Brevet FR2953138A1 — publié le 20110603

Composés aminostéroïdiens pour une application topique locale pour la décolonisation cutanéo-muqueuse de Staphylococcus aureus La présente invention concerne l'utilisation de la squalamine et de ses dérivés aminostéroïdiens antibactériens de type polyamino cholestane ou cholestène pour une application par voie topique locale pour la décolonisation cutanéo-muqueuse de Staphylococcus aureus, notamment sous forme de pommade ou de crème. Les infections à staphylocoques dorés sont souvent transmises par des porteurs chroniques asymptomatiques. Ces porteurs chroniques ont des réservoirs cutanés ou muqueux, en particulier la muqueuse nasale. La décontamination de la muqueuse nasale est devenue un préalable de plus en plus commun et important dans les hospitalisations car la colonisation du nez par les staphylocoques dorés est associée à un risque accru d'augmentation des infections hospitalières, en particulier vasculaires et ostéoarticulaires, notamment en cas d'opération chirurgicale sur le patient porteur de cette colonisation nasale qui peut s'auto-infecter par contamination per opératoire. Plusieurs types de produits ont été utilisés dans le passé pour tenter d'éradiquer les staphylocoques présents dans les narines. Des produits contenant de la rifampicine puis de la fucidine ont été utilisés mais très rapidement les staphylocoques sont devenus résistants à ces antibiotiques pour lesquels des mutants sont facilement sélectionnés. Depuis une vingtaine d'années, le produit le plus utilisé est une pommade à la mupirocine, qui est un produit à activité antibiotique, qui n'est utilisée dans aucune autre indication. Le fait que ce produit ne soit pas utilisé dans d'autres indications ménage l'écologie de la résistance des staphylocoques pour les infections générales par voie systémique (sanguine). L'augmentation de la résistance à la mupirocine ne risquait pas d'avoir des conséquences sur la prise en charge thérapeutique des infections systémiques à staphylocoque doré avec d'autres antibiotiques. Par ailleurs, l'absence de prescription de mupirocine dans d'autres circonstances que l'éradication des staphylocoques dans les fosses nasales a évité une prescription massive de ce produit et a donc retardé l'apparition de mutants résistants. Malheureusement, apparaissent maintenant des mutants résistants à la mupirocine qui risquent de s'étendre extrêmement rapidement du fait d'une part de la capacité de transfert latéral de cette résistance entre les souches et d'autre part de l'usage intensif de la mupirocine actuellement pour la prévention des infections staphylococciques. Récemment, l'utilisation de lysostaphine s'est avérée très efficace (comparativement à la mupirocine) pour la décolonisation nasale mais elle présente également une limitation d'emploi puisque des souches résistantes sont apparues. En 1993, la squalamine (Formule Ia), un stéroïde naturel, isolée majoritairement des tissus d'un petit requin Squalus acanthias, s'est révélée être une substance très active présentant essentiellement une activité antiangiogénique contre les cellules et une activité anti virale et antibactérienne. NH2 OSO3H • H Formule la Chimiquement, la squalamine la est une molécule originale présentant un caractère amphiphile. Elle comporte ainsi, une partie centrale apolaire (un squelette de type cholestane) et deux extrémités polaires (une chaîne polyamine et un groupement sulfate). Initialement, ce polyaminostérol hydrosoluble avait suscité l'intérêt pour ses propriétés antiangiogéniques et antimicrobiennes sur une variété de bactéries à Gram positif (Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis) et à Gram négatif (Escherichia coli, Pseudomonas NH ''OH aeruginosa), des champignons (Candia albicans, Candida tropicalis) et des protozoaires. La source naturelle de la squalamine étant limitée, on a recherché des dérivés synthétiques analogues aminostéroïdiens de la squalamine. On a décrit notamment des dérivés ou analogues comportant une chaine polyaminée en position 3 ou 7 de cycles 10, 13 diméthyl, 17 octane cholestane ou cholestène, éventuellement hydroxylés en position 7 ou respectivement 3. En particulier, des dérivés de formule IIa û IIb û IIc - IId et II-1 ci- après on été décrits comme présentant une activité antibactérienne similaire à la squalamine vis-à-vis de diverses bactéries Gram positivf et Gram négatif multirésistantes (références 6 et 9 à 14). Toutefois les Concentrations Minimales Inhibitrices (CMI) de la squalamine et de ces composés aminostéroïdiens contre ces microorganismes sont trop élevées pour pouvoir envisager une utilisation par voie générale sans toxicité. Dans ces différentes publications (références 9 à 14), on n'avait pas élucidé le mécanisme d'action de l'activité antibactérienne in vitro de la squalamine et ses dérivés synthétiques analogues aminostéroïdiens et, surtout, on n'avait pas observé que ces dérivés n'induisaient pas in vitro de résistance de la bactérie Staphylococcus aureus. Le but de la présente invention est de fournir des molécules anti Staphylococcus aureus non utilisées par voie