Brevet FR3006313A1 — publié le 20141205

La présente invention concerne des composés phénoliques naturels et leurs dérivés acyles, leurs procédés de préparation, leur utilisation en thérapeutique et leurs applications dans les domaines cosmétique ou alimentaire. Plus particulièrement, la présente invention concerne de nouveaux composés phénoliques naturels et leurs dérivés acyles, à usage thérapeutique pour la prévention ou le traitement de maladies neurodégénératives, cardiovasculaires, inflammatoires, et hypertensives, de cancers, et pour des applications dans des préparations alimentaires ou cosmétiques. Le brevet EP1516866 décrit l'utilisation de composés phénoliques naturels et leurs dérivés pour la prévention et le traitement de maladies cardiovasculaires, hépatiques, rénales et pour des applications cosmétiques. Ces composés sont des esters d'acides gras saturés ou polyinsaturés et d'alcool phénolique choisi parmi le hydroxytyrosol et le tyrosol. Les composés obtenus présentent pour la plupart un motif orthodiphénol. Ces molécules ont comme principal inconvénient d'être très coûteuses, du fait essentiellement de leur faible disponibilité et de leur procédé d'extraction complexe. Il est donc nécessaire de proposer de nouvelles molécules présentant une meilleure activité ainsi qu'une meilleure stabilité et biodisponibilité. A cet effet, et conformément à la présente invention, il est proposé de nouveaux composés de formule (I) (I) où R1 est choisi parmi le groupe comprenant H, OH, 00H3, R3 est choisi parmi le groupe comprenant H, OH, 00H3, au moins l'un de R1 et R3 étant le groupe 00113, R2 est H, OH; R4 est H, OH; R5 est une chaîne alkyle, alkényle, comportant de 1 à 4 atomes de carbone; R6 est une chaîne linéaire alkyle, alkényle, comportant de 1 à 32 atomes de carbone. La présente invention concerne également un procédé de synthèse de tels composés. La présente invention concerne également l'utilisation de tels composés comme médicament, en particulier pour la prévention ou le traitement des cancers, de maladies cardiovasculaires, ou neurodégénératives. La présente invention concerne également des compositions pharmaceutiques comprenant comme principe actif au moins un tel composé. La présente invention concerne également des préparations alimentaires ou cosmétiques comprenant au moins un tel composé. La présente invention concerne également l'utilisation d'un tel composé pour la fabrication de préparations alimentaires, cosmétiques et pharmaceutiques. D'autres caractéristiques apparaitront à la lecture de la description qui suit, faite en référence aux dessins dans lesquels: - la figure 1 représente le spectre de RMN du proton de l'ester vanillique de DHA - la figure 2 représente une comparaison des courbes d'évolution du poids des souris en fonction du temps, les régimes administrés correspondant à des croquettes imprégnées soit de margarine, soit de margarine enrichie en oléate d'éthyle, soit de margarine enrichie en ester éthylique de DHA, - la figure 3 représente une comparaison des courbes d'évolution du poids des souris en fonction du temps, les régimes administrés correspondant à des croquettes imprégnées soit de margarine, soit de margarine enrichie en alcool vanillique, soit de margarine enrichie en alcool homovanillique, - la figure 4 représente une comparaison des courbes d'évolution du poids des souris en fonction du temps, les régimes administrés correspondant à des croquettes imprégnées soit de margarine, soit de margarine enrichie en ester vanillique de DHA, soit de margarine enrichie en ester homovanillique de DHA, - la figure 5 représente une comparaison des courbes d'évolution du poids des souris en fonction du temps, les régimes administrés correspondant à des croquettes imprégnées soit de margarine, soit de margarine enrichie en ester vanillique d'acide oléique, soit de margarine enrichie en ester homovanillique d'acide oléique, - la figure 6 représente le pourcentage en DHA érythrocytaire pour des souris exposées à différents régimes alimentaires, - la figure 7 représente la viabilité cellulaire de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde, en présence de DHA ou de l'ester vanillique de DHA, - la figure 8 représente la viabilité cellulaire de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde, en présence d'alcool vanillique ou de l'ester vanillique de DHA, - la figure 9 représente la viabilité cellulaire de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde, en présence d'alcool homovanillique ou de l'ester homovanillique de DHA, - la figure 10 représente la viabilité cellulaire de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde en présence d'un mélange DHA + alcool vanillique ou de l'ester vanillique de DHA, - la figure 11 représente les résultats du test de scission de l'ADN induite par le peroxyde d'hydrogène, et - la figure 12 représente l'évolution de l'indice de peroxyde de margarines enrichies ou non en composés selon l'invention. Le composé selon l'invention correspond à la formule (I) :30 (I) où R1 est choisi parmi le groupe comprenant H, OH, 00113, R3 est choisi parmi le groupe comprenant H, OH, 00H3, au moins l'un de R1 et R3 étant le groupe 00H3, R2 est H, OH; R4 est H, OH; R5 est une chaîne linéaire ou ramifiée, alkyle, alkényle, comportant de 1 à 4 atomes de carbone; R6 est une chaîne linéaire alkyle, alkényle, comportant de 1 à 32 atomes de carbone. D'une manière particulièrement avantageuse, le composé selon l'invention présente un degré de pureté supérieur à 90%, de préférence supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 96%. Dans la présente invention, le degré de pureté est mesuré par spectroscopie par Résonance Magnétique Nucléaire (RMN) du proton 1H, après purification, le composé ayant été préalablement solubilisé dans du chloroforme deutéré (0D013). Les spectres de RMN sont enregistrés sur un appareil « Bruker DRX 400», à une fréquence de 400.1 MHz. Les spectres du proton sont calibrés par rapport au pic résiduel du solvant deutéré (7.25 ppm). De préférence, R1 est H. De préférence, R2 est OH. De préférence, R3 est 00H3. Parmi ces composés, des composés préférés de l'invention sont des dérivés vanilliques ou homovanilliques. De préférence, R4 est H. Selon une variante de composés, R5 comprend de 1 à 2 atomes de carbone. D'autres composés selon l'invention sont tels que R5 comprend de 2 à 4 atomes de carbone, de préférence de 2 à 3 atomes de carbone. De préférence, R6 est une chaîne linéaire alkyle, alkényle, comportant de 2 à 22 atomes de carbone, plus préférentiellement de 4 à 22 atomes de carbone. De préférence, R6 est une chaîne alkényle dans laquelle toutes les doubles liaisons présentent une configuration Z. Un composé préféré de l'invention est un composé pour lequel R5 est -CH2- et R6 est une chaîne alkényle dans laquelle toutes les doubles liaisons présentent une configuration Z. Un autre composé préféré de l'invention est un composé pour lequel R5 est -CH2-CH2- et R6 est une chaîne alkényle dans laquelle toutes les doubles liaisons présentent une configuration Z. De préférence, R6 est un groupe dérivé d'un acide gras insaturé de formule R6000H, où, de préférence, toutes les doubles liaisons présentent une configuration Z. De préférence, R6 est le groupe dérivé de l'acide docosahexaénoïque (DHA), de l'acide oléique, de l'acide érucique, de l'acide eicosapentaénoïque, de l'acide docosapentaénoïque (DPA), de l'acide linoléique, de l'acide a linolénique, de l'acide y linolénique, de l'acide arachidonique, de l'acide stéarique. Un composé préféré de l'invention est le 4,7,10,13,16,19- Docosahexaénoïque acide, (4-hydroxy-3-methoxyphenyl)ethyl ester. Un composé particulièrement préféré de l'invention est le (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-4,7,10,13,16,19-Docosahexaénoïque acide, (4- hydroxy-3-methoxyphenyl)ethyl ester. Un autre composé préféré de l'invention est le 4,7,10,13,16,19- Docosahexaénoïque acide, (4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl ester. Un autre composé particulièrement préféré de l'invention est le (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-4,7,10,13,16,19-Docosahexaénoïque acide, (4- hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl ester. Un autre composé préféré de l'invention est l'ester vanillique d'acide oléique. Un autre composé préféré de l'invention est l'ester homovanillique d'acide oléique. Les composés de l'invention présentent notamment un effet antioxydant, neuroprotecteur, même à de très faibles concentrations (0,5 pM). La présente invention concerne également un procédé de synthèse d'un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, ledit procédé comprenant une étape de transestérification d'un alcool de formule (II) avec un ester R6000R7, R7 étant un groupe méthyle ou éthyle. R1, R2, R3, R4, R5 et R6 étant définis ci-dessus, le procédé étant sans solvant. La synthèse est alors réalisée en milieu fondu, le composé phénolique étant directement solubilisé dans l'acide gras ou son ester méthylique ou éthylique. Il est bien évident qu'un procédé avec solvant peut être utilisé. Toutefois, un tel procédé avec solvant se déroule à 55°C au lieu de 37°C pour le procédé sans solvant. Le procédé sans solvant permet donc une économie d'énergie. Par ailleurs, cela permet de limiter les risques d'oxydation des acides gras polyinsaturés. Le procédé sans solvant évite également l'utilisation de tout solvant au cours de la synthèse des esters, d'où un impact environnemental moindre par rapport à un procédé avec solvant. De préférence, l'étape de transestérification est réalisée par catalyse enzymatique, qui permet un greffage sélectif de la chaîne grasse sur la fonction hydroxyle primaire du composé phénolique. Ainsi, les groupements phénoliques ne sont pas modifiés au cours du procédé. Une telle enzyme est par exemple la lipase B de Candida antarctica immobilisée sur une résine acrylique (NOVOZYM 435 ()). D'une manière avantageuse, la réaction de transestérification est réalisée dans un réacteur comprenant un excès d'ester R6000R7 à l'état liquide dans lequel est solubilisé l'alcool de formule (II). Ceci a pour conséquence de déplacer l'équilibre de la synthèse en faveur de la formation de l'ester. Ceci peut être accentué en se plaçant sous pression réduite, ce qui a pour effet de i) limiter le contact du milieu avec l'oxygène atmosphérique, ii) obtenir des rendements très élevés. D'une manière particulièrement préférée, le réacteur est alimenté avec l'alcool de formule (II) au cours de la réaction jusqu'à atteindre l'équilibre réactionnel, selon un procédé en fed-batch. D'une manière particulièrement avantageuse, le procédé de synthèse selon l'invention ne comprend aucune étape de purification du milieu réactionnel final. En effet, le procédé selon l'invention permet d'obtenir un taux de conversion de l'alcool de formule (II) et une concentration en ester élevés, ce qui permet d'envisager une utilisation directe du milieu réactionnel. Le procédé sans solvant permet d'obtenir des rendements largement supérieurs à ceux observés