Brevet FR3000104A1 — publié le 20140627

DERIVES DE TRICLOSANE ET LEURS UTILISATIONS La présente invention concerne les dérivés de triclosane et leurs utilisations, en particulier, des agents sélectifs comprenant des dérivés de triclosane et des milieux sélectifs contenant des dérivés de triclosane. L'invention concerne également des procédés d'inhibition sélective de la croissance de certaines cellules dans une population mixte au moyen d'un agent sélectif comprenant un dérivé de triclosane et des kits pour mettre en oeuvre ces procédés. ETAT DE LA TECHNIQUE ANTERIEURE La description suivante de l'arrière-plan de l'invention est censée faciliter la compréhension de la présente invention. Cependant, il doit être entendu que cette description n'est pas une reconnaissance ni admission du fait qu'un quelconque des documents dont il est question était publié, connu ou faisait partie de la connaissance générale commune de l'homme du métier dans une quelconque juridiction à la date de priorité de la demande. L'agent antimicrobien à large spectre, 5-chloro-2-(2,4- dichlorophénoxy)phénol (également appelé « triclosane » ou « Irgasan® », qui est le nom de marque de Ciba Specialty Chemical pour le triclosane), est communément utilisé depuis le début des années 1970 pour les produits d'hygiène personnelle, y compris le savon, le dentifrice, le déodorant, et pour les produits de nettoyage domestiques et industriels. Même si à des concentrations élevées, le triclosane est un biocide, à des niveaux inférieurs, il fonctionne comme un agent bactériostatique. En dépit de la longue histoire de son usage antimicrobien, le triclosane seul n'est pas utilisé habituellement comme agent sélectif dans un milieu de différentiation pour la croissance préférentielle d'espèces bactériennes particulières. Le brevet U.S. 5 447 849 de Toora traite de l'utilisation d'une combinaison de cefsulodine et de triclosane pour la croissance sélective de la Yersinia enterocolitica. Le brevet U.S. 5 741 663 de Russell traite de l'utilisation du triclosane en combinaison avec de la carbénicilline et de la nitrofurantoïne pour la croissance sélective de Pseudomonas fluorescens. La publication de la demande de brevet U.S. 2010/0 278 847 de Good et al. traite de l'ajout de triclosane dans la plage de 100 nM à 10 pM à un milieu de culture (qui a également été supplémenté avec de l'ampicilline) pour la distinction de E. cou/ génétiquement modifiés (transformés) présentant une expression médiée par vecteur du gène pour une enoyl-ACP réductase (fabl). Dans Good et al., il ne figure pas de description relative à la culture des bactéries et/ou champignons d'origine naturelle du type rencontré d'ordinaire dans des échantillons environnementaux, industriels ou médicaux. RESUME DE L'INVENTION Un premier aspect de l'invention propose un agent de sélection comprenant un dérivé de triclosane destiné à être utilisé dans l'inhibition sélective de cellules non cibles dans une population mixte de cellules cibles et non cibles. Tout au long du présent mémoire et des revendications, sauf exigence contraire du contexte, le terme « comprendre » ou des variations telles que « comprend » ou « comprenant », seront entendus comme impliquant l'inclusion d'un entier ou groupe d'entiers indiqué mais pas l'exclusion de n'importe quel autre entier ou groupe d'entiers. Les populations mixtes sont du type trouvé dans des échantillons environnementaux, industriels et/ou cliniques. Les dérivés de triclosane divulgués peuvent être utilisés sans autres antibiotiques, colorants inhibiteurs, biocides ou agents bactériostatiques. Les conditions dans lesquelles les microorganismes existaient au moment de la collecte ainsi que les conditions de transport des échantillons environnementaux, industriels et/ou médicaux sont généralement stressantes et potentiellement sources de dommages. En conséquence, les microorganismes cibles à l'intérieur d'un échantillon peuvent avoir une résistance affaiblie aux antibiotiques et autres agents inhibiteurs et requièrent souvent une phase de latence prolongée avant de reprendre une croissance normale. La pratique standard dans de nombreux laboratoires consiste à soumettre les échantillons à une culture de pré-enrichissement dans un milieu de croissance nutritif sans antibiotiques pendant une période de temps suffisante pour faciliter la récupération des microorganismes cibles, par exemple, pendant 16 heures environ. Cependant, les cellules cibles sont souvent présentes dans des nombres plus faibles que les microorganismes non cibles et la culture de pré-enrichissement peut exacerber ce déséquilibre conduisant à une surcroissance des microorganismes non cibles et à un masquage des microorganismes cibles. Etant donné que les dérivés de triclosane de la présente invention et les compositions contenant ces dérivés de triclosane permettent une culture sans antibiotiques ou autres biocides, le besoin d'une culture de pré-enrichissement est éliminé pour la plupart des échantillons, ce qui permet de gagner