Brevet FR2958848A1 — publié le 20111021

-1- La présente invention se rapporte au domaine des actifs anti-âge et de leurs utilisations en cosmétique notamment. Plus particulièrement, la présente invention se rapporte à l'utilisation d'un extrait de son de riz non germé et non fermenté en cosmétique afin de prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et du photo- vieillissement de la peau et des phanères, et en particulier protéger la peau contre les agressions dues aux rayonnements UV. Ledit extrait est un agent activateur des fonctions respiratoires de la mitochondrie, particulièrement dans les cellules de la peau. Le vieillissement correspond à l'ensemble des processus physiologiques et psychologiques qui modifient la structure et les fonctions de l'organisme à partir d'un certain âge. On distingue deux types de vieillissement, d'une part, le vieillissement intrinsèque et, d'autre part, le vieillissement extrinsèque. Le vieillissement intrinsèque est dû à des facteurs génétiques, à des modifications biochimiques qui ont lieu lors d'états de fatigue, de stress, de changements hormonaux comme lors de la grossesse... Le vieillissement extrinsèque, quant à lui, est dû à des facteurs environnementaux auxquels est soumis l'organisme tout au long de sa vie, tels que la pollution, le soleil, les maladies etc. II s'agit d'un processus lent et progressif qui atteint toutes les cellules de l'organisme par différents moyens et se manifeste de différentes manières. Par exemple, au niveau de la peau, l'aspect de celle-ci est modifié par les divers types d'agressions internes ou externes et l'on voit apparaître alors des rides et ridules, des taches d'hyper ou d'hypopigmentation, une sècheresse voire une déshydratation de la peau, un amincissement de l'épiderme, une élastose, des imperfections, des taches de vieillesse.... Tous ces changements affectent non seulement la peau, mais également les phanères tels que les ongles et les cheveux. Ces modifications sont dues entre autres à l'altération des fonctions de renouvellement cellulaire, de cohésion cellulaire, de synthèse de collagène, d'élastine et d'autres protéines, et conduisent finalement à une diminution des qualités de barrière protectrice de la peau et à un aspect peu esthétique de celle-ci. Mais l'un des processus principaux responsables du vieillissement des cellules est sans conteste la formation excessive de radicaux libres dans les cellules et l'affaiblissement des mitochondries. En effet, il a été montré un déclin progressif des fonctions mitochondriales avec l'âge, probablement lié à l'accumulation de mutations sur l'ADNmt (K. Singh, Ann. N.Y. Acad. Sci. 1019, 2004). En outre, une des conséquences importantes de l'accumulation des 2958848 -2- dommages oxydatifs est une réduction de la capacité de la cellule à produire de l'ATP (Porteous et al., Eur J Biochem 1998, 257(l):192-201). Plusieurs explications ont été données à l'augmentation de la formation de radicaux libres même si les causes sont encore loin d'être élucidées complètement. Parmi celles-ci, 5 on retrouve l'hypoxie, l'ischémie, la diminution du métabolisme des graisses, les anomalies de fonctionnement des UCP, une méthylation diminuée etc. L'environnement a également un impact majeur sur nos mitochondries. En effet, l'air, la pollution (plomb, mercure, produits organochlorés...), les eaux traitées (dénaturées par le chlore et le fluor), la nourriture industrielle (pesticides, herbicides, additifs), le stress (vulnérabilité aux 10 virus, bactéries, toxines), sont tous destructeurs de l'activité des mitochondries. La production d'ATP par la phosphorylation oxydative de la mitochondrie génère naturellement des radicaux libres, mais lorsque l'environnement s'y ajoute, la balance se déséquilibre, la surproduction des radicaux libres est encore plus agressive sur les mitochondries, accentuant encore le vieillissement. 