Brevet FR2983092A1 — publié le 20130531

PROCEDE ET DISPOSITIF DE REMPLISSAGE DE NANOPIPETTES PAR MICRODISTILLATION DYNAMIQUE. La présente invention est relative aux procédés de 5 remplissage de tubes possédant une région de très faible section ainsi qu'aux dispositifs permettant de remplir de tels tubes. Plus particulièrement, l'invention se rapporte à un procédé de remplissage d'une nano-pipette par un liquide, 10 la nano-pipette s'étendant suivant une direction longitudinale, au moyen d'une paroi évasée présentant une surface intérieure, depuis une extrémité proximale terminée par une grande ouverture jusqu'à une extrémité distale terminée par une petite ouverture, la section interne de la 15 petite ouverture s'inscrivant dans un cercle de diamètre inférieur ou égal à 60 nanomètres. Dans plusieurs domaines d'applications, il est nécessaire de pouvoir remplir de façon complète une pipette en évitant la présence de bulles de gaz à son extrémité de 20 petit diamètre. Ainsi, par exemple en électrophysiologie, pour mesurer les courants et les potentiels électrochimiques présents dans des cellules comme les neurones, on cherche à établir un contact électrique avec un milieu extérieur par l'intermédiaire du fluide contenu 25 dans la pipette. La présence d'une bulle de gaz non-conducteur empêche donc le fonctionnement de l'appareil. On connait des façons de remplir une pipette dont la petite ouverture est de l'ordre du millionième de mètre (micron) ou plus. Il est par exemple possible d'appliquer 30 une forte pression au fluide ou à l'inverse, une dépression au milieu extérieur. Il est aussi possible d'utiliser une pipette comportant un filament de verre à l'intérieur. Cependant, pour des applications, par exemple dans le domaine de l'électrophysiologie, il est intéressant de 35 pouvoir utiliser des pipettes dont la dimension de petite ouverture est beaucoup plus petite que le micron, aussi appelées nano-pipette, afin d'améliorer la résolution spatiale de la mesure. Les méthodes de remplissages détaillées plus haut ne sont pas utilisables pour remplir de telles nanopipettes dont l'ouverture distale possède des dimensions nanométriques, par exemple de moins de 60 milliardièmes de mètres (nanomètres). Dans le cas de la méthode sous pression, par exemple, la tension de surface exercée par le fluide dont on cherche à remplir la pipette devient élevée et la pression à appliquer pour remplir la pipette dans un temps raisonnable est souvent telle que la pipette est brisée dans l'opération. Dans le cas des pipettes à filament de verre, l'extrémité distale du filament est fondue lors de la fabrication et introduit des impuretés de verre dans le quartz ainsi que des irrégularités dans l'ouverture distale. Il est à noter que l'invention concerne le remplissage des nano-pipettes à un seul canal. La présente invention a pour but de pallier à ces 20 inconvénients en présentant une méthode et un dispositif nouveaux. À cet effet, selon l'invention, un procédé de remplissage d'une nano-pipette par un liquide du genre en question comprend au moins les étapes suivantes : 25 une étape d'introduction de liquide dans la nano- pipette par la grande ouverture terminant son extrémité proximale, réalisée au moyen d'un dispositif d'introduction de liquide; une étape de chauffage, réalisée au moyen d'un 30 élément de chauffage, d'une région chauffée de la nanopipette, des région froides proximales et distales de la nano-pipette restant froides, la région chauffée comprenant une partie du liquide, de façon à ce que ladite partie se vaporise et se condense en gouttelettes sur la surface 35 intérieure de la nano-pipette dans la région froide distale ; et une étape de déplacement relatif suivant la direction longitudinale, de la région chauffée par rapport à la nano-pipette, réalisée au moyen d'un élément de