Brevet FR3018919A1 — publié le 20150925

INTRODUCTION La présente invention se rapporte au domaine des modulateurs du récepteur ErbB2, et propose une nouvelle méthode de criblage permettant d'identifier des inhibiteurs dudit récepteur, ainsi qu'un procédé de préparation d'une composition pharmaceutique comprenant le(s)dit(s) inhibiteur(s) pour la prévention et/ou le traitement de pathologies associées à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2. La présente invention propose également un kit pouvant être utilisé dans lesdits procédés. ErbB2 (récepteur pour les facteurs de croissance épidermiques humains, également connu sous l'abréviation HER-2) est un récepteur cellulaire de 185 kDa appartenant à la famille des récepteurs à tyrosine kinase, qui consiste structurellement en un ectodomaine, un segment transmembranaire et en une région cytoplasmique comprenant un domaine à activité tyrosine kinase. L'activation de ce récepteur entraîne une autophosphorylation de tyrosines présentes dans le domaine intracellulaire de ce dernier, qui exerce en retour, via diverses voies de signalisation intracellulaires (kinase PI- 3, ERK, p38, etc.), un effet sur de nombreux processus cellulaires tels que la transformation, la prolifération, la survie, l'apoptose et le développement des cellules. Il est connu de longue date que la dérégulation de ce récepteur est responsable du développement de nombreux types de cancers humains, dont le cancer du sein, des ovaires, de l'estomac et salivaires. A ce jour, il est estimé qu'environ 20 à 30 % des cancers du sein sont provoqués par le biais d'une amplification génique anormale conduisant à la surexpression d'ErbB2 (tumeurs dites ErbB2 positives, ou ErbB2+) (Yarden et al., 2001). Cette surexpression favorise l'activation ligand-indépendante d'ErbB2 et induit une augmentation de la prolifération cellulaire et du potentiel métastatique. Les tumeurs à croissance rapide liées à cette surexpression sont notamment plus agressives et beaucoup moins sensibles aux chimiothérapies ou hormonothérapie, et il a été démontré que les patientes porteuses de tumeurs du sein ErbB2+ présentent en proportion plus de métastases viscérales et cérébrales. Ces tumeurs sont donc associées à un mauvais pronostique clinique. L'activation constitutive du récepteur ErbB2 peut également résulter de la présence de mutations somatiques dans le domaine transmembranaire ou le domaine kinase, comme cela a pu être observé dans les carcinomes mammaires, gastriques et colorectaux (Lee et al., 2006). En outre, il a été démontré que, dans les cellules du cancer du sein, le récepteur ErbB2 subit un clivage protéolytique générant un fragment de 95 kDa (p95) de ce dernier (récepteur ErbB2 tronqué p95ErbB2) qui présente une plus grande activité kinase que le récepteur de type sauvage. L'expression de cette forme tronquée, dépourvue de domaine extracellulaire, très oncogène, est corrélée à une apparition accrue de métastases ganglionnaires, et est associée à un mauvais pronostique clinique (Saez et al., 2006). De ce fait, le récepteur ErbB2 constitue une cible thérapeutique majeure, dans le traitement des cancers, en particulier des cancers du sein ErbB2+ dont la prévalence est relativement élevée dans la population (20 à 30% des cancers primitifs du sein, ou environ 8000 patientes par an en France). Cependant, malgré tout l'intérêt porté à ce récepteur et les efforts conduits à ce jour pour mettre au point une thérapie efficace, les stratégies actuelles visant à cibler le domaine extracellulaire de ce récepteur (thérapies à base d'anticorps monoclonaux antiErbB2 tels que le Trastuzumab ou le Pertuzumab, utilisés seuls ou en combinaison avec la chimiothérapie) ou l'activité kinase du récepteur (thérapies à l'aide de petites molécules inhibitrices de l'activité kinase, telles que le Lapatinib, également connu sous la dénomination Tykerb) (Spektor et al., 2007) se sont révélées avoir une action limitée, et sont fortement coûteuses pour les patients. Ces molécules ne sont en outre pas efficaces sur les formes mutées et tronquées du récepteur ErbB2. En ce qui concerne plus particulièrement le Trastuzumab, environ 66 à 88% des patientes traitées ne répondent pas au traitement (i.e. patientes présentant une résistance dite primaire ou intrinsèque), et près d'un tiers des patientes répondant initialement à cet anticorps développent dans l'année suivante une résistance dite acquise, avec apparition de métastases dans 15% des cas (Bublil et al., 2007). Il a été démontré que l'apparition de ce type de résistance est principalement liée à l'expression du fragment p95ErbB2, car cette forme tronquée très active est dépourvue du site de reconnaissance du Trastuzumab (Bublil et al., 2007). En outre, cet anticorps n'a pas d'effet sur les cellules cancéreuses exprimant de faibles taux ou des formes mutées du récepteur. Un autre problème rencontré avec cet anticorps est le risque de progression du cancer dans le système nerveux central, en raison de son poids moléculaire élevé qui limite son accès au cerveau : en effet, environ 20 à 30% des femmes sous thérapie à base de Trastuzumab développent des métastases dans le cerveau. Les traitements à l'aide de petites molécules inhibitrices de l'activité kinase, telles que le Lapatinib, sont quant à eux généralement associés à l'apparition d'effets toxiques importants en raison de leur manque de spécificité, ce qui limite grandement leur utilisation pour des questions de sécurité. Il a notamment été démontré que la durée médiane de la réponse au Lapatinib est inférieure à un an, et qu'une majorité des patientes pré-traitées avec le Trastuzumab (-- 80 %) n'y répondent pas. Il existe donc un besoin urgent d'identifier de nouveaux inhibiteurs du récepteur ErbB2 qui ne présentent pas ces inconvénients. Il a été précédemment découvert qu'une nouvelle famille de partenaires du récepteur ErbB2 contrôle l'activité physiologique de ce dernier: Il s'agit de la famille des protéines ERM (Ezrin, Radixin, Moesin) qui sont naturellement présentes dans les cellules et qui sont, en outre, connues pour leur capacité à établir un lien entre les protéines exprimées à la surface des cellules et le squelette cellulaire. Ces molécules ERM ont la particularité de se lier directement au récepteur ErbB2 par l'intermédiaire d'un sous-domaine qu'elles possèdent en commun au sein leur extrémité amino-terminale, o dénommé le domaine FERM (F pour protéine 4.1, E pour Ezrin, R pour Radixin, M pour Moesin). Pour ce faire, ErbB2 possède, à la différence des autres membres de la famille des récepteurs ErbB, un motif spécifique de liaison à ce domaine FERM, dénommée EBM ou EBD (domaine de liaison à Ezrin) dans sa région cytosolique juxtamembranaire (soit les acides aminés 674 à 689). Il a ainsi été démontré que le récepteur ErbB2 interagit 15 spécifiquement avec le domaine FERM de l'Ezrin, de la Moesin et de la protéine apparentée Merlin, et que cette interaction stabilise ErbB2 dans un état catalytiquement inactif en exerçant une contrainte moléculaire sur le domaine juxtamembranaire d'ErbB2, limitant ainsi l'accès du domaine kinase aux tyrosines substrats. De manière intéressante, l'expression de la Moesin est absente dans 97% des tumeurs ErbB2+. L'introduction du 20 domaine FERM de l'Ezrin ou de la Moesin dans des cellules de cancer du sein surexprimant ErbB2 est suffisante pour inhiber l'activité fonctionnelle d'ErbB2 et la croissance de ces cellules. Fait important, ce domaine a également une action efficace sur les formes mutées du récepteur, y compris la forme hautement métastatique p95ErbB2 qui est insensible aux thérapies actuelles. La découverte de ce nouveau mécanisme de 25 régulation spécifique du récepteur ErbB2, qui a fait l'objet de la demande de brevet VVO/2011/036211 Al, ouvre donc la voie au développement de nouvelles approches thérapeutiques mieux ciblées, basées sur l'utilisation du domaine FERM afin d'inhiber l'activation des récepteurs ErbB2 surexprimés, ainsi que celle des formes mutées et tronquées de ce dernier. 