas at Austin - USA). Comme il sera exemplifié ci-après, les biomasses extraites du milieu de fermentation par tout moyen connu de l'homme du métier (par exemple par centrifugation) sont ensuite désactivées par traitement thermique flash. La deuxième étape du procédé de l'invention consiste à pulvériser la suspension de biomasse dans un atomiseur vertical équipé d'une bande mobile à sa base, et d'une buse haute pression à sa partie supérieure, tout en réglant : - la première température de l'air primaire à une valeur comprise entre 160 et 220°C, - la seconde température de l'air primaire à une valeur comprise entre 90 et 150°C - la pression de pulvérisation à une valeur comprise entre 50 et 250 bar, de préférence entre 80 et 150 bar, La troisième étape du procédé de l'invention consiste à régler la température d'entrée de la zone de post séchage sur la bande mobile à une valeur comprise entre 70 et 90°C, et régler la température de la zone de refroidissement à une valeur comprise entre 15 et 25°C. Les granules de farine de biomasse de microalgues présentent, en sortie de chambre principale, une humidité résiduelle comprise entre 8 et 15 °A. Pour amener le degré d'humidité des granules de farine de microalgues à la valeur souhaitée (en sortie de sécheur : entre 3 et 6 %), la société Demanderesse a trouvé qu'il fallait respecter les barèmes de température des zones de séchage et de refroidissement. La dernière étape du procédé conforme à l'invention consiste enfin à collecter les granules de farine de biomasse de microalgues ainsi obtenus. Les granules de farine de microalgues conformes à l'invention peuvent être employés, en raison de la qualité de leurs propriétés fonctionnelles mentionnées plus haut, dans les applications en alimentations humaine et animale (animaux de compagnie, aquaculture...), ou dans des applications de l'industrie pharmaceutique et cosmétique. Par industrie pharmaceutique, il est important de noter que les granules de farine de microalgues conformes à l'invention ne sont pas utilisés comme principe actif, mais comme agents de formulation, pour la préparation de comprimés. Ainsi, la présente invention est également relative à une méthode de préparation de compositions alimentaires humaines ou animales ou de compositions pharmaceutiques ou cosmétiques, comprenant une étape d'incorporation de granules de de farine de microalgues conformes à l'invention. Il est ainsi trouvé un grand intérêt des granules de farine de microalgues conformes à l'invention en regard de leurs propriétés fonctionnelles : - leur écoulement libre (poudre moins fine déjà agglomérée) permet de faciliter une alimentation en extrudeur et le remplissage des trémies, - leur densité aérée plus forte permet de faciliter également leur transport (coût réduit), de réduire l'émission de poussière lors de la manipulation des sacs de poudres ; leur dispersion facile dans les liquides permet : o d'éviter la formation de grumeaux, o de faciliter la préparation pour boisson, o de les incorporer dans les milieux visqueux, sans formation de grumeaux ni besoin de « disperseurs » puissants comme les gommes. leur aptitude à la compression les destine à la fabrication de granulés solides, insolubles, résistant au procédé de fabrication des aliments qui permettent, pour les granules de farine de microalgues vertes selon l'invention, de créer des produits mouchetés verts attrayants (cake, biscuit, comprimés, gommes, enrobage...). Par exemple, dans le domaine des compléments alimentaires, les granules de farine de biomasse de microalgues peuvent être aisément incorporés dans des comprimés orodispersibles, formes galéniques adaptées par exemple à la pédiatrie et la gériatrie. A titre d'illustration, la société Demanderesse a combiné les granules de farine de microalgues selon l'invention à un de ses excipients à désintégration rapide pour la formulation de comprimés orodispersibles : le PEARLITOL® Flash. Comme il sera exemplifié ci-après, l'évaluation des caractéristiques de ces comprimés montrent que : il n'y a pas d'influence négative de l'incorporation des granules de farine de biomasse de microalgues sur la dureté des comprimés ; les granules de farine de biomasse de microalgues diminuent la friabilité des comprimés. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent. Ils ne sont toutefois donnés ici qu'à titre illustratif et non limitatif. EXEMPLES Exemple 1 : Production de C. sorokiniana en fermentation de type « fed batch » avec apport en glucose limitant La souche utilisée est une Chlorella sorokiniana (souche UTEX 1663 - The Culture Collection of Algae at the University of Texas at Austin - USA). Préculture : - 600 mL de milieu dans un Erlenmeyer de 2 L ; - Composition du milieu (tableau 1 ci-dessous) Tableau 1. Macro Glucose 20 éléments (g/L) K2HPO4.3H20 0,7 MgSO4.7H20 0,34 Acide citrique 1,0 Urée 1,08 Na2SO4 0,2 Na2CO3 0,1 Extrait de levure 1 clerol FBA 3107 (antimousse) 0,5 Micro Na2EDTA 10 éléments (mg/L) CaCl2.2H20 80 FeSO4.7H20 40 MnSO4.4H20 