Brevet FR2965624A1 — publié le 20120406

Pointe de microscope à force atomique modifiée et biomodifiée La présente invention concerne des pointes de microscope à force atomique (AFM : Atomic Force Microscope) modifiées, leur procédé de préparation et leur utilisation, en particulier pour l'immobilisation de biomolécules d'intérêt. La présente invention concerne également des pointes AFM biomodifiées, leur procédé de préparation et leur utilisation pour la mesure de forces d'interactions entre biomolécules d'intérêt. Un microscope à force atomique sert à visualiser la topographie de la surface d'un échantillon et à mesurer des forces de surface. Le principe de cette méthode se fonde sur les interactions entre l'échantillon et une pointe montée sur un microlevier. En biologie, il est souvent utile d'identifier des molécules ou de cartographier une protéine à la surface de cellules vivantes, d'observer l'organisation de protéines membranaires, de quantifier in situ la force d'interaction entre un récepteur et son ligand. Un AFM est capable de mesurer des forces de l'ordre de la dizaine de piconewtons (1 pN = 10-12 N), avec une précision nanométrique de positionnement de la pointe. Il est ainsi particulièrement adapté à l'analyse des interactions entre ligands et récepteurs, par exemple. Un moyen de mise en ceuvre de I'AFM consiste à greffer ces biomolécules sur la pointe AFM. La pointe AFM ainsi fonctionnalisée est ensuite approchée puis retirée d'une surface présentant le partenaire complémentaire de celui greffé sur la pointe. La mesure de la déflexion du microlevier donne une mesure directe des forces d'interactions entre la biomolécule et son partenaire. De telles interactions spécifiques existent notamment entre des brins complémentaires d'acides nucléiques, entre des protéines (protéine/ protéine, par exemple antigène/anticorps) ou entre des protéines et une autre molécule ou biomolécule (acides nucléiques, saccharides ou polysaccharides, substrat d'enzymes, lipides, peptides). Les pointes AFM doivent permettre de préférence l'immobilisation reproductible de biomolécules d'intérêt, dans la mesure où une immobilisation reproductible est conditionnelle d'une détection elle-même reproductible. Les forces de liaison entre les biomolécules et les pointes auxquelles elles sont reliées sont ainsi généralement supérieures aux forces d'interaction que l'on souhaite mesurer. Les biomolécules sont par exemple greffées de manière covalente aux pointes AFM. De préférence, les pointes AFM doivent également permettre de mesurer des interactions à l'échelle de la molécule unique. La sensibilité de détection d'un microlevier AFM dépend de sa constante de raideur et du système associé de détection des déflexions du levier. Plus le microlevier est souple, plus il est capable de mesurer des forces de faible niveau. Les pointes AFM et un système de détection des déflexions du levier possédant un bruit de fond très bas et une sensibilité de détection du signal élevée sont donc préférables. Par « bruit de fond », on entend le signal parasite non spécifique enregistré lors de la mesure des interactions par AFM. Ce signal, généralement de faible intensité, est issu de la somme de toutes les petites interactions entre la pointe AFM et le milieu extérieur, mais peut néanmoins perturber l'analyse des mesures. Le bruit de fond mesuré sur les courbes de force dépend de l'agitation moléculaire du liquide dans lequel baigne le microlevier. Une diminution du bruit de fond améliore le rapport signal/bruit. Par « sensibilité de détection », on entend la capacité d'une pointe AFM à détecter des interactions de faibles intensités, généralement de l'ordre de quelques dizaines de pN. Les biomolécules greffées sont généralement espacées de la surface de la pointe AFM sur laquelle elles sont greffées afin de ne pas perturber la mesure de la force d'interaction avec leur partenaire. Un espaceur d'au moins une quarantaine d'atomes (4-5 nm) est généralement nécessaire pour éviter les contraintes stériques entre la biomolécule et la surface de la pointe AFM. La densité de greffage des biomolécules à la surface des pointes AFM doit permettre d'obtenir une unique interaction entre une biomolécule et un partenaire. A l'heure actuelle, différents types de pointes AFM modifiées ont déjà été proposés (Hinterdorfer et al. Nature Methods 2006, 3, 347) : Parmi ces méthodes, un premier type d'espaceur utilisé est un espaceur de type polyéthylèneglycol (PEG). L'article Hinterdorfer et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, vol. 93, 3477-3481 décrit une pointe AFM en nitrure de silicium (Si3N4), fonctionnalisée par un espaceur de type PEG de 8 nm, possédant une terminaison amine et une terminaison thiol. L'article Riener et al. Anal. Chim. Acta 2003, 497, 101-104 décrit une pointe AFM en nitrure de silicium (Si3N4), fonctionnalisée par un espaceur de type PEG, possédant une terminaison NTA (acide nitrilotriacétique) qui réagit avec une biomolécule préalablement dérivatisée par une histidine, et une terminaison dithiopyridyle qui réagit avec une fonction thiol de la pointe AFM, préalablement fonctionnalisée. L'article Ebner et al. Bioconjugate Chem. 2007, 18, 1176-1184 décrit une pointe AFM en nitrure de silicium (Si3N4), fonctionnalisée par un espaceur de type PEG, possédant une terminaison benzaldéhyde qui réagit avec une fonction amine d'une unité lysine d'une biomolécule préalablement dérivatisée par une molécule de biotine, et une terminaison NHS (N-succinimidyl) qui réagit avec fonction amine de la pointe AFM, préalablement fonctionnalisée. Cependant, les méthodes décrites dans ces articles comportent plusieurs inconvénients : elles requièrent généralement de nombreuses étapes pour synthétiser l'espaceur de type PEG, celui-ci étant peu accessible et difficile à synthétiser. Certaines de ces méthodes nécessitent de plus une dérivatisation de la biomolécule d'intérêt par un tag histidine ou par une biotine, ce qui peut en modifier sa structure, et/ou affecter les interactions à étudier. Un deuxième type d'espaceur utilisé est un espaceur « dendron », notamment décrit dans les demandes US 2008/0113353 et WO2005/026191, concernant respectivement des pointes AFM modifiées et des molécules dendrons. Les espaceurs dendrons utilisés sont des macromolécules organiques ramifiées ne présentant pas d'atomes de phosphore, et dont la synthèse et le greffage