Brevet FR3004189A1 — publié le 20141010

La présente invention concerne le domaine technique des complexes de lanthanide. En particulier, la présente invention concerne des complexes de lanthanide comprenant au moins deux groupes bétaïnes sur leur partie organique, leur conférant des propriétés intéressantes en termes de solubilité dans l'eau et les milieux biologiques et permettant de limiter, voire supprimer les phénomènes d'adhésion non spécifique avec les biomolécules (protéines...) ou les parties lipophiles des cellules, autorisant notamment leur utilisation dans des applications biologiques. Certains complexes de lanthanide présentent des propriétés spectroscopiques remarquables (bandes d'émission fines caractéristiques d'un métal donné et à durée de vie longue) et sont, de ce fait, des composés à très fort potentiel pour des applications en imagerie biologique (S. V. Eliseeva, J.-C. G. Bünzli, Chem. Soc. Rev. 2010, 39, 189). Ces composés luminescents peuvent être utilisés seuls pour des applications en imagerie par microscopie de fluorescence mono- ou biphotonique, ou bien en conjonction avec un fluorophore approprié pour réaliser des expériences de FRET (F6rster/Fluorescence Resonant Energy Transfer). Dans ce dernier cas, les complexes de lanthanide sont généralement sous la forme d'un complexe conjugué à une biomolécule. Ces deux techniques peuvent éventuellement être résolues en temps grâce à la durée de vie longue des lanthanides, ce qui constitue un avantage important pour améliorer la détection en s'affranchissant de signaux de fluorescence parasites à durée de vie courte (C. P. Montgomery B. S. Murray, E. J. New, R. Pal, D. Parker, Acc. Chem. Res. 2009, 42, 925. E. G. Moore, A. P. S. Samuel, K. N. Raymond, Acc. Chem. Res. 2009, 42, 542.). De très nombreux composés de lanthanide luminescents ont été décrits dans la littérature pour de telles applications (M. Latva, H. Takalo, V.-M. Mukkala, C. Matachescu, J.C. Rodriguez-Ubis, J. Kankare, J. Lumin., 1997 75 149-169 ; A. Picot, A. D'Aléa, P. L. Baldeck, A. Grichine, A. Duperray, C. Andraud, O. Maury, J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 1532) et certains sont commercialisés comme des dérivées du DTPA (diéthylène triamine penta acide, US 5,622,821), des composés à base de pyridine ou poly-pyridine (US 4,920, 195 ; US 4,761,481 ; US 5,216,134 ; 3004 189 2 US 4,859 , 777 ; US 5,202,423 ; US 5,324,825), ou encore des cryptates macrocycliques (EP 0 180 492 ; EP 0 321353 ; EP 0 601 113 ; WO 2001/96877 ; WO 2008/063721). Par le passé, les complexes de lanthanides avaient une structure simple 5 avec peu de carbone, étaient généralement chargés, et de ce fait étaient donc solubles dans l'eau. Avec les développements de ces dernières années, des complexes fonctionnalisés ont été développés pour optimiser leurs propriétés spectroscopiques, déplacer leur absorption vers le visible et optimiser leur absorption biphotonique. De plus en plus, des antennes 10 fonctionnelles généralement conjuguées et/ou aromatiques comportant un grand nombre de carbone sont introduites, ce qui conduit à des composés lipophiles, donc non solubles dans l'eau (C. Andraud, O. Maury Eur. J. Inorg. Chem. 2009, 4357-4371). Pour augmenter l'hydrosolubilisation des complexes de lanthanides, 15 différentes approches ont été développées. Une approche consiste à introduire des groupements polyéthylène glycol (PEG) en tant que groupements hydrosolubilisants. A. Picot, A. D'Aléo, P.L. Baldeck, A. Grichine, A. Duperray, C. Andraud et O. Maury, dans J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 1532453,3 utilisent cette approche dans le cas de complexes de lanthanide 20 dont la complexation est assurée par trois ligands intégrant un groupe 2,6- pyridine-diacide carboxylique. L'introduction de groupements PEG est également envisagée dans C. R. Chim., 2010, 13, 681-690, Inorg. Chem., 2011, 50, 4987-4999 et Angew. Chem, In. Ed. 2012, 51, 6622 -6625 La demande de brevet WO 2013/011236, relative à des composés de 25 lanthanide fortement luminescents dont certains sont basés sur un cycle 1,4,7-triazacyclononane (TACN) substitué par des chromophores à base de pyridine conjuguée, utilise également des groupement PEG. Les complexes décrits sont très stables dans l'eau et la présence de groupements PEG assure leur bonne solubilité. 30 Ces ligands macrocycliques fonctionnels conduisent notamment à la formation de complexes d'europium qui présentent une brillance très élevée à 337 nm (la brillance est définie par le produit du rendement quantique par 3004 189 3 l'absorption à la longueur d'onde d'intérêt, ici 337nm), 337 nm correspondant à la longueur d'onde d'excitation du laser azote utilisé pour les applications commerciales (J. W. Walton, A. Bourdolle, Si. Butler, M. Soulier, M. Delbianco, B.K. McMahon, R. Pal, H. Puschmann, J.M. Zwier, L. Lamarque, 5 0. Maury, C. Andraud and D. Parker Chem. Commun. 2013, 49, 1600-1602). Ces composés peuvent également être pourvus d'une fonction réactive, pour être éventuellement conjugués par liaison covalente à une molécule d'intérêt, telle qu'une biomolécule. Dans ce cas, les composés ont pour finalité d'être liés de manière covalente à une biomolécule, en vue de réaliser 10 des expériences de FRET (applications HTRF® commercialisées par CISBIO BIOASSAYS). Cependant, ces composés présentent deux inconvénients majeurs : 1) dans le cadre de leurs recherches, les inventeurs ont observé que ces complexes s'adsorbent de manière non spécifique sur les biomolécules, 15 ce qui complique la préparation de biomolécules conjuguées. Ce phénomène se retrouve également dans les expériences d'imagerie par microscopie mono ou bi-photonique réalisées sur des cellules fixées. Dans ce cas, une accumulation spécifique de ces composés dans les membranes et/ou organelles lipophiles est constatée. Les inventeurs de la présente invention 20 ont associé cet inconvénient à la présence de groupements PEG. 2) De plus, ces composés sont préparés par une voie de synthèse convergente donc peu versatile, longue et d'efficacité modeste. D'autres solutions proposent de solubiliser les complexes de lanthanides par introduction de groupements chargés anioniques. Dans Inorg. Chem. 25 2009, 48(9), 4207-4218, l'hydrosolubilisation est assurée par des groupements -S03", alors que dans Inorg. Chem., 2009, 48, 4601-4603 l'hydrosolubilisation est assurée par des groupements -0O3-. Dans ces exemples, l'introduction de groupements anioniques permet d'assurer une bonne hydrosolubilisation, le problème de l'adsorption non spécifique n'est 30 pas abordé et aucun exemple ne décrit leur comportement en présence de bioconjugués. La présente invention se propose de fournir de nouveaux complexes de lanthanide fluorescents qui présentent une solubilité satisfaisante dans l'eau et donc en milieux physiologiques et biologiques, mais qui ne présentent pas l'inconvénient des solutions antérieures utilisant des groupements PEG pour lesquels les inventeurs ont constaté une tendance à adhérer aux biomolécules, aux membranes cellulaires et, plus généralement, aux parties hydrophobes présentes en grand nombre dans les biomolécules et milieux biologiques. Dans ce contexte, l'invention concerne des complexes de lanthanide 10 luminescents comportant un agent chélatant, formé d'un macrocycle ou d'un ensemble de ligands, complexant un ion lanthanide Ln3+, caractérisés en ce que l'agent chélatant est substitué par au moins deux groupes bétaïne. A titre d'exemple d'ion lanthanide Ln3+, on peut citer Eu3+, Sm3+, Tb3+ ou Dy3+. 15 Dans le cadre de l'invention, la solubilisation des complexes de lanthanide en milieu aqueux est assurée par des groupes hydrosolubilisants zwitterioniques de type bétaïne. La présente invention propose une fonctionna lisation de complexes de lanthanide avec deux groupes bétaïne ou plus. Cette fonctionnalisation 20 permet de solubiliser les complexes de lanthanide dans l'eau et les milieux biologiques et permet d'éviter les phénomènes d'adhésion non spécifiques avec des biomolécules et les organelles. Cette fonctionnalisation peut être appliquée à tous types de complexes de lanthanide. De plus, dans le cadre de l'invention, il a été démontré que la présence de groupes bétaïne 25 n'affectait pas les propriétés de luminescence des complexes. Certes, des bétaïnes, en très grand nombre, avaient déjà été utilisées pour fonctionnaliser des nano-objets comme des nanoparticules paramagnétiques ou des quantum dots (H. Wei, N. Insin, J. Lee, H.-S. Han, J. M. Cordero, Wenhao Liu, M. G. Bawendi Nano Lett. 2012, 12, 22-25 ; E. 30 Muro, T. Pons, N. Lequeux, A. Fragola, N. Sanson, Z. Lenkei, B. Dubertret J. Am. Chem. Soc 2010, 132, 4556-4557). Cependant, dans ce type de nana-objets polyforictionnels, il est impossible de savoir si la limitation des 3004 189 5 phénomènes d'adhésion non spécifiques observés pouvait découler de la nature même du groupe bétaïne ou de la présence simultanée d'un très grand nombre de ces fonctions (phénomène dit de multivalence). Ainsi, en l'état actuel des connaissances, il était totalement impossible de prédire le 5 comportement de petites molécules, tels que des complexes de lanthanides, fonctionnalisées par des groupes bétaïne. Dans la littérature, des groupes bétaïne ont également été introduits sur des chromophores organiques (cyanines, bodipy) pour les rendre solubles dans l'eau, mais rien n'est décrit concernant une éventuelle propriété de non adhésion. La propriété de non 10 adhésion obtenue pour des composés moléculaires, comme c'est le cas dans le cadre de l'invention, n'était donc nullement prévisible. Un groupe bétaïne est défini comme un groupement zwittérionique dans lequel l'atome portant la charge positive ne porte pas d'atome d'hydrogène et n'est pas adjacent à l'atome porteur de la charge négative. 