Brevet FR2978457A1 — publié le 20130201

COMPOSES CONTENANT UN VECTEUR VIRAL A SPECIFICITE HEPATIQUE ET PRESENTANT UNE ACTIVITE ANTI-INFLAMMATOIRE La présente invention concerne des composés contenant un vecteur viral à spécificité 5 hépatique et présentant une activité anti-inflammatoire. A ce jour, il est déjà connu que plusieurs pathologies, telles que l'athérosclérose, l'hypertrophie cardiaque, la fibrose hépatique ou la pathologie d'Alzheimer, présentent un aspect inflammatoire. Dans ce contexte, la diminution d'inflammation pourrait offrir des avantages 10 préventifs ou thérapeutiques. L'une des stratégies thérapeutiques envisagées dans ces dernières années pour le traitement de ces pathologies consiste à rechercher des moyens permettant de stimuler une réponse anti inflammatoire, sachant que la réaction inflammatoire est souvent une série de réactions dans lesquelles impliquent de nombreuses protéines. Dans ces dernières années, 15 différents composés anti-inflammatoires qui visent à inhiber l'une des protéines pro- inflammatoires ou stimuler l'une des protéines anti-inflammatoires ont été développées. Cependant, ces méthodes concernent souvent une administration orale ou intraveineuse, qui ne permet pas de cibler directement la cause d'inflammation et de diminuer spécifiquement l'inflammation. 20 De plus, les ratios bénéfices/effets secondaires des anti-inflammatoires déjà connus dans l'art antérieur ne sont pas clairement en faveur d'un traitement particulier. Un ciblage cellulaire est donc nécessaire afin d'éviter les effets secondaires. La protéine paraoxonase-1 (PONT) humaine est une enzyme antioxydante essentiellement synthétisée dans le foie et située dans le plasma à la surface des HDL (high- 25 density lipoprotein). PON1 est une enzyme ayant à la fois l'activité de lactonase et celle d'estérase. Il est déjà connu que le processus inflammatoire lié à l'athérosclérose commence par l'oxidation des LDL (low-density lipoprotein) dans la paroi artérielle, et que des HDL peuvent inhiber l'oxydation des LDL par l'intermédiaire de la protéine PONT, très probablement grâce à l'activité d'estérase de cette dernière. Il est également connu que la 30 protéine PONT permet d'augmenter l'efflux de cholestérol depuis des macrophages par intermédiaire des HDL (HDL-mediated macrophage cholesterol efflux), car PONT peut promouvoir la liaison des HDL avec le transporteur ABCA-1. Tous ces résultats signifient que la protéine PONT joue un rôle protecteur contre l'inflammation lié à l'athérosclérose. Par ailleurs, l'expression de PONT est étroitement corrélée avec l'expression de la protéine MCP-1 (monocyte chemoattractant protein-1). Cette dernière contrôle le recrutement des monocytes dans les tissus et leur différenciation subséquente vers des macrophages (Marsillach et al., BMC Gastroenterology 2009, 9 :3). Etant donné que la concentration plasmique de la protéine MCP-1 est directement corrélée avec l'état inflammatoire, notamment l'état inflammatoire hépatique, chez un patient, la concentration plasmique de la protéine PON1 reflète également l'état inflammatoire d'un patient. La protéine DYRKla (dual-specificity tyrosine-(Y)-phosphorylation regulated kinase) est une sérine/thréonine kinase. Elle autophosphoryle une tyrosine essentielle pour la boucle d'activation permettent la phosphorylation des substrats sur un résidu sérine ou thréonine. L'étude sur DYRK1 a humain a montré que cette protéine possède des multifonctions dans le développement, la croissance et l'apoptose de cellules. En effet, cette protéine dont le gène se trouve sur le chromosome 21 (Song et al 1996, Genomics. 1996, Dec 15;38(3):331-9.) joue un rôle important dans le développement du cerveau. Le retard et l'anomalie de développement neural, ainsi que la neurodégénérescence chez les patients atteints de trisomie 21, sont considérés comme étant associés à la surexpression de DYRK1 a, à cause d'une copie supplémentaire du chromosome 21 dans le génome des patients. Par ailleurs, les résultats récents montrent que la surexpression de la protéine DYRKla peut également contribuer à la phosphorylation de la protéine tau et la production de l'amyloïde chez les patients de trisomie 21, deux signes caractéristiques de la pathologie d'Alzheimer (Ryoo et al., JNeurochem. 