Brevet FR3007945A1 — publié le 20150109

L'invention concerne une méthode de conservation et/ou de conditionnement d'oeufs d'Ephestia Kuehniella dans laquelle les oeufs d'Ephestia Kuhniella sont maintenus sous atmosphère contrôlée, dans un contenant hermétique, et de préférence sous vide, ainsi que des oeufs d'Ephestia Kuehniella susceptibles d'être obtenus selon ladite méthode et un kit comprenant un contenant hermétique, lequel contenant hermétique comprend des oeufs d'Ephestia Kuehniella susceptibles d'être obtenus selon la méthode de l'invention. L'invention a aussi pour objet l'utilisation d'oeufs d'Ephestia Kuehniella susceptibles d'être obtenus selon la méthode de l'invention pour nourrir des prédateurs. L'agriculture et la sylviculture font régulièrement appel à des agents de contrôle biologiques pour protéger les productions végétales des ravageurs, des agents pathogènes ou des plantes adventices. Les agents de contrôle biologiques sont le plus souvent des organismes naturels antagonistes de ces ravageurs, tels que des phytophages (dans le cas d'une plante adventice), des parasitoïdes (arthropodes...), des prédateurs (nématodes, arthropodes, vertébrés, mollusques, chauves-souris...) ou des agents pathogènes (virus, bactéries, champignons...). Cette démarche nécessite de réintroduire l'agent de contrôle biologique, sous forme de prédateurs vivants et en nombre suffisant pour atteindre l'effet recherché. L'alimentation des agents de contrôle biologique est par conséquent déterminante dans le procédé d'élevage envisagé. Les oeufs d'Ephestia Kuehniella sont couramment utilisés pour l'élevage des agents de contrôle biologiques, en particulier de prédateurs (Macrolophus, Orius, coccinelles) ou de parasitoïdes (Trichogrammatidae). On sait donc déjà produire Ephestia Kuehniella de façon industrielle pour l'élevage d'entomophages. Cette proie de substitution est en outre de manutention facile du fait que les oeufs sont tous individualisés et se présentent sous forme d'une "poudre". Ephestia Kuehniella, ou pyrale de la farine, est un insecte de l'ordre des lépidoptères de 20 à 25 mm d'envergure. L'insecte adulte a une petite tête globuleuse, ses ailes antérieures sont grisâtres et satinées, avec des points noirs, et ses ailes postérieures, finement frangées, sont blanchâtres. La ponte débute juste après l'accouplement et peut produire 200 à 300 oeufs blancs et de forme elliptique. Ephestia Kuehniella vit jusqu'à deux semaines, même si son métabolisme est susceptible de changer avec la température. En effet, Ephestia Kuehniella peut rester vivante plus longtemps à des températures de -10°C voire -15°C, grâce à un phénomène d'hibernation. Il est donc possible de prolonger l'espérance de vie de population adultes d'Ephestia Kuehniella en les conservant au froid, puis de les placer dans des conditions appropriées pour la ponte lorsque cela est nécessaire. Cependant, la fréquence des pontes de cet insecte est elle aussi largement tributaire des conditions de température de la culture de cette pyrale. Dans les lieux chauffés, en l'absence d'hibernation ou de vie ralentie, on peut espérer obtenir 3 à 6 générations par an. Dans le cas d'hibernation ou de vie ralentie, le nombre de générations sera bien entendu moindre. Il reste donc difficile et coûteux de s'approvisionner régulièrement en oeufs d'Ephestia Kuehniella. L'approvisionnement en oeufs d'Ephestia Kuehniella étant le facteur limitant dans l'élevage des agents de contrôle biologiques, diverses approches ont été développées. Une première approche consiste à utiliser des aliments dits artificiels pour l'élevage des agents de contrôle biologiques, plus particulièrement des prédateurs. Ainsi, la demande W00049897 décrit l'utilisation de milieux nutritifs qui sont dépourvus de constituants obtenus à partir d'insectes. Cette méthode cependant ne fournit pas