Brevet FR2955120A1 — publié le 20110715

La présente invention se rapporte d'une manière générale au domaine du contrôle microbiologique des liquides. Plus particulièrement, la présente invention concerne une méthode dite de filtration par membrane. Cette méthode consiste à filtrer un échantillon liquide sur une membrane poreuse et à déposer ensuite la membrane sur un milieu de culture gélosé (gel growth media). L'ensemble est ensuite mis à incuber pour que les microorganismes de l'échantillon retenus sur la membrane lors de la filtration puissent se développer suffisamment pour être visibles à l'oeil nu. Cette méthode simple permet de compter les microorganismes présents dans l'échantillon et de déterminer ainsi le degré de contamination de celui-ci. On connaît des dispositifs à membrane filtrante permettant de mettre en oeuvre cette méthode. Le document FR 2558847 décrit un dispositif de filtration présentant un manchon tubulaire pour contenir un échantillon, et dont le fond est constitué d'une membrane filtrante, fixée à l'extrémité du manchon dans un embout femelle formant un cadre de maintien pour la membrane et destiné à coopérer avec un récipient contenant un milieu de culture. Une fois la filtration effectuée, on pose un couvercle étanche sur l'extrémité opposée du manchon, ce qui a pour effet de comprimer un peu d'air dans le manchon et pousser sur la membrane qui prend alors une forme de dôme pointant vers l'extérieur du manchon. Le manchon est alors disposé sur le milieu de culture, et la membrane entre en contact avec le milieu de culture depuis son centre vers l'extérieur, minimisant ainsi le risque de formation de bulles. Une fois la membrane en contact avec le milieu de culture, le manchon peut être séparé de l'embout portant la membrane. L'embout est alors pourvu d'un couvercle de protection puis l'ensemble est mis en incubation. En pratique, la surface d'une membrane augmente lorsqu'elle passe d'un état sec à un état mouillé. C'est ce qui se passe à l'issue de l'étape de filtration. De plus, le milieu de culture sur lequel la membrane est ensuite déposée présente une forme de dôme pointant vers la membrane. Ainsi lors de l'incubation, la membrane se déforme par fluage au contact du milieu de culture : sa surface augmente encore par rapport à celle obtenue à l'issue de l'étape de filtration. Dans certaines analyses microbiologiques, il est nécessaire d'appliquer un réactif à la membrane après l'avoir incubé. Il peut s'agir, par exemple, d'un réactif révélateur. Pour ce faire, on utilise un tampon sensiblement plan, que l'on imprègne du réactif choisi avant d'y déposer la membrane, que l'on a préalablement séparé du milieu de culture. En pratique, ceci pose plusieurs problèmes : - à l'issue de la filtration et de l'incubation, la surface de la membrane est plus grande que celle du tampon de réactif, - le rayon de courbure de la membrane et celui du tampon ne 15 correspondent pas entre eux, - le manchon n'est plus en place et il n'est donc plus possible d'appliquer une surpression pour donner à la membrane une forme de dôme pointant vers l'extérieur, - le couvercle mis en place avant incubation ne peut pas être retiré 20 pour éviter une éventuelle contamination par l'air extérieur. La présente invention vise à surmonter ces problèmes pour permettre d'appliquer, via un tampon sensiblement plan, un réactif à la membrane déformée après filtration et incubation. Elle propose à cet effet un procédé de transfert d'une membrane de filtrage chargée d'un retentât vers un 25 tampon pour réactif, dans lequel la membrane est montée dans un cadre de support présentant un épaulement et une jupe en saillie depuis l'épaulement ; le tampon étant monté sur une cassette de forme complémentaire à ladite jupe ; la jupe étant adaptée à coulisser de manière étanche sur la cassette jusqu'en butée formée par l'épaulement ; le procédé comportant les étapes consistant à 30 engager la jupe du cadre de support de membrane sur la cassette de manière étanche, établir une différence de pression entre la cassette et le cadre de support de la membrane de manière à ce que celle-ci prenne une forme de dôme pointant vers le tampon ; tout en maintenant la différence de pression, appliquer