Brevet FR2972605A1 — publié le 20120921

MODELE ANIMAL POUR ETUDIER L'ACTIVATION DE LA VOIE DE SIGNALISATION eIF2afATF4 DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne un modèle animal pour étudier l'activation de la voie de signalisation eIF2a/ATF4. ART ANTERIEUR En cas de stress environnemental, la cellule est capable de mettre en route des processus adaptatifs dépendants en partie d'une reprogrammation de l'expression génique. La phosphorylation de la sous-unité a du facteur d'initiation de la traduction eIF2 (eukaryotic initiation factor 2), appelée eIF2a, constitue une réponse cellulaire clé à certains stress environnementaux tels qu'une hypoxie, un stress du réticulum endoplasmique (RE), une carence en acide aminé ou une infection virale. Cette phosphorylation induit une inhibition globale de la synthèse protéique, pendant que la traduction de certains ARNm spécifiques, dont le facteur de transcription ATF4 (activating transcription factor 4), est augmentée. ATF4 va alors se lier à certaines séquences d'ADN spécifiques appelées séquences CARE (C/EBP-ATF Responsive Element) et induit ainsi la transcription de gènes cibles (Figure 1). Chez les mammifères, quatre kinases ont été décrites comme étant capables de phosphoryler eIF2a et par conséquent d'induire la voie ATF4/CARE (voir Figure 1). Elles ont pour nom : PKR (protein kinase R) activée par l'ARN double brin, HRI (heure-regulated inhibitor) activée par la carence en hème, GCN2 (general control nonderepressible-2) activée par la carence en acides aminés et PERK (protein kinase R- like ER kinase) activée par un stress du réticulum endoplasmique. La phosphorylation d'eIF2a par ces kinases va déclencher l'ISR (Integrated Stress Response) qui permet d'augmenter la capacité de la cellule à gérer ces stress en agissant sur un grand nombre de fonctions biologiques de la cellule (synthèse des protéines, transcription, autophagie, apoptose....). L'importance de la phosphorylation d'eIF2a est reflétée par son action sur un grand nombre de fonctions biologiques de la cellule (synthèse des protéines, transcription, autophagie, apoptose...) et par son association avec différentes pathologies telles que le diabète, le cancer, les maladies dégénératives comme Parkinson et Alzheimer, les infections virales (hépatite C, infections par le cytomégalovirus). De plus, l'induction de cette voie est aussi associée à certaines situations nutritionnelles telles que des déséquilibres ou carences en acide aminé et des régimes riches en lipides. Il est donc important d'être en mesure d'étudier cette voie de signalisation, afin de mieux comprendre les mécanismes de réponse aux stress environnementaux et d'établissement des pathologies associées. SOMMAIRE DE L'INVENTION Les inventeurs ont donc développé un modèle animal permettant l'étude de l'activation de la voie de signalisation eIF2a/ATF4. L'invention a donc pour objet un animal transgénique non humain ayant incorporé dans son génome un transgène comprenant un gène rapporteur lié à des séquences régulatrices CARE (C/EBP-ATF Responsive Element) et un promoteur ubiquitaire. L'invention concerne aussi l'utilisation d'un tel animal transgénique pour étudier l'effet d'un stimulus environnemental sur la voie de signalisation eIF2a/ATF4. L'invention concerne enfin une méthode de criblage de substances susceptibles de moduler la voie de signalisation eIF2a/ATF4, ladite méthode comprenant : - l'induction d'un stimulus environnemental chez l'animal transgénique, la mesure du niveau d'expression du gène rapporteur sous le contrôle des séquences CARE compris dans le transgène, chez ledit animal subissant ou non ledit stimulus, l'administration de ladite substance audit animal subissant ledit stimulus, la mesure du niveau d'expression du gène rapporteur sous le contrôle des séquences CARE compris dans le transgène après administration de ladite substance, ladite substance étant sélectionnée comme une substance d'intérêt si celle-ci agit sur la sur l'animal transgénique en rétablissant dans ledit animal une expression similaire à l'expression du gène rapporteur dans le même animal transgénique non soumis au stimulus, ou en augmentant l'expression du gène rapporteur de l'animal transgénique soumis au stimulus. DESCRIPTION DES DESSINS La Figure 1 décrit de manière schématique la voie de signalisation