Brevet FR2958164A1 — publié le 20111007

UTILISATION COSMETIQUE ANTI-STRESS ET ANTI-AGE D'UN PRINCIPE ACTIF ISSU DE CALICES DE DIOSPYROS KAKI, PRINCIPE ACTIF, PROCEDE D'OBTENTION ET COMPOSITIONS La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'un principe actif issu de calices de Diospyros kaki pour un effet cosmétique anti-stress et anti-âge ainsi qu'à un procédé cosmétique de soin destiné à protéger la peau humaine et à prévenir le vieillissement cutané. L'invention se rapporte également à un principe actif anti-stress et anti-âge particulier issu de calices de Diospyros kaki, à un procédé d'obtention ainsi qu'à des compositions anti-stress et anti-âge renfermant cet actif. Le stress est omniprésent dans nos sociétés actuelles. Il se manifeste chez un individu par un ensemble de réactions physiologiques et psychologiques de l'organisme, lorsque celui-ci est soumis à un changement ou à une contrainte. Bien qu'ayant souvent une connotation négative, le stress est en fait une réponse de l'organisme pour maintenir l'équilibre biologique dans un état fonctionnel. C'est un mécanisme qui permet aux individus de s'adapter à toutes modifications physiques, sociales et/ou psychiques de leur environnement. Comme le reste de l'organisme, l'enveloppe corporelle possède également un système d'adaptation au stress pour faire face aux diverses agressions extrinsèques ou intrinsèques qui l'affectent et maintenir ses fonctions biologiques face à son environnement. Tout se passe comme si la peau avait un capital stress, qui lorsqu'il est épuisé conduit à la modification de ses paramètres et à son vieillissement. La sénescence des cellules cutanées à l'origine du vieillissement de la peau peut en effet être déclenchée prématurément par divers agents stressants environnementaux, biologiques ou mécaniques. On parle d'état de « sénescence prématurée induite par un stress » ou SIPS. En outre, un stress psychologique peut également avoir un retentissement cutané. On sait que la peau, le système nerveux et le système immunitaire sont associés à la fois physiologiquement et anatomiquement dans le cadre d'un système dit « neuro-immuno-cutané ». Intimement liés par un ensemble de sécrétions biochimiques, le dialogue entre cerveau et peau est permanent. Lorsque le cerveau ressent un stress psychologique, la peau répond par un manque d'éclat et une grise mine. Depuis plusieurs années, l'industrie de la cosmétique et de la beauté s'est particulièrement attachée au phénomène du stress en proposant des produits aux objectifs variés, visant la protection de la peau contre les agressions environnementales, la stimulation du bien-être via les molécules de plaisir ou encore la multiplication des instituts et spas pour retrouver un état de relaxation et de sérénité. Mais, au delà de l'aspect du bien-être, il faut considérer le stress comme un des responsables majeurs de l'atteinte des paramètres cutanés accélérant inévitablement le vieillissement. C'est pourquoi l'objectif de la présente invention est de proposer une solution cosmétique permettant de lutter contre les effets du stress, quelle qu'en soit son origine et combattre le vieillissement induit par le stress. Pour y répondre, la présente invention vise à utiliser au moins un principe actif issu de calices de Diospyros kaki, en tant que principe actif cosmétique anti-25 stress et anti-âge. Diospyros kaki est un arbre de la famille des Ebénacées, originaire de Chine et cultivé dans les pays chauds pour son fruit. Quelques études ont déjà montré des efficacités cosmétiques d'extraits de Diospyros kaki en association avec d'autres plantes, notamment la demande de brevet JP-2006083070, la demande JP-2006160629, ou encore la demande FR-2841782 qui décrit des composés phénoliques de calices de biospyros kaki associés à un extrait de Pueraria lobata. Toutefois, de façon surprenante, l'utilisation seule de principes actifs issus de calices de biospyros kaki, contenant peu ou pas de composés phénoliques, présentent des propriétés remarquables qui permettent de combattre le vieillissement prématurément induit par le stress. Avantageusement, l'utilisation d'un principe actif issu de calices de biospyros kaki selon l'invention dans une composition cosmétique permet de limiter le vieillissement prématuré en corrigeant l'impact du stress mécanique sur les propriétés biomécaniques de la peau et en diminuant visiblement les rides. L'invention a également pour objet un procédé cosmétique de soin de la peau, destiné à la protéger contre les effets du stress sur la peau et à combattre le vieillissement cutané induit par le