Brevet FR2977494A1 — publié le 20130111

Compositions cosmétiques ou pharmaceutiques contenant des acides hyaluroniques de masses moléculaires différentes Domaine technique de l'invention L'invention concerne le domaine des compositions cosmétiques, et notamment dermocosmétiques, et des compositions pharmaceutiques et notamment dermatologiques. Plus particulièrement, elle concerne une nouvelle composition comportant une association d'acide hyaluronique de différentes masses moléculaires, non réticulé, comme ingrédients actifs. Cette association permet d'optimiser l'effet des différents acides hyaluroniques sur les phénomènes de prolifération cellulaires ; elle conduit notamment à une cicatrisation plus rapide. Etat de la technique Le hyaluronane ou l'acide hyaluronique (CAS [9004-61-9], appelé ici HA) fait partie de la famille des glycosaminoglycanes. C'est un polymère de disaccharides, plus précisément un glycosaminoglycane linéaire non sulfaté composé d'unités répétitives de D-acide glucuronique et de N-acetyl-D-glucosamine liés entre eux par des liaisons glycosidiques alternées beta-1,4 et beta-1,3 (voir la publication de Tammi et al. « Hyaluronan metabolism in skin » paru dans la revue Progress in Histochemistry & Cytochemistry, 29 (2) : 1-81, 1994)). Les polymères de cette unité récurrente peuvent avoir une taille comprise entre 102 et 104 kDa in vivo, mais il existe également des produits avec des masses moléculaires beaucoup plus grandes. L'acide hyaluronique peut être obtenu industriellement, par exemple par broyage de crêtes de coqs, après broyage, ou par fermentation bactérienne (par exemple avec Streptococcus zooepidemicus). Par hydrolyse contrôlée, on obtient un produit avec une masse moléculaire plus faible. L'acide hyaluronique est utilisé depuis de nombreuses années en chirurgie ophtalmique (i.e. transplantation de cornée, glaucome, cataracte). Il est également utilisé pour traiter l'arthrose du genou (ce traitement est appelé « viscosupplémentation »). Enfin, depuis quelques années, l'acide hyaluronique est utilisé en médecine esthétique pour le comblement de rides, et il est utilisé dans les produits cosmétiques en raison de ses propriétés hydratantes. L'HA est la composante majeure de la matrice extracellulaire. II est surtout présent dans les tissus conjonctifs dits « mous » par opposition à d'autres glycosaminoglycanes comme l'acide chondroïtine sulfurique présents dans les tissus dits « durs » tels que le cartilage. On le retrouve ainsi en quantités importantes principalement dans la peau. Dans le tissu cutané, le HA est synthétisé par les fibroblastes et les kératinocytes, par les enzymes appelées « hyaluronate synthétases ». Le contenu dans un tissu jeune est de l'ordre de 0,5 à 1 mg de hyaluronane par gramme de tissu humide. Le HA est localisé non seulement dans le derme (à raison d'environ 0,5 mg/ml) mais également dans l'épiderme où sa concentration est plus élevée (2 à 4 mg/ml). Grâce à ses résidus portant une charge négative, le HA joue le rôle d'une pompe à eau permettant de maintenir l'élasticité de la peau. Le HA a un rôle principal dans le contrôle de la diffusion des aliments, des hormones, des vitamines et des sels inorganiques du tissu conjonctif et dans le nettoyage des déchets métaboliques pouvant induire des réactions inflammatoires. Avec l'âge, la quantité de HA et son degré de polymérisation diminuent, résultant en une diminution de la quantité d'eau retenue dans le tissu conjonctif. La peau subit alors un processus de vieillissement qui aboutit à une augmentation de la fibrose et à une baisse de la teneur en fibres élastiques. Dans la peau humaine normale, le HA existe sous forme d'un polymère de haut poids moléculaire (600 000 - 1 000 000 Da). La dégradation physiologique du HA dans la peau se fait par (i) l'internalisation par les kératinocytes via le CD44 et (ii) la fragmentation intracellulaire en fragments de taille intermédiaire par les hyaluronidases (60 000 - 300 000 Da). Le HA