Brevet FR2957515A1 — publié le 20110923

PROCEDE DE PRELEVEMENT CUTANE A HAUTE RESOLUTION SPATIALE DESTINE A LA RECHERCHE ET L'ANALYSE BIOMEDICALE DESCRIPTION Domaine technique La présente invention concerne un procédé de transfert sélectif 10 ou prélèvement d'au moins un matériel biologique sur une surface d'un substrat, au moyen d'un timbre. Ce procédé présente notamment l'avantage d'être non invasif, de permettre la localisation des prélèvements sur la surface du substrat, de sélectionner spécifiquement les espèces biologiques d'intérêt prélevées, puis de déposer ces espèces sur un 15 support avec une excellente fidélité pour des travaux ultérieurs, notamment de recherche et d'analyse biomédicale. Le prélèvement peut par exemple être réalisé depuis la surface d'un tissu d'un organisme biologique, humain, animal ou végétal ou depuis celle d'un instrument après son introduction dans le tissu. II permet 20 d'obtenir, par exemple, des informations vitales à la pose de diagnostic par le médecin et la mise en place d'un traitement. Dans d'autres cas, le calcul de l'activité d'enzymes au sein d'un tissu, utilisées comme marqueur d'une maladie peut être intéressant. De même, pour certaines maladies qui entraînent des 25 anomalies des nerfs, la capacité d'examiner directement ces derniers peut-être avantageux dans le diagnostic et le traitement de ces maladies. Par exemple, l'examen microscopique d'un échantillon de nerf peut révéler si la gaine de myéline protectrice qui entoure le nerf, est intacte ou en voie de dégradation. Les prélèvements musculaires peuvent avoir le même 30 objectif, puisque les maladies qui affectent la structure et/ou le fonctionnement des nerfs, affectent les muscles dans lesquels passe le5 nerf. La perte de la fonction musculaire peut être la conséquence directe de dommages au système nerveux. Par ailleurs, les prélèvements cutanés sont essentiels pour confirmer un diagnostic et classifier certaines maladies comme par exemple la lèpre ; l'érythème ; les urticaires aiguës et chroniques ; les éruptions toxidermiques ; le psoriasis ; l'acné ; les dermatoses bactériennes, virales, fungiques, parasitaires, neutrophiliques ; l'eczéma ; les cancers épithéliaux ; la dermatite atopique. Les prélèvements cutanés peuvent également permettre de diagnostiquer et de décrire des traitements locaux d'aide à la cicatrisation des plaies. Dans la description ci-dessous, les références entre crochets [ ] renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte. Etat de la technique Le prélèvement d'un échantillon biologique à des fins analytiques, thérapeutiques, diagnostiques etc. est un acte courant et important dans le domaine médical. Les méthodes de prélèvements surfaciques actuelles sont, pour la plupart, non localisées, invasives et/ou non sélectives ce qui moyenne les prélèvements sur l'ensemble d'une lésion. La non sélectivité peut avoir pour effet de masquer un certain nombre de marqueurs plus pertinents que d'autres par un effet de moyennage. Aujourd'hui, l'un des moyens le plus utilisé est l'écouvillonnage. L'écouvillonnage permet de prélever les micro-organismes et cellules présents à la surface d'un tissu comme la peau ou un organe, en le « raclant » et en récupérant de façon grossières l'ensemble du matériel biologique. Le geste même induit un mélange de cellules prélevées sur toute la zone « frottée ». Par ailleurs, l'échantillon prélevé par écouvillonnage doit ensuite être cultivé ce qui suppose inévitablement de faire l'hypothèse d'une non-modification des espèces pendant la culture, hypothèse qui ne peut être vérifiée à chaque fois. II existe donc un réel besoin dans le secteur médical, d'une technologie permettant de réaliser des prélèvements de matériel biologique de manière non invasive, localisée et sélective. Depuis environ 10 ans, la lithographie douce a été développée afin de déposer sur une surface des molécules suivant des motifs micrométriques et nanométriques. Introduite par G. Whitesides dans les années 1980, la méthode utilise un timbre élastomère en polydiméthylsiloxane (PDMS) qui peut être moulé rapidement à bas coût sur des surfaces de silicium structurées à petites échelles par des méthodes de microfabrication issues de la microélectronique. Après moulage, le timbre en PDMS présente à sa surface des motifs conformes à ceux inscrits dans le moule de silicium. Par incubation dans une solution contenant les molécules d'intérêt, la surface du timbre s'imprègne puis par simple contact entre ce timbre et un substrat, il est alors possible d'imprimer des motifs moléculaires comme décrit dans G. M. Whitesides et al, Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, 550 ù 575 [1]. Cette technologie d'impression a permis la réalisation d'une autre technologie pour fabriquer des biopuces à ADN et à protéines à très bas coût. Dans cette technologie, une architecture particulière de timbre en PDMS permet de déposer différentes molécules en une seule étape, comme décrit dans la demande de brevet FR 2 921 002 [2]. Description de l'invention De manière tout à fait inattendue, les inventeurs ont réussi à utiliser un « timbre » comme un outil de transfert, c'est-à-dire de prélèvement et dépôt, sélectif et localisé de matériel biologique présent à la surface d'un tissu et/ou d'un organe vers un substrat, et ce avec une excellente fidélité, sans passer par une étape de culture dudit matériel. 