Brevet FR3008891A1 — publié le 20150130

PRINCIPE ACTIF A APPLICATION CUTANEE OBTENU A PARTIR DE METSCHNIKOWIA PULCHERRIA4A ET UTILISATION COSMETIQUE La présente invention se rapporte à un principe actif obtenu à partir de Metschtykowla pulcherritna, et à son utilisation cosmétique en particulier pour améliorer et/ou restaurer l'éclat du teint. L'invention concerne également les compositions cosmétiques incluant ce principe 5 actif, et un procédé de traitement cosmétique destiné à prévenir et/ou traiter une altération ou une perte de l'éclat du teint. La peau, barrière entre le corps et les éléments extérieurs, se trouve directement confrontée à diverses agressions quotidiennes qui altèrent son fonctionnement et son aspect. Le vieillissement environnemental en particulier 10 met en jeu des radicaux libres de diverses sources qui peuvent être endogènes (activation du métabolisme de l'acide arachidonique, activation de la phagocytose ou accumulation de métabolites réduits) ou exogènes (radiations, rayons UV, pollution de l'air, fumée de cigarettes, pesticides, etc.). Ces radicaux ont une durée de vie très courte, mais sont très réactifs. Produits en quantité excessive, 15 les radicaux libres oxygénés (ROS) s'attaquent à toute une série de substrats biologiques, et les systèmes de défense des cellules sont alors submergés. Les ROS provoquent des dégâts cellulaires souvent irréversibles, intenses et ciblés, en particulier l'oxydation des protéines, des cassures de l'ADN et la peroxydation des lipides. 20 L'oxydation des acides aminés conduit à la formation de groupements hydroxyles sur les chaînes latérales des protéines qui peut aboutir à la fragmentation des chaines polypeptidiques ou à des réticulations intra- ou intermoléculaires. bans le cas d'oxydations plus franches, des dérivés carbonylés sont générés par oxydation catalysée de certains acides aminés par des métaux ou par clivage des protéines. Ces molécules modifiées tendent à s'accumuler et à s'agréger dans l'épiderme, en particulier avec l'âge et les stress photo-induits. Or, la présence de protéines carbonylées au niveau de la couche cornée affecte les propriétés mécaniques de la peau et dégrade la fonction barrière. Des études récentes ont en outre démontré que la carbonylation des protéines participait à la modification de la structure fibreuse de la kératine et à l'altération des propriétés optiques du stratum corneum. Ces différentes altérations se traduisent par des manifestations visibles au niveau de la peau notamment par un trouble de l'hydratation, une perte de la souplesse de la peau, l'apparition d'une rugosité de la peau et une altération l'éclat du teint. L'objectif de la présente invention est de proposer un principe actif cosmétique qui soit capable d'améliorer l'état de la peau, en particulier l'éclat du teint, notamment en limitant la production de protéines carbonylées dans la peau. Pour répondre à cet objectif, la présente invention vise un principe actif obtenu à partir de Atletschtykowha pulcherritna et son utilisation au sein d'une composition cosmétique à application cutanée destinée au traitement de la peau. Atletschtykowha pulcherritna. Metschtykowha pulcherrima est une levure appartenant à la classe des Saccharomycetes et à la famille Metschnikowiaceae. Les cellules sont de forme ellipsoïdale, contenues par 1 ou 2 dans des ascospores de forme allongée. Elle se reproduit par bourgeonnement multilatéral et apparaît sous la forme de colonies de couleur crème à rouge-marron, à la surface lisse et brillante. Atletschtykowha pulcherrima se trouve naturellement sur des fleurs et des fruits d'arbres fruitiers tels que le pommier. Elle est impliquée dans la fabrication du cidre comme levure secondaire, et agirait sur la composition aromatique de vins lors du procédé de fermentation. Certaines souches seraient efficaces comme agents de lutte contre des pathogènes post-récoltes de fruits tels que la pomme ou le raisin. L'utilisation de cette levure dans le domaine cosmétique et/ou dermopharmaceutique n'a jamais été envisagée. Or, de façon surprenante, Metschtykowla pulcherritna présente des propriétés remarquables au niveau de la peau et des phanères. Avantageusement, l'utilisation de Metschnikowla pulcherritna permet d'améliorer l'état de la peau, en particulier de prévenir et/ou traiter une altération ou une perte de l'éclat du