Brevet FR2964037A1 — publié le 20120302

UTILISATION D'UNE SOUCHE PROBIOTIQUE GM-080 DANS LE TRAITEMENT DE L'INFLAMMATION CARDIAQUE ET DE L'APOPTOSE CARDIAQUE Cette invention porte d'une manière générale sur l'utilisation d'une souche probiotique, et plus particulièrement sur l'utilisation d'une souche probiotique GM-080 pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque. D'une manière générale, les probiotiques (ou bactéries probiotiques) tels que les bactéries lactiques (LAB) et certaines levures sont présentés comme des microorganismes vivants bénéfiques pour la santé du tractus gastro-intestinal (GI) qui sont des suppléments ou habitent originellement dans le corps humain pour le bénéfice de la santé du tractus gastro-intestinal (GI). Les bactéries lactiques sont nommées ainsi parce que la plupart de leurs membres convertissent le lactose et autres sucres en acide lactique. Les bactéries lactiques sont également un genre de bactéries anaérobies facultatives ou micro-aérophiles Gram-positives et elles sont largement appliquées dans la fermentation pour l'industrie alimentaire. De nombreuses recherches prouvent que les bactéries lactiques peuvent améliorer les maladies liées à une allergie et le reflux gastro-intestinal, par exemple les maladies intestinales inflammatoires. Typiquement, les bactéries lactiques comprennent les principaux membres des genres Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus et Streptococcus, et d'autres membres des genres Aerococcus, Carnobacterium, Enterococcus, Oenococcus, Sporolactobacillus, Teragenococcus, Vagococcu et Weisella. La plupart des souches de bactéries lactiques appartiennent au genre Lactobacillus. Les souches de bactéries lactiques mentionnées ci-dessus appartiennent à l'ordre des Lactobacillales, dont certaines souches peuvent servir de probiotiques. Dans les présentes études, deux types principaux de bactéries probiotiques, membres des genres Lactobacillus et Bifidobacterium ont été étudiés en détail. Selon de récentes études épidémiologiques, les bactéries lactiques peuvent stimuler la réponse immunitaire, de façon à promouvoir la tolérance immunitaire pour les allergènes innocents. (Voir Penders, J., Stobberingh, E.E., van den Brandt, P.A., Thijs, C. « The rote of the intestinal microbiota in the development of atopic disorders ». (Rôle du microbiote intestinal dans le développement de troubles atopiques) European Journal of Allergy and Clinical Immunology 62(11), 1223-1236. (2007)). Les bactéries lactiques ont été évaluées dans d'autres études de recherche sur des animaux et des êtres humains en ce qui concerne les diarrhées associées aux antibiotiques, les diarrhées du voyageur, les diarrhées pédiatriques, les maladies intestinales inflammatoires, le syndrome du côlon irritable (Voir Furrie, E. Probiotics and allergy (Probiotiques et allergie) Proceedings of the Nutrition Society 64(4), 465-469, 2005 ; Goossens, D., Jonkers, D., Stobberingh, E., van den Bogaard, A., Russel, M., Stockbrugger, R. Probiotics in gastroentrology : indication and future perspectives (Probiotiques en gastro-entérologie : indication et perspectives futures). Scandinavian Journal of Gastroenterology 239 (Suppl.), 15-23, 2003 ; Kalliomaki, M., Salminen, S., Poussa, T., Arvilommi, H., Isolauri, E. Probiotics and prevention of atopic disease : 4-year follow-up of a randomised placebo-controlled trial (Probiotiques et prévention de maladies atopiques : 4 ans de suivi d'un essai randomisé contrôlé par placebo). Lancet 361, 1869-1871, 2003 ; Pfruender, H., Amidjojo, M., Hang, F., Weuster-Botz, D. Production of Lactobacillus kefir cells for asymmetric synthesis of a 3,5-dihydroxycarboxylate (Production de cellules de kéfir de Lactobacillus pour une synthèse asymétrique de 3,5- dihydroxycarboxylate). Applied Microbiology and Biotechnology 67, 619-622, 2005 Shanahan, F. Probiotics and inflammatory bowel disease : is there a scientific rationale? (Probiotiques et maladies intestinales inflammatoires : y a-t-il une rationalité scientifique ? Inflammatory Bowel Disease 6(2), 107-115, 2000), les maladies atopiques etc. (Voir Penders, J., Stobberingh, E.E., van den Brandt, P.A., Thijs, C. The rote of the intestinal microbiota in the development of atopic disorders (Rôle du microbiote intestinal dans le développement de troubles atopiques). European Journal of Allergy and Clinical Immunology 62(11), 1223-1236, 2007 ; Lee, J., Seto, D., Bielory, L. Meta-analysis of clinical trials of probiotics for prevention and treatment of pediatric atopic dermatitis (Méta-analyse d'essais cliniques de probiotiques pour la prévention et le traitement de dermatites atopiques pédiatriques. Journal of Allergy and Clinical Immunology 123(1), 266-267, 2009) Le traitement de maladies cardiovasculaires par des bactéries lactiques a en fait été suggéré il y a plus de 50 ans lorsqu'il a été rapporté que la consommation de bactéries lactiques diminuait la pression sanguine et l'hypocholestérolémie chez les êtres humains. (Voir Pfruender et al., 2005 ; Lye, H.S., Kuan, C.Y., Ewe, J.A., Fung, W.Y., Liong, M.T. The improvement of hypertension by probiotics : Effects on cholesterol, diabetes, renin, and phytoestrogens (Amélioration de l'hypertension par des 4 probiotiques : effets sur le cholestérol, le diabète, la rénine et