4 Ceci est d'autant plus inattendu que la surface des tissus comme la peau et/ou des organes comme les glandes salivaires, n'est pas lisse et présente habituellement des reliefs, des dépressions et/ou des orifices, ce qui faisait obstacle, dans les procédés de l'art antérieur, à un prélèvement fidèle du matériel biologique. De manière avantageuse, le timbre utilisé dans la présente invention est non seulement capable de s'adapter à la morphologie des différents tissus et/ou organes, mais aussi d'assurer un contact conforme permettant un transfert localisé, sélectif et fidèle du matériel biologique. Par ailleurs, dans l'art antérieur, il n'existait pas de procédé ou timbre biocompatible qui soit en même temps capable de prélever efficacement le matériel biologique depuis le tissu et/ou l'organe et le déposer par simple contact sur la surface du substrat sans entraîner la dénaturation dudit matériel biologique. Le timbre utilisé dans la présente invention permet avantageusement un prélèvement efficace du matériel biologique depuis le tissu et/ou l'organe et un dépôt par simple contact sur la surface du substrat sans entrainer la dénaturation dudit matériel. Aussi, la présente invention permet précisément de répondre aux besoins et de résoudre les problèmes techniques de l'art antérieur en fournissant un procédé de transfert sélectif d'au moins un matériel biologique depuis une surface S1 vers une surface S2 d'un substrat, au moyen d'un timbre, comprenant les étapes suivantes : (i) mise en contact de la surface S1 avec un timbre ; (ii) adsorption éventuellement sélective sur le timbre, d'au moins un matériel biologique présent sur la surface S1 ; (iii) application du timbre sur la surface S2 d'un substrat de telle sorte que le(s) matériel(s) biologique(s) adsorbé(s) se dépose(nt) éventuellement sélectivement sur la surface S2 dudit substrat. Le procédé de l'invention est une avancée importante dans le domaine des transferts surfaciques de matériel biologique. Avec ce procédé, il est possible d'effectuer directement l'analyse du matériel transféré, sans passer par une étape de culture qui peut induire une incertitude quant à la réalité du résultat. Ce procédé diffère des procédés déjà existants car il est non invasif, il permet de localiser les prélèvements, de sélectionner spécifiquement les matériels biologiques d'intérêt, puis de déposer ces échantillons sur un support solide avec une excellente fidélité pour des caractérisations et recherches ultérieures. Dans le cadre de l'invention, le terme « transfert » englobe le prélèvement d'un échantillon suivi de son dépôt sur un substrat. La sélectivité du transfert peut avoir lieu au stade du prélèvement du matériel biologique et/ou au stade de dépôt sur le substrat. Par « matériel biologique », on entend par exemple tout matériel d'origine biologique pouvant se trouver à la surface ou dans un tissu. Il peut s'agir de protéines à activités catalytiques, par exemple les enzymes, les acides nucléiques, etc. ; des protéines à activités thérapeutiques, des anticorps, par exemple des anticorps monoclonaux ; des cellules, par exemple eucaryotes ou procaryotes ; des microorganismes, par exemple des virus, des bactéries, des parasites, des champignons, des levures, etc. Un ou plusieurs types de matériels biologiques, identiques ou différents, peuvent être transférés simultanément par le procédé de l'invention. Dans la suite de l'exposé, le terme « matériel biologique », même utilisé au singulier, doit être compris comme étant un ou plusieurs matériels biologiques. Dans le procédé de l'invention, l'outil de transfert, c'est-à-dire de prélèvement et de dépôt du matériel biologique est un timbre. Le choix du matériau constituant le timbre est d'une grande importance. Le timbre doit avantageusement être assez souple pour permettre un contact uniforme sur toute la surface de S1 et assez rigide pour que le matériel prélevé ou adsorbé ne soit pas déformé et puisse être reproduit de façon fidèle à la surface S2 du substrat. Par ailleurs, la capacité d'adhésion du timbre doit être telle qu'elle permet d'adsorber efficacement à sa surface le matériel biologique depuis la surface S1 et que ledit matériel puisse être déposé sur la surface S2 du substrat par simple contact sans sa dénaturation, même dans le cas où il s'agit de cellules vivantes. Le timbre est avantageusement constitué d'un matériau biocompatible et inerte, durcissable de type thermoplastique et/ou élastomère, comme par exemple un polydiméthylsiloxane (PDMS), un polyméthylméthacrylate (PMMA). Le timbre peut être de toute forme appropriée pour le prélèvement. Il peut être choisi par exemple plat, d'épaisseur contrôlée ou micro et nanostructurés, par exemple comme décrit dans G. M. Whitesides et al [1], ou présenté le format d'un macrotimbre muni de plots micro- et nanométriques comme décrit dans FR 2 921 002 [2]. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention le timbre est un macrotimbre en polydiméthylsiloxane (PDMS) muni de plots micro-et nanométriques comme décrit dans FR 2 921 002 [2]. En raison des capacités de moulage du PDMS, le prélèvement surfacique du matériel biologique peut être opéré de manière localisée dans l'espace sous forme d'une matrice de points de prélèvement. La nature souple du PDMS permet l'adaptation de la surface du timbre à la conformation complexe que certaines surfaces S1 comme la peau peuvent avoir. Lorsqu'il s'agit d'un macrotimbre en PDMS muni de plots, la dimension des plots, c'est-à-dire leur largeur, leur espacement et leur hauteur, peut être ajustée de façon à assurer un contact conforme entre le timbre et le substrat qui peut être un substrat souple comme la peau. Les plots peuvent être structurés avec des motifs micrométriques ou nanométriques à souhait, par exemple comme décrit dans FR 2 921 002 [2]. Les timbres de PDMS restent souples une fois réticulés. Ils peuvent alors facilement épouser la zone lésionnelle à prélever, quelle que soit sa localisation. De plus, les timbres de PDMS présentent une 7 excellente transparence optique dans le visible et sont compatibles avec toutes les techniques d'imagerie comme par exemple l'AFM (Microscopie à Force Atomique), la MEB ou SEM en anglais (microscopie électronique à balayage ou « Scanning Electron Microscopy » en anglais) ce qui permet de réaliser une caractérisation à tous les stades du procédé de l'invention. Au cours de l'étape (i) du procédé de l'invention, le timbre est mis en contact avec la surface S1. La surface S1 peut être toute surface portant ou susceptible de porter de manière superficielle ou interne du matériel biologique. Par « superficiel » on entend à la surface du tissu ou de l'organe et directement accessible. Par « interne », on entend à l'intérieur du tissu ou de l'organe et qui nécessite d'ouvrir ou d'inciser la surface du tissu ou de l'organe pour faire le prélèvement selon l'invention. La surface S1 peut être la partie superficielle ou interne d'un tissu biologique choisi par exemple parmi la peau ou épiderme, les ongles, un organe choisi parmi, par exemple, le cerveau, les poumons, le foie, l'intestin, les glandes salivaires, la glande thyroïde, les