Brevet FR3005264A1 — publié le 20141107

Solution marine enrichie en zinc et en potassium La présente invention concerne une solution à base d'eau de mer, destinée particulièrement à des applications sur les yeux, la peau ou les 5 muqueuses. Les solutions salines sont couramment utilisées en ophtalmologie en tant qu'excipient pour des collyres, des solutions de rinçage des lentilles de contact ou des conditionneurs pour des implants intraoculaires. Les solutions salines 10 sont également couramment utilisées en ORL pour le lavage des fosses nasales. D'autres compositions tentent de se rapprocher plus précisément de l'eau de mer. Ainsi, la demande FR 2 803 205 décrit une solution aqueuse à base d'eau de mer dont la teneur de certains ingrédients est modifiée par 15 électrodialyse sélective. Une diminution du pH, une osmolalité inférieure, et des concentrations respectivement supérieures en potassium et inférieures en sodium, magnésium, calcium et chlore par rapport à celles de l'eau de mer, permettent une utilisation pour l'hygiène de 20 La demande FR 2 843 029 décrit une solution de rinçage des lentilles de contact à base d'eau de mer. Certaines caractéristiques de ses constituants peuvent être modifiées ; ainsi son pH et son osmolalité peuvent être inférieurs à ceux de l'eau de mer naturelle. A ces modifications peuvent s'ajouter une concentration supérieure en potassium et une concentration inférieure en 25 sodium, magnésium, calcium et chlore. De telles solutions d'eau de mer traitées de l'état de la technique, ne permettent pas de répondre sélectivement à certains besoins, en particulier pour ce qui concerne les thérapies de l'ceil et des muqueuses et, plus 30 particulièrement, leur efficacité reste souvent très limitée pour le traitement des pathologies impliquant une interaction avec les récepteurs P2X tels que P2X7. Pour pallier tout ou partie des inconvénients de l'état de la technique, la présente invention a pour objet une composition aqueuse obtenue à partir d'eau purifiée, de pH de 5.5 à 7.5, d'osmolalité de 270 à 330 mOsm/kg, de conductivité de 17 à 22.5 mS/cm à 25°C et préparée à partir de 1 à 20% d'eau de mer filtrée, et telle que ladite composition incorpore un sel de potassium dans une teneur de 90 à 150 mmol/L. Les concentrations sont données en référence à la composition finale dans laquelle le sel est ajouté, c'est également le cas pour l'ensemble des concentrations décrites dans la suite de la présente demande (sauf si une autre référence est expressément mentionnée). L'eau de mer est considérée comme le réservoir de tous les oligo-éléments dans la mesure où ils sont quasiment tous représentés, dans des concentrations plus ou moins importantes. De préférence, la composition selon l'invention incorpore une teneur de sel de potassium de 95 à 145 mmol/L, et avantageusement la teneur en sel de potassium est de 98 à 141 mmol/L. L'osmolalité est mesurée selon la méthode décrite dans la Pharmacopée Européenne 6.0 (sixième édition) - point 2.2.35. La conductivité est mesurée selon la méthode décrite dans la Pharmacopée Européenne 6.0 - point 2.2.38. Le tableau 1 montre les éléments constitutifs de l'eau de mer ainsi que leur proportion théorique, exprimés en parts par million : Tableau 1 : Element ppm Chlorine, Cl 19 500 Sodium, Na 10 770 Magnesium, Mg 1 290 Sulphur, S 905 Calcium, Ca 412 Potassium, K 380 Bromine, Br 67 Carbon, C 28 Nitrogen, N 11.5 Strontium, Sr 8 Oxygen, 0 6 Zirconium, Zr 0.00003 Bismuth, Bi 0.00002 Niobium, Nb 0.00001 Thallium, Tl 0.00001 Thorium, Th 0.00001 Hafnium, Hf 7 x 10-6 Helium, He 6.8 x 10-6 Beryllium, Be 5.6 x 10-6 Germanium, 5 x 10-6 Ge Gold, Au 4 x 10-6 Rhenium, Re 4 x 10-6 Cobalt, Co 3 x 10-6 Lanthanum, La 3 x 10-6 Neodymium, 3 x 10-6 Nd Lead, Pb 2 x 10-6 Silver, Ag 2 x 10-6 Tantalum, Ta 2 x 10-6 Gallium, Ga 2 x 10-6 Yttrium, Y 1.3 x 10-6 Mercury, Hg 1 x 10-6 Cerium, Ce 1 x 10-6 Dysprosium, 9 x 10-7 Dy Erbium, Er 8 x 10-7 Ytterbium, Yb 8 x 10-7 Gadolinium, Gd 7 x 10-7 Praseodymium, 6 x 10-7 Pr Scandium, Sc 6 x 10-7 Tin, Sn 6 x 10-7 Holmium, Ho 2 x 10-7 Lutetium, Lu 2 x 10-7 Thulium, Tm 2 x 10-7 