Brevet FR2957803A1 — publié le 20110930

La présente invention concerne un procédé de préparation d'une composition vaccinale injectable destinée à combattre le syndrome dysgénésique et respiratoire (SDRP) chez les espèces porcines Le syndrome dysgénésique et respiratoire du porc (SDRP) est une infection virale qui touche principalement les porcs domestiques, et qui a également déjà été diagnostiqué chez des sangliers. La nature et la gravité des troubles dépendent de l'âge, du sexe, des conditions dans lesquelles les porcs sont élevés ainsi que de la souche du virus. Les gros dommages causés par le SDRP sont essentiellement dus aux troubles de la fertilité et aux affections pulmonaires propres à cette maladie. Une fièvre passagère et des problèmes respiratoires dus à une pneumonie sont les symptômes caractéristiques du SDRP. Le manque d'oxygène causé par la détresse respiratoire peut provoquer une cyanose au niveau des oreilles, du ventre et des extrémités. Les paupières sont enflées et on observe un écoulement oculaire aqueux. Dans les exploitations d'engraissement, c'est le faible rendement à l'engraissement dû aux pneumonies qui cause le plus de problèmes, alors que les troubles de la fertilité sont naturellement au premier plan dans les exploitations d'élevage. Dans ces dernières, jusqu'à 50% des portées peuvent subir d'importantes pertes. Les virus, inhalés ou avalés, se propagent d'abord dans les cellules du poumon et les amygdales du pharynx, puis dans tout l'organisme. Les virus peuvent alors être excrétés par les voies les plus diverses : sécrétions nasales, excréments, urine, semence, foetus mort-nés. Dans les porcheries, la maladie se propage par contact direct avec du matériel infectieux ou par inhalation de gouttelettes infectieuses. La propagation est beaucoup plus rapide en cas de stress et de densité élevée des animaux. L'agent infectieux pouvant survivre longtemps dans un animal infecté, les porcs restent contagieux même guéris. Le virus peut aussi être propagé par des oiseaux, des insectes comme par exemple des mouches, ou par des personnes (habits, mains non lavées, équipement, etc...). Des vaccins, aussi bien vivants qu'inactivés, ont été mis au point pour une utilisation chez les truies et les porcelets. La vaccination consiste à inoculer à l'espèce à protéger une quantité de pathogène tué (vaccin inactivé) ou rendue non pathogène (vaccin vivant atténué) afin de déclencher une réponse biologique chez l'hôte, le protégeant lors de la survenue ultérieure de la maladie. Les vaccins vivants sont généralement suffisamment efficaces pour ne pas nécessiter l'utilisation d'adjuvants. Un adjuvant de vaccin est un excipient amplifiant la réponse biologique contre l'antigène auquel il est associé. On citera par exemple l'hydroxyde d'aluminium, les adjuvants huileux commercialisés sous l'appellation MontanideTM par la société SEPPIC. Ces adjuvants sont de natures diverses. Ils peuvent aussi bien consister en des liposomes, en des émulsions comprenant au moins une phase huile et au moins une phase aqueuse, du type adjuvants dits de Freund ou, de manière plus courante en des sels minéraux insolubles dans l'eau. Parmi les sels minéraux utilisés comme adjuvants de compositions vaccinales, on peut citer par exemple l'hydroxyde d'aluminium, le nitrate de cérium, le sulfate de zinc, l'hydroxyde de fer colloïdal ou le chlorure de calcium. L'hydroxyde d'aluminium est l'adjuvant le plus couramment utilisé. Ces sels minéraux utilisés comme adjuvants de compositions vaccinales sont décrits notamment dans l'article de Rajesh K. Gupta et al "Adjuvants, balance between toxicity and adjuvanticity", Vaccine, vol. 11, Issue 3, 1993, pages 993-306. Dans le cas du SDRP, des vaccins, aussi bien vivants qu'inactivés, ont été mis au point pour une utilisation chez les truies et les porcelets. a) Les vaccins inactivés sont en général destinés à la vaccination des