2008 Mar;104(5):1333-44). Jusqu'à présent, la surexpression de la protéine DYRKla, notamment dans le cerveau, est considérée comme délétère. De nombreuses études ont montré que la surexpression de la protéine DYRKla dans le cerveau peut entraîner la neuro-dégradation. Aucun lien entre DYRKla et l'inflammation n'a été établi à ce jour. Dans l'hyperhomocystéinémie on observe dans le foie une diminution de la quantité de protéine DYRK1 a et une augmentation d'expression de gènes cibles de la voie de signalisation NF-kB dans le foie des souris surexprimant DYRK1 a. Inversement dans le poumon de ces mêmes souris on observe une augmentation de la protéine Dyrkl a et une inhibition de la voie NF-kB. Dans un modèle de souris transgénique surexprimant la protéine DYRKla on a pu montrer lors de la création d'un état inflammatoire artificiel par injection intrapéritonéale de LPS une surproduction d'IL10 antiinflammatoire d'un facteur trois par rapport aux souris sauvages. Le premier aspect de l'invention a pour objectif de proposer un médicament destiné au traitement de pathologies associées à un état inflammatoire. Un autre aspect de l'invention a pour objectif de proposer un médicament destiné au traitement de pathologies associées à un état inflammatoire avec des effets secondaires limités. L'un des aspects de l'invention est de proposer un vecteur adénoviral à spécificité hépatique. Contre toute attente, les Inventeurs de la présente invention ont observé, pour la première fois, que la surexpression contrôlée de la protéine DYRKla dans certains organes peut apporter un effet bénéfique. Les Inventeurs ont constaté que le niveau d'expression de la protéine DYRKla peut être corrélé avec l'inflammation. Les Inventeurs de la présente invention ont réussi à surexprimer localement la protéine DYRK1 a dans le foie, grâce à un vecteur adénoviral à spécificité hépatique. Cette surexpression locale permet d'éviter l'effet délétère de la surexpression de la protéine DYRKla vis-à-vis du cerveau. Dans le cadre d'un projet de recherche visant à étudier les fonctions de la protéine PON-1, les Inventeurs ont constaté de façon surprenante que la surexpression de la protéine DYRKla dans le foie permet d'augmenter la concentration plasmique de PON-1. Encore plus surprenant, la surexpression locale de DYRK1 a permet de diminuer globalement l'état inflammatoire, grâce à l'augmentation de la concentration de la protéine PON-1, qui est une protéine plasmique circulante et anti-inflammatoire. Par conséquent, le composé selon l'invention permet de traiter les pathologies autres que les pathologies hépatiques, notamment les pathologies associées à un état inflammatoire. La présente invention porte sur un composé comprenant une protéine ayant l'activité de la protéine DYRKla, ou un acide nucléique codant une protéine ayant l'activité de la protéine DYRKla, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de pathologies associées à un état inflammatoire. Plus particulièrement, la présente invention concerne un composé comprenant : - un acide nucléique d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 2, et codant un polypeptide d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 1, ou - un acide nucléique d'intérêt représenté par une séquence ayant au moins 83%, particulièrement 90%, notamment 95% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 ; ou - un polypeptide d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 1, ou - un polypeptide d'intérêt représenté par une séquence ayant au moins 83%, particulièrement 90%, notamment 95% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 1, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de pathologies associées à un état