Brevet FR2962879A1 — publié le 20120127

DESCRIPTION DE L'INVENTION TITRE BIOFERTILISATION D'UNE CULTURE VIA L'AZOTOBACTÉRISATION DE LA CULTURE PRÉCÉDENTE DOMAINE TECHNIQUE DE L'INVENTION Le domaine technique de l'invention concerne la biofertilisation bactérienne, notamment azotobactérienne des grandes cultures agronomiques. II est question de production et d'utilisation inocula contenant des Azotobacteraceae. ÉTAT DE LA TECHNIQUE Valorisation microbiologique des résidus de culture au sol par inoculation azotobactérienne Les BFCP (bactéries favorisant la croissance des plantes) colonisent, outre les racines de certaines cultures, les résidus de cultures (pailleux), les engrais organominéraux et/ou les 20 biomasses racinaires résiduelles. Les BFCP appartiennent à plusieurs genres, y compris Agrobacterium, Alcaligenes, Arthrobacter, Azotobacter, Bacillus, Cellulomonas, Erwinia, Flavobacterium, Pseudomonas, (Brady)rhizobium et Xanthomonas. Les bactéries membre de la famille Azotobacteraceae sont de bactéries libres, aérobies et capables de fixer l'azote de manière non symbiotique. Leurs populations peuvent varier dans le sol mais ne dépasse que très rarement 25 102 à 103 par gramme de sol. Le genre Azotobacter est en principe composé de plusieurs espèces ; eg. Azotobacter armeniacus, Azotobacter beijerinckii, Azotobacter chroococcum, Azotobacter nigricans, Azotobacter paspali et Azotobacter vinelandi. La valorisation microbiologique des résidus de culture pailleux au sol - notamment via leur 30 azotobactérisation (Claude et Fillion 2004), permet aux BFCP de s'affranchir du flux photosynthétique de la plante ; cette autonomie relative minimise la ponction des réserves glucidiques de la culture, ponction qui autrement pourrait devenir à terme contreproductive. II est aussi possible de valoriser de la sorte des matières organo-minérales apportées au sol soit entant qu'engrais starter (Claude et Giroux 2006) et/ou fumure de fond, en pré-semis de culture 35 intermédiaire piège à nitrate (Cipan). Or, ces pratiques culturales nécessitent cependant la pulvérisation exprès des résidus de culture au sol et/ou l'application d'une fumure de fond ou d'un engrais starter organo-minéral. Or, ces pratiques culturales engendrent des coûts et remettre en question l'utilisé agronomique de ces pratiques innovantes. Par exemple, la pulvérisation azotobactérienne des résidus de culture au sol est difficilement justifiable économiquement sur la15 2 seule base de sont efficacité agronomiques, soit en terme d'augmentation des rendements - quelques quintaux de céréales, et/ou soit en terme de réduction des besoins en engrais azotée - environ 25 à 33 kg par hectare généralement (Claude et Fillion 2004). Pire, l'application d'engrais NP, mêmes organo-minéraux, n'est pas recommandée sur céréales d'hivers ; l'acheminement d'inocula BFCP incorporés à de tels engrais n'est donc praticable que pour les semis de printemps (Claude et Giroux 2006) une fois les résidus de culture pailleux au sol dégradés en bonne partie. Endo - et épiphytes dans les phyllosphères Les endophytes bactériennes sont des bactéries capables de coloniser les tissus internes de la plante sans être phyto-pathogène à son égards (Ryan et al. 2008). II est reconnu que de telles bactéries peuvent coloniser I'apoplasme, les espaces intercellulaires, les cellules aerenchymènes ainsi que les vaisseaux du xylème. Leurs contributions au bilan azoté de la plante, au rendement et à l'efficacité pondérale des engrais sont cependant marginales, et cela vraisemblablement le fait du coût métabolique trop important de cette proto-symbiose capable de ponctionner le flux photosynthétique de la plante. En effet, et bien que l'infestation histologique des racines (rhizosphère) et/ou du feuillage (phy/losphère) par certaine bactéries - eg. Azorhizobium caulinodans, soit effective (voir O'Callaghan et al 2000), ces endophytes ne sont pas véritablement conséquents en agronomie. En effet, les données dans AU 2004903788 (WO 2006/005100 AI) indiquent que les teneurs en N des feuilles peuvent augmenter par rapport à divers témoins, mais les rendements agronomique ne sont pas rapportés. Les bactéries épiphytes elles ne font que - en principe, coloniser la surface des phyllosphères. Ces épiphytes sont pourtant très présentes, à hauteur d'environ 107 cellules par gramme de feuillage (Mercier et Lindow 2000), mais ne disposent naturellement que de quelques ug/gfeuillage de sucres assimilables, soit l'équivalent de quelques dizaines de grammes par hectare (Mercier et Lindow 2000 ; Johan et al. 2001). Une activité diazotrophe agronomiquement conséquente à partir d'aussi petites quantités de substrats est donc impossible. Il existe aussi des épiphytes bactériennes méthylotrophes, notamment les PPFM (pink pigmented facultative methylotrophes ; WO 1999/043632 AI) pouvant servir d'inocula foliaires. L'éventuel effet phytogène de tels inocula PPFM dépend essentiellement de la production de cytokines en présence de méthanol et d'azote fertilisant. Or, les apports de méthanol préconisés sont de l'ordre de 100 L par ha, quantité onéreuse et coûteuse par rapport aux bénéfices agronomiques escomptés. L'état de la technique comprend aussi une invention à base de PPFM, mais cette fois- ci destinée uniquement aux traitements de semences, et sans pour autant revendiquer des augmentations de rendements (US 2006/0228797 AI). Stades d'inoculation des épi/endophtytes Pour la plupart des études consultées (Beattie et Lindow 1994 ; Gyaneshwar et al. 2001 ; Lambert et al. 1990 ; Mazzola et White 1994 ; Wilson et al. 1999 ; Elbeltagy et al. 2001) les plantules de fèves, de riz, de betteraves ou d'avoine sont inoculées bien avant les stades Z 55-59, soit généralement avant même les stades 39-40, i.e. avant le développement des parties sexuées et/ou récoltables (épis, grains, etc.). Il existe cependant quelques exceptions. Murty 1984 mentionne le prélèvement de plantules de coton non-inoculés aux stades Z 55-59 ; il s'agit cependant de prélever que des épiphytes - aucun endophytes, présents naturellement et du coup peu/pas conséquents en terme de diazotrophie (i.e. 1 à 3 kg-N / ha / an). Dans le cas de Sabaratnam et Beatie 2003, l'inoculation des Pseudomonas à la fin de la floraison du maïs (Z 69-71) servit seulement à comparer le comportement histologique des biovars patho - et non-pathogéniques. Or, à ce stade, seules les biovar pathogéniques purent infester - même que superficiellement et cela que via les stomates, l'intérieur des feuilles ; les biovars non-pathogéniques concernés par la présente invention, n'eurent aucune impacts histologiques. Enfin, seul Lovell et al. 2001 mentionnent une infestation des résidus végétaux - des matières sèches des parties aériennes (MSPA) dans les faits, « sur pieds » plutôt qu'au sol. Cela dit, il ne s'ait pas ici d'une culture agronomique mais bien de Spartina alterniflora, une Poaceae sauvage des marais salés des côtes du sud-est américain et du golf du Mexique. Sans nier l'importance écologique de ces biomasses, y compris notamment des taux appréciables de la diazotrophie aérienne qu'elles comportent, il ne s'agit ici aucunement de grandes culture agronomique, et encore moins de procédés pour leur biofertilisation (azoto)bactérienne. Croissance, développement et maturation (sénescence) des parois végétales La paroi végétale est de texture dispersée, riche en eau et rigide tout en conservant une plasticité 25 qui permet sa croissance sous l'influence des auxines. La fin de la croissance cellulaire dans les parties végétative de la plante - aux alentours des stades Z/BBCH 55-59, s'accompagne habituellement d'un verrouillage de la paroi grâce à la formation de ponts diphénols covalents entre les polypeptides et les acides hydroxy-cinnamiques des hémicelluloses pariétaux. Cette fin de la croissance cellulaire et la mise en place de la paroi secondaire plus cellulosique sont intimement 30 liées car la rigidité pariétale qui en résulte limite et puis stoppe la plasticité de la paroi primaire. Chronoloqie et cinétique La croissance, le développement et la maturation des parois squelettiques en paroi primaires et 35 secondaire est la résultante d'une méthylation des précurseurs pectiques, leur incorporation dans et/ou sur la paroi - par intusseception dans un premier temps, et par apposition par après (Heller et al. 2007 ; pp 55-57), et la dé-méthylation et calcification spontanée de ces mêmes composés pectiques. Il en résulte que la paroi est le siège de deux tendances - élongation par relâchement et solidification par calcification, la prédominance d'une sur l'autre dictant si la paroi croît ou non. 40 -4- La croissance et le développement des parois végétale est comme de raison beaucoup plus forte pour les tissus jeunes qu'histologiquement plus développés. Or, cela vaut aussi pour les émanations de méthanol à la surface de la phyllosphère en raison de la dé-méthylation des pectines lors de leur calcification sous forme de pectate. Ces émanations sont aussi beaucoup plus fortes le jour, notamment en conditions de fortes irradiations et/ou de température élevés. Enzymoloqie Bien que constitutives, les pectines sont relativement - par rapport aux non-Poaceae, peu présentes dans les parois des Poaceae. Les composés pectiques représentent 35% (p/p) des parois primaires des non-Poaceae (di-cotylédons et mono-cotylédon non-Poaceae), mais à peine 2 à 10% des parois primaires des Poaceae (Wolf et al. 2009). II existe de nombreuse pectinases telles que la PME (pectin methylesterase) ; elles sont classées selon leurs modes d'actions entant que lyases (pectate lyase ; EC 4.2.2.10), transferases (polygalactruonase ; EC 3.2.1.15), ou encore la susdite et maintenant fameuse pectin methylesterase, ou PME (pectinesterase ; EC 3.1.1.11). C'est surtout cette dernière pectinase qui nous intéresse ici cars elle est impliquée dans la libération de méthanol vers la surface de la phyllosphère (i.e. le phylloplan). Les auxines - l'IAA du moins, agissent sur les PMT (pectin methyltransferase ; EC 3.1.1.11) mais non sur les PME (pectin methylesterase ; EC 2.2.2.4). Les contribuent donc à la méthylation des composés pectiques, mais non à leurs déméthylation. L'action des auxines sur la croissance par élongation des parois squelettique ce fais donc d'une part via la méthylation des précurseurs pectique - au niveau du réticulum endoplasmique il semble, et d'autre part via la déstabilisation du squelette calcifié (pectate) formé à partir de ces précurseurs. La dé-méthylation elle - en présence d'ions calciques, au contraire contribue à la calcification de la paroi squelettique. Implication des auxines (IAA) et de l'acide abcissique (ABA) La présence d'auxines, et plus particulièrement d'IAA, en quantités micro-molaires (uM) en proximité de cellules végétales stimule fortement le développement et la croissance de leurs parois primaires, surtout, mais secondaires aussi. Cette croissance et ce développement des parois induits par l'IAA est associée à une acidification appréciable de l'apoplasme provoquant ainsi un relâchement des parois ; sous l'effet de la turgescence cellulaire, elles ce distendent et reçoivent entre les mailles écarté de leurs parois de nouveaux éléments constitutifs. On parle ici de croissance par intussuception (Heller et al. 2000 ; pp 5-7). Sans omettre une action génique des auxines capable de réguler la synthèse la synthèse de mRNA codant pour des protéines nécessaires à ce type de croissance des parois. Cette théorie - dite « acid growth theory », est maintenant et toujours réputé (Lüthen et al. 1990 ; Rayle et Cleland 1992 ; Cosgrouve 2001 ; Vanderhoef et Dute 1981 ; Mentze et al. 1977 ; Proseus et Boyer 2007). Cette théorie est donc surtout applicable aux tissus jeunes en plein croissance (coléoptiles, radicelles, jeunes feuilles et - tiges excisées, etc. ; elle n'est jamais évoquée en ce qui concerne le traitement des tissus histologiquement plus mature, par exemple au-delà des stades Z 55-59. L'IAA favorise donc la méthylisation des composés pectiques intégrables aux parois squelettiques lors de leur élongation par relâchement des liens (ponts) calciques dû à une acidification de l'apoplasme. C'est le constat que l'élongation de la paroi squelettique des cellules végétales induite par l'IAA et la méthylisation de leurs précurseurs pectiques elle aussi induite par l'IAA sont néanmoins indépendantes l'une de l'autre qui amena la formulation de la théorie de la croissance par acidification (acid growth theory ; voir la bibliographie séminale - Ordin et ai 1955, Ordin et al. 1957, Cleland 1962, 1963, Sato 1960 et Ray et Baker 1964, etc.). Production concomitante de méthanol de VOC C'est la prédominance de polymères pectate au dépends de pectines méthylées qui est associé à la libération du méthanol des feuilles. La méthylisation des composés pectiques de la paroi par l'action de la PME permet par après la formation spontanés de pont calciques entre les groupements carboxyliques de la pectate, solidifiant ainsi la paroi. Le groupement méthyle lui est - en conditions aérobies, transformé de facto en méthanol émis par les stomates. Donc, bien que les plantes ne synthétisent pas de novo du méthane (Nisbet et al.2009), elles sont néanmoins - en raison du susdit métabolisme pectique des parois squelettiques, capable d'émettre du méthanol. Chez beaucoup d'espèces - essentiellement des non-Poaceae, ces émissions de méthanol sont abaxiale plutôt qu'adaxiale, très corrélés à la conductivité des stomates, rage et/ou ou la position de la feuille - les feuille plus jeune au sommet de la plante étant plus émettrices, voire à l'application de l'acide abcissique (ABA ; Nemecek-Marshall et al. 1995). Ce méthanol est comme de raison le substrat privilégiée des bactéries méthylotrophes, y compris donc les susdites pinkpigmented facultative methylotrophes (PPFM ; Fall et Benson 1996). Enfin, il est important de noter que ces émissions de méthanol ne sont pas directement - mais qu'accessoirement via la méthylisation initiale des précurseurs pectique, sous contrôle des auxines. Rôle des auxines - et de leurs précurseurs, dans la colonisation de la phyllosphère La biosynthèse des auxines - généralement à partir du tryptophane (TRP) peut être effectuée par six (6) voies métaboliques distinctes (voir Spaepen et al. 2007), les trois premières étant les plus 35 reconnues et répandues ; - IAM (via l'intermédiaire indole-3-acetamide) - IPyA (via l'intermédiaire indole-3-pyruvate) - TAM (via l'intermédiaire