fragmenté est libéré par les kératinocytes, passe la membrane basale et est libéré directement dans les vaisseaux lymphatiques, comme décrit dans l'article précité de Tammi et al. Dans des conditions inflammatoires, l'accumulation des formes de bas poids moléculaire de HA a été démontrée chez l'animal. Pendant l'inflammation, des facteurs chimiotactiques plaquettaires comme de la fibrine stimulent l'afflux et l'activation des fibroblastes qui dégradent le HA par sécrétion de hyaluronidase résultant en des concentrations tissulaires élevées de petits fragments de HA. La génération de ces petits fragments de HA se fait aussi par divers mécanismes comme la dépolymérisation par les espèces réactives d'oxygène relâchées par les granulocytes, ou dans la peau irradiée par les ultraviolets, ou par la synthèse de novo de fragments de bas poids moléculaire. Plusieurs études (à savoir l'article de Termeer et al., « Oligosaccharides of hyaluronan are potent activators of dendritic cells » paru dans J.Immunology.165 (4) : 1863-70, 2000, l'article de Fitzgerald et al. « Ras, Protein kinase C zeta, and l kappa B kinases 1 and 2 are downstream effectors of CD44 during the activation of NF-kappa B by hyaluronac acid fragments in T-24 carcinoma cells » paru dans J.Immunology 164 (4) : 2053-63,2000, et l'article de McKee et al. « Hyaluronan (HA) fragments induce chemokine gene expression in alveolar macrophages.The role of HA size and CD44 » paru dans J.Clinical Investigation 98 (10) : 2403-13,1996) ont suggéré que le HA de haut et bas poids moléculaire peut avoir des effets biologiques différents sur les cellules et les tissus. Il a été démontré que le HA de poids moléculaires intermédiaires (50 000-250 000 Da), appliqué sur la peau murine et humaine, traverse les couches épidermiques et dermiques. Les produits de dégradation apparaissent dans le sérum 2 heures après l'application du HA sur la peau. On sait que le poids moléculaire du HA récupéré dans le sérum est légèrement inférieur à celui du HA appliqué sur la peau (voir l'article de Brown et al. « Absorption of hyaluronan applied to the surface of intact skin » paru dans J.Investigative Dermatology. 113 (5) : 740-6,1999), démontrant ainsi que le passage transcutané du HA ne se limite pas uniquement à des fragments de plus petite taille (environ 350 - 10 000 Da). On sait que le HA a comme rôle principal l'hydratation, mais joue également un rôle dans la régulation de phénomènes biologiques comme la migration des cellules, la différentiation des tissus, l'angiogenèse et la régulation des cellules immunitaires. Ainsi, l'état de la technique attribue des fonctions assez différentes à cette molécule. Le brevet FR 2 932 381 (Innoderm) décrit une composition cosmétique et pharmaceutique contenant une association de hyaluronane réticulé ou non réticulé et de l'héparine ou un ou plusieurs dérivés dits « héparinoïdes » pour une utilisation topique et injectable. Ces compositions ont pour objet de prolonger la durée de vie du hyaluronane afin d'améliorer ses actions anti-âge et hydratantes ainsi que ses propriétés de comblement de rides. La demande de brevet EP 1 884 231 Al (Auriga Int.) décrit une composition cosmétique ou pharmaceutique contenant des mélanges d'acides hyaluronique combinés à un surfactant polycationique pour le comblement des rides et des lèvres. Les HA ont une masse moléculaire comprise entre 400 Da et 2 500 KDa. La demande de brevet EP 1 767211 Al (Glycoscience Laboratories) décrit une composition pharmaceutique contenant de l'acide hyaluronique comme un ingrédient actif. Cet acide hyaluronique (appelé HA4) est un tetrasaccharide composé de deux unités répétitives de HA. La demande de brevet EP 1 922 077, décrit des formulations thérapeutiques à base de 10 HA ou ses dérivés de masse moléculaire comprise entre 360 et 20 000 KDa, avec des anticorps thérapeutiques. La demande de brevet EP 2 292 243 (Holy Stone Healthcare Co.) décrit un mélange d'au moins deux acides hyaluroniques de