Brevet FR2951946A1 — publié le 20110506

-1- Domaine de l'invention La présente invention se situe dans le domaine cosmétique et dermatopharmaceutique. L'invention concerne l'utilisation d'une composition comprenant au moins un hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae), en tant qu'agent actif, pour renforcer le cheveu et améliorer la santé du cheveu. L'invention est également relative à l'utilisation de ce nouvel agent actif pour la réalisation d'une composition dermato-pharmaceutique destinée à stimuler la pousse du cheveu ou lutter contre la chute du cheveu dans le cadre d'un traitement préventif ou curatif de la perte de cheveux liée à un état pathologique. L'invention porte encore sur un procédé de traitement cosmétique destiné à stimuler la pousse ou lutter contre la chute du cheveu et à lutter contre les agressions extérieures touchant le cheveu, selon lequel on applique topiquement une composition contenant l'agent actif sur les zones à traiter. L'invention porte encore sur un procédé de traitement cosmétique destiné à prévenir ou à lutter contre les agressions extérieures. Arrière plan de l'invention La croissance des cheveux et leur renouvellement sont principalement déterminés par l'activité des follicules de cheveu et de leur environnement matriciel. Le follicule de cheveu est une annexe cutanée autonome complexe qui comporte six grands compartiments, les uns d'origine dermique (gaine conjonctive et papille dermique), les autres de nature épithéliale (gaines épithéliales interne et externe, tige pilaire et sébacée). A la base du follicule se trouve la matrice, richement vascularisée, à l'origine des 3 couches concentriques du cheveu. Le cheveu est constitué de cellules épithéliales différenciées contenant essentiellement des kératines, elles-mêmes organisées en superstructures protéiques très stables. L'organisation et la solidité de la tige pilaire et du cheveu sont déterminées par l'activité et la bonne santé du follicule. Le follicule de cheveu se renouvelle selon un cycle d'activité qui comprend trois phases : la phase anagène, la phase catagène et la phase télogène. La phase anagène (phase de croissance) dure de un à dix ans et se caractérise par l'allongement constant du cheveu. Au début de chaque phase anagène, on observe un développement du micro-réseau vasculaire périfolliculaire. La microcirculation périfolliculaire joue donc un rôle primordial dans le processus de croissance du cheveu, en apportant les facteurs et les nutriments nécessaires à la croissance du follicule. 2951946 -2- La phase catagène qui succède dure seulement quelques semaines. Au cours de cette phase, les capillaires sanguins se collapsent et disparaissent. Le follicule s'atrophie et se rétracte vers la surface, à l'exception notoire de la papille dermique qui sera l'élément-clé de la future régénération. 5 La phase terminale ou phase télogène, qui dure quelques mois, correspond à une phase de repos du follicule à la fin de laquelle le cheveu finit par tomber. A la fin de cette période de repos, un nouveau follicule est régénéré et un nouveau cycle démarre. Il est par ailleurs été bien décrit que les mécanismes de différenciation des kératinocytes de l'épiderme et du follicule de cheveu sont sensiblement différents. Ainsi, 10 il est connu que les kératines de la tige pilaire représente une famille de kératines distincte de celle exprimée dans l'épiderme (Langbein et al., 2001, J. Biol. Chem. 276), ainsi la kératine K6irs (Porter et al., 2001, Br. J. Dermatol. 145: 558-568) est exprimée dans la gaine interne du follicule pileux mais pas dans l'épiderme, alors que les marqueurs de différenciation épidermiques, tels les kératines K1 et K10, ne sont pas exprimés dans le 15 follicule pileux (Lenoir et al., 1988, Dev. Biol. 130: 610-620). La chute ou perte naturelle des cheveux peut être estimée, en moyenne, à une centaine de cheveux par jour pour un état physiologique normal. Ce processus de renouvellement permanent peut être perturbé par de nombreux facteurs extrinsèques et intrinsèques, entraînant une perte importante, temporaire ou définitive, des cheveux que l'on regroupe 20 sous le terme générique d'alopécie. Ainsi, des perturbations de la microcirculation ont été observées dans la peau alopécique. Parallèlement, dans les zones alopéciques, une fibrose périfolliculaire s'installe, les follicules se miniaturisent cycle après cycle et progressivement, la vascularisation des bulbes s'amoindrie. Par ailleurs, le processus de renouvellement physiologique permanent des cheveux est 25 soumis au vieillissement. Si le signe le plus visible du vieillissement du cheveu est le blanchiment, la qualité de