Brevet FR2954164A1 — publié le 20110624

COMPOSITION ANTIFONGIQUE DESTINEE A ETRE APPLIQUEE SUR L'ONGLE PERFORE DOMAINE TECHNIQUE La présente invention porte sur l'identification d'une composition améliorant la pénétration à travers un ongle perforé d'un agent antifongique se présentant sous la forme d'un sel d'acide, tel que par exemple le chlorhydrate de terbinafine. Ainsi, il a été mis en évidence que la viscosité de la composition, la présence en quantité limitée de solvant volatil, et avantageusement la présence d'un tensioactif cationique ou amphotère tel que la cocobétaïne, étaient des facteurs favorisant cette pénétration à travers des trous dans l'ongle pour atteindre efficacement le lit de l'ongle. De telles compositions pharmaceutiques ou dermatologiques sont utiles en particulier pour le traitement, chez l'homme et l'animal, des onychomycoses notamment à dermatophytes ou à Candida. ETAT ANTERIEUR DE LA TECHNIQUE Les ongles sont fréquemment le siège d'onychomycoses notamment à dermatophytes ou à Candida. Bien que le traitement de ces pathologies à l'aide d'agents antifongiques se fasse de manière privilégiée par voie transunguéale, la structure très rigide de l'ongle rend le traitement difficile. Pendant la formation de la tablette unguéale, les cellules basales de la matrice grossissent, les noyaux des cellules se fragmentent, les cytoplasmes se condensent pour former des cellules plus grosses et kératinisées bien individualisées constituant la couche granuleuse. La tablette de l'ongle est constituée de cellules mortes, kératinisées et adhérentes, sans noyau, mais avec des membranes épaisses. Elle contient essentiellement de la kératine a et est constituée de 3 couches : les couches dorsale et intermédiaire, issues de la matrice, et la couche ventrale, issue du lit de l'ongle (Figure 1). La partie dorsale est formée de quelques couches de cellules riches en kératine dure constituant la couche granuleuse. La partie intermédiaire est constituée de cellules riches en kératine plus souple avec disparition de la couche granuleuse, et constitue les trois quarts de l'épaisseur totale de l'ongle. La partie ventrale est formée d'une ou deux couches de cellules riches en kératine souple et hyponychiale; il n'existe toujours pas de couche granuleuse. L'ongle est essentiellement composé de kératine, scléroprotéine riche en acides aminés soufrés. Du point de vue morphologique, les fibres de kératines sont pour la plupart orientées perpendiculairement à la pousse de l'ongle, dans un plan parallèle à la surface de l'ongle. Les chaînes de kératine sont liées entre elles par des liaisons de différents types : liaison hydrogène, liaison peptide, liaison polaire et liaison disulfure (Figure 2). Ces liaisons peuvent être attaquées par diverses agressions : agents chimiques, alcalins, oxydants, thioglycolates pour les ponts disulfures ; par désagrégation par les bases ou acides forts pour les unions acido-basiques ; ou rupture des ponts hydrogène par les molécules d'eau. La composition chimique de l'ongle est plus proche de celle des cheveux que de celle de la peau. Les composés lipophiles gras de l'ongle ne représente que 0.1 à 1% des constituants de l'ongle. C'est essentiellement du cholestérol, qui a un rôle de plastifiant. L'eau est présente entre 15 et 18% et peut même atteindre 25%. La teneur en eau de l'ongle est surtout dépendante du degré d'hygrométrie. A saturation, elle peut atteindre un tiers du poids sec de l'ongle. Il est ainsi aisé de comprendre que les molécules hydrophiles pénètrent plus facilement la tablette unguéale que les molécules lipophiles. Il existe aussi des éléments traces dans l'ongle : le zinc, le fer, le manganèse, le cuivre... Le soufre entre pour 5% dans le poids de la tablette, particulièrement riche en acides aminés soufrés, principalement la cystine et l'arginine. Le traitement de l'onychomycose comprend différentes approches : - la chirurgie, qui consiste à débrider la lésion jusqu'à l'ongle sain ; - les traitements anti-fongiques topiques ; - les traitements anti-fongiques systémiques. Une molécule particulièrement utilisée dans ce domaine thérapeutique est la terbinafine, disponible sous forme de chlorhydrate de terbinafine (terbinafine HCl) 5 de formule : . HCI 10 La plupart des traitements oraux à action systémique sont longs et ne sont pas dénués 15 d'effets secondaires importants. L'option du traitement topique s'avère beaucoup moins toxique, mais pour être efficace, nécessite que l'agent antifongique puisse pénétrer au travers de la kératine dure de l'ongle et atteindre le lit de l'ongle à une concentration suffisante pour 20 pouvoir détruire et éradiquer l'agent pathogène, le Trichophyton Rubrum. Or, de part sa nature cationique, la terbinafine, outre sa faible solubilité dans l'eau qui pose des problèmes de formulation à haute concentration, présente une grande affinité pour la kératine. La terbinafine HC1 se fixe donc très facilement sur la 25 kératine dès les couches supérieures de l'ongle et de ce fait, seule une faible proportion pénètre réellement jusqu'au lit de l'ongle. Afin de surmonter cette difficulté de passage à travers l'ongle, il a été proposé de perforer l'ongle pour amener le principe actif à proximité de son site d'action. Ainsi, le document WO 02/11764 propose de réaliser une multitude de trous dans l'ongle à l'aide d'un rayon laser afin d'atteindre de 80 à 100% de l'épaisseur de l'ongle. 35 Le document WO 2006/021312 préconise ce même système de perçage de l'ongle mais cette fois pour créer des orifices partiels, c'est-à-dire atteignant de 10 à 80% de 30 l'épaisseur de l'ongle. Il est rapporté une meilleure pénétration, par exemple de la terbinafine, en comparaison avec un ongle non perforé. Toutefois, ces documents sont très peu informatifs concernant la formulation des 5 principes actifs, notamment la terbinafine, dans des compositions adaptées à ce mode d'application particulier. Il existe donc le besoin de trouver de nouvelles formulations pour les agents antifongiques permettant une pénétration optimisée à travers l'ongle perforé d'une 10 quantité efficace de principe actif EXPOSE DE L'INVENTION Dans le cadre de la présente invention, la contribution du Demandeur se situe à 15 différents niveaux : - la détermination des paramètres d'une composition pour que celle-ci soit particulièrement adaptée à une application sur ongle perforé : consistance adéquate, solubilisation de l'agent antifongique en évitant la cristallisation de 20 cet agent dans les trous de l'ongle perforé ; la mise en évidence que la réalisation de trous favorise la diffusion des agents antifongiques dans les différentes couches de l'ongle, et notamment au niveau de la couche intermédiaire, par le biais de la surface latérale intérieure 25 des trous. Ainsi et à la connaissance du Demandeur, c'est la première fois qu'un intérêt est porté à la diffusion d'un principe actif tel que la terbinafine HC1 dans les différentes couches de l'ongle ; - la démonstration que la présence d'un tensioactif cationique, 30 avantageusement amphotère, permet d'augmenter la pénétration d'un agent antifongique se présentant sous forme d'un sel d'acide, tel que la terbinafine HC1. Sans vouloir être lié à une quelconque théorie, il est présumé que le tensio-actif, de part sa nature cationique ou amphotère, se fixe sur la kératine permettant ainsi à la terbinafine HC1 de diffuser à travers la matrice de 35 l'ongle et d'atteindre son site d'action, le lit de l'ongle. La formulation adaptée et la diffusion facilitée du principe actif, directement au niveau du lit de l'ongle mais aussi via la couche intermédiaire, permet d'augmenter les concentrations efficaces et ainsi d'améliorer l'efficacité thérapeutique dans le traitement de l'onychomycose. Plus précisément, la présente invention a trait à une composition pharmaceutique spécialement destinée à être appliquée sur un ongle perforé. Dans le cadre de l'invention et de manière privilégiée, on appelle « ongle perforé » 10 un ongle dans lequel ont été réalisées des ouvertures qui doivent au moins perforer la couche dorsale et qui peuvent être traversantes, c'est à dire déboucher dans le lit de l'ongle. Le but est ainsi d'atteindre au moins la couche intermédiaire voire également la couche ventrale. 