Brevet FR2982262A1 — publié le 20130510

NANOPARTICULE COMPORTANT UN COEUR CHARGE EN PHOSPHOLIPIDE ET UNE PROTEINE ADSORBEE SUR LEDIT COEUR-UTILISATION POUR LA DELIVRANCE D'UNE PROTEINE DANS UNE CELLULE DOMAINE TECHNIQUE La présente invention concerne une nanoparticule comprenant ou consistant en (a) un coeur solide et poreux, formé d'un polymère obtenu par réaction entre une maltodextrine et un composé époxyde, des fonctions ammonium quaternaire étant greffées sur ledit polymère pour lui conférer une charge positive, et (b) un lipide de charge ionique négative, ladite nanoparticule étant associée à une protéine ou un fragment de protéine adsorbé(e) sur ledit coeur pour la délivrance de ladite protéine dans une cellule vivante. ART ANTERIEUR Il existe un besoin d'outils d'étude des mécanismes de fonctionnement 15 cellulaires. Une meilleure compréhension de ces mécanismes permettrait en effet d'aboutir à de nouvelles thérapies qui prendraient en charge la cellule elle-même. Massignani et al. (Nature Precedings, 8 May 2010) décrit un procédé de délivrance d'un anticorps dans une cellule, basé sur l'utilisation de nano capsules de copolymères sensibles au pH. Ces nano capsules sont encore appelées 20 « polymersome ». Des copolymères particuliers sont capables de former, dans un milieu dont le pH est sensiblement égal au pH physiologique, des nano capsules. Des anticorps peuvent être encapsulés dans ces nano capsules pour être délivrés dans des cellules. Des nano capsules remplies d'anticorps sont introduites dans des cellules dans lesquelles elles sont prises en charge par les mécanismes de 25 l'endocytose. Lors de l'endocytose, les nano capsules sont soumises à une brusque chute de pH. Cette chute de pH provoque la dislocation des nano capsules, les copolymères formant à ce pH des chaînes polymériques. Cette transformation des copolymères augmente la pression osmotique ce qui aboutit à la rupture de la membrane des endosomes provoquant la libération des anticorps dans le 30 cytoplasme de la cellule. Cependant, ce procédé, qui nécessite la formation des nano capsules puis l'encapsulation des anticorps, est assez complexe. En effet le procédé nécessite la préparation et caractérisation d'un copolymère et l'ajustement du pH à 6 avant d'ajouter l'anticorps à délivrer. Le mélange copolymère anticorps doit être soniqué pendant 10 minutes. Les nano capsules contenant les anticorps sont ensuite extraites et séparées des autres composants par chromatographie d'exclusion sur Sepharose 4B. De plus, la concentration en nano capsules et le taux d'encapsulation de l'anticorps doivent être déterminés avant utilisation de la solution contenant les nano capsules préparées. Il existe donc un besoin en moyens simples et efficaces, permettant la délivrance de protéines, en particulier des anticorps, dans des cellules, qui puissent être utilisés dans des procédés. DESCRIPTION DE L'INVENTION Un but de la présente invention est de proposer un moyen à base de nanoparticules telles que décrites dans l'invention, permettant d'introduire, de délivrer ou de transférer une protéine ou un fragment de protéine dans le cytosol d'une cellule vivante de manière à pouvoir observer les interactions entre cette protéine ou ce fragment de protéine et la cellule, la protéine ou le fragment introduit dans la cellule modifiant le fonctionnement de la cellule ou pouvant marquer certains compartiments de la cellule pour des applications en imagerie cellulaire. Ce but est atteint au moyen d'une nanoparticule comprenant (a) un coeur solide et poreux, formé d'un polymère obtenu par réaction entre une maltodextrine et un composé époxyde, des fonctions ammonium quaternaire étant greffées sur ledit polymère pour lui conférer une charge positive et (b) un phospholipide de charge ionique négative contenu dans ledit coeur. Selon l'invention, de manière caractéristique, ladite nanoparticule comporte une protéine ou un fragment de protéine adsorbé(e) sur ledit coeur. Par «adsorbé(e) », on entend que la protéine ou le fragment de protéine est lié(e) à la surface du coeur de la nanoparticule (sans limitation des forces et interactions qui permettent de lier le coeur à ladite protéine ou du fragment