Brevet FR2958645A1 — publié le 20111014

HEMI-ANTICORPS A AUTO-ASSEMBLAGE L'invention porte sur de nouvelles molécules chimériques, appelées « hémianticorps », capables de s'auto-assembler pour former un site de reconnaissance d'un épitope. Un hémi-anticorps est constitué d'au moins deux molécules chimériques A et B, comprenant chacune un domaine polypeptidique caractéristique d'un domaine variable (ou DV) d'une chaîne lourde ou d'une chaîne légère d'un anticorps, et un domaine nucléotidique, le domaine nucléotidique de A et celui de B étant capables de s'apparier en une structure double-brin, par exemple en milieu hydrique. Sur ces molécules chimériques peuvent être greffées des séquences nucléiques biologiquement actives permettant par exemple d'empêcher l'expression de gènes cibles à l'intérieur d'une cellule de mammifère humain ou non humain. Ces hémi-anticorps présentent un potentiel important d'une part pour le traitement de maladies génétiques ou de cancers et d'autre part pour le traitement de maladies infectieuses. Dans le cadre de certaines maladies génétiques, telles que la myopathie, l'utilisation d'une telle molécule chimérique peut permettre d'empêcher l'expression de gènes mutés au niveau de la traduction, afin de diminuer la présence de protéines défectueuses, à l'origine de la maladie. Dans le domaine de la lutte contre les cancers, cette molécule chimérique peut permettre d'inactiver des protéines intra-cellulaires. Au niveau de maladies infectieuses (en particulier les maladies virales et les infections bactériennes), cette molécule chimérique peut également permettre de bloquer l'expression de gènes de l'agent pathogène qui conditionnent spécifiquement soit des activités primordiales de l'agent pathogène (par exemple, la rétro-transcription chez un rétrovirus), soit des résistances à des traitements existants (par exemple, la résistance des bactéries aux antibiotiques). Les acides nucléiques, ou analogues d'acides nucléiques, antisens ou possédant une activité ribo- ou desoxyribo-nucléase, sont utilisés pour bloquer l'expression de gènes, que ce soit au niveau de la réplication, de la transcription, ou de la traduction. Parce qu'elles peuvent agir directement sur une séquence ciblée, ces séquences présentent un potentiel important pour le traitement de maladies génétiques, de maladies infectieuses, et dans la lutte contre des mécanismes de résistance (par exemple la résistance des bactéries aux antibiotiques). Toutefois, l'utilisation de séquences nucléotidiques ou d'analogues en tant que médicament se voit très largement limitée, d'une part par la nécessité d'adresser spécifiquement ces séquences à la cellule cible et, d'autre part par la faible efficacité de passage de ces séquences à travers la membrane cellulaire. Afin d'améliorer leur efficacité de passage à travers la membrane cellulaire, ces séquences nucléotidiques ou analogues peuvent être modifiés par l'ajout, en 5' ou en 3', de fonctions ou des groupements chimiques lipophiles (Manoharan et al., 1995; Pfeiffer and Hébk, 2004). Cette modification permet de faciliter le passage des acides nucléiques, à travers la membrane plasmique, comme cela a été démontré sur cultures cellulaires (Tripathi et al., 2005). Bien que facilitant le passage de la membrane plasmique, la simple addition d'un groupement hydrophobe à l'extrémité des séquences nucléiques ne permet cependant pas d'utiliser ces dernières dans le cadre de traitements thérapeutiques, en raison du caractère non spécifique des groupements hydrophobes. En effet, les séquences d'acide nucléique ainsi modifiées peuvent se retrouver, dans leur grande majorité, absorbées de manière aspécifique par diverses cellules avant d'atteindre la cible, diminuant ainsi l'effet du traitement. Un adressage spécifique de ces molécules vers la cible est donc nécessaire. Pour palier à ces problèmes d'adressage quelles que soient les conditions du milieu, les inventeurs ont mis au point des molécules chimériques comprenant un domaine nucléique, par exemple de l'ADN, et un domaine polypeptidique caractéristique d'un fragment d'anticorps comprenant un site de reconnaissance d'un épitope. Ces molécules chimériques acide nucléique/Anticorps (par exemple ADN/Anticorps ou ADN/AC) peuvent être utilisées pour marquer et amplifier les marquages de protéines par exemple à la surface d'une cellule, ou encore pour fonctionnaliser une surface par des anticorps dans le cadre de la réalisation de Biopuces. Il existe, dans l'art antérieur, des molécules chimériques anticorps/acide nucléique (FR286006; FR2882563 ; FR2882564), qui présentent toutefois des inconvénients : a) le mécanisme de pénétration à l'intérieur d'une cellule est basé sur l'endocytose ou pinocytose cellulaire, ce qui implique une interaction non covalente entre l'acide nucléique et l'anticorps, de manière à ce que le changement de pH après fusion des vésicules d'endocytose avec des vésicules basiques ou acides intra-cellulaires rompe les interactions non covalentes et sépare les acides nucléiques des anticorps. Ce mode d'adressage et d'absorption fait intervenir une activité cellulaire et n'est donc pas indépendant de l'état de la cellule. Ce mode de réalisation sera peu ou pas efficace sur des modèles cellulaires faisant peu ou ne faisant pas d'endocytose. b) Les séquences d'acide nucléique qui sont déjà utilisées dans les molécules anticorps/acide nucléique sont généralement de type antisens et éventuellement micro ARN (Mi-RNA) à destination des systèmes protéosomes ; elles n'ont pas d'activité enzymatique propre (Baulcombe, 2002). c) De plus, le greffage de séquences nucléotidiques sur des anticorps déjà constitués est limité d'une part par la faible reproductibilité du site de greffage sur l'anticorps (Fan et al., 2008) et d'autre part par le maintien du site de reconnaissance de l'anticorps ; il existe en effet une probabilité importante pour que la fonctionnalisation par l'acide nucléique se fasse dans le site actif de l'anticorps, influençant ainsi négativement son activité. d) La fabrication d'anticorps à partir de séquences clonées reste très difficile à obtenir. Un anticorps est un assemblage complexe de chaînes polypeptidiques reliées par des ponts disulfures. C'est aussi une protéine relativement lourde (en moyenne 150 kDa) et dont la fabrication par des méthodes de clonage et d'expression recombinante in vitro reste difficile. En effet, une fois les chaînes produites, l'étape de reconstitution par appariement entre ces chaînes légères et lourdes et l'établissement des ponts disulfures corrects restent limitants. Une grande diversité d'appariements incorrects se forme entre les chaînes et, parmi les combinaisons de chaînes lourdes/légères obtenues, une grande partie n'est pas fonctionnelle en raison d'un mauvais repliement de ces chaînes. Pour palier à ces différents inconvénients, les inventeurs ont mis au point des molécules chimériques particulières, appelées «hémi-anticorps» (ou « HAC »), qui comprennent des polypeptides caractéristiques de fragments des parties variables d'anticorps, et des acides nucléiques (ou des analogues) capables de s'auto-assembler pour reformer un site de reconnaissance d'un anticorps fonctionnel en milieu hydrique, y compris en milieu réducteur. La délivrance de séquences nucléiques d'intérêt (en particulier de séquences nucléiques biologiquement actives) à l'intérieur de cellules cibles, via les molécules chimères mises au point par les inventeurs, est en partie indépendante du mécanisme d'endocytose et/ou de pinocytose et permet donc de cibler n'importe quelle cellule indépendamment de son métabolisme. Ainsi, l'invention a pour objet une molécule chimérique appelée « hémianticorps », caractérisée en ce qu'elle comprend ou consiste en deux molécules chimériques A et B, comprenant ou consistant chacune en (i) un domaine polypeptidique caractéristique d'un domaine variable (ou DV) d'une chaîne lourde ou d'une chaîne légère d'un anticorps, ce domaine polypeptidique étant positionné à une extrémité dans les molécules chimériques A et B, le domaine polypeptidique (i) d'une des deux molécules chimériques, A ou B, étant caractéristique d'un DV d'une chaîne légère d'un anticorps et le domaine polypeptidique (i) de l'autre molécule chimérique, respectivement B ou A, étant caractéristique d'un DV d'une chaîne lourde d'un anticorps (le même anticorps ou un anticorps distinct); et (ii) un domaine nucléotidique (ou domaine structural) comprenant ou consistant en un polynucléotide, en particulier un ADN ou un ARN, ou un analogue d'un polynucléotide, en particulier un acide nucléique peptidique (ANP), un acide nucléique bloqué (ou LNA ; Locked Nucleic Acid), un acide nucléique méthylphosphonate, ou un acide nucléique thioate (en particulier un acide nucléique phosphorothioate ou phosphorodithioate), le domaine nucléotidique de A et celui de B étant capables de s'apparier en une structure double-brin, par exemple en milieu hydrique, en particulier en milieu réducteur ; et (iii) le cas échéant, une ou plusieurs molécule (s) de liaison (ou linker(s)) en particulier un linker liant les domaines (i) et (ii) d'une molécule chimérique A ou B, ledit ou lesdits linker(s) comprenant ou consistant en une chaîne hydrogénocarbonée (ou squelette) comportant de préférence 1 à 20 carbones, les domaines (i) et (ii) de chacune des molécules chimériques A et B étant liés par une liaison covalente, par exemple par l'intermédiaire d'un groupement NH2, en particulier un groupement NH2 d'un linker. Sauf indication contraire, chaque mode de réalisation particulier présenté dans la présente demande peut être combiné indépendamment avec un ou plusieurs autres modes de réalisation particuliers présentés dans la demande. L'hémi-anticorps de l'invention est capable de s'auto-assembler, en particulier en milieu hydrique ou aqueux, y compris en milieu réducteur, par l'intermédiaire du domaine (ii) de la molécule chimérique A et de celui de la molécule chimérique B, qui s'apparient en une structure double brin. Le terme « chimérique » désigne ici une molécule qui associe plusieurs domaines, d'au moins deux types différents par leur fonction et/ou par leur nature, au moins deux de ces domaines étant de nature distincte, l'un étant de nature polypeptidique et l'autre étant de nature nucléotidique. Le terme « plusieurs » tel qu'utilisé dans la présente demande signifie deux ou plus de deux (par exemple trois, quatre, cinq, six ou sept). Par « hémi-anticorps », on entend ici une molécule chimérique particulière, 20 comprenant ou consistant en : - au moins une composante peptidique caractéristique d'un anticorps, qui comprend ou consiste en un site de reconnaissance (ou paratope) d'un épitope c'est-à-dire capable de se lier à un épitope; et - une composante nucléotidique (par exemple une structure nucléotidique 25 double-brin), qui stabilise la molécule chimérique. Par « domaine variable » (ou « DV »), on entend, au sens de la présente demande, un polypeptide qui constitue, une partie du site de reconnaissance d'un épitope, c'est-à-dire un polypeptide impliqué dans la reconnaissance d'un épitope et dans l'interaction avec ledit épitope. Dans un mode de réalisation particulier de 30 l'invention, ledit DV comprend ou consiste en : le domaine variable VH porté par la chaîne lourde d'un anticorps (c'est-à-dire un domaine variable codé par