d'éléments nutritifs comparables aux proies habituelles des agents de contrôle biologiques, et pourrait nuire au bon développement des populations ainsi nourries. Une deuxième approche consiste à utiliser, pour l'élevage des agents de contrôle biologiques, des oeufs d'Ephestia Kuehniella transformés de façon à pouvoir être conservés. Par exemple, le brevet FR 2 460 620 décrit une méthode de préparation de parasitoïdes à partir d'oeufs d'Ephestia Kuehniella conditionnés. Dans la méthode de ce brevet, les oeufs d'Ephestia Kuehniella sont tués par les ultraviolets ou le froid, puis éventuellement conservés à 3 degrés pendant une durée maximale de 14 jours. Par ailleurs, la demande WO 2011/010308 utilise, en tant qu'aliment pour divers insectes auxiliaires, des oeufs d'insectes desséchés parmi lesquels des oeufs 5 d'Ephestia Kuehniella mélangés à des composés antiagglomérants. Néanmoins, ces formes de préparation et de conditionnement des oeufs d'Ephestia Kuehniella présentent l'inconvénient d'altérer la structure des oeufs, et probablement leurs qualités nutritives. En effet, il a été démontré, dans le cas particulier où les oeufs d'Ephestia Kuehniella étaient utilisés pour l'élevage de parasitoïdes, que la 10 conservation des oeufs pendant 30 jours à 3°C réduisait considérablement leur capacité à être parasités par des Trichogramma. Or, il est bien connu que les parasitoïdes ne peuvent se développer normalement sur des oeufs dont les tissus sont altérés. Ainsi, les formes connues de préparation et de conditionnement des oeufs d'Ephestia 15 Kuehniella conduisent à une altération des oeufs préjudiciable à leur utilisation ultérieure qui ne permet pas un stockage des oeufs sur une longue période. Il existe donc un besoin d'une méthode de conservation des oeufs d'Ephestia Kuehniella qui permette de les conserver sur une longue durée, sans altérer les propriétés nécessaires à l'élevage d'agents de contrôle biologiques, particulièrement 20 des prédateurs. Les utilisateurs cherchent le plus souvent à utiliser des oeufs qui ont conservé visuellement les caractéristiques des oeufs frais, telles que leur couleur blanche et une forme ovoïde intacte. On estime ainsi généralement que les propriétés des oeufs d'Ephestia Kuehniella sont conservées si ceux-ci restent blancs et ne s'affaissent pas au cours de la conservation. Ces caractéristiques sont facilement 25 mesurables visuellement par l'homme du métier, par exemple en comparant la couleur des oeufs après conservation avec celle des oeufs frais, qui sont blancs, et avec celle des oeufs laissés à température ambiante pendant plusieurs jours, par exemple au moins trois jours, qui quant à eux sont jaunes. Les Inventeurs ont ainsi découverts de façon surprenante qu'en conservant les oeufs d'Ephestia Kuehniella sous vide dans un contenant hermétique, il est possible de stocker ces oeufs de façon prolongée sans pourtant altérer leurs propriétés. Les oeufs d'Ephestia Kuehniella ainsi conservés restent blancs et ne s'affaissent pas, même après de longues périodes de conservation. L'invention a ainsi pour premier objet une méthode de conservation d'oeufs d'Ephestia Kuehniella caractérisée en ce que les oeufs d'Ephestia Kuhniella sont maintenus sous atmosphère contrôlée, dans un contenant hermétique. Au sens de la présente invention, on entend par « atmosphère contrôlée » une atmosphère dont la composition gazeuse est déterminée. La composition gazeuse de l'invention pourra en particulier comprendre des gaz rares, qui ont la propriété d'être inertes. Préférentiellement, l'atmosphère contrôlée de l'invention est un mélange gazeux comprenant au moins un des gaz compris dans la liste consistant en le diazote, l'argon, le protoxyde d'azote, l'hélium et le dioxyde de carbone. Par « diazote », on entend au sens de la présente demande le gaz formé de molécules diatomiques composées de deux