Brevet FR2980364A1 — publié le 20130329

Nanoémulsions et leur utilisation comme agents de contraste La présente invention concerne de nouveaux systèmes optimisés de type nanoémulsions et leur utilisation comme agents de contraste notamment en IRM. Dans le domaine de l'imagerie diagnostique, un grand nombre de recherches a concerné des nanosystèmes lipidiques de type émulsion. Typiquement les émulsions utilisées sont sous forme de vésicules préparées à l'aide de constituants lipidiques (huile en particulier) et de tensioactifs (également désignés surfactants) servant d'interface entre la phase aqueuse et le noyau lipidique de la nanoparticule. Les émulsions lipidiques huile dans eau incorporent une phase huileuse lipophile, formant des gouttelettes lipidiques en solution aqueuse. Une première catégorie d'émulsions décrite notamment dans W003/062198 ou US 6 676 963 est celle de nanoémulsions fluorées comprenant, intégrés à l'intérieur des vésicules lipidiques, des composés fluorés comportant des atomes de fluor F19 utilisés pour l'imagerie de résonance magnétique IRM. En effet le fluor a notamment l'intérêt par rapport à l'IRM du proton d'être quasiment absent dans les systèmes biologiques à l'état libre ce qui lui permet d'être reconnu comme une excellente sonde quantitative sous la forme fluor F19. Le coeur lipidique est formé d'une huile fluorée, et entouré d'une couche lipidique formée par un tensioactif (lécithine par exemple). Ces émulsions fluorées peuvent comprendre en outre un nombre très élevé de complexes de métaux paramagnétiques, en particulier de lanthanides, pour associer l'IRM du fluor 19F et du proton 1H. On connaît ainsi des émulsions fluorées pour IRM incorporant des chélates capables de complexer des lanthanides en particulier le gadolinium. Les chélates utilisés sont notamment des dérivés du DTPA, DOTA, DOSA, HPDO3A et autres chélates largement décrits dans l'art antérieur. Ces chélates hydrophiles sont rendus lipophiles en leur greffant une zone lipophile telle qu'un phospholipide, ce qui permet de les intégrer dans la membrane lipidique que forme le tensioactif lipidique de la composition. Plusieurs milliers (5000 à 100 000 environ) de ces complexes sont intégrés dans la membrane lipidique de ces vésicules, ce qui permet d'obtenir une relaxivité (signal IRM) élevée pour une détection de la zone physiologique étudiée et mofifier le temsp de relaxation du 19F. La partie hydrophile (la partie hydrophile que représente le chélate auquel est attaché un groupe lipophile de manière à prendre le chélate amphiphile) est localisée à la surface externe des nanogouttelettes, en contact avec la phase aqueuse de la solution de nanogouttelettes. On connaît aussi des émulsions huile dans eau et non fluorées, comprenant des chélates de lanthanides pour l'IRM uniquement du proton. En outre, afin d'obtenir un signal spécifique de zones pathologiques, par exemple associés à une surexpression d'un marqueur de ces zones (récepteurs par exemple), des molécules de ciblage (ou ligands de ciblage, peptide par exemple ayant une affinité pour le récepteur) ont été greffés sur les nanogouttelettes des ces émulsions fluorées. W003/062198 décrit en particulier l'utilisation de composés peptidomimétiques pour cibler des intégrines surexprimmées dans des zones tumorales. Pour l'incorporation à la membrane lipidique, les ligands de ciblage (souvent hydrophiles) sont rendus amphiphiles en les associant à des chaînes lipophiles. Toutefois, malgré des avancées prometteuses, les agents de contraste fluorés et vectorisés décrits n'ont pas encore démontré totalement leur efficacité clinique, et posent des difficultés en matière de stabilité dans la durée. Par rapport aux émulsions fluorées connues, on cherche : à améliorer la stabilité des ligands de ciblage dans ces émulsions, d'autant que le prix de revient industriel des nanoémulsions est pour environ au moins 80 à 90% représenté par les ligands de ciblage qui sont très onéreux à augmenter le taux et le rendement d'incorporation des ligands de ciblage, et l'affinité des émulsions pour la cible biologique à atteindre une stabilité dans le temps d'au moins un an, et de préférence de 2 à 3 ans. Il est rappelé que l'optimisation des constituants est complexe : nature et teneur de l'huile, des tensioactifs, des ligands de ciblage. Par exemple un taux de tensioactifs trop élevé se traduit par : la formation dans la composition, en plus des nanogoutelettes, de micelles dont le retrait nécessiterait pour une production à l'échelle industrielle de centaines de tonnes de produit, des étapes de séparation et de purification complexes et coûteuses d'où une chute du rendement industriel la difficulté voire l'impossibilité d'incorporer aux nanoparticules une quantité appropriée de ligands de ciblage biologique dont le coût est très élevé. En effet, les ligands de ciblage amphiphiles sont souvent moins bon tensioactifs que les tensioactifs utilisés pour stabiliser l'interface. De ce fait, la surface des gouttelettes est occupée principalement par la couche de lipides amphiphiles tensioactifs et les ligands de ciblage ont du mal à s'intégrer au sein de cette couche. D'autres catégories d'émulsions pour l'imagerie médicale existent, en particulier des nanoémulsions pour l'imagerie de fluorescence, ne comprenant pas de composés fluorés, et utilisant des nanocristaux d'oxydes métalliques. Le document W02010/018222 décrit de telles nanoémulsions comprenant : une solution aqueuse une phase dispersée (huile) formant des nanogouttelettes lipidiques dans la solution aqueuse, les nanogouttelettes incorporant des nanocristaux d'oxydes métalliques ayant des propriétés de luminescence pour une imagerie de fluorescence un surfactant (phospholipides par exemple) et des co-surfactants pour stabiliser les nanogouttelettes. L'imagerie de fluorescence n'est cependant pas bien adaptée pour plusieurs indications diagnostiques majeures, en particulier certaines imageries de territoires vasculaires et/ou tumoraux. Au vu de cet art antérieur complexe, on voit la difficulté d'obtenir des nanoémulsions très efficaces, en particulier des nanoémulsisons fluorées vectorisées pour IRM du fluor, répondant aux contraintes d'industrialisation et cliniquement performantes dans un large spectre d'indications. Le demandeur a réussi à obtenir des nanoémulsions fluorées sous forme de nanogouttelettes vectorisées : suffisamment stables colloïdalement pour être produites et conservées pendant une longue durée, en particulier sans problème de coalescence entre elles des gouttelettes lipidiques suffisamment stables in vivo pour ne pas être dégradées adaptées sur le plan de la pharmacocinétique suffisamment efficaces en terme de signal pour l'imagerie clinique chez le patient capables d'incorporer des ligands de ciblage de zones pathologiques à la surface des nanogouttelettes, en quantité appropriée et sans perte d'affinité gênante avec leur cible biologique. Le demandeur a pour cela incorporé aux nanoémulsions antérieures des agents dispersants fluorophiles, désignés composés fluorophiles di- ou tri-blocs. A cet effet l'invention concerne selon un premier aspect une composition de nanoémulsion huile dans eau, comprenant : une phase aqueuse, une phase fluorée comprenant au moins une huile fluorée, un tensioactif à l'interface entre les phases aqueuse et fluorée, le tensioactif comprenant : au moins un ligand de ciblage amphiphile, au moins un lipide amphiphile, et - au moins un composé fluorophile di- ou tri-bloc. Par nanoémulsion, on entend que la taille des gouttelettes est comprise entre 1 et 1000 nm. La taille des gouttelettes est typiquement de 50 à 400 nm, avantageusement 100 à 350 nm, notamment 150 à 300 nm, en particulier 200 à 250 nm. - tensioactif Par souci de simplification, il est indiqué que la nanoémulsion comprend un tensioactif. Il est clair pour l'homme du métier qu'il s'agit d'un tensioactif formant une couche entre la phase huileuse et la phase aqueuse, et désigné également « tensioactifs totaux » dans la demande. Comme détaillé plus loin, le tensioactif (tensioactifs totaux) comprend d'une part des composés amphiphiles non fluorés, et d'autre part des composés amphiphiles fluorés, notamment le composé fluorophile di- ou tri-bloc. L'homme du métier comprend que le tensioactif à l'interface huile fluorée/phase aqueuse correspond à l'ensemble des tensioactifs utilisés, c'est à dire comme expliqué en détail dans la demande : des lipides amphiphiles, des composés fluorophiles di- ou tri- blocs, des ligands de ciblage amphiphiles, et éventuellement en outre des chélates de métal paramagnétique amphiphiles présents ou non selon les réalisations, et le cas échéant d'autres composés tels que des lipides pégylés (lipides couplés à des PEG). De par leur structure amphiphile, les ligands de ciblage amphiphiles jouent un rôle de tensioactif étant précisé que leur quantité est généralement faible par rapport aux autres composés amphiphiles utilisés. On entend par l'expression « tensioactif total », l'ensemble des tensioactifs dans la composition. - composé fluorophile di- ou tri-bloc Le composé fluorophile di- ou tri-bloc s'écrit de préférence sous la forme FnHm décrite en détail