Brevet FR2977160A1 — publié le 20130104

La présente invention concerne une composition, telle qu'une composition pharmaceutique, dermatologique ou cosmétique, comprenant une huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse, avantageusement pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des mycoses telles que les dermatophytoses ou les candidoses. Avantageusement, la composition selon la présente invention comprend en outre au moins un agent antifongique tel qu'un agent antifongique azolé du type itraconazole, fluconazole, ou cétoconazole. Les champignons se classent généralement en deux catégories : les levures et les champignons filamenteux. Les infections fongiques, causées par l'une ou l'autre de ces deux classes, sont décrites sous le nom de mycoses. Celles-ci peuvent être de plusieurs 15 types : superficielles (peau, cheveux, ongles), sous-cutanées ou systémiques. Les mycoses superficielles sont le plus souvent causées par des champignons filamenteux, dits dermatophytes, et incluent en particulier les genres Trichophyton, Microsporum et Epidermophyton. Ces infections sont généralement connues sous le nom de teignes, les espèces du genre Trichophyton (T. rubrum, T. mentagrophytes) 20 étant par exemple responsables du très répandu «pied d'athlète ». Ces champignons infectent l'organisme notamment en dégradant la kératine des tissus humains et animaux. Les levures du genre Candida sont également responsables d'un grand nombre de mycoses superficielles, le pathogène le plus répandu étant C. albicans, causant par 25 exemple le muguet du nourrisson. Ces mycoses superficielles touchent généralement toutes les catégories de population. Elles sont répandues dans le monde entier, certaines d'entre elles étant cependant plus présentes dans les zones tropicales du fait de facteurs climatiques (chaleur et humidité favorables au développement des mycoses) ou sociaux (question de l'accès aux soins). 30 Les mycoses sous-cutanées sont quant à elles majoritairement présentes dans les zones tropicales et sub-tropicales. Il s'agit d'infections dues à une contamination du derme et des tissus sous-cutanés par des pathogènes généralement originaires de l'environnement extérieur (sol, plantes...). Elles peuvent éventuellement s'étendre à l' épiderme. Les mycoses systémiques opportunistes touchent plus particulièrement les patients gravement malades (VIH en particulier) ou immunodéprimés. Elles sont en 5 particulier causées par les levures du genre Candida, présentes à l'état normal dans la flore microbienne de la peau, des muqueuses, de l'appareil digestif et du système reproducteur humain. L'incidence des infections fongiques, quelle que soit leur catégorie, est en nette croissance ces dernières années du fait de l'augmentation du nombre de patients à haut 10 risque et du développement des résistances aux antifongiques actuels. En effet, les progrès thérapeutiques et chirurgicaux ont permis des avancées notables dans le domaine des greffes, du traitement des maladies chroniques comme le diabète, des traitements contre le VIH, des opérations chirurgicales lourdes ou des soins aux enfants grands prématurés. Ces patients sont cependant beaucoup plus sensibles aux 15 mycoses du fait de l'altération de leurs défenses immunitaires. Les agents antifongiques actuellement utilisés sont dans leur grande majorité (environ 80 %) d'origine synthétique, l'antifongique d'origine naturelle le plus utilisé étant l'amphotéricine B, découverte en 1956, mais qui présente cependant une toxicité 20 non négligeable. Par ailleurs, les produits existants pour le traitement des mycoses présentent fréquemment des effets secondaires dans le cadre de traitements sur le long terme, sont parfois d'accès difficile pour des raisons de coût, sont en nombre limité et voient se développer des phénomènes de résistance à leur encontre nécessitant la mise au point de 25 nouveaux traitements. Or, la demanderesse a découvert de manière surprenante que l'huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse était efficace comme agent antifongique, en particulier pour prévenir ou traiter les infections fongiques dues aux champignons deimatophytes filamenteux et aux levures. 