inflammatoire. La présente invention repose sur la constatation surprenante faite par les Inventeurs que la surexpression de la protéine DYRKla dans le foie permet de diminuer l'inflammation liée aux pathologies telles que l'athérosclérose, l'hypertrophie cardiaque, la fibrose hépatique ou la pathologie d'Alzheimer. La séquence SEQ ID NO : 1 correspond à la séquence peptidique de la protéine DYRKla de rat qui présente 99.61 % d'homologie avec la sequence humaine La séquence SEQ ID NO : 2 correspond à la séquence d'acides nucléiques codant la protéine DYRKla humaine. Le pourcentage d'identité entre deux séquences peptidiques ou entre deux séquences d'acides nucléiques peut être calculé selon la formule suivante : le nombre des résidus identiques x 100 le nombre des résidus de la séquence la plus courte Un polypeptide d'intérêt représenté par une séquence ayant au moins 83%, particulièrement 90%, notamment 95% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 1 est un polypeptide ayant l'activité de la protéine DYRKla humaine, telle que la protéine DYRKla murine ou la protéine DYRKla issue de zebrafish. Un acide nucléique d'intérêt représenté par une séquence ayant au moins 83%, particulièrement 90%, notamment 95% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 est un acide nucléique codant un polypeptide ayant l'activité de la protéine DYRKla humaine. Un polypeptide d'intérêt est considéré comme ayant l'activité de la protéine DYRKla humaine, lorsqu'il contient le site catalytique Un tel polypeptide d'intérêt peut être la protéine DYRK1 a murine ou la protéine DYRKla issue de zebrafish. On entend par « état inflammatoire » un état pathologique marqué par l'augmentation du nombre plasmique des cellules impliquées dans le processus d'inflammation, telles que les polynucléaires neutrophiles, les monocytes et macrophages, les lymphocytes, les mastocytes et les plaquettes, et des molécules cellulaires tels que les cytokines (IL1, IL6), le TNF (facteur de nécrose tumorale) et les interférons. Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne un composé constitué : - d'un acide nucléique contenant un acide nucléique d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 2, et codant un polypeptide d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 1, ou - d'un acide nucléique contenant un acide nucléique d'intérêt représenté par une 5 séquence ayant au moins 83%, particulièrement 90%, notamment 95% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 ; ou - d'un polypeptide contenant un polypeptide d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 1, ou - ou d'un polypeptide contenant un polypeptide d'intérêt représenté par une séquence 10 ayant au moins 83%, particulièrement 90%, notamment 95% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 1, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de pathologies associées à un état inflammatoire. 15 Dans un mode de réalisation plus avantageux, la présente invention concerne un composé constitué : - d'un acide nucléique d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 2, et codant un polypeptide d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 1, ou - d'un acide nucléique d'intérêt représenté par une séquence ayant au moins 83%, 20 particulièrement 90%, notamment 95% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 ; ou - d'un polypeptide d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 1, ou - ou d'un polypeptide d'intérêt représenté par une séquence ayant au moins 83%, particulièrement 90%, notamment 95% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 1, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de pathologies associées à un état 25 inflammatoire. Les composés selon l'invention permettent de traiter les pathologies associées à un état inflammatoire, telles que l'athérosclérose, l'hypertrophie cardiaque, la fibrose hépatique, la neuroinflammation et la maladie d'Alzheimer. Lorsqu'un composé selon l'invention comprend une protéine ou est constitué d'une protéine, ladite protéine peut être une protéine recombinante produite in vitro dans un système d'expression eucaryote, tel que la ligne cellulaire CHO, HEK, YB2/0, ou procaryote, tel que E.coli, ou isolée et purifiée d'un animal transgénique qui exprime cette protéine. 