Brevet FR2952538A1 — publié le 20110520

Composition cosmétique comprenant un extrait de Cochlearia officinalis. La présente invention concerne une composition cosmétique comprenant un extrait de Cochlearia officinalis. La présente invention concerne également l'utilisation de cette composition pour retarder ou pour lutter contre le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau. La présente invention concerne aussi l'utilisation de cette composition pour protéger l'activité protéasomique cellulaire. Les protéines de l'organisme sont constamment synthétisées et dégradées dans tous les types de cellules en particulier celles de la peau. Ceci a pour but d'éviter les risques d'accumulation de protéines défectueuses qui perturberaient gravement le fonctionnement cellulaire. Ces protéines défectueuses résultent de la modification d'un ou plusieurs acide(s) aminé(s) au cours de la biosynthèse protéique ou de dommages subits pendant leur fonctionnement au sein de la cellule (exemple : le stress oxydatif). Un des phénomènes remarquables observés au cours du vieillissement est l'accumulation de protéines oxydées par des radicaux libres. Le fonctionnement normal de la cellule implique une élimination régulière de ces molécules altérées par oxydation. Au premier rang des systèmes enzymatiques en charge de «l'assainissement» cellulaire figure le protéasome, complexe macromoléculaire constitué d'un complexe catalytique, le protéasome 20S, et de plusieurs composants régulateurs qui influent sur son activité et sa spécificité. Il réunit un grand nombre d'activités de dégradation de protéines endommagées ou bien porteuses d "autres signaux de 2 dégradation. En particulier, le protéasome joue un rôle majeur dans la dégradation des protéines impliquées dans le cycle cellulaire, la prolifération, l'apoptose, le contrôle de la transcription, la transduction du signal et la régulation du métabolisme. Le ralentissement du renouvellement des protéines avec l'âge et l'accumulation des protéines endommagées par oxydation ou autres voies apparentées suggèrent une baisse d'efficacité de la dégradation des protéines par le protéasome. Bertrand Friguet et ses collaborateurs, travaillant sur du protéasome purifié à partir de foies de rats jeunes et de rats âgés, ont montré qu "une des activités de ce complexe multienzymatique diminuait d'environ 50% chez les animaux les plus vieux. Cette baisse d'efficacité est accentuée par l'oxydation (Friguet B et al.., Protein degradation by the proteasome and its implication in aging, Ann.Rev. N.Y. Acad. Sci. , 2000, 908, p. 143). L'équipe de Friguet a montré que cette baisse d'activité du protéasome était associée à une diminution de son expression dans les fibroblastes et kératinocytes humains ainsi que dans les cardiomyocytes de rat. L'étude à grande échelle des variations de l'expression des gènes lors du vieillissement dans des cellules mitotiques (fibroblastes de derme humain) et post-mitotiques (muscle squelettique de souris) a révélé qu'une soixantaine de gènes (c'est-à-dire moins de 1 des 6347 gènes analysés) voyaient leur expression modifiée. Dans les deux situations, la transcription de plusieurs sous-unités du protéasome se trouvait affectée (Vijg J.,Somatic mutations and aging: a re-evaluation, Mut. Res., 2000, 447, p. 117) ( Ly D.H., Mitoticmisregulation and human aging, Science, 2000, 287, p. 2486). L'activité du protéasome pourrait être également diminuée du fait de la formation de protéines modifiées 3 (réticulées suite à des réactions d'oxydation ou des réactions de couplage covalent avec des produits de peroxydation lipidique comme le 4-hydroxy-2-nonenal) qui agissent comme inhibiteurs endogènes. En effet, il a été observé que certaines activités protéolytiques du protéasome, qui étaient très diminuées dans les extraits cellulaires, étaient partiellement restaurées lors de la purification du protéasome à partir de coeur de rat âgé, suggérant une élimination d'agents inhibiteurs lors des étapes de purification (Bulteau A.L., Szweda L.I.,Friguet B., Age-dependent declines in proteasome activity in the heart, Arch. Biochem. Biophys., 2002, 397, p. 298). Dans le cadre de la formation de protéines modifiées, Friguet et al. ont pu récemment montrer que les protéines glyquées étaient très faiblement dégradées par le protéasome (Bulteau A.L.,Friguet B, Proteasome