Brevet FR2974287A1 — publié le 20121026

REVENDICATIONS1. Procédé pour évaluer la synthèse du néoc lage fibrillaire dans ime peau (P) reconstruite présentant une base collagène structure tridimensionnelle dite éponge, le procédé comportant les étaps consistant à: a) effectuer par microscopie m tiph , au moins une première acquisition tridimensionnelle des signaux fluorescence 2PEF et génération de seconde harmonique SHG du collagène fibrillaire dans un échantillon de ladite peau, générer sur la base au moins de cette acquisition une information représentative de la distribution clou de la quantité néofibrilles collagène dans ladite peau, Procédé selon la revendication 1, utilisant une longueur d'onde infrarouge d'excitation comprise notamment entre 700 mn et 1000 nt 3. Procédé selon l'une des revendications 1 ou l'information étant générée sous la forme d'a moins une ima4. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, le signal SHG étant obtenu à travers un filtre interférentiel centré sur moitié la longueur d'onde d'excitation, 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, 20 l'information étant générée par un traitement des signaux SHG et 2PEF sous forme d'images, le traitement comportant superposition des images SHG et 2PEF / ou, suppression des éléments représentatifs du collagène natif Æ Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes 25 l'information étant générée façon automatique suite à l'étape a). Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, l'informationt générée étant une information quantitative, renseignant sur la surface et/ou le volume occupé par les fibrilles collagène nec ynthAÜf dans l'échantillon de peau. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, 30 l'information générée comportant une représentation tridimensionnelle de la présence du néocollagène au sein ladite peau,9. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, l'étape a) comportant, préalablement à l'acquisition tridimensionnelle par microscopie multiphoton, l'exposition l'échantillon à un stimulus choisi psi: un rayonnement lum£neu , notamment solaire, ultra-violet (L W), infrarouge (IR), un stimulus provoquant une réponse inflammatoire, une action mécanique o=`à un traitement, en particulier par au moins un produit cosmétique, notamment comportant de la vitamine C. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes comportant : ® au moins une première et une deuxième acquisition selon l'étape a) sur des 10 premier et deuxième échantillons, ® une comparaison d'informations générées selon l'étape pour les premier et deuxième échantillons, - la génération n dans une étac), sur la base au moins de cette comparaison, d'une information représentative de la distribution des fibrilles de néocollagène. 15 IL Procédé selon les revendications 9 et 10 pour évaluer l'action d'un stimulus et/ou d'un traitement sur le néocollagène dans une peau reconstruite, les premier et deuxième échantillons étant les mêmes, la deuxième acquisition étant notamment effectuée sensiblement au même emplacement que la première acquisition e! 20 ledit échantillon étant exposé, avant première acquisition ou après la première acquisition et avant la deuxième acquisition, à un stimulus ou à un traitement et e l'information générée dans l'étape étant représentative de l'action du stimulus e/ou du traitement sur néosynthèse du collagène. 12 Procédé selon les revendications 9 et 10 pour évaluer l'action d'un 25 stimulus et/ou d'un traitement sur le néocollagène dans une peau reconstruite ou artificielle les premier et deuxième échantillons étant exposés différemment à un stimulus et/ou à un traitement. 13. Procédé selon la revendication 10 pour évaluer l'action d'un stimulus d'un traitement avec un produit notamment cosmétique, pexemple à base de vitam C sur la 30 néosynthèse du collagène dans une peau reconstruite, première acquisition étant réalisée après le traitement avec le produit, et deuxième acquisition étant réalisée après le traitement avec un placébo de ce produit.14. Procédé comportant les étapes consistant à: ® effectuer microscopie m t ,! h on au moins une acquisition tridimensionnelle des signaux de fluorescence 2PEF et génération de seconde harmonique SHG du collagène fibrillaire dans des échantillons de peau reconstruite présentant une base collagène structure tridimensionnelle dite éponge qui ont été traités par un composé cosmétique, et au moins une acquisition tridimensionnelle des signaux de fluorescence 2PEF et de génération de seconde harmonique SHG du collagène fibrillaire dans des mêmes échantillons qui ont été traités par un placebo du composé cosmétique, calculer une#keulreprésentative, notamment moyenne ou médiane, de la distribution ou de la quantité de fibrilles de néocollagène, et comparer qualitativement les images acquises et /ou e comparer quantitativement à2Ü d'un outil de traitement dimage d'ùd'un outil statitique s les deux traitements. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes étant mis oeuvre in vivo chez l'homme ou avec greffage la peau reconstruite sur un mammifère non humain.