Brevet FR2955024A1 — publié le 20110715

DISPOSITIF DE MISE EN CONTACT TRANSITOIRE D'AU MOINS UNE UNITE DE CAPTURE DE CIBLES BIOLOGIQUES AVEC UN FLUIDE LES CONTENANT, ET PROCEDE DE RECUPERATION DES CIBLES CAPTUREES. La présente invention concerne un dispositif de mise en contact transitoire d'au moins une unité de capture de cibles biologiques avec un fluide corporel les contenant, et un procédé de récupération de ces cibles capturées pour analyse. L'invention s'applique à des prélèvements réalisés en 10 particulier in vivo dans des fluides corporels du corps humain, par exemple des fluides corporels circulants, et notamment le sang, le liquide céphalorachidien, le fluide interstitiel ou la lymphe, ces fluides pouvant contenir à titre de cibles des protéines, des oligonucléotides tels que de l'ARN ou de l'ADN, des anticorps, des enzymes ou des cellules, à titre non limitatif. 15 Depuis de nombreuses années, les techniques d'analyse, qu'elles soient basées sur la génomique, la protéomique ou l'immunologie, progressent et atteignent des niveaux de sensibilité remarquables. Ces techniques sont basées sur la reconnaissance d'éléments d'intérêt ou cibles 20 biologiques qu'il faut extraire des autres éléments présents dans le prélèvement effectué que cela soit fait in vivo ou ex vivo. Si la cible est absente ou en trop faible proportion par rapport à la sensibilité de la méthode d'analyse, alors la mesure ne sera pas possible. Les méthodes de préparation de l'échantillon visent à capturer 25 les cibles recherchées et à les mettre en contact après concentration avec une surface fonctionnalisée, sur laquelle on réalise une mesure. Elles sont très intéressantes car elles permettent, par concentration de cette cible, de relâcher la contrainte sur la sensibilité de mesure. Par contre, elles sont inopérantes si la cible n'est pas présente dans le prélèvement effectué. Cet 30 écueil est évident par exemple, lors de l'analyse sanguine qui a vu la course à la réduction du volume prélevé mise à mal par la présence ou non de l'élément recherché et par la sensibilité du système de mesure. Une méthode classique est de mélanger des nanoparticules porteuses de sites de reconnaissance, telles que des nanobilles, avec l'échantillon contenant la cible puis d'effectuer la reconnaissance en volume et enfin de récupérer ces nanoparticules par centrifugation ou attraction magnétique avant d'effectuer un re-largage contrôlé des cibles captées sur une surface de mesure. Une autre méthode connue consiste à effectuer une recirculation du liquide à tester sur une surface présentant les sites de reconnaissance en question. La problématique du test de fluides corporels circulant dans le corps humain peut s'appréhender de la même manière. Dans l'exemple où le volume à tester est l'ensemble du sang ou du liquide céphalorachidien, on peut par analogie envisager la même approche qui consiste à injecter des nanoparticules métalliques et/ou magnétiques dans le fluide corporel ou sous la peau, les laisser reconnaître les cibles puis les récupérer par exemple par apposition d'un champ magnétique local ou par filtration sur une dérivation extra-corporelle. Cette approche nécessite une étude très approfondie des particules injectées en termes de toxicité et de filtration dans les reins, le foie, etc. Un problème non résolu à ce jour est une récupération satisfaisante de telles particules injectées. Pour parer aux problèmes notamment de risque de déclenchement de réactions immunitaires et de toxicité que peut poser l'injection de telles nanoparticules dans le corps humain, les solutions développées à ce jour reposent en général sur l'encapsulation de ces nanoparticules métalliques et/ou magnétiques dans différents matériaux et en particulier dans des polymères biocompatibles. En fonction de la porosité de ce polymère, il peut faire office de filtre, bloquant des espèces biologiques dépassant une certaine taille. Par espèce biologique, on entend ici les cellules, les molécules, virus, bactéries ou anticorps. Dans l'article "Multi-reservoir device for detecting a soluble cancer biomarker", K.D. Daniel et al, Lab on a Chip, 2007, Vol 7, les auteurs utilisent des nanoparticules d'oxyde de fer magnétiques fonctionnalisées avec des anticorps pour se lier spécifiquement à des cibles. Pour parer à un problème d'instabilité, ces nanoparticules sont disposées dans des puits en PDMS derrière une membrane en polycarbonate avec des pores de 10 nm. Les biomarqueurs peuvent passer à travers la membrane mais pas les nanoparticules, qui restent donc encapsulées. La détection se fait directement dans le dispositif par fluorescence. Le document de Brevet US-A1-2007/0122829 présente un dispositif de mesure de la concentration d'un analyte dans un fluide au moyen d'un agent de détection de type matrice de support polymérique macroporeuse couplée à un ligand, au sein d'un logement au moins en partie perméable. Le document de Brevet US-A1-2004/0157951 divulgue quant à lui un dispositif de mesure comprenant, d'une part, un noyau par exemple de type hydrogel qui peut contenir un agent capable de se lier de façon réversible avec un analyte et, d'autre part, un revêtement polymérique à perméabilité sélective. La détection se fait in situ par mesure de la fluorescence. Dans ces dispositifs connus, l'utilisation d'un revêtement ou d'une encapsulation améliore les performances du dispositif de mesure que ce soit pour l'efficacité de contraste, la tolérance face aux tissus ou la capacité