Brevet FR2949684A1 — publié le 20110311

PRINCIPE ACTIF ISSU DE CANDIDA SAITOANA ET UTILISATION COSMETIQUE POUR LA DETOXIFICATION DES CELLULES DE LA PEAU La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique de Candida saitoana comme principe actif cosmétique, en particulier pour la détoxification des cellules de la peau, ainsi qu'à un procédé cosmétique de soin pour améliorer l'état de surface des peaux ternes et intoxiquées. L'invention se rapporte également à un principe actif issu de Candida saitoana, à un procédé d'obtention ainsi qu'à des compositions cosmétiques renfermant cet actif. La peau, organe de contact avec l'environnement, est constamment soumise à des agressions, tant externes qu'internes, qui menacent son équilibre et son aspect. Afin de se protéger et maintenir son intégrité face à ces agressions, la peau possède des systèmes naturels de protection. Toutefois lorsque ces systèmes sont surpassés ou défaillants, elle n'est plus protégée : elle est fatiguée, intoxiquée et son aspect est modifié. On sait par exemple que l'exposition excessive aux rayons ultraviolets (UV) se traduit par diverses manifestations cutanées, comme des érythèmes actiniques, de l'élastose solaire ou encore l'apparition prématurée des effets du vieillissement cutané : la peau devient lâche, profondément ridée, rugueuse, sèche, parsemée de taches hypopigmentées ou hyperpigmentées et de vaisseaux dilatés. Ces manifestations, qui reflètent de profonds changements structuraux dans le 20 tissu cutané, sont inesthétiques et disgracieuses et beaucoup de gens ont tendance à vouloir les estomper. C'est pourquoi l'objectif de la présente invention est de proposer un moyen cosmétique efficace pour protéger la peau contre les agressions, tant externes qu'internes, susceptibles d'altérer son bon fonctionnement et son aspect, en particulier un moyen capable de stimuler les systèmes naturels de protection des cellules cutanées. Les systèmes de protection de la peau sont organisés en systèmes de défense, permettant de limiter l'induction de dégâts cellulaires en contrecarrant notamment les espèces réactives de l'oxygène, et en systèmes de réparation et de détoxification, éliminant les constituants cellulaires déjà endommagés tels que les molécules ou organites. Les cellules de la peau sont notamment dotées d'une machinerie protéolytique puissante composée de deux mécanismes majeurs et complémentaires dans l'élimination et la détoxification des protéines et des organites altérés : le protéasome et l'autophagie. La fonction principale du protéasome relié à l'ubiquitine est de dégrader de façon ciblée les protéines solubles à durée de vie courte, fonctionnelles et non fonctionnelles. L'autophagie associée aux lysosomes, quant à elle, prend en charge le recyclage continuel des protéines à durée de vie longue et des organites devenus non fonctionnels ou obsolètes et assure ainsi un contrôle qualité des éléments du cytoplasme. Dans cette voie, des vacuoles, appelées autophagosomes, séquestrent une portion de cytoplasme contenant des protéines ou organites à éliminer, puis fusionnent avec les lysosomes contenant des protéases qui vont assurer la dégradation de leur contenu. Ces deux entités de détoxification, par leur action complémentaire, éliminent les divers constituants anormaux ou superflus de la cellule, les dégradent en acides aminés qui seront ensuite recyclés pour la synthèse de nouvelles molécules. Dans le cas d'un stress oxydatif modéré, c'est principalement le système de dégradation protéasomique qui agit. Les protéines intracellulaires oxydées perdent leur activité et se déplient, devenant une cible parfaite pour une dégradation par la voie du protéasome. Au contraire, l'autophagie élimine peu de protéines cytosoliques mais se concentre sur les organites cellulaires altérés, sa première cible étant la mitochondrie pour éviter la production excessive de radicaux libres et la propagation du stress. Dans le cas d'un stress plus important ou d'un stress modéré mais répété, les dégâts sont plus élevés. Plus nombreuses, les protéines intracellulaires surchargent puis épuisent la capacité de dégradation du protéasome et s'accumulent. Elles subissent en outre des modifications supplémentaires ou s'agrègent : elles sont alors insolubles et non dépliables et deviennent non seulement résistantes à la dégradation par la voie du protéasome mais agissent également comme inhibiteurs de celui-ci. Les capacités du protéasome étant surpassées, l'autophagie prend le relais pour compenser ses défaillances et assurer la dégradation des protéines solubles altérées tout en maintenant son rôle dans l'élimination des protéines insolubles, des lipides oxydés et des organelles endommagées. Malheureusement, à un stade plus avancé, lorsque les capacités de dégradation de l'autophagie sont à leur tour saturées, les agrégats s'accumulent et s'associent avec des résidus de lipides peroxydés ou d'organelles altérées pour former un matériel non dégradable, appelé lipofuscine qui induit la production supplémentaire d'espèces réactives de l'oxygène, impacte sur l'efficacité des systèmes de détoxification protéasomique et autophagique et conduit à de nouveaux dommages cellulaires. Cela engendre une perte de fonctionnalité cellulaire jusqu'à la mort de la cellule. En outre, en cas de défaillance des systèmes naturels de détoxification, la peau, intoxiquée par ses propres constituants altérés qui l'encombrent petit à petit, subit des signes de fatigue et de vieillissement prématurés. La peau étant la cible constante de stress potentiels, des recherches ont été menées sur les systèmes naturels de protection cutanés. En particulier des produits ont été développés en vue de stimuler la voie du protéasome. Toutefois, bien qu'il soit sensible