Brevet FR2967781A1 — publié le 20120525

DETERMINATION DU POUVOIR THROMBOGENE D'IMMUNOGLOBULINES HUMAINES La présente invention concerne la détermination du pouvoir thrombogéne 5 d'immunoglobulines humaines contenues dans un échantillon à tester. Les immunoglobulines humaines, contenant essentiellement des IgG, sont utilisées couramment dans la thérapie des pathologies telles que l'immunodéficience ou des maladies auto-immunes et particulièrement par voie intraveineuse (MG). Néanmoins, selon l'observation clinique, l'utilisation des MG chez des patients 10 entraîne parfois des effets secondaires graves, comme par exemple des accidents thromboemboliques. Une thrombose embolique consiste en la formation d'un thrombus obturant un vaisseau sanguin. Le thrombus peut se développer dans la circulation veineuse et donner lieu à une thrombose veineuse, ou dans la circulation artérielle et entraîner une occlusion artérielle 15 avec ischémie voire infarctus. Un thrombus résulte de la coagulation sanguine, par l'agrégation plaquettaire et l'activation du système de coagulation, ceci étant une réaction en chaîne qui met en jeu les plaquettes et les facteurs de la coagulation. Un thrombus contient essentiellement de fibrine, une protéine insoluble, formée à partir du fibrinogène. Les facteurs XI et IX font partie des facteurs intervenant dans la coagulation 20 sanguine par voie intrinsèque. Le facteur IX est activé par le facteur XI activé, ce dernier étant lui-même activé par le facteur XII activé. Cette cascade d'activation aboutit finalement à la formation du fibrinogène (FI). Les études de la Demanderesse présentées dans la présente demande ont permis de mettre en évidence pour la première fois la présence de facteur XI activé et/ou de facteur IX 25 activé dans les MG, ce qui pourrait être la cause d'accidents thrombo-emboliques après l'injection des MG chez des patients. Par conséquent, il y a une grande nécessité à mettre à disposition un procédé fiable et sensible permettant de déterminer la présence de facteur XI activé et/ou de facteur IX activé dans un produit biologiquement acceptable contenant des immunoglobulines. 30 Le test de génération de thrombine (TGT) est connu de l'homme du métier. Le principe de ce test concerne l'analyse de la cinétique de la formation de thrombine qu'un plasma donné produit en réponse à une stimulation standardisée. Parmi les TGT développés à ce jour, la thromboélastographie consiste à mesurer les propriétés physiques d'un sang total en analysant de manière mécanique la formation du caillot en fonction du temps. Selon les paramètres extraits d'un graphique (appelé thromboélastogramme) généré par le thromboélastographe, on peut évaluer l'aptitude à la coagulation d'un patient. Par ailleurs, Hemker et al. proposent en 2002 le concept de thrombinographie permettant de mesurer la génération de thrombine par fluorométrie (Pathophysiol Haemost thromb 2002 ; 32 : 249-53). La thrombinographie consiste à utiliser un calibreur de thrombine et un substrat fluorescent spécifique en plasma pauvre en plaquettes ou en plasma riche en plaquettes, afin d'établir un thrombinogramme. Un signal induit par la thrombine générée par le facteur tissulaire est confronté au signal généré par une quantité normalisée de thrombine exogène dans ce même plasma. La Demanderesse de la présente demande a trouvé de manière surprenante qu'un test de génération de thrombine permet également de déterminer la présence de FXI et/ou de FIX dans un échantillon. La présente invention a pour l'objectif de fournir un kit pour la détermination du 15 pouvoir thrombogène d'immunoglobulines humaines contenues dans un produit biologiquement acceptable. La présente invention a également pour l'objectif de fournir un procédé permettant de déterminer le pouvoir thrombogène lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé dans un échantillon susceptible d'être administré chez des humains. 20 Le premier aspect de l'invention concerne l'utilisation d'un kit comprenant les éléments suivants: - un échantillon de plasma sanguin humain, - des phospholipides, 25 - du CaClz, et éventuellement - du facteur tissulaire humain, pour déterminer le pouvoir thrombogène d'immunoglobulines humaines contenues dans un échantillon à tester, notamment biologiquement acceptable, lesdits éléments du kit et l'échantillon à tester formant un milieu réactionnel. 