de protéine). Le terme « adsorbé » peut désigner notamment, une liaison non covalente, par exemple une liaison de faible énergie, de type van der Waals (hydrophobe) ou une liaison ionique. Les inventeurs ont en effet découvert que les protéines de taille supérieure à la section des pores du coeur ne peuvent pénétrer dans ce dernier. Les protéines étant globalement de charge négative, lorsqu'elles ne peuvent pas pénétrer dans le coeur, elles s'associent à la surface de ce dernier, qui est chargé positivement dans le cas de la présente invention. Les inventeurs ne sont néanmoins pas liés à cette explication. Ainsi, les inventeurs ont découvert que les protéines de masse moléculaire supérieure ou égale à 100KDa ne pouvaient pas pénétrer dans le coeur des nanoparticules comportant un coeur tel que précité, du fait, probablement, de leur taille trop importante. Des protéines de tailles plus petite que précitée mais étant agrégées ou agglomérées, peuvent également rester liées à la surface du coeur de la particule. Le type de coeur précité s'est révélé particulièrement performant pour la délivrance d'une protéine. En effet, la cytotoxicité de la nanoparticule comportant un tel coeur peut être contrôlée en fonction de la concentration en nanoparticules mises en contact avec la cellule, de la densité de charge de la nanoparticule, des conditions de cultures des cellules, et de la durée de contact entre les nanoparticules et les cellules. Par ailleurs, de telles nanoparticules se sont révélées être très stables dans le temps à température ambiante, et aptes à être stérilisées sans que leurs propriétés, en particulier quand à la délivrance de la protéine, ne soient altérées. Le document FR 2 803 517 décrit la fabrication de nanoparticules cationiques comportant un coeur à base de maltodextrine greffée telles que précité. Le phospholipide est contenu dans le coeur. De telles nanoparticules sont utilisées pour la préparation d'un complexe comportant un principe actif destiné à être administré par voie mucosale. Le principe actif, qui peut être une protéine, est toujours incorporé dans le coeur, soit lors de la formation du polymère constitutif de ce dernier, soit lors de l'introduction du phospholipide dans les porosités du coeur. Par ailleurs, l'anticorps n'est pas cité parmi les principes actifs associables à la nanoparticule. La publication de Paillard et al. [2010 ; Pharm Res, Issue 1 (2010), 126-133)]. décrit des nanoparticules comportant un coeur identique à celui des particules de l'invention qui est également chargé en phospholipide. Ces nanoparticules comportent dans leur coeur, en plus du phospholipide, une protéine (une albumine). La publication démontre que la protéine n'est pas adsorbée à la surface du coeur mais incorporée dans ce dernier. Par ailleurs, ces nanoparticules n'ont jamais été mises au contact de cellules. Or, le comportement des nanoparticules par rapport à une cellule vivante est très dépendant de la nature du coeur et du lipide contenu dans ce dernier. L'Homme du Métier ne peut donc pas prédire a priori le comportement de telles nanoparticules lorsqu'elles sont mises au contact de cellules. La publication « Evaluation of effect of charge and lipid coating on ability of 60- nm nanoparticules to cross an in vitro model of the blood-brain barrier » publiée dans la revue The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics décrit des nanoparticules comportant un coeur identique à celui des nanoparticules de l'invention. Ces particules ne comportent pas de phospholipide incorporé dans le coeur ; le coeur est recouvert d'un mélange de lécithines (diacyl phosphatidyl choline de charge globale neutre (zwitterioniques). Ces particules sont capables de pénétrer 5 dans une cellule et de la traverser, par transcytose, sans délivrance dans le cytosol. La cellule les prend en charge et les libère ensuite comme tout corps étranger. Ces nanoparticules sont capables ainsi de franchir in vitro la barrière hémato encéphalique (BHE) dans des conditions sans sérum mais, en présence de globules rouges, il a été montré qu'elles ne pouvaient plus pénétrer dans les cellules de la 10 BHE (voir publication précitée). La protéine liée à la