de capture. Cependant, un inconvénient majeur de ces dispositifs connus est qu'ils ne sont pas conçus pour récupérer les nanoparticules, telles que des nanobilles ou nanosphères, après leur mise en contact avec les cibles recherchées dans le fluide considéré, notamment pour la capture de ces cibles ou pour une analyse d'IRM (imagerie par résonance magnétique). En d'autres termes, le problème du devenir des nanoparticules injectées in vivo n'est pas vraiment abordé dans cet état antérieur de la technique. Un but de la présente invention est de proposer un dispositif de mise en contact transitoire, notamment in vivo, d'au moins une unité de capture de cibles ou espèces biologiques à analyser avec un fluide corporel contenant ces cibles, qui remédie aux inconvénients précités. A cet effet, un dispositif selon l'invention comprend : - un embout de prélèvement présentant une extrémité de mise en contact destinée à être introduite dans un milieu contenant ce fluide, et - ladite ou chaque unité de capture qui est liée à ladite extrémité et qui comprend un support de capture définissant une surface de capture des cibles recouverte par au moins une couche polymérique réticulée biocompatible et poreuse conçue pour retenir ledit ou chaque support de capture et pour ne laisser passer que des particules biologiques incluant ces cibles de taille inférieure à une taille limite, de telle sorte que le ou chaque support de capture, notamment lorsqu'il est lié aux cibles, soit récupérable après cette mise en contact par dissolution de la ou de chaque couche. On entend par « unité de capture » un support de capture de ces cibles présentant une surface de capture qui est préférentiellement fonctionnalisée et qui est recouverte de la ou de chaque couche polymérique précitée. Cette surface dédiée à la capture des cibles contient ainsi préférentiellement des groupes fonctionnels conçus pour interagir sélectivement ou non avec ces cibles pour les capturer. La surface de capture qui caractérise ladite ou chaque unité de capture peut être la surface d'un support polymérique, semi-conducteur, métallique ou en verre, sur laquelle ont été greffés ces groupes fonctionnels. Cette surface peut être plane, micro ou nanostructurée, ou encore sphérique. ll peut notamment s'agir de la surface totale de nanoparticules de matériaux tels que le polystyrène, la silice ou un métal. Ces nanoparticules peuvent être magnétiques. Par l'expression « retenir le ou chaque support de capture », on entend éviter que tout ou partie de ce(s) support(s) soit dispersé dans l'organisme. Il s'agit donc de maintenir le(s) support(s) de capture solidaire(s) de l'embout de prélèvement. Par « embout de prélèvement», on entend dans la présente description un embout, pouvant correspondre à l'extrémité d'une aiguille, d'un cathéter ou d'un système externe, apte à être introduit dans le milieu contenant le fluide corporel. Un tel milieu peut par exemple être la veine d'un être humain ou animal. On notera que la ou chaque couche polymérique réticulée (i.e. gélifiée) selon l'invention présente ainsi une perméabilité sélective qui permet de faire en sorte que lors de cette mise en contact, ces composés soient isolés des éléments du fluide de taille supérieure à ladite taille limite. On notera en outre que cette couche de revêtement polymérique poreuse pour les composés permet : d'éviter un contact direct entre le support de capture qu'elle recouvre - et notamment les groupes fonctionnels greffés en surface - et le fluide corporel, afin de prévenir une réaction immunitaire ; d'empêcher la diffusion de tout ou partie du ou de chaque support de capture dans le milieu ; et - une capture sélective des cibles biologiques selon leur taille. De plus, cette couche polymérique présente l'avantage d'imposer moins de contraintes mécaniques aux tissus biologiques environnants du fait de sa souplesse. Selon une autre caractéristique de l'invention, la surface de capture dudit ou de chaque support de capture peut être constituée d'une partie de la surface de l'embout et/ou peut être reliée à cet embout, cette surface étant de préférence fonctionnalisée par des groupes fonctionnels greffés qui sont conçus pour interagir avec lesdites cibles pour les capturer. Lorsque le ou chaque support de capture constitue une partie de l'embout, il est de préférence localisé à ladite extrémité dudit embout, sous la forme d'une surface fonctionnalisée recouverte de la couche polymérique, cette surface pouvant être une partie de la surface de l'embout ou la surface de particules (préférentiellement des nanoparticules) noyées dans la couche polymérique, laquelle recouvre une partie de la surface de l'embout. Lorsque le ou chaque support de capture est relié à l'embout, il peut avoir la forme de fils ou de sphères, de diamètres micrométriques ou nanométriques, qui sont maintenus solidaires dudit embout, comme cela sera détaillé par la suite. Les groupes fonctionnels greffés sur la surface du ou de chaque support et aptes à capturer les cibles, forment des sites de reconnaissance de ces cibles, ces groupes étant de préférence choisis dans le groupe constitué par les fonctions anioniques, les fonctions cationiques, les anticorps, et les oligonucléotides tels que les aptamères. On peut également citer les fonctions de surfaces de type chromatographie et les fonctions des librairies peptidiques et oligonucléotidiques. A titre encore plus préférentiel, ces groupes fonctionnels qui fonctionnalisent la ou chaque surface