tryptamine) 40 - TSO (dit via le tryptophan side-chain oxidase) - IAN (via l'intermédiaire indole-3-acetonitrile) - Indépendamment du TRP 2962879 -6 Il est reconnu que les auxines bactériennes peuvent avoir soit un effet phytogène - rhizogène en particulier, soit phytopathogène. II est généralement reconnu que les bactéries produisant des auxines via le parcours IAM (Vanderhoff et al. 1981) - parcours particulièrement présent chez les 5 bactéries et généralement absent chez les plantes, sont plutôt pathogènes, tandis que celles produisant des auxines via le parcours IPyA - la voie métabolique la plus présente chez les plantes, le sont beaucoup moins ; elles sont mêmes parfois phytogènes (Glickmann et Dessaux 1995). Cette prépondérance du parcours IAM chez certains microorganismes phytopathologique est exploitée ; Robinson et al. 1998 et Maor et al. 2004 rapportent que le mycoherbicide 10 Colletotrichum glucosporiodes produit effectivement l'essentiel de son IAA via IAM. Or, cette apparente prépondérance à la phytopathogénécité des bactéries produisant des auxines via IAM serait tributaire du fait que - peu présent chez les végétaux, ce parcours métabolique ne générait peu ou pas des intermédiaires moléculaires provoquant chez la plante une rétroaction 15 négative de cette production d'auxine (Patten et Glick 2002, et Patten et Glick 1996 ; Can. J. Microbiol. 42 :207-220) ; la bactérie peut donc fabriquer sans encombre une quantité d'auxines trop importante pour les besoins et/ou le bon fonctionnement de la plante et sans égards pour la santé de celle-ci. Au contraire, les bactéries produisant l'IAA via IPyA verront leurs production de cette phytohormone fortement contrainte - à l'avantage de la plante, une fois un seuil 20 physiologique attient, par la rétroaction négative que provoquera la présence de métabolites intermédiaires facilement reconnus comme tels par la plante. En accord avec ce probable rôle des auxines dans la croissance, le développement, et la maturation des parois végétales, y compris et notamment au sein de l'apoplast, c'est donc par 25 l'entremise de l'action des auxines que certaines bactéries endo/épiphytes sécrètent que des substrats carbonés peuvent « fuir » (leak) vers la surface de la phyllosphère (Brandi et al. 2001 ; Brandi et Lindow 1998). Cette fuite des produits de la photosynthèse, bien qu'en principe dommageable pour la plante, contribue donc à la compétence épiphytique de certaines bactéries. 30 DIVULGATION DE L'INVENTION Problème technique La bactérisation des résidus de culture pailleux au sol, bien qu'une source abondante de substrat carboné pour les Azotobacteraceae, est problématique en ce qu'elle nécessite un passage dédié d'un pulvérisateur tracté ou porté, passage relativement énergivore et souvent difficilement justifiable à la vue de l'efficacité relative actuel de ce type de bactérisation des résidus de culture au sol, soit de l'ordre de 2 à 3 quintaux de céréales, ou l'équivalent de 25 à 33 kg d'N par hectare économisés. Il serait donc avantageux d'apporter les Azotobacteraceae pré - récolte lorsque la culture précédente est toujours « sur pieds ». Pour ce faire, il faut cependant s'assurer que les Azotobacteraceae puissent par la suite survivre au sein de la phyllosphère sénescente, et du coup servir de facto à inoculer les résidusphères une fois ces résidus de culture pailleux incorporés en surface de sols arables. La grande culture d'hiver non-Fabaceae suivante pourra donc bénéficier de cette biofertilisaiton Azotobacteraceae. Cela dit, la présence de tels épi-lendophytes pourrait aussi ponctionner le flux photosynthétique de la culture et réduire les rendements agronomiques de ladite culture précédente. II faudra donc aussi chercher à minimiser cet impacte agronomique sur la culture précédente recevant directement l'inoculum Azotobacteraceae. Solution technique Pour ce faire, je propose d'apporter un inoculum Azotobacteraceae directement à la phyllosphère de la culture précédant le semis d'une grande culture d'hiver non-Fabaceae. Cette culture 15 recevant le dit inoculum sera comme de raison avantageusement une céréale à paille produisant une quantité de résidus pailleux. Nous pouvons envisager ce type d'infestation comme une façon de bactériser les résidus de culture « sur pieds » plutôt « qu'au sol » ; après la récolte, les bactéries qu'abritent les pailles et chaumes pourraient effectivement entrer en jeux et valoriser ces résidus comme substrat carboné d'autant plus rapidement. Encore faudra-t-il que cette infestation 20 des Azotobacteraceae ainsi réintroduites dans la phyllosphère de la culture précédente toujours « sur pieds » ne nuise pas à la translocation des produits photosynthétiques vers les grains. Cette pseudo-pathogénécité peut être assurée en gérant au mieux le moment de l'application d'éventuelles Azotobacteraceae (AZB), et en ajoutant une dose de tryptophane (TRP) précurseur 25 d'IAM et/ou d'IAA responsables en partie de cette colonisation. En effet, la production d'IAA via le parcours IAM - plutôt qu'IPyA moins pathogène, devrait favoriser l'incrustation des cellules Azotobacteraceae dans la phyllosphère, phyllosphère en voie de devenir prochainement une résidosphère, sans pour autant provoquer une pathologie pour autant. En effet, un stade d'application aux environs de Z 55-59 et au plus tard avant Z 73-75, nous assure que la 30 pathogénèse des Azotobacteraceae n'a aucune chance - faute de temps, de ce réaliser. En effet, si appliqués stratégiquement dans cette interstice phénologique Z55 : Z75, infectuosité des Azotobacteraceae sur la culture précédente s'avérera probablement inconséquente en terme d'élaboration du rendement, et favoriser par après la présence des Azotobacteraceae dans la 35 résidusphère issue de l'incorporation au sol de cette phyllosphère. Le potentiel de croissance pariétale des dernières feuilles (i.e. les feuilles les plus « jeunes » en haut de la plante) est donc très faible ; l'application d'auxines - et/ou plus simplement d'une de leurs précurseurs tel que le tryptophane (TRP), à ce stade serait dont a première vue incongru aux yeux de l'homme de métier. J'ai schématisé graphiquement à la Figure 1 l'intensité des activités liées à la croissance des paroi 40 végétale (croissance pariétale) de donc à la croissance et au développement des feuilles d'une céréale selon la position - et donc l'âge, de la feuilles, les feuilles (nos. 6-7) du haut de la plante 10 8- étant plus jeunes que celles au bas (nos. 1-2) de la plante. A noter qu'une fois un certain stade de développement franchi - i.e. aux alentours de Z 55-59 (pleine épiaison), les différences entre la croissance pariétale des différentes feuilles d'estompe. Il est donc aussi a priori incongru pour l'homme de métier d'appliquer des auxines et/ou leurs précurseurs sur des tissues histologiquement matures, il est tout aussi inutile - en principe, de le faire peu après le début de l'anthèse, disons au alentour du stade Z 65-69. En effet, chez les plante, et notamment les angiosperme y compris les céréales (Poaceae), les teneurs en auxines endogènes ré-augmentent appréciablement, vraisemblablement du fait du développement rapide des grains de pollens en germination, des ovules, des caryopsis et l'ensemble