30 Une telle huile est d'origine naturelle et présente l'avantage d'être non cytotoxique. La présente invention a ainsi pour objet une composition, telle qu'une composition pharmaceutique, dermatologique ou cosmétique, comprenant une huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse et éventuellement un excipient approprié. Otacanthus azureus (Linden) Ronse est une espèce anciennement membre de la famille des Scrophulariaceae et récemment reclassée parmi les Plantaginaceae. Originaire du Brésil (états de Rio de Janeiro et Espirito Santo, dans la région de la Mata Atlântica), elle est également présente en Amazonie (Manaus (Amazonas), Guyane française, Colombie) ou naturalisée dans des zones sub-tropicales (Madagascar, Seychelles, île Maurice, Réunion, Hawaï). Il s'agit d'une herbacée terrestre pérenne de 1 à 2 m de hauteur environ portant de larges inflorescences terminales d'un violet très vif et lumineux. Les feuilles, simples, opposées, à limbe décurrent, discolores, sont couvertes de minuscules poils glandulaires, et légèrement collantes au toucher. En les froissant, il s'en dégage une forte odeur aromatique, mentholée, résineuse, rappelant l'encens. Cette plante est ainsi connue sous le nom vernaculaire de «fleur d'encens» en Guyane française et «incenso» au Brésil, ou «fleur cirage» à la Réunion, son odeur évoquant également l'encaustique. Elle est également nommée «Brazilian Snapdragon», du fait de la forme de ses fleurs. Avantageusement selon la présente invention, l'huile essentielle est obtenue à partir des parties aériennes de la plante, telles que les feuilles, les tiges, les fleurs, et leurs mélanges, typiquement par hydrodistillation. Typiquement, l'huile essentielle selon la présente invention contient majoritairement des sesquiterpènes, en particulier des sesquiterpènes oxygénés et hydrocarbonés. Selon une caractéristique particulière de la présente invention, l'huile essentielle contient au moins 50%, avantageusement au moins 60%, par exemple de 60% à 75%, de sesquiterpènes (concentrations relatives). L'huile essentielle contient typiquement plus de sesquiterpènes oxygénés que de sesquiterpènes hydrocarbonés, et contient ainsi généralement de 20 à 50%, en 30 particulier de 25 à 45% de sesquiterpènes oxygénés. Les sesquiterpènes les plus représentés généralement sont les molécules de la famille des cadinanes et leurs dérivés, tels que le 13-copaèn-4-a-ol qui est une molécule possédant une forte odeur d'encens rappelant le parfum caractéristique de la plante fraîche et l'a-copaène (odeur à caractère plus floral), ou encore des molécules telles que l'a-humulène (odeur boisée). Selon une autre caractéristique particulière de la présente invention, l'huile 5 essentielle contient au moins 15%0, avantageusement de 15% à 30%, en particulier de 18 à 26% de monoterpènes (concentrations relatives). Les monoterpènes les plus représentés généralement sont les molécules de la famille des pinanes et leurs dérivés, tels que le myrténal, le trans-pinocarvéol et la pinocarvone. 10 Ainsi, typiquement, les molécules les plus abondantes dans l'huile essentielle selon l'invention sont le P-copaèn-4-a-ol, avantageusement avec une teneur de l'ordre de 15% à 25%, l'a-humulène avantageusement avec une teneur dé l'ordre de 10% à 15%, l'a-copaène, avantageusement avec une teneur de l'ordre de 5% à 10%, ou encore. le myrténal, avantageusement avec une teneur de l'ordre de 4% à 7%, et le viridiflorol, 15 avantageusement avec une teneur de l'ordre de 3% à 6% (concentrations relatives). Typiquement, à elles seules, ces 5 molécules représentent au moins 50 % du contenu total de l'huile essentielle. Le trans-pinocarvéol et un isomère non déterminé du bulnésol sont également présents en quantités importantes. 