Brevet FR3004650A1 — publié le 20141024

L'invention se rapporte au domaine de la préparation de compositions topiques pour un usage cosmétique ou thérapeutique, contenant des principes actifs se liant à des cibles d'intérêt. Il existe un certain nombre de maladies dermatologiques, telles que les eczémas, psoriasis, lichen plan et dermatoses bulleuses auto-immunes, ou des cancers de la peau (mélanome). Afin de traiter ces maladies, il est souhaitable de pouvoir disposer de compositions topiques, c'est-à-dire s'appliquant directement sur les lésions de la peau (ou du cuir chevelu) et agissant localement à l'endroit où il est appliqué. Par ailleurs, de telles compositions topiques sont souhaitables pour le traitement de maladies oculaires, qu'elles soient liées à des dérèglements 15 métaboliques (notamment dus à l'âge) ou à des infections oculaires (conjonctivites sévères, kératites et ulcères cornéens). Quelle que soit la maladie, il existe généralement une cible d'intérêt thérapeutique sur laquelle les médicaments sont actifs. Ce peut être un récepteur cellulaire, ou une protéine de surface d'un microorganisme. D'une façon générale, 20 il apparaît souhaitable de disposer de compositions permettant l'application de principes actifs agissant sur les cibles d'intérêt thérapeutiques directement sur le lieu d'action, en évitant le plus que possible le passage par la voie systémique. Toutefois, les anticorps ne pénètrent pas facilement la barrière de la peau ou de la cornée. 25 La demande VVO 2007/139397 décrit l'utilisation de banques de protéines à pli-OB dans lesquelles on modifie le domaine OB par l'introduction de mutations dans ce domaine de liaison de la protéine à son ligand naturel. La demande VVO 2008/068637 décrit l'utilisation d'une banque basée sur la 30 protéine Sac7d pour obtenir des ligands présentant une affinité pour des cibles d'intérêt. La méthode décrite dans VVO 2008/068637 comprend la génération de banques combinatoires contenant une pluralité de molécules d'ADN ayant toutes la même séquence, sauf la présence de certaines mutations aléatoires menant à la production de variants d'une protéine sauvage, présentant des mutations à 35 certains acides aminés du site de liaison de cette protéine à pli-OB sauvage. En particulier, dans le cadre de VVO 2008/068637, la protéine à pli-OB sauvage est une protéine Sac7d, dans laquelle on introduit des mutations pour générer une variabilité, notamment aux acides aminés K7, Y8, K9, K21, K22, VV24, V26, M29, séquence de Sac7d, telle que représentée par SEQ ID N° 1. La demande de brevet VVO 2012/150314 présente la portabilité de mutations d'une protéine de la famille Sac7d vers une autre protéine de la même famille. Cette portabilité revient à créer un mutant d'une autre protéine de la famille Sac7d à partir d'un mutant d'une protéine de ladite famille, que l'on a pu obtenir notamment en mettant en oeuvre le procédé de VVO 2008/068637. La famille Sac7d est définie comme se rapportant à La famille Sac7d correspond à une famille de protéines de 7 kDa liant l'ADN isolées de bactéries extrémophiles. Ces protéines et cette famille sont notamment décrites dans VVO 2008/068637. Ainsi, dans le cadre de la présente invention, une protéine appartient à la famille Sac7d lorsqu'elle présente une séquence correspondant à la séquence SEQ ID N° 8. Cette famille comprend notamment les protéines Sac7d or Sac7e issues de Sulfolobus acidocaldarius, Sso7d issue de Sulfolobus solfataricus, DBP 7 issue de Sulfolobus tokodaii, Ssh7b issue de Sulfolobus shibatae, Ssh7a issue de Sulfolobus shibatae, et p7ss issue de Sulfolobus solfata ficus. Les protéines à pli-OB sont connues dans l'art. Elles sont notamment décrites dans les documents cités plus haut, ainsi que dans Arcus (Curr Opin Struct Biol. 2002 Dec;12(6):794-801). Le pli-OB se présente sous la forme d'un cylindre présentant cinq feuillets beta ([3). La plupart des protéines à pli-OB utilisent le même interface de liaison de leur ligand naturel, qui peut être un oligosaccharide, un oligonucléotide, une protéine, un ion métallique ou un substrat catalytique. Cette interface de liaison comprend principalement les résidus situés dans les feuillets beta. Certains résidus situés dans les boucles peuvent