Brevet FR2963007A1 — publié le 20120127

DÉRIVÉS ANTICANCEREUX, LEUR PRÉPARATION ET LEUR APPLICATION THÉRAPEUTIQUE La présente invention se rapporte à des conjugués de dimères de pyrrolo[1,4]benzodiazépine (PBD), les compositions les contenant et leur application thérapeutique, notamment comme anticancéreux. L'invention se rapporte aussi au procédé de préparation des conjugués à leur application en tant qu'anticancéreux ainsi qu'aux dimères eux-mêmes. [Domaine technique] Les dimères de pyrrolo[1,4]benzodiazépines sont des anticancéreux qui agissent en se liant de façon covalente à l'ADN des cellules. Ces dérivés ont été décrits dans les demandes WO 00/12508 et WO 2005/085260 ainsi que dans les publications suivantes : Eur.J,Med.Chem. 2005, 40, 641-654 ; Tetrahedron Letters 1988, 29(40), 5105-5108. La chimie des conjugués est connue depuis de nombreuses années et a été appliquée à plusieurs familles de cytotoxiques comme par exemple les maytansinoïdes (WO 04103272), les taxanes (WO 06061258), les leptomycines (WO 07144709), le CC-1065 et ses analogues (WO 2007102069); voir aussi à propos des conjugués, Monneret C., et al., Bulletin du Cancer 2000, 87(11), 829-38 ; Ricart A.D., et al., Nature Clinicat Practice Oncology 2007, 4, 245-255 ; Singh R. et Rickson H.K., Therapeutic Antibodies : Methods and Protocols, 2009, 525, 445-467. [Art antérieur] Des conjugués de dimères de pyrrolo[1,4]benzodiazépine ont déjà été décrits dans demandes WO 07085930 ou WO 2009/016516. Les dimères utilisés ont pour formules : N~~H les X-An-T-A'n'-X',, N O H -N X-An-T-A'n'-X' H dans lesquelles T peut représenter un groupe aryle ou hétéroaryle substitué par -G-D-(Z)p SZa ou -G-D-(Z)p-C(=O)ZbRb. G représente une liaison simple ou double ou bien -0-, -S- ou -NR-. D représente une liaison simple ou bien l'un des groupes suivants : -E-, -E-NR-, -E-NR-F-, -E-O-, - E-O-F-, -E-NR-CO-, -E-NR-CO-F-, -E-CO-, -CO-E-, -E-CO-F, -E-S-, -E-S-F-, -E-NR-C-S-, -E-NRCS-F- pour lesquels E et F sont choisis parmi -(OCH2CH2);alkyl(OCH2CH2)i-, -alkyl(OCH2CH2);-alkyl-, -(OCH2CH2);-, -(OCH2CH2);cycloalkyl(OCH2CH2)i-, -(OCH2CH2);hétérocyclyl(OCH2CH2)i-, - (OCH2CH2);aryl(OCH2CH2)i-, -(OCH2CH2);hétéroaryl(OCH2CH2)i-, -alkyl-(OCH2CH2);alkyl(OCH2CH2)i-, -alkyl-(OCH2CH2);-, -alkyl-(OCH2CH2);cycloalkyl(OCH2CH2)i-, - alkyl(OCH2CH2);hétérocyclyl(OCH2CH2)i-, -alkyl-(OCH2CH2);aryl(OCH2CH2)i-, alkyl(OCH2CH2);hétéroaryl(OCH2CH2)i-, -cycloalkyl-alkyl-, -alkyl-cycloalkyl-, -hétérocyclyl-alkyl-, - alkyl-hétérocyclyl-, -alkyl-aryl-, -aryl-alkyl-, -alkyl-hétéroaryl- , -hétéroaryl-alkyl-. I et j représentent des nombres entiers allant de 0 à 2000. Z représente un groupe alkyle et p est un nombre entier valant 0 ou 1. Dans ces composés, le R du groupe NR ne comprend pas de chaîne PEG. Immunogen a décrit en novembre 2009 au congrès de l'EORTC (Abstract B-126) le conjugué suivant : qui se distingue par la nature du linker et du composé cytotoxique. Ce composé a été redécrit au congrès Sixth Annual PEGS à Boston ayant eu lieu du 17 au 21 mai 2010 ainsi que les McOOOCOOR O composés précurseurs suivants : hydroxysuccinimide ou Me. Les dimères suivants sont notamment décrits respectivement dans WO 07085930 et WO 2009/016516 : NH-anticorps avec R= N- (ex.28) H ~N o- O N O O' /7-N O O Ces trois demandes ne décrivent ni ne suggèrent les nouveaux linkers de l'invention qui comprennent une ou deux chaîne(s) pegylée(s). [Problème technique] Le problème technique qu'entend résoudre la présente invention est de proposer de nouveaux conjugués de dimères de pyrrolo[1,4]benzodiazépine. [Définitions] On entend par : - conjugué : un agent de ciblage cellulaire auquel est attaché de façon covalente au moins une molécule d'un composé cytotoxique ; - agent de ciblage cellulaire (ou « cell binding agent » en anglais) : une molécule ayant une affinité pour une cible biologique : il peut s'agir par exemple d'un ligand, d'une protéine, d'un anticorps, plus particulièrement monoclonal, d'un fragment de protéine ou d'anticorps, d'un peptide, d'un oligonucléotide, d'un oligosaccharide. L'agent de ciblage a pour fonction de diriger le composé biologiquement actif comme un cytotoxique vers la cible biologique ; - cible biologique : un antigène (ou groupe d'antigènes) localisé préférentiellement à la surface des cellules cancéreuses ou cellules stromales associées à cette tumeur ; ces antigènes pouvant être par exemple, un récepteur de facteur de croissance, un produit d'oncogène ou de gène « suppresseur de tumeur » muté, une molécule liée à l'angiogénèse, une molécule d'adhésion ; - linker : un ensemble d'atomes permettant d'attacher de façon covalente un composé cytotoxique à l'agent de ciblage ; - groupe alkyle : un groupe hydrocarboné aliphatique saturé obtenu en enlevant un atome d'hydrogène d'un alcane. Le groupe alkyle peut être linéaire ou ramifié. A titre d'exemples, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, iso-butyle, tertio-butyle, pentyle, 2,2-diméthylpropyle, hexyle ; - groupe cycloalkyle : un groupe alkyle cyclique comprenant entre 3 et 8 atomes de carbone engagés dans la structure cyclique. A titre d'exemples, on peut citer les groupes cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle, cyclohexyle ; - groupe aryle : un groupe aromatique ne contenant pas d'hétéroatome, mono- ou bicyclique. II s'agit plus particulièrement des groupes phényle et naphtyle ; - groupe hétéroaryle : un groupe aromatique comprenant au moins un hétéroatome (O, S, N) engagé dans le cycle et relié aux atomes de carbone formant le cycle, mono- ou bicylique. II s'agit plus particulièrement des groupes pyridinyle, pyrrolyle, thienyle, furanyle, pyrimidinyle, triazolyle ; - groupe hétérocycloalkyle : un groupe cycloalkyle comprenant au moins un hétéroatome (O, S, N) engagé dans le cycle et relié aux atomes de carbone formant le cycle. II s'agit plus particulièrement des groupes pipérazino, N-méthylpipérazino, morpholino, pipéridino ou pyrrolidino ; - groupe alcoxy : un groupe -0-alkyle, où le groupe alkyle est tel que défini ci-dessus ; - groupe alcanoyloxy : un groupe -O-CO-alkyle, où le groupe alkyle est tel que défini ci-dessus ; - groupe alkylène : un groupe divalent saturé de formule brute -CmH2m , obtenu en enlevant deux atomes d'hydrogène d'un alcane. A titre d'exemples, on peut citer les groupes méthylène (-CH2-), éthylène (-CH2CH2-), propylène (-CH2CH2CH2-), butylène (-CH2CH2CH2CH2-), Me, Me isobutylène ( ), hexylène (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-). Le groupe alkylène peut être plus particulièrement de formule -(CH2)m , m représentant un nombre entier ; - dans les plages de valeurs, les bornes sont incluses (par ex. une plage du type « i allant de 1 4 à 6 » inclut les bornes 1 et 6. De plus, la plage décrit aussi tous les points de plage ; ainsi, « i allant de 1 à 6 » décrit les valeurs 1, 2, 3, 4, 5 et 6. Abréviations utilisées AcOEt : acétate d'éthyle ; ALK : groupe alkylène ; (CX Cy)ALK : groupe (CX Cy)alkylène ; CCM : chromatographie sur couche mince (TLC en Anglais) ; CMS : chlorure de méthanesulfonyle ; DBU : 1,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ène ; DCC : N,N'-dicyclohexylcarbodiimide ; DCM : dichlorométhane ; DEAD : diéthylazodicarboxylate ; DIC: N,N'-diisopropylcarbodiimide ; DIPEA : N,N-diisopropyléthylamine ; DMA : diméthylacétamide ; DMAP : 4-diméthylaminopyridine ; DME : diméthoxyéthane ; DMF : diméthylformamide ; DMSO: diméthylsulfoxyde ; eLO nm coefficient d'extinction molaire à la longueur d'onde LO ; EEDQ : 2-éthoxy-1-éthoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline ; EDCI : N-(3-diméthylaminopropyl)-N'-éthylcarbodiimide ; EDTA : acide éthylène-diamine-tétraacétique ; Fmoc : fluorénylméthoxycarbonyl ; Hal : atome d'halogène ; HOBt : 1-hydroxybenzotriazole ; HEPES : acide 4-(2-hydroxyéthyl)-1- pipérazineéthanesulfonique ; LO : longueur d'onde ; NHS: N-hydroxysuccinimide ; NMP : N-méthylpyrrolidinone ; PR: pression réduite ; Rf : facteur de rétention ; SEC: chromatographie d'exclusion stérique ; TA : température ambiante ; TBDMS : tert-butyldiméthylsilyl ; TEA : triéthylamine ; TFA : acide trifluoroacétique ; TIPS : triisopropylsilyl ; THF : tétrahydrofurane ; tR : temps de rétention. [Figures] Fig.1 : modification d'un agent de ciblage par le SPDP ; Fig.2 : modification d'un agent de ciblage par un iminothiolane ; Fig.3: spectre de masse haute résolution déconvolué du conjugué de l'ex.l après déglycosylation. Cette figure montre la distribution des espèces portant de 0 à 8 dimères de tomaymycines (Do : aucun dimère ; DX : x dimères). [Brève description de l'invention] L'invention est relative à des composés de formule (I) : Q-(CH2CH2O)k-CH2CH2-G N, GCR, L, L2 W 11 U ° (I) dans laquelle : - représente une liaison simple ou une liaison double avec la condition que si représente une liaison simple alors : - ---- représente une liaison simple ; - U et/ou U' identique ou différent, représente(nt) indépendamment l'un de l'autre H ; - W et/ou W' identique ou différent, représente(nt) indépendamment l'un de l'autre : OH, -OR, -OCOR, -OOOR, -OCOOR, -OCONRR', un carbamate cyclique tel que N10 et C11 soient inclus dans un cycle, -NRCONRR', - OCSNHR, un thiocarbamate cyclique tel que N10 et C11 soient inclus dans un cycle, - SH, -SR, -SOR, -SOOR, -S03-, -NRSOOR', -NRR', une amine cyclique telle que N10 et C11 soient inclus dans un cycle, -NROR', -NRCOR', -N3, -CN, Hal, un groupe trialkylphosphonium ou triarylphosphonium ; - RI, R2, RI', R2' identiques ou différents, représentent, indépendamment l'un de l'autre : H, Hal ou un groupe (C1-C6)alkyle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituant(s) choisi(s) parmi : Hal, CN, NRR', CF3, OR, un groupe aryle ou hétéroaryle, S(0)qR avec q =0,1 ou 2 ; ou bien RI et R2 et/ou Ri' et R2' forment ensemble respectivement une double liaison =CH2 ou =CH-CH3 ; - Y et Y', identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre H ou -OR ; - M représente CH ou N ; - ALK et ALK' désignent un groupe (C1-C6)alkylène ; - R et R' représentent indépendamment l'un de l'autre, H ou un groupe (C1-C6)alkyle ou aryle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituant(s) choisi(s) parmi : Hal, CN, NRR', CF3, OR, un groupe aryle ou hétéroaryle ; - LI représente : o une liaison simple ; ou o le groupe -(OCH2CH2)i-, rattaché au cycle phényle ou pyridinyle par l'atome d'oxygène, i représentant un nombre entier allant de 2 à 40, de préférence de 2 à 10; ou o le groupe -D-(C1-C6)ALK- rattaché au cycle phényle ou pyridinyle par D, dans lequel D représente -0-, -NH- ou -N(C1-C4)alkyle-; - L2 représente : o un groupe -(C1-C6)ALK- ; 35 ou o le groupe -(CH2CH2O))-CH2CH2-, j représentant un nombre entier allant de 1 à 40, de préférence de 1 à 10 ; ou o un groupe -(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK-, rattaché à l'atome d'azote par le motif -(CH2CH2O)-, j représentant un nombre entier allant de 1 à 40, de préférence de 1 à 10, et R" représentant H ou un groupe (C1-C4)alkyle; - Q représente une liaison simple ou le groupe C(=0) ; - k représente un nombre entier allant de 0 à 40, de préférence de 1 à 40, plutôt de 1 à 10 ; - G représente un groupe -OR ou -NRR', R et R' étant tels que définis précédemment ou étant tels qu'ils forment ensemble avec l'atome d'azote auxquels ils sont liés un groupe (C4-C1o)hétérocycloalkyle pouvant comprendre dans le cycle un autre hétéroatome choisi parmi N, O ou S et pouvant être éventuellement substitué par au moins un substituant choisi parmi un groupe (C1-C4)alkyle, un atome d'halogène ou un groupe hydroxy ; - GCR1 représente le groupe -SZa ou -C(=O)-ZbRb ; - Za représente Ac, Ra or SRa ; - Ra représente H, ou un groupe (C1-C6)alkyle, (C3-C8)cycloalkyle, aryle, hétéroaryle ou (C4-C1o)hétérocycloalkyle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituant(s) choisi(s) parmi : Hal, CN, NRR', CF3, OR, NO2, un groupe aryle ou hétéroaryle ; - Zb représente une liaison simple, -O- ou -NH- et Rb représentant H ou un groupe (Cr C6)alkyle, (C3-C8)cycloalkyle, aryle, hétéroaryle ou (C4-C1o)hétérocycloalkyle ou bien Zb représente une liaison simple et Rb représente Hal ; avec la condition que si LI représente une liaison simple alors GCR1 représente -SZa. Plus particulièrement, il s'agit des composés de formule (IA) ou (IB) : Q-(CH,CH2O)k CH2CH2 G ,GCR, I, Li O~~ O N-Nt Q-(CH2CH2O)k CH2CH2 G L'invention est aussi relative au procédé de préparation d'un conjugué, consistant à : (i) mettre en contact et laisser réagir une solution aqueuse, éventuellement tamponnée, de l'agent de ciblage, éventuellement modifié à l'aide d'un agent de modification, et une solution d'un composé de formule (I), (ii) puis à éventuellement séparer le conjugué formé à l'étape (i) du composé de formule (I) et/ou de l'agent de ciblage n'ayant pas réagi et/ou des agrégats qui se seraient éventuellement formés. Le groupe chimique GCR1 du composé de formule (I) doit être réactif vis-à-vis des groupes chimiques GCR2 présents sur l'agent de ciblage notamment vis-à-vis des groupes amino présents sur les anticorps, lesdits groupes chimiques GCR2 ayant été introduits le cas échéant par l'agent de modication. de façon à assurer l'attachement du composé de formule (I) sur l'agent de ciblage par formation d'une liaison covalente. L'invention est aussi relative à un conjugué ainsi qu'à une solution de conjugué susceptible d'être obtenu(e) par le procédé décrit ci-dessus. L'invention est aussi relative à l'utilisation d'un dérivé de formule (I) pour la préparation d'un agent de ciblage auquel est attaché de façon covalente en position para de M le dimère de formule : Le composé, le conjugué ainsi que la solution du conjugué peuvent être utilisés en tant qu'anticancéreux. L'invention est aussi relative au composé de formule P2 : Q-(CH2CH2O)k-CH2CH2G P z LGALK MALK' LG' dans laquelle LI, L2, Q, k, ALK, ALK' et G sont tels que définis précédemment ; LG et LG' représentent un groupe partant et X' représente GCR1. L'invention est aussi relative à un agent de ciblage auquel a été attaché de façon covalente en position para de M le dimère de formule : 20 w u Ri' R2 après réaction d'un composé de l'invention avec l'agent de ciblage. 