déplacement, pour amener ladite région chauffée à proximité de l'extrémité distale de la nano-pipette. Grâce à ces dispositions, on peut utiliser une pipette en quartz pur, sans l'introduction d'un filament en verre et l'on remplit la pipette rapidement et sans exercer d'efforts sur celle-ci, ce qui garantit son intégrité à la fin du procédé. Dans des modes de réalisation préférés de l'invention, on peut éventuellement avoir recours en outre à l'une et/ou à l'autre des dispositions suivantes : - la vitesse de déplacement relatif de la région chauffée par rapport à la nano-pipette lors de l'étape de déplacement est supérieure à une vitesse basse en dessous de laquelle les gouttelettes forment des bouchons, et inférieure à une vitesse haute au-dessus de laquelle une pluralité de gouttelettes se trouve du côté de l'extrémité proximale par rapport à la région chauffée. - la vitesse de déplacement relatif de la région chauffée par rapport à la nano-pipette lors de l'étape de déplacement est définie par un procédé de calibration comprenant au moins une succession d'étapes comprenant au moins l'étape de chauffage, l'étape de déplacement relatif ainsi qu'une étape de contrôle de la quantité de liquide déplacée jusqu'à l'extrémité distale réalisée au moyen d'un dispositif de contrôle, ladite succession d'étapes étant réalisée pour des vitesses de déplacement relatif différentes. - la vitesse de déplacement relatif de la région chauffée par rapport à la nano-pipette lors de l'étape de déplacement est comprise entre 10 millionièmes de mètre par 35 seconde et 1 millième de mètre par seconde. - l'étape de déplacement est réitérée au moins une fois. - la vitesse de déplacement relatif de la région chauffée par rapport à la nano-pipette lors de l'étape de 5 déplacement augmente lorsque la région chauffée se rapproche de l'extrémité distale de la nano-pipette. Un autre aspect de l'invention concerne un dispositif de remplissage d'une nano-pipette par un liquide, la nano-pipette s'étendant suivant une direction 10 longitudinale d'une extrémité proximale terminée par une grande ouverture, à une extrémité distale terminée par une petite ouverture, la section interne de la petite ouverture s'inscrivant dans un cercle de diamètre inférieur ou égal à 60 nanomètres, le dispositif comprenant au moins : 15 un élément de chauffage adapté pour chauffer une partie du liquide situé dans la nano-pipette et un élément de déplacement adapté pour déplacer au moins un élément choisi dans la liste comprenant l'élément de chauffage et la nano-pipette. 20 Dans des modes de réalisation préférés de l'invention, on peut éventuellement avoir recours en outre à l'une et/ou à l'autre des dispositions suivantes : - l'élément de chauffage est un filament parcouru par un courant. 25 - l'élément de chauffage est un laser. Un dernier aspect de l'invention concerne une machine de séquençage caractérisée en ce qu'elle comprend un dispositif de remplissage tel que décrit ci-dessus. D'autres caractéristiques et avantages de 30 l'invention apparaîtront au cours de la description suivante d'une de ses formes de réalisation, donnée à titre d'exemple non limitatif, en regard des dessins joints. Sur les dessins : - la figure 1 présente un schéma simplifié d'un 35 système d'électrophysiologie employant une nano-pipette. - la figure 2 illustre une nano-pipette telle que celles sur lesquelles le procédé peut être appliqué, - la figure 3a présente un mode de réalisation d'un dispositif de remplissage selon l'invention, - les figures 3b et 3c illustrent deux modes de réalisation d'un dispositif de remplissage selon l'invention, - la figure 4 est un organigramme illustrant les étapes d'un procédé de remplissage selon l'invention, - les figures 5a, 5b, 5c et 5d illustrent l'état d'une nano-pipette à différents moments au cours d'un procédé de