Brevet FR2949781A1 — publié le 20110311

-1- La présente invention se situe dans le domaine cosmétique et pharmaceutique, et plus particulièrement dans le domaine de la dermatologie. L'invention concerne un hydrolysat peptidique enrichi en peptide bioactif, capable d'activer la transglutaminase dans les cellules cutanées. Le peptide bioactif est caractérisé en ce qu'il comprend de 4 à 6 acides aminés dont au moins deux résidus arginine, un résidu glycine et un résidu glutamine. De préférence, le principe actif provient de l'hydrolyse de protéines de plantes choisies parmi les plantes du genre Zea, et plus particulièrement de l'espèce Zea maïs L. L'invention est également relative à une composition cosmétique et/ou pharmaceutique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, ledit hydrolysat en tant que principe actif. L'invention concerne encore l'utilisation, dans une composition cosmétique, du principe actif selon l'invention pour renforcer la fonction barrière cutanée et stimuler la régénération et la différenciation épidermique. L'invention est également relative à une composition pharmaceutique comprenant ce nouveau principe actif à titre de médicament. L'invention porte encore sur un procédé de traitement cosmétique destiné à prévenir et/ou à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et à lutter contre les manifestations du vieillissement cutané, selon lequel on applique une quantité efficace de principe actif, ou une composition le contenant, sur les zones à traiter. La fonction première de l'épiderme est de constituer une barrière entre l'environnement extérieur et le milieu intérieur. C'est la couche la plus externe de l'épiderme, le stratum corneum, qui assure cette fonction. Il est composé de kératinocytes au stade ultime de leur différenciation, les cornéocytes, scellés les uns aux autres par un ciment intercellulaire, à la fois souple et imperméable. On distingue ainsi dans le stratum corneum un compartiment cellulaire constitué des cornéocytes et un compartiment extracellulaire principalement constitué de lipides, organisés en structures multilamellaires. Les cornéocytes sont entourés par une membrane spécifique, appelée enveloppe cornée, en grande partie responsable de la résistance, de l'insolubilité et de la souplesse de la peau. L'enveloppe cornée est constituée d'un mélange de protéines structurales reliées entre elles par des liaisons covalentes sous l'action de la transglutaminase. Les principales protéines constitutives de l'enveloppe cornée sont l'envoplakine, la periplakine, l'involucrine, les Small Prolin-Rich proteins (SPR protéins) et la loricrine. 2949781 -2- Les transglutaminases (EC 2.3.2.13) sont une famille d'enzymes calcium-dépendantes qui catalysent la formation de ponts peptidiques entre un E-amino d'un résidu lysine et un y-carboxamide d'un résidu de glutamine, ces ponts extra et intramoléculaires sont extrêmement résistants à la dégradation (Lorand et al., Nat Rev 5 Mol Cell Biol. Feb;4(2), 2003). Chez l'humain, on a identifié 9 transglutaminases dont 4 sont exprimées dans la peau. La transglutaminase-1 (TG 1) est exprimée dans les kératinocytes et présente sous forme liée à la membrane. La transglutaminase-2 (TG2, type 2a ou 2b) n'est présente que dans la couche 10 basale de l'épiderme. Elle est soluble et ne semble pas avoir de rôle dans la formation de l'enveloppe cornée. La TG2 présente la capacité d'induire des liaisons covalentes entre les protéines, mais elle peut également lier le GTP ou le GDP et se comporter alors comme une G protéine, en particulier lorsque la cellule est en situation d'apoptose ou de nécrose. La TG2 peut également être exportée à la membrane et s'associer avec les 15 intégrines pour augmenter l'adhésion cellulaire, l'étalement des cellules et la migration des cellules sur la fibronectine de la matrice extracellulaire. De part ses fonctions pleïotropiques, la TG2 est entre autre impliquée dans la cicatrisation. La transglutaminase-3 (TG3) est exprimée dans les follicules pileux et dans les stades ultimes de la différenciation kératinocytaire. 20 La transglutaminase-5 (TG5) est présente dans les couches supérieures de l'épiderme et joue également un rôle dans les premières étapes de la différenciation épidermique. Dans l'épiderme, la TG1, la TG3 et la TG5 sont impliquées dans la formation de l'enveloppe cornée (Lorand et al., Nat Rev Mol Cell Biol. Feb;4(2), 2003). 25 Les TG ont des substrats très diversifiés. Ainsi, elles sont capables de réticuler les kératines entre elles et avec la filaggrine, ce qui conduit à la stabilisation et la coordination du réseau kératine-filaggrine dans les cellules cornées. Lors des premiers stades de la différentiation épidermique, les TG améliorent l'ancrage des desmosomes, puis dans la couche granuleuse ces mêmes TG assurent 30 l'attachement de certains lipides à l'enveloppe cornée et la liaison de la loricrine avec les Small Proline Rich Protein (SPR). Dans les couches granuleuses supérieures, les lipides provenant des corps de golgi sont réticulés par les TG1 et TG5 aux protéines précurseurs de l'enveloppe, déjà partiellement réticulées. Enfin la phase de desquamation, qui siège 2949781 -3- au niveau des couches cornées les plus externes, implique des réticulations supplémentaires de la loricrine et d'autres protéines, impliquant TG1. Plusieurs études montrent que les trois TG impliquées dans la formation de l'enveloppe cornée dans l'épiderme ont des fonctions différenciées (Candi et al 1995). 5 Le rôle clé des transglutaminases dans la formation du stratum corneum, plus largement dans la différenciation épidermique et en conséquence sur la fonction barrière, est confirmé par certains modèles pathologiques. Ainsi des souris invalidées pour le gène TG1 homozygotes TG1-/- souffrent de malformations létales du stratum corneum et meurent rapidement après la naissance (Matsuki et al, Proc. Nat. Acad. Sci. 95, 1998). 10 D'autre part, chez l'humain, des mutations portées par la TG1 sont responsables de formes plus ou moins graves d'ichthyose (Huber et al. Science 267, 1995). Au cours du vieillissement cutané, l'intégrité de la barrière cutanée ainsi que ses capacités de réparation s'altèrent. On observe une déficience globale en lipides, 15 aboutissant à une diminution des multicouches lipidiques du compartiment extracellulaire du stratum corneum. Ces changements fonctionnels sont en corrélation avec une susceptibilité accrue des peaux âgées aux agressions extérieures (Ghadially R. et al., J Clin Invest., 1995 (95 (5), p. 2281-90). Indépendamment du vieillissement intrinsèque ou photo-induit, des altérations de la 20 barrière cutanée peuvent se produire lors d'agressions extérieures. On entend par l'expression � agression extérieure �, les agressions que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les UV, ou encore les produits à caractère irritant tels que les tensioactifs, les conservateurs ou les parfums, les agressions mécaniques, telles que les abrasions, le 25 rasage ou l'épilation. Par pollution, on entend aussi bien la pollution � extérieure � due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, que la pollution � intérieure � qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papier-peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldéhyde), ou bien encore la fumée de cigarette. La sécheresse de l'atmosphère est également une cause 30 importante d'agression cutanée. Ces agressions extérieures aboutissent à une altération de la fonction barrière qui se traduit par un inconfort cutané, des phénomènes sensoriels désagréables, tels que des tiraillements ou des démangeaisons, voire des fragilités excessives et des rougeurs. 