l'environnement biologique du follicule du cheveu est également affectée. Parmi les manifestations de vieillissement du cheveu, on observe une moindre synthèse des protéines de la matrice extracellulaire (collagène, laminine, fibronectine), provoquant une perte d'élasticité et de tonicité du tissu sous-cutané. Il y a 30 également une diminution de la cohérence et de l'organisation des follicules de cheveu, une diminution de la durée de la phase anagène et un allongement de la durée de la phase télogène (Courtois et al., 1995, Br. J. dermatol., 132 :86-93). Les cheveux perdent en effet de leur élasticité, ils sont plus fins donc plus fragiles. Au niveau de l'ensemble du cuir 2951946 -3- chevelu, le vieillissement se manifeste par une diminution de la densité capillaire et par la diminution progressive du diamètre des follicules, donnant à la chevelure un aspect plus pauvre, plus clairsemé (Pelfini, C. et al., J. Méd. Esth. Et Chir. Derm.1987 ; Birch MP et al. Br. J. Dermatol 2001;144:297-304). 5 Indépendamment du vieillissement intrinsèque, des altérations du cheveu ou du follicule de cheveu peuvent se produire lors d'agressions extérieures. En effet, si le cheveu est d'une remarquable stabilité, certains facteurs extérieurs, tels que le soleil, responsable du photo-vieillissement, les radicaux libres, la pollution ou encore certains traitements inappropriés peuvent aboutir à une détérioration prématurée de la structure 10 des cheveux et à un épuisement des follicules. On entend par l'expression « agression extérieure », les agressions que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les UV, ou encore les produits à caractère irritant tels que les tensioactifs trop détergents, les colorations et décolorations, permanentes ou défrisages trop fréquents, les 15 agressions mécaniques, telles que le frottement des vêtements, les coiffures provoquant des étirements répétés, le brossage trop intense, les brushings, le séchage à l'air trop chaud. Par pollution, on entend aussi bien la pollution « extérieure » due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, que la pollution « intérieure » qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papier- 20 peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldéhyde), ou bien encore la fumée de cigarette. Ces agressions extérieures aboutissent à une altération de la structure externe du cheveu et de ses propriétés mécaniques, mais peuvent aussi affecter le follicule de cheveu et provoquer un vieillissement prématuré. L'industrie cosmétique ou pharmaceutique recherche toujours des compositions 25 permettant de supprimer ou de réduire la perte ou de stimuler la croissance des cheveux. Comme molécule connue, on peut citer le 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde ou "Minoxidil" (brevets US 4 139 619 et US 4 596 812). Un composé connu pour maintenir la vascularisation périfolliculaire est le 4- vérapamil, décrit comme étant actif dans le traitement de la chute des cheveux, en particulier par leurs effets sur la 30 microcirculation (JP 88/062680). En outre, il existe d'autres brevets décrivant l'utilisation de vasodilatateurs pour application topique, destinés à stimuler la croissance des cheveux en agissant sur la microcirculation du cuir chevelu (EP 327 263). Un autre document brevet de Shiseido (JP 2951946 -4- 07316023) décrit également l'utilisation de l'arginine et de ses dérivés dans le traitement de l'alopécie. Toutefois, certains produits disponibles présentent des effets secondaires, comme c'est le cas pour le Minoxidil, ou ont une efficacité relative et circonscrite à la durée du traitement. Aussi, il subsiste le besoin d'une nouvelle composition 5 physiologiquement acceptable pour favoriser la croissance des cheveux et/ou réduire leur chute, présentant une action rapide et durable dans le temps. Des extraits peptidiques de levure ont précédemment été décrits pour leurs propriétés d'hydratation de la fibre capillaire pour une utilisation dans des compositions à rincer pour les cheveux (EP0695801). 10 D'autre part, des extraits peptidiques de levure ont précédemment été décrits pour leurs effets sur la peau (FR 2904 552, FR 2887 772). Les inventeurs ont maintenant mis en évidence que de tels hydrolysats peptidiques de levure avaient une activité sur le renforcement de la structure du follicule de cheveu et une amélioration de la santé du cheveu. Il a en particulier été démontré que l'hydrolysat peptidique, lorsqu'il est appliqué 15 sur le cheveu, augmente la différenciation des cellules épithéliales de la gaine externe du follicule, améliore la vascularisation du follicule et augmente l'expression des protéines de la matrice extracellulaire. Exposé de l'invention Le premier objet de l'invention est l'utilisation cosmétique d'une composition 20 comprenant au moins un hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae), en tant qu'agent actif, pour renforcer le cheveu et améliorer la santé du cheveu. Les fibres kératiniques humaines auxquelles s'applique l'invention sont notamment les cheveux, les sourcils, les cils, les poils de barbe, de moustache, les poils pubiens et les ongles. Plus spécialement, l'invention s'applique aux cheveux et/ou aux cils humains. 