Brevet FR2956325A1 — publié le 20110819

Radiomarquage stable à dose thérapeutique au rhénium-188, et automatisation de celui- ci, en particulier pour le traitement du cancer du foie DESCRIPTION La présente invention a pour objet une composition pour le traitement du cancer du foie comprenant un complexe de rhénium radioisotopique (III) à haute activité et une phase organique lipophile. Elle met notamment en oeuvre un nouveau procédé pour le radiomarquage stable en phase lipophile par un complexe de rhénium radioisotopique (III) à haute activité, ainsi que l'automatisation de ce procédé. ETAT DE L'ART Le cancer du foie est une pathologie grave qui représente le cinquième cancer le plus commun dans le monde. Son incidence varie grandement selon les régions du monde. Il affecte plus particulièrement l'Asie du Sud-Est, mais son incidence dans les pays développés, et particulièrement l'Europe, est en forte progression (1). Son pronostic est extrêmement faible. Les possibilités thérapeutiques sont limitées par le degré de sévérité de l'hépatopathie sous-jacente et par l'extension intra-hépatique de la maladie. La transplantation hépatique est le seul traitement réellement curatif traitant la tumeur et la maladie hépatique favorisante. La résection chirurgicale est également une méthode chirurgicale efficace. Elle n'est malheureusement applicable qu'à des patients non cirrhotiques, ce qui représente moins de 5 % des cas dans les pays occidentaux. Dans ce contexte, deux approches thérapeutiques semblent les plus prometteuses : la chimioembolisation artérielle par le Lipiodol et la radiothérapie métabolique par voie intraartérielle ou intra-tumorale. La radiothérapie métabolique est largement utilisée dans le traitement, curatif ou palliatif; de nombreux cancers, et notamment du cancer du foie. La radiothérapie métabolique des tumeurs hépatiques se fait principalement via l'artère hépatique. Le foie sain est irrigué en sang et oxygène à la fois par la veine porte et l'artère hépatique ; néanmoins, dans le cas des tumeurs, ces dernières, richement vascularisées, sont essentiellement irriguées par l'artère hépatique, tandis que l'irrigation des tissus sains se fait à 80 % par la veine porte. Le vecteur le plus utilisé pour l'administration intra-hépatique est le Lipiodol. Le Lipiodol est un agent de contraste liposoluble obtenu par iodation et estérification de l'huile d'oeillette (mélange d'acides linoléique, oléique, palmitique et stéarique). La proportion d'iode est d'environ 38 % en masse (soit 475 mg/mL). Le Lipiodol est sélectivement capté par les hépatocarcinomes (CHC) et par certaines métastases hépatiques, d'origine colonique, neuroendocrine et mammaire. Le Lipiodol a donc été utilisé pour la détection du CHC et de ses éventuelles tumeurs satellites non détectables par les méthodes usuelles d'imagerie, puis également pour vectoriser des substances chimiothérapeutiques. Il a également été montré un temps de rétention intra-tumoral largement supérieur au temps de rétention dans le foie sain, avec une rétention dans l'hépatocarcinome pouvant atteindre plusieurs mois. La persistance du Lipiodol au sein des tumeurs a amené à la proposition du marquage de celui-ci par de l'iode radioactif (131I) afin d'effectuer une radiothérapie ciblée. Cependant, les propriétés de l'iode-131 étant sub-optimales, d'autres radioéléments, avec des caractéristiques plus adaptées, ont été proposés, notamment l'yttrium (90Y) et le rhénium (186Re, 188Re). Toutefois, l'90Y est coûteux et