15 Plusieurs stratégies ont été avancées afin de limiter le vieillissement et l'affaiblissement des mitochondries. Plusieurs types de molécules ont été proposés à titre de supplémentation, comme par exemple, le Coenzyme Q10, l'idébénone, l'acétyl-L-carnitine, les vitamines B1, B2 et B3, le succinate etc. Aujourd'hui, la Demanderesse a découvert qu'un composé actif, permettant 20 d'augmenter la production d'ATP et de diminuer la production de radicaux libres, pouvait améliorer les fonctions respiratoires de la mitochondrie et ainsi limiter le vieillissement des cellules. Ledit composé actif est en fait un extrait de son de riz non germé et non fermenté, ayant donc une action anti-âge et de protection de l'ADN des cellules. Cet extrait de son de riz se distingue de l'art antérieur du fait qu'il soit issu de l'enveloppe du 25 grain de riz, contrairement aux autres extraits issus de la graine débarrassée de son enveloppe. En outre, le riz utilisé n'a subi aucune étape de germination ni de fermentation, ce qui permet de garder les protéines natives intactes, contrairement à ce qui est fait dans l'art antérieur comme dans les demandes de brevet FR2915380, JP2007131578, ou JP2004189707. 30 Ainsi, le premier objet de la présente invention se rapporte à l'utilisation d'un extrait de son de riz non germé et non fermenté en tant qu'agent actif anti-âge, caractérisée en ce que ledit extrait est obtenu : 2958848 -3- a) - par séparation du grain de l'enveloppe ; b) - extraction à chaud à l'aide d'éthanol ; c) - séparation du son de riz du filtrat par filtration pour obtenir un résidu sec, puis évaporation sous vide du filtrat ; 5 d) - délipidation du résidu de l'étape c) à l'aide d'un solvant organique ; e) - filtration puis séchage sous vide pour obtenir un résidu sec délipidé et ; f) - solubilisation du résidu de l'étape e) dans un solvant aqueux. Le second objet de la présente invention concerne plusieurs utilisations dudit extrait dans une composition cosmétique afin de i) prévenir et/ou traiter les signes cutanés du 10 vieillissement et/ou le photovieillissement de la peau et des phanères, et ii) améliorer les fonctions respiratoires de la mitochondrie et protéger l'ADN des cellules de la peau. Un troisième et dernier objet de la présente invention se rapporte à des procédés de traitement cosmétiques non thérapeutiques afin, d'une part, de prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou le photovieillissement de la peau et, d'autre part, 15 limiter la formation de radicaux libres, augmenter la production d'ATP intracellulaire et protéger l'ADN des cellules de la peau La présente invention concerne donc l'utilisation d'un extrait issu du son de riz non germé et non fermenté obtenu : 20 a) - par séparation du grain de l'enveloppe ; b) - extraction à chaud à l'aide d'éthanol ; c) - séparation du son de riz du filtrat par filtration pour obtenir un résidu sec, puis évaporation sous vide du filtrat ; d) - délipidation du résidu de l'étape c) à l'aide d'un solvant organique ; 25 e) - filtration puis séchage sous vide pour obtenir un résidu sec délipidé et ; f) - solubilisation du résidu de l'étape e) dans un solvant aqueux. Procédé d'obtention de l'extrait de son de riz : Le grain de riz entier non fermenté et non germé est séparé du son par action 30 mécanique. Le son de riz ainsi obtenu est mis à agiter dans 10 volumes d'éthanol à chaud afin de permettre l'extraction des différents produits solubles en milieu alcoolique tels que les 2958848 -4- protéines, et préférentiellement les prolamines, ainsi que des composés de nature polysaccharidique de bas poids moléculaire. Après extraction, le son de riz est séparé du filtrat par filtration gravitationnelle. Le solvant est ensuite évaporé sous vide afin d'obtenir un résidu sec. 5 Ce résidu sec est ensuite délipidé à froid à l'aide d'un solvant organique, préférentiellement avec de l'acétone. Après filtration, le résidu sec est récupéré puis séché sous vide. Ce résidu sec délipidé subi une dernière étape de solubilisation dans un solvant aqueux. Ledit solvant peut être composé uniquement d'eau ou d'un mélange eau/glycol(s) 10 ou tout autre mélange physiologiquement acceptable. Par « physiologiquement acceptable », on entend un solvant approprié pour entrer en contact avec la peau ou une muqueuse sans provoquer de réactions de toxicité ou d'intolérance et compatible avec la nature du résidu sec. Préférentiellement, ledit solvant aqueux est un mélange d'eau et de glycol(s). Le 15 résidu est mis en solution dans de l'eau dans diverses proportions avec un ou plusieurs glycols à une concentration de 1 à 10 % et préférentiellement de 1 à 5 %, et constitue alors l'extrait de son de riz selon l'invention. Les glycols utilisables et physiologiquement acceptables sont le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, ou tout mélange de ces solvants 20 avec de l'eau. Dans ces conditions, on obtient un extrait composé de 10 à 20 % de protéines et de 50 à 60 % de sucres. 