Brevet FR2968673A1 — publié le 20120615

Méthode de diagnostic in vitro intra-tissulaire pour diagnostiquer les tumeurs du cerveau La présente invention concerne une méthode de diagnostic in vitro intra-tissulaire pour diagnostiquer les tumeurs du cerveau, utilisant des miARNs comme biomarqueurs. Les tumeurs du système nerveux central (SNC) sont pour la plupart des gliomes (50%), regroupant les glioblastomes (GBM) et les oligodendrogliomes (ODG). Ces tumeurs constituent une cause importante de morbidité et de mortalité et représentent un problème important de santé publique. En effet, les tumeurs du SNC constituent la deuxième cause de décès par cancer chez les enfants et la troisième cause chez l'homme adulte (15-34 ans). L'incidence globale des tumeurs du SNC est voisine de 7000 nouveaux cas dépistés chaque année en France. Enfin, sur 6 millions de décès annuels dans le monde à cause d'une forme quelconque de cancer, 1 à 2 % sont imputables aux tumeurs du SNC (Données de l'Organisation Mondiale de la Santé). Les gliomes ou tumeurs gliales sont classés par l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS) en 4 grades histologiques, le grade indiquant principalement le degré de malignité. Les oligodendrogliomes (ODG) de grade II, développés à partir des oligodendrocytes, sont des gliomes de bas grade. En revanche, les glioblastomes (GBM) de grade IV, développés à partir des astrocytes, sont des gliomes de haut grade. Pour les oligodendrogliomes, la médiane de survie est d'environ 7 ans alors qu'elle n'est que d'environ 1 an pour les glioblastomes après traitement ; diagnostiquer précisément la nature de la tumeur est donc d'une importance décisive. L'exérèse de la tumeur constitue un moyen, a priori radical, pour éradiquer une tumeur mais dans la pratique clinique, cette stratégie reste imparfaite. L'ablation de la tumeur se doit d'être exhaustive, ce qui est loin d'être le cas soit parce que les tumeurs au caractère infiltrant ont « irradié» des cellules pré-tumorales dans les régions cérébrales voisines à la tumeur primitive, soit parce que les limites de la tumeur sont mal évaluées lors du diagnostic. A l'heure actuelle, en dehors de l'analyse histologique réalisée par l'anatomopathologiste, il n'existe que quelques rares tests-diagnostics basés sur des approches moléculaires. Les observations microscopiques de la morphologie des cellules sont complétées dans quelques laboratoires par la recherche de certains marqueurs protéiques à l'aide d'anticorps spécifiques. Ces tests immunohistochimiques présentent néanmoins de nombreux inconvénients pour l'instant. Ils n'ont qu'un faible débit de productivité (ils ne permettent la détection que d'un seul antigène à la fois), ne permettent pas de distinguer sans ambiguïté les différents types de cellules tumorales et n'offrent que de médiocres possibilités de détection quantitative des marqueurs. Les diagnostics réalisés sur la détection de marqueurs génétiques (tels que les pertes d'hétérozygotie lp et 19q dans les oligodendrogliomes) sont actuellement peu usités ou lourd à mettre en oeuvre. Ces dernières années, les scientifiques ont découvert qu'une classe d'ARN, désignés miARNs ou microARNs, peut réguler l'expression des gènes soit par dégradation d'ARN messagers cibles, soit par répression de leur traduction suivant le degré de complémentarité entre le miARN et son ARNm cible. Les microARNs (miARN) représentent une classe d'ARN simple brin de petite taille (21 à 25nt), endogènes, non codants, d'identification relativement récente. Les gènes responsables de l'expression de ces miARNs sont préalablement transcrits sous forme de longs précurseurs, eux-mêmes clivés en pré-miARN par la RNAse III Drosha. La maturation de ces pré-miARN est effectuée par une autre RNAse, Dicer, qui donne lieu à un duplex d'ARN noté [miARN : miARN*]. Seul l'un des 2 brins, le brin mature, participe au complexe ribonucléoprotéique RISC (RNA-induced silencing complex) pour fonctionner comme régulateur post-transcriptionnel (Bartel et al., Cell, 2004. 116(2) : 281-97). Ces ARNs jouant un rôle important dans la régulation traductionnelle, ils sont donc fortement impliqués dans de nombreux processus cellulaires tels que le développement, la différenciation, la prolifération, l'apoptose et la réponse aux stress, processus souvent dérégulés dans les tumeurs. De nombreux travaux scientifiques ont été consacrés au rôle des miARN dans les processus d'oncogenèse (Benard, J. and S. Douc-Rasy, Bull Cancer, 2005. 92(9) : p. 757-62; Hammond Curr Opin Genet Dev, 2006. 16(1) : p. 4-9). Maintenant, il est reconnu que des miARNs sont activement impliqués dans le développement des cancers. Chez l'Homme, le nombre de gènes codant les précurseurs de miARNs actuellement identifiés est de 1048 (Sanger miRBase version 16, septembre 2010). Certains de ces miARNs ont été détectés comme marqueurs tumoraux dans le contexte des cancers du sein et de la prostate et sont donc considérés comme des miARNs oncogènes ou suppresseurs de tumeur suivant leur expression dans les tumeurs et leur rôle post-transcriptionnel. Dans les dernières années, l'altération éventuelle des niveaux d'expression des miARNs dans les tumeurs gliales a déjà fait l'objet de plusieurs publications scientifiques. Une publication de Ciafre et al. en 2005 (Biochem Biophys Res Commun. 2005. Sep 9 ; 334(4) : 1351-8) compare les niveaux d'expression de 245 miARNs dans les glioblastomes et dans les tissus normaux, et met en évidence un profil d'expression distinct de ces miARNs dans les glioblastomes par rapport au profil d'expression dans les tissus normaux. Cette publication décrit que miR-221 est surexprimé dans les glioblastomes par rapport aux tissus normaux, alors que miR-128, miR-181a, miRl 8 l b et miRl 8 l c sont sous exprimés dans les glioblastomes. Au même moment, Chen (N Engl J Med, 2005. 353 (17) : 1768-71) décrit que miR-21 est fortement surexprimé dans les glioblastomes par rapport aux tissus normaux. Un autre balayage des niveaux d'expression de 192 miARNs, dans les tissus de tumeurs gliales et des tissus normaux, a été effectué par Silber et al. en 2008 (BMC Med. 2008. Jun 24 ; 6 :14.). Cette étude vise à analyser une modification éventuelle du profil d'expression des miARNs dans les astrocytomes anaplasiques (grade III) ou les glioblastomes (grade IV), de tumeurs de différents grades ayant les mêmes origines cellulaires. Cette étude montre un profil d'expression modifié des miARNs dans les astrocytomes anaplasiques et les glioblastomes, par rapport aux tissus normaux. Les miARNs mentionnés dans cette publication, dont l'expression est modifiée, ne sont pas identiques à ceux déjà mentionnés dans les publications antérieures. Cependant, jusqu'à présent, d'une part aucune étude antérieure n'a fait un balayage 15 exhaustif, car l'ensemble des microARNs exprimés dans les cellules humaines n'est jamais exploré, et d'autre part l'enseignement de l'art antérieur est divergent. De plus, dans la plupart des cas, ces études ne permettent que de diagnostiquer un gliome vis-à-vis de tissu sain ou tissu péritumoral, mais ne permettent pas de distinguer un glioblastome d'un oligodendrogliome, deux tumeurs dont les origines cellulaires et pronostics 20 sont très différents, et nécessitant également des traitements bien distincts. Bien que l'étude de Silber et al. (BMC Med. 2008. Jun 24 ; 6 :14.) ait montré que les profils d'expression de miARNs mesurés dans les astrocytomes anaplasiques et ceux mesurés dans les glioblastomes sont différents, ces tumeurs, respectivement en grade III et grade IV, sont en effet des tumeurs de même nature, car elles sont développées toutes les deux à partir 25 des astrocytes. En effet, les astrocytomes anaplasiques peuvent évoluer rapidement vers un glioblastome. Une méthode permettant de distinguer un glioblastome (GBM) d'un oligodendrogliome (ODG) apporte un intérêt sur le plan de santé publique différent de celui d'une méthode ne permettant de distinguer que deux tumeurs de grade élevé et de même 30 nature. Par ailleurs, un tel procédé n'est pas généralisable dans le mode de distinction de tumeurs de nature différente. En effet, aucune de ces études antérieures ne permet de diagnostiquer précisément et rapidement la présence d'un glioblastome, d'un oligodendrogliome,chez un patient, à partir de l'analyse d'un groupe de biomarqueurs. Il existe une grande nécessité de développer une méthode de diagnostic capable de distinguer entre un oligodendrogliome et un glioblastome, permettant à un patient de recevoir des soins correspondant à son état physique et d'augmenter ses chances de survie. La présente invention concerne une méthode de diagnostic in vitro d'une tumeur cérébrale appartenant au groupe constitué de 2 types de tumeurs : ODG et GBM, et d'identification du type de la tumeur, comprenant : (i) la mesure d'au moins deux ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales, lesdits deux ratios des niveaux d'expression étant notamment : 1- un ratio des niveaux d'expression d'un couple de miRNA, ledit ratio étant spécifique des ODG, et 2- un ratio des niveaux d'expression d'un couple de miRNA, ledit ratio étant spécifique des GBM, (ii) la comparaison des susdits ratios mesurés dans ledit échantillon avec ceux obtenus respectivement dans un tissus sain de référence, un tissu d'ODG de référence et un tissu de GBM de référence. La présente invention repose sur la constatation inattendue faite par les Inventeurs au cours d'un balayage destiné à mesurer les niveaux d'expression de 847 microARNs humains dans des tissus de cerveaux sains et des tissus de tumeurs cérébrales (GBM, ODG). A partir de ce balayage, les Inventeurs ont réussi à identifier 23 miARNs qui constituent des indicateurs biologiques (biomarqueurs) qui permettent grâce à la méthode décrite dans la présente invention de distinguer un tissu cérébral sain, un tissu provenant d'une tumeur de type glioblastome ou un tissu provenant d'une tumeur de type oligodendrogliome. Les séquences nucléotidiques ainsi que les numéros d'accession de 23 miARNs sont présents dans le tableau 1 ci-dessous. De manière générale, la présente invention repose sur le dosage des niveaux d'expression des 23 microARNs dans un tissu cérébral sain, ou un tissu provenant d'une tumeur de type glioblastome ou un tissu provenant d'une tumeur de type oligodendrogliome. Ensuite les ratios des niveaux d'expression de ces microARN sont calculés par couple de microRNAs. Les inventeurs ont fait la constatation que 21 ratios parmi ceux qui peuvent être calculés constituent des signatures spécifiques d'un seul ou de deux des différents types de tissus (cf exemple 1). Ainsi, parmi ces 21 ratios, on distingue : 1. des ratios qui sont spécifiques d'un tissu de tumeur ODG (ratios 1 et 2 du tableau 2). Les valeurs des ratios obtenus pour le tissu ODG sont toujours 4 fois supérieures au moins aux valeurs de ces ratios calculés dans un tissu cérébral sain ou un tissu provenant d'une tumeur de type glioblastome, 2. des ratios qui sont spécifiques d'un tissu de tumeur GBM (ratios 3 et 4 du tableau 2). Les valeurs des ratios obtenus pour le tissu GBM sont toujours 4 fois supérieures au moins aux valeurs de ces ratios calculés dans un tissu cérébral sain ou un tissu provenant d'une tumeur de type oligodendrogliome. 3. des ratios qui sont spécifiques d'un tissu de tumeur gliale (GBM ou ODG) (ratios 5 à 10 du tableau 2). Les valeurs des ratios obtenus pour le tissu de tumeur gliale est toujours 4 fois supérieure au moins aux valeurs de ces ratios calculés dans un tissu cérébral sain. 4. des ratios qui sont spécifiques d'un tissu de tumeur ODG (ratios 11 à 18 du tableau 2). Les valeurs des ratios obtenus pour le tissu ODG sont toujours 4 fois supérieures au moins aux valeurs de ces ratios calculés dans un tissu cérébral sain, 20 5. des ratios qui sont spécifiques d'un tissu de tumeur GBM (ratios 19 à 21 du tableau 2). Les valeurs des ratios obtenus pour le tissu GBM sont toujours 4 fois supérieures au moins aux valeurs de ces ratios calculés dans un tissu cérébral sain, 25 L'invention présentée repose donc sur l'analyse des niveaux d'expression des microARN dans un tissu suspecté d'être tumoral, puis de calculer les valeurs des ratios par couples de microARN et de comparer les valeurs obtenus pour les ratios avec celles d'un tableau de référence (cf exemple 2) qui collige les valeurs des ratios spécifiques calculées pour des tissus sains de référence, des tissus GBM de référence, des tissus ODG de référence. 30 L'analyse des niveaux d'expression des microARN dans un tissu suspecté d'être tumoral permet grâce à la présente invention de spécifier la nature du tissu analysé. (i) Lorsque les valeurs calculées pour les ratios 5 à 10 sont significativement différentes de celles des ratios obtenus pour les tissus sains, mais voisines de celles 10 15 des ratios pour les GBM ou les ODG, alors le tissu est confirmé comme tumoral (sans précision du type de tumeur). (ii) Lorsque les valeurs calculées pour les ratios 1 et 2 sont significativement différentes de celles des ratios obtenus pour les tissus sains et les GBM, mais voisines de celles des ratios pour les ODG, alors le tissu est confirmé comme tumoral et présentant un ODG. (iii) Lorsque les valeurs calculées pour les ratios 3 et 4 sont significativement différentes de celles des ratios obtenus pour les tissus sains et les ODG, mais voisines de celles des ratios pour les GBM, alors le tissu est confirmé comme tumoral et présentant un GBM. (iv) Lorsque les valeurs calculées pour les ratios 11 à 21 sont significativement différentes de celles des ratios obtenus pour les tissus sains, et sont voisines de celles des ratios pour les ODG, alors le tissu est confirmé comme tumoral et présentant un ODG (ratios 11 à 18), ou sont significativement différentes de celles des ratios obtenus pour les tissus sains, et sont voisines de celles des ratios pour les GBM, alors le tissu est confirmé comme tumoral et présentant un GBM (ratios 19 à 21). Dans un mode de réalisation de l'invention, la présente invention concerne une méthode de diagnostic in vitro d'une tumeur cérébrale appartenant au groupe constitué de 2 types de tumeurs : ODG, GBM, et d'identification du type de la tumeur, comprenant : (i) la mesure d'au moins deux ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales, lesdits deux ratios des niveaux d'expression étant : - un ratio N°l des niveaux d'expression de couples de miARNs choisis parmi le groupe 1 constitué de hsa-miR-106a/hsa-miR-494 et hsa-miR-17/hsa-miR-494, - un ratio N°2 des niveaux d'expression de couples de miARNs choisis parmi le groupe 2 constitué de hsa-miR-210/hsa-miR-193b et hsa-miR-210/hsa-miR-423-5p, , (ii) la comparaison des susdits ratios mesurés dans ledit échantillon avec ceux obtenus respectivement dans un tissu sain de référence, un tissu d'ODG de référence et un tissu de GBM de référence. Les miARNs utilisés dans la présente invention sont référencés dans la base de données miRBase (bttp://www.mirbaseorg/) (miRBase : tools for microRNA genomic, Griffiths-Jones et al., NAR 2008 36(Database Issue):D154-D158) où la séquence nucléique d'un miARN peut être retrouvée par un numéro d'accession MIMAT ou une annotation uniforme. Un système d'annotation a été mis en place pour nommer les différents miARNs (A uniform system for microRNA annotation, Ambros et al., RNA 2003 9(3):277-279). Dans ce système, les microARNs sont désignés par un numéro. Ce numéro d'identification est précédé de l'abréviation «miR » ou « mir », qui permet une distinction entre le microARN mature (miR) et la boucle précurseur (hairpin) du microARN (mir), correspondant respectivement à un numéro d'accession MIMAT et MI. Un préfixe de trois ou quatre lettres est utilisé pour distinguer les origines génomiques de ce miARN. Par exemple « hsa-miR-126» signifie que ce miARN mature provient du génome humain. Parfois, les microARN matures peuvent être très proches (une seule base de différence). Dans ce cas, les microARNs portant un même numéro sont distingués entre eux par une lettre minuscule comme a, b, c...par exemple hsamiR-26b. Parfois une boucle précurseur peut générer, de son côté 5' et son coté 3', deux microARNs matures qui sont distingués l'un de l'autre par l'annotation « 5p » ou « 3p ». Par exemple « hsa-miR-151-3p » signifie un miARN mature provenant du côté 3' de son précurseur. Parfois, une boucle précurseur du microARN peut dériver deux miARNs matures, à savoir un produit majeur et un produit mineur. Un tel miARN mineur est distingué du miARN majeur dérivé du même précurseur par une étoile suivie du numéro d'identification, par exemple « hsa-miR-425 * » ou hsa-miR-425-star. Dans la présente invention, les expressions « miARN » et « microARN » peuvent être remplacées l'une par l'autre. Les expressions tumeurs gliales ou gliomes sont équivalentes. Glioblastomes