un gène comportant des segments V (variables), J (de jonction) et D (de diversité)) ; ou le domaine variable VL porté par la chaîne légère d'un anticorps (c'est-à- dire un domaine variable codé par un gène comportant des segments V et J mais aucun segment D) ; ou une ou plusieurs portion(s) de VH ou VL, , en particulier une ou plusieurs portion(s) de VH ou VL capable(s) de se lier audit épitope, ledit DV conservant la capacité de VH ou VL à interagir avec ledit épitope. A titre d'exemple, dans un mode de réalisation particulier de l'invention, par « portion(s) » de VH ou VL on entend une ou plusieurs (en particulier deux, trois, voire quatre) régions hypervariables, également appelées régions déterminant la complémentarité ou CDRs (de l'anglais « complementary determining regions »), et en particulier tous les CDRs, d'un domaine VH ou VL. Lesdites régions CDRs sont le cas échéant utilisées en combinaison avec les fragments non variables (frameworks 1, 2...) présents dans les domaines variables natifs des anticorps. Par domaine polypeptidique « caractéristique d'un DV », on entend ici un domaine polypeptidique présentant les propriétés d'un domaine DV, c'est-à-dire un domaine polypeptidique impliqué dans la reconnaissance d'un épitope et dans la liaison audit épitope. Ledit domaine polypeptidique peut être d'origine synthétique ou être issu ou dérivé d'un DV d'un anticorps donné (par exemple un anticorps humain ou humanisé), en particulier ledit domaine polypeptidique peut comprendre ou consister en un DV d'un anticorps donné (par exemple un anticorps humain ou humanisé), ou consister en une séquence obtenue par insertion, délétion ou substitution de résidus d'acides aminés, par exemple un, deux, trois, quatre, ou cinq résidus, dans la séquence d'un DV d'un anticorps donné. Lorsque les molécules chimériques A et B d'un hémi-anticorps sont assemblées (par l'intermédiaire de leur domaine nucléotidique (ii) respectif), le domaine polypeptidique (i) de A et celui de B constituent un site de reconnaissance d'un épitope, capable d'interagir (de préférence spécifiquement) avec un épitope. Un hémi-anticorps de l'invention peut être obtenu en recombinant des fragments de différents anticorps et en particulier des domaines DV, ou leurs parties actives dans la reconnaissance d'un épitope, issus ou dérivés de différents anticorps, lesdits différents anticorps pouvant provenir ou non de la même espèce de mammifère humain ou non humain. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, un hémi-anticorps comprend au moins deux DV issus ou dérivés d'anticorps donnés (d'un seul et même anticorps ou d'anticorps distincts), en particulier un DV positionné en N-terminal de la molécule chimérique A et un DV positionné en N-terminal de la molécule chimérique B, qui en s'assemblant et en se structurant, forment un site de reconnaissance d'un épitope. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le domaine (i) de la molécule chimérique A ou B d'un hémi-anticorps de l'invention comprend ou consiste en le domaine variable VH d'un anticorps ou une ou plusieurs portion(s) du domaine VH d'un anticorps et le domaine (i) de l'autre molécule chimérique dudit hémi-anticorps (respectivement B ou A) comprend ou consiste en le domaine variable VL du même anticorps ou d'un anticorps distinct, ou une ou plusieurs portion(s) de ce domaine VL (lesdites portions de VH ou VL étant telles que définies dans la demande). Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les domaines (i) des 20 molécules A et B d'un hémi-anticorps sont humanisés. Le terme « au moins x » élément(s) signifie, dans la présente demande, x élément(s) ou plus de x élément(s), par exemple deux, trois ou quatre éléments. Par « acide nucléique phosphonate » ou « acide nucléique thioate », on entend ici des acides nucléiques modifiés, dans lesquels des phosphores sont 25 bloqués (c'est-à-dire estérifies par du méthanol) ou substitués par du soufre. Un domaine polypeptidique (i) peut être caractéristique d'un DV d'une chaîne lourde ou d'une chaîne légère de n'importe quel anticorps. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le domaine polypeptidique (i) de la molécule chimérique A et celui de B sont caractéristiques 30 d'un DV d'un même anticorps ou, au contraire, d'anticorps distincts. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les domaines polypeptidiques (i) de A et de B comportent au moins une cystéine permettant d'établir un pont disulfure entre le domaine polypeptidique (i) de A et celui de B, et en particulier au moins une cystéine permettant d'établir un pont disulfure entre le DV de A et celui de B. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les domaines polypeptidiques (i) de A et de B sont caractéristiques d'un DV d'un anticorps reconnaissant (de préférence spécifiquement) un épitope d'un antigène intra et/ou extra cellulaire, plus particulièrement d'un antigène de surface, par exemple, d'un antigène exprimé à la surface d'organelles ou un antigène de surface cellulaire ou intracellulaire. Ces antigènes peuvent être notamment d'origine cellulaire, virale, bactérienne ou tumorale. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les domaines polypeptidiques (i) de A et de B et en particulier leurs domaines polypeptidique (i) N-terminaux sont caractéristiques de DV d'un ou plusieurs anticorps dirigé(s) contre (c'est-à-dire reconnaissant, de préférence spécifiquement) un antigène présent à la surface de cellules de mammifère, par exemple contre la protéine CD4, ou contre un antigène viral, en particulier contre une protéine d'une enveloppe virale, par exemple la protéine d'enveloppe externe d'un virus VIH (virus de l'immunodéficience humaine), ou contre un antigène bactérien, en particulier contre une protéine d'une enveloppe bactérienne, ou contre une rétrotranscriptase, notamment une rétrotranscriptase de VIH-1 ou VIH-2. Un domaine polypeptidique (i) consiste de préférence en 10 à 300 résidus d'acides aminés et plus préférablement 20 à 200 ou 40 à 200 résidus d'acides aminés (les bornes inférieures et supérieures de ces gammes de valeur étant incluses). Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les domaines nucléotidiques (ii) tels que définis dans la présente demande sont des acides nucléiques simple brin. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le domaine nucléotidique (ii) de la molécule chimérique A et de celui de la molécule chimérique B d'un hémi-anticorps, qui sont des structures simple brin, s'apparient, en milieu hydrique et en particulier en milieu réducteur, en une structure double brin. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les domaines nucléotidiques (ii) de A et B sont choisis parmi un polynucléotide, un ANP, ou un LNP et sont capables de former une structure stable double brin, en particulier une hélice alpha. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les séquences des domaines nucléotidiques (ii) des deux molécules chimériques A et B sont complémentaires et antiparallèles, et en particulier sont capables de s'hybrider, de préférence sur toute leur longueur. L'hybridation de ces deux domaines nucléotidiques permet de reconstituer une molécule d'hémi-anticorps, en particulier en milieu hydrique (y compris en milieu réducteur). De par cette hybridation, les domaines peptidiques (i) des molécules A et B d'un hémi-anticorps ainsi auto-assemblé (lesdits domaines peptidiques étant, le cas échéant, liés l'un à l'autre par une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure) se trouvent rapprochés l'un de l'autre dans l'espace, ce qui permet de structurer et stabiliser le site de reconnaissance de l'épitope, en particulier en milieu réducteur. Ainsi, même en milieu réducteur, le site de liaison à l'antigène est fonctionnel dans l'hémi-anticorps de l'invention. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la taille du domaine (ii) varie de 3 à 100 nucléotides et plus préférablement de 5 à 60 nucléotides (les 20 bornes inférieures et supérieures de ces gammes de valeur étant incluses). Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, - le domaine nucléotidique (ii) de la molécule chimérique A ou B d'un hémianticorps de l'invention comprend ou consiste en la séquence suivante : ATGGTAGAG ; et 25 - le domaine nucléotidique (ii) de l'autre molécule chimérique de l'hémianticorps de l'invention, respectivement B ou A, comprend ou consiste en la séquence suivante : CTCTACCAT. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, un « linker » au sens de la présente invention est un espaceur, c'est-à-dire qu'il permet d'éloigner dans 30 l'espace les deux domaines qu'il lie, de façon à ce que ces deux domaines puissent exercer leur(s) fonction(s) de façon optimale. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, un « linker » au sens de la présente invention comporte de préférence 1 à 20 carbones et comprend ou consiste en un ou plusieurs élément(s) (par exemple un élement) choisi(s) parmi un peptide (ou un polypeptide), un polynucléotide en particulier un polynucléotide tel que défini dans la présente demande (ou un analogue, en particulier tel que défini dans la présente demande), une chaîne polycarbonnée, ethylènediamine, polylysine, bêta-alanine, et un sucre. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, ledit linker est un peptide ou un polypeptide, qui comprend ou consiste par exemple en une ou plusieurs lysine(s). Ce linker sera dénommé dans la présente demande « linker peptidique ». Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, un linker comprend ou consiste en un acide nucléique, en particulier un ADN ou un ARN et consiste par exemple en une séquence de 5 à 50 nucléotides (les bornes inférieures et supérieures de cette gamme de valeur étant incluses). Ce linker sera dénommé dans la présente demande « linker nucléique ». Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le linker liant le cas échéant les domaines (i) et (ii) d'une molécule chimérique A et le linker liant le cas échéant les domaines (i) et (ii) d'une molécule chimérique B sont des linkers peptidiques. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les domaines (i) et (ii) sont liés par l'intermédiaire d'un linker (par exemple un linker peptidique) dans les deux molécules chimériques A et B d'un hémi-anticorps, le linker présent dans A étant de préférence de même taille que le linker présent dans B. Par exemple le même linker peut lier les domaines (i) et (ii) dans A et dans B. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, un « linker » au sens de la présente invention, par exemple un linker peptidique ou nucléique, comporte une liaison labile en milieu réducteur (par exemple un pont disulfure) ou comporte à l'une de ses extrémités, un ou plusieurs acide(s) aminé(s) ou nucléotide(s) permettant de former, avec une des deux molécules qu'il lie, une telle liaison. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, « une liaison labile en milieu réducteur » signifie une liaison labile en milieu réducteur et persistante en milieu non-réducteur, ladite liaison pouvant être covalente (par exemple un pont disulfure) ou non covalente. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, dans la molécule chimérique A, l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i) (par exemple un domaine VH ou VL ou une portion d'un domaine VH ou VL) est liée de façon covalente à l'extrémité 3' d'un acide nucléique (ii) (par exemple un LNA, un acide nucléique méthylphosphonate ou un acide nucléique thioate) ou à l'extrémité C-terminale d'un ANP, par exemple par l'intermédiaire du groupement NH2 de la chaîne latérale d'une lysine liée à l'extrémité C terminale dudit ANP par une liaison peptidique. Alternativement ou cumulativement, selon un mode de réalisation particulier dans la molécule chimérique B, l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i) (par exemple un domaine VH ou VL ou une portion d'un domaine VH ou VL) est liée de façon covalente à l'extrémité 5' de l'acide nucléique (ii) (par exemple un LNA, un acide nucléique méthylphosphonate ou un acide nucléique thioate) ou à l'extrémité N-terminale d'un ANP, par exemple par l'intermédiaire d'une liaison peptidique ou amide avec l'un des groupements NH2 d'une lysine, ladite lysine étant liée, par son groupement COOH, à l'extrémité N-terminale dudit ANP. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la molécule chimérique A et/ou la molécule chimérique B comprend (comprennent) en outre un domaine étiquette et/ou un domaine biologiquement actif, ledit domaine étant lié soit à l'extrémité libre du domaine nucléotidique (ii) de la molécule chimérique A ou B soit à l'extrémité libre d'un linker lié au domaine nucléotidique (ii) de la molécule chimérique A ou B. La liaison dudit domaine étiquette ou dudit domaine biologiquement actif au domaine nucléotidique (ii) de la molécule chimérique A ou B ou à l'extrémité libre dudit linker s'effectue de préférence par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure, ou au contraire, par l'intermédiaire d'une liaison persistante en milieu réducteur, par exemple par l'intermédiaire d'une liaison établie avec un acide maléïmide. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, ce linker a une longueur suffisante pour être traversant dans une membrane (par exemple une membrane plasmique ou une membrane intracellulaire). Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, ce linker est un linker nucléique. Ainsi, dans ce mode de réalisation particulier, l'hémi-anticorps de l'invention permet de délivrer, dans une cellule cible (en particulier une cellule de mammifère humain ou non humain), un domaine biologiquement actif, permettant d'inhiber (complètement ou partiellement) l'expression de gènes dans ladite cellule cible, indépendamment des mécanismes fonctionnels intrinsèques à ladite cellule. Dans le mode de réalisation particulier utilisant une liaison labile en milieu réducteur, le domaine étiquette et/ou le domaine biologiquement actif est libéré à l'intérieur de la cellule après réduction des ponts disulfure. Dans un mode de réalisation particulier, le domaine étiquette et/ou le domaine biologiquement actif comprend ou consiste en un polynucléotide ou un analogue comprenant ou consistant en une séquence étiquette (ou séquence TAG) et/ou une séquence biologiquement active permettant de bloquer (complètement ou partiellement) l'expression de gènes cibles (notamment au niveau de la réplication, de la transcription, ou de la traduction), en particulier à l'intérieur d'une cellule, par exemple un polynucléotide ou un analogue choisis parmi les éléments suivants: - un acide nucléique, en particulier un acide nucléique antisens ou un acide nucléique ayant une activité endonucléase par exemple une activité ribonucléase (RNAse) ou desoxyribonucléase (DNAse) ; - un ANP, en particulier un ANP antisens ou un ANP ayant une activité endonucléase (ANPzyme), par exemple une activité ribo- ou desoxyribo-nucléase, - un LNA, un acide nucléique méthylphosphonate, un acide nucléique méthylsulfonate, un acide nucléique ou desoxy-nucléique modifié, un ADNzyme, un ARNzyme ou un ANPzyme, un micro ARN (miRNA), une séquence mixte ANP/acide nucléique ou ANP/peptide, un dimère DNA/ANP-zyme ; et - une combinaison d'au moins deux de ces éléments. Alternativement ou cumulativement, dans un mode de réalisation particulier, le domaine étiquette et/ou le domaine biologiquement actif comprend ou consiste en un enchaînement de plusieurs (au moins deux) résidus d'acides aminés successifs, formant la structure d'un peptide ou d'un polypeptide. A titre d'exemple, ledit domaine étiquette et/ou ledit domaine biologiquement actif peut comporter au moins 4 ou 6 résidus d'acides aminés, par exemple 4 à 200, 6 à 100 ou 6 à 50 résidus d'acides aminés. Un peptide désigne, dans la présente demande, une chaîne de 2 à 20 résidus successifs (en particulier 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 résidus), en particulier une chaîne de 5 à 10, de 10 à 15 ou de 15 à 20 résidus d'acides aminés successifs. Dans le cadre de l'invention, un polypeptide, qui désigne également une protéine ou un fragment d'une protéine, est un enchaînement de plus de 20 (au moins 21) résidus successifs, en particulier une chaîne de 21 à 1000 résidus successifs, de préférence de 21 à 500, 21 à 250 ou 21 à 150 résidus successifs, et plus préférablement de 21 à 50 ou 21 à 100 résidus d'acides aminés successifs. Cumulativement ou alternativement à la présence du domaine étiquette et/ou du domaine biologiquement actif dans la molécule chimérique A et/ou B, selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la molécule chimérique A et/ou la molécule chimérique B comprend (comprennent) en outre un élément lipophile (ou hydrophobe), en particulier une séquence, un groupement chimique ou un composé chimique lipophile, qui comporte de préférence un ou plusieurs groupement(s) et/ou composé(s) aromatique(s), par exemple un ou plusieurs résidu(s) tryptophane, ledit élément lipophile étant de préférence positionné à l'extrémité libre de la molécule chimérique A ou B. Cet élément lipophile est le cas échéant lié à la molécule chimérique A ou B par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure. Selon un mode de réalisation particulier, un hémi-anticorps de l'invention est tel que : • la première molécule chimérique, A ou B, comprend ou consiste en : un domaine polypeptidique (i) tel que défini dans la présente demande, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker (par exemple un linker peptidique) tel que défini dans la présente demande, un domaine nucléotidique (ii) tel que défini dans la présente demande, le cas échéant, un linker (par exemple un linker nucléique), lié, de préférence par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure ou par l'intermédiaire d'une liaison persistante en milieu réducteur, par exemple par l'intermédiaire d'une liaison établie avec un acide maléïmide, à un domaine étiquette ou un domaine biologiquement actif tel que défini dans la présente demande, et le cas échéant, un élément lipophile tel que défini dans la présente demande ledit élément lipophile étant le cas échéant relié au domaine étiquette ou au domaine biologiquement actif par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure ou par l'intermédiaire d'un linker (par exemple un linker peptidique ou nucléique) tel que défini dans la présente demande ; et • la deuxième molécule chimérique, respectivement B ou A, comprend ou consiste en : un domaine polypeptidique (i) tel que défini dans la présente demande, ce domaine et le domaine polypeptidique (i) de la première molécule chimérique étant de préférence caractéristiques de DV d'un même anticorps, l'un de ces domaines étant caractéristique d'un DV de la chaîne légère d'un anticorps donné et l'autre étant caractéristique d'un DV de la chaîne lourde du même anticorps, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): - le cas échéant, un linker (par exemple un linker peptidique) tel que défini dans la présente demande, et un domaine nucléotidique (ii) tel que défini dans la présente demande. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, par « les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant », on entend « les domaines suivants, liés successivement dans l'ordre suivant ». Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, un hémi-anticorps de l'invention, dénommé HAC_1, est tel que : • la première molécule chimérique, A ou B, comprend ou consiste en: un domaine polypeptidique (i) tel que défini dans la présente demande, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker (par exemple un linker peptidique) tel que défini dans la présente demande, un domaine nucléotidique (ii) tel que défini dans la présente demande, appelé S1, le cas échéant, un linker (par exemple un linker nucléique) tel que défini dans la présente demande, lié, de préférence par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur par exemple un pont disulfure, à un domaine étiquette ou un domaine biologiquement actif tel que défini dans la présente demande, lié, le cas échéant, par exemple, par l'intermédiaire d'une liaison covalente, à le cas échéant, un linker (par exemple un linker nucléique ou peptidique) tel que défini dans la présente demande, un second domaine nucléotidique appelé S3, qui comprend ou consiste en un polynucléotide, en particulier un ADN ou un ARN, ou un analogue d'un polynucléotide, en particulier un ANP, un LNA, un acide nucléique méthylphosphonate, ou un acide nucléique thioate, et qui est capable de s'apparier en une structure double-brin avec un domaine nucléotidique complémentaire appelé S4, par exemple en milieu hydrique, en particulier en milieu réducteur ; et le cas échéant, un linker (par exemple un linker peptidique) tel que défini dans la présente demande, le domaine S3 ou ledit linker étant lié à l'extrémité C-terminale d'un second domaine polypeptidique, appelé DV2a, qui est caractéristique d'un DV d'une chaîne lourde ou d'une chaîne légère d'un anticorps, DV2a et le domaine polypeptidique (i) de cette première molécule chimérique (A ou B) étant de préférence caractéristiques de DV d'anticorps distincts, et - le cas échéant, un élément lipophile tel que défini dans la présente demande, ledit élément lipophile étant relié à DV2a par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure ou par l'intermédiaire d'un linker (par exemple un linker nucléique) tel que défini dans la présente demande, ledit linker comportant une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure ou étant lié à DV2a par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure, et la deuxième molécule chimérique, respectivement B ou A, comprend ou consiste en: un domaine polypeptidique (i) tel que défini dans la présente demande, ce domaine et le domaine polypeptidique (i) de la première molécule chimérique (de HAC_1) étant de préférence caractéristiques de DV d'un même anticorps, l'un de ces domaines étant caractéristique d'un DV de la chaîne légère d'un anticorps donné et l'autre étant caractéristique d'un DV de la chaîne lourde du même anticorps, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker (par exemple un linker peptidique) tel que défini dans la présente demande, et un domaine nucléotidique (ii) tel que défini dans la présente demande, appelé S2, capable de s'apparier en une structure double brin avec S1 en milieu hydrique, en particulier en milieu réducteur. Dans un mode de réalisation particulier, un hémi-anticorps de l'invention, dénommé HAC_2, est tel que : • la première molécule chimérique, A ou B, comprend ou consiste en : un domaine polypeptidique (i) tel que défini dans la présente