Brevet FR3017879A1 — publié le 20150828

DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention se rapporte au domaine de l'identification de composés antiviraux, et en particulier de l'identification de composés actifs à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus. ART ANTERIEUR La famille des herpes virus représente un groupe de virus à ADN double brin qui est largement distribué au sein du règne animal. Les herpes virus représentent la seconde cause majeure de maladies virales chez l'homme, juste après les pathologies provoquées par les infections par les virus de l'influenza. Certaines pathologies provoquées par les herpes virus, et notamment par les gamma herpès virus, entraînent des conséquences importantes pour la vie des patients. A titre illustratif, une infection par le virus d'Epstein-Barr (EBV), qui est un gamma herpès virus, est l'agent causal du lymphome de Burkitt, du carcinome naso- pharyngé et de la mononucléose infectieuse. Or, il n'existe à ce jour aucun traitement thérapeutique à l'encontre d'EBV. Seuls des outils thérapeutiques du type vaccin sont actuellement en développement. Une autre illustration concerne les infections par le gamma herpès virus HHV8 (aussi appelé KSHV), lesquelles provoquent le syndrome de Kaposi. Le virus HHV8 est associé à des troubles lympho-prolifératifs associés à la maladie SIDA. Pour cet autre gamma herpès virus, l'arsenal thérapeutique est également limité, voire inexistant. A titre d'illustration de traitements contre les cancers induits par KSHV, on citera la chirurgie ou l'irradiation locale, le traitement anti-herpès par le ganciclovir, le traitement HAART chez les patients atteints du VIH, ou encore les anthracyclines liposomales telles que la daunorubicine, la doxorubicine, ou encore des associations doxorubicine/bleomycine/vinblastine ou bleomycine/vinblastine. Ces anthracyclines liposomales peuvent être également associées à une thérapie antiangiogénique à l'IL-12. Au sein des herpesvirus, on distingue les sous-familles des Alphaherpesvirinae, 30 des Betaherpesvirinae et des Gammaherpesvirinae (ou gamma herpès virus). L'une des principales caractéristiques des herpes virus est leur capacité à établir une infection latente de longue durée chez les hôtes. Les infections latentes sont établies après une étape initiale d'infection primaire, l'infection latente étant caractérisée par la persistance du virus dans des cellules hôtes spécifiques en l'absence de production détectable de virus infectieux. Deux caractéristiques fondamentales de ces infections latentes sont (i) la maintenance du génome viral dans la cellule hôte infectée et (ii) la capacité du virus à échapper à la détection par le système immunitaire. Les gamma herpès virus établissent des infections latentes dans les lymphocytes B ou T. Les mécanismes contribuant à la maintenance de la latence de cette sous-famille d'herpesvirus ont été bien caractérisés. Les études portant sur l'infection latente des gamma herpès virus ont mis en évidence le rôle essentiel d'une catégorie de protéines virales, dites « de stabilité », désignées GMP (pour « Genome Maintenance Protein »). La/les protéine(s) GMP joue(nt) un rôle essentiel (i) dans la persistance du génome viral au sein des cellules infectées de manière latente et (ii) dans la transmission du génome viral aux cellules filles lors des divisions cellulaires. De plus, des études récentes ont révélé les mécanismes qui permettent à la protéine virale GMP d'être exprimée dans les cellules infectées de manière latente et de simultanément échapper à la détection par les lymphocytes T cytotoxiques CD8+ de l'organisme hôte. Pendant la phase d'infection latente, la régulation négative de l'expression génique virale représente une caractéristique essentielle permettant aux gamma herpès virus d'échapper à la surveillance du système immunitaire. Cependant, du fait du rôle central de la protéine GMP dans la phase de latence à long terme, toute stratégie d'évasion du contrôle par le système immunitaire doit impliquer la protéine GMP elle-même. Au vu des connaissances actuelles, l'effet global des propriétés d'échappement au contrôle par le système immunitaire impliquant les protéines GMP constitue un mécanisme de régulation conservé chez les gamma herpès virus en général. Les études les plus nombreuses concernant les mécanismes d'action des protéines GMP ont trait au virus d'Epstein-Barr (ou EBV), pour lequel la protéine GMP est désignée EBNA1 (pour « Epstein-Barr Nuclear Antigen 1 »). L'Homme de l'Art pourra notamment se référer à Blake (« Immune evasion by gamma herpès virus genome maintenance proteins » ; Journal of General Virology (2010) ; 91, 829-846) pour une introduction sur les protéines dites « GMP ». Comme toutes les GMPs des gamma herpès virus, la protéine EBNA1 est essentielle pour le maintien de la persistance virale. Toutefois, en dépit de la forte antigénicité de la protéine EBNA1 et de la présence de cellules T spécifiques de peptides antigéniques dérivés d'EBNA1, le système immunitaire ne détecte pas et ne détruit pas les cellules exprimant EBNA1. Le caractère furtif de la protéine EBNA1 est dû à l'inhibition de la traduction de l'ARNm codant EBNA1 par un mécanisme agissant en cis (on parlera de « Cis-inhibition » ou « Inhibition en cis »), lequel mécanisme est induit par une séquence répétée d'acides aminés, dénommée le domaine GAr (ou encore « Glycine-Alanine repeat »). On entend par « partie [GAr] ») une séquence répétée Glycine-Alanine, laquelle consiste en une série d'Alanines, séparées par une, deux ou trois glycines localisées à la partie N-terminale d'EBNA1 du virus d'Epstein-Barr (voir Levitskaya et al., « Inhibition of antigen processing by the internal repeat region of the Epstein-Barr virus nuclear antigen-1 ; Nature (1995) ; 375, 685-8). Pour référence, la séquence peptidique de la protéine EBNA1 (souche B95-8) du virus d'Epstein-Barr, telle que publiée par Baer et al. (Nature, 1984, vol. 310) est représentée par la séquence SEQ ID N°1. Egalement pour référence, la séquence peptide complète du domaine GAr de la protéine EBNA1 de séquence SEQ ID N°1, également appelée « 239 GAr » car d'une longueur de 239 acides aminés, est représentée par la séquence SEQ ID N°2. Ainsi, selon un mode de réalisation, la partie [GAr] peut être un peptide de 20 séquence SEQ ID N° 2, également appelé « 239GAr », lequel est codé par un acide nucléique de séquence SEQ ID N°3. Il est donc connu que le domaine GAr contenu dans la protéine GMP EBNA1 contrôle la traduction de son propre ARNm, minimisant ainsi la production de peptides 25 dérivés de EBNA1 susceptibles d'être présentés à la surface des cellules hôtes infectées en association avec un antigène de Classe I du CMI-I. L'obtention d'une réponse immunitaire efficace induite par les lymphocytes T CD8+ à l'encontre de cellules infectées par EBV dans lequel le domaine GAr de la protéine EBNA1 a été supprimé démontre l'importance du domaine GAr dans la stratégie du virus d'inhiber la présentation d'antigènes dérivés 30 d'EBNA1 aux cellules du système immunitaire (Apcher et al., 2010, PLoS Pathog, Vol. 6 : e100151 ; Levitskaya et al., 1995, Nature, Vol. 375 : 685-688 ; Yin et al., 2003, Science, Vol. 301 : 1371-1374). Comme cela a été mentionné précédemment, les outils thérapeutiques existants à l'encontre des pathologies provoquées par les gamma herpès virus sont aujourd'hui très limités. Pour l'essentiel, il s'agit de la mise au point de stratégies vaccinales, dont l'efficacité est incertaine du fait du caractère furtif de ces virus qui leur permet d'échapper au contrôle de l'infection virale par le système immunitaire, principalement par les lymphocytes T CD8+. Il existe donc un besoin pour la disponibilité de substances actives utiles à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus, et notamment de procédés permettant de sélectionner de telles substances actives. Il existe en particulier un besoin pour la mise en place de méthodes de criblage, afin d'identifier de nouveaux composés susceptibles d'agir sur la capacité de ces gamma herpès virus à échapper au système immunitaire de l'hôte. Il existe tout particulièrement un besoin d'identifier des composés susceptibles de traiter et/ou prévenir des pathologies associées à EBV, telles que les cancers associés à 15 EBV. L'invention a pour objet de satisfaire ces besoins. RESUME DE L'INVENTION La présente invention fournit un procédé in vitro de sélection de composés 20 actifs à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus, comprenant les étapes suivantes : a) cultiver des cellules de levure dans le génome desquelles a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GMP] et au moins une partie 25 [REPORTER], dans laquelle : - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de levure, et 30 les cellules de levure étant cultivées en présence d'un composé candidat, b) mesurer le niveau de production de ladite protéine recombinante par les cellules cultivées à l'étape a), et c) comparer le niveau de production de ladite protéine recombinante mesuré à l'étape b) avec une valeur de référence La présente invention fournit en particulier un procédé in vitro de sélection de composés actifs à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus, comprenant les étapes suivantes : a) cultiver des cellules de levure dans le génome desquelles a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante de formule (I) suivante : NH2-[TAG1],[GMP]-[REPORTER]- [TAG2]y-COOH (I), dans laquelle : - [TAG1] et [TAG2] signifient un peptide apte à se lier à un ligand, - x et y, identiques ou différents, représentent un entier égal à 0 ou 1, - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de levure, les cellules de levures étant cultivées en présence d'un composé candidat, b) mesurer le niveau de production de la protéine de formule (I) par les cellules cultivées à l'étape a), et c) comparer le niveau de production de la protéine de formule (I) mesuré à l'étape b) avec une valeur de référence. Dans certains modes de réalisation du procédé, la protéine recombinante 25 comprend un peptide comprenant de 8 à 239 acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr. L'invention est aussi relative à un procédé in vitro de sélection de composés actifs à l'encontre d'une infection par le virus d'Epstein-Barr comprenant les étapes 30 suivantes : 1) cultiver des cellules de mammifère ayant les caractéristiques suivantes : (i)) lesdites cellules expriment un antigène de Classe I du CMH, et (ii) lesdites cellules expriment une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GMP] et au moins une partie [REPORTER], dans laquelle : - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de mammifère, les cellules de mammifère étant cultivées en présence d'un composé candidat, 2) mesurer le niveau d'expression de la protéine recombinante associée au CMH de classe I à la surface des cellules cultivées à l'étape a), et 3) comparer le niveau d'expression de la protéine recombinante mesuré à l'étape b) avec une valeur de référence. L'invention est aussi relative au procédé in vitro de sélection ci-dessus (ou « second procédé »), dans lequel le composé candidat est sélectionné, ou présélectionné, par la mise en oeuvre du premier procédé. L'invention est aussi relative à une cellule de levure dans le génome de laquelle a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante telle que décrite ci-dessus. L'invention est aussi relative à une cellule de mammifère dans le génome de laquelle a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante telle que décrite ci-dessus ainsi qu'un antigène du CMH de classe I. L'invention est aussi relative à des cellules dans le génome desquelles a été inséré une unique copie d'un acide nucléique, rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante telle que décrite ci-dessus. L'invention est aussi relative à des procédés de sélection, tels que décrits ci-dessus, et mettant en oeuvre les dites cellules. DESCRIPTION DES FIGURES La Figure 1 illustre la mise au point d'un test d'inhibition de la traduction médiée par une région GAr dans des cellules de levure. Figure IA : schémas représentant des constructions d'acides nucléiques codant des protéines de fusion comprenant l'enzyme Ade2p dont l'extrémité N-terminale est fusionnée à un domaine GAr de longueur spécifiée. pADH : promoteur du gène ADH ; HA : polynucléotide codant le peptide HA ; xxGAr : polynucléotide codant un domaine GAr ayant « xx » acides aminés de longueur ; Figure IB Analyse en gel SDS PAGE et Western Blot des extraits protéiques des cellules des clones ADE2, ade24, 2IGArADE2, 43GArADE2 et 