du temps et de réduire les risques associés à la manipulation additionnelle d'échantillons pour effectuer une culture pré-enrichie de récupération. L'invention propose en outre l'utilisation d'un dérivé de triclosane en tant qu'agent sélectif pour l'inhibition sélective de cellules non cibles dans une population mixte de cellules cibles et non cibles. Le terme « dérivé » tel qu'utilisé ici en rapport avec le triclosane désigne une substance chimique dérivée du triclosane soit directement, soit par modification ou substitution partielle. Les cellules peuvent être des cellules eucaryotes (par exemple, des cellules de mammifère, des cellules fongiques ou des cellules de levure) mais sont plus généralement des cellules bactériennes. En particulier, les cellules cibles et non cibles comprendront toutes deux normalement des bactéries. Le terme « inhibition » tel qu'utilisé ici désigne généralement l'inhibition de la croissance des cellules par réduction, ralentissement ou arrêt de la croissance des cellules. Tel qu'utilisé ici, le terme « croissance » signifie une augmentation de la taille ou une prolifération ou les deux. Ainsi, un composé de la présente invention peut inhiber les cellules en les tuant, en les empêchant de grossir, et/ou peut empêcher les cellules de se diviser et de se répliquer et d'augmenter en nombre. Par-dessus tout, cette inhibition empêche une augmentation nette des nombres de cellules viables. Dans les modes de réalisation préférés, l'agent sélectif est une composition destinée à être incluse dans un milieu de croissance 15 bactérienne. De préférence, le dérivé de triclosane est un dérivé glycosidique de triclosane. En d'autres termes, l'agent sélectif est un glycoside dans lequel l'aglycone est du triclosane. Le fragment sucre est lié au fragment triclosane via une liaison O. Le triclosane est lié au carbone anomère d'un 20 fragment carbohydrate. De préférence, le dérivé du triclosane glycosidique est un dérivé pyranoside à savoir, un glycopyranoside de triclosane). En d'autres termes, le fragment glycone (à savoir, comprend un cycle de pyranose. le fragment sucre) du glycoside 25 Dans des modes de réalisation préférés, le dérivé de triclosane glycosidique est choisi parmi : triclosan-a-D-arabinopyranoside, triclosan-11-D-arabinopyranoside, triclosan-a-D-galactopyranoside, 30 triclosan-11-D-galactopyranoside, triclosan-a-D-glucopyranoside, triclosan-11-D-glucopyranoside, et triclosan-a-D-mannopyranoside. Dans des modes de réalisation préférés, l'agent sélectif a la formule générale (I) : R1 dans laquelle R1 est une glycone (c'est-à-dire que R1 est un fragment sucre). De préférence, le groupe R1 comprend un cycle pyranose. Dans des modes de réalisation préférés un agent sélectif peut être utilisé, dans lequel l'agent sélectif exerçant un effet toxique sur les cellules non cibles lorsqu'il est mis en contact avec les cellules non cibles, alors que l'agent sélectif n'exerce pas d'effet toxique sur les cellules cibles lorsqu'il est mis en contact avec les cellules cibles. L'agent sélectif de la présente invention peut être utilisé dans n'importe quelle situation où il est souhaitable de causer l'inhibition d'une partie d'une population mixte de cellules. L'agent sélectif inhibe de manière appropriée la croissance de cellules non cibles lorsqu'il est mis en contact avec des cellules non cibles mais il est essentiellement non inhibiteur pour les cellules cibles, qu'elles soient stressées ou non stressées, lorsqu'il est mis en contact avec les cellules cibles. Lorsque des cellules bactériennes sont placées dans un milieu de croissance approprié, il existe une « phase de latence » pendant laquelle le nombre net de cellules bactériennes viables n'augmente pas, ou augmente très lentement. Après la phase de latence, la culture entre dans une phase de croissance exponentielle dans laquelle le « temps de génération » moyen (à savoir, le temps moyen mis par un nombre de cellules pour passer de la formation à la fission) est le plus court. Pour illustrer ce qui est considéré comme « essentiellement non inhibiteur », un agent sélectif sera normalement considéré comme essentiellement non inhibiteur pour les cellules cibles à une concentration particulière s'il cause une augmentation de la phase de latence de moins de 25 °A, de préférence, de moins de 20 % et plus préférablement, de moins de 15 % et s'il provoque une augmentation du temps de génération moyen, lors de la phase de croissance exponentielle, de moins de 20 %, de préférence, de moins de 10 %, et plus préférablement, de moins de 5 %. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, l'agent sélectif est utilisé dans des situations dans lesquelles les cellules cibles sont des espèces du genre Salmonella et les cellules non cibles sont des bactéries E. cou/ et/ou d'autres formes de bactéries coliformes. L'agent sélectif permet la croissance des souches de Salmonella, tout en inhibant (à savoir, en empêchant toute augmentation nette des nombres de cellules viables) les organismes coliformes concurrents. L'agent sélectif est sensiblement non inhibiteur pour les souches de Salmonella, mêmes celles dans un état stressé. En conséquence, il est possible de réduire le temps de culture global requis pour les souches de Salmonella (si elles sont présentes dans l'échantillon original) pour obtenir la densité cellulaire requise pour donner un résultat positif dans une quelconque analyse de présence (par exemple, ELISA, PCR, etc.), étant donné que leur croissance n'est pas inhibée. Dans une variante de mode de réalisation, l'agent sélectif est utilisé dans des situations dans lesquelles les cellules cibles sont des espèces du genre Campylobacter. En d'autres termes, l'agent sélectif est sélectif pour les espèces du genre Campylobacter. Il est également prévu un milieu pour l'inhibition sélective de cellules non cibles dans une population mixte de cellules cibles et non cibles, le milieu comprenant un agent sélectif tel que défini plus haut. Le milieu sélectif est d'ordinaire un milieu de culture qui assure l'inhibition de cellules non cibles dans une population mixte de cellules cibles et non cibles. Le milieu peut être liquide ou solide et peut comprendre n'importe lequel des composants qui peut être inclus de manière traditionnelle et appropriée dans le milieu, tels qu'une base nutritive, des peptones, un extrait de levure, de la gélose (ou autre agent solidifiant), des sels, des tampons, des colorants indicateurs et similaires. De préférence, l'agent sélectif est prévu dans une quantité efficace pour inhiber les cellules non cibles. Le milieu peut comprendre un inducteur approprié. L'utilisation d'un inducteur approprié augmente l'activité inhibitrice de l'agent sélectif. Parmi les inducteurs appropriés, on trouve le glycoside de méthyle, l'isopropyl-pD-thiogalactopyranoside, le p-nitrophényl-a-L-arabinopyranoside ou le pnitrophényl-p-D-xylopyranoside. L'agent sélectif est adéquatement prévu dans le milieu à une concentration appropriée qui permet la croissance des cellules cibles, tout en inhibant les cellules non cibles. De manière appropriée, l'invention concerne également un milieu, tel que défini plus haut, en contact avec une population mixte de cellules cibles et non cibles. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, un milieu de culture est prévu pour la différentiation de la Salmonella, le milieu de culture comprenant un agent sélectif tel que défini plus haut. Ceci donne un milieu pour la différentiation de la Salmonella, par exemple de bactéries coliformes telles que les E. coll. Les cellules cibles sont des espèces du type Salmonella et les cellules non cibles sont coliformes, de préférence, des E. coll. Dans ce mode de réalisation, l'agent sélectif est de préférence du 11-D-galactopyranoside de triclosane. Dans des variantes de modes de réalisation, un milieu de culture pour l'énumération des espèces du genre Campylobacter est prévu, le milieu de culture comprenant un agent sélectif tel que défini plus haut. Ceci donne un milieu de culture pour la croissance et l'énumération des colonies de Campylobacter. Le demandeur a découvert que le milieu de culture de l'invention réduit ou prévient les faux positifs de la présence d'espèces à Gram négatif multi-résistantes aux médicaments notamment aux antibiotiques. Dans ce mode de réalisation, l'agent sélectif est de préférence du 11-D-galactopyranoside de triclosane ou du a-Darabinopyranoside de triclosane. L'invention propose également l'utilisation d'un agent sélectif ou milieu tel que défini plus haut pour la croissance et l'énumération des Campylobacter. L'invention propose en outre l'utilisation d'un dérivé de triclosane ayant n'importe laquelle des caractéristiques préférées susmentionnées en tant qu'agent sélectif ou dans un milieu sélectif pour l'inhibition sélective de cellules non cibles dans une population mixte de cellules cibles et non cibles. Dans un autre aspect, l'invention propose un procédé de culture de bactéries, de cellules fongiques ou de levure dans un échantillon suspecté de contenir une population mixte de cellules cibles et non cibles, le procédé comprenant les étapes de mise en contact des cellules échantillons avec un agent sélectif tel que défini plus haut, l'agent sélectif étant inhibiteur pour les cellules non cibles mais étant essentiellement non inhibiteur pour les cellules cibles, et culture des cellules dans des conditions qui permettent la croissance des cellules cibles. Le procédé peut utiliser un milieu tel que défini plus haut. Le procédé peut être effectué sans mettre en contact l'échantillon avec un milieu de pré-enrichissement qui est dépourvu de l'agent sélectif. Avant l'étape de culture, le nombre de cellules non cibles dans la population mixte peut être supérieur au nombre de cellules cibles dans la population mixte. Il sera entendu que la mise en oeuvre des procédés selon l'invention peut permettre d'apporter des conclusions concernant l'identité des organismes qui sont aptes à croître avec succès dans des conditions