25 On entend par « hydrolysat peptidique », un mélange de composés majoritairement représentés par des peptides ou des oligopeptides. Selon l'invention, on utilisera indifféremment les termes « hydrolysat peptidique » ou « agent actif ». On entend par « agent actif capable de renforcer le cheveu et d'améliorer la santé du cheveu », tout hydrolysat peptidique issu de levure, capable d'augmenter l'expression des 30 kératines K14 et K17, d'augmenter l'expression de protéines de la matrice extracellulaire telle que le collagène I et d'augmenter l'expression de protéines de la lame basale telle que le collagène IV. 2951946 -5- On entend également que l'agent actif est capable d'augmenter l'expression de protéines présentes dans la paroi des vaisseaux sanguins présents dans le follicule, tels que la protéine CD34 et le collagène W. L'agent actif selon l'invention peut être obtenu par extraction de protéines de levure, 5 suivie d'une hydrolyse contrôlée qui libère des composés de nature peptidique. On entend par « composés de nature peptidique », les fragments de protéines et les peptides présents dans l'hydrolysat peptidique selon l'invention. L'utilisation d'hydrolysats peptidiques, et en particulier d'hydrolysats peptidiques de bas poids moléculaires, présente de nombreux avantages en cosmétique. Outre le fait de 10 générer des composés de nature peptidique qui ne préexistaient pas dans le mélange protéique de départ, l'hydrolyse et la purification permettent d'obtenir des mélanges plus stables, plus facilement standardisables et ne provoquant pas de réactions allergiques en dermato-cosmétique. L'hydrolysat de levure du genre Saccharomyces doit s'entendre comme un hydrolysat 15 de levure appartenant au genre Saccharomyces. Bien entendu l'hydrolysat peut être préparé à partir de levure d'au moins l'une quelconque des nombreuses variétés et espèces appartenant au genre Saccharomyces. Selon un mode de réalisation préférée, ledit agent actif provient de l'hydrolyse de protéines de levure de l'espèce Saccharomyces cerevisiae. 20 De très nombreuses protéines de levure sont susceptibles de contenir des peptides bioactifs au sein de leur structure. L'hydrolyse ménagée permet de dégager ces composés de nature peptidique. Il est possible, mais non nécessaire pour réaliser l'invention, d'extraire soit les protéines concernées d'abord et de les hydrolyser ensuite, soit d'effectuer l'hydrolyse d'abord sur un extrait brut et de purifier les composés de nature 25 peptidique ensuite. Selon une méthode de réalisation de l'invention actuellement préférée, l'hydrolysat de levure est un extrait aqueux. Par extrait aqueux, on entend tout ensemble de composés solubles dans l'eau ou dans tout solvant constitué totalement ou partiellement d'eau. Les extraits selon l'invention sont notamment des extraits aqueux purifiés. On peut en 30 particulier citer des solvants aqueux. Par solvant aqueux, on entend tout solvant constitué totalement ou partiellement d'eau. On peut citer l'eau elle-même, le glycérol, les solvants hydro-alcooliques en toutes proportions ou encore les solvants constitués d'eau et d'un composé comme le propylène glycol ou le butylène glycol en toutes proportions. Cet 2951946 -6- hydrolysat peut être obtenu par dissolution dans l'eau, l'alcool ou l'éther, puis par concentration de cette solution en faisant intervenir l'évaporation ou la distillation. Toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier peut être utilisée pour préparer l'hydrolysat selon l'invention. 5 Ainsi, dans une première étape, les levures sont mises en culture de manière classique dans un milieu adapté à leur développement, de préférence en présence de lactose. Elles sont récoltées par centrifugation puis mises en suspension dans une solution tampon, préférentiellement un tampon phosphate. Dans une seconde étape, ces cellules sont éclatées à l'aide d'une presse de french ou à l'aide d'un broyeur à bille, la majorité des 10 composants membranaires insolubles étant écartés par centrifugation ou par filtration. Un filtrat riche en protéines peut être alors recueilli et remis en solution. Une fraction, riche en composés de nature peptidique, peut alors être isolée par précipitation en milieu alcoolique ou par une solution saline. Les composants solubles et les acides nucléiques sont ainsi écartés. Selon une variante du procédé d'obtention de l'hydrolysat selon 15 l'invention, une étape de dialyse ainsi qu'une étape d'hydrolyse par un cocktail de protéases peuvent être ajoutées afin d'obtenir une fraction riche en composés de nature peptidique. Une étape supplémentaire de purification par un procédé de type chromatographique peut être envisagée. 