sur la pointe nécessitent de nombreuses étapes. L'article Jung et al. Nucleic Acids Research 2009, vol. 37, n °2 décrit une pointe AFM en nitrure de silicium (Si3N4), fonctionnalisée par des dendrons en forme de cône, possédant une terminaison acide carboxylique qui réagit avec une fonction hydroxyle de la pointe AFM préalablement fonctionnalisée. Les dendrons sont ensuite fonctionnalisés par une terminaison NHS, qui réagit avec une biomolécule d'intérêt, à savoir des brins d'ADN ou d'ARN. L'article Kim et al. Anal. Chem. 2009, 81, 3276-3284 décrit une pointe AFM en nitrure de silicium (Si3N4), fonctionnalisée par des dendrons similaires, possédant une terminaison acide carboxylique qui réagit avec une fonction hydroxyle de la pointe AFM préalablement fonctionnalisée. Les dendrons sont ensuite fonctionnalisés par une terminaison GSH (glutathion réduit) qui permet de fixer des protéines de surface, préalablement dérivatisées par un GST (glutathion S-transférase). Cependant, les méthodes décrites dans ces articles comportent plusieurs inconvénients : la synthèse difficile des dendrons et la nécessité d'étapes intermédiaires entre la fixation des dendrons à la pointe AFM et le greffage de la biomolécule, généralement modifiée. En effet, les dendrons présentent deux types de fonctions terminales, l'une destinée à former une liaison avec la pointe AFM, l'autre devant être protégée lors de cette étape, avant d'être déprotégée, puis modifiée pour former une liaison avec la biomolécule. De plus, le greffage des biomolécules nécessite généralement d'utiliser des protéines de fusion, ce qui entraîne une modification de la biomolécule et une incertitude sur la nature de l'interaction mesurée. La demande internationale WO 03/091304 décrit la préparation de supports solides fonctionnalisés par des dendrimères phosphorés et leur utilisation pour la préparation de biopuces, par l'immobilisation de biomolécules. Les supports solides concernés sont des lames de verre macroscopiques, présentant au moins une dimension supérieure à 1 cm. Cette méthode a notamment été développée dans le but de réaliser l'hybridation entre un oligonucléotide greffé sur la biopuce et un oligonucléotide complémentaire marqué par un fluorochrome. L'hybridation du brin complémentaire sur la biopuce est visualisée par la fluorescence des fluorochromes après excitation par un laser. Cette méthode n'était donc pas destinée à la mesure de forces d'interactions de quelques pN par AFM. Or, pour des raisons de précision de mesure et de sensibilité de détection évoquées précédemment, l'analyse des interactions moléculaires par microscopie AFM requiert des conditions distinctes de l'objet de la demande WO 03/091304. Un but de l'invention est de fournir de nouvelles pointes AFM modifiées aptes à immobiliser de manière simple et reproductible des biomolécules d'intérêt, dépourvues des inconvénients des méthodes connues précitées, présentant une excellente stabilité dans le temps et une sensibilité de détection équivalente voire même supérieure aux pointes AFM modifiées précédemment décrites. En particulier, l'invention vise à fournir des pointes AFM modifiées par des espaceurs peu déformables permettant le greffage de biomolécules d'intérêt sur lesdites pointes AFM, de manière covalente, à moindre coût et en peu d'étapes, et idéalement sans avoir à modifier les biomolécules d'intérêt. La présente invention a pour premier objet une pointe de microscope à force atomique modifiée caractérisée en ce qu'elle contient une surface greffée de manière covalente par des dendrimères phosphorés possédant un noyau central de valence supérieure ou égale à 2 et comportant à leur périphérie plusieurs fonctions terminales F, aptes à permettre la fixation covalente desdits dendrimères sur ladite surface, et la fixation covalente des biomolécules d'intérêt sur lesdits dendrimères. Dans le cadre de la présente description, on entend par « pointe de microscope à force atomique modifiée » ou « pointe AFM modifiée », une pointe de microscope AFM fonctionnalisée par une ou plusieurs espèces chimiques, aussi appelées espaceurs, propres à immobiliser des biomolécules. Dans le cadre de la présente description, les biomolécules d'intérêt sont par exemple des protéines, des acides nucléiques, des lipides, des peptides, des enzymes, des anticorps ou leurs partenaires moléculaires. Dans le cadre de la présente description, on entend par « partenaire moléculaire d'une biomolécule » une molécule présentant une interaction spécifique avec ladite biomolécule. De préférence, la fixation des biomolécules aux dendrimères se fait par l'intermédiaire d'une ou plusieurs liaisons covalentes. Dans le cadre de la présente description, par « apte à permettre la fixation covalente », on entend qu'une première fonction F; est propre à réagir avec une deuxième fonction F;; pour former une liaison covalente. Alternativement, la première fonction F; est convertie en fonction F';, propre à réagir avec la deuxième fonction F;; pour former une liaison covalente. Typiquement, les fonctions terminales F, sont propres à réagir avec une fonction de la surface de la pointe AFM et sont propres à réagir avec une fonction de la biomolécule pour former une liaison covalente avec chacune desdites fonctions. Alternativement, la fonction F, est convertie en fonction F', qui est propre à réagir avec l'une ou l'autre desdites fonctions, voire les deux. De préférence, la fixation des dendrimères à la surface de la pointe AFM se fait par l'intermédiaire d'une liaison covalente entre une fonction terminale F, du dendrimère et une fonction de ladite surface. Selon une première variante, la surface greffée est une surface à base de silicium, telle que du nitrure de silicium (Si3N4), ou de l'oxyde de silicium (SiO2). Préalablement au greffage, ladite surface peut être activée par une étape générant des fonctions SiOH. Dans le cadre de la présente description, par « à base de » on entend que les pointes AFM possèdent une surface constituée au moins en partie, et de préférence entièrement, d'un certain matériau de base. Selon un premier mode de cette variante, les pointes AFM utilisées dans le cadre de l'invention sont à base de Si3N4i voire entièrement constituée de Si3N4. Selon un autre mode de cette variante, les pointes AFM utilisées dans le cadre de l'invention sont à base de SiO2, voire entièrement constituée de SiO2. Selon l'un