de capture sont des groupes chargés de type anionique ou cationique. Avantageusement, ladite ou chaque couche polymérique peut présenter une porosité définissant ladite taille limite qui est comprise entre 30 nm et 500 nm. Lorsque le ou chaque support de capture est constitué de nanoparticules sphériques, la porosité de la couche polymérique est définie afin d'éviter que ces nanoparticules ne sortent de cette couche. On notera ainsi qu'un dispositif selon l'invention permet : - de laisser les surfaces de capture en contact étroit de manière transitoire avec les éléments circulants du fluide et notamment avec les cibles à capturer, - aux groupes fonctionnels liés aux cibles d'être aisément récupérables via le caractère réversible de la réticulation (i.e. gélification) de 25 ladite ou de chaque couche, - de garantir une non-dispersion dans le fluide testé de ces groupes fonctionnels ou de toute autre partie du support de capture. - d'éviter l'adsorption d'éléments biologiques indésirables du fluide sur ces groupes fonctionnels, ces éléments indésirables présentant 30 typiquement une taille supérieure à la taille des pores et étant par exemple des cellules sanguines telles que des globules rouges, ou de grosses protéines telles que l'albumine, grâce à la filtration produite par ladite ou chaque couche polymérique poreuse. D'une façon préférée, le dispositif est conçu de façon à ce que la ou chaque unité de capture, c'est-à-dire un support de capture recouvert d'au moins une couche polymérique, soit protégé mécaniquement lors de l'introduction et le retrait dans le milieu contenant le fluide biologique, et qu'il puisse être déployé une fois cette introduction réalisée. Cette protection mécanique a pour but de limiter les risques de dispersion de tout ou partie du ou des supports de capture, par exemple au contact de tissus lors de l'introduction et du retrait du dispositif dans un organisme. Le déploiement permet l'exposition du système de capture aux différentes espèces contenues dans le fluide biologique. Par exemple, lors de l'introduction, l'embout de prélèvement et la ou chaque unité de capture solidaire de cet embout peuvent être insérés dans une enveloppe protectrice de guidage, puis déployés lorsque l'extrémité de cette enveloppe protectrice a été introduite dans ledit milieu. De préférence, le déploiement est prévu réversible, et permet un reploiement en position repliée avant le retrait de l'enveloppe dudit milieu. L'enveloppe protectrice peut prendre la forme d'un l'extrémité creuse d'un tube, d'une aiguille, d'un cathéter, étant précisé que l'embout et/ou la ou chaque unité de capture peuvent être translatés à l'intérieur de cette extrémité, de façon à être déployés ou repliés selon le sens de la translation. Selon un premier mode de réalisation de l'invention, ladite ou chaque couche polymère recouvre une zone déterminée par exemple métallique de la paroi de l'embout, lequel est de préférence de type aiguille ou cathéter. Ainsi, selon ce premier mode, le support de capture est la partie de l'embout dont la surface est de préférence fonctionnalisée et recouverte de ladite ou de chaque couche polymérique. Avantageusement selon ce premier mode de réalisation de l'invention, la surface de capture dudit ou de chaque support de capture définit au moins une surface fonctionnalisée de l'embout qui peut être définie-: (i) par ladite zone de la paroi de l'embout avant son recouvrement par ladite ou chaque couche, et/ou (ii) par les surfaces fonctionnalisées respectives de particules noyées dans ladite ou chaque couche. Selon ce cas (i), la surface de capture dudit ou de chaque support de capture peut être formée exclusivement ou en partie desdits groupes fonctionnels qui sont formés en surface directement sur ladite zone de la paroi de l'embout (laquelle paroi est ainsi fonctionnalisée) et recouverts de ladite couche polymérique poreuse. Ladite zone de paroi est alors avantageusement constituée d'un matériau fonctionnalisable chimiquement et en outre structurable, tel que le silicium, le verre, un matériau métallique ou un oxyde, ou encore un polymère. Selon ce cas (ii), ledit ou chaque support de capture peut être constitué exclusivement ou en partie desdites particules fonctionnalisées en surface qui sont noyées dans ladite ou chaque couche, ces particules étant de type magnétiques ou non et étant de préférence des nanobilles ou nanosphères réalisées en un matériau ferromagnétique tel qu'un oxyde de fer et de taille moyenne comprise entre 50 nm et 250 nm. En relation avec ledit premier mode de l'invention, le matériau de ladite zone de paroi de l'embout peut avantageusement présenter une structuration géométrique de surface permettant d'optimiser l'adhésion et la bonne conformation de ladite ou chaque couche polymère. De plus, cette zone déterminée de l'embout peut avantageusement former une cuvette, une rainure ou une fente, de sorte à faciliter l'adhésion de ladite ou chaque couche sur cette zone de l'embout. Selon un second mode de réalisation de l'invention, ladite ou chaque unité de capture est reliée à ladite extrémité de mise en contact de l'embout par l'intermédiaire de moyens de liaison qui sont fixés par exemple par soudage ou collage à cette extrémité. Conformément à un premier exemple de ce second mode selon l'invention, lesdits moyens de liaison comprennent un sachet biocompatible poreux qui est fixé à ladite extrémité de l'embout et qui enveloppe ladite ou chaque unité de capture, par exemple sensiblement