Brevet FR3008107A1 — publié le 20150109

AUGMENTATION DE LA RECOMBINAISON MÉIOTIQUE CHEZ LES PLANTES PAR INHIBITION DE LA PROTÉINE FIDG La présente invention est relative à une méthode pour augmenter la recombinaison méiotique chez les plantes. La recombinaison méiotique est un échange d'ADN entre chromosomes homologues au cours de la méiose ; elle 5 intervient pendant la prophase de la première division méiotique. Un des produits de la recombinaison est le crossing-over, qui entraine un échange réciproque de continuité entre deux chromatides homologues. Cette prophase (prophase I) comprend 5 stades successifs : leptotène, 10 zygotène, pachytène, diplotène, et diacinèse. Au leptotène les chromosomes s'individualisent, chaque chromosome étant formé de deux chromatides soeurs issues de la duplication intervenue préalablement à la prophase. Durant le zygotène, les chromosomes homologues s'apparient, formant une structure 15 appelée « bivalent » qui contient quatre chromatides, deux chromatides soeurs maternelles et deux chromatides soeurs paternelles, homologues des chromatides maternelles. Au pachytène les chromosomes sont totalement appariés, et des nodules de recombinaison se forment entre les chromatides 20 homologues étroitement reliées entre elles par le complexe synaptonémal (SC) ; au diplotène, le SC se dissocie progressivement, et les chromosomes homologues commencent à se séparer, mais restent joints au niveau des chiasmas, qui correspondent aux sites de crossing-overs (C0s). Les 25 chromosomes se condensent au cours de la diacinèse ; les chiasmas subsistent jusqu'a la métaphase I pendant laquelle ils maintiennent l'appariement des bivalents de part et d'autre de la plaque équatoriale. La recombinaison méiotique est déclenchée par la 30 formation de cassures double-brin (CDB) dans l'une ou l'autre des chromatides homologues, et résulte de la réparation de ces cassures, utilisant comme matrice une chromatide du chromosome homologue. La recombinaison méiotique a pour conséquence de 35 provoquer un réassortiment des allèles d'origine paternelle et maternelle dans le génome, ce qui contribue à générer de la diversité génétique. Elle présente donc un intérêt particulier dans les programmes d'amélioration des plantes (WIJNKER & de JONG, Trends in Plant Science, 13, 640-646, 2008, CRISMANI et al, Journal of Experimental Botany, 64, 55-65, 2013). Notamment, un contrôle du taux de recombinaison peut permettre d'augmenter le brassage génétique, et donc les probabilités d'obtenir de nouvelles combinaisons de caractéristiques ; elle peut permettre aussi de faciliter l'introgression de gènes d'intérêt, ainsi que la cartographie génétique et le clonage positionnel de gènes d'intérêt. Diverses méthodes pour contrôler la recombinaison méiotique ont été proposées, basées sur la sur-expression ou l'extinction de l'un ou l'autre des très nombreux gènes 15 identifiés comme étant impliqués ou potentiellement impliqués dans ce mécanisme. Par exemple, la Demande PCT W0/0208432 propose la surexpression de la protéine RAD51, qui est impliquée dans la recombinaison homologue, pour stimuler la recombinaison méiotique ; la Demande US 2004023388 propose de 20 surexprimer un activateur de la recombinaison méiotique choisi parmi : SPO11, MRE11, RAD50, XRS2/NBS1, DMC1, RAD51, RPA, MSH4, MSHS, MLH1, RAD52, RAD54, TID1, RAD5S, RADS7, RADS9, une résolvase, une protéine liant l'ADN simple brin, une protéine impliquée dans le remodelage de la chromatine, 25 ou une protéine du complexe synaptonémal, pour augmenter la fréquence de recombinaison entre chromatides homologues ; la Demande PCT WO 2004016795 propose d'augmenter la recombinaison entre chromosomes homologues en exprimant une protéine SP011 fusionnée à un domaine de liaison à l'ADN ; la 30 Demande PCT WO 03104451 propose d'augmenter le potentiel de recombinaison entre des chromosomes homologues par la surexpression d'une protéine (MutS) impliquée dans la réparation des mésappariements. Cependant, dans la plupart des cas, l'effet de 35 ces gènes candidats sur la formation de COs méiotiques in planta n'a pas été confirmé, et il est donc nécessaire d'identifier d'autres gènes intervenant dans ce phénomène. L'un des facteurs connus pour agir sur le taux de recombinaison méiotique est le phénomène d'interférence: la formation d'un CO à un endroit du chromosome inhibe la formation d'autres COs à proximité. Toutefois, il a été montré qu'il existait en fait 2 voies distinctes de formation des COs méiotiques (HOLLINGSWORTH & BRILL, Genes Dev., 18,117-125, 2004 ; BERCHOWITZ & COPENHAVER, Current genomics, 11, 91-102, 2010). La première génère des COs interférents dénommés COs de type I (COI), et fait intervenir un ensemble de gènes collectivement désignés sous les appellations de gènes ZMM (ZIP1, ZIP2/SHOC1, ZIP3, HEI10, ZIP4, MERS, MSH4, MSH5, PTD) ainsi que les protéines MLH1 et MLH3 ; la seconde voie génère des COs non-interférents, dénommés COs de type II (COII), et dépend du gène MUS81. L'utilisation de l'une et/ou l'autre de ces deux voies est variable d'un organisme à l'autre. Chez les végétaux supérieurs, représentés par la plante modèle Arabidopsis thaliana, les 2 voies coexistent, celle des COs de type I étant prédominante ; il a été observé que l'inactivation des gènes AtMSH4, AtMSH5, AtMER3, SHOC1, PTD, AtHEI10 ou AtZIP4 (induisait jusqu'à 85% de réduction de la fréquence des COs (HIGGINS et al., 2004, précité ; MERCIER et al., 2005, précité ; CHELYSHEVA et al., PLoS Genet. 