Brevet FR3005062A1 — publié le 20141031

NOUVELLE ALGUE RADIORESISTANTE DU GENRE COCCOMYXA L'invention est relative à de nouvelles algues et à leur utilisation pour le captage de métaux à partir de milieux aqueux, et notamment de milieux radioactifs. Des effluents radioactifs sont produits principalement par les centrales de production d'électricité nucléaire. Il s'agit principalement des eaux des piscines d'entreposage de combustible usé, des eaux des bassins de décontamination, des eaux des circuits de refroidissement des installations nucléaires, ou encore des effluents ultimes rejetés dans l'environnement, qui finissent par contenir des composés radioactifs, du fait de l'activation de composés inactifs par les rayonnements, ou du relargage et de la dissolution de composés radioactifs. D'autres sources d'effluents radioactifs sont la médecine nucléaire, les hôpitaux réalisant des traitements radiochimiques, les laboratoires de recherche utilisant des matériaux radioactifs, ainsi que certaines industries non nucléaires (par exemple l'extraction des terres rares). Diverses méthodes physiques et chimiques sont utilisées pour purifier les effluents, notamment les eaux, contenant des composés radioactifs. Mais elles ont des coûts de fonctionnement et d'équipement importants, demandent une maintenance lourde et génèrent des volumes importants de déchets radioactifs. De plus, leur champ d'application est souvent limité. Par exemple, des résines échangeuses d'ions sont utilisées pour maintenir une faible conductivité dans les eaux des installations nucléaires. Elles se chargent en ions radioactifs et sont entreposées dans l'attente d'une filière de retraitement adaptée lorsqu'elles sont saturées ou stockées dans des conditions mettant en oeuvre des composés toxiques ou très réactifs. Par ailleurs, il existe des méthodes biologiques utilisant par exemple des bactéries, des champignons, des levures ou des plantes pour purifier des milieux contaminés (effluents industriels, milieux naturels, etc.) par des produits toxiques (non radioactifs ou radioactifs). Ces méthodes utilisent des organismes vivants pour concentrer, assimiler, rendre moins toxiques (par modification de la forme chimique) des composés polluants ou de la biomasse non-vivante ainsi que des dérivés provenant d'organismes vivants pour biosorber les polluants. Les méthodes biologiques ont en général un champ d'application plus large que les méthodes physiques et chimiques. Elles ne nécessitent pas l'ajout de réactif ou de produit chimique et permettent en général un traitement à plus faible coût, d'où leur intérêt 30 économique. Les plantes en particulier sont de bons épurateurs de sols ou d'eaux car elles possèdent tout un système de métabolites, protéines, enzymes, mécanismes d'import, canaux membranaires, structure interne, etc., qui les rendent capables selon les cas d'immobiliser des composés toxiques, de les chélater à l'extérieur ou à l'intérieur de la plante, de les incorporer en plus ou moins grande quantité via des voies d'import spécifiques ou non, de les séquestrer à l'intérieur des cellules, de modifier leur spéciation pour les rendre inoffensifs ou moins toxiques, de les rendre moins solubles, de les stocker sous forme non toxique dans la vacuole, etc. Des études ont montré que certains micro-organismes étaient capables de concentrer par biosorption des ions métalliques, tels que Ag, Al, Au, Co, Cd, Cu, Cr, Fe, Hg, Mn, Ni, Pb, Pd, Pt, U, Th, Zn, etc., dans des solutions diluées (White et al., International Biodeterioration & Biode gradation, 35: 17-40, 1995 ; Brevet US 6,355,172). La biosorption est la capacité de la biomasse à fixer des métaux lourds au moyen de mécanismes physico- chimiques, non actifs métaboliquement, par des interactions avec les groupements fonctionnels de composés pariétaux situés à la surface des cellules. Par exemple, il a été proposé d'utiliser des bactéries et des mélanges de micro-organismes pour biosorber non sélectivement des métaux lourds (Brevet US 7,479,220 ; Demande PCT WO 03/011487). D'autres méthodes utilisent de la biomasse morte ou des composés dérivés 15 provenant de la culture d'organismes vivants pour dépolluer des milieux contaminés en métaux. Les processus mis en jeu sont des mécanismes physico-chimiques, inactifs biologiquement, tels l'échange d'ions par exemple avec les polysaccharides présents dans les parois cellulaires, la complexation, ou l'adsorption. La biomasse dérivée d'algues, par exemple de leurs parois cellulaires, a été 20 utilisée pour épurer des métaux contenus dans des effluents liquides (Brevet US 4,769,223; Demande PCT WO 86/07346 ; Brevet US 5,648,313 ; Demande PCT WO 2006/081932). Pour le traitement de milieux pollués par des composés radioactifs, les méthodes faisant appel à des organismes vivants sont peu nombreuses. En effet, dans le cas d'eaux contaminées par des composés radioactifs ou d'eaux situées au voisinage de sources 25 radioactives, il est nécessaire d'utiliser des organismes radiotolérants ou radiorésistants, qui soient capables de résister à la toxicité chimique et radiologique des contaminants, mais aussi de fixer ces contaminants en quantité suffisante pour être utilisés dans le cadre d'un procédé industriel de décontamination. Les procédés pour la biodécontamination des radionucléides dans les 30 effluents nucléaires sont inexistants. Cependant, l'accident nucléaire de Fukushima du 11 mars 2011 a conduit le Japon à envisager ce type de solution à partir d'un matériau constitué d'une microalgue déshydratée, Parachlorella sp. binos (WO 2010/024367). Cinq grammes de cette microalgue ont permis de décontaminer 1 litre d'eau de composition similaire à celle des réacteurs de Fukushima. Les Etats-Unis d'Amérique s'intéressent depuis longtemps à la 35 possibilité d'épurer les radionucléides par des méthodes biologiques. L'utilisation d'une algue, Closterium monilifèrum, qui incorpore le strontium, a été envisagée, mais ni la capacité d'accumulation d'isotopes radioactifs ni la radiorésistance n'ont été testées pour cette algue (Krej ci M.R. et al., ChemSusChem, 4:470-473, 2011; Lovett R.A., Nature, doi:10.1038/news.2011.195, 2011). En milieu naturel, les organismes accumulant des composés radioactifs sont en général soumis à une radioactivité faible. Par exemple, immédiatement après l'accident de Tchernobyl, pour les milieux aquatiques, le débit de dose de rayonnements ionisants externe de l'eau du réservoir de refroidissement du réacteur n'a pas excédé 100 .tGy/h et la dose maximale cumulée sur 1 an était de 0,01 Gy en 