inhibition in glyoxal treated fibroblats and resistance of glucose-6-phosphate deshydrogenase to 20S proteasome degradation in vitro, Journal of Biological Chemistry, vol 276, N° 49, pp 45662-45668, 2001). Egalement, une inhibition du protéasome dans des fibroblastes a été observée suite à l'introduction dans la cellule de lipofuscine artificielle (ou pigment céroide) suggérant une implication directe de ces protéines réticulées dans l'altération fonctionnelle du protéasome (Sitte N., Huber T., Grune T., Ladhoff A., Doecke W.D., Von Zglinicki T.,Proteasome inhibition by lipofuscin/ceroid during post-mitotic aging of fibroblasts, FASEB J., 2000, 14, p. 1490). Ainsi, selon le type cellulaire ou tissulaire, la diminution de l'activité du protéasome avec l'âge pourrait provenir de trois actions combinées : la diminution de son expression, l'existence de modifications structurales des sous-unités du protéasome, la présence dans les cellules sénescentes de protéines endommagées inhibitrices du protéasome. Dans toutes les cellules de l'organisme vivant on observe un phénomène de vieillissement intrinsèque du au fonctionnement cellulaire. On peut également observer un phénomène de vieillissement extrinsèque du aux facteurs environnementaux, tels que l'air (02), le soleil, les rayons UV, la pollution etc. Un des principaux effets des facteurs de vieillissement extrinsèque sur la cellule est une oxydation des composants de la cellule. On sait qu'une action antioxydante permet de retarder et/ou prévenir le vieillissement des cellules et en particulier du protéasome. La demanderesse a mis en évidence de manière surprenante qu'une composition comprenant un extrait de Cochlearia officinalis protège l'activité protéasomique cellulaire acteur majeur de la lutte anti vieillissement, contre les facteurs extrinsèques du vieillissement, notamment contre l'oxydation et en particulier l'oxydation provoquée par les radicaux libres, les rayons UV et/ou la pollution. On peut donc utiliser un extrait de Cochlearia officinalis comme agent actif anti âge. On peut également utiliser un extrait de Cochlearia officinalis comme agent actif protecteur du protéasome. Selon un aspect, la composition de la présente invention est fournie pour son utilisation cosmétique ou dermatologique pour inhiber et/ou prévenir et/ou retarder la dégradation du protéasome due à l'oxydation. Cette composition est également fournie pour son utilisation cosmétique ou dermatologique pour inhiber et/ou prévenir et/ou retarder la dégradation du protéasome due aux radicaux libres, notamment due aux UV et/ou à la pollution. En outre, la composition selon la présente invention est fournie pour son utilisation cosmétique ou dermatologique pour stimuler et/ou favoriser et/ou restaurer l'expression du protéasome dans les cellules. Selon un autre aspect de la présente invention, est fourni un procédé de traitement cosmétique de la peau pour prévenir, pour retarder ou pour lutter contre les atteintes cutanées liées à l'âge et/ou l'apparition des signes de vieillissement et/ou pour inhiber et/ou prévenir et/ou retarder la dégradation du protéasome, caractérisé par le fait qu'on applique sur la peau une composition selon la présente invention. La Cochlearia officinalis est une plante bisannuelle ou vivace. C'est une plante halophyte, adaptée aux milieux salés. On la retrouvait autrefois surtout au bord de la mer, sur les rochers, sur les côtes de la Manche et de 1"Océan Atlantique. Elle colonise de plus en plus le bord des routes où 1" on répand du sel de déglaçage en hiver. ""La composition cosmétique et/ou dermatologique, objet de la présente invention contient un extrait de Cochlearia officinalis. Il s'agit préférentiellement d'un extrait des parties aériennes (tiges, feuilles et fleurs) de Cochlearia officinalis. De façon avantageuse, cet extrait est un extrait hydro-glycériné et de préférence il est stabilisé par de la glycérine, il s'agit alors d'un extrait hydro-glycériné. De préférence il s'agit d'un extrait hydroglycériné obtenu selon un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - Macération dans de l'eau des parties aériennes de Cochlearia officinalis. - Centrifugation - Filtration - Concentration - Stérilisation - Séchage, de préférence par zéodratation - Ajout de glycérine L'extrait hydro-glycériné de Cochlearia officinalis