3, e83, 2007 ; HIGGINS et al., Plant J., 55, 28-39, 2008 ; MACAISNE et al., Current Biology, 18, 1432-1437, 2008; WIJERATNE et al, Molecular Biology of the cell, 17, 1331-43; CHELYSHEVA et al, PLoS Genetics 8, e1002799, 2012). Certains chromosomes homologues ne sont de ce fait plus appariés sous forme de bivalents, mais apparaissent sous forme d'univalents. Cette diminution du nombre de bivalents s'accompagne d'une forte réduction de la fertilité. Précédemment, les Inventeurs ont identifié un gène, dénommé FANCM (pour « Fanconi Anemia Complementation Group M »), dont l'inactivation compensait les effets de celle d'AtMSH5, de SHOC1, ou d'AtZIP4, et permettait d'augmenter le nombre de COs méiotiques (Demande PCT WO 2013/038376). En poursuivant leurs recherches, les Inventeurs ont maintenant identifié un autre gène dont l'inactivation produit des effets similaires à celle de FANCM. Il s'agit du gène « FIDGETIN » (FIDG) d'Arabidgpsis thaliana (AtFIDG) : son inactivation compense les effets de celle d'AtMSH5, de SHOC1, d'AtZIP4, ou d'AtHEI10 et permet d'augmenter le nombre de COs méiotiques et de restaurer la fertilité chez les mutants zmm Atzip4-/-, Atmsh5-/-, shocl-/- et Athei10-/-. Les Inventeurs ont en outre découvert que les effets de l'inactivation du gène FIDG sur l'augmentation du nombre de COs méiotiques se produisaient non seulement chez les mutants zmm, mais également chez les plantes de type sauvage possédant des gènes ZMM fonctionnels, et que lorsque l'inactivation du gène FIDG était combinée à celle du gène FANCM, le nombre de COs méiotiques était encore augmenté par rapport à ceux observés lorsque ces gènes étaient inactivés séparément. Par ailleurs, aucune influence de l'inactivation du gène FIDG sur le phénotype somatique n'a été observée. Le premier mutant fidg a été décrit dès 1943 (Grüneberg, Journal of Genetics, 45, 22-28, 1943), comme étant associé chez la souris à un nouveau phénotype comprenant des hochements répétés de la tête et des mouvements circulaires de l'animal. COX et al. (Nat Genet, 25 26, 198-202, 2000) ont identifié le gène FIDGETIN dont la mutation était responsable de ce phénotype, et ont également découvert l'existence, chez la souris, de 2 gènes apparentés qui ont été dénommés FIDGETIN-LIKE 1 et FIDGETIN-LIKE 2. Différentes fonctions des protéines FIDG ont été décrites, 30 les impliquant notamment dans la régulation de la prolifération et de la différenciation des ostéoblastes (PARK et al., J Bone Miner Res, 22, 889-96, 2007), la régulation de la spermatogenèse (L'HOTE et al., PLoS One, 6, e27582, 2011), le sectionnement des microtubules (MUKHERJEE et al., Cell 35 Cycle, 11, 2359-66, 2012), et la participation à un complexe, contenant hsRAD51, impliqué dans la réparation de cassures double-brin dans des cellules somatiques (YUAN & CHEN, Proc Natl Acad Sci USA, 2013). Les protéines FIDG appartiennent à la famille des AAA-ATPases (ATP-ases Associated with various Activities), et plus particulièrement au sous-groupe 7 (BEYER, Protein Sci, 6, 2043-58, 1997 ; FRICKEY & LUPAS, J Struct Biol, 146, 2-10, 2004). Ce sous-groupe comprend également les protéines KATANIN et SPASTIN qui sont, tout comme FIDGETIN, décrites comme des enzymes de sectionnement des microtubules. Elles ont été impliquées dans la régulation du nombre et de la taille de microtubules chez des nombreuses espèces : C. elegans (YAKUSHIJI et al., FEBS Lett, 578, 191-7, 2004) ; D. melanogaster (ZHANG et al., J Cell Biol, 177, 231-42, 2007) ; H. sapiens (NUKHERJEE et al., Cell Cycle, 11, 235966, 2012); A. thaliana, (STOPPIN-MELLET et al., Biochem J, 365, 337-42, 2002). Les protéines FIDG apparaissent conservées chez les animaux et les plantes, mais semblent absentes chez les levures. Chez les animaux, de une à trois protéines apparentées ont été identifiés à FIDGETIN, (notamment trois chez les mammifères) ; en revanche, un seul représentant de cette famille a été identifié dans le génome du nématode C. elegans, du xénope, ainsi que dans ceux de la plupart des plantes. Qu'elles soient animales ou végétales, les protéines FIDG présentent deux domaines protéiques conservés : un domaine AAA-ATPase, avec un rôle putatif d'hydrolyse de l'ATP ; ainsi qu'un domaine VSP4, connu pour jouer un rôle important dans la liaison aux microtubules. Ces deux domaines sont respectivement répertoriés sous les références PF00004 et PF09336 dans la base de données PFAM (PUNTA et al., Nucleic Acids Res. Database Issue 40:D290- D301, 2012). La séquence de la protéine FIDG d'Arabidopsis thaliana déterminée par les Inventeurs par séquençage de l'ADN complémentaire (cDNA) dérivé de l'ARN messager codant 35 