2949781 -4- Les personnes particulièrement concernées par cette altération de la fonction barrière par des agressions extérieures sont les personnes à peau dite "fragile" ou "sensible", c'est-à-dire particulièrement sensibles aux variations de température ou d'humidité et/ou particulièrement réactive vis-à-vis des produits agressifs (cas des peaux 5 de bébé par exemple). Les personnes à peau dite "fragile" regroupent notamment les personnes dont les lipides protecteurs du stratum corneum se raréfient, comme c'est le cas pour les personnes âgées et très âgées (au moins 75 ans), les personnes dont la composition des lipides protecteurs du stratum corneum est modifiée, comme c'est le cas des personnes diabétiques, ou dialysées, ou atteintes de certaines maladies. Les personnes 10 à peau dite � sensible � possèdent un seuil de réactivité abaissé pouvant être lié à une hyperactivité neurogène. Ces peaux sensibles présenteront des signes cliniques beaucoup plus rapidement et fréquemment que les autres types de peaux. Une altération de la fonction barrière cutanée peut notamment se traduire par un trouble de l'hydratation, par une perte de souplesse de la peau, par une altération de l'éclat 15 du teint, par l'apparition d'une rugosité sur la peau et plus généralement par l'apparition de signes cutanés du vieillissement. Il convient alors de chercher à prévenir l'altération ou à rétablir la fonction barrière de l'épiderme. Or, le rôle clé de la transglutaminase en a fait une cible de choix pour 20 renforcer la fonction barrière de l'épiderme. Dans le domaine de la cosmétique, l'activation de la transglutaminase a déjà été décrite dans le but d'améliorer la fonction barrière en utilisant des extraits végétaux, par exemple des extraits d'Asiasarum hétérotropoides F., ou Asiasarum sieboldi F., et d'Apocynum venetum L, tels que cités dans la demande de brevet JP2004 1 1 545 1. La demande de brevet US2007134172 décrit 25 l'utilisation de flavonoïdes extraits préférentiellement de Sidastrum pour obtenir une meilleure résistance de la peau aux facteurs environnementaux et en particulier le desséchement. Les inventeurs ont maintenant mis en évidence une activité cosmétique et thérapeutique, notamment dermatologique, d'un hydrolysat peptidique enrichi en peptide 30 bioactif. Il a en particulier été démontré que cet hydrolysat peptidique, lorsqu'il est appliqué sur la peau, renforce la fonction barrière de l'épiderme et stimule la régénération et la différenciation épidermique. 2949781 -5- Par conséquent, le premier objet de la présente invention est un hydrolysat peptidique enrichi en peptide bioactif capable d'activer la transglutaminase humaine, caractérisé en ce qu'il comprend de 4 à 6 acides aminés dont au moins deux résidus arginine, un résidu glycine et un résidu glutamine. 5 Les inventeurs ont en effet mis en évidence une activité cosmétique et thérapeutique, notamment dermatologique, d'hydrolysats peptidiques contenant certains peptides particuliers, dénommés peptides bioactifs ci-après. On entend par � peptide bioactif � selon l'invention, un enchaînement d'au moins quatre acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques ou par des liaisons 10 peptidiques modifiées, et qui possède une activité in vivo ou in vitro caractéristique de l'activité du principe actif selon l'invention. L'activité biologique caractéristique selon l'invention est définie in vitro par la capacité du peptide à activer la transglutaminase, soit par l'augmentation de la synthèse protéique de la transglutaminase (par modulation directe ou indirecte de l'expression 15 génique de la transglutaminase), soit par l'augmentation de l'activité enzymatique de la transglutaminase, soit par d'autres processus biologiques tels que la stabilisation de la protéine transglutaminase ou encore la stabilisation des transcrits d'ARN messager. On entend par peau, l'ensemble des tissus de recouvrement constituant la peau et les muqueuses, y compris les phanères (cheveux, cils, poils, sourcils). 20 On entend par � hydrolysat peptidique �, un mélange de composés majoritairement représentés par des peptides ou des oligopeptides. Selon l'invention, on utilisera indifféremment les termes � hydrolysat peptidique � ou � principe actif �. On entend par � composés de nature peptidique �, les fragments de protéines, les peptides et les acides aminés libres présents dans l'hydrolysat peptidique selon 25 l'invention. On entend par � application topique �, le fait d'appliquer ou d'étaler le principe actif selon l'invention, ou une composition le contenant, à la surface de la peau ou d'une muqueuse. On entend par � physiologiquement acceptable �, que l'hydrolysat peptidique selon l'invention, ou une composition le contenant, est approprié pour entrer en contact 30 avec la peau ou une muqueuse sans provoquer de réactions de toxicité ou d'intolérance. Selon une méthode particulièrement avantageuse de réalisation de l'invention, le peptide bioactif contenu dans l'hydrolysat possède une séquence de formule générale (I) : 2949781 -6- XI -X2-X3-X4-X5-X6 Dans laquelle, XI est l'alanine, la valine ou aucun acide aminé, X2 est l'alanine, la valine ou aucun acide aminé, 5 X3 est l'arginine, X4, est l'arginine, la glycine ou la glutamine, X5 est l'arginine, la glycine ou la glutamine, X6 est l'arginine, la glycine ou la glutamine, 10 Selon une méthode de réalisation de l'invention tout particulièrement préférée, le peptide bioactif est de séquence : (SEQ ID n°1) Ala-Ala-Arg-Arg-Gly-Gln (SEQ ID n°2) Val-Val-Arg-Arg-Gly-Gln (SEQ ID n°3) Ala-Val-Arg-Arg-Gln-Gly 15 (SEQ ID n°4) Ala-Arg-Gly-Arg-Gln (SEQ ID n°5) Arg-Arg-Gly-Gln (SEQ ID n°6) Arg-Arg-Gln-Gly (SEQ ID n°7) Arg-Gln-Gly-Arg (SEQ ID n°8) Arg-Gly-Arg-Gln 20 Selon un mode de réalisation particulièrement intéressant, le peptide biologiquement actif correspond à la séquence SEQ ID n°5. De manière préférentielle, le principe actif selon l'invention est plus particulièrement 25 capable d'activer les transglutaminases humaines de type 1, 2a, 2b, 3 ou 5. Le principe actif selon l'invention peut être obtenu par extraction de protéines d'origine végétale, suivie d'une hydrolyse contrôlée qui libère des composés de nature peptidique, parmi lesquels se trouvent les peptides bioactifs. 