Brevet FR2968306A1 — publié le 20120608

La présente invention vise à proposer un procédé de préparation d'hydrogels à base d'un polysaccharide réticulé, et de préférence d'acide hyaluronique ou de l'un de ses sels. Naturellement présent dans la peau, l'acide hyaluronique est connu pour ses propriétés viscoélastiques ainsi que sa très grande propension à absorber l'eau. Ses propriétés expliquent en grande partie l'élasticité de la peau. Ses biocompatibilités, tolérance et défaut de toxicité sont tels que depuis plus de 10 ans, cette molécule a des applications dans les domaines médicaux et cosmétiques, et en particulier pour le comblement des rides. Ainsi, l'injection dans le derme d'un hydrogel réticulé de polysaccharide au niveau des rides à traiter permet d'amoindrir, voire d'effacer l'affaissement local de la structure du derme qu'est une ride. D'une manière générale, le polysaccharide, et plus particulièrement l'acide hyaluronique, est mis en oeuvre sous une forme réticulée compte tenu de la résistance accrue de cette forme particulière à la dégradation et à la chaleur. Ces gels réticulés de polysaccharides peuvent être préparés par différents procédés de préparation. D'une manière générale, ces procédés requièrent deux étapes principales, la première consistant à réhydrater le polysaccharide considéré pour le transformer en un gel aqueux et la seconde visant à mettre ledit gel aqueux en présence d'un agent apte à induire sa réticulation. Selon les conditions spécifiques retenues pour la réticulation, il s'avère possible d'ajuster la viscosité ou encore les propriétés rhéologiques de l'hydrogel réticulé formé. A titre illustratif de ces procédés, peuvent notamment être cités les procédés décrits dans US 2006/0105022, qui comprend l'utilisation d'un mélange comprenant au moins 10 % d'acide hyaluronique, un agent réticulant et de l'eau dans des conditions acides ou basiques, dans WO 2006/056204, qui comprend une étape de traitement du gel d'acide hyaluronique réticulé avec du divinylsulfone et dans US 2007/0036745, qui conduit à un gel cohésif à partir d'un polymère d'hyaluronane réticulé avec du divinylsulfone (DVS). Pour des raisons évidentes, l'amélioration des propriétés mécaniques des hydrogels pour des applications dans les domaines médicaux et cosmétiques relève d'un objectif constant. La présente invention vise précisément à proposer un procédé permettant l'obtention de gels réticulés présentant des propriétés mécaniques particulièrement avantageuses. Contre toute attente, les inventeurs ont constaté qu'un mode de préparation original de gels réticulés permet d'améliorer significativement les propriétés desdits gels. Ainsi, la présente invention concerne, selon un premier de ses aspects, un procédé de préparation d'un gel réticulé d'au moins un polysaccharide ou un de ses sels, comprenant au moins les étapes consistant à : a) disposer d'au moins un gel aqueux dudit polysaccharide sous une forme non réticulée, b) mettre en contact ledit gel aqueux avec une quantité efficace d'au moins un agent réticulant, c) imposer au mélange formé en étape b) des conditions propices à la réticulation dudit polysaccharide et, le cas échéant, d) récupérer ledit hydrogel réticulé, caractérisé en ce que ledit procédé comprend, antérieurement à l'étape c), au moins une étape e) consistant à faire circuler le gel aqueux de polysaccharide de l'étape a) et/ou le mélange de l'étape b) à travers au moins un dispositif apte à retenir toute particule de diamètre supérieur à 100 microns. Cette étape e), consistant à faire circuler le gel aqueux de polysaccharide et/ou le mélange obtenu à l'issue de l'étape b) à travers un dispositif tel que précité, peut également être désignée, dans la suite de la présente description, comme une « étape d'extrusion ». Plus précisément, la présente invention résulte de l'observation inattendue, par les inventeurs, que la mise en oeuvre d'une étape d'extrusion permet l'obtention de gels de polysaccharide réticulés présentant des propriétés viscoélastiques significativement améliorées par rapport aux procédés de réticulation classiques. Eu égard à la fragilité des chaînes de polysaccharide, cette observation est d'autant plus surprenante qu'une telle étape d'extrusion pourrait au contraire contribuer à une altération