des l'appareil reproducteur, fécondé le cas échéant, ces processus nécessitant comme de raison un développement rapide des parois végétales. Cela dit, cette ré-augmentation des teneurs en auxines est cette fois-ci surtout limité aux parties florales et reproductives (Lur et Setter 1993 ; Yang et al. 2001) ; les feuilles elles tendent à rapidement s'appauvrir en auxines (Jin juan et al. 2004). Entre les stades de mi-épiaison (Z 55-59) et de mi-floraison (Z 65-69) il existe donc une « fenêtre » pendant laquelle les teneurs en auxines des tissues - reproducteurs et végétatifs, sont relativement faibles, fenêtre de deux à trois semaines pendant laquelle l'apport d'IAA exogène pourrait donc être conséquente agronomiquement. J'ai schématisé graphiquement à la Figure 2 la teneur en auxine (IAA) des plantes (céréales) selon leurs stades de croissance et de développement Z (i.e. selon Zadok et/ou BBCH). Entre les stades Z 55-59 et au-delà de Z 73-75, soit temporellement une période d'au moins 2 à 3 semaines en milieu tempéré (France), les teneurs en IAA de la plante - y compris donc des parties florales et reproductives post Z 70, sont en principe faibles. Cet interstice entre Z/BBCH 55 : 75 représente donc une fenêtre d'opportunité pour la mise en oeuvre de la présente invention. La croissance et le développement cellulaire des parois squelettiques est comme de raison beaucoup plus dynamique aux stades BCH 31-40 qu'aux stades Z 55-59. A ces stades plus avancés, les feuilles sont histologiquement matures, et les phénomènes a-d ne sont plus considérés par l'homme de métier comme importants. Or, nous avons pu observer que cette atténuation des processus de croissance et de développement peut en soi être mise à contribution. En présence d'inocula Azotobacteraceae ce relâchement très partiel de la paroi squelettique peu propice à une infestation (incrustation) importante, voire pathogénique, des feuilles, permet néanmoins une infestation très limitée - nécessairement non-pathogénique, des phyllosphères, du moins suffisamment pour permettre auxdites Azotobacteraceae de « s'incruster » dans ces MFPA toujours « sur-pieds », i.e. dans les faits des résidus de culture pailleux (au sol) en devenir. Pour faire simple, disons que l'invention permet de cibler l'interstice phénologique entre la maturation histologique des parties végétatives (Z 55-59) et la maturation physiologique des parties reproductives (Z 73-75), et cela au profit de la culture suivante, mais et surtout pas au dépends de la culture en cours.40 -9- Enfin, dans la mesure où les Azotobacteraceae, comme les Pseudomondaceae, produiraient des auxines (IAA) principalement via IAM plutôt que via IPyA, intermédiaire qui s'avère rétroagir négativement avec la production d'IAA du fait de sont implication dans la synthèse d'IAA chez la plante - ce qui n'est pas le cas avec pour IAM, leurs présences dans les phyllosphères pourraient être ainsi mieux assurées. Il est donc en principe - tenant compte du susdit interstice phénologique, d'utiliser des Azotobacteracea IAM positives dans l'inoculum. Il y a donc deux composantes à la solution technique ; - une application stratégique, dès les stades Z 55-59 et au plus tard aux alentours des stades Z 73-75, d'un inoculum d'Azotobacteraceae (AZB) productrices d'auxines (IAA), et cela avantageusement via l'intermédiaire IAM plutôt qu'IPyA ; - un précurseur d'auxines - le tryptophane (TRP) au sein de la formulation inoculantes ; Plus précisément il s'agit d'un procédé de biofertilisation d'une culture à l'aide d'un inoculum Azotobacteraceae appliqué aux feuillages d'une précédente culture caractérisé en ce que l'inoculum est apporté dans l'interstice phénologique compris entre le stade de maturité histologique des parties végétatives et le stade de maturité physiologique des parties reproductives de cette précédente culture toujours « sur pieds » et produisant à terme une quantité de résidus pailleux incorporables en surface de sols arables. La culture est une grande culture d'hiver non-Fabaceae comprise dans un groupe comprenant les cultures céréalières à pailles, le colza, le lin, voire une culture intermédiaire piège à nitrate (Cipan). Le stade de maturité histologique des parties végétatives de la précédente culture est conforme aux stades phénologiques compris entre indices 55 et 59 des échelles dites de Zadok et/ou BBCH, tandis que le stade de maturité physiologique des parties reproductives de la précédente culture est conforme aux stades phénologiuqes compris entre les indices 73 et 75 des échelles dites de Zadok et/ou BBCH. La quantité de résidus pailleux incorporables en surface de sols arables est de l'ordre d'au moins 5 à 8 tonnes par hectare et elle n'est pas récoltée mais laissée au sol pour fin d'incorporation. De plus, l'inoculum Azotobacteraceae contient avantageusement des cellules bactériennes produisant des auxines principalement via l'intermédiaire métabolique qu'est l'IAM (indole-3-acetamide) ; il comprend avantageusement entre 1 et 10 x 1012 cellules Azotobacteraceae par dose-hectare. Cet inoculum comprend aussi par dose-hectare une certaine quantité d'auxines, voire plus avantageusement de leurs précurseurs tel que le tryptophane, soit entre 1 et 50, plus particulièrement entre 5 et 25, et avantageusement entre 10 et 20 g de tryptophane par dose- hectare. Il s'agit donc aussi d'un inoculum Azotobacteraceae pour la biofertilisation d'une grande culture d'hiver non-Fabaceae appliqué au feuillage d'une précédente culture produisant une certaine quantité de résidus de culture pailleux. L'invention est avantageusement, mais non exclusivement, mise en oeuvre avec un agent azoto- nutritionnel (ANN) foliaire appliqué aux alentours des stades Z 55-59. Il existe tels ANN - notamment PhyléasTM qui peuvent avantageusement être intégrés à la bouillie pulvérisable. Cette 2962879 -10- pulvérisation desdits ANN étant en soi défendable d'un point de vue azoto-nutritionnel, l'apport des Azotobacteraceae peut être à ce stade perçue que comme co-formulant plutôt que comme matière active vis-à-vis de la culture en cour. A ce stade, les cultures peuvent encore bénéficiers de l'application de produits phytosanitaires et/ou de certains agents azoto - nutritionnels (ANN). 