Brevet FR3002228A1 — publié le 20140822

Domaine de l'invention La présente invention se rapporte au domaine de la mise au point de nouveaux outils de diagnostic médical, en particulier pour le diagnostic de cancers telle que la leucémie lymphoïde chronique. Art antérieur La leucémie lymphoïde chronique, aussi appelée LLC, est une maladie cancéreuse caractérisée par une prolifération lymphoïde monoclonale, responsable d'une infiltration médullaire, sanguine, parfois ganglionnaire, constituée de lymphocytes matures de morphologie normale et de phénotype B. Les leucémies lymphoïdes chroniques représentent la forme de leucémie la plus courante chez l'adulte en occident (Gary-Gouy et al., 2007, J Immunol, 179:4335-4344). Elle ne se rencontre pas chez l'enfant. D'évolution chronique, la LLC reste aujourd'hui une maladie incurable, mais de progression lente pour une large majorité des patients. La LLC affecte principalement les individus âgés de plus de 50 ans, et en majorité de sexe masculin. L'incidence de la LLC est évaluée aujourd'hui à 3,5 nouveaux cas par an pour 100 000 personnes aux Etats-Unis. Le plus fréquemment, la survenue d'une LLC est détectée lors d'une analyse de numération de la formule sanguine, qui met en évidence une hyperlymphocytose. Dans la majorité des cas, le diagnostic d'une hyperlymphocytose est au moins indicatif pour suspecter 20 la survenue d'une LLC. Toutefois, le diagnostic de survenue d'une LLC doit impérativement être confirmé par la réalisation d'au moins un, et de préférence plusieurs, tests de diagnostic complémentaires. Pour obtenir une confirmation de la survenue d'une LLC, on pratique couramment 25 un test d'immunophénotypage, lequel permet de calculer une valeur de score (dit score de « Matutes », allant de 0 à 5 selon l'expression ou non de divers antigènes). Selon ce test, une valeur de score supérieure ou égale à 4 est indicative de la survenue d'une LLC. Plus précisément, l'établissement d'un score dit de « Matutes », consiste à mettre en contact un échantillon, préalablement prélevé à partir d'un individu à tester, avec une 30 combinaison de cinq anticorps, respectivement des anticorps anti-CD5, anti-CD22, anti- CD23, anti-FMC7 et anti-IgS, (Matutes et al., 1994, Leukemia, 8: 1640-45; Matutes et al., 1994, Leuk Lymphoma, 14 Suppl 1:57-61). Puis un score est établi sur une échelle de 0 (pas de LLC ou atypique) à 5 (LLC probable) en fonction du caractère positif des lymphocytes marqués, lequel score permet de distinguer la LLC d'autres types de leucémies. On précise que le score de Matutes permet de distinguer la LLC des tricholeucémies (HCL ou Hairy Cell Leukemia), des variantes de ces tricholeucémies (HCLvariants), des autres formes atypiques telles que les SLVL (ou Splenic Lymphoma with Vinons' Lymphocytes), des leucémies prolymphocytiques (ou PLL), des lymphomes folliculaires, les lymphomes lymphoplasmacytiques, des lymphomes du manteau (ou MCL), ou encore des lymphomes de type LCL (Large Cell Lymphoma). De manière générale le principe de ce test d'immunophénotypage est basé sur l'utilisation de la combinaison des cinq anticorps différents précités. Une valeur de score de 4 ou 5 permet de conclure à la présence probable d'une LLC. Des études ont pu établir que 87 % des LLCs présentaient une valeur de score de Matutes de 4 ou 5. Inversement, seulement 0,4 % des LLCs diagnostiquées présentaient une valeur de score de Matutes de 0 ou 1. Bien que le test de Matutes soit aujourd'hui le test de diagnostic de LLC le plus pertinent qui soit disponible pour les praticiens cliniciens, sa spécificité et sa sensibilité ne sont pas optimales. Il est important de noter qu'une valeur de score de Matutes intermédiaire, de 2 ou 3, ne permet pas actuellement de conclure de façon appréciable à la présence d'une LLC au regard d'autres types de leucémies, et notamment de cellules B de type CD5+. L'insuffisance de fiabilité des tests de diagnostic de LLC actuellement disponibles, y compris le test de Matutes qui est celui qui est le plus souvent mis en oeuvre, est de nature à conduire à des erreurs dans le choix de stratégies thérapeutiques appropriées. Dans certaines situations, un résultat faussement négatif peut conduire à différer un traitement thérapeutique approprié et ainsi à réduire la durée de vie d'un patient. A l'inverse, un résultat faussement positif peut conduire à l'application de traitements chimio-thérapeutiques provoquant des effets indésirables susceptibles d'être significativement délétères pour la santé générale du patient diagnostiqué par erreur comme étant affecté d'une LLC. Egalement, le test de Matutes est insuffisamment sensible et ne permet pas de diagnostiquer des formes précoces de LLC, ni a fortiori des états pré-LLCs, et en particulier des formes asymptomatiques précédant les premiers signes cliniques de la maladie. Pour confirmer la survenue d'une LLC, on peut réaliser des tests complémentaires tels qu'une électrophorèse des protéines sériques dont les résultats peuvent montrer (i) l'existence d'une hypo-gammaglobulinémie et/ou (ii) la présence d'un composant monoclonal, le plus souvent d'isotype IgM. Concernant l'évaluation pronostique de l'évolution de la LLC, deux classifications sont actuellement couramment proposées, respectivement (i) la classification de Binet, notamment en Europe et (ii) la classification de Rai, notamment aux Etats-Unis. Il n'y a pas d'indication aujourd'hui à traiter des patients affectés d'une LLC et classés au stade A de la classification de Binet. En revanche, les patients classés au stade B ou C de la classification de Binet doivent être traités. En général, le traitement étiologique d'une LLC repose sur la chimiothérapie par voie orale ou par injection. Pour les individus ayant un mauvais pronostic, il peut être proposé un traitement intensif sous la forme d'une chimiothérapie intensive suivie d'une greffe de moelle osseuse. La greffe de moelle osseuse peut être une auto-greffe ou une allo-greffe. Les traitements chimiothérapeutiques utilisés dans le traitement intensif de la LLC sont le chlorambucil, la fludarabine ainsi qu'une combinaison de Cyclophosphamide, d'(H)adriamycine, d'Oncovin (vincristine) et de Prednisolone (combinaison thérapeutique aussi appelée CHOP). Les traitements de première ligne modernes, utilisent systématiquement la fludarabine seule, ou associée à une autre chimiothérapie (cyclophosfamide) ou immunothérapie (anti-CD20/ Rituximab) Les traitements de la LLC peuvent aussi inclure le traitement des complications auto-immunes et des complications infectieuses. De manière générale, il existe un besoin (i) pour un diagnostic amélioré et (ii) pour de nouveaux traitements de la LLC. L'antigène CD5 a été proposé dans l'état de la technique comme l'un des marqueurs majeurs de diagnostic de la leucémie lymphoïde chronique, ou LLC (Boumsell et al., 1980, J Exp Med., 152: 229-234). L'antigène CD5 (ou « Cluster de Différenciation 5 ») est un corécepteur du récepteur de l'antigène présent comme marqueur à la surface des lymphocytes T ainsi que d'une sous-population de lymphocytes B. La plupart des cellules T immatures et matures expriment ce marqueur à leur surface, de façon constitutive, y compris les cellules T précurseurs. L'expression du CD5 augmente au fur et à mesure de la différenciation T. Son expression varie dans le même sens que celle du TCR/CD3. Il est ainsi connu que ce marqueur CD5 va s'associer physiquement avec le récepteur à l'antigène des cellules T, ou TCR, au niveau de la membrane et moduler la réponse médiée par le récepteur TCR; en son absence les cellules T immatures présentent par le biais de leur TCR une plus grande réponse à la stimulation in vitro. Ainsi, le marqueur CD5 est depuis longtemps connu pour agir comme régulateur négatif de la transduction du signal médiée par le TCR (Tarakhovsk et al., 1996, Science, 269, 535-537 Les lymphocytes B peuvent être séparés en différents sous-groupes, appelés B-la, B-lb et B-2. Les lymphocytes B-2 sont les plus conventionnels ; ils sont produits au niveau de la moelle osseuse au cours de la vie adulte, et sauf mention contraire seront cités uniquement en tant que lymphocytes B. Bien que ces lymphocytes B n'expriment pas, contrairement aux lymphocytes T ou B-1 a, le marqueur CD5 de manière constitutive, ils peuvent en revanche l'exprimer après activation de ces lymphocytes, notamment par des antigènes T-dépendants. Les lymphocytes B-1 a et B-lb sont généralement désignés comme lymphocytes « foetaux », et localisés au niveau des cavités pleurales et/ou du péritoine. Les lymphocytes B1 a présentent des propriétés toutes particulières, telles que des capacités d'autorenouvèlement, ainsi que de production de larges quantités d'anticorps poly-réactifs de type IgM, d'IgG3 et d'IgA (Tarakhovsky, A., 1997, J. Exp. Med. 185, 981-984). Ainsi, le sous- groupe B-la exprime CD5 de façon constitutive, tandis que les autres sous-groupes B-lb et B2 ne l'expriment pas du tout. Il a ainsi été montré en particulier que, dans les sous-populations lymphocytaires Bl-a, le marqueur CD5 exerce également un rôle de modulation dans l'activation médiée par les IgM, en interagissant physiquement avec le récepteur associé à l'antigène des cellules B (ou BCR). Il a également été montré que la surexpression de CD5 dans les lymphocytes B joue un rôle dans la tolérance aux antigènes du soi. En modulant le seuil d'activation, CD5 empêche donc la mort cellulaire induite par cette activation et maintient la tolérance des lymphocytes B anergiques in vivo (Hippen et al., 2000, J Exp Med., 191:883-890). De même, à la suite de l'activation d'un lymphocyte par l'antigène, l'activation de CD5 prévient en retour une réponse immune excessive génératrice d'auto-immunité. En raison de ses propriétés antiprolifératives et de régulation négative de la voie de signalisation médiée par les TCR et BCR, le marqueur CD5 constitue donc un sujet d'étude particulier dans les domaines du diagnostic des maladies auto-immunes et/ou lympho- prolifératives (Pers et al., 1999, Int J Mol Med., 3(3):239-45). Toutefois les mécanismes précis à l'origine de l'activation du récepteur CD5, en particulier l'activation de