masses moléculaires différentes, dont la plus faible est d'au moins 500 kDa, pour la prévention et la thérapie d'inflammations 15 intestinales. La demande de brevet WO 2007/028196 (Alchemia Oncology Ltd.) décrit l'effet de HA sur l'efficacité thérapeutique de certains anticorps des formulations pharmaceutiques. La demande de brevet WO 2007/026193 (Matrix Biology Institute) décrit la prépararation de biopolymères à base de HA réticulés par irradiation à haute énergie. Objets de l'invention La présente invention se focalise sur les effets dermocosmétiques et dermatologiques de préparations comprenant des HA. Plus particulièrement, elle vise à améliorer l'efficacité de l'action du HA dans des préparations topiques destinées à être 25 appliquées sur la peau saine, vieillissante et/ou lésée. Ainsi, un premier objet de l'invention est une composition pharmaceutique ou cosmétique pour application topique, comportant à titre d'ingrédients actifs dans un milieu physiologiquement acceptable un mélange d'acides hyaluroniques (HA) de poids moléculaires différentes, caractérisée en ce que la masse moléculaire desdites 30 HA se situe dans un intervalle dont la largeur est supérieure à D +/- 0,5D et de 20 préférence supérieure à D +/- 0,6D, et encore plus préférentiellement supérieure à D +/- 0,7D, D étant la valeur centrale dudit intervalle. Avantageusement, la valeur supérieure dudit intervalle ne dépasse pas 3000 kDa, et de préférence ne dépasse pas 2000 kDa ;.on préfère que la valeur supérieure dudit intervalle ne dépasse pas 400 kDa. Avantageusement, la valeur inférieure dudit intervalle est d'au moins 10 kDa, et de préférence d'au moins 15 kDa. Dans un mode de réalisation, lesdits acides hyaluroniques ne sont pas réticulés. La distribution de masses moléculaires desdits HA peut être bimodale ou multi-modale. Dans un mode de réalisation, lesdits acides hyaluroniques sont sélectionnés dans le groupe formé par les HA dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [20 kDa ; 50 kDa] (appelé « HA 50 »), les HA dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [100 kDa ; 300 kDa] (appelé « HA 300 »), et les HA dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [800 kDa ; 1200 kDa] (appelé « HA 1200 »). Dans un mode de réalisation la composition selon l'invention est sélectionnée dans le groupe des compositions suivantes : (i) composition comprenant 0,01 à 2% massiques (et préférentiellement 0,02 à 2%) de HA 50 ; (ii) composition comprenant 0,01 à 2% massiques (et préférentiellement 0,2 à 20/0) de 20 HA 300 ; (iii) composition comprenant 0,01 à 20/0 massiques (et préférentiellement 0,02 à 20/0) de HA 50 et 0,01 à 20/0 massiques (et préférentiellement 0,2 à 20/0) de HA 300, le rapport massique HA 50 / HA 300 étant préférentiellement compris entre 40/60 et 60/40, le reste étant chaque fois constitué par ledit milieu physiologiquement acceptable et/ou 25 d'autres principes actifs. Dans un autre mode de réalisation la composition selon l'invention est sélectionnée dans le groupe des compositions suivantes : (i) composition comprenant 0,01 à 2% massiques (et préférentiellement 0,02 à 2%) de HA 50 ; 30 (ii) composition comprenant 0,01 à 2% massiques (et préférentiellement 0,2 à 2%) de HA 300 ; (iii) composition comprenant 0,01 à 20/0 massiques (et préférentiellement 0,02 à 20/0) de HA 50 et 0,01 à 2% massiques (et préférentiellement 0,2 à 20/0) de HA 300, le rapport massique HA 50 / HA 300 étant préférentiellement compris entre 40/60 et 60/40, le reste étant chaque fois constitué par ledit milieu physiologiquement acceptable et/ou d'autres principes actifs. La composition peut comprendre en plus un ou plusieurs principes actifs sélectionné(s) dans le groupe constitué par les anti-biotiques, les anti-septiques, les anti-mycosiques, les anti-inflammatoires, les antalgiques à application topique, les antalgiques à effet systémique, l'huile d'argan. En particulier, elle peut comprendre de 1,0% à 50% massiques d'huile d'argan et de 0,05% à 