une force sur le cadre de manière à faire coulisser la jupe sur la cassette jusqu'à établir un contact entre l'extrémité du dôme et le tampon ; et maintenir une force sur le cadre de manière à le faire descendre celui-ci jusqu'en butée formée par l'épaulement tout en maintenant la différence de pression. Ainsi, selon un effet avantageux de l'invention, à l'issue de ce procédé, la membrane retrouve ses dimensions originelles, sensiblement identiques à celles de son cadre de support tout en se trouvant appliquée depuis un point sensiblement central vers l'extérieur du tampon, en évitant ainsi la formation de bulles. En effet, même humide et chargée d'un retentât, la membrane présente une certaine rigidité. Le fait d'appliquer une différence de pression de part et d'autre de la membrane permet de lui donner une forme de dôme pointant vers le tampon. Ceci permet lors de la descente de toucher le tampon en un point sensiblement central. Une fois cette première zone de contact établie, une friction de contact se crée entre la membrane et le tampon imprégné sur cette surface de contact. La membrane présentant une certaine rigidité propre, le fait d'appliquer une force sur le cadre pour faire descendre la membrane contre le tampon se traduit par un effort de compression radial et centripète de la membrane le long de la ligne délimitant la surface de contact de la membrane avec le tampon. En d'autres termes, une fois une surface de contact établie, la friction qu'il y a entre la membrane et le tampon sur cette surface est mise à profit pour venir appliquer sur la ligne délimitant cette surface, une force centripète comprimant la membrane vers le centre alors que la membrane est en train d'être appliquée au tampon. Cette force résulte de l'effort appliqué au cadre. Cet effort est transmis vers la surface de contact grâce à la rigidité propre de la membrane. La différence de pression contribue à maintenir la membrane bombée et rigidifiée pour éviter qu'elle ne s'effondre sur elle-même sous l'application de cet effort. Ainsi, le procédé selon l'invention permet de résoudre les problèmes exposés ci-dessus : la membrane est posée de manière uniforme sur le tampon, en limitant le risque de formation de bulles, et, à l'issue de l'opération, la surface de la membrane revient sensiblement à sa surface d'origine, elle- même sensiblement identique à la surface du tampon. Selon d'autres caractéristiques, éventuellement combinées : - la différence de pression est une dépression appliquée dans un espace entre la membrane et la cassette. - le procédé est précédé d'une étape consistant à saturer le tampon 10 d'un réactif. - le réactif est une solution adaptée à révéler les microorganismes contenus dans le retentât de la membrane. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un outil de transfert d'une membrane de filtrage chargée d'un retentât vers un tampon pour 15 réactif, dans lequel a membrane est montée dans un cadre de support présentant un épaulement et une jupe en saillie depuis l'épaulement, le tampon est monté sur une cassette de forme complémentaire à ladite jupe, la jupe étant adaptée à coulisser de manière étanche sur la cassette jusqu'en butée formée par l'épaulement, l'outil de transfert de membrane comportant un corps d'outil 20 avec une extrémité libre adaptée à recevoir ladite cassette pour réactif, une tête d'éjection montée à translation par rapport au corps, adaptée à venir prendre appui sur la cassette pour éjecter celle-ci, un moyen d'actionnement de la tête en translation, des moyens d'étanchéité et de rétention disposés sur le corps d'outil de manière à retenir de manière étanche la cassette sur le corps, des 25 moyens pour appliquer une différence de pression entre la cassette et le corps de l'outil. Selon des caractéristiques avantageuses, éventuellement combinées: - les moyens pour appliquer une différence de pression entre la 30 cassette et le corps de l'outil sont une ouverture pratiquée dans le corps de l'outil, destinée à être raccordée à une pompe à vide extérieure à l'outil, et débouchant à son autre extrémité dans un espace étanche entre la cassette et le corps de l'outil. - la tête d'éjection est annulaire et entoure le corps de