et rapidement inductible, ce système est facilement saturable puis défaillant. Aussi, pour pallier aux manques et inconvénients de l'art antérieur, l'invention 10 propose une solution cosmétique efficace pour le soin et la protection de la peau, capable d'agir en particulier sur l'autophagie des cellules cutanées. A cet effet, l'invention propose d'utiliser une levure, Candida saitoana, en tant que principe actif cosmétique. Candida saitoana est une levure connue, principalement utilisée en lutte 15 biologique pour assurer la protection et la conservation des fruits après leur récolte. Or, de façon surprenante, Candida saitoana présente des effets notables au niveau de la peau avec des propriétés cosmétiques très intéressantes. L'invention vise donc, l'utilisation de Candida saitoana ou d'un actif issu de 20 Candida saitoana, comme principe actif cosmétique, destiné à être appliqué sur la peau, en particulier pour stimuler l'autophagie, système indispensable pour libérer les cellules cutanées de tous les dommages qui peuvent les engorger et empêcher leur bon fonctionnement. L'invention vise également un principe actif cosmétique issu de Candida saitoana 25 comprenant notamment des carbohydrates, principalement sous forme d'oligosaccharides d'a-glucanes, ainsi qu'un procédé d'obtention de ce principe actif et des compositions cosmétiques incluant au moins un tel principe actif. Les principes actifs selon l'invention peuvent être obtenus par un procédé comprenant une étape de solubilisation de Candida saitoana (obtenue par fermentation) suivie d'au moins une étape d'hydrolyse enzymatique de façon à obtenir un actif comprenant des carbohydrates. De manière préférentielle, les compositions cosmétiques selon l'invention contiennent 0,01 à 20% d'un actif issu de Candida saitoana comprenant des carbohydrates majoritairement sous forme d'oligosaccharides d'a-glucanes. L'administration d'une composition contenant un principe actif issu de Candida saitoana selon l'invention est effectuée par voie topique. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toutes formes permettant l'application par voie topique. Enfin, l'invention a également pour objet un procédé cosmétique de soin de la peau, destiné à améliorer l'état de surface des peaux ternes et/ou intoxiquées, en particulier destiné à lisser le microrelief de la peau et/ou améliorer l'éclat du teint. La présente invention est maintenant décrite en détail. PRINCIPE ACTIF L'invention vise donc l'utilisation de Candida saitoana ou d'un extrait de Candida 20 saitoana en tant que principe actif cosmétique. L'invention concerne également un principe actif cosmétique particulier obtenu à partir de Candida saitoana comprenant des carbohydrates. Préférentiellement, il s'agit d'un extrait présentant une teneur en carbohydrates d'au moins 28% du poids total de la matière sèche, en particulier une teneur en 25 carbohydrates comprise entre 28% et 67% du poids total de la matière sèche. Encore plus préférentiellement, au moins 20% des carbohydrates présents dans le principe actif sont sous forme d'oligosaccharides d'a-glucanes. Le principe actif selon l'invention se présente préférentiellement sous forme liquide. Il peut être défini par les caractéristiques exposées ci-après. Matières sèches : Le taux de matières sèches d'un principe actif issu de Candida saitoana selon l'invention, mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable jusqu'à obtention d'un poids constant, est compris entre 7 et 125 g/I, préférentiellement entre 30 et 45 g/I. Mesure du pH : Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 2,5 et 5,5, préférentiellement entre 3,0 et 4,0. Détermination de la teneur en sucres totaux On utilise la méthode de DUBOIS. En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de carbohydrates d'un principe actif selon l'invention. Le taux de carbohydrates d'un actif issu de Candida saitoana selon l'invention mesuré par la méthode de DUBOIS est compris entre 3 et 56 g/I, préférentiellement entre 13 et 20 g/I. L'actif contient au moins 28% de carbohydrates par rapport aux matières sèches totales. Préférentiellement la teneur est comprise entre 28 et 67%. Caractérisation des carbohydrates L'analyse par HPLC d'un principe actif selon l'invention permet de déterminer la répartition des poids moléculaires de la fraction glucidique. Poids moléculaire (Da) Pourcentage de la fraction glucidique d'un principe actif selon l'invention (%) Monosaccharides PROCEDE D'OBTENTION La présente invention vise aussi un procédé d'obtention d'un principe actif issu de Candida saitoana. Il s'agit d'un procédé qui permet de concentrer l'actif en terme de sucres, en particulier en terme d'oligosaccharides d'a-glucanes. Il comprend au moins les étapes suivantes : - culture de levures de Candida saitoana, - solubilisation aqueuse des levures obtenues, - au moins une hydrolyse enzymatique en vue d'obtenir des oligosaccharides, - inactivation des activités enzymatiques par traitement thermique, - séparation des phases soluble et insoluble, - concentration de la phase soluble pour récupérer une fraction active comprenant des sucres, préférentiellement une fraction active comprenant des sucres dont au moins 20% sous forme d'oligosaccharides d'a-glucanes. Un mode de réalisation particulièrement adapté de l'invention comprend les étapes suivantes : - mise en culture de levures de Candida saitonana de manière classique dans un milieu adapté à leur développement, de préférence en présence de saccharose, - récolte des levures par centrifugation, puis congélation des levures (pour 10 conservation), - solubilisation des levures récoltées dans une solution aqueuse, - réalisation d'au moins une hydrolyse enzymatique en vue d'obtenir des oligosaccharides, - inactivation des activités enzymatiques par traitement thermique, 15 - centrifugation ou filtration de façon à écarter la majorité des composants membranaires insolubles, et à recueillir un filtrat riche en composés de nature carbohydrates, à savoir une fraction comprenant au moins 28% de carbohydrates par rapport au poids total de la matière sèche, dont au moins 20% sous forme d'oligosaccharides d'a-glucanes. 