générale ou systémique, n'induisant pas de résistance de la bactérie Staphylococcus aureus et aptes à être appliquées par voie topique pour une action locale de décolonisation cutanéo-muqueuse de la bactérie Staphylococcus aureus. Pour ce faire la présente invention fournit un composé choisi parmi la squalamine ou un composé aminostéroïdien analogue de la squalamine pour une application par voie topique locale pour la décolonisation cutanéo-muqueuse de Staphylococcus aureus, ledit composé aminostéroidien analogue de la squalamine répondant à une formule générale comprenant un squelette de formule (I) ci-après sur lequel est greffée au moins 1 chaine polyaminée ùNHR, de préférence 1 ou 2 chaînes ùNHR, R étant une chaine hydrocarbonée éventuellement substituée comportant au moins un groupe ùNH2 : dans laquelle : - soit toutes les liaisons doublées de traits en pointillés entre les carbones des positions 7-8, 5-6, 4-5, et 3-4 représentent une simple liaison, le squelette étant celui d'un 10, 13, 17 triméthyl cholestane, 10 - soit l'une des liaisons doublées de traits en pointillés entre les carbones des positions 7-8, 5-6, 4-5, et 3-4 représente une double liaison et les autres liaisons doublées de traits en pointillés sont des simples liaisons, le squelette étant celui d'un 10, 13, 17 triméthyl cholestène. 15 La présente invention a donc aussi pour objet l'utilisation d'un dit composé pour la préparation d'un médicament destiné à une dite application topique locale pour la décolonisation cutanéo-muqueuse de Staphylococcus aureus. De préférence, l'utilisation selon l'invention concerne une 20 application sur la muqueuse nasale. Ces composés analogues de la squalamine présentent une activité antibactérienne in vitro avec notamment une CMI sur Staphylococcus aureus inférieure à 50 pg/ml, de préférence inférieure à 15 pg/ml. 165 On entend ici par "décolonisation" cutanéo-muqueuse, que l'on réduit une concentration initiale de bactéries Staphylococcus aureus de 106 CFU/ml sur un modèle de colonisation cutanée chez la souris à moins de 103 CFU/ml, de préférence moins de 102 CFU/ml au bout de 48 heures après application d'une pommade contenant les composés selon l'invention 2 fois par jour matin et soir pendant pas plus de 5 jours. En pratique, les composés selon l'invention présentent une activité bactéricide in vitro sur Staphylococcus aureus, c'est-à-dire qu'on est capable de réduire d'au moins 99.9% un inoculum bactérien initial de 106 CFU/ml incubé pendant 24 heures aux concentrations utilisées (Référence 15 : Daniel Amsterdam. Susceptibility testing of antimicrobials in liquid media. In Antibiotics in Laboratory Medicine. 5t" Edition. Editor Victor Lorian. Lippincott Williams and Wilkins 2005. Philadelphia, USA), et la concentration de bactéries est réduite à moins de 102 CFU/ml au bout de 48 heures après une seule application de pommade au temps t=0. En pratique, les composés selon l'invention les plus actifs, de formules IIa, IIb, II-1, IIIa, IIIb, III-1 ci-après, présentent des CMI sur Staphylococcus aureus inférieures à 5 pg/ml. Selon la présente invention, on a découvert et démontré que la squalamine et ses dérivés synthétiques analogues aminostéroïdiens n'induisent pas de résistance pour la bactérie Staphylococcus aureus. Cette propriété est corroborée par le fait, également observé et démontré selon la présente invention, que l'activité bactéricide de la squalamine et ses dérivés synthétiques analogues aminostéroïdiens sur Staphylococcus aureus relève d'un mécanisme d'action physicochimique de type détergent faisant éclater et détruisant la paroi de la bactérie et que ces composés n'agissent donc pas comme des antibiotiques. On sait, en effet, que les antibiotiques agissent par inhibition d'un processus essentiel à la multiplication bactérienne codé par une cible génomique en bloquant soit la réplication du génome soit en inhibant la synthèse d'un facteur protéique tel qu'une enzyme nécessaire à la survie et/ou croissance de la bactérie, notamment la synthèse de la paroi. Les bactéries peuvent résister à ces mécanismes d'action des antibiotiques par le biais de mutations géniques induisant l'apparition d'une résistance à l'antibiotique en cause. De telles mutations conférant une résistance sont en revanche improbables face au mécanisme d'action bactéricide direct par destruction physico-chimique de la paroi. La résistance de Staphylococcus aureus aux composés aminostéroïdiens a été étudiée par la méthode des passages successifs (Référence 16 : Banerjee R et al. In Vitro Selection and Characterization of Ceftobiprole-Resistant Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother 2008, 52(6) : 2089-2096). La souche de S. aureus (ATCC 25923) a été cultivée en milieu Müller Hinton (MH) en présence d'une gamme de dilutions d'ordre géométrique de base 2 afin d'obtenir des concentrations variant de 0,5 fois la CMI à 4 fois la CMI. La suspension bactérienne est ajoutée dans chaque tube à une densité de 109 UFC/ml. Après incubation de 18 h à 37 °C, le dernier tube à croissance visible (0,5 x CMI) dilué au 1/20 est mis en présence d'une nouvelle série