Brevet FR2966056A1 — publié le 20120420

La présente invention concerne un procédé de traitement des acides nucléiques résiduels présents à la surface des consommables, plus particulièrement des consommables de laboratoire, en particulier des tubes et des filtres utilisés dans les manipulations d'amplification d'échantillons d'ADN ou d'ARN. Cette invention vise à répondre plus particulièrement au problème posé par l'amplification spécifique ou non spécifique des acides nucléiques résiduels présents à la surface desdits consommables, lors de la mise en oeuvre de techniques utilisant des réactions de polymérisation en chaîne (PCR) ou des réactions d'amplification par transcription (TMA). Ces acides nucléiques résiduels proviennent généralement de l'environnement, où ils peuvent être présents sous forme libre, ou bien contenus dans des cellules vivantes telles que des microorganismes, virus ou protozoaires. 20 PREAMBULE Les réactions d'amplifications des acides nucléiques consistent en une succession de réactions enzymatiques impliquant l'activité d'une polymérase, permettant la synthèse de nouvelles molécules d'acides nucléiques à partir d'une séquence d'acides nucléique initialement présente 25 dans le milieu réactionnel. Ces réactions enzymatiques ont généralement pour but de générer des copies d'une même séquence d'acides nucléiques présente initialement en petite quantité dans un échantillon. Les réactions d'amplifications les plus fréquemment utilisées sont celles faisant intervenir 30 des réactions successives de polymérisation ou de transcription, telles que la PCR et le TMA. De telles techniques sont largement décrites et bien connues de l'homme du métier. Elles permettent, à l'aide d'amorces spécifiques, de 10 15 copier un très grand nombre de fois la même séquence d'acides nucléiques à partir d'une seule matrice d'ADN ou d'ARN. Dans de telles réactions, c'est la séquence nucléotidique des amorces utilisées pour initier la réaction de polymérisation, qui détermine quelle est la séquence d'acides nucléique devant être amplifiée. Les séquences d'acides nucléiques obtenues par les réactions d'amplifications sont utiles dans de nombreuses applications dans le domaine de la biologie moléculaire telles que le clonage des gènes, le diagnostic des maladies génétiques, ou bien encore la détection de virus ou de microorganismes [Vosberg, H.P., (1989) The polymerase chain reaction : an improved method for the analysis of nucleic acids, Hum Genet. 83(1) : 1- 15]. Selon les conditions dans lesquelles les réactions enzymatiques sont effectuées, notamment le degré de stringence utilisé (concentration en sels et température d'hybridation), il est possible d'amplifier des séquences d'ADN ou d'ARN dont la séquence est plus ou moins identique à celle que l'on cherche à amplifier. Pour obtenir une amplification très spécifique d'une séquence donnée, c'est-à-dire cibler uniquement des acides nucléiques ayant une séquence identique à celle des amorces introduites dans le milieu de réaction, il convient d'adopter des conditions de forte stringence. A l'inverse, lorsqu'on cherche à amplifier des séquences présentant une certaine variabilité par rapport aux amorces utilisées, les conditions de réactions doivent être de stringence plus faible. Dans le cadre de tests de détection universelle de microorganismes, d'investigations génétiques, ou du diagnostic de maladies infectieuses, il est fréquent de devoir rechercher des séquences d'acides nucléiques présentant une certaine variabilité par rapport à la séquence type recherchée pour tenir compte des différences de séquences entre individus ou espèces. A cet effet, il est souvent nécessaire de recourir à des conditions de stringence plus faibles permettant de prendre en compte la diversité génétique. Cependant, les tests effectués en conditions de faible stringence comportent le risque d'amplifier des séquences provenant d'acides nucléiques résiduels, étrangères à l'échantillon étudié. Il en résulte alors l'apparition de « faux positifs », pouvant fausser sensiblement les résultats des tests. Dans le cas de la détection universelle des microorganismes, le risque de faux positifs lié à la présence d'acides nucléiques résiduels