atomes d'azote et noté N2. Par « argon », on entend au sens de la présente demande le gaz formé d'atomes d'argon et noté Ar. Par « protoxyde d'azote », on entend au sens de la présente demande le gaz formé de molécules composées de deux atomes d'azote et d'un atome d'oxygène et noté N20. Par « hélium », on entend au sens de la présente demande le gaz formé d'atomes d'hélium et noté He. Par « dioxyde de carbone », on entend au sens de la présente demande le gaz formé 25 de molécules composées de deux atomes d'oxygène et d'un atome de carbone et noté CO2. Afin d'obtenir une atmosphère contrôlée selon l'invention, l'homme du métier pourra ajouter au moins l'un de ces gaz à l'intérieur du contenant comprenant les 30 oeufs, par exemple par injection. De cette façon, la composition gazeuse à l'intérieur du contenant hermétique correspondra à un mélange de l'air ambiant et du ou des gaz injectés. La composition gazeuse est particulièrement avantageuse lorsqu'elle comprend peu de dioxygène, car ce type de composition permet de minimiser les processus d'oxydation. Plus précisément, les inventeurs ont déterminé que les oeufs présentent une meilleure conservation lorsque la composition gazeuse a une concentration d'02 de moins de 10 %. Préférentiellement, l'atmosphère contrôlée de l'invention est un mélange gazeux comprenant une concentration d'02 de moins de 15 %. En outre, les inventeurs ont établi que la conservation des oeufs est améliorée si la composition gazeuse à l'intérieur du contenant hermétique est enrichie en CO2. Préférentiellement, l'atmosphère contrôlée de l'invention est un mélange gazeux comprenant une concentration de CO2 d'au moins 2 %. Selon un mode de réalisation avantageux, la méthode de l'invention est caractérisée en ce que l'atmosphère contrôlée de l'invention est un mélange gazeux comprenant une concentration d'Oz de moins de 15 % et une concentration de CO2 d'au moins 2 %. En outre, les inventeurs ont observé que la conservation des oeufs, en particulier des oeufs d'Ephestia Kuhniella, est meilleure lorsque ces oeufs sont conservé sous vide. Selon un mode de réalisation particulier, les oeufs d'Ephestia Kuhniella sont maintenus en outre sous vide. Au sens de la présente invention, on entend par « sous vide » une dépression de l'intérieur du contenant par rapport à la pression extérieure au contenant dans des conditions de stockage. Au sens de la présente invention, la pression atmosphérique est la pression atmosphérique mesurée à l'altitude à laquelle se trouve le contenant. Préférentiellement, l'intérieur du contenant a une pression inférieure à la pression atmosphérique extérieure au contenant, Préférablement, la pression atmosphérique normale est la pression atmosphérique normalisée, à savoir 1013,25 hPa. Les Inventeurs ont en particulier découvert que les oeufs d'Ephestia Kuehniella pouvaient être stockés durablement lorsqu'ils étaient conservés sous vide. Selon un mode de réalisation avantageux, la méthode de l'invention est caractérisée en ce que le vide est compris entre 10% et 99% du vide absolu, préférentiellement 5 entre 20% et 80% du vide absolu. Au sens de la présente invention, 0% de vide correspond à la pression atmosphérique à l'extérieur du contenant, mesurée à l'altitude à laquelle se trouve le contenant. Préférentiellement, 0% de vide correspond à une pression à l'intérieur du contenant 10 hermétique de 1013,25 hPa. Au sens de la présente invention, le vide absolu correspond à une pression nulle. Au sens de la présente invention, les termes « contenant hermétique » signifient tout contenant qui une fois fermé empêche tout échange physico-chimique, en particulier 15 gazeux, entre l'intérieur et l'extérieur du contenant. En particulier, l'homme du métier choisira des contenants dont les matériaux et/ou l'agencement permettent d'éviter tout échange physico-chimique, en particulier