15 Dans le cadre de l'invention par bétaïne, on entend, par exemple, les groupements zwittérioniques associant un cation ammonium, ou iminium aromatique, généralement pyridinium, imidazollium, et un groupement anionique de type sulfonate, phosphonate ou carboxylate, de préférence sulfonate. Le cation et l'anion sont espacés par au moins un chainon CH2, et 20 de préférence par une chaine alkyle bivalente (également nommé alkylène) comprenant de 1 à 4, voire de 1 à 6, atomes de carbone. A titre d'exemple de groupe bétaïne, on peut citer les groupes de formule : e .,(---.)...'_--,. / \/(il R ---N ci SO3- S03- , avec R qui représente un groupe alkyle de 1 à 6 atomes de carbone, et 25 de préférence un méthyle ou éthyle, et q qui est égal à 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, et de préférence qui est égal à 1 ou 2. Le groupe -N(CH3)2+-(CH2)3-503- est préféré. De manière avantageuse, les complexes de lanthanide selon l'invention comporte un agent chélatant substitué par au plus 12 groupes bétaïne, par 30 exemple 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou 11 groupes bétaïne. 3004 189 6 Par ailleurs, les complexes selon l'invention peuvent également être pourvus d'une fonction réactive, pour permettre leur conjugaison par liaison covalente à une molécule d'intérêt, telle qu'une biomolécule. Par fonction réactive, on entend une fonction permettant un greffage covalent sur une 5 fonction réactive présente sur une biomolécule (amine, alcool, thiol, acide carboxylique, fonctions insaturées...). Les différentes fonctions permettant une telle bio-conjugaison sont bien connues de l'Homme de l'Art et sont décrites, par exemple, dans Bioconjugate Techniques, G.T. Hermanson, Academic Press, 1996, 137-166. De manière préférée, cette fonction réactive sera une fonction amine, un ester activé, un groupement azido. En particulier, les complexes de lanthanide selon l'invention comporteront un agent chélatant substitué par au moins une, et en particulier une seule, fonction réactive permettant son couplage par liaison covalente à une biomolécule, la dite fonction réactive étant, de préférence choisie parmi - COOH, -NH2, un acrylamide, une amine activée, un ester activé, un aldhéhyde, un halogénure d'alkyle, un anhydride, une aniline, un azide, une aziridine, un acide carboxylique, un diazoalcane, un haloacétamide, une halotriazine, une hydrazine, un imido ester, un isocyanate, un isothiocyanate, un maléimide, un halogénure de sulfonyle, un thiol, une cétone, une amine, un halogénure d'acide, un ester d'hydroxysuccinimidyle, un ester de succinimidyle, un ester d'hydroxysulfosuccinimidyle, un azidonitrophényle, un azidophényle, un 3-(2-pyridyl dithio)-propionamide, un glyoxal, une triazine, un groupe acétylénique, et les groupes de formule : eN4CH2)--NCS H v w 0 --(-LN+ECH2)-NCO H v vv 0 CH23-* H2 0 H eN4CH2)-N3 H v w 0 H v w O eN+,CE12---S-S-Ar 1-1 v w 0 S-.)-4CH2)-NH- Ar H v w 0 v w O NCS C H2 H 0 -(1-N ) (CH2 1-1 0 CI N--)-(CH2)-NH H v w N-( 1(N CI dans lesquels w est un entier appartenant à la gamme allant de 0 à 8 et est égal à 0 ou 1, et Ar est un hétérocycle à 5 ou 6 chaînons saturé ou insaturé, comprenant 1 à 3 hétéroatomes, éventuellement substitué par un 5 atome d'halogène ; les fonctions réactives choisies parmi -COOH, -NH2, les esters de succinimidyle, les haloacétamides, les azides, les hydrazines, les isocyanates et les maléimides étant préférées. Par biomolécules, on entend les molécules d'intérêt biologique qu'il peut être avantageux de marquer grâce à un complexe luminescent, par exemple, les protéines, les peptides, les anticorps, les antigènes, les brins D'ADN, la biotine, la streptavidine. Les protéines sont les biomolécules qui seront le plus souvent liées aux complexes selon l'invention. Des exemples de complexes de lanthanide selon l'invention comportent un agent chélatant formé de trois ligands intégrant un groupe 2,6-pyridinediacide carboxylique ou formé d'un macrocycle à structure 1,4,7- triazacyclononane. En particulier, l'invention concerne les complexes de lanthanide choisis parmi les complexes de lanthanide de formule (Iv) : Chroml Chrom3 dans lesquelles : - Ln est un lanthanide, notamment Eu, Sm, Tb ou Dy, - Z représente -C- ou -PR3-, - R3 représente un groupe phényle, benzyle, méthyle, éthyle, propyle, n-butyle, sec-butyle, iso-butyle ou tert-butyle, et de préférence un groupe phényle ou méthyle, - Chromi, Chrom2 et Chrom3, identiques ou différents, sont choisis parmi 20 les groupements : C ' Arl ,-- 1)--- --) L ---- dans lesquels : - L1 représente une liaison directe, -C=C- ou -C-----C-, - Ar' représente un groupe aromatique choisi parmi les groupes phényle, thiophényle, furanyle, pyrrolyle, imidazolyle ou triazolyle, substitué par s groupes Ro identiques ou différents, -s est égal à 1, 2 OU 3, et - Ro est choisi parmi les groupes alkyle comprenant de 1 à 10, et de préférence de 1 à 6, atomes de carbone ; les groupes alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone porteurs d'au moins une fonction bétaïne et/ou d'une fonction réactive ; et les groupements électrodonneurs, notamment 0-donneurs, S-donneurs, NHCO-donneurs, SCO-donneurs, NHCS-donneurs, et SCS-donneurs, lesdits groupes électrodonneurs pouvant être porteurs ou non d'un ou plusieurs groupes bétaïne, et/ou d'une fonction réactive, étant entendu que lorsque tous les groupes Ad représentent un groupe phényle, au moins l'un de ces groupes phényle, de préférence deux, voire trois de ces groupes, est (sont) substitué(s) par au moins un groupe Ro 15 comportant un groupement électrodonneur ; caractérisés en ce qu'au moins deux des groupements Chroml, Chrom2 et Chrom3 sont substitués par au moins un groupe Ro porteur d'au moins un groupe bétaïne. De manière préférée, dans les complexes de formule (iv), Chroml, 20 Chrom2 et Chrom3 sont définis comme suit : a. Soit Chroml, Chrom2 et Chrom3, identiques ou différents, sont choisis parmi les groupements : Art avec Ad tel que défini pour les complexes de formule (Iv), (ce 25 qui correspond au cas où L1 représente une liaison directe ou covalente), b. Soit Chroml, Chrom2 et Chrom3, identiques ou différents, sont choisis parmi les groupements Art; )Art; et 3004 1 89 10 avec Art qui représente un groupe phényle, thiophényle, furanyle, pyrrolyle ou imidazolyle substitué par s groupes Ro identiques ou différents, s et Ro étant tels que définis pour les complexes de formule (1v). 5 Dans les complexes de formule (iv) selon l'invention, les substituants Ro, identiques ou différents, sont choisis, par exemple, parmi : -L2-Al k, -L2-L3-Q1 et -L2-1-3-Q2 ; - les groupements NHCO-donneurs choisis parmi : -NHCO(0A1k), -NHCO(NHAIk), -NHCO(NAlklAlk2), -NHCO(SAlk), 10 - les groupements SCO-donneurs choisis parmi -SCO(0A1k), -SCO(NHAlk), -SCO(NAlklAlk2), -SCO(SAIk), - les groupements NHCS-donneurs choisis parmi : -NHCS(0A1k), -NHCS(NHAIk), -NHCS(NAlk1A1k2), et - les groupements SCS-donneurs choisis parmi : -SCS(0A1k), -SCS(NHAIk), -SCS(NAIk1AIk2), -SCS(SAlk), Alk, Alkl et Alk2, identiques ou différents, sont des groupes alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, éventuellement substitués par au moins un groupe bétaïne, - C21 représente un groupe bétaïne ou un groupement ramifié porteur d'au moins deux groupes bétaïne, - L2 est une liaison directe, -0-, -S-, -NHCO-, -SCO-, -NHCS- ou -SCS- L.3 est un bras de liaison, et - Q2 est un groupe réactif susceptible de permettre la liaison covalente avec une molécule d'intérêt à marquer, étant entendu qu'au moins deux des substituants Ro présents sont porteurs d'au moins un groupe bétaïne, de manière à ce qu'au moins deux des groupements Chroml, Chrom2 et Chrom3 soient substitués par au moins un groupe Ro porteur d'au moins un groupe bétaïne. A titre d'exemple de groupement ramifié porteur d'au moins deux groupes bétaïne, on peut citer les groupes de formule suivante : avec u est qui égal à 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Dans les complexes de formule (iv) selon l'invention, il est possible que Chroml = Chrom2 = Chrom3 ou, de préférence, que Chroml = Chrom2 et 5 sont substitués par au moins un groupe Ro porteur d'au moins un groupe bétaïne et Chrom3 est substitué par au moins un groupement Ro porteur d'une fonction -L2-1-3-Q2, tel que défini précédemment, avec de préférence Q2 qui représente un groupe choisi parmi -COOH, -NH2, un acrylamide, une amine activée, un ester activé, un aldhéhyde, un halogénure 10 d'alkyle, un anhydride, une aniline, un azide, une aziridine, un acide carboxylique, un diazoalcane, un haloacétamide, une halotriazine, une hydrazine, un imido ester, un isocyanate, un isothiocyanate, un maléimide, un halogénure de sulfonyle, un thiol, une cétone, une amine, un halogénure d'acide, un ester d'hydroxysuccinimidyle, un ester de succinimidyle, un ester 15 d'hydroxysulfosuccinimidyle, un azidonitrophényle, un azidophényle, un 3-(2- pyridyl dithio)-propionamide, un glyoxal, une triazine, un groupe acétylénique, et les groupes de formule : S03- SO3 u H N 11 H C1-12 OS 0 -(1'N---)-(CH2)-NH2 H v w 0 H v w 12 O H v w 0 v w 0 eN+,C1-12)---S-S-Ar H v vv 0 H CH2-NH-Ar NOS 0 H v CH2 O kILN H 0 H v w 0 H v 0 --)LN CH2)--NH H CI-123-N w 0 O H NCO S03- HCH23 v w CI dans lesquels w est un entier appartenant à la gamme allant de 0 à 8 et v est égal à 0 ou 1, et Ar est un hétérocycle à 5 ou 6 chaînons saturé ou insaturé, comprenant 1 à 3 hétéroatomes, éventuellement substitué par un atome d'halogène ; Q2 étant de préférence choisi parmi -COOH, -NH2, les esters de succinimidyle, les haloacétamides, les hydrazines, les isocyanates et les maléimides étant préférées. Les complexes de formule (iv) selon l'invention, dans lesquels Li représente une liaison directe ou et les groupes Art, identiques ou différents, représentent chacun un groupe phényle, substitué par s groupes Ro identiques ou différents, avec s et Ro qui sont tels que définis pour les complexes de formule (Iv) sont des exemples de complexes selon l'invention. Les complexes de formule (iv) selon l'invention dans lesquels s est égal à 1 pour tous les groupes Art sont plus simples à synthétiser et seront préférés. A titre d'exemple de complexes de formule (Iv) selon l'invention, on peut citer ceux dont tous les groupes Art, identiques ou différents, représentent un groupe phényle choisi parmi les groupements Ro avec