remplissage selon l'invention, - les figures 6a et 6b illustrent le cas où des bouchons se forment dans la nano-pipette, - les figures 7a et 7b illustrent le cas où la région chauffée dépasse les gouttelettes, - les figures 8a à 8d présentent des images de microscopie électronique à balayage d'extrémités de nanopipettes ainsi qu'un schéma explicatif, - la figure 9a est une photographie d'une nano- pipette dans l'état de la figure 5b, - la figure 9b est une photographie d'une nanopipette dans l'état de la figure 6a. Sur les différentes figures, les mêmes références 25 désignent des éléments identiques ou similaires. La figure 1 présente un schéma d'un système usuel d'électrophysiologie 56 employant une nano-pipette 10. Le système 56 comprend deux électrodes 50, 51. L'électrode 50 30 est insérée dans une nano-pipette 10 par sa grande ouverture 12a. La nano-pipette 10 contient un liquide 14 dans lequel trempe l'électrode 50. Le liquide 14 rempli une partie de la nano-pipette 10 jusqu'à la petite ouverture 13a de la nano-pipette 10 et est par exemple en contact au 35 niveau de cette petite ouverture 13a avec une cellule 52 dont on cherche mesurer les caractéristiques électrochimiques. La seconde électrode 51 est immergée dans un liquide 53 formant le milieu dans lequel baigne la cellule 52. La seconde électrode 51 permet de fournir un potentiel de référence. Les deux électrodes 50, 51 sont reliées à un d'amplifier le signal à un dispositif de mesure constitué par une carte amplificateur 54 permettant électrique qui est lui-même relié et de traitement 55, par exemple 10 d'acquisition et un ordinateur. Un tel système 56 permet donc caractéristiques électrochimiques de la exemple son potentiel ou les courants qui de mesurer les cellule 52, par y circulent. Plus l'ouverture 13a est petite, plus la résolution spatiale de 15 la mesure est grande. La figure 2 présente une nano-pipette 10 s'étendant suivant une direction longitudinale X d'une extrémité proximale 12 terminée par une grande ouverture 12a, à une extrémité distale 13 terminée par une petite ouverture 13a. 20 La section interne de la petite ouverture 13a peut par exemple s'inscrire dans un cercle de diamètre inférieur ou égal à 60 nanomètres. La nano-pipette comprend une paroi évasée 11 tubulaire, comportant une surface intérieure 16 et une 25 surface extérieure 17. La paroi évasée 11 de la nanopipette 10 possède une section, prise perpendiculairement à la direction longitudinale X, diminuant progressivement depuis l'extrémité proximale 12 jusqu'à l'extrémité distale 13. 30 Les figures 8a à 8c présentent des images de microscopie électronique à balayage d'extrémités distales 13 de nano-pipettes 10 tandis que la figure 8d est un schéma explicatif illustrant une nano-pipette 10 vue sous le même angle que les figures 8a à 8c. 35 Une telle nano-pipette 10 peut par exemple être réalisée au moyen d'une étireuse laser. Elle peut par exemple être constituée de quartz ou de verre. Le quartz présente des propriétés physiques et électriques intéressantes telles qu'une forte résistance mécanique, un 5 faible facteur de dissipation ainsi qu'une faible constante diélectrique. Ceci permet d'obtenir des nano-pipettes 10 solides et de réduire les bruits électriques lors de l'utilisation de ces nano-pipettes 10 pour réaliser des mesures électriques. Des nano-pipettes 10 constituées 10 d'autres matériaux pourront être utilisées par l'homme du métier suivant les besoins et les contraintes. La figure 2 correspond à l'état initial 100 de la nano-pipette 10. Le liquide 14, introduit par la grande ouverture 12a terminant l'extrémité proximale 12, est 15 localisé majoritairement à proximité de l'extrémité proximale 12 et une bulle de gaz 15 est présente au niveau de l'extrémité distale 13 de petit diamètre. La figure 3a présente un dispositif 1, selon l'invention, de remplissage d'une nano-pipette 10. 