0,41 CoSO4.7H20 0,24 CuSO4.5H20 0,24 ZnSO4.7H20 0,5 H3B03 0,11 (NH4)6Mo7027.4H20 0,04 Le pH est ajusté à 7 avant stérilisation par ajout de NaOH 8N. L'incubation se déroule dans les conditions suivantes : durée : 72 h ; température : 28°C ; agitation : 110 rpm (Incubateur Infors Multitron). La préculture est ensuite transférée dans un fermenteur de 30L de type Sartorius. Culture pour production de biomasse : Le milieu de départ est similaire à celui de la préculture : Tableau 2. Macro Glucose 10 éléments (g/L) KH2PO4 8 MgSO4.7H20 0,35 Ac Citrique 1,0 (NH4)2SO4 0,2 Na2SO4 1 Extrait de levure 3,2 clerol FBA 3107 (antimousse) 0,2 Micro Na2EDTA 10 éléments (mg/L) CaCl2 100 FeSO4.7H20 400 MnSO4.4H20 4,1 CoSO4.7H20 2,4 CuSO4.5H20 2,4 ZnSO4.7H20 5 H3B03 1,1 (NH4)6Mo7027.4H20 0,4 Le volume initial (Vi) du fermenteur est ajusté à 13,5 L après ensemencement. Il est porté à 16 - 20 L en final. Les paramètres de conduite de la fermentation sont les suivants : Tableau 3. Température 28 °C pH 6,5 par NH3 28% p/p p02 > 20% (maintenue par agitation) Agitation 300 RPM mini Débit d'air 15 L/min Lorsque le glucose apporté initialement est consommé, un apport de milieu est réalisé en continu sous forme d'une solution concentrée contenant 500 g/L de glucose et 8 g/L de MgSO4.7H20. La vitesse d'apport est inférieure à la vitesse de consommation que la souche pourrait réaliser de sorte que la teneur résiduelle en glucose dans le milieu est maintenue nulle, c'est-à-dire que la croissance de la souche est limitée par la disponibilité en glucose (condition glucose-limitant). De l'antimousse Clerol FBA 3107 est ajouté à la demande pour éviter un moussage excessif. Résultats : Après 75 h de culture, on obtient 74 g/L de biomasse à une teneur en protéines (évalué par le N 6,25) de 57 %. Pour la suite des opérations, la température est maintenue sous 8-10°C. Après cette étape, la concentration de la biomasse est d'environ 18 % (masse cellulaire sèche). Exemple 2. Séchage de la biomasse de Chlorelle sorokiniana On procède au séchage de la biomasse obtenue à l'exemple 1 : - dans un dispositif FILTERMAT, pour obtenir les granules de farine de microalgues conformes à l'invention, - dans un atomiseur multiple effet (liquide séché dans le flux de chaleur puis récupéré en bas de la tour au niveau du cyclone ou du filtre à manche), de manière à obtenir une farine de microalgues témoin, conforme à ce qui est commercialement accessible. Les principales conditions opératoires d'atomisation multiple effet d'une suspension de biomasse de microalgues à 18 % de matière sèche sont les suivantes : pression de pulvérisation (2 buses) : 150 bars température d'entrée : 275°C, température de sortie : 80°C. température du lit statique : 80°C refroidissement sur lit fluidisé vibré : o température entrée 1 ère section : 50°C o température entrée 2ème section : 20°C Quant au procédé d'atomisation conforme à l'invention, il consiste à pulvériser la biomasse à haute pression dans un dispositif de type FILTERMAT commercialisé par la société GEA/NIRO, muni d'une buse d'injection haute pression de type DELAVAN, dans les conditions suivantes : matière sèche de la suspension de biomasse de microalgues : 18 % première température de l'air primaire : 175°C +/-10°C seconde température de l'air primaire : 110°C +/-10°C pression de pulvérisation : 120 bar température d'entrée de la zone de post séchage : 80°C température de la zone de refroidissement : 18°C température de sortie de la chambre : 55°C +/- 2°C Après séchage, les granules de farine de biomasse de microalgues présentent ne humidité résiduelle comprise entre 3 et 6 %. Exemple 3 : Production de Chlorelle protothecoides à 28°C en fermentation de type fed-batch Pour obtenir une concentration en biomasse élevée, nous apportons le glucose en cours de culture (fed-batch) pour éviter une inhibition de la croissance par le glucose. Les apports en sels sont effectués au départ de la fermentation (Batch). La souche utilisée est Chlorella protothecoides UTEX 250 (The Culture Collection of 20 Algae at the University of Texas at Austin - USA). Pré-culture : 500 mL de milieu dans un Erlenmeyer de 2L ; Composition du milieu (en g/L) : 25 Tableau 4. Macro Glucose 40 éléments (g/L) K2H PO4 3 Na2HPO4 3 MgSO4.7H20 0,25 (NH4)2SO4 1 Ac Citrique 1 clerol FBA 3107 (antimousse) 0,1 éléments CaCl2.2H20 30 et Vitamines FeSO4.7H20 1 MnSO4.1H20 8 CoSO4.7H20 0,1 CuSO4.5H20 0,2 ZnSO4.7H20 0,5 H3B03 0,1 Na2Mo04 - 2H20 0,4 Thiamine HCI 1 Biotine 0,015 B12 0,01 Calcium pantothénate 0,03 acide p-aminobenzoïque 0,06 L'incubation se déroule dans les conditions suivantes : durée : 72 h ; température : 28°C ; agitation : 110 rpm (Incubateur Infors Multiron). La pré-culture est ensuite transférée dans un fermenteur de 30L de type Sartorius. Culture pour production de biomasse : Le milieu est le suivant : Tableau 5. Macro Glucose 40 éléments (g/L) KH2PO4 1,8 NaH2PO4 1,4 MgSO4.7H20 3,4 (NH4)2SO4 0,2 clerol FBA 3107 (antimousse) 0,3 Micro-éléments et Vitamines (mg/L) CaCl2.2H20 