Brevet FR2949198A1 — publié le 20110225

-1- La présente invention se situe dans le domaine cosmétique et pharmaceutique, et plus particulièrement dans le domaine de la dermatologie. La présente invention concerne une composition cosmétique ou pharmaceutique, et notamment dermatologique, comprenant, dans un milieu physiologiquement adapté, en tant que principe actif, des polypeptides ou des peptides, utilisé seul ou en association avec au moins un autre principe actif. L'invention est également relative à l'utilisation d'une composition capable d'augmenter l'énergie cellulaire et de protéger la peau des dommages oxydatifs. L'invention porte encore sur un procédé de traitement cosmétique destiné à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et à lutter contre le vieillissement cutané. Le principe actif peut également être utilisé pour préparer des compositions pharmaceutiques destinées à prévenir ou lutter contre les pathologies liées à des processus d'oxydation ou encore, certaines pathologies du vieillissement. Le terme � phanères � selon l'invention englobe l'ensemble des annexes kératiniques présentes à la surface du corps, en particulier les poils, les cils, les sourcils, les ongles et les cheveux. La peau est un organe vital qui recouvre toute la surface du corps et assure des fonctions protectrices, sensitives, immunitaires, métaboliques ou encore thermorégulatrices. La peau, comme les autres organes, est soumise au vieillissement. Or, un des mécanismes majeurs impliqués dans les processus du vieillissement est l'accumulation de dommages oxydatifs dans des molécules essentielles telles que les lipides membranaires, les protéines, l'ADN et tout particulièrement l'ADN mitochondrial (ADNmt). Les dommages oxydatifs sont provoqués par les radicaux libres, des espèces chimiquement instables et très réactionnelles, générées par le métabolisme intracellulaire ou les agressions extérieures. Parmi ces agressions extérieures, on peut citer : les rayonnements UV, les toxines, les polluants atmosphériques, les oxydants alimentaires. Dans la peau, on observe un vieillissement prématuré survenant dans les zones exposées aux rayonnements, caractérisé par des phénomènes d'altérations des macromolécules (péroxydation lipidique, carbonylation des protéines) touchant en particulier l'élastine, le collagène ou la fibronectine. On a également pu montrer un déclin progressif des fonctions mitochondriales avec l'âge, probablement lié à l'accumulation de mutations sur l'ADNmt (K. Singh, Ann. N.Y. Acad. Sci. 1019, 2004). Une des conséquences importantes de l'accumulation des dommages oxydatifs est une réduction de la capacité de la cellule à produire de dATP (Porteous et al., Eur J Biochem 1998, 257(1):192-201). Ainsi, le phénomène du vieillissement cellulaire est en relation avec les dommages oxydatifs que subit la cellule mais aussi avec le processus de production d'énergie nécessaire à la cellule pour survivre. L'organisme possède des mécanismes de défense, capables de piéger ou de transformer les radicaux libres (enzymes, glutathion, vitamines A et E, coenzyme Q10, etc.). Cependant, ces systèmes de défenses antioxydants s'avèrent souvent insuffisants devant les nombreux stress et agressions extérieures auxquels sont soumis les organismes et la peau en particulier. Dans ce contexte, les propriétés antioxydantes du coenzyme Q10 apparaissent comme particulièrement intéressantes : Le coenzyme Q10 (ou ubiquinone) est un coenzyme présent dans les complexes mitochondriaux impliqués dans la phosphorylation oxydative conduisant à la production d'ATP (Mitchell and al, 1976; Mitchell and al, 1990). L'autre propriété fondamentale du coenzyme Q10 est d'être un antioxydant, neutralisant les radicaux libres (Beyer et al 1990, Villalba et al 1997). 0 Le coenzyme Q10 est un dérivé benzoquinonique flanqué d'une longue chaîne latérale isoprénique composée le plus souvent de dix unités isoprénoïdes (d'où le nom de Coenzyme Q 10). Ce coenzyme n'étant pas soluble dans l'eau, on ne le rencontre que dans des membranes lipidiques comme la membrane interne de la mitochondrie, où il peut diffuser librement parmi les phospholipides membranaires. Le Coenzyme Q10 peut exister sous trois états d'oxydation : une forme réduite 25 (CoQH2 ou UQH2), une forme oxydée (CoQ10), et une forme intermédiaire le radical ubisemiquinone (Q°). Le coenzyme Q10 est présent dans la peau où il stimule les fonctions naturelles des cellules et agit en défenseur vis-à-vis des agressions extérieures. 2949198 -3- La biosynthèse du coenzyme Q10 se fait à partir de la tyrosine pour le noyau quinone, et à partir du farnesyl pyrophosphate pour la chaîne latérale. L'enzyme responsable de cette dernière réaction, qui est une étape essentielle dans la biosynthèse du coenzyme Q10, est la transprényl transférase (ou polyprenyl transférase). La recherche de composés pouvant stimuler la synthèse de coenzyme Q10, les synthèses énergétiques d'ATP et/ou protéger les cellules des dommages causés par les radicaux libres est une préoccupation de la recherche médicale et de la cosmétique. Il a ainsi été proposé des solutions par l'apport de substances d'origine peptidiques présentant 10 des propriétés antioxydantes (WO2005097060, JP2006131626), mais aucune composition cosmétique ou pharmaceutique comprenant les peptides ou polypeptides de la présente invention n'a été décrite à ce jour. Les inventeurs ont mis en évidence une activité thérapeutique, et plus particulièrement dermatologique et cosmétique, de peptides particuliers, décrits dans la présente invention. 