Brevet FR2964014A1 — publié le 20120302

Nucléus enrobé d'un revêtement filmogène aux propriétés antibactériennes et cicatrisantes et procédé d'obtention. DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne le domaine de l'enrobage de nucléus dans le cadre de la perliculture (production de perles par des huîtres perlières). La présente invention a donc pour objet un nucléus revêtu d'un film présentant des propriétés cicatrisantes et antibactériennes, et permettant de réduire la mortalité consécutive à l'insertion dudit nucléus dans l'huître perlière receveuse et le phénomène de rejet de nucléus. ETAT TECHNIQUE ANTERIEUR A L'INVENTION La perliculture est une activité humaine consistant en la culture, en milieu naturel, d'huîtres perlières Pinctada sp en vue de la production de perles de culture. La première étape concerne la collecte et l'élevage des huîtres perlières qui serviront soit d'huître donneuse soit d'huître receveuse. La greffe consiste en l'opération chirurgicale au cours de laquelle le greffon, une partie de l'épithélium du manteau de l'huître donneuse (environ 4 mm2) est inséré dans la poche perlière de l'huître receveuse, en combinaison avec une bille de nacre, le nucléus. Une fois insérée dans l'huître receveuse, la bordure épithéliale du greffon se multiplie et tapisse la poche perlière pour donner le sac perlier qui englobe le nucléus. Ledit sac perlier dépose des couches de nacre autour du nucléus, résultant en la production de la perle (Montagnani et al., 2009). Des mortalités et des rejets de nucléus se produisent pendant environ 45 jours après la greffe, à des taux variables. Ces phénomènes, qui touchent de 40 à 50% des huîtres dans les trois semaines suivant l'intervention, semblent résulter de pathologies infectieuses, ou d'une pratique de greffe inadaptée. Le développement d'une réaction inflammatoire suite à l'insertion du nucléus et la contamination par des bactéries pathogènes, combinées à l'absence de cicatrisation rapide des tissus incisés lors de la greffe sont probablement les causes principales de rejet de nucléus (Cochennec et al., 2010). Il existe donc un besoin de procédés ayant pour résultat la diminution du taux d'échec des opérations de greffe, se traduisant notamment par la diminution de la mortalité et du rejet de nucléus. La demande de brevet JP05219856 décrit l'insertion dans l'huître receveuse, pendant l'étape de greffe et en parallèle du nucléus ou au moyen du nucléus, d'un matériau solide contenant à sa surface un polymère associé à un antibiotique. Les demandes de brevet japonais JP02308869 et JP63215609 revendiquent l'utilisation d'un nucléus recouvert d'un polymère pour améliorer notamment la qualité des perles obtenues, en augmentant l'homogénéité de la surface du nucléus, et pour diminuer les phénomènes de rejet et de mortalité, en évitant par exemple la colonisation du nucléus par divers parasites. La demande de brevet japonais JP02174621 décrit l'utilisation d'un polymère naturel pour enrober le nucléus, associé à un agent antifongique, dans le but de limiter les contaminations lors de la greffe. Le brevet US6514614 décrit l'enrobage du nucléus par un polymère hydrosoluble, associé à une substance ayant une activité antibactérienne, ledit polymère étant partiellement dissous par l'eau de mer (le taux de dissolution étant supérieur à 25%) pour permettre une diminution effective des frictions et de la résistance à l'insertion dudit nucléus. Enfin, la demande de brevet japonais JP03183424 décrit un système d'enrobage du nucléus par un polymère hydrosoluble (ou par tout autre composé permettant une administration différée), permettant l'administration à un taux contrôlé d'un antibiotique associé audit polymère. Cependant, les publications citées ci-dessus ne résolvent pas le problème de la cicatrisation de l'incision pratiquée durant la greffe. D'autre part, l'utilisation d'antibiotiques pose un problème environnemental, du fait de leur biodégradabilité incomplète, et de santé publique par le biais du développement de résistances bactériennes. De façon surprenante, le déposant a remarqué que l'enrobage du nucléus par un film d'EPS (exopolysaccharides) permet de réduire le taux d'échec des opérations de greffe. Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, l'enrobage du nucléus par un film d'EPS permettrait d'accélérer la cicatrisation de l'huître receveuse. De plus, l'association dudit film d'EPS avec des agents bactéricides ou bactériostatiques, comme par exemple les peptides antimicrobiens (PAM), permet de diminuer l'occurrence de contaminations microbiennes. La présence des EPS seuls ou en combinaison avec un agent bactéricide ou bactériostatique permet ainsi de diminuer les échecs de l'étape de greffe, et notamment de diminuer la mortalité des huîtres receveuses et le rejet de nucléus par lesdites huîtres. RESUME L'invention a pour objet un nucléus revêtu d'un film comprenant un ou plusieurs exopolysaccharides (EPS). Selon un mode de réalisation de l'invention, le film comprend en outre une ou plusieurs molécules bioactives. Selon un mode de réalisation de l'invention, lesdites molécules bioactives sont choisies parmi un ou plusieurs agents bactéricides ou bactériostatiques, un ou plusieurs agents cicatrisants et/ou un ou plusieurs agents antiinflammatoires. Selon un mode de réalisation de l'invention, les EPS sont choisis parmi HE 800, EPS 721, MO245, GG1, HYD 657, HYD 1644, HYD 1545, GY 785, MS 907, ST 716, HYD 721, GY 772, HYD 750, GY 768, GY 788, BI746, GY 786, GY 685, GY 686, ST 719, HYD 1574, HYD 1579, HYD 1582, HYD 1584, ST 708, ST 722, ST 342, ST 349, HYD 1625, et HYD 1666, de préférence MO 245, HE 800, GG1, HYD 721 et ST 716. Selon un mode de réalisation de l'invention, le ou les agents bactéricides ou bactériostatiques sont choisis parmi les peptides antimicrobiens (PAM). Selon un mode de réalisation de l'invention, ledit PAM est choisi parmi la tachyplesine ou les défensines d'huitre Cg-Defs. L'invention a également pour objet un procédé d'obtention du nucléus tel que décrit ci-dessus, ledit procédé comprenant une étape d'enrobage du nucléus par les EPS par immersion dans une solution contenant 0.1 à 10 % en poids d'EPS par rapport au volume de la solution. Selon un mode de réalisation de l'invention, le procédé comprend : - une première étape telle que décrite ci-dessus, et - une seconde étape d'association d'un ou plusieurs agents bactéricides ou bactériostatiques avec le film d'EPS préalablement formé, par immersion dans une solution comprenant 1 à 10 CMI dudit ou desdits agents bactéricides ou bactériostatiques. Selon un autre mode de réalisation, le procédé d'obtention d'un nucléus revêtu d'un film comprenant un ou plusieurs EPS en combinaison avec un ou plusieurs agents bactéricides ou bactériostatiques comprend une étape d'enrobage du nucléus par les EPS et les agents bactéricides ou bactériostatiques, par immersion dans une solution comprenant 0.05 à 10 % en poids d'EPS par rapport au volume de la solution et 1 à 10 CMI dudit ou desdits agents bactéricides ou bactériostatiques. L'invention a également pour objet une huitre perlière comprenant un nucléus tel que décrit ci- dessus. L'invention a aussi pour objet l'utilisation du nucléus tel que décrit précédemment ou du procédé tel que décrit précédemment pour réduire l'échec de greffe d'une huître receveuse par un nucléus, ledit échec consistant en une mortalité ou un rejet du nucléus par l'huître perlière receveuse. DEFINITIONS Dans la présente invention, les termes suivants ont la signification suivante : - « Nucléus » : élément, généralement sphérique, formé d'un composé naturel (par exemple en nacre de moule du