40 FeSO4.7H20 12 MnSO4.1H20 40 CoSO4.7H20 0,1 CuSO4.5H20 0,5 ZnSO4.7H20 50 H3B03 15 Na2Mo04 - 2H20 2 Thiamine HCI 6 Biotine 0,1 B12 0,06 Calcium pantothénate 0,2 Acide p-aminobenzoïque 0,2 Le volume initial (Vi) du fermenteur est ajusté à 17 L après ensemencement. Il est porté à 20 à 25 L environ en final. Les paramètres de conduite de la fermentation sont les suivants : Tableau 6. Température 28 °C pH 5,0 - 5,2 par NH3 28% p/p p02 20% +/- 5% (maintenue par agitation) Agitation 300 RPM mini Débit d'air 15 L/min Lorsque la concentration résiduelle en glucose tombe en dessous de 10 g/L, un apport de glucose sous forme d'une solution concentrée à 800 g/L environ est réalisé de façon à maintenir la teneur en glucose entre 0 et 20 g/L dans le fermenteur. Résultats En 40h, nous obtenons 89 g/L de biomasse contenant 68,5 % de protéines. Les cellules sont désactivées par traitement thermique à travers une zone HTST à 70°C pendant 3 minutes Pour la suite des opérations, la température est maintenue sous 8-10°C. Après cette étape, la concentration de la biomasse est d'environ 20 % (masse cellulaire sèche). Exemple 4 : Séchage de la biomasse de Chlorelle protothecoides On procède au séchage de la biomasse obtenue à l'exemple 3 : - dans un dispositif FILTERMAT, pour obtenir les granules de farine de microalgues conformes à l'invention, - dans un atomiseur multiple effet (liquide séché dans le flux de chaleur puis récupéré en bas de la tour au niveau du cyclone ou du filtre à manche), de manière à obtenir une farine de microalgues témoin, conforme à ce qui est commercialement accessible. Les principales conditions opératoires d'atomisation multiple effet d'une suspension de biomasse de microalgues à 20 % de matière sèche sont les suivantes : pression de pulvérisation (2 buses) : 150 bars température d'entrée : 270°C, température de sortie : 80°C. température du lit statique : 80°C refroidissement sur lit fluidisé vibré : o température entrée 1 ère section : 50°C o température entrée 2ème section : 20°C Quant au procédé d'atomisation conforme à l'invention, il consiste à pulvériser la biomasse à haute pression dans un dispositif de type FILTERMAT commercialisé par la société GEA/NIRO, muni d'une buse d'injection haute pression de type DELAVAN, dans les conditions suivantes : matière sèche de la suspension de biomasse de microalgues : 20 % première température de l'air primaire : 174°C +/-10°C seconde température de l'air primaire : 102°C +/-10°C pression de pulvérisation : 150 bar température d'entrée de la zone de post séchage : 80°C température de la zone de refroidissement : 20°C température de sortie de la chambre : 57°C +/- 3°C Après séchage, les granules de farine de biomasse de microalgues présentent une humidité résiduelle comprise entre 3 et 6 %. Exemple 5. Caractérisation des granules de farine de biomasse de microalgues conformes à l'invention Le Tableau 7 suivant présente le profil physicochimique de 4 lots de granules de farine de microalgues selon l'invention (deux lots produits avec Chlorella sorokiniana - Lots 1 et 2 - et deux lots avec Chlorella protothecoides - Lots 3 et 4), en comparaison avec des farines séchées sur atomiseur multiple effet (sur une tour MSD). Tableau 7. Chlorella sorokiniana Chlorella protothecoides Lot 1 Lot 2 Témoin Lot 3 Lot 4 Témoin selon selon Atomisation selon selon Atomisation l'invention l'invention MSD l'invention l'invention MSD Matière sèche % 92,2 91 95,2 92,8 93,2 97,3 Matière protéique % 54,3 54,5 48,7 62,8 62,6 60,8 Nx6.25 Amidon % 6,9 5,3 18,3 6,8 6,4 5,0 Lipides Totaux % 9,3 8,9 8,2 10,7 12,7 14,7 Chlorophylles totaux % 2,49 2,15 1,97 On applique 5 forces de compression différentes (exprimées en « force de poinçon supérieur ») - de 5, 10, 15, 20 et 25 kN - sur la même poudre, afin d'obtenir des comprimés de 5 duretés croissantes (essais référencées 1 à 5 dans les tableaux ci-dessous). Deux formules de comprimés sont élaborées avec (de l'ordre de 10 %) ou sans granules de farine de microalgues selon l'invention, et les paramètres de dureté et de texture sont évalués. Comprimés contenant des granules de farine de biomasse de microalgues Formule: PEARLITOL® Flash 89,7 % 627,9 g Lot 1 10,0 % 70,0 g Stéarate de magnésium Bârlocher végétal 0,3 % 2,1 g Mode opératoire: 25 - Dans un récipient de deux litres, introduire la totalité du PEARLITOL® Flash et du Lot 1, puis mélanger pendant cinq minutes à l'aide d'un mélangeur TURBULA®. - Ajouter le stéarate de magnésium puis mélanger à nouveau à l'aide du TURBULA® pendant cinq minutes. - Compression du mélange sur une presse à comprimés KORSCH XP1 équipée 30 de poinçons plats de diamètre 13 mm à la cadence 20 comprimés / min.20 Tableau 9. Comprimés préparés selon 5 différentes forces de compression 1 2 3 4 5 Force poinçon sup. (kN) 5,033 10,025 15,376 20,056 25,470 Ecart type poinçon sup (kN) 0,026 0,053 0,088 0,145 0,126 Force poinçon inf. (kN) 4,695 9,250 14,119 18,398 23,501 Ecart type poinçon inf (kN) 0,022 0,047 0,079 0,135 0,122 Force éjection (N) 