Brevet FR3001152A1 — publié le 20140725

Combinaisons contre le Paludisme Gestationnel Domaine de l'Invention La présente invention concerne l'utilisation de combinaisons de régions spécifiques de la partie N-terminale de la protéine VAR2CSA provenant de différentes lignées parasitaires de Plasmodium falciparum dans la prévention et/ou le traitement du paludisme gestationnel. Contexte de l'Invention Le paludisme (ou malaria) est la plus fréquente des infections parasitaires observées dans le monde. Il est dû à un parasite du genre Plasmodium, qui est transmis lors de la piqûre par une femelle moustique (Anopheles). Plusieurs espèces de Plasmodium peuvent infecter l'être humain, mais Plasmodium falciparum est l'espèce la plus fréquente et la plus pathogène et celle qui est responsable des cas mortels. Une fois introduit dans le sang, le parasite infecte les cellules hépatiques, dans lesquelles il prolifère, avant de circuler à nouveau dans le sang et d'envahir les globules rouges (érythrocytes ou hématies). Le paludisme touche une centaine de pays dans le monde, particulièrement dans les zones tropicales défavorisées d'Afrique, d'Asie et d'Amérique latine ; l'Afrique étant, de loin, le continent le plus affecté. Selon les estimations de l'Organisation Mondiale de la Santé, le paludisme est responsable annuellement de 225 millions de cas de fièvres et environ 1 million de morts (World Malaria Report, WHO, 2010). Les moyens de lutte existants sont les médicaments antipaludiques (dont les plus connus sont la chloroquinine et la quinine) et la lutte contre les moustiques vecteurs du parasite. Mais la situation est d'autant plus préoccupante que depuis plusieurs années, les parasites développent de plus en plus de résistances aux médicaments et les moustiques développent des résistances aux insecticides. Aucun vaccin n'est aujourd'hui disponible. Le paludisme concerne majoritairement les enfants de moins de 5 ans et les femmes enceintes, en particulier les primigestes (c'est-à-dire enceintes pour la première fois). Les femmes enceintes sont particulièrement vulnérables car le placenta constitue une cible où les parasites peuvent s'accumuler. Chez la femme enceinte, l'infection palustre peut provoquer toute une gamme d'effets dommageables : avortement spontané, accouchement prématuré, insuffisance pondérale à la naissance, transmission congénitale, et décès néonatal. Dans les zones d'Afrique où le paludisme est endémique, 3 à 5% des décès des nourrissons à la naissance peuvent être imputés au paludisme gestationnel. En outre, il présente également un réel danger pour la mère qui peut souffrir d'une anémie parfois sévère, voire mortelle. Actuellement, la prévention du paludisme chez la femme enceinte repose sur le traitement préventif par la sulfadoxine-pyriméthamine (Cot et al., Br. Med. Bull., 2003, 67: 137-148). Mais ce traitement intermittent n'est pas à même d'assurer une prévention du paludisme pendant l'ensemble de la grossesse : premièrement, parce que l'administration du médicament ne se fait qu'à partir de la 20ème semaine de grossesse (le risque tératogène au cours de l'embryogenèse étant considéré trop important) ; deuxièmement parce qu'il repose sur deux administrations à dose curative de sulfadoxine-pyriméthamine espacées d'au moins un mois, ce qui ne procure qu'une couverture médicamenteuse partielle ; et troisièmement, parce que l'efficacité de la sulfadoxine-pyriméthamine est en train de diminuer très largement dans l'ensemble des zones d'endémie palustre en raison de l'expansion de la résistance parasitaire (Cot et al., Am. J. Trop. Med. Hyg., 1998, 59: 813-822; WHO/HTM/MAL/2005.1103. Geneva: World Health Organization; ter Kuile et al., JAMA, 2007, 297: 2603-2616; Mockenhaupt et al., J. Infect. Dis., 2008, 198: 1545-1549; Briand et al., J. Infect. Dis., 2009, 991-1001; Harrington et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2009, 106: 9027-9032). Des médicaments sont actuellement à l'étude dans ce contexte, et de nombreux efforts sont également concentrés vers le développement d'un vaccin contre le paludisme gestationnel. La possibilité de vacciner la femme enceinte ou la jeune fille pré-pubère constituerait un avantage évident sur un traitement médicamenteux, dans la mesure où la couverture préventive de la grossesse serait étendue, et potentiellement de meilleure qualité. Une des stratégies vaccinales envisagées pour lutter contre le paludisme gestationnel est de recréer l'immunité protectrice naturelle. En effet, la sévérité clinique du paludisme dû à Plasmodium falciparum est liée en partie à des altérations des érythrocytes infectés. Ces altérations sont induites par les protéines du parasite qui sont exportées à la surface des érythrocytes durant la phase de développement dans le sang. Certaines de ces protéines de surface de la famille PfEMP1 (Plasmodium falciparum Erythrocyte Membrane Protein 1), codées par les parasites, confèrent de nouvelles propriétés de cytoadhérence aux érythrocytes. Les érythrocytes sont alors capables de se fixer à la paroi interne des vaisseaux sanguins, empêchant par là même l'acheminement des érythrocytes infectés vers les organes épurateurs du système immunitaire, dont l'un des rôles est de détruire les cellules reconnues comme anormales. Dans le cas du paludisme gestationnel, les érythrocytes parasités se fixent à un sucre, la chondroïtine sulfate A (CSA), présent dans le placenta. Après plusieurs grossesses, les femmes acquièrent des anticorps protecteurs qui bloquent cette adhésion. Une des stratégies vaccinales est de recréer cette immunité protectrice, en bloquant l'adhésion des érythrocytes infectés au placenta. La protéine VAR2CSA, une des protéines de la famille PfEMP1, fait actuellement l'objet de nombreuses recherches en vue de l'obtention d'un vaccin spécifique de la femme enceinte (Tuikue Ndam et al., J. Infect. Dis., 2005, 192: 331-335 ; Chia et al., J. Infect. Dis., 2005, 192: 1284-1293; Tuikue Ndam et al., J. Infect. Dis., 2006, 193: 713- 720 ; Dahlbâck et al., PLoS Pathogens, 2006, 2: 1069-1082 ; Badaut et al., Mol. Biochem. Parasitol., 2007, 15: 89-99; Khattab et al., Parasitol. Res., 2007, 101: 767-774; Guitard et al., Malaria J., 2008, 11: 7-10; Guitard et al., Malaria J., 2010, 9: 165; Gangnard et al., Mol. Biochem. Parasitol., 2010, 173: 115-122 ; Gnidehou et al., Mol. Biochem. Parasitol., 2010, 5(10): e13105 ; WO 2012/014073). Ces travaux se heurtent au polymorphisme de VAR2CSA, mais des essais de phase 1 sont néanmoins envisagés. La totalité du domaine extracellulaire de cette protéine a été exprimée en système hétérologue (Srivastava et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107: 4884-4889; Khunrae et al., J. Mol. Biol., 2010, 397: 826-834), et les anticorps induits contre ce domaine extracellulaire présentent un très fort taux d'antiadhérence. Cependant, le développement de nouvelles approches vaccinales, devront prendre en compte les nombreux épitopes immunodominants qui n'induisent pas des anticorps « antiadhérence ». Il apparaît donc crucial de continuer à explorer et développer de nouvelles stratégies de lutte et de prévention contre le paludisme gestationnel. Résumé de l'Invention Les présents inventeurs ont précédemment identifié la région N-terminale de VAR2CSA, et notamment la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x consistant en le domaine DBL1x, l'interdomaine Idl et le domaine DBL2x, comme étant celle qui contient des épitopes capables d'induire in vivo des anticorps qui bloquent l'adhérence au CSA des hématies infectées par Plasmodium falciparum, et la sous-région Idl-DBL2x comme étant la région antigénique minimale de VAR2CSA impliquée dans l'acquisition de l'immunité protectrice vis-à-vis de la séquestration placentaire qui a lieu dans le paludisme gestationnel (WO 2012/014073). Ils ont maintenant découvert que la combinaison d'anticorps induits contre la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x de VAR2CSA des deux lignées parasitaires FCR3 et 3D7 de Plasmodium falciparum inhibent totalement la fixation des érythrocytes parasités à la chondroïtine sulfate A (CSA) aussi bien sur des isolats placentaires de terrain de femmes enceintes que sur des souches de laboratoire bien caractérisées. Par comparaison, les anticorps induits contre la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x de VAR2CSA de chacune des deux lignées parasitaires FCR3 et 3D7 de Plasmodium falciparum utilisés séparément ne présentent un pourcentage d'inhibition que d'environ 70%. En conséquence, un premier aspect de la présente invention est l'utilisation de combinaisons de séquences polypeptidiques ou polynucléotides correspondant à la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou à la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA provenant de différentes lignées parasitaires de Plasmodium falciparum dans la gestion du paludisme de la femme enceinte. Plus spécifiquement, l'invention concerne une combinaison d'au moins deux polypeptides isolés ou