Brevet FR2988479A1 — publié le 20130927

La présente invention concerne le domaine médical en général, et en particulier le domaine de la réanimation. Plus précisément, l'invention concerne un procédé de détermination de la susceptibilité aux infections nosocomiales chez un patient hospitalisé en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique ou SIRS, en particulier chez un patient en état septique, notamment sévère, et de préférence chez un patient en choc septique. Les infections nosocomiales sont un problème de santé publique important. Les patients hospitalisés ont souvent, par nature, des défenses immunitaires diminuées ou altérées, du fait de pathologies portant directement atteinte à leurs compétences immunitaires, ou en raison de leur état général. Ces patients, et en particulier les personnes dénutries ou aux âges extrêmes de la vie (personnes âgées, nourrissons) sont spécialement sensibles aux infections en général, et en particulier à la survenue d'infections nosocomiales. La prévalence des infections nosocomiales est nettement plus élevée dans les unités de réanimation que celle observée dans d'autres secteurs hospitaliers. L'incidence importante des infections nosocomiales dans ce secteur s'explique par la conjonction délétère de plusieurs facteurs de risque endogènes : une exposition du patient à des procédures invasives (ventilation artificielle, sondage urinaire, cathétérisme), la gravité des patients (ainsi que les comorbidités associées) et les thérapeutiques (transfusions multiples, sédation). Néanmoins malgré l'ensemble des mesures d'hygiène et de surveillance (risques exogènes) et la prise en compte de ces facteurs de risque endogènes, l'incidence des infections nosocomiales reste stable ou diminue modestement. Déterminer la susceptibilité d'un patient aux infections nosocomiales est donc essentiel pour pouvoir proposer une prise en charge personnalisée, et ainsi tenter de minimiser les risques additionnels de décès. A la connaissance des inventeurs, le seul marqueur immunologique actuellement connu pour être associé à une susceptibilité accrue aux infections nosocomiales est le marqueur HLA-DR (Human Leukocyte AntigenDR) dont l'expression sur les monocytes (mHLA-DR) est diminuée chez les patients qui développent des infections nosocomiales. Cependant, l'expression de ce marqueur, développée en cytométrie en flux nécessite un équipement particulier (cytomètre en flux), qui est non disponible sur les plateaux de biologie (usage reservé à des laboratoires spécialisés d'hématologie ou d'immunologie) et dont la standardisation d'utilisation n'est pas établie. La mesure de mHLA-DR ne peut donc pas être réalisée en routine. Ainsi, il existe un réel besoin de disposer d'autres marqueurs immunologiques permettant de prévoir, facilement et rapidement, la susceptibilité d'un patient aux infections nosocomiales. En effet, pouvoir identifier les sujets les plus à risque de contracter des infections nosocomiales permettrait de leur réserver des thérapeutiques préventives plus adaptées et ciblées. C'est dans ce contexte que la présente invention se propose de fournir un nouveau biomarqueur prédictif d'un risque accru aux infections nosocomiales chez un patient, et notamment chez un patient hospitalisé en réanimation et/ou ayant subi une agression (chirurgie, brulure, traumatisme...) générant une réponse inflammatoire systémique (SIRS), en particulier chez un patient en état septique, notamment sévère, et de préférence chez un patient en choc septique. L'étude du niveau d'expression de ce biomarqueur permet ainsi de déterminer, facilement et rapidement, la susceptibilité d'un patient aux infections nosocomiales et de prendre les dispositions préventives nécessaires. Selon un premier aspect, la présente invention a donc pour objet un procédé de détermination de la susceptibilité aux infections nosocomiales chez un patient, comprenant les étapes suivantes - obtenir un échantillon biologique dudit patient ou échantillon à tester, - mesurer l'expression de sCD127, - conclure à une susceptibilité accrue aux infections nosocomiales après comparaison de l'expression de sCD127 par rapport à une valeur de référence. Le sCD127 est la forme soluble ou plasmatique du CD127, récepteur de l'IL-7. Le CD127 ou chaîne alpha du récepteur de l'IL-7 est une glycoprotéine de 75 kDa membre de la superfamille des récepteurs aux facteurs de croissance hématopoïétiques. Il est exprimé au niveau membranaire en association avec le CD132 (chaîne yc commune) pour former le récepteur de l'IL-7. Ce récepteur joue un rôle important dans la différenciation, la survie et la prolifération lymphocytaire. Le CD127 est constitué d'une partie extracellulaire de 219 acides aminés (aa), d'une partie transmembranaire de 25 aa et d'une partie intracytoplasmique de 195 aa. L'existence d'une forme soluble/plasmatique, nommée sCD127, générée par épissage alternatif de l'ARNm codant le CD127 a été décrite en 1990 par Goodwin RG et al., Cell, 1990, 23, 941-951, mais sa fonction biologique reste à ce jour mal connue. On entend par « infection nosocomiale », toute infection, principalement bactérienne mais également virale et fongique, qui survient dans un établissement de santé au cours ou au décours d'une prise en charge (diagnostique, thérapeutique, palliative, préventive ou éducative), d'un patient, et qui n'était ni présente ni en incubation au début de la prise en charge. Lorsque l'état infectieux n'est pas connu avec précision au début de la prise en charge, un délai d'au moins 48 heures ou un délai supérieur à la période d'incubation est couramment accepté pour définir une infection nosocomiale. Au sens de l'invention, on entend par « réponse inflammatoire systémique » ou « SIRS », une réponse associant au moins deux des critères suivants : Température > 38 °C ou 90/minute, Fréquence respiratoire > 20 / minute ou paCO2 12.000/mm3 ou Dans ce mode de réalisation, la première valeur de référence peut correspondre au niveau d'expression de sCD127 mesuré dans un échantillon biologique issu d'un patient hospitalisé en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique ou SIRS dont on sait qu'il n'a pas développé d'infection nosocomiale, notamment d'un patient en état septique dont on sait qu'il n'a pas développé d'infection nosocomiale, et de préférence d'un patient en choc septique dont on sait qu'il n'a pas développé d'infection nosocomiale. Dans ce cas, cette mesure de l'expression de sCD127 qui constitue la première valeur de référence est de préférence effectuée en parallèle, c'est-à-dire en même temps que la mesure de l'expression de sCD127 qui est faite dans l'échantillon issu du patient chez qui on cherche à déterminer la susceptibilité aux infections nosocomiales, bien que le prélèvement de l'échantillon de référence ait été effectuée antérieurement à celui de l'échantillon à tester. Cette première valeur de référence peut également correspondre à une valeur moyenne du niveau d'expression de sCD127 qui est mesuré sur un pool d'échantillons issu de patients hospitalisé en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique (SIRS) dont on sait qu'ils n'ont pas développé d'infection nosocomiale, notamment de patients en état septique dont on sait qu'ils n'ont pas développé d'infection nosocomiale, et de préférence de patients en choc septique dont on sait qu'ils n'ont pas développé d'infection nosocomiale. Dans ce cas, cette mesure de l'expression de sCD127 qui constitue la première valeur de référence est de préférence effectuée préalablement à la mesure de l'expression de sCD127 qui est faite dans l'échantillon issu du patient chez qui on cherche à déterminer la susceptibilité aux infections nosocomiales, bien que le prélèvement des échantillons de référence destinés à être « poolés » ait été effectué antérieurement à celui de l'échantillon à tester. Dans ce premier mode de réalisation préféré, et notamment pour déterminer la susceptiblité aux infections nosocomiales d'un patient en choc 5 septique, la mesure de l'expression de sCD127 dans l'échantillon à tester et le cas échéant dans l'échantillon biologique utilisé pour obtenir la première valeur de référence, c'est-à-dire lorsque la première valeur de référence est obtenue à partir d'un échantillon biologique, est réalisée dans les 10 jours ou à 10 jours (310) après le choc septique, de préférence dans les 7 jours ou à 10 7 jours (37) après le choc septique, de manière encore préférée dans les 4 jours ou à 4 jours (34) après le choc septique, et en particulier dans les 3 jours ou à 3 jours (J3) après le choc septique. Selon un deuxième mode de réalisation préféré, le procédé de l'invention permet de déterminer la susceptibilité d'un patient aux infections 15 nosocomiales, c'est-à-dire conclure à un risque accru de développer une infection nosocomiale ou à une suceptibilité accrue aux infections nosocomiales, lorsque l'expression de sCD127 qui est mesurée dans l'échantillon à tester n'est pas significativement abaissée diminuée par rapport à une deuxième valeur de référence. De manière particulièrement 20 préférée, il est conclut à un risque accru de développer une infection nosocomiale si l'expression de sCD127 qui est mesurée dans l'échantillon à tester n'est pas diminuée de plus de 25 %, et en particulier pas diminuée de plus de 20 %, par rapport à cette deuxième valeur de référence. Cette deuxième valeur de référence peut correspondre au niveau 25 d'expression de sCD127 mesuré dans un échantillon biologique issu du même dit patient lors d'un prélèvement antérieur, c'est-à-dire dans un échantillon biologique qui a été prélevé antérieurement par rapport à l'échantillon à tester. Par « antérieurement » ou « antérieur », on entend de manière plus précoce dans le temps ou préalablement au prélèvement de l'échantillon à 30 tester. Dans ce deuxième mode de réalisation préféré, et notamment pour déterminer la susceptiblité aux infections nosocomiales d'un patient en choc septique, la mesure de l'expression de sCD127 dans l'échantillon à tester est réalisée environ ou à 10 jours (310) après le choc septique, de préférence environ ou à 7 jours (J7) après le choc septique, de préférence encore environ ou à 4 jours (J4) après le choc septique. Le prélèvement antérieur peut par exemple être effectué dans les ou à 48h après le choc septique et au moins 24h avant celui de l'échantillon à tester, et de préférence le prélèvement antérieur est effectué dans les ou à 48h après le choc septique et celui de l'échantillon à tester est effectué dans les 48h qui suivent le prélèvement antérieur ou à 48h après le prélèvement antérieur. Ainsi, dans tous les cas, avant la mesure de l'expression de sCD127 proprement dite dans l'échantillon à tester, le procédé de l'invention peut comprendre l'obtention préalable de la valeur de référence, que ce soit la première valeur de référence ou la deuxième valeur de référence, à laquelle le niveau d'expression qui sera détecté dans l'échantillon à tester pourra être comparé afin de conclure à un risque accru ou non de développer des infections nosocomiales chez le patient duquel est issu l'échantillon à tester. C'est donc à ces valeurs de référence, que ces soit la première valeur de référence ou la deuxième valeur de référence, obtenues préalablement ou 20 en même temps, que sera comparée la valeur de l'expression de sCD127 qui est mesurée dans l'échantillon à tester. L'échantillon sur lequel le procédé de l'invention est mis en oeuvre, encore nommé ici échantillon à tester, peut être d'origine animale ou humaine, et de préférence humaine. 25 Par conséquent, l'échantillon à tester peut être de différentes natures. En particulier, cet échantillon est un fluide biologique, par exemple choisi parmi le sang, le sang total (tel que collecté de la voie veineuse, c'est-à-dire contenant les cellules blanches et rouges, les plaquettes et le plasma), le sérum, le plasma et le liquide de lavage broncho-alvéolaire. 30 De préférence, l'échantillon à tester issu dudit patient est un échantillon de plasma ou de sérum. Les échantillons à partir desquels peut être déterminée les valeurs de référence, que ce soit la première valeur de référence ou la deuxième valeur de référence, encore nommés « échantillons de référence », peuvent être de différentes natures et notamment de naturq)iologique tel que mentionné ci- dessus s'agissant de l'échantillon à tester (fluides biologiques). Avantageusement, ces échantillons biologiques sont de même nature que celle de l'échantillon biologique à tester ou tout du moins d'une nature compatible pour constituer une référence quant à la détection et/ou la quantification de l'expression de sCD127. Pour obtenir la première valeur de référence en particulier, ces échantillons sont de préférence issus de personnes ayant les mêmes caractéristiques ou une majorité de caractéristiques communes, notamment du même sexe et/ou d'un âge similaire ou identique et/ou de même origine ethnique, avec celles du sujet ou patient chez qui on souhaite déterminer la susceptibilité aux infections nosocomiales. L'échantillon de référence peut également dans ce cas être constitué par tout échantillon, biologique ou non biologique, qui a été préalablement calibré pour contenir une valeur moyenne de sCD127 qui correspond au niveau qui a été mesuré sur un pool d'échantillons biologiques issus de patients, hospitalisés en réanimation et/ou ayant subi une agression, tell que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique (SIRS) dont on sait qu'ils n'ont pas développé d'infection nosocomiale, notamment de patients en état septique dont on sait qu'ils n'ont pas développé d'infection nosocomiale, et de préférence de patients en choc septique dont on sait qu'ils n'ont pas développé d'infection nosocomiale. Dans ce cas, et selon une variante particulièrement préférée, l'échantillon de référence est issu d'un ou de patients en choc septique dont on sait qu'il(s) n'a(ont) pas développé d'infection nosocomiale. Pour obtenir la deuxième valeur de référence en particulier, l'échantillon 30 de référence est un échantillon biologique issu du même dit patient, c'est-à-dire du patient chez qui on souhaite déterminer la susceptibilité aux infections nosocomiales et dont est issu l'échantillon à tester, mais obtenu à partir d'un prélèvement antérieur, c'est-à-dire d'un échantillon biologique qui a été prélevé antérieurement dans le temps par rapport à l'échantillon à tester. Au sens de la présente invention, le terme « mesurer l'expression » 5 s'entend être une mesure in vitro ou ex vivo. Par ailleurs, ce terme entend désigner la détection et la quantification de sCD127 au niveau protéique. A cet effet, toute méthode de détection et/ou de quantification bien connue de l'homme du métier peut être utilisée pour la mise en oeuvre de l'invention, que ce soit en rapport avec la détermination de la présence et/ou la mesure 10 de l'expression de la protéine sCD127. A titre d'exemple de méthode de mesure de l'expression de la protéine sCD127, on peut notamment citer celle décrite par Crawley et al, Journal of Immunology, 2010, 184, 4679-4687. En particulier, la mesure du niveau d'expression de sCD127 est réalisée à l'aide d'outils ou de réactifs qui sont spécifiques de sCD127 et qui 15 permettent, directement ou