demande, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker (par exemple un linker peptidique) tel que défini dans la présente demande, le domaine nucléotidique (ii) tel que défini dans la présente demande, appelé S5, le cas échéant, un linker (par exemple un linker nucléique ou peptidique) tel que défini dans la présente demande, ledit linker comportant le cas échant une liaison labile en milieu réducteur (par exemple un pont disulfure), ou étant lié par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur (par exemple un pont disulfure) à, un second domaine nucléotidique appelé S4, qui comprend ou consiste en un polynucléotide, en particulier un ADN ou un ARN, ou un analogue d'un polynucléotide, en particulier un ANP, un LNA, un acide nucléique méthylphosphonate, ou un acide nucléique thioate, et qui est capable de s'apparier en une structure double-brin avec un domaine nucléotidique complémentaire appelé S3, par exemple en milieu hydrique, en particulier en milieu réducteur ; et le cas échéant, un linker (par exemple un linker peptidique) tel que défini dans la présente demande, le domaine S4 ou ledit linker étant lié à l'extrémité C-terminale d'un second domaine polypeptidique, appelé DV2b, qui est caractéristique d'un DV d'une chaîne lourde ou d'une chaîne légère d'un anticorps, DV2b et le domaine polypeptidique (i) de cette première molécule chimérique étant caractéristiques de DV d'anticorps distincts, et le cas échéant, un élément lipophile tel que défini dans la présente demande, ledit élément lipophile étant relié à DV2b par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure ou par l'intermédiaire d'un linker (par exemple un linker nucléique) tel que défini dans la présente demande, ledit linker comportant une liaison labile en milieu réducteur (par exemple un pont disulfure) ou étant lié à DV2a par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur (par exemple un pont disulfure); et • la deuxième molécule chimérique, respectivement B ou A, comprend ou consiste en : un domaine polypeptidique (i) tel que défini dans la présente demande, ce domaine et le domaine polypeptidique (i) de la première molécule chimérique (de HAC_2) étant de préférence caractéristiques de DV d'un même anticorps, l'un de ces domaines étant caractéristique d'un DV de la chaîne légère d'un anticorps donné et l'autre étant caractéristique d'un DV de la chaîne lourde du même anticorps, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker (par exemple un linker peptidique) tel que défini dans la présente demande, et un domaine nucléotidique (ii) tel que défini dans la présente demande, appelé S6, capable de s'apparier en une structure double brin avec S5 en milieu hydrique, en particulier en milieu réducteur. HAC_2 peut être utilisé en conjonction en HAC_1, par exemple administré à un même hôte, en particulier à un mammifère humain ou non humain, HAC_1 et HAC_2 étant administrés séparément (HAC_1 et HAC_2 étant présents dans des compositions, des vésicules ou des particules virales de l'invention distinctes), et ce simultanément ou séparément dans le temps). Ainsi, dans les cellules de l'hôte ayant intégré à la fois HAC_1 et HAC_2, un troisième type d'hémi-anticorps, constitué d'une partie de HAC_1 et d'une partie de HAC_2, pourra se former. A titre d'exemple, dans un mode de réalisation particulier, cet hémi-anticorps, dénommé HAC_3, est tel que : • la première molécule chimérique, A ou B, comprend ou consiste en : le domaine polypeptidique DV2a, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine DV2a: le cas échéant, un linker (par exemple un linker peptidique) tel que défini dans la présente demande, le domaine nucléotidique S3, le cas échéant, un linker (par exemple un linker nucléique ou peptidique) tel que défini dans la présente demande, et le domaine étiquette ou le domaine biologiquement actif présente dans HAC_1 ; et • la deuxième molécule chimérique, respectivement B ou A, comprend ou consiste en : le domaine polypeptidique DV2b, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine DV2b: le cas échéant, un linker (par exemple un linker peptidique) tel que défini dans la présente demande, et le domaine nucléotidique S4. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, l'un des domaines DV2a et DV2b tels que défini dans la présente demande est caractéristique d'un DV de la chaîne légère d'un anticorps donné et l'autre de ces domaines est caractéristique d'un DV de la chaîne lourde du même anticorps. L'invention a également pour objet une molécule chimérique A ou B, telle que définie dans la présente demande. L'invention a également pour objet une vésicule, en particulier un liposome, et plus particulièrement un liposome constitué de membrane virale, par exemple de membrane de particules du virus VIH-1 ou VIH-2, ou une particule virale, ladite vésicule ou ladite particule virale comportant un ou plusieurs hémi-anticorps tel(s) que défini(s) dans la présente demande et/ou un ou plusieurs molécule(s) chimérique(s) A et/ou B telle(s) que définie(s) dans la présente demande. A titre d'exemple, dans un mode de réalisation particulier, la vésicule ou ladite particule virale comporte un hémi-anticorps HAC_1 ou un hémi-anticorps HAC_2 tels que définis ci-dessus, et en particulier: • un hémi-anticorps HAC_1, dans lequel : - le domaine polypeptidique (i) des molécules chimériques A et B est de préférence caractéristique d'un même anticorps dirigé contre un premier antigène présent à la surface de cellules de mammifère ou dirigé contre un antigène viral, par exemple contre la protéine d'enveloppe externe d'un virus VIH; et - le domaine polypeptidique DV2a est de préférence caractéristique d'un anticorps anti rétro-transcriptase, notamment anti-rétrotranscriptase de VIH-1 ou VIH-2 ; ou • un hémi-anticorps HAC_2, dans lequel - le domaine polypeptidique (i) des molécules chimériques A et B est de préférence caractéristique d'un DV d'un même anticorps dirigé contre un deuxième antigène présent à la surface de cellules de mammifère, par exemple contre la protéine CD4, ou dirigé contre un antigène viral; et - le domaine polypeptidique DV2b est de préférence caractéristique d'un DV du même anticorps que le DVdomaine DV2a, DV2a ou DV2b étant caractéristique d'un DV de la chaîne légère d'un anticorps donné, par exemple un anticorps anti rétro-transcriptase, et l'autre domaine, respectivement DV2b ou DV2a, étant caractéristique d'un DV d'une chaîne lourde du même anticorps. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, deux hémi-anticorps sont utilisés, par exemple un hémi-anticorps HAC_1 et un hémi-anticorps HAC_2 tels que définis dans la présente demande. L'un de ces hémi-anticorps, par exemple HAC_2, peut être présent sous une forme incorporée dans une vésicule ou une particule virale telles de définies dans la présente demande, l'autre hémianticorps, par exemple HAC_1, étant présent en solution. HAC_1 et HAC_2 peuvent être en particulier dirigés respectivement contre un épitope d'un VIH-1 ou VIH-2 et un épitope exprimé à la surface de cellules de mammifères notamment des cellules T, par exemple un épitope de la protéine CD4 des cellules CD4+. L'invention vise également une composition, en particulier une composition pharmaceutique ou thérapeutique, immunologique ou vaccinale, comprenant, consistant en ou consistant essentiellement en : - un ou plusieurs hémi-anticorps tel(s) que défini(s) dans la présente demande et/ou un ou plusieurs molécule(s) chimérique(s) A et/ou B telle(s) que définie(s) dans la présente demande, ou une ou plusieurs vésicule(s) ou particule(s) virale(s) de l'invention, et - le cas échéant, un support, un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. L'expression « consiste essentiellement en » signifie que outre les éléments expressément listés, d'autres ingrédients ou molécules mineur(e)s peuvent être présents dans la composition de l'invention, sans affecter pour autant l'activité des éléments expressément listés. Une substance ou une combinaison de substances est dite « pharmaceutiquement acceptable » lorsqu'elle est appropriée pour une administration à un hôte à des fins thérapeutiques ou prophylactiques. Elle est donc préférentiellement non toxique pour l'hôte auquel elle est administrée. Un « hôte » au sens de la présente invention désigne notamment un hôte humain (ou patient) ou un animal non humain, par exemple un mammifère humain ou non humain. Dans un mode de réalisation particulier, la composition de l'invention comprend, consiste en ou consiste essentiellement en l'hémi-anticorps HAC_1 et/ou l'hémi-anticorps HAC_2 tel(s) que défini(s) dans la présente demande. L'invention a également pour objet, un kit (ou trousse) comprenant : - un ou plusieurs élément(s) choisi(s) parmi : un hémi-anticorps de l'invention, une molécule chimérique A ou B de l'invention, une vésicule de l'invention, une particule virale de l'invention, et une composition de l'invention, - et le cas échéant, une notice d'utilisation. Dans un mode de réalisation particulier, le kit de l'invention comprend 20 l'hémi-anticorps HAC_1 et/ou l'hémi-anticorps HAC_2 tel(s) que défini(s) dans la présente demande. L'invention a également pour objet, un ou plusieurs élément(s) choisi(s) parmi : un hémi-anticorps de l'invention, une molécule chimérique A ou B de l'invention, une vésicule de l'invention, une particule virale de l'invention, une 25 composition de l'invention ou un kit de l'invention, pour une utilisation comme médicament. Lesdits éléments peuvent être notamment utilisés chez un hôte, par exemple un humain ou un mammifère non humain, pour la prévention ou le traitement d'une maladie génétique, par exemple une myopathie, et/ou d'une maladie infectieuse, en particulier d'une maladie virale et plus particulièrement une 30 infection par un lentivirus, par exemple VIH-1 ou VIH-2, et/ou d'une infection bactérienne, par exemple une infection par une bactérie résistante à des antibiotiques et/ou pour la prévention ou le traitement d'un cancer. L'invention a également pour objet l'utilisation d'un ou plusieurs éléments choisis parmi ceux indiqués ci-dessus, pour la fabrication d'un médicament destiné à prévenir ou traiter les maladies ou infections susmentionnées, chez un hôte, par exemple un humain ou un mammifère non humain. L'invention a également pour objet une méthode pour prévenir ou traiter les maladies ou infections susmentionnées chez un hôte le nécessitant, ladite méthode comprenant ou consistant en une étape d'administration audit hôte d'un ou plusieurs éléments choisis parmi ceux indiqués ci-dessus. Afin d'augmenter les effets bénéfiques de ces éléments, il est envisageable de procéder à une administration sous la forme de plusieurs administrations successives, répétées à une ou plusieurs occasions, après un intervalle de temps particulier. L'invention a également pour objet l'utilisation d'un ou plusieurs éléments choisis parmi ceux indiqués ci-dessus, pour marquer et/ou amplifier les marquages de protéines, par exemple à la surface d'une cellule, in vitro, in vivo et ex vivo. L'invention a également pour objet un procédé de synthèse d'un hémianticorps tel que défini dans la présente demande. Ce procédé peut comporter une étape dans laquelle le greffage ou la liaison, sur l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i) (par exemple, l'extrémité C-terminale d'un