Indium, In 1 x 10-7 Trebium, Tb 1 x 10-7 Palladium, Pd 5 x 10-8 Samarium, Sm 5 x 10-8 Tellurium, Te 1 x 10-8 Europium, Eu 1 x 10-8 Radium, Ra 7 x 10-11 Protactinium, 5 x 10-11 Pa Radon, Rn 6 x 10-16 Fluorine, F 1.3 lodine, I 0.06 Barium, Ba 0.02 Boron, B 4.4 Silicon, Si 2 Argon, Ar 0.43 Lithium, Li 0.18 Rubidium, Rb 0.12 Phosphorus, P 0.06 Molybdenium, Mo 0.01 Arsenic, As 0.0037 Uranium, U Vanadium, V 0.0032 0.0025 Titanium, Ti 0.001 Zinc, Zn Nickel, Ni 0.0005 0.00048 Aluminium, Al 0.0004 Cesium, Cs 0.0004 Chromium, Cr 0.0003 Antimony, Sb 0.00024 Krypton, Kr 0.0002 Selenium, Se 0.0002 Neon, Ne 0.00012 Manganese, Mn 0.0001 Cadmium, Cd 0.0001 Copper, Cu 0.0001 Tungsten, W 0.0001 Iron, Fe 0.000055 Xenon, Xe 0.00005 On voit, d'après ce tableau 1, que de nombreux éléments chimiques sont représentés, en quantité plus ou moins importante, dans l'eau de mer. Ces concentrations sont exprimées en valeurs moyennes, qui peuvent varier selon la localisation géographique de la mer, et même du lieu de pompage de l'eau de mer. L'eau de mer destinée à la composition selon l'invention est pompée directement en mer de manière à respecter son état initial, et par conséquent ses propriétés intrinsèques. La concentration des éléments constitutifs de l'eau peut varier en fonction de la localisation géographique du lieu de pompage, et nécessiter éventuellement une modification de la concentration en certains éléments. Le lieu de pompage sera donc choisi avec précision de manière à ce que l'eau puisse être utilisée directement, sans modification des concentrations de ses éléments constitutifs. Ainsi, par exemple, l'eau de mer sera choisie de manière à ne pas avoir une concentration en sodium trop importante, dans la mesure où cet élément est impliqué dans les réactions inflammatoires quand il est présent en quantité trop importante. L'eau de mer utilisée dans le cadre de l'invention a un pH de 7.5 à 8.5, comprenant une concentration en sels ou ions proche de la composition théorique de l'eau de mer (tableau 1). Les eaux de mer utilisées sont sélectionnées pour leurs emplacements privilégiés : - absence d'industries à proximité, avec un environnement sain, site de prélèvement non enclavé : renouvellement constant d'eau, courants sur la zone favorisant le renouvellement de l'eau, qualité reconnue satisfaisante par des organismes spécialisés, tels que l'IFREMER et la DDASS. Les inventeurs ont découvert, de manière tout à fait inattendue, qu'une solution d'eau de mer diluée dans la plage de valeur conformément à la composition selon la présente invention, en combinaison avec un ajout de sel de zinc dans les teneurs préconisées, permettait après application sur de par une synergie d'action, d'obtenir une réponse en créant un signal électrique spécifique apte à agir sur les canaux ioniques des cellules de l'ceil. Il a été mis en évidence que la composition selon l'invention, notamment ses ions, permet un transport passif et actif vers les cellules, dû à ses canaux ioniques. La composition selon l'invention a montré, de manière surprenante qu'elle présente une grande tolérance pour les tissus les plus fragiles (réduction de stress oxydatif ou inflammatoire...), telle que la surface oculaire et les muqueuses et une activité anti-apoptotique (par action sur le récepteur P2X7). Elle peut être utilisée pour des applications directes (rinçage) ou comme excipient (cosmétiques, dispositifs médicaux...). L'étude de la cytotoxicité de la solution selon l'invention a permis d'évaluer sa haute tolérance pour son utilisation en ophtalmologie. Différents tests d'évaluation de la cytotoxicité ont été réalisés pour cerner au mieux la tolérance de la composition selon l'invention par les différents types de cellules de la surface oculaire (cornéennes et conjonctivales). L'eau de mer à la base de la composition selon l'invention, constitue un réservoir de différents éléments chimiques, présents en concentration plus ou moins importante. Les propriétés physico-chimiques de l'eau de mer sont dues à un équilibre entre anions et cations. Ces éléments se comportent comme un ensemble de biomolécules