reins, etc. La surface S1 est plus particulièrement la peau. La surface S1 peut également être la partie superficielle ou surface ou une surface interne d'une prothèse choisie par exemple, parmi une prothèse cardiaque, un stimulateur cardiaque comme un pacemaker, une prothèse de genou. La surface S1 peut être également la surface d'un dispositif médical qui comporte ou qui est susceptible de comporter, à sa surface, au moins un matériel biologique tel que défini ci-dessus. A titre d'exemple de dispositif médical, on peut citer une pince à biopsie, un endoscope, un cathéter, une sonde, une aiguille ou tout dispositif permettant de prélever un échantillon de tissu à l'intérieur d'un organisme, le procédé de l'invention étant réalisé in vitro sur l'échantillon prélevé. Dans l'étape (i), la durée de mise en contact de la surface S1 avec le timbre est une durée permettant l'adsorption éventuellement sélective du matériel biologique. Par exemple, cette durée peut être d'au moins une seconde à quelques minutes, par exemple de 1 seconde à 15 minutes, par exemple de 2 secondes à 10 minutes, par exemple de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 56, 57, 58, 59 ou 60 secondes, par exemple de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 minutes. Dans un mode de réalisation de l'invention, la durée de mise en contact de la surface S1 avec le timbre est de 5 à 7 minutes, par exemple 6 minutes. Dans l'étape (i), la mise en contact peut avoir lieu à la température ambiante, c'est-à-dire sans chauffage ou refroidissement, par exemple entre 20 et 40°C, par exemple entre 20 et 30°C, par exemple entre 20 et 25°C. La mise en contact peut également se faire à partir d'un timbre chauffé à une température de 20 à 40°C, par exemple de 30 à 40°C, par exemple de 36 à 38°C, par exemple à 37°C. L'étape (ii) du procédé de l'invention consiste à adsorber à la surface du timbre, éventuellement de manière sélective, au moins un matériel biologique présent sur la surface S1. II est possible de conférer au timbre des propriétés particulières en surface par un traitement de surface approprié. Un tel traitement peut par exemple favoriser une adsorption sélective du matériel biologique sur le timbre. Un traitement de surface du timbre peut également accroître la cinétique et/ou l'efficacité de l'adsorption. Dans un mode de réalisation de l'invention, dans l'étape (ii) l'adsorption d'au moins un matériel biologique présent sur la surface S1 sur le timbre, est sélective. A cet effet, préalablement à l'adsorption, le timbre peut subir par exemple un traitement de surface permettant l'adsorption sélective à sa surface d'un ou de plusieurs matériel(s) biologique(s) par rapport à l'ensemble des matériels biologiques présents à la surface S1. Le traitement de surface peut être par exemple un traitement de surface conventionnel, par exemple un traitement plasma ; un traitement ou dépôt en phase liquide, par exemple par encrage d'une ou de plusieurs molécules comme décrit dans le document Cerf, A.; Cau, J.-C.; Vieu, C.; Dague, E., Nanomechanical properties of dead or alive single-patterned bacteria. Langmuir 2009, 25, (10), 5731-5736 [3] ; un dépôt en phase vapeur, par exemple par silanisation comme décrit dans le document Ressier, L.; Viallet, B.; Beduer, A.; D., F.; Fabié, L.; Palleau, E.; Dague, E., Combining convective/capillary deposition and AFM oxidation lithography for close-packed directed assembly of colloids. Langmuir 2008, 24, (23), 13254-13257 [4] ; une impression par microcontact ou « pcontact printing », c'est-à-dire un contact du timbre préleveur avec un tampon encreur comme décrit dans le document Chalmeau, J., Thibault, C. et al. (2008), "Micro-contact printing of two different biomolecules in one step using deformable poly(dimethylsiloxane)-based stamp." Japanese Journal of Applied Physics 47: 5221-5225 [5]. Le traitement de surface du timbre peut également, en plus des traitements de surface précités ou alternativement à ceux-ci, comporter la fixation d'une ou de plusieurs molécule(s) biologique(s) complémentaire(s) de la ou des molécule(s) à prélever sur la surface SI. Lorsque les molécules à prélever sont par exemple des acides nucléiques (AN), des acides ribonucléiques (ARN), des acides désoxyribonucléiques (ADN), des enzymes, des substrats d'enzymes, des antigènes ou des anticorps, les molécules biologiques qui peuvent être fixées à la surface du timbre pour un prélèvement sélectif des molécules précités peuvent être respectivement des brins d'AN complémentaires des AN à prélever, des brins d'ARN complémentaires des ARN à prélever, des brins d'ADN complémentaires des ADN à prélever, des substrats dont les enzymes sont les enzymes à prélever, des enzymes ayant pour substrat les substrats à prélever, des anticorps des antigènes à prélever ou des antigènes des anticorps à prélever, comme décrit par exemple dans Bernard et al., 2001. Nature Biotechnology 19, 866-869 [6]. La reconnaissance de ces molécules entre elles et leur appariement ou interactions permet un prélèvement sélectif des molécules au moyen du procédé de la présente invention sur la surface S1. Selon l'invention, le traitement de surface peut être homogène, sélectif et multiplexé, par exemple par encrage d'un macrotimbre dans une plaque à puits, comme décrit par exemple dans le document Lalo, H., Cau, J. C., et al. 2009. "Microscale multiple biomolecules printing in one step using a PDMS macrostamp." Microelectron. Eng. 86: 1428-1430 [7] ou une combinaison des deux derniers L'étape (iii) de l'invention consiste à appliquer le timbre sur la surface S2 d'un substrat de telle sorte que le(s) matériel(s) biologique(s) adsorbé(s) se dépose(nt) éventuellement sélectivement sur la surface S2 dudit substrat. La surface S2 d'un substrat peut être la surface d'un substrat choisi parmi une lame ou plaque de verre, de plastique, de métal, de textile, de mica, de silicium, de polymères, comme décrit par exemple dans le document PMMA Kraus et al., 2007, Nature Nanotech. 2. 