Brevet FR2968996A1 — publié le 20120622

La présente invention a pour objet une formulation aqueuse injectable stérile à base d'un mélange d'acide hyaluronique et d'alginate, ou de l'un de leurs sels, utilisée en ophtalmologie et présentant des propriétés spécifiques de viscoélasticité, d'étalement, de recouvrement et d'adhésion des tissus oculaires ainsi qu'une forte capacité à neutraliser les radicaux libres, propriétés lui permettant de protéger fortement les tissus de l'oeil. Toute invasion chirurgicale est dommageable pour les tissus de l'oeil. Pour minimiser les dommages en cause, notamment dans des zones où les tissus sont particulièrement fragiles et/ou irremplaçables, il est connu d'utiliser des formulations viscoélastiques comme auxiliaires de chirurgie (voir tableau 1). De telles solutions protègent les tissus des instruments chirurgicaux et aident à la manipulation desdits tissus. Elles sont également utilisées pour maintenir des espaces ou volumes de l'oeil. Dans le contexte de la chirurgie de la cataracte, on observe des dommages importants vis-à-vis des tissus oculaires et en particulier des cellules endothéliales cornéennes. Une perte excessive de ces cellules représente une complication sérieuse de la chirurgie de la cataracte car cette perte peut conduire à un oedème cornéen irréversible (kératopathie bulleuse), pouvant alors impliquer de fortes douleurs et une perte permanente de la vision. La chirurgie de la cataracte par phacoémulsification est devenue la technique la plus populaire depuis plusieurs décennies. Cette technique implique une perte des cellules endothéliales cornéennes du fait de dommages mécaniques, de l'émission de chaleur et de radicaux libres très réactifs générés par les ultrasons. Dans la littérature, l'action délétère des radicaux libres est de plus en plus mise en avant comme étant un facteur majeur de la perte endothéliale (Murano N., lshizaki, Corneal endothelial cell damage by free radicals associated with ultrasound oscillation, Arch. Ophthalmol., Vol. 126, 6, 816-820, 2008). Actuellement, différentes formulations viscoélastiques (voir tableau 1) sont présentes sur le marché de l'ophtalmologie. Ces formulations sont commercialisées sous différentes marques et comprennent, au choix, de l'acide hyaluronique, de l'hypromelose, de l'acide hyaluronique avec de l'hypromelose ou de l'acide hyaluronique avec de la chondroitine sulfate. Chacune de ces formulations présente des avantages spécifiques permettant de répondre aux besoins des praticiens (protection des tissus oculaires, forte capacité à créer et maintenir des espaces intraoculaires, forte capacité à être aspiré de l'oeil en fin d'intervention chirurgicale, ...). En effet, certaines formulations sont connues pour leur forte capacité à protéger les tissus oculaires, notamment les cellules de l'endothélium cornéen. C'est le cas du produit Viscoat® (commercialisé par Alcon Laboratories) qui est une formulation à base d'acide hyaluronique et de chondroitine sulfate, ou d'autres produits à base d'hypromelose tel que l'OcuCoat® (commercialisé par Bausch+Lomb). D'autres produits, tels que le Healon® ou Healon® GV (tous deux commercialisés par Abbott Medical Optics), sont plus connus pour leur forte capacité à créer et à maintenir des espaces intraoculaires. L'intérêt de l'ensemble de ces formulations pour protéger les tissus oculaires est bien connu. Toutefois, il a été montré dans la littérature que la capacité de protection des tissus oculaires et notamment des cellules endothéliales cornéennes est bien différente d'un produit à l'autre (Takahashi H., Free radicals in phacoemulsification and aspiration procedures, Arch. Ophthalmol., Vol. 120, 1348-1352, 2009 // Augustin A.J., Oxidative tissue damage after phacoemulsification : influence of ophthalmic viscosurgical devices, J. Cataract Refract Surg, Vol. 30, 424-427, 2004 // Bresciani C., Lebuisson D.A., Eveillard M., Viscosité dynamique et protection endothéliale cornéenne du Healonid, du Healon GV, du Provisc et du Viscoat au cours de la phacoémulsification, J. Fr. Ophhtalmologie, 19,1, 39-50, 1996). Dans la littérature, on trouve différentes hypothèses pour expliquer qu'une formulation viscoélastique permet d'obtenir une meilleure protection des tissus oculaires qu'une autre formulation. Les hypothèses les plus couramment émises sont i) une forte capacité de dispersion du produit permet de couvrir la surface du tissu oculaire à protéger, ii) les tissus oculaires comportent des récepteurs CD44 de l'acide hyaluronique qui permettent une bonne adhérence d'une formulation à base d'acide hyaluronique à la surface du tissu oculaire, iii) les formulations qui possèdent de la chondroitine sulfate, polymère fortement chargé négativement, ont une forte adhérence avec les tissus oculaires chargés positivement. Ainsi, une formulation comme Viscoat®, connue