significative des chaines de polysaccharides et, à ce titre, des propriétés viscoélastiques des gels réticulés. L'amélioration des propriétés viscoélastiques des gels réticulés obtenus par mise en oeuvre d'un procédé selon l'invention peut s'expliquer par le fait que l'étape d'extrusion contribue, d'une part, à un meilleur ordonnancement des chaînes de polysaccharide et, d'autre part, à préserver le gel aqueux de l'étape a) et/ou le mélange de l'étape b) d'une quantité significative de particules résiduelles ou agglomérats qui, pour des raisons évidentes, sont préjudiciable à leur bonne homogénéité et donc à celle des gels réticulés s'y rapportant. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, le procédé peut en outre comprendre une étape f) d'arrêt de la réticulation consistant à exposer le gel réticulé à des conditions propices à l'arrêt de sa réticulation, cette étape pouvant être réalisée antérieurement, conjointement ou postérieurement à l'étape de récupération d). Selon une variante de réalisation préférée, l'étape f) est réalisée antérieurement à l'étape d). Avantageusement, le gel réticulé obtenu à l'issu du procédé décrit ci-dessus est un gel monophasique et plus particulièrement un gel viscoélastique majoritairement élastique, c'est-à-dire diminué, voire dénué, de la faculté de s'écouler en l'absence de contraintes autres que son propre poids, à l'image par exemple d'une gomme. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé tel que défini précédemment, pour le comblement durable des défauts de volume de la peau, et notamment le comblement des rides. I) Procédé Un procédé selon l'invention requiert, dans un premier temps, de disposer d'au moins un gel aqueux d'au moins un polysaccharide sous une forme non réticulée conforme à l'invention. Cela se rapporte plus particulièrement à l'étape a). Par « non réticulé », au sens de la présente invention, on entend désigner un gel aqueux de polysaccharide non réticulé ou faiblement réticulé, c'est-à-dire un gel dont l'angle de déphasage 8, mesuré en rhéologie dynamique à 1 Hz, est supérieur à 40° lorsqu'il est soumis à une contrainte supérieure à 1 Pa. L'obtention d'un tel gel aqueux peut être réalisée par mise en présence, au sein d'un réceptacle approprié, d'au moins un milieu aqueux et du polysaccharide et homogénéisation conjointe et/ou consécutive à l'ajout dudit polysaccharide dans ledit milieu aqueux ou inversement. Pour des raisons évidentes, il convient de réaliser l'étape d'homogénéisation considérée ci-dessus de manière à former des structures homogènes. Dans un second temps, un procédé selon l'invention requiert l'ajout, audit gel aqueux de polysaccharide obtenu en étape a), de l'agent réticulant. Cela se rapporte plus particulièrement à l'étape b). Avantageusement, l'étape b) se déroule sur une durée supérieure à 5 minutes, de préférence allant de 15 à 180 minutes. Pour des raisons évidentes, cette étape b) peut également s'accompagner d'au moins une nouvelle étape d'homogénéisation conjointe et/ou consécutive à l'ajout dudit agent réticulant. Avantageusement, l'étape b) de mise en contact d'un gel aqueux de polysaccharide 5 sous une forme non réticulée avec un agent réticulant est réalisée dans des conditions non propices à la réalisation effective de la réticulation. Quel que soit le mode de réalisation considéré, les étapes a) et/ou b) implique(nt) au moins une homogénéisation. 10 Cette opération, réalisée ou non en présence de l'agent réticulant, a plus particulièrement pour but d'hydrater et d'homogénéiser parfaitement le polysaccharide dans le milieu aqueux et, le cas échéant, l'agent réticulant, et ainsi de contribuer à l'optimisation des qualités du gel réticulé attendu. En effet, pour des raisons évidentes, l'homogénéité du gel réticulé est étroitement 15 liée au caractère homogène du gel avant réticulation. L'homogénéisation est considérée comme satisfaisante lorsque la solution obtenue présente une coloration homogène, sans agglomérat, et une viscosité uniforme. Elle peut avantageusement être réalisée dans des conditions opératoires douces pour prévenir une dégradation des chaines du polysaccharide. 