25 De manière générale, dans la présente demande, on entend par « extrait », le résidu sec obtenu à l'étape f) solubilisé dans un solvant aqueux. On utilisera indifféremment les termes « extrait », « extrait solubilisé », ou encore « agent actif », ou « composé actif ». Le second objet de la présente invention concerne l'utilisation dans une composition 30 cosmétique, d'un extrait tel que décrit précédemment, pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou le photovieillissement de la peau et des phanères. Les « signes cutanés du vieillissement » incluent, mais ne se limitent pas à, toutes les manifestations visibles sur la peau causées par le vieillissement. On entend en particulier 2958848 -5- les rides, les rides profondes et grossières, les ridules, les crevasses, le relâchement des tissus cutanés et sous-cutanés, la perte de l'élasticité cutanée et l'atonie, la perte de fermeté et de tonicité, et l'atrophie dermique. En outre, on entend aussi par « signes cutanés du vieillissement », les pores élargis, les imperfections, la décoloration, les taches 5 de vieillesse, les kératoses, la perte de collagène, et autres changements du derme et de l'épiderme, mais également toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau et des phanères dues au vieillissement comme, par exemple, les rugosités superficielles de la couche cornée, mais également toute modification interne de la peau qui ne se traduit pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, l'amincissement 10 du derme. Par « photo-vieillissement » on entend le vieillissement prématuré de la peau causé par l'exposition prolongée et cumulative au soleil. Ainsi, la présente invention se rapporte plus particulièrement à l'utilisation d'une composition pour traiter ou prévenir les rides, les rides profondes et grossières, les 15 ridules, les crevasses, le relâchement des tissus cutanés et sous-cutanés, la perte de l'élasticité cutanée et l'atonie, la perte de fermeté et de tonicité, et l'atrophie dermique. Encore plus particulièrement, la composition selon l'invention permet de protéger la peau des agressions extérieures et en particulier prévenir et/ou traiter les dommages causés par les rayonnements UVB. On entend, par « agressions extérieures », les 20 agressions que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les UV, ou encore les produits à caractère irritant tels que les produits de coloration, décoloration, défrisage, les tensioactifs, les conservateurs ou les parfums. Par pollution, on entend aussi bien la pollution « extérieure » due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, que la pollution 25 « intérieure » qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papiers-peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldehyde), ou bien encore la fumée de cigarette. Il a été démontré que l'actif, c'est-à-dire l'extrait de son de riz selon l'invention, utilisé dans une composition cosmétique, pouvait améliorer les fonctions respiratoires de la mitochondrie et protéger l'ADN des cellules de la peau. En 30 particulier, l'actif peut être utilisé afin d'augmenter la synthèse d'ATP intracellulaire. L'amélioration des fonctions mitochondriales permet à la cellule de mieux résister à un stress tel que des rayonnements UVB, notamment par limitation de la formation de radicaux libres (ROS) et par augmentation de la production d'ATP. De plus, on constate 2958848 -6- une meilleure protection de l'ADN grâce à l'utilisation de l'extrait. Cette protection est constatée lors de l'application d'un stress oxydatif (méthylglyoxal) sur des biopsies de peaux. On constate que les coupes de peaux prétraitées avec l'actif présentent moins de cellules endommagées au niveau de leur ADN et sont donc plus résistantes aux stress. Selon un premier mode de réalisation, l'extrait solubilisé selon l'invention est utilisé dans une composition cosmétique en une quantité représentant de 0,001 % à 5 % du poids total de la composition, et préférentiellement en une quantité représentant de 0,01 % à 1 % du poids total de la composition. 