Brevet FR3004651A1 — publié le 20141024

Composition pharmaceutique ou diététique ayant pour objet l'augmentation du passage des xénobiotiques, des médicaments et des nutriments au travers les barrières biologiques. Quelques définitions. Pour mieux comprendre ce texte il est souhaitable de définir quelques mots et termes qui y sont employés. La majorité de tous les termes et mots employés sont définis dans le le dictionnaire illustré des termes de médecine de Garnier Delamare 28e édition. Adjuvant de médicament: Auxiliaire thérapeutique ou produit thérapeutique. Ce sont généralement les produits administrés préalablement à des produits thérapeutiques. En chimiothérapie, ces produits sont administrées avant les anticancéreux. Biodisponibilité: Disponibilité biologique des médicaments comme il est défini 15 dans le dictionnaire illustré des termes de médecine de Garnier Delamare 28e édition. Bioéquivalence: La bioéquivalence est l'absence d'une différence significative de la biodisponibilité d'un principe actif à partir d'une forme pharmaceutique équivalente, administrée à la même dose dans des conditions similaires au 20 cours d'une étude appropriée. La bioéquivalence correspond à l'équivalence de la biodisponibilité des médicaments comparés. La notion de la bioéquivalence tolère pour ces critères une certaine différence entre une substance de référence et un générique dans la limite qui séparent un intervalle défini par les autorités de santé. 25 Barrières biologiques: Ensemble des structures qui séparent un compartiment biologique à un autre. Parmi les barrières biologiques on peut citer la barrière intestinale qui sépare le contenu de l'intestin (compartiment muqueux) et sang (compartiment séreux). Les barrières biologiques les plus importantes sont: - 2 - l'intestin, la peau, la cornée, la barrière hémato-encéphalique, la barrière alvéolocapillaire. Excipient: C'est un véhicule d'un médicament. C'est une substance à laquelle on incorpore les principes actifs pour les rendre facilement absorbables. Nutriments: substance alimentaire pouvant être directement et entièrement assimilée, sans avoir à subir les modifications de la digestion et pouvant être introduite par injection intraveineuse. Exemple : glucose, vitamines, sels minéraux etc. Médicament: Substance ou combinaison de substances présentée comme possédant des propriétés curatives ou préventives à l'égard des maladies humaines ou animales, ainsi que tout produit pouvant être administré à l'homme ou à l'animal en vue d'établir un diagnostic médical, restaurer, corriger ou modifier leurs fonctions organiques. Médicament essentiel: Médicament qui satisfait aux besoins prioritaires de la 15 population en matière de soins de santé. Ces médicaments sont généralement utilisés pour des pathologies prioritaires et sont inscrits sur la liste nationale des médicaments essentiels. Principe actif Substance qui induit l'effet thérapeutique. Traceur biologique: Encore appelé marqueur biologique ou bio marqueur ou 20 indicateur biologique. Élément permettant de dépister une substance sur laquelle il est fixé. Utilisé pour le diagnostic médical le traceur biologique est une substance dont le dosage permet l'exploration des affections spécifiques. Exemple, marqueur de tumeur, de l'hépatite virale, du métabolisme etc. Promoteur ou facilitateur de l'absorption intestinale des médicaments: 25 substance qui favorise l'absorption intestinale des nutriments, des médicaments ou des xénobiotiques. Xénobiotiques : Produits chimique, ménager ou industriel, étranger à la chimie biologique et se comportant comme un toxique ou un allergène vis-à-vis de l'organisme. - 3 - Sels mineraux: sont des substances provenant de roches qui entrent dans la composition des organismes et qui sont présents dans l'alimentation animale. Parmi les sels minéraux les plus courant ont peut citer: calcium, chlore, magnésium, phosphore, potassium, sodium, soufre. Oligoéléments: aluminium, brome, cuivre, cobalt, fer, fluor, manganèse, molybdène, iode, sélénium, silicium, vanadium, zinc. Exploration fonctionnelle: Ensemble d'examens destinés à explorer les grandes fonctions de l'organisme : les fonctions respiratoires, cardiaques, circulatoire, digestives, reproduction etc. La présente invention concerne une nouvelle utilisation thérapeutique ou diététique de l'extrait de l'Hibiscus Sabdariffa. On sait que l'Hibiscus sabdariffa L. appartient à la classe des magnoliopsida, à la famille des malvacées, au genre Hibiscus, Les autres noms usuels sont les suivants: Bissap, Dah, Oseille de Guinée. En France on l'appelle également 15 karkadé. Le Bissap est une plante annuelle, haute de 1 à 2 m. Les feuilles, alternes, sont lobées, quelquefois profondément. Les fleurs, jaune-crème, axillaires, atteignant jusqu'à 7 cm de diamètre; le calice, gamosépale, comportant 5 lobes, est accompagné de 5 bractées (épicalices); la corolle compte 5 pétales 20 obovales arrondis à leur sommet, avec une tâche rouge à la base. Le calice devient accrescent, charnu, après la chute de la corolle. Le fruit, capsule conique, mesure jusqu'à 20 mm de longueur. Espèce paléo tropicale, Hibiscus sabdariffa est cultivée dans toutes les régions tropicales du monde. Les usages de la plante 25 En Afrique de l'Ouest, et sous le nom principal d'Oseille de Guinée, on emploie les feuilles au goût acidulé comme légume cuit à la façon des épinards, et comme salade à saveur comparable, effectivement, à celle de l'Oseille. Quant aux calices de la variété verte, ils sont utilisés dans la confection de nombreux plats à base de riz, de mil, de poisson, de viande. On trouve d'ailleurs 30 couramment en vente sur les marchés les feuilles en bottes et les calices verts, - 4 - toujours présentés unis aux fruits. Bien que les calices verts soient réservés essentiellement aux usages culinaires, on reconnaît toutefois que leur introduction dans les préparations alimentaires favorise la digestion et combat la fatigue ainsi que la constipation due à une trop grande consommation de riz. De leur côté, les calices de la variété rose qui se présentent à l'état sec comme de petites languettes charnues de 3 cm de longueur associées par deux ou trois, sont destinés à l'exportation et utilisés localement en médecine populaire sous forme de décoctés aqueux comme diurétique, diaphorétique et cholagogue. Ces boissons sont également considérées comme rafraichissantes et tonifiantes; aussi sont-elles très appréciées des musulmans qui en font une grande consommation pendant le Ramadan. Il y a lieu de signaler en outre que la poudre et le décocté de feuilles sont souvent recommandés en usage externe pour les plaies et les blessures. On peut utiliser l'hibiscus sabdariffa avec de la myrtille (Vaccinium myrtillus) pour lutter contre l'hypertension et l'hyperlipidémie ou comme colorant alimentaire et dans la préparation des phytomédicaments. Le déposant a constaté, de façon surprenante, qu'un extrait aqueux de fruits (surtout le calice) et les feuilles d'Hibiscus sabdariffa sont utilisables en tant que composition pharmaceutique ou diététique pour augmenter l'absorption intestinale des xénobiotiques, des médicaments, et des nutriments. En utilisant les cultures cellulaires et d'autres barrières biologiques comme la peau, la cornée, la muqueuse buccale, anale et vaginale on peut tout aussi bien augmenter le passage des xénobiotiques, des médicaments et des nutriments. Par conséquent la composition selon l'invention peut aussi bien être utilisée en tant que promoteur de l'absorption des médicaments, des xénobiotiques et des nutriments au cours d'études expérimentales, fondamentales ou appliquées. Cependant, l'applica-tion préférée de l'extrait aqueux de d'Hibiscus sabdariffa est l'augmentation de la biodisponibilité par voie orale des médicaments notamment les médicaments à faible biodisponibilité orale comme les anticancéreux, les antirétroviraux, les