Brevet FR2969657A1 — publié le 20120629

La présente invention a pour un objet une nouvelle souche bactérienne isolée à partir d'une nappe phréatique. L'invention concerne également des extraits bactériens et leur utilisation dans le cadre du traitement des inflammations. Plus particulièrement, la présente invention se rapporte à de nouvelles compositions intéressantes dans le traitement et dans la prévention des troubles inflammatoires notamment des pathologies dermatologiques. Les maladies dermatologiques comme la dermatite atopique, le prurit, l'eczéma et le psoriasis sont de plus en plus fréquentes chez le jeune enfant. La prévalence de la dermatite atopique a doublé voire triplé dans les pays développés durant les 30 dernières années : 15 à 30 % des enfants et 2 à 10 % des adultes en sont également affectés (Williams H et al, JACI 2006 ; 118:209-13). La dermatite atopique est la manifestation cutanée de l'atopie, c'est une dermatose inflammatoire chronique ou eczéma, survenant sur un terrain génétiquement déterminé. Elle est maintenant considérée comme une préoccupation majeure de la santé publique. La dermatite atopique est souvent associée à d'autres désordres atopiques tels que la rhinite allergique et l'asthme. Cette affection apparaît le plus souvent au cours de la petite enfance et se caractérise par des éruptions répétées pendant plusieurs années. Elle évolue par poussées entrecoupées de rémissions spontanées. La qualité de vie des patients atteints de dermatite atopique est profondément 2 0 perturbée. Les traitements adoptés incluent les corticostéroïdes et immunomodulateurs topiques, les agents systémiques dont les fréquents effets secondaires limitent l'utilisation à long terme, les émollients. La thérapeutique actuelle est réactive - traitement des poussées - mais on estime maintenant qu'une intervention précoce focalisée sur le contrôle des éruptions et de l'inflammation cutanée peut être bénéfique 25 aussi bien en termes de contrôle de la maladie que de l'éventuelle apparition d'asthme et/ou de rhinite (BIEBER, T. 2008, Atopic dermatitis, The New England Journal of Medecine, vol 358 (14) 1483-1494), la dermatite atopique étant considérée comme la phase initiale de l'évolution dite atopique. Dans la majorité des cas, les soins locaux associés apportent un complément aux traitements utilisés et permettent de soulager les 3 0 patients. Les traitements classiques de la dermatite atopique utilisent notamment des dermocorticoïdes ou des immunosuppresseurs, cependant ils ne sont pas dénués d'effets indésirables notamment chez l'enfant. La dermatite atopique est complexe et multifactorielle. Dans la littérature, certaines études épidémiologiques ont montré que le facteur « d'hygiène » dans les milieux urbains contribuait à favoriser la maladie comme l'allergie et l'auto-immunité. En revanche, dans le milieu rural où l'homme est en contact permanent avec les microorganismes et/ou les allergènes, ceux ci stimulent leur système immunitaire de défense dès sa naissance. Dans la dermatite atopique, la fonction barrière de la peau est fragilisée et altérée, ce qui favorise l'invasion et la colonisation des pathogènes (bactéries, virus) en particulier Staphylococcus aureus. Ce dernier est connu de prendre le dessus des bactéries commensales de la peau. Sur le plan immunologique on parle de déséquilibre de réponses immunitaires, l'atopie est souvent décrite comme une manifestation type allergique (IgE médié, dominance de cytokines type IL 4, IL 5, IL 13) ou encore réponse Th2, ce dernier est d'autant plus accentué en présence des « stimulis d'antigènes » de Staphylococcus aureus. L'immunomodulation consiste à rétablir l'homéostasie immunitaire vers un équilibre Thl/Th2. L'immunité innée est la réponse primaire, rapide et non spécifique de la réponse immunitaire chez le mammifère. Les premières barrières de défense de la cellule sont 2 0 constituées par des récepteurs Tolls ou encore TLRs. Chaque TLR reconnaît spécifiquement des motifs de molécules (PAMP) tels que acides nucléiques (TLR3), peptides, protéines de surface, acide lipotéchoique (TLR2), flagelles (TLR5), lipopysaccharides (TLR4), issus des microorganismes étrangers. Une interaction spécifique entre un motif (agoniste) et un TLR déclenche une cascade de réactions 25 complexes résultant par la transcription du facteur NFxB, suivi de production de cytokines pro-inflammatoires et anti-inflammatoires, de chémiokines (Kang et al., 2006). Autres conséquences pharmacologiques résultantes sont l'induction des peptides anti-microbiens (PAM), ceux ci ont le pouvoir d'inhiber la croissance des pathogènes (bactéries, virus, parasites) (Glaser, R. et al. 2005, Nat. Immunol. 6:57-64). 30 La dermatite atopique est souvent accompagnée de démangeaisons et de prurit qui engendrent des inconforts et des désagréments dans le quotidien (grattages, perte de sommeil, ...). Une des causes de cette pathologie inflammatoire est due à l'activation d'un récepteur couplé à la protéine G nommé PAR 2 (Protease-activated receptor) (Steinhoff, M. et al. 2003 J Neurosci. 