20 Des étapes supplémentaires de filtration et filtration stérilisante peuvent être envisagées. L'actif obtenu se présente sous la forme d'une solution aqueuse liquide limpide de couleur jaune clair. 25 UTILISATION L'invention concerne également l'utilisation de Candida saitoana ou d'un extrait de Candida saitoana en tant que principe actif cosmétique, en particulier l'utilisation de Candida saitoana ou d'un extrait de Candida saitoana en tant que principe actif cosmétique activateur de l'autophagie des cellules cutanées dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique. Selon l'invention Candida saitoana ou un actif issu de Candida saitoana peut en effet être utilisé comme agent cosmétique sur la peau pour activer l'autophagie des cellules cutanées en vue de leur détoxification. La présence en quantité suffisante de carbohydrates, notamment d'oligosaccharides d'a-glucanes, encore plus particulièrement de tri-saccharides d'a-glucanes, dans l'actif de Candida saitoana, permet en particulier de lui conférer cette activité cosmétique. Lorsqu'il est appliqué sur la peau, Candida saitoana ou un actif issu de Candida saitoana, peut stimuler la voie de l'autophagie des cellules cutanées. En particulier, il est capable d'agir sur la synthèse de la protéine LC3, marqueur spécifique de l'autophagosome. L'autophagie est un processus � d'auto-digestion partielle � qui consiste en une dégradation de composants intracellulaires par le lysosome. Il existe trois types d'autophagie : la microautophagie, l'autophagie médiée par des protéines chaperonnes et la macroautophagie, les deux dernières étant uniquement reliées au stress. La macroautophagie est la forme principale de l'autophagie et la moins sélective. Son mécanisme comporte plusieurs étapes : - la formation d'une structure multimembranaire, appelée phagophore ou pré-autophagosome, qui s'allonge pour séquestrer le matériel cytoplasmique à dégrader, formant ainsi une vacuole d'autophagie ou autophagosome, - la fusion entre cette vacuole et le lysosome pour permettre la dégradation du contenu à éliminer par les enzymes lysosomales. La machinerie moléculaire responsable de l'autophagie est sous le contrôle des gènes ATG (� autophagy related genes �). Au cours de la formation de l'autophagosome, les protéines ATG sont recrutées à partir du cytoplasme et s'associent transitoirement avec la membrane autophagosomale. Le complexe Beclin 1 (ATG6)-phosphatidyl inositol 3-phosphatase initie la formation de l'autophagosome. Il permet le recrutement séquentiel des conjugués cytosoliques ATG12-ATG5 et LC3 (� Light Chain 3 � ou AT68) au niveau de la membrane autophagosomale. La protéine recrutée LC3-I est liée de façon covalente à une phosphatidyléthanolamine, un lipide de la membrane autophagosomale, pour former la forme LC3-II. Toutes les protéines ATG se dissocient rapidement, à l'exception de la protéine LC3-II qui reste associée à la membrane de l'autophagosome et qui est responsable de la taille de l'autophagosome formé. Le dysfonctionnement de l'autophagie peut conduire à une formation moindre des vacuoles autophagiques, à une diminution de leur fusion avec les lysosomes et à une réduction de leur élimination après qu'elles aient fusionné. Le matériel non dégradé s'accumule à l'intérieur du lysosome sous forme de lipofuscine, qui peut inactiver les enzymes du lysosome ou déstabiliser sa membrane, conduisant à des dommages cellulaires supplémentaires. Or, utilisé sur la peau, Candida saitoana ou un actif issu de Candida permet de booster la voie de l'autophagie des cellules cutanées. En particulier il stimule la synthèse de la protéine LC3. Avantageusement, en stimulant la formation de l'autophagosome chargé de séquestrer les constituants cellulaires altérés et de les orienter vers la voie de dégradation lysosomale, il permet ainsi de dépolluer les cellules des constituants altérés qui les saturent, source de vieillissement accéléré. Candida saitoana ou un actif issu de Candida saitoana peut ainsi être utilisé pour renforcer la détoxification des cellules cutanées, notamment pour réduire le taux de protéines oxydées et de lipides peroxydés. En effet, tous les acides aminés composant les protéines peuvent être oxydés, les acides aminés soufrés et aromatiques étant les plus sensibles. Leur oxydation conduit à la formation de groupements hydroxyles sur les chaînes latérales des protéines qui peut aboutir à la fragmentation des chaînes polypeptidiques ou à des réticulations intra- ou inter-moléculaires. Dans le cas d'oxydations plus franches, des dérivés carbonylés sont générés par oxydation catalysée par des métaux, de certains acides aminés ou par clivage des protéines. En outre, sur ces modifications dites directes, peuvent se greffer des réactions secondaires, qui mettent en jeu des oxydations et impliquent la fixation, sur les protéines, de glucides ou d'aldéhydes dérivés de peroxydation lipidique. Il existe des systèmes spécifiques de réversion de l'oxydation des acides aminés soufrés, mais l'oxydation des autres acides aminés ainsi que la carbonylation conduisent à des modifications irréversibles de la structure des protéines qui s'accumulent et s'agrègent avec l'âge ou en cas d'agression prolongée ou répétée de la peau. Si ces agrégats ne sont pas éliminés, ils peuvent conduirent à des dommages importants. On sait notamment que la présence de protéines