de croissance sélectives. Ainsi, dans certains modes de réalisation, l'invention peut comprendre une étape supplémentaire d'identification des organismes cellulaires cibles qui sont aptes à croître dans une culture comprenant l'agent sélectif. En variante, ou en outre, le procédé peut comprendre une étape d'isolation de colonies des organismes cellulaires cibles qui sont aptes à croître dans une culture comprenant l'agent sélectif. Ces procédés d'identification et/ou d'isolation sont des procédés de routine pour l'homme du métier. La présente invention propose en outre un kit destiné à être utilisé avec un procédé tel que défini plus haut, comprenant un milieu contenant un agent sélectif tel que défini plus haut ou des composants pour sa préparation. Le kit peut en outre comprendre des instructions de mise en oeuvre du procédé selon l'invention. La présente invention propose également une composition comprenant un dérivé de dérivé glycosidique de triclosane. Dans des modes de réalisation préférés, le dérivé glycosidique de triclosane est un dérivé pyranosidique. Dans des modes de réalisation particulièrement préférés, le dérivé pyranosidique de triclosane est choisi parmi : triclosan-a-D-arabinopyranoside, triclosan-11-D-arabinopyranoside, triclosan-a-D-galactopyranoside, triclosan-11-D-galactopyranoside, triclosan-a-D-glucopyranoside, triclosan-11-D-glucopyranoside, et triclosan-a-D-mannopyranoside. Les termes arabinoside, galactoside, glucoside et mannoside sont utilisés ici comme raccourcis pour désigner le fragment glycone associé. Dans des modes de réalisation préférés, l'agent sélectif a la formule générale (I) : R1 dans laquelle R1 est une glycone (c'est-à-dire que R1 est un fragment sucre). De préférence, le groupe R1 comprend un cycle de pyranose. DESCRIPTION DES FIGURES Nous allons maintenant décrire les modes de réalisation préférés de la présente invention à titre d'exemple uniquement en nous référant aux dessins joints, sur lesquels : la figure 1 montre un graphique de la croissance d'une culture mixte de E. cou/ 607 et de Salmonella typhimunum 722 dans un bouillon de culture N° 2 contenant du triclosan-p-D-galactoside (2 (pg/ml) à 37°C. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Dérivés de triclosane Les dérivés de triclosane de la présente invention comprennent des dérivés glycosidiques du biocide dans lesquels le groupe phénolique du triclosane est couple à l'hydroxyle de sucre anom ère. Des exemples de procédés de fabrication de glycosides de triclosane sont fournis dans les exemples 1 à 4. Parmi les exemples de glycosides, on trouve, sans limitation, a-D-arabinopyranoside, 11-D-arabinopyranoside, a-D- galactopyranoside, 11-D-galactopyranoside, a-D-glucopyranoside, 11-D- glucopyranoside et a-D-mannopyranoside. Comme le montre le tableau 1, pratiquement tous les microorganismes présentaient une concentration minimale inhibitrice (« CMI ») plus importante pour les dérivés glycosidiques de triclosane que pour le triclosane libre. Le triclosane (Irgasan®, Ciba Specialty Chemicals) ou le triclosan-B-D-galactoside a été ajouté dans des concentrations variables au bouillon de culture n° 2 (Oxoid CM0067, Thermofisher Scientific). Des espèces de bactéries telles qu'indiquées dans le tableau 1 ont été incubées pendant environ 24 heures à 37 °C. les concentrations minimales inhibitrices (CMI) de chaque agent sélectif ont été déterminées comme la concentration la plus basse (pg/ml) requise pour inhiber complètement la croissance (telle que déterminée en mesurant l'absorption à 600 nm au moyen d'un instrument Bioscreen ; Oy Growth Curves Ab Ltd) pendant un temps d'incubation de 24 heures. Tous les organismes qui ont été testés ont été inhibés par le triclosane mais plusieurs ont été totalement résistants à ses glycosides (tableau 1). Tableau 1. CMI des triclosane-glycosides dans un bouillon de culture n° 2 Souches Nbre de souches Triclosane non dérivé a-D- a-D- a-D- a-D- Glucoside Galactoside Arabinoside Mannoside Sans induct eur Avec inducte ur Sans induct eur Avec induct eur Sans induct eur Avec induct eur Sans induc teur Avec induc teur Organisme s à Gram-négatif Aeromonas hydrophila OCC 778 1 8 256 256 >256 >256 128 256 >25 6 >25 6 Citrobacter freundii OCC 851 1 0,5 4 4 64 128 8 8 64 64 Crono.saka 1 0,5 8 4 128 64 8 16 128 32 zakii ATCC 29544 Enterobact er aerogenes ATCC 13048 1 0,5 8 4 128 64 8 16 32 32 Ent. cloacae ATCC 13047 1 0,5 1 1 32 16 0,5 0,5 8 8 Escherichi a coli 8 0,1à 2 à 8 1 à 4 16 à 8 à 0,5 à 4 0,5 à 8 4 à 4 à 0,5 64 64 64 32 E. hermanii ATCC 1 0,5 1 1 32 32 1 2 16 8 33650 Hafnia 1 0,1 1 1 16 8 0,5 0,5 4 4 alvei ATCC 13337 Kleb. aerogenes NCTC 88167 1 0,5 2 4 32 64 4 4 32 32 Kleb. 1 0,1 1 1 1 1 0,5 0,5 4 2 pneumonia e ATCC 10031 Proteus mira buis ATCC 12453 1 0,5 2 2 32 32 4 2 16 8 Proteus vulga ris OCC 195 1 0,5 4 4 64 64 16 8 32 32 Ps. Aeruginosa ATCC >25 >25 27853 1 32 >256 >256 >256 >256 >256 >256 6 6 1 0,5 32 à 32 à 16à 8 à Salmonella 1 à 1 2 à 8 1 à 4 64 128 2 à 8 2 à 8 64 32 Serra tia marcescen >25 >25 