aussi être impliqués dans la liaison d'une protéine à pli-OB avec son ligand naturel. Ainsi, les demandes VVO 2007/139397 et VVO 2008/068637 et le document Arcus (2002, op. cit.) décrivent les domaines de liaison des protéines à pli-OB avec leur ligand naturel. Par extension, dans le cadre de la présente demande, le terme « protéine à 35 pli-OB » comprend également les domaines présentant un pli-OB que l'on peut S31, T33, T40, R42, A44, S46, ou sur d'autres acides aminés, comme V26, G27, K28, M29, S31, R42, A44, S46, E47 et K48. Ces acides aminés sont basés sur la isoler de protéines plus complexes. Ces domaines à pli-OB sont notamment décrits plus en détail dans les demandes VVO 2007/139397 et VVO 2008/068637. L'intérêt de la méthode décrite dans VVO 2008/068637 est qu'elle permet d'obtenir des variants de protéines à pli-OB par criblage de banques combinatoires 5 contenant ou exprimant une pluralité de variants dans lesquels un certain nombre d'acides aminés ont été « randomisés », c'est-à-dire remplacés par un acide aminé aléatoire. Le criblage de ces banques permet d'identifier des variants de ces protéines qui se lient de façon spécifique, généralement avec une forte affinité (la demande VVO 2008/068637 décrit en effet des affinités de l'ordre du nanomolaire), 10 avec une cible d'intérêt, différente du ligand naturel de la protéine sauvage à partir de laquelle la banque combinatoire a été générée. La présente invention se rapporte ainsi à une composition topique comprenant un variant d'une protéine sauvage à pli-OB, ledit variant présentant 15 entre 5 et 32 résidus mutés dans l'interface de liaison de ladite protéine sauvage à pli-OB à son ligand naturel, ledit variant se liant de façon spécifique à une cible d'intérêt différente dudit ligand naturel. Ainsi que vu plus haut, ladite protéine sauvage à pli-OB englobe aussi les domaines à pli-OB. D'une façon préférée, le variant mis en oeuvre dans le cadre de 20 la présente invention contient au maximum 150 acides aminés, de façon plus préférée au maximum 100 acides aminés. Dans un mode de réalisation particulier, il contient au maximum 70 acides aminés. Le nombre de résidus mutés dans ledit variant (par rapport à la protéine sauvage) est compris entre 5 et 32. Dans d'autres modes de réalisation, ces 25 variants présentent de préférence au moins 5, de façon plus préférée au moins 8, de façon encore plus préférée au moins 10, mais généralement moins de 32, de façon plus préférée moins de 24, de façon encore plus préférée moins de 20 ou moins de 15 acides aminés substitués par rapport à la protéine (ou au domaine) à pli-OB sauvage. Ces acides aminés mutés sont localisés dans le site de liaison de 30 la protéine à pli-OB avec son ligand naturel. Ils sont généralement répartis sur l'ensemble de ce domaine de liaison. Étant donné la structure de ce domaine de liaison, certains résidus mutés se trouvent dans un (généralement plusieurs, notamment deux ou trois) feuillet beta. Dans un mode de réalisation particulier, ces variants peuvent également 35 comprendre des insertions d'acides aminés dans des boucles reliant les feuillets beta du pli-OB. Ainsi, on peut introduire entre 1 et 15 acides aminés dans la boucle 1 et/ou dans la boucle 4 et/ou dans la boucle 3 (les boucles étant numérotées de la même façon que dans VVO 2008/068637. Dans un mode de réalisation particulier, ladite protéine sauvage à pli-OB est choisie parmi Sac7d or Sac7e issues de Sulfolobus acidocaldarius, Sso7d issue de Sulfolobus solfataricus, DBP 7 issue de Sulfolobus tokodaii, Ssh7b issue de Sulfolobus shibatae, Ssh7a issue de Sulfolobus shibatae, et p7ss issue de Sulfolobus solfata ficus. Il s'agit donc de la protéine à laquelle est comparée le variant mis en oeuvre 10 dans la composition topique de la présente invention. Les différentes séquences des protéines Sac7d, Sso7d, Sac7e, Ssh7b, SSh7a, DBP7 et Sis7 sont représentées par SEQ ID N° 1 à SEQ ID N° 7 respectivement. Un variant d'une protéine de cette famille Sac7d est appelée une 15 nanofiti ne® La concentration du variant dans la composition selon la présente invention est généralement supérieure à 10 ng/ml et inférieure à 600 mg/ml. En effet, dans la cas d'une application oculaire, la concentration de protéine