25 [Description de l'invention] L'invention est relative à des composés de formule (I) : Q-(CH2CH2O)k-CH2CH2-G N~ GCR, LI L2 dans laquelle : représente une liaison simple ou une liaison double avec la condition que si représente une liaison simple alors : - ---- représente une liaison simple ; - U et/ou U' identique ou différent, représente(nt) indépendamment l'un de l'autre H ; - W et/ou W' identique ou différent, représente(nt) indépendamment l'un de l'autre : OH, -OR, -OCOR, -000R, -OCOOR, -OCONRR', un carbamate cyclique tel que N10 et C11 soient inclus dans un cycle, -NRCONRR', - OCSNHR, un thiocarbamate cyclique tel que N10 et C11 soient inclus dans un cycle, - SH, -SR, -SOR, -SOOR, -SO3 , -NRSOOR', -NRR', une amine cyclique telle que N10 et C11 soient inclus dans un cycle, -NROR', -NRCOR', -N3, -CN, Hal, un groupe trialkylphosphonium ou triarylphosphonium ; - RI, R2, RI', R2' identiques ou différents, représentent, indépendamment l'un de l'autre : H, Hal ou un groupe (C1-C6)alkyle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituant(s) choisi(s) parmi : Hal, CN, NRR', CF3, OR, un groupe aryle ou hétéroaryle, S(0)qR avec q =0,1 ou 2 ; ou bien RI et R2 et/ou Ri' et R2' forment ensemble respectivement une double liaison =CH2 ou =CH-CH3 ; - Y et Y', identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre H ou -OR ; - M représente CH ou N ; - ALK et ALK' désignent un groupe (C1-C6)alkylène ; - R et R' représentent indépendamment l'un de l'autre, H ou un groupe (C1-C6)alkyle ou aryle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituant(s) choisi(s) parmi : Hal, CN, NRR', CF3, OR, un groupe aryle ou hétéroaryle ; - LI représente : o une liaison simple ; (I) ou o le groupe -(OCH2CH2)i-, rattaché au cycle phényle ou pyridinyle par l'atome d'oxygène, i représentant un nombre entier allant de 2 à 40, de préférence de 2 à 10, ou o le groupe -D-(C1-C6)ALK- rattaché au cycle phényle ou pyridinyle par D, dans lequel D représente -0-, -NH- ou -N(C1-C4)alkyle- ; - L2 représente : o un groupe -(C1-C6)ALK- ; ou o le groupe -(CH2CH2O)i-CH2CH2-, j représentant un nombre entier allant de 1 à 40, de préférence de 1 à 10 ; ou o un groupe -(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK-, rattaché à l'atome d'azote par le motif -(CH2CH2O)-, j représentant un nombre entier allant de 1 à 40, de préférence de 1 à 10, et R" représentant H ou un groupe (C1-C4)alkyle ; - Q représente une liaison simple ou le groupe C(=0) ; - k représente un nombre entier allant de 0 à 40, de préférence de 1 à 40, plutôt de 1 à 10 ; - G représente un groupe -OR ou -NRR', R et R' étant tels que définis précédemment ou étant tels qu'ils forment ensemble avec l'atome d'azote auxquels ils sont liés un groupe (C4-C1o)hétérocycloalkyle pouvant comprendre dans le cycle un autre hétéroatome choisi parmi N, O ou S et pouvant être éventuellement substitué par au moins un substituant choisi parmi un groupe (C1-C4)alkyle, un atome d'halogène ou un groupe hydroxy ; - GCR1 représente le groupe -SZa ou -C(=O)-ZbRb ; - Za représente Ac, Ra or SRa ; - Ra représente H, ou un groupe (C1-C6)alkyle, (C3-C8)cycloalkyle, aryle, hétéroaryle ou (C4-C1o)hétérocycloalkyle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituant(s) choisi(s) parmi : Hal, CN, NRR', CF3, OR, NO2, un groupe aryle ou hétéroaryle ; - Zb représente une liaison simple, -O- ou -NH- et Rb représentant H ou un groupe (CIC6)alkyle, (C3-C8)cycloalkyle, aryle, hétéroaryle ou (C4-C1o)hétérocycloalkyle ou bien Zb représente une liaison simple et Rb représente Hal ; avec la condition que si LI représente une liaison simple alors GCR1 représente -SZa. Les composés de formule (I) peuvent donc exister sous la forme : Q-(CH2CH2O)k CHzCHz-G N ,GCRI Lz ALK M ALK' Y Y. W. Q-(CH2CH2O)k-CH2CH2-G 1 N L, LZ~ On désigne par L le linker défini par ''1^ Plus particulièrement, si LI représente une liaison simple, L2 représente -(CH2CH2O))-CH2CH2- ou -(CH2CH2O))-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK- et/ou k#2. Plus particulièrement, lorsque M représente N, -D-(C1-C6)ALK- représente plutôt -O-(C1-C6)ALK-. Plus particulièrement, les deux groupes ALK et ALK' attachés au noyau phényle ou pyridinyle désignent tous deux un groupe méthylène. Plus particulièrement, D représente -0-, -NH- ou -NMe-. Dans la formule (I) ci-dessus, chaque groupe alkylène (ainsi, par exemple, les deux groupes ALK et ALK' attachés au noyau phényle ou pyridinyle peuvent être identiques ou différents ; selon un autre exemple, le groupe ALK de -D-(C1-C6)ALK- peut être identique ou différent du groupe ALK rattaché au noyau phényle ou pyridinyle). ALK peut être choisi parmi l'un des suivants : -CH2-, - CH2CH2-, CH2CMe2-, -CH2CH2CH2-. Y et Y' représentent plus particulièrement un groupe (C1-C4)alcoxy, notamment le groupe méthoxy. R et R' peuvent représenter plus particulièrement indépendamment l'un de l'autre, H ou un groupe (C1-C6)alkyle. Selon un mode particulier, U=U' et/ou W=W' et/ou R1=R1' et/ou R2=R2' et/ou Y=Y' et/ou les deux groupes ALK et ALK' attachés au noyau phényle ou pyridinyle sont identiques (dimère symétrique plus facile à préparer). Plus particulièrement, W et W' sont identiques ou différents et représentent OH, OMe, OEt, NHCONH2, SMe. R" peut représenter H ou un groupe (C1-C4)alkyle, notamment Me. G peut représenter un groupe -OR, plus particulièrement un groupe -OH ou -O(C1-C6)alkyle, notamment -OMe. G peut aussi représenter un groupe -NRR' dans lequel R et R' représentent indépendamment l'un de l'autre H ou un groupe (C1-C6)alkyle. Plus particulièrement, G peut donc représenter un groupe -NH2, -NH(C1-C6)alkyle ou -N(C1-C6)alkyle2. G peut aussi représenter un groupe -NRR' dans lequel R et R' forment ensemble avec l'atome d'azote auxquels ils sont liés un groupe (C4-C1o)hétérocycloalkyle pouvant comprendre dans le cycle un autre hétéroatome choisi parmi N, O ou S et pouvant être éventuellement substitué par au moins un substituant choisi parmi un groupe (C1-C4)alkyle, un atome d'halogène ou un groupe hydroxy. Le groupe hétérocycloalkyle peut être notamment choisi parmi pipérazino, N-méthylpipérazino, morpholino, pipéridino ou pyrrolidino. k représente un nombre entier allant de 0 à 40. k peut prendre la valeur 0 (aucune chaîne PEG terminée par G attachée à l'atome d'azote). Parmi les composés de l'invention, on peut distinguer ceux qui comprennent une chaîne PEG terminée par G attachée à l'atome d'azote et k va de 1 à 40, plutôt de 1 à 10. On peut distinguer aussi ceux qui comprennent au moins une chaîne PEG c'est-à-dire ceux pour lesquels k va de 1 à 40, de préférence de 1 à 10, et/ou Li= -(OCH2CH2)iet/ou L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2- ou bien -(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK-. Les composés de formule (I), y compris ceux exemplifiés, peuvent exister à l'état de bases ou de sels d'addition à des acides pharmaceutiquement acceptables ainsi que sous forme d'hydrates ou de solvates de ces bases ou de ces sels. Plus particulièrement, on distingue ceux de formule (IA) ou (IB) : De plus, on distingue : ^ un 1er sous-groupe de composés pour lequel Li= -D-(C1-C6)ALK- et L2= -(C1-C6)ALK- ; ^ un 2ème sous-groupe de composés pour lequel Li= -(OCH2CH2)i- et L2= -(C1-C6)ALK- ; ^ un 3ème sous-groupe de composés pour lequel Li= liaison simple et L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK- ; ^ un 4ème sous-groupe de composés pour lequel Li= -D-(C1-C6)ALK-, et L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK- ; ^ un 5ème sous-groupe de composés pour lequel Li= -D-(C1-C6)ALK- et L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2-. On peut également distinguer les groupes de composés suivants : ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; Q-(C HiC H20)k CHIC H2 -G GCR' L, Li Q-(CHzCHzO)k CHzCHfG ry\ /GCR~ ^ Li= liaison simple, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= liaison simple, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= liaison simple, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=0-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= liaison simple, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=CO, k=0-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=0-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=CO, k=0-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2=-(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2=-(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2-, Q=liaison simple, k=0-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2-, Q=CO, k=0-10, G=NRR', GCR1=- C(=O)ZbRb. Le Tableau I décrit des linkers L particuliers ainsi que les exemples de composés qui leur correspondent. Chaque composé de ce tableau peut exister sous la forme avec M=CH (benzène) ou bien M=N (pyridine). Dans ce tableau, les exemples sont donnés sous une forme (IA) mais peuvent aussi exister sous une forme (IB). On pourra choisir L, L1, L2, k, G parmi ceux décrits dans le Tableau I ou parmi les exemples. Tableau I L1 L2 Q G composé de formule (IA) ex. -D-(CI- (C1-C6)ALK - OR otio~o~ ex.1 C6)ALK- N Za H ,N o N O N H N V O O ®// O o -D-(CI- (C1-C6)ALK CO OR o~otio~ o ex.2 C6)ALK- Za N O O N_ N- ~O O ®\\ o o -D-(CI- (C1-C6)ALK - OR otio~o~ ex.3 C6)ALK- ,N~ Za H _N ® O ® O ®N- H N \\ O O // o o -D-(CI- (C1-C6)ALK CO OR o~otio~ o ex.4 C6)ALK- ,N~ Za N O ® O ®N_ N ~/ ~O O N O o -(OCH2CH2);- (C1-C6)ALK - OR O O~ 0~ Za ex.5 _ .O I O_ N_ N-y O N o o (OCHZCHZ);- (C -C6)ALK CO OR otio~ ex.6 0~ 0~. N~S,Za _N O N O N_ H N\\® O O // N H o o -D-(CI- (C1-C6)ALK - NRR' N o~o~ ex.7 C6)ALK- 1 Za H ,N o N O N H N V O O ®// O o -D-(C,- (C,-C6)ALK CO NRR' N~o~o~ o ex.8 C6)ALK- N~S,Za N O N O N_ '0 // o o -D-(C,- (C,-C6)ALK - OR Za ex. 9 C6)ALK- S' H ,-,N u O N O~ ~N H N ~~ O o i/-N o o -D-(CI- (C,-C6)ALK CO OR o~o~o~o~oo ex.10 C6)ALK- N Za N O N O N_ N _ ® O O® N O O liaison simple -(CHZCHZO) - OR o~o~NOotiN,Za ex.11 CHZCHZNR" (C, H .N ® O ® O ®N C6)ALK- N O O ~ N o o liaison simple -(CHZCHZO)r CO OR O ex.12 CHZCHZNR" (C, oo~ N~O~o~N~S,Za C6)ALK- H N ii O ® O ®N H 'O // O o -D-(C,- -(CHZCHZO), - OR otiN~O~O~N Za ex.13 C6)ALK- CHZCHZNR"-(C,- _N O N O N_ C6)ALK- N VA® O O // N H o o -D-(C,- -(CHZCHZO), CO OR o~o~o i~ o ex.14 C6)ALK- CHZCHZNR"-(C,- ~N~ tiOf s C6)ALK- O O N~ a H -N O N O` N_ `N O o O o liaison simple -(CHZCHZO) - NRR' ,N~.NtiO/otiN-Za ex.15 CHZCHZNR"-(C,- H _N O ® O ®N H C6)ALK- N ~O O ~ N o o liaison simple -(CHZCHZO)r CO NRR' O ex.16 CHZCHZNR"-(C, N~ N~ O/ o~ N~s-Za C6)ALK- - ® O ® O ®N- H N O O // o o -D-(C1- -(CHZCHZO)r - NRR' ex.17 C6)ALK- CHZCHZNR"-(C1- H Cs)ALK- o N 0 O Na ,N O N O N_ H N O o // O o -D-(C1- -(CHZCHZO)r CO NRR' I ex.18 C6)ALK- CHZCHZNR"-(C1- ,N~\ Cs)ALK- o~ N o 0 NçS.Za N O N O N_ H N VA® O O // N H O o -D-(C1- (C1-C6)ALK - OR o ex.19 C6)ALK- N O~ ZbRb _N O N O N_ H N VA® O O // N H o o -D-(C1- (C1-C6)ALK - OR ex.20 C6)ALK- N ZbRb o H ,N O N O N_ H N O o // o o -D-(C1- (C1-C6)ALK CO OR o 0 o o ex.21 C6)ALK- N O~ ZbRb _N O N O N_ H N VA® O O // N H o o -D-(C1- (C1-C6)ALK CO OR o 0 o ex.22 C6)ALK- N ZbRb o H ,N O N O N_ H N 'O o // o o -D-(C1- (C1-C6)ALK - OR o ex.23 Cs)ALK- N~ N ZbRb H _N O N O O o o -D-(C1- (C1-C6)ALK CO OR Oo~O~ 0 o ex.24 C6)ALK- N N ZbRb H N® o ® O N H N O o o -(OCH2CH2)i- (C,-C6)ALK - OR -0 oo ex.25 o N o o ZbRb H _N .O, N O N- H N O // O O (OCHZCHZ);- (C,-C6)ALK CO OR O o~ O~ O oo ex.26 o N o o v v ZbRb N O INA O N_ H N _ ® O O® N O O -D-(C,- (C,-C6)ALK - NRR' N o ex.27 C6)ALK- 1 N O~ ZbRb H _N O, ~ N O N- H N 1'O ®// O O -D-(CI- (CI-C6)ALK CO NRR' 1 ex.28 C6)ALK- N 0 O\ O 0 O V N ZbRb N O N O N_ H N VA® O O // N H O -D-(CI- (CI-C6)ALK - OR -0ti0~0tiO o ex.29 C6)ALK- N O ZbRb H _N O N O, N H N ~~® O O' O -D-(C,- (C,-C6)ALK CO OR -- 0~0~0~0o o ex.30 C6)ALK- N O~ ZbRb H N O ~N O~ YN- H N ® O O~ N O O -D-(CI- -(CH2CHZO)r - OR -0tiO~0~ 0 ex.31 C6)ALK- CHZCHZ O NOtiO/ DZbR H _N .O N A. N N '~~ O O' N O O -D-(C,- -(CH2CHZO), CO OR OO O o ex.32 C6)ALK- CHZCHZ- OOti00ZbR N ,O O N_ N N- O ®// O O -D-(CI- -(CH 2CHZO)r - NRR' N, ex.33 C6)ALK- CHZCHZ- o O O O Q ZbR H . O N O " H N \\ O O ®// O O -D-(CI- -(CH 2CHZO)r CO NRR' I ex.34 C6)ALK- CHZCHZ- N\ ^ O o o N~ O~ O/`O ZbR N O N O N_ H N VA® O O ®// O O Les composés décrits comprennent un groupe chimique réactif (GCR1) vis-à-vis d'un groupe chimique réactif (GCR2) présent sur l'agent de ciblage. La réaction entre GCR1 et GCR2 assure l'attachement du composé de formule (I) sur l'agent de ciblage par formation d'une liaison covalente. Ainsi, les composés de formule (I) sont aptes à être conjugués à un agent de ciblage. GCR1 représente : (i) le groupe réactif -SZa pour lequel Za représente H ou le groupe -SRa et Ra représentant un groupe (C1-C6)alkyle, (C3-C7)cycloalkyle, aryle, hétéroaryle ou (C4-C1o)hétérocycloalkyle ; (ii) le groupe réactif -C(=O)-ZbRb pour lequel Zb représente une liaison simple, -O- ou -NH-, plus particulièrement -0-, et Rb représentant H ou un groupe (C1-C6)alkyle, (C3-C7)cycloalkyle, aryle, hétéroaryle ou (C4-C1o)hétérocycloalkyle. Plus particulièrement, -SZa peut représenter -SH ou -SS(C1-C6)alkyle, notamment -SSMe, ou - S, s SS-hétéroaryle, notamment s " ou S N (XI et X2 étant définis plus bas). Plus particulièrement, -ZbRb peut représenter -OH (fonction acide), -O(C1-C6)alkyle, notamment O -0 -N -OCH3, -OCH2CH=CH2 (fonction ester) ou bien -ZbRb peut représenter o ~SO3M O N M=H ou cation - GI \/ ® ou le groupe r dans lequel GI représente au moins un groupe électroinductif tel que -NO2 ou -Hal, notamment -F. Il peut s'agir par exemple des groupes x,~ x2 " N O-N suivants : O- -NO2 . Un autre type de groupe -C(=O)ZbRb est le ou