30 La présente invention a ici pour but de proposer une nouvelle stratégie permettant d'identifier des composés mimant l'action du domaine FERM et bloquant ainsi l'activité du récepteur ErbB2. Pour ce faire, les Inventeurs ont mis au point un nouveau procédé de criblage en deux étapes principales, robuste, reproductible et peu coûteux, basé sur la technologie 35 Alphascreen (essai homogène de proximité par luminescence amplifié), et qui peut, si besoin, être réalisé dans un format adapté à un criblage haut débit. La première étape de ce procédé repose plus particulièrement sur l'étude de la déstabilisation de l'interaction entre la région juxtamembranaire d'ErbB2 (domaine de liaison à Ezrin ou EBM) et le domaine FERM de l'Ezrin par un ou plusieurs composés candidats. Afin de discriminer les composés déstabilisant l'interaction entre ErbB2 et FERM en interagissant avec ErbB2 de ceux qui interagissent avec le domaine FERM, ce procédé comprend une seconde étape dite de contre-criblage, qui mesure l'interaction entre le domaine FERM et le motif de liaison aux ERM contenu dans la région juxtamembranaire d'une protéine autre que ErbB2, telle que CD44. Ce procédé permet d'identifier de manière fiable des composés liant la région juxtamembranaire d'ErbB2 et pouvant inhiber ainsi l'activité de ce récepteur. Ce procédé a été validé avec succès par criblage de 1,200 composés bioactifs approuvés par la FDA (Agence américaine des produits alimentaires et médicamenteux) et de 320 composés phytochimiques, tous sélectionnés sur la base de leur grande diversité chimique et pharmacologique, de leur biodisponibilité et de leur éventuelle toxicité chez l'homme. En effet, ce criblage a permis l'identification de façon efficace et sélective de plusieurs composés d'intérêt, dont l'activité inhibitrice d'ErbB2 a été validée in cellulo. Outre leur capacité à mimer l'action du domaine FERM, ces composés sont des molécules de petite taille et sont susceptibles de contourner les difficultés rencontrées avec les thérapies actuelles contre les cancers ErbB2+. La présente invention propose donc un nouveau procédé de criblage, facile à mettre en oeuvre, permettant de sélectionner de manière efficace et fiable et à moindre coût des inhibiteurs d'ErbB2, basé sur l'étude de l'interaction entre le domaine FERM et le domaine EBM d'ErbB2. La présente invention propose également un procédé de préparation d'une composition pharmaceutique comprenant un inhibiteur identifié par ce criblage, ainsi qu'un kit permettant de mettre en oeuvre les procédés décrits ici. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Sauf indication contraire, les termes scientifiques et techniques utilisés dans le cadre de la présente invention auront les significations qui sont communément admises par l'homme du métier. Par « ErbB », on entend désigner ici un récepteur tyrosine kinase appartenant à la famille des récepteurs de facteurs de croissances épidermiques, qui inclue notamment les récepteurs ErbB1, ErbB2, ErbB3 et ErbB4. Les récepteurs de type ErbB comprennent généralement un domaine extracellulaire, pouvant se lier à un ligand qui lui est spécifique, un domaine transmembranaire lipophile, un domaine intracellulaire tyrosine kinase hautement conservé, ainsi qu'un domaine C-terminal de signalisation intracellulaire présentant des résidus tyrosine dont la phosphorylation contrôle la croissance, la survie, l'adhésion, la migration ainsi que la différenciation cellulaire. Les expressions « ErbB2 » et « HER2 » peuvent être utilisées ici de manière interchangeable, et se réfèrent à la protéine HER2 humaine décrite, par exemple, par Semba et al. (1985) et Yamamoto et al. (1986). Tel qu'exposé ci-dessus, ce terme couvre également les formes tronquées et mutées de cette protéine (Lee et al., 2006; Saez et al., 2006). Par ailleurs, en sus des domaines communs aux récepteurs de type ErbB, ErbB2 présente dans sa région juxtamembranaire cytosolique un motif d'interaction aux domaines FERM des protéines ERM, appelé EBM (domaine de liaison à l'Ezrin), qui a été lo décrit dans la demande de brevet VVO 2011/036211. Par « FERM » (F pour protéine 4.1, E pour Ezrin, R pour Radixin, M pour Moesin), « domaine FERM », « 4.1N30 » ou « domaine d'attachement membranaire », on entend désigner ici la partie N-terminale hautement conservée des protéines ERM (Ezrin, Radixin, Moesin), qui a été décrite notamment par Chishti et al. (1998), et dont la capacité 15 à se lier au motif EBM du récepteur ErbB2 et à prévenir ainsi l'activation ligand- indépendante de ce dernier et les événements de signalisation conduisant à la prolifération cellulaire a été démontré dans la demande de brevet VVO 2011/036211. Le domaine FERM est généralement constitué de trois sous-domaines, dénommés sous-domaines A, B et C (ou lobes F1, F2 et F3), le sous-domaine C (ou lobe F3) étant 20 suffisant pour la liaison au motif EBM. Par « polypeptide », « protéine », « peptide » il faut comprendre ici une séquence d'acides aminés reliés par des liaisons peptidiques (-NHCO-) - quelle(s) que soi(en)t leur longueur ou modification(s) post-traductionnelle(s) - qui peut être d'origine naturelle ou synthétique, et qui peut jouer un rôle structurel et/ou fonctionnel dans une cellule, in vitro 25 et/ou in vivo. Ce terme englobe en outre des variants fonctionnels et des fragments fonctionnels d'une protéine donnée. Par « variant fonctionnel » ou « fragment fonctionnel » d'une protéine donnée, on entend un variant (par exemple une protéine mutée) ou un fragment de celui-ci qui conserve la même fonction biologique que celle de ladite protéine. Lorsque le polypeptide selon l'invention comprend ou consiste en un domaine particulier 30 d'une protéine, un fragment ou variant dudit polypeptide est dit fonctionnel s'il exerce la même fonction biologique que celui dudit domaine. Par exemple, dans le contexte de la présente invention, un variant ou fragment d'un polypeptide comprenant ou consistant en le domaine EBM d'ErbB2 est dit fonctionnel s'il est capable de se lier au domaine FERM des protéines ERM. 35 Par « inhibiteur du récepteur ErbB2 » ou « inhibiteur d'ErbB2 », on entend désigner ici un agent actif capable d'inhiber l'activité tyrosine kinase du récepteur ErbB2. Dans le contexte de la présente invention, ledit inhibiteur est de préférence spécifique au récepteur ErbB2, c'est à dire qu'il n'inhibe pas l'activité tyrosine kinase d'autres récepteurs de la même famille, tels que les récepteurs ErbB1, ErbB3 et/ou ErbB4. Outre le procédé de criblage selon l'invention, l'inhibition de l'activité tyrosine kinase peut être mesurée à l'aide de tests bien connus de l'homme du métier, tels que la mesure de la phosphorylation de tyrosine(s) du domaine intracellulaire ErbB2 (Graus-Porta et al., 1997; Dankort et al., 2011), par exemple à l'aide de kits commerciaux tels que le kit « PhosphoErbB2 (Tyr1248) Assay VVhole Oeil Lysate » de Mesoscale. Par « essai homogène de proximité par luminescence amplifié » (plus communément désigné en anglais sous le nom de «Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay Screen »), on entend désigner ici un essai non-radioactif permettant d'étudier les interactions entre biomolécules à une distance généralement égale ou inférieure à 200 nm. Le terme « homogène » signifie ici que cet essai ne nécessite pas d'étape de séparation ou de lavage, à la différence des essais qualifiés d'hétérogènes. Cet essai est plus connu sous le nom de technologie AlphaScreen ou AlphaLISA qui est commercialisée par la société PerkinElmer (http://www.perkinelmer.com). Le principe de cette technologie est basée sur la conjugaison de deux biomolécules à des particules donneuses et acceptrices, qui lorsque ces biomolécules se lient l'une à l'autre, conduisent à un transfert d'énergie, produisant alors un signal luminescent (Arkin et al., 2012). Plus particulièrement, la photo-excitation des particules donneuses conduit à la formation d'oxygène singulet qui diffuse vers les particules acceptrices, ces dernières émettant un signal luminescent lorsqu'elles sont à proximité des particules donneuses. En l'absence de liaison entre les biomolécules testées, et donc de rapprochement des particules donneuses et acceptrices, l'oxygène singulet tombe dans un état basal et aucun signal luminescent ne peut être émis par les particules acceptrices. A la différence de la technologie FRET (transfert d'énergie par résonance de type Rirster), l'émission du signal fluorescent par les particules acceptrices a lieu à une longueur d'onde plus faible que celle permettant l'excitation des particules donneuses. Par « particules donneuses », on entend désigner ici des particules donneuses d'énergie, tandis que le terme « particules acceptrices » qualifie ici des particules acceptrices d'énergie. Généralement, les particules donneuses contiennent un « photo- sensibilisateur », c'est-à-dire un agent excitable par la lumière qui a la capacité de convertir l'oxygène ambiant en oxygène singulet après illumination, tandis que les particules acceptrices contiennent un agent « chimioluminescent », c'est-à-dire