Brevet FR2980801A1 — publié le 20130405

Utilisation de « polyketide synthases » de type III (PKS III) recombinantes d'algues brunes marines La présente invention concerne une méthode de production de composés polyphénoliques, i.e. le phloroglucinol ou l'un de ses dérivés, par une polyketide synthase de type III (PKSIII) d'algue brune marine. L'invention concerne également des acides nucléiques recombinants codant pour une polyketide synthase de type III (PKSIII) de l'algue brune Ectocarpus siliculosus (E. siliculosus), des vecteurs recombinants comprenant ces acides nucléiques, ainsi que des cellules hôtes comprenant ces vecteurs. Enfin, l'invention concerne une méthode de préparation de divers composés à l'aide des composés polyphénoliques produits selon la méthode précitée. Les métabolites secondaires polyphénoliques forment un large groupe de composés chimiques divers qui existent à la fois chez les plantes terrestres et chez les macrophytes aquatiques (Waterman et Mole, 1994, Analysis of phenolic plant metabolites, Blackwell Scientific Publications : Oxford, Great Britain). Parmi ces composés, le phloroglucinol ainsi que ses dérivés sont largement utilisés dans l'industrie, et notamment dans les industries pharmaceutique, cosmétique ou encore agro-alimentaire. Plus récemment, le phloroglucinol et ses dérivés ont montré des activités potentiellement intéressantes pour l'homme en pharmacologie (production d'intermédiaires réactionnels pour l'hémi-synthèse de composés chimiques), médecine (propriétés antimicrobiennes, anti-VIH, anti-cancéreux, anti-diabétique, anti-allergique, anti-inflammatoire) ou cosmétique (effet anti-âge) qui en font des molécules naturelles à potentiel très intéressant (Singh IP et al., 2009, Expert Opin Ther Pat, 19: 847-66, pour revue). A l'heure actuelle, seul le phloroglucinol, synthétisé de manière chimique, est commercialisé comme médicament antispasmodique musculotrope (sous l'appellation Spasfon ® en France). Par ailleurs, des mélanges de produits sont aussi commercialisés comme des extraits d'Ascophyllum nodosum par la société Algues & Mer d'Ouessant (29, France), des produits comme le SeanolTM, extrait d'Ecklonia cava ou encore HealSea, extrait de Fucus vesiculosus par Diana Naturals (35, France) et quelques autres entreprises dans le monde. L'un des enjeux majeurs actuels est donc de fournir des méthodes de production de phloroglucinol ou de ses dérivés qui soient efficaces et rapides, et qui permettent d'obtenir ces composés dans des proportions importantes. L'une des possibilités consiste à le produire via une voie de biosynthèse mettant en oeuvre l'utilisation d'enzymes. Parmi ces enzymes potentiellement capables de synthétiser du phloroglucinol, on distingue notamment les polyketide synthases de type III (PKS III) qui sont des enzymes clés du métabolisme secondaire chez les plantes terrestres (voie des flavonoïdes, biosynthèse de phytoalexines) mais aussi chez les bactéries, les champignons et quelques protozoaires. Les PKS III correspondantes (chalcone synthases, stilbène synthases, pyrone synthases, ...) partagent le même mécanisme réactionnel mais diffèrent par leur spécificité de substrat pour les molécules « starters » et par la stéréochimie de la réaction de cyclisation donnant naissance à un large panel de métabolites secondaires polyphénoliques ayant des fonctions très diverses. De nombreuses polyketides synthases ont ainsi été isolées à partir de divers organismes, tels que l'algue brune Sargassum binderi, les plantes terrestres Aloe arborescens et Arabidopsis thaliana, l'amibe Dictyostelium discoideum, ou encore les bactéries Mycobacterium tuberculosis, Streptomyces coelicolor et Pseudomonas fluorescens (Baharum et al., Mar Biotechnol, 2011, 13(5) : 845-856 ; Wanibuchi et al., Bioorg Med Chem Lett, 2011, 21 : 2083-2086 ; Abe et al., J Am Chem Soc, 2005, 127(5) :1362-1363 ; Mizuuchi et al., Biol Pharm Bull, 2008, 31(12) : 2205-2210 ; Austin et al., Nat Chem Biol, 2006, 2(9) : 494-502 ; Sankaranarayanan et al., Nat Struct Mol Biol, 2004, 11(9) : 894-900 ; Izumikawa et al., J Ind Microbiol Biotechnol, 2003, 30 : 510-515 ; W02006/044290). Parmi ces polyketides synthases, seule la polyketide synthase PhID issue de la bactérie Pseudomonas fluorescens est capable de synthétiser du phloroglucinol en utilisant le malonyl-CoA comme molécule « starter » (W02006/044290). Les autres polyketides synthases, bien qu'utilisant également le malonyl-CoA en tant que molécule « starter », sont malheureusement incapables de synthétiser le phloroglucinol. Les inventeurs ont identifié une nouvelle polyketide synthase chez l'algue brune marine Ectocarpus siliculosus, qui a été appelée PKS1. Pour la première fois, les inventeurs ont produit une polyketide synthase de type III (PKS III) d'algue brune marine de façon recombinante et active dans un système hétérologue (la bactérie Escherichia coli) avec un protocole établi de purification à homogénéité permettant de produire environ 5 à 10 mg de protéine pure par litre de culture. Les inventeurs ont également montré que cette PKS1 était capable de synthétiser in vitro du phloroglucinol à partir de malonyl-coenzyme A (malonylCoA). De plus, d'autres produits obtenus à partir de malonylCoA et de plusieurs acylCoA à plus ou moins longues chaînes aliphatiques (hexanoylCoA, decanoylCoA, lauroylCoA et palmitoylCoA) sont présents dans les réactions.35 Acide nucléique, protéine et méthode de production de l'enzyme La présente invention concerne un acide nucléique isolé comprenant ou consistant en la séquence SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 4, ou en une séquence au moins 85% identique à la séquence SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 4, ou en une séquence complémentaire de SEQ ID NO : 2 ou de SEQ ID NO : 4. De manière préférée, ledit acide nucléique isolé code pour une polyketide synthase de type III. La présente invention concerne en outre un acide nucléique isolé codant pour une polyketide synthase de type III (PKSIII) comprenant ou consistant en : a) la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 2, b) la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 4, c) la séquence complémentaire de SEQ ID NO : 2 ou de SEQ ID NO : 4, d) une séquence au moins 85% identique à SEQ ID NO : 2 ou à SEQ ID NO : 4, e) une séquence différant des séquences a) à d) par dégénérescence du code, f) une séquence nucléotidique s'hybridant en conditions de stringence spécifiques avec au moins l'une des séquences a) à e). Par « isolé », on entend un composé qui a été isolé d'un organisme vivant, tel qu'une algue, ou un animal, et/ou d'une bibliothèque de composés. De manière préférée, l'acide nucléique isolé provient d'une algue brune marine. De manière encore plus préférée, l'acide nucléique isolé provient de l'algue brune marine Ectocarpus siliculosus (E. siliculosus). Préférentiellement, les acides nucléiques selon l'invention sont des acides nucléiques recombinants. Par « acide nucléique recombinant », on entend un acide nucléique, i.e. une molécule d'ADN ou d'ARN, qui a subi une manipulation biologique moléculaire. Par « acide nucléique », on entend la forme polymérique ester phosphate des ribonucléosides (adénosine, guanosine, uridine ou cytidine ; "molécules d'ARN") ou des désoxyribonucléosides (désoxyadénosine, désoxyguanosine, désoxythymidine ou désoxycytidine ; "molécules d'ADN") sous forme monocaténaire ou sous forme d'une hélice bicaténaire. Des hélices bicaténaires ADN-ADN, ADN-ARN et ARN-ARN sont possibles. Le terme acide nucléique, et en particulier molécule d'ADN ou d'ARN, ne se réfère qu'à la structure primaire ou secondaire de la molécule, et ne se limite aucunement à des formes tertiaires particulières. Ainsi, ce terme comprend l'ADN bicaténaire que l'on trouve, entre autres, dans les molécules d'ADN linéaire ou circulaire (par exemple, fragments de restriction), les virus, les plasmides et les chromosomes. Lorsque l'on évoque la structure de molécules d'ADN bicaténaire particulières, les séquences peuvent être décrites ici conformément à la convention normale qui ne donne la séquence que dans la direction 5' vers 3' le long du brin non transcrit de l'ADN (c'est-à-dire le brin ayant une séquence homologue à l'ARNm). Par séquence au moins 85% identique à une séquence de référence, on entend que la séquence est identique à la séquence de référence, sauf que la séquence peut inclure jusqu'à quinze altérations de nucléotides tous les 100 nucléotides de la séquence de référence. En d'autres termes, pour obtenir une séquence au moins 85% identique à la séquence de référence, jusqu'à 15% des nucléotides de la séquence peuvent être insérés, délétés, ou substitués par un autre nucléotide. Le pourcentage d'identité peut être calculé en réalisant un alignement global par paire basé sur l'algorithme d'alignement Needleman-Wunsch pour trouver l'alignement optimal (incluant des "trous" ou "gaps") entre deux séquences sur toute leur longueur, par exemple en utilisant Needle, et en utilisant la matrice BLOSUM62 avec une pénalité d'insertion de « gaps » de 10 et une pénalité d'extension de « gaps » de 0.5. De manière préférée, la séquence