interagissant les unes avec les autres. Dans le cadre de l'invention, la synergie d'action se fait non seulement entre ces différents ions, mais également avec les sels de zinc présents dans la composition. L'eau de mer est diluée et enrichie en zinc puis est ajustée afin d'obtenir une solution dans la gamme de pH et d'osmolalité souhaitée, par ajout d'un sel. Le sel utilisé préférentiellement est le chlorure de potassium. L'interaction des ions zinc avec les différents éléments de l'eau de mer renforce son action sur les stress cellulaires. De préférence, le pH de la composition est de 6 à 7.2. Une étude a été réalisée par la demanderesse sur les récepteurs de mort cellulaire P2X. Ces récepteurs sont des récepteurs ionotropiques conduisant un influx cationique après leur activation. Plus précisément, parmi les récepteur P2X cités ci-dessus, le récepteur P2X7 induit des réponses inflammatoires, une surproduction des espèces réactives de l'oxygène, une apoptose, voire une cytolyse. Les différents essais comparatifs montrent, comme cela est décrit dans la partie expérimentale, que l'activation des récepteurs P2X7 est fortement inhibée en présence d'une composition à base d'eau de mer selon l'invention. L'inhibition de l'activation des récepteurs P2X7 peut être assimilée à un ordre de « non-mort » des cellules, atténuant les phénomènes inflammatoires et l'apoptose. Cela démontre également une bonne tolérance cellulaire. La composition d'eau de mer est avantageusement enrichie en zinc, et plus particulièrement en un sel du type Zn(X)2 à une concentration de 125 à 500 pmol/L, X- pouvant être tout type de contre-anion complexé avec le cation Zn2+. 10 Comme source de Zinc, on préfère incorporer dans la composition selon l'invention du chlorure de zinc (ZnCl2), favorisant les interactions avec les autres éléments constitutifs de l'eau de mer. Dans ce cadre, la présente invention concerne avantageusement une composition telle que décrite précédemment, 15 pour lequel le sel de zinc est un chlorure de zinc (ZnCl2). De préférence, le Zn(X)2 est incorporé dans une teneur de 200 à 300 pmol/L. 20 La composition selon l'invention comporte un sel de potassium qui est de préférence un chlorure de potassium (KCI). L'enrichissement de l'eau de mer avec d'autres ions, tels que Mg2+ ou Ca2+ ne donne pas de résultats aussi probants que ceux obtenus avec le Zn2+. 25 De préférence, l'eau de mer est présente dans la composition dans une teneur de 3 à 17 %. La composition peut être utilisée comme excipient ou comme produit de 30 contact selon sa destination. La composition selon l'invention est avantageusement destinée à une utilisation comme médicament dans le traitement des maladies oculaires par inactivation des récepteurs de mort cellulaire du type P2X7. La composition selon l'invention peut également être utilisée en tant que collyre, larmes artificielles, solution de rinçage pour lentilles, solution de lavage oculaire et/ou comme produit de récipient pour implant oculaire. En raison de sa polarité, elle possède de bonnes propriétés lavantes ainsi que de bonnes propriétés de solvant. De ce fait, elle permet le rinçage de l'oeil en cas de projection de produits nocifs, sans provoquer d'irritation et favorisant la régénération cellulaire. La composition selon l'invention a été décrite précisément pour l'ophtalmologie, mais pourrait s'appliquer néanmoins à tout autre domaine faisant intervenir la physiologie cellulaire, dans d'autres organes tels que les organes de la sphère ORL - notamment les muqueuses nasales - en vu de prévenir les affections telles que les rhinites, les congestions nasales, les sécheresses nasales, les sinusites ou les bronchites. La composition selon l'invention peut également s'appliquer à la peau et aux muqueuses vaginales, notamment dans des préparations pour l'hygiène intime. La composition selon l'invention est destinée avantageusement pour une utilisation comme médicament dans le traitement des muqueuses nasales, buccales, vaginales et/ou de la peau. Aussi, pour nettoyer des tissus agressés, des muqueuses ou la peau, la composition