10 Préférentiellement, l'extrait est utilisé dans une composition qui se présente sous une forme adaptée à l'application par voie topique. Selon un second mode de réalisation de l'invention, l'extrait solubilisé peut être encapsulé ou mis dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes 15 ou toute autre microcapsule utilisée dans le domaine de la cosmétique, ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur physiologiquement acceptable. Les compositions destinées à être appliquées sur la peau peuvent se présenter sous 20 forme de solution aqueuse ou hydroalcoolique, d'émulsion eau dans huile ou huile dans eau, de microémulsion, de gel aqueux ou anhydre, de sérum, ou encore de dispersion de vésicules, de patch, de crème, de spray, d'onguent, de pommade, de lotion, de colloïde, de solution, de suspension ou autres. Les compositions peuvent aussi être appliquées sur les phanères sous forme de shampoing, de teinture ou de mascara à appliquer au pinceau ou 25 au peigne, en particulier sur les cils, les sourcils ou les cheveux, ou encore de soins pour les ongles tels que les vernis. Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention contient en outre, au moins un autre agent actif favorisant l'action dudit extrait. On peut citer, de 30 manière non limitative, les classes d'ingrédients suivantes : des agents actifs peptidiques, d'autres extraits de végétaux, des agents cicatrisants, anti-âge, anti-rides, apaisants, antiradicalaires, anti-UV, des agents stimulant la synthèse de macromolécules dermiques ou le métabolisme énergétique, des agents hydratants, anti-bactériens, anti-fongiques, anti- 5 2958848 -7- inflammatoires, anesthésiques, des agents modulant la différenciation, la pigmentation ou la dépigmentation cutanée, des agents stimulant la pousse des ongles ou des cheveux.... Préférentiellement, on utilisera un agent présentant une activité dans le domaine des antirides, tel qu'un agent anti-radicalaire ou antioxydant, ou un agent stimulant la 5 synthèse de macromolécules dermiques, ou encore un agent stimulant le métabolisme énergétique. Dans un mode plus particulier de réalisation, la composition selon l'invention comprendra, outre l'extrait de son de riz, - un (ou plusieurs) composé activateur du cytochrome c, et/ou ; - un (ou plusieurs) composé activateur des aquaporines et/ou ; 10 - un (ou plusieurs) composé activateur des sirtuines et/ou ; - un (ou plusieurs) composé qui augmente l'adhésion cellulaire et/ou ; - un (ou plusieurs) composé qui augmente la production de protéines matricielles type collagène, laminine etc. ; - un (ou plusieurs) composé modulateur de l'activité du protéasome ; 15 - un (ou plusieurs) composé modulateur du rythme circadien ; - un (ou plusieurs) composé modulateur des protéines hsp ; - un (ou plusieurs) composé qui augmente l'énergie cellulaire ; - un (ou plusieurs) composé modulateur de la pigmentation ; - un (ou plusieurs) composé inducteur du Coenzyme Q10 ; 20 - un (ou plusieurs) composé améliorant la fonction barrière de la peau ; - un (ou plusieurs) composé protecteur de la mitochondrie. Lesdits composés ci-dessus peuvent être naturels, comme des hydrolysats peptidiques de végétaux, ou encore d'origine synthétique, comme des composés peptidiques. Enfin, la composition pourra comprendre tout additif communément utilisé dans le 25 domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des co-solvants (éthanol, glycérol, alcool benzylique, humectant...), des épaississants, des diluants, des émulsionnants, des anti-oxydants, des colorants, des filtres solaires, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des huiles essentielles, des oligo-éléments, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères 30 filmogènes, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants ou des eaux thermales etc. On peut par exemple citer des polymères hydrosolubles de type polymère naturel, tels que les polysaccharides, ou polypeptides, des dérivés cellulosiques de type méthylcellulose ou hydroxypropylcellulose, ou encore des polymères synthétiques, 2958848 -8- polaxamères, carbomères, PVA ou PVP et notamment les polymères vendus par la société ISP. Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses 5 recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, être compris entre 0,01 et 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux 10 classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés dans une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, par rapport au poids total de la composition. Un autre objet de la présente invention concerne un procédé de traitement cosmétique 15 non thérapeutique destiné à prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou le photovieillissement de la peau, par application quotidienne sur la zone à traiter, d'une composition comprenant ledit extrait de son de riz. Enfin, l'invention concerne un procédé de traitement cosmétique non thérapeutique destiné à limiter la formation de radicaux libres, augmenter la production d'ATP 20 intracellulaire et protéger l'ADN des cellules de la peau, par application quotidienne sur la zone à traiter, d'une composition comprenant ledit extrait de son de riz. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif. 25 Exemple 1 : Mise en évidence des propriétés réparatrice et protectrice d'un extrait de son de riz sur des biopsies de peau humaine soumises à des rayonnements UVB Le but de cette expérience est de mesurer les propriétés réparatrices et/ou protectrices de l'extrait suite à une irradiation par rayonnements UVB sur biopsies de peau humaine. Le rayonnement UV, et particulièrement UVB, entraîne des réactions de dimérisation 30 donnant lieu à des photoproduits dimériques entre deux bases pyrimidines adjacentes. Plusieurs types de photoproduits sont alors formés, dont les dimères de cyclobutanepyrimidine ou CPDs. 2958848 -9- Par conséquent, un immunomarquage à l'aide d'un anticorps anti-CPDs permet d'évaluer les dommages de l'ADN. Il est alors possible d'évaluer les propriétés d'un composé à favoriser la réparation et/ou la protection de l'ADN face aux agressions UV. 5 Protocole d'immunomarquage des CPDs sur des biopsies de peau soumises à des UVB Des biopsies de peau humaine sont mises en culture à l'interface air/liquide. Ces biopsies sont soumises à des irradiations par rayonnements UVB à des doses de 100 ou 200 mJ/ cm2, selon le protocole mis en jeu. 10 Après irradiation à 200 mJ/cm2, dans une première condition, une solution à 1 % d'extrait est appliquée topiquement sur les biopsies durant 48 h. Dans une deuxième condition, les biopsies sont cultivées avec 1 % de l'extrait durant 48 h, irradiées à 100 mJ/cm2 puis ré-incubées pendant 2 heures. Pour le marquage des dimères cyclobutane-pyrimidine, les biopsies de peau sont 15 incluses dans de la paraffine et des coupes histologiques de 4µm d'épaisseur sont effectuées. Les lames sont déparaffinées, hydratées puis soumises à un immunomarquage par un anticorps dirigé contre les dimères cyclobutane-pyrimidine (MBL D194-1, mouse monoclonal), puis par un anticorps secondaire adapté et une enzyme streptavidineperoxydase. Cette dernière réagit avec la DAB pour donner une coloration brune. 20 Résultats : En condition contrôle, la coloration observée est plus intense lorsque les biopsies ont été soumises aux rayonnements UVB. Avec un post-traitement de 48 h avec l'extrait de riz, on observe une coloration 25 beaucoup moins intense que dans la condition contrôle avec UVB. De la même façon, un traitement avec l'extrait de riz pendant 48 h, consécutif à une irradiation aux UVB, induit une coloration beaucoup moins intense que dans la condition contrôle avec UVB. Conclusions : 30 Lorsque l'on traite les biopsies avec l'extrait de riz, selon les deux protocoles, les dommages de l'ADN induits par les UVB, sont moins importants que ceux observés sur 2958848 -10- les biopsies en condition contrôle. On peut donc conclure que l'extrait améliore