96,777 201,465 258,040 299,089 306,315 Ecart type force éjection (N) 21,645 7,015 10,558 11,758 4,869 Déplacement poinçon sup (mm) 7,602 8,075 8,357 8,572 8,730 Déplacement poinçon inf. (mm) 8,036 8,041 8,050 8,052 8,059 Transmission (%) 93,275 92,272 91,828 91,735 92,271 Ecart type de transmission. (%) 0,398 0,117 0,184 0,074 0,088 Poids comprimés (mg) 601,2 600,8 602,6 602,0 604,9 Ecart type poids (mg) 0,8 1,0 1,0 1,6 1,0 Epaisseur comprimés (mm) 4,45 4,05 3,84 3,67 3,59 Ecart type épaisseur (mm) 0,02 0,02 0,04 0,02 0,02 Densité des comprimés 1,018 1,109 1,182 1,236 1,269 Dureté Schleuniger (N) 0,0 23,2 54,5 81,5 106,9 Ecart type dureté (N) 0,0 0,8 1,4 1,0 2,3 Friabilité comprimés (%) 100 100 0,22 0,16 0,11 Temps délitement comp. (s) 138 148 147 156 158 Ecart type délitement (s) 6 12 12 6 12 Comprimés "témoins" Formule: PEARLITOL® Flash lot E019F 99,7 % 627,9 g Stéarate de magnésium Bârlocher végétal 0,3 % 2,1 g Mode opératoire: Dans un récipient de deux litres, introduire le PEARLITOL® Flash et le stéarate de magnésium puis mélanger à l'aide du mélangeur TURBULA® pendant cinq minutes. Compression du mélange sur une presse à comprimés KORSCH XP1 équipée de poinçons plats de diamètre 13 mm à la cadence 20 comprimés / min.15 Tableau 10. Comprimés préparés selon 5 différentes forces de compression 1 2 3 4 5 Force poinçon sup. (kN) 5,098 10,215 15,054 20,206 25,117 Ecart type poinçon sup (kN) 0,025 0,035 0,075 0,081 0,069 Force poinçon inf. (kN) 4,845 9,600 14,109 18,918 23,550 Ecart type poinçon inf (kN) 0,024 0,030 0,061 0,070 0,058 Force éjection (N) 102,734 173,730 226,367 270,345 294,141 Ecart type force éjection (N) 3,316 10,527 10,472 13,976 9,736 Déplacement poinçon sup (mm) 7,864 8,293 8,561 8,732 8,894 Déplacement poinçon inf. (mm) 8,255 8,217 8,207 8,188 8,189 Transmission (%) 95,036 93,978 93,724 93,629 93,760 Poids comprimés (mg) 603,0 602,4 601,7 603,4 600,6 Ecart type poids (mg) 0,4 0,8 0,7 0,7 0,9 Epaisseur comprimés (mm) 4,37 3,95 3,75 3,62 3,51 Ecart type épaisseur (mm) 0,01 0,01 0,01 0,02 0,01 Densité des comprimés 1,040 1,149 1,206 1,256 1,289 Dureté Schleuniger (N) 0,0 27,3 58,6 91,8 116,9 Ecart type dureté (N) 0,0 0,7 0,8 1,3 1,7 Friabilité comprimés (%) 100 100 0,95 0,25 0,05 Temps délitement comp. (s) 58 61 78 82 92 Ecart type délitement (s) 6 4 7 8 9 Ecart type de transmission. (%) 0,325 0,276 0,165 0,099 0,092 Conclusions : Deux différentes poudres ont été comprimées à l'aide de la presse alternative KORSCH équipée de poinçons plats de diamètre 13 mm : En témoin, une poudre avec PEARLITOL® Flash seul, une autre avec 90% PEARLITOL® Flash et 10% de granules de farine de microalgues conformes à l'invention (Lot 1). Le taux de lubrifiant est constant pour les deux formules avec 0,3 % de stéarate de magnésium. A la lecture des résultats, il apparaît : - que tous les mélanges sont homogènes et s'écoulent parfaitement. De même, il n'y a aucun problème de collage et/ou de clivage. - qu'il n'y a pas d'influence négative de la composante « granules de farine de microalgues » sur la dureté des comprimés. - les granules de farine de microalgues selon l'invention diminuent la friabilité des comprimés. Exemple 7. Formulation des granules de farine de biomasse de microalgues en compléments alimentaires 11 recettes ont été élaborées à partir des granules du Lot 1. Soupe aux poireaux Témoin Essai Lait entier poudre 33 33 NUTRIOSE® FB06 8 8 GLUC1DEXO1T21 7 7 Bouillon de volaille 5 5 Poireaux en poudre 4 4 PREGEFLO® CH10 3 3 Lot 1 0 1,5 Oignons en poudre 2,5 2,5 Sel 0,5 0,5 Ail en poudre 0,5 0,5 Poivre 0,1 0,1 Persil déshydraté 0,3 0,3 Total : 63,9 65,4 Eau 250 250 Prémélanger toutes les poudres ensemble Disperser dans l'eau chaude et mixer Soupe aux légumes (glutamates) Lait entier poudre 33 NUTRIOSE® FB06 8 GLUC1DEXO1T21 7 Bouillon de volaille 2,5 Poireaux en poudre 0,5 Epinards poudre 3 Tomates poudre 1,5 Carottes poudre 1 PREGEFLO® CH10 3 Lot 1 1,5 Oignons en poudre 1,4 Oignons grillés 1,1 Sel 0,5 Ail en poudre 0,6 Poivre o Glutamate 0,2 Persil poudre 0,3 250 Eau Muscade 0,3 Total : 65,4 Prémélanger toutes les poudres ensemble Disperser dans l'eau chaude et mixer Cake au citron riche en fibres 24 Beurre pommadé 82% MGr Sucre poudre A Colorant jaune d'oeuf Arome citron Mane Arome vanille Sel OEuf entire B Lait UHT 1/2 écrémé Farine Leforest Fécule de PdT C Fibre de pois W8024 NUTRIOSE® FB06 Spongolit 283 Poudre levante, volcano D Lot 1 Pépites de chocolat Total : Témoin Essai Témoin Essai 200 200 19,31 19,31 252 217 24,32 20,95 1 1 0,10 0,10 0 4 0 0,39 4 0 0,39 0 3 3 0,29 0,29 180 180 17,37 17,37 100 100 9,65 9,65 178 153 17,18 14,77 70 70 6,76 6,76 0 25 0 2,41 0 35 0 3,38 6 6 0,58 0,58 6 6 0,58 0,58 36 0 3,47 36 0 3,47 0 1036 1036 100 100 Dans le bol hobart à l'aide de la feuille, mélanger A 30 sec V1 puis 2 min V2 Incorporer B mélanger 1 min V1 muis 2 min V2 Ajouter C mélanger 1 min V1 puis 3 min V2 Incorporer D mélanger 15 sec V1 Remplir les moules et cuisson Cuire en four rotatif 18min à 170°C Quantité pour 32 cakes de 