Brevet FR3020952A1 — publié le 20151120

Formulation à action rapide d'insuline comprenant un composé anionique substitué et un composé polyanionique [0001] La présente invention concerne une formulation à action rapide d'insuline comprenant au moins un composé anionique substitué et au moins un composé polyanionique, et ledit composé anionique substitué en tant que tel. [0002] Depuis la production d'insuline par génie génétique, au début des années 80, les patients diabétiques bénéficient d'insuline humaine pour se traiter. Ce produit a grandement amélioré cette thérapie puisque les risques immunologiques liés à l'utilisation d'insuline non humaine en particulier de porc se trouvent éliminés. Cependant, l'insuline humaine injectée par voie sous-cutanée a un effet hypoglycémiant seulement après 60 minutes, ce qui implique que les patients diabétiques traités avec l'insuline humaine doivent procéder à l'injection 30 minutes avant le repas. [0003] Un des problèmes à résoudre pour améliorer la santé et le confort des patients diabétiques est de mettre à leur disposition des formulations d'insuline qui permettent d'apporter une réponse hypoglycémiante plus rapide que celle de l'insuline humaine et si possible s'approchant de la réponse physiologique de la personne saine après la prise d'un repas. La sécrétion d'insuline endogène chez l'individu sain est immédiatement déclenchée par l'augmentation de la glycémie. L'objectif est de réduire le plus possible le délai entre l'injection d'insuline et le début du repas. [0004] Aujourd'hui, il est admis que la mise à disposition de telles formulations est utile pour que la prise en charge de la maladie soit la meilleure possible. [0005] Le génie génétique a permis d'apporter une réponse avec le développement d'insulines analogues rapides. Ces insulines sont modifiées sur un ou deux acides aminés pour être plus rapidement absorbées dans le compartiment sanguin après une injection sous-cutanée. Ces insulines lispro (Humalog®, EU Lilly), aspart (Novolog®,Novo Nordisk) et glulisine (Apidra®, Sanofi Aventis) sont des solutions stables d'insuline avec une réponse hypoglycémiante plus rapide que celle de l'insuline humaine. Dès lors, les patients traités avec ces insulines analogues rapides peuvent procéder à l'injection d'insuline seulement 15 minutes avant le repas. [0006] Le principe des insulines analogues rapides est de former des hexamères à la concentration de 100 UI/mL pour assurer la stabilité de l'insuline dans le produit commercial tout en favorisant la dissociation très rapide de ces hexannères en monomères après injection sous-cutanée afin d'obtenir une action rapide. [0007] L'insuline humaine telle que formulée sous sa forme commerciale, ne permet pas d'obtenir une réponse hypoglycémiante proche en terme de cinétique de la réponse physiologique générée par le début d'un repas (hausse de la glycémie), car à la concentration d'usage (100 UI/mL), en présence de zinc et d'autres excipients tels que le phénol ou le m-crésol, elle s'assemble sous forme d'hexamères alors qu'elle est active sous forme de monomère et de dimère. L'insuline humaine est préparée sous forme d'hexamères pour être stable près de 2 ans à 4°C car sous forme de monomères, elle a une très forte propension à s'agréger puis à fibriller ce qui lui fait perdre son activité. De plus sous cette forme agrégée, elle présente un risque immunologique pour le patient. [0008] Les dissociations des hexamères en dimères et des dimères en monomères retardent son action de près de 20 minutes comparativement à une insuline analogue rapide (Brange J., et al, Advanced Drug Delivery Review, 35,1999, 307-335). [0009] En outre, la cinétique de passage des insulines analogues dans le sang, ainsi que leur cinétique de réduction de la glycémie, ne sont pas optimales et il existe un réel besoin d'une formulation ayant un temps d'action encore plus court afin de s'approcher des cinétiques de sécrétion d'insuline endogène chez les personnes saines. [00010] La société Biodel a proposé une solution à ce problème avec une formulation d'insuline humaine comprenant de l'EDTA et de l'acide citrique telle que décrite dans la demande de brevet US200839365. L'EDTA par sa capacité à complexer les atomes de zinc et l'acide citrique par ses interactions avec les zones cationiques présentes à la surface de l'insuline sont décrits comme déstabilisant la forme hexamèrique de l'insuline et réduisant ainsi son temps d'action. [00011] Cependant, une telle formulation présente notamment comme inconvénient de dissocier dans la forme pharmaceutique la forme hexamèrique de l'insuline qui est la seule forme stable susceptible de répondre aux exigences de stabilité de la réglementation pharmaceutique. [00012] On connait également au nom de la demanderesse, les demandes PCT W02010/122385 et W02013/064787 qui décrivent des formulations d'un polysaccharide ou d'un