Brevet FR2959668A1 — publié le 20111111

La présente invention a pour objet une nouvelle association pharmaceutique comprenant, à titre de principes actifs, l'acide lipoïque ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, l'acide hydroxycitrique ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et la somatostatine ou l'un de ses analogues ou l'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Cette association pharmaceutique, qui peut se présenter sous forme unitaire ou sous forme de kit, présente une activité antitumorale 10 particulièrement élevée. L'acide lipoïque est un co-facteur de plusieurs complexes enzymatiques. L'acide lipoïque est également un antioxydant puissant. Il aide dans la protection des cellules contre les dommages des radicaux libres. 15 Ce produit est connu, en tant que principe actif de médicament. Il est en particulier préconisé pour le traitement de neuropathies associées au diabète, de myopathies mitochondriales et de scléroses multiples. Il est parfaitement toléré et sa toxicité est très faible. A titre d'exemple, il peut être administré en une quantité comprise entre 600 et 20 1800 mg/j. L'utilisation de l'acide lipoïque ou de l'un de ses sels solubles dans l'eau, seul ou en association avec l'acide ascorbique, a été préconisée dans le traitement du cancer, notamment par le document WO 00/48594 correspondant au brevet US 6 448 287. 25 Par ailleurs, l'utilisation de dérivés de l'acide lipoïque ou de leurs sels pharmaceutiquement acceptables a également été préconisée dans le traitement des maladies néoplasiques par le document WO 00/731734 correspondant au Dr-e,vet US 6 951 887 rependant: aucun médicament 3 base ''acide ilpoïque ou de l'un de ses dérivés ou de :'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables ne semble à ce jour en cours de développement pour le traitement du cancer. L'acide hydroxycitrique est un produit naturel que l'on trouve à tat naturel dans l'écorce des fruits cit, 1-amariner de malabar (Garcinia). çon ÇPI ria rAlril (l'hvdrnvvrîtratL est connu pour inhiber la 35 uluDyl lu duueb yl L'utilisation de l'hydroxycitrate de calcium a ainsi été préconisée pour la perte de poids, en association avec une alimentation faible en gras, la posologie recommandée étant de 500 mg à 1 500 mg trois fois par jour avant les repas. C'est une substance parfaitement bien tolérée chez l'adulte et chez l'enfant. Parallèlement, l'hydroxycitrate de calcium est connu pour augmenter l'oxydation des acides gras au niveau des cellules hépatiques, ce qui permet leur transformation en glycogène. Le glycogène est ensuite stocké au niveau des muscles pour être disponible en cas d'effort. L'hydroxycitrate est ainsi utilisé dans de nombreux régimes diététiques pour le traitement de l'obésité. Il présente notamment l'avantage de ne pas modifier le taux de glucose sanguin. Le brevet US 6,207,714 souligne que l'hydroxycitrate peut être utilisé comme hypoglycémiant pour le traitement de personnes atteintes de diabète résistant à l'insuline. Par ailleurs, l'hydroxycitrate est cité parmi les très nombreux composés susceptibles d'être utilisés dans le traitement de cellules cancéreuses présentant un taux élevé de glycolyse aérobie (document WO 2004/100885). La somatostatine est une hormone peptidique existant sous deux formes actives produites par le clivage alternatif d'une même pré-protéine ; l'une de 14 acides aminés, et l'autre de 28 acides aminés. Elle est synthétisée par l'hypothalamus et les cellules neuroendocrines de l'estomac, de l'intestin et du pancréas. Elle inhibe la sécrétion d'un grand nombre d'hormones (dont l'hormone de croissance, la TSH, le glucagon, l'insuline, la gastrine...), la prolifération et la survie cellulaire via sa liaison à des récepteurs spécifiques dont on dénombre 5 types (SSTR1 à SSTR5). rependant son action reste limitée car sa demi-vie est très courte. es analogues de ia ° omatostatine sont des peptides synthétiques dérivés de la '3omatostatine ayant une activité similaire et une demi-vie supérieure. parmi ces molécules, on peut citer i'octréotide, le ianréotide, le vapréotide (RC-160), le pasiréotide (SOM-230) et le TT-232. '_.'acétate d'octréotide est actuellement utilisé pour contrôle: ies çprr4tinnc hnrmonai uti ùdénomes i1tuitùf+ i duit et normalise la 