truies. b) Les vaccins vivants sont surtout utilisés chez les porcelets charcutiers contre les troubles respiratoires, mais récemment, un enregistrement a également été obtenu pour la prévention des troubles de la reproduction chez les truies. Certains vaccins vivants se multiplient longtemps dans les poumons des porcelets vaccinés, et certaines souches de vaccins vivants pourraient engendrer une infection transplacentaire. Aussi, on comprend le danger de vacciner des truies gestantes n'ayant jamais été en contact auparavant avec le virus SDRP. Il n'est pas rare cependant qu'on utilise des vaccins vivants pour susciter une infection avec un virus atténué, afin d'induire une immunité collective en bas âge (porcelets âgés de 3 à 4 semaines) et/ou d'homogénéiser le statut immunitaire des truies non gestantes. Parmi les vaccins vivants développés et commercialisés pour lutter contre le SDRP, on peut citer par exemple le vaccin AMERVAC-PRRS/A3 commercialisé par Hipra Lab., le vaccin INGELVAC PRRS Modified Live Virus commercialisé par Boehringer Ingelheim, le vaccin PORCILIS PRRS commercialisé par Intervet. Devant la survenue d'épidémies résistant à l'utilisation des vaccins vivants classiques, comme dans le cas du SDRP, différentes techniques adjuvantes ont été testées, afin de : • augmenter l'intensité de la réponse protectrice permettant d'assurer un meilleur niveau de protection ; • prolonger la durée de la protection conférée par une dose de vaccin, assurant une protection plus durable des animaux dans les élevages tout au long de leur croissance ; • assurer une protection suffisante avec un seul traitement quand deux traitements étaient nécessaires en absence de ces amplificateurs de réponse immunitaire. Le gain est alors dans le nombre de doses à injecter (divisé par deux), la manipulation des animaux (main d'oeuvre) et le stress généré lors de la manipulation des animaux (divisé aussi par deux) ; • obtenir, avec une dose antigénique moindre, une efficacité équivalente à celle conférée par une dose complète utilisée sans adjuvant. Ainsi, une entité de production de vaccins se verra, avec une même capacité productive, capable de produire un nombre supérieur de doses de vaccins. De même, un conditionnement existant pourra être proposé pour vacciner un plus grand nombre d'animaux. Il existe un besoin de développer des diluants qui possèdent également la fonction adjuvante pour améliorer la réponse immunitaire telle que décrite ci-dessus. On nomme ces compositions des Diluants Adjuvants (DA). La difficulté principale rencontrée dans le développement d'un DA est la faculté dudit diluant adjuvant (DA) à préserver vivant le vaccin vivant pour qu'il conserve ses propriétés immunogènes. Un élément important du développement d'adjuvants pour les vaccins vivants réside dans la spécificité des formulations adjuvantes à ne pas tuer les micro-organismes vivants constituant les antigènes vaccinaux lors de leur mise en contact avant injection. Des DA existent sur le marché (comme par exemple l'acétate de tocophérol de la société Intervet compris dans le Diluvac Forte®) et sont recommandés pour certains vaccins vivants. De plus un vaccin vivant est connu dans la demande de brevet français FR 2385401. Toutefois, ce vaccin vivant n'est pas préparé avec des substances adjuvantes. Il a jusqu'ici été tenu pour acquis que la réponse immunitaire plus importante pourrait être réalisée avec un vaccin vivant, par exemple, en augmentant la teneur en virus, ou en utilisant une souche plus immunogène. Selon la présente invention une méthode de préparation d'un vaccin à virus vivant a été trouvée, qui est caractérisée en ce que le vaccin vivant est préparé par le biais d'un adjuvant du type émulsion à phase continue aqueuse, par exemple une émulsion ou micro émulsion eau dans huile. Il a étonnamment été constaté que l'utilisation d'une émulsion huile dans eau (H / E) comme "diluant" pour vaccins