30 L'utilisation d'hydrolysats peptidiques, et en particulier d'hydrolysats peptidiques de bas poids moléculaires, présente de nombreux avantages en cosmétique. Outre le fait de générer des composés de nature peptidique qui ne préexistaient pas dans le mélange protéique de départ, l'hydrolyse et la purification permettent d'obtenir des mélanges plus 2949781 -7- stables, plus facilement standardisables et ne provocant pas de réactions allergiques en dermato-cosmétique. Il est également possible d'utiliser certains extraits hydrolysés sans en purifier les composés de nature peptidique correspondant aux peptides bioactifs selon l'invention, 5 mais en s'assurant toutefois de la présence desdits peptides par des moyens analytiques appropriés. De très nombreuses protéines de plantes sont susceptibles de contenir des peptides bioactifs au sein de leur structure. L'hydrolyse ménagée permet de dégager ces composés particuliers de nature peptidique. Il est possible, mais non nécessaire pour réaliser 10 l'invention, d'extraire soit les protéines concernées d'abord et de les hydrolyser ensuite, soit d'effectuer l'hydrolyse d'abord sur un extrait brut et de purifier les composés de nature peptidique ensuite. Selon un mode de réalisation préférée, ledit principe actif provient de l'hydrolyse de 15 protéines de plantes choisies parmi des plantes du genre Zea et préférentiellement l'espèce Zea mays L. Selon l'invention, le matériel végétal utilisé sera le grain et préférentiellement le grain débarrassé de son enveloppe par une étape de décorticage. De préférence, les plantes utilisées ne sont pas soumises à une fermentation préalable. Toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier peut être 20 utilisée afin de préparer l'hydrolysat selon l'invention. Dans une première étape, les graines sont broyées à l'aide d'un broyeur à plantes. La poudre ainsi obtenue peut ultérieurement être "délipidée" à l'aide d'un solvant organique classique (comme par exemple un alcool, l'hexane ou de l'acétone). On réalise ensuite l'extraction des protéines suivant le procédé classique (Osborne, 25 1924) modifié ; le broyat de plante est mis en suspension dans une solution alcaline contenant un produit adsorbant de type polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) insoluble (0,01 -20 %) ; en effet, il a été observé que les opérations d'hydrolyses et de purifications ultérieures étaient facilitées par ce moyen. En particulier, la concentration en substances de type phénoliques, interagissant avec les protéines, se trouve nettement réduite. 30 La fraction soluble, contenant les protéines, les glucides et éventuellement des lipides, est recueillie après des étapes de centrifugation et de filtration. Cette solution brute est ensuite hydrolysée dans des conditions ménagées pour générer des peptides solubles. L'hydrolyse se définit comme étant une réaction chimique impliquant le clivage d'une 2949781 -8- molécule par de l'eau, cette réaction pouvant se faire en milieu neutre, acide ou basique. Selon l'invention, l'hydrolyse est réalisée par voie chimique et/ou de façon avantageuse par des enzymes protéolytiques. On peut alors citer l'utilisation des endoprotéases d'origine végétale (papaïne, bromelaïne, ficine) ou de micro-organismes (Aspergillus, 5 Rhizopus, Bacillus, (alcalase� de Novozym, etc.). Les conditions d'hydrolyses sont choisies pour favoriser l'enrichissement en peptide bioactif. Pour les mêmes raisons que précédemment, c'est-à-dire l'élimination des substances polyphénoliques, une quantité de polyvinylpolypyrrolidone est additionnée au milieu réactionnel lors de cette étape d'hydrolyse ménagée. Après filtration, permettant 10 d'éliminer les enzymes et les polymères, le filtrat (solution) obtenu constitue une première forme du principe actif selon l'invention. L'hydrolysat obtenu à ce stade peut être encore purifié afin de sélectionner les fractions de bas poids moléculaires, préférentiellement inférieures à 6 kDa, et les peptides générés selon leur nature. Le fractionnement peut s'effectuer avantageusement par des 15 étapes d'ultrafiltrations successives à travers des filtres de porosité décroissante, en conservant les filtrats à chaque étape et/ ou par une méthode de type chromatographique, afin d'enrichir spécifiquement l'hydrolysat en peptide bioactif. On procède à une phase de dilution dans de l'eau ou dans tout mélange contenant de l'eau, puis cette dilution est stérilisée par ultrafiltration afin d'obtenir un hydrolysat 20 peptidique caractérisé par une teneur en protéines de 3,5 à 5,5 g/1. Cet hydrolysat peptidique correspond à la forme la plus purifiée du principe actif selon l'invention. L'hydrolysat peptidique obtenu selon l'invention est analysé qualitativement et quantitativement en chromatographie liquide haute pression (CLHP), permettant 25 d'analyser les protéines ayant des poids moléculaires de 0,2 à 25 kDa (selon un gradient de solvants approprié). Les différentes fractions peptidiques qui ont pu être isolées sont ensuite analysées pour leur efficacité biologique. Ces diverses fractions sont ensuite analysées par spectrométrie de masse afin d'identifier spécifiquement le contenu en acides aminés des peptides de chaque pic. Il a également été réalisé une analyse de 30 séquençage pour déterminer la séquence peptidique du peptide bioactif. L'hydrolysat obtenu est composé de peptides de poids moléculaire inférieur à 6 kDa et préférentiellement inférieur à 5 kDa, enrichi en peptide bioactif de 4 à 6 acides aminés comprenant au moins deux résidus arginine, un résidu glycine et un résidu glutamine. 2949781 -9- Le deuxième objet de la présente invention est une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, en tant que principe actif capable d'activer la transglutaminase humaine, l'hydrolysat peptidique enrichi en peptide bioactif selon l'invention. 5 Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le principe actif selon l'invention est présent dans les compositions de l'invention à une concentration comprise entre 0,0001 % et 20 % environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,05 % et 5 % environ par rapport au poids total de la composition finale. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le principe actif selon 10 l'invention est solubilisé dans un ou plusieurs solvants physiologiquement acceptables, classiquement utilisés par l'homme du métier, comme l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propanediol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. 15 Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, le principe actif selon l'invention est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur physiologiquement acceptable. 20 La composition utilisable selon l'invention peut en particulier consister en une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, un après-shampooing, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant, une lotion restructurante pour les cheveux, un masque, etc. La composition peut également se présenter sous forme de teinture ou de mascara à appliquer au pinceau ou au peigne, en particulier sur les cils, les 25 sourcils ou les cheveux. La composition utilisable selon l'invention pourra être appliquée par toute voie appropriée, notamment orale, parentérale ou topique, et la formulation des compositions sera adaptée par l'homme du métier, en particulier pour des compositions cosmétiques ou dermatologiques. Avantageusement, les compositions selon l'invention sont destinées à 30 une administration par voie topique. Ces compositions doivent donc contenir un milieu physiologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau et les phanères, et couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. 