ou l'autre des modes ci-dessus, préalablement au greffage, ladite surface peut être activée par une étape générant des fonctions SiOH. Selon une autre variante, la surface greffée est une surface à base d'un métal tel que l'or, l'argent, le chrome ou le platine. Selon un premier mode de cette variante, les pointes AFM utilisées dans le cadre de l'invention sont à base d'or. La présente invention concerne en particulier une pointe AFM modifiée telle que décrite précédemment, dans laquelle les dendrimères comprennent : un noyau central Po, éventuellement phosphoré, de valence v comprise entre 2 et 12 g couches de génération, identiques ou différentes, chacune desdites couches de génération étant constituée de chaînes de génération répondant à la formule (1) suivante : E II/ -L-M-Ç=N-N-P ~ R1 R2 dans laquelle : L représente un atome d'oxygène, de phosphore, de soufre ou d'azote, M représente l'un des groupes suivants : un groupe aromatique éventuellement mono-, di-, tri- ou tétrasubstitué par des groupes alkyle, des groupes alcoxy, des (1) groupements insaturés du type oléfinique en C1-C12, azoïque, acétylénique, tous ces groupes étant éventuellement substitués ; ou un groupe alkyle ou alcoxy éventuellement substitué, R, et R2i identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou l'un des groupes suivants : alkyle, alcoxy, aryle, éventuellement substitués, avec R2 étant généralement différent de R,, g est un nombre entier compris entre 1 et 11, E représente un atome d'oxygène, de soufre ou un groupe NR3i où R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, alcoxy ou aryle, éventuellement substitué ; et une couche externe constituée de chaînes terminales, identiques ou différentes, comportant en périphérie des fonctions terminales F,, lesdites chaînes répondant à la formule (II) suivante : -W- (Il) 15 dans laquelle : W représente l'un des groupes suivants : -alkyle-, -0-alkyle-, -aryle-, -0-aryle-, éventuellement substitué, F, représente un groupement aldéhyde -CHO, thiol -SH, époxyde, acide carboxylique -0OOH, alcool -OH ou amine -NRR' où R et R', identiques 20 ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle. Dans le cadre de la présente description, on entend par « groupe éventuellement substitué » un groupe éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements choisis parmi les groupes alkyle, phosphonate, -OH, halogènes, -CN, -0-alkyle, thioalkyl -SR, 25 aminoalkyl -NRR', alcoxy -COR, ester -0OOR, amide -CONRR' où R et R', identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle. Dans le cadre de la présente description, les radicaux alkyle représentent des radicaux hydrocarbonés saturés, en chaîne droite ou ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbone, de préférence de 1 à 6 atomes de carbone. 30 On peut notamment citer, lorsqu'ils sont linéaires, les radicaux méthyle, éthyle, propyle, butyle, pentyle, hexyle, heptyle, octyle, nonyle, décyle, dodécyle, hexadécyle, et octadécyle. On peut notamment citer, lorsqu'ils sont ramifiés ou substitués par un ou plusieurs radicaux alkyles, les radicaux isopropyle, tert-butyl, 2-éthylhexyle, 2-méthylbutyle, 2-35 méthylpentyle, 1-méthylpentyle et 3-méthylheptyle. 10 Parmi les atomes d'halogène, on cite plus particulièrement les atomes de fluor, de chlore, de brome et d'iode. Aryle désigne un système aromatique hydrocarboné, mono ou bicyclique de 6 à 10 atomes de carbone. Parmi les radicaux aryle, on peut notamment citer le radical phényle ou naphtyle, plus particulièrement substitué par au moins un atome d'halogène. Parmi les radicaux alkylearyle, on peut notamment citer le radical benzyle ou phénéthyle. Le terme "phosphonate" désigne un groupe -P(=O)(O-alkyl)2(alkyl') où les groupes alkyle étant tels que définis ci-dessus. Le terme "alkylthio" désigne un groupe -S-alkyl, le groupe alkyle étant tel que défini ci-dessus. Le terme "alkylamino" désigne un groupe -NH-alkyl, le groupe alkyle étant tel que défini ci-dessus. Lorsqu'un radical alkyle est substitué par un groupe aryle, on parle de radical "arylalkyle" ou "aralkyle". Les radicaux « arylalkyles » ou « aralkyles » sont des radicaux aryl-alkyl-, les groupes aryles et alkyles étant tels que définis ci-dessus. Parmi les radicaux arylalkyles, on peut notamment citer le radical benzyle ou phénéthyle. Les dendrimères sont des macromolécules construites par itération de séquences répétitives selon un processus arborescent autour d'un noyau central plurifonctionnel. Dans le cadre de la présente description, on entend par « en arborescence » la structure divergente particulière des chaînes de générations en couches de génération autour du noyau central Po de valence v. Les dendrimères sont des polymères fonctionnels hautement ramifiés de structure définie. Ces macromolécules sont effectivement des polymères puisqu'elles sont basées sur l'association d'unités répétitives. Cependant, les dendrimères diffèrent fondamentalement des polymères classiques dans la mesure où ils ont des propriétés propres dues à leur construction en arborescence. Le poids moléculaire et la forme des dendrimères peuvent être précisément contrôlés et les fonctions sont situées à la terminaison des arborescences, formant une couche externe en périphérie, ce qui les rend facilement accessibles. Les dendrimères sont construits étape par étape, par la répétition d'une séquence de réactions permettant la multiplication de chaque unité répétitive et de leurs fonctions terminales. Chaque séquence de réactions forme ce qui est appelé une nouvelle « couche de génération ». Les différentes couches de génération sont obtenues en générations successives par des procédés divers de type divergent à une ou plusieurs étapes. Les dendrimères obtenus à chaque génération, c'est-à-dire ayant un nombre déterminé de couches, peuvent être isolés. La dernière couche de génération (génération g) comprend en périphérie des fonctions terminales, formant ainsi une couche externe hautement fonctionnalisée. Le plus souvent les chaînes de génération de toutes les couches internes du dendrimère sont identiques et constituent donc des unités répétitives. La forme de la molécule présente généralement une forme sphérique à partir des générations 4 ou 5, et prend alors une forme globulaire hautement ramifiée et plurifonctionnalisée grâce aux nombreuses fonctions terminales présentes en périphérie. Du fait de leur structure, les dendrimères