la protection et la réparation de l'ADN face aux irradiations UVB. Exemple 2 : Mise en évidence de l'effet stimulant de l'extrait sur la synthèse d'ATP 5 intracellulaire Le but de cette étude est de déterminer l'influence de l'extrait de son de riz sur la synthèse d'ATP, produit par les mitochondries. Protocole : 10 Cette étude s'effectue à l'aide d'un Kit « ATP Bioluminescence Assay Kit HS II » (Roche Applied Science). Des fibroblastes dermiques sont traités avec une solution à 1 % d'extrait, pendant une période allant de 1 à 3 heures. A la fin de l'incubation, les puits sont rincés avec 2 ml de PBS froid avant d'ajouter 250 !Il d'un tampon de lyse inclus dans le kit. Les cellules de chaque puits sont ensuite grattées puis récoltées dans des tubes de 15 14 ml. Chaque puits est rincé avec 2 x 500 µl PBS froid et le tout est de nouveau récolté dans les tubes respectifs. A partir de ces échantillons, une dilution est réalisée au 1/120001ème dans du PBS froid avant chaque lecture. Le dosage d'ATP est réalisé sur ces échantillons : 50 tL de cette dilution sont déposés dans une luma-cuvette et 50 tL de luminol sont ajoutés. Après 10 secondes, la lecture de la luminescence est déclenchée. 20 Les valeurs sont standardisées par rapport à la quantité de protéines pour chaque échantillon. Les mesures sont effectuées à l'aide d'un appareil : le Biocounter M2010A LUMAC®/3M. Résultats : 25 Les dosages d'ATP montrent qu'il y a une augmentation importante de la quantité d'ATP intracellulaire dans des cellules traitées avec l'extrait, en comparaison des cellules non traitées. Après 1 heure et 3 heures de traitement avec l'extrait, la quantité d'ATP est augmentée, respectivement, de 27% et de 18%. Conclusion : 30 L'extrait augmente sensiblement le niveau énergétique des cellules cutanées telles que les fibroblastes, et plus généralement stimule les fonctions mitochondriales. 2958848 -11- Exemple 3 : Mise en évidence de la réduction de la quantité de radicaux libres mitochondriaux, en présence d'extrait de son de riz, sur des kératinocytes via le test MitoSOXTM 5 Le MitoSOXTM Red mitochondrial superoxide indicator est un réactif commercialisé par Invitrogen (Molecular Probes M36008). Il est utilisé lors d'un stress oxydatif UV ou lors de l'inhibition du complexe-1 de la chaine respiratoire mitochondriale via la Rotenone. Il permet de mesurer la production mitochondriale de Radicaux libres (ROS) dans les cellules en imagerie microscopique. Plus particulièrement, le MitoSOXTM est 10 spécifique de l'anion superoxyde qui est la forme prédominante de ROS. Le MitoSOXTM s'applique sur cellule vivante : il est perméant à la membrane, et une fois à l'intérieur de la cellule, il diffuse rapidement et de façon spécifique dans la mitochondrie. Une fois dans la mitochondrie, le MitoSOXTM est oxydé par l'anion superoxyde en un composé qui présente une fluorescence rouge. Ce réactif est facilement 15 oxydé par l'anion superoxyde mais pas par les autres radicaux libres, ni par les espèces réactives de l'azote (NOS). Protocole : Des kératinocytes normaux humains sont traités une fois par jour avec l'extrait de son 20 de riz, à une concentration de 1 % pendant 24 h. Dans un second temps, les cellules sont stressées : - Soit par un stress à l'aide d'une solution de Rotenone à 1µM pendant 4 h - Soit par des rayonnements UVB à 75 mJ/cm2 Après le stress, les cellules sont rincées puis remises dans un milieu adapté pendant 1 h à 25 37 °C dans un incubateur de culture. Il s'en suit deux lavages à l'aide de milieu de Hanks, l'application de la solution de Mitosox pendant 5 minutes, et enfin deux nouveaux lavages à l'aide du même milieu. Les cellules sont fixées avec du formaldéhyde pendant 10 minutes et du DAPI est appliqué pendant 5 minutes, avant deux rinçages à l'aide de PBS. Les résultats sont lus par lecture en microscopie à fluorescence. 