Brevet FR3006896A1 — publié le 20141219

L'invention se rapporte au domaine de la cosmétologie, en particulier à la production de produits topiques permettant une filtration efficace des ultraviolets, 5 lesdits produits contenant des extraits de plantes halophiles. La protection de l'Homme contre les radiations UV suscite un réel intérêt de part les risques de cancer de la peau et de photovieillissement liés à l'exposition. A l'heure actuelle, l'industrie cosmétique est à la recherche de nouveaux actifs 10 toujours plus efficaces dans la protection solaire. A ce titre, différentes méthodes in vitro ont été développées pour apprécier l'effet photo-protecteur de composés destinés à entrer dans la composition de produits cosmétiques (crèmes protectrices anti-UV). 15 Le facteur de protection solaire (FPS) est un indicateur universel de la performance photoprotectrice des écrans solaires contre les rayons UV-B. Il est généralement déterminé in vivo sur un groupe de volontaires exposés à des doses croissantes de radiations UV en présence ou non de crème protectrice. Le FPS est alors déterminé par le rapport entre la dose minimale de radiations nécessaires 20 pour induire un érythème (coup de soleil) sur une peau protégée et la dose minimale de radiations nécessaires pour induire ce même érythème sur une peau non protégée. Ainsi, le FPS indique la capacité d'un produit de protection solaire à réduire les érythèmes induits par les UV. Le FPS est généralement mesuré in vivo par la 25 méthode de la FDA (Food and Drug Administration) (Food and Drug Administration, Federal Register 64 (1999) 27666-27693) ou la méthode COLIPA en Europe (Comité de Liaison des Industries de la Parfumerie, Guidelines for International Sun Protection Factor Test Method, 2006).]. 30 Toutefois, des méthodes in vitro ont également été développées, car elles sont plus rapides, moins coûteuses et surtout ne posent pas les problèmes éthiques liés à la participation de volontaires. Ces méthodes consistent, soit en la mesure de la transmittance spectrale de la substance écran incorporée dans une émulsion de crème et appliquée sur un support synthétique simulant la peau humaine, soit en l'analyse spectrophotométrique des solutions diluées de produits de protection solaire. Le FPS est alors déterminé par des équations mathématiques sur la base des spectres UV observés entre 290 à 400 nm (COLIPA, op. cit.). En outre, ceci 5 permet d'évaluer la photostabilité des produits en comparant les valeurs du FPS avant et après irradiation UV. Afin d'évaluer rapidement la capacité photoprotectrice d'extraits de plantes sans être obligé de les incorporer dans des matrices cosmétiques, un test in vitro a 10 été développé par (Hupel et al, Talanta, 86 (2011) 362- 371). Ce test est notamment basé sur la capacité des extraits testés à filtrer de fortes radiations UV-B (290-320 nm) et empêcher la dégradation de la chlorophylline de magnésium et de sodium (CMS), un dérivé de la chlorophylle. Le dispositif expérimental est composé d'une chambre d'irradiation avec six 15 lampes UV-B (312 nm, 8 \N) et une disposition spécifique d'exposition des échantillons. Les échantillons sont exposés à 40 W m-2 d'UV-B et 20 W m-2 d'UVA. Les caractéristiques spectrales des échantillons sont déterminées par la mesure de leur spectre d'absorbance dans l'UV (290-400 nm). Plusieurs 20 paramètres sont alors définis après intégration des aires d'absorbance des échantillons dans l'UV : - Les longueurs d'onde maximales d'absorption de l'échantillon (Àmax) - Le ratio UV-B/UV-A qui représente le potentiel de protection de l'échantillon dans l'UV-B (290-320 nm) par rapport au potentiel de protection de 25 l'échantillon dans l'UV-A (320-400 nm). Ainsi, un ratio UV-B/UV-A 1 dénote une protection potentielle majoritairement contre les UV-B (ou UVB dans la demande) 30 - La longueur d'onde critique (Ac) qui est la longueur d'onde pour laquelle l'aire sous la courbe d'absorbance de l'échantillon, intégrée de 290 à Ac, est égale à 90% de l'aire intégrée de 290 à 400 nm. (Domaine de l'UV-B et de l'UV-A). Une longueur d'onde critique de 370 nm dénote une bonne protection potentielle à la fois dans l'UV-A et dans l'UV-B. Cette longueur d'onde critique est mesurée avant 35 (Aco) et après 2 h d'irradiation UV-B (Ac120). - La photostabilité de l'échantillon contre les radiations UV-B est déterminée par le ratio de l'absorbance de l'échantillon entre 290 et 320 nm avant et après 2h d'irradiation (UV-Sm/UV-B0). Ainsi, si UV-B120/UV-B0 > 0.9, l'échantillon a une très bonne photostabilité. Si 0.5 120 min à 0.1 g L-1 d'extrait = Très forte activité photoprotectrice et pas de test des extraits à 1 g L-1 - Si t1/2 CMS à 0.1 g L-1 d'extrait 0.4 g L-1 = Faible activité - Si t1/2 CMS à 1 g L-1 d'extrait est 120 min = Très forte activité photoprotectrice - Si t1/2 CMS Les plantes halophiles (ou halophytes) colonisant les milieux salés littoraux (dunes, falaises, marais) sont soumises à des conditions environnementales extrêmement changeantes de par leur exposition aux embruns et aux marées (salinité, lumière, température... Leur survie dans ces milieux contraignants est notamment due à une forte capacité d'acclimatation grâce à la synthèse de molécules de défense variées et potentiellement originales. Ainsi, Hupel et al ont étudié le potentiel de photoprotection d'extraits de plantes halophiles, ces plantes étant particulièrement exposées à de fortes radiations UV dans leurs milieux. Les auteurs ont ainsi rapporté un potentiel photoprotecteur important pour 5 les extraits de plantes halophiles testées, et notamment Crithmum maritimum et Matricaria marftima. Ces extraits ont été obtenus par lyophilisation d'échantillons de parties aériennes, broyés en poudre fine, et extrait par macération dans le méthanol. 