provenant de l'environnement, est très élevé [Schmidt, T., Hummel, S., Hermann, B., 1995, Evidence of contamination in PCR Iaboratory disposables ; Naturwissenschaften 82] Dans le domaine médico-légal, lorsqu'on cherche à établir l'identité d'un criminel à partir de ses empreintes génétiques, il existe également un risque non nul que les tubes ou le matériel utilisé au laboratoire puissent être contaminés par l'ADN d'une autre personne, voir celui du manipulateur. Il est alors difficile de pouvoir établir avec certitude le profil ADN du criminel. Pour ces raisons, il est très important que des dispositifs dédiés à l'amplification des acides nucléiques soient débarrassés des acides nucléiques résiduels amplifiables. En général, les produits consommables utilisés dans les réactions de biologie moléculaire, y compris ceux impliqués dans les réactions d'amplification de l'ADN ou de TARN, sont fabriqués dans une salle blanche, avant de subir une étape finale de stérilisation classique pour assurer l'absence de microbes. Ces méthodes de stérilisation classiques ne sont cependant pas suffisantes pour éliminer tous les acides nucléiques amplifiables des surfaces des consommables. Les consommables exempts d'ADN humain, de DNase, de RNase et autres inhibiteurs de PCR peuvent recevoir le label « PCR clean ». Cela ne signifie pas pour autant qu'ils sont exempts d'acides nucléiques bactériens provenant de l'environnement. Il est possible, pour y remédier, d'avoir recours à des enzymes telles que des endonucléases ou des produits chimiques tels que le psoralène afin de rendre les molécules d'acides nucléiques résiduelles non amplifiables. Cependant, de tels produits ou enzymes sont susceptibles d'avoir une interaction négative avec les réactifs et les échantillons utilisés dans les réactions d'amplification. D'autres méthodes utilisent, dans le même but, des rayonnements ionisants (ultra violet (UV), gamma (y), rayons-X et beta ((3)), mais, pour être efficace, la durée d'exposition doit être de plusieurs heures, ce qui rend le procédé couteux, et surtout dégrade ou fragilise les matériaux dont sont fabriqués les consommables. Par ailleurs, la manipulation des rayonnements ionisants est soumise à une réglementation stricte, ce qui limite leur possibilité de mise en oeuvre. Actuellement, pour stériliser ses consommables, le demandeur utilise un procédé de traitement au peroxyde d'hydrogène commercialisé sous le nom de Sterrad® (Johnson & Johnson). Le péroxyde d'hydrogène est un gaz oxydant qui permet la destruction par oxydation des composants cellulaires des microorganismes, notamment les protéines, et dans une moindre mesure celle des molécules d'acides nucléiques. Le procédé Sterrad® utilise le péroxyde d'hydrogène sous forme gazeuse à basse température, à raison de 90 % de péroxyde d'hydrogène. Selon ce procédé, une phase de vide est appliquée dans l'enceinte où se trouvent les consommables à traiter, de telle sorte que la phase gazeuse pénètre et circule dans toutes les parties des dispositifs à traiter. En fin de cycle, une phase de vide est appliquée de nouveau, tandis que les molécules de péroxyde d'hydrogène sont ionisées par application d'un champ électrique et formation d'un plasma. L'un des avantages du procédé Sterrad est de pouvoir stériliser des dispositifs préalablement emballés dans des sachets en plastique comportant une face en non-tissé synthétique (Tyvek ®) perméable au péroxyde d'hydrogène. Celui-ci a, en effet, constaté que ce procédé ne permettait pas de détruire totalement les acides nucléiques résiduels contenus à l'intérieur des dispositifs. Aussi, le procédé Sterrad® ne donne-t-il que partiellement satisfaction au demandeur. Il convient de préciser que le demandeur est spécialisé dans la fabrication de dispositifs de filtration comprenant des membranes filtrantes destinées à des tests de détection de micro-organismes. Ces tests de détection des microorganismes s'effectuent typiquement par amplification PCR après filtration d'échantillon liquide à travers lesdits dispositifs rendus stériles. Ces dispositifs consistent souvent en des dispositifs fermés comprenant des conduites, des réservoirs et une membrane filtrante, ce qui rend leur