nucléotidique de l'invention, notamment la séquence c) est au moins 90%, 95%, ou 99% identique à la séquence SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 4. Par « séquence différant des séquences a) à c) par dégénérescence du code », on entend une séquence qui diffère de la séquence de référence par une substitution conservative comme indiqué dans le tableau ci-dessous. Substitutions conservatives Type d'acide aminé Ala, Val, Leu, Ile, Met, Pro, Phe, Trp Acides aminés avec chaînes latérales hydrophobes aliphatiques Ser, Tyr, Asn, Gln, Cys Acides aminés avec chaînes latérales polaires non chargées Asp, Glu Acides aminés avec chaînes latérales acides Lys, Arg, His Acides aminés avec chaînes latérales basiqueq Gly Chaîne latérale neutre Une molécule d'acide nucléique "peut s'hybrider" à une autre molécule d'acide nucléique tel qu'un ADNc, un ADN génomique ou un ARN, lorsque la forme monocaténaire de la molécule d'acide nucléique peut s'hybrider à l'autre molécule d'acide nucléique dans des conditions appropriées de température et de force ionique de la solution (voir Sambrook et al., supra). Les conditions de température et de force ionique déterminent la "stringence" de l'hybridation. Des conditions d'hybridation de faible stringence, correspondent à un Tm de 55 °C, par exemple SSC 5X, SDS 0,1 %, lait 0,25 %, et pas de formamide ; ou formamide 30 %, SSC 5 x, SDS 0,5 %). Des conditions d'hybridation de stringence modérée correspondent à un Tm plus élevé (environ 60 °C), par exemple formamide 40 %, avec du SSC 5x ou 6x. Des conditions d'hybridation de stringence élevée correspondent au Tm le plus élevé (supérieur ou égale à environ 65 °C), par exemple formamide 50 %, SSC 5x ou 6x. L'hybridation nécessite que les deux molécules d'acide nucléique contiennent des séquences complémentaires, bien qu'en fonction de la stringence de l'hybridation, des mésappariements entre les bases soient possibles. La stringence appropriée à l'hybridation de molécules d'acide nucléique dépend de la longueur des molécules d'acide nucléique et du degré de complémentation, des variables bien connues des hommes du métier. Plus le degré de similarité ou d'homologie entre deux séquences nucléotidiques est élevé, plus la valeur des Tm pour les hybrides des molécules d'acide nucléique ayant ces séquences est élevée. La stabilité relative (correspondant à un Tm plus élevé) d'hybridations d'acide nucléique décroît dans l'ordre suivant : ARN:ARN, ADN:ARN, ADN:ADN. Pour des hybrides d'une longueur supérieure à 100 nucléotides, les équations pour calculer le Tm ont été dérivées (voir Sambrook et al., supra, 9.50-0.51). Pour l'hybridation avec des molécules d'acide nucléique plus courtes, c'est-à-dire des oligonucléotides, la position des mésappariements devient plus importante, et la longueur de l'oligonucléotide détermine sa spécificité (voir Sambrook et al., supra, 11.7-11.8). De préférence, une longueur minimale pour une molécule d'acide nucléique pouvant s'hybrider est d'au moins environ 10 nucléotides ; de préférence, d'au moins environ 10 nucléotides ; et plus préférablement, la longueur est d'au moins environ 50 nucléotides ; encore plus préférablement d'au moins 100 nucléotides ; encore plus préférablement d'au moins 1000 nucléotides. Le terme "conditions d'hybridation spécifique" désigne un Tm de 55 °C et utilise des conditions décrites ci-dessus. Dans un mode de réalisation préféré, le Tm est égal à 60 °C, dans un mode de réalisation encore plus préféré, le Tm est égal à 65 °C. Une "séquence codante" d'ADN est une séquence d'ADN bicaténaire qui est transcrite et traduite en un polypeptide in vivo lorsqu'elle est placée sous le contrôle de séquences régulatrices appropriées. Les frontières de la séquence codante sont déterminées par un codon de début à l'extrémité 5' (amino) et par un codon d'arrêt de la traduction à l'extrémité 3' (carboxy). Une séquence codante peut inclure, sans s'y limiter, des séquences procaryotes, de l'ADNc issu d'ARNm eucaryote, des séquences d'ADN génomique provenant d'ADN eucaryote (par exemple de mammifères), et même des séquences d'ADN synthétiques. Si la séquence codante est destinée à une expression dans une cellule eucaryote, un signal de polyadénylation et une séquence de terminaison de la transcription seront généralement situés en 3' de la séquence codante. Des séquences de contrôle de la transcription et de la traduction sont des séquences régulatrices d'ADN, telles que des promoteurs, des activateurs, des terminateurs et d'autres séquences similaires, qui permettent l'expression d'une séquence codante dans une cellule hôte. Dans les cellules eucaryotes, les signaux de polyadénylation sont des séquences de contrôle. Une "séquence promoteur" est une région régulatrice d'ADN capable de lier l'ARN polymérase dans une cellule et d'initier la transcription d'une séquence codante vers l'aval (direction 3'). Dans les objectifs de définition de la présente invention, la séquence promoteur est liée à son extrémité 3' par le site d'initiation de la transcription et s'étend en amont (direction 5') en incluant le nombre minimal de bases ou d'éléments nécessaires pour initier la transcription à des niveaux détectables par rapport au bruit de fond. Dans la séquence promoteur, se trouve un site d'initiation de la transcription (commodément défini, par exemple, par cartographie avec la nucléase Si), ainsi que des domaines de liaison aux protéines (séquences consensus) responsables de la liaison de l'ARN polymérase. Des promoteurs eucaryotes contiendront souvent, mais pas toujours des boîtes "TATA" et des boîtes "CAT". Une séquence codante est "sous le contrôle" de séquences de contrôle de la transcription et de la traduction dans une cellule, lorsque l'ARN polymérase transcrit la séquence codante en ARNm qui est ensuite traduite en protéine codée par la séquence codante. Une "séquence signal" peut être incluse avant la séquence codante. Cette séquence code un peptide signal, en position N-terminale de la protéine, qui commande à la cellule hôte de transporter la protéine sur la surface cellulaire ou de sécréter la protéine dans le milieu, et ce peptide signal est généralement sélectivement dégradé par la cellule après exportation. Les séquences signal peuvent se trouver associées avec diverses protéines natives des procaryotes et des eucaryotes. De manière préférée, la séquence signal consiste en ou comprend la séquence 5'- ATGTCTTCTGCTGCGGTTGCTATGCTGGCTGACCCGACTGTCCAGATCGCTCTGGCG TGCCTGGTGGTGTCTCTCTTCGTTGTGCTGCAGTCGGTCAAAAAG-3' (SEQ ID NO: 5). De manière préférée, la séquence signal code pour le peptide signal de séquence MSSAAVAMLADPTVQIALACLVVSLFVVLQSVKK (SEQ ID NO : 6). Une « séquence étiquette » (ou « Tag ») peut également être incluse avant ou après la séquence codante. Cette séquence code généralement pour une répétition d'histidine, en position N-terminale de la protéine, et permet la purification de la protéine. De manière préférée, la séquence étiquette est placée avant la séquence codante, et code pour la séquence de six histidines SEQ ID NO : 7 (HHHHHH), la séquence étiquette peut donc avoir pour séquence nucléotidique la séquence SEQ ID NO : 8 (5'- CAYCAYCAYCAYCAYCAY-3'). De manière encore plus préférée, la séquence étiquette a pour séquence d'acides aminés la séquence MRGSHHHHHHGS (SEQ ID NO : 9). La séquence nucléotidique correspondant à la séquence étiquette codant pour la séquence SEQ ID NO: 9 peut être la séquence 5'- ATGCGCGGCAGCCATCATCATCATCATCATGGCAGC-3' (SEQ ID NO : 10). Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, l'acide nucléique selon l'invention code pour une PKSIII capable de synthétiser du phloroglucinol à partir de malonyl-CoA seul ou en combinaison avec d'autres substrats, par exemple l'acétyl-CoA, l'hexanoyl-CoA, le décanoyl-CoA, le lauroyl-CoA, ou le palmitoyl-CoA. L'invention concerne également une protéine codée par un acide nucléique isolé selon l'invention. De manière préférée, ladite protéine est codée par un acide nucléique comprenant ou consistant en la séquence SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 4. De manière encore plus préférée, ladite protéine comprend ou consiste en la séquence SEQ ID NO : 1 ou SEQ ID NO: 3. Alternativement, ladite protéine comprend ou consiste en une séquence ayant au moins 93% d'identité, préférentiellement au moins 95% d'identité, ou encore plus préférentiellement 99% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 1 ou SEQ ID NO : 3. De préférence, ladite protéine est une PKSIII capable de synthétiser du phloroglucinol à partir de malonyl-CoA seul ou en combinaison avec d'autres substrats, par exemple l'acétyl-CoA, l'hexanoyl-CoA, le décanoyl-CoA, le lauroyl-CoA, ou le palmitoyl-CoA. Par séquence au moins 93% identique à une séquence de référence, on entend que la séquence est identique à la séquence de référence, sauf que la séquence peut inclure jusqu'à sept altérations d'acides aminés tous les 100 acides aminés de la séquence de référence. En d'autres termes, pour obtenir une séquence au moins 93% identique à la séquence de référence, jusqu'à 7% des acides aminés de la séquence peuvent être insérés, délétés, ou substitués