présentent une forte densité fonctionnelle à leur périphérie permettant le greffage d'un ou plusieurs groupe(s) fonctionnel(s) réparti(s) à la périphérie du dendrimère. Selon un mode de réalisation avantageux, les dendrimères sont choisis parmi les composés tels que décrits précédemment, et dans lesquels : le noyau central Po est phosphoré et v est comprise entre 3 et 6 ; les chaînes de génération sont identiques et répondent à la formule (l') suivante : S II/ -O-M-C=N-N-P ~ R1 R2 (I,) dans laquelle : M représente un groupe phénylène -C6H4-, éventuellement mono-, di-, tri-ou tétrasubstitué par des groupes alkyle, des groupes alcoxy, des groupements insaturés du type oléfinique en C1-C12, azoïque, acétylénique, tous ces groupes étant éventuellement substitués ; - R1 et R2, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, avec R2 étant généralement différent de R1 ; et les chaînes terminales sont identiques et répondent à la formule (II') suivante : -W-F' (II') dans laquelle : W représente un groupe -O-alkyle- ou -O-aryle-, éventuellement substitué, et F, représente un groupement aldéhyde -CHO, thiol -SH, époxyde, acide carboxylique -000H, alcool -OH ou amine -NRR' où R et R', identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle. De préférence, le noyau central Po comprend au moins un atome de phosphore. De préférence, le noyau central Po est sélectionné dans le groupe constitué par : - le groupement de formule générale (111a) : (IIIb) dans lequel R4 représente un atome de soufre, d'oxygène ou un groupe =NR3i où R3 est défini comme précédemment. Les dendrimères utilisés conformément à l'invention sont par exemple ceux décrits 15 dans la demande internationale WO 03/091304 ou dans l'article Trévisiol et al. (New. J. Chem. (2003), 27, 1713-1719). Selon un mode de réalisation particulier, les dendrimères sont choisis parmi les composés tels que décrits précédemment, et dans lesquels : les chaînes de génération répondent à la formule (1") suivante : S II/ C=N-N-P ~ 20 H CH3 les chaînes terminales répondent à la formule (II") suivante : C=0 1 H (11") et dans lesquels le nombre g de couches de génération est de préférence compris de 1 à 6. ( et le groupement de formule générale (IIIb) : / R P\ (1') 25 Les dendrimères utilisés conformément à l'invention peuvent être synthétisés de façon connue de l'homme du métier, par répétition d'une même séquence réactionnelle, permettant l'obtention d'une nouvelle génération à la fin de chaque cycle de synthèse, et par conséquent d'un nombre croissant de branches et de fonctions terminales toutes identiques. De tels polymères ont notamment été décrits par Tomalia et al. D. A., Ang. Chem. Int. Ed., 1990, 29, 138, Launay et al., Angew. Chem. /nt. Ed. Engl., 1994, 33, 15/16, 1590-1592, ou encore Launay et al., J. Organomet. Chem, 1997, 529, 51-58. En particulier, ces dendrimères peuvent être construits étape par étape à partir d'un noyau central possédant au moins deux groupements fonctionnels (à savoir v > 2), tel que par exemple I'hexachlorocyclotriphosphazène (N3P3CI6), qui possède six groupements fonctionnels (à savoir v = 6). De façon plus précise, ces dendrimères sont généralement construits par la répétition de deux étapes à partir du noyau. La première étape est la substitution des atomes de chlore en milieu basique par un composé difonctionnel ayant une fonction alcool et une fonction aldéhyde, par exemple le 4-hydroxybenzaldéhyde. La deuxième étape consiste en une réaction de condensation avec un composé ayant deux types de fonctions : un groupement -NH2 et au moins un groupement -PC12 comme par exemple le composé H2NNMeP(S)C12. Une suite itérative des étapes de synthèse permet de construire des dendrimères de génération croissante. De préférence, les dendrimères selon l'invention sont issus de dendrimères commerciaux auxquels ont été greffées les chaînes terminales. Selon l'invention, lesdits dendrimères commerciaux sont notamment choisis parmi les dendrimères de type PMMH (phénoxyméthyl(méthylhydrazono)), comme par exemple le cyclotriphosphazène-PMMH, le thiophosphoryl-PMMH ou les dendrimères phosphorés tels que : P 3 Gc1 G1 \ 1 e /CI N- N- P- CI II S / Gc2 Gc3 ainsi que les générations ultérieures. 12 Ces dendrimères sont commercialisés, ou bien peuvent être préparés selon les méthodes décrites par Launay et al., Angew. Chem. /nt. Ed. Engl., 1994, 33, 15/16, 1590-1592, ou par Launay et al., J. Organomet. Chem, 1997, 529, 51-58. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation d'une pointe AFM modifiée selon l'invention, ledit procédé comprenant une étape de formation d'une liaison covalente entre les dendrimères phosphorés et une surface de ladite pointe AFM présentant au moins une fonction F2 apte à permettre la fixation covalente desdits dendrimères sur ladite surface. Selon une variante du procédé, la surface de la pointe AFM utilisée ne comprend pas, à l'état non modifié, de fonctions aptes à permettre la fixation de dendrimères phosphorés. C'est en particulier le cas de pointes AFM à base de Si3N4 pour lesquelles il est généralement nécessaire de procéder à une étape d'activation pour introduire des fonctions sur la surface, telles que des fonctions hydroxyles -OH. Dans le cadre de la présente description, par « pointe AFM à l'état non modifié » on entend le fait que la pointe AFM est brute et n'a subi aucun traitement préalable, aucune modification ou aucun greffage de groupes fonctionnels. Dans ce cas, le procédé selon l'invention comprend l'étape de fonctionnalisation préalable de la pointe AFM. La surface présentant au moins une fonction F2 peut être obtenue par le procédé comprenant les étapes suivantes : a) le prétraitement éventuel d'au moins une surface de la pointe AFM, ce par quoi on obtient une surface activée ; b) la fonctionnalisation d'au moins une surface éventuellement activée de la pointe AFM par au moins une fonction F2 apte à permettre la fixation covalente des dendrimères sur la surface ainsi fonctionnalisée ; Typiquement, une fonction F2 de la surface fonctionnalisée est propre à réagir avec une fonction F, des dendrimères pour former une liaison covalente. Alternativement, la fonction F, est convertie en fonction F', qui est propre à réagir avec la fonction F2. De préférence, la fixation covalente du ou des dendrimères sur la surface fonctionnalisée de la pointe AFM se fait par l'intermédiaire d'une liaison covalente entre