traitement plus difficile. Le demandeur a appliqué plusieurs fois de suite le procédé Sterrad® pour tenter d'éliminer complètement les acides nucléiques résiduels persistant dans les dispositifs. Cependant, il n'est pas parvenu à éliminer totalement les amplifications non liées à la présence de microorganismes (figure 3B). Le demandeur a donc entrepris des recherches pour améliorer les procédés existants, en vue de mettre au point un procédé permettant de traiter les acides nucléiques résiduels, présents dans ces dispositifs, avec la contrainte de ne pas endommager les matériaux dont sont constituées les dispositifs, notamment les membranes et les filtres (par exemple : polypropylène, PES, PVDF) et sans que le traitement n'ait l'effet d'inhiber les réactions d'amplification d'acides nucléiques, pour lesquelles ces dispositifs sont destinés. Au terme de nombreux essais, le demandeur a déterminé qu'un traitement de décontamination des surfaces, en deux étapes, permettait de remplir ces conditions. Le procédé mis au point comprend une première étape de traitement par de l'oxyde d'éthylène en phase gazeuse, suivie d'une seconde étape de traitement au péroxyde d'hydrogène en phase liquide ou gazeuse. Le demandeur a constaté que la combinaison de ces deux étapes, permettait d'obtenir une décontamination plus poussée que celle des techniques antérieures. En particulier, le demandeur a pu constater à l'aide de tests comparatifs, que les deux étapes de traitement du dispositif avaient pour effet d'éliminer toute amplification indésirable, même lorsque les acides nucléiques résiduels se trouvent initialement contenus dans des microorganismes, ce qui ne peut être obtenu lorsqu'on pratique seulement une seule des étapes de traitement. Les différents modes de l'invention et les avantages en résultant sont détaillés ci-après. Figure 1 : Graphique comparant différents traitements de décontamination appliqués à des ADN résiduels contenus initialement dans des microorganismes (S. epidermis). Les surfaces des consommables (tubes de 1,5 ml) ont été contaminées avec un même nombre de cellules de S. epidermis avant de recevoir respectivement un des traitements mentionnés. NS (gris clair): Aucun traitement. EO (gris moyen) : traitement par l'oxyde d'éthylène en phase gazeuse. EO + H2O2 (1) (noir) : traitement selon l'invention par l'oxyde d'éthylène en phase gazeuse puis par du peroxyde d'hydrogène en solution liquide (30 %). Neg. (gris foncé) : témoin négatif non contaminé par S. epidermis. Les surfaces ainsi traitées ont ensuite été rincées et une réaction de PCR (40 cycles) a été réalisée sur les produits de rinçage, en vue de détecter les éventuels ADN résiduels provenant de S. epidermis. Les courbes représentent la quantité d'ADN amplifié, détecté par fluorescence. Figure 2 : Graphique comparant les différents traitements de décontamination appliqués à des ARN résiduels contenus initialement dans des microorganismes (P. aeruginosa). Les surfaces des consommables (tubes de 1,5 ml) ont été contaminées avec un même nombre de cellules de P. aeruginosa avant de recevoir respectivement un des traitements mentionnés. 2A : EO (noir) : traitement par l'oxyde d'éthylène en phase gazeuse. y (gris foncé): traitement avec des radiations Gamma. NS (gris clair) : aucun traitement. 2B : EO + H2O2 (1) (noir) : traitement à l'oxyde d'éthylène en phase gazeuse puis au peroxyde d'hydrogène en solution (30 %). y + H2O2 (1) (gris foncé) : traitement par irradiation Gamma puis au peroxyde d'hydrogène en solution (30 %). NS + H2O2 (1) (gris clair): traitement au peroxyde d'hydrogène en solution (30 %) uniquement. NS (gris clair) : aucun traitement. Les surfaces ainsi traitées ont ensuite été rincées et une réaction de TMA (76 cycles) à été réalisée sur les produits de rinçage, en vue de détecter les éventuels ARN résiduels provenant de P. aeruginosa. Les courbes représentent la quantité d'ARN amplifié, détecté par fluorescence. Figure 3 : Graphique comparant les différents traitements de décontamination appliqués à des ARN résiduels contenus initialement dans des microorganismes (P. acnes). Les surfaces des consommables ont été contaminées avec un même nombre de cellules de P. acnes avant de recevoir respectivement un des traitements mentionnés. 