23:6176-6180). PAR 2 est exprimé à la surface de nombreuses cellules notamment des kératinocytes, des cellules endothéliales, myocytes du colon, entérocytes, neurones entériques, cellules immunes, .... Des protéases (trypsine, tryptase), présentes en abondance dans l'épiderme clivent le PAR-2 par le N-terminal exposant un peptide spécifique qui active ce même récepteur (phénomène d'auto-activation) (Vergnolle, N. 2009 Pharmacol. Ther. 123:292-309). Ceci implique l'activation du gène NFxB, suivi de l'induction de cytokines pro-inflammatoires et déclenche ainsi l'inflammation. Dans ce contexte, le développement des antagonistes de PAR 2 et/ou d'inhibiteur de protéases ont un fort potentiel pour traiter la pathologie de prurit. Le psoriasis est également une maladie inflammatoire cutanée d'évolution chronique ; il affecte 2 % de la population. Avec la dermatite atopique, ce sont les maladies inflammatoires chroniques cutanées les plus fréquentes. Il est caractérisé par une croissance anormale des cellules épidermiques associée à une réaction inflammatoire. Le mécanisme central du phénomène de l'inflammation est lié à l'action des cellules T du système immunitaire, cellules de type Thl en prédominance (Wilsmann-Theis, D. et al., Eur J Dermatol., vo1.18(2) 172-180), qui initient et entretiennent le processus inflammatoire et stimulent la prolifération excessive des 2 0 kératinocytes qui traversent alors une phase de différenciation accélérée et incomplète. Les kératinocytes expriment des récepteurs qui les rendent sensibles aux signaux inflammatoires et libèrent des médiateurs pro-inflammatoires. L'inflammation psoriasique se trouve ainsi entretenue par une stimulation mutuelle des cellules T et des kératinocytes. 25 La maladie doit donc être traitée au long cours. Il existe ainsi un besoin et une forte demande pour des alternatives thérapeutiques à ces dermatoses inflammatoires. Dans ce contexte, la présente invention permet d'apporter une solution au traitement de ces troubles inflammatoires par l'isolement, la caractérisation ainsi que le fractionnement d'une nouvelle bactérie jamais décrite à ce jour. 30 Pour la première fois, et de manière surprenante, la demanderesse a réussi à isoler une souche appartenant à une nouvelle espèce bactérienne à partir d'une nappe phréatique, ladite nouvelle souche bactérienne (ou bactérie) étant nommée LMB64. Cette bactérie LMB64, outre le fait d'avoir été isolée, a été caractérisée et définie comme appartenant à la classe des beta-proteobacteria, sous-famille des Neisseriaceae, et probablement d'un nouveau genre non encore défini. L'analyse de la séquence du gène codant pour l'ARN ribosomique (ARNr) 16S a permis de situer cette bactérie proche des genres Chromobacterium, Paludimonas, Lutelia et Glubenkiana, avec lesquels elle partage 95 % de similarité de séquence. Cette bactérie, non pathogène, est une bactérie à gram négatif et sera détaillée plus en détails dans les exemples. Le gène codant pour l'ARNr 16S a été presque totalement séquencé (1487 pb, correspondant à la séquence SEQ ID No. 1). La bactérie LMB64 possède un plasmide circulaire de 10948 pb. Ce plasmide a été entièrement séquencé et la séquence est représentée en la séquence SEQ ID No. 2. Selon une première forme d'exécution, la présente invention concerne une bactérie non pathogène à gram négatif appartenant à la classe des beta-proteobacteria, sous-famille des Neisseriaceae, dont la séquence en nucléotides du gène codant pour l'ARNr 16S comprend la séquence SEQ ID No. 1, ou toute séquence en nucléotides présentant au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 98 % d'identité avec ladite séquence SEQ ID No. 1. 2 0 Par « pourcentage d'identité » entre deux séquences d'acides nucléiques au sens de la présente invention, on entend désigner un pourcentage de nucléotides identiques entre les deux séquences à comparer, obtenu après le meilleur alignement (alignement optimal), ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux séquences étant réparties au hasard et sur toute leur longueur. Les comparaisons de 25 séquences entre deux séquences d'acides nucléiques sont traditionnellement réalisées en comparant ces séquences après les avoir alignées de manière optimale, ladite comparaison pouvant être réalisée par segment ou par « fenêtre de comparaison ». L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé, outre manuellement, au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Smith et Waterman 30 (1981) [Ad. App. Math. 2:482], au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Neddleman et Wunsch (1970) [J. Mol. Biol. 48:443], au moyen de la méthode de recherche de similarité de Pearson et Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444], au moyen de logiciels informatiques utilisant ces algorithmes (GAP, BESTFIT, FASTA et TFASTA dans le Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI, ou encore par les logiciels de comparaison BLAST N ou BLAST P). Le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides nucléiques est déterminé en comparant ces deux séquences alignées de manière optimale dans laquelle la séquence d'acides nucléiques à comparer peut comprendre des additions ou des délétions par rapport à la séquence de référence pour un alignement optimal entre ces deux séquences. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide est identique entre les deux séquences, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison et en multipliant le résultat obtenu par 100 pour obtenir le pourcentage d'identité entre ces deux séquences. Par exemple, on pourra utiliser le programme BLAST, « BLAST 2 sequences » (Tatusova et al., "Blast 2 sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequences", FEMS Microbiol Lett. 174:247-250) disponible sur le site http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/b12.htm1, les paramètres utilisés étant ceux donnés par défaut (en particulier pour les paramètres « open gap penaltie » : 5, et « extension gap penaltie » : 2 ; la matrice choisie étant par exemple la matrice « BLOSUM 62 » 2 0 proposée par le programme), le pourcentage d'identité entre les deux séquences à comparer étant calculé directement par le programme. Il est également possible d'utiliser d'autres programmes comme les logiciels « ALIGN » ou « Megalign » (DNASTAR). Selon une autre forme d'exécution, la bactérie selon l'invention comprend au 25 moins un plasmide comprenant la séquence SEQ ID No. 2, ou toute séquence présentant au moins 80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et 98 % d'identité avec ladite séquence SEQ ID No. 2. D'autres caractéristiques de ladite bactérie LMB64 seront détaillées plus loin dans les exemples. 