purifiés pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du paludisme gestationnel, où le premier polypeptide isolé ou purifié consiste en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA d'une première lignée parasitaire de Plasmodium falciparum et le deuxième polypeptide isolé ou purifié consiste en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA d'une deuxième lignée parasitaire de Plasmodium falciparum. Dans certains modes de réalisation, la combinaison consiste en les deux polypeptides isolés ou purifiés. Dans certains modes de réalisation préférés, le premier polypeptide isolé ou purifié consiste en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire FCR3 de Plasmodium falciparum, et le deuxième polypeptide isolé ou purifié consiste en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire 3D7 de Plasmodium falciparum. Préférablement, dans certains modes de réalisation, la séquence du premier polypeptide isolé ou purifié qui consiste en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée FCR3 est la séquence SEQ ID NO: 1, et la séquence du deuxième polypeptide isolé ou purifié qui consiste en la région NTS-DBL lx-Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée 3D7 est la séquence SEQ ID NO: 5. Dans d'autres modes de réalisation, la séquence du premier polypeptide isolé ou purifié qui consiste en la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée FCR3 est la séquence SEQ ID NO: 3, et la séquence du deuxième polypeptide isolé ou purifié qui consiste en la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée 3D7 est la séquence SEQ ID NO: 7. L'invention concerne également une combinaison d'au moins deux protéines de fusion pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du paludisme gestationnel, où la première protéine de fusion consiste en un premier polypeptide consistant en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA d'une première lignée parasitaire de Plasmodium falciparum fusionnée à une première séquence partenaire de fusion, et où la deuxième protéine de fusion consiste en un deuxième polypeptide consistant en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région Idl- DBL2x de la protéine VAR2CSA d'une deuxième lignée parasitaire de Plasmodium falciparum fusionnée à une deuxième séquence partenaire de fusion. Dans certains modes de réalisation, la combinaison consiste en les deux protéines de fusion. Dans certains modes de réalisation préférés, le premier polypeptide de la première protéine de fusion consiste en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région IdlDBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire FCR3 de Plasmodium falciparum, et le deuxième polypeptide de la deuxième protéine de fusion consiste en la NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire 3D7 de Plasmodium falciparum. Préférablement, le premier polypeptide de la première protéine de fusion a une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 1 et SEQ ID NO: 3, et le deuxième polypeptide de la deuxième protéine de fusion a une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 5 et SEQ ID NO: 7. Préférablement, la première séquence partenaire de fusion et la deuxième séquence partenaire de fusion sont choisies indépendamment dans le groupe constitué de la protéine liant le maltose, la séquence signal de la protéine liant le maltose, un S-tag, la glutathione-S-transférase, la thiorédoxine, la P-galactosidase, la streptavidine, la dihydrofolate réductase, la séquence signal pelB, la séquence signal ompA, la séquence signal de l'alkaline phosphatase, la protéine fluorescente verte, les toxines, l'hormone de croissance humaine, l'interleukin-2 (IL-2), le granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF), le granulocyte colony stimulating factor (G-CSF), la calcitonine, l'interféron-beta, l'interféron-alpha, le glucagon like peptide 1 (GLP-1), le glucagon like peptide 2 (GLP-2), la toxine PA, les hormones parathyroïdiennes (PTH(1-34) and PTH(1-84)), la butyrylcholinestérase, la glucocérébrosidase (GBA), et l'exendine-4. L'invention concerne aussi une combinaison d'au moins deux polynucléotides isolés ou purifiés pour utilisation dans le traitement ou la prévention du paludisme gestationnel, où le premier polynucléotide consiste en une séquence nucléotidique codant pour un premier polypeptide consistant en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA d'une première lignée parasitaire de Plasmodium falciparum ou codant pour une première protéine de fusion comprenant ce premier polypeptide et les éléments nécessaires à l'expression du premier polypeptide ou de la première protéine de fusion in vitro ou in vivo, et où le deuxième polynucléotide consiste en une séquence nucléotidique codant pour un deuxième polypeptide consistant en la région NTS-DBL lx-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA d'une deuxième lignée parasitaire de Plasmodium falciparum ou codant pour une deuxième protéine de fusion comprenant ce deuxième polypeptide et les éléments nécessaires à l'expression du deuxième polypeptide ou de la deuxième protéine de fusion in vitro ou in vivo. Dans certains modes de réalisation, la combinaison consiste en les deux polynucléotides isolés ou purifiés. Dans certains modes de réalisation préférés, la séquence nucléotidique du premier polynucléotide code pour un premier polypeptide consistant en la région NTS-DBL1xIdl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire FCR3 ou code pour une première protéine de fusion comprenant ce premier polypeptide, et la séquence nucléotidique du deuxième polynucléotide code pour un deuxième polypeptide consistant en la région NTS-DBL lx-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire 3D7 ou code pour une deuxième protéine de fusion comprenant ce deuxième polypeptide. Préférablement, la séquence nucléotidique du premier polynucléotide code pour un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 3 ou pour une première protéine de fusion comprenant ce premier polypeptide, et la séquence nucléotidique du deuxième polynucléotide code pour un deuxième polypeptide de séquence SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 7 ou pour une deuxième protéine de fusion comprenant ce deuxième polypeptide. Dans certains modes de réalisation préférés, la séquence nucléotidique codant pour le premier polypeptide consistant en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire FCR3 a la séquence SEQ ID NO: 2, et la séquence nucléotidique codant pour le deuxième polypeptide consistant en la région NTS-DBL lx- Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire 3D7 a la séquence SEQ ID NO: 6. Dans d'autres modes de réalisation préférés, la séquence nucléotidique codant pour le premier polypeptide consistant en la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire FCR3 a la séquence SEQ ID NO: 4, et la séquence nucléotidique codant pour le deuxième polypeptide consistant en la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire 3D7 a la séquence SEQ ID NO: 8. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition immunogène comprenant au moins un véhicule ou excipient acceptable sur le plan pharmaceutique et au moins une combinaison de polypeptides ou de protéines de fusion ou de polynucléotides selon l'invention. Préférablement, une telle composition immunogène est caractérisée en ce qu'elle est capable d'induire des anticorps qui inhibent totalement l'adhésion d'érythrocytes infectés par Plasmodium falciparum au récepteur placentaire CSA (chondroïtine sulfate A). Dans une variante de cet aspect, l'invention se rapporte également à des vaccins contre le paludisme gestationnel. En particulier, l'invention fournit un vaccin comprenant au moins une combinaison de polypeptides ou de protéines de fusion selon l'invention, ou au moins une combinaison de polynucléotides selon l'invention. Dans certains modes de réalisation, les polynucléotides de la combinaison présente dans un vaccin sont insérés dans au moins un plasmide. Préférablement, les vaccins selon l'invention sont caractérisés en ce qu'ils sont capables d'induire des anticorps qui inhibent totalement l'adhésion d'érythrocytes infectés par Plasmodium falciparum au récepteur placentaire CSA. Les vaccins décrits ici peuvent en outre comprendre un adjuvant. Dans une autre variante de cet aspect, l'invention concerne des méthodes de traitement ou de prévention du paludisme gestationnel. En particulier, l'invention fournit une méthode pour induire une réponse immunitaire protectrice contre Plasmodium falciparum chez un être humain de sexe féminin, la méthode comprenant une étape d'administration d'une quantité efficace d'une composition immunogène ou d'un vaccin décrit ici. L'invention fournit également une méthode de vaccination d'un être humain de sexe féminin contre Plasmodium falciparum, la méthode comprenant une étape d'administration d'une quantité efficace d'un vaccin, en particulier d'un vaccin ADN décrit ici ou d'un vaccin protéique décrit