plus loin. De tels composés fluorophiles di- ou tri-blocs sont connus notamment du document US 5,733,526, mais ils y sont utilisés pour stabiliser des systèmes lipidiques d'un certain type (micelles ou gouttelettes huileuses) incorporés dans un système non aqueux d'un autre type (huile fluorée), et non comme c'est le cas dans la présente invention, pour stabiliser des systèmes lipidiques dans une phase aqueuse. Plus précisément le document US 5,733,526 décrit notamment dans ses exemples: - des micelles avec ligands de ciblage (les micelles ne délimitant pas un compartiment interne aqueux), incorporés dans une huile fluorée (PFOB), les di- ou tri-blocs étant directement les constituants des micelles. une huile carbonée, incorporée dans une huile fluorée (PFOB), des di- ou tri-blocs étant utilisés pour stabiliser cette interface. Ainsi, dans US 5,733,526, les composés fluorophiles diblocs se situent à l'interface d'une huile fluorée et d'une huile non fluorée (huile à base d'hydrocarbure), alors que dans la présente demande, les composés fluorophiles diblocs se situent à l'interface entre l'huile fluorée et la phase aqueuse. De préférence, la nanoémulsion selon l'invention est exempte d'huile à base d'hydrocarbure. De manière inattendue, le demandeur a réussi à démontrer que ses nouveaux systèmes permettent non seulement d'obtenir des nanoémulsions stables, mais aussi que l'affinité des nanoémulsions huile dans eau synthétisées pour la cible biologique est significativement améliorée. Les composés fluorophiles diblocs utilisés pour les nanoémulsions selon l'invention ont avantageusement pour formule générale : RF -L-RH (-Z), dans laquelle : 1) RF est un groupe fluoré ou perfluoré (qui comprend ou non des chaînes latérales et/ou des cycles et/ou des hétéroatomes notamment des halogènes) 2) RH est un groupe hydrocarboné (qui comprend ou non des chaînes latérales et/ou des cycles et/ou des hétéroatomes notamment des halogènes et/ou des liaisons multiples (exemple -(CH2)n -, -C6H4 (CH2)4-, -(CH2)p O(CH2)q -, -(CH2)2 CH=CH(CH2)5 -; n, p et q étant des nombres entiers variant de 1 à 50, notamment de 1 à 20, de préférence de 2 à 10) ; 3) L est un groupe de liaison et peut comprendre notamment un des groupes suivants : liaison simple, -CH2-, -CH=CH-, -0-, -S-, -F04 -, CONH 4) Z est H ou un groupe plus polaire ou polarisable que les groupes RH (par exemple un alcool, un halogène, un groupe -O-R'H où FG est - un groupe hydrocarboné, notamment un alkyle ou un groupe-(CH2)mCH=CH2 avec m nombre entier variant de 1 à 16), ou - un groupe -P(0)[N(CH2 CH2)2 012) 5) z représente 0 ou 1. Avantageusement le composé fluorophile dibloc est de formule RFLRH, dans lequel RF est un alkyle fluoré de 2 à 12 atomes de carbone, RH est un groupe hydrocarboné linéaire, ramifié, ou cyclique, saturé ou insaturé de 2 à 16 atomes de carbone, et L est un groupe de liaison comprenant par exemple une simple liaison carbone-carbone ou un atome d'oxygène ou tout autre groupement approprié, notamment ceux cité ci-dessus. Avantageusement le composé fluorophile di- ou tri-bloc est choisi parmi les suivants, où n, m et p sont des nombres entiers : composés de formule C n F 2n+1 C m H 2m+1 (saturé), ou de formule C n F 2n+1 C m H 2m-1 (insaturé), ou leurs combinaisons, n étant un nombre entier de 2 à 12 et m étant un entier de 2 à 16, composés de formule Cp H 2p+1 -C n F2n - C m H 2m+1, avec p=1-12, m=1-12 et n=2-12 composés de formule Cn F 2n+1 - CH = CH - C m H 2m+1 , avec n et m identiques ou différents comprise entre 2 et 12 composés éthers ou polyéthers substitués (i.e : XC n F2n 0Cm H2m X, XCF200n H2n OCF2 X, avec n et m=1-4, X=Br, Cl ou I) composés diblocs ou triblocs éthers notamment : - a) C n F 2n+1 -0-C m H 2m+1, avec n=2-10; m=2-16 - b) Cp H 2p+1 -0-Cn F2n -0-C m H 2m+1, avec p=2-12, m=1-12 et n=2-12. Avantageusement le composé fluorophile dibloc est un composé perfluoro-15- crown-5-ether (PFCE) ou un composé analogue : FFFF Il est rappelé que la nomenclature des composés fluorophiles di- ou tri-blocs est connue de l'homme du métier. Par exemple les diblocs FnHm représentent l'écriture simplifiée des diblocs Cn F 2n+1 C m H 2m+1 (avec m=8,12,14 pour 1-octène, 1- dodécène, 1-tétradécène), étant entendu que un ou plusieurs des atomes d'hydrogène peut être remplacé par un halogène, notamment un iode. Par exemple : - le composé fluorophile dibloc F4H8I a pour formule CF3-(CF2)2- CF2-CH2-CH1-CH2- (CH2)4-CH3 - le composé fluorophile dibloc F4H14I a pour formule CF3-(CF2)2- CF2-CH2-CH1-CH2- (CH2)10-CH3. Les composés fluorophiles diblocs Cn F 2n+1 C m H 2m+1 sont particulièrement avantageux pour la présente invention. Le groupe hydrocarboné et/ou le groupe fluoré du composé fluorophile di- ou tri-bloc peut aussi : comprendre du phosphore (par exemple le (perfluoroalkyl)alkylene mono- ou dimorpholinophosphate et des phospholipides fluorés) être substituée par un alcool, comprendre un polyol, ou comprendre un groupeun polyhydroxylé ou aminé, être substitué par un groupe amine oxydes ou amino acides. On citera aussi le dibloc (perfluoroalkyle)alkylène phosphate : RFRi -0P(0)[N(CH2 CH2)2 0]2 ou [RF Ri 0]2 P(0)[N(CH2 0H2)2 O], où RF est CF3 (CF2)1, avec t un nombre entier entre 1 et 11, et R1 est une chaîne hydrocarbonée saturée ou insaturée, linéaire ou ramifiée, et RF et Ri peuvent comprendre au moins un atome O et/ou S. - lipides amphiphiles Les lipides amphiphiles comportent une partie hydrophile et une partie lipophile. Ils sont généralement choisis parmi les composés dont la partie lipophile comprend une chaîne saturée ou insaturée, linéaire ou ramifiée, ayant de 8 à 30 atomes de carbone. Ils peuvent être choisis parmi les phospholipides, les cholestérols, les lysolipides, les sphingomyélines, les tocophérols, les glucolipides, stéarylamines, les cardiolipines d'origine naturelle ou synthétique ; les molécules composées d'un acide gras couplé à un groupement hydrophile par une fonction éther ou ester tels que les esters de sorbitan comme par exemple les monooléate et monolaurate de sorbitan ; les lipides polymérisés ; les esters de sucre tels que les mono-et di-laurate, mono- et di-palmitate, mono- et distéarate de saccharose ; lesdits lipides amphiphiles pouvant être utilisés seuls ou en mélanges. Avantageusement le lipide amphiphile est un phospholipide, de préférence choisi parmi : phosphatidylcholine dioléoylphosphatidylcholine, dimyristoylphosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylcholine, distéaroylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, sphingomyéline, phosphatidylsérine, phosphatidylinositol. La phosphatidylcholine de jaune d'ceuf est un lipide amphiphile préféré. Selon un mode de réalisation particulier, tout ou partie du lipide amphiphile peut posséder une fonction réactive, telle qu'un groupe maléimide, thiol, amine, ester, oxyamine ou aldéhyde ou alcyne ou azide. La présence de fonctions réactives permet le greffage de composés fonctionnels au niveau de l'interface entre la phase aqueuse et la phase fluorée. - lipide pégylé En plus du lipide amphiphile, du ligand de ciblage amphiphile, du composé fluorophile di- ou tri-bloc et de l'éventuel chélate de métal paramagnétique amphiphile, le tensioactif peut comprendre des lipides pégylés c'est à dire porteurs de groupes oxyde de polyéthylène (PEG), tels que le polyéthylèneglycol/phosphatidyl-éthanolamine (PEG-PE). Ces lipides pégylés permettent d'agir sur le caractère furtif de la composition selon l'invention dans l'organisme. Par « polyéthylèneglycol » PEG, au sens de la présente demande, on désigne de façon générale, des composés comprenant une chaîne -CH2- (CH2-0-CH2)k-CH2OR3 dans laquelle k est un nombre entier variant de 2 à 100 (par exemple 2, 4, 6, 10, 50), et R3 est choisi parmi H, alkyle ou -(CO)Alk, le terme "alkyle" ou "alk" désignant un groupe aliphatique hydrocarboné, linéaire ou ramifié, ayant environ de 1 à 6 atomes de carbone dans la chaîne. Le terme « polyéthylèneglycol » tel qu'employé ici englobe notamment les composés aminopolyéthylèneglycols. On utilise notamment les PEG 350, 750, 2000, 3000, 5000, modifiés par ajout de groupements lipophiles pour s'insérer au sein de la couche de tensioactif de la nanogouttelette, notamment : 1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Methoxy(Polyethylene glycol)- 750] 1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Methoxy(Polyethylene glycol)- 2000], 1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Methoxy(Polyethylene glycol)-5000] On utilisera notamment le lipide pégylé : 0 II H 0 r(:)ro j '0 N 0 0 - composés amphiphiles fluorochromes Selon des variantes on peut intégrer des composés amphiphiles fluorochromes pour combiner l'IRM du F19 et l'imagerie optique de flurorescence, tels que le DSPE- rhodamine. o / o _ 45 - Ligand de ciblage amphiphile Les nanoémulsions du demandeur sont vectorisées à l'aide d'au moins un ligand de ciblage amphiphile, partie de reconnaissance biologique localisée à la surface externe des nanogouttelettes, capable de reconnaître la cible biologique dont l'expression est modifiée dans une zone pathologique (tumeur par exemple), par rapport à la zone saine. La nanoémulsion comprend au moins un ligand de ciblage