Brevet FR2979917A1 — publié le 20130315

La présente invention se rapporte au domaine des automates permettant l'ensemencement d'un substrat de culture avec un échantillon à analyser, généralement un échantillon sensiblement liquide. Elle se rapporte plus particulièrement à un dispositif pour prélever et ensemencer l'échantillon, par exemple sur un substrat dans une boîte de Pétri. 15 Dans un automate d'ensemencement, chaque échantillon est prélevé par l'automate dans un bac d'échantillon, à l'aide d'un stylet, puis réparti à la surface du substrat à l'aide du même stylet. Le stylet doit donc pouvoir être déplacé depuis une zone de prélèvement de l'échantillon dans le bac correspondant, vers une zone 20 d'ensemencement, dans laquelle l'échantillon doit être réparti, par exemple selon un motif en spirale. Le motif en spirale permet d'obtenir une concentration variable de l'échantillon le long du motif. Cependant, la lecture et l'interprétation du résultat de la culture sont généralement difficiles. En outre, la différence de concentration entre les zones les plus extrêmes n'est pas 25 toujours suffisante, notamment lorsque l'échantillon est particulièrement concentré. L'invention a pour but de proposer un automate qui puisse répondre aux inconvénients précédemment évoqués, particulièrement un automate simple et peu coûteux, permettant une manipulation aisée et efficace de 30 l'échantillon tout en permettant une lecture simple et fiable du résultat. -2 Selon l'invention, un tel automate d'ensemencement pour un échantillon sur un substrat est caractérisé en ce qu'il comprend des moyens pour diluer l'échantillon d'origine en au moins un sous-échantillon et des moyens pour ensemencer l'au moins un sous-échantillon sur un substrat. s Avantageusement, les moyens de dilution sont prévus pour permettre au moins deux dilutions successives. Ainsi, les moyens de dilution comprennent au moins un contenant pour l'échantillon d'origine et au moins un bac, de préférence au moins deux bacs, pour y mélanger un échantillon de moindre dilution avec du diluant. Le contenant de l'échantillon d'origine peut par 10 exemple être un bac, une pipette, une seringue ou un stylet. L'automate peut comprendre des moyens adapté pour prélever un échantillon dans un bac respectif et pour le déposer sur le substrat, des moyens de réserve pour un diluant, et des moyens de dosage pour l'échantillon et le diluant. Les moyens de prélèvement peuvent être un stylet ou une seringue. 15 Notamment si les moyens de prélèvement sont un stylet, il peut aussi être prévu des moyens pour approvisionner le diluant depuis l'amont du stylet. L'invention concerne aussi un procédé d'ensemencement d'une boîte de Pétri utilisant un dispositif selon l'invention. Plusieurs modes d'exécution de l'invention seront décrits ci-après, à 20 titre d'exemples non limitatifs, en référence aux dessins annexés dans lesquels : la figure 1 est une coupe qui illustre schématiquement le fonctionnement d'un automate d'ensemencement selon l'invention ; la figure 2 est une vue de dessus d'une boîte de Pétri ensemencée par un 25 procédé selon l'invention. La figure 1 illustre un automate 1 pour ensemencer un substrat 2 avec un échantillon 3 d'un produit à tester. Dans l'exemple illustré, le substrat est contenu dans une boîte de Pétri 4, sous forme d'un gel, et le produit 3 est sensiblement liquide. L'automate illustré comprend un châssis formant plateau 5 et une tête 6 prévue pour se déplacer au dessus du plateau 5. La tête est munie d'un stylet 7, notamment utilisé pour manipuler l'échantillon. L'automate 1 comprend en outre plusieurs bacs 9-12 reposant de façon amovible dans des orifices respectifs 14 du plateau 5, permettant le positionnement des bacs. L'un des bacs est un bac de rinçage 9, prévu pour le rinçage du stylet. Dans l'exemple illustré, le bac de rinçage 9 est un bac à déversement. Un autre bac 10 est réservé à l'échantillon d'origine 3, les deux autres bacs 11, 12 sont un premier bac de dilution 11 et un deuxième bac de dilution 12. Dans l'exemple illustré, les bacs sont représentés alignés entre eux et avec la boîte de Pétri 4, dans le plan de la figure 1, et la tête est prévue pour se déplacer en translation selon trois axes, deux axes horizontaux et l'axe vertical. Ainsi, la tête peut se déplacer horizontalement d'un bac à l'autre, parallèlement à la direction d'alignement D des bacs et y plonger verticalement ; la tête peut aussi se déplacer transversalement et horizontalement selon une direction horizontale et transversale T (voir figure 2). Le stylet est un tube raccordé en amont à une conduite 15, partiellement représentée à la figure 1. En amont de la conduite 15, l'automate comprend, non représentés aux figures : une réserve pour un produit de rinçage