Mississipi, Amblema plicata) ou synthétique (par exemple 10 en Bironite) introduit dans l'huître receveuse lors de l'étape de greffe, et servant de support au dépôt de nacre par l'huître perlière receveuse. Ledit nucléus peut-être enrobé de substances particulières pour améliorer la qualité de la perle obtenue. - « Perliculture » : activité humaine ayant pour but la production de perle de cultures par des huîtres perlières, appartenant généralement du genre Pinctada sp. 15 - « Agent bactéricide » : substance ayant une action bactéricide, i.e. entraînant la mort des bactéries. - « Agent bactériostatique » : substance ayant une action bactériostatique, i.e. bloquant le développement, la croissance et/ou la division des bactéries. - «CMI » : concentration minimale inhibitrice. Elle correspond à la concentration minimale 20 à partir de laquelle un agent inhibe la croissance visible d'un microorganisme après incubation sur la nuit. Les méthodes de détermination de la CMI d'un agent sont bien connues dans l'état de l'art. - «Cicatrisant» : se dit d'un agent capable de favoriser la guérison, ou cicatrisation d'une blessure, plus précisément d'une blessure ouverte, telle une incision. 25 - « Environ » : placé devant un élément numérique, signifie plus ou moins 10% de cet élément numérique. - « Nacre » : structure biominéralisée formée de cristaux d'aragonite (constituant près de 90% de la nacre) et de conchyoline. L'aragonite est un composé chimique de formule CaCO3 + traces de Sr ; Pb ; Zn. 30 DESCRIPTION DETAILLEE En perliculture, la production de la perle résulte du dépôt de nacre sur un nucléus inséré dans l'huître receveuse lors de l'étape de greffe. L'étape de greffe du nucléus présente 35 généralement un taux d'échec élevé, du fait d'une faible cicatrisation de l'huître receveuse au niveau de l'incision pratiquée lors de la greffe ou de contaminations bactériennes. Ainsi, les5 nucléus utilisés en perliculture sont de plus en plus souvent recouverts d'un revêtement permettant de diminuer l'échec de l'étape de greffe. La présente invention concerne donc un nucléus revêtu ou enrobé d'un film comprenant un ou plusieurs exopolysaccharides (EPS). Le film d'EPS présenterait des propriétés cicatrisantes, permettant d'accélérer la cicatrisation des blessures induites par l'étape de greffe, et donc de réduire la mortalité de l'huître receveuse conduisant à l'échec de la greffe. Il a été démontré que certaines bactéries ont la capacité de synthétiser, dans des conditions contrôlées, des exopolymères dont les exopolysaccharides (EPS), en réponse à des conditions de déséquilibre nutritionnel. Les exopolysaccharides peuvent être définis comme des macromolécules formées de l'enchaînement de glucides similaires (appelés couramment sucres ou oses). Ces exopolysaccharides peuvent être produits à l'échelle industrielle, et possèdent, entre autres propriétés, des propriétés adhésives (liées à la fonction de ces molécules dans la nature) et filmogènes. Les EPS peuvent être produits par de nombreux microorganismes tels que des bactéries gram positive ou gram négative, des archeae, des champignons, et quelques algues. Les EPS peuvent être extraits à partir de cultures de microorganismes par des méthodes d'extraction physiques ou chimiques bien connues comme par exemple sonication, centrifugation, traitement alcalin, extraction à l'éthanol, extraction enzymatique... Selon un mode de réalisation de l'invention, les EPS peuvent être choisis parmi ceux produits par des organismes marins tels que Bacillus, Halomonas, Planococcus, Enterobacter, Alteromonas, Pseudoalteromonas, Rhodococcus, Zoogloea, Cyanobactéries, Vibrio, comme décrit dans Satpute et al. (Biotechnology Advances 2010, 28 :436-450). Si la taxonomie devait être modifiée, l'homme du métier pourrait adapter les modifications de taxonomie pour en