2949781 -10- Il est bien entendu que le principe actif selon l'invention peut être utilisé seul ou bien en association avec d'autres principes actifs. Avantageusement, les compositions utilisables selon l'invention contiennent, en outre, divers principes actifs protecteurs ou antivieillissement, destinés à favoriser et à 5 compléter l'action dudit principe actif. On peut citer, de manière non limitative, les ingrédients suivants : des agents cicatrisants, anti-âge, antirides, apaisants, antiradicalaires, anti-UV, des agents stimulant la synthèse de macromolécules dermiques ou le métabolisme énergétique, des agents hydratants, antibactériens, antifongiques, anti-inflammatoires, anesthésiques, des agents modulants la différenciation, la pigmentation 10 ou la dépigmentation cutanée, des agents stimulant la pousse des ongles ou des cheveux. Préférentiellement, on utilisera un agent présentant une activité antiride, tel qu'un agent anti-radicalaire ou antioxydant, ou un agent stimulant la synthèse de macromolécules dermiques, agent stimulant le métabolisme énergétique, inhibiteur de métallo-protéinase. Par exemple, il peut être ajouté d'autres principes actifs ayant une action anti- 15 radicalaire ou antioxydante, choisis parmi la vitamine C, la vitamine E, le coenzyme Q10 et les extraits polyphénoliques de plantes, les rétinoïdes. La composition selon l'invention peut encore associer au principe actif selon l'invention, d'autres principes actifs stimulant les synthèses des macromolécules dermiques (laminine, fibronectine, collagène), par exemple le peptide de collagène 20 commercialisé sous le nom � Collaxyle' � par la société Vincience. La composition selon l'invention peut également associer au principe actif selon l'invention, d'autres principes actifs stimulant le métabolisme énergétique, comme le principe actif commercialisé sous la dénomination � GP4G" � par la société Vincience. Il est bien évident que l'invention s'adresse aux mammifères en général, et plus 25 particulièrement aux êtres humains. Ces compositions pourront notamment se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse ; d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ; elles peuvent aussi se présenter sous forme de crèmes, de suspensions, ou encore de poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, 30 les lèvres et/ou les phanères. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick 2949781 -11- ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau. L'ensemble de ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur 5 formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des anti-oxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, d'autres principes actifs cosmétiques, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc. 10 Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à une concentration allant de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter 15 de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, par rapport au poids total de la composition. 20 L'invention a pour troisième objet une composition pharmaceutique comprenant une quantité efficace d'hydrolysat peptidique selon l'invention, à titre de médicament. Par exemple, la composition pharmaceutique pourra être destinée à prévenir ou traiter les pathologies caractérisées par une altération de la fonction barrière, telles que les peaux 25 hypersensibles, irritées, ou réactives et l'eczéma atopique. Selon cette forme de l'invention, les compositions seront appropriées à une administration orale pour un usage pharmaceutique. Ainsi les compositions pourront notamment se présenter sous forme de comprimés, capsules, gélules, pâtes à mâcher, poudres à consommer telles quelles ou à mélanger extemporanément avec un liquide, 30 sirop, gels, et toute autre forme connue de l'homme du métier. Ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des solvants, des 2949781 -12- épaississants, des diluants, des antioxydants, des conservateurs, d'autres principes actifs pharmaceutiques, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, etc. L'invention a pour quatrième objet l'utilisation, dans une composition cosmétique, 5 d'une quantité efficace d'hydrolysat peptidique, en tant que principe actif pour renforcer la fonction barrière cutanée et de stimuler la régénération et la différenciation épidermique. On entend par � renforcer la fonction barrière cutanée et stimuler la régénération et la différenciation épidermique �, l'amélioration de la structure de la couche cornée, 10 l'augmentation des signes de régénérations cellulaires, tels que la densité des couches basales épidermiques et la vitesse de migration des fibroblastes, et l'augmentation de l'expression des marqueurs de différenciation kératinocytaire. L'invention a pour cinquième objet l'utilisation d'une composition cosmétique 15 comprenant l'hydrolysat peptidique, en tant que principe actif, pour lutter de manière préventive et/ou curative contre les signes du vieillissement cutané, et plus particulièrement le vieillissement photo-induit (photo-vieillissement). Par manifestations cutanées du vieillissement, on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau et des phanères dues au vieillissement comme, par exemple, les rugosités superficielles de 20 la couche cornée, les rides et ridules, mais également toute modification interne de la peau qui ne se traduit pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, l'amincissement du derme ou toute autre dégradation interne de la peau consécutive à une exposition aux rayonnements ultraviolets (UV). 25 L'invention a pour sixième objet l'utilisation d'une composition cosmétique comprenant l'hydrolysat peptidique en tant que principe actif, pour protéger la peau et les phanères contre tout type d'agressions extérieures. En particulier, l'invention a pour objet l'utilisation de l'hydrolysat selon l'invention dans une composition cosmétique destinée à prévenir ou traiter les dommages causés à la 30 peau par des agressions extérieures de la peau, choisies parmi les traitements mécaniques tels que le rasage ou l'épilation, les lessivages trop intenses par les détergents, les conditions climatiques extrêmes ou les variations brutales de température et d'hygrométrie. 2949781 -13- L'invention a pour septième objet un procédé de traitement cosmétique caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la peau ou les phanères à traiter une composition contenant une quantité efficace de principe actif pour prévenir ou traiter les signes cutanés du vieillissement ou protéger la peau et les phanères contre les agressions extérieures. 