teint. Selon un avantage particulier, l'utilisation de Metschtykowla pulcherritna sur la peau, permet notamment de limiter la production de protéines carbonylées dans la peau. Or, si d'autres levures ont déjà été utilisées en cosmétique, toutes les levures ne présentent pas une efficacité cosmétique et encore moins un tel effet. L'invention vise également les compositions cosmétiques comprenant un principe actif obtenu à partir de Metschnikowla pulcherritna, ainsi qu'un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à prévenir et/ou traiter une altération ou une perte de l'éclat du teint, comprenant l'application topique d'une composition renfermant un principe actif obtenu à partir de Metschtykowla pulcherritna. La présente invention est maintenant décrite en détail. Selon un premier aspect, l'invention vise donc l'utilisation dans une composition cosmétique destinée à une application topique sur la peau, d'un principe actif 25 obtenu à partir de Metschtykowla pulcherritna comme principe actif cosmétique pour améliorer l'état de la peau. Les principes actifs obtenus à partir de levures peuvent être de deux types. Il s'agit : - soit de molécules produites à partir de levures ; ce sont seulement les molécules produites par les levures et non les levures en tant que telles qui sont utilisées, - soit de principes actifs obtenus à partir des levures en tant que telles. Ces deux types de principes actifs sont différents. bans le premier cas, les molécules produites par une levure peuvent éventuellement être produites par d'autres types de levures, alors que dans le second cas, le principe actif est totalement dépendant du choix de la levure. Par "principe actif obtenu à partir de Metschtykowla pulcherritnd au sens de la présente invention, on entend un principe actif obtenu à partir de la levure Metschtykowla pulcherritna en tant que telle et non d'une molécule ou d'un mélange de molécules produites à partir de la levure Metschnikowla pulcherrima. Avantageusement, un principe actif obtenu à partir de Metschtykowla pulcherritna permet en effet d'améliorer l'état de la peau, notamment d'améliorer et/ou restaurer l'éclat du teint de la peau. Son utilisation sur la peau confère un teint lumineux et des traits du visage lissés. Appliqué sur la peau, un principe actif obtenu à partir de Metschtykowla pulcherritna agit notamment en limitant la production de protéines carbonylées dans la peau. Il améliore ainsi les propriétés mécaniques de la peau et la fonction barrière et restaure la structure fibreuse de la kératine et les propriétés optiques du stratum corneum. Visuellement, les traits du visage sont visiblement lissés, la peau est plus lumineuse et le teint est plus éclatant. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l'invention vise l'utilisation cosmétique d'un principe actif obtenu à partir de Metschtykowla pulcherritna, tel que décrit en suivant. Le principe actif selon l'invention est obtenu à partir de Metschtykowla pulcherritna. La souche de Metschtikowha pulcherritna peut par exemple être une souche isolée à partir de fleurs de trèfle. Selon un mode de réalisation particulier, il s'agit d'un hydrolysat de Metschtykowia pulcherritna. Par « hydrolysat » on entend tout extrait obtenu à 5 partir de kletschtykowha pulcherritna, comprenant au moins une étape d'hydrolyse de Metschnikowha pulcherritna. Préférentiellement, il s'agit d'un hydrolysat enzymatique de kletschtykowha pulcherritna. Par "hydrolysat enzymatique" on entend tout extrait obtenu à partir de kletschtykowha pulcherritna, comprenant au moins une étape d'hydrolyse 10 enzymatique de Metschnikowha pulcherritna. De façon préférée, le principe actif selon l'invention comprend des protéines, en particulier au moins 19% de protéines en poids total de matière sèche. Par protéines au sens de l'invention, on entend également les peptides de toute tai Ile. 15 Le principe actif présente préférentiellement une couleur jaune clair. Il peut se présenter sous forme liquide limpide et peut être défini par au moins une des caractéristiques exposées ci-après, préférentiellement toutes. Matières sèches : Le taux de matières sèches d'un principe actif selon l'invention (mesuré par 20 passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant) peut être compris entre 10 et 55g/I, préférentiellement entre 24 et 36g/I. Mesure du pH : Le pH (mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante) peut 25 être compris entre 3,0 et 5,0 préférentiellement entre 3,5 et 4,5. Protéines : La teneur en protéines d'un principe actif selon l'invention peut être déterminée par la méthode de KJELDHAL (référence : Official method of analysis of the A.O.C. 1975, 12th ed. W Horwitz, E.D., New York, p 15-60), et exprimée en pourcentage de poids par rapport au poids total de la matière sèche du principe actif. La teneur en protéines est préférentiellement comprise entre 19 et 55%. Préférentiellement la teneur en protéines totales est comprise entre 3 et 20g/I, plus particulièrement entre 7 et 13g/I. Teneur en cendres brutes : La teneur en cendres brutes est déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électrique (VULCAN®). La teneur en cendres brutes est déterminée en pourcentage de poids par rapport au poids total de la matière sèche du principe actif. Elle est comprise entre 39 et 51% en poids de matière sèche. Carbohydrates : Détermination de la teneur en sucres totaux Le dosage de la teneur en sucres totaux peut être réalisé par la méthode de DUBOIS (DUBOIS M. et al., (1956), Analytical chemistry, 28, n°3, p. 350-356). En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. La teneur en sucres totaux peut être comprise entre 6 et 42% en poids de matière sèche. Le principe actif selon l'invention est préférentiellement obtenu par un procédé comprenant une hydrolyse. Un procédé particulièrement adapté comprend au moins la succession des étapes suivantes : - solubilisation de levures Metschnikowha pulcherritna dans une solution aqueuse, et - hydrolyse. Préférentiellement, l'hydrolyse est une hydrolyse enzymatique. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le procédé comprend au moins la succession des étapes suivantes - solubilisation de levures kletschtykowha pulcherritna dans une solution aqueuse, - hydrolyse enzymatique, - inactivation enzymatique par traitement thermique, - filtration, - purification, - filtration et filtration stérilisante. Des étapes de désodorisation et de décoloration ou de concentration peuvent 15 être ajoutées. Les paramètres des différentes étapes doivent être ajustés afin d'obtenir des principes actifs comprenant des protéines de kletschtykowha pulcherritna. La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant un principe actif obtenu à partir de kletschtykowha pulcherritna, dans différentes 20 formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huiledans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels 25 aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Il peut s'agir de compositions comprenant entre 0,1 et 3% de principe(s) actif(s) obtenu(s) à partir de kletschtykowha pu/cherritna selon la présente invention. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba ; - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ; les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ; les épaississants et/ou gélifiants ; les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ; les filtres organiques ; les filtres inorganiques ; les colorants, les conservateurs, les charges ; - les tenseurs ; - les séquestrants ; - les parfums ; -et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council). Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'ad jonction envisagée. Ces compositions sont notamment destinées à favoriser à améliorer l'état de la peau, en particulier à prévenir et/ou traiter une altération et/ou une perte de l'éclat du teint. L'invention vise à cet effet un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à prévenir et/ou traiter une altération et/ou une perte de l'éclat du teint, comprenant l'application topique d'une composition renfermant un principe actif obtenu à partir de Metschtykowhapulcherrima selon la présente invention. L'invention est à présent illustrée par des exemples et des résultats d'essais. EXEMPLES Un exemple non limitatif de procédé d'obtention, de principe actif obtenu à 15 partir de kletschtykowha pulcherritna, est présenté en suivant, ainsi que des exemples de composition incluant un tel principe actif. Exemple 1 : procédé d'obtention du principe actif selon l'invention Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : 20 - solubilisation de levures kletschtykowha pulcherritna dans l'eau en milieu basique à raison de 20g/I, - hydrolyse