o O-N suivant : N\". Les groupes réactifs -SH et ° présentent une bonne réactivité. Plus particulièrement, GCR1 pourra être choisi parmi l'un de ceux décrits dans les exemples. A titre d'exemple de GCR2, on peut citer les groupes g-amino des lysines portés par les chaînes latérales des résidus lysine qui sont présents à la surface d'un anticorps, les groupes saccharides de la région charnière ou les thiols de cystéines par réduction de liaisons disulfures intra-chaînes (Garnett M.C., et al., Advanced Drug Delivery Reviews 2001, 53, 171-216). Plus récemment d'autres approches ont été considérées comme l'introduction de cystéines par mutation (Junutula J.R., et al., Nature Biotechnology 2008, 26, 925-932; WO 09026274) ou l'introduction d'acides aminés non-naturels permettant d'autres types de chimie (de Graaf A.J., et al., Bioconjugate Chem. 2009, Publication Date (Web): February 3, 2009 (Review); DOI: 10.1021/bc800294a ; WO 2006/069246 et selon Chin J.W., et al., JACS 2002, 124, 9026-9027 (technologie ReCode®)). Ces modes d'attachement utilisés avec les anticorps sont applicables à l'ensemble des agents de ciblage connus en fonction de leur structure. II est également possible de modifier chimiquement l'agent de ciblage de façon à introduire de nouveaux groupes chimiques réactifs GCR2. Ainsi, il est bien connu de l'homme du métier comment modifier un anticorps à l'aide d'un agent de modification (voir notamment WO 2005/077090 page 14). La modification permet d'améliorer la réaction de conjugaison et d'utiliser une plus grande variété de groupes GCR1. Agents de modification permettant d'introduire des groupes disulfures L'agent de modification peut être un ester activé NHS de formule laquelle R représente un groupe (C1-C6)alkyle, aryle, hétéroaryle, (C3-C7)cycloalkyle, (C4- C1o)hétérocycloalkyle; par exemple, on peut utiliser le N-succinimidyl pyridyldithiopropionate (SPDP) ou le N-succinimidyl pyridyldithiobutyrate (SPDB ou ester N-hydroxy-succinimidyle de l'acide 4-(2-pyridyldithio)butanoïque) de façon à introduire des groupes réactifs GCR2 dithiopyridyl (voir Bourdon M.A., et al., Biochem. J. 1978, 173, 723-737 ; US 5208020) lesquels peuvent ensuite réagir avec un groupe chimique réactif GCR1 de type -SH présent sur le linker du dimère de pyrrolo[1,4]benzodiazépine afin de former une nouvelle liaison -S-S- (voir ex.1) pour un conjugué présentant une liaison disulfure). Le groupe N-hydroxysuccinimide réagit préférentiellement sur les groupes amino présents sur l'anticorps de façon à former des liaisons amides. Un autre exemple d'agent de modification est décrit dans WO 2004/016801 de formule ; par exemple, on peut utiliser le N-succinimidyl 4-(5-nitro-2-pyridyldithio)-pentanoate (SNPP), ou un analogue pegylé de formule décrit dans WO 2009/134976 ou un analogue sulfonique -- a SNi de formule ° décrit dans WO 2009/134977 formules dans lesquelles : - X3, X4, X5, X6 représentent H ou un groupe (C1-C6)alkyle, - XI et X2 représentent -H, -CONX$X9, -NO2, X3 et X9 représentant H ou un groupe (C1-C6)alkyle, - X7 représente -SO3 M+ ou H ou bien un groupe ammonium quaternaire ; - a désigne un entier allant de 0 à 4 et b désigne un entier allant de 0 à 2000, de préférence entre 1 et 200 ; a et b peuvent prendre toutes les valeurs entre respectivement 0 et 4 ou entre 0 et 2000. De préférence, parmi les composés de formule X2=NO2 et X1=X4=X5=X6=X7=H). Agents de modification permettant d'introduire des groupes maléimido Un autre agent de modification peut être un ester activé NHS de formule dans laquelle R représente un groupe -(CH2)n , -(CH2)n-cyclohexyl-, -cyclohexyl-(CH2)n et n représente un entier allant de 1 à 10 ; par exemple, on peut utiliser le succinimidyl-4-(N-maléimidométhyl)cyclohexane-1-carboxylate (SMCC) (selon EP 0306943), ou un sulfo-SMCC (sulfosuccinimidyl 4-(N-maléimidométhyl)cyclohexane-1-carboxylate). On peut citer comme O O (C1-C,)ALK O-N autres exemples : comme le 3-maléimido-propanoate de N-succinimidyle ; comme le 6-(3-maléimidopropionamido)hexanoate de N- ti° b Ô ~~ b étant un nombre entier compris entre 0 et 2000, de succinimidyle ; , a=1, X3=Me et ~(C1-Ce)ALK~ N O O (CCe)ALK ~O\N préférence entre 1 et 200 (b peut prendre toutes les valeurs entre 0 et 2000), comme le 3-(2-{2-[3-maléimido-propionylamino]-éthoxy}-éthoxy)-propanoate de N-succinimidyle ou SM(PEG)2 ; comme le succinate de maléimidoéthyle et de N-succinimidyle ; comme le 4-(4-maléimidophényl)butanoate de N-succinimidyle ou comme le 3-maléimidobenzoate de N-succinimidyle. Agents de modification permettant d'introduire des groupes thiols Un autre exemple d'agent de modification décrit dans WO 90/06774 est de formule x10 x11 NH2* Hal- x12 x13 dans laquelle : - Hal représente un atome d'halogène ; - X10 représente un atome d'halogène ou le groupe COOX14, nitro, (C1-C8)alkyle non substitué ou halogéné, (C1-C8)alkoxy non substitué ou halogéné, (C2-C8)alkényle non substitué ou halogéné, (C2-C8) alkynyle non substitué ou halogéné, (C3-C8)cycloalkyle non substitué, aryle non substitué ou substitué par un à trois substituants sélectionnés parmi amino, atome d'halogène, groupe (C1- C8)alkyle non substitué ou halogéné, (C1-C8)alkoxy non substitué ou halogéné ; - chacun des X11, X12, X13 représente indépendamment un atome d'hydrogène ou bien peut représenter X10 ; ou X10 et X11 forment ensemble un cycle (C2-05)alkylène, non substitué ou substitué par un à cinq groupe(s) (C1-C4)alkyle ; ou X10 ou X11 forment ensemble avec X12 un cycle (C1-05)alkylène, non substitué ou substitué par un à cinq groupes (C1-C4) alkyle ; et X14 est -H ou un groupe (C1-C8)alkyle ; OU X10=X11=X12=X13=H. De préférence, Hal représente un atome de chlore ou de brome. On trouvera dans le tableau ci-dessous des possibilités pour X10-X13 : X10 X11 X12 X13 Hal Me H H H Cl Ph H H H Cl t-Bu H H H Cl Me Me H H Cl o (-CH2(CH2)3CH2-) H H Cl H (-CH2(CH2)3CH2-) H Cl Et H H H Br Et Me H H Cl -CH-CHZ CH H H H Cl Me H Me H Cl H H Me Me Cl Ph Me H H Cl 4-CIPh H H H Cl 3-furanyl H H H Cl i-Pr H H H Cl Me Me Me Me Cl C6Hii H H H Cl CH2Br H H H Cl CF3 H H H Cl CH=CH2 H H H Cl 2-NH2Ph H H H Cl + NH2 Cl s Un exemple d'iminothiolane préféré est le suivant : Agents de modification permettant d'introduire des groupes haloacétamido Un autre exemple d'agent de modification est le succinimidyl-4-(N-iodoacétyl)-aminobenzoate , ou des composés similaires parmi lesquels le succinimidyl-N- N,O iodoacétate (SIA) ° , le succinimidyl-N-bromoacétate (SBA), ou le succinimidyl-3-(N-bromoacétamido)propionate (SBAP) ou un composé pegylé similaire décrit dans WO H O b 2009/134976 , b étant tel que décrit précédemment. Les Figures 1 et 2 illustrent la modification d'un groupe amino d'un agent de ciblage par le SPDP ou bien par 10 l'iminothiolane préféré ci-dessus. Ainsi, on peut introduire sur l'agent de ciblage des groupes GCR2 disulfures (-SSR), notamment x, x2 de type pyridyldisulfures s N ou s N , dans le cas où GCR1 représente -SH. De même, on peut introduire sur l'agent de ciblage des groupes GCR2 thiol (-SH), par ex. avec 15 un iminothiolane, dans le cas où GCR1 représente disulfure (c'est-à-dire GCR1= -SZa avec (SIAB) v~O Za#H, par exemple Za= s). On peut également modifier ces groupes GCR2 thiol (-SH) en groupes GCR2 disulfures (-SSR), notamment de type pyridisulfures ou 2 ou x NOS SAN correspondants par réaction avec les disulfures aromatiques x, .x2 NSS N3 ---,x2 . Dans les deux cas, la liaison covalente qui se forme par réaction entre GCR1 et GCR2 est une liaison disulfure clivable. Il est également possible, dans le cas où GCR1 représente -SH, d'introduire à la surface de N l'agent de ciblage des groupes GCR2 de type maléimido ( ) ou haloacétamido (par ex. H bromo- ou iodoacétamido 0 ). Dans ce cas, la liaison covalente qui se forme par Brout réaction entre GCR1 et GCR2 est une liaison sulfure non-clivable. Ainsi, - en présence d'un dérivé de formule (I) comprenant un groupe chimique réactif GCR1 de type -SZa, l'agent de ciblage comprend : ^ des groupes chimiques disulfures dans le cas où GCR1 représente -SH ; ^ des groupes chimiques thiols dans le cas où GCR1 représente -SZa avec Za#H ; ^ des groupes chimiques maléimido ou haloacétamido dans le cas où GCR1 représente - SH; -en présence d'un dérivé de formule (I) comprenant un groupe chimique réactif GCR1 de type -C(=O)-ZbRb, on fait réagir le dérivé de formule (I) avec les fonctions amino de l'agent de ciblage, notamment les groupes g-amino portés par les chaînes latérales des résidues lysine (Lys) d'un anticorps. Plus particulièrement, -lorsque le groupe chimique réactif GCR1 est de type -SH, et que l'agent de ciblage présente des fonctions amino, notamment des groupes g-amino portés par les chaînes latérales des résidus lysine d'un anticorps, celui-ci est modifié à l'aide d'un agent de modification choisi 0 IoI S S (C Cs)ALK o N parmi un composé de formule : ° dans laquelle R représente un groupe (C1-C6)alkyle, aryle, hétéroaryle, (C3-C7)cycloalkyle, (C4-C1o)hétérocycloalkyle; un analogue pegylé de formule : ou un analogue sulfonique de formule dans lesquelles X3 X4, X5, X6 représentent H ou un groupe (CI- C6)alkyle, XI et X2 représentent -H, -CONX$X9, -NO2, X3 et X9 représentant H ou un groupe (Cr 5 C6)alkyle, X7 représente -SO3 M+ ou H ou bien un groupe ammonium quaternaire et a désigne un entier allant de 0 à 4 et b désigne un entier allant de 0 à 2000 ; ou parmi succinimidyl-4-(N- maléimidométhyl)cyclohexane-1-carboxylate ; sulfosuccinimidyl 4-(N- maléimidométhyl)cyclohexane-1-carboxylate ; O O (C1-C,)ALK N O-N O o dans laquelle R représente un groupe -(CH2)n-, -(CH2)n-cyclohexyl-, -cyclohexyl-(CH2)n- et n 10 représente un entier allant de 1 à 10 ; O N O/ AC,-Ce)ALK-O (CCe)ALK°SNII O b étant un nombre entier compris entre 0 et ; succinimidyl-N-bromoacétate ; succinimidyl-3-(N- H b bromoacétamido)propionate ; ° ° , b étant un nombre entier compris entre 15 0 et 2000. - lorsque le groupe chimique réactif GCR1 est de type -SZa avec Za#H, et que l'agent de ciblage présente des fonctions amino, notamment les groupes g-amino portés par les chaînes 2000 ; latérales des résidus lysine d'un anticorps, celui-ci est modifié à l'aide de l'agent de x10 NH2* Hal- modification de formule décrit précédemment. -lorsque le groupe chimique réactif GCR1 est de type -SH, et que l'agent de ciblage présente des fonctions thiol, notamment suite à l'introduction de cystéines par mutation ou par modification chimique d'un agent de ciblage présentant des fonctions amino, l'agent de ciblage est modifié de façon à ce que ses fonctions thiol soient transformées en fonctions disulfures. On peut utiliser par exemple un agent de modification choisi parmi un composé de NOS SAN formule ou dans laquelle XI et X2 représentent -H, - 2 CONX8X9 ou -NO2, X8 et X9 représentant H ou un groupe (C1-C6)alkyle. Le Tableau II ci-dessous illustre la modification d'un groupe amino d'un agent de ciblage selon les méthodes précédentes. On utilise pour simplifier les abréviations suivantes : w. NNH w Tom'1 = Tomi =15 Tableau II : exemples de modifications d'agent de ciblage lorsque GCR1=-SZa agent de modification exemple après réaction sur un conjugué groupe amino, notamment lysine, d'un anticorps noté MAb o~ - - MAb s, NH-MAb 0 R O L* S-(C1-C6)ALK L. d R S (C1-C6)ALK L. - S-(Ci-C6)ALK Tome ^ ~Tom'1 S O S NH ALK M ALK' O -g SPDP= S CHzCHz o NH-MAb O O~ N S NH-MAb L`'S-S-CH zCHz II d N~SS CHzCHz Tome Tom'1 O ALK M ALK' SPDB= - MAb -off MAb O O g S-CH2CH2CHZ O NOS S CHZCHZCHZ NH NH NOS S-CHZCHZCHZ 0 Tom ALKMALK'-Tom', d SMCC= 0 MAb L. /\\ MAb o \N Hz \ NH Tom,3 0 o ° ALK ~N H~ NH Hz, O N Ô S O d MALK' Tom'' sulfo-SMCC= O O SO,M g ~` Ov N N z '12 0 O O MAb-NH 9 MAb 0 / O Xie/Xz _ NH X L* S N X X6 X5 X4 3 Xa Xa X3 S-S,X Tome Tom'i ALK M ALK' S, O S N O X6 XS X' s SNPP= _ MAb OI MAb OZN~ O OZN ,S-S O L* NH NS NH ~ N NOS O ~ _g Tomi- AL.MALK' Tom g Xz X1 X2 MAb-NH v L* 0, -0 X- Xz MAb-NH~,O O~iS~Si~N v- Jb N b ro 0\ ,O\ OS NJ O m'i Tome O - g K' b ALK M ALK' d x, MAb-NH S03H Xie/Xz 9 MAb SO3H d O N/\O X x ~S SAN NHS S L SO3H O _ a r0 _ S~S~N Tom'i a Tome O ALK M ALK' MAb-NH Xio XII X i° SH MAb-NH Xio X12 ~S NHZ X13X12 S NHZ* Hal - Hal- ~S~ L* X13 NHZ X13X12 Hal- Tom' Tom 1 X11 X10 MAb-NH S-S N ALK M ALK' d NHZ Xia12 Hal- Xi X2 _g O O MAb-NH O MAb-NH N ~,1y O ~I ~I O H ®/S' O H SIAB= Tom' _g Tome d ALK M ALK' ° N ,o O MAb-NH L* SIA= O MAb-NH 9 Tom', d Tomi-ALK MALK' b N MAb-NH MAb-NH' H OH O Tom' O O -9 Tom -ALK M~ALK' d g : nombre de fonctions GCR2 sur un agent de ciblage modifié ; d : nombre de dimère(s) de pyrrolo[1,4]benzodiazépine sur l'agent de ciblage Mab L* représente -Ll-N(Q-CH2CH2O)k-CH2CH2-G)-L2 Les composés selon l'invention peuvent donc être utilisés pour la préparation d'un agent de ciblage auquel est attaché de façon covalente en position para de M le dimère de formule : Plus particulièrement, l'agent de ciblage est un anticorps. Plus particulièrement, le dimère a pour formule : o 1 o -Y ,o Procédé de préparation des composés de formule (I) Les composés de formule (I) peuvent être préparés selon le Schéma 1 : Q-(CH2CH2O)k CHZCHZG N X- L1 L2 _ o MALK' ALK P3 y.-- -- o U. W' 10 N 11 H P1 o P'1 o + Q-(CH2CHZO)k CHZCHZG N X- L1 L2 o Ri' R2 P2 G /LG ALK MALK Schéma 1 On fait réagir ensemble les composés PI, P'1 et P2 pour conduire à P3. LG et LG' désignent un groupe partant. On désigne par « groupe partant » un atome ou un groupe d'atomes qui, dans la 10 réaction hétérolytique entre P2 et PI ou P'1, part en emportant le doublet d'électrons de la liaison covalente reliant ALK et LG ou LG'. Le groupe partant est choisi plus particulièrement parmi un atome d'halogène, notamment chlore ou brome, un groupe mésylate, tosylate, nosylate ou - OPPh3+. Les composés intermédiaires P2 font également partie de l'invention. 