235GArADE2 ; Figure IC : analyse en gel SDS PAGE et Western Blot des extraits protéiques des cellules des clones ADE2, ade2A et Papio-30GArDE2; Figure ID : Détermination du temps de demi-vie des protéines de fusion HA- Ade2p et HA-43GAr-Ade2p par la méthode de chasse à la cycloheximide. Résultats représentatifs de cinq essais indépendants. Figure 1E : niveaux relatifs des ARNm de HA-ADE2, ade24, 43GArADE2 et Papio-30GArDE2 en utilisant la technique de qRT-PCR. Ce schéma représente la moyenne des résultats de trois essais indépendants. La Figure 2 illustre sur l'effet du domaine GAr sur la traduction dans les cellules de levure est indépendant du promoteur utilisé. Le polynucléotide codant le domaine 235 GAr (domaine GAr complet ou « full length ») fusionné au gène ADE2 inhibe la traduction de son propre ARNm lorsqu'il est exprimé sous le contrôle du promoteur constitutif fort pTEF. Figure 2A : schémas représentant les constructions d'acides nucléiques testées ; Figure 2B : Analyse en gel SDS PAGE et Western Blot des extraits protéiques des cellules des clones ADE2, ade2A et 235GArADE2 dont l'expression est sous le 25 contrôle du promoteur pTEF. La Figure 3 illustre les résultats de l'essai « pulse-chase » montrant que le domaine 43GAr inhibe la synthèse d'Ade2p mais n'exerce aucun effet sur la stabilité de Ade2p. Des cellules de levure exprimant HA-43GAr-ADE2 ou HA-ADE2 ont été incubées 30 avec un mélange de méthionine/cystéine radiomarquées pendant 15 minutes (étape de « pulse »), puis un large excès d'un mélange de méthionine/cystéine non radiomarqués a été ajouté (étape de chasse ou « chase »). Figure 3A : Aux temps indiqués, des extraits protéiques ont été préparés ; les protéines ont été immuno-précipitées en utilisant un anticorps anti-HA, puis ont été analysées par la méthode SDS-PAGE, suivie par une étape d'autoradiographie en utilisant un appareil de visualisation de matériel radioactif de type « Storm Phosphorimager® ». Figure 3B : les mêmes extraits protéiques que ceux analysés en Figure 3A ont été analysés par SDS-PAGE et par Western blot en utilisant des anticoprs anti-HA. La Figure 4 illustre que la doxorubicine (DXR) interfère spécifiquement avec l'effet du domaine GAr sur la traduction chez la levure. La souche ade2A exprimant la construction HA-43GAr-ADE2 a été étalée sur du milieu riche, puis des concentrations croissantes de 5-fluorouracile (5FU) ou de doxorubicine (DXR) ont été chargées sur les filtres. Figures 4A et 4B : on a déterminé les niveaux relatifs des ARNm de HA-ADE2 ou de HA-43GAr-ADE2 qui ont été non-traitées ou traitées avec les concentrations indiquées de 5FU (figure 4A) ou de DXR (Figure 4B) en utilisant la technique de qRTPCR. Les figures 4A et 4B représentent la moyenne des résultats de trois essais indépendants. Figures 4C et 4D : Les mêmes extraits cellulaires que ceux utilisés pour les Figures 4A et 4B ont été analysés par SDS-PAGE et Western blot afin de déterminer les niveaux relatifs de 43GAr-Ade2p ou de Ade2p par rapport à l'actine qui a été utilisée comme témoin de charge. Les Figures 4C et 4D montrent l'effet des concentrations indiquées de 5FU ou de DXR sur le niveau de HA-43GAr-Ade2p, par comparaison avec HA-Ade2p. La Figure 5 illustre que le DXR stimule de manière spécifique la présentation antigénique à partir de la construction 235GAr-Ova dans un essai basé sur les cellules T, et augmente le niveau d'expression de la protéine EBNA1. Des cellules HEK 293 T Kb exprimant de manière stable la molécule du CMH de Classe I Kb ont été transfectées avec des plasmides codant l'ovalbumine de poulet seule (OVA - partie gauche des figures 5A, 5B et 5C), ou codant l'ovalbumine de poulet fusionnée au domaine GAr complet (235GAr-OVA - partie droite des figures 5A, 5B et 5C). Figure 5A : niveaux d'expression des protéines OVA et 235GAr-OVA dans les cellules HEK 293 T Kb. Figure 5B : la présentation des antigènes dérivés de OVA restreinte au CMH de Classe I a été estimée après traitement des cellules avec des concentrations croissantes de DXR pendant 24 heures, puis en mesurant l'activité f3Gal dans les cellules T de l'hybridome reporter B3Z CD8+. Les résultats ont été normalisés par comparaison avec la présentation du peptide SL8 exogène. Figure 5C : la présentation des antigènes dérivés de OVA restreinte au CMH de Classe I a été estimée après traitement des cellules avec des concentrations croissantes de 5FU pendant 24 heures, puis en mesurant l'activité (3Gal dans les cellules T de l'hybridome reporter B3Z CD8+. Les résultats ont été normalisés par comparaison avec la présentation su peptide SL8 exogène. Figure 5D : De manière similaire, les niveaux des protéines EBNA1 et EBNA14 dans les cellules HEK 293 T ont été déterminés après 24 heures de traitement avec les concentrations indiquées de DXR. L'actine a été utilisée comme contrôle de charge. Figure 5E : Des cellules de lymphome de Burkitt Raji exprimant de manière endogène une protéine EBNA1 ont été transfectées avec un ADNc codant une protéine EBNA1 dont le domaine GAr est plus long, ce qui a permis la détection de EBNA1 endogène et de EBNA1 exogène dans les mêmes cellules après traitement avec DXR pendant 8 heures. L'actine a été utilisée comme témoin de charge. Les résultats ont été comparés par analyse de variance à un facteur « one-way analysis of variance ») avec le test de Dunnett avec comparaison multiple (*** signifie p La Figure 6 illustre l'effet de DXR et ses analogues chimiques sur la suppression de la traduction médiée par GAr chez la levure et sur l'induction de l'expression de p53 et de p21 dans les cellules de mammifère. Figure 6A : Représentation des structures chimiques de la doxorubicine et de ses analogues. Figure 6B : boite de criblage levure avec les dérivés de la doxorubicine. Figure 6C : On a estimé l'effet génotoxique de DXR et de ses analogues spécifiés par Western blot en utilisant comme données de visualisation l'activation de l'expression du gène suppresseur de tumeur p53 et de l'un de ses gènes cibles p21 dans des cellules A549. La Figure 7 illustre l'effet de DXR et de ses analogues chimiques sur la présentation antigénique dans des tests basés sur les cellules T. On a évalué l'effet de la daunorubicine (Figure 7A), de la valrubicine (Figure 7B), de l'etoposide (Figure 7C) et de l'épirubicine (Figure 7D) sur la présentation de l'antigène en utilisant le test basé sur les cellules T, comme décrit dans la Figure 5. Les résultats ont été comparés par analyse de variance à un facteur « one-way analysis of variance ») avec le test de Dunnett avec comparaison multiple (*** signifie p On entend également par «procédé pour la sélection de substances actives à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus» des procédés susceptibles d'agir sur la capacité de ces gamma herpès virus à échapper au système immunitaire de l'hôte. La présente invention fournit donc également des procédés applicables pour la sélection de composés susceptibles de traiter et/ou prévenir des pathologies associées à EBV, telles que les cancers associés à EBV. La demanderesse a conçu un procédé pour la sélection de substances actives à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus, lequel procédé met en oeuvre des cellules de levure recombinantes. Plus précisément, la demanderesse a conçu des cellules de levure recombinantes aptes à exprimer des constructions polypeptidiques recombinantes comprenant tout ou partie d'une «protéine de stabilité » d'un gamma herpès virus, dite protéine GMP (pour « Genome Maintenance Protein »), l'expression de ces constructions polypeptidiques dans lesdites cellules de levure recombinantes pouvant être aisément détectée ou quantifiée, en particulier par détection d'un peptide ou un polypeptide de type « rapporteur ». La demanderesse a ainsi montré qu'une corrélation existait entre (i) la modulation du niveau d'expression des constructions recombinantes par ces cellules de levure, sous l'effet d'un composé candidat et (ii) l'aptitude dudit composé candidat à agir à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus, en particulier dans une cellule de mammifère. Avantageusement, et comme montré dans les exemples, une cellule de mammifère peut être une cellule humaine. En particulier, la demanderesse a montré que, dans les cellules recombinantes de levure qui ont été conçues, la protéine GMP complète ou le domaine contenant les séquences répétées de cette dernière responsables de la furtivité du virus, agit en inhibant la traduction de son propre ARNm, comme cela a été montré dans les cellules humaines. Illustrativement, cette protéine GMP peut être le domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr (EBV). En d'autres termes, il est fourni selon l'invention, avec les cellules de levure recombinantes définies dans la présente description, un modèle cellulaire eucaryote mimant la physiologie humaine d'un gamma herpès virus, et plus spécifiquement mimant les mécanismes utilisés par les gamma herpès virus dans les cellules humaines pour échapper au contrôle d'une infection virale par le système immunitaire. Ainsi, les cellules de levures recombinantes qui ont été conçues par la demanderesse peuvent être utilisées pour sélectionner des composés d'intérêt thérapeutiques, destinés au traitement d'infections par des gamma herpès virus. Il est encore fourni, selon l'invention, des cellules de mammifères exprimant un antigène de classe I du CMH et aptes à exprimer des constructions polypeptidiques recombinantes comprenant tout ou partie d'une protéine GMP (pour « Genome Maintenance Protein ») d'un gamma herpès virus, l'expression de ces constructions polypeptidiques dans lesdites cellules de mammifères pouvant être également détectée ou quantifiée, en particulier par un peptide ou un polypeptide de type « rapporteur ». Au sens de l'invention, on entend en particulier par « gamma herpès virus» tout virus appartenant aux genres Lymphocryptovirus, Rhadinovirus, Macavirus ou Percavirus. Selon un mode préféré de réalisation, le Lymphocryptovirus peut être le virus d'Epstein-Barr ou le virus KSHV. La protéine GMP complète, laquelle inclut les séquences répétées responsables de la furtivité du virus, agit en inhibant la traduction de son propre ARNm (on parle d'inhibition en cis). Ainsi, selon un mode particulier de réalisation, la protéine GMP de gamma herpès virus, ou partie [GMP], laquelle est comprise dans la protéine recombinante exprimée par les cellules de l'invention, est codée par un acide nucléique dont la séquence correspond à celle présente dans la souche dudit gamma herpès virus. A cet égard, et toujours selon ce mode de réalisation, on comprend que l'acide nucléique codant pour ladite protéine recombinante comprend préférentiellement un acide nucléique correspondant à celui présent dans la souche dudit gamma herpès virus. Les cellules de mammifères et de levures recombinantes sont adaptées à la mise en oeuvre des procédés de sélection détaillés ci-dessous. Avantageusement, les cellules de levure et les cellules de mammifères de l'invention sont modifiées génétiquement, par insertion dans leur génome d'au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GMP] et au moins une partie [REPORTER]. De préférence, ces cellules sont modifiées génétiquement de manière à insérer dans leur génome une unique copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante de l'invention, laquelle comprend au moins une partie [GMP] et au moins une partie [REPORTER]. L'insertion, dans le génome, dudit acide nucléique en une unique copie présente un certain nombre d'avantages, en particulier un meilleur contrôle de l'expression du gène rapporteur, l'absence de phénomènes de surexpression et la réduction de la toxicité desdites insertions. Les lignées obtenues sont ainsi plus stables, permettant de fait une plus grande reproductibilité lorsqu'elles sont mises en oeuvres dans les procédés de sélection de l'invention. PROCEDES DE SELECTION La présente invention est relative à un procédé in vitro de sélection de composés actifs à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus, comprenant les étapes suivantes : a) cultiver des cellules de levure dans le génome desquelles a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GMP] et au moins une partie [REPORTER], dans laquelle : - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de levure, et les cellules de levure étant cultivées en présence d'un composé candidat, b) mesurer le niveau de production de ladite protéine recombinante par les cellules cultivées à l'étape a), et c) comparer le niveau de production de ladite protéine recombinante mesuré à l'étape b) avec une valeur de