10 L'invention se base sur le fait que l'on peut obtenir des compositions photoprotectrices améliorées lorsqu'elles contiennent des extraits de plusieurs plantes halophiles. En particulier, ces compositions contiennent plusieurs extraits éthanoliques de plantes halophiles. Un extrait éthanolique, au sens de l'invention est un extrait d'une plante, obtenu avec un solvant éthanolique. Ces compositions 15 peuvent en particulier présenter une amélioration des niveaux d'absorption des UV (en particulier des UV-B), des durées d'efficacité, ou un élargissement des spectres d'absorption par rapport à des compositions ne contenant qu'un seul extrait de plante. De façon surprenante, des synergies ont été observées. Ainsi, ces mélanges peuvent être utilisés en tant que filtres à ultra violets, en particulier 20 en tant que filtres à UV-B, mais également en tant que filtres à UV-A. Ainsi, l'invention se rapporte notamment à une composition photoprotectrice caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles. De manière préférée, il s'agit d'extraits 25 éthanoliques, c'est-à-dire que les extraits de plantes introduits dans la composition selon l'invention ont été obtenus avec un solvant éthanolique. Toutefois, d'autres solvants (à base de méthanol, de chloroforme, de solvants polaires ou apolaires, acides ou basiques) peuvent aussi être utilisés dans le cadre de l'invention. Le terme « solvant éthanolique » se rapporte à l'éthanol pur ou à un solvant 30 contenant 50 % au moins (en volume) d'éthanol avec un autre solvant miscible à l'éthanol. De préférence, le second solvant est adapté à l'obtention d'extraits que l'on souhaite utiliser dans une composition destinée à l'application chez l'homme. Ainsi, un mélange éthanol / eau (éthanol à 50 % en volume ou plus) est considéré comme un solvant éthanolique, dans le cadre de la présente invention). Cet extrait éthanolique est obtenu par tout moyen connu dans l'art permettant l'obtention de composés solubles dans l'éthanol. Par ailleurs, et comme vu plus haut, dans le cadre de la présente invention, le terme « extrait éthanolique » se rapporte également aux extraits hydro-éthanoliques, c'est-à-dire solubles dans un solvant comprenant l'éthanol mélangé avec de l'eau. Dans un mode de réalisation, cette composition comprend un extrait éthanolique d'exactement deux plantes halophiles. Dans un autre mode de réalisation, cette composition comprend un extrait éthanolique alcoolique de trois plantes halophiles. Bien qu'il soit possible que ladite composition présente des extraits issus de plus de trois plantes halophiles, ces modes de réalisations ne sont généralement pas préférés. Dans le cadre de la présente demande, une composition photoprotectrice est une composition permettant de filtrer les ultra-violets (c'est-à-dire de diminuer l'intensité des UV après que ceux-ci ont traversé ladite composition). La composition photoprotectrice permet donc de limiter l'exposition de la peau au rayonnement. En particulier, les compositions photoprotectrices selon l'invention sont parfaitement adaptées pour filtrer les UV-B, les UV-A ou à la fois les UV-B et les UV-A. Dans un mode de réalisation préféré, lesdits extraits ont été obtenus par macération avec un solvant éthanolique, c'est-à-dire que l'on a laissé des broyats de plantes ou de parties de plantes macérer dans le solvant éthanolique. Cette étape de macération peut être effectuée à température ambiante, avec ou sans agitation, pendant une durée qui est adaptée par l'homme du métier (une durée supérieure à 15 minutes, mais inférieure à 2h, préférentiellement inférieure à 1h, de façon plus préférée inférieure à 30 minutes, est parfaitement appropriée). Dans un mode de réalisation particulier, le solvant d'extraction contient également de l'eau, en particulier au maximum 50 % d'eau. Les halophytes envisagées pour la préparation des compositions selon l'invention sont des plantes adaptées aux milieux salés ou aux milieux à pression osmotique importante. Ces plantes peuvent être des « halophytes facultatives » (pouvant résister à d'importantes concentration de sel dans le milieu, mais se comportant normalement sur des sols non salés) ou être des « halophytes obligatoires », qui ne se développent complètement qu'en présence de fortes concentrations salines. Parmi les halophytes utilisables pour leur potentiel photoprotecteur dans le cadre de la présente invention, on choisit particulièrement qu'un moins une des plantes soit du genre Matricaria, Crithmum ou Aster. En particulier, on préfère des plantes des espèces Crithmum maritimum, Matricaria maritima ou Aster tripolium. D'autres plantes adaptées sont choisies dans le genre Beta (en particulier Beta vulgaris, notamment subsp. maritima), ou Limonium (Limonium vulgare ou Limonium latifolium sont particulièrement adaptés). Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition contient un extrait éthanolique de Matricaria maritima ou Crithmum maritimum ou Aster tripolium, ainsi qu'un extrait éthanolique d'une autre halophyte. Dans un mode de réalisation particulier, cet autre plante halophile est du genre Matricaria, Crithmum, Aster, Beta ou Limonium. Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition contient un extrait éthanolique de Matricaria maritima ou Crithmum maritimum ou Aster tripolium, et un extrait d'une autre plante choisie parmi Beta maritima, Limonium vulgare, Limonium latifolium, Crithmum maritimum et Matricaria maritima. Ainsi, la composition selon l'invention comprend préférentiellement un mélange d'extraits de Matricaria maritima et Crithmum maritimum ou un mélange d'extraits de (Matricaria maritima ou Crithmum maritimum ou Aster tripolium) et de (Aster tripolium, Beta maritima, Limonium vulgare ou Limonium latifolium). Sont donc objets préférés de l'invention les compositions contenant un mélange d'extraits éthanoliques de : - Matricaria maritima et Crithmum maritimum - Matricaria maritima et Beta maritima - Matricaria maritima et Limonium vulgare - Matricaria maritima et Limonium latifolium - Matricaria maritima et Aster tripolium - Crithmum maritimum et Aster tripolium - Crithmum maritimum et Beta maritima - -Crithmum maritimum et Limonium vulgare - Crithmum maritimum et Limonium latifolium - Aster tripolium et Beta maritima - Aster tripolium et Limonium vulgare - Aster tripolium et Limonium latifolium35 L'invention se rapporte également à une composition telle que décrite plus haut, pour son utilisation dans la protection d'un épiderme contre un rayonnement UV, en particulier le rayonnement solaire. Elle se présente alors sous la forme d'une composition topique, en particulier une sous la forme d'une crème, d'une lotion, d'un onguent ou d'une pommade, d'une émulsion. Ces compositions sont préparées selon des méthodes connues dans l'art. Les compositions selon l'invention peuvent également contenir un filtre solaire minéral. De tels filtres minéraux sont connus, et incluent les oxydes métalliques, notamment les oxydes de titane (dioxyde de titane amorphe ou cristallisé sous forme rutile et/ou anatase), les oxydes de zinc, les oxydes de fer, les oxydes de zirconium, les oxydes de cérium ou leurs mélanges. Ils peuvent se présenter sous forme de micro- ou nano-pigments (enrobés ou non). De même, on peut utiliser tout filtre organique anti UV-A et/ou UV-B dans la composition selon l'invention. Certaines de ces molécules sont citées dans Hupel et al, mais on peut mentionner les dérivés de dibenzoylméthane, les dérivés de benzophénone, les anthranilates, les dérivés de triazine, et les mélanges de ces filtres (filtre anti UV-A). Comme filtres anti UV-B, on peut citer les dérivés de l'acide salicylique, les dérivés de l'acide cinnamique, les dérivés de [3, [3 '-diphénylacrylate liquide, les dérivés de l'acide p-aminobenzoïque, le 4-méthyl benzylidène camphre, l'acide 2-phénylbenzimidazole 5-sulfonique, les dérivés de 1,3,5-triazine, et les mélanges de ces filtres. En fonction du résultat recherché, un mélange de filtres anti UV-A et UV-B peut être utilisé. L'invention se rapporte également à une méthode de préparation d'une 25 composition photoprotectrice, ladite méthode comprenant l'étape de mélange d'extraits éthanoliques d'au moins deux plantes halophiles dans un milieu cosmétiquement acceptable. Le milieu cosmétiquement acceptable consiste en de l'eau ou un mélange d'eau et de solvant, ledit solvant pouvant être un alcool inférieur en C1-C4 comme 30 l'éthanol ou l'isopropanol ou un polyol ou un éther de polyol comme la glycérine, le polypropylène glycol ou leurs éthers. Dans un mode de réalisation particulier, ladite méthode comprend également une étape de concentration (ou purification) des actifs desdits extraits éthanoliques. Cette étape est préférentiellement réalisée par chromatographie 35 d'adsorption d'extraits de broyats de plantes sur colonne C18. L'élution est alors réalisée par passage de solvants hydroalcooliques de polarité décroissante (100% d'eau à 100% d'éthanol). De manière préférentielle, les extraits photoprotecteurs sont récupérés avec un solvant d'élution composé de 50 à 100% d'éthanol. Dans un mode de réalisation préféré, la concentration finale du mélange d'extraits éthanoliques d'au moins deux plantes halophiles sera préférentiellement de 0.1% (1 g L-1) dans le cas de mélanges d'extraits bruts (notamment ceux obtenus par macération dans le solvant éthanolique) et préférentiellement de 0.01% (0.1 g L-1) dans le cas de mélanges d'extraits purifiés (notamment ceux obtenus par chromatographie). Lors du mélange d'extraits de deux plantes halophiles constituant la composition photoprotectrice, on ajoute