l'outil. Ainsi, avantageusement, l'effort d'éjection se fait de manière uniformément répartie sur le pourtour et il n'y a pas de déformation de la cassette ou du cadre ce qui permet de garder une bonne adhérence entre la membrane et le tampon, une fois la membrane en contact avec celui-ci. Selon des caractéristiques avantageuses, éventuellement combinées: - l'outil comporte en outre des moyens intégrés de régulation de pression. - les moyens de régulation de pression sont tarés pour une pression comprise entre 40 et 70 millibars. Ainsi, avantageusement, ces dispositions permettent d'éviter d'appliquer une pression trop élevée pour ne pas déformer la membrane, tout en maintenant une pression optimale pour arriver à comprimer la membrane lors de son application sur le tampon pour que celle-ci retrouve sensiblement ses dimensions originelles. De plus, ce dispositif permet de gommer les éventuelles variations résultant d'un fonctionnement irrégulier de la pompe à vide. Selon une caractéristique avantageuse de l'invention, les moyens d'étanchéité et de rétention disposés sur le corps d'outil de manière à retenir de manière étanche la cassette sur le corps moyens sont un joint inséré dans une gorge pratiquée dans le corps à cet effet. Cette construction est particulièrement simple et la fonction d'étanchéité et de rétention mécanique de la cassette sur l'outil est assurée par un même élément. Selon une caractéristique avantageuse, les moyens d'actionnement de la tête en translation sont un levier d'éjection. Ceci permet d'augmenter la force d'éjection. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de mise en oeuvre d'un outil tel que décrit ci-dessus, qui comporte les étapes consistant à : - Poser la cassette sur l'outil de manière à engager les moyens d'étanchéité et de rétention prévus à cet effet, - Imprégner le tampon de réactif, - démarrer les moyens pour appliquer une différence de pression entre la cassette et le corps de l'outil, - engager la jupe du cadre de support de membrane sur la cassette 10 de manière étanche ; - établir une différence de pression entre la cassette et le cadre de support de la membrane de manière à ce que celle-ci prenne une forme de dôme pointant vers le tampon ; - tout en maintenant la différence de pression, appliquer une force 15 sur le cadre de manière à faire coulisser la jupe sur la cassette jusqu'à établir un contact entre l'extrémité du dôme et le tampon ; - maintenir une force sur le cadre de manière à le faire descendre celui-ci jusqu'en butée formée par l'épaulement tout en maintenant la différence de pression. 20 Selon une caractéristique avantageuse, la cassette présente des ouvertures permettant un passage d'air de part et d'autre de celle-ci et l'établissement d'une différence de pression entre la cassette et le cadre de support de la membrane de manière à ce que celle-ci prenne une forme de dôme pointant vers le tampon est généré par les moyens pour appliquer une 25 différence de pression entre la cassette et le corps de l'outil à l'aide d'un passage d'air entre l'outil et la membrane via la cassette. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description d'un exemple de réalisation d'un outil et de la mise en oeuvre d'un procédé selon l'invention, en référence aux dessins annexés, donnés à titre d'exemple non 30 limitatif, et sur lesquels : - les figures 1 à 3 sont des vues schématiques en coupe d'un dispositif d'analyse microbiologique connu, - la figure 4 est une vue d'un cadre de support de membrane monté sur une cassette complémentaire, - la figure 5 est une vue éclatée d'un outil selon l'invention avec une cassette et un support de membrane, - les figures 6 à 13 sont les étapes successives d'utilisation du dispositif représenté en figure 5 dans un procédé d'analyse microbiologique selon l'invention. Comme visible plus particulièrement en figures 1 et 2, un dispositif de filtration 100 présente un manchon tubulaire 110 solidaire d'un cadre de maintien 120 pour une membrane 130 destiné à coopérer avec une cassette 200 contenant un milieu de culture 210. Un échantillon d'un liquide non représenté est introduit dans le manchon 110 puis filtré à travers la membrane filtrante 130. Une fois la filtration effectuée, la membrane 