indirectement, de déterminer sa présence et/ou de quantifier son niveau d'expression. Parmi les outils ou réactifs capable(s) de détecter et/ou quantifier sCD127, on peut notamment citer des anticorps spécifiques, polyclonaux ou monoclonaux, de préférence monoclonaux, ou des fragments ou dérivés de 20 ceux-ci, par exemple des anticorps « single Cain » Sv. Parmi ces outils ou réactifs, on préféra notamment ceux qui sont spécifiques de la forme soluble du récepteur de VIL-7, c'est-à-dire qui ne reconnaissent pas CD127 qui est la forme cellulaire/membranaire non soluble de ce récepteur. On peut néanmoins utiliser des outils ou réactifs qui 25 reconnaissent à la fois la forme soluble ou sCD127 et la forme cellulaire du récepteur de l'IL-7 ou CD127, tant qu'il est possible de distinguer ces deux formes par un autre moyen, comme par exemple la nature de l'échantillon analysé (par exemple, plasma ou sérum versus échantillon biologique contenant des cellules ou sang total. 30 Lorsque la détection et/ou la quantification de sCD127est réalisée au niveau protéique, les techniques standards telles que le Western-Biot, ELISA, RIA, IRMA, FIA, CLIA, ECL, cytométrie de flux ou immunocytologie peuvent être utilisées. De manière particulièrement avantageuse, l'expression de sCD127 est mesurée au niveau protéique, et de préférence à l'aide d'une technique 5 ELISA. Selon l'invention, et en particulier dans ce mode de réalisation particulier, le niveau d'expression de sCD127 est de préférence mesuré à l'aide d'anticorps anti-sCD127, monoclonaux ou polyclonaux, et notamment d'anticorps monoclonaux anti-sCD127. A titre d'exemple, on peut notamment 10 citer les anticorps monoclonaux anti-CD127 humain R34.34 commercialisés par la société Beckman Coulter® ou les anticorps polyclonaux anti-CD127 commercialisés par la société R&D Systems®. Toutes les indications et préférences mentionnées ci-dessus s'agissant de la mesure de l'expression de sCD127 s'appliquent indifféremment que ce 15 soit pour la mesure de cette expression dans l'échantillon à tester et dans l'échantillon de référence. Selon un deuxième aspect, la présente invention a également pour objet l'utilisation de la mesure, in vitro ou ex vivo, de l'expression de sCD127 pour déterminer la susceptibilité d'un patient aux infections nosocomiales. 20 De manière préférée, cette utilisation est particulièrement avantageuse pour déterminer la susceptibilité aux infections nosocomiales d'un patient hospitalisé en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique ou SIRS, en particulier d'un patient en état septique, notamment 25 sévère, et de préférence d'un patient en choc septique. De préférence, l'utilisation selon l'invention permet de déterminer la susceptibilité aux infections nosocomiales d'un patient en choc septique. Par ailleurs, dans le cadre de l'utilisation selon l'invention, l'expression de sCD127 est de préférence mesurée au niveau protéique, et en particulier 30 à l'aide d'une technique ELISA. En particulier, l'expression de sCD127 peut être mesurée à l'aide d'anticorps anti-sCD127, monoclonaux ou polyclonaux, et de préférence d'anticorps monoclonaux anti-sCD127. Les anticorps cités ci-dessus peuvent également être utilisés pour ce deuxième aspect de l'invention. Plus largement, tous les modes de réalisation préférés qui sont mentionnés ci-dessus concernant le procédé et leurs combinaisons 5 constituent également des modes de réalisation préférés s'agissant de l'utilisation. Selon un troisième aspect, la présente invention a aussi pour objet un kit pour la mesure, de préférence in vitro ou ex vivo, de l'expression de sCD127 dans un échantillon biologique, comprenant : 10 - des outils ou réactifs spécifiques permettant de mesurer l'expression de sCD127 dans ledit échantillon biologique, et - éventuellement au moins un échantillon contrôle. De préférence, les outils ou réactifs spécifiques permettant de mesurer l'expression de sCD127 dans un échantillon biologique qui sont présents dans 15 le kit de l'invention permettent de détecter et/ou de quantifier l'expression de sCD127, que ce soit au niveau protéique ou au niveau de l'activité de sCD127, et de préférence au niveau protéique. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le kit de l'invention contient des anticorps anti-sCD127, monoclonaux ou polyclonaux, 20 et en particulier des anticorps monoclonaux L'échantillon contrôle peut être un contrôle positif ou un contrôle négatif. Parmi les exemples d'échantillon contrôle positif, on peut notamment citer un échantillon issu d'un patient dont on sait qu'il a développé une infection nosocomiale, ou bien un contrôle négatif, comme par exemple un 25 échantillon issu d'un patient dont on sait qu'il n'a pas développé d'infection nosocomiale. Pour le contrôle positif, il peut également s'agir d'un échantillon calibré pour contenir la quantité de sCD127 qui correspond à la quantité moyenne mesurée dans un pool d'échantillons de patients dont on sait qu'ils ont développé une infection nosocomiale. De même, pour le contrôle négatif, 30 il peut également s'agir d'un échantillon