difficile à imager, et des risques de relargage, conduisant à une irradiation médullaire indésirable, ne sont pas à négliger, ce qui limite son développement (2). En ce qui concerne le rhénium, deux stratégies de marquage ont été décrites. La première, similaire au marquage à 1'131I, consiste en un marquage covalent du Lipiodol (3), via un chélate EDTB (N,N,N',N'-tetrakis(2-benzymidazoylmethyl)1,2-ethanediamine), peu pratique et non reproductible. La deuxième stratégie consiste en la solubilisation dans le Lipiodol d'un complexe neutre et lipophile de rhénium et est actuellement la voie la plus développée. Des essais cliniques de phase I sont en cours avec le 188Re-HDD/Lipiodol (4) (HDD = 4-hexadecyl-2,2,9,9-tetramethyl-4,7-diaza-1,10-decanethiol). Malheureusement, les rendements de marquage obtenus sont d'environ 50 %, ce qui est un obstacle à l'obtention d'activités importantes (5). D'autres complexes que le Re-HDD ont ainsi été proposés, comme le ReN-DEDC (bis-(diethyldithiocarbamato)nitrido rhenium) (6), qui, lui, présente un problème de stabilité à 24 h, dû à la radiolyse du complexe à haute activité. Une trousse pour le marquage, basée sur le complexe SSS (« Super Six Sulphur », bis(trithioperoxybenzoate)(dithiobenzoate) rhénium (III)) décrit par F. Mévellec et al. (7), a montré de bons résultats à basse activité (8). Ces complexes, au degré d'oxydation III, sont particulièrement intéressants dans des produits radiopharmaceutiques car ils présentent une meilleure stabilité chimique et thermodynamique que les produits radiopharmaceutiques dans lesquels le métal radioactif est au degré d'oxydation V, comme c'est le cas pour le HDD et le DEDC. La composition obtenue au moyen de cette trousse, comprenant le complexe 188Re-SSS à basse activité et le Lipiodol, est stable au moins 48 h et fixe préférentiellement la tumeur hépatique. Cette trousse, néanmoins, ne permet pas le marquage à haute activité de rhénium. En outre, la préparation de radiotraceurs, et en particulier le marquage du Lipiodol à haute activité de rhénium, entraine une irradiation non négligeable du personnel manipulant. Dans ce contexte, plusieurs systèmes automatisés ont été décrits dans la littérature, principalement pour la préparation de radiotraceurs fluorés et carbonés, pour l'imagerie par Tomographie par Emission de Positons (TEP), mais également pour la préparation de traceurs rhéniés à haute activité (9). DESCRIPTION DE L'INVENTION La présente invention a pour objet une nouvelle composition pour le traitement du cancer du foie comprenant un complexe de rhénium radioisotopique (III) à haute activité et une phase organique lipophile, et plus particulièrement le Lipiodol, aisément préparée et stable après préparation. Elle est caractérisée par une fixation tumorale préférentielle et durable, permettant ainsi de traiter efficacement le cancer du foie. La composition comporte un complexe de rhénium radioisotopique (III) à haute activité de formule suivante : [M(RCS3)2(RCS2)] (I) où M est le 188Re, et où le groupe R des ligands soufrés RCS3 et RCS2 peut être un groupe aliphatique, alkyle, cycloalkyle, aralkyle ou aryle. Ce groupe peut être non-substitué ou substitué par un ou plusieurs substituants choisis parmi les atomes d'halogène, par exemple le fluor, le groupe hydroxyle, les groupes alkyle et les groupes alcoxy. Les groupes alkyles utilisés pour R peuvent être des groupes linéaires ou ramifiés en Cl à C12, de préférence des groupes ayant 3 à 12 atomes de carbone. Les groupes cycloalkyles