130 chargée du rétentat passe d'un état sec à un état humide ce qui la détend augmentant ainsi sa surface par rapport à sa surface initiale. Ceci est plus particulièrement visible en figure 1. Afin de disposer la membrane 130 sur le milieu de culture 210, le manchon est fermé à l'aide d'un couvercle 111 étanche. La fermeture de ce couvercle permet de comprimer une petite quantité d'air à l'intérieur du manchon qui exerce alors une pression sur la membrane ce qui a pour effet de pousser celle-ci vers l'extérieur lui donnant une forme de dôme pointant vers l'extérieur du manchon comme visible en figure 2. Le manchon peut alors être disposé sur le milieu de culture 210 sans risque de formation de bulles. En effet, comme visible en figures 1 et 2, le milieu de culture 210 présente une forme de dôme pointant vers le manchon. Le contact entre la membrane 130 et le milieu de culture 210 se fera donc d'abord par le centre puis s'étendra vers l'extérieur, limitant ainsi le risque de formation de bulles et assurant une adhésion optimale de la membrane chargée du rétentat de la filtration avec le milieu de culture. Une fois le contact établi entre la membrane 130 et le milieu de culture 210, le manchon 110 est séparé du cadre de maintien 120 pour la membrane 130 et le couvercle 111 est disposé sur le cadre afin de protéger la membrane 130 d'éventuelles contaminations. L'ensemble formé par la cassette 200 contenant le milieu de culture 210, le cadre 120 supportant la membrane 130 et le couvercle 111 tel que visible en figure 3 est alors mis à incuber pour une durée allant en général de 6 à 24 heures. Pendant cette incubation, les micro-organismes contenus dans le rétentat se développent jusqu'à être visibles à l'oeil nu : ils peuvent ainsi être comptés et le degré de contamination de l'échantillon peut ainsi être déterminé. Cependant, pendant cette période d'incubation, le milieu de culture présentant une forme bombée, la membrane 130 se déforme par fluage au contact de celui-ci. Une fois l'incubation terminée, l'ensemble formé par le cadre 120 et le couvercle 111 est séparé de la cassette de milieu de culture 200 pour être appliqué sur une cassette 300 sur laquelle est monté un tampon 310 selon un procédé de transfert selon l'invention. Comme on peut le constater, à l'issue de la filtration et du fluage, la 15 membrane 130 est fortement distendue et présente une surface très supérieure à sa surface originelle. Comme visible en figure 4, ceci pose un certain nombre de problèmes, empêchant d'appliquer la membrane sur le tampon. En effet, la géométrie de la membrane 130 est très différente de la géométrie du tampon 20 310, le manchon 110 n'est plus disponible pour donner à la membrane une forme de dôme et le couvercle 111 ne peut pas être retiré pour éviter toute contamination. Le procédé de transfert selon l'invention permet de transférer la membrane 130 sur le tampon 310 sans la formation de bulles de manière 25 simple, uniforme et régulière. Ceci est rendu possible par l'utilisation d'un empilement de dispositifs tel que visible en figures 5 et suivantes. Un outil 400 de transfert d'une membrane de filtrage chargé d'un rétentat vers un tampon 310 selon l'invention et destiné à recevoir une cassette 300 elle-même surmontée d'un ensemble 30 formé par un cadre de support de membrane 120 et un couvercle 111. Comme visible plus particulièrement en figure 5, la membrane 130 est montée dans un cadre de support 120 présentant un épaulement 121 et une jupe 122 en saillie depuis l'épaulement. La cassette 300 portant le tampon 310 présente une forme extérieure 320 conique de forme complémentaire à la jupe 122 permettant à celle-ci de coulisser de manière étanche sur la cassette jusqu'à la butée formée par l'épaulement 121. Ceci est plus particulièrement visible sur les figures 9 à 12. L'outil 400 de transfert de la membrane 130 vers le tampon 310 présente un corps d'outil 410 avec une extrémité libre adaptée à recevoir la cassette 300 et une tête d'éjection 420 annulaire montée à translation autour du corps 410. La tête d'éjection est adaptée à se mouvoir par rapport au corps d'outil de manière à prendre appui sur un rebord 321 inférieur de la surface extérieure de la cassette pour éjecter