référence. Une « protéine recombinante comprenant au moins une partie [GMP] et au moins une partie [REPORTER] » au sens de l'invention, inclut également une « protéine recombinante comprenant une unique partie [GMP] et une unique partie [REPORTER]. Selon certains modes de réalisation, ladite protéine recombinante peut donc comprendre une séquence comprenant un polypeptide de formule (Ia) ou (Ib) suivante : NH2-[GMP]-[REPORTER]-COOH (Ia) ou NH2-[REPORTER]-[GMP]-COOH (lb). Selon un mode particulier de réalisation, la dite protéine recombinante comprend au moins une partie [GMP] et au moins une partie [REPORTER], la partie [GMP] étant placée en N-terminal de la partie [REPORTER]. Selon ce mode de réalisation, la partie [GMP] peut en particulier être la partie [GAr] de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr. Avantageusement, ladite protéine recombinante peut en outre inclure un ou plusieurs peptides additionnels de type « étiquette » ou « tag », aptes à se lier à un ligand. Ces peptides additionnels peuvent en particulier être utilisés comme moyens de détection, afin de quantifier la concentration en protéine recombinante dans ladite cellule. Il est clair que de tels peptides « étiquette » peuvent être aussi bien présents en N-terminal qu'en C-terminal. Selon un mode de réalisation exemplifié, un peptide « étiquette » (ou [TAG]) peut être greffé en N-terminal de la construction. Dans certains modes de réalisation particuliers, la protéine recombinante comprend une partie [TAG] (incluant [TAG1] ou [TAG2]), ladite partie [TAG] étant un peptide choisi dans la liste suivante: un peptide HA, un peptide poly-histidine, un peptide poly-glutamate, un peptide Calmoduline, un peptide FLAG, et un peptide c-myc. Une protéine recombinante de l'invention peut donc comprendre, zéro, une, ou plusieurs parties [TAG], en N-terminal ou en C-terminal de la construction. Selon un mode de réalisation exemplifié, la protéine recombinante comprend 10 un peptide HA en N-terminal de la construction. Avantageusement, la présence d'une partie [TAG] aux protéines recombinantes exprimées par les cellules de l'invention permet de vérifier, par exemple par Western Blot, la variation d'expression de ladite protéine recombinante. Une protéine recombinante selon l'invention peut être sous la dépendance du 15 promoteur pADH, ou promoteur du gène ADH. Une protéine recombinante selon l'invention peut être sous la dépendance du promoteur pTEF, ou promoteur du gène TEF. La présente invention fournit en particulier un procédé in vitro de sélection de composés actifs à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus, comprenant les 20 étapes suivantes : a) cultiver des cellules de levure dans le génome desquelles a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante de formule (I) suivante : NH2-[TAG1],,-[GMP]-[REPORTER]- [TAG2]y-COOH (I), 25 dans laquelle : - [TAG1] et [TAG2] signifient un peptide apte à se lier à un ligand, - x et y, identiques ou différents, représentent un entier égal à 0 ou 1, - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, et 30 - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de levure, les cellules de levures étant cultivées en présence d'un composé candidat, b) mesurer le niveau de production de la protéine de formule (I) par les cellules cultivées à l'étape a), et c) comparer le niveau de production de la protéine de formule (I) mesuré à l'étape b) avec une valeur de référence. Selon un mode préféré de réalisation, le polypeptide [GMP] comprend le domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr, ou d'un fragment de celui-ci. Ainsi, la présente invention est également relative à un procédé in vitro de sélection de composés actifs à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus, comprenant les étapes suivantes : a) cultiver des cellules de levure dans le génome desquelles a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GAr] et au moins une partie [REPORTER], dans laquelle : - [GAr] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de levure, et les cellules de levure étant cultivées en présence d'un composé candidat, b) mesurer le niveau de production de ladite protéine recombinante par les cellules cultivées à l'étape a), et c) comparer le niveau de production de ladite protéine recombinante mesuré à l'étape b) avec une valeur de référence. Ainsi, la présente invention est également relative à un procédé in vitro de sélection de composés actifs à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus, comprenant les étapes suivantes : a) cultiver des cellules de levure dans le génome desquelles a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante de formule (II) suivante : NH2- [TAG]'- [GMP]- [REPORTER]-COOH (II), dans laquelle : - [TAG] signifie un peptide apte à se lier à un ligand, - x est un entier égal à 0 ou 1, - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de levure, les cellules de levures étant cultivées en présence d'un composé candidat, b) mesurer le niveau de production de la protéine de formule (II) par les cellules cultivées à l'étape a), et c) comparer le niveau de production de la protéine de formule (II) mesuré à l'étape b) avec une valeur de référence. Dans certains modes de réalisation, l'invention concerne également des procédés de sélection tels que décrits ci-dessus, dans lesquels ladite protéine recombinante comprend une partie [GMP] comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus choisi parmi un Lymphocryptovirus, un Rhadinovirus, un Macavirus et un Percavirus. En particulier, la dite protéine recombinante comprend une partie [GMP] comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du 20 génome d'un gamma herpès virus choisi parmi le virus KSHV, le virus d'Epstein-Barr (EBV) et le papio virus (HVP), tout particulièrement KSHV et EBV. L' expression « la protéine recombinante comprend ... » ou « l'acide nucléique comprend... » s'entend également par « la protéine recombinante est constituée par/de... » et « l'acide nucléique est constitué par/de... ». 25 De préférence, la dite protéine recombinante comprend une partie [GMP] comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome du virus d'Epstein-Barr. Encore plus préférentiellement, la dite protéine recombinante comprend une partie [GAr] comprenant tout ou partie du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus 30 d'Epstein-Barr. Dans certains modes de réalisation, la protéine recombinante comprend un peptide comprenant de 8 à 250 acides aminés continus d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, ce qui inclut de 8 à 250 acides aminés continus d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, par exemple de 10 à 250, par exemple de 15 à 250 acides aminés, ce qui inclut de 20 à 60 acides aminés, ce qui inclut également 21 acides aminés, 43 acides aminés, 235 acides aminés et 239 acides aminés. Au sens de l'invention, un peptide comprenant de 8 à 250 acides aminés continus d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus inclut un peptide comprenant 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, ou 250 acides aminés continus d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus. Dans certains modes de réalisation, la protéine recombinante comprend un peptide comprenant de 8 à 239 acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr. On comprend donc que, au sens de l'invention, et selon ce mode de réalisation, un peptide comprenant de 8 à 239 acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr inclut un peptide comprenant 8, 9, 10, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 11, 35, 59, 83, 12, 13, 14, 36, 37, 38, 60, 61, 62, 84, 85, 86, 106, 107, 124, 125, 15, 39, 63, 87, 108, 126, 127, 145, 163, 181, 199, 217, 235, 128, 146, 164, 182, 200, 218, 236, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 237, 238 ou 239 acides aminés continus du domaine GAr en question. 143, 161, 179, 197, 215, 233, 144, 162, 180, 198, 216, 234, Dans certains modes de réalisation particuliers, la protéine recombinante comprend un peptide comprenant de 15 à 239 acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr, et de préférence de 20 à 60 acides aminés. Ainsi, selon un mode de réalisation, la protéine recombinante comprend un peptide comprenant de 8 à 239 acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr de séquence SEQ ID N°2. Ainsi, selon un autre mode de réalisation, ladite protéine recombinante est codée par un acide nucléique, lequel comprend une séquence codant pour un peptide comprenant de 8 à 239 acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr. La présence d'une partie [REPORTER] dans la protéine recombinante exprimée par les cellules de l'invention va ainsi permettre de quantifier le niveau de production de ladite protéine recombinante, en déterminant le taux d'expression de cette partie [REPORTER]. Une partie [REPORTER] correspond donc à un peptide ou à une protéine possédant une caractéristique lui permettant d'être observé en laboratoire. Ainsi une partie [REPORTER] peut correspondre au produit d'un des nombreux gènes « rapporteur » connus par l'Homme du métier, tels que la GFP (ou « green fluorescent protein »), ou encore des enzymes dont l'action provoquera directement ou indirectement l'apparition d'un produit coloré, tels que le gène codant pour la P-galactosidase. Il est communément admis qu'un gène « rapporteur » est un gène dont le produit (peptide ou protéine) possède une caractéristique lui permettant d'être observé en laboratoire. De préférence, une partie [REPORTER] permet donc une quantification rapide, par visualisation dans le milieu de culture, du produit formé. Dans certains modes de réalisation particuliers, la protéine recombinante comprend une partie [REPORTER] choisie dans un groupe comprenant une protéine fluorescente et une enzyme. Avantageusement, la partie [REPORTER] peut consister en une enzyme susceptible d'induire dans le milieu de culture une réaction colorée permettant la sélection des colonies par quantification du taux d'expression de la protéine recombinante. Dans certains modes de réalisation particuliers, la protéine recombinante 10 comprend donc une partie [REPORTER] consistant en l'enzyme Ade2p. Selon ce mode de réalisation, la protéine recombinante comprend de préférence une partie [REPORTER] consistant en l'enzyme Ade2p de Saccharomyces cerevisiae. L'enzyme Ade2p est codée par le gène rapporteur ADE2 de la levure, et concerne une phosphoribosylaminoimidazole carboxylase, laquelle est impliquée dans la 15 voie de biosynthèse de l'adénine. Les cellules de levure dans lesquelles le gène ADE2 a été muté ou supprimé (souches ade24) forment des colonies rouges dans un milieu riche, en raison de l'accumulation de phosphoribosylaminoimidazole (AIR), le substrat de Ade2p, lequel devient rouge après oxydation. A l'inverse, des cellules exprimant une quantité suffisante de Ade2p formeront 20 des colonies blanches. Une quantité intermédiaire de Ade2p entraine la formation de colonies roses, dont l'intensité est proportionnelle à la quantité produite de Ade2p. A titre d'exemple, les cellules de levure peuvent être cultivées dans les milieux suivants : YPD [1% (p/p) yeast extract, 2% (p/v) peptone, 2% (p/v) glucose], 1/2 YPD [0.5% (p/v) yeast extract, 2% (p/v) peptone, 2% (p/v) glucose]. 