déduire les EPS pouvant être utilisés dans l'invention. Selon un mode de réalisation de l'invention, les EPS peuvent être obtenus par fermentation de bactéries issues d'écosystèmes hydrothermaux profonds. Plus particulièrement, ces EPS sont ceux synthétisés dans des conditions contrôlées (déséquilibre nutritionnel généré par un rapport Carbone/Azote élevé dû à un milieu nutritionnel enrichi en carbohydrates) lors de la fermentation de bactéries issues d'écosystèmes hydrothermaux profonds (voir par exemple Guezennec, J. (2002). Deep-sea hydrothermal vents: A new source of innovative bacterial exopolysaccharides of biotechnological interest? Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 29: 204-208). Suivant un mode de réalisation, les EPS sont choisis dans le groupe comprenant les EPS non chargés (ou neutres), tels que par exemple GG1. Suivant un mode de réalisation, les EPS sont choisis dans le groupe comprenant les EPS chargés, tels que par exemple HE800 et MO245. Suivant un mode de réalisation, les EPS peuvent être choisis parmi HE 800, EPS 721, MO245, GG1, HYD 657, HYD 1644, HYD 1545, GY 785, MS 907, ST 716, HYD 721, GY 772, HYD 750, GY 768, GY 788, BI746, GY 786, GY 685, GY 686, ST 719, HYD 1574, HYD 1579, HYD 1582, HYD 1584, ST 708, ST 722, ST 342, ST 349, HYD 1625, et HYD 1666, de préférence MO 245, HE 800, GG1, HYD 721 et ST 716. Suivant un mode de réalisation, les EPS sont natifs. Suivant un autre mode de réalisation, les EPS peuvent être chimiquement ou physiquement modifiés (comme par exemple par ajout de groupement(s) sulfate, acétate, lactate, succinate ou pyruvate). . Selon un mode de réalisation de l'invention, le film d'EPS est continu autour du nucléus. L'invention a également pour objet un nucléus revêtu d'un film comprenant un ou plusieurs EPS et une ou plusieurs molécules bioactives. Suivant un mode de réalisation, ces molécules bioactives sont des agents bactéricides ou bactériostatiques. En perliculture, l'ajout d'un agent bactéricide ou bactériostatique sur le nucléus permet de limiter l'occurrence de contaminations bactériennes chez l'huître receveuse, pouvant conduire à un rejet du nucléus ou à la mort de ladite huître. Suivant un autre mode de réalisation, ces molécules bioactives sont des agents cicatrisants ou antiinflammatoires tels que collagène, fibrinogène, laminine, ou facteurs de croissance. Suivant un mode de réalisation de l'invention, les agents bactéricides ou bactériostatiques sont choisis parmi les antibiotiques chimiques comme par exemple la tétracycline, kanamycine, sulfamonométhoxyne, ampicilline. 30 Suivant un autre mode de réalisation de l'invention, les agents bactéricides ou bactériostatiques sont choisis parmi les peptides antimicrobiens (PAM). Les peptides antimicrobiens (PAM) sont des molécules effectrices de l'immunité innée, conservées au cours de l'évolution et répandues dans tout le règne vivant. Une grande variété de PAMs a été identifiée au cours des dernières années, révélant une grande diversité en termes de 35 structures, tailles et modes d'action. Les PAMs sont généralement caractérisés par une forte représentativité en acides aminés cationiques et hydrophobes. Ces molécules ont le plus souvent25 un caractère amphiphile essentiel pour leur interaction avec les membranes bactériennes (Bulet et al. 2004). Les PAMs tuent les microorganismes, soit en perméabilisant leur membrane par un effet de type détergent ou par la formation de pores, soit par le blocage de la synthèse de peptidoglycane composant la paroi bactérienne, soit encore par l'inhibition des voies métaboliques bactériennes (Brodgen et al., 2005). Par rapport aux antibiotiques chimiques généralement utilisés, les PAM présentent l'avantage d'être totalement biodégradables. Ils apparaissent comme de bons candidats en substitution aux antibiotiques chimiques