selon l'invention peut stimuler la cicatrisation, grâce à ses propriétés. La composition selon l'invention est destinée avantageusement pour une utilisation comme médicament dans le traitement de la cicatrisation des muqueuses et/ou de la peau. La composition selon l'invention peut également être utilisée en tant que spray, goutte ou excipient de solubilisation de molécules présentant un intérêt thérapeutique telles que l'acide hyaluronique, les polyphénols ou les acides gras... La présente invention concerne aussi un procédé de préparation d'une composition telle que décrite précédemment dans le cadre de l'invention, comprenant les étapes : a) pomper l'eau de mer ; b) prétraiter éventuellement l'eau de mer à l'aide d'un premier filtre naturel ou artificiel ; c) filtrer l'eau de mer éventuellement prétraitée au travers d'un deuxième filtre dont le diamètre moyen des pores est inférieur ou égal 5 pm ; d) effectuer une autre filtration au travers d'un troisième filtre dont le diamètre moyen des pores est inférieur à ceux du deuxième filtre et est inférieur ou égal 0.45 pm ; e) diluer la solution filtrée avec de l'eau purifiée. A l'étape a), l'eau de mer prélevée par pompage est filtrée éventuellement (étape b)) à l'aide, soit d'un filtre naturel comme par exemple du sable, soit d'un filtre artificiel comme par exemple une grille adaptée pour retirer les particules de grosse taille. L'eau est ensuite avantageusement entreposée dans un bassin de prétraitement. Cette eau de mer est ensuite redirigée vers des canalisations à l'aide d'une pompe en vue de sa filtration. L'eau de mer prétraitée est filtrée aux étapes c) et d) au travers de deux filtres dont les diamètres moyens sont respectivement de 5 pm à 1 pm (pour c)), et inférieur à 0,45 pM (pour d)). Pour cette étape de filtration, l'eau est de préférence injectée dans un ensemble de filtration intégrant des canalisations qui comportent avantageusement des filtres sous forme de cartouches cylindriques. Un exemple d'ensemble de filtration est décrit à la suite dans la partie expérimentale. La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la partie expérimentale qui va suivre, dont les exemples et les figures sont uniquement donnés à titre illustratif et ne peuvent nullement être considérés comme limitatif. Pour illustrer les résultats de la partie expérimentale, le schéma 1 représente une vue schématique en coupe transversale d'un ensemble de filtration qui permet de filtrer l'eau de mer avant sa dilution pour obtenir la composition selon l'invention. PARTIE EXPERIMENTALE 1) Préparation d'une composition selon l'invention comprenant 5 % d'eau 5 de mer (SCHEM. 1) : Litres d'une eau de mer prélevée dans le sud du Finistère par pompage sont filtrées à l'aide d'une trémie. L'eau de mer ainsi prélevée est entreposée dans un bassin de prétraitement. On procède ensuite au pompage de cette eau de mer à l'aide d'une pompe. L'eau de mer prétraitée est injectée dans les canalisations d'un ensemble de filtration 1 représenté sur le schéma 1. L'ensemble de filtration 1 comprend une arrivée 2 de l'eau de mer. Cette arrivée d'eau 2 est connectée à un débitmètre 3 qui est branché sur la partie basse du carter 4 d'un préfiltre 5 (1 pm). La sortie du préfiltre 5 (toujours en partie basse du carter 4) est branchée sur la partie basse du carter 6 d'un filtre 7 (0.22 pm) dont la sortie est reliée à une canalisation qui sert à collecter l'eau issue de la filtration pour la stocker dans un container 8. On complète ensuite la solution filtrée avec de l'eau distillée et on ajoute du chlorure de zinc et du chlorure de potassium de sorte à obtenir une composition (1) comportant 250 pmol/L de ZnCl2 et 140.9 mmol/L de KCI. 2) Etude de la viabilité cellulaire : Des cellules WKD (cellules épithéliales conjonctivales humaines) sont mises à incuber dans différents milieux de culture et la viabilité cellulaire est évaluée par le test au rouge neutre. Le rouge neutre est incubé pendant 3 heures à 37°C avec les cellules puis les cellules sont rincées avec du tampon PBS et une solution d'acide acétique/éthanol est utilisée