15 Dans la préparation d'un composé de formule (I) comprenant le groupe GCR1, X' peut représenter ledit groupe GCR1 auquel cas P3 représente un composé de formule (I). X' peut aussi être un précurseur dudit groupe GCR1 du type -SZa ou bien -C(=O)ZbRb et dans ce cas, il est nécessaire de transformer X' en GCR1 à l'aide d'une ou plusieurs réaction(s) chimique(s). Selon une variante, la transformation X' GCR1 peut aussi s'effectuer sur P2. 20 Ainsi, pour la préparation d'un composé P3 (ou selon la variante P2) pour lequel Za=H, on préfère introduire un groupe X'=-SZa pour lequel Za=-S(CI-C6)alkyle utilisant le précurseur de linker correspondant, puis à réduire la fonction disulfure -SS(C1-C6)alkyle en fonction thiol -SH. On peut utiliser pour cela par exemple la tris(2-carboxyéthyl)phosphine : voir à ce propos Burns J.A., 25 et al., J.Org.Chem. 1991, 56(8), 2648-2650. Cette transformation -SS(C1-C6)alkyle -SH peut s'appliquer notamment aux composés des exemples 1 à 18 du Tableau I. (I)5 Dans le cas de la préparation d'un composé de formule (I) à partir de P3 selon la transformation X' 4 GCR1 tel que GCR1 représente le groupe -SH, il peut se former un composé P3 tel que X' w u ALK R1. R2 peut aussi représenter le groupe -SZa avec Za= o correspondant au produit d'addition d'une fonction thiol sur la fonction imine. De même, pour l'obtention d'un composé de formule (I) comprenant un groupe GCR1= - C(=O)ZbRb, il est possible de transformer un groupe X'= -C(=O)ZbRb en un groupe GCR1= - C(=O)ZbRb à l'aide d'une ou de plusieurs réaction(s) chimique(s). En particulier, dans le cas où - 0 O-N C(=O)ZbRb= ° , on peut introduire au niveau d'un composé P3 (ou selon la variante P2) 10 le groupe X'= -C(=O)O-(C1-C4)alkyle ou -C(=O)O-allyle qui est transformé ensuite en groupe - C(=O)OH lequel réagit finalement avec le carbonate de N-N'-disuccinimidyle ou le NHS. La transformation -COOalkyle/allyle en -COOH peut être réalisée par un traitement avec une base telle que LiOH ou un catalyseur au palladium, par exemple le tétrakis(triphénylphosphine)palladium en présence d'une amine « scavenger », par exemple la 15 morpholine. La réaction avec le carbonate de N,N'-disuccinimidyle est conduite en présence d'une base, par exemple la DIPEA ; celle avec le NHS en présence d'un agent de couplage, par --LN/1 le DCC. De même, dans le cas où -C(=O)ZbRb= , on peut introduire un groupe -C(=O)ZbRb= -COOH qui réagit ensuite avec le N,N'-carbonyldiimidazole (JACS 1958, 80, 4423 ; JACS 1960, 82, 4596). Cette transformation X'=-C(=O)ZbRb 4 GCR1= -C(=O)ZbRb peut 20 s'appliquer notamment aux composés des exemples 19 à 34 du Tableau I. Les composés PI et P'1 sont décrits dans les demandes de brevets WO 00/12508, WO 00/12507, WO 2005/040170, WO 2005/085260, WO 07085930 ou WO 2009/016516 ou accessibles par synthèse totale (Mori M. et al., Tetrahedron, 1986, 42, 3793-3806). Dans le cas 25 où PI et/ou P'1 représente(nt) la tomaymycine de formule : , cette dernière peut être préparée à l'aide de la souche Streptomyces croceus en suivant l'enseignement de FR 1516743 ou bien par synthèse totale (voir J. Antibiotics 1983, XXXVI(3), 276-282 Z.Tozuka "Studies on tomaymycin. Total syntheses of the antitumor antibiotics E- and Z- tomaymycins"). II existe également des composes P1/P'1 commerciaux. Pour 0 JI Tomaymycin l'introduction des groupes W,W', la fonction imine ( = liaison double) est susceptible d'additionner divers composés HW/HW' (par ex. H2O, alcool ROH). Cas où Q=liaison simple P2 Schéma 2 Préparation de P2 CHZCHZ O)k-CHZCHZ-G N Li ÎZ X. +PI+P'l (I) HO P4 P2 Schéma 3 i. réaction nucléophile entre la fonction amine secondaire -NH- de P4 et un réactif de formule LG"-(CH2CH2O)k-CH2CH2-G (LG"=groupe partant) en présence d'une base telle que par ex. K2CO3 dans un solvant polaire tel que le DMF ou le THF. 15 Le réactif LG"-(CH2CH2O)k-CH2CH2-G est obtenu à partir d'un composé de formule HO-(CH2CH2O)k-CH2CH2-G en remplaçant le groupe -OH par le groupe partant LG" à l'aide de réaction(s) chimique(s) connue(s) de l'homme du métier. Par exemple, dans le cas où LG" représente un groupe mésylate, on utilise le chlorure de méthanesulfonate en présence d'une base telle qu'une amine tertiaire (par ex. TEA). Dans le cas où LG" représente I, on substitue le 20 mésylate par I en utilisant par ex. l'iodure de sodium, selon D. Marquis et al. J. Org. Chem. 1995, 24, 7984-96. Les PEG-alcools de formule HO(CH2CH2O)k-CH2CH2OCH3 sont commercialement disponibles (voir par exemple le catalogue de la société américaine QuantaBioDesign, Ltd.). D'autres PEG- 25 alcools HO(CH2CH2O)k-CH2CH2OR avec R#Me sont commercialement disponibles ou bien accessibles à partir de HO(CH2CH2O)k-CH2CH2OH à l'aide de réaction(s) chimique(s) connue(s) de l'homme du métier. De même, certains composés pour lesquels G=NRR' et k>=1 sont commercialement disponibles, par exemple :10 N O OH N/ O O O OH / \/ \ / / \ O O OH /--\/--\ /--\/--\ N O O O OH O O OH OH (n-Bu)»N ii. introduction de LG et LG'. Dans le cas d'un groupe mésylate, on utilise le CMS en présence 5 d'une base telle qu'une amine tertiaire (par ex. TEA). Cas où Q=-C(=O) O\/(CHZCHZO)k-CHZCHZ G N Li I2 X' LG' LG~ALK M ALK' P2 + p, + p', (I) Schéma 4 H N L1 IZ / N X' i. T-C(=O)-(CH2CH2O)k-CHZCHZ G L Z X' 10 Préparation de P2 0,','','-CHZCHZ G O\/(CHZCHZO)k-CHZCHZ G N Li L2 ii. introduction de LG et LG' X- HO HO OH ALK M ALK P4 OH ALK M ALK' LG LG ALK M ALK' P2 Schéma 5 i. réaction d'amidification entre P4 et un dérivé d'acide carboxylique de formule T-C(=0)-(CH2CH2O)k-CH2CH2-G. 15 Le dérivé d'acide carboxylique peut être un halogénure d'acyle (T=-Hal). Selon une variante, on utilise un ester activé (par ex. T=-ONHS) ou bien l'acide carboxylique (T=-OH) en présence d'un agent de couplage. Les PEG-acides de formule HOC(=O)-(CH2CH2O)k-CH2CH2OR peuvent être préparés à partir des PEG-alcools correspondants de formule HO-(CH2CH2O)k_1-CH2CH2OR, 20 lesquels sont commercialement disponibles pour k= 1 à 11, par addition sur l'acrylate de sodium selon J. Huskens, J.A. Peters, H. van Bekkum, Tetrahedron 1993, 15, 3149-64. II en est de même quand G est le groupe NRR' pour k>=1 à partir des composés correspondants de formule H-(OCH2CH2)k_1-CH2CH2NRR'. De même, les composés HOC(=O)-(CH2CH2)-NRR' (k=0) sont commercialement disponibles. 25 ii. introduction de LG et LG'. Dans le cas d'un groupe mésylate, on utilise le CMS en présence d'une base telle qu'une amine tertiaire (par ex. TEA). Préparation de P4 Cas où X'= -C =0 -ZbRb iv. déprotection HO GPO Schéma 6 i. introduction du groupement protecteur GP". Dans le cas d'un groupe nosylate, on utilise le chlorure de 2-nitro-benzène-sulfonyle en présence d'une base telle qu'une amine tertiaire (par 10 ex. TEA) ou la pyridine ; ii. déprotection des groupes GP et GP'. Par ex. en présence d'acide chlorhydrique ou de TFA quand les groupes GP et GP' sont le TBDMS. EtO OEt Selon une variante, dans le cas où ALK=ALK'=-CH2-, P5 peut représenter ° o L'étape de déprotection est alors remplacée par une étape de réduction de la fonction ester en 15 fonction -CH2OH, par exemple avec le borohydrure de sodium ; on peut appliquer pour cela les conditions de la réduction donnée en pages 62-63 de WO 2007/085930. Comme décrit plus loin, cette variante consistant à utiliser un diester et à appliquer ensuite une réduction peut être généralisée aux autres P5. De plus, la réduction des fonctions ester peut être réalisée au niveau d'un P4 mais éventuellement aussi selon une variante, au niveau d'un P5. 20 iii. réaction nucléophile entre la fonction amine protégée -NH(GP") et un réactif de formule LGL2-C(=O)-ZbRb en présence d'une base telle que par ex. K2CO3 dans un solvant polaire tel que le DMF ou le THF. 25 Pour le cas où L2=(C1-C6)ALK, les bromo-alkyls esters de formule Br-(C1-C6)ALK-C(=O)-OMe sont commercialement disponibles. Pour le cas où L2=-(CH2CH2O)i-CH2CH2-, LG peut être introduit à partir des PEG-alcools correspondants de formule HO-(CH2CH2O)i-CH2CH2-C(=O)ZbRb. De tels composés sont commercialement disponibles ou bien peuvent être obtenus à partir des PEG-diols correspondants de formule HO-(CH2CH2O)i-H, lesquels sont 30 commercialement disponibles pour j= 1 à 11 par addition sur l'acrylate de sodium selon J. Huskens, J.A. Peters, H. van Bekkum, Tetrahedron 1993, 15, 3149-64. iv. déprotection du groupe GP". Par ex. en présence de thiophénol et d'une base telle que le carbonate de césium quand GP" est le groupe nosylate. 32 Cas où X'= -SZa Cas où L2=(C1-C6 ALK NH2 NH2 Li L déprotection H N L~ (C1-C6)ALK-SZa ALK-SZa OH ALK M ALK' ALK M ALK' OH ALK M ALK' GPO OGP' HOC HO iii. réduction P5 P4 Schéma 7 i. déprotection des groupes protecteurs GP et GP', de préférence en milieu acide, par ex. en présence d'acide chlorhydrique ou de TFA quand les groupes GP et GP' sont le TBDMS. EtO OEt Selon une variante, dans le cas où ALK=ALK'=-CH2-, P5 peut représenter ° o L'étape de déprotection des fonctions alcool est alors remplacée par une réaction de réduction de la fonction ester en fonction -CH2OH, par exemple avec le borohydrure de sodium, suivi d'une étape de déprotection de la fonction amine ; on peut appliquer pour cela les conditions de la réduction donnée en pages 62-63 de WO 2007/085930. ii. amination réductrice avec l'aldéhyde de formule HC(=O)-ALK-SZa ; iii. l'imine intermédiaire est réduite in situ avec un agent réducteur comme par exemple le triacétoxyborohydrure de sodium selon A.F. Abdel-Magid et al., J. Org. Chem. 1996, 61, 3849-62, de préférence dans l'acide acétique. Cas où L CH,CH2OL-CH,CH,N R"-ALK- /NHZ Li i. protection Li GP" GP" NH N Li (CH2CH2O)jCH2CH2NH2 LG (CH2CH2O)jCH2CH2N3 HO OH ,- ALK M ALK' GPO~ OGP' ALK M ALK' ii. déprotection P5 iv. réduction OH HO ALK M ALK' o V. H ALK-SZa vi. réduction GP" H 1 N N L 1-l'(CH2CH2O)jCH2CH2NR"-(C1-C6)ALK-SZa L l''(CH2CH2O)jCH2CH2NH-(C1-C6)ALK-SZa OH ALK M ALK' vii. alkylation HOC OH viii. déprotection ALK M ALK' HO P4 Schéma 8 i. introduction du groupement protecteur GP". Dans le cas d'un groupe nosylate, on utilise le chlorure de 2-nitro-benzène-sulfonyle en présence d'une base telle qu'une amine tertiaire (par ex. TEA) ou la pyridine ; ii. déprotection des groupes GP et GP'. Par ex. en présence d'acide chlorhydrique ou de TFA 5 quand les groupes GP et GP' sont le TBDMS. EtO OEt Selon une variante, dans le cas où ALK=ALK'=-CH2-, P5 peut représenter ° O L'étape de déprotection est alors remplacée par une étape de réduction de la fonction ester en fonction -CH2OH, par exemple avec le borohydrure de sodium ; on peut appliquer pour cela les conditions de la réduction donnée en pages 62-63 de WO 2007/085930. 10 iii. réaction nucléophile entre la fonction amine protégée -NH(GP") et un réactif de formule LG-(CH2CH2O))CH2CH2N3 en présence d'une base telle que par ex. K2CO3 dans un solvant polaire tel que le DMF ou le THF. De tels composés peuvent être obtenus selon WO 07/085930, à partir des PEG-diols correspondants de formule HO-(CH2CH2O))+1-H, lesquels sont commercialement disponibles pour j= 0 à 10. 15 iv. réduction du groupement azido, par exemple par la réaction de Staudinger en présence de triphénylphosphine et d'eau. v. amination réductrice avec l'aldéhyde de formule HC(=O)-ALK-SZa ; vi. l'imine intermédiaire est réduite in situ avec un agent réducteur comme par exemple le triacétoxyborohydrure de sodium selon A.F. Abdel-Magid et al., J. Org. Chem. 1996, 61, 3849-62, 20 de préférence dans l'acide acétique. vii. alkylation de la fonction amine secondaire. viii.déprotection du groupe GP". Par ex. en présence de thiophénol et d'une base telle que le carbonate de césium quand GP" est le groupe nosylate. 25 Préparation de P5 Cas où L1=-D-(C1-C6)ALK-, D = O ou NH P5 GPO~ OGP' GPO , OGP' GPO~ i OGP' ALK M ALK' ALK M ALK' ALK M ALK' Schéma 9 30 i. réaction nucléophile entre la fonction -DH et une bromo-amine protégée par boc de formule Br(C1-C6)ALK-NHboc en présence d'une base telle que par ex. K2CO3 dans un solvant polaire tel que le DMF ou le THF (voir par ex. les conditions en page 63 de WO 07085930). ii. déprotection sélective de l'amine, de préférence en milieu acide, par ex. en présence d'acide chlorhydrique ou de TFA. Pour les cas où une déprotection sélective n'est pas réalisable, par ex. D-H D-(C1-C6)ALK-NHBoc D-(C1-C6)ALK-NH2 i.Br-(C1-C6)ALK-NHboc ii.déprotection quand les groupes PG et PG' sont le TBDMS, une étape de reprotection sélective des alcools est nécessaire. Selon une variante, dans le cas où ALK=ALK'=-CH2-, on peut réaliser la substitution nucléophile DH de la bromo-amine par un diester de formule : ~-C6)ALK-N Hz , de façon à obtenir un EtO OEt composé P5 de formule qui est utilisé tel quel pour la préparation de P4. EtO OEt Cas où L1=-N((C1-C4)alkyle)- (C1-Ç6 ALK- R* R* N-(Cl -C6)ALK-N H Boc -(Cl-C6)ALK-NHZ déprotection NH-(C1-C6)ALK-NHBoc R*-Hal GPO 0G P' GPO 0G P' ALK M ALK' ALK M ALK' P4 OGP' ALK M ALK' GPO Schéma 9' i. réaction nucléophile entre la fonction -NH- et un halogénure d'alkyle formule R*-Hal avec R* = (C1-C4)alkyle en présence d'une base telle que par ex. K2CO3 dans un solvant polaire tel que le DMF ou le THF. Selon une variante, dans le cas où ALK=ALK'=-CH2-, on peut réaliser la substitution nucléophile N Cl-C6)ALK-NHBoc EtO OEt Cas où L1= -(OCH~CH de l'halogénure d'alkyle par un diester de formule : R* EtO composé P5 de formule , qui est utilisé tel quel pour la préparation de P4. o o , de façon à obtenir un ii. réduction OH LG-(CH2CH2)-(OCH2CH2),_1-N3OCH2CH2)i-N3 OCH2CH2)i-NH2 GPO~ 0G P' ALK M ALK' ALK M ALK' OGP' ALK M ALK' GPO GPO 0G P' P5 Schéma 10 i. réaction nucléophile entre l'une des fonctions -OH (les deux autres étant protégées par GP qui désigne un groupe protecteur) et un réactif azido-PEG de formule LG-(Cl2CH2)-(OCH2CH2)i-1-N3 porteur d'un groupement nucléofuge (LG) comme Hal ou mésylate, en présence d'une base telle que par ex. K2CO3 dans un solvant polaire tel que le DMF ou le THF (voir par ex. les conditions en page 63 de WO 07085930). ii. réduction du groupe azido par exemple par la triphénylphosphine en présence d'eau dans un solvant polaire tel que le THF. Selon une variante, dans le cas où ALK=ALK'=-CH2-, on peut réaliser la substitution nucléophile 10 du réactif azido-PEG par l'hydroxy- diester de formule : 0-(CHzCHz)1-NH2 , de façon à obtenir un OH EtO composé P5 de formule , qui est utilisé tel quel pour la préparation de P4. EtO OEt Cas où L1=liaison simple NH2 NH2 I. protection HOC / OH ALK M ALKGPO 0G P' ALK M ALK' P5 15 Schéma 11 i. protection des groupes alcools HAL HOC ~OH P5 peut être obtenu à partir du diol halogéné de formule ALK M ALK . Un exemple de diol halogéné et du diol protégé correspondant est celui décrit sur le Schéma 1 en page 48 de WO 2009/016516 (composés 2 et 3 du schéma 1). Deux exemples de diols protégés sont ceux de N° 20 CAS 181225-40-1 et 181225-41-2. Le diol halogéné peut être obtenu par réduction du composé diacide ou diester correspondant, par exemple celui de N° CAS 193010-40-1. Voir également dans le cas d'une pyridine (M=N) : Liebigs Annalen der Chemie 1991, 10, 987-988 ou Tetrahedron 2005, 61(7), 1755-1763 (composé 3 du Schéma 1). 