utilisé dans la composition selon l'invention, est un liquide visqueux marron orangé à marron foncé. Il présente les caractéristiques analytiques suivantes : pH : 4.5 à 6.5 Densité à 20°C : 1.24 à 1.29 Indice de réfraction à 20°C : 1.464 à 1.484 Rapport plante / extrait : 1.5/1 Polyphénols totaux : 0.06 à 0.2% De préférence la composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention comprend de 0,01 à 10 % d'extrait de Cochlearia officinalis en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. Avantageusement, la composition comprend de 0,01 à 5 % d'extrait de Cochlearia officinalis en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. Les compositions selon l'invention peuvent encore comprendre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs d'usage connu et classique dans les compositions cosmétiques et dermatologiques tels que, à titre d'exemples et de façon non limitative, des adoucissants, des colorants, des actifs filmogènes, des tensioactifs, des parfums, des conservateurs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, des vitamines, des filtres UV, etc... Grâce à ses connaissances en matière de 7 cosmétique, l'homme du métier saura quels agents de formulation ajouter aux compositions de l'invention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans le domaine de la cosmétologie et de la dermatologie sans autre restriction galénique que l'application sur le visage et sur le corps. De façon avantageuse, les compositions selon l'invention se présentent sous la forme d'un gel, d'une crème, d'une lotion, d'une huile, d'un lait, d'un spray, etc... La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention peut être utilisée pour prévenir, pour retarder ou pour lutter contre le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau. On entend par signes de vieillissement de la peau : les rides, les ridules, le relâchement cutané, la perte d'élasticité des fibres cutanées, une peau flétrie, une peau amincie, et une peau terne et/ou sans éclat. La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention peut être également utilisée pour protéger l'activité protéasomique cellulaire. Les exemples ci-après concernent, d'une part l'évaluation de l'effet d'un extrait de Cochlearia officinalis sur la protection de l'activité protéasomique cellulaire, et d'autre part des compositions objets de la présente invention. Les exemples font référence aux figures suivantes dans lesquelles : - La figure 1 représente la gamme étalon en AMC 4-methylcoumarinyl-7-amide) établie à partir d'une solution stock d'AMC 125pM. Elle a été établie pour convertir l'unité de fluorescence (RFU) émise en pmol des fluorophores utilisés. - La figure 2 montre l'AMC libéré dans les différentes conditions de traitement (doses d'extrait de Cochlearia officinalis utilisées : 0.01, 0.05 et 0.1%). L' AMC libéré reflète l'activité enzymatique du protéasome qui clive le fluorophore (AMC) du peptide qui lui est associé. La fluorescence émise par l'AMC libéré est convertie en }mol de fluorophore utilisées grâce à la courbe étalon. I.EVALUATION DE L'ACTIVITE PROTEASOMIQUE Les essais décrits ci-dessous ont pour but de tester l'effet d'un extrait de Cochlearia officinalis sur l'évolution de l'activité protéasomique dans des fibroblastes de derme humain présentant une sénescence cellulaire induite. On utilise un extrait de Cochlearia officinalis commercialisé par la société Alban Muller sous la dénomination PHYTAMI COCHLEAIRE PAF. A.MATERIEL ET METHODE Le fibroblaste de derme humain ayant subi des dommages oxydatifs non négligeables in vitro par le peroxyde d'hydrogène (H202) (sénescence cellulaire induite) constitue notre modèle expérimental pour démontrer l'efficacité d'un agent cosmétique vis-à-vis de l'activité protéasomique. 1) Culture de fibroblastes Des fibroblastes humains normaux adultes ont été cultivés à 37 °C et 5% de CO2 en boite de Pétri diamètre 60 à raison de 106 cellules par boite. Le milieu d'incubation est le milieu MEM (Minimum Essential Medium) complété avec 10% de sérum de veau foetal et la pénicilline/streptomycine (50 pg/ml). Les fibroblastes ont été incubés pendant 48 heures dans le milieu décrit ci-dessus. Ce milieu est remplacé pour une incubation de 72 heures (37°C, 5% CO2) par le même milieu sans sérum (milieu conditionné) avec ou sans le produit à tester après rinçage des tapis cellulaires au PBS (Phosphate Buffer Saline). Le 9 milieu conditionné est ensuite aspiré et les tapis cellulaires sont rincés. Le milieu MEM 10% de sérum de veau foetal contenant 150 pM ou 300 pM de H2O2 est ajouté. Une boite de Pétri ne contenant que le MEM 10% de sérum constitue le témoin négatif. Après 2 heures d'incubation, les cellules sont rincées pour éliminer toute trace de H2O2 résiduel. Les boites de Pétri sont ensuite incubées pendant 72 heures dans du milieu MEM 10% de sérum. 