conventionnels, du fait de leurs propriétés biologiques. En effet, ils présentent un large spectre d'activité antimicrobienne, peu de spécificité, différents modes d'actions, une innocuité sur le milieu. Les PAMs peuvent être produits par synthèse chimique ou par l'expression en système recombinant (clonage, expression, purification) bactérien ou levure. Suivant un mode de réalisation de l'invention, les PAM peuvent appartenir à la famille des PAM linéaires à hélice alpha, à la famille des PAM présentant une surreprésentation en un ou plusieurs acides aminés, à la famille des PAM à épingles à cheveux (bêta Hairpin) avec 1 ou 2 ponts disulfures, à la famille des PAM cycliques à feuillet bêta et hélice alpha avec 3 ponts disulfure ou plus (Bulet et al., Immunological reviews, 2004, 198: 169-184 ; Brogden, Nature Review Microbiology, 2005, 3 :238-250). Des exemples de PAM linéaires à hélice alpha incluent, mais ne sont pas limités à, cécropine, stomoxyne, ponéricine, spinigérine, l'oxyopinine, la cupiennine, clavanine, styeline, pardaxine, misgurine, pleurocidine, parasine, oncorhyncine, moronécidine, magainine, temporine, cathelicidine, indolicidine. Des exemples de PAM enrichis en un ou plusieurs acides aminés, proline, arginine, glycine, ou tryptophane, incluent, mais ne sont pas limités aux bacténicines, PR-39, abaecines, apidaecines, drosocine, pyrrhocoricines, Cg-Prp, prophenine, indolicine. Des exemples de PAM en épingles à cheveux contenant 2 à 4 cysteines incluent, mais ne sont pas limités à, la tachyplesine, la protégrine, la thanatine, l'androctonine, la gomesine, la polyphemusine, l'hepcidine, la brevinine, l'esculentine, la tigerinine ou la bactenecine. Des exemples de PAM cycliques contenant 6 ou plus résidus de cystéines ou à cycle ouvert incluent, mais ne sont pas limités à, défensines (de vertébrés, d'invertébrés ou de plantes), termicine, héliomicine, drosomycine, ASABF, pBD, pénaeidines, ALF, big-défensines. Des exemples de défensines d'invertébrés sont les défensines d'huitre Cg-Defs ou les défensines de moules MGD. Selon un mode de réalisation de l'invention, le PAM est choisi parmi la tachyplesine et les défensines d'huître Cg-Defs. Selon un mode de réalisation de l'invention, les PAM sont synthétisés par synthèse chimique. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, les PAM sont synthétisés par synthèse biologique en système recombinant bactérien ou fongique et de préférence, en système levure. La mortalité ou le rejet de nucléus consécutifs à la greffe de l'huître receveuse interviennent généralement durant les 45 jours suivant l'intervention, majoritairement pendant les 3 premières semaines suivant l'intervention. Selon un mode de réalisation de l'invention, les PAM sont associés avec ledit film d'EPS de façon stable. Selon un mode de réalisation de l'invention, le film comprenant des EPS et optionnellement des agents bactériostatiques ou bactéricides résiste au lavage par l'eau de mer et est stable pendant plus de 3 semaines, préférentiellement plus d'un mois à des températures variant entre 4 et 30°C. Selon un mode de réalisation de l'invention, l'association entre le film d'EPS et le ou les agents bactériostatiques ou bactéricides tels que les PAM résulte d'un phénomène d'adsorption ou d'une réaction chimique entre les EPS et lesdits agents. La présente invention concerne également un procédé de revêtement du nucléus de perliculture par un film comprenant un ou plusieurs exopolysaccharides d'origine bactérienne. Selon un mode de réalisation de l'invention, ledit procédé comprend une première étape d'immersion du nucléus dans une solution aqueuse d'EPS. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, ladite solution aqueuse d'EPS possède une concentration en EPS de 0.1 à 10 % poids/volume, plus préférentiellement de 0.5 à 5 %, encore plus préférentiellement de 1 % en poids d'EPS par volume de la solution aqueuse. Selon un mode de réalisation de l'invention, ladite première étape d'immersion du nucléus dans une solution contenant un ou plusieurs EPS est réalisée à une température constante, préférentiellement à température ambiante (i.e. de 15 à 25 °C), plus préférentiellement environ 20 °C. Selon ce mode de réalisation de l'invention, ladite première étape d'immersion du nucléus dans une solution contenant un ou plusieurs EPS est réalisée préférentiellement pendant 1 à 60 minutes, plus préférentiellement pendant 5 à 20 minutes, encore plus préférentiellement 10 minutes. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, ladite première étape d'immersion du nucléus dans une solution contenant un ou plusieurs EPS est réalisée à une température constante, préférentiellement de 1 à 10 °C, plus préférentiellement environ 4 °C. Selon ce mode de réalisation de l'invention, ladite première étape d'immersion du matériau dans une solution contenant un ou plusieurs EPS est réalisée préférentiellement pendant 1 à 3 heures, plus préférentiellement pendant environ 2 heures. Selon un mode de réalisation de l'invention, le nucléus enrobé est ensuite séché sous- vide. Lorsque le film enrobant le nucléus comprend également un ou plusieurs agents bactéricides ou bactériostatiques, la première étape décrite ci-dessus est suivie d'une seconde étape comprenant l'immersion du nucléus dans une solution comprenant un ou plusieurs agents bactéricides ou bactériostatiques à une concentration de 1 à 10 CMI. Selon l'invention, l'agent bactéricide ou bactériostatique est en solution dans un solvant polaire biologiquement acceptable tel que l'eau, l'éthanol, le trifluoroéthanol (CF3CH2OH, TFE) ou leur mélange comme par exemple eau/TFE, de préférence le trifluoroéthanol (CF3CH2OH). Selon un mode de réalisation de l'invention, la seconde étape d'immersion du nucléus est réalisée à une température constante, préférentiellement de 1 à 10 °C, plus préférentiellement environ 4 °C. Selon un mode de réalisation de l'invention, ladite seconde étape d'immersion du nucléus est réalisée préférentiellement pendant 24 à 120 heures, plus préférentiellement pendant 48 à 96 heures, encore plus préférentiellement 72 heures. Selon un mode de réalisation de l'invention, le nucléus enrobé est ensuite séché sous- vide. Selon un mode de réalisation de l'invention, ledit procédé comporte optionnellement une étape de rinçage du nucléus entre la première étape d'immersion et la seconde étape d'immersion. Selon ce mode de réalisation, le nucléus est rincé par un volume de 10 à 1000 mL d'eau distillée, préférentiellement 100 à 300 mL d'eau distillée, plus préférentiellement environ 200 mL d'eau distillée. L'invention a également pour objet un procédé d'obtention d'un nucléus revêtu d'un film comprenant un ou plusieurs EPS et un ou plusieurs agents bactériostatiques ou bactéricides, ledit procédé comprenant une seule étape d'immersion du nucléus dans une solution comprenant des EPS et des agents bactériostatiques ou bactéricides. Selon un mode de réalisation, les EPS sont présents dans la solution à une concentration de 0.05 à 10 % en poids par rapport au volume total de la solution, préférentiellement de 0.1 à 5%, plus préférentiellement à une concentration de 1%. Selon un mode de réalisation, les agents bactéricides ou bactériostatiques sont présents dans la solution à une concentration de 1 à 10 CMI. Selon un mode de réalisation, cette étape d'immersion est réalisée à une température constante, de 1 à 10°C, préférentiellement 4°C, et pendant 12 à 128 h, préférentiellement pendant 48 à 96 heures, et plus préférentiellement pendant 72h. Selon un mode de réalisation de l'invention, le nucléus est d'origine naturelle, plus préférentiellement ledit nucléus est en nacre de