s OCC 217 1 64 >256 >256 >256 >256 >256 >256 6 6 Tablc,T)u 1. (suite) CMI des triclosane-glycosides dans un bouillon de culture n° 2 Souches Nbre de souches Triclosane non Dérivé 13-D- 13-D- 13-D- Glucoside Galactoside Arabinoside sans inductE ur avec induct eur sans inducte ur avec induct eur sans induct eur avec induct eur Organisme s à Gram négatif Aeromona s hydrophila OCC 778 1 8 >256 256 256 256 >256 >256 Citrobacter freundii OCC 851 1 0,5 64 8 8 8 64 64 Crono.sak azakii ATCC 29544 1 0,5 64 8 8 8 128 64 Enterobact er aerogenes ATCC 13048 1 0,5 64 16 8 16 128 64 Ent. cloacae ATCC 13047 1 0,5 16 1 0.5 0.1 16 16 Escherichi a cou/ 8 0,1 à 8 à 1 à 8 0,5 à 0,5 4 à 8 à 4 à 0,5 64 32 32 32 E. hermanii ATCC 33650 1 0,5 16 2 2 2 32 16 Hafnia alvei ATCC 13337 1 0,1 4 0,5 0,5 0,5 4 4 Kleb. 1 0,5 32 4 4 4 32 32 aerogenes NCTC 88167 Kleb. pneumonia e ATCC 10031 1 0,1 0,5 0,5 0,5 0,1 4 8 Proteus mira buis ATCC 12453 1 0,5 16 2 4 2 32 16 Proteus vulga ris OCC 195 1 0,5 64 8 8 4 128 64 Ps. Aeruginos a ATCC 27853 1 32 >256 >256 >256 >256 >256 >256 1 0,5à 16 à 32 à32 à Salmonella 1 1 32 2 à 8 2 à 16 2 à 8 64 64 Serra tia marcescen s OCC 217 1 64 >256 >256 >256 >256 >256 >256 Tablc,T)u 1. (suite) CMI des triclosane-glycosides dans un bouillon de culture n° 2 Souches Nbre de souches I riciosane non dérivé a-D- a-D- a-D- a-D- Glucoside Galactoside Arabinoside Mannosid e sans induct eur avec induct eur sans induct eur avec induct eur sans induct eur avec induct eur san s indu cteu r avec induc teur Organisme s à Gram positif Bacillus cereus ATCC 25 14579 1 2 128 128 >256 >256 128 128 6 256 Bacillus subtilis NCTC 12 10073 1 1 32 32 256 >256 32 32 8 256 Enterococc us faecalis ATCC 25 29212 1 8 128 128 >256 >256 128 128 6 256 Enterococc us faecium ATCC 25 19434 1 4 256 256 >256 >256 256 256 6 256 Staph. 0,0 8 à 8 à 2 à 2 à aureus 8 1 1 1 16 16 0,5 0,5 8 8 Staph. 0,0 8 à 4 à 4 à 4 à epidermidi s 3 1 1 1 32 256 0,5 0,5 8 8 Staph. 0,0 haemolytic us OCC 2223 1 1 1 1 16 32 0.5 0.5 8 8 Staph. 0,0 saprophyti cus ATCC 15305 1 1 4 4 64 64 8 8 32 32 Strep. 12 agalactiae 1 4 128 128 >256 >256 128 128 8 128 OCC 182 Strep. pneumonie e ATCC 6305 1 1 32 16 128 256 64 32 64 128 Strep. pyogenes ATCC 19615 1 1 32 16 256 256 16 8 32 32 Strep. viridans 12 OCC 234 1 4 128 64 >256 >256 128 128 8 128 Tablcu 1. (suite) CMI triclosane-glycosides dans un bouillon de culture n° 2 Souches Nbre de souches Triclosane non dérivé 13-D- 13-D- 13-D- Glucoside Galactoside Arabinoside sans induct eur Avec induct eur sans induct eur Avec induct eur sans induct eur Avec induct eur Organismes à Gram positif Bacillus cereus ATCC 14579 1 2 256 128 256 256 128 128 Bacillus subtilis 1 1 256 32 32 32 128 128 NCTC 10073 Enterococcus faecalis ATCC 29212 1 8 16 128 128 128 256 256 Enterococcus faecium ATCC 19434 1 4 >256 256 >256 >256 256 256 Staph. aureus 8 0,01 4 à 8 0,5 à 2 0,5 0,5 4 à 8 4 à 8 Staph. 3 0,01 8 à 0,5 à 1 0,5 0,5 8 à 4 à epidermidis 16 16 64 Staph. 1 0,01 16 0,5 0,5 0,5 128 16 haemolyticus OCC 2223 Staph. 1 0,01 64 8 8 8 64 64 saprophyticu s ATCC 15305 Strep. 1 4 256 128 256 256 128 128 agalactiae OCC 182 Strep. 1 1 128 64 128 128 64 64 pneumoniae ATCC 6305 Strep. 1 1 32 16 128 128 32 32 pyogenes ATCC 19615 Strep. 1 4 256 128 256 >256 128 128 viridans OCC 234 Exemple 1 Acétylation des sucres Une suspension of 30,0 mmoles du sucre dans 10 ml (129 mmoles) de pyridine anhydre sans une atmosphère d'argon a été refroidie dans de la glace avec agitation. De l'anhydride acétique (10 ml, 0,09 mol) a ensuite été ajouté goutte à goutte et la réaction agitée à température ambiante pendant 18 heures. La solution a ensuite été concentrée sous vide, en l'azéotropant avec du toluène. Le résidu obtenu a été dissous dans du dichlorométhane (50 ml) et lavé avec de l'HCI 1M (2 x 50 ml), saturé avec une solution de NaHCO3 aqueuse (2 x 50 ml) et de la saumure (2 x 50 ml). La couche de dichlorométhane a ensuite été séchée avec du sulfate de magnésium, filtrée et concentrée sous vide pour donner le produit sous la forme d'une poudre blanche. OH OAc Ac20/ Pyr/ argon Ac HO Ac OH OAc OAc OH Exemple 2 Brom uration A 13,0 mmoles du sucre acétyle issu de l'exemple 1, refroidi à 0°C, on a ajouté goutte à goutte 36,7 mmoles d'HBr dans de l'acide acétique glacial (45 % p/v). La solution a été agitée à 0°C pendant 3 heures, puis elle a été versée sur de la glace et extraite avec du CH2Cl2 (2 x 100 ml). Les extraits combinés ont été lavés avec une solution de NaHCO3 aqueuse saturée (2 x 100 ml), puis séchés avec du sulfate de magnésium anhydre, filtrés et concentrés sous vide pour donner un sirop orange clair. HO Le sirop a été dissous dans de l'acétate d'éthyle et cristallisé sous la forme d'une poudre blanche. Exemple 3 Procédé 1 de glycosidation L'utilisation du procédé de Koenigs-Knorr a permis de s'assurer que 10 seule la forme trans anomère du glycoside a été formée. Du triclosane (4,04 g, 14,0 mmoles) a été dissous dans 100 ml d'eau contenant 14 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium 1M (14 mmoles) et 40 ml d'acétone. A la solution agitée, on a ensuite ajouté 60 ml d'une solution d'acétobromogalactose (13,2 mmoles) dans de 15 l'acétone en une seule fois. Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 18 heures, puis le solvant a été éliminé sous vide. Le produit brut a été purifié par chromatographie rapide (gel de silice élue avec un mélange 3:2 d'hexane/acétate d'éthyle) pour donner le produit. 20 Ac OAc OAc HBr/ AcOH/ 0°C Ac Ac Ac OAc Ac OAc Br Exemple 4 Procédé 2 de glycosidation En tant que variante de procédé, les deux a- et p- anomères sont 5 formés et peuvent être séparés au moyen d'une chromatographie rapide de type « Flash ». Sous argon, le sucre acétyle (17,0 mmoles) a été dissous dans 100 ml de dichlorométhane anhydre et du triclosane (18,0 mmoles) a ensuite été ajouté. A la solution agitée à 0°C, on a ensuite ajouté de 10 l'éthérate de trifluorure de bore (51,0 mmoles). On a ensuite laissé la réaction se réchauffer à température ambiante et on l'a agitée pendant 18 heures. De l'eau (20 ml) a été ajoutée pour refroidir rapidement la réaction, qui a ensuite été agitée pendant 15 minutes de plus. Puis 50 ml de dichlorométhane ont été ajoutés et la solution a été lavée avec de l'eau 15 (2 x 150 ml) et de la saumure (2 x 150 ml) et séchée avec du sulfate de magnésium. Après filtrage, le solvant a été éliminé sous vide et le produit brut a été purifié par chromatographie rapide (gel de silice élue avec un mélange 3:2 d'hexane/acétate d'éthyle). 20 Procédure générale : déprotections Sous argon, le sucre protégé (1 éq) a été dissous dans du Me0H anhydre (1 ml par mmol). Du K2CO3 (0,1 éq) a ensuite été ajouté. La 25 réaction a ensuite été agitée jusqu'à ce qu'elle soit censée être terminée comme mis en évidence par l'analyse chromatographie sur couche mince (CCM). Une résine Amberlite 1R-120 (plus) a ensuite été ajoutée et la réaction a été agitée pendant 30 minutes de plus. La résine a ensuite été filtrée et le filtrat concentré sous vide pour donner le produit souhaité. Exemple 5 La figure 1 montre la croissance d'une culture mixte de E. cou/ 607 et Salmonella typhimurium 722 dans un bouillon de culture n° 2 contenant du triclosan-B-D-galactoside (2 (pg/ml) à 37° C. Des échantillons ont été prélevés toutes les 30 minutes environ et appliqués sur de la gélose nutritive. Bien que les E. cou/ 607 aient présenté une légère augmentation en nombre de 1,0 x 104 à 1,86 x 104 au bout de 30 minutes, les nombres se sont ensuite réduits à 3,98 x 103 cfu/ml au bout de 7 heures. Au contraire, les Salmonella typhimurium 722, après une brève période de latence d'une heure et demie, est entrée dans une phase de croissance logarithmique normale (temps de doublement = 28,5 minutes) et au bout de 7 heures étaient passées à 2.51 x 105 cfu/ml. Etant donné que dans des échantillons types, les microorganismes d'arrière-plan sont présents dans des nombres plus importants que l'organisme cible, pour cette expérience, les nombres initiaux d'E.coli dans la culture mixte étaient de 1,5 log cfu/ml plus élevés que ceux de Salmonella typhimurium. Exemple 6 Des microorganismes à Gram négatif multirésistants aux médicaments et notamment multi-résistant aux antibiotiques, comprenant des Acinetobacter baumanii et des espèces d'Enterobacteriaceae commencent à apparaître dans la chaîne alimentaire en raison de la vaste utilisation d'antibiotiques en agriculture. Ces microorganismes peuvent apparaître comme de faux positifs sur la gélose d'énumération pour Campylobacter. Les espèces de Campylobacter sont inhabituelles dans leurs besoins nutritionnels en ce qu'elles ne requièrent que des acides aminés et des intermédiaires de cycle des ATC pour la croissance et n'utilisent pas de carbohydrates. Les inventeurs ont découvert que les Campylobacter sont résistantes aux dérivés glycosidiques de triclosane. Le triclosan-p-D-galactoside et le triclosan-a-arabinoside ont tous deux de faibles valeurs MCI pour les organismes d'Enterobacteriaceae et ont été, par conséquent, choisis pour examen. Les composés de triclosane ont été ajoutés à la gélose Brilliance CampyCount (Oxoid) et les organismes inoculés en de multiples points sur la surface des plaques. Les plaques ont été incubées pendant 24 heures à 37°C dans des conditions microaérobies. Les deux composés ont inhibé la croissance de l'ensemble des souches de A. baumanii testées (tableau 2). Le triclosan-pgalactoside a été particulièrement actif dans l'inhibition de deux souches de Klebsiella pneumoniae produisant de la carbapénémase lorsqu'il a été utilisé à 5 pg/ml alors que l'ensemble des souches de Campylobacter ont été résistantes au triclosan-a-arabinoside à des concentrations allant jusqu'à 50 pg/ml. Tableau 2. Valeurs CMI pour Campylobacter et organismes interférents (14/m1) Organisme Triclosane-a-Arabinoside Triclosane- 13- galactoside Acinetobacter baumanii GOXA23 40 40 Acinetobacter baumanii Strain 99 40 30 Acinetobacter baumanii 0CC834 30 20 Acinetobacter baumanii SE clone 40 40 Acinetobacter baumanii 0XA23 30 40 