31g environ Perte en eau à la cuisson : 15% Lot 1 avec 10% de NUTRIOSE® FB06 Biscuits Témoin Essai Témoin Essai 100% Sucre 100% 100% Sucre 100% MALTISORB® MALTISORB® 85 95 7,83 8,68 3 3 0,28 0,27 2 2 0,18 0,18 180 0 16,59 0 0 180 0 16,44 160 160 14,75 14,61 2 2 0,18 0,18 637 637 58,71 58,17 10 10 0,92 0,91 2 2 0,18 0,18 4 4 0,37 0,37 1085 1095 100 100 Dans le bol hobart à l'aide de la feuille, mélanger A 2 min V1 Incorporer B mélanger 1 min V1, puis 2 min V2 Ajouter C mélanger 1 min V1, puis 3 min V2 Introduire le mélange des poudres C, mélanger 4 min V1 Laisser reposer la pâte 15 minutes La passer dans la rotative à biscuits Déposer les biscuits sur une plaque et cuire Témoin Essai 30 min ++ 15 min ++++ 9 min ++++++ 0 Four rotatif 125°c Coloration Four rotatif 150°c Coloration Four rotatif 170°c Coloration 25 Total : Eau Bicarbonate de soude Bicarbonate d'ammonium Sucre glace Maltisorb P200 MGr, Biscuitine 500 Lécithine de soja Farine Leforest Lot 1 Sel Arôme vanille Ketchup Essai 1 Essai 2 Essai 3 Essai 4 Essai 5 Essai 6 Essai 7 Sans Arôme Arôme Arôme Arôme Tomate Arôme Arôme Heinz + Tomate Giv. arôme Ketchup Tomate Heinz Giv. Ketchup + Tomate (Mane) 5 5 5 5 5 5 25 25 25 25 25 25 25 66 66 66 66 66 66 66 60 60 60 60 60 60 60 50 50 50 50 50 50 50 10 10 10 10 10 10 281 281 280 281 275 281 278 0 0,25 0 0 0 0,125 0 0 0 0,75 0 0 0,375 0 0 0 0 0,35 0 0 0,175 0 0 0 0 6 0 3 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 0,3 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 499,8 500 499,5 500,1 499,75 500,25 499,925 Mixer tous les ingrédients ensemble Cuire au bain-marie pendant 10 min à 90-95°C Essai 1 Essai 2 Essai 3 Essai 4 Essai 5 Essai 6 Essai 7 Sans Arôme Arôme Arôme Arôme Arôme Arôme Heinz + Tomate Giv. arôme Ketchup Tomate Heinz Tomate Ketchup + Giv. Tomate (Mane) 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 5,00 5,00 5,01 5,00 5,00 5,00 5,00 13,21 13,20 13,21 13,20 13,21 13,19 13,20 12,00 12,00 12,01 12,00 12,01 11,99 12,00 10,00 10,00 10,01 10,00 10,01 10,00 100 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 56,22 56,20 56,06 56,19 55,03 56,17 55,61 0 0,05 0 0 0 0,02 0 0 0 0,15 0 0 0,07 0 0 0 0 0,07 0 0 0,04 0 0 0 0 1,20 0 0,60 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,06 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 100 100 100 100 100 100 100 26 Total : Total : Pea Starch CLEARAM® CH2020 MALTISORB® 75/75 NUTRIOSE® FB17 Vinaigre 8° Sel Eau Arôme Ketchup Mane Arôme Tomate Mane Arôme Ketchup Heinz Arôme Tomate Givaudan Lot 1 Acesulfame K Amidon de pois CLEARAM® CH2020 MALTISORB® 75/75 NUTRIOSE® FB17 Vinaigre 8° Sel Eau Arôme Ketchup Mane Arôme Tomate Mane Arôme Ketchup Heinz Arôme Tomate Givaudan Lot 1 Acesulfame K C PREGEFLO® PJ30 Mayonnaise Témoin Essai Témoin Essai 50 50 5,00 4,98 100 100 10,00 9,95 40 40 4,00 3,98 30 30 3,00 2,99 393 393 39,30 39,10 1,5 1,5 0,15 0,15 0,50 0,5 0,5 0,05 0,05 50 50 5,00 4,98 300 300 30,00 29,85 35 35 3,50 3,48 1000 1005 100 100 Dans un bol mixer, mélanger A pendant 1 min Incorporer le jaune d'oeufs (B) Ajouter C en filet, mélanger à vitesse maxi Continuer l'agitation pendant 1 minute "Wine gums" Total : Essai 45,5 10,8 0,5 26,3 1,0 14,2 2,8 101,0 27 Total : FLOKYS® B6080S CLEARGUM® LG7015 Pectine PG769S Saccharose Lot 1 Eau Acide citrique 50% A Eau Sucre Poudre Vinaigre 8° Moutarde Sel Colorant Jaune d'OEuf Lot 1 Sorbate de Potassium (E202) Jaune d'oeufs frais Huile de Colza Cacahuètes enrobées 28 Cacahuètes Nutriose FB 06 Lot 1 PREGEFLO® CH1OG Farine Amidon de maïs Total : Essai 27,3 34,4 3 25,3 6,2 3,8 100 Chauffer au bain-marie le sirop de NUTRIOSE® FB 06 (40% MS) à 50°C Mélanger les poudres Mettre les cacahuètes grillées dans la turbine Ajouter le sirop de NUTRIOSE® FB 06 (15-20g) et le mélange des poudres (30g environ) Répéter cette opération autant de fois que possible Cuire au four à 200°C pendant 7 minutes Sauce Pesto Basilic Fromage Sel Acide lactique Pignon Ail Sorbate de potassium Lot 1 Huile de tournesol Amidon PGHV Sirop de glucose Huile d'holive PREGEFLO® CH20 Eau Total : Témoin Essai 1 Essai 2 33,0 24,0 20,0 5,2 7,2 5,0 1,5 1,5 1,5 0,7 0 0 2,1 2,1 0,5 2,0 2,0 0,3 0 0,7 0,1 1,0 4,0 40,0 40,0 30,0 1,0 4,0 1,0 8,0 8,0 1,5 1,5 3,0 0 0 0 2,0 0 6,5 34,1 95 100 100 Croquettes pour chiens Recette Chlorelle Chlorelle 3% Chlorelle 5% initiale 1% Farine de volaille 83,5 82,5 80,5 78,5 Matière grasse de volaille 3,5 3,5 3,5 3,5 Saccharose 5,0 5,0 5,0 5,0 Sel 1,0 1,0 1,0 1,0 Lot 1 Eau 7 7 7 7 Total : 100,0 100,0 100,0 100,0 Vit B12/repas(Beagle)(pour 240g) 0,0 2,4 7,2 12,0 Vit B12/repas(Labrador)(pour 500g) 0,0 5,0 15,0 25,0 Mélange des poudres + matière grasse Extrusion avec un apport d'eau suffisant pour la cuisson des croquettes T°C cuisson : 115-130°C -240 g de croquettes pour des chiens de 10 à 12kg type Beagle -500 g de croquettes pour des chiens de -40kg type Labrador Croquettes aux légumes Recette Chlorelle Chlorelle Chlorelle Chlorelle Steak initiale (100g) NUTRALYS® F85G TVP 17,0 17,0 17,0 17,0 17,0 17,0 Eau 74,5 72,2 72,2 71,2 69,9 70,8 