carbonylées au niveau de la couche cornée affecte ses propriétés : la fonction barrière est détériorée, les propriétés mécaniques modifiées, la structure fibreuse de la kératine transformée et les propriétés optiques du stratum corneum altérées, impactant la qualité d'aspect de la peau. Par ailleurs, la formation d'hydroperoxydes lipidiques résulte de l'attaque de radicaux libres au niveau d'une double liaison d'un acide gras polyinsaturé. En présence d'oxygène, des réactions en chaîne s'en suivent donnant naissance à de nombreux composés de structure différente comme des aldéhydes dont le dialdéhyde malonique particulièrement réactif avec les acides aminés lysine et cystéine pour former des protéines carbonylées. Les lipoperoxydes ont en outre des effets importants sur la stabilité et la perméabilité des membranes cellulaires. De façon avantageuse, Candida saitoana ou un principe actif issu de Candida saitoana utilisé sur la peau stimule l'élimination par la voie de l'autophagie des protéines oxydées et/ou des lipides peroxydés. Candida saitoana ou un principe actif issu de Candida saitoana intervient ainsi dans le processus de détoxification cellulaire et participe à modérer les phénomènes impliqués dans le vieillissement cutanée. Avantageusement l'invention peut donc être utilisée pour améliorer l'état de surface de la peau, en particulier pour lisser le microrelief cutané et améliorer l'éclat du teint. Candida saitoana ou un actif issu de Candida saitoana, permet en effet de régénérer les peaux ternes et intoxiquées pour améliorer leur état de surface : appliqué sur la peau, il présente un effet réparateur et détoxifiant. Les traits du visage sont visiblement lissés, l'éclat des peaux intoxiquées et fatiguées est ravivé. COMPOSITIONS COSMETIQUES ET PROCEDE COSMETIQUE DE SOIN DE LA PEAU La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant au moins un principe actif issu de Candida saitoana présentant une teneur en carbohydrates d'au moins 28%, dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huiledans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersion, gel aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Ces compositions contiennent entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) issus) de Candida saitoana selon la présente invention, préférentiellement entre 0,5% et 3%. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur tels que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Ce milieu contient généralement de l'eau. Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un 5 composé choisi parmi - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba ; 10 - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ; - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ; - les épaississants et/ou gélifiants, 15 - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ; - les filtres organiques, - les filtres inorganiques, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, 20 - les séquestrants, - les parfums, et - leurs mélanges, sans que cette liste ne soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingrédient Dictionary and Handbook publié par le 25 Personal Gare Product Council). Ces compositions sont notamment destinées au soin, au traitement, à la protection de la peau humaine contre les effets d'agressions internes ou externes diverses, en particulier à la détoxification cellulaire et à l'amélioration de l'état de surface de la peau. L'invention vise à cet effet un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à améliorer l'état de surface des peaux ternes et/ou intoxiquées, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition renfermant un principe actif issu de Candida saitoana, en particulier une composition renfermant entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) issu(s) de Candida saitoana selon la présente invention. L'invention vise également un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à lisser le microrelief de la peau et/ou améliorer l'éclat du teint, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition renfermant un principe actif issu de Candida saitoana, en particulier une composition renfermant entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) issu(s) de Candida saitoana selon la présente invention. On peut citer des formulations ayant montré une stabilité physique incluant 5% d'un principe actif selon l'invention. La stabilité est caractérisée par une absence de précipitation de l'extrait, une absence de crémage et une absence de déphasage. Gel limpide : - Carbopol : 0,5% avec Triéthanolamine : qsp pl-I=6,5 - Glycérol : 10,0% - Propylène glycol : 10,0% - Conservateur : 1,0% - Actif issu de Candida saitoana selon l'invention : 5,0% - Eau : 73,5% Gel opaque : - Sépigel 305: 3,0% - Lanol 99 : 12,0% - Conservateur : 1,0% - Actif issu de Candida saitoana selon l'invention : 5,0% - Eau : 79,0% Gel émulsionné : - Montanov 202 : 3,0% - Isopropyl palmitate : 10,0% - Sepigel 305 : 2,0% - Conservateur : 1,0% - Actif issu de Candida saitoana selon l'invention: 5,0% - Eau : 79,0% Emulsion non ionique : - Montane 60 : 2,0% - Montanox 60 : 4,0% - Isopropyl myristate : 8,0% - Paraff in wax 130/135 : 3,0% - Conservateur : 1,0% - Actif issu de Candida saitoana selon l'invention: 5,0% - Eau : 77,0% 15 Emulsion anionique : - Acide stéarique : 7,0% Triethanolamine qsp pH=8 - Ritaphyl ICS : 20,0% - Conservateur : 1,0% - Actif issu de Candida saitoana selon l'invention: 5,0% - Eau : 67,0% 20 Emulsion cationique : - Quaternium-82 : 5,0% - Alcool cétylique : 1,0% - Gemseal 60 : 8,0% - Alcool cétéarylique : 1,0% - PEG 100 stéarate : 1,0% 25 - Conservateur : 1,0% - Actif issu de Candida saitoana selon l'invention: 5,0% - Eau : 78,0% Des tests ont montré la compatibilité du principe actif avec les matières premières utilisées en cosmétique : épaississants, émulsionnants, solvants. On peut également citer des exemples de compositions cosmétiques incluant le principe actif selon l'invention. Les exemples de compositions qui suivent sont obtenus par mélange des différents composants. Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et/ou leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Exemple 1 : crème de Nuit La formulation est la suivante : A. Eau QSP 100% Propylène glycol 10% Carbopol 2050 (Noveon) 0,2% B. DUB MCT 5545 (Stéarinerie Dubois) 107. DUB Liquide 85 (Stéarinerie Dubois) 6% DUB Cire A (Stéarinerie Dubois) 2% DUB G1218A (Stéarinerie Dubois) 3% DUB 1632 (Stéarinerie Dubois) 2% DC 200 (Dow Corning) 2% C. Conservateur 1% Principe actif issu de Candida saitoana selon l'invention 3% D. NaOH 0,5% Cette crème a un pH de 5. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, chauffer à 60°C et bien disperser le gel sous agitation mécanique jusqu'à complète dissolution du carbopol, - chauffer A et B à 80°C, sous agitation mécanique, - émulsionner B dans A sous émulseur, - ajouter C dans l'ordre à 40°C, et homogénéiser, - ajuster le pH avec D à 30°C, - continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que la crème soit uniforme. Exemple 2 : crème de jour anti-âge La formulation est la suivante : A. Eau QSP 100% Carbopol Ultrez 20 (Noveon) 0,3% Glycérol 3% EDTA 0,2% B. Sophim MC30 (Sophim) 6% DUB MCT5545 (Stéarinerie Dubois) 5% Beurre de Karité (Sictia) 3% Stérol CC/595 (Cesalpina) 3% Ritapro 165 (Rita) 3% DC 345 (Dow Corning) 1% DUB Zenoat (Stéarinerie Dubois) 2% C. Conservateur 1% D. Principe actif issu de Candida saitoana selon l'invention 3% TEA qsp pH 5,3 Ce gel émulsionné a un pH de 5,3. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, 25 - mélanger B, - chauffer A et B sous agitation mécanique à 80°C, - émulsionner B dans A sous agitation, - ajouter C dans l'ordre à 50°C, et homogénéiser, - continuer l'homogénéisation en ajoutant D jusqu'à ce que le mélange soit uniforme, et - laisser refroidir sous agitation jusqu'à 30°C. Exemple 3 : sérum La formulation est la suivante : A. Eau QSP 100% Glycérol 3% Carbopol ETC) 2050 (Noveon) 0,3% Butylène Glycol 5% B. DUB ININ (stéarinerie Dubois) 3% Arlamol E (Noveon) 3% DUB PTIS (stéarinerie Dubois) 2% DUB PTCC (stéarinerie Dubois) 3,3% C. Conservateur 1% D. Principe actif issu de Candida saitoana selon l'invention 3% NaOH qsp pH 6,5 Ce sérum a un pH de 6,5. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, en dispersant bien le gel sous agitation mécanique, - mélanger B, - chauffer A et B à 80°C, - émulsionner B dans A sous émulseur, - à 40°C ajouter C dans l'ordre, et homogénéiser, - ajuster le pH avec D, sous agitation mécanique, - continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que le sérum soit uniforme, - laisser sous agitation jusqu'à refroidissement à 30°C. Exemple 4 : émulsion La formulation est la suivante : A. Eau QSP 100% Lanol 99 (Seppic) 5% Sepigel 305 (Seppic) 0,3% B. Montanov 202 (Seppic) 3% Montanov 68 (Seppic) 2,0% C. Conservateur 0,7% Principe actif issu de Candida saitoana selon l'invention 3% Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, en dispersant bien le gel sous agitation mécanique, - mélanger B, - chauffer A et B à 80°C, - émulsionner B dans A sous émulseur, - à 40°C ajouter C dans l'ordre, et homogénéiser, - ajuster le pH, sous agitation mécanique, - continuer l'homogénéisation jusqu'à ce que le sérum soit uniforme, - laisser sous agitation jusqu'à refroidissement à 30°C. EVALUATION DE L'EFFET COSMETIQUE DE CANDIDA SAITOANA Des essais ont été menés pour montrer les effets revendiqués. Le principe actif utilisé pour les études qui suivent est issu de Candida saitoana et présente les caractéristiques suivantes : - solution aqueuse - aspect : liquide limpide - couleur : jaune clair - pH:3,8 - matières sèches : 36,4 g/I - teneur sucres totaux : 16,3 g/I soit 45% en poids de matière sèche - teneur en a-glucanes : 27,9 % en poids par rapport aux carbohydrates totaux. Il est obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - solubilisation de Candida saitoana dans l'eau, - hydrolyse enzymatique à l'aide d'une carbohydrase, - inactivation par traitement thermique, - séparation des phases solubles et insolubles, - concentration de la phase soluble, - filtrations, - filtration stérilisante. 1/ Evaluation de l'effet sur la voie de l'autophagie Cette première étude a pour objectif d'évaluer in vitro l'efficacité d'un actif issu 15 de Candida saitoana sur la synthèse de la protéine LC3, marqueur spécifique des vacuoles autophagiques, les autophagosomes. L'étude a été réalisée par Western Blot et par immunocytologie respectivement sur des kératonicytes humains et sur des kératinocytes HaCat normaux, dont l'autophagie a été induite par une dose modérée de H2O2. 20 Le protocole opératoire est décrit en suivant. Les kératinocytes sont d'abord ensemencés dans un milieu de culture et incubés à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2. Après 48heures d'incubation, le milieu de culture est éliminé et remplacé par un milieu de culture contenant ou non le principe actif issu de Candida saitoana 25 à 0,50% et 1% (V/V). Les cellules sont ensuite incubées pendant 3 heures. Après incubation, le milieu de culture est éliminé et remplacé : - pour les cellules normales : - par le milieu de culture pour une partie (témoin), ou - un milieu de culture contenant le principe actif issu de Candida saitoana à 1% (V/V), pour une autre partie. - pour les cellules � autophagie-induite � - une solution de H2O2 à 250um pour une autre partie (témoin), ou 5 - un milieu de culture contenant le principe actif issu de Candida saitoana à 0,50% (V/V), pour une autre partie. - un milieu de