35 eÂLessive d'hormones de croissance et d'Insulin-litre Growth Factor (IGF-1) associée à l'acromégalie et réduit la taille de la tumeur, L'octréotide est également utilisé dans le traitement des tumeurs endocrines gastroenteropancréatiques. Enfin, il a été utilisé pour le traitement de divers cancers solides en combinaison avec la chimiothérapie sans apporter de bénéfice majeur au traitement. Ce composé est généralement bien toléré. Dans ce contexte, il a été découvert, et ceci constitue le fondement de la présente invention, que l'association de l'acide lipoïque ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, l'acide hydroxycitrique ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et la somatostatine ou l'un de ses analogues ou l'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables présente une activité antitumorale particulièrement élevée. Il a en particulier été démontré que cette nouvelle association permet de limiter la croissance des tumeurs d'une façon tout à fait inattendue. Cet effet de stabilisation des tumeurs est de façon surprenante, supérieur à celui obtenu à l'aide de médicaments anticancéreux connus. Ainsi, la présente demande vise notamment à couvrir une association pharmaceutique qui comprend, à titre de principes actifs : - l'acide lipoïque ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables - l'acide hydroxycitrique ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et - la somatostatine ou l'un de ses analogues ou l'un de leurs sels 25 pharmaceutiquement acceptables, lesdits ingrédients actifs étant de préférence formulés ensemble ou séparément, pour une utilisation conjuguée, simultanée ou séparée. Dans le cadre de la présente description, par acide lipoïgt.ro », , entei'le couvrir le. '-ompose existant sous Id torme acide ainsi que le 30 ompose existant sous forme réduite également dénommé acide dihydrolipoique. Par ailleurs, l'acide lipoïque et l'acide hydroxycitrique présentent respectivement ' atomes de carbone assvmetriqlies Ilq nell\/Pnl- clone cl'c';PentiomE cumul l:1 35 el Id' t UldbWMUSIOMèreS ainsi que leurs mélanges, y compris les mélanges racémiques, font partie de l'invention. D'une manière préférée, on utilisera la forme R de l'acide lipoïque et la forme 2S, 3S de l'acide hydroxycitrique. Dans le cadre de la présente description, par « somatostatine » on entend la totalité des formes actives connues ou inconnues susceptibles 5 de produire une réponse biologique telle que précitée. Dans le cadre de la présente description, par « analogue de la somatostatine » on entend couvrir les molécules synthétiques ou non synthétiques pouvant stimuler/reproduire l'activité pharmacologique naturelle de la somatostatine. Ces composés sont donc capables d'inhiber 10 la sécrétion d'hormones telles que les hormones de croissance, le glucagon et l'insuline. L'un des analogues de la somatostatine les plus utilisés dans le traitement, par exemple, de l'acromégalie ou de la diarrhée et des bouffées congestives associées aux tumeurs carcinoïdes, est l'octréotide et 15 plus particulièrement son sel d'acétate commercialisé sous le nom de Sandostatin@ (Novartis Pharmaceuticals). En tant qu'autres analogues de la somatostatine on peut citer le vapréotide, le pasiréotide ou bien encore le composé de formule D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Cys-Thr-NH2 20 plus connu sous le nom TT-232. L'association pharmaceutique selon l'invention contient donc préférentiellement un analogue de la somatostatine choisi parmi l'octréotide, le vapréotide, le pasiréotide, le U-232 ou une combinaison 25 de ses derniers, de préférence l'octréotide et plus préférentiellement le sel d'acétate de l'octréotide. D'une façon générale, les trois principes actifs caractérisant :issociatlor pharmaceutique selon l'invention peuven formule; nsemble ;forme ,nitaire) or séparément 'kit) Egalement d'une façon générale, les trois principes actifs, formulés ensemble ou séparément, peuvent être administrés simultanément ou séparément avec un décalage dans le temps qui peut (T)prnir;.hhh.n Un sel pharmaceutiquement acceptable de l'acide lipoïque peut être un sel soluble dans l'eau tel que décrit dans le brevet US 6 448 287. Un sel pharmaceutiquement acceptable de l'acide hydroxycitrique peut être un sel de métal