30 Ladite protéine peut être aussi une protéine naturelle isolée et purifiée d'un animal de type sauvage. Ladite protéine contenue dans un composé selon l'invention peut être une protéine nue ou une protéine vectorisée selon une méthode conventionnelle, telle qu'une vectorisation dans des liposomes ou des nanoparticules. Lorsqu'un composé selon l'invention comprend un acide nucléique ou est constitué d'un acide nucléique, ledit acide nucléique peut être un acide nucléique nu ou vectorisé selon une méthode conventionnelle, telle que la vectorisation dans des vecteurs viraux ou non viraux. Des vecteurs non viraux peuvent être des liposomes, des nanoparticules, des molécules non chargées, telles que les copolymères amphiphiles non chargés, constitués de motifs oxyde de polyéthylène (POE) et oxyde de polypropylène (PPO), les poloxamères, ou les composés cationiques, tels que les peptides cationiques poly-L lysine (PLL). Avantageusement, ledit acide nucléique est vectorisé dans un vecteur viral. L'utilisation d'un vecteur viral permet de cibler spécifiquement certaines cellules, et donc ainsi limiter les effets secondaires éventuels liés à l'expression dudit acide nucléique. Selon un autre mode de réalisation, l'invention concerne un vecteur adénoviral à spécificité hépatique permettant de provoquer in vivo une augmentation de l'expression de 20 DYRKl a dans le foie. La présente invention concerne un vecteur adénoviral comprenant : - un acide nucléique d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 2, et codant un polypeptide représenté par la séquence SEQ ID NO : 1, ou un acide nucléique d'intérêt représenté par une séquence ayant au moins 83%, particulièrement 90%, notamment 95% 25 d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 2, et - un promoteur de primate choisi parmi des promoteurs spécifiques des hépatocytes, notamment le promoteur humain de l'al-antitrypsine représenté par la séquence SEQ ID NO : 3, le promoteur humain de la cholesterol 7 alpha-hydroxylase représenté par la séquence SEQ ID NO : 6, ou le promoteur humain du facteur IX représenté par la séquence SEQ ID NO : 7, 30 ou un acide nucléique ayant au moins 90%, particulièrement 95%, notamment 98% d'identité avec l'une des trois séquences SEQ ID NO : 3, SEQ ID NO : 6 et SEQ ID NO : 7, et - éventuellement un enhancer choisi parmi ceux des gènes ayant une spécificité d'expression hépatique supérieure à 99%, notamment l'enhancer de l'al-microglobuline microglobuline représenté par la séquence SEQ ID NO : 4, l'enhancer de l'apolipoproteine E représenté par la séquence SEQ ID NO : 8, ou l'enhancer de la phenylalanine hydroxylase représenté par la séquence SEQ ID NO : 9, ou un acide nucléique ayant au moins 90%, particulièrement 95%, notamment 98% d'identité avec l'une des trois séquences SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 8 et SEQ ID NO : 9, et - éventuellement un intron choisi parmi ceux des gènes ayant une spécificité d'expression hépatique supérieure à 90%, notamment l'intron de l'apo A-I représenté par la séquence SEQ ID NO : NO : 5, l'intron de l'aldolase B représenté par la séquence SEQ ID NO : 10, ou l'intron de la vitamin D-binding protéine représenté par la séquence SEQ ID NO : 11, ou un acide nucléique ayant au moins 90%, particulièrement 95%, notamment 98% d'identité avec l'un des trois séquences SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 1l, ledit intron étant situé entre l'acide nucléique d'intérêt et le promoteur. L'avantage d'un vecteur adénoviral réside sur le fait que le vecteur ne s'intègre pas dans le génome des cellules hôtes, et permet d'obtenir un haut niveau d'expression transitoire d'un gène d'intérêt dans les cellules hôtes. On entend par « promoteur », une région d'ADN qui contient en général une séquence d'ADN particulière permettant d'initialiser la transcription d'un gène particulier. Un promoteur est en général proche (d'une vingtaine à une centaine de nucléotides) du gène à régler et situé en amont du site de démarrage de la transcription. La présence d'un promoteur est essentielle pour la transcription d'un gène particulier. On entend par « promoteur spécifique des hépatocytes », un promoteur qui permet d'initialiser spécifiquement la transcription d'un gène dans les cellules hépatocytes. En général, un tel promoteur ne peut pas initialiser la transcription dudit gène dans un tissu autre que le foie. «Un acide nucléique ayant au moins 90%, particulièrement 95%, notamment 98% d'identité avec l'une des trois séquences SEQ ID NO : 3, SEQ ID NO : 6 et SEQ ID NO : 7 » contenu dans un vecteur adénoviral selon l'invention est un acide nucléique ayant soit l'activité du promoteur humain de l'al-antitrypsine, soit celle du promoteur humain de la cholesterol 7 alpha-hydroxylase, soit celle du promoteur humain du factor IX. On entend par « enhancer », un segment court d'ADN qui peut se lier à des facteurs de transcription pour stimuler le niveau de transcription d'un gène. Un enhancer n'est pas nécessairement proche du gène à réguler, et peut se situer en amont, en aval ou même au milieu du gène à régler. On entend par «enhancer des gènes ayant une spécificité d'expression hépatique supérieure à 99% », un enhancer d'un gène dont l'expression est essentiellement hépatique, à savoir que 99% de la quantité de protéine correspondante est exprimée chez le foie. « Un acide nucléique ayant au moins 90%, particulièrement 95%, notamment 98% d'identité avec l'une des trois séquences SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 8 et SEQ ID NO : 9 » contenu dans un vecteur adénoviral selon l'invention est un acide nucléique ayant soit la fonction de l'enhancer de l'al-microglobuline microglobuline, soit celle de l'enhancer de l'apolipoproteine E, soit celle de l'enhancer de la phenylalanine hydroxylase. On entend par « intron », une partie non codante d'un gène. Un intron est situé souvent entre deux exons. Après la transcription, cette partie est excisée de l'ARN pour donner l'ARN messager. La présence d'un intron hétérologue permet d'optimiser l'expression des gènes exogènes dans une construction d'ADN. « Un acide nucléique ayant au moins 90%, particulièrement 95%, notamment 98% d'identité avec l'une des quatre séquences SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 11» est un acide nucléique qui conserve la capacité d'être excisé d'un pré-ARNm pour donner un ARNm mature. On entend par «intron des gènes ayant une spécificité d'expression hépatique supérieure à 90% », un intron d'un gène dont l'expression est essentiellement hépatique, à savoir que 90% de la quantité de protéine correspondante est exprimée dans le foie. Dans un mode de réalisation avantageux, les régions El/E3/E4 de l'adénovirus sont délétées d'un vecteur adénoviral selon l'invention. Les régions El/E3/E4 de l'adénovirus contiennent des gènes codant les protéines virulentes, par exemple les protéines qui peuvent induire l'apoptose de cellules, ou les protéines pro-inflammatoires, telles que TNF. La délétion des régions El/E3/E4 permet d'assurer que le vecteur adénoviral selon l'invention ne présente aucune pathogénicité liée au virus. Dans un mode de réalisation avantageux, le vecteur selon l'invention comprend : - un acide nucléique d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 2, et codant un polypeptide représenté par la séquence SEQ ID NO : 1, - un promoteur humain de l'al-antitrypsine représenté par la séquence SEQ ID NO : 3, - éventuellement au moins une copie d'un enhancer de l'al-microglobuline représenté par la séquence SEQ ID NO : 4, - éventuellement un intron apo A-I représenté par la séquence SEQ ID NO : NO : 5. Dans un mode de réalisation plus avantageux, le vecteur adénoviral selon l'invention