domaine VH ou VL ou d'une portion d'un domaine VH ou VL), d'un domaine nucléotidique (ii), par exemple un ANP modifié en N- ou en C-terminal par une lysine ou un acide nucléique modifié en 5' ou en 3' par un NH2, se fait par l'action de l'acide 2 mercapto-ethansulfonique ou de l'acide 3 mercaptopropionique, sur une cystéine dudit domaine polypeptidique (i). Alternativement ou cumulativement, le procédé de synthèse d'un hémi- anticorps de l'invention peut comporter une étape dans laquelle les domaines polypeptidiques (i) dudit hémi-anticorps, qui sont des DV d'anticorps (par exemple des domaines VH ou VL d'anticorps ou comprennent une ou plusieurs portion(s) d'un domaine VH ou VL d'anticorps), sont obtenus soit par digestion d'un ou plusieurs anticorps par une enzyme, par exemple la pepsine, la papaïne, la trypsine, soit par l'expression de polynucléotides codant pour ces DV, dans des systèmes tels que des bactéries, des levures, des cellules d'insectes, ou par des synthèses in vitro, puis par purification. Alternativement ou cumulativement, pour cloner les domaines polypeptidiques, par exemple des DV tels que définis dans la présente demande, ces domaines sont fusionnés à leur extrémité C-terminale avec une séquence peptidique LPXTAAAA (leucine - proline û X û Thréonine û (Alanine)4, où X est un acide aminé quelconque). Le domaine nucléotidique à greffer, en particulier l'acide nucléique ou l'ANP à greffer, peut être quand à lui fonctionnalisé à l'une de ses extrémités par un poly-G (poly-glycine), éventuellement par l'intermédiaire d'une lysine, l'extrémité N-terminale du poly-G restant libre. Un domaine polypeptidique (i) (par exemple un DV tel que défini dans la présente demande) et un domaine nucléotidique (ii) (par exemple un acide nucléique (ou polynucléotide) ou un ANP, tels que définis dans la présente demande) sont alors fusionnés sous l'action d'une sortase A. D'autres modes de réalisation particuliers, caractéristiques et avantages de l'invention apparaissent dans les exemples qui suivent ainsi, que dans les figures. DESCRIPTION DES DESSINS Figure 1 : Exemple de synthèse réalisée. 1 : anticorps natif ; 2 : pont disulfure (ou pont S-S) ; 3 : domaines variables (DV)de chaîne légère et de chaîne lourde ; 4 : domaines nucléotidiques structuraux (ANP structural ou Zipper) ; 5. hémianticorps ; 5a : site actif ( DV1 a+DV1 b ; site comportant un site de reconnaissance d'un épitope) de hémi-anticorps structuré ; 5b : acides nucléiques structuraux appariés formant une structure de type zipper ; 6-8 : séquence nucléotidique tag comportant une séquence biologiquement active ; 6 : séquence linker/espaceur ; 7 : pont disulfure labile ; 8 : séquence biologiquement active (ANP,LNA...) ; 9 : élément lipophile (ex :tryptophane). Figure 2. Réacteur. 10 : Electrode ou électrode et gel reliés aux bornes d'un 30 générateur ; 11 : Tube de laiton contenant la solution à réduire ; 12 : Gel duracryl & billes SH ; 13 : Tube en matière plastique (Tycon) isolant électrique ; 14 : Guide d'électrode ; 15 : Spirale de refroidissement, Radiateur dans lequel circule de l'eau à une température inférieure à 10°C. Figure 3. 16: Analyse western-blot Anticorps natifs ; 17 : Analyse western-blot Anticorps dénaturés ; 18 : Analyse western-blot Anticorps électroréduits dans le réacteur laiton /Tycon à 100V, 2mA, 10 sec. Figure 4. 19 : antisens acides nucléique bloquant ; 22 : Interaction, mise en évidence par RMN, entre un ANP w-GTCCCGUCCCCGCCA-c ; SEQ ID No. 1 (w : tryptophane ; c : cystéine); 23 : boucle de l'activité RNase ou DNAse d'une DNAzyme ANP/DNAzyme ; 24 : motif DH ou HD d'une boucle enzymatique d'un ANPzyme. Figure 5. 6 : séquence linker/espaceur ; 7 : pont disulfure labile ; 8 : séquence biologiquement active (ANP, LNA...) ; 25 : HAC_tag (1) ; 26 : ANP structural 1 (S3) ; 27 : DV2a) ; 28 : DV2b) ; 29 : ANP structural 1 (S4) ; 30 : HAC_tag (2) ; 31 : HAC_tag (3) Figure 6 : 20 : interaction, mise en évidence par RMN, entre un ANP w-CGCCA-c (w: tryptophane et c : cystéine avec N-terminal 5' et C-terminal 3') ; 21 :Interaction, mise en évidence par RMN, entre un ANP w-GTCCC-c (w : tryptophane et c : cystéine avec N-terminal 5' et C-terminal 3') ; 22 : Interaction, mise en évidence par RMN, entre un ANP w-GTCCCGUCCCCGCCA-c SEQ ID No. 1 (w : tryptophane ; c : cystéine). Figure 7: reconnaissance anticorps/antigène sur membrane de nitrocellulose. A. Anticorps électro-réduits + BSA. B. Chimère + BSA Figure 8: Résultats de la fluorescence par marquage sur membrane de nitrocellulose. (1) Fluorescence du surnageant chimère/BSA sur nitrocellulose ( ; (2) contrôle négatif (sonde fluorescente sur BSA). Figure 9 : Résultats de la fluorescence sur les pièges magnétiques. (1) surnageant des pièges magnétiques / chimères marquées ; (2) contrôle négatif (sonde fluorescente avec pièges magnétiques).30 EXEMPLES De nouvelles molécules chimériques dites « hémi-anticorps », capables de s'auto-assembler dans un milieu approprié, sont synthétisées. Elles comprennent une partie de nature polypeptidique et une partie constituée d'une séquence nucléotidique ou d'un analogue. Préférentiellement, la partie polypeptidique est constituée de parties d'anticorps, et plus précisément des domaines variables d'un ou plusieurs anticorps qui sont issus des chaînes lourdes et légères d'un anticorps, et qui, en se structurant forment spécifiquement un site de reconnaissance de l'épitope. La seconde partie est constituée d'un acide nucléique ou d'un analogue tel qu'un ANP ou un LNA. Un premier type d'HAC consiste en deux domaines DV (un domaine issu d'une chaîne lourde d'un anticorps et un domaine issu d'une chaîne légère du même anticorps, qui reconnaissent spécifiquement l'antigène) et de deux séquences nucléiques. L'un des domaines DV (figure 1.3) est couplé de façon covalente (figure 1.4) en C-terminal, soit à l'extrémité 5' d'un acide nucléique (LNA, acide nucléique méthylphosphonate, acide nucléique thioate...), soit à l'extrémité N-terminale d'un ANP. L'autre domaine DV est couplé de façon covalente à son extrémité C-terminale, soit à l'extrémité 3' d'un acide nucléique (LNA, acide nucléique méthylphosphonate, acide nucléique thioate...), soit à l'extrémité C-terminale d'un ANP. Les deux séquences nucléotidiques complémentaires et orientées de façon anti-parallèle s'apparient créant une hélice alpha qui permet aux deux parties protéiques d'acquérir une forme fonctionnelle. En d'autres termes, les séquences ANP et/ou acide nucléique greffées à la suite des peptides du domaine DV agissent comme une structure de type « zipper » (ANP « Zipper » ou structuraux) et les deux domaines DV se disposent en vis-a-vis pour reformer le site actif d'un hémi-anticorps (Figure 1.5a), capable de cibler un antigène intra et/ou extra cellulaire. Cet auto-assemblage peut être utilisé pour associer, selon des assemblages nouveaux, des domaines DV nouveaux ou des domaines DV issus de domaines DV existants non associés afin de rechercher de nouvelles affinités. Cette invention décrit également un procédé de synthèse pour les chimères HAC et enfin des exemples particuliers d'utilisation de HAC spécifiques notamment pour lutter contre VIH-1 &2. Espaceurs/linkers peptidiques : polymère de 1 à 20 carbones : Dans un mode de réalisation particulier, les domaines DV utilisés conservent au moins une cystéine permettant d'établir des ponts disulfures entre domaines DV. Les acides nucléiques et/ou les ANP sont alors greffés après les dites cystéines, de manière qu'en s'hybridant, les acides nucléiques et/ou ANP greffés disposent judicieusement les cystéines en permettant la formation des ponts disulfures entre les deux chaînes DV qui formeront le site actif de l'hémi- anticorps. L'appariement des séquences nucléique de type zipper permet la formation d'une molécule stable, avec un pont disulfure ayant un potentiel rédox modifié. Ce pont disulfure est maintenu en milieu intracellulaire, ce qui augmente la possibilité d'avoir un site hémi-anticorps fonctionnel. Dans certains modes de réalisation, des molécules espaceurs linkers, telles que la Lysine, ou toute autre chaîne hydrogéno-carbonée, peuvent être intercalées entre l'acide nucléique et/ou l'ANP structural du domaine DV, de manière à ce qu'une fois les nucléotides hybridés entre eux, le décalage introduit par les espaceurs linkers entre les deux domaines DV permettent l'optimisation de la formation du site actif de l'hémi-anticorps. Greffage : Selon un mode de réalisation préférentiel, un ANP (a) est greffé en C- terminal d'un domaine DV, par l'intermédiaire du NH2 de la chaîne latérale d'une lysine liée à l'extrémité C-terminale dudit ANP (a) par une liaison peptidique. L'ANP (a) est donc d'orientation C vers N, opposée à l'orientation N vers C du DV, et la lysine joue le rôle d'espaceur linker. Le second domaine DV est liée par son extrémité C-terminale à l'extrémité N-terminale d'un autre ANP (b), grâce à une liaison peptidique ou amide avec l'un des NH2 d'une lysine, la dite lysine étant liée, par son groupement COOH, à l'extrémité N-terminale de l'ANP (b) complémentaire de l'ANP (a). L'ANP (b) est donc orienté N vers C, de même que le DV. Dans un mode de réalisation particulier, le greffage, d'un ANP modifié en N-ou en C-terminal par une lysine ou d'un acide nucléique modifié en 5' ou en 3' par un NH2, sur l'extrémité C-terminale des domaines DV se fait par l'action de l'acide 2 mercapto-ethansulfonique ou par l'action de l'acide 3 mercaptopropionique sur la cystéine des DV impliquée dans la formation du pont disulfure reliant la chaîne lourde et la chaîne légère d'un anticorps. Domaines peptidiques DV utilisés : Les domaines DV utilisés pour réaliser les chimères peuvent provenir soit de la digestion des anticorps par la pepsine, la papaïne, la trypsine (ou toute autre enzyme), soit de l'expression des gènes codant pour ces peptides dans des systèmes cellulaires tels que des bactéries, des levures, des cellules d'insectes, ou synthèses in vitro (kits)..., puis purification. La taille de ces domaines peut varier par exemple de 10 à 300, de 20 à 200 ou de 40 à 200 résidus d'acides aminés. Acides nucléiques structuraux « zippers » (ou domaines nucléotidiques (ii) ; figure 1.4 ; 1.5b) : Les acides nucléiques utilisés pour structurer l'hémi-anticorps sont des séquences complémentaires, dont la taille peut varier par exemple de 3 à 100 ou de 5 à 60 nucléotides. Ces séquences peuvent être de simples séquences nucléotidiques, des ANP, des LNA... Clonage : Dans le cas du clonage des domaines DV, le domaine DV peut être fusionné à son extrémité C avec une séquence peptidique LPXTAAAA (leucine- proline-X-Thréonine-ALANINE(4) (X = un acide aminé quelconque) ; SEQ ID No. 2). L'acide nucléique ou le ANP à greffer est quant à lui fonctionnalisé à l'une de ses extrémités par un poly-G, éventuellement par l'intermédiaire d'une lysine, l'extrémité N terminale du poly-G restant libre. Le domaine DV et l'acide nucléique ou le ANP sont alors fusionnés sous l'action de sortase A. Dans un mode de réalisation particulier, il est possible de combiner des DV d'anticorps différents en les complexant grâce à des ANP structuraux complémentaires pour obtenir des nouveaux anticorps dirigés contre de nouveaux antigènes. Il est ainsi possible d'effectuer des criblages d'antigènes pour la recherche de nouveaux anticorps. Dans un mode de réalisation