20 Cette étape est d'autant plus importante lorsque le polysaccharide présente un haut poids moléculaire. L'hydratation d'un tel composé a alors en effet tendance à engendrer la formation d'une solution de haute viscosité au sein de laquelle l'apparition de d'agglomérats est couramment observée. La durée de cette étape d'homogénéisation dépend donc de la nature du 25 polysaccharide, et plus particulièrement de son poids moléculaire, de sa concentration, des conditions opératoires au sein du milieu aqueux ainsi que du dispositif d'homogénéisation utilisé. L'ajustement de la durée d'homogénéisation adéquate pour obtenir un gel aqueux de polysaccharide suffisamment homogène relève des connaissances générales de l'homme 30 du métier. Tant que la dissolution du polysaccharide ou mélange de polysaccharides dans le milieu aqueux n'est pas complètement satisfaisante, il est appliqué autant de cycles d'homogénéisation que nécessaire. De préférence, une étape d'homogénéisation selon la présente invention peut se dérouler sur une durée inférieure à 200 minutes, de préférence inférieure à 150 minutes, voire comprise entre 15 et 100 minutes. Comme il ressort de ce qui précède, le gel aqueux de l'étape a) et/ou le mélange de l'étape b) est(sont) soumis à au moins une étape e) d'extrusion. Cette étape e) d'extrusion consiste à faire circuler le gel aqueux de polysaccharide de l'étape a) et/ou le mélange obtenu à l'issue de l'étape b) à travers au moins un dispositif apte à retenir toute particule de diamètre supérieur à 100 microns. Cette étape a pour but, d'une part, d'ordonner les chaînes de polysaccharide et, d'autre part, de préserver le gel d'éventuelles particules résiduelles préjudiciables à son homogénéité, avant l'étape c) de réticulation. Par ailleurs, cette étape est également avantageuse en ce qu'elle permet une amélioration de l'homogénéisation du gel aqueux de l'étape a) et/ou du mélange de l'étape b). Elle contribue ainsi à améliorer de manière significative la qualité des gels réticulés obtenus à l'issu du procédé de l'invention. Comme précité, l'étape e) d'extrusion intervient antérieurement à l'étape c). Ainsi, elle peut intervenir antérieurement, conjointement et/ou postérieurement à l'étape b) de mise en contact du gel aqueux de polysaccharide avec l'agent réticulant. Selon une variante de réalisation préférée, l'étape e) de filtration est réalisée postérieurement à l'étape b) de mise en contact du gel aqueux de polysaccharide de l'étape a) avec l'agent réticulant ou, autrement dit, sur le mélange de l'étape b). Avantageusement, l'étape e), notamment lorsqu'elle intervient postérieurement à l'étape b), est réalisée dans des conditions propices à la conservation du gel à l'état non 25 réticulé, tel que défini précédemment. Pour se faire, l'étape e) est réalisée à une température inférieure à 25 °C, de préférence à une température allant de 15 à 25 °C, et mieux à température ambiante. La mise en oeuvre de l'étape e) d'extrusion relève des connaissances générales de l'homme du métier. 30 Avantageusement, l'étape e) d'extrusion est réalisée par mise en oeuvre d'au moins un dispositif comprenant au moins un filtre. L'homme du métier saura définir les caractéristiques adaptées en termes de porosité, géométrie, résistance et capacité de rétention d'un tel filtre de manière à ce que ce dernier permette le passage du gel aqueux de l'étape a) et/ou mélange obtenu à l'issue de l'étape b), tout en retenant des particules de diamètre supérieur à 100 microns. Dans la suite de la présente description, le dispositif comprenant au moins un filtre mis en oeuvre pour la réalisation de l'étape e) d'extrusion pourra être également désigné par l'expression « dispositif d'extrusion ». En particulier, les caractéristiques du filtre sont déterminées au regard du(es) poids moléculaire du(es) polysaccharide(s) mis en oeuvre. Avantageusement, le filtre est constitué d'au moins une grille ou tissu, de préférence de nature métallique, composite ou polymérique. Avantageusement, l'étape e) d'extrusion est réalisée au moyen d'au moins un dispositif d'extrusion comprenant au moins un filtre de porosité allant de 2 à 100 microns, de préférence de 5 à 50 microns, mieux de 8 à 30 microns, et plus particulièrement de porosité de 10 microns. Par ailleurs, la vitesse de passage du gel aqueux de l'étape a) et/ou mélange obtenu à l'issue de l'étape b) à travers ledit dispositif est également un paramètre