CD5 associée à la voie de signalisation du récepteur à l'antigène (BCR ou TCR), sont méconnus. Comme vu précédemment, et bien que l'expression du récepteur CD5 à la surface de ces lymphocytes, constitutive ou induite, soit une condition nécessaire à sa fonction, il convient de souligner qu'elle n'est pas suffisante. Il a ainsi été proposé que le marqueur CD5 puisse alterner lui-même entre une forme non-active, ou inactivée, et une forme active ou activée (Gringhuis et al., 1998, Mol Cell Biol, 18(3): 1725-1735). Le passage d'une forme à l'autre a ainsi été attribué à une série de cascades de signalisation induites par la voie de signalisation du récepteur à l'antigène, notamment en raison de l'interaction physique entre ce récepteur à l'antigène et le marqueur CD5 lui-même. Cette activation est induite par l'action séquentielle de plusieurs tyrosine kinases et phosphatases. En particulier, il a été proposé que la forme active du récepteur CD5 soit induite par la phosphorylation de la région intracellulaire de CD5. Sous sa forme active, la partie intracellulaire de CD5 est ainsi capable de recruter d'autres protéines effectrices, en particulier d'autres kinases, et donc de moduler la voie de signalisation du récepteur à l'antigène. Il a ainsi été montré que la capacité à modifier post-traductionnellement le marqueur CD5 dans sa partie intracellulaire, est un paramètre critique pour réguler à la fois la voie de signalisation du récepteur à l'antigène et la genèse d'un phénomène de tolérance des lymphocytes T et B (Xianghuai et al., 2002, J Immuno1,168:5612-5620). Du point de vue de sa structure, le marqueur CD5 est une protéine transmembranaire de 67 kDa environ, de forme monomérique, présentant une région extracellulaire, une région transmembranaire et une région intracellulaire. Cette protéine appartient à une famille de protéines exprimées par les cellules du système immunitaire. Toutefois, l'étude structurale de cette protéine est limitée par son caractère transmembranaire ainsi que sa sensibilité à la dénaturation (Brown & Lacey, 2010, J Immunol, 185(10), 6068-6074). La protéine CD5, de séquence SEQ ID N°2, comprend au total 495 acides aminés. Elle comprend en outre une séquence signal, ou peptide signal, de 24 acides aminés à l'extrémité N-terminale de la protéine. La région extracellulaire, ou partie N-terminale de la CD5, s'étend chez l'homme de l'acide aminé 1 à 379 environ. Elle est caractérisée par la présence de trois domaines conservés, riches en cystéine (SRCR ou Scavenger Receptor Cysteine-Rich domain), et la structure cristallographique d'un de ces domaines a été élucidée (Rodamilans et al., 2007, J Biol Chem, 282(17):12669-77). La région transmembranaire s'étend de l'acide aminé 380 à 402 environ et fait directement suite à la partie C-terminale du troisième domaine SRCR. La région intracellulaire s'étend de l'acide aminé 403 et jusqu'à l'extrémité C- terminale de la protéine. Cette région est constituée d'une queue cytoplasmique susceptible d'être modifiée post-traductionnellement, dans le cadre de la voie de signalisation du récepteur à l'antigène (TCR et BCR), au niveau de son domaine régulateur intracellulaire. Certaines de ces modifications vont ainsi conduire à l'activation de CD5. En particulier, plusieurs sites potentiels de phosphorylation sur thréonine (Vilà et al., 2001, J Immunol., 166(1):396-402) et sur tyrosine ont été mis en évidence dans la littérature (Dennehy et al., 2001, International Immunology, 13(2), 149-156; Gary-Gouy et al., 2000, Journal of Biological Chemistry, 275, 548-556; Gary-Gouy et al., 2002, J Immunol, 168, 232-239). Il est important de souligner que le rôle particulier de cette région intracellulaire dans le phénomène d'activation de CD5 reste aujourd'hui méconnu. Bien que plusieurs formes phosphorylées de CD5 aient été rapportées, le profil particulier de phosphorylation correspondant à l'étape d'activation de CD5 elle-même n'a pas été identifié. En particulier, il convient de distinguer l'étape d'activation de CD5, qui résulte nécessairement et directement de l'activation du récepteur à l'antigène, des étapes supplémentaires de phosphorylation, voire de déphosphorylation de CD5, qui vont moduler la voie de signalisation du récepteur à l'antigène. Comme déjà précisé précédemment, il existe un besoin pour des outils et des méthodes destinés au diagnostic ou au pronostic de maladies auto-immunes et/ou lymphoprolifératives, qui soient alternatifs ou améliorés par rapport aux outils et aux méthodes connus. Résumé de l'invention La séquence de la protéine CD5 considérée par l'invention est préférentiellement celle définie selon la SEQ ID N°2. Il convient toutefois de noter que, dans la littérature, la séquence de CD5 considérée peut omettre les 24 premiers acides aminés constituant la séquence signal N-terminale, ou peptide signal. Sauf indication contraire, la numérotation des acides aminés considérés se réfère ici à la numérotation définie par cette séquence SEQ ID N°2, et qui comprend donc la séquence signal N-terminale. Naturellement sont également considérés les polymorphismes et variants naturels de CD5. En particulier, on considérera les séquences de CD5 référencées dans Carnero-Montoro et al. (Carnero-Montoro et al., Evolutionary and functional evidence for positive selection at the human CD5 immune receptor gene, 2012, Mol Biol Evol., 29(2):811-23). L'homme de l'art pourra alors déduire la séquence peptidique correspondante en se reportant à la séquence SEQ ID N°2 de CD5 comme référence (Ref. UNIPROT : P06127). La présente invention fournit des ligands, en particulier des anticorps, se liant spécifiquement à la forme activée de l'antigène CD5 de SEQ ID N°2, qui est phosphorylée sur le résidu tyrosine en position 453, ainsi que des méthodes de détection, de diagnostic et de pronostic mettant en oeuvre lesdits ligands. Selon l'invention, il est fourni un anticorps monoclonal dirigé contre un peptide comprenant la séquence de formule (I) suivante : NH2-[Nt] X1X2X3X4DNEY(P03H2)X5X6X7X8X9- [Ct]z -COOH (I) dans lequel : - y est un nombre entier consistant en 0 ou 1, - z est un nombre entier consistant en 0 ou 1, - Nt consiste en un peptide de 1 à 100 acides aminés en longueur, - Ct consiste en un peptide de 1 à 100 acides aminés en longueur. - X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8 et X9.représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un résidu d'acide aminé. La présente invention concerne aussi des méthodes et des kits de détection de CD5 activé mettant en oeuvre un anticorps monoclonal tel que défini ci-dessus. Dans certains modes de réalisation, un kit de détection de CD5 activé comprenant ce même anticorps, ainsi qu'un autre anticorps reconnaissant la forme non active du récepteur CD5. Dans certains modes de réalisation, ledit anticorps monoclonal est combiné à un ou plusieurs autres anticorps, en particulier un ou plusieurs autres anticorps choisis parmi les anticorps anti-CD22, anti-CD23, anti-FMC7, anti-IgS et/ou anti chaînes K ou k Dans certains modes de réalisation, ledit anticorps monoclonal peut être combiné à un ou plusieurs autres ligands, en particulier un ou plusieurs autres anticorps. L'invention est aussi relative à des méthodes de détermination de l'occurrence d'une leucémie lymphoïde chronique dans lesquelles est utilisé l'anticorps monoclonal tel que défini ci-dessus. L'invention a notamment trait à des méthodes in vitro de détection de CD5 activé, ainsi que de détermination de la survenue d'une leucémie lymphoïde chronique comprenant les étapes suivantes: a) mise en contact d'un échantillon avec l'anticorps monoclonal défini ci-dessus, b) détection ou quantification des complexes formés entre ledit anticorps monoclonal et des cellules exprimant un CD5 activé éventuellement présentes dans ledit échantillon. Description des fi2ures Fi2ure 1: expression de CD5 phosphotylé sur tyrosine 453, après marquage en immunofluorescence et analyse en cytomé trie en flux de cellules de LLC, de cellules B purifiées du sang périphérique humain d'un donneur sain et de cellules de Lymphome du manteau. Le marquage de surface CD19 est indiqué en ordonnée pour toutes les séries sauf la ligne 3. Ligne 1 : marquage de CD5 (abscisse) ; ligne 2 : marquage de CD23 (abscisse) ; ligne 3 : marquage des chaînes Kappa ic (abscisse) et Lambda 2 des IgM membranaires (ordonnée) ; ligne 4 : marquage intracellulaire contrôle isotypique, après fixation et perméabilisation des cellules ; ligne 5 : marquage intracellulaire avec l'anticorps PCD5 couplé à Alexa 488, après fixation et perméabilisation des cellules. Fi2ure 2: mise en évidence par immunoprécipitation et sur lysat total de la sélectivité de l'anticorps anti-PCD5 pour la forme activée du récepteur CD5. La figure 4a met en évidence la présence de PCD5 après immunoprécipitation par un anticorps anti-PCD5, sur western blot et par anti-CD5 ou antiphosphotyrosine. La figure 4b compare la présence de PCD5 et de CD5 à la fois sur lysat total et après immunoprécipitation. Fi2ure 3: Titration par méthode ELISA d'un anticorps polyclonal (pAb) et 20 monoclonal (mAb) d7gG anti-PCD5 contre le peptide synthétique natif et le même peptide phosphotylé. Les concentrations initiales d'anticorps monoclonal et polyclonal sont respectivement de 10 et 130 mg/mL. Description détaillée 25 Il est fourni selon l'invention de nouveaux outils et de nouvelles méthodes pour le diagnostic de la leucémie lymphoïde chronique (LLC, ou CLL). On entend par « leucémie lymphoïde chronique », une maladie cancéreuse caractérisée par une prolifération lymphoïde monoclonale telle que définie précédemment. Avantageusement on considère les formes typiques de la leucémie lymphoïde chronique, dites 30 LLC de type B (LLC-B), mais également les formes atypiques. Il est montré selon l'invention que la présence d'une forme activée de l'antigène CD5 à la surface des lymphocytes, laquelle forme activée de CD5 possède le résidu tyrosine en position 453 à l'état phosphorylé, est indicative de la survenue d'une LLC. La demanderesse a montré que la tyrosine 453 de CD5, comprise dans ce motif DNEY sous sa forme phosphorylée, est nécessaire et suffisante