les phyto-estrogènes). International Journal of Molecular Sciences 10, 3755-3775, 2009). Cependant les études précédentes sont peu pertinentes ou non pertinentes sur le fait de savoir si les probiotiques peuvent prévenir l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque chez des animaux enclins à une allergie, si bien qu'elles ne discutent pas le mécanisme potentiel du probiotique pour prévenir l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque. Par conséquent, il est nécessaire de proposer une nouvelle utilisation de la souche probiotique pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque, développant par là d'autres applications des souches probiotiques. En conséquence, un aspect de la présente invention porte sur une composition pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque, laquelle comprend une quantité thérapeutiquement efficace d'une souche probiotique GM-080 de Lactobacillus paracasei. La souche GM-080 de L. paracasei a été déposée auprès du China Center for Type Culture Collection (CCTCC), Université de Wuhan, Wuhan 430072, République populaire de Chine sous le numéro d'entrée CCTCC M 204012 le 19 février 2004. Un autre aspect de la présente invention porte sur un procédé de traitement de l'inflammation cardiaque et de l'apoptose cardiaque par l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace de la souche probiotique GM-080 de Lactobacillus paracasei (déposée auprès du CCTCC de l'Université de Wuhan en Chine sous le numéro d'entrée CCTCC M 204012) dans lequel la souche probiotique GM-080 inhibe spécifiquement l'expression génique de p-JNK, Bad et Bax. 5 Selon l'aspect mentionné ci-dessus de la présente invention, celle-ci porte sur une composition pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque. Dans un mode de réalisation, la composition peut comprendre une quantité thérapeutiquement efficace d'une souche probiotique GM-080 de Lactobacillus paracasei (déposée auprès du CCTCC de l'Université de Wuhan en Chine sous le numéro d'entrée CCTCC M 204012). Dans un mode de réalisation, la souche probiotique GM-080 peut être vivante ou inactivée. Dans un autre mode de réalisation, la souche probiotique GM-080 inhibe spécifiquement l'expression génique de p-JNK, Bad et Bax. Dans un mode de réalisation additionnel, la souche probiotique GM-080 peut être une composition médicale, un additif alimentaire, un aliment ou son ingrédient. Selon d'autres aspects de la présente invention, celle-ci porte sur un procédé pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque par l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace de la souche probiotique GM-080 de Lactobacillus paracasei (déposée auprès du CCTCC de l'université de Wuhan en Chine sous le numéro d'entrée CCTCC M 204012), dans lequel la souche probiotique GM-080 inhibe spécifiquement l'expression 6 génique de p-JNK, Bad et Bax. Dans un mode de réalisation, la composition peut en outre comprendre au moins une autre souche. La au moins une autre souche est choisie dans le groupe constitué par Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium longum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus cremors, Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus rhamnosus GG et toute combinaison de celles-ci. En ce qui concerne la souche probiotique susmentionnée GM-080 pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque, cette souche peut spécifiquement inhiber l'expression génique de p-JNK, Bad et Bax de manière à traiter efficacement l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque, développant par là d'autres applications de la souche probiotique. Les aspects précédents et nombre des avantages de cette invention qui en découlent seront appréciés plus facilement et mieux compris par référence à la description détaillée suivante, prise conjointement avec les dessins annexés dans lesquels : la Figure 1 représente un diagramme de voies de transduction du signal mises en jeu dans le traitement de l'inflammation cardiaque et de l'apoptose cardiaque selon un mode de réalisation de la présente invention. La Figure 2 représente une analyse par transfert 15 7 Western de tissu cardiaque de souris selon un mode de réalisation de la présente invention. La Figure 3 représente un diagramme à barres de 5 l'expression relative de p-JNK normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline de la Figure 2. La Figure 4 représente un diagramme à barres de l'expression relative de JNK 1/2 normalisée par rapport à 10 l'expression d'a-tubuline de la Figure 2. La Figure 5 représente une analyse par transfert Western de tissu cardiaque de souris selon un autre mode de réalisation de la présente invention. La Figure 6 représente un diagramme à barres de l'expression relative de p-NFKB normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline de la Figure 5. 