ici. Les méthodes de traitement et de prévention du paludisme gestationnel s'adressent principalement aux jeunes filles pré-pubères et aux femmes en âge de procréer. Dans certains modes de réalisation préférés, une méthode de traitement ou de prévention du paludisme gestationnel est caractérisée en ce qu'elle induit, chez l'être humain de sexe féminin, des anticorps qui empêchent l'adhésion d'érythrocytes infectés par Plasmodium falciparum au récepteur placentaire CSA. Dans les méthodes de traitement ou de prévention du paludisme gestationnel selon l'invention, l'administration de la composition immunogène ou du vaccin peut se faire par n'importe quelle voie appropriée. Dans un autre aspect, l'invention concerne un kit de vaccination contre le paludisme gestationnel comprenant au moins une combinaison, ou au moins une composition immunogène ou au moins un vaccin selon l'invention et des instructions pour effectuer une vaccination contre le paludisme gestationnel. Dans certains modes de réalisation, les au moins deux polypeptides ou au moins deux protéines de fusion ou au moins deux polynucléotides de la combinaison, de la composition immunogène ou du vaccin sont fournis séparément dans le kit. Une description plus détaillée de certains modes de réalisation préférés de l'invention est donnée ci-dessous. Description Détaillée de l'Invention D'une manière générale, la présente invention se rapporte à l'utilisation de combinaisons de régions spécifiques de la partie N-terminale de la protéine VAR2CSA provenant de différentes lignées parasitaires de Plasmodium falciparum, dans la prévention et/ou le traitement du paludisme gestationnel. I - NTS-DBL1x-Idl-DBL2x et Idl-DBL2x Polynucléotides et Polypeptides Relatifs à NTS-DBL1x-Idl-DBL2x et Idl-DBL2x La présente invention se rapporte à des combinaisons d'au moins deux polynucléotides ou d'au moins deux polypeptides dérivés de la partie N-terminale du domaine extracellulaire de VAR2CSA de différentes lignées parasitaires de Plasmodium falciparum, ainsi qu'à leurs applications dans la gestion du paludisme gestationnel. En particulier, l'invention concerne des combinaisons d'au moins deux polynucléotides ou d'au moins deux polypeptides dérivés de la région N-terminale du domaine extracellulaire de VAR2CSA des lignées parasitaires FCR3 et 3D7. Le gène codant pour VAR2CSA a été isolé chez plusieurs souches parasitaires dont FCR3 (GenBank Accession Number: AY372123) et 3D7 (GenBank Accession Number: AE014188.3) et séquence. La protéine VAR2CSA correspondante a été déduite (GenBank Accession Number: AAQ73926.1 pour la lignée FCR3 et GenBank Accession Number: AAN36095.1 pour la lignée 3D7). En particulier, la présente invention concerne des combinaisons d'au moins deux polypeptides isolés ou purifiés correspondant à la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou à la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA des lignées parasitaires FCR3 et 3D7. Le terme "isolé ou purifié", tel qu'employé ici pour qualifier un polypeptide ou polynucléotide, désigne un polypeptide ou polynucléotide qui, de par son origine ou sa manipulation, est séparé d'au moins certains composants avec lesquels il est naturellement associé. Alternativement ou additionnellement, par "isolé ou purifié", on entend un polypeptide ou polynucléotide qui est produit ou synthétisé par l'homme. Les termes "NTS-DBL1x-DBL2x" et "NTS-DBL1x-Idl-DBL2x" sont ici employés indifféremment. Ils désignent la région de VAR2CSA constituée par les domaines : Duffy-binding-like domain lx (DBL1x), l'interdomaine 1 (Idl) et Duffy-binding-like domain 2x (DBL2x). Le terme "Idl-DBL2x" désigne la région de VAR2CSA constituée par l'interdomaine 1 (Idl) et le Duffy-binding-like domain 2x (DBL2x). Dans certains modes de réalisation préférés, le premier polypeptide d'une combinaison selon l'invention consistant en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire FCR3 a la séquence SEQ ID NO: 1, une séquence homologue de la séquence SEQ ID NO: 1 ou une séquence modifiée de la séquence SEQ ID NO: 1, et le deuxième polypeptide d'une combinaison selon l'invention consistant en la région NTS-DBL lx-Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire 3D7 a la séquence SEQ ID NO: 5, une séquence homologue de la séquence SEQ ID NO: 5 ou une séquence modifiée de la séquence SEQ ID NO: 5. Dans d'autres modes de réalisation préférés, le premier polypeptide d'une combinaison selon l'invention consistant en la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire FCR3 a la séquence SEQ ID NO: 3, une séquence homologue de la séquence SEQ ID NO: 3 ou une séquence modifiée de la séquence SEQ ID NO: 3, et le deuxième polypeptide d'une combinaison selon l'invention consistant en la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée parasitaire 3D7 a la séquence SEQ ID NO: 7, une séquence homologue de la séquence SEQ ID NO: 7 ou une séquence modifiée de la séquence SEQ ID NO: 7. Les termes "peptide", "protéine", "séquence peptidique", "séquence polypeptidique", et "polypeptide" sont ici employés indifféremment. Par ces termes, on entend désigner un enchaînement précis d'acides aminés, modifiés ou non, liés entre eux par des liaisons peptidiques. Par "séquence peptidique homologue de la séquence SEQ ID NO: X", on entend toute séquence peptidique qui diffère de la séquence SEQ ID NO: X par substitution, délétion, et/ou insertion d'un acide aminé ou d'un nombre réduit de acide aminés, à des positions telles que ces séquences peptidiques homologues ont substantiellement les mêmes propriétés biologiques que la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région IdlDBL2x de VAR2CSA de la lignée FCR3 ou de la lignée 3D7. De préférence, une telle séquence peptidique homologue a un pourcentage d'identité tel qu'elle est identique à au moins 75% de la séquence SEQ ID NO: X, préférablement au moins 85%, plus préférablement encore au moins 95%. Par "pourcentage d'identité" ou "homologie" entre deux séquences nucléotidiques ou deux séquences peptidiques, on entend désigner un pourcentage de nucléotides ou de résidus d'acides aminés identiques entre les deux séquences à comparer, obtenu après alignement optimal. Ce pourcentage est purement statistique et les différences entre les deux séquences sont réparties au hasard et sur toute la longueur de la séquence. Les termes "alignement optimal" et "meilleur alignement", qui sont utilisés de façon interchangeable ici, désignent l'alignement pour lequel le pourcentage d'identité déterminé comme décrit ci-dessous est le plus élevé. L'alignement optimal des séquences, nécessaire à la comparaison, peut être réalisé manuellement ou au moyen de logiciels informatiques (GAP, BESTFIT, BLASTP, BLASTN, FASTA, et TFASTA, qui sont disponibles soit sur le site NCBI, soit dans le Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, Madison, WI). Le pourcentage d'identité entre deux séquences nucléotidiques ou deux séquences peptidiques est calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide ou le résidu d'acide aminé est identique entre les deux séquences, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions comparées et en multipliant le résultat obtenu par 100. Par "séquence peptidique modifiée de la séquence SEQ ID NO: X ", on entend toute séquence polypeptidique qui diffère de la SEQ ID NO : X par une ou plusieurs modifications, telles que par exemple les modifications cellulaires post-traductionnelles (ex. "editing", glycosylation, sulfatation, etc). La présente invention concerne également des combinaisons d'au moins deux protéines de fusion pour le traitement ou la prévention du paludisme gestationnel, où la première protéine de fusion consiste en un premier polypeptide tel que défini ci-dessus fusionné à une première séquence partenaire de fusion, et où la deuxième protéine de fusion consiste en un deuxième polypeptide tel que défini ci-dessus fusionné à une deuxième séquence partenaire de fusion. Par "séquence partenaire de fusion", on entend ici une séquence peptidique qui confère à la protéine de fusion une ou plusieurs propriétés souhaitables. Ainsi, une séquence partenaire de fusion peut consister en une protéine qui favorise l'expression de la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou de la région Idl-DBL2x dans la cellule hôte lors de la préparation de la protéine de fusion, et/ou en une protéine qui facilite la purification de la protéine de fusion, et/ou en une protéine qui augmente la stabilité (ex. stabilité plasmatique) de la protéine de fusion (par comparaison avec une séquence correspondant à NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou à Idl-DBL2x non fusionnée), et/ou en une protéine qui favorise l'administration de la protéine de fusion au sujet vacciné, et/ou en une protéine qui augmente l'effet thérapeutique recherché (par exemple en augmentant la réponse immune et vaccinale) et/ou en une protéine présentant une activité biologique ou thérapeutique. Les partenaires de fusion qui peuvent être utilisés