avec le procédé avec solvant. En effet, avec un procédé avec solvant, la conversion de l'alcool vanillique est d'au plus 50% après 30 heures de réaction dans de l'acétonitrile ou du 2- méthyl-butanol. On obtient une concentration maximum de 7,2 g/L d'ester. Avec un procédé sans solvant, la conversion de l'alcool vanillique est quasiment totale et peut être comprise par exemple entre 80% et 95%. On obtient une concentration en ester de l'ordre de 300 g/L à 450 g/L, après 30 heures de réaction. Aucune oxydation du milieu n'est observée. L'alcool de formule (II) est de préférence l'alcool vanillique ou l'alcool homovanillique. L'ester R6COOR7 est de préférence l'ester éthylique ou méthylique de DHA, l'ester éthylique ou méthylique de l'acide oléique, l'ester éthylique ou méthylique de l'acide érucique, l'ester éthylique ou méthylique de l'acide eicosapentaénoïque, l'ester éthylique ou méthylique de l'acide linoléique, l'ester éthylique ou méthylique de l'acide a linolénique, l'ester éthylique ou méthylique de l'acide y linolénique, l'ester éthylique ou méthylique de l'acide arachidonique, l'ester éthylique ou méthylique de l'acide stéarique, l'ester éthylique ou méthylique de l'acide docosapentaénoïque. La présente invention concerne un composé de formule (I) tel que défini ci- dessus, pour utilisation comme médicament, notamment pour la prévention ou le traitement d'un cancer, pour la prévention ou le traitement de maladies cardiovasculaires, pour la prévention ou le traitement du déclin cognitif et/ou du vieillissement cérébral, pour la prévention ou le traitement de maladies neurodégénératives, et plus particulièrement pour la prévention ou le traitement de maladies neurodégénératives liées au stress amyloïde. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique, contenant à titre de principe actif une dose efficace d'au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, ou un de ses sels d'addition avec des acides minéraux et organiques ou avec des bases minérales ou organiques pharmaceutiquement acceptables. Le principe actif est mélangé à au moins l'un des composés choisis parmi au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou au moins un autre principe actif. Ces excipients sont connus de l'Homme du métier et seront adaptés à la forme pharmaceutique et au mode d'administration souhaité. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention se présentent sous toutes les formes connues de l'Homme du métier, adaptées notamment pour une administration par voie orale, sublinguale, intramusculaire, intraveineuse, topique, locale, intra nasale, transdermique ou rectale. Les compositions pharmaceutiques peuvent ainsi se présenter sous la forme de gélules, de comprimés, de granulés, de suppositoires, de préparations injectables, de crèmes, préparés selon des méthodes usuelles. La présente invention concerne également une préparation alimentaire comprenant au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus. Une telle préparation alimentaire est par exemple une margarine. La présente invention concerne également une préparation cosmétique comprenant au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus. Une telle préparation cosmétique est par exemple une crème dermocosmétique. La présente invention concerne également un complément alimentaire comprenant au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus. Un tel complément alimentaire est par exemple une capsule d'huile de poisson. La présente invention concerne également l'utilisation d'un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, pour la fabrication de préparations alimentaires, cosmétiques et pharmaceutiques. Les composés de l'invention sont avantageux en ce que le greffage moléculaire d'un acide gras insaturé et de préférence polyinsaturé d'un alcool phénolique conformément à l'invention permet d'obtenir des structures stables et sans effet anti-nutritionnel, c'est-à-dire sans effet négatif sur la valeur nutritive d'un aliment. Les esters phénoliques de DHA ne présentent aucune cytotoxicité vis-à-vis des cellules neuronales. Au contraire, un effet neurogénique a été mis en évidence. In vitro, le fait d'associer le DHA à un alcool phénolique par le biais d'une liaison covalente n'affecte en rien l'activité neuroprotectrice et la biodisponibilité du DHA. In vivo, le greffage d'un composé phénolique sur le DHA permet d'augmenter la concentration de ce dernier dans le sang circulant. Les esters d'acides gras et de composés phénoliques présentent un fort potentiel applicatif. Ils permettent en effet d'envisager l'enrichissement de matrices alimentaires ou cosmétiques en acides gras d'intérêt et en espèces antioxydantes, par le biais d'ingrédients fonctionnels stables, et capables de protéger la matrice d'incorporation. Dans le cas d'applications alimentaires, les esters sont rapidement hydrolysés après ingestion; le greffage enzymatique de l'entité phénolique et de la chaîne grasse n'affecte donc pas leurs biodisponibilités respectives. Les molécules libérées après hydrolyse des esters sont naturellement présentes dans les aliments et ne présentent donc pas de danger pour le consommateur, a priori. Les exemples suivants illustrent la présente invention sans toutefois en limiter la portée. PREPARATIONS DES COMPOSÉS Matériels et préparation des milieux réactionnels : Les composés sont synthétisés par un procédé enzymatique, sans solvant. La réaction de transestérification de la synthèse est menée dans le ballon d'évaporation d'un évaporateur rotatif (R-205 rotavapor