n'a pas besoin d'être 20 très importante. Elle est donc généralement inférieure à 10 mg/ml, de préférence inférieure 1 mg/ml, de préférence inférieure à 500 ng/ml, ou à 250 ng / ml, voire inférieure à 100 ng/ml. De même, si la concentration peut être aussi faible que 10 ng / ml, elle est de préférence supérieure à 50 ng / ml, voire supérieure à 100 ng / ml. 25 Dans le cadre d'une utilisation par voie topique par application sur la peau (ou le cuir chevelu), la concentration du produit peut généralement être plus importante. Ainsi, la concentration sera généralement supérieure à 10 mg / ml, de préférence supérieure à 50 mg / ml, de façon plus préférée supérieure à 100 mg / ml, de façon encore plus préférée supérieure à 200 mg / ml. 30 Le variant présent dans la composition selon l'invention se lie de façon spécifique à une cible d'intérêt. De fait, il a été sélectionné, par une méthode telle que décrite dans VVO 2008/068637 ou VVO 2007/139397 pour sa spécificité de liaison avec cette cible d'intérêt. Par ailleurs, les méthodes décrites dans ces demandes de brevets permettent d'obtenir des affinités de l'ordre du micromolaire (VVO 2007/139397) ou du nanomolaire (VVO 2008/068637). Les cibles d'intérêt sont choisies en fonction de la maladie que l'on souhaite traiter. On peut ainsi citer tout antigène, anticorps, protéine cellulaire, protéine circulante, peptides. On peut également cibler un principe actif de médicament, ou un acide nucléique particulier. On envisage en particulier que la cible d'intérêt soit une interleukine, une cytokine, un récepteur aux cytokines ou aux interleukines, une protéine codée par un oncogène, une protéine de surface d'un microorganisme, ou un lipopolysaccharide de microorganisme. Dans un mode de réalisation particulier, la composition topique selon l'invention est destinée à être appliquée sur la peau. Dans un autre mode de réalisation, cette composition topique est destinée à être appliquée au niveau oculaire. La forme de la composition topique selon l'invention est classique, et dépend notamment du lieu d'administration (peau ou oeil). Ainsi, cette composition peut se présenter sous une forme liquide (notamment un collyre pour un application oculaire), pâteuse, ou solide. Elle peut se présenter sous la forme d'une crème d'une pommade, d'un onguent d'une poudre, d'un gel, d'une émulsion (huile dans eau ou eau dans huilte), d'une mousse. Elle peut aussi se présenter sous la forme de tampon imbibé, de lingette, de spray, d'un aérosol, de lotion, de stick, de shampooing. La composition selon l'invention peut également se présenter sous forme de suspension de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques ou de patchs polymériques et d'hydrogels permettant une libération contrôlée. Cette composition pour application topique peut se présenter sous forme anhydre, sous forme aqueuse ou sous la forme d'une émulsion. Dans un mode de réalisation particulier, la composition topique selon l'invention se présente sous la forme d'un « patch » (système transdermal). De tels systèmes peuvent notamment permettre une libération contrôlée du principe actif. Un tel système comprend généralement une feuille protectrice (couche de support) imperméable à la substance d'intérêt (le variant de la protéine à pli-OB 35 dans le cadre de la présente invention), un réservoir contenant la substance d'intérêt, un élément contrôlant la livraison de la substance d'intérêt sur la peau, à travers une couche adhésive (sensible à la pression) permettant le maintien du dispositif sur la peau, et une couche-protectrice détachable avant application sur la peau. Il est possible que le même élément accomplisse plusieurs fonctions (par exemple réservoir, contrôle de libération et adhésion). De tels dispositifs sont connus dans l'état de la technique. Les variants des protéines à pli-OB utilisés dans la composition selon l'invention peuvent être produits par synthèse chimique en phase solide ou par recombinaison génétique. La synthèse chimique peut être réalisée par exemple avec un synthétiseur automatique de peptide du type Applied Biosystems, mod. 433A., ou en chimie Fmoc qui utilise le groupement fluoremylméthyloxycarbonyle pour la protection temporaire de la fonction a-aminique