Ro tel que défini pour les complexes de formule (iv). L'invention concerne également les complexes de lanthanide de formule Chrom4 Chrom4 (iii) Chrom4 o dans laquelle : - Ln est un lanthanide, notamment Eu, Sm, Tb ou Dy, Chrom4 est choisi parmi les groupements Ar2i dans lesquels : - Lt représente une liaison directe, -C=C- ou 20 - Ar2 représente un groupe aromatique choisi parmi les groupes phényle, thiophényle, furanyle, pyrrolyle, imidazolyle ou triazolyle, lesdits groupes Ar2 étant substitués par s groupes R1 identiques ou différents, -s est égal à 1, 2 ou 3, et - R1 est choisi parmi les groupes alkyle comprenant de 1 à 10 atonies de carbone porteurs d'au moins un groupe bétaïne ; et les groupements électrodonneurs, notamment 0-donneurs, S-donneurs, NHCO-donneurs, SCO-donneurs, NHCS-donneurs, et SCS-donneurs, lesdits groupes électrodonneurs étant porteur d'un ou plusieurs groupes bétaïne, étant entendu que lorsque le groupe Ar2 représente un groupe phényle, il est substitué par au moins un groupe R1 comportant un groupement électrodonneur. Dans les complexes de formule (iii) selon l'invention, Ar2 est, par exemple, choisi c. soit parmi les groupements : Ar2 avec Ar2 tel que défini pour les complexes de formule (in) (ce qui correspond au cas où Li représente une liaison directe ou covalente), d. soit parmi les groupements : r" Inn 49 Ar2 I Ar2 et avec Ar2 qui représente un groupe phényle, thiophényle, furanyle, pyrrolyle ou imidazolyle substitué par s groupes identiques ou différents, s et R1 étant tels que définis les complexes de formule (iii). De manière préférée, dans les complexes de formule (III) selon l'invention, les substituants R1, identiques ou différents, sont choisis parmi : - -L2-Alk, 3004 189 15 - les groupements NHCO-donneurs choisis parmi : -NHCO(0A1k), -NHCO(NHAIk), -NHCO(NAlk1A1k2), -NHCO(SAlk), - les groupements SCO-donneurs choisis parmi : -SCO(0A1k), -SCO(NHAIk), -SCO(NAlk1Alk2), -SCO(SAIk), 5 - les groupements NHCS-donneurs choisis parmi : -NHCS(0A1k), -NHCS(NHAIk), -NHCS(NAlklAlk2), et - les groupements SCS-donneurs choisis parmi : -SCS(0A1k), -SCS(NHAIk), -SCS(NAlk1A1k2), -SCS(SAlk), - Alk, Alkl et Alk2, identiques ou différents, sont des groupes alkyle 10 comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, substitué par au moins un groupe bétaïne, - Q. représente un groupe bétaïne ou un groupement ramifié porteur d'au moins deux groupes bétaïne, - L2 est une liaison directe, -0-, -S-, -NHCO-, -SCO-, -NHCS- ou -SCS-, 15 - L3 est un bras de liaison. Dans les complexes de formule (iii) et (Iv) selon l'invention, L3 représente, de préférence, une liaison covalente, un groupe alkylène de 1 à 12 atomes de carbone, comprenant éventuellement une ou plusieurs double ou triple liaison; un groupe cycloalkylène de 5 à 8 atomes de carbone, un 20 groupe arylène de 6 à 14 atomes de carbone ; ou un enchainement de un ou plusieurs groupes alkylène de 1 à 12 atomes de carbone, cycloalkylène de 5 à 8 atomes de carbone et/ou arylène de 6 à 14 atomes de carbone ; lesdits groupes alkylène, cycloalkylène ou arylène pouvant ou non comprendre un ou plusieurs hétéroatomes tels que l'oxygène, l'azote, le soufre, le phosphore 25 ou un ou plusieurs carbamoyle ou carboxamido et/ou pouvant être non substitués ou substitués par un ou plusieurs groupe alkyle de 1 à 8 atomes de carbone, aryle de 6 à 14 atome de carbone, sulfonate ou oxo ; les bras de liaison suivants étant préférés : o o n m -CH2 0 ( CH2) o (CH2) O 0 --(0H2+0 (CH2H0 0 ---{CH2}-NH-&4CH2)- n P o O CH2H n P P CH2)-NH- 84C112- n O -(CH2).---NHCH2 °'1CF12-)--P 0 S (C1-12) r n est égal à 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, m, p et r, identiques ou différents, sont égaux à 1, 2 ou 3. Lorsque L2 et L3 représentent chacun une liaison directe (nommée indifféremment liaison covalente), -1-2-L3-Q1, correspond à -QI et -L2-L3-Q2 à -Q2 Dans les complexes de formule (Iv) et (I11) définis dans le cadre de l'invention, si Ln3+= Eu3+ ou Sm3+, dans ce cas, on choisira, de préférence, L1 qui représente qui conduit à des propriétés de luminescence appropriées. Dans les complexes de formule (1v) et (in) définis dans le cadre de l'invention, si Ln3+= Eu3+, Sm3+, Tb3+ ou Dy3+ (et, en particulier Tb3+ ou Dy3+), on choisira, de préférence, L1 qui représente une liaison directe (nommée également liaison covalente). Dans les complexes de formule (1v) et (I11) définis dans le cadre de l'invention, les groupes bétaïne présents sont, par exemple, des groupes zwittérioniques associant un cation ammonium, ou iminium aromatique, généralement pyridinium, imidazollium, et un groupement anionique de type sulfonate, phosphonate ou carboxylate, de préférence sulfonate. Le cation et l'anion sont espacés par au moins un chaînon CH2, et de préférence par une chaîne alkyle bivalente (également nommé alkylène) comprenant de 1 à 4, voire de 1 à 6, atomes de carbone. De préférence, les groupes bétaïne présents dans les complexes de formule (iv) et (lu) sont choisis parmi : / SO3 , avec R qui représente un groupe alkyle de 1 à 6 atomes de carbone, et de préférence un méthyle ou éthyle, et q qui est égal à 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, et de préférence qui est égal à 1 ou 2, le groupe -N(CH3)2+-(CH2)3-S03- étant préféré. L'invention a également pour objet : - les agents chélatants de formule (I) : Chrom1 avec Ra qui est un groupe protecteur des fonctions acides tel qu'un alkyle, 15 du type méthyle, et Z, Chroml, Chrom2 et Chrom3, identiques ou différents, qui sont tels que définis pour les composés de formule (iv) ; et - les ligands de formule (I) : Chrom4 0, _OR 'Z a 0R, Chrom3 Ra0,z O formule (II) Chrom2 O O (I) ORa ORa 3004 189 18 avec Ra qui est un groupe protecteur des fonctions acides tel qu'un alkyle, du type méthyle, et Chrom4 qui est tel que défini pour les composés de formule (IO. Dans le cadre de l'invention, par groupe « alkyle », à moins qu'il n'en 5 soit spécifié autrement, on entend une chaîne hydrocarbonée, saturée, linéaire ou ramifiée. A titre d'exemple de groupe alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, on peut citer, notamment, les groupes méthyle, éthyle, n-propyle, iso-propyle, n-butyle, tert-butyle, sec-butyle, n-pentyle, n-hexyle. Par « cycloalkyle », on entend un groupement hydrocarboné saturé ou 10 insaturé constitué d'au moins un cycle, éventuellement ponté. A titre d'exemple, on peut citer les groupes cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle, cyclohexyle, cycloheptyle, adamantyle et cyclohexene. Par groupe « aryle », on entend les groupes carbocycliques mono-, bi- ou polycycliques, comportant de préférence de 6 à 12 atomes de carbone, comprenant au moins un groupe aromatique, par exemple, un groupe phényle, cinnamyle ou naphtyle ; ainsi que les groupes hétéroaryle. Par groupe hétéroaryle, on entend un carbocycle mono-, bi- ou polycyclique, comportant de préférence de 6 à 12 chainons, et comprenant au moins un groupe aromatique et au moins un hétéroatome choisi parmi les atomes d'oxygène, azote ou soufre intégré au sein du carbocycle. A titre d'exemple de groupe hétéroaryle, on peut citer les 2-, 3- ou 4-pyridinyle, 2- ou 3- furoyle, 2- ou 3-thiophényle, pyrrolyle, imidazolyle, pyrazolyle, thiazolyle, oxazolyle, isoxazolyle, pyridinyle, pyrazinyle, pyrimidinyle, tétrazolyle, thiadiazolyle, oxadiazolyle, triazolyle, pyridazinyle, indolyle. Le phényle et le 1,2,3-triazole sont les groupes aryle particulièrement préférés. De manière avantageuse, les complexes selon l'invention sont luminescents. La luminescence correspond à une émission de lumière consécutive à un apport en énergie, en particulier par un apport de lumière. Cet apport en énergie fait passer des atomes ou molécules dans un état « excité » se situant à une énergie supérieure à celle qu'ils possèdent dans leur état normal dit « fondamental ». C'est lors du retour à leur état fondamental qu'ils peuvent émettre de la lumière. De manière générale, les 3004 189 19 complexes de lanthanide sont sensibilisés par effet d'antenne et la nature de l'antenne organique contrôle l'absorption de la lumière et permet d'optimiser la luminescence du lanthanide (S. V. Eliseeva, J.-C. G. Bürizli, Chem. Soc, Rev. 2010, 39, 189). 5 Dans le cadre de l'invention, l'antenne est, de manière avantageuse, constituée d'un dérivé de pyridine fonctionnalisé en position 4 par un système conjugué appelé chromophore et défini notamment sous les dénominations Chroml, Chrom2, Chrom3 et Chrom4 dans les complexes préférés, Ce chromophore est constitué éventuellement d'un espaceur 10 conjugué choisi parmi les double ou triple liaisons carbone-carbone, qui de manière avantageuse correspond à la liaison -CEC-, et d'un groupe aryle ou heteroaryle substitué par 1, 2 ou 3 groupements, de manière à ce qu'au moins 2 groupes bétaïne soient présents sur le complexe final. Les antennes dans lesquelles le groupe aryle ou heteroaryle est directement lié à la 15 pyridine seront préférées pour sensibiliser des complexes d'europium, samarium, terbium et dysprosium, alors que les antennes comportant un espaceur conjugué seront préférées pour les complexes d'europium et de samarium. Plus particulièrement, l'invention est appliquée à des ligands chélatants 20 décrits sous leur forme protégée selon la formule (I) ou à des macrocycles chélatants décrits sous leur forme protégée selon la formule (II) et à leurs complexes de lanthanide correspondant selon les formules (HO et (iv). Selon la formule (iii) est décrite la famille de complexes de lanthanide issue de la coordination de 3 ligands chélatants identiques de formules (I) 25 après déprotection et libération des fonctions acides. Selon la formule (1v) est décrite la famille de complexes de lanthanide issue de la coordination d'un ligand macrocyclique de formule (ii) après déprotection et libération des fonctions acide. Chroml 20 0, ,OR, z.