20 La Figure 7 représente un diagramme à barres de l'expression relative de p-IKB normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline de la Figure 5. La Figure 8 représente une analyse par transfert 25 Western de tissu cardiaque de souris selon un autre mode de réalisation de la présente invention. La Figure 9 représente un diagramme à barres de l'expression relative de Bad normalisée par rapport à 10 15 8 l'expression d'a-tubuline de la Figure 8. La Figure 10 représente un diagramme à barres de l'expression relative de Bax normalisée par rapport à 5 l'expression d'a-tubuline de la Figure 8. La Figure 11 représente une analyse par transfert Western de tissu cardiaque de souris selon encore un autre mode de réalisation de la présente invention. La Figure 12 représente un diagramme à barres de l'expression relative de Bad normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline de la Figure 11. La Figure 13 représente un diagramme à barres de l'expression relative de caspase 3 normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline de la Figure 11. Par conséquent, la présente invention porte sur 20 l'utilisation de la souche probiotique GM-080 de Lactobacillus paracasei avec une quantité thérapeutiquement efficace pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque. L'expression « souche probiotique GM-080 » 25 utilisée présentement désigne la souche GM-080 de Lactobacillus paracasei. La souche GM-080 de Lactobacillus paracasei a été déposée auprès du China Center for Type Culture Collection (CCTCC), Université de Wuhan, Wuhan 430072, République Populaire de Chine sous le numéro 9 d'entrée CCTCC M 204012 le 19 février 2004 dans le cadre du Traité de Budapest et a la désignation de dépôt de brevet interne CCTCC M 204012 et la référence d'identification du déposant GM-080. L'homme du métier est familier avec la souche probiotique GM-080 obtenue par les procédés antérieurs ou le procédé du brevet US 6 994 848 B2. Celle-ci n'est donc pas décrite en détail dans la présente description. Brièvement, la souche probiotique GM-080 peut être cultivée dans du milieu bouillon de culture MRS (DIFCO®0881) (pH final 6,5±0,2) à 37°C en condition anaérobie ou aérobie. Dans un autre exemple, le bouillon de culture MRS de la culture de souche probiotique GM-080 peut être incorporé en stries sur une plaque d'agar. Dans un mode de réalisation, la souche probiotique GM-080 de la présente invention peut inhiber spécifiquement l'expression génique de p-JNK, Bad et Bax qui est indiquée par une série d'expériences immunitaires in vivo sur animaux, traitant par là l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque. L'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque peuvent induire une myocardite et des cardiomyopathies, par exemple, une myocardite d'hypersensibilité, un rhumatisme cardiaque (ou une cardiopathie valvulaire), une myocardiopathie hypertrophique, une myocardiopathie dilatée, une myocardiopathie restrictive etc. Plus spécifiquement, la souche probiotique GM-080 peut être en quantité thérapeutiquement efficace pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque induites par une réaction allergique. De plus, l'expression « expériences 10 immunitaires sur animaux » utilisée présentement désigne l'emploi d'un modèle de test « d'animal enclin aux allergies » pour évaluer l'effet de la souche probiotique GM-080 pour prévenir l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque, modèle dans lequel ces animaux sont induits artificiellement par l'utilisation d'allergènes tels que l'ovalbumine (OVA) pour provoquer des allergies. Si l'on se réfère à la Figure 1, celle-ci représente un diagramme de voies de transduction du signal mises en jeu dans le traitement de l'inflammation cardiaque et de l'apoptose cardiaque selon un mode de réalisation de la présente invention. Dans un mode de réalisation, la voie de transduction du signal 103 représentée à droite sur la Figure 1 indique que la souche probiotique GM-080 101 inhibe spécifiquement l'expression génique de p-JNK de manière à supprimer l'expression génique en aval de p-NFKB et TNF-a éliminant ainsi l'inflammation cardiaque, par exemple l'inflammation myocardique induite par une allergie. Dans un autre mode de réalisation, la souche probiotique GM-080 inhibe également spécifiquement l'expression génique de Bad et Bax pour empêcher efficacement l'accumulation de la protéine promoteur de mort associée à Bol-2 (Bad) et de la protéine X associée à Bol-2 (Bax) sur la surface mitochondriale, de manière à supprimer l'expression génique en aval du cytochrome C et de la caspase 3, éliminant ainsi l'apoptose contrôlée par le mitochondrion 111 (ou la mort cellulaire programmée, par exemple, l'apoptose myocardique induite par une allergie), 11 comme représenté par la voie de transduction du signal 105 sur la gauche de la Figure 1 Dans un mode de réalisation additionnel, la souche probiotique GM-080 est facultativement mélangée à au moins une autre souche de manière à produire une composition pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque. Dans un exemple, la au moins une autre souche peut comprendre mais sans y être limitée Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium longum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus cremors, Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus rhamnosus GG ou toute combinaison de celles-ci. Il doit être ajouté que la souche probiotique GM-080 (par exemple, la souche GM-080 de Lactobacillus paracasei ; numéro d'entrée CCTCC M 204012) peut être vivante ou inactive lorsqu'elle est appliquée dans la composition pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque. Dans un exemple, la composition peut être une composition médicale, un