FIDG, est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 1. La séquence du gène FIDG correspondant est une séquence composite des deux gènes chevauchants répertoriés sur la base de données TAIR10 sous les références AT3G27120 et AT3G27130. L'ARN messager est composé de 13 exons, le départ de traduction étant celui du gène prédit comme AT3G27130 et le codon stop appartenant au gène prédit comme AT3G27120 (la protéine est codée sur le brin Crick). Un site d'épissage mal prédit est à l'origine de la mauvaise annotation de ce gène dans les bases de données. Une recherche dans les bases de données de séquences a permis d'identifier des orthologues d'AtFIDG chez un large panel d'eucaryotes, et il très probable que cette 10 protéine est conservée dans l'ensemble des plantes terrestres. A titre d'exemple non limitatifs d'orthologues d'AtFIDG on citera notamment: la protéine de Brachypodium distachyon dont la séquence polypeptidique est disponible dans la base de données 15 Genbank sous le numéro d'accès XM 003576467 ; la protéine de Carica papaya dont la séquence polypeptidique est prédite dans la base de données Phytozome sous le numéro d'accès evm.model.supercontig171.22 et dans la base de données 20 PLAZA sous le numéro d'accès CP00171G00260 la protéine de Fragaria vesca dont la séquence polypeptidique prédite figure dans la base de données Phytozome sous le numéro d'accès mrna25885.1 et dans la base de données PLAZA sous le numéro d'accès FV6G37220 ; 25 chez Glycin max, deux gènes issus d'une duplication spécifique à cette espèce existent ; leur séquence polypeptidique est disponible dans la base de données Phytozome sous les numéros d'accès G1ymal9g18350.2 et Glyma05g14440.2 , et dans la base de données PLAZA sous 30 les numéros d'accès respectifs GM19G18350 et GM05G14440 - la protéine de Oryza sativa dont la séquence polypeptidique est disponible dans la base de données GenBank sous le numéro d'accès ABA97741 ; la protéine de Populus tri cocarpa dont la séquence polypeptidique est disponible dans la base de données GenBank sous le numéro d'accès POPTR 0001s33870 ; la protéine de Ricinus communis dont la séquence polypeptidique est disponible dans la base de données Genbank sous le numéro d'accès XM 002509479 ; la protéine de Solanum lycopersicum dont la séquence polypeptidique est disponible dans la base de données Genbank sous le numéro d'accès XM 004233540.1 ; la protéine de Sorghum bicolor dont la séquence polypeptidique est disponible dans la base de données Genbank sous le numéro d'accès XM 002442067.1 ; la protéine de Theobroma cacao dont la séquence polypeptidique est prédite dans la base de données Phytozome sous le numéro d'accès ThecclEG017182t1 et dans la base de données PLAZA sous le numéro d'accès TC04G003320; la protéine de Vitis vinifera dont la séquence polypeptidique est disponible dans la base de données GenBank sous le numéro d'accès CBI21358 ; la protéine de Zea mays dont la séquence polypeptidique est disponible dans la base de données GenBank sous le numéro d'accès DAA54951 ; la protéine de Hordeum vulgare dont la séquence polypeptidique est disponible dans la base de données Genbank sous le numéro d'accès BAK02801.1 la protéine de Triticum urartu dont la séquence polypeptidique est disponible dans la base de données Genbank sous le numéro d'accès EMS65393.1 La présente invention a pour objet une méthode pour augmenter la fréquence des COs méiotiques chez une plante, caractérisée en ce qu'elle comprend l'inhibition dans ladite plante, d'une protéine ci-après dénommée FIDG, ladite protéine ayant au moins 35%, et par ordre de préférence croissante, au moins 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% d'identité de séquence, ou au moins 50%, et par ordre de préférence croissante, au moins 50,55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% de similarité de séquence avec la protéine AtFIDG de séquence SEQ ID NO: 1, et contenant un domaine AAA-ATPase (PF00004) et un domaine VSP4 (PF09336). De préférence, ladite protéine a au moins 70%, et par ordre de préférence croissante, au moins 75, 80, 85, 90, 10 95 ou 98% d'identité de séquence, ou au moins 80%, et par ordre de préférence croissante, au moins 85, 90, 95 ou 98% de similarité de séquence avec l'un quelconque des orthologues d'AtFIDG dont la liste est indiquée ci-dessus. Selon un mode de mise en oeuvre préféré de la 15 présente invention, le domaine AAA-ATPase de ladite protéine FIDG a au moins 60%, et par ordre de préférence croissante, au moins 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% d'identité de séquence, ou au moins 70%, et par ordre de préférence croissante, au moins 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% de similarité 20 de séquence avec le domaine AAA-ATPase de la protéine AtFIDG (acides aminés 431-561 de la SEQ ID NO: 1). Selon un autre mode de mise en oeuvre préféré de la présente invention, le domaine VSP4 de ladite protéine FIDG a au moins 60%, et par ordre de préférence croissante, 25 au moins 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% d'identité de séquence, ou au moins 70%, et par ordre de préférence croissante, au moins 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% de similarité de séquence avec le domaine VSP4 de la protéine AtFIDG (acides aminés 623-672 de la SEQ ID NO: 1). 