20 Le dispositif 1 comprend un dispositif d'introduction de liquide 70 permettant d'introduire du liquide 14 dans la nano-pipette 10 par l'intermédiaire de la grande ouverture 12a. Le dispositif d'introduction de liquide 70 peut par exemple être constitué par un tube 71 25 relié à un réservoir 72 adapté pour être mis sous pression à l'aide d'une pompe 73 afin d'injecter le liquide 14 dans la nano-pipette 10. Le dispositif comprend en outre un élément de chauffage 20 pouvant être activé pour chauffer une région 30 chauffée 21 de la nano-pipette sans chauffer des régions froides proximale 22 et distale 23 de la nano-pipette 10. La région chauffée 21 peut comprendre une partie 14a du liquide 14 situé dans la nano-pipette 10. L'élément de chauffage 20 est adapté pour permettre de chauffer la 35 région chauffée 21 jusqu'à la vaporisation de la partie 14a du liquide 14 comprise dans ladite région chauffée 21. Selon un premier mode de réalisation indiqué figure 3b, l'élément de chauffage 20 comprend un filament de tantale 24 placé à l'extérieur de la nano-pipette 10 et en entourant une section, prise perpendiculairement à la direction longitudinale X. Le filament de tantale 24 peut être activé par le passage d'un courant électrique, par exemple d'environ 1,5 Watt dans ledit filament. Le matériau constituant le filament pourra être choisi par l'homme du métier pour s'adapter au mode de réalisation. Le matériau sera de préférence résistif et de telle sorte qu'il supporte l'élévation de température induite par le passage du courant. La région chauffée 21 de la nano-pipette 10 correspond dans ce mode de réalisation à la section de la nano-pipette 10 entourée par le filament et possède une certaine extension latérale en direction des extrémités proximale et distale, induite par la conduction thermique du matériau constituant la nano-pipette 10. Dans un autre mode de réalisation indiqué figure 3c, l'élément de chauffage 20 comprend un laser 26 générant un faisceau laser 25 focalisé sur la nano-pipette 10. La région chauffée 21 correspond à l'intersection entre le faisceau laser 25 et la nano-pipette 10. La région chauffée 21 possède à nouveau une extension latérale ayant les mêmes propriétés que dans le premier mode de réalisation décrit ci-dessus. Dans tous les modes de réalisation, si la position relative de la région chauffée 21 par rapport à la nano- pipette 10 reste inchangée au cours du temps, l'extension latérale de la région chauffée 21 va aller en s'accroissant du fait de la conduction thermique dudit matériau. Tout dispositif de chauffage permettant de chauffer, à un certain moment, une région chauffée 21 de la 35 nano-pipette 10 sans chauffer des régions froides 22, 23 de la nano-pipette 10, peut être utilisé comme élément de chauffage 20. Si l'on se réfère à nouveau à la figure 3a, le dispositif 1 comprend aussi un élément de déplacement 30 5 permettant de déplacer la région chauffée 21 par rapport à la nano-pipette 10. Dans le mode de réalisation où l'élément de chauffage 20 est un filament de tantale 24 entourant une section de la nano-pipette 10, l'élément de déplacement 30 10 peut, par exemple, être un actionneur linéaire adapté pour déplacer l'élément de chauffage 20 et/ou la nano-pipette 10 l'un par rapport à l'autre. Dans le mode de réalisation où l'élément de chauffage 20 est un laser 26, l'élément de déplacement peut comprendre un actionneur linéaire comme 15 décrit ci-dessus ou un dispositif rotatif orientant le faisceau du laser vers différentes région de la nanopipette 10 comme indiqué sur la figure 3c. Enfin, le dispositif 1 peut comprendre un dispositif de contrôle 40 adapté pour déterminer la 20 présence de liquide au niveau de l'extrémité distale 13 de la nano-pipette 10. Le dispositif de contrôle 40 peut par