Albumen 3,7 3,7 3,7 3,7 3,7 3,7 Pregeflo MI20A 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 Arôme poulet 2,5 0 0 0 0 0 Oignons poudre 0 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 Sel 0,3 0 0 0 0 0 Lot 1 0 0,5 1 2 3,3 2,0 Carotte poudre 0 0 0 0 0 0 Tomate poudre 0 0 0 0 0 0 Epinard poudre 0 4,0 3,5 3,5 3,5 3,5 Persil poudre 0 0 0 0 0 0,3 Muscade 0 0 0 0 0 0,1 Colorant 0 0 0 0 0 0 Total : 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 Vit 0,0 0,3 0,6 1,2 2,0 2,0 812/repas(60ou100g) Apport Journalier 0% 15% 30% 60% 99% 100% Batter : Amidon de pois 43,5% ; PREGEFLOO CH2020 1,2% ; Sel 1,5%; Eau 53,8% Préparer un bouillon de légumes : 1 cube dans 300mL d'eau bouillante Hydrater les TVP 98% Nutralys (70g) dans ce bouillon pendant 30 min Cutterer au blender (1min, en 2 fois) pour obtenir un aspect fibreux Ajouter le mélange des poudres Former les croquettes (10g) et cuire au four vapeur pendant 30 min Surgeler Plonger les croquettes dans le batter, puis dans la chapelure Frire à 190°C pendant 1 min Surgeler Cuire les nuggets à la friture à 190 °C pendant 3 mh 30 On considère que le repas est composé de 6 "croquettes" de 10 g. L'apport en VitB12 recommandé chaque jour est de 2 g (au min) Le tableau 11 suivant présente les résultats de ces conditions d'incorporation des granules de farine de microalgues conformes à l'invention comme compléments alimentaires, en regard de leurs propriétés fonctionnelles. Tableau 11 Applications Dose de granules de farine de biomasse de Avantages microalgues (Lot 1) Cible En g En % Par portion Pour 100g Par portion Pour 100g Soupe aux poireaux nutrition 1,5 0,5 0,5 0,5 dispersion plus facile, meilleure répartition Soupe aux légumes nutrition 0,2 0,1 0,06 0,1 dispersion plus facile, meilleure répartition (Glutamate) Cake nutrition 0,97 3,1 3,1 3,1 broyage pour obtenir décor des granulés 100% chlorelle pour cake moucheté Biscuits nutrition 0,9 0,9 broyage grossier pour obtenir des granulés 100 % biomasse de microalgues pour cake moucheté Ketchup colorant 0,5 0,5 neutre Mayonnaise colorant 0,5 0,5 neutre « Wine gums » nutrition 1 1 dispersion plus facile colorant du produit dans une masse visqueuse Cacahuètes enrobées colorant 3 3 mélange des poudres et répartition facilitée Sauce pesto colorant 1 1 neutre Croquette de légumes (2%) colorant 1,2 2 1,2 2 neutre Croquettes pour chiens nutrition 15 facilite l'alimentation de l'extrudeur De bons résultats ont été obtenus en incorporant les granules de farine de biomasse de microalgues selon l'invention dans des recettes de : céréales pour petit déjeuner yaourts paillettes pour assaisonnement crème dessert (pistache) croquettes pour alevin croquettes pour chevaux. Exemple 8. Formulation des granules de farine de biomasse de microalgues en compléments alimentaires 10 recettes similaires à celles de l'exemple 7 ont été élaborées à partir des granules du Lot 3. Biscuits (recette classique et aux céréales) Témoin Lot 3 Contrôle Lot 3 recette classique recette recette Céréales recette Céréales classique Eau 60 60 65 65 Bicarbonate de soude 3 3 3,5 3,5 Bicarbonate d'ammonium 2 2 1,5 1,5 Saccharose 180 180 150 150 Miel 0 0 25 25 Sirop de glucose 4779 25 25 0 0 MGr, Biscuitine 500 130 130 150 150 Lécithine de soja 2 2 2 2 Farine de blé 576 466 435 330 Farine de blé complet 0 0 65 64 Flocons d'avoine 0 0 80 80 Lot 3 0 110 0 105 Poudre de lait écrémé 15 15 15 15 Sel 2 2 2 2 Pyrophosphate de sodium 2 2 3 3 Arôme vanille 2 2 2 2 Arôme beurre M_0056299 1 1 1 2 1000 1000 1000 1000 Pains Témoin NUTRALYS® Pea- Lot 3 + Lot 3 BF NUTRALYS® Pea- BF 970 860 860 860 30 40 40 40 0 0 40 100 0 100 60 0 18 18 18 18 7 7 7 7 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 600 725 725 700 1625,4 1750,4 1750,4 1725,4 Farine de blé Gluten ot 3 NUTRALYS® pea based (BF) Sel evures sèches Acide ascorbique NUTRILIFE® AM17, enzyme Eau (20°C) Céréales petit déjeuner Témoin Nutralys pea protein + Lot 3 47,6 39,9 10,5 5,6 8,4 4,2 0,0 12,0 5,5 15,5 15,5 15,0 15,0 3,0 3,0 100,0 100,0 % Farine de blé complet Semoule de maïs Amidon de maïs NUTRALYS® W wheat protein Lot 3 Saccharose Sirop de glucose 7080 Eau5 Velouté potiron 33 Témoin NUTRALYS® Lot 3 NUTRALYS® NUTRALYS® S85F S85F + Lot 3 S85F + Lot 3 % % % % % 53,25 52,15 51,75 52,00 50,25 2 2 2 2,00 2,00 8 8 8 8,00 8,00 23,5 23,5 23,5 23,50 23,50 3 3 3 3,00 3,00 3 3 3 3,00 3,00 2,6 2,6 2,6 2,60 2,60 0,8 0,8 0,8 0,80 0,80 1 1 1 1,00 1,00 1,1 1,1 1,1 1,10 1,10 0,7 0,7 0,7 0,70 0,70 0,8 0,8 0,8 0,80 0,80 0 2 0,2 0,2 0,20 0,20 1,5 - 1,1 0 1,25 3,00 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 100 100 100 100 100,00 En % Eau Pommes de terre Carottes Potiron Oignons émincé Poireaux Crème (35% matière grasse) CLEARAM® CH2020 Sucre Beurre (82% matière grasse) Sel Fibres de pois 150M Extrait de levures Lot 3 NUTRALYS® S85F pea protein Mélange 60 % NUTRALYS S85F pea protein / 40 % Lot 3 Noix de muscade Velouté poireaux / pommes de terre Témoin NUTRALYS® S85F + Lot 3 NUTRALYS® S85F + Lot 3 % 50,6 49,9 48,25 14,5 14,5 14,5 5,5 