30 On entend par « Immunoglobulines humaines » ou « IgG humaines » dans le cadre de l'invention, des immunoglobulines polyvalentes qui sont essentiellement des IgG, incluant éventuellement des IgM. Il peut s'agir d'immunoglobulines entières, ou de fragments tels que F(ab')2 ou F(ab) et toute fraction intermédiaire obtenue au cours du procédé de fabrication des immunoglobulines polyvalentes. Dans le cadre de l'invention, on entend par «pouvoir thrombogéne », la capacité d'immunoglobulines humains à déclencher une coagulation et former un thrombus chez des patients. Etant donné que les facteurs de coagulation sont naturellement présents dans les plasmas humains, le pouvoir thrombogéne d'immunoglobulines est un index relatif par rapport à la coagulation sanguine pouvant être déclenchée naturellement chez des patients. On entend un échantillon « biologiquement acceptable », un échantillon susceptible d'être administré chez les humains par voix intraveineuse, parentérale, ou intramusculaire. Avantageusement, l'invention concerne l'utilisation d'un kit comprenant les éléments suivants: - un échantillon de plasma sanguin humain, - des phospholipides, - du CaC12, et éventuellement - du facteur tissulaire humain, pour déterminer le pouvoir thrombogéne, lié à la présence du facteur XI et/ou du facteur IX, et/ou facteur XI activé et/ou du facteur IX activé, d'immunoglobulines humaines contenues dans un échantillon à tester, notamment biologiquement acceptable, lesdits éléments du kit et l'échantillon à tester formant un milieu réactionnel. Par « facteur XI activé » ou « FXIa », on entend une protéine constituée de deux 20 sous-unités de 80 kDa, liées entre elle par un pont disulfure à la position Cys-321 et capable de reconnaître son substrat naturel : FIX. Par « facteur IX activé » ou « FIXa », on entend une protéine de FIX capable de reconnaître son substrat naturel : FX. 25 Dans un mode de réalisation particulier, le kit selon l'invention comprend en outre un substrat fluorogénique ou flurorescent. Le plasma sanguin humain est prélevé chez des donneurs volontaires sains ne présentant pas de maladies graves, et contient tous les facteurs de la coagulation, en taux normal, intervenant dans la coagulation sanguine par voie intrinsèque. 30 Dans un mode de réalisation avantageux, le plasma sanguin humain est un pool de plasmas sanguins humains frais ou congelé ou un plasma sanguin commercial calibré. Le plasma sanguin utilisé dans l'invention peut contenir ou être dépourvu de facteur tissulaire. Dans un mode de réalisation avantageux, le plasma sanguin humain est dépourvu de facteur tissulaire. Dans un mode de réalisation avantageux, le facteur tissulaire humain est d'origine plasmatique, d'origine recombinante, ou d'origine transgénique. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'invention concerne l'utilisation d'un kit comprenant : - un plasma sanguin humain, dont le volume représente de 80% à 40%, notamment de 75% à 50%, particulièrement 53% du volume du milieu réactionnel. - des phospholipides humains, dont la concentration finale dans le milieu réactionnel est de 1 µM à 10 µM, particulièrement 4 µM, - du facteur tissulaire humain, dont la concentration finale dans le milieu réactionnel est de 0,05 pM à 10 pM, particulièrement 0,3 pM, - un tampon contenant du CaC12. Dans un mode de réalisation avantageux, le ratio entre le volume du plasma sanguin et celui de l'échantillon à tester est de 8 :1 à 2 :1, particulièrement 4 :1. Un autre aspect de l'invention concerne un procédé de mesure du pouvoir thrombogéne d'immunoglobulines humaines contenues dans un échantillon à tester notamment biologiquement acceptable. Ledit procédé comprend les étapes suivantes : a) le mélange d'un échantillon à tester avec un échantillon de plasma sanguin humain pour former un milieu réactionnel intermédiaire, b) l'ajout dans le milieu réactionnel intermédiaire obtenu à l'étape précédente d'un mélange comprenant des phospholipides, du CaC12, et éventuellement du facteur tissulaire 25 humain, pour former un milieu réactionnel; c) l'obtention d'un thrombinogramme