pour libérer le rouge neutre des cellules et homogénéiser la coloration. L'appareil utilisé pour quantifier la fluorescence est un cytomètre adapté aux microplaques (Safire, TECAN). Le test au rouge neutre est recommandé pour l'évaluation de la cytotoxicité des dispositifs médicaux dans la norme ISO 10993-5 version de juillet 2010. Les résultats de ce test sont exprimés en pourcentage par rapport aux cellules contrôles. Les résultats sont reportés dans le tableau 2. Tableau 2. Compositions utilisées pour l'incubation Solution PBS Eau de mer 5% Eau de mer 5% + KCI 140.9 mM Eau de Eau de Eau de Eau de Eau de Eau de des mer 5% + ZnCl2 250 pmol/L mer 5% + mer 5% + mer 5% + mer 5% + mer 5% + cellules KCI 140.9 mM + ZnCl2 250 pmol/L KCI KCI KCI KCI 100 mM + ZnCl2 250 pmol/L 160 mM + ZnCl2 250 pmol/L 250 mM + ZnCl2 250 pmol/L 500 mM + ZnCl2 250 pmol/L Pourcentage de cellules vivantes après 1h 100 54 102 42 97 102 63 43 25 d'incubation On constate que la composition comportant 5% d'eau de mer et du KCI à 140.9 mmol/L montre une tolérance cellulaire (102%) améliorée par rapport à la composition équivalente ne contenant que l'eau de mer, et, qu'en outre cette tolérance n'est pas dégradée par la présence de ZnCl2 à raison de 250 pmol/L. 3) Mesure de l'état d'oxydo-réduction des cellules : La composition préparée à la partie 1) (désignée ci-après composition (1)) a été 15 testée en vue d'évaluer son pouvoir cytotoxique. Un agent cytotoxique a le pouvoir de baisser le potentiel redox d'une cellule. Cela provoque la diminution de l'activité des enzymes d'oxydo-réduction et donc la mort cellulaire. Dans le test effectué, on observe une sonde fluorescente, l'alamar blue, incubée 20 pendant 6 heures à 37°C avec les cellules. L'appareil utilisé pour quantifier la fluorescence est un cytomètre adapté aux microplaques (Safire, TECAN). Ce test fait partie des tests proposés pour l'évaluation du potentiel cytotoxique oculaire des solutions multifonction pour l'entretien des lentilles de contact dans la norme NF S11-820 dans sa version de février 2012. L'intensité de la fluorescence est 25 proportionnelle à la capacité d'oxydo-réduction, et par extension aux nombres de 10 cellules vivantes. Les tests sont réalisés en comparaison avec une solution de NaCI à 0.9 % et une solution tampon phosphate salin (PBS, couramment utilisé en culture cellulaire), et les résultats sont reportés sur les figures 1 et 2. Les résultats montrent en ordonnée le pourcentage de fluorescence quantifié par rapport au PBS (ou «% Fluo / PBS»). Ce ratio est calculé en divisant l'intensité de fluorescence des cellules traitées par l'intensité de fluorescence des cellules non traitées (incubées avec le tampon PBS), puis on multiplie par 100 pour obtenir un pourcentage. Pour la figure 1, les résultats concernent une incubation d'une heure sur des cellules WKD (cellules épithéliales conjonctivales humaines), et pour la figure 2, ils concernent une incubation d'une heure sur des cellules HCE (cellules épithéliales cornéennes humaines). Les résultats montrent que la composition n'induit pas de diminution du potentiel redox par rapport au témoin sur cellules de la conjonctive. On observe une légère diminution de fluorescence pour les cellules de la cornée mais celle-ci n'est pas statistiquement significative. En conclusion, l'incubation dans la composition (1) ne crée pas de perte du potentiel redox, il n'y a donc pas de diminution du nombre de cellules vivantes. La composition 1 est donc bien tolérée. 4) Modulation de l'activation des P2X7 : Des cellules WKD (cellules épithéliales conjonctivales humaines) sont mises à incuber dans différentes solutions salines et l'activation des récepteurs P2X7 est quantifiée grâce au test YO-PRO-1. La sonde YO-PRO-1 entre dans les cellules suite à l'ouverture d'un pore membranaire, issue de l'activation du récepteur P2X7. Une augmentation de la fluorescence correspond à une activation du récepteur P2X7. L'activation du P2X7 est signe d'apoptose. L'appareil utilisé pour quantifier la fluorescence est un cytomètre adapté aux microplaques (Safire, TECAN). A la lecture de la figure 3 (en abscisse, on lit le temps en minutes, et les ordonnées sont à lire en unité RFU ou unité relative de fluorescence), on constate que la composition (2) comportant 5% d'eau de mer et du KCI à 140.9 mmol/L montre une inhibition de l'activation des P2X7, cette inhibition est visible par rapport à une composition (3) de référence de NaCI à 0.9%, et, qu'en outre, cette inhibition est encore améliorée par la présence de ZnCl2 à raison de 250 pmol/L pour la composition (1) (pour mémoire, la composition (1) comporte 5% d'eau de mer, du KCI à 140.9 mmol/L et du ZnCl2 à 250 pmol/L). 