dans le contexte de la présente invention incluent, sans limitation, la protéine liant le maltose, la séquence signal de la protéine liant le maltose, des segments poly-histidine capables de lier des ions métalliques, un S-Tag, la glutathione-S-transférase, la thiorédoxine, la P-galactosidase, streptavidine, dihydrofolate réductase, la séquence signal pelB, la séquence signal ompA, la séquence signal de l'alkaline phosphatase, protéine fluorescente verte, une toxine telle que, par exemple l'entérotoxine LT de E. coli ou sa sous-unité B, un domaine du fragment C de la toxine tétanique, la toxine du choléra ou sa sous-unité B, CTA1-DD. D'autres partenaires de fusion peuvent être l'hormone de croissance humaine, une cytokine immunostimulante telle que : interleukin-2 (IL-2), un facteur de croissance tel que le granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF), le granulocyte colony stimulating factor (G-CSF), des peptides ou hormones tels que la calcitonin, l'interféron-beta, interféron-alpha, le glucagon like peptide 1 (GLP-1), glucagon like peptide 2 (GLP-2), PA toxin, parathyroid hormone (PTH(1-34) and PTH(1-84)), butyrylcholinesterase, glucocérébrosidase (GBA), et exendin-4. La présente invention concerne également des combinaisons d'au moins deux polynucléotides isolés ou purifiés pour le traitement ou la prévention du paludisme gestationnel, où le premier polynucléotide consiste en une séquence nucléotidique codant pour un premier polypeptide tel que défini ci-dessus ou une première protéine de fusion telle que définie ci-dessus et les éléments nécessaires à l'expression du premier polypeptide ou de la première protéine de fusion in vitro ou in vivo, et où le deuxième polynucléotide consiste en une séquence nucléotidique codant pour un deuxième polypeptide tel que défini ci-dessus ou pour une deuxième protéine de fusion telle que définie ci-dessus et les éléments nécessaires à l'expression du deuxième polypeptide ou de la deuxième protéine de fusion in vitro ou in vivo. Les termes "séquence nucléotidique", "acide nucléique", "séquence nucléique", "polynucléotide" et "oligonucléotide" sont ici employés indifféremment. Par ces termes, on entend désigner un enchaînement précis de nucléotides, modifiés ou non, permettant de définir une région d'un acide nucléique, et pouvant correspondre aussi bien à un ADN double brin ou un ADN simple brin qu'à des produits de transcription de ces ADNs. Les éléments nécessaires à l'expression d'une séquence nucléotidique in vivo incluent, par exemple, un promoteur, une région d'initiation de la transcription, et une région de terminaison de la transcription qui sont fonctionnels dans une cellule mammalienne, préférablement une cellule humaine. De plus, des séquences qui augmentent l'expression génique, comme les introns, les séquences "enhancer" et les séquences "leader" sont souvent nécessaires pour l'expression d'une séquence codant pour une protéine immunogène. Comme il est connu dans l'art, ces éléments sont préférablement liés de façon opérationnelle à la séquence nucléotidique qui doit être exprimée. Les termes "lié opérationnellement" et "lié de façon opérationnelle" sont utilisés indifféremment et font référence à un lien fonctionnel entre les séquences régulatrices et la séquence d'acide nucléique qu'elles contrôlent. Des exemples de promoteurs utiles dans le contexte de la présente invention incluent de façon non-limitative les promoteurs du virus SV40, du virus de tumeur mammaire de souris (MMTV), du virus VIH, du virus de Moloney, du cytomégalovirus (CMV), du virus Epstein-Barr (EBV), du virus sarcome Rous (RSV), ainsi que les promoteurs de gènes humains tels que le gène humain de l'actine, de la myosine, de l'hémoglobine, de la créatine musculaire et de la métallothionéine. La construction d'un polynucléotide consistant en une séquence nucléotidique donnée et les éléments nécessaires à l'expression de cette séquence nucléotidique entre dans les compétences de l'homme du métier. Dans certains modes de réalisation préférés, la séquence nucléotidique du premier polynucléotide code pour la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée FCR3 et a la séquence SEQ ID NO: 2 ou une séquence homologue de la SEQ ID NO: 2, et la séquence nucléotidique du deuxième polynucléotide code pour la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée 3D7 et a la séquence SEQ ID NO: 6 ou une séquence homologue de la SEQ ID NO: 6. Dans d'autres modes de réalisation préférés, la séquence nucléotidique du premier polynucléotide code pour la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée FCR3 et a la séquence SEQ ID NO: 4 ou une séquence homologue de la SEQ ID NO: 4, et la séquence nucléotidique du deuxième polynucléotide isolé ou purifié code pour la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée 3D7 et a la séquence SEQ ID NO: 8 ou une séquence homologue de la SEQ ID NO: 8. Par "séquence nucléotidique homologue de la séquence SEQ ID NO: X", on entend toute séquence nucléotidique qui diffère de la séquence SEQ ID NO: X par substitution, délétion, et/ou insertion d'un nucléotide, ou d'un nombre réduit de nucléotides, à des positions telles que ces séquences codent pour le même polynucléotide ou substantiellement le même polynucléotide que la SEQ ID NO: X. Une "séquence nucléotidique homologue de la séquence SEQ ID NO: X" est préférablement une séquence homologue de SEQ ID NO: X qui résulte de la dégénérescence du code génétique. Préparations de Polynucléotides et Polypeptides Relatifs à NTS-DBL1x-Idl-DBL2x et 5 Idl-DBL2x Les polynucléotides, protéines de fusion et polypeptides de la présente invention peuvent être préparés par n'importe quelle méthode appropriée. Les techniques pour isoler ou cloner un gène ou une séquence nucléotidique codant pour un domaine spécifique d'une protéine sont connues dans l'art et incluent l'isolation 10 à partir d'ADN génomique, la préparation à partir d'ADN complémentaire, ou une combinaison de ces méthodes. Le clonage d'un gène, ou d'une séquence nucléotidique codant pour un domaine spécifique d'une protéine, à partir d'un ADN génomique peut être effectué par exemple en utilisant une réaction de chaîne polymérase (PCR) ou par criblage de librairies d'expression pour détecter les fragments d'ADN clonés avec des 15 caractéristiques structurelles identiques (Innis et al., "PCR: A Guide to Method and Application", 1990, Academic Press: New York). D'autres méthodes d'amplification d'acides nucléiques connues de l'homme du métier peuvent être utilisées, comme par exemple, une réaction en chaîne par ligase (LCR), une transcription activée par ligation (LAT) et la technique NASBA (Nucleic Acid Sequence Based Amplification). Il est 20 également possible d'utiliser une méthode de synthèse chimique pour préparer une séquence nucléotidique. Les méthodes de synthèse chimique totale de brins d'ADN ou d'ARN sont connues de l'homme du métier, et utilisent des synthétiseurs automatisés commerciaux. Les méthodes pour préparer une séquence peptidique incluent les méthodes 25 chimiques (R.B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 1963, 85: 2149-2154; "Solid Phase Peptide Synthesis" , Methods in Enzymology, G.B. Fields (Ed.), 1997, Academic Press: San Diego, CA), et les méthodes recombinantes (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., 1989, Cold Spring Harbor Press: Cold Spring, NY) utilisant des cellules hôtes (en particulier dans le cas des protéines de fusion). 30 Composition d'une Combinaison Dans une combinaison selon l'invention, les polynucléotides ou protéines de fusion ou polypeptides peuvent être présents dans n'importe quelles proportions. Dans les modes de réalisation où une combinaison de l'invention n'est constituée que de deux composants (deux polypeptides, deux protéines de fusion ou deux polynucléotides), les deux composants peuvent en particulier être présents en quantités égales. Les quantités respectives des composants d'une combinaison peuvent être déterminées et/ou optimisées par l'homme du métier en fonction de l'utilisation de la combinaison et/ou de la nature de ses composants. II - Compositions Immunogènes et Vaccins Les combinaisons selon l'invention sont particulièrement adéquates pour une utilisation comme médicaments dans la gestion du paludisme gestationnel. En effet, comme l'ont démontré les inventeurs, ces combinaisons permettent d'induire des anticorps anti-adhérence à large spectre d'activité. A ce titre, elles peuvent être utilisés, comme telles ou sous une forme modifiée, en tant que composition immunogène ou vaccin. Une modification appropriée des polypeptides contenus dans une combinaison selon l'invention est la réalisation de conjugués. Ceux-ci comportent au moins un des polypeptides d'une combinaison selon l'invention, lié à un support. Les conjugués peuvent être obtenus par couplage via une liaison convalente entre un polypeptide et un support physiologiquement acceptable, non toxique, naturel ou synthétique, susceptible par exemple