5 En particulier, l'invention se rapporte à un procédé de traitement cosmétique destiné à protéger la peau et les phanères contre les agressions dues aux rayonnements UV. Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent également de la description précédente. D'autres avantages et caractéristiques de 10 l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif. Liste des figures Figure 1 : Exemple de chromatogramme obtenu par CLHP, avec mise en évidence du pic correspondant au peptide bioactif dans un hydrolysat de maïs obtenu selon 15 l'exemple 1. Figure 2: Evaluation de l'effet protecteur vis-à-vis des agressions extérieures : Coloration histologique Hématoxyline-Eosine de peaux humaines agressées par tape-stripping et traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1. Exemple 1 : Préparation d'un hydrolysat peptidique à partir de tourteaux de maïs 20 (Zea mars L.) Le tourteau de maïs (Zea mays L.) est mis en solution dans 10 volumes d'eau en présence de 2 % de POLYCLAR� 10 (polyvinylpyrrolidone ù PVPP - insoluble). Le mélange est ajusté à un pH compris entre 7,5 et 9,5 avec une solution aqueuse de soude 1 M. 25 Après ajustement du pH, un mélange de bromélaïne à 2 % et d'alcalase� (Novozym) est ajouté dans le milieu réactionnel. L'hydrolyse est obtenue après 2 heures d'agitation à 50°C. On procède ensuite à l'inactivation de l'enzyme par chauffage de la solution à 80°C pendant 2 heures. Après centrifugation, la solution aqueuse surnageante correspondant à un hydrolysat brut de maïs est récupérée. Les conditions d'hydrolyse ont été choisies de 30 façon à permettre un enrichissement en peptide bioactif de 4 à 6 acides aminés contenant les résidus Arg, Gly et Gln. 2949781 -14- Le procédé de purification de l'hydrolysat brut commence par des filtrations successives à l'aide de filtres-plaques Seitz-Orion de porosité décroissante (jusqu'à 0,2 gym) afin d'obtenir une solution jaune, brillante et limpide, qualifié d'hydrolysat 1. A cette étape, l'hydrolysat 1 de maïs est caractérisé par un extrait sec titrant de 20 à 5 30 g/kg, un taux de protéines de 20 à 25 g/1 et un taux de sucres de 2 à 5 g/l. La nature protéique de l'hydrolysat 1 est mise en évidence après analyse par électrophorèse sur gel de polyacrylamide NuPAGE� Bis-Tris Pre-cast (Invitrogen). L'hydrolysat protéique de maïs est chauffé à 70°C pendant 10 minutes dans des conditions réductrices dénaturantes dans un tampon de préparation d'échantillon 10 NuPAGE� LDS. Une solution de NuPAGE� Antioxydant est ajoutée dans la cuve intérieure (cathode) pour éviter que les protéines réduites ne se ré-oxydent durant l'électrophorèse. La migration des protéines est réalisée dans du tampon de migration NuPAGE� MES avec le standard SeeBlue Plus2 comme marqueur de poids moléculaire. La coloration des protéines est effectuée à l'aide de Bleu de Coomassie� R-250. Dans ces 15 conditions, on observe des protéines de poids moléculaire inférieur à 6 kDa. L'hydrolysat 1 est ensuite purifié en éliminant les protéines de haut poids moléculaire par ultrafiltration à l'aide de la cassette Pellicon� 2 Biomax 5 kDa afin de ne conserver que les composés de nature peptidique de poids moléculaire inférieur à 5 kDa. Après cette purification finale, on procède à une phase de dilution afin d'obtenir un 20 hydrolysat peptidique caractérisé par un taux de protéines compris entre 3,5 et 5,5 g/l. Cet hydrolysat peptidique correspond au principe actif selon l'invention. Cet hydrolysat peptidique est alors analysé en chromatographie liquide haute pression (CLHP) à l'aide d'un appareil HP1100 piloté par le logiciel ChemStation. La colonne utilisée lors de l'élution de l'hydrolysat est une Nucleosil� 300-5 C4 MPN (125 x 4 mn), 25 permettant de chromatographier des protéines ayant des poids moléculaires de 0,2 à 25 kDa dans les conditions suivantes : Un gradient Méthanol: - Colonne Uptisphere OPB 125 x 3 mm - Solvant A: eau grade HPLC contenant 0,1 % d'acide heptafluorobutyrique (HFBA) 30 - Solvant B: méthanol grade HPLC - Gradient: 100 % à 40 % solvant A en 13 minutes puis de 40 % à 10 % en 5 minutes Dans ces conditions chromatographiques, plusieurs fractions peptidiques ont pu être isolées. Un exemple de chromatogramme obtenu par CLHP (chromatographie en phase 2949781 -15- liquide à haute pression), avec mise en évidence du pic correspondant au peptide bioactif est donné à la figure 1. Ces diverses fractions sont ensuite analysées par spectrométrie de masse afin d'identifier spécifiquement le contenu en acides aminés des peptides de chaque pic. Il a 5 également été réalisé une analyse de séquençage pour déterminer la séquence peptidique du peptide bioactif. Exemple 2 : Mise en évidence de l'augmentation de l'activité enzymatique globale des transglutaminases par l'hydrolysat selon l'exemple 1 Le but de cette étude est de déterminer l'influence de l'hydrolysat selon l'exemple 1 10 sur l'activité totale des transglutaminases dans les kératinocytes humains normaux (KHN). Pour cela, l'activité enzymatique totale des transglutaminases est dosée par spectrophotométrie à l'aide d'un substrat donneur d'acides aminés marqué à la fluorescéine. Protocole : Des KHN sont ensemencés dans des plaques 96 puits noirs. Après 4 jours 15 de culture, les KHN sont traités avec une solution à 1 % d'hydrolysat selon l'exemple 1, pendant 24 ou 48 heures (le principe actif est rajouté toutes les 24 heures). Un contrôle positif est réalisé par traitement des cellules à l'EGCG à 20 �g/ml (épigallocatéchine gallate, le principal polyphénol du thé vert). Le substrat utilisé est la cadavérine marquée à la fluorescéine (Invitrogen A10466) diluée à 100 �M dans du milieu de culture. Le 20 substrat est incubé pendant 2 heures avec les cellules à raison de 200 0/puits). Les cellules sont ensuite rincées deux fois dans du tampon HBSS et fixées par un mélange acide acétique-éthanol-eau (1:49:50) pendant 20 minutes. Après deux rinçages dans de l'éthanol puis trois rinçages dans du tampon HBSS, 100 �l de PBS sont ajoutés dans chaque puits et une lecture au spectrophotomètre à des longueurs d'onde d'excitation de 25 485 nm et d'émission de 530 nm est réalisée. Dans ces conditions, l'activité transglutaminase est proportionnelle à la quantité de fluorescence émise (exprimée en unités de fluorescence), rapportée à la quantité totale de protéines présente dans chaque puits, préalablement dosée par la technique BCA. Résultats : Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport au contrôle non 30 traité. En présence de 1% d'hydrolysat selon l'exemple 1, l'activité enzymatique est augmentée de plus de 30% après 24 heures. L'augmentation est encore plus marquée après 48 heures de traitement. 