20 Selon un autre mode de réalisation de l'hydrolysat de levure selon l'invention, l'étape d'hydrolyse peut être réalisée directement sur les levures récoltées après centrifugation ou sur les fractions obtenues après éclatement cellulaire. Des étapes de filtrations et de stérilisation sont par la suite réalisées. On procède à une phase de dilution dans de l'eau ou dans tout mélange contenant de 25 l'eau, puis cette dilution est stérilisée par ultrafiltration afin d'obtenir un hydrolysat peptidique caractérisé par une concentration en protéines de 30 et 70 % du poids total de l'extrait sec, plus particulièrement cette concentration est de 40 et 50 % du poids total de l'extrait sec. Les solvants utilisés sont physiologiquement acceptables et classiquement utilisés par l'homme du métier, choisis parmi le glycérol, l'éthanol, le propanediol, le 30 butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, ou tout mélange de ces solvants. Ainsi, l'agent actif selon l'invention est avantageusement solubilisé dans un ou plusieurs solvants physiologiquement acceptables, tels que l'eau, le glycérol, l'éthanol, le 2951946 -7- propanediol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques ou tout mélange de ces solvants. L' agent actif dilué est ensuite stérilisé par ultrafiltration. Après cette étape de dilution, l'agent actif peut être encapsulé ou inclus dans un 5 vecteur cosmétique ou pharmaceutique tels que les liposomes ou toute autre microcapsule utilisée dans le domaine de la cosmétique ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites. Selon un mode de réalisation avantageux, l'agent actif est présent dans les compositions de l'invention à une concentration comprise entre 0,001 % et 5 % environ, 10 et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 % et 1 % environ par rapport au poids total de la composition finale. Les compositions utilisables selon l'invention peuvent se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse ; d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans- 15 huile ou émulsions multiples ; elles peuvent aussi se présenter sous forme de crèmes, de suspensions, ou encore de poudres. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick ou être appliquées sur la zone à traiter sous forme d'aérosol. Elles 20 peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau. L'ensemble de ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des co-solvants (éthanol, glycérol, alcool benzylique, humectants...), 25 des épaississants, des diluants, des émulsionnants, des antioxydants, des colorants, des filtres solaires, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des huiles essentielles, des oligo-éléments, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants ou des eaux thermales etc. On peut par exemple citer des polymères 30 hydrosolubles de type polymère naturel, tels que les polysaccharides, ou polypeptides, des dérivés cellulosiques de type methylcellulose ou hydroxypropylcellulose, ou encore des polymères synthétiques, polaxamères, carbomères, PVA ou PVP et notamment les polymères vendus par la société ISP. 2951946 -8- Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à une concentration allant de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. 5 Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, par rapport au poids 10 total de la composition. Les compositions utilisables selon l'invention peuvent en particulier consister en un shampooing, un après-shampooing, une lotion traitante pré- ou post- traitement agressif pour les cheveux, une crème ou un gel coiffant, une lotion restructurante pour les cheveux, un masque, etc. La composition peut également se présenter sous forme de 15 mascara pour une application sur les cils, les sourcils ou les cheveux. Par ailleurs l'agent actif selon l'invention peut être utilisé seul ou bien en association avec d'autres agents actifs. Avantageusement, les compositions utilisables selon l'invention contiennent, en outre, 20 au moins un autre agent actif protecteur ou qui améliore la pousse et/ou la santé des cheveux. On peut citer, de manière non limitative, les ingrédients suivants : des vitamines, des agents anti-radicalaires, anti-UV, d'autres extraits peptidiques végétaux, le minoxidil, des esters de l'acide nicotinique, des agents anti-inflammatoires, de l'acide rétinoïque ou ses dérivés, du rétinol, des inhibiteurs de la 5 alpha-réductase ou des composés 25 peptidiques issus de la synthèse chimique. La composition utilisable selon l'invention pourra être appliquée par toute voie appropriée, notamment orale, parentérale ou topique, et la formulation des compositions sera adaptée par l'homme du métier, en particulier pour des compositions cosmétiques ou dermatologiques. 