d'accroître le caractère immunogène du polypeptide. Concernant les conjugués, on citera à titre d'exemple, la demande WO 2006/124712, qui décrit des méthodes de préparation de conjugués comportant une pluralité de peptides antigéniques de Plasmodium falciparum liés à une protéine support améliorant l'immunogénicité desdits antigènes. Les supports préférés selon l'invention sont choisis parmi les particules virales, des lipides, par exemple des lipides de type C16-C18, les polylysines, les poly(DL-alanine)- poly(Lysine)s, la nitrocellulose, les microparticles de polystyrène, les microparticules de billes de latex, les polymères biodégradables, les microparticules de polyphosphoglycanes, les protéines supports telles que l'OPMC (outer membrane protein complex of Neisseria meningitidis) ou l'OPMC améliorié, la BSA (bovine serum albumin), le TT (tetanus toxoid), l'ovalbumine, la KLH (heyhole limpet hemocyanin), la THY (bovine thyroglobulin), l'HbSAg et l'HBcAg du virus de l'hépatite B, les protéines capsides rotavirus, la protéine Ll du virus papillome humain, la VLP (virus like particle) de type 6, 11 et 16, le tuberculin PPD (purified protein derivative). Compositions Immunogènes Une composition immunogène selon l'invention comprend, en plus d'une combinaison décrite ici, un véhicule ou excipient acceptable sur le plan pharmaceutique. Le terme "véhicule ou excipient acceptable sur le plan pharmaceutique" désigne tout véhicule ou milieu qui n'interfère pas avec l'efficacité de l'activité biologique du principe actif de la composition, et qui n'est pas toxique pour l'individu à la concentration à laquelle il est administré. L'utilisation de tels véhicules ou excipients pour la formulation de substances actives est bien connue dans l'art ("Remington's Pharmaceutical Sciences", E.W. Martin, 18th Ed., 1990, Mack Publishing Co.: Easton, PA). La formulation d'une composition immunogène de la présente invention peut varier en fonction de la voie d'administration et du dosage. Après formulation avec au moins un véhicule ou excipient acceptable sur le plan pharmaceutique, une composition immunogène de l'invention peut être administrée sous toute forme appropriée pour l'administration à un être humain, par exemple sous forme solide ou liquide. L'homme du métier sait sélectionner les véhicules et excipients les plus appropriés à la préparation d'un certain type de formulation. Ainsi, par exemple, les excipients tels que l'eau, 2-3- butanediol, solution isotonique de chlorure de sodium, mono ou diglycérides synthétiques, et acide oléique sont souvent utilisés pour la formulation de préparations injectables. Les compositions liquides, y compris les émulsions, microémulsions, solutions, suspensions, sirops, etc., peuvent être formulées en présence de solvants, d'agents solubilisants, d'émulsifiants, d'huiles, d'acides gras et d'autres additifs comme des agents de suspension, des conservateurs, des agents viscosants, etc. Les compositions solides pour administration par voie orale peuvent être formulées en présence d'un excipient inerte comme le citrate de sodium, et éventuellement d'additifs tels que des agents liants, des agents humectants, des agents de désintégration, des accélérateurs d'absorption, des agents lubrifiants, etc. Selon un mode de réalisation préféré, les compositions immunogènes et les vaccins de l'invention peuvent comprendre un ou plusieurs adjuvants utilisés en combinaison. Des adjuvants classiques tels que le Montanide et/ou l'Alum peuvent être utilisés. Cependant d'autres adjuvants tels que QS21, SBQS2, MF59, mLT, PHL, CpG DNA, phosphate de calcium, sulfate de calcium déshydraté, PLG, CT, LTB, CT/LT, ASO2A sont également appropriés. Les compositions immunogènes et vaccins selon l'invention peuvent comporter en outre au moins un antigène spécifique des stages préérythrocytaires (CSP, TRAP, LSA-1, LSA-3, SALSA, STARP, EXP-1), érythrocytaires asexués (MSP-1, MSP-3, AMA-1, EBA-175, GLURP, MSP-2, MSP-4, MSP-5, RAP-2, RESA, PfEMP-1, toxine GPI synthétituq) ou sexués (PfS25). Vaccins, Vaccins Polypeptidiques, Vaccins ADN D'une façon générale un vaccin contre le paludisme gestationnel selon l'invention comprend au moins une combinaison décrite ici et est utilisé pour induire chez les sujets vaccinés des anticorps inhibiteurs de la cytoadhérence au CSA. En particulier, l'invention concerne un vaccin ADN (également appelé vaccin plasmidique ou vaccin polunucléotidique) contre le paludisme gestationnel. L'invention concerne aussi un vaccin protéique (également appelé vaccin polypeptidique) contre le paludisme gestationnel. Vaccins Protéiques La présente invention a donc pour objet un vaccin protéique comprenant une combinaison d'au moins deux polypeptides telle que décrite plus haut ou une combinaison d'au moins deux protéines de fusion telle que décrite plus haut. La préparation d'un vaccin protéique, qui peut se faire par voie chimique ou biochimique (protéine recombinante) entre dans les compétences de l'homme du métier. L'administration d'un vaccin protéique peut se faire par n'importe quelle voie appropriée, comme par exemple par voie intraveineuse, sous-cutanée, intradermique, orale, topique ou systémique. Vaccins ADN La présente invention a aussi également pour objet un vaccin ADN contre le paludisme gestationnel. La vaccination génétique ou vaccination par ADN a pour but d'induire une réponse immunitaire et consiste à introduire directement dans certaines cellules de l'organisme un gène ou une séquence polynucléotidique codant pour un antigène vaccinal ou un plasmide purifié d'ADN contenant une séquence codant pour l'antigène vaccinal. Les cellules concernées sont, dans l'exemple de l'invention, des cellules musculaires, mais tout autre type de cellule peut convenir, comme par exemple les cellules de la peau. L'administration se fait, de façon non-exclusive, par injection intra-musculaire ou par "bombardement" de particules sur la peau ou encore par voie nasale. L'ADN pénètre dans les cellules musculaires, les cellules de la peau ou autres; et ces cellules synthétisent ensuite elle-même l'antigène. L'antigène est présenté au système immunitaire et déclenche une réponse (la production d'anticorps capables, lors d'une infection, de reconnaître spécifiquement cet antigène sur le parasite). Le vaccin est donc produit, localement, par l'organisme de l'individu à immuniser. Cette méthode de vaccination, simple et peu coûteuse, présente d'importants avantages en termes d'efficacité: l'antigène ainsi produit se présente généralement sous sa séquence peptidique native, fusionnée ou non à une ou plusieurs séquences peptidiques (partenaires de fusion). Surtout, il est produit de façon prolongée par les cellules de l'organisme, et cette présentation durable de l'antigène au système immunitaire devrait permettre d'éviter le recours aux rappels. De plus, les vaccins ADN sont chimiquement définis et thermiquement stables, ce qui réduit la nécessité de maintenir la chaîne du froid. La présente invention a donc pour objet un vaccin ADN comprenant une combinaison d'au moins deux polynucléotides telle que décrite plus haut. Un polynucléotide d'une combinaison de l'invention peut être un ADN nu, en particulier plasmide vaccinal circulaire, super-enroulé ou non, ou une molécule d'ADN linéaire, incorporant et exprimant in vivo une séquence nucléotidique codant pour la région NTSDBL1x-Idl-DBL2x ou pour la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée FCR3 ou de la lignée 3D7. Par "ADN nu", on entend comme cela est aujourd'hui communément accepté, une unité de transcription ADN sous forme d'une séquence polynucléotidique comprenant au moins une séquence nucléotidique codant pour un antigène vaccinal et les éléments nécessaires à son expression in vivo. Les polynucléotides d'une combinaison selon l'invention peuvent être avantageusement insérés dans un plasmide de type DNA-CSP, Nyvac pf7, VR1020, VR1012, etc. Il est également envisagé que l'ADN nu soit incorporé dans un vecteur de médicament. Des exemples de vecteurs de médicaments appropriés incluent de façon non-limitative des microcapsules biodégradables, des complexes immuno-stimulants, des liposomes, des lipides cationiques et des vecteurs vivants génétiquement atténués comme des virus et des bactéries. Un vaccin ADN de l'invention peut également être administré en conjonction avec un agent qui améliore la pénétration du matériel génétique du vaccin dans les cellules traitées. Ainsi le vaccin ADN peut être formulé pour contenir un tel agent ou être administré en même temps qu'un tel agent. Des exemples d'agents qui améliorent la pénétration du matériel génétique du vaccin dans les cellules traitées incluent de façon non limitative les esters d'acide benzoïque, les anilides, les amidines, les uréthanes, et leurs sels d'hydrochlorure (Brevet U.S. 6,248,565). L'administration de l'ADN aux cellules peut-être favorisée par des vecteurs chimiques (comme, par exemple, les polymères cationiques ou les lipides cationiques), des techniques