de dilutions géométriques équivalentes à celles du 1er jour pour le même composé. Cette expérience a été répétée 10 fois en triplicata sans jamais réussir à isoler de bactéries résistantes à ces composés. D'autre part, les composés de squalamine et dérivés aminostéroïdiens présentent une nature amphiphile. En effet, chimiquement, ils comportent une partie centrale apolaire (un squelette de type cholestane ou cholestène) et une extrémité polaire (une chaîne polyamine et un groupement hydroxyl). Il en résulte qu'ils sont susceptibles d'être incorporés dans un excipient lipophile, tout en étant capables d'en être libérés progressivement et d'interagir avec la peau et la muqueuse de par leur composante hydrophile, mais cette action restant locale, c'est-à-dire sans absorption du composé dans l'organisme par voie percutanée et évitant ainsi d'induire une toxicité. Enfin, il a été démontré que ces composés présentent une activité in vivo de décolonisation cutanée d'une colonisation à S. aureus en application topique locale sur la souris et ce sans induire de toxicité par lésions cutanées ni mortalité subséquente de la souris. Certains résultats des essais in vitro et in vivo sur la souris sont rapportés dans la description détaillée ci- après. Plus particulièrement, les composés squalamine et dits analogues de squalamine sont utiles pour la décolonisation cutanéo-muqueuse de Staphylococcus aureus transitoire pendant au moins 48 heures, pas plus de 24 heures après seulement une seule application. Plus particulièrement, lesdits composés aminostéroïdiens analogues de squalamine présentent une formule Ib suivante : dans laquelle: - l'un au moins des Ro est une dite chaîne polyaminée ùNRo'R avec R=ù[(CR1R2)nù(XR5)kù(CR3R4)m]pùNR6R7 en au moins une dite position choisie de préférence parmi les positions 3, 7 et 20 avec : •- n et m étant des entiers identiques ou différents de 1 à 20 7, •- p un nombre entier de 1 à 4, • k est 0 ou 1 • X= N ou O, seul N étant substitué par R5 • Rio et R1 à R7 étant identiques ou différents, choisis parmi H, un alkyl, notamment un alkyl en Cl à C8, plus particulièrement en Cl à C3, un aryl, notamment un phényl,un groupe ûCOOalk, alk étant un alkyl en Cl à C8, notamment en Cl à C3, - les autres Ro étant identiques ou différents étant choisis parmi H, OH, NH2, SH, OSO3H, un alkyl en Cl à C8, un aryl et un groupe ûCOOalk, alk étant un alkyl en Cl à C3, - lesdits alkyl ou aryl de Ro, Rio et R1 à R7 étant éventuellement substitués par OH, NH2, SH, ou OSO3H. Plus particulièrement encore, ledit composé aminostéroïdien analogue de squalamine utilisé selon l'invention présente une formule comprenant le squelette de formule I ci-dessus comportant : a) au moins 1 chaine -NHR sur un des carbones en positions 3, 7, et 20, et R représente ù[(CH2)nù(NR1)kù(CH2),]pùNH2 avec : - n et m étant des entiers identiques ou différents de 1 à 7, - k= 0 ou 1, - p étant un nombre entier de 1 à 4, et - R1 étant choisi parmi H, un alkyl en Cl à C3, un phényl éventuellement substitué et un groupeùCOOalk, alk étant un alkyl en Cl à C3, avec de préférence : - lorsque k= 0, alors p=1 ou lorsque k= 1, alors p= 2, et - lorsque ledit composé comprend une seule chaîne ùNHR celle-ci est greffée de préférence en postion 3 ou 7, et 2953138 Nouvelle page 9 b) les carbones aux autres positions dudit squelette comprenant un radical Ro identique ou différent choisi parmi H, OH, NH2, SH, et R1, de préférence Ro étant H ou OH mais avec 1 seul Ro représentant OH. De préférence, ledit composé comprend une seule chaîne ûNHR en 5 position 3 ou 7 et un radical diméthyl-butyl en position 20. Plus particulièrement encore, ledit composé aminostéroïdien répond à une des formules générales suivantes IIa, IIb, IIc, IId et II-1 dans lesquelles R représente ù[(CH2)nù(NR1)kù(CH2)m]pùNHZ, n, m, p, k et R1 ayant les significations données ci-dessus, et, de préférence, R 10 étant choisi parmi ù(CH2)n1ùNH2 avec n1 = 2 à 14, et ù(CH2)3--NH (CH2)3ùNHù(CH2)3-NHZ: Ilb 15 HO NHR RNH RNH~- H IIc et IId, pour lesquels R= ù(CH2)n1ùNH2 avec n1= 2 à 11, ont une CMI sur Staphylococcus aureus inférieure à 15 pg/ml. Ces composés peuvent être préparés par les procédés décrits dans les articles des références 9 à 14, notamment 9 et 13, listés en fin de 10 description, consistant essentiellement à réaliser une réaction d'amination réductrice au titane entre les différentes cétones (cholestenone, cholestanone) et diamines mises en oeuvre. La présente invention fournit aussi de nouveaux composés aminostéroïdiens antibactériens et leur utilisation thérapeutique par 15 application topique locale selon la présente invention, lesdits nouveaux composés présentant une formule Ib ci-dessus comprenant deux dites chaînes polyaminées, dans lesquelles : a) deux des Ro identiques ou différents sont une chaîne polyaminée ùNRo'R avec R= ù[(CR1R2)nù(XR5)kù(CR3R4),n]pùNR6R, 20 respectivement en 2 positions choisies de préférence parmi les positions 3, 7 et 20, et avec : • n et m étant des nombres entiers identiques ou différents de 1 à 7, 25 • p un nombre entier de 1 à 4, • k est 0 ou 1 IId5 • X= N ou O, seul N étant substitué