Brevet FR2990856A1 — publié le 20131129

UTILISATION D'UN PRINCIPE ACTIF ISSU DE CELOSIA CRISTATA POUR AGIR SUR LA DIFFERENCIATION DES CELLULES SOUCHES ADIPOCYTAIRES La présente invention se rapporte à l'utilisation sur la peau d'un principe actif particulier issu de Celosia cristata, plante de la famille des Amaranthacae, pour agir sur la différenciation des cellules souches du tissu adipeux, ainsi que les compositions incluant un tel principe actif. Le tissu adipeux ou hypoderme est rattaché à la partie inférieure du derme par des expansions de fibres de collagène. Son épaisseur est variable, mince sur le front, il se développe largement sur des zones particulières. La localisation anatomique du tissu adipeux est un véritable caractère sexuel secondaire. Chez l'homme, il est prépondérant au-dessus de la ceinture, au niveau de l'abdomen et des épaules, alors que chez la femme, il se concentre au-dessous de la ceinture, dans la partie basse de l'abdomen et au niveau des hanches, fesses et cuisses. Cette localisation liée au sexe est fortement soulignée en cas d'obésité dont on distingue deux formes, la forme androïde et la forme gynoïde. L'hypoderme est constitué d'une couche de tissu adipeux blanc organisé en 15 lobules rattachés à la partie inférieure du derme par des travées de fibres de collagène et de fibres élastiques. Le tissu adipeux présente une grande hétérogénéité cellulaire. Outre les adipocytes matures qui sont la composante cellulaire majeure, il renferme une fraction stroma-vasculaire (FSV) constituée de cellules endothéliales, de cellules 20 immunitaires et de cellules souches. L'adipocyte représente le type cellulaire majoritaire. C'est la cellule métaboliquement active du tissu adipeux : elle stocke l'énergie sous forme de triglycérides (processus de lipogenèse) et la libère sous forme d'acides gras libres (processus de lipolyse). Les triglycérides sont stockés dans une vacuole lipidique unique entourée de protéines spécifiques (les périlipines), qui peut représenter 95% du volume cytoplasmique. Le diamètre d'un adipocyte gorgé de lipides peut varier de 15 à 150pm voire plus chez des individus obèses. On parle d'hypertrophie adipocytaire. Lorsque la capacité de stockage des adipocytes est atteinte, on assiste ensuite à une augmentation du nombre d'adipocytes, c'est l'hyperplasie adipocytaire. L'adipocyte étant une cellule mature incapable de proliférer, l'augmentation du nombre d'adipocytes dans le tissu adipeux résulte de la différenciation de précurseurs locaux. Le tissu adipeux contient en effet une population de cellules souches dans la fraction cellulaire Cb34+/C1)31-, potentiellement capables de participer au renouvellement et à la croissance des adipocytes. Ces cellules ont une localisation périvasculaire et stromale au sein du tissu adipeux humain, et leur prolifération augmente sous l'influence des sécrétions des adipocytes matures et des cellules endothéliales, ainsi que d'un environnement hypotoxique. Comme le développement excessif du tissu adipeux humain résulte conjointement de l'hypertrophie des adipocytes existants et l'hyperplastie due à la formation de nouveaux adipocytes issu de ces cellules souches, si un déséquilibre s'installe dans l'organisme, le volume et le nombre des adipocytes peut augmenter. On assiste alors au développement excessif de la masse adipeuse qui peut se traduire par des modifications de l'aspect de la peau, voire évoluer vers une surcharge pondérale. En particulier, les lobules graisseux des adipocytes se développant, ils poussent les tissus supérieurs vers la surface cutanée causant l'aspect bosselé de la peau dite « peau d'orange ». L'objectif de la présente invention est de proposer une solution cosmétique efficace amincissante et anti-cellulite, capable de limiter la différenciation des 5 cellules souches en adipocytes matures. Pour y répondre, l'invention propose un hydrolysat de Celosia cristata pour son application comme principe actif dans une composition à application cutanée pour limiter la différenciation des cellules souches du tissu adipeux en adipocytes matures. 