20 Avantageusement, la composition selon la présente invention est une composition antifongique comprenant une huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse comme seul principe actif, ou en combinaison avec au moins un autre ingrédient actif tel qu'un agent antifongique avantageusement azolé tel que l'itraconazole, le fluconazole ou le cétoconazole. 25 Ainsi, de manière particulièrement avantageuse, la composition selon l'invention est utilisée comme médicament, notamment dans la prévention et/ou le traitement des mycoses ou infections fongiques, telles que des mycoses humaines ou animales. Selon une caractéristique particulière de la présente invention, les mycoses sont 30 des dermatophytoses ou des candidoses. Il a ainsi été découvert que l'huile essentielle selon l'invention présentait une activité antifongique significative sur des champignons dermatophytes filamenteux tels que les dermatophytes du genre Trichophyton et Microsporum, en particulier sur les espèces Trichophyton tonsurans, Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, et Microsporum gypseum, ainsi que sur des levures du genre Candida, en particulier sur les espèces Candida albicans, Candida parapsilosis et Candida tropicalis. Dans un mode de réalisation particulier selon la présente invention, l'huile essentielle et les compositions selon l'invention permettent de traiter des infections fongiques chez l'être humain ou l'animal. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'huile essentielle et les compositions selon l'invention permettent de traiter des phytopatogènes de plantes et 10 donc de prévenir ou traiter les infections fongiques végétales. Dans le cadre de la présente invention, l'huile essentielle et les compositions selon l'invention sont avantageusement utilisées pour prévenir ou traiter les mycoses cutanées ou superficielles, telles que les mycoses de la peau, des phanères tels que les ongles, poils et cheveux, ou encore des muqueuses telles que les muqueuses buccales, 15 digestives, bronchiques, oculaires, génitales. De par son activité antifongique particulièrement élevée sur les champignons dermatophytes filamenteux, tels que Trichophyton rubnun et Trichophyton mentagrophytes qui infectent l'organisme notamment en dégradant la kératine des tissus humains et animaux, l'huile essentielle selon l'invention est particulièrement efficace 20 pour traiter les mycoses connues sous le nom de teigne ou encore le très répandu «pied d'athlète ». L'huile essentielle et les compositions selon l'invention peuvent également être utilisées avantageusement pour prévenir ou traiter les mycoses systémiques ou sous-25 cutanées. Dans un mode de réalisation particulier selon la présente invention, la composition est formulée pour être administrée par voie topique. De manière avantageuse selon la présente invention, la composition se présente 30 alors sous forme de crème, pommade, lotion, onguent, shampooing, sérum, pâte, mousse, d'huile, de gel ou de stick Avantageusement, l'huile essentielle ou la composition selon la présente invention est utilisée dans une composition cosmétique ou dermatologique comme produit de soin, comme produit d'hygiène corporelle ou de traitement cosmétique de la peau, des cheveux ou des ongles. Par exemple, l'huile essentielle peut être incorporée au sein d'une lotion, d'un gel douche ou d'un shampoing, notamment un gel douche ou un shampoing antifongique. Dans un autre mode de réalisation particulier selon la présente invention, la composition est formulée pour être administrée par voie orale. De manière avantageuse selon la présente invention, la composition se présente alors sous forme de gélule, capsule, comprimé, granule, poudre, solution ou suspension buvable. D'autres voies d'administration de la composition peuvent également être envisagées dans le cadre de cette invention. De manière avantageuse selon la présente invention, la composition peut comprendre tout véhicule ou excipient approprié, acceptable du point