surface du coeur de la nanoparticule de l'invention peut être choisie parmi les anticorps, les fragments d'anticorps, les enzymes, les facteurs de transcription, les facteurs de régulation, les cytokines, les protéines de transport, les protéines nucléaires, les protéines mitochondriales et les protéines 15 biologiquement actives. Avantageusement, la protéine adsorbée est un anticorps, plus particulièrement un anticorps du type IgG et plus particulièrement PDX-1. Les anticorps ont une demi-durée de vie longue dans l'organisme. Normalement, les anticorps ne pénètrent pas dans les cellules mais agissent au 20 niveau de la paroi de ces dernières. La présente invention a pour avantage de permettre l'introduction d'un anticorps (ou fragment fonctionnel d'anticorps) dans une cellule, cet anticorps conservant de plus, et de manière surprenante, ses fonctionnalités au sein de la cellule, en termes de reconnaissance et/ou de fixation de l'antigène cible. De plus, les inventeurs ont en effet montré que la nanoparticule 25 de l'invention permet la délivrance d'un anticorps dans le cytosol d'une cellule, l'anticorps interagissant alors avec la cellule et modifiant le fonctionnement biologique de cette dernière. Avantageusement, le phospholipide de charge ionique négative, est choisi parmi le 1, 2-diacylyl-sn-glycéro-3-phosphatidylglycérol, 1, 2-diacylyl-sn-glycero-3- 30 phosphatidylsérine, le 1, 2-dipalmitoyl-sn-glycéro-3-phosphatidylglycérol et le 1, 2- d iacylyl-sn-glycéro-3-phosphatidylsérine. Avantageusement, la nanoparticule a un taux de charge lipidique supérieur ou égal à environ de 10 à 100%. Dans un mode de réalisation particulier, le taux de charge lipidique des nanoparticules de l'invention est compris entre 50 et 80%, de préférence entre 65 et 70%. Le taux de charge lipidique est défini comme étant le rapport massique : masse de lipide incorporé/masse de la nanoparticule, ce taux étant une valeur moyenne établie sur une masse donnée de nanoparticules et une masse donnée de lipide. La taille des nanoparticules utilisables dans le cadre de l'invention n'est pas limitée. Toutefois, dans un mode de réalisation particulier, les nanoparticules présentent une taille moyenne comprise entre 5 nm et 10 microns (pm), de préférence entre 5 nm et 1 pm, entre 5 et 100 nm, entre 10 et 100 nm, entre 20 et 100 nm ou entre 40 et 60nm. Cette taille peut être déterminée par tout moyen connu, en particulier par diffusion dynamique de la lumière à l'aide du NanoZS (Malvern). La méthode précitée permet d'obtenir la taille moyenne des nanoparticules qui est calculée à partir des dimensions de ces dernières mesurées selon les trois directions orthogonales. Cette taille est une valeur moyenne calculée sur un ensemble (ou population) de nanoparticules à partir des trois dimensions des nanoparticules et qui dépend notamment de la forme de la nanoparticule. La forme des nanoparticules utilisables dans le cadre de l'invention n'est pas limitée. Il est connu que la forme de la nanoparticule peut être déduite de l'indice de polydispersité. En effet, la taille moyenne étant calculée selon trois directions orthogonales, elle prend en compte la forme des nanoparticules. Ainsi, plus l'indice de polydispersité est grand, plus les nanoparticules ont des formes ou des tailles variables ou sont, par exemple, sous la forme de bâtonnets dont les trois dimensions sont très différentes l'une de l'autre. A l'inverse, plus l'indice de polydispersité est bas, plus l'ensemble de nanoparticules est homogène en taille. Dans un mode de mise en oeuvre particulier, l'ensemble de nanoparticules utilisable dans le cadre de l'invention présente un indice de polydispersité inférieur ou égal à 0,3. En effet, un indice de polydispersité bas (inférieur ou égal à 0,3) indique que les trois dimensions des nanoparticules sont sensiblement égales et que les nanoparticules sont donc statistiquement sphériques. Ainsi, les inventeurs ont mis en évidence qu'un ensemble de nanoparticules sensiblement sphériques (indice de polydispersité inférieur ou égal à 0,3) influence la délivrance et permet une libération plus facile de la protéine ou du polypeptide dans le cytosol de la cellule. D'autres formes de