comprend en outre au moins une région contrôle hépatique représentée par la séquence SEQ ID NO : 12, ou un acide nucléique ayant au moins 90%, particulièrement 95%, notamment 98% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 12. La région contrôle hépatique est une région d'ADN située généralement en aval du site de transcription d'un gène et permettant de contrôler l'expression spécifique dudit gène dans les hépatocytes. « Un acide nucléique ayant au moins 90%, particulièrement 95%, notamment 98% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 12 » conserve la fonction d'une région contrôle hépatique représentée par la séquence SEQ ID NO : 12, notamment celle de contrôler l'expression spécifique d'un gène dans les hépatocytes. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, le vecteur adénoviral selon l'invention comprend : - un acide nucléique d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 2, - un promoteur humain de l'al-antitrypsine représenté par la séquence SEQ ID NO : 3, - au moins une copie d'un enhancer de l'al-microglobuline représenté par la séquence SEQ ID NO : 4, - un intron représenté par la séquence SEQ ID NO : 5, et - au moins une copie d'une région contrôle hépatique représentée par la séquence SEQ ID NO : 12. Dans un autre mode de réalisation préféré, le vecteur adénoviral selon l'invention comprend : - un acide nucléique d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 2, - un promoteur humain de l'al-antitrypsine représenté par la séquence SEQ ID NO : 3, - deux copies de l'enhancer de l'al-microglobuline représenté par la séquence SEQ ID NO : 4, - un intron représenté par la séquence SEQ ID NO : 5, et - deux copies de la région contrôle hépatique représentée par la séquence SEQ ID NO : 12. La présente de deux copie de l'enhancer de l'al-microglobuline et de deux copies de la région contrôle hépatique permet d'augmenter la spécificité tissulaire Dans un mode de réalisation particulier, le vecteur adénoviral selon l'invention est représenté par la séquence SEQ ID NO : 13. Le vecteur adénoviral selon l'invention est en particulier utilisé pour le traitement des pathologies associées à un état inflammatoire, telles que l'athéroslérose, l'hypertrophie cardiaque, la fibrose hépatique, la neuroinflammation et la maladie dAlzheimer. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant : - un acide nucléique d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 2, et codant un polypeptide d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 1, ou - un acide nucléique d'intérêt représenté par une séquence ayant au moins 83%, particulièrement 90%, notamment 95% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 ; ou - un polypeptide d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 1, ou - ou un polypeptide d'intérêt représenté par une séquence ayant au moins 83%, particulièrement 90%, notamment 95% d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 1, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Un tel véhicule utilisé dans une composition pharmaceutique selon invention peut être tout véhicule pharmaceutiquement acceptable conventionnel. La composition pharmaceutique selon l'invention est susceptible d'être administrée au patient à une dose de 10 12 particules / kg avec une administration par semaine. Dans un mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique selon l'invention est sous forme de solution injectable. Ladite composition peut être administrée par injection intraveineuse, intraportale ou intrahépatique (Berrando et al., Hum Gene Ther. 2006, Jun;17(6):601-10). Dans un mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique selon l'invention comprend un vecteur adénoviral tel que décrit dans la présente invention en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Dans un mode de réalisation plus particulier, la composition pharmaceutique selon l'invention comprend un vecteur adénoviral comprenant : - un acide nucléique d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 