vivants a un effet positif sur la réponse sérologique et immunitaire chez les animaux vaccinés. Dans cette émulsion huile- dans-l'eau, la phase aqueuse externe permet au vaccin (en général lyophilisé) d'être facilement dissous. Un autre aspect de l'invention est que l'utilisation de l'émulsion huile dans eau comme diluant adjuvant pour les vaccins vivants provoque une réponse sérologique très élevée chez les jeunes animaux ayant encore l'immunité maternelle. Cet effet surprenant peut être causé par l'action protectrice de l'émulsion sur le virus vivant contre la neutralisation par les anticorps présents chez l'animal. Un but de la présente invention est de pallier tout ou partie des inconvénients de l'art antérieur relevés ci-dessus. A cette fin, la présente invention a pour objet un procédé de préparation d'une composition vaccinale injectable destinée à combattre le syndrome dysgénésique et respiratoire (SDRP) chez les espèces porcines comprenant au moins l'étape : - mélange d'un vaccin vivant extemporanément avec un diluant adjuvant (DA) ; caractérisé en ce que ledit diluant adjuvant est une émulsion de type huile dans eau ou une microémulsion de type huile dans eau, ou une solution aqueuse comprenant de l'eau et au moins un sel minéral choisi parmi l'hydroxyde d'aluminium, le nitrate de cérium, le sulfate de zinc, l'hydroxyde de fer colloïdal ou le chlorure de calcium les sels de métaux divalents ou trivalents ou encore de composés sympathomimétiques. Par diluant on entend une substance à ajouter à une autre pour diminuer son titre, sa richesse, ou son pourcentage. Par ailleurs, des modes de réalisation de l'invention peuvent comporter l'une ou plusieurs des caractéristiques suivantes : Procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que le diluant adjuvant (DA) comprend un adjuvant, une phase aqueuse et optionnellement un polymère de la famille des polyacrylates de sodium. Procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que le virus contenu dans ledit vaccin vivant est lyophilisé avant l'étape a). Procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que ledit diluant adjuvant est une émulsion de type huile dans eau comprenant pour 100% de sa masse : - de 99% à 50% massique d'eau, plus particulièrement de 99% à 75% massique d'eau, et encore plus particulièrement de 90% à 80% massique d'eau ; - de 1% à 50% massique d'adjuvant huileux, plus particulièrement de 1% à 25% massique d'adjuvant huileux, et encore plus particulièrement de 5% à 19% massique d'adjuvant huileux. Procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que le diluant adjuvant comprend en outre de 0,25% à 5% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium, plus particulièrement de 0,2% à 4% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium, et encore plus particulièrement de 0,3% à 3% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium. Procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que ledit diluant adjuvant est une micro-émulsion de type huile dans eau comprenant pour 100% de sa masse : - de 99% à 50% massique d'eau, plus particulièrement de 99% à 75% massique d'eau, et encore plus particulièrement de 90% à 80% massique d'eau ; - de 10/0 à 50% massique d'adjuvant huileux, plus particulièrement de 1% à 25% massique d'adjuvant huileux, et encore plus particulièrement de 5% à 19% massique d'adjuvant huileux. Procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que le diluant adjuvant comprend en outre de 0,25% à 5% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium, plus particulièrement de 0,2% à 4% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium, et encore plus particulièrement de 0,3% à 3% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium. Procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que ledit adjuvant huileux comprend pour 100% de sa masse : de 1% à 95% massique d'au moins une huile minérale, plus