25 L'homme du métier pourra s'inspirer des conditions opératoires des exemples décrits ci-après qui sont donnés pour des linkers LI et L2 particuliers et les adapter à d'autres linkers LI et L2. procédé de préparation du conjuqué Le conjugué est obtenu par le procédé consistant à : (i) mettre en contact et laisser réagir une solution aqueuse, éventuellement tamponnée, de l'agent de ciblage, éventuellement modifié à l'aide d'un agent de modification, et une solution d'un composé de formule (I) ; (ii) puis à éventuellement séparer le conjugué formé à l'étape (i) du composé de formule (I) et/ou de l'agent de ciblage n'ayant pas réagi et/ou des agrégats qui se seraient éventuellement formés. Le groupe chimique GCR1 du composé de formule (I) doit être réactif vis-à-vis des groupes chimiques GCR2 présents sur l'agent de ciblage notamment vis-à-vis des groupes amino présents sur les anticorps, lesdits groupes chimiques GCR2 ayant été introduits le cas échéant par l'agent de modication, ceci afin d'assurer l'attachement du composé de formule (I) sur l'agent de ciblage par formation d'une liaison covalente. Selon une variante, on sépare à l'étape (ii) le conjugué qui s'est formé à l'étape (i) de l'agent de ciblage n'ayant pas réagi et des agrégats éventuellement présents dans la solution. Selon une autre variante, on ne sépare à l'étape (ii) le conjugué de l'étape (i) que du composé de formule (I) n'ayant pas réagi et des agrégats qui se seraient formés et on laisse dans la solution l'agent de ciblage qui n'aurait éventuellement pas réagi. La solution aqueuse de l'agent de ciblage peut être tamponnée à l'aide d'au moins un tampon tel que par exemple le phosphate de potassium ou l'acide N-2-hydroxyéthylpipérazine-N'-2-éthanesulfonique (tampon HEPES). Le tampon dépend de la nature de l'agent de ciblage. Le composé de formule (I) est mis en solution dans un solvant organique polaire, par exemple le DMSO ou la DMA. La réaction a lieu à une température comprise généralement entre 20 et 40°C. La durée de la réaction peut varier entre 1 à 24 h. La réaction entre l'agent de ciblage et composé de formule (I) peut être suivie par SEC avec un détecteur réfractométrique et/ou ultraviolet afin d'en déterminer l'état d'avancement. Si le taux de greffage est insuffisant, on peut laisser réagir plus longtemps et/ou bien ajouter du composé de formule (I). On pourra se reporter à la méthode générale donnée dans la partie exemples pour plus de détails sur des conditions particulières utilisables pour la conjugaison. L'homme du métier dispose de différentes techniques chromatographiques pour la séparation de l'étape (ii) : le conjugué peut être purifié par exemple par chromatographie d'exclusion stérique (SEC), par chromatographie d'adsorption (comme l'échangeuse d'ions, IEC), par chromatographie d'interaction hydrophobe (HIC), par chromatographie d'affinité, par chromatographie sur des supports mixtes comme l'hydroxyapatite céramique ou par HPLC. La purification par dialyse ou diafiltration peut également être utilisée. On entend par « agrégats » les associations qui peuvent se former entre deux agents de ciblage ou plus, les agents de ciblage ayant été modifiés ou non par conjugaison. Les agrégats sont susceptibles de se former sous l'influence d'un grand nombre de paramètres tels qu'une concentration élevée en agent de ciblage dans la solution, le pH de la solution, des forces de cisaillement élevées, le nombre de dimères greffés et leur caractère hydrophobe, la température (voir les références citées dans l'introduction de J.Membrane Sci. 2008, 318, 311-316), l'influence de certains d'entre eux n'étant parfois pas éclaircie avec précision. Dans le cas des protéines ou des anticorps, on pourra se reporter à AAPS Journal, « Protein Aggregation and Bioprocessing » 2006, 8(3), E572-E579. La teneur en agrégats peut être déterminée à l'aide de techniques connues telles que la SEC (voir à ce propos, Analytical Biochemistry 1993, 212(2), 469-480). Après l'étape (i) ou (ii), la solution du conjugué peut subir une étape (iii) d'ultrafiltration et/ou de diafiltration. On obtient donc à l'issue de ces étapes le conjugué en solution aqueuse. anticorps L'anticorps (voir à ce propos, Janeway et al. « Immunobiology », 5ème édition, 2001, Garland Publishing, New York) pourra être choisi parmi ceux décrits notamment dans les demandes WO 04043344, WO 08010101, WO 08047242, WO 05009369 (anti-CA6). L'anticorps peut être notamment monoclonal, polyclonal ou multispécifique. II peut s'agir aussi d'un fragment d'anticorps. II peut s'agir aussi d'un anticorps murin, humain, humanisé ou chimérique. conjugué Un conjugué comprend généralement de l'ordre de 1 à 10 dimère(s) de pyrrolo[1,4]benzodiazépine attaché(s) à l'agent de ciblage (il s'agit du taux de greffage ou "drugto-antibody ratio" ou "DAR" en Anglais). Ce nombre varie en fonction de la nature de l'agent de ciblage et du dimère ainsi que des conditions opératoires utilisées pour la conjugaison (par exemple le nombre d'équivalents de dimère par rapport à l'agent de ciblage, le temps de réaction, la nature du solvant et de l'éventuel cosolvant). La mise en contact de l'agent de ciblage et du dimère conduit à un mélange comprenant : plusieurs conjugués se distinguant individuellement les uns des autres par des DAR différents ; éventuellement l'agent de ciblage n'ayant pas réagi (dans le cas d'une réaction incomplète) ; éventuellement des agrégats. Le DAR qui est déterminé sur la solution finale par exemple par spectroscopie UV correspond donc à un DAR moyen. Dans le cas où l'agent de ciblage est un anticorps, la spectroscopie UV peut être une méthode utilisée pour déterminer le DAR. Cette méthode s'inspire de celle présentée dans Antony S. Dimitrov (ed), LLC, 2009, « Therapeutic Antibodies and Protocols », vol. 525, 445, Springer Science. Elle consiste à mesurer l'absorbance d'une solution de conjugué après l'étape de séparation (ii) à deux longueurs d'onde notées LOI et L02. On utilise les coefficients d'extinction molaires suivants de l'anticorps nu et du dimère de pyrrolo[1,4]benzodiazépine mesurés préalablement à la conjugaison. Les absorbances de la solution de conjugué à LOI et L02 (ALOI) et (ALO2) sont mesurées soit sur le pic correspondant du spectre SEC (ceci permet de calculer un "DAR(SEC)") ou en utilisant un spectrophotomètre UV classique (ceci permet de calculer un "DAR(UV)"). Les absorbances peuvent être exprimées sous la forme : AL01 = (CD X eD L01) + (CA X eA L01) AL02 = (CD X eD L02) + (CA X eA L02) équations pour lesquelles : - cD et cA désignent respectivement les concentrations dans la solution de la partie du conjugué relative au dimère de pyrrolo[1,4]benzodiazépine et la partie du conjugué relative à l'anticorps ; - eD LOI et eD L02 désignent respectivement les coefficients d'absorption molaires du dimère de pyrrolo[1,4]benzodiazépine avant conjugaison aux deux longueurs d'onde LOI et L02; - eA Loi et eA Lo2 désignent respectivement les coefficients d'absorption molaires de l'anticorps nu aux deux longueurs d'onde LOI et L02. On entend par anticorps nu, l'anticorps auquel n'est attaché aucun dimère de pyrrolo[1,4]benzodiazépine, c'est-à-dire l'anticorps avant l'étape de conjugaison. La résolution de ces deux équations conduit à : CD = [(eA L01 X AL02) - (eA L02 X AL01)] / [(eD L02 X eA L01) - (eA L02 X eD L01)] CA = [AL01 - (CD X eD L01)] / eA LOI Le DAR moyen correspond alors à CD/CA. Dans le cas des dimère de pyrrolo[1,4]benzodiazépine, on considére les deux longueurs d'onde : LOI= 280 nm et L02= 320 nm. Le DAR moyen est de préférence compris entre 1 et 10, de préférence entre 1,5 et 7. 35 Le conjugué peut être utilisé en tant qu'anticancéreux. De par la présence de l'agent de ciblage, le conjugué est rendu très sélectif vis-à-vis des cellules tumorales plutôt que des cellules saines. Ceci permet de diriger le composé de formule (I) qui a une activité anticancéreuse dans un environnement proche de celles-ci ou directement à l'intérieur de celles-ci (à ce propos, voir les30 publications suivantes qui décrivent l'utilisation de conjugués d'anticorps monoclonaux dans le traitement de cancers : « Antibody-drug conjugates for cancer therapy » Carter P.J., et al., Cancer J. 2008, 14, 154-169 ; « Targeted cancer therapy: conferring specificity to cytotoxic drugs » Chari R., Acc. Chem. Res. 2008, 41, 98-107). II est possible de traiter des cancers solides ou liquides. Le conjugué est formulé sous forme d'une solution aqueuse tamponnée à une concentration généralement comprise entre 1 et 10 mg/ml. Cette solution peut être injectée sous forme de perfusion telle qu'elle ou bien être rediluée pour former une solution de perfusion. [Exemples] Méthode A : Chromatographie Liquide Haute pression - Spectrométrie de masse (LCMS) Les spectres ont été obtenus sur un appareil Waters UPLC-SQD en mode ionisation électrospray positif et/ou négatif (ES+/-). Conditions chromatographiques : colonne : ACQUITY BEH C18- 1,7 pm - 2,1x50 mm ; solvants : A : H2O (0,1% acide formique) B : CH3CN (0,1% acide formique) ; température de colonne : 50°C ; débit : 1 ml/min ; gradient (2 min) : de 5 à 50% de B en 0,8 min 1,2 min : 100% de B ; 1,85 min : 100% de B ; 1,95:5% de B. Méthode B : chromatographie Liquide Haute pression - spectrométrie de masse (LCMS) Les spectres ont été obtenus sur un appareil Waters ZQ en mode électrospray positif et/ou négatif (ES+/-) avec détecteur UV. DAD 200 Méthode C : chromatographie Liquide Haute pression - spectrométrie de masse (LCMS) Les spectres ont été obtenus sur un appareil Waters ZQ en mode électrospray positif et/ou négatif (ES+/-) avec détecteur U.V. DAD 200 Méthode D : déglycosylation et spectrométrie de masse (HRMS) d'un conjugué La déglycosylation est une technique de digestion enzymatique à l'aide de glycosidase. Elle est faite à partir de 500 pl de conjugué + 100 pl de tampon Tris HCI 50 mM + 10 pl d'enzyme glycanase-F (100 unités d'enzyme lyophilisée/100 pl d'eau). Le mélange est passé au vortex et maintenu une nuit à 37°C. L'échantillon déglycosylé est alors prêt à être analysé en HRMS. Selon le cas, l'analyse HRMS de l'échantillon peut aussi être effectuée sans déglycosylation préalable. Dans les deux cas, les spectres de masse ont été obtenus sur un appareil Waters QTof-2 en mode électrospray positif (ES+). Conditions chromatographiques : colonne : 4 pm BioSuite 250 URH SEC 4,6x300 mm (Waters) ; solvants : A : formiate d'ammonium 25 mM +1% d'acide formique : B : CH3CN ; température de colonne 30°C : débit 0,4 ml/min ; isocratique 70%A+30%B (15 min). On utilise l'anticorps hu2H11 (dénommé aussi hu53 2H11 en page 15 de WO 2008010101 ; il s'agit d'un anticorps comprenant une Vh ayant la séquence d'aminoacides SED ID N°24). Exemple 1 : conjugué hu2H11-SPDB-4-{2-[{2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-(2-méthyl- (2-méthyl-2-mercapto-propyl)-amino]-éthoxy}-2,6-bis-[(S)-2-éth-(E) -ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tetrahydropyrrolo[2,1 c][1,4] benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridine 1.1. préparation du conjugué A 24 mg de hu2H11 (anticorps décrit aussi par hu53 2H11 en page 15 de WO 2008010101 ; il s'agit d'un anticorps comprenant une Vh ayant la séquence d'aminoacides SED ID N°24) dans 2,37 mL d'un tampon aqueux de concentration 0,05 M en phosphate de potassium, 0,05 M en NaCI et 2 mM en acide éthylène-diamine-tetra-acétique (EDTA) de pH=6,5, sont additionnés 320 µg de SPDB en solution dans 62 IaL de DMA sous agitation magnétique. Après 4 h à TA, l'anticorps modifié est purifié par gel filtration sur Sephadex G25 (Colonne PD-10 GE) préalablement équilibrée dans un tampon aqueux de concentration 0,05 M en acide N-(2-hydroxyéthyl)-pipérazine-N'-2-éthanesulfonique (HEPES), 0,05 M en NaCI et 2 mM en acide ethylène-diamine-tetra-acétique (EDTA) de pH=8. Un aliquot de l'anticorps modifié est traité par le dithiothréitol (DTT) pour cliver les groupes dithiopyridines. L'anticorps modifié ainsi que la pyridine thiol relarguée sont dosés par spectrophotométrie en utilisant les coefficients d'extinction de la pyridine thiol (e343 nm= 8080 M-'cm-l), du groupe dithiopyridine e280 nm= 5100 M-1 cm-1) et de hu2H11 (e28o nm= 206941 M-'cm-l) : une moyenne de 3,2 groupes dithiopyridine par molécule d'anticorps à la concentration de 7,08 mg/mL a été déterminée. A 12 mg d'anticorps modifié hu2H11-SPDB dans 3,2 mL d'un tampon aqueux de concentration 0,05 M en acide N-(2-hydroxyéthyl)-pipérazine-N'-2-éthanesulfonique (HEPES), 0,05 M en NaCI et 2 mM en acide éthylène-diamine-tetra-acétique (EDTA) de pH=8, sont additionnés 713 µL de DMA et 1,22 mg de 4-{2-[{2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-(2-méthyl- (2-méthyl-2-mercapto-propyl)-amino]-éthoxy}-2,6-bis-[(S)-2-éth-(E) -ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 atetrahydropyrrolo[2,1c][1,4] benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridine en solution dans 87 µL de DMA sous agitation magnétique. Après 12 h à 30°C, le mélange est filtré sur MillexR-SV 0,45 µM (PVDF Durapore Millipore) et purifié sur une colonne SuperdexTM 200 prep grade (Colonne HiloadTM 26/60 GE) préalabrement équilibrée dans un tampon phosphate salin contenant 20% de N-méthylpyrrolidone (NMP). Les fractions d'intérêt sont réunies et concentrées sur Amicon Ultra-15 (Ultracel 50k Millipore) puis filtrées sur Sephadex G-25 (Colonnes PDI0, GE) préalablement équilibrée dans un tampon aqueux de concentration 10mM en histidine contenant 10% de sucrose et 5% de NMP. Le conjugué obtenu (3,5 mL) est dosé par spectrophotométrie en utilisant les coefficients d'extinction e320 nm= 7958M-1 cm-1 and e28o nm= 9250 M-1 cm-1 pour la 4-{2-[{2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)- éthoxy]-éthyl}-(2-méthyl-2-méthyldisulfanyl-propyl)-amino]-éthoxy}-2, 6-bis-[(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tetrahydropyrrolo[2,1 c][1,4] benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridine et e28onm = 206941 M-'cm-1 pour hu2H11 : une moyenne de 3,01 dimère de tomaymycine (4-{2-[{2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-(2-méthyl- (2-méthyl-2-mercapto-propyl)-am ino]-éthoxy}-2,6-bis-[(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tetrahydropyrrolo[2,1 c][1,4]benzodiazépin-5- one-8-yloxyméthyl]-pyridine) par molécule d'anticorps à la concentration de 1,63 mg/mL a été déterminée. 