15 Il a notamment été mis en évidence que ces peptides, lorsqu'ils sont appliqués sur la peau, ont une forte activité protectrice vis-à-vis des dommages oxydatifs subis par la peau et favorisent de façon importante la synthèse d'ATP, ainsi que la synthèse ou l'activité de l'enzyme transprényl transférase et du coenzyme Q10. Ce nouveau principe actif, capable d'augmenter l'énergie cellulaire et de protéger la peau des dommages oxydatifs, permet 20 ainsi d'ouvrir de nouvelles perspectives thérapeutiques et cosmétiques. On entend par � principe actif capable d'augmenter l'énergie cellulaire et de protéger la peau des dommages oxydatifs� toute substance capable d'augmenter la synthèse d'ATP intracellulaire et de présenter des propriétés protectrices dans des cellules ou des tissus soumis à un stress oxydant d'origine physico-chimique ou environnementale. Ainsi, l'invention a pour objet premier une composition cosmétique ou pharmaceutique, et notamment dermatologique, comprenant, dans un milieu physiologiquement adapté, en tant que principe actif, des peptides ou polypeptides capables d'augmenter l'énergie cellulaire et de protéger la peau des dommages oxydatifs, seul ou en association avec au moins un autre principe actif. Le terme � peptide � désigne un enchaînement de deux ou plusieurs acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques ou par des liaisons peptidiques modifiées, le terme � polypeptide � désignant un peptide de taille plus importante. 2949198 -4- Par � peptide �, il faut entendre le peptide naturel ou synthétique de l'invention tel que décrit ci-dessus ou au moins l'un de ses fragments, qu'il soit obtenu par protéolyse ou de manière synthétique, ou encore tout peptide naturel ou synthétique dont la séquence est totalement ou partiellement constituée par la séquence du peptide selon l'invention. 5 Préférentiellement, selon la présente invention, le principe actif selon l'invention ou ses dérivés biologiquement actifs est composé d'au moins un peptide dont le nombre d'acides aminés est compris entre 3 et 50, et plus particulièrement entre 3 et 8. Par l'expression � biologiquement actif �, on entend � qui possède une activité in vivo 10 ou in vitro caractéristique de l'activité du principe actif selon l'invention �. Selon une méthode particulièrement avantageuse de réalisation de l'invention, le peptide possède une séquence qui répond en tout ou en partie à la formule générale (I) 15 R1-(AA)p X1-X2- X3- X4-X5- X6-(AA)P R2 Dans laquelle X1 est la glutamine, l'histidine, l'alanine ou l'acide aspartique, X2 est la méthionine, l'acide aspartique ou la valine, X3 est la leucine, l'isoleucine, l'acide aspartique ou la valine, 20 X4 est l'histidine, la valine, l'alanine, la leucine ou aucun acide aminé, X5 est la thréonine, l'isoleucine, la glycine, l'acide aspartique ou aucun acide aminé, X6 est l'alanine, l'acide aspartique, la phénylalanine ou aucun acide aminé. AA représente un acide aminé quelconque, ou un de ses dérivés, et n et p sont des 25 nombres entiers compris entre 0 et 4. R1 représente la fonction amine primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle. 30 R2 représente le groupe hydroxyle de la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal, libre ou substitué par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi une chaîne alkyle de Cl à C20, ou un groupement NH2, NHY ou NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de Cl à C4. 2949198 -5- Selon une méthode de réalisation de l'invention tout particulièrement préférée, le peptide biologiquement actif est de séquence : (SEQ ID n°1) Glu-Met-Ile-His-Thr-Ala-Ser-Leu 5 (SEQ ID n°2) Asp-Asp-Val-Leu-Asp-Phe-Thr (SEQ ID n°3) His-Asp-Asp-Val-Ile-Asp (SEQ ID n°4) Ala-Val-Leu-Ala-Gly-Asp-NH2 (SEQ ID n°5) Ala-Val-Leu-Ala-Gly-Asp (SEQ ID n°6) Ala-Val-Leu-Ala-Gly 10 (SEQ ID n°7) Ala-Val-Ile-Val-Gly-NH2 (SEQ ID n°8) Ala-Val-Ile-Val (SEQ ID n°9) Glu-Met-Ile-NH2 (SEQ ID n°10) Asp-Asp-Val (SEQ ID n°11) Ala-Val-Leu-Ala-Gly-NH2 15 Selon un mode de réalisation particulièrement intéressant, le peptide biologiquement actif correspond à la séquence SEQ ID n°4. Selon un autre mode de réalisation particulièrement intéressant, le peptide biologiquement actif correspond à la séquence SEQ ID n°11. 20 L'invention concerne aussi des formes homologues de ces séquences. Le terme � homologue � désigne, selon l'invention, toute séquence peptidique identique à au moins 50%, ou de préférence au moins 80%, et encore plus préférentiellement à au moins 90% de ladite séquence peptidique, choisie parmi les séquences SEQ ID n° 1 à SEQ ID n° 11. Par � séquence peptidique identique à au moins X% �, on entend désigner un pourcentage 25 d'identité entre les résidus d'acides aminés des deux séquences à comparer, obtenu après l'alignement optimal des deux séquences. L'alignement optimal est obtenu à l'aide d'algorithmes d'homologies locales tels que ceux utilisés par les logiciels informatiques BLAST P ou T BLAST N disponibles sur le site NCBI. Le terme � homologue � peut également désigner un peptide qui diffère de la 30 séquence d'un peptide de séquence SEQ ID n° 1 à SEQ ID n° 11 par la substitution d'acides aminés chimiquement équivalents, c'est-à-dire par la substitution d'un résidu par un autre possédant les mêmes caractéristiques. Ainsi, les substitutions classiques se font entre Ala, Val, Leu et Ile ; entre Ser et Thr ; entre les résidus acides Asp et Glu ; entre 2949198 -6- Asn et Gln ; et entre les résidus basiques Lys et Arg ; ou entre les résidus aromatiques Phe et Tyr. Dans l'invention, le terme � acide aminé � se réfère ici à tout acide organique naturel 5 ou non naturel ayant la formule : ûNHR-CR-C(0)-O- où chaque -R est indépendamment sélectionné entre un hydrogène et un groupement alkyl ayant