5 L'application des produits, notamment dudit ANN, permet de véhiculer cet inoculum Azotobacteraceae et évite le recours à un passage dédié du pulvérisateur. Cette notion d'inoculer les résidus « sur pieds » est nouvelle et ne fait l'objet d'aucun développement commercial, exception fait encore une fois de la canne à sucre. Pour cause ; un 10 éventuel effet positif sur le rendement et/ou la fourniture en azote ne sera détectable que sur la culture suivante (Cipan ou culture de rapport). Avantages apportés et activité inventive 15 L'invention permet de bactériser les résidus de culture pailleux « sur - pieds » avant la récolte d'une culture céréalière. Les résidus de culture au sol sont dont en ce sens « pré - inoculés » avant même leur enfouissement, ce qui facilite grandement ce type de biofertilisation azotobactérienne en réduisant ses coûts d'implantation. En effet, il n'est plus nécessaire de prévoir un passage pulvérisateur dédié expressément à l'inoculation des résidus de culture au sol. 20 Apporter des biomasses azotobactériennes à ce stade (voir Figure 2) - y compris avec du TRP, est contre-intuitif et contraire aux habitudes de l'homme de métier. En effet, chercher à agir sur la décalcification - et donc l'élongation, par relâchement des parois squelettiques des Poaceae histologiquement mature - i.e. au-delà de Z 55-59, est contraire aux préjugés et habitudes de 25 l'homme de métiers ; i.e. à ce stade - i.e. post Z55-59, l'élongation par décalcification est jugée comme inutile puisque la méthylation des précurseurs de la pectine est à toute fin pratique en bout de course, et pourrait être en e sens contreproductive. En effet, et pour ce qui concerne les cultures céréalières et d'un point de vue histologique plutôt que physiologique, les feuilles et les tiges sont matures dès les stades Z55-59 atteints. Intervenir à ce stade avec un inoculum 30 azotobactériens afin de coloniser que partiellement les phyllosphères dans l'espoir de provoquer un quelconque effet BFCP est un contresens aux yeux de l'homme du métier. Idem pour ce qui concerne l'application d'auxines et/ou de leurs précurseurs ; l'élongation des parois n'étant plus d'actualité, aucun effet positif n'est à espérer. 35 BRÈVE DESCRIPTION DES DESSINS ET FIGURES Figure 1 : Représentation graphique schématisée de l'intensité des activités liées à la croissance des paroi végétale (croissance pariétale) de donc à la croissance et au développement des feuilles d'une céréale selon la position - et donc rage, de la feuilles, les feuilles (nos. 6-7) du haut de la plante 40 étant plus jeunes que celles au bas (nos. 1-2) de la plante. A noter qu'une fois un certain stade de développement franchi - i.e. aux alentours de Z 55-59 (pleine épiaison), les différences entre la 2962879 -11- croissance pariétale des différentes feuilles d'estompe ; a - répartition des taux de croissance pariétale avant Z 55-59, b - répartition des taux de croissance pariétale après Z 59. Figure 2 : Teneur en auxine (IAA) des plantes (céréales) selon leurs stades de croissance et de développement (Z). Entre les stades Z 55-59 et au-delà de Z 73-75, soit temporellement une période 5 d'au moins 2 à 3 semaines en milieu tempéré (France), les teneurs en IAA de la plante - y compris donc des parties florales et reproductives post Z 73-75, sont très faibles. Cet interstice phénologique Z 55 / 75 représente donc une fenêtre d'opportunité pour la mise en oeuvre de la présente invention. Figure 3 : Représentation graphique des augmentations de l'efficacité relative de l'azotobactérisation des résidus de culture pailleux « sur pieds » - des phyllosphères sénescentes (erAZB), au sens de la 10 présente invention en termes de divers paramètre agronomiques (%N-Z31, %N-Z41, EPM, GRE, RDT, RDN, NBR et PMG ; voire le texte pour explicitations) sans (-TRP) et avec (+TRP) l'équivalent d'une dose hectare de tryptophane (TRP). Figure 4 : Représentation graphique d'EPM (nombre d'épi par m2 au stade Z77) selon la modalité expérimentale, y compris le témoin sans azotobactérisation (AZB) ou tryptophane (TRP). L'absence 15 de lettre indique que l'analyse de covariance (Ancova ; voir texte pour explication) n'a pas révélée à ce stade d'effet significatif des modalités. Figure 5 : Représentation graphique de GRE (poids (g) des grains par épi au stade Z87) selon la modalité expérimentale, y compris le témoin sans azotobactérisation (AZB) ou tryptophane (TRP). L'absence de lettre indique que l'analyse de covariance (Ancova ; voir texte pour explication) n'a pas révélée à 20 ce stade d'effet significatif des modalités. Figure 6 : Représentation graphique de RDT (poids (kg) des grains par hectare au stade Z77) selon la modalité expérimentale, y compris le témoin sans azotobactérisation (AZB) ou tryptophane (TRP). Les modalités associées aux mêmes lettrages ne sont pas significativement différentes (comparaison des moyennes selon Duncan ; a = 5%) en dépit d'une Ancova révélatrice. 25 Figure 7 : Représentation graphique de RDN (kg-N par hectare mobilisés par RDT au stade Z77) selon la modalité expérimentale, y compris le témoin sans azotobactérisation (AZB) ou tryptophane (TRP). Les modalités associées aux mêmes lettrages ne sont pas significativement différentes (comparaison des moyennes selon Duncan ; a = 5%) en dépit d'une Ancova révélatrice. 30 MODE DE REALISATION PREFERE DE L'INVENTION Obtention des biomasses azotobactériennes (AZB) L'invention est réalisable à l'aide de souches et/ou de biomasses azotobactériennes (AZB) 35 compétentes in situ ; l'action du tryptophane (TRP) sur le relâchement des parois végétales devant favoriser l'incrustation de celles-ci dans la phyllosphère. Cela dit il est en principe avantageux d'obtenir des échantillons de sol dans lesquels des résidus de culture au sol ont récemment été enfouis ; en principe, ces résidus de culture, alias des phyllosphères. 40 Les phyllosphères sénescentes sont dans les faits des résidus de cultures pailleux enfouis au sol post-récolte et donc partie intégrante d'un échantillon de sol intègre ; celui-ci peut avantageusement servir à la constitution desdites cultures mères, selon le protocole décrit dans FR 01/15442 par exemple. Selon Joseph et al. 2003, les Beijernickiaceae et les Phyllobacteriaceae - 12 - phyllogénétiquement rapprochées. Bien que les premières sont en principes surtout telluriques, il n'est plus étonnant de les retrouver ensembles, voire associées, sur les parties aériennes de la plante, y compris donc au sein de la phyllosphère. Or, cette association peut, une fois transposée vers un milieu d'obtention et de mise en culture in vitro approprié - eg. FR 01/15542, apparaître comme une contamination, contamination pourtant nécessaire au développement in vivo et in vitro de telles colonies dites « mixtes ». En effet, selon Kaeberlein et al. 2002, ce sont ces « cocultures » qui permettent la rétention et le développement in vitro de telles cellules bactériennes autrement viables mais non cultivables (in vitro). Il est donc possible - voir souhaitable, que les inocula Azotobacteraceae soient constitués de biomasses issus de phyllosphères et/ou de résidusphères, et associés in situ et/ou in vitro à des PPFM - ou toute autre souches pigmentées. Les grandes cultures non-légumineuses concernées sont avantageusement les céréales, le colza et/ou le lin. Étant donnée la nature édaphique et commensale, des AZB ainsi recherchées, il est avantageux de procéder à leurs production en masse par voie de fermentation à l'état solide (FMS), et plus particulièrement modulaire tel décrit et proposé dans FR 06/00014. A titre de doses-hectare avantageuses, il est préconisé - selon l'état de la technique et sans préjuger d'éventuelles avancées technique, d'apporter entre 1 et 10 x 1012 cellules azotobactériennes viables et correctement formulées par hectare. En ce sens, la mise en oeuvre de la biofertilisation azotobactériennes proposée par Claude et Fillion 2004 peut servir ici de référence ; le conditionnement des ces biomasses peut ce faire selon FR 05/05753. Par exemple et à titre expérimental, les inocula avec et sans TRP ont été préparées à partir de lots - quatre en tout, de 50 g de résidus de culture pailleux hachés et tamisés à 2 mm sont étuvés à 65 degrés C pendant 45 minutes (pas