utilisés pour R ont de préférence 3 à 7 atomes de carbone, par exemple 6 atomes de carbone. Les groupes aryles utilisés pour R peuvent être du type phényle ou naphtyle. Les groupes aralkyles utilisés pour R peuvent être du type C6H5(CH2)n avec n allant de 1 à 3, de préférence n est égal à 1 ou 2. De préférence, selon l'invention, le groupe R est un groupe aryle, aralkyle ou cyclohexyle, éventuellement substitué. Avantageusement, lorsque R est un groupe aryle, il est choisi parmi les groupes phényle, phényle substitué par un ou plusieurs groupes méthyle, éthyle, propyle, butyle, éthoxy, méthoxy et/ou hydroxyle, et/ou par un ou plusieurs atomes de fluor, chlore, brome et/ou iode, naphtyle et naphtyle substitué par un groupe choisi parmi les groupes alkyle, alcoxy et les atomes d'halogène. Dans le cas où R est un groupe aralkyle, celui-ci est avantageusement le groupe benzyle ou 20 phénéthyle. La composition comprend également une phase organique lipophile, qui peut-être un solvant organique ou une huile. Dans le cas où la phase organique est une huile, elle sera de préférence le Lipiodol, un mélange iodé d'esters méthyliques de l'huile d'oeillette. La composition pour le traitement du cancer du foie comprenant un complexe de rhénium radioisotopique de formule (I) à haute activité et la phase organique lipophile peut être préparée en moins d'une heure à partir d'une trousse comportant trois récipients contenant respectivement le réducteur et des additifs (sel d'étain, gluconate, oxalate, antioxydant), le dithiocarboxylate (RCS2 Zl+) dans lequel R est tel que défini ci-dessus et Z1 représente un cation pharmaceutiquement acceptable, et une phase organique lipophile. Les cations pharmaceutiquement acceptables utilisés pour Z1 peuvent être choisis parmi MgX+ où X est un atome d'halogène tel que Br ou Cl, les cations ammonium quaternaire, ainsi que les ions de métal alcalin tel que Na. La composition pour le traitement du cancer du foie comprenant un complexe de rhénium radioisotopique de formule (I) à haute activité et la phase organique lipophile peut être préparée à l'aide d'un système automatisé, et notamment l'automate TADDEO de Comecer (Italie). Le procédé automatisé de l'invention comprend les étapes suivantes : (i) Synthèse du complexe de formule (I) (ii) Purification du complexe de formule (I) sur colonne (iii) Evaporation du solvant organique (iv) Filtration stérilisante (v) Solubilisation du complexe de formule (I) dans la phase organique lipophile, de préférence le Lipiodol. Le complexe de formule (I) est synthétisé en 2 étapes. Le solvant organique est évaporé à une température comprise entre 40 et 100°C. En outre, la composition pour le traitement du cancer du foie comprenant un complexe de rhénium radioisotopique de formule (I) à haute activité et la phase organique lipophile peut-être mise en émulsion avec une phase aqueuse, et notamment du sérum physiologique, pour améliorer sa biodistribution. Les exemples suivants sont donnés à titre illustratif et non limitatif. EXPOSE DETAILLE DES MODES DE REALISATION Exemple 1 : Préparation du complexe [188Re(PhCS3)2(PhCS2)] (188Re-SSS) à haute activité Un récipient contenant 4 mg de chlorure d'étain, 30 mg de gluconate de sodium, 60 mg d'oxalate de potassium et 30 mg d'acide ascorbique est reconstitué dans 0,5 mL de sérum physiologique. Puis la solution de 188Re-perrhénate (11,1 GBq, 1 mL) est ajoutée et la solution est agitée 15 minutes à température ambiante. 