additif alimentaire, un aliment ou son ingrédient. Dans un autre exemple, la souche probiotique GM-080 peut être lyophilisée et la souche probiotique GM-080 peut en outre comprendre d'autres ingrédients, par exemple, du glucose, de la maltodextrine, du lait pour bébé, des fructo-oligosaccharides, du stéarate de magnésium, des épices de yaourt, d'autres résidus incertains séparés de ceux-ci ou toute combinaison de ceux- ci. 12 Ci-dessous, diverses applications de la souche probiotique GM-080 seront décrites plus en détail par référence aux modes de réalisation à titre d'exemples ci-dessous, à titre non limitatif. Ainsi, l'homme du métier peut déterminer facilement les caractéristiques essentielles de la présente invention, et sans s'écarter de l'esprit et de la portée de celle-ci, peut réaliser divers changements et modifications de l'invention pour l'adapter à divers usages et conditions. EXEMPLE 1 Etablissement d'un modèle de test d'animal enclin aux allergies 1. Préparation de la souche probiotique GM-080 Dans cet exemple, la souche probiotique GM-080 de Lactobacillus paracasei (numéro d'entrée CCTCC M 204012) peut être utilisée dans des expériences immunitaires sur animaux de façon à évaluer l'effet de la souche probiotique GM-080 pour prévenir l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque. La souche GM-080 de L.paracasei (numéro d'entrée CCTCC M 204012) peut avoir un dosage de 1 x 106 à 1 x 1011 CFU/g (unités de formation de colonie par gramme). La souche GM-080 de L.paracasei peut être lyophilisée, et la souche GM-080 de L.paracasei peut en outre comprendre d'autres ingrédients, par exemple, du glucose, de la maltodextrine, du lait pour bébé, des fructooligosaccharides, du stéarate de magnésium, des épices de 13 yaourt, d'autres résidus incertains non séparés de ceux-ci ou toute combinaison de ceux-ci. Dans ce mode de réalisation, au moins une autre souche peut être facultativement ajoutée dans la souche GM- 080 de L. paracasei. La au moins une autre souche appropriée peut comprendre mais sans y être limitée Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium longum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus cremors, Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus rhamnosus GG ou toute combinaison de celles-ci. En outre, les produits probiotiques disponibles dans le commerce qui contiennent les autres souches mentionnées ci-dessus peuvent également être utilisés présentement. Dans un exemple, la au moins une autre souche peut comprendre au moins une souche mixte constituée par au moins deux parmi Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium longum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus cremors. Cette souche mixte peut avoir un dosage de 1 x 10' CFU/g ou plus. Dans un autre exemple, la au moins une autre souche peut comprendre au moins une autre souche mixte, laquelle comprend Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus rhamnosus GG. Cette autre souche mixte peut avoir un dosage de 1 x 10' CFU/g ou plus. 2. Etablissement d'un modèle de test d'animal enclin aux allergies Dans ce qui suit, le souche mixte A est constituée par un mélange de Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium longum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus cremors. La souche mixte B est constituée par un mélange de Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus rhamnosus GG. Dans cet exemple, des souris BALB/C (achetées auprès de BioLASCO Taiwan Co., Ltd) ont été utilisées pour établir un modèle de test d'animal enclin aux allergies. Tout d'abord, toutes les souris sont divisées aléatoirement en trois groupes tests (groupes d'allergie) et deux groupes témoins (groupe témoin normal et groupe témoin d'allergie), chaque groupe comprenant sept souris BALB/c mâles de 5 semaines (groupe témoin normal, n = 7) ou huit souris BALB/c mâles de 5 semaines (un groupe témoin d'allergie et trois groupes d'allergie, n = 8 par groupe). Le groupe témoin normal reçoit 0,2 ml d'eau distillée par souris par administration orale (par exemple, intubation orogastrique) une fois par jour. Les quatre groupes d'allergie (un groupe témoin d'allergie et trois groupes d'allergie) reçoivent un témoin d'allergie constitué par 0,2 ml d'eau distillée, différentes souches probiotiques (souche mixte A, souche mixte B ou souche GM-080 de L.paracasei (CCTCC M 204012)) par voie orale à 1 x 106 à 1 x 1011 CFU/g par souris et une fois par jour. On injecte par voie intrapéritonéale aux souris du groupe témoin d'allergie et des groupes 14 15 d'allergie 2 pg, 6 pg/souris d'OVA mélangé avec un adjuvant de Freund complet (CFA), respectivement aux jours 0 et 14, de façon à induire la réaction allergique de ces souris. Toutes les souris sont pesées et décapitées après le processus de traitement de 28 jours. Les coeurs des souris sont ensuite excisés et nettoyés à l'eau distillée. Les oreillettes et ventricules gauche et droit sont séparés et pesés. La température ambiante est régulée à 25±1°C, l'humidité relative à 65±5%. De plus, les animaux sont maintenus sur un cycle lumière-obscurité inversé de 12h. La période de lumière commençait à 7h00. Les souris sont nourries par de la nourriture de laboratoire standard (MF-18 ; ORIENTAL YEAST CO., LTD) et de l'eau à volonté. Toutes les procédures