2949781 -16- Conclusion : L'hydrolysat selon l'exemple 1 augmente significativement l'activité enzymatique totale des transglutaminases dans les kératinocytes humains normaux. Exemple 3 : Mise en évidence de l'effet activateur de l'hydrolvsat selon l'exemple 1 sur l'expression des TG1, TG2, la TG3 et TG5 5 Le but de cette étude est de déterminer l'influence de l'hydrolysat selon l'exemple 1 sur l'expression des différentes transglutaminases exprimées dans la peau humaine. Pour cela, des marquages spécifiques par immunofluorescence ont été réalisés sur culture de kératinocytes humains normaux (KHN) et sur biopsie de peau. Des marquages par immunofluorescence ont également été réalisés sur des cultures de fibroblastes humains 10 normaux spécifiquement pour la TG2, exprimée dans ce type de cellules. Protocole des immunomarquages sur kératinocytes humains normaux en culture : Des KHN en culture sont traités avec une solution à 1 % d'hydrolysat selon l'exemple 1 pendant 24 heures. Pour l'immunomarquage par l'anticorps anti TG1, les cellules sont lavées et fixées au paraformaldéhyde à 3,7% pendant 10 minutes. Les cellules sont 15 ensuite incubées en présence d'un anticorps spécifique anti TG1 (Clinisciences BT-621, mouse monoclonal), puis d'un anticorps secondaire adapté, couplé à un marqueur fluorescent. Pour les autres immunomarquages, les cellules sont lavées et fixées au méthanol froid pendant 1 minutes. Les cellules sont ensuite incubées en présence d'un anticorps spécifique ; anti-TG2 (Abcam ab2972, rabbit polyclonal), anti TG3 (Abcam 20 ab53236, mouse monoclonal) ou anti TG5 (Abcam ab26992, rabbit polyclonal). Les lames sont ensuite observées au microscope à épifluorescence (Nikon Eclipse E 80i microscope), après montage dans un milieu ad hoc. Protocole des immunomarquages sur fibroblastes humains normaux en culture : Des fibroblastes humains dermiques sont traités et immunomarqués à l'aide d'un anticorps 25 anti TG2 selon le même protocole que pour les KHN. Protocole des immunomarquages sur biopsies de peau : Des biopsies de peau humaine sont mises en culture à l'interface air/liquide. Une solution à 1 % d'hydrolysat selon l'exemple 1 est appliquée topiquement durant 24 heures. Pour les marquages de la TG1 et de la TG2, les biopsies de peau sont ensuite incluses 30 dans de la résine et congelées dans l'azote. Des coupes d'environ 6�m sont ensuite réalisées au cryostat. L'immunomarquage est réalisé à l'aide d'un anticorps spécifique ; 2949781 -17- anti TG1 (Clinisciences BT-621, mouse monoclonal) ou anti-TG2 (Abcam ab2972, rabbit polyclonal) puis d'un anticorps secondaire adapté, couplé à un marqueur fluorescent. Les coupes de peau sont alors examinées au microscope à Epi-fluorescence (Nikon Eclipse E 80i microscope). 5 Pour les marquages de la TG3, les biopsies de peau sont incluses dans de la paraffine et des coupes histologiques de 3 gm d'épaisseur sont effectuées. Les lames sont déparaffinées, hydratées puis soumises à un immunomarquage par un anticorps dirigé contre TG3 (Abcam ab53236, mouse monoclonal) puis d'un anticorps secondaire adapté, couplé à un marqueur fluorescent. Les coupes de peau sont alors examinées au 10 microscope à Epi-fluorescence (Nikon Eclipse E 80i microscope). Résultats : Dans toutes les conditions testées, on observe une fluorescence plus intense dans les cultures et sur les coupes de peaux traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1 à 1 % que dans les conditions contrôle, non traité. Conclusions : L'hydrolysat selon l'exemple 1 stimule l'expression des TG1, TG2, TG3 15 et TG5 dans les kératinocytes humains normaux en culture, ainsi que l'expression de la TG2 dans les fibroblastes humains. L'hydrolysat selon l'exemple 1 stimule l'expression des TG1, TG2 et TG3 dans des biopsies de peaux cultivées ex vivo. Exemple 4 : Mise en évidence de l'effet activateur de l'hvdrolvsat selon l'exemple 1 20 sur la différenciation épidermique Le but de cette étude est de déterminer l'influence de l'hydrolysat selon l'exemple 1 sur la différenciation épidermique. Pour cela, l'expression des principaux marqueurs de la différenciation épidermique, exprimés spécifiquement dans les kératinocytes des couches suprabasales, a été étudiée. Les marqueurs testés sont la transglutaminase 1, les 25 pankératines, la filaggrine, l'involucrine et la loricrine. D'autre part, la filaggrine, l'involucrine et la loricrine sont des précurseurs de l'enveloppe cornée et des substrats des transglutaminases. Protocole des immunomarquages sur kératinocytes humains normaux en culture : Des KHN en culture sont traités avec une solution à 1 % d'une solution d'hydrolysat selon 30 l'exemple 1 pendant 24 heures. Les cellules sont ensuite lavées et fixées au paraformaldéhyde à 3,7% pendant 10 minutes. Après démarquage des sites spécifiques, 2949781 -18- les cellules sont incubées en présence d'un anticorps spécifique dirigé contre la TG1 (Clinisciences BT-621, mouse monoclonal), ou contre la loricrine (Abcam ab24722, rabbit polyclonal), ou l'involucrine (Novocastra NCL-INV, mouse monoclonal, clone SY5,), puis incubées en présence d'un anticorps secondaire adapté, couplé à un marqueur 5 fluorescent. Pour une plus grande facilité d'observation, les noyaux des cellules peuvent être contre-colorés par le DAPI (4',6' Di Amidino-2-Phényl Indole), une molécule fluorescente bleue capable de se lier fortement à l'ADN). Les lames sont ensuite observées au microscope à épifluorescence (Nikon Eclipse E 80i microscope), après montage dans un milieu ad hoc. 10 Protocole des immunomarquages sur biopsies de peau : Des biopsies de peau humaine sont mises en culture à l'interface air/liquide. Une solution à 1 % d'hydrolysat selon l'exemple 1 est appliquée topiquement durant 24 heures. Les biopsies de peau sont ensuite incluses dans la paraffine et des coupes histologiques de 3 �m d'épaisseur sont effectuées. Les lames sont déparaffinées, hydratées puis soumises à un immunomarquage 15 par un anticorps dirigé contre la TG1 (Clinisciences BT-621, mouse monoclonal) ou les cyto-pankératines (Novocastra (NCL-CK10, mouse monoclonal), ou la loricrine (Abcam ab24722, rabbit polyclonal), ou l'involucrine (Novocastra NCL-1NV, clone SY5, mouse monoclonal) ou la filaggrine (Tebu Santa Cruz sc-58761, mouse monoclonal). Pour une plus grande facilité d'observation les noyaux des cellules peuvent être contre-colorés par 20 le DAPI (4',6' Di Amidino-2-Phényl Indole, une molécule fluorescente bleue capable de se lier fortement à l'ADN). Un anticorps secondaire adapté, couplé à un marqueur fluorescent est ensuite utilisé. Après montage dans un milieu ad hoc, les lames sont observées au microscope à épifluorescence (Nikon Eclipse E 80i microscope). Protocole des immunotransferts : Des KHN en culture sont traités avec une solution à 25 1 % d'hydrolysat selon l'exemple 1 pendant 24 heures. Les cellules sont ensuite rincées puis détachées du support par grattage dans un tampon RIPA en présence d'un cocktail d'inhibiteurs de protéases (Thermo Scientific, Rockford, USA). Les cellules lysées sont centrifugées à 4°C à 10000 rpm pendant 20 minutes et les surnageants collectés. Les échantillons sont alors standardisés par dosage des protéines par le kit BCA (Pierce, 30 France). Les échantillons sont mélangés puis soumis à une électrophorèse sur gel NuPAGE 3-8% Tris-acetate, dans un tampon de migration NuPAGE Tris-acetate, puis transférés sur membrane de nitrocellulose à l'aide d'un dispositif de transfert (Invitrogen, Paisley, UK). Les membranes sont saturées dans du TBS-lait 5 %, 2 heures à température 2949781 -19- ambiante, puis incubées à 4°C toute la nuit avec un anticorps primaire dirigé contre la TG1 (Clinisciences BT-621, mouse monoclonal) ou contre l'involucrine (Novocastra NCL-INV, clone SY5, mouse monoclonal) ou contre la loricrine (Abcam ab24722, rabbit polyclonal).Après lavage par du tampon TBS-Tween 0,05%, la membrane est incubée 5 avec un anticorps secondaire adapté, couplé à la péroxydase. Les transferts sont ensuite développés à l'aide d'un substrat chimioluminescent (SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate, Pierce, Brebiere, France). Les bandes de protéines spécifiques ainsi révélées sont quantifiées à l'aide d'un analyseur d'image Chemi-Imager technology (Alpha Innotech Corporation). 