Brevet FR3014435A1 — publié le 20150612

PURIFICATION D'ACIDES GRAS PAR UN PROCEDE CHROMATOGRAPHIQUE 10 DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne un procédé chromatographique de production d'acides gras, et notamment d'acides gras polyinsaturés, tels que l'acide eicosapentaénoïque, ainsi qu'une installation adaptée à la mise en oeuvre de ce procédé. 15 ARRIERE-PLAN TECHNIQUE Les acides gras, dont les acides gras polyinsaturés (en abrégé PUFA), sont des composés biologiques particulièrement importants car ils interviennent dans de nombreux processus biologiques tels que la 20 construction et le maintien des membranes cellulaires, la synthèse d'hormones (par exemple les prostaglandines) qui jouent un rôle dans l'agrégation plaquettaire, les processus d'inflammation et la réponse immunologique, etc. La plupart des PUFA peuvent être synthétisés par un organisme 25 humain, à l'exception de deux familles -de PUFA qui doivent être obligatoirement apportés par l'alimentation, appelés les acides gras essentiels. Les deux familles d'acides gras essentiels sont : - les oméga-6, qui sont particulièrement abondant dans les huiles 30 de noix, de tournesol, de soja, de pépins de raisins ou de maïs et les volailles grasses (tel que le canard) ; - les oméga-3 qui sont surtout présents dans les huiles de noix, dans les végétaux tel que le colza et le lin et dans les poissons gras (tels que le saumon, le thon, la sardine, le maquereau ou le 35 hareng). Des procédés de production d'oméga-3 utilisant des cultures de micro-algues, des levures transgéniques ou de krill ont été récemment développés_ Les oméga-3 sont des PUFA particulièrement intéressants pour leurs vertus antioxydantes. Parmi ces oméga-3, l'EPA (acide eicosapentaénoïque, C20-5w3) et le DHA (acide docosahexaénoïque, C22-6w3) purifiés et leurs combinaisons enrichies sont les plus utilisés comme compléments alimentaires ou médicaments pour diminuer le taux de triglycérides, les risques cardiovasculaires, améliorer la cognition ou la vision, etc. Des études cliniques récentes ont montré que le traitement de patients ayant un taux de triglycérides supérieur à 500 ml/dL par 4 grammes par jour d'ester éthylique d'EPA à 96 % sans DHA permettait de faire baisser le taux de triglycéride, sans faire augmenter le taux de LDL (« mauvais » cholestérol), alors que le traitement avec 4 grammes par jour d'un mélange d'esters éthyliques d'EPA et de DHA, à environ 50 % et 35 % respectivement, conduisait à une augmentation du taux de LDL concomitant à la diminution des triglycérides. Jusqu'à présent, les compléments alimentaires de PUFA utilisés, notamment les oméga-3, sont essentiellement basés sur des mélanges contenant 30 à 60 % du mélange d'EPA et DHA. Dans les méthodes de séparation utilisées à ce jour, le mélange est obtenu par transestérification des triglycérides en esters éthyliques puis par un enrichissement des oméga- 3 par distillation moléculaire et/ou co-cristallisation des acides gras saturés et mono-insaturés à l'urée. Les esters éthyliques enrichis sont éventuellement reconvertis en triglycérides par voie chimique ou de préférence par voie enzymatique. Cependant, ces procédés de séparation ne sont pas satisfaisants pour la production d'un oméga-3 tel que l'EPA, le DHA ou encore l'acide stéaridonique (SDA, C18-Sw3) à plus de 80 %, voire encore à plus de 96 %, notamment sous forme estérifiée. Or, la purification des oméga-3 est délicate car ces composés comprennent plusieurs doubles liaisons carbone-carbone qui les rendent sensible à l'oxydation ou la dégradation. En présence d'oxygène et lorsqu'ils sont chauffés, ces PUFA subissent notamment des réactions d'isomérisation, d'oxydation, de peroxydation et d'oligomérisation. Ainsi, les techniques de séparation énoncées ci-dessus permettent d'obtenir un mélange de PUFA avec un bon rendement et un degré de pureté acceptable ; mais elles ne peuvent pas être mises en oeuvre pour la séparation individuelle des PUFA. Elles ne permettent donc pas de séparer des oméga-3 entre eux. En effet, la distillation moléculaire, par exemple, ne peut pas économiquement éliminer le DHA de l'EPA ou du SDA ; elle ne permet pas une séparation efficace des oméga-3 à longue chaîne de type C20 et C22. La combinaison de la clathration à l'urée et de la distillation moléculaire permet d'obtenir des mélanges d'oméga-3 à plus haute pureté, au prix d'un rendement généralement faible et d'un coût opératoire élevé, mais ne peut pas être utilisée pour la séparation des oméga-3 à longue chaîne entre eux, et de l'EPA et du DHA en particulier. Il existe donc un besoin de fournir un procédé de purification industriel d'oméga-3 sous forme estérifiée à très haute pureté. La chromatographie est une technique de séparation fine permettant la purification ou l'enrichissement efficace de molécules dans des conditions douces et à l'abri de la lumière et de l'air. Cette technologie repose sur la séparation des molécules qui sont mises en contact avec une phase stationnaire avec lesquelles elles ont des interactions différentes. L'utilisation d'un ou plusieurs fluides, dits phases mobiles ou éluants, permet la percolation des différentes molécules à différentes vitesses. Ces différentes vitesses permettent de séparer physiquement les molécules et de les récolter sous forme purifiée à l'issue de procédés chromatographiques à une ou plusieurs colonnes. Les fractions purifiées sont en général concentrées, dans des conditions douces à température ambiante ou modérée, par des moyens tels que l'évaporation sous vide ou les procédés membranaires. Dans certains cas, le produit de départ de la purification chromatographique est une huile composée d'esters d'acides gras déjà enrichie par distillation moléculaire, comprenant de préférence plus de 30 % de l'oméga-3 d'intérêt, qui a subi un traitement d'élimination des composés oxydés, soit par la dernière distillation moléculaire, soit par adsorption, de préférence sur des dérivés de silice (gel de silice, bentonite, terre de diatomée) ou sur charbon actif par exemple. Un certain nombre de procédés chromatographiques ont été décrits, pour l'obtention d'oméga-3 avec une haute pureté. Ainsi, le document US 5,719,302 décrit un procédé dans lequel les PUFA sont séparés notamment à l'aide d'un éluant supercritique (le gaz carbonique sous pression), et notamment sur lit mobile simulé (SMB pour « Simulated Moving Bed » selon la terminologie anglo-saxonne). Le document US 2011/0091947 décrit un autre procédé de purification d'oméga-3 utilisant la technique de la chromatographie en lit mobile simulé. Le document décrit en particulier la succession d'une étape de transestérification enzymatique, de deux étapes de distillation moléculaire, et d'une étape de type SMB, ces trois dernières étapes permettent de séparer les produits en deux fractions par ordre de temps de rétention. Le document WO 2011/080503 décrit la purification d'oméga-3 à partir d'un dispositif comprenant deux dispositifs chromatographiques SMB disposé en série et une zone de lavage, chaque dispositif chromatographique SMB définissant une zone de séparation et étant constitué de plusieurs colonnes. La charge à traiter est injectée dans une première zone de séparation pour obtenir un flux d'extrait et un flux de raffinat, ledit flux de raffinat comprenant les composés d'intérêts étant ensuite injecté dans une colonne de la seconde zone de séparation non adjacente à une colonne de la première zone. Le document WO 2013/005051 décrit la purification d'oméga-3 par deux séparations chromatographiques par SMB ou AMB (« Actual Moving Bed », c'est-à-dire lit mobile réel) en phase inversée avec un éluant hydro- organique, dans lequel les deux séparations par SMB ou AMB sont réalisées séquentiellement sur le même dispositif chromatographique, ou sur deux dispositifs différents, l'intermédiaire purifié par le premier dispositif étant introduit dans le second. Le document WO 2013/005048 décrit la purification d'EPA à plus de 90 % de pureté par une première séparation chromatographique suivie de deux séparations chromatographiques par SMB ou AMB en phase inversée avec un éluant hydro-organique à chaque étape, l'intermédiaire purifié par la première séparation chromatographique étant introduit dans la seconde séparation chromatographique, et l'intermédiaire purifié par la deuxième séparation chromatographique étant introduit dans la troisième séparation chromatographique. Il existe encore un besoin de fournir un procédé de purification d'acide gras, de préférence polyinsaturé, pouvant être mis en oeuvre dans une installation chromatographique plus simple que celles de l'état de la technique, avec par ailleurs une productivité spécifique (masse de produit purifié par masse de phase stationnaire et par unité de temps) élevée et une faible consommation de solvants, de sorte à réduire les coûts d'investissement. RESUME DE L'INVENTION L'invention concerne en premier lieu un procédé de purification d'un premier acide gras à partir d'un mélange initial comprenant en outre au moins un deuxième acide gras et un troisième acide gras, le procédé comprenant au moins : - une première étape de séparation chromatographique en phase liquide, à partir du mélange initial, effectuée dans une première unité de séparation chromatographique, permettant de récupérer d'une part un premier flux enrichi en premier acide gras et d'autre part un flux enrichi en deuxième acide gras ; - une deuxième étape de séparation chromatographique en phase liquide, à partir du premier flux enrichi en premier acide