celle-ci. La translation de la tête d'éjection par rapport au corps est actionnée au moyen d'un levier d'actionnement 421 permettant d'augmenter la force d'éjection. Le corps d'outil 410 présente à son extrémité libre une gorge 411 dimensionnée pour accueillir un joint d'étanchéité 412. Le joint d'étanchéité 412 et la gorge 411 forment conjointement des moyens d'étanchéité et de rétention de la cassette 300 une fois celle-ci introduite sur l'outil. En effet, l'élasticité du joint 412 contribue au maintien mécanique en place de la cassette 300. Le corps 410 de l'outil 400 présente en outre une ouverture transversale 413 destinée à être raccordée par un embout 414 à un dispositif de pompage extérieur non représenté permettant de créer une dépression dans cette ouverture qui débouche à son extrémité opposée à l'extrémité libre du corps d'outil destiné à accueillir la cassette 300. Ainsi, cette ouverture permet d'appliquer une dépression entre la cassette et le corps d'outil. Comme visible en figure 6, le procédé de transfert d'une membrane selon l'invention consiste à présenter dans un premier temps la cassette 300 sur le corps d'outil 410. Cette introduction s'effectue jusqu'en butée formée par la face intérieure de la cassette 300 et l'extrémité libre du corps 410 de l'outil 400. Cette insertion a pour effet de faire descendre la tête d'éjection par rapport au corps 410 comme visible en figure 7. Par ce même mouvement, le levier d'actionnement 421 remonte vers une position sensiblement horizontale. Un film protecteur non représenté et disposé sur le tampon 310 peut alors être retiré et le tampon est saturé avec une solution de réactifs. Dans le présent exemple de réalisation, il s'agit d'une solution adaptée à révéler les micro-organismes contenus dans le rétentat de la membrane. Comme visible plus particulièrement en figure 8, le cadre de support de membrane 120 est alors présenté sur la cassette 300. La pompe à vide raccordée à l'ouverture 413 est alors mise en route, et génère une aspiration entre la cassette 300 et le joint 412. Comme visible en figure 8, la cassette présente dans sa partie supérieure sur le pourtour du tampon 310 une pluralité d'ouvertures 322 permettant une communication d'air entre l'espace défini par le joint 412, la face intérieure de la cassette 300 et l'extérieur. Comme visible en figure 9, le cadre de support de membrane est alors monté sur la cassette 300. La jupe 122 coopérant alors avec la surface extérieure 320 conique de la cassette de manière étanche, il se crée via les ouvertures 322 une différence de pression entre les deux faces de la membrane. Celle-ci prend alors une forme de dôme pointant vers le tampon tel que visible en figure 9. Comme visible en figure 10, une force schématiquement représentée par une flèche verticale est appliquée sur le cadre 120 de support de membrane via le couvercle 111 ce qui a pour effet de faire coulisser de manière étanche la jupe 122 par rapport à la cassette. Il s'établit alors une surface de contact sensiblement centrale entre la membrane et le tampon. Tout en maintenant la différence de pression de part et d'autre de la membrane, la force de compression est continuellement appliquée sur le cadre de support de membrane comme visible en figures 11 et 12, de manière à transférer la membrane sur le tampon progressivement depuis la surface de contact central vers l'extérieur. Pendant ces étapes représentées sur les figures 10 à 12, la membrane se trouve progressivement comprimée vers son centre et elle retrouve à l'issue de cette opération ses dimensions originelles. Le fait d'appliquer une différence de pression de part et d'autre de la membrane a pour effet de lui donner une forme de dôme pointant vers le tampon. La membrane présente en outre une certaine rigidité propre. Une fois une première zone de contact établie entre la membrane et le tampon, l'effort appliqué sur le cadre 120 combiné à une friction de contact qui s'est créée entre la membrane et le tampon sur cette première zone de contact se traduit par un effort de compression radial et centripète vu par la membrane le long de la ligne délimitant la surface de contact entre la membrane et le tampon. La rigidité propre de la membrane