exemple comprendre un détecteur optique 41 couplé à un émetteur optique 42 émettant un rayonnement. Le dispositif de contrôle peut par exemple mesurer un changement 25 d'absorption ou de transmission du rayonnement en présence de liquide 14. Alternativement, le dispositif de contrôle 40 pourra être constitué de deux électrodes placées respectivement au niveau de l'extrémité proximale 12 et distale 13 ainsi que d'un élément de mesure de conductivité 30 électrique entre ces deux électrodes. Les électrodes seront adaptées pour que la mesure de conductivité soit positive lorsque la nano-pipette 10 est remplie, c'est-à-dire lorsqu'il n'existe plus de bulle de gaz 15 non-conductrice dans la nano-pipette 10. Le dispositif de contrôle 40 35 pourra employer d'autres principes physiques selon les besoins de l'homme du métier. Si l'on se réfère maintenant à la figure 4, celle-ci détaille l'organigramme d'un procédé de remplissage selon l'invention. Les figures 5a à 5d illustrent l'état de la nano-pipette 10 au cours des différentes étapes du procédé de remplissage. Une première étape d'introduction 100 consiste à introduire un liquide 14 dans la nano-pipette 10 par la grande ouverture 12a terminant son extrémité proximale 12. L'introduction du liquide 14 crée une bulle de gaz 15 au niveau de l'extrémité distale 13. Au cours de cette étape, l'élément de chauffage 20 est positionné à proximité de l'extrémité proximale 12 à l'aide de l'élément de déplacement 30 si besoin est, de façon à ce que la région chauffée 21 comprenne une partie 14a du liquide 14. L'élément de chauffage 20 est inactif au cours de l'étape d'introduction 100. L'état de la nano-pipette 10 à l'issue de l'étape d'introduction 100 est figuré sur la figure 5a. Au cours d'une étape de chauffage 200, on chauffe au moyen de l'élément de chauffage 20, la région chauffée 21 de la nano-pipette 10. La partie 14a du liquide 14 comprise dans la région chauffée 21 est donc aussi chauffée et va se vaporiser en un gaz 14g du liquide 14. Le gaz 14g va se condenser en gouttelettes 18 au niveau des régions froides de la nano-pipette 10 comme indiqué sur la figure 5b et sur la photographie de la figure 9a. Les régions froides proximales 22 et distales 23 sont des régions situées de part et d'autre de la région 21 suivant l'axe longitudinal X. La région froide proximale 22 est située du côté de l'extrémité proximale 12 par rapport à la région chauffée 21. Elle est remplie de liquide 14. La présence du liquide 14 empêche alors la formation de gouttelettes 18 au niveau de la région froide proximale 22. La région froide distale 23 est, quant à elle, située du côté de l'extrémité distale 13 par rapport à la région chauffée 21. Elle contient la bulle de gaz 15 et le gaz 14g peut donc se condenser sur la surface intérieure 16 de la nano-pipette 10. Le gaz 14g se condense sous la forme de gouttelettes 18 qui sont donc plus proches de l'extrémité distale 13 que ne l'était la partie 14a du liquide 14. Ceci a donc permis de déplacer une partie 14a du liquide 14 en direction de l'extrémité distale 13. Puis, au cours d'une étape de déplacement 300, la région chauffée 21 va être déplacée par rapport à la nanopipette 10 à l'aide du dispositif de déplacement 30 selon la direction longitudinale X. Le sens du déplacement est orienté de l'extrémité proximale 12 vers l'extrémité distale 13. La région chauffée 21 va donc se rapprocher des gouttelettes 18 déposées dans la région froide distale 23 et les régions froides proximales 22 et distales 23 vont donc être modifiées. La région froide proximale 22, située du côté de l'extrémité proximale 12 par rapport à la région chauffée 21, va s'étendre en direction de l'extrémité distale à la suite de la région chauffée 21. La région froide distale 23, située du côté de l'extrémité distale 13 par rapport à la région