de vue pharmaceutique, cosmétique, ou dermatologique, ainsi que des additifs conventionnels, 20 connus de l'homme du métier. Avantageusement, la composition selon la présente invention comprend en outre au moins un agent antifongique tel qu'un agent antifongique azolé avantageusement choisi dans le groupe constitué par l'itraconazole, le fluconazole, le cétoconazole et 25 leurs mélanges. Il a ainsi été mis en évidence que des associations de l'huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse avec au moins un agent antifongique azolé du type itraconazole, cétoconazole et fluconazole, présentaient un effet synergique sur des levures et des champignons dermatophytes, tels que ceux mentionnés ci-dessus, en 30 particulier sur Candida albicans, Candida parapsilosis et sur Trichophyton mentagrophytes et Microsporum gypseum. Les combinaisons de l'huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse avec l'itroconazole ou le cétoconazole montrent un effet synergique particulièrement élevé pour le traitement des mycoses. Ainsi, la présente invention a également pour objet une composition 5 antifongique comprenant une association synergique d'huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse et d'un agent antifongique azolé avantageusement choisi dans le groupe constitué par l'itraconazole, le fluconazole, le cétoconazole et leurs mélanges. Une telle association synergique est particulièrement efficace pour prévenir ou traiter les dermatophytoses, notamment les mycoses provoquées par les champignons du 10 type Trichophyton mentagrophytes et Microsporum gypseum. De manière particulièrement avantageuse selon la présente invention, la composition comprend une association synergique d'huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse et de l'itraconazole, le cétoconazole, ou un mélange 15 d' itraconazole et de cétoconazole. Une telle association synergique est particulièrement efficace pour prévenir ou traiter les dermatophytoses telles que mentionnées ci-dessus ou les candidoses notamment provoquées par les levures du type Candida albicans et Candida parapsilosis. 20 Les combinaisons ou associations synergiques selon la présente invention sont particulièrement avantageuses car elles permettent de réduire à la fois les concentrations d'huile essentielle et des agents antifongiques, tels que l'itraconazole, le fluconazole et le cétoconazole, nécessaires à l'inhibition de la croissance fongique, réduisant ainsi les 25 effets secondaires desdits agents antifongiques et limitant le développement des résistances à ces substances, et améliorent également la biodisponibilité de l'huile essentielle ainsi utilisée à dose moins élevée. La présente invention a également pour objet une composition ou un produit 30 contenant: une huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse, et - au moins un agent antifongique, tel qu'un agent antifongique azolé avantageusement choisi dans le groupe constitué par l'itraconazole, le fluconazole, le cétoconazole et leurs mélanges, comme produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans 5 le temps, comme médicament, comme agent cosmétique ou dermatologique, en particulier pour la prévention et/ou le traitement des mycoses, telles que celles mentionnées ci-dessus. Les figures et exemples suivants sont donnés à titre non limitatif et illustrent la 10 présente invention. Exemples : Exemple 1 : composition de l'huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) 15 Ronse Composés Concentration relative (5 ) Monoterpènes 18,7 Acycliques 0,2 linalol Menthanes 0,1 a-terpinène para-cymène 0,7 limonène 0,4 y-terpinène 0,2 terpinolène 0,1 terpinèn-4-ol 0,6 cuminaldéhyde 0,6 Pinanes et dérivés 1,3 a-pinène (3-pinène 0,8 trans-pinocarvéol 4,4 pinocarvone 2,6 myrténal 5,6 Thujanes 0,9 sabinène acétate de sabinyle 0,2 Sesquiterpènes 69,1 Humulanes et caryophyllanes (3-caryophyllène 0,5 a-humulène 10,6 NI + oxyde d'humulène II 5,1 caryophylla-7(12),8-dièn-5-o1 0,2 Germacranes