570-576 [8], et de papier. Ledit substrat S2 peut être souple ou rigide. Selon un mode de réalisation de l'invention, le(s) matériel(s) biologique(s) adsorbé(s) se dépose(nt) sélectivement sur la surface S2 d'un substrat. Dans ce mode de réalisation, le dépôt peut être obtenu par exemple en fonctionnalisant la surface S2 du substrat avec une molécule possédant une affinité spécifique avec un matériel biologique ciblé. Des exemples sont donnés ci-dessus et ci-après. Pour un dépôt sélectif, préalablement à l'application du timbre, la surface S2 du substrat subit un traitement de surface permettant le dépôt sélectif d'un ou de plusieurs matériels biologiques sur la surface S2 dudit substrat. Le traitement de surface peut être choisi parmi ceux cités précédemment pour le timbre. La surface S2 peut, en outre, être fonctionnalisée par impression microcontact (« microcontact printing ») de la manière indiquée ci-dessus. Recueillir sélectivement à partir d'un premier prélèvement large ou sélectif, uniquement du matériel choisi est très avantageux. En effet, un dépôt sélectif des matériels biologiques depuis la surface du timbre vers le substrat peut être réalisé grâce au procédé de la présente invention, par simple contact mécanique sans dénaturation des matériels même lorsqu'il s'agit de cellules vivantes. Le substrat S2 peut être un support d'analyse. Dans ce cas, le(s) matériel(s) biologique(s) peu(ven)t être transféré(s) directement par exemple depuis la surface d'un tissu et/ou d'un organe vers un substrat d'analyse, sans passer par une étape de culture dudit matériel. Ainsi, l'étape de culture qui induit un moyennage des données, des contaminations, provenant par exemple du manipulateur et/ou de l'environnement de la manipulation, et une dilution de l'information est éliminée. Le(s) matériel(s) biologique(s) adsorbé(s) à la surface du timbre peut (peuvent) être déposé(s), éventuellement sélectivement, sur la surface S2 dudit substrat, par exemple par impression. L'impression peut être par exemple une technique de lithographie douce, comme décrite par exemple dans le document Kumar, A.; Whithesides, G. M., Features of gold having micrometer to centimeter dimensions can be formed through a combination of stamping with an elastomeric stamp and an alkanethiol "ink" followed by chemical etching. Appl. Phys. Lett. 1993, 14, 2002-2004 [9]. La lithographie douce est une technique de lithographie qui utilise un élastomère, le plus souvent du polydiméthylsiloxane. Ce matériau, liquide avant réticulation, peut reproduire la structure d'un moule plat ou présentant des motifs de toutes dimensions, par exemple du micromètre au nanomètre, à sa surface. La lithographie douce est une forme de lithographie par impression dans laquelle on utilise une matière plus ou moins souple, par exemple un timbre ou tampon, pour imprimer des molécules sur une surface à une échelle du micromètre au nanomètre. L'impression peut être effectuée en milieu humide, c'est-à-dire en déposant le matériel biologique par l'intermédiaire d'un film de solution liquide adéquate, comme décrit par exemple dans Cerf, A.; Vieu, C., Transfer printing of sub-100 nm nanoparticles by soft lithography with solvent mediation. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects 2009, 342, (1-3), 136-140 [10]. Le timbre utilisé dans ce procédé présente l'avantage d'être parfaitement compatible avec toutes les techniques de lithographie pour les nano ou les microtechnologies. Ainsi, le procédé de l'invention est un procédé simple à exécuter, non invasif et non agressif et peut être spécifique d'un matériel biologique d'intérêt qui peut être utilisé par exemple comme outil de collecte pour mettre en oeuvre un procédé de détection, un procédé diagnostique et/ou suivi thérapeutique. La présente invention fournit un procédé de prélèvement cutané avec une résolution spatiale submicronique. La sélectivité peut être utilisée au niveau du prélèvement, en fonctionnalisant le timbre avec des molécules spécifiques, par exemple comme indiqué dans la présente, et/ou en fonctionnalisant la surface S2, par exemple la surface d'analyse, comme indiqué dans la présente. Il y a donc possibilité d'une double sélectivité, ce qui permet avantageusement d'affiner l'analyse qui peut ensuite être effectuée sur la surface S2. Avec le procédé de l'invention, il est possible de corréler l'observation macroscopique et microscopique d'une lésion, l'analyse peut être faite directement sur le matériel biologique transféré sans passer par une phase de culture pour concentrer le matériel, le procédé peut être rendu spécifique du matériel biologique d'intérêt. D'autres caractéristiques et avantages apparaîtront encore à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, donnés à titre illustratif et non limitatif, en référence aux figures annexées. Brève description des figures ù La figure 1 représente le principe des cascades d'adhésion mises en oeuvre dans l'invention. La première étape consiste à procéder au prélèvement des molécules (M) de la zone d'intérêt en mettant en contact un timbre (T) avec la surface (Si) de prélèvement (peau, instrument, outil). La deuxième étape consiste à imprimer le matériel prélevé avec le timbre (T) sur la surface S2. ù Les figures 2 et 3 représentent des exemples surfaces de prélèvement S1 possibles. À titre d'exemple, sont présentées : la peau (figure 2), une prothèse de hanche (figure 3). ù La figure 4 représente des exemples d'architecture du timbre préleveur : il peut être par exemple plat (figure 4(a)), fonctionnalisé ou non, il peut également être micro ou nano structuré (figure 4(b)), les plots (P) pouvant être fonctionnalisés de façon homogène (la même fonctionnalisation pour tous les plots) ou multiplexée (différentes fonctionnalisations sur les différents plots) ou toutes combinaisons. ù La figure 5 est une image par microscopie électronique à balayage du support d'analyse après transfert du prélèvement du timbre sur le support d'analyse selon le procédé d'invention. L'échelle de taille est indiquée sur la photographie. EXEMPLES Exemple 1 : Fabrication d'un timbre préleveur utilisable pour la mise en oeuvre de la présente invention La technologie Macrotimbre (marque déposée) est utilisée ici. Elle implique la fabrication d'un moule en silicium et d'un cadre capable de générer les plots millimétriques adaptés aux plaques de titration standards. La fabrication du cadre est décrite dans la référence [2]. Les moules en silicium structurés sont fabriqués par photolithographie pour des motifs micrométriques et par