2) Extraction cellulaire Au terme des 72h d'incubation, les cellules sont observées macroscopiquement. Le surnageant est éliminé par aspiration et l'on dépose 5 ml de PBS froid dans chacune des boites de Pétri. Au moment de l'extraction, le PBS est aspiré et l'on dépose 300pl de tampon RIPA froid. A l'aide d'un grattoir, le tapis cellulaire de chaque boite de Pétri est détaché. L'homogénat cellulaire de chaque boite est transféré dans un tube Eppendorf. Les tubes Eppendorf sont ensuite placés sur un vortex sous agitation légère pendant 20 minutes à 4°C puis centrifugés à 12000 rpm pendant 10 minutes à 4°C. Le surnageant est récupéré pour doser la quantité de protéines totales. 20 à 30 pg de protéines totales seront nécessaires pour doser l'activité du protéasome. 3) Mesure de l'activité du protéasome Le protéasome comporte trois activités enzymatiques (trypsin-like TL, peptidylglutamyl peptide hydrolyzing PGPH et chymotrypsin-like CT-L) qu'il est possible de mesurer individuellement à l'aide du 4-methylcoumarinyl-7- 10 amide (AMC), un fluorophore lié au substrat spécifique de chaque activité enzymatique. L'analyse est basée sur la détection de l'AMC libre après l'hydrolyse du substrat-AMC par le protéasome. Dans cette étude, la mesure de l'activité du protéasome est effectuée en utilisant un peptide fluorogènique Succinyl-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC pour l'activité CT-L (Proteasome activity assay, Chemicon). Après 2 h d'incubation à 45°C, la fluorescence est mesurée avec un lecteur de plaque à fluorescence (Fluostar, BMG). Les longueurs d'onde d'excitation et d'émission de l'AMC sont respectivement 380 nm et 460 nm. La fluorescence mesurée traduit la libération du fluorochrome (AMC) suite au clivage du substrat par l'enzyme du protéasome. B. RESULTATS La fluorescence en RFU (Relative Fluorescent Unit) émise par la libération de l'AMC a été mesurée par le lecteur de microplaque à des longueurs d'ondes d'excitation /émission de 380 nm/460 nm, respectivement. Pour convertir l'unité de fluorescence (RFU) émise en }mol de fluorophore utilisés, une gamme étalon a été établie (figure 1). Les résultats (figure 2) montrent que la baisse de l'activité protéasomique suite au stress oxydatif généré par le peroxyde d'hydrogène dans le milieu de culture est stoppée en présence de l'extrait de Cochlearia officinalis. L'actif utilisé à 0,05% rétablit le taux d'activité protéasomique au niveau de celui du témoin non traité à l'H2O2 (contrôle négatif). Il l'augmente en plus de manière assez sensible lorsque l'extrait de Cochlearia officinalis est utilisé à 0,1%. Les dommages aux composants cellulaires infligés par les espèces réactives de l'oxygène représentent un facteur important dans le processus de vieillissement. En effet, une 11 caractéristique du vieillissement cellulaire est l'accumulation de protéines oxydées (augmentation des dommages aux protéines, diminution de l'efficacité des systèmes d'élimination des protéines endommagées). Le protéasome constitue le système protéolytique intracellulaire majeur impliqué dans la dégradation des protéines oxydées et dans le renouvellement continu des protéines. Le ralentissement du renouvellement des protéines avec l'âge et l'accumulation des protéines endommagées par oxydation ou autres voies apparentées suggère une baisse d'efficacité de la dégradation des protéines par le protéasome. En ce sens, le protéasome constitue une nouvelle cible de traitement cosmétique et l'extrait de Cochlearia officinalis assure le bon fonctionnement de ce système protéolytique majeur. II.EXEMPLES DE FORMULATION L'application des produits selon les formulations décrites ci-dessous sur les zones cutanées concernées peut être répétée avec une fréquence et pour une durée que l'Homme du métier sait adapter en fonction de l'individu et du traitement dermatologique