-o OR, Chrom3 N R,O,z 0 formule (II) Chrom2 formule (I) Chrom4 OR, OR, Chrom4 Chrom4 Chrom4 Chrom2 Chrom3 formule (III) formule (IV) A titre d'exemple de sous-structure des complexes de formule (III) et (IV) tel qu'exemplifiés dans les exemples, on peut citer : a) Les complexes (Iva) R01 L R 2 R03 avec 11 tel que défini dans le cadre de l'invention et qui représente de préférence Z tel que défini pour les complexes de formule (1v) et qui représente de préférence un atome de carbone et R01, 21 R02 et R03, identiques ou différents, qui représentent un groupes Ro tel que défini pour les complexes de formule (Iv), au moins deux des groupes Ro', R02 et R03 étant substitués par au moins un groupe bétaïne, b) Les complexes (Illa) R1 3- N - N NN R1 avec R1 tel que défini pour les complexes de formule (III). La préparation des complexes selon l'invention met en oeuvre des techniques et réactions classiques connues de l'homme de l'art. Ils peuvent, 10 notamment être obtenus selon des procédés analogues à ceux utilisés dans les exemples. Les réactifs de départ sont disponibles dans le commerce ou facilement accessibles. Les composés de formule (I) et (1i) sont donc d'accès chimique relativement classique, et peuvent être obtenus à un coût de préparation 15 raisonnable. Les groupes fonctionnels éventuellement présents dans les composés de formule (I) et (11) et dans les intermédiaires réactionnels peuvent être protégés au cours des synthèses, soit sous forme permanente soit sous forme temporaire, par des groupes protecteurs qui assurent une synthèse 20 univoque des composés attendus. Les réactions de protection et déprotection sont effectuées selon des techniques bien connues de l'Homme de l'art. Par groupe protecteur temporaire des amines, alcools ou des acides carboxyliques, on entend les groupes protecteurs tels que ceux décrits dans Protective Groups in Organic Synthesis, Greene T.W. et Wuts P.G.M., ed 3004 189 22 John Wiley et Sons, 2006 et dans Protecting Groups, Kocienski P.J., 1994, Georg Thieme Verlag. Les réactions de complexation sont, en général, menées avec un sel du lanthanide souhaité notamment un chlorure, un nitrate ou un triflate dans un solvant dissociant, notamment un alcool et, de manière préférée, le méthanol ou l'acétonitriie, ou encore dans un mélange de solvants, en présence d'une base généralement un carbonate, à une température comprise entre 25 et 80°C pendant une durée variant de 30 minutes à quelques heures. Par exemple, dans le cas des complexes (Iv), les agents complexants de formule (1) selon l'invention, dans le cas où les trois chromophores sont identiques (agents complexants symétriques) peuvent être préparés à partir de l'intermédiaire (A1) : dans laquelle Ra est un groupe protecteur des fonctions acides tel qu'un alkyle de 1 à 4 atomes de carbone, du type méthyle, Z est tel que défini pour les composés de formule (Iv) et Y qui représente un atome de chlore, brome, ou de préférence iode, ou une fonction -N3 ou -C-2=-CH. Les agents complexants de formule (II) selon l'invention, dans le cas où 20 Chroml = Chrom2 Chrom3 (agents complexants dissymétriques) peuvent être préparés à partir de l'intermédiaire (A2) Y ,ORaN '0 ÔRa N {A2) 3004 1 89 23 dans laquelle Ra est un groupe protecteur des fonctions acides tel qu'un alkyle de 1 à 4 atonies de carbone, du type méthyle, Z est tel que défini pour les composés de formule (Iv) et Y qui représente un atome de chlore, brome, ou de préférence iode, ou un une fonction -N3 ou -CEECH. 5 L'introduction des groupements Chroml, Chrom2 et Chrom3 peut se faire en une seule étape dans le cas des agents complexants symétriques à partir de (A1) ou en deux étapes dans le cas des agents complexants dissymétriques à partir de (A2) selon les techniques détaillées dans les exemples ci-après, ou selon des techniques analogues bien connues de 10 l'homme de l'art. Dans le cadre de l'invention, le procédé mettant en oeuvre une synthèse divergente à partir des intermédiaires (A1) et (A2) clefs est plus rapide et plus efficace pour la préparation d'agents complexant de formule (iv) que le procédé proposé pour la préparation des agents complexants dans la 15 demande WO 2013/011236. Dans le procédé de synthèse utilisé dans le cadre de l'invention, les chromophores Chroml, Chrom2 et Chrom3 ou certains de leurs précurseurs sont introduits directement sur (A1) et (A2) en utilisant des réactions classiques de couplage carbone-carbone catalysées au palladium, comme la réaction de Sonogashira, de Heck, de Susuki, de Stille, ou encore les réactions de cycloaddition 1,3 dipolaire catalysée au cuivre appelées communément « chimie click ». Dans tous les cas, les chromophores Chroml, Chrom2 et Chrom3 seront fonctionnalisés par des fonctions réactives compatibles avec les réactions de couplage carbone-carbone ou de « chimie click » envisagées. Ces fonctionnalisations sont conduites selon des protocoles issus de la littérature et connus de l'homme de l'art. Sont envisagées notamment la présence de fonctions alcyne ou alcène terminale dans le cas des chromophores Chroml, Chrom2 et Chrom3 présentant un espaceur, compatibles avec des réactions de Sonogashira et de Heck. Est envisagée également la présence d'une fonction acide boronique compatible avec des réactions de Suzuki dans le cas des chromophores Chroml, Chrom2 et Chrom3 sans espaceur dans lesquelles le groupe aryle ou hétéroaryle est directement lié à la pyridine. Notamment, l'introduction de groupements : -y(Ro)s ,- -, , Arl j avec Art, s et Ro (étant entendu que différents groupes Ro peuvent substituer le groupe Art) qui sont tels que définis pour les composés de formule (iv), pourra se faire : soit par action d'un composé de formule (V): - (Fo)s ____LArlj (H0)2B "' (V) avec R`o (étant entendu que différents groupes R'o peuvent substituer le groupe Ad) qui représente Ro ou un groupe précurseur de Ro et Art s et Ro qui sont tels que définis pour les composés de formule (iv), sur l'intermédiaire (A1) ou (A2), dans lequel Y est un atome de chlore, brome ou de préférence iode, dans les conditions d'un couplage de Sukuzi, - soit dans le cas où Art représente un groupe 1,2,3-triazole, par action d'un composé de formule (vi) : = Ro (Vo) avec R'0 qui représente Ro ou un groupe précurseur de Ro, Ro étant tel que défini pour les composés de formule (iv), sur l'intermédiaire (A1) ou (A2), dans lequel Y est N3, par une réaction dite de « chimie click ». Il est également possible de réaliser le couplage avec un composé N3-R'0, la fonction alcyne étant alors portée par la pyridine de l'intermédiaire (A1) ou (A2). L'introduction de groupements : (RID)s25 avec Ro (étant entendu que différents groupes Ro peuvent substituer le groupe phényle) tels que définis pour les composés de formule (iv) pourra se faire par action d'un composé de formule (vii) : (R10)5 H (Vit) avec R'0 (étant entendu que différents groupes R'0 peuvent substituer le groupe phényle) qui représente Ro ou un groupe précurseur de Ro, et Ro et s qui sont tels que définis pour les composés de formule (iv), sur l'intermédiaire (A1) ou (A2) dans lequel Y est un atome de chlore, brome ou de préférence iode, dans les conditions d'une réaction de Sonogashira. Les complexes selon l'invention de formule (Ili) sont préparés à partir d'un ligand de type (I): Chrom4 00 N ORa ORa (1), dans lequel Chrom4 est tel que défini précédemment pour les complexes de formule (i11), et Ra est un groupe protecteur des fonctions acides tel qu'un alkyle, par exemple un méthyle. Les agents complexants selon la formule (0 sont préparés de la même façon à partir des intermédiaires de formule (A3) : Y o (A3) dans laquelle Ra est un groupe protecteur des fonctions acides tel qu'un alkyle de 1 à 4 atomes de carbone, du type méthyle, et Y représente un atome de chlore, brome, ou de préférence iode, ou un une fonction -N3 ou -C.--_-CH et dont la synthèse est décrite dans A. Picot, C. Feuvrie, C. Barsu, B. Le Guennic, H. Le Bozec, C. Andraud, L. Toupet, 0. Maury Tetrahedron. 3004 189 26 2008, 64, 399-411 et dans Z. El Abidine Chamas, X. Guo, 3.-L. Canet, A. Gautier, D. Bayer, R. Mahioub Dalton Trans., 2010, 39, 7091-7097. De tels ligands sont préparés selon les techniques détaillées dans les exemples ci-après, ou selon des techniques analogues bien connues de 5 l'homme de l'art. En particulier, l'introduction de groupements : avec Ar2, s et R1 (étant entendu que différents groupes R1 peuvent substituer le groupe Ar2) qui sont tels que définis pour les composés de formule (III), pourra se faire : 10 soit par action d'un composé de formule (viii): Ar2 (1-10)2B (VIII) avec R'1 (étant entendu que différents groupes R'1 peuvent substituer le groupe Ar2) qui représente R1 ou un groupe précurseur de R1 et Ar2, s et R1 qui sont tels que définis pour les composés de formule (in), sur le 15 composé de formule (ix) : o o ORa ORa (IX) avec X qui est un atome de chlore, brome ou de préférence iode, et Ra qui est un groupe protecteur des fonctions acides tel qu'un alkyle, du type méthyle, dans les conditions d'un couplage de Sukuzi, 20 - soit dans le cas où Ar2 représente un groupe 1,2,3-triazole, par action d'un composé de formule : R'1 (X) avec R'1 qui représente R1 ou un groupe précurseur de R1 et R1 qui est tel que défini pour les composés de formule (In), sur le composé de formule (x1): N3 27 o avec Ra qui est un groupe protecteur des fonctions acide tel qu'un alkyle, du type méthyle, par une réaction dite de chimie click. Il est également possible de réaliser le couplage avec un composé N3-R'1, la fonction alcyne étant alors portée par la pyridine des ligands (I). L'introduction de groupements : ,.