BÜCHI) équipé d'une pompe (BÜCHI Vac ® V-500), d'un régulateur de pression (BÜCHI vacuum controller V-800) et d'un bain thermostaté (BÜCHI heating bath B-490). Les réactions sont menées à l'abri de la lumière, sous atmosphère inerte (N2) à 37 °C, sous une agitation de 250 tr/min et une pression réduite de 500 m bars. Les substrats sont un alcool phénolique et un ester éthylique ou méthylique d'acide gras. Les synthèses sont menées en milieu fondu, c'est-à-dire en l'absence de solvant. Le substrat ester éthylique ou méthylique d'acide gras est utilisé en large excès, à l'état liquide. Il sert de « solvant » au substrat alcool phénolique. Pour les réactions de synthèse d'esters, la présence d'eau doit être évitée au maximum pour limiter les réactions d'hydrolyse. Le matériel et les produits sont soigneusement séchés avant utilisation. Ainsi, le réacteur et la verrerie sont rincés à l'acétone, puis séchés pendant 24 heures dans une étuve à 100 °C. Les substrats et l'enzyme sont également séchés pendant au moins 5 jours dans un dessiccateur à 4 °C, en présence de gel de silice et d'anhydride phosphorique. Conduite du procédé : Un procédé semi-continu est appliqué, caractérisé par une alimentation du réacteur avec le substrat phénolique. Les milieux de synthèse sont préparés en solubilisant le composé phénolique dans l'ester éthylique ou méthylique d'acide gras, pendant une nuit, à 37°C. Les réactions sont initiées par l'ajout de l'enzyme, à savoir une lipase comme la lipase B de Candida antarctica immobilisée sur une résine acrylique (Novozym 435 ®, commercialisée par Novozymes). Les quantités de substrats et d'enzyme mises en oeuvre en début de synthèse sont présentées dans le tableau 1, en prenant comme exemple la synthèse de l'ester vanillique de DHA. Tableau 1 : composition des milieux réactionnels en début de synthèse Volume Nombre de Concentration Réactifs/biocatalyseur moles 20 mL 5,13x10-2 - Ester éthylique de DHA - 3,24x10-3 25 g/L Alcool vanillique - - 20 g/L Novozym 435® Après 4 heures de réaction, le milieu réactionnel séparé de l'enzyme, est transféré dans un autre ballon et un nouvel ajout de composé phénolique est effectué sous un courant d'azote. Le système est remis sous agitation pendant une nuit, dans les mêmes conditions de température et de pression que celles appliquées pour les synthèses, de manière à solubiliser le composé phénolique. La réaction est redémarrée par un nouvel ajout d'enzyme. Plusieurs ajouts de composé phénolique sont ainsi effectués au cours de chaque synthèse. Purification des produits de synthèse : Les réactions d'acylation sont arrêtées en transférant le milieu réactionnel sans l'enzyme dans un tube, conservé à l'abri de la lumière, au congélateur. Les esters produits sont purifiés par flash-chromatographie sur gel de silice. 5.5 mL de milieu réactionnel sont injectés sur une colonne en verre de 2,5 cm de diamètre et de 30 cm de longueur (KONTES CHROMAFLEX), remplie avec 60 g de gel de silice (silica gel 60; taille de particules 40-63 pm, GRACE). Cette colonne est installée dans un robot de purification GILSON 712, équipé d'une pompe GILSON 306 assurant un débit de 20 mL/min. En sortie de colonne, les fractions sont collectées dans des tubes à raison de 1 tube/min (FC 204, Fraction collector GILSON). La composition de l'éluant au cours d'un cycle de purification est donnée dans le tableau 2. Afin de déterminer les fractions d'intérêt, les fractions collectées sont analysées par chromatographie sur couche mince (cyclohexane/acétate d'éthyle; 4/1) ; les plaques sont visualisées sous lumière UV à 254 nm puis traitées par pulvérisation avec une solution d'acide sulfurique méthanolique pour être ensuite chauffées. Les fractions contenant les produits d'intérêt sont rassemblées et le solvant est éliminé par évaporation sous vide. Le résidu est pesé. Tableau 2: Gradient d'élution optimisé pour la purification des milieux de synthèse de l'ester vanillique de DHA par Flash-chromatographie Temps (minutes) Phases mobiles 60 40 0 60 85 95 % Phase A:cyclohexane 40 15 5 % Phase B: acétate d'éthyle 15 Caractérisation structurale et détermination de la pureté des esters produits : La structure et la pureté des esters produits sont analysées par IR, RMN du proton 1H et du carbone 130 et par spectrométrie de masse haute résolution, après purification. 20 RMN: Les spectres de résonance magnétique nucléaire (RMN) ont été enregistrés en solution dans le chloroforme deutéré (CDCI3) sur un appareil Bruker DRX 400 à 400 MHz pour le proton et 100,6 MHz pour le carbone 13. Les déplacements chimiques sont donnés en ppm et les spectres du proton sont 25 calibrés par rapport au pic résiduel du solvant deutéré (7.25 ppm pour le proton et 77.16 pour le carbone 13). Les constantes de couplages sont données en hertz (Hz). La multiplicité des signaux est notée avec les désignations : s (singulet), d (doublet), dd (doublet de doublet), t (triplet), q (quadruplet), m (massif ou multiplet). L'attribution des protons et des 10 carbones a été réalisée à l'aide d'expériences bi dimensionnelle de type COSY, HMQC, HMBC) La figure 1 représente le spectre de RMN du proton de l'ester vanillique de DHA. La pureté de l'ester est calculée selon la formule ci-dessous : % de pureté = (Intégral du pic à 3.91 ppm/Intégral du pic à 0.98 ppm)*100 Le pic à 0.98 ppm correspond au signal du groupement -0H3 terminal du DHA et le pic à 3.91 ppm correspond au signal du groupement -00H3 de l'alcool vanillique. Dans l'ester pur, ces signaux doivent intégrer pour le même