expérimentales sont réalisées conformément au guide du NIH pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire. 3. Extraction de tissu cardiaque Les extraits de tissu cardiaque sont obtenus par homogénéisation des échantillons de ventricule gauche dans un tampon de lyse (20 mM Tris, 2 mM EDTA, 50 mM 2- mercaptoéthanol, 10 % glycérol, pH 7,4, inhibiteur de protéinase (Roche), cocktail d'inhibiteurs de phosphatase (Sigma)) à un rapport de 100 mg tissu/1 ml tampon pendant 1 minute. Les homogénats sont placés sur glace pendant 10 minutes puis centrifugés à 12 000 x g pendant 40 minutes deux fois. Le surnageant est collecté et stocké à -80°C 16 pour des expériences ultérieures. EXEMPLE 2 Evaluation de l'effet de la souche probiotique GM-080 pour 5 prévenir l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque Dans cet exemple une analyse par électrophorèse et un essai de transfert Western sont utilisés pour évaluer l'effet de la souche probiotique GM-080 pour prévenir 10 l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque. Le détail est décrit comme suit. Les échantillons de tissu extraits sont préparés comme décrit ci-dessus. Une électrophorèse sur gel de sodium dodécyl sulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE) est 15 réalisée avec des gels de polyacrylamide à 10 Les échantillons sont alors soumis à une électrophorèse à 85 V pendant 3,5 h et sont équilibrés pendant 15 minutes dans du Tris-HC1 25 mM, pH 8,3, contenant 192 mM de glycine et 20 % (V/V) de méthanol. La préparation du SDS-PAGE et les 20 équipements apparentés sont familiers à l'homme du métier de la présente invention et ne sont présentement pas décrits en détail. Les protéines qui ont été soumises à l'électrophorèse sont transférées sur une membrane de 25 transfert telle qu'une membrane de poly (fluorure de vinylidène) (PVDF) (Millipore, Bedford, MA, dimension de pores de 0,45 }gym) avec un kit de transfert Western, par exemple une unité Transphor de Bio-rad Scientific Instruments, à 85 V pendant 2,5 h. Puis, les membranes de 17 PVDF sont incubées à température ambiante pendant 1 h dans un tampon de blocage contenant 5 % de lait sans matières grasses et un tampon TBS (Tris-Base, NaCl, Tween-20, pH 7,4). Les premiers anticorps sont dilués à 1:500 dans un tampon de liaison d'anticorps sur la nuit à 4°C. Les immunotransferts sont lavés trois fois dans le tampon TBS pendant 10 minutes durant chaque phase, puis immergés dans la seconde solution d'anticorps pendant 1 h et dilués 500 fois dans le tampon TBS. Les immunotransferts sont ensuite lavés dans un tampon de transfert trois fois pendant 10 minutes chaque phase. Les protéines immunotransférées sont visualisées par l'utilisation d'un réactif luminol de transfert Western ECL à chimioluminescence accrue et quantifiées à l'aide d'un système de détection de chimioluminescence Fujifilm LAS-3000 (Tokyo, Japan). Les premiers anticorps décrits ci-dessus peuvent comprendre TNF-a (Cell Signaling. Technology, Beverly, MA, USA), le récepteur de type Toll 4 (TLR4), la phospholate-Jun-N-terminal kinase (p-JNK), le facteur nucléaire -KB phospholate (p-NFKB), phospholate-IKB (p-IKB), phospholatep 38 (p-p38), Bad, Bax, le cytochrome C, la caspase 3 et l'cc-tubuline (ceux-ci sont achetés auprès de Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). La seconde solution d'anticorps décrite ci-dessus peut contenir de l'IgG-HRP anti-souris de chèvre, de l'IgG-HRP anti-lapin de chèvre, ou de l'IgG-HRP anti-chèvre d'âne (celles-ci sont achetées après de Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Le tampon de liaison d'anticorps décrit ci-dessus 18 peut contenir 100 mM Tris-HC1, pH 7,5, 0,9 % (p/v) NaCl, 0,1 % (v/v) Tween 20. De plus, chaque exemple décrit présentement et ci-après est répété un minimum de trois fois, et les données sont exprimées en tant que moyenne ± écart-type. On utilise un ANOVA à un critère de classification avec une procédure Tukey-Kramer pour de multiples comparaisons pour examiner les différences statistiques entre les traitements. Les différences ont été considérées comme significatives à p 1. Evaluation de l'influence de la mise en jeu de la souche probiotique GM-080 dans l'expression génique de p-JNK et JNK 1/2 dans des coeurs de souris enclines aux allergies Si l'on se réfère à la Figure 2, celle-ci représente une analyse par transfert Western de tissu cardiaque de souris selon un mode de réalisation de la présente invention, dans laquelle les lignes 1 et 2 se rapportent au groupe témoin normal, les lignes 3 et 4 se rapportent au groupe témoin d'allergie, les lignes 5 et 6 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration par voie orale de la souche mixte A (c'est-à-dire la première souche mixte), les lignes 7 et 8 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration par voie orale de la souche mixte B (c'est-à-dire la deuxième souche mixte), les lignes 9 et 10 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration par voie orale de la souche L. paracasei GM- 19 080 (numéro d'entrée CCTCC M 204012). La Figure 2 représente l'expression protéique de TLR4 (environ 89 kDa), p-JNK (environ 54 kDa et environ 46 kDa) et JNK 1/2 (environ 54 kDa et environ 46 kDa) dans les tissus cardiaques de souris enclines aux allergies. La quantité d'a-tubuline (environ 57 