nanoparticules permettent néanmoins d'aboutir également à la libération de la protéine et/ou du polypeptide dans la cellule. La taille, la forme et l'indice de polydispersité décrits dans la présente invention peuvent être déterminés et calculés par tout moyen connu, en particulier par les méthodes décrites dans la publication de Paillard et al. [2010 ; Pharm Res, Issue 1 (2010), 126-133)]. Avantageusement, pour une utilisation en imagerie, un élément choisi parmi le coeur de ladite nanoparticule, le phospholipide contenu dans ledit coeur et ladite protéine ou ledit fragment de protéine est associé à un produit de marquage. Ce produit de marquage peut être, par exemple, un radio-marqueur ou un marqueur fluorescent. La présente invention concerne également l'utilisation d'une nanoparticule selon l'invention pour la délivrance de ladite protéine ou dudit fragment de protéine adsorbé(e) sur ledit coeur dans le cytosol d'une cellule, ladite protéine ou ledit fragment de protéine ainsi libéré dans le cytosol interagissant avec le fonctionnement de ladite cellule ou pouvant marquer ses composants (lorsqu'un produit de marquage est utilisé). La présente invention concerne, en outre, un procédé de délivrance d'une protéine ou d'un fragment de protéine dans le cytosol d'une cellule, selon lequel - on mélange, éventuellement dans un solvant, une protéine ou un fragment de protéine avec une nanoparticule qui comprend (a) un coeur solide et poreux, formé d'un polymère obtenu par réaction entre une maltodextrine et un composé époxyde, des fonctions ammonium quaternaire étant greffées sur ledit polymère pour lui conférer sa charge positive et (b) un phospholipide de charge ionique négative contenu dans ledit coeur, et - on met en contact ledit mélange avec une cellule ; De façon surprenante, les inventeurs ont mis en évidence que le mélange des nanoparticules telles que décrites dans la présente demande avec une protéine ou un fragment de protéine, en particulier au sein d'un solvant, permettait d'obtenir des nanoparticules associées à ladite protéine qui sont capables de délivrer ladite protéine ou ledit fragment de protéine dans le cytosol d'une cellule vivante, par simple contact avec cette cellule. De façon intéressante, la protéine associée à la nanoparticule est libéré(e) dans le cytosol. La durée de contact pour obtenir la libération de la protéine dépend du type de protéine, du type de cellule et des conditions de culture. Selon le procédé de l'invention, le terme « associé(e) » signifie que la protéine ou le fragment de protéine peut être contenu(e) dans le coeur de la nanoparticule et/ou lié(e) à la surface de ce dernier. La nanoparticule peut donc également comporter des protéines contenues dans son coeur et des protéines liées à la surface de ce dernier. La protéine est choisie, par exemple, parmi les anticorps, les fragments d'anticorps, les enzymes, les facteurs de transcription, les facteurs de régulation, les cytokines, les protéines de transport, les protéines nucléaires, les protéines mitochondriales et les protéines biologiquement actives. Dans un mode de mise en oeuvre particulier, la protéine est un anticorps, plus particulièrement un anticorps de type IgG et, plus particulièrement, l'anticorps PDX-1. Avantageusement, le phospholipide est choisi parmi les phospholipides anioniques tels que le 1, 2-diacylyl-sn-glycéro-3-phosphatidylglycérol, 1, 2-diacylylsn-glycero-3-phosphatidylsérine, le 1, 2-dipalmitoyl-sn-glycéro-3-phosphatidylglycérol 15 et le 1, 2-diacylyl-sn-glycéro-3-phosphatidylsérine. Dans un mode de réalisation particulier, le solvant utilisé pour la formation du mélange est un solvant protique, polaire par exemple l'eau ou apolaire. La présente invention concerne également une nanoparticule comprenant (a) un coeur solide et poreux, formé d'un polymère obtenu par réaction entre une 20 maltodextrine et un composé époxyde, des fonctions ammonium quaternaire étant greffées sur ledit polymère pour lui conférer une charge positive,(b) un phospholipide de charge ionique négative contenu dans ledit coeur et (c) un anticorps ou un fragment d'anticorps associé à ladite nanoparticule. Le terme « associé » signifie, notamment que l'anticorps ou le fragment 25 d'anticorps est soit contenu dans le coeur, soit lié à la surface du coeur (indépendamment du type de force qui créé la liaison), soit à la fois contenu dans le coeur et lié à la surface de ce dernier. Les inventeurs ont en effet montré qu'une telle association nanoparticule/anticorps permettait la délivrance fonctionnelle de l'anticorps ou du 30 fragment d'anticorps dans le cytosol de la cellule. L'anticorps utilisé en association avec la nanoparticule telle que précitée peut être un anticorps du type IgG et plus particulièrement PDX-1. 