alcalin (notamment de sodium) ou alcalino- terreux (notamment de calcium ou de magnésium). De façon générale, les sels pouvant être utilisés sont (mais ils ne sont pas limités à), acétate, aspartate, benzoate, besylate, bicarbonate/carbonate, bisulphate/sulphate, borate, camsylate, citrate, edisylate, esylate, formate, fumarate, gluceptate, gluconate, glucuronate, hexafluorophosphate, hibenzate, hydrochloride/chloride, hydrobromide/bromide, hydroiodide/iodide, isethionate, lactate, malate, maléate, malonate, mésylate, méthylsulphate, naphthylate, 2-napsylate, nicotinate, nitrate, orotate, oxalate, palmitate, pamoate, phosphate/hydrogen phosphate/dihydrogen phosphate, saccharate, stearate, succinate, tartrate, tosylate, trifluoroacétate. L'invention comprend aussi les mélanges des sels précités. Les principes actifs contenus dans l'association selon la présente invention peuvent aussi être administrés sous forme de pro-drogues. Par « pro-drogues » on entend un composé qui est transformé in-vivo en principes actifs tels que décrit dans la présente description. La transformation peut s'opérer via de nombreux mécanismes différents, tels que par hydrolyse dans le sang. Les associations pharmaceutiques de l'invention comprennent les trois principes actifs identifiés précédemment. Selon un mode de réalisation particulier, elles ne comprennent aucun autre principe actif. Alternativement, la présence d'au moins un autre principe actif au sein de ces nouvelles associations peut être envisagée. Ainsi, l'antres principes Kilts connus peuvent également être enlisés en ,ornbinaison avec es associations pharmaceutiques selon Invention et on peut citer, à titre non limitatif, les agents anticancéreux pouvant endommager l'ADN tels que les agents alkylants, antirnétabolites, antibiotiques antitumeur, les agents anti-mitotiques tels que les taxanes oi t les vinca-alcaloides les analogues de dérivés du platine, les Inhibiteurs es se ,.avoisomérase II, agents ai Iu-at 191UytI iese et les inhibiteurs de Kinases pan. Les associations pharmaceutiques de l'invention comprenant les trois principes actifs identifiés précédemment peuvent également être combinées avec au moins un principe actif additionnel choisi dans le groupe constitué du cisplatine, de la capsaïcine, de la choline, de la miltéfosine et de la vitamine B12. Selon un premier mode de réalisation actuellement préféré de l'invention, l'association pharmaceutique précitée consiste en une forme unitaire incorporant les principes actifs habituellement dans un excipient pharmaceutiquement acceptable. Selon un second mode de réalisation, cette association pharmaceutique se présente sous forme d'un kit contenant : - l'acide lipoïque ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, habituellement dans un excipient pharmaceutiquement acceptable - l'acide hydroxycitrique ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, habituellement dans un excipient pharmaceutiquement acceptable ; et - la somatostatine ou l'un de ses analogues ou l'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, habituellement dans un excipient 20 pharmaceutiquement acceptable. Alternativement, le kit comprend, d'une part, l'acide lipoïque ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et l'acide hydroxycitrique ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans un même excipient pharmaceutiquement acceptable et, d'autre part, la 25 somatostatine ou l'un de ses analogues ou l'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables dans un excipient pharmaceutiquement acceptable Quel que soit te mode de réalisation envisagé, la nature et les aucintites i espectives des différents excipients pourront être facilement 30 déterminées par un nomme du métier en tonction de la forme galénique finale souhaitée, Dans le cas d'une forme unitaire, les principes actifs pourront être conditionnés sons une forme galénique adaptée à une administration Iltr !nies d'administration Lafyi amuseulaire, n aven ieuse, topique ou euianee peuvent etre envisagées étant donné que la forme orale n'est pas toujours adaptée à la somatostatine ou à ses analogues. De même, dans le cas où les principes actifs se présentent séparément, ils pourront également être conditionnés indépendamment l'un de l'autre, chacun sous une forme