gazeux, entre des systèmes soumis à des pressions différentes, tels que par exemple les contenants thermoplastiques. Par « thermoplastique » il est fait référence à un matériau 20 polymérique obtenu par polymérisation de monomères comprenant au moins un atome de carbone, et susceptible d'être, de manière répétée, ramolli par chauffage et durci par refroidissement. Un grand nombre de contenants hermétiques sont bien connus et régulièrement utilisés pour la conservation sous vide de matière organique, qu'il n'est donc pas nécessaire de décrire en détail ici. 25 Le contenant hermétique selon l'invention peut se présenter sous toute forme et sous toutes les dimensions adaptées au stockage des oeufs d'Ephestia Kuehniella. En particulier, le contenant selon l'invention peut être une boîte, une poche souple ou un flacon. Les Inventeurs ont par ailleurs découvert qu'il était possible d'améliorer la conservation des oeufs d'Ephestia Kuehniella, en les maintenant en outre dans un intervalle de températures appropriées. Selon un mode de réalisation avantageux, la méthode de l'invention est caractérisée en ce que les oeufs d'Ephestia Kuehniella sont en outre maintenus à une température comprise entre -18°C et -80'°C, préférentiellement entre -18°C et -50°C, encore préférentiellement entre -18°C et -30°C. Les Inventeurs ont été particulièrement surpris de trouver que les oeufs d'Ephestia Kuehniella peuvent être conservés selon la méthode de l'invention pendant plus de 150 jours sans que les propriétés des oeufs d'Ephestia Kuehniella ne s'en trouvent altérées. La méthode de l'invention est ainsi particulièrement avantageuse dans les cas où il s'avère nécessaire ou utile de conserver les oeufs d'Ephestia Kuehniella pendant une longue période, avant qu'ils ne soient utilisés. Selon un mode de réalisation avantageux, la méthode de l'invention est caractérisée en ce qu'elle est mise en oeuvre pendant plus de 60 jours, préférentiellement pendant plus de 120 jours, encore plus préférentiellement pendant plus de 150 jours. Selon un mode de réalisation avantageux, la méthode de l'invention est caractérisée en ce qu'elle est mise en oeuvre pendant 60 à 180 jours, préférentiellement 120 à 180 jours. L'invention a pour deuxième objet des oeufs d'Ephestia Kuehniella susceptibles d'être obtenus selon la méthode de l'invention. Les oeufs ainsi obtenus peuvent être utilisés dans toutes les méthodes d'élevages d'agents de contrôle biologiques connues, et remplace avantageusement les oeufs d'Ephestia Kuehniella frais ou conservés selon d'autres procédés. L'invention a par conséquent aussi pour objet l'utilisation d'oeufs d'Ephestia Kuehniella susceptibles d'être obtenus selon la méthode de l'invention pour nourrir des prédateurs. L'invention a pour autre objet un kit comprenant un contenant hermétique, lequel contenant hermétique comprend des oeufs d'Ephestia Kuehniella susceptibles d'être obtenus selon la méthode de l'invention. Figure 1 : Taux d'oeufs d'Ephestia Kuehniella affaissés, 96 heures après décongélation, en fonction de leur méthode de conservation. Dans la condition A, les oeufs sont conservés de manière classique (conservation au froid). Dans la condition B, les oeufs sont conservés selon la méthode de l'invention . Figure 2 : Taux d'oeufs d'Ephestia Kuehniella jaunis, 96 heures après décongélation, en fonction de leur méthode de conservation. Dans la condition A, les oeufs sont conservés de manière classique (conservation au froid). Dans la condition B, les oeufs sont conservés selon la méthode de l'invention. Figure 3 : Taux de fécondité d'Orius laevigatus selon leur alimentation. Dans la condition A, les larves sont nourries par des oeufs conservés de manière classique (conservation au froid). Dans la condition B, les larves sont nourries par des oeufs conservés selon la méthode de l'invention Figure 4 : Taux de