ou cosmétique associé. Quel que soit l'objectif, on peut proposer une application quotidienne, d'une à trois fois par jour, pour une durée de quelques jours à plusieurs mois. Les pourcentages sont des pourcentages en poids par rapport au poids total de la composition. On utilise un extrait de Cochlearia officinalis commercialisé par la société Alban Muller sous la dénomination PHYTAMI COCHLEAIRE PAF. EMULSION H/E o ô TRYGLYCERIDE C8C10 10,00 CETEARYL OCTANOATE 10,00 CETEARYL GLUCOSIDE 4,50 BEURRE DE KARITE 3,00 MONOSTEARATE DE GLYCEROL AE 2,50 TRYGLYCERIDE C10C18 2,50 HUILE DE VASELINE FLUIDE 5,00 GLYCERINE 5,00 EXTRAIT DE COCHLEARIA OFFICINALIS 1,00 ACETATE DE TOCOPHEROL 0,20 CHELATANT 0,20 PARFUM 0,60 CONSERVATEUR Q.S. COLORANT Q.S. EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 EMULSION E/H PEG 30 DIPOLYHYDROXYSTEARATE 4,00 TRIGLYCERIDES C16-C18 HYDROGENES 5,00 PEG-45 / DODECYL GLYCOL COPOLYMER 1,20 HUILE DE VASELINE FLUIDE 8,00 TRYGLYCERIDE C8C10 19,00 GLYCOLS 10,00 EXTRAIT DE COCHLEARIA OFFICINALIS .. 1,00 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 GEL o o CARBOXYMETHYLCELLULOSE 0,03 CARBOMER 0,60 SOUDE 0,17 GLYCOLS 5,00 EXTRAIT COCHLEARIA OFFICINALIS 1,00 ACETATE DE TOCOPHEROL 0,05 HUILE DE RICIN HYDROGENEE PEG-40 1,35 CHELATANT 0,03 CONSERVATEURS 0,50 COLORANT 0,017 PARFUM 0,30 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 LOTION GLYCOL 2,00 CHLORURE DE SODIUM 1,00 ETHANOL 5,00 EXTRAIT DE COCHLEARIA OFFICINALIS 1,00 TROMETHAMINE 0,80 CONSERVATEURS 0,50 SOLUBILISANT 0,30 PARFUM 0,10 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 REVENDICATIONS1)Composition cosmétique et/ou dermatologique comprenant un extrait de Cochlearia officinalis. 2)Composition selon la revendication 1, dans laquelle l'extrait de Cochlearia officinalis est un extrait des parties aériennes de la plante. 3)Composition selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l'extrait de Cochlearia officinalis est un extrait hydrosoluble. 4)Composition selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l'extrait de Cochlearia officinalis est un extrait hydro-glycériné. 5)Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant de 0,01 à 10 % d'extrait de Cochlearia officinalis en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,01 à 5 % d'extrait de Cochlearia officinalis en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. 6)Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant en outre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs tels que des adoucissants, des colorants, des agents filmogènes, des tensio-actifs, des parfums, des conservateurs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, filtres UV, et des vitamines. 1415 7)Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes pour son utilisation pour retarder ou pour lutter contre le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau. 8)Composition selon la revendication 7, dans laquelle les signes de vieillissement de la peau sont sélectionnés parmi les rides, les ridules, le relâchement cutané, la perte d'élasticité des fibres cutanées, une peau flétrie, une peau amincie, et une peau terne et/ou sans éclat. 9)Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes pour son utilisation cosmétique ou dermatologique pour inhiber et/ou prévenir et/ou retarder la dégradation du protéasome. 10)Composition selon la revendication 9 pour son utilisation cosmétique ou dermatologique pour inhiber et/ou prévenir et/ou retarder la dégradation du protéasome due à l'oxydation. 11)Composition selon l'une des revendications 9 et 10 pour son utilisation cosmétique ou dermatologique pour inhiber et/ou prévenir et/ou retarder la dégradation du protéasome due aux radicaux libres, notamment due aux UV et/ou à la pollution. 12)Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes pour son utilisation cosmétique ou dermatologique pour stimuler et/ou favoriser et/ou restaurer l'expression du protéasome dans les cellules. 13)Procédé de traitement cosmétique de la peau pour prévenir, pour retarder ou pour lutter contre les atteintes cutanées liées à l'âge et/ou l'apparition des signes de vieillissement et/ou pour inhiber et/ou prévenir et/ou retarder la dégradation du protéasome, caractérisé par le fait qu'on applique sur la peau une composition telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 12.