2, - un promoteur humain de l'al-antitrypsine représenté par la séquence SEQ ID NO : 3, - au moins une copie d'un enhancer de l'al-microglobuline représenté par la séquence SEQ ID NO : 4, - un intron représenté par la séquence SEQ ID NO : 5, et - au moins une copie d'une région contrôle hépatique représentée par la séquence SEQ 5 ID NO : 12. Dans un mode de réalisation plus particulier, la composition pharmaceutique selon l'invention comprend un vecteur adénoviral comprenant : - un acide nucléique d'intérêt représenté par la séquence SEQ ID NO : 2, 10 - un promoteur humain de l'al-antitrypsine représenté par la séquence SEQ ID NO : 3, - deux copies de l'enhancer de l'al-microglobuline représenté par la séquence SEQ ID NO : 4, - un intron représenté par la séquence SEQ ID NO : 5, et - deux copies de la région contrôle hépatique représentée par la séquence SEQ ID NO : 15 12. Dans un mode de réalisation encore plus particulier, la composition pharmaceutique selon l'invention comprend un vecteur adénoviral représenté par la séquence d'acide nucléique SEQ ID NO : 13. 20 La présente invention porte également sur les cellules de mammifère transfectées par un vecteur tel que défini dans la présente invention. Particulièrement, ladite cellule est une cellule humaine. Plus particulièrement, ladite cellule est une cellule hépatique humaine. La transfection d'une cellule de mammifère par l'intermédiaire d'un vecteur viral peut 25 être mise en oeuvre par toutes méthodes connues de l'homme du métier, telles que l'électroporation ou la transfection par phosphate de calcium. Enfin, l'invention vise également à proposer une méthode pour déterminer l'évolution de l'état inflammatoire d'un patient sous traitement d'une composition pharmaceutique selon 30 la présente invention. Cette méthode comprend : - la mesure de la concentration sanguine de la protéine parooxonase-1, représentée par la séquence SEQ ID NO : 14, dans un échantillon sanguine dudit patient, - la détermination de l'évolution inflammatoire dudit patient. Etant donné que la concentration plasmique de la protéine paraoxonase-1(PON1) est corrélée négativement avec l'état inflammatoire d'un patient, l'augmentation du niveau de PONT plasmique signifie que l'inflammation chez le patient est réduite ; la diminution du niveau de PONT plasmique signifie que l'inflammation du patient est aggravée. La présente invention est illustrée plus en détail par les figures et les exemples ci-après. Ils ne peuvent, en aucun cas, être interprétés comme une illustration exhaustive de la portée de la présente invention. 10 Figures Figure 1 : la figure 1 illustre la structure du plasmide pTG14681-DC172.AIintron.Dyrkla.HCR2. Dans l'ordre de 5' à 3' de la séquence d'ADN, ledit plasmide contient deux copies de 160 bp de l'enhancer de l'alpha 1 microglobuline (représentées par le diamant gris), 890 bp du promoteur de l'alpha 1 anti trypsine humaine (représenté par le triangle 15 blanc), l'intron de l'apo A-I (représenté par le triangle noir), 2,6kb de l'ADNc de DYRKla du rat (représenté par le rectangle noir) et deux copies de 770bp de la région-I de contrôle hépatique (représentées par ellipse grise) et un site poly A provenant du virus SV40 (représenté par le rectangle blanc). 20 Figure 2 : la figure 2 représente l'activité plasmatique de la protéine PONT chez les souris contrôles Cbs+/+ (WT) et les souris hyperhomocystéinémiques Cbs+/- traitées (HT+AD) ou non par le vecteur adénoviral selon la présente invention (HT). N représente le nombre de souris analysé dans chaque groupe. Les valeurs sont considérées comme significativement différentes pour p 30 Figure 3 : la figure 3 représente les niveaux relatifs d'ARN messagers IL10 dans le cerveau des souris contrôles(WT) (100%) et des souris BACtgDyrkla surexprimant la protéine Dyrkla après l'injection péritonéale d'une solution de Nacl (WT et Tg) ou d'une préparation de lipopolysaccharides (LPS) (WT LPS et Tg LPS). L'axe des ordonnées5 représente le ratio