pour induire la forme active du récepteur CD5. Aux fins de la présente description, un antigène CD5 possédant le résidu tyrosine en position 453 sous forme phosphorylée peut être aussi désigné « PCD5 ». Compte-tenu de la présence d'une séquence signal de 24 acides aminés à l'extrémité N-terminale de la protéine CD5, de séquence SEQ ID N**2, le résidu tyrosine en position 453 (ou Y453), peut également être cité dans la littérature en position 429 (ou Y429). Les travaux de la demanderesse ont ainsi permis la mise au point de ligands se liant spécifiquement à l'antigène CD5 phosphorylé sur le résidu tyrosine en position 453 (« PCD5 »), l'utilisation de ces ligands pour la détection de l'antigène CD5 sous forme activée, et pour le diagnostic d'une LLC chez un individu ou pour le pronostic d'une LLC affectant un individu. Au sens de l'invention, un « ligand » englobe tout type de molécule se liant à une molécule cible, et englobe notamment les anticorps, les aptamères nucléiques et les aptamères protéiques, en particulier les anticorps. La demanderesse a en particulier mis au point un procédé d'obtention de ligands de type anticorps se liant spécifiquement à la forme activée de l'antigène CD5 phosphorylé sur le résidu tyrosine en position 453. De manière surprenante, la demanderesse a montré que des ligands, en particulier des anticorps, dirigés contre un petit peptide de 13 acides aminés de longueur et phosphorylé sur le résidu tyrosine en position 8 dudit peptide, sont capables de se lier spécifiquement, in situ, sur la région intra-cytoplasmique de la forme activée de l'antigène CD5 qui est indicative de la survenue d'une LLC. De façon surprenante, l'anticorps monoclonal ainsi obtenu présente des propriétés particulières de spécificité à l'égard du motif phosphorylé sur tyrosine DNEY453(P03H2), et sur tout le domaine peptidique du CD5 entourant cette tyrosine, de séquence SEQ ID N°1. Ce motif phosphorylé qui comprend une séquence DNEY453, comprenant le résidu Y453, est un site consensus correspondant au motif d'autophosphorylation des protéines tyrosines kinases de la famille Src (Gary-Gouy et al., 2002, J Immunol, 168, 232-239). La séquence consensus de ce motif d'autophosphorylation correspond notamment à un motif D(D/N)XpY, potentiellement reconnu par d'autres protéines comme le proto-oncogène Cbl (Lupher et al., 1997, J Biol Chem., 272(52):33140-4). En effet, en 1997, Lupher et al. ont montré que lorsque le motif DNEY416 de Src kinase était phosphorylé, il correspondait à la séquence de type D(D/N)xpY du domaine PTB « protein tyrosine binding » de la protéine Cbl. Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, ces données suggèrent que DNEY pourrait être un motif de liaison à une Src kinase. Cette séquence phosphorylée du CD5 fait office de site d'ancrage sur tyrosine pour des protéines effectrices ou intermédiaires, et potentiellement des kinases (notamment des protéines tyrosine kinases de la famille des src kinases via leur domaine SH2 pour Src Homology -2 domain) indéterminées, qui phosphorylent le CD5 sur une ou plusieurs tyrosines, et en particulier la tyrosine critique sur le plan fonctionnel, Y453. L'homme de l'art, désirant obtenir un anticorps dirigé contre un motif phosphorylé, et à plus forte raison une protéine phosphorylée, se serait attendu à ce que l'anticorps ainsi obtenu ne présente pas de spécificité particulière, ou au mieux une spécificité faible, à l'égard de l'environnement chimique, en particulier les enchaînements d'acides aminés localisés à proximité dudit motif. C'est également de manière surprenante qu'un anticorps dirigé contre un peptide de faible longueur, c'est-à-dire normalement un peptide comprenant un ou plusieurs épitopes de type linéaire, possède l'aptitude à reconnaître une région intra-cytoplasmique d'une protéine de plusieurs centaines d'acides aminés de longueur, laquelle est donc susceptible de comprendre essentiellement des épitopes conformationnels. La mise en évidence d'une relation entre (i) la présence de l'antigène CD5 phosphorylé sur le résidu tyrosine en position 453 (« PCD5 ») exprimé par les lymphocytes d'un individu et (ii) la survenue d'une LLC chez cet individu, d'une part, et, d'autre part, les propriétés particulières et inattendues de spécificité de l'anticorps anti-CD5 activé obtenu par la demanderesse, ont permis la mise au point de kits ou de méthodes ayant trait à la détermination de l'état d'activation du récepteur CD5, en particulier dans le cadre du diagnostic des maladies auto-immunes et des syndromes lympho-prolifératifs, et le cas échéant dans le pronostic d'évolution de ces pathologies. Les travaux de la Demanderesse permettent de cibler encore plus spécifiquement, parmi les syndromes lympho-prolifératifs, le diagnostic ou le pronostic des leucémies lymphoïdes chroniques de type B (LLC ou B-LLC). L'expression de CD5 a initialement conduit à l'hypothèse selon laquelle cette malignité (« malignancy ») aurait pour origine la population de cellules B de type B-1 a ; toutefois, il découle des observations précédentes que la LLC puisse également avoir pour origine l'activation des lymphocytes B, dans la mesure où l'expression de CD5 est elle-même induite par la stimulation BCR. Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, la Demanderesse est également d'avis que les cellules B leucémiques de type LLC ont été sélectionnées par des interactions permanentes avec un antigène du soi. Ainsi, alors que des cellules B auto-réactives normales auraient été vraisemblablement supprimées au cours du processus développemental, ces cellules leucémiques doivent nécessairement avoir échappé à ce processus de sélection négative. Il est vraisemblable que la rencontre du BCR avec un antigène du soi implique la phosphorylation de CD5 sur tyrosines ; en conséquence, les cellules B de type LLC exprimant un répertoire auto-réactif, devraient également exprimer le marqueur CD5 sous une forme particulière et phosphorylée. En particulier, les résultats de la Demanderesse indiquent que les pathologies de type LLC présentent toutes un mécanisme commun d'initiation de la malignité. Il est montré selon l'invention que les cellules B de type LLC expriment à leur surface le marqueur CD5 sous sa forme active, telle que définie dans la présente description. La MBL (ou « lymphocytose B monoclonale ») est généralement asymptomatique, caractérisée comme une forme précoce de la LLC (ou LLC-like), mais ne nécessitant pas de traitement particulier. Elle nécessite toutefois un suivi afin d'en déterminer l'évolutivité (Marti et al., 2005, Br J Haematology, 130, 325-332). Il n'existe pas actuellement de critère unique permettant de distinguer les cellules B de type MBL ou LLC. Toutefois l'organisation mondiale de la santé (OMS), propose un seuil de 5x109 cellules par litre de cellules B monoclonales afin d'apprécier la différence entre ces deux pathologies (Kern et al., 2012, Br J Haematol., 157(1), 86-96). Dans la suite de la description, et pour un souci de clarté, on distinguera volontairement les cellules B de type MBL et de type LLC. Toutefois, et compte-tenu des similitudes entre ces deux pathologies, la présente invention englobe également l'utilisation d'un anticorps selon l'invention comme outil de suivi de l'évolution des proliférations lymphocytaires monoclonales (de type MBL) vers un stade pathologique de type LLC (ou LLC-like). Certes, de très nombreux exemples d'anticorps monoclonaux ont déjà été rapportés dans la littérature. Il convient toutefois de noter qu'aucun de ces anticorps n'est dirigé contre le peptide bien spécifique défini ci-dessus. Par ailleurs des anticorps monoclonaux anti-résidus phospho-tyrosines ont été rapportés. Toutefois, il convient également de noter que ces anticorps anti-phosphotyrosines, sauf exception, ne présentent aucune autre spécificité particulière, et sont donc susceptibles de reconnaitre toute tyrosine phosphorylée, quelle que soit la nature de son environnement chimique/peptidique. On citera en particulier les anticorps monoclonaux anti-phosphotyrosine de souris PY20 commercialisé par la société Abcam® (référence : ab10321) ou 4G10 commercialisé par la société MilliporeTM (référence 05-777) capables de reconnaitre les tyrosines phosphorylées au sein d'une protéine. Il convient toutefois de noter que ces anticorps ne renseignent pas sur la position de ou des tyrosine(s) phosphorylée(s) dans la protéine d'intérêt et impliquée(s) dans tel ou tel mécanisme cellulaire. D'autres anticorps monoclonaux plus spécifiques ont également été rapportés. On citera par exemple l'anticorps monoclonal anti V-Src pTyr416 commercialisé par la société Antibodies-online GmbH (référence : ABIN204748). Ce dernier anticorps semble en effet capable de reconnaitre la forme phosphorylée de la protéine Src parmi les formes nonphosphorylées. De manière générale, les anticorps monoclonaux contre des phospho-tyrosines particulières sont moins fréquemment rapportés, principalement en raison des risques élevés de réaction croisée de ces anticorps avec des molécules dites « carrier » (telles que la KLH), ou des phospho-tyrosines isolées (Glenney et al., 1988, Journal of Immunological Methods, 109, 277-285). Certains anticorps anti-phosphoprotéines sont cependant très utilisés en recherche. Citons à titre d'exemples des anticorps qui reconnaissent des protéines phosphorylées sur tyrosine, comme l'anti-PY705-STAT3, (Santa Cruz Biotechnology, référence sc-8059), l'anti-PY1054-1055-Tyk2 (Cell Signaling référence 9321), ou l'antiPY694-STAT5 (Cell Signaling, référence 9351). La présente invention concerne un anticorps monoclonal dirigé contre un peptide comprenant la séquence de formule (I) suivante : NH2-[Nt] X1X2X3X4DNEY(P03H2)X5X6X7X8X9- [Ct]z -COOH (I) dans laquelle : - y est un nombre entier consistant en 0 ou 1, - z est un nombre entier consistant en 0 ou 1, - Nt consiste en un peptide de 1 à 100 acides aminés en longueur, - Ct consiste en un peptide de 1 à 100 acides aminés en longueur, et - Xi, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8 et X9.représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un acide aminé. Comme cela est montré