d'un agent capable d'émettre un signal luminescent en présence d'oxygène singulet. D'autres définitions sont données ci-après dans la description. Les Inventeurs ont développé un procédé de criblage nouveau et innovant permettant d'identifier des molécules utiles pour traiter et/ou prévenir les pathologies associées à la suractivation et/ou à la surexpression du récepteur ErbB2. Ce procédé est rapide, sensible, fiable et peu onéreux, et peut être réalisé en criblage haut débit. Ainsi, dans un premier aspect, la présente invention propose un procédé de criblage in vitro pour sélectionner un inhibiteur d'ErbB2, comprenant les étapes suivantes : a) contact dans un premier milieu d'au moins un composé candidat avec : - un polypeptide comprenant le domaine de liaison Ezrin (EBM) d'ErbB2, ledit polypeptide étant conjugué à une ou plusieurs particules donneuses, et - un polypeptide comprenant le domaine FERM, ledit polypeptide étant conjugué à une ou plusieurs particules acceptrices, b) excitation du milieu de l'étape a) à l'aide d'une illumination stimulant l'activation des particules donneuses, et C) mesure du signal luminescent émis par les particules acceptrices suite à l'excitation b), une variation Al significative du signal luminescent en présence dudit composé candidat par rapport au signal luminescent en l'absence dudit composé candidat étant indicative de l'inhibition de la liaison du domaine FERM au domaine EBM d'ErbB2 par le composé candidat ; d) sélection d'au moins un composé candidat capable d'inhiber la liaison du domaine FERM au domaine EBM d'ErbB2 (ledit composé étant identifié après réalisation des étapes a) à c) décrites ci-dessus), et contact dans un second milieu dudit composé avec : - un polypeptide comprenant le domaine EBM d'une protéine autre que ErbB2, ledit polypeptide étant conjugué à une ou plusieurs particules donneuses, et - un polypeptide comprenant le domaine FERM, ledit polypeptide étant conjugué à une ou plusieurs particules acceptrices, e) excitation du milieu de l'étape b) à l'aide d'une illumination stimulant l'activation des particules donneuses, et f) mesure du signal luminescent émis par les particules acceptrices suite à l'excitation e), une variation 32 non significative du signal luminescent en présence dudit composé candidat étant indicative de la capacité d'inhibition d'ErbB2 dudit composé sélectionné à l'étape d). De manière préférée, ladite inhibition est une inhibition spécifique du récepteur ErbB2, c'est à dire que le composé candidat inhibe l'activité tyrosine kinase du récepteur ErbB2, et non celle d'autres récepteurs de la même famille, tels que les récepteurs ErbB1, ErbB3 et/ou ErbB4. A l'issue de l'étape f), on observe donc un signal luminescent susceptible de révéler ou non la liaison du domaine FERM au domaine EBM d'une protéine autre que ErbB2. Par cette information, il sera possible de conclure quant à la capacité d'inhibition, de préférence spécifique, d'ErbB2 par le composé candidat testé. De manière préférée, ledit procédé comprend en outre une étape g) de sélection du composé candidat en tant qu'inhibiteur d'ErbB2. Ce procédé a ainsi la particularité de discriminer les composés inhibant l'interaction entre ErbB2 et FERM en interagissant avec ErbB2, de ceux qui interagissent avec le domaine FERM, grâce à l'utilisation d'un contre-criblage dans la seconde étape de sélection (étapes d à f, préférablement d à g) qui mesure l'interaction entre le domaine FERM et le motif de liaison aux ERM contenu dans la région juxtamembranaire de protéines autres que le récepteur ErbB2. Seuls les composés capables d'inhiber la liaison du domaine FERM au domaine EBM d'ErbB2 sont en effet soumis à un contre-criblage selon les étapes d) à f), afin d'identifier parmi ces derniers ceux se liant au domaine EBM d'ErbB2 (et donc inhibant ErbB2). Les exemples décrits ci-après démontrent que cette nouvelle approche permet d'identifier des composés capables d'inhiber efficacement et spécifiquement ErbB2. L'activité inhibitrice de ces derniers a en effet été validée in vitro dans une lignée cellulaire de cancer du sein surexprimant ErbB2. Plus précisément, par « variation 3.1 » du signal luminescent, on entend ici la variation du signal luminescent évaluée à l'issue de l'étape c), tandis que le terme « variation 32 » du signal luminescent désigne la variation du signal luminescent évaluée à l'issue de l'étape f). Dans le cadre de la présente invention, il convient que la variation 3.1 soit significative à l'issue de l'étape c). Par « variation significative » du signal luminescent, on entend ici une absence totale de signal luminescent ou une diminution significative du signal par rapport au signal luminescent en l'absence du composé candidat. Par « diminution significative », on entend ici une diminution du signal luminescent d'au moins 30%, d'au moins 40%, de manière plus préférée d'au moins 50%, d'au moins 60%, et de manière encore plus préférée d'au moins 70% ou d'au moins 80% par rapport au signal luminescent en l'absence dudit composé candidat. En dehors de ces conditions, la variation 3.1 n'est pas significative, et il n'est donc pas procédé aux étapes de contre-criblage d) à f) (ou d) à g)) du procédé de l'invention. Par ailleurs, il convient dans le cadre de la présente invention que la variation 32 soit non significative à l'issue de l'étape f). Par « variation non significative », on entend ici que la variation 32 est une fraction de la variation M, qui ne représente pas plus de un tiers de ladite variation M, préférablement pas plus de un quart de de ladite variation M, et de manière encore préférée pas plus de un cinquième de ladite variation M. L'homme du métier comprendra que pour évaluer de manière objective la variation 32 au regard de la variation M, une concentration identique du composé candidat testé devra être utilisée dans l'étape de criblage a) à c) et dans l'étape de contre-criblage d) à f) ou d) à g). De manière préférée, une variation non significative du signal luminescent pourra correspondre à une variation inférieure à 10%, de préférence inférieure à 5 % en présence du composé candidat par rapport au signal luminescent en l'absence dudit composé candidat. Ladite variation pourra être nulle par rapport au signal luminescent en l'absence dudit composé candidat (i.e. signal luminescent émis en présence du composé candidat identique à celui émis en l'absence dudit composé). En dehors de ces conditions, la variation 32 est significative, et le composé candidat testé n'est pas sélectionné. La mesure du signal luminescent peut être effectuée à l'aide de tout dispositif de mesure approprié. Ces dispositifs sont bien connus de l'homme du métier, et incluent, sans limitation, les détecteurs de luminescence tels que l'appareil « New lnfinite M1000 PRO » commercialisé par la société TECAN. Dans le contexte de la présente invention, ErbB2 est préférablement d'origine humaine. Ainsi, selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le domaine EBM du récepteur ErbB2 est de séquence SEQ ID NO: 1. L'homme du métier sera néanmoins en mesure d'identifier la séquence d'acides aminés du domaine EBM du récepteur ErbB2 d'autres espèces animales, par exemple par homologie de séquences. Dans le contexte de la présente invention, le domaine FERM est préférablement d'origine humaine, et/ou est préférablement sélectionné dans le groupe consistant en le domaine FERM de la protéine Ezrin, de la Moesin, de la Radixin et de Merlin. De manière encore préférée, le domaine FERM est le domaine FERM de la protéine Ezrin. Ainsi, selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le domaine FERM est de séquence SEQ ID NO: 2. L'homme du métier comprendra aisément que le domaine FERM peut être utilisé ici dans son intégralité ou en partie à condition que soit conservé au moins le sous-domaine C de liaison au domaine EBM. L'homme du métier sera également en mesure d'identifier la séquence d'acides aminés du domaine FERM d'autres espèces animales, par exemple par homologie de séquence. Les protéines autres que ErbB2 utilisées dans l'étape de contre-criblage du procédé de l'invention sont des protéines contenant un domaine EBM dans leur région juxtamembranaire. Ces protéines sont bien connues de l'homme du métier et incluent notamment les molécules d'adhésion telles que le récepteur de l'acide hyaluronique CD44 (cluster de différenciation 44) et la sialomucine CD43 (cluster de différenciation), ou encore les protéines de la superfamille des immunoglobulines telles que les ICAM-1, -2 et -3. Ainsi, selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le domaine EBM d'une protéine autre que ErbB2 qui est compris dans le polypeptide utilisé à l'étape d) du procédé est sélectionné dans le groupe consistant en les domaines EBM de CD44, CD43, ICAM-1, ICAM-2 et ICAM-3. De manière encore plus préférée, ledit domaine EBM est le domaine EBM de CD44. Dans le contexte de la présente invention, ce domaine EBM est préférablement d'origine humaine. Ainsi, selon un mode de réalisation particulièrement o préféré de l'invention, le domaine EBM de CD44 humain est de séquence SEQ ID NO : 3. L'homme du métier sera néanmoins en mesure d'identifier la séquence d'acides aminés du domaine FERM d'autres espèces animales, par exemple par homologie de séquence. Le procédé de criblage de l'invention est basé sur un transfert d'énergie entre des particules donneuses et acceptrices qui sont conjuguées à des biomolécules (i.e. à un 15 polypeptide comprenant un domaine EBM et à un polypeptide comprenant un domaine FERM, respectivement). De manière préférée, le procédé de criblage selon l'invention est un essai homogène de proximité par luminescence amplifié. Ainsi, selon un mode de réalisation préféré de l'invention, lesdites particules donneuses comprennent au moins un photosensibilisateur et lesdites particules acceptrices comprennent au moins un agent 20 chimioluminescent, ledit agent générant le signal luminescent lorsque le photosensibilisateur convertit l'oxygène ambiant en oxygène singulet suite à l'excitation avec ladite illumination et que les particules donneuses et acceptrices sont à proximité les unes des autres. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, ledit photosensibilisateur est 25 sélectionné dans le groupe consistant en l'acétone, l'endopéroxide, le benzophénone, les chlorophylles, l'éosine, l'érythrosine, les fullerènes, le bleu de methylène, les porphyrines telles que l'hématoporphyrine, les phthalocyanines telles que les phthalocyanines Al3+, les phthalocyanines Cu2+ ou les phthalocyanines Zn2+, le rose Bengale, la 9-thioxanthone, et l'un quelconque dérivé de ceux-ci. Ces composés ainsi que d'autres exemples de 30 photosensibilisateurs pouvant être utilisés dans le procédé de criblage selon l'invention sont décrits notamment dans les documents de brevet U.S. 5340716, U.S. 5516636, U.S. 5536834, U.S. 5709994, U.S. 5763602, U.S. 6251581, U.S. 6406667, U.S. 6797481, U.S. 7033775, et U.S. 7101682, ainsi que par Ullman et al. (1994) et DeRosa et al. (2002). 35 Le photosensibilisateur particulièrement préféré selon l'invention est la phthalocyanine, de préférence complexée à un métal tel que Al3+'Cu2+ ou Zn2+. Selon un mode de réalisation également préféré de l'invention, ledit agent chimioluminescent est sélectionné dans le groupe consistant en le thioxène, l'anthracène (e.g. 9,10-bis(phenylethynyl)anthracène, 9,10-diphenylanthracène), le rubrène, l'europium, le terbium, et l'un quelconque dérivé de ceux-ci. Ces composés ainsi que d'autres exemples d'agents chimioluminescents pouvant être utilisés dans le procédé de criblage selon l'invention sont décrits notamment dans les documents de brevet U.S. 5340716, U.S.5516636, U.S.5536834, U.S. 5709994, U.S. 5763602, U.S. 6251581, U.S. 6406667, U.S. 6797481, U.S. 7033775, et U.S. 7101682, ainsi que par Ullman et al. (1994). Les agents chimioluminescents particulièrement préférés selon l'invention sont le thioxène, l'anthracène et le rubrène. Tel qu'indiqué ci-dessus, un signal luminescent signal est généré lorsque les particules donneuses et les particules accceptrices sont à proximité les unes des autres. Ce rapprochement desdites particules a lieu lorsque les biomolécules auxquelles elles sont conjuguées interagissent entre elles. Plus particulièrement, lesdites particules donneuses et acceptrices sont dites à proximité si la distance entre elles est inférieure ou égale à celle parcourue par l'oxygène singulet dans ledit milieu. De manière préférée, lesdites particules donneuses et acceptrices sont dites à proximité si la distance entre elles est inférieure ou égale à environ 200 nm. Dans le contexte de la présente invention, le terme « environ » signifie qu'une variation de plus ou moins 5 % d'une valeur donnée peut être tolérée. L'illumination permettant d'exciter les particules donneuses peut quant à elle être effectuée à l'aide de n'importe quelle source de lumière appropriée, telle qu'un laser. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, l'illumination est effectuée à une longueur d'onde supérieure à celle de la mesure du signal luminescent. Il est entendu que la longueur d'onde de cette illumination, et celle à laquelle le signal luminescent est émis et doit par conséquent être mesuré, varient en fonction de la nature du photosensibilisateur et de l'agent chimioluminescent. Ces longueurs d'onde peuvent être aisément déterminées par l'homme du métier. Ainsi, selon un mode de réalisation préféré de l'invention, lorsque le photosensibilisateur est la phtalocyanine, l'illumination est effectuée à une longueur d'onde d'environ 680 nm. Selon un mode de réalisation également préféré de l'invention, lorsque l'agent chimioluminescent final est le rubrène, la mesure du signal luminescent est effectuée à une longueur d'onde comprise entre environ 520 et 620 nm. Les particules donneuses et acceptrices utilisées ici sont préférablement des billes de polymères, telles que des billes de polystyrène, de polyacrilamide, de polyvinyl chloride, polyvinylnaphthalène et/ou de polyméthacrylate. De manière particulièrement préférée, lesdites particules sont des billes de latex. En outre, afin d'éviter que ces particules ne sédimentent dans le milieu, le diamètre desdites particules est préférablement inférieur ou égal à environ 250 nm. Les particules peuvent également être recouvertes d'un hydrogel pour minimiser les interactions non spécifiques et l'auto-agrégation. Tel qu'indiqué ci-dessus, les polypeptides selon l'invention sont « conjugués » auxdites particules, i.e. à la surface desdites particules. Par « conjugué » ou « conjugaison », on entend ici une liaison covalente ou non-covalente. Les méthodes permettant de réaliser ces types de liaison sont bien connues de l'homme du métier et n'ont donc pas besoin d'être détaillées plus avant. Les liaisons non-covalentes sont particulièrement préférées selon l'invention, et incluent, sans limitation, la liaison streptavidine ou avidine - biotine, la liaison histidine - ion métallique (nickel, cobalt), et la liaison hydrogène entre la glutathione S-transférase et la GSH. Il est entendu que le procédé de criblage selon l'invention est réalisé dans des conditions expérimentales permettant une interaction entre les domaines EBM et FERM, afin de pouvoir tester la capacité d'un composé candidat à inhiber ErbB2. Le milieu utilisé pour ce faire est généralement un milieu aqueux. Le pH dudit milieu est quant à lui préférablement compris entre un pH5 et un pH10, et de manière préférée entre un pH6 et un pH8. Un tampon peut également être utilisé dans ledit milieu, tel qu'un tampon borate, cacodylate, carbonate, citrate, HEPES, MES, MOPS, phosphate, PIPES, TAPS, TES ou Tris. Dans un autre aspect, la présente invention concerne un inhibiteur d'ErbB2 capable d'être sélectionné par le procédé de criblage selon l'invention tel que décrit ci- dessus. De manière préférée, ledit inhibiteur d'ErbB2 est l'isoliquiritigénine. Un autre aspect de la présente demande concerne un procédé de préparation d'une composition pharmaceutique pour la prévention et/ou le traitement de pathologies associées à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2, comprenant les étapes: a) sélection d'au moins un inhibiteur d'ErbB2 selon le procédé de criblage tel que décrit ci-dessus; et b) ajout d'un support pharmaceutiquement acceptable audit inhibiteur. De manière préférée, ledit inhibiteur d'ErbB2 est l'isoliquiritigénine. Par « pathologies associées à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2 », on entend désigner ici toute pathologie résultant d'une augmentation de l'activation et/ou de la surexpression d'ErbB2. On parle de suractivation du récepteur ErbB2 lorsque l'activité de ce dernier est significativement plus élevée dans des cellules d'un patient par rapport à des cellules saines issues du même type de tissu. Cette suractivation peut résulter d'une surexpression du récepteur ErbB2, d'une mutation de ce dernier, de son clivage ou encore d'une hétérodimérisation avec d'autres membres de la famille des récepteurs ErbB, et peut être déterminée à l'aide de tests bien connus de l'homme