de préférence chaque extrait à la même concentration. Selon certains modes de réalisation de la présente invention, la composition photoprotectrice comprend un mélange d'extraits éthanoliques bruts ou purifiés d'au moins deux plantes halophiles qui peut être utilisé soit sous forme liquide soit sous forme sèche après évaporation du solvant et/ou lyophilisation de la partie aqueuse dans le cas de l'utilisation d'extraits hydroalcooliques. Dans le cas de la préparation du mélange sous forme sèche, il est préférable que l'on effectue le mélange des extraits sous forme liquide, pour s'assurer de l'homogénéité du mélange, puis que l'on effectue l'étape de séchage. Dans les compositions cosmétiques de type crème, le mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles sera préférentiellement préparé sous forme d'un mélange d'extraits bruts liquide de concentration finale égale à 1% (10 g L-1) ou d'un mélange d'extraits purifiés liquide de concentration finale égale à 0.1% (1 g L-1) et incorporé au minimum à 10% du poids total de la préparation. Description des Figures Figure 1 : Schéma du dispositif expérimental constitué d'une chambre d'irradiation (1) fournissant un rayonnement UV (60 VV.m-2) et équipée d'un système de refroidissement externe, d'un plateau (2) permettant la disposition spécifique de 30 unités expérimentales à soumettre à irradiation, placées à 10 cm des lampes UV-B. Chaque unité expérimentale est composée d'une cuvette contenant l'échantillon testé placé au-dessus d'une cuvette contenant la CMS. E1, E2...: échantillon 1, échantillon 2, ... Figure 2 : Distribution spectrale de l'énergie émise par les lampes à 312 nm. Figure 3 : Profil d'absorption UV des extraits purifiés de Matricaria maritima obtenus par chromatographie d'adsorption sur colonne C18 avec un gradient eau/alcool (100/0 à 0/100). Figure 4: Temps de demi-vie de la CMS (min) de mélanges d'extraits 5 méthanoliques, éthanoliques et hydroéthanoliques (éthanol 50%) à une concentration finale de 1 g L-1 (0.5 g L-1 de chacune des plantes). Cases blanches : Mélange d'extraits moins efficace qu'au moins un des deux extraits seuls à 1 g L-1 ; Cases gris clair : Mélange d'extraits aussi efficace qu'au moins un des deux extraits seuls à 1 g L-1; Cases gris foncé : Mélange d'extraits plus 10 efficace que les deux extraits seuls à 1 g L-1 Exemples Exemple 1 - Préparation des extraits de plantes halophiles 1) Préparation d'un extrait brut de Matricaria maritima, Crithmum maritimum, 15 Limonium vulgare ou Beta maritima Les plantes halophiles entières ou uniquement leurs parties aériennes (feuilles, tiges, fleurs) sont récoltées, lyophilisées puis broyées. La poudre de plante sèche est alors extraite avec le solvant souhaité (rapport masse sèche de plante/solvant égale à 1/10) par macération pendant 20 min. L'opération est 20 renouvelée trois fois afin d'épuiser la matière végétale. L'extrait obtenu est filtré et le solvant est évaporé sous vide à une température de 40°C (et/ou lyophilisé si le solvant contient une partie aqueuse) afin d'obtenir un extrait sec. L'extrait sec est alors dissous dans un volume approprié du solvant d'extraction afin d'obtenir un extrait liquide à 1% (10g.L-1). 25 Dans cet exemple, le choix des solvants d'extraction a permis d'obtenir des extraits aqueux, hydroalcooliques (éthanol 20%, éthanol 50%) et alcooliques (éthanol et méthanol). 2) Préparation d'extraits purifiés de Matricaria maritima 30 Un extrait brut alcoolique à 50% d'éthanol de Matricaria maritima préparé selon le protocole de l'exemple 1) est adsorbé sur une colonne de silice greffée C18 préalablement conditionnée avec 100% d'alcool puis 100% d'eau. Des extraits purifiés sont alors obtenus après élutions successives par des mélanges eau/alcool selon le gradient 0/100, 20/80, 40/60, 60/40, 80/20 et 100/0. Les 35 différents extraits obtenus sont alors séchés par évaporation sous vide et/ou lyophilisation puis repris dans un volume approprié d'eau (fractions 0/100 à 40/60) ou d'alcool (fractions 60/40 à 100/0) pour obtenir un extrait liquide à 0.01%. 3) Préparation d'un mélange de deux extraits de plantes halophiles Le mélange d'extraits de plantes halophiles est préparé à une concentration finale de 0.1% en diluant au 1/10 des parts équivalentes d'extraits à 1% de deux plantes halophiles. Exemple 2 Mesure de l'activité photoprotectrice d'extraits de plantes 1) Dispositif et Principe de la méthode La méthode de mesure de la capacité d'échantillons à filtrer les radiations UV-B est celle mise au point par Hupel et al. en 2011 (op. cit.). Les composés absorbeurs d'UV sont majoritairement localisés dans les tissus périphériques épidermiques des végétaux supérieurs, protégeant les tissus photosynthétiques sous-jacents de la dégradation. Cette « hiérarchisation » verticale des composés photoprotecteurs situés au-dessus des pigments photosynthétiques (notamment la chlorophylle sensible aux UV) a servi de modèle au développement du dispositif expérimental utilisé dans cette méthode (Figure 1). Ainsi, une cuve de spectrophotomètre UV contenant l'extrait à tester est placée horizontalement sur une autre cuve