des acides aminés. Il est toutefois préféré de produire les variant utilisables dans le cadre de l'invention par génie génétique, en particulier en intégrant une séquence d'acide nucléique codant pour ledit polypeptide dans un vecteur d'expression. Ce vecteur d'expression est alors introduit dans une cellule hôte (les bactéries telles Esche richia cou sont particulièrement adaptées), qui est cultivée dans des conditions de culture permettant la synthèse du polypeptide (on peut notamment utiliser des promoteurs inductibles en amont du polypeptide dans le vecteur d'expression. Le polypeptide synthétisé est alors récupéré. On peut alors greffer tout type de molécules en N- ou C-terminal du polypeptide. L'homme du métier connaît les méthodes de production de polypeptides, qui sont notamment décrites dans l'ouvrage de Sambrook, Fritsch et Maniatis, 25 MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL, 2nde édition. La composition selon l'invention peut contenir des variants de la protéine à pli-OB seuls ou avec d'autres principes actifs. Ainsi, la composition peut aussi contenir au moins un agent choisi parmi les agents antibactériens, antiparasitaires, 30 antifongiques, anti-inflammatoires, antiprurigineux, anesthésiques, antiviraux, kératolytiques, anti-radicaux libres, antiséborrhéiques, antipelliculaires, antiacnéiques et les agents modulant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation cutanée. Cette composition peut également contenir un agent régulateur de pH, notamment pour permettre la régulation du pH autour de pH = 7. Les variants de la protéine à pli-OB peuvent aussi être fusionnés avec une protéine active, notamment afin d'augmenter leur temps de demi-vie. La composition selon l'invention peut aussi être utilisée dans une méthode de diagnostic in vivo. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, le variant de la protéine à pli-OB est couplé à un agent de détection ou de contraste. Ceci permet notamment un suivi de cet agent de contraste et de déterminer les organes sur lesquels le variant de la protéine à pli-OB se lie (ce qui indique la présence de la cible d'intérêt). L'invention se rapporte aussi à un procédé de préparation d'une composition topique, comprenant l'étape de mélanger un variant d'une protéine sauvage à pli-OBà un excipient à usage topique, pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptable. Dans un mode de réalisation particulier, ladite composition est destinée à 20 être appliquée sur la peau. L'excipient permet, de préférence, donc la réalisation d'une composition qui peut être étalée sur la peau, telle qu'une pommade, un onguent ou une lotion. Dans un autre mode de réalisation, ladite composition est destinée à être appliquée sur l'oail, et les excipients sont choisis en conséquence. On obtient ainsi 25 notamment des collyres, des gouttes d'oeil. L'invention se rapporte également à une composition topique, selon l'invention, contenant un variant d'une protéine sauvage à pli-OB, ledit variant présentant entre 5 et 32 résidus mutés dans l'interface de liaison de ladite protéine 30 sauvage à pli-OB à son ligand naturel, ledit variant se liant de façon spécifique à une cible d'intérêt différente dudit ligand naturel, en tant que médicament. L'invention se rapporte également à une composition topique selon l'invention pour le traitement d'une maladie ou d'un désordre dermatologique ou ophtalmologique. Dans ce mode de réalisation, le variant de la protéine à pli-OB utilisé cible un facteur étiologique de la maladie visée. L'invention se rapporte également à une composition cosmétique 5 comprenant une composition topique selon l'invention et à l'utilisation cosmétique d'une composition topique selon l'invention. L'invention se rapporte également à une méthode de traitement d'une maladie ou d'un désordre dermatologique ou ophtalmologique, caractérisé en ce 10 que l'on applique localement (sur la peau ou au niveau oculaire selon le besoin) une composition topique selon l'invention, contenant une protéine à pli-OB ciblant, de préférence, un facteur étiologique de ladite maladie ou dudit désordre. 