Acinetobacter baumanii E36 50 50 Campylobacter cou/ 0CC776 >50 >50 Campylobacterjejuni 0CC1596 >50 >50 Campylobacterjejuni 0CC1261 >50 >50 Campylobacterjejuni 0CC2340 >50 >50 Campylobacter lari OCC1598 >50 >50 Campylobacter coli OCC2774 >50 >50 Klebsiella pneumoniae KPC2 >50 5 Klebsiella pneumoniae 7KPC3 >50 5 Enterobacter cloacae CTXm9 10 5 Exemple 7 Divers dérivés glycosidiques de triclosane ont été ajoutés à 64 pg/ml de bouillon de culture n° 2 pour déterminer les concentrations minimales inhibitrices (CMI) de chaque agent sélectif et les résultats sont présentés dans le tableau 1. Les essais ont été répétés avec l'ajout d'inducteurs. Le glycoside de méthyle a été le principal inducteur utilisé, mais d'autres exemples d'inducteurs appropriés sont l'isopropyl-p-Dthiogalactopyranoside, le p-nitrophényl-a-L-arabinopyranoside et le pnitrophényl-p-D-xylopyranoside. La concentration de l'inducteur dans tous les cas était de 100 pg/ml. D'après le tableau 1, on peut voir que l'ajout de triclosan-a-Dmannoside au bouillon de culture à 64 pg/ml peut permettre la croissance et la récupération de Cronobacter sakazakii, un pathogène important trouvé en particulier dans le lait infantile, mais inhiberait la croissance de nombreux des organismes qui sont souvent isolés avec l'organisme. Ainsi, l'ensemble des souches de Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae, Escherichia cou, Esche richia hermanii, Hafnia alvei, Klebsiella, Proteus, Salmonella et Staphylococcus ont été inhibées par cette concentration. En outre, du triclosan-p-D-arabinoside à 16 pg/ml permettrait la récupération sélective de Salmonella et le triclosan-a-D-glucoside permettrait la récupération sélective de souches pathogènes de Streptococcus. Il a également été observé que l'ajout d'inducteurs augmentait sensiblement l'activité inhibitrice des glycosides de triclosane. Exemple 8 Procédé de détermination des concentrations minimales inhibitrices dans la gélose nutritive Les glycosides de triclosane ont été ajoutés à de la gélose nutritive (Oxoid CM0003 ; Thermofisher Scientific) et des organismes ont été transférés sur la surface des plaques au moyen d'un dispositif d'inoculation en de multiples points (Oxoid Cathra, Thermofisher Scientific). Ce dernier est essentiellement une plaque métallique contenant un certain nombre d'aiguilles. Chaque pointe d'aiguille (généralement 36 par plaque) plonge dans une suspension d'organismes (dans une solution saline tamponnée au phosphate ; PBS) et les aiguilles sont ensuite déplacées sur la plaque de gélose et abaissées sur sa surface. De cette manière, la croissance de colonies de jusqu'à 36 organismes différents peut être observée sur une seule plaque. La gélose nutritive n° 2 a été préparée selon les instructions du fabricant, mise en autoclave et refroidie à 50°C. Les composés d'essai ont ensuite été ajoutés sous la forme de solutions stérilisées filtrées (50:50 d'eau désionisée:éthanol), pour donner des concentrations finales de 256 pg/ml à 0 pg/ml dans des doubles dilutions. Des inducteurs ont également été ajoutés à une concentration finale de 0,1 mg/ml. Les mélanges ont été brassés, puis quatre plaques (25 ml de gélose fondue) ont été versées pour chaque concentration. Les plaques ont été séchées dans une hotte à flux laminaire, puis inoculées pendant la nuit avec des cultures d'organismes qui ont été diluées deux fois de façon décimale dans une solution saline stérile (environ 107 cfu/ml) au moyen d'un inoculateur en de multiples points. Les plaques ont ensuite été incubées à 37°C pendant 24 heures. Les CM1 ont été déterminées comme la concentration à laquelle aucune croissance n'était observée. Les résultats sont présentés dans le tableau 3. Les CM1 obtenues à partir des plaques étaient similaires à celles obtenues dans le bouillon, indiquant que la tension superficielle de la gélose ne stressait pas les cellules dans une grande mesure. Ceci a également montré que le triclosane libre libéré des organismes susceptibles n'inhibait pas les organismes les plus résistants sur les plaques et que les glycosides pouvaient par conséquent être utilisés pour la récupération de cultures mixtes. Tableau 3. CM1 des Triclosane-glycopyranosides (pg/ml) dans de la gélose nutritive contenant 0,1pg/m1 d'inducteur Organismes Nbre de souches a-D- a-D- a-D- a-D- 13-D- 13-D- 13-D- arabinopyranoside galactopyranoside glucopyranoside mannopyranoside arabinopyranoside galactopyranoside glucopyranoside Bacillus cereus 1 128 >256 64 128 256 256 256 Bacillus subtilis 1 128 128 16 256 256 64 256 Ent. faecalis 1 256 >256 128 256 256 >256 >256 Ent. faecium 1 256 >256 128 256 256 >256 >256 S. aureus 8 1 à 2 4 à 8 025à 1 4 à 8 8 à 2 4 à 8 16 S. epidermidis 3 2 à 8 0,5 à 1 8 16 4 8 à 16 64 S. haemolyticus 1 2 8 1 8 16 4 16 S. 1 128 32 4 32 64 16 32 saprophyticus Str. agalactiae 1 128 >256 128 128 128 256 >256 Str. pneumoniae 1 64 256 32 64 64 64 128 Str. pyogenes 1 128 >256 64 64 64 256 64 Str. viridans 1 128 >256 64 128 128 256 256 Aer. hydrophila 1 128 >256 128 