enzymatique, - inactivation enzymatique par traitement thermique, - filtration et purification par récupération du filtrat, 25 - concentration, - filtration et filtration stérilisante. Le principe actif obtenu présente les caractéristiques suivantes : - aspect : solution aqueuse limpide - couleur : jaune clair - teneur en matières sèches : 32,3g/I - pH : 4,3 - teneur en protéines : 13,4g/l, soit 41,5% de protéines par rapport à la matière sèche, - teneur en sucres totaux : 4,4g/I soit 13,6% de sucres par rapport à la matière sèche, - teneur en cendres : 14,5 g/I soit 44,9% par rapport à la matière sèche. Exemple 2 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème de jour Phase A . Eau QSP 100% Glycérine 1% Phase B. DUB GMS AE (Stéarinerie DUBOIS) 1,3% DUB SEG (Stéarinerie DUBOIS) 1% Cetearyl alcool 1,3% DUB MCT 5545 (Stéarinerie DUBOIS) 6,2% Lanol 99 (Seppic) 4% Cetyl palmitate 0,8% Sophiderm MC30 (Sophim) 3,4% Huile de palme (Sictia) 1% Phase C. Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Conservateur 0,7% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion onctueuse, fondante, blanche présente un pH de 5,5. En application topique sur la peau, elle présente une pénétration rapide avec un fini 25 doux. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - mélanger B, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner B dans A sous rotor stator à 1600 tours/min, - A 30°C, ajouter C, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 1500 tours/minute, et - laisser refroidir sous rotor stator jusqu'à complète homogénéisation de l'émulsion. Exemple 3 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème de nuit Phase A. Eau QSP 100 % Phase B. DUB LAHE (Stéarinerie DUBOIS) 5% DUB ZENOATE (Stéarinerie DUBOIS) 5% Montanov 202 (Seppic) 4% Montanov 14 (Seppic) 4% Montanov 5 (Seppic) 1% DUB 340 (Stéarinerie DUBOIS) 3% DUB Lilirose (Stéarinerie DUBOIS) 6% DUB PIS (Stéarinerie DUBOIS) 6% DUB PPH1 (Stéarinerie DUBOIS) 4% Phase C. Conservateur 0,7 % Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion compacte blanche présente un pH de 5,5. En application topique, elle présente une application douce, avec un fini sec et un effet filmogène. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - chauffer A au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - mélanger B, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner B dans A sous rotor stator à 3200 tours/min, - A 40°C, ajouter C, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 3000 tours/minute, - laisser refroidir sous agitation. Exemple 4: utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une mousse couvrante Eau QSP 100% Phase A. Carbopol ETI)2050 (Noveon) 0,7% Phase B. AAB2 (Aiglon) 2% Stéarine TP micronisée (Stéarinerie Dubois) 2% DUB GMS AE (Stéarinerie Dubois) 2% DUB RG AE (Stéarinerie Dubois) 2,7% DUB IPM (Stéarinerie Dubois) 3% Phase C. Conservateur 0,7% Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Phase D. Titanium dioxide 3,4% Kaolin 2% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel émulsionné, mousseux, blanc présente un pH de 5,8. En application topique, il présente un étalement confortable avec un fini cotonneux légèrement filmogène. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, chauffer au bain marie à 80°C, sous agitation mécanique en veillant à bien disperser le gel (environ 800 tours/minute), - mélanger B, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner B dans A sous rotor stator à 2200 tours/min, - ajouter C, aussitôt dans l'ordre indiqué sous rotor stator à 2200 tours/min, - laisser refroidir sous agitation, - mélanger la phase pulvérulente b à l'aide d'un mortier, - à 30°C, ajouter I), petit à petit et sous agitation mécanique à 2000 tours/min, en veillant à sa complète dispersion, - laisser la mousse obtenue sous agitation mécanique jusqu'à sa complète homogénéisation. Exemple 5: utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un fluide régénérant Phase A. Eau QSP 100% Glycérine 4% Blanose 7M31CF (Hercules) 0,8% Phase B. DUB RG AE (Stéarinerie DUBOIS) 3% DUB PPH1 (Stéarinerie DUBOIS) 6,7% DUB MDIS (Stéarinerie DUBOIS) 6,7% DUB MCT5545 (Stéarinerie DUBOIS) 5,4% Phase C. Conservateur 0,7% Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel émulsionné, fluide, blanc présente un pH de 7,5. Il présente un étalement confortable, un fini doux et un effet hydraté. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, chauffer au bain marie à 80°C, sous agitation mécanique en veillant à bien disperser le gel (environ 1000 tours/minute), - mélanger B, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner B dans A sous rotor stator à 2500 tours/min, - à 30°C, ajouter C dans l'ordre toujours sous rotor stator à 2200 tours/min, - laisser refroidir sous agitation jusqu'à complète homogénéisation. Exemple 6 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une émulsion éclat du teint Phase A. Eau QSP 100% Phase B. Montanov 68 (Seppic) 2% Montanov 202 (Seppic) 3% Lanol 99 (Seppic) 5% Conservateur 0,7% Phase C. Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Phase D. Sepigel 305 (Seppic) 0,3% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion présente un pH de 6,8. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes - chauffer A au bain marie à 80°C, - mélanger B, dans une marmite et chauffer au bain-marie à 80°C, - émulsionner A dans B sous rotor-stator entre 2000 et 5000 tours/minute, - à 50°C, ajouter C, puis I), toujours sous rotor stator - laisser agiter jusqu'à complet refroidissement. EVALUATION DE L'EFFICACITE COSMETIQUE D'UN PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION A. Tests ex vivo : Etude de l'effet sur les protéines carbonylées Le but de cette étude est de quantifier ex vivo, sur des prélèvements réalisés sur volontaires, l'effet du principe actif de l'exemple 1 sur la formation de protéines oxydées sous l'action des UV artificiels. La carbonylation des protéines (ajout d'un groupe carbonyle, CO),= peut survenir par clivage oxydatif des protéines ou par oxydation directe de certains résidus aminés sous l'influence de stress environnementaux tels que les UV. La réaction avec des aldéhydes dérivés de la peroxydation lipidique est également à l'origine de la formation de ces groupements carbonyles. Cette modification de la structure des protéines est irréversible et participe au vieillissement prématuré de la peau (Fujita, Skin Res Technol, 13, 84-90, 2007) ainsi qu'à la diminution de la transmission de lumière du Stratum corneum modifiant ainsi la qualité de l'aspect de la peau (Iwai, Int J Cosmet Sci, 30(1) : 41-46, 2008). Le marquage des protéines oxydées a été effectué sur des prélèvements de Stratum corneum réalisés à l'aide d'un adhésif. Les prélèvements ont été mis en contact avec les actifs à tester puis irradiés pendant 24H à l'aide d'un simulateur solaire. L'étude a été réalisée à partir de prélèvements de Stratum corneum de volontaires sains, de sexe féminin présentant une peau normale au niveau des avant-bras. L'étude a été réalisée sur 6 volontaires sains de sexe féminin d'âge compris entre 31 et 42 ans, leur âge moyen étant de 36 ± 5 ans. Les échantillons de Stratum corneum ont été prélevés à l'aide d'adhésifs adaptés au niveau des avant-bras. Les prélèvements ont été mis en contact avec l'actif en solution aqueuse à 3% ou de l'eau distillée (véhicule) dans une boite de pétri pendant 24 H. Pour l'actif à tester, les prélèvements suivants ont été étudiés - un prélèvement traité avec l'actif, à 3% en solution aqueuse, soumis à une irradiation pendant 24H - un prélèvement traité avec le véhicule soumis à une irradiation pendant 24H - un prélèvement traité avec l'actif, à 3% en solution aqueuse, et maintenu à l'abri de la lumière pendant 24H - un prélèvement traité avec le véhicule et maintenu à l'abri de la lumière pendant 24H. Chaque résultat est une moyenne de 6 prélèvements. Exposition au simulateur solaire Les échantillons ainsi préparés ont été soumis à une irradiation artificielle à 25 l'aide d'un simulateur solaire grâce à une lampe à xénon de 1500 W (SUNTEST® CPS). Les échantillons témoins, non irradiés, ont été maintenus à l'abri de la lumière pendant 24H. Marquage des protéines oxydées Les protéines oxydées ont été directement marquées sur l'adhésif préalablement séché, à l'aide d'une solution de fluoresceine-5-thiosemicarbazide (FTZ), marqueur spécifique des groupements carbonyles. Le marquage à la FTZ permet d'évaluer la quantité de protéines oxydées présentes dans l'échantillon. Plus le taux de protéines oxydées de l'échantillon de stratum corneum est important et plus la fluorescence sera importante dans la longueur d'onde verte. La fluorescence de chaque échantillon est observée grâce à un microscope à 10 