15 Exemples Exemple 1 : test de pénétration de nanofitines® à travers un modèle de peau humaine Le test utilisé est le test de diffusion des cellules de Franz. Les cellules de Franz servent déterminer, ex vivo, la pénétration cutanée de 20 substances exogènes, et de mesurer effectivement la vitesse de passage à travers les différentes couches de la barrière cutanée des molécules constituant le principe actif déposé à la surface de la peau. Une solution contenant la molécule à étudier est déposée dans un compartiment « donneur » du dispositif. La molécule diffuse ensuite à travers une 25 membrane (la peau en l'occurrence) et est collectée dans un compartiment « récepteur ». En pratique, après avoir retiré la couche hypodermique (tissu adipeux), le fragment de peau est déposé sur une cellule de diffusion, appelée cellule de Franz. La face profonde du derme est en contact avec une solution réceptrice qui 30 est censée remplacer le liquide interstitiel de la peau. Une solution contenant la molécule étudiée est déposée au-dessus de la peau. A intervalle de temps régulier, la solution réceptrice est prélevée afin de doser la molécule qui a traversé la peau dégraissée et une nouvelle solution lui est alors substituée. Le dosage de substances présentes dans la phase réceptrice prélevée permet de déterminer soit la quantité de molécules ayant traversée la peau, soit le flux (en nanogramme/cm2/heure). On a testé des nanofitines® issues de criblages d'une banque de variants de Sac7d pour leur affinité contre trois cibles d'intérêt différentes, impliquées dans des maladies cutanées ou ophtalmologiques. Ces nanofitines® ont été produites dans un système bactérien et se lient donc à des ligands différents. On a utilisé 6 fragments de peau humaine (épaisseur 1 mm), décongelés 10 issus du même donneur. Le compartiment récepteur était rempli de PBS (tampon phosphate salin, pH 7,4; 5,8 ml). La membrane a été placée sur le milieu récepteur. On a déposé 100 pl de chaque formulation contenant 5mg/m1 de nanofitine® sur la membrane. La surface d'échange était de 2 cm2. 15 La température a été maintenue à 35°C pendant toute l'expérience du côté récepteur, correspondant à une température de 32° C à la surface externe de la peau humaine. À chaque période d'échantillonnage suivante : 0 h et 24h, on a prélevé 500 pl de liquide du côté récepteur que l'on a remplacé par du PBS. 20 Du côté donneur, à t=24h, la peau a été rincée avec 5 ml de PBS. À la fin de la période d'échantillonnage, les 2cm2 de peau ont été retirés du dispositif de cellules de Franz et placés dans un bain à ultra-son dans 1 ml de PBS. On a mesuré sur chacun des échantillons prélevés la concentration en 25 nanofitines® par la technologie de BioLayer Interferometry qui permet de mesurer l'interaction entre deux protéines. En l'occurrence, la teneur en nanofitines® est mesurée par la reconnaissance d'un tag poly-Histidine qui leur est préalablement couplé. Les résultats sont les suivants : 30 Le pourcentage de nanofitines® retrouvé du côté récepteur s'échelonne, selon la nanofitine®, entre 8% et 17%. Le standard de perméabilité de la peau utilisé est la caféine, qui dans le contexte expérimental présente une perméabilité de l'ordre de 10%. Ces résultats montrent que les nanofitines® traversent effectivement la peau humaine, et que ce résultat n'est pas dépendant de la cible contre laquelle la nanofitine® a été générée et se lie. Exemple 2 : test de pénétration de nanofitines® à travers la cornée de lapin On a utilisé trois lapins mâles (Fauve de Bourgogne). Le principe est le même que pour la perméabilité de la peau. 2 chambres de réaction ont été utilisées pour l'étude de la perméabilité de 10 chaque formulation (NFI, NF2 et NF3). 3 ml de formulation contenant chaque nanofitine® ont été placés du côté donneur des chambres de réaction et 3m1 de PBS ont été placés du côté récepteur. Des tissus cornéens fraîchement prélevés ont été placés entre les deux demi-chambres. 15 La température a été maintenue à 37°C pendant toute l'étude et l'oxygénation a été fournie par une perfusion continue de carbogène (95 % 02, 5 % 002). La surface d'échange était de 0,5cm2. À chaque période d'échantillonnage suivante : Oh ; 2h et 4h, on a prélevé 500 pl de liquide du côté récepteur que l'on a remplacé par du PBS. 20 - 100 pl de liquide ont été prélevés du côté donneur et n'ont pas été remplacés. À la fin de la période d'échantillonnage, les 0,5 cm2 de cornées ont été retirés de la chambre de réaction et grattés avec un scalpel. 