relevant des connaissances générales de l'homme du métier. Avantageusement, la vitesse linéaire d'extrusion du gel aqueux de l'étape a) et/ou du mélange obtenu à l'issue de l'étape b) à travers le(s) dispostif(s) d'extrusion est lente, de manière à ne pas dégrader les chaînes de polysaccharide lors de leur passage. Ainsi, la vitesse linéaire d'extrusion du(es)dit(s) gel aqueux de l'étape a) et/ou mélange obtenu à l'issue de l'étape b) à travers le(s) dispositif(s) d'extrusion est comprise entre 1 et 100 cm par minute, de préférence entre 1 et 4 cm par minute. Cette vitesse est fonction de la porosité et de la nature du filtre, du polysaccharide considéré et, également, de la quantité de matière à traiter. A titre d'étape e) d'extrusion, peut notamment être fait état du protocole suivant. Un gel aqueux de l'étape a) et/ou mélange de l'étape b) peut être placé dans un système comprenant une cuve équipée d'un piston et, en sortie dudit système, d'au moins un dispositif d'extrusion tel que décrit ci-dessus. Le passage du gel aqueux de l'étape a) et/ou mélange de l'étape b) à travers le dispositif d'extrusion est alors assuré par la mise sous pression du piston, cette mise sous pression pouvant être effectuée de manière manuelle, mécanique, pneumatique ou hydraulique. Selon un mode de réalisation particulier, l'étape e) d'extrusion peut résulter de la mise en oeuvre de dispositifs d'extrusion en cascade ayant des filtres de porosités différentes, et de préférence décroissantes. Ce mode de réalisation particulier est particulièrement avantageux dans la mesure où il permet d'aboutir à des hydrogels réticulés présentant des propriétés viscoélastiques encore améliorée. En effet, ce système en cascade permet un ordonnancement des chaînes de polysaccharide ainsi qu'une extrusion progressive et par conséquent moins agressive vis-à-vis de la dégradation desdites chaînes de polysaccharide. Comme il ressort de ce qui précède, le mélange obtenu à l'issue de l'étape b), qu'il soit ou non soumis à une étape intermédiaire e) d'extrusion est ensuite soumis à des conditions propices à la réticulation. La réticulation a pour but la création de ponts entre les chaines de polysaccharide, et notamment d'acide hyaluronique, permettant l'obtention d'un réseau tridimensionnel solide et dense à partir d'une solution visqueuse. L'étape de réticulation requiert des conditions particulières qui dépendent à la fois de la nature du polysaccharide, de son poids moléculaire, du milieu aqueux et de la nature de l'agent réticulant. Par « conditions », on entend désigner l'élément déclenchant la réticulation tel 20 que par exemple le chauffage, ou l'exposition sous UV. Le choix du moyen déclenchant approprié pour l'obtention d'un gel réticulé relève des connaissances générales de l'homme du métier. De manière avantageuse, un élément déclenchant peut être réalisé par : - immersion du réceptacle comprenant le mélange « polysaccharide/agent 25 réticulant » dans un bain contenant un fluide chaud ; - exposition de celui-ci à des rayonnements de certaines longueurs d'ondes de type UV, par exemple, à des rayonnements micro-ondes ou encore à infrarouge ; - irradiation au moyen de rayons ionisants, à l'image du procédé décrit dans le document US 2008/0139796 ; et 30 - réticulation enzymatique ; De préférence, l'étape de réticulation est réalisée par voie thermique. Le moyen de chauffage et son intensité sont bien évidemment ajustés au regard du mode de réticulation, du degré de réticulation et de la viscosité du gel recherchés. Une température particulièrement adaptée à l'étape c) de réticulation dépend de la nature du polysaccharide considéré. Dans le cas où le polysaccharide est l'acide hyaluronique, une température particulièrement adaptée à l'étape c) de réticulation est comprise entre 25 et 60 °C, de 5 préférence entre 45 et 55 °C, et mieux entre 48 et 52 °C. Le degré de réticulation dépend également de la durée de réticulation imposée au mélanges obtenu à l'issue de l'étape b), qu'il soit ou non préalablement à l'étape c) de réticulation soumis à une étape e) d'extrusion. Plus le temps sera long, plus il sera important, avec toutefois un optimum à ne pas dépasser, sous risque de dégrader le polysaccharide. 