galénique adaptée à l'administration par voie orale. Toutefois, d'autres voies d'administration peuvent être envisagées pour chacune des formes galéniques, et de façon indépendante. Selon une caractéristique particulière, une forme galénique 10 adaptée à la voie orale peut être choisie parmi les comprimés, les gélules, les poudres, les granulés, les lyophilisats, les solutés buvables et les sirops. Les comprimés constituent cependant la forme galénique adaptée à la voie orale actuellement préférée. Ces comprimés peuvent être de 15 nature variée, à libération immédiate, contrôlée ou retardée et éventuellement sous forme effervescente ou orodispersible. D'une façon générale, la posologie sera adaptée en fonction de la voie d'administration et du patient à traiter. Par exemple, un seul bolus peut être administré, plusieurs doses 20 divisées peuvent être administrées au cours du temps ou la dose peut-être proportionnellement réduite ou augmentée en fonction des exigences de la situation thérapeutique. La posologie la plus appropriée, la quantité de chaque dose administrée et/ou l'intervalle entre l'administration de chaque dose dépendra des caractéristiques spécifiques du patient ayant besoin du 25 traitement et de la sévérité de la maladie traitée. De ce fait, un homme du métier pourra, en se basant sur l'enseignement divulgué dans la présente description, déterminer et ajuster la posologie appropriée au vu des méthodes bien connues dans l'ad thérapeutique Par conséquent, !a dose maximum tolérable par ie patient peut être facilement déterminée, et la quantité efficace produisant: un effet thérapeutique détectable profitable pour le patient pourra aussi être déterminée. De cette façon, bien que certaines posologies et certains régimes d'administration sont spécifiquement exemplifiés dans cette res exemple Joiver Lus êta sidérés 35 limitant a posologie et regime d dUIIIIFUSLrdtion pouvant être fou patient en exerçant la présente invention. On notera également que pour chaque patient, la posologie pourra être ajustée au cours du temps selon les besoins individuels et le jugement professionnel de la personne administrant ou supervisant l'administration de l'association. Par exemple, la posologie peut être ajustée en fonction de paramètres pharmacocinétiques et pharmacodynamiques qui comprennent les effets cliniques tels que les effets toxiques et/ou les valeurs obtenues en laboratoire. L'acide lipoïque ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables peut ainsi être administré, en une, deux ou trois fois, en une quantité de 0,1 à Io() mg/kg/j, de préférence de 1 à 60 mg/kg/j et de préférence encore de 5 à 35 mg/kg/j. L'acide hydroxycitrique, ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, peut être administré quant à lui en une, deux ou trois fois, en une quantité de 0,1 à 170 mg/kg/j, de préférence de 3 à 120 mg/kg/j et de préférence encore de 15 à 85 mg/kg/j. La somatostatine ou l'un de ses analogues, ou l'un de leur sels pharmaceutiquement acceptables, peut être administrée quant à elle en 2 à 5 fois, en une quantité de 0,15 à 160 µg/kg/j, de préférence de 1 à 85 ptg/kg/j et de préférence encore de 8 à 40 pg/kg/j. Les associations pharmaceutiques de l'invention peuvent être préparées de façon habituelle. Cette préparation comprend - soit la formulation des principes actifs ensemble dans un excipient pharmaceutiquement acceptable - soit la formulation séparée de chacun des principes actifs dans des excipients pharmaceutiquement acceptables identiques ou non. Les techniques de formulation susceptibles d'être utilisées à cet effet sont bien connues de l'homme du métier et comprennent essentiellement le mélange physique du (des) principets~ actifs} avec x( 1pient(s) pharmaceutiquement accept.abie(s). A titre d'exemple une administration séparée des trois composés peut être adaptée dans le cadre de la présente invention. Notamment, un kit d'administration de la triple association permettant de combiner, de façon séparée ou simultanée, l'administration orale séparée ou simultanée i i que e,::ide hydroYa/citrique iministra.oi, gai 35 voie sous-Luianée à ation imméuiate ou par vole intramuscuiaire à libération lente de la somatostatine ou d'un analogue de la somatostatine est préférentiellement envisagé. Bien entendu, tout