sphérique (la porosité de ce sachet étant de préférence de l'ordre du pm, voire inférieure à 1 pm), laquelle unité renferme des particules qui constituent ledit support et qui sont noyées dans ladite ou chaque couche polymérique. Dans ce cas, la ou chaque unité de capture a une dimension supérieure à la porosité du sachet (par dimension d'unité de capture, on entend le diamètre ou la plus grande largeur du support de capture recouvert de la couche polymérique correspondante). Dans ce premier exemple, ledit sachet poreux peut avantageusement envelopper une pluralité desdites unités de capture, qui peuvent par exemple comprendre chacune un support de capture sous forme de particules, lesquelles sont de type magnétiques ou non et sont de préférence des nanobilles ou nanosphères réalisées en un matériau ferromagnétique tel qu'un oxyde de fer, ces particules présentant une taille moyenne de préférence comprise entre 50 nm et 250 nm, ces particules étant recouvertes de ladite ou de chaque couche polymérique poreuse. Conformément à un deuxième exemple de ce second mode de réalisation selon l'invention, lesdits moyens de liaison comprennent au moins un fil biocompatible qui est fixé à ladite extrémité de l'embout et qui porte directement ou indirectement ladite ou chaque unité de capture, laquelle présente au moins une surface de capture fonctionnalisée définie par ce fil et/ou par les surfaces de particules noyées dans ladite ou chaque couche polymérique qui est formée sur ce fil. Dans ce deuxième exemple, ledit ou chaque support de 30 capture peut être constitué exclusivement ou en partie : - desdits groupes fonctionnels qui sont formés en surface sur ledit ou chaque fil (qui est ainsi fonctionnalisé) et qui sont recouverts d'un 2955024 'o revêtement ou gaine polymérique poreuse pour ce fil formant ladite couche ou, en variante, - desdites particules qui sont noyées dans un revêtement ou gaine polymérique poreuse pour ledit ou chaque fil formant ladite couche, ces 5 particules étant de type magnétiques ou non et étant de préférence des nanobilles ou nanosphères réalisées en un matériau ferromagnétique tel qu'un oxyde de fer, ces particules présentant une taille moyenne de préférence comprise entre 50 nm et 250 nm. Les surfaces de ces nanoparticules sont fonctionnalisées. 10 Dans une autre variante relative à ce deuxième exemple, ledit ou chaque fil peut porter indirectement au moins un support de capture par exemple sensiblement sphérique. Avantageusement, lesdits moyens de liaison peuvent alors comporter une pluralité de ces fils qui portent chacun plusieurs unités de capture, lesquelles peuvent être formées au contact de 15 chaque fil par trempage. Selon cette variante, chaque fil peut ainsi porter une pluralité d'unités de capture alignées le long de ce fil. Selon un troisième exemple de ce mode de réalisation, les supports de capture sont intégrés à une structure maillée composée d'une pluralité de brins ou segments organisés selon un réseau définissant des 20 mailles, dont la taille varie entre 30 et 100 pm et est préférentiellement de 50 Kim environ. Cette maille peut être de section polygonale ou circulaire, et les brins définissant la maille sont reliés à l'embout, directement ou par l'intermédiaire d'un fil. Ces brins peuvent être réalisés en métal ou en polymère(s), et ils sont recouverts d'une couche polymérique poreuse 25 encapsulant des nanoparticules fonctionnalisées. Ces brins peuvent également être fonctionnalisés, et recouverts d'une couche polymérique poreuse. Une telle structure maillée est initialement repliée dans une structure de guidage par exemple tubulaire, durant l'introduction dans le milieu biologique, puis elle est déployée selon des moyens connus, par exemple par des moyens de déploiement utilisés pour les stents. La structure en maille est ensuite repliée dans la structure de guidage avant d'être retirée du milieu. Dans ces exemples et variantes, le dispositif selon l'invention peut permettre un déploiement de la ou de chaque unité de capture dans le fluide corporel analysé. Par exemple, les unités de capture sont regroupées dans une enveloppe creuse de guidage formant par exemple l'extrémité creuse d'une aiguille, d'un cathéter ou d'un tube, lors de l'introduction et du retrait de cette enveloppe dans le milieu contenant le fluide corporel. Lorsque l'enveloppe a pénétré dans le milieu, la ou chaque unité de capture peut être déployée, étant précisé que ce déploiement peut par exemple être réalisé par translation de la ou de chaque unité de capture à l'intérieur de cette enveloppe de guidage. Le reploiement est réalisé par une translation en sens inverse, permettant de regrouper la ou chaque unité de capture dans cette enveloppe creuse. Selon une autre caractéristique de l'invention, la ou chaque couche est à base d'au moins un polymère biocompatible et à gélification réversible de préférence choisi dans le groupe constitué par les gels d'alginate (par exemple les hydrogels d'alginate), les copolymères d'alginate et de poly-L-lysine, le chitosan, l'agarose, la cellulose, le poly(triméthylammonium éthylacrylate méthyl sulfate)-b-poly (acrylamide), le poly(hydroxyéthylmétacrylate (HEMA), le poly(hydroxyéthylmétacrylate-méthyl éthacrylate (HEMA-MMA) et les autres copolymères issus du méthacrylate, les polyéthylèneglycols, les copolymères d'acrylonitrile et de polyéthylèneglycol, les polysaccharides et leurs mélanges. A titre encore plus préférentiel, ladite ou chaque couche est à base