particulièrement de 10% à 90% massique d'au moins une huile minérale, et encore plus particulièrement de 20% à 90% massique d'au moins une huile minérale; et de 1% à 80% massique d'au moins un tensioactif, plus particulièrement de 2% à 70% massique d'au moins un tensioactif, et encore plus particulièrement de 10% à 45% massique d'au moins un tensioactif. Procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que ledit diluant adjuvant est une solution aqueuse comprenant pour 100% de sa masse: - de 99,5% à 95,0% massique d'eau, plus particulièrement de 99,5% à 97,0% massique d'eau, et encore plus particulièrement de 99,0% à 97,0% massique d'eau ; - de 0,5% à 5,0% massique de sels minéraux, plus particulièrement de 0,5% à 3,0% massique de sels minéraux, et encore plus particulièrement de 1,0% à 3,0% massique de sels minéraux. Procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que la solution aqueuse comprend pour 100% de sa masse: - de 1% à 15% massique, plus particulièrement de 1% à 10% massique, encore plus particulièrement de 1% à 5% massique d'au moins un tensioactif ; - de 1% à 25% massique, plus particulièrement de 1% à 10% massique, encore plus particulièrement de 1% à 5% massique d'au moins une huile minérale ; - de 40% à 97% massique d'eau, plus particulièrement de 50% à 95% massique d'eau, et encore plus particulièrement de 75 % à 90% massique d'eau ; - de 0,1 % à 5% massique de sels minéraux, plus particulièrement de 0,2% à 4% massique de sels minéraux, et encore plus particulièrement de 0,5% à 3% massique de sels minéraux. Les vaccins vivants sont généralement conservés lyophilisés et doivent être remis en suspension de façon extemporanée avec une phase aqueuse. Le vaccin ainsi reconstitué devant être utilisé dans les heures qui suivent l'ajout d'un diluant. Les huiles minérales utilisées pour la préparation des adjuvants huileux sont sélectionnées dans le groupe constitué par les huiles minérales, hydrocarbures, obtenues par distillation du pétrole et par la mise en oeuvre d'étapes de traitement subséquentes comme par exemple les étapes de désulfurisation, de désasphaltage, d'extraction des composés aromatiques, d'extraction des cires, et autres étapes de traitement de finition (on peut citer par exemple les huiles du type MARCOL 52, MARCOL 82, DRAKEOL 5 ET DRAKEOL 6, ...). Les tensioactifs présents dans les adjuvants huileux sont des tensioactifs émulgateurs, présentant un caractère hydrophile caractérisé par une valeur HLB comprise entre 8 et 19, plus particulièrement comprise entre 8 et 15. Un tel tensioactif peut consister en un alkylpolyglycoside ou un mélange d'alkylpolyglycosides ; des saponines ; des lécithines ; des alcanols polyoxyéthylés ; des polymères comprenant des blocs polyoxyéthylènes et polyoxypropylènes ; des esters obtenus par condensation d'un acide gras, avantageusement un acide gras liquide à 20°C avec un sucre, du sorbitol, du mannitol ou du glycérol. Ledit sucre peut consister en du glucose ou du saccharose ou, de préférence, mannitol. A titre d'esters préférés, on peut citer les esters d'acides gras, comme par exemple l'acide oléique, l'acide stéarique, l'acide palmitique, l'acide laurique, et de sorbitol ou de mannitol, obtenus par estérification de l'acide gras avec le sorbitol ou le mannitol, ou bien par estérification avec les produits résultant de l'anhydrisation de la chaîne polyhydroxylée du sorbitol ou du mannitol qui se cyclise en position 1-4 ou en position 2-6, ou bien par estérification avec le sorbitol ou le mannitol et avec les produits résultant de l'anhydrisation de la chaîne polyhydroxylée du sorbitol ou du mannitol qui se cyclise en position 1-4 ou en position 2-6. Comme esters de mannitol particulièrement préférés, on peut citer les oléates de mannitol, les oléates de mannitan, les oléates de mannitol éthoxylés à 5 moles ou 10 moles ou 15 moles ou 20 moles d'oxyde d'éthylène, les oléates