pour sa forte capacité de protection de l'endothélium cornéen, est composée d'acide hyaluronique, de chondroitine sulfate et elle possède une forte capacité de dispersion. Du fait de sa forte adhérence avec les tissus oculaires, cette formulation est beaucoup plus difficile à retirer de l'oeil en fin de chirurgie par rapport à une formulation ne contenant que de l'acide hyaluronique, comme c'est le cas de Healon®. A ce jour, il n'existe pas de formulation viscoélastique à usage ophtalmologique possédant des caractéristiques idéales permettant de répondre à l'ensemble des besoins des praticiens tout au long d'une chirurgie comme la chirurgie de la catarate. Ainsi, de nombreux praticiens combinent différents produits au cours de leur chirurgie de l'oeil pour réunir différentes caractéristiques de viscoélasticité et de protection des tissus oculaires afin d'avoir l'efficacité souhaitée. Dans ce contexte, il est important de mettre à la disposition des praticiens des formulations possédants des caractéristiques adaptées à leurs besoins. Il est notamment clé de mettre à leur disposition des formulations possédant une capacité optimale à protéger les tissus oculaires comme les cellules de l'endothélium cornéen, ceci afin de limiter les complications liées aux chirurgies de l'oeil. L'invention décrite ci-après a pour objectif de proposer une nouvelle formulation aqueuse injectable stérile à base d'un mélange d'acide hyaluronique et d'alginate, ou de l'un de leurs sels, utilisée en ophtalmologie et présentant des propriétés spécifiques de viscoélasticité, d'étalement, de recouvrement et d'adhésion des tissus oculaires ainsi qu'une forte capacité à neutraliser les radicaux libres, propriétés lui permettant de protéger fortement les tissus de l'oeil et notamment les cellules de l'endothélium cornéen. Cette formulation est caractérisée en ce que i) la concentration en acide hyaluronique, ou de l'un de ses sels, est comprise entre 0.001% et 10% (masse/volume), préférentiellement entre 1% et 4%, ii) la concentration en alginate, ou de l'un de ses sels, est comprise entre 0.001% et 10% (masse/volume), préférentiellement entre 0.1% et 4%, iii) la viscosité à cisaillement nul no de ladite formulation aqueuse injectable stérile est comprise entre 0.001 Pa.s et 450 Pa.s, préférentiellement entre 5 et 90 Pa.s. La présente invention concerne une formulation aqueuse injectable stérile utilisée en ophtalmologie à base d'un mélange d'acide hyaluronique et d'alginate, ou de l'un de leurs sels, caractérisée en ce que : - la concentration en acide hyaluronique, ou de l'un de ses sels, est comprise entre 0.001% et 10% (masse/volume), préférentiellement entre 1% et 10 4%, - la concentration en alginate, ou de l'un de ses sels, est comprise entre 0.001% et 10% (masse/volume), préférentiellement entre 0.1% et 4%, - la viscosité à cisaillement nul no de ladite formulation aqueuse injectable stérile est comprise entre 0.001 Pa.s et 450 Pa.s, préférentiellement 15 entre 5 et 90 Pa.s. La présente invention, du fait de sa composition et de ses propriétés rhéologiques spécifiques, possède une forte capacité à protéger les tissus oculaires. De manière tout à fait surprenante cette formulation possède des 20 propriétés de viscoélasticité remarquables (on observe une synergie au niveau de la viscosité entre l'acide hyaluronique et l'alginate mais également au niveau du module élastique G' et du module visqueux G"). Ces propriétés permettent notamment un étalement approprié et homogène de la formulation sur les tissus oculaires ainsi que la création et le maintien d'un espace intraoculaire (ce qui 25 permet alors de limiter les agressions « mécaniques » qui se déroulent dans l'oeil au cours de la chirurgie en créant un espace pour que le chirurgien puisse effectuer ses manipulations). Par ailleurs, la combinaison entre l'acide hyaluronique et l'alginate, dans les conditions selon l'invention, permet une forte adhérence entre la formulation et les tissus oculaires, permettant ainsi la 30 création d'un « dépôt protecteur » résistant à la surface de l'oeil (ce qui permet alors de limiter les « agressions mécaniques » et « radicalaires » qui se déroulent dans l'ceil au cours de la chirurgie). Il a également été observé que la présence d'alginate dans la formulation selon l'invention permet de renforcer la capacité du gel à neutraliser les radicaux libres présents dans l'espace oculaire et notamment les radicaux libres à forte action délétère libérés au cours de la chirurgie de la cataracte par phacoémulsification. Il est à noter que cette forte activité anti-radicalaire, clé pour limiter les agressions des tissus par les radicaux libres, peut être améliorée par l'ajout d'une molécule à activité antioxydante dans la formulation selon l'invention, comme une molécule de la famille des polyols. Il a été constaté que la formulation