15 De manière classique, elle comprend : - un agent antifongique se présentant sous la forme d'un sel d'acide, avantageusement un chlorhydrate ; et - un système solvant ; 20 De manière caractéristique en relation avec l'application visée, cette composition présente une viscosité inférieure à 500 cPs, avantageusement inférieure à 400 cPs et de préférence comprise entre 150 cPs et 300 cPs. La viscosité est mesurée selon la méthode décrite à l'exemple 1, c'est-à-dire en utilisant un viscosimètre de type Brookfield LVDVII+ équipé d'un Mobile SC4-18. 25 La vitesse et la température auxquelles sont effectuées les mesures sont respectivement de 12 rpm et de 25°C. Les agents antifongiques d'intérêt plus particulièrement visés par la présente invention sont ceux de la classe des allylamines ou des morpholines, les allylamines 30 étant préférées. En effet, les agents antifongiques de la classe des allylamines, en particulier la terbinafine ou la naftitine, ainsi que ceux de la classe des morpholines, en particulier l'amorolfine, sont des composés prometteurs dans la lutte antifongique. Leur mode d'action supposé ou démontré passerait par une inhibition au niveau de l'ergostérol, constituant spécifique de la paroi des cellules fongiques, en particulier 35 via l'inhibition de la squalène époxydase.5 Dans la classe des allylamines, on peut citer, en particulier, le chlorhydrate de terbinafine et le chlorhydrate de naftifine, dont les formules respectives sont les suivantes : Chlorhydrate de terbinafine Chlorhydrate de naftifine Parmi les molécules de cette classe, la terbinafine est préférée. Alternativement, l'agent anti-fongique peut appartenir à la classe des morpholines, notamment l'amorolfine, pour lesquelles des problèmes similaires se posent. 15 En pratique, l'agent anti-fongique tel qu'il a été défini ci-dessus représente de préférence plus de 5%, voire au moins 8%, ou même au moins 10% (p/p) de la composition totale. On peut ainsi envisager jusqu'à 15%, voire 20% de cet agent dans la composition. Bien évidemment, il est possible d'envisager un mélange 20 d'agents antifongiques, éventuellement de classe différente pour augmenter l'efficacité. Comme déjà dit, ces molécules présentent l'inconvénient d'être quasi-insolubles dans l'eau et d'être peu diffusibles dans l'ongle, probablement en raison de leur 25 interaction avec la kératine. 10 En pratique, il a été déterminé qu'un des paramètres importants pour la viscosité de la composition selon l'invention est le système solvant. Ainsi et de manière avantageuse, le système solvant de la composition revendiquée présente une teneur en solvant(s) volatil(s), à l'exception de l'eau, inférieure ou égale à 40% en poids de la composition totale. On entend par solvant volatil tout composé organique volatil défini comme étant un composé organique ayant une pression de vapeur de 0,01 KPa ou plus à une température de 293,15 K ou ayant une volatilité correspondante dans les conditions d'utilisation particulières. Un composé organique se définit comme un composé contenant au moins l'élément de carbone et un ou plusieurs des éléments suivants : hydrogène, halogène, oxygène, soufre, phosphore, silicium ou azote, à exception des oxydes de carbone et des carbonates et bicarbonates inorganiques. De manière encore plus avantageuse, le système solvant est un système aqueux ternaire constitué de : - l'eau ; - au moins un alcanol en C2-C8 à chaîne droite ou ramifiée, avantageusement de l'éthanol ; - au moins un glycol (présentant des fonctions hydroxy libres), avantageusement du propylène glycol. Dans ce système, le solvant volatil correspond à l'alcanol, avantageusement l'éthanol, qui doit donc représenter moins de 40% en poids de la composition. De manière encore plus avantageuse, la quantité d'eau totale représente plus de 30% en poids de la composition, avantageusement plus de 33%, voire plus de 35% ou même plus de 40%. Cette forte quantité d'eau dans la formule confère au produit un caractère non négligeable d'hydrophilie. En effet, l'ongle étant une matrice hydrophile hygroscopique, il gonfle en présence d'eau ce qui facilite la diffusion des principes actifs. Par eau totale, on entend la quantité d'eau introduite en tant que telle dans la composition, additionnée de la quantité d'eau provenant des différents solvants et/ou excipients de la composition lorsqu'ils en contiennent. Cette forte teneur en eau est extrêmement avantageuse en raison de l'application transunguéale visée. En outre, il a été montré dans le cadre de l'invention que, malgré la faible solubilité dans l'eau des molécules antifongiques concernées, le système solvant proposé permet une solubilisation à haute concentration des molécules d'intérêt, y compris en présence du tensioactif cationique ou amphotère selon l'invention. Outre la forte teneur en eau, le système ternaire de solvant contient avantageusement un alcool à chaîne courte, et plus précisément au moins un alcanol en C2-C8 à chaîne droite ou ramifiée, de préférence l'éthanol, l'isopropanol et le n-butanol. L'éthanol est particulièrement préféré. Un mélange de différents alcools peut également être envisagé. Enfin, ce système solvant ternaire comprend au moins un glycol. On entend ici par glycol, un composé présentant au moins deux fonctions hydroxy. Sont plus précisément visés par l'invention les glycols dont les deux fonctions hydroxy sont libres, c'est-à-dire qu'elles ne sont pas engagées dans une liaison éther ou ester. On peut citer par exemple le propylène glycol, le butylène glycol, l'hexylène glycol, l'éthylène glycol et les polyéthylènes glycols. Le propylène glycol est préféré. Un mélange de différents glycols peut également être envisagé. De manière avantageuse, le système solvant ternaire représente au moins 60%, voire 70%, 80% ou même 90% (p/p) de la composition totale. En outre, et de manière avantageuse, la proportion en alcool est supérieure ou égale à celle en glycol. De manière encore plus avantageuse, la proportion d'eau totale est supérieure à celle en glycol. 30 Selon un mode de réalisation privilégié, la composition contient en outre un tensioactif de nature cationique, voire amphotère, susceptible d'entrer en compétition avec l'agent antifongique sous forme de sel d'acide pour la fixation de la kératine, présente dans la structure des différentes couches de l'ongle sous forme de fibres et chargée négativement. 