kDa) est détectée comme témoin interne pour normaliser les quantités de protéine. Si l'on se réfère à la Figure 3, celle-ci représente un diagramme à barres de l'expression relative de p-JNK normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline de la Figure 2, dans lequel l'axe vertical se rapporte à l'expression relative de p-JNK normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline (c'est-à-dire l'expression relative de p-JNK/a-tubuline) et l'expression relative de p-JNK/cc-tubuline du groupe normal est fixée à 1,0. Si l'on se réfère à La Figure 4, celle-ci représente un diagramme à barres de l'expression relative de JNK 1/2 normalisée par rapport à l'expression d'octubuline de la Figure 2, dans lequel l'axe vertical se rapporte à l'expression relative de JNK 1/2 normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline (c'est-à-dire l'expression relative de JNK 1/2/a-tubuline) et l'expression relative de JNK 1/2/cc-tubuline du groupe normal est fixée à 1,0. Selon les résultats des Figures 2 à 4, par comparaison au groupe témoin normal (les lignes 1 à 2 de la Figure 2), l'expression de p-JNK et JNK 1/2 est augmentée de manière significative dans les tissus cardiaques des souris du groupe témoin d'allergie (lignes 3 et 4 de la 20 Figure 2) après sensibilisation des souris par les allergènes. En comparaison avec le groupe témoin d'allergie (lignes 3 et 4 de la Figure 2), l'expression de p-JNK et JNK 1/2 dans les tissus cardiaques de souris du groupe d'allergie (les lignes 9 à 10 de la Figure 2, administration orale de la souche GM-080 de L. paracasei) est inférieure de manière significative à celle dans les groupes d'allergie (lignes 5 à 8 de la Figure 2, administration orale des souches mixtes A ou B) et du groupe témoin d'allergie (lignes 3 et 4 de la Figure 2) selon les résultats des Figures 3 à 4. Le résultat indique que l'administration orale de la souche probiotique GM-080 de l'Exemple 1 inhibe spécifiquement l'expression génique de p-JNK et JNK 1/2 dans les coeurs de souris enclines aux allergies. 2. Evaluation de l'influence de la mise en jeu de la souche probiotique GM-080 dans l'expression génique de p-NFxB et p-IKB dans des coeurs de souris enclines aux allergies. Si l'on se réfère à la Figure 5, celle-ci représente une analyse par transfert Western de tissu cardiaque de souris selon un autre mode de réalisation de la présente invention, dans lequel les lignes 1 à 2 se rapportent au groupe témoin normal, les lignes 3 à 4 se rapportent au groupe témoin d'allergie, les lignes 5 et 6 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration orale de la souche mixte A (c'est-à-dire la première souche mixte), les lignes 7 à 8 se rapportent au 21 groupe d'allergie ayant reçu une administration orale de la souche mixte B (c'est-à-dire la deuxième souche mixte), les lignes 9 à 10 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration orale de la souche GM-080 de L. paracasei GM-080 (numéro d'entrée CCTCC M 204012). La Figure 5 représente l'expression protéique de p-NFKB (environ 65 kDa) et p-IKB (environ 40 kDa) dans les tissus cardiaques de souris enclines aux allergies). La quantité d'a-tubuline (environ 57 kDa) est détectée comme témoin interne pour normaliser les quantités de protéine. Si l'on se réfère à la Figure 6, celle-ci représente un diagramme à barres de l'expression relative de p-NFKB normalisée par rapport à l'expression d'octubuline de la FIGURE 5, dans lequel l'axe vertical se rapporte à l'expression relative de p-NFKB normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline (c'est-à-dire l'expression relative de p-NFxB/a-tubuline), et l'expression relative de p-NFxB/cc-tubuline du groupe normal est fixée à 1,0. Si l'on se réfère à la Figure 7, celle-ci représente un diagramme à barres de l'expression relative de p-NFKB normalisée pour l'expression d'a-tubuline de la Figure 5, dans lequel l'axe vertical porte sur l'expression relative de p-IFxB normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline (c'est-à-dire l'expression d'a-tubuline de p-IFxB/cc-tubuline) et l'expression relative de p-IFxB/cctubuline du groupe normal est fixée à 1,0. Selon les résultats des Figs. 5 à 7, par comparaison avec le groupe témoin normal (les lignes 1 à 2 22 de la Figure 5), l'expression de p-NFKB et p-IKB est légèrement augmentée dans les tissus cardiaques de souris du groupe témoin d'allergie (les lignes 3 à 4 de la Figure 5) après sensibilisation des souris par l'allergène. Selon les résultats des Figures 5 à 7, par comparaison avec le groupe témoin d'allergie (les lignes 3 à 4 de la Figure 5), l'expression de p-NFKB dans les tissus cardiaques de souris du groupe d'allergie (les lignes 9 à 10 de la Figure 5, administration orale de la souche GM-080 de L. paracasei) est inférieure de manière significative à celle du groupe témoin d'allergie (les lignes 3 à 4 de la Figure 5) et l'expression de p-IxB dans les tissus cardiaques de souris du groupe d'allergies (les lignes 9 à 10 de la Figure 5, administration orale de la souche GM-080 de L. paracasei) est inférieure de manière significative à celle des groupes d'allergie (les lignes 5 à 8 de la Figure 5, administration orale de la souche mixte A ou B) et du groupe témoin d'allergie (les lignes 3 à 4 de la Figure 5). Le résultat indique que l'administration orale de la souche probiotique GM-080 de l'exemple 1 inhibe spécifiquement l'expression génique de p-NFKB et p-IxB dans les coeurs de souris enclines aux allergies. 