40 mg de ligand PhCS2Na (0,2 mmoles), en solution dans 0,5 mL de sérum physiologique, sont additionnés et le mélange est chauffé 15 minutes à 100°C pour donner le complexe [188Re(PhCS3)2(PhCS2)]. Exemple 2 : Préparation du composé marqué au 188Re (III) à haute activité en solution dans le Lipiodol Au mélange réactionnel obtenu dans l'exemple 1, on ajoute 2 mL de Lipiodol. Le mélange est agité 10 minutes puis centrifugé à 3500 tours/min pendant 10 minutes supplémentaires. La phase aqueuse est éliminée et la phase Lipiodolée radiomarquée est recueillie. Rendement de marquage (Rdt) = 98,6 % Pureté radiochimique (PRC) = 96 % Chromatographie sur couche mince sur silice CCM (éluant : Ether de Pétrole/Dichlorométhane 6/4) : Rf= 0,62 Exemple 3 : Préparation du composé marqué au 188Re (III) à haute activité en solution dans le Lipiodol Au mélange réactionnel obtenu comme dans l'exemple 1, avec le ligand 4-MeOPhCS2Na (47,6 mg, 0,23 mmoles), on ajoute 2 mL de Lipiodol. Le mélange est agité 10 min puis centrifugé à 3500 tours/min pendant 10 min supplémentaires. La phase aqueuse est éliminée et la phase Lipiodolée radiomarquée est recueillie. Rdt=98% PRC=97% CCM (Ether de Pétrole/Dichlorométhane 6/4) : Rf= 0,25 Exemple 4 : Préparation du composé marqué au 188Re (III) à haute activité en solution dans le Lipiodol Au mélange réactionnel obtenu comme dans l'exemple 1, avec le ligand CH3(CH2)11CS2Na (61 mg, 0,2 mmoles), on ajoute 2 mL de Lipiodol. Le mélange est agité 10 min puis centrifugé à 3500 tours/min pendant 10 min supplémentaires. La phase aqueuse est éliminée et la phase Lipiodolée radiomarquée est recueillie. Rdt=32% PRC=97% CCM (Ether de Pétrole/Dichlorométhane 6/4) : Rf= 0,90 Exemple 5 : Préparation automatisée (TADDEO) du composé marqué au 188Re (III) à haute activité en solution dans le Lipiodol Un récipient A contenant 4 mg de chlorure d'étain, 30 mg de gluconate de sodium, 40 mg d'oxalate de potassium et 30 mg d'acide ascorbique est reconstitué par 1 mL de 188Reperrhénate (8 GBq). Après 5 min à température ambiante, la solution est automatiquement transférée dans le réacteur R par flux d'air à 1,5 bars. Un flacon B, contenant 20 mg de ligand PhCS2Na (0,2 mmoles), est reconstitué par vidange de la fiole F2 (0,5 mL d'éthanol + 0,3 mL de Lipiodol). La solution est transférée de B vers R par flux d'air à 1,5 bar. Le réacteur R est chauffé 12 minutes à 100°C pour donner le complexe [188Re(PhCS3)2(PhCS2)], puis refroidi par souffle d'air à 2 bars sur le réacteur pendant 7 minutes. Le milieu réactionnel est ensuite transféré sur une colonne Sep-Pak Cu et lavé par 20 mL d'eau distillée (F3) puis par 2 mL d'un mélange eau distillée/éthanol 1/1 (F4). Le complexe [188Re(PhCS3)2(PhCS2)] est ensuite élué dans le flacon C par 5 mL d'éthanol (F5). L'éthanol est évaporé à 85 °C et 2 mL de Lipiodol (F6) sont ajoutés pour donner la composition radiomarquée désirée. Rdt=60% PRC=91,2% CCM (Ether de Pétrole/Dichlorométhane 6/4) : Rf= 0,62 Exemple 6 : Préparation automatisée (TADDEO) du composé marqué au 188Re (Ill) à haute activité (> 3,7 GBq) en solution dans le Lipiodol Un récipient A contenant 4 mg de chlorure d'étain, 30 mg de gluconate de sodium, 40 mg d'oxalate de potassium et 30 mg d'acide ascorbique est reconstitué par 1,5 mL de 188Reperrhénate (7,65 GBq). Après 5 min à température ambiante, la solution est automatiquement transférée dans le réacteur R par flux d'air à 1,5 bars. Un flacon B, contenant 40 mg de ligand PhCS2Na (0,4 mmoles), est reconstitué par vidange de la fiole F2 (1 mL d'éthanol + 0,3 mL de Lipiodol). La solution