d'une zone pathologique ancré à la nanogouttelette, typiquement à l'aide d'un groupe d'ancrage du ligand de ciblage. Avantageusement le nombre de ligands de ciblage par nanogouttelette est d'au moins 1000 et typiquement de l'ordre de 1000, 2000, 5000, 10 000. Comme indiqué précédemment, les nanoémulsions obtenues ont l'avantage important d'avoir une stabilité et une affinité augmentées. Le demandeur explique cet effet technique avantageux par l'augmentation de l'incorporation des ligands de ciblage dans l'interface formée par les tensioactifs, entre l'huile fluorée et la phase aqueuse. Les composés fluorophiles di- ou tri-blocs s'avèrent avoir la propriété de co-surfactant, en se localisant dans l'interface huile fluorée / phase aqueuse des gouttelettes. La chaîne fluorée des composés fluorophiles di- ou tri-blocs s'oriente vers le coeur fluoré (huile PFOB par exemple) de la gouttelette, et la chaîne alkylée des composés fluorophiles di-ou tri-blocs se positionne du côté des chaînes lipidiques des lipides amphiphiles. Selon des réalisations avantageuses, la chaîne alkylée des di- ou tri-blocs est choisie pour avoir une forte interaction avec les chaînes lipidiques des lipides amphiphiles, avantageusement en utilisant des chaînes de longueurs proches ou identiques, par exemple en C12, C14 ou C16. Les ligands de ciblage amphiphile comprennent un ligand de ciblage et un groupe lipophile, l'ensemble ayant un caractère amphiphile. Les ligands de ciblage (partie ligand de ciblage du ligand de ciblage amphiphile) pour la reconnaissance de la cible en milieu biologique sont greffés à l'aide de groupes chimiques sur une partie lipophile permettant l'ancrage du ligand de ciblage dans la couche de tensioactifs. Cela permet aux ligands de ciblage de se trouver essentiellement du côté de la surface externe des nanogouttelettes. Avantageusement le ligand de ciblage du ligand de ciblage amphiphile(à savoir la partie de reconnaissance biologique du ligand de ciblage amphiphile, localisée à la surface externe des nanogouttelettes) est choisi parmi : les pharmacophores, les peptides (avantageusement de moins de 20 acides aminés, plus avantageusement de 5 à 10 acides aminés), les pseudopeptides, les peptidomimétiques, les acides aminés, les agents de ciblage d'intégrines (peptides et pseudopeptides, peptidomimétiques notamment), les glycoprotéines, les lectines, la biotine, les dérivés ptéroïques ou aminoptéroïques, les dérivés de l'acide folique et antifolique, les anticorps ou fragments d'anticorps, l'avidine, les stéroïdes, les oligonucléotides, les séquences d'acide ribonucléique, les séquences d'acide désoxyribonucléique, les hormones, les protéines éventuellement recombinantes ou mutées, les mono- ou polysaccharides, les composés à squelette benzothiazole, benzofurane, styrylbenzoxazole/thiazole/imidazole/quinoline, styrylpiridine et composés dérivés, et leurs mélanges. Les peptides, les dérivés de l'acide folique et antifolique, les agents de ciblage d'intégrines (peptides et pseudopeptides, peptidomimétiques notamment), les agents de ciblage de récepteurs cellulaires ou d'enzymes (notamment de ciblage de kinases, notamment tyrosine kinase ; de métalloprotéases ; de caspases ...) sont particulièrement préférés. On entend par pharmacophore les molécules connues pour leur capacité à avoir un effet pharmacologique, notamment de par leur capacité à cibler au moins une cible biologique (récepteur cellulaire par exemple). Plus globalement, selon des réalisations avantageuses, le ligand de ciblage du ligand de ciblage amphiphile est choisi parmi la liste suivante (les documents et références entre parenthèses sont des exemples et non une liste limitative) : 1) Les ligands de ciblage ciblant des récepteurs VEGF et angiopoiétine (décrits dans WO 01/97850), les polymères tels que polyhystidine (US 6,372,194), les polypeptides ciblant la fibrine (WO 2001/9188), les peptides de ciblage d'intégrines (WO 01/77145, WO 02 26776 pour alphav beta3, WO 02/081497, par exemple RGDWXE), les pseudopeptides et peptides de ciblage de métalloprotéases MMP (WO 03/062198, WO 01/60416), les peptides ciblant par exemple le récepteur KDR/Flk-I dont R-X-K-X-H et RX-K-X-H, ou les récepteurs Tie-1 et 2 (WO 99/40947 par exemple), les glycosides de sialyl Lewis (WO 02062810 et « Müller et al, Eur. J. Org. Chem, 2002,3966-3973), les antioxydants tels que l'acide ascorbique (WO 02/40060), les ligands de ciblage de la tuftsine (par exemple US 6,524,554), de ciblage de récepteurs à protéine G GPCR en particulier la cholécystokinine (WO 02/094873), les associations entre antagoniste d'intégrine et mime de la guanidine (US 6 489 333), les quinolones ciblant alphav beta3 ou 5 (US 6,511,648), les benzodiazépines et analogues ciblant des intégrines (US A 2002/0106325, W001/97861), les imidazoles et analogues (WO 01/98294), les peptides RGD (WO 01/10450), les anticorps ou fragments d'anticorps (FGF, TGFb, GV39, GV97, ELAM, VCAM, inductible par TNF ou IL (US 6,261,535), les molécule de ciblage modifiées par interaction avec la cible (US 5,707,605), les agents de ciblage de dépôts amyloïdes (WO 02/28441 par exemple), les peptides clivés cathepsines (WO 02/056670), les mitoxantrone ou quinone (US 6,410,695), les polypeptides ciblant des cellules épithéliales (US 6,391,280), les inhibiteurs de cystéines protéases (WO 99/54317), les ligands de ciblage décrits dans : US 6,491,893 (GCSF), US 2002/0128553, WO 02/054088, WO 02/32292, WO 02/38546, W020036059, US 6,534,038, WO 0177102, EP 1 121 377, Pharmacological Reviews (52, n '2, 179 ; facteurs de croissance PDGF, EGF, FGF...), Topics in Current Chemistry (222, W.Krause, Springer), Bioorganic & Medicinal Chemistry (11, 2003, 1319-1341 ; dérivés tétrahydrobenzazépinones ciblant alpha v beta3). 2) Les inhibiteurs d'angiogenèse, notamment ceux testés en essais cliniques ou déjà commercialisés, notamment : - les inhibiteurs d'angiogenèse impliquant des récepteurs FGFR ou VEGFR tels que SU101, SU5416, SU6668, ZD4190, PTK787, ZK225846, des composés azacycles (WO 00244156, WO 02059110) ; - les inhibiteurs d'angiogenèse impliquant des MMP tels que le BB25-16 (marimastat), le AG3340 (prinomastat), le solimastat, le BAY12-9566, le BMS275291, le metastat, le neovastat ; - les inhibiteurs d'angiogenèse impliquant des intégrines tels que le SM256, le SG545, des molécules d'adhésion bloquant le EC-ECM (tels que le EMD 121-974, ou la vitaxine) ; - des médicaments à mécanisme d'action antiangiogenèse plus indirect tels que le carboxiamidotriazole, le TNP470, la squalamine, le ZD0101 ; - les inhibiteurs décrits dans le document WO 99/40947, les anticorps monoclonaux très sélectifs pour la liaison au récepteur KDR, les analogues de la somatostatine (WO 94/00489), les peptides de liaison à la sélectine (WO 94/05269), des facteurs de croissance (VEGF, EGF, PDGF, TNF, MCSF, interleukines); des ligands de ciblage de VEGF décrits dans Nuclear Medicine Communications, 1999, 20 ; - les peptides inhibiteurs du document WO 02/066512. 3) Des ligands de ciblage capables de cibler des récepteurs : CD36, EPAS-1, ARNT, NHE3, Tie-1, 1/KDR, Flt-1, Tek, neuropiline-1, endogline, pléientropine, endosialine, Axl., alPi, a2ssl, a4P1, a5p1, eph B4 (éphrine), récepteur laminine A, récepteur neutrophiline 65, récepteur leptine OB-RP, récepteur chimiokine CXCR-4 (et autres récepteurs cités dans le document W099/40947), LHRH, bombésine/GRP, récepteurs gastrine, VIP, CCK. 4) Des ligands de ciblage de type inhibiteurs de tyrosine kinase. 5) Les inhibiteurs du récepteur GPIlb/Illa connus choisis parmi : (1) le fragment fab d'un anticorps monoclonal du récepteur GPIlb/111a, Abciximab, (2) les petites molécules peptidiques et peptidomimétiques injectées en intraveineuse telles que l'eptifibatide et le tirofiban. 6) Des peptides antagonistes de récepteurs au fibrinogène (EP 425 212), des peptides ligands de récepteurs 11b/111a, des ligands du fibrinogène, des ligands de la thrombine, des peptides capables de cibler la plaque d'athérome, les plaquettes, la fibrine, des peptides à base d'hirudine, des dérivés à base de guanine ciblant le récepteur 11b/111a. 7) D'autres ligands de ciblage ou fragments biologiquement actifs de ligands de ciblage connus de l'homme du métier comme médicaments, à action anti-thrombotique, anti agrégation plaquettaire, antiathérosclérotique, antiresténotique, anticoagulante. 8) D'autres ligands de ciblage ou fragments biologiquement actifs de ligands de ciblage ciblant alpha v beta3, décrits en association avec des DOTA dans le brevet US 6 537 520, choisis parmi les suivants : mitomycine, tretinoine, ribomustine, gemcitabine, vincristine, etoposide, cladribine, mitobronitol, methotrexate, doxorubicine, carboquone, pentostatine, nitracrine, zinostatine, cetrorelix, letrozole, raltitrexed, daunorubicine, fadrozole, fotemustine, thymalfasin, sobuzoxane, nedaplatin, cytarabine, bicalutamide, vinorelbine, vesnarinone, aminoglutethimide, amsacrine, proglumide, elliptinium acetate, ketanserin, doxifluridine, etretinate, isotretinoine, streptozocine, nimustine, vindesine, flutamide, drogenil, butocin, carmofur, razoxane, sizofilan, carboplatine, mitolactol, tegafur, ifosfamide, prednimustine, picibanil, levamisole, teniposide, improsulfan, enocitabine, lisuride, oxymetholone, tamoxifen, progesterone, mepitiostane, epitiostanol, formestane, interferon-alpha, interferon-2 alpha, interferon-beta, interferon-gamma, colony stimulating factor-1, colony stimulating factor-2, denileukin diftitox, interleukin-2, leutinizing hormone releasing factor. 