25 Les milieux de culture solides peuvent contenir 2 % (p/v) agar. Selon un mode particulier de réalisation, la protéine recombinante comprend de préférence une partie [REPORTER] consistant en l'enzyme Ade2p, et les cellules de levure sont des cellules de levure possédant un gène ADE2 non fonctionnel, par exemple 30 de génotype ade2-1 ou ade221). Les souches de levure utilisées peuvent donc être dérivées de la souche « W303 WT »: MATa, leu2-3,112 trp 1-1 canl-100 ura3-1 ade2-1 his3-11,15 . Selon un mode particulier de réalisation, le génotype de la souche ade2A est le suivant : MATa,leu2-3,112 trp1-1 canl-100 ura3-1 ade2-1::his5s. pombe A cet égard, et selon un mode préféré de réalisation, les cellules de levure sont des cellules de Saccharomyces cerevisiae ou Schizosaccharomyces pombe, de préférence des cellules de Saccharomyces cerevisiae, et de préférence de génotype MATA leu2-3, 112 trpl-1 canl-100 ura3-1 ade2-1 ::his5s.pombe On comprend donc qu'une souche préférée de l'invention est une souche ne produisant pas de protéine comprenant, ladite partie [REPORTER], ce qui inclut donc à la fois (i) les souches incapables naturellement de produire ladite protéine, et (ii) les souches rendues incapables de le faire, par exemple suite à une mutation ou une délétion. Lorsque l'enzyme Ade2p est utilisée comme partie [REPORTER], une souche selon l'invention ne produira donc pas l'enzyme Ade2p de manière endogène. Selon un mode de réalisation, lorsque l'enzyme Ade2p est utilisé comme partie [REPORTER], l'étape b) des procédés peut être réalisée par détermination de la couleur des cellules cultivées à l'étape a). Comme cela est illustré dans les exemples, le procédé de sélection décrit ci-dessus a permis de sélectionner, à partir d'une vaste collection de composés candidats, plusieurs composés d'intérêt aptes à moduler l'expression d'une protéine GMP de gamma herpès virus, en particulier de composés capables de réduire la capacité d'une protéine GMP de gamma herpès virus à inhiber la traduction de son propre ARNm, et ainsi d'exposer les cellules infectées par le gamma herpès virus considéré à l'action cytotoxique des lymphocytes T CD8+ de l'hôte. Il est montré dans les exemples que les composés sélectionnés par le procédé décrit ci-dessus permettent la présentation de la protéine GMP virale considérée à la surface des cellules hôtes infectées en association avec une molécule de Classe I du CMH, lesdites cellules hôtes devenant des cibles pour les lymphocytes T CD8+ de l'hôte. Ainsi, l'invention concerne également un procédé in vitro de sélection de composés actifs à l'encontre d'une infection par le virus d'Epstein-Barr comprenant les étapes suivantes : 1) cultiver des cellules de mammifère ayant les caractéristiques suivantes : (i)) lesdites cellules expriment un antigène de Classe I du CMH, et (ii) lesdites cellules expriment une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GMP] et au moins une partie [REPORTER], dans laquelle : - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome de gamma herpès virus, de préférence du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de mammifère, les cellules de mammifère étant cultivées en présence d'un composé candidat, 2) mesurer le niveau d'expression de la protéine recombinante associée au CMH de classe I à la surface des cellules cultivées à l'étape a), et 3) comparer le niveau d'expression de la protéine recombinante mesuré à l'étape b) avec une valeur de référence. Selon un mode de réalisation particulier, l'invention concerne donc également un procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite protéine recombinante est une protéine recombinante de formule (I) suivante : NH2-[TAG1],,-[GMP]-[REPORTER]-[TAG2]y-COOH (I), dans laquelle : - [TAG1] et [TAG2] signifient un peptide apte à se lier à un ligand, - x et y, identiques ou différents, représentent un entier égal à 0 ou 1, - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome de gamma herpès virus, de préférence du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de mammifère. Selon un mode de réalisation alternatif, l'invention concerne un procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite protéine recombinante est une protéine recombinante de formule (II) suivante : NH2-[TAG]'-[GMP]-[REPORTER]-COOH (II), dans laquelle : - [TAG] signifie un peptide apte à se lier à un ligand, - x représente un entier égal à 0 ou 1, - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome de gamma herpès virus, de préférence du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de mammifère. Comme vu précédemment, la protéine recombinante peut comprendre une partie [GMP] de taille variable, ayant par exemple une longueur allant de 8 à 250 acides aminés continus d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, de préférence du virus d'Epstein-Barr. En particulier, la protéine recombinante peut comprendre une partie [GMP] ayant une longueur allant de 8 à 250 acides aminés, en particulier de 15 à 250 acides aminés, ce qui inclut de 20 à 60 acides aminés. Avantageusement, les procédés de sélection mettant en oeuvre des cellules recombinantes de levure et des cellules de mammifères peuvent être mis en oeuvre séparément, séquentiellement ou conjointement. Illustrativement, un procédé de sélection mettant en oeuvre des cellules de mammifères peut ainsi être mis en oeuvre à l'égard d'un ou plusieurs composés candidats préalablement sélectionnés par un procédé de sélection mettant en oeuvre les cellules de levure recombinantes de l'invention. Selon un mode de réalisation, l'invention concerne donc un procédé tel que décrit ci-dessus, le composé candidat étant sélectionné par la mise en oeuvre du procédé in vitro de sélection mettant en oeuvre des cellules de levure recombinante. Selon un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un procédé de sélection mettant en oeuvre des cellules de mammifères tel que décrit ci-dessus, dans lequel la protéine recombinante comprend une partie [REPORTER] qui comprend un antigène reconnu spécifiquement par des cellules lymphocytaires T CD8+. Des exemples de tels antigènes sont connus de l'homme du métier. On citera par exemple des antigènes produits par protéolyse et reconnus par le complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) de classe I, tels que des antigènes produits par protéolyse de l'Ovalbumine. Pour référence, la séquence de l'ovalbumine de poulet est une séquence SEQ ID N°4. Des exemples d'antigènes selon l'invention peuvent être des peptides obtenus par protéolyse d'Ovalbumine tels que le peptide NH2-SIINFEKL-COOH (SEQ ID N°5) et commercialisés par la société AnaSpec, Inc. Selon un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un procédé de sélection mettant en oeuvre des cellules de mammifères tel que décrit ci-dessus, dans 10 lequel la protéine recombinante comprend une partie [REPORTER] qui est un fragment d'ovalbumine comprenant le peptide NH2-SIINFEKL-COOH (SEQ ID N°5). Selon ce mode de réalisation, l'invention concerne donc un procédé in vitro de sélection de composés actifs tel que décrit ci-dessus, l'étape b) étant réalisée selon les étapes suivantes : 15 b1) cultiver les cellules de mammifères obtenues à la fin de l'étape a) en présence de cellules lymphocytaires T CD8+ reconnaissant spécifiquement le peptide NH2-SIINFEKL-COOH (SEQ ID N°5), et b2) mesurer le niveau de prolifération des cellules lymphocytaires T CD8+ cultivées à l'étape 1)1). 20 Selon ce mode réalisation, les cellules lymphocytaires T CD8+ cultivées à l'étape bl) expriment une protéine recombinante détectable, de préférence une enzyme ou une protéine fluorescente. Les procédés de sélection mettant en oeuvre des cellules de mammifères 25 peuvent être mises en oeuvre à partir de cellules de mammifères particulières telles que les cellules de la lignée HEK293 T kb et les cellules Raji. Les cellules de la lignée HEK293 T kb sont issues de cellules humaines embryonnaires de rein qui expriment de façon stable l'antigène murin Kb du CMH de classe I. Les cellules Raji sont des cellules tumorales issues d'un lymphome de Burkitt de 30 type III et infectées par le virus EBV. Tous les procédés de sélection de l'invention sont susceptibles de prendre, en tant que valeur de référence à l'étape c), une valeur de référence choisie parmi : (i) une valeur obtenue à l'étape b) lorsque l'étape a) est réalisée en l'absence de composé candidat, (ii) une valeur obtenue à l'étape b) lorsque l'étape a) est réalisée en présence d'un composé apte à induire une surproduction de la protéine recombinante, et (iii) une valeur obtenue à l'étape b) lorsque l'étape a) est réalisée en présence d'un composé apte à bloquer la production de la protéine recombinante. On comprend donc, au regard de ces modèles, que la faculté d'un composé candidat à moduler la production de la protéine recombinante comprenant la partie [GMP] d'une protéine de stabilité d'un gamma herpès virus, est indicatrice de sa faculté à moduler la capacité dudit gamma herpès virus à échapper au système immunitaire de l'hôte. Ainsi, la faculté d'un composé candidat à augmenter la production de ladite protéine recombinante est indicatrice de sa faculté à rendre les cellules infectées par un gamma herpès virus visibles par le système immunitaire, tout particulièrement au cours de la phase latente de l'infection. La faculté d'un composé candidat à augmenter la production de ladite protéine recombinante peut être également indicatrice de sa faculté à traiter et/ou prévenir les maladies associées à une infection par ledit gamma herpès virus. CELLULES DE LEVURES ET DE 1VIAM1VIIFERES Il est également fourni, selon l'invention, des cellules de mammifères et de levures en tant que telles, aptes à permettre la mise en oeuvre des procédés de sélection de l'invention. Naturellement, les cellules et variantes de ces cellules mises en oeuvre dans lesdits procédés sont également considérées en tant que telles ci-dessous. L'invention concerne donc une cellule de levure dans le génome de laquelle a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GMP] et au moins une partie 30 [REPORTER], dans laquelle : - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, en particulier du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par ladite cellule de levure. L'invention concerne en particulier une cellule de levure dans laquelle ladite protéine recombinante est une protéine recombinante de formule (I) suivante : NH2-[TAG1],,-[GMP]-[REPORTER]-[TAG2]y-COOH (I), dans laquelle : - [TAG1] et [TAG2] signifient un peptide apte à se lier à un ligand, - x et y, identiques ou différents, représentent un entier égal à 0 ou 1, - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, en particulier du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de levure. Selon un mode de réalisation, la protéine recombinante comprend une partie [TAG1] et/ou [TAG2], ladite partie [TAG1] et/ou [TAG2] étant un peptide choisi dans la liste suivante: un peptide HA, un peptide poly-histidine, un peptide poly-glutamate, un peptide Calmoduline, un peptide FLAG et un peptide c-myc. Selon un mode particulier de réalisation, la protéine recombinante comprend une partie [GMP] ayant une longueur allant de 8 à 250 acides aminés, de préférence de 20 à 60 acides aminés. Selon un mode préféré de réalisation, la partie [GMP] correspond à tout ou partie du domaine [GAr] (ou « partie [GAr] ») de la protéine EBNA1 du virus d'EpsteinBarr. Selon un mode particulier de réalisation, la protéine recombinante comprend 30 une partie [REPORTER] choisie dans un groupe comprenant une protéine fluorescente et une enzyme. Selon ce mode de réalisation, la protéine recombinante comprend une partie [REPORTER] consistant en l'enzyme Ade2p de Saccharomyces cerevisiae. L'invention concerne également une cellule de mammifère, de préférence une cellule humaine, ayant les caractéristiques suivantes : (i) ladite cellule exprime un antigène de Classe I du CMH, et (ii) ladite cellule exprime une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GAr] et au moins une partie [REPORTER], dans laquelle : - [GAr] signifie un peptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés 10 continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par ladite cellule de mammifère. Selon un mode particulier l'invention concerne une cellule de mammifère, de préférence une cellule humaine, ayant les caractéristiques suivantes : 15 (i) ladite cellule exprime un antigène de Classe I du CMH, et (ii) ladite cellule exprime une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GAr] et au moins une partie [REPORTER], dans laquelle : - [GAr] signifie un peptide comprenant au moins 8 acides aminés de la séquence d'acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr, et 20 - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par ladite cellule de mammifère. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne une cellule de mammifère ayant les caractéristiques suivantes : (i) ladite cellule exprime un antigène de Classe I du CMH, et 25 (ii) ladite cellule exprime une protéine recombinante de formule (I) suivante : NH2-[TAG1],,-[GAr]-[REPORTER]-[TAG2]y -COOH (I), dans laquelle : - [TAG1] et [TAG2] signifient un peptide apte à se lier à un ligand, - x et y, identiques ou différents, représentent un entier égal à 0 ou 1, 30 - [GAr] signifie un peptide comprenant au moins 8 acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par ladite cellule de mammifère. Ainsi, selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne une cellule de mammifère ayant les caractéristiques suivantes : (i) ladite cellule exprime un antigène de Classe I du CMH, et (ii) ladite cellule exprime une protéine recombinante de formule (I) suivante : NH2-[TAG1],,-[GAr]-[REPORTER]-[TAG2]y -COOH (I), dans laquelle : - [TAG1] et [TAG2] signifient un peptide apte à se lier à un ligand, - x et y, identiques ou différents, représentent un entier égal à 0 ou 1, - [GAr] signifie un peptide comprenant de 8 à 239 acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par ladite cellule de mammifère. DOMAINES GMP Une protéine ou un polypeptide GMP (« Genome Maintenance Protein »), également appelé « partie [GMP] », correspond à toute ou partie d'une protéine virale jouant un rôle dans le maintien de la phase latente d'un gamma herpès virus. Selon le gamma herpès virus considéré, ce ou ces protéines GMP vont généralement présenter une ou plusieurs séquences répétées. A titre d'exemple, on citera la protéine EBNA1 (virus d'Epstein-Barr) de séquence, et la protéine LANA1 (herpes virus associé au sarcome de Kaposi ou KSHV) de séquence. A titre d'exemple, et de manière non-limitative, trois protéines LANA1 de tailles différentes ont été décrites : une protéine de 1129 acides aminés de séquence SEQ ID N°6, une autre (dite « forme longue » de LANA1) de 1162 acides aminés de séquence SEQ ID N°7, et une autre de 1003 acides aminés de séquence SEQ ID N°8. Egalement à titre de référence, la protéine LANA1 de 1162 acides aminés de séquence SEQ ID N°6 est codée par un acide nucléique de séquence SEQ ID N°9. La protéine LANA1 de 1003 acides aminés de séquence SEQ ID N°8 est codée par un acide nucléique de séquence SEQ ID N°10. Ces protéines GMP comportent majoritairement une ou plusieurs séquences répétées de taille variable, constituant un domaine central, lequel est responsable du maintien de la phase latente dudit gamma herpès virus. On citera tout particulièrement le « domaine GAr » de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr, ainsi que le domaine « DEQPRLV-rich » de la protéine LANA1 du virus KSHV. On entend par « domaine GAr », ou « partie [GAr] », une séquence répétée Glycine-Alanine, laquelle consiste en une série d'Alanines, séparées par une, deux ou trois glycines localisées à la partie N-terminale d'EBNA1 du virus d'Epstein-Barr (voir Levitskaya et al., « Inhibition of antigen processing by the internai repeat region of the Epstein-Barr virus nuclear antigen-1 ; Nature (1995) ; 375, 685-8). On entend par domaine « DEQPRLV-rich » ou « partie [DEQPRLV] », une série de séquences répétées, lesquelles consistent en une série d'Aspartates, de Glutamates, de Glutamines, de Prolines, d'Arginines, de Leucines et/ou de Valines localisées sur la protéine LANA1 du virus KSHV. Pour référence, la séquence du domaine « DEQPRLVrich » correspondant à la forme longue de la protéine LANA1 du virus KSHV est une protéine séquence SEQ ID N°17, laquelle est codée par un acide nucléique de séquence SEQ ID N°18. Ce domaine «DEQPRLV-rich » peut être également divisé, dans la littérature, en plusieurs sous-domaines, tels que des domaines de type CR1-2-3, « DEQ-rich » ou encore « EQL-rich ». Au sens de l'invention, un domaine « DEQPRLV-rich » est donc susceptible de comprendre toute ou partie de ces sous-domaines. Dans un mode de réalisation, le domaine « DEQPRLV-rich » comprend la totalité de la séquence répétée comprise dans la protéine LANA1, laquelle concerne un peptide de séquence SEQ ID N°6, 7 ou 8,. Selon un mode préféré de réalisation, la protéine recombinante comprend au moins une partie [GAr], ladite partie [GAr] étant de taille variable. Selon un mode de réalisation particulier, la partie [GAr] peut être un peptide de séquence SEQ ID N°11, également appelé « 21GAr », lequel est codé par un acide 30 nucléique de séquence SEQ ID N°12. Selon ce mode de réalisation particulier, la partie [GAr] , appelée « 21GAr », peut donc être un peptide codé par un acide nucléique de séquence SEQ ID N°12. Selon un mode de réalisation, la partie [GAr] peut être un peptide de séquence SEQ ID N°13, également appelé « 43GAr », lequel est codé par un acide nucléique de séquence SEQ ID N°14. Selon ce mode de réalisation particulier, la partie [GAr], appelée 43GAr, peut donc être un peptide codé par un acide nucléique de séquence SEQ ID N°14. Selon un mode de réalisation, la partie [GAr] peut être un peptide de séquence SEQ ID N° 15, également appelé « 235GAr », lequel est codé par un acide nucléique de séquence SEQ ID N°16. Selon ce mode de réalisation particulier, la partie [GAr], appelée 235 GAr, peut 10 donc être un peptide codé par un acide nucléique de séquence SEQ ID N°16. Pour référence, la séquence « 21 GAr » correspond à la partie N-terminale de la séquence « 43 GAr », laquelle est incluse dans la séquence « 235 GAr ». Selon un mode préféré de réalisation, la partie [GAr] peut être un peptide « 21 GAr », « 43 GAr » et/ou « 235 GAr ». 15 Selon un mode encore préféré, la partie [GAr] peut être un peptide « 43 GAr » et/ou « 235 GAr ». NOUVELLES UTILISATIONS THERAPEUTIOUES Il est rappelé que les infections par gamma herpès virus ont déjà été mises en 20 causes dans la survenue de plusieurs types de maladies, et en particulier de plusieurs types de cancers. Il est également rappelé que l'infection par le virus d'Epstein-Barr (EBV) est un agent causal du lymphome de Burkitt, du carcinome naso-pharyngé et de la mononucléose infectieuse. 25 EBV est aussi associé à certaines formes de lymphome de Hodgkin. La mise en oeuvre des procédés de sélection de l'invention a d'ores et déjà permis de proposer une nouvelle utilisation thérapeutique de composés jusqu'alors connus pour d'autres indications. A cet égard, l'identification du mode d'action de composés sur le cycle lytique des gamma herpès virus permet d'envisager à la fois leur utilisation sur de 30 nouveaux types de pathologie, mais également sur des populations de patients distinctes. Parmi les composés identifiés par la Demanderesse, on citera la doxorubicine (aussi appelée hydroxydaunorubicine, autrement connue sous son nom commercial: Adriamycine), laquelle est utilisée très largement en chimiothérapie pour traiter des cancers tels que les lymphomes, des carcinomes, des sarcomes, ou des cancers du sein. C'est un antibiotique de la famille des anthracyclines jusque là connu pour être un intercalant de l'ADN. La doxorubicine est notamment utilisée pour traiter des cancers liés au virus d'Epstein-Barr. L'Homme de l'Art pourra notamment se référer à la revue de Zimmermann & Trappe (Therapeutic options in post-transplant lymphoproliferative disorders; Ther Adv Hematol. 2011; 2(6): 393-407). De manière surprenante, il semble donc que les multi-chimiothérapies contenant de la doxorubicine ou ses dérivés provoquent l'activation de la phase lytique du 10 virus d'Epstein-Barr via le domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein Barr. Ainsi, l'invention concerne également l'utilisation thérapeutique des composés identifiés par les procédés de sélection in vitro décrits ci-dessus, pour traiter et/ou prévenir les maladies associées à une infection par gamma herpès virus, et en particulier par le virus 15 d'Epstein-Barr. Parmi les maladies associées à une infection par gamma herpès virus, on citera le lymphome de Burkitt, le carcinome naso-pharyngé, la mononucléose infectieuse et les désordres lymphoprolifératifs associés ou consécutifs à une transplantation. 20 En particulier, l'invention concerne l'utilisation thérapeutique des composés identifiés par les procédés de sélection in vitro décrits ci-dessus, pour traiter et/ou prévenir le lymphome de Burkitt, le lymphome de Hodgkin, le carcinome naso-pharyngé, la mononucléose infectieuse et/ou les désordres lymphoprolifératifs associés ou consécutifs à une transplantation. 25 Outre la Doxorubicine, la Demanderesse a également identifié la daunorubicine, l'Epirubicine et la Pirarubicine en tant que composés d'intérêt. EXEMPLES A. Matériels et méthodes A.1. Souches de levure et milieux de culture Toutes les souches de levure utilisées sont dérivées de la souche « W 303 WT» (Blondel et al., 2005) : MATa, leu2-3,112 trpl-1 canl-100 ura3-1 ade2-1 his3-11,15. Le génotype de la souche ade2A est le suivant : MATa, leu2-3,112 trpl-1 canl-100 ura3-1 ade2-1::HIS5si''b'. Les cellules souches ont été cultivées et utilisées comme décrit dans les articles de Bach et al. (2003) et de Bach et al. (2006). Les milieux de culture utilisés pour la croissance des cellules de levure ont été les suivants : YPD [1% (p/p) yeast extract, 2% (p/v) peptone, 2% (p/v) glucose], 1/2 YPD [0.5% (p/v) yeast extract, 2% (p/v) peptone, 2% (p/v) glucose]. Les milieux de culture solides contenaient 2% (p/v) agar. A.2. Construction des plasmides Tous les plasmides ont été construits en utilisant des procédures standards. Les enzymes de restriction T4 DNA ligase et phosphatase alcaline intestinale de veau ont été obtenues auprès de la Société New England Biolabs (Ipswich, MA, Etats-Unis). Les oligonucléotides synthétiques purifiés ont été obtenus auprès de la Société Eurogentec. La conservation des plasmides a été réalisée dans les souches bactériennes DH5a et TOP10. Le plasmide p416-pADH-HA-ADE2 a été construit de la manière suivante : le polynucléotide HA-ADE2 a été amplifié avec (i) l'amorce sens 5'- GCGCGAATTCATGTACCCATACGATGTTCCAGATTACGCTAGGGAT TCTAGAACAG-3' (SEQ ID N°19) et (ii) l'amorce antisens 5'- GCGCGGTACCTTACTTGTTTTCTAGATAAGG-3' (SEQ ID N°20), ce qui a permis d'introduire les sites de restriction EcoR1 et Kpnl ; le polynucléotide amplifié a ensuite été cloné dans le vecteur p416-pADH. Pour construire le plasmide p416-pADH-HA-21GAr-ADE2, le polynucléotide HA-21GAr a été amplifié avec (i) l'amorce sens 5'- GCGCGGATCCATGGGGTACCCATACGATGTT-3' (SEQ ID N°21) et (ii) l'amorce antisens 5'- GCGCGAATTCTGGTGAATTCAGGGCCCCTCC-3' (SEQ ID N°22), ce qui a permis d'introduire les sites de restriction BamH1 et EcoR1 ; le polynucléotide amplifié a ensuite été cloné dans le vecteur p416-pADH-HA-ADE2 en amont du gène ADE2. Le plasmide p416-pADH-HA-43GAr-ADE2 a été construit de la même 5 manière, en utilisant les mêmes amorces que pour le plasmide p416-pADH-HA-21GArADE2 Le plasmide p416-pADH-HA-235GAr-ADE2 a été construit comme suit : le polynucléotide HA-235GAr a été amplifié en utilisant (i) l'amorce sens 5'- GCGCGGATCCATGTACCCCTACGACGTCCCCG-3' (SEQ ID N°23) et 10 (ii) l'amorce antisens 5'- GCGCGAATTCCTCGAGGATATCACCTTCTTGG-3' (SEQ ID N°24), ce qui a permis d'introduire les sites de restriction BamH1 et EcoR1 ; le polynucléotide amplifié a ensuite été cloné dans le vecteur p416-pADH-ADE2 en amont du gène ADE2. Pour construire le plasmide p416-pADH-HA-papio3OGAr-ADE2, la cassette 15 HA-papio3OGAr a été amplifiée en utilisant (i) l'amorce sens 5'- GCGCGGATCCATGGCTTACCCCTACGACG-3' (SEQ ID N°25) et (ii) l'amorce antisens 5'-GCGCGGTGAATTCTCCTCCTGCTCC-3' (SEQ ID N°26), ce qui a permis d'introduire les sites de restriction BamH1 et EcoR1 ; le polynucléotide amplifié a ensuite été cloné dans le plasmide p416-pADH-ADE2 en amont du gène ADE2. 20 Pour construire le plasmide p416-pTEF-HA-ADE2, le vecteur p416-pADH-HA- ADE2 a été soumis à une digestion avec EcoR1 et Kpnl et la cassette HA-ADE2 qui a été ainsi excisée a été insérée dans le vecteur p416-pTEF. Pour construire les vecteurs p416-pTEFHA-21GAr-ADE2, p416-pTEF-HA43GAr-ADE2 et p416-pTEF-HA-235GAr-ADE2, les cassettes HA-21GAr-ADE2, HA- 25 43GAr-ADE2 et HA-235GAr-ADE2 ont été obtenues en soumettant les constructions p416- pADH respectives avec BamH1 et Kpnl ; puis les cassettes correspondantes ont été insérées dans le vecteur 416-p TEF . Les constructions pCDNA3 -OVA , pCDNA3-235GAr-OVA, pCDNA3-EBNA 1 et pCDNA3-EBNA 1 AGAr ont été obtenues comme décrit par Apcher et al. (2010) et Yin 30 et al. (2003). A.3. Construction des cellules de levure Afin d'obtenir une expression homogène dans toutes les cellules, une copie unique de HA-43GAr-ADE2 ou de HA-ADE2 sous le contrôle du promoteur ADH a d'abord été intégrée de manière stable dans le génome de la souche ade2 A. Les fragments pADH-HA-ADE2, pADH-HA-21GAr-ADE2, pADH-HA-43GAr-ADE2 et pTEF-HA235GAr-ADE2ont été excisés à partir des plasmides respectifs p416-pADH-HA-ADE2, p416-pADH-HA-21GAr- ADE2, p416-pADH-HA-43GAr-ADE2 et p416-pTEF-HA-235GAr-ADE2, en utilisant les enzymes de restriction SacI et KpnI ; puis les fragments excisés ont été sous- clonés dans le plasmide désintégrateur pIS375 (Sadowski et al., 2007). Les plasmides désintégrateurs permettent d'obtenir l'intégration d'une copie unique des constructions d'intérêt à la jonction de la délétion du marqueur, ainsi que l'élimination complète des séquences plasmidiques additionnelles (Sadowski et al., 2007). Du fait que les constructions intégrées ne contiennent aucune duplication de séquence flanquante, les intégrations sont hautement stables. Les transformations des levures ont été réalisées selon la procédure utilisant l'acétate de lithium. Les souches de levure obtenues ont été respectivement désignées pADH-HA-ADE2, pADH-HA-21GAr-ADE2, pADH-HA-43GArADE2 et pTEF-HA-235GAr-ADE2. A.4. Bibliothèques de composés