oligosaccharide substitué comprenant des groupes carboxyles. [00013] On connaît encore la demande PCT/FR2013/052736 déposée le 13 novembre 2013 au nom de la demanderesse qui décrit des formulations d'insuline humaine ou analogue et qui permet également de résoudre les différents problèmes évoqués ci- dessus par l'addition d'un composé anionique substitué. [00014] Les polysaccharides décrits dans les demandes WO 2010/122385A1 et US 2012/094902A1 comme excipients sont des composés constitués de chaînes dont les longueurs sont statistiquement variables et qui présentent une grande richesse de sites d'interaction possibles avec des principes actifs protéiques. Cette richesse pourrait induire un manque de spécificité en termes d'interaction et une molécule plus petite et mieux définie pourrait permettre d'être davantage spécifique à ce sujet. [00015] En outre, une molécule avec un squelette bien défini est en général plus facilement traçable (MS/MS par exemple) dans les milieux biologiques lors d'expériences de pharmacocinétique ou d'ADME (administration, distribution, métabolisme, élimination) par rapport à un polymère qui donne généralement un signal très diffus et bruité en spectrométrie de masse. [00016] A contrario, il n'est pas exclu qu'une molécule bien définie et plus courte puisse présenter un déficit de sites d'interaction possibles avec des principes actifs protéiques. En effet, en raison de leur taille réduite ils ne présentent pas les mêmes propriétés que les polymères de type polysaccharide car il y a perte de l'effet polymère. [00017] En dépit de ces inconvénients potentiels, la demanderesse a mis au point des formulations susceptibles d'accélérer l'insuline en utilisant un composé anionique substitué en combinaison avec un composé polyanionique. La présente invention comme celle décrite dans la demande PCT/FR2013/052736 permet de résoudre les différents problèmes ci-dessus exposés. [00018] L'invention consiste en une composition, en solution aqueuse, comprenant de l'insuline sous forme hexamèrique, au moins un composé anionique substitué et un composé polyanionique. [00019] L'invention consiste en une composition, en solution aqueuse, comprenant de l'insuline sous forme hexamèrique, au moins un composé anionique substitué et au moins un composé polyanionique, ledit composé anionique substitué étant constitué d'un nombre discret n compris entre 1 et 8 d'unité(s) saccharidique(s) identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, ladite unité saccharidique ou l'une desdites unités saccharidiques étant sous forme ouverte, oxydée ou réduite, ledit composé comportant des groupes carboxyles salifiables et ledit composé anionique substitué portant sur son bout de chaîne réducteur au moins un radical AA issu d'un acide aminé aromatique comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué, ou d'un dérivé d'acide aminé aromatique comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué. [00020] Ledit composé anionique substitué, constitué d'un nombre discret n compris entre 1 et 8 d'unité(s) saccharidique(s) identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, ladite unité saccharidique ou l'une desdites unités saccharidiques étant sous forme ouverte, oxydée ou réduite est issu d'un composé constitué d'un nombre discret n compris entre 1 et 8 d'unité(s) saccharidique(s) identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes et portant à son extrémité un bout de chaîne réducteur. [00021] On entend par « unité saccharidique ouverte » une unité saccharidique issue d'une unité saccharidique portant une extrémité réductrice. [00022] On entend par « reducing end group », « bout de chaîne réducteur », ou « extrémité réductrice », l'extrémité de la chaîne formée d'un nombre défini d'unités saccharidiques portant une fonction hémi-acétal ou aldéhyde. Il se comporte comme un agent réducteur dans le test de Tollens, par exemple, qui permet de doser les bouts de chaîne portant un aldéhyde chez les sucres : Sucre-CHO + 2Ag+(ac) + 3H0- Sucre-000- + 2Ag(s) + 2H20 [00023] On entend par « forme oxydée » que la fonction aldéhyde est sous forme amide, représentée -C(0)N-. [00024] On entend par « forme réduite » que la fonction aldéhyde est sous forme amine, représentée -CH2-N-. [00025] Ledit composé anionique substitué constitué d'un nombre discret n compris entre 1 et 8 d'unité(s) saccharidique(s) identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes comprend une unité saccharidique sous forme ouverte, oxydée ou réduite, les n-1 autres unités saccharidiques étant sous forme fermée, encore appelée forme cyclique. [00026] Selon un mode de réalisation, le radical AA porté par le bout de chaine réducteur est lié directement à celui-ci. [00027] Selon un autre mode de réalisation, le radical AA porté par le bout de chaine réducteur est lié à celui-ci via un bras de liaison E, au moins divalent. [00028] Dans