30 Avantageusement, ladite protéine FIDG contient en outre un domaine de liaison à RAD51, ayant au moins 50%, et par ordre de préférence croissante, au moins 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% d'identité de séquence, ou au moins 70%, et par ordre de préférence croissante, au moins 75, 80, 35 85, 90, 95 ou 98% de similarité de séquence avec les acides aminés 268-346 de la SEQ ID NO: 1. Sauf précisions contraire, les valeurs d'identité et de similarité de séquence indiquées ici sont calculées sur la totalité de la longueur des séquences comparées, en utilisant l'algorithme d'alignement global de NeedlemanWunsch (programme Needle EMBOSS avec les paramètres par défaut). Les calculs de similarité sont effectués en utilisant la matrice BLOSUM62. L'inhibition peut notamment être obtenue par mutagenèse du gène FIDG. Par exemple, une mutation dans la séquence codante peut induire, selon la nature de la mutation, l'expression d'une protéine inactive, OU d'une 10 protéine à activité réduite; une mutation au niveau d'un site d'épissage peut également altérer ou abolir la fonction de la protéine ; une mutation dans la séquence promotrice peut induire l'absence d'expression de ladite protéine, ou la diminution de son expression. 15 La mutagenèse peut être effectuée par exemple par la suppression de tout ou partie de la séquence codante ou du promoteur de FIDG, ou par insertion d'une séquence exogène, par exemple un transposon ou un ADN-T, au sein de ladite séquence codante ou dudit promoteur. Elle peut également être 20 effectuée en induisant des mutations ponctuelles, par exemple par mutagénèse EMS, par radiations, ou par mutagénèse dirigée, par exemple à l'aide de nucléases TALENs (Transcription Activator-Like Effector Nucleases) ou de nucléases à doigt de zinc (CHRISTIAN et al., Genetics, 186, 25 757-61, 2010; CURTIN et al., Plant Gen., 5, 42-50, 2012). Les allèles mutés peuvent être détectés par exemple par PCR, en utilisant des amorces spécifiques du gène FIDG. Différentes méthodes de mutagénèse et de criblage 30 à haut débit sont décrites dans l'art antérieur. A titre d'exemples, on peut citer des méthodes de type « TILLING » (Targeting Induced Local Lesions In Genome), décrit par McCALLUM et al., Plant Physiol., 123, 439-442, 2000). L'absence de fonctionnalité de FIDG chez les mutants peut 35 être vérifiée sur la base des caractéristiques phénotypiques de leur descendance ; les plantes homozygotes pour une mutation inactivant le gène FIDG ont un taux de COs méiotiques supérieur à celui des plantes sauvages (ne portant pas la mutation dans le gène FIDG) dont elles sont issues. Généralement ce taux de COs méiotiques est supérieur d'au moins 50%, de préférence au moins 2 fois supérieur à celui des plantes sauvages dont elles sont issues. Alternativement, l'inhibition de la protéine FIDG est obtenue par extinction (silencing) du gène FIDG. Différentes techniques d'extinction de gènes dans les plantes sont connues en elles-mêmes (pour revue voir par exemple : WATSON & GRIERSON, Transgenic Plants : Fundamentals and Applications (Hiatt, A, ed) New York : Marcel Dekker, 255281, 1992 ; CHICAS & MACINO, EMBO reports, 21, 992-996, 2001). On peut citer l'inhibition antisens ou co-suppression, décrites par exemple dans les Brevets US°5190065 et US°5283323. Il est également possible d'utiliser des ribozymes ciblant l'ARNm de la protéine FIDG. De préférence, l'extinction du gène FIDG est induite par interférence ARN ciblant ledit gène. Un ARN interférent (ARNi) est un petit ARN qui peut éteindre un gène cible de manière séquence spécifique. 20 Les ARN interférents comprennent en particulier les « petits ARN interférents » (siRNA) et les micro-ARN (miRNA). Initialement, les constructions d'ADN pour exprimer des ARN interférents dans les plantes contenaient un fragment de 100 pb ou plus (généralement de 100 à 800 pb) de 25 l'ADNc du gène ciblé, sous contrôle transcriptionnel d'un promoteur approprié. Actuellement, les constructions les plus largement utilisées sont celles qui peuvent produire un transcrit d'ARN en épingle à cheveux (hpRNA). Dans ces constructions, le fragment du gène cible est inversement 30 répété, avec généralement une région d'espacement entre les répétitions (pour revue, cf. WATSON et al., FEBS Letters, 579, 5982-5987, 2005). On peut également utiliser des micro- ARN artificiels (amiRNAs) dirigés contre le gène FIDG (OSSOWSKI et al., The Plant Journal, 53, 674-690, 2008 ; 35 SCHWAB et al., Methods Mol Biol., 592, 71-88, 2010 ; WEI et al., Funct Integr Genomics., 9, 499-511, 2009). La présente invention a pour objet des constructions d'ADN recombinant, et notamment des cassettes d'expression, produisant un ARNi permettant d'éteindre le gène FIDG. Une cassette d'expression conforme à l'invention comprend une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARNi, notamment un hpRNA