(Ri)s avec s et R1 (étant entendu que différents groupes R1 peuvent substituer le groupe phényle) tels que définis pour les composés de formule (III) pourra se faire par action d'un composé de formule (xii) : ,(R1)s H (XU) avec R'1 (étant entendu que différents groupes R'1 peuvent substituer le groupe phényle) qui représente R1 ou un groupe précurseur de R1, et R1 et s qui sont tels que définis pour les composés de formule (III), sur le composé de formule (Ix) : x o avec X qui est un atome de chlore, brome ou de préférence iode et Ra qui est un groupe protecteur des fonctions acides tel qu'un alkyle, du type méthyle, dans les conditions d'une réaction de Sonogashira. Quelle que soit la voie de synthèse envisagée et le complexe de lanthanide visé, les groupes bétaïne peuvent, par exemple, être introduites au niveau des substituants R0 ou R1 via une alkylation directe d'un 3004 1 89 28 groupement phénol, thiophénol, aniline etc... ou bien via une réaction dite de « chimie click» à partir d'un précurseur propargylique. Pour former les complexes de lanthanide correspondants, le ligand sélectionné (i) ou le macrocycle de formule (II) est mis en solution dans un 5 solvant dans lequel il est soluble, par exemple de l'éthanol ou du méthanol, et la déprotection des fonctions acide est réalisée en milieu basique, puis la complexation est menée avec un sel de la terre rare souhaitée, notamment sous la forme d'un chlorure, triflate ou nitrate. De façon avantageuse, environ 3 équivalents molaires de ligand (I) sont utilisés par atome de terre 10 rare et environ 1 équivalent molaire de macrocycle de formule (II) est utilisé par atome de terre rare. La complexation peut être réalisée à une température de 25 à 80 °C, par exemple pendant une durée de l'ordre de 30 minutes à 6 heures. Les exemples ci-après permettent d'illustrer l'invention, mais n'ont 15 aucun caractère limitatif. Les abréviations ci-dessous sont utilisées dans les exemples qui vont suivre : ACN : Acétonitrile DMF : Diméthylformamide 20 DPA : Acide dipicolinique Et3N : Triéthyle amine Me0H : Méthanol Ms : Groupement Mésyle TA : Température Ambiante TACN : Triazacyclononane TBTA : tris[(1-benzy1-1/1-1,2,3-triazol-4-yl)méthyl]amine THF : Tétrahydrofurane TMSA : Triméthylsilylacétylène 3004 189 29 Informations Générales Les spectres RMN CH et 1-3C) ont été enregistrés sur un appareil Bruker AC 200 à une fréquence de 200.13 et 50.32 MHz pour les 1F1 et '3C respectivement et sur un Bruker Advence à une fréquence de 500.10 et 5 12575 MHz pour des 1H et 13C respectivement. Les déplacements chimiques (8) sont exprimés en partie par million (ppm) par rapport au triméthylsilane utilisé comme référence interne et en utilisant les solvants indiqués. Les constantes de couplage (J) sont exprimés en Hz et les notations suivantes sont utilisées : s (singulet), brs (broad singulet ou singulet large), d 10 (doublet), dd (doublet de doublet), m (multiplet). Les spectres de masse haute résolution HRMS ont été enregistrés au centre commun de spectrométrie de masse de Lyon (Université Claude Bernard Lyon, Lyon, France) sur un appareil MicroTOFQII équipé avec une source ESI positive. 15 Les chromatographies sur couche mince ont été réalisées sur des plaques de gel de silice sur feuilles d'aluminium (silica gel, Fluka) et révélées à l'aide d'une lampe UV (7\. = 254 ou 365 nm) ou bien par coloration. Les purifications ont été réalisées par colonne chromatographique sur gel de silice (silica gel 0.035-0.070 mm, 60A). 20 Les solvants utilisés pour les réactions ont été achetés chez Aldrich ou Acros Organics en tant que solvants sec ou extra sec et stockés sur tamis moléculaire 3Â. Les spectres d'absorption UV/Vis ont été enregistrés sur un spectromètre 3ASCO V670 ; les spectres d'émission sur un spectrofluorimètre 25 30BIN-YVON fluorolog 3. 3004 189 A. PREPARATION DES COMPLEXES Exemple I. Complexe d'Europium de formule (1v) Schéma Synthèse des intermédiaires 3 et 6 OH 0 1 2 TACN 3HCI Na2CO3 ACN 48h, 60°C o 3 N MsCI THF/Et3N -14' 0 N"-1 TFA, DCM NBoc RT, 4h 5 NH NBoc 4 5 ACN, 50'C 2, Na2CO3 L'intermédiaire 3 est obtenu par une réaction d'alkylation du TACN.3HCI, à partir d'un dérivé mésylate (ou tosylate) dans les conditions classiques d'alkylation. Ce composé va pouvoir ensuite être engagé dans diverses réactions de couplage croisé pour obtenir les ligands désirés. 10 La synthèse de l'intermédiaire dissymétrique 6 nécessite plusieurs étapes de protection/déprotection du TACN et est préparé conformément à la méthode décrite dans le brevet WO 2013/011236. Le TACN-boc 4 est substitué par le composé 2 pour mener au composé 5 précurseur de l'intermédiaire dissymétrique 6 après déprotection de la 15 fonction Boc. Schéma 2 : Synthèse de complexes d'Europium La synthèse du composé 10 peut être réalisée dans des conditions 5 classiques de substitution sur le 4-iodophénol à partir d'une amine commerciale 8. La fonction alcyne protégée du composé 10 peut être introduite via une réaction de couplage croisé de Sonogashira en présence de TMSA. L'introduction du composé 10 sur l'intermédiaire 3 peut être réalisée après déprotection de l'alcyne, en alcyne vrai, qui est ensuite engagé 10 directement dans une étape de couplage de Sonogashira modifié (sans Cul). CI N HCI 8 OH K2CO3 DMF, 80°C, 12h TMSA PdC12(PPh3)2, Cul THF,Et3N, TA, 12h 10 \\' \ 1) K2CO3' Me0H 4,'"---- c). TA, 1h _ -C\o 2) 3 DMFJEt3N r." 1.4 PdCl2(PPh3)4 0 '----N ) 80'C, 48h . 1, ID-) ."-T,' N',.T.-->' i ? 10 11 sol.. 1) NaOH, H20/Me0E1 2) HCI aq 3) EuCI3 6H20 N 1,3-propanesu(tone Acetone, 16h, TA / 12 3004 189 32 La fonction bétaïne peut être préparée par une réaction d'ouverture de la 1,3-propanesultone sélectivement sur l'amine terminale du composé 11 pour mener à l'agent complexant 12. Les esters méthyliques peuvent ensuite être hydrolysés et l'agent complexant obtenu réagit in situ en présence d'une solution de sel d'europium pour mener au complexe Eu2. Schéma 3 : Synthèse de complexes d'Eu(III) dissymétrique NHBoc Le composé 15 est obtenu après substitution du composé 6 par l'antenne 14. Le composé 14 est obtenu comme décrit dans la demande de brevet WO 2013/011236. Le composé 16 pourra être obtenu après couplage de Sonogashira de l'antenne 10b, tel que décrit précédemment pour le complexe symétrique. De même le composé 17 pourra être obtenu après ouverture de la 1,3-propanesultone sélectivement sur les amines terminales du composé 16. NHElac o 16 17 14 0M3 ACN, Na2CO3 50°C, 24h N N-, N O 10b DMF/Et3N, PdCl2(PPh3)4 80°C, 48h N 1,3-propanesultone .... - Acetone, 16h, TA o NHEloc 15 3004 189 33 a) Préparation du composé 2 I O OMs 2 Le composé 1 (1,56g, 5,33mmol, 1,0eq) est dissous dans 50 mL de THF distillé. La triéthylamine (1,63 mg, 16 mmol, 3,0eq) est ensuite ajoutée, 5 ainsi que le chlorure de mésyle (976 mg, 8,53 mmol, 1.6 eq). La solution est agitée sous argon à température ambiante. La réaction est suivie par CCM. Après 4h, la réaction est totale, les solvants sont évaporés. Le résidu est solubilisé dans l'acétate d'éthyle et la phase organique est lavée avec une solution saturée de NaHCO3, puis à l'eau. La phase organique est ensuite 10 séchée sur Na2SO4, puis filtrée. Le solvant est éliminé sous pression réduite. Le produit brut obtenu est purifié par colonne chromatographie sur gel de silice (Fluant : dichlorométhane/méthanol de 0% jusqu'à 5% en volume, par incrément de 1%) conduisant au produit désiré sous la forme d'un solide blanc (1,40 g, 90%). 15 RMN 11i (500 MHz, CDCI3) 5: 8,47 (d, 4..k--- 1,5 Hz, 1H), 8,05 (d, 4J=1,5 Hz, 1H), 5,37 (s, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,16 (s, 3H) RMN 13C (500 MHz, CDCI3) 5: 164, 155, 148, 134, 107, 70, 53, 38 HRMS (ESI 4") : (Calc pour C91110NO5SNa : 393,9212) ; mesurée : [M+Nar : m/z= 393,9217. b) Préparation du composé 3 3 A une suspension de Na2CO3 (1,59g, 15mmol, 10eq) dans 60 ml d'acétonitrile sous argon sont ajoutés le TACN.3HCI (356mg, 1,5mmol, 3004 189 34 1,Oeq), et le composé 2 (1,4g, 4,79mmol, 3,2eq). Le mélange réactionnel est agité 48h à 60°C sous argon. Après retour à température ambiante, le mélange réactionnel est filtré et le filtrat est évaporé sous pression réduite. Le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur colonne d'alumine 5 neutre (Fluant : acétate d'éthyle). Le produit final est obtenu sous la forme d'un solide jaune (814 mg, 57%). RMN 1H (200 MHz, CDCI3) 5: 8,35 (d, J=1,4 Hz, 3H), 8,21 (d, J=1,4 Hz, 3H), 3,97 (s, 9H), 3,93(s, 6H), 2,90 (s, 12H) RMN "C (125,76 MHz, CDCI3) é: 164,6, 161,9, 147,65, 147,62, 135,6, 10 132,8, 106,65, 106,60, 63,9, 56,1, 53,2, 53,19, 53,14. HRMS (ESI ) : (Calc pour C301-13413N606 : 954,9627); mesurée : [N1Hr : m/z= 954,9668. c) Préparation du composé 5 5 15 Dans un ballon, le composé 4 (370mg, 1,24mmol, 1.0 eq) est solubilisé dans de l'acétonitrile sec (100mL). A cette solution sont ajoutés sous argon le Na2CO3 (789mg, 7,44 mmol, 6,0eq) et le composé 3 (966 mg, 2,6 mmol, 2,1 eq). Le mélange réactionnel est agité sous argon à 60°C pendant 4h. A la fin de la réaction, le Na2CO3 est filtré sous pression réduite et les solvants sont 20 évaporés. Le brut réactionnel est purifié sur colonne chromatographique sur gel de silice (Fluant : AcOEt). Le produit est obtenu sous la forme d'une huile jaune (633 mg, 66%). RMN 'H (500 MHz, CDCI3) é: 8,35 (2s, 2H), 8,24 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 3,98 (2s, 2x 3H), 3,95 (2s, 2x 1H), 3,42 (brs, 2H), 3,36 (brs, 2H), 3,10 (brs, 2H), 2,98 (brs, 2H), 2,7 (brs, 2H), 2,62 (brs, 2H), 1,48 (s, 9H). 3004 189 35 RMN 13C (125,76 MHz, CDCI3) 5: 164,80, 164,73, 162,32, 162,13, 155,79, 147,95, 147,77, 135,57, 135,39, 132,96, 132,92, 106,81, 106,76, 79,69, 63,30, 63,03, 56,77, 55,15, 55,10, 54,59, 53,28, 50,94, 50,42, 28,91. 5 d) Préparation du compose 6 i 6 Dans un ballon, le compose 5 (50mg, 6,41.10-2mmol, 1,0 eq) est solubilisé dans du CH2Cl2 (2mL). A cette solution est ajouté l'acide trifluoroacétique (20eq). Le mélange réactionnel est agité sous argon pendant 4h. A la fin de 10 la réaction, les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le produit est obtenu sous la forme d'une huile jaune et est engagé directement dans l'étape suivante sans autre purification. RMN 1H (500 MHz, CDCI3) 5: 8,29(s, 2H), 7,88 (s, 2H), 4,34 (brs, 4H), 3,89 (s, 6H), 3,65 (brs, 4H), 3,51 (brs, 4H), 3,29 (brs, 4H). 