contenant la cible de dégradation, formant une unité expérimentale. L'ensemble des unités expérimentales est placé dans un dispositif où elles sont physiquement indépendantes les unes des autres, pour permettre une irradiation exclusivement verticale et limitée aux radiations UV-B provenant du dessus. Le composé utilisé comme cible de dégradation est un dérivé synthétique de la chlorophylle (molécule se dégradant face aux UV), la chlorophylline de magnésium et de sodium (CMS), dont l'absorbance à 650 nm est mesurée avant et après exposition aux UV-B (Figure 2) dans une chambre d'irradiation. Les unités expérimentales sont exposées à une intensité de 40 W m-2 d'UV-B et de 20 W m-2 d'UV-A pendant deux heures et la capacité de l'échantillon à filtrer les radiations UV-B est ensuite basée sur une inhibition plus ou moins importante de la dégradation de la CMS. Les échantillons testés sont également évalués pour leur photostabilité par mesure de leur spectre d'absorbance dans l'UV-B avant et après irradiation. 2) Paramètres mesurés 2.2.1) Caractéristiques spectrales et photostabilité Les caractéristiques spectrales des échantillons sont déterminées par la 5 mesure de leur spectre d'absorbance dans l'UV (290-400 nm). Plusieurs paramètres sont alors calculés après intégration des aires d'absorbance des échantillons dans l'UV : - Les longueurs d'onde maximales d'absorption de l'échantillon (Àmax) - La longueur d'onde critique (Àc) 10 - La photostabilité par le ratio de l'absorbance de l'échantillon entre 290 et 320 nm avant et après 2h d'irradiation (UV-B120/UV-B0) 2.2.2) Activité photoprotectrice L'activité photoprotectrice est déterminée par la capacité de l'échantillon à 15 empêcher la dégradation de la CMS. Cette protection est calculée par le temps de demi-vie de la CMS (t112 CMS). Les échantillons ont été testés à 0.1 et 1 g L-1. Une irradiation a été réalisée au préalable avec uniquement le solvant de reprise de l'échantillon en guise de témoin. Le temps de demi-vie de la CMS est 20 calculé à chaque concentration testée tel que décrit dans la publication de Hupel et al. (2011, op. cit.). La concentration efficace en extrait nécessaire pour protéger la CMS de la dégradation pendant 120 min (EC120) est également calculée. Les critères d'évaluation de l'intensité de l'activité photoprotectrice d'extraits bruts sont décrits 25 ci dessous : Si t112 CMS > 120 min à 0.1 g L-1 d'extrait = Très forte activité photoprotectrice et pas de test des extraits à 1 g L-1 - Si t112 CMS à 0.1 g L-1 d'extrait 0.4 g L-1 = Faible activité - Si t1/2 CMS à 1 g L-1 d'extrait est 120 min = Très forte activité photoprotectrice - Si t112 CMS 0.4 g L-1 Activité photoprotectrice moyenne : t112 CMS > 120 min à 1 g L-1 et 0.2 g L-1 120 min et EC120 0.2 g L-1) Extraits Ethanol/Eau (50/50) Extraits Ethanol Àmax Àc UVB120 Àmax Àc UVB120 (nm) (nm) (nm) (nm) UVB0 UVB0 Aster 296 360 0.74 294 375 0.56 tripolium 320 330 Beta 330 370 0.93 332 382 0.84 maritima Crithmum 296 355 0.78 282 371 0.51 maritimum 323 332 Limonium 270 368 1.00 294 388 0.97 vu/gare 336 281 325 Matricaria 298 353 0.63 300 369 0.61 maritima 325 290 329 Tableau 2 Propriétés spectrales (Maximum d'absorption (4,,x), Longueur d'onde critique (Àc)) avant irradiation et photostabilité dans l'UV-B UV13120/UVB0 après 120 min d'irradiation d'extraits hydroéthanoliques (éthanol 50%) et éthanoliques de plantes halophiles. L'analyse des extraits bruts montre une influence du solvant d'extraction sur l'activité photoprotectrice, notamment en termes de durée d'efficacité (t1,2 CMS) (Tableau 1). Les extraits présentant les durées d'efficacité les plus fortes chez toutes les espèces sont les extraits alcooliques purs ou à 50% d'éthanol, dont le t1/2 CMS varie de 250 min à 540 min selon les espèces (Tableau 1) et est largement supérieur à la durée de l'irradiation (120 min). Les extraits alcooliques à 20% d'éthanol ont également des durées d'efficacité fortes chez Matricaria maritima (t112 CMS = 250 min), moyennement fortes chez Crithmum maritimum et Beta maritima (t112 CMS = 180-200 min) et faibles chez Limonium vulgare et Aster tripolium (t112 CMS = 140-150 min). Les extraits aqueux présentent une forte durée d'efficacité uniquement chez Matricaria maritima (t112 CMS = 250 min). Chez Limonium vulgare, les extraits alcooliques purs ou à 50% d'éthanol ont la même durée d'efficacité (t112 CMS = 250 min). De manière globale, Matricaria maritima est l'espèce offrant le plus large choix d'extraits photoprotecteurs actifs puisque la durée d'efficacité est forte pour des extraits aqueux à alcooliques purs (Tableau 1). Néanmoins, il est préférable d'utiliser ses extraits alcooliques purs ou à 50% d'éthanol qui ont une durée d'efficacité potentielle 1.5 à 2 fois plus longue que les extraits aqueux ou les extraits alcooliques à 20% d'éthanol (t112 CMS = 400-540 min contre 250 min). L'analyse des valeurs d'EC120 obtenues pour les extraits alcoolique pur ou à 50% d'éthanol de plantes halophiles montrent que les concentrations minimales en extrait nécessaire pour limiter la dégradation de la Chlorophylline de Magnésium et Sodium (CMS) à 50% (t112 CMS = 