d'au moins un gel d'alginate qui est obtenu au moyen de polycations de préférence choisis dans le groupe constitué par les polycations de calcium, baryum, fer et strontium. L'utilisation d'un alginate est en effet particulièrement avantageuse, du fait qu'il est parfaitement biocompatible, non toxique et laisse les cibles à capturer le traverser. De plus, il est polymérisable et gélifiable (ou réticulable) aux températures ambiantes et demeure sous forme gélifiée à des températures corporelles et au pH correspondant aux conditions physiologiques. Selon une autre caractéristique de l'invention, le dispositif selon l'invention peut être équipé : - de moyens de dissolution de ladite ou de chaque couche polymérique après la mise en contact, pour avoir accès audit ou à chaque support de capture qui y est noyé et qui s'est lié ou non avec lesdites cibles à analyser, ces moyens de dissolution comprenant au moins un agent chélateur desdits polycations qui est par exemple, pour des polycations sodium, l'acide éthylène diamine tétra acétique (EDTA) ou le citrate de sodium, et - de moyens de récupération de préférence magnétiques du ou de chaque support de capture, dans le cas où ce support est constitué de particules magnétiques à surfaces respectives fonctionnalisées par lesdits groupes fonctionnels. Un procédé de récupération selon l'invention de cibles biologiques préalablement capturées par un dispositif de mise en contact tel que défini ci-dessus, notamment par greffage de ces cibles sur la surface de capture de ladite ou de chaque unité de capture, comprend les étapes successives suivantes : - un lavage de la ou de chaque unité de capture liée à ladite extrémité de l'embout par une solution tampon de préférence saline, une dissolution de la ou de chaque couche polymérique recouvrant ledit ou chaque support de capture, de préférence par au moins un agent chélateur de polycations tel que l'acide éthylène diamine tétra acétique (EDTA) dans le cas préférentiel où cette couche est à base d'un gel d'alginate, puis - une analyse des cibles biologiques présentes sur la surface de capture du ou de chaque support de capture.30 D'autres avantages, caractéristiques et détails de l'invention ressortiront du complément de description qui va suivre en référence à des dessins annexés, donnés uniquement à titre d'exemples et parmi lesquels : la figure 1 est une vue schématique en coupe longitudinale d'un dispositif de mise en contact de type cathéter conforme audit premier mode de réalisation selon l'invention, la figure 2 est une vue schématique en coupe d'un dispositif de mise en contact conforme audit premier exemple dudit second mode de réalisation de l'invention de type à sachet poreux relié à un embout, et 10 la figure 3 est une vue schématique en coupe d'un dispositif de mise en contact conforme audit second exemple dudit second mode de réalisation de l'invention de type à fils reliés à un embout. Dans les exemples décrits ci-dessous, on a utilisé pour la ou 15 chaque couche polymérique poreuse un hydrogel d'alginate formé par polymérisation dans un tampon aqueux adéquat composé de 150 mM de NaCl et de 10 mM d'HEPES à pH 7,4. On a mélangé l'alginate à ce tampon selon un rapport de 0,25 % à 2 %, de préférence autour de 1 %, pour l'obtention de cette couche polymérique dans laquelle on noie le ou chaque 20 support de capture selon l'invention à surface de capture avantageusement focnctionnalisée, pour se lier avec les cibles biologiques du fluide. On a ensuite réalisé la gélification (i.e. réticulation) de cette couche d'alginate en mettant en contact le polymère ainsi formé avec un bain aqueux contenant des polycations de préférence calcium (étant précisé que 25 les cations baryum, fer ou strontium sont également utilisables). Ce bain contenait de 10 mM à 1 M de CaCl2, de préférence 100 mM de CaCl2. La porosité de la couche réticulée d'alginate permet d'exclure les éléments indésirables du fluide de taille supérieure. Ces éléments indésirables peuvent être des cellules sanguines et de grosses protéines, telles que l'albumine ou 30 l'immunoglobuline. En référence aux figures 2 et 3, on a par exemple utilisé un microsystème d'éjection de gouttes pour former des couches polymériques sensiblement sphériques de 10 pm à 50 pm de diamètre, ce microsystème ayant les dimensions requises comme connu en soi. Un éjecteur disponible dans le commerce (de préférence avec une pointe piézoélectrique) peut également être utilisé pour former de telles 5 couches sphériques de 50 pm à 600 pm de diamètre. Une fois la capture des cibles réalisée par le support de capture formé de particules noyées dans la couche de la figure 1 ou dans chaque couche des figures 2 et 3, on a récupéré le support de capture inclus dans la ou chaque couche en opérant une « dégélification » ou dissolution de 10 cette couche en la mettant en contact avec un chélateur des polycations utilisés qui est avantageusement constitué d'EDTA ou de citrate de sodium dans le cas des polycations calcium. Une fois la ou chaque couche « dégélifiée », on a récupéré le support de capture qui y était noyé par exemple en utilisant un aimant pour le 15 « culotter » dans un puits, dans le cas préférentiel où les supports noyés dans les couches sphériques des figures 2 et 3 étaient chacun formés de nanoparticules magnétiques. Le procédé de récupération selon l'invention des cibles biologiques captées par ces supports de capture comprend les étapes 20 successives suivantes : lavage de la ou de chaque