ou un amiRNA, ciblant le gène FIDG, placée sous contrôle transcriptionnel d'un promoteur fonctionnel dans une cellule végétale. Un large choix de promoteurs appropriés pour l'expression de gènes hétérologues dans des cellules 10 végétales ou des plantes est disponible dans l'art. Ces promoteurs peuvent être obtenus par exemple à partir de plantes, de virus de plantes, ou de bactéries comme Agrobacterium. Ils incluent des promoteurs constitutifs, à savoir des promoteurs qui sont actifs dans la plupart des 15 tissus et cellules et dans la plupart des conditions environnementales, ainsi que des promoteurs tissu-spécifiques ou cellule spécifiques, qui sont actifs uniquement ou principalement dans certains tissus ou certains types de cellules, et des promoteurs inductibles qui sont activés par 20 des stimuli physiques ou chimiques. Des exemples de promoteurs constitutifs qui sont couramment utilisés dans les cellules végétales sont le promoteur 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur (CaMV) décrit par KAY et al. (Science, 236, 4805, 1987), ou ses 25 dérivés, le promoteur du virus de la mosaïque des nervures de manioc (CsVMV) décrit dans la Demande Internationale WO 97/48819, le promoteur de l'ubiquitine du maïs ou le promoteur « Actine-Intron-actine » du riz (McELROY et al., Mol. Gen. Genet., 231, 150-160, 1991 ; GenBank numéro d'accès 30 S 44221). Dans le cadre de la présente invention on pourra aussi utiliser un promoteur spécifique de la méiose (c'est-à-dire actif exclusivement ou préférentiellement dans les cellules en méiose). A titre d'exemple non limitatif on peut 35 citer le promoteur DMC1 (KLIMYUK & JONES, Plant J., 11, 1-14, 1997). Les cassettes d'expression de l'invention comprennent généralement un terminateur transcriptionnel, par exemple le terminateur 3'NOS de la nopaline synthase (DEPICKER et al., J. Mol. Appl. Genet., 1, 561-573, 1982), ou le terminateur 3'CaMV (FRANCK et al., Cell, 21, 285-294, 1980). Elles peuvent également comprendre d'autres éléments 5 de régulation de la transcription tels que des amplificateurs. Les constructions d'ADN recombinant conformes à l'invention englobent également des vecteurs recombinants contenant une cassette d'expression conforme à l'invention. 10 Ces vecteurs recombinants peuvent également inclure un ou plusieurs gènes marqueurs, qui permettent la sélection des cellules ou plantes transformées. Le choix du vecteur le plus approprié dépend notamment de l'hôte prévu et de la méthode envisagée pour la 15 transformation de l'hôte en question. De nombreuses méthodes pour la transformation génétique de cellules végétales ou de plantes sont disponibles dans l'art, pour de nombreuses espèces végétales, dicotylédones ou monocotylédones. A titre d'exemples non-limitatifs, on peut citer la transformation 20 médiée par virus, la transformation par microinjection, par électroporation, la transformation par microprojectiles, la transformation par Agrobacterium, etc. L'invention a également pour objet une cellule-hôte comprenant une construction d'ADN recombinant conforme à 25 l'invention. Ladite cellule-hôte peut être une cellule procaryote, par exemple une cellule d'Agrobacterium, ou une cellule eucaryote, par exemple une cellule végétale génétiquement transformés par une construction d'ADN de l'invention. La construction peut être exprimée 30 transitoirement, elle peut aussi être incorporée dans un réplicon extrachromosomique stable, ou intégrée dans le chromosome. L'invention fournit également un procédé pour produire une plante transgénique ayant un taux de COs 35 méiotiques supérieur à celui de la plante sauvage dont elle est issue, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - la transformation d'une cellule végétale avec un vecteur contenant une cassette d'expression conforme à l'invention ; - la culture de ladite cellule transformée afin 5 de régénérer une plante ayant dans son génome un transgène contenant ladite cassette d'expression. L'invention englobe également des plantes génétiquement transformées par une construction d'ADN de l'invention. De préférence, lesdites plantes sont des plantes 10 transgéniques, dans laquelle ladite construction est contenue dans un transgène intégré dans le génome de la plante, de sorte qu'il est transmis aux générations successives de plantes. L'expression de la construction d'ADN de l'invention résulte en une régulation négative de l'expression du gène 15 FIDG, qui confère auxdites plantes transgéniques un taux de COs méiotiques supérieur à celui des plantes sauvages (ne contenant pas la construction d'ADN de l'invention) dont elles sont issues. Généralement ce taux de COs méiotiques est supérieur d'au moins 50%, de préférence au moins 2 fois 20 supérieur à celui des plantes sauvages dont elles sont issues. De manière particulièrement avantageuse, le taux de COs méiotiques peut encore être augmenté en combinant dans une même plante, l'inhibition de la protéine FIDG avec celle 25 de la protéine FANCM. Dans ce cas, le taux de COs méiotiques est au moins 3 fois supérieur, de préférence au moins 5 fois