un mode de réalisation, le bras de liaison E est issu d'un acide aminé, d'une diamine ou d'un amino-alcool. [00029] Selon un mode de réalisation, le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, ladite formule I représentant l'unité saccharidique sous forme ouverte dans laquelle au plus l'un des R2, R3, R4, R6 représente un squelette saccharidique formé d'un nombre discret d'unités saccharidiques fermées : dans laquelle : 1) Z est soit un radical -C=0-, soit un radical -CH2-, 2) X est soit un radical -C=0-, soit un radical -CH2-, 3) R5 est soit un radical -OH, soit un radical -f-[A]-COOH, 4) R2, R3, R4, R6 identiques ou différents sont choisis dans le groupe constitué par les radicaux -OH, -f-[A]-COOH et au plus un des R2, R3, R4, R6 est un radical issu d'un squelette saccharidique formé d'un nombre discret n-1 compris entre 1 et 7 (1 P. 2,8 p. 2,5 k p. 2> P. 3,5 p 0,1. 3,2 p 0,2. 3> p k 0,3. 2,8 p k 0,5. 2,5 - p 0,7. 2> p k 0,9. [00078] Dans un mode de réalisation, le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, dans laquelle au plus un des R2, R3, R4, R6 est un radical issu d'un squelette formé d'un nombre discret n-1 compris entre 1 et 6, soit 1 Tout particulièrement, le mode d'administration est la voie sous-cutanée. [000356] Les voies d'administration transdermique, orale, nasale, vaginale, oculaire, buccale, pulmonaire sont également envisagées. [000357] L'invention concerne également l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la formulation d'une solution d'insuline humaine ou analogue de concentration de 100 UI/mL, 200 UI/mL ou 300 UI/ml destinée aux pompes à insuline implantables ou transportables. [000358] Selon un autre de ses aspects, l'invention porte également sur les composés anioniques substitués de formule I tels que définis ci-dessous : [000359] Le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, ladite formule I représentant l'unité saccharidique sous forme ouverte dans laquelle au plus l'un des R2, R3, R4, R6 représente un squelette saccharidique formé d'un nombre discret d'unités saccharidiques fermées : dans laquelle : 1) Z est soit un radical -C=0-, soit un radical -CH2-, 2) X est soit un radical -C=0-, soit un radical -CH2-, 3) R6 est soit un radical -OH, soit un radical -f-[A]-COOH, 4) R2, R3, Ra, R6 identiques ou différents sont choisis dans le groupe constitué par les radicaux -OH, -f-[A]-COOH et au plus un des R2, R3, R4, R6 est un radical issu d'un squelette saccharidique formé d'un nombre discret n-1 compris entre 1 et 7 (1 n-1 7) d'unités saccharidiques fermées identiques ou différentes dont les fonctions hydroxyles sont substituées ou non substituées par un radical -f-[A]-COOH, 5) -[A]- est un radical au moins divalent comprenant de 1 à 4 atomes de carbone choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles -(CH2)x- 1 x 0,1 , et les fonctions acides étant sous forme de sels de cations alcalins choisis dans le 25 groupe constitué par Na + et K+. Partie A : Synthèse des composés anioniques substitués Exemple Al : composé anionique substitué Al [000360] Composé 1 : produit obtenu par réaction d'amination réductrice entre le bout de chaine réducteur du maltotriose et l'ester méthylique de la L-phénylalanine suivant la procédure modifiée de Sisu, E. et al, Central European Journal of Chemistry 2008, 7 (1), 66-73. [000361] A une solution d'ester méthylique de la L-phénylalanine (11,13 g, 62,18 mmol) dans le DMSO (210 mL) à 50 °C sont ajoutés successivement de l'acide paratoluènesulfonique monohydraté (11,83 g, 62,18 mmol), du maltotriose (Carbosynth) (10,45 g, 20,72 mmol), de l'acide acétique (2,1 mL) et du cyanoborohydrure de sodium (13,02 g, 207,18 mmol). Après agitation à 50 °C pendant 4 jours, de l'acétone est ajoutée au milieu réactionnel et le précipité formé est isolé par filtration. Le précipité obtenu est solubilisé dans un volume minimum d'eau et est à nouveau précipité par ajout d'acétone. Après filtration, le mélange est isolé puis séché sous vide. [000362] Rendement : 11,78 g (85%) [000363] Le produit est analysé par RMN 1-1-1 en conditions d'hydrolyse de l'ester 20 méthylique. RMN 11-I (D20 + Na0D + DCI , ppm) : 7,25-7,12 (m, 5H) ; 5,18 (d, 1H, J = 3,8 Hz) ; 4,89 (d, 1H, J = 3,8 Hz) ; 4,24 (dd, 1H, J = 6,6 et 6,6 Hz) ; 3,96 (m, 1H) ; 3,80-3,72 (m, 3H) ; 3,67-3,36 (m, 13H) ; 3,24-3,08 (m, 5H). [000364] Seul le produit avec l'ester méthylique hydrolysé est observé en analyse 25 LC/MS. LC/MS (ESI-ES+) : 654,5 (calculé ([M+H]) : 654,3). Composé anionique substitué Al [000365] Le composé 1 (11,7 g) est solubilisé dans 20 mL d'eau et la solution est 30 chauffée à 55 °C. A cette solution est ajouté 3 mL de NaOH 10N et le mélange est agité à 55 °C pendant 10 minutes puis le pH de la solution est ajusté à 7 par ajout de 2,2 mL d'une solution HCI (37 %). Le mélange réactionnel est ensuite porté à 65 °C puis du chloroacétate de sodium (36,7 g, 315,1 mmol) est ajouté. Après 60 minutes d'agitation, 32 mL de NaOH 10 N sont ajoutés au goutte à goutte. 