physiques telles que l'électroporation, la sonoporation, la magnétofection, etc, ou encore des vecteurs viraux tels que les virus associés à l'adénovirus, etc. III - Utilisations des Compositions Immunogènes et Vaccins Les compositions immunogènes et les vaccins peuvent être avantageusement utilisés pour immuniser des êtres humains de sexe féminin (des jeunes filles pré-pubères et des femmes en âge de procréer) dans le cadre d'une thérapie préventive du paludisme gestationnel. En conséquence, l'invention concerne également des méthodes de traitement ou de prévention du paludisme gestationnel. En particulier, l'invention fournit une méthode pour induire une réponse immunitaire protectrice contre Plasmodium falciparum chez un être humain de sexe féminin, la méthode comprenant une étape d'administration d'une quantité efficace d'une composition immunogène ou d'un vaccin décrit ici. L'invention fournit également une méthode de vaccination d'un être humain de sexe féminin contre Plasmodium falciparum, la méthode comprenant une étape d'administration d'une quantité efficace d'un vaccin, en particulier d'un vaccin ADN ou d'un vaccin protéique décrit ici. Dans certains modes de réalisation préférés, une méthode de traitement ou de prévention du paludisme gestationnel est caractérisée en ce qu'elle induit, chez l'être humain de sexe féminin, des anticorps qui empêchent l'adhésion d'érythrocytes infectés par Plasmodium falciparum au récepteur placentaire CSA. Dans les méthodes de traitement ou de prévention du paludisme gestationnel selon l'invention, l'administration de la composition immunogène ou du vaccin peut se faire par n'importe quelle voie appropriée (voie orale, parentérale, mucosale). Dans certains modes de réalisation, l'administration d'un vaccin ADN se fait par voie intramusculaire, intradermique, ou mucosale. Dans d'autres modes de réalisation, l'administration d'un vaccin protéique se fait, par exemple, par voie intraveineuse, sous-cutanée, intradermique, orale, topique ou systémique. Une composition immunogène ou un vaccin selon l'invention peut être administré en une seule dose ou en plusieurs doses. L'homme de l'art saura déterminer la dose efficace de protéine immunisante ou d'ADN à utiliser dans chaque protocole d'immunisation ou de vaccination. IV - Kits La présente invention vise également un kit pour la prévention contre le paludisme gestationnel. Plus spécifiquement, le kit comprend du matériel utile pour la réalisation d'une vaccination selon la méthode de l'invention. En général, un kit comprend une combinaison, une composition immunogène ou un vaccin selon l'invention, et des instructions pour effectuer une vaccination contre le paludisme gestationnel. De façon optionnelle, le kit peut en outre comprendre des moyens pour effectuer la vaccination. Dans certains modes de réalisation, un kit selon l'invention est configuré de telle sorte que les composants d'une combinaison selon l'invention sont fournis séparément (par exemple dans des récipients différents). Une telle configuration permet aussi bien l'administration simultanée que l'administration séquentielle des composants de la combinaison. Par "administration simultanée", on entend ici une administration des composants, ensemble ou séparément, à approximativement le même moment (par exemple, à un intervalle de 5, 10, 15 ou 30 minutes les uns autres). Par "administration séquentielle", on entend ici une administration des composants séparément et à différents moments (par exemple à différentes heures du même jour, ou à un ou plusieurs jours d'intervalle). Le kit peut comprendre des réactifs ou des solutions pour la préparation de la composition à administrer. Les différents composants du kit peuvent être fournis sous forme solide (par exemple sous forme lyophilisée) ou sous forme liquide. Un kit peut éventuellement inclure un récipient contenant chacun des réactifs ou solutions, et/ou des récipients (tubes à essais, flacons, etc.) pour réaliser la préparation de la composition à administrer. Enfin, une notice sous la forme prescrite par une agence gouvernementale régulant la vente et l'utilisation de produits pharmaceutiques peut être incluse dans le kit. A moins qu'ils ne soient définis d'une autre manière, tous les termes techniques et scientifiques utilisés ici ont la même signification que celle couramment comprise par un spécialiste ordinaire du domaine auquel appartient cette invention. De même, toutes les publications, demandes de brevet, tous les brevets et toutes autres références mentionnés ici sont incorporés par référence. Les exemples suivants et les figures sont présentés pour illustrer certains modes de réalisation des procédures décrites ci-dessus et ne doivent en aucun cas être considérés comme une limite à la portée de l'invention. Exemples Les exemples suivants décrivent certains modes de réalisation de la présente invention. Cependant, il est entendu que les exemples ne sont présentés qu'à titre illustratif seulement et ne limitent en aucun cas la portée de l'invention. Il a été démontré que des anticorps contre des constructions correspondant à une région de la partie N-terminale de VAR2CSA d'un seul variant parasitaire ne pouvaient inhiber que 70% de l'adhérence au CSA d'isolats de femmes enceintes (Bigey et al., J Infect Dis., 2011, 204: 1125-1133 ; Bordbar et al., Vaccine, 2012, 30: 1343-1348). Les inventeurs ont précédemment identifié une région dimorphique dans le domaine DBL2x de VAR2CSA (Sander et al., PLoS One, 2009, 4: e6667), conduisant à deux catégories phylogénétique distincte de type FCR3 et de type 3D7. Dans l'étude présentée ci-dessous, les inventeurs ont étudié la prévalence des types de variant du DBL2x dimorphique parmi les parasites Plasmodium falciparum isolés d'échantillons obtenus de femmes enceintes du Bénin et la capacité inhibitrice d'adhésion d'anticorps spécifiques induits contre la région NTS-DBL lx-Idl-DBL2x de chaque sérotype sur les érythrocytes infectés isolés de femmes enceintes. Méthodes et Matériels Utilisés Isolats de Plasmodium falciparum. Les femmes enceintes n'ont été inclues dans la présente étude qu'après leur consentement obtenu par écrit. L'étude a été approuvée par le Comité Consultatif de Déontologie et d'Ethique de l'IRD (Institut de Recherche pour le Développement), et le comité d'éthique de la faculté des sciences de la santé (Université de Abomey-Calavi, Bénin). Toutes les procédures utilisées dans la présente étude sont conformes aux régulations Européennes et Nationales. La procédure d'immunisation animale est conforme aux directives du FELASA (Federation of Laboratory Animal Science Associations) et a été approuvée par le Comité d'éthique en matière d'expérimentation animale affilié à l'Université Paris Descartes. Isolats de Plasmodium falciparum. Les échantillons de terrain d'érythrocytes infectés ont été obtenus de femmes enceintes à la maternité Suru Léré dans la région Est du Cotonou. Le site d'étude est caractérisé par un paludisme hyper-endémique dans la zone lagunaire et un fort taux de transmission du paludisme avec deux pics correspondant aux deux saisons pluvieuses (Akogbeto et al., Parasitologia, 1992, 34: 147-154). Du sang veineux périphérique a été collecté dans des Vacutainers contenant l'anticoagulant citrate phosphate dextrose adénine (CPDA), lors des visites prénatales et au moment de l'accouchement. Les érythrocytes ont été séparés du plasma et lavés avec du RPMI 1640 (Lonza). 200 µL de culots d'érythrocytes ont été homogénéisés dans 10 volumes de réactif TRIzol (Invitrogen) et congelés à -80°C jusqu'au moment de l'extraction de l'ARN total ou congelés à -20°C jusqu'au moment de l'extraction de l'ADN total. Les culots des érythrocytes infectés par des parasites au stade d'anneaux (ring ou trophozoïte jeune) ont été immédiatement cultivés in vitro pour obtenir des trophozoïtes âgés comme précédemment décrit (Trager et al., Science, 1976, 193: 673- 675). En bref, les isolats ont été cultivés dans des récipients contenant du RPMI 1640 additionné d'HEPES et de L-glutamine (Lonza Biowhittaker), 0,3 g/L 1-glutamine, 0,05 g/L gentamicine, 5 g/L albumax. Les récipients de culture ont été mis sous atmosphère d'un mélange de 92,5% N2, 2% 02 et 5,5% CO2 et incubés à 37°C pour pas plus de 48 heures avant les tests. Les souches parasitaires de laboratoire FCR3, HB3 et NF54 ont été cultivées dans des érythrocytes 0+ et ont été sélectionnées après plusieurs étapes de panning sur la lignée cellulaire BeWo comme précédemment décrit (Haase et al., Infect. Immun., 2006, 74: 3035-3038). Extraction d'ADN et Génotypage msp. L'ADN a été extrait de 100 iaL de culot de sang avec le kit GeneJet Genomic Purification (Fermentas) conformément aux recommandations du fabricant. Les gènes mspl et msp2 ont été amplifiés par nested PCR en utilisant des amorces spécifiques (Snounou et al., Trans R Soc Trop Med Hyg , 1999, 93: 369-374). La multiplicité d'infection (MOI) a été déterminée pour chaque échantillon. Extraction d'ARN, Synthèse de cDNA et