dans les exemples, l'anticorps monoclonal défini ci-dessus reconnait spécifiquement la forme active de l'antigène CD5 qui est phosphorylée sur le résidu tyrosine localisé en position 453 de la séquence d'acides aminés de CD5 de SEQ ID N°2. Dans un souci de simplification, on nommera pour la suite l'anticorps monoclonal de l'invention, lequel se lie spécifiquement à l'antigène CD5 phosphorylé sur le résidu tyrosine en position 453 (« PCD5 »), peut être désigné anticorps « anti-PCD5 ». On entend par « anticorps monoclonal » des anticorps reconnaissant le même épitope et issus d'une même lignée de plasmocyte. Ces anticorps sont généralement produits à partir de plasmocytes de rongeurs, tels que la souris, le rat ou le lapin. On entend par "forme active" ou "forme activée" de CD5, un état de CD5 résultant directement et nécessairement de l'activation du récepteur à l'antigène (TCR ou BCR), et qui est phosphorylée sur le résidu tyrosine en position 453 de CD5. Anticorps anti-CD5 activé La présente invention est relative à un anticorps monoclonal dirigé contre un peptide comprenant, ou alternativement consistant en, la séquence de formule (I) suivante : NH2-[Nt] X1X2X3X4DNEY(P03H2)X5X6X7X8X9- [Ct] z -COOH (I) dans laquelle : - y est un nombre entier consistant en 0 ou 1, - z est un nombre entier consistant en 0 ou 1, - Nt consiste en un peptide de 1 à 100 acides aminés de longueur, - Ct consiste en un peptide de 1 à 100 acides aminés de longueur, et - Xi, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8 et X9.représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un résidu d'acide aminé. Un peptide Nt de 1 à 100 acides aminés de longueur englobe des peptides de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57,58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 et 100 acides aminés de longueur. Un peptide Ct de 1 à 100 acides aminés de longueur comprend des peptides de 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57,58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 et 100 acides aminés de longueur. Dans certains modes de réalisation, le peptide Nt est de 10 acides aminés de longueur ou moins, ce qui englobe 4 acides aminés de longueur. Dans certains modes de réalisation, le peptide Ct est de 10 acides aminés de longueur ou moins, ce qui englobe 5 acides aminés de longueur. Au sens de l'invention, un acide aminé est choisi parmi les acides aminés suivants: A (Alanine), G (Glycine), V (Valine), L (Leucine), I (Isoleucine, M (Méthionine), P (Proline), W (Tryptophane), F (Phénylalanine), M (Méthionine), H (Histidine), S (Sérine), T (Thréonine), C (Cystéine), N (Asparagine), Q (Glutamine), Y (Tyrosine), D (Acide Aspartique), E (Acide Glutamique), K (Lysine) et R (Arginine). Les acides aminés X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8 et X9 peuvent être identiques ou différents. Par Cystéine et Méthionine, on englobe également les acides aminés dits "non-naturels" tels que les Sélénocystéines et Sélénométhionines. Dans certains modes de réalisation, ledit anticorps monoclonal est dirigé contre un peptide de formule (I), dans laquelle : - X1 et X4 sont des acides aminés non polaires choisis parmi A, G, V, L, I, - X2 et X5 sont des acides aminés polaires choisis parmi S et T, - X6 est choisi parmi N et Q, - X3 et X9 sont des acides aminés basiques choisis parmi H, K et R, - X7 et X8 sont des prolines. L'invention est aussi relative à un anticorps monoclonal dirigé contre un peptide ou une protéine comprenant, et de préférence consistant en, la séquence SEQ ID N° 1 phosphorylée sur tyrosine: - ASHVDNEY(P03H2)SQPPR - Par "anticorps" au sens de la présente invention, on entendra notamment des anticorps monoclonaux ou des fragments (par exemple les fragments F(ab)'2, F(ab)) ou encore tout peptide comprenant un domaine de l'anticorps initial reconnaissant le peptide de formule (I), y compris tout peptide comprenant un domaine de l'anticorps initial reconnaissant le peptide phosphorylé sur tyrosine de séquence SEQ ID N°1. Des anticorps monoclonaux peuvent être préparés à partir d'hybridomes selon la technique décrite par KOHLER et MILSTEIN (1975). La présente invention concerne donc également des anticorps monoclonaux dirigés contre un peptide de formule (I), y compris des anticorps monoclonaux dirigés contre un peptide phosphorylé sur tyrosine de séquence SEQ ID N°1, lesdits anticorps monoclonaux étant produits selon la technique du trioma ou encore la technique d'hybridome décrite par KOZBOR et al. (1983). L'invention a également trait à des fragments d'anticorps simple chaîne Fv (ScFv) se liant spécifiquement à un peptide de formule (I), y compris à un peptide phosphorylé sur tyrosine de séquence SEQ ID N° 1, et produits selon la technique décrite dans le brevet US N°4,946,778 ou encore par MARTINEAU et al. (1998). Les anticorps monoclonaux selon l'invention englobent également des fragments d'anticorps obtenus à l'aide de banques de phages telles que décrites par RIDDER et al. (1995) ou encore des anticorps humanisés tels que décrits par REINMANN et al. (1997) et LEGER et al. (1997). Un anticorps monoclonal selon l'invention peut comprendre en outre un marqueur détectable isotopique ou non isotopique, par exemple fluorescent, ou encore être couplé à une molécule telle que la biotine, selon des techniques bien connues de l'homme du métier. Notamment, les anticorps monoclonaux sont choisis parmi : (i) des anticorps monoclonaux produits par des cellules issues de la fusion cellulaire entre (a) des cellules B d'un mammifère non humain immunisé à l'encontre d'un peptide formule (I), y compris un peptide phosphorylé sur tyrosine de séquence SEQ ID N° 1, et (b) des cellules d'une lignée cellulaire productrice d'anticorps, telle que des cellules d'un myélome ; (ii) des anticorps monoclonaux produits par des cellules transfectées ou transformées avec un ADN codant une immunoglobuline, ledit ADN étant préalablement isolé à partir de l'ADN d'une cellule B d'un mammifère non humain immunisé à l'encontre d'un peptide formule (I), y compris un peptide phosphorylé sur tyrosine de séquence SEQ ID N° 1; (iii) les fragments Fab ou F(ab)'2 préparés à partir des anticorps monoclonaux (i) et (ii) ci-dessus ; (iv) des fragments ScFv se liant spécifiquement à un peptide formule (I), y compris un peptide phosphorylé sur tyrosine de séquence SEQ ID N° 1. Un anticorps selon l'invention peut être notamment d'isotype IgG, tels que les IgGl, IgG2a, IgG2b et IgG3, IgA ou IgM. Selon un mode préféré de réalisation, un anticorps est choisi parmi les anticorps d'isotype IgG-3 kappa et un anticorps d'isotype IgM-kappa en fonction de leur spécificité vis à vis du peptide phosphorylé immunisant. Selon un mode préféré de réalisation, un anticorps selon l'invention peut être un anticorps de souris. Un tel anticorps peut être obtenu par les méthodes décrites dans (Bismuth G, Gouy H, et al, 1990, Mol Immunol. 27:1127-36) et telles que précisées dans l'exemple 1. Ainsi un anticorps monoclonal selon l'invention peut être produit à partir d'un hybridome issu de la fusion cellulaire des cellules B issues de la rate de souris immunisées Balb/c est réalisée avec le myélome 5P2/0. Ce motif phosphorylé de 13 acides aminés est propre à la protéine CD5 humaine. Avantageusement, l'anticorps monoclonal selon l'invention est spécifique de la forme active du récepteur CD5 ou PCD5. De façon préférentielle, cette forme active du récepteur CD5 est exprimée à la surface des lymphocytes T et des lymphocytes B et des lymphocytes Bi-a normaux après activation et des lymphocytes B de type LLC. La séquence de la protéine CD5 considérée peut être avantageusement celle définie selon la SEQ ID N°2. Sont également considérés les polymorphismes naturels connus de CD5. Comme vu précédemment, on considérera par exemple les séquences de CD5 référencées dans Carnero-Montoro et al. (Carnero-Montoro et al., Evolutionary and functional evidence for positive selection at the human CD5 immune receptor gene, 2012, Mol Biol Evol., 29(2):811-23). Avantageusement, et de façon non limitative, l'anticorps de l'invention permet de reconnaître les formes humaines et murines du CD5 en raison d'une forte homologie de séquence du domaine cytoplasmique des formes humaines et murines de CD5. Ainsi, l'anticorps de l'invention reconnait spécifiquement la forme active de CD5 ou PCD5, par exemple la forme de CD5 qui est activée suite à l'engagement du TCR ou du BCR, en particulier du BCR. Avantageusement, cette forme activée correspond à la forme de CD5 phosphorylée sur son domaine régulateur intracellulaire suite à l'engagement du BCR. Selon un mode de réalisation, un anticorps selon l'invention est capable de discriminer la forme active de CD5 (aussi appelée « PCD5 ») de la forme non-active. Selon un mode préféré de réalisation, l'anticorps de l'invention reconnait spécifiquement le motif DNEY de CD5, dans sa forme phosphorylée sur Y453 ainsi que la séquence peptidique de CD5 englobant ce motif DNEY, en particulier le domaine régulateur intracellulaire de CD5. Par "domaine régulateur intracellulaire de CD5" on entend la région intracellulaire de CD5 comprise entre l'acide aminé 446 et l'acide aminé 458, et comprenant 5 un motif DNEY. Avantageusement, un anticorps monoclonal selon l'invention ne présente pas de réaction croisée avec un peptide de SEQ ID N°1 ou la forme non phosphorylée sur tyrosine d'un peptide de formule (I), en particulier avec un peptide de SEQ ID N°1. Avantageusement, un anticorps monoclonal selon l'invention ne présente pas de 10 réaction croisée avec une tyrosine phosphorylée isolée. Avantageusement un anticorps monoclonal selon l'invention ne présente pas de réaction croisée avec la forme non-activée du récepteur CD5. Avantageusement, un anticorps monoclonal selon l'invention ne présente pas de réaction croisée avec une tyrosine phosphorylée isolée, ou de la forme non-activée du 15 récepteur CD5. Encore plus avantageusement un anticorps monoclonal selon l'invention ne présente pas de réaction croisée avec : a) Un peptide comprenant, ou consistant, en la forme non-activée du récepteur CD5, 20 b) un peptide de séquence SEQ ID N°1, c) une tyrosine phosphorylée