10 Ainsi, l'étape c) de réticulation peut être réalisée sur une durée allant de 30 à 300 minutes, préférentiellement de 100 à 200 minutes, et mieux de 150 à 190 minutes. Avantageusement, les conditions de réticulation sont ajustées pour obtenir un rendement maximal de réticulation, c'est-à-dire l'obtention d'un taux de réticulation effectif maximum pour un minimum d'agent réticulant utilisé. 15 Autrement dit, les conditions de réticulation sont ajustées pour obtenir un degré de réticulation tel que le produit formé soit viscoélastique, voire même solide. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, l'étape c) de réticulation est réalisée en milieu basique, le réceptacle contenant le gel correspondant, en particulier 20 d'acide hyaluronique, étant placé dans un bain thermostaté porté à une température de l'ordre de 50 à 55 °C, pendant une durée au moins égale à 1H30, et de préférence comprise entre 2H30 et 3H10. Comme exposé précédemment, l'arrêt de la réticulation (étape f)) peut intervenir 25 antérieurement, conjointement ou postérieurement à l'étape de récupération du gel d). Une telle étape, selon un procédé conforme à l'invention, requiert d'exposer le gel réticulé ou en cours de réticulation, voire le réceptacle le contenant, à des conditions propices à l'arrêt de celle-ci, ou encore à des conditions capables de stopper la formation de liaisons entre les différentes chaines de polysaccharides. 30 Selon une variante de réalisation préférée, l'étape f) est réalisée antérieurement à l'étape d). Par exemple, au regard des conditions thermiques qui auront été appliquées pour initier le processus de réticulation, l'arrêt de la réticulation peut être réalisé : - par simple retrait du réceptacle du bain thermostaté, puis par refroidissement jusqu'à un retour à température ambiante; - en plaçant le réceptacle dans un bain d'eau froide, de préférence à une température inférieure à la température ambiante, jusqu'à ce que la température à l'intérieur dudit réceptacle soit proche de la température ambiante ; voire - en extrayant le gel dudit réceptacle. Dans le cas d'une réticulation par rayonnement, celle-ci est stoppée via l'arrêt de l'exposition dudit gel aux rayonnements. Selon encore un mode de réalisation particulier, un procédé de l'invention peut être réalisé au moins en partie au sein d'un réceptacle spécifique à paroi déformable, tel que par exemple une poche. En effet, les propriétés de déformabilité d'un tel réceptacle et son caractère hermétique permettent de réaliser les étapes d'homogénéisation et de réticulation dans des conditions optimales qui conduisent à l'obtention d'un gel réticulé encore amélioré, c'est-à-dire présentant des propriétés d'injectabilité supérieures à celles manifestées par un gel obtenu selon un procédé mettant en oeuvre un réceptacle conventionnel type pot ou cuve. Avantageusement, le réceptacle spécifique peut être muni d'un système ou port d'ouverture, refermable, propice à l'introduction de tout composé utile à la fabrication d'un gel conforme à l'invention. Toutefois, l'étape d'extrusion décrite précédemment impose au gel aqueux de l'étape a) et/ou au mélange obtenu à l'issue de l'étape b) son(leur) passage au travers d'au moins un dispositif d'extrusion. Cette étape implique par conséquent que ledit gel et/ou mélange ne soi(en)t plus compris dans le réceptacle spécifique décrit ci-dessus. Ainsi, pour conserver les avantages liés à la mise en oeuvre du procédé de l'invention au sein d'un réceptacle spécifique tel que décrit ci-dessus, et notamment pour limiter tout risque de contamination, la présence du système ou port d'ouverture refermable comme précité sur le réceptacle spécifique autorise un système continu. Un tel système peut par exemple être caractérisé par la mise en oeuvre d'au moins deux réceptacles spécifiques, le premier réceptacle, dédié notamment à la réalisation du gel aqueux de polysaccharide de l'étape a) et, le cas échéant, du mélange obtenu à l'issue de l'étape b), ainsi que son(leur) homogénéisation, étant relié au dispositif d'extrusion, lui-même relié au second réceptacle, dédié à la récupération du gel aqueux de l'étape a) et/ou mélange de l'étape b) après l'étape d'extrusion, et à la réalisation de l'étape c) de réticulation et, le cas échéant, d'arrêt de la réticulation. Le gel réticulé obtenu à l'issue du procédé tel que décrit