256 256 256 >256 C. freundii 1 16 64 4 64 64 8 64 Cr. sakazakii 1 16 32 4 64 256 64 32 Ent. aerogenes 1 16 64 4 64 64 16 32 Ent. cloacae 1 4 32 1 16 16 1 16 8 à 8 à8 à 16 à E. coli 8 2 à 8 0,5 à 4 1 à 4 32 64 32 32 E. hermanii 1 4 32 1 16 32 4 16 Hafnia alvei 1 2 4 0.5 4 8 2 8 Kleb. aerogenes 1 8 32 2 32 64 8 32 Kleb. pneumoniae 1 2 16 0.5 16 8 1 4 Ps. aeruginosa 1 >256 >256 >256 >256 >256 >256 >256 4 à8 à 16 à 32 à 4 à 16 à Salmonella 11 1 à 4 16 64 32 64 16 128 Ser. marcescens 1 >256 >256 >256 >256 >256 >256 >256 REVENDICATIONS1. Agent de sélection comprenant un dérivé de triclosane destiné à être utilisé dans l'inhibition sélective de cellules non cibles dans une population mixte de cellules cibles et non cibles, dans lequel le dérivé de triclosane est un dérivé glycosidique de triclosane. 2. Agent de sélection selon la revendication 1, dans lequel le dérivé glycosidique de triclosane est un dérivé pyranosidique. 3. Agent de sélection selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le dérivé glycosidique de triclosane est choisi parmi : triclosan-a-D-arabinopyranoside, triclosan-11-D-arabinopyranoside, triclosan-a-D-galactopyranoside, triclosan-R-D-galactopyranoside, triclosan-a-D-glucopyranoside, triclosan-R-D-glucopyranoside, et triclosan-a-D-mannopyranoside. 4. Agent de sélection selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'agent de sélection est d'un type exerçant un effet toxique sur des cellules non cibles lorsqu'il est mis en contact avec les cellules non cibles, alors que l'agent de sélection n'exerce pas d'effet toxique sur des cellules cibles lorsqu'il est mis en contact avec les cellules cibles. 5. Agent de sélection selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'agent de sélection est d'un type exerçant un effet inhibiteur sur la croissance des cellules non cibles lorsqu'il est mis en contact avec les cellules non cibles mais est essentiellement non inhibiteur pour les cellules cibles, qu'elles soient stressées ou non stressées, lorsqu'il est mis en contact avec les cellules cibles. 6. Agent de sélection selon l'une quelconque des revendications précédentes destiné à être utilisé dans une inhibition sélective, danslequel les cellules cibles sont des espèces du genre Salmonella et les cellules non cibles sont des bactéries E. cou et/ou d'autres bactéries coliformes. 7. Agent de sélection selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel les cellules cibles sont des espèces du genre Campylobacter. 8. Milieu pour l'inhibition sélective de cellules non cibles dans une population mixte de cellules cibles et non cibles, le milieu comprenant un agent de sélection selon l'une quelconque des revendications précédentes. 10 9. Milieu selon la revendication 8, en contact avec une population mixte de cellules cibles et non cibles. 10. Milieu pour la différentiation d'espèces du genre Salmonella, le milieu comprenant un agent de sélection selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 15 11. Milieu pour l'énumération d'espèces du genre Campylobacter, le milieu comprenant un agent de sélection selon l'une quelconque des revendications 5 ou 7. 12. Procédé de culture de bactéries, de cellules fongiques ou de levure dans un échantillon suspecté de contenir une population mixte de 20 cellules cibles et non cibles, le procédé comprenant les étapes de mise en contact des cellules échantillons avec un agent de sélection selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 précédentes, l'agent de sélection étant inhibiteur pour les cellules non cibles mais étant essentiellement non inhibiteur pour les cellules cibles, 25 et culture des cellules dans des conditions qui permettent la croissance des cellules cibles. 13. Procédé selon la revendication 12, dans lequel le procédé est effectué sans mettre en contact l'échantillon avec un milieu de pré-enrichissement dépourvu de l'agent de sélection.. Procédé selon la revendication 12 ou 13, dans lequel avant l'étape de culture, le nombre de cellules non cibles dans la population mixte est supérieur au nombre de cellules cibles dans la population mixte. 15. Kit destiné à être utilisé avec un procédé selon l'une 5 quelconque des revendications 12 à 14, comprenant un milieu selon l'une quelconque des revendications 8 à 11 ou des composants pour sa préparation. 16. Kit selon la revendication 15, dans lequel le kit comprend un moyen sous forme d'instructions pour effectuer le procédé selon l'une 10 quelconque des revendications 12 à 14. 17. Composition comprenant un dérivé glycosidique de triclosane. 18. Composition selon la revendication 17, dans laquelle le dérivé glycosidique de triclosane est un dérivé pyranosidique. 19. Composition selon la revendication 18, dans laquelle le dérivé 15 glycosidique de triclosane est choisi parmi : triclosan-a-D-arabinopyranoside, triclosan-R-D-arabinopyranoside, triclosan-a-D-galactopyranoside, triclosan-e-D-galactopyranoside, 20 triclosan-a-D-glucopyranoside, triclosan-11-D-glucopyranoside, et triclosan-a-D-mannopyranoside.