unité de capture dans une solution tampon, de préférence un tampon salin de type PBS (« Phosphate Buffered Saline » ou tampon phosphate isotonique) ; dépolymérisation, en utilisant par exemple une solution d'EDTA (l'acide éthylène diamine tétra acétique) à 0,5 M ; analyse des cibles biologiques greffées en surface sur les supports de capture (cette analyse peut être réalisée par toute technique d'identification de bio-marqueurs greffés en surface d'un support connue de l'homme du métier, notamment une technique de spectrométrie de masse, par exemple la spectrométrie de masse « SELDI » (« Surface 25 30 2955024 i5 Enhanced Laser Desorption/lonization » ou désorption/ionisation de surface activée par laser). Le dispositif 1 de mise en contact illustré à la figure 1 est essentiellement constitué d'un embout 2 de type embout de cathéter qui est conçu pour être introduit dans une veine ou cavité biologique d'un être humain ou animal en étant laissé quelques minutes en place, puis retiré. Cet embout 2 peut être réalisé en un matériau organique (par exemple plastique) ou inorganique (par exemple métallique) et plus généralement en tout matériau pouvant constituer un embout de cathéter ou d'aiguille d'injection ou de prélèvement. Dans l'exemple de la figure 1 qui est conforme au cas (ii) précité, les groupes fonctionnels définissant des sites de reconnaissance des cibles sont constitués de nanoparticules 3 fonctionnalisées en surface qui sont noyées dans une couche polymérique 4 enduite sur la zone de la paroi 2a de l'embout 2 et qui sont constituées de nanobilles ou nanosphères réalisées en un oxyde de fer ferromagnétique et de taille moyenne par exemple voisine de 100 nm. On a utilisé de telles nanoparticules commercialisées par les sociétés ChemiCell ou Biorad, pour utiliser la technologie des librairies combinatoires. Dans cet exemple, le support de capture est formé par les nanoparticules 3, et l'unité de capture correspondante est constituée par la couche polymérique 4 et les nanoparticules 3 noyées dans cette couche. On a déposé la couche 4, qui est de préférence à base d'alginate réticulé tel que défini ci-dessus, en couche fine sur cette paroi d'embout 2a par exemple métallique, en enrobant une multitude de ces nanoparticules 3 (typiquement de quelques dizaines de milliers à quelques milliards) via une polymérisation et une gélification in situ de l'alginate enrobant ces nanoparticules 3. Avantageusement, la zone de la paroi 2a de l'embout 2 destinée à recevoir cette couche d'alginate 4 présente une forme en cuvette ou rainure permettant d'y réaliser directement et de manière aisée la gélification et de faciliter l'adhésion de cette couche. La rainure peut être réalisée selon un axe parallèle à l'axe longitudinal de l'embout, sa profondeur étant comprise entre 300 pm et 1 mm. En variante, on pourrait former cette couche polymérique 4 sur l'embout 2 par trempage dans des solutions adéquates. On peut en outre prévoir une fonctionnalisation préalable de la paroi 2a de l'embout 2 de préférence par des fonctions chargées cationiques (poly-Lysine, amine, ammonium, polyméthylène-co-guanidine, poly-ornithine), ou en variante par celles précitées dans l'exposé général de l'invention, pour permettre une meilleure adhésion de la couche polymérique 4 d'alginate sur cette paroi 2a. Après retrait de cet embout 2 de la veine ou de la cavité biologique, on procède comme expliqué ci-dessus à la « dégélification » de cette couche 4 en vue de récupérer les nanoparticules 3 liées aux cibles du fluide pour analyse. Le dispositif 101 de mise en contact illustré à la figure 2 comporte, outre un embout 102 par exemple de type cathéter destiné à pénétrer dans une veine V ou cavité biologique d'un être humain ou animal, une pluralité de couches polymériques 104 sensiblement sphériques qui contiennent chacune une multitude de nanoparticules 103 par exemple du type de celles décrites en référence à la figure 1 et qui sont reliées à l'embout 102 par un sachet biocompatible poreux 105 fixé (par exemple par soudage ou collage) à l'extrémité 102a de l'embout 102 destinée à être immergée dans le fluide. Le sachet 105, tel qu'un sac de dialyse mais poreux avec des pores de taille contrôlée, est par exemple réalisé en « Nylon », en polycarbonate ou autre polymère biocompatible, voire en cellulose. La porosité de ce sachet 105 est de préférence choisie de l'ordre de 1 pm, voire plusieurs pm, à l'instar de celle des couches sphériques d'alginate 104. Dans cet exemple, les supports de capture sont chacun formés des nanoparticules 103 et chaque unité de capture est formée d'une couche polymérique 104 enveloppant ces nanoparticules 103. Quant au diamètre ou plus petite dimension transversale de chacune des couches sphériques d'alginate 104 enveloppées dans le sachet 105, il est de préférence supérieur à plusieurs pm, ce qui permet d'utiliser un sachet 105 de porosité de l'ordre de 1 pm, voire de plusieurs pm, d'où une réalisation relativement aisée de ce sachet 105. On réalise avantageusement la gélification des couches sphériques 104 dans lesquelles sont noyées les nanoparticules 103 directement dans le sachet en y injectant les gouttes d'alginate, étant précisé que ce sachet 105 contient au préalable l'agent gélificateur. On remplace ensuite le liquide contenant cet agent gélificateur par un tampon physiologique en utilisant la présence des pores, pour son utilisation in vivo. Comme indiqué précédemment, l'utilisation d'un alginate réversible permet