lithographie électronique pour des motifs nanométriques. Le procédé de photolithographie utilisé commence par l'application d'une résine photosensible positive « novolaque cresol » (AZ® 1529) sous forme d'un film fin d'épaisseur 2,7 pm sur la surface d'une galette (« wafer ») en silicium. La résine est ensuite exposée à une radiation lumineuse dans l'UV à une longueur d'onde de 405 nm pendant 12s à 20 mW/cm2. Lors de cette étape, l'utilisation d'un masque, formé de zones opaques et transparentes, permet de définir le motif que l'on souhaite reproduire sur la plaquette. L'exposition crée des réactions au sein de la résine et engendre des modifications chimiques. Le mécanisme de formation des images dans de la résine positive est donc basé sur la différence de solubilité des zones exposées, ou non, au rayonnement lumineux. Les solvants spécifiques contenus dans le développeur (solution alcaline, AZ developer (marque déposée)), permettent de dissoudre les parties exposées du film de résine, et de mettre à nu la plaquette à ces endroits-là. L'étape suivante, la gravure sèche, permet d'éliminer la couche du substrat (ici SiO2) dans toutes les régions non recouvertes de résine, les motifs du masque sont alors reproduits sur la couche inférieure. La lithographie électronique, quant à elle, repose sur l'utilisation d'un faisceau d'électrons pour tracer des motifs sur une surface d'un « wafer » en silicium recouvert d'un film mince de résine électrosensible, ici le polyméthylmétacrylate ou PMMA. Par rapport à la photolithographie, l'avantage de cette technique est qu'elle permet de repousser les limites de la diffraction de la lumière et de dessiner des motifs avec une résolution pouvant aller jusqu'au nanomètre. Madou, 1997. Fundamental of microfabrication CRC Press [11]. Les moules ainsi structurés subissent ensuite une étape de silanisation en utilisant de l'octadécyltrichlorosilane en phase liquide, pour permettre le démoulage ultérieur du polydiméthylsiloxane (PDMS), utilisé dans cet exemple pour constituer le timbre, comme décrit dans le document Lalo, H., J. C. Cau, et al. (2009). "Microscale multiple biomolecules printing in one step using a PDMS macrostamp. Microelectron. Eng. 86: 1428-1430 [7]. Les dimensions du cadre et du moule sont celles décrites dans FR 2 921 002 [2]. Le moule en silicium est placé entre le cadre percé de trous de l mm de diamètre, et une surface de maintien en polyuréthane. Le timbre préleveur fabriqué est en polydiméthylsiloxane (PDMS). Cet élastomère est obtenu en mélangeant une base pré-polymère et un agent réticulant Sylgard 184 (marque déposée) de la société Dow Corning dans un rapport de 10/1. Ce mélange est versé sous forme liquide dans le cadre et il coule au travers de chaque trou du cadre jusqu'à atteindre la surface de silicium : le cadre supérieur donne alors la forme et les dimensions requises aux plots millimétriques, et la surface du moule en silicium, qui est structurée, génère les micro- ou nanostructures souhaitées à la surface de chaque plot. Ce timbre est représenté schématiquement sur la figure 4(b) annexée. Ensuite, le cadre et la surface de maintien en polyuréthane sont vissés l'un à l'autre et l'ensemble est placé dans une étuve à 80°C pendant 7 heures afin que le PDMS réticule. Le timbre est récupéré par simple démoulage.30 Exemple 2 : Fabrication d'un timbre préleveur plat utilisable pour la mise en oeuvre de la présente invention La fabrication du timbre plat s'effectue de la même façon que dans l'exemple 1, mais le PDMS est versé directement sur un support (« wafer ») en silicium plat, c'est-à-dire non structuré. Ce timbre est représenté schématiquement sur la figure 4(a) annexée. Le timbre est récupéré par simple démoulage. Exemple 3 Fonctionnalisation multiplexée d'un timbre préleveur Le timbre préleveur fabriqué dans l'exemple 1 a des dimensions parfaitement adaptées aux dimensions de toutes plaques de titration commerciale (de 96 à 1536 puits) Ce timbre est représenté schématiquement sur la figure 4(b) annexée. Ce timbre est fonctionnalisé, ou « encré », par immersion de ses plots (P) pendant 45 secondes dans une plaque de titration préalablement remplie de différentes solutions de molécules différentes (appelées aussi ci-dessous, « solutions types »). Les solutions types suivantes sont utilisées : oligonucléotides à la concentration de 10 pM protéines (de type streptavidine) à la concentration de 200pg/mI thiols à la concentration de 0,1 - 1 mM peptide à la concentration de 150 pg/mL dendrimères à la concentration de 60pM. PLL-polyéthylène glycol à la concentration de 100 pg/mL PLL-Dextran à la concentration de 100 pg/mL. Chaque plot du timbre ainsi « encré » présente une fonctionnalisation différente. Le timbre est ensuite séché avec un flux azote dans des conditions stériles à 25°C. Exemple 4 : Fonctionnalisation homoqène d'un timbre préleveur Ici, on fonctionnalise un timbre, obtenu avec le protocole de l'exemple 1, de manière homogène et non multiplexée. Le timbre est immergé dans une plaque de titration comme celle 10 utilisée dans l'exemple 3, mais dont les puits sont remplis avec une seule solution (se reporter à la liste de solutions type précédente). Le timbre est ensuite séché avec un flux azote dans des conditions stériles à 25°C. 15 Exemple 5 : Fonctionnalisation homogène d'un timbre préleveur par contact avec un timbre de fonctionnalisation Dans cet exemple, on réalise la fonctionnalisation d'un timbre obtenu avec le protocole de l'exemple 1 par mise en contact du timbre avec un timbre de fonctionnalisation plat préalablement encré. Pour cela, 20 on dépose une goutte d'une des solutions types précédemment listées sur le timbre de fonctionnalisation pendant 10 minutes et on sèche cette goutte pendant 1 minute avec un flux azote. L'affinité de la molécule choisie doit être plus importante pour le timbre préleveur fabriqué comme dans l'exemple 1 que pour le timbre de fonctionnalisation de façon à ce que la 25 molécule soit transférée vers le timbre préleveur fabriqué comme dans l'exemple 1 préférentiellement. Pour que cette affinité pour le timbre préleveur ait lieu, la surface du timbre préleveur fabriqué comme dans l'exemple 1 peut être activée par action d'un plasma oxygène (2O0W, 30 secondes). Le timbre de fonctionnalisation