stress, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition renfermant un principe actif issu de biospyros kaki. L'invention vise également un principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge, obtenu à partir d'au moins un principe actif issu de calices de biospyros kaki, un procédé d'obtention de ce principe actif et des compositions cosmétiques incluant au moins un tel principe actif. Par principe actif « anti-stress » on entend un principe actif capable d'agir sur au moins un paramètre cutané modifié par un stress. Par « paramètres cutanés » on entend l'ensemble des données permettant d'évaluer l'état général de la peau. Elles peuvent être obtenues par analyse sensorielle, par évaluation clinique d'un expert, par mesures au moyen d'appareils et de sondes ou par photographies. Les principes actifs issus de calices de biospyros kaki selon l'invention peuvent être obtenus par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique. De manière préférentielle, les compositions cosmétiques selon l'invention contiennent 0,01 à 20% d'un principe actif issu de calices de Diospyros kaki L'administration d'une composition contenant un principe actif issu de calices de Diospyros kaki selon l'invention est effectuée par voie topique. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toutes formes permettant l'application par voie topique. La présente invention est maintenant décrite en détail. UTILISATION Selon un premier aspect l'invention vise donc l'utilisation cosmétique d'au moins un principe actif issu de calices de Diospyros kaki, en tant que principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge dans une composition cosmétique, en particulier l'utilisation d'un principe actif présentant une teneur en composés phénoliques totaux inférieure à 5%, de façon préférée inférieure à 1%. Préférentiellement, l'invention vise l'utilisation cosmétique d'au moins un principe actif issu de calices de Diospyros kaki présentant une teneur en carbohydrates d'au moins 21% en poids de l'extrait sec. En particulier l'invention a pour objet l'utilisation d'au moins un principe actif issu de calices de Diospyros kaki en tant que principe actif dans une composition cosmétique pour corriger les modifications de l'expression des marqueurs biologiques et des paramètres cutanés induits par un stress mécanique. Selon l'invention un principe actif issu de calices de Diospyros kaki peut donc être utilisé pour lutter contre le vieillissement prématuré cutané induit par un stress. Tout stress implique un spectre de réponse cellulaire. La réponse au stress des cellules est variable. Les cellules sont affectées graduellement en fonction de la nature du stress et de leurs caractéristiques intrinsèques. D'une période d'adaptation transitoire, permettant à la cellule de moduler son expression génique pour faire face à son environnement, la cellule peut également, en état de stress, entrer dans un état de sénescence prématurée. L'état de sénescence prématurée induite par le stress se caractérise par un arrêt de la croissance cellulaire associé à des modifications morphologiques, une activité béta-galactosidase, une régulation du cycle cellulaire et des modifications de l'expression génique : certains gènes sont sous-régulés tandis que d'autres sont sur-exprimés. L'étude de l'expression génique d'une population de jeunes fibroblastes ayant subi d'une part un stress oxydatif, et d'autre part, un vieillissement par réplications successives, montre que certains gènes sont sous-régulés tant sur les cellules stressées que sur les cellules vieillies. Parmi les gènes présentant le même comportement chez des fibroblastes stressés et des fibroblastes vieillis, on peut citer notamment les gènes codant pour des protéines de la matrice extracellulaire, comme le collagène V, le perlécan ou le Hyaluronane synthase-2 (HAS-2), et pour des protéines de défense cellulaire comme la Protectine ou l'HIF-la (l'Hypoxia Inductible Factor-la). Le collagène V est un collagène fibrillaire associé au collagène I et III qui régule le diamètre des fibres de collagène et la fibrillogenèse, processus majeur déterminant les caractéristiques fonctionnelles du tissu. Le perlécan ou Heparan sulfate proteoglycan 2 est un composant des protéoglycannes simples intervenant dans l'organisation fonctionnelle de la membrane basale en interagissant avec le collagène IV, les laminines et le nidogène. Le HAS-2 est une enzyme de synthèse de l'acide hyaluronique qui est le constituant le plus important des glycosaminoglycanes de la matrice extracellulaire. Ce dernier assure l'hydratation et l'assemblage des différents éléments