calibré pour contenir la quantité de sCD127 qui correspond à la quantité moyenne mesurée dans un pool d'échantillons de patients dont on sait qu'ils n'ont pas développé d'infection nosocomiale. Que ce soit pour le contrôle positif ou négatif, et en particulier tel(s) que décrit(s) dans les deux paragraphes qui précèdent, l'échantillon contrôle est de préférence issu d'un ou de plusieurs patient(s) hospitalisé(s) en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique (SIRS), notamment d'un ou de plusieurs patient(s) en état septique, et de préférence d'un ou de plusieurs patient(s) en choc septique. Par exemple, le kit peut contenir un échantillon contrôle négatif issu d'un ou de plusieurs patient(s) hospitalisé(s) en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique (SIRS), dont on sait qu'il(s) n'a(ont) pas développé d'infection nosocomiale. De préférence, le kit contient un échantillon contrôle négatif issu d'un ou de plusieurs patient(s) en choc septique dont on sait qu'il(s) n'a(ont) pas développé d'infection nosocomiale. Outre les outils ou réactifs spécifiques permettant de mesurer l'expression de sCD127, le kit contient de préférence un échantillon contrôle négatif, et notamment tel que défini ci-dessus. De manière encore préférée, le kit contient à la fois un contrôle positif et un contrôle négatif, et notamment choisis chacun ceux définis ci-dessus. L'invention couvre également l'utilisation d'un kit selon l'invention pour réaliser le procédé de l'invention, et en particulier pour déterminer la susceptibilité d'un patient aux infections nosocomiales, de préférence chez un patient hospitalisé en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique (SIRS), en particulier chez un patient en état septique, notamment sévère, et de préférence un patient en choc septique. De préférence, l'utilisation du kit selon l'invention permet de déterminer la susceptibilité aux infections nosocomiales chez un patient en choc septique. Tous les modes de réalisation préférés qui sont mentionnés ci-dessus concernant le procédé et leurs combinaisons constituent également des modes de réalisation préférés s'agissant du kit selon l'invention et de son utilisation. Diverses autres caractéristiques ressortent de la description faite ci-dessous en référence aux figures annexées qui montrent, à titre d'exemples non limitatifs, des formes de réalisation de l'objet de l'invention et dans lesquelles : - la figure 1 représente la concentration d'IL-7 plasmatique chez 35 patients en choc septique aux jours 1-2 (1-2) et 3-4 (3-4) et 30 sujets sains « HV » (A) et la comparaison de ces résultats selon les groupes de patients « NS » ou « S » (figure 1B) et les groupes de patients « NI » ou « No NI » (figure 1C). * p METHODES Mesure de la concentration en IL-7 plasmatique La concentration d'IL-7 plasmatique a été mesurée grâce à un kit utilisant la technique LUMINEXTM commercialisé par la société Bio-Rad (Bio- Plex Pro Cytokine, Chemokine and Growth Factor Assays : BioPlex Pro Reagent kit, Bio-Rad #171-304070 et SinglePlex IL-7) en suivant les instructions du fournisseur. Mesure de l'expression cellulaire du récepteur de 17L-7 (CD127) Brièvement, 50p1 de sang total est incubé en présence de 5p1 d'Ac anti10 CD4 couplé Phycoérythine-TexasRed (ECD) (BeckmanCoulter #6604727) ou de 5p1 d'Ac anti-CD8 couplé ECD (BeckmanCoulter #737659) ainsi que 10p1 d'Ac anti-CD127 couplé à la phycoérythrine (PE) (BeckmanCoulter #IM1980U) pendant 15 minutes à température ambiante et à l'obscurité. Les globules rouges sont ensuite lysés grâce à une lyse hypotonique et les 15 cellules fixées grâce à une lyse automatique réalisée sur un automate TQPrep (BeckmanCoulter). L'expression membranaire du CD127 à la surface des lymphocytes T CD4+ ou CD8+ est enfin mesurée par cytométrie en flux. Dosage de la forme soluble du récepteur de l'IL-7 (sCD127) par ELISA 20 « Coating » Un tampon de « coating » a été préparé pour contenir 0,8 g Na2CO3, 1,4 g NaHCO3, 0,1 g NaN3 dans 500 ml d'eau (pH 9.6). 100 pL d'anticorps (Ac) de capture (anticorps monoclonal de souris anti-CD127 humain R34.34, Beckman, Coulter®) dilués dans du tampon de 25 « coating » (ont été déposés par puits dans une plaque ([Ac] = 8 pg/mL). La plaque a ensuite été recouverte pour être incubée à 4°C pendant une nuit. Le contenu des puits a ensuite été aspiré et les puits ont été lavés 3 fois avec au moins 3001.aL de tampon de lavage PBS-Tween2o 0,05%. Tout le liquide a soigneusement été enlevé à chaque lavage. Après le dernier lavage, 30 la plaque a été retournée sur du papier absorbant afin d'éliminer toutes les traces de tampon. « Blocking » La fixation non spécifique a été bloquée à l'aide de 150 pL de tampon de blocage par puits (10% sérum de bovin foetal (FBS)/PBS-Tween200,05°/0), puis la plaque a été incubée pendant 1h à 37°C. De nouveau, le contenu des puits a été aspiré et les puits ont été lavés 3 fois avec au moins 300pL de tampon de lavage PBS-Tween20 0,05%. Tout le liquide a soigneusement été enlevé à chaque lavage. Après le dernier lavage, la plaque a été retournée sur du papier absorbant afin