Approximativement 2 000 composés ont été criblés à partir de deux bibliothèques de composés chimiques, ce qui inclut (i) la bibliothèque « Prestwick Chemical Library® », laquelle contient une collection de 1 200 composés testés au moins en phase II d'essais cliniques et (ii) la bibliothèque « BIOMOL's FDA Approved Drug Library » (Enzo Life Sciences) qui consiste en une collection de 640 molécules médicamenteuses approuvées par l'agence américaine du médicament (FDA), lesquelles ont été sélectionnées aux fins de maximiser la diversité chimique et pharmacologique. Les composés ont été fournis (i) à la concentration de 10 mM dans des puits de plaques de 96 puits (Prestwick®) ou (ii) sous forme de solutions à 2 mg/ml dans du DMSO (BIOLMOL®). Les composés 5-Fluorouracile (5FU), doxorubicine et daunorubicine sont commercialisés par la Société Sigma Aldrich. Les composés Epirubicine, Idarubicine, Pirarubicine, ectoposide et tenoposide sont commercialisés par la Société Santa Cruz. Le composé Valrubicine est commercialisé par la Société Chemos. A. 5. Test de criblage avec des levures Ce test a été adapté à partir d'un test décrit par Bach et al. (2003) et de Bach et al. (2006). Une fraction aliquote d'une culture en croissance exponentielle (200 1.11 d'une culture à une D.0.600 de 0,55) de la levure pADH-HA-43GAr-ADE2 a été étalée de manière homogène en utilisant des billes de verre stériles (diamètre de 3 et 5 mm) sur des boîtes de Pétri carrées (12 cm x 12 cm) contenant du milieu solide YPD. Des filtres stériles (Thermo-Fisher) ont ensuite été placés à la surface de l'agar. Puis un volume de 2 1.11 des composés à tester a été appliqué sur chaque filtre. De plus, le filtre localisé dans la partie supérieure gauche a reçu du DMSO, comme témoin négatif. Les cultures ont été incubées à 29°C pendant quatre à cinq jours puis ont été scannées à l'aide d'un dispositif scanner Scan1212 (Société Agfa). A. 6. Culture des cellules de levure Pour l'obtention d'extrait protéique de levure, une quantité correspondant à une valeur de 6 D.0.660 de cellules en croissance exponentielle ont été recueillies par centrifugation, puis les culots de cellules ont été remis en suspension dans un tampon de lyse (25 mM Tris-HC1 pH 7,4, 100 mM NaC1, 0,2% Triton X-100, cocktail d' antiprotéases (Société Roche), 1 mM de fluorure de phényl-méthylsulfonyle). Après addition de billes de verres d'une taille de 425 pm-600 iam (Société Sigma), les cellules ont été lysées par agitation sur un dispositif Vortex pendant six enchainements de (i) 30 secondes d'agitation Vortex puis (ii) 30 secondes de refroidissement dans la glace ; puis le liquide résultant a été centrifugé pendant 30 minutes à 200 g à 4°C. Les fractions surnageantes ont été récupérées et testées pour leur teneur en protéines. Après dénaturation par la chaleur pendant 3 minutes à 95°C, les extraits protéiques ont été analysés par électrophorèse 10 % SDSPAGE (precast NuPage, Invitrogen), puis transférés sur des membranes de nitrocellulose de 0,45 iam (Whatman). Les membranes ont subi une étape de blocage avec une solution PBS 1X/0,1% Ipegal contenant 5 % de lait écrémé et 0,5 % de SAB ; puis les membranes ont été incubées une nuit à 4°C avec les anticorps primaires indiqués (anticorps de souris anti-HA, anticorps IgM de souris anti-actine, Société Calbiochem). Les membranes ont ensuite été lavées avec une solution neuve de PBS 1X/0,1% Ipegal puis ont été incubées pendant 45 minutes avec des anticorps secondaires (anticorps de chèvre anti-souris, Biorad ; anticorps de chèvre anti-IgM de souris, Calbiochem) qui ont été conjugués à la peroxydase de raifort à la dilution 1 :3000, puis analysés par Chimiluminescence Augmentée (« Enhanced Chemiluminescence », ECL, Société Amersham), en utilisant un appareil imageur du type Vilber-Lourmat Photodocumentation Chemistart 5000. Le sérum de souris anti-HA a été utilisé à la dilution 1 :5000, comme l'anticorps anti-actine. Pour l'analyse des protéines de mammifère par Western blot, les cellules ont été récupérées 48 heures après leur transfection, puis ont été lysées dans un tampon de lyse (20 mM Tris, pH 7.5, 150 mM NaC1, 1% NP-40) contenant des inhibiteurs de protéases (Roche, Mannheim, Allemagne). Les concentrations en protéines ont été mesurées selon le test de Bradford. Les extraits cellulaires totaux ont été fractionnés par SDS-PAGE, transférés sur des membranes to BioTrace NT Nitrocellulose Blotting (PALL), puis ont été incubées avec un anticorps polyclonal de lapin anti-OVA (Sigma) ou un anticorps monoclonal de souris anti-EBNA1 (OT1X), tous les deux à la dilution 1 :1000, ou bien avec un anticorps anti- p53 (D01, 1 :1000), ou bien avec un anticorps anti-p21 (12D1, Cell Signalling, dilution 1 :500). Après incubation avec des anticorps secondaires appropriés, les protéines ont été visualisées par ECL (Amersham Biosciences). A. 7. Test de « Pulse-Chase » Des cellules de levure pADH-HA-ADE2 ou pADH-HA-43GAr-ADE2 en phase de croissance exponentielle ont été marquées (« pulse labelling ») avec 90 p.Ci/OD600 (EasyTag Express protein labeling mix [35S], PerkinElmer Life Sciences) pendant 15 minutes, après avoir été cultivées pendant 15 minutes dans du milieu exempt de méthionine ; puis les cellules ont été soumises à une étape de « chase » dans du milieu frais contenant 50 mM de méthionine et de cystéine pendant les durées indiquées, avant récupération. Après centrifugation, les culots cellulaires ont été remis en suspension dans du tampon de lyse (25 mM Tris-HC1 pH 7.4, 100 mM NaC1, 0.2% Triton X-100, antiprotease cocktail (Roche), 1 mM de fluorure de phenyl-methylsulfonyle), puis ont été traités comme décrit précédemment. Les lysats cellulaires ont été pré-clarifiés avec des billes de G-Sépharose pendant 45 minutes à 4°C, puis ont été immuno-précipités avec 1 lag d'anticorps monoclonaux anti-HA qui ont été préalablement immobilisés sur des billes de G-Sépharose pendant une nuit à 4°C. Les billes ont ensuite été lavées quatre fois avec une solution PBS 1X-0,2% Igepal, puis ont été ébouillantées dans un tampon de charge SDS. Les immuno-précipités ont été analysés par SDS-PAGE en utilisant des gels 10 % precast NUPAGE (InVitrogen). Le gel a été séché puis a été analysé en utilisant un appareil imageur du type Typhoon 9400 Phosphorimager (GE). A.B. PCR quantitative en temps réel L'ARN cellulaire total de levure a été extrait en utilisant les kits RNAeasy® et RNAase-free® commercialisés par la Société Qiagen (Etats-Unis). La sythèse d'ADNc a été réalisée à partir de 1 lag d'ARN exempt d'ADN en utilisant le kit QUperscript commercialisé par la Société InVitrogen (France), à l'aide des hexamères aléatoires commercialisés par la Société Qiagen (Etats-Unis). Des échantillons d'ADNc en duplicats ont été soumis à un procédé de PCR quantitative en utilisant le kit QuantiTect SYBR Green PCR® commercialisé par la Société Qiagen (Etats-Unis) et l'appareil Abiprism 7000 Sequence Detection System commercialsié par la Société Applied Biosystems (Etats- Unis). La quantité relative de l'ARNm amplifié a été déterminée en utilisant l'actine comme standard pour la normalisation. Les paires d'amorces utilisées pour la PCR ont été les suivantes : - amorce aller ADE2 : ATTGTGCAAATGCCTAGAGGTG (SEQ ID N°27) - amorce retour ADE2 : AATCATAAGCGCCAAGCAGTC (SEQ ID N°28) - amorce aller Actine : ATGGTCGGTATGGGTCAAAAA (SEQ ID N°29) - amorce retour Actine : TTCCATATCGTCCCAGTTGGT (SEQ ID N°30) A.9. Test des cellules T Ce test a été réalisé comme décrit dans Apcher et al. (2010). En résumé, des cellules HEK 293 T Kb ont été ensemencées dans des plaques de 6 puits à une densité de 200 000 cellules par puits. Le jour suivant, les cellules ont été transfectées avec 1 1.1G du plasmide d'expression OVA ou du plasmide d'expression 235Gar-OVA avec 3 pl de Genejuice®, selon les recommandations du fabricant (Société Merck Biosciences). Le jour suivant, les cellules transfectées ont été traitées avec des concentrations croissantes de composés candidats à tester. Après 24 heures, les cellules HEK 293 T Kb transfectées et traitées ont été ensemencées à une densité de 50 000 cellules par puits dans des microplaques de 96 puits, puis cultivées en présence de cellules de l'hybridome de cellules T B3Z pendant 16 h. Les cellules ont ensuite été récupérées et ont subi deux lavages dans du tampon froid PBS 1X. Puis les cellules ont été lysées dans une solution de Triton X- 100® à 0,2 %, KH2PO4 à 0,5 M pendant 5 min sur la glace. Les lysats cellulaires ont été centrifugés pendant 5 minutes à 200 g. Puis un volume de 25 1.1.1 de surnageant de chacun des puits a été transféré dans des plaque de comptage de 96 puits Optiplate® (Packard Bioscience, Randburg, SA), puis testées pour l'activité P-Galactosidase en utilisant le test Luminescence Assay® (BD Biosciences, Clontech) avec un dispositif de lecture Fluostar® (BMG Labtech). Les résultats ont été exprimés en unités arbitraires Gal et les données ont été normalisées au regard de la présentation du peptide SIINFEKL (SL8 -SEQ ID N° 5), correspondant aux acides aminés 257 à 264 de l'ovalbumine, commercialisé par la Société Eurogentec (Seraing, Belgique). Exemple 1 : Modèle de test d'inhibition de la traduction via une région GAr dans des cellules de levure. Il a été conçu un modèle de test d'inhibition de la traduction de protéines dépendante de la présence de la région GAr, dans des cellules de levure. Ce test est basé sur l'utilisation du gène rapporteur ADE2 originaire de levure qui code une phophoribosylaminoimidazole carboxylase, qui est une enzyme impliquée dans la voie de biosynthèse de l'adénine. Des cellules de levure, dans lesquelles le gène ADE2 a été délété (souche ade2A), forment des colonies rouges dans un milieu riche, la couleur rouge étant due à l'accumulation de phosphoribosylimidazole (AIR), le substrat de l'enzyme Ade2p, ce substrat devenant rouge lorsqu'il est oxydé par la respiration active. Au contraire, les cellules exprimant une quantité suffisante de l'enzyme Ade2p forment des colonies blanches. Des quantités intermédiaires de l'enzyme Ade2p conduit à la formation de colonies roses, dont l'intensité de couleur est proportionnelle au niveau de l'expression d' Ade2p. A partir de la souche de levure ade2A, on a déterminé que le promoteur pADH permettait une expression minimale du gène ADE2 conduisant à la formation de colonies blanches, permettant la détection de tout effet inhibiteur de la traduction de l'ARNm d' ADE2, même un effet inhibiteur faible, par détermination d'un changement de couleur des colonies. En utilisant le promoteur pADH, on a testé l'effet de la fusion de domaines GAr de différentes longueurs à l'extrémité N-terminale de la protéine Ade2p. Les différentes constructions résultantes ont été fusionnées à leur extrémité N-terminale avec un peptide étiquette TAG de manière à permettre leur détection (Figure 1A). On a observé une diminution des niveaux d'Ade2p qui est dépendante de la longueur du domaine GAr qui est présent dans les constructions de fusion testées, comme cela a été visualisé par la détermination d'un gradient de couleur des colonies allant du blanc au rouge. Ces résultats ont été confirmés par une analyse par test Western blot, qui montre une inhibition croissante de la production des protéines de fusion qui est proportionnelle à la longueur du domaine GAr (Figure 1B). L'effet d'inhibition est indépendant du promoteur puisque la présence d'un domaine GAr complet (235Gar) conduit aussi à la formation de colonies de couleur rose, profond/rouge et à une forte diminution du niveau de Ade2p lorsqu'il est exprimé sous le contrôle du promoteur le plus fort pTEF (Figures 2A, 2B). L'ensemble de ces résultats suggère que, comme dans les cellules de mammifère, le domaine GAr de la protéine EBNA1 altère la traduction de l'ARNm chez la 20 levure de manière dépendante de la longueur du domaine GAr. Afin de comparer plus avant l'effet dépendant de GAr sur l'expression protéique chez la levure, on a utilisé le domaine GAr du virus simien apparenté à l'EBV dont il a été montré une absence d'effet sur la traduction dans les cellules de mammifère (Apcher et al., 2010 ; Apcher et al., 2009). Le lymphocrypto-Papio virus infecte les 25 primates de l'Ancien Monde et exprime un homologue de la protéine EBNA1 qui comprend de courtes séquences apparentées au domaine GAr dont il a été montré qu'elles sont incapables d'empêcher la présentation antigénique (Blake et al., 1997). Le domaine GAr du virus EBV consiste en des résidus uniques d'acides aminés séparés par un, deux ou trois résidus glycine, tandis que le domaine GAr de la protéine 30 EBNA1 du virus Papio contient quatre résidus