1986. Le débit de dose provenant des radionucléides déposés sur les sédiments dans la rivière Pripyat, située dans la zone de 30 km autour de la centrale, est quant à lui monté ponctuellement à 0,4 mGy/h immédiatement après 10 l'accident (Kryshev et Sazykina, Journal of Environmental Radioactivity, 28 : 91-103, 1995). Dans la plupart des cas, la résistance aux rayonnements ionisants des microorganismes proposés pour dépolluer des matériaux ou des effluents contaminés par la radioactivité et/ou concentrer des composés radioactifs n'a pas été testée. En effet, ils sont utilisés pour extraire l'uranium (U) et le thorium (Th) dont l'activité des principaux isotopes 15 est faible. Par exemple, l'activité est respectivement de 0,13 et 0,8 Bq/1 pour une solution contenant 10 ilg/l de 238U ou 235U). Le Brevet US 4,320,093 propose l'utilisation de champignons du genre Rhizopus pour extraire de l'uranium ou du thorium contenu dans des effluents aqueux. Le Brevet GB 1,472,626 propose l'utilisation d'algues vertes unicellulaires mutantes obtenues par irradiation aux rayons X d'algues vertes unicellulaires préalablement 20 accoutumées à l'uranium, et le Brevet GB 1,507,003 propose l'utilisation de divers microorganismes, notamment le champignon Aspergillus niger et des Cyanobactéries de type Oscillatoria, pour concentrer l'uranium naturellement présent dans l'eau de mer. Le Brevet US 7,172,691 propose l'utilisation d'algues vivantes photosynthétiques des genres Chlorella, Scenedesmus, Oocystis, et Chlamydomonas, pour concentrer des contaminants radioactifs, et 25 notamment de l'uranium, à partir de milieux aqueux contenant une concentration d'uranium de l'ordre de 0-20 ppm, ce qui représente une activité de 260 et 1600 Bq/1 pour 238U et 235U respectivement. En comparaison, l'activité de l'eau des piscines d'entreposage d'éléments nucléaires, qui constitue le milieu de vie de la microalgue selon l'invention est d'environ 300 000 Bq/1. 30 Les organismes les plus radiorésistants décrits jusqu'à présent sont des procaryotes. L'espèce Deinococcus radiodurans possède une extraordinaire capacité de résistance aux rayonnements ionisants qui se développe sous des irradiations de 60 Gy/h et survit à des doses de 15 kGy. Mais il n'y a pas de lien entre radiotolérance et accumulation importante de 35 radionucléides ou de métaux. L'utilisation la bactérie radiorésistante Deinococcus radiodurans comme épurateur de milieux radioactifs nécessite des modifications génétiques de la bactérie pour y introduire des gènes qui lui permettront d'accumuler les métaux d'intérêt. Ainsi, il a été proposé d'utiliser des bactéries du genre Deinococcus modifiées génétiquement pour exprimer des enzymes capables de détoxifier ou de métaboliser des composés organiques, des métaux, ou des radionucléides, à des fins de bioremédiation in situ de sites de déchets nucléaires (Demande PCT WO 01/23526). Plus récemment, des bactéries de l'espèce Kineococcus radiotolerans ont été isolées et purifiées à partir d'un site de déchets radioactifs de haute activité. Ces bactéries ont été décrites comme étant capables de dégrader des contaminants organiques en présence de rayonnements ionisants dont le débit de dose est supérieur à 10 Gy/h, et leur utilisation pour la dépollution non sélective de radionucléides par biosorption a été proposée mais non montrée (Brevet US 7,160,715). Ces deux organismes présentent l'inconvénient d'être des bactéries non autotrophes, et donc de nécessiter l'apport extérieur de nutriments carbonés pour pouvoir utilisées leur culture. D'autre part, leur culture est plus sensible à la contamination que celle d'organismes autotrophes, ces derniers nécessitant un milieu de culture moins riche et moins sensible à la contamination bactérienne. Deux organismes radiotolérants et autotrophes ont été décrits. Une microalgue de la classe des Chlorophycées, qui tolère des rayonnements ionisants avec une DL50 de 6 kGy, a été étudiée (Farhi E. et al., J. Phys. Condens. Matt., 20: 104216, 2008). Une nouvelle espèce de microalgue, Coccomyxa actinabiotis, a aussi été identifiée, et tolère des rayonnements ionisants avec une DL50 de 10 kGy (Demande PCT WO 2011/098979). De tels niveaux de radiotolérance sont rares, notamment chez les algues. En général, les DL50 de résistance aux rayonnements ionisants des algues sont comprises entre 30 et 1200 Gy (Agence internationale de l'énergie atomique, AIEA, « Effects of ionizing radioation on aquatic organisms and ecosystems », Technical reports series No. 172, 1976). L'algue Coccomyxa actinabiotis décrite dans la Demande PCT WO 2011/098979 est capable de capter et de concentrer des ions métalliques radioactifs ou non en solution dans un milieu aqueux, et peut se développer en milieu radioactif. Un test d'épuration d'une piscine grandeur réelle à base de cette algue a généré par exemple, pour une efficacité équivalente, un volume de déchets de l'ordre de 100 fois moins important que les résines échangeuses d'ions utilisées dans les procédés classiques d'épuration des eaux d'installation nucléaire (Rivasseau et al., Energy Environ. Sci., 6, 1230- 1239 2013). Les Inventeurs ont à présent découvert que d'autres microalgues du genre Coccomyxa sont capables de capter et de concentrer des ions radioactifs en solution dans un milieu aqueux, et qu'en outre elles peuvent se développer en milieu radioactif. Ils ont en particulier découvert, dans les piscines de refroidissement 35 d'éléments nucléaires usés, une nouvelle espèce de Coccomyxa se développant spontanément dans cet environnement riche en rayonnements ionisants et très pauvre en éléments nutritifs. Ils ont isolé et caractérisé cette nouvelle espèce, dénommée ci-après Coccomyxa C-1R3-4C. Comme Coccomyxa actinabiotis, cette algue est à la fois radiotolérante et accumulatrice de radionucléides. Cette microalgue a été déposée selon le traité de Budapest le 29 janvier 2013 auprès de la Culture Collection of Algae and Protozoa (CCAP, Scottish Association for Marine Science, Dunstaffnage Marine Laboratory, GB-Oban, Argyll, PA37 1QA, Royaume-Uni) sous le numéro CCAP 216/26. Les algues de l'espèce Coccomyxa C-1R3-4C se caractérisent notamment en ce que leurs gènes correspondant à l'ARN ribosomique 18S-ITS1-ARN ribosomique 5.8S-ITS2-ARN ribosomique 28S (début) contiennent une séquence présentant au moins 96%, et, par ordre de préférence croissante, au moins 97%, 98%, ou 99%, d'identité avec la séquence SEQ ID NO: 1. Le pourcentage d'identité indiqué ci-dessus est calculé après alignement des séquences en utilisant l'outil BLAST®, sur