et oligodendrogliomes sont deux types de gliomes. Tissu sain ou échantilllon sain signifient tissu non tumoral ou échantillon non tumoral. Ces expressions au singulier peuvent s'entendre au pluriel et réciproquement. Les séquences d'acides nucléiques des miARNs mentionnés ci-dessus et utilisés dans la présente invention ainsi que leurs numéros d'accession sont présentés dans l'exemple 1 (tableau 1). intitulés des N° de séquence N° d'accession miARN Séquence miRBase Sanger SEQ ID NO : 1 hsa-miR-320c AAAAGCUGGGUUGAGAGGGU MIMAT0005793 hsa-miR-320a SEQ ID NO : 2 AAAAGCUGGGUUGAGAGGGCGA MIMAT0000510 hsa-miR-320b SEQ ID NO : 3 AAAAGCUGGGUUGAGAGGGCAA MI MAT0005792 hsa-miR-491-5p SEQ ID NO : 4 AGUGGGGAACCCUUCCAUGAGG MI MAT0002807 hsa-miR- 1 27-3p SEQ ID NO : 5 UCGGAUCCGUCUGAGCUUGGCU MI MAT0000446 hsa-miR-132 SEQ ID NO : 6 UAACAGUCUACAGCCAUGGUCG MI MAT0000426 hsa-miR-574-3p SEQ ID NO : 7 CACGCUCAUGCACACACCCACA MI MAT0003239 hsa-miR-494 SEQ ID NO : 8 UGAAACAUACACGGGAAACCUC MIMAT0002816 hsa-miR-107 SEQ ID NO : 9 AGCAGCAUUGUACAGGGCUAUCA MIMAT0000104 8 hsa-miR-23b SEQ ID NO : 10 AUCACAUUGCCAGGGAUUACC MIMAT0000418 hsa-m i R-425-sta r SEQ ID NO : 11 AUCGGGAAUGUCGUGUCCGCCC MI MAT0003393 hsa-miR-345 SEQ ID NO : 12 GCUGACUCCUAGUCCAGGGCUC MI MAT0000772 hsa-miR-423-5p SEQ ID NO : 13 UGAGGGGCAGAGAGCGAGACUUU MI MAT0004748 hsa-miR-193b SEQ ID NO : 14 AACUGGCCCUCAAAGUCCCGCU MIMAT0002819 hsa-miR-320d SEQ ID NO : 15 AAAAGCUGGGUUGAGAGGA MI MAT0006764 hsa-miR-1207-5p SEQ ID NO : 16 UGGCAGGGAGGCUGGGAGGGG MIMAT0005871 hsa-miR-210 SEQ ID NO : 17 CUGUGCGUGUGACAGCGGCUGA MI MAT0000267 hsa-miR-92a SEQ ID NO : 18 UAUUGCACUUGUCCCGGCCUGU MI MAT0000092 hsa-miR-106a SEQ ID NO : 19 AAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG MIMAT0000103 hsa-miR-17 SEQ ID NO : 20 CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG MIMAT0000070 hsa-miR-191 SEQ ID NO : 21 CAACGGAAUCCCAAAAGCAGCUG MIMAT0000440 hsa-miR-324-5p SEQ ID NO : 22 CGCAUCCCCUAGGGCAUUGGUGU MIMAT0000761 hsa-miR-185 SEQ ID NO : 23 UGGAGAGAAAGGCAGUUCCUGA MI MAT0000455 Tableau 1 La mesure des niveaux d'expression des miARNs peut être réalisée par toute méthode conventionnelle, telle que - l'hybridation sur « puces à ADN », - des méthodes de séquençage à haut débit d'un grand nombre de miARN individualisés, - la PCR en temps réel, - le Northern blot, ou encore par toute autre méthode spécifique des miARNs. La mesure des 23 microARN peut être réalisée de manière individuelle et indépendante ou de manière simultanée sans que cela altère le procédé d'analyse décrit par la présente invention. Le niveau d'expression des miARNs peut être mesuré par la technique de la « puce à ADN ». La technique de la « puce à ADN » est bien connue de l'homme du métier. Il s'agit de l'hybridation de miARNs extraits sur un support solide composé d'une membrane nylon, d'une surface de silicium ou de verre, éventuellement de nano-billes ou particules, comportant des oligonucléotides de séquences connues fixés sur le support ou adhérents à celui-ci. La complémentarité des oligonucléotides fixés avec les séquences des microARNs ou de leurs produits de conversion (produits d'amplification, cDNA, ARN ou cARN) permet de générer un signal (fluorescence, luminescence, radioactivité, signal électrique...) selon les techniques de marquage employées, au niveau des oligonucléotides immobilisés sur les supports (puces à ADN). Ce signal est détecté par un équipement spécifique et une valeur d'intensité de ce signal propre pour chaque miARN est ainsi enregistrée. Plusieurs types de puces destinées à la détection des miARNs sont déjà mis sur le marché, comme par exemple les GeneChip® miRNA commercialisés par Affymetrix, miRcury arrays par Exiqon, miRXplore microarrays par Miltenyi. Dans le cas de l'analyse haut débit par séquençage, les miARNs sont extraits et purifiés d'un échantillon, isolés les uns des autres par des méthodes proposées par les fournisseurs d'équipements de séquençage tels que Roche, Invitrogen. Ce genre d'analyse consiste à individualiser les molécules des différents microARNs, de procéder à une étape d'amplification et de séquencer les produits (« clones d'acides nucléiques ») ainsi générés. La réalisation de très nombreuses séquences pour identifier chacun de ces « clones » (plusieurs milliers) permet de générer un listing des microARNs présents dans un échantillon et de quantifier chacun de ces miARNs en comptant tout simplement combien de fois chaque séquence est retrouvée dans le listing détaillé. Par « échantillon biologique », on entend un échantillon tissulaire, notamment un tissu cérébral obtenu par exérèse. L'échantillon peut être congelé ou fixé dans la paraffine (fragment tissulaire fixé par traitement chimique et inclus dans un bloc de paraffine selon les techniques classiques de l'anatomo-pathologie). L'échantillon biologique peut être également un échantillon de liquides biologiques, notamment un échantillon sanguin (sous forme non coagulé ou ses dérivés, plasma ou sérum). Un échantillon tissulaire cérébral peut être un tissu du système nerveux central 20 provenant du cortex cérébral, du cortex cérébelleux, des noyaux gris centraux ou des noyaux du tronc cérébral. Lorsque « un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales » est un échantillon tissulaire cérébral, il s'agit d'un tissu prélevé, par biopsie ou par exérèse au bloc opératoire ou toute autre méthode de prélèvement 25 intratumoral adapté, du siège tumoral soupçonné d'un patient. Le siège tumoral soupçonné est repéré préalablement par une méthode classique, telle qu'une IRM, un Pet Scan (Scanner par image de rayons gamma), ou un scanner classique. Lorsque « un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales » est un échantillon sanguin, cet échantillon est obtenu d'un 30 patient par prélèvement du sang selon les méthodes conventionnelles. « Un tissu sain de référence » peut être un tissu cérébral dépourvu de tout caractère tumoral d'après une analyse histologique réalisée par les anatomopathologistes. Le tissu sain de référence peut être un tissu du système nerveux central provenant du cortex cérébral, du cortex cérébelleux, des noyaux gris centraux ou des noyaux du tronc cérébral. Le tissu sain de référence est préférentiellement prélevé à partir d'un même patient (tissu sain de zone périphérique à la tumeur). Alternativement il peut être constitué de fragments encéphaliques obtenus après chirurgie dite de cortectomie réalisée sur des individus ne présentant pas de tumeurs du cerveau mais dans le cadre d'intervention pour traitement de l'épilepsie ou suite à des traumatismes crâniens. « Un tissu sain de référence » peut être aussi un échantillon de liquides biologiques, notamment un sérum sanguin ou un plasma sanguin prélevé d'une personne saine, et notamment d'une personne ne présentant aucun cancer. « Un tissu d'ODG de référence » est un tissu provenant d'un patient, dans lequel la 10 présence des oligodendrogliomes a été certifiée par l'analyse anatomo-pathologique. « Un tissu de GBM de référence » est un tissu provenant d'un patient, dans lequel la présence des glioblastomes a été diagnostiquée par l'analyse anatomo-pathologique. « Un tissu d'ODG de référence » ou « un tissu de GBM de référence » peut être un fragment de tumeur gliale obtenu par exérèse chez un patient et dont le type de tumeur a été 15 certifié par l'analyse anatomo-pathologique. Idéalement, le diagnostic des oligodendrogliomes ou des glioblastomes peut également être confirmé par des analyses moléculaires telles que par exemple l'analyse des profils d'expression de gènes de ces tissus tumoraux. Les tumeurs sont ensuite caractérisées en utilisant la méthode de classification de Li et al (Li A, Walling J, Ahn S, Kotliarov Y, Su Q, 20 Quezado M, Oberholtzer JC, Park J, Zenklusen JC, Fine HA. Cancer Res. 2009 Mar 1;69(5):2091-9) qui repose sur l'utilisation des niveaux d'expression d'un jeu de 54 gènes. Les glioblastomes ou oligodendrogliomes sont classés respectivement dans les groupes G et O de la publication suscitée. Un ratio des niveaux d'expression de deux microARN mesurés dans un échantillon est 25 considéré comme significativement différent d'un ratio correspondant préalablement établi dans un tissu de référence, lorsque le ratio obtenu dans ledit échantillon est 4 fois supérieur ou 4 fois inférieur au ratio préalablement établi dans ledit tissu de référence. En revanche, un ratio obtenu dans un échantillon n'est pas considéré