par R5, • Rio et R1 à R7 étant choisis parmi H, un alkyl, notamment un alkyl en Cl à C8, plus particulièrement en Cl à C3, un aryl, notamment un phényl, un groupe ûCOOalk, alk étant un alkyl en Cl à C8, notamment en Cl à C3, b) les autres Ro étant identiques ou différents étant choisis parmi H, OH, NH2, SH, OSO3H, un alkyl en Cl à C8, un aryl éventuellement substitué, et un groupe ûCOOalk, alk étant un alkyl en Cl à C3, et c) lesdits alkyl ou aryl de Ro, Rio et R1 à R7 étant éventuellement 10 substitués par OH, NH2, SH, ou OSO3H. Plus particulièrement, ledit nouveau composé répond à la formule générale constituée par un dit squelette de formule (I) comportant : a) 2 chaines identiques ùNHR sur les carbones en positions 3 et, respectivement, 20, et R représente ù[(CH2)nù(NR1)kù(CH2),]pùNH2 15 avec : - n et m étant des entiers identiques ou différents de 1 à 7, - k= 0 ou 1, - p étant un nombre entier de 1 à 4, - R1 étant choisi parmi H, un alkyl en Cl à C3, un phényl 20 éventuellement substitué et un groupe ùCOOalk, alk étant un alkyl en Cl à C3, avec, de préférence, lorsque k= 0, alors p=1, ou lorsque k= 1, alors p= 2, et b) les carbones aux autres positions du dit squelette de formule 25 (I) comprenant un radical Ro identique ou différent choisi parmi H, NH2, 2953138 Nouvelle page 12 SH, ou R1r de préférence Ro étant H ou OH mais avec 1 seul Ro étant OH. Plus particulièrement, lesdits nouveaux composés répondent aux formules générales IIIa, IIIb et III-1 suivantes, dans lesquelles : 5 - R représente ù[(CH2)nù(NR1)kù(CH2)m]pùNH2, m, n, p, k et R1 ayant les significations données ci-dessus, et, de préférence, R étant choisi parmi ù(CH2)n1ùNH2 avec n1= 2 à 14, et ù(CH2)3ùN Hù(CH2)3ùN Hù(CH2)3ùN H2 RHN NHR RHN NHR H H2N~~N lH-1 Les nouveaux composés selon l'invention ci-dessus peuvent être 15 préparés simplement par amination réductrice au titane entre un produit de départ correspondant au produit final mais avec une fonction carbonyl ou cétone ûCO- en lieu et place de la fonction ûNHRù et une diamine NH2R via la formation transitoire des imines correspondantes réduites in situ par le borohydrure de sodium. Plus particulièrement pour les composés de formules IIIa et IIIb, la synthèse de ces dérivés met en jeu une réaction d'amination réductrice au titane entre la progestérone Iva ou respectivement la progestanone IVb et une diamine via la formation transitoire des 3,20 diimino polyamino cholestanes ou cholestènes avec un radical de formule =NR en positions 3 et 20 -correspondantes réduites ensuite in situ par un borohydrure de sodium. 2 to 4 equiv. Ti(OR)4, 2 to 4 equiv. NHZR solvent, T°C, 4 to 24h 3 equiv. NaBH4, 2h, -78°C RHN 4 equiv. H2O, 1h, 0 to 30°C RHN Différentes sources de titane de type Ti(OR')4 avec R'= Me, Et, Propyl, Isopropyl, butyl sont facilement disponibles commercialement. Différents solvants de réaction CH2Cl2, CHCI3, THF, Ethanol, Isopropanol sont appropriés. Le contrôle de la stéréosélectivité au niveau du carbone portant la chaine aminée se fait en fonction de la nature de l'agent réducteur employé en cours de procédé. Ainsi la réduction réalisée avec le borohydrure de sodium (NaBH4) conduit majoritairement aux dérivés béta tandis que l'emploi de cyanoborohydrure de sodium (NaBH3CN) ou bien d'oxyde de platine/hydrogène conduit à la formation préférentielle des dérivés alpha. Sur ce principe général de synthèse, de nombreux dérivés 313-2013 polyamino-4-cholestenes de formule IIIa et 313-2013 polyamino cholestanes de formule IIIb ont été préparés avec ùNHR choisi parmi HN---'''-''H2 HNNH2 HNNHZ HN NH2 HNWNH2 HN NHZ HNH2 HNN iNH2 H HN N H 2 HN N H 2 HN NH2 La présente invention fournit également une composition pharmaceutique utile pour une utilisation par voie topique locale pour une décolonisation cutanéo-muqueuse de Staphylococcus aureus caractérisée en ce qu'elle comporte, comme composé actif, un dit composé choisi parmi la squalamine et un dit composé aminostéroidien analogue de la squalamine antibactérien selon l'invention incorporé dans un excipient lipophile sous forme de lotion, crème, pommade ou onguent. Selon d'autres caractéristiques particulières préférées de la 15 composition selon l'invention : - la concentration de dit composé squalamine ou un dit composé aminostéroidien analogue de la squalamine est de 0,5 à 2% en poids, - ledit excipient lipophile est choisi parmi la vaseline, lanoline, les esters de glycérol, esters d'acides gras et de macrogols (PEG). Ces 20 excipients lipophiles sont avantageux car ils ne s'absorbent pas par voie per cutanée, - ledit composé squalamine ou composé aminostéroidien analogue de la squalamine antibactérien est sous forme de sel hydrosoluble, de préférence "sous la forme de sel de chlorhydrate, bromhydrate, triflate, 25 phosphate, lactate, ou succinate" Ces deux dernières caractéristiques permettent d'optimiser la valeur de la concentration et donc l'action topique locale desdits composés actifs. D'autres caractéristiques de la présente invention apparaitront à la lumière de la description détaillée suivante faite en référence aux figures 1 à 3 suivantes dans lesquelles - la figure 1 