du tissu par formation de complexes supramoléculaires. La Protectine (CD 59 ou Homologous Restriction Factor 20) est une glycoprotéine membranaire de 18 à 20 kb possédant un résidu carbohydrate lié au phosphatidylinositol. La Protectine régule négativement l'activation du complément et maintient ainsi l'intégrité de la peau pendant les réponses inflammatoires. L'HIF-1a est un facteur transcriptionnel hétérodimère régulateur clé de la réponse cellulaire à l'hypoxie. Le stress hypoxique est géré par la stabilisation et l'activation de la sous-unité HIF-1a du facteur transcriptionnel central HIF-1. Le profil d'expression des gènes codant pour ces protéines, sur des fibroblastes est présenté ci-dessous Gènes Fibroblastes Fibroblastes Fibroblastes jeunes vieillis stressés Matrice Collagène V 100 54 41 extracellulaire al Perlecan HAS-2 100 76 69 100 43 37 Défense Protectine 100 13 59 cellulaire HIF-la 100 55 72 Selon l'invention, un principe actif issu de calices de Diospyros kaki peut être utilisé pour stimuler l'expression des protéines sous-exprimées dans les cellules de la peau en cas de stress et de vieillissement cutané, et ainsi lutter contre le vieillissement cutané prématuré induit par un stress. En particulier, un principe actif issu de calices de Diospyros kaki peut être utilisé pour stimuler l'expression des ARNm (acides ribonucléiques messagers) codant pour le collagène V, le perlecan, l'HAS-2, la Protectine et/ou l'HIF-1a. Avantageusement, l'utilisation cosmétique d'un principe actif issu de calices de Diospyros kaki tend à restaurer les expressions des différents marqueurs de vieillissement prématuré induit par un stress à un taux similaire à celui des fibroblastes jeunes et prévient ainsi le vieillissement cellulaire accéléré induit par le stress. L'invention permet de rendre les traits du visage plus détendus, la peau plus relaxée, et d'atténuer les signes de fatigue. Ainsi, un principe actif issu de calices de Diospyros kaki peut être utilisé pour un effet cosmétique anti-stress et anti-âge, en particulier pour agir sur l'expression des marqueurs biologiques du vieillissement cutané, notamment pour rajeunir une peau stressée et diminuer les signes visibles du vieillissement comme les rides. Avantageusement, un principe actif issu de calices de Diospyros kaki permet de ressourcer les peaux surmenées et fatiguées pour un aspect plus jeune. PRINCIPE ACTIF Selon un deuxième aspect, l'invention concerne un principe actif cosmétique antistress et anti-âge, obtenu à partir de calices de Diospyros kaki. Il s'agit d'un principe actif présentant une teneur en composés phénoliques inférieure à 5%, préférentiellement inférieure à 1%. Le principe actif selon l'invention présente également une teneur en sucres supérieure ou égale à 21% du poids total de l'extrait sec. De façon préférée, le principe actif comprend entre 21 et 65% en poids de carbohydrates par rapport au poids total de l'extrait sec. Selon un mode de réalisation préféré et particulièrement adapté, le principe actif est un hydrolysat. Le principe actif selon l'invention est soluble en milieu aqueux. Préférentiellement, le principe actif selon l'invention est sous forme liquide. Il peut être défini par les caractéristiques exposées ci-après. Matières sèches : Le taux de matières sèches est mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant. Le taux de matières sèches d'un principe actif issu de calices de Diospyros kaki selon l'invention est compris entre 10 et 110g/I, préférentiellement entre 20 et 33g/l. Mesure du pH : Le pH est mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante. Le pH d'un principe actif issu de calices de Diospyros kaki selon l'invention est compris entre 3,0 et 6,0, préférentiellement entre 3,5 et 4,5. 15 Détermination de la teneur en sucres totaux La teneur en sucres totaux est déterminée par la méthode de DUBOIS (DUBOIS M. & al [1956], Analytical chemistry, 28, n°3 p 350-356). En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune-orangé. 