120 min = durée de l'irradiation) sont comprises entre 0.05 et 0.3 g L-1 selon les espèces (Tableau 1). Selon Hupel et al. (2011, op.cit.), le t112 CMS de filtres UV-B autorisés dans des formulations cosmétiques à 1 g L-1 varie de 137 à 971 min et l' ECi20 de 0.01 à 0.4 g L-1. Les valeurs obtenues pour les extraits de plantes halophiles sont comprises dans ces intervalles et dénotent donc un potentiel fort de ces plantes en tant que compléments à des filtres UV chimiques et/ou minéraux. L'analyse des caractéristiques spectrales des extraits alcooliques purs ou à 50% d'éthanol montrent des profils d'absorption différents selon les espèces. Pour les extraits alcooliques à 50% d'éthanol, un profil d'absorption similaire et majoritairement dans l'UV-B (290-320 nm) est observé pour les extraits de Matricaria maritima, d'Aster tripolium et de Crithmum maritimum au regard des maxima d'absorption (296-298 nm et 320-325 nm) et de la longueur d'onde critique inférieure à 370 nm (353-360 nm) (Tableau 2). Les extraits alcooliques à 50% d'éthanol de Beta maritima et Limonium vulgare montrent une capacité d'absorption à la fois dans l'UV-B et l'UV-A au regard de leur maximum d'absorption dans l'UV (330-336 nm) et de la longueur d'onde critique égale à 370 nm (Tableau 2). Les extraits alcooliques purs de toutes les espèces halophiles ont potentiellement une capacité de photoprotection dans l'UV-B et l'UV-A avec des longueurs d'ondes critiques égales ou supérieures à 370 nm (Tableau 2). La photostabilité des extraits est globalement plus faible pour les extraits alcooliques purs que pour les extraits alcooliques à 50% d'éthanol (Tableau 2). Les extraits alcooliques de Matricaria maritima, Aster tripolium et Crithmum maritimum ont une activité photoprotectrice forte (Tableau 1) mais une photostabilité qui pourrait être meilleure (0.51 à 0.78) alors que les extraits alcooliques de Limonium vulgare ont une activité plus faible mais la photostabilité la plus forte (0.84 à 1.00). L'extrait alcoolique de Beta maritima a une activité photoprotectrice forte et une photostabilité forte (0.84-0.93). 2) Activité photoprotectrice d'extraits purifiés de Matricaria maritima Les résultats d'activité photoprotectrice d'extraits purifiés par chromatographie d'adsorption sur colonne C18 chez Matricaria maritima sont présentés dans le Tableau 3. Le profil d'absorption dans l'UV des différents extraits purifiés est présenté en Figure 3, leurs propriétés spectrales et photostabilité dans le Tableau 4. Les fractions 60/40, 40/60 et 20/80 présentent une activité photoprotectrice est supérieure à celle de l'extrait brut L'extrait purifié correspondant à la fraction 40/60 est aussi actif à 0.1 g L-1 que l'extrait brut à 1 g L-1 (t112 CMS = 399 ± 29) Solvant d'élution (Eau/Alcool) utilisé sur colonne C18 Extrait 100/0 80/20 60/40 40/60 20/80 0/100 brut 103 ± 5 5± 1 107 ± 7 165± 17 396 ± 31 240 ± 9 16 ±2 Tableau 3 : Exemple de temps de demi-vie (min) de la Chlorophylline de Magnésium et Sodium (t112 CMS) d'extraits purifiés par chromatographie d'absorption sur colonne C18 chez Matricaria maritima. Les différents extraits purifiés ont été obtenus après adsorption d'un extrait alcoolique à 50% d'éthanol sur colonne C18 et élutions successives avec un gradient eau/alcool (100/0 à 0/100). Les temps de demi-vie sont donnés pour une concentration de 0.1 g L.30 Extrait actifs Àmax Àc UVBi20 (nm) (nm) UVB0 80/20 291/319 347 0.77 60/40 291/319 350 0.76 40/60 341 >370 0.73 20/80 329 >370 0.67 Tableau 4 : Propriétés spectrales (Maximum d'absorption (Àmax), Longueur d'onde critique (Àc)) avant irradiation et photostabilité (UVB120/UVB0) après 120 min d'irradiation des extraits purifiés et actifs de Matricaria maritima obtenus par chromatographie d'adsorption sur colonne C18. Les résultats montrent que l'étape de purification d'un extrait brut alcoolique à 50% d'éthanol de Matricaria maritima par chromatographie d'adsorption permet d'obtenir des extraits purifiés actifs à faible concentration (0.1 g L-1), notamment pour les extraits obtenus avec un solvant d'élution composé de 40 à 80% d'alcool (Tableau 3). Chez Matricaria maritima, l'extrait purifié obtenu avec un solvant d'élution composé de 60% d'alcool a une activité photoprotectrice équivalente à 0.1 g L-1 à celle de l'extrait brut alcoolique à 50% d'éthanol à 1 g L-1 ( t112 CMS = 396-399 min). Il est donc possible d'obtenir des extraits purifiés photoprotecteurs utilisables à des concentrations 10 fois plus faibles que l'extrait brut pour la même activité. L'analyse des caractéristiques spectrales des différents extraits purifiés montre une faible absorption dans l'UV des extraits obtenus avec 100% d'eau et 100% d'alcool, compatibles avec leur faible activité. Cela est logique puisque l'extrait à 100% d'eau contient essentiellement des sucres et l'extrait à 100% d'alcool essentiellement des pigments photosynthétiques, molécules n'ayant pas d'activité photoprotectrice connue. Les extraits les plus actifs (20% à 80% d'alcool) absorbent fortement dans l'UV, majoritairement dans l'UV-B pour les extraits à 20 et 40% d'alcool (À, = 347-350 nm) et à la fois dans l'UV-B et l'UV-A pour les extraits à 40 et 60% d'alcool (À, > 370 nm) (Tableau 4 et Figure 3). Les extraits à 20 et 40 % d'alcool ont le même profil d'absorption (Àmax = 291/319 nm) et la même photostabilité (0.76-0.77). Les extraits les plus actifs à 60% et 80% d'alcool ont respectivement un maximum d'absorption à 341 et 329 nm et des photostabilité proches (0.67-0.73) (Tableau 4 et Figure 3). 