1.2. 4-{2- j{2- j2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxyl-éthyl}-(2-méthyl- (2-méthyl-2-mercapto-propyl)-aminol-éthoxy}-2,6-bis-f(S)-2-éth-(E) -ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a- tetrahydropyrrolof2,1 clf1,41 benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyll-pyridine o--°~ o~ O~~N SH O N O o o A 20 mg de 4-{2-[{2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}- (2-méthyl-2-méthyldisulfanyl-propyl)-amino]-éthoxy}-2,6-bis-[(S)-2-éth-(E) -ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tetrahydropyrrolo[2,1 c][1,4] benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridine en solution dans 900 µL de MeOH et 400 µL de DMF, est additionnée une solution de 17,5 mg de chlorhydrate de tris(2-carboxyéthyl)phosphine et de 15,8 mg de NaHCO3 dans 370 µL d'eau. Le mélange obtenu est agité 1 h à TA puis concentré sous PR et purifié par chromatographie flash sur silice (Interchrom Puriflash Silice 15/35U 2G), en utilisant un gradient de 0 à 10% de MeOH dans un mélange DCM/acétonitrile 9:1. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient ainsi 7 mg de 4-{2-[méthyl-(2-méthyl-2-mercapto-propyl)-amino]-éthoxy}-2,6-bis-[(S)-2- éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tetrahydro-pyrrolo[2,1 c][1,4] benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridine: LC/MS (A) : tr= 1,06 min ; [M+H]+ : m/z 941 ; [M+H20+H]+ : m/z 959. 1.3. 4-{2- j{2-j2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxyl-éthyl}- (2-méthyl-2-méthyldisulfanyl-propyl)-aminol-éthoxy}-2,6-bis-f(S)-2-éth-(E) -ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 atetrahydropyrrolof2,1 clf1,41 benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyll-pyridine NOH N O O A une solution de 30 mg de 4-{2-[{2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}- (2-méthyl-2-méthyldisulfanyl-propyl)-amino]-éthoxy}-2,6-bis- (hydroxyméthyl)-pyridine et de 65,5 µL de diisopropyléthylamine dans 200 IaL de DCM refroidie à -20°C, est additionné 19,4 IaL de CMS. Après 20 min d'agitation, le mélange est hydrolysé et la phase organique lavée à l'eau puis séchée sur MgSO4 et concentrée sous PR. Le résidu obtenu (36 mg) en solution dans 400 µL de DMF est additionné à une solution de 26 mg de tomaymycine dans 425 IaL de DMF, ainsi que 39,6 mg de K2CO3 et 15,8 mg de KI. Le mélange est agité 12 h à 30°C puis hydrolysé jusqu'à précipitation. L'insoluble est éliminé par filtration sur fritté, lavé au DCM puis les phases organiques rassemblées sont concentrées sous PR et purifiées par chromatographie flash sur silice (Analogix Super Flash SiO2 SF25-8g) en utilisant un gradient de 0 à 10% de MeOH dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies, concentrées sous PR, reprises dans un mélange dioxanne/eau 1/1 et concentrées à nouveau sous PR. On obtient ainsi 23 mg de 4-{2-[{2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}- (2-méthyl-2-méthyldisulfanyl-propyl)-amino]- éthoxy}-2,6-bis-[(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tetrahydropyrrolo [2,1c][1,4] benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridine. RMN 1H (500 MHz, CHLOROFORM-d) : signaux larges : 1,20 à 1,78 (m, 12 H) ; 2,40 (s, 3 H) ; 2,70 à 3,10 (m, 10 H) ; 3,34 (m, 4 H) ; 3,49 à 3,70 (m, 8 H) ; 3,71 (s,3 H) ; 3,91 (m, 2 H) ; 4,00 (s, 6 H) ; 4,27 (m, 4 H) ; 5,27 (m, 4 H) ; 5,60 (m, 2 H) ; 6,86 (s, 2 H) ; 7,00 (m, 2H) ; 7,56 (s, 2 H) ; 7,65 (d, J=4,4 Hz, 2 H) . LC/MS (A) : Tr= 0,81 min ; [M+H]+ : m/z 987. 1.4. 4-{2-F{2-f2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxyl-éthyl}- (2-méthyl-2-méthyldisulfanyl-propyl)- aminol-éthoxy}-2,6-bis-(hydroxy méthyl)-pyridine N A une solution de 100 mg de 4-[2-(2-méthyl-2-méthyldisulfanyl-propylamino)-éthoxy]-2,6-bis- (hydroxyméthyl)-pyridine dans 2 mL de DMF sont additionnés 99 mg del-iodo-2-[2-(2-méthoxy- éthoxy)-éthoxy]-éthane et 54 mg de K2CO3. Après 12 h à 60°C, le mélange est additionné de 40 mg del-iodo-2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthane et 55 mg de K2CO3 supplémentaires. Le mélange obtenu est agité 24 h supplémentaires à 80°C. Après concentration sous PR, le brut ainsi obtenu est mis en solution dans un minimum de MeOH et déposé sur Mega BE-SCX, 1GM 6ML (Varian). Après lavage de la phase avec du MeOH, le produit d'intérêt est élué avec une solution d'ammoniac 2N dans le MeOH. La phase MeOH est concentrée sous PR puis redéposée sur Mega BE-SCX, 2GM 12ML (Varian) selon le même protocole. Les phases méthanol / NH3 sont concentrées sous PR et le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash sur silice (Merck SuperVarioFlash 10g column, Si60 15-40 µm), en utilisant un gradient de 0 à 10% de MeOH dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient ainsi 30 mg de 4-{2-[{2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}- (2-méthyl-2-méthyldisulfanyl-propyl)-amino]-éthoxy}-2,6-bis- (hydroxyméthyl)-pyridine. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 1,27 (s, 6 H) ; 2,40 (s, 3 H) ; 2,75 (s, 2 H) ; 2,80 (t,J=5,9 Hz, 2 H) ; 3,00 (t, J=5,9 Hz, 2 H) ; 3,23 (s, 3 H) ; 3,40 (m, 2 H) ; 3,47 à 3,55 (m, 8 H) ; 4,12 (t, J=5,9Hz, 2 H) ; 4,45 (d, J=5,9 Hz, 4 H) ; 5,30 (t, J=5,9 Hz, 2 H) ; 6,85 (s, 2 H). LC/MS (A) : tr= 0,44 min ; [M+H]+ : m/z 479 ; [MH+HCO2H]- : m/z 523. 1.5. 4-f2-(2-méthyl-2-méthyldisulfanyl-propylamino)-éthoxyj-2,6-bis- (hydroxyméthyl)-pyridine 0 - . NH2 c) s-s A une suspension de 390 mg de 4-[2-amino-éthoxy]-2,6-bis-(hydroxyméthyl)-pyridine (préparé après déprotection du groupe boc de 4-(2-tert-butoxycarbonylamino-éthoxy)-2,6-bis- (hydroxyméthyl)-pyridine décrit en page 101 de WO 07085930) dans 2 mL de THF sont additionnés 270 pL de 2-(méthyldithio)-isobutyraldéhyde et 730 pL d'isopropoxyde de titane. Après 20 min, 270 pL de 2-(méthyldithio)-isobutyraldéhyde et 730 pL d'isopropoxyde de titane supplémentaires sont additionnés et le mélange est agité 2 h à TA. Le mélange est alors additionné de 6 mL d'éthanol, agité 20 min à TA puis additionné de 124 mg de cyanoborohydrure de sodium. Après 45 min d'agitation, 124 mg de cyanoborohydrure de sodium supplémentaires sont additionnés et après 1 h d'agitation, le mélange est concentré sous PR, dilué dans AcOEt et de l'eau. Le précipité résultant est filtré, dissout dans une solution aqueuse HCI 1M. La phase aqueuse obtenue est amenée à pH basique avec une solution aqueuse de soude 5M, extraite 3x avec du DCM et les phases organiques rassemblées sont concentrées sous PR. On obtient 322 mg de 4-[2-(2-méthyl-2-méthyldisulfanyl-propylamino)-éthoxy]-2,6-bis- (hydroxyméthyl)-pyridine. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 1,26 (s, 6 H) ; 1,81 (m large, 1 H) ; 2,39 (s, 3 H) ; 2,67 (s large, 2 H) ; 2,94 (t large, J=5,7 Hz, 2 H) ; 4,11 (t, J=5,7 Hz, 2 H) ; 4,45 (d, J=5,5 Hz, 4 H) ; 5,32 (t,J=5,5 Hz, 2 H) ; 6,85 (s, 2 H). LC/MS (A) : tr= 0,24 min ; [M+H]+ : m/z 347. Exemple 15 15.1. Acide 4-(f2-(2,6-bis-f(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tétrahydropyrrolor2,1 clf 1,41benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyll-pyridin-4-yloxy)-éthyll-{2-f2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxyl-éthyl}-amino)-butanoïque o o O N o 0 A une solution de 28 mg de 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3, 11atétrahydro-pyrrolo[2,1 c][1,4]benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-butanoate d'éthyle dans 527 pl de THF et 61 pl d'eau sont ajoutés 32 pl d'une solution aqueuse 1 M de lithine. Le mélange est agité 1 h30 à TA puis 5 pl d'une solution aqueuse 1 M de lithine y sont de nouveau ajoutés. Après agitation 1 h30 à TA, le mélange est acidifié à un pH proche de 3 par ajout de 800 pl de tampon phosphate de potassium (pH=3) puis extrait 5x par du DCM. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO4, concentrées sous PR et purifié par chromatographie flash sur silice (Analogix 4 g, Si60 15-40 pm), en utilisant un gradient de 3 à 20 % de MeOH dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 10,2 mg d'acide 4-([2-(2,6- bis-[(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tétrahydro-pyrrolo[2,1 c][1,4]benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-am ino)-butanoïque. LC/MS (B) : tr= 3,08min ; [M+H]+ : m/z 939. 15.2. 4-(f2-(2,6-Bis-f(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tétrahydropyrrolof2,1 cl ri,41benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyll-pyridin-4-yloxy)-éthyll-{2-I2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxyl-éthyl}-amino)-butanoate d'éthyle 0 O,-,N O O A une solution de 50,4 mg de (S)-2-éth-(E)-ylidène-8-hydroxy-7-méthoxy-1,2,3,11a-tétrahydropyrrolo[2, 1-c][1,4]benzodiazépin-5-one dans 4 ml de DMF sont ajoutés 77 mg de K2CO3, 30,7 mg de iodure de potassium et 67 mg de 4-([2-(2,6-bis-méthanesulfonyloxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-butyrate d'éthyle. Le mélange est chauffé 18 h à 30°C puis ramené à TA, filtré sur membrane 0,45 pm, concentré sous PR et purifié par chromatographie flash sur silice (Analogix 12 g, Si60 15-40 pm), en utilisant un gradient de 0 à 10 % de MeOH dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 51 mg de 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy- 1,2,3,11 a-tétrahydro-pyrrolo[2,1 c][1,4] benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy] éthyl}-amino)-butanoate d'éthyle. LC/MS (B) : tr= 3,20 min ; [M+H]+ : m/z 967. o s o ni O o 15.3. (f2-(2,6-Bis-méthanesulfonyloxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyll-{2-j2- (2-méthoxyéthoxy)-éthoxyl-éthyl}-amino)-butyrate d'éthyle -O A une solution de 51 mg de 4-([2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxyéthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-butanoate d'éthyle dans 5 ml de DCM, préalablement refroidie à - 25°C, sont ajoutés 110 pl de diisopropyléthylamine et 34 pl de CMS. Le mélange est agité 1 h à - 15°C puis est lavé par 5 ml d'eau. La phase aqueuse est extraite par 5 ml de DCM. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO4, concentrées sous PR. On obtient 69 mg de 4-([2- (2,6-bis-méthanesulfonyloxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-butyrate d'éthyle. LC/MS (B) : tr= 2,87 min ; [M+H]+ : m/z 615. 15.4. 4-(f2-(2,6-Bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyll-{2-f2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxyl-éthyl}-amino)-butanoate d'éthyle 0 0 0 0 0 N~`0 Obi N A une solution de 180 mg de 4-[2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthylamino]-butanoate d'éthyle dans 18 ml d'acétonitrile sont ajoutés 207 mg de 1-iodo-2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthane et 192 pl de diisopropyléthylamine. Le mélange est chauffé 3 jours à 80°C puis concentré sous PR et purifié par chromatographie flash sur silice (Merck 15 g, Si60 15-40 pm), en utilisant un mélange DCM / MeOH / eau (40/5/0,5). Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 51 mg de 4-([2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-butanoate d'éthyle. LC/MS (B) : tr= 0,70 min ; [M+H]+ : m/z 459. 15.5. 4-I2-(2,6-Bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthylaminol-butanoate d'éthyle A une solution de 390 mg de 4-[[2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]- (2-nitrobenzènesulfonyl)-amino]-butanoate d'éthyle dans 10 ml d'acétonitrile, sous argon, sont ajoutés 766 mg de carbonate de césium et 160 pl de thiophénol. Le mélange est agité 17 h à TA puis filtré sur verre frité porosité 4. Le gâteau est lavé par AcOEt et le filtrat est concentré sous PR et purifié sur cartouche SCX (Varian - 2 g), en utilisant un lavage au MeOH et un décrochage du produit attendu par une solution d'ammoniac 2 N dans le MeOH. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 183 mg de 4-[2-(2,6-bishydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthylamino]-butanoate d'éthyle. LC/MS (B) : tr= 0,68 min ; [M+H]+ . m/z 313. 15.6. 