aqueuse injectable stérile de l'invention présente une synergie au niveau de la viscoélasticité (synergie au niveau de la viscosité mais également au niveau du module élastique G' et du module visqueux G") entre l'acide hyaluronique et l'alginate. En effet, la présence d'alginate (ou de l'un de ses sels) dans une solution à base d'acide hyaluronique (ou de l'un de ses sels) entraîne une forte augmentation de la viscosité par rapport à une solution d'acide hyaluronique seule. Cette augmentation ne s'explique pas par la viscosité de la solution d'alginate seule comme montré dans les exemples 1, 2 et 3 de la présente description. En effet, la viscosité d'une formulation aqueuse viscoélastique (ou hydrogel) comprenant de l'acide hyaluronique et de l'alginate, dans les conditions de l'invention, est significativement supérieure à la somme des viscosités correspondant à une 1 ere formulation comprenant de l'acide hyaluronique et à une 2eme formulation comprenant de l'alginate (il est à noter qu'une formulation à base d'alginate seul, c'est-à-dire sans acide hyaluronique, possède une viscosité insuffisante pour une utilisation en ophtalmologie pour maintenir efficacement l'espace intraoculaire). On observe la même synergie au niveau du module élastique G' et du module visqueux G". Cette propriété est constatée pour des formulations selon l'invention comprenant, ou pas, d'antioxydant(s) tel qu'un polyol. Cette synergie, démontrant une structure très spécifique entre l'acide hyaluronique et l'alginate, présente un intérêt majeur dans le domaine de l'ophtalmologie car la viscoélasticité joue un rôle clé dans l'efficacité du produit notamment, entre autre, sur la capacité à créer et à maintenir l'espace intraoculaire et sur la capacité à s'étaler sur les tissus oculaires. C'est pour cette raison que les produits viscoélastiques intraoculaires (produits possédant une composante visqueuse et une composante élastique, utilisés par injection dans l'oeil) utilisés dans le cadre de la chirurgie de la cataracte sont classifiés selon leur niveau de viscosité (voir Dick., et al., in Ophthalmologe 1999 Mar;96(3):193-211 et Tableau 1 suivant). Tableau 1 Produit Viscosité à cisaillement nul no Amivisc Plus® 128 AMO Vitrai® 41 Biolon® 243 Dispasan® 130 Dispasan Plus® 782 Healon® 243 Healon GV® 2451 Healon 5® 5525 Microvisc (Morcher Oil) ® 1162 Microvisc Plus® 3663 Morcher Oil® 1253 Provisc® 207 Rayvisc® 78 Viscoat® 58 Viscorneal (Allervisc) ® 733 Viscorneal Plus (Allervisc Plus) ® 1176 Visko® 206 Visko Plus® 1683 Acrivisc® 7 Adatocel® 8 Coatel® 6 HPMC Ophthal H® 94 HPMC Ophthal L® 7 Ocucoat® 6 PeHa-Visko® 5 Visco Shield® 60 La « viscosité à cisaillement nul » fait référence à la viscosité de 5 l'hydrogel lorsque celui-ci est au repos (pas de cisaillement imposé). Le module élastique qui représente le comportement élastique du matériau pour une fréquence donnée est classiquement noté G' tandis que le module visqueux, qui représente le comportement visqueux du matériau pour une fréquence donnée, est classiquement noté G". Ces grandeurs sont notamment définies dans le « Handbook of Pressure Sensitive Adhesive Technology » 3rd edition, D. Satas, chap. 9 p. 155 à 157". La formulation selon l'invention possède des caractéristiques importantes d'étalement, de recouvrement et d'adhésion des tissus oculaires en présence d'une concentration faible d'alginate. En effet, la concentration en alginate, ou de l'un de ses sels, est avantageusement comprise entre 0.001% et 10% (masse/volume). De manière préférentielle, cette concentration est comprise entre 0.1% et 4% (masse/volume). La présence d'alginate dans la formulation selon l'invention permet d'obtenir des propriétés de surface (fortes adhésion aux tissus oculaires) remarquables pour l'ophtalmologie, même à très faible concentration. Selon un mode de l'invention, l'alginate et l'acide hyaluronique (ou l'un de leurs sels) sont structurellement associés ou combinés tel que décrit dans la littérature (Oerther et al., Biochim Biophys Acta. 1999 Jan 4;1426(1):185-94 ; Oerther et al., Biopolymers. 2000 Oct 5;54(4):273-81). Parmi les sels d'alginate préférés selon l'invention, on citera les sels d'alginate, avec un cation, par exemple un sel mono- ou divalent tel que les sels de sodium, potassium, magnésium, calcium, manganèse. Les sels de sodium sont tout particulièrement préférés. On constate pour une formulation selon l'invention une forte adhérence entre ladite formulation et les tissus de l'oeil. Cette forte adhérence est clé pour la protection de l'oeil au cours d'une chirurgie et notamment pour limiter la perte des cellules endothéliales au cours d'une chirurgie de la cataracte. Cette forte adhérence, couplée à la capacité de l'hydrogel selon l'invention, de s'étaler et de couvrir les tissus oculaires permet la formation d'un « ceating-dépôt protecteur » à la surface