3h après le début de l'ajout de 35 NaOH, du chloroacétate de sodium (18,4 g, 157,5 mmol) est ajouté. Après 20 minutes d'agitation, 16 mL supplémentaires de NaOH 10N sont ajoutés au goutte à goutte. Après 60 minutes d'agitation, le milieu réactionnel est dilué avec de l'eau, neutralisé par ajout d'acide acétique, puis purifié par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre NaCI (0,9%) et de l'eau. [000366] La concentration en composé anionique substitué Al de la solution finale est déterminée par extrait sec. [000367] D'après l'extrait sec : [Composé anionique substitué Al] = 11,9 mg/g [000368] Le degré de substitution en nnéthylcarboxylate de sodium par unité saccharidique est déterminé par intégration relative du signal du carbonyl du motif méthyl carboxylate avec les signaux des carbones du cycle aromatique de la phénylalanine par RMN 1-3C. Le degré de substitution en méthylcarboxylate de sodium par unité saccharidique est de 1,9. Partie B: Préparation des solutions Bi. Solution d'insuline analogue rapide Novolog® à 100 UI/mL [000369] Cette solution est une solution commerciale d'insuline aspart de Novo Nordisk vendue sous le nom de Novolog®. Ce produit est une insuline analogue rapide. B2. Solution d'insuline analogue rapide Humalog® à 100 UI/mL [000370] Cette solution est une solution commerciale d'insuline lispro de Eh i Lilly vendue sous le nom de Humalog®. Ce produit est une insuline analogue rapide. B3. Solution d'insuline humaine Humulin® R à 100 UI/mL [000371] Cette solution est une solution commerciale d'insuline humaine de Eh i Lilly vendue sous le nom d'Hurnulin® R. Ce produit est une formulation d'insuline humaine. B4. Solution d'insuline analogue rapide Apidra® à 100 UI/mL [000372] Cette solution est une solution commerciale d'insuline glulisine de Sanofi vendue sous le nom d'Apidra®. Ce produit est une insuline analogue rapide. 85. Préparation d'une solution de citrate de sodium à 1,188 M [000373] La solution de citrate de sodium est obtenue en solubilisant 9,0811 g de citrate de sodium (30,9 mmol) dans 25 mL d'eau dans une fiole jaugée. Le pH est ajusté à 7,4 par ajout de 1 mL d'HCI 1M. La solution est filtrée sur 0,22 prn. B6. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé anionique substitué Al [000374] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé anionique substitué Al]/[insuline lispro] de 2,0, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités précisées ci-dessous et dans l'ordre suivant Composé lyophilisé (composé anionique substitué Al) 730 mg Solution commerciale d'Hurnalog® 100 mL [000375] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000376] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22pm et stockée à 4°C. B7. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé anionique substitué Al et de citrate [000377] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé anionique substitué Al]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 9,3 nnM de citrate, les différents réactifs sont additionnés dans les précisées ci-dessous et dans l'ordre suivant Composé lyophilisé (composé anionique substitué Al) 730 mg Solution commerciale d'Humalog® 100 mL Solution de citrate de sodium à 1,188 M 783 pL [000378] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000379] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pnn et stockée à 4°C. B8. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé anionique substitué Alet de citrate [000380] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé anionique substitué Ai]/[insuline humaine] de 2,0 et une concentration de 9,3 mM de citrate, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités précisées ci-dessous et dans l'ordre suivant Composé lyophilisé (composé anionique substitué Al) 730 mg Solution commerciale d'Humulin® R 100 mL Solution de citrate de sodium à 1,188 M 783 pL [000381] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000382] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B9. Préparation d'une solution d'insuline aspart à 100 UI/mL en présence du 35 composé anionique substitué Al et de citrate [000383] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé anionique substitué Al]/[insuline aspart] de 2,0 et une concentration de 9,3 mM de citrate, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités précisées ci-dessous et dans l'ordre suivant Composé lyophilisé (composé anionique substitué Al) 730 mg Solution commerciale de Novolog® 100 mL Solution de citrate de sodium à 1,188 M 783 pL [000384] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000385] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pnn et stockée à 4°C. B10. Préparation d'une solution d'insuline glulisine à 100 UI/mL en présence 10 du composé anionique substitué Alet de citrate [000386] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé anionique substitué Al]/[insuline glulisine] de 2,0 et une concentration de 9,3 mM de citrate, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités précisées ci-dessous et dans l'ordre suivant 15 Composé lyophilisé (composé anionique substitué Al) 730 mg Solution commerciale d'Apidra® 100 mL Solution de citrate de sodium à 1,188M 783 pL [000387] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000388] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C 20 Exemple B11 : préparation d'une solution de composé anionique substitué Al à 315 mg/mL [000389] Le composé anionique substitué Al obtenu dans l'exemple Al est lyophilisé. Une quantité de lyophilisat est solubilisée dans l'eau pour injection de sorte à obtenir 25 une solution à 360 mg/mL à pH 7,5 de composé anionique substitué Al. Partie C: Test de solubilisation de l'insuline humaine à son point isoélectrique [000390] L'insuline humaine a un point isoélectrique de 5,3. A un pH de 5,3, l'insuline humaine précipite a une concentration supérieure ou égale à 10 UT/mi (0,36 mg/mL). 30 Un test démontrant une interaction entre l'insuline humaine et les composés anioniques substitués au point isoélectrique a été effectué. Si une interaction existe entre l'insuline humaine et le composé anionique substitué, il est possible alors de solubiliser l'insuline humaine à son point isoélectrique. [000391] Une solution d'insuline humaine à 500 UI/mL est préparée. Un mélange entre 35 une solution d'insuline humaine et la solution de composé anionique substitué Al préparée à l'exemple B11 est effectué pour mener à une solution contenant 100 UI/mL d'insuline humaine et la concentration désirée en composé anionique Al. Le pH est ajusté à pH 5,3 par ajout d'acide chlorhydrique ou d'hydroxyde de sodium en fonction du pH atteint à la suite du mélange entre le composé anionique substitué Al et la solution d'insuline humaine. [000392] L'aspect de la solution est documenté. Si la solution est turbide, le composé anionique substitué Al à la concentration testée ne permet pas la solubilisation de l'insuline humaine à son point isoélectrique. Si la solution est limpide, le composé anionique substitué Al permet la solubilisation de l'insuline humaine à la concentration testée. De cette façon, une estimation de la concentration en composé anionique substitué Al nécessaire pour solubiliser l'insuline humaine à son point isoélectrique peut être déterminée. Plus cette concentration est basse plus l'affinité du composé anionique substitué Al pour l'insuline humaine est importante. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 1. Solution Insuline humaine seule (100 UI/ml) Insuline humaine (100 UI/ml) et composé anionique substitué Al (10 mg/m1) Insuline humaine (100 UI/ml) et compose anionique substitué Al (50 mg/mi) Tableau 1 Aspect Visuel Turbide Turbide Limpide [000393] Les résultats montrent que le composé anionique substitué Al permet la solubilisation de l'insuline humaine au Pi à une concentration de 50 mg/mL signe de la formation d'un complexe entre l'insuline humaine à son point isoélectrique et le composé anionique substitué Al. 51 REVENDICATIONS1. Composition, en solution aqueuse, comprenant de l'insuline sous forme hexamèrique, au moins un composé anionique substitué et au moins un composé polyanionique, ledit composé anionique substitué étant constitué d'un nombre discret n compris entre 1 et 8 d'unité(s) saccharidique(s) identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, ladite unité saccharidique ou l'une desdites unités saccharidiques étant sous forme ouverte, oxydée ou réduite, ledit composé comportant des groupes carboxyles salifiables et ledit composé anionique substitué portant sur son bout de chaîne réducteur au moins un radical AA issu d'un acide aminé aromatique comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué, ou d'un dérivé d'acide aminé aromatique comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, ladite formule I représentant l'unité saccharidique sous forme ouverte dans laquelle au plus l'un des R2r R3, R4I R6 représente un squelette saccharidique formé d'un nombre discret d'unités saccharidiques fermées : dans laquelle : 1) Z est soit un radical -C=0-, soit un radical -0-12-, 2) X est soit un radical -C=0-, soit un radical -CH2-, 3) R5 est soit un radical -OH, soit un radical -f-[A]-COOH, 52 3020952 4) R2, R3, R4, R6 identiques ou différents sont choisis dans le groupe constitué par les radicaux -011, -f-[A]-COOH et au plus un des R2, R3, R4, R6 est un radical issu d'un squelette saccharidique formé d'un nombre discret n-1 compris entre 1 et 7 (1 5. n-1 5 7) d'unités saccharidiques fermées identiques ou différentes dont les fonctions hydroxyles sont substituées ou non substituées par un radical -f-[A]-COOH, 5) -[A]- est un radical au moins divalent comprenant de 1 à 4 atomes de carbone choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles -(CH2)x1 6) f est choisie dans le groupe constitué par les fonctions éther, carbamate, ou 15 amide ; 7) R1 est un radical -N(1-)s(LE]-(o-[AA])Ot ou -N(L)s[AA] - le bras de liaison -E- est un radical au moins divalent comprenant de 1 à 10 atomes de carbone comprenant éventuellement au moins un hétéroatome choisi parmi 0, N et S, et éventuellement porteur de fonctions 20 carboxyle, et/ou -N(L),-([E]-(o-)u) est issu d'un acide aminé, d'une diamine, d'un amino-alcool, d'une amine diacide, d'une triamine, d'une tétraaminne, d'un amino-diol ou d'un amino-triol comprenant de 2 à 12 atomes de carbone dont les fonctions amines sont primaires et/ou secondaires; - -[AA] est un radical issu d'un acide aminé aromatique comportant un 25 phényle ou un indole, substitué ou non substitué, ou d'un dérivé d'acide aminé aromatique comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué, - o est une fonction amide, carbamate ou carbamide, - u = 1, 2 ou 3 et 30 - lorsque R1 est un radical -N(1-)5([E]-(0-[AA])Ot et - lorsque X est un radical -C=0- alors 0 S = 0 OU 1, t = 1 ou 2 et s+t = 2 ; L est choisi dans le groupe constitué de -H, et 53 3020952 un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et - lorsque X est un radical -CH2-, alors o s = 0, 1 ou 2, t = 1 ou 2 et s+t = 2 ou 3 ; 5 o si s = 1, L est choisi dans le groupe constitué de -H, et -H et/ou -[A]-COOH si f telle que définie au point 6) est une fonction éther, -H et/ou-CO-NH-[A]-COOH si f telle que définie au 10 point 6 est une fonction carbamate, et un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et o si s = 2, L est choisi dans le groupe constitué de : -H, et 15 - -H et/ou -[A]-COOH si f telle que définie au point 6) est une fonction éther, et un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et lorsque R1 est un radical -N(L)s[AA] et 20 - lorsque X est un radical -C=0- alors s = 1 et L est choisi dans le groupe constitué de : -H, - un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, 25 - lorsque X est un radical -CH2-, alors s = 1 ou 2 et o Si s = 1, L est choisi dans le groupe constitué de : -H, et 54 3020952 -H et/ou -[A]-COOH si f telle que définie au point 6) est une fonction éther, -H et/ou-CO-NH-[A]-COON si f telle que définie au point 6) est une fonction carbamate, et 5 - un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et o si s = 2, L est choisi dans le groupe constitué de - -H, et -H et/ou -[A]-COOH si f telle que définie au point 6) 10 est une fonction éther, et un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et le degré de substitution, représenté par p, est le nombre de fonctions carboxylates par unité saccharidique, lesdites fonctions carboxylates étant éventuellement des 15 fonctions carboxylates naturellement présentes sur les unités saccharidiques, étant issues de la substitution par des radicaux -[A]-COOH et/ou des radicaux -[AA] et 6 p 0,1, et les fonctions acides étant sous forme de sels de cations alcalins choisis dans le groupe constitué par Na + et K. 20 3. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 2, caractérisée en ce que le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, dans laquelle le radical -[AA] est issu d'un acide aminé aromatique comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué, ou d'un dérivé d'acide aminé aromatique 25 comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué. 4. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, dans laquelle le radical -[AA] est issu d'un acide aminé aromatique comportant un phényle 30 ou un indole, substitué ou non substitué choisi dans le groupe constitué par la phénylalanine, l'alpha-méthyl phénylalanine, la 3,4-dihydroxyphénylalanine, l'alpha phénylglycine, la 4-hydroxy phénylglycine, la 3,5-phénylglycine, la tyrosine, l'alphaméthyl tyrosine, la 0-méthyl tyrosine et le tryptophane. 55 3020952 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, dans laquelle le radical -f-[A]-COOH est choisi dans le groupe constitué par .les 5 enchainements suivants, f ayant la signification donnée ci-dessus : OH ou leur sels de cations alcalins choisis dans le groupe constitué de Na + et K. 10 6. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, caractérisée en ce que le composé anionique substitué choisi parmi les composés de formule I, a un degré de substitution p compris dans l'intervalle 3,5kpk0,1. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce 15 que le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, dans laquelle au plus un des R2, R3r R4, R6 est un radical issu d'un squelette saccharidique formé d'un nombre discret n-1 d'unités saccharidiques identiques ou différentes et lesdites unités saccharidiques sont choisies dans le groupe constitué par les pentoses, les hexoses, les acides uroniques et les N-acétylhexosamines. 