3) Activité photoprotectrice de mélanges d'extraits alcooliques ou hydroalcooliques 5 Influence du mélange d'extraits sur l'efficacité photoprotectrice Pour le mélange d'extrait de plantes halophiles, il a été choisi de garder les extraits alcooliques pur (méthanol et éthanol) et à 50% d'éthanol qui sont les plus actifs en termes de durée d'efficacité (t112 CMS) et/ou de concentration efficace (ECi20). Les résultats de l'activité photoprotectrice et des caractéristiques 10 spectrales des mélanges d'extraits alcooliques purs (éthanol ou méthanol) ou à 50% d'éthanol sont présentés en Tableau 5 et Figure 4. Le mélange d'extraits éthanoliques de Matricaria maritima et Crithmum maritimum est le plus performant en termes de durée potentielle d'efficacité (t112 CMS jusqu'à 698 min) (Figure 4) et il y a un effet synergique par rapport à 15 l'utilisation des extraits des deux plantes seuls (Tableau 1). De façon surprenante, et contrairement à ce qui aurait pu être attendu à la vue des résultats de Hupel et al, le mélanges d'extraits méthanoliques de Matricaria maritima et Crithmum maritimum a un effet inhibiteur sur l'activité photoprotectrice par rapport à l'utilisation d'un des deux extraits seuls (Tableau 1 et 20 Figure 4). Un tel effet inhibiteur n'est pas observé pour les mélanges d'extraits hydroéthanoliques ou éthanoliques, où on observe un effet synergique du mélange sur l'activité photoprotectrice par rapports aux extraits seuls (Figure 4). Ces résultats montrent bien l'importance du solvant d'extraction pour l'obtention d'un effet photoprotecteur pour des mélanges d'extraits de plantes 25 halophiles. Ainsi, le méthanol en tant que solvant d'extraction, semble avoir un effet inhibiteur sur l'activité photoprotectrice lors du mélanges d'extraits, ce qui n'était pas le cas pour les extraits seuls (Tableau 1). 30 Cet effet inhibiteur semble également confirmé pour les mélanges d'extraits méthanoliques de Matricaria maritima, Aster tripolium ou Crithmum maritimum avec Limonium vulgare comparativement aux mélanges à base d'extraits éthanoliques (Figure 4). Les mélanges d'un extrait éthanolique (pur ou à 50%) de Matricaria 35 maritima ou Crithmum maritimum ou Aster tripolium avec un même extrait de Limonium vulgare ou Beta maritima donnent des activités photoprotectrices supérieures aux deux extraits seuls (Crithmum maritimum + Limonium vulgare) ou au moins équivalentes à l'extrait le plus actif seul (Figure 4). Les mélanges d'extrait de Matricaria maritima ou Crithmum maritimum avec un même extrait d'Aster tripolium donnent des activités photoprotectrices au moins équivalentes à un des deux extraits seul. L'ensemble des mélanges cités ont une forte activité photoprotectrice bien qu'il soit préférable d'utiliser les mélanges d'extraits éthanoliques purs plutôt que les mélanges d' extraits éthanoliques à 50% d'éthanol qui donnent une durée d'efficacité maximum (Figure 4). En termes d'efficacité photoprotectrice, le mélange d'extraits éthanoliques de Crithmum maritimum et de Matricaria maritima sera préféré. Influence du mélange d'extraits sur le spectre d'action et la photostabilité L'analyse de l'ensemble des données obtenues sur des extraits bruts seuls de plantes halophiles à également suggéré que l'association d'extrait éthanolique de Matricaria maritima ou Crithmum maritimum ou Aster tripolium (forte activité photoprotectrice, absorption majoritaire dans l'UV-B, faible photostabilité) avec un extrait éthanolique de Limonium vulgare ou Beta maritima (activité photoprotectrice globalement plus faible mais absorption plus importante dans l'UV-A et meilleure photostabilité) pourrait donner une composition photoprotectrice efficace notamment en termes d'amélioration de la photostabilité et du spectre d'action (activité photoprotectrice dans les UV-A). Les résultats montrent que le mélanges d'extraits éthanoliques purs ou à 50% d'éthanol de Matricaria maritima, Aster tripolium ou Crithmum maritimum avec Beta maritima ou Limonium vulgare donnent des photostabilités meilleures par rapport aux extraits seuls (Tableaux 2 et 5) (ce qui est également le cas lors de l'association deux à deux d'extraits de Matricaria maritima, Aster tripolium et Crithmum maritimum). Les photostabilités les plus fortes sont obtenues pour les mélanges d'extraits éthanoliques à 50% (photostabilité entre 0.9 et 1), ainsi que pour le mélange d'extraits éthanoliques purs de Matricaria maritima ou Aster tripolium avec Beta maritima (photostabilité égale à 0.96 et 0.91, respectivement) (Tableau 5). Les autres mélanges d'extraits éthanoliques ont cependant une très bonne photostabilité (0.77 à 0.85).35 Ethanol/Eau (50/50) Ethanol Mélange Àmax Àc UVBi20 Àmax Àc UVBi20 (0.5 g L-1+ 0.5 g L-1) UVB0 UVB0 Matricaria maritima + 297 355 0. 