est fabriqué suivant le protocole 30 de l'exemple 2. Le timbre de fonctionnalisation avec la goutte de solution séchée est ensuite mis en contact avec le timbre préleveur fabriqué comme dans l'exemple 1 pendant 1 minute. Les molécules en question sont alors transférées de la surface du timbre de fonctionnalisation à celle du timbre préleveur de façon homogène Exemple 6 : Fonctionnalisation d'un timbre plat Un timbre plat obtenu dans l'exemple 2, est fonctionnalisé par dépôt sur une surface de celui-ci d'une goutte de molécules en solution, puis incubation pendant 10 minutes, et séchage au flux azote. Exemple 7 : Fonctionnalisation hydrophile d'un timbre par traitement au plasma d'oxygène Un timbre obtenu comme dans l'exemple 1 est fonctionnalisé de manière à le rendre hydrophile. On applique pour cela à ce timbre un simple traitement au plasma oxygène pendant 30 secondes à 200 Watts comme décrit dans le document Lalo Vieu, 2009 Langmuir 25. 7752-7758 [12]. Exemple 8 : Fonctionnalisation du support d'analyse S2 en silicium Des supports d'analyse en silicium (« wafer » en silicium) monocristallin de qualité microélectronique sont utilisés. Ces supports sont préalablement activés par un plasma oxygène pendant 5 minutes à 800 Watts suivant la technique décrite dans le document Cerf, A. et al. [3] de façon à créer des groupements hydroxyles à leur surface. Ensuite, les supports obtenus sont séparés en trois groupes pour être fonctionnalisés par les différents moyens suivants : mise en contact avec un timbre plat encré obtenu comme dans l'exemple 6 ci-dessus, mise en contact avec un timbre préalablement fonctionnalisé multiplexé comme dans l'exemple 3 ci-dessus, et -mise en contact avec un timbre préalablement fonctionnalisé avec une seule fonctionnalité comme dans l'exemple 4 ci- dessus. En pratique, les timbres préalablement « encrés » sont séchés avec un flux azote puis mis en contact avec le support d'analyse pendant moins de 3 minutes. Les timbres sont ensuite retirés comme décrit dans le document Chalmeau, J.,C. Thibault et al (2008) [5]. On observe les transferts des timbres vers les supports S2. Exemple 9 : Fonctionnalisation du support d'analyse S2 en silicium Dans cet exemple, on reproduit l'exemple 8, mais les supports d'analyse sont fonctionnalisés soit par dépôt des molécules en phase liquide soit en phase vapeur comme dans le cas des silanes (« APTES » pour 3-aminopropyltriethoxysilane ou « OTS » pour octadecyltrichlorosilane) comme décrit dans le document Cau, Cerf et al. [13]. Dans cet exemple, le transfert est donc sélectif grâce à la chimie de surface du support d'analyse. En effet, dans ce cas, la surface du support d'analyse peut présenter un contraste hydrophile/hydrophobe : pour ce faire on dépose par pCP, suivant le protocole de l'exemple 8, une première molécule hydrophobe (OTS par exemple) puis on incube une deuxième molécule hydrophile (APTES par exemple). Les molécules hydrophiles se déposent alors de façon localisée, aux endroits de la surface qui ne sont pas répulsifs. Une autre méthode pour réaliser une bi-fonctionnalisation de surface consiste à utiliser un timbre à deux niveaux de topographie de façon à déposer deux encres moléculaires en une seule étape par application d'une légère pression à l'arrière du timbre lors du contact comme décrit dans Chalmeau, J.,C. Thibault et al (2008) [5]. Exemple 10 : Fonctionnalisation du support d'analyse S2 avec des oligonucléotides La palette de choix des molécules qui peuvent être utilisées pour fonctionnaliser le support d'analyse selon l'invention est variée. Ici, on fonctionnalise des supports d'analyse S2 comme ceux décrits dans l'exemple 9 avec les molécules suivantes : des oligonucléotides par microcontact printing comme décrit dans Thibault, Severac et al (2007) [14], des peptides et des protéines comme décrit dans Chalmeau, J.,C. Thibault et al (2008) [5], des thiols et des dendrimères comme décrit dans Thibault, C., C. Severac, et al. (2006) [15], du PLL-polyéthylène glycol comme décrit dans Chalmeau, Dagkessamanskaia et al. [16] , ou du PLL-Dextran. Les mêmes essais sont réalisés sur un support d'analyse lui- même structuré comme dans l'exemple 1 par gravure sèche. Exemple 11 : Protocole expérimental pour réaliser un prélèvement selon le procédé de la présente invention : Cas d'un prélèvement non sélectif Dans cet exemple, deux timbres préleveurs sont fabriqués comme dans l'exemple 1 et placés pour être activés sous un plasma oxygène à 200W pendant 30 secondes comme décrit dans le document Lalo, H. et al., [12]. Ensuite, les timbres préleveurs activés sont mis en contact avec une zone de prélèvement (peau d'un patient), qui représente la surface S1 dans la présente, pendant une durée située entre 5 et 6 minutes. Les timbres préleveurs sont ensuite retirés de la surface S1 puis mis immédiatement en contact l'un avec un support d'analyse activé par traitement plasma, l'autre avec un support d'analyse S2 hydrophile obtenu par un procédé comme décrit dans le document Cerf, A. et al. [3]. Cette mise en contact est effectuée pendant 3 minutes de façon à transférer le matériel prélevé depuis le timbre préleveur vers chacun des supports en question. Une fois ces 3 minutes écoulées, le timbre préleveur est retiré de la surface S2. La figure 1 est une représentation schématique montrant le prélèvement au moyen du timbre (T) de molécules (M) présentes sur la surface (Si), puis de transfert de ces molécules (M) sur un support (S2) par mise en contact du timbre (T) sur lequel sont présentes les molécules (M) sur avec la surface (S2). La figure 5 est montre les résultats obtenus sur support d'analyse (lamelle de verre fonctionnalisée APTES) après transfert d'un prélèvement cutané à l'aide d'un macrotimbre activé. II s'agit d'une image par microscopie électronique à balayage du support d'analyse après transfert du prélèvement du timbre utilisé dans la présente invention sur les supports d'analyse. Sur cette figure, nous pouvons apercevoir les empreintes des plots du timbre préleveur sur le support d'analyse, témoignant bien d'un transfert de matériel du timbre préleveur vers la surface du support.30 Exemple 12: Protocole expérimental pour réaliser un prélèvement selon le procédé de la présente invention : prélèvement etlou