de récupérer aisément les nanoparticules 103 liées aux cibles recherchées pour les analyses ultérieures, après retrait du sachet 105 de la veine V ou cavité biologique. Le dispositif 201 de mise en contact illustré à la figure 3 comporte, outre un embout 202 par exemple formé d'une extrémité d'un cathéter destiné à pénétrer dans une veine V ou cavité biologique d'un être humain ou animal, une pluralité de couches polymériques 204 sensiblement sphériques qui contiennent chacune une multitude de nanoparticules 203 par exemple du type de celles décrites en référence à la figure 1 et qui sont reliées à l'embout 202 par au moins un fil biocompatible 205a, 205b portant ces couches 204 et fixé (par exemple par soudage ou collage) à l'extrémité 202a de l'embout 202 destinée à être immergée dans le fluide. Dans l'exemple de la figure 3, plusieurs de ces fils 205a, 205b portent chacun une pluralité de ces couches 204, lesquelles sont directement formées de manière espacée au contact de chaque fil 205a, 205b par trempage dans des solutions appropriées. Dans cet exemple, les supports de capture sont chacun formés des nanoparticules 203, et chaque unité de capture comprend une couche polymérique 204 enveloppant ces nanoparticules 203. Ces fils 205a, 205b sont réalisés en toute matière biocompatible et conformable en fil (e.g. en « Nylon » ou autre polymère, voire en cellulose, à titre non limitatif). Avantageusement, on utilise des fils 205a, 205b préalablement fonctionnalisés en surface pour permettre une meilleure adhésion de la couche polymérique d'alginate 204 sur la surface de chaque fil 205a, 205b, étant précisé que les fonctionnalisations possibles sont du même type que celles précitées en relation avec la figure 1. Pour former ces couches sphériques 204 à base d'alginate au contact des fils 205a, 205b, on introduit ces derniers dans un bain gélifiant et l'on forme directement les gouttes d'alginate sur ces fils 205a, 205b par éjection dirigée. Comme précédemment, après avoir laissé ces fils 205a, 205b portant les nanoparticules 203 noyées dans les couches d'alginate 204 quelques minutes en place dans la veine V ou cavité biologique via l'embout 202 qui les porte, on retire cet embout 202 du fluide puis l'on procède comme expliqué ci-dessus à la « dégélification » de chaque couche sphérique d'alginate 204 en vue de récupérer les nanoparticules 203 liées aux cibles du fluide pour analyse.15 REVENDICATIONS1) Dispositif (1, 101, 201) de mise en contact transitoire notamment in vivo d'au moins une unité de capture de cibles biologiques avec 5 un fluide corporel contenant ces cibles, caractérisé en ce que le dispositif comprend : - un embout de prélèvement (2, 102, 202) présentant une extrémité (102a, 202a) de mise en contact destinée à être introduite dans un milieu (V) contenant ce fluide, et 10 - ladite ou chaque unité de capture qui est liée à ladite extrémité et qui comprend un support de capture (3, 103, 203) définissant une surface de capture des cibles recouverte par au moins une couche polymérique (4, 104, 204) réticulée biocompatible et poreuse conçue pour retenir ledit ou chaque support de capture et pour ne laisser passer que des 15 particules biologiques incluant lesdites cibles de taille inférieure à une taille limite, de telle sorte que ledit ou chaque support de capture soit récupérable après cette mise en contact par dissolution de ladite ou chaque couche. 2) Dispositif (1, 101, 201) selon la revendication 1, caractérisé 20 en ce que ladite surface de capture dudit ou de chaque support de capture est constituée d'une partie de la surface de l'embout (2) et/ou est reliée à cet embout (102, 202), cette surface étant fonctionnalisée par des groupes fonctionnels greffés qui sont conçus pour interagir avec lesdites cibles pour les capturer, ces groupes fonctionnels étant de préférence choisis dans le 25 groupe constitué par les fonctions anioniques, les fonctions cationiques, les anticorps et les oligonucléotides tels que les aptamères. 3) Dispositif (1, 101, 201) selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ladite ou chaque couche (4, 104, 204) présente une 30 porosité définissant ladite taille limite qui est comprise entre 30 nm et 500 nm. 4) Dispositif (1) selon une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ladite ou chaque couche (4) recouvre une zone déterminée (2a) par exemple métallique de la paroi de l'embout (2), lequel est de préférence de type aiguille ou cathéter. 5) Dispositif (1) selon la revendication 4, caractérisé en ce que ladite surface de capture dudit ou de chaque support de capture (3) définit au moins une surface fonctionnalisée de l'embout (2) qui est définie : - par ladite zone de la paroi de l'embout avant son recouvrement par ladite ou chaque couche, et/ou - par les surfaces fonctionnalisées respectives de particules (3) noyées dans ladite ou chaque couche (4). 6) Dispositif selon,les revendications 2 et 5, caractérisé en ce que ladite surface de capture dudit ou de chaque support de capture (3) est constituée exclusivement ou en partie desdits groupes fonctionnels qui sont formés en surface directement sur ladite zone (2a) de la paroi fonctionnalisée de l'embout et recouverts de ladite couche (4). 