représente une photo du mécanisme de destruction de la paroi bactérienne sur une souche de S. aureus, - la figure 2 représente le graphique de réduction de concentration bactérienne d'une souche de S. aureus au cours du temps t par un traitement par les composés squalamine la (-^-), composé II-1 (-0-) et contrôle (-O-), - la figure 3 représente des photographies du modèle expérimental d'infection à S. aureus chez la souris à J=0 et des colonies à J1 (1 jour après infection) et J2 (2 jours après infection) sur gélose Chapman, - la figure 4 représente le graphique des dénombrements des colonies de S. aureus isolées à partir du modèle expérimental de colonisation cutanée chez la souris après application de pommade avec la squalamine la (-^-) ou sans molécule active (-0-) sur gélose Chapman, en fonction du temps, - la figure 5 représente les photographies des colonies de S. aureus isolées à partir du modèle expérimental de colonisation cutanée chez la souris après application de pommade avec un dérivé aminostéroïdien II-1 (A) ou sans molécule active (B) sur gélose Chapman, obtenues après 1 jour d'application de pommade, Exemple 1: préparation du composé II-1 Dans un ballon bicol mis sous argon, 3 équivalents de butane diamine (0,69 10-3 mol, 61 mg) sont dissous dans 5 ml de MeOH, puis on additionne 87 pl de Ti(Oipr)4 (0,30 10-3 mol). Après 2 minutes d'agitation, on ajoute au mélange 100 mg de 7-cétocholest-5-ene-38-ol (0,23 10-3 mol). Après 24 heures sous agitation, on place le ballon à -78°C, puis 11 mg de NaBH4 (0,23 10-3 mol) sont ajoutés. La phase organique est séchée sur Na2SO4, filtrée puis évaporée sous vide poussé. On purifie le produit par une chromatographie sur gel de silice (éluant : CH2Cl2/MeOH/NH4OH (7/3/1)). 7[3-(1,4-diaminobutane)-cholest-5-ene-3[3-ol II-1: Purification par chromatographie sur gel de silice (silicagel; CH2Cl2/MeOH/NH4OH (32%), 7:3:1). Solide jaune clair (Rdt: 70%); û 1H NMR (300 MHz, CDCI3): b= 5.27-5.64 (m, 1H), 0.63-3.49 (m, 55H); û 13C NMR (75 MHz, CDCI3): b = 141.75, 123.99, 70.80, 60.32, 56.79, 55.72, 55.22, 53.02, 49.46, 48.32, 43.21, 42.07, 39.37, 38.98, 37.28, 36.09, 35.90, 35.67, 35.59, 27.88, 26.11, 24.44, 23.71, 22.70, 22.44, 20.70, 18.96, 18.65, 18.59, 11.96, 11.50. C31H56N201 ; MS (ESI) m/z = 473.5 [M+H]+. Exemple 2 : préparation du composé III-1 Dans un ballon bicol mis sous argon, 140 mg de spermine H2Nù(CH2)3ùNHù(CH2)4ùNHù(CH2)3ùNH2 sont additionnés à 200 pl de Ti(Oipr)4 (0,70 10-3 mol). Après 2 minutes d'agitation, on ajoute au mélange 100 mg de progestérone IVa (0,31 10-3 mol). Après 24 heures sous agitation, on place le ballon à -78°C, puis 37 mg de NaBH4 (0,70 10-3 mol) sont ajoutés. 2 heures plus tard, 2 ml d'eau sont ajoutés pour arrêter la réaction. 5 minutes après, le mélange est filtré sur frité et célite. La phase organique est séchée sur Na2SO4, filtrée puis évaporée sous vide poussé. On purifie le produit par une chromatographie sur gel de silice (éluant : CH2Cl2/MeOH/NH4OH (7/3/1)). Purification par chromatographie (gel de silice ; dichlorométhane, méthanol, ammoniaque, 70/30/10) ; Solide jaune clair (Rdt: 58%)- RMN 1H (300 MHz, CD3OD) : b= 5.30 (s, 1H), 3.30-2.67 (m, 23H), 2.77-1.02 (m, 55H), 0.80-0.66 (m, 6H).- RMN 13C (75 MHz, CD3OD) : b= 148.69, 122.37, 71.21, 69.24, 65.10, 61.68, 59.80, 58.00, 57.57, 56.48, 56.41, 56.23, 54.10, 46.48, 45.79, 45.63, 44.09, 43.81, 40.87, 40.41, 39.08, 37.93, 37.70, 34.75, 33.88, 32.44, 31.61, 30.60, 30.05, 29.68, 28.35, 27.26, 25.88, 24.20, 22.75, 22.43, 19.97. C43H85N7. Exemple 3 : mécanisme d'action bactéricide des composés I, II-1 et III-1 On a étudié le mécanisme d'action de ces composés par microscopie électronique afin de savoir si une éventuelle résistance à ces composés était prévisible au cours du temps. Pour ce faire, on a mis à incuber une souche de référence de S. aureus (ATCC 25923) cultivée en milieu liquide en présence de respectivement la squalamine de formule la ou du dérivé II-2 ou dérivé III-1 aux mêmes concentrations de 8 pg/ml pendant 24 heures. Puis, on a fixé les bactéries ainsi incubées avec du glutaraldéhyde à 2.5%. Après fixation au tétroxyde d'osmium pendant 1 heure et déshydratation par l'éthanol, les échantillons ont été inclus dans de la paraffine (Epon 812 resin). Des coupes de 70 nm ont ensuite été réalisées puis marquées avec de l'acétate d'uranyle à 4% puis visualisées à l'aide d'un microscope électronique à transmission de type Philips Morgavi 268D. On a pu montrer que l'action de ces composés sur S. aureus était nouvelle et originale avec un effet physico-chimique spectaculaire par destruction de la paroi microbienne, comme représenté figure 1, et non par un mécanisme d'action de type antibiotique. Cet effet est par ailleurs quasiment immédiat comme le montre l'analyse in vitro réalisée au cours du temps représenté (figure 2). Du fait de cet effet physico-chimique létal irréversible rapide, on comprend pourquoi il n'a pas été possible de sélectionner des mutants résistants in vitro contre ces composés au cours du temps. A ce jour aucune des souches de S. aureus testées n'a présenté de résistance aux différents dérivés