précédemment n'est généralement pas directement injectable, au regard notamment de sa trop forte concentration en polysaccharide et de la présence éventuelle de résidus d'agent réticulant, ou encore de ses conditions physiologiques ou de pH. Le gel obtenu à l'issue de la mise en oeuvre du procédé tel que décrit précédemment peut notamment présenter une rigidité trop élevée pour être injecté chez un 10 patient en l'état. Par conséquent, plusieurs étapes additionnelles, connues de l'homme du métier, sont susceptibles d'être mis en oeuvre. Plus particulièrement, une étape de neutralisation et d'expansion de ce gel est requise pour lui conférer ses qualités d'implant. Les chaines du réseau de polysaccharide sont 15 alors étirées, hydratées, tandis que le pH est ramené à celui du derme. Une étape de protection et de redensification du gel est également susceptible d'être réalisée afin d'améliorer encore les qualités de l'implant, selon le savoir-faire de l'homme de l'art. Le gel doit être formulé physiologiquement grâce à la présence de sels en quantités équivalentes à celles du milieu injecté. 20 Pour une pureté encore améliorée, une étape de purification complémentaire peut être, en outre, réalisée. L'ultime étape consiste au remplissage du gel en seringue qui est réalisé dans des conditions d'atmosphère contrôlé, puis d'une stérilisation finale thermique qui intervient immédiatement après le remplissage en seringue. 25 II) Polysaccharide Par «polysaccharide » conforme à l'invention, on entend tout polymère constitué de plusieurs oses liés entre eux par des liaisons 0-osidiques et ayant pour formule générale : -[Cx(H2O)y)]n-. 30 Un polysaccharide conforme à l'invention est plus particulièrement sélectionné au regard des propriétés que l'on souhaite voir manifester par le gel réticulé obtenu selon l'invention. Plus particulièrement, un tel polysaccharide doit présenter une bonne biocompatibilité. Ainsi, un polysaccharide ou sel de polysaccharide physiologiquement acceptable peut être d'origine naturelle ou synthétique. Les polysaccharides convenant à l'invention peuvent notamment être choisis parmi le sulfate de chondroïtine, le kératane, le sulfate de kératane, l'héparine, le sulfate d'héparine, le xanthane, la carraghénine, l'acide hyaluronique, le chitosane, la cellulose et ses dérivés, l'alginate, l'amidon, le dextrane, le pullulane, le galactomannane et leurs sels biologiquement acceptables. Les sels de polysaccharides conformes à l'invention sont plus particulièrement choisis parmi les sels physiologiquement acceptables, tels que le sel de sodium, le sel de potassium, le sel de zinc, le sel d'argent, et leur mélange, de préférence le sel de sodium. De préférence, un polysaccharide ou sel de polysaccharide selon l'invention présente un haut poids moléculaire, de préférence un poids moléculaire supérieur ou égal à 100 000 Da, voire même supérieur à 3 MDa selon l'application considérée. Un polysaccharide particulièrement préféré est l'acide hyaluronique ou l'un de ses 15 sels, de préférence le hyaluronate de sodium (NaHA). L'étape a) d'un procédé de l'invention consiste à disposer d'un gel aqueux de polysaccharide, ou d'un de ses sels, sous une forme non réticulée. Un tel gel aqueux est obtenu par formulation dudit polysaccharide dans un milieu aqueux. 20 Par « milieu aqueux », au sens de la présente invention, on entend tout milieu liquide contenant de l'eau et qui a la propriété de dissoudre un polysaccharide ou un de ses sels. La nature du milieu aqueux est plus particulièrement conditionnée au regard du type de réticulation envisagée mais également du type de polymère utilisé. 25 A ce titre, un milieu aqueux susceptible de convenir peut être soit acide, soit basique. Un milieu aqueux particulièrement préféré est un milieu alcalin, de préférence l'hydroxyde de sodium (NaOH), plus particulièrement une solution d'hydroxyde de sodium à pH supérieur à 12. III) Agent réticulant Par « agent réticulant » conforme à l'invention, on entend tout composé capable d'induire une réticulation entre les différentes chaines de polysaccharides. 