10 Résultats : Dans toutes les conditions testées par immunofluorescence, on observe une fluorescence plus intense dans les cultures et sur les coupes de peaux traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1 à 1 % que dans les conditions contrôle, non traité. Sur les coupes de peau ex vivo, on note une différenciation épidermique avec présence d'une couche cornée plus épaisse. 15 L'analyse quantitative des immunotransferts permet d'évaluer l'augmentation de l'expression des marqueurs testés. L'augmentation de la TG1 est de l'ordre de 20 %, de l'involucrine est supérieure à 25 % et de la loricrine est de l'ordre de 15 %. Conclusions : L'hydrolysat selon l'exemple 1 stimule l'expression des pankératines, de l'involucrine, de la filaggrine, de la loricrine, ainsi que de la TG1 dans les 20 kératinocytes humains normaux. L'hydrolysat selon l'exemple 1 améliore également la différenciation épidermique et en particulier la morphologie de la couche cornée. Exemple 5 : Mise en évidence de l'effet protecteur vis-à-vis des agressions extérieures de l'h_ydrolvsat selon l'exemple 1 Le but de cette étude est de déterminer l'effet protecteur sur la peau de l'hydrolysat 25 selon l'exemple 1 vis-à-vis d'agressions extérieures. Pour cela, un modèle ex vivo d'agression sévère de la barrière cutanée a été utilisé. Protocole : Les biopsies de peau humaine sont soumises à une agression provoquée par des arrachements successifs de strates de la couche cornée à l'aide de ruban adhésif (technique dite de � tape stripping �). L'étape d'arrachement est répétée 20 fois de suite 30 sur la même zone. Les biopsies de peau humaine � strippées � sont ensuite mises en culture et traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1 à 1 % et 3% selon le protocole de 2949781 -20- l'exemple 3, pendant 24 heures et 48 heures. Les biopsies de peau sont ensuite incluses dans de la paraffine et des coupes histologiques de 3 d'épaisseur sont réalisées. Les coupes sont déposées sur des lames Superfrost Plus (Menzel Glaser, Thermo Scientific), puis déparaffinées dans le xylène et réhydratées dans une série de solutions alcool-eau. 5 Les coupes sont ensuite colorées par de l'hématoxyline à 50 % pendant 3 minutes, rincées, puis colorées à l'éosine 60 %, pendant 3 minutes et rincées à l'eau. Les coupes sont déshydratées, montées dans l'Eukitt et examinées en microscopie optique. Résultats : Les coupes histologiques de peau traitée par l'hydrolysat selon l'exemple 1 à la concentration 1 % et 3 %, montrent une néo-synthèse plus importante des couches 10 cornées. L'ensemble des couches épidermiques présente moins de cellules vacuolées ainsi qu'une plus grande densité cellulaire. Voir Figure 2. Conclusion : L'hydrolysat selon l'exemple 1 améliore la reconstruction de l'épiderme agressé. Exemple 6 : Mise en évidence de l'effet régénérant de l'hydrolysat selon l'exemple 1 15 Le but de cette étude est de déterminer l'effet régénérant de l'hydrolysat selon l'exemple 1 sur les fibroblastes dermiques et sur l'épiderme. Protocole d'utilisation du modèle in vitro de régénération fibroblastique Ibidi : Le modèle de cicatrisation In vitro Ibidi a été utilisé (Biovalley, Marne la Vallée, France). Des fibroblastes humains sont ensemencés dans deux compartiments séparés d'un insert 20 Ibidi puis celui-ci est déposé dans une boîte de culture. A confluence, l'insert est enlevé créant ainsi une zone acellulaire de 400 �m de large entre les deux tapis cellulaires. L'hydrolysat selon l'exemple 1 dilué à 1 % et 3 % est alors ajouté au milieu de culture, et le traitement est effectué pendant 48 heures avec renouvellement du principe actif toutes les 24 heures. Des observations en microscopie à contraste de phase (Olympus CK40 25 microscope, x5, connecté à un appareil photo Olympus E-510) ont été réalisées à différents temps (0 à 48 heures) pendant le processus de migration. Protocole d'étude de la régénération épidermique : Des biopsies de peau humaine sont mises en culture à l'interface air/liquide. Une solution à 1 % de l'hydrolysat selon l'exemple 1 est appliquée topiquement, puis les échantillons sont incubés durant 24 30 heures. Les biopsies de peau sont ensuite incluses dans de la paraffine et des coupes histologiques de 3 �m d'épaisseur sont réalisées. Les coupes sont déposées sur des lames 2949781 -21- Superfrost Plus (Menzel Glaser, Thermo Scientific), puis déparaffinées dans le xylène et réhydratées dans une série de solutions alcool-eau. Les coupes sont ensuite colorées par de l'hématoxyline à 50 % pendant 3 minutes, rincées, puis colorées à l'éosine 60 %, pendant 3 minutes et rincées à l'eau. Les coupes sont ensuite déshydratées, montées dans 5 l'Eukitt et examinées en microscopie optique. Résultats : i) L'envahissement par les fibroblastes de la zone acellulaire est plus rapide lorsque les cellules sont traitées par le principe actif à 1 % et à 3 %, comparé aux conditions contrôle. L'effet est dose-dépendant. 10 ii) Les coupes histologiques d'épiderme traités par de l'hydrolysat selon l'exemple 1 montrent une néo-synthèse de la couche cornée qui apparait plus épaisse et mieux hydratée. On observe également une plus grande densité des cellules de la couche basale qui apparaissent mieux orientées dans l'axe vertical et plus homogènes. Conclusions : L'hydrolysat selon l'exemple 1 assure une régénération des fibroblastes 15 dermiques ainsi que de l'épiderme. Il induit une plus grande cohésion des couches cornées. Exemple 7 : Préparation de compositions 1 - Crème protection solaire: Noms commerciaux I Noms INCI % massique PHASE A Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Pemulen TRI Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate 0,40 Crosspolymer Glycerine Glycerin 3,00 Nipastat Sodium Sodium Methylparaben (and) Sodium 0,15 Ethylparaben (and) Sodium Butyl paraben (and) Sodium Propylparaben (and) Sodium Isobutylparaben PHASE B Parsol MCX Ethylhexyl Methoxycinnamate 7,50 Eusolex 4360 Benzophenone-3 3,00 Parsol 1789 Butyl Methoxydibenzoylmethane 2,00 Myritol 318 Caprylic/Capric Triglyceride 4,00 -22- Noms commerciaux Noms INCI % massique Emulgade SEV Hydrogenated Palm Glycerides (and) 5,00 Ceteareth-20 (and) Ceteareth-12 (and) Cetearyl Alcohol Propylparaben Propylparaben 0,15 Nacol 16-98 Cetyl Alcohol 1,00 PHASE C TEA I Triethanolamine 0,20 PHASE D Hydrolysat selon l'exemple 1 0,5 % Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément entre 70°C et 75°C. La phase B est émulsionnée dans la phase A sous agitation. La phase C est ajoutée, à 45°C, en augmentant l'agitation. La phase D est ensuite additionnée lorsque la température se situe en dessous de 40°C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C sous vive agitation. 