est transférée de B vers R par flux d'air à 1,5 bars. Le réacteur R est chauffé 15 minutes à 100°C pour donner le complexe [188Re(PhCS3)2(PhCS2)], puis refroidi par souffle d'air à 2 bars sur le réacteur pendant 7 minutes. Le milieu réactionnel est ensuite transféré sur une colonne Sep-Pak C18 et lavé par 10 mL d'eau distillée (F3) puis par 2 mL d'un mélange eau distillée/éthanol 1/1 (F4). Le complexe [188Re(PhCS3)2(PhCS2)] est ensuite élué dans le flacon C par 5 mL d'éthanol (F5). L'éthanol est évaporé à 100 °C et 2 mL de Lipiodol (F6) sont ajoutés pour donner la composition radiomarquée désirée. Rdt = 59,5 % PRC=94% CCM (Ether de Pétrole/Dichlorométhane 6/4) : Rf= 0,62 Exemple 7 : Préparation automatisée (TADDEO) du composé marqué au 188Re (III) en solution dans le Lipiodol Un récipient A contenant 4 mg de chlorure d'étain, 30 mg de gluconate de sodium, 40 mg d'oxalate de potassium et 30 mg d'acide ascorbique est reconstitué par 1 mL de 188Reperrhénate (0,2 GBq). Après 5 min à température ambiante, la solution est automatiquement transférée dans le réacteur R par flux d'air à 1,5 bars. Un flacon B, contenant 40 mg de ligand PhCS2Na (0,4 mmoles), est reconstitué par vidange de la fiole F2 (1 mL d'éthanol + 0,5 mL de Lipiodol). La solution est transférée de B vers R par flux d'air à 1,5 bars. Le réacteur R est chauffé 15 minutes à 100°C pour donner le complexe [188Re(PhCS3)2(PhCS2)], puis refroidi par souffle d'air à 2 bars sur le réacteur pendant 7 minutes. Le milieu réactionnel est ensuite transféré sur une colonne Sep-Pak C8 et lavé par 10 mL d'eau distillée (F3) puis par 2 mL d'un mélange eau distillée/éthanol 1/1 (F4). Le complexe [188Re(PhCS3)2(PhCS2)] est ensuite élué dans le flacon C par 2,5 mL d'éthanol (F5). L'éthanol est évaporé à l00 °C et 2 mL de Lipiodol (F6) sont ajoutés pour donner la composition radiomarquée désirée. Rdt=67,4% PRC = 90,1 % CCM (Ether de Pétrole/Dichlorométhane 6/4) : Rf= 0,62 Exemple 8 : Stabilité du composé marqué au 188Re (III) à haute activité en solution dans le Lipiodol La composition radiomarquée obtenue selon l'exemple 2 est mise à incuber en présence de sérum physiologique pendant 64 h. Puis on procède à une séparation des phases comme précédemment. Le mélange est agité 10 minutes puis centrifugé à 3500 tours/min pendant 10 minutes supplémentaires. La phase aqueuse est éliminée et la phase lipiodolée radiomarquée est recueillie. Les deux phases sont comptées pour vérifier qu'on n'a pas de redistribution de la radioactivité dans la phase aqueuse (radiolyse du complexe). 97 % de la radioactivité reste dans le Lipiodol, et la PRC du complexe est restée inchangée. Exemple 9 : Stabilité du composé marqué au 188Re (III) à haute activité en solution dans le Lipiodol Une autre composition radiomarquée obtenue selon l'exemple 2 (10, 3 GBq ; Rdt = 97,8 % ; PRC = 92,1 %) est mise à incuber en présence de sérum physiologique pendant 168 h. Puis on procède à une séparation des phases comme précédemment. Le mélange est agité 10 minutes puis centrifugé à 3500 tours/min pendant 10 minutes supplémentaires. La phase aqueuse est éliminée et la phase lipiodolée radiomarquée est recueillie. Les deux phases sont comptées pour vérifier qu'on n'a pas de redistribution de la radioactivité dans la phase aqueuse (radiolyse du complexe). 