par un autre acide aminé. De préférence, la séquence au moins 93% identique est une séquence homologue à la séquence de référence, c'est-à-dire qu'elle diffère de la séquence de référence par une ou plusieurs substitutions conservatives. Le pourcentage d'identité peut être calculé en réalisant un alignement global par paire basé sur l'algorithme d'alignement Needleman-Wunsch pour trouver l'alignement optimal (incluant des "trous" ou "gaps") entre deux séquences sur toute leur longueur, par exemple en utilisant Needle, et en utilisant la matrice BLOSUM62 avec une pénalité d'insertion de « gaps » de 10 et une pénalité d'extension de « gaps » de 0.5. Par « substitutions conservatives », on entend le remplacement d'un acide aminé par un autre, sans altérer la conformation et la fonction de la protéine, incluant, mais sans être limitant, le remplacement d'un acide aminé par un autre acide aminé ayant les mêmes propriétés (telles que par exemple, les mêmes polarités, potentiels de liaison à l'hydrogène, propriétés acide, basique, hydrophobe, aromatique, et autres). Les acides aminés ayant les mêmes propriétés sont connus de l'homme du métier. Par exemple, l'arginine, l'histidine et la lysine sont des acides aminés basiques hydrophiles qui peuvent être interchangeables. De manière similaire, l'isoleucine, un acide aminé hydrophile, peut être remplacé par la leucine, la méthionine ou la valine. Les acides aminés neutres hydrophiles, qui peuvent être substitués entre eux, incluent l'asparagine, la glutamine, la sérine et la thréonine. Par « substitué » ou « modifié », la présente invention inclut les acides aminés qui ont été altérés ou modifiés à partir d'acides aminés naturels. Ainsi, il doit être compris que dans le contexte de l'invention, une substitution conservative est reconnue dans l'état de l'art comme une substitution d'un acide aminé par un autre acide aminé ayant les mêmes propriétés. Des exemples de substitutions conservatives sont donnés dans le Tableau 1 ci- dessous : Tableau 1 : Substitutions conservatives I Caractéristiques de la chaîne latérale Acide aminé Non polaire GAPILV Polaire non chargée C S T M N Q Polaire chargée D E K R Aromatique H F W Y Autres NQDE Alternativement, les acides aminés peuvent être groupés comme décrit par Lehninger (1975, Biochemistry, Second Edition, Worth Publishers, Inc. New-York: NY., pp. 71-77), comme décrit dans le Tableau 2 ci-dessous :30 Tableau 2 : Substitutions conservatives II Caractéristiques de la chaîne latérale Acide aminé Non polaire Aliphatique A L I V P Aromatique F W Contenant du Soufre M Cas à part G Polaire non chargée Hydroxyle S T Y Amides N Q Sulfhydryle C Cas à part G Chargée positivement (basique) K R H Chargée négativement (acide) D E Dans une autre alternative, des exemples de substitutions conservatives sont données dans le Tableau 3 ci-dessous : Tableau 3 : Substitutions conservatives III Résidu original Exemple de substitution A VLI R K Q N N QHKR D E C S G N E D H NQKR I LVMAF L IVMAF K R Q N M LFI F LVIA P G S T T S W Y Y WFTS V ILMFA L'invention concerne également un vecteur comprenant un acide nucléique selon l'invention, dans lequel ledit acide nucléique est placé sous le contrôle de signaux (i.e. un promoteur, un terminateur et/ou un enhancer) permettant l'expression de l'acide nucléique selon l'invention. Le vecteur peut en outre comprendre un gène de résistance à un antibiotique, tel que l'ampicilline ou la kanamycine. Le terme « vecteur » désigne un élément extrachomosomique qui peut porter un gène non essentiel pour le métabolisme cellulaire, et qui est généralement un ADN circulaire double brin. L'élément extrachomosomique peut être une séquence autoréplicative, une séquence de phage ou une séquence nucléotidique, un ADN ou ARN simple ou double brin, un plasmide, un cosmide. Généralement, un vecteur contient des séquences régulatrices de la transcription ou de la traduction, un marqueur de sélection, ou une séquence permettant l'autoréplication ou une insertion chromosomique. Un vecteur approprié inclut la région 5' d'un gène qui régule l'initiation de la transcription (i.e. un promoteur) et une région 3' qui contrôle la terminaison de la transcription (i.e. un terminateur). Le promoteur peut par exemple être celui de CYC1 , HIS3, GAL1 , GAL10, ADH1, PGK, PHO5, GAPDH, ADC1, TRP1, URA3, LEU2, ENO, TPI, lac, trp, ÀPL, ÀPR, T7, tac, bactériophage T5 ou trc. Le terminateur peut être dérivé de nombreux gènes d'une cellule hôte préférée et peut, optionnellement, être omis. Préférentiellement, le vecteur est un plasmide pQE-80L (Qiagen) contenant le promoteur du bactériophage T5 inductible par l'Isopropy1-8-D-thiogalactopyranoside (IPTG). Les acides nucléiques et/ou le vecteur selon l'invention peuvent être utilisés pour transformer une cellule ou un organisme hôte, i.e. pour l'expression ou la production d'une protéine selon l'invention. Ainsi, un autre aspect de l'invention concerne un hôte ou une cellule hôte qui contient un acide nucléique ou un vecteur selon l'invention, ou qui exprime (ou qui est capable d'exprimer dans des conditions appropriées) une protéine selon l'invention. Des hôtes ou cellules hôtes adaptés sont connus de l'homme du métier, et peuvent par exemple être n'importe quel champignon, cellule ou lignée cellulaire eucaryote ou procaryote, organismes eucaryotes ou procaryotes. Par exemple, l'hôte ou la cellule hôte peut être (i) une souche bactérienne, incluant, sans être limitant, les lignées de bactéries gram-négatives telles que les lignées d'Escherichia, par exemple Escherichia coli; de Proteus, par exemple Proteus mirabilis; de Pseudomonas, par exemple Pseudomonas fluorescens; et les souches de bactéries gram-positives telles que les lignées de Bacillus, par exemple Bacillus subtilis ou Bacillus brevis; de Streptomyces, par exemple Streptomyces lividans; de Staphylococcus, par exemple de Staphylococcus carnosus; et de Lactococcus, par exemple Lactococcus lactis ; (ii) une cellule fongique, incluant, sans être limitant les cellules des espèces Trichoderma, par exemple Trichoderma reesei; Neurospora, par exemple Neurospora crassa; Sordaria, par exemple Sordaria macrospore; Aspergillus, par exemple Aspergillus piger ou Aspergillus sojae; ou d'autres champignons filementeux ; (iii) une levure, incluant, sans être limitant, les cellules des espèces Saccharomyces, par exemple Saccharomyces cerevisiae; Schizosaccharomyces, par exemple Schizosaccharomyces pombe; Pichia, par exemple Pichia pastoris ou Pichia methanolica; Hansenula, par exemple Hansenula polymorpha; Kluyveromyces, par exemple Kluyveromyces lactis; Arxula, par exemple Arxula adeninivorans; Yarrowia, par exemple Yarrowia lipolytica; (iv) une cellule ou lignée cellulaire d'amphibien, telle que les ovocytes de Xenopus; (y) une cellule ou lignée cellulaire d'insecte, telle que les lignées SF9 ou Sf21; (vi) une plante ou une cellule de plante, par exemple une plante de tabac ; et/ou (vii) une cellule ou lignée cellulaire de mammifère, incluant, sans être limitant, les cellules CHO, BHK, HeLa, COS (i.e. COS-7) et PER.C6. Préférentiellement, la cellule hôte est une bactérie de type Escherichia coli, et plus préférentiellement la cellule hôte est la souche E. coli BL21-CodinPlus-RILP (Stratagene). Un autre aspect de l'invention concerne une méthode de production d'une polyketide synthase, comprenant les étapes de : a) culture d'une cellule hôte selon l'invention, dans des conditions permettant l'expression d'une polyketide synthase recombinante, b) extraction et/ou purification, de ladite polyketide synthase recombinante. La méthode comprend en outre une étape de transformation d'une cellule hôte à l'aide d'un vecteur recombinant tel que défini précédemment avant l'étape a). En conséquence, la méthode selon l'invention peut comprendre les étapes de : a0) transformation d'une cellule hôte à l'aide d'un vecteur tel que défini précédemment ; a) culture de ladite cellule transformée, dans des conditions permettant l'expression d'une polyketide synthase recombinante, b) extraction et/ou purification de ladite polyketide synthase recombinante. La transformation à l'étape a0) peut être réalisée par des procédés connus de l'homme du métier, par exemple, par transfection, électroporation, électrotransfert, microinjection, transduction, fusion de cellules, DEAE-dextran, précipitation au phosphate de calcium, lipofection, utilisation de canon à gènes, ou un transporteur de vecteur d'ADN (voir par exemple, Wu et al., 1992, J. Biol Chem. 267 :963-967 ; Wu et al., 1988, J. Biol Chem. 263 :14621-14624 ; Hartmut et al., demande de brevet canadienne No. 2 012 311, publiée le 15 mars 1990). De manière préférée, la transformation à l'étape a0) est réalisée par choc thermique sur des cellules rendues chimiquement compétentes, dans un milieu de culture approprié. De manière préférée, le choc thermique est réalisé entre 35°C et 50°C pendant 30 secondes à 1 min suivi d'un retour dans la glace pendant 1 à 3 min. De manière encore plus préférée, le choc thermique est réalisé à 42°C pendant 45 secondes suivi d'un retour dans la glace pendant 2 min Par milieu de culture approprié, on entend un milieu de culture