comme différent d'un ratio correspondant préalablement établi dans un tissu de référence, lorsque le ratio 30 obtenu dans ledit échantillon n'est pas 4 fois supérieur ou 4 fois inférieur au ratio préalablement établi dans ledit tissu de référence. Le ratio des niveaux d'expression d'un couple de miARNs appartenant au groupe 1 obtenu d'un tissu d'ODG est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu d'un tissu sain, ou celui obtenu d'un tissu de GBM alors que ce ratio n'est pas différent du ratio obtenu d'un tissu d'ODG de référence. En revanche, le ratio des niveaux d'expression d'un couple de miARNs appartenant au groupe 2 obtenu d'un tissu de GBM est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu d'un tissu sain, ou celui obtenu d'un tissu d'ODG alors que ce ratio n'est pas différent du ratio obtenu d'un tissu de GBM de référence. Dans un mode de réalisation particulier, laquelle la déduction de la présence d'ODG dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui mesuré dans un tissu d'ODG de référence, ou lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence. Dans un autre mode de réalisation particulier, la déduction de la présence de GBM 20 dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, ou lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un 25 tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence. Dans un mode de réalisation avantageux, la méthode de diagnostic in vitro selon 30 l'invention comprend en outre la mesure d'un ratio du groupe 3 de niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales, ledit ratio étant le ratio des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-423-5p/hsa-miR-491-5p, hsa-miR-210/hsa- miR-491-5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-92a/hsa-miR-132, hsa-miR-320 a/hsamiR-4 9 1 -5p et hsa-miR-320c/hsa-miR-491-5p. Ce mode de réalisation avantageux est basé sur le fait que les Inventeurs, en plus des groupes 1 et 2 des couples de miARNs, ont réussi à identifier un groupe 3 de couples de miARNs dont les ratios des niveaux d'expression dans les gliomes, autrement dit les oligodendrogliomes et les glioblastomes, sont significativement différents de ceux mesurés dans un tissu sain. Le ratio des niveaux d'expression d'un tel couple de miARNs, à savoir hsa-miR-423-5p/hsa-miR-491-5p, hsa-miR-2 10/hs a-miR-4 9 1-5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR- 92a/hsa-miR-132, hsa-miR-320 a/hsa-miR-4 9 1-5p et hsa-miR-320 c/hsa-miR-491-5p, obtenu dans un tissu d'ODG ou un tissu de GBM est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain. Par conséquent, ce ratio obtenu d'un échantillon provenant d'un patient permet d'indiquer la présence éventuelle d'un gliome dans le susdit échantillon. Dans un mode de réalisation particulier, la susdite méthode selon l'invention comprend : (i) la mesure de trois ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales, 20 lesdits trois ratios des niveaux d'expression étant : - le ratio N°3 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-423-5p/hsamiR-4 9 1-5p, hsa-miR-2 10/hs a-miR-4 9 1-5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-92a/hsamiR-132, hsa-miR-320 a/hs a-miR-49 1 -5p et hsa-miR-320 c/hs a-miR-49 1 -5p, - le ratio N°l des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-106a/hsa-25 miR-494 et hsa-miR-17/hsa-miR-494, - le ratio N°2 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-210/hsamiR- 193 b et hsa-miR-2 10/hsa-miR-423 -5p , (ii) la comparaison des susdits ratios obtenus dans ledit échantillon avec ceux obtenus respectivement dans un tissus sain de référence, un tissu d'ODG de référence et un tissu de 30 GBM de référence. Dans un mode de réalisation particulier, la déduction de la présence d'ODG dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, ou lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence. Dans un autre mode de réalisation particulier, la déduction de la présence de GBM dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, ou lorsque le ratio N° 1 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence. Dans un mode de réalisation avantageux, la méthode de diagnostic in vitro selon l'invention comprend en outre la mesure d'un ratio du groupe 4 de niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales, ledit ratio étant le ratio des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-320a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-320b/hsamiR-127-3p, hsa-miR-320c/hsa-miR-127-3p, hsa-miR- 17/hsa-miR-107, hsa-miR- 1 0 6 a/hs a- 3 0 miR-23b, hsa-miR- 17/hsa-miR-23b, hsa-miR-345/hsa-miR-574-3p, hsa-miR- 1 91/hs a-miR-425-star. La valeur d'un ratio du groupe 4 obtenu pour le tissu ODG est toujours 4 fois supérieure au moins aux valeurs de ce ratio calculé dans un tissu cérébral sain. Cette valeur permet d'indiquer la présence éventuelle d'un tissu d'ODG dans un échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une tumeur gliale. Dans un mode de réalisation particulier, la susdite méthode selon l'invention 5 comprend : (i) la mesure de quatre ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales, lesdits quatre ratios des niveaux d'expression étant : - le ratio N°3 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-423-5p/hsa-10 miR-491-5p, hsa-miR-2 10/hs a-miR-4 9 1-5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-92a/hsamiR-132, hsa-miR-320a/hsa-miR-491-5p et hsa-miR-320 c/hs a-miR-4 9 1 -5p , - le ratio N°l des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-106a/hsamiR-494 et hsa-miR- 17/hsa-miR-4 94 , - le ratio N°2 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-210/hsa-15 miR-193b et hsa-miR-2 10/hsa-miR-423 -5p , - le ratio N°4 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-320a/hsamiR-127-3p, hsa-miR-320b/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-320c/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-17/hsa-miR-107, hsa-miR- 1 0 6 a/hs a-miR-23 b, hsa-miR- 17/hsa-miR-23b, hsa-miR-345/hsamiR-574-3p, hsa-miR- 19 1 /hs a-miR-425 -star . 20 Dans ce mode de réalisation particulier, la présence d'ODG dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est confirmée : - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, ou lorsque le 25 ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et 30 - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et - lorsque le ratio N°4 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence. Dans un autre mode de réalisation avantageux, la méthode de diagnostic in vitro selon l'invention comprend en outre la mesure d'un ratio du groupe 5 de niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales, ledit ratio étant le ratio des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-345/hsa-miR-324-5p, hsa-miR-345/hsa-miR-185 et hsa-miR-345/hsa-miR-320d. La valeur d'un ratio du groupe 5 obtenu pour le tissu GBM est toujours 4 fois supérieure au moins aux valeurs de ce ratio calculé dans un tissu cérébral sain. Cette valeur permet d'indiquer la présence éventuelle d'un tissu de GBM dans un échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une tumeur gliale. Dans un mode de réalisation particulier, la susdite méthode selon l'invention comprend : (i) la mesure de quatre ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs 15 cérébrales, lesdits quatre ratios des niveaux d'expression étant : - le ratio N°3 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-423-5p/hsamiR-4 9 1-5p, hsa-miR-2 10/hs a-miR-4 9 1-5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-92a/hsamiR-132, hsa-miR-320 a/hs a-miR-4 9 1 -5p et hsa-miR-320 c/hs a-miR-4 9 1 -5p - le ratio N°l des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-106a/hsa-20 miR-494 et hsa-miR-17/hsa-miR-494, - le ratio N°2 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-210/hsamiR-193b et hsa-miR-210/hsa-miR-423-5p, et - le ratio N°5 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-345/hsamiR-324-5p, hsa-miR-345/hsa-miR-185 et hsa-miR-345/hsa-miR-320d, 25 (ii) la comparaison des susdits ratios obtenus dans ledit échantillon avec ceux obtenus respectivement dans un tissus sain de référence, un tissu d'ODG de référence et un tissu de GBM de référence. Dans ce mode de réalisation particulier, la présence de GBM dans l'échantillon 30 provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est confirmée : - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, ou lorsque le ratio du groupe 1 