20 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, dans laquelle I"unité saccharidique sous forme ouverte est issue d'une unité saccharidique choisie dans le groupe constitué par les pentoses, les hexoses, les acides uraniques et 25 les les N-acétylhexosamines. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, dans laquelle le radical R1 est choisi parmi les radicaux de formule -N(L),-([E]-(o-[AA]u)t. 30 10. Composition selon la revendication 9, caractérisée en ce que le radical -N(L),- ([E]-(0-[AAL)t est choisi parmi les radicaux dans lesquels -N(L),-([E]-(o-)u)- est un 56 3020952 radical au moins divalent issu d'un acide aminé comprenant de 2 à 12 atomes de carbone 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en 5 ce que Le composé anionique substitué est choisi parmi les composés de formule I, dans laquelle R1 est choisi parmi les radicaux de formule -N(L)s[AA]. 12. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le composé anionique substitué est choisi parmi les composés 10 de formule IV : XR1 R2 Formule IV dans laquelle 15 R est -OH ou -f-[A]-COOH. 13. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les ratios molaires composé anionique substitué/insuline sont compris entre 0,6 et 75. 20 14. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'insuline est l'insuline humaine. 15. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, 25 caractérisée en ce que l'insuline est une insuline analogue. 16. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le composé polyanionique présente une affinité pour le zinc inférieure à l'affinité de l'insuline pour le zinc et une affinité pour le calcium définie par 30 une constante de dissociation Kdca = [composé PNP]' [Ca21s/[(composé PNP)r-(Ca2+)s] est inférieure ou égale à 10-1'5. 57 3020952 17. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le composé polyanionique est une molécule anionique choisie dans le groupe constitué de l'acide citrique, l'acide aspartique., l'acide glutamique, 5 l'acide malique, l'acide tartrique, l'acide succinique, l'acide adipique, l'acide oxalique, le phosphate, les polyacides phosphoriques, comme le triphosphate et leur sels de Na, K+, Ca2+ ou Mg2+. 18. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisée en 10 ce que le composé polyanionique est un polymère anionique choisi dans le groupe constitué de l'acide dextraneméthylcarboxylique, l'acide polyglutamique, l'acide polyaspartique, le PAA (acide polyacrylique), l'alginate, l'acide hyaluronique, les polymères à base d'acide glucuronique ou à base d'acide galacturonique et leur sels de Na, e, Ca2+ ou Mg2+. 15 19. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisée en ce que le composé polyanionique est choisi parmi les composés anioniques constitués d'un squelette saccharidique formé d'un nombre discret u compris entre 1 et 8 (1 20. Méthode de préparation d'une formulation d'insuline humaine ayant une 25 concentration en insuline comprise entre 240 et 3000 pM (40 et 500 UI/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à celui de la formulation de référence à la même concentration en insuline en l'absence de composé anionique substitué et de composé polyanionique caractérisée en ce qu'elle comprend :(1) une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, 30 ledit composé anionique substitué étant constitué d'un nombre discret n compris entre 1 et 8 d'unité(s) saccharidique(s) identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, ladite unité saccharidique ou l'une desdites unités saccharidiques étant sous forme ouverte, oxydée ou réduite, ledit composé comportant des groupes carboxyles salifiables et ledit 58 3020952 composé anionique substitué portant sur son bout de chaîne réducteur au moins un radical AA issu d'un acide aminé aromatique comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué, ou d'un dérivé d'acide aminé aromatique comportant un phényle ou un 5 indole, substitué ou non substitué, et (2) une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. 21. Méthode de préparation d'une formulation d'insuline analogue ayant une 10 concentration en insuline comprise entre 240 et 3000 pM (40 et 500 UI/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à celui de la formulation de référence à la même concentration en insuline en l'absence de composé anionique substitué et de composé polyanionique caractérisée en ce qu'elle comprend (1) une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, 15 ledit composé anionique substitué étant constitué d'un nombre discret n compris entre 1 et 8 d'unité(s) saccharidique(s) identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, ladite unité saccharidique ou l'une desdites unités saccharidiques étant sous forme ouverte, oxydée ou réduite, ledit 20 composé comportant des groupes carboxyles salifiables et ledit composé anionique substitué portant sur son bout de chaîne réducteur au moins un radical AA issu d'un acide aminé aromatique comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué, ou d'un dérivé d'acide aminé aromatique comportant un phényle ou un 25 indole, substitué ou non substitué, et (2) une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. 