2,5 % massiques de HA, de préférence de 2,0% à 50% d'huile d'argan et de 0,1% à 2,5% de HA, et encore plus préférentiellement de 4,2% à 20% d'huile d'argan et de 0,1°/o à 2,0% de HA. Un autre objet de l'invention est l'utilisation de la composition selon l'invention pour le traitement topique de la peau saine, vieillissante et/ou lésée. Un autre objet de l'invention est l'utilisation de la composition selon l'invention pour le traitement de plaies cutanées ou de l'irritation cutanée chez les mammifères, et de préférence chez l'homme ou chez le cheval. Description détaillée de l'invention Dans le cadre de la présente invention, la demanderesse a mise en évidence que des acides hyaluroniques de différentes masses moléculaires ont des effets différents sur la prolifération de fibroblastes de derme humains. Elle a également mise en évidence un effet dose - réponse des fibroblastes de derme humain par rapport à la masse moléculaire du HA utilisé. Un effet sur la cinétique de prolifération a également été mis en évidence. Les acides hyaluroniques natives sont disponibles dans le commerce sous la forme de mélanges représentant une distribution de masses moléculaires, la masse moléculaire étant exprimée en kiloDalton. Cette distribution est caractérisée par une valeur minimale de masse moléculaire Drnin, une valeur maximale de masse moléculaire Dm. et une valeur centrale D de l'intervalle. Ces produits présentent en général une distribution qui n'est pas plus large que D +/- 0,5 D , c'est-à-dire que Dmin vaut au moins 0,5 D, et Dm. ne dépasse pas 1,5 D. Pour certains produits, cette distribution est plus étroite, par exemple D +/- 0,4 D ou D +/- 0,2 D. Les produits commerciaux sont habituellement désignés comme « HA Dmax ». Ainsi, on connaît notamment les produits HA 50, HA 300 et HA 1200 qui correspondent à des mélanges de HA de différentes masses moléculaires comprises, respectivement, dans les aux intervalles de 20 kDa à 50 kDa, de 100 kDa à 300 kDa] et de 800 kDa à 1200 kDa. La masse moléculaire de l'acide hyaluronique peut être déterminé selon la pharmacopée européenne à partir des viscosités intrinsèques mesurées à l'aide d'un viscosimètre Ubbelhode à 25°C pour des solutions à différentes concentrations d'acide. La demanderesse a trouvé que les compositions comportant à titre d'ingrédients actifs, éventuellement dans un milieu physiologiquement acceptable, des mélanges de HA à large distribution de masse moléculaire, et en particulier des mélanges de HA présentant une distribution bimodale ou multimodale de masses moléculaires, présentent une activité biologique renforcée lors qu'elles sont appliquée de manière topique sur la peau saine, vieillissante et/ou lésée. Plus précisément, dans les compositions selon l'invention, l'intervalle est caractérisé par une largeur supérieure à D +/- 0,5D et de préférence supérieure à D +/- 0,6D, et encore plus préférentiellement supérieure à D +/- 0,7D. Une telle composition permet d'optimiser et de prolonger l'effet des différents HA sur les phénomènes de prolifération cellulaire. Une telle composition peut être utilisée de manière topique sur la peau saine, vieillissante ou lésée à des fins cosmétiques prophylactiques ou curatives, ou à des fins thérapeutiques, par exemple pour le traitement de plaies cutanées ou de l'irritation cutanée. En particulier, elle favorise la cicatrisation. Cet effet a été constaté chez l'homme et certains espèces animales, notamment les espèces équines, canines, félines, caprins, ovines, bovins. Selon l'invention, les acides hyaluroniques peuvent éventuellement étant présents sous la forme d'un sel physiologiquement acceptable. Avantageusement, les acides hyaluroniques ne sont pas réticulés. Il peut s'agir avantageusement d'acides hyaluroniques hydrolysés. On peut utiliser des mélanges de HA présentant des distributions bimodales ou multimodales. Pour les réaliser, on peut mélanger deux ou plusieurs HA présentant une distribution plus étroite. Les intervalles Dmin