transfert sélectif(s) Dans cet exemple, l'adsorption sélective est testée suivant deux protocoles : l'un pour lequel le prélèvement à partir de la surface SI est sélectif au moment même du prélèvement (exemple 12.1), l'autre pour lequel c'est le transfert sur le support d'analyse S2 qui est sélectif (exemple 12.2). Il est également possible, selon l'invention, d'utiliser simultanément ces deux protocoles pour la mise en oeuvre du procédé de la présente invention, afin qu'à la fois le prélèvement et le transfert soient sélectifs. Ceci permet par exemple de corriger certains défauts de sélectivité du prélèvement à partir de la surface S1, par exemple liés à des interactions non spécifiques de molécules présentes sur la surface de la peau d'un patient avec le timbre préleveur. Un transfert spécifique du timbre vers le support d'analyse S2 permet de « trier », par simple mise en contact du timbre de prélèvement avec le support d'analyse S2 sélectif, les molécules prélevées sur le timbre. Exemple 12.1 : prélèvement sélectif Dans cet exemple, le timbre préleveur est préalablement encré avec des molécules permettant la sélectivité du prélèvement. Les techniques utilisables selon l'invention sont par exemple les techniques par incubation, par contact timbre-timbre ou par immersion dans une plaque de titration comme illustré par les exemples ci-dessus. Dans cet exemple, on utilise une immersion dans une plaque de titration suivant le protocole de l'exemple 3 sur un timbre préleveur fabriqué suivant le protocole de l'exemple 1. Le timbre obtenu est ensuite mis en contact avec la zone de prélèvement qui est ici une zone lésée d'un épiderme. Le même protocole est réalisé avec une mise en contact sur une zone lésée d'un derme (figure 2 annexée). Le même protocole est réalisé avec une mise en contact sur une prothèse de hanche (figure 3 annexée). Le prélèvement sélectif ainsi obtenu est ensuite transféré par mise en contact du timbre avec un support d'analyse en silicium obtenu comme dans l'exemple 8, mais non fonctionnalisé. Cette mise en contact est effectuée pendant 3 minutes de façon à transférer le matériel prélevé depuis le timbre préleveur vers le support d'analyse. Exemple 12.2 : transfert sélectif Dans le deuxième cas, trois timbres préleveurs vierges sont activés par plasma oxygène et mis en contact avec la zone de prélèvement (zone lésée d'une épiderme ou derme par exemple). Pour cela, on procède comme dans l'exemple 11. Les prélèvements obtenus sont ensuite transférés sur trois supports d'analyse différents présentant une chimie de surface (i) spécifique, (ii) bi-fonctionnelle, ou (iii) multiplexée. Dans le cas (i), le support d'analyse est préparé en le fonctionnalisant avec une protéine reconnaissant spécifiquement une autre protéine présente dans le prélèvement. Dans ce cas, il s'agit d'une reconnaissance de type antigène-anticorps. À titre d'exemple, on peut citer le cas d'une interaction anti protéine A û protéine A. Dans ce cas précis, le support d'analyse est activé par plasma oxygène selon l'exemple 7, puis fonctionnalisé avec une couche moléculaire d'OTS suivant l'exemple 9. Ensuite, une deuxième couche moléculaire d'anti protéine A est déposée sur la première par incubation. Plus précisément, une goutte de solution contenant des anti protéines A est incubée sur ce support pendant 20 minutes. Le support est ensuite rincé avec une solution saline (Phosphate buffer ou PBS) puis séché quelques secondes avec un flux azote. Lors du transfert du prélèvement, uniquement les protéines A présentes dans le prélèvement reconnaîtront spécifiquement la chimie du support d'analyse par une interaction de type antigène-anticorps et seront transférées. Dans le cas (ii), le support d'analyse est obtenu en réalisant une double fonctionnalisation chimique. Dans ce cas précis, un timbre structuré préparé selon l'exemple 1 est placé sur une tournette. 100 pl d'une solution d'OTS à 1% v/v dans du trichloroéthylène sont déposés sur le timbre pendant 30 secondes. Ensuite la tournette est mise en marche avec une accélération de 5000 rpm/sec et une vitesse de 3000 rpm pendant 2 minutes. Le timbre est ensuite séché avec un flux azote pendant 1 minute puis mis en contact avec le support d'analyse préalablement activé au plasma oxygène selon l'exemple 7, pendant 3 minutes. À ce stade, le support d'analyse est entièrement recouvert d'une couche moléculaire hydrophobe, sauf aux endroits des motifs restés vierges. Ce support est ensuite placé dans un bain d'une solution d'APTES (1% dans de l'éthanol) pendant 15 minutes, rincé à l'éthanol, puis à l'eau déionisée, séché avec un flux azote, puis finalement placé sur une plaque chauffante à 140°C pendant 5 minutes, comme décrit dans le document [13]. Ici, les molécules d'APTES se déposent uniquement à l'intérieur des motifs restés vierges, le reste du support étant passivé. Lors du transfert du prélèvement, le matériel prélevé ne sera attiré que par les zones hydrophiles ou « attractives » du support, et sera transféré sélectivement. Dans le cas (iii), le support d'analyse est obtenu par contact avec un macrotimbre encré. Le macrotimbre est immergé dans une plaque de titration remplie de solutions de molécules différentes pendant moins d'une minute. Le macrotimbre ainsi encré est ensuite séché avec un flux azote puis mis en contact avec le support d'analyse préalablement activé selon l'exemple 7 pendant moins de 2 minutes, comme décrit dans le document [7]. À ce stade, le support est multiplexé, avec des motifs moléculaires différents. Sur chacun de ces motifs, tout se passe exactement comme dans le cas i). Lors du transfert du prélèvement, le matériel prélevé sera attiré par les zones « attractives » du support suivant son affinité pour chaque motif moléculaire, et sera transféré sélectivement. De cette façon, seules les espèces d'intérêt sont transférées des trois timbres vers les trois supports d'analyse et fixées sur les supports d'analyse. Le non-spécifique (matériel et molécules à interaction non spécifiques avec les molécules précitées), faiblement accroché à la surface du support d'analyse, peut éventuellement être éliminé par rinçages ultérieurs avec la solution tampon des molécules, à savoir la solution saline PBS. Exemple 12.3 : transfert en milieu humide Lors du transfert, sélectif comme non sélectif, une goutte de solution saline (PBS) ou tampon peut éventuellement être déposée sur le support d'analyse hydrophile avant la mise en contact du timbre préleveur avec le support. De cette façon, le film mince de liquide présent entre le timbre et le support à ce moment-là sert de médiateur/intermédiaire pour que le matériel biologique prélevé soit transféré du timbre vers le support dans un environnement plus idéal et propice. Dans ce cas, le contact entre le timbre et le support est plus long, par exemple pendant 10 à 20 minutes, par exemple pendant 15 min, de façon à permettre l'évaporation du liquide et ainsi favoriser le transfert du matériel par capillarité. Listes des références [1] G. M. Whitesides et al, Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, 550 ù 575. [2] FR 2 921 002. [3] Cerf, A.; Cau, J.