fluorescence (réf. IX70, Olympus) équipé d'une caméra CCb (réf. bXM 1200C, Nikon) couplé à un logiciel d'analyse d'image (réf. NIS-Elements AR, Nikon). Quantification des protéines oxydées Une technique d'imagerie permettant de différencier les cornéocytes du fond de la plaque a été développée spécifiquement pour ce type d'images. A l'aide de 2 15 images exposées différemment au moment de la prise de vue et de leur histogramme, on quantifie uniquement l'information des cornéocytes. En effet, les valeurs du fond, qui biaisent le résultat dans une analyse classique où l'image entière est examinée, ne sont ainsi pas prises en compte. La valeur d'intensité de fluorescence était observée pour chaque pixel détecté, 20 et exprimée en niveau de gris. La moyenne de ces valeurs ramenée à la surface mise en évidence, donne le résultat, exprimé en niveau de gris par pixel. Le logiciel utilisé est le logiciel Matlab®, version R2008a. Analyse des données La variation de la quantité de protéines oxydées créées sous l'influence de 25 l'irradiation est calculée de la manière suivante : (VMExp - VM non exp) Variation Exp / non exp (%) - VM non exp Avec : VMExp : valeur moyenne de niveau de gris sur l'échantillon exposé VMnon exp : valeur moyenne de niveau de gris sur l'échantillon non exposé Le pourcentage de variation observé sous l'effet d'un actif par rapport à un véhicule est calculé de la manière suivante : (VM actif - VM véhicule) VM véhicule Avec : VM actif : valeur moyenne de niveau de gris mesurée sur l'échantillon traité par l'actif, VM véhicule : valeur moyenne de niveau de gris mesurée sur l'échantillon traité par le véhicule. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 1 ci-après. Tableau 1 Variation traité / non traité Principe actif issu de -28% Atletschnikowia pulcherritna (exemple 1) (p=0,0694) Ces résultats montrent bien que le principe actif issu de Atletschnikowia pulcherritna permet de limiter significativement la quantité de protéines carbonylées engendrée par une irradiation artificielle. B. Tests in vivo : Etude de l'éclat du teint L'objectif de cette étude était de quantifier in vivo, sur volontaires, l'influence du principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion (exemple 6) sur des paramètres cutanés impliqués dans la notion d'éclat du teint en comparaison à un placebo. L'effet de cet actif a été étudié selon les méthodes suivantes : - Une étude de l'effet lissant sur le microrelief cutané de la patte d'oie par projection de franges - Une évaluation visuelle de l'éclat du teint par un panel d'experts - Une évaluation subjective par les volontaires Les différentes essais ont été réalisés avant et après 28 jours d'applications biquotidiennes de l'actif et du placebo en hémi-visage, sur 20 volontaires sains, de sexe féminin, âgées de 35 à 55 ans présentant un teint terne. B.1. Evaluation de l'effet lissant sur k microrelief cutané de la patte d'oie Les acquisitions ont été réalisées à l'aide d'un appareil de projection de franges dédié à la mesure 31) du relief cutané (Eotech, France). Ce système (bermaTOP 1303) comprend un capteur de mesure associant un projecteur de franges lumineuses et une caméra CCD haute résolution reliée à un logiciel d'acquisition Optocat (Eotech, France). Un système de repositionnement de la tête du volontaire selon les 3 axes de déplacement permet de retrouver la même zone de mesure aux différents temps de l'étude. L'effet du produit est mesuré sur une région d'intérêt découpée automatiquement sur l'acquisition originale. Le microrelief de la peau est étudié par deux paramètres de rugosité en 31) - Sa : moyenne arithmétique de rugosité de surface > Sq : moyenne quadratique de rugosité de surface Une diminution de ces différents paramètres est caractéristique d'un lissage du microrelief de la surface étudiée. Le pourcentage de variation observé sous l'effet de chacun des trois actifs contre placebo est calculé de la manière suivante : (Pdt j28 - Pd t n) - (PI J28 - PI JO) 4 (%) - X100 Pdt JO + (PI J28 - PI Jo) Avec : Pdt-28 : valeur moyenne du côté traité par l'actif, après 28 jours d'applications Pdtjo : valeur moyenne du côté traité par l'actif à JO P1j28 : valeur moyenne du côté traité par le placebo, après 28 jours d'applications PIJ0 : valeur moyenne du côté traité par le placebo à JO Les moyennes des résultats obtenus sont présentés dans le tableau 2. 