antifongiques, les antibiotiques ou d'autres médicaments qui ont des difficultés à passer la barrière intestinale. L'extrait aqueux, selon l'invention, peut renfermer en outre une ou plusieurs autres substances naturelle ou chimique comme le bicarbonate de sodium ou - 5 - tout autre produit semblable utilisables par l'homme de métier et pouvant remplacer ledit extrait aqueux dans une formulation pharmaceutique pour apporter la même fonction ou rôle. Composition d'Hibiscus sabdariffa Produits Partie de la plante Acides acétique Fruit Acide aspartique Fleur Acide butyrique Fruit Acide citrique Calice Fleur Fruit Acide formique Fruit acide glycolique Fleur Acide malique Fleur Fruit Acide oxalique Calice Fleur Fruit] Acide propionique Fruit Acide tartarique Calice Fleur Fruit Table 1 - Les Acides organiques d'Hibiscus sabdariffa 15 Le déposant a constaté que seule une partie des extraits pouvait favoriser l'augmentation de l'absorption intestinale des xénobiotiques et des médicaments. Parmi les composants les plus efficaces on trouve des composés acides de la plantes. Le tableau 1 résume quelques produits acides identifiés 20 dans l'extrait d'hibiscus sabdariffa. A ces acides organiques repris ci-dessus d'autres produits ont été identifiés et pouvant être efficaces, seuls ou en synergie, avec les produits du tableau 1. Parmi ces composants, on trouve ceux du tableau 2 et 3:10 Produit Partie de la plante Acide ascorbique Fleur Fruit Acide galacturonique Fleur Acide Utalonique Fleur Acide gallique Fruit Acide protocatéchique Fleur Tableau 2 Autres produits d'Hibiscus sabdariffa. D'autres plantes renferment les mêmes composés que l'Hibiscus sabdariffa et 10 peuvent jouer le même rôle à l'instar de myrtille (voir tableau 2). Produit Partie de la plante Acide 4-hydroxycinnamique Plante Acide acétique Jus de Fruit Acide acétique-hex-trans-2-enyl-ester Jus de Fruit Acide P-hydroxy-benzoïque Jus de Fruit Acide Butyrique-hex-trans-2-enyl-ester Jus de Fruit Acide P-hydroxy-benzoïque Plante Table 3- Les Acides organiques de myrtille 20 Formes galéniques Selon l'invention, la composition peut être présentée sous forme de comprimés, gélules, granulés, sirop ou solution buvable, suppositoire comprenant l'extrait d'hibiscus sabdariffa avec au moins un acide organique contenu dans la plante. Les hommes du métier connaissent et utilisent différents excipients comme 25 liants ou lubrifiants pour fabriquer les poudres, les granulés ou autres préparations. Des exemples d'excipients qui peuvent être ainsi utilisés selon l'invention sont : le lactose, l'amidon, la dextrine, le phosphate de calcium, le 15 - 7 - carbonate de calcium, le silicate d'aluminium naturel ou synthétique, l'oxyde de magnésium, l'hydroxyde d'aluminium hydraté, le stéarate de magnésium, le bicarbonate de sodium. D'autres excipients non cités ci-dessus mais qui conviennent également sont décrits dans le « Remington's Pharmaceutical Sciences » par E.W. Martin, et peuvent être utilisés selon l'invention. Dans ces différentes formulations, et par exemple celles mentionnées ci-dessus, la composition peut aussi être présentée en poudre pour dilution ou sirop. Cette poudre peut ne contenir que les principes actifs. Celle-ci est obtenue par exemple par atomisation, séchage, ou lyophilisation à partir de l'extrait aqueux, d'hydro-alcoolique ou l'extrait par le CO2. Le but de l'invention est donc de proposer une nouvelle composition pharmaceutique et/ou diététique qui augmente le passage des xénobiotiques, des médicaments et des nutriments au travers des barrières biologiques et plus particulièrement au niveau de la barrière intestinale. Le déposant parvient à ce que l'administration par voie orale (per os) d'une quantité efficace du mélange d'un extrait aqueux d'hibiscus sabdariffa avec ou sans bicarbonate de sodium provoque une augmentation du flux net au travers de l'intestin de rat. Le flux net (J,,e) étant la différence entre le flux muqueux séreux (Jms) et