20 A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. Le teneur de sucres totaux du principe actif issu de calices de Diospyros kaki selon la présente invention est supérieure à 21% du poids total de l'extrait sec, préférentiellement compris entre 21% et 65% par rapport à 25 la matière sèche. Les sucres totaux sont préférentiellement compris dans le principe actif selon l'invention sous forme aqueuse, entre 3 à 44 g/I, en particulier entre 7 à 13 g/I. Caractérisation des carbohydrates La caractérisation et la quantification des sucres simples du principe actif selon l'invention est réalisée par chromatographie ionique (Dionex system ICS 3000). La concentration de chaque sucre est déterminée grâce à une gamme standard de sucre synthétique. Les sucres simples présents dans le principe actif issu de calices de Diospyros kaki selon l'invention sont résumés dans le tableau suivant : Sucres Pourcentage massique (%) Acide galacturonique 62,9 Rhamnose 11,2 Glucose 10,6 Fructose 8,8 Galactose 3,5 Arabinose 3,0 La détermination de la masse molaire de la fraction carbohydrates est réalisée par chromatographie HPLC. Elle permet de déterminer la structure des sucres. La fraction saccharidique du principe actif selon l'invention est composée essentiellement d'acide galacturonique, de rhamnose et de glucose sous la 15 forme de monosaccharides. Détermination de la teneur en composés phénoliques Les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium des composés colorés, détectables à 715nm. L'intensité de coloration est proportionnelle à la quantité de composés 20 phénoliques. Les lectures sont réalisées à partir d'une gamme étalon d'acide gallique allant de 40 à 120mg/I. La teneur en composés phénoliques est exprimée en pourcentage par rapport aux matières sèches. L'actif cosmétique selon l'invention issu de calices de Diospyros kaki contient moins de 5% de composés phénoliques totaux par rapport aux matières sèches totales, préférentiellement moins de 1%. PROCEDE D'OBTENTION Selon un autre aspect, la présente invention vise un procédé d'obtention d'un principe actif issu de calices de Diospyros kaki. Le procédé comprend au moins une étape d'hydrolyse enzymatique. Préférentiellement il s'agit d'un procédé comprenant les étapes suivantes - solubilisation de poudre de calices de Diospyros kaki dans l'eau, - hydrolyse enzymatique, - séparation des phases soluble et insoluble, - inactivation des enzymes utilisées pour l'hydrolyse par traitement thermique, et - filtration(s) et concentration. Des étapes supplémentaires peuvent être ajoutées comme une étape de désodorisation ou de décoloration afin de garantir l'obtention d'un produit liquide de couleur claire et d'odeur faible. L'hydrolysat obtenu se présente sous la forme d'une solution aqueuse liquide limpide de couleur jaune. COMPOSITIONS COSMETIQUES La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant au moins un principe actif issu de calices biospyros kaki, dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huiledans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersion, gel aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Ces compositions contiennent entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) issu(s) de calices biospyros kaki selon la présente invention, préférentiellement entre 0,5% et 3%. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur tels que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Ce milieu contient généralement de l'eau. Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou 25 la cire de carnauba ; - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ; - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ; - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ; - les filtres organiques, - les filtres inorganiques, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, - les séquestrants, - les parfums, - et leurs mélanges, sans que cette liste ne soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingrédient Dictionary and Handbook publié par le Personal Gare Product Council). Ces compositions sont notamment destinées au soin, au traitement, à la protection et/ou à l'hydratation de la peau humaine, en particulier pour un effet anti-stress et/ou anti-âge : pour rajeunir la peau stressée, diminuer les rides, améliorer l'éclat de la peau et illuminer le teint. On peut citer des exemples de compositions cosmétiques anti-stress et/ou anti-âge, incluant le principe actif selon l'invention. Les exemples de compositions qui suivent sont obtenus par mélange des différents composants. Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et/ou leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Exemple de crème détente hydratante La formulation est la suivante : A. Eau QSP 100% B. Emulgade 1000 MI (Henkel) 4% Montanov 14 (Seppic) 2,3% Pelemol 89 (Cornelius) 2,7% Gemseal 60 (Total) 4% DC 200 (Dow Corning) 3,3% C. Conservateur 1% Principe actif issu de calices de Diospyros kaki 3% D. Aristoflex 0,5% pH 6,5 (Henkel) 3,3% Cette crème a un pH de 4,3. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - chauffer A et B à 80°C, sous agitation mécanique, - émulsionner B dans A sous agitation, - ajouter C dans l'ordre à 40°C, et homogénéiser, - additionner D, - continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que la crème soit uniforme, et - laisser sous agitation jusqu'à refroidissement à 30°C. Exemple de gel ressourçant anti-stress La formulation est la suivante : A. Eau QSP 100% Glycérol 1% B. Lanette N (Cognis) 2% DUB STG AE 30 (Stéarinerie Dubois) 1,2% Lanette 37 T (Seppic) 2,3% DUB Synersol (Stéarinerie Dubois) 10% 14 DC 345 (Dow Corning) 3% C. Conservateur 1% Principe actif issu de calices de Diospyros kaki 3% D. Viscolam SMC20 (Rita) 3% Ce gel a un pH de 4,8. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - chauffer A et B à 80°C, - émulsionner B dans A sous agitation, - ajouter C dans l'ordre à 40°C, et homogénéiser, - additionner D, - continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que le gel émulsionné soit uniforme, et - laisser sous agitation jusqu'à refroidissement à 30°C. Exemple de crème adoucissante relaxante La formulation est la suivante : A. Eau QSP 100% B. Volpo G26LW (Croda) 3% DUB MCT 45 (Stéarinerie Dubois) 5% Finester EH 25 (Cornelius) 8% DC 345 (Dow Corning) 3% DUB microlub 50 (Stéarinerie Dubois) 2% STG AE 30 (Stéarinerie Dubois) 2% Montanov 82 (Seppic) 1% C. DC 7-3100 (Dow Corning) 10% D. Conservateur 1% Principe actif issu de calices de Diospyros kaki 3% Cette crème a un pH de 5,6. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - chauffer A et B à 80°C, - émulsionner B dans A sous agitation, - ajouter C à 50°C, et homogénéiser sous émulseur rotor/stator, 5 - additionner D dans l'ordre à 40°C, - continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que la crème soit uniforme, et - laisser sous agitation jusqu'à refroidissement à 30°C. Exemple de lait fondant délassant 10 La formulation est la suivante : A. Eau QSP 100% Glycérol 1% Statiaxane CX 930 (Degussa) 1,3% B. DC 345 (Dow Corning) 2,1% 15 Eumulgine B1 (Sidobre) 1% Montanov 68 (Seppic) 5,7% C. Monomuls 900 18 (Henkel) 1% Conservateur Principe actif issu de calices de Diospyros kaki 3% 20 Ce lait gel a un pH de 5. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - chauffer A et B à 80°C, - émulsionner B dans A sous agitation, - ajouter C dans l'ordre à 50°C, et homogénéiser, 25 - continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que le lait soit uniforme, et - laisser sous agitation jusqu'à refroidissement à 30°C. EVALUATION DE L'EFFET D'UN PRINCIPE ACTIF ISSU DE CALICES DE DIOSPYROS KAKI SELON L'INVENTION Le principe actif utilisé pour les études qui suivent est un hydrolysat issu de calices de biospyros kaki seul obtenu par la mise en oeuvre d'un procédé 5 comprenant les étapes suivantes : - solubilisation de poudre de calices de biospyros kaki dans l'eau, - hydrolyse enzymatique, - séparation des phases soluble et insoluble, - inactivation des enzymes utilisées pour l'hydrolyse par traitement 10 thermique, et - filtration(s) et concentration, et présentant les caractéristiques suivantes : - solution aqueuse - aspect : liquide limpide 15 - couleur : jaune - matières sèches : 22,4g/I - sucres totaux : 9g/l - protéines totales : 1,5g/l - polyphénols totaux : 0,014g/I 20 - pH : 4,0 Cet exemple n'est bien entendu pas limitatif. En outre dans les études sur volontaires ce principe actif est intégré dans la formulation suivante : Lanol 99 (Seppic) 5,0% 25 Principe actif issu de Calices de biospyros kaki 3,0% Montanov 202 (Seppic) 3,0% Montanov 68 (Seppic) 2,0% Conservateur 1,0% 17 Sepigel 305 (Seppic) 0,3% Eau qsq 100% 1/ Evaluation de l'effet anti-stress et anti-âge d'un principe actif issu de Calices 5 de Diospyros kaki sur des études in vitro Cette évaluation consiste à réaliser dans un premier temps une modélisation de l'induction de stress et de vieillissement cellulaire prématuré sur des cultures de cellules cutanées, puis à évaluer l'effet du principe actif issu de Calices de Diospyros kaki sur les cellules stressées et vieillies. 10 1.1/ Modélisation d'un stress inducteur de vieillissement cellulaire prématuré Le but de cette étude est d'étudier l'expression différentielle de gènes de jeunes fibroblastes humains normaux ayant subi d'une part un stress oxydatif (H202) et d'autre part un vieillissement par passages 15 successifs. L'étude est réalisée à l'aide de puces à ADN (« Microarrays »), en comparant le profil de ces populations dites fibroblastes normaux, fibroblastes stressés et fibroblastes vieillis. Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous Gènes Abréviatio Fibroblastes Fibroblastes Fibroblastes n normaux vieillis stressés Enzyme de Steroid 5- SRDA1 100 50 61 régulation alpha reductase 1 14-3-3- YWHAE 100 40 59 Signalisation protein cellulaire epsilon Biglycan BGN 100 18 14 Collagène V COL5A1 100 54 41 al Fibrilline 1 FBN1 100 62 65 Matrice Fibronectin FN1 100 31 48 extracellulaire e Perlecan HSPG2 100 76 69 HAS-2 HAS-2 100 43 37 Lamin LAMC1 100 13 11 gamma 1 subunit Epidermal EGFR 100 50 51 growth factor receptor Facteurs de Fibroblast FGF7 100 21 68 croissance growth factor 7 Vascular VEGFB 100 16 62 endothelial growth factor B Protectine CD59 100 13 59 27-KD heat HSP27 100 58 69 Défense shock protéine cellulaire Hypoxia HIF-1a 100 55 72 inductible factor 1 alpha On constate que des fibroblastes stressés par le stress oxydatif présente des modifications de l'expression de certains de leur gènes similaires à celles obtenues pour les fibroblastes vieillis. Ces résultats permettent donc de modéliser le stress oxydatif cellulaire comme un inducteur de vieillissement prématuré. 1.2/ Evaluation de l'effet sur les marqueurs du vieillissement prématuré L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif issu de calices de biospyros kaki sur sa capacité à augmenter l'expression d'ARNm codant pour différents marqueurs du vieillissement cutané prématuré : - marqueurs de la matrice extracellulaire : HAS-2, collagène V et Perlécan, et - marqueurs de défense cellulaire : protectine et HIF-1a. L'étude est réalisée par PCR quantitative sur de jeunes fibroblastes humains normaux ou stressés par H2O2. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant en pourcentage d'ARNm exprimé, par rapport aux fibroblastes humains normaux non traités. Taux d'ARNm (%) HAS-2 Collagène V Perlécan HIF- la Protectine Fibroblastes normaux non traités 100 100 100 100 100 Fibroblastes normaux + principe 104 100 111 85 98 actif 0,5% Fibroblastes stressés non traités 55 37 33 62 74 Fibroblastes stressés + principe 107 78 82 75 87 actif 0,5% h,% +95 +111 +148 +21 +18 Avec _ (Fibroblastes stressés traités - f ibroblastes stressés non traités) / (f ibroblastes stressés non traités) On constate que l'expression des ARNm des différents marqueurs du vieillissement prématuré des fibroblastes stressés est réduite par rapport aux fibroblastes normaux. Ces résultats montrent que testée à 0,5% sur fibroblastes stressés, l'utilisation d'un principe actif issu de calices de biospyros kaki selon l'invention permet de restaurer les expressions des ARNm de différents marqueurs de vieillissement prématuré à un taux similaire à celui des fibroblastes normaux. 2/ Evaluation de l'effet anti-stress et anti-âge d'un principe actif issu de calices de biospyros kaki sur des études in vivo 2.1./ Etude des propriétés biomécaniques de la peau face à un stress mécanique Cette évaluation consiste à réaliser dans un premier temps une étude comparative des propriétés biomécaniques de la peau après un stress mécanique entre deux groupes d'âge différent, puis à évaluer l'effet sur les paramètres biomécaniques de la peau après traitement avec le principe actif issu de calices de biospyros kaki. L'étude est réalisée sur 36 volontaires de sexe féminin réparties en deux groupes : le groupe A d'âge moyen 62 ans, et le groupe B d'âge moyen 46 ans. Les mesures des paramètres biomécaniques sont réalisés au niveau des avant bras à l'aide d'un cutomètre® SEM 575 (Courage & Khazaka) avant et après 42 jours de traitement biquotidien. Ces mesures sont réalisées après un stress mécanique induit par plusieurs aspirations successives, permettant de mettre en évidence la fatigabilité de la peau. a/ Modélisation : Etude comparative des propriétés biomécaniques de la peau entre les deux groupes d'âge différent L'objectif de cette étude est d'évaluer l'impact de l'âge sur le paramètre biomécanique R9 représentatif de la fatigabilité de la peau. Les résultats obtenus sur le paramètre R9, fatigabilité après plusieurs aspirations successives de la peau pour les deux groupes sont présentés dans le tableau suivant : On constate qu'il existe une différence significative sur le paramètreR9 entre le groupe A d'âge moyen 62 ans et le groupe B d'âge moyen 46 ans. La fatigabilité de la peau est plus importante pour le groupe A d'âge moyen 62 ans. b/Evaluation de l'effet du principe actif issu de Calices de biospyros kaki sur le groupe A Variation du paramètre R9 / JO (%) Groupe A d'âge moyen 62 ans +2,1 Groupe B d'âge moyen 46 ans -1,5 L'évaluation de la fatigabilité a également été réalisée avant et après 42 jours d'applications biquotidiennes d'un principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion, sur le paramètre R9. Les résultats obtenus pour le groupe A montrent une diminution du paramètre R9 par rapport à JO de 9,2%. On constate ainsi que dans les conditions de cette