d'autoclavage) afin d'en atténuer la flore non-azotobactérienne. Vingt-cinq (25) grammes de fines particules de sols - ici deux sols de la région de Thann (France) dits se13 et Gewn (Tableau 1), tamisées à 250 um sont intégrés à chacun de ces lots, le mélange résultant étant disposé dans bacs plastiques appropriés. Tableau 1 : Caractérisation physico-chimique du sol alsacien - dit « gewn » Paramètre Unité Valeur Argile % 27,0 LF/LG Na 1,72 Sables fins % 18,1 pH (eau) Na 5.7 Matière organique g/kg-sol 55,5 CEC mÉq/kg-sol 101 Saturation CEC % 56 P205 assimilable mg/kg-sol 37 K20 échangeable mg/kg-sol 80 MgO échangeable mg/kg-sol 200 CaO échangeable mg/kg-sol 1850 Zn-DTPA ug/kg-sol 700 - 13 - En principe, ces fines particules de sols comportent nécessairement des Azotobacteraceae endogènes à cette région française - voir aux agro-pédo-climats (APC) qu'elle abrite, et peuvent donc être ainsi réintroduites sans risques écotoxicologiques. A ces mélanges (i.e. 50 g desdits résidus pailleux + 25 g desdites fines particules de sol) 50 ml d'eau déminéralisée comprenant un minimum de Mo en guise de cofacteur de la nitrogenase azotobactérienne. Le mélange est par la suite pré-incubé pendant 10 à 12 jours à température ambiante (i.e. - 21 degrés C) ; en situations bio-industrielle plus optimales, le temps de pré-incubation peut être avantageusement réduit à un minimum. Cette pré-incubation assure la prolifération de la flore azotobactérienne endogène au sol, et/ou au résidus pailleux ; cette prolifération fait donc office de fermentation à l'état solide. Une fois les inocula ainsi produits, ces lots d'Azotobacteraceae - quatre lots de 75 g chacun, sont combinés et placés dans 3 L d'eau (déminéralisée). Cette suspension semi-liquide est filtrée à 167 um de façon à retenir les susdites fines particules de sol qui pourraient intervenir avec la pulvérisation liquide de cette bouillie (FR 05/05753). (Co)formulation et application des biomasses azotobactériennes (AZB) Deux (2) litres de cette bouille sont ainsi obtenus ; une dose-hectare d'une biomasse Azotobacteracea compétente in situ peut aussi être envisagée. Une dose-hectare équivalente à 20 10 g de TRP est ajouté à une moitié de cette bouillie (Modalité D) et non à l'autre (Modalité C ; les modalités A et B étant les témoins non-inocula respectifs). Ces modalités peuvent maintenant être appliquées par pulvérisation liquide des matières fraiches des parties aérienne (MFPA) sur-pieds - ici une orge de printemps au stade Z 54-56 (mi-épiaison), à l'aide de l'équivalent de 100 à 360 L d'eau par hectare, au choix et par exemple. 25 Afin de favoriser le relâchement des parois végétales, la plante étant peu enclin à le faire à ce stade (Z 55-59) du fait de la maturation histologique de ses feuilles, une certaine dose de précurseurs auxigéniques - du tryptophane (TRP) notamment, est apporté avec l'inoculum AZB. Mieux : étant donnée le stade avancé de cette maturation histologique des feuilles, la dégradation 30 - ou du moins la déméthylisation de leurs parois squelettiques s'accélère, rendant les composés Cl (méthane, méthyle, méthanol notamment) plus disponibles aux méthylotrophies épiphytes. Les doses-hectare de TRP - à la lumière de l'état de la technique actuelle et/ou de considérations économiques, sont avantageusement comprises entre 5 et 50 g, une dose-hectare de l'ordre de 10 à 20 g étant la plus raisonnable. 35 Afin de biofertiliser la culture d'hiver suivante, et cela sans perturber la phase de remplissage des grains post Z 55-59, l'invention préconise l'application sur la culture en cour - avec l'inoculum Azotobacteraceae, un complément à base de tryptophane (TRP) précurseur d'IAA entre les stades Z 55-59 et Z 71-73 (voir Figure 2), période pendant laquelle les teneurs en IAA de la plante est 40 particulièrement déprimées (Figure 2). Cette présence de TRP/IAA permettra de -15 - 14 - exceptionnellement, relâcher les parois végétales sans pour autant retarder la maturation histologique des feuilles, retard qui pourrait autrement perturber l'amorce et la montée en puissance du remplissage de grains ; voir en ce sens Yang et al. 2001 et Jin-juan et al. 2004. Afin de cadrer avec des pratiques culturales existantes, l'invention préconise l'application conjointe d'un agent azoto-nutritionnel (ANN) dès la mi/fin-épiaison (Z 55-59). Tel que déjà mentionné, il existe actuellement sur le marché de tels ANN, y compris PhyléasTM (www.phyleas.com) et OptéineTM (Goëmar, France), voire plus généralement (librement) au sens de FR 09/00867. Ces ANN - à base de simples acides aminés et/ou polysaccharides, sont parfaitement solubles et/ou miscibles à l'eau et requiert des doses-hectare d'ingrédients actifs de l'ordre du kg, et donc parfaitement adaptés à la réalisation de la présente invention. APPLICATIONS BIOINDUSTRIELLES ET AGRONOMIQUES Afin de réaliser cette « pré-inoculation » des résidus de culture au sol en devenir que sont les phyllosphères en fin de campagne, nous avons installé un dispositif sur un sol alsacien du quel fut initialement prélevé un échantillon de sol pour l'obtention des biomasses azotobactériennes à réintroduire par inoculation des phyllosphères le moment venu. Pour ce faire, une parcelle de céréale à paille a été donc repérée dans le département du Haut Rhin en Alsace (France) comportant un sol arable du même type que celui caractérisé au Tableau 1. Une fois cette culture d'orge de printemps ayant attient le stade Z 55-59, soit environ mi-épiaison, les préparations inoculantes et leurs témoins (voir infra) au sens de la présente invention ont été appliquées. La disposition des quatre (4) modalités en bandes essais comprend dont les modalités suivantes ; (A) un témoin ne recevant que le l'eau déminéralisée (B) un autre témoin recevant l'équivalent une dose de 20 g de tryptophane (TRP) par hectare (C) une inoculation azotobactérienne (Azotobacteraceae) des résidus de culture « sur-pieds » au sens de la présente invention mais ne comprenant pas de TRP (D) une inoculation Azotobacteraceae des résidus de culture « sur-pieds » au sens de la présente invention mais comprenant cette fois-ci ladite dose-hectare de TRP (voir B). Un premier passage de pulvérisateur autoporté est effectué sur la longueur de la parcelle (12 x 15 = 180 m) sur une largeur de 6 m afin d'appliquer la suspension inoculante - dite AZB ici, préalablement préparée (voir supra) ; un volume pulvérisable de 100 à 300 L, ou encore selon les règles de l'art et sans compromettre la survie des cellules Azotobacteraceae, et prévu. Immédiatement à côté de cette bande traitée est située une bande appariée non-traitée (i.e. pulvérisation d'eau). Ces deux bandes de 180 x 6 m sont par la suite entrecoupées à tous les 15 m de bandes perpendiculaires avec et sans application de l'équivalent de la dose - hectare (dha) de tryptophane - dit TRP ici.40 - 15 - A remarquer que ce découpage perpendiculaire sera facilement implémenté plein champ par un agriculteur qui n'aura qu'à interrompre la pulvérisation périodiquement lors du passage de son engin. Cette disposition des quatre modalités en bandes essais non - répliquées est donc recherchée et propre à ce type d'expérimentation in situ (i.e. au champ, ou « on-farm experimentation » ; voir Bermudez et