entre 1 et 12 atomes de carbone. Préférentiellement, au moins un groupement -R de chaque acide aminé est un hydrogène. Par le terme � alkyl �, on entend ici une chaîne 10 carbonée pouvant être linéaire ou ramifiée, substituée (mono- ou poly-) ou non-substituée ; saturée, mono-saturée (une double ou triple liaison dans la chaîne) ou polyinsaturée (deux ou plusieurs doubles liaisons, deux ou plusieurs triples liaisons, une ou plusieurs doubles liaisons et une ou plusieurs triples liaisons dans la chaîne). Par � peptide �, il faut entendre le peptide naturel ou synthétique de l'invention tel 15 que décrit ci-dessus ou au moins l'un de ses fragments, qu'il soit obtenu par protéolyse ou de manière synthétique, ou encore tout peptide naturel ou synthétique dont la séquence est totalement ou partiellement constituée par la séquence du peptide précédemment décrit. De façon à améliorer la résistance à la dégradation, il peut être nécessaire d'utiliser une forme protégée du peptide selon l'invention. La forme de protection doit évidemment 20 être une forme biologiquement compatible et doit être compatible avec une utilisation dans le domaine des cosmétiques ou de la pharmacie. De nombreuses formes de protection biologiquement compatibles peuvent être envisagées, elles sont bien connues de l'homme du métier comme, par exemple, l'acylation ou l'acétylation de l'extrémité amino-terminale, ou l'amidation ou 25 l'estérification de l'extrémité carboxy-terminale. Ainsi, l'invention concerne une composition telle que définie précédemment, caractérisée par le fait que le peptide de séquence SEQ ID n°1 à SEQ ID n° 11 est sous une forme protégée ou non. On peut utiliser une protection basée sur une substitution sur l'extrémité amino-terminale par un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement 30 benzyloxycarbonyle. De préférence, on utilise une protection basée sur l'amidation de la fonction hydroxyle de l'extrémité carboxy-terminale par un groupement NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de C1 à C4, ou l'estérification par un groupement alkyle. Il est également possible de protéger les deux extrémités du peptide. -7- Les dérivés de peptides concernent aussi les acides aminés et les peptides reliés entre eux par une liaison pseudo-peptidique. On entend par � liaison pseudo-peptidique �, tous les types de liaisons susceptibles de remplacer les liaisons peptidiques � classiques �. Dans le domaine des acides aminés, la géométrie des molécules est telle qu'elles peuvent théoriquement se présenter sous la forme d'isomères optiques différents. Il existe, en effet, une conformation moléculaire de l'acide aminé (AA) telle qu'elle dévie à droite le plan de polarisation de la lumière (conformation dextrogyre ou D-aa), et une conformation moléculaire de l'acide aminé (aa) telle qu'elle dévie à gauche le plan de polarisation de la lumière (conformation lévogyre ou L-aa). La nature n'a retenu pour les acides aminés naturels que la conformation lévogyre. En conséquence, un peptide d'origine naturelle ne sera constitué que d'acides aminés de type L-aa. Cependant, la synthèse chimique en laboratoire permet de préparer des acides aminés ayant les deux conformations possibles. A partir de ce matériel de base, il est ainsi possible d'incorporer lors de la synthèse de peptide aussi bien des acides aminés sous forme d'isomères optiques dextrogyre ou lévogyre. Ainsi, les acides aminés constituant le peptide selon l'invention peuvent être sous configuration L- et D- ; de manière préférentielle, les acides aminés sont sous forme L. Le peptide selon l'invention peut donc être sous forme L-, D-ou DL-. Le peptide de formule générale (I) selon l'invention peut être obtenu soit par synthèse chimique classique (en phase solide ou en phase homogène liquide), soit par synthèse enzymatique (Kullman et al., J. Biol. Chem. 1980, 225, 8234), à partir d'acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés. Le peptide selon l'invention peut également être obtenu par fermentation d'une souche de bactéries modifiées ou non, par génie génétique, ou encore par extraction de protéines d'origine animale ou végétale, préférentiellement d'origine végétale, suivie d'une hydrolyse contrôlée qui libère des fragments peptidiques correspondant totalement ou partiellement aux peptides de formule générale (I). De très nombreuses protéines trouvées dans les plantes sont susceptibles de contenir ces séquences au sein de leur structure. L'hydrolyse ménagée permet de dégager ces fragments peptidiques. Il est possible, mais non nécessaire pour réaliser l'invention, d'extraire soit les protéines concernées d'abord et de les hydrolyser ensuite, soit d'effectuer l'hydrolyse d'abord sur un extrait brut et de purifier les fragments peptidiques ensuite. Il est également possible d'utiliser certains extraits hydrolysés sans en purifier les 2949198 -8- fragments peptidiques correspondant aux peptides de formule générale (I) selon l'invention, mais en s'assurant toutefois de la présence desdits fragments par des moyens analytiques appropriés. D'autres procédés plus simples ou plus complexes peuvent être envisagés par l'homme 5 du métier connaissant le métier de synthèse, d'extraction et de purification des protéines et des peptides. Ainsi le peptide selon l'invention peut être d'origine naturelle ou synthétique. Préférentiellement selon l'invention, le peptide est obtenu par synthèse chimique. Selon l'invention, le principe actif peut être un mélange de dérivés peptidiques et/ou 10 constitués de dérivés d'acides aminés. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le principe actif selon l'invention est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables, classiquement utilisés par l'homme du métier, comme 15 l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, le principe actif selon l'invention est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou 20 pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbés sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisés dans, ou fixés sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. Il est bien entendu que le principe actif selon l'invention peut être utilisé seul ou bien 25 en association avec au moins un autre principe actif, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique et/ou dermatologique. Les compositions selon l'invention pourront être appliquées par toute voie appropriée, notamment orale, parentérale ou topique externe, et leur formulation sera adaptée par l'homme du métier, en particulier pour des compositions cosmétiques ou 30 dermatologiques. Avantageusement, les compositions selon l'invention sont destinées à une administration par voie topique cutanée. Ces compositions doivent donc contenir un milieu cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau et les phanères, et couvrent toutes les formes cosmétiques ou 2949198 -9- dermatologiques. Ces compositions pourront notamment être sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsions multiples, solutions, suspensions, gels, laits, lotions, sticks ou encore de poudres, adaptés à une application sur la peau, les lèvres et/ou les phanères. 5 Ces compositions comprennent les excipients nécessaires à leur formulation, tels que solvants, épaississants, diluants, tensioactifs, anti-oxydants, colorants, conservateurs, parfums. Bien entendu, l'homme de métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et/ou leur quantité, de telle sorte que les propriétés 10 avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. La composition utilisable selon l'invention peut en particulier consister en une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, un après-shampooing, une lotion de mise en plis, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant, une lotion 15 restructurante pour les cheveux, un masque, etc. La composition cosmétique selon l'invention peut être utilisée notamment dans les traitements mettant en oeuvre une application qui est suivie ou non suivie d'un rinçage, ou encore sous forme de shampooing. Elle peut également se présenter sous forme de teinture ou de mascara à appliquer au 20 pinceau ou au peigne, en particulier sur les cils, les sourcils ou les cheveux. Avantageusement, les compositions utilisables selon l'invention contiennent en outre divers principes actifs destinés, notamment, à la prévention et/ou au traitement des désordres liés au photo-vieillissement. Ainsi, la composition selon l'invention peut 25 associer, au principe actif selon l'invention, d'autres principes actifs favorisant son action. Par exemple, il peut être ajouté des principes actifs ayant une action antioxydante, choisis parmi la vitamine C, la vitamine E, ou les extraits polyphénoliques de plantes. La composition selon l'invention peut encore associer, au principe actif selon l'invention, des principes actifs stimulant les synthèses des macromolécules dermiques 30 (laminine, fibronectine, collagène), par exemple le peptide de collagène commercialisé sous le nom � Collaxyl� � par la société Vincience. 2949198 -10- La composition selon l'invention peut également associer, au principe actif selon l'invention, des principes actifs stimulant le métabolisme énergétique, comme le principe actif commercialisé sous la dénomination � GP4G� � par la société Vincience. Selon un autre aspect, la composition selon l'invention peut être une composition solaire, 5 c'est-à-dire une composition aidant à la protection contre le rayonnement solaire. Ainsi, il peut être avantageusement ajouté, à la composition selon l'invention, des actifs aidant à la protection solaire tels que, par exemple, des filtres solaires. Il est bien évident que l'invention s'adresse aux mammifères en général, et plus particulièrement aux êtres humains. 10 La quantité efficace de principe actif correspond à la quantité de peptide selon l'invention nécessaire pour obtenir le résultat recherché, à savoir : augmenter la synthèse d'ATP, protéger la peau des dommages oxydatifs et plus généralement, protéger la peau des agressions extérieures et prévenir ou traiter le vieillissement cutané. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le principe actif de formule 15 générale (I) est présent dans les compositions de l'invention à une concentration comprise entre 0,0005 et 500 ppm (parties par million) environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 et 5 ppm environ par rapport au poids total de la composition finale. Ces compositions pourront notamment se présenter sous forme d'une solution 20 aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse ; d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ; elles peuvent aussi se présenter sous forme de crèmes, de suspensions, ou encore de poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou les phanères. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une 25 pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau. Ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels 30 que des solvants, des épaississants, des diluants, des anti-oxydants, des colorants, des filtres solaires, des principes auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des actifs cosmétiques ou 2949198 -11- pharmaceutiques, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc. Dans tous les cas, l'homme du métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses 5 recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux 10 classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, par rapport au poids total de la composition. Par ses activités particulières, le principe actif selon l'invention pourra être utilisé avantageusement dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une 15 composition pharmaceutique. En particulier, le principe actif selon l'invention pourra être utilisé avantageusement dans une composition cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, le principe actif, ou la composition le contenant, étant destiné à augmenter la synthèse d'ATP intracellulaire des cellules de la peau. 20 Le principe actif selon l'invention pourra également être utilisé avantageusement dans une composition cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, le principe actif, ou la composition le contenant, étant destiné à augmenter l'activité ou la synthèse d'enzyme transprényl transférase et/ou de coenzyme Q10 dans les cellules de la peau. 25 Un aspect essentiel de l'invention est l'utilisation du principe actif selon l'invention, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique, à usage topique, destinée, notamment, à obtenir une activité protectrice vis-à-vis des espèces réactives de l'oxygène. Ledit principe actif étant avantageusement utilisé en tant que 30 principe actif antioxydant, et/ou en tant que principe actif anti-radicalaire, et/ou en tant que principe actif anti-glycation. Par principe actif anti-radicalaire, on entend tout composé capable de piéger les radicaux libres avant les étapes ultimes de dégradation des constituants biologiques de la peau, on parle alors de composés antioxydants. Par principe 2949198 -12- actif anti-glycation, on entend tout composé capable de limiter les dommages cellulaires causés par les réactions de glycation ou de glycoxydation. Ainsi, le principe actif selon l'invention permettra de lutter contre les dommages esthétiques provoqués sur la peau et/ou les cheveux par les radicaux libres. 5 On entend, par l'expression � agression extérieure �, les agressions que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les rayonnements UV, ou encore les produits à caractère irritant tels que les tensioactifs, les conservateurs ou les parfums. Par pollution, on entend aussi bien la pollution � extérieure �, due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, 10 que la pollution � intérieure � qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papier-peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldehyde), ou bien encore la fumée de cigarette. Un autre aspect de l'invention est l'utilisation dudit principe actif dans une 15 composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, en tant que principe actif photo-protecteur et, plus particulièrement, en tant que principe actif photo-protecteur dit � secondaire �. On distingue, en effet, les principes actifs photo-protecteurs primaires des principes actifs photo-protecteurs secondaires. Les principes actifs photo-protecteurs primaires sont des substances qui exercent un pouvoir physique : 20 ils sont en mesure d'absorber les rayonnements UV et de les restituer sous forme de chaleur afin de protéger la peau. Les principes actifs photo-protecteurs secondaires sont des substances qui ont plutôt un effet biologique ; ce sont, par exemple, les principes actifs de type antioxydant qui interrompent les chaînes de réactions photochimiques qui sont déclenchées lorsque le rayonnement UV pénètre dans la peau. 25 Dans un autre aspect essentiel de l'invention, le principe actif pourra être utilisé avantageusement dans une composition cosmétique destinée à lutter de manière préventive et/ou curative contre les manifestations du vieillissement cutané, et plus spécifiquement, afin de lutter contre et/ou de prévenir le vieillissement photo-induit 30 (photo-vieillissement). Par manifestations cutanées du vieillissement, on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau et des phanères dues au vieillissement comme, par exemple, les rides et ridules, la peau flétrie, la peau molle, la peau amincie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, la peau terne et sans éclat ou les taches de 2949198 -13- pigmentation de la peau, la décoloration des cheveux ou les taches sur les ongles, mais également toute modification interne de la peau qui ne se traduit pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, tout dommage oxydatif de la peau consécutif à une exposition aux rayonnements ultraviolets (UV). Le principe actif selon 5 l'invention, ou la composition le contenant, permettra de lutter, en particulier, contre la perte d'élasticité et de fermeté de la peau. L'invention a également pour objet l'utilisation dans une composition cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, d'une quantité efficace de 10 principe actif tel que décrit précédemment, le principe actif, ou la composition le contenant, étant destiné à prévenir les dommages causés à la peau par une exposition au soleil ou une exposition à des rayonnements ionisants lors de radiothérapies. L'invention a également pour objet l'utilisation dans une composition cosmétique, ou 15 pour la préparation d'une composition pharmaceutique, d'une quantité efficace de principe actif tel que décrit précédemment, le principe actif, ou la composition le contenant, étant destiné à stimuler et/ou protéger les mitochondries, en particulier sur les zones du corps exposées aux rayonnements UV. 20 L'invention consiste encore en une composition pharmaceutique caractérisée en ce que le principe actif selon l'invention est formulé pour atténuer une pathologie liée à des processus d'oxydation, ou encore certaines pathologies du vieillissement. L'invention consiste encore en un procédé de traitement cosmétique destiné à protéger 25 la peau et les phanères des agressions extérieures et à lutter contre le vieillissement cutané caractérisé par l'application sur la peau ou les phanères à traiter d'une composition contenant une quantité efficace de principe actif selon l'invention. Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent 30 également de la description précédente. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif. 2949198 -14- Exemple 1 : Mise en évidence de l'effet activateur du peptide SEO ID n°5 sur la synthèse d'ATP intracellulaire Le but de cette étude est de déterminer l'influence du peptide SEQ ID n°5 sur la synthèse d'ATP. 5 Protocole Cette étude a été effectuée à l'aide d'un Kit � ATP Bioluminescence Assay Kit HS II � (Roche Applied Science) : Les fibroblastes dermiques sont traités avec une solution à 1 %, d'une solution à 50 ppm, contenant le peptide SEQ ID n°5, représentatif de la famille de peptides selon 10 l'invention, pendant une période allant de 1 à 3 heures. A la fin des temps d'incubation, les puits sont vidés de leur milieu et rincés avec 2 ml de PBS froid avant d'ajouter 250 �l d'un tampon de lyse fourni par le kit. Les cellules de chaque puits sont ensuite grattées puis récoltées dans des tubes de 14 ml. Chaque puits est rincé avec 2 x 500 �l de PBS froid et le tout est de nouveau récolté dans les tubes respectifs. A partir de ces 15 échantillons, une dilution est réalisée au 1/120001ème dans du PBS froid avant chaque lecture. Le dosage d'ATP est réalisé sur ces échantillons : 50 tL de cette dilution sont déposés dans une luma-cuvette et 50 �L de luminol sont ajoutés. Après 10 secondes, la lecture de la luminescence est déclenchée. Les valeurs sont standardisées par rapport à la quantité de protéines pour chaque échantillon. Les mesures sont effectuées à l'aide d'un 20 appareil : le Biocounter M2010A LUMAC�/3M. Résultats Les dosages d'ATP montrent qu'il y a une augmentation de la quantité d'ATP intracellulaire de 17 % après 1 heure et de 67% après 3 heures de culture dans des cellules traitées par le peptide SEQ ID N°5, en comparaison des cellules non traitées. 25 Conclusion Le peptide SEQ ID n°5 active fortement la synthèse d'ATP intracellulaire dans les cellules cutanées. 2949198 -15- Exemple 2 : Evaluation de l'effet protecteur du peptide SEO ID n°4 vis-à-vis des dommages oxydatifs Le but de cette étude est de déterminer l'effet protecteur du peptide SEQ ID n°4 vis-à-vis de fibroblastes dermiques soumis à un stress oxydatif provoqué par des rayonnements 5 UVB ou par de l'eau oxygénée (H2O2). Pour évaluer les dommages oxydatifs subis par les cellules, des dosages de la carbonylation des protéines ont été réalisés. La carbonylation des protéines résulte du clivage oxydatif des protéines ou d'une oxydation des résidus arginine, lysine, proline ou thréonine. Le dosage de la carbonylation des protéines s'effectue par une technique EIA (Enzyme Immuno Assay). 10 Protocole Des fibroblastes en culture ont été mis en présence du peptide SEQ ID n°4 à 1 %, d'une solution à 50 ppm, 72 heures avant, pendant, et encore 24 heures après le stress oxydatif (irradiation aux UVB à 50 mJ/cm2 ou traitement par 2 mM d'H2O2). Des contrôles non traités et non soumis au stress oxydatif sont réalisés. 15 La mesure de la carbonylation consiste à utiliser du DNP (dinitrophényl) qui a la propriété de se fixer spécifiquement sur les groupements carbonyles des protéines. Le DNP fixé sera ensuite dosé par une méthode ELISA, grâce à un anticorps anti-DNP couplé à une peroxydase. Une gamme de BSA (bovine sérum albumine) oxydée (dont on connaît la concentration en groupements carbonyles) est utilisée pour l'étalonnage. 20 Résultats Les résultats obtenus montrent une diminution de 30% de la carbonylation des protéines lorsque les cellules sont traitées avec le peptide SEQ ID n°4 selon l'invention, en comparaison avec les cellules non traitées. On observe plus particulièrement une diminution de 20 % de la carbonylation lorsque 25 les cellules traitées avec le peptide SEQ ID n°4 sont soumises à une irradiation par les UVB ou à un stress oxydatif par l'H2O2, par comparaison aux cellules irradiées ou stressées mais non traitées avec le principe actif. Conclusion Le peptide SEQ ID n°4 protège efficacement les cellules cutanées contre les 30 dommages oxydatifs provoqués par des rayonnements UVB ou de l'eau oxygénée. 2949198 -16- Exemple 3 : Evaluation de l'effet protecteur du peptide SEQ ID n°4 vis-à-vis d'un stress induit par la glycation Le but de cette étude est de déterminer l'effet protecteur du peptide SEQ ID n°4, vis-à-vis de culture d'épiderme ex vivo soumises à un stress par un agent glycant. 