eIF2a/ATF4. La Figure 2 illustre le transgène de l'invention. La figure 2A représente la carte du transgène (2xAARE TRIB3 : partie du transgène comprenant les 2 copies de la séquence CARE de TRIB3, TK : promoteur minimum de la thymidine kinase, LUC : gène de la luciférase). La figure 2B représente la séquence du transgène (en gris souligné apparaissent les séquences régulatrices CARE (deux copies de l'AARE de TRIB3), en noir souligné apparait le promoteur TK, en gris non souligné la séquence luciférase, et en noir italique les autres séquences (sites de restriction...)). La Figure 3 représente le dosage de l'activité Luciférase dans les tissus des souris transgéniques selon l'invention (AARE-LUC). Au début de l'expérience nutritionnelle, les souris AARE-LUC ont été habituées au régime contrôle pendant 7 jours puis ont été mises à jeun pendant 16h. Le jour de l'expérience, les souris ont été nourries pendant 4h, soit avec le régime contrôle (CTL) ou soit avec un régime carencé en leucine (-leu). Après sacrifice des souris, l'activité luciférase a été dosée dans différents tissus. La Figure 4 représente la quantification de l'imagerie optique en bioluminescence sur les souris AARE-LUC. Au début de l'expérience d'alimentation, les souris AARE-LUC ont d'abord été acclimatés avec un régime contrôle (CTL) contenant tous les acides aminés indispensables pendant 7 jours. (A) Les souris ont ensuite été mises à jeun pendant 16h. Le jour de l'expérience, elles ont été nourries pendant 4h, soit avec le régime CTL ou soit avec un régime carencé en leucine (-leu). (B) Les souris ont été ensuite nourries pendant 16h avec le régime CTL ou avec le régime -leu. Dans les 2 cas, la bioluminescence provenant de la luciférase a été mesurée avant et après la consommation du régime -leu. Le comptage des photons a été réalisé au niveau de l'abdomen sur le ventre et sur le dos de l'animal. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION La présente invention a pour objet un animal transgénique non humain ayant incorporé dans son génome un transgène comprenant un gène rapporteur lié à des séquences régulatrices CARE (C/EBP-ATF Responsive Element) et un promoteur ubiquitaire. Par « séquence régulatrice CARE » (C/EBP ATF responsive element), on entend toute séquence cible de la voie de signalisation eIF2a/ATF4 capable de lier le facteur de transcription ATF4. Dans cette voie, le facteur de transcription ATF4 (activating transcription factor 4, aussi appelé CREB2; TAXREB67, TXREB) se lie à ces séquences CARE pour induire ou réguler la transcription de gènes cibles en réponse à un stress environnemental donné (Kilberg et al., Trends Endocrinol Metab. 2009 Nov;20(9):436-43). Différentes séquences CARE ont été décrites, notamment pour les gènes suivants : CHOP (C/EBP homologous protein, aussi appelé GADD153), ASNS (Asparagine Synthetase), SNAT2 (System A Amino Acid Transporter), ATF3, TRIB3, Ce-1, xCT, HERP, VEGF et 4E-BPI. Plus particulièrement, on entend par Amino Acid Response Element (AARE) des séquences régulatrices CARE cibles de la voie GCN2, activée en cas de carence en acide aminé. Les séquences CARE des gènes CHOP, ASNS, SNAT2, ATF3 et TRIB3 sont des séquences dites AARE, ciblées en cas de phosphorylation d'eIF2a par GCN2 et de surexpression d'ATF4. L'expression de ces gènes est donc régulée en cas de carence en acides aminés. Dans un mode particulier de réalisation de l'invention, la séquence régulatrice CARE utilisée dans le transgène est sélectionnée parmi le groupe comprenant : la séquence CARE du gène TRIB3 (SEQ ID N :1), la séquence CARE du gène CHOP (SEQ ID N :2), la séquence CARE du gène ASNS (SEQ ID N :3), la séquence CARE du gène ATF3 (SEQ ID N :4) et la séquence CARE du gène SNAT2 (SEQ ID N :5). De préférence, ladite séquence est la séquence CARE de TRIB3 définie par la séquence SEQ ID N :1. Séquence CARE du gène TRIB3 CGGTTTGCATCACCCG (SEQ ID NO :1) Séquence CARE du gène CHOP AACATTGCATCATCCC (SEQ ID NO:2) Séquence AARE du gène ASNS GAAGTTTCATCATGCC (SEQ ID NO:3) Séquence AARE du gène ATF3 AGCGTTGCATCACCCC (SEQ ID N°:4) Séquence AARE du gène SNAT2 GATATTGCATCAGTTT (SEQ ID NO 5) Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les séquences régulatrices CARE comprises dans le transgène de l'invention comprennent à une ou plusieurs copies d'une séquence régulatrice LARE, plus