culture contenant le principe actif issu de Candida saitoana à 1% (V/V), pour une troisième partie. Les kératinocytes sont à nouveau incubés. Après 3 heures les milieux de culture 10 sont éliminés et remplacés par un milieu de culture contenant ou non le principe actif issu de Candida saitoana à 0,50% et 1% (V/V). Les cellules sont encore incubées pendant 90 minutes, puis les extraits cellulaires sont récupérés et stockés. a - Quantification par Western blot 15 On réalise une électrophorèse sur gel SbS-polyacrylamide et un immunomarquage, puis on visualise les bandes semi-quantifiées par densitométrique après analyse d'images à l'aide d'un logiciel Multigauge. Les résultats obtenus sont présentés en pourcentage de synthèse de LC3 par rapport au témoin, dans le tableau suivant : Synthèse de LC3 (%) Cellules normales Témoin 100 Actif issu de Candida saitoana 1% 99 Cellules � autophagie-induite � Témoin 238 Actif issu de Candida saitoana 0,5% 255 Actif issu de Candida saitoana 1% 284 On constate donc que testé à 1% sur kératinocytes, un actif issu de Candida saitoana permet de booster de 19% la synthèse de LC3, marqueur spécifique de l'autophagie. b - Visualisation par immunocytologie On réalise un immunomarquage et on visualise les résultats sur microscope couplé à un système d'analyse d'images. L'intensité du marquage des protéines LC3 est proportionnelle à l'intensité de fluorescence verte présente au niveau cytoplasmique des cellules. Plus la couleur verte est importante, plus le taux de synthèse de LC3 est élevé. Les noyaux des cellules apparaissent colorés en bleu. Les résultats immunocytologiques étant qualitatifs, 4 niveaux de synthèse de LC3 ont été définis : - très faible détection d'immunoréactivité (couleur verte très faible) - - faible détection d'immunoréactivité (couleur verte faible) + - moyenne détection d'immunoréactivité (couleur verte moyenne) ++ - forte détection d'immunoréactivité (couleur verte intense) +++ Les résultats obtenus sont résumés dans le tableau ci-dessous : Synthèse de LC3 Cellules normales Témoin - Actif issu de Candida saitoana 1% - Cellules � autophagie-induite � Témoin + Actif issu de Candida saitoana 1% +++ Ces résultats confirment ceux obtenus par Western blot et montrent bien qu'un actif issu de Candida saitoana permet d'augmenter l'activité autophagique des cellules cutanées initialement déclenchée par une dose modérée de H2O2. 2/ Evaluation de l'effet sur la détoxification cellulaire La peau, par son rôle barrière contre les agressions environnementales, est continuellement exposée au stress oxydatif. Les protéines sont susceptibles d'être des cibles du stress oxydatif et de subir ainsi des altérations structurelles dues à ce dernier. La carbonylation des protéines (ajout d'un groupement carbonyle C=O), peut survenir par clivage oxydatif des protéines ou par oxydation directe de certains résidus aminés. La réaction avec des aldéhydes dérivés de la peroxydation lipidique est également à l'origine de la formation de ces groupements carbonyles. Cette modification de la structure des protéines est irréversible et participe au vieillissement prématuré de la peau ainsi qu'à la diminution de la transmission de lumière du stratum corneum modifiant la qualité de l'aspect de la peau. 2.a Etude in vivo de l'effet sur le taux de protéines oxydées La présente étude a pour objectif d'évaluer in vivo l'influence d'un actif issu de Candida saitoana formulé à 3% en émulsion de l'exemple 4 sur la formation de protéines oxydées induites par des facteurs environnementaux au niveau du stratum corneum. L'étude a été réalisée contre placebo sur 19 volontaires sains, sélectionnés selon 25 un critère de peau � intoxiquée � caractérisée par un taux de protéines et lipides oxydés élevés. En effet, une étude préalable menée sur 2 groupes de volontaires : le premier groupe (35 volontaires) correspondant à des personnes présentant un teint éclatant, le second groupe (37 volontaires) correspondant aux personnes présentant un teint terne, a permis de mettre en évidence une différence significative du taux de protéines et de lipides oxydés entre le groupe de personnes au teint terne et celui de personnes présentant un teint éclatant (respectivement +13% et +33% de variation par rapport au teint éclatant). Le marquage des protéines oxydées a été réalisé sur des prélèvements de stratum corneum réalisés à l'aide d'un adhésif au niveau des joues avant et après 14 jours d'applications biquotidiennes. Le protocole opératoire est le suivant. Pendant 14 jours, les volontaires appliquent deux fois par jour un placebo sur le visage. A Jo, on réalise un prélèvement au niveau des joues de chaque volontaire. Les volontaires appliquent deux fois par jour la composition comprenant l'actif de Candida saitoana et le placebo. A J14 on réalise un dernier prélèvement au niveau des joues de chaque volontaire. Les protéines oxydées sont directement marquées sur l'adhésif prélevé sur le volontaire à l'aide d'une solution de fluoresceine-5-thiosemicarbazide (FTZ), marqueur spécifique des groupements carbonyles. Ce marquage permet d'évaluer la quantité de protéines oxydées présentes à la surface de la peau. Plus le taux de protéines oxydées de l'échantillon de stratum corneum est important, plus la fluorescence sera importante dans la longueur d'onde verte. La fluorescence est observée grâce à un microscope à fluorescence équipé d'une caméra couplée à un logiciel d'analyse d'images. Les variations observées sous l'effet du produit testé contre placebo sont 25 calculées en pourcentage à partir des valeurs moyennes. Les résultats globaux montrent qu'après 14 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, l'actif issu de Candida saitoana formulé à 3% en émulsion, diminue la quantité de protéines oxydées de 13,9%. En limitant la quantité de protéines oxydées, l'actif issu de Candida saitoana favorise la détoxification cellulaire. 