5 Protocole Des biopsies de peau humaine sont maintenues en culture ex vivo, traitées avec une solution à 1 %, d'une solution mère à 50 ppm de peptide SEQ ID n°4, 24 heures avant, et encore 24 heures après la mise en présence avec un agent glycant (méthyl glyoxal à 5 ou 10 mM). Des coupes et des colorations histologiques hématoxyline-éosine (H&E) 10 permettent d'évaluer la qualité des structures cutanées. Résultats L'évaluation des structures cutanées montrent une nette résistance au stress cellulaire induit par la glycation des biopsies de peau traitées par le peptide SEQ ID n°4. Conclusion 15 Le peptide SEQ ID n°4 protège la peau d'un stress induit par la glycation. Exemple 4 : Evaluation de l'effet du peptide SEQ ID n°11 sur le taux d'expression de l'ARN messager codant pour la sous-unité 1 de la transprényl transférase (PDSS1) Le but de cette étude est de déterminer l'effet du peptide SEQ ID n°11 sur le niveau 20 d'expression de l'ARN messager codant pour la sous-unité 1 de la transprényl transférase, qui est l'enzyme principale dans la biosynthèse du coenzyme Q10. Pour évaluer le niveau d'expression de l'ARN messager de PDSS1, un dosage par PCR en temps réel a été réalisé. Protocole 25 Des kératinocytes humains normaux en culture ont été mis en présence du peptide SEQ ID n°1 1 à 1 %, d'une solution à 100 ppm, durant 24 heures. Des contrôles non traités sont réalisés. La mesure du niveau d'expression de l'ARN messager de PDSS 1 consiste à isoler les ARNs totaux des kératinocytes en culture, traités ou non par le peptide SEQ ID n°11. Les 30 ARNs totaux sont ensuite transformés en ADN complémentaires par l'action d'une 2949198 -17- enzyme transcriptase inverse. Une quantification des ADN complémentaires est ensuite réalisée PCR en temps réel à l'aide d'un thermocycleur StepOnePlusTM (Applied Biosystems). Cette quantification permet de connaitre le taux d'expression des ARNs messagers de PDSS 1. 5 Résultats On observe une augmentation de 44% du taux d'expression de l'ARN messager de PDSS1 lorsque les cellules sont traitées avec le peptide SEQ ID n°11 selon l'invention, comparée aux cellules non traitées. Conclusion 10 Le peptide SEQ ID n°11 augmente très sensiblement le taux d'expression de l'ARN messager codant pour la sous-unité 1 de la transprényl transférase, dans les kératinocytes humains normaux. Exemple 5 : Préparation de compositions 1 - Crème protection solaire: Noms commerciaux I Noms INCI I % massique PHASE A Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Pemulen TRI Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate 0,40 Crosspolymer Glycerine Glycerin 3,00 Nipastat Sodium Sodium Methylparaben (and) Sodium 0,15 Ethylparaben (and) Sodium Butyl paraben (and) Sodium Propylparaben (and) Sodium Isobutylparaben PHASE B Parsol MCX Ethylhexyl Methoxycinnamate 7,50 Eusolex 4360 Benzophenone-3 3,00 Parsol 1789 Butyl Methoxydibenzoylmethane 2,00 Myritol 318 Caprylic/Capric Triglyceride 4,00 Emulgade SEV Hydrogenated Palm Glycerides (and) 5,00 Ceteareth-20 (and) Ceteareth-12 (and) Cetearyl Alcohol Propylparaben Propylparaben 0,15 2949198 -18- Noms commerciaux Noms INCI % massique Nacol 16-98 Cetyl Alcohol 1,00 PHASE C TEA I Triethanolamine 0,20 PHASE D Peptide SEQ ID n° 4 3 ppm Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément entre 70°C et 75°C. La phase B est émulsionnée dans la phase A sous agitation. La phase C est ajoutée, à 45°C, en augmentant l'agitation. La phase D est ensuite additionnée lorsque la 5 température se situe en dessous de 40°C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C sous vive agitation. 2 ûLait après-soleil : Noms commerciaux I Noms INCI % massique PHASE A Montanov L C 14-22 Alcohols (and) C 12-20 3,00 Alkyl Glucoside Waglinol 2559 Cetearyl Isononanoate 4,00 Tegosoft TN C 12-15 Alkyl Benzoate 3,00 Huile de Noyaux d'Abricot Prunus Armeniaca (Apricot) 2,00 Kernel Oil Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,00 Abil 350 Dimethicone 1,00 PHASE B Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp PHASE C 2949198 -19- Noms commerciaux Noms INCI % massique Simulgel EG Sodium 0,4 Acrylate/Acryloyldimethyl Taurate Copolymer (and) Isohexadecane (and) Polysorbate 80 Copolymer (and) Polysorbate 80 PHASE D Phenonip Phenoxyethanol (and) 0,30 Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Ethylparaben and Propylparaben and Buthylparaben Germall 115 Imidazolidinyl Urea 0,20 PHASE E Peptide SEQ ID n° 5 0,1 ppm Préparer la phase A sous agitation. Incorporer la gomme xanthane progressivement, sous agitation défloculeuse. Les phases C et D seront incorporées une fois le gel terminé. La phase E, préparée préalablement jusqu'à parfaite dissolution de la DHA, sera rajoutée 5 ensuite. Ajuster le pH si nécessaire à 4 - 4,5. Colorer et parfumer. 3 ûCrème anti-âge : Noms Noms INCI % commerciaux massique Phase A Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl Glucoside 6,00 Squalane Squalane 3,00 Cetiol SB 45 Butyrospermum Parkii (Shea Butter) 2,00 Waglinol 250 Cetearyl Ethylhexanoate 3,00 Amerchol L- 101 Minerai Oil (and) Lanolin Alcohol 2,00 -20- Noms Noms INCI % commerciaux massique Abil 350 Dimethicone 1,50 BHT BHT 0,01 Phase B Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,25 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben 0,75 (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Phase C Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Glucam E10 Methyl Gluceth-10 1,00 Allantoin Allantoin 0,15 Carbopol Ultrez 10 Carbomer 0,20 Phase D TEA I Triethanolamine 0,18 Phase E Peptide SEQ ID n°4 0,5 ppm ou Peptide SEQ ID 11011 GP4G Water (and) Artemia Extract 1,50 Collaxyl Water (and) Butylene Glycol (and) Hexapeptide-9 3,00 Phase F Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Préparer et fondre la phase A à 65-70°C. Chauffer la phase C à 65-70°C. La phase B est ajoutée à la phase A juste avant d'émulsionner A dans B. A environ 45°C, le carbomer est neutralisé par addition de la phase D. La phase E est ensuite additionnée sous légère 2949198 -21- agitation et le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C. La phase F est alors additionnée si souhaité. 