5,5 5,5 4,4 4,4 4,4 18,0 18,0 18 2,2 2,2 2,2 0,8 0,8 0,6 1,0 1,0 1 1,5 1,5 1,5 0,7 0,7 0,8 0,8 0,8 0,8 0,0 0,7 2,45 100 100 100 En % Eau Pommes de terre Epinards Oignons émincé Poireaux Crème (35% matière grasse) CLEARAM® CH2020 Sucre Beurre (82% matière grasse) Sel Fibres de pois 150M Mélange 60 % NUTRALYS S85F pea protein / 40 % Lot 35 Mix pour boissons à 21 % protéines Témoin Lot 3 NUTRALYS® S85F + Lot 3 En % % % % Poudre de lait écrémé 28,5 30,2 28,6 Sucre 27,0 27,0 27,0 GLUCIDEX® IT 47 23,5 20,3 22,4 Poudre de cacao (23-24% matière grasse) 6,0 6,0 6,0 NUTRALYS® XF 4,0 0,0 5,4 NUTRALYS® WF 4,0 0,0 0,0 Lot 3 0,0 9,5 3,6 WPC 90 4,0 4,0 4,0 Pregeflo® C100 3,0 3,0 3,0 Total 100,0 100,0 100,0 Mix pour crème chocolat Témoin Rapport NUTRALYS® XF (60%) Lot 3 (40%) B -Isolat protéines de lait C - Poudre de lait entier substitution substitution En % % % Isolat protéines de lait (Prodiet 85_Ingredia) 36,5 0,00 36,5 NUTRALYS® XF_Lab 4460 (W106R) 0,00 24,50 6,00 HPAF (EA342) 0,00 16,30 4,00 Poudre de lait entier 27,00 27,00 0,00 Poudre de cacao « low fat » 13,00 13,00 13,00 GLUCIDEXO1T19 0,00 0,00 17,00 PREGEFLO® C100 5,00 3,00 5,00 NUTRIOSE® FM06 6,00 3,70 6,00 Caramel colorant (M_0052208) 2,00 2,00 2,00 carraghénanes Matgum L03_AGI) 3,70 3,70 3,70 Gomme de guar (Matguar 5000_AGI) 1,11 1,11 1,11 Gomme de xanthanes (F80_AGI) 1,11 1,11 1,11 Sel 1,50 1,50 1,50 Aspartame 0,40 0,40 0,40 Potassium acesulfame 0,20 0,20 0,20 Mix de Vitamines PNU CN 02_VitaBlend 0,12 0,12 0,12 Mix de Minéraux PNU CN 02_VitaBlend 2,36 2,36 2,36 Total 100,00 100,00 100,005 Boisson 100% végétale à base Lot 3 En % % NUTRALYS® S85F pea protein 2,81 Biomasse de Chlorelle riche en lipides 1,70 Lot 3 1,87 Saveur de masquage SYMRISE 688571 0,187 Saveur poire SYMRISE 329082 0,204 Arôme vanille SYMRISE 826892 0,041 CLEARGUM® CK2020 0,26 Sucre de cane 3,40 Eau 89,53 100 Le tableau 12 suivant présente les résultats de ces conditions d'incorporation des granules de farine de microalgues conformes à l'invention comme compléments alimentaires, en regard de leurs propriétés fonctionnelles. I, rlUelqUi Aoplicarion Allegatipn --ii Prote nes -l-b Farine Plalgu es r ahe er-iaroté nes Puen.-e-s rec:_eines 1..y-anriages '.obles- .: - sees d Pi iarm-ule --., Biscuit classioue source 14,1 11 blé Pas le men:1 flea: cri la rece'.:e e presea ou ---1 -ii_:.L., n._.: ...1 cuissoa :e>:ture cir H r -_.1.: r nor moditlé. çiol.r. correct Bis-eu : céréales 14,3 13,5 blé Pas de cire ficar. ch la recete: le procedé ou le ',eirds de flics-cri '..e>lue du h sel., : non modifié. gol.r. correct Pain riche 5,7 bë Pas pe rad î nplon :a e ---ece'le rim; oie mo....1 Ion (cess pa:es sir la Ires au lei-apr. 2,8 blé ne s Pas d ne' uence majeure sur :a :eiilure ces aains, n_c.ration eigeremer:lus folle. - y r_e-:eales a déjeuner riche ...-:i 8 F.,-7: :".-.ois Ok en pu: et. croiser-once SOUPES 1,-..elou:e potiron 3,5 cris Les founu.es de souoes er-rsnlies en :.-: _. aes pan lem oe me -..eirs PCS.r.Y.:.-- en :Élisant un inl, li-_-:',-° de 11 .11nal\--_:,:!-:iS87.1F 40% le: '::.n iant pic racer: a la te>:n.ue -..11.nal_, gsul. :_le ratio 804.1. es: el au:an: plus nleressan: Liu I permet. if D:7;i miser e. erof I en acides pairies F-ictior de DciciAAS).1_e lot 3 e: le NUTRALYS-,:=- -_if.:-..F 74.,:iisr.er: au co cerne-r: :nen-raque -ache 2,6 1,2 pois. -----'eloute poireaux--..ao Ime source 1,5 0,3 pois e a :enne riche 2,8 1 l---LITITION 11i:, pour ho sson à 21% 21,5 3,6 acsoserum. pois Bonne cors stance et corps: Morfil ok pro:eines lait écreme 11 x pour créme chocola: :30 0 4 air isolat, -cc s 6e rie T.ecire et dout accepanne Boisson - 33cli. i.-egetale à 3.,51 -1,87 pois 1.i1elange farine riches en lipides ji 'inie, et de bas-e de farine d'algues re_.T.R'ALYS: Exemple 9. Incorporation des granules de farine de biomasse de microalgues dans des barres hyperprotéinées. Dans cet exemple, on réalise des barres hyperprotéinées combinant les granules de farine de biomasse de Chlorella protothecoides (Lot 3 de l'exemple 5) avec d'autres ingrédients commercialisés par la société Demanderesse selon les recettes présentées dans le tableau ci-dessous. Barres hyperprotéinées Témoin Lot 3 60/40 NUTRALYS® XF+BF / Lot 3 En % % % % FLOLYS® E7081S 21,10 21,10 20,25 Matière grasse 3,00 3,00 2,90 Lot 3 37,44 16,10 Poudre de cacao 0,90 0,90 0,90 Chocolat maltitol 15,00 NEOSORB® 70/70 1,75 1,75 1,68 NUTRALYS® XF+BF 21,40 14,64 NUTRALYS® WF 15,20 9,98 chocolat sucre 0,00 15,00 15,00 NUTRI OSE® 06 7,20 7,20 7,24 Eau 12,80 12,80 10,17 Total 98,35 99,19 98,86 Conclusions : Il est observé la formation d'une pâte souple très rapidement pendant le pétrissage ; et lors de l'incorporation de protéines de blé et de pois, la texture est qualifiée de souple, masticable et non granuleuse. Le goût « céréales grillées » est jugé agréable. Exemple 10. Incorporation des granules de farine de biomasse de microalgues dans des boissons pour sportifs. Dans cet exemple, on réalise des boissons hyperprotéinées pour sportifs combinant les granules de farine de