gras, effectuée dans une deuxième unité de séparation chromatographique, permettant de récupérer d'une part un deuxième flux enrichi en premier acide gras et d'autre part un flux enrichi en troisième acide gras, la deuxième unité de séparation chromatographique étant une unité de séparation chromatographique à lit statique. Selon un mode de réalisation, la première unité de séparation chromatographique est une unité de séparation chromatographique à plusieurs colonnes ; et de préférence est un système à lit mobile simulé ou à lit mobile réel ou un système dans lequel les points d'injection et les points de collecte des flux sont déplacés périodiquement de manière asynchrone. Selon un mode de réalisation, le mélange initial comprend en outre un quatrième acide gras, le procédé comprenant : - une troisième étape de séparation chromatographique en phase liquide, à partir du deuxième flux enrichi en premier acide gras, effectuée dans une troisième unité de séparation chromatographique, permettant de récupérer d'une part un troisième flux enrichi en premier acide gras et d'autre part un flux enrichi en quatrième acide gras, la troisième unité de séparation chromatographique étant de préférence une unité de séparation chromatographique à lit statique. Selon un mode de réalisation : - au moins l'une parmi la première unité de séparation chromatographique, la deuxième unité de séparation chromatographique et la troisième unité de séparation chromatographique est une unité de séparation chromatographique à lit statique à colonne unique, qui de préférence est un système avec recyclage à l'état stationnaire ; - de préférence, au moins deux unités parmi la première unité de séparation chromatographique, la deuxième unité de séparation chromatographique et la troisième unité de séparation chromatographique sont des unités de séparation chromatographique à lit statique à colonne unique, qui de préférence sont des systèmes avec recyclage à l'état stationnaire ; - le cas échéant, à la fois la première unité de séparation chromatographique, la deuxième unité de séparation chromatographique et la troisième unité de séparation chromatographique sont des unités de séparation chromatographique à lit statique à colonne unique, qui de préférence sont des systèmes avec recyclage à l'état stationnaire. Selon un mode de réalisation : - la deuxième unité de séparation chromatographique est une unité de séparation chromatographique à colonne unique ; et de préférence est un système avec recyclage à l'état stationnaire ; et/ou - le cas échéant, la troisième unité de séparation chromatographique est une unité de séparation chromatographique à colonne unique ; et de préférence est un système avec recyclage à l'état stationnaire. Selon un mode de réalisation : - la première étape de séparation chromatographique est mise en oeuvre avec un premier éluant qui est un éluant hydro-organique ; et/ou - la deuxième étape de séparation chromatographique est mise en oeuvre avec un deuxième éluant qui est un éluant hydroorganique ; et/ou - le cas échéant, la troisième étape de séparation chromatographique est mise en oeuvre avec un troisième éluant qui est un éluant hydro-organique. Selon un mode de réalisation : - le premier éluant est différent du deuxième éluant et le cas échéant le troisième éluant est différent du premier éluant et du deuxième éluant ; - de préférence, le premier éluant est un mélange cétone / eau, de manière plus particulièrement préférée acétone / eau ; - de préférence, le deuxième éluant est un mélange alcool / eau, de manière plus particulièrement préférée méthanol / eau ; - le cas échéant de préférence le troisième éluant est un mélange cétone / eau, de manière plus particulièrement préférée acétone / eau. Selon un mode de réalisation, le premier acide gras est un premier acide gras polyinsaturé. A titre d'exemple : - le premier acide gras polyinsaturé est l'acide eicosapentaénoïque, et est de préférence récupéré à l'issue du procédé avec une pureté supérieure ou égale à 80 %, ou à 90 %, ou à 96 % ; ou - le premier acide gras polyinsaturé est l'acide docosahexaénoïque, et est de préférence récupéré à l'issue du procédé avec une pureté supérieure ou égale à 70 %, ou à 80 %, ou à 90 %, ou à 95 % ; o u - le premier acide gras polyinsaturé est l'acide arachidonique, et est de préférence récupéré à l'issue du procédé avec une pureté supérieure ou égale à 70 %, ou à 80 %, ou à 90 %, ou à 95 % ; ou - le premier acide gras polyinsaturé est l'acide docosapentaénoïque, et est de préférence récupéré à l'issue du procédé avec une pureté supérieure ou égale à 70 %, ou à 80 %, ou à 90 % , o u à 95 % Selon un mode de réalisation : - la première étape de séparation chromatographique est une étape de séparation entre le premier acide gras et un ou des composés plus retenus que celui-ci ; et/ou - la deuxième étape de séparation chromatographique est une étape de séparation entre le premier acide gras et un ou des composés plus retenus que celui-ci ; et/ou - le cas échéant, la troisième étape de séparation chromatographique est une étape de séparation entre le premier acide gras et un ou des composés moins retenus que celui-ci. Selon un mode de réalisation le procédé est mis en oeuvre dans une installation comprenant des unités de séparation chromatographique, au moins l'une de celles-ci comprenant une colonne de séparation présentant une longueur supérieure ou égale à 5 cm, ou à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm ; et/ou présentant un diamètre supérieur ou égal à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm. L'invention a également pour objet une installation de purification d'un premier acide gras (de préférence un premier acide gras polyinsaturé) à partir d'un mélange initial, l'installation comprenant : - une première unité de séparation chromatographique en phase liquide, alimentée par une conduite d'amenée de mélange initial, et à laquelle sont connectées en sortie d'une part une première conduite de flux enrichi en premier acide gras et d'autre part une conduite de flux enrichi en deuxième acide gras ; - une deuxième unité de séparation chromatographique en phase liquide, alimentée par la première conduite de flux enrichi en premier acide gras, et à laquelle sont connectées en sortie d'une part une deuxième conduite de flux enrichi en premier acide gras et d'autre part une conduite de flux enrichi en troisième acide gras, la deuxième unité de séparation chromatographique étant une unité de séparation chromatographique à lit statique. Selon un mode de réalisation, la première unité de séparation chromatographique est une unité de séparation chromatographique à plusieurs colonnes ; et de préférence est un système à lit mobile simulé ou à lit mobile réel ou un système dans lequel les points d'injection et les points de collecte des flux sont déplacés périodiquement de manière asynchrone. Selon un mode de réalisation, l'installation comprend : - une troisième unité de séparation chromatographique en phase liquide, alimentée par la deuxième conduite de flux enrichi en premier acide gras, et à laquelle sont connectées en sortie d'une part une troisième conduite de flux enrichi en premier acide gras et d'autre part une conduite de flux enrichi en quatrième acide gras, la troisième unité de séparation chromatographique étant de préférence une unité de séparation chromatographique à lit statique. Selon un mode de réalisation : - la deuxième unité de séparation chromatographique est une unité de séparation chromatographique à colonne unique ; et de préférence est un système avec recyclage à l'état stationnaire ; et/ou le cas échéant, la troisième unité de séparation est une unité de séparation chromatographique à colonne unique ; et de préférence est un système avec recyclage à l'état stationnaire. Selon un mode de réalisation, au moins l'une parmi la première unité 5 de séparation chromatographique, la deuxième unité de séparation chromatographique et la troisième unité de séparation chromatographique comprend une colonne de séparation présentant une longueur supérieure ou égale à 5 cm, ou à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm ; et/ou présentant un diamètre supérieur ou égal à 10 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm. La présente invention permet de surmonter les inconvénients de l'état de la technique. Elle fournit plus particulièrement un procédé de purification d'acide gras (et notamment d'acide gras polyinsaturé) pouvant être mis en 15 oeuvre dans une installation chromatographique plus simple que celles de l'état de la technique, avec par ailleurs une productivité spécifique élevée et une faible consommation de solvants. Cela est accompli grâce à la mise en oeuvre d'une étape de séparation dans une unité de séparation à lit statique (de préférence mono- 20 colonne), à la suite d'une première étape de séparation dans une unité de séparation - qui, elle, peut être mise en oeuvre dans une unité de séparation à plusieurs colonnes telle qu'une unité à lit mobile simulé ou autre. Dans un mode de réalisation préféré, l'invention prévoit deux étapes successives dans des unités de séparation à lit statique (de préférence 25 mono-colonnes), à la suite de la première étape susmentionnée. L'invention permet ainsi de fournir un acide gras (notamment acide gras polyinsaturé) de pureté élevée, permettant son utilisation dans des compositions de suppléments alimentaires ou de médicaments, à partir d'une charge multi-composés, et ce en minimisant le nombre de colonnes 30 chromatographiques employées. BREVE DESCRIPTION DES FIGURES La figure 1 représente de manière schématique un mode de réalisation d'une installation pour la mise en oeuvre de l'invention. 