de mannitan éthoxylés à 5 moles ou 10 moles ou 15 moles ou 20 moles d'oxyde d'éthylène. Des dérivés d'esters de sucre de polyéthylèneglycol, de sorbitol ou de glycérol peuvent être également mis en oeuvre. Les autres types de tensioactifs préférés consistent en des huiles végétales éthoxylées, comme par exemple des huiles de maïs éthoxylées ayant entre 3 moles et 40 moles d'oxyde d'éthylène, des huiles de colza éthoxylées ayant entre 3 moles et 40 moles d'oxyde d'éthylène, des huiles de ricin éthoxylées ayant entre 3 moles et 60 moles d'oxyde d'éthylène. EXEMPLES La compatibilité des formules adjuvantes avec la viabilité des vaccins lyophilisés est liée à la composition de cette formule adjuvante et à son taux d'utilisation. La sélection de constituants biocompatibles combinés dans des proportions assurant une bonne mise en oeuvre et un pouvoir adjuvant a été effectuée puis évaluée dans des protocoles d'études quantitatives. L'effet adjuvant a ensuite été évalué sur un élevage de porcs mis en contact avec la maladie ; différents groupes ayant reçus différents vaccins ; l'effet protecteur a été mesuré par quantification : - des titres anticorps spécifiques anti SDRP dans les prélèvements sanguins effectués après la vaccination ; - des lésions pulmonaires caractéristiques des sur-infections bactériennes liées à la pathogénie de SDRP ; - de la persistance de la fièvre suite à l'épreuve virulente. ETUDE 1 : VIABILITE DU VACCIN VIVANT La quantification de l'effet virucide est effectuée selon une méthode permettant de quantifier la quantité de virus restant vivant pendant une période suivant la redilution adaptée à l'utilisation et aux contraintes réglementaires (comme par exemple les pharmacopées européennes ou américaines). Le lyophilisat de vaccins vivants est mis en contact avec le DA contenant différents taux de différents adjuvants, pendant une période fixe. La quantification de virus après la mise en contact permet de déterminer le caractère virucide du DA. Les résultats de l'essai de virucidie sont comparés à la viabilité, dans les mêmes conditions, d'une suspension du lyophilisat avec de l'eau pure. Un DA est jugé non virucide si le rapport de la concentration finale sur la concentration initiale en virus est inférieur ou égal à 7. En réalité inférieur à 0,7 dans notre cas car les valeurs sont exprimées en logarithme. a) Produits objets de l'étude. Les adjuvants (ADJ) mis en oeuvre pour préparer les DA huileux présentent les compositions massiques suivantes pour 100% de leur masse : ADJ 1 : Oléate de mannitan = 40 % massique Marcol 52 = 60 % massique ADJ 2 : Oléate de sorbitan = 30 % massique Marcol 52 = 70 % massique ADJ 3 : Oléate de mannitan = 15 % massique Marcol 52 = 85 % massique 30 ADJ 4 : Oléate de sorbitan = 15 % massique Marcol 52 = 85 % massique 35 Différents Diluants Adiuvants testés (proportions massiques de chacun des constituants pour 100% de la masse de DA) : Diluant DA11 DAl2 DA13 DA14 DA15 DA16 DA17 DA18 Adjuvant Eau 95 % 90% 85% 80% 75% 70% 50% 45% Adjuvant 1 5 % 5 % 15% 15% 25% 25% 50% 50% Polymère 0% 5% 0% 5% 0% 5% 0% 5% Tableau 1 Diluant DA21 DA22 DA33 DA24 DA25 DA26 DA27 DA28 Adjuvant Eau 95 % 90% 85% 80% 75% 70% 50% 45% Adjuvant 2 5 % 5 % 15% 15% 25% 25% 50% 50% Polymère 0% 5% 0% 5% 0% 5% 0% 5% Tableau 2 Diluant DA31 DA32 DA33 DA34 DA35 DA36 DA37 DA38 Adjuvant Eau 95 % 90% 85% 80% 75% 70% 50% 45% Adjuvant 3 5 % 5 % 15% 15% 25% 25% 50% 50% Polymère 0% 5% 0% 5% 0% 5% 0% 5% Tableau 3 Diluant DA41 DA42 DA43 DA44 DA45 DA46 DA47 DA48 Adjuvant Eau 95 % 90% 85% 80% 75% 70% 50% 45% Adjuvant 4 5 % 5 % 15% 15% 25% 25% 50% 50% Polymère 0% 5% 0% 5% 0% 5% 0% 5% 10 Tableau 4 Diluant DA51 DA52 DA53 Adjuvant Eau 95 % 85% 75% Adjuvant 0 % 0 % 0% Polymère 5% 15% 25%5 Le Polymère utilisé dans la préparation des DA ci-dessus est un polyacrylate de sodium, pouvant se présenter sous la forme d'une poudre ou bien d'un latex inverse tel que celui présent