et Dm. des différents HA peuvent se recouvrir ou non. A titre d'exemple, on peut réaliser un mélange comportant un premier HA avec D= X1 et une largeur d'intervalle X1 +/- p1 X1, et un deuxième HA avec D= X2 et une largeur d'intervalle X2 +/- p2 X2, où X1 (X2 - p2 X2). Dans les deux cas, on peut ajouter par exemple un troisième HA avec D=X3 et une largeur d'intervalle X3 +/- p3 X3, et le mélange résultant peut être caractérisé par X3 > X2 et (X2 + p2 X2) «X3 - p3 X3) ou (X2 + p2 X2) > (X3 - p3 X3). Dans un premier mode particulier de réalisation, on utilise une composition comportant un premier acide hyaluronique HA dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [20 kDa ; 50 kDa] et un deuxième acide hyaluronique dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [100 kDa ; 300 kDa]. Dans un deuxième mode particulier de réalisation, on utilise une composition comportant un premier acide hyaluronique HA dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [20 kDa ; 50 kDa] et un deuxième acide hyaluronique dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [800 kDa ; 1200 kDa]. Dans un troisième mode particulier de réalisation, on utilise une composition comportant un premier acide hyaluronique HA dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [100 kDa ; 300 kDa] et un deuxième acide hyaluronique HA dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [800 kDa ; 1200 kDa]. Dans un quatrième mode particulier de réalisation, on utilise une composition comportant un premier acide hyaluronique HA dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [20 kDa ; 50 kDa], un deuxième acide hyaluronique dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [100 kDa ; 300 kDa], et un troisième acide hyaluronique dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [800 kDa ; 1200 kDa]. Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, les formulations selon l'invention comportent au moins deux HA sélectionnés parmi les produits HA 50, HA 300 et HA 1200, par exemple HA 50 + HA 300, HA 50 + HA 1200, HA 300 + HA 1200. En tous les cas, l'acide hyaluronique peut se présenter, totalement ou partiellement, sous la forme d'un sel physiologiquement acceptable, par exemple d'un sel de sodium.30 En tous les cas, les compositions selon l'invention peuvent comporter d'autres ingrédients actifs (tels que des vitamines, notamment 1, E, B12), &ou des excipients physiologiquement acceptables et compatibles avec les ingrédients actifs et l'utilisation prévue. Cette utilisation est principalement soit une utilisation topique sur la peau, notamment à des fins dermocosmétiques ou dermatologiques, soit une utilisation topique oculaire. Ainsi, les compositions selon l'invention se présentent avantageusement notamment sous la forme de crème, gel, pommade, baume, solution, émulsion. Les émulsions ou solutions peuvent avoir une consistance plus ou moins fluide, gélifiée ou crémeuse, en fonction de ce qui est souhaité. Cette consistance peut être obtenue le cas échéant, de manière connue par l'homme du métier, par l'ajout d'agents épaississants appropriés. Comme autre ingrédient actif, les compositions selon l'invention peuvent comprendre en plus un ou plusieurs principes actifs sélectionné dans le groupe constitué par les anti-biotiques, les anti-septiques, les anti-mycosiques, les anti-inflammatoires, les antalgiques à application topique, les antalgiques à effet systémique, l'huile d'argan. Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention peut comprendre en outre comme ingrédient de la glycériné (propane-1,2,3-triol). La glycérine, ou glycérol, ou propan-1,2,3-triol est classiquement utilisée comme agent hydratant, solvant et lubrifiant dans les produits cosmétiques. Dans encore un autre mode de réalisation, qui peut être combiné avec tous les autres, la composition selon l'invention peut comprendre en outre comme ingrédient du DPanthénol ou dexpanthénol ou provitamine B5. Le D-Panthénol est un anti-inflammatoire et un puissant hydratant qui redonne souplesse et élasticité à la peau. En raison de ses propriétés, il est communément utilisé dans les préparations cosmétiques pour la peau. Comme autre ingrédient actif, les compositions selon l'invention peuvent comporter par exemple de l'huile d'argan. Une telle composition peut se présenter sous la forme d'une crème ou pommade de type émulsion « huile dans l'eau », l'huile d'argan et les ingrédients solubles dans l'huile constituant la phase grasse et l'acide hyaluronique et les ingrédients solubles dans l'eau constituant la phase aqueuse. Une telle composition avantageuse comprend, dans un milieu physiologiquement acceptable : 1,0 à 50 % massiques d'huile d'argan, et 0,05 à 2,5 % massiques d'un mélange acides hyaluroniques telle que décrit ci-dessus, ce dernier étant présent éventuellement sous la forme d'un sel physiologiquement acceptable (tel que le sel de sodium). Le reste est constitué d'autres ingrédients actifs (si présents, mais dans ce mode de réalisation, on préfère une composition qui ne comporte comme seuls principes actifs que le mélange d'acides hyaluroniques et l'huile d'argan) et d'autres d'ingrédients physiologiquement et dermatologiquement acceptables pour fabriquer une crème, une pommade, une baume, un gel ou une forme similaire qui peut être appliquée sur la peau et qui y reste pendant le temps nécessaire entre deux applications. Si la proportion d'huile d'argan est supérieure à 50%, la composition est une solution huileuse, et l'action de l'avide haluronique devient négligeable ; on obtient en effet les mêmes résultats qu'avec l'huile d'argan seule. Par conséquent, dans ce mode de réalisation, la composition ne doit pas contenir plus de 50% d'huile d'argan. Pour des concentrations en huile 'argan inférieures à 2,0%, les effets sur la cicatrisation et l'inflammation sont très diminués. Quant à la concentration d'acide hyaluronique, au-delà de 2,50/0, la solution devient un gel, et la composition ne montre plus ses avantages spécifiques. Au-dessous de 0,05%, on n'obtient pas une augmentation suffisante des propriétés cicatrisantes et anti-inflammatoires. Une telle composition qui est particulièrement avantageuse comprend 2,0 à 50% massiques d'huile d'argan et 0,1% à 2,5% d'un mélange d'acides hyaluroniques, et encore plus préférentiellement 4,2 à 20% massiques d'huile d'argan et 0,1% à 2,0% d'un mélange d'acides hyaluroniques. Avantageusement, l'huile d'argan utilisé est une huile pure, de préférence avec un indice de réfraction compris entre 1,4687 et 1,4689. Nous indiquons ici à titre d'exemple un procédé pour fabriquer une telle composition selon l'invention sous la forme d'une émulsion de type « huile dans l'eau ». Dans ce procédé on prépare d'abord, à une température supérieure à 45°C et sous agitation, une émulsion de type « huile dans l'eau », ladite phase huileuse comprenant l'huile d'argan, puis on laisse refroidir, de préférence à une température ne dépassant pas 30°C et de préférence ne dépassant pas 25°C, et on ajoute à ladite émulsion une phase aqueuse comprenant le mélange d'acides hyaluroniques ou un de ses sels physiologiquement acceptables. Exemples Nous donnons ici une description détaillée de quelques essais qui ont été menés pour établir ces effets biologiques des formulations dermocosmétiques ou dermatologiques. Différentes concentrations de HA (de 0,0001 à 1 mg/mL) ont été testées sur des fibroblastes de derme humain. Trois témoins ont été ajoutés pour chaque plaque, en triplicata : - Un témoin en milieu complet (ou enrichi), soit du DMEM (Duibecco's Modified Eagie 5 Medium) + 10% se sérum de veau foetal (SVF) ; - Un témoin en milieu appauvri soit, DMEM + 2,5 %, c'est avec ce milieu que les HA ont été étudiés et qui sert de point de comparaison des résultats obtenus ; - Un témoin avec du DMEM seul, qui ne permet pas la prolifération cellulaire. 