15 e) Préparation du composé 9 / /N\ \ 0 9 Dans un ballon, le composé 7 (1,00g, 4,54mmol, 1,0eq) est solubilisé dans du DMF anhydre (30mL). A cette solution sont ajoutés l'amine 8 (1,07g, 20 6,81mmol, 1,5eq) et K2CO3 (6,30 g, 45,4 mmol, 10 eq). Le mélange réactionnel est agité sous argon à 80°C pendant 12h. Après retour à la température ambiante, du CH2Cl2 est ajouté. La phase organique est lavée trois fois avec une solution aqueuse de NaCI saturée, puis à l'eau, séchée sur 3004 189 36 Na2SO4, filtrée et évaporée. Le produit est obtenu sous la forme d'une poudre jaune sans autre purification (1,20g, 87%). RMN 111 (200 MHz, CDCI3) 5: 7.54 (d, 2H, ..1= 8.9Hz), 6.73 (d, 2H, J=8.9Hz), 3.97(t, 2H, J= 6.4Hz), 2.43 (t, 2H, J= 6.9Hz), 2,25 (s, 6H), 1.93 5 (m, 2H). RMN 13C (5032 MHz, CDCI3) 5: 159.04, 138.26, 117.07, 82.65, 66.47, 56.43, 45.67, 27.60. HRMS (ESI 1 : (Calc pour C11li16IN0 : 305.0277) ; mesurée : [MH]+ : m/z= 306.0349 10 f) Préparation du composé 10 / N \/ S _ /w 10 Dans un tube de Schlenk, le composé 9 (860mg, 2,81mmol, 1,0eq) est solubilisé dans un mélange THF/Et3N (20mL, 1/1, v/v). La solution est 15 dégazée sous argon pendant 20min puis le TMSA (555mg, 5,64mmol, 2,0eq) est ajouté, ainsi que les catalyseurs, PdCl2(PPh3)2 (59mg, 7,86.10-5mol, 0,03 eq) et Cul (50 mg, 2,64. 10-1 mol, 0,1eq). Le mélange réactionnel est agité sous argon à la température ambiante pendant 16h. A la fin de la réaction, les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le brut réactionnel est 20 dissous dans du CH2Cl2 et la phase organique est lavée avec une solution aqueuse saturée en NH4CI, puis à l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur Na2SO4, filtrée et évaporée sous pression réduite. Le brut obtenu est purifié sur colonne chromatographique sur gel de silice. Eluant CH2Cl2/MeOH (de 0 à 5% en volume). Le composé désiré est obtenu sous la 25 forme d'une huile orange (650mg, 84%). RMN 1}1 (200 MHz, CDCI3) 5: 7.36 (d, 2H, J= 8.9Hz), 6.78 (d, 2H, J=8.9Hz), 3.97(t, 2H, J= 6.4Hz), 2.43 (t, 2H, J= 7.3 Hz), 2.24 (s, 6H), 1.93 (m, 2H), 0.22 (s, 9H). RMN 13C (50.32 MHz, CDCI3) 5: 159.33, 133.54, 115.21, 115.21, 114.46, 105.42, 92.39, 66.32, 56.42, 45.66, 27.61. 3004 189 37 HRMS (ESI "f) : (Calc pour C161-125NOSi : 275.1705) ; mesurée : [MH]+ . m/z= 276.1805 g) Préparation du composé 10b / 5 10b Dans un ballon, le composé 10 (445mg, 1,61mmol, 1,0eq) est solubilisé dans du Me0H anhydre (15 mL). A cette solution est ajouté du K2CO3 (268mg, 1,93mmol, 1,2eq). Le mélange réactionnel est agité à la température ambiante pendant une heure. A la fin de la réaction, le solvant 10 est évaporé sous pression réduite. Le résidu est solubilisé dans du CH2Cl2 et la phase organique est lavée deux fois à l'eau, puis séchée sur Na2SO4, filtrée et évaporée sous pression réduite. Le composé est obtenu sous la forme d'une huile brune et est engagé directement dans l'étape suivante sans autre purification. 15 RMN 1H (200 MHz, CDCI3) 5: 7.36 (d, 2H, 3= 8.9Hz), 6.84 (d, 2H, 3=8.9Hz), 4.02 (t, 2H, 3= 6.5Hz), 2.99 (s, 1H), 2.44 (t, 2H, 3= 7.0 Hz), 2.25 (s, 6H), 1.95 (m, 2H). 3004 189 38 h) Préparation du composé 11 N 0 --N N ,F) 0 11 Dans un tube de Schlenk, le dérivé 3 (64mg, 6,76.10-5mol, 1,0eq) est solubilisé dans un mélange DMF/Et3N (2mL, 1/1, v/v). La solution est 5 dégazée sous argon pendant 30min. A cette solution sont ensuite ajoutés une solution de 106 (55mg, 2,70.10-1 mol, 4,Oeq) solubilisé dans du DMF (1 mL) préalablement dégazé sous argon, puis le PdCl2(PPh3)2 (4mg, 5,68.10-6 mmol, 0,03eq). Le mélange réactionnel est agité sous argon pendant 48h à 80°C. A la fin de la réaction, les solvants sont évaporés sous pression 10 réduite. Du CH2C12 est ajouté au brut réactionnel et la phase organique est lavée avec une solution saturée en Na2CO3, puis à l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur Na2SO4, filtrée puis évaporée sous pression réduite. Le brut réactionnel est purifié par des précipitations successives dans un mélange AcOEt/Pentane pour mener au composé désiré sous la forme d'une 15 huile orange (52 mg, 65%). RMN 1H (500 MHz, CDCI3) 6: 8.03 (s, 3H), 7.85 (s, 3H), 7.45 (d, 6H, 3= 8.8Hz), 6.88 (d, 6H, J= 8.8Hz), 4.03 (t, 6H, J=6,2 Hz), 3.96 (m,15 H), 2.96 (brs, 12H), 2.45 (t, 6H, 3= 6,4 Hz), 2.26 (s, 18H), 1,97 (m, 6H). RMN 13C (125,76 MHz, CDCI3) 6: 165,73, 161,57,160,12, 147,47, 133,76, 20 133,60, 128;74, 127,95, 125,60, 114,87, 113,93, 95,56, 85,65, 66,47? 64,47? 56,40, 56,16, 53,13, 45,59, 45,41, 27,49. HRMS (ESI (Calc pour C691-I84N909: 394,2142 ) ; mesurée : [M+31-1]3+ m/z= 394,2125 i) Préparation du composé 12 : 12 Le composé 11 (36mg, 3,05.10-5mol, 1,0eq) est solubilisé dans 1mL d'acétone. La 1,3-propanesultone est ajoutée et le mélange réactionnel est agité sous argon à température ambiante pendant 16h. A la fin de la réaction, le solvant est évaporé et le résidu est trituré dans du CH2Cl2. Le produit est obtenu sous la forme d'une huile orange (40 mg, 85%). RMN 1H (200 MHz, CDCI3) ô: 7,83 (s, 3H), 7,67 (s, 3H), 7,38 (d, 6H, J= 8,9 Hz), 6,93 (d, 6H, J=8,9 Hz), 4,26 (brs, 4H), 4,16-4,10 (m, 8H), 3,92 (s, 9H), 3,69-3,48 (m, 16H), 3,17 (brs, 12H), 2,94-2,90 (m, 6H), 2,37-2,13 (m, 6H) j) Préparation du complexe 13, Eu2 Le composé 12 (25 mg, 1,65105 mol, 1,0 eq) est solubilisé dans un mélange Me0H/H20 (4 mL, 1/1, v/v). A cette solution est ajoutée une solution aqueuse de NaOH (1M) (4 mL) et le mélange réactionnel est agité sous argon pendant une heure. A la fin de la réaction une solution aqueuse d'HCI est ajoutée jusqu'à pH=2. A ce mélange sont ensuite ajoutés une solution de Na2CO3 (8,0 eq) ainsi que le sel d'EuC13.6H20 (3.0 eq). Le 0 3004 189 40 mélange réactionnel est agité sous argon à 50°C pendant 16h. A la fin de la réaction, les solvants sont évaporés sous pression réduite et le complexe est purifié par dialyse dans H20 pendant 24h. Le produit est obtenu sous la forme d'une poudre blanche. 5 HRMS (ESI +) : (Cals pour C75H90EuN9Na4018S3 : 436.3593 ) ; mesurée : [M+4Na]4+ : m/z= 436,3589 k) Préparation du composé 15 Le composé 6 (86 mg, 1,28.104mol, 1,0 eq) est solubilisé dans 4 mL d'ACN. 10 A cette solution est ajouté sous argon le composé 14 (86 mg, 1,66.10-4mol, 1,3 eq) et le Na2CO3 (40 mg, 3,84.104 mol, 3,0 eq). Le mélange réactionnel est agité sous argon à 50°C pendant 24h. A la fin de laréaction , les solvants sont évaporés et le brut est purifié par colonne chromatographique sur A1203 (Fluant : CH2Cl2/MeOH de 0 à 5% de Me0H). Le produit est obtenu sous la 15 forme d'une huile jaune (m= 60 mg, 42%) RMN 1H (300 MHz, CDCI3) ô: 8,07-8,06 (m, 2H), 7,98 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,20 (d, 2H, J-, 8,5Hz), 6,62 (d, 2H, J= 8,5 Hz), 3,81-3,76 (m, 4H), 3,73-3,64 (m, 13H), 3,09-3,03 (m, 4H), 2,74-2,62 (m, 9H), 1,73 (t, 2H, J= 6,37 Hz), 1,17 (s, 9H).20 Exemple 2 : Complexe de Terbium de formule (IV) Schéma 4 : Synthèse de complexes de terbium 20 , PH 18 OH N---\ _ . . -"N `-- N,.) rrk,,-PCI(PP113),t Cs2CO3 \N.,-,, \------"I DMF1O0°C, 72h r- / N L.- 0 --i 0 N-r)J..2 0 '0 ?"N 3 ,-;--j'--. 19 t ! NaOH, H20/Me0H 11) HCI aq »N". -e 12) TbC136H20 ,Tb 0- "N / 20 0 De la même façon, l'intermédiaire 3 peut réagir dans des conditions de couplage de Suzuki en présence de l'acide boronique 18 pour mener au ligand 19. Les esters méthyliques sont ensuite hydrolysés en milieu basique et le composé réagit in situ en présence de sel de Tb(III) pour conduire à la formation du complexe 20. Schéma 5 : Synthèse de complexes de terbium Tb2 (BPin)2 Pd(PPh3)4, KOAc DMF10O'C, 16h 21 42 N o Yi'j) O. Cè 3 21 Pd(PPh3)4 Cs2CO3 DMF100'd, 72h 22 N e r' N / 23 1,3-propanesultone ...... Acetone, 16h, TA N. o Le complexe Tb2 porteur de fonctions bétaïnes peut être obtenu via la même voie de synthèse que son analogue 20. L'intermédiaire 3 peut réagir via une réaction de Suzuki avec l'antenne correspondante 21. Le ligand 22 pourra réagir en présence de 1,3-propanesultone pour mener au ligand 23. Comme précédemment le complexe sera formé in situ en présence du sel de Tb(III) correspondant pour mener au complexe Tb2. 10 3004 189 43 a) Préparation du composé 19 : --o 19 Dans un tube de Schlenk, l'intermédiaire 3 (150mg, 1,57.10-4 mol, 1,0 eq) et l'acide boronique 18 (79 mg, 5,18.10-4mol, 3,3eq) sont solubilisés dans du DMF anhydre (4 mL). La solution est dégazée sous argon pendant 30min. A cette solution sont ensuite ajoutés le Cs2CO3 (215 mg, 6,59.10" 4mol, 4,2eq) et le Pd(PPh3)4 (10mg, 9,42.10-6mmol, 0,06eq). Le mélange réactionnel est agité sous argon pendant 72h à 100°C. A la fin de la réaction, le Cs2CO3 est filtré sous pression réduite et rincé plusieurs fois avec du CH2Cl2. Le filtrat est évaporé sous pression réduite et dilué dans CH20z. La phase organique est lavée avec une solution de NaCI saturée, puis à l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur Na2504, filtrée puis évaporée sous pression réduite. Le brut réactionnel est purifié par des précipitations successives dans un mélange AcOEt/Pentane pour mener au composé désiré sous la forme d'une huile orange (58 mg, 41%). RMN 1H (200 MHz, CDC13) Ô: 8.19 (s, 3H), 8.02 (s, 3H), 7.58 (d, 6H, J= 8.8Hz), 6.94 (d, 6H, 3= 8.9Hz), 4.02 (s, 6H), 3.99 (s, 9H), 3.85 (s, 9H), 3.02 (brs, 12H). RMN 13C (50.32 MHz, CDC13) 5: 166.33, 161.79, 161.03, 149.37, 147.95, 129.60, 128.35, 123.33, 121.21, 114.81, 65.05, 56.48, 55.59, 29.90. HRMS (ESI 4-) : (Calc pour C511-155N609: 895,4032) ; mesurée : [MFI] : m/z= 895,4025. b) Préparation du complexe Tb2 Le complexe Tb2 est préparé de manière analogue au complexe Eu2, en utilisant le protocole décrit à l'exemple 1, paragraphe f). HRMS (ESI +) : (Calc pour C481-145N6Na209Tb : 527,1144) ; mesurée : 5 [M+2Na]2+ : m/z= 527,1143 Exemple 3 : Complexe de Terbium de formule (III) Schéma 6 : Synthèse de complexes de Tb à ligands DPA 3Na+ 7-60,- /--- IV. ,5 1, .', 1'1,(1; N ,.--....--"--N-'--- 603- --" ri ,n .') ' i) NaOH, H2OIMeOH 25 '1;1 21 HCI aq o,,,N-5.1,o o ,,.-11... -..-.1. o CuSO4.5H20, Asc.Sod, ii-)1 ' 11 tvi Y THPTA 3) TbC13,61-120 ! à 0 24 0 THF/H20 '°-?("-N--1-°°- -o,s o,,,,,o.'-, y.'0'o o , ,T .