moule du Mississipi appartenant au genre Amblema sp., de préférence Amblema plicata. Des exemples de nucléus sont ceux vendus par Aming (Standard Aming) ou par Poe Import. Selon un mode de réalisation de l'invention, ledit nucléus a un diamètre de 1 à 20 mm, préférentiellement de 2 à 15 mm, plus préférentiellement de 2 à 4 mm, et encore plus préférentiellement de 2,1 à 3.5 mm. L'invention a également pour objet une huitre comprenant un nucléus tel que décrit ci-dessus ou obtenu par un procédé tel que décrit ci-dessus. De préférence, l'huitre appartient au genre Pinctada sp., plus préférentiellement, aux espèces Pinctada fucata, Pinctada maxima, Pinctada margaritifera. Selon l'invention, la présence d'un film autour du nucléus telle que décrit dans l'invention présente plusieurs avantages : - Amélioration de l'homogénéité de la surface du nucléus, et/ou - Amélioration de la qualité de la perle obtenue (limitation de l'apparition de défauts de surface), et/ou - Accélération de la cicatrisation de l'incision pratiquée pendant la greffe, et/ou - Action sur les cellules du greffon et du sac perlier améliorant l'élaboration de la perle, et/ou - Inhibition des phénomènes de contamination microbienne, et/ou - Réduction de la mortalité des huîtres receveuses par infection de l'incision. D'autre part, l'utilisation des PAM en tant qu'agent bactériostatiques ou bactéricides permet un meilleur respect de l'environnement par rapport à l'utilisation d'antibiotiques chimiques classiques, et de la santé, le muscle de l'huitre perlière pouvant être consommé cru. BREVE DESCRIPTION DES FIGURES La figure 1 est un assemblage de photos obtenues par microscopie à balayage, des nucléi non enrobé (a) et enrobés (b, c et d). Les marques correspondent à des déchirements volontaires afin de conforter la présence du film. La figure 2 est un assemblage de photos de boites de Pétri après la culture réalisée par des solutions bactériennes incubés avec des nucléus. (a) nucléus non enrobé ou enrobé avec EPS seul. (b) nucléus enrobé avec une combinaison EPS/PAM sans rinçage. (c) nucléus enrobé avec une combinaison EPS/PAM et rinçé à l'eau de mer ou à l'eau MilliQ. EXEMPLES La présente invention sera mieux comprise et interprétée au vu des exemples ci-dessous. 10 Exemple 1 : présence du film d'EPS Des nucléi ont été revêtus d'un film comprenant l'EPS MO245 et optionnellement de la tachyplesine. Ces nucléi ont été obtenus par un procédé en deux étapes : 1) immersion dans une solution comprenant 1% de MO245 pendant 2h à 4°C, 2) immersion dans une solution de TFE comprenant 70 mg/1 de tachyplésine (soit 10 15 CMI) pendant 72h à 4°C. La figure 1 obtenue par microscopie à balayage montre sans ambigüité la présence d'un film. Les figures b et c montrent la présence du film suite à une déchirure et la figure d montre que le film reste stable après lavage à l'eau et/ou au TFE. 20 Exemple 2 : Activité antimicrobienne Expérimentations : Des nucléi de diamètre standard ont été utilisés pour les études portant sur l'influence 25 d'un prétraitement des surfaces par des biopolymères issus de fermentation bactérienne. Les nucléi sont revêtu d'un film comprenant l'EPS MO245 seul ou en combinaison avec la tachyplésine. Ces nucléi sont obtenus par un procédé en une seule étape : immersion des nucléi dans une solution comprenant 0.1% de MO245 et optionnellement 70 mg/1 (soit 10 CMI) de 30 tachyplésine pendant 48h à 4°C. Certains nucléi ont été rincés avec 200 ml d'eau de mer ou d'eau MilliQ avant d'être séchés. Tous les nucléi ont ensuite été séchés sous vide. Un test classique d'inhibition de croissance bactérienne a été réalisé sur ces nucléi : les 35 nucléi ont été mis en contact avec une solution bactérienne en phase exponentielle de croissance de la souche Vibrio isolée de Pinctada margaritifera lors d'un greffe à Tahiti pendant 