des tissus. Ce « ceating-dépôt protecteur » permet une protection des cellules de l'oeil en limitant les « agressions mécaniques et radicalaires » subies par les tissus oculaires au cours de la chirurgie. La forte adhérence constatée avec la combinaison [acide hyaluronique / alginate] selon l'invention est significativement supérieure à celle obtenue avec une formulation à base d'acide hyaluronique sans alginate (voir exemple 5). Cette forte adhérence entre l'acide hyaluronique et l'alginate est également constaté lorsque l'on souhaite retirer la formulation de l'espace intraoculaire par aspiration. Ce temps d'aspiration, tout comme le produit Viscoat®, est supérieur à celui de Healon® (formulation à base d'acide hyaluronique). Sans vouloir être lié à une explication théorique, les multiples charges négatives (2 fois plus de charges négatives que l'acide hyaluronique) portées par l'alginate dans la formulation selon l'invention doivent fortement participer à cette bonne adhérence formulation/tissus, les tissus oculaires étant chargés positivement. Il a été observé que cette bonne adhérence formulation/tissus est également à corréler avec la viscosité de la formulation selon l'invention (voir exemple 5). Ainsi, la viscosité à cisaillement nul no de ladite formulation aqueuse injectable stérile selon l'invention est généralement comprise entre 0.001 Pa.s et 450 Pa.s., ceci afin de garantir une mouillabilité appropriée permettant aux composés de la formulation d'interagir avec les tissus oculaires. Afin d'obtenir une excellente adhérence formulation/tissu, il est préférable d'avoir une viscosité à cisaillement nul no comprise entre 5 à 90 Pa.s. Une bonne adhérence formulation/tissu est constatée pour une viscosité de la formulation selon l'invention préférablement comprise entre 90 Pa.s et 160 Pa.s. Par ailleurs, une adhérence satisfaisante est constatée pour une viscosité de la formulation selon l'invention comprise entre 160 Pa.s et 450 Pa.s. Il a également été observé que la formulation selon l'invention possède une forte capacité à neutraliser les radicaux libres générés dans l'oeil tout en limitant de façon importante la perte de ses propriétés rhéologiques par dégradation radicalaire. Comme décrit dans la littérature, les radicaux libres ont une forte action délétère vis-à-vis des cellules des tissus oculaires. Les radicaux libres sont notamment générés au cours de l'étape de phacoémulsification lors de la chirurgie de la cataracte. La formulation selon l'invention, de par sa forte capacité à neutraliser les radicaux libres, permet de réduire la quantité de radicaux libres présents dans l'oeil et ainsi de limiter les dommages provoqués par ces radicaux sur les tissus oculaires. Comme démontré dans l'exemple 6, la présence d'alginate dans la formulation selon l'invention permet d'obtenir une résistance à la dégradation radicalaire supérieure à celle d'une formulation à base d'acide hyaluronique. Cette meilleure capacité à neutraliser les radicaux libres et à conserver ses propriétés rhéologiques est une propriété clé de cette nouvelle formulation pour avoir une forte protection des tissus oculaires. Selon un mode particulier de l'invention, cette propriété peut être améliorée en ajoutant un ou plusieurs antioxydants à la formulation selon l'invention. Avantageusement, cet antioxydant est un polyol. En plus d'améliorer la capacité antioxydante de la formulation, le polyol, de par sa capacité à former des liaisons faibles avec l'acide hyaluronique et l'alginate, est également en mesure d'interagir par des liaisons faibles avec les tissus oculaires. Ainsi, la création de liaisons faibles entre la formulation et les tissus oculaires par l'intermédiaire du polyol de la formulation selon l'invention peut contribuer à augmenter la forte adhérence formulation - tissus oculaires. L'acide hyaluronique est un glycosaminoglycane réparti largement parmi les tissus conjonctifs, épithéliaux et nerveux. Il constitue l'un des principaux composants de la matrice extracellulaire. Il contribue de façon significative à la prolifération et à la migration des cellules. L'acide hyaluronique est un polymère de disaccharides eux-mêmes composés d'acide D-glucuronique et de D-N-acétylglucosamine, liés entre eux par des liaisons glycosidiques alternées beta- 1,4 et beta-1,3. La masse moléculaire de l'acide hyaluronique in vivo peut aller jusqu'à environ 2 à 7 millions de daltons. La présente invention comprend généralement une concentration en acide hyaluronique, ou de l'un de ses sels, comprise entre 0.001% et 10% (masse/volume), préférentiellement entre 10/0 et 4%. Parmi les sels d'acide hyaluronique préférés selon l'invention, on citera les sels d'acide hyaluronique, avec un cation, par exemple un sel mono- ou divalent tel que les sels de sodium, potassium, magnésium, calcium, manganèse. Les sels de sodium