particulièrement deux copies d'une séquence régulatrice CARE. Plus particulièrement, les séquences régulatrices CARE comprises dans le transgène comprennent deux copies d'une séquence CARE. De préférence, la séquence régulatrice CARE contenue dans le transgène comprend deux copies de la séquence CARE de TRIB3. La notion de « gène rapporteur » est bien connue de l'homme du métier et se réfère à un gène codant pour une protéine qui possède une caractéristique lui permettant d'être facilement détecté en laboratoire, telle que la fluorescence ou une activité enzymatique détectable. Des exemples de gènes rapporteurs codent pour les protéines suivantes, mais ne sont pas limités à : la luciférase (LUC), la (3-galactosidase, la protéine fluorescente verte (GFP) et ses variants tels que l'EGFP (enhanced green fluorescent protein), la REP (red fluorescence proteine), la CFP (cyan fluorescent protein), la BFP (blue green fluorescent protein) ou l'YFP (yellow fluorescent protein), la phosphatase alcaline, la béta-glucuronidase (GUS), la peroxydase du raifort (HRP), la 13-lactamase, la chloramphénicol acétyltransférase (CAT), le récepteur dopaminergique 2 (D2R) et la thymidine kinase (TK). De préférence, le gène rapporteur utilisé pour l'invention peut être détecté sans nécessité de mort de l'animal. Notamment, le gène rapporteur peut induire une fluorescence, une bioluminescence ou une coloration viable. Dans ce cadre, le gène rapporteur de l'invention peut être choisi parmi le groupe comprenant : la luciférase (LUC), la 13-galactosidase, la GUS, la GFP, l'EGFP, la REP, la CFP, la BFP ou l'YFP. Plus préférablement, le gène rapporteur utilisé pour l'invention est le gène de la luciférase. Le terme « promoteur » est bien connu de l'homme de l'art et se réfère à une région de l'ADN située à proximité d'un gène sur laquelle se fixe l'ARN polymérase, afin de démarrer la transcription. Le promoteur utilisé selon l'invention est un promoteur ubiquitaire. Par « promoteur ubiquitaire », on entend un promoteur sans activité basale pouvant potentiellement diriger la transcription dans tous les types cellulaires. Dans un mode particulier de réalisation de l'invention, ledit promoteur ubiquitaire est un promoteur minimum. On entend par « promoteur minimum » un promoteur consistant en un site d'initiation de la transcription et des séquences pour la fixation du complexe d'initiation de la transcription (TATA-box). Le promoteur utilisé selon l'invention est sélectionné parmi les promoteurs fonctionnels dans les cellules de l'organisme transgénique de l'invention. Le promoteur peut être un promoteur eucaryote qui doit être fonctionnel dans l'organisme hôte. De préférence, le promoteur utilisé selon l'invention est le promoteur minimum de la thymidine kinase, correspondant à la partie -40 à +50 de la séquence de la thymidine kinase, +l étant le site d'initiation de la transcription (Majumder S, DePamphilis ML, Mol Cell Biol, 1994). Selon l'invention, le transgène peut, de manière optionnelle, contenir un marqueur de sélection qui permet de sélectionner aisément les cellules ou animaux ayant incorporé le transgène. Un tel marqueur peut par exemple être un gène de résistance aux antibiotiques couramment utilisé, tel que la néomycine, la puromycine, la blasticidine ou l'hygromycine, ou un gène rapporteur autre que le gène rapporteur de l'invention sous le contrôle des séquences CARE. Dans un mode préféré de réalisation de l'invention, le transgène incorporé dans le 10 génome de l'animal non humain selon l'invention comprend : deux copies de la séquence CARE du gène TRIB3, le promoteur minimum de la thymidine kinase (TK), le gène codant pour la luciférase (LUC). Un tel transgène est défini par la séquence SEQ ID NO :6 (Figure 2B). Selon l'invention, l'animal transgénique non humain est un mammifère. De préférence, ledit animal transgénique non humain est un rongeur. Plus préférablement, l'animal transgénique non humain de l'invention est une souris, un rat ou un lapin. L'invention concerne aussi une cellule dérivée d'un animal transgénique selon 20 l'invention. Ladite cellule comprend donc dans son génome un transgène comprenant un gène rapporteur lié à des séquences régulatrices CARE et un promoteur ubiquitaire tel que défini ci-dessus. L'invention concerne un chromosome transgénique d'un animal transgénique dans lequel ledit chromosome contient le transgène de l'invention. La présente invention a pour objet un procédé de production d'un animal transgénique non humain selon l'invention. 