2.b Etude in vivo de l'effet sur le taux de lipides peroxydées Le vieillissement est un processus multifactoriel lié à une accumulation de dommages cutanés. Les agressions environnementales et les espèces radicalaires produites au cours du métabolisme cellulaire sont à l'origine d'un stress oxydatif impliqué dans le vieillissement prématuré de la peau. Ce stress oxydatif génère entre autre la formation de lipides peroxydés au niveau des membranes cellulaires et des lipoprotéines. L'objectif de cette étude est d'évaluer in vivo l'effet anti-lipoperoxydant d'un actif issu de Candida saitoana formulé à 3% en émulsion (exemple 4) contre placebo au niveau des joues. L'étude a été réalisée contre placebo sur 19 volontaires sains, sélectionnés selon 15 un critère de peau intoxiquée c'est-à-dire un taux de protéines et lipides oxydés élevés. L'effet anti-lipoperoxydant a été évalué par dosage des lipides peroxydés sur des prélèvements de stratum corneum réalisés à l'aide d'un adhésif au niveau des joues avant et après 14 jours d'applications biquotidiennes. 20 Le protocole opératoire est le suivant. Pendant 14 jours, les volontaires appliquent deux fois par jour un placebo sur le visage. A Jo, on réalise un prélèvement au niveau des joues de chaque volontaire et on stocke les prélèvements à -20°C. 25 Les volontaires appliquent deux fois par jour la composition comprenant l'actif de Candida saitoana et le placebo. A J14 on réalise un dernier prélèvement au niveau des joues de chaque volontaire et on stocke les prélèvements à -20°C. Les lipides peroxydés sont prélevés à l'aide d'éthanol absolu. Les lipides peroxydés sont dosés par une méthode spectrophotométrique à une absorbance de 500nm, en utilisant une gamme de calibration de lipides peroxydés à différentes concentrations. Les variations observées sous l'effet du produit contre placebo sont calculées en pourcentage à partir des valeurs moyennes. Les résultats globaux montrent qu'après 14 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, l'actif issu de Candida saitoana formulé à 3% en émulsion, diminue la quantité de lipides peroxydés de 23,4%. En limitant la quantité de lipides peroxydés, l'actif issu de Candida saitoana renforce le processus de détoxification cellulaire. 3/ Evaluation de l'effet sur le microrelief cutané Cette étude a pour but d'évaluer in vivo l'effet lissant d'un actif issu de Candida 15 saitoana formulé à 3% en émulsion (exemple 4) contre placebo au niveau des joues par projection de franges. L'étude a été réalisée sur 19 volontaires sains sélectionnés selon un critère de peau intoxiquée c'est-à-dire un taux de protéines et lipides oxydés élevés. Des empreintes au niveau des joues ont été réalisés avant et après 14 jours de 20 traitement biquotidien et analysées par projection de franges. Le protocole opératoire est le suivant. Pendant 14 jours, les volontaires appliquent deux fois par jour un placebo sur le visage. A Jo, on réalise des empreintes au niveau des joues de chaque volontaire. 25 Les volontaires appliquent deux fois par jour la composition comprenant l'actif de Candida saitoana et le placebo. A J14 on réalise à nouveau des empreintes au niveau des joues de chaque volontaire. Pour l'analyse des empreintes, l'effet est mesuré sur une région d'intérêt de 10mm2 découpée automatiquement sur l'acquisition originale. Les paramètres les plus pertinents retenus pour cette étude sont des paramètres de rugosité en 3D: - Sq : moyenne quadratique de rugosité de surface, - Sa : moyenne arithmétique de rugosité de surface. Une diminution de ces différents paramètres est caractéristique d'un lissage de la surface étudiée. Les variations observées sous l'effet du produit testé contre placebo sont 10 calculées en pourcentage à partir des valeurs moyennes. Les résultats globaux après 14 jours d'applications biquotidiennes sont présentés dans le tableau suivant : Variation / Placebo (%) -6,2% -7,0% 15 Ces résultats montrent bien que dans les conditions de cette étude, après 14 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, un actif issu de Candida saitoana selon l'invention formulé à 3% en émulsion, lisse le microrelief cutané au niveau des joues. 20 4/ Evaluation de l'effet sur l'éclat du teint L'objectif de cette étude est d'évaluer in vivo l'influence d'un actif issu de Candida saitoana formulé à 3% en émulsion (exemple 4) contre placebo sur l'éclat du teint. L'éclat du teint est une notion subjective, néanmoins admise par tous, qui repose 25 sur la réflexion de la lumière sur la peau. L'éclat du teint est influencé par Paramètre Sa Paramètre Sq différents paramètres tels que le style de vie ou l'environnement. Le stress oxydatif lié aux agressions environnementales entraîne l'altération de différentes structures moléculaires telles que les protéines et participe ainsi à l'altération de l'aspect de la peau en jouant sur la diminution de la transmission de lumière du stratum corneum. La présente étude a été réalisée sur 19 volontaires sains sélectionnés selon un critère de peau intoxiquée c'est-à-dire un taux de protéines et de lipides oxydés élevés. L'évaluation de l'éclat du teint a été réalisé en aveugle par un expert entraîné, 10 avant et après 14 jours d'applications biquotidiennes Le protocole opératoire est le suivant. Pendant 14 jours, les volontaires appliquent deux fois par jour un placebo sur le visage. A Jo un expert évalue l'éclat du teint. 