9) certains ligands de ciblage ciblant des types particuliers de cancers, par exemple des peptides ciblant le récepteur ST associé au cancer colorectal, ou le récepteur tachykinine. 10) des ligands de ciblage utilisant des composés de type phosphines. 11) des ligands de ciblage de P-sélectine, E-sélectine ; par exemple, le peptide de 8 acides aminés décrit par Morikawa et al, 1996, 951, ainsi que différents sucres. 12) l'annexine V ou des ligands de ciblage ciblant les processus apoptotiques. 13) tout peptide obtenu par des technologies de ciblage telles que le phage display, modifié éventuellement par des acides aminés non naturels (http//chemlibrary.bri.nrc.ca), par exemple des peptides issus de banques phage display RGD 14) d'autres ligands de ciblage peptidiques connus de ciblage de plaques d'athérome, cités notamment dans le document WO 2003/014145. 15) des vitamines. 16) des ligands de récepteurs hormonaux dont les hormones et les stéroïdes. 17) des ligands de ciblage ciblant des récepteurs opioïdes. 18) des ligands de ciblage ciblant des récepteurs TKI. 19) des antagonistes LB4 et VnR. 20) des composés nitriimidazoles et benzylguanidines. 21) des ligands de ciblage rappelés dans Topics in Current Chemistry, vol.222, 260- 274, Fundamentals of Receptor-based Diagnostic Metallopharmaceuticals, notamment : - des ligands de ciblage de récepteurs peptidiques surexprimés dans les tumeurs (récepteurs LHRH, bombésine/GRP, récepteurs VIP, récepteurs CCK, récepteurs tachykinine par exemple), notamment les analogues de somatostatine ou de bombésine, des peptides dérivés octréotide éventuellement glycosylés, les peptides VIP, les alpha- MSH, les peptides CCK-B - des peptides choisis parmi : des peptides cycliques RGD, fibrine-chaîne alpha, CSVTCR, tuftsine, f MLF, YIGSR (récepteur : laminine). 22) des oligosaccharides, des polysaccharides et des dérivés d'oses, des dérivés ciblant les récepteurs Glut (récepteurs d'oses). 23) des ligands de ciblage utilisés pour des produits de type smart. 24) des marqueurs de la viabilité myocardique (tétrofosmine et hexakis2méthoxy2méthylpropylisonitrile). 25) des traceurs du métabolisme des sucres et des graisses. 26) des ligands de récepteurs de neurotransmetteurs (récepteurs D, 5HT, Ach, GABA, NA). 27) des oligonucléotides. 28) le facteur tissulaire 29) des ligands de ciblage décrits dans WO 03/20701, en particulier le PK11195 ligand du récepteur périphérique aux benzodiazépines. 30) des peptides liant la fibrine, notamment les séquences peptidiques décrites dans WO 03/11115. 31) des inhibiteurs d'agrégation de plaques amyloïdes (décrits par exemple dans WO 02/085903). 32) des pharmacophores composés de ciblage de la maladie d'Alzheimer, en particulier les composés comprenant les squelettes de type benzothiazole, benzof uranes, styrylbenzoxazoles/thiazoles/imidazoles/quinoline, styrylpiridines. 33) des composés de ciblage d'intégrines notamment ayant une affinité supérieure à 10 000, 100 000 ou plus, notamment des composés non peptidiques mimétiques de peptides RGD, et en particulier des composés comprenant un groupe tetrahydro naphtyridine décrits par exemple dans : J Med. Chem., 2003, 46, 4790-4798, Bioorg. Med. Chem. Letters, 2004, 14, 4515-4518, Bioorg. Med. Chem. Letters, 2005, 15, 1647- 1650. En particulier pour ces composés naphtyridine, le demandeur utilise tout composé de naphtyridine connu de l'art antérieur (notamment ceux de W02009/114776), l'utilisation des composés naphtyridine comme ligand de ciblage pour imagerie médicale étant décrite dans W02007/042506 page 13 lignes 30-34. Alternativement ou cumulativement, les ligands de ciblage amphiphiles s'écrivent avantageusement sous la forme : Bio - L1 - L2 - Lipo dans laquelle : Bio est un ligand de ciblage, notamment choisi parmi ceux susmentionnés (c'est-à-dire la partie de reconnaissance biologique, qui est localisée à la surface externe des nanogouttelettes) Lipo est un groupe lipophile permettant l'insertion du ligand de ciblage au sein de la couche de tensioactif L2 est un groupe de liaison, avantageusement choisi parmi : C1_6 alkylène, PEG par exemple CH2-(CH2-O-CH2)k-CH2 avec k=2 à 10, (CH2)3- NH, NH-(CH2)2-NH, NH-(CH2)3-NH, rien ou une simple liaison, (CH2)n, (CH2)n-00- , -(CH2)nNH-00- avec n nombre entier de 2 à 10 , (CH2CH20)q(CH2)r-00- , (CH2CH2O)q(CH2)r-NH-00- avec q nombre entier de 1 à 10 et r nombre entier de 2 à 10, (CH2)n-CONH - , (CH2)n-CONH - PEG, (CH2)n-NH- HOOC-CH2-0- (CH2)2-0-(CH2)2-0-CH2-000H ; H000-(CH2)2-0O2-(CH2)2-000-(CH2)2- 000H ; HOOC-CH(OH)-CH(OH)-COOH; H000-(CH2)n-000H; NH2-(CH2)nNH2, avec n nombre entier de 0 à 20; NH2-(CH2)n-CO2H ; NH2-CH2 - (CH2-0- CH2)n-CO2H avec n nombre entier de 1 à 10, squarate P1-1-P2, P1 et P2 identiques ou différents, étant choisis parmi 0, S, NH, rien (liaison simple), 002, NHCO, CONH, NHCONH, NHCSNH, SO2NH-, NHS02-, squarate avec I = alkylène, alkoxyalkylène, polyalkoxyalkylène (notamment PEG), alkylène interrompu par un ou plusieurs squarates ou par un ou plusieurs aryles, avantageusement phényle, alcénylène, alcynylène, alkylène interrompu par un ou plusieurs groupes choisis parmi -NH-, -0-, -CO-, -NH(C0)-, -(CO)NH-, - 0(C0)-, ou -(00)0- , L1 est choisi parmi une liaison simple, -CONH-, -000-, -NHCO-, -000-, -NH-CS- NH-, -C-S-, -N-NH-00-, -CO- NH-N-, -CH2-NH-, -N-CH2-, -N-CS-N-, -CO-CH2-S-, -N-CO-CH2-S-, -N-CO-CH2-CH2-S-, -CH=NH-NH-, -NH-NH=CH-, -CH=N-O-, -0- N=CH- ou répondant aux formules suivantes : HN..---- CI \-... N, N 1 o N"---4N \ )\ / N N N HN N ll H \ ) iN - H H S .---.0 / N>_ H S-CH, 0 N\__ __ On inclut dans la définition des huiles fluorées les huiles de formule Cn F 2n+1 X, XCn F2n X, où n est un nombre entier variant de 2 à 10, X = Br, Cl ou I notamment : 1bromo-F-butane (n-C4 F9 Br), 1-bromo-F-hexane (n-C6 F13 Br), 1-bromo-Fheptane (n-C7 F15 Br), 1,4-dibromo-F-butane et 1,6-dibromo-F-hexane. On inclut aussi des composés fluorés avec des substituants chlorés par exemple: perfluorooctyl chloride (n-C8 F17 Cl), 1,8-dichloro-F-octane (n-CI C8 F16 Cl), 1,6-dichloro-F- hexane (n-CIC6 F12 Cl), et 1,4-dichloro-F-butane (n-CI C4 F8 Cl). On inclut aussi les huiles fluorées de formule Cn F 2n+1 OCni F 2m+1, Cn F 2n+1 CH=CHCm F 2m+1, par exemple : C4 F9 CH=CHC4 F9 (F-44E), i-C3 F9 CH=CHC6 F13 (F- i36E), C6 F13 CH=CHC6 F13 (F-66E)) où n et m sont identiques ou différentes, et sont des entiers compris entre 2 et 12. On inclut aussi des composés polycycliques ou cycliques tels que : C10 F18 (F- decalin ou perfluorodecalin), et des mélanges de perfluoroperhydrophenanthrene et de perfluoro n-butyldecalin. On inclut aussi des amines perfluorées, telles que : F-tripropylamine ("FTPA"), F20 tributylamine ("FTBA"), F-4-methyloctahydroquinolizine ("FM0Q"), F-N-methyldecahydroisoquinoline ("FMIQ"), F-N-methyldecahydroquinoline ("FHQ"), F-Ncyclohexylpyrrolidine ("FCHP"), F-2- butyltetrahydrofuran ("FC-75" or "FC-77"). Parmi les mélanges d'huiles fluorés, on citera les mélanges de 10 à 70% d'une première huile, de type PFOB par exemple, et de 30 à 70% d'une seconde huile fluorée. 25 - Phase aqueuse La phase aqueuse est avantageusement de l'eau ou une solution aqueuse pharmaceutiquement acceptable telle qu'une solution saline, une solution tampon. 30 - Proportions des constituants de la composition Plus spécifiquement la composition de nanoémulsion huile dans eau comprend selon des réalisations avantageuses : 35 - une phase aqueuse, représentant de préférence 29.4 à 80 % en poids de la composition, avantageusement 55 à 65%, plus avantageusement de 58 à 62%, - une phase fluorée comprenant au moins une huile fluorée, représentant 19.4 à 70% en poids de la composition, avantageusement 35 à 45%, plus avantageusement 37 à 42°/0, - un tensioactif (formant la couche de tensioactif) à l'interface entre les phases aqueuse et fluorée, le tensioactif comprenant au moins un composé fluorophile di- ou tri-bloc, au moins un lipide amphiphile et au moins un ligand de ciblage amphiphile, la teneur totale en tensioactif en poids par rapport à l'huile fluorée étant comprise entre 3 et 15%, notamment entre 3 et 12%, avantageusement entre 4 et 8 % ; la teneur totale en tensioactif en poids par rapport à la composition étant comprise entre 0.6 et 7%, avantageusement entre 1 et 3 %. Avantageusement le ligand de ciblage amphiphile représente 0,1 à 10% en mole du total de tensioactif, avantageusement 0.5 à 5%, notamment 1 à 2 %. Avantageusement le tensioactif comprend : - 50% en moles de composés fluorophiles di- ou tri-blocs - 50% en mol de tensioactifs autres (c'est-à-dire des composés amphiphiles non fluorés). Avantageusement, les 50% de tensioactifs autres (composés amphiphiles non fluorés) comprennent : - 50 à 95% en moles de lipide amphiphile, - 0 à 25% en moles de chélate de métal paramagnétique amphiphile, - 0.1 à 10% en moles de ligand de ciblage amphiphile. - 0 à 10% en moles de lipides pegylés - 0.1 