15 25 Les techniques de génération d'animal transgénique sont bien connues de l'homme du métier. Des procédés de base existent notamment pour générer une souris transgénique. La première consiste en la microinjection du transgène d'intérêt dans le génome de l'animal au stade de développement « une cellule » (zygote), dans le pronucléus male de l'oocyte fertilisé, et en la réimplantation de celui-ci dans une femelle pseudo-gravide (Constantin et Lacy, 1981 ; Gordon et Ruddle, 1981). La deuxième consiste en la transfection du transgène dans une cellule souche embryonnaire et l'injection de ladite cellule dans un blastocyste (Robertson et al., 1986 ; Gossler et al., 1986). Des animaux transgéniques autres que la souris peuvent être produits selon cette méthode. Ainsi, l'invention concerne un procédé d'obtention d'un animal transgénique selon l'invention, comprenant les étapes suivantes : l'injection à un zygote d'une particule lentivirale contenant un transgène comprenant un gène rapporteur lié à des séquences régulatrices CARE et un promoteur ubiquitaire tel que défini ci- dessus, et l'obtention d'une souris à partir dudit zygote, par réimplantation dudit zygote dans l'utérus d'une femelle pseudo-gravide. Par ailleurs, un animal transgénique tel que décrit ci-dessus permet d'observer dans l'espace et le temps l'activation de la voie de signalisation eIF2a/ATF4. En effet, quand cette voie est activée, le gène rapporteur présent dans le transgène est exprimé, et son expression peut être étudiée. Ainsi, l'animal transgénique de l'invention constitue un outil pour étudier l'activation de cette voie en fonction de différents stimuli ou stress subis. Il permet par exemple d'observer l'impact de certains régimes nutritionnels (carence en acides aminés, régimes riches en matière grasse...) sur l'activation de la voie de signalisation, ou encore l'effet d'un stress du réticulum endoplasmique, d'une carence en hème, d'un choc thermique, d'un choc osmotique ou d'une infection virale. Ainsi, l'invention a pour objet l'utilisation d'un animal transgénique tel que décrit précédemment pour étudier l'effet de différents stimuli environnementaux sur la voie de signalisation eIF2a/ATF4. L'utilisation de l'animal transgénique de l'invention pour étudier l'activation de la voie de signalisation eIF2a/ATF4 selon les différents paramètres cités (stimuli 5 environnementaux, molécules chimiques) peut se faire in vivo ou ex vivo. Dans un mode de réalisation de l'invention, le stimulus environnemental subi par l'animal est une carence en acide aminé essentiel. Notamment, le stimulus environnemental subi par l'animal est une carence en leucine, méthionine, tryptophane, histidine, lysine, valine, isoleucine, leucine, phénylalanine ou thréonine. 10 Préférentiellement, le stimulus environnemental subi par l'animal est une carence en leucine. Dans ce mode de réalisation, le transgène incorporé dans le génome dudit animal comprend plus particulièrement la séquence régulatrice CARE d'un gène sélectionné dans le groupe comprenant TRIB3, CHOP, ASNS, ATF3 et SNAT2. Préférentiellement, 15 le transgène est défini par la séquence SEQ ID NO :6. Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le stimulus environnemental subi par l'animal est l'induction d'une infection virale ou l'administration d'une molécule mimant une infection virale. En effet, la voie eIF2a/ATF4 est activée lors d'une infection virale par la présence d'ARN bicaténaire produit par le virus, par les 20 cytokine et l'interféron, ou encore par la protéine PACT et par l'héparine. Ainsi, une infection virale peut être mimée par l'un de ces éléments. Dans un autre mode de réalisation, le stimulus environnemental subi par l'animal est l'induction d'un stress du réticulum endoplasmique. Un tel stress peut notamment être induit par un certain nombre de drogues telles que la tunicamycine, le dithiothreitol, 25 la thapsigargine ou la brefeldine A, ou par une injection de lipopolysaccahride. Dans un autre mode de réalisation, le stimulus environnemental subi par l'animal est l'induction d'une carence en hème. Dans un autre mode de réalisation, le stimulus environnemental subi par l'animal est un régime riche en lipides. 