3 0 En outre, la bactérie LMB64 objet de la présente invention a été déposée en accord avec le traité de Budapest au nom de la demanderesse à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM), Institut Pasteur, Paris, le 8 avril 2010 sous la référence I-4290. L'invention a donc pour objet la bactérie déposée à la CNCM le 8 avril 2010 sous la référence I-4290, ou un homologue, un descendant ou tout autre mutant. Selon un premier mode d'exécution de l'invention, à partir d'une culture bactérienne, la biomasse entière peut être isolée par diverses méthodes connues comme, par exemple, par filtration, coagulation avec un alcool (éthanol, isopropanol, isobutanol), par séchage sur cylindre à pré-couche raclée, etc., puis utilisée sous forme lyophylisée ou encore inactivée à la chaleur. Selon un autre mode d'exécution préféré, l'invention se rapporte de manière générale à un extrait bactérien, autrement appelé fraction de bactérie, obtenu à partir d'une suspension de bactéries telles que décrites plus haut, à savoir la bactérie LMB64. Par extrait bactérien, on entend désigner tout extrait ou fraction de la biomasse bactérienne ou toute fraction active dudit extrait. Par exemple, un tel extrait peut être obtenu à partir d'une culture de la bactérie LMB64 et dont le procédé de préparation comprend au moins une étape de lyse des bactéries et une étape de séparation des différentes fractions la constituant par centrifugation ou filtration. De manière non limitative, l'extrait selon l'invention peut consister en des cellules de bactéries isolées du milieu de culture qui ont été concentrées, par exemple par centrifugation ; ou des cellules de bactéries concentrées qui ont été soumises à une 2 0 opération de rupture des enveloppes des cellules par tout moyen connu de l'homme de l'art, comme l'action d'ultrasons ou l'autoclavage ; ou encore le surnageant obtenu par filtration. Une étape importante du procédé de préparation des extraits selon l'invention consiste en l'élimination des différents composants intra-cellulaires comme, par 25 exemple, les acides nucléiques (ADN chromosomique, ADN circulaire extra-chromosomique, plasmides, ribosomes, substances intracellulaires de réserve comme le glycogène, l'amidon ou encore le poly-b-hydroxybutyrate, etc.). De manière préférée, l'extrait bactérien selon l'invention est obtenu après traitement de ladite suspension bactérienne de manière à éliminer les composants intra- 3 0 cellulaires. Il en résulte que l'extrait selon l'invention comprend majoritairement des composants issus de la membrane, de l'espace périplasmique et/ou de l'espace extra- cellulaire. Plus particulièrement, lesdits composants intra-cellulaires comprennent au moins les acides nucléiques. Outre l'élimination des composés intra-cellulaires, et ce a titre d'exemple non limitatif, il est également aisément possible pour l'homme de l'art de séparer, après lyse des bactéries et centrifugation, les composants du surnageant de culture (ci-après fraction SO) des composants constituant le culot (ci-après EO). A titre indicatif, il peut être avancé que le seuil de séparation entre les constituants de SO et de EO se trouve aux environs d'un poids moléculaire de 100 Kda. En conséquence, les constituants de la fraction SO présentent, en majorité, un poids moléculaire inférieur à 100 Kda alors que les constituants de la fraction EO présentent, en majorité, un poids moléculaire supérieur à 100 Kd. Plus particulièrement, il est donc possible, par les techniques connues par l'homme de l'art, d'extraire et de séparer les biomolécules se retrouvant dans le surnageant de culture (SO) de celles comprenant majoritairement des protéines de surface et des protéines localisées dans l'espace périplasmique de la bactérie (EO). Selon une forme d'exécution de l'invention, l'extrait bactérien comprend une fraction EO comprenant au moins des protéines membranaires, des protéines périplasmiques et des protéines issues du flagelle. 2 0 Par protéines périplasmiques, il faut comprendre les protéines se trouvant logées dans l'espace périplasmique de la bactérie à gram négatif, dont la libération peut se faire par choc osmotique ou par incubation dans un milieu contenant un agent chaotropique ou des détergents (Molecular cloning, A lab. manual 3rd edition : Sambrook and Russel. CSHL Press). 25 Par protéines issues du flagelle, il faut comprendre des protéines multimériques du flagelle ou les fragments de flagelle. Il est décrit dans la littérature des méthodes d'isolement et de purification des flagelles entiers de bactéries par des détergents suivi de séparations par ultracentifugation (en présence d'un gradient CsCl). Dans l'invention, les exemples de procédés d'extraction ont permis de récupérer les fragments 3 0 de flagelles. Par protéines membranaires, il faut comprendre les protéines qui sont ancrées dans la membrane et dont une partie est exposée à la surface (Omp, outer membrane protein), les protéines qui sont adhérées à la surface de la membrane, les lipoprotéines, les porines (Ward JB., Microbial adhesion to surfaces, 1980). De manière préférée, lesdites protéines membranaires consistent en les porines, les OmpA, les lipopolysaccharides et/ou les lipoprotéines. Selon une autre forme d'exécution de l'invention, il peut être préféré d'utiliser la fraction S0. Plus particulièrement, l'extrait bactérien selon l'invention comprend une fraction SO comprenant au moins des peptides et protéines secrétés et des métabolites secondaires. Par peptides et protéines sécrétés, il faut comprendre les protéines et les peptides qui sont naturellement produits et secrétés par la bactérie LMB64 et qui peuvent être récupérés par centrifugation ou par filtration. Par métabolites secondaires, il faut comprendre les petites molécules que la bactérie LMB64 produit et secrète dans le milieu de culture. Il convient de mentionner ici la présence de lipopolysaccharides au sein de la fraction S0. En effet, les lipopolysaccharides, s'ils