chauffée 21, va se contracter en direction de l'extrémité distale suite à l'avancée de la région chauffée 21. Ceci est illustré figure 5c. Lorsque les gouttelettes 18 entrent dans la région chauffée 21, elles vont être à nouveau chauffées, vont à nouveau s'évaporer et se redéposer en majorité dans la région froide distale 23, en direction de l'extrémité distale 13 de la nano-pipette 10. La présence de la région chauffée 21 empêche les gouttelettes 18 de venir se déposer dans la région froide proximale 22 comme indiqué sur la figure 5d. Le déplacement de l'élément de chauffage 20 permet donc de déplacer une partie 14a du liquide 14 en direction de l'extrémité distale 13. Pour permettre un remplissage optimal de la nano- pipette 10, la vitesse de déplacement relatif de la région chauffée 21 par rapport à la nano-pipette 10 pourra être comprise entre deux vitesses limites, une vitesse basse 31 et une vitesse haute 32. Si l'on se réfère à la figure 6a et à la photographie de la figure 9b, la vitesse basse 31 correspond à la vitesse de déplacement relatif en dessous de laquelle des bouchons 19 se forment. Lorsque la vitesse de déplacement est faible, les gouttelettes 18 vont grossir et finir par remplir toute la section de la nano-pipette 10, prise perpendiculairement à la direction longitudinale X. Elles constituent alors des bouchons 19 formés d'une partie de liquide 19a entourée de deux bulles de gaz 15a et 15 b. Lorsque le déplacement de la région chauffée 21 amène celle-ci au niveau d'un bouchon 19, le liquide 19a va être chauffé et s'évaporer. La présence du bouchon 19 empêche cependant ledit gaz d'aller se déposer au niveau de la région froide distale 23 et celui-ci va donc se déposer en gouttelettes 19b au niveau de la région froide proximale 22. Les bouchons 19 vont donc entraîner un déplacement du liquide 19a vers l'extrémité proximale 12 ce qui correspond à un fonctionnement non optimal du dispositif de remplissage 1. Ce cas est illustré sur la figure 6b. Si l'on se réfère maintenant à la figure 7a, la vitesse haute 32 correspond à une vitesse au-dessus de laquelle la région chauffée 21 dépasse certaines des gouttelettes 18. On peut distinguer les gouttelettes proximales 18a situées du côté de l'extrémité proximale 12 par rapport à la région chauffée 21, selon la direction longitudinale X, et les gouttelettes distales 18b situées du côté de l'extrémité distale 13 par rapport à la région chauffée 21. Dans ce cas, illustré figure 7b, le fonctionnement est aussi non optimal car les gouttelettes proximales 18a se trouvant dans la région chauffée 21, une fois chauffées et vaporisées vont se condenser majoritairement dans la région froide proximale 22, l'accès à la région froide proximale 23 étant bloqué par la région chauffée 21. Les valeurs des vitesses basse 31 et haute 32 dépendent du liquide 14 utilisé et des caractéristiques de la nano-pipette 10 comme par exemple sa matière, son état de surface interne 16 et sa géométrie. Lesdites vitesses pourront être définies grâce à un procédé de calibration réalisé préalablement à l'exécution du procédé de remplissage selon l'invention. Un tel procédé de calibration consiste par exemple, en se référant à nouveau à la figure 4, à réaliser une succession 500 d'étapes comprenant par exemple les étapes de chauffage 200, de déplacement 300, ainsi qu'une étape de contrôle 400 de la quantité de liquide 14 déplacée jusqu'à l'extrémité distale 12. Cette étape de contrôle 400 pourra par exemple être réalisée au moyen d'un dispositif de contrôle 40 adapté pour déterminer la présence de liquide au niveau de l'extrémité distale 13 de la nano-pipette 10. Le dispositif de contrôle peut par exemple comprendre un détecteur optique 41 couplé à un émetteur optique 42 émettant un rayonnement. Le dispositif de contrôle peut par exemple mesurer un changement