2ûCrème anti-âge : Noms Noms INCI % commerciaux massique Phase A Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl Glucoside 6,00 Squalane Squalane 3,00 Cetiol SB 45 Butyrospermum Parkii ( Shea Butter) 2,00 Waglinol 250 Cetearyl Ethylhexanoate 3,00 Amerchol L- 101 Minerai Oil (and) Lanolin Alcohol 2,00 Abil 350 Dimethicone 1,50 BHT BHT 0,01 Coenzyme Q 10 Ubiquinone 0,10 Phase B 2949781 -23- Noms Noms INCI % commerciaux massique Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,25 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben 0,75 (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Phase C Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Glucam E10 Methyl Gluceth-10 1,00 Allantoin Allantoin 0,15 Carbopol Ultrez 10 Carbomer 0,20 Phase D TEA Triethanolamine 0,18 Phase E Hydrolysat selon 1 % l'exemple 1 GP4G Water (and) Artemia Extract 1,50 Collaxyl Water (and) Butylene Glycol (and) Hexapeptide-9 3,00 Phase F Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Préparer et fondre la phase A à 65-70°C. Chauffer la phase C à 65-70°C. La phase B est ajoutée à la phase A juste avant d'émulsionner A dans B. A environ 45°C, le carbomer est neutralisé par addition de la phase D. La phase E est ensuite additionnée sous légère 5 agitation et le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C. La phase F est alors additionnée si souhaité. ûCrème protectrice de jour : Noms commerciaux Noms INCI % massique Phase A Emulium Delta Cetyl alcohol (and) Glyceryl Stearate (and) PEG- 4,00 75 Stearate (and) Ceteth-20 (and) Steareth-20 Lanette O Cetearyl Alcohol 1,50 D C 200 Fluid/100cs Dimethicone 1,00 DUB 810C Coco Caprylate/Caprate 1,00 DPPG Propylene Glycol Dipelargonate 3,00 DUB DPHCC Dipentaerythrityl Hexacaprylate/Hexacaprate 1,50 Cegesoft PS6 Vegetable Oil 1,00 Vitamine E Tocopherol 0,30 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) 0,70 Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Phase B Eau déminéralisée Aqua qsp 100 Glycerine Glycerin 2,00 Carbopol EDT 2020 Acrylates/C 10-30Alkyl Acrylate Crosspolymer 0,15 Keltrol BT Xanthan Gum 0,30 Phase C Sodium Hydroxide (sol.à Sodium Hydroxide 0,30 10%) Phase D Eau déminéralisée Aqua 5,00 Stay-C 50 Sodium Ascorbyl Phosphate 0,50 Phase E -24- 2949781 -25- Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Dekaben CP Chlorphenesin 0,20 Phase F GP4G Water (and) Artemia Extract 1,00 Hydrolysat selon l'exemple 1 2 % Préparer la phase A et chauffer à 75°C sous agitation. Préparer la phase B en dispersant le carbopol, puis la gomme xanthane sous agitation. Laisser reposer. Chauffer à 75°C. A température, émulsionner A dans B sous agitation rotor-stator. Neutraliser avec la phase C sous agitation rapide. Après refroidissement à 40°C, additionner la phase D, puis la phase E. Le refroidissement est poursuivi sous agitation légère et la phase F rajoutée. REVENDICATIONS1. Hydrolysat peptidique enrichi en peptide bioactif capable d'activer la transglutaminase humaine, caractérisé en ce que ledit peptide bioactif contient de 4 à 6 acides aminés dont au moins deux résidus arginine, un résidu glycine et un résidu glutamine. 2. Hydrolysat peptidique selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit peptide bioactif est de formule générale (I) X1-X2-X3-X4-X5-X6 Dans laquelle, XI est l'alanine, la valine ou aucun acide aminé, X2 est l'alanine, la valine ou aucun acide aminé, X3 est l'arginine, X4, est l'arginine, la glycine ou la glutamine, X5 est l'arginine, la glycine ou la glutamine, X6 est l'arginine, la glycine ou la glutamine. 3. Hydrolysat peptidique selon la revendication 2, caractérisé en ce que ledit peptide bioactif est de séquence : (SEQ ID n°1) Ala-Ala-Arg-Arg-Gly-Gln (SEQ ID n°2) Val-Val-Arg-Arg-Gly-Gln (SEQ ID n°3) Ala-Val-Arg-Arg-Gln-Gly (SEQ ID n°4) Ala-Arg-Gly-Arg-Gln (SEQ ID n°5) Arg-Arg-Gly-Gln (SEQ ID n°6) Arg-Arg-Gln-Gly (SEQ ID n°7) Arg-Gln-Gly-Arg (SEQ ID n°8) Arg-Gly-Arg-Gln 4. Hydrolysat peptidique selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les transglutaminases humaines activées sont de type 1, 2a, 2b, 3 ou 5. 2949781 -27- 5. Hydrolysat peptidique selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il provient de l'hydrolyse de plantes choisies parmi le genre Zea et préférentiellement de l'espèce Zea mays L. (maïs). 5 6. Hydrolysat peptidique selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il contient entre 3,5 et 5,5 g/1 de composés de nature peptidique. 7. Hydrolysat peptidique selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il contient des peptides de poids moléculaire inférieur à 6 kDa et préférentiellement 10 de poids moléculaire 5 kDa. 8. Composition cosmétique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, en tant que principe actif capable d'activer la transglutaminase humaine, l'hydrolysat peptidique défini selon l'une des revendications précédentes, en une quantité 15 représentant de 0,0001 % à 20 % du poids total de la composition, et préférentiellement en une quantité représentant de 0,05 % à 5 % du poids total de la composition. 9. Composition selon la revendication 8, caractérisée en ce que ledit hydrolysat 20 peptidique est solubilisé dans un ou plusieurs solvants physiologiquement acceptables, comme l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propanediol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. 25 10. Composition selon l'une des revendications 8 ou 9, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme adaptée à l'application par voie topique. 11. Composition selon l'une des revendications 8 à 10, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre, au moins un autre principe actif favorisant l'action dudit 30 hydrolysat peptidique. 2949781 -28- 12. Composition pharmaceutique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, l'hydrolysat peptidique défini selon l'une des revendications 1 à 7, à titre de médicament. 5 13. Utilisation d'une composition cosmétique comprenant l'hydrolysat peptidique tel que défini selon l'une des revendications 1 à 7 en tant que principe actif, pour renforcer la fonction barrière de l'épiderme et stimuler la régénération et la différenciation épidermique. 10 14. Utilisation d'une composition cosmétique comprenant l'hydrolysat peptidique tel que défini selon l'une des revendications 1 à 7 en tant que principe actif, pour prévenir et lutter contre les signes cutanés du vieillissement et du photo-vieillissement. 15. Utilisation d'une composition cosmétique comprenant l'hydrolysat peptidique tel que 15 défini selon l'une des revendications 1 à 7 en tant que principe actif, pour protéger la peau des agressions extérieures.