et dérivés alloaromadendrène 1,0 germacrène D 0,0 bicyclogermacrène 0,3 viridiflorol 5,1 bulnésol 4,1 Cadinanes et dérivés Cyclosativène +a-ylangène 0,9 a-copaène 8,8 (3-cubébène 0,2 trans-cadina-1(6)-4-diène 0,1 trans-muurola-4(14),5-diène 0,2 cis-cubébol 1,3 3-cadinène 2,9 calaménène 0,7 a-calacorène 0,4 (3-copaèn-4-a-ol 23,3 (3-muurola-4(10),14-diénol + cis-cadin-4-èn-7-ol 1,3 cubénol + NI 0,8 cadalène 1,3 Total 87,8 Légende : NI : non identifié Exemple 2 : Etude de l'activité antifongique de l'huile essentielle d'Otacanthus 5 azureus (Linden) Ronse Des essais in vitro d'activité antifongique de l'huile essentielle selon l'invention ont été réalisés sur diverses souches de levures (Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida tropicalis) et de champignons filamenteux (Trichophyton tonsurans, 10 Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Microsporum gypseum). Les souches choisies sont ainsi réparties en deux groupes : des espèces du genre Candida, une des causes les plus importantes de mycoses superficielles dans les zones tropicales, et systémiques sur l'ensemble de la planète, ainsi que des champignons filamenteux responsables des teignes (Trichophyton spp. et Microsporum spp.) aussi bien dans les régions tempérées qu'en milieu tropical. L'évaluation de l'activité antifongique a été réalisée par une méthode de microdilution consistant à mettre en contact les huiles essentielles et molécules testées 5 avec une solution de mycélium en milieu de culture liquide. Avec cette approche, il est possible de lire la concentration inhibitrice minimale (CIM, calculée en gg/ml) en observant l'absence de croissance du champignon dans certains puits. La concentration inhibitrice minimale (CIM) correspond à la concentration 10 minimale d'antifongique permettant d'inhiber totalement (ou à 80% dans le cas des antifongiques de référence) la croissance fongique après un temps d'incubation (par exemple 5 jours à 32°C pour les champignons dermatophytes filamenteux, 2 jours à 32°C pour les levures). Un produit antifongique est considéré comme actif si sa concentration inhibitrice 15 minimale (CIM) est inférieure ou égale à 500 gg/ml Les produits utilisés comme contrôles positifs sont des antifongiques de référence : l'itraconazole dans le cas de l'ensemble des souches testées, ainsi que le fluconazole pour les levures, les CIM relevées pour cette molécule dans les cas des dermatophytes étant généralement élevées et donc non discriminantes. 20 L'essai a été effectué sur une plaque de 96 puits. Conformément aux normes pour la détermination de la sensibilité des colonies vis-à-vis d'antifongiques ou autres substances que l'on désire tester, le milieu de culture utilisé a été le RPMI-1640 (avec glutamine, sans bicarbonate et avec un indicateur au 25 rouge de phénol). La solution de milieu de culture a été tamponnée par ajout d'une solution de MOPS préparée dans l'eau distillée stérile à une concentration de 0,165 mol/1 jusqu'à obtention d'un pH égal à 7. Les solutions-mères d'huile essentielles testées ont été préparées dans le DMSO à 50 mg/ml. Les solutions-mères sont ensuite diluées dans le RPMI pour obtenir des 30 concentrations de 500 gg/ml à 1 gg/ml pour l'huile essentielle. Des solutions-mères des antifongiques utilisés comme contrôles positifs dans le test (itraconazole et fluconazole) ont été préparées dans le DMSO de façon à obtenir une concentration de 6,4 mg/ml pour l'itraconazole et 25,6 mg/ml pour le fluconazole. Les solutions-mères ont ensuite été diluées dans le RPMI stérile afin d'obtenir une gamme de concentrations comprises entre 16 et 0,03 µg/ml pour l'itraconazole et entre 62 et 0,125 gg/ml pour le fluconazole dans les puits de la plaque. Une solution d'inoculum a ensuite été déposée dans tous les puits de la première à la onzième colonne. La solution mère de mycélium de chaque souche a été préparée par mise en suspension des parties visibles des mycéliums dans de l'eau stérile. Toutes les solutions mères