15 Tableau 2 Variation / Placebo (%) Paramètre Sa -6,6% Paramètre Sq -6,9% On constate que, dans les conditions de cette étude, après 28 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, la formule contenant le principe actif issu de Atletschtykowta pulcherritna réduit la rugosité du relief cutané au niveau des pattes d'oie. 20 9.2. Evalua tien de l'éclat du teint L'évaluation de l'éclat du teint a été réalisée en aveugle par deux experts préalablement entraînés à juger différents paramètres représentatifs de l'éclat du teint. L'évaluation se fait à partir d'échelles de scores (de 1 à 10) et les paramètres 5 suivants ont été retenus - Le grain de peau, en effet l'irrégularité de la surface cutanée est corrélée à l'aspect terne de la peau. - La transparence de la peau permet d'apercevoir les veinules à travers la peau. Plus une peau est fine et transparente, plus elle laisse passer la lumière 10 naturelle de la peau, ce qui donne un effet bonne mine. - Le rayonnement de la peau est caractéristique d'un teint éclatant. Plus l'intensité des accroches de lumière sur les zones saillantes du visage est importante plus la peau est lumineuse. - La couleur rose claire permet de caractériser un teint éclatant. Plus le 15 teint est rosé plus il est perçu comme frais. L'évaluation de ces différents paramètres se fait sur les zones suivantes : - Pommettes - Front - Menton 20 - Yeux Le pourcentage de variation observé sous l'effet de chacun des trois actifs contre placebo est calculé de la manière suivante : (Pdt J28 - Pd t n) - (PI J28 - PI JO) 4 (%) - X100 25 Pdt JO + (Pl J-28 - PI JO) Avec : Pdt-28: valeur moyenne du côté traité par l'actif, après 28 jours d'applications Pdt-0 : valeur moyenne du côté traité par l'actif à JO Plj-28 : valeur moyenne du côté traité par le placebo, après 28 jours d'applications P1J0 : valeur moyenne du côté traité par le placebo à JO Les moyennes des résultats obtenus sont présentés dans le tableau 3. Tableau 3 Variation / Placebo (%) Grain de peau +7,1% Transparence +8,3% Rayonnement +6,9% Couleur rose +12,3% Ces résultats montrent que, dans les conditions de cette étude, après 28 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, le principe actif issu 10 de Atletschtykowta pulcherritna favorise une amélioration des paramètres caractéristiques de l'éclat du teint. En effet, le grain de peau est affiné, la transparence et le rayonnement de la peau sont augmentés donnant ainsi un effet bonne mine et une peau plus lumineuse. De plus, l'application du principe actif selon l'invention rend le teint 15 plus rosé et plus frais, mesuré par une augmentation du paramètre couleur rose. 3. Evaluation subjective Les sensations ressenties par chacun des volontaires ayant utilisé le principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion ainsi que la formule placebo pendant 28 jours d'applications biquotidiennes ont été évaluées à l'aide de questionnaires d'auto-évaluation. Le traitement des données de l'évaluation subjective est réalisé par cumul des réponses « plutôt d'accord » et « d'accord » est effectué. Les résultats (moyenne des résultats) des questions fermées correspondant à l'évaluation subjective du principe actif selon l'invention comparé au placebo après 28 jours d'applications biquotidiennes, sont présentés dans le tableau 4. 10 Tableau 4 Côté traité par Côté traité par C Placebo le principe actif selon l'invention Avec cette émulsion, ma peau paraît plus lumineuse 67% 94% Avec cette émulsion, mon teint est plus éclatant 61% 94% Avec cette émulsion, mon grain de peau est affiné 89% 100% Avec cette émulsion, ma peau est revitalisée 72% 94% Avec cette émulsion, mes rides et ridules sont lissées 61% 78% Avec cette émulsion, ma peau paraît plus lisse 78% 89% Cette émulsion diminue les signes fatigue 56% 67% Avec cette émulsion, la couleur de mon teint est plus homogène 72% 83% Avec cette émulsion, mon teint est plus transparent 56% 78% Avec cette émulsion, mon teint paraît plus frais (effet rosé sur les pommettes) 33% 61% Avec cette émulsion, mon teint est plus clair 50% 67% Selon cette évaluation et dans les conditions de l'étude, on constate que la formule contenant le principe actif issu de Metschmkowha pulcherrima: - rend la peau plus lumineuse, - rend le teint est plus éclatant et revitalise la peau, - permet d'affiner le grain de peau, - permet de lisser