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, - lorsque le ratio N°5 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la méthode de diagnostic in vitro de l'invention comprend en outre la mesure dans un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales : - d'un ratio N°4 des niveaux d'expression de couples de miARNs choisis parmi le groupe 4 constitué de hsa-miR-320a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-320b/hsa-miR-127-3p, hsamiR-320c/hsa-miR-127-3p, hsa-miR- 17/hsa-miR- 107, hsa-miR- 1 0 6 a/hs a-miR-23 b , hsa-miR- 17/hsa-miR-23b, hsa-miR-345/hsa-miR-574-3p, hsa-miR- 1 91/hs a-miR-425 - star, et - d'un ratio N°5 des niveaux d'expression de couples de miARNs choisis parmi le groupe 5 constitué de hsa-miR-345/hsa-miR-324-5p, hsa-miR-345/hsa-miR-185 et hsa-miR-345/hsa-miR-320d. Dans un mode de réalisation particulier, la susdite méthode selon l'invention 20 comprend : (i) la mesure de cinq ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales, lesdits cinq ratios des niveaux d'expression étant : - le ratio N°3 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-423-5p/hsa-25 miR-491-5p, hsa-miR-210/hsa-miR-491-5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-92a/hsamiR-132, hsa-miR-320a/hsa-miR-491-5p et hsa-miR-320c/hsa-miR-491-5p - le ratio N°l des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-106a/hsamiR-494 et hsa-miR- 17/hsa-miR-4 94 , - le ratio N°2 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-210/hsa-30 miR-193b et hsa-miR-2 10/hsa-miR-423 -5p , - le ratio N°4 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-320a/hsamiR-127-3p, hsa-miR-320b/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-320c/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-17/hsa-miR-107, hsa-miR- 1 0 6 a/hs a-miR-23 b, hsa-miR- 17/hsa-miR-23b, hsa-miR-345/hsamiR-574-3p, hsa-miR- 1 91/hs a-miR-425 - star, et - le ratio N°5 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-345/hsamiR-324-5p, hsa-miR-345/hsa-miR-185 et hsa-miR-345/hsa-miR-320d, (ii) la comparaison des susdits ratios obtenus dans ledit échantillon avec ceux obtenus respectivement dans un tissu sain de référence, un tissu d'ODG de référence et un tissu de 5 GBM de référence. Dans ce mode de réalisation particulier, la déduction de la présence d'ODG dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite : - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, ou lorsque le 10 ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et 15 - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et - lorsque le ratio N°4 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence. En revanche, la déduction de la présence de GBM dans l'échantillon provenant d'un 20 patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite : - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, ou lorsque le ratio du groupe 1 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et 25 - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, 30 - lorsque le ratio N°5 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence. La présente invention est illustrée à titre d'exemple par les exemples suivants. Ces exemples ne visent en aucun cas à limiter le mode de réalisation éventuel de l'invention. Figure la : la figure la illustre la comparaison des valeurs des 21 ratios des couples de microARN dosés dans l'échantillon suspecté A (montrées dans le Tableau 3) reportées en ordonnées, avec les valeurs des ratios dans un tissu sain de référence (valeurs du Tableau 2) reportées en abscisses. Les valeurs de ratios pour l'échantillon suspecté A sont mises en corrélation avec les valeurs respectives pour un tissu sain de référence. La droite reportée dans le graphique illustre la situation théorique de parfaite corrélation entre les valeurs obtenues pour l'échantillon A suspecté et celles de l'échantillon de référence. Figure lb : la figure lb illustre la comparaison des valeurs des 21 ratios des couples de microARN dosés dans l'échantillon suspecté A (montrées dans le Tableau 3) reportées en ordonnées, avec les valeurs des ratios dans un tissu ODG de référence (valeurs du Tableau 2) reportées en abscisses. Les valeurs de ratios pour l'échantillon suspecté A sont mises en corrélation avec les valeurs respectives pour un tissu ODG de référence. La droite reportée dans le graphique illustre la situation théorique de parfaite corrélation entre les valeurs obtenues pour l'échantillon A suspecté et celles de l'échantillon de référence. Figure le : la figure le illustre la comparaison des valeurs des 21 ratios des couples de microARN dosés dans l'échantillon suspecté A (montrées dans le Tableau 3) reportées en ordonnées, avec les valeurs des ratios dans un tissu GBM de référence (valeurs du Tableau 2) reportées en abscisses. Les valeurs de ratios pour l'échantillon suspecté A sont mises en corrélation avec les valeurs respectives pour un tissu GBM de référence. La droite reportée dans le graphique illustre la situation théorique de parfaite corrélation entre les valeurs obtenues pour l'échantillon A suspecté et celles de l'échantillon de référence. Figure 2a : la figure 2a illustre la comparaison des valeurs des 21 ratios des couples de microARN dosés dans l'échantillon suspecté B (montrées dans le Tableau 3) reportées en ordonnées, avec les valeurs des ratios dans un tissu sain de référence (valeurs du Tableau 2) reportées en abscisses. Les valeurs de ratios pour l'échantillon suspecté B sont mises en corrélation avec les valeurs respectives pour un tissu sain de référence. La droite reportée dans le graphique illustre la situation théorique de parfaite corrélation entre les valeurs obtenues pour l'échantillon B suspecté et celles de l'échantillon de référence. Figure 2b : la figure 2b illustre la comparaison des valeurs des 21 ratios des couples de microARN dosés dans l'échantillon suspecté B (montrées dans le Tableau 3) reportées en ordonnées, avec les valeurs des ratios dans un tissu ODG de référence (valeurs du Tableau 2) reportées en abscisses. Les valeurs de ratios pour l'échantillon suspecté B sont mises en corrélation avec les valeurs respectives pour un tissu ODG de référence. La droite reportée dans le graphique illustre la situation théorique de parfaite corrélation entre les valeurs obtenues pour l'échantillon B suspecté et celles de l'échantillon de référence. Figure 2c : la figure 2c illustre la comparaison des valeurs des 21 ratios des couples de microARN dosés dans l'échantillon suspecté B (montrées dans le Tableau 3) reportées en ordonnées, avec les valeurs des ratios dans un tissu GBM de référence (valeurs du Tableau 2) reportées en abscisses. Les valeurs de ratios pour l'échantillon suspecté B sont mises en corrélation avec les valeurs respectives pour un tissu GBM de référence. La droite reportée dans le graphique illustre la situation théorique de parfaite corrélation entre les valeurs obtenues pour l'échantillon B suspecté et celles de l'échantillon de référence. Figure 3a : la figure 3a illustre la comparaison des valeurs des 21 ratios des couples de microARN dosés dans l'échantillon suspecté C (montrées dans le Tableau 3) reportées en ordonnées, avec les valeurs des ratios dans un tissu sain de référence (valeurs du Tableau 2) reportées en abscisses. Les valeurs de ratios pour l'échantillon suspecté C sont mises en corrélation avec les valeurs respectives pour un tissu sain de référence. La droite reportée dans le graphique illustre la situation théorique de parfaite corrélation entre les valeurs obtenues pour l'échantillon C suspecté et celles de l'échantillon de référence. Figure 3b : la figure 3b illustre la comparaison des valeurs des 21 ratios des couples de microARN dosés dans l'échantillon suspecté C (montrées dans le Tableau 3) reportées en ordonnées, avec les valeurs des ratios dans un tissu ODG de référence (valeurs du Tableau 2) reportées en abscisses. Les valeurs de ratios pour l'échantillon suspecté C sont mises en corrélation avec les valeurs respectives pour un tissu ODG de référence. La droite reportée dans le graphique illustre la situation théorique de parfaite corrélation entre les valeurs obtenues pour l'échantillon C suspecté et celles de l'échantillon de référence. Figure 3c : la figure 3cic illustre la comparaison des valeurs des 21 ratios des couples de microARN dosés dans l'échantillon suspecté C (montrées dans le Tableau 3) reportées en ordonnées, avec les valeurs des ratios dans un tissu GBM de référence (valeurs du Tableau 2) reportées en abscisses. Les valeurs de ratios pour l'échantillon suspecté C sont mises en corrélation avec les valeurs respectives pour un tissu GBM de référence. La droite reportée dans le graphique illustre la situation théorique de parfaite corrélation entre les valeurs obtenues pour l'échantillon C suspecté et celles de l'échantillon de référence. Figure 4 : la figure 4 représente un graphique à deux dimensions, dans lequel les valeurs du ratio hsa-miR-210/hsa-miR-491-5p mesurées dans les différents échantillons sont reportées en abscisse ; et les valeurs du ratio hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p mesurées dans ces échantillons sont reportées en ordonnée. Les losanges représentent les échantillons de tissu sain. Les carrés représentent les échantillons d'ODG. Les triangles représentent les échantillons de GBM. Figure 5 : la figure 5 représente un graphique à deux dimensions, dans lequel les valeurs du ratio hsa-miR-320c/hsa-miR-127-3p mesurées dans les différents échantillons sont reportées en abscisse ; et les valeurs du ratio hsa-miR-210/hsa-miR-491-5p mesurées dans ces échantillons sont reportées en ordonnée. Les losanges représentent les échantillons de tissu sain. Les carrés représentent les échantillons d'ODG. Les triangles représentent les échantillons de GBM. Figure 6 : la figure 6 représente un graphique à deux dimensions, dans lequel les valeurs du ratio hsa-miR-17/hsa-miR-494 mesurées dans les différents échantillons sont reportées en abscisse ; et les valeurs du ratio hsa-miR-210/hsa-miR-193b mesurées dans ces échantillons sont reportées en ordonnée. Les losanges représentent les échantillons de tissu sain. Les carrés représentent les échantillons d'ODG. Les triangles représentent les échantillons de GBM. Figure 7 : la figure 7 représente un graphique à deux dimensions, dans lequel les valeurs du ratio hsa-miR-320c/hsa-miR-127-3p mesurées dans les différents échantillons sont reportées en abscisse ; et les valeurs du ratio hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p mesurées dans ces échantillons sont reportées en ordonnée. Les losanges représentent les échantillons de tissu sain. Les carrés représentent les échantillons d'ODG. Les triangles représentent les échantillons de GBM. Figure 8 : la figure 8 représente un graphique à deux dimensions, dans lequel les valeurs du ratio hsa-miR-210/hsa-miR-491-5p mesurées dans les différents échantillons sont reportées en abscisse ; et les valeurs du ratio hsa-miR-106a/hsa-miR-23b mesurées dans ces échantillons sont reportées en ordonnée. Les losanges représentent les échantillons de tissu sain. Les carrés représentent les échantillons d'ODG. Les triangles représentent les échantillons de GBM. Exemple 1 : Matériel et Méthodes 1.1 Echantillons tumoraux Les échantillons tumoraux de glioblastomes, oligodendrogliomes et méningiomes ainsi que les échantillons de tissu sain (cortectomies) sont obtenus après exérèse par les neurochirurgiens au bloc opératoire du CHU de Grenoble et sont immédiatement congelés à - 80°C. Des coupes de tissu d'environ 401um d'épaisseur sont ensuite réalisées à l'aide d'un cryotome en nombre suffisant afin d'obtenir environ 80mg de tissu et conservées à -80°C jusqu'à extraction des ARN. 1.2 Liquides biologiques Pour la purification des microARNs circulants dans le sang, des échantillons sanguins sont prélevés chez les patients sur des tubes de prélèvement de type PAXGene Blood RNA (PreAnalytix- Qiagen - BD company). La lyse totale des cellules circulantes est réalisée et les ARN sont collectés par centrifugation et purifiés selon les indications du fournisseur. En ce qui concerne les fractions de microARN contenus dans les microvésicules produites par les tumeurs et présentes dans le sang, la méthode utilisée est directement basée sur celle décrite par Skog et coll (Skog J, Würdinger T, van Rijn S, Meijer DH, Gainche L, Sena-Esteves M, Curry WT Jr, Carter BS, Krichevsky AM, Breakefield XO. Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers. (Skog et coll,, Nat Cet/ Biot. 2008 Dec;10(12):1470-6. Epub 2008 Nov 16). Les microvésicules sont purifiées à partir des sérums par centrifugations et microfiltration. Les sérums sont centrifugés une première fois pendant 10 min à 300g, puis les surnageants sont ensuite centrifugés pendant 20 min à 17000g et filtrés sur filtre de 0,22 microns. Les microvésicules sont obtenues par ultracentrifugation du filtrat à 110000g pendant 70 min. Le culot est enfin resuspendu en tampon phosphate (PBS) et les ARN sont extraits selon le protocole décrit ci-après. 1.3 Extraction d'ARN Les ARN sont extraits grâce au kit hsa-miRVanaTM (Ambion, ABI) permettant de séparer les ARN longs (taille > 250nt) des ARN courts (taille 1.4 Dosage des miARNs par hybridation sur puce à ADN Les ARN courts (taille inférieure à 250 bases) obtenus à l'étape précédente sont utilisés pour l'analyse par hybridation sur puce à ADN GeneChip miRNA Affymetrix. La première étape consiste à ajouter une extrémité poly-A en position 3' des ARN. La seconde étape consiste à réaliser le marquage des ARN. Pour cela, une réaction de ligature va être faite pour ajouter aux ARN de l'ADN biotinylé (par exemple avec les réactifs de marquage et détection du kit Flash Tag HSR de chez Genisphere, Hatfield, USA). Une fois cette étape réalisée, l'hybridation pourra avoir lieu avec les sondes se trouvant sur la puce. Après l'hybridation, il y a une étape d'amplification du marquage puis des lavages qui sont faits avant que la puce ne soit scannée. Enfin la puce sera scannée et on obtient une image de chaque puce qui devra être traitée pour avoir une valeur d'intensité correspondant à l'hybridation ARN/Sonde pour chaque microARN. Les données sont ensuite traitées et normalisées avec le logiciel QC Tools selon les méthodes proposées par Irizarry et al (RA. Irizarry, B Hobbs, F Collin, Y D. Beazer-Barclay, K J. Antonellis, U Scherf and T P. Speed. Exploration, Normalization, and Summaries of High Density Oligonucleotide Array Probe Level Data. Biostatistics, April 2003; Vol. 4; Number 2: 249-264). Alternativement, les résultats peuvent aussi être générés par dosage par RT-Q-PCR, tout autre type de puce à ADN d'un quelconque fournisseur ou toute autre méthode de dosage. Les analyses peuvent être réalisées sur les liquides biologiques (sang ou sous-fraction par exemple). 1.5 Dosage des miARNs par PCR en temps réel L'expression de miARNs est quantifiée par la technique de PCR quantitative à l'aide des kits distribués par Applied Biosystems, spécifiques des miARNs matures. Dans un premier temps, 80ng d'ARNs courts sont inversement transcrits (en cDNA monobrin) en présence d'amorces en boucle, qui confèrent la spécificité pour la quantification de l'expression des miARNs matures. La PCR en temps réel est ensuite réalisée à l'aide des amorces fournies dans les kits. Une des amorces comporte des groupements fluorescents (sonde dite Taqman@) ce qui permet de réaliser une mesure quantitative en utilisant un fluorimètre adapté tel que la station Stratagene Mx3005.Le seuil de détection est déterminé dans un premier temps par l'utilisateur en début de phase exponentielle. La valeur de Ct correspond au nombre de cycles à partir duquel la fluorescence dépasse ce seuil de détection. Cette valeur de Ct est proportionnelle à la quantité de cDNA présent initialement dans l'échantillon. Le calcul des ratios entre deux miARN donnés à partir de mesures de Ct réalisés pour un même échantillon et pour deux miARN différents (appelés ici pour exemple miRA et miRB) est obtenu grâce à la formule suivante : hsa-miRA / hsa-miRB = 2^(Ct hsa-miRA - Ct hsa-miRB) Exemple 2 Un abaque des ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs (tableau 2 ci-dessous) est établi à partir des ratios mesurés dans un tissu sain de référence (N), un tissu d'ODG de référence (ODG), un tissu de GBM de référence (GBM) Le tissu sain de référence, le tissu d'ODG de référence et le tissu de GBM de référence sont obtenus tel que décrit dans l'exemple 1 (partie 1.1). Les niveaux d'expression des miARNs sont mesurés selon la méthode décrite dans l'exemple 1. Pour augmenter la lisibilité et afin de disposer de valeurs des ratios supérieure à 1 dans la plupart des cas, les valeurs calculées ont été multipliées par un facteur 10. ratio N ODG GBM 1 groupe 1 : type de gliome : ODG 72,9 hsa-miR-106a/hsa-miR-494 51,9 344,4 2 hsa-miR-17/hsa-miR-494 