du métier, tels que la mesure de la phosphorylation de tyrosine(s) du domaine intracellulaire ErbB2 (Graus-Porta et al., 1997; Dankort et al., 2001), par exemple à l'aide de kits commerciaux o tels que le kit « Phospho-ErbB2 (Tyr1248) Assay VVhole Cell Lysate » de Mesoscale. On parle de surexpression du récepteur ErbB2 lorsque ce dernier est exprimé à un niveau significativement plus important à la surface de cellules d'un patient par rapport à des cellules saines issues du même type de tissu. Cette surexpression peut résulter d'une augmentation anormale de l'amplification du gène codant pour ce récepteur et/ou d'une 15 augmentation de la transcription et/ou de la traduction d'ErbB2 ou même d'une mutation, et peut être déterminée par des tests bien connus de l'homme du métier permettant de mesurer l'expression de protéines notamment à l'aide d'anticorps spécifiques dirigés contre le récepteur ErbB2, tels que l'immunohistochimie, l'immunoprécipitation, le Western-blot, l'immunoblot, le dosage d'immunoadsorption par enzyme liée (ELISA) et 20 ses variantes (ELISPOT), le dosage radio-immunologique, la cytométrie en flux, mais aussi à l'aide de tests évaluant l'expression du gène codant pour ErbB2 tels que l'hybridation in situ en fluorescence (FISH), ou la réaction en chaîne par polymérase (PCR, RT-PCR). Par exemple, le document de brevet W091/05264 décrit la mesure de l'expression du récepteur ErbB2 à partir d'un fluide biologique d'un patient. 25 Les pathologies associées à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2 sont bien connues de l'homme du métier et incluent, entre autres, des tumeurs bénignes ou malignes telles que le cancer, dont notamment le cancer du sein, le cancer squameux cellulaire, le cancer du poumon à petites cellules, le cancer pulmonaire non à petites cellules, le cancer gastro-intestinal, le cancer du pancréas, le glioblastome, le cancer du 30 col de l'utérus, le cancer de l'ovaire, le cancer du foie, le cancer de la vessie, l'hépatome, le cancer du côlon, le cancer colorectal, le carcinome de l'endomètre, le carcinome des glandes salivaires, le cancer du rein, le cancer du foie, le cancer de la prostate, le cancer de la vulve, le cancer de la thyroïde, le carcinome hépatique et divers types de cancer de la tête et du cou. 35 Par le terme « prévention », il faut comprendre ici le moyen d'empêcher la pathologie de se déclarer ou de ralentir son apparition, tandis que par le terme « traitement », on entend ici le moyen de soigner une pathologie déclarée ou d'en atténuer ses symptômes et/ou sa progression. Par « support pharmaceutiquement acceptable », on entend ici un composant inactif ou inerte, non toxique et, par conséquent, dépourvu d'action pharmacologique, qui peut être utilisé pour améliorer les propriétés d'une composition pharmaceutique, telle que sa durée de conservation ou son administration. Des exemples de tels supports incluent, entre autres, des agents tensioactifs (cationiques, anioniques ou neutres), des stabilisants de surface, des conservateurs, des agents mouillants ou émulsifiants, des solvants, des tampons, des solutions salines, des milieux de dispersion, des agents isotoniques et de retardement d'absorption, et leurs analogues, qui sont physiologiquement compatibles. De tels supports sont décrits dans le manuel « Remington's Pharmaceutical Sciences » (22ème édition, édité par by Allen, Loyd V., Jr), auquel l'homme du métier pourra se référer. La présente invention concerne également, dans un autre aspect, une composition pharmaceutique comprenant au moins : a) un inhibiteur d'ErbB2 capable d'être sélectionné selon le procédé de criblage tel que décrit ci-dessus; et b) un support pharmaceutiquement acceptable tel que décrit ci-dessus. Ladite composition est notamment utile pour prévenir et/ou traiter des pathologies associées à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2 tel qu'exposé ci-dessus. De manière préférée, ledit inhibiteur d'ErbB2 est l'isoliquiritigénine. Ainsi, selon un autre aspect, l'invention concerne une méthode de prévention et/ou de traitement d'une pathologie associée à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2, comprenant l'administration à un sujet d'une quantité pharmaceutiquement efficace de la composition pharmaceutique selon l'invention. De manière préférée, ladite composition comprend l'isoliquiritigénine en tant qu'inhibiteur d'ErbB2 capable d'être sélectionné selon le procédé de criblage tel que décrit ci-dessus. En d'autres termes, l'invention concerne une composition pharmaceutique telle que décrite ci-dessus, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une pathologie associée à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2. De manière plus précise, l'invention concerne l'utilisation de la composition pharmaceutique selon l'invention, pour la fabrication d'un médicament pour prévenir et/ou traiter une pathologie associée à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2. L'invention concerne également une méthode de prévention et/ou de traitement d'une pathologie associée à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2, comprenant l'administration à un sujet d'une quantité pharmaceutiquement efficace d'isoliquiritigénine. En d'autres termes, l'invention concerne l'isoliquiritigénine pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une pathologie associée à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2. De manière plus précise, l'invention concerne l'utilisation isoliquiritigénine pour la fabrication d'un médicament pour prévenir et/ou traiter une pathologie associée à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2. Par « sujet », on entend décrire ici n'importe quel membre du règne animal, et de manière préférée l'homme. Le terme « administration » ou « administrer » signifie ici qu'un composé d'intérêt est délivré ou dispensé à un sujet par n'importe quel mode d'administration approprié, qui pourra être aisément déterminé par l'homme du métier selon la nature dudit composé. Par exemple, ledit composé pourra être délivré ou dispensé audit sujet selon le cas par voie orale, transdermale, ou parentérale telle que par injection sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire, ou intrapéritonéale. Dans le contexte de la présente invention, par « quantité pharmaceutiquement efficace », on entend ici une quantité ou concentration prophylactique ou thérapeutique d'un composé d'intérêt, c'est-à-dire une quantité ou concentration dudit composé suffisante pour empêcher la pathologie liée à la suractivation et/ou à la surexpression de se déclarer ou de retarder son apparition, ou pour soigner ladite pathologie une fois déclarée ou d'en atténuer ses symptômes et/ou sa progression. L'homme de l'art est à même de déterminer cette quantité dite pharmaceutiquement efficace. Afin de réaliser le criblage selon l'invention, et ainsi de sélectionner un inhibiteur d'ErbB2 susceptible d'être utilisé pour prévenir et/ou traiter des pathologies associées à la suractivation et/ou à la surexpression dudit récepteur, il est particulièrement utile de disposer d'un kit comprenant les composants nécessaires. Ainsi, l'invention concerne dans un autre aspect un kit pour son utilisation dans l'un quelconque des procédés décrits ci-dessus, comprenant : a) un polypeptide comprenant le domaine EBM d'ErbB2; b) un polypeptide comprenant le domaine FERM; et optionnellement, un polypeptide comprenant le domaine EBM d'une protéine autre que ErbB2. Les modes de réalisation préférés sont tels que décrits ci-dessus. En particulier, le domaine EBM d'une protéine autre que ErbB2 qui est compris dans le polypeptide c) est préférablement sélectionné dans le groupe consistant en les domaines EBM de CD44, CD43, ICAM-1, ICAM-2 et ICAM-3, et de manière encore plus préférée est le domaine EBM de CD44. Il est entendu les dits polypeptides peuvent être labellisés à l'aide d'un marqueur permettant sa conjugaison à un support solide, telles qu'a des particules donneuses ou acceptrices. De manière préférée, ledit kit comprend en outre : d) des particules donneuses capables d'être conjuguées audit polypeptide a); e) des particules acceptrices capables d'être conjuguées audit polypeptide b); et f) optionnellement, des particules acceptrices capables d'être conjuguées audit polypeptide c). De manière optionnelle, ledit kit peut en outre comprendre des instructions pour réaliser ledit procédé. La présente invention sera mieux comprise à la lumière des exemples ci-après. DESCRIPTION DES DESSINS Figure 1. Mise au point du test Alpha-screen : robustesse et validation de sa spécificité. (A) Principe de la mesure en Alphascreen de l'interaction entre la région juxtamembranaire de HER2 (Biot-EBM) et le domaine FERM de l'Ezrin (GST-FERM). (B) Séquence du polypeptide biotinylé correspondant à la région juxtamembranaire de HER2 de type sauvage (HER2 VVT), comprenant le domaine EBM d'ErbB2 et du polypeptide biotinylé correspondant à la région juxtamembranaire de HER2 portant des mutations sur les résidus critiques impliqués dans l'interaction avec le domaine FERM de l'Ezrin (HER2 MUT). (C) Quantification des signaux mesurés en Alphascreen en absence (Bic) ou en présence du polypeptide biotinylé correspondant à la région juxtamembranaire de HER2 et du domaine FERM de l'Ezrin (Pept/FERM) permettant de calculer un score de robustesse (Z'=0.8). (D) Quantification de l'efficacité de la compétition de l'interaction HER2/FERM par le polypeptide non biotinylé de la région juxtamembranaire de HER2 de type sauvage (HER2 VVT) ou muté sur les résidus critiques impliqués dans l'interaction avec le domaine FERM de l'Ezrin (HER2 MUT). Figure 2. Mise au point du contre-criblage : validation de sa spécificité. (A) Principe de la mesure en Alphascreen de l'interaction entre le domaine FERM de l'Ezrin (GST-FERM) et le motif connu de liaison aux ERM contenu dans la région juxtamembranaire de CD44 (Biot-CD44). (B) Séquence du polypeptide biotinylé correspondant à la région juxtamembranaire de CD44 contenant le motif connu de liaison aux ERM. (C) Quantification de l'efficacité de la compétition de l'interaction CD44/FERM par le polypeptide non biotinylé de la région juxtamembranaire de CD44 contenant le motif connu de liaison aux ERM. Figure 3. Démarches du criblage à haut-débit selon l'invention. Figure 4. Caractérisation en Alphascreen du hit 8 identifié dans la banque de composés phytochimiques : confirmation et contre crible. (A) Confirmation en Alphascreen de l'inhibition de l'interaction HER2/FERM en présence de concentrations croissantes du composé 8 pendant 1h (FERM_EBM_1h). (B) Confirmation en Alphascreen de l'inhibition de l'interaction HER2/FERM en présence o de concentrations croissantes du composé 8 pendant 20h (FERM_EBM_20h). (C) Résultat du contre crible montrant la quantification de l'inhibition de l'interaction CD44/FERM en présence de concentrations croissantes du composé 8 pendant 1h (FERM-CD44 1h). (D) Résultat du contre crible montrant la quantification de l'inhibition de l'interaction 15 CD44/FERM en présence de concentrations croissantes du composé 8 pendant 20h (FERM-CD44 20h). Figure 5. Confirmation du hit 8 : interaction avec ErbB2 et inhibition de sa phosphorylation. (A) Mesure en Résonance Plasmonique de Surface des interactions entre le composé 8 20 et le polypeptide de la région juxtamembranaire de ErbB2 de type sauvage ('/VT ErbB2) ou muté sur les résidus critiques impliqués dans l'interaction avec le domaine FERM de l'Ezrin (Mut ErbB2) ou un peptide non relevant (CD147). (B) Mesure en Résonance Plasmonique de Surface des interactions entre le composé 8 et le domaine FERM de l'Ezrin (GST-FERM) ou la GST seule (GST). 25 (C) Analyse en dot Blot de l'inhibition de la phosphorylation sur tyrosine d'ErbB2 dans des cellules SKBR3 traitées par des concentrations croissantes du composé 8 (0,625-80 pM) pendant 24h à l'aide d'un anticorps anti phospho-tyrosine totale (4G10). (D) Quantification des signaux représentés en C. (E) Analyse en dot Blot de l'inhibition de la phosphorylation sur tyrosine d'ErbB2 dans des 30 cellules SKBR3 traitées par des concentrations croissantes du composé 8 (0,625-80 pM) pendant 48h à l'aide d'un anticorps anti phospho-tyrosine totale (4G10). (F) Quantification des signaux représentés en E. Figure 6. Confirmation du hit 8 : inhibition de la prolifération cellulaire dépendante de ErbB2. 35 (A) Quantification de la prolifération de cellules SKBR3 non traitées (SKBR3) ou traitées pendant trois jours avec le composé 8 à 3,2 pM (SKBR3_8). (B) Quantification de la prolifération de cellules HBMEC non traitées (H BM EC) ou traitées pendant trois jours avec le composé 8 à 3,2 pM (HBMEC_8). (C) Quantification de la prolifération de cellules MCF7 stablement transfectées avec un vecteur permettant l'expression de HER2 non traitées (HER2) ou traitées pendant trois jours avec le composé 8 à 5 pM (HER2_8_5pM). (D) Quantification de la prolifération de cellules MCF7 stablement transfectées avec un vecteur vide non traitées (pIRES) ou traitées pendant trois jours avec le composé 8 à 5 pM (pl RES_8_5pM). (E) Quantification de la prolifération de cellules SKBR3 non traitées (SKBR3) ou traitées pendant trois jours avec le composé 8 à 20 pM (SKBR3_8). (F) Quantification de la prolifération de cellules HBMEC non traitées (HBMEC) ou traitées pendant trois jours avec le composé 8 à 20 pM (HBMEC_8). La significativité (* P Figure 9. Expériences complémentaires sur le hit T : inhibition de la prolifération cellulaire dépendante de ErbB2. (A) Quantification de la prolifération de cellules SKBR3 non traitées (SKBR3) ou traitées pendant trois jours avec le composé T à 3,2 pM (SKBR3_T). (B) Quantification de la prolifération de cellules HBMEC non traitées (HBMEC) ou traitées o pendant trois jours avec le composé T à 3,2 pM (HBMEC_T). (C) Quantification de la prolifération de cellules HBMEC transfectées avec un vecteur permettant l'expression de HER2 (HBMEC+HER2) non traitées (CTRL) ou traitées pendant trois jours avec le composé T à 2.5 pM (T). (D) Quantification de la prolifération de cellules HBMEC transfectées avec un vecteur vide 15 (H BM EC) non traitées (CTRL) ou traitées pendant trois jours avec le composé T à 2.5 pM (T). (E) Quantification de la prolifération de cellules SKBR3 non traitées (SKBR3) ou traitées pendant trois jours avec le composé T à 8 pM (SKBR3_T). (F) Quantification de la prolifération de cellules HBMEC non traitées (HBMEC) ou traitées 20 pendant trois jours avec le composé T à 8 pM (HBMEC_T). La significativité (* P L'AG1478, un inhibiteur non spécifique de l'activité kinase de ErbB2, a été utilisé comme contrôle positif et les cellules non traitées servent de contrôle négatif. 2. RESULTATS ET DISCUSSION Le cancer du sein constitue la première cause de mortalité par cancer chez les femmes dans le monde. En 2008, ce cancer était responsable de 23 % (1.38 million) du total des nouveaux cas de cancer et de 14 % (458,400) de la mortalité associée aux cancers (J Emal et al., 2011). On estime que près de la moitié des cas de cancers du sein et 60 % de la mortalité associée proviennent des pays en voie de développement. En Europe, la France appartient aux pays où l'incidence de ce type de cancer est la plus forte et ne cesse d'augmenter. 20 à 30 % des cancers du sein primaires chez la femme sont dus à l'expression dérégulée d'ErbB2, ce qui représente approximativement 8,000 patientes par an en France et environ 450,000 patientes par an dans le monde. Seules 25 % des patientes répondent aux thérapies actuelles, non efficaces sur les formes mutées ou tronquées de ce récepteur ou présentant une forte toxicité du fait de leur manque de sélectivité. Il y a donc un besoin urgent de développer des approches alternatives pour cibler spécifiquement ErbB2, réduire le risque de toxicité et agir efficacement sur les formes mutées ou tronquées d'ErbB2. L'approche développée ici permet d'identifier des molécules attractives répondant à ces exigences et présentant un bénéfice clinique pour ces patientes. Il a en effet été découvert que l'interaction entre le domaine FERM des protéines de la famille ERM stabilise ErbB2 dans un état catalytiquement inactif en exerçant une contrainte moléculaire sur sa région juxtamembranaire, empêchant ainsi l'accès des tyrosines substrats au domaine kinase. Le but de la présente approche est d'identifier des petites molécules mimant le domaine FERM afin d'inhiber ErbB2. Pour ce faire, un test Alphascreen, robuste et reproductible et qui de plus est adapté à des cribles à haut débit (HTS) a été mis au point. Ce test repose sur la déstabilisation de l'interaction entre la région juxtamembranaire de ErbB2 (EBM) et le domaine FERM de l'Ezrin (Figure 1). Réalisé en microplaques de 384 puits, ce test est adapté à l'automatisation des cribles. Après optimisation, le test est robuste, présentant un Z' de 0.8 (ce score sans dimension est utilisé pour évaluer la reproductibilité et la qualité d'un test), indiquant qu'il permet de bien discriminer les composés actifs des composés inactifs. Cette interaction est inhibée efficacement par le peptide soluble