sont tout particulièrement préférés. Selon une variante préférentielle, la formulation aqueuse selon l'invention comprend de l'acide hyaluronique, ou l'un de ses sels, dont la masse moléculaire est comprise entre 4x105 Da et 2x106 Da et de l'alginate, ou l'un de ses sels, dont la masse moléculaire est inférieure à 3x105 Da. Selon une variante particulièrement préférée, la masse moléculaire de l'acide hyaluronique, ou de l'un de ses sels, est comprise entre 4x105 Da et 1,5x106 Da et celle de l'alginate, ou de l'un de ses sels, est inférieure à 1x105 Da. Une variante alternative de la présente invention prévoit que la gamme de masse moléculaire de l'acide hyaluronique, ou de l'un de ses sels, comprise entre 4x105 Da et 2x106 Da, est obtenue par un mélange de différentes masses moléculaires d'acide hyaluronique et/ou d'alginate (ou de l'un de leurs sels). Dans ce cas, la gamme de masse moléculaire considérée reflète donc le résultat de la moyenne des masses moléculaires de deux ou plusieurs acides hyaluroniques et/ou alginates, ou de l'un de leurs sels. L'acide hyaluronique, ou l'un de ses sels ainsi que l'alginate, ou l'un de ses sels, peuvent être sous forme de polymère linéaire et/ou réticulé et/ou greffé. Des procédés de réticulation, notamment de l'acide hyaluronique, sont connus de l'homme du métier et sont, par exemple, décrits dans les demandes WO 2005/085329 (déposée au nom d'ANTEIS SA) et WO 97/004012 (déposée au nom Q MED AB). Dans le cadre de variantes avantageuses, la formulation aqueuse selon l'invention comprend en outre un ou plusieurs antioxydants. De manière préférentielle ces antioxydants sont choisis parmi la famille des polyols. Parmi les polyols les plus couramment rencontrés on peut citer, entre autres exemples, le sorbitol, le glycérol, le mannitol et le propylène glycol. Selon une variante particulièrement avantageuse, la concentration en polyol est inférieure à 10% (masse/volume), préférentiellement inférieure à 5% (masse/volume). Egalement dans le cadre de variantes avantageuses, la formulation aqueuse selon l'invention comprend en outre un anesthésique. Parmi les anesthésiques les plus couramment rencontrés on peut citer, entre autres exemples, la lidocaïne seule ou en combinaison avec de l'adrénaline, la procaïne, l'étidocaïne seule ou en combinaison avec de l'adrénaline, l'articaïne seule ou en combinaison avec de l'adrénaline, la mépivacaïne, la pramocaïne, la quinisocaïne, ou un ou plusieurs de ces anesthésiques. Un des objets de la présente invention concerne l'utilisation des formulations aqueuses décrites ci-dessus comme auxiliaires et/ou implants temporaire de chirurgie en ophtalmologie. Les formulations aqueuses de l'invention sont particulièrement performantes dans ce contexte d'utilisation, en particulier lors de la chirurgie de la cataracte. Dans un tel contexte d'utilisation, les formulations aqueuses selon l'invention sont injectées, remplissent leur fonction tel que décrit plus haut et dans les exemples, puis retirées totalement ou en grande partie en fin d'intervention. Les formulations aqueuses de l'invention peuvent également ne pas être retirées en fin d'intervention. Elles peuvent ainsi jouer un rôle clé pour améliorer le résultat clinique de la chirurgie comme dans le cas de la chirurgie du glaucome, pour laquelle l'implantation dans l'oeil d'une formulation selon l'invention peut permettre d'effectuer un drainage entre différents compartiments de l'oeil et ainsi améliorer la fibrose post-opératoire permettant ainsi d'obtenir un meilleur taux de succès de la chirurgie. Un autre objet de la présente invention concerne également une formulation pour l'hydratation et/ou la cicatrisation et/ou la protection des tissus oculaires utilisée en ophtalmologie, caractérisée en ce qu'elle consiste en, ou consiste essentiellement en une formulation aqueuse selon invention décrite ci- dessus. La formulation selon l'invention peut alors être utilisée soit dans le contexte d'une chirurgie de l'aeil ou soit hors contexte d'une chirurgie de l'oeil. La présente invention comprend aussi une formulation aqueuse, telle que décrite ci-dessus, pour le traitement de maladies ophtalmiques telles que dégénérescence de la rétine, glaucome, cataracte, par utilisation intraoculaire ou topique. Les formulations aqueuses de l'invention sont généralement utilisées telles quelles mais il n'est pas exclu qu'il leur soit ajouté au moins un autre additif (autre que ceux citées plus haut) et/ou au moins un principe actif. Par conséquent, les implants et/ou auxiliaires mentionnés ci-dessus consistent donc, ou consistent donc essentiellement, en les formulations selon l'invention. Selon un autre objet, la présente invention concerne un procédé de préparation d'une formulation aqueuse selon l'invention comprenant les étapes suivantes : a) dans une première étape, des quantités adéquates