permettant la croissance des cellules transformées. Un tel milieu de culture est connu de l'homme du métier. Par exemple, il s'agit d'un milieu incluant, sans être limitant, un substrat carboné ou une source de carbone qui peut être métabolisé(e) par la cellule transformée. Le substrat carboné ou la source de carbone peut être sélectionné(e) parmi les monosaccharides, les oligosaccharides, les polysaccharides, les substrats simple-carbone, et un mélange de ces composés. Optionnellement, le milieu de culture contient un antibiotique, tel que l'ampicilline ou la kanamycine. De manière préférée, la cellule transformée à l'étape a0) est une bactérie de type E. coli, telle que la souche E. coli BL21-CodinPlus-RILP (Stratagene), transformée avec un vecteur et/ou un acide nucléique selon l'invention, et cultivée en utilisant un milieu adapté, tel que le milieu Luria-Broth (LB), de préférence contenant au moins 100 pg/m1 d'ampicilline. La culture réalisée à l'étape a) a pour but de permettre l'expression de la polyketide synthase recombinante. Elle peut être réalisée par des procédés connus de l'homme du métier, par exemple, à l'aide d'un bioréacteur, aussi appelé fermenteur. Le bioréacteur est une cuve hermétique munie d'un système d'agitation, d'un système d'aération, de sondes servant à mesurer divers paramètres (pH, température, oxygène dissout) et des pores d'alimentation permettant un dosage précis de la composition du milieu de culture en cours de fermentation. La fermentation dans le bioréacteur s'effectue en deux phases : une phase I de croissance durant laquelle les cellules se divisent à un rythme accéléré, puis une phase II d'accumulation ou d'induction menant à l'expression de la protéine recombinante. L'homme du métier est capable de déterminer les conditions de culture appropriées pour permettre la phase I de croissance et la phase II d'accumulation ou d'induction. Dans un mode de réalisation particulier, les phases I et II peuvent être réalisées comme décrit dans l'exemple 1.3. L'extraction et/ou la purification à l'étape b) peuvent être réalisées à l'aide de procédés connus de l'homme du métier. A titre d'exemple non limitatif, l'extraction peut être réalisée par lyse des cellules à l'aide d'une presse de French, par sonication, ou par voie enzymatique, ou par toute autre technique standard. La lyse des cellules peut être suivie d'une étape de filtration, et/ou centrifugation du lysat. A titre d'exemple non limitatif, la purification peut être réalisée à l'aide d'une chromatographie (sur colonne échangeuse d'ions, d'affinité, ou de séparation par taille), d'une centrifugation, d'une solubilité différentielle ou par toute autre technique standard. Dans un mode de réalisation particulier, l'extraction et/ou la purification peuvent être réalisées comme décrit dans l'exemple 1.3. De préférence, ladite méthode de production permet de produire au moins 1 mg/L à 20 mg/L de protéine pure, et de préférence encore au moins 5 à 10 mg/L de protéine pure. Méthode de production de composés polvphénoliques Les inventeurs ont ainsi identifié qu'une polykétide synthase de type III (PKSIII) extraite d'une algue brune était capable de synthétiser du phloroglucinol et/ou l'un de ses dérivés à partir de divers substrats carbonés, et plus particulièrement à partir de malonylCoA. La présente invention concerne donc également une méthode de production d'au moins un composé polyphénolique, dans laquelle : - une polyketide synthase de type III (PKSIII) d'algue brune est mise en contact avec au moins un substrat carboné dans des conditions permettant la production majoritaire d'au moins un composé polyphénolique, - ledit composé phénolique produit est le phloroglucinol et/ou un de ses dérivés. De préférence, la méthode comporte une étape de récupération du phloroglucinol et/ou d'un de ses dérivés. Cette étape de récupération peut comprendre une étape d'extraction et/ou une étape de purification. Par « composé polyphénolique », on entend un composé issu du métabolisme secondaire du règne végétal, i.e. plantes terrestres et macrophytes aquatiques, qui présente au moins un cycle aromatique à 6 carbones (phénol) lui-même porteur d'une ou plusieurs fonctions hydroxyles (OH). On distingue plusieurs familles de molécules dont la structure est relativement proche : les flavonoïdes (pigments végétaux jaunes-orangés), les anthocyanes (composés de couleurs rouge à violet responsable de la couleur pourpre des raisins rouges) et les tannins. Par « polyketide synthase de type III », on entend une enzyme capable de synthétiser du phloroglucinol et/ou l'un de ses dérivés à partir d'un substrat carboné. De manière préférée, la PKSIII est obtenue à partir d'une algue brune marine, de manière encore préférée, la PKSIII est obtenue à partir d'une algue brune marine du genre Ectocarpus, et de manière encore plus préférée, la PKSIII est issue de l'algue brune marine Ectocarpus siliculosus. Dans un mode de réalisation préféré, la PKSIII est produite par la méthode selon l'invention décrite ci-dessus. Selon un aspect particulier de l'invention, la PKSIII comprend ou consiste en une protéine selon l'invention. Plus particulièrement la PKSIII comprend ou consiste en la séquence SEQ ID NO : 1 ou SEQ ID NO : 3 ou une séquence ayant au moins 93%, 95% ou 99% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 1 ou SEQ ID NO : 3. La séquence ayant au moins 93% d'identité avec SEQ ID NO : 1 ou SEQ ID NO : 3 peut différer de la séquence de référence (i.e. SEQ ID NO : 1 ou SEQ ID NO : 3) par une ou plusieurs substitution(s) conservatives(s). Les termes « substitutions conservatives » sont tels que définis ci-dessus. Selon un aspect particulièrement préféré, la PKSIII consiste en la séquence SEQ ID NO : 1 ou SEQ ID NO : 3. Selon un autre aspect particulier de l'invention, ladite la PKSIII comprend ou consiste en une séquence susceptible d'être codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 2 ou une séquence ayant au moins 85% d'identité avec SEQ ID NO : 2. Selon un autre aspect particulier de l'invention, ladite la PKSIII comprend ou consiste en une séquence susceptible d'être codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 4 ou une séquence ayant au moins 85% d'identité avec SEQ ID NO : 4. La séquence ayant au moins 85% d'identité avec SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 4 peut différer de la séquence de référence (i.e. SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 4) par une ou plusieurs substitution(s) conservatives(s). Les termes « substitutions conservatives » sont tels que définis ci-dessus. Par « substrat carboné », on entend un composé utilisé en tant que source de carbone. Par exemple, le substrat carboné inclut des composés de type métabolites, tels que les chaînes carbonées Cl à C18, les acides gras, les mono-, di-, tri-glycérides, les polyols, les phospholipides, les phosphoacides, les monosaccharides, les acides aminés, les nucléotides, les homo- ou hétéro-oligomères ou polymères hydrolysables de ces composés, et les formes biologiquement actives de ces composés. Lesdits métabolites peuvent être de n'importe quelle origine, biologique ou synthétique. D'autres exemples de composés sont les composés aromatiques, aliphatiques et cycloaliphatiques C1-018. Dans un aspect particulier, le substrat carboné est choisi parmi le malonyl-CoA, l'acétyl-CoA, l'hexanoyl-CoA, le décanoyl-CoA, le lauroyl-CoA, et/ou le palmitoyl-CoA. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, le substrat carboné est le malonyl-CoA. Par « phloroglucinol », on entend le benzène-1,3,5-triol, son numéro CAS est le 108-73-6. Par « dérivé du phloroglucinol », on entend notamment les composés suivants : l'acétyl-phloroglucinol, le lauroyl-phloroglucinol, le palmitoyl-phloroglucinol, l'hexanoyl- phloroglucinol, le décanoyl-phloroglucinol. Dans un aspect particulièrement préféré, le substrat carboné est le malonyl-CoA et le composé phénolique produit consiste en ou comprend le phloroglucinol. Dans un autre aspect particulièrement préféré, le substrat carboné est le malonyl- CoA et l'acétyl-CoA, et le composé phénolique produit consiste en ou comprend le phloroglucinol et l'acétyl-phloroglucinol. Dans un autre aspect particulièrement préféré, le substrat carboné est le malonyl- CoA et le lauroyl-CoA et le composé phénolique produit consiste en ou comprend le phloroglucinol et le lauroyl-phloroglucinol. Dans un autre aspect particulièrement préféré, le substrat carboné est le malonyl- CoA et le palmitoyl-CoA et le composé phénolique produit consiste en ou comprend le phloroglucinol et le palmitoyl-phloroglucinol. Dans un autre aspect particulièrement préféré, le substrat carboné est le malonyl- CoA et l'hexanoyl-CoA et le composé phénolique produit consiste en ou comprend le phloroglucinol et l'hexanoyl-phloroglucinol. Dans un autre aspect particulièrement préféré, le substrat carboné est le malonyl- CoA et le décanoyl-CoA et le composé phénolique produit consiste en ou comprend le phloroglucinol et le décanoyl-phloroglucinol. Par production majoritaire de phloroglucinol ou de l'un de ses dérivés, on entend que le phloroglucinol ou l'un de ses dérivés