se retrouvent majoritairement dans la fraction E0, il n'en reste pas moins vrai que des quantités plus faible peuvent également se retrouver dans la fraction S0. De manière avantageuse, les fractions EO et SO peuvent être combinées de 2 0 manière à obtenir une fraction ESO en laissant, par exemple, incuber et réagir en milieu basique (pH 9 à 11) le bouillon de culture pendant environ 5 H à la t° = 4°C, en centrifugeant et en filtrant à 0,2 µ afin d'obtenir une solution limpide ESO. L'extrait bactérien ESO est alors composé, entre autre, de protéines membranaires, de lipopolysaccharides, de protéines périplasmiques, de protéines 2 5 fragments du flagelle et de métabolites primaires et secondaires produits par la bactérie. Selon encore une autre forme d'exécution de l'invention, l'extrait bactérien comprend une fraction ESO comprenant au moins la fraction EO et la fraction S0. Selon un autre aspect de l'invention, il est décrit un procédé pour la préparation 3 0 d'un extrait bactérien comprenant les étapes de : a) mise en culture de la bactérie LMB64 dans un milieu approprié ; et b) élimination des composants intra-cellulaires. Selon une autre forme d'exécution, le procédé selon l'invention consiste en un procédé de préparation d'un extrait bactérien S0, ledit procédé comprenant les étapes de . a) mise en culture de la bactérie LMB64 dans un milieu approprié ; b) centrifugation de ladite culture ; et c) récupération du surnageant S0. Selon encore une autre forme d'exécution, le procédé selon l'invention consiste en un procédé de préparation d'un extrait bactérien E0, ledit procédé comprenant les étapes de : a) mise en culture de la bactérie LMB64 dans un milieu approprié ; b) centrifugation de ladite culture et élimination du surnageant ; c) traitement de la biomasse issue de l'étape b) de manière à éliminer les composants intracellulaires; et d) récupération du culot E0. De manière préférée, l'étape c) consiste en un traitement par ultrasons de la biomasse issue de l'étape b) puis d'une première centrifugation visant à éliminer le culot comprenant lesdits composants intra-cellulaires et d'une seconde centrifugation du surnageant. Selon encore une autre forme d'exécution, le procédé selon l'invention consiste en un procédé de préparation d'un extrait bactérien E0, ledit procédé comprenant les étapes de : a) mise en culture de la bactérie LMB64 dans un milieu approprié ; b) centrifugation de ladite culture et élimination du surnageant ; c) traitement par ultrasons de la biomasse issue de l'étape b) ; d) centrifugation de ladite biomasse traitée aux ultrasons et élimination de la biomasse obtenue ; e) centrifugation du surnageant issue de l'étape d) ; et f) récupération du culot E0. Il est à noter que les différents procédés décrits plus haut le sont à titre illustratif 3 0 et que tout procédé connu de l'homme de l'art pourra être utilisé. Comme cela ressortira des exemples plus bas, la demanderesse a mis en évidence, outre les activités attendues pour ce type d'extrait, plusieurs activités nouvelles et non décrites. Un premier aspect avantageux de l'invention, lié à l'immunomodulation, repose sur la propriété de modulation des cytokines pro-inflammatoires. Plus particulièrement, l'utilisation d'une bactérie et/ou d'un extrait selon l'invention induit d'une part de manière importante les cytokines, IL10, IL12 ou encore les TNFalpha qui sont impliquées préférentiellement dans la réponse immunitaire de type Thl et d'autre part inhibe de manière importante les cytokines IL4 et IL6. Cela a pour résultat d'activer les cellules de Langerhans et de permettre un retour à l'équilibre Thl/Th2. En outre, une autre observation a permis de mettre en évidence que l'utilisation d'une bactérie et/ou d'un extrait selon l'invention permet de diminuer fortement l'expression des récepteurs IgE, ce qui présente un intérêt en ce sens que l'IgE potentialise les phénomènes d'allergie. Un autre avantage de l'invention repose sur le fait que, comme cela ressortira des exemples, l'utilisation d'une bactérie et/ou d'un extrait selon l'invention induit la production des peptides anti-microbiens comme, par exemple, les peptides hBD2, hBD3, S 1007A, LL31. Plus particulièrement, il était connu un extrait de bactérie Vitreoscilla filiformis (Guéniche et col., Eur J Dermatol 2006 ;16:380) présentant une activité sur les récepteurs TLR2, de par la présence d' OmpA, et sur les récepteurs TLR4, de par la 2 0 présence de lipopolysaccharides. Pour la première fois, la demanderesse décrit un extrait de bactérie selon l'invention qui présente, outre une activité sur les mêmes récepteurs TLR2 et TLR4, une activité sur le récepteur TLR5. L'invention vise donc l'utilisation d'une bactérie et/ou d'un extrait bactérien 2 5 tel(le) que décrit(e) plus haut comme activateur des récepteurs TLR2, TLR4 et TLR5. De manière préférée, ledit extrait bactérien activateur des récepteurs TLR2, TLR4 et TLR5 consiste en un extrait comprenant tout ou partie de protéines issues du flagelle. Dans le cas présent, à titre d'exemple, il s'agit préférentiellement de l'extrait EO ou de l'extrait ESO. 30 Cette activité d'activation des récepteurs TLR5 est d'un intérêt important en ce sens que les récepteurs TLR5 sont connus pour induire certains peptides antimicrobiens comme la psoriasine S100A7 et hBD2 (Glaser et al., Journal of Investigative Dermatology (2009) 129, 641-649;). De plus l'agoniste du TLR5 agit en synergie avec ceux des TLR2 et TLR4 permettant de potentialiser la production des peptides antimicrobiens. Il a été montré qu'en bloquant le TLR5 avec un anticorps, ces derniers sont peu ou pas produits. Cet aspect est donc particulièrement innovant au regard des applications d'immunomodulation de la bactérie et/ou des extraits selon l'invention. En outre, de manière inattendue, la demanderesse a également mis en évidence, contrairement aux extraits bactériens décrits à ce