à 0.5% en moles de composés amphiphiles comprenant un fluorophore (par exemple la rhodamine). Avantageusement, pour une phase fluorée représentant 19.4 à 70%, et notamment 30 à 50% de la composition, le taux massique de tensioactif total par rapport à la phase fluorée est supérieur à 3%, de préférence de 3 à 8 %, encore de préférence de 4 à 6 `3/0. De préférence, le tensioactif de la composition selon l'invention comprend : des composés amphiphiles non fluorés dont 80 à 95% en moles de lipide amphiphile, 0 à 5% en moles de lipides pegylés et 0.1 à 10% en moles de ligand de ciblage amphiphile. - des composés fluorophiles di- ou tri-blocs ; les composés amphiphiles non fluorés représentant 30 à 60% en moles des tensioactifs totaux, et les composés fluorophiles di- ou tri-blocs représentent 30 à 60% en moles des tensioactifs totaux ; avantageusement les composés amphiphiles non fluorés représentant 50 % en moles des tensioactifs totaux, et les composés fluorophiles di- ou tri-blocs représentent 50 % en moles des tensioactifs totaux. Selon des réalisations préférées, la nanoérnulsion selon l'invention a pour composition en poids 1) 29.4 à 80% en poids de phase aqueuse, avantageusement 55 à 65%, plus avantageusement de 58 à 62% 2) 19.4 à 70% en poids de phase fluorée comprenant une huile fluorée, avantageusement 35 à 45%, plus avantageusement 37 à 42 % 3) 0.6 à 7% de tensioactif total ou bien 3 à 10% par rapport à la phase fluorée, le tensioactif comprenant : - des composés amphiphiles non fluorés dont 80 à 95% en moles de lipide amphiphile, 0 à 5% en moles de lipides pegylés et 0.1 à 10% en moles de ligand de ciblage amphiphile, et - des composés fluorophiles di- ou tri-blocs. De préférence, les composés amphiphiles non fluorés représentent 30 à 60% en moles des tensioactifs totaux, et les composés fluorophiles di- ou tri-blocs représentent 30 à 60% en moles des tensioactifs totaux (le total des composés amphiphiles non fluorés et des composés fluorophiles di- ou tri-blocs étant de 100%). De manière préférée les composés amphiphiles non fluorés représentent 50 % en moles des tensioactifs totaux, et les composés fluorophiles di- ou tri-blocs représentent 50 % en moles des tensioactifs totaux. En particulier, parmi les réalisations ci- dessous les réalisations suivantes sont avantageuses : % en poids de phase aqueuse (1) % en poids % en poids de tensioactif par rapport à l'huile % en poids de tensioactif d'huile (2) (3) par rapport à la composition totale (4) 50-70 29.1-50 3 à 10% de (2) 0.9-5 % (*) 55-65 33.95-45 3 à 10% de (2) 1.05-4.5 % 3 à 10% de (2) 57-61 37-41 1.11-4.1 % 4 à 8% de (2) 55-65 33.6-45 1.4-3.6 cY0 57-61 37-41 4 à 8% de (2) 1.48-3.28 cY0 Etant précisé que le total (1) + (2) + (4) = 100% (*) la gamme [0.9 - 5] correspond à 0.03*30 = 0.9 % et 0.1*50= 5 Ces gammes sont préférées notamment dans la mesure où elles permettent d'obtenir une taille des nanogouttelettes comprise entre 150 et 350 nm, et en particulier autour de 200 à 250 nm. La taille et la stabilité des nanogouttelettes sont très satisfaisantes, ainsi que la viscosité (de l'ordre de 2 à 3 mPa.$). Leur comportement est newtonien, ce qui constitue un avantage important pour des solutions pharmaceutiques injectables. On a par exemple les gammes de proportions suivantes des constituants. Mode de Mode de Mode de réalisation A réalisation B réalisation C Phase aqueuse de la 29.4 à 80, de préférence 55 à 65, 29.4 à 80, de préférence 55 à 65, 29.4 à 80, de préférence 55 à 65, composition de préférence 59 de préférence 59 de préférence 59 Phase fluorée 19.4 à 70, de préférence 35 à 45, 19.4 à 70, de préférence 35 à 45, 19.4 à 70, de préférence 35 à 45, en % de la composition de préférence de préférence de préférence 39 39 39 Teneur (% molaire) en tensioactifs 3 à 10, 3 à 10, 3 à 10, par rapport à la phase fluorée de préférence de préférence de préférence 4 à 8 4 à 8 4 à 8 Teneur (% molaire) 40 à 60 `3/0, de préference 50% 40 à 60 `3/0, de préférence 50% 40 à 60 `3/0, de préférence 50% en composés fluorophiles di- ou tri-blocs des tensioactifs Teneur % molaire 40 à 60 `3/0, de préférence 50% 40 à 60 `3/0, 40 à 60 `3/0, des composés amphiphiles non fluorés de préférence de préférence des tensioactifs 50% 50% Teneur % molaire 60 à 95 50 à 95 0 en lipides amphiphiles des composés amphiphiles non fluorés (a) Teneur % molaire 0 à 25 0 à 25 0 à 99.95 en chélates de métal paramagnétique amphiphiles des composés amphiphiles non fluorés (b) Teneur % molaire 0 5 à 15 0 à 5 en lipides pégylés des composés amphiphiles non fluorés (c) Teneur % molaire 0.1 à 0.5% 0.1 à 0.5% 0.1 à 0.5% en composé amphiphile comprenant un fluorophore des composés amphiphiles non fluorés (d) Teneur % molaire 0.1 à 10 0.1 à 10 0.1 à 10 en ligands de ciblage de préférence de 0.5 à 3% de préférence de 0.5 à 3% de préférence de 0.5 à 3% amphiphiles des composés amphiphiles non fluorés (e) Dans les modes de réalisation du tableau ci-dessus, l'ensemble [lipides amphiphiles, chélates de métal paramagnétique amphiphiles, lipides pégylés, ligands de ciblage amphiphiles] correspondant aux composés amphiphiles non fluorés, le total (a) + (b) + (c) + (d) + (e) est de 100%. - Procédé de préparation On rappelle que les émulsions sont des mélanges lipidiques hétérogènes obtenues de manière appropriée notamment par agitation mécanique et/ou addition d'agents émulsifiants. Par exemple, les [ligand de ciblage amphiphile / lipide amphiphile / éventuel chélate de métal paramagnétique amphiphile / éventuel lipides pegylés / eventuel composés amphiphiles comprenant un fluorophore] sont dispersés dans la phase aqueuse sous agitation magnétique et à l'aide d'ultrasons. Le composé fluorophile di- ou tri-bloc est ensuite ajouté à cette phase aqueuse puis l'huile fluorée est introduite goutte à goutte en pré-émulsifiant à l'Ultraturax par exemple. La pré-émulsion est alors finalisée au microfluidiseur et filtrée sur 0.45 pm. - Utilisation de la composition selon l'invention Selon un deuxième aspect, l'invention concerne aussi un agent de contraste comprenant une composition telle que décrite précédemment. Les ligands de ciblage amphiphiles cités sont essentiellement à vocation diagnostique. La composition selon l'invention est donc utile pour le diagnostic, notamment par imagerie par résonance magnétique (IRM). On peut toutefois préparer des nanoémulsions pour le traitement thérapeutique. Les nanogouttelettes comprendront alors d'une part un ligand de ciblage amphiphile ancré dans la couche de tensioactif permettant d'atteindre la cible biologique (la zone pathologique), notamment tel que défini ci-dessus, et d'autre part un principe actif utilisé comme médicament pour le traitement thérapeutique et encapsulé dans les gouttelettes d'huile fluorée dans le cas de principes actifs solubles dans l'huile fluorée. Il est précisé que comme compte tenu notamment du volume injectable aux patients, de l'ordre de 10 à 50 ml, l'huile fluorée est généralement utilisée à un taux suffisamment élevé, d'au moins 20% par rapport au poids total de la composition, afin d'avoir une solution suffisamment concentrée et un signal en IRM suffisant. Il est important d'avoir une concentration adaptée pour la durée d'injection, le moment de l'acquisition du signal et le traitement associé des données par le praticien. Une solution trop diluée la rendrait généralement inutilisable pour les examens d'imagerie médicale. Les compositions (nanoémulsions) du demandeur ont une taille de gouttelettes suffisamment petite pour leur permettre de circuler dans les milieux biologiques sans dégradation du produit, jusqu'à la cible du ligand de ciblage fixé aux gouttellettes. La taille est typiquement de 50 à 400 nm, avantageusement 100 à 350 nm, notamment 150 à 300 nm, en particulier 200 à 250 nm. Les nanogouttelettes comprennent chacune un nombre de ligands de ciblage de l'ordre de 100 à 5000, notamment 500 à 2000, ce qui permet le ciblage efficace selon l'affinité et la multivalence du ligand de ciblage. Les résultats biologiques obtenus grâce aux nouvelles nanoémulsions du demandeur montrent de plus que les ligands de ciblage sont avantageusement répartis sur l'ensemble de la surface externe des nanogouttelettes, ce qui se traduit par une multivalence optimisée des ligands de ciblage. Les ligands de ciblage amphiphiles représentent avantageusement 0.1 à 10% en moles du total des tensioactifs, avantageusement 0.5 à 5%, notamment 0.5 à 3 %. Le produit de contraste injecté ayant les compositions de nanoémulsions décrites ont une affinité avantageusement de l'ordre de 1 pM à 100 nM, notamment 1 pM à 10 nM, avantageusement 1 pM à 1 nM (l'affinité par ligand de ciblage amphiphile, est multipliée par le nombre de ligands de ciblage par nanogouttelette). Avantageusement la composition comprend 0,001 à 0.1 % en poids de ligand de ciblage amphiphile, notamment 0,01 à 0,1%. Les nanoémulsions du demandeur ont en outre l'avantage de pouvoir contrôler le type et la quantité de ligands de ciblage, et notamment de pouvoir incorporer des ligands de ciblage différents. Par exemple une nanogouttelette comprendra : un ligand de ciblage amphiphile qui permet l'accès à une zone physiologique pathologique, par exemple un ligand