d'absorption ou de transmission du rayonnement en présence de liquide 14. Le dispositif de contrôle pourra employer d'autres principes physiques selon les besoins et les contraintes. Cette succession d'étapes 500 pourra être réalisée pour différentes vitesses de déplacement relatif afin de comparer les quantités de liquide déplacées pour chaque 35 vitesse de déplacement. On déterminera ainsi une vitesse de déplacement relatif optimale 33. Dans le cas d'une nano-pipette 10 en quartz et d'un liquide 14 de caractéristiques proches de celles de l'eau, la vitesse de déplacement pourra être comprise entre 10 millionièmes de mètre par seconde et 1 millième de mètre par seconde. À mesure que la région chauffée 21 se rapproche de l'extrémité distale 13, la section de la nano-pipette prise perpendiculairement à la direction longitudinale X se rétrécit du fait de la paroi tubulaire évasée 11 de la nano-pipette 10. Ladite section se rétrécissant, les propriétés de condensation des gouttelettes 18 et de formation des bouchons 19 sont modifiées et la vitesse de déplacement pourra être adaptée en conséquence. La vitesse de déplacement pourra par exemple augmenter lorsque la région chauffée 21 se rapproche de l'extrémité distale 13 de la nano-pipette 10. Il peut être nécessaire de réitérer l'étape de 20 déplacement 300 ainsi que l'étape de chauffage 200 une ou plusieurs fois pour déplacer une partie du liquide 14 jusqu'à l'extrémité distale 13. On peut par exemple désactiver l'élément de chauffage 20, déplacer la région chauffée 21 en direction 25 de l'extrémité proximale, jusqu'à une position adaptée pour que la région chauffée 21 comprenne une partie 14b du liquide 14. On procède ensuite à nouveau aux étapes de chauffage 200 et de déplacement 300 afin d'amener la majorité du liquide compris dans la partie 14b jusqu'à 30 l'extrémité distale 13. Au cours du procédé décrit ci-dessus, le déplacement d'une partie du liquide 14 vers l'extrémité distale 13 va entraîner le déplacement de la bulle de gaz 15 en direction de l'extrémité proximale 12. Il est 35 possible de déplacer ainsi la bulle de gaz 15 jusqu'à ce qu'elle se trouve au niveau de l'extrémité proximale 12. Il est ensuite possible de retirer cette bulle de gaz 15 de la nano-pipette 10, une fois que ladite bulle de gaz 15 se situe dans la partie de grand diamètre de la 5 nano-pipette 10, c'est-à-dire à proximité de l'extrémité proximale 12. La bulle de gaz 15 peut par exemple être retirée par des moyens mécaniques comme l'introduction d'une tige à l'intérieur de la nano-pipette 10 depuis l'extrémité proximale 12. REVENDICATIONS1. Procédé de remplissage d'une nano-pipette (10) par un liquide (14), la nano-pipette (10) s'étendant 5 suivant une direction longitudinale (X), au moyen d'une paroi évasée (11) présentant une surface intérieure (16), depuis une extrémité proximale (12) terminée par une grande ouverture (12a) jusqu'à une extrémité distale (13) terminée par une petite ouverture (13a), la section interne de la 10 petite ouverture (13a) s'inscrivant dans un cercle de diamètre inférieur ou égal à 60 nanomètres, le procédé comprenant au moins les étapes suivantes : une étape d'introduction (100) de liquide (14) dans la nano-pipette (10) par la grande ouverture (12a) 15 terminant son extrémité proximale (12), réalisée au moyen d'un dispositif d'introduction de liquide (70) ; une étape de chauffage (200), réalisée au moyen d'un élément de chauffage (20), d'une région chauffée (21) de la nano-pipette (10), des régions froides proximales 20 (22) et distales (23) de la nano-pipette (10) restant froides, la région chauffée (21) comprenant une partie (14a) du liquide (14), de façon à ce que ladite partie (14a) se vaporise et se condense en gouttelettes (18) sur la surface intérieure (16) de la nano-pipette (10) dans la 25 région froide distale (23) ; et une étape de déplacement relatif (300) suivant la direction longitudinale (X), de la région chauffée (21) par rapport à la nano-pipette (10), réalisée au moyen d'un élément de déplacement (30), pour amener ladite région 30 chauffée (21) à proximité de l'extrémité distale (13) de la nano-pipette (10). 