une fonction terminale F, du dendrimère et une fonction F2 de ladite surface fonctionnalisée. Selon un mode de réalisation avantageux de cette variante du procédé, les fonctions F2 sont des fonctions amine primaire -NH2 et l'étape b) de fonctionnalisation de la surface est réalisée en présence d'un réactif comportant une fonction amine primaire et une autre fonction, apte à former une liaison covalente avec la surface de la pointe AFM, éventuellement activée. De préférence, les fonctions F2 sont des fonctions amine primaire -NH2 et l'étape b) de fonctionnalisation de la surface est réalisée par un réactif comportant une fonction amine primaire et une fonction hydroxyle -OH apte à former une liaison covalente avec une fonction de la surface activée de la pointe AFM, tel que par exemple l'éthanolamine. Selon une variante, les fonctions F2 sont des fonctions amine primaire -NH2 et l'étape b) de fonctionnalisation de la surface est réalisée par un réactif de silanisation comportant une fonction amine primaire et une fonction silylée apte à former une liaison covalente avec une fonction de la surface activée de la pointe AFM, comme par exemple le 3-aminopropyltriéthoxysilane, l'aminopropyldiéthoxyméthylsilane ou l'aminopropylmonoéthoxydiméthylsilane. Certains types de pointes AFM nécessitent une étape a) de prétraitement d'au moins une de leur surface. Selon une première forme de réalisation, la pointe AFM est à base de Si3N4 et l'étape a) comprend une étape d'oxydation de ladite surface, pour obtenir une surface activée apte à être fonctionnalisée, et comportant par exemple des fonctions hydroxyles - OH, plus particulièrement des fonctions SiOH, générées par oxydation. Selon une autre variante du procédé, la pointe AFM est à base de SiO2, et l'étape a) comprend une étape d'oxydation de ladite surface, pour obtenir une surface activée apte à être fonctionnalisée, et comportant par exemple des fonctions hydroxyles -OH, plus particulièrement des fonctions SiOH, générées par oxydation. Préalablement aux étapes a) précitées, la pointe AFM peut faire l'objet d'un lavage. Selon une autre forme de réalisation, la pointe AFM est à base d'or et l'étape b) de fonctionnalisation de la surface est réalisée en présence d'un réactif comportant une fonction amine primaire -NH2 et une fonction thiol -SH apte à former une liaison covalente avec la surface à base d'or de la pointe AFM, tel que la cystéamine (encore appelée 2-aminoéthanethiol). Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, l'étape b) ou l'étape a) si elle est présente, est précédée d'une étape de lavage de la surface de la pointe AFM. Le lavage de la surface de la pointe AFM est effectué par une technique classique connue de l'homme du métier. Le lavage est généralement réalisé à l'aide de dichlorométhane, d'acétone, d'éthanol ou de tout autre solvant usuel. De préférence, l'étape de fixation covalente des dendrimères, consiste à: préparer une solution desdits dendrimères dans un solvant, mettre en contact la surface fonctionnalisée, avec ladite solution de dendrimères. Généralement, ladite mise en contact est réalisée pendant une durée comprise entre 10 minutes à 24 heures, de préférence de 2 à 8 heures, à une température de préférence comprise entre 4 à 50°C, de préférence à température ambiante. A l'issue de l'étape de fixation covalente des dendrimères, les pointes AFM modifiées sont de préférence rincées puis séchés. L'étape de rinçage est de préférence réalisée à l'aide d'un solvant organique tel que le dichlorométhane ou le tétrahydrofurane, puis à l'aide d'un alcool tel que l'éthanol. Le séchage des pointes AFM modifiées peut par exemple être effectué à l'air comprimé ou sous courant d'azote. Les pointes AFM modifiées ainsi obtenues peuvent ensuite être stockées et/ou directement utilisées pour l'immobilisation de biomolécules d'intérêt. Les pointes AFM modifiées selon l'invention sont en particulier stables au stockage pendant au moins deux mois, sans qu'aucune altération des fonctions terminales F, ne se produise. La présente invention a également pour objet l'utilisation d'une pointe AFM modifiée greffée de manière covalente par des dendrimères phosphorés telle que définie précédemment, comme support pour l'immobilisation de biomolécules d'intérêt. Les biomolécules d'intérêt sont en particulier des protéines, des acides nucléiques, des saccharides, des lipides, des peptides, des enzymes, des anticorps ou leurs partenaires moléculaires. La présente invention a aussi pour objet une pointe AFM biomodifiée comportant une pointe AFM modifiée selon l'invention comprenant au moins une surface greffée de manière covalente par des dendrimères phosphorés tels que définis précédemment, et sur lesquels sont fixées de manière covalente des biomolécules d'intérêt. Dans le cadre de la présente description, par « pointe AFM biomodifiée », on entend une pointe AFM sur laquelle sont greffées, de manière covalente, des biomolécules d'intérêt, via un espaceur. Dans le cadre de l'invention, les dendrimères phosphorés précédemment décrits jouent ce rôle d'espaceur. Ces pointes biomodifiées sont particulièrement utiles pour la mesure par AFM des forces d'interactions entre une biomolécule d'intérêt et son partenaire moléculaire. Les dendrimères selon l'invention s'avèrent être des espaceurs peu flexibles, peu sensibles à l'étirement et peu déformables, ce qui permet de mesurer les forces d'interactions entre une biomolécule immobilisée sur la pointe AFM biomodifiée et son partenaire moléculaire immobilisé par ailleurs sur un support. Un autre objet de l'invention est un procédé de préparation d'une pointe AFM biomodifiée selon l'invention, qui comprend l'étape consistant à mettre en contact une pointe AFM modifiée ayant au moins une surface greffée par des dendrimères phosphorés selon l'invention, avec une solution tampon contenant des biomolécules d'intérêt préalablement fonctionnalisées par, ou comportant déjà, une ou plusieurs fonctions F3 aptes à former une liaison covalente avec lesdites fonctions terminales F, desdits dendrimères. Le plus souvent, les biomolécules comportent déjà des fonctions F3 aptes à former une liaison covalente avec lesdites fonctions F, et ne nécessitent ainsi pas de 25 fonctionnalisation. Cependant, pour certaines biomolécules, il peut s'avérer nécessaire d'introduire ces fonctions F3 par une étape préalable de fonctionnalisation. Cette étape