35 DESCRIPTION DE MODES DE REALISATION DE L'INVENTION L'invention est maintenant décrite plus en détail et de façon non limitative dans la description qui suit. De manière générale, les proportions exprimées sont des proportions massiques, sauf mention contraire. L'ensemble de la description qui suit est effectuée en relation avec le mode de réalisation préféré dans lequel le premier acide gras est un PUFA, appelé « premier PUFA ». Toutefois, cette description vaut de manière analogue lorsque le premier acide gras n'est pas polyinsaturé. Il convient alors de remplacer « premier PUFA » par le terme plus général « premier acide gras » dans la description ci-dessous. Ainsi, le premier acide gras peut également être un acide gras saturé, un acide gras mono-insaturé, ou un dérivé d'acide gras tel qu'un acide gras ramifié, naturel ou modifié. Procédé de préparation Le procédé de l'invention permet d'obtenir un premier PUFA sous forme purifiée, à partir d'un mélange initial. Le mélange initial comprend, outre le premier PUFA, d'autres acides gras non souhaités, à savoir généralement des acides gras saturés ou mono-insaturés et d'autres PUFA, ainsi que d'autres impuretés éventuelles. Le deuxième acide gras, le troisième acide gras et le quatrième acide gras, mentionnés ci-dessus, font partie de ceux-ci. Le mélange initial peut être un mélange d'acides gras dérivé de poisson, de végétaux, d'algues et/ou de levure, et de préférence de poisson. Il peut s'agir d'une matière brute, par exemple de l'huile de poisson ou de l'huile d'algue, ou de l'huile de levure. Il peut également s'agir d'un produit dérivé des matières brutes ci-dessus, et par exemple dérivé d'huile de poisson, d'huile d'algue et/ou d'huile de levure. L'huile peut par exemple être extraite de végétaux, algues ou levures naturelles ou génétiquement modifiées. Par « produit dérivé d'une matière brute », on entend une matière brute qui a été soumise à une ou plusieurs étapes de traitement. Ces étapes de traitement peuvent comprendre une ou plusieurs étapes de désintégration cellulaire, de broyage, de séparation ou de purification (par exemple un fractionnement) et/ou une étape d'hydrolyse pour convertir des triglycérides en acides gras libres et/ou une étape de transestérification pour convertir les acides gras en alkyl esters, et de préférence en éthyl esters, et/ou une étape de réduction de l'indice de peroxyde et/ou de l'indice d'anisidine (cf. ci- dessous), et/ou une étape de distillation moléculaire, et/ou une ou plusieurs étapes de séparation chromatographique, etc. Selon un mode de réalisation avantageux, le mélange initial est un produit estérifié ou transestérifié, tel qu'une huile de poisson, une huile végétale, une huile d'algue ou une huile de levure transestérifiée. Ainsi, chaque acide gras (et en particulier chaque PUFA) obtenu ou utilisé dans le procédé de l'invention peut être un dérivé d'acide gras, notamment sous la forme d'un monoglycéride, diglycéride ou triglycéride, d'un ester, d'un phospholipide, d'un amide, d'une lactone ou d'un sel. Les formes acide gras libre et esters sont préférées, et tout particulièrement les esters. Les esters sont typiquement des alkyl esters, par exemple des alkyl esters en C1-C6, notamment en C1-C4, par exemple des méthyl esters et des éthyl esters. Les éthyl esters sont préférés. Ainsi, le premier PUFA, le deuxième acide gras, le troisième acide gras et le quatrième acide gras mentionnés dans la présente demande peuvent être par exemple sous forme acide gras libre ou ester, et de préférence sont sous forme de composés éthyl esters. En faisant référence à la figure 1, le procédé selon l'invention peut être mis en oeuvre dans une installation comprenant une première unité de séparation chromatographique 3. La première unité de séparation chromatographique 3 assure la séparation entre le premier PUFA et le deuxième acide gras. A chaque fois qu'il est fait mention dans la présente demande d'une séparation entre le premier PUFA et un acide gras donné, il est entendu que d'autres acides gras peuvent également être séparés du premier PUFA simultanément avec la séparation vis-à-vis de l'acide gras donné. Généralement, chaque séparation chromatographique sépare le premier PUFA d'un ensemble de composés plus polaires que lui ou moins polaires que lui. La séparation peut également s'effectuer selon des critères de taille de longueur de chaine aliphatique et de nombre d'insaturation. Plus généralement, les effets pouvant être dépendants des éluants utilisés, la séparation s'effectue selon des critères de temps de rétention qui sont différents selon le cas, permettant ainsi de séparer le premier PUFA d'impuretés qui sont plus ou moins retenues que lui. La température de la séparation peut être ajustée selon les critères bien connus de l'homme de l'art dans une gamme située entre 5°C et 90°C, préférentiellement entre 15 et 60°C, et encore préférentiellement entre la température ambiante et 45°C. Le cas échéant la pression est ajustée pour maintenir un état monophasique, de préférence liquide ou supercritique dans la colonne. La première unité de séparation chromatographique 3 est alimentée par une conduite d'alimentation en mélange d'acides gras 1 ainsi que par une conduite d'alimentation en premier éluant 2. En sortie de la première unité de séparation chromatographique 3 sont connectées d'une part une première conduite de flux enrichi en premier PUFA 5 et d'autre part une conduite de flux enrichi en deuxième acide gras 4. Dans le contexte de la présente demande, le terme « enrichi » a une signification relative : une séparation entre une espèce A et une espèce B à partir d'un flux initial, permettant de récupérer un flux enrichi en espèce A, signifie ainsi que le flux ainsi récupéré présente un rapport massique A/B supérieur à celui du flux initial. Le mélange initial peut avoir subi des étapes préliminaires de traitement telles que décrites ci-dessus, auquel cas les unités de traitement correspondantes, non représentées, peuvent être incluses dans l'installation de l'invention. Une deuxième unité de séparation chromatographique 6 est prévue en aval, pour assurer une séparation entre le premier PUFA et un troisième acide gras. Cette deuxième unité de séparation chromatographique 6 est alimentée par la première conduite de flux enrichi en premier PUFA 5 ainsi que par une conduite d'alimentation en deuxième éluant 7. En sortie de la deuxième unité de séparation chromatographique 6 sont connectées d'une part une deuxième conduite de flux enrichi en premier PUFA 9 et d'autre part une conduite de flux enrichi en troisième acide gras 8. De préférence, une troisième unité de séparation chromatographique 10 est prévue, pour assurer une séparation entre le premier PUFA et un quatrième acide gras. Cette troisième unité de séparation chromatographique 10 est alimentée par la deuxième conduite de flux enrichi en premier PUFA 9 ainsi que par une conduite d'alimentation en troisième éluant 11. En sortie de la troisième unité de séparation chromatographique 10 sont connectées d'une part une troisième conduite de flux enrichi en premier PUFA 12 et d'autre part une conduite de flux enrichi en quatrième acide gras 13. De préférence, le procédé comporte exactement trois étapes de séparation chromatographique dans les trois unités décrites ci-dessus. Alternativement, le procédé ne comprend que deux séparations chromatographiques, auquel cas la troisième unité de séparation chromatographique 10 est omise. Alternativement encore, le procédé peut comprendre quatre étapes de séparation chromatographique successives (ou davantage), auquel cas des unités de séparation chromatographique supplémentaires sont ajoutées de manière analogue. Le terme « unité de séparation chromatographique » désigne soit un système chromatographique à colonne unique soit un système chromatographique à plusieurs colonnes. Il peut s'agir d'un système chromatographique à lit statique ou non. Dans un système chromatographique à lit statique, le mélange de composés à séparer percole dans une enceinte (ou colonne), généralement cylindrique. La colonne contient un lit de matériau poreux (phase stationnaire) perméable aux fluides. La vitesse de percolation de chaque composé dans le mélange dépend des propriétés physiques du composé. Les composés les plus retenus sur la phase stationnaire percolent plus lentement que les composés les moins retenus sur la phase stationnaire. Ce principe permet d'effectuer la séparation souhaitée. Il est possible d'effectuer un tel traitement dans plusieurs colonnes en série ou en parallèle, mais généralement une séparation chromatographique dans un système à lit statique est mise en oeuvre avec une colonne unique. Des exemples de tels systèmes chromatographiques à lit statique sont les systèmes HPLC (chromatographie en phase liquide à haute performance) ou CYCLOJETTM (système avec recyclage à l'état stationnaire). Le système CYCLOJETTm est tel que décrit dans le document US 6,063,284, auquel il est fait expressément référence. Il s'agit d'un système de séparation chromatographique discontinue à colonne unique, dans lequel les espèces (i) les plus retenues puis (ii) les moins retenues sont collectées séparément à la sortie de la colonne, une portion non-séparée du chromatogramme étant recyclée par une pompe principale. Le mélange à séparer est périodiquement injecté au moyen d'une