autre kit d'administration de la triple association permettant d'obtenir l'activité pharmaceutique recherchée par la présente invention doit être considéré comme faisant intégralement partie de la présente demande. Ainsi, la présente demande vise également à protéger une association pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'un kit d'administration permettant l'administration orale séparée ou simultanée de acide lipoïque et de l'acide hydroxycitrique et l'administration par voie sous-cutanée, de préférence à libération immédiate, ou par voie intramusculaire, de préférence à libération lente, de la somatostatine ou de l'un de ces analogues. Compte-tenu de l'activité antitumorale élevée de l'association qui vient d'être décrite, l'invention est particulièrement utile pour la fabrication de médicaments destinés au traitement d'une maladie de la prolifération cellulaire, choisi dans le groupe comprenant les cancers du sein, des ovaires, du col, de la prostate, des testicules, de l'oesophage, de l'estomac, de la peau, des poumons, des os, du côlon, du pancréas, de la thyroïde, des voies biliaires, de la cavité buccale et du pharynx (région orale), des lèvres, de la langue, de la bouche, du pharynx, de l'intestin grêle, du côlon-rectum, du gros intestin, du rectum, du cerveau et du système nerveux central, un glioblastome, un neuroblastome, un kératoacanthome, un carcinome épidermoïde, un carcinome à grandes cellules, un adénocarcinome, un adénome, un carcinome folliculaire, un carcinome indifférencié, un carcinome papillaire, un séminome, un mélanome, un sarcome, un carcinome de la vessie, un carcinome du foie, un carcinome des reins, des troubles myéloïdes, des troubles lymphoïdes, la maladie de Hodgkin, un carcinome à tricholeucocytes et la leucémie. Les associations pharmaceutiques de l'invention peuvent bien entendu être utilisées dans cri traitement thérapeutique en compiément d'autres traitements anticancéreux Selon un autre aspect de la présente invention, la présente demande vise à couvrir une association pharmaceutique comprenant !es trois ingrédients actifs précités formulés ensemble ou séparément, pour fine(-nt, en ta! que compoaiti 35 a aLuviLe al iuiun lu, ale des« lue u auti lie! IL u un cancer, de préférence choisi parmi le traitement d'un carcinome de la vessie, un carcinome pulmonaire, un carcinome du pancréas, un carcinome du foie, un sarcome ou un mélanome. Selon un autre aspect, la présente demande vise à couvrir l'utilisation d'une association pharmaceutique telle que décrite précédemment, pour la fabrication d'un médicament à activité antitumorale destiné notamment au traitement des maladies précitées, de préférence un carcinome de la vessie, un carcinome pulmonaire, un carcinome du pancréas, un carcinome du foie, un sarcome ou un mélanome. La présente demande vise enfin à couvrir une méthode de traitement des maladies précitées comprenant l'administration à un patient en ayant besoin, d'une quantité thérapeutiquement efficace d'une association telle que décrite précédemment. Par « quantité thérapeutiquement efficace » on entend une quantité de composé, composition, association ou médicament qui (a) traite ou prévient une maladie, condition ou désordre particulier ; (b) atténue, améliore ou supprime un ou plusieurs symptômes d'une maladie, condition ou désordre particulier ; (c) prévient ou retarde le début d'un ou plusieurs symptômes d'une maladie, condition ou désordre particulier décrit dans la présente description. On notera que les termes « thérapeutique » et « thérapeutiquement efficace » englobent l'un quelconque des effets précités (a)-(c), seul ou en association avec l'un quelconque des autres effets (a)-(c). L'invention sera maintenant illustrée par les exemples non limitatifs suivants et par les figures annexées qui montrent respectivement : - Figure 1A : Représentation graphique montrant l'évolution du i/01un e tumoral de tumeurs de type MBT2 traitées à l'aide de l'association pharmaceutique selon l'invention; igure 1B . Représentation graphique montrant taux de mortalité chez les animaux implantés avec une tumeur de type MBT2 traités à l'aide de l'association pharmaceutique selon l'invention ; Figure 2A i Représentation graphique montrant l'évolution du ùurne tumoral '" h miel. LLC