d'éliminer toutes les traces de tampon. Échantillons et contrôles Une gamme étalon a été réalisée avec recombinant human IL-7Ra / CD127 Fc chimera (R&D Systems - Catalog Number: 306-IR) dilué dans du tampon de dilution PBS 5 % FCS, comme décrit dans le tableau 1 ci-dessous et conformément à C. Janot-Sardet et al. Journal of Immunological Methods, 2010, 28, 115-123. Tableau 1 rh IL-7Ra / CD127 Fc chimera [c] (ng/mL) 500 250 125 62.5 31.25 15.7 7.85 0 Diluant (pL) 0 100 100 100 100 100 100 100 Solution à 100 100 Dilutions successives 0 500 ng/mL (pL) 100 pL d'échantillon ou de contrôle (solution de CD127 Fc chimera reconstitué extemporanément et aliquoté à des concentrations de 6Ong/ml et 1Ong/m1) ont été ajoutés dans chaque puits, puis la plaque a été incubée pendant 1h à 37°C. De nouveau, le contenu des puits a été aspiré et les puits ont été lavés 3 fois avec au moins 300pL de tampon de lavage PBS-Tween20 0,05%. Tout le liquide a soigneusement été enlevé à chaque lavage. Après le dernier lavage, 1a plaque a été retournée sur du papier absorbant afin d'éliminer toutes les traces de tampon. Anticorps de détection 100 pL d'anticorps de détection (anticorps de chèvre polyclonal antiCD127 biotinylé reconstitués avec 1 mL de TBS-BSA 10/0, R&D Systems®) dilués dans du PBS/5 %FBS ont été ajoutés dans chaque puits ([Ac] = 200 ng/mL), puis la plaque a été incubée pendant 1h à 37°C. A nouveau, le contenu des puits a été aspiré et les puits ont été lavés 3 fois avec au moins 300pL de tampon de lavage PBS-Tween20 0,050/0. Tout le liquide a soigneusement été enlevé à chaque lavage. Après le dernier lavage, la plaque a été retournée sur du papier absorbant afin d'éliminer toutes les traces de tampon. Révélation 100 pL de Streptavidin-HRP ont été ajoutés dans chaque puits ([Streptavidin-HRP] = 8 pL/mL). La plaque a ensuite été recouverte pour être incubée pendant 30 min à température ambiante. A nouveau, le contenu des puits a été aspiré et les puits ont été lavés 3 fois avec au moins 300pL de tampon de lavage PBS-Tween20 0,05%. Tout le liquide a soigneusement été enlevé à chaque lavage. Après le dernier lavage, la plaque a été retournée sur du papier absorbant afin d'éliminer toutes les traces de tampon. A cette étape de lavage, les puits ont été imbibés avec le tampon de lavage 1 à 2 min avant aspiration. Les deux flacons de la solution de substrat calorimétrique TMB (3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, bioMérieux #XX7LF1UC) ont été mélangés volume à volume. 100 pL de cette solution de substrat ont été déposés dans chaque puits, La plaque a ensuite été recouverte pour être incubée pendant 30 min à température ambiante. Enfin, la lecture de la plaque a été effectuée par mesure de l'absorbance à 450 nm. Mesure de l'expression monocytaire de HLA-DR La mesure a été réalisée par la technique de cytométrie en flux, à l'aide 30 d'un marquage direct en sang total prélevé sur EDTA. Les deux anticorps suivants ont été incubés avec 50 1.1.L de sang total (30 minutes à température ambiante et à l'obscurité) 2 9 884 79 17 - 5 piL d'anticorps anti-CD14, couplés fluoresceine (Beckman Coulter Immunotech, - Réf. : IM0645), permettant d'identifier les monocytes parmi les leucocytes) -10 juL d'anticorps anti-HLA-DR, couplés phycoérythrine (Bedon 5 Dickinson - Réf. : 347401), permettant de quantifier l'expression de HLA-DR à la surface des cellules. Les globules rouges ont ensuite été éliminés : lyse par ajout de 1 ml de solution de lyse (commercialisée par la société Becton Dickinson sous la référence 349202) diluée (1/10) (15 minutes à température ambiante et à 10 l'obscurité). Les cellules ont ensuite été analysées sur un cytométre de flux (FC500 Beckman Coulter). Les résultats sont exprimés en % de cellules positives, le seuil de positivité étant défini grâce à un contrôle isotypique (Mouse IgG2a PE Bedon 15 Dickinson - Réf. : 349053). RÉSULTATS Des échantillons de plasma ont été prélevés sur 35 patients en choc septique aux jours 1-2 (31-2) et 3-4 (33-4) après choc septique, puis ont été stockés (cohorte rétrospective). Différents paramètres ou marqueurs ont été 20 mesurés tels que les concentrations d'IL-7 et de sCD127 plasmatiques, et l'expression de CD127 sur les cellules T CD4+, et l'expression de HLA-DR sur les monocytes. A 28 jours après admission en réanimation pour choc septique, 13 patients n'ont pas survécu (« NS ») soit 37 % alors que 22 patients ont survécu (« S ») sur les 35 patients. Par ailleurs, 6 patients ont 25 contracté une infection nosocomiale (« NI ») soit 17 %, alors que 29 patients sont restés exempt de toute épisode nosocomiale (« No NI »). Les mêmes mesures ont également été effectuées sur 30 sujets sains volontaires (HV). Les résultats obtenus ont été comparés à l'aide d'un test U Mann 30 Whitney au sein de ces différentes populations de sujets ou patients et sont regroupés sur les figures 1 à 4 annexées. Ces résultats montrent que la concentration d'IL-7 plasmatique est significativement diminuée (à J1-2, mais ce n'est pas significatif à 33-4 chez les patients qui développent une infection secondaire