66,3 443,7 80,8 3 groupe 2 : type de gliome : GBM 51,7 hsa-miR-210/hsa-miR-193b 7,3 9,9 4 hsa-m i R-210/hsa-m i R-423-5p 13,0 13,5 190,4 5 groupe 3 : marqueurs de gliomes 17,5 hsa-miR-423-5p/hsa-miR-491-5p 1,7 13,6 6 hsa-miR-210/hsa-miR-491-5p 2,2 18,4 334,1 7 hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p 4,5 111,7 25,7 8 hsa-miR-92a/hsa-miR-132 4,9 55,1 29,0 9 hsa-miR-320a/hsa-miR-491-5p 47,5 389,1 474,3 10 hsa-miR-320c/hsa-miR-491-5p 39,9 335,1 436,7 11 groupe 4 : marqueurs de gliome (ODG) 42,8 hsa-miR-320a/hsa-miR-127-3p 12,6 120,8 12 hsa-miR-320b/hsa-miR-127-3p 12,1 115,3 43,1 13 hsa-miR-320c/hsa-miR-127-3p 10,6 104,0 39,4 14 hsa-miR-17/hsa-miR-107 1,7 7,3 5,2 hsa-miR-106a/hsa-miR-23b 2,1 9,5 4,4 16 hsa-miR-17/hsa-miR-23b 2,6 12,3 4,9 17 hsa-miR-345/hsa-miR-574-3p 3,2 20,1 5,3 18 hsa-miR-191/hsa-miR-425-star 148,8 702,4 450,7 19 groupes : marqueurs de gliome (GBM) 10,6 hsa-miR-345/hsa-miR-324-5p 2,3 6,8 hsa-miR-345/hsa-miR-185 0,6 1,6 3,7 21 hsa-miR-345/hsa-miR-320d 0,8 1,9 3,6 Tableau 2 L'utilisation des valeurs de référence établies dans l'abaque (Tableau 2) dans le cadre de la réalisation d'analyses afin de caractériser un échantillon suspecté d' être tumoral est illustrée dans les exemples 3 à 5 ci-après. Exemple 3 Dans l'exemple 3, trois échantillons distincts (A, B ou C) sont analysés. Les taux respectifs de chacun des 23 miRNA du tableau 1 sont mesurés dans ces échantillons. Les valeurs des 21 ratios décrits dans le tableau 2 entre microARNs dosés dans un même échantillon sont ensuite calculées. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 3. On constate par comparaison des valeurs du Tableau 3 avec celles indiquées dans le Tableau 2 que les valeurs des ratios dans l'échantillon A sont très proches des valeurs des ratios caractéristiques d'un échantillon normal. Il peut être conclu que l'échantillon A est un tissu cérébral normal. Les valeurs respectives des ratios de microARN pour l'échantillon B sont très semblables aux valeurs caractéristiques des ODG. L'échantillon B est donc diagnostiqué comme ODG. Les valeurs respectives des ratios de microARN pour l'échantillon C sont très semblables aux valeurs caractéristiques des GBM. L'échantillon C est donc diagnostiqué comme GBM. 1 ratio A B C hsa-miR-106a/hsa-miR-494 61,1 471,6 94,0 2 hsa-miR-17/hsa-miR-494 84,9 625,6 102,6 3 hsa-miR-210/hsa-miR-193b 6,0 9,0 61,4 4 hsa-miR-210/hsa-miR-423-5p 13,3 9,9 169,0 5 hsa-miR-423-5p/hsa-miR-491-5p 1,6 16,5 22,0 6 hsa-miR-210/hsa-miR-491-5p 2,2 16,4 371,8 7 hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p 4,3 122,7 30,4 8 hsa-miR-92a/hsa-miR-132 5,6 48,0 35,5 9 hsa-miR-320a/hsa-miR-491-5p 45,3 452,2 420,9 10 hsa-miR-320c/hsa-miR-491-5p 38,4 415,5 401,3 11 hsa-miR-320a/hsa-miR-127-3p 13,6 123,7 40,4 12 hsa-miR-320b/hsa-miR-127-3p 12,9 121,3 40,5 13 hsa-miR-320c/hsa-miR-127-3p 11,5 113,7 38,5 14 hsa-miR-17/hsa-miR-107 1,2 8,6 5,5 15 hsa-miR-106a/hsa-miR-23b 1,5 8,2 4,9 16 hsa-miR-17/hsa-miR-23b 2,1 10,9 5,4 17 hsa-m i R-345/hsa-m i R-574-3p 2,6 20,4 4,9 18 hsa-mi R-191/hsa-miR-425-star 19 hsa-m i R-345/hsa-m i R-324-5p 20 hsa-miR-345/hsa-miR-185 21 hsa-m i R-345/hsa-m i R-320d 124,4 706,5 437,8 2,6 5,7 12,0 0,6 1,2 4,1 0,8 2,0 4,1 Tableau 3 Exemple 4 Dans l'exemple 4, l'exploration est menée de manière identique à celle indiquée dans l'exemple 3 ci-dessus. Cependant, afin de rendre l'interprétation des analyses plus directe et évidente, une représentation graphique des résultats obtenus, préférée des inventeurs est proposée comme exemple. Les valeurs des ratios entre des couples de microARN dosés dans un même échantillon (montrées dans le Tableau 3 pour les échantillons A, B et C) sont reportées dans des graphiques à deux dimensions (Figures la, lb, 1c pour l'échantillon A, Figure 2a, 2b, 2c pour l'échantillon B, Figure 3a, 3b, 3c pour l'échantillon C) dans lesquels les valeurs des ratios des échantillons de référence (valeurs du Tableau 2) sont reportées en abscisse et les valeurs des ratios identiques obtenus pour les échantillons analysés (Tableau 3) sont reportées en ordonnée. Les valeurs de ratios pour un échantillon suspecté sont mises en corrélation avec les valeurs respectives pour un tissu sain de référence, un tissu ODG de référence et un tissu GBM de référence. Pour chacun des graphiques, la droite (y = x) reportée dans les graphiques illustre la corrélation théorique parfaite entre les valeurs obtenues pour un échantillon suspecté et celles d'un échantillon de référence. Plus l'ensemble des points d'un graphique est positionné à proximité de la droite de parfaite corrélation du graphique plus forte est l'identité du tissu analysé avec le tissu de référence pris en considération dans ledit graphique. Ainsi la lecture visuelle des graphiques de la Figure 1 montre à l'évidence que l'échantillon A est très semblable au tissu sain de référence et se distingue nettement des tissus ODG ou GBM. On en déduit donc que l'échantillon A est un tissu cérébral sain. De manière identique, il peut être constaté que l'échantillon B est un tissu ODG et que l'échantillon C est un tissu GBM. Exemple 5 Dans l'exemple 5, les valeurs de deux ratios entre microARN d'un même échantillon sont utilisés pour créer un graphique qui permet de distinguer très rapidement les types de tissus. Dans ces graphiques, et pour chaque échantillon de tissu on reporte en abscisse la valeur obtenue pour un ratio donné entre un couple de microARN et en ordonnée les valeurs d'un deuxième ratio pour un autre couple de microARN. Chaque échantillon est représenté par un point sur le graphique. Ce graphique permet de constituer, comme montré par les figures 4-8, des nuages de points regroupés de manière cohérente en fonction du type de tissu. Ainsi les tissus sains forment un ensemble de point de coordonnées très distinctes des tumeurs gliales et les tissus ODG sont regroupés dans une zone de coordonnées très distinctes du nuage des points correspondant aux tissus GBM. Ainsi pour tout échantillon inconnu, on peut sur la base des valeurs d'un couple de ratio entre miRNA préciser par cette représentation graphique si l'échantillon montre des caractéristiques identiques à celles d'un tissu sain, d'un tissu ODG ou d'un tissu GBM et donc d'en déduire la nature de cet échantillon analysé.10 REVENDICATIONS1. Méthode de diagnostic in vitro d'une tumeur cérébrale appartenant au groupe constitué de 2 types de tumeurs : ODG, GBM, et d'identification du type de la tumeur, comprenant : (i) la mesure d'au moins deux ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrales, lesdits deux ratios des niveaux d'expression étant : - un ratio N°l des niveaux d'expression de couples de miARNs choisis parmi le groupe 1 constitué de hsa-miR-106a/hsa-miR-494 et hsa-miR-17/hsa-miR-494, - un ratio N°2 des niveaux d'expression de couples de miARNs choisis parmi le groupe 2 constitué de hsa-miR-210/hsa-miR-193b et hsa-miR-210/hsa-miR-423-5p, (ii) la comparaison des susdits ratios mesurés dans ledit échantillon avec ceux obtenus respectivement dans un tissus sain de référence, un tissu d'ODG de référence et un tissu de GBM de référence. 2. Méthode selon la revendication 1, dans laquelle la déduction de la présence d'ODG dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui mesuré dans un tissu d'ODG de référence, ou lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence. 3. Méthode selon la revendication 1, dans laquelle la déduction de la présence de GBM dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, ou lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence. 4. Méthode selon la revendication 1, comprenant en outre la mesure d'un ratio N°3 des niveaux d'expression de couples de miARNs dans un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrale, ledit ratio étant le ratio des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-423-5p/hsa-miR-491-5p, hsa-miR- 210/hsa-miR-4 9 1 -5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-92a/hsa-miR-132, hsa-miR- 320 a/hsa-miR-4 9 1 -5p et hsa-miR-320 c/hs a-miR-4 9 1-5p. 5. Méthode selon la revendication 4, comprenant : (i) la mesure de trois ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un 10 échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrale, lesdits trois ratios des niveaux d'expression étant : - le ratio N°3 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-423-5p/hsamiR-491-5p, hsa-miR-2 10/hs a-miR-4 9 1-5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-92a/hsamiR-132, hsa-miR-320 a/hs a-miR-4 9 1 -5p et hsa-miR-320 c/hs a-miR-4 9 1 -5p, 15 - le ratio N°l des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-106a/hsa- miR-494 et hsa-miR- 17/hsa-miR-494, - le ratio N°2 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-210/hsamiR- 193 b et hsa-miR-2 10/hsa-miR-423 -5p , (ii) la comparaison des susdits ratios obtenus dans ledit échantillon avec ceux obtenus 20 respectivement dans un tissus sain de référence, un tissu d'ODG de référence et un tissu de GBM de référence. 