ont été ajustées visuellement au standard de turbidité McFarland 0,5 pour ensuite être diluées dans une proportion de 1:5 (v/v, dermatophytes) ou 1:1000 (v/v, levures) dans du RPMI stérile. Les dix premières colonnes de la plaque servent à mesurer la CIM (Concentration Inhibitrice Minimale) des produits, la onzième colonne étant un témoin de la croissance du champignon (inoculum + RPMI), et la douzième, qui ne contient que du RPMI, un témoin pour vérifier la non-contamination du milieu. Les plaques de microdilution ont été incubées à 32°C. Les résultats ont été observés après 5 jours pour les champignons dermatophytes et après 2 jours pour les levures. Les résultats expérimentaux sont donnés dans le tableau 1 ci-dessous. Tableau 1 : Activité antifongique de l'huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse Produit Levuresa Filamenteux' C. a. C. p. C.L T.t. T. r. T. m. M. g. HE Otacanthus 250 125 125 62 4 31 31 azureusHEb 0,25 0,25 0,25 0,25 2 0,5 0,5 Itraconazole Fluconazole 2 2 1 n.t.` na. n.t. n.t. ' C a. = Candida albicans, C. p. = Candida parapsilosis, C.t. = Candida tropicalis, T.t. = Trichophyton tonsurons, T.r. = Trichophyton rubrum, T.m. = Trichophyton mentagrophytes, M.g. = Microsporum gypseum, b HE = huile essentielle, ' n.t. = non testé. L'huile essentielle est active sur C. albicans, C. parapsilosis, ainsi que sur C. tonsurans, avec des concentrations minimales d'inhibition (CIM) de 250 et 125 gg/ml respectivement. Dans le cas des champignons filamenteux, responsables en particulier des mycoses connues sous le nom de teignes, les CIM mesurées sont inférieures ou égales à 62 gg/ml pour T. tonsurans, T. rubrum, T. mentagrophytes et M. gypseum. Pour Trichophyton rubrum en particulier, champignon dermatophyte responsable par exemple du très répandu "pied d'athlète", et une des espèces les plus fréquemment rencontrées dans le cas des mycoses dues à des champignons filamenteux, cette huile essentielle présente une concentration minimale d'inhibition (CIM) de la croissance du champignon de l'ordre de 4 gg/ml. Il peut donc en être conclu que l'huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse présente des propriétés antifongiques, notamment sur les dermatophytes filamenteux tels que Trichophyton tonsurans, Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Microsporum gypseum, ainsi que sur les levures telles que Candida albicans, Candida parapsilosis et Candida tropicalis. Exem le 3 : Etude de l'activité antifon ue des associations d -~. ue s ner _ l'huile essentielle d'Otaeanthus azureus (Linden) Ronse avec des antifongiques azolés tels que l'itraconazole, le cétaconazole et le fluconazole Des essais in vitro d'activité antifongique de combinaisons de l'huile essentielle selon l'invention avec les antifongiques azolés suivants : l'itraconazole, le cétaconazole et le fluconazole ont été réalisés sur diverses souches de levures (Candida albicans et Candida parapsilosis) et de champignons filamenteux (Trichophyton mentagrophytes et Microsporum gypseum). Pour l'évaluation de l'activité antifongique de combinaisons de substances, les deux produits à évaluer en combinaison (huile essentielle et antifongique de référence) sont déposés en dilutions sériées croisées sur une plaque de 96 puits. Les combinaisons testées contiennent de 16 gg/ml à 0,03 gg/ml d'itraconazole, de 16 gg/ml à 0,03 gg/ml de cétoconazole ou de 64 gg/ml à 0,125 gg/ml de fluconazole, et de 125 gg/ml à 4 gg/ml d'huile essentielle. L'antifongique est dilué dans le sens horizontal sur la plaque, et l'huile essentielle dans le sens vertical. La première ligne de la plaque est utilisée pour la lecture de la concentration inhibitrice minimale de l'antifongique seul, et la dernière ligne pour la lecture de la concentration inhibitrice minimale de l'huile essentielle seule. Les plaques ont ensuite été inoculées avec les solutions de champignons (100 µ 1 d'inoculum par puits) selon le même protocole que pour la microdilution. La lecture des