Génotypage des DBL2x. Les ARN ont été extraits d'échantillons congelés conservés dans le réactif TRIzol (Invitrogen) conformément aux recommandations du fabricant. Les ARN totaux ont été traités avec DNAse I (Invitrogen) pendant 15 minutes à température ambiante conformément aux recommandations du fabricant pour éliminer toute contamination potentielle par de l'ADN génomique (gADN). L'absence de gADN dans les échantillons d'ARN a été confirmée par une absence d'amplification après 40 cycles d'une PCR en temps réelle avec des amorces ciblant le gène housekeeping seryl-tRNA synthetase (Salanti et al., Mol Microbiol, 2003, 49: 179-191). La transcription inverse de l'ARN (sans ADN) a été effectuée avec du Thermoscript (Invitrogen) et des amorces hexamères aléatoires pendant 1 heure à 50°C dans un volume total de 20 iaL conformément aux recommandations du fabricant. Pour le génotypage du motif de séquence dimorphique (DSM) dans le domaine DBL2x de VAR2CSA des isolats de Plasmodium falciparum (Sander et al., PLoS One, 2009, 4: e6667), ce domaine a été sélectionné pour amplifier le cDNA de chaque isolat avec une paire d'amorces (5'-TTAYCCCCAAGAACACA-3' et 5'- TTTTAAATTTTTTCCATGAA-3'). Les réactions ont été effectuées avec la Polymérase Taq Fusion de fidélité élevée (pour obtenir des rendements plus élevés et des taux de mutation plus faibles) dans les conditions suivantes: 94°C pendant 1 minute, suivi de 35 cycles à 94°C pendant 30 secondes, 50°C pendant 30 secondes et 68°C pendant 50 secondes, et une extension finale à 68°C pendant 10 minutes. Les produits de PCR ont été digérés avec les enzymes de restriction BstCI (qui coupe les DSM de type FCR3) et Hppy1881 (qui coupe les DSM de type 3D7) pendant 1 heure à 50°C et 37°C, respectivement. Les produits digérés ont été séparés par électrophorèse sur 1,5% de gel d'agarose. Production des Anticorps et Préparation des IgG. Le fragment NTS-DBL1x-IdlDBL2x et la séquence entière du gène optimisé var2csa des lignées parasitaires FCR3 et 3D7 ont été utilisés pour produire des IgG anti-VAR2CSA spécifiques, par vaccination ADN comme précédemment décrit (Bigey et al., J Infect Dis., 2011, 204: 1125-1133). En bref, les séquences d'ADN ont été clonées dans un vecteur dérivé de pVaxl et fusionné à la séquence signal mEPO comme précédemment décrit (Trollet et al., Infect Immun., 2009, 77: 2221-2229). Des immunisations ont été effectuées sur des souris femelles suisses âgées de 6 semaines et sur des lapins de Nouvelle-Zélande (Janvier-France). Les souris ont été anesthésiées par injection intrapéritonéale avec un mélange kétamine-xylazine et dans le cas des lapins l'injection a été effectuée à 5 sites le long de chaque muscle longissimus dorsi. Le transfert d'ADN a été effectué par des impulsions électriques transcutanées appliquées par deux électrodes en acier inoxydable placées à chaque site d'injection. Les animaux ont été immunisés aux jours 0, 30 et 60, et les antisera ont été collectés aux jours 0 et 15 après chacune des immunisations. Les IgG totaux ont été purifiés dans l'échantillon final de sérum de souris ou de lapin sur colonne Hi-Trap sur laquelle la protéine recombinante correspondante avait été couplée conformément aux recommandations du fabricant (GE Healthcare). Cytométrie de Flux. La réactivité des IgG purifiés envers la surface des érythrocytes infectés par Plasmodium falciparum a été analysée par cytométrie de flux (FACS Calibur) comme précédemment décrit (Magistrado et al., Vaccine, 2011, 29: 437- 443). En bref, les érythrocytes infectés adhérant au CSA (FCR3-Bewo et HB3-Bewo) et les isolats parasitaires de terrain ont été enrichis par exposition à un champ magnétique d'intensité élevée (VarioMACS and CS columns, Miltenyi). Pour chaque test, 2x105 d' érythrocytes infectés ont été marqués avec du bromure d' éthydium, et séquentiellement exposés à un IgG de lapin, et puis à un anticorps anti-lapin conjugué à FITC (Invitrogen). Les données ont été acquises et analysées, et l'intensité médiane de fluorescence (MIT) a été déterminée. Le marquage de la surface de VAR2CSA est considéré comme positif si le rapport de MFI est supérieur à 1,2 (MFI avec post-immunisation IgG au jour 75 / MIT avec pré-immunisation IgG au jour 0) comme décrit par Magistrado et al. (Vaccine, 2011, 29: 437-443). Tests d'Inhibition d'Adhésion. La capacité des anticorps à inhiber l'adhésion des érythrocytes infectés à la chondroïtine sulfate (CSPG) a été déterminée par un test en boîtes de Petri précédemment décrit (Bigey et al., J Infect Dis., 2011, 204:1125-1133). Brièvement, des boîtes de Petri (Falcon 351029) ont été recouvertes par des spots de 100 x 15 mm de 20 µL de 5 mg/mL CSPG-Decorin (Sigma) ou de 10 i.tg/mL d'albumine de sérum bovin (BSA) dilué dans du PBS. Les spots ont été incubés pendant la nuit à 4°C en chambre humide. Chaque spot a été bloqué avec 3% BSA dans du PBS pendant 30 minutes à 37°C. Des suspensions enrichies en érythrocytes infectés de trophozoïtes âgés ont été obtenues par filtration sur une colonne magnétique (VarioMACS, Miltenyi). La suspension dont la densité parasitaire a été ajustée à 20% dans 1x105 cellules, a ensuite été bloquée pendant 30 minutes à température ambiante (RT) dans une solution de BSA à 3% diluée dans du RPMI. La préparation érythrocytaire a été incubée avec des IgG purifiés (0,25 mg/mL) ou 500 i.tg/mL de CSA soluble (Sigma), et les cellules ont ensuite été mises à adhérer pendant 15 minutes à température ambiante sur des boîtes de Petri pré-coatées avec différents ligands. Les cellules non-adhérentes ont été éliminées par un système de lavage automatique. Les spots ont été fixés avec 1,5% de glutaraldéhyde dans du PBS, colorés avec une solution de Giemsa et les érythrocytes infectés adhérents ont été comptés au microscope. Légendes des Figures Figure 1 est un graphe montrant la distribution des signatures de séquence dimorphique de la région DBL2x de VAR2CSA parmi les parasites infectant les femmes enceintes. Le motif de séquence dimorphique (DSM) dans DBL2x qui distingue les allèles de VAR2CSA en deux sous-groupes (les types 3D7 et FCR3) ont été génotypés dans des parasites collectés chez des femmes enceintes au Bénin. Les proportions du type 3D7 (histogrammes blancs), du type FCR3 (histogrammes rayés) et de mélange des deux génotypes (histogrammes noirs) sont présentées. La multiplicité d'infection (MOI) est indiquée pour chaque catégorie. Figure 2 est un graphe montrant la reconnaissance de VAR2CSA exprimé dans des isolats de terrain par les IgG dirigés contre les différentes constructions de Var2CSA. La capacité de reconnaissance de VAR2CSA exprimé par les IgG induits contre les constructions de VAR2CSA (NTS-DBL2X/3D7 et NTS-DBL2X/FCR3) et contre le domaine extracellulaire entier de VAR2CSA (NTS-DBL1-6E/FCR3) de la souche FCR3 a été étudiée sur des isolats de terrain par cytométrie de flux. Les parasites ont été séparés en fonction de leur catégorie DSM (DSM 3D7, DSM FCR3 ou DSM Mélange FCR3/3D7). Les barres indiquent la moyenne du rapport MIT (MIT correspondant à la réactivité de l'IgG de l'animal hyper-immune / MFI correspondant à la réactivité de l'IgG du même animal pré-immun. Figure 3 comprend deux graphes montrant l'activité inhibitrice d'adhésion d'IgG induit contre chacun des deux sérotypes' de NTS-DBL1x-Idl-DBL2x sur des isolats de terrain. L'activité inhibitrice d'adhésion a été évaluée sur 18 isolats de Plasmodium falciparum fraichement obtenus de femmes enceintes. Les données sont présentées sous forme de pourcentage d'inhibition pour chaque anticorps normalisé par la valeur d'inhibition du CSA (utilisée comme référence de l'inhibition d'adhésion maximale). Les histogrammes sont présentés pour chacun des types de DSM détectés dans l'isolat: ^ pour les DSM de type 3D7, gel pour les DSM de type FCR3, et ^ pour les DSM de mélange des deux génotypes. Figure 4 est une série de trois graphes montrant le profil d'inhibition des anticorps sur des souches sélectionnées et adaptées et se liant au CSA. Les souches FCR3, HB3 et NF54 sélectionnées sur les cellules Bewo (FCR3-Bewo, HB36-Bewo et NF54-Bewo) ont été utilisées pour évaluer la capacité des anticorps induits à inhiber l'adhérence des 3 souches de laboratoire à CSPG. La fonctionnalité in vitro des mélanges d'anticorps a également été évaluée. Les valeurs présentées sont normalisées avec la valeur d'inhibition du CSA. Résultats Détermination de la Multiplicité d'Infection et Typage Moléculaire de var2csa parmi les Parasites Isolés de Femmes Enceintes. Au total, 122 parasites ont été collectés, et il a été déterminé par génotypage de msp-2 que la multiplicité d'infections (MOI) est de 3,10 génotypes distincts par isolat avec une fourchette de 1 à 7. Une méthode de PCR-RFLP a été développée et mise en oeuvre sur tous les isolats pour étudier la distribution des deux variants majeurs de var2csa parmi les isolats de terrain du Bénin. L'analyse de la région dimorphique de var2csa dans les isolats de femmes enceintes a révélé la présence d'au moins un des