une fenêtre de comparaison constituée par la totalité de la séquence SEQ ID NO: 1. Les algues de l'espèce Coccomyxa C-1R3-4C peuvent également être caractérisées en ce que la région correspondant aux ITS1-ARNr5.8S-ITS2 présente au moins 96% d'identité avec la région correspondante de la séquence SEQ ID NO: 1. Ce seuil a été estimé à 96% sur la base des observations des Inventeurs, qui montrent un maximum de 95% d'identité entre cette région chez Coccomyxa C-1R3-4C et chez d'autres Coccomyxae ainsi qu'un maximum de 88% d'identité entre les ITS1-ARNr5.8S-ITS2 des autres Coccomyxae comparés entre eux. La séquence des gènes d'ARN ribosomique de Coccomyxa C-1R3-4C se différencie notamment de celle d'autres espèces du genre Coccomyxa par la nature de ses gènes ITS1 et ITS2. Coccomyxa C-1R3-4C peut croître en milieu radioactif, ce qui lui permet de capter et métaboliser des composés radioactifs autres que des métaux, en plus de pouvoir capter et concentrer des ions métalliques, radioactifs ou non, en solution dans un milieu aqueux radioactif ou non. Des composés radioactifs autres que des métaux sont par exemple 3H ou 1 4C . Ce dernier est métabolisable sous forme minérale de CO2, carbonate ou hydrogénocarbonate au cours de la photosynthèse ou sous forme organique telle que l'acétate dans divers processus métaboliques des algues. Les Inventeurs ont également découvert qu'une autre espèce de Coccomyxa, Coccomyxa chodatii (souche SAG n° 216-2), également radiotolérante, est capable de concentrer des radionucléides. La présente invention a en conséquence pour objet l'utilisation d'algues vertes du genre Coccomyxa, et notamment de l'espèce Coccomyxa C-1R3-4C définie ci- dessus et/ou de Coccomyxa chodatii, pour capter au moins un élément, radioactif ou non, choisi parmi l'antimoine (Sb) et les métaux suivants : Cs, Ag, Co, Mn, Sr, Cu, Cr, Zn, Ni, Fe, actinides, tels que l'uranium, lanthanides, et terres rares, telles que Sc, Y, La, Ce, Pr, Nd, Pm, Sm, Eu, Gd, Tb, Dy, Ho, Er, Tm, Yb, Lu, et/ou pour capter au moins un des radioisotopes 14C et 3H, à partir d'un milieu aqueux contenant ledit élément et/ou ledit radioisotope en solution. Plus particulièrement, la présente invention a pour objet un procédé de captage d'au moins un élément, radioactif ou non, choisi parmi Cs, Ag, Co, Mn, Sr, Cu, Cr, Zn, Ni, Fe, Sb, les actinides, les lanthanides et les terres rares, et/ou au moins un des radioisotopes 14C et 3H, à partir d'un milieu aqueux contenant ledit élément et/ou ledit radioisotope en solution, caractérisé en ce que ledit captage est effectué en incubant dans ledit milieu aqueux des algues vertes du genre Coccomyxa, en particulier Coccomyxa C-1R3-4C et/ou Coccomyxa chodatii. De manière avantageuse, ledit élément est un métal choisi parmi Ag, Co, Cs, U, Mn, Cu et Sr, et les terres rares. Selon un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un procédé de captage d'au moins un élément, radioactif ou non, choisi parmi Sr et Cu à partir d'un milieu aqueux contenant ledit élément en solution, caractérisé en ce que ledit captage est effectué en incubant, dans ledit milieu aqueux, des algues vertes unicellulaires du genre Coccomyxa. Selon un mode de mise en oeuvre préféré de la présente invention, ledit milieu aqueux est un milieu radioactif, c'est-à-dire un milieu dans lequel lesdites algues sont soumises à un débit de dose pouvant aller de quelques i_tGy/h jusqu'à quelques kGy/h. Selon une disposition préférée de ce mode de mise en oeuvre, l'élément à capter est un métal choisi 20 parmi ceux indiqués ci-dessus, sous forme d'isotope stable ou radioactif, ou sous forme de mélange d'isotopes. Selon un autre mode de mise en oeuvre préféré de la présente invention, ledit milieu aqueux est un milieu non radioactif. L'élément à capter est de préférence un métal choisi parmi les terres rares. 25 La durée d'incubation des algues dans le milieu aqueux peut varier notamment selon le ou les éléments concerné(s), d'une part, et la nature du milieu aqueux à partir duquel le captage doit être effectué. Elle sera généralement d'au moins 1 heure, et peut aller jusqu'à plusieurs mois, voire plusieurs années. Par exemple, si l'on souhaite capter Ag ou Cs ou U, une durée d'incubation d'environ 24 heures pourra être suffisante pour en capter 30 la majeure partie. La durée maximale d'incubation qui peut être envisagée dépendra en fait principalement de la capacité de croissance et de survie des algues dans le milieu aqueux. En présence de lumière et de gaz carbonique (introduit par contact avec l'air ambiant, agitation des cultures ou bullage), les algues du genre Coccomyxa, et notamment de 35 l'espèce Coccomyxa C-1R3-4C et Coccomyxa chodatii, peuvent croître et vivre pendant de très longues périodes dans de l'eau faiblement minéralisée (conductivité 1 à 2 gS/cm), à un pH de 6 à 7 et une température de 20 à 30°C. Ces algues vertes ayant besoin de lumière pour réaliser la photosynthèse et fabriquer leur matière organique, leur croissance cesse lorsqu'elles sont placées à l'obscurité. Ainsi, selon un mode de mise en oeuvre du procédé conforme à la présente invention, la croissance des algues vertes de l'espèce Coccomyxa C-1R3-4C et Coccomyxa chodatii peut être maîtrisée en contrôlant l'illumination du milieu aqueux comprenant lesdites algues. Les algues Coccomyxa C-1R3-4C peuvent en outre croître et vivre pendant plusieurs années dans un milieu faiblement radioactif, où elles sont soumises à une irradiation inférieure ou égale à 0,1 mGy/h. Pour la mise en oeuvre du procédé conforme à l'invention, les algues peuvent être utilisées en suspension dans le milieu aqueux à partir duquel le captage doit être effectué, sous agitation pour éviter leur agglomération. Elles peuvent également être fixées sur un support solide, lisse, poreux, ou sous forme de billes, placé dans ledit milieu aqueux. Le procédé peut être déporté, c'est-à-dire que les algues sont mises en contact avec le milieu à dépolluer dans une enceinte séparée de l'installation nucléaire, ou mis en oeuvre in situ; dans ce dernier cas les algues sont alors implantées directement dans le milieu à dépolluer. Dans le cadre de la présent invention les termes « dépollution » et « décontamination » sont synonymes et peuvent être employés l'un à la place de l'autre pour des éléments radioactifs ou non.Dans le cas d'un procédé de captage ou de décontamination in situ, les algues peuvent séjourner dans l'installation tant qu'elles ne gênent pas les opérations. A titre indicatif, leur croissance peut être maîtrisée par l'intensité d'éclairement (obscurité ou faible illumination), ou le choix de la longueur d'onde des lampes (par exemple lumière inactinique jaune-vert). Une filtration des eaux permet également de maîtriser leur croissance en captant les algues en suspension dans l'eau. S'il s'avère nécessaire de les éliminer, la destruction définitive des algues pourra être obtenue par oxydation, par exemple avec de l'eau oxygénée à 4 g/1 pendant 1 à 7 jours. Cette opération s'accompagne d'un relargage des métaux, et devra donc préférentiellement s'effectuer par section dans les installations, avec récupération des effluents concentrés en métaux. Dans le cas d'un procédé déporté ou d'un procédé in situ, à la fin de l'incubation, les algues ayant capté les métaux sont récoltées par des moyens conventionnels (filtration, décantation, centrifugation, etc.). Elles peuvent ensuite être éliminées comme des déchets éventuellement après avoir été séchées et/ou brûlées, sans extraction préalable des métaux qu'elles contiennent. Avantageusement, on peut récupérer les éléments captés par les algues afin de recycler ces éléments. Cette récupération peut s'effectuer par tous moyens appropriés. En particulier, les éléments peuvent être récupérés après destruction des algues. Cette destruction peut par exemple être effectuée par lyse des algues, avantageusement par oxydation, par exemple avec de l'eau oxygénée à 4 g/1 pendant 1 à 7 jours. Elle peut aussi être effectuée par incinération des algues. Les éléments peuvent être récupérés par ajout d'un complexant tel que l'EDTA (éthylène diamine tétraacétique acide) ou par ajout d'acide. Le procédé conforme à l'invention peut être mis en oeuvre dans tous les cas où l'on souhaite extraire des éléments, radioactifs ou non, et notamment ceux mentionnés ci-dessus, d'un milieu aqueux, à des fins d'exploitation minière, ou de dépollution d'effluents aqueux, notamment d'effluents radioactifs. Outre leur forte capacité à capter et concentrer spécifiquement les éléments mentionnés ci-dessus (Cs, Ag, Co, Mn, Sr, Cu, Cr, Zn, Ni, Fe, Sb, les actinides, les lanthanides et terres rares, telles que Sc, Y, La, Ce, Pr, Nd, Pm, Sm, Eu, Gd, Tb, Dy, Ho, Er, Tm, Yb, Lu, qu'ils soient radioactifs ou non), les algues du genre Coccomyxa, et notamment de l'espèce Coccomyxa C-1R3-4C et Coccomyxa chodatii, possèdent également des propriétés de captage non-spécifique d'autres éléments, en particulier des métaux, notamment du fait de leur mucilage extracellulaire constitué de polysaccharides, qui ont la propriété de complexer les cations. Le procédé conforme à l'invention est donc particulièrement approprié à la dépollution et à la décontamination de milieux aqueux ou de sols (tourbières, marais) contaminés par des métaux, radioactifs ou non, et plus particulièrement de milieux radioactifs, tels que l'eau des piscines de stockage ou encore l'eau légère des circuits de refroidissement secondaires de centrales ou de réacteurs nucléaires, ou les effluents de centrales nucléaires rejetés dans l'environnement, ou les effluents issus du milieu hospitalier. La présente invention peut être mise en oeuvre non seulement avec des algues vertes unicellulaires de l'espèce Coccomyxa C-1R3-4C, ou Coccomyxa chodatii, ou 25 une autre algue appartenant au genre Coccomyxa, ou leurs mélanges, mais également avec un mélange de microorganismes comprenant au moins une algue verte unicellulaire appartenant au genre Coccomyxa, en particulier une microalgue de l'espèce Coccomyxa C-1R3-4C ou de l'espèce Coccomyxa chodatii, et au moins un microorganisme, notamment une bactérie, un champignon, une levure, une autre algue unicellulaire, et/ou une plante multicellulaire, de 30 préférence radiorésistant ou radiotolérant, capable de concentrer des ions métalliques en solution et/ou de capter et métaboliser des composés radioactifs autres que des métaux (par exemple 3H ou 14C). Les microorganismes et plantes multicellulaires utilisables en combinaison avec les algues vertes unicellulaires du genre Coccomyxa sont notamment ceux et celles cités ci-dessus, en particulier ceux et celles étant radiorésistants ou radiotolérants. 35 Dans le cas où la présente invention est appliquée à un milieu aqueux radioactif, le temps d'incubation du mélange de microorganismes dépendra de la résistance individuelle des microorganismes composant le mélange. De même, les conditions de culture pourront être adaptées afin de favoriser la croissance d'un ou plusieurs microorganismes constituant le mélange. La présente invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples illustrant l'isolement et la caractérisation de l'espèce Coccomyxa C-1R3-4C, ainsi que son utilisation pour décontaminer un milieu aqueux radioactif, et la caractérisation des propriétés de captage de radionucléides de Coccomyxa chodatii. EXEMPLE 1: ISOLEMENT ET CARACTÉRISATION DE COCCOMYXA C-1R3-4C La microalgue a été récoltée dans une piscine de stockage d'éléments nucléaires usés. L'eau contenue dans cette piscine a un pH compris entre 6 et 7, une conductivité de 1 à 2 tS/cm, est en contact avec l'air ambiant et contient des éléments radioactifs dissous. Sa température varie entre 22 et 28°C et est en moyenne de 25°C. L'activité radiologique dans la piscine est très variable selon les points de mesure, faible à très forte. La présence de films de matière organique verte a été observée sur les parois et diverses surfaces de cette piscine. Des prélèvements ont été effectués et leur observation au microscope a montré qu'il s'agissait d'une micro-algue verte unicellulaire. Conditions de culture Les échantillons prélevés ont été stockés et mis en culture à la lumière, sur un milieu nutritif gélosé, dans un environnement stérile, à une température de 20 à 23°C. Le milieu nutritif est un milieu de culture BBM (Bold's Basal Medium, Sigma) pur ou dilué dans de l'eau déminéralisée. Le milieu BBM est classiquement utilisé pour la culture d'algues vertes. Le milieu de culture a un pH de 6,4. Sa composition est indiquée dans le Tableau I ci-dessous. Tableau I: Constituants en g/L BBM NaNO3 0,25 KH2PO4 0,175 K2HPO4 0,075 MgSO4, 7H20 0,075 FeSO4, 7H20 0,005 CaCl2, 2H20 0,025 NaCI 0,025 Na2EDTA 0,01 KOH 0,006 H3B04 12,86 MnCl2, 4H20 1,81 ZnSO4, 7H20 0,222 Na2Mo04, 2H20 0,39 CuSO4, 5H20 0,079 Co(NO3)2, 6H20 0,049 Des algues ont été mises en culture sur un milieu de culture BBM solide gélosé. Des colonies ont été isolées, puis diluées de manière à étaler des cellules isolées sur milieu de culture gélosé. Cette opération a été répétée cinq fois afin d'obtenir la souche 5 Coccomyxa C-1R3-4C qui a été