18h à 30°C.5 La solution bactérienne est ensuite étalée sur boite de pétri (milieu Zobell Agar) et les colonies développées sont ensuite comptées. La figure 2a montre que la présence de nucléi non enrobés n'inhibe pas la croissance bactérienne. Des résultats similaires ont été obtenus avec des nucléi revêtu uniquement par un 5 film comprenant des EPS. La figure 2b montre que la présence de nucléi revêtu par un film comprenant une combinaison EPS+PAM inhibe la croissance bactérienne. La figure 2c montre que l'activité antibactérienne des nucléi revêtus par un film comprenant une combinaison EPS+PAM est conservée après lavage des nucléi. 10 D'autre part, la stabilité de l'activité antimicrobienne a été étudiée dans le temps et contre le traitement par l'eau de mer (élément essentiel dans la cavité perlière de l'huître). Les résultats montrent que l'activité antimicrobienne d'un nucléus revêtu par un film comprenant une combinaison EPS+PAM est stable pendant au moins deux semaines à température ambiante 15 (18 à 21°c). REVENDICATIONS1. Un nucléus revêtu d'un film comprenant un ou plusieurs exopolysaccharides (EPS). 2. Le nucléus selon la revendication 1, caractérisé en ce que le film comprend en outre une ou plusieurs molécules bioactives. 3. Le nucléus selon la revendication 2, caractérisé en ce que la ou les molécules bioactives 10 sont choisies parmi des agents bactéricides ou bactériostatiques, des agents cicatrisants et/ou des agents anti-inflammatoires. 4. Le nucléus selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les EPS sont choisis parmi HE 800, EPS 721, MO245, GG1, HYD 657, HYD 1644, HYD 15 1545, GY 785, MS 907, ST 716, HYD 721, GY 772, HYD 750, GY 768, GY 788, BI746, GY 786, GY 685, GY 686, ST 719, HYD 1574, HYD 1579, HYD 1582, HYD 1584, ST 708, ST 722, ST 342, ST 349, HYD 1625, et HYD 1666, de préférence MO 245, HE 800, GG1, HYD 721 et ST 716. 20 5. Le nucléus selon l'une quelconque des revendications 3 à 4, caractérisé en ce que le ou les agents bactéricides ou bactériostatiques sont choisis parmi les peptides antimicrobiens (PAM), de préférence parmi la tachyplesine ou les défensines d'huître Cg-Defs. 25 6. Un procédé d'obtention du nucléus selon la revendication 1, ledit procédé comprenant une étape d'enrobage du nucléus par les EPS par immersion dans une solution contenant 0.1 à 10 % en poids d'EPS par rapport au volume de la solution. 7. Un procédé d'obtention du nucléus selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, 30 caractérisé en ce qu'il comprend : - une première étape selon la revendication 6, et5 une seconde étape d'association d'un ou plusieurs agents bactéricides ou bactériostatiques avec le film d'EPS préalablement formé, par immersion dans une solution comprenant 1 à 10 CMI dudit ou desdits agents bactéricides ou bactériostatiques. 8. Un procédé d'obtention du nucléus selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend une étape d'enrobage du nucléus par les EPS et les agents bactéricides ou bactériostatiques, par immersion dans une solution comprenant 0.05 à 10 % en poids d'EPS par rapport au volume de la solution et 1 à 10 CMI dudit ou desdits agents bactéricides ou bactériostatiques. 9. Huître perlière comprenant un nucléus selon l'une quelconque des revendications 1 à 5. 10. Utilisation du nucléus selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou du procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 8 pour réduire l'échec de greffe d'une huître receveuse par un nucléus, ledit échec consistant en une mortalité ou un rejet du nucléus par l'huître perlière receveuse. 11. Procédé d'obtention de perle, comprenant la greffe d'un nucléus selon l'une quelconque 20 des revendications 1 à 5 en combinaison avec une partie de l'épithélium du manteau de l'huître donneuse dans la poche perlière de l'huître receveuse.