35 En effet, la composition revendiquée est destinée à être appliquée au niveau de trous réalisés dans l'ongle. Outre un accès plus direct au lit de l'ongle, ces trous25 permettent, via leurs parois latérales, une diffusion du principe actif -en l'occurrence un agent antifongique se présentant sous la forme d'un sel d'acide- au niveau des différentes couches de l'ongle, et en particulier de la couche intermédiaire. Or, comme démontré dans la présente demande, la présence d'un tensioactif cationique ou amphotère augmente in situ la biodisponibilté de l'actif dans l'ongle, notamment de la terbinafine HC1, au travers de la tablette unguéale kératinisée de l'ongle, des annexes cutanées et de la peau. Par définition, un tensioactif cationique est un tensioactif dont la partie hydrophile est chargée positivement. Il libère une charge positive (cation) en solution aqueuse. I1 possède des propriétés bactériostatiques et émulsionnantes et il présente une affinité avec la kératine chargée négativement avec qui il va se combiner. Un tensioactif amphotère est un tensioactif dont la partie hydrophile comporte une chargepositive et une charge négative, la charge globale étant nulle. Suivant le pH du milieu où il se trouve, il libère un ion positif et un ion négatif. En pH alcalin, il se comporte comme un tensioactif anionique, et en pH acide, il se comporte comme un tensioactif cationique. Dans le contexte de l'invention, dans la mesure où l'agent antifongique est sous forme d'un sel d'acide, la composition se trouve donc à pH acide inférieur au pKa de l'agent antifongique, de préférence à un pH compris entre 3 et 6, préférentiellement entre 3 et 5, et le tensioactif amphotère chargé positivement, joue alors le rôle d'un tensioactif cationique. A titre de tensioactifs cationiques utilisables selon l'invention, on citera à titre non limitatif : - les ammoniums quaternaires, dans lesquels le contre-ion peut être • chlorure, bromure, phosphate, hydroxyde, méthosulfate, sulfate ou un anion d'acide carboxylique, dans lesquels les substituants de l'azote peuvent être • des chaînes alkyles de 1 à 20 carbones, saturées ou insaturées, 35 éventuellement hydroxylées, la fonction hydroxyle pouvant être estérifiée, ces chaînes pouvant être éventuellement substituées, pouvant provenir de composés définis, ou bien être des mélanges issus de produits naturels, • des groupements aromatiques éventuellement substitués, des cycles, en particulier des cycles aromatiques, par exemple la pyridine, éventuellement substitués • des mélanges de ces diverses catégories • eux-mêmes substitués par une fonction amine quaternisée ou non - les amines, qui peuvent se protoner en fonction du pH et les sels d'amines dans lesquels l'azote porte les substituants précédemment cités et/ou de l'hydrogène, ces produits étant utilisés dans des conditions où ils sont cationiques - les dérivés de bétaïne ou d'aminoacides, dans les conditions de pH qui les rendent cationiques, éventuellement substitués par les groupements précédemment cités Avantageusement, les tensioactifs amphotères utilisés ont une structure de dérivé de bétaïne répondant à la formule générale (I) suivante : CH 1+3 RùN O CH (I) dans laquelle R représente un radical alkyle ou un radical R'CO-NH(CH2)3-, R' représentant un radical alkyle. On entend par radical alkyle une chaine hydrocarbonée, saturée, linéaire ou ramifiée. Parmi les radicaux alkyles, on préfèrera ceux comprenant de 1 à 20 atomes de carbones. Parmi les dérivés de bétaine, on préfèrera plus particulièrement le tensioactif amphotère connu sous le nom commercial de Dehyton® AB30 ou encore Lauryl Dimethylaminoacetic Acid Betaine répondant à la formule générale (I) dans laquelle R représente le radical lauryle. Cette molécule est communément appelée cocobetaine. Cette molécule est par exemple vendue par la société Cognis en solution aqueuse à 30% sous le nom Dehyton® AB30. 3 O A titre d'exemples supplémentaires, on peut citer d'autres bétaïnes comme la cétylbetaine ou encore la cocamidopropyl betaine. Dans le cadre de l'invention et de manière avantageuse, le tensioactif cationique ou amphotère représente au moins 0,1% en poids de la composition. Il peut représenter jusqu'à 10%, voire même 15% en poids de la composition sans perturber la solubilisation de l'agent antifongique à haute concentration. Typiquement, il représente de 0,1 à 20% en poids de la composition, avantageusement de 0,1 à 15%, encore plus avantageusement de 0,1 à 10%. Selon un mode de réalisation particulier, le tensioactif cationique et/ou amphotère est le seul tensioactif dans la composition selon l'invention. Ceci exclut la présence simultanée de tensioactifs non ioniques et également de tensioactifs anioniques. Le fait d'utiliser un tensioactif amphotère confère comme autre avantage un aspect lavable à la composition. En effet, par simple rinçage à l'eau, il est possible d'éliminer la composition. Ceci est particulièrement avantageux dans le cas d'une application sur un ongle perforé. Avantageusement, la composition selon l'invention comprend en outre un agent de texture de la classe des celluloses, par exemple, les dérivés alkylcellulosiques, en particulier les méthylcelluloses, les éthylcelluloses, les propylcelluloses et les hydroxyalkylcelluloses, telles que celles commercialisées sous la dénomination "KLUCEL", avantageusement l'hydroxyéthyl cellulose (Natrosol HHX250) ou l'hydroxypropyl cellulose. Cet agent de texture permet de moduler la viscosité de la composition et ainsi d'atteindre les valeurs adaptées à une application sur ongle perforé, comme mentionné ci-dessus. D'autre part, le contrôle de la viscosité permet d'éviter l'évaporation trop rapide des solvants ce qui permet entre autre d'éviter une obstruction des trous opérés dans l'ongle par recristallisation du principe actif. Dans le cadre de l'invention et de manière avantageuse, l'agent de texture représente au moins 0,1% en poids de la composition. Il peut représenter jusqu'à 1%, voire même 2% en poids de la composition. Typiquement, il représente de 0,1 à 1% en poids de la composition, avantageusement de 0,1 à 0,5%, encore plus avantageusement de 0,3 à 0,5%. Par ailleurs, la composition selon l'invention peut également renfermer au moins un additif choisi dans le groupe formé par : - les agents conservateurs, tels que l'alcool phényléthylique, l'alcool benzylique, le phénoxyéthanol, les parabens et leurs dérivés ; - les antioxydants, tels que le butylhydroxyanisole (BHA), le butylhydroxytoluène (BHT), l'ascorbate de palmityle, l'alpha -tocophérol et/ou ses esters ; - les colorants, charges ou pigments, tels que les micatitanes couramment utilisés dans le domaine cosmétique pour réaliser des vernis à ongles ; - les agents chélatants tels que le disodium EDETATE (EDTA) ; - les émollients tels que le cyclométhicone ; - d'autres principes actifs tels qu'un antiseptique, notamment l'acide acétique. Les quantités de chacun des ces additifs sont aisément déterminées par l'homme du métier. Avantageusement, la composition selon l'invention est une composition aqueuse de type solution. On entend par solution, une préparation liquide claire et homogène contenant une ou plusieurs substances dissoutes dans un solvant ou mélange de solvants miscibles entre eux. On entend par préparation liquide, un produit qui s'écoule à température ambiante et comportant un caractère newtonien ou un écoulement pseudoplastique. Dans un mode de réalisation privilégié, la composition se présente sous la forme d'une solution gélifiée rinçable à l'eau. Typiquement et à titre d'illustration, une composition selon l'invention comprend : 1% à 20% en poids de terbinafine HC1 sous forme solubilisée ; 0% à 10% en poids d'un agent de texture. 