de ciblage de passage à travers la BHE (barrière hémato encéphalique), un autre ligand de ciblage amphiphile de ciblage qui permet ensuite le ciblage d'un marqueur biologique cible surexprimmé par certaines cellules de cette zone pathologique. Les interactions moléculaires entre le ligand de ciblage et le marqueur biologique cible permettent la captation des nanogouttelettes au niveau de la zone pathologique, et l'imagerie IRM qui en résulte permet de localiser précisément la zone pathologique. La composition formant l'agent de contraste est administrée de préférence en intravasculaire, selon le patient examiné. Les compositions lipidiques obtenues sont le cas échéant formulées à l'aide d'additifs connus rappelés par exemple dans US 6 010 682, notamment pour une administration par injection intraveineuse. On citera notamment des agents épaississants, des saccharides ou polysaccharides, le glycérol, le dextrose, le chlorure de sodium, des antimicrobiens. Avantageusement grâce aux compositions selon l'invention on peut obtenir typiquement les caractéristiques suivantes, pouvant varier selon les compositions précises des émulsions et leur procédé de préparation : viscosité cinématique (cSt) : 1 à 4 osmomalité (miliosmol) : 250 à 350 nombre de ligands de ciblage : 50 à 1000, notamment 100 à 3000 - diamètre : 10 à 300 nm L'invention concerne aussi : un produit de contraste, de préférence pour IRM, comprenant les compositions de nanoémulsions de la demande les nanoémulsions de demandeur pour leur utilisation dans le diagnostique, et notamment dans le diagnostique de maladies, notamment cancéreuses, inflammatoires, neurodégénératives, cardiovasculaires. L'invention est illustrée à l'aide des exemples qui suivent. Exemple 1 : Synthèse d'un lipophile RGD linéaire (ligand de ciblage amphiphile) Etape 1 HNI,,,,NH2 HN HOj 0 - H H2N,...'..e.,« j.,......,N1(.' Il H H 0 0 100mg (0,15mmol) de peptide H-Gly-(D)-Phe-(L)-Val-(L)-Arg-Gly-(L)Asp-NH2 (HGfVRGD-NH2) acheté chez Bachem sont dissous sous argon dans 3m1 de DMSO séché sur tamis. 241 de 3,4-Diethoxy-3-cyclobutene-1,2-dione (0.15mmol ; léquiv) et 25111 de triéthylamine sont ajoutés. Le milieu réactionnel est laissé une nuit à 40°C avant d'être précipité dans 40m1 d'éther diéthylique. Après filtration, on obtient 98mg d'une poudre blanche (Rendement : 84%) C34H48N10011 ; m/z = 773 (ES+) Etape 2 HNYNH HN 0 HOjç î OH H N rFNIYFNI 01--1(N°'11.'C) 45 H 0 0 95mg de l'intermédiaire obtenu en a) (0,12mmol ; 1 équiv) et 430mg (0,15mmol, 1,25 eq) de 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] (ammonium sait) sont dissous dans 3 mL de DMSO séché sur tamis en présence de 25111 de triéthylamine. Le milieu réactionnel est agité 48h à température ambiante avant d'être précipité dans 40m1 d'éther diéthylique. Après filtration, on obtient 400mg d'une poudre blanche. Le produit ainsi obtenu est ensuite purifié par flash sur cartouche C4 avec un gradient formiate d'ammonium 10mM pH6 / Methanol. On obtient 260mg d'une poudre blanche (Rendement : 62%). C164H305N12064P ; MALDI-TOF: Mode positif m/z = 3501 Exemple 2 : Synthèse d'un lipophile RGD cyclique (ligand de ciblage amphiphile) HN )-NH2 OH 1 0 4o IF^1(:).1'..° O 0 NH N El 0£ HN nul\--\- H 0N NH `a'Le H Même mode opératoire que pour l'exemple 4 en partant de 90mg de peptide cyclique RGDfK acheté chez Bachem. C163H302N11063P ; MALDI-TOF: Mode positif m/z = 345620 Exemple 3 : Synthèse d'un lipophile avec un peptidomimétique du RGD comprenant un groupe naphtyridine (ligand de ciblage amphiphile) Schéma de synthèse : 0 H H BocHNyk ..- rNNCbz 0 orNNCbz 0 0 HN.'. Int 2 1,0 04,S NH NH o OH H N H './.1r"^/NCbz './r NNH2 0 0 NH N H 0 N Int 3 Int 4 Molecular Weight =646,81 Molecular Formula =C31H46N607S 0_40 H OEt Et0 OEt N.''......''N H 0 Int 5 1 0.11/.....1.,e1M,..."--,/^^----./1 (0 0 }IL H2N 4./.' 0 N.\/°`Î'°\.),0)L/\././\./\/\/\/\/\ 45 H 8 1.0 C)31,r *S. 0 0 H O-IL./..."...."\/^.....".' H [ ± H 0 p- (y 0 0 0 45 H u 0 Int6 Molecular Weight =3484,34 Molecular Formula =C166H 305N8063PS Première étape : 1g de l'int 1 est dissout dans 5 ml de CH2C12. 5m1 de TFA sont ajoutés au milieu. Laisser 3h à TA puis évaporer à sec. Reprendre dans 2*40 ml d'éther iso, récupérer une huile que l'on sèche par évaporation. N .',,..... N Mobt = 0,8 g ; Rdt = 90% ; MALDI-TOF: Mode positif m/z = 564 NH N 0 Hy. N OH 0 HN Deuxième étape : Réactifs Quantités Solvants Int 2 641.031 M = 0.564g (0.001m) DMF V=10m1 Naphtyridine sous-traitée M =0.235g (0.00023m) HOBT M= 0.131g DIPEA M= 0.286g EDCI V= 0.2m1 Int3 641.032 Dissoudre l'acide dans le DMF puis introduire HOBT et EDCI et laisser 1 h sous argon. Rajouter l'int 2 et la DIPEA ; laisser 18h à TA sous argon. Après évaporation l'huile est reprise dans CH2Cl2 et lavée par une solution diluée de Na2CO3 ; après évaporation obtention d'une huile. Mobt = 0,600 g; Rdt =77%; M/Z = 780 Troisième étape : Réactifs Quantités Solvants Int 3 641.032 M = 0.6g (0.0077m) Me0H V=30m1 Pd/C 10% 1 pointe de spatule Int4: 641.034 15 Dissoudre l'int 3 dans le méthanol et introduire la solution dans l'autoclave de 125 ml ; rajouter le catalyseur et laisser 3h sous pression d'hydrogène (P= 5 bars) Après filtration du catalyseur et évaporation, obtention d'une huile que l'on lave par 50 ml d'éther iso. Attention à l'absorption possible de l'amine sur le catalyseur (travailler avec le mini de 20 catalyseur). Mobt = 0,300 g ; Rdt =60% ; HPLC = 90% ; M/Z = 646 10 Quatrième étape : Réactifs Quantités Solvants Int 4 641.034 M = 0.300g (0.000442m) DMSO V=10m1 TEA V= 0.25m1 Diethyl squarate M= 0.286g Int5: 641.037 Dissoudre l'int 4 dans le DMSO puis rajouter le diethyl squarate et la TEA ; Laisser 1 nuit à TA sous argon. Verser dans de l'ether : obtention d'une pate blanche. Mobt = 0,330 g ; Rdt =97%; M/Z = 770 Cinquième étape : Réactifs Quantités Solvants Int 5 641.037 M = 0.330g (0.00043m) DMSO V=10m1 DSPE-PEG2000 M =1.07g (0.000385m) solution saturée de Na2CO3 M= 0.131g Int6: 641.040 Dissoudre l'int 5 dans le DMSO, rajouter 3 gouttes de solution saturée en Na2CO3 => solution A. La DSPE est introduite dans 5m1 de DMSO (solution partielle) : ajouter 1 ml d'eau => toujours trouble blanc. Introduire la solution DSPE à la solution A : obtention d'un milieu trouble qui est agité 24h. Rajouter 1,5m1 d'eau et laisser encore 24h à TA : le milieu devient homogène. Après évaporation de l'eau, le résidu est lavé par 3*50 ml d'éther (permet d'éliminer le DMSO) : la pate obtenue est solubilisée dans 50 ml de CH2Cl2 et le trouble est éliminé par filtration. Le produit est purifié par une silice, éluant CH2Cl2 (faire un fractionnement fin). Après avoir rassemblé et évaporé les fractions conformes : obtention de cristaux. REMARQUE : Le produit obtenu est sous la forme acide par coupure de l'ester de methyl par la présence de Na2CO3 => Confirmation en MALDI Mobt = 0,170 g ;Rdt =17% ; M/Z = 3484 (ester de METHYL PM=3498) Exemple 4 : synthèse d'un complexe de Gd amphiphile (chélate de métal paramagnétoqie amphiphile) Schéma de synthèse : Molecular Weight =269.52 NH2 Molecular Formula =C18H39N (D) Int 2 oN HOOC) Molecular Weight =357.32 Molecular Formula =C14H19N308 HN HOOC \-N 0 Int 3 N- COOH Molecular Weight =896.36 HOOC Molecular Formula =C50H97N508 N 0 CH3OH/CH3ONa GdC13 pH=7 Int 4 Molecular Weight =1050.59 Molecular Formula =C50H94GdN508 Int 1 DMF10 Ouverture du DTPA bis anhydride par l'octadécylamine : Int 1 Int 2 Molecular Weight =357.32 Molecular Formula =C14H19N308 y 5° , a0 HOOC" DMF 50°C Molecular Weight =269.52 Molecular Formula =C18H39N NH2 HN HOOC \-N O Molecular Weight =896.36 Molecular Formula =C50H97N508 HOOC \-N 0 \--N M (g/mol) m (g) n (mmol) eq V (mL) octadécylamine 269.52 10 37.2 2.2 DTPA 357.32 6 16.8 1 bisanhydride DMF 240 Le DTPA bis anhydride est mis en suspension dans le DMF. La suspension est 10 chauffée à 50°C et il y a passage en solution. L'octadécylamine est ajouté en une seule fois. La réaction est maintenue 1 nuit à 50°C. Durant la réaction, on voit la dissolution lente de l'amine dans le DMF puis la précipitation du produit désiré. Le milieu réactionnel est refroidi puis filtré sur fritté. Le précipité est lavé une fois au DMF puis abondamment au méthanol. 15 13.5 g de poudre jaune-blanche sont obtenus avec un rendement de 90%. L'analyse de spectrométrie de masse se fait par infusion de l'échantillon en ES+. Le produit peut être dissout dans le méthanol ou le toluène en rajoutant du TFA. Int 3 COOH N-e. Complexation du ligand en milieu organique HN 0- HOOC 0 (L.° H (:)-(2Nov)GdY \I)LD H ° Int 4 HOOC CH3OH/CH3ONa Molecular Weight =1050.59 N H pH=7 Molecular Formula =C50H94GdN50E Molecular Weight =896.36 Molecular Formula =C50H97N508 M (g/mol) m (g) n (mmol) eq V (mL) Ligand Int 3 896.36 13.4 15 1 GdC13, 6H20 371 6.67 18 1.2 Me0Na/Me0H 2.68 400 Me0H 600 Le ligand (Int3) est mis en suspension dans le méthanol. Le GdC13,6H20 est 10 ajouté. Il y a solubilisation instantanément. Le pH de la solution est ajusté à 7 à l'aide d'une solution de méthanolate de sodium dans le méthanol. La solution est portée au reflux pendant 45 min. Le méthanol est évaporé et le résidu repris à l'eau. La poudre est lavée abondamment à l'eau. 15 g de produit brut sont obtenus avec un rendement de 96%. 