le flux séreux muqueux (Jsm). On appelle ici le flux, la quantité de produit qui passe au travers de l'intestin de rat. Si le passade se fait de la lumière intestinale vers le sang, on parle alors du flux muqueux séreux. Mise en oeuvre de l'invention La mise en oeuvre de l'invention peut se faire sur l'action de la préparation selon l'invention sur l'augmentation du passage des médicaments avec une 25 biodisponibilité orale très faible comme les anticancéreux et les antirétroviraux. Exemples de préparation selon l'invention non limitatifs Un exemple de préparation simplifiée de l'invention se fait par un mélange de la poudre de l'extrait sec de l'hibiscus sabdariffa obtenu par atomisation ou lyophilisation avec le bicarbonate de sodium selon le tableau 4. Compositions Hibiscus Bicarbonate de Solution Sabdariffa sodium physiologique (Ringer) F1 10g 12g 500 ml Qsp F2 5g 5,5g 500 ml Qsp F3 2,5 g 2,20 g 500 ml Qsp Tableau 4: Trois compositions très simplifiés de l'illustration de l'invention Essai du principe actif 10 Par les études sur les organes isolés nous avons montré que la composition pharmaceutique selon la présente invention augmente l'absorption intestinale des anticancéreux comme le cisplatine (Cisp) et l'oxaliplatine (Oxa). D'autre part la composition pharmaceutique selon l'invention augmente également le passage intestinal des autres médicaments ou xénobiotiques à faible 15 biodisponibilité par voie orale comme les antirétroviraux: l'Atanazavir (ATV), l'Effavirenz (EFV) et des molécules comme le dextran (F04). La description ci-après montre, à l'aide des chambres de perméation ou chambres d'Ussing, l'effet de la composition pharmaceutique selon l'invention, sur l'absorption intestinale de ces différents produits peu perméables chez le 20 rat. Mode de réalisation de l'essai Matériels et méthodes utilisés Produits chimiques La Bumétanide (outil pharmacologique), le bicarbonate de sodium, le FITC25 dextran (4-kDa) proviennent de chez Sigma (St Quentin-Fallavier, France). La composition pharmaceutique selon l'invention a est fabriquée par le laboratoire5 - 9 - TBC-Transcell-Lab, Faculté de médecine Xavier Bichat (Paris France). Le cisplatine et l'oxaliplatine nous ont été gracieusement fournis par l'université Paris-Sud, Centres d'études pharmaceutiques, département de physicochimie, pharmacotechnie, biopharmacie - UMR CNRS 8 612, laboratoire du professeur G. Ponchel. L'acide citrique provient de Prolabo (Merck-Eurolab), Paris, France. Les antirétroviraux utilisés proviennent des laboratoires: Atanazavir (Reyata®, Bristol-Meyer Squibb Pharma) et Efavirenz (Norvir®, Abbot). Préparation de tissus Les rats Wistar sont achetés chez Janviers SA (France) et sont nourris par les aliments standard de laboratoire (UAR, Villemoisson s / Orge, France) jusqu'à la réalisation des études. La nourriture est retirée 18 h avant les expériences, mais les animaux ont l'accès libre à eau potable. Pour les études de l'électrophysiologie, les animaux sont tués par la dislocation cervicale après anesthésie. Des segments d'intestin d'animaux à jeun sont enlevés et rincés du contenu intestinal avec solution du Ringer frais. Tous les animaux sont à jeun et l'estomac vide. Les morceaux de tissus sont ensuite ouverts le long de la bordure mésentérique et sont montés bien aplatis entre les deux demi-chambres Ussing (TBC-Biomécatronics SAS, ZI de Ruitz, France). Études du courant de Court-circuit en chambres Ussing La solution du Ringer isotonique contenant l'extrait d'hibiscus sabdariffa selon le tableau 4 est utilisée dans les expériences est cette solution est composée de (en mM) 115 NaCl, 25 NaHCO3, 1.2 MgC12, 1.2 CaCl2, 2.4 K2HPO4 et 0.4 KH2PO4. Le pH était 7.40 à 37°C. Une préparation intestinale est montée entre deux demi chambres en plexiglas avec un compartiment muqueux et un compartiment séreux. Ces demi-chambres, dont l'ouverture est appliquée contre la surface exposée du tissu intestinal, contiennent le