2 982 262 8 Le phospholipide contenu dans le coeur de la nanoparticule associée à un anticorps telle que précité, peut être choisi parmi le 1, 2-diacylyl-sn-glycéro-3- phosphatidylglycérol, 1, 2-diacylyl-sn-glycero-3-phosphatidylsérine, le 1, 2- d ipalmitoyl-sn-g lycéro-3-phosphatidylglycérol et le 1, 2-d iacylyl-sn-g lycéro-3- 5 phosphatidylsérine. La présente invention, ses caractéristiques et les différents avantages qu'elle procure seront mieux compris à la lecture de la description qui suit et des exemples cités à titre non limitatif et qui font référence aux figures annexées sur lesquelles : - la Figure 1 représente l'expression des gènes Ins1 (A) et Ins2 (B) 10 déterminées 48h après incubation des différentes associations nanoparticule/anticorps testées avec les cellules ; Ct : contrôle négatif. - la Figure 2 représente l'expression des gènes Ins1 (A) et Ins2 (B) déterminées 72h après incubation des différentes associations nanoparticule/anticorps testées avec les cellules ; et - la Figure 3 représente l'expression des gènes Ins1, Ins2, Pdx1 et Mafa, déterminées 72h après incubation des différentes associations nanoparticule/anticorps testées avec les cellules. EXEMPLES Préparation des nanoparticules Les nanoparticules sont préparées, par exemple, selon le protocole décrit par Paillard et al. [2010 ; Pharm Res, Issue 1 (2010), 126-133)]. Exemple 1: Préparation de nanoparticules hydrophiles cationiques 25 submicroniques à base de maltodextrine greffée par des fonctions ammonium quaternaire (fabrication du coeur). 50 g d'une maltodextrine (Glucidex 6, hydrolysat de polysaccharide Mw : 3400, Roquette Frères, France) sont solubilisés dans 80 ml d'eau puis 20 ml de soude 10M sont ajoutés. Dans la solution alcaline de polysaccharide maintenue sous 30 agitation, 3,54 g d'épichlorhydrine (38,3 mmol) sont ajoutés. Après une nuit d'agitation douce à température ambiante, la solution gélifie. 31,2 g de glycidyl triméthyl ammonium (200 mmol) sont ajoutés au gel et la réaction est laissée 8 heures sous agitation. Après la fin de la réaction, 1 litre d'eau est ajouté et le pH de la solution est amené entre 5 et 7 à l'aide d'acide acétique. La suspension est pré-homogénéisée à l'aide d'un Ultra-Turrax T-25. La suspension de particules est alors homogénéisée (Minilab H-80) à une pression variant entre 500 et 900 bars pour obtenir des particules ayant une taille inférieure à 100nm. Les particules sont ensuite purifiées par ultrafiltration sur une membrane de 30 kDa (système Minissette, Filtron, USA). La suspension de particules est ensuite purifiée par micro filtration sur membrane de 0,2 m (Spiral-Cap 0,2 m, Gelman, USA) et stockée à 4 C. Les caractéristiques de la suspension sont : - Taille (Coulter N4D) : 40- 80 nm (S. D= 20 nm) - Charge (Analyse élémentaire) : 2mmol / g - Potentiel Z (Malvern série 3000 Tampon phosphate 15 mM pH 7) : + 25 +/- 10 mV - Concentration : 17 g/I Exemple 2 : introduction du lipide dans le coeur précédemment formé 24 ml d'une solution à 17 g/I (408 mg de particules) en matrice hydrophile cationique préparée suivant l'exemple 1 sont maintenus sous agitation à 80 C. A l'aide d'une pompe péristaltique, 10,2 ml d'une solution éthanolique de DPPG (DPPG : 1, 2-d ipalmitoyl-sn-glycéro-3-phosphatidylglycérol ou dipalmitoylphosphatidyl glycérol) (commercialisé par la société Lipoid®) 16 g/I (éthanol : eau 88 : 12, DPPG 163 mg) sont ajoutés lentement dans la solution de polysaccharide cationique. Après l'ajout de la totalité du DPPG, la solution est laissée sous agitation à 80 C durant 30 min. La solution est purifiée par ultrafiltration sur une membrane ayant un seuil de