7) Dispositif (1) selon la revendication 5, caractérisé en ce que ledit ou chaque support de capture (3) est constitué exclusivement ou en partie desdites particules (3) fonctionnalisées en surface qui sont noyées dans ladite ou chaque couche (4), ces particules étant de type magnétiques ou non et étant de préférence des nanobilles ou nanosphères réalisées en un matériau ferromagnétique tel qu'un oxyde de fer et de taille moyenne comprise entre 50 nm et 250 nm. 8) Dispositif selon une des revendications 4 à 7, caractérisé en ce que ladite zone déterminée (2a) de la paroi de l'embout (2) forme une cuvette, une rainure ou une fente, de sorte à faciliter l'adhésion de ladite ou de chaque couche (4) directement sur cette zone de l'embout. 9) Dispositif (101, 201) selon une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ladite ou chaque unité de capture est reliée à ladite extrémité (102a, 202a) de l'embout (102, 202) par l'intermédiaire de moyens de liaison (105, 205a, 205b) qui sont fixés par exemple par soudage ou collage à cette extrémité. 10) Dispositif (101) selon la revendication 9, caractérisé en ce que lesdits moyens de liaison (105) comprennent un sachet biocompatible poreux (105) qui est fixé à ladite extrémité (102a) de l'embout (102) et qui enveloppe ladite ou chaque unité de capture, laquelle renferme des particules (103) qui constituent ledit support et qui sont noyées dans ladite ou chaque couche polymérique (104). 11) Dispositif (101) selon les revendications 2 et 10, caractérisé en ce que ledit sachet poreux (105) enveloppe une pluralité desdites unités de capture par exemple de forme sensiblement sphérique qui comprennent chacune un support de capture sous forme de particules (103), lesquelles sont de type magnétiques ou non et sont de préférence des nanobilles ou nanosphères réalisées en un matériau ferromagnétique tel qu'un oxyde de fer, ces particules présentant une taille moyenne de préférence comprise entre 50 nm et 250 nm. 12) Dispositif (201) selon la revendication 9, caractérisé en ce que lesdits moyens de liaison (205) comprennent au moins un fil biocompatible (205a, 205b) qui est fixé à ladite extrémité (202a) de l'embout (202) et qui porte directement ou indirectement ladite ou chaque unité de capture sous la forme d'au moins une surface de capture fonctionnalisée définie par ce fil et/ou par les surfaces de particules (203) noyées dans ladite ou chaque couche polymérique (204) qui est formée sur ce fil. 13) Dispositif selon les revendications 2 et 12, caractérisé en ce que ledit ou chaque support de capture est constitué exclusivement ou enpartie desdits groupes fonctionnels qui sont formés en surface sur ledit ou chaque fil (205a, 205b) et qui sont recouverts d'un revêtement ou gaine polymérique poreuse pour ce fil formant ladite couche. 14) Dispositif selon les revendications 2 et 12, caractérisé en ce que ledit ou chaque support de capture est constitué exclusivement ou en partie desdites particules qui sont noyées dans un revêtement ou gaine polymérique poreuse pour ledit ou chaque fil (205a, 205b) formant ladite couche, ces particules étant de type magnétiques ou non et étant de préférence des nanobilles ou nanosphères réalisées en un matériau ferromagnétique tel qu'un oxyde de fer, ces particules présentant une taille moyenne de préférence comprise entre 50 nm et 250 nm. 15) Dispositif (201) selon les revendications 2 et 12, caractérisé en ce que ledit ou chaque fil (205a, 205b) porte indirectement ladite ou chaque unité de capture qui comprend à titre de support de capture (203) lesdites particules noyées dans ladite ou chaque couche polymérique (204), lesdits moyens de liaison (205) comportant de préférence une pluralité desdits fils (205a, 205b) qui portent chacun plusieurs unités de capture formées au contact de chaque fil par trempage. 16) Dispositif (1, 101, 201) selon une des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite ou chaque couche (4, 104, 204) est à base d'au moins un polymère biocompatible et à gélification réversible choisi dans le groupe constitué par les gels d'alginate, les copolymères d'alginate et de poly-L-lysine, le chitosan, l'agarose, la cellulose, le poly(triméthylammonium éthylacrylate méthyl sulfate)-b-poly (acrylamide), le poly(hydroxyéthylmétacrylate (HEMA), le poly(hydroxyéthylmétacrylate-méthyl éthacrylate (HEMA-MMA) et les autres copolymères à base de méthacrylate, les polyéthylèneglycols, les copolymères d'acrylonitrile et de polyéthylèneglycol, les polysaccharides et leurs mélanges. 23 17) Dispositif (1, 101, 201) selon la revendication 16, caractérisé en ce que ladite ou chaque couche (4, 104, 204) est à base d'au moins un gel d'alginate qui est gélifié au moyen de polycations de préférence choisis dans le groupe constitué par les polycations de calcium, baryum, fer et strontium. 18) Procédé de récupération de cibles biologiques préalablement capturées par un dispositif (1, 101, 201) de mise en contact selon une des revendications précédentes, notamment par greffage de ces cibles sur la surface de capture de ladite ou de chaque unité de capture, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes successives suivantes : - un lavage de la ou de chaque unité de capture liée à ladite extrémité (102a, 202a) de l'embout (2, 102, 202) par une solution tampon de préférence saline, - une dissolution de ladite ou de chaque couche polymérique (4, 104, 204) recouvrant ledit ou chaque support de capture (3, 103, 203), de préférence par au moins un agent chélateur de polycations tel que l'acide éthylène diamine tétra acétique (EDTA) dans le cas où cette couche est à base d'un gel d'alginate, puis - une analyse des cibles biologiques présentes sur la surface de capture dudit ou de chaque support de capture.