peut être réalisée par toute méthode connue en soi, notamment par application ou adaptation des procédures décrites par Larock, Comprehensive Organic 30 Transformations, VCH Publishers, 1989. Ainsi, par exemple, des fonctions amine primaire -NH2 peuvent être introduites sur les biomolécules de façon à former une liaison covalente avec les fonctions aldéhyde -CHO des dendrimères. Selon un mode de réalisation particulier, les fonctions terminales F, des 35 dendrimères utilisés sont des fonctions aldéhyde -CHO, et les biomolécules d'intérêt comprennent au moins une fonction F3 choisie parmi : -NH2, -ONH2 et -NH-NH2. La liaison covalente formée entre un dendrimère et une biomolécule par la réaction entre une fonction F, aldéhyde -CHO et une fonction F3 -NH2, -ONH2 ou -NHNH2 est une liaison de type -CH=N-. De préférence, selon ce mode, les biomolécules d'intérêt sont préalablement fonctionnalisées par, ou contiennent déjà, une ou plusieurs fonctions amine primaire -NH2 et la réaction de fixation des biomolécules d'intérêt est suivie d'une réaction de réduction des fonctions de type -CH=N- en fonctions de type -CH2-NH-, de préférence réalisée in situ par un agent réducteur, tel qu'un hydrure de bore, comme par exemple NaBH3CN ou NaBH4. Le plus souvent, les biomolécules comportent déjà des fonctions amine primaire - NH2 aptes à former une liaison covalente avec lesdites fonctions F,. Selon ce mode, les biomolécules d'intérêt (par exemple acides nucléiques aminés, oligonucléotides de tailles variables ou produits PCR), sont immobilisées sur les pointes AFM modifiées dans une solution tampon, par exemple le tampon phosphate (0,3 M, pH 9). Lorsque les biomolécules d'intérêt sont préalablement fonctionnalisées par, ou contiennent déjà, une ou plusieurs fonctions amine -NH2, cette étape est suivie d'une réduction des fonctions imine formées entre les biomolécules et les dendrimères, par l'intermédiaire d'un agent réducteur généralement additionné en fin de réaction. Dans le cas où les dendrimères sont eux-mêmes greffés aux pointes AFM par l'intermédiaire de liaisons imine, celles-ci sont également réduites après le greffage de la biomolécule. Cette étape de réduction permet également de réduire les fonctions aldéhyde résiduelles des dendrimères en alcool, ce qui rend hydrophile la surface de la pointe AFM modifiée. De plus, les fonctions alcool ainsi obtenues ne provoquant pas d'interaction non spécifique avec les partenaires moléculaires des biomolécules d'intérêt fixées aux dendrimères. Selon d'autres modes de réalisation, les fonctions terminales F, des dendrimères utilisés sont choisies parmi les fonctions thiol, amine et époxyde. De préférence, la réaction de fixation covalente des biomolécules d'intérêt sur la pointe AFM modifiée est réalisée à une température comprise entre 4 et 50°C, de préférence à température ambiante, pendant une durée comprise entre 10 minutes et 24 heures, de préférence entre 1 et 2 heures. La présente invention concerne également l'utilisation d'une pointe AFM biomodifiée telle que définie précédemment pour la mesure par microscopie à force atomique des forces d'interaction entre des biomolécules d'intérêt immobilisées sur ladite pointe AFM biomodifiée et leurs partenaires moléculaires, de préférence immobilisés sur un support solide. Les partenaires moléculaires des biomolécules immobilisées sur la pointe AFM biomodifiée utilisée peuvent être greffés sur un support solide par une technique connue de l'homme du métier, et notamment en suivant la méthode d'immobilisation de biomolécules sur un support solide décrite dans le brevet WO 03/091304. Les supports solides peuvent être par exemple des lames de verre fonctionnalisées par des fonctions époxyde, des lames comprenant une surface d'or ou bien des supports en silicium. Les figures et exemples suivants sont apportés pour illustrer de façon non limitative des modes de réalisation de la présente invention. FIGURES La Figure 1 illustre de manière schématique l'interaction spécifique mesurée par AFM entre une pointe biomodifiée par greffage d'une biomolécule d'intérêt selon 20 l'invention, et une lame sur laquelle est immobilisé son partenaire moléculaire. Sur la Figure 1, les éléments suivants sont représentés : (1) représente la pointe AFM, (2) représente l'espaceur greffé de manière covalente à la pointe AFM, (3) représente un dendrimère fixé de manière covalente à l'espaceur (2), 25 (4) représente les fonctions terminales du dendrimère (3), (5) représente une biomolécule d'intérêt greffée de manière covalente au dendrimère (3), et (6) représente son partenaire moléculaire immobilisé sur une lame (7). 30 La Figure 2 illustre de manière schématique le blocage de cette interaction spécifique par saturation du partenaire moléculaire immobilisé sur la lame avec des biomolécules d'intérêt libres. Sur la Figure 2, les éléments suivants sont représentés : (10) représente la pointe AFM, 35 (20) représente l'espaceur greffé de manière covalente à la pointe AFM, (30) représente un dendrimère fixé de manière covalente à l'espaceur (20),15 (40) représente les fonctions terminales du dendrimère (30), (50) représente une biomolécule d'intérêt greffée de manière covalente au dendrimère (30), et (60) représente son partenaire moléculaire immobilisé sur la lame époxyde (70), saturé par une biomolécule libre. La Figure 3 représente les résultats de la mesure de l'interaction GST - anti-GST, effectuée par AFM dans l'Exemple 5. La Figure 4 représente les résultats de la mesure de l'interaction GST - anti-GST saturée de GST, effectuée par AFM dans l'Exemple 6. EXEMPLES 1. Nettoyage et prétraitement de la pointe AFM La pointe AFM utilisée est une pointe AFM en nitrure de silicium (Si3N4), de VEECO Instruments, Santa Barbara (CA), USA. Caractéristiques de la pointe AFM Geometry: Anisotropic Tip Height (h): 2.5 - 8.0 µm Front Angle (FA): 15 ± 2.5° Back Angle (BA): 25 ± 2.5° Side Angle (SA): 17.5 ± 2.5° Tip Radius (Nom): 20 nm Tip Radius (Max): 60 nm Tip SetBack (TSB)(Nom): 5 µm Tip Set Back (TSB)(RNG): 3 - 7 µm Cette pointe est successivement lavée avec du dichlorométhane, de l'acétone, puis de l'éthanol absolu et séchée sous un flux d'azote. Elle est ensuite placée sous UV-ozone pendant 15 minutes afin de l'oxyder et de l'activer sous forme de groupements - OH. Alternativement, la pointe AFM est soumise à un traitement plasma-02 afin de réaliser cette même oxydation.25 2. Fonctionnalisation de la pointe AFM activée La pointe AFM activée est ensuite incubée pendant 14 heures à température ambiante dans une solution d'éthanolamine (8 M dans le DMSO) en présence de tamis moléculaire. Elle est ensuite rincée trois fois avec du DMSO (5 minutes), puis de l'éthanol (3 fois 5 minutes) et enfin séchée sous azote avant d'être placée dans un dessicateur. 