jour, une activité d'antagonisme des récepteurs PAR 2. Cette activité présente un intérêt important dans le cadre d'un traitement anti-inflammatoire. L'invention vise donc, tout particulièrement, l'utilisation d'une bactérie et/ou d'un extrait bactérien tel(le) que décrit(e) plus haut comme antagoniste du récepteur PAR 2. De manière préférée, ledit extrait bactérien antagoniste de PAR 2 consiste en l'extrait SO ou de l'extrait ESO. PAR-2 est surexprimé chez les cellules endothéliales, myocites du côlon, entérocytes, neurones entériques, cellules immunes et les Kératinocytes. Des protéases (trypsine, tryptase) présentes en abondance dans l'environnement clivent le PAR-2 par l'extrémité N-terminal exposant un peptide spécifique qui active ce même récepteur 2 0 (phénomène d'auto-activation). En conséquence, ceci active la production de cytokines pro-inflammatoires et déclenche l'inflammation (Vergnolles, N. 2009 Pharmacol. Ther. 123:292-309). Ce phénomène est observé chez la souris sauvage mais ne se manifeste pas chez la souris KO (PAR-2 déficiente). Le traitement par un anti-protéase et/ou un antagoniste de PAR-2 permet d'éviter ce phénomène d'inflammation. 25 La combinaison et la synergie de toutes ces activités font que cette bactérie LMB64, ou tout extrait issue de cette même bactérie, possède un fort potentiel dans le traitement des maladies inflammatoires et, tout particulièrement, des maladies inflammatoires où PAR 2 est impliqué et/ou pour lesquelles le système immunitaire est affaibli, perturbé ou déséquilibré. 3 0 L'invention vise donc l'utilisation d'une bactérie telle que décrite et/ou d'un extrait bactérien issu de ladite bactérie pour la préparation d'une composition destinée au traitement et/ou la prévention de troubles inflammatoires dermatologiques. De manière préférée, lesdits troubles inflammatoires dermatologiques consistent en la dermatite atopique, le prurit, l'eczéma ou le psoriasis. Selon un autre mode de réalisation, l'invention objet de la présente demande de brevet vise une composition comprenant au moins, à titre de principe actif, une bactérie et/ou un extrait bactérien selon l'invention. L'invention concerne donc, de manière préférée, une composition cosmétique ou dermatologique. La composition selon l'invention vise le traitement de troubles inflammatoires dermatologiques. De manière préférée, lesdits troubles inflammatoires dermatologiques consistent en la dermatite atopique, le prurit, l'eczéma ou le psoriasis. La composition selon l'invention peut en particulier contenir des additifs et aides à la formulation, tels que des émulsionnants, des épaississants, des gélifiants, des fixateurs d'eau, des agents d'étalement, des stabilisants, des colorants, des parfums et des conservateurs. La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention comprend, en outre, un ou plusieurs excipients usuels dermatologiquement compatibles. La composition selon l'invention peut être préparée sous la forme d'une émulsion eau dans huile (E/H) ou huile dans eau (H/E), d'une émulsion multiple comme 2 0 par exemple, une émulsion eau dans huile dans eau (E/H/E) ou une émulsion huile dans eau dans huile (H/E/H), d'une micro-émulsion ou encore sous la forme d'une hydrodispersion ou une lipodispersion, un gel ou un aérosol. Les excipients dermatologiquement ou cosmétiquement compatibles peuvent être tout excipient parmi ceux connus de l'homme de l'art en vue d'obtenir une 25 composition pour l'application topique sous forme d'un lait, d'une crème, d'un baume, d'une huile, d'une lotion, d'un gel, d'un gel moussant, d'une pommade, d'un spray, etc. Outre des compositions dermatologiques et cosmétiques, l'invention vise également des compositions pharmaceutiques pour une utilisation à titre de médicament. 3 0 L'invention vise donc une composition pharmaceutique comprenant, en outre, un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Dans la présente description, on entend désigner par véhicule pharmaceutiquement acceptable, un composé ou une combinaison de composés entrant dans une composition pharmaceutique ne provoquant pas de réactions secondaires et qui permet par exemple la facilitation de l'administration du ou des composés actifs, l'augmentation de sa durée de vie et/ou de son efficacité dans l'organisme, l'augmentation de sa solubilité en solution ou encore l'amélioration de sa conservation. Ces véhicules pharmaceutiquement acceptables sont bien connus et seront adaptés par l'homme de l'art en fonction de la nature et du mode d'administration du ou des composés actifs choisis. De préférence, ces composés pourront être administrés par voie systémique intramusculaire, intradermique, intrapéritonéale ou sous-cutanée, ou par voie orale. La composition comprenant les anticorps selon l'invention, pourra être administrée à plusieurs reprises, de manière étalée dans le temps. Leurs modes d'administration, posologies et formes galéniques optimaux peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement adapté à un patient comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au traitement et les effets secondaires constatés. L'invention sera mieux comprise à la lecture des exemples ci-dessous qui l'illustrent sans en limiter la portée. Légendes des figures : La figure 1 illustre la position phylogénétique de la séquence codant pour l'ARNr 16S de la souche LMB64. Les séquences figurant sur cet arbre sont les séquences de la base de données Genbank les plus proches de la séquence de LMB64. Les figures 2A et 2B illustrent l'observation de la bactérie LMB64 au microscope électronique à transmission (A) et à balayage (B). La figure 3 représente les optima de croissance qui ont été déterminés en fonction de la température, du pH et de la salinité du milieu de culture R3. La figure 4 illustre l'induction des cytokines IL-10 et IL-12 par l'extrait EO 3 0 (effet dose). La figure 5 illustre l'induction des molécules