en effectuant un test de génération de thrombine sur le milieu réactionnel obtenu à l'étape b) ; d) la comparaison d'au moins l'un des paramètres du thrombinogramme obtenu de l'étape c) à un paramètre homologue obtenu à partir de thrombinogrammes standards établis 30 sur la base d'une série de calibreurs dont le pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé est connu et varie entre chaque calibreur ; e) la déduction de l'étape d) du pouvoir thrombogéne d'immunoglobulines humaines contenues dans l'échantillon à tester. Dans un mode réalisation particulier, le thrombinogramme standard est obtenu en effectuant un test de génération de thrombine sur un milieu réactionnel comprenant i) un calibreur dont le pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé est connu, ii) un plasma sanguin humain, iii) un mélange réactionnel comprenant des phopholipides et éventuellement le facteur tissulaire humain. Dans un autre mode de réalisation particulier, la concentration finale du facteur tissulaire humain dans le milieu réactionnel est de 0,05 pM à 10 pM, particulièrement 0,3 pM. Dans un autre mode de réalisation particulier, la concentration finale des phospholipides humains dans le milieu réactionnel est de 1 µM à 10 µM, particulièrement 4 µM. Dans un autre mode de réalisation particulier, le volume du plasma sanguin représente de 80% à 40%, notamment de 75% à 50%, particulièrement 53% du volume du milieu réactionnel. Dans un autre mode de réalisation particulier, le ratio entre le volume du plasma sanguin et celui de l'échantillon est de 8:1 à 2:1, particulièrement 4:1. Dans un autre mode de réalisation particulier, le thrombinogramme est obtenu par la méthode de la thromboélastographie ou la méthode de thrombinographie. La thromboélastographie peut être mise en oeuvre selon la méthode connue de l'homme du métier, telle que décrite par Savey et al. (Ann Fr Anesth Reanim 2005 ; 24 :607- 16). La thrombinographie peut être mise en oeuvre selon la méthode connue de l'homme du métier, telle que décrite par Hemker et al. (Pathophysiol Haemost thromb 2002 ; 32 : 249-53). Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, le procédé selon l'invention comprend les étapes suivantes : a) le mélange d'un échantillon avec un plasma sanguin humain représentant 53% du volume du milieu réactionnel, dans lequel le ratio entre le volume du plasma sanguin et celui de l'échantillon est de 8:1 à 2:1, particulièrement 4:1 pour former un milieu réactionnel intermédiaire ; b) l'ajout dans le milieu réactionnel intermédiaire obtenu à l'étape précédente d'un mélange comprenant 4µM des phopholipides, et 3pM de facteur tissulaire humain et du CaC12, pour former un milieu réactionnel; c) l'obtention d'un thrombinogramme par la mise en oeuvre de thrombinographie, en effectuant un test de génération de thrombine sur le milieu réactionnel obtenu à l'étape b) ; d) la comparaison d'au moins l'un des paramètre du thrombinogramme obtenu à l'étape c) à un paramètre homologue obtenu à partir de thrombinogrammes standards établis sur la base d'une série de calibreurs dont le pouvoir thrombogène lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé est connu et varie entre chaque calibreur ; e) la déduction de l'étape d) du pouvoir thrombogène lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé dans l'échantillon. La présente invention est illustrée davantage par les figures et les exemples ci-dessous. Ces figures et exemples représentant les modes de réalisation particuliers de l'invention, ne visent en aucun cas à limiter la portée de l'invention. Figures Figure 1 : la figure 1 représente la détermination respective du pouvoir thrombogène du facteur XI activé dans un pool de plasma normal, ou un pool de plasma normal dilué (1/9), du tampon de dilution dans un pool de plasma normal, ou un pool de plasma normal dilué (1/9) respectivement, selon le premier protocole. La concentration finale du facteur tissulaire dans le milieu réactionnel est 20 pM. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée « Protocole 1 ». Figure 2 : la figure 2 représente la détermination respective du pouvoir thrombogène du facteur XI activé dans un pool de plasma normal, ou du FXIa dans un pool de plasma normal dilué (1/9), et du tampon de dilution dans un pool de plasma normal, ou du tampon de dilution dans un pool de plasma normal dilué (1/9), selon le deuxième protocole. La concentration finale du facteur tissulaire dans le milieu réactionnel est 0,3 pM. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée «Protocole 2 ». Figure 3 : la figure 3 représente la détermination respective du pouvoir thrombogène du facteur XI activé dans un pool de plasma normal, du FXI dans un pool de plasma normal dilué (1/9), du tampon de dilution dans un pool de plasma normal, ou du tampon de dilution dans un pool de plasma normal dilué (1/9), selon le deuxième protocole. Le milieu réactionnel ne contient pas de facteur tissulaire. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée « Protocole 2 ». Figure 4 : la figure 4 représente la détermination respective du pouvoir thrombogéne du facteur XI activé de concentrations différentes dans un pool de plasma normal contenant IgG, du XIa activé dans un pool de plasma normal, d'un pool de plasma normal contenant IgG, et du tampon de dilution dans un pool de plasma normal, selon le deuxième protocole. La concentration finale du facteur tissulaire dans le milieu réactionnel est 0,3 pM. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée «Protocole 2 ». Figure 5 : la figure 5 représente la détermination respective du pouvoir thrombogéne du facteur IX activé de concentrations différentes dans un pool de plasma normal contenant IgG, du IXa activé dans un pool de plasma normal, d'un pool de plasma normal contenant IgG, et du tampon de dilution dans un pool de plasma normal, selon le deuxième protocole. La concentration finale du facteur tissulaire dans le milieu réactionnel est 0,3 pM. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée «Protocole 2 ». Figure 6 : la figure 6 représente la détermination respective du pouvoir thrombogéne du tampon de dilution dans un pool de plasma normal, du facteur XI activé dans un pool de plasma normal contenant IgG, du facteur IX activé dans un pool plasma normal contenant IgG, du facteur XI activé et du facteur IX activé dans un pool de plasma normal contenant IgG, des immunoglobulines de type Tégéline® (LFB) dans un pool de plasma normal contenant, des immunoglobulines de type Clairyg® (LFB) dans un pool de plasma normal, de des immunoglobulines de type IgNG (LFB) dans un pool de plasma normal, des immunoglobulines de type IVHEBEX® (LFB) dans un pool de plasma normal. La concentration finale du facteur tissulaire dans le milieu réactionnel est 0,3 pM. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée «Protocole 2 ». Figure 7 : la figure 7 représente la détermination respective du pouvoir thrombogéne du plasma calibré commercialisé par la société Stago sous le nom « Unicalibrator® », du plasma « Unicalibrator® » contenant le tampon de dilution, du plasma « Unicalibrator® » contenant le facteur IX activé, du plasma « Unicalibrator® » contenant le facteur XI activé, du plasma « Unicalibrator® » contenant le facteur IX activé et le facteur XI activé, du plasma « Unicalibrator® » contenant des immunoglobulines de type Clairyg®. La concentration finale du facteur tissulaire dans le milieu réactionnel est 0,3 pM. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée «Protocole 2 ». Figure 8 : la figure 8 représente la détermination respective du pouvoir thrombogéne du plasma « Unicalibrator® » contenant le tampon de dilution, du plasma « Unicalibrator® » contenant le facteur IX activé, du plasma « Unicalibrator® » contenant le facteur XI activé, du plasma «Unicalibrator®» contenant des immunoglobulines de type IgNG. Le milieu réactionnel ne contient pas de facteur tissulaire. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée « Protocole 2 ». Figure 9 : la figure 9 représente la détermination respective du pouvoir thrombogéne du plasma déficient en FXI, du FIXa dans un plasma déficient en FXI, du FXIa dans un plasma déficient en FXI, du FIXa et du FXIa dans un plasma déficient en FXI, de des immunoglobulines de type Clairyg® dans un plasma déficient en FXI. La concentration finale du facteur tissulaire dans le milieu réactionnel est 0,3 pM. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée «Protocole 2 ». Figure 10: la figure 10 représente la détermination respective du pouvoir thrombogéne du plasma déficient en FXI, du FIXa dans un plasma déficient en FXI, du FXIa dans un plasma déficient en FXI, des immunoglobulines de type IgNG dans un plasma déficient en FXI. Le milieu réactionnel ne contient pas de facteur tissulaire. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée «Protocole 2 ». Figure 11 : la figure 11 représente la détermination respective du pouvoir thrombogéne du plasma déficient en FIX, du FIXa dans un plasma déficient en FIX, du FIXa dans un plasma déficient en FIX, des immunoglobulines de type IgNG dans un plasma déficient en FIX. La concentration finale du facteur tissulaire dans le milieu réactionnel est 0,3 pM. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée «Protocole 2 ». Figure 12: la figure 12 représente la détermination respective du pouvoir thrombogéne du plasma déficient en FIX, du FIXa dans un plasma déficient en FIX, du FIXa dans un plasma déficient en FIX, des immunoglobulines de type IgNG dans un plasma déficient en FIX. Le milieu réactionnel ne contient pas de facteur tissulaire. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée «Protocole 2 ». Figure 13 : la figure 13 représente la détermination respective du pouvoir thrombogène du tampon de dilution dans le plasma « Unicalibrator® », du FXIa dans le plasma « Unicalibrator® », des immunoglobulines de type Tégéline dans le plasma « Unicalibrator® », des immunoglobulines de type Clairyg dans le plasma « Unicalibrator® », des immunoglobulines de type IVhebex dans le plasma « Unicalibrator® », des immunoglobulines de type IgNG 10% dans le plasma « Unicalibrator®», des immunoglobulines de type IgNG 5% dans le plasma «Unicalibrator®». Le milieu réactionnel ne contient pas de facteur tissulaire. La concentration finale des phospholipides dans le milieu réactionnel est 8µM. Les autres conditions de réactions sont décrites dans le tableau 1, sous la colonne désignée « Protocole 2 ». Exemples Protocole 1 pour déterminer le pouvoir thrombogène d'un échantillon à tester - Equipement: système CAT (Stago) Réactifs: Stago - Plasma Normal : pool de Plasma congelé (interne) - Préparation des échantillons: 1 volume de produit pour 8 volumes de PN ou de PN au 1/5ème en Tampon de dilution (Rl). - Conditions expérimentales: - 80 µL Préparation. +20 µL PPP-reagent High (4 µM phospholipides et 20 pM FT final) - 20 µL F1uCa-reagent ajoutés par l'appareil - Fluorescence: excitation = 390 nm, émission = 460 nm Protocole 2 pour déterminer le pouvoir thrombogène d'un échantillon à tester - Equipement : Fuoroscan / système CAT (Stago) Réactifs: Stago - Plasma Normal (PN): Pool de Plasma congelé (interne) ou Unicalibrator (Stago) - Préparation des échantillons: 1 vol de produit pour 4 ou 8 vol de PN - mélange réactionnel : 500 µL MP-reagent repris avec 0,5mL d'eau + 300 µL PRP-reagent + 200 µL de tampon de dilution - Conditions expérimentales: - 80 itL Préparation - 20 itL mélange réactionnel (4 itM phospholipides et 0,3 pM FT final) - 20 itL F1uCa-reagent ajoutés par l'appareil - Fluorescence: excitation = 390 nm, émission = 460 nm Les conditions de réactions selon le protocole 1 ou le protocole 2 sont résumés dans le tableau 1 ci-dessus. Protocole 1 Protocole 2 Equipement Fluoroscan système CAT (Hemker) Plasma Normal pur Normal 1/5 Normal pur ou R1 déficient FXI Stago .Facteur Tissulaire Stago Stago PRP-reagent PP-reagent PPP-reagent Phospholipides High High Stago MP-reagent F1uCa kit F1uCa kit F1uCa kit Substrat Stago Stago Stago fluorogénique CaC12 CaC12 CaC12 FT finale 20 pM 20pM 0,3 pM PL finale 4 µM 4 µM 4 µM Plasma final 59% 12% 53% Plasma / Ech 8:1 8:5 4:1 Résultats Concentration finale du facteur tissulaire Le pouvoir thrombogéne du FXIa dans un pool de plasma normal ou dans un pool de plasma dilué est déterminé selon le protocole 1 (Figure 1) ou le protocole 2 (Figure 2), respectivement décrits ci-dessus. Le protocole 2, effectué en faible concentration finale du facteur tissulaire, permet d'obtenir un résultat plus sensible que celui obtenu par le protocole 1, utilisant une forte concentration finale du facteur tissulaire. Présence du facteur tissulaire dans le milieu réactionnel Le pourvoir