boucle d'injection dans la portion recyclée du chromatogramme. La boucle d'injection est de préférence connectée entre la pompe principale et la colonne. Après plusieurs cycles chromatographiques, le procédé atteint un état stationnaire périodique dans lequel la quantité de produits injectés est égale à la quantité de produits collectés séparément à la sortie de la colonne. Selon un mode de réalisation, la séparation chromatographique dans un système à lit statique mono-colonne avec recyclage à l'état stationnaire est cyclique et comprend les étapes suivantes : - établissement et maintien d'un profil chromatographique circulant dans la colonne au moyen d'une pompe à éluant ; - injection dans ledit profil chromatographique circulant d'un échantillon comprenant les au moins deux composés à séparer, de manière discontinue et à chaque cycle, l'injection étant effectuée au moyen d'une boucle d'injection contrôlée dans une position d'injection par une vanne d'injection, afin d'injecter l'échantillon présent dans la boucle dans le profil chromatographique circulant, la vanne d'injection restant en position d'injection du début de l'injection jusqu'au moment où la totalité du profil est élue de la colonne, puis basculement de la vanne d'injection dans une position de charge, pour charger la boucle d'injection lorsque tout le profil est dans la colonne, et - collecte d'au moins deux fractions enrichies à partir du profil circulant, de manière discontinue et périodique. Cette séparation peut également comprendre l'étape suivante : - passage d'éluant dans la colonne en tant que phase mobile, de manière essentiellement continue au cours du cycle, au moyen de la pompe à éluant. Cette séparation peut également comprendre les étapes suivantes : - enregistrement des événements se produisant à partir du début de la collecte d'une première fraction jusqu'au début suivant de collecte de première fraction ; - interruption de la pompe à éluant lors de la collecte d'une troisième fraction, cette interruption se poursuivant jusqu'à la fin du cycle, de sorte que les cycles soient reproductibles temporellement. Selon un mode de réalisation, il n'y a aucune perte de profil circulant lors de l'injection dans le profil circulant maintenu. Un mode de réalisation détaillé de ce système figure en col.5 1.36- co1.101.41 du document US 6,063,284 précité. L'unité de séparation chromatographique peut également être un système chromatographique à lit non-statique. Un système à lit non-statique est un système multi-colonnes, dans lequel les positions relatives du lit de phase stationnaire et des points d'injection et/ou de collecte des flux se déplacent au cours du temps. Des exemples de tels systèmes chromatographiques à lit non-statique sont les systèmes SMB, iSMB, SSMB, AMB, VARICOL Tm, MODICON Tm, 5 POWERFEEDTM, DCC ou MCSGP. Un système SMB comprend une pluralité de colonnes individuelles contenant un adsorbant, qui sont connectées en série. Un flux d'éluant traverse les colonnes selon une première direction. Les points d'injection du flux d'alimentation et de l'éluant, ainsi que les points de collecte des 10 composés séparés, sont décalés périodiquement et simultanément au moyen d'un ensemble de vannes. L'effet global est de simuler le fonctionnement d'une colonne unique contenant un lit mobile d'adsorbant solide, l'adsorbant solide se déplaçant dans une direction à contre-courant du flux d'éluant. Ainsi, un système SMB est composé de colonnes qui 15 contiennent des lits stationnaires d'adsorbant solide à travers lesquels passe l'éluant, mais le fonctionnement est tel qu'un lit mobile continu à contre-courant est simulé. La forme la plus conventionnelle d'un système SMB est le système SMB à quatre zones. D'autres formes possibles sont les systèmes SMB à 20 trois zones et les systèmes SMB à deux zones (tels que décrits dans l'article « Two Section Simulated Moving Bed Process » de Kwangnam Lee, dans Separation Science and Technology 35(4):519-534, 2000, auquel il est fait expressément référence). Un système iSMB est tel que décrit dans les documents EP 0342629 25 et US 5,064,539, auxquels il est fait expressément référence. Un système SSMB découpe les introductions et collectes des flux en sous séquences appliquées de façons périodiques. Dans les systèmes iSMB et SSMB, il y a au moins une étape dans laquelle le système fonctionne en boucle fermée, sans entrée ou sortie de produit. 30 D'autres variantes des systèmes SMB sont : le système SMB variant dans le temps et le système POWERFEEDTM, tels que décrits dans le document US 5,102,553 et dans l'article « PowerFeed operation of simulated moving bed units: changing flow-rates during the switching interval », de Zhang et al. dans Journal of Chromatography A, 1006:87-99, 2003, auxquels 35 il est fait expressément référence; le système MODICON Tm, tel que décrit dans le document US 7,479,228, auquel il est fait expressément référence ; et le système SMB avec recirculation interne, tel que décrit dans le document US 8,282,831, auquel il est fait expressément référence. Un système de chromatographie DCC est tel que décrit dans le document FR 2889077, auquel il est fait expressément référence. Un système DCC est un procédé séquentiel à déplacement périodique des points d'injection de phase mobile et de mélange à séparer, ayant la caractéristique d'être constamment en boucle ouverte. Il utilise deux colonnes ou plus. Un système AMB présente un fonctionnement similaire à un système SMB. Toutefois, au lieu de déplacer les points d'injection du flux d'alimentation et de l'éluant, ainsi que des points de collecte, au moyen d'un o système de vannes, un ensemble d'unités d'adsorption (colonnes) sont déplacées physiquement par rapport aux points d'alimentation et de collecte. A nouveau, le fonctionnement permet de simuler un lit mobile continu à contre-courant. Un système de chromatographie VARICOLTM est tel que décrit dans 15 les documents US 6,136,198, US 6,375,839 US 6,413,419 et US 6,712,973, auxquels il est fait expressément référence. Un système VARICOLTM comprend une pluralité de colonnes individuelles contenant un adsorbant qui sont reliées en série. On fait passer un éluant dans les colonnes selon une première direction. Contrairement au système SMB, les points d'injection 20 pour le mélange à séparer et pour l'éluant et les points de collecte des composés séparés dans le système sont déplacés périodiquement mais de manière asynchrone, au moyen d'un ensemble de vannes. L'effet global est de créer des zones de séparation de longueur variable dans le temps, allouant ainsi la phase stationnaire de manière dynamique dans les zones où 25 elle est la plus utile, et permettant une puissance de séparation similaire avec moins d'unités de séparation chromatographique et une productivité accrue. Contrairement à un système SMB, un système VARICOLTM ne simule pas le fonctionnement d'une colonne unique contenant un lit mobile d'adsorbant solide, l'adsorbant solide se déplaçant dans une direction à 30 contre-courant du flux d'éluant, et ainsi le principe de fonctionnement du VARICOLTM ne peut pas être mis en oeuvre dans un système AMB équivalent. L'invention prévoit que la première étape de séparation est mise en oeuvre soit dans une unité de séparation à lit statique, soit dans une unité de 35 séparation à lit non-statique et de préférence dans une unité de séparation à lit non-statique; et que la deuxième étape de séparation est mise en oeuvre dans une unité de séparation à lit statique. La troisième étape, si elle est présente, est mise en oeuvre soit dans une unité de séparation à lit statique, soit dans une unité de séparation à lit non-statique et de préférence dans une unité de séparation à lit statique. Ainsi, selon un mode de réalisation, la première étape est mise en oeuvre dans une unité à lit non-statique, la deuxième étape est mise en oeuvre dans une unité à lit statique, et le cas échéant (c'est-à-dire dans l'hypothèse où la troisième étape de séparation chromatographique est présente) la troisième étape est mise en oeuvre dans une unité à lit statique. Egalement, selon un mode de réalisation, la première étape est mise en oeuvre dans une unité multi-colonnes, la deuxième étape est mise en oeuvre dans une unité à colonne unique, et le cas échéant la troisième étape est mise en oeuvre dans une unité à colonne unique. Selon un mode de réalisation, la première étape est mise en oeuvre dans une unité VARICOLTM ou SMB ou AMB, la deuxième étape est mise en oeuvre dans une unité HPLC ou CYCLOJETTM, et la troisième est mise en oeuvre dans une unité VARICOLTM ou SMB ou AMB. Selon un mode de réalisation alternatif et préféré, la première étape est mise en oeuvre dans une unité VARICOLTM ou SMB ou AMB, la deuxième étape est mise en oeuvre dans une unité HPLC ou CYCLOJETTm, et la troisième est mise en oeuvre dans une unité HPLC ou CYCLOJETTm. Dans une variante préférée, la première étape est mise en oeuvre dans une unité VARICOLTM, la deuxième étape est mise en oeuvre dans une unité CYCLOJETTM, et la troisième est mise en oeuvre dans une unité CYCLOJETTm. Les étapes de séparation peuvent être effectuées simultanément dans des unités physiquement distinctes, ou peuvent être effectuées séquentiellement, dans des unités physiquement distinctes ou dans des mêmes unités. Il faut noter que lorsque deux étapes de séparation chromatographique sont effectuées dans un système de type SMB ou AMB, il est possible de les mettre en oeuvre simultanément sur un même système SMB ou AMB. Un exemple de mise en oeuvre simultanée