15 Les volontaires appliquent deux fois par jour la composition comprenant l'actif de Candida saitoana et le placebo. A J14 on réalise à une évaluation de l'éclat du teint. L'évaluation de l'éclat du tient se fait à partir d'échelles de scores (de 1 à 10) pour les paramètres suivants : 20 - le rayonnement de la peau, caractéristique d'un teint éclatant : plus l'intensité des accroches de lumière sur les zones saillantes du visage est importante, plus la peau est lumineuse, - la transparence de la peau, qui permet d'apercevoir les veinules à travers la peau : plus la peau est fine, plus elle laisse passer la lumière ce qui 25 donne un effet bonne mine, - la couleur rose claire, qui permet de caractériser un teint éclatant : plus le teint est rosé, plus il est perçu comme frais, - la couleur olive, paramètre représentatif de l'effet bonne mine : si la couleur olive diminue, l'effet bonne mine est plus important. L'évaluation ces paramètres se fait sur les zones suivantes : pommettes, front, menton et yeux. Les variations observées sous l'effet du produit testé contre placebo sont calculées en pourcentage à partir des valeurs moyennes. Les résultats globaux sont présentés dans le tableau suivant : Variation / Placebo (%) Rayonnement +8% Transparence +9,4% Couleur rose +10,7% Couleur olive -8,3% On constate ainsi qu'après 14 jours d'applications biquotidiennes en comparaison au placebo, un actif issu de Candida saitoana formulé à 3% en émulsion, améliore l'éclat du teint : - il augmente le rayonnement et la transparence de la peau, - il augmente la couleur rose et diminue la couleur olive. L'actif issu de Candida saitoana favorise ainsi l'amélioration des paramètres importants intervenants dans l'appréciation de l'éclat du teint. Ces différents essais montrent donc bien les effets cosmétiques d'un actif issu de Candida saitoana et d'une composition cosmétique l'incluant, sur la stimulation de la voie de l'autophagie ainsi que les conséquences qui en découlent sur la détoxification des cellules, et visuellement, sur l'état de surface de la peau. REVENDICATIONS1. Utilisation de Candida saitoana ou d'un actif issu de Candida saitoana en tant que principe actif cosmétique. 2. Principe actif cosmétique issu de Candida saitoana, caractérisé en ce qu'il comprend des composés de nature carbohydrate. 3. Principe actif cosmétique issu de Candida saitoana selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il présente une teneur en carbohydrates supérieure ou égale à 28% par rapport à la teneur totale en matière sèche. 4. Principe actif cosmétique issu de Candida saitoana selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce qu'il présente une teneur en carbohydrates comprise entre 28 et 67% par rapport à la teneur totale en matière sèche. 5. Principe actif cosmétique issu de Candida saitoana selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisé en ce qu'une partie des carbohydrates sont présents sous forme d'oligosaccharides d'a-glucanes. 6. Principe actif cosmétique issu de Candida saitoana selon la revendication 5, 15 caractérisé en ce que les carbohydrates sont présents sous forme d'oligosaccharides d'a-glucanes pour au moins 20%. 7. Principe actif cosmétique issu de Candida saitoana selon l'une des revendications 2 à 6, caractérisé en ce qu'il présente les caractéristiques suivantes 20 - un taux de matières sèches compris entre 7 et 125 g/I, - un pH compris entre 2,5 et 5,5. 8. Principe actif cosmétique issu de Candida saitoana selon l'une des selon l'une des revendications 2 à 7, caractérisé en ce qu'il présente les caractéristiques suivantes : 25 - un taux de matières sèches compris entre 30 et 45 g/I,- un pH compris entre 3,0 et 4,0. 9. Utilisation cosmétique sur la peau de Candida Saitoana ou d'un principe actif selon l'une des revendications 2 à 8, pour activer l'autophagie des cellules cutanées. 10. Utilisation cosmétique sur la peau de Candida Saitoana ou d'un principe actif selon l'une des revendications 2 à 8, pour activer l'autophagie des cellules cutanées en stimulant la synthèse de LC3. 11. Utilisation cosmétique sur la peau de Candida saitoana ou d'un principe actif selon l'une des revendications 2 à 8, pour la détoxification des cellules cutanées. 12. Utilisation cosmétique sur la peau de Candida saitoana ou d'un principe actif selon l'une des revendications 2 à 8, pour améliorer l'éclat du teint et/ou pour lisser le microrelief cutané. 13. Procédé d'obtention d'un principe actif cosmétique selon l'une des 15 revendications 2 à 8, comprenant au moins une étape de solubilisation de Candida saitoana en milieu aqueux et au moins une d'hydrolyse enzymatique. 14. Procédé d'obtention d'un principe actif selon l'une des revendications 2 à 8, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes : - culture de levures de Candida saitoana, 20 - solubilisation aqueuse des levures obtenues, - au moins une hydrolyse enzymatique en vue d'obtenir des oligosaccharides, - inactivation des activités enzymatiques par traitement thermique, - séparation des phases soluble et insoluble, 25 - concentration de la phase soluble pour récupérer une fraction active comprenant des composés de nature carbohydrate. 15. Composition cosmétique pour application topique, caractérisée en ce qu'elle comprend un principe actif selon l'une des revendications 2 à 8. 16. Composition cosmétique selon la revendication 15, caractérisée en ce qu'elle comprend entre 0,01 et 20% en poids d'un principe actif selon l'une des revendications 2 à 8. 17. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à améliorer l'état de surface des peaux ternes et/ou intoxiquées, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition renfermant un principe actif selon l'une des revendications 2 à 8. 18. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à lisser le microrelief de la peau et/ou améliorer l'éclat du teint, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition renfermant un principe actif selon l'une des revendications 2 à 8.