les rides et ridules, - diminue les signes de fatigue sur la peau, - rend le teint plus homogène, - rend le teint plus transparent, - rend le teint plus frais, - éclaircit le teint. En particulier, on constate que : - 94% des volontaires trouve que la formule contenant le principe actif selon l'invention rend la peau plus lumineuse contre seulement 67% pour le placebo, - 94% d'entre elles constatent que leur teint est plus éclatant et leur peau revitalisée avec la formule contenant le principe actif selon l'invention contre respectivement 61% et 72% avec le placebo, - pour l'ensemble des volontaires le principe actif selon l'invention permet d'affiner le grain de peau contre 89% pour le placebo, - 78% des femmes ont pu constater que la formule contenant le principe actif selon l'invention permet de lisser les rides et ridules contre 61% avec le placebo ; elles sont 89%, à noter que leur peau paraît plus lisse après application de la formule contenant le principe actif selon l'invention contre 78% du côté traité placebo, - de plus, le principe actif selon l'invention diminue les signes de fatigue pour 67% des volontaires l'ayant testé, contre 56% pour le placebo, - elles sont 83% à avoir constaté un teint plus homogène avec le principe actif selon l'invention contre 72% avec le placebo, - pour 78% des volontaires le principe actif selon l'invention rend le teint plus transparent contre 56% avec le placebo, - elles sont 61% à trouver leur teint plus frais contre 33% avec le placebo, et enfin, - 67% d'entre elles constatent que leur teint s'éclaircit avec le principe actif selon l'invention contre seulement 50% avec le placebo. Cette étude dans son ensemble montre qu'après 28 jours d'applications biquotidiennes, et en comparaison au placebo, la formule contenant le principe actif selon l'invention - permet de lisser le microrelief cutané de la patte d'oie - permet d'améliorer de façon significative les paramètres importants entrant en jeu dans la perception de l'éclat du teint, - et de plus, d'une manière générale, l'évaluation subjective a permis de mettre en évidence une efficacité éclat du teint supérieure du principe actif selon l' invention par rapport à la formule placebo. REVENDICATIONS1. Principe actif cosmétique, caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir de Metschnikawia puicherrima 2. Principe actif cosmétique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat de Metschnikowia pulcherrima. 3. Principe actif cosmétique selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat enzymatique de kletschnikowi a pulcherritna. 4. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il comprend au moins 19% de protéines en poids de matière sèche. 5. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il se présente sous forme liquide et qu'il présente au moins une des caractéristiques suivantes : un taux de matières sèches compris entre 24 et 369/1, - un taux de protéines totaux compris entre 3 et 209/1. 6. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il comprend également des sucres. 7. Utilisation dans une composition cosmétique destinée à une application topique sur la peau, d'un principe actif selon l'une des revendications 1 à 6 comme principe actif cosmétique pour améliorer l'état de la peau. 8. Utilisation selon la revendication 7, pour améliorer et/ou restaurer l'éclat du teint de la peau. 9. Utilisation selon l'une des revendications 7 ou 8, pour conférer un teint lumineux à la peau. 10. Utilisation selon l'une des revendications 7 à 9, pour lisser les traits du 25 visage.11 Utilisation selon l'une des revendications 7 à 10, caractérisée en ce que le principe cosmétique est destiné à limiter la production de protéines carbonylées dans la peau. 12. Composition cosmétique pour application topique, caractérisée en ce 5 qu'elle comprend un principe actif selon l'une des revendications 1 à 6, présent entre 0,1 et 3% en poids total de la composition. 13. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à prévenir et/ou traiter une altération et/ou une perte de l'éclat du teint, comprenant l'application topique d'une composition renfermant un principe actif obtenu à 10 partir de kletschnikowia pulcherrima. 14. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine selon la revendication 13, caractérisé en ce que la composition est une composition selon la revendication 12.