sur un même appareil est décrit dans le document WO 2011/080503, ou le document WO 2013/005048, ou le document WO 2013/005051, auxquels il est fait expressément référence. De préférence, toutes les unités de séparation chromatographique sont physiquement distinctes. Selon un mode de réalisation, la ou les colonnes de séparation (de préférence les colonnes de séparation) de la première unité de séparation chromatographique 3 présentent une longueur totale ou cumulée supérieure ou égale à 5 cm, ou à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm ; et/ou présentent un diamètre supérieur ou égal à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm. Selon un mode de réalisation, la ou les colonne de séparation (de préférence la colonne de séparation) de la deuxième unité de séparation chromatographique 6 présentent une longueur totale ou cumulée supérieure ou égale à 5 cm, ou à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm ; et/ou présentent un diamètre supérieur ou égal à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm. Selon un mode de réalisation, la ou les colonne de séparation (de préférence la colonne de séparation) de la troisième unité de séparation chromatographique 10 présentent une longueur totale ou cumulée supérieure ou égale à 5 cm, ou à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm ; et/ou présentent un diamètre supérieur ou égal à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm. Selon un mode de réalisation, la totalité des colonnes chromatographiques utilisées dans le procédé ou l'installation de l'invention présentent une longueur totale ou cumulée supérieure ou égale à 5 cm, ou à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm ; et/ou présentent un diamètre supérieur ou égal à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm. La longueur et le diamètre des colonnes sont les dimensions utiles des colonnes, c'est-à-dire les dimensions du lit de phase stationnaire dans les colonnes. Différentes géométries de colonnes existent, les colonnes cylindriques axiales ou radiales mais également des cellules à section non cylindriques auxquelles il est fait expressément référence (dans ce cas, le diamètre fait référence à la dimension maximale de la section). Chaque étape de séparation chromatographique peut être effectuée sur une phase inversée, en tant qu'adsorbant (phase stationnaire). Par exemple, on peut utiliser des adsorbants basés sur des résines faiblement polaires ou des phases stationnaires à base de silice chimiquement modifiée avec des groupements organiques tels que des groupements alkyles (notamment en C4, C8, C18, C24, C30), phényles, ou autres. Chaque étape de séparation chromatographique peut être effectuée en utilisant un éluant hydro-organique, c'est-à-dire un mélange d'un ou plusieurs solvants organiques avec de l'eau. De préférence, toutes les étapes de séparation chromatographique sont effectuées en utilisant des éluants hydro-organiques. Alternativement, il est possible de mettre en oeuvre certaines étapes de séparation chromatographiques avec des éluants purement organiques. Les solvants organiques utilisables dans le cadre de l'invention (notamment pour former les éluants hydro-organiques) sont par exemple les alcools tels que l'éthanol, le propanol, l'isopropanol et de manière davantage préférée le méthanol ; les cétones telles que l'acétone ou la méthyléthylcétone ; les nitriles tels que l'acétonitrile ; les esters tels que l'acétate de méthyle ou l'acétate d'éthyle ; les furanes tels que le tétrahydrofurane ; les éthers tels que le diéthylether or le méthyléthylether ; et les combinaisons de deux ou plus de deux solvants parmi ceux-ci. Le méthanol et l'acétone sont les solvants organiques préférés. Chaque éluant hydro-organique est caractérisé par un rapport eau/organique, qui est le rapport volumique de l'eau par rapport au(x) solvant(s) organique(s) dans l'éluant. Le rapport eau/organique de chaque éluant hydro-organique peut de préférence varier de 0,01:99,99 à 30:70, et de préférence de 5:95 à 25:75. Les différentes étapes de séparation chromatographique peuvent être effectuées avec des éluants ayant la même composition ou des compositions différentes. Il est préféré d'utiliser des éluants ayant des compositions différentes, et en particulier ayant des rapports eau/organique différents, cela permettant d'ajuster la force éluante de l'éluant à chaque étape de séparation et donc d'obtenir la séparation de différents composés à chaque étape. On peut aussi souhaiter utiliser des éluants composés de différents solvants organiques dans les différentes étapes, afin d'ajuster la sélectivité chromatographique entre certaines espèces devant être séparées à chaque étape de séparation et ainsi obtenir la séparation de différents composés à chaque étape. De préférence, la concentration massique du premier éluant en solvant(s) organique(s) est contrôlée à 2 % près, de préférence à 1 % près, ou à 0,5 % près, ou à 0,2 % près, ou à 0,1 % près ; le cas échéant de préférence la concentration massique du deuxième éluant en solvant(s) organique(s) est contrôlée à 2 % près, de préférence à 1 % près, ou à 0,5 % près, ou à 0,2 % près, ou à 0,1 % près ; le cas échéant de préférence la concentration massique du troisième éluant en solvant(s) organique(s) est contrôlée à 2 % près, de préférence à 1 % près, ou à 0,5 % près, ou à 0,2 % près, ou à 0,1 % près. Le contrôle de la composition des éluants est effectué assurant des apports d'eau et/ou de solvant(s) organiques afin de procéder aux ajustements nécessaires. Dans la première étape de séparation chromatographique, le premier PUFA est de préférence séparé de composés (notamment le deuxième acide gras) plus retenus que celui-ci. Dans ce cas, lorsque la première unité de séparation chromatographique 3 est une unité à lit non-statique, le flux enrichi en premier PUFA est le raffinat, et le flux enrichi en deuxième acide gras est l'extrait. Dans la deuxième étape de séparation chromatographique, le premier PUFA est de préférence séparé de composés (notamment le troisième acide gras) plus retenus que celui-ci. Dans la troisième étape de séparation chromatographique, le premier PUFA est de préférence séparé de composés (notamment le quatrième acide gras) moins retenus que celui-ci. Chaque flux issu d'une étape de séparation chromatographique subit de préférence une étape de concentration. Les flux sont concentrés de sorte à en éliminer l'éluant (solvants organiques et eau) ou à réduire la teneur massique du flux en solvants organiques et eau à un niveau de moins de 90%, ou de moins de 80%, ou de moins de 70%, ou de moins de 60%, ou de moins de 50%, ou de moins de 40%, ou de moins de 30%, ou de moins de 20%, ou de moins de 10 %, ou de moins de 5 %, ou de moins de 2 %, ou de moins de 1 %, ou de moins de 0,5 %, ou de moins de 0,1 %. Ainsi, dans un mode de réalisation préféré, au moins une unité de concentration (non représentée sur la figure) est associée à chaque unité de séparation chromatographique 3, 6, 10. Ainsi, de préférence, le premier flux enrichi en premier PUFA collecté à l'issue de la première séparation chromatographique est un flux concentré (appauvri en éluant ou dépourvu ou essentiellement dépourvu de solvants organiques et d'eau) ; de même, le deuxième flux enrichi en premier PUFA collecté à l'issue de la deuxième séparation chromatographique est de préférence un flux concentré (appauvri en éluant ou dépourvu ou essentiellement dépourvu de solvants organiques et d'eau) ; de même, le cas échéant, le troisième flux enrichi en premier PUFA collecté à l'issue de la troisième séparation chromatographique est de préférence un flux concentré (appauvri en éluant ou dépourvu ou essentiellement dépourvu de solvants organiques et d'eau). Eventuellement, le flux enrichi en deuxième acide gras, le flux enrichi en troisième acide gras et le cas échéant flux enrichi en quatrième acide gras sont des flux concentrés (appauvris en éluant ou dépourvus ou essentiellement dépourvus de solvants organiques et d'eau). Dans chaque unité de concentration, l'éluant peut être évaporé et condensé, de sorte à le séparer du mélange d'acides gras. On peut utiliser par exemple un évaporateur à film tombant à recirculation, un évaporateur à flux montant, un évaporateur à film raclé, un évaporateur à couche mince, un évaporateur à thermosiphon, un évaporateur rotatif, une colonne à distiller, une colonne de rectification ou tout autre évaporateur ou combinaison d'évaporateurs permettant l'évaporation de l'éluant et la concentration des acides gras concentrés au fond de l'appareil. L'évaporation est de préférence effectuée à une pression inférieure à la pression atmosphérique, notamment à une pression inférieure ou égale à 750 mbar, ou inférieure ou égale à 500 mbar, ou inférieure ou égale à 300 mbar. Alternativement, on peut utiliser un dispositif de séparation membranaire, avec un ou plusieurs étages de séparation, ou une combinaison de moyens d'évaporation et de séparation membranaire. L'éluant obtenu à l'issue d'une étape de concentration (par exemple évaporé et condensé, ou autrement séparé), peut être recyclé vers une ou plusieurs étapes du procédé, notamment une ou plusieurs des étapes de séparation chromatographique. Ainsi, de préférence le procédé de l'invention prévoit un recyclage de l'éluant utilisé dans la première étape de séparation chromatographique. De manière plus particulièrement préférée, l'éluant est recyclé pour être réutilisé dans la première étape de séparation chromatographique. De préférence le