filtration de 30 KDa. Il en résulte une suspension de matrices amphiphiles submicroniques avec un rapport matrice : lipides de 40 % w/w. En tenant compte du taux de charge de la matrice (2 mmol / g) et du poids molaire du DPPG (722 Da), on peut conclure que le taux de neutralisation de la charge cationique par le DPPG est de 26 %. Il en résulte 34 ml d'une suspension de particules submicroniques (40-80 nm mesurées au Coulter N4D) à 16,5 g /I. Le potentiel Z de ces matrices amphiphiles reste largement cationique (+ 15 mV mesuré dans du tampon phosphate 15mM pH 7). Délivrance d'un anticorps dans des cellules RINm5F Les exemples qui suivent ont pour but de tester l'effet de la délivrance de l'anticorps anti PDX-1 sur l'expression du gène de l'insuline. L'introduction de cet anticorps dans la cellule permet d'inhiber spécifiquement l'activité de PDX-1 qui est un facteur de transcription impliqué dans la régulation de l'expression des gènes de l'insuline Ins1 et Ins2 chez les rongeurs. L'exemple est réalisé sur la lignée RINm5F provenant d'un insulinome de rat. Cette lignée est difficilement transfectable avec les techniques couramment utilisées dans les laboratoires. Par exemple, l'utilisation de la lipofectamine 2000 avec du siRNA anti-PDX1 (Santa Cruz, US) n'a pas donné de résultats significatifs. Protocole de culture Les cellules RINm5F à 70% confluence sont rincées au PBS et trypsinées. La suspension cellulaire est rassemblée et centrifugée pendant 5 minutes à une vitesse de 1200 rpm. Le culot est ensuite repris dans un volume de 5mL de milieu RPMI 1640 (ATCC 30-2001) complémenté avec 10% de SVF (sérum de veau foetal) et 1% de pénicilline/streptomycine. La suspension cellulaire de cellules RINm5F est répartie dans des puits d'une plaque de culture de 12 puits, à raison de 250 000 cellules/puits. Les cellules sont 15 cultivées pendant 24 h de manière à adhérer au fond des puits. Préparation des formulations à tester Dans des Eppendorfs distincts, sont réparties, sous la hotte, pendant 1h d'incubation à TA (température ambiante), différentes solutions d'anticorps, de nanoparticules seules et de nanoparticules sur lesquelles sont fixés différents 20 anticorps. Ces solutions sont utilisées pour la mise en oeuvre du procédé de l'invention. -5pg de NPL70 - 5pg NP+ - 1pg IgG (IgG anti-lapin non spécifique) 25 - 2.5pg IgG - 5pg IgG - 1pg d'anticorps anti PDX-1 (a PDX-1); - 2.5pg a PDX-1 ; - 5pg a PDX-1 ; 30 - 5pg NP+/1pg IgG - 5pg NP+/2.5pg IgG - 5pg NP+/5pg a IgG - 5pg NPL70/1pg IgG - 5pg NPL70/2.5pg IgG - 5pg NPL70/5pg a IgG - 5pg NP+/1pg a PDX-1 - 5pg NP+/2.5pg a PDX-1 - 5pg NP+/5pg a PDX-1 - 5pg NPL70/1pg a PDX-1 - 5pg NPL70/2.5pg a PDX-1 - 5pg NPL70/5pg a PDX-1 Après 1 heure d'incubation des solutions mentionnées ci-dessus, on ajoute 0,5mL de milieu contenant du SVF pendant 1 heure à TA. Les préparations sont ensuite réparties sur les cellules RINm5F pendant 6 heures d'incubation avec du milieu contenant du SVF. Après ce temps d'incubation les puits sont lavés et du milieu frais est ajouté pendant une durée de 48h ou 72h. Un contrôle négatif (Ct) représente les cellules testées seules, sans incubation avec une solution. Comme représenté sur la figure 1, il n'y a aucun effet sur les gènes Ins1 et Ins2, 48h après l'introduction de l'anticorps à l'aide des nanoparticules NP+ ou des nanoparticules NPL70 dans la cellule. Toutefois, si on prolonge cette incubation jusqu'à 72h, on observe alors une forte augmentation de l'expression des gènes Ins1 et Ins2, et ceci uniquement quand on utilise les nanoparticules NPL70. Cet effet est spécifique pour l'expression de ces deux gènes, expression qui ne varie pas significativement après incubation de cellules avec les nanoparticules ou l'anticorps anti-PDX1 seuls (Figure 2). En conséquences, ces résultats démontrent que l'anticorps anti-PDX1 a été délivré dans la cellule et a interagi avec les gènes Ins1 et Ins2. Il est connu que le facteur de transcription Pdx1, en plus de réguler les gènes Ins1 et Ins2, régule également l'expression de son gène par une boucle d'autorégulation ainsi que l'expression d'un autre facteur de transcription spécifique des cellules beta, le facteur Mafa. Il a donc été recherché