3A : EO + H2O2 (g) (noir) : traitement par l'oxyde d'éthylène en phase gazeuse puis par le peroxyde d'hydrogène en phase gazeuse (Sterrad). NS (gris clair) : aucun traitement. 3B : H2O2 (g) + H2O2 (g) (noir) : traitement comprenant deux cycles de traitement par le peroxyde d'hydrogène en phase gazeuse (Sterrad). NS (gris clair) : aucun traitement. Les surfaces ainsi traitées ont ensuite été rincées et une réaction de TMA (76 cycles) à été réalisée sur les produits de rinçage, en vue de détecter les éventuels ARN résiduels provenant de P. acnes. Les courbes représentent la quantité d'ARN amplifié, détecté par fluorescence. Figure 4: Graphique comparant différents traitements de décontamination appliqués à des ADN résiduels contenus initialement dans des microorganismes (G. stearothermophilus). Les consommables (unités de filtration comprenant plusieurs filtres) ont été contaminés avec un même nombre de spores de G. stearothermophilus avant de recevoir respectivement un des traitements mentionnés. NS (gris clair): Aucun traitement. EO + H2O2 (g) (noir) : traitement selon l'invention par l'oxyde d'éthylène en phase gazeuse puis par le peroxyde d'hydrogène en phase gazeuse (90 %). DESCRIPTION DETAILLEE : La présente invention a donc pour objet une méthode de traitement des acides nucléiques résiduels amplifiables, présents à la surface d'un objet, par exemple d'un consommable de biologie moléculaire, alliant une phase traitement à l'oxyde d'éthylène gazeux et une seconde phase de traitement au peroxyde d'hydrogène liquide ou gazeux. Cette méthode comprend préférentiellement les étapes 15 suivantes : i) Traitement à l'oxyde d'éthylène en phase gazeuse de la surface dudit consommable; puis ii) Traitement de ladite surface au peroxyde d'hydrogène en phase liquide ou en phase gazeuse. 20 Par consommable, on entend ici tout objet entrant dans la manipulation des acides nucléiques depuis leur prélèvement dans l'environnement jusqu'au laboratoire, où sont effectuées les amplifications. Le consommable peut être fait de différents matériaux. Les consommables visés par l'invention sont plus particulièrement 25 des dispositifs de filtration en plastique comprenant des membranes de filtration, de préférence en polypropylene, en PES ou en PVDF telles que ceux commercialisés par le demandeur. Les consommables sont plus particulièrement mis en oeuvre dans le cadre des manipulations en vue de réaliser des amplifications d'acides 30 nucléiques, en particulier au moyen de techniques telles que la PCR qui se pratique préférentiellement à partir d'échantillons d'ADN, ou le TMA qui se pratique préférentiellement à partir d'échantillons d'ARN. La première étape i) du procédé est généralement mise en ceuvre de manière classique [Pittet et al. 1997, Swiss Noso, 4(1)] dans une enceinte fermé (ex : Stéri-Vac 5 XL, 3M) à raison d'une concentration d'oxyde d'éthylène gazeux préférentiellement supérieure à 75 %, plus préférentiellement comprise entre 60 et 99 %, et plus préférentiellement encore entre 70 et 90 %. L'oxyde d'éthylène étant une molécule de petite taille, son pouvoir de pénétration est important, ce qui permet, entre autre, de traiter des consommables pré-emballés dans un conditionnement perméable au gaz. Ce pouvoir explique sa grande efficacité à stériliser des objets complexes, difficiles d'accès. L'oxyde d'éthylène atteint également les principaux constituants de la matière vivante (ADN, protéines, vitamines, enzymes), ce qui lui confère un fort pouvoir de stérilisation. Le traitement à l'oxyde d'éthylène est donc actif contre toutes les cellules vivantes et a donc un effet de stérilisation. L'efficacité du traitement est influencée par plusieurs paramètres : l'humidité relative du gaz, qui est préférentiellement supérieure ou égale à 30 % et la température qui se situe préférentiellement entre 40 et 60°C, plus préférentiellement entre 50 et 60 °C. La durée de contact entre l'oxyde d'éthylène gazeux et la surface des consommables varie entre une et six heures, selon la concentration supposée de spores et de germes, et les matériaux dont sont constitués les consommables. Le traitement en phase gazeuse est plus efficace