particulier, les hémi-anticorps ADN/AC décrits ont à la fois la capacité d'atteindre spécifiquement la cellule ciblée (propriété de reconnaissance conférée par la partie anticorps) et celle de délivrer à l'intérieur de la cellule un domaine biologiquement actif (propriété conférée par la séquence hydrophobe additionnée). Ainsi, la molécule chimérique assure l'adressage de l'acide nucléique à la cellule mais aussi sa pénétration à l'intérieur de la cellule. L'invention concerne également un HAC qui peut être utilisé pour cibler des cellules spécifiques afin d'y introduire par exemple un domaine nucléique biologiquement actif (ex : ANP) dirigée contre une cible particulière. Ce domaine biologiquement actif est greffé par une liaison covalente à la suite d'une des séquences nucléiques zippers décrites plus haut. Dans ce cas, le site actif ou de reconnaissance anticorps de HAC est dirigé vers des antigènes de surface. Ceci permet d'une part de reconnaître spécifiquement les cellules ciblées, et d'autre part, favorise la pénétration d'un domaine biologiquement actif en rapprochant celle-ci de la membrane. En d'autres termes, la molécule chimérique est constituée des parties variables d'un hémi-anticorps DV1 a/DV1 b (figure 1.5a). Sur chaque peptide DV est greffé un acide nucléique structural (zipper), de telle sorte que cet acide nucléique greffé sur un peptide DV1 a est complémentaire et antiparallèle à l'acide nucléique structural (zipper) greffé sur le deuxième peptideDV1 b. Les deux peptides DV forment alors un hémi-anticorps avec son site actif ou de reconnaissance. Un des deux acides nucléiques structuraux se continue par une séquence nucléotidique (tag) (figure 1.6 à 1.8) comportant un domaine biologiquement actif. Dans un mode encore plus particulier l'hémi-anticorps permet de cibler des organelles ou des molécules intracellulaires. Domaine biologiquement actif (ou domaine Tag ; figure 1.6 à 1.9) Le domaine biologiquement actif peut être un acide nucléique, un ANP, une séquence mixte ANP/acide nucléique, ANP/peptide et plus généralement une séquence nucléotidique ou un analogue (ANP, LNA, méthylphosphonates, méthylsulfonates, acides nucléiques ou desoxy nucléiques modifiés ou un mélange de ces différentes molécules...) un ADNzyme, ANPzyme, ou un MiRNA, éventuellement un antisens, qui en entrant dans la cellule cible empêchera l'expression d'une séquence cible ou la dégradera ou présentera une activité DNAase ou RNAase , ou une combinaison de ces deux propriétés (figure 4.19). Dans un mode de réalisation particulier le domaine biologiquement actif est une séquence antisens comprenant tout ou partie de L'ARNtLys3, par exemple GTCCC ou GUCCC, complémentaire d'une partie de l'ARN viral VIH-1. Dans la figure 6.21, est présentée l'interaction, mise en évidence par RMN, entre un ANP w-GTCCC-c (w tryptophane et c cystéine avec N terminal 5' et C terminal 3') et les séquences Primer Binding Site (PBS) de VIH-1. La séquence forme un complexe extrêmement stable avec le PBS de VIH-1, capable de déplacer le complexe ARNtARNtLys3/ PBS de VIH-1. Dans un autre mode de réalisation le domaine biologiquement actif est une séquence antisens comprenant tout ou partie de la séquence terminale du tRNA_Iys3 par exemple CGCCA, complémentaire d'une partie de l'ARN viral VIH1. Dans la figure 6.20 est présentée l'interaction, mise en évidence par RMN, entre un ANP w-CGCCA-c (W tryptophane et c cystéine avec N terminal 5' et C terminal 3') et les séquences PBS de VIH-1. La séquence forme un complexe extrêmement stable avec PBS de VIH-1, capable de déplacer le complexe ARNtARNtLys3/ PBS VIH-1. Dans un mode de réalisation encore plus particulier le domaine biologiquement actif proprement dit est une combinaison des deux séquences GTCCC ou GUCCC et CGCCA (figure 6.22) (N' ATGGTAGAG-cystéine C' & N' cystéine-CTCTACCAT C' ). Dans un mode de réalisation particulier, la séquence antisens proprement dite est une séquence complémentaire à tout ou partie de la région PBS ou de la région TAR de l'ARN viral de VIH-1 ou VIH-2. Dans un mode de réalisation particulier, le domaine biologiquement actif antisens comprend des ANP (figure 6.22). Dans un mode de réalisation particulier, le domaine biologiquement actif est une séquence à activité enzymatique de type DNAzyme et des séquences de reconnaissance complémentaires de tout ou partie de la séquence PBS. Dans un mode de réalisation encore plus particulier, le domaine biologiquement actif est constitué d'un dimère DNA/ANP-zyme. La partie ANP (flanquant de part et d'autre la boucle DNA-Zyme) est complémentaire d'une séquence cible d'intérêt qui peut être tout ou partie de la séquence PBS ou TAR du VIH-1 ou VIH-2 (figure 4.22) et la partie DNA-zyme, formée de 2 à 23 résidus, présente une structure en boucle (Figure 4.23) et entraînera la dégradation de la séquence cible de par son activité RNase ou DNase. Dans un mode de réalisation particulier, la totalité de la séquence enzymatique est un ANP, formant ainsi un ANP-zyme. Dans un mode de réalisation particulier, la boucle enzymatique du ANPzyme est complètement ou partiellement substituée par un motif comprenant au moins un acide aminé tel que DH (acide aspartique - histidine), HD (histidine - acide aspartique), EH (acide glutamique - histidine) ou HE (histidine - acide glutamique) (figure 4.24). Dans un mode de réalisation particulier, la séquence ANPzyme, antisens, ANP/DNAzyme proprement dite est utilisée seule ou en combinaison de n'importe quelle partie de l'HAC_Tag (HAC, séquence espaceur, extrémité lipophile ou aromatique). Le système de séquence biologiquement active peut être adapté à tous types de virus, de bactéries notamment en ciblant les gènes de résistance aux antibiotiques afin d'inhiber la résistance et de rendre les bactéries sensibles à l'antibiotique correspondant. Dans un mode de réalisation particulier, la séquence anti-sens proprement dite comprend tout ou partie de la séquence ARN ou ADN des gènes bactériens de résistance aux antibiotiques ou une séquence anti-sens complémentaire à tout ou partie de cette séquence. Espaceurs/linkers nucléiques (figure 1.6) : La séquence greffée peut comporter une séquence espaceur de 5 à 50 10 nucléotides visant à optimiser la distance entre le domaine nucléique ii) l'HAC et et le domaine biologiquement actif qui doit pénétrer dans la cellule. Dans un mode de réalisation préférentiel, la séquence tag comprend une partie acide désoxyribonucléique faisant office d'espaceur (figure 1.6). L'espaceur est relié à une séquence ANP (ou à un autre acide nucléique, modifié ou non) 15 constituant le domaine biologiquement actif proprement dit (figure 1.8). Le domaine biologiquement actif est par exemple relié par une de ses extrémités à la séquence espaceur par une séquence labile en milieu réducteur par exemple un pont disulfure SS (figure 1.7). Dans un mode de réalisation particulier, la séquence espaceur est absente 20 et le domaine biologiquement actif est relié à l'hémi-anticorps par une liaison covalente. Dans un mode de réalisation particulier, une fonction thiol est présente à l'autre extrémité libre de la séquence espaceur. Cette fonction permet de greffer une autre molécule sur la séquence espaceur par l'établissement, par exemple, 25 d'une liaison SS. Cette liaison SS est labile en milieu réducteur tel que le milieu du cytoplasme cellulaire. Cette liaison, après réduction du pont SS, permet la séparation du HAC et du domaine biologiquement actif. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la fonction thiol est introduite à l'extrémité de la séquence espaceur par fusion, avec la dite séquence, d'une séquence comportant 30 une fonction thiol à une des extrémités. La fusion de la séquence espaceur et de la séquence comportant une fonction thiol à son extrémité libre peut être obtenue grâce à une ligase. Le domaine biologiquement actif peut, par exemple, comporter une fonction thiol à une de ses extrémités pour l'établissement d'un pont disulfure entre le domaine biologiquement actif et la séquence espaceur. Cette fonction thiol peut être remplacée par un acide maléïmide afin que la liaison entre la séquence espaceur et le domaine biologiquement actif soit persistante en milieu réducteur. Passaqe transmembranaire: La cible de cet HAC peut-être extra ou intracellulaire, ce qui implique, dans ce dernier cas, le passage de l'acide nucléique à travers la membrane plasmique. Ce passage est rendu possible par l'addition d'une séquence hydrophobe à l'extrémité libre de l'acide nucléique (domaine biologiquement actif) à transférer. Ce groupement lipophile (figure 1.9) permet au domaine biologiquement actif de traverser la membrane cellulaire plus facilement. Dans un mode de réalisation encore plus préférentiel, le groupement lipophile est aromatique de manière à s'intercaler dans une hélice mixte ANP/Acide nucléique afin de stabiliser cette structure formée entre l'antisens ANP et la cible acide nucléique. Le site de reconnaissance de la structure HAC_tag se fixe spécifiquement sur les cellules comportant les antigènes cibles ; la fonction lipophile greffée sur le domaine biologiquement actif (ANP antisens, DNAzyme...) permet au bras nucléotidique de traverser la membrane, et plus particulièrement, au domaine biologiquement actif. Le milieu intracellulaire étant un milieu réducteur, les ponts SS reliant le domaine biologiquement actif à la séquence espaceur sont réduits, libérant ainsi le domaine biologiquement actif à l'intérieur de la cellule cible. Par exemple I'ANP antisens se complexer alors avec les séquences sens cibles (ARN dans le cytoplasme ou ADN dans le noyau) et bloque les possibilités d'expression de la séquence cible (au niveau de la transcription, rétrotranscription, réplication, et/ou traduction). La molécule aromatique, telle que le tryptophane introduit à l'extrémité du ANP antisens, stabilise le duplex ANP/ADN ou ARN qui se forme, et améliore ainsi l'efficacité de blocage par l'ANP.30 Anticorps ou domaines peptidiques DV Dans un mode de réalisation particulier, l'anticorps utilisé pour réaliser le HAC_tag est un anticorps reconnaissant une protéine d'une enveloppe virale ou bactérienne. Dans un mode de réalisation particulier, l'anticorps utilisé pour réaliser l'HAC_tag est capable de se fixer sur la particule virale. Dans un mode de réalisation dédié, l'anticorps utilisé pour réaliser l'HAC_tag est l'anticorps anti gp120-17b. L'HAC_tag-gp120-17b peut se fixer sur les particules virales et est conduit par elles jusqu'aux cellules cibles du virus grâce aux interactions CD4/gp120. Après fixation des virions sur les cibles, le bras nucléique de l'HAC-tag peut traverser la membrane cellulaire grâce à la fonction lipophile greffée à l'extrémité du domaine biologiquement actif. Après passage au travers de la membrane cellulaire, le pont SS, reliant la séquence espaceur et le domaine biologiquement actif, est réduit dans le cytosol, libérant le domaine biologiquement actif dans la cellule. La séquence biologiquement active bloque ou bloque et dégrade la séquence virale, selon que domaine biologiquement actif est un antisens ou un antisens/ANPzyme. Selon un mode de réalisation particulier, l'anticorps utilisé pour la synthèse de l'hémi-anticorps est constitué d'un anticorps anti-retrotranscriptase notamment anti-retrotranscriptase VIH-1 ou VIH-2. Dans cette configuration, l'hémi-anticorps