-C.; Vieu, C.; Dague, E., Nanomechanical properties of dead or alive single-patterned bacteria. Langmuir 2009, 25, (10), 5731-5736. [4] Ressier, L.; Viallet, B.; Beduer, A.; D., F.; Fabié, L.; Palleau, E.; Dague, E., Combining convective/capillary deposition and AFM oxidation lithography for close-packed directed assembly of colloids. Langmuir 2008, 24, (23), 13254-13257. [5] Chalmeau, J., Thibault, C. et al. (2008). "Micro-contact printing of two different biomolecules in one step using deformable poly(dimethylsiloxane)-based stamp." Japanese Journal of Applied Physics 47: 5221-5225. [6] Bernard et al., 2001. Nature Biotechnology 19. 866-869 [7] Lalo, H., Cau, J. C., et al. 2009. "Microscale multiple biomolecules printing in one step using a PDMS macrostamp." Microelectron. Eng. 86: 1428-1430. [8] Kraus, T.; Malaquin, L.; Schmid, H.; Riess, W.; Spencer, N. D.; Wolf, H. Nanoparticle printing with single particle resolution. Nature Nanotechnology 2007, 2, 570-576. [9] Kumar, A.; Whithesides, G. M., Features of gold having micrometer to centimeter dimensions can be formed through a combination of stamping with an elastomeric stamp and an alkanethiol "ink" followed by chemical etching. Appl. Phys. Lett. 1993, 14, 2002-2004. [10] Cerf, A.; Vieu, C., Transfer printing of sub-100 nm nanoparticles by soft lithography with solvent mediation. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects 2009, 342, (1-3), 136-140. [11] Madou, 1997. Fundamental of microfabrication CRC Press. [12] Lalo, H., Vieu, C. 2009 Langmuir 25, 13, 7752-7758 [13] Cau, J.-C., Cerf, A. et al. (2008). "Chemical engineering of silicon oxide surfaces using micro-contact printing for localizing adsorption events of nanoparticles, dendrimers and bacteria." Microelectronic Engineering 85(5-6): 1143-1146. [14] Thibault, C., Severac, C. et al. (2007). "Poly(dimethylsiloxane) contamination in microcontact printing and its influence on patterning oligonucleotides." Lanqmuir 23(21): 10706-10714. [15] Thibault, C., Severac, C. et al. (2006). "Microtransfer molding of hydrophobic dendrimer." Microelectron. Enq. 83: 1513-1516. [16] Chalmeau, J., Dagkessamanskaia, A. et al. (2009). "Contribution to the elucidation of the structure of the bacterial flagellum nanomotor through AFM imaging of the M-ring." REVENDICATIONS1. Procédé de transfert sélectif d'au moins un matériel biologique depuis une surface S1 vers une surface S2 d'un substrat, au moyen d'un timbre (T), comprenant les étapes suivantes : (i) mise en contact du timbre avec la surface SI ; (ii) adsorption éventuellement sélective sur le timbre, d'au moins un matériel biologique présent à la surface S1 ; (iii) application du timbre sur la surface S2 d'un substrat de telle sorte que le(s) matériel(s) biologique(s) adsorbé(s) se dépose(nt) éventuellement sélectivement sur la surface S2 dudit substrat. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel la surface SI est la partie superficielle d'un tissu biologique choisi parmi la peau (épiderme), les ongles, les organes. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel la surface S2 d'un substrat est la surface d'un substrat choisi parmi, une lame ou plaque de verre, de silicium, de plastique, de métal, de textile. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel le timbre est choisi parmi les timbres plats, les timbres micro et nanostructurés et les macrotimbres munis de plots (P) micro- et nanométriques. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel le timbre est constitué d'un polydiméthylsiloxane (PDMS) ou d'un polyméthylméthacrylate (PMMA). 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel le matériel biologique est choisi dans le groupe comprenant les protéines, les lipides, les glucides, les cellules, les microorganismes. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel dans l'étape (i), la durée de mise en contact de la surface SI avec le timbre est de 1 seconde à 15 minutes. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel dans l'étape (i), la mise en contact a lieu à une température de 20 à 40°C. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel dans l'étape (ii) l'adsorption d'au moins un matériel biologique présent sur la surface S1 sur le timbre et/ou sur la surface S2 est sélective. 10. Procédé selon la revendication 9, dans lequel préalablement à l'adsorption, le timbre et/ou la surface S2 subit (subissent) un traitement de surface permettant l'adsorption sélective d'un ou de plusieurs matériel(s) biologique(s) par rapport à l'ensemble des matériels biologiques présents à la surface S1. 11. Procédé selon la revendication 10, dans lequel le traitement de surface est choisi parmi un traitement plasma, un dépôt phase liquide, un dépôt en phase vapeur, une impression par microcontact. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel dans l'étape (iii) le(s) matériel(s) biologique(s)adsorbé(s) se dépose(nt) éventuellement sélectivement sur la surface S2 dudit substrat par impression. 13. Procédé selon la revendication 12, dans lequel l'impression utilisée est une technique de lithographie. 14. Procédé selon la revendication 12, dans lequel le dépôt par impression est réalisé en milieu humide. 15. Utilisation d'un timbre comprenant du polydiméthylsiloxane (PDMS) ou du polyméthylméthacrylate (PMMA) pour le transfert de molécules d'une surface SI vers une surface S2, les surfaces S1 et S2 n'étant pas des surfaces du timbre.