0.1% à 20% en poids d'un tensio actif amphotère ; 20% à 80% en poids de phase solvante contenant majoritairement de l'eau ; 0% à 1% d'un agent chélatant ; 0% à 2% d'un agent antioxydant ; 0% à 20% d'additifs. Préférentiellement, la composition est constituée de : 1% à 15% en poids de terbinafine HC1 sous forme solubilisée ; 0% à 5% en poids d'un agent de texture ; 0.1% à 15% en poids d'un tensioactif amphotère ; 20% à 60% en poids de phase solvante contenant majoritairement de l'eau ; 0% à 0.5% d'un agent chélatant ; 0% à 1% d'un agent antioxydant ; 0% à 10% d'additifs. Encore plus préférentiellement, la composition est constituée de: 1% à 10% en poids de terbinafine HC1 sous forme solubilisée ; 0% à 2% en poids d'un agent de texture ; 0.1 % à 10% en poids d'un tensioactif amphotère ; 20% à 55% en poids de phase solvante contenant majoritairement de l'eau ; 0% à 0.05% d'un agent chélatant ; 0% à 0.5% d'un agent antioxydant ; 0% à 5% d'additifs. De façon préférée, la composition est constituée de: 1% à 10% en poids de terbinafine HC1 sous forme solubilisée ; (0% à 2% en poids d'un agent de texture ; 0.1 % à 10% en poids d'un tensioactif amphotère ; 20% à 55% en poids de phase solvante contenant majoritairement de l'eau ; 0% à 0.05% d'un agent chélatant ; - 0% à 0.5% d'un agent antioxydant ; - 0% à 5% d'additifs. Ainsi, la présente invention porte sur une composition pharmaceutique ou 5 dermatologique destinée au traitement des onychomycoses. Comme déjà dit, une composition selon l'invention est particulièrement adaptée pour son application sur ongles perforés. 10 Des mesures étant délicates à réaliser sur l'épaisseur de l'ongle et de ses différentes couches, il est préconisé de réaliser des trous de profondeur comprise entre 10% et 100% de l'épaisseur totale de l'ongle. En pratique, les trous ont une profondeur typiquement comprise entre 0,2 et 5 mm (dans le cas particulier des ongles atteints 15 d'onychomycose). De manière avantageuse, ces trous présentent un diamètre compris entre 400 µm et lmm et plus particulièrement entre 400 et 600 µm Ils ont avantageusement une forme cylindrique ou conique. Différentes technologies sont disponibles pour la réalisation de tels trous. L'utilisation de rayons lasers est par exemple décrite dans les documents WO 02/11764 et WO 2006/021312. Alternativement, un dispositif de type chignole, comme celui décrit dans le document WO 2004/086938 peut être utilisé. L'application de la composition selon l'invention dans les trous peut être réalisée à l'aide de pipettes ou seringues. Les volumes déposés dans chaque trou sont typiquement compris entre 0,05 et 41. Une couche protectrice peut éventuellement être déposée à la surface de l'ongle traité. EXEMPLES DE REALISATION L'invention et les avantages qui en découlent ressortiront mieux des exemples de 35 réalisation suivants, à l'appui des figures annexées. Ceux-ci ne sont cependant en aucun cas limitatifs. 20 25 30 LEGENDE DES FIGURES La figure 1 représente un schéma en coupe de la structure d'un ongle. La figure 2 est une représentation schématique des différentes liaisons existant au 5 niveau des chaînes de kératine dans l'ongle. La figure 3 représente la quantité cumulée de terbinafine dans le liquide récepteur (ng/cm2) à travers les ongles perforés dans le cas de la solution amphotère et des différentes formes commerciales contenant de la terbinafine. La figure 4 représente la quantité cumulée (ng/cm2) de terbinafine après 5 jours 10 d'application au niveau de l'ongle dans le cas de la solution amphotère et des différentes formes commerciales contenant de la terbinafine. La figure 5 représente la quantité cumulée de terbinafine dans le liquide récepteur (µg/cm) à travers les ongles perforés dans le cas de la solution amphotère et des différentes formes commerciales contenant de la terbinafine, avec la solution amphotère 15 prise comme référence. La figure 6 représente la quantité cumulée de terbinafine dans le liquide récepteur (µg/cm) à travers les ongles perforés, dans le cas d'une solution avec ou sans amphotère. La figure 7 représente le schéma en coupe d'un trou dans l'ongle faisant apparaître les 20 zones colorées à considérer et celle à exclure pour l'évaluation de la diffusion. La figure 8 représente la quantité cumulée rapportée à l'épaisseur des ongles (ng/cm2/mm) de terbinafine après 5 jours d'application au niveau de la couche intermédiaire et dorsale, dans le cas d'une solution avec ou sans amphotère. La figure 9 représente la quantité de terbinafine dans l'ongle (ng/mg) après 5 jours 25 d'application au niveau de la couche intermédiaire et dorsale, dans le cas d'une solution avec ou sans amphotère. La figure 10 représente la quantité de terbinafine dans l'ongle (ng/mg) après 5 jours d'application au niveau de la couche intermédiaire et dorsale, dans le cas d'une solution type Lamisil Spray® avec ou sans amphotère. 30 Exemple 1 : Procéde de fabrication d'une composition à base de terbinafine HC1 contenant un tensioactif cationique ou amphotère et étude de stabilité de ladite composition. 1/ Procédé de fabrication : 15 35 Ce procédé de fabrication se réalise simplement dans un bécher de fabrication en faisant gonfler l'agent de texture dans l'eau. On ajoute ensuite la phase active (voir préparation ci-dessous) contenant le chlorhydrate de terbinafine en solution. Puis on ajoute sous agitation modérée le tensioactif cationique ou amphotère. a- Préparation de la phase aqueuse : Dans un bécher, l'eau et l'agent de texture sont introduits et laissés sous agitation pour obtenir un mélange limpide, lisse et homogène. 10 b- Préparation de la phase active : Dans un bécher annexe, le principe actif est solubilisé dans les solvants organiques, glycols et alcooliques. c- Mélange final : 15 La phase active (b) est incorporée dans la phase aqueuse (a) et homogénéisée, puis le tensioactif cationique ou amphotère est ajouté et l'homogénéisation poursuivie. On obtient ainsi une composition à base de terbinafine HC1 contenant un tensioactif cationique ou amphotère 20 Méthode de contrôle de la viscosité : Viscosimètre de type Brookfield LVDVII+ Mobile SC4-18 +petit volume Vitesse 12 rpm Temps : 1 minute 25 Température :25°C 2/ Mesure de la stabilité de la composition : a- Stabilité physique : 30 La stabilité physique des formulations est mesurée par une observation macroscopique de la formulation à température ambiante (TA), à 4°C et à 40°C, après 1 mois, 2 mois et 3 mois afin de garantir l'intégrité physique des produits et vérifier l'absence de recristallisation de la terbinafine HC1 solubilisée. 