deux variants dimorphiques décrits par Sander et al. (PLoS One, 2009, 4: e6667) dans tous les parasites. Les transcrits de DSM de type 3D7 ont été retrouvés dans 54 isolats (44%) et les transcrits de DSM de type FCR3 ont été retrouvés dans 47 isolats (39%) (Figure 1). Dans 21 isolats (17%), les deux types de transcrits ont été détectés, suggérant un mélange de génotypes. Aucune différence n'a été observée entre les MOI des isolats des groupes déterminées après le typage de var2csa (les MOI déterminés sont de 3,05 dans les isolats exprimant le type 3D7, de 2,98 dans les isolats exprimant le type CFR3 et de 3,6 dans les isolats avec un mélange des deux signatures DSM). IgG Spécifiquement Induits contre la Région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x des Lignées FCR3 et 3D7 reconnaissent tous les Isolats des Femmes Enceintes. Le niveau de reconnaissance de VAR2SCA exprimé à la surface des érythrocytes a été estimé immunologiquement sur 47 érythrocytes infectés par Plasmodium falciparum isolés de femmes enceintes. Parmi ces isolats, il a été trouvé que 16 d'entre eux présentent le DSM de type 3D7, 21 présentent le DSM de type FCR3 et un mélange de génotypes a été détecté dans 10 isolats. Les érythrocytes infectés ont été marqués et évalués par cytométrie de flux en utilisant des IgG purifiés de sera d'animaux vaccinés. Les IgG anti-NTS-DBL1x-Idl-DBL2x spécifiques aux variants var2csa de 3D7 et FCR3, et les IgG induits contre le domaine extracellulaire entier de VAR2CSA ont été utilisés dans cette expérience. Les IgG induits contre le domaine extracellulaire entier de VAR2CSA ont été utilisés pour estimer le niveau de reconnaissance absolu de la protéine VAR2CSA native exprimée à la surface des érythrocytes infectés. Un niveau de réactivité élevé a été observé avec des anticorps induits contre le domaine extracellulaire entier de VAR2CSA comparé aux anticorps dirigés contre le domaine NTS-DBL1x-Idl-DBL2x de VAR2CSA quelle que soit l'origine de ce dernier (P La capacité des anticorps à inhiber l'adhérence au CSA d'érythrocytes infectés exprimant VAR2CSA et le comportement du mélange des deux anticorps induits contre le domaine NTS-DBL1x-Idl-DBL2x de VAR2CSA ont été étudiés sur les souches de laboratoire et des souches sélectionnées par Bewo : FCR3 et HB3 (qui ont un DSM de type FCR3) et NF54 (qui un background de type 3D7). Une activité inhibitrice élevée a été obtenue avec des anticorps envers des érythrocytes infectés appartenant au DSM homologue. Les anticorps anti-NTS-DBL1x-Idl-DBL2x induits contre le variant FCR3 inhibent totalement (100%) l'adhérence au CSA des lignées FCR23 et HB3 (Figure 4). Cependant, seule une inhibition partielle de ces lignées (20% à 40%) a été observée avec les IgG anti-NTS-DBL1x-Idl-DBL2x induits contre le variant 3D7, qui par ailleurs inhibent fortement l'adhérence au CSA du parasite NF54. De plus, le mélange des IgG anti-NTS-DBL1x-Idl-DBL2x de la lignée FCR3 et de la lignée 3D7 conserve la propriété d'inhiber totalement l'adhérence de tous les érythrocytes infectés à CSPG. Conclusions Ce travail démontre que que la région NTS-DBL2X de VAR2CSA contient des épitopes anti-adhérence conservés et indique que le développement d'un vaccin efficace à base de VAR2CSA nécessitera la combinaison d'un nombre restreint de variants VAR2CSA. La combinaison des deux variants majeurs de VAR2CSA utilisés dans ce travail sera essentielle pour développer un vaccin efficace contre le paludisme placentaire. REVENDICATIONS1. Combinaison d'au moins deux polypeptides isolés ou purifiés, le premier polypeptide isolé ou purifié consistant en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA d'une première lignée parasitaire de Plasmodium falciparum, et le deuxième polypeptide isolé ou purifié consistant en la région NTS-DBL1x-Idl-DBL2x ou la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA d'une deuxième lignée parasitaire de Plasmodium falciparum, pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du paludisme gestationnel. 2. Combinaison selon la revendication 1, caractérisée en ce que la première lignée parasitaire de Plasmodium falciparum est la lignée FCR3, et la deuxième lignée parasitaire de Plasmodium falciparum est la lignée 3D7. 3. Combinaison selon la revendication 2, caractérisée en ce que la région NTSDBL1x-Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée FCR3 a la séquence SEQ ID NO: 1 ou une séquence homologue de SEQ ID NO: 1, et la région NTS- DBL1x-Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée 3D7 a la séquence SEQ ID NO: 5 ou une séquence homologue de SEQ ID NO: 5. 4. Combinaison selon la revendication 2, caractérisée en ce que la région IdlDBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée FCR3 a la séquence SEQ ID NO: 3 ou une séquence homologue de SEQ ID NO: 3, et la région Idl-DBL2x de la protéine VAR2CSA de la lignée 3D7 a la séquence SEQ ID NO: 7 ou une séquence homologue de SEQ ID NO: 7. 5. Combinaison d'au moins deux protéines de fusion, la première protéine de fusion consistant en le premier polypeptide défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 4 fusionné à une première séquence partenaire de fusion, et la deuxième protéine de fusion consistant en le deuxième polypeptide défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 4 fusionnée à une deuxième séquence partenaire de fusion, pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du paludisme gestationnel. 6. Combinaison selon la revendication 5, caractérisée en ce que la première séquence partenaire de fusion et la deuxième séquence partenaire de fusion sontchoisies dans le groupe constitué de la protéine liant le maltose, la séquence signal de la protéine liant le maltose, un S-tag, la glutathione-S-transférase, la thiorédoxine, la P-galactosidase, la streptavidine, la dihydrofolate réductase, la séquence signal pelB, la séquence signal ompA, la séquence signal de l'alkaline phosphatase, la protéine fluorescente verte, les toxines, l'hormone de croissance humaine, l'interleukin-2 (IL-2), le granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF), le granulocyte colony stimulating factor (G-CSF), la calcitonine, l'interféron-beta, l'interféron-alpha, le glucagon like peptide 1 (GLP1), le glucagon like peptide 2 (GLP-2), la toxine PA, les hormones parathyroïdiennes (PTH(1-34) and PTH(1-84)), la butyrylcholinestérase, la glucocérébrosidase (GBA), et l'exendine-4. 7. Combinaison d'au moins deux polynucléotides isolés ou purifiés, le premier polynucléotide consistant en une séquence nucléotidique codant pour le premier polypeptide défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou la première protéine de fusion définie dans l'une quelconque des revendications 5 à 6 et les éléments nécessaires à l'expression du premier polypeptide ou de la première protéine de fusion in vitro ou in vivo, et le deuxième polynucléotide consistant en une séquence nucléotidique codant pour le deuxième polypeptide défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou la deuxième protéine de fusion définie dans l'une quelconque des revendications 5 à 6 et les éléments nécessaires à l'expression du deuxième polypeptide ou de la deuxième protéine de fusion in vitro ou in vivo, pour utilisation dans le traitement ou la prévention du paludisme gestationnel. 8. Combinaison selon la revendication 7, caractérisé en ce que le premier polynucléotide comprend une séquence choisie dans le groupe constitué de SEQ ID NO: 2, une séquence homologue de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 et une séquence homologue de SEQ ID NO: 4, et le deuxième polynucléotide comprend une séquence choisie dans le groupe constitué de SEQ ID NO: 6, une séquence homologue de SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, et une séquence homologue de SEQ ID NO: 8. 9. Composition immunogène comprenant au moins un véhicule ou excipient acceptable sur le plan pharmaceutique et au moins une combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 8. 10. Vaccin contre le paludisme gestationnel comprenant au moins une combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 8. 11. Vaccin ADN contre le paludisme gestationnel comprenant au moins une combinaison selon la revendication 7 ou la revendication 8, caractérisé en ce que les polynucléotides de la combinaison sont insérés dans au moins un plasmide. 12. Vaccin selon la revendication 10 ou la revendication 11 comprenant en outre au moins un adjuvant. 13. Kit de vaccination contre le paludisme gestationnel comprenant au moins une combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, ou une composition immunogène selon la revendication 9 ou un vaccin selon l'une quelconque des revendications 10 à 12, et des instructions pour effectuer une vaccination contre le paludisme gestationnel. 14. Kit selon la revendication 13, caractérisé en ce que les au moins deux polypeptides ou au moins deux protéines de fusion ou au moins deux polynucléotides de la combinaison sont fournis séparément dans le kit.