procédé de l'invention prévoit un recyclage de l'éluant utilisé dans la deuxième étape de séparation chromatographique. De manière plus particulièrement préférée, l'éluant est recyclé pour être réutilisé dans la deuxième étape de séparation chromatographique. Ainsi, de préférence le procédé de l'invention prévoit un recyclage de l'éluant utilisé dans la troisième étape de séparation chromatographique. De manière plus particulièrement préférée, l'éluant est recyclé pour être réutilisé dans la troisième étape de séparation chromatographique. Selon des modes de réalisation particuliers, l'éluant séparé à partir du premier flux enrichi en premier PUFA est recyclé à plus de 50%, de préférence à plus de 60%, de préférence à plus de 70%, de préférence à plus de 80%, de préférence à plus de 90%, de préférence à plus de 95%, de préférence à plus de 98%, de préférence à plus de 99% . Selon des modes de réalisation particuliers, l'éluant séparé à partir du deuxième flux enrichi en premier PUFA est recyclé à plus de 50%, de préférence à plus de 60%, de préférence à plus de 70%, de préférence à plus de 80%, de préférence à plus de 90%, de préférence à plus de 95%, de préférence à plus de 98%, de préférence à plus de 99% . Selon des modes de réalisation particuliers, l'éluant séparé à partir du troisième flux enrichi en premier PUFA est recyclé à plus de 50%, de préférence à plus de 60%, de préférence à plus de 70%, de préférence à plus de 80%, de préférence à plus de 90%, de préférence à plus de 95%, de préférence à plus de 98%, de préférence à plus de 99% . Selon des modes de réalisation particuliers, l'éluant séparé à partir du flux enrichi en deuxième acide gras est recyclé à plus de 50%, de préférence à plus de 60%, de préférence à plus de 70%, de préférence à plus de 80%, de préférence à plus de 90%, de préférence à plus de 95%, de préférence à plus de 98%, de préférence à plus de 99% . Selon des modes de réalisation particuliers, l'éluant séparé à partir du flux enrichi en troisième acide gras est recyclé à plus de 50%, de préférence à plus de 60%, de préférence à plus de 70%, de préférence à plus de 80%, de préférence à plus de 90%, de préférence à plus de 95%, de préférence à plus de 98%, de préférence à plus de 99% . Selon des modes de réalisation particuliers, l'éluant séparé à partir du flux enrichi en quatrième acide gras est recyclé à plus de 50%, de préférence à plus de 60%, de préférence à plus de 70%, de préférence à plus de 80%, de préférence à plus de 90%, de préférence à plus de 95%, de préférence à plus de 98%, de préférence à plus de 99%. De préférence, le produit d'alimentation qui est fourni en entrée de chaque unité de séparation chromatographique et qui est destiné à être séparé est aussi dépourvu de solvants que possible. Ainsi : - le mélange initial comprend moins de 80 % de solvants organiques, de préférence moins de 60 % ou moins de 40 % ou moins de 20 % ou moins de 10 % ou moins de 5 % ou moins de 2 % ou moins de 1 % de solvants organiques, et de manière plus particulièrement préférée est un mélange d'acides gras essentiellement dépourvu de solvants organiques ; et/ou le cas échéant, le premier flux enrichi en premier PUFA qui alimente la deuxième unité de séparation chromatographique 6 comprend moins de 80 % de solvants organiques, de préférence moins de 60 % ou moins de 40 % ou moins de 20 % ou moins de 10 % ou moins de 5 % ou moins de 2 % ou moins de 1 % de solvants organiques, et de manière plus particulièrement préférée est un mélange d'acides gras essentiellement dépourvu de solvants organiques ; et/ou le deuxième flux enrichi en premier PUFA qui alimente la troisième unité de séparation chromatographique 10 comprend moins de 80 % de solvants organiques, de préférence moins de 60 % ou moins de 40 % ou moins de 20 % ou moins de 10 % ou moins de 5 % ou moins de 2 % ou moins de 1 % de solvants organiques, et de manière plus particulièrement préférée est un mélange d'acides gras essentiellement dépourvu de solvants organiques. Le procédé selon l'invention prévoit optionnellement une étape d'élimination (ou de réduction de la quantité) des composés oxygénés après 20 la séparation chromatographique, ou après les séparations chromatographiques. De préférence, cette étape n'est pas une étape de séparation chromatographique, et n'est pas mise en oeuvre dans une unité de séparation chromatographique. 25 De préférence, cette étape ne sépare essentiellement pas le premier PUFA d'autres acides gras présents dans le flux (à l'exception des composés oxygénés du type aldéhydes et peroxydes). L'étape d'élimination des composés oxygénés peut être mise en oeuvre dans une unité de traitement 14, alimentée directement ou 30 indirectement par la troisième conduite de flux enrichi en premier PUFA 12 (ou par la deuxième conduite de flux enrichi en premier PUFA 9 s'il n'y a que deux étapes de séparation chromatographique). En sortie de cette unité est connectée une conduite de collecte de premier PUFA purifié 15. L'unité de traitement 14 peut notamment être une unité de distillation 35 moléculaire ou évaporateur à court trajet. Un évaporateur à court trajet est équipé d'un condenseur intérieur et peut produire des évaporations avec un temps de résidence de préférence inférieur à 1000 s, de préférence inférieur à 100 s, de préférence inférieur à 10 s, sous une pression préférence inférieure à 10 mbar, de préférence inférieure à 1 mbar, de préférence inférieure à 0,1 mbar, de préférence inférieure à 0,01 mbar, de préférence inférieure à 0,001 mbar, à une température inférieure ou égale à 200°C, de préférence inférieure ou égale à 150°C, de préférence inférieure ou égale à 120°C, de préférence inférieure ou égale à 100°C, de préférence inférieure ou égale à 80°C. Alternativement l'unité de traitement 14 peut être une unité de mise en contact avec un substrat d'adsorption. Le substrat d'adsorption est tout substrat susceptible d'adsorber des composés oxygénés tels que les peroxydes et les composés aldéhydiques. Il peut être choisi par exemple parmi la silice, l'alumine, le charbon actif et les dérivés de ceux-ci, notamment les gels de silice, les silicates, aluminates et aluminosilicates. Une argile telle que la bentonite est un exemple de substrat approprié, de même que la terre de diatomée. L'adsorption peut être effectuée en discontinu, c'est-à-dire en « batch », ou en continu, par percolation à travers un lit d'adsorbant. De préférence, les acides gras ne sont pas dilués au cours de cette étape, et en particulier aucun solvant n'est ajouté. La mise en contact peut durer par exemple de 5 minutes à 24 heures, et notamment de 10 minutes à 10 heures, de 20 minutes à 5 heures, de 30 minutes à 2 heures, et de 45 minutes à 1h30. La quantité d'adsorbant utilisée dépend de la nature de l'adsorbant et de sa capacité à capturer les composés oxygénés. Elle peut être par exemple de 1 à 1000 g d'adsorbant par kg de flux à traiter (mélange d'acides gras), notamment de 10 à 500 g/kg, et plus particulièrement de 25 à 200 g/kg. A l'issue de la mise en contact, l'adsorbant est séparé du mélange d'acides gras, et ce dernier peut être filtré afin d'éviter toute contamination par de l'adsorbant résiduel. De préférence, la liaison des composés oxygénés à l'adsorbant est essentiellement irréversible, c'est-à-dire que l'adsorbant n'est pas régénéré. Il est cependant possible de régénérer l'adsorbant, par traitement thermique par exemple, afin de limiter le volume et/ou le coût de traitement des déchets. L'étape de traitement dans l'unité de traitement 14 peut permettre de réduire l'indice de peroxyde du flux traité d'au moins 25 %, de préférence d'au moins 50 %, de préférence d'au moins 75 %, de préférence d'au moins 80 % ou d'au moins 90 % ou d'au moins 95 % ou d'au moins 98 %. L'étape de traitement dans l'unité de traitement 14 peut permettre de réduire l'indice d'anisidine du flux traité d'au moins 25 %, de préférence d'au moins 50 %, de préférence d'au moins 75 %, de préférence d'au moins 80 % ou d'au moins 90 % ou d'au moins 95 % ou d'au moins 98 %. L'indice de peroxyde mesure la quantité de composés peroxydes dans un mélange d'acides gras. La méthode d'analyse utilisée est de préférence Ph Eur 2.5.5 met A. L'indice d'anisidine mesure la quantité de composés aldéhydiques dans un mélange d'acides gras. La méthode d'analyse utilisée est de préférence Ph Eur 2.5.36. Selon un mode de réalisation, l'indice de peroxyde du flux issu de l'étape de traitement (produit récolté dans la conduite de collecte de premier PUFA purifié 15) est inférieur ou égal à 10, ou inférieur ou égal à 9, ou inférieur ou égal à 8, ou inférieur ou égal à 7, ou inférieur ou égal à 6, ou inférieur ou égal à 5, ou inférieur ou égal à 4, ou inférieur ou égal à 3, ou inférieur ou égal à 2, ou inférieur ou égal à 1,5, ou inférieur ou égal à 1. Selon un mode de réalisation, l'indice d'anisidine du flux issu de l'étape de traitement (produit récolté dans la conduite de collecte de premier PUFA purifié 15) est inférieur ou égal à 20, ou inférieur ou égal à 18, ou inférieur ou égal à 16, ou inférieur ou égal à 14, ou inférieur ou égal à 12, ou inférieur ou égal à 10, ou inférieur ou égal à 9, ou inférieur ou égal à 8, ou inférieur ou égal à 7, ou inférieur ou égal à 6, ou inférieur ou égal à 5. Une autre étape de traitement analogue à celle décrite ci-dessus, et plus particulièrement une étape de distillation moléculaire, peut également être prévue en amont, notamment avant toute étape de séparation chromatographique. Produit obtenu Selon un mode de réalisation, le premier