35 L'analyse microscopique est réalisée à 4°C et à température ambiante (TA) afin de vérifier l'absence de recristallisation de la terbinafine HC1 solubilisée.5 b- Stabilité chimique : La stabilité chimique est mesurée par dosage de l'actif en HPLC et les résultats sont exprimés en % de la teneur initiale. Exemple 2: Solution amphotère contenant 10% de Terbinafine HC1 Ingrédients / Nom INCI Teneur Teneur (% tenant compte de l'eau (% m/m) contenue dans chaque ingrédient) Eau Purifiée 27.87 / Eau totale (eau purifiée + eau / 27.87+(6.0x0.7)+ contenue dans les ingrédients) (35.53x0.05)=33.85 Titriplex III / EDTA disodique 0.01 0.01 Natrosol 250 HHX / 0.30 0.30 Hydroxyéthylcellulose Dehyton AB30 (solution aqueuse 6.0 / à 30%) / Cocobétaïne Cocobétaïne matière active (sans / 6.0x0.3=1.8 eau) Propylène Glycol 20.25 20.25 Ethanol 95-96% 35. 53 / Ethanol Absolu / 35.53-(35.53x0.05) =33.75 Nipanox BHT / Butyl 0.04 0.04 hydroxytoluène Terbinafine HC1 10.0 10.0 Le pH initial est 4,69. Stabilité physique : 5 10 Temps initial 1 mois 2 mois 3 mois Aspect Solution fluide 4°C Idem Idem Idem macroscopique limpide incolore temps temps temps initial initial initial TA Idem Idem Idem temps temps temps initial initial initial 40°C Idem Idem Idem temps temps temps initial initial initial Aspect Absence de 4°C Idem Idem Idem microscopique cristaux temps temps temps initial initial initial TA Idem Idem Idem temps temps temps initial initial initial Stabilité chimique : TO T 1 mois T 2 mois T 3 mois TA 100.8% 102.2% 101.2% 99.3% 40°C -- 101.8% 101% 100.1% La composition de l'exemple 2 est donc stable physiquement et chimiquement pendant 3 mois à 4°C, à température ambiante et à 40°C. Exemple 3: Solution amphotère contenant 10% de Terbinafine HC1 Ingrédients / Nom INCI Teneur Teneur (% tenant compte de l'eau (% m/m) contenue dans chaque ingrédient) Eau purifiée 29.45 / Eau totale (eau purifiée + eau / 29.45+(6.0x0.7) =33.65 contenue dans les ingrédients) Titriplex III / EDTA disodique 0.01 0.01 Klucel HF / 0.5 0.5 Hydroxypropylcellulo se 5 DehytonAB30 (solution aqueuse à 6.0 / 30%) / Cocobétaïne Cocobétaïne matière active (sans / 6.0xO.3=1.8 eau) Propylène Glycol 20.25 20.25 Ethanol Absolu 33.75 33.75 Nipanox BHT / Butyl 0.04 0.04 hydroxytoluène Terbinafine HC1 10.0 10.0 Le pH initial est de 4,50. Stabilité physique : Temps initial 1 mois 2 mois 3 mois Aspect Solution fluide 4°C Idem Idem Idem macroscopique limpide incolore temps temps temps initial initial initial TA Idem Idem Idem temps temps temps initial initial initial 40°C Idem Idem Idem temps temps temps initial initial initial Aspect Absence de 4°C Idem Idem Idem microscopique cristaux temps temps temps initial initial initial TA Idem Idem Idem temps temps temps initial initial initial Stabilité chimique : TO T 1 mois T 2 mois T 3 mois TA 104% 103.8% 102.1% 103.5% 40°C -- 103.6% 103% 103.4% La composition de l'exemple 3 est donc stable physiquement et chimiquement pendant 3 mois à 4°C, à température ambiante et à 40°C. Exemple 4 : Etude de diffusion de la terbinafine à travers des ongles perforés L'objectif de cette étude est d'évaluer la pénétration de différentes formulations commerciales contenant de la terbinafine HC1 à travers des ongles de cadavres humains perforés et de comparer cette pénétration à celle obtenue avec une solution amphotère telle que préparée selon le procédé décrit dans l'exemple 1. Pour cette étude,. les ongles ont été totalement perforés de 3 trous de diamètre 0.6 mm. La durée totale du traitement a été de 5 jours avec une nouvelle application de chaque formulation chaque jour. L'application est de 10 µl•cm2 ou 10 mg•cm2 selon la formulation. A l'issue du traitement, les prélèvements ont été analysés afin de déterminer la pénétration in vitro de la terbinafine à travers et dans les ongles. Les formulations testées sont les suivantes : • Solution amphotère 10% correspondant à l'exemple 2 • Lamisil Spray 1% • Lamisilate Monodose 1% • Lamisil Gel 1% • Lamisil Crème 1% Les formulations commerciales présentent les compositions qualitatives et quantitatives suivantes : Lamisilate Monodose 1 % Lamisil AT Spray 1 % Ingrédients Teneur Ingrédients Teneur (%m/m) (%m/m) Terbinafine HC1 1 Terbinafine 1 HC1 ~;'tha o 9w3.% °- 86 .ri Eau purifiée NC Acrylate / octylacrylamide NC copolymer Hydroxypropylcellulose NC Propylène NC glycol Médium chain triglycérides NC Cetomacrogol NC 10 1000 NC : non communiqué Lamisil Gel 1% Lamisil Crème 1% Ingrédients Teneur Ingrédients Teneur (%m/m) (%m/m) Terbinafine Base 1 Terbinafine 1 HC1 Eau purifiée NC Eau purifiée NC than 't 1 Sodium NC hydroxide Isopropyl myristate NC Alcool NC benzylique Polysorbate 20 NC Sorbitan NC stéarate Carbomer 974P NC Alcool Cétyl NC stearylique Sorbitan laurate NC Polysorbate NC 60 Alcool benzylique NC Isopropyl NC myristate Sodium hydroxide NC Butyl hydroxytoluène NC NC : non communiqué Les viscosités des différentes formulations testées ont été mesurées en utilisant un viscosimètre Brookfield LVDVII+ à 25°C. Formulations Aiguille Vitesse Viscosité (cPs) Lamisil Crème 1% SC4-25 12 rpm 23 715 Lamisilate Monodose 1% SC4-25 12 rpm 17 916 Lamisil Ge1l% SC4-25 1.5 rpm 289.103 Lamisil Spray 1% SC4-18 12 rpm 3.75 Solution amphotèrel0% SC4-18 l2 rpm 205 A/ Matériels et Méthode : Des cellules de diffusion de type Franz ont été utilisées pour étudier la pénétration de la Terbinafine à travers l'ongle perforé de 3 trous. Le perçage a été réalisé manuellement au centre de l'ongle avec des trous espacés d'environ 0.2mm. Au cours des cinq jours d'expérimentation, les cellules de diffusion ont été placées dans un bain thermostaté à 34.2°C afin de maintenir une température à la surface des ongles de 32 ± 1 °C. Toutes les 24 heures, la totalité du liquide récepteur des cellules de diffusion contenant du tampon phosphate, pH 7.4 ± 0.1 et 0.1% de Volpo (O1eth-20) a été prélevée et remplacée par un volume équivalent. La surface des ongles a été délicatement nettoyée avant chaque réapplication. Après le dernier prélèvement du liquide récepteur, les ongles ont été traités afin d'extraire la terbinafine présente dans la matrice kératinique. Tous les prélèvements, liquides réceptuer et extraits d'ongles ont été dosés par HPLC (limite de quantification û 20 ng/ml). B/ Résultats : Au cours de l'étude, une observation systématique des trous, avant le prélèvement du liquide récepteur et après le nettoyage de la surface de l'ongle, a été réalisée afin de noter la présence ou non de bouchon obstruant les trous. Solution Lamisil Lamisil Lamisil Lamisil amphotère Spray Monodose Gel Crème (10%) (1%) (1%) (1%) (1%) Avant 0/180 * 0/90 ** 66/90 54/90 76/90 Prélèvement Avant 0/180 0/90 6/90 2/90 19/90 Nouvelle Application * : 180 correspond à 2 séries de 3 trous x 6 ongles x 5 applications * * : 90 correspond à 3 trous x 6 ongles x 5 applications Les formulations Solution amphotère et Lamisil Spray, les plus fluides, n'ont jamais 25 obstrué les trous. Avec les formulations Lamisilate Monodose et Lamisil Gel, entre 60 et 75 % des trous étaient bouchés. Cependant, lors de l'étape de nettoyage et de rinçage, la majorité de ces trous étaient débouchés puisqu'il ne restait plus que 7 % de trous obstrués. La formule Lamisil Crème est celle pour laquelle on trouve le plus de trous bouchés (85 %) et dont 22 % le sont restés après le nettoyage et le rinçage 30 des ongles.20 Ce premier résultat montre que la forme galénique et en particulier la viscosité a une influence sur l'obstruction des trous et donc potentiellement sur la diffusion de la Terbinafine. Après 5 jours d'application, les résultats décrivant la quantité de terbinafine ayant diffusée dans le liquide récepteur se présentent en trois groupes : • La solution