3. Fixation des dendrimères sur la pointe AFM fonctionnalisée La pointe AFM fonctionnalisée par des fonctions amine est incubée dans une solution de dendrimères G4 (58 µM dans du tetrahydrofurane) pendant 5 heures à température ambiante. Les dendrimères G4 utilisés sont des dendrimères de génération 4, représentés sur le schéma 1, dont la synthèse est notamment décrite dans Launay et al. (Angew. Chem. /nt. Ed. Engl., 1994, 33, 15/16, 1590-1592) ou encore dans Launay et al. (J. Organomet. Chem, 1997, 529, 51-58). La pointe est ensuite rincée avec du THF (3 fois 5 minutes) puis avec de l'éthanol absolu avant d'être séchée sous un flux d'azote. Les pointes AFM modifiées présentant des fonctions terminales aldéhyde ainsi obtenues sont conservées à température ambiante. Schéma 1 : Dendrimères G4 de génération 4 à terminaisons aldéhyde 4. Greffaqe de biomolécules sur les pointes AFM modifiées Les pointes AFM modifiées sont incubées pendant une heure dans une solution contenant des anticorps anti-GST (0,5 mg/mL dans un tampon carbonate 0,1 M à pH = 8,4), puis du NaBH3CN (20 mM) est ajouté 10 min avant la fin de la réaction. L'immobilisation de l'anticorps se fait par réaction entre des fonctions amine de l'anticorps et des fonctions aldéhyde des dendrimères. La liaison imine -C=N- ainsi formée est réduite in situ en liaison amine -CH-NH- par le NaBH3CN. 5. Mesure des forces d'interactions entre l'anticorps anti-GST et l'antiqène GST En parallèle de l'obtention d'une pointe AFM biomodifiée par greffage d'anticorps anti-GST, les protéines GST sont immobilisées sur une lame fonctionnalisée époxyde (disponible chez Schott Nexterion) d'après une technique connue de l'homme du métier. L'interaction « GST - anti-GST » est mesurée par AFM. Le principe de telles mesures consiste à approcher la pointe AFM biomodifiée de la lame où sont immobilisées les protéines GST, d'effectuer l'interaction GST-anti-GST, puis de retirer la pointe AFM et de mesurer la déflection de la pointe lors du retrait de celle-ci. Une vision schématique de cette interaction est représentée sur la Figure 1. Ces mesures de type « approche-retrait » sont répétées n fois, n au moins supérieur à 100 afin d'obtenir des résultats statistiques fiables. Les résultats obtenus pour l'interaction « GST - anti-GST » montrent que l'interaction est réalisée dans 86,6% des cas (n=500). On observe deux types d'interaction, une interaction simple avec un pic d'adhésion à 63 pN (piconewton = 10-12 N) et une double interaction avec un pic à 129 pN, tel que représenté sur la Figure 3. 6. Témoins néqatifs montrant la spécificité de l'interaction La même mesure est réalisée en mettant préalablement en contact la lame greffée de protéines GST avec un excès d'anticorps libres anti-GST, de manière à saturer les protéines GST de la lame et ainsi bloquer leur interaction spécifique avec les anticorps anti-GST greffés sur la pointe AFM biomodifiée. Une vision schématique du blocage de cette interaction est représentée sur la Figure 2. Comme attendu, aucune interaction spécifique n'est observée, tel que représenté sur la Figure 4. Ceci rend compte du blocage ainsi effectué et prouve la spécificité entre la pointe AFM biomodifiée par l'anti-GST et la surface greffée de protéines GST. D'autres études comparatives montrent la spécificité de l'interaction entre une pointe AFM biomodifiée par une biomolécule, et son partenaire moléculaire immobilisé sur une lame fonctionnalisée époxyde. a) Des mesures d'interaction sont effectuées entre : une pointe AFM en Si3N4 brute non modifiée, et une lame époxyde vierge non greffée. Comme attendu, aucune interaction spécifique n'est observée. b) Des mesures d'interaction sont effectuées entre : une pointe AFM fonctionnalisée par l'éthanolamine puis greffée d'anticorps anti-GST, et une lame époxyde vierge non greffée. 35 21 Comme attendu, aucune interaction spécifique n'est observée. c) Des mesures d'interaction sont effectuées entre : une pointe AFM fonctionnalisée par l'éthanolamine puis greffée d'anticorps anti-GST, et une lame époxyde greffée de protéines GST. Comme attendu, aucune interaction spécifique n'est observée. d) Des mesures d'interaction sont effectuées entre : une pointe AFM fonctionnalisée par l'éthanolamine puis greffée d'anticorps anti-GST, et une lame époxyde greffée de protéines GST, et saturée d'anticorps anti-GST libres. Comme attendu, aucune interaction spécifique n'est observée. 15 e) Des mesures d'interaction sont effectuées entre : une pointe AFM fonctionnalisée par l'éthanolamine puis greffée par des dendrimères à terminaisons aldéhyde, et une lame époxyde vierge non greffée. 20 Comme attendu, aucune interaction spécifique n'est observée. f) Des mesures d'interaction sont effectuées entre : une pointe AFM fonctionnalisée par l'éthanolamine puis greffée par des dendrimères à terminaisons aldéhyde, et 25 une lame époxyde greffée de protéines GST. Comme attendu, aucune interaction spécifique n'est observée. 10 REVENDICATIONS1. Pointe de microscope à force atomique modifiée (pointe AFM) caractérisée en ce qu'elle contient une surface greffée de manière covalente par des dendrimères phosphorés possédant un noyau central de valence supérieure ou égale à 2 et comportant à leur périphérie plusieurs fonctions terminales F, aptes à permettre la fixation covalente desdits dendrimères sur ladite surface, et la fixation covalente des biomolécules d'intérêt sur lesdits dendrimères. 2. Pointe AFM modifiée selon la revendication 1, dans laquelle la surface greffée est une surface à base de silicium, telle que du nitrure de silicium, ou de l'oxyde de silicium, ou bien une surface à base d'un métal tel que l'or, l'argent, le chrome ou le platine. 