nombre de protons. Spectroscopie infrarouge : Les spectres infra rouge (IR) ont été enregistrés sur un spectromètre Perkin Elmer spectrum 1000 en film sur pastille de NaCI. Les fréquences indiquées correspondent à des maxima d'absorption et sont exprimés en cm-1. Spectrométrie de masse haute résolution : Les spectres de masse haute résolution HRMS ont été enregistrés sur un appareil microTOFQ Bruker. EXEMPLES - Description des dérivés produits: Exemple1: Ester homovanillique de DHA ou (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-4,7,10,13,16,19- Docosahexaenoïque acide, (4-hydroxy-3-methoxyphenyl)ethyl ester Ce composé est obtenu à partir de l'alcool homovanillique et de l'ester éthylique de DHA. C311-14204, M = 478.67 Rf 0.28, Hexane/AcOEt 4/1. huile IR : NaCI (y, cm-1) : 3546, 3439, 3014, 2964, 2929, 2865, 1730, 1606, 1514, 1429, 1269, 1234. RMN 1H, (CDCI3, 400 MHz) (ppm) :1.00 (t, 3H, J = 7.5 Hz, CH3), 2.10 (m, 2H, H21a, H21b), 2.34-2.45 (m, 4H, H2a, H2b, H3a, H3b), 2.81-2.87 (m, 10H, H6a, H6b, H9a, H9b, H12a, H12b, H15a, H15b, H18a, H18b), 2.89 (t, 2H, J = 7.5 Hz, H2'a, H2'b), 3.90 (s, 3H, OCH3), 4.28 (t, 2H, J = 7.5 Hz, M'a, Htb), 5.28-5.47 (m, 12H, H4, H5, H7, H8, H10, H11, H13, H14, H16, H17, H19, H20), 5.55 (s, 1H, OH), 6.73 (d, 1H, J = 8.2 Hz, H5" ou H6"), 6.74 (s, 1H, H2"), 6.87 (d, 1H, J = 8.2 Hz, H5" ou H6"). RMN 13C, (CDCI3, 100.6MHz) (ppm) : 14.7 (C-22), 21.0 (C-21), 23.2(C-3), 25.9, 26.0, 26.0 (C-6, C-9, C-12, C-15, C-18), 34.6 (C-2), 35.2 (C-2'), 56.3 (OCH3), 65.5 (C-1'), 111.8 (C-2"), 114.8, 122.0 (C-5", C-6"), 127.4, 128.3, 128.3, 128.5, 128.5, 128.5, 128.7, 128.7, 128.7, 129.0, 129.7, 132.4 5 (C-4, C-5, C--7, C-8, C-10, C-11, C-13, C-14, C-16, C-17, C-19, C-20), 130.0 (C1"), 144.7, 146.9 (C-3", C-4"), 173.4 (C-1). HRMS-ESI, calculé pour C31H42Na04 501.2975(M+Na)+, trouvé 501.2991 Exemple 2: Ester vanillique de DHA ou (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-4,7,10,13,16,19- Docosahexaenoïque acide, (4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl ester Ce composé est obtenu à partir de l'alcool vanillique et de l'ester éthylique de DHA. 3006 3 1 3 H6C0 3" 2" 15 22, ......',-, 16 10 HO C30H4004, M = 464.64 Rf 0.24, Hexane/AcOEt 4/1. Huile 5 IR : NaCI (y, cm-1) : 3543, 3435, 3004, 2962, 2924, 1733, 1603, 1518, 1429, 1272,1156. RMN 1H, (CDCI3, 400 MHz) Ô (ppm) :1.00 (t, 3H, J = 7.5 Hz, CH3), 2.10 (m, 2H, H21a, H21b), 2.42 (m, 4H, H2a, H2b, H3a, H3b), 2.77-2.96 (m, 10H, H6a, H6b, H9a, H9b, H12a, H12b, H15a, H15b, H18a, H18b), 3.92 (s, 3H, 10 OCH3), 5.06 (s 2H, M'a, Htb), 5.31-5.46 (m, 12H, H4, H5, H7, H8, H10, H11, H13, H14, H16, H17, H19, H20), 5.65 (s, 1H, OH), 6.89 (d, 1H, J = 1.7Hz, H5" ou H6"), 6.91 (s, 1H, H2"), 6.91 (d, 1H, J = 1.7 Hz, H5" ou H6"). RMN 13C, (CDCI3, 100.6 MHz) Ô (ppm) : 14.6 (C-22), 21.0 (C-21), 23.2 (C- 3), 25.9, 26.0 (C-6, C-9, C-12, C-15, C-18), 34.7 (C-2), 56.3 (OCH3), 66.8 15 11, C-13, C-14, C-16, C-17, C-19, C-20, C-1"), 146.2, 146.9 (C-3", C-4"), 173.4 (C-1). HRMS-ESI, calculé pour C301-140Na04 487.2819 (M+Na)+, trouvé 487.2827. 20 - Etude in vivo du passage des esters d'acides gras et d'alcools phénoliques de l'aliment à l'organisme (souris) et de leurs effets: Les molécules ciblées dans ces exemples sont les esters des alcools 25 vanillique et homovanillique. Afin d'étudier leurs effets biologiques, les esters produits et purifiés ont été incorporés dans des margarines (0,5% w/w) utilisées pour la fabrication de croquettes destinées à l'alimentation de 60 souris, réparties en 6 lots. Ces tests ont été menés afin de savoir si les esters agissent sur le poids des (C-1'), 111.7, 114.7, 122.5 (C-2", C-5", C-6"), 127.4, 128.3, 128.5, 128.5, 128.5, 128.6, 128.7, 128.7, 129.0, 129.7, 132.4, (C-4, C-5, C-7, C-8, C-10, C- souris et s'ils franchissent les barrières gastrique et intestinale. . Les souris ont ainsi pu disposer de l'aliment ad libitum. L'étude a débuté par des tests témoins servant de référence : enrichissement de la margarine utilisée pour la préparation des croquettes avec des acides gras insaturés seuls (Figure 2, margarine non enrichie [courbe A], enrichissement en ester éthylique de DHA [courbe B] ou en oléate d'éthyle [courbe C]), enrichissement de la margarine avec des alcools phénoliques (Figure 3, alcool homovanillique [courbe D] ou alcool vanillique [courbe E]). Une comparaison est faite avec la prise pondérale obtenue avec des croquettes imprégnées de margarine non enrichie. La figure 2 montre que les souris ayant consommé les croquettes imprégnées de margarine enrichie en ester éthylique de DHA présentent une évolution pondérale similaire à celle des souris ayant consommé les croquettes imprégnées de margarine non enrichie. En revanche, les souris ayant consommé les croquettes imprégnées de margarine enrichie en oléate d'éthyle présentent une prise pondérale moins importante que les lots précédents. Une perte de poids est même observée au cours des 12 premiers jours d'étude, suivie d'une difficile reprise de poids. En conclusion, la prise d'ester éthylique de DHA ne modifie pas la prise de poids des souris mais la prise d'oléate d'éthyle pourrait avoir une action antinutritionnelle. La figure 3 montre une augmentation du poids des souris ayant consommé des croquettes enrichies en alcool vanillique ou alcool homovanillique dans les premiers jours. Après 6 semaines, les poids moyens des 3 lots de souris sont similaires. Les composés de l'invention sont également utilisés : des régimes à base de croquettes imprégnées de margarine enrichie, soit en ester homovanillique