=,,.. i 26 , -N-"''' \ ---1-''-'1 / \''''5° 'e / 1 ii N'` 0 0 Tbl 10 Dans le cas des complexes de dérivés de DPA, l'introduction de groupes bétaïne peut se réaliser via deux voies de synthèse différentes. le groupe bétaïne peut être introduit en une seule étape de « chimie click », comme illustré Schéma 6, dans le cas des précurseurs 24 et 25 pour mener au ligand 26. Les esters méthyliques sont ensuite hydrolysés en milieu basique 15 et l'intermédiaire réagit en présence de sels de Tb(III) pour mener au complexe Tbl. a) Préparation du composé 26 S03 o 26 20 Le dérivé 24 (300mg, 1,27mmol, 1,0eq) et le composé 25 (315 mg, 1,52mmol, 1,2eq) sont solubilisés dans du THF (5 mL). A cette solution est 3004 189 45 ajoutée une solution fraichement préparée d'un mélange de CuSO4.5H20 (6,5mg, 0,02mmol, 0,02 eq), de TBTA (15mg, 0,07mmol, 0,06eq) et d'ascorbate de sodium (14mg, 0,02mmol, 0,02eq) dans un mélange THF/H20. Le mélange réactionnel est agité 16h à température ambiante. Les solvants sont ensuite évaporés et le brut est trituré dans l'acétone. Le précipité formé est filtré sous pression réduite et le produit désiré est obtenu sous la forme d'une poudre blanche (400mg, 72%). RMN 1H (500 MHz, D20) 5: 9.20 (s, 1H), 8.82 (s, 2H), 4.83(s, 2H), 4.03 (s, 6H), 3,53-3,50 (m, 2H), 3,18 (s, 6H), 2,97 (t, 2H, J= 6,8Hz), 2,38-2,34 (ni, 2H). RMN 13C (125,76 MHz, D20) 5 : 166,09, 150,81, 146,44 ? 137,82, 128,60, 120,08, 63,40, 58,78, 54,89, 51,64, 48,35, 19,49. HRMS (ESI +) (Calc pour C17H24N507S : 442,1318) ; mesurée [Mr : m/z= 442,1391 ; [M-H + Na] m/z= 464,1214. b) Préparation du complexe Tb1 Le complexe Tb1 est préparé de manière analogue au complexe Eu2, en utilisant le protocole décrit à l'exemple 1, paragraphe f), en présence de 3,0 équivalents de ligand 18. Exemple 4 Complexe d'Europium de formule (IV) Schéma 7 Synthèse du complexe Eu1 ,N, S03- 3-, 3Na+ i (L ) (--1 ? 1) K2CO3. Me01-1 ((JI . _ 1..,_..,,..,., 1,3-propanesultone )- -->--- TA 1h J 2)DPA-1 ------- DMF/Et3N 11i PdC12{PPV4 ,s 80°C, 48h ,,,c, 10 DPA-I: O Acetone: 16h, TA 1) NaOH, H20/Me01-1 2) HCI aq 3) EuCI3 - --::o N 28 ô Eul o ,03S 3004 1 8 9 46 Le précurseur 27 peut être obtenu via une réaction de Sonogashira sur le composé DPA-I. La fonction bétaïne est introduite dans ce cas par ouverture de la 1,3-propanesultone sur la dirnéthylamine terminale. Les esters méthyliques de l'intermédiaire 28 peuvent ensuite être hydrolysés en 5 milieu basique et l'intermédiaire formé réagit en présence de sel d'Eu(III) pour mener au complexe Eu1. a) Préparation du composé 27 27 o 10 Dans un tube de Schlenk, le composé DPA-I (215mg, 6,72.10-4mol, 1,0eq) est solubilisé dans un mélange THF/Et3N (7mL, 1/1, v/v). La solution est dégazée sous argon pendant 20min puis le composé 10b (265mg, 1,30rnmol, 1,2eq) est ajouté, ainsi que les catalyseurs, PdCl2(PPh3)2 (5mg, 2,0.105 mol, 0,03eq) et Cul (5g, 6.72. 1041 mol, 0,1eq). Le mélange 15 réactionnel est agité sous argon à température ambiante pendant 16h. A la fin de la réaction, les solvants sont évaporés. Le brut réactionnel est dissous dans du CH2Cl2 et la phase organique est lavée avec une solution aqueuse de NH4C1 saturée, puis à l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur Na2SO4, filtrée et évaporée sous pression réduite. Le brut obtenu est purifié 20 par colonne chromatographie sur gel de silice. Eluant CH2Ct2/MeOH (de 0 à 5%). Le composé désiré est obtenu sous la forme d'une poudre jaune (210 mg, 80%). RMN l'H (200 MHz, CDCI3) 5: 8.31 (s, 2H), 7.48 (d, 2H, J= 8.9Hz), 6.90 (d, 2H, J= 8.9 Hz), 4.90-197 (m, 6+2H), 2.51 (t, 2H, J= HZ), 2.33 (s, 6H), 2.03 (m, 2H). RMN 13C (50.32 MHz, CDCI3) 5:164.81, 16.26, 148.34, 134.92, 133.80, 129.45, 114.80 113.27, 97.59, 84.61, 66.17, 56.16, 53.31, 45.21, 27.03. HRMS (ESI ) : (Cale pour C22H25N205 : 397,1744 ) ; mesurée : [Me : m/z= 397,1758 b) Préparation du composé 28 : 0----------N---->"--"'S03 1 Ir" Y' I,I 0 o 28 Le composé 27 (70mg, 1.76.10-4 mol, 1 eq) est solubilisé dans l'acétone anhydre. A cette solution est ajouté sous argon la 1,3-propanesultone (22mg, 1.76.10-4 mol, 1 eq). Le mélange réactionnel est agité sous argon pendant 2h. A la fin de la réaction, le précipité formé est filtré sous pression réduite et trituré dans un mélange Acétone/CH2Cl2 (1/1, v/v) puis à nouveau filtré. Le produit désiré est obtenu sous la forme d'une poudre blanche (80mg, 88%) RMN 1H (500 MHz, Me0D) 5: 8.27 (s, 2H), 7.57 (d, 2H, J= 8.9Hz), 7,01 (d, 2H, J= 8.9 Hz), 4,16 (t,2H, J= 6,01-1z),4,01 (s, 6H), 3,60-3,57 (m, 4H), 3,17 (s, 6H) 2.89 (t, 2H, 3= 6,4Hz), 2.34-2,30 (m, 2H), 2,27-2,23 (m, 2H). RMN 13C (125,76 MHz, Me0D) 6: 166,03, 161,40, 149,98, 136,21, 135,16, 130,34, 116,15, 98,18, 85,60, 79,63, 66,03, 63,96, 62,97, 53,65, 30,82, 23,93, 20,06 HRMS (ESI 1 : (Calc pour C25H301\12Na08S : 541,1615) ; mesurée : [M+Nar : m/z= 541,1615 c) Préparation du complexe Tb1 : Le complexe Tb1 est préparé de manière analogue au complexe Eu2, en utilisant le protocole décrit à l'exemple 1, paragraphe f), en présence de 3,0 équivalents de ligand 28. B. EVALUATION DES PROPRIETES SPECTROSCOPIQUES DES COMPLEXES a) Propriétés spectroscopiques du complexe Eu2 dans l'eau. Le complexe Eu2 présente une bonne solubilité dans l'eau de l'ordre de 10-4-10-5 mol.L-1), ainsi qu'une excellente stabilité dans l'eau jusqu'à des dilutions de l'ordre de 10-7 moll-1. La Figure unique présente A. le spectre d'absorption du complexe Eu2 dans l'eau ; B. le spectre d'émission du complexe Eu2 enregistré dans l'eau (a v -excit= 310nm). Le complexe Eu2 présente des propriétés spectroscopiques remarquables dans l'eau Xmax = 335 nm, g = 50000 Lmol-1.cm-1 ; (I) = 0,18 et T = 0,8 ms, ainsi qu'une section efficace à deux photons significative. Sa brillance à 337 nm est donc estimée à 9000 Lmo1-1.cm-1, dans le même ordre de grandeur que ses homologues fonctionnalisés par les fragments PEG décrits dans la demande WO 2013/011236. Ces résultats montrent que l'introduction des fonctions bétaïnes ne nuit pas aux propriétés spectroscopiques du complexe. Dans le cas des autres complexes synthétisés, on constate également que l'introduction de bétaïne permet d'améliorer la solubilité des complexes (en comparaison aux complexes analogues sans bétaïne) et ne modifie pas de manière significative les propriétés luminescentes du complexe. C. ETUDE EN MILIEU CELLULAIRE Le composé Eu2 a permis la réalisation d'images de cellules fixées par microscopie mono-ou biphotonique. Des cellules cancéreuses T24 (ligne de cellule de cancer de la vessie ATCC, HTB-4, voir A. Picot, A. D'Aléo, P.L. Baldeck, A. Grichine, A. Duperray, C. Andraud, O. Maury J. Am. Hein. Soc. 2008, 130, 1532), ont été fixées avec du méthanol et ont été mises en présence d'une solution du complexe (concentration finale dans le milieu = 10-5 mo11-1). Les images des cellules ont été enregistrées sur un microscope confocal Zeiss fonctionnant en régime mono ou biphotonique. Il a été observé que le complexe Eu2 marque la cellule de façon réversible. En effet, après lavage, le complexe disparait de la cellule indiquant clairement que la fonctionnalisation avec des bétaïnes ne provoque pas une accumulation irréversible dans les tissus lipophiles, contrairement à ce qui est observé lorsque des groupements PEG sont utilisés. Ceci montre clairement que la présence des trois groupes bétaïne permet d'éviter les interactions non spécifiques avec les parties lipophiles de la cellule. REVENDICATIONS1. - Complexes de lanthanide luminescents, comportant un agent chélatant, formé d'un macrocycle ou d'un ensemble de ligands, complexant un ion lanthanide Ln3+, caractérisés en ce que l'agent chélatant est substitué 5 par au moins deux groupes bétaïne. 2 - Complexes de lanthanide selon la revendication 1 caractérisés en ce que l'agent chélatant est formé de trois ligands intégrant un groupe 2,6- pyridine-diacide carboxylique ou est formé d'un macrocycle à structure 1,4,7- triazacyclononane. 10 3 - Complexes de lanthanide selon la revendication 1 ou 2 caractérisés en ce que l'agent chélatant est substitué par au plus 12 groupes bétaïne, par exemple 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou 11 groupes bétaïne. 4 - Complexes de lanthanide selon l'une des revendications précédentes caractérisés en ce que l'agent chélatant est substitué par au moins une, et 15 en particulier une seule, fonction réactive permettant son couplage par liaison covalente à une biomolécule, la dite fonction réactive étant, de préférence, choisie parmi -COOH, -NH2, un acrylamide, une amine activée, un ester activé, un aldhéhyde, un halogénure d'alkyle, un anhydride, une aniline, un acide, une aziridine, un acide carboxylique, un diazoalcane, un 20 haloacétamide, une halotriazine, une hydrazine, un imido ester, un isocyanate, un isothiocyanate, un maléimide, un halogénure de sulfonyle, un thiol, une cétone, une amine, un halogénure d'acide, un ester d'hydroxysuccinimidyle, un ester de succinimidyle, un ester d'hydroxysulfosuccinimidyle, un azidonitrophényle, un azidophényle, un 3-(2- 25 pyridyl dithio)-propionamide, un glyoxal, une triazine, un groupe acétylénique, et les groupes de formuleO -("11-N-)--{CH2--NCS H v w . eNH CH23.-NH2 w 0 N--)-(CH2)--SFI H v w 0 -(-1(N--)C1-12)-N1-1-Ar H v w . N,a4_,C1-123-NCO 1-I v w 0 CH23-N3 eN w H 0 S--).--(CH2)--S-S-Ar H v w 0 N H C1-12-N w O 0 eN---)\---{CI-12 H v NCO SO3- NCS o 0 0 0 eN+.(c,_12'cH H v w 0 , --).1-N-)-4-CH2)----NH H w dans lesquels w est un entier appartenant à la gamme allant de 0 à 8 et y est égal à 0 ou 1, et Ar est un hétérocycle à 5 ou 6 chaînons saturé ou insaturé, comprenant 1 à 3 hétéroatomes, éventuellement substitué par un 5 atome d'halogène ; les fonctions réactives choisies parmi -COOH, -NH2, les esters de succinimidyle, les haloacétamides, les azides, les hydrazines, les isocyanates et les maléimides étant préférées. 