99,6 % de la radioactivité reste dans le Lipiodol, et la PRC du complexe est restée similaire (PRC = 90,2 %). REFERENCES (1) E. Garin, P. Bourguet, in Ell and Gambir 3rd Ed., NuclearMedicine in Clinical Diagnosis and Treatment, Hong-Kong: Churchill-Livingstone, 2004, 473-483. (2) S.J. Wang et al., J. Nucl. Med., 1996, 37, 332-335. (3) S.J. Wang et al., Appl. Radiat. Isot., 1996, 47, 267-271. (4) B. Lambert et al., J. Nucl. Med., 2005, 46, 60-66. (5) B. Lambert et al., Eur. J. Nucl. Med., 2006, 33, 344-352. (6) A. Boschi et al., Nucl. Med. Commun., 2004, 25, 691-699. (7) F. Mévellec et al., Inorg. Chem. Comm., 1999, 2, 230-233 ; WO 01/90114 Al (8) N. Lepareur et al., J. Label. Compd. Radiopharm., 2004, 47, 857-867 ; E. Garin et al., Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2004, 31, 542-546. (9) S.J. Oh et al., Appl. Radiat. Isot., 2001, 54, 419-427 ; S.J. Oh et al., Appl. Radiat. Isot., 2003, 59, 225-230. REVENDICATIONS1- Une composition pour le traitement du cancer du foie comprenant un complexe de formule suivante : [M(RCS3)2(RCS2)] (I) où M est le 188Re à haute activité, et une phase organique lipophile. R représente un groupe alkyle, cycloalkyle, aralkyle ou aryle, non substitué ou substitué par un ou plusieurs substituants choisis parmi les atomes d'halogène, le groupe hydroxyle, les groupes alkyle et les groupes alcoxy. 2- Une composition selon la revendication 1, dans lequel R est le groupe phényle. 3- Une composition selon la revendication 1, dans lequel R est un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, en C1 à C12. 4- Une composition selon la revendication 1, dans lequel R représente le groupe naphtyle ou le groupe naphtyle substitué par un groupe choisi parmi les groupes alkyle, alcoxy et les atomes d'halogène. 20 5- Une composition selon la revendication 1, dans lequel R est choisi parmi les groupes phényle substitué par un ou plusieurs groupes méthyle, éthyle, propyle, butyle, méthoxy, éthoxy et/ou hydroxyle, et/ou par un ou plusieurs atomes de fluor, chlore, brome et/ou iode. 6- Une composition selon la revendication 1, dans lequel R est le groupe cyclohexyle, benzyle 15 25 ou phénéthyle. 7- Une composition selon les revendications de 1 à 6, dans laquelle la phase organique lipophile est une huile. 8- Une composition selon la revendication 7, dans laquelle l'huile est un mélange d'esters d'acides gras iodés. 9- Une composition selon la revendication 8, dans laquelle l'huile est du Lipiodol. 10- Une composition selon les revendications 1 à 6, dans laquelle la phase organique lipophile est un solvant organique. 11- Une composition selon les revendications 1 à 9, dans laquelle la phase organique lipophile est mise en émulsion avec une phase aqueuse. 12- Une composition selon la revendication 11, dans laquelle la phase aqueuse est du sérum physiologique. 13- Procédé de préparation d'une composition selon l'une quelconque des revendications de 1 20 à 12, caractérisé en ce qu'il inclut les étapes suivantes : (i) Synthèse du complexe de formule (I) (ii) Purification du complexe de formule (I) sur colonne (iii) Evaporation du solvant organique (iv) Filtration stérilisante 25 (v) Solubilisation du complexe de formule (I) dans la phase organique r- Un procédé selon la revendication 13, dans lequel le complexe de formule (I) est synthétisé en 2 étapes. 15- Un procédé selon la revendication 14, dans lequel le complexe de formule (I) est purifié sur colonne. 16- Un procédé selon la revendication 15, dans lequel la colonne est une C8. 10 17- Un procédé selon la revendication 15, dans lequel la colonne est une C18. 18- Un procédé selon la revendication 13, dans lequel le solvant organique est évaporé à une température comprise entre 40 et 100°C. 15