aminostéroïdiens connus et nouveaux aminostéroïdiens selon la présente invention. Ceci a été réalisé selon une méthode de référence (Banerjee R et al. In Vitro Selection and Characterization of Ceftobiprole-Resistant Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother 2008, 52(6) :2089-2096) en essayant de sélectionner in vitro des souches de S. aureus (ATCC 25923) résistantes aux dits composés. Les composés ont été dilués successivement (dilutions de raison 2) dans des tubes contenant 5 ml de milieu MH afin d'obtenir des concentrations variant de 0.5X la CMI à 4X la CMI. La suspension bactérienne est ajoutée dans chaque tube à une densité de 109 CFU/ml. Après incubation de 18 h à 37 °C, le dernier tube à croissance visible (0,5 x CMI) dilué au 1/20 est mis en présence d'une nouvelle série de dilutions géométriques équivalentes à celles du 1er jour pour le même composé. Les essais ont été répétés 10 fois en triplicata mais n'ont jamais permis d'isoler de bactéries en croissance dans les tubes contenant les dérivés aminostéroïdiens à des concentrations égales ou supérieures à leur CMI. On n'a donc pas réussi à obtenir de mutants résistants à ces molécules. Ce résultat est à rapprocher de celui obtenu avec des antiseptiques à base d'alcool ou d'iode qui sont utilisés comme antiseptiques locaux (peau et muqueuses) depuis des dizaines d'années sans qu'aucune résistance ne soit apparue. Ceci est totalement différent pour la rifampicine, l'acide fusidique ou la mupirocine pour lesquels des résistances apparaissent très fréquemment et très rapidement. En conclusion on a montré que compte tenu de l'effet physicochimique de ces composés et de l'absence d'obtention de mutants résistants in vitro, l'éventualité d'un développement futur de résistance à ces composés est improbable. Ce nouveau mécanisme d'action de type létal, irréversible et quasiment immédiat sur la paroi bactérienne des composés selon l'invention rend improbable le développement de résistances dans le futur. Exemple 4 : activité bactéricide in vitro et mesure de CMI On a rapporté dans la publication de Alhanout et al (6) que les CMI de la squalamine et du dérivé II-1 sur différentes souches de S. aureus (y compris des souches résistantes à la méticilline (MRSA)) étaient égales (2pg/ml). De même Les composés IIa, IIb, IIc et IId présentent des CMI de 1.5 à 12,5 pg/ml. Les nouveaux composés de la présente invention de formules IIIa, IIIb et III-1 présentent une meilleure activité in vitro contre les souches de S. aureus et dérivé II-1 présentant une CMI de 1 pg/ml et une activité bactéricide beaucoup plus rapide (15 minutes, figure 3, dérivé III-1). Les composés IIIa et IIIb avec R=-(CH2)n1-NH2 et n1=2 à 9 présentent une CMI de 2,5 à 20 pg/ml. Tableau 1 : CMI des dérivés III-a sur S. aureus ATCC 25923 ni CMI (pg/mL) 2 20 3 5 4 5 5 5 6 2,5 7 2,5 8 2,5 9 5 Le composé III-1 présente la meilleure activité avec une CMI de lpg/ml pour S. Aureus. Tableau 2 : CMI de la squalamine la et des dérivés II-1 et III-1 sur différentes souches de S. aureus. CMI mg/l Reference strain la Dérivé Dérivé II-1 III-1 Staphylococcus aureus ATCC 25923 2 2 1 Staphylococcus aureus (MRSA) 2 2 1 SQ: squalamine En conclusion, on a démontré que le dérivé III-1 synthétisé spécifiquement pour cette application présente la meilleure activité in vitro ainsi qu'un effet bactéricide plus rapide par rapport aux autres composés évalués in vitro. Exemple 5 : modèle de test d'activité in vivo sur la souris Afin de tester l'activité in vivo des composés, on a inventé un modèle expérimental de colonisation cutanéo-muqueuse à S. aureus chez la souris. En effet, les modèles expérimentaux existants sont compliqués, fastidieux et/ou très coûteux à mettre en oeuvre (colonisation nasale chez le rat ou modèle ex vivo sur de la peau humaine) (7;8). Brièvement, 10 pl d'une suspension bactérienne calibrée à 108 CFU/ml S. aureus a été appliquée sur la peau préalablement rasée des souris sur deux quadrants différents (figure 4). La colonisation par S. aureus était ensuite suivie quotidiennement pendant 2 jours par écouvillonnage cutané des souris, reprise de l'écouvillon dans 1 ml d'eau stérile et mise en culture de 100 pl sur gélose Chapman à 37°C pendant 24 heures avant énumération des colonies bactériennes. Le nombre de CFU/ml était stable pendant le temps de la manipulation soit 2 jours (figure 4). Sur la figure 3, on a représenté des photographies du modèle expérimental d'infection à S. aureus chez la souris; et des colonies à J1 et J2 sur gélose Chapman. Ce modèle expérimental de colonisation cutanéo-muqueuse à S. aureus chez la souris s'avère être plus simple à mettre en oeuvre et permet de tester l'efficacité des composés in vivo. Exemple 6 : préparation d'une pommade et activité topique locale sur la souris Une pommade à usage cutanéo-muqueux à 1% de squalamine ou de dérivés aminostéroïdiens II-1 et III-1 a été élaborée en mélangeant 9,9 g de vaseline pour 0,1 g de produit actif et évaluée dans la décolonisation cutanée de S. aureus (souche de référence ATCC 25923) sur le modèle de souris colonisée à S. aureus. De la même manière, 10 pl d'une