étude, après 42 jours d'applications biquotidiennes, un principe actif issu de calices de Diospyros kaki formulé à 3% en émulsion, diminue significativement « l'effet de fatigue» de la peau. L'utilisation du principe actif selon l'invention permet au groupe A d'âge moyen 62 ans de retrouver une valeur de ce paramètre comparable à celle du groupe B d'âge moyen 46 ans. Le principe actif selon l'invention permet donc aux peaux matures, après un stress mécanique, de retrouver les caractéristiques et les qualités biomécaniques d'un peau plus jeune de 15 ans. 2-2/Etude comparative du microrelief de la glabelle sur peaux de groupes d'âge différent Cette évaluation consiste à réaliser une étude comparative du microrelief cutané de la glabelle sur trois groupes. Cette étude a été réalisée sur 57 volontaires de sexe féminin réparties en 3 groupes : - groupe A d'âge moyen 62 ans traité avec le principe actif formulé à 3% ; - groupe B d'âge moyen 61 ans traité avec le placebo et - groupe C d'âge moyen 46 ans traité avec le placebo. Des empreintes en polymère siliconé sont réalisées au niveau de la glabelle. Ces empreintes sont observées et analysées à l'aide d'un prof ilomètre muni d'un système d'analyse d'image et d'un logiciel adapté S.I.A. (software Image Analysis). Le paramètre surface totale ridée (mm 2) est retenu pour caractériser le microrelief de la glabelle. a/ Modélisation : comparaison du microrelief cutané de deux groupes d'âge différent L'objectif de cette étude est d'évaluer l'impact de l'âge sur le microrelief de la glabelle. Le tableau suivant présente les variations par rapport à JO du paramètre de surface totale ridée (mm 2) de deux groupes. Groupe B : d'âge moyen 61 ans Groupe C : d'âge moyen 46 ans Variation de la Surface totale ridée (mm 2) / JO (%) +4,7 -6,1 Ces résultats montrent qu'il existe une différence significative sur le paramètre surface totale ridée caractéristique du microrelief de la glabelle entre les deux groupes d'âge moyen différent. b/ Evaluation de l'effet du principe actif issu de calices de biospyros kaki sur le groupe A d'âge moyen 62 ans L'évaluation du microrelief cutané a également été réalisée avant et après 42 jours d'applications biquotidiennes d'un principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion. Les résultats obtenus pour la groupe A montrent une diminution de la surface totale ridée en mm2 par rapport à JO de 28,5%. Ainsi, dans les conditions de cette étude, après 42 jours d'applications biquotidiennes sur le groupe d'âge moyen 62 ans, l'application du principe actif issu de Calices de biospyros kaki permet de diminuer significativement la surface totale ridée. Cette diminution permet de revenir à un aspect du microrelief proche de celui du groupe d'âge moyen 46 ans. 2.3./ Evaluation de l'effet anti-rides d'un principe actif issu de Calices de Diospyros kaki sur la patte d'oie L'objectif de cette étude est dans un premier temps de comparer les différences existantes sur des paramètres du microrelief de la patte d'oie entre deux groupes d'âge différent, puis d'évaluer l'effet antirides du principe actif selon l'invention sur la patte d'oie. Les deux groupes sont les suivants : - groupe A : 19 volontaires d'âge moyen 62 ans, - groupe B : 19 volontaires d'âge moyen 46 ans. Des empreintes en polymère siliconé sont réalisées au niveau de la patte d'oie. Ces empreintes sont observées et analysées à l'aide d'un prof ilomètre muni d'un système d'analyse d'image et d'un logiciel adapté S.I.A. (Software Image Analysis). Le paramètre surface totale ridée (mm 2) est retenu pour caractériser le microrelief de la patte d'oie. a/ Modélisation : comparaison du microrelief cutané de deux groupes d'âge différent L'objectif de cette étude est d'évaluer l'impact de l'âge sur le microrelief de la patte d'oie. Le tableau suivant présente les résultats correspondant au paramètre de surface totale ridée (mm 2) de deux groupes peaux non stressées.25 Ces résultats montrent qu'il existe une différence significative sur le paramètre surface totale ridée caractéristique du microrelief de la patte d'oie entre deux groupes ayant en moyenne 15 ans d'écart d'âge. b/ Evaluation de l'effet du principe actif issu de Calices de biospyros kaki sur le groupe mature L'évaluation de microrelief cutané a également été réalisée avant et après 42 jours d'applications biquotidiennes d'un principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion. Les résultats obtenus pour le groupe A montrent une diminution de la surface totale ridée en mm2 de la patte d'oie par rapport à JO de 23%. Dans les conditions de cette étude, après 42 jours