est le produit qui est retrouvé en concentration la plus importante par rapport aux autres composés produits. Préférentiellement, la production de phloroglucinol ou de l'un de ses dérivés est d'au moins 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100%. L'étape de mise en contact de la polyketide synthase avec au moins un substrat carboné est connue de l'homme du métier. De manière préférée, mais non limitante, cette étape est réalisée comme décrit dans les exemples 1.4 ou 1.5. Plus particulièrement, elle comprend les étapes de (i) mise en contact de la polyketide synthase avec la source carbonée dans un milieu approprié, (ii) incubation du mélange ainsi obtenu. Le milieu approprié à l'étape (i) peut être un milieu HCI-EDTA dont les concentrations respectives sont comprises entre 30 et 70 mM d'HCI et 0,5 et 2 mM d'EDTA, préférentiellement comprises entre 45 et 55 mM d'HCI et 0,8 et 1,2 mM d'EDTA, encore plus préférentiellement les concentrations d'HCI et d'EDTA sont respectivement de 50 mM et 1 mM. De préférence, le pH du milieu est compris entre 6 et 8, et de préférence encore, le pH est de 7,5 environ. L'incubation (ii) est de préférence réalisée à température ambiante, i.e. à une température comprise entre 20°C et 30°C, et pendant une durée comprise entre 30 min et 8h. Encore de préférence, l'incubation est réalisée à une température comprise entre 22°C et 28°C, et de préférence encore l'incubation est réalisée à 25°C environ. De préférence, l'incubation est réalisée pendant une durée comprise entre 1h et 5h, et de préférence encore l'incubation est réalisée pendant 1h, 2h, 3h, 4h ou 5h environ. Dans un mode de réalisation particulièrement préférée, l'incubation est réalisée à 25°C environ pendant 1h, 2h, 3h, 4h ou 5h environ. L'étape d'extraction et/ou de purification peut être réalisée par des techniques connues de l'homme du métier. Par exemple, l'extraction peut être réalisée à l'aide d'acétate d'éthyle. L'étape de purification peut, par exemple, être réalisée par chromatographie sur couche mince (CCM) ou par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS). Les composés polyphénoliques produits par la méthode selon l'invention, tels que le phloroglucinol et ses dérivés, peuvent être utilisés dans de nombreuses applications dans les domaines pharmaceutique, nutraceutique, cosmétique, agroalimentaire ou phytosanitaire. Ainsi, l'invention concerne également une méthode de production d'un composé pharmaceutique, nutraceutique, cosmétique, agroalimentaire ou phytosanitaire, ladite méthode comprenant les étapes de : a) production d'au moins un composé polyphénolique par la méthode selon l'invention ; b) optionnellement, modification dudit composé phénolique obtenu à l'étape a) pour produire un composé pharmaceutique, nutraceutique, cosmétique, agroalimentaire ou phytosanitaire, c) addition d'un support, véhicule, excipient, diluant et/ou adjuvant acceptable pour l'application retenue. L'invention concerne également l'utilisation des composés polyphénoliques produits par la méthode selon l'invention pour la préparation de compositions pharmaceutiques, nutraceutique, cosmétique, agroalimentaire ou phytosanitaire. L'invention a aussi pour objet ces compositions. Plus particulièrement, les compositions pharmaceutiques ou nutraceutiques peuvent contenir des supports ou similaires (véhicules, excipients, diluants) et/ou des adjuvants pharmaceutiquement acceptables. Utilisé ici, le terme "pharmaceutiquement acceptable" signifie de préférence approuvé par une agence réglementaire gouvernementale, en particulier recommandée dans la Pharmacopée américaine ou européenne, pour une utilisation chez les animaux, et plus particulièrement les humains. Des supports pharmaceutiques ou similaires appropriés sont notamment décrits dans "Remington's Pharmaceutical Sciences" par E.W. Martin. Ces supports ou similaires pharmaceutiquement acceptables peuvent être des liquides stériles, tels que l'eau et des huiles, incluant les liquides issus du pétrole, des animaux, des végétaux, ou d'origine synthétique, tel que l'huile d'arachide, l'huile de soja, l'huile minérale, l'huile de sésame, et d'autres huiles similaires. L'eau est un support préféré lorsque la composition pharmaceutique est administrée par voie intraveineuse. Des solutions salines et des solutions aqueuses de dextrose et de glycérol peuvent également être employées comme supports liquides, en particulier pour les solutions injectables. Des excipients pharmaceutiques appropriés comprennent le mannitol, la sérumalbumine humaine (HSA), l'amidon, le glucose, le lactose, le saccharose, la gélatine, le malt, le riz, une farine, la craie, le gel de silice, le carbonate de magnésium, le stéarate de magnésium, le stéarate de sodium, le monostéarate de glycérol, le talc, le chlorure de sodium, le lait écrémé en poudre, le glycérol, le propylène, le glycol, l'eau, l'éthanol et d'autres excipients similaires. Ces compositions peuvent prendre la forme de solutions, de suspensions, de comprimés, de pilules, de capsules, de poudres, de formulations à libération prolongée et d'autres formes similaires. Ces compositions contiendront une quantité diagnostique ou thérapeutique efficace du composé actif avec une quantité appropriée du support ou similaire de façon à fournir la forme pour une administration appropriée au patient. Bien que l'injection intraveineuse soit une forme très efficace d'administration, d'autres modes peuvent être employés, tels qu'une injection, ou une administration orale, nasale ou parentérale. Plus particulièrement, les compositions cosmétiques peuvent contenir un véhicule cosmétiquement acceptable. Par " véhicule cosmétiquement acceptable ", on entend un véhicule adapté pour une utilisation en contact avec des cellules humaines et animales, en particulier les cellules de l'épiderme, sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable. Comme exemple de véhicule cosmétiquement acceptable, on peut citer notamment l'eau, en particulier l'eau distillée. Les compositions cosmétiques selon l'invention peuvent comprendre en outre tout additif usuellement utilisé dans le domaine cosmétique, tel que des séquestrants, des antioxydants, des conservateurs, des charges, des électrolytes, des humectants, des colorants, des bases ou des acides usuels, minéraux ou organiques, des parfums, des huiles essentielles, des actifs cosmétiques, des hydratants, des vitamines, des acides gras essentiels, des sphingolipides, des composés autobronzants, des agents apaisants et protecteurs de la peau. Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir ce ou ces éventuels composés complémentaires et/ou leur quantité, de manière telle que les propriétés avantageuses de la composition selon l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées. Ces additifs peuvent être présents dans la composition à raison de 0,001 % à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition. De façon connue, les compositions cosmétiques de l'invention peuvent contenir des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique ou dermatologique, tels que les émulsionnants, les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les parfums, les charges, les filtres et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines cosmétique et/ou dermatologique et, par exemple, de 0,01 % à 20 cY0 du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse et/ou dans les vésicules lipidiques. L'application d'une composition cosmétique selon l'invention est effectuée par voie topique sur la peau, y compris les muqueuses, notamment les lèvres ou les phanères. L'application d'une composition cosmétique selon l'invention peut également être effectuée par injection intradermique. Les compositions cosmétiques selon l'invention peuvent se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique, sous forme d'onguent, de crème, d'huile, de lait, de pommade, de poudre, de tampon imbibé, de solution, de gel, de spray, de lotion, de suspension, de savon. Les compositions de l'invention peuvent être des compositions cosmétiques sous la forme d'émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile, ou d'émulsion multiple, de microémulsion, de gel hydroalcoolique, de crème, d'huile, de lotion hydroalcoolique. Les compositions cosmétiques de l'invention sont particulièrement utiles, pour hydrater, apaiser, réparer et/ou protéger la peau. Ces compositions cosmétiques sont également particulièrement avantageuses pour lutter contre le vieillissement cutané, à savoir notamment les phénomènes de rides, de perte de tonicité et d'élasticité dus aux modifications structurales de la peau en raison de l'âge. Les compositions cosmétiques de l'invention sont également utiles pour protéger la peau des agressions extérieures, telles que notamment les rayons ultraviolets ou les pollutions de l'air. Les compositions phytosanitaires selon l'invention peuvent comprendre en outre un ou plusieurs tensioactifs, conservateurs, dispersants, mouillants, émulsionnants, antimousse, de l'eau. Les compositions phytosanitaires selon l'invention peuvent être formulées sous différentes formes, par exemple sous la forme de poudres mouillables, granulés