suspension bactérienne calibrée à 108 CFU/ml S. aureus a été appliquée sur la peau préalablement rasée d'une série de 4 souris sur deux quadrants différents (figure 3). Après 2 heures d'incubation et séchage, la pommade contenant la squalamine la ou un dérivé aminostéroïdien II-1 ou III-1 a été appliquée sur un des deux quadrants de peau contre une pommade contenant l'excipient seul sur l'autre quadrant. Les quantités de S. aureus, au temps 0 (avant application de la pommade) puis aux jours 1 et 2 (J1 et J2) après application, ont été déterminées par écouvillonnage cutané et mise en culture sur milieu Chapman pour le dénombrement des colonies comme décrit précédemment. Le nombre moyen de CFU/ml pour les souris ayant reçu la pommade contenant la squalamine la ou un dérivé aminostéroïdien II-1 ou III-1 à J1 et J2 était très significativement diminué par rapport à la pommade ne contenant pas de molécule active avec une diminution de 4 à 5 logarithmes du nombre de CFU/ml (102 CFU/ml vs 106 CFU/ml à J1 et 101 CFU/ml vs 106 CFU/ml à J2; (p La figure 4 représente le graphique des dénombrements des colonies de S. aureus après application de pommade avec la squalamine la ou sans molécule active sur gélose Chapman obtenus en fonction du temps. La figure 5 représente les photographies des dénombrements des colonies de S. aureus après application de pommade avec un dérivé aminostéroïdien II-1 (A) ou sans molécule active (B) sur gélose Chapman obtenus après 1 jour d'application de pommade. On a montré qu'une pommade à base de dérivés aminostéroïdiens Ia, II-1 et III-1 diminuait de manière très significative une colonisation cutanéo-muqueuse à S. aureus et ceci très rapidement en une seule application après 1 jour alors que la mupirocine est utilisée à raison de 2 applications par jour pendant 5 jours pour la décolonisation nasale de S. aureus. References (1) Falagas ME, Bliziotis IA, Fragoulis KN. Oral rifampin for eradication of Staphylococcus aureus carriage from healthy and sick populations: a systematic review of the evidence from comparative trials. Am J Infect Control 2007 Mar;35(2):106-14. (2) Howden BP, Grayson ML. Dumb and dumber--the potential waste of a useful antistaphylococcal agent: emerging fusidic acid resistance in Staphylococcus aureus. Clin Infect Dis 2006 Feb 1;42(3):394-400. (3) Morton TM, Johnston JL, Patterson J, Archer GL. Characterization of a conjugative staphylococcal mupirocin resistance plasmid. Antimicrob Agents Chemother 1995 Jun;39(6):1272-80. (4) Chatfield CA, O'Neill WA, Cooke RP, McGhee KJ, Issack M, Rahman M, et al. Mupirocin-resistant Staphylococcus aureus in a specialist school population. J Hosp Infect 1994 Apr;26(4):273-8. (5) Climo MW, Ehlert K, Archer GL. Mechanism and suppression of lysostaphin resistance in oxacillin-resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents )Chemother 2001 May;45(5):1431-7. (6) Alhanout K, Brunet JM, Raoult D, Rolain JM. In vitro antibacterial activity of aminosterols against multidrug-resistant bacteria from patients with cystic fibrosis. J Antimicrob Chemother 2009 Oct;64(4):810-4. (7) Desbois AP, Lang S, Gemmail CG, Coote PJ. Surface disinfection properties of the combination of an antimicrobial peptide, ranalexin, with an endopeptidase, lysostaphin, against methicillin- resistant Staphylococcus aureus (MRSA). 3 Appl Microbiol 2009 Jul 13. (8) Kokai-Kun JF, Walsh SM, Chanturiya T, Mond JJ. Lysostaphin cream eradicates Staphylococcus aureus nasal colonization in a cotton rat model. Antimicrob Agents Chemother 2003 May;47(5):1589-97. (9) Loncle et al. Tetrahedron 2007, 63, 12968-12974 ; (10) Salmi et al. European Journal of Medicinal Chemistry 2008, 43, 540-547; (11) Salmi et al. Letters in Drug Design & Discovery 2008, 5, 169-172.; (12) Salmi et al. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry 2008, 23, 860-865; (13) Loncle et al. Letters in Drug Design & Discovery 2008, 5, 388-393 ; (14) Salmi et al. Tetrahedron 2008, 64, 4453-4459.) (15) Daniel Amsterdam. Susceptibility testing of antimicrobials in liquid media. In Antibiotics in Laboratory Medicine. 5t" Edition. Editor Victor Lorian. Lippincott Williams and Wilkins 2005. Philadelphia, USA (16) Banerjee R et al. In Vitro Selection and Characterization of Ceftobiprole-Resistant Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother 2008, 52(6) : 2089-209620 REVENDICATIONS1. Composé choisi parmi la squalamine et un composé aminostéroidien analogue de la squalamine pour une application par voie topique locale pour la décolonisation cutanéo-muqueuse de Staphylococcus aureus, ledit composé aminostéroïdien analogue de la squalamine répondant à une formule générale comprenant un squelette de formule (I) ci-après sur lequel est greffée au moins 1 chaine polyaminée ùNHR, R étant une chaine hydrocarbonée éventuellement substituée comportant au moins un groupe ùNH2 : 16 dans laquelle : - soit toutes les liaisons doublées de traits en pointillés entre les carbones des positions 7-8, 5-6, 4-5, et 3-4 représentent une simple 15 liaison, le squelette étant celui d'un 10, 13, 17 triméthyl cholestane, - soit l'une des liaisons doublées de traits en pointillés entre les carbones des positions 7-8, 5-6, 4-5, et 3-4 représente une double liaison et les autres liaisons doublées de traits en pointillés sont des simples liaisons, le squelette étant celui d'un 10, 13, 17 triméthyl 20 cholestène. 