Mallarino 2002, 2004). Cela dit, et outre une comparaison directe des parcelles appariées « en ligne » les une avec les autres (i.e. les modalité A :C et B :D) la comparaison des moyennes des quatre modalités entre elles nécessitera des analyses de covariances (Ancova) plus poussées (voir infra). J'ai suivi les paramètres agronomiques suivants ; (i) %N-Z31 : pourcentage d'azote des partie aériennes au stade Z31 (ii) EPM : nombre (n) d'épis par m2 au stade Z77 (iii) GRE : grammes (g) de grains par épi au stade Z87 (iv) RDT : kg de grain par hectare (EPM x GRE) (v) RDN : kg-N mobilisé par RDT par hectare (RDT x %N-grain (NGR)) (vi) NBR : nombre (n) de grains par épis (vii) PMG poids de mille grains (en g). Peu après la récolte de cette culture cible - ici, l'orge de printemps, précédant la culture suivante à biofertiliser proprement, il faut incorporer les résidus de culture pailleux au sol ; les pailles ne doivent donc pas être enlevées si possible. II est généralement recommandé de broyer les pailles afin d'en facilité l'enfouissement et la dégradation ; sur des micro-parcelles expérimentale telles que celles-ci, il est important d'effectuer ce broyage dans le même sens que la récolte, les pailles ainsi broyées ayant tendance à être projetées vers l'arrière, ce qui contribuera à compenser pour le transport ver l'avant de ces paille par la moissonneuse. Afin d'incorporer ces résidus pailleux, il n'est pas absolument nécessaire de les labourer ; un bon « disquage » permet d'intégrer l'essentiel de ces résidus en surface (8 à 10 cm). La culture de rapport est ici un blé d'hiver par la suite, avantageusement semée pas trop tard afin de profiter au maximum de l'effet du traitement « sur pieds » desdits résidus de culture pailleux maintenant incorporés au sol. II faut par la suite fertiliser ce blé d'hiver selon les bonnes pratiques habituelles, sachant que la fertilisation raisonnée avec pilotage intra- saisonnier (eg. Jubile, NTesterO, etc.) est ici particulièrement avantageuse (Claude et Fillion 2004). A noter que si cette fertilisation raisonnée pilotée n'est pas réalisable, mieux vaux dans ce cas opter pour une parcelle à faible rendement, voire pour une parcelle en agriculture dite « biologique », parcelle sur laquelle les faibles teneurs en N rétroagirons que faiblement avec l'appareil diazotrophique des Azotobacteraceae. -16- Ayant donc établit les quatre modalités suivantes en ce sens ; A : sans azotobactérisation sans TRP, B : sans azotobactérisation avec TRP, C : avec azotobactérisation sans TRP et D : avec azotobactérisation avec TRP, il m'est possible de calculer les efficacités relative suivantes ; - a : C/A = efficacité relative (er) de l'azotobactérisation sans TRP - b : D/B = efficacité relative de l'azotobactérisation avec TRP Ces quatre modalités reprises six (6) fois permirent dans un premier temps dix (10) comparaisons appariées des modalités sans (A et B) et avec (C et D) inoculation Azotobacteraceae. Il fut donc aussi possible d'établir dix comparaisons appariées de l'efficacité relative de l'inoculation azotobactériennes (erAZB) sans (C/A) et avec (D/B) TRP. J'ai établit donc le 16 avril 20010 la teneur en azote des plantules aux stades Z31 (%N-Z31). En comparant ces valeurs pour les plantules en D/B, et en C/A de façon ainsi apparié et symétrique, je peux obtenir dix (10) ratios D/B : C/A, soit une mesure de l'impacte de TRP sur l'efficacité relative de AZB. Ce type de comparaison appariée peut être effectué pour plusieurs des paramètres agronomiques mesurés (Figure 3). La plupart des paramètres agronomiques - à l'exception notable d'EPM à ce stade (voir infra), traduisent ainsi une augmentation de l'efficacité relative d'une telle azotobactérisation (erAZB ; témoins sans AZB = 1,00) attribuable à la présence de TRP dans la formulation de l'inoculum. En accord avec les revendications et la description, cette présence du TRP est donc partie intégrante de la présente invention. Or, c'est précisément ce rôle important du tryptophane (TRP) appliqué lors de ledit interstice phénologique (Figure 2) qui est a priori non-évident étant donné la non-élongation des cellules (voir supra). Pour analyser la variance provenant de ces pseudo-blocs (répétitions) et permettre ainsi la comparaison plus directe des modalités entre elles, il faut adopter une variante de l'approche proposée par Bermudez et Mallarino 2002 et 2004 ; (i) Effectuer une analyses de variance (Anova) en prétendant que les (pseudo-)blocs sont disposés entant que blocs Fischer (RCBD) ; les résidus pour chacune des observations (24) ainsi obtenus serviront pour le calcul d'une covariable ; (ii) Calculer pour chacune des 24 observations ladite covariable en soustrayant à la valeur variable de la parcelle la plus proche - droite ou gauche, (Nb. Il n'y a ici que deux bandes, avec et sans TRP) le susdit résidu correspondant. (iii) Effectuer une analyses de covariance (Ancova) avec comme covariables les valeurs calculées en (ii). J'ai pu ainsi observer que l'augmentation de l'efficacité relative de l'azotobactérisation des résidus pailleux « sur-pieds » attribuable à la présence de TRP dans la formulation (Figure 3) ce traduit bel et bien en augmentations d'EPM (Figure 4), GRE (Figure 5), RDT (Figure 6) et RDN (Figure 7). Cela dit, seules les augmentations de RDT et RDN - i.e. les résultantes de l'interaction des -17- composantes du rendement que sont EPM, GRE, NBR et PMG, sont véritablement statistiquement défendables (Figure 6 et 7). De plus, l'action d'AZB+TRP (D) sur %N-Z31 d'une part, et d'autre part sur EPM => GRE _> RDT(RDN), sans pour autant agri sur - ou nuire à, NBR et/ou PMG est cohérente. En effet, en améliorant transitoirement la teneur en N des plantules à Z31, AZB+TRP (D) favorise ainsi le tallage (Weisz et al. 2001), et à terme donc EPM. Cette meilleure alimentation en N des plantules - ou du moins leurs meilleurs état azoto-nutritionnel à ce stade, et l'augmentation d'EPM qu'elle provoque ne pourront que contribuer à maintenir, voire réduire légèrement NBR et/ou PMG ; le nombre d'épi étant plus grand, le nombre (NBR) et le poids individuel (PMG) des grains auront certainement tendance à baisser, ou du moins ne pas augmenter et contribuer eux mêmes à l'augmentation de RDT(RDN). Voir en ce sens la matrice de corrélation (Pearson) au Tableau 2. Néanmoins, cette (ces) baisses n'étant que très tendancielles (i.e. coefficient de corrélations (cc) avec EPM de -0,284, -0,190 et -0,166 pour GRE, NBR et PMG, respectivement), l'augmentation d'EPM en réponse à l'action de AZB+TRP (D) permet bel et bien d'augmenter RDT(RDN). Tableau 2 : Matrice de corrélation Variables %N Z31 %N Z41 EPM GRE NBR RDT RDN PMG %N Z31 0,66 0,77 -0,35 -0,30 0,52 0,52 -0,10 %N Z41 0,66 0,60 -0,25 -0,19 0,43 0,43 -0,09 EPM 0,77 0,60 -0,28 -0,19 0,78 0,78 -0,17 GRE -0,35 -0,25 -0,28 0,87 0,37 0,37 0,32 NBR -0,30 -0,19 -0,19 0,87 0,39 0,39 -0,20 RDT 0,52 0,43 0,78 0,37 0,39 0,98 0,01 RDN 0,52 0,43 0,78 0,37 0,39 0,98 0,01 PMG -0,10 -0,09 -0,17 0,32 -0,20 0,01 0,01 Enfin, à noter qu'il existe une certaine corrélation entre %N-Z31 et %N-Z41 et EPM (cc = 0,77 et 0,60, respectivement ; Tableau 2) et - à terme, RDT et RDN (cc = 0,52 et 0,43, respectivement ; Tableau 2). Ces corrélations entre l'état azoto-nutritionnel