10 L'invention vise également les compositions cosmétiques à application cutanée comprenant un tel principe actif. La présente invention est maintenant décrite en détail, en regard notamment d'un exemple particulier de principe actif et des figures la à ld annexées qui représentent les résultats de l'étude de l'efficacité du principe actif menée sur 15 des cellules souches du tissu adipeux Cb34+/C1)31- : - Figure la : témoin non traité - Figure lb : traitement TNF-a 0,25nM - Figure lc : principe actif de l'exemple 1 à 0,25% - Figure ld : principe actif de l'exemple 1 à 0,5% 20 L'invention vise donc l'utilisation d'un hydrolysat de Celosia cristata comme principe actif dans une composition à application topique sur la peau, le principe actif et/ou la composition étant destinés à limiter la différenciation des cellules souches du tissu adipeux en adipocytes matures. En limitant l'hyperplasie adipocytaire, le principe actif selon l'invention permet 25 de limiter le développement excessif de la masse adipeuse pour un effet amincissant et anti-cellulite. Le principe actif selon l'invention ou la composition l'incluant peuvent donc être utilisés pour un effet amincissant et/ou anti-cellulite. Le principe actif selon l'invention est un hydrolysat de Celosia cristata, préférentiellement un hydrolysat enzymatique. Le principe actif peut se présenter sous forme de liquide limpide, notamment une solution hydroglycérique de couleur ambrée. Il peut être défini par au moins une des caractéristiques exposées ci-après, préférentiellement toutes. Matières sèches : Le taux de matières sèches d'un principe actif selon l'invention (mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant) peut être compris entre 400 et 850 g/I, préférentiellement entre 500 et 720 g/I. Mesure du pH : Le pH (mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante) peut être compris entre 2,0 et 4,0 préférentiellement entre 2,5 et 3,5. Carbohydrates : Le dosage de la teneur en sucres totaux peut être réalisé par la méthode de DUBOIS (DUBOIS M. et al., (1956), Analytical chemistry, 28, n°3 p. 350-356). En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. Le taux de sucres totaux d'un principe actif selon l'invention est préférentiellement compris entre 8 et 24g/I, encore plus préférentiellement entre 10 et 20 g/I. Le principe actif selon l'invention tel que décrit précédemment peut être obtenu 25 préférentiellement par un procédé comprenant une hydrolyse enzymatique de Celosia cristata. Un procédé d'obtention du principe actif selon l'invention particulièrement adapté, comprend la succession des étapes suivantes : - solubilisation d'une poudre de Celosia cristata, à raison d'au moins 50 g/I, préférentiellement les sommités fleuries, - hydrolyse enzymatique en présence d'au moins une carbohydrase, - séparation des phases soluble et insoluble, - conservation de la phase soluble, - inactivation de l'activité enzymatique dans cette phase soluble par exemple par traitement thermique, - concentration de la fraction active, - ajout de glycérine, - filtration(s), préférentiellement filtration et filtration stérilisante. Selon un autre aspect, l'invention vise également les compositions, en particulier les compositions cosmétiques, incluant un hydrolysat de Celosia cristata sous forme de solution hydroglycérique, dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huiledans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Il peut s'agir de compositions comprenant entre 0,1 et 3% du principe actif issu selon la présente invention. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement 25 acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur tels que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi : - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba ; - les élastomères de silicone ; - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ; - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ; - les épaississants et/ou gélifiants ; - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ; - les filtres organiques ; - les filtres inorganiques ; - les colorants, les conservateurs, les charges ; - les tenseurs ; - les séquestrants ; - les parfums ; -et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council). Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les 25 propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'ad jonction envisagée. Ces compositions sont notamment destinées à agir comme amincissant et/ou anticellulite en limitant le processus de différenciation adipocytaire des cellules souches du tissu adipeux. L'invention peut être illustrée par un exemple non limitatif de principe actif et 5 des exemples de compositions, ainsi que par un test démontrant l'efficacité du principe actif sur la différenciation des cellules souches. Exemple 1 : principe actif selon l'invention Un exemple de principe actif adapté selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : 10 - solubilisation d'une poudre de sommités fleuries de Celosia cristata à raison de 50 g/I dans l'eau, - hydrolyse enzymatique en présence d'au moins une carbohydrase, - séparation des phases soluble et insoluble, - conservation de la phase soluble, 15 - inactivation de l'activité enzymatique dans cette phase soluble par traitement thermique à 90°C, et - nanofiltration pour concentration à environ 80 g/I, - ajout de 50% de glycérine, - filtration et filtration stérilisante. 20 Le principe actif obtenu présente les caractéristiques suivantes : - aspect : liquide limpide - couleur : ambré - odeur : caractéristique - teneur en matières sèches : 613g/I 25 - teneur en sucres totaux : 16,2g/I - pH : 2,9 Exemple 2 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un baume minceur A. Eau Q5P 100% Propylène glycol Glycérol 7% el. % Satiaxane CX930 (begussa) 0,3% B. Pelemol 2014 (Cornelius) 3% DC 200 (Dow Corning) 3% Finester EH25 (Cornelius) 2% Paraff in Wax (Rita) 1% A 72 (Cornelius) 1% DUB CA (Stéarinerie Dubois) el. % Cire de Lanol (Seppic) 2% C. Conservateur 1% Principe actif de l'exemple 1 3% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion épaisse présente un pH de 4,5. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes - Mélanger A, chauffer à 60°C et bien disperser le gel sous agitation mécanique jusqu'à complète dissolution du satiaxane. - Chauffer A et B à 80°C, sous agitation mécanique. - Emulsionner B dans A sous émulseur. - A 50°C, ajouter C dans l'ordre. - Homogénéiser jusqu'à ce que le baume soit uniforme. Exemple 3: Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un lait amincissant satiné A. Eau Glycérol B. behymuls PGPH Pelemol BB DC 345 (Cognis) (Cornelius) (Dow Corning) 9 DUB Zenoat (Stéarinerie Dubois) 10% DUB ININ (Stéarinerie Dubois) 5% Pelemol 2014 (Cornelius) 2% Arlamol E (Noveon) 1% DUB 1632 (Stéarinerie Dubois) 5% Ritapro 165 (RITA) 3% C. MGEVSPH (FACI) 1% Patlac ZnLP (RITA) 0,8% Conservateur - 1% Principe actif de l'exemple 1 3% Ethanol - 6% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion laiteuse présente un pH de 5,4. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes - Mélanger A, mélanger B. - Chauffer A et B sous agitation mécanique à 80°C. - Emulsionner B dans A sous agitation. - A 40°C, additionner C dans l'ordre, bien homogénéiser entre chaque ingrédient. - Continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que le mélange soit uniforme et laisser refroidir sous agitation jusqu'à 30°C. Exemple 4 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème A. Eau QSP 100% Glycérol 3% Carbopol Ultrez 10 (Noveon) 0,4% B. Ritabate 20 (RITA) 2% Montane 481 (Seppic) 2% DUB PTCC (Stéarinerie Dubois) 4% C. Conservateur 1% Principe actif de l'exemple 1 3% D. NaOH qsp pH 5 Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel émulsionné présente un pH de 5. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : Mélanger A, bien disperser le gel sous agitation mécanique. Mélanger B. Chauffer A et B à 80°. - Emulsionner B dans A sous émulseur. A 40°C, ajouter C dans l'ordre, homogénéiser. Ajuster le pH avec I), sous agitation mécanique. Continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que le gel émulsionné soit uniforme. Laisser sous agitation jusqu'à refroidissement, 30°C Evaluation de l'effet du principe actif selon l'invention sur la différenciation 15 adipocytaire - Etude sur cellules souches du tissu adipeux L'objectif de cette étude a été d'évaluer la capacité du principe actif selon l'invention (exemple 1) à inhiber le phénomène de différenciation sur cellules souches du tissu adipeux en mesurant le taux de lipides présents dans les cellules par la méthode de coloration Oil Red O'. 20 L'étude a été réalisée sur cellules souches Cb347C1)31- et le protocole opératoire est décrit en suivant. A JO, les cellules souches Cb347C1)31- sont isolées de façon spécifique à partir de la fraction stroma vasculaire (F5V) de lipoaspiration à l'aide de billes magnétiques C1)34* et Cb31-. 25 Les cellules souches Cb347C1)31- sont ensemencées en plaques 24 puits avec un milieu de culture favorisant la différenciation adipocytaire. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une étuve contenant 5% de CO2. A J4 et J7, le principe actif selon l'invention est ajouté à 0,25%, et 0.5% (v/v) dans le milieu de culture, afin d'évaluer son effet sur la différenciation. Le TNF-a à 0,25nM, molécule connue comme inhibant la différenciation adipocytaire, a été utilisée comme témoin positif. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une étuve contenant 5% de CO2. A J10, les cellules sont traitées pour la coloration Oil Red 0' : Fixation des cellules avec une solution de formaldéhyde à 10%, rinçage des plaques avec une solution de PBS et coloration des cellules à l'aide d'une solution d'Oil Red O' à 0,3% (v/v). Les cellules sont visualisées à l'aide du microscope couplé à un système d'analyse d'images. La densité optique est lue à 540nm à l'aide d'un spectrophotomètre. Plus la coloration est importante, plus la différenciation adipocytaire est élevée. Les résultats obtenus de la quantification du contenu en lipides intracellulaires sont présentés dans le tableau ci-dessous (densité optique et pourcentage par rapport au témoin non traité), ainsi que sur les figures la al d : DO (UA) Efficacité / Témoin (%) Témoin non traité (figure la) 0.781 TNF-a 0,25 nM (figurelb) 0.466 - 40% Principe actif selon l'invention 0,25% (figure 1c) 0.551 - 29 % Principe actif selon l'invention 0,5% (figure 1d) 0.408 - 48 % Ces résultats montrent que le principe actif selon l'invention permet de limiter le processus de différenciation adipocytaire des cellules souches. En particulier, testé à 0,25% et 0,50%, le principe actif de l'exemple 1 permet de limiter respectivement de 29% et de 48% le taux de lipides présents dans les cellules, ceci traduisant une inhibition du processus de différenciation adipocytaire des cellules souches Cb34+/C1)31-. REVENDICATIONS1. Hydrolysat de Celosia cristata pour son application comme principe actif dans une composition à application cutanée, ledit principe actif ou ladite composition étant destinés à limiter la différenciation des cellules souches du tissu adipeux en adipocytes matures. 2. Hydrolysat de Celosia cristata selon la revendication 1, pour son application comme principe actif dans une composition à application cutanée, ledit principe actif ou ladite composition étant destinés à un effet amincissant et/ou anti-cellulite. 3. Hydrolysat de Celosia cristata selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat enzymatique. 4. Hydrolysat de Celosia cristata selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il présente au moins une des caractéristiques suivantes - un taux de matières sèches compris entre 400 et 850g/I, - une teneur en carbohydrates comprise entre 8g/I et 24g/I. 5. Hydrolysat de Celosia cristata selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il présente au moins une des caractéristiques suivantes : - un taux de matières sèches compris entre 500 et 720g/I, - une teneur en carbohydrates comprise entre 10g/I et 20g/I. 6. Composition cosmétique pour application topique, caractérisé en ce qu'elle comprend un hydrolysat de Celosia cristata selon l'une des revendications 1 à 5 comme principe actif présent entre 0,01 et 3% en poids total de la composition.