et une réserve pour un produit désinfectant, affectés au nettoyage du stylet entre deux prélèvements et/ou entre deux dilutions ; une réserve pour un produit diluant, affecté à la dilution de l'échantillon 3 ; des moyens de pompage pour prélever et ensemencer l'échantillon, et distribuer les produits, depuis leurs réserves respectives. L'automate comprend aussi des moyens d'agitation des échantillons dans les bacs de dilution, par exemple des moyens d'agitateur du type électromagnétique. A la figure 1, l'échantillon est contenu dans un gobelet 16, disposé à l'intérieur du bac à échantillon 10. L'extrémité libre 17 du stylet 7 y est représentée dans une position de prélèvement de l'échantillon 3. On va maintenant décrire un procédé d'ensemencement selon l'invention. Le but d'un ensemenceur est de proposer une dilution à laquelle on pourra compter le nombre de bactéries présentes par unité de volume dans l'échantillon 3. Dans l'exemple illustré, il est possible de prélever un échantillon 3 10 dans le gobelet 16, puis de le déposer sur le substrat 2 pour y former une double ligne L3, représentée en trait gras à la figure 2. On prélève ensuite une autre partie de l'échantillon 3 pour le mélanger dans le premier bac de dilution 11 avec du diluant, par exemple dans une proportion de 1/10. Une fois le mélange effectué, on obtient un premier sous-échantillon S1 qui peut être 15 ensemencé en une double ligne LS1. Une même opération est ensuite réalisée à partir du sous-échantillon S 1. On prélève une partie du premier sous-échantillon Si pour le mélanger dans le deuxième bac de dilution 11 avec du diluant, par exemple dans une proportion de 1/10. Une fois le mélange effectué, on obtient un deuxième 20 sous-échantillon S2, représentant une dilution au 1/100e de l'échantillon 3 d'origine, qui peut être ensemencé en une double ligne LS2. La même opération peut être renouvelée après remplacement du premier bac de dilution par un troisième ; et ainsi de suite. Bien entendu, les opérations sont réalisées automatiquement par 25 l'automate. Elles peuvent avantageusement être programmées, notamment, les taux de dilution successifs, le nombre de lignes. Lorsque les lignes sont réalisées toutes à la même vitesse linéaire, une même longueur de ligne représente toujours la même quantité d'échantillon, au taux de dilution près. Il est ainsi très aisé de mesurer et analyser les résultats, sans risque d'erreur. Un tel dispositif ne nécessite donc pas d'abaque sophistiqué et d'utilisation délicate. Bien sûr, l'invention n'est pas limitée aux exemples qui viennent d'être décrits. Ainsi, au lieu d'être prévu amovible, le bac à déversement, ou les autres bacs, peuvent être prévus fixes et formés par emboutissage directement dans la plateforme de l'automate. Le bac de rinçage peut ne pas être non plus à déversement. La tête, au lieu d'être montée en translation, peut être montée sur un bras s'étendant depuis une tourelle rotative. Notamment dans ce cas, la disposition des bacs entre eux peut être différente, par exemple sensiblement sur un même cercle. Le nombre de bacs de dilution peut être différent aussi ; il peut y en avoir un seul ou plus de deux. Notamment s'il y a plusieurs bacs de dilutions, seuls certains des taux 15 de dilution peuvent être utilisés pour être ensemencés, les autres ne constituants que des dilutions intermédiaires permettant d'atteindre un taux de dilution recherché. Au lieu de motifs uniquement linéaires, il peut être prévu des motifs ayant notamment des formes de points plus ou moins épais ou circulaires. 20 REVENDICATIONS1. Automate (1) d'ensemencement pour un échantillon (3) sur un substrat (2), caractérisé en ce qu'il comprend des moyens (6, 7, 11, 12) pour diluer l'échantillon d'origine (3) en au moins un sous-échantillon (S1, S2) et des moyens pour ensemencer (7) l'au moins un sous-échantillon sur un substrat (2). 2. Automate selon la revendication 1, caractérisé en ce que les moyens de dilution (6, 7, 11, 12) sont prévus pour permettre au moins deux dilutions successives. 3. Automate selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que les moyens de dilution comprennent au moins un bac (9) pour contenir l'échantillon d'origine (3) et au moins un bac (11, 12) pour y mélanger un échantillon de moindre dilution (3, 51) avec du diluant. 4. Automate selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend un stylet (7) adapté pour prélever un échantillon (3, S 1, S2) dans un bac respectif (11, 12) et pour le déposer sur le substrat (2), des moyens de réserve pour un diluant, et des moyens de dosage pour l'échantillon et le diluant. 5. Automate selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il comprend des moyens pour approvisionner le diluant depuis l'amont (15) du stylet (7).