transformation de larves d'Orius laevigatus en adulte selon leur alimentation. Dans la condition A, les larves sont nourries par des oeufs conservés de manière classique (conservation au froid). Dans la condition B, les larves sont nourries par des oeufs conservés selon la méthode de l'invention Les exemples suivants sont fournis ici à titre d'illustration et ne sont pas, sauf indication contraire, destinés à être limitatifs. Exemple 1 : Les oeufs d'Ephestia conservés selon la méthode de l'invention restent blancs et ne s'affaissent pas, contrairement aux oeufs conservés selon les méthodes de l'art antérieur. Selon une première condition A, des oeufs d'Ephestia sont introduits dans un contenant hermétique, puis congelés à une température comprise entre -30°C et - 18°C. Dans cette première condition, les oeufs ne sont donc pas conservés sous vide. Parallèlement, selon une deuxième condition B, des oeufs d'Ephestia sont introduits dans un contenant hermétique, puis ce contenant est mis sous vide de façon à obtenir entre 70% et 99% de vide. De l'azote est ensuite injecté dans le contenant hermétique de façon à obtenir entre 20% et 50% de vide. Les oeufs dans le contenant sont ensuite congelés à une température comprise entre -30°C et -18°C Les oeufs correspondant aux deux conditions sont stockés à une température comprise entre -30°C et -18°C pendant 1 à 7 mois. Tous les mois après le début de la congélation, un échantillon de chacune des deux conditions est décongelé, laissé à 25°C pendant 96 heures, puis l'affaissement des oeufs et leur coloration sont évalués, par observation sous loupe binoculaire, en les comparant à des oeufs frais. Le protocole suivit est le suivant : Des oeufs sont prélevés à partir des deux conditions décrites ci-dessus, grâce à un support collant (de type scotch ou post-it) marqué de manière à identifier les oeufs. Certaines zones du support collant peuvent ainsi être passées au préalable sur un tampon encreur pour que les oeufs soient visibles. Les oeufs sont ensuite laissés à 25°C pendant 96 heures. Le taux d'affaissement et le taux de jaunissement sont ensuite calculés après observation sous loupe binoculaire. Le taux d'affaissement correspond au nombre d'oeufs affaissés sur le nombre total d'oeufs dans l'échantillon observé. On considère qu'un oeuf est affaissé lorsqu'au moins 3/4 de sa forme n'est pas ovoïde. Le taux de jaunissement correspond au nombre d'oeufs jaunis (en comparaison avec des oeufs frais) sur le nombre total d'oeufs dans l'échantillon observé. Les résultats sont présentés dans les tableaux ci-dessous, ainsi que dans les figures 1 et 2. Temps de la Taux d'oeufs Taux d'oeufs affaissés Gain conservation affaissés Condition B : Sous vide entre -30°C et - Condition A : 18°C (en mois) Atmosphère normale 0 3,00% 3,45% 1 6,70% 5,68% 15,20% 3 8,70% 6,07% 30,20% 5 16,00% 7,06% 55,90% 7 22,20% 6,39% 71,20% Tableau 1 : Taux d'oeufs affaissés Le gain (G) correspondant est calculé par l'équation suivante : G= (Taux d'oeufs affaissés Condition B- Taux d'oeufs affaissés Condition A)*100/ Taux d'oeufs affaissés Condition A Temps de la Taux d'oeufs jaunis Taux d'oeufs Gain conservation entre Condition A : jaunis -30°C et -18°C Atmosphère Condition B : (en mois) normale Sous vide 0 4,20% 4,80% 1 6,10% 5,61% 8,09% 3 7,10% 6,67% 6,00% 5 7,80% 5,87% 21,00% 7 11,20% 7,31% 34,70% Tableau 2 : Taux d'oeufs jaunis Le gain (G) correspondant est calculé par l'équation suivante G= (Taux d'oeufs jaunis Condition B- Taux d'oeufs jaunis Condition A)*100/ Taux d'oeufs affaissés Condition Conclusion : Les proportions d'oeufs affaissés ou jaunis sont plus importantes lorsque les oeufs ont été simplement conservés au froid, plutôt que lorsqu'ils ont été conservés selon la méthode de l'invention. La différence entre les deux types de méthode est d'autant plus importante que la durée de conservation est