30 Le choix de cet agent réticulant au regard du polysaccharide à réticuler relève clairement des compétences de l'homme de l'art. Un agent réticulant conforme à l'invention est choisi parmi l'époxyde, l'aldéhyde, le polyaziridyl, le divinyl sulphone (DVS), et leurs mélanges. De préférence, un agent réticulant conforme à l'invention est choisi parmi les agents réticulant époxydiques, de préférence bi- ou multi-fonctionnels, et plus particulièrement choisi parmi que le 1,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE), le diépoxyoctane ou le 1,2-bis-(2,3-époxypropyl)-2,3-éthylène, le 1,4-bis(2,3-epoxypropoxy)butane, le 1,4-bisglycidyloxybutane, le 1,2-bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene, le 1-(2,3-epoxypropyl)-2,3- epoxycyclohexane, et leurs mélanges. De préférence, l'agent réticulant est le 1,4-butanediol diglycidyl éther. L'ajustement de la quantité en agent réticulant pour la réalisation de la réaction de réticulation relève également clairement des compétences de l'homme du métier. Ainsi, par l'expression « quantité efficace », au sens de la présente invention, on entend désigner une quantité suffisante pour obtenir l'effet attendu. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le procédé selon l'invention met en oeuvre du hyaluronate de sodium en un milieu alcalin avec le 1,4-butanediol diglycidyl éther, à titre d'agent réticulant. Dans toute la description, y compris les revendications, l'expression « comportant un » doit être comprise comme étant synonyme de « comportant au moins un », sauf si le contraire est spécifié. Les expressions « compris entre ... et ... » et « allant de ... à ... » doivent se comprendre bornes incluses, sauf si le contraire est spécifié. L'exemple et figure qui suivent sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l'invention. FIGURE : - Figure 1 : illustre les propriétés viscoélastiques de gels d'acide hyaluronique 30 via la mesure de leur module élastique G' (en Pa). EXEMPLE Pour chacun des gels réticulés décrits ci-après, 10 g d'acide hyaluronique (1.5MDa,) 73 g de soude 1 % et 1,2 g de butanediol diglycidyl éther (BDDE) sont mis en oeuvre. La réticulation est provoquée par une incubation de 3 heures à 52 °C. Les conditions particulières pour chaque gel sont les suivantes : Produit A (témoin) Le protocole de préparation est comme suit : 1. Homogénéisation à température ambiante du mélange « acide hyaluronique + 10 soude 1 %» pendant 1H30 environ pour l'obtention d'une solution visqueuse parfaitement homogène ; 2. Ajout de l'agent réticulant (BDDE) et nouvelle homogénéisation, à température ambiante, pendant 20 min environ ; 3. Incubation 3 heures à 52 °C de la solution visqueuse acide hyaluronique/soude 15 1 %/BDDE de manière à initier l'étape de réticulation ; et 4. Neutralisation, gonflement et homogénéisation du solide obtenu (solution d'acide hyaluronique réticulé) dans une solution de Tampon Phosphate acidifiée, de façon à obtenir un hydrogel à 20 mg/g en acide hyaluronique, au pH proche de la neutralité. 20 Produits B et B' (conforme à l'invention) Il s'agit du même protocole que celui décrit pour le produit A mais réalisé, après l'étape 2 d'ajout du BDDE et 15 min d'homogénéisation, avec une étape d'extrusion, à température ambiante, consistant à faire circuler le mélange obtenu à l'issue de l'étape 2 à travers un dispositif d'extrusion comprenant un filtre, respectivement, de 10 microns (produit 25 B) et 50 microns (produit B'). Cette étape d'extrusion se déroule sur une durée maximale de 5 minutes. Le mélange obtenu à l'issue de l'étape 2 est ainsi placé dans une cuve dont la sortie est une section cylindrique équipée d'un filtre grille de porosité de, respectivement, 10 et 50 µm, et de diamètre 55 mm, notamment un filtre grille tel que ceux commercialisés par la 30 société Rubber Fab, sous la dénomination « Platinum Screen Gasket ». La pression appliquée au mélange, effectuée à l'aide d'un piston à air comprimé, est régulée de façon à ce que la vitesse linéaire d'extrusion soit de l'ordre de 4 cm/min, ce qui représente un débit de l'ordre de 100 cm3/min. L'ensemble des produits A, B et B' est conditionné en seringues. Les mesures des propriétés viscoélastiques de ces produits sont réalisées à l'aide d'un rhéomètre (Haake RS6000) équipé d'une géométrie cône/plan (1°/diamètre 35mm). Un balayage en contrainte est effectué, le module élastique G'(en Pa) et l'angle de déphasage ô (°) sont mesurés à 1Hz pour une contrainte de 5 Pa. Résultats La