résultats a été faite par le repérage des puits dans lesquels une 10 croissance fongique a eu lieu, afin de déterminer les CIM des produits purs et des mélanges. Les résultats ont été analysés par le calcul des concentrations inhibitrices fractionnées (CIF) et des indices de CIF, définis comme suit : Les concentrations inhibitrices fractionnées (CIF) sont calculées en divisant la 15 CIM (concentration inhibitrice minimale) de la combinaison des deux produits par la CIM des produits testés indépendamment. CIF de l'huile= ((CIM de l'huile dans la combinaison la plus efficace avec l'antifongique)/( CIM de l'huile seule)) CIF de l'antifongique= ((CIM de l'antifongique dans la combinaison la plus 20 efficace avec l'huile)/( CIM de l'antifongique seul)). L'ICIF (indice de CIF), obtenu par addition des deux valeurs de CIF, est interprété comme suit: - ICIF > 2 : association antagoniste 0,5 Les résultats expérimentaux figurent dans le tableau 2 ci-dessous. Tableau 2: Concentrations inhibitrices minimales (CIM, µg/ml), concentrations 30 inhibitrices fractionnées et indice de CIF pour des combinaisons d'huile essentielle d'Otaeanthus azureus et d'antifongiques azolés Levures a Filamenteux Ca. C p. T. m. M. g Produit / Résultats ` CIM, CIlvç CIF ICIF CIM, CIM, CIF ICIF CIM, CIMo CIF ICIF CIM, CIMc CIF ICIF Otacanthus azureus - fluconazole HE b Otacanthus n.t.d n.t. azureus Fluconazole 500 62 0,12 125 16 0,13 Otacanthus azureus - cétoconazole HE b Otacanthus azureus 0,1 0,2 Cétoconazole 16 0,03 0,002 0,5 0,03 0,06 Ca. = Candida albicans, C. p. = Candida parapsilosis, T.m. = Trichophyton mentagrophytes,M.g. = Microsporum gypseum b HE = huile essentielle °CIM, : CIM du produit seul, CIMe: CIM du produit en combinaison, CIF: concentration inhibitrice fractionnée (ou partielle), ICIF: indice de CIF n.t. = non testé Otacanthus azureus - itraconazole HE b Otacanthus azureus Itraconazole 500 16 0,03 125 31 0,25 62 8 0,13 0,3 0,4 0,4 0,125 0,03 0,24 0,25 0,03 0,12 0,5 0,125 0,25 62 16 0,26 0,5 1 0,25 0,25 62 31 0,5 0,5 8 0,25 0,03 31 16 0,516 0,6 0,5 0,03 0,06 0,6 31 16 0,52 8 1 0,13 31 16 0,516 0,8 2 0,5 0,25 Au vu de ces résultats, des effets de synergie entre l'huile essentielle et les trois antifongiques azotés : l'itraconazole, le fluconazole et le cétoconazole ont ainsi été démontrés. Sur les levures testées, la combinaison huile essentielle/antifongique est particulièrement efficace sur Candida parapsilosis et sur Candida albicans (ICIF 0,1 à 0,4). Ainsi, une synergie a été particulièrement mise en évidence entre l'huile essentielle d'Otacanthus azureus et l'itraconazole, ainsi qu'entre l'huile essentielle et le cétonconazole. Avec ces combinaisons, les concentrations d'itraconazole et de cétoconazole nécessaires à l'inhibition de la croissance des souches sont donc très nettement réduites (CIF de 0,03), de même que la concentration en huile essentielle. Dans le cas des champignons dermatophytes (T. mentagrophytes et M. gypseum), une synergie a été observée pour l'huile essentielle en association avec chacun des trois antifongiques testés. Ainsi, la concentration en antifongique est nettement réduite dans tous les cas (CIF des antifongiques de 0,03 à 0,25). L'intérêt d'une combinaison de produits dans le but de diminuer les doses d'antifongiques pour en réduire les effets secondaires et diminuer le phénomène de développement des résistances est donc également pleinement démontré par ces tests expérimentaux. Les résultats ont également été analysés selon la méthode des isobologrammes : les CIM de chaque combinaison entre les deux produits ont été calculées et tracées graphiquement afin de déterminer l'aspect de la combinaison. Dans le cas où les produits se substituent mutuellement, la courbe tracée est une diagonale, ce qui montre un effet additif. Quand les deux produits accentuent mutuellement leurs activités respectives, la courbe qui en résulte se rapproche de l'origine des deux axes et prend un aspect concave: il s'agit dans ce cas