de DHA (exemple 1, figure 4, courbe F) soit en ester vanillique de DHA (exemple 2, figure 4, courbe G), ont été administrés à deux lots de souris (Figure 4). Des régimes à base de croquettes imprégnées de margarine enrichie, soit en ester homovanillique d'acide oléique (figure 5, courbe H) soit en ester vanillique d'acide oléique (figure 5, courbe J), ont été administrés à deux autres lots de souris (Figure 5). D'après la figure 4, le suivi du poids moyen des souris alimentées avec des croquettes enrichies en ester vanillique de DHA, exemple 2 de l'invention, indique une augmentation régulière et similaire à celle observée dans le cas d'une alimentation avec des croquettes imprégnées de margarine non enrichie. Dans le cas d'un enrichissement de l'alimentation en ester homovanillique de DHA, exemple 1 de l'invention, une prise de poids est également observée, même si elle est inférieure par rapport aux deux autres lots. La figure 5 montre que les résultats obtenus indiquent une prise de poids supérieure dans le cas des régimes enrichis en esters de phénol et d'acide oléique par rapport au régime à base de margarine non enrichie. L'apparent effet antinutritionnel relevé dans le cas de l'oléate d'éthyle (Figure 2, courbe C) n'est pas observé dans le cas des esters phénoliques selon l'invention. Cette étude in vivo montre l'absence d'effet « antinutritionnel » des composés selon l'invention. - Influence des régimes sur les compositions en acides gras des membranes érythrocytaires : Des souris ont été exposées à différents régimes alimentaires. À partir de prélèvements de sang, les acides gras des membranes cellulaires (très majoritairement de type érythrocytaire) ont été extraits et dosés par chromatographie en phase gazeuse. Les résultats sont montrés sur la figure 6 qui représente le pourcentage de DHA dans les membranes érythrocytaires des souris soumises aux différents régimes. CTRL : régime standard DHA-EE : régime supplémenté en ester éthylique de DHA. DHA-VE : régime supplémenté en ester vanillique de DHA. Les mesures ont été réalisées sur les échantillons sanguins prélevés avant (DO) ou au terme de la supplémentation de 30 jours (D30). La figure 6 montre qu'une alimentation enrichie en ester vanillique de DHA conforme à l'invention conduit à une concentration en DHA dans le sang circulant supérieure à celle obtenue dans le cas d'une alimentation enrichie en ester éthylique de DHA. Cela permet d'avancer que le greffage de l'alcool vanillique sur le DHA augmenterait la biodisponibilité de ce dernier. De plus, en ce qui concerne l'effet antioxydant protecteur de l'alcool vanillique, cela permet d'avancer que le DHA, sous forme d'ester, serait plus stable, moins dégradé, et les quantités de DHA réellement ingérées seraient supérieures à celles introduites par le biais d'une alimentation enrichie en ester éthylique de DHA. - Etude in vitro de l'activité neuroprotectrice des acides gras, des alcools phénoliques et des esters d'acides gras et d'alcools phénoliques : Des expérimentations in vitro visant à évaluer le potentiel neuroprotecteur des esters d'acides gras et d'alcools phénoliques synthétisés selon l'invention ont été menées selon le test de l'activité mitochondriale au MTT, sur des neurones sains et des neurones exposés au stress amyloïde en les cultivant durant 24h dans du milieu conditionné de cellules humaines HEK- hAPP. Ces cellules recombinantes surexpriment la protéine APP humaine, précurseur du peptide Ap, et disposent des enzymes assurant le clivage protéolytique capable de produire le peptide amyloïde-8 (Ap) ainsi retrouvé en concentrations nanomolaires dans le milieu. Dans tous les cas, les neurones en culture sont prétraités durant 48h avec du DHA sous forme libre ou estérifiée à la concentration de 0,5 pM, concentration identifiée comme celle offrant le meilleur niveau neuroprotecteur selon Florent et al. (2006). Cette étape a été montrée nécessaire pour la protection contre le stress amyloïde, permettant l'incorporation de l'acide gras dans la bicouche phospholipidique des membranes neuronales. Le milieu de culture est alors remplacé par le milieu conditionné des cellules HEK-hAPP pendant 24h supplémentaires, délai après lequel la viabilité des neurones est évaluée par le test colorimétrique au MTT. On mesure ainsi l'effet de l'ester vanillique de DHA (DHA-Van) (exemple 2 de l'invention) sur la viabilité de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde (essai DHA-van et essai DHA-van + A13). A titre comparatif et de contrôle positif, on mesure l'effet du DHA sur la viabilité de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde (essai DHA et essai DHA + A13). Ces résultats sont comparés à la viabilité de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde (essai 0 et essai A13). Les résultats sont représentés sur la figure 7. A titre comparatif, on mesure également l'effet de l'alcool vanillique (Van) sur la viabilité de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde (essai Van et essai Van + A13). Les résultats sont représentés sur la figure 8. On mesure également l'effet de l'ester homovanillique de DHA (DHAHomovan) (exemple 1 de l'invention) sur la viabilité de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde (essai DHA-Homovan et essai DHAHomovan + A13). A titre comparatif, on mesure également l'effet de l'alcool homovanillique (Homovan) sur la viabilité de neurones primaires de rats exposés ou non au stress Al3 (essai Homovan et essai Homovan + A13). Les résultats sont représentés sur la figure 