de la culture en sortie d'hiver et son rendement - y compris certaines de ces composantes (EPM), illustrent bien l'importance de la fertilisation raisonnée - avantageusement avec pilotage intra-saisonnier des apports d'engrais N, dans la valorisation de ce type de biofertilisation azotobactériennes. Un tel pilotage par diagnostique de l'état azoto-nutritionnel avait eu lieu, une minoration des apports subséquents d'engrais N aurait vraisemblablement été préconisée. C'est un peu ce qui a été ici réalisé sur cette parcelle à faible rendement où seulement 67 kg-N ont été apportés aux environs du stade Z41. Un rendement plus important - il n'est de l'ordre que de 45 qx/ha ici, nécessiterait simplement des apports fractionnés additionnels ; voir en ce sens Claude et Fillion 2004. Sigles et définitions Azotobacteraceae : désignation fonctionnelle et taxonomique d'un groupe - alias une famille, de bactéries Gram-négatives, sous forme de bâtonnets de 1 à 3 um au stade végétatif et parfois de kystes plutôt circulaires, avec ou sans flagelle selon le cas, et surtout capables de réduire à haut régime de l'azote diatomique par aérobiose. C'est cette dernière caractéristique, voire le développement d'une certaine -18- polyploïdie, qui définie ici fonctionnellement lesdites Azotobacteraceae. D'un point de vue plus génomique et biomoléculaire, les Azotobacteraceae comprennent vraisemblablement l'ensemble des Pseudomonaceae capable de dlazotrophie au même régime dans les mêmes conditions. Échelles Zadok et/ou BBCH : échelles numériques décrivant schématiquement les stades phénologiques des principales cultures agronomiques et fourragères. Elles s'échelonnent de 01 à 99 et comportent dix (10) sous-divisions, une pour chacune des principales étapes (germination, montaison, gonflement, maturation des grains, etc.). Je considère ici que les échelles BBCH et Zadok sont interchangeables. Histologiquement mature : ce rapporte surtout aux parties végétatives de la plante (culture) au moment ou sa croissance structurelle (tiges, feuilles, épi, racines) s'estompe aux alentours des stades Z/BBCH 55-59. En termes physiologiques, à ce stade les « sources » photosynthétiques sont en places voir en bout de course. Interstice phénologique : voir Figure 2 et texte supra. Phyllosphère : par analogie avec la rhizosphère, le volume immédiatement intra- et/ou extra- (endo- / ecto/) cuticulaire du feuillage, voire plus simplement des partie aériennes d'une céréale avant lé début de la maturation des grains. II s'agira ici donc non seulement des feuilles à proprement parler, mais aussi les gaines des feuilles, des brins, voire des épis encore verts. Physiologiquement mature : ce rapporte surtout aux parties reproductive de la plante (culture) au moment ou le remplissage des grains est quasi complet est les graines ont attient leurs tailles finales mais sont toujours vertes, soit aux alentours des stades Z/BBCH 73-75. En terme physiologiques, à ce stade les « puits » sont remplis bien que leurs contenus doivent maintenant entreprendre leurs maturations. Phyllosphères sénescentes (résidus pailleux « sur pieds ») Précédente culture : la culture en place immédiatement avant la culture à biofertiliser. C'est elle qui recevra directement l'inoculum Azotobacteraceae selon la présente invention. Résidusphère : par analogie avec la notion de rhizosphère plus reconnue, il s'agit du volume édaphique entourant immédiatement un brin de résidus de culture - pailleux plus particulièrement ici ; fonctionnellement, la résidusphère ne s'étend à guère plus de 4 à 5 mm desdits résidus de culture, soit la distance de migration apparente des solutés carbonés provenant de leurs dégradations in situ. Stade phénologique : Période-repère individualisée dans la croissance ou le développement d'une plante pendant laquelle peuvent intervenir des pathologies spécifiques. (selon Inra) ; voir comme de raisons les échelles Zadok et/ou BBCH. Références Bermudez , M. et A.P. Mallarino. 2002. Yield and Early Growth Responses to Starter Fertilizer in No-Till Corn Assessed with Precision Agriculture Technologies. Agron. J. 94:1024-1033. Bermudez, M. et A.P. Mallarino. 2004. 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Procédé de biofertilisation d'une culture à l'aide d'un inoculum Azotobacteraceae appliqué aux feuillages d'une précédente culture caractérisé en ce que l'inoculum est appliqué dans l'interstice phénologique compris entre le stade de maturité histologique des parties végétatives et le stade de maturité physiologique des parties reproductives de cette précédente culture toujours « sur pieds » et produisant à terme une quantité de résidus pailleux incorporables en surface de sols arables. 2. Procédé de biofertilisation d'une culture à l'aide d'un inoculum Azotobacteraceae selon 10 la revendication 1 caractérisé en ce que la culture est une grande culture d'hiver non- Fabaceae comprise dans un groupe comprenant les cultures céréalières à pailles, le colza, le lin, voire une culture intermédiaire piège à nitrate (Cipan). 3. Procédé de biofertilisation d'une culture à l'aide d'un inoculum Azotobacteraceae selon une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que le stade de maturité 15 histologique des parties végétatives de la précédente culture est conforme aux stades phénologiques compris entre indices 55 et 59 des échelles dites de Zadok et/ou BBCH. 4. Procédé de biofertilisation d'une culture à l'aide d'un inoculum Azotobacteraceae selon une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que le stade de maturité physiologique des parties reproductives de la précédente culture est conforme aux stades 20 phénologiuqes compris entre les indices 73 et 75 des échelles dites de Zadok et/ou BBCH. 5. Procédé de biofertilisation d'une culture à l'aide d'un inoculum Azotobacteraceae selon une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que la quantité de résidus pailleux incorporables en surface de sols arables soit de l'ordre d'au moins 5 à 8 tonnes par hectare et qu'elle ne soit pas récoltée mais laissée au sol pour fin d'incorporation. 25 6. Procédé de biofertilisation d'une culture à l'aide d'un inoculum Azotobacteraceae selon une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que les l'inoculum contient avantageusement des cellules bactériennes produisant des auxines principalement via l'intermédiaire métabolique qu'est l'IAM (indole-3-acetamide). 7. Procédé de biofertilisation d'une culture à l'aide d'un inoculum Azotobacteraceae selon 30 une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que l'inoculum comprend avantageusement entre 1 et 10 x 1012 par dose-hectare de cellules Azotobacteraceae. 8. Procédé de biofertilisation d'une culture à l'aide d'un inoculum Azotobacteraceae selon une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que l'inoculum comprend par dose-hectare une certaine quantité d'auxines, voire plus avantageusement de leurs 35 précurseurs tel que le tryptophane. 9. Procédé de biofertilisation d'une culture à l'aide d'un inoculum Azotobacteraceae selon la revendication précédente caractérisé en ce que l'inoculum comprend entre 1 et 50, plus particulièrement entre 5 et 25, et avantageusement entre 10 et 20 g de tryptophane par dose-hectare. -20-