dispersibles, suspensions concentrées, poudres pour poudrage. L'invention concerne également l'utilisation du phloroglucinol et/ou un ou plusieurs de ses dérivés produit(s) par la méthode selon l'invention pour le traitement de désordres spasmodiques, maladies virales, maladies parasitaires, maladies microbiennes, maladies fongiques, désordres dermatologiques, l'hypertension, l'ostéoporose, maladies inflammatoires, maladies vasculaires, désordres sexuels, cancers, diabète, maladies neurodégénératives, la dépression, et l'allergie. L'invention concerne également des méthodes de traitement de désordres spasmodiques, maladies virales, maladies parasitaires, maladies microbiennes, maladies fongiques, désordres dermatologiques, l'hypertension, l'ostéoporose, maladies inflammatoires, maladies vasculaires, désordres sexuels, cancers, diabète, maladies neurodégénératives, la dépression, et l'allergie, comprenant l'administration de phloroglucinol et/ou d'un ou plusieurs de ses dérivés à un patient le nécessitant. Les désordres spasmodiques peuvent notamment comprendre les troubles fonctionnels du tube digestif (colites) et des voies biliaires, les coliques néphrétiques ou hépatiques, les douleurs gynécologiques, et les contractions au cours de la grossesse. Les maladies virales peuvent notamment comprendre les infections au virus de l'immunodéficience acquise (VIH) et au virus de l'herpès. Les maladies parasitaires peuvent notamment comprendre la malaria. Les maladies microbiennes peuvent notamment comprendre les infections dues à des bactéries Gram-négatives ou Gram-positives, et plus particulièrement les bactéries de types Streptococcus mutans, Porphyromonas gingivalis, Bacillus subtilis et Staphylococcus aureus. Les maladies fongiques peuvent notamment comprendre les infections dues à Aspergillus piger, Aspergillus flavus, Mucor et Cladosporium. Les désordres dermatologiques peuvent notamment comprendre le psoriasis, l'alopécie de la peau, les problèmes de cicatrisation de la peau, et le vieillissement cutané à savoir notamment les phénomènes de rides, de perte de tonicité et d'élasticité dus aux modifications structurales de la peau en raison de l'âge. Les maladies vasculaires peuvent notamment comprendre la maladie de Raynaud et l'acrocyanose. Les maladies neurogénératives peuvent notamment comprendre la maladie d'Alzheimer, le syndrome de Kiloh Nevin, le syndrome du canal carpien, la paralysie de Tardy Ulnar, le syndrome du canal de Guyon. Les désordres sexuels peuvent notamment comprendre des troubles de l'érection. Le phloroglucinol ou ses dérivés peuvent être utilisés seuls ou en combinaison avec d'autres composés ayant une activité thérapeutique pour le traitement des désordres cités ci-dessus. L'invention va être expliquée plus en détail par les exemples suivants, sans en limiter sa portée. DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1. La figure 1 représente le vecteur d'expression pQE-80L (Qiagen) contenant le promoteur du bactériophage T5 inductible par l'Isopropyl-b-D-thiogalactopyranoside (IPTG) utilisé pour l'expression de la protéine PKS1. Figure 2. La figure 2 représente l'analyse en spectrométrie de masse de la protéine PKS1 recombinante purifiée d'E. siliculosus. Figure 3. La figure 3 représente l'analyse en chromatographie sur couche mince des produits formés au cours de la réaction enzymatique utilisant les différents substrats suivants : malonylCoA seul, malonylCoA + acétyl-CoA, malonylCoA + hexanoyl-CoA, malonylCoA + lauroyl-CoA, malonylCoA + palmytoyl-CoA et malonylCoA + décanoyl-CoA. Figure 4. La figure 4 représente l'analyse en spectrométrie de masse GC-MS des produits formés au cours de la réaction enzymatique utilisant les différents substrats suivants : malonylCoA seul, malonylCoA + acétyl-CoA, malonylCoA + hexanoyl-CoA, malonylCoA + lauroyl-CoA, malonylCoA + palmytoyl-CoA et malonylCoA + décanoyl-CoA. Figure 5. La figure 5 représente l'analyse en spectrométrie de masse GC-MS des produits formés au cours de la réaction enzymatique utilisant les différents substrats suivants : malonylCoA seul, malonylCoA + acétyl-CoA, malonylCoA + hexanoyl-CoA, malonylCoA + lauroyl-CoA, malonylCoA + palmytoyl-CoA et malonylCoA + décanoyl-CoA. Figure 6. La figure 6 représente l'analyse en spectrométrie de masse LC-MS des produits formés au cours de la réaction enzymatique en utilisant le malonylCoA seul ou le malonylCoA + acétyl-CoA. 1 : Contrôle négatif, 2 : Protéine dénaturée, 3 : Malonyl-CoA, 4 : Acétyl-CoA, 5 : Lauroyl-CoA, 6 : Palmitoyl-CoA, 7 : Hexanoyl-CoA, 8 : Decanoyl-CoA. Paramètres NL : 2.10E4, m/z : 307.1877-307.1939, MS bl. Figure 7. La figure 7 représente l'analyse en spectrométrie de masse LC-MS des produits formés au cours de la réaction enzymatique en utilisant comme substrat le malonylCoA et le lauroyl-CoA. 1 : Contrôle négatif, 2 : Protéine dénaturée, 3 : Malonyl-CoA, 4 : AcétylCoA, 5 : Lauroyl-CoA, 6 : Palmitoyl-CoA, 7 : Hexanoyl-CoA, 8 : Decanoyl-CoA. EXEMPLES EXEMPLE 1 : Matériel, méthodes et procédures expérimentales 1.1. Produits chimiques Les composés malonyl-CoA, acétyl-CoA, hexanoyl-CoA, lauroyl-CoA, palmytoyl- CoA et decanoyl-CoA proviennent de chez Sigma. Le [2-14C] Malonyl-CoA (55 mCi/mmol) provient de chez Perkin Elmer (USA). 1.2. Souche bactérienne La souche Escherichia coli DH5a [fhuA2 (argF-lacZ)U169 phoA gInV44 080 (lacZ)M15 gyrA96 recA1 relA1 endA1 thi-1 hsdR17 ] (Stratagene) a été utilisée en tant que souche hôte pour le maintien des plasmides. Pour l'expression protéique, les dérivés pQE-80L « cis-repressed » ont été transformés dans la souche E. coli BL21 (DE3) codon Plus RILP [E. coli B F- ompT hsdS(rB- mB-) dcm+ Tetr gal I (DE3) endA Hte [argU ileY leuW Camr]] (Stratagene) contenant des copies supplémentaires des ARNt arginine, isoleucine, proline et leucine. 1.3. Expression et purification de la polykétide synthase de type III recombinante d'Ectocarpus siliculosus Le gène codant pour la PKS1 d'E. siliculosus a été amplifiée par PCR (30 cycles d'amplification) à partir de l'ADNc décrit dans Cock et al., 2010, Nature 465(7298): 617- 621. Le vecteur d'expression pQE-80L (Qiagen) contenant le promoteur du bactériophage T5 inductible par l'Isopropyl-b-D-thiogalactopyranoside (IPTG) a été utilisé pour l'expression de la protéine (Figure 1). La PKS1 E. siliculosus a été clonée dans le vecteur au niveau des sites de restriction Sphl et Hindi!! en utilisant les oligonucléotides PQECHSFowBis (5'- GGCGGATCCGCATGCATGTCCAAGGACGAGCAGACGGTATACCCGGTCATCGCC- 3' (SEQ ID NO : 11)) et PQECHSRev (5'- GGCTAAGCTTTTACTAGATCTGCCTGAGAAGGATGCCCTCTGCCCC-3' (SEQ ID NO : 12)). Les conditions de PCR utilisées pour le clonage sont les suivantes : 50 ng ADNc PKS1, 0,4 pM de chaque oligonucléotide, 0,4 mM dNTP mix dans un milieu réactionnel de 50 pL avec l'enzyme Phusion (Finnzyme) avec son tampon HF selon les recommandations du fournisseur. La réaction a été effectuée en 3 étapes : dénaturation de l'ADN et des amorces à 98°C pendant 5 min, 30 cycles de PCR à 98°C pendant 30s, 52°C pendant 30s, 72°C pendant 2min puis au final une étape de fin d'élongation à 72°C pendant 7min. Une étape supplémentaire consistant à ajouter des dA aux extrémités du fragment du PCR a été réalisée pendant 10min à 72°C avec l'ajout de 0,5 pL d'enzyme GoTaq (Promega). Le fragment d'ADN amplifié est purifié directement sur colonne MinElute (Qiagen). La ligation est effectuée dans un premier temps dans le pGEM-Teasy (Promega) selon des conditions standards (une nuit à température ambiante dans un milieu réactionnel de 12 pL contenant un ratio 10/1 de produit à cloner/vecteur avec la T4 DNA ligase du kit Promega). Le produit de ligation est introduit par choc thermique dans des cellules compétentes DHSalpha préparées au laboratoire, et un transformant est sélectionné pour la production en masse de vecteur recombinant contenant l'insert PKS1. Le plasmide est purifié avec le kit Miniprep SV (Promega). Après vérification de la séquence nucléotidique de PKS1, l'insert est digéré par Sphl et HindIlI, puis purifié sur gel d'agarose avec le kit MinElute (Qiagen) avant d'être ligué dans le vecteur pQE8OL (Qiagen) doublement digéré avec les mêmes enzymes de restriction et déphosphorylé par la SAP (NE Biolabs). Les conditions de ligation dans pQE8OL sont les mêmes que décrites précédemment. Les constructions codent pour une protéine totale à laquelle une étiquette de six histidines (His-tag) a été ajoutée à son extrémité N-terminale. Les constructions ont été transformées dans la souche E. coli BL21-CodonPlus-RILP strain (Stratagene) en utilisant un milieu LB solide contenant 100 pg/mL d'ampicilline. L'expression de la protéine recombinante a été réalisée en cultivant les bactéries dans un milieu ZYP à 20°C en utilisant un lot fermenteur de 5L. Après 48 heures de culture, l'induction de l'expression protéique est poursuivie en ajoutant 0,5 mM d'IPTG. Après cette dernière induction, les cellules sont collectées par centrifugation et congelées à -80°C. Les cellules sont ensuite remises en suspension dans le milieu A (20 mM Tris-HCI pH 7,5, 300 mM NaCI et 50 mM Imidazole) supplémenté avec un mélange d'inhibiteur de protéases, du lysozyme (1mg/mL) et de la DNase (10 mg/mi). La lyse des cellules est ensuite réalisées par deux passages dans une presse de French afin de réduire la viscosité du surnageant. Les débris cellulaires sont éliminés par centrifugation à 20000 t/min à 4°C pendant 1h30. Le surnageant est ensuite transféré dans une colonne Nisepharose (GE Healthcare). L'extrait cellulaire est ensuite fractionné par chromatographie d'affinité dite « IMAC » (Immobilized-metal affinity chromatography) sur un appareil ÂKTA Tm-Avant (GE Healthcare). Après une étape de lavage avec un tampon A (20 mM Tris-HCI pH 7.5; 300 mM NaCI ; 50 mM imidazole), les protéines sont éluées selon un protocole de gradient de 50 mM à 500 mM d'imidazole en mélangeant le tampon A avec le tampon B (20 mM Tris-HCI pH 7,5 ; 300 mM NaCI ; 500 mM imidazole). Les fractions C12 à E10 ont ensuite été concentrées à 5 ml par ultrafiltration sur un CentriPrep 10 kDa (Millipore) et simultanément échangées dans un tampon contenant 20 mM Tris-HCI pH 7,5 100 mM NaCI. Les protéines sont ensuite transférées dans une colonne de filtration sur gel Superdex S-200 HR 16/60 (GE Healthcare) et purifiées par chromatographie d'exclusion stérique en utilisant un appareil ÂKTA-Avant (GE Healthcare). La pureté et l'intégrité de tous les échantillons de protéines ont été analysées par électrophorèse sur gel 12%SDSpolyacrylamide et par spectrométrie de masse MALDI-TOF. 1.4. Essais enzymatiques (Chromatographie sur couche mince (CCM)) Les essais enzymatiques ont été réalisés en utilisant : - a) le malonyl-CoA seul : 200pM de malonyl-CoA a été ajouté au mélange d'essai contenant 20 pM de Malonyl-CoA radio-marqué au [2-14C] (55 mCi/mmol), 50 pg d'enzyme recombinante purifiée PKS1 d'E. siliculosus, dans un volume final de 500 pI de 50 mM Tris HCI pH 7,5 et 1 mM d'EDTA, ou - b) les cinq substrats suivants : acétyl-CoA, hexanoyl-CoA, lauroyl-CoA, palmytoyl-CoA et décanoyl-CoA. 200 pM de chaque substrat a été ajouté au mélange d'essai contenant 20 pM de Malonyl-CoA radio-marqué au [2-14C] (55 mCi/mmol), 50 pg d'enzyme recombinante purifiée PKS1 d'E. siliculosus, dans un volume final de 500 pI de 50 mM Tris HCI pH 7,5 et 1 mM d'EDTA. L'incubation des mélanges en a) et b) a été réalisée à température ambiante pendant 1 h ou 3h et a été stoppée par l'ajout de HCI à 37%. Les produits des réactions ont été ensuite extraits avec 1 ml d'acétate d'éthyl, et séparés par chromatographie sur couche mince (Merck Art. 1.11798 Silica gel 60 F254; ethyl acetate/hexane/AcOH 65 : 25 : 5, v/v/v). Les signaux radioactifs ont été détectés et quantifiés à l'aide d'un système d'imagerie Typhoon (Molecular Dynamics-GE Healthcare). 1.5. Essais enzymatiques (Spectrométrie de masse couplée à la chromatographie en phase gazeuse GC-MS) Les essais enzymatiques ont été réalisés en utilisant : - a) le malonyl-CoA seul : 200pM de malonyl-CoA a été ajouté au mélange d'essai contenant 50 pg d'enzyme recombinante purifiée PKS1 d'E. siliculosus, dans un volume final de 500 pI de 50 mM Tris HCI pH 7,5 et 1 mM d'EDTA, ou - b) les cinq substrats suivants : acétyl-CoA, hexanoyl-CoA, lauroyl-CoA, palmytoyl-CoA et décanoyl-CoA. 200 pM de chaque substrat a été ajouté au mélange d'essai contenant 20 pM de Malonyl-CoA, 50 pg d'enzyme recombinante purifiée PKS1 d'E. siliculosus, dans un volume final de 500 pI de 50 mM Tris HCI pH 7,5 et 1mM d'EDTA. L'incubation des mélanges en a) et b) a été réalisée à température ambiante pendant 1, 2, 3, 4, ou 5h et a été stoppée par l'ajout de HCI à 37%. Les produits des réactions ont été ensuite extraits avec 1 ml d'acétate d'éthyle. 2,50 pg de vanilline ont été ajouté en tant que standard interne. Les échantillons ont ensuite été vortexés pendant 5 min et centrifugés pendant 5 min à 1000g. La phase organique a été transférée dans un flacon en verre et évaporée sous un flux d'azote. Des triméthylsilyl-éthers (TMS-ether) ont été formés par addition de 100 pl d'acétonitrile et de 100 pl de Sylon-BFT pendant 60 min à 60°C et évaporés sous un flux d'azote. Les métabolites sont resuspendus dans 100 pl d'hexane et analysés par GC-MS en mode El sur un Agilent GC 6890 couplé à un détecteur « 5973 MS Detector » (Agilent, Les Ulis, France) et équipé d'une colonne DB5MS (30 m x 0.25 mm de diamètre interne x 0,25 pm d'épaisseur de film (J and W Scientific, Agilent)). Les températures de l'orifice d'injection et de l'interface sont respectivement 250 et 280°C; celle de la source d'ion et de l'analyseur MS ont été fixées respectivement à 230 et 150°C. Les échantillons ont été injectés en mode « d'injection sans division » ou mode « splitless ». La température du four a été premièrement fixée à 60°C pendant 5 min, puis augmentées de 10°C/min jusqu'à 100°C, élevée de 1 °C/min jusqu'à 150°C et finalement élevée de 8°C/min jusqu'à 290°C, puis maintenue pendant 5 min. Les composés ont été ionisés par impact électronique à 70eV d'énergie. Les analytes ont été détectés par un courant ionique total de 50 à 850 m/z. Toutes les données ont été traitées avec le logiciel MSDchem (EMBL-EBI). 1.6. Essais enzymatiques (spectrométrie de masse couplée à la chromatographie en phase liquide LC-MS) Les essais enzymatiques ont été réalisés en utilisant : - a) le malonyl-CoA seul : 200pM de malonyl-CoA a été ajouté au mélange d'essai contenant 50 pg d'enzyme recombinante purifiée PKS1 d'E. siliculosus, dans un volume final de 500 pI de 50 mM Tris HCI pH 7,5 et 1 mM d'EDTA, ou - b) les cinq substrats suivants : acétyl-CoA, hexanoyl-CoA, lauroyl-CoA, palmytoyl-CoA et décanoyl-CoA. 200 pM de chaque substrat a été ajouté au mélange d'essai contenant 20 pM de Malonyl-CoA, 50 pg d'enzyme recombinante purifiée PKS1 d'E. siliculosus, dans un volume final de 500 pI de 50 mM Tris HCI pH 7,5 et 1mM d'EDTA. L'incubation des mélanges en a) et b) a été réalisée à température ambiante pendant 1, 2, 3, 4, ou 5h et a été stoppée par l'ajout de HCI à 37%. Les produits des réactions ont été ensuite extraits avec 1 ml d'acétate d'éthyle. 2,50 pg de vanilline ont été ajouté en tant que standard interne. Les échantillons ont ensuite été vortexés pendant 5 min et centrifugés pendant 5 min à 1000g. La phase organique a été transférée dans un flacon en verre et évaporée sous un flux d'azote. Les métabolites sont resuspendus dans 100 pl d'hexane. Pour l'analyse LC-MS, un système de chromatographie liquide DionexUltiMate 3000Rapid Separation LC (RSLC, Dionex) est couplé à un spectromètre de masse hybride LTQ-OrbitrapTM (Thermo Fisher Scientific). Tous les solvants et réactifs utilisés sont de qualité analytique ou HPLC grade (Carlo Erba). La séparation chromatographique a été réalisée sur une colonne Acclaim RSLC 120, C18, 2 pm taille de particules, 2,1 x 100 mmcolumn (Dionex) maintenue à 20°C. La phase mobile est de l'eau contenant 0,1% d'acide acétique (A) et de l'acétonitrile contenant 0,1% d'acide acétique (B). Le flux a été réglé à 0,25 ml.min-1. Le gradient d'élution (A:B, v/v) a été réalisé comme décrit en suivant: 80:20 de 0 à 1 min; puis 0:100 de 1 à 10 min; puis 20:100 pendant 10 min et à 20,1 min à 80:20 pour 10 min. Le volume injecté est de 50 pL. La colonne HPLC a été connectée sans découplage avec l'interface opérative électrospray en mode négatif. Le voltage du spray était de 3,5 kV et la température du capillaire de transfert a été maintenue à 350 °C. Le "sheath liquid" et l'azote gazeux auxiliaire ont été appliqués pour aider à l'évaporation de solvant à un flux de 25 et 5 unités arbitraires respectivement. La totalité des scans des spectres de masse a été obtenue pour des m/z de 50 à 2000 en utilisant une résolution de masse de 30,000 FWHM à 400 m/z en mode profil. EXEMPLE 2 : Résultats 2.1. Séquences nucléotidique et protéique de PKS1 Le gène PKS1 présent sur le génome d'E. siliculosus est disponible dans les bases de données publiques depuis juin 2010 et il correspond à une séquence de 1245 nucléotides, codant pour une protéine de 415 acides aminés. Un peptide signal d'adressage a été prédit selon l'utilisation du logiciel SIGNALP v.2.0 qui utilise les deux modèles Neural Networks et Hidden Markov (Nielsen et al., Protein Eng, 1999, 12 : 3-9) et cette séquence de 102 nucléotides, correspondant aux 34 premiers acides aminés, a été éliminée pour donner une protéine recombinante mature exprimée dans le cytoplasme bactérien. 