isolée ou faisant partie d'un peptide tel que défini dans a). Par « réaction croisée » on entend la capacité d'un anticorps à se lier de manière détectable à une tyrosine isolée phosphorylée, ou à un peptide distinct d'un peptide de formule 25 (I), en particulier à un peptide distinct du peptide de SEQ ID N°1 phosphorylé sur tyrosine. L'homme de l'art est ainsi parfaitement capable de déterminer un seuil de détection pour établir la présence, ou non, d'une réaction croisée selon la méthode employée. On considèrera en particulier, et de façon non-limitative, une méthode de détection parmi un groupe comprenant les techniques ELISA, les western-blots, l'immunoprécipitation, 30 l'immunofluorescence, l'immunohistochimie, la cytométrie en flux, la cytométrie de masse, la microscopie électronique, les puces à protéines ou « protein arrays », ou encore telle que définie par les exemples 4 et 5. Avantageusement l'anticorps monoclonal selon l'invention peut donc être utilisé par ELISA, Western-blot, immunoprécipitation, immunofluorescence, immunohistochimie, cytométrie en flux, cytométrie de masse, microscopie électronique et puces à protéines ou « protein array ». Un anticorps selon l'invention est ainsi particulièrement avantageux pour une utilisation en immunohistochimie ou en cytométrie en flux. Selon un mode particulier de réalisation, l'anticorps peut être combiné de manière covalente ou non covalente à une molécule détectable. De tels exemples de molécule détectable sont bien connus de l'homme de l'Art. En particulier, un exemple de molécule détectable est illustré dans l'exemple 2. On citera en particulier, et de façon non limitative, un anticorps couplé à une molécule détectable, choisie parmi le groupe suivant : (i) une molécule radioactive, (ii) une molécule fluorescente, (iii) une molécule luminescente, (iv) une molécule récepteur sélectivement reconnue par un ligand et (v) une étiquette métallique. En particulier on considèrera un anticorps couplé à une molécule radioactive telle qu'un isotope lourd naturel ou radioactif, une molécule luminescente telle qu'un chromophore, un luminophore, un fluorophore, un agent calorimétrique, une substance magnétique, un marqueur électro-chemi-luminescent, un marqueur de spin, des particules d'or ou d'argent, ou encore des enzymes ou substrats. Des fluorophores peuvent avantageusement être utilisés, ainsi que des complexes de lanthanides et des étiquettes métalliques, notamment Europium et Terbium, la fluoresceine, la fluoresceine isothiocyanate (FITC), la dichlorotriazinylamine, la rhodamine, l'éosine, la coumarine, les méthyl-coumarines, le pyrène, le vert de Malachite, les fluorophores de type Cy® ou Alexa® (Invitrogen) tels que le Cy°3, Cy°5, Alexa Fluor® 488, Lucifer Yellow, Cascade Blue, Texas Red, le chlorule de dansyle, la phycoerythrine, la luciferine, la GFP et ses variants, le bore-dipyromethene (BODIPY), et d'autres connus dans l'art antérieur tels que ceux décrits dans Haugland, Molecular Probes Handbook, (Eugene, Oreg.) 6th Edition; The Synthegen catalog (Houston, Tex.), Lakowicz, Principles of Fluorescence Spectroscopy, 2nd Ed., Plenum Press New York (1999). Méthodes de détection, de dia2nostic et de pronostic Comme le montre notamment l'exemple 3, les anticorps anti-PCD5 de l'invention permettent avantageusement de distinguer les formes inactives de CD5 des formes activées. In vitro, le phénomène d'activation du récepteur CD5 peut ainsi être induit, de façon non limitative, sur des cellules normales ou des cellules B Daudi, après stimulation par des anti-IgM et, optionnellement, pontage de ces dernières au BCR. Ce nouvel outil permet avantageusement d'analyser l'intensité et la cinétique du phénomène de phosphorylation de CD5 dans les cellules dites « normales », par rapport à une population de cellules « test », notamment de cellules B leucémiques. L'anticorps anti-PCD5 permet en particulier de déterminer le pourcentage de cellules CD5+ PCD5+ à un temps donné. Comme vu précédemment, les résultats de la Demanderesse renforcent l'idée que le complexe BCR est stimulé in vivo, et de façon permanente, dans toutes les cellules de type LLC, indépendamment de leur statut mutationnel IgV. L'invention concerne donc également une méthode in vitro de détection de CD5 activé (aussi appelé « PCD5 ») dans un échantillon comprenant les étapes suivantes : a) mise en contact d'un échantillon à tester avec un anticorps monoclonal anti- PCD5 tel que défini dans la présente description, b) détection ou quantification des complexes formés entre ledit anticorps monoclonal et des cellules exprimant un CD5 activé (« PCD5 ») éventuellement présentes dans ledit échantillon. Préférentiellement, l'échantillon est choisi dans le groupe consistant en (i) un échantillon de sang total, (ii) une suspension de cellules mononucléaires et polymorphonucléaires périphériques purifiées à partir d'un échantillon de sang total, (iii) une suspension de cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) purifiées à partir d'un échantillon de sang total, (iv) une suspension de cellules lymphocytaires T purifiées à partir d'un échantillon de sang total, et (v) une suspension de cellules lymphocytaires B purifiées à partir d'un échantillon de sang total. Dans des modes de réalisation particuliers, la méthode de détection telle que définie ci-dessus peut comprendre une étape de mise en contact dudit échantillon avec un ou plusieurs ligands additionnels, en particulier des anticorps, préférentiellement avec un ou plusieurs anticorps spécifiques d'un type cellulaire particulier susceptible d'être contenu dans ledit échantillon, le(s)dit(s) ligand ou anticorps additionnel(s) étant choisi(s) parmi le groupe suivant : (i) des ligands ou anticorps reconnaissant un marqueur ou antigène spécifique des lymphocytes B présents chez un individu affecté d'une lymphocytose B monoclonale, (ii) des ligands ou anticorps reconnaissant un marqueur ou antigène spécifique des lymphocytes B1 (iii) des ligands ou anticorps reconnaissant un marqueur ou antigène spécifique des lymphocytes B2, (iv) des ligands ou anticorps reconnaissant un marqueur ou antigène spécifique des lymphocytes T, (v) des ligands ou anticorps reconnaissant un marqueur ou antigène spécifique des lymphocytes B présents chez un individu affecté d'une LLC, et (vi) des ligands ou anticorps reconnaissant un marqueur ou antigène spécifique des lymphocytes B présents chez un individu affecté d'une MCL. Avantageusement, l'étape de détection telle que définie précédemment peut être réalisée par une technique choisie dans le groupe suivant : ELISA, Western-blot, immunoprécipitation, immunocyto-chimie, immunocyto-fluorescence, cytométrie en flux, cytométrie de masse, microscopie électronique, puce à protéines ou « protein array ». De façon remarquable, l'exemple 4 montre que le marquage par un anticorps antiPCD5 selon l'invention n'est retrouvé sur aucun (0 %) des lymphocytes B CD5+ issus de la totalité des individus « sains » testés, alors que l'anticorps anti-PCD5 se lie aux cellules B des patients affectés d'une LLC. Il convient donc de reconnaitre que la méthode de détection selon l'invention présente des caractéristiques de sensibilité et de spécificité requises pour réaliser un diagnostic de la survenue d'une LLC chez un individu. Ce résultat est compatible avec les données in vitro décrites dans l'exemple 3. En outre, l'exemple 4 montre que les anticorps anti-PCD5 selon l'invention permettent de distinguer certaines formes pathologiques associées aux lymphocytes exprimant le marqueur CD5 à leur surface. Sont ici tout particulièrement considérées les formes pathologiques associées aux cellules B, et encore plus particulièrement les syndromes lymphoprolifératifs associés aux cellules B. Comme vu précédemment, les leucémies lymphoïdes chroniques présentent une activation à leur surface du marqueur CD5 : ces cellules B de type LLC présentent donc un profil CD5+ PCD5+. On montre en particulier que ce double marquage concerne 100 % des cellules B de type LLC extraites de patients diagnostiqués, ainsi qu'une majorité de cellules B extraites de trois patients MBL. Ce marquage des cellules B de type LLC n'apparait pas dépendant du statut mutationnel IgV. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention concerne donc également une méthode de diagnostic et de pronostic de la Leucémie Lymphoïde Chronique. A titre de comparaison, et comme décrit précédemment, un score de Matutes de 4 ou 5 n'est établi que pour seulement 87 % des cas de LLC. En d'autres termes, prêt de 13 % des LLC présentent un score de 0, 1, 2 ou 3, et ne permettent donc pas d'être identifiés par cette seule méthode. La méthode décrite ci-dessus permet donc avantageusement de détecter des cellules B de type LLC parmi d'autres populations pour lesquelles CD5 est également un marqueur de surface, et/ou pour lesquels il est susceptible d'être sous sa forme activée. La méthode décrite par l'invention peut donc avantageusement compléter voire se substituer à celle actuellement employée, qui requiert l'établissement d'un score de Matutes de 4 ou 5. En particulier l'exemple 4 démontre que le profil d'activation des cellules B de type LLC (PCD5+) est distinct de celui observé pour les cellules B de type Lymphome de Manteau, ou MCL (PCD5-). La présente invention concerne aussi une méthode in vitro de détermination de la survenue d'une leucémie lymphoïde chronique chez un individu, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : a) mise en contact d'un échantillon préalablement collecté chez ledit individu avec un anticorps anti-PCD5 tel que défini dans la présente description, b) détection ou quantification des complexes formés entre ledit anticorps et des cellules exprimant un CD5 activé qui sont éventuellement présentes dans ledit échantillon. Dans certains modes de réalisation de la méthode ci-dessus, ladite méthode comprend aussi une étape de mise en contact de l'échantillon avec au moins un ligand se liant spécifiquement à un antigène choisi parmi les antigènes CD5, CD22, CD23, FMC7, IgS, chaîne x d'immunoglobuline et chaîne 2 d'immunoglobuline. Comme ligand, on utilise de préférence