10 Ces trois témoins apparaissent sur les figures pour illustrer le comportement des cellules en milieu optimal (complet), en milieu de comparaison pour le HA (appauvri) et en milieu sans prolifération (DMEM seul). Après 48 et 72 heures d'incubation, 10 pl du sel de tetrazolium MTT (bromure de 3- 15 (4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium) ont été ajoutés au milieu de culture à une concentration de 5 mg/mL pendant 4 heures. Les cellules vivantes vont capter le MTT et le transformer en composé formazan à l'intérieur des mitochondries. Au bout des 4 heures le milieu a été est retiré et les cristaux de formazan (violet) ont été dissous dans un mélange à volume égal d'éthanol pur et de diméthylsulfoxide (DMSO). 20 Les densités optiques de chaque puits ont ensuite été mesurées avec un spectrophotomètre. Les densités optiques (via le test MTT) traduisent la viabilité cellulaire; plus il y aura de cellules dans un puits, plus elle sera élevée. Des puits sans cellule ont aussi été inclus, pour avoir un «blanc» en densité optique. La moyenne 25 obtenue à partir de ces puits a été soustraite des densités optiques des autres puits. Les figures 1 à 4 illustrent des résultats d'une étude de type « dose - réponse » après 48 heures d'incubation qui concernait l'effet de HA de masses moléculaires différentes ou de mélanges de HA de masses moléculaires différentes, sur la prolifération de 30 fibroblastes de derme humains. L'axe horizontal indique la concentration de HA (de 0,0001 à 1 mg/L). L'axe vertical montre la densité optique. La figure 1 montre à titre de référence les résultats pour trois HA natifs de masses 35 moléculaire différentes : (a) Produit appelé HA 50 (intervalle 20 kDa à 50 kDa) (b) Produit appelé HA 300 (intervalle 100 kDa à 300 kDa) (c) Produit appelé HA 1200 (intervalle 800 kDa à 1200 kDa). Les points représentés par un rond correspondent au HA concerné (i.e. HA 50, HA 300 ou HA 1200) mis en culture dans 10% de SVF. Les points représentés par une croix correspondent au HA concerné mis en culture dans 2,50/0 de SVF. Les lignes pointillées correspondent aux témoins 2,5% et 10%. Ces résultats montrent un effet dose réponse différents en fonction de la masse moléculaire du HA sur la prolifération cellulaire. Ils montrent également que d'un point de vue physiologique, la cellule peut utiliser des acides hyaluroniques en différentes tailles moléculaire (i.e. masses moléculaires) pour ses besoins métaboliques. On a alors testé l'effet de mélanges de ces acides hyaluroniques. Plus précisément, on s'est posé la question de savoir si une formulation contenant un mélange de HA avec des poids moléculaires différents apporterait une différence dans la croissance cellules testée en prolifération de fibroblastes de derme humain. Les figures 2 à 4 montrent les résultats obtenus avec ces formulations. La figure 2 montre le même type d'étude pour le mélange HA 50 / HA 300 (concentration représentée par rapport à HA 300) à 48 heures (figure 2 a) et 72 heures (figure 2 b). L'axe horizontal représente la teneur en HA 300 [mg/I], sachant que la concentration de HA 50 était fixée à 0,025 mg/I. Les lignes horizontales représentent les témoins : (i) HA 50 à 0,025 mg& (ii) HA 300 à 0,025 mg/l, (iii) SVF 2,50/0, (iv) SVF 100/0. La figure 3 montre le même type d'étude pour le mélange HA 50 / HA 1200 (concentration représentée par rapport à HA 1200) à 48 heures (figure 3 a) et 72 heures (figure 3 b). L'axe horizontal représente la teneur en HA 1200 [mg/l], sachant que la concentration de HA 50 était fixée à 0,025 mg/I. Les lignes horizontales représentent les témoins : (i) HA 50 à 0,025 mg/l, (ii) HA 1200 à 0,025 mg/I, (iii) SVF 2,50/0, (iv) SVF 10%. La figure 4 montre le même type d'étude pour le mélange HA 300 / HA 1200 (concentration représentée par rapport à HA 1200) à 48 heures (figure 4 a) et 72 heures (figure 4 b). L'axe horizontal représente la teneur en HA 1200 [mg/I], sachant que la concentration de HA 300 était fixée à 0,025 mg& Les lignes horizontales représentent les témoins : (i) HA 300 à 0,025 mg/I, (ii) HA 1200 5 à 0,025 mg/I, (iii) SVF 2,5%, (iv) SVF 10%. Ces résultats illustré sur les figures 2 à 4 montrent que les mélanges sont non seulement supérieurs au témoin de référence (DMEM + 2,5 % SVF ou 10% SVF), mais aussi aux HA lorsque présents seuls avec les cellules. 