30 Dans un autre mode de réalisation, le stimulus environnemental subi par l'animal est un choc thermique ou un choc osmotique. De même, l'effet de diverses substances sur la voie de signalisation eIF2a/ATF4 peut être étudié dans le cadre d'un stimulus environnemental ou d'une pathologie tels que décrits précédemment. Par substance, on entend tout type de molécule chimique ou biologique, synthétique ou naturelle. L'invention concerne une méthode de criblage de substances susceptibles de moduler la voie de signalisation eIF2a/ATF4, ladite méthode comprenant : l'induction d'un stress environnemental chez l'animal transgénique, la mesure du niveau d'expression du gène rapporteur sous le contrôle des séquences CARE compris dans le transgène, chez ledit animal subissant ou non ledit stress, l'administration de ladite substance audit animal subissant ledit stress, la mesure du niveau d'expression du gène rapporteur sous le contrôle des séquences CARE compris dans le transgène après administration de ladite substance, ladite substance étant sélectionnée comme une substance d'intérêt si celle-ci agit sur la sur l'animal transgénique en rétablissant dans ledit animal une expression similaire à 20 l'expression du gène rapporteur dans le même animal transgénique non soumis au stimulus, ou en augmentant l'expression du gène rapporteur de l'animal transgénique soumis au stimulus. Par « moduler », on entend activer ou inhiber la voie ATF4. Par «substance agissant sur l'animal transgénique en rétablissant l'expression du 25 gène rapporteur », on entend aussi une substance tendant à rétablir cette expression. Dans un mode particulier de réalisation, le stress ou stimulus environnemental induit chez l'animal est choisi parmi le groupe comprenant une carence en acide aminé, une carence en hème, une infection virale, un choc osmotique, un choc thermique ou un 15 stress du réticulum endoplasmique. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le stimulus environnemental subi par l'animal est une carence en acide aminé sélectionné dans le groupe comprenant la leucine, la méthionine, le tryptophane, l'histidine, la lysine, la valine, l'isoleucine, la leucine, la phénylalanine ou la thréonine. Plus préférablement, le stimulus environnemental subi par l'animal est une carence en leucine. Dans ce mode particulier de réalisation, le transgène incorporé dans le génome dudit animal comprend la séquence régulatrice CARS d'un gène sélectionné dans le groupe comprenant TRIB3, CHOP, ASNS, ATF3 et SNAT2. De préférence, le transgène comprend le gène rapporteur de la luciférase lié à deux copies de la séquence régulatrice CARE de TRB3 et le promoteur minimum de la thymidine kinase. Plus préférentiellement, ce transgène est défini par la séquence SEQ ID NO :6. Les stress environnementaux induits chez l'animal sont potentiellement liés à des pathologies, telles que l'obésité, le diabète, l'athérosclérose, les infections virales ou les maladies neurodégénératives (Alzheimer, Parkinson). Si le stress induit chez l'animal est lié à une pathologie donnée, la molécule sélectionnée est ensuite testée dans un modèle animal de ladite pathologie. Les modèles animaux de ces pathologies sont bien connus de l'homme de l'art. Par exemple, la souris Ob/Ob, déficiente en leptine, peut être utilisée comme modèle animal de l'obésité et du diabète de type 2 ; la souris ApoE-/-, déficiente en Apolipoprotéine E, peut être utilisée comme modèle animal de l'athérosclérose, les souris Tg2576 et 5XFAD (The Jackson Laboratory) peuvent être utilisées comme modèle animal de la maladie d'Alzheimer et les souris park2 peuvent être utilisées comme modèle animal de la maladie de Parkinson (The Jackson Laboratory). L'étude de la voie de signalisation eIF2a/ATF4 sur ces modèles permet de déterminer de nouvelles stratégies de traitement pour ces pathologies. EXEMPLES D'autres caractéristiques de l'invention apparaîtront dans les exemples qui suivent, sans pour autant que ceux-ci ne constituent une quelconque limitation de l'invention. Matériel et Méthodes Réalisation du transgène RARE-TK-LUC. La construction 2XAARE TRIB3-TK-LUC représentée en Figure 2 a été obtenue en sous-clonant un oligonucléotide double brin contenant 2 copies de la séquence CARE/AARE de TRIB3 (-7131 à -7033) au