d'ErbB2 correspondant au motif de liaison aux ERM (SEQ ID NO: 1) et cette inhibition est bien moins efficace en présence d'un peptide de ErbB2 muté sur les résidus clés impliqués dans l'interaction avec le domaine FERM (SEQ ID NO : 4). Pour discriminer entre les composés inhibant l'interaction ErbB2/FERM en interagissant avec ErbB2 de ceux qui interagissent avec le domaine FERM, un contre crible (ou contre-criblage) en Alpha screen permettant de mesurer l'interaction entre le domaine FERM et le motif connu de liaison aux ERM contenu dans la région juxtamembranaire de CD44 (SEQ ID NO: 3) (Figure 2). Cette interaction est inhibée o efficacement par le peptide soluble de CD44. Après la mise au point de ces tests, un crible pilote a été effectué avec des composés chimiques pharmacologiquement actifs issus de banques commercialisées par Prestwick Chemical sur une plateforme dédiée à l'Alphascreen (BMIScreen, Bordeaux, 15 France) (Figure 3). Ces banques comportent 1,200 composés bioactifs approuvés par la FDA et 320 composés phytochimiques, tous sélectionnés sur la base de leur grande diversité chimique et pharmacologique et sur la connaissance de leur bio-disponibilité et de leur toxicité chez l'Homme. L'utilisation de molécules dont l'utilisation chez l'Homme a déjà été approuvée permet de les repositionner rapidement et à moindre coût en 20 diminuant le temps nécessaire à leur développement, ainsi que les risques puisque des essais cliniques ont déjà été réalisés et que leurs profils toxicologiques et pharmacocinétiques sont connus. Ces composés ont d'abord été testés pour leur capacité à inhiber l'interaction FERM/ErbB2 en AlphaScreen®. En parallèle, les composés ont été testés pour leur 25 possible interférence avec les signaux de fluorescence du test dans un crible d'élimination des faux positifs (billes donneuses et acceptrices seules). Pour valider les premiers hits, leur efficacité à inhiber l'interaction FERM/ErbB2 a été analysée en effectuant des effets dose en AlphaScreen® et leur IC50 a été déterminée. Les composés ainsi validés ont ensuite été testés dans un contre crible reposant sur l'interaction entre le domaine FERM 30 et le peptide de CD44 pour déterminer la sélectivité de leur effet inhibiteur. Cette méthode a permis une bonne discrimination entre les composés actifs et les composés inactifs, entre les composés qui entrent spécifiquement en compétition avec l'interaction ErbB2/FERM et ceux qui inhibent à la fois les interactions ErbB2/FERM et CD44/FERM. 35 Parmi les 1500 molécules testées, deux composés ont été identifiés : un composé phytochimique (8) et un composé chimique (T) inhibant de façon statistiquement significative l'interaction FERM/ERbB2 (>40%) et ne présentant pas ou peu d'interférence avec la technique lors du crible d'élimination des faux positifs (Tableau 1). Tableau 1. Composés identifiés par le crible pilote Hit NOM CRIBLE Interférence non spécifique avec le signal Alpha screen Inhibition max, % Inhibition max, % 1h 20h BANQUE PHYTOCHIMIQUE 8 lsoliquiritigenin 37.66 56.83 4.04 BANQUE CHIMIQUE T Alexidine dihydrochloride 49.36 18.55 14.61 Validation et caractérisation du composé 8 Pour valider le composé 8, son efficacité à inhiber l'interaction FERM/ErbB2 a été analysée en réalisant des effets dose en AlphaScreen® pour déterminer son 1050. Tableau 2. Caractéristiques du composé 8 Inhibition max, % IC50 pM Inhibition max, IC50 pM, Hit NOM % FERM-CD44 1h 20h 1h 20h 1h 20h 1h 20h 43, 8 lsoliquiritigenin 33,3 9 20.3 4 14,8 0 N/D N/D Ces résultats démontrent que le composé 8 inhibe l'interaction FERM/ERbB2 (43.9 %) à 24h de façon dose-dépendante (IC50 = 4 pM). Par ailleurs, ce composé n'interfère pas avec l'interaction FERM/CD44 et représente donc un hit très attractif (Figure 4). La Figure 5 montre la validation du composé 8: l'interaction directe entre le composé 8 et ErbB2 ou le domaine FERM a été testée par des expériences de Résonance Plasmonique de Surface en utilisant un Biacore T200. Le composé 8 interagit spécifiquement avec ErbB2 sans aucune interaction avec le peptide mutant d'ErbB2 ou le peptide non relevant (CD147). Par ailleurs, on ne détecte qu'une faible interaction du composé 8 avec le domaine FERM (Figures 5A et 5B). Ces résultats confirment l'interaction directe entre le composé 8 et ErbB2 ; la capacité du composé 8 à inhiber in cellulo l'activation d'ERbB2 a ensuite été analysée sur la lignée SKBR3, une lignée de cellules de cancer mammaire surexprimant ErbB2 fréquemment utilisée comme modèle d'étude de ces cancers. Les SKBR3 ont été traitées 24h ou 48h avec des concentrations croissantes du composé 8 (0.625-80 pM) et la phosphorylation d'ErbB2 a été analysée en « dot blot ». Le composé 8 diminue la phosphorylation d'ErbB2 à 24h et à 48h de façon dose-dépendante (Figures 50 à 5F). Pour poursuivre la caractérisation des effets du composé 8, sa capacité à inhiber la prolifération cellulaire due à la surexpression d'ERbB2 a été analysée. Des cellules SKBR3 ont été utilisées pour ce faire, ainsi que des cellules endothéliales humaines normales (HBMEC) comme contrôle, afin d'éliminer les risques d'effets toxiques non spécifiques. Un traitement avec le composé 8 à 3.2 pM diminue faiblement la prolifération des cellules SKBR3 aux jours 1 et 2, et à 20 pM, cette inhibition devient significative sans aucun effet sur la prolifération des HBMEC. Les effets sélectifs du composé 8 ont ensuite été confirmé à l'aide des cellules MCF7, cellules de cancer mammaire ErbB2-négatif transfectées stablement avec un vecteur d'expression de ErbB2 (MCF-HER2) ou un vecteur vide (MCF7 pIRES). Un traitement avec le composé 8 à 5 pM inhibe significativement la prolifération des cellules MCF7-ErbB2 aux jours 2 et 3, sans affecter celle des cellules MCF7 contrôles (Figure 6). Le composé 8 issu de la banque de composés phytochimiques a donc été validé pour son interaction directe avec le domaine juxtamembranaire d'ErbB2 ainsi que pour sa capacité à inhiber la phosphorylation (et donc l'activation) d'ErbB2 et la prolifération cellulaire ErbB2-dépendante. Ce composé inhibe spécifiquement l'interaction ErbB2/FERM (contre crible négatif) ce qui se traduit par une spécificité de l'inhibition d'ErbB2 et une absence de toxicité aux fortes concentrations dans les cellules contrôles. Validation et caractérisation du composé T Pour valider le composé T, son efficacité à inhiber l'interaction FERM/ERbB2 a été évaluée en réalisant des effets dose en AlphaScreen®. Le composé T inhibe l'interaction FERM/ERbB2 de 64.7 % à 1h de façon dose-dépendante (1050=6.2 pM) sans effet à 24h. Tableau 3. Caractéristiques du composé T Hit NOM Inhibition max, IC50 pM, FERM- EBM Inhibition max, % IC50 pM, FERMCD44 % lh 20h lh 20h lh 20h lh 20h T Alexidine 64,7 41,2 6.2 157 66,8 28,59 4.86 9.50 dihydrochloride Cependant, ce composé interfère aussi drastiquement avec l'interaction FERM/CD44 de façon dose-dépendante (Inhibition > 60%) suggérant une faible spécificité de ce composé pour ErbB2 (Figure 7). Des expériences complémentaires sur le composé, exposées sur la Figure 8: l'interaction directe du composé T avec ErbB2 ou le domaine FERM a été testée en SPR. Le composé T interagit très fortement avec le peptide correspondant à la région juxtamembranaire d'ErbB2 alors que peu ou pas d'interaction sont détectées avec le peptide mutant d'ErbB2 ou le peptide non relevant. Par ailleurs, on ne détecte aucune interaction du composé T avec le domaine FERM. Ces résultats confirment o l'interaction directe entre le composé T et ErbB2 (Figures 8A et 8B) ; la capacité du composé T à inhiber l'activation d'ErbB2 a été ensuite analysée dans les cellules SKBR3. Le composé T diminue fortement la phosphorylation d'ErbB2 à 24h et à 48h de façon dose-dépendante (Figures 8C à 8F). Pour poursuivre la caractérisation des effets du composé T, sa capacité à inhiber 15 la prolifération cellulaire due à la surexpression d'ErbB2 a été analysée. Un traitement avec le composé T à 3.2 pM diminue significativement la prolifération des cellules SKBR3 du jour 1 au jour 3 sans aucun effet sur la prolifération des HBMEC. Par ailleurs, un traitement avec le composé T à 2.5 pM inhibe significativement la prolifération des cellules HBMEC surexprimant ErbB2 aux jours 2 et 3 sans affecter celle des cellules 20 HBMEC qui ne surexpriment pas ErbB2. En revanche, à des doses supérieures ou égales à 5 pM, des effets toxiques non spécifiques sont observés sur les HBMEC (Figure 9). Le composé T issu du premier crible a donc été validé pour son interaction directe avec ErbB2 ainsi que pour sa capacité à inhiber l'activation d'ErbB2 et la prolifération cellulaire ErbB2-dépendante. Ce composé présente toutefois une toxicité à des 25 concentrations modérées dans les cellules contrôles. 