des polymères acide hyaluronique et alginate ou l'un de leurs sels, sont mis en solution (mise en solution simultanée des polymères ou l'un avant l'autre), de sorte que la concentration en acide hyaluronique, ou de l'un de ses sels, est comprise entre 0.001 % et 10% (masse/volume), préférentiellement entre 1% et 4%, et la concentration en alginate, ou de l'un de ses sels, est comprise entre 0.001 % et 10% (masse/volume), préférentiellement entre 0.1% et 4%, b) dans une deuxième étape, un mélange adapté est effectué, c) dans une troisième étape, le mélange ainsi obtenu est rempli dans son contenant final comme par exemple à l'intérieur d'une seringue, d) dans une quatrième étape, le produit est stérilisé. Le remplissage de la formulation dans son contenant tel que détaillé dans l'étape c) peut également être effectué après l'étape de stérilisation. Dans ce cas, le remplissage du produit devra se faire de manière aseptique. La stérilisation de la formulation selon l'étape d) de l'invention est effectuée selon les différentes techniques connues par l'homme de l'art. On citera par exemple la stérilisation par filtration aseptique ou la stérilisation à la chaleur humide, cette dernière étant préférée. L'homme de l'art saura sélectionner un cycle de stérilisation à la chaleur (température et durée du cycle de stérilisation) approprié à la stérilisation de son produit. Par exemple, les cycles de stérilisation à la chaleur humide suivants peuvent être utilisés : 131°C, 1 min / 130°C, 3 min / 125°C, 7 min / 121 °C, 20 min / 121°C, 10 min / 100°C, 2h. Selon un autre objet, la présente invention concerne un kit se présentant préférentiellement sous la forme de seringue contenant la formulation telle que décrit précédemment. La présente invention concerne également un kit sous forme d'un 5 contenant différent d'une seringue comme une ampoule ou un flacon contenant la formulation telle que décrit précédemment. L'invention va maintenant être illustrée à titre non limitatif par les exemples 1 à 6 suivants : 10 EXEMPLES Exemple 1 Mise en avant de la synergie HA/alginate dans la formulation selon l'invention 15 Fabrication de trois hydrogels selon la méthode décrite ci-dessous : Hydrogel A : Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire, on ajoute 0.90 g de hyaluronate de sodium à 1.1 MDa. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On 20 obtient un gel visuellement transparent et homogène. Soit Al, le gel ainsi obtenu. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 20 min à une température de 121 °C. Soit A2, le gel ainsi obtenu. 25 Hydrogel B : Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire, on ajoute 0.6 g d'alginate de sodium à 35 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. Soit B1, le gel ainsi 30 obtenu. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 20 min à une température de 121 °C. Soit B2, le gel ainsi obtenu. Hydrogel C : Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire, on ajoute 0.90 g de hyaluronate de sodium à 1.1 MDa et 0.6 g d'alginate de sodium à 35 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. Soit Cl, le gel ainsi obtenu. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 20 min à une température de 121°C. Soit C2, le gel ainsi obtenu. La viscosité à taux de cisaillement nul (= viscosité zéro) ainsi que les modules élastiques et visqueux G' et G" (à la fréquence de 1 Hz) des hydrogels Al, A2, B1, B2 et Cl, C2 sont mesurés à l'aide d'un rhéomètre AR1000 (TA instruments) avec une géométrie plate de 40 mm, un entrefer de 1000 microns et une température d'analyse de 25°C. Hydrogel Al : Viscosité zéro = 189 Pa.s, G'(1 Hz) = 203 Pa, G"(1 Hz) = 181 Pa Hydrogel B1 : Viscosité zéro On constate la même synergie au niveau des modules élastiques et visqueux G' et G". Exemple 2 Mise en avant de la synergie HA/alginate dans la formulation selon l'invention Fabrication de trois hydrogels selon la méthode décrite ci-dessous : Hydrogel A : Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire contenant 35 mg/ml de sorbitol, on ajoute 0.30 g de hyaluronate de sodium à 3.7 MDa. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 5 min à une température de 121°C. Hydrogel B : Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire contenant 35 mg/ml de sorbitol, on ajoute 0.03 g d'alginate de sodium à 285 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 5 min à une température de 121°C. Hydrogel C : Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire contenant 35 mg/ml de sorbitol, on ajoute 0.30 g de hyaluronate de sodium à 3.7 MDa et 0.03 g d'alginate de sodium à 285 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 5 min à une température de 121°C. La viscosité à taux de cisaillement nul (= viscosité zéro) des hydrogels A, B et C est mesurée à l'aide d'un rhéomètre AR1000 (TA instruments) avec une géométrie plate