15 L'analyse de spectrométrie de masse se fait par infusion de l'échantillon en ES+. Le produit peut être dissout dans le méthanol avec du dichlorométhane. Purification : Le produit est purifié par chromatographie flash sur gel de silice. On purifie 15 g 20 avec une phase éluante composée de 90/10 en méthanol-dichlorométhane. Après purification, 10 g de produit pur sont obtenus (poudre blanche grasse) Rendement de purification = 67% 25 Exemple 5 : synthèse d'une émulsion de PFOB avec le composé fluorophile dibloc F6H10 et le ligand de ciblage amphiphile de l'exemple 3 Int 35 1.18 g g de phosphatidylcholine de jaune d'oeuf (EPC) (Lipoïd), 220 mg de DSPE-PEG 2000 (Lipoïd) et 110 mg du composé de l'exemple 3, sont dispersés sous agitation magnétique dans 30 ml d'eau à 2,5 % m/m de glycérol pendant 2 heures après avoir été passé dans un bain à ultrasons 20 minutes. Après ajustage au pH physiologique, 740 mg de dibloc F6H10 sont ajoutés. Enfin 20 g de PFOB sont introduits lentement goutte à goutte en pré-émulsionnant à l'ultraturax. La pré-émulsion est finalisée au microfluidiseur puis filtrée sur 0,45pm. Cette composition correspond à une émulsion 40 % (m/m) de PFOB. La composition en tensioactifs est de 11 % (m/m) de tensioactifs par rapport au PFOB ou bien 16 mmol de tensioactif pour 100 g de PFOB. Les proportions molaires dans les tensioactifs sont les suivantes : 50% de F6H10 et 50% de tensioactifs non fluorés. La composition molaire en tensioactifs non fluorés est de 93% d'EPC, 5% de DSPE-PEG 2000 et 2% du composé de l'exemple 3. L'émulsion obtenue est caractérisée par un diamètre hydrodynamique de 196 nm mesurée au Nanosizer ZS de chez Malvern. Exemple 6 : synthèse d'une émulsion de PFOB avec le composé fluorophile dibloc F6H10 et le ligand de ciblage amphiphile de l'exemple 3 avec une composition différente de celle de l'exemple 5 Le protocole de synthèse est identique à l'exemple 5 mais en utilisant la composition suivante: 20 g de PFOB 590 mg d'EPC 110 mg de DSPE-PEG 2000 28 mg de composé de l'exemple 3 370 mg de dibloc F6H10 30 ml de phase aqueuse Le PFOB et le dibloc F6H10 ont été préalablement purifiés suivant la procédure décrit dans M. Le Blanc et al., Pharmaceutical research, 246-248 (1985) Cette composition correspond à une émulsion 40 % (m/m) de PFOB. La composition en tensioactifs est de 5.5 % (m/m) de tensioactifs par rapport au PFOB ou bien 8 mmol de tensioactif pour 100 g de PFOB. Les proportions molaires dans les tensioactifs sont les suivantes : 50% de F6H10 et 50% de tensioactifs non fluorés. La composition molaire en tensioactifs non fluorés est de : 94 % d'EPC, 5% de DSPE-PEG 2000 et 1 % du composé de l'exemple 3. L'émulsion obtenue est caractérisée par un diamètre hydrodynamique de 225 nm mesurée au Nanosizer ZS de chez Malvern. Exemple 7 : synthèse d'une émulsion de PFOB avec le composé fluorophile dibloc F6H10 et le ligand de ciblage amphiphile de l'exemple 1 Protocole de synthèse identique à l'exemple 5 mais en utilisant le composé de l'exemple 1 à la place de celui de l'exemple 3. 5 g de PFOB 145 mg d'EPC 30 mg de DSPE-PEG 2000 mg de composé de l'exemple 1 92 mg de dibloc F6H10 ml de phase aqueuse 15 Cette composition correspond à une émulsion 20 % (m/m) de PFOB. La composition en tensioactifs est de 5.5 % (m/m) de tensioactifs par rapport au PFOB ou bien 8 mmol de tensioactif pour 100 g de PFOB. Les proportions molaires dans les tensioactifs sont les suivantes : 50% de F6H10 et 50% de tensioactifs non fluorés. La composition molaire en tensioactifs non fluorés est de : 93% d'EPC, 5% de DSPE-PEG 20 2000 et 2% du composé de l'exemple 1. L'émulsion obtenue est caractérisée par un diamètre hydrodynamique de 178 nm mesurée au Nanosizer ZS de chez Malvern. Exemple 8 : Synthèse d'une émulsion de PFOB avec le composé fluorophile dibloc F6H10 et le ligand de ciblage amphiphile de l'exemple 1 avec un faible % de tensioactifs Protocole identique à l'exemple 5 mais en incorporant les quantités suivantes de tensioactifs : 5 g de PFOB 75 mg d'EPC 15 mg de DSPE-PEG 2000 7 mg de composé de l'exemple 1 46 mg de dibloc F6H10 20 ml de phase aqueuse35 Cette composition correspond à une émulsion 20 % (m/m) de PFOB. La composition en tensioactifs est de 2.75 % (m/m) de tensioactifs par rapport au PFOB ou bien 4 mmol de tensioactif pour 100 g de PFOB. Cette composition n'est pas dans la gamme [3%-15% massique]. Les proportions molaires dans les tensioactifs sont les suivantes : 50% de F6H10 et 50% de tensioactifs non fluorés. La composition molaire en tensioactifs non fluorés est de : 93% d'EPC, 5% de DSPE-PEG 2000 et 2% du composé de l'exemple 3. L'émulsion obtenue est caractérisée par un diamètre hydrodynamique de 260 nm mesurée au Nanosizer ZS de chez Malvern Exemple 9 : Synthèse d'une émulsion de PFOB avec le composé fluorophile dibloc F6H10 et le ligand de ciblage amphiphile de l'exemple 1 avec une étape solvant. La composition est identique à celle de l'exemple 7 mais le mode opératoire inclus un solvant organique : L'EPC, le DSPE-PEG 2000, le composé de l'exemple 1 et le dibloc F6H10 sont dissous dans un mélange chloroforme / méthanol (7/3). La phase organique est évaporée dans un rotavapor . Le film obtenu est repris dans la phase aqueuse puis le PFOB est ajouté à la solution. Cette solution est passée à l'Ultraturax puis au microfluidiseur et enfin filtrée sur 0.45 prn. L'émulsion obtenue est caractérisée par un diamètre hydrodynamique de 336 nm. Exemple 10 : synthèse d'une émulsion PFOB avec ajout de rhodamine. Le protocole est identique à celui de l'exemple 5 avec les quantités suivantes de tensioactifs : 20 g de PFOB 580 mg d'EPC 110 mg de DSPE-PEG 2000 55 mg de composé de l'exemple 3 370 mg de dibloc F6H10 2 mg de DSPE - rhodamine (Lipoïd) 30 ml de phase aqueuse Cette composition correspond à une émulsion 40 % (m/m) de PFOB. La composition en tensioactifs est de 5.5 % (m/m) de tensioactifs par rapport au PFOB ou bien 8 mmol de tensioactif pour 100 g de PFOB. Les proportions molaires dans les tensioactifs sont les suivantes : 50% de F6H10 et 50% de tensioactifs non fluorés. La composition molaire en tensioactifs non fluorés est de : 92.8% d'EPC, 5% de DSPE-PEG 2000, 2% du composé de l'exemple 3 et 0.2% de DSPE-rhodamine. L'émulsion obtenue est caractérisée par un diamètre hydrodynamique de 198 nm mesurée au Nanosizer ZS de chez Malvern Exemple 11 : synthèse d'une émulsion PFOB avec rhodamine et complexe de Gd : Le protocole est identique à celui de l'exemple 5 avec les quantités suivantes de tensioactifs : 20 g de PFOB 460 mg d'EPC 110 mg de DSPE-PEG 2000 370 mg de dibloc F6H10 2 mg de DSPE - rhodamine (Lipoïd) 168 mg du composé de l'exemple 4 30 ml de phase aqueuse Cette composition correspond à une émulsion 40 % (m/m) de PFOB. La composition en tensioactifs est de 5.5 % (m/m) de tensioactifs par rapport au PFOB ou bien 8 mmol de tensioactif pour 100 g de PFOB. Les proportions molaires dans les tensioactifs sont les suivantes : 50% de F6H10 et 50% de tensioactifs non fluorés. La composition en tensioactifs non fluorés est de : 74.8% d'EPC, 5% de DSPE-PEG 2000, 0.2% de DSPErhodamine et 20% de complexe de Gd. L'émulsion obtenue est caractérisée par un diamètre hydrodynamique de 210 nm mesurée au Nanosizer ZS de chez Malvern Exemple 12 : synthèse d'une émulsion de PFOB sans dibloc avec le ligand spécifique de l'exemple 1 (exemple comparatif) Le protocole est identique à celui de l'exemple 5 cependant le dibloc F6H10 n'est pas ajouté. Les différents composés sont introduits dans les quantités suivantes : 5 g de PFOB 285 mg d'EPC 15 mg de DSPE-PEG 2000 7 mg de composé de l'exemple 1 20 ml de phase aqueuse Cette composition correspond à une émulsion 20 % (m/m) de PFOB. La composition en tensioactifs est de 6 % (m/m) de tensioactifs par rapport au PFOB ou bien 7 mmol de tensioactif pour 100 g de PFOB. Les proportions molaires dans les tensioactifs sont les suivantes : 98 % d'EPC, 1.5 % de DSPE-PEG 2000 et 0.5 % du composé de l'exemple 1. L'émulsion obtenue est caractérisée par un diamètre hydrodynamique de 134 nm mesurée au Nanosizer ZS de chez Malvern. Exemple 13 : synthèse d'une émulsion de crown ether Le protocole et la composition sont identiques à l'exemple 5 en remplaçant le PFOB par le perfluoro 15- crown-5 ether. Exemple 14 : suivi en stabilité des émulsions des exemples 5, 7, 8, 9, 12 Le tableau suivant rapporte les mesures de diamètre hydrodynamique mesuré au Nanosizer ZS de chez Malvern à t = 0, 3, 9 et 12 mois. Produit DH (nm) DH (nm) DH (nm) 9 DH (nm) TO 3 mois mois 12 mois Exemple 5 196 240 257 ND Exemple 7 178 230 263 283 Exemple 8 260 313 400 430 Exemple 12 134 202 300 > 1 jim Exemple 9 336 641 300 et ND 2000 Les émulsions des exemples 5, 7 et 8 présentent une bonne stabilité à 12 mois malgré une légère augmentation de taille. Exemple 14 : mesure d'IC50 des émulsions des exemples 5, 7, 8, 9 et 12. La mesure d'IC50 des émulsions est réalisée 3 par des mesures de compétitions avec ocv133 sur des cellules HUVEC surexprimant de l'Echistatine 1251. La suspension des HUVEC est distribuée dans une plaque 96 puits à fond conique, à raison de 2.105 cellules dans 50 pl_ en tampon de binding. Cinquante pl_ des solutions de concentration croissante d'échistatine ou des produits RGD sont ajoutés par puits. Le contrôle positif est réalisé par l'ajout de tampon de binding sans compétiteur. L'ensemble des points de concentration est réalisé en duplicat. La plaque est incubée 2 h à température ambiante sous agitation. Cinquante 1.11_ de la solution d'échistatine-1251-SIB à 3 nM sont alors distribués dans chaque puits et la plaque est de nouveau incubée 2 h à température ambiante sous agitation. Les mélanges réactionnels sont transférés dans des ampoules contenant 200 1.11_ d'un coussin de densité composé de paraffine et de dibutylphtalate (10/90). Les microtubes sont ensuite centrifugés à 12 000 rpm pendant 3 min. Les tubes sont finalement congelés dans l'azote liquide, puis sectionnés afin de compter le culot cellulaire et le surnageant au compteur gamma. Une courbe de compétition est alors tracée où la fixation relative de l'échistatine1251-SIB est déterminée par l'équation suivante : RadidoctikMe fix...ee a13 ,..