combinée à la différence de pression assurant une forme bombée de la membrane vers le tampon permet d'obtenir un effet de compression progressive de la membrane vers le centre au fur et à mesure de son application vers le tampon comme visible sur les figures 10 à 12. Pour arriver à ce résultat, il est nécessaire d'appliquer une différence de pression prédéterminée de préférence comprise dans une plage allant de 40 à 70 millibars. Idéalement, cette pression est de 50 millibars. Pour maintenir cette pression à cette valeur, le corps de l'outil 410 est pourvu d'un dispositif de régulation de pression non représenté qui permet de maintenir la différence de pression constante entre l'ouverture 413 et le milieu extérieur de manière à gommer les éventuelles variations de pression qui pourraient être générées par la pompe à vide raccordée à l'embouchure 414. En effet, une pression trop faible ne permettrait pas de rigidifier suffisamment la membrane qui s'effondrerait alors sur elle-même sous l'application de l'effort et, une pression trop forte, aurait tendance à déformer au contraire la membrane pour agrandir encore sa surface. L'effort appliqué au déplacement du cadre doit être suffisant pour parcourir la course entre l'engagement de la jupe 122 sur la cassette 300 jusqu'à la butée constituée par l'épaulement 121 et la partie supérieure de la cassette 300, cette distance étant en pratique de l'ordre de 5 à 6 mm et devant être parcourue dans un temps supérieur à 0,6 secondes pour arriver à ce résultat. Une fois la membrane appliquée de manière uniforme sur le tampon, il est nécessaire, pour la suite des opérations de l'analyse microbiologique qui ne seront pas décrites plus en détail ici, d'extraire l'ensemble formé du cadre 120 du couvercle 111 et de la cassette 300 de l'outil 400. Comme visible en figure 13, le levier 421 est actionné à cet effet. La tête d'éjection 420 se déplace alors par rapport au corps de l'outil 410 et vient appuyer de manière uniforme sur le rebord inférieur 321 de la cassette 300. De cette manière, l'extraction se fait via une force répartie régulièrement de manière annulaire sur le pourtour de la cassette ce qui évite avantageusement de lui appliquer des efforts de torsion qui pourraient avoir comme effet de décoller la membrane du tampon. Ainsi extrait, l'ensemble formé par la cassette, le couvercle et le cadre est prêt à être utilisé dans la suite des analyses microbiologiques. D'une manière générale, on notera que dans l'exemple décrit ci-dessus, l'ensemble des éléments présente une section sensiblement circulaire. Cependant, la réalisation d'un ensemble selon l'invention présentant une section fermée ovale ou polygonale est à la portée de l'homme du métier sans sortir du cadre de l'invention. Bien entendu, de nombreuses modifications peuvent être apportées à l'exemple de réalisation décrit précédemment sans sortir du cadre de l'invention.15 REVENDICATIONS1. Procédé de transfert d'une membrane (130) de filtrage chargée d'un retentât vers un tampon (310) pour réactif, caractérisé en ce que : - la membrane est montée dans un cadre (120) de support présentant un épaulement (121) et une jupe (122) en saillie depuis l'épaulement ; - le tampon est monté sur une cassette (300) de forme complémentaire à ladite jupe ; - la jupe étant adaptée à coulisser de manière étanche sur la cassette jusqu'en butée formée par l'épaulement ; le procédé comportant les étapes consistant à : - engager la jupe du cadre de support de membrane sur la cassette de manière étanche ; - établir une différence de pression entre la cassette et le cadre de support de la membrane de manière à ce que celle-ci prenne une forme de dôme pointant vers le tampon ; - tout en maintenant la différence de pression, appliquer une force sur le cadre de manière à faire coulisser la jupe sur la cassette jusqu'à établir un contact entre l'extrémité du dôme et le tampon ; - maintenir une force sur le cadre de manière à le faire descendre celui-ci jusqu'en butée formée par l'épaulement tout en maintenant la différence de pression. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la 25 différence de pression est une dépression appliquée dans un espace entre la membrane (130) et la cassette (300). 