1 mL de PBS a été ajouté aux échantillons qui ont été homogénéisés. 25 On a mesuré sur chacun des échantillons prélevés la concentration en nanofitines® par la technologie de BioLayer Interferometry qui permet de mesurer l'interaction entre deux protéines. En l'occurrence, la teneur en nanofitines® est mesurée par la reconnaissance d'un tag poly-Histidine qui leur est préalablement couplé. 30 Les résultats sont les suivants : La quantité de nanofitines® retrouvée du côté récepteur permet de calculer une perméabilité apparente (cm/s) comprise, selon les nanofitines®, entre 5 10-6 et 2.10-5. En comparaison avec les standards utilisés dans ce type de protocole 35 expérimental, les nanofitines® testées présentent une perméabilité comparable à celle de la norfloxacine (1,1.10-5 dans ce modèle expérimental), qui est une molécule présentant une bonne pénétration de la cornée et qui est utilisé en ophtalmologie dans un collyre pour le traitement antibactérien local des infections oculaires sévères dues à des germes sensibles à la norfloxacine. Ces résultats montrent que les nanofitines® traversent effectivement la cornée, et que ce résultat n'est pas dépendant de la cible contre laquelle la nanofitine® a été criblée. 10 REVENDICATIONS1. Composition topique comprenant un variant d'une protéine sauvage à pli-OB, ledit variant présentant entre 5 et 32 résidus mutés dans l'interface de liaison de ladite protéine sauvage à pli-OB à son ligand naturel, ledit variant se liant de façon spécifique à une cible d'intérêt différente dudit ligand naturel. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite protéine sauvage à pli-OB est choisie parmi Sac7d or Sac7e issues de Sulfolobus acidocaldarius, Sso7d issue de Sulfolobus solfataricus, DBP 7 issue de Sulfolobus to,kodaii, Ssh7b issue de Sulfolobus shibatae, Ssh7a issue de Sulfolobus shibatae, et p7ss issue de Sulfolobus solfataricus. 3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle contient entre 10 ng/ml et 600 mg/mi dudit variant. 4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ladite cible d'intérêt dudit variant est choisie parmi les antigènes, les anticorps, les protéines cellulaires, les protéines circulantes, les peptides, les principes actifs de médicaments, les acides nucléiques, et notamment les interleukines, les cytokines, les récepteurs aux cytokines ou interleukines, les protéines codées par des oncogènes, les protéines de surfaces de microorganismes, et les lipopolysaccharides de microorganismes. 5. Composition selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle est destinée à être appliquée sur la peau. 6. Composition selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'elle est destinée à être appliquée au niveau oculaire. 30 7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une solution aqueuse, huileuse ou hydroalcoolique, d'une émulsion, d'une microémulsion, d'un gel aqueux, d'un gel anhydre, d'un sérum, d'une dispersion de vésicules, d'une lotion, d'un gel, d'une crème, d'une 35 mousse, d'un aérosol ou d'un spray. 8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle contient en outre au moins un agent choisi parmi les agents antibactériehs, antiparasitaires, antifongiques, anti-inflammatoires, antiprurigineux, anesthésiques, antiviraux, kératolytiques, anti-radicaux libres, antiséborrhéiques, antipelliculaires, antiacnéiques et les agents modulant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation cutanée. 9. Composition topique selon l'une des revendications 1 à 8, pour son utilisation dans le traitement d'un désordre ou d'une maladie dermatologique ou ophtalmologique. 10. Procédé de préparation d'une composition topique selon l'une des revendications 1 à 9, comprenant l'étape de mélanger un variant d'une protéine sauvage à pli-OB, ledit variant présentant entre 5 et 32 résidus mutés dans l'interface de liaison de ladite protéine sauvage à pli-OB à son ligand naturel, ledit variant se liant de façon spécifique à une cible d'intérêt différente dudit ligand naturel, dans un véhicule pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptable.20