par rapport aux patients qui n'ont rencontré aucun épisode nosocomial (figure 1C), alors qu'elle reste inchangée entre les patients survivants « S » ou non-survivants « NS ». De plus, l'expression cellulaire du récepteur de l'IL-7 (CD127) est conservée après choc septique (figure 2A et 2B), et sans aucune différence entre les patients survivants « S » ou non-survivants « NS » ou les patients qui ont développé une infections nosocomiale « NI » ou pas « No NI » (résultats non représentés). La légère augmentation de la concentration plasmatique de la forme soluble du récepteur de l'IL-7 ou sCD127 observée au début du choc septique n'est pas statistiquement significative et revient à des valeurs « normales » avec le temps (figure 3A). En revanche, alors que la concentration plasmatique de sCD127 reste inchangée entre les patients survivants « S » ou non-survivants « NS » (figure 3B), on observe une augmentation marquée de la concentration plasmatique de sCD127 chez les patients « NI » qui ont présenté une infection nosocomiale par rapport aux patients « No NI » qui n'ont pas contracté d'infection nosocomiale (figure 3C). Par ailleurs, on observe également que la concentration plasmatique du sCD127 n'évolue pas dans le temps (entre 31-2 et 33-4) chez les patients « NI » qui ont présenté une infection nosocomiale, contrairement aux patients « No NI » qui n'ont pas contracté d'infection nosocomiale (figure 3C). A titre de comparaison, l'étude de l'expression du marqueur de l'art antérieur HLA-DR sur la même cohorte de patients n'a pas permis de mettre en évidence la diminution de l'expression de ce marqueur entre les patients « NI » qui ont présenté une infection nosocomiale et les patients « No NI » qui n'ont pas contracté d'infection nosocomiale (figure 4), contrairement à ce qui est clairement établi dans l'art antérieur. Cette différence, probablement liée à la taille de la cohorte présentement étudiée qui est plus petite par rapport à celle des cohortes analysées dans les études de l'art antérieur, permet de mettre en évidence la pertinence du marqueur sCD127 par rapport à HLA-DR. En effet, malgré la taille de la cohorte qui a été étudiée ici, les résultats montrent que l'étude de l'expression de sCD127 selon l'invention est informative quant à la susceptibilité des patients aux infections nosocomiales. En conséquence, l'ensemble de ces résultats démontrent que la mesure de l'expression de sCD127 est un marqueur immunologique utile pour déterminer la susceptibilité d'un patient aux infections nosocomiales, et en particulier des patients hospitalisés en réanimation et/ou ayant subi une agression (chirurgie, brulure, traumatisme...) générant une réponse inflammatoire systémique (SIRS), et en particulier des patients en état septique, notamment sévère, et de préférence des patients en choc septique. L'invention n'est pas limitée aux exemples décrits et représentés car diverses modifications peuvent y être apportées sans sortir de son cadre. REVENDICATIONS1. Procédé de détermination de la susceptibilité aux infections nosocomiales chez un patient, comprenant les étapes suivantes : - obtenir un échantillon biologique dudit patient ou échantillon à tester, - mesurer l'expression de sCD127, - conclure à une susceptibilité accrue aux infections nosocomiales après comparaison de l'expression de sCD127 par rapport à une valeur de référence. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'échantillon biologique est issu d'un patient hospitalisé en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique ou SIRS, en particulier issu d'un patient en état septique, notamment sévère. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'échantillon biologique est issu d'un patient en choc septique. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il est conclut à une susceptibilité accrue aux infections nosocomiales lorsqu'une surexpression de sCD127 est mise en évidence dans l'échantillon à tester par rapport à une première valeur de référence. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que la première valeur de référence correspond au niveau d'expression de sCD127 mesuré dans un échantillon biologique issu d'un patient hospitalisé en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique ou SIRS dont on sait qu'il n'a pas développé d'infection nosocomiale, notamment d'un patient en état septique dont on sait qu'il n'a pas développé d'infection nosocomiale, ou bien correspond à une valeur moyenne du niveau d'expression de sCD127 qui est mesuré sur un pool d'échantillons issu de tels patients. 6. Procédé selon les revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que la 30 première valeur de référence correspond au niveau d'expression de sCD127 mesuré dans un échantillon biologique issu d'un patient en choc septique dont on sait qu'il n'a pas développé d'infection nosocomiale, ou bien correspond à une valeur moyenne du niveau d'expression de sCD127 qui est mesuré sur un pool d'échantillons issu de tels patients. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisé en ce que la mesure de l'expression de sCD127 dans l'échantillon à tester et 5 le cas échéant dans l'échantillon biologique utilisé pour obtenir la première valeur de référence est réalisée dans les 10 jours ou à 10 jours (310) après le choc septique, de préférence dans les 7 jours ou à 7 jours (37) après le choc septique, de manière encore préférée dans les 4 jours ou à 4 jours (34) après le choc septique, et en particulier dans les 3 jours ou à 3 jours (33) après le 10 choc septique. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il est conclut à une susceptibilité accrue aux infections nosocomiales lorsque l'expression de sCD127 qui est mesurée dans l'échantillon à tester n'est pas significativement diminuée par rapport à une deuxième valeur de 15 référence, de préférence lorsque l'expression de sCD127 qui est mesurée dans l'échantillon à tester n'est pas diminuée de plus de 25 0/0, et de préférence pas diminuée de plus de 20 0/0, par rapport à cette deuxième valeur de référence. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que la deuxième 20 valeur de référence correspond au niveau d'expression de sCD127 mesuré dans un échantillon biologique issu du même dit patient lors d'un prélèvement antérieur, c'est-à-dire dans un échantillon biologique qui a été prélevé antérieurement par rapport à l'échantillon à tester. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3, et 8 ou 9, 25 caractérisé en ce que la mesure de l'expression de sCD127 dans l'échantillon à tester est réalisée à environ ou 10 jours (310) après le choc septique, de préférence à environ ou 7 jours (J7) après le choc septique, de préférence encore à environ ou 4 jours (34) après le choc septique. 11.. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que le 30 prélèvement antérieur est effectué dans les ou à 48h après le choc septique et au moins 24h avant celui de l'échantillon à tester.FR 12 52641 Réponse à notifications d'irrégularités et avant décision de rejet du 26/06/12 22 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 et 11, caractérisé en ce que le prélèvement antérieur est effectué dans les ou à 48h après le choc septique et celui de l'échantillon à tester est effectué dans les 48h qui suivent le prélèvement antérieur ou à 48h après le prélèvement antérieur. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'échantillon à tester issu dudit patient est un échantillon de plasma ou de sérum. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, 10 caractérisé en ce que l'expression de sCD127 est mesurée au niveau protéique, de préférence à l'aide d'une technique ELISA. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'expression de sCD127 est mesurée à l'aide d'anticorps anti-sCD127, eet notamment d'anticorps monoclonaux anti-sCD127. 15 16. Utilisation de la mesure, in vitro ou ex vivo, de l'expression de sCD127 pour déterminer la susceptibilité d'un patient aux infections nosocomiales. 17. Utilisation selon la revendication 16, caractérisée en ce que ledit patient est un patient hospitalisé en réanimation et/ou ayant subi une 20 agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique (SIRS), en particulier d'un patient en état septique, notamment sévère. 18. Utilisation selon la revendication 17, caractérisée en ce que ledit patient est un patient en choc septique. 25 19. Utilisation selon la revendication 17 ou 18, caractérisée en ce que l'expression de sCD127 est mesurée au niveau protéique, de préférence à l'aide d'une technique ELISA. 20. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 16 à 19, caractérisé en ce que l'expression de sCD127 est mesurée à l'aide d'anticorps 30 anti-sCD127, de préférence d'anticorps monoclonaux anti-sCD127. 21. Kit pour la mesure, in vitro ou ex vivo, de l'expression de sCD127 dans un échantillon biologique, comprenant :FR 12 52641 , Réponse à notifications d'irrégularités et avant décision de rejet du 26/06/12 23 - des outils ou réactifs spécifiques permettant de mesurer l'expression de sCD127 dans ledit échantillon biologique, et - éventuellement au moins un échantillon contrôle. 22. Kit selon la revendication 21, caractérisé en ce que lesdits outils ou réactifs spécifiques permettent de détecter et/ou de quantifier l'expression de sCD127, et de préférence au niveau protéique. 23. Kit selon la revendication 21 ou 22, caractérisé en ce qu'il contient un échantillon contrôle négatif issu d'un ou de plusieurs patient(s) hospitalisé(s) en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique (SIRS), dont on sait qu'il(s) n'a(ont) pas développé d'infection nosocomiale, de préférence d'un ou de plusieurs patient(s) en choc septique. 24. Utilisation d'un kit tel que défini à l'une quelconque des revendications 21 à 23 pour déterminer la susceptibilité d'un patient aux infections nosocomiales, ledit patient étant un patient hospitalisé en réanimation et/ou ayant subi une agression, telle que chirurgie, brulure, traumatisme..., générant une réponse inflammatoire systémique (SIRS). 25. Utilisation d'un kit selon la revendication 24 pour déterminer la susceptibilité aux infections nosocomiales chez un patient en choc septique.