supérieur à celui des plantes sauvages dont elles sont issues. L'augmentation du taux de COs méiotiques par 30 inhibition de la protéine FANCM est décrite dans la Demande PCT W02013038376, dont le contenu est incorporé par référence à la présente description. La protéine FANCM est définie comme une protéine ayant au moins 30% et par ordre de préférence croissante, au 35 moins 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% d'identité de séquence, ou au moins 45%, et par ordre de préférence croissante, au moins 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% de similarité de séquence avec la protéine AtFANCM d'Arabidopsis thaliana (GenBank : NP 001185141 ; UniProtKB : F4HYE4), et contenant un domaine hélicase DEXDc (cd00046) et un domaine hélicase HELICc (cd00079). De préférence, le domaine hélicase DEXDc a au moins 65%, et par ordre de préférence croissante, au moins 70,75, 80, 85, 90, 95 ou 98% d'identité de séquence, ou au moins 75%, et par ordre de préférence croissante, au moins 80,85, 90, 95 ou 98% de similarité de séquence avec le domaine DEXDc (acides aminés 129-272) de la protéine AtFANCM, et le domaine hélicase HELICc a au moins 60%, et par ordre de préférence croissante, au moins 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% d'identité de séquence, ou au moins 70%, et par ordre de préférence croissante, au moins 75, 80, 85, 90, 95 ou 98% de similarité de séquence avec le domaine HELICc (acides aminés 445-570) de la protéine AtFANCM. La séquence polypeptidique de la protéine AtFANCM est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 2. La présente invention a donc également pour objet : - un procédé pour augmenter la fréquence des COs méiotiques chez une plante, comprenant l'inhibition dans ladite plante, de la protéine FIDG et de la protéine FANCM ; - des cassettes et vecteurs d'expression comprenant une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit 25 est un ARN interférent ciblant le gène FIDG, et une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FANCM ; - des cellules-hôtes et des plantes transgéniques co-transformées par une séquence d'ADN recombinant dont le 30 transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FIDG, et une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FANCM ; - des plantes mutantes contenant dans le gène FIDG une mutation induisant l'inhibition de la protéine FIDG, 35 et dans le gène FANCM une mutation induisant l'inhibition de la protéine FANCM ; - des plantes mutantes et transgéniques, contenant dans le gène FIDG une mutation induisant l'inhibition de la protéine FIDG, et transformées par une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FANCM , ou bien contenant dans le gène FANCM une mutation induisant l'inhibition de la protéine FANCM, et transformées par une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FIDG. La présente invention peut s'appliquer notamment dans le domaine de l'amélioration des plantes, afin d'accélérer l'obtention de nouvelles variétés. Elle permet aussi de faciliter la recombinaison entre espèces apparentées, et donc l'introgression de caractères d'intérêt. Elle permet également d'accélérer l'établissement de cartes génétiques et les clonages positionnels. La présente invention s'applique à un large éventail de plantes d'intérêt agronomique monocotylédones ou dicotylédones. A titre d'exemples non-limitatifs, on peut citer le colza, le tournesol, la pomme de terre, le maïs, le blé, l'orge, le seigle, le sorgo, le riz, le soja, le 20 haricot, la carotte, la tomate, la courgette, le poivron, l'aubergine, le navet, l'oignon, le pois, le concombre, le poireau, l'artichaut, la betterave, le choux, le chou-fleur, les salades, l'endive, le melon, la pastèque, le fraisier, le pommier, le poirier, le prunier, le peuplier, la vigne, le 25 coton, la rose, la tulipe, etc. La présente invention sera mieux comprise l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples non-limitatifs illustrant les effets de mutations du gène AtFIDG sur la recombinaison méiotique et le 30 taux de COs. EXEMPLE 1 : OBTENTION DE MUTANTS SUPPRESSEURS DE MUTATIONS DE GÈNES Z1414 Des graines d'Arabidopsis thaliana homozygotes pour l'insertion d'ADN-T dans AtZIP4, SHOC1, AtHEI10, AtMSH5 35 ou AtMSH4 (Atzip4-/-, shocl-/-, Athei10-/-,Atmsh5-/- ou Atmsh4-/-) ont été mutées par EMS (éthylméthane sulfonate). Les plantes issues des graines mutées (population Ml, hétérozygotes pour les mutations induites par l'EMS, et homozygotes pour la mutation du gène ZMM) ont un phénotype identique, résultant de l'inactivation du gène ZMM, qui se traduit par une diminution forte de la fréquence de CO, qui 5 mène à une diminution forte du nombre de bivalents, et une baisse très importante de la fertilité (plantes « semi stériles »), résultant en la formation de siliques courtes qui se différencient facilement de celles des plantes sauvages. Les plantes M1 ont été auto-pollinisées, pour 10 produire une population de descendants (population M2) contenant potentiellement des plantes homozygotes pour les mutations induites par l'EMS. Des