traitées à 'aide de l'association pharmaceutique stiur i muer iuuii; - Figure 2B : Représentation graphique montrant le taux de mortalité chez les animaux implantés avec une tumeur de type LLC traités à l'aide de l'association pharmaceutique selon l'invention ; - Figure 3A : Représentation graphique montrant l'évolution du 5 volume tumoral de tumeurs de type B16-F10 traitées à l'aide de l'association pharmaceutique selon l'invention; - Figure 3B : Représentation graphique montrant le taux de mortalité chez les animaux implantés avec une tumeur de type B16-F10 traités à l'aide de l'association pharmaceutique selon l'invention 10 EXPÉRIMENTATIONS RÉALISÉES L'activité antitumorale remarquable de l'association thérapeutique selon l'invention a été mise en évidence par les expérimentations décrites ci-après. 15 1 û Modèles tumoraux et suivi des animaux Les compositions décrites ci-après ont été testées contre trois modèles tumoraux syngéniques : - Un carcinome de la vessie MBT-2 implanté dans des souris 20 syngéniques C3H, - Un carcinome pulmonaire LL/2 (ou LLC1) dit « carcinome de Lewis » implanté dans des souris syngéniques C57BL/6J, - Un mélanome (B16-F10) implanté dans des souris syngéniques C57BL/63. 25 Lorsque les volumes tumoraux ont atteints 95-100 mm3, les souris ont été randomisées en groupe de 6 animaux en fonction de la taille de la tumeur et de !a masse des animaux Les associations pharmaceutiques selon l'invention ainsi que les compositions témoins ont été administrées nar voie intraperitoneald durant 1R Jours 30 -fous ies 5 lour,, ia survie et le ,/ urne tumoral sont contrôlés Pour chaque animal, les deux diamètres tes plus grands et la hauteur de chaque tumeur ont été mesurés au Vernier pour déterminer le volume ilmotal selon formule : !nuque' It largeur haute! ir `! )i/61, Les souris utilisées dans cette étude ont été traitées conformément aux règles éthiques en vigueur. Une surveillance quotidienne des animaux a tuée et a permis de miner avec précision le jour de la mort des animaux et de les autopsier rapidement. Cette surveillance a également permis d'isoler ou d'euthanasier les animaux faibles ou moribonds selon les recommandations de la CEE, de l'ASAB, du Canadian Council on Animal Care et I'UKCCCR. 2 -- Culture et inoculation des tumeurs 2.1 û Lignées cellulaires La lignée cellulaire tumorale MBT-2 est un carcinome transitionnel de la vessie induit par le FANFT (N-[4-(5-nitro-2-furyl)-2-thiazolyl] formamide) chez une souris de lignée C3H/HeN (Soloway MS. et 1973 Sure Forum. 24: 542-4) obtenu auprès d'un laboratoire public. La lignée cellulaire LL/2 (ATCC CRL-1642) est un carcinome pulmonaire murin (carcinome de Lewis) obtenu auprès de l'ATCC (LGC Promochem). La lignée cellulaire B16F10 (ATCC n° CRL-6475) est un mélanome murin obtenu auprès d'un laboratoire public. 2.2 û Culture et implantation Les trois lignées cellulaires ont été cultivées en monocouche à 37°C dans une atmosphère humidifiée (5% de CO2, 95% d'air). Le milieu de culture qui a été utilisé est du DMEM Glutamax I (Invitrogen) supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal (Eurobio) et 1/10000 UI de pénicilline et streptomycine. Les cellules ont été détachées du flacon de culture par un 25 traitement de 10 minutes avec une solution de trypsine/EDTA puis comptées. Les cellules ont été ensuite dissociées dans une suspension '-ellulaire et une injection a été effectuée via une aiguille de diamètre 25 ;jauge clans le dos d'une souris : i0 cellules (l00 ou). 30 3 û Combinaisons testées L'association pharmaceutique selon l'invention a été testée in vivo: .s produits suivants ont été utilisés pour préparer cette associs 35 _ aipha-liporqui igma-Aldrich - Hydroxycitrate de calcium/potassium (Garcinia cambodia extract, 60% HCA, Indo World Trade company) - Acétate d'octréotide (Novartis) Des lots de souris témoins ont été traitées à l'aide de compositions 5 comprenant : - un complexe organométallique à base de platine utilisé comme médicament dans le traitement du cancer: le cisplatine (CIS) (Sigma 479306), - la solution saline isotonique (9 g/L) utilisée pour l'injection 10 intrapéritonéale sans principe actif, le véhicule de dissolution des principes actifs (éthanol 0,5%) (témoin neutre). Les concentrations testées et les conditions expérimentales utilisées sont récapitulées dans les tableaux 1 et 2 suivants. 