30 Résultats : En microscopie à fluorescence, on constate que dans la condition contrôle, le nombre de cellules présentant des dommages, aussi bien dus aux rayonnements UVB qu'à la 2958848 -12- Rotenone, est très important. En effet, la fluorescence est très importante dans ces conditions, ce qui indique une forte production de radicaux libres. Par contre, lorsque les cellules ont été traitées avec l'extrait puis stressées, on constate que le nombre de cellules fluorescentes est fortement réduit. Ceci implique donc que l'extrait a protégé les cellules 5 contre la production excessive de radicaux libres. Exemple 4 : Mise en évidence de l'effet protecteur de l'extrait de son de riz sur des biopsies de peau soumises à un stress oxydatif (methylglyoxal) Une étude de l'effet protecteur de l'extrait a été réalisée en évaluant en immunohistologie, 10 au moyen d'une coloration de coupes de peaux, les dommages causés par le méthyglyoxal. Protocole Des échantillons de peau humaine, sont mis en culture à l'interface air/liquide. L'extrait, 15 dilué à 0,5 et 1 %, est appliqué de façon topique sur ces échantillons pendant 24 h. Les échantillons sont ensuite soumis à un stress oxydatif via une solution de méthylglyoxal à 5 mM. Le méthyglyoxal est dilué à la fois dans le milieu de culture et dans la solution de PBS, cette dernière permettant une application topique de celui-ci. L'extrait est ajouté à des concentrations de 0,5 et 1 % dans des solutions destinées à être appliquées 20 topiquement. Les biopsies sont alors incubées pendant 24 h supplémentaires. Les échantillons de peaux stressés avec le méthyglyoxal mais non traités servent de contrôles. Par la suite, les échantillons sont fixés au formaldéhyde à 4 % et inclus dans la paraffine. Des coupes de 4 µm sont réalisées au microtome. Une coloration des tissus est faite par l'hématoxyline (qui colore les noyaux en bleu) et l'éosine qui est spécifique de la 25 coloration des cytoplasmes. Cette coloration permet l'évaluation de la morphologie cellulaire et la visualisation des dommages dus au stress. Les lames sont alors montées dans un milieu adéquat et observées au microscope. Résultats : 30 Les résultats obtenus montrent que les peaux non traitées avec l'extrait de riz sont plus endommagées que les peaux traitées avec ledit extrait. En effet, on constate un plus grand nombre de vacuoles ainsi qu'une désorganisation des couches cellulaires de l'épiderme. Les biopsies de peau traitées avec l'extrait conservent une bonne morphologie et les 2958848 -13- dégâts dus au méthylglyoxal sont nettement moins marqués que ceux observés sur les biopsies de peau non traitées. Conclusion : 5 L'extrait de riz protège efficacement la peau contre les dommages oxydatifs causés par le méthylglyoxal, en diminuant le nombre de vacuoles et en améliorant la structure des cellules de la peau. Exemple 5 : Préparation de compositions 1. Crème protectrice de jour 10 Préparer la phase A et chauffer à 75°C sous agitation. Préparer la phase B en dispersant le carbopol, puis la gomme xanthane sous agitation. Laisser reposer. Chauffer à 75°C. A température, émulsionner A dans B sous agitation rotor-stator. Neutraliser avec la phase C sous agitation rapide. Après refroidissement à 40°C, additionner la phase D, puis 15 la phase E. Le refroidissement est poursuivi sous agitation légère et la phase F rajoutée. Nom commercial Nom INCI % massique Phase A Emulium Delta Cetyl alcohol (and) Glyceryl Stearate (and) PEG-75 4,00 Stearate (and) Ceteth-20 (and) Steareth-20 Lanette O Cetearyl Alcohol 1,50 D C 200 Fluid/100cs Dimethicone 1,00 DUB 810C Coco Caprylate/Caprate 1,00 DPPG Propylene Glycol Dipelargonate 3,00 DUB DPHCC Dipentaerythrityl Hexacaprylate/Hexacaprate 1,50 Cegesoft PS6 Vegetable Oil 1,00 Vitamine E Tocopherol 0,30 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben 0,70 (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Phase B Eau déminéralisée Aqua qsp 100 2958848 -14- Glycerine Glycerin 2,00 Carbopol EDT 2020 Acrylates/C 10-30Alkyl Acrylate Crosspolymer 0,15 Keltrol BT Xanthan Gum 0,30 Phase C Sodium Hydroxide Sodium Hydroxide 0,30 (sol.