plantes de la population M2 ayant des siliques plus longues que celles des plantes zmm homozygotes de la génération M1 ont été sélectionnées et 15 génotypées afin de vérifier leur statut homozygote pour l'insertion d'ADN-T dans le gène ZMM concerné. Ce sont des suppresseurs. Le nombre de bivalents en métaphase I de ces suppresseurs a été comparé avec celui de plantes sauvages et de plantes zmm homozygotes non-mutées à l'EMS. 20 Les résultats sont illustrés par la Figure 1. Légende de la Figure 1 : en abscisse, phénotype des plantes testées ; en ordonnée nombre de bivalents (en noir) et de paires univalents (en gris clair) par méiose. Alors que les plantes sauvages montrent 25 systématiquement 5 bivalents par méiose, les mutants zmm-/-, notamment Atzip4-/-, montrent une forte diminution du nombre de bivalents (et donc l'apparition d'univalents). Les mutations dans FIDGETIN en fond Atzip4-/- (suppresseurs 339 et 346) permettent de restaurer partiellement la formation de 30 bivalents. Les simples mutants fidg présentent, comme le sauvage, 5 bivalents. Dans les plantes zmm/SUPPRESSEUR, on observe une mauvaise ségrégation des chromosomes qui résulte d'une diminution du nombre de bivalents, induite par la mutation 35 zmm, et qui conduit à des gamètes déséquilibrés, non-viables. Au contraire, dans les plantes zmm/suppresseur, le nombre de bivalents est plus élevé, assurant une fertilité en partie restaurée. Les simple mutants ZMM/suppresseur se comportent comme les normale des équilibrés. plantes sauvages, on observe une ségrégation chromosomes, conduisant à la formation de gamètes présentent Les plantes zmm/suppressor et ZMM/suppressor ne par ailleurs pas de différences somatiques phénotypiques visibles avec les plantes sauvages. Les mutations induites par l'EMS sont récessives. En effet, elles ne se traduisent pas par un phénotype détectable à l'état hétérozygote dans la population de mutants Ml, et les plantes résultant du rétrocroisement des mutants zmm/suppressor avec les mutants zmm initiaux dont ils sont respectivement issus, ont un phénotype qui ne diffère pas de celui des mutants initiaux. Par ailleurs, la ségrégation des phénotypes « fertile » et « semi-stérile » chez les descendants issus de l'auto-pollinisation des plantes résultant du rétrocroisement des mutants zmm/suppressor avec les mutants zmm initiaux dont ils sont respectivement issus indique qu'un seul locus est concerné par la mutation. EXEMPLE 2 : LOCALISATION DANS LE GÈNE FIDGETIN Parmi les mutants EMS décrits à l'Exemple 1 ci- dessus, deux lignées de mutants suppresseurs de la mutation du gène ZIP4 (Figure 1), trois lignées de mutants suppresseurs de la mutation du gène SHOC1, trois lignées de mutants suppresseurs de la mutation du gène AtMSH5, trois lignées de mutants suppresseurs de la mutation du gène AtHEI10, ainsi que une lignée de mutant suppresseurs de la mutation du gène AtMSH4 ont été isolées. Ces lignées sont respectivement dénommées : zip4 (s) 339, zip4(s)346, msh5 (s) 647, msh5 (s) 5, msh5 (s) 652, shocl (s) 101, shocl (s) 123, shoc1(s) 161, heil0(s)141, heil0(s)208, heil0(s)235, msh4 (s) 80. Les mutations correspondantes ont toutes été localisées dans la séquence génomique d'AtFIDGETIN. Des tests de complémentation ont confirmé que ces mutations étaient 35 bien responsables du phénotype observé. Le Tableau I ci-dessous indique la nature et la position des mutations identifiées. Tableau I Allèles de FIDG Changement dans la séquence Changement dans la séquence nucléotidique (TAIR 10) protéique zip4(s)339 fidg-2 Chr3 10 001 129: C>T Site d'épissage modifié zip4(s)346 fidg-1 Chr3 10 001 783: délétion 1pb Décalage de phase, STOP msh5(s)647 fidg-3 Chr3 10 000 278: C>T STOP msh5(s)5 fidg-4 Chr3 10 004 090: C>T STOP msh5(s)652 fidg-5 Chr3 10 001 772: C>T Changement d'acide aminé : E>K shoc1(s)101 fidg-6 Chr3 10 001 017: G>A Changement d'acide aminé: L>F shocl(s)123 fidg-7 Chr3 10 001 812: C>T Site d'épissage modifié shocl(s)161 fidg-8 Chr3 10 001 909: G>A Changement d'acide aminé: R>K hei10(s)141 fidg-9 Chr3 10 001 970: C>T STOP hei10(s)208 fidg-10 Chr3 10 000 328: C>T Changement d'acide aminé: E>K hei10(s)235 fidg-11 Chr3 10 001 422: C>T Changement d'acide aminé: D>N msh4(s)80 fidg-12 Chr3 10 000 840: C>T Changement d'acide aminé: L> F EXEMPLE 3 : INFLUENCE DE L'INACTIVATION DU GÈNE FIDG SUR LA FRÉQUENCE DE RECOMBINAISON MÉIOTIQUE Les fréquences de recombinaison méiotique chez 5 des plantes mutantes fidg et sauvages ont été comparées. La fréquence de recombinaison méiotique a été mesurée par analyse de tétrades à l'aide de marqueurs fluorescents, comme décrit par BERCHOWITZ & COPENHAVER (Nat. Protoc., 3, 41-50, 2008). La distance génétique a été mesurée sur 2 intervalles 10 adjacents sur le chromosome 2 (I2a et I2b), 2 intervalles adjacents du chromosome 3 (I3b et I3c), ainsi que 2 intervalles adjacents sur le chromosome 5 (intervalles I5c et I5d). Les résultats sont illustrés par la Figure 2 et le tableau II. 15 Légende de la Figure 2 : [1: : plantes sauvages ; ^ : plantes fidg-1; Axe des abscisses : Intervalles testés, selon