22. Formulation pharmaceutique comprenant une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, caractérisée en ce que la concentration en 30 insuline est comprise entre 240 et 3000 pM (40 à 500 UI/mL). 59 3020952 23. Composé anionique substitué choisi parmi les composés de formule I, ladite formule I représentant une unité saccharidique sous forme ouverte dans laquelle au plus l'un des R2, R3; R4, R6 représente un squelette saccharidique formé d'un nombre discret d'unités saccharidiques fermées : 5 dans laquelle : 1) Z est soit un radical -C=0-, soit un radical -C1-12-, 10 2) X est soit un radical -C=0-, soit un radical -0-12-, 3) R5 est soit un radical -OH, soit un radical -f-[A]-COOH, 4) R2, R3/ R4, R6 identiques ou différents sont choisis dans le groupe constitué par les radicaux -OH, -f-[A]-COOH et au plus un des R2, R3r R4, R6 est un radical issu d'un squelette saccharidique formé d'un nombre discret n-1 15 compris entre 1 et 7 (1 5 n-1 5 7) d'unités saccharidiques fermées identiques ou différentes dont les fonctions hydroxyles sont substituées ou non substituées par un radical -f-[A]-COOH, 5) -[A]- est un radical au moins divalent comprenant de 1 à 4 atomes de carbone choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles -(0-12)x- 20 1 5 x 5 4, les radicaux comprenant au moins un hétéroatome choisi parmi 0, N et S et les radicaux porteurs de fonctions carboxyles et/ou -f-[A]- - COOH est issu d'un acide aminé ou d'un alcoolacide, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone, et est lié aux unités saccharidiques du composé par une fonction f; 25 6) f est choisie dans le groupe constitué par les fonctions éther, carbamate, ou amide ; 7) R1 est un radical -N(L)s([E]-(0-[AA])u)t ou -N(L)[AA] - le bras de liaison -E- est un radical au moins divalent comprenant de 1 à 10 atomes de carbone comprenant éventuellement au moins un 30 hétéroatome choisi parmi 0, N et S, et éventuellement porteur de fonctions carboxyle, et/ou -N(L),-([E]-(o-)u) est issu d'un acide aminé, d'une diamine, d'un amino-alcool, d'une amine diacide, d'une triamine, d'une tetraamine, 60 3020952 d'un amino-diol ou d'un amino-triol comprenant de 2 à 12 atomes de carbone dont les fonctions amines sont primaires et/ou secondaires; - -[AA] est un radical issu d'un acide aminé aromatique comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué, ou d'un dérivé d'acide 5 aminé aromatique comportant un phényle ou un indole, substitué ou non substitué, - o est une fonction amide, carbamate ou carbamide, - u = 1, 2 ou 3 et - lorsque R1 est un radical -N(L)s([E]-(0-[AA])Ot et 10 - lorsque X est un radical -C=0- alors o s = 0 ou 1, t = 1 ou 2 et s+t = 2 ; o L est choisi dans le groupe constitué de Il -H, et - un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 15 à 4 atomes de carbone, et lorsque X est un radical -CH2-, alors o s = 0, 1 ou 2, t = 1 ou 2 et s+t = 2 ou 3 ; o Si s = 1, L est choisi dans le groupe constitué de - -H, et 20 - -H et/ou -[A]-COOH si f telle que définie au point 6) est une fonction éther, - -H et/ou-CO-NH-[A]-COOH si f telle que définie au point 6 est une fonction carbamate, et - un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 25 à 4 atomes de carbone, et o si s = 2, L est choisi dans le groupe constitué de : - -H, et - -H et/ou -[A]-COOH si f telle que définie au point 6) est une fonction éther, et 30 - un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et - lorsque R1 est un radical -N(L)s[AA] et lorsque X est un radical -C=0- alors s = 1 et L est choisi dans le groupe constitué de : 35 - - un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, - lorsque X est un radical -CH2-, alors s = 1 ou 2 et 61 3020952 o si s = 1, L est choisi dans le groupe constitué de : - -H, et - -H et/ou -[A]-COOH si f telle que définie au point 6) est une fonction éther, 5 - -H et/ou-CO-NH-[A]-COOH si f telle que définie au point 6) est une fonction carbamate, et - un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et Sio s = 2, L est choisi dans le groupe constitué de 10 - -H, et - -H et/ou -[A]-COOH si f telle que définie au point 6) est une fonction éther, et - un radical alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, et 15 le degré de substitution, représenté par p, est le nombre de fonctions carboxylates par unité saccharidique, lesdites fonctions carboxylates étant éventuellement des fonctions carboxylates naturellement présentes sur les unités saccharidiques, étant issues de la substitution par des radicaux -[A]-COOH et/ou des radicaux -[AA] et 6 k p 0,1, 20 et les fonctions acides étant sous forme de sels de cations alcalins choisis dans le groupe constitué par Na + et K.