sérine uniques insérés tous les sept résidus de la répétition. Au contraire de tous les domaines GAr de EBV qui ont été testés, ce qui inclut le domaine court 21Gar, une séquence de 30 acides aminés du domaine GAr de Papio n'a pas d'effet sur la traduction d'ARNm ni sur la présentation de l'antigène (Apcher et al., 2010). On a fusionné la même séquence de 30 acides aminés du domaine GAr de Papio à Ade2p et on a déterminé que ce domaine GAr n'a pas d'effet sur les niveaux de Ade2p, par comparaison avec des cellules témoin exprimant le gène ADE2 placé sous le contrôle du même promoteur ADH (Figure 1C). L'ensemble de ces résultats souligne que l'effet GAr-dépendant sur l'expression protéique est opérationnel chez la levure et que les mécanismes cellulaires qui y contribuent sont conservés de la levure à l'homme. Le niveau protéique peut être perturbé en altérant respectivement (i) les niveaux d'ARNm, (ii) la traduction de l'ARNm ou (iii) la stabilité des protéines. Afin de déterminer si le domaine GAr affecte le niveau de son propre ARNm, on a mesuré l'expression de plusieurs constructions dans la souche ade2A par PCR quantitative en temps réel (qRT-PCR). Comme cela est montré sur la Figure 1E, les niveaux d'ARNm ade2A obtenus sous le contrôle du promoteur pADH étaient similaires en présence ou en l'absence du domaine GAr de 43 acides aminés de longueur ou avec le domaine GAr de Papio. Ces résultats indiquent que le domaine GAr n'a pas d'effet sur le niveau du transcrit de ADE2. On a ensuite déterminé l'effet du domaine GAr sur la stabilité de la protéine Ade2p. En utilisant un test de chasse (« chase ») à la cycloheximide, on a montré qu'Ade2p est une protéine très stable et que le domaine GAr ne modifie pas sa stabilité (Figure 1D). En tenant compte des résultats de marquage métabolique des protéines nouvellement synthétisées ainsi que les résultats d'essais de « pulse-chase » (Figure 3), l'ensemble de ces résultats montre que le domaine GAr inhibe la traduction de son propre ARNm chez la levure, d'une manière dépendant de la longueur du domaine GAr, comme c'est le cas dans les cellules humaines. Exemple 2 : Test de criblage de composés anti-viraux Il a été tiré parti du modèle de test d'inhibition chez la levure décrit à l'exemple 1, et de la facilité de lecture des résultats du test par analyse de la couleur des colonies, afin de mettre au point un test de criblage de composés pour leur capacité à interférer avec l'effet du domaine GAr sur la traduction protéique. Le principe du test de criblage est basé sur l'identification de composés ayant la capacité à altérer l'inhibition en cis de la traduction médiée par le domaine GAr. En premier lieu, ce test de criblage permet la sélection de composés ayant la capacité à empêcher l'inhibition en cis de la traduction médiée par le domaine GAr et peuvent prévenir une évasion des cellules infectées par EBV d'un contrôle par le système immunitaire, ces composés pouvant dès lors constituer des composés d'intérêt thérapeutique. En second lieu, ce test de criblage permet la sélection de composés d'intérêt thérapeutique qui ont la capacité d'accroitre l'effet inhibiteur du domaine GAr, du fait que la protéine EBNA1 est requise pour la réplication virale et que cette protéine prévient aussi les activités oncogénique et anti-apoptotique du virus (Gruhne et al., 2009 ; Kennedy et al., 2003 ; Wilson et aL, 1996). Pour les besoins de ce test de criblage, on a sélectionné la construction de fusion comprenant le domaine 43GAr du fait que cette construction exerce un effet intermédiaire conduisant à la formation de colonies de couleur rose sur un milieu riche. Les cellules de levure ont été étalées sur un milieu riche solide et ont été exposées à des filtres imprégnés chacun d'un composé à tester. Peuvent ensuite être sélectionnés à la fois (i) les composés qui empêchent l'effet du domaine GAr sur la traduction, lesquels conduisent à l'obtention d'un halo de colonies plus blanches autour du filtre imprégné avec le composé considéré et (ii) les composés qui accroissent l'effet inhibiteur du domaine GAr, lesquels conduisent à l'obtention d'un halo de colonies rouges ou rose plus foncé sur le milieu riche. Un avantage du test de criblage qui a été mis au point est la possibilité de tester simultanément, et de manière très simple, de nombreux composés candidats, chacun selon une large gamme de concentrations, du fait de la diffusion des composés candidats dans le milieu solide environnant. De plus, ce test de criblage s'est avéré très sensible, du fait que de nombreux composés sont toxiques lorsqu'ils sont à forte concentration. Le cas échéant, les résultats du test de criblage peuvent conduire à des faux positifs lorsqu'un composé candidat interfère avec les mécanismes de phosphorylation oxydative, car la respiration active est requise pour l'oxydation du substrat AIR en un pigment rouge. Toutefois, les composés conduisant à des résultats faux positifs peuvent être aisément repérés, du fait que ces composés vont aussi empêcher la croissance des cellules de levure sur un substrat non fermentable comme le glycérol ou l'éthanol. On a ensuite déterminé l'effet de composés sélectionnés sur l'expression d'ADE2 à l'aide de la technique de qRT-PCR et par analyse de Western blot. Les composés qui affectent de manière spécifique l'expression de 43GAr-ADE2 ont ensuite été testés pour leur effet sur l'expression de GAr-OVA et de EBNA1 dans des cellules de mammifère par analyse de Western blot et par un test « T-cell reporter » de présentation antigénique restreint à l'antigène C1\41-1 de Classe I. Exemple 3 : Identification de composés d'intérêt On a procédé à l'identification de composés d'intérêt en utilisation le test de criblage qui est décrit à l'exemple 2. On a réalisé un criblage de composés d'intérêt, à partir de deux collections de composés, respectivement (i) la chimiothèque Prestwick® et (ii) la chimiothèque 15 BIOLMOL®, ces chimiothèques contenant chacune une collection de composés thérapeutiques pour lesquels les études de toxicité et de biodisponibilité ont déjà été réalisées chez l'homme. En conséquence, les composés sélectionnés à l'issue du test de criblage sont susceptibles d'entrer directement dans des programmes d'optimisation. Parmi les 2 000 composés thérapeutiques testés à l'aide du test de criblage, 20 seulement deux composés ont été sélectionnés pour leur capacité à engendrer des halos blancs de colonies de levures, correspondant à une forte augmentation des niveaux d'Ade2p. Ces résultats montrent que le test de criblage qui a été mis au point est à la fois spécifique et fiable. Les composés identifiés à l'aide du test de criblage sont respectivement le 5- 25 fluorouracile (5FU) et la doxorubicine (DXR). Les résultats montrent qu'à la fois l'intensité de couleur et le diamètre du halo sont proportionnels à la quantité de composé thérapeutique contenue sur le filtre considéré. On a ensuite cherché à déterminer si les composés 5FU et DXR affectent ou non les niveaux d'ARNm des diverses constructions, par la méthode de qRT-PCR 30 (Figures 4A et 4B). Afin de déterminer si les composés 5FU et DXR interfèrent avec la capacité de GAr à inhiber la traduction, on a déterminé l'effet de ces composés sur le niveau d'état à l'équilibre des protéines 43GAr-Ade2p et Ade2p (Figures 4C et 4D). Les deux composés 5FU et DXR ont conduit à une augmentation significative des niveaux de la protéine 43GAr-Ade2p, ce qui corrobore leur capacité à induire un halo de colonies plus blanches dans le test en cellules de levure. Cependant, seul le composé DXR a exercé un effet GAr-dépendant car DXR n'a pas exercé d'effet sur le niveau de la protéine Ade2p, au contraire de 5FU qui a aussi conduit à une augmentation du niveau de la protéine Ade2p. Ces résultats suggèrent que DXR affecte spécifiquement l'inhibition de la traduction qui dépend du domaine GAr, alors que 5FU pourrait avoir un effet général sur la traduction. Exemple 4: DXR interfère avec la suppression de la présentation antigénique et l'inhibition de la traduction médiée par GAr. Après avoir identifié et validé les composés DXR et 5FU avec le test de criblage en cellules de levure, la capacité de ces deux composés à interférer avec la suppression de la présentation de l'antigène médiée par GAr a été évaluée, en utilisant un test à base de cellules T décrit par Apcher et al. (2010) et par Karttunen et al. (1992). A cette fin, on a utilisé une construction résultant de la fusion (i) du domaine GAr de 235 acides aminés de longueur (235GAr) avec (ii) l'extrémité N-terminale de l'ovalbumine de poulet (Ova). Ova contient le peptide antigénique SIINFEKL (SL8 - SEQ ID N°5) qui est détecté par les cellules T CD8+ rapporteurs spécifiques (cellules B3Z), lorsque le peptide antigénique SL8 est présenté en association avec des molécules du CMH de classe I Kb murines (Karttunen et al., 1992). De l'Ova seule a été utilisée comme témoin. des cellules HEK 293 T qui expriment de manière stable la molécule de Classe I Kb (HEK 293T Kb, référence) ont été transfectés par les ADNc codant ces polypeptides dans. Les cellules HEK 293T Kb transfectées ont ensuite été traitées ou non avec des concentrations variées de DXR ou 5FU pendant 24 heures. Puis les composés ont été éliminés et les cellules HEK 293T Kb ont été mélangées avec un nombre égal de cellules B3Z et incubées pendant une nuit. La quantité de peptide SL8 présenté à la surface des cellules HERK 293T Kb a ensuite été déterminé indirectement en mesurant l'activité (3-Gal dans les cellules B3Z, laquelle est proportionnelle à l'activation des récepteurs de cellules T spécifiques du peptide SL8. Cette méthode a permis de réaliser un suivi de l'effet des composés sur la présentation de l'antigène à partir des constructions Ova et 235GAr-Ova. Les composés DXR (Figure 5B) et 5FU (Figure 5C) ont induit une augmentation significative de la présentation d'antigène à partir de la construction 235GAr-Ova. Cependant, comme cela a été observé dans le test basé sur les cellules de levure, cet effet n'est spécifique de GAr que pour le composé DXR car ce composé thérapeutique n'accroit pas la présentation d'Ova seule. Au contraire, 5FU induit une augmentation de la présentation d'Ova à un degré similaire à la construction 235GAr-Ova. On a aussi déterminé les niveaux protéiques d'Ova et de 235GAr-Ova dans les cellules HEK 393T Kb et on a montré que le composé DXR conduisait à une augmentation significative, et dépendante de la dose de DXR, sur le niveau à l'équilibre de GAr-Ova, alors que DXR n'a pas d'effet significatif sur Ova seul (Figure 5A), comme cela avait aussi été observé dans le test basé sur les cellules de levure. L'ensemble de ces résultats montre que le composé DXR affecte l'expression et la présentation antigénique de la construction GAr-Ova, d'une manière dépendant de la présence du domaine GAr. Ces résultats valident le test de criblage de composés thérapeutiques avec des cellules de levure qui est décrit dans les exemples précédents. Exemple 5 : DXR conduit à une augmentation du niveau d'expression de EBNA1 dépendante de la présence de GAr. L'effet du composé DXR sur le niveau d'expression de la protéine EBNA1 a été déterminé. Des cellules HEK 293T Kb exprimant soit EBNA1, soit EBNA14GAr ont été traitées ou non avec des concentrations croissantes de DXR pendant 24 heures. Comme cela est illustré sur la Figure 5D, le composé DXR conduit à une augmentation dépendant de la dose des niveaux à l'équilibre de la protéine EBNA1, alors que DXR n'a pas exercé d'effet sur les niveaux de EBNA14GAr. L'effet de DXR sur l'expression de EBNA1 endogène a été déterminé en utilisant des cellules Raji, lesquelles consistent en des cellules de lymphome de Burkitt portant le virus EBV. La protéine EBNA1 endogène dans les cellules Raji migre plus rapidement que la protéine EBNA1 exogène, du fait de sa séquence GAr plus courte. Les niveaux de EBNA1 endogène et de EBNA1 exogène exprimés dans les mêmes cellules ont augmenté après un traitement de 8 heures avec 400 nM de DXR (Figure 5E). L'ensemble de ces résultats montre que, au-delà de son effet sur l'expression de GAr-Ova et sur la présentation antigénique dépendante de GAr, DXR conduit aussi à une augmentation GAr-dépendante du niveau à l'équilibre de la protéine EBNA1 complète (« full length »), que EBNA1 soit surexprimée ou exprimée de manière endogène dans des cellules infectées par EBV. Exemple 6 : L'effet de DXR sur le contrôle de la traduction médiée par 5 GAr est indépendant d'une altération de l'ADN Sur la base de l'observation que DXR, mais pas 5FU, surmonte spécifiquement l'effet de GAr sur la traduction, on a testé