4- ff2-(2,6-Bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyll- (2-nitro-benzènesulfonyl)-aminol-butanoate d'éthyle NOz NOz 0=5=0 O O O=S=O 0,-' NH A une solution de 767 mg de N-[2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl] -2-nitrobenzènesulfonamide dans 15 ml de DMF sous argon, sont ajoutés 344 pl de 3-bromo-butyrate d'éthyle et 1,38 g de K2CO3. Le mélange est agité environ 20 h à 40°C puis filtré sur verre frité porosité 4. Le gâteau est lavé par AcOEt et le filtrat est concentré sous PR. Le brut est purifié par chromatographie flash sur silice (Merck 90 g, Si 15-40 pm), en utilisant un gradient de 0 à 10% de MeOH dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 395 mg de 4-[[2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-(2-nitro- benzenesulfonyl)-amino]-butanoate d'éthyle. LC/MS (B) : tr= 2,72 min ; [M+H]+ : m/z 498 ; [M+HCO2H-H]- : m/z 542. 15.7. N-I2-(2,6-Bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy) -éthyll-2-nitro-benzènesulfonamide NO, 0=S=0 O,-,,,NH NOz O=S=O 0,-,,,NH ,O O O A une solution de 1,3 g de 4-[2-(2-nitro-benzènesulfonylamino)-éthoxy]-pyridine-2,6-dicarboxylate de diéthyle dans 200 ml d'éthanol, sont ajoutés successivement 315 mg de borohydrure de sodium et 941 mg de CaCl2. Le mélange est agité 1 h30 à TA puis 50 ml d'eau y sont ajoutés. L'éthanol est éliminé sous PR et 50 ml d'eau sont ajoutés au résidu obtenu ; la phase aqueuse est extraite 3x par AcOEt. Les phases organiques sont réunies, lavées par une solution saturée de NaCl, séchées sur MgSO4, concentrées sous PR. On obtient 1,06 g de N-[2-(2,6-bishydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl] -2-nitro-benzenesulfonamide. LC/MS (A) : tr= 0,57 min ; [M+H]+ : m/z 384. 15.8. 4-I2-(2-Nitro-benzènesulfonylamino)-éthoxyl-pyridine-2,6-dicarboxylate de diéthyle A une solution de 957 mg de monochlorhydrate de 4-(2-amino-éthoxy)-pyridine-2,6-dicarboxylate de diéthyle dans 30 ml de DCM et 734 pl de pyridine, préalablement refroidie à environ 5°C, sont ajoutés 798 mg de chlorure de 2-nitrobenzènesulfonyle. Le mélange est ramené à TA et agité 2 h. 244 pl de pyridine et 665 mg de chlorure de 2-nitrobenzènesulfonyl supplémentaires y sont ensuite additionnés et l'agitation est poursuivie 15 h. Le mélange est lavé par 25 ml d'eau et la phase aqueuse est extraite 2x par 25 ml de DCM. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO4, concentrées sous PR et purifiées par chromatographie flash sur silice (Merck 100 g, Si 15-40 pm), en utilisant un gradient de 0 à 10% AcOEt dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 960 mg de 4-[2-(2-nitrobenzènesulfonylamino)-éthoxy]-pyridine-2,6-dicarboxylate de diéthyle. RMN 'H (400 MHz, DMSO-d6) : 1,35 (t, J=7,2 Hz, 6H) ; 3,41 (t, J=5,2 Hz, 2 H) ; 4,22 (t, J=5,2 Hz, 2 H) ; 4.39 (q, J=7,2 Hz, 4 H) ; 7,50 (s, 2 H) ; 7,80 (m, 2 H) ; 7,92 (m, 1 H) ; 8,04 (m, 2 H) ; 8,40 (m, 1 H). LC/MS (C) : tr= 3,50 min ; [M+H]+ : m/z 468. 15.9. 4-(2-Amino-éthoxy)-pyridine-2,6-dicarboxylate de diéthyle, monochlorhydrate 0 0 A une solution de 2,64 g de 4-(2-tert-butoxycarbonylamino-éthoxy)-pyridine-2,6-dicarboxylate de diéthyle (décrit en page 101 de WO 07085930) dans 27 ml de dioxane sont ajoutés 20,7 ml d'acide chlorhydrique 4 N dans le dioxane. Le mélange est agité environ 20 h à TA, puis concentré sous PR. Le résidu d'évaporation est repris par environ 70 ml de dioxane, puis concentré de nouveau sous PR. L'opération est répétée 3x. Le mélange est repris par 50 ml de tert-butyl-méthyl-ether et la suspension obtenue est filtrée sur verre frité porosité 4. Le gâteau est lavé par du tert-butyl-méthyl-ether, séché en dessiccateur sous PR à TA. On obtient 2 g de 4-(2- amino-éthoxy)-pyridine-2,6-dicarboxylate de diéthyle, monochlorhydrate. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 1,35 (t, J=7,2 Hz, 6H) ; 3,26 (m, 2H) ; 4,39 (q, J=7,2 Hz, 4 H) ; 4,45 (m, 2 H) ; 7,77 (s, 2 H) ; 8,16 (m large, 3 H). LC/MS (C) : tr= 2,39 min ; [M+H]+ : m/z 283. Exemple 16 16.1. Acide 3-(f2-(2,6-bis-f(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tétrahydropyrrolor2,1 clf 1,41benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyll-pyridin-4-yloxy)-éthyll-{2-f2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxyl-éthyll-amino)-propanoïque 0 0 o o A une solution de 30 mg de 3-([2-(2,6-bis-[(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3, 11atétrahydro-pyrrolo[2,1 c][1,4]benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-propanoate de méthyle dans 576 pl de THF et 67 pl d'eau sont ajoutés 35 pl d'une solution aqueuse 1 M de lithine. Le mélange est agité 1 h30 à TA puis repris par 4 ml de DCM et acidifié à un pH proche de 3 par ajout de 1 ml de tampon phosphate de potassium (pH=3). Le mélange est extrait 4x par du DCM et les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO4, concentrées sous PR et purifié par chromatographie flash sur silice (Analogix 4 g, Si60 15-40 pm), en utilisant un gradient de 10 à 20% de MeOH dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 13 mg d'acide 3-([2-(2,6-bis-[(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tétrahydropyrrolo[2,1 c][1,4]benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxyéthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-propanoïque. LC/MS (B) : tr= 3,07 min ; [M+H]+ : m/z 925 16.2. 3-(f2-(2,6-Bis-f(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tétrahydro-pyrrolof2,1 et f 1,41benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyll-pyridin-4-yloxy)-éthyll-{2-f2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxyl-éthyl}-amino)-propanoate de méthyle obi1N- a O O o o A une solution de 84 mg de (S)-2-éth-(E)-ylidène-8-hydroxy-7-méthoxy-1,2,3,11a-tétrahydro- pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazépin-5-one dans 5 ml de DMF sont ajoutés 128 mg de K2CO3, 51 mg de KI et 110 mg de 3-([2-(2,6-bis-méthanesulfonyloxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-propanoate de méthyle. Le mélange est chauffé 18 h à 30°C puis ramené à TA, filtré sur membrane 0,45 pm, concentré sous PR et purifié par chromatographie flash sur silice (Analogix 24 g, Si60 15-40 pm), en utilisant un gradient de 0 à 10% de MeOH dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 33 mg de 3-([2-(2,6-bis-[(S)-2-éth-(E)-ylidène-7-diméthoxy-1,2,3,11 a-tétrahydro-pyrrolo[2,1 c][1,4]benzodiazépin-5-one-8-yloxyméthyl]-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-propanoate de méthyle. LC/MS (B) : tr= 3,21 min ; [M+H]+ : m/z 939 16.3. 3-(f2-(2,6-Bis-méthanesulfonyloxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyll-{2-j2- (2-méthoxyéthoxy)-éthoxyl-éthyl}-amino)-propanoate de méthyle s- ni O N O O O~ N~yO IOI 0.5 ,0 A une solution de 80 mg de 3-([2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxyéthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-propanoate de méthyle dans 8 ml de DCM, préalablement refroidie à -25°C, sont ajoutés 183 pl de diisopropyléthylamine et 57 pl de CMS. Le mélange est agité 1 h à -15°C puis est lavé par 5 ml d'eau. La phase aqueuse est extraite par 5 ml de DCM. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO4, concentrées sous PR. On obtient 110 mg de 3-([2-(2,6-bis-méthanesulfonyloxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-amino)-propanoate de méthyle. LC/MS (B) : tr= 2,67 min ; [M+H]+ : m/z 587 16.4. 3-(f2-(2,6-Bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyll-{2-f2- (2-méthoxy-éthoxy)-éthoxyl-éthyl}-amino)-propanoate de méthyle A une solution de 284 mg de 3-[2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthylamino]-propanoate de méthyle dans 28 ml d'acétonitrile sont ajoutés 356 mg de 1-iodo-2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)- éthoxy]-éthane et 330 pl de diisopropyléthylamine. Le mélange est chauffé à 80°C pendant 3 jours puis concentré sous PR et purifié par chromatographie flash sur silice (Merck 50 g, Si60 15-40 pm), en utilisant un gradient de 5 à 10% de MeOH dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 165 mg de 3-([2-(2,6-bishyd roxym éthyl-pyrid i n-4-yloxy)-éthyl]-{2-[2-(2-méthoxy-éthoxy)-éthoxy]-éthyl}-am i no)-propa noate de méthyle. LC/MS (B) : tr= 0,44 min ; [M+H]+ : m/z 431. 16.5. 3-f2-(2,6-Bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthylaminol-propanoate de méthyle NOz O rl HO. N OH A une solution de 155 mg de 3-[[2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]-(2-nitro- benzènesulfonyl)-amino]-propanoate de méthyle dans 6 ml d'acétonitrile, sous argon, sont ajoutés 325 mg de carbonate de césium et 67 pl de thiophénol. Le mélange est agité 4 h à TA puis filtré sur verre frité porosité 4. Le gâteau est lavé par AcOEt et le filtrat est concentré sous PR et purifié sur cartouche SCX (Varian - 2 g), en utilisant un lavage au MeOH et un décrochage du produit attendu par une solution d'ammoniac 2 N dans le MeOH. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 82 mg de 3-[2-(2,6-bishydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthylamino]-propanoate de méthyle. LC/MS (B) : tr= 0,33 min ; [M+H]+ : m/z 285. 16.6. 3-f f2-(2,6-Bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyll- (2-nitro-benzènesulfonyl)-aminol-propanoate de méthyle NOz NOz O=S=O 0=5=0 O~~N 0'Y- 0 O O 1 HO_ N OH A une solution de 670 mg de 3-[2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthylamino]-propanoate de tert-butyle dans 20 ml de DCM, sont ajoutés 2 ml de TFA. Le mélange est agité 6 h à TA puis concentré sous PR, repris par du DCM et à nouveau concentré sous PR. Au résidu obtenu, mis en solution dans 10 ml de MeOH, sont ajoutés, à 5°C, 7 ml de solution 2 M de (triméthylsilyl)diazométhane dans l'hexane. Le mélange est agité 1 h30 à 5°C puis 200 pl d'acide acétique sont ajoutés. Le mélange est repris par 30 ml d'eau et 30 ml d'AcOEt. La phase aqueuse est extraite 2x par 30 ml d'AcOEt. Les phases organiques sont réunies, lavées par une solution saturée de NaCl, concentrées sous PR et purifiées par chromatographie flash sur silice (Analogix 24 g, Si 15-40 pm), en utilisant un gradient de 0 à 10 % de MeOH dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 155 mg.de 3-[2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthylamino]-propanoate de méthyle. LC/MS (C) : tr= 2,56 min ; [M+H]+ : m/z 470. 16.7. 3-f f2-(2,6-Bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyll- (2-nitro-benzènesulfonyl)-aminol-propanoate de tert-butyle O O 'NO, A une solution de 0,8 g de 4-{2-[(2-tert-butoxycarbonyl-éthyl)-(2-nitro-benzènesulfonyl)-amino] -éthoxy}-pyridine-2,6-dicarboxylate de diéthyle dans 80 ml d'éthanol, sont ajoutés successivement 152 mg de borohydrure de sodium et 447 mg de CaCl2. Le mélange est agité à TA puis 20 ml d'eau y sont ajoutés en fin de réaction. L'éthanol est éliminé sous PR et 100 ml d'eau sont ajoutés au résidu obtenu et la phase aqueuse est extraite 3x par AcOEt. Les phases organiques sont réunies, lavées par une solution saturée de NaCl, séchées sur MgSO4, concentrées sous PR. On obtient 670 mg de 3-[[2-(2,6-bis-hydroxyméthyl-pyridin-4-yloxy)-éthyl]- (2-nitrobenzènesulfonyl)-amino]-propanoate de tert-butyle. LC/MS (C) : tr= 3 min ; [M+H]+ : m/z 512. 16.8. 4-{2-f(2-Tert-butoxycarbonyl-éthyl)-(2-nitro-benzènesulfonyl)-am inol-éthoxy}-pyridine-2,6-dicarboxylate de diéthyle 51 NOz 0=S=0 OH O O A une solution de 10,6 g de 3-[(2-méthanesulfonyloxy-éthyl)-(2-nitro-benzènesulfonyl)-amino] -propioniate de tert-butyle dans 220 ml de DMF, sont ajoutés 16,2 g de K2CO3 et 5,6 g de 4-hydroxy-pyridine-2,6-dicarboxylate de diéthyle. Le mélange est chauffé 20 h à 60°C puis concentré sous PR, repris par 200 ml d'eau et 200 ml d'AcOEt. La phase aqueuse est extraite 2x par AcOEt. Les phases organiques sont réunies, lavées par une solution saturée de NaCl, séchées sur MgSO4, concentrées sous PR et purifiées par chromatographie flash sur silice (Merck 600 g, Si 15-40 pm), en utilisant un gradient de 0 à 20% AcOEt dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 6,56 g de 4-{2-[(2-tert-butoxycarbonyl-éthyl)-(2-nitro-benzènesulfonyl)-amino] -éthoxy}-pyridine-2,6- dicarboxylate de diéthyle. LC/MS (C) : tr= 4,14 min ; [M+H]+ : m/z 596. 16.9. 3-f(2-Méthanesulfonyloxy-éthyl)-(2-nitro-benzènesulfonyl) -aminol-propioniate de tert-butyle NO, NO, O=S=O HO~~NO O 0 0=3=0 S O~~N O II 01 A une solution de 9,2 g de 3-[(2-hydroxy-éthyl)-(2-nitro-benzènesulfonyl)-amino]-propioniate de tert-butyle dans 92 ml de DCM sont ajoutés 8,1 ml de diisopropyléthylamine. Le mélange est refroidi à -5°C et une solution de 2,34 ml de CMS dans 10 ml de DCM est additionnée goutte à goutte. Après retour à TA, le mélange est agité 2 h environ puis est additionné de 100 ml d'eau. La phase aqueuse est extraite 2 fois par du DCM et les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO4, concentrées sous PR et purifiées par chromatographie flash sur silice (Analogix 240 g, Si 15-40 pm), en utilisant un gradient de 0 à 5 % d'acétate d'éthyle dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 10,62 g de 3-[(2-méthanesu lfonyloxy-éthyl)-(2-nitro-benzènesulfonyl)-amino]-propioniate de tert-butyle. LC/MS (C) : tr= 3,77 min ; [M+Na]+ : m/z 475. 16.10. 