à 10%) Phase D Eau déminéralisée Aqua 5,00 Stay-C 50 Sodium Ascorbyl Phosphate 0,50 Phase E Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Dekaben CP Chlorphenesin 0,20 Phase F GP4G Water (and) Artemia Extract 1,00 Extrait de son de riz N/A 1,50 2. Crème anti-âge Nom commercial Nom INCI % massique Phase A Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl Glucoside 6,00 Squalane Squalane 3,00 Cetiol SB 45 Butyrospermum Parkii ( Shea Butter) 2,00 Waglinol 250 Cetearyl Ethylhexanoate 3,00 Amerchol L- 101 Minerai Oil (and) Lanolin Alcohol 2,00 Abil 350 Dimethicone 1,50 BHT BHT 0,01 Coenzyme Q10 Ubiquinone 0,10 Phase B Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,25 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben 0,75 (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Phase C Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 2958848 -15- Glucam E10 Methyl Gluceth-10 1,00 Allantoin Allantoin 0,15 Carbopol Ultrez 10 Carbomer 0,20 Phase D TEA Triethanolamine 0,18 Phase E Extrait de son de riz N/A 1,00 GP4G Water (and) Artemia Extract 1,50 Phase F Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Préparer et fondre la phase A à 65-70°C. Chauffer la phase C à 65-70°C. La phase B est ajoutée à la phase A juste avant d'émulsionner A dans B. A environ 45°C, le carbomer est neutralisé par addition de la phase D. La phase E est ensuite additionnée sous légère 5 agitation et le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C. La phase F est alors additionnée si souhaité. REVENDICATIONS1. Utilisation d'un extrait de son de riz non germé et non fermenté en tant qu'agent actif anti-âge pour la préparation d'une composition cosmétique, caractérisée en ce que ledit extrait est obtenu : a) - par séparation du grain de l'enveloppe ; b) - extraction à chaud à l'aide d' éthanol ; c) - séparation du son de riz du filtrat par filtration pour obtenir un résidu sec, puis évaporation sous vide du filtrat ; d) - délipidation du résidu de l'étape c) à l'aide d'un solvant organique ; e) - filtration puis séchage sous vide pour obtenir un résidu sec délipidé et ; f) - solubilisation du résidu de l'étape e) dans un solvant aqueux. 2. Utilisation selon la revendication précédente, caractérisée en ce que le résidu de l'étape e) est mis en solution dans un mélange eau/glycol(s) à une concentration de 1 à 10 %, préférentiellement de 1 à 5 %. 3. Utilisation selon la revendication précédente caractérisée en ce que les glycols utilisables sont choisis parmi le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, ou tout mélange de ces solvants avec de l'eau. 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisée en ce que l'extrait est composé de 10 à 20 % de protéines et de 50 à 60 % de sucres. 5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4 pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou le photovieillissement de la peau et des phanères. 6. Utilisation selon la revendication précédente pour protéger la peau des agressions 30 extérieures et en particulier prévenir et/ou traiter les dommages causés par les rayonnements UV. 2958848 -17- 7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4 pour améliorer les fonctions respiratoires de la mitochondrie et protéger l'ADN des cellules de la peau. 8. Utilisation selon la revendication précédente pour augmenter la synthèse 5 intracellulaire d'ATP. 9. Utilisation selon l'une des revendications 5 à 8, caractérisée en ce que l'extrait solubilisé est utilisé en une quantité représentant de 0,001 % à 5 % du poids total de la composition, et préférentiellement en une quantité représentant de 0,01 % à 1 % du 10 poids total de la composition. 10. Utilisation selon l'une des revendications 5 à 9, caractérisée en ce que la composition se présente sous une forme adaptée à l'application par voie topique. 15 11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 5 à 10, caractérisée en ce que la composition comprend en outre, au moins un autre agent actif. 12. Utilisation selon la revendication 11 caractérisée en ce que ledit composé est choisi parmi un agent anti-radicalaire ou antioxydant, ou un agent stimulant la synthèse de 20 macromolécules dermiques, ou encore un agent stimulant le métabolisme énergétique. 13. Procédé de traitement cosmétique non thérapeutique destiné à prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et/ou le photovieillissement de la peau, 25 caractérisé en ce que l'on applique quotidiennement sur la zone à traiter une composition comprenant un extrait tel que défini selon l'une des revendications 1 à 4.