des analogues commerciaux de DXR, dont les structures chimiques sont illustrées sur la Figure 6A, dans le test de criblage dans des cellules de levure décrit dans les exemples précédents. Ces tests ont pour objectif de 10 valider la sélection de DXR en tant que composé d'intérêt, et pour déterminer s'il existe un lien entre l'activité génotoxique connue de DXR et son effet sur l'inhibition de la traduction par le domaine GAr. Comme cela est illustré sur la Figure 6B, la daunorubicine, l'epirubicine et la pirarubicine sont aussi actives dans ce test basé sur les cellules de levure, bien qu'à un degré moindre que DXR. Cependant, l'idarubicine et la valrubicine, qui sont 15 également proches de DXR, étaient inactives, ce qui indique un effet spécifique encore inconnu de DXR et de ses analogues sur la traduction dépendant de GAr. DXR et ses cinq analogues ont tous été décrits comme provoquant un dommage à l'ADN, du fait de leur capacité à cibler les complexes topoisomérase II/ADN (Nitiss, 2009). En accord avec cet effet génotoxique, on a montré que ces composés activent la voie suppresseur de tumeur 20 p53, comme cela est mis en évidence du fait de leur capacité à induire l'expression à la fois des gènes p53 et p21. (Figure 6C). On peut noter qu'à la fois l'etoposide et le teniposide, qui représentent une classe distincte de composés ciblant la topoisomérase II, n'ont aucun effet sur le contrôle de la traduction dépendante de GAr dans le test basé sur les cellules de levure, tandis que ces composés activent la voie de p53 aussi bien que DXR et ses 25 analogues (Figure 6B & 6C). Ces résultats indiquent que l'effet de DXR sur l'inhibition de la traduction médiée par GAr n'est pas couplé à son effet génotoxique déjà connu. Afin de valider plus avant la relation structure-activité (SAR) de DXR, on a testé l'effet de quelques analogues chimiques de DXR dans le test basé sur les cellules T de mammifère. En accord avec son effet dans la levure, un traitement par la daunorubicine a 30 conduit à une augmentation significative de la présentation antigénique à partir de la construction 235GAr-Ova (Figure 7A). Au contraire, et comme cela a été montré avec le test dans les cellules de levure, à la fois la valrubicine (Figure 7B) et l'etoposide (Figure 7C) n'ont pas d'effet. L'epirubicine, qui est modérément active dans le test dans des cellules de levure, exerce un effet modeste dans le test basé sur les cellules T (Figure 7D). L'ensemble de ces résultats suggère que le test dans les cellules de levure peut être utilisé pour réaliser des études de relation structure-activité (SAR), pour des composés qui interfèrent avec l'effet du domaine GAr sur la traduction. De plus, sur la base de la comparaison entre les effets sur les dommages à l'ADN et un effet de suppression de la traduction dépendant de GAr, ces résultats montrent que ces deux effets ne sont pas couplés. LISTAGE DE SEQUENCES SEO ID N°1 MSDEGPGTGPGNGLGEKGDT SGPEGSGGSGPQRRGGDNHGRGRGRGRGRGGGRP GAP GGS GS GPRHRDGVRRPQKRP S CIGCKGTHGGTGAGAGAGGAGAGGAGAGG GAGAGGGAGGAGGAGGAGAGGGAGAGGGAGGAGGAGAGGGAGAGGGAGGA GAGGGAGGAGGAGAGGGAGAGGGAGGAGAGGGAGGAGGAGAGGGAGAGGA GGAGGAGAGGAGAGGGAGGAGGAGAGGAGAGGAGAGGAGAGGAGGAGAGG AGGAGAGGAGGAGAGGGAGGAGAGGGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGG AGGAGAGGGAGAGGAGAGGGGRGRGGSGGRGRGGSGGRGRGGSGGRRGRGRE RARGGSRERARGRGRGRGEKRPRSP SSQSSS SGSPPRRPPPGRRPFFHPVGEADYFE YHQEGGPDGEPDVPPGAIEQGPADDPGEGP S T GPRGQ GD GGRRKKGGWF GKHRG QGGSNPKFENIAEGLRALLARSHVERTTDEGTWVAGVFVYGGSKT SLYNLRRGTA LAIPQCRLTPL SRLPFGMAPGPGPQPGPLRESIVCYFMVFLQTHIFAEVLKDAIKDL VMTKPAPTCNIRVTVC SFDDGVDLPPWFPPMVEGAAAEGDDGDDGDEGGDGDE GEEGQE SEO ID N°2 GAGAGAGGAGAGGAGAGGGAGAGGGAGGAGGAGGAGAGGGAGAGGGAGGA GGAGAGGGAGAGGGAGGAGAGGGAGGAGGAGAGGGAGAGGGAGGAGAGGG AGGAGGAGAGGGAGAGGAGGAGGAGAGGAGAGGGAGGAGGAGAGGAGAGG AGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGGAGGAGAGGGAGGAGA GGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGGAGAGGAGAGGGG SEO ID N°3 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SEO ID N°12 GGAGCAGGAGGGGCAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGGGCAGGAGGGGCAGGA GCAGGAGGGGCC 20 SEQ ID N°13 GAGGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGGAGAGGA SEO ID N°14 GGAGCAGGAGGGGCAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGGGCAGGAGGGGCAGGA 25 GCAGGAGGGGC AGGAGGGGC AGGAGC AGGAGGGGC AGGAGGGGC AGGAGC A GGAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGGGCC SEO ID N°15 GAGAGAGGAGAGGAGAGGGAGAGGGAGGAGGAGGAGAGGGAGAGGGAGGA 30 GGAGAGGGAGAGGGAGGAGAGGGAGGAGGAGAGGGAGAGGGAGGAGAGGG AGGAGGAGAGGGAGAGGAGGAGGAGAGGAGAGGGAGGAGGAGAGGAGAGG AGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGGAGGAGAGGGAGGAGA GGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGGAGAGGAGA 35 SEQ ID N°16 GGAGCAGGAGCAGGAGCGGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGGGCAGGAGCAGGA GGAGGGGCAGGAGCAGGAGGAGGGGCAGGAGGGGCAGGAGGGGCAGGAGGG GCAGGAGCAGGAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGAGGGGCAGGAGGGGCAGGA GGGGCAGGAGCAGGAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGAGGGGCAGGAGGGGCA 40 GGAGCAGGAGGAGGGGCAGGAGGGGCAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGAGGG GCAGGAGCAGGAGGAGGGGCAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGAGGGGCAGGA GGGGCAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGGGCAGGA GGGGCAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGGGCAGGAGCAGGAGGAGGGGCAGGA GGGGC AGGAGGGGCAGGAGC 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GAGCAGCAGCAGGATGAGCAGCAGCAGGATGAGCAGCAGCAGGATGAGCAGC AGCAGGATGAGCAGCAGCAGGATGAGCAGCAGCAGGATGAGCAGCAGCAGG AT GAGCAGC AGCAGGATGAGC AGCAGC AGGAT GAGCAGC AGCAGGATGAGC A GCAGCAGGATGAGCAGCAGCAGGATGAGCAGGAGCAGCAGGATGAGCAGGA GCAGCAGGAT GAGC AGGAGCAGCAGGAT GAGC AGCAGC AGGAT GAGCAGC A GCAGCAGGAT GAGCAGC AGCAGC AGGATGAGCAGCAGCAGCAGGATGAGC AG CAGCAGCAGGATGAGCAGCAGCAGCAGGATGAACAGGAGCAGCAGGAGGAG CAGGAGCAGCAGGAGGAGCAGGAGCAGGAGTTAGAGGAGCAGGAGCAGGAG TTAGAGGATCAGGAGCAGGAGTTAGAGGAGCAGGAGCAGGAGTTAGAGGAGC AGGAGCAGGAGTTAGAGGAGCAGGAGCAGGAGTTAGAGGAGCAGGAGCAGG AGTTAGAGGAGCAGGAGCAGGAGTTAGAGGAGCAGGAGCAGGAGTTAGAGG AGCAGGAGCAGGAGTTAGAGGAGCAGGAGCAGGAGTTAGAGGAGCAGGAGG TGGAAGAGCAAGAGCAGGAGGTGGAAGAGCAAGAGCAGGAGCAGGAAGAGC AGGAATTAGAGGAGGTGGAGGAGCAAGAGCAGGAGCAGGAGGAGCAGGAGG AGCAGGAGTTAGAGGAGGTGGAAGAGCAGGAAGAGCAGGAGTTAGAGGAGG TGGAAGAGCAGGAAGAGCAGGAGTTAGAGGAGGTGGAAGAGCAGGAGCAGC AGGAGTTAGAGGAGGTGGAAGAGCAGGAGCAGCAGGGGGTGGAACAGCAGG AGCAGGAG SEO ID N°19 GCGCGAATTCATGTACCCATACGATGTTCCAGATTACGCTAGGGATTCTAGAA 10 CAG SEO ID N°20 GCGCGGTACCTTACTTGTTTTCTAGATAAGG 15 SEO ID N°21 GCGCGGATCCATGGGGTACCCATACGATGTT SEO ID N°22 GCGCGAATTCTGGTGAATTCAGGGCCCCTCC-3' 20 SEO ID N°23 GCGCGGATCCATGTACCCCTACGACGTCCCCG SEO ID N°24 25 GCGCGAATTCCTCGAGGATATCACCTTCTTGG SEO ID N°25 GCGCGGATCCATGGCTTACCCCTACGACG 30 SEO ID N°26 GCGCGGTGAATTCTCCTCCTGCTCC SEO ID N°27 ATTGTGCAAATGCCTAGAGGTG 35 SEO ID N°28 AATCATAAGCGCCAAGCAGTC SEO ID N°29 40 ATGGTCGGTATGGGTCAAAAA SEO ID N°30 TTCCATATCGTCCCAGTTGGT 45 REVENDICATIONS1. Procédé in vitro de sélection de composés actifs à l'encontre d'une infection par un gamma herpès virus, comprenant les étapes suivantes : a) cultiver des cellules de levure dans le génome desquelles a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GMP] et au moins une partie [REPORTER], dans laquelle : - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de levure, et les cellules de levure étant cultivées en présence d'un composé candidat, b) mesurer le niveau de production de ladite protéine recombinante par les cellules cultivées à l'étape a), et c) comparer le niveau de production de ladite protéine recombinante mesuré à l'étape b) avec une valeur de référence. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel ladite protéine recombinante est une protéine recombinante de formule (I) suivante : NH2-[TAG1],,-[GMP]-[REPORTER]-[TAG2]y-COOH (I), dans laquelle : - [TAG1] et [TAG2] signifient un peptide apte à se lier à un ligand, - x et y, identiques ou différents, représentent un entier égal à 0 ou 1, - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de levure. 3. Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, la protéine recombinante de formule (I) comprenant un peptide comprenant de 8 à 239 acides aminés continus du 30 domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, la protéine recombinante comprenant une partie [REPORTER] consistant en l'enzyme Ade2p de Saccharomyces cerevisiae. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, les cellules de levure étant des cellules de Saccharomyces cerevisiae, de préférence des cellules de Saccharomyces cerevisiae de génotype MATA leu2-3, 112 trp1-1 canl-100 ura3-1 ade2-1 ::his5 S. pombe 6. Procédé in vitro de sélection de composés actifs à l'encontre d'une infection par le virus d'Epstein-Barr comprenant les étapes suivantes : a) cultiver des cellules de mammifère ayant les caractéristiques suivantes : (i)) lesdites cellules expriment un antigène de Classe I du CMH, et (ii) lesdites cellules expriment une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GMP] et au moins une partie [REPORTER], dans laquelle : - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de mammifère, les cellules de mammifère étant cultivées en présence d'un composé candidat, b) mesurer le niveau d'expression de la protéine recombinante associée au CMH de classe I à la surface des cellules cultivées à l'étape a), et c) comparer le niveau d'expression de la protéine recombinante mesuré à l'étape b) avec une valeur de référence. 7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel ladite protéine recombinante est une protéine recombinante de formule (I) suivante : NH2-[TAG1],,-[GMP]-[REPORTER]-[TAG2]y-COOH (I), dans laquelle : - [TAG1] et [TAG2] signifient un peptide apte à se lier à un ligand, - x et y, identiques ou différents, représentent un entier égal à 0 ou 1, - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de mammifère. 8. Procédé selon les revendications 6 ou 7, le composé candidat étant sélectionné par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 à 5. 9. Procédé selon l'une des revendications 6 à 8, l'étape b) étant réalisée selon les étapes suivantes :b1) cultiver les cellules de mammifères obtenues à la fin de l'étape a) en présence de cellules lymphocytaires T CD8+ reconnaissant spécifiquement le peptide de séquence SEQ ID N°5, et b2) mesurer le niveau de prolifération des cellules lymphocytaires T CD8+ cultivées à l'étape 1)1). 10. Procédé selon la revendication 9, les cellules lymphocytaires T CD8+ cultivées à l'étape bl) exprimant une protéine recombinante détectable. 11. Procédé selon l'une des revendications 6 à 10, les cellules de mammifère étant choisies dans le groupe comprenant les cellules de la lignée HEK293T kb et les cellules Raji. 12. Cellule de levure dans le génome de laquelle a été inséré au moins une copie d'un acide nucléique rendant ces cellules aptes à exprimer une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GMP] et au moins une partie [REPORTER], dans laquelle : - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par ladite cellule de levure. 13. Cellule de levure selon la revendication 12, dans laquelle ladite protéine recombinante est une protéine recombinante de formule (I) suivante : NH2-[TAG1],,-[GMP]-[REPORTER]-[TAG2]y-COOH (I), dans laquelle : - [TAG1] et [TAG2] signifient un peptide apte à se lier à un ligand, - x et y, identiques ou différents, représentent un entier égal à 0 ou 1, - [GMP] signifie un polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés d'une protéine de stabilité du génome d'un gamma herpès virus, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par lesdites cellules de levure. 14. Cellule de mammifère ayant les caractéristiques suivantes : (i) ladite cellule exprime un antigène de Classe I du CMH, et (ii) ladite cellule exprime une protéine recombinante comprenant au moins une partie [GAr] et au moins une partie [REPORTER], dans laquelle :- [GAr] signifie un peptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par ladite cellule de mammifère. 15. Cellule de mammifère selon la revendication 14, ayant les caractéristiques suivantes : (i) ladite cellule exprime un antigène de Classe I du CMH, et (ii) ladite cellule exprime une protéine recombinante de formule (I) suivante : NH2-[TAG1],,-[GAr]-[REPORTER]-[TAG2]y -COOH (I), dans laquelle : - [TAG1] et [TAG2] signifient un peptide apte à se lier à un ligand, - x et y, identiques ou différents, représentent un entier égal à 0 ou 1, - [GAr] signifie un peptide comprenant de 8 à 239 acides aminés continus du domaine GAr de la protéine EBNA1 du virus d'Epstein-Barr, et - [REPORTER] signifie un polypeptide détectable, non exprimé en tant que tel par ladite cellule de mammifère.