de 40 mm, un entrefer de 1000 microns et une température d'analyse de 25°C. Hydrogel A : Viscosité zéro = 124 Pa.s Hydrogel B : Viscosité zéro Exemple 3 Mise en avant de la synergie HA/alginate dans la formulation selon l'invention Fabrication de trois hydrogels selon la méthode décrite ci-dessous : Hydrogel A : Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire contenant 1 mg/ml de sorbitol, on ajoute 0.90 g de hyaluronate de sodium à 440 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. Hydrogel B : Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire contenant 1 mg/ml de sorbitol, on ajoute 1.2 g d'alginate de sodium à 75 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. Hydrogel C : Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire contenant 1 mg/ml de sorbitol, on ajoute 0.90 g de hyaluronate de sodium à 440 000 Da et 1.2 g d'alginate de sodium à 75 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. La viscosité à taux de cisaillement nul (= viscosité zéro) des hydrogels A, B et C est mesurée à l'aide d'un rhéomètre AR1000 (TA instruments) avec une géométrie plate de 40 mm, un entrefer de 1000 microns et une température d'analyse de 25°C. Hydrogel A : Viscosité zéro = 29 Pa.s Hydrogel B : Viscosité zéro Exemple 4 Formulation injectable en ophtalmologie Dans 30g d'un tampon phosphate contenant 20 mg/ml de sorbitol, on ajoute 0.90 g de hyaluronate de sodium à 900 000 Da et 0.6 g d'alginate de sodium à 5 35 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 20 min à une température de 121°C. On obtient un gel visuellement 10 transparent et homogène. On mesure le pH et l'osmolarité de l'hydrogel stérilisé : pH = 6.95 à 25°C ; Osmolarité =297 mOsm/kg On mesure également la viscosité zéro du produit à l'aide d'un rhéomètre AR1000 (TA instruments) avec une géométrie plate de 40 mm, un entrefer de 15 1000 microns et une température d'analyse de 25°C. Viscosité zéro = 55 Pa.s Le produit est facilement injectable à travers une canule 27G angulée à usage intra-oculaire. Une étude de biocompatibilité sur des cornées de porc démontre une absence 20 de toxicité vis-à-vis des cellules endothéliales cornéennes. L'ensemble des paramètres mesurés démontre que la formulation ci-dessus selon l'invention est conforme aux critères requis pour être utilisée en intraoculaire. 25 Exemple 5 Propriétés de surface de la formulation selon l'invention / Effet protecteur vis-à- vis des tissus oculaires Soit A, B et C, les formulations décrites ci-dessous : 30 Hydrogel A : (gel selon l'invention) Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire, on ajoute 0.90 g de hyaluronate de sodium à 1.1 MDa et 0.6 g d'alginate de sodium à 35 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 20 min à une température de 121°C. La viscosité zéro est mesurée à 65 Pa.s. Hydrogel B : (gel selon l'invention) Dans 30g d'un tampon phosphate, on ajoute 0.90 g de hyaluronate de sodium à 3.3 MDa et 0.3 g d'alginate de sodium à 35 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 20 min à une température de 121°C. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. La viscosité zéro est mesurée à 412 Pa.s. Hydrogel C : (gel selon l'art antérieur) Dans 30g d'une solution aqueuse iso-osmolaire, on ajoute 0.90 g de hyaluronate de sodium à 1.1 MDa. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 20 min à une température de 121°C. La viscosité zéro est mesurée à 52 Pa.s. Les étapes d'une chirurgie de la cataracte sont effectuées sur un oeil de porc frais en s'arrêtant avant l'étape d'implantation d'une lentille intra-oculaire. Lors de cette expérience, le chirurgien utilise soit l'hydrogel A, B ou C (1 ml disponible pour chaque hydrogel et chaque expérience). L'expérience est effectuée 3 fois pour chaque hydrogel et un comptage des cellules endothéliales cornéennes est réalisé avant et après chaque chirurgie afin d'évaluer la perte endothéliales subies au cours de la chirurgie. Pour chaque hydrogel testé, une moyenne de la perte endothéliale cornéenne est effectuée sur les 3 expériences réalisées. Une comparaison de la perte endothéliale est effectuée pour les 3 hydrogels testés (normalisée à 1 par rapport au gel C) : Formulation A : 0.79 Formulation B : 0.95 Formulation C: 1 La formulation A selon l'invention possède la meilleure protection de l'endothélium cornéen. La formulation B selon l'invention possède une meilleure protection de l'endothélium cornéen que la formulation C (formulation selon art antérieur) mais cette protection est significativement moins bonne que celle apportée par la formulation A. Exemple 6 Forte résistance à la dégradation radicalaire de la formulation selon l'invention Soit A et B, les formulations décrites ci-dessous : Hydrogel A : (gel selon l'invention) Dans 30g d'un tampon phosphate, on ajoute 0.90 g de hyaluronate de sodium à 900 000 Da et 0.6 g d'alginate de sodium à 35 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 20 min à une température de 121°C. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. Hydrogel B : (gel selon l'art antérieur) Dans 30g d'un tampon phosphate, on ajoute 0.90 g de hyaluronate de sodium à 900 000 Da. On mélange par agitation mécanique à température ambiante pendant 24h. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. On rempli le gel ainsi obtenu en seringue verre et on le stérilise à l'autoclave pendant 20 min à une température de 121°C. On obtient un gel visuellement transparent et homogène. La résistance à la dégradation radicalaire des gels A et B est comparée. Le test de dégradation est effectué à l'aide d'un rhéomètre AR1000 (TA instruments) avec une géométrie plate de 40 mm et un entrefer de 1000 µm. Le test de dégradation est effectué en ajoutant un oxydant (H2O2) dans le gel à tester, en homogénéisant à la spatule pendant 1 minute, en se plaçant à la température de 37°C et en imposant une déformation de 0,3%. La valeur de la viscosité complexe rr à 1 Hz est mesurée à t=5 min et t=40 min. Les formulations testées sont comparées en fonction de leur diminution de viscosité complexe Orb*(1 Hz) entre t=5 min et t=40 min. Formulation Orb*(1 Hz) Entre t=5min et t=40min Gel A -33% Selon l'invention Gel B -37% Selon l'art antérieur On constate que la formulation (gel) selon l'invention possède une meilleure résistance à la dégradation radicalaire. Les radicaux libres ont une action délétère vis-à-vis des tissus oculaires. Par exemple, il est intensivement décrit dans la littérature que l'étape de phacoémulsification utilisée au cours d'une chirurgie de la cataracte induit une forte émission de radicaux libres. Ces radicaux libres engendrent une perte significative des cellules endothéliales cornéennes. Les hydrogels à base d'acide hyaluronique jouent un rôle majeur dans la protection des cellules endothéliales cornéennes au cours de cette chirurgie car 20 il neutralise une partie des radicaux libres formés. Comme démontré ci-dessous, le gel selon l'invention possède une capacité améliorée à résister à la dégradation par les radicaux libres. Cette capacité lui permet d'avoir une meilleure conservation de sa rhéologie au cours d'une chirurgie de la cataracte, en particulier de limiter l'évolution des propriétés de 25 viscoélasticité et d'adhérence aux tissus oculaires lors de l'étape de phacoémulsification. Ainsi, le gel selon l'invention permet une protection accrue REVENDICATIONS1. Formulation aqueuse injectable stérile utilisée en ophtalmologie à base d'un mélange d'acide hyaluronique et d'alginate, ou de l'un de leurs sels, caractérisée en ce que : - la concentration en acide hyaluronique, ou de l'un de ses sels, est comprise entre 0.001% et 10% (masse/volume), préférentiellement entre 1% et 4%, - la concentration en alginate, ou de l'un de ses sels, est comprise entre 0.001% et 10% (masse/volume), préférentiellement entre 0.1% et 4%, - la viscosité à cisaillement nul no de ladite formulation aqueuse injectable stérile est comprise entre 0.001 Pa.s et 450 Pa.s, préférentiellement entre 5 et 90 Pa.s. 2. La formulation aqueuse selon la revendication 1 comprenant en outre un ou plusieurs antioxydants, comme les antioxydants de la famille des polyols. 3. La formulation aqueuse selon l'une quelconque des revendications 1 ou 20 2 comprenant en outre un anesthésique. 4. La formulation aqueuse selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que l'un des sels d'acide hyaluronique est le hyaluronate de sodium. 5. La formulation aqueuse selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que l'un des sels d'alginate est l'alginate de sodium. 30 6. La formulation aqueuse selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que la masse moléculaire préférentielle de l'acide hyaluronique, ou de l'un de ses sels, est comprise entre 4x105 Da et 252x106 Da et la masse moléculaire préférentielle de l'alginate, ou de l'un de ses sels, est inférieure à 3x10500-000 Da. 7. La formulation aqueuse selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que l'acide hyaluronique et/ou l'alginate, ou l'un de leurs sels, est réticulé et/ou greffé. 8. Auxiliaires et/ou implants temporaire de chirurgie en ophtalmologie, caractérisés en ce qu'ils consistent en, ou consistent essentiellement en, une 10 formulation aqueuse selon l'une quelconque des revendications précédentes. 9. Formulation pour l'hydratation et/ou la cicatrisation et/ou la protection des tissus utilisée en ophtalmologie, caractérisée en ce qu'elle consiste en, ou consiste essentiellement en une formulation aqueuse selon l'une quelconque 15 des revendications précédentes. 10. Formulation aqueuse selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 pour le traitement de maladies ophtalmiques par utilisation intra-oculaire ou topique. 20