3. Evaluation de l'influence de la mise en jeu de la souche 25 probiotique GM-080 dans l'expression génique de Bad et Bax dans des coeurs de souris enclines aux allergies Si l'on se réfère à la Figure 8, celle-ci représente une analyse par transfert Western de tissu cardiaque de souris selon un autre mode de réalisation de 23 la présente invention, dans laquelle les lignes 1 à 2 se rapportent au groupe témoin normal, les lignes 3 à 4 se rapportent au groupe témoin d'allergie, les lignes 5 à 6 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration orale de la souche mixte A (c'est-à-dire la première souche mixte), les lignes 7 à 8 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration orale de la souche mixte B (c'est-à-dire la deuxième souche mixte), les lignes 9 à 10 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration orale de la souche GM-080 de L. paracasei (numéro d'entrée CCTCC M 204012). La Figure 8 représente l'expression protéique de Bad (environ 25 kDa) et Bax (environ 23 kDa) dans les tissus cardiaques de souris enclines aux allergies. La quantité d'a-tubuline (environ 57 kDa) est détectée comme témoin interne pour normaliser les quantités de protéine. Si l'on se réfère à la Figure 9, celle-ci représente un diagramme à barres de l'expression relative de Bad normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline de la Figure 8, dans lequel l'axe vertical se rapporte à l'expression relative de Bad normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline (c'est-à-dire l'expression relative de Bad/a-tubuline) et l'expression relative de Bad/a-tubuline du groupe normal est fixée à 1,0. La Figure 10 représente un diagramme à barres de l'expression relative de Bax normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline de la Figure 8, dans lequel l'axe vertical se rapporte à l'expression relative de Bax normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline (c'est- 24 à-dire l'expression relative de Bax/cc-tubuline) et l'expression relative de Bax/cc-tubuline du groupe normal est fixée à 1,0. Selon les résultats des Figs. 8 à 10, par comparaison avec le groupe témoin normal (les lignes 1 à 2 de la Figure 8), l'expression de Bad et Bax est augmentée de manière significative dans les tissus cardiaques des souris du groupe témoin d'allergie (les lignes 3 à 4 de la Figure 8) après sensibilisation des souris par l'allergène. Selon les résultats des Figs. 8 à 10, en comparaison avec le groupe témoin d'allergie (les lignes 3 à 4 de la Figure 8), l'expression de Bad et Bax dans les tissus cardiaques de souris du groupe d'allergie (les lignes 9 à 10 de la Figure 8, administration orale de la souche GM-080 de L. paracasei) est inférieure de manière significative à celle des groupes d'allergie (les lignes 5 à 8 de la Figure 8, administration orale de la souche mixte A ou B) et du groupe témoin d'allergie (les lignes 3 à 4 de la Figure 8). Le résultat indique que l'administration orale de la souche probiotique GM-080 de l'Exemple 1 inhibe spécifiquement l'expression génique de Bad et Bax dans les coeurs de souris enclines aux allergies. 4. Evaluation de l'influence de la mise en jeu de la souche probiotique GM-080 dans l'expression génique du cytochrome C et de la caspase 3 dans des coeurs de souris enclines aux allergies 25 Si l'on se réfère à la Figure 11, celle-ci représente une analyse par transfert Western de tissu cardiaque de souris selon encore un autre mode de réalisation de la présente invention, dans laquelle les lignes 1 à 2 se rapportent au groupe témoin normal, les lignes 3 à 4 se rapportent au groupe témoin d'allergie, les lignes 5 à 6 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration orale de la souche mixte A (c'est-à-dire la première souche mixte), les lignes 7 à 8 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration orale de la souche mixte B (c'est-à-dire la seconde souche mixte), les lignes 9 à 10 se rapportent au groupe d'allergie ayant reçu une administration orale de la souche GM-080 de L. paracasei (numéro d'entrée CCTCC M 204012). La Figure 11 représente l'expression protéique du cytochrome C (environ 11 kDa) et de la caspase 3 (environ 17 kDa) dans les tissus cardiaques de souris enclines aux allergies. La quantité d'a-tubuline (environ 57 kDa) est détectée comme témoin interne pour normaliser les quantités de protéine. Si l'on se réfère à la Figure 12, celle-ci représente un diagramme à barres de l'expression relative du cytochrome C normalisée par rapport à l'expression d'octubuline de la Figure 11, dans lequel l'axe vertical se rapporte à l'expression relative du cytochrome C normalisée par rapport à l'expression d'a-tubuline (c'est-à-dire l'expression relative de cytochrome C/a-tubuline) et l'expression relative de cytochrome C/a-tubuline du groupe normal est fixée à 1,0. 