30 Avantageusement, les compositions selon l'invention sont destinées à une administration par voie topique. Ces compositions doivent donc contenir un milieu physiologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau et les phanères, et couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. 2951946 -9- On entend par « application topique », le fait d'appliquer ou d'étaler l'agent actif selon l'invention, ou une composition le contenant, à la surface de la peau ou d'une muqueuse. On entend par « physiologiquement acceptable », que l'hydrolysat peptidique selon l'invention, ou une composition le contenant, est approprié pour entrer en contact 5 avec la peau ou une muqueuse sans provoquer de réactions de toxicité ou d'intolérance. Selon un autre aspect de l'invention, la composition comprenant l'hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae), en tant qu'agent actif, est utilisée pour lutter contre l'alopécie. 10 L'alopécie recouvre un ensemble d'atteintes du follicule pileux ayant pour conséquence finale la perte transitoire ou définitive, partielle ou générale des cheveux. Les hommes comme les femmes peuvent être atteints d'alopécie, mais les zones préférentiellement touchées chez les hommes sont les golfes temporaux ou frontaux, alors que chez les femmes on constate une alopécie diffuse du vertex. 15 Le deuxième objet de l'invention est l'utilisation d'un hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae), en tant qu'agent actif, capable de renforcer les structures du follicule de cheveu. Cette action se caractérise au niveau histologique par une augmentation de la différenciation des cellules épithéliales de la gaine externe du 20 follicule, une stimulation de la vascularisation du follicule de cheveu et une densité accrue de la matrice extracellulaire et de la membrane basale. Au niveau moléculaire, l'action de l'hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae), selon l'invention se caractérise par l'augmentation de l'expression des kératines K14 et K17. 25 L'action de l'hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae) selon l'invention se caractérise également l'augmentation de l'expression de la protéine CD34 et du collagène IV dans la paroi des vaisseaux sanguins du follicule de cheveu. L'action de l'hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae), selon l'invention se caractérise encore par l'augmentation de l'expression du collagène I dans la 30 matrice extracellulaire et l'augmentation de l'expression du collagène IV dans la membrane basale du follicule de cheveu. 2951946 -10- Le troisième objet de l'invention concerne un procédé de traitement cosmétique destiné à prévenir ou à lutter contre les agressions extérieures du cheveu, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la zone à traiter la composition selon l'invention. 5 Le quatrième objet de l'invention concerne un procédé de traitement cosmétique destiné à restaurer et/ou stimuler la pousse des cheveux, ou lutter contre la chute du cheveu, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la zone à traiter la composition selon l'invention. 10 Le cinquième objet de l'invention est l'utilisation d'un hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae), en tant qu'agent actif capable de renforcer et protéger le follicule de cheveu, pour la réalisation d'une composition dermato-pharmaceutique, destinée à stimuler la pousse du cheveu ou lutter contre la chute du cheveu, dans le cadre d'un traitement préventif ou curatif de la perte de cheveux liée à un état pathologique. 15 Parmi les états pathologiques fréquemment responsables de la perte de cheveux, on peut citer la pelade, les effets secondaires de traitements médicamenteux certaines infections ou inflammations du cuir chevelu (le psoriasis, la dermatite séborrhéique, etc...). Selon cette forme de l'invention, les compositions seront appropriées à une administration orale pour un usage pharmaceutique. Ainsi, les compositions pourront 20 notamment se présenter sous forme de comprimés, capsules, gélules, pâtes à mâcher, poudres à consommer telles quelles ou à mélanger extemporanément avec un liquide, sirop, gels, et toute autre forme connue de l'homme du métier. Ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des solvants, des 25 épaississants, des diluants, des antioxydants, des conservateurs, d'autres agents actifs pharmaceutiques, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, etc. L'invention concerne encore un procédé de traitement cosmétique destiné à prévenir ou à lutter contre les manifestations du vieillissement et du photo-vieillissement du 30 cheveu, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la zone à traiter la composition selon l'invention. 2951946 -11- L'invention a encore pour objet un procédé de traitement cosmétique destiné à stimuler la pousse des ongles, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la zone à traiter la composition selon l'invention. Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent 5 également de la description précédente. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif. Liste des figures Figure 1 : Immunomarquage de la kératine K14 dans le follicule de cheveu traité par 10 l'hydrolysat selon l'exemple 1. Exemple 1 : Préparation d'un hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae) L'agent actif est obtenu à partir d'un extrait de levure de l'espèce Saccharomyces cerevisiae. 15 Les levures sont cultivées dans un milieu adapté à leur développement puis centrifugées pour récupérer une biomasse. La biomasse est ensuite broyée dans un broyeur à billes. Ensuite, le broyat est remis en suspension dans de l'eau à une concentration de 100 grammes par litre avant une hydrolyse enzymatique entre 40 et 60°C pendant 6 heures. Après hydrolyse, l'extrait est 20 centrifugé puis soumis à une dilution dans un mélange eau-glycérol. L'extrait est ensuite filtré avant stérilisation. On obtient alors un hydrolysat contenant une quantité de composés de nature protéique et peptidique représentant environ entre 30 et 70 % du poids total de l'extrait sec, plus particulièrement cette quantité est comprise entre 40 et 50 % du poids total de l'extrait 25 sec. La détermination de la composition en acides aminés de l'agent actif selon l'invention a également été réalisée. Après un dosage des protéines et des peptides par la méthode de Lowry, une hydrolyse acide est réalisée, pour réduire tous les peptides à l'état d'acides aminés libres. Un exemple de composition en acides aminés de l'hydrolysat est donné 30 dans le tableau suivant. Les valeurs sont exprimées en pourcentage d'acides aminés pour 100 g de protéines. 2951946 -12- Acides aminés % Alanine 7.4 Acide Aspartique 12.0 At-pinne 4.6 Acide Glutamique 15.6 Glycine 5.5 Histidine 2.8 Isoleucine 4.6 Leucine 9.2 Lysine 8.3 Phénylalanine 5.5 Proline 4.6 Serine 6.5 Thréonine 5.5 Tyrosine 4.6 valine 6.5 Tryptophane ND Exemple 2 : Mise en évidence de la stimulation de la différenciation des cellules épithéliales de la gaine externe du cheveu par l'hydrolysat selon l'exemple 1 5 Le but de cette étude est de déterminer l'influence de l'hydrolysat selon l'exemple 1 sur la différenciation des cellules épithéliales de la gaine externe du cheveu. Pour cela, des marqueurs de la différenciation des kératinocytes ont été étudiés. La kératine K14 est un marqueur précoce de la différenciation, exprimé dans le compartiment prolifératif de la gaine épithéliale externe du follicule de cheveu. La kératine K17 est un marqueur de 10 différenciation tardif, étroitement associé à la force de la tige pilaire. Protocole ; Des biopsies de peaux de 6 mm de diamètre provenant de lifting et contenant des follicules de cheveu sont mis en culture sur des inserts dans un milieu WILLIAM E., puis traitées pendant 48 heures par l'hydrolysat selon l'exemple 1 à 1 %. Des contrôles non traités sont également réalisés. A la fin de l'expérience, les biopsies 15 sont mises en cassette et plongées dans un mélange de formol à 10 % pendant 2 heures dans un appareil automatisé (VIP). L'enrobage dans la paraffine est préparé par une série de bains d'alcool (à concentration et temps croissants), suivie de 2 bains de xylène et enfin d'un bain de paraffine. La durée totale de cette série d'opérations est d'une douzaine d'heures. Les biopsies incluses dans la paraffine sont ensuite coupées à 4µm par un 20 microtome et montées sur des lames. Les lames sont déparaffinées, réhydratées puis soumises à un immunomarquage par un anticorps monoclonal dirigé contre la kératine 2951946 -13- K14 (Abcam) ou un anticorps monoclonal dirigé contre la kératine K17 (Abcam). puis d'un anticorps secondaire adapté, couplé à un marqueur fluorescent. Les coupes de peau sont alors examinées au microscope à Epi-fluorescence (Nikon Eclipse E 80i microscope). 