2.2. Surexpression chez E.coli et purification de la PKS1 recombinante Suivant les protocoles de surexpression et de purification de PKS1 chez E. coli, le gel d'électrophorèse des fractions d'élution de la colonne d'affinité « IMAC » coloré au bleu de Coomassie a permis de détecter la production d'une protéine recombinante à la taille attendue d'environ 50 kDa. Pour augmenter le niveau de pureté de la protéine recombinante et éliminer les formes inactives de l'enzyme (e.g. agrégats solubles), une seconde purification sur une colonne d'exclusion de taille a permis d'obtenir la protéine recombinante avec une homogénéité à plus de 99% selon une analyse en DLS (Dynamic Light Scattering). Cette analyse coïncide avec le volume d'élution de la protéine sur gel filtration et suggère que la forme active de l'enzyme est bien un dimère comme la majorité des PKS III connues à ce jour. La pureté de l'enzyme a aussi été validée par une analyse en spectrométrie de masse MALDI-TOF de la bande découpée sur gel et digérée à la trypsine. Les masses des fragments obtenus correspondent bien à la séquence de PKS1 avec 32 peptides identifiés correspondant à une couverture de 47% de la séquence (Figure 2). Le rendement de production pour une culture en fermenteur de 5L a été estimé à environ 5 à 10 mg de protéine recombinante active par litre de culture et peut donc supporter un niveau de production industriel. De plus, l'enzyme s'est révélée stable pendant un à deux mois à 4°C et elle supporte la congélation à -80°C. 2.3. Activité enzymatique : analyses en spectrométrie de masse des composés formés L'analyse des produits formés en CCM indique qu'il y a formation de phloroglucinol avec ou sans starters (malonylCoA seul, malonylCoA + acétyl-CoA, malonylCoA + hexanoyl-CoA, malonylCoA + lauroyl-CoA, malonylCoA + palmytoyl-CoA et malonylCoA + décanoyl-CoA) et que les composés principaux de la réaction obtenus sont le phloroglucinol dans le cas du malonylCoA seul ou du malonylCoA + acétyl-CoA et un acyl-phloroglucinol dans le cas du malonylCoA avec les autres starters (acétyl-CoA, hexanoyl-CoA, lauroyl-CoA, palmytoyl-CoA et décanoyl-CoA) (Figure 3). Ces résultats ont été confirmés par l'analyse en spectrométrie de masse GC-MS qui a permis d'identifier clairement la production de phloroglucinol à partir de malonyl-CoA avec un optimum de production situé entre 3h et 5h de réaction (Figures 4 et 5 et Tableau 5). Temps Aire m/z Aire m/z Rapport Phloroglucinol/ (h) 194 342 342/194 échantillon (I18) CB 6232490 0 0 0,00 1 5968432 955510 0,16009397 1,70 2 6169748 5641093 0,91431498 9,08 3 5847716 39184281 6,70078386 65,64 4 4159877 9789969 2,35342752 23,15 5 4452610 12232641 2,74729675 27,00 Tableau 5 : Quantité de phloroglucinol produite par la PKS1 a partir de Malonyl-CoA. L'analyse en spectrométrie de masse LC-MS a également permis d'identifier clairement la production de phloroglucinol à partir de malonyl-CoA et d'acétyl-CoA (Figure 6). La formation des acyl-phloroglucinols a été mise en évidence en extrayant spécifiquement les composés présents sur CCM et en les analysant par spectrométrie de masse LC-MS. Ainsi, par exemple, en présence de malonylCoA et lauroyl-CoA l'enzyme PKS1 produit le lauroyl-phloroglucinol (Figure 7). D'autres résultats d'analyse en GC-MS de produits formés en présence des différents acyl-CoA suggèrent aussi la formation de composés de type tétraketide pyrones comme chez Mycobacterium tuberculosis. 2.4. Cristallisation et obtention de la structure de l'enzyme PKS1 Après obtention des conditions de cristallisation, plusieurs cristaux de l'enzyme PKS1 ont permis d'obtenir des jeux de données de diffraction aux rayons X permettant la résolution de la structure à 2,85 Â par la technique de remplacement moléculaire (Tableau 6). Collecte des données PKS Haute résolution Ligne de faisceau ESRF ID23-1 Longueur d'onde (Â) 0.979239 Groupe d'espace P212121 Paramètres de la maille (Â) A=61.99,b=83.92, c=154.91 Résolution (Â) 83,920-2,85 (3.02-2.85) Nombre d'observations (F>0) 93096 (12976) Nombre de réflections uniques 22949 (3105) Achèvement (%) 100 (100) Moyenne 1/11) 3,8 (1,4) Rp',-, (%) 13,3 (58,7) Redondance 4,1 (4,2) Affinement Résolution 56,917-2,85 Nombre de réflections uniques 21715 Facteur R (Rfree on 5%) 30,17 (41,31) Nombre d'atomes/protéine 5768 (45,86) (moyenne facteur B en A2) Nombre d'atomes de solvant 4 (34,20) (moyenne facteur B en Â^2 Ecart-type sur les liaisons (A) 0,013 Ecart-type sur les angles (°) 1,736 Moyenne Bfact (Â2) 45,769 Tableau 6. Données collectées et statistiques de pureté de la PKS à la résolution de 2,85 À. Ces données confirment la formation d'un dimère de PKS1 pour l'enzyme sous sa forme recombinante active. La structure globale d'un monomère de PKS1 révèle une composition en hélices a et feuillets p organisés en un repliement canonique de type apapa-thiolase. La triade catalytitique est représentée par les résidus Cys194, His331 et Asn364. Comme la PKS III de Mycobacterium tuberculosis nommée PKS18, PKS1 semble présenter un tunnel d'accès au site catalytique où peuvent s'engouffrer des acyl-CoA à plus ou moins longues chaînes. Le site de fixation potentiel du malonyl-CoA a aussi été identifié. REVENDICATIONS1. Méthode de production d'au moins un composé polyphénolique, dans laquelle : - une polyketide synthase de type III (PKSIII) d'algue brune est mise en contact avec au moins un substrat carboné dans des conditions permettant la production majoritaire d'au moins un composé polyphénolique, - ledit composé phénolique produit est le phloroglucinol ou un de ses dérivés. 2. Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite PKSIII comprend ou consiste en : - la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1 ou une séquence ayant au moins 93% d'identité avec SEQ ID NO: 1, ou une séquence susceptible d'être codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 2 ou une séquence ayant au moins 85% d'identité 15 avec SEQ ID NO : 2, ou - la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 3 ou une séquence ayant au moins 93% d'identité avec SEQ ID NO : 3, ou une séquence susceptible d'être codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 4 ou une séquence ayant au moins 85% d'identité avec SEQ ID NO : 4. 20 3. Méthode selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit substrat est sélectionné parmi le malonyl-CoA, l'hexanoyl-CoA, le decanoyl-CoA, le lauroyl-CoA et/ou le palmitoyl-CoA. 25 4. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit substrat est le malonyl-CoA et ledit composé phénolique produit est le phloroglucinol. 5. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce 30 que ledit substrat est le malonyl-CoA et le lauroyl-CoA et ledit composé phénolique produit est le lauroyl-phloroglucinol. 6. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle ladite PKSIII est obtenue après les étapes de : 35 - culture d'une cellule hôte recombinante comprenant un vecteur recombinant codant pour une PKSIII comprenant ou consistant en (i) la séquence d'acides aminésSEQ ID NO : 1 ou une séquence ayant au moins 93% d'identité avec SEQ ID NO : 1, ou un vecteur recombinant comprenant la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 2 ou une séquence ayant au moins 85% d'identité avec SEQ ID NO : 2, ou (ii) la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 3 ou une séquence ayant au moins 93% d'identité avec SEQ ID NO : 3, ou un vecteur recombinant comprenant la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 4 ou une séquence ayant au moins 85% d'identité avec SEQ ID NO : 4 dans des conditions permettant l'expression de ladite PKSIII, et - extraction et/ou purification, de ladite PKSIII. 7. Acide nucléique isolé comprenant ou consistant en la séquence SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO: 4, caractérisé en ce que ledit acide nucléique isolé code pour une polykétide synthase de type III (PKSIII). 8. Acide nucléique isolé comprenant ou consistant en une séquence au moins 15 85% identique à la séquence SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 4, caractérisé en ce que ledit acide nucléique isolé code pour une polykétide synthase de type III (PKSIII). 9. Acide nucléique isolé comprenant ou consistant en la séquence complémentaire de SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 4, caractérisé en ce que ledit acide nucléique isolé 20 code pour une polykétide synthase de type III (PKSIII). 10. Acide nucléique isolé codant pour une polyketide synthase de type III (PKSIII) comprenant ou consistant en : a) la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 2, 25 b) la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 4, c) la séquence complémentaire de SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 4, d) une séquence au moins 85% identique à SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO: 4, e) une séquence différant des séquences a) à d) par dégénérescence du 30 code, f) une séquence nucléotidique s'hybridant en conditions de stringence spécifiques avec au moins l'une des séquences a) à e). 11. Polyketide synthase isolée caractérisée en ce qu'elle est codée par un acide 35 nucléique isolé selon l'une quelconque des revendications 7 à 10. 12. Polyketide synthase isolée caractérisée en ce que ladite protéine comprend ou consiste en : - la séquence SEQ ID NO : 1 ou une séquence ayant au moins 93% d'identité avec la SEQ ID NO : 1, ou - la séquence SEQ ID NO : 3 ou une séquence ayant au moins 93% d'identité avec la SEQ ID NO : 3. 13. Vecteur recombinant, comprenant l'acide nucléique isolé selon l'une quelconque des revendications 7 à 10. 14. Cellule hôte recombinante, caractérisée en ce que la cellule a été transformée par un vecteur recombinant selon la revendication 13. 15. Méthode de production d'une polyketide synthase, comprenant les étapes de : a) culture d'une cellule selon la revendication 14, dans des conditions permettant l'expression d'une polyketide synthase recombinante,. b) extraction et/ou purification, de ladite polyketide synthase recombinante.20