26 Si l'on se réfère à la Figure 13, celle-ci représente un diagramme à barres de l'expression relative de la caspase 3 normalisée par rapport à l'expression d'octubuline de la Figure 11, dans lequel l'axe vertical se rapporte à l'expression relative de la caspase 3 normalisée par rapport à l'expression de l'cc-tubuline (c'est-à-dire l'expression relative de la caspase 3/a-tubuline) et l'expression relative de la caspase 3 /cc-tubuline du groupe normal est fixée à 1,0. Selon les résultats des Figures 11 à 13, par comparaison avec le groupe témoin normal (les lignes 1 à 2 de la Figure 11) l'expression du cytochrome C et de la caspase 3 est légèrement augmentée dans les tissus cardiaques de souris du groupe témoin d'allergie (les lignes 3 à 4 de la Figure 11) après sensibilisation des souris par l'allergène. Selon les résultats des Figures 11 à 13, en comparaison avec les groupes témoins d'allergie (les lignes 3 à 4 de la Figure 11), l'expression du cytochrome C de la caspase 3 dans les tissus cardiaques de souris du groupe d'allergie (les lignes 9 à 10 de la Figure 11, administration orale de la souche GM-080 de L. paracasei) est inférieure de manière significative à celle des groupes d'allergie (les lignes 5 à 8 de la Figure 11, administration orale de la souche mixte A ou B) et du groupe témoin d'allergie (les lignes 3 à 4 de la Figure 11). Le résultat indique qu'une administration orale de la souche probiotique GM-080 de l'Exemple 1 inhibe spécifiquement l'expression génique du cytochrome C et de 27 la caspase 3 dans les coeurs de souris en enclines aux allergies. En résumé, la présente invention apporte la preuve que la souche probiotique GM-080 (souche GM-080 de L. paracasei ; numéro d'entrée CCTCC M 204012) de la présente invention peut être appliquée dans le traitement de l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque, et la souche probiotique GM-080 est potentiellement mise en jeu dans le mécanisme de l'inhibition spécifique de l'expression génique de p-JNK, Bad et Bax de manière à traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque, exploitant par là d'autres applications des souches probiotiques. Cependant, il doit être ajouté nécessairement que les souches spécifiques, méthodes d'analyse spécifiques, modèles animaux spécifiques, conditions de réaction spécifiques, voies d'immunisation spécifiques, matières spécifiques ou appareils spécifiques sont employés à titre d'exemple pour clarifier l'utilisation de la souche probiotique GM-080 pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque de la présente invention. Cependant, comme il est compris par l'homme du métier, d'autres souches, d'autres méthodes d'analyse, d'autres modèles animaux, d'autres conditions de réaction, d'autres voies d'immunisation, d'autres matières ou appareils comparables peuvent également être employés dans la composition pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque de la présente invention, sans être limités à ceux-ci. De plus, lorsque la souche probiotique GM-080 est appliquée dans une composition d'une composition médicale, un additif 28 alimentaire, un aliment ou son ingrédient, la souche probiotique GM-080 est vivante, inactivée ou lyophilisée. De plus, la souche probiotique GM-080 peut en outre comprendre d'autres ingrédients, par exemple du glucose, de la maltodextrine, du lait pour bébé, des fructooligosaccharides, du stéarate de magnésium, des épices pour yaourt, d'autres résidus incertains non séparés de ceux-ci ou toute combinaison de ceux-ci. Selon les modes de réalisation de la présente invention, la souche probiotique GM-080 susmentionnée pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque, la souche probiotique GM-080 inhibe avantageusement et spécifiquement l'expression génique de p-JNK, Bad et Bax de manière à traiter efficacement l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque, développant par là d'autres applications des souches probiotiques. Comme il est compris par l'homme du métier, les modes de réalisation précédents de la présente invention sont destinés à illustrer la présente invention plutôt qu'à limiter la présente invention. Celle-ci est destinée à couvrir diverses modifications et arrangements similaires compris dans l'esprit et la portée des revendications annexées. Par conséquent, on doit accorder à la portée de celle-ci l'interprétation la plus large de manière à englober l'ensemble de telles modifications et structures similaires. REVENDICATIONS1 - Composition pour traiter l'inflammation cardiaque et l'apoptose cardiaque qui comprend une quantité thérapeutiquement efficace d'une souche probiotique GM-080 de Lactobacillus paracasei (déposée au China Center for Type Culture Collection (CCTCC) de l'Université de Wuhan en Chine sous le numéro d'entrée CCTCC M 204012). 2 - Composition selon la revendication 1, 10 caractérisée par le fait que la souche probiotique GM-080 est vivante ou inactivée. 3 - Composition selon la revendication 1, caractérisée par le fait que la composition est une composition médicale, un additif alimentaire, un aliment ou 15 son ingrédient. 4 - Composition selon la revendication 1, caractérisée par le fait qu'elle comprend en outre au moins une autre souche. 5 - Composition selon la revendication 1, 20 caractérisée par le fait que la au moins une autre souche est choisie dans le groupe constitué par Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium longum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus cremors, 25 Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus rhamnosus GG et toute combinaison de celles-ci.