biomasse de Chlorella protothecoides (Lot 3 de l'exemple 5) avec d'autres ingrédients commercialisés par la société Demanderesse selon les recettes présentées dans le tableau ci-dessous. Mix pour boissons à 74 % protéines Témoin Lot 3 NUTRALYS® S85F -E Lot 3 En % % % % Isolat protéique de lactosérum WPC 80 49,62 69,46 49,62 NUTRALYS® XF 49,62 - 29,77 Lot 3 - 29,78 19,85 REBAUDIOSI DE A (Stevia) 0,06 0,06 0,06 Arôme vanille MANE M555943 0,70 0,7 0,7 100 100 100 Conclusions : Les formules sont bien adaptées : si le Gout reste végétal, il n'y a pas d'amertume. La farine de biomasse de Chlorella protothecoides confère même une Rondeur en bouche agréable. REVENDICATIONS1. Granules de farine de biomasse de microalgues riches en protéines caractérisés en ce qu'ils présentent : o une distribution granulométrique, mesurée sur un granulomètre laser LS de marque COULTER®, présentant un Dmode compris entre 60 et 300 lm et un D4,3 entre 70 et 420 lm, o une densité aérée, mesurée sur Powder Characteristics Tester HOSOKAWA, comprise entre 0,60 et 0,70 %, o une compressibilité, mesurée sur Powder Characteristics Tester HOSOKAWA, comprise entre 15 et 25 %, de préférence entre 18 et 21 %. 2. Granules selon la revendication 1, caractérisés en ce que la microalgue est choisie dans le groupe constitué de Chlorella sorokiniana et Chlorella protothecoides. 3. Granules selon la revendication 2, caractérisés en ce que la microalgue est Chlorella sorokiniana. 4. Granules selon la revendication 2, caractérisés en ce que la microalgue est Chlorella protothecoides. 5. Granules selon la revendication 3, caractérisés en ce qu'ils présentent une distribution granulométrique présentant un Dmode compris entre 70 et 130 lm et un D4,3 entre 75 et 140 lm. 6. Granules selon la revendication 4, caractérisés en ce qu'ils présentent une distribution granulométrique présentant un Dmode compris entre 200 et 280 lm et un D4,3 entre 300 et 420 lm. 7. Granules selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils présentent un degré de mouillabilité, exprimé selon un test B, par la hauteur du produit décanté dans un bécher, à une valeur comprise entre 5 et 25 mm. 8. Granules selon la revendication 3, caractérisés en ce qu'ils présentent un degré de mouillabilité, exprimé selon un test B, par la hauteur du produit décanté dans un bécher, à une valeur comprise entre 5 et 15 mm. 9. Granules selon la revendication 3, caractérisés en ce qu'ils présentent un degré de mouillabilité, exprimé selon un test B, par la hauteur du produit décanté dans un bécher, à une valeur comprise entre 15 et 25 mm. 10. Granules selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisés en ce qu'ils présentent une surface spécifique selon la méthode BET, comprise entre 0,45 et 0,70 m 2/g . 11 Granules selon la revendication 3, caractérisés en ce qu'ils présentent une surface spécifique selon la méthode BET, comprise entre 0,45 et 0,50 m2/g. 12. Granules selon la revendication 4, caractérisés en ce qu'ils présentent une surface spécifique selon la méthode BET, comprise entre 0,60 et 0,70 m2/g. 13. Procédé de préparation des granules selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : 1) préparer une suspension de biomasse de microalgues riche en protéines dans de l'eau à une matière sèche comprise entre 10 et 35 % en poids sec, 2) la pulvériser dans un atomiseur vertical équipé d'une bande mobile à sa base, et d'une buse haute pression à sa partie supérieure, tout en réglant : - la première température de l'air primaire à une valeur comprise entre 160 et 220°C, - la seconde température de l'air primaire à une valeur comprise entre 90 et 150°C - la pression de pulvérisation à une valeur comprise entre 50 et 250 bars, de préférence entre 80 et 150 bars, 3) régler la température d'entrée de la zone de post séchage sur la bande mobile à une valeur comprise entre 70 et 90°C, et iégler la température de la zone de refroidissement à une valeur comprise entre 15 et 25°C, 4) collecter les granules de farine de biomasse de microalgues ainsi obtenus.14. Utilisation des granules de l'une quelconque des revendications 1 à 12 ou obtenus selon le procédé de la revendication 13 en alimentations humaine et animale (animaux de compagnie, aquaculture...), ou pour des applications dans l'industrie pharmaceutique et cosmétique. 15. Utilisation selon la revendication 14, pour la fabrication de comprimés orodispersibles. 16. Utilisation selon la revendication 14, pour la fabrication de soupes, sauces, gâteaux, biscuits, céréales pour petit déjeuner, mayonnaise, ketchup, « wine gums », cacahuètes enrobées, yaourts, crème dessert, nuggets de légumes, paillettes pour assaisonnement. 17. Utilisation selon la revendication 14, pour la fabrication de barres hyperprotéinées. 18. Utilisation selon la revendication 14, pour la fabrication de boissons hyperprotéinées pour sportifs. 19. Utilisation selon la revendication 14, pour la fabrication de croquettes pour chiens, croquettes pour chevaux, ou croquettes pour alevins.