300 375 Aster tripolium 325 0.99 329 0.77 Matricaria maritima 299 353 1. 286 378 0.83 + Crithmum maritimum 324 1.00 328 Matricaria maritima 298 356 0.91 310 380 0.96 + Beta maritima 325 296 330 Matricaria maritima 291 354 1. 297 385 0.85 + Limonium vulgare 322 1.00 328 Crithmum maritimum + 296 358 0.92 0. 293 379 0.85 Aster tripolium 324 329 Crithmum maritimum 289 363 0.97 0. 287 383 0.84 + Beta maritima 323 330 Crithmum maritimum 280 360 0.96 0. 280 385 0.83 + Limonium vulgare 322 328 Aster tripolium + 283 368 0. 98 282 385 0.91 Beta maritima 326 334 Aster tripolium + 282 368 0. 98 292 384 0.84 Limonium vulgare 326 329 Tableau 5 : Propriétés spectrales (Maximum d'absorption (Àmax), Longueur d'onde critique (Àc)) avant irradiation et photostabilité (UVB120/UVB0) après 120 min d'irradiation d'extraits hydroalcooliques et alcooliques de quelques halophytes. Les cases foncées représentent les extraits pour lesquels on obtient une augmentation de la longueur d'onde critique et de la photostabilité Concernant l'élargissement du spectre d'action, l'ensemble des mélanges d'extraits éthanoliques purs donnent une longueur d'onde critique supérieures à 10 370 nm, suggérant une photoprotection potentielles à la fois dans les UV-A et les UV-B (Tableau 5), et améliorée par rapport aux extraits seuls (Tableau 2). En termes de spectre d'action, les mélange d'extraits éthanoliques purs de Matricaria maritima, Aster tripolium ou Crithmum maritimum avec Limonium vulgare et de Matricaria maritima ou Aster tripolium avec Beta maritima donnent 15 les longueurs d'onde critique les plus fortes. Le mélange d'extrait éthanoliques purs deux à deux de Matricaria maritima, Aster tripolium et Crithmum maritimum n'est pas préféré pour son spectre d'action (longueurs d'onde critique supérieures à 370 nm mais plus faibles par rapport aux autres mélanges). Le mélange d'extraits éthanoliques purs de Matricaria maritima et Beta maritima donnent un spectre d'absorption avec trois maxima d'absorption dans le domaine de l'UV, d'où une spécificité d'action plus large. Pour les mélanges d'extraits éthanoliques à 50% d'éthanol, les longueurs 5 d'ondes critiques obtenues sont égales ou légèrement supérieures aux extraits seuls, mais inférieures à 370 nm. Cela indique que les extraits éthanoliques à 50% d'éthanol seront préférentiellement utilisés pour la protection contre les UV-B. En résumé, l'ensemble des mélanges d'extraits éthanoliques (pur ou à 50% 10 d'alcool) de plantes halophiles testés peut être utilisé pour leur activité photoprotectrice contre les UV-B en termes d'efficacité et de bonne photostabilité. Concernant une protection potentielle à la fois contre les UV-B et les UV-A, les mélanges d'extraits éthanoliques purs seront préférés pour leur spectre d'action. 15 REVENDICATIONS1. Composition photoprotectrice, caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles. 2. Composition photoprotectrice selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange d'extraits éthanoliques d'au moins deux plantes halophiles. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que au moins un extrait a été obtenu par extraction par chromatographie d'adsorption après élution avec un solvant éthanolique composé de 20 à 80% d'éthanol. 4. Composition selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que ledit solvant éthanolique contient au minimum 50 % d'éthanol 5. .Composition selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'au moins l'une des plantes halophiles est choisie dans le groupe constitué des plantes de genre Matricaria, Crithmum, et Aster. 6. Composition selon la revendicaton 5, caractérisée en ce qu'au moins l'une des plantes halophiles est choisie dans le groupe constitué de Matricaria maritima, Crithmum martitimum, et Aster tripolium. 7. Composition selon la revendication 5 ou 6, caractérisée en ce que la seconde plante halophile est choisie parmi Beta maritima, Limonium vulgare, Limonium latifolium, Aster tripolium et (Crithmum maritimum ou Matricaria maritima (en fonction de la première plante)). 8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle contient en outre un filtre solaire minéral. 9. Composition selon l'une des revendications 1 à 8, pour son utilisation dans la protection d'un épiderme contre le rayonnement UV.35 10. Composition selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une crème, d'une lotion, d'un onguent ou d'une pommade. 11. Méthode de préparation d'une composition photoprotectrice comprenant l'étape de mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles avec des excipients pharmaceutiquement (cosmétiquement) acceptables. 12. Méthode selon la revendication 11, caractérisée en ce que lesdits extraits sont des extraits éthanoliques. 13. Méthode selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'isolation desdits extraits éthanoliques à partir d'échantillons de plantes. 14. Méthode selon la revendication 13, caractérisée en ce que ladite étape d'isolation est réalisée par chromatographie d'adsorption d'extraits de broyats de plantes sur colonne C18, par élution avec un solvant hydroéthanol igue. 20