liquide de Ringer tamponnée à pH = 7,6 maintenues à 37°C et buller en permanence avec le carbogène (mélange gazeux composé d'oxygène et de dioxyde de carbone dans les proportions 95% d'02 et 5% de CO2). Le bullage assure également le brassage permanent du milieu - 10 - d'incubation dans les deux compartiments. Le potentiel électrique transépithéliale qui l'asymétrie de charges électriques entre le coté muqueux et séreux de la membrane est mesuré par les électrodes de calomel (TBCBiomécatronics SAS, France) reliées par des ponts d'agaroses plongés dans une solution de KCI 3 molaire. Ces ponts sont placés sur les deux côtés du tissu et sont adaptés à chaque demi-chambre. Le tout est relié à un voltmètre à haute impédance (TBC-Biomécatronics SAS, France). La différence de potentiel mesurée à l'aide des électrodes de calomels est court-circuitée par un courant de court-circuit (lcc) via des ponts d'agaroses contenant du KCI à 3M et placés dans chaque réservoir. Le tout étant relié à un système de voltage-Clamp (TBC-Biomécatronics SAS, France). Toutes les mesures sont ensuite enregistrées de façon continue sur un ordinateur à l'aide d'un logiciel BiodacqSoft (TBC-Biomécatronics SAS, France). Icc représente la somme des flux d'ions nets transportés à travers l'épithélium en absence d'un gradient électrochimique (principalement Na+, CI-2 et HC0-3). Mesure de flux bidirectionnels au travers de l'intestin de rat. Après la stabilisation des paramètres électriques des tissus, les différentes chambres d'Ussing sont appariées selon leur conductance afin de réaliser les flux bidirectionnels. La chambre choisie pour effectuer le flux muqueux-séreux (Jms) et appariée selon la même conductance avec la chambre qui servira à réaliser le flux unidirectionnel séreux-muqueux (Jsm). Le flux net est ensuite calculé selon la formule suivante: Jnet = Jrns Jsm Les différents produits utilisés pour mesurer le flux (passage au travers l'intestin de rat) sont introduits à la concentration de 1mg/mL dans le compartiment donneur. Les prélèvements avec remplacement sont ensuite effectués à 0, 1, 2 heure puis congelés jusqu'à la mesure du flux par UV pour les ARV et le FD4 et par l'ICP pour le cisplatine et l'oxaliplatine. Les variations des paramètres électriques sont ensuite relevées puis enregistrés sur l'ordinateur.30 Statistiques Les résultats qui sont montrés sur les figures jointes sont rapportés en moyenne (M) de mesures plus l'écart type (M ± ET). Toutes les déterminations sont faites avec une moyenne d'au moins de 7 morceaux de tissu (n). L'analyse de la variance à une voie suivie du test de Dunnett est réalisée grâce au logiciel GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc. CA 92037 USA). Résultats sont: Figure 1: Enregistrement typique de l'effet de trois compositions selon l'invention (voir tableau 4) sur le courant de court circuit en fonction du temps. La première flèche à 62 min marque l'ajout de la composition (F1 ou F2 ou F3). La deuxième flèche à 135 min marque l'ajout de la Bumétanide dans le milieu séreux. Cet enregistrement montre que l'effet de la composition selon l'invention sur le courant de court-circuit (le) est dose dépendant. Figure 2: A) -Passage des antirétroviraux (ARVs) seuls au travers de l'intestin de rat en fonction du temps. Cette figure montre que le passage de l'Efavirenz (EFV) est supérieur à celui de l'Atanazavir (ATV). B) Le passage des ARVs en présence de la composition selon l'invention (F2). EFV= l'Efavirenz et ATV = Atanazavir. En présence de F2 la cinétique de passage des ARVs est totalement modifiée. Ce résultat montre l'effet de F2 sur la cinétique de passage des ARVs au travers de la barrière intestinale. Figure 3: A: Perméabilité apparente de l'Efavirenz (EFV) seul et en présence des différentes compositions F2 et F3 selon le tableau 4. B: montre la variation de la conductance du tissu en présence de la composition F2. La perméabilité apparente de l'EFV est augmentée