-xéseri.f...e conlyebteur Fixation relative de l'échistatine-1125-SIB = ReeciactivÊté: :de rechwtilbn Gka î. i. (r.13d1), X 100 Les données sont analysées à l'aide du logiciel GraphPad Prism® 5.0 qui détermine les valeurs 1050 pour chaque produit à partir de la courbe de compétition. Composé 1050 (nM d'émulsion) Exemple 5 0.002 Exemple 7 4 Exemple 8 6 Exemple 9 0.7 Exemple 12 75 REVENDICATIONS1. Composition de nanoémulsion huile dans eau, comprenant : une phase aqueuse, une phase fluorée comprenant au moins une huile fluorée, un tensioactif à l'interface entre les phases aqueuse et fluorée, le tensioactif comprenant : au moins un ligand de ciblage amphiphile, au moins un lipide amphiphile, et au moins un composé fluorophile di- ou tri-bloc. 2. Composition selon la revendication 1 dans laquelle le composé fluorophile dibloc a pour formule RF -L-RH (-Z)z dans laquelle : 1) RF est un groupe fluoré ou perfluoré (qui comprend ou non des chaînes latérales et/ou des cycles et/ou des hétéroatomes notamment des halogènes) 2) RH est un groupe hydrocarboné qui comprend ou non des chaînes latérales et/ou des cycles et/ou des hétéroatomes notamment des halogènes et/ou des liaisons multiples; 3) L est un groupe de liaison et peut comprendre notamment un des groupes suivants : liaison simple, -CH2-, -CH=CH-, -0-, -S-, -PO4 -, CONH 4) Z est H ou un groupe plus polaire ou polarisable que les groupes RH, 5) z représente 0 ou 1. 3. Composition selon la revendication 1 ou 2 dans laquelle le composé fluorophile di- ou tri-bloc est choisi parmi : les composés de formule C n F 2n+1 C m H 2m+1 (saturé), ou de formule C n F 2n+1 C m H 2m-1 (insaturé), ou leurs combinaisons, n étant un nombre entier de 2 à 12 et m étant un entier de 2 à 16, les composés de formule Cp H 2p+1 -C n F2n - C m H 2m+1, avec p=1-12, m=1-12 et n=2-12, les composés de formule Cn F 2n+1 - CH = CH - C m H 2m+1 , avec n et m identiques ou différents comprise entre 2 et 12, les composés éthers ou polyéthers substitués de formule XC n F2n 0Cm H2m X, XCF2OCn H2n OCF2 X, avec n et m=1-4, X=Br, Cl ou I,- les composés diblocs ou triblocs éthers de formule - a) 0 n F 2n+1 -0-C m H 2m+1, avec n=2-10; m=2-16 ou - b) Cp H 2p+1 -0-Cn F2n -0-C m H 2m+1, avec p=2-12, m=1-12 et n=2-12, où, dans chaque formule, n, m et p sont des nombres entiers. 4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3 comprenant : une phase aqueuse, représentant de préférence 29.4 à 80 % en poids de la composition, avantageusement 55 à 65%, plus avantageusement de 58 à 62%, une phase fluorée comprenant au moins une huile fluorée, représentant 19.4 à 70% en poids de la composition, avantageusement 35 à 45%, plus avantageusement 37 à 42°/0, un tensioactif à l'interface entre les phases aqueuse et fluorée, le tensioactif comprenant un composé fluorophile di- ou tri-bloc, au moins au moins un lipide amphiphile et au moins un ligand de ciblage amphiphile, la teneur totale en tensioactif en poids par rapport à l'huile fluorée étant comprise entre 3 et 10%, avantageusement entre 4 et 8 % ; la teneur totale en tensioactif en poids par rapport à la composition étant comprise entre 0.6 et 7%, avantageusement entre 1 et 3 % . 5. Composition selon l'une des revendications 1 à 4 dans laquelle le tensioactif comprend: - des composés amphiphiles non fluorés dont 80 à 95% en moles de lipide amphiphile, 0 à 5% en moles de lipides pegylés et 0.1 à 10% en moles de ligand de ciblage amphiphile. - des composés fluorophiles di- ou tri-blocs ; les composés amphiphiles non fluorés représentant 30 à 60% en moles des tensioactifs totaux, et les composés fluorophiles di- ou tri-blocs représentent 30 à 60% en moles des tensioactifs totaux ; avantageusement les composés amphiphiles non fluorés représentant 50 % en moles des tensioactifs totaux, et les composés fluorophiles di- ou tri-blocs représentent 50 % en moles des tensioactifs totaux. 6. Composition selon l'une des revendications 1 à 5 dans laquelle : 1) le tensioactif comprend : - 50% en moles de composés fluorophiles di- ou tri-blocs- 50% en mol de composés amphiphiles non fluorés 2) les 50% de composés amphiphiles non fluorés comprennent : - 50 à 95% en moles de lipide amphiphile, - 0 à 25% en moles de chélate de métal paramagnétique amphiphile, - 0.1 à 10% en moles de ligand de ciblage amphiphile. - 0 à 10% en moles de lipides pegylés - 0.1 à 0.5% en moles de composés amphiphiles comprenant un fluorophore. 7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6 dans laquelle l'huile fluorée est choisie parmi les perfluorocarbones linéaires ou ramifiés, ou cycliques ou polycycliques, saturés ou insaturés, des amines tertiaires cycliques perfluorées, des perfluoro esters ou thioesters, des haloperfluorocarbones ; et avantageusement : perfluorooctylbromide PFOB, C8F17Br (PFOB ou perfluorobron), perfluorooctyléthane (C8F17C2H5 PFOE), perfluorodecalin FDC, perfluorooctane C8F18, perfluorodichlorooctane, bromure de perfluoro-n-octyl, perfluoroheptane, perfluorodécane Ci oF22, perfluorododécyle bromide C10F22Br PFDB, perfluorocyclohexane, perfluoromorpholine, perfluorotripropylamine, perfluorotributylamine, perfluorodiméthylcyclohexane, perfluorotriméthylcyclohexane, ester de perfluorodicyclohexyl, perfluoro-n- butyltétrahydrofuran. 8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7 dans laquelle le ligand de ciblage du ligand de ciblage amphiphile est choisi parmi : les pharmacophores, les peptides (avantageusement de moins de 20 acides aminés, plus avantageusement de 5 à 10 acides aminés), les pseudopeptides, les peptidomimétiques, les acides aminés, les peptides et pseudopeptides, peptidomimétiques de ciblage d'intégrines, les glycoprotéines, les lectines, la biotine, les dérivés ptéroïques ou aminoptéroïques, l'acide folique, les dérivés de l'acide folique et antifolique, les anticorps ou fragments d'anticorps, l'avidine, les stéroïdes, les oligonucléotides, les séquences d'acide ribonucléique, les séquences d'acide désoxyribonucléique, les hormones, les protéines éventuellement recombinantes ou mutées, les mono- ou polysaccharides, les agents de ciblage de récepteurs cellulaires ou d'enzymes (notamment de ciblage de kinases, notamment tyrosine kinase ; de métalloprotéases ; de caspases). 9. Composition selon l'une des revendications 1 à 7 dans laquelle le ligand de ciblage du ligand de ciblage amphiphile est un composé naphtyridine. 10. Composition selon l'une des revendications 1 à 9 dans laquelle le ligand de ciblage amphiphile s'écrit sous la forme : Bio - L1- L2- Lipo dans laquelle : Bio est un ligand de ciblage, Lipo est un groupe lipophile permettant l'insertion du ligand de ciblage au sein de la couche de tensioactif L2 est un groupe de liaison, avantageusement choisi parmi : C1-6 alkylène, PEG par exemple CH2-(CH2-O-CH2)k-CH2 avec k=2 à 10, (CH2)3- NH, NH-(CH2)2-NH, NH-(CH2)3-NH, rien ou une simple liaison, (CH2)n, (CH2)n-00- , -(CH2)nNH-00- avec n nombre entier de 2 à 10 , (CH2CH20)q(CH2)r-00- , (CH2CH20)q(CH2)r-NH-00- avec q nombre entier de 1 à 10 et r nombre entier de 2 à 10, (CH2)n-CONH - , (CH2)n-CONH - PEG, (CH2)n-NH- HOOC-CH2-0- (CH2)2-0-(CH2)2-0-CH2-COOH ; HOOC-(CH2)2-0O2-(CH2)2-0C0-(CH2)2- COOH ; HOOC-CH(OH)-CH(OH)-COOH; HOOC-(CH2)n-COOH; NH2-(CH2)n- NH2, avec n nombre entier de 0 à 20; NH2-(CH2)n-CO2H ; NH2-CH2 - (CH2-0- CH2)n-CO2H avec n nombre entier de 1 à 10, squarate P1-1-P2, P1 et P2 identiques ou différents, étant choisis parmi O, S, NH, rien (liaison simple), CO2, NHCO, CONH, NHCONH, NHCSNH, SO2NH-, NHSO2-, squarate avec I = alkylène, alkoxyalkylène, polyalkoxyalkylène (notamment PEG), alkylène interrompu par un ou plusieurs squarates ou par un ou plusieurs aryles, avantageusement phényle, alcénylène, alcynylène, alkylène interrompu par un ou plusieurs groupes choisis parmi -NH-, -0-, -CO-, -NH(CO)-, -(CO)NH-, - 0(C0)-, ou -(0C)0- , L1 est choisi parmi une liaison simple, -CONH-, -000-, -NHCO-, -000-, -NH-CS-NH-, -C-S-, -N-NH-CO-, -CO- NH-N-, -CH2-NH-, -N-CH2-, -N-CS-N-, -CO-CH2-S-, -N-COCH2-S-, -N-CO-CH2-CH2-S-, -CH=NH-NH-, -NH-NH=CH-, -CH=N-O-, -O-N=CH- ou répondant aux formules suivantes :0 / H N----- CI N H 0 N -*": N N "-----L-'-'s N " 11.- Agent de contraste comprenant une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10.