amphotère présente une quantité cumulée de l'ordre de 2.3 mg•cm 2 • Le Lamisil Spray présente une quantité cumulée de l'ordre de 0.3 mg•cm2, • Les 3 autres formulations, Lamisilate Monodose, Lamisil Gel et Lamisil Crème, pour lesquelles la quantité cumulée est comprise entre 0.015 et 0.04 mg•cm-2. Les différentes quantités cumulées de terbinafine dans le liquide récepteur sont représentées dans la figure 3. La solution amphotère présente la plus grande quantité de terbinafine cumulée dans le liquide récepteur dans la mesure où elle présente la plus forte concentration 10%. Par contre, à concentration équivalente (1%), le Lamisil Spray présente la plus grande quantité cumulée de terbinafine. Ce résultat peut être directement corrélé d'une part à la viscosité et d'autre part à l'obturation des trous. En effet, le Lamisil Spray a une viscosité bien plus faible par rapport à celles du Lamisil Gel et du Lamisil Crème respectivement. De plus, n'ayant pas obturé les trous contrairement aux autres formulations, le Lamisil Spray a permis la diffusion de la terbinafine dans le liquide récepteur. La quantité de terbinafine se trouvant dans l'ongle a été mesurée à la fin de l'étude. Les données obtenues sont présentées sur la figure 4, La concentration de terbinafine la plus importante est obtenue avec la Solution amphotère. Pour cette solution, la concentration moyenne dans l'ongle est de l'ordre de 1200 ng•mg-l. Les 4 autres formulations présentent une concentration de terbinafine assez proche comprise entre 45 et 75 ng•mg-l. En prenant la solution amphotère comme reference c'est-à-dire avec une concentration normalisée à 1%, le taux le plus important de terbinafine ayant diffusé dans le liquide récepteur est obtenu avec la Solution amphotère et le Lamisil Spray. Pour ces deux solutions, le taux de terbinafine trouvé dans le liquide récepteur varie en moyenne entre 9 et 11 % de la dose appliquée (figure 5). Avec les autres formulations Lamisilate Monodose, Lamisil Gel et Lamisil Crème, seulement 1% de la dose de terbinafine appliquée est trouvée dans le liquide récepteur. Exemple 5 : Etude de diffusion de la terbinafine à travers des ongles perforés L'objectif de cette étude est d'étudier la diffusion de la terbinafine HC1 à travers des ongles perforés, en comparant deux solutions avec et sans amphotère, préparées selon 10 le procédé décrit selon l'exemple 1: - Solution avec amphotère 10% m/m terbinafine HC1 selon l'exemple 3; - Solution sans amphotère 10% m/m terbinafine HC1 présentant la même composition que l'exemple 3 à l'exception de l'amphotère remplacé par une quantité équivalente en eau. 15 A/ Matériel et Méthodes : Les formulations sont évaluées en duplicate sur des ongles de cadavre perforés provenant de donneurs différents, à l'exception du pouce. Des quantités de 10µUcm2 20 sont appliquées quotidiennement pendant 5 jours, les ongles étant au préalable fixés sur des cellules de diffusion. Le protocole de l'étude est ensuite identique à celui décrit dans l'exemple 4. 25 B/ Résultats : Le tableau ci-dessous représente la quantité de terbinafine HC1 dans le liquide récepteur (µg/cm2) après 5 jours d'application Temps (j) Solution amphotère Solution sans amphotère 10% m/m (selon 10% m/m exemple 3) 1 148.9±85.6 138.5±63.6 2 273.7 ± 164.6 244.8 ± 83.5 3 401.1±240.6 333.4±116.7 4 569.5 ± 356.9 449.9 ± 169.4 713.2±385.9 552.7±198.1 5 30 Par ailleurs, la quantité cumulée de terbinafine dans le liquide récepteur (µg/cm) à travers les ongles perforés est illustrée à la figure 6. Cette étude montre que la terbinafine HC1 diffuse mieux à travers l'ongle perforé lorsque la composition contient de l'amphotère. Exemple 6 : Etude de la diffusion d'un colorant (Red Nile) à travers des ongles perforés L'objectif de cette étude est d'évaluer, sur des ongles perforés, la diffusion d'un colorant, le Red Nile, présent dans une solution avec et sans amphotère. Les formulations testées correspondent à celle de l'exemple 3 dans laquelle : - Pour la solution amphotère, la terbinafine HC1 a été remplacée par 0.03% de Red Nile - Pour la solution sans amphotère, la terbinafine HC1 a été remplacée par 0.03% de Red Nile et l'amphotère par une quantité équivalente en eau A/ Matériel et Méthodes : L'expérimentation porte sur des ongles de cadavres humains perforés de 3 trous et placés sur des cellules de diffusion type cellules de Franz. Sur chaque ongle est appliqué 2m1 de la formulation à tester. 25 La diffusion du Red Nile est suivi pendant 24 heures à l'abri de la lumière et à température ambiante. A la fin de l'étude, les ongles sont rincés abondamment à l'eau déminéralisée. Les ongles sont ensuite coupés transversalement et l'analyse de la distribution du 30 colorant dans l'ongle s'effectue d'après une observation de la tranche de l'ongle au microscope confocal équipé d'un logiciel d'acquisition et d'un logiciel de traitement de l'image (figure 7). B/ Résultats :20 L'analyse des images colorées montre que la zone de diffusion sur les parois latérales des trous est plus large que celle obtenue à partir de la zone dorsale, c'est à dire la partie supérieure de l'ongle. Le tableau ci-dessous présente le pourcentage de surface colorée en fonction de la formulation testée. Solution sans amphotère Solution amphotère Surface colorée (%) 11.01 21.13 Cette étude met en évidence qu'en fonction de la présence de l'amphotère dans la composition : - la diffusion dans l'ongle du colorant Red Nile est plus ou moins importante ; - la diffusion du colorant sur les parois latérales du trou correspondant à la couche intermédiaire de l'ongle est plus importante comparativement à la couche dorsale. Ainsi, en fonction de la couche de l'ongle, dorsale ou intermédiaire, la diffusion du 15 Red Nile est différente. Ce résultat met donc en évidence que la nature de la couche de l'ongle a un impact sur la diffusion du colorant. De plus, en fonction de la présence de l'amphotère ou non dans la solution telle que préparée, la diffusion du colorant est différente. Cette diffusion est d'autant plus 20 importante que l'amphotère est présent dans la composition. Exemple 7 : Etude de la mouillabilité des différentes couches de l'ongle L'objectif de cette étude est de caractériser les propriétés de surface des différentes 25 couches de l'ongle (dorsale, intermédiaire, ventrale) en déterminant leur tension superficielle respectives. A/ Matériel et Méthodes : 30 Les expérimentations sont réalisées sur des ongles de cadavres humains. La mesure de l'angle de contact aété réalisée à l'aide d'un goniomètre (Contact angle measuring system G10, KRÜSS, Allemagne). La tension de surface des différentes couches de l'ongle a été déterminée par la méthode des deux liquides en utilisant des solutions de référence : l'eau et le diiodométhane. 