4 ûCrème protectrice de jour : Noms commerciaux Noms INCI % massique Phase A Emulium Delta Cetyl alcohol (and) Glyceryl Stearate (and) PEG- 4,00 75 Stearate (and) Ceteth-20 (and) Steareth-20 Lanette O Cetearyl Alcohol 1,50 D C 200 Fluid/100cs Dimethicone 1,00 DUB 810C Coco Caprylate/Caprate 1,00 DPPG Propylene Glycol Dipelargonate 3,00 DUB DPHCC Dipentaerythrityl Hexacaprylate/Hexacaprate 1,50 Cegesoft PS6 Vegetable Oil 1,00 Vitamine E Tocopherol 0,30 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) 0,70 Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Phase B Eau déminéralisée Aqua qsp 100 Glycerine Glycerin 2,00 Carbopol EDT 2020 Acrylates/C10-30Alkyl Acrylate Crosspolymer 0,15 Keltrol BT Xanthan Gum 0,30 Phase C Sodium Hydroxide (sol.à Sodium Hydroxide 0,30 10%) Phase D 2949198 -22- Eau déminéralisée Aqua 5,00 Stay-C 50 Sodium Ascorbyl Phosphate 0,50 Phase E Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Dekaben CP Chlorphenesin 0,20 Phase F GP4G Water (and) Artemia Extract 1,00 Peptide SEQ ID n°5 5 ppm Préparer la phase A et chauffer à 75°C sous agitation. Préparer la phase B en dispersant le carbopol, puis la gomme xanthane sous agitation. Laisser reposer. Chauffer à 75°C. A température, émulsionner A dans B sous agitation rotor-stator. Neutraliser avec la phase C sous agitation rapide. Après refroidissement à 40°C, additionner la phase D, puis la phase E. Le refroidissement est poursuivi sous agitation légère et la phase F rajoutée. REVENDICATIONS1. Composition cosmétique ou pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient en tant que principe actif, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un peptide, ou un dérivé biologiquement actif de ceux-ci, comprenant de 3 à 8 résidus d'acides aminés, et dont la séquence répond en tout ou en partie à la formule générale (I) : R1-(AA)n X1-X2- X3- X4-X5- X6-(AA)p-R2 Dans laquelle X1 est l'alanine X2 est valine, X3 est la leucineX4 est l'alanine X5 est la glycineX6 est l'alanine, l'acide aspartique, la phénylalanine ou aucun acide aminé. AA représente un acide aminé quelconque, ou un de ses dérivés, et n et p sont des nombres entiers compris entre 0 et 4, AA représente un acide aminé quelconque, ou un de ses dérivés, et n et p sont des nombres entiers compris entre 0 et 4, R1 représente la fonction amine primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle. R2 représente le groupe hydroxyle de la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal, libre ou substitué par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi une chaîne alkyle de C1 à C20, ou un groupement NH2, NHY ou NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de C 1 à C4. 2. Composition cosmétique ou pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que le peptide de formule générale (I) correspond à une des séquences suivantes : (SEQ ID n°4) Ala-Val-Leu-Ala-Gly-Asp-NH2 (SEQ ID n°5) Ala-Val-Leu-Ala-Gly-Asp (SEQ ID n°6) Ala-Val-Leu-Ala-Gly (SEQ ID n°11) Ala-Val-Leu-Ala-Gly-NH2 2949198 -24- 3. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le principe actif est présent dans la composition à une concentration comprise entre 0,0005 et 500 ppm environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 et 5 ppm. 5 4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le principe actif est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables, comme l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols 10 éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme adaptée à l'application par voie topique 15 comprenant un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable. 6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle contient, en outre, au moins un autre principe actif antioxydant et/ou au moins un principe actif stimulant la synthèse de la matrice extracellulaire, et/ou au 20 moins un principe actif stimulant le métabolisme cellulaire énergétique. 7. Utilisation d'une quantité efficace de principe actif, tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique. 8. Utilisation d'une quantité efficace de principe actif, tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à augmenter la synthèse d'ATP intracellulaire des cellules de la peau. 9. Utilisation d'une quantité efficace de principe actif, tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à augmenter l'activité ou la 25 30 2949198 -25- synthèse d'enzyme transprényl transférase et/ou de coenzyme Q10 dans les cellules de la peau. 10. Utilisation d'une quantité efficace de principe actif, tel que défini dans l'une 5 quelconque des revendications 1 à 3, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à protéger la peau et les phanères contre tous les types d'agressions extérieures. 11. Utilisation d'une quantité efficace de principe actif, tel que défini dans l'une 10 quelconque des revendications 1 à3, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou à traiter les dommages causés à la peau et aux phanères par les rayonnements UV. 12. Utilisation d'une quantité efficace de principe actif, tel que défini dans l'une 15 quelconque des revendications 1 à 3, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à protéger la peau et les phanères des dommages oxydatifs. 13. Utilisation d'une quantité efficace de principe actif, tel que défini dans l'une 20 quelconque des revendications 1 à 3, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou à traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement. 14. Utilisation d'une quantité efficace de principe actif, tel que défini dans l'une 25 quelconque des revendications 1 à 3, pour préparer des compositions pharmaceutiques destinées à prévenir ou à lutter contre les pathologies liées aux processus d'oxydation. 15. Procédé de traitement cosmétique destiné à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et à lutter contre le vieillissement cutané, caractérisé en ce que 30 l'on applique topiquement sur la peau ou les phanères à traiter une composition telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.