2. Composé pour une application selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit composé répond à une formule générale comprenant un dit squelette de formule (I) comportanta) au moins 1 chaine -NHR sur un des carbones en positions 3, 7, et 20, et R représente ù[(CH2)nù(NR1)kù(CH2)m]pùNH2 avec : - n et m étant des entiers identiques ou différents de 1 à 7, - k= 0 ou 1, - p étant un nombre entier de 1 à 4, et - R1 étant choisi parmi H, un alkyl en Cl à C3, un phényl éventuellement substitué et un groupe ùCOOalk, alk étant un alkyl en Cl à C3, avec de préférence : - lorsque k= 0, alors p=1 ou lorsque k= 1, alors p= 2, et - lorsque ledit composé comprend une seule chaîne ùNHR, celle-ci est greffée de préférence en postion 3 ou 7, et b) les autres carbones dudit squelette comprenant un radical Ro identique ou différent choisi parmi H, OH, NH2, SH, et R1, de préférence Ro étant H ou OH mais avec 1 seul Ro représentant OH. 3. Composé pour une application selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ledit composé aminostéroidien répond à une des formules générales suivantes IIa, IIb, IIc ou IId dans lesquelles R représente ù [(CH2)n-(NR1)kù(CH2)m]pùNH2, n, m, p, k et R1 ayant les significations données dans la revendication 2, et, de préférence, R étant choisi parmi ù(CH2)niùNH2 avec ni = 2 à 14, et ù (CH2)3ùN Hù(CH2)3ùN Hù(CH2)3-NHZOu Ilb HO NHR Ou RNH Ou RN H IId H15 4. Composé pour une application selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit composé répond à la formule générale II-1 suivante : HO 5. Composé pour une application selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit composé répond à la formule générale constituée par un dit squelette de formule (I) comportant : a) 2 chaines identiques ùNHR sur les carbones en positions 3 et, respectivement, 20, et R représente ù[(CH2)nù(NR1)kù(CH2),]pùNH2 avec : - n et m étant des entiers identiques ou différents de 1 à 7, - k= 0 ou 1, - p étant un nombre entier de 1 à 4, - R1 étant choisi parmi H, un alkyl en Cl à C3, un phényl éventuellement substitué et un groupeùCOOalk, alk étant un alkyl en Cl à C3, avec, de préférence, lorsque k= 0, alors p=1, ou lorsque k= 1, alors p= 2, et b) les autres carbones du dit squelette de formule (I) comprenant un radical Ro identique ou différent choisi parmi H, NH2, SH, ou R1, de préférence Ro étant H ou OH mais avec 1 seul Ro étant OH. 2953138 Nouvelle page 29 6. Composé pour une application selon la revendication 5, caractérisé en ce que ledit composé répond aux formules générales suivantes IIIa ou IIIb, dans lesquelles R représenteù[(CH2)nù(NR1)kù(CH2)R,]pùNH2, et, de préférence, R étant choisi parmi ù(CH2)n-NH2 avec 5 n= 2 à 14, et ù(CH2)3ùNHù(CH2)3ùNHù(CH2)3ùNH2 RHN'W 7. Composé pour une application selon la revendication 6, 10 caractérisé en ce que ledit composé aminostéroïdien répond à la formule III-1 suivante H H H2N~~N III-1 NHR RHN Ou NHR 8. Composé pour une application selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit composé est la squalamine de formule la suivante : NH2 OSO3H H 9. Composé selon l'une des revendications 1 à 8, pour une décolonisation cutanéo-muqueuse transitoire de Staphylococcus Aureus, pas plus de 24 heures après seulement une seule application, cette décolonisation étant maintenue pendant au moins 48 heures. 10. Composé selon l'une des revendications 1 à 9, pour une application sur la muqueuse nasale. 11. Composition pharmaceutique utile pour une utilisation par voie topique locale pour une décolonisation cutanéo-muqueuse de Staphylococcus aureus, caractérisée en ce qu'elle comporte, comme composé actif, un dit composé choisi parmi la squalamine et un dit composé aminostéroidien analogue de la squalamine antibactérien selon l'une des revendications 1 à 10, incorporé dans un excipient lipophile sous forme de lotion, crème, pommade ou onguent. 12. Composition pharmaceutique selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle comporte une concentration de 0,5 à 2% en poids de dit composé squalamine ou un dit composé aminostéroidien analogue de la squalamine. 13. Composition pharmaceutique selon la revendication 11 ou 12, caractérisée en ce que ledit excipient lipophile est choisi parmi la vaseline, lanoline, les esters de glycérol, macrogols, esters d'acides gras et de macrogols. NH N''OH 14. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 11 à 13, caractérisée en ce que ledit composé squalamine ou composé aminostéroidien analogue de la squalamine antibactérien est sous forme de sel hydrosoluble, de préférence "sous la forme de sel de chlorhydrate, bromhydrate, triflate, phosphate, lactate, ou succinate". 15. Utilisation d'un composé tel que défini dans l'une des revendications 1 à 10, pour la préparation d'un médicament pour une application topique locale pour une décolonisation cutanéo-muqueuse de Staphylococcus aureus.10