d'applications biquotidiennes sur le groupe d'âge moyen 62 ans, le principe actif issu de Calices de biospyros kaki diminue donc significativement la surface totale ridée de la patte d'oie. Cette diminution permet de revenir à un aspect du microrelief proche de celui du groupe d'âge moyen 46 ans. Variation de la Surface totale ridée (mm 2) / JO (%) Groupe A : d'âge moyen 62 ans - 4,5 Groupe B : d'âge moyen 46 ans + 2,0 REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique d'un principe actif issu de calices de Diospyros kaki présentant une teneur en composés phénoliques totaux inférieure à 5%, en tant que principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge dans une composition cosmétique. 2. Utilisation cosmétique selon la revendication 1, pour corriger les modifications de l'expression des marqueurs biologiques et des paramètres cutanés induits par un stress environnemental ou émotionnel. 3. Utilisation cosmétique la revendication 1 ou 2, pour lutter contre le vieillissement prématuré cutané induit par un stress. 4. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, pour diminuer les rides. 5. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, pour stimuler l'expression du collagène V, du perlecan, de l'HAS-2, de la Protectine et/ou de l'HIF-1a. 6. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que le principe actif issu de calices de Diospyros kaki présente une teneur en composés phénoliques totaux inférieure à 1%. 7. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que le principe actif issu de calices de Diospyros kaki présente une teneur en carbohydrates d'au moins 21% du poids total de l'extrait sec. 8. Principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge, obtenu à partir de calices de Diospyros kaki, présentant une teneur en composés phénoliques totaux inférieure à 5% et une teneur en sucres totaux d'au moins 21% du poids total de l'extrait sec. 9. Principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge, obtenu à partir de calices de Diospyros kaki selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il présente une teneur en composés phénoliques totaux inférieure à 1% du poids total de l'extrait sec. 10. Principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge, obtenu à partir de calices de Diospyros kaki selon la revendication 8 ou 9, présentant une teneur en sucres totaux comprise entre 21% et 65% du poids total de l'extrait sec. 11. Principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge, obtenu à partir de calices de Diospyros kaki selon l'une des revendications 8 à 10, caractérisé en ce que les sucres sont présents sous forme de monosaccharides d'acide galacturonique, de rhamnose et de glucose. 12. Principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge, selon l'un des revendications 8 à 11, caractérisé en ce qu'il présente un taux de matières sèches compris entre 10 et 110 g/I. 13. Principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il présente un taux de matières sèches compris entre 20 et 33 g/l. 14. Principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge selon l'une des revendications 8 à 13, caractérisé en ce qu'il présente un pH compris entre 3 20 et 6. 15. Principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge selon la revendication 14, caractérisé en ce qu'il présente un pH compris entre 3,5 et 4,5. 16. Procédé d'obtention d'un principe actif cosmétique anti-stress et anti-âge selon l'une des revendications 8 à 15, comprenant au moins une étape 25 d'hydrolyse enzymatique de calices de Diospyros kaki . 17. Procédé d'obtention selon la revendication 16, comprenant les étapes suivantes :- solubilisation de poudre de calices de Diospyros kaki dans une solution aqueuse, - hydrolyse enzymatique, - séparation des phases soluble et insoluble, - inactivation des enzymes utilisées pour l'hydrolyse par traitement thermique, et - filtration(s) et concentration. 18. Composition cosmétique anti-stress et anti-âge, contenant dans un milieu physiologiquement acceptable entre 0,01% et 20% en poids d'au moins un 10 principe actif selon l'une des revendications 8 à 15. 19. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à lutter contre les effets du stress sur la peau et à combattre le vieillissement induit cutané par le stress, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition renfermant un principe actif issu de calices de Diospyros kaki selon 15 l'une des revendications 1 à 15. 20. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine selon la revendication 19, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition selon la revendication 18.