6. Méthode selon la revendication 5, dans laquelle la déduction de la présence d'ODG dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite 25 - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, ou lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à 30 celui mesuré dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence. 7. Méthode selon la revendication 5, dans laquelle la déduction de la présence de GBM dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, ou lorsque le ratio N° 1 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence. 8. Méthode selon l'une des revendications 4 à 7, comprenant en outre la mesure dans un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs 15 cérébrale - d'un ratio N°4 des niveaux d'expression de couples de miARNs choisis parmi le groupe 4 constitué de hsa-miR-320a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-320b/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-320c/hsa-miR-127-3p, hsa-miR- 17/hsa-miR-107, hsa-miR- 1 0 6 a/hsa-miR-23 b, hsa-miR-17/hsa-miR-23b, hsa-miR-345/hsa-miR-574-3p, hsa-miR- 19 1 /hs a-miR-425 -star . 20 9. Méthode selon la revendication 8, comprenant : (i) la mesure de quatre ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrale, lesdits quatre ratios des niveaux d'expression étant : 25 - le ratio N°3 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-423-5p/hsamiR-4 9 1-5p, hsa-miR-2 10/hs a-miR-4 9 1-5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-92a/hsamiR-132, hsa-miR-320a/hsa-miR-491-5p et hsa-miR-320c/hsa-miR-491-5p, - le ratio N°l des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-106a/hsamiR-494 et hsa-miR- 17/hsa-miR-4 94 , 30 - le ratio N°2 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-210/hsa- miR- 193b et hsa-miR-2 10/hsa-miR-423 -5p , - le ratio N°4 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-320a/hsamiR-127-3p, hsa-miR-320b/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-320c/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-17/hsa-miR-107, hsa-miR- 1 0 6 a/hs a-miR-23 b, hsa-miR- 17/hsa-miR-23b, hsa-miR-345/hsamiR-574-3p, hsa-miR- 19 1 /hs a-miR-425 -star. 10. Méthode selon la revendication 9, dans laquelle la présence d'ODG dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est confirmée : - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, ou lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et - lorsque le ratio N°4 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence. 11. Méthode selon l'une des revendications 4 à 7, comprenant en outre la mesure dans un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrale d'un ratio N°5 des niveaux d'expression de couples de miARNs choisis parmi le groupe 5 constitué de hsa-miR-345/hsa-miR-324-5p, hsa-miR-345/hsa-miR-185 et hsa-miR-345/hsa-miR-320d. 12. Méthode selon la revendication 11, comprenant : (i) la mesure de quatre ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrale, lesdits quatre ratios des niveaux d'expression étant : - le ratio N°3 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-423-5p/hsamiR-4 9 1-5p, hsa-miR-2 10/hs a-miR-4 9 1-5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-92a/hsa-30 miR-132, hsa-miR-320 a/hs a-miR-4 9 1 -5p et hsa-miR-320 c/hs a-miR-4 9 1 -5p, - le ratio N°l des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-106a/hsamiR-494 et hsa-miR- 17/hsa-miR-494, - le ratio N°2 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-210/hsamiR-193b et hsa-miR-210/hsa-miR-423-5p, et- le ratio N°5 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-345/hsamiR-324-5p, hsa-miR-345/hsa-miR-185 et hsa-miR-345/hsa-miR-320d, (ii) la comparaison des susdits ratios obtenus dans ledit échantillon avec ceux obtenus respectivement dans un tissus sain de référence, un tissu d'ODG de référence et un tissu de 5 GBM de référence. 13. Méthode selon la revendication 12, dans laquelle la présence de GBM dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est confirmée : - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur 10 ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, ou lorsque le ratio du groupe 1 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu d'ODG de 15 référence, et - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, - lorsque le ratio N°5 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence. 20 14. Méthode selon l'une des revendications 4 à 7, comprenant en outre la mesure dans un échantillon biologique provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrale - d'un ratio N°4 des niveaux d'expression de couples de miARNs choisis parmi le 25 groupe 4 constitué de hsa-miR-320a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-320b/hsa-miR-127-3p, hsamiR-320c/hsa-miR-127-3p, hsa-miR- 17/hsa-miR- 107, hsa-miR- 1 0 6 a/hs a-miR-23 b, hsa-miR-17/hsa-miR-23b, hsa-miR-345/hsa-miR-574-3p, hsa-miR- 1 91/hs a-miR-425 - star, et - d'un ratio N°5 des niveaux d'expression de couples de miARNs choisis parmi le groupe 5 constitué de hsa-miR-345/hsa-miR-324-5p, hsa-miR-345/hsa-miR-185 et hsa-miR- 30 345/hsa-miR-320d. 15. Méthode selon la revendication 14, comprenant :(i) la mesure de cinq ratios des niveaux d'expression de couples de miARNs extraits d'un échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs cérébrale, lesdits cinq ratios des niveaux d'expression étant : - le ratio N°3 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-423-5p/hsa-5 miR-491-5p, hsa-miR-210/hsa-miR-491-5p, hsa-miR-92a/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-92a/hsamiR-132, hsa-miR-320 a/hs a-miR-4 9 1 -5p et hsa-miR-320 c/hs a-miR-4 9 1 -5p - le ratio N°l des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-106a/hsamiR-494 et hsa-miR- 17/hsa-miR-4 94 , - le ratio N°2 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-210/hsa-10 miR-193b et hsa-miR-2 10/hsa-miR-423 -5p , - le ratio N°4 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-320a/hsamiR-127-3p, hsa-miR-320b/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-320c/hsa-miR-127-3p, hsa-miR-17/hsa-miR-107, hsa-miR- 1 0 6 a/hs a-miR-23 b, hsa-miR- 17/hsa-miR-23b, hsa-miR-345/hsamiR-574-3p, hsa-miR- 1 91/hs a-miR-425 -star, et 15 - le ratio N°5 des niveaux d'expression de couples choisis parmi hsa-miR-345/hsamiR-324-5p, hsa-miR-345/hsa-miR-185 et hsa-miR-345/hsa-miR-320d, (ii) la comparaison des susdits ratios obtenus dans ledit échantillon avec ceux obtenus respectivement dans un tissus sain de référence, un tissu d'ODG de référence et un tissu de GBM de référence. 20 16. Méthode selon la revendication 15, dans laquelle la déduction de la présence d'ODG dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite : - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, ou lorsque le 25 ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et - lorsque le ratio N°l mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, et 30 - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et - lorsque le ratio N°4 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence. 17. Méthode selon la revendication 15, dans laquelle la déduction de la présence de GBM dans l'échantillon provenant d'un patient suspecté de présenter une des susdites tumeurs est faite : - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon n'est pas au moins 4 fois supérieur ou au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu de GBM de référence, ou lorsque le ratio du groupe 1 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois inférieur à celui obtenu dans un tissu d'ODG de référence, et - lorsque le ratio N°2 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, et à celui obtenu dans un tissu d'ODG de 10 référence, et - lorsque le ratio N°3 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui obtenu dans un tissu sain de référence, - lorsque le ratio N°5 mesuré dans ledit échantillon est au moins 4 fois supérieur à celui mesuré dans un tissu sain de référence.