dans la composition commercialisée sous l'appellation MONTANIDETMGEL. Les résultats de virucidie des différents diluants adjuvants sont présentés dans le tableau 6. Diluant Adjuvant Effet virucide selon pharmacopée américaine 9cfr113.35 DA11 0.12 DAl2 0.08 DA13 0.332 DA14 0.34 DA15 0.45 DA16 0.52 DA21 0.14 DA22 0.11 DA23 0.27 DA24 0.35 DA25 0.48 DA26 0.58 DA37 1.77 DA38 1.82 DA47 2.39 DA48 2.19 DA51 0.12 DA52 0.08 DA53 1.52 Tableau 6 : Effets virucides des diluants adjuvants testés 10 Les résultats de l'essai de virucidie du tableau 6 sont comparés à la viabilité, dans les mêmes conditions, d'une composition résultant de la remise en suspension du lyophilisat d'antigène (le lyophilisat en question est le virus du SDRP lyophilisé, La quantité de virus injectée dans la vaccination sans adjuvant est 104 TCID 50/dose 15 de 2 ml (« tissue infective dose » 50% / dose de virus modifiant 50% des cellules dans des essais in vitro normalisés) avec de l'eau pure.5 Interprétation : Les DA11, DAl2, DA13, DA14, DA15, DA16, DA21, DA22, DA23, DA24, DA25, DA26, comprenant de 5% à 25% d'adjuvant 1 et 2 , les DA51 et DA52 comprenant 5 de 5% à 15% de polymères se révèlent non virucides. ETUDE 2 : EFFICACITE DES VACCINS ADJUVES DANS LE PORC Des porcs non contaminés par le SDRP sont vaccinés avec différents DA en conservant le même lyophilisat de vaccin vivant (virus SDRP). Ce lyophilisat 10 correspond à un vaccin commercial vendu pour être dilué dans de l'eau. Certain vaccins sont préparés avec seulement 50% de la dose virale mais en présence de DA. Des groupes de 10 porcs reçoivent une injection de vaccin à l'âge de 4 semaines. Une épreuve virulente par mise en contact avec un virus SDRP pathogène est 15 réalisée à l'âge de trois mois. Les animaux sont abattus trois semaines après l'épreuve virulente. L'efficacité des vaccins est quantifiée par : • le suivi des titres anticorps spécifiques anti PRRS dans les prélèvements sanguins effectués après la vaccination ; • la durée de la fièvre induite par l'épreuve virulente ; 20 • les lésions observées sur les poumons après autopsie. Les Diluants Adjuvants DA I et DA II ont été préparés pour être testés. DA I (composition massique): 25 - Adjuvant 1 (ADJ 1) = 15% - Eau = 85% DA II (composition massique): - Adjuvant 1 (ADJ 1) = 1% - Eau = 95% 30 - Carbopol 971 (Polyacrylate de sodium) = 4% Les résultats pour les groupes vaccinés avec DA I (Groupe I) et DA II (Groupe II) ont été comparés avec les résultats obtenus dans les mêmes conditions qu'un groupe vacciné avec un vaccin mis en suspension dans l'eau sans adjuvant 35 (Groupe T), qu'un groupe non vacciné mais éprouvé (Groupe NV) et qu'un groupe sentinelle, qui ne reçoit pas de vaccin ni d'épreuve de virulence pour vérifier qu'une épidémie ne vient pas perturber l'essai (Groupe SE). Groupes Group Groupe I Groupe T Groupe II Groupe I Control for Groupe SE vaccinaux e Il virulent PRRS virus (Groupe NV) °la de la 100% 100% 100% 50% 50% charge antigèn antigène antigène antigène antigène virale e Animaux séroconverti 10/10 10/10 10/10 10/10 10/10 0/10 0/5 s (i.e: ayant développé une réponse immunitaire) Anticorps 1.566 1.735 1.520 1.768 1.347 0.010 0.010 avant vaccine ±0.255 ±0.386 ±0.404 ±0.641 ±0.976 ±0.00 ±0.00 (DO, ELISA) Tableau 7 : Titres anticorps 90 jours après vaccination (avant épreuve virulente) et animaux séroconvertis en fonction des groupes vaccinaux. • Résultats du suivi des titres anticorps spécifiques anti SDRP dans les prélèvements sanguins effectués après la vaccination : Les résultats de titres anticorps à 90 jours après vaccination sont présentés dans le tableau 7. Tous les animaux vaccinés ont été séroconvertis et les titres anticorps sont similaires pour tous les groupes, sans différence significative. Les groupes sentinelle et témoin non vaccinés sont indemnes. • Résultats sur la durée de la fièvre induite par l'épreuve virulente : Lors de l'épreuve virulente, un pic