5 Résultats : Sur les coupes de follicule de cheveu traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1 et marquées pour la kératine K14 ou la kératine K17, on observe une fluorescence beaucoup plus intense des cellules de la gaine épithéliale externe en comparaison avec le contrôle non traité. A l'aide d'un logiciel de quantification de la fluorescence, on peut mesurer une 10 augmentation de 44 % pour la kératine K14 et de 44% pour la kératine K17. Conclusions : L'hydrolysat selon l'exemple 1 augmente la différenciation des kératinocytes, en particulier de la kératine K17 étroitement associée à la résistance de la tige pilaire. L'hydrolysat selon l'exemple 1 augmente la cohésion de la gaine épithéliale externe et améliore la conformation de la gaine épithéliale interne. 15 Dans son ensemble, cette étude démontre que l'agent actif selon l'invention renforce la structure du cheveu. Exemple 3: Mise en évidence de l'effet stimulant de l'hydrolvsat selon l'exemple 1 sur la vascularisation du follicule de cheveu Le but de cette étude est de déterminer l'influence de l'hydrolysat selon l'exemple 1 20 sur les vaisseaux sanguins du follicule de cheveu. Pour cela, l'expression de marqueurs de la paroi des vaisseaux sanguins a été étudiée. Protocole Les cultures et les inclusions en paraffine sont réalisées selon le même protocole que dans l'exemple 2. Les lames sont déparaffinées, réhydratées, soumises à une étape de 25 démasquage puis à un immunomarquage par un anticorps monoclonal dirigé contre le collagène IV (Chemicon) ou contre la protéine CD34 (Novocastra), puis d'un anticorps secondaire adapté, couplé à un marqueur fluorescent. Les coupes de peau sont alors examinées au microscope à Epi-fluorescence (Nikon Eclipse E 80i microscope). 2951946 -14- Résultats Sur les coupes de follicule de cheveu traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1, et dont le collagène IV a été immunomarqué, on observe une fluorescence plus intense de la lame basale et de la paroi des vaisseaux sanguins comparativement au contrôle non traité. 5 A l'aide d'un logiciel de quantification de la fluorescence, on peut mesurer une augmentation de 144 %. Sur les coupes de follicule de cheveu traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1, et dont la protéine CD34 a été immunomarquée, on observe une fluorescence plus intense de la paroi des vaisseaux sanguins et de la gaine conjonctive comparativement au contrôle 10 non traité. Conclusions L'hydrolysat selon l'exemple 1 améliore la circulation sanguine dans le follicule, ce qui a pour conséquence d'augmenter l'apport de nutriment et ainsi d'améliorer la santé du cheveu. 15 D'autre part, l'hydrolysat selon l'exemple 1 améliore les structures du follicule de cheveu. Exemple 4 : Mise en évidence du renforcement des structures matricielles de l'hvdrolysat selon l'exemple 1 Le but de cette étude est de déterminer l'influence de l'hydrolysat selon l'exemple 1 20 sur la matrice extracellulaire et la papille dermique du follicule. Pour cela l'expression de l'une des principales protéines de la matrice a été étudiée. Protocole Les cultures et les inclusions en paraffine sont réalisées selon le même protocole que dans l'exemple 2. Les lames sont déparaffinées, réhydratées, soumises à une étape de 25 démasquage puis à un immunomarquage par un anticorps polyclonal dirigé contre le collagène I (Tebu-Rockland), puis d'un anticorps secondaire adapté, couplé à un marqueur fluorescent. Les coupes de peau sont alors examinées au microscope à Epifluorescence (Nikon Eclipse E 80i microscope). Résultats Sur les coupes de follicule de cheveu traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1, et dont le collagène I a été immunomarqué, on observe une fluorescence plus intense de la gaine conjonctive et de la papille dermique comparativement au contrôle non traité. Conclusions L'hydrolysat selon l'exemple 1 renforce la partie dermique entourant le follicule et assure ainsi une meilleure cohésion et une meilleure protection de la structure folliculaire du cheveu. Exemple 5 : Préparation de compositions 1 û Soin nourrissant pour cheveu et cuir chevelu Appliquer le produit sur le cuir chevelu humide. Masser pour répartir uniformément le produit. Renforce les cheveux tout en les rendant lisses et faciles à coiffer. Formulation 1 2 Nom INCI Nom commercial % % Fournisseur massique massique Phase A Deionized Water - Q.S. Q.S. Aminomethyl Propanol AMP-95 0,05 0,05 Acrylic Acid/VP Crosspolymer UltraThixTM P- 0,85 0,85 ISP 100 Phase B Gycerol Dilaurate EmulsyntTM 0,50 0,50 