PUFA est un acide gras 30 omega-3. Selon des modes de réalisation différents, le premier PUFA peut être l'EPA, ou le DHA, ou l'ARA, ou le DPA, ou le SDA. Selon un mode de réalisation, le premier PUFA est l'EPA, le deuxième acide gras est un acide gras saturé ou mono-insaturé, le troisième acide gras 35 est le DHA ou le SDA, et le quatrième acide gras est celui du DHA et du SDA qui n'est pas le troisième acide gras. Par exemple, le troisième acide gras et le DHA et le quatrième acide gras est le SDA. La concentration en premier PUFA dans le produit final obtenu à l'issue du procédé (récolté dans la conduite de collecte de premier PUFA purifié 15, ou dans la troisième conduite de collecte de flux enrichi en premier PUFA 12 s'il n'y a pas d'étape d'élimination des composés oxygénés, ou encore dans la deuxième conduite de collecte de flux enrichi en premier PUFA 9 s'il n'y a ni troisième étape de séparation chromatographique ni étape d'élimination des composés oxygénés) peut être supérieure ou égale à environ 80 %, de préférence supérieure ou égale à environ 90%, ou à environ 95 %, ou à environ 97 %, ou à environ 98 %, ou à environ 99 % (par rapport au total des acides gras). La concentration en deuxième acide gras dans ce produit final peut être inférieure ou égale à environ 1 %, ou à environ 0,1%, ou à environ 0,05 %, ou à environ 0,03 %, ou à environ 0,01% (par rapport au total des acides gras). La concentration en troisième acide gras dans ce produit final peut être inférieure ou égale à environ 1 %, ou à environ 0,1%, ou à environ 0,05 %, ou à environ 0,03 %, ou à environ 0,01% (par rapport au total des acides gras). La concentration en quatrième acide gras dans ce produit final peut être inférieure ou égale à environ 1 %, ou à environ 0,1%, ou à environ 0,05 %, ou à environ 0,03 %, ou à environ 0,01% (par rapport au total des acides gras). Par exemple, le produit final obtenu à l'issue du procédé, peut contenir de l'EPA dans une proportion supérieure ou égale à environ 80 %, ou supérieure ou égale à environ 95 %, ou supérieure ou égale à environ 97 %, ou supérieure ou égale à environ 98 %, ou supérieure ou égale à environ 99% (par rapport au total des acides gras); ainsi que du DHA dans une proportion inférieure ou égale à environ 1 %, ou inférieure ou égale à environ 0,1%, ou inférieure ou égale à environ 0,05 %, ou inférieure ou égale à environ 0,03 %, ou inférieure ou égale à environ 0,01%. L'huile enrichie en premier PUFA est stockée à l'abri de l'air et de la lumière avant son conditionnement et/ou son utilisation, comprenant par exemple la formulation finale et/ou l'encapsulation. Selon un mode de réalisation, le produit final est combiné avec un véhicule pharmaceutiquement et/ou diététiquement acceptable et/ou des excipients et/ou diluants. Ce produit peut ainsi être formulé par exemple sous forme de gélules, capsules ou comprimés (ou sous toute autre forme adaptée à une administration orale ou topique ou parentérale). Chaque forme de dosage individuelle (par exemple capsule ou gélule) peut contenir par exemple de 250 à 1500 mg, de préférence de 300 à 1000 mg du produit ci-dessus. Le produit peut ainsi être utilisé pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour la prévention et/ou le traitement et/ou la prophylaxie de facteurs de risques pour les maladies cardiovasculaires, comme l'hypertriglycéridémie, l'hypercholestérolémie et l'hypertension ; et de maladies cardiovasculaires comme l'arythmie, la fibrillation atriale et/ou ventriculaire, la décompensation et l'insuffisance cardiaque ; pour la prévention primaire et secondaire de l'infarctus et du ré-infarctus ; pour le traitement de toute autre pathologie pouvant être traitée par les PUFA susmentionnés, comme par exemple les maladies auto-immunes, la cholique ulcéreuse, les pathologies tumorales, les maladies du système nerveux, le vieillissement cellulaire, l'infarctus cérébral, les maladies ischémiques, le psoriasis. Alternativement, le produit peut être utilisé dans des utilisations parapharmaceutiques, et notamment diététiques. EXEMPLES Les exemples suivants illustrent l'invention sans la limiter. Exemple 1 a - purification en deux étapes à l'échelle laboratoire Dans cet exemple, un ester éthylique d'EPA à plus de 94% est obtenu par 2 étapes de chromatographie à partir d'un mélange d'esters éthyliques contenant plus de 50% d'EPA. L'EPA est purifié par deux étapes de chromatographie, sur silice phase inversée C18, avec des particules de 20 pm de diamètre en moyenne. Les conditions de chromatographie sont les suivantes : Etape 1 : - VARICOLTM équipé de 5 colonnes de 9 cm de long et 4.8 cm de diamètre. - Eluant : acétone/eau à 90/10 v/v. Le raffinat contient de l'EPA à environ 70% (aire de chromatographie en phase gazeuse ou CPG). Après concentration dans un évaporateur rotatif opéré sous vide, le raffinat concentré contient moins de 1`)/0 de solvants résiduels. Etape 2 : - Le raffinat concentré obtenu à l'étape précédente est purifié dans un CYCLOJETTM équipé d'une colonne à compression dynamique axiale de 39 cm de long et de 5 cm de diamètre - Eluant : méthanol/eau à 93/7 v/v. On collecte une fraction contenant de l'EPA à environ 94 % (aire CPG), et moins de 0,1 % de DHA. Le taux de récupération de l'EPA dans cette fraction est supérieur à 95%. La productivité spécifique est de 2,76 kg d'EPA pur / kg phase stationnaire / jour. La consommation spécifique d'éluant est de 224 L/kg d'EPA pur. Après concentration dans un évaporateur rotatif opéré sous vide, la fraction concentrée contient moins de 1`)/0 de solvants résiduels. Exemple lb (comparatif) Dans cet exemple, le raffinat concentré obtenu à l'étape 1 de l'exemple précédent est purifié dans un système VARICOLTM équipé de 5 colonnes de 9 cm de long et 4,8 cm de diamètre, avec un éluant méthanol/eau à 93/7 v/v. Le raffinat contient de l'EPA à environ 92% (aire CPG), et moins de 0,1 % de DHA. Le taux de récupération de l'EPA dans le raffinat est supérieur à 95 %. La productivité spécifique est de 2,46 kg d'EPA pur / kg de phase stationnaire / jour. La consommation spécifique d'éluant est de 258 L/kg d'EPA pur. La productivité spécifique du CYCLOJETTM est donc de 12% supérieure à celle du VARICOLTM, et sa consommation spécifique d'éluant est inférieure de 13% par rapport à celle du VARICOLTM. De façon surprenante, le CYCLOJETTM conduit à des performances supérieures à celles du VARICOLTM pour la deuxième étape de purification. Exemple 2a : ultra-purification à l'échelle laboratoire par CYCLOJETTM Dans cet exemple, un ester éthylique d'EPA à plus de 96 % est obtenu par une étape de chromatographie à partir du produit obtenu à l'exemple 1 a. L'EPA est purifié sur silice phase inversée C18, avec des particules de 20 pm de diamètre en moyenne. Les conditions de chromatographie sont les suivantes : - Cyclojet équipé d'une colonne à compression dynamique axiale de 39 cm de long et de 5 cm de diamètre. - Eluant : acétone/eau à 79/21 v/v. L'une des fractions collectées contient de l'EPA à environ 96,8% (aire CPG), et moins de 0,1% de DHA. Le taux de récupération de l'EPA dans l'extrait est d'environ 95 %. La productivité spécifique est de 3,58 kg d'EPA pur / kg de phase stationnaire / jour. La consommation spécifique d'éluant est de 153 L/kg d'EPA pur. Après concentration dans un évaporateur rotatif opéré sous vide, la fraction concentrée contient moins de 1 % de solvants résiduels. Exemple 2b (comparatif) Dans cet exemple, le raffinat concentré obtenu à l'exemple 1 a est purifié dans un VARICOLTM équipé de 5 colonnes de 9 cm de long et 4,8 cm de diamètre, avec un éluant acétone/eau à 79/21 v/v. L'extrait contient de l'EPA à environ 97 % (aire CPG), et moins de 0,1 % de DHA. Le taux de récupération de l'EPA dans l'extrait est d'environ 95 %. La productivité spécifique est de 3,35 kg d'EPA pur / kg de phase stationnaire / jour. La productivité spécifique du Cyclojet est 7 % supérieure à celle du VARICOLTM. De façon surprenante, le Cyclojet conduit à une meilleure productivité que le VARICOLTM pour la deuxième étape de purification. Exemple 3 - purification à l'échelle pilote Dans cet exemple, un ester éthylique d'EPA à plus de 96 % est obtenu par trois étapes de chromatographie à partir d'un mélange d'esters éthyliques contenant plus de 50 % d'EPA. L'EPA est purifié par trois étapes de chromatographie, sur silice phase inversée C18. Les conditions de chromatographie sont les suivantes : Etape 1 : - VARICOLTM équipé de 5 colonnes de 9 cm de long et 59 cm de diamètre. Configuration des colonnes : 1/1,6/1,6/0,8 dans les zones 1/2/3/4 respectivement. - Eluant : acétone/eau à 90/10 v/v. Le raffinat contient de l'EPA à environ 70 % (aire CPG). Après concentration dans un évaporateur rotatif opéré sous vide, le raffinat concentré contient moins de 1 % de solvants résiduels. Etape 2 : - Cyclojet équipé d'une colonne à compression dynamique axiale de 49 cm de long et de 30 cm de diamètre. - Eluant : méthanol/eau à 93/7 v/v. On collecte une fraction contenant de l'EPA à environ 94 % (aire CPG), et moins de 0,1 % de DHA. Le taux de récupération de l'EPA dans la fraction est supérieur à 95 %. Après concentration dans un évaporateur rotatif opéré sous vide, la fraction concentrée contient moins de 1% de solvants résiduels. Etape 3 : - Cyclojet équipé d'une colonne à compression dynamique axiale de 49 cm de long et de 30 cm de diamètre. - Eluant : acétone/eau à 79/21 v/v. On collecte une fraction contenant de l'EPA à environ 96.,8% (aire CPG), et moins de 0,1% de DHA. Le taux de récupération de l'EPA dans la fraction est supérieur à 95 % Après concentration dans un évaporateur rotatif opéré sous vide, la fraction concentrée contient moins de 1% de solvants résiduels.15 REVENDICATIONS1. Procédé de purification d'un premier acide gras à partir d'un mélange initial comprenant en outre au moins un deuxième acide gras et un troisième acide gras, le procédé comprenant au moins : - une première étape de séparation chromatographique en phase liquide, à partir du mélange initial, effectuée dans une première unité de séparation chromatographique, permettant de récupérer d'une part un premier flux enrichi en premier acide gras et d'autre part un flux enrichi en deuxième acide gras ; - une deuxième étape de séparation chromatographique en phase liquide, à partir du premier flux enrichi en premier acide gras, effectuée dans une deuxième unité de séparation chromatographique, permettant de récupérer d'une part un deuxième flux enrichi en premier acide gras et d'autre part un flux enrichi en troisième acide gras, la deuxième unité de séparation chromatographique étant une unité de séparation chromatographique à lit statique. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel la première unité de séparation chromatographique est une unité de séparation chromatographique à plusieurs colonnes ; et de préférence est un système à lit mobile simulé ou à lit mobile réel ou un système dans lequel les points d'injection et les points de collecte des flux sont déplacés périodiquement de manière asynchrone. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le mélange initial comprend en outre un quatrième acide gras, le procédé comprenant : - une troisième étape de séparation chromatographique en phase liquide, à partir du deuxième flux enrichi en premier acide gras, effectuée dans une troisième unité de séparation chromatographique, permettant de récupérer d'une part un troisième flux enrichi en premier acide gras etd'autre part un flux enrichi en quatrième acide gras, la troisième unité de séparation chromatographique étant de préférence une unité de séparation chromatographique à lit statique. 4. Probédé selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel : - au moins l'une parmi la première unité de séparation chromatographique, la deuxième unité de séparation chromatographique et le cas échéant la troisième unité de 10 séparation chromatographique est une unité de séparation chromatographique à lit statique à colonne unique, qui de préférence est un système avec recyclage à l'état stationnaire ; - de préférence, au moins deux unités parmi la première 15 unité de séparation chromatographique, la deuxième unité de séparation chromatographique et le cas échéant la troisième unité de séparation chromatographique sont des unités de séparation chromatographique à lit statique à colonne unique, qui de préférence sont des systèmes avec 20 recyclage à l'état stationnaire ; - le cas échéant, à la fois la première unité de séparation chromatographique, la deuxième unité de séparation chromatographique et le cas échéant la troisième unité de séparation chromatographique sont des unités de 25 séparation chromatographique à lit statique à colonne unique, qui de préférence sont des systèmes avec recyclage à l'état stationnaire. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, dans lequel : 30 - la deuxième unité de séparation chromatographique est une unité de séparation chromatographique à colonne unique ; et de préférence est un système avec recyclage à l'état stationnaire ; et/ou - le cas échéant, la troisième unité de séparation 35 chromatographique est une unité de séparation chromatographique à colonne unique ; et de préférence est un système avec recyclage à l'état stationnaire. 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, dans lequel : - la première étape de séparation chromatographique est mise en oeuvre avec un premier éluant qui est un éluant hydro-organique ; et/ou - la deuxième étape de séparation chromatographique est mise en oeuvre avec un deuxième éluant qui est un éluant hydro-organique ; et/ou - le cas échéant, la troisième étape de séparation chromatographique est mise en oeuvre avec un troisième éluant qui est un éluant hydro-organique. 7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel : - le premier éluant est différent du deuxième éluant et le cas échéant le troisième éluant est différent du premier éluant et du deuxième éluant ; - de préférence, le premier éluant est un mélange cétone / eau, de manière plus particulièrement préférée acétone / eau - de préférence, le deuxième éluant est un mélange alcool / eau, de manière plus particulièrement préférée méthanol / eau ; - le cas échéant de préférence le troisième éluant est un mélange cétone / eau, de manière plus particulièrement préférée acétone / eau. 8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, dans lequel le premier acide gras est un premier acide gras polyinsaturé ; et, par exemple : - le premier acide gras polyinsaturé est l'acide eicosapentaénoïque, et est de préférence récupéré à l'issue du procédé avec une pureté supérieure ou égale à 80 %, ou à 90 %, ou à 96 % ; ou - le premier acide gras polyinsaturé est l'acide docosahexaénoïque, et est de préférence récupéré à l'issue du procédé avec une pureté supérieure ou égale à 70 %, ou à 80 %, ou à 90 %, ou à 95 % ; ou - le premier acide gras polyinsaturé est l'acide arachidonique, et est de préférence récupéré à l'issue du procédé avecune pureté supérieure ou égale à 70 %, ou à 80 %, ou à 90 %, ou à 95 % ; ou - le premier acide gras polyinsaturé est l'acide docosapentaénoïque, et est de préférence récupéré à l'issue du procédé avec une pureté supérieure ou égale à 70 %, ou à 80 %, ou à 90 %, ou à 95 %. 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, dans lequel : - la première étape de séparation chromatographique est une étape de séparation entre le premier acide gras et un ou des composés plus retenus que celui-ci ; et/ou - la deuxième étape de séparation chromatographique est une étape de séparation entre le premier acide gras et un ou des composés plus retenus que celui-ci ; et/ou - le cas échéant, la troisième étape de séparation chromatographique est une étape de séparation entre le premier acide gras et un ou des composés moins retenus que celui-ci. 10. Procédé selon l'une des revendications 1 à 9, qui est mis en oeuvre dans une installation comprenant des unités de séparation chromatographique, au moins l'une de celles-ci comprenant une colonne de séparation présentant une longueur supérieure ou égale à 5 cm, ou à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm ; et/ou présentant un diamètre supérieur ou égal à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm. 11. Installation de purification d'un premier acide gras à partir d'un mélange initial, l'installation comprenant : - une première unité de séparation chromatographique en phase liquide (3), alimentée par une conduite d'amenée de mélange initial (1), et à laquelle sont connectées en sortie d'une part une première conduite de flux enrichi en premier acide gras (5) et d'autre part une conduite de flux enrichi en deuxième acide gras (4) ;- une deuxième unité de séparation chromatographique en phase liquide (6), alimentée par la première conduite de flux enrichi en premier acide gras (5), et à laquelle sont connectées en sortie d'une part une deuxième conduite de flux enrichi en premier acide gras (9) et d'autre part une conduite de flux enrichi en troisième acide gras (8), la deuxième unité de séparation chromatographique (6) étant une unité de séparation chromatographique à lit statique. 12. Installation selon la revendication 11, dans laquelle la première unité de séparation chromatographique (3) est une unité de séparation chromatographique à plusieurs colonnes ; et de préférence est un système à lit mobile simulé ou à lit mobile réel ou un système dans lequel les points d'injection et les points de collecte des flux sont déplacés périodiquement de manière asynchrone. 13. Installation selon la revendication 11 ou 12, comprenant : - une troisième unité de séparation chromatographique en phase liquide (10), alimentée par la deuxième conduite de flux enrichi en premier acide gras (9), et à laquelle sont connectées en sortie d'une part une troisième conduite de flux enrichi en premier acide gras (12) et d'autre part une conduite de flux enrichi en quatrième acide gras (13), la troisième unité de séparation chromatographique (10) étant de préférence une unité de séparation chromatographique à lit statique. 14. Installation selon l'une des revendications 11 à 13, dans laquelle : - la deuxième unité de séparation chromatographique (6) est une unité de séparation chromatographique à colonne unique ; et de préférence est un système avec recyclage à l'état stationnaire ; et/ou - le cas échéant, la troisième unité de séparation (10) est une unité de séparation chromatographique à colonne unique ; et de préférence est un système avec recyclage à l'état stationnaire. 15. Installation selon l'une des revendications 11 à 14, dans laquelle au moins l'une parmi la première unité de séparation chromatographique (3), la deuxième unité de séparation chromatographique (6) et le cas échéant la troisième unité de séparation chromatographique (10) comprend uni colonne de séparation présentant une longueur supérieure ou égale à 5 cm, ou à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm ; et/ou présentant un diamètre supérieur ou égal à 10 cm, ou à 20 cm, ou à 25 cm, ou à 30 cm, ou à 40 cm, ou à 50 cm, ou à 60 cm.