d'un effet de synergie. A l'inverse, lorsque la courbe est convexe et se situe au-dessus de la diagonale, l'inhibition mutuelle des activités indique que l'on est en présence d'antagonisme. Les isobologrammes obtenus ont été représentés sur les Figures 1 à 10. Les Figures 1 à 3 représentent les isobologrammes de la combinaison de l'huile essentielle selon l'invention avec respectivement le fluconazole (Figure 1), l'itraconazole (Figure 2) ou le cétoconazole (Figure 3) sur l'inhibition de la croissance des champignons dermatophytes T. mentagrophyte. Les Figures 4 à 6 représentent les isobologrammes de la combinaison de l'huile essentielle selon l'invention avec respectivement l'itraconazole (Figure 4), le fluconazole (Figure 5), ou le cétoconazole (Figure 6) sur l'inhibition de la croissance des champignons dermatophytes M. gypseum. Les Figures 7 et 8 représentent les isobologrammes de la combinaison de 10 l'huile essentielle selon l'invention avec respectivement l'itraconazole (Figure 7) ou le cétoconazole (Figure 8) sur l'inhibition de la croissance des levures C. albicans. Les Figures 9 et 10 représentent les isobologrammes de la combinaison de l'huile essentielle selon l'invention avec respectivement l'itraconazole (Figure 9) ou le cétoconazole (Figure 10) sur l'inhibition de la croissance des levures C. parapsilosis. 15 Ces isobologrammes montrent tous des courbes concaves et confirment bien les effets de synergie des associations de l'huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse avec antifongiques azolés : l'itraconazole, le fluconazole et le cétoconazole sur l'inhibition de la croissance de champignons dermatophytes tels que T. 20 mentagrophytes et M. gypseum, et l'itraconazole et le cétoconazole sur l'inhibition de la croissance de levures telles que C. albicans et C. parapsilosis. REVENDICATIONS1. Composition pharmaceutique, dermatologique ou cosmétique comprenant une huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse. 2. Composition selon la revendication 1, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des mycoses. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que les mycoses sont des mycoses humaines ou animales. 4. Composition selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce que les 15 mycoses sont des dermatophytoses ou des candidoses. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisée en ce que les mycoses sont des mycoses de la peau, des phanères tels que les ongles, poils et cheveux, et/ou des muqueuses ou des mycoses systémiques. 6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle est formulée pour être administrée par voie topique ou orale. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, 25 caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de crème, pommade, lotion, onguent, shampooing, sérum, pâte, mousse, d'huile, de gel ou de stick. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un agent antifongique tel qu'un 30 agent antifongique azolé avantageusement choisi dans le groupe constitué par l'itraconazole, le fluconazole, le cétoconazole et leurs mélanges. 20 9. Composition antifongique comprenant une huile essentielle d' Otacanthus azureus (Linden) Ronse. 10. Composition selon la revendication 9, comprenant une association synergique d'huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse et d'un agent antifongique azolé avantageusement choisi dans le groupe constitué par l'itraconazole, le fluconazole, le cétoconazole et leurs mélanges. 11. Produit contenant: - une huile essentielle d'Otacanthus azureus (Linden) Ronse, et - au moins un agent antifongique, tel qu'un agent antifongique azolé avantageusement choisi dans le groupe constitué par l'itraconazole, le fluconazole, le cétoconazole et leurs mélanges, comme produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, comme médicament, comme agent cosmétique ou dermatologique. 12. Produit selon la revendication 11, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des mycoses.