un anticorps choisi parmi les anticorps suivants: anti-CD5, anti-CD22, anti-CD23, anti-FMC7, anti-IgS, et/ou anti chaînes x ou k Avantageusement, une méthode telle que définie ci-dessus peut inclure une étape de réalisation d'un score de Matutes. Dans ce mode de réalisation particulier, on pourra utiliser les anticorps anti-CD5, anti-CD22, anti-CD23, anti-FMC7 et/ou anti-IgS selon les protocoles classiquement définis pour la réalisation d'un tel score. Ces protocoles et anticorps sont connus de l'homme de l'Art, et déjà présentés, par exemple, dans (Matutes et al., 1994, Leukemia, 8: 1640-45 ; Matutes et al., 1994, Leuk Lymphoma, 14 Suppl 1:57-61). On citera en particulier l'anticorps anti-CD5 (clone UCH-T2), les anticorps antiCD22, anti-CD23, anti-FMC7 et anti-IgS commercialisés par la société Dako. Les anti- CD5/CD23/CD22/FMC7/anti chaînes ic ou 2 directement couplés à des fluorochromes utilisés en routine en cytométrie de flux peuvent être commercialisés par les sociétés Becton Dickinson et Beckman Coulter Immunotech. Selon un mode de réalisation, la méthode définie précédemment est ainsi particulièrement avantageuse dans le cadre d'échantillons pour lesquels le score de Matutes de l'échantillon est égal ou inférieur à 3. Avantageusement, une méthode selon l'invention permet donc de distinguer la LLC des tricholeucémies (HCL ou Hairy Cell Leukemia), des variantes de ces tricholeucémies (HCL-variants), des autres formes atypiques telles que les SLVL (ou Splenic Lymphoma with Villous Lymphocytes), des leucémies prolymphocytiques (ou PLL), des lymphomes folliculaires, les lymphomes lymphoplasmacytiques, des lymphomes du manteau (ou MCL), ou encore des lymphomes de type LCL (Large Cell Lymphoma). Comme vu précédemment, il convient par ailleurs de noter que les cellules B de type lymphocytose monoclonale B (ou MBL) constituent une forme particulière de lymphocytose, ne nécessitant pas de traitement mais susceptible d'évoluer vers des cas de 20 LLC. Selon un mode alternatif de réalisation, une méthode de l'invention peut ainsi également être employée comme outil de suivi de l'évolution des proliférations lymphocytaires monoclonales (de type MBL) vers un stade pathologique de type LLC. Il conviendra alors, afin de préciser ces formes intermédiaires de la LLC, de 25 compléter ce diagnostic par d'autres analyses, telles qu'une numérotation des lymphocytes B présents dans le sang. Comme vu précédemment, une telle numérotation peut se traduire par l'établissement d'un seuil pathologique, qui peut être d'environ 5x109 cellules par litre de cellules B monoclonales, ou encore de 5000 cellules B / mm3. Naturellement, des cas 30 particuliers, ou « frontières », peuvent également être établis pour des valeurs supérieures ou inférieures à ce seuil. Une telle sélection, ainsi que l'établissement d'un seuil pathologique, sont parfaitement dans les connaissances de l'homme de l'art. De manière générale, les méthodes définies par l'invention peuvent également être associées à d'autres méthodes de détection, de diagnostic ou de pronostic, telles qu'un immunophénotypage, la mise en évidence d'une hyperleucocytose, l'établissement d'un myélogramme, l'électrophorèse des protides, l'analyse cytogénétique (notamment par hybridation in situ ou méthode FISH), l'analyse du profil mutationnel par séquençage des gènes des immunoglobulines (on parlera alors de profil « non muté » ou « hypermuté »), ou encore la mesure de l'expression de la protéine ZAP70 (notamment par cytométrie en flux). En particulier il convient de noter que l'observation conjointe de certaines délétions chromosomiques, d'un profil non muté et de la présence de ZAP70 sont indicateurs d'un pronostic défavorable de LLC. L'interprétation de ces données fait également partie des connaissances générales de l'homme de l'Art, qui peut être un biologiste spécialisé dans les maladies du sang. Ainsi la méthode selon l'invention viendra avantageusement compléter ou confirmer l'établissement d'un pronostic défavorable. Kits de détection La présente invention concerne aussi un kit de détection de la présence de CD5 activé (« PCD5 »), ou de lymphocytes activés, comprenant nécessairement l'anticorps anti- PCD5 de l'invention, ainsi qu'un ou plusieurs ligands reconnaissant un autre marqueur cellulaire. Le cas échéant, un ligand dirigé contre un des marqueurs du kit peut être un anticorps, un aptamère nucléique, un aptamère protéique ou encore tout autre ligand connu dudit marqueur. De préférence, ce ligand est un anticorps. En particulier sont considérés tous les types cellulaires pour lesquels le marqueur de surface CD5 peut être exprimé, et donc pour lesquels peut être envisagée son activation. De façon non exhaustive et non limitative, on citera parmi les types cellulaires envisagés, les lymphocytes T, les lymphocytes B et les lymphocytes B-la. De façon non limitative, peuvent être également considérés dans ce kit les marqueurs de tous les types cellulaires exprimant physiologiquement ou non, de façon constitutive ou induite, le marqueur de surface CD5, tels que : les lymphocytes B de type HCL, ou Haity Cell Leukemia, des variantes de ces tricholeucémies (HCL-variants), des autres formes atypiques telles que les SLVL (ou Splenic Lymphoma with Villous Lymphocytes) , des leucémies prolymphocytiques (ou PLL), des lymphomes folliculaires, des lymphomes lymphoplasmacytiques, des lymphomes du manteau (ou MCL), ou encore des lymphomes de type LCL (Large Cell Lymphoma). Enfin, les proliférations B monoclonales (Monoclonal B cell lymphocytosis, MBL) fréquentes chez le sujet âgé (>2 % de la population) et dont une fraction évolue vers la LLC, sont également considérées. Une telle sélection de marqueurs relève des connaissances générales de l'homme de l'Art. Selon un mode de réalisation, l'invention concerne donc un kit de détection de CD5 activé comprenant : a) un anticorps anti-PCD5 tel que défini dans la présente description, et b) un ligand dirigé contre une cellule exprimant le récepteur CD5, ledit ligand étant distinct de l'anticorps anti-PCD5 utilisé à l'étape a). Selon un mode particulier de réalisation, ledit kit de détection de CD5 activé comprend : a) un anticorps anti-PCD5 tel que défini dans la présente description, b) un ligand anti-CD5. Un kit de détection peut ainsi être utilisé dans le cadre, ou en complément, de l'établissement d'un score de Matutes, et/ou de toute méthode décrite par l'invention. Selon ce mode de réalisation, l'invention peut donc concerner un kit de détection de lymphocyte activé comprenant un ou plusieurs ligands choisis parmi le groupe suivant: ligands anti-CD5, anti-CD22, anti-CD23, anti-FMC7, anti-IgS, anti chaînes ic ou k De façon préférée, ce ligand est un anticorps anti-CD5, anti-CD22, anti-CD23, anti-FMC7, anti-IgS et/ou anti chaînes ic ou k Selon un mode particulier de réalisation du kit de détection de lymphocytes activés, ledit kit peut aussi inclure: a) un anticorps anti-PCD5 tel que défini précédemment, b) un ligand anti-CD5, anti-CD22, anti-CD23, anti-FMC7, et/ou anti-IgS. Avantageusement, l'invention concerne un kit de détection qui peut comprendre : a) un anticorps anti-PCD5 tel que défini précédemment, b) un ligand anti-CD5, c) un ligand anti-CD22, d) un ligand anti-CD23, e) un ligand anti-FMC7, f) un ligand anti-IgS. Dans certaines variantes du kit, un kit tel que défini précédemment peut comprendre en outre un ligand, en particulier un anticorps, dirigé contre un des marqueurs suivants : un ligand anti-CD2, anti-CD19, anti-CD27, anti-CD38, anti-HLA-DR, anti-IgM, anti-phosphoprotéine. Les phosphoprotéines considérées peuvent notamment être des P-CD5, des P-Lyn, P-p38MAP Kinase et P-STAT3. Selon un mode particulier de réalisation, le kit peut donc également comprendre un ligand, en particulier un anticorps, dirigé contre des phosphotyrosines ou des phosphoprotéines, et tout particulièrement P-CD5, P-Lyn, P-p38MAP Kinase et P-STAT3. Selon un mode préféré de réalisation, le kit peut donc également comprendre un ligand, en particulier un anticorps, choisi dans le groupe suivant : anti P-CD5, anti P-Lyn, anti P-p38MAP Kinase, anti P-STAT3. Selon un mode de réalisation, un anticorps monoclonal de souris anti-P-STAT3 peut être un anti-PY705-STAT3 (clone B-7, Ref. sc-8059, « Mouse Monoclonal anti-human P-STAT3 »), commercialisé par Santa Cruz Biotech®. Selon un mode de réalisation, un anticorps anti P-Lyn peut être un anti-PY507 ou un anti-PY396 (Ref. AJ1451c; Ref. AJ1451b), commercialisés par Abgent. Selon un mode de réalisation, un anticorps polyclonal de lapin anti-P-p38MAP Kinase peut être un anti-P-T180/Y182-p38MAPK (Ref AF869) commercialisé par R&D 20 Systems® Selon un autre mode de réalisation, le kit peut également comprendre un ligand, en particulier un anticorps, dirigé contre les formes non phosphorylées de ces phosphoprotéines. Naturellement, un kit de détection de CD5 activé, ou encore de lymphocytes 25 activés, peut être utilisé dans le cadre des méthodes définies par l'invention, telles que par exemple une puce à protéines ou « protein array ». La présente invention est en outre illustrée, sans y être limitée, par les exemples suivants. 30 EXEMPLES Exemple 1: Obtention d'un anticorps monoclonal anti-PCD5. Les peptides de CD5 qui ont été utilisés pour l'immunisation des souris et pour les deux tests ELISA de criblage des anticorps monoclonaux ont été synthétisés et phosphorylés à façon par la Société EUROGENTEC. 