est relié au domaine biologiquement actf par l'intermédiaire d'une liaison persistante en milieu réducteur, par exemple par l'intermédiaire d'un acide maléïmide. Une séquence espaceur peut éventuellement être intercalée entre l'hémi-anticorps et le domaine biologiquement actif, les liaisons reliant HAC, séquence espaceur et domaine biologiquement actif étant persistantes en milieu réducteur. Le domaine biologiquement actif est préférentiellement une séquence ANPzyme, DNAzyme ou ANP antisens. Le HAC-tag ainsi constitué se complexe à la reverse transcriptase alors que le domaine biologiquement actif dégrade et/ou bloque l'ARN viral. Les HAC_tag peuvent être inclus (en particulier encapsidé) dans des microsphères ou des liposomes, plus particulièrement les HAC_tag seront inclus dans des liposomes constitués de membrane virale. L'invention concerne également un système comprenant (voir figure 5): 1) un premier HAC (HAC_1 ; figure 5.25), dirigé par exemple contre un antigène présent à la surface des cellules ou un antigène viral et comprenant ou constitué de: o deux domaines DV (DV1 a et DV1 b), liés respectivement à o deux séquences zippers (Si et S2) complémentaires, antiparallèles o un espaceur lié à une séquence zipper de HAC_1, lié par une de ses extrémités et par l'intermédiaire d'un pont SS à, o un domaine biologiquement actif (figure 5.8), lié par le biais d'une liaison covalente à o un acide nucléique structural, S3 (figure 5.26), d'un troisième HAC (HAC_3), o l'autre extrémité de la séquence structurale (S3) étant liée à o un domaine DV (DV2a ; figure 5.27); 2) un second HAC (HAC_2), dirigé par exemple contre un antigène présent également à la surface des cellules et comprenant ou constitué de: o deux domaines DV (DV3a et DV3b), liés respectivement à o deux séquences zippers (S5 et S6) complémentaires, antiparallèles o un espaceur comportant un pont disulfure ou lié par l'intermédiaire d'un pont disulfure à, o un acide nucléique structural, S4 (figure 5.29), complémentaire, antiparallèle à S3, lié à o un domaine DV (DV2b ; figure 5.28). 3) Dans une cellule comportant HAC_1 et HAC_2, un troisième HAC, HAC_3 se forme. Celui-ci comprend : o deux DV (DV2a et DV2b), liés aux o deux acides nucléiques structuraux, S3 et S4, complémentaires, antiparallèles (dérivés respectivement de HAC_1 et HAC_2), o S3 étant relié par le biais d'une liaison covalente au o domaine biologiquement actif dérivé de HAC_1 (figure 5.8). Selon un mode de réalisation particulier HAC_1 est dirigé contre la protéine gp120, HAC_2 est dirigé contre la protéine CD4. Selon un mode de réalisation particulier, DV2a et DV2b forment un site de reconnaissance HAC_3 (figure 5.31) anti retro-transcriptase lorsque les deux acides nucléiques structuraux S3 et S4 s'hybrident. Ce système peut être décliné de diverses manières pour délivrer, à l'intérieur d'une cellule, les deux parties d'un hémi-anticorps, qui peuvent ainsi s'auto-assembler dans la cellule. On peut notamment utiliser des particules virales pour délivrer spécifiquement les hémi-anticorps et leur domaine biologiquement actif dans la cellule. Préparation des molécules chimériques a) Réacteur L'anticorps subi une réduction électrochimique ménagée dans un réacteur refroidi. Le réacteur se compose d'un tube vertical de laiton de 2 mm de diamètre et de 1,5 cm de longueur contenant la solution d'anticorps à électroréduire. L'extrémité inférieur du tube est relié à la borne positive d'un générateur par une électrode mixte composée d'une aiguille remplie et entourée d'un de gel duracryl 20 % (124 µL de duracryl (Sigma)30% + 30 pL de Tris 1,5M pH 8,9 + 43,6 pL H2O + 50 pL de Tampon d'électroréduction + 5 pL APS 10% + 2 pL de Temed) contenu dans un tube Tycon (Norton) de 1.5 cm, fermé d'un côté à l'aide de la flamme d'un bec bensen. L'électrode gel permet le passage des électrolytes, mais limite la diffusion des anticorps ou de leurs formes réduites. L'extrémité supérieure du réacteur est reliée au pôle négatif du générateur par une aiguille, de manière à empêcher tout contact entre les parois du réacteur et l'électrode grâce à un cône de pipette qui guide l'aiguille à l'intérieur du réacteur. Le réacteur est entouré par un système de refroidissement constitué d'un autre tube en laiton torsadé pour former une spirale dans lequel circule de l'eau à la température de la glace fondante, sous à l'action d'une pompe péristaltique. Les paramètres utilisés pour la réduction de l'anticorps en hémi-anticorps sont : +100V, 2mA, 10 sec. b) Fonctionnalisation des hémi-anticorps Une solution de 4µL d'anticorps anti-BSA à 0,5 4 pL de tampon 0,12% R-mercaptoéthanol et de 6 µL de la séquence Tag_C à 500 ng/µL (5iHSTCAAGTAGCTTCAGAATCTTTTCCCCCC3' ; SEQ ID No. 3), est utilisé pour fonctionaliser les fonctions Thiols (SH) libéré sur les anticorps après réduction par électro-oxydation à -100V, 2mA, pendant 10 secondes. 10 Mise en évidence par fluorescence Le marquage des séquences Tag_C des chimères est réalisé grâce à une séquence nucléotidique (tag_D = 5'CTGAAGCT3_cystéine) complémentaire de la séquance tag_C et fonctionnalisée en 3' par un fluorophore Cyanine 3. 15 pL de séquence tag_D (0,3 pg/µL) sont ajoutés à 10 µL d'une solution de chimères 15 fonctionnalisées par une séquence tag_C et diluée (1/1000) dans du lait/TBS1X. Dans cette solution, un dépôt d'antigène BSA sur membrane nitrocellulose est incubé toute la nuit à 4°C. Après trois lavages avec du TBS 1X pendant 5 minutes pour éliminer les accrochages aspécifiques, la membrane est dénaturée par 50 pL de R-mercaptoéthanol 2,5%, à une température de 95°C, pendant 20 minutes. 2 20 pL de surnageant sont déposés sur une lame de verre. Le dépôt est séché 20 minutes à l'air libre et à l'abri de la lumière, puis la lame est scannée (Packard Bioscience) à 455 nm. Un contrôle négatif est effectué en parallèle : une membrane comportant un dépôt d'antigène est incubée avec 15 µL de tag_D et 1 mL de lait/TBS 1X à 4°C 25 toute la nuit avec agitation. La membrane subie le même protocole que précédemment. 2 gL provenant de sa dénaturation sont de même déposés sur lame de verre et scannés pour évaluer l'accrochage aspécifique. 30 REFERENCES David Baulcombe. 2002. An RNA Microcosm. Science, 297: 2002-2003. Rong Fan, Ophir Vermesh, Alok Srivastava, Brian K H Yen, Lidong Qin, Habib Ahmad, Gabriel A Kwong, Chao-Chao Liu, Juliane Gould, Leroy Hood & James R Heath. 2008. Integrated barcode chips for rapid, multiplexed analysis of proteins in microliter quantities of blood. Nature Biotechnology. Vol. 26, No. 12: 1373 ù 1378. Muthiah Manoharan, Kathleen L. Tivel and P. Dan Cook. 1995. Lipidic nucleic acids. Tetrahedron Letters. Vol. 36, No. 21: 3651-3654. Indriati Pfeiffer and Fredrik Hôôk. 2004. Bivalent Cholesterol-Based Coupling of 10 Oligonucletides to Lipid Membrane Assemblies. J. Am. Chem. Soc. 126 (33): 10224ù10225. Snehlata Tripathi, Binay Chaubey, Sabyasachi Ganguly, Dylan Harris, Ralph A Casale, and Virendra N. Pandey. 2005. Anti-VIH-1 activity of anti-TAR polyamide nucleic acid conjugated with various membrane transducing peptides. Nucl. Acids 15 Res. Vol. 33, No. 13: 4345-4356. 37 REVENDICATIONS1. Molécule chimérique appelée « hémi-anticorps », caractérisée en ce qu'elle comprend ou consiste en deux molécules chimériques A et B comprenant ou consistant chacune en : (i) un domaine polypeptidique caractéristique d'un domaine variable (ou DV) d'une chaîne lourde ou d'une chaîne légère d'un anticorps, ce domaine polypeptidique étant positionné à une extrémité dans les molécules chimériques A et B, le domaine polypeptidique (i) d'une des deux molécules chimériques, A ou B, étant caractéristique d'un DV d'une chaîne légère d'un anticorps et le domaine polypeptidique (i) de l'autre molécule chimérique, respectivement B ou A, étant caractéristique d'un DV d'une chaîne lourde d'un anticorps; et (ii) un domaine nucléotidique simple brin consistant en un polynucléotide, en particulier un ADN ou un ARN, ou un analogue d'un polynucléotide, en particulier un acide nucléique peptidique (ANP), un acide nucléique bloqué (ou LNA ; Locked Nucleic Acid), un acide nucléique méthylphosphonate, ou un acide nucléique thioate, le domaine nucléotidique de A et celui de B étant capables de s'apparier en une structure double-brin, par exemple en milieu hydrique et en particulier en milieu réducteur ; et (iii) le cas échéant, une ou plusieurs molécule(s) de liaison (ou linker(s)), et en particulier un linker liant les domaines (i) et (ii) d'une molécule chimérique A ou B, ledit ou lesdits linker(s) comprenant ou consistant en une chaîne hydrogénocarbonée comportant de préférence 1 à 20 carbones, et comprenant ou consistant en un ou plusieurs élément(s) choisi(s) parmi un peptide ou un polypeptide, un polynucléotide ou un analogue, une chaîne polycarbonnée, ethylènediamine, polylysine, bêta-alanine, et un sucre, le domaine polypeptidique (i) et le domaine nucléotidique (ii) de chacune des molécules chimériques A et B étant liés par une liaison covalente, par exemple par l'intermédiaire d'un groupement NH2, en particulier un groupement NH2 d'un linker, et le domaine (ii) de la molécule chimérique A et de celui de la molécule chimérique B étant appariés en une structure double brin en milieu hydrique, en particulier en milieu réducteur. 38 2. Hémi-anticorps selon la revendication 1, dans lequel: - dans la molécule chimérique A, l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i) est liée de façon covalente à l'extrémité 3' d'un acide nucléique ou à l'extrémité C-terminale d'un ANP, par exemple par l'intermédiaire du groupement NH2 de la chaîne latérale d'une lysine liée à l'extrémité C terminale dudit ANP par une liaison peptidique ; et/ou - dans la molécule chimérique B, l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i) est liée de façon covalente à l'extrémité 5' de l'acide nucléique ou à l'extrémité N-terminale d'un. ANP, par exemple par l'intermédiaire d'une liaison peptidique ou amide avec l'un des groupements NH2 d'une lysine, ladite lysine étant liée, par son groupement COOH, à l'extrémité N-terminale dudit ANP. 3. Hémi-anticorps selon la revendication 1 ou 2, dans lequel la 15 molécule chimérique A et/ou la molécule chimérique B comprend (comprennent) en outre un ou plusieurs élément(s) choisis parmi : • un domaine étiquette et/ou un domaine biologiquement actif, qui est un polynucléotide ou un analogue comprenant ou consistant en une séquence étiquette (ou séquence TAG) et/ou une séquence biologiquement active 20 permettant de bloquer l'expression de gènes cibles, en particulier à l'intérieur d'une cellule, par exemple un polynucléotide ou un analogue choisis parmi les éléments suivants: - un acide nucléique, en particulier un acide nucléique antisens ou un acide nucléique ayant une activité endonucléase par exemple une activité 25 ribonucléase ou desoxyribonucléase ; - un ANP, en particulier un ANP antisens ou un ANP ayant une activité endonucléase (ANPzyme), par exemple une activité ribo- ou desoxyribonucléase, - un LNA, un acide nucléique méthylphosphonate, un acide nucléique 30 méthylsulfonate, un acide nucléique ou desoxy-nucléique modifié, un ADNzyme, un ARNzyme ou un ANPzyme, un micro ARN (miRNA), uneséquence mixte ANP/acide nucléique ou ANP/peptide, un dimère DNA/ANP-zyme ; et - une combinaison d'au moins deux de ces éléments, ledit domaine