9. Ces différents essais montrent que, dans le cas des esters vanilliques de DHA (composé de l'exemple 2 de l'invention) un effet protecteur identique à celui obtenu avec le DHA seul est observé. Ceci indique que l'activité et la biodisponibilité du DHA sont conservées lorsque celui-ci est administré sous forme d'ester phénolique. Par ailleurs, d'une manière surprenante et inattendue, les esters vanilliques de DHA selon l'invention ne présentent aucune cytotoxicité vis-à-vis des neurones. En effet, au vu des concentrations élevées en composés phénoliques, on aurait pu craindre un effet toxique de ces molécules. Une étude identique a été réalisée dans le cas des esters homovanilliques de DHA (composé de l'exemple 1 de l'invention). - Mise en évidence de l'intérêt du greffage enzymatique : Afin de mettre en évidence l'intérêt de l'association phénol-DHA par rapport à un simple mélange de ces deux familles de molécules, une étude in vitro similaire à la précédente a été menée en exposant les cellules neuronales à des mélanges. Les résultats ont été comparés avec ceux précédemment présentés. Plus précisément, on mesure l'effet de l'ester vanillique de DHA (exemple 2 de l'invention) sur la viabilité de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde (essai DHA-Van et essai DHA-Van + A13), comparé à l'effet d'un mélange de DHA et d'alcool vanillique sur la viabilité de neurones primaires de rats exposés ou non au stress amyloïde (essai DHA + Van et essai DHA + Van + A13). Les résultats sont représentés sur la figure 10. Les résultats montrent que, d'une manière surprenante et inattendue, on observe un effet bénéfique cumulatif sur la viabilité des neurones dans le cas de l'ester vanillique de DHA, par rapport au DHA seul ou au mélange DHA + alcool vanillique. Ceci mène à l'hypothèse selon laquelle l'ester vanillique de DHA pourrait exercer un effet synergique susceptible d'atténuer la mortalité résiduelle des neurones en culture primaire. Par ailleurs, ces résultats obtenus pour une concentration de 0,5 i.tM d'esters phénoliques de DHA sont comparables à ceux obtenus pour l'hydroxytyrosol à une concentration de 50 i.tM (exemple 2 de la demande de brevet WO 03/082259). Ils démontrent non seulement l'absence de toxicité des composés de l'invention (on aurait pu en effet s'attendre à une toxicité due à l'entité phénolique) mais également leur activité neuroprotectrice importante. - Etude des propriétés antioxydantes des esters de composés phénoliques et d'acides gras : L'effet protecteur des composés contre la scission de l'ADN, induite par le peroxyde d'hydrogène a été étudié. Les radicaux hydroxyles générés à partir du peroxyde d'hydrogène sous certaines conditions physiologiques, en présence de métaux de transition, entrainent des dommages oxydatifs de l'ADN. Dans cette étude, l'effet protecteur des composés phénoliques et de leurs esters contre la scission de l'ADN est déterminé en suivant la perte de la structure surenroulée du plasmide PCMV Neo (Origin, France), induite par les radicaux hydroxyles. Pour cela, 2 pL des composés d'intérêt sont dissous dans de l'éthanol et transférés dans un tube Eppendorf de 0,5 ml. Le solvant est évaporé sous un courant d'azote ; 2 pL d'eau distillée sont ajoutés et le tout est agité par vortex pendant 1 min. Les réactifs suivants sont alors ajoutés dans l'ordre suivant : 2pL de solution tampon (PBS 0,5 M, pH 7,4), 2 pL de la solution contenant le plasmide PCMV (Neo, 50pg / ml), 2pL de solution d'H202 (1mM) et 2pL de solution de FeSO4 (0,5mM). Le mélange obtenu (10 pL) contient le composé testé à 1pM, 0,1M de PBS, 10pg / ml d'ADN, 0,2mM d'H202 et 0,1mM de FeSO4 (concentrations finales). Ce mélange est incubé à 37°C durant 1h. Un blanc (ADN seul) et un contrôle (ADN+H202+FeSO4+PBS) sont préparés pour chaque essai. Après incubation, 2 pL du réactif "Orange Loading Buffer" (Jena Bioscience) sont ajoutés et le mélange est déposé sur un gel d'agarose préparé en dissolvant 0.7 % (masse/volume) d'agarose dans le tampon Tris-Acétate-EDTA (TAE). L'électrophorèse est réalisée dans une cuve horizontale à 80 V pendant 90 minutes, dans le même tampon. Les bandes sont visualisées sous une lumière UV et quantifiées par le logiciel de traitement d'image "Image J". Les résultats sont représentés sur la figure 11. La colonne 1 correspond au test ADN+FeSO4+PBS+H202 (contrôle); La colonne 2 correspond à l'ADN seul (blanc); La colonne 3 correspond au test ADN+FeSO4+PBS+H202+ alcool vanillique; La colonne 4 correspond au test ADN+FeSO4+PBS+H202+ ester vanillique de DHA (composé de l'exemple 2 de l'invention); La colonne 5 correspond à l'ADN linéaire. L'alcool vanillique et son ester permettent de maintenir 67% d'ADN natif, contre 36% dans le cas d'un milieu exempt de composé antioxydant. Ces résultats montrent l'intérêt des esters de l'invention et notamment les esters de DHA, qui présentent globalement des activités antioxydantes similaires à celles des alcools vanillique et homovanillique. Ceci montre que le greffage d'une chaîne grasse n'affecte pas le pouvoir antioxydant des composés phénoliques de l'invention. - Incorporation des esters phénoliques de DHA dans une matrice alimentaire : Une étude de vieillissement accéléré a été réalisée sur une matrice alimentaire de type margarine, contenant les esters phénoliques de DHA. L'oxydation de la matrice a été évaluée au cours du temps, grâce à des mesures d'indice de peroxyde. L'indice de peroxyde (IP) correspond à la quantité de peroxyde présent dans l'échantillon, exprimée en nombre de milliéquivalents d'oxygène actif contenus dans un kilogramme de produit et oxydant l'iodure de potassium avec libération d'iode (1 millimole / kg = 2 milliéquivalent/kg = 16 microgrammes/g). L'iode libéré en milieu acide est titré par une solution de thiosulfate de sodium. Pour réaliser cette étude, la phase lipidique de la margarine est extraite après fonte à 35°C, sous azote et soumise à une température de 150°C (étuve thermo-statée) en présence ou non de composé antioxydant, à l'abri de la lumière. Des prélèvements sont effectués au cours du temps pour déterminer l'indice de peroxyde. Pour cela, un mélange acide acétique - chloroforme (3-2, v/v ; 25 ml) est additionné à un échantillon de 1 à 5g de matière grasse. 