d'ARN messagers IL10 entre les souris étudiées et les souris contrôles (WT correspondant aux controles plus Nacl et Tg aux souris Tg plus Nacl) . Matériels et Méthodes Exemple 1 : Construction du plasmide pTG14681-DC172.A-Iintron.Dyrkla.HCR2 Pour obtenir le plasmide pTG14681-DC172.A-Iintron.Dyrkla.HCR2, le fragment contenant la séquence codante complète de Dyrkla (pb 130 à pb 2421 dans NM 012791, NCBI) a été obtenu par une digestion BglII-Afel de la construction EGFP-Dyrkla cDNA (Becker et al, 1998). Ledit fragment est ensuite inséré dans le plasmide pTG14681-DC172.AIintron.HCR2 (Jacobs F, et al; 2008, Gene Ther. 2008 Apr;15(8):594-603). Le plasmide pTG14681-DC172.A-Iintron.HCR2 contient le promoteur DC172 (1.2 kb), qui consiste en 890 pb du promoteur de l'alpha 1 anti trypsine humaine et en deux copies de 160 bp de l'enhancer de l'alpha 1 microglobuline, de la partie amont du 5'UTR du gène l'apo A-I humaine et en deux copies de la région-1 de contrôle hépatique de 774 pb. La production du vecteur pTG14681-DC172.A-Iintron.Dyrkla.HCR2 a été effectuée selon le protocole décrit par Van Linthout S et al. (Van Linthout S et al., 2011, J Mol Med (Berl). 2011 Feb;89(2):151- 60). La structure du plasmide pTG14681-DC172.A-Iintron.Dyrkla.HCR2 ainsi obtenu est illustrée dans la figure 1. Exemple 2: Surexpression hépatique de DYRKla permettant d'augmenter la concentration plasmatique de PON1 La mesure d'activité PONT plasmatique a été effectuée une semaine après l'injection du vecteur adénoviral pTG14681-DC172.A-Iintron.Dyrkla.HCR2. Le sang est prélevé au niveau du sinus rétro-orbital et placé dans des tubes contenant 1/10 de volume de citrate de sodium à 3,8%. L'activité phénylacétate hydrolase de la PONT a été dosée avec 100 µg de protéines de foie ou avec 5 µL de plasma. Le dosage est réalisé à température ambiante en suivant l'apparition du phénol à 270 nm dans 500 µL de PBS contenant 20 mM de Tris, 1 mM de CaC12 et 10 mM de phénylacétate pendant 1 minute avec un intervalle de 10 secs. La figure 2 illustre l'activité de la protéine PONT plasmatique provenant respectivement du groupe sauvage (WT), du groupe des souris hyperhomocystéinémiques Cbs+/- traitées par le vecteur adénoviral selon la présente invention (HT+AD), ou du groupe des souris Cbs+/- non traitées par le vecteur adénoviral selon l'invention (HT). La figure 2 montre que la concentration plasmatique de PON1 est diminuée dans les souris hyperhomocystéinémiques par rapport à celle dans les souris sauvages. Cela signifie la présence d'un état inflammatoire dans les souris Cbs+/-, car la concentration plasmatique de PONT est corrélée avec l'état inflammatoire : le niveau de PONT est abaissé dans les situations inflammatoires. Le traitement des souris Cbs+/- par le vecteur adénoviral à spécificité hépatique qui permet de surexprimer de la protéine DYRKl a dans le foie induit une augmentation significative de la concentration plasmatique de PONT dans ces souris montrant ainsi que l'inflammation a été stoppée. Exemple 3 : Surexpression hépatique de DYRK1a permettant de diminuer l'état inflammatoire des souris transgéniques soumises à un agent d'inflammation (LPS) Un état inflammatoire est créé par injection intrapéritonéale de lipopolysaccharides (LPS). Un hémisphère cérébral permet d'extraire les ARNs qui sont ensuite utilisés pour les expériences de PCR quantitative. L'injection de Nacl n'entraine pas de variation de l'expression en ARNm codant pour IL-10, une cytokine antiinflammatoire, chez les souris BACtgDyrkl a (cette lignée construite par intégration d'une copie supplémentaire du gène murin codant pour Dyrkl a surexprime cette protéine d'un facteur 1.5) en comparaison avec les souris contrôles (WT) traitées au NaCl. En présence de LPS, une augmentation significative de cette expression est observée chez les souris WT (d'un facteur 4) tandis que chez les Tg cette hausse correspondant à une forte réaction anti-inflammatoire est beaucoup plus importante (d'environ un facteur 15). (Figure 3)