5 - Complexes de lanthanide selon l'une des revendications précédentes choisis parmi les complexes de lanthanide de formule (1v) : Chrom1 Chrom3 dans lesquelles : - Ln est un lanthanide, notamment Eu, Sm, Tb ou Dy, Z représente -C- ou -PR3-, - R3 représente un groupe phényle, benzyle, méthyle, éthyle, propyle, n- butyle, sec-butyle, iso-butyle ou tert-butyle, et de préférence un groupe phényle ou méthyle, Chrom1, Chrom2 et Chrom3, identiques ou différents, sont choisis parmi les groupements : Ar1 dans lesquels : - L1 représente une liaison directe, -C=C- ou Ar1 représente un groupe aromatique choisi parmi les groupes phényle, thiophényle, furanyle, pyrrolyle, imidazolyle ou triazolyle, substitué par s groupes Ro identiques ou différents, s est égal à 1, 2 ou 3, et - Ro est choisi parmi les groupes alkyle comprenant de 1 à 10, et de préférence de 1 à 6, atomes de carbone ; les groupes alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone porteurs d'au moins une fonction bétaïne et/ou d'une fonction réactive ; et les groupements électrodonneurs, notamment 0-donneurs, 5-donneurs, NHCO-donneurs, SCO-donneurs, NHCS-donneurs, etSCS-donneurs, lesdits groupes électrodonneurs pouvant être porteurs ou non d'un ou plusieurs groupes bétaïne, et/ou d'une fonction réactive, étant entendu que lorsque tous les groupes Arl représentent un groupe phényle, au moins l'un de ces groupes phényle, de préférence deux, voire trois de ces groupes, est(sont) substitué(s) par au moins un groupe Ro comportant un groupement électrodonneur ; caractérisés en ce qu'au moins deux des groupements Chroml, Chrom2 et Chrom3 sont substitués par au moins un groupe Ro porteur d'au moins un groupe bétaïne. 6 - Complexes de lanthanide selon la revendication 5 caractérisés en ce que Chroml, Chrom2 et Chrom3 sont définis comme suit : a. Soit Chroml, Chrom2 et Chrom3, identiques ou différents, sont choisis parmi les groupements : Ani avec Ani tel que défini à la revendication 5, b. Soit Chroml, Chrom2 et Chrom3, identiques ou différents, sont choisis parmi les groupements : et avec Ad qui représente un groupe phényle, thiophényle, furanyle, pyrrolyle ou imidazolyle substitué par s groupes Ro identiques ou différents, s et Ro étant tels que définis à la revendication 5. 7 - Complexes de lanthanide selon la revendication 5 ou 6 caractérisés en ce que les substituants Ro, identiques ou différents, sont choisis parmi : - -L2-Alk, - L2- L3-Q1 et -1_2-1-3-Q2 ; - les groupements NHCO-donneurs choisis parmi : -NHCO(0A1k),-NHCO(NHAlk), -NHCO(NAlk1A1k2), -NHCO(SAlk), - les groupements SCO-donneurs choisis parmi : -SCO(0A1k), -SCO(NHAlk), -SCO(NAlklAlk2), -SCO(SAlk),- les groupements NHCS-donneurs choisis parmi : -NHCS(0A1k), -NHCS(NHAIk), -NHCS(NAIk1AIk2), et - les groupements SCS-donneurs choisis parmi : -SCS(0A1k), -SCS(NHAIk), -SCS(NAlklAlk2), -SCS(SAIk), - Alk, Alkl et Alk2, identiques ou différents, sont des groupes alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, éventuellement substitués par au moins un groupe bétaïne, - Qi représente un groupe bétaïne ou un groupement ramifié porteur d'au moins deux groupes bétaïne, - L2 est une liaison directe, -0-, -S-, -NHCO-, -SCO-, -NHCS- ou -SCS- - L3 est un bras de liaison, et - Q2 est un groupe réactif susceptible de permettre la liaison covalente avec une molécule d'intérêt à marquer, étant entendu qu'au moins deux des substituants Ro présents sont 15 porteurs d'au moins un groupe bétaïne, de manière à ce qu'au moins deux des groupements Chroml, Chrom2 et Chrom3 soient substitués par au moins un groupe Ro porteur d'au moins un groupe bétaïne. 8 - Complexes de lanthanide selon la revendication 5, 6 ou 7 caractérisés en ce que Chroml = Chrom2 = Chrom3. 20 9 - Complexes de lanthanide selon la revendication 5, 6 ou 7 caractérisés en ce que Chroml = Chrom2 et sont substitués par au moins un groupe Ro porteur d'au moins un groupe bétaïne et Chrom3 est substitué par au moins un groupement Ro porteur d'une fonction -L2-L3-Q2, tel que défini à la revendication 7, avec de préférence Q2 qui représente un groupe choisi 25 parmi -COOH, -NH2, un acrylamide, une amine activée, un ester activé, un aldhéhyde, un halogénure d'alkyle, un anhydride, une aniline, un azide, une aziridine, un acide carboxylique, un diazoalcane, un haloacétamide, une halotriazine, une hydrazine, un imido ester, un isocyanate, un isothiocyanate, un maléimide, un halogénure de sulfonyle, un thiol, une cétone, une amine, 30 un halogénure d'acide, un ester d'hydroxysuccinimidyle, un ester de succinimidyle, un ester d'hydroxysulfosuccinimidyle, un azidonitrophényle, unazidophényle, un 3-(2-pyridyl dithio)-propionamide, un glyoxal, une triazine, un groupe acétylénique, et les groupes de formule : 0 0 kiLN--)---(CH2--NCO -()LN--)-{CH2}-NCS ' H v w H v w O N--.)---(C1-12)-N3 0 --(-1LN Hv w eN4_,cH2,..,NE12 H H y w 0 -(3'LN H C1-12)--SH CI-12)-S-S-Ar w W 0 0 -0°N-4--(CH2)---NH-Ar eN--)--{CH23--N H v w H v w NCS 0 eN--)4CH H v 0 eN+,C1-1 H v O 0-N1 w 0 0 CH2----:--=CH w NCO S03" CI N.-= 10 - Complexes de lanthanide selon l'une des revendications 5 à 9 caractérisés en ce que L1 représente une liaison directe ou et les groupes Arl, identiques ou différents, représentent chacun un groupe phényle, substitué par s groupes R0 identiques ou différents, avec s et R0 qui sont tels que définis à la revendication 5, 7, 8 ou 9. 11 - Complexes de lanthanide selon l'une des revendications 5 à 10 10 caractérisés en ce que dans tous les groupes Ad, s est égal à 1. 12 - Complexes de lanthanide selon l'une des revendications 5 à 11 caractérisés en ce que les groupes Ad, identiques ou différents, représentent chacun un groupe phényle choisi parmi les groupements : Ro 15 avec Ro tel que défini à la revendication 5, 7, 8 ou 9. 13 - Complexes de lanthanide selon l'une des revendications 1 à 4 choisis parmi les complexes de lanthanide de formule {III) : Chrom4 3- Chrom4 Chrom4 o dans laquelle 20 - Ln est un lanthanide, notamment Eu, Sm, Tb ou Dy, Chrom4 est choisi parmi les groupements : 3004 189 57 dans lesquels - L1 représente une liaison directe, -C.--C- ou -C---C-, - Ar2 représente un groupe aromatique choisi parmi les groupes phényle, thiophényle, furanyle, pyrrolyle, imidazolyle ou triazolyle, lesdits groupes Ar2 5 étant substitués par s groupes R1 identiques ou différents, - s est égal à 1, 2 ou 3, et - Ri, est choisi parmi les groupes alkyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone porteurs d'au moins un groupe bétaïne ; et les groupements électrodonneurs, notamment 0-donneurs, S-donneurs, NHCO-donneurs, SCO-donneurs, NHCS-donneurs, et SCS-donneurs, lesdits groupes électrodonneurs étant porteur d'un ou plusieurs groupes bétaïne, étant entendu que lorsque le groupe Ar2 représente un groupe phényle, il est substitué par au moins un groupe R1 comportant un groupement électrodonneur. 14 - Complexes de lanthanide selon la revendication 13 caractérisés en ce que Ar2 est choisi : a. soit parmi les groupements : i Ar2; avec Ar2 tel que défini à la revendication 13, b. soit parmi les groupements : et avec Ar2 qui représente un groupe phényle, thiophényle, furanyle, pyrrolyle ou imidazolyle substitué par s groupes R1 identiques ou différents, s et R1 étant tels que définis à la revendication 13. 15 - Complexes de lanthanide selon la revendication 13 ou 14 caractérisés en ce que les substituants Ri,, identiques ou différents, sont choisis parmi : - -L2-Alk, -L2-L3-Q1;-les groupements NHCO-donneurs choisis parmi : -NHCO(0A1k), -NHCO(NHAIk), -NHCO(NAlk1Alk2), -NHCO(SAlk), - les groupements SCO-donneurs choisis parmi : -SCO(0A1k), -SCO(NHAlk), -SCO(NAlk1Alk2), -SCO(SAlk), - les groupements NHCS-donneurs choisis parmi : -NHCS(0A1k), -NHCS(NHAIk), -NHCS(NAlk1A11(2), et - les groupements SCS-donneurs choisis parmi : -SCS(0A1k), -SCS(NHAIk), -SCS(NAlk1Alk2), -SCS(SAlk), - Alk, Alkl et Alk2, identiques ou différents, sont des groupes alkyle 10 comprenant de I. à 10 atomes de carbone, substitué par au moins un groupe bétaïne, - Q représente un groupe bétaïne ou un groupement ramifié porteur d'au moins deux groupes bétaïne, - L2 est une liaison directe, -0-, -S-, -NHCO-, -SCO-, -NHCS- ou -SCS-, 15 - L3 représente un bras de liaison. 16 - Complexes de lanthanide selon la revendication 7, 9 ou 15 caractérisés en ce que L3 représente une liaison covalente, un groupe alkylène de 1 à 12 atomes de carbone, comprenant éventuellement une ou plusieurs double ou triple liaison ; un groupe cycloalkylène de 5 à 8 atomes 20 de carbone, un groupe arylène de 6 à 14 atomes de carbone ; ou un enchainement de un ou plusieurs groupes alkylène de 1 à 12 atomes de carbone, cycloalkylène de 5 à 8 atomes de carbone et/ou arylène de 6 à 14 atomes de carbone ; lesdits groupes alkylène, cycloalkylène ou arylène pouvant ou non comprendre un ou plusieurs hétéroatomes tels que 25 l'oxygène, l'azote, le soufre, le phosphore ou un ou plusieurs carbamoyle ou carboxamido et/ou pouvant être non substitués ou substitués par un ou plusieurs groupe alkyle de 1 à 8 atomes de carbone, aryle de 6 à 14 atome de carbone, sulfonate ou oxo ; les bras de liaison suivants étant préférés :o o n n m -CH2 -0---+CH2H0-(CH2 ---(CH2±0----ECH2)--0H'CH2)-NH-&-iCH m p n m p n 0 O 0 n P ---(C1-12)-NH-2d---(CH2)-N 0\s O N11- 0 CH2 ---(C112)--NH CH2*r --(CH2)-N1-1-(CH23- n P CH2 , p 0 C1-12-NH- CH2 n est égal à 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, m, p et r, identiques ou différents, sont égaux à 1, 2 ou 3, 17 - Complexes de lanthanide selon l'une des revendications 5 à 16 5 caractérisés en ce que Ln3+= Eu3+ ou Sm3+ et L1 représente 18 - Complexes de lanthanide selon l'une des revendications 5 à 16 caractérisés en ce que Ln3+= Eu3+, Sm3+, Tb3+ ou Dy3+ et, de préférence Tb3+ ou Dy3+, et L1 représente une liaison directe. 19 - Complexes de lanthanide selon l'une des revendications 1 à 18 10 caractérisés en ce que les groupes bétaïne sont choisis parmi 0 1-4 ----N -SO3- R SO3-, avec R qui représente un groupe alkyle de 1 à 6 atomes de carbone, et de préférence un méthyle ou éthyle, et q qui est égal à 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, et de 15 préférence qui est égal à 1 ou 2, le groupe -N(C1-13)2+-(C1-12)3-S03- étant préféré. 3004 189 60 20 - Agent chélatant de formule (u) : Chrom I avec Ra qui est un groupe protecteur des fonctions acides tel qu'un alkyle, du type méthyle, et Z, Chrom1, Chrom2 et Chrom3, identiques ou différents, qui sont tels que définis aux revendications 5 à 12, 16 ou 19. 21 - Ligand de formule (I) : Chrom4 N 0(I) ORa ORa avec Ra qui est un groupe protecteur des fonctions acides tel qu'un alkyle, du type méthyle, et Chrom4 qui est tel que défini aux revendications 13 à 15 16 ou 19. (21- -0Ra z"ci OR, Chrom3 Ra0,z 8 formule (Il) Chrom2