1 ml d'une solution de KI saturée (5g/5m1 d'eau) est ajouté, et le mélange est agité pendant 1 min puis laissé au repos pendant 5 minutes, à l'abri de la lumière. 30 ml d'eau distillée sont ajoutés pour arrêter la réaction, puis 1 mL d'empois d'amidon à 1 % qui servira d'indicateur. L'iode libéré est titré sous agitation vigoureuse avec la solution de thiosulfate de sodium 0,001 N. Un essai à blanc est effectué sans matière grasse. Le résultat est exprimé comme suit : IP = (V-V0)x N x 1000/M VO : Volume de thiosulfate de sodium nécessaire pour titrer l'iode dans le blanc (mL) ; V : Volume de thiosulfate de sodium nécessaire pour titrer l'iode dans l'échantillon (mL) ; N : Normalité de thiosulfate de sodium ; M : Masse de l'échantillon. Les résultats sont présentés sur la figure 12 qui montre l'évolution de l'indice de peroxyde de margarines enrichies ou non, conservées à 150°C, à l'abri de la lumière. La courbe K correspond à la margarine seule. La courbe L correspond à la margarine + alcool vanillique. La courbe M correspond à la margarine + ester éthylique de DHA. La courbe N correspond à la margarine + ester éthylique de DHA + alcool vanillique. La courbe P correspond à la margarine + ester vanillique de DHA (composé de l'exemple 2 de l'invention). Les cinétiques d'oxydation les plus rapides sont observées pour la margarine seule et la margarine enrichie en ester éthylique de DHA. Un ralentissement significatif de l'oxydation est observé dans le cas des échantillons de margarine enrichie en alcool vanillique, en ester vanillique de DHA (composé de l'exemple 2 de l'invention) et avec un mélange d'alcool vanillique et d'ester éthylique de DHA. On confirme ainsi l'effet antioxydant de l'alcool vanillique. L'acylation du composé phénolique par le DHA pour obtenir un composé de l'invention n'affecte en rien son aptitude à stabiliser la matrice alimentaire. Ceci montre l'intérêt des composés selon l'invention pour la stabilisation et l'enrichissement de matrices alimentaires en acides gras polyinsaturés. REVENDICATIONS1. Composé de formule (I) R2 (I) où R1 est choisi parmi le groupe comprenant H, OH, OCH3 R3 est choisi parmi le groupe comprenant H, OH, OCH3 au moins l'un de R1 et R3 étant le groupe OCH3 R2 est H, OH R4 est H, OH R5 est une chaîne alkyle, alkényle, comportant de 1 à 4 atomes de carbone R6 est une chaîne linéaire alkyle, alkényle, comportant de 1 à 32 atomes de carbone. 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il présente un degré de pureté supérieur à 90%, de préférence supérieur à 95%, le degré de pureté étant mesuré par spectroscopie RMN du proton 1H à une fréquence de 400.1 MHz, le composé ayant été préalablement solubilisé dans du chloroforme deutéré. 3. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que R6 est une chaîne alkényle dans laquelle toutes les doubles liaisons présentent une configuration Z. 4. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que R2 est OH. 5. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que R1 et R4sont l'hydrogène. 6. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que R5 comprend de 1 à 2 atomes de carbone. 7. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que R6 est dérivé de l'acide docosahexaénoïque. 8. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, ce composé étant le (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-4,7,10,13,16,19-Docosahexaénoïque acide, (4- hydroxy-3-methoxyphenyl)ethyl ester. 9. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, ce composé étant le (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-4,7,10,13,16,19-Docosahexaénoïque acide, (4- hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl ester. 10. Procédé de synthèse d'un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, comprenant une étape de transestérification d'un alcool de formule (II) avec un ester R6COOR7, R7 étant un groupe méthyle ou éthyle. R5,--- OH R2 (Il) R1, R2, R3, R4, R5 et R6 étant définis ci-dessus, le procédé étant sans solvant. 11. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, pour utilisation comme médicament. 12. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif au moins un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, ou un de ses sels d'addition avec des acides minéraux et organiques ou avec des bases minérales ou organiques pharmaceutiquement acceptables. 13. Préparation alimentaire comprenant au moins un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 9. 14. Préparation cosmétique comprenant au moins un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 9. 15. Complément alimentaire comprenant au moins un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 9. 16. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, pour la fabrication de préparations alimentaires, cosmétiques et pharmaceutiques.