étiquette ou le domaine biologiquement actif étant lié à l'extrémité libre du domaine nucléotidique (ii) de la molécule chimérique A ou B ou à l'extrémité libre d'un linker lié au domaine nucléotidique (ii) de la molécule chimérique A ou B, ledit linker étant tel que défini à la revendication 1, et la liaison dudit domaine étiquette ou dudit domaine biologiquement actif s'effectuant de préférence par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure, ou par l'intermédiaire d'une liaison persistante en milieu réducteur, par exemple une liaison établie avec un acide maléïmide ; et • un élément lipophile, en particulier une séquence, un groupement chimique ou un composé chimique lipophile, qui comporte de préférence un ou plusieurs groupement(s) et/ou composé(s) aromatique(s), par exemple un ou plusieurs résidu(s) tryptophane, ledit élément lipophile étant de préférence positionné à l'extrémité libre de la molécule chimérique A ou B. 4. Hémi-anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel : • la première molécule chimérique, A ou B, comprend ou consiste en: un domaine polypeptidique (i) tel que défini à la revendication 1, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, un domaine nucléotidique (ii) tel que défini à la revendication 1, le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, lié, de préférence par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure ou par l'intermédiaire d'une liaison persistante en milieu réducteur, par exemple une liaison établie avec un acide maléïmide, à un domaine étiquette ou un domaine biologiquement actif tel que défini à la revendication 3, etle cas échéant, un élément lipophile tel que défini à la revendication 3 ;et • la deuxième molécule chimérique, respectivement B ou A, comprend ou consiste en : un domaine polypeptidique (i) tel que défini à la revendication 1, ce domaine et le domaine polypeptidique (i) de la première molécule chimérique étant caractéristiques de DV d'un même anticorps, l'un de ces domaines étant caractéristique d'un DV de la chaîne légère d'un anticorps donné et l'autre étant caractéristique d'un DV de la chaîne lourde du même anticorps, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, et un domaine nucléotidique (ii) tel que défini à la revendication 1. 5. Hémi-anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel : • la première molécule chimérique, A ou B, comprend ou consiste en: un domaine polypeptidique (i) tel que défini à la revendication 1, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, un domaine nucléotidique (ii) tel que défini à la revendication 1, appelé S1 le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, lié, par exemple par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, en particulier un pont disulfure à un domaine étiquette ou un domaine biologiquement actif tel que défini à la revendication 3, lié, par exemple, par l'intermédiaire d'une liaison covalente, à le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, un second domaine nucléotidique appelé S3, qui comprend ou consiste en un polynucléotide, en particulier un ADN ou un ARN, ou un analogue d'un polynucléotide, en particulier un ANP, un LNA, un acide nucléiqueméthylphosphonate, ou un acide nucléique thioate, et qui est capable de s'apparier en une structure double-brin avec un domaine nucléotidique complémentaire appelé S4, par exemple en milieu hydrique, en particulier en milieu réducteur ; et le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, le domaine S3 ou ledit linker étant lié à l'extrémité C-terminale d'un second domaine polypeptidique, appelé DV2a, qui est caractéristique d'un DV d'une chaîne lourde ou d'une chaîne légère d'un anticorps, DV2a et le domaine polypeptidique (i) de la molécule chimérique A ou B étant de préférence caractéristiques de DV d'anticorps distincts, et le cas échéant, un élément lipophile tel que défini à la revendication 3, ledit élément lipophile étant relié à DV2a par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure ou par l'intermédiaire d'un linker tel que défini à la revendication 1, ledit linker comportant une liaison labile en milieu réducteur ou étant lié à DV2a par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, • la deuxième molécule chimérique, respectivement B ou A, comprend ou consiste en : un domaine polypeptidique (i) tel que défini à la revendication 1, ce domaine et le domaine polypeptidique (i) de la première molécule chimérique étant caractéristiques de DV d'un même anticorps, l'un de ces domaines étant caractéristique d'un DV de la chaîne légère d'un anticorps donné et l'autre étant caractéristique d'un DV de la chaîne lourde du même anticorps, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, et un domaine nucléotidique (ii) tel que défini à la revendication 1, appelé S2, capable de s'apparier en une structure double brin avec S1 en milieu hydrique, en particulier en milieu réducteur. 6. Hémi-anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel : • la première molécule chimérique, A ou B, comprend ou consiste en: un domaine polypeptidique (i) tel que défini à la revendication 1, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, le domaine nucléotidique (ii) tel que défini à la revendication 1, appelé S5, le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, ledit linker comportant le cas échant une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure ou étant lié par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure à, un second domaine nucléotidique appelé S4, qui comprend ou consiste en un polynucléotide, en particulier un ADN ou un ARN, ou un analogue d'un polynucléotide, en particulier un ANP, un LNA, un acide nucléique méthylphosphonate, ou un acide nucléique thioate, et qui est capable de s'apparier en une structure double-brin avec un domaine nucléotidique complémentaire appelé S3, par exemple en milieu hydrique, en particulier en milieu réducteur ; et le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, le domaine S4 ou ledit linker étant lié à l'extrémité C-terminale d'un second domaine polypeptidique, appelé DV2b, qui est caractéristique d'un DV d'une chaîne lourde ou d'une chaîne légère d'un anticorps, DV2b et le domaine polypeptidique (i) de la première molécule chimérique étant caractéristiques de DV d'anticorps distincts, et le cas échéant, un élément lipophile tel que défini à la revendication 3, ledit élément lipophile étant relié à DV2b par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur, par exemple un pont disulfure ou par l'intermédiaire d'un linker tel que défini à la revendication 1, ledit linker comportant une liaison labile en milieu réducteur ou étant lié à DV2a par l'intermédiaire d'une liaison labile en milieu réducteur; et• la deuxième molécule chimérique, respectivement B ou A, comprend ou consiste en : un domaine polypeptidique (i) tel que défini à la revendication 1, ce domaine et le domaine polypeptidique (i) de la première molécule chimérique étant de préférence caractéristiques de DV d'un même anticorps, l'un de ces domaines étant caractéristique d'un DV de la chaîne légère d'un anticorps donné et l'autre étant caractéristique d'un DV de la chaîne lourde du même anticorps, et les domaines suivants, positionnés successivement dans l'ordre suivant, à partir de l'extrémité C-terminale du domaine polypeptidique (i): le cas échéant, un linker tel que défini à la revendication 1, et un domaine nucléotidique (ii) tel que défini à la revendication 1, appelé S6, capable de s'apparier en une structure double brin avec S5 en milieu hydrique, en particulier en milieu réducteur. 7. Hémi-anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel les domaines polypeptidique (i) et en particulier les domaines polypeptidique (i) sont caractéristiques de domaines DV d'un ou plusieurs anticorps dirigé(s) - contre un antigène présent à la surface de cellules de mammifère, par exemple la protéine CD4, ou - contre un antigène viral, en particulier une protéine d'une enveloppe virale, par exemple la protéine d'enveloppe externe d'un virus VIH, ou - contre un antigène bactérien, en particulier une protéine d'une enveloppe bactérienne, ou - contre une rétrotranscriptase, notamment une rétrotranscriptase de VIH-1 ou VIH-2. 8. Vésicule, en particulier liposome, et plus particulièrement liposome constitué de membrane virale, par exemple de membrane de particules du virus VIH-1 ou VIH-2, ladite vésicule comportant un ou plusieurs hémi-anticorps tel(s)que défini(s) dans l'une quelconque des revendications 1 à 7, par exemple ladite vésicule comportant: • un hémi-anticorps tel que défini à la revendication 5, appelé HAC_1, dans lequel - le domaine polypeptidique (i) des molécules chimériques A et B est de préférence caractéristique d'un DV d'un anticorps dirigé contre un premier antigène présent à la surface de cellules de mammifère ou dirigé contre un antigène viral, par exemple contre la protéine d'enveloppe externe d'un virus VIH; et - le domaine polypeptidique DV2a est de préférence caractéristique d'un DV d'un anticorps anti rétro-transcriptase, notamment anti-rétrotranscriptase de VIH-1 ou VIH-2 ; ou • un hémi-anticorps tel que défini à la revendication 6, appelé HAC_2, dans lequel - le domaine polypeptidique (i) des molécules chimériques A et B est de préférence caractéristique d'un DV d'un anticorps dirigé contre un deuxième antigène présent à la surface de cellules de mammifère, par exemple contre la protéine CD4, ou dirigé contre un antigène viral; et - le domaine polypeptidique DV2b est de préférence caractéristique d'un DV du même anticorps que le domaine DV2a, DV2a ou DV2b étant caractéristique d'un DV de la chaîne légère d'un anticorps donné, par exemple un anticorps anti rétro-transcriptase, et l'autre domaine, respectivement DV2b ou DV2a, étant caractéristique d'un DV d'une chaîne lourde du même anticorps. 9. Composition, en particulier composition pharmaceutique ou thérapeutique, comprenant, consistant en ou consistant essentiellement en un ou plusieurs hémi-anticorps tel(s) que défini(s) dans l'une quelconque des revendications 1 à 7, en particulier un hémi-anticorps HAC_1 ou un hémianticorps HAC_2 tels que définis à la revendication 8, ou une ou plusieurs vésicules telle(s) que définie(s) à la revendication 8 et, le cas échéant, un support, un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 10. Composition selon la revendication 9, pour une utilisation comme médicament et en particulier pour la prévention et/ou le traitement d'un cancer et/ou d'une maladie génétique, par exemple une myopathie, et/ou d'une maladie infectieuse, en particulier d'une maladie virale et plus particulièrement une infection par un lentivirus, par exemple VIH-1 ou VIH-2, et/ou d'une infection bactérienne, par exemple une infection par une bactérie résistante à des antibiotiques. 11. Kit comprenant un ou plusieurs hémi-anticorps tel(s) que défini(s) dans l'une quelconque des revendications 1 à 7, en particulier un hémi-anticorps HAC_1 et/ou un hémi-anticorps HAC_2 tels que définis à la revendication 8, une ou plusieurs vésicules telle(s) que définie(s) à la revendication 8, une ou plusieurs composition(s) telle(s) que définie(s) à la revendication 9, et le cas échéant, une notice d'utilisation. 12. Kit selon la revendication 11, pour une utilisation telle que définie à la revendication 10.