15 Tableau 1: Nombre d'injections intra-péritonéales par jour et quantités de molécules injectées en fonction des conditions. Principes actifs Abréviation Fréquence des injections Quantité par injection Acide alpha-lipoïque ALA toutes les 12 heures 10 mg/kg Ca/K Hydroxycitrate HCA toutes les 12 heures 250 mg/kg Cisplatine CIS 1 jour sur 2 1 mg/kg Octréotide OCT toutes les 12 heures 100 pg/kg 20 Tableau 2: Groupes d'animaux testés et conditions expérimentales correspondantes. Groupe traitemr~t Nombre Durée du d'animaux traitement t Solution 5aline h éthanol 05,5 6 I J8 jours CIS 6 28 jours 6 28 jours x x O 6 2R iurc t 25 Pour les trois modèles tum£ ultats de me: volume moyen des tumeurs dans chacu les groupes de souris raitée_, en fonction du temps, sont reportés dans les graphiques des figures 1A, 2A et 3A. Dans ces graphiques, l'axe des ordonnées indique l'accroissement en pourcentage du volume moyen (par rapport au volume mesuré le premier jour du traitement) des tumeurs mesurées chez les souris. L'axe des abscisses indique le nombre de jours durant lesquels les souris ont été suivies à partir de l'implantation des tumeurs. Les résultats montrant la survie des souris traitées dans cette étude sont reportés dans les graphiques des figures 1B, 2B et 3B. Dans ces graphiques, l'axe des ordonnées indique le nombre de souris en vie. L'axe des abscisses indique le nombre de jours durant lesquels les souris ont été suivies à partir de l'implantation des tumeurs. Par ailleurs dans les figures 1A, 2A et 3A, la partie grisée représente la durée pendant laquelle le traitement a été administré. 5 ù Discussion des résultats Comme le montrent les figures 1A, 2A et 3A, dans les trois modèles tumoraux, l'association pharmaceutique selon l'invention permet de limiter de façon très significative la croissance des tumeurs. Dans le modèle MBT-2, la combinaison ALA/HCA/OCT permet de réduire de plus de 67% le volume tumoral en comparaison du contrôle éthanol (63 jours). En comparaison, les traitements avec le cisplatine seul ou l'octréotide seul permettent d'inhiber la croissance tumorale de 24% (63 jours). Cette inhibition de la croissance par la combinaison ALA/HCA/OCT est associée à un allongement de la survie des animaux avec un décalage d'au moins 10 jours entre la durée de vie des animaux contrôle (100% de survie à `Ï8 jours) et ' elle des animaux traités par la combinaison ALA/FJCA/OCI « 00% de survie à 68 jours) En comparaison, les traitements avec le cisplatine ou l'octréotide permettent seulement de prolonger survie des animaux de 5 jours par rapport au contrôle éthanol. Dans le modèle C, la combinaison ALA/HCA/OCT nerme al en comparaison ,, 1 pCII CH JUII, traitements avec le seul ou l'octréotide seul permettent d'inhiber la croissance tumorale de 27% (62 jours). Cette inhibition de la croissance par la combinaison ALA/HCA/OCT est associée à un allongement de la survie des animaux avec un décalage d'au moins 26 jours entre la durée de vie des animaux contrôle (100% de survie à 41 jours) et celle des animaux traités par la combinaison ALA/HCAJOCT (100% de survie à 67 jours). Dans le modèle B16-F10, la combinaison ALA/HCA/OCT permet de réduire de plus de 69% le volume tumoral en comparaison du contrôle éthanol (51 jours). En comparaison, les traitements avec le cisplatine seul ou l'octréotide seul permettent d'inhiber la croissance tumorale de seulement 20% (51 jours). Cette inhibition de la croissance par la combinaison ALA/HCA/OCT est associée à un allongement de la survie des animaux avec un décalage d'au moins 16 jours entre la durée de vie des animaux contrôle (100% de survie à 45 jours) et celle des animaux traités par la combinaison ALA/HCA/OCT (100% de survie à 61 jours). En comparaison, le traitement avec l'octréotide (56 jours) permettent de prolonger la survie des animaux de 5 jours par rapport au contrôle éthanol. Il est donc intéressant de noter que le traitement selon l'invention a permis, d'une façon tout à fait surprenante et inattendue, d'obtenir un effet de stabilisation des tumeurs significativement plus important que celui obtenu en utilisant le cisplatine, qui est un médicament anticancéreux, ou un analogue de la somatostatine tel que l'octréotide seul.