site MIuI-Xhol de la construction plasmidique TATA-TK-LUC contenant la séquence codante du gène luciférase provenant de pGL3 basic (Promega). La construction a été séquencée puis la réponse à la carence en leucine a été testée en transfection transitoire dans des cellules humaines HepG2 (Hépatome de foie) et murines (MEF : Mouse Embryonic Fibroblasts). Le fragment d'ADN correspondant aux séquences du transgène 2XARRE-TK- LUC a ensuite été cloné aux sites BamHI/Xbal du vecteur lentiviral pRRL.PPT.SF.GFPpre IxHS4 (Schambach A, Galla M, Maetzig T, Loew R, Baum C. Mol Ther. 2007 Jun;15(6):1167-73) contenant les séquences « insulator » 5'HS4 de la (3-globine du poulet. Pour vérifier l'inductibilité du transgène AARE-LUC via la voie de signalisation eIF2a/ATF4, des cellules HeLa ont été infectées par ces particules lentivirales. Les résultats montrent que le transgène LUC, intégré de manière stable dans des cellules HeLa est induit par une diminution de la concentration de leucine de manière dose-dépendante de l'ordre de celles observées dans le plasma des souris (30 à 70 µM) et par différents concentrations de tunicamycine, un agent qui induit le stress du réticulum endoplasmique. Génération des souris transgéniques. Pour générer les souris transgéniques AARE-TK-LUC, les particules lentivirales ont été microinjectées dans l'espace périvitellin d'un oocyte au stade une cellule provenant de souris C57BL/6JxDB/2J (Charles River, Wilmington, MA). Cette intégration germinale lentivirale a permis d'obtenir plus de 50% de fondateurs portant le transgène. Quinze lignées indépendantes ont été ainsi été obtenues, mais seulement 5 fondateurs comportaient au moins une copie du transgène intégré. Une descendance F 1 a été obtenue pour ces 5 souris fondatrices FO sélectionnées. Dosage de l'activité luciférase dans les extraits de tissus. L'activité luciférase dans les extraits de cellules ou de tissus a été mesurée en utilisant un kit commercial (YELEN, Ensue La Redonne, France). L'activité luciférase relative correspond au rapport entre l'activité luciférase et la quantité de protéines. Mesure de la bioluminescence par imagerie. L'activité luciférase a été visualisée sur les souris AARE-LUC vivantes avec une unité d'imagerie in vivo NightOWL II LB 983 NC100 (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Allemagne). Ce système utilise une caméra CCD ultrasensible refroidie par effet Peltier à balayage lent équipée d'un objectif 25 mm/0.95 située dans une chambre noire étanche et thermocontrolée permettant la détection de niveaux très faibles de lumière émise par une cellule exprimant un gène traceur comme la luciférase. Il est également muni d'un système d'anesthésie gazeuse intégré. Pour la détection de la bioluminescence, les souris ont été anesthésiées à l'isoflurane (induction 5% isofluorane, maintien à 2% dans 70% air-30% oxygène) et ont reçu une injection intrapéritonéale d'une solution aqueuse de luciférine (Caliper LIFE SCIENCES, 150mg/kg), 10 min avant mesure de l'émission de photons (2x 4min d'intégration, pixel binning 8x8), pour obtenir une bio-distribution uniforme du substrat. Les images de bioluminescence sont présentées comme des images pseudocolorées superposées à une photographie acquise avant l'image de bioluminescence en niveau de gris en utilisant le logiciel WinLight (Berthold technologies). L'intensité du signal bioluminescent est ensuite quantifiée au niveau des régions d'intérêt avec le logiciel WinLight et exprimée en nombre de photons par seconde. Résultats Mesure de l'activité luciférase dans les tissus. Dans un premier temps, l'évaluation de l'inductibilité du transgène AARE-TKLUC à la carence en leucine a été réalisée en mesurant l'activité luciférase dans les différents tissus des différentes lignées transgéniques. Les souris âgées d'environ 2 mois ont été habituées pendant 7 jours à un régime contrôle (CTL) contenant tous les acides aminés indispensables. Ensuite, après avoir été mises à jeun pendant 16h, elles ont été nourries soit avec le régime CTL ou soit avec un régime carencé en leucine (-Leu) puis sacrifiées pour le prélèvement de différents tissus. L'analyse de l'activité luciférase montre que la consommation d'un régime dépourvu de leucine entraîne une forte induction de l'activité LUC dans le foie, l'intestin et le cerveau (Figure 3). Ce profil