la nomenclature de BERCHOWITZ & COPENHAVER (Nat. Protoc., 3, 41- 20 50, 2008). I2a et I2b sont deux intervalles adjacents sur le chromosome 2 ; I3b et I3c sur le chromosome 3 ; I5c et I5d sur le chromosome 5. Axe des ordonnées : distance génétique (en cM) La mutation du gène FIDGETIN augmente la 25 recombinaison par rapport au sauvage de 72% en moyenne sur les 6 intervalles. EXEMPLE 4 : INFLUENCE DE L'INACTIVATION COMBINÉE DES GÈNES FIDG ET FANCM SUR LA FRÉQUENCE DE RECOMBINAISON MÉIOTIQUE De la même façon que dans l'exemple 2, les fréquences de mutant fidgl-1 la figure 3 et Légende recombinaison ont été mesurées dans le double fancm-1. Les résultats sont représentés dans dans le Tableau II. de la Figure 3 : Sauvage fidg-1 fancm fidg-1 fancm-1 Axe des abscisses : intervalle testé. Axe des ordonnées : distance génétique (en cM) sur l'intervalle I5c et I5d. Le Tableau II représente les tailles génétiques (en cM) des différents intervalles chez les différents mutants (les erreurs standard sont indiquées entre parenthèses ; ND : non déterminé). Tableau II cM sauvage +/- fidg-1 +1- fancm-1 +1- fidg-1 +/- fancm-1 12a 2,8 (0,2) 4,9 (0,3) 9,0 (0,7) ND 12b 4,8 (0,3) 9,4 (0,5) 17,1 (1,0) ND 13c 5,8 (0,5) 9,7 (0,7) 15,4 (1,1) ND I3d 19,7 (1,1) 24,2 (1,2) 34,5 (2,0) ND I5c 6,2 (0,1) 9,6 (0,5) 17,8 (0,6) 35,7 (2,6) I5d 6,3 (0,1) 13,5 (0,8) 21,5 (0,8) 49,3 (3,4) Ces résultats montrent que l'inactivation conjointe de FIDG et FANCM conduit à une augmentation de la recombinaison d'en moyenne 7 fois par rapport au sauvage.25 REVENDICATIONS1) Procédé pour augmenter la fréquence des COs méiotiques chez une plante, caractérisé en ce qu'il comprend l'inhibition dans ladite plante, d'une protéine ci-après dénommée FIDG, ladite protéine ayant au moins 45% d'identité de séquence, ou au moins 60% de similarité de séquence avec la protéine AtFIDG de séquence SEQ ID NO: 1 et contenant un domaine AAA-ATPase et un domaine VSP4. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend en outre l'inhibition dans ladite plante, d'une protéine ci-après dénommée FANCM, ladite protéine ayant au moins 30% d'identité de séquence, ou au moins 45% de similarité de séquence avec la protéine AtFANCM de séquence SEQ ID NO: 2, et contenant un domaine hélicase DEXDc et un domaine hélicase HELICc. 3) Procédé selon une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'inhibition de la protéine FIDG et le cas échéant de la protéine FANCM, est obtenue par mutagenèse du gène codant pour ladite protéine ou de son promoteur. 4) Procédé selon une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'inhibition de la protéine FIDG et le cas échéant de la protéine FANCM, est obtenue par extinction du gène codant pour ladite protéine en exprimant dans ladite plante un ARN interférent ciblant ledit gène. 5) Cassette d'expression, caractérisée en ce qu'elle comprend une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FIDG placée sous contrôle transcriptionnel d'un promoteur fonctionnel dans une cellule végétale. 6) Cassette d'expression selon la revendication 5, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FANCM, placée sous contrôle transcriptionnel d'un promoteur fonctionnel dans une cellule végétale. 7) Vecteur recombinant contenant une cassette d'expression selon une quelconque des revendications 5 ou 6. 8) Cellule-hôte contenant une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FIDG placée sous contrôle transcriptionnel d'un promoteur fonctionnel dans ladite cellule. 9) Cellule-hôte selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'elle contient en outre une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FANCM placée sous contrôle transcriptionnel d'un promoteur fonctionnel dans ladite cellule. 10) Plante mutante caractérisée en ce qu'elle contient une mutation dans le gène FIDG, ladite mutation induisant l'inhibition de la protéine FIDG dans ladite plante. 11) Plante mutante selon la revendication 10 15 caractérisée en ce qu'elle contient en outre une mutation dans le gène FANCM, ladite mutation induisant l'inhibition de la protéine FANCM dans ladite plante. 12) Plante mutante selon la revendication 10 caractérisée en ce qu'elle contient en outre une séquence 20 d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FANCM placée sous contrôle transcriptionnel d'un promoteur fonctionnel dans ladite plante. 13) Plante transgénique contenant un transgène comprenant une séquence d'ADN recombinant dont le transcrit 25 est un ARN interférent ciblant le gène FIDG, placée sous contrôle transcriptionnel d'un promoteur fonctionnel dans ladite plante. 14) Plante transgénique selon la revendication 13, caractérisée en ce qu'elle contient en outre une séquence 30 d'ADN recombinant dont le transcrit est un ARN interférent ciblant le gène FANCM placée sous contrôle transcriptionnel d'un promoteur fonctionnel dans ladite plante. 15) Plante transgénique selon la revendication 13, caractérisée en ce qu'elle contient en outre une mutation 35 dans le gène FANCM, ladite mutation induisant l'inhibition de la protéine FANCM dans ladite plante.