1) peptide synthétique pour la détection ELISA Séquence : H2N - ASHVDNEYSQPPR - CONH2 Poids Moléculaire : 1499,57 g/mol 2) peptide synthétique phosphorylé pour la détection ELISA Peptide No : EP091263 correspondant à EP081741 pY453 Séquence : H2N - ASHVDNEY(P03H2)SQPPR - CONH2 Poids Moléculaire : 1578,57 g/mol 3) peptide synthétique phosphorylé couplé à KLH pour immunisation Conjugaison du peptide à une protéine porteuse « carrier » Protéine porteuse : KLH (couplage avec 5 mg de peptide) Réactif de couplage : glutaraldéhyde Rendement de couplage : 55 % Le peptide correspondant à la région de CD5 humain et comprenant la Tyrosine 453 est synthétisé, puis phosphorylé et couplé à la protéine cargo KLH avant immunisation de souris. La fusion cellulaire des cellules B issues de la rate des souris immunisées Balb/c est réalisée avec le myélome 5P2/0 (Shulman et al., 1978, Nature, 276, 269 -270). La sélection des hybridomes est réalisée selon le protocole établi (Bismuth G, Gouy H et al., 1990, Mol Immunol., 27:1127-36). Six cent surnageants de culture d'hybridome ont été criblés par deux tests ELISA à partir des peptides phosphorylés et natifs. Les hybridomes ont été clonés en utilisant la méthode statistique de Poisson de clonage par dilution limitée. Les surnageants des clones ont été de nouveau testés par ELISA contre les 2 peptides de 13 acides aminés cités plus-haut, phosphorylé et natif pour vérification. La classe d'anticorps monoclonaux de souris et l'identité de la sous-classe ont été déterminées à partir du kit "Rapid Mouse Antibody Isotyping kit - Kappa & Lambda - Mouse" (Thermo Scientific, Perbio Sciences France SAS). Deux anticorps monoclonaux ont été sélectionnés: un anticorps IgG3 Kappa et un anticorps de type IgM Kappa. Exemple 2: Purification et marquage d'un anticorps monoclonal anti-PCD5 et Isotype contrôle IgG3k par un fluorophore. Le surnageant d'une culture d'hybridome (IgG3k) est précipité par le sulfate d'ammonium. Une procédure de purification d'anticorps de type IgG par centrifugation sur colonne MelonTM Gel est appliquée sur l'échantillon dialysé selon les instructions du fabricant, et en utilisant un kit de type MelonTM Gel IgG Spin Purification kit (Thermo Scientific, Perbio Sciences France SAS). L'anticorps monoclonal purifié de l'invention et l'anticorps monoclonal purifié IgG3, K Isotype Control (BD Pharmingen) sont marqués tous deux par le fluorophore Alexa Fluor 488 (Alexa Fluor 488 Monoclonal Antibody Labeling Kit de Molecular Probes, Invitrogen référence A-20181) ou bien marqués par la Biotine (Thermofisher/Perbioscience/Pierce), avec le E2 link microsulfo-NHS-biotinylation kit (référence 21217) en suivant les instructions du fabricant. Exemple 3: Evaluation par analyse microscopique de la spécificité de l'anticorps anti-PCD5 pour la forme activée de CD5. Objectif de l'étude : mise en évidence de la spécificité de l'anticorps anti-PCD5 pour la forme activée de CD5, par rapport à la forme inactive (i.e. non-activée par la voie de signalisation du récepteur BCR). A. Matériel & Méthodes Les anticorps anti-PCD5 sont obtenus selon le protocole décrit en exemples 1 et 2. Des cellules B Daudi (2x106) transfectées avec un vecteur vide pNT (voir GaryGouy H et al, Blood 2002), ou contenant la séquence entière cDNA du CD5 humain (SEQ ID N°2) sont stimulées, ou non, avec une solution d'anti-IgM F(ab)'2 de lapin à 2 mg/mL (Jackson Immunosearch, Baltimore, référence 309-006-043) pendant 5 minutes, puis marquées par un anticorps anti-CD5 UCH-T2 couplé à un fluorochrome (Santa-Cruz Biotechnology®, CD5 (UCH-T2), référence sc-1180). Les cellules sont ensuite fixées en tampon neutre PBS Dulbecco contenant 4 % w/v Paraformaldéhyde pendant 30 minutes à température ambiante et perméabilisées en tampon neutre PBS Dulbecco contenant 0,5 % de Triton X100 pendant 4 minutes à température ambiante. La réaction est bloquée par une solution de PBS contenant 5 % d'albumine bovine pendant 30 minutes. Les lames sont ensuite marquées (i) soit avec un anticorps de lapin anti-CD5 (Santa-Cruz Biotechnology, CD5 (H300) référence sc-20920) et un anticorps anti-lapin couplé à A1exa594 (InvitrogenTM) (ii) soit avec un anticorps de souris anti-PCD5 non marqué et un anticorps anti-souris couplé à A1exa488 ((InvitrogenTM) (iii) soit avec un anticorps purifié contrôle isotype IgG3 kappa de souris (BD Pharmingen, référence 550341) et un anticorps anti-souris couplé à A1exa488 (InvitrogenTm). Les plaques sont montées dans un milieu Vectashield® (Vector Laboratories) comprenant du DAPI pour la coloration du noyau. Les clichés sont pris à un grossissement x40. Les images sont acquises avec un microscope Zeiss Axio2 et le logiciel Axio (Carl Zeiss, 20 Oberkochem Germany). B. Résultats L'expérience met en évidence la coloration par le fluorochrome DAPI du noyau de toutes les cellules. Les cellules sont marquées et expriment la protéine CD5 à leur surface. 25 Seules les cellules qui ont été stimulées présentent une coloration à leur périphérie associée à l'anticorps anti-PCD5 qui reconnait la forme active du marqueur CD5. Ce résultat met donc en évidence la spécificité particulière de l'anticorps de l'invention pour la forme active. L'analyse par immunofluorescence des cellules B du sang d'un sujet sain (avec un 30 pontage de l'IgM de surface, qui induit leur activation) et de cellules pathologiques issues d'un patient souffrant de LLC, est également réalisée après marquage par l'anticorps antiPCD5 de l'invention. Cette analyse confirme le résultat précédent et permet de l'étendre aux cellules B caractéristiques de la LLC. Exemple 4: Etude de l'activation du récepteur CD5 sur des cellules de LLC, de cellules B purifiées du sang périphérique humain d'un donneur sain et de cellules de Lymphome du manteau. Objectif de l'étude : mise en évidence de la capacité de l'anticorps anti-PCD5 à marquer spécifiquement certaines populations pathologiques de lymphocytes B. A. Matériel & Méthodes 1. Sélection des patients On considère ici 3 patients MBL (Lymphocytose monoclonale B), 4 patients MCL (Lymphome du manteau) et 23 patients LLC (Leucémie lymphoïde chronique). Les cellules issues de ces patients ont été collectées après consentement éclairé et signé conformément à la déclaration d'Helsinki et les lois éthiques de la faculté de médecine de l'université de Nancy. Les cellules B issues de ces groupes de donneurs ont été séparées à partir d'un cocktail d'enrichissement RoseftesepTM selon le protocole établi par le fabricant (Stem Cell technologies, Vancouver Canada). La pureté des préparations obtenues est supérieure à 97 %. Les cellules extraites des patients du groupe « témoin » (patients 1 à 6) utilisées pour cette étude sont décrites dans Gary-Gouy et al (Gary-Gouy et al. 2007, J Immunol., 179 : 4333-4344). En outre, les cellules de 6 patients LLC issus de cette étude sont également incluses dans l'analyse, ce qui porte le nombre total de patients à 23. Ces cellules sont décongelées et, sauf indication contraire, maintenues pendant une nuit dans un incubateur ( 5 % CO2 et à 37 °C) avant de procéder à leur analyse. Les caractéristiques des patients participant à l'étude (hormis les 6 patients LLC issus de l'étude mentionnée ci-dessus, ainsi que des témoins) sont résumées dans le tableau 1. Le groupe LLC comprend 10 hommes et 8 femmes, de 47 à 82 ans, et à un stage de Binet de A (9 patients), B (4 patients) et C (4 patients). Comme vu précédemment, le stage de Binet est un système de classification communément utilisé pour l'évaluation de la gravité d'une leucémie lymphoïde chronique. Les caractéristiques cliniques des patients spécifiquement inclus dans cette étude et constituant ces groupes sont récapitulées dans le tableau 1. Tableau 1 : patients représentatifs inclus dans l'étude, diagnostiqués LLC, MBL ou MCL. Patient Age Sexe Stage IgV Statut Lymphocytes (Maladie) Binet Mutationnel Bimm3 7(LLC) 80 F A NR 9810 8 (LLC) 67 M A UM 12292 9 (LLC) 61 M C NR 39739 10 (LLC) 66 M C NR 61920 11 (LLC) 79 M B NR 172900 12 (LLC) 57 M B NR 12701 13 (LLC) 77 M B NR 5550 14 (LLC) 78 F A NR 25389 15 (LLC) 47 M A NR 22850 16 (LLC) 68 M C NR 288100 17 (LLC) 82 F A NR 49390 18 (LLC) 77 M B NR 59923 19 (LLC) 72 M A NR 186000 20 (LLC) 79 F A NR 127960 21 (LLC) 80 F C NR 109700 22 (LLC) 52 F A NR 8960 23 (LLC) 67 F A NR 109500 24 (MBL) 63 M MBL NR 4234 25 (MBL) 49 M MBL NR 4050 26 (MBL) 71 F MBL NR 6090 27 (MCL) 75 M MCL NR 4240 28 (MCL) 56 M MCL NR 136409 29 (MCL) 60 F MCL NR 3119 30 (MCL) 66 M MCL NR 1683 LLC = leucémie lymphoïde chronique MBL = lymphocytose monoclonale B (inférieur ou égal à 6000 cellules B / mm3) MCL = lymphome du manteau Statut mutationnel : UM (non muté), M (muté), NR (non renseigné)10 2. Marquage des cellules et FACS Les statistiques du tableau 1 sont obtenues à partir de l'ensemble des patients considérés dans l'étude. On considère en particulier (figure 1) pour l'étude par FACS les cellules B extraites du sang d'un adulte sain (groupe « témoin »), les cellules B issues d'un patient LLC représentatif (patient 12, voir tableau 1), et un patient MCL (patient 27), toutes positives pour la chaine sIgLx, sont marquées à leur surface par des anticorps monoclonaux anti-CD19 (Beckman-Coulter catalog no : IM1285U), anti-CD5 (IoTest® CD5-FITC Beckman Coulter référence A08932) et anti-CD23 (Dako, clone MFIN46, Ref 7062) ainsi que des anticorps polyclonaux anti-Igx, afflige, (Dako, catalog no : FR481) puis perméabilisées et marquées intra-cellulairement par un contrôle isotype IgG3 kappa de souris (BD Pharmingen, référence 550341) couplé à Alexa 488 et l'anticorps anti-PCD5-A1exa488. L'expérience de FACS est réalisée sur un cytomètre en flux (FACSCa1iburTM Beckton Dickinson). Les cellules en Dulbecco PBS sont fixées et perméabilisées selon le protocole du kit de fixation- perméabilisation Beckton Dickinson CytoFix/ CytoPermTM (référence 554714). B. Résultats Le tableau 2 récapitulatif compare, à partir des cellules B extraites de témoins et de patients LLC, MBL ou MCL, les pourcentages de lymphocytes B CD5+ présents dans l'échantillon, ainsi que de lymphocytes présentant le double marquage CD5+ PCD5+. Ces valeurs sont obtenues à partir d'une analyse par FACS de l'ensemble des échantillons extraits des patients décrits dans le tableau 1. On observe donc que les cellules B de type leucémie lymphoïde chronique présentent bien un double marquage CD5+PCD5+ caractéristique, qu'on ne retrouve ni dans les cellules B « saines », ni dans les cellules B de type MCL. On note également que la majorité des cellules B de type MBL présentent aussi ce double marquage. Cette propriété est cohérente avec les propriétés évolutives de certaines formes de MBL vers la LLC, et valide donc l'utilisation de l'anticorps de l'invention comme outil de pronostic. Tableau 2 : effet du marquage par l'anticorps PCD5 d'échantillons de cellules B extraits de patients souffrant des pathologies de