l'effet de l'inhibition de l'activité de Pdx1 sur l'expression de ces gènes. La figure 3 démontre que 30 l'expression des gènes Pdx1 et Mafa (à 72h) suit, comme attendu, un profil d'expression similaire aux gènes Ins1 et Ins2, ce qui signifie que l'anticorps a été effectivement délivré dans la cellule et agit sur le métabolisme de cette dernière. Les exemples précités montrent d'une manière inattendue que la nanoparticule NPL70 permet la délivrance intracellulaire de l'anticorps anti-PDX1, alors que ce même anticorps soit seul, soit associé à la particule NP+ n'est pas délivré dans la cellule (aucun effet sur les gènes Ins1, Ins2, Pdx1 et Mafa testés). De plus, contrairement à ce qui est généralement observé pour les autres techniques de transfection, la délivrance de l'anticorps anti-PDX1 dans les cellules 5 n'affecte pas leur viabilité (aucune augmentation de la mortalité cellulaire n'a été observée). REVENDICATIONS1. Nanoparticule comprenant (a) un coeur solide et poreux, formé d'un polymère obtenu par réaction entre une maltodextrine et un composé époxyde, des fonctions ammonium quaternaire étant greffées sur ledit polymère pour lui conférer sa charge positive et (b) un phospholipide de charge ionique négative contenu dans ledit coeur, caractérisée en ce que ladite nanoparticule comporte une protéine ou un fragment de protéine adsorbé(e) sur ledit coeur. 2. Nanoparticule selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite protéine est choisie parmi les anticorps, les fragments d'anticorps, les enzymes, les facteurs de transcription, les facteurs de régulation, les cytokines, les protéines de transport, les protéines nucléaires, les protéines mitochondriales et les protéines biologiquement actives. 3. Nanoparticule selon la revendication 2, caractérisée en ce que ledit anticorps est un anticorps de type IgG, plus particulièrement l'anticorps PDX-1. 4. Nanoparticule selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit phospholipide est choisi parmi : le 1, 2-diacylyl-sn-glycéro-3- phosphatidylglycérol, 1, 2-diacylyl-sn-glycero-3-phosphatidylsérine, le 1, 2- dipalmitoyl-sn-glycéro-3-phosphatidylglycérol et le 1, 2-diacylyl-sn-glycéro-3- phosphatidylsérine. 5. Utilisation d'une nanoparticule selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 pour la délivrance in vitro de ladite protéine ou dudit fragment de protéine dans le cytosol d'une cellule, ladite protéine ou ledit fragment de protéine ainsi libéré dans le cytosol interagissant avec le fonctionnement de ladite cellule. 6. Procédé de délivrance in vitro d'une protéine ou d'un fragment de protéine dans le cytosol d'une cellule, caractérisé en ce que - on mélange, éventuellement dans un solvant, une protéine ou un fragment de protéine avec une nanoparticule qui comprend (a) un coeur solide et poreux, formé d'un polymère obtenu par réaction entre une maltodextrine et un composé époxyde, des fonctions ammonium quaternaire étant greffées sur ledit polymère pour lui conférer sa charge positive et (b) un phospholipide de charge ionique négative contenu dans ledit coeur ; et- on met en contact ledit mélange avec une cellule vivante. 7. Procédé de délivrance selon la revendication 6, caractérisé en ce que ledit phospholipide est choisi parmi le 1, 2-diacylyl-sn-glycéro-3-phosphatidylglycérol, le 1, 2-diacylyl-sn-glycero-3-phosphatidylsérine, le 1, 2-dipalmitoyl-sn-glycéro-3- phosphatidylglycérol et le 1, 2-diacylyl-sn-glycéro-3-phosphatidylsérine. 8. Procédé selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que ladite protéine est choisie parmi les anticorps, les fragments d'anticorps, les enzymes, les facteurs de transcription, les facteurs de régulation, les cytokines, les protéines de transport, les protéines nucléaires, les protéines mitochondriales et les protéines biologiquement actives. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que ladite protéine est un anticorps, plus particulièrement un anticorps de type IgG et, plus particulièrement, l'anticorps PDX-1. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 9, caractérisé en ce que ledit solvant est choisi parmi les solvants protiques polaires, en particulier l'eau et les solvants protiques apolaires.