3. Pointe AFM modifiée selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, dans laquelle les dendrimères comprennent : un noyau central Po, éventuellement phosphoré, de valence v comprise entre 2 et 12; g couches de génération, identiques ou différentes, chacune desdites couches de génération étant constituée de chaînes de génération répondant à la formule (1) suivante : E II/ L-M-C=N-N-P~ R1 R2 dans laquelle : L représente un atome d'oxygène, de phosphore, de soufre ou d'azote, M représente l'un des groupes suivants : un groupe aromatique éventuellement mono-, di-, tri- ou tétrasubstitué par des groupes alkyle, des groupes alcoxy, des groupements insaturés du type oléfinique en C1-C12, azoïque, acétylénique, tous ces groupes étant éventuellement substitués ; ou un groupe alkyle ou alcoxy éventuellement substitué, R, et R2, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou l'un des groupes suivants : alkyle, alcoxy, aryle, éventuellement substitué, avec R2 étant généralement différent de R,, (1) 30g est un nombre entier compris entre 1 et 11, E représente un atome d'oxygène, de soufre ou un groupe NR3i où R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, alcoxy ou aryle, éventuellement substitué ; et une couche externe constituée de chaînes terminales, identiques ou différentes, comportant des fonctions terminales F,, lesdites chaînes répondant à la formule (II) suivante : -W-Fi (II) dans laquelle : W représente l'un des groupes suivants : -alkyle-, -0-alkyle-, -aryle-, -0-aryle-, éventuellement substitué, F, représente un groupement aldéhyde -CHO, thiol -SH, époxyde, acide carboxylique -000H, alcool -OH ou amine -NRR' où R et R', identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle. 4. Pointe AFM modifiée selon la revendication 3, dans laquelle : le noyau central Po est phosphoré et v est comprise entre 3 et 6 ; les chaînes de génération sont identiques et répondent à la formule (l') suivante : S II/ -O-M-C=N-N-P~ R1 R2 (I,) 20 dans laquelle : M représente un groupe phénylène -C6H4-, éventuellement mono-, di-, tri-ou tétrasubstitué par des groupes alkyle, des groupes alcoxy, des groupements insaturés du type oléfinique en C1-C12, azoïque, acétylénique, tous ces groupes étant éventuellement substitués ; 25 - R, et R2, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, avec R2 étant généralement différent de R, ; et les chaînes terminales sont identiques et répondent à la formule (II') suivante : -W-F' (II') dans laquelle : 30 W représente un groupe -0-alkyle- ou -0-aryle-, éventuellement substitué, et F, est défini comme à la revendication 3. 15 5. Pointe AFM modifiée selon l'une quelconque des revendications 3 ou 4, dans laquelle le noyau central Po est sélectionné dans le groupe constitué par : - le groupement de formule générale (111a) : - et le groupement de formule générale (Illb) : / R=P a \ (Illb) dans lequel R4 représente un atome de soufre, d'oxygène ou un groupe =NR3i où R3 est défini comme aux revendications précédentes. 6. Procédé de préparation d'une pointe AFM modifiée selon l'une des revendications 1 à 5, ledit procédé comprenant une étape de formation d'une liaison covalente entre les dendrimères phosphorés et une surface de ladite pointe AFM présentant au moins une fonction F2 apte à permettre la fixation covalente desdits dendrimères sur ladite surface. 7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel la surface de la pointe AFM utilisée présentant au moins une fonction F2 est obtenue par un procédé comprenant les étapes suivantes : a) le prétraitement éventuel d'au moins une surface de la pointe AFM, ce par quoi on obtient une surface activée ; b) la fonctionnalisation d'au moins une surface éventuellement activée de la pointe AFM par au moins une fonction F2 apte à permettre la fixation covalente des dendrimères sur la surface ainsi fonctionnalisée. 8. Procédé selon la revendication 7, dans lequel les fonctions F2 sont des fonctions amine primaire -NH2 et l'étape b) de fonctionnalisation de la surface est réalisée en présence d'un réactif comportant une fonction amine primaire et une autre fonction, apte à former une liaison covalente avec la surface de la pointe AFM, éventuellement activée. (111a)30 9. Procédé selon la revendication 8, dans lequel l'étape b) de fonctionnalisation de la surface est réalisée par un réactif comportant une fonction amine primaire -NH2 et une fonction hydroxyle -OH apte à former une liaison covalente avec une fonction de la surface activée de la pointe AFM. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 ou 8, dans lequel la pointe AFM est à base d'or et l'étape b) de fonctionnalisation de la surface est réalisée en présence d'un réactif comportant une fonction amine primaire -NH2 et une fonction thiol - SH apte à former une liaison covalente avec la surface à base d'or de la pointe AFM. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, dans lequel l'étape de fixation covalente des dendrimères, consiste à: préparer une solution desdits dendrimères dans un solvant, mettre ladite solution de dendrimères en contact avec la surface fonctionnalisée. 12. Utilisation d'une pointe AFM modifiée greffée de manière covalente par des dendrimères phosphorés telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 5, comme support pour l'immobilisation de biomolécules d'intérêt. 20 13. Utilisation selon la revendication 12, dans laquelle les biomolécules d'intérêt sont des protéines, des acides nucléiques, des saccharides, des lipides, des peptides, des enzymes, des anticorps ou leurs partenaires moléculaires. 14. Pointe AFM biomodifiée caractérisée en ce qu'elle comporte au moins une 25 pointe AFM modifiée selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, comprenant au moins une surface greffée de manière covalente par des dendrimères phosphorés tels que définis aux revendications précédentes, et sur lesquels sont fixées de manière covalente des biomolécules d'intérêt. 30 15. Procédé de préparation d'une pointe AFM biomodifiée selon la revendication 14, qui comprend l'étape consistant à mettre en contact une pointe AFM modifiée selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, une solution tampon contenant des biomolécules d'intérêt préalablement fonctionnalisées par, ou comportant déjà, un ou plusieurs fonctions F3 aptes à former une liaison covalente avec les fonctions terminales 35 F, des dendrimères. 10 15 16. Utilisation d'une pointe AFM biomodifiée telle que définie à la revendication 14 pour la mesure par microscopie à force atomique des forces d'interaction entre des biomolécules d'intérêt immobilisés sur ladite pointe AFM biomodifiée et leurs partenaires moléculaires, de préférence immobilisés sur un support solide.5