de surface CD80, CD86, CD83 et CD54 par l'extrait EO (effet-dose). La figure 6 illustre l'inhibition des récepteurs aux IgE par l'extrait E0. La figure 7 illustre l'activation du TLR2 par l'extrait ESO. La figure 8 illustre l'activation du TLR4 par l'extrait ESO. La figure 9 illustre l'activation du TLR5 par l'extrait ESO. La figure 10 illustre l'activité antagoniste spécifique du récepteur PAR-2 par l'extrait ESO. La figure 11 illustre l'induction de peptides et protéines antimicrobiens par l'extrait ESO. Exemple 1 : Sélection et caractérisation de la bactérie LMB64 La bactérie AV 13 a été isolée à partir de la nappe phréatique. La position taxonomique de la nouvelle bactérie LMB64 est proposée à la Figure 1. Plus particulièrement, la bactérie LMB64 se présente sous la forme d'un bâtonnet d'une longueur aux alentours de 2,3 µm (+/- 0,3) et d'une largeur aux alentours de1,0 µm (+/-0,1). Une particularité de cette bactérie est la présence d'un flagelle polaire (Figures 2A et 2B). Comme mentionné plus haut, la bactérie LMB64 possède un plasmide circulaire d'environ 11 kpb. Ce plasmide a été entièrement séquencé (SEQ ID No. 2). 2 0 Le gène codant pour l'ARNr 16S a également été séquencé (SEQ ID No. 1). La bactérie a été cultivée en fermenteur dans un milieu synthétique. Le taux de croissance est plus élevé lorsque le milieu est peu concentré en substrats carbonés. Les milieux de culture testés sont les milieux R3, MSGIuc et LB dont les compositions sont reprises ci-dessous respectivement dans les tableaux la, lb et 1c. 25 5 10 15 25 30 COMPOSITION DU MILIEU R3 Extrait de levure 1 g/1 Difco protéose peptone 1 g/1 Casamino acids 1 g/1 Glucose 1 g/1 Amidon soluble 1 g/1 Pyruvate de sodium 0,5 g/1 K2HPO4 0,6 g/1 MgSO4, 7H2O 0,1 g/1 Tableau la COMPOSITION DU MILIEU MSGIuc Glucose 6,0 g/1 Acide citrique 0,84 g/1 MgSO4, 7H2O 0,25 g/1 NH4C1 1,06 g/1 K2HPO4 anhydre 8,75 g/1 Pyruvique Acid sodium sait 0,5 g/1 Sulfate de Zinc, 7H2O 4 mg/1 Chlorure de Cobalt, 6H2O 3,5 mg/1 Molybdate de Sodium, 2H2O 3,5 mg/1 Sulfate de Manganèse, 1H2O 5 mg/1 Acide Borique 2 mg/1 Acide Chloridrique concentré 50 mg/1 Sulfate de Cuivre, 5H2O 4 mg/1 Chlorure Ferrique, 6H2O 27 mg/1 Tableau lb Tableau le 10 Les taux de croissance de la bactérie LMB64 en fonction des milieux de culture sont représentés au tableau 2 ci-dessous. Taux de croissance Vil) LB 0,25 (± 0,05) LB dilution 0,46 (± 0,11) LB dilution 1/5 0,60 (± 0,14) LB dilution 1/10 0.69 (± 0,15) MSGluc 0,13 (± 0,04) R3 0.62 (± 0,14) Tableau 2 Les optima de croissance ont été déterminés en fonction de la température, du pH et de la salinité du milieu de culture R3 (Figure 3). 25 Les sources de carbone assimilables par la bactérie ont été caractérisées en utilisant une galerie API 50CH (température d'incubation : 25° C). Les résultats sont regroupés dans le tableau 3 ci-dessous. COMPOSITION DU MILIEU LB Tryptone Extrait de levure NaCl 10 g/1 5 g/1 5 g/1 15 20 Temps d'incubation 4 jours 5 jours l.glycerol 2. erythritol 3. D-arabinose 4. L-arabinose 5. D-ribose 6. D-xylose 7. L-xylose 8. D-adonitol 9. methyl RD xylopyrannoside 10. D-galactose 11. I)-glucose 12. I)-Fructose 13. D-mannose 14. L-sorbose 15. L-rhamnose 16. dulcitol 2 0 17. inositol 18. D-mannitol 19. D-sorbitol 20. methyl aD mannopyrannoside 21. methyl aD glucopyrannoside 2 5 22. N-acétylglucosamine 23. amygdaline 24. arbutine 25. esculine/citrate de fer 26. salicine 3 0 27. D-cellobiose 28. 1)-maltose 29. 1)-lactose «)rugine hov Ille) 30. 1)-melihiose 31.1)-saCCharoSe 35 32.1)-trehalose 33. inuline 34. D-mélézitose 35. D-raffinose 36. amidon 4 0 37. glycogène 38. xylitol 39. gentobiose 40. 1)-turanose 41. D-lyxose 4 5 42. D-tagatose 43. D-fucose 44. L-fucose 45. D-arabitol 46. L-arabitol 5 0 47. potassium gluconate 48. potassium 2-cétogluconate 49. potassium 5-cétogluconate + : substrat utilisable, f : faible utilisation 55 Tableau 3 Les activités enzymatiques mises en évidence sur galerie API ZYM sont : phosphatase alcaline, estérase (C4), estérase/lipase (C8), leucine arylamidase, valine arylamidase, phosphatase acide, Naphtol-AS-BI-phosphohydrolase, et a-glucosidase. La bactérie LMB64 est sensible à tous les antibiotiques testés comme cela ressort du tableau 4 ci-dessous. Diamètre zone d'inhibition (mm) Activité inhibitrice Antibiotiques testés R3 LB I/2 LB I/5 Ampicilline (10 µg) 29 28 29 + Chloramphénicol (30 µg) 29 26 24 + Ciprofloxacine (5 µg) 38 34 34 + Kanamycine (30 µg) 27 30 27 + Pénicilline (6 µg) 21 26 20 + Polymyxine B (50 µg) 11 15 13 + Rifampicine (30 µg) 20 19 15 + Tétracycline (30 µg) 30 25 20 + Streptomycine (10 µg) 25 25 24 + Vancomycine (30 µg) 20 21 21 + Tableau 4 Exemple 2 : Procédé d'extraction des fractions E0, SO et ESO Pré-culture : La souche AV 13 est inoculée dans un erlen contenant 250 mL du milieu MS Glucose Pyruvate (voir Tableau 5 ci-dessous). Suit alors une incubation sous agitation environ 40 H à 30°C (pH 7) et à 200 rpm (tours par minutes) jusqu'à obtention 15 d'une densité optique DO(600) 1,5. MS Glucose Pyruvate Acide citrique 0,84 g MgSO4, 7H2O 0,25 g NH4C1 1,06 g K2HPO4 anhydre 8,75 g Pyruvique Acid sodium sait 0,5 g Oligo Mix 1 mL H2O dd qsp 1000 mL Vérifier le pH 7 Autoclavage 121°C 30 mn Après autoclavage ajouter: 30 mL Glucose 20 % OLIGO MIX dissoudre dans 100 mL d'eau distillée : 4 g Sulfate de Zinc, 7H2O 3,5 g Chlorure de Cobalt, 6H2O 3,5 g Molybdate de Sodium, 2H2O 5 g Sulfate de Manganèse, 1H2O Acide Borique 2 g Acide Chloridrique concentré 50 g Sulfate de Cuivre, 5H2O 4 g dissoudre dans 50 mL d'eau distillée 27 g Chlorure Ferrique, 6H2O H2O dd qsp 1000 mL Tableau 5 Culture : La préculture est ensuite inoculée dans un fermenteur (APPLIKON) contenant 3,7 L de milieu MS Pyruvate + 114 mL de solution de glucose 20 %. Une sonde de température pilote la régulation de la température de préférence proche de 30°C. Une sonde d'oxygène (AppliSens) permet de réguler la concentration en oxygène dissout à 