3-f(2-Hydroxy-éthyl)-(2-nitro-benzènesulfonyl)-aminol-propioniate de tert-butyle HO NO, O=S=O HOC NH NO00=S=0 A une solution de 8,7 g de N-(2-hydroxy-éthyl)-2-nitro-benzènesulfonamide (Skerlj, R.T. ; Nan, 30 S. ; Zhou, Y. ; Bridger, G.J. Tetrahedron Lett. 2002 (43) 7569-7571) dans 87 ml de DMF, sous argon, sont ajoutés 8,8 ml de 3-bromo propionate de tert-butyle et 14,6 g de K2CO3. Le mélange est agité 15 h à 40°C puis 5 ml de 3-bromo propionate de tert-butyle sont de nouveau ajoutés. Le mélange est chauffé à 40°C jusqu'au lendemain puis filtré sur verre frité porosité 4. Le gâteau est lavé par AcOEt puis le filtrat est concentré sous PR et purifié par chromatographie flash sur silice (Merck 240 g, Si 15-40 pm), en utilisant un gradient de 0 à 10% d'AcOEt dans le DCM. Les fractions contenant le produit recherché sont réunies et concentrées sous PR. On obtient 9,54 g de 3-[(2-hydroxy-éthyl)-(2-nitro-benzènesulfonyl)-amino]-propioniate de tert-butyle. LC/MS (C) : tr= 3,39 min ; [M+Na]+ : m/z 397. REVENDICATIONS1. Composé de formule (I) : Q-(CHZCH2O)k-CH2CH2-G N~ GCR, LI L2 dans laquelle : - représente une liaison simple ou une liaison double avec la condition que si représente une liaison simple alors : - ---- représente une liaison simple ; - U et/ou U' identique ou différent, représente(nt) indépendamment l'un de l'autre H ; - W et/ou W' identique ou différent, représente(nt) indépendamment l'un de l'autre : OH, -OR, -OCOR, -000R, -OCOOR, -OCONRR', un carbamate cyclique tel que N10 et C11 soient inclus dans un cycle, -NRCONRR', - OCSNHR, un thiocarbamate cyclique tel que N10 et C11 soient inclus dans un cycle, - SH, -SR, -SOR, -SOOR, -S03-, -NRSOOR', -NRR', une amine cyclique telle que N10 et C11 soient inclus dans un cycle, -NROR', -NRCOR', -N3, -CN, Hal, un groupe trialkylphosphonium ou triarylphosphonium ; - RI, R2, RI', R2' identiques ou différents, représentent, indépendamment l'un de l'autre : H, Hal ou un groupe (C1-C6)alkyle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituant(s) choisi(s) parmi : Hal, CN, NRR', CF3, OR, un groupe aryle ou hétéroaryle, S(0)qR avec q =0,1 ou 2 ; ou bien RI et R2 et/ou Ri' et R2' forment ensemble respectivement une double liaison =CH2 ou =CH-CH3 ; - Y et Y', identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre H ou -OR ; - M représente CH ou N ; - ALK et ALK' désignent un groupe (C1-C6)alkylène ; - R et R' représentent indépendamment l'un de l'autre, H ou un groupe (C1-C6)alkyle ou aryle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituant(s) choisi(s) parmi : Hal, CN, NRR', CF3, OR, un groupe aryle ou hétéroaryle ; - LI représente : o une liaison simple ; (I) ou o le groupe -(OCH2CH2)i-, rattaché au cycle phényle ou pyridinyle par l'atome d'oxygène, i représentant un nombre entier allant de 2 à 40, de préférence de 2 à 10; ou o le groupe -D-(C1-C6)ALK- rattaché au cycle phényle ou pyridinyle par D, dans lequel D représente -0-, -NH- ou -N(C1-C4)alkyle-; - L2 représente : o un groupe -(C1-C6)ALK- ; ou o le groupe -(CH2CH2O)i-CH2CH2-, j représentant un nombre entier allant de 1 à 40, de préférence de 1 à 10 ; ou o un groupe -(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK-, rattaché à l'atome d'azote par le motif -(CH2CH2O)-, j représentant un nombre entier allant de 1 à 40, de préférence de 1 à 10, et R" représentant H ou un groupe (C1-C4)alkyle; - Q représente une liaison simple ou le groupe C(=0) ; - k représente un nombre entier allant de 0 à 40, de préférence de 1 à 40, plutôt de 1 à 10 ; - G représente un groupe -OR ou -NRR', R et R' étant tels que définis précédemment ou étant tels qu'ils forment ensemble avec l'atome d'azote auxquels ils sont liés un groupe (C4-C1o)hétérocycloalkyle pouvant comprendre dans le cycle un autre hétéroatome choisi parmi N, O ou S et pouvant être éventuellement substitué par au moins un substituant choisi parmi un groupe (C1-C4)alkyle, un atome d'halogène ou un groupe hydroxy ; - GCR1 représente le groupe -SZa ou -C(=O)-ZbRb ; - Za représente Ac, Ra or SRa ; - Ra représente H, ou un groupe (C1-C6)alkyle, (C3-C8)cycloalkyle, aryle, hétéroaryle ou (C4-C1o)hétérocycloalkyle éventuellement substitué par un ou plusieurs substituant(s) choisi(s) parmi : Hal, CN, NRR', CF3, OR, NO2, un groupe aryle ou hétéroaryle ; - Zb représente une liaison simple, -O- ou -NH- et Rb représentant H ou un groupe (Cr C6)alkyle, (C3-C8)cycloalkyle, aryle, hétéroaryle ou (C4-C1o)hétérocycloalkyle ou bien Zb représente une liaison simple et Rb représente Hal ; avec la condition que si LI représente une liaison simple alors GCR1 représente -SZa. 2. Composé selon la revendication 1 dans lequel U=U' et/ou W=W' et/ou R1=R1' et/ou R2=R2' et/ou Y=Y' et/ou les deux groupes ALK et ALK' attachés au noyau phényle ou pyridinyle sont identiques 3. Composé selon la revendication 1 de formule (IA) ou (IB) : ry\ ,GCR, L Q-(CH,CH2O)k CHzCHz G N ,GCR, I, Li 1 O N-Nt 0. 4. Composé selon la revendication 1 à 3 dans lequel Y et Y' représentent un groupe (Cr Q-(CH2CH20)k CHzCHz G C4)alcoxy, plus particulièrement méthoxy. 5. Composé selon l'une des revendications 1 à 4 dans lequel si LI représente une liaison simple, L2 représente -(CH2CH2O)i-CH2CH2- ou -(CH2CH2O))-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK-. 6. Composé selon l'une des revendications 1 à 5 dans lequel G représente un groupe -OH, -O(C1-C6)alkyle, -OMe, -NH2, -NH(C1-C6)alkyle ou -N(C1-C6)alkyle2 ou G représente un groupe -NRR' dans lequel R et R' forment ensemble avec l'atome d'azote auxquels ils sont liés un groupe hétérocycloalkyle choisi parmi pipérazino, N-méthylpipérazino, morpholino, pipéridino ou pyrrolidino, qui peut être éventuellement substitué par au moins un substituant choisi parmi un groupe (C1-C4)alkyle, un atome d'halogène ou un groupe hyd roxy. 7. Composé selon l'une des revendications 1 à 6 dans lequel : - Li= -D-(C1-C6)ALK- et L2= -(C1-C6)ALK- ; ou - Li= -(OCH2CH2);- et L2= -(C1-C6)ALK- ; ou - Li= liaison simple et L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK-; ou - Li= -D-(C1-C6)ALK-, et L2= -(CH2CH2O))-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK-; ou - Li= -D-(C1-C6)ALK- et L2= -(Cl2CH2O)i-Cl2CH2-. 8. Composé selon la revendication 1 à 6 dans lequel : ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= liaison simple, L2= -(CH2CH2O))-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= liaison simple, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= liaison simple, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=0-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= liaison simple, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=CO, k=0-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=0-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(CH2CH20)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=CO, k=0-10, G=NRR', GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2=-(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2=-(CH2CH2O)i-CH2CH2NR"-(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-SZa ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(CI-C6)ALK-, Q=liaison simple, k=1-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -(C1-C6)ALK-, Q=CO, k=1-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2-, Q=liaison simple, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2-, Q=CO, k=1-10, G=OR, GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(CI-C6)ALK-, L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2-, Q=liaison simple, k=0-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb ; ^ Li= -D-(C1-C6)ALK-, L2= -(CH2CH2O)i-CH2CH2-, Q=CO, k=0-10, G=NRR', GCR1=-C(=O)ZbRb. 9. Composé selon la revendication 1 à 8 dans lequel -COZbRb représente -COOH,-CO-O-N - COO(C1-C6)alkyle, -COOCH3, -COOCH2CH=CH2, ôr ou SO3M CO-O-N NcN 57 -CO-O-N M=H ou cation GI -coo , ou le groupe dans lequel GI représente au moins un groupe inductif, , plus particulièrement COQ- -NO, ou -COO ou ~N _ N 10. Composé selon la revendication 1 à 8 dans lequel -SZa représente -SH ou-SS(C1-C6)alkyle, plus particulièrement -SSMe, ou -SS-hétéroaryle, plus particulièrement SS ou XI et X2 représentant -H, -CONX8X9, -NO2, X8 et X9 X~V iXrz représentant H ou un groupe (C1-C6)alkyle. 11. Procédé de préparation d'un conjugué, consistant à : (i) mettre en contact et laisser réagir : - une solution aqueuse, éventuellement tamponnée, de l'agent de ciblage, éventuellement modifié à l'aide d'un agent de modification, et - une solution d'un composé de formule (I) tel que défini à l'une des revendications 1 à 10, le groupe chimique GCR1 du composé de formule (I) étant réactif vis-à-vis des groupes chimiques GCR2 présents sur l'agent de ciblage notamment vis-à-vis des groupes amino présents sur les anticorps, lesdits groupes chimiques GCR2 ayant été introduits le cas échéant par l'agent de modication, de façon à assurer l'attachement du composé de formule (I) sur l'agent de ciblage par 25 formation d'une liaison covalente ; (ii) puis à éventuellement séparer le conjugué formé à l'étape (i) du composé de formule (I) et/ou de l'agent de ciblage n'ayant pas réagi et/ou des agrégats qui se seraient éventuellement formés. 30 12. Procédé selon la revendication 11 dans lequel : 5 10 15 2025- en présence d'un dérivé de formule (I) comprenant un groupe chimique réactif GCR1 de type -SZa, l'agent de ciblage comprend : ^ des groupes chimiques disulfures dans le cas où GCR1 représente -SH ; ^ des groupes chimiques thiols dans le cas où GCR1 représente -SZa avec Za#H ; ^ des groupes chimiques maléimido ou haloacétamido dans le cas où GCR1 représente -SH ; - en présence d'un dérivé de formule (I) comprenant un groupe chimique réactif GCR1 de type -C(=O)-ZbRb, on fait réagir le dérivé de formule (I) avec les fonctions amino de l'agent de ciblage, notamment les groupes g-amino portés par les chaînes latérales des résidues lysine (Lys) d'un anticorps. 13. Procédé selon la revendication 11 ou 12 dans lequel : - lorsque le groupe chimique réactif GCR1 est de type -SH, et que l'agent de ciblage présente des fonctions amino, notamment des groupes g-amino portés par les chaînes latérales des résidus lysine d'un anticorps, celui-ci est modifié à l'aide d'un agent de modification choisi parmi un composé de formule : 0 IoI R S (C °s)ALK N S I ° dans laquelle R représente un groupe (C1-C6)alkyle, aryle, hétéroaryle, (C3-C7)cycloalkyle, (C4-C1o)hétérocycloalkyle; 2 un analogue pegylé de formule : ou un analogue sulfonique de formule dans lesquelles X3 X4, X5, X6 représentent H ou un groupe (C1-C6)alkyle, XI et X2 représentent -H, -CONX$X9, -NO2, X3 et X9 représentant H ou un groupe (C1-C6)alkyle, X7 représente -SO3 M+ ou H ou bien un groupe ammonium quaternaire et a désigne un entier allant de 0 à 4 et b désigne un entier allant de 0 à 2000 ; ou parmi succinimidyl-4-(N-maléimidométhyl)cyclohexane-1-carboxylate ; sulfosuccinimidyl 4-(N-maléimidométhyl)cyclohexane-1-carboxylate ; N 0-N N y N // AA O dans laquelle R représente un groupe -(CH2)n , O O 4C1-(CiO R O,-(CH2)n-cyclohexyl-, -cyclohexyl-(CH2)n- et n représente un entier allant de 1 à 10 ; H , (Ci -C,)AL K-( 'N O AC1-Ce)AL K-N 0 étant un nombre entier compris entre 0 et 2000 ; b Ce)ALK (°-N O (CI-Cs)ALK (O\N O succinimidyl-N-bromoacétate ; succinimidyl-3-(N- H 15 20 25 bromoacétamido)propionate ; ° ° , b étant un nombre entier compris entre 0 et 2000. - lorsque le groupe chimique réactif GCR1 est de type -SZa avec Za#H, et que l'agent de ciblage présente des fonctions amino, notamment les groupes g-amino portés par les chaînes latérales des résidus lysine d'un anticorps, celui-ci est modifié à l'aide d'un agent de modification choisi parmi un composé de formule x10 dans laquelle : - Hal représente un atome d'halogène ; - X10 représente un atome d'halogène ou le groupe -COOX14, nitro, (C1-C8)alkyle non substitué ou halogéné, (C1-C8)alkoxy non substitué ou halogéné, (C2-C8)alkényle non substitué ou halogéné, (C2-C8) alkynyle non substitué ou halogéné, (C3-C8)cycloalkyle non substitué, aryle non substitué ou substitué par un à trois substituants sélectionnés parmi amino, atome d'halogène, groupe (C1-C8)alkyle non substitué ou halogéné, (C1-C8)alkoxy non substitué ou halogéné ; - chacun des X11, X12, X13 représente indépendamment un atome d'hydrogène ou bien peut représenter X10 ; ou X10 et X11 forment ensemble un cycle (C2-05)alkylène, non substitué ou substitué par un à cinq groupe(s) (C1-C4)alkyle ; ou X10 ou X11 forment ensemble avec X12 un cycle (C1-05)alkylène, non substitué ou substitué par un à cinq groupes (C1-C4) alkyle et X14 est -H ou un groupe (C1-C8)alkyle NH2* Hal- 5OU X1 p=X11=X12=X13= H . - lorsque le groupe chimique réactif GCR1 est de type -SH, et que l'agent de ciblage présente des fonctions thiol, notamment suite à l'introduction de cystéines par mutation ou par modification chimique d'un agent de ciblage présentant des fonctions amino, l'agent de ciblage est modifié de façon à ce que ses fonctions thiol soient transformées en fonctions disulfures, plus particulièrement à l'aide d'un agent de 3 N modification choisi parmi un composé de formule ou 60 dans laquelle X1 et X2 représentent -H, -CONX8X9 ou -NO2, X8 2 10 et X9 représentant H ou un groupe (C1-C6)alkyle. 14. Conjugué susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une des revendications 11 à 13. 15 15. Solution de conjugué susceptible d'être obtenue par le procédé selon l'une des revendications 11 à 13 ou comprenant le conjugué tel que défini à la revendication 14. 16. Utilisation d'un dérivé de formule (I) selon l'une des revendications 1 à 10 pour la préparation d'un agent de ciblage auquel est attaché de façon covalente en position para 20 de M le dimère de formule 17. Utilisation selon la revendication 16 dans laquelle l'agent de ciblage est un anticorps. 18. Utilisation selon la revendication 16 ou 17 dans laquelle le dimère a pour formule : Y 25 H N 19. Composé selon l'une des revendications 1 à 10 pour utilisation en tant qu'anticancéreux. 20. Conjugué selon la revendication 14 pour utilisation en tant qu'anticancéreux. 21. Solution de conjugué selon la revendication 15 pour utilisation en tant qu'anticancéreux. 22. Composé de formule P2 : Q-(CH2CH2O)k-CH2CH2G L1 L2 P2 1 LGALK MALK' dans laquelle : - LI, L2, Q, k, ALK, ALK' et G sont tels que définis à l'une des revendications 1 à 9, - LG et LG' représentent un groupe partant ; - X' représente GCR1. 23. Utilisation d'un composé selon la revendication 22 comme composé intermédiaire dans la préparation d'un composé selon l'une des revendications 1 à 10. 24. Agent de ciblage auquel a été attaché de façon covalente en position para de M le dimère de formule : après réaction d'un composé tel que défini l'une des revendications 1 à 10 avec l'agent de ciblage. 25. Agent de ciblage selon la revendication 24 ayant une affinité pour un antigène ou groupe 25 d'antigènes localisé sur des cellules cancéreuses ou des cellules stromales associées à une tumeur. 26. Agent de ciblage selon la revendication 24 à 25 qui est un anticorps, de préférence monoclonal. w u LG' 30