lorsque, préalablement, on applique le vide dans l'enceinte de traitement, à l'intérieur ou bien autour du consommable à traiter. Si nécessaire, l'oxyde d'éthylène résiduel peut être éliminé entre les étapes i) et ii). Selon l'invention, l'étape ii) de traitement au peroxyde d'hydrogène s'effectue soit en phase liquide, à l'aide d'une solution aqueuse, soit en phase gazeuse. Lorsque le peroxyde d'hydrogène à l'étape ii) se trouve en phase liquide, sa concentration est, de préférence, comprise entre 25 et 60 %. Une concentration supérieure ou égale à 30% s'est avérée optimale selon les expériences réalisées par les inventeurs (tableau 3). Le traitement en phase liquide a l'avantage de solubiliser les acides nucléiques résiduels. De plus, le passage d'un flux liquide au travers des filtres, le cas échéant, permet d'atteindre plus efficacement les acides nucléiques résiduels situés dans les matériaux poreux qui constituent ces filtres. Le peroxyde d'hydrogène en phase liquide est plus efficace lorsqu'il est chauffé à une température comprise entre 50 et 70° C, de préférence supérieure à 60° C. Cette température présente l'avantage de ne pas endommager les matériaux dont sont constitués les consommables. Le peroxyde d'hydrogène, en phase liquide, est généralement maintenu en contact avec la surface à décontaminer de préférence pendant une période d'au moins 40 minutes, préférentiellement comprise entre 40 minutes et 1 heure. Cette durée est supérieure à celle du traitement en phase gazeuse décrit ci-après et nécessite généralement une étape de séchage pour éliminer le peroxyde d'hydrogène de la surface des consommables. Le traitement au peroxyde d'hydrogène de l'étape ii) en phase gazeuse s'effectue généralement par vaporisation du peroxyde d'hydrogène, lequel est porté de préférence à une concentration supérieure à 30 %, de préférence supérieure à 50 %, plus préférentiellement supérieure à 80 % du gaz total. Si nécessaire, le peroxyde d'hydrogène résiduel peut être éliminé de la surface du consommable après l'étape ii). Le peroxyde d'hydrogène peut être passé à l'état de plasma par application d'un champ électrique, de préférence à une température inférieure à 70°C, plus préférentiellement inférieure à 60°C, ce qui permet sa dégradation et donc son inactivation à la fin du traitement.Les températures indiquées ci-dessus, inférieures aux procédés de stérilisation classiques, préservent mieux la qualité des matériaux dont peuvent être constitués les consommables, notamment les membranes ou les filtres qui peuvent les composer. Un tel procédé peut être mis en oeuvre dans des dispositifs dédiés aux traitements utilisant le peroxyde d'hydrogène en phase gazeuse, comme par exemple le Sterrad® (ASP - Johson & Johnson), suivant les recommandations des fabriquants de ces dispositifs. Le procédé Sterrad® constitue un mode de mise en oeuvre possible, mais non limitatif de l'étape ii). La mise en oeuvre du peroxyde d'hydrogène en phase gazeuse présente l'avantage de pouvoir être appliqué à des consommables pré-emballés dans un conditionnement perméable au gaz. Ainsi, lorsque les deux étapes du procédé selon l'invention sont effectuées en phase gazeuse, le consommable peut être conditionné ou pré-emballé avant de subir ces deux étapes. En particulier, le consommable de biologie moléculaire peut-être préalablement conditionné dans un emballage partiellement non tissé. De même, lorsque le traitement au peroxyde d'hydrogène est effectué en phase gazeuse, les étapes i) et ii) peuvent se succéder dans une même enceinte de traitement, ce qui limite le contact des consommables avec les acides nucléiques résiduels de l'environnement. Les résultats obtenus par les inventeurs sont illustrés plus bas dans les exemples de la demande. Les figures 1 à 4, montrent que le procédé selon l'invention permet d'obtenir un traitement plus efficace des acides nucléiques résiduels, quelque soit leur origine (cellulaire ou libre), leur nature (ARN ou ADN) ou le mode d'amplification envisagé (PCR ou TMA). Un tel niveau d'efficacité résulte de la combinaison des étapes i) et ii) selon l'invention et de l'ordre dans lequel elles sont effectuées. Il résulte du procédé selon l'invention un