de température est généralement observé. Des animaux vaccinés protégés retrouvent généralement plus rapidement une température normale grâce à l'immunité développée préalablement grâce à la vaccination. Groupes Groupe Groupe I Groupe Groupe Groupe Control Groupe vaccinaux II T II I for SE virulent PRRS virus (Groupe NV) 0/0 de la 100% 100% 100% 50% 50% charge antigène antigène antigène antigène antigène virale Durée 5.2±2.3 4.1±1.4 6.3±2.8 6.2±2.8 6.4±2.5 10.7±1.8 0 moyenne d e I a fièvre post vaccin (jours) Tableau 8: Durée moyenne de fièvre (en jour) après épreuve virulente des groupes de dix animaux ayant reçu les différents vaccins. Le groupe non vacciné (Groupe NV) présente une durée de fièvre d'environ 10 jours. Les groupes (I) et (II) vaccinés avec 50% d'antigène ainsi que le groupe vacciné avec le vaccin témoin (groupe T) commercial, présentent une durée de fièvre d'environ 6 jours. Les groupes (I) et (II) vaccinés avec 100% d'antigène présentent une durée de fièvre réduite de 4 jours (Groupe I) et de 5 jours (Groupe II). Le groupe sentinelle ne présente pas d'hyperthermie. • Résultats sur les lésions observées sur les poumons après autopsie : Les taux de lésions observées sur les différents poumons après autopsie sont présentés dans le tableau 9. Groupes Groupe II Groupe I Groupe T Groupe II Groupe I Contrai for Groupe vaccinaux virulent SE PRRS virus (Groupe NV) °la de la 100% 100% 100% 50% 50% charge antigène antigène antigène antigène antigène virale Lesions 2.63±1.94 1.60±1.72 12.04±17.84 4.84±8.18 5.58±7.25 18.41±22.79 0.44±0.49 pulmonaires (%) Tableau 9: lésions pulmonaires induites par l'épreuve virulente sur les différents groupes à l'abattage. Le groupe non vacciné (Groupe NV) présente le plus haut taux de lésion de 18, avec un écart type de 22, indiquant de fortes lésions mais hétérogènes. Le groupe T, vacciné avec le vaccin commercial ne comprenant pas d'adjuvant, donne un taux de 12 avec un écart type de 18. Les groupes (I) et (II) vaccinés avec une charge virale à 50% d'antigène donnent 10 des taux d'environ 5 avec un écart type de 8. Les groupes (I) et (II) vaccinés avec une charge virale à 100% d'antigène donnent les scores les plus faibles (environ 2 avec un écart type de 2). Un faible écart type indique une bonne homogénéité de réponse. Dans le cas des groupes (I) et (II), c'est à dire les groupes vaccinés avec 15 respectivement les diluants adjuvants DA I et DA II, les susceptibilités individuelles des animaux ont été atténuées en harmonisant les niveaux de réponse. Ce point est très important pour éviter que quelques animaux infectés ne maintiennent des foyers continus de propagation par excrétion de virus tout au long de l'élevage. 20 Conclusion des essais expérimentaux : Ces résultats expérimentaux démontrent clairement que l'utilisation d'adjuvants de type 1 et 2, pour préparer des Diluants Adjuvants de type DA I et DAII (avec ou sans polymère) améliore l'efficacité du vaccin sur les critères de durée de l'hyperthermie et protection de l'intégrité des poumons ; les résultats sont très 25 nettement meilleurs par rapport à un vaccin commercial utilisant l'eau comme diluant au lieu d'un DA contenant l'Adjuvant 1 ; les résultats obtenus avec seulement 50% de la charge antigénique, mais avec les DA, sont meilleurs que le vaccin commercial. REVENDICATIONS1. Procédé de préparation d'une composition vaccinale injectable destinée à combattre le syndrome dysgénésique et respiratoire (SDRP) chez les espèces porcines comprenant au moins l'étape : a) mélange d'un vaccin vivant extemporanément avec un diluant adjuvant (DA) ; caractérisé en ce que ledit diluant adjuvant est une émulsion de type huile dans eau ou une microémulsion de type huile dans eau, ou une solution aqueuse comprenant de l'eau et au moins un sel minéral choisi parmi l'hydroxyde d'aluminium, le nitrate de cérium, le sulfate de zinc, l'hydroxyde de fer colloïdal ou le chlorure de calcium les sels de métaux divalents ou trivalents ou encore de composés sympathomimétiques. 