2. Procédé selon la revendication précédente, dans lequel la vitesse de déplacement relatif de la région chauffée (21) par rapport à la nano-pipette (10) lors de 35 l'étape de déplacement (300) est supérieure à une vitessebasse (31) en dessous de laquelle les gouttelettes (18) forment des bouchons (19), et inférieure à une vitesse haute (32) au-dessus de laquelle une pluralité de gouttelettes (18a) se trouve du côté de l'extrémité proximale (12) par rapport à la région chauffée (21). 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la vitesse de déplacement relatif de la région chauffée (21) par rapport à la nano-pipette (10) lors de l'étape de déplacement (300) est définie par un procédé de calibration comprenant au moins une succession (500) d'étapes comprenant au moins l'étape de chauffage (200), l'étape de déplacement relatif (300) ainsi qu'une étape de contrôle (400) de la quantité de liquide (14) déplacée jusqu'à l'extrémité distale (12) réalisée au moyen d'un dispositif de contrôle (40), ladite succession (500) d'étapes étant réalisée pour des vitesses de déplacement relatif différentes. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la vitesse de déplacement relatif de la région chauffée (21) par rapport à la nano-pipette (10) lors de l'étape de déplacement (300) est comprise entre 10 millionièmes de mètre par seconde et 1 millième de mètre par seconde. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'étape de déplacement (300) est réitérée au moins une fois. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la vitesse de déplacement relatif de la région chauffée (21) par rapport à la nano-pipette (10) lors de l'étape de déplacement (300) augmente lorsque la région chauffée (21) se rapproche de l'extrémité distale (13) de la nano-pipette (10). 7. Dispositif de remplissage (1) d'une nano-pipette (10) par un liquide (14), la nano-pipette (10) s'étendant 35 suivant une direction longitudinale (X), au moyen d'uneparoi évasée (11) présentant une surface intérieure (16), depuis une extrémité proximale (12) terminée par une grande ouverture (12a) jusqu'à une extrémité distale (13) terminée par une petite ouverture (13a), la section interne de la petite ouverture (13a) s'inscrivant dans un cercle de diamètre inférieur ou égal à 60 nanomètres, le dispositif comprenant au moins : un élément d'introduction de liquide (70) adapté pour introduire du liquide (14) dans la nano-pipette (10) 10 par la grande ouverture (10a) de son extrémité proximale (12) ; un élément de chauffage (20) adapté pour chauffer une région chauffée (21) de la nano-pipette (10), des régions froides proximales (22) et distales (23) de la 15 nano-pipette (10) restant froides, la région chauffée (21) comprenant une partie (14a) du liquide (14), l' élément de chauffage (20) étant adapté pour que ladite partie (14a) se vaporise et se condense en gouttelettes (18) sur la surface intérieure (16) de la nano-pipette (10) dans la région 20 froide distale (23) et un élément de déplacement (30) adapté pour déplacer relativement la région chauffée (21) par rapport à la nanopipette (10) suivant la direction longitudinale (X) et adapté pour amener ladite région chauffée (21) à proximité 25 de l'extrémité distale (13) de la nano-pipette (10). 8. Dispositif selon la revendication 7, dans lequel l'élément de chauffage (20) comprend un filament (24) parcouru par un courant. 9. Dispositif selon l'une quelconque des 30 revendications 7 et 8, dans lequel l'élément de chauffage (20) comprend un laser (26).