consommable traité, exempt d'acides nucléiques amplifiables, ce qui n'avait pas pu être obtenu auparavant, notamment en ce qui concerne les consommables comprenant un ou plusieurs filtres ou membranes, de préférence en polypropylène, PES ou en PVDF. L'invention permet ainsi, notamment, d'obtenir un consommable de biologie moléculaire, simple ou complexe, exempt d'acides nucléiques 30 d'origine bactérienne (garantis ADNfree). EXEMPLES Protocole 1 Plusieurs consommables consistant en des tubes en polypropylène de 1,5 ml ont été contaminés en parallèle avec une quantité connue d'ADN, d'ARN ou de germes. Ces consommables ont été ensuite stérilisés gamma (doses de 0 à 60kGy) ou traités à l'oxyde d'éthylène en phase gazeuse. Après stérilisation, la présence d'acides nucléiques résiduels est déterminée par PCR (pour l'ADN) et TMA (pour l'ARN) et comparée à un consommable témoin, non stérilisé. Les résultats obtenus ont été récapitulés dans le tableau 1, ci-dessous. Tableau 1 : Efficacité des traitements des acides nucléiques résiduels réalisés au moyen d'oxyde d'éthylène (EO) et d'une radiation gamma. Type Germes Testés Gamma EO ADN E.coli +++ + (PCR) P.aeruginosa Dégradation de l'ADN Dégradation partielle (30-40kGy) ARN P.acnes + +++ (TMA) P.aeruginosa Dégradation partielle Dégradation Germes E.coli + + (PCR) P.aeruginosa Dose doit être Dégradation partielle supérieure à 60kGy Germes P.acnes - - (TMA) P.aeruginosa Peu d'effet Aucun effet (selon les germes) Ces résultats montrent que le traitement gamma ne dégrade pas complètement l'ARN contenu dans les germes, ni sous forme libre. L'ADN n'est que lui partiellement dégradé. Le traitement à l'oxyde d'éthylène est efficace contre l'ARN sous forme libre, mais il n'a pas d'effet sur l'ARN contenu dans les germes. 12 Protocole 2 Plusieurs consommables du même type que ceux utilisés dans le protocole 1, ont été contaminés avec la même quantité connue d'ADN, d'ARN ou de germes. Ces consommables ont ensuite été traités par un traitement au peroxyde d'hydrogène s'effectuant en solution liquide (respectivement 3 % et 30 % H2O2). Le peroxyde d'hydrogène est évaporé à l'issu du procédé grâce à une étape de séchage sous vide à une température de 60°C. Après traitement, la présence d'acides nucléiques résiduels a été déterminée par PCR (pour l'ADN) et TMA (pour l'ARN) et comparée à un échantillon non traité. Les résultats obtenus ont été récapitulés dans le tableau 2, ci-dessous, dans lequel (-) signifie aucun effet, (++) signifie partielle dégradation des acides nucléiques et (+++) signifie leur dégradation totale. Tableau 2: Efficacité des traitements des acides nucléiques résiduels réalisés au moyen du peroxyde d'hydrogène en solution 3% et 30% Germes Testés H2O2 3%* H2O2 30%* ADN E.coli ++ +++ (PCR) P.aeruginosa ARN P.acnes ++ +++ (TMA) P.aeruginosa Germes E.coli (PCR) P.aeruginosa Germes P.acnes (TMA) P.aeruginosa Temps d'action minimum sur acides nucléiques 40min à 60°C Il ressort de ces résultats qu'une concentration en H2O2 de 30% permet de dégrader des acides nucléiques libres de manière plus efficace qu'une concentration de 3 % H2O2. Néanmoins, le traitement n'a aucun effet sur des acides nucléiques contenus dans les germes. Protocole 3 (selon l'invention) Plusieurs consommables du même type que ceux utilisés dans le protocole 1, ont été contaminés avec la même quantité connue d'ADN, d'ARN ou de germes. Une partie de ces consommables ont ensuite été traités selon l'invention à l'oxyde d'éthylène gazeux suivi du peroxyde d'hydrogène 30/0 ou 300/0. Une autre partie a été traitée gamma à la place de l'oxyde éthylène gazeux puis au peroxyde d'hydrogène. Dans les deux cas, le peroxyde d'hydrogène a été évaporé grâce à une étape de séchage sous vide à une température de 60°C. Après traitement, la présence d'acides nucléiques résiduels a été déterminée par PCR (pour l'ADN) et TMA (pour l'ARN) et comparée à un échantillon non traité. Les résultats obtenus ont été récapitulés dans le tableau 3, ci-dessous, dans lequel (-) signifie aucun effet, (++) signifie une partielle dégradation des acides nucléiques et (+++) signifie leur dégradation totale. Il ressort de ces résultats que le traitement gamma + H2O2 permet, dans une