2. Procédé selon la revendication précédente caractérisé en ce que le 15 diluant adjuvant (DA) comprend un adjuvant, une phase aqueuse et optionnellement un polymère de la famille des polyacrylates de sodium. 3. Procédé selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que le virus contenu dans ledit vaccin vivant est lyophilisé avant l'étape a). 4. Procédé selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que ledit diluant adjuvant est une émulsion de type huile dans eau comprenant pour 100% de sa masse : - de 99% à 50% massique d'eau, plus particulièrement de 99% à 75% massique d'eau, et encore plus particulièrement de 90% à 80% massique d'eau ; - de 1% à 50% massique d'adjuvant huileux, plus particulièrement de 1% à 25% massique d'adjuvant huileux, et encore plus particulièrement de 5% à 19% massique d'adjuvant huileux. 30 5. Procédé selon la revendication 4 caractérisé en ce que le diluant adjuvant comprend en outre de 0,25% à 5% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium, plus particulièrement de 0,2% à 4% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium, et encore plus 35 particulièrement de 0,3% à 3% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium. 20 25 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisé en ce que ledit diluant adjuvant est une micro-émulsion de type huile dans eau comprenant pour 100% de sa masse : - de 99% à 50% massique d'eau, plus particulièrement de 99% à 75% massique d'eau, et encore plus particulièrement de 90% à 80% massique d'eau ; - de 1% à 50% massique d'adjuvant huileux, plus particulièrement de 1% à 25% massique d'adjuvant huileux, et encore plus particulièrement de 5% à 19% massique d'adjuvant huileux. 7. Procédé selon la revendication 6 caractérisé en ce que le diluant adjuvant comprend en outre de 0,25% à 5% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium, plus particulièrement de 0,2% à 4% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium, et encore plus particulièrement de 0,3% à 3% massique de polymères de la famille des polyacrylates de sodium. 8. Procédé selon l'une des revendications 4 à 7, caractérisé en ce que ledit adjuvant huileux comprend pour 100% de sa masse : de 1% à 95% massique d'au moins une huile minérale, plus particulièrement de 10% à 90% massique d'au moins une huile minérale, et encore plus particulièrement de 20% à 90% massique d'au moins une huile minérale ; et de 1% à 80% massique d'au moins un tensioactif, plus particulièrement de 2% à 70% massique d'au moins un tensioactif, et encore plus particulièrement de 10% à 45% massique d'au moins un tensioactif. 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ledit diluant adjuvant est une solution aqueuse comprenant pour 100% de sa masse: - de 99,5% à 95,0% massique d'eau, plus particulièrement de 99,5% à 97,0% massique d'eau, et encore plus particulièrement de 99,0% à 97,0% massique d'eau ; - de 0,5% à 5,0% massique de sels minéraux, plus particulièrement de 0,5% à 3,0% massique de sels minéraux, et encore plus particulièrement de 1,0% à 3,0% massique de sels minéraux. 10. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que la 35 solution aqueuse comprend pour 100% de sa masse: - de 1% à 15% massique, plus particulièrement de 1% à 10% massique, encore plus particulièrement de 1% à 5% massique d'au moins un tensioactif ;- de 1% à 25% massique, plus particulièrement de 1% à 10% massique, encore plus particulièrement de 1% à 5% massique d'au moins une huile minérale ; - de 40% à 97% massique d'eau, plus particulièrement de 50% à 95% massique d'eau, et encore plus particulièrement de 75 % à 90% massique d'eau ; - de 0,1 % à 5% massique de sels minéraux, plus particulièrement de 0,2% à 4% massique de sels minéraux, et encore plus particulièrement de 0,5% à 3% massique de sels minéraux.