type LLC, MBL et MCL. Les résultats (%) sont rapportés au nombre total de cellules marquées. Les résultats illustrés correspondent à ceux obtenus par la méthode FACS. Type and number CD5+ CD5+ PCD5+ Methods used for of patients quantification « normal » B-cells 10 % 0 % FACS Western Blot Immunofluorescence Microscopy Immunohistochemistry Chronic Lymphoid 100 % 100 % FACS Leukemia (LLC) Western Blot N = 23 Immunofluorescence Microscopy Immunohistochemistry Monoclonal B-cells Variable (30-88 %) Variable (25-88 %) FACS Lymphocytosis (MBL) N = 3 Mantle-cell 100% 0% FACS Lymphoma (MCL) N = 4 Comme le montre la figure 1, toutes les cellules leucémiques CD19+CD23+CD5+ (LLC) expriment un CD5 phosphorylé (lè' colonne), alors que les cellules CD5+ (10 % des cellules B) d'un donneur sain restent négatives en PCD5 (2è1e colonne) ainsi que les cellules B CD19+CD23-CD5+ provenant d'une autre forme d'hémopathie maligne, le lymphome du manteau ou MCL (3ème colonne). Les échantillons extraits de patients atteints de lymphocytose monoclonale B (ou MBL) présentent également un taux de CD5+PCD5+ pour trois malades testés, qui peut être corrélé avec le caractère évolutif de cette maladie vers la LLC. L'anticorps anti-PCD5 permet donc bien de distinguer les leucémies lymphoïdes chroniques d'autres types de maladies lympho-prolifératives, et en particulier des lymphomes du manteau. Exemple 5: Evaluation de la spécificité d'un anticorps anti-PCD5 pour la forme activée du récepteur CD5, par rapport à la forme inactive, par immunoprécipitation. Objectif de l'étude : mise en évidence par immunoprécipitation de la sélectivité de l'anticorps anti-PCD5 pour la forme activée du récepteur CD5, et comparaison avec un anticorps anti-phosphotyrosine ainsi qu'un anticorps anti-CD5. A. Matériel & Méthodes Western Blots (a)Des cellules B Daudi (2x106) transfectées avec un vecteur vide pNT (voir Gary-Gouy H et al, Blood 2002), ou contenant la séquence entière cDNA du CD5 humain sont stimulées ou non par une solution d'anti-IgM F(ab)'2 de lapin à 2 mg/mL (Jackson Immunosearch, Baltimore, référence 309-006-043)). Les cellules sont ensuite lysées en tampon de lyse à 4 °C pendant 30 mn (20 mM Tris-Hcl, pH 7.5, 140 mM NaCl, 1 mM EDTA, 50 U/ml aprotinin, 1 mM PMSF, 1 mM sodium orthovanadate) contenant 1 % de détergent NonidetTM P-40. Les lysats sont immunoprécipités avec 1 mg d'anticorps monoclonal UCH- T2 anti-CD5 (Santa Cruz) ou d'anticorps monoclonal anti-PCD5 de type IgG3 en présence de billes de protéine G-Sepharose (Sigma-Aldrich0). Les protéines sont séparées par une électrophorèse sur gel SDS-polyacrylamide, electro-transférées sur une membrane de PVDF (Amersham, GE), et hybridées en parallèle par un anti-CD5 UCH-T2 mAb, ou anti-(PY)- phosphotyrosine recombinant 4G10 mAb (Upstate Cell Signaling). La révélétion utilise un anticorps de chèvre anti-souris couplé à la peroxydase (Bio-Rad Laboratories) avec une détection ECL (Amersham). (b) Le lysat total de cellules B Daudi est extrait comme précédemment et analysé par western blot avec un anticorps anti-PCD5 révélé par un anticorps de chèvre anti-souris couplé à la peroxydase comme précédemment. B. Résultats La figure 2 montre que les anticorps anti-PCD5 reconnaissent spécifiquement la forme activée de CD5 : seules les cellules transfectées avec le vecteur CD5 et stimulées par les anti-IgM sont positives, alors que les cellules non activées ne contiennent pas PCD5. La figure 2 montre en outre que l'anticorps anti-PCD5 de l'invention peut être avantageusement utilisé comme outil pour immunoprécipiter spécifiquement la forme activée du récepteur CD5. Exemple 6: Quantification d'un anticorps monoclonal et polyclonal anti-PCD5 par ELISA. Objectif de l'étude : mise en évidence par dosage ELISA de la spécificité in vitro des anticorps de l'invention pour la forme activée de CD5. A. Matériel & Méthodes Des dilutions en séries de l'anticorps monoclonal IgG3 anti-PCD5 ont été testées avec les peptides synthétiques sous leur forme phosphorylée et non phosphorylée, tels que décrits dans l'exemple 1, à 100 ng par puits. Après saturation des puits à la BSA et incubation avec les anticorps dilués, la réaction est révélée par un anticorps anti-lapin IgG-HRP ou antisouris IgG-HRP. La réaction est développée par ajout du substrat ABTS SIGMA (Sigma-Aldrich® référence A 3219). Les quantités initiales d'anticorps monoclonal et polyclonal étaient de 10 et 130 mg/mL respectivement. B. Résultats Comme le montre la figure 3, les anticorps de l'invention reconnaissent spécifiquement la forme phosphorylée du peptide.20 REVENDICATIONS1. Un anticorps monoclonal dirigé contre un peptide de formule (I) suivante : NH2-[Nt]y X1X2X3X4DNEY(P03H2)X5X6X7X8X9- [Cti, -COOH dans lequel : - y est un nombre entier consistant en 0 ou 1, z est un nombre entier consistant en 0 ou 1, - Nt consiste en un peptide de 1 à 100 acides aminés en longueur, - Ct consiste en un peptide de 1 à 100 acides aminés en longueur, - X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, Xg et X9.représentent chacun, indépendamment l'un de l'autre, un résidu d'acide aminé. 2. Un anticorps selon la revendication précédente, dans lequel: - X1, X4 sont des acides aminés non polaires choisis parmi A, G, V, L, I, - X2, X6 sont des acides aminés polaires choisis parmi S et T, - X6 est choisi parmi N et Q, - X3, X9 sont des acides aminés basiques choisis parmi H, K et R, - X7, Xg sont des prolines. 3. Un anticorps selon l'une quelconque des revendications précédentes dirigé contre un peptide ou une protéine comprenant, ou consistant en, la séquence SEQ N° 1 phosphorylée sur tyrosine: - ASHVDNEY(P03H2)SQPPR - 4. Un anticorps selon l'une quelconque des revendications précédentes, ne présentant pas de réaction croisée avec : a) un peptide comprenant, ou consistant, en la forme non-activée du récepteur CD5, b) un peptide de séquence SEQ ID N°1, c) une tyrosine phosphorylée isolée ou faisant partie d'un peptide tel que défini dans a), 5. Un anticorps selon l'une des revendications précédentes combiné de manière covalente ou non covalente à une molécule détectable. 6. Une méthode in vitro de détection de CD5 activé dans un échantillon comprenant les étapes suivantes : a) mise en contact d'un échantillon à tester avec l'anticorps défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 5,b) détection ou quantification des complexes formés entre ledit anticorps monoclonal et des cellules exprimant un CD5 activé éventuellement présentes dans ledit échantillon 7. Une méthode in vitro de détermination de la survenue d'une leucémie lymphoïde chronique chez un individu comprenant les étapes suivantes: d) mise en contact d'un échantillon préalablement collecté chez ledit individu avec l'anticorps défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, e) détection ou quantification des complexes formés entre ledit anticorps et des cellules exprimant un CD5 activé éventuellement présentes dans ledit échantillon. 8. Une méthode selon la revendication précédente comprenant une étape de mise en contact de l'échantillon avec au moins un ligand choisi parmi la liste suivante: anti-CD5, anti-CD22, anti-CD23, anti-FMC7, anti-IgS, anti chaînes -k ou I. 9. Une méthode selon rune des revendications précédentes comprenant en outre une étape de réalisation d'un score de Matutes. 10. Une méthode selon la revendication précédente comprenant l'utilisation d'un kit selon l'une des revendications 15 à 18. 11. Une méthode selon l'une des revendications précédentes comprenant une étape de mise en contact d'un échantillon avec un ou plusieurs ligands additionnels spécifiques d'un type cellulaire particulier susceptibles d'être contenus dans l'échantillon et choisi parmi le groupe suivant : (i) des ligands reconnaissant un marqueur spécifique des lymphocytes B présents chez un individu affecté d'une lymphocytose B monoclonale, (ii) des ligands reconnaissant un marqueur spécifique des lymphocytes B1 (iii) des ligands reconnaissant un marqueur spécifique des lymphocytes B2, (iv) des ligands reconnaissant un marqueur spécifique des lymphocytes T, (v) des ligands reconnaissant un marqueur spécifique des lymphocytes B présents chez un individu affecté d'une LLC, et (vi) des ligands reconnaissant un marqueur spécifique des lymphocytes B présents chez un individu affecté d'une MCL. 12. Une méthode selon l'une des revendications précédentes dans laquelle le score de Matutes de l'échantillon est égal ou inférieur à 3. 13. Une méthode selon l'une des revendications précédentes où l'échantillon est choisi dans le groupe consistant en (i) un échantillon de sang total, (ii) une suspension de cellules mononucléaires périphériques et pol3rmorphonucléaires purifiées à partir d'unéchantillon de sang total, (iii) une suspension de cellules mononucléaires du sang périphériques purifiées à partir d'un échantillon total de sang, (iv) une suspension de cellules lymphocytaires T purifiées à partir d'un échantillon total de sang, (v) une suspension de cellules lymphocytaires B purifiées à partir d'un échantillon total de sang. 14. Une méthode selon l'une des revendications précédentes où l'étape de détection est réalisée par une technique choisie parmi le groupe suivant : cytométrie de masse, cytométrie en flux, immunocyto-chimie, immunocyto-fluorescence, immunoprécipitation, western-blot, microscopie électronique, cytométrie de masse, puce à protéines. 15. Un kit de détection de CD5 activé comprenant : a) un anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, b) un ligand anti-CD5. 16. Un kit de détection de lymphocyte activé selon la revendication précédente comprenant en outre un ou plusieurs ligands choisis parmi le groupe suivant: ligands antiCD22, anti-CD23, anti-FMC7, anti-IgS, anti chaînes x ou 17. Un kit selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant un ou plusieurs ligands choisis parmi le groupe suivant: anti-CD2, anti-CD19, anti-CD27, antiCD38, anti-HLA-DR, anti-IgM, anti-phosphotyrosine, anti-phosphoprotéine. 18. Un kit selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant un ou plusieurs ligands anti-phosphoprotéine choisis parmi le groupe suivant : P-CD5, P-Lyn, Pp38MAP Kinase, P-STAT3.