10 REVENDICATIONS1. Composition pharmaceutique ou cosmétique pour application topique, comportant à titre d'ingrédients actifs dans un milieu physiologiquement acceptable un mélange d'acides hyaluroniques (HA) de poids moléculaires différentes, caractérisée en ce que la masse moléculaire desdites HA se situe dans un intervalle dont la largeur est supérieure à D +1- 0,5D et de préférence supérieure à D AI- 0,6D, et encore plus préférentiellement supérieure à D 0,7D, D étant la valeur centrale dudit intervalle. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisé en ce que la valeur supérieure dudit intervalle ne dépasse pas 3000 kDa, et de préférence ne dépasse pas 2000 kDa. 3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la valeur inférieure dudit intervalle est d'au moins IO ea, et de préférence d'au moins 15 kDa. 4. Composition selon rune quelconque des revendications caractérisé en ce que lesdits acides hyaluroniques ne sont pas réticulés, 5. Composition selon rune quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la distribution de masses moléculaires desdits HA est bimodale ou multimodale. 25 6. Composition selon l'Une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que lesdits acides hyaluroniques sont sélectionnés dans le groupe formé par les HA dont la masse moléculaire se situe dans l'intervalle [20 kDa ; 50 kDa] (appelé « HA 50 »), les HA dont la masse moléculaire se situe dans rintervalle [100 kDa ; 300 kDaj (appelé « HA 300 »), et les HA dont la masse moléculaire se situe dans 30 l'intervalle [800 kDa ; 1200 kDa] (appelé « HA 1200 »). 7. Composition selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'elle est sélectionnée dans le groupe des compositions suivantes : (i) composition comprenant 0,01 à 2% massiques (et préférentiellement 0,02 à 2%) 35 de HA 50 ;20 (il) composition comprenant 0,0 à 2% massiques (e préférentiellement 0,2 à 2%) de HA 300 ; (Hi) composition comprenant 0,01 à massiques (et préférentiellement 0,02 à 2%) de HA 50 et 0,01 à 2% massiques (et préférentiellement 0,2 à 2%) de HA 300, le rapport massique HA 50 / HA 300 étant préférentiellement compris entre 40/60 et 60/40, le reste étant chaque fois constitué par ledit milieu physiologiquement acceptable et/ou d'autres principes actifs. 8. Composition selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'elle est sélectionnée dans le groupe des compositions suivantes : composition comprenant 0,01 à2% massiques (et préférentiellement 0,02 à 2%) de HA 50 ; (ii) composition comprenant 0,01 à 20/o massiques (et préférentiellement CU à 2%) do HA 300 ; (iii) composition comprenant 0,01 à 2% massiques (et préférentiellement 0,02 à 2%) de HA 50 et 0,01 à 2% massiques (et préférentiellement 0,2 à 2%) de HA 300, le rapport massique HA 50 1 HA 300 étant préférentiellement compris entre 40/60 et 60/40, le reste étant chaque fois constitué par ledit milieu physiologiquement acceptable et/ou d'autres principes actifs. 9, Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu'elle comprend en OIUS Un ou plusieurs principes actifs sélectionné(s) dans le groupe constitué par les anti-biotiques, les anti-septiques, les anti-mycosiques, les anti-inflammatoires, les antalgiques à application topique, les antalgiques à effet systémique, l'huile d'argan. 10, Composition selon [a revendication 9, caractérisée en ce qu'elle comprend de 1,0% à 50% massiques d'huile d'argan et de 0,05% à 2,5 % massiques de HA, de préférence de 2,0% à 50% d'huile d'argan et de 0,1% à 2,5% de HA, et encore plus préférentiellement de 4,2% à 20% d'huile d'argan et de 01% à 2,0% de HA. 11. Composition selon l'une quelconque des oevendiCations 1 à 9, caractérisé en ce que la valeur supérieure dudit intervalle ne dépasse pas 400 kDa.