séquencée. Un échantillon de cette culture a été déposé selon le traité de Budapest le 29 janvier 2013 auprès de la Culture Collection of Algue and Protozoa (CCAP), sous le numéro CCAP 216/26. Dans un milieu BBM liquide, les microalgues de souche Coccomyxa C-IR3- 10 4C ont cru avec une phase de croissance exponentielle. La croissance des microalgues a été mesurée par comptage de la densité cellulaire de la population algale au cours du temps sur trois échantillons d'algues cultivées en milieu BBM dilué deux fois, dans un incubateur Infors Multitron maintenu à 21±1°C, sous une agitation de 100 rpm et une illumination continue de 90±10 PAR. Le comptage est réalisé au moyen d'une cellule de Malassez sous microscope 15 (grossissement objectif x40). Les courbes de croissance sont présentées sur la Figure 1, qui montre l'évolution de la densité cellulaire de la population algale en fonction de la durée de la culture. Les microalgues de souche Coccomyxa C-1R3-4C sont capables de vivre dans une large gamme de pH en milieu liquide. Les algues ont été cultivées dans de l'eau 20 déminéralisée dont le pH a été ajusté aux valeurs cibles par ajout de HC1 ou KOH. Les cultures sont réalisées dans un incubateur Infors Multitron maintenu à 21±1°C, sous une agitation de 100 rpm et une illumination continue de 90±10 PAR. Le pH des milieux est vérifié et réajusté quotidiennement si nécessaire. L'état des algues en fonction du pH du milieu est évalué par leur rendement de photosynthèse qui est un indicateur de l'état 25 physiologique global des cellules. Le rendement de photosynthèse est mesuré en utilisant un fluorimètre PAM 103. La Figure 2 donne les valeurs du rendement de photosynthèse des microalgues en fonction de différents pH. Elle montre qu'elles peuvent vivre dans des milieux de pH 1 à pH 9 (gamme de pH testée). La Figure 2 indique que les microalgues conservent un bon état physiologique dans un milieu constitué d'eau déminéralisée et qu'elles conservent un bon état physiologique quel que soit le pH. Les microalgues de souche Coccomyxa C-1R3-4C sont également capables de croître dans une large gamme de pH en milieu liquide. La Figure 3 montre l'évolution de la densité cellulaire de la population algale en fonction du pH au fil du temps dans des milieux de pH 1 à pH 9. Les conditions de culture sont identiques à celles de la Figure 2. Le comptage de la densité cellulaire est réalisé au moyen d'une cellule de Malassez sous microscope (grossissement x40). Pour obtenir une croissance rapide et une densité de microalgues importante, on pourra se placer dans la gamme de pH 4 à 8. Caractéristiques morphologiques et biochimiques Les microalgues isolées observées en microscopie photonique et en microscopie électronique sont unicellulaires, ellipsoïdales et nucléées (Figures 4A et 4B). Les Figures 4A et 4B représentent des photographies de ces microalgues observées respectivement en microscopie photonique (microscope Zeiss binoculaire Axioplan 2, grossissement 1300) et en microscopie électronique à transmission (JEOL 1200EX et Philips CM 120. Les observations au TEM Philips CM 120 ont été réalisées au Centre Technologique 20 des Microstructures - Plateforme de l'Université Claude Bernard Lyonl ). Les microalgues renferment un chloroplaste (peut-être plusieurs) qui contient la chlorophylle et qui est le siège de la photosynthèse. D'autres organites, notamment la vacuole, occupent le reste de la cellule. Le spectre d'absorption UV-visible de cet organisme montre la présence de chlorophylle a (pic d'absorption à 663nm), chlorophylle b (pic d'absorption à 647 nm) et de 25 caroténoïdes (pic d'absorption à 470 nm). Amplification et séquençage des gènes de l'ADN ribosomal L'ADN total de la microalgue C-1R3-4C isolée comme décrit ci-dessus a été extrait en utilisant le kit de purification d'ADN génomique « Wizard Genomic DNA purification Kit » (Promega). 30 La région du génome couvrant les gènes de l'ADN ribosomal ARNr18S- ITS1-ARNr5.8S-ITS2-ARNr28S (500 premières bases) a été amplifiée par PCR. Les amorces utilisées sont EAF3 : TCGACAATCTGGTTG ATCCTGCCAG (SEQ ID NO: 2) et ITS055R : CTCCTTGGTC CGTGTTTCAAGACGGG(SEQ ID NO: 3), classiquement utilisées pour amplifier les gènes 35 des ARNr de microalgues. Les produits d'amplification obtenus en utilisant l'ADN isolé de deux cultures indépendantes ont été séquencés et sont de 3101 bases. La séquence de ces produits d'amplification est représentée à la Figure 5, ainsi que dans la liste des séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 1. Cette séquence représente la séquence de la région génomique couvrant les gènes de l'ADN ribosomal ARNr18S-ITS1-ARNr5.8S-ITS2-ARNr28S (début) de l'algue Coccomyxa C-1R3-4C. La partie correspondant à l'ARNr18S est en italique souligné, à ITS1 en gras, à l'ARNr5.8S en caractères soulignés, à ITS2 en italique, à l'ARNr28S en gras souligné. L'algorithme BLASTN (Altschul et al., Nucleic Acids Research, 25 : 3389- 3402, 1997) a été utilisé pour rechercher dans les bases de données les séquences de gènes d'ARN ribosomal présentant le maximum d'identité avec la séquence SEQ ID NO: 1. Cette recherche a fait apparaître que les espèces caractérisées les plus proches de la microalgue C-1R3-4C appartiennent au genre Coccomyxa. La comparaison des séquences correspondant à l'ARN de la petite sous- unité du ribosome (ARNr 18S) de la microalgue C-1R3-4C (1807 bp), et des autres espèces de Coccomyxa répertoriées dans les bases de données a été réalisée par alignement multiple des séquences au moyen de l'algorithme BLAST®. Le Tableau II ci-dessous présente les résultats de cette comparaison de séquences. Les séquences des autres espèces sont accessibles dans la base de données GenBank, les numéros d'accès correspondants sont également indiqués dans le Tableau II. Tableau II : Accession Description Total Query Max ident score coverage HQ317304.1 Coccomyxa rayssiae isolate UTEX273 small 3290 99% 99% subunit ribosomal RNA gene, partial sequence FN298927'1 Coccomyxa sp. CCAP 216/24 18S rRNA 3269 98% 99% gene (partial), ITS1, 5.8S rRNA gene, ITS2 and 28S rRNA gene (partial), strain CCAP 216/24 FN298926.1 Pseudococcomyxa simplex 18S rRNA gene 3264 98% 99% (partial), ITS1, 5.8S rRNA gene, ITS2 and 28S rRNA gene (partial), strain SAC 216-9a HE586518.1 Choricystis sp. GSE4G genomic DNA 3262 98% 99% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain GSE4G FR865679.1 'Chlorella' saccharophila genomic DNA 3262 98% 99% containing 18S rRNA gene, ITS1, culture collection CCAP 211/60 FN597598.1 Coccomyxa chodatii SAC 216-2 3254 98% 