3. CONCLUSION Il a été précédemment démontré que le ciblage du domaine juxtamembranaire d'ErbB2 par le domaine FERM de l'Ezrin inhibe sélectivement l'activation de ErbB2 par un 30 mécanisme différent de celui du Trastuzumab et du Lapatinib et bloque efficacement l'activation de diverses formes oncogéniques de ErbB2, dont la forme hautement métastatique p95ErbB2qui est insensible aux thérapies ciblées actuelles. En outre, le domaine FERM interagit avec ErbB2, mais pas avec les autres membres de la famille ErbB, car le motif consensus permettant cette interaction n'est pas 35 présent dans les autres membres de la famille ErbB. Ainsi, des composés ciblant le domaine juxtamembranaire de ErbB2 ne devraient pas présenter de toxicité due à une inhibition non spécifique des kinases ErbB et non-ErbB. Un composé mimant les effets du domaine FERM devrait donc permettre de surmonter des principales difficultés rencontrées à ce jour avec les thérapies existantes. Le procédé de criblage selon l'invention a permis d'identifier ce type de composésqui : - interagissent avec la région juxtamembranaire d'ErbB2 ; - inhibent la phosphorylation d'ErbB2 ; et - inhibent la prolifération cellulaire ErbB2-dépendante. Il est à noter que ces composés ont déjà été approuvés pour leur utilisation chez l'homme, offrant la possibilité d'un repositionnement thérapeutique, de manière rapide et rentable. Grace au contre-criblage du procédé de l'invention, il est par ailleurs possible de distinguer les composés ayant un effet sélectif sur l'inhibition d'ErbB2. Ainsi, cette stratégie de criblage innovante est adaptée à l'identification de nouvelles molécules inhibant l'activité d'ErbB2 de façon efficace et sélective, qui pourront être utilisées dans des nouvelles thérapies ciblées des cancers mammaires surexprimant ErbB2. REFERENCES Arkin M.R., Glicksman M.A., Fu H., Havel J.J., et Du Y. (2012). Assay guidance manual éditeurs Sittampalam G.S., Gal-Edd N., Arkin M.et al., Bethesda (MD): Eh i Lilly & Company and the National Center for Advancing Translational Sciences. Bublil E.M. et Yarden Y. (2007). Curr Opin Ce!! Biol ; 19: 124-34. Chishti A.H., Kim A.C., Marfatia S.M., Lutchman M., Hanspal M., Jindal H., Liu S.C., Low P.S., Rouleau G.A., Mohandas N., Chasis J.A., Conboy J.G., Gascard P., Takakuwa Y., Huang S.C., Benz E.J., Bretscher A., Fehon R.G., Gusella J.F., Ramesh V., Solomon F., Marchesi V.T., Tsukita S., Tsukita S., Hoover K.B. (1998). Trends Biochem. Sci. ; 23 (8): 281-2. Dankort D., Jeyabalan N., Jones N., Dumont D.J. et Muller W. J.(2001). J. Biol. Chem. ; 276 : 38921-38928 (2001). DeRosa M.C., et Crutchley R.J. (2002). Coordination Chemistry Reviews : 233-234,351- 371. Graus-Porta D., Beerli R.R., Daly J.M. et Hynes N.E. (1997). Embo J; 16: 1647-55. Jemal A., Bray F., Center MM., Ferlay J., VVard E., et Forman D. (2011). CA Cancer J Clin ; 61:69-90. Lee J.VV., Soung Y.H., Seo S.H., Kim S.Y., Park OH., Wang Y.P., Park K., Nam S.W., Park W.5., Kim S.H., Lee J.Y., Yoo N.J., et Lee S.H. (2006). Clin Cancer Res ; 12: 57-61. Sàez R., Molina M.A., Ramsey E.E., Rojo F., Keenan E.J., Albanell J., Lluch A., GarciaConde J., Baselga J., et Clinton G.M. (2006). Clin Cancer Res ; 12: 424-31. Semba K., Kamata N., Toyoshima K., et Yamamoto T. (1985). Proc Nati Acad Sci U SA; 82(19): 6497-6501. Spector N., Xia W., El-Hariry I., Yarden Y. et Bacus S. (2007). Breast Cancer Res ; 9: 205. Remington's Pharmaceutical Sciences, 22ème édition, édité par by Allen, Loyd V., Jr. Ullman E.F., Kirakossian H., Singh S., Wu Z.P., lrvin B.R., Pease J.S., Switchenko A.C., lrvine J.D., Dafforn A., Skold ON., et al. (1994). Proc Nat! Acad Sci U S A. 1994; 30 91(12):5426-30. Yamamoto T., lkawa S., Akiyama T., Semba K., Nomura N., Miyajima N., Saito T., et Toyoshima K. (1986). Nature ;319(6050):230-4. Yarden Y. et Sliwkowski M.X. (2001). Nat Rev Mol Ce!! Biol ; 2: 127-37. REVENDICATIONS1. Procédé de criblage in vitro pour sélectionner un inhibiteur d'ErbB2, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) contact dans un premier milieu d'au moins un composé candidat avec : - un polypeptide comprenant le domaine de liaison Ezrin (EBM) d'ErbB2, ledit polypeptide étant conjugué à une ou plusieurs particules donneuses, et - un polypeptide comprenant le domaine FERM, ledit polypeptide étant conjugué à une ou plusieurs particules acceptrices, b) excitation du milieu de l'étape a) à l'aide d'une illumination stimulant l'activation des particules donneuses, et c) mesure du signal luminescent émis par les particules acceptrices suite à l'excitation b), une variation M significative du signal luminescent en présence dudit composé candidat par rapport au signal luminescent en l'absence dudit composé candidat étant indicative de l'inhibition de la liaison du domaine FERM au domaine EBM d'ErbB2 par le composé candidat ; d) sélection d'au moins un composé candidat capable d'inhiber la liaison du domaine FERM au domaine EBM d'ErbB2, et contact dans un second milieu dudit composé avec : - un polypeptide comprenant le domaine EBM d'une protéine autre que ErbB2, ledit polypeptide étant conjugué à une ou plusieurs particules donneuses, et - un polypeptide comprenant le domaine FERM, ledit polypeptide étant conjugué à une ou plusieurs particules acceptrices, e) excitation du milieu de l'étape b) à l'aide d'une illumination stimulant l'activation des particules donneuses, et f) mesure du signal luminescent émis par les particules acceptrices suite à l'excitation e), une variation A2 non significative du signal luminescent en présence dudit composé candidat étant indicative de la capacité d'inhibition d'ErbB2 dudit composé sélectionné à l'étape d). 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel : - ledit domaine EBM d' ErbB2 est de séquence SEQ ID NO: 1 ; et/ou ledit domaine FERM est de séquence SEQ ID NO: 2 ; et/ou - ledit domaine EBM d'une protéine autre que ErbB2 est sélectionné dans le groupe consistant en les domaines EBM de CD44, CD43, ICAM-1, ICAM-2 et ICAM-3. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel lesdites particules donneuses comprennent au moins un photosensibilisateur et lesdites particules acceptrices comprennent au moins un agent chimioluminescent, ledit agent générant le signal luminescent lorsque le photosensibilisateur convertit l'oxygène ambiant en oxygène singulet suite à l'excitation avec ladite illumination et les particules donneuses et acceptrices sont à proximité les unes des autres. 4. Procédé selon la revendication 3, dans lequel ledit photosensibilisateur est sélectionné dans le groupe consistant en l'acétone, l'endopéroxide, le benzophénone, les chlorophylles, l'éosine, l'érythrosine, les fullerènes, le bleu de methylène, les porphyrines, les phthalocyanines, le rose Bengale, la 9-thioxanthone, et l'un quelconque dérivé de ceux-ci. 5. Procédé selon la revendication 3, dans lequel ledit agent chimioluminescent est sélectionné dans le groupe consistant en le thioxène, l'anthracène, le rubrène, l'europium, le terbium, et l'un quelconque dérivé de ceux-ci. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, dans lequel lesdites particules donneuses et acceptrices sont à proximité les unes des autres si la distance entre elles est inférieure ou égale à environ 200 nm. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel l'illumination est effectuée à une longueur d'onde supérieure à celle de la mesure du signal luminescent. 8. Procédé de préparation d'une composition pharmaceutique pour la prévention et/ou le traitement de pathologies associées à la suractivation et/ou à la surexpression d'ErbB2, comprenant les étapes: a) sélection d'au moins un inhibiteur d'ErbB2 selon le procédé tel défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 7; et b) ajout d'un support pharmaceutiquement acceptable audit inhibiteur, dans lequel ledit inhibiteur d'ErbB2 est l'isoliquiritigénine. 9. Kit pour son utilisation dans un procédé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 8, comprenant : a) un polypeptide comprenant le domaine EBM d'ErbB2; b) un polypeptide comprenant le domaine FERM; et- c) optionnellement, un polypeptide comprenant le domaine EBM d'une protéine autre que ErbB2. 10. Kit selon la revendication 9, comprenant en outre: d) des particules donneuses capables d'être conjuguées audit polypeptide a); et e) des particules acceptrices capables d'être conjuguées audit polypeptide b).