35 Les mesures débutent sur la face dorsale de l'ongle. Les mesures sont réalisées à température ambiante. Une goutte (û2-5 µl) d'eau déminéralisée est déposée sur la face dorsale de l'ongle à l'aide d'une aiguille et d'une seringue disposées verticalement à la surface de l'ongle. La goutte ainsi en contact sur l'ongle est photographiée. Le logiciel mesure ensuite l'angle de contact que la goutte fait avec la surface de l'ongle. La goutte est ensuite essuyée avec du papier Joseph. La même procédure (dépôt de la goutte, mesure de l'angle de contact) est répétée 10 fois de suite pour la solution testée. La surface de l'ongle est rapidement nettoyée avec de l'éthanol. Les mesures identiques sont ensuite effectuées successivement avec le diiodométhane. Une fois les mesures sur la couche dorsale terminées, l'ongle est récupéré et rectifié pour réaliser les mesures sur la couche intermédiaire comme décrit précédemment. Une fois toutes les mesures terminées, l'ongle est retourné afin de procéder aux mesures de l'angle de contact sur la face ventrale avec les 2 solutions. B/ Résultats : Les moyennes des tensions de surface (ys) des 3 couches de l'ongle (mJ.m2) sont données ci-dessous : Couche de l'ongle ys (mJ.m-2) dorsale 33.52 f 6.16 intermédiaire 44.36 ± 3.40 ventrale 54.71 ± 6.28 Ces résultats apportent des éléments nouveaux par rapport à la mouillabilité des différentes couches de l'ongle. En effet, ces résultats montrent que l'ongle n'est pas un matériau biologique homogène vis-à-vis de ce paramètre. Chaque couche possède ses propres propriétés de mouillabilité bien distinctes des autres couches. La couche dorsale représente une barrière en terme de mouillabilité par rapport aux 30 deux autres couches qui sont plus mouillables en raison de leur tension de surface supérieure à celle de la couche dorsale. Ces résultats sont en adéquation avec les précédents montrant une différence de diffusion du colorant Red Nile en fonction de la nature de la couche. Exemple 8 : Etude de diffusion de la terbinafine HC1 à travers les différentes couches de l'ongle : Les objectifs de cette étude sont: • d'étudier l'influence de la nature de la couche de l'ongle sur la diffusion de la terbinafine HC1 du fait de la différence de mouillabilité des couches dorsale et intermédiaire, • d'étudier l'influence de l'amphotère sur la diffusion de la terbinafine HC1 à travers les différentes couches de l'ongle La formulation contenant de l'amphotère correspond à celle de l'exemple 2. La formulation sans amphotère correspond à celle de l'exemple 2 dans laquelle l'amphotère a été remplacé par une quantité équivalente en eau. Pour chaque formulation, 2 ongles (1 avec la couche dorsale et 1 sans la couche dorsale) sont utilisés par donneur. La durée du traitement est de 5 jours avec une nouvelle application de chaque formule chaque jour. La quantité de formule déposée quotidiennement sur la surface de l'ongle est de 10 µl/cm2. A/ Matériel et Méthodes : Pour chaque donneur, l'épaisseur des ongles est mesurée. Ensuite, pour chaque donneur, les ongles sont préparés de la manière suivante : • 4 ongles sans couche dorsale : pour les ongles de ce groupe, la face dorsale est enlevée à l'aide d'une ponceuse miniature afin d'atteindre la couche intermédiaire en retirant 40% de l'épaisseur initiale de l'ongle, • 4 ongles avec couche dorsale : pour les ongles de ce groupe, la face ventrale est enlevée à l'aide d'une ponceuse miniature afin d' atteindre la couche intermédiaire en retirant 40% de l'épaisseur initiale de l'ongle. Les cellules de diffusion de type Franz utilisées sont placées dans un bain thermostaté afin d'obtenir une température de 32 ± 1°C à la surface de l'ongle Les ongles sont placés dans la cellule de diffusion côté ventral vers le compartiment récepteur , tampon phosphate (pH 7.4 ± 0.1) contenant 0.1% de Volpo (O1eth-20). 5 10 Au cours de l'expérience, les cellules de diffusion. Pour tous les ongles, l'application de la formule (10 µl/cm2) est répétée toutes les 24h pendant 5 jours. Le protocole de l'étude est ensuite identique à celui décrit dans l'exemple 4. Les échantillons, liquides récepteur et extraits d'ongle sont ensuite analysés par MS / MS. B/ Résultats : Pour s'affranchir de la variabilité de l'épaisseur de l'ongle, les quantités cumulées de terbinafine HC1 dans le liquide récepteur (ng/cm2) ont été normalisées. Les résultats sont donc exprimés en ng/cm2/mm dans le tableau ci-dessous. Temps Solution avec amphotère 10% Moyenne (j) Couche intermédiaire (ng/cm2/mm) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 1 2 3 4 5 6 0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 57.98 154.35 238.15 392.94 253.76 631.67 288.14± 210. Solution avec amphotère 10% Moyenne Couche dorsale (ng/cm2/mm) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 1 2 3 4 5 6 0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 5 14.63 389.43 55.44 20.50 79.55 82.44 1.28 Solution sans amphotère 10% Moyenne Couche intermédiaire (ng/cm2/mm) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 1 2 3 4 5 6 0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 5 126.73 686.15 239.34 21.50 198.53 212.04 ± 250.70 Solution sans amphotère 10% Moyenne Couche dorsale (ng/cm2/mm) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 1 2 3 4 5 6 0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 5 0.00 0.00 0.00 0.00 207.23 34.54 ± 84.60 15 Ainsi, la quantité cumulée rapportée à l'épaisseur des ongles (ng/cm2/mm) de terbinafine après 5 jours d'application est illustrée à la figure 8. Il apparaît que : • Avec ou sans amphotère, la diffusion de la terbinafine est plus importante à travers la couche intermédiaire comparée à la couche dorsale. • La présence de l'amphotère favorise la pénétration de la terbinafine (x3) à travers la couche dorsale. En revanche, l'action de l'amphotère sur la couche intermédiaire est moins significative bien qu'il y ait une tendance à augmenter la diffusion à travers la couche intermédiaire également. • Les quantités de terbinafine HC1 diffusée à travers les couches dorsale et intermédiaire sont plus importantes lorsque la formulation contient l'amphotère. Ces résultats montrent bien que la couche dorsale est une barrière à la pénétration de la terbinafine HC1 à travers l'ongle. Une fois cette barrière franchie, les quantités de terbinafine HC1 ayant diffusée après 5 jours d'application sont plus importantes. Les quantités de terbinafine HC1 dans l'ongle (ng/mg) sont données dans le tableau ci-dessous : Temps Solution avec amphotère 10% Moyenne (j) Couche intermédiaire (ng/mg) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 2 3 4 5 6 5 1428.41 1583.09 1982.11 1354.79 1517.44 1176.74 f 272 04 Solution avec amphotère 10% Moyenne Couche dorsale (ng/mg) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 2 3 4 5 6 5 2806.07 3180.52 2770.33 2122.09 2177.24 1544.53 + 2433.46 593.84 Solution sans amphotère 10% Moyenne Couche intermédiaire (ng/mg) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 2 3 4 5 6 5 718.20 1796.26 1506.90 1263.62 2238.02 1899.68 1570.45 534.70 Solution sans amphotère 10% Moyenne Couche dorsale (ng/mg Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 1 2 3 4 5 6 20 5 2852.58 2163.81 2569.12 5402.01 2431.90 2784.16 3033.93 f 1186.48 Par ailleurs, la quantité de terbinafine HC1 dans l'ongle (ng/mg) est illustrée à la figure 9. Il apparaît que : • Avec ou sans amphotère, la quantité de terbinafine HC1 retrouvée dans l'ongle est plus importante dans la couche dorsale que dans la couche intermédiaire. • La présence de l'amphotère permet de réduire l'effet réservoir de la molécule dans la couche dorsale en diminuant la quantité de terbinafine HC1 stockée dans cette couche. • En revanche, l'effet de l'amphotère est peu marqué sur la couche intermédiaire en raison d'un temps d'application court, seulement 5 jours et d'une forte concentration 10% (m/m) en terbinafine