99% FJ946891.1 Trebouxiophyceae sp. VPL5-6 18S 3234 97% 99% ribosomal RNA gene, partial sequence FJ648514.1 Pseudococcomyxa simplex strain UTEX 274 3229 97% 99% 18S ribosomal RNA gene, complete sequence FN597599.1 Coccomyxa peltigerae SAC 216-5 3221 98% 99% HE586504.1 Pseudococcomyxa simplex genomic DNA 3195 96% 99% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain CAUP H 102 HE586513.1 Coccomyxa sp. KN-2011-E4 genomic DNA 3181 96% 99% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain E4 FN298928'1 Coccomyxa sp. CCAP 211/97 18S rRNA 3181 98% 99% gene (partial), ITS1, 5.8S rRNA gene, ITS2 and 28S rRNA gene (partial), strain CCAP 211/97 AB742451.1 Coccomyxa sp. KGU-D001 gene for 18S 3158 95% 99% ribosomal RNA, partial sequence HE586512.1 Coccomyxa sp. KN-2011-C15 genomic DNA containing 18S rRNA gene, strain C15 3129 97% 99% FR850476.1 Coccomyxa actinabiotis 18S rRNA, ITS1' 3126 98% 99% 5.8S rRNA, IT52 (CCAP 216-25) HE586505.1 Pseudococcomyxa simplex genomic DNA containing 18S rRNA gene, strain CAUP H 3109 96% 99% 103 HE586514.1 Coccomyxa sp. KN-2011-T2 genomic DNA 3103 97% 98% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain T2 AY422078.1 Paradoxia multiseta 18S small subunit ribosomal RNA gene, partial sequence 3081 93% 99% AM981206.1 Coccomyxa sp. CPCC 508 18S rRNA gene, strain CPCC 508 3077 99% 98% Accession Description Total Query Max ident score coverage AJ302939.1 Coccomyxa sp. SAG 2325 18S rRNA gene, culture collection SAG:2325 3070 99% 98% AM167525.1 Coccomyxa glaronensis 18S rRNA gene, 3061 99% 97% strain CCALA 306 HE586507.1 Ellipsoidion sp. UTEX B SNO113 genomic 3059 98% 98% DNA containing 18S rRNA gene, strain UTEX B SNO113 HE586519.1 Monodus sp. CR2-4 genomic DNA 3055 98% 98% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and TS2, strain CR2-4 FR865588.1 Chlamydomonas bipapillata genomic DNA 3053 98% 98% containing 18S rRNA gene, ITS1, culture collection CCAP 11/47 EU282454.1 Paradoxia sp. 294-GA206 18S ribosomal 3044 93% 99% RNA gene, partial sequence GQ122371'1 Trebouxiophyceae sp. KMMCC FC-10 18S ribosomal RNA gene, partial sequence 3042 92% 99% HE586506.1 Monodus sp. UTEX B SN083 genomic DNA 3035 98% 97% containing 18S rRNA gene, ITS1 and 5.8S rRNA gene, strain UTEX B SN083 HE586509'1 Coccomyxa sp. KN-2011-C10 genomic DNA containing 18S rRNA gene, strain C10 3022 97% 98% JQ946088.1 Coccomyxa sp. XDL-2012 18S ribosomal 3014 92% 99% RNA gene, partial sequence EU127471.1 Coccomyxa sp. Flensburg fjord 2 18S ribosomal RNA gene, partial sequence 3014 98% 97% FJ648513.1 Coccomyxa mucigena strain SAG 216-4 2998 97% 97% 18S ribosomal RNA gene, complete sequence HE586508.1 Coccomyxa sp. KN-2011-C4 genomic DNA 2964 96% 97% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain C4 EU127470.1 Coccomyxa sp. Flensburg fjord 1 18S ribosomal RNA gene, partial sequence 2953 97% 97% AY195970.1 Choricystis sp. AS 5-1 18S ribosomal RNA gene, partial sequence 2931 99% 96% AY197620'1 Chlorella sp. Mary 9/21 BT-10w 18S 2913 99% 96% ribosomal RNA gene, partial sequence AB080308.1 Chlorella vulgaris gene for 18S rRNA, partial sequence 2896 99% 96% EF106784.1 Chlamydomonas sp. CCMP 681 2235 86% 93% Cette comparaison de séquences montre que les espèces les plus proches de la souche C-1R3-4C sont Coccomyxa rayssiae souche UTEX273, Coccomyxa souche CCAP 216/24, Pseudococcomyxa simplex souche SAG 216-9a, Coccomyxa chodatii souche SAG 216-2, Pseudococcomyxa simplex souche UTEX 274, Coccomyxa peltigerae souche SAG 216-5, Pseudococcomyxa simplex souche CAUP H 102, Coccomyxa souche KN-2011-E4, Coccomyxa souche CCAP 211/97, ainsi que d'autres souches appartenant au genre des Coccomyxae avec 99% d'identité de séquence, puis d'autres souches appartenant toujours au genre des Coccomyxae telles que Coccomyxa souche CPCC 508 ou Coccomyxa souche SAG 2325 avec 98% d'identité de séquence, puis d'autres Coccomyxae telles que Coccomyxa glaronensis souche CCALA 306, Coccomyxa sp. Flensburg fjord 2 ou Coccomyxa mucigena souche SAG 216-4 avec 97% d'identité de séquence. Ces forts scores d'identité obtenus pour la souche Coccomyxa C-1R3-4C par rapport au genre Coccomyxa sont voisins de ceux obtenus après comparaison des séquences des Coccomyxae entre elles (96-99%) et éloignés du score obtenu pour la comparaison de séquence avec une microalgue unicellulaire appartenant à un autre genre (Chlamydomonas sp. CCMP681 (EF106784.1), identité de 93%). Cela indique l'appartenance de la souche CCAP 216/26 au genre Coccomyxa. Par ailleurs, la comparaison des séquences de la région des ITS de la souche C-1R3-4C avec celles des autres Coccomyxae a également été réalisée. Le Tableau III ci-dessous présente les résultats de cette comparaison de séquence des régions ITS1- ARNr5.8S-ITS2. Les séquences des autres espèces sont accessibles sur la base de données GenBank, les numéros d'accès correspondants sont également indiqués dans le Tableau III. Tableau III : Accession Description Total Query Max ident score coverage AY293967.1 Coccomyxa solarinae var. saccatae internai 1035 99% 95% transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internai transcribed spacer 2, complete sequence AY293966.1 Coccomyxa solarinae var. bisporae internai 1030 99% 95% transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internai transcribed spacer 2, complete sequence AY293965.1 Coccomyxa solarinae var. croceae internai 1009 99% 94% transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internai transcribed spacer 2, complete sequence HE586513.1 Coccomyxa sp. KN-2011-E4 genomic DNA 1002 100% 95% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain E4 HE586545.1 Coccomyxa sp. KN-2011-E5 genomic DNA 985 99% 94% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain E5 HE586551.1 Coccomyxa sp. KN-2011-T5 genomic DNA containing ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, 939 93% 94% strain T5 AY293964.1 Coccomyxa peltigerae var. variolosae 910 94% 94% internai transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internai transcribed spacer 2, complete sequence HQ335215.1 Coccomyxa sp. S2 internai transcribed spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene, complete sequence; and internai 745 83% 92% transcribed spacer 2, partial sequence HQ335216.1 Coccomyxa sp. S10 internai transcribed 745 83% 92% spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene, complete sequence; and internai transcribed spacer 2, partial sequence FN298926.1 Pseudococcomyxa simplex 18S rRNA gene 673 92% 95% (partial), ITS1, 5.8S rRNA gene, ITS2 and 28S rRNA gene (partial), strain SAG 216-9a