thrombogéne du FXIa dans un pool de plasma normal ou dans un pool de plasma dilué est déterminé, selon le protocole 2, dans un milieu réactionnel contenant 0,3 pM du facteur tissulaire (Figure 2) ou sans facteur tissulaire (Figure 3). La variabilité des réponses obtenues dans le milieu réactionnel sans FT est plus importante que celle dans le milieu réactionnel avec FT. En l'absence de FT, La spécificité de cette réponse qui intervient à des temps tardifs ( >20min) n'est pas assurée. Concentration finale des phospholipides Le pouvoir thrombogéne du FXIa dans un pool de plasma commercial calibré (Unicalibrator®, Stago) est déterminé, selon le protocole 2, dans un milieu réactionnel contenant 41LtM (Figure 8) ou 8µM (Figure 13) des phospholipides et sans FT. Il ressort que l'augmentation de la concentration en phospholipides de 4µM à 8µM en absence de facteur tissulaire n'a pas permis de stabiliser les réponses. Détermination du pouvoir thrombogéne des immunoglobulines de type IgNG Le protocole 2 décrit ci-dessus est mis en oeuvre pour déterminer le pouvoir thrombogéne lié à la présence du FXIa (Figure 4) ou du FIXa (Figure 5) des immunoglobulines de type IgNG (LFB). Le signal de l'apparition de la thrombine dans l'échantillon contenant seulement des immunglobulines de type IgNG est apparu quasiment en même temps que celui de l'apparition de la thrombine dans l'échantillon contenant le tampon de dilution. Il ressort que les immunoglobulines de type IgNG ne contient quasiment pas du FXIa ou FIXa. Origine du pool de plasma sanguin Le pouvoir thrombogéne du FXIa ou du FIXa est déterminé, selon le protocole 2, dans un milieu réactionnel contenant respectivement un pool de plasma normal commercial calibré (Unicalibrator®) (Figures 7 et 8), un pool de plasma déficient en FXI (Figures 9 et 10), ou un pool de plasma déficient en FIX (Figures 11 et 12). La capacité discriminant du signal vis-à-vis d'un échantillon contenant FXIa dans un milieu réactionnel contenant un pool de plasma commercial n'est pas significativement différente de celle dans un pool de plasma déficient en FXI (Figures 12, 13, 14 et 15). Il ressort que les modifications observées entre les résultats obtenus dans les milieux réactionnels contenant de différentes origines de pool de plasma sont très faibles. Pouvoir thrombogéne de différentes immunoglobulines Le pouvoir thrombogéne respectif des immunoglobulines de type Tégéline® (LFB), des immunoglobulines de type Clairyg® (LFB), des immunoglobulines de type IvHEBEX® (LFB), et des immunoglobulines de type IgNG (LFB), lié à la présence du FXIa et/ou du FIXa, est déterminé, selon le protocole 2. Les résultats sont illustrés dans la figure 6. REVENDICATIONS1. Utilisation d'un kit comprenant les éléments suivants: - un échantillon de plasma sanguin humain, - des phospholipides, - du CaClz, et éventuellement - du facteur tissulaire humain, pour déterminer le pouvoir thrombogéne d'immunoglobulines humaines contenues dans un échantillon à tester, notamment biologiquement acceptable, lesdits éléments du kit et l'échantillon à tester formant un milieu réactionnel. 2. Utilisation d'un kit comprenant les éléments suivants: - un échantillon de plasma sanguin humain, - des phospholipides, - du CaClz, et éventuellement - du facteur tissulaire humain, pour déterminer le pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI et/ou du facteur IX, et/ou facteur XI activé et/ou du facteur IX activé dans un échantillon à tester, notamment biologiquement acceptable, lesdits éléments du kit et l'échantillon à tester formant un milieu réactionnel. 3. Utilisation d'un kit selon la revendication 1 ou 2, comprenant en outre un substrat fluorogénique. 4. Utilisation selon les revendications précédentes, d'un kit comprenant : - un plasma sanguin humain, dont le volume représente de 80% à 40%, notamment de 75% à 50%, particulièrement 53% du volume du milieu réactionnel. - des phospholipides humains, dont la concentration finale dans le milieu réactionnel est de 1 µM à 10 µM, particulièrement 4 µM, - du facteur tissulaire humain, dont la concentration finale dans le milieu réactionnel est de 0,05 pM à 10 pM, particulièrement 0,3 pM, - un tampon contenant du CaClz. . Utilisation selon les revendications précédentes, dans laquelle le ratio entre le volume du plasma sanguin et celui de l'échantillon à tester est de 8:1 à 2:1, particulièrement 4:1. 6. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle le facteur tissulaire 5 humain est d'origine plasmatique, d'origine recombinante, ou d'origine transgénique. 7. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle le plasma sanguin humain est un pool de plasmas sanguins humains frais ou congelé ou un plasma sanguin commercial calibré. 8. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle le plasma sanguin humain est dépourvu de facteur tissulaire. 9. Procédé de mesure du pouvoir thrombogéne d'immunoglobulines humainescontenues dans 15 un échantillon à tester notamment biologiquement acceptable, comprenant les étapes suivantes : a) le mélange d'un échantillon à tester avec un échantillon de plasma sanguin humain pour former un milieu réactionnel intermédiaire, b) l'ajout dans le milieu réactionnel intermédiaire obtenu à l'étape précédente d'un mélange 20 comprenant des phopholipides, et CaClz, et éventuellement le facteur tissulaire humain, pour former un milieu réactionnel; c) l'obtention d'un thrombinogramme en effectuant un test de génération de thrombine sur le milieu réactionnel obtenu à l'étape b) ; d) la comparaison d'au moins l'un des paramètres du thrombinogramme obtenu de l'étape c) à 25 un paramètre homologue obtenu à partir de thrombinogrammes standards établis sur la base d'une série de calibrateurs dont le pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé est connu et varie entre chaque calibrateur ; e) la déduction de l'étape d) du pouvoir thrombogéne d'immunoglobulines humaines contenues dans l'échantillon à tester. 30 10. Procédé selon la revendication 9, dans lequel le thrombinogramme standard est obtenu en effectuant un test de génération de thrombine sur un milieu réactionnel comprenant i) un calibrateur dont le pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur10IX activé est connu, ii) un plasma sanguin humain, iii) un mélange réactionnel comprenant des phopholipides et éventuellement le facteur tissulaire humain. 11. Procédé selon la revendication 9 ou 10, dans lequel la concentration finale du facteur 5 tissulaire humain dans le milieu réactionnel est de 0,05 pM à 10 pM, particulièrement 0,3 pM. 12. Procédé selon l'une des revendications 9 à 11, dans lequel la concentration finale des phospholipides humains dans le milieu réactionnel est de 1 µM à 10 µM, particulièrement 4 µM. 13. Procédé selon l'une des revendications 9 à 12, dans lequel le volume du plasma sanguin représente de 80% à 40%, notamment de 75% à 50%, particulièrement 53% du volume du milieu réactionnel. 15 14. Procédé selon l'une des revendications 9 à 13, dans lequel le ratio entre le volume du plasma sanguin et celui de l'échantillon est de 8:1 à 2:1, particulièrement 4:1. 15. Procédé selon l'une des revendications 9 à 14, dans lequel le thrombinogramme est obtenu par la méthode de la thromboélastographie ou la méthode de thrombinographie. 20 16. Procédé selon l'une des revendications 9 à 15, comprenant les étapes suivantes : a) le mélange d'un échantillon avec un plasma sanguin humain représentant 53% du volume du milieu réactionnel, dans lequel le ratio entre le volume du plasma sanguin et celui de l'échantillon est de 8 :1 à 2 :1, particulièrement 4 :1 pour former un milieu réactionnel 25 intermédiaire ; b) l'ajout dans le milieu réactionnel intermédiaire obtenu à l'étape précédente d'un mélange comprenant 4µM des phopholipides, et 3pM du facteur tissulaire humain et CaClz, pour former un milieu réactionnel; c) l'obtention d'un thrombinogramme par la mise en oeuvre de thrombinographie, en effectuant 30 un test de génération de thrombine sur le milieu réactionnel obtenu à l'étape b) ; d) la comparaison d'au moins l'un des paramètre du thrombinogramme obtenu à l'étape c) à un paramètre homologue obtenu à partir de thrombinogrammes standards établis sur la base d'une série de calibrateurs dont le pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé est connu et varie entre chaque calibrateur ; 10e) la déduction de l'étape d) du pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé dans l'échantillon.