18 - 25 % dans le milieu. Une sonde de pH (AppliSens) permet de réguler le pH à 7 par l'ajout de NH40H (à 10%) via une pompe à débit fixe. Une sonde Wedgewood analytical permet de suivre l'évolution de la densité optique en temps réel. La culture est programmée en mode Fed Batch, via une pompe à débit variable on alimente la culture par une solution de glucose 20 %. On arrête la fermentation lorsque la densité optique atteint (DO(600) 22 - 26) en général au bout d'environ 30 H. Extraction SO : le surnageant est séparé de la biomasse par centrifugation 1 H à 4°C à 4000 g. Extraction EO : la biomasse humide est reprise dans une solution de NaCl (1 M). Après une centrifugation de 15 mn à 4°C à 9000 g, le surnageant est éliminé et le culot est repris dans une solution de NaCl 1M. Le tube est alors plongé dans un bain à ultrasons réfrigéré à une puissance de 50 - 60 Watts pendant quelques minutes. Après une centrifugation de 30 mn à 4°C à 6000 g, le culot est éliminé et le surnageant est récupéré. 2 volumes d'éthanol froid sont ajoutés et la suspension est laissée une nuit à 4°C. Après une centrifugation de 30 mn à 4°C à 6000 g, le surnageant est éliminé et le 2 0 culot est repris dans du tampon Tris 25 mM pH 8,8. Extraction ESO : la culture est ramenée à pH basique (pH : 9 à 11) avec un tampon basique. Suit une incubation sous agitation pendant 5 H à la t° = 4°c. Après centrifugation, le surnageant est pré-filtré pour éliminer les débris de biomasse restants puis filtré sur 0,2 µm. On obtient une solution ESO limpide de couleur jaune. 25 Les protéines sont dosées selon le protocole du kit « DC Protein Assay kit II » de Bio-Rad. Les sucres sont dosés en équivalent glucose selon la méthode phénol / acide sulfurique (M Dubois et al, 1956). Exemple 3 : Mise en évidence des activités pharmacologiques de la fraction EO 3 0 Les cellules de Langerhans (CL) sont générées in vitro à partir de monocytes humains isolés à partir de poches Buffy-Coat issues de l'Etablissement Français du Sang (EFS) Pyrénées Méditerranée : isolement sur gradient de Ficoll (Milieu de Séparation des Lymphocytes, densité L077g/m1) et purification par immunosélection magnétique (Miltenyi Biotec) ; la différenciation en CL est réalisée pendant 6 jours en présence d'un cocktail de cytokines GMCSF/IL4/TGF(3. Les CL distribuées en plaques 24 puits dans du milieu de culture RPMI 5 % SVF, sont incubées pendant 24 heures avec l'extrait ESO. Les molécules de surface sont analysées en cytométrie en flux (FACS Calibur BD Biosciences) en triple ou quadruple marquage : CD la/ CD54/ CD80/ CD83/ CD86/ FcERI ; les cytokines secrétées dans les surnageants de culture sont analysées par CBA (Cytometry Bead Array, Cat Number 550749, BECTON Dickinson) en cytométrie en flux : IL6, ILB, TNF, IL4, I110, I112. 3.1 Induction des cytokines clés pour une polarisation Thl L'extrait EO induit l'expression des cytokines IL-10 et IL-12 selon un effet-dose par les cellules de Langherans (figure 4). Ces cytokines favorisent l'induction d'une 15 polarité TH1 des lymphocytes T naïfs. 3.2 Maturation des cellules de Langherans et inhibition du récepteur aux IgE (FcERI) L'extrait EO induit la maturation des cellules de Langerhans observée par 2 0 l'induction dose-dépendante des molécules de surface CD80, CD86, CD83 et CD54 (figure 5). De même, l'extrait EO inhibe l'expression des récepteurs aux IgE (FcERI) selon un effet-dose (figure 6). 3.3 Activation des récepteurs TLRs 25 L'activité TLR de ESO a été évaluée sur les récepteurs TLR-2, TLR-4 et TLR-5 sur le modèle de cellules HEK293 cotransfectées par le gène du TLR-2, TLR-4 ou TLR-s et par le gène reporter NFxB-sAP (Phosphatase Alcaline sécrétée). La fixation d'un ligand à son récepteur TLR conduit à l'activation du facteur de transcription NFxB ; le gène sAP est placé sous le contrôle d'un promoteur inductible par NFxB. Ce gène 3 0 reporter permet le suivi de la signalisation cellulaire via les TLRs : la libération de sAP induite par ESO et mesurée par dosage colorimétrique permet de déterminer l'activité de cet actif en tant qu'agoniste TLR-2, TLR-4, TLR-5. L'étude a été réalisée sur les lignées cellulaires HEK293 (Human Embryonic Kidney) suivantes : - HEK-Blue-2 cells pour le TLR-2, - HEK-Bluen4-4 cells pour le TLR-4, - HEK-Blue-5 cells pour le TLR-5, Ces lignées ont été entretenues dans du milieu de culture HEK-Blue Selection 10%SVF, puis distribuées en plaques 96 puits dans du milieu HEK-Blue Détection en présence de ESO pendant 18h. La lecture des plaques est réalisée en colorimétrie à 620nm. 3.3.1 Activation des récepteurs TLR2 L'extrait ESO induit l'activation des récepteurs TLR2 selon un effet-dose avec un maximum d'activité à 100 ng/ml (figure 7). 3.3.2 Activation des récepteurs TLR4 L'extrait ESO induit l'activation des récepteurs TLR4 avec un maximum d'activité à 10 ng/ml (figue 8). 3.3.3 Activation des récepteurs TLR5 L'extrait ESO induit l'activation des récepteurs TLR5 de façon dose-dépendante. Cette activité est inhibée en présence d'anticorps anti-TLR5, montrant la spécificité 2 0 d'activation de l'extrait ESO sur les TLR5 (figure 9). 3.4 Inhibition des récepteurs PAR-2 L'évaluation de l'inhibition des récepteurs PARs par l'extrait ESO est réalisée sur des kératinocytes humains issus d'une lignée (HaCaT), en mesurant l'influx de 25 calcium intracellulaire induit après stimulation spécifique des récepteurs PAR-2 par la SCTE (SCTE pour « stratum corneum trypsin-like enzyme »). La sonde fluorescente Fluo-4/AM est utilisée, sa forme estérifiée facilite sa pénétration par diffusion passive dans la cellule ; seule la forme désestérifiée et liée aux ions calcium est excitable en fluorescence à 485 nm et émet à 535 nm. 30 La sonde fluorescente est incorporée pendant 30 min dans les cellules ensemencées en plaque 96 puits puis l'extrait ESO est incubé pendant 30 min. Le flux calcique est mesuré puits par puits en temps réel selon une cinétique avant et après injection de la SCTE. Les lectures sont réalisées au Mithras LB940Tm (Berthold Technologies®). L'extrait ESO inhibe d'une façon dose-dépendante l'activation des récepteurs PAR-2 induite par la trypsine humaine SCTE (figure 10). 