figure 1 ci-après représente les valeurs des modules élastiques G' (en Pa). A titre indicatif, la valeur de l'angle de déphasage ô (°) est indiquée en haut de chaque colonne, 10 à droite de la valeur de G'. Les résultats pour les produits B et B' sont similaires. L'angle de déphasage mesuré est minime ce qui traduit un caractère principalement élastique (solide) de ces gels. Toutefois, au regard des résultats de la figure 1, on constate un effet significatif 15 sur l'augmentation de G' de l'étape d'extrusion pré-réticulation. REVENDICATIONS1. Procédé de préparation d'un gel réticulé d'au moins un polysaccharide ou un de ses sels, comprenant au moins les étapes consistant à : a) disposer d'au moins un gel aqueux dudit polysaccharide sous une forme non réticulée, b) mettre en contact ledit gel aqueux avec une quantité efficace d'au moins un agent réticulant, c) imposer au mélange formé en étape b) des conditions propices à la réticulation dudit polysaccharide et, le cas échéant, d) récupérer ledit hydrogel réticulé, caractérisé en ce que ledit procédé comprend, antérieurement à l'étape c), au moins une étape e) consistant à faire circuler le gel aqueux de polysaccharide de l'étape a) et/ou le mélange de l'étape b) à travers au moins un dispositif apte à retenir toute particule de diamètre supérieur à 100 microns. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le polysaccharide est l'acide hyaluronique ou l'un de ses sels. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'étape e) est réalisée sur le mélange de l'étape b). 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape e) est réalisée au moyen d'au moins un dispositif comprenant au moins un filtre. 5. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que le filtre a une porosité allant de 2 à 100 microns, de préférence de 5 à 50 microns, mieux de 8 à 30 microns, et plus particulièrement une porosité de 10 microns. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la vitesse linéaire d'extrusion du gel aqueux de l'étape a) et/ou du mélange de l'étape b) à travers le dispositif apte à retenir toute particule de diamètre supérieur à 100 microns est comprise entre 1 et 100 cm par minute, de préférence entre 1 et 4 cm par minute. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le gel aqueux de polysaccharide de l'étape a) et/ou le mélange de l'étape b) subit préalablement à l'étape c) au moins une homogénéisation. 8. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que l'étape d'homogénéisation se déroule sur une durée inférieure à 200 minutes, de préférence inférieure à 150 minutes, voire comprise entre 15 et 100 minutes. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape c) de réticulation est réalisée par voie thermique à une température comprise entre 25 et 60 °C, de préférence entre 45 et 55 °C, et mieux entre 48 et 52 °C. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape c) de réticulation est réalisée sur une durée allant de 30 à 300 minutes, préférentiellement de 100 à 200 minutes, et mieux de 150 à 190 minutes. 11. Procédé selon une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'agent réticulant est choisi parmi les agents réticulants époxydiques, de préférence biou multi-fonctionnels. 12. Procédé selon une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'agent réticulant est choisi parmi le 1,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE), le diépoxy-octane ou le 1,2-bis-(2,3-époxypropyl)-2,3-éthylène, le 1,4-bis(2,3-epoxypropoxy)butane, le 1,4-bisglycidyloxybutane, le 1,2-bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene, le 1-(2,3-epoxypropyl)-2,3-epoxycyclohexane, et leurs mélanges, de préférence le 1,4-butanediol diglycidyl éther. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé 20 en ce qu'il met en oeuvre du hyaluronate de sodium en un milieu alcalin, et le 1,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE), à titre d'agent réticulant. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le gel réticulé est un gel monophasique majoritairement élastique. 15. Utilisation d'un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé tel que 25 défini selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour le comblement durable des défauts de volume de la peau, et notamment le comblement des rides.