d'expression du gène LUC a été confirmé en mesurant le niveau des ARNm LUC. Mesure de la bioluminescence sur les souris vivantes. Ensuite, l'induction de l'expression du gène de luciférase par la carence en leucine correspondant à l'activation de la voie de signalisation eIF2u/ATF4 a été visualisée par imagerie en bioluminescence sur des animaux vivants (Figure 4). Comme précédemment les souris ont d'abord été acclimatées avec un régime CTL pendant 7 jours et ensuite deux types d'expériences ont été réalisés: - dans un premier cas, les souris ont été mises à jeun pendant 16h. Le jour de l'expérience, elles ont été nourries pendant 4h, soit avec le régime CTL ou soit avec un régime carencé en leucine (-leu). - dans un deuxième cas, les souris ont été nourries pendant 16h soit avec le régime CTL ou soit avec le régime -leu. Dans les deux cas, la bioluminescence provenant de la luciférase a été mesurée avant et après la consommation du régime -leu. Le comptage des photons a été réalisé au niveau de l'abdomen. Les résultats obtenus avec la face ventrale montrent clairement une forte augmentation de la luminescence dans la région abdominale 4h après le début du repas. Cette augmentation est encore plus importante après 16h de consommation du régime -leu. En ce qui concerne la vue dorsale, une forte augmentation de la luminescence est observée uniquement après 16h de consommation du régime -Leu. REVENDICATIONS1. Animal transgénique non humain ayant incorporé dans son génome un transgène comprenant un gène rapporteur lié à des séquences régulatrices CARE (C/EBPATF responsive element) et un promoteur ubiquitaire. 2. Animal transgénique non humain selon la revendication 1, caractérisé en ce que les séquences régulatrices CARE consistent en deux copies de la séquence CARE du gène TRIB3 définie par la séquence SEQ ID N°1. 3. Animal transgénique non humain selon l'une quelconque des revendications 1 à 2, caractérisé en ce que le promoteur est le promoteur minimum de la thymidine kinase. 4. Animal transgénique non humain selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le gène rapporteur est le gène de la luciférase. 5. Animal transgénique non humain selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le transgène incorporé dans son génome est défini par la séquence SEQ ID NO :6. 6. Animal transgénique non humain selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que ledit animal est une souris. 7. Utilisation d'un animal transgénique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 pour étudier l'effet d'un stimulus environnemental sur la voie de signalisation eIF2a/ATF4. 8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisé en ce que le stimulus environnemental est une carence en acide aminé, une carence en hème, un stress du réticulum endoplasmique, un choc thermique, un choc osmotique ou une infection virale. 9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisé en ce que ledit stimulus est une carence en leucine, méthionine, tryptophane, histidine, lysine, valine, isoleucine, leucine phénylalanine ou thréonine. 10. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que l'animal transgénique non humain utilisé est défini selon l'une quelconque des revendications 2 ou 5. 11. Méthode de criblage de substances susceptibles d'agir sur la voie de signalisation eIF2a/ATF4, ladite méthode comprenant :l'induction d'un stimulus environnemental tel que défini dans la revendication 8 chez l'animal transgénique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, - la mesure du niveau d'expression du gène rapporteur sous le contrôle des séquences CARE compris dans le transgène tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 6, chez ledit animal subissant ou non ledit stimulus, l'administration de ladite substance audit animal subissant ledit stimulus, la mesure du niveau d'expression du gène rapporteur sous le contrôle des séquences CARE compris dans le transgène après administration de ladite substance, ladite substance étant sélectionnée comme une substance d'intérêt si celle-ci agit sur la sur l'animal transgénique en rétablissant dans ledit animal une expression similaire à l'expression du gène rapporteur dans le même animal transgénique non soumis au stimulus, ou en augmentant l'expression du gène rapporteur de l'animal transgénique soumis au stimulus.