5) Inhibition de la production d'espèces réactives de l'oxygène : On mesure la production d'espèces réactives de l'oxygène (ERO), sur les cellules WKD grâce au test H2DCF-DA. Cette sonde entre dans les cellules et est hydrolysée par les enzymes intracellulaires. Une fois hydrolysée, la sonde est piégée dans les cellules et peut être oxydée par les ERO présentes. Cette forme oxydée est alors fluorescente. L'appareil utilisé pour quantifier la fluorescence est un cytomètre adapté aux microplaques (Safire, TECAN). Les tests sont réalisés en se référant à une solution tampon phosphate salin (PBS, couramment utilisé en culture cellulaire), et les résultats sont reportés à la figure 4. Les résultats montrent en ordonnée le pourcentage de fluorescence quantifié par rapport au PBS. Ce ratio est calculé en divisant l'intensité de fluorescence des cellules traitées par l'intensité de fluorescence des cellules non traitées (incubées avec le tampon PBS), puis on multiplie par 100 pour obtenir un pourcentage. On constate, à la lecture de la figure 4, que pour les solutions suivantes les commentaires suivants s'appliquent : > Solution d'eau de mer (ou « EDM ») 5% + KCI à 140.9 mM : il y a inhibition du stress oxydatif ; et > Solution d'eau de mer 5% + KCI de 140.9 mM + 250 pM ZnC12: l'inhibition du stress oxydatif est optimale. Pour les plus forts taux de ZnCl2, ou les taux plus faibles, l'inhibition est moins franche voire inexistante. Evaluation de l'intérêt de la composition (1) dans le rinçage de l'ceil après exposition à un agent toxique : Lors d'un travail in vitro, l'impact du rinçage par différentes solutions d'un oeil brûlé chimiquement, a été étudié. (Said et al. 2009) Une évaluation de la viabilité cellulaire par le test au rouge neutre 24 h après la brûlure au méthanol ou à la soude, suivie de l'application des solutions de rinçage a été réalisée. Le rouge neutre est incubé pendant 3 heures à 37°C avec les cellules puis les cellules sont rincées avec du tampon PBS et une solution d'acide acétique/éthanol est utilisée pour libérer le rouge neutre des cellules et homogénéiser la coloration. L'appareil utilisé pour quantifier la fluorescence est un cytomètre adapté aux microplaques (Safire, TECAN). Le test au rouge neutre est recommandé pour l'évaluation de la cytotoxicité des dispositifs médicaux dans la norme ISO 10993-5 dans sa version de juillet 2010. Les résultats de ce test évalué en pourcentage par rapport aux cellules contrôles, sont présentés à la figure 5 (p La composition (1) selon l'invention apporte une meilleure viabilité cellulaire. 8) Etude de la protection contre l'inflammation sur des macrophages On mesure le relargage de cytokines pro-inflammatoires (TNF-a) sur les macrophages par la technique ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Cette technique permet le dosage de protéines dans un échantillon ; dans notre cas, la technique ELISA nous permet de quantifier la cytokine TNF-a, libérée dans le surnageant cellulaire par les macrophages, suite à un stress inflammatoire. L'antigène spécifique du TNF-a est accroché à un support, une microplaque 96 puits. On y dépose le surnageant cellulaire et le TNF-a peut se lier à son antigène. Un anticorps primaire permet de reconnaître le TNF-a, puis un anticorps secondaire conjugué à une enzyme se lie à l'anticorps primaire. Une réaction enzymatique colorimétrique permet la révélation du complexe anticorps. L'appareil utilisé pour quantifier l'absorbance est un cytomètre adapté aux