HE586504.1 Pseudococcomyxa simplex genomic DNA 668 92% 94% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain CAUP H 102 FN298927.1 Coccomyxa sp. CCAP 216/24 18S rRNA 651 100% 88% gene (partial), TS1, 5.8S rRNA gene, ITS2 and 28S rRNA gene (partial), strain CCAP 216/24 AY328524.1 Coccomyxa rayssiae strain SAG 216-8 18S 640 92% 94% ribosomal RNA gene, partial sequence; internai transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internai transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence Accession Description Total Query Max ident score coverage HE586526.1 Pseudococcomyxa sp. KN-2011-A1 genomic 568 90% 91% DNA containing ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, intragenomic variability copy B, strain Al HE586525.1 Pseudococcomyxa sp. KN-2011-A1 genomic 566 90% 91% DNA containing ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, intragenomic variability copy A, strain Al AY293968*1 Coccomyxa chodatii internai transcribed 559 92% 90% spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internai transcribed spacer 2, complete sequence FR850476.1 Coccomyxa actinabiotis rRNA 376 59% 88% ITS1-5.8S-ITS2-28S AY328522"1 Coccomyxa peltigerae strain SAC 216-5 18S ribosomal RNA gene, partial sequence; internai transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internai transcribed spacer 2, 166 31% 94% complete sequence; and 26S ribosomal ' RNA gene, partial sequence HE586515.1 Coccomyxa sp. KN-2011-T3 genomic DNA 158 23% 83% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain T3 HE586550.1 Coccomyxa sp. KN-2011-T1 genomic DNA 158 23% 83% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain T1 HE586514.1 Coccomyxa sp. KN-2011-T2 genomic DNA 128 15% 86% containing 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene and ITS2, strain T2 Cette comparaison de séquences montre une identité de 83% à 95% de la séquence de la souche C-1R3-4C par rapport aux autres souches Coccomyxae référencées, du même ordre que les scores obtenus pour la comparaison de la région des ITS des Coccomyxae référencées entre eux (78% à 99%), et très éloigné de celui obtenu pour la comparaison avec d'autres genres (de l'ordre de 30 à 50%). Il s'agit donc d'une espèce de Coccomyxa différente de toutes celles référencées à ce jour. Ces résultats indiquent en effet que la microalgue isolée appartient au genre Coccomyxa, mais que son ADN diffère suffisamment de celui des autres espèces de Coccomyxae répertoriées dans les banques de données, notamment au niveau de l'ADN des ITS1 et ITS2 pour que l'on considère qu'il s'agit d'une nouvelle espèce, qui est dénommée ici Coccomyxa C-1R3 -4 C . La Figure 6 présente l'arbre phylogénétique obtenu après alignement des séquences d'ADN correspondant à PARNr 18S (BLASTN). La barre indique un taux de substitution de 1% (0,01). EXEMPLE 2: RÉSISTANCE AUX RAYONNEMENTS IONISANTS DE COCCOMYXA C-1R3-4C La résistance aux rayonnements ionisants des algues Coccomyxa C-1R3-4C a été testée en les exposant à différentes doses de rayonnements gamma issus d'éléments de combustible usés en cours de décroissance. La mortalité après irradiation a été déterminée par colorant vital (rouge neutre). La Figure 7 montre le pourcentage de mortalité de Coccomyxa C-1R3-4C en fonction de la dose d'irradiation, mesuré trois jours après l'irradiation aiguë. La dose de rayonnements ionisants qui provoque la mort de la moitié de la population est comprise entre 10 2 et 6 kGy. EXEMPLE 3: DÉCONTAMINATION D'EAUX D'INSTALLATIONS NUCLÉAIRES AU MOYEN DE COCCOMYXA C-IR3-4C Une eau de composition typique de celle d'eaux provenant d'une piscine de stockage d'éléments nucléaires usés a été mise en contact avec Coccomyxae C-1R3-4C 15 pendant 24 h, sous illumination. Une masse fraîche de 100 mg d'algues Coccomyxae C-IR3- 4C initialement cultivées en milieu liquide BBM et préalablement rincées trois fois avec de l'eau milli-Q est mise en contact avec 50 ml d'une eau contenant initialement les radionucléides émetteurs bêta 3H (200000 Bq/1) et 14C (1000 Bq/1), ainsi que les radionucléides émetteurs gamma listés dans le Tableau IV ci-dessous. 20 Tableau IV: Radionucléide 54Mn soc° ilomAg 137CS 238u Activité (Bq/1) 9 42 23 67 21 Le dosage de l'eau et des algues par spectrométrie y 24 h après la mise en contact montre une élimination de 81% de l'activité y de l'eau. Le pourcentage de radionucléides émetteurs y fixés par les algues en 24 h est indiqué dans le tableau V ci-dessous. 25 Tableau V- Radionucléide 54Mn 6°Co ilomAg 137Cs 238u % de fixation 52 45 100 95 100 La totalité ou quasi-totalité de l'llOmAg, du 137Cs et de l'238U et la moitié du 54Mn et du 60Co ont été épurés de l'eau. EXEMPLE 4: DÉCONTAMINATION D'UNE EAU DE PISCINE D'ENTREPOSAGE AU MOYEN DE COCCOMYXA C-1R3-4C PAR ACTION IN SITU 30 Les microalgues Coccomyxae C-1R3-4C, présentes dans une piscine de refroidissement d'éléments nucléaires usés, décontaminent les radionucléides présents dans cette piscine. Cette piscine est remplie d'eau de pH compris entre 6 et 7, de conductivité comprise entre 1 et 2 p,S/cm, de température moyenne 25°C, et contient des éléments métalliques radioactifs du fait des pièces qui y sont entreposées. Elle est en contact avec l'air ambiant et est illuminée par des néons. Dans ces conditions, Coccomyxa C-1R3-4C est capable de coloniser les supports de la piscine et peut y vivre et s'y reproduire pendant des années. Des comptages réalisés par spectrométrie y ont permis de déterminer l'activité totale ainsi que la nature et l'activité de chaque émetteur y concentrés par environ 1 g de masse fraîche d'algues et sont donnés dans le Tableau VI ci-dessous. L'activité des microalgues est définie dans ce tableau comme le rapport de l'activité (Bq) d' 1 g de masse fraiche d'algues à l'activité d'l mL de l'eau dans laquelle elles vivent. Tableau VI: Radionucléide Activité des microalgues/Activité de l'eau 67 suc° bttu 167 92Sr 7,5 liornAg 62 1"Cs 17 1"Cs 8030 Total 8380 Ces résultats montrent que les algues sont jusqu'à 104 fois plus actives que l'eau dans laquelle elles vivent, et donc qu'elles ont effectivement concentré les radioéléments 60co, 66cu,92sr, 110mAg, 134cs et 137cs. Le facteur de concentration du césium 137 (137Cs) par l'algue Coccomyxa C-1R3-4C, défini comme le rapport de la concentration de Cs fixé par les algues, en atomes/g de matière fraîche, à la concentration de Cs dans l'eau, en atomes/ml, est de l'ordre de 20000. EXEMPLE 5: DÉCONTAMINATION D'EAUX D'INSTALLATIONS NUCLÉAIRES AU MOYEN DE COCCOMYXA CHODATH La détermination de la résistance aux rayonnements