certaine mesure, de dégrader les acides nucléiques, mais ce procédé n'est pas aussi performant que le traitement EO + H2O2, en particulier pour TARN contenu dans les germes. Le traitement de l'oxyde d'éthylène suivi par peroxyde d'hydrogène 300/0 solution permet de dégrader complètement l'ADN et TARN contenu dans les germes, tandis que le même traitement mais avec seulement 30/0 H2O2 est moins efficace sur l'ADN et ne marche pas de tout sur TARN. Tableau 3: Efficacité des traitements des acides nucléiques résiduels contenus dans des germes. Gamma Gamma Oxyde Oxyde Germes + + éthylène éthylène Testées H2O2 3%* H2O2 30%* + + H2O2 3%* H2O 30%* Germes + +++ + +++ E.coli (PCR) Diminue Diminue P.aeruginosa niveau de niveau de positivité positivité Germes + ++ - +++ P.acnes (TMA) Diminue Efficacité Peu ou pas P.aeruginosa niveau de variable d'effet positivité * Contact l h à 60°C Protocole 4 Plusieurs consommables complexes comprenant plusieurs filtres ont été contaminés avec une même quantité connue de germes (G. stearothermophilus). Une partie de ces consommables ont ensuite été traités selon le procédé de l'invention par l'oxyde d'éthylène gazeux puis le peroxyde d'hydrogène gazeux à environ 90 %. Une autre partie des consommables servant de témoin n'a pas été traitée. La présence d'acides nucléiques résiduels (ADN) a été déterminée par PCR. La figure 4 rend compte des quantités d'ADN amplifiées au cours des différents cycles de PCR. On peut observer l'absence d'amplification dans les échantillons traités. REVENDICATIONS1. Méthode de traitement des acides nucléiques résiduels amplifiables, présents à la surface d'un consommable, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : i) Traitement à l'oxyde d'éthylène en phase gazeuse de la surface dudit consommable; puis ii) Traitement de ladite surface au peroxyde d'hydrogène en phase liquide ou en phase gazeuse. 2. Méthode selon la revendication 1, dans laquelle l'oxyde d'éthylène à l'étape i) est utilisé à raison d'une concentration comprise entre 70 et 90 %. 3. Méthode selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le peroxyde d'hydrogène à l'étape ii) se trouve en phase liquide à une concentration comprise entre 25 et 60 %, de préférence supérieure à 300/0. 4. Méthode selon la revendication 3, dans laquelle le peroxyde d'hydrogène en phase liquide est chauffé à une température comprise entre 50 et 70° C, de préférence supérieure à 60° C. 5. Méthode selon la revendication 2 ou 3, dans laquelle le peroxyde d'hydrogène, en phase liquide, est en contact à l'étape ii) avec la surface à décontaminer pendant une période d'au moins 40 minutes. 6. Méthode selon la revendication 1, dans laquelle le traitement au peroxyde d'hydrogène s'effectue en phase gazeuse. 7. Méthode selon la revendication 6, dans laquelle le peroxyde d'hydrogène est vaporisé, puis porté à une concentration supérieure à 30 %, de préférence supérieure à 50 %, plus préférentiellement supérieure à 80 %. 8. Méthode selon la revendication 7, dans laquelle le peroxyde d'hydrogène est passé à l'état de plasma par application d'un champ électrique à une température inférieure à 60°C. 9. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, comprenant, en outre, une étape d'évaporation entre les étapes i) et ii). 10. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle le consommable de biologie moléculaire est préalablement conditionné dans un emballage partiellement non tissé. 11. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans laquelle le vide est appliqué avant l'une des étapes i) et ii). 12. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, dans laquelle l'oxyde d'éthylène résiduel est éliminé entre les étapes i) et ii). 13. Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, dans laquelle le peroxyde d'hydrogène résiduel est éliminé de la surface du consommable après l'étape ii). 14. Consommable traité selon la méthode de l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisé en ce qu'il est exempt d'acides nucléiques résiduels amplifiables. 15. Consommable selon la revendication 14, caractérisé en ce qu'il comprend un filtre ou une membrane, lesquels filtres ou membrane sont de préférence en polypropylene, PES ou PVDF.