ISP GDL Jojoba Seed Oil - 2,00 2,00 Lipo Cetearyl Alcohol - 2,00 2,00 Rita Phase C Cyclopentasiloxane SiTecTM CM040 0,50 1,00 ISP Phase D VP/DMAPA Acrylates Styleze® CC-10 3,00 3,00 ISP Copolymer Water 20,00 20,00 Aminomethyl Propanol 0,37 0,37 Phase E Diazolidinyl Urea (and) Germaben® M 0,75 0,75 ISP Methylparaben (and) Propylene Glycol Hydrolysat selon 0,50 1,00 ISP l'exemple 1 Total 100,00 100,00 -15- 2951946 -16- Mettre l'eau et l'AMP-95 dans un récipient sous agitation. Ajouter l'UltraThixTM P-100 dans l'eau sous agitation vigoureuse et maintenir sous agitation pendant 30 minutes. Chauffer la phase A à 65 °C. Chauffer les ingrédients de la phase B à 65 °C puis les mélanger. Ajouter à la phase B et mélanger soigneusement. Refroidir à 35 °C. Ajouter la 5 phase C au mélange principal et mélanger jusqu' à obtenir un aspect uniforme. Indépendamment, mélanger les ingrédients de la phase D, jusqu'à obtenir un aspect uniforme. Ajouter le Germaben ®M (Phase E) et mélanger jusqu'à obtenir un aspect uniforme. Ajouter l'hydrolysat selon l'exemple 1 et agiter jusqu'à obtenir un aspect uniforme. 10 2 û Sérum pour la pousse des cheveux : Appliquer le produit sur le cuir chevelu humide. Masser pour répartir uniformément le produit. Favorise la pousse ou repousse des cheveux et rend la chevelure plus nerveuse. Formulation 1 2 Nom INCI Nom % % Fournisseur commercial massique massique Water Q.S. Q.S. Hydroxyethylcellulose Natrosol 0,35 0,50 Hercules/Aqualon 250HHR Disodium EDTA Dissolvine 0,05 0,05 Akzo Nobel NA-2S VP/DMAPA Acrylates Styleze® 5,00 5,00 ISP Copolymer CC-10 Quaternium-26 Ceraphyl® 1,00 1,00 ISP 65 Panthenol Ritapan DL 0,15 0,15 RITA Propylene Glycol (and) Liquid 0,50 0,50 ISP Diazolidinyl Urea (and) Germall® Plus Iodopropynyl Butylcarbamate Hydrolysat 1,00 1,00 ISP selon l'exemple 1 Total 100,00 100,00 Disperser le Natrosol 250HHR et le Disodium EDTA dans l'eau sous agitation. Chauffer à 50-60 °C, et agiter jusqu'à obtenir un aspect uniforme. Ajouter le Styleze CC-10, et agiter jusqu'à obtenir un aspect uniforme. Laisser refroidir à température ambiante et ajouter les ingrédients dans l'ordre de la liste en agitant jusqu'à obtenir un aspect uniforme entre chaque ajout. 2951946 -17- 3 ù Mousse traitante non aérosol : Appliquer le produit sur le cuir chevelu humide. Masser pour répartir uniformément le produit. Renforce la vitalité et la santé des cheveux et favorise une tenue durable de la coiffure, en particulier en atmosphère humide. Formulation 1 2 Nom INCI Nom % % Fournisseur commercial massique massique Water Q.S. Q.S. PEG-45M POLYOX N- 0,075 0,075 Dow 750 Polyquaternium-55 (20%) Styleze® W 5,00 5,00 ISP Propylene Glycol (and) Diazolidinyl Liquid 0,50 0,50 ISP Urea (and) Iodopropynyl Germall® Plus Butylcarbamate PEG/PPG-25/25 Dimethicone SiTecTM DMC 1,00 - ISP 6031 Palmitamidopropyltrimonium Varisoft PATC - 0,80 Degussa Chloride Hydrolysat 1,00 1,00 ISP selon l'exemple 1 Total 100,00 100,00 Mette de l'eau dans un récipient convenable, et agiter vigoureusement pour créer un vortex. Disperser le Polyox dans le vortex et agiter jusqu'à complète dissolution. Ajouter le Styleze W-20 et agiter jusqu'à obtenir un aspect uniforme. Ajouter ensuite les ingrédients dans l'ordre 10 de la liste en agitant jusqu'à obtenir un aspect uniforme entre chaque ajout. 5 REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique d'une composition comprenant au moins un hydrolysat peptidique de levure (Saccharomyces cerevisiae), en tant qu'agent actif, pour 5 renforcer le cheveu et améliorer la santé du cheveu. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'hydrolysat peptidique a une concentration en protéines de 30 et 70 % du poids total de l'extrait sec, et plus particulièrement de 40 et 50 % du poids total de l'extrait sec. 10 3. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'hydrolysat peptidique est solubilisé dans un ou plusieurs solvants physiologiquement acceptables, comme l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propanediol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques ou 15 tout mélange de ces solvants. 4. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'hydrolysat peptidique est utilisé en une quantité représentant de 0,001 % à 5 % du poids total de la composition, et préférentiellement en une quantité représentant de 20 0,01 % à 1 % du poids total de la composition. 5. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition se présente sous une forme adaptée à l'application par voie topique comprenant un milieu physiologiquement acceptable. 6. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition comprend en outre au moins un autre agent actif protecteur