3.5 Modulation des cibles de la dermatite atopique sur kératinocytes L'étude a été réalisée sur des kératinocytes épidermiques humains normaux (NHEK, milieu de culture K-SFM) dans le cadre de l'induction d'un phénotype dermatite atopique. L'activité de ESO a été étudiée sur des kératinocytes présentant un phénotype dermatite atopique après stimulation pendant 24h par du Poly L-C + IL4 + IL13 + TNFa, et analysée par PCR array sur l'expression d'un panel de 32 gènes sélectionnés. Sur kératinocytes, l'extrait ESO a inhibé selon un effet-dose, 15 cibles parmi les médiateurs impliqués dans la pathologie de la dermatite atopique. Cela ressort clairement du tableau 6 ci-dessous. ESO Dexaméthasone 10µg/ml 30µg/ml 60µg/ml 2µm TSLP 56 % 75 % 92 % 91 % Cytokines ILla 35 % 46 % 59 % 54 % IL18 27 % 44 % 65 % 44 % IFN(31 66 % 82 % 90 % 49 % IL8 37 % 55% 88 % 75 % MIPla 10 % 43 % 75% 76 % RANTES 15 % 44 % 65% 12 % Chemokines MCP3 43 % 63 % 88 % pro 20 % TARC 58 % 64 % 39 % Pro 20 % MIP3a 41 % 61 % 80 % 40 % MDC 16 % 44 % 58 % 45 % Skinkine 28 % 32 % 39 % 59 % IL4-R 30 % 45 % 69 % 75 % Récepteurs RARRES3 30 % 47 % 63 % 28 % TLR-3 22 % 50 % 60 % pro 29 % Tableau 6 3.6 Induction des peptides antimicrobiens L'activité de l'extrait ESO sur l'expression des peptides et protéines antimicrobiens est étudiée sur la lignée de kératinocytes HaCaT : après 3h de traitement en présence de ESO, les cellules sont récupérées pour une analyse de l'expression des cibles anti-microbiennes par RT-PCR quantitative ; les ARNs totaux sont extraits et dosés ; après transcription inverse des ARNms en cDNA, l'étape d'amplification par PCR quantitative est réalisée en plaque 96 puits sur un appareil à PCR quantitative iCycler (BioRad). Les résultats obtenus sont exprimés en quantité relative (QR) d'ARNm après traitement par ESO par rapport au témoin sans actif. L'IL113 est parallèlement utilisée comme inducteur référent positif de l'expression des peptides antimicrobiens. La régulation de l'expression du gène d'intérêt est prise en compte à partir d'un QR > ou = à 2 (induction) ou d'un QR REVENDICATIONS1. Bactérie non pathogène à gram négatif appartenant à la classe des betaproteobacteria, sous-famille des Neisseriaceae, caractérisée en ce que la séquence en nucléotides du gène de l'ARNr 16S de ladite bactérie comprend la séquence SEQ ID No. 1, ou toute séquence en nucléotides présentant au moins 80 % d'identité avec ladite séquence SEQ ID No. 1. 2. Bactérie selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un plasmide comprenant la séquence SEQ ID No. 2, ou toute séquence présentant 10 au moins 80 % d'identité avec ladite séquence SEQ ID No. 2. 3. Bactérie selon la revendication 1 ou 2, déposée à la CNCM le 8 avril 2010 sous la référence I-4290. 4. Extrait bactérien obtenu à partir d'une suspension de bactéries selon l'une des revendications 1 à 3. 15 5. Extrait bactérien selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il est obtenu après traitement de ladite suspension bactérienne de manière à éliminer les composants intra-cellulaire. 6. Extrait bactérien selon la revendication 5, caractérisé en ce que lesdits composants intra-cellulaires comprennent au moins les acides nucléiques. 2 0 7. Extrait bactérien selon la revendication S ou 6, caractérisé en ce qu'il comprend une fraction EO comprenant au moins des protéines membranaires, des protéines périplasmiques et des protéines issues du flagelle. 8. Extrait bactérien selon la revendication 7, caractérisé en ce que lesdites protéines membranaires consistent en les porines, les OmpA, les lipopolysaccharides 2 5 et/ou les lipoprotéines. 9. Extrait bactérien selon la revendication 5 ou 6, caractérisé en ce qu'il comprend une fraction SO comprenant au moins des peptides et protéines secrétés et des métabolites secondaires. 10. Extrait bactérien selon la revendication 5 ou 6, caractérisé en ce qu'il 3 0 comprend une fraction ESO comprenant au moins la fraction EO et la fraction S0. 11. Utilisation d'une bactérie selon l'une des revendications 1 à 3 et/ou d'un extrait bactérien selon l'une des revendications 4 à 8 et 10 pour la préparation d'une composition destinée à l'activation des récepteurs TLR2, TLR4 et TLR5. 12. Utilisation d'une bactérie selon l'une des revendications 1 à 3 et/ou d'un extrait bactérien selon l'une des revendications 9 ou 10 pour la préparation d'une composition antagoniste du récepteur PAR 2. 13. Utilisation d'une bactérie selon l'une des revendications 1 à 3 et/ou d'un extrait bactérien selon l'une des revendications 4 à 10 pour la préparation d'une composition destinée au traitement et/ou la prévention de troubles inflammatoires dermatologiques. 14. Utilisation selon la revendication 13, caractérisée en ce que lesdits 10 troubles inflammatoires dermatologiques consistent en la dermatite atopique, le prurit, l'eczéma ou le psoriasis. 15. Composition comprenant au moins, à titre de principe actif, une bactérie selon l'une des revendications 1 à 3 et/ou un extrait bactérien selon l'une des revendications 4 à 10. 15 16. Composition selon la revendication 15, pour le traitement de troubles inflammatoires dermatologiques. 17. Composition selon la revendication 16, caractérisée en ce que lesdits troubles inflammatoires dermatologiques consistent en la dermatite atopique, le prurit, l'eczéma ou le psoriasis. 2 0 18. Composition cosmétique ou dermatologique selon la revendication 15, caractérisée en ce qu'elle comprend, en outre, un ou plusieurs excipients usuels dermatologiquement compatibles. 19. Composition pharmaceutique selon la revendication 15, caractérisée en ce qu'elle comprend, en outre, un véhicule pharmaceutiquement acceptable.