ionisants des algues Coccomyxa chodatii (souche SAG 216/2) montre que la dose de rayonnements ionisants qui provoque la mort de la moitié de la population est de l'ordre de 1.5 kGy (Rivasseau et al., 2013, précité). La DL50 de résistance aux rayonnements ionisants des algues est généralement comprise entre 30 et 1200 Gy (AIEA, 1976, précité). Il semble que les microalgues appartenant au genre Coccomyxa présentent une radiotolérance supérieure à celles d'algues appartenant à d'autres genres, avec une résistance exceptionnelle chez Coccomyxa actinabiotis, de la même manière que toutes les bactéries appartenant au genre Deinococcus présentent une forte radiotolérance. Afin de déterminer si Coccomyxa chodatii partageait la capacité de captage d'éléments de Coccomyxa actinabiotis et Coccomyxa C-1R3-4C, une eau de composition typique de celle d'eaux provenant d'une piscine de stockage d'éléments nucléaires usés a été mise en contact avec des Coccomyxae chodatii pendant 24 h, sous illumination. Une masse fraîche de 110 mg d'algues Coccomyxae chodatii initialement cultivées en milieu liquide BBM et préalablement rincées trois fois avec de l'eau milli-Q est mise en contact avec 50 ml d'une eau contenant initialement les radionucléides émetteurs bêta 3H (200000 Bq/1) et 14C (1000 Bq/1), ainsi que les radionucléides émetteurs gamma listés dans le Tableau IV ci-dessus. Le dosage de l'eau et des algues 24 h après la mise en contact montre une élimination de 80% de l'activité y de l'eau. Le pourcentage de radionucléides émetteurs y fixés par les algues en 24 h est indiqué dans le tableau VII ci-dessous. Tableau VII: Radionucléide 54Mn 60CO 110mA 137CS 238-u % de fixation 100 54 100 94 100 La totalité ou quasi-totalité de P11°mAg, du 54Mn, du 137Cs et de l'238U et la moitié du 60Co ont été épurés de l'eau. EXEMPLE 6: MAITRISE DE LA PROLIFERATION OU ELIMINATION DES MICROALGUES Les microalgues sont photosynthétiques. Elles ont besoin de lumière pour réaliser la photosynthèse et fabriquer leur matière organique. Dans le milieu très pauvre en nutriments qui correspond aux divers milieux et effluents des centrales nucléaires, leur croissance peut donc être maîtrisée par l'illumination. Pour qu'elles se développent à un endroit donné, il suffit de les éclairer. Leur croissance peut aussi être maîtrisée en les éclairant avec une lumière qui ne permette pas ou peu de photosynthèse, par exemple avec une lampe inactinique de couleur jaune-verte. Une filtration des eaux permet de capter les algues en suspension dans l'eau, et d'en maîtriser leur croissance. Une méthode chimique telle une oxydation, par exemple par l'eau oxygénée, permettra de les éliminer totalement. Dans un milieu contenant 20 ml de suspension cellulaire de microalgues, on introduit 5 ml d'eau oxygénée à 20 g/1, soit une concentration finale de 11202 de 4 g/l. Après 1 jour, la culture contient des agrégats de matière marron-blanc et sa couleur verte a disparu. Au bout d'une semaine, plus rien n'est observable au microscope. La dégradation des algues par l'eau oxygénée est donc rapide, progressive et totale, ne laissant aucun résidu de matière organique. Cette solution peut aussi être employée pour nettoyer des pièces radioactives transférées d'un milieu à un autre et éviter toute contamination du nouveau milieu par des algues, ou encore pour nettoyer les parois des piscines lorsque celles-ci sont vidées.35 REVENDICATIONS1) Algue verte unicellulaire du genre Coccomyxa, définie par la présence dans les gènes d' ARN ribosomique 18S-ITS1-ARN ribosomique 5.8S-ITS2-ARN ribosomique 28S, d'une séquence présentant au moins 96% d'identité avec la séquence SEQ ID NO: 1. 2) Algue verte unicellulaire selon la revendication 1, possédant les caractéristiques de la souche de Coccomyxa déposée le29 janvier 2013 auprès de la CCAP sous le numéro CCAP 216/26 3) Procédé de captage d'au moins un élément, radioactif ou non, choisi parmi Cs, Ag, Co, Mn, Sr, Cu, Cr, Zn, Ni, Fe, Sb,U, les actinides, les lanthanides et terres 10 rares, telles que Sc, Y, La, Ce, Pr, Nd, Pm, Sm, Eu, Gd, Tb, Dy, Ho, Er, Tm, Yb, Lu, et/ou au moins un des radioisotopes 14C et 3H, à partir d'un milieu aqueux contenant ledit élément et/ou ledit radioisotope en solution, caractérisé en ce que ledit captage est effectué en incubant, dans ledit milieu aqueux, l'algue verte telle que définie dans les revendications 1 ou 2. 15 4) Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit élément est choisi parmi Sr et Cu. 5) Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 ou 4, caractérisé en ce que ledit milieu aqueux est un milieu radioactif. 6) Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 4 caractérisé en 20 ce que ledit milieu aqueux est un milieu non radioactif. 7) Procédé selon la revendication 5, pour le captage d'un métal choisi parmi Ag, Co, Cs, U, Mn, Cu et Sr, caractérisé en ce que ledit métal est sous forme d'isotope radioactif, ou sous forme de mélange d'isotopes. 8) Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 7, caractérisé en 25 ce que ladite algue verte est associée à au moins un autre microorganisme et/ou au moins une plante multicellulaire. 9) Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 8, caractérisé en ce que la croissance de ladite algue verte est maîtrisée en contrôlant l'illumination dudit milieu aqueux. 30 10) Procédé selon une quelconque des revendications 3 à 9, caractérisé en ce que l'élément capté, radioactif ou non, est choisi parmi Cs, Ag, Co, Mn, Sr, Cu, Cr, Zn, Ni, Fe, Sb, les actinides, les lanthanides et terres rares, telles que Sc, Y, La, Ce, Pr, Nd, Pm, Sm, Eu, Gd, Tb, Dy, Ho, Er, Tm, Yb, Lu, et en ce que ledit procédé comprend une étape de récupération dudit élément à partir de ladite algue verte. 11) Utilisation d'une algue verte du genre Coccomyxa telle que définie dans la revendication 1 ou 2, pour la dépollution d'un milieu aqueux contenant au moins un élément, radioactif ou non, choisi pal/ni Cs, Ag, Co, Mn, Sr, Cu, Cr, Zn, Ni, Fe, Sb, les actinides, les lanthanides et terres rares, et/ou au moins un des radioisotopes 14C et 3H. 12) Utilisation selon la revendication 11 caractérisée en ce que ledit milieu est radioactif. 13) Utilisation selon une quelconque des revendications 11 ou 12, caractérisée en ce que ledit élément est choisi parmi Sr et Cu. 14) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 12 ou 13, 10 caractérisée en ce que ladite algue verte est associé à au moins un autre microorganisme radiorésistant ou radiotolérant et/ou au moins une plante multicellulaire radiorésistante ou radiotolérante.