microplaques (Safire, TECAN). En parallèle, une gamme étalon est réalisée à partir d'une solution de TNF-a pour permettre de transposer l'absorbance en quantité de protéine (pg/mL). Les tests sont réalisés en se référant au milieu de culture, et les résultats sont reportés à la figure 6. Les résultats montrent en ordonnée la quantité de TNF-a dosée dans le surnageant des macrophages en pg/mL. Les macrophages ont été incubés avec la composition 1 diluée à 1:2 dans le milieu de culture puis stimulés avec du LPS (lipopolysaccharide) d'Escherichia Coli pendant 24 heures à 37°C. La figure 6 montre les résultats obtenus pour le contrôle (ou control.) - sans (ou « 0 LPS ») et avec le LPS d'Escherichia Coli. La figure 6 montre également les résultats obtenus pour la composition (1) sans et avec le LPS d'Escherichia Coli. D'après la figure 6, la composition (1) est favorable à la réduction des phénomènes inflammatoires. Le tableau 5 reprend les résultats de la figure 6 pour les exprimer sous forme de ratio : la quantité de TNF-a sécrétée dans le contrôle sans LPS est rapportée à 1, et les quantités de TNF-a sécrétées dans les autres conditions sont toutes rapportées à la quantité de TNF-a sécrétée dans le contrôle (en divisant la quantité de TNF-a par la quantité de TNF-a dans le contrôle). Tableau 5 : Seul LPS Contrôle 1 422,0 Composition 1 1,28 356,27 Lorsque les cellules sont stimulées avec du LPS pour induire une inflammation, la préincubation avec la composition 1 diluée à 1:2 réduit la production de TNFa (x422 -> x356). 20 REVENDICATIONS1. Composition aqueuse obtenue à partir d'eau purifiée, de pH de 5.5 à 7.5, d'osmolalité de 270 à 330 mOsm/kg, de conductivité de 17 à 22.5 mS/cm à 25°C et préparée à partir de 1 à 20% d'eau de mer filtrée, et telle que ladite composition incorpore un sel de potassium dans une teneur de 90 à 150 mmol/L. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le pH est de 6 à 7.2. 3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle incorpore en outre du Zn(X)2 à une concentration de 125 à 500 pmol/L. 4. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que les ions X- sont des ions chlorures. 5. Composition selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que la concentration en Zn(X)2 est de 200 à 300 pmol/L. 6. Composition selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le sel de potassium est du chlorure de potassium. 7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6, pour son utilisation comme médicament dans le traitement des maladies oculaires par inactivation des récepteurs de mort cellulaire du type P2X7. 8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, pour son utilisation comme au moins l'un des éléments sélectionné parmi un collyre, des larmes artificielles, une solution de rinçage pour lentilles, une solution de lavage oculaire et un produit de récipient pour implant oculaire. 9. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, pour son utilisation comme médicament dans le traitement d'au moins l'un des élémentssélectionné parmi les muqueuses nasales, les muqueuses buccales, les muqueuses vaginales et la peau. 10. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, pour son utilisation comme médicament dans le traitement de la cicatrisation d'au moins l'un des éléments sélectionné parmi des muqueuses et de la peau. 11. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, pour son utilisation comme excipient de solubilisation de molécules présentant un intérêt thérapeutique. 12. Procédé de préparation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 11 comprenant les étapes : a) pomper l'eau de mer ; b) prétraiter éventuellement l'eau de mer à l'aide d'un premier filtre naturel ou artificiel ; c) filtrer l'eau de mer éventuellement prétraitée au travers d'un deuxième filtre dont le diamètre moyen des pores est inférieur ou égal 5 pm ; d) effectuer une autre filtration au travers d'un troisième filtre dont le diamètre moyen des pores est inférieur à ceux du deuxième filtre et est inférieur ou égal 0.45 pm ; et e) diluer la solution filtrée avec de l'eau purifiée.25