en présence de F2 et F3. ** p Figure 6: A: Perméabilité apparente des anticancéreux Cisplatine (Cisp) et l'Oxaliplatine (Oxa) en présence de la composition F2.B: montre la variation de la conductance du tissu qui augmente en présence de la composition F2. *** p Selon l'invention, la composition peut être utilisée: - en tant qu'adjuvent de médicament pour la facilitation et l'augmentation du transport des médicaments au travers des barrières biologiques, - en tant qu'excipientpour favoriser le passage des médicaments au travers des barrières biologiques, - pour augmenter la biodisponibilité par voie orale des vitamines, des nutriments, des oligoéléments et les sels minéraux. - pour augmenter le passage de traceurs biologiquesau travers des barrières biologiques pour faire le diagnostic médical et l'exploration fonctionnelle, REVENDICATIONS1. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa, pour son utilisation pour augmenter le passage des xénobiotiques, des médicaments et des 5 nutriments au travers des barrières biologiques. 2. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que cet extrait d'hibiscus sabdariffa soit associé à au moins un acide organique naturel, parmi les suivants: acide acétique, acide aspartique, acide butyrique, acide citrique, acide formique, 10 acide glycolique, acide malique, acide oxalique, acide propionique, acide tartarique, acide ascorbique, acide galacturonique, acide utalonique, acide gallique, acide protocatéchique. 3. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que cet extrait d'hibiscus sabdariffa 15 contienne au moins un acide organique naturel natif de Vaccinium myrtillus parmi les acides suivantes: acide 4-hydroxycinnamique, acide acétique-hextrans-2-enyl-ester, acide P-hydroxy-benzoïque, acide Butyrique-hex-trans-2- enyl-ester, acide P-hydroxy-benzoïque. 4. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son utilisation 20 selon les revendications 1 à 3 caractérisée en ce qu'elle comprenne en plus au moins du bicarbonate de sodium. 5. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son utilisation selon les revendications 1 à 4, pour son utilisation en tant qu'adjuvent de médicament pour la facilitation et l'augmentation du passage des autres 25 médicaments au travers des barrières biologiques. 6. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son utilisation selon les revendications 1 à 4, pour son utilisation en tant qu'excipient pour favoriser l'augmentation du passage des principes actifs des médicaments au travers des barrières biologiques.-14- 7. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son utilisation selon les revendications 1 à 4, pour son utilisation pour augmenter la biodisponibilité par voie orale des nutriments. 8. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son utilisation 5 selon les revendications 1 à 4, pour son utilisation pour augmenter la biodisponibilité par voie orale des vitamines. 9. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son utilisation selon les revendications 1 à 4, pour son utilisation pour d'augmenter la biodisponibilité par la voie orale des sels minéraux et les oligo éléments. 10 10. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son utilisation selon les revendications 1 à 4, pour son utilisation pour d'augmenter le passage des traceurs biologiques au travers des barrières biologiques pour faire le diagnostic médical et l'exploration fonctionnelle 11. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son 15 utilisation selon les revendications 1 à 4, pour son utilisation en tant que médicament facilitateur du passage des autres médicaments au travers des barrières biologiques. 12. Composition comprenant un extrait d'Hibiscus Sabdariffa pour son utilisation selon des revendications 1 à 11, pour son utilisation pour augmenter 20 le passage des xénobiotiques au travers des barrières biologiques au cours d'études expérimentales, fondamentales et appliquées.