longue. La méthode de l'invention permet ainsi de conserver des oeufs pendant de longues durées, sans altérer leurs propriétés, contrairement aux méthodes déjà connues. Exemple 2: Les oeufs d'Ephestia conservés selon la méthode de l'invention permettent d'obtenir une population de prédateurs plus féconde qu'avec des oeufs conservés selon une méthode classique. Des adultes Orius laevigatus (femelles) sont élevées dans les conditions standards suivantes : 25°C / 75% HR ; photopériode L:D=16:8 Élevage en boîtes aérées de surface 0,017 m2 Les Orius laevigatus sont nourries pendant 10 jours: - soit avec des oeufs ayant été conservés selon la condition A de l'exemple 1, (ci-après « condition A ») soit avec des oeufs ayant été conservés selon la condition B de l'exemple 1, (ci-après « condition B ») La fécondité journalière des femelles Orius laevigatus est suivie pendant 10 jours. La fécondité journalière moyenne pour chacune des deux conditions ci-dessus est représentée figure 3. Conclusion : La fécondité journalière des Orius laevigatus est plus importante lorsque les oeufs ont été conservés selon la méthode de l'invention (condition B), plutôt que lorsqu'ils ont été conservés selon la méthode de l'art antérieur (condition A). Les oeufs conservés selon la méthode de l'invention sont plus nutritifs et permettent une plus grande fécondité des prédateurs que les oeufs conservés de façon classique. Exemple 3 : Les oeufs d'Ephestia conservés selon la méthode de l'invention permettent d'obtenir une meilleure survie des larves de prédateurs qu'avec des oeufs conservés selon une méthode classique. Des larves de Orius laevigatus sont élevées dans les conditions standard suivantes : - 25°C / 75% HR ; photopériode L:D=16:8 - Élevage en boîtes aérées de surface 0,017 m2 Les larves d'Orius laevigatus sont nourries pendant 14 jours: soit avec des oeufs ayant été conservés selon la condition A de l'exemple 1, (ci-après « condition A ») soit avec des oeufs ayant été conservés selon la condition B de l'exemple 1, (ci-après « condition B ») La survie des larves Orius laevigatus est évaluée par le pourcentage de larve atteignant le stade adulte, aussi appelé taux de transformation des larves en adulte. Le nombre de larves passant au stade adulte est mesuré pendant 14 jours. Le taux de REVENDICATIONS1) Méthode de conservation d'oeufs d'Ephestia Kuehniella caractérisée en ce que les oeufs d'Ephestia Kuhniella sont maintenus sous atmosphère contrôlée, dans un contenant hermétique. 2) Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'atmosphère contrôlée est un mélange gazeux comprenant au moins un des gaz compris dans la liste consistant en le diazote, l'argon, le protoxyde d'azote, l'hélium et le dioxyde de carbone. 3) Méthode selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l'atmosphère contrôlée est un mélange gazeux comprenant une concentration d'02 de moins de 15 % et une concentration de CO2 d'au moins 2 %. 4) Méthode selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que les oeufs d'Ephestia Kuehniella sont maintenus à une température comprise entre 18°C et -80°C°C. 5) Méthode selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que la pression dudit vide est comprise entre 20% et 99% de vide. 6) Méthode selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle est mise en oeuvre pendant plus de 60 jours, préférentiellement pendant plus de 120 jours, encore plus préférentiellement pendant plus de 150 jours. 7) OEufs d'Ephestia Kuehniella susceptibles d'être obtenus selon la méthode de l'une des revendications 1 à 6. 8) Utilisation d'oeufs d'Ephestia Kuehniella selon la revendication 7 pour nourrir des prédateurs. 9) Kit comprenant un contenant hermétique, caractérisé en ce que ledit contenant hermétique comprend des oeufs d'Ephestia Kuehniella susceptibles d'être obtenus selon l'une des revendications 1 à 7.5