HC1. Afin de confirmer le résultat selon lequel l'amphotère permet de favoriser la diffusion de la terbinafine HC1 à travers l'ongle, aussi bien à travers la couche dorsale que à travers la couche intermédiaire, cette même étude de diffusion a été réalisée avec la formule commerciale Lamisil Spray 1% avec et sans amphotère. Les modalités de l'étude ainsi que les quantités de terbinafine HC1 dans les différentes couches de l'ongle, dorsale et intermédiaire, ont été réalisées et analysées selon le même protocole que précédemment. Les quantités de terbinafine HC1 dans l'ongle (ng/mg) sont données dans le tableau ci-dessous : Temps Lamisil Spray 1 % avec amphotère Moyenne (j) Couche intermédiaire (ng/mg) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 1 2 3 4 5 6 5 149.83 153.47 247.22 231.39 165.44 95.69 156.33 Lamisil Spray 1 % avec amphotère Moyenne Couche dorsale (ng/mg) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 1 2 3 4 5 6 5 184.04 256.60 157.75 196.22 283.56 596.00 2 16222 Lamisil Spray 1 % Moyenne Couche intermédiaire (ng/mg) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 1 2 3 4 5 6 615.72 475.81 541.52 884.45 351.10 407.24 549058 Lamisil Spray 1 % Moyenne Couche dorsale (ng/mg) Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule Cellule 1 2 3 4 5 6 5 502.52 498.12 1022.72 969.48 438.16 419.40 627693 La quantité de terbinafine HC1 dans l'ongle (ng/mg) est illustrée à la figure 10. Il apparaît que : 5 • Comme pour la solution amphotère, la quantité de terbinafine HC1 est plus importante dans la couche dorsale quand dans la couche intermédiaire. • La présence de l'amphotère permet de diminuer de manière très importante (par un facteur 3) la quantité de terbinafine HC1 aussi bien dans la couche dorsale que dans la couche intermédiaire. Du fait d'une quantité moins importante de Terbinafine HC1 dans la composition, l'effet de l'amphotère sur la diminution du stockage de l'actif dans les deux couches est plus marqué. CONCLUSIONS En conclusion, les différents résultats montrent donc que : 20 - Les compositions doivent avoir des spécifications particulières en termes de teneur de solvant volatile (à l'exception de l'eau) et de viscosité afin de permettre à la formulation d'une part de pénétrer dans les trous sans les obstruer et d'autre part de permettre à la terbinafine HC1 de diffuser dans la couche intermédiaire. 25 - L'ongle en fonction de la nature des couches, dorsale, intermédiaire et ventrale présente des propriétés de surface différentes se traduisant par une tension de surface différente. En effet, la couche dorsale est nettement moins mouillable que les couches intermédiaire et ventrale.15 - Les études de diffusion comparative de la terbinafine HC1 à travers la couche dorsale et la couche intermédiaire ont montré que la couche intermédiaire facilite la diffusion de l'actif. Ce résultat peut être corrélé à une mouillabilité plus importante de la couche intermédiaire par rapport à la couche dorsale. - La présence de l'amphotère facilite la diffusion de la terbinafine HC1 à travers la couche dorsale et la couche intermédiaire. - La présence de l'amphotère diminue le stockage de la terbinafine HC1 dans la couche dorsale et la couche intermédiaire, ce qui facilite sa diffusion. Ainsi, la réalisation de trous à travers la tablette de l'ongle donne accès à la couche intermédiaire, laquelle est plus favorable à la diffusion de la terbinafine HC1 que la couche dorsale. De part la présence de l'amphotère dans la composition, la terbinafine HC1 diffuse d'autant mieux dans la couche intermédiaire, d'un facteur 3 par rapport à la couche dorsale. La terbinafine HC1 diffuse mieux à travers l'ongle percé lorsque la composition contient de l'amphotère La présence de trous permet donc : - d'un part d'atteindre le lit de l'ongle directement sans traverser la tablette de l'ongle, - d'autre part d'atteindre le lit de l'ongle via la couche intermédiaire avec des quantités plus importantes. L'effet combiné de ces deux aspects permet d'obtenir des concentrations efficaces plus importantes de terbinafine HC1 au niveau du lit de l'ongle.30 REVENDICATIONS1. Composition pharmaceutique destinée à être appliquée sur un ongle perforé comprenant : - un agent antifongique se présentant sous la forme d'un sel d'acide, avantageusement un chlorhydrate ; et - un système solvant ; ladite composition présentant une viscosité inférieure à 500 cPs, 10 avantageusement comprise entre 300 cPs et 150 cPs, et ladite viscosité étant mesurée selon la méthode Brookfield à 25°C. 2. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que le système solvant présente une teneur en solvant(s) volatil(s), à l'exception de l'eau, inférieure ou 15 égale à 40% en poids de la composition totale. 3. Composition selon les revendications 1 ou 2 caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un tensioactif cationique, avantageusement un tensioactif amphotère chargé positivement. 4. Composition selon la revendication 3 caractérisée en ce que le tensioactif amphotère est un dérivé de bétaïne répondant à la formule générale (I) suivante : CH 1+3 RùN \/O CH3 O (1) 25 dans laquelle R représente un radical alkyle ou un radical R'CO-NH(CH2)3-, R' représentant un radical alkyle. 5. Composition selon la revendication 3 ou 4 caractérisée en ce que le tensioactif amphotère est la cocobétaine. 6. Composition selon l'une des revendications 3 à 5 caractérisée en ce que le tensioactif représente de 0,1 à 20% en poids de la composition, avantageusement de 0,1 à 15%, encore plus avantageusement de 0,1 à 10%. 20 30 7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6 caractérisée en ce que l'agent antifongique est de la classe des allylamines ou des morpholines, avantageusement de la terbinafine ou son chlorhydrate. 8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7 caractérisée en ce que l'agent antifongique représente au moins 5% ; avantageusement au moins 8%, encore plus avantageusement au moins 10% en poids de la composition totale. 9. Composition selon l'une des revendications 1 à 8 caractérisée en ce que le système solvant est un système aqueux constitué de : - l'eau ; - au moins un alcanol en C2-C8 à chaîne droite ou ramifiée, avantageusement de l' éthano l ; - au moins un glycol, avantageusement du propylène glycol. 10. Composition selon l'une des revendications 1 à 9 caractérisée en ce que ladite composition comprend en outre un agent de texture, avantageusement un alkyle cellulose, et encore plus avantageusement à une teneur de 0,3 à 0,5%.. 11. Composition selon l'une des revendications 1 à 10 caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un composé choisi dans la liste suivante : agent chélatant, agent anti-oxydant, agent antiseptique, émollient. 12. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 11 pour la préparation d'un médicament destiné à être appliqué sur l'ongle perforé pour le traitement des onychomycoses. 13. Utilisation selon la revendication 12 caractérisée en ce que l'ongle présente des trous de diamètre compris entre 400 µm et lmm, avantageusement compris entre 400 µm et 600 µm . 14. Utilisation selon l'une des revendications 12 ou 13 caractérisée en ce que l'ongle présente des trous dont la profondeur représente de 10 à 100% de l'épaisseur de l'ongle , typiquement d'une profondeur comprise entre 0,2 mm et 5 mm.