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'il est précédé d'une étape consistant à saturer le tampon (310) d'un réactif. 30 4. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que le réactif est une solution adaptée à révéler les microorganismes contenus dans le retentât de la membrane (130). 5. Outil (400) de transfert d'une membrane (130) de filtrage chargée d'un retentât vers un tampon (310) pour réactif, caractérisé en ce que : la membrane est montée dans un cadre (120) de support présentant un épaulement (121) et une jupe (122) en saillie depuis l'épaulement; le tampon est monté sur une cassette (300) de forme complémentaire à ladite jupe ; la jupe étant adaptée à coulisser de manière étanche sur la cassette jusqu'en butée formée par l'épaulement ; l'outil de transfert de 10 membrane comportant : - un corps d'outil (410) avec une extrémité libre adaptée à recevoir ladite cassette pour réactif, - une tête d'éjection (420) montée à translation par rapport au corps, adaptée à venir prendre appui sur la cassette pour éjecter celle-ci 15 - un moyen d'actionnement (421) de la tête en translation, - des moyens d'étanchéité (412, 411) et de rétention disposés sur le corps d'outil de manière à retenir de manière étanche la cassette sur le corps, - moyens (413, 414) pour appliquer une différence de pression entre la cassette et le corps de l'outil. 20 6. Outil selon la revendication précédente, caractérisé en ce que les moyens pour appliquer une différence de pression entre la cassette et le corps de l'outil sont une ouverture (413) pratiquée dans le corps de l'outil, destinée à être raccordée à une pompe à vide extérieure à l'outil, et débouchant à son autre extrémité dans un espace étanche entre la cassette et le corps de l'outil. 25 7. Outil selon la revendication 5 ou 6, caractérisé en ce que la tête d'éjection est annulaire et entoure le corps de l'outil. 8. Outil selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce qu'il comporte en outre des moyens intégrés de régulation de pression. 9. Outil selon la revendication précédente, caractérisé en ce que les 30 moyens de régulation de pression sont tarés pour une pression comprise entre 40 et 70 millibars. 10. Outil selon l'une quelconque des revendications 5 à 9, caractérisé en ce que les moyens d'étanchéité et de rétention disposés sur le corps d'outil de manière à retenir de manière étanche la cassette sur le corps moyens sont un joint (412) inséré dans une gorge (411) pratiquée dans le corps à cet effet 11. Outil selon l'une quelconque des revendications 5 à 10, caractérisé en ce que les moyens d'actionnement de la tête en translation sont un levier d'éjection (421). 12. Procédé d'utilisation d'un outil selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes consistant à : - Poser la cassette (300) sur l'outil (400) de manière à engager les moyens d'étanchéité 412, 411 et de rétention prévus à cet effet, - Imprégner le tampon (310) de réactif, - démarrer les moyens pour appliquer une différence de pression entre la cassette et le corps de l'outil, - engager la jupe (122) du cadre de support de membrane sur la cassette de manière étanche ; - établir une différence de pression entre la cassette et le cadre de support de la membrane de manière à ce que celle-ci prenne une forme de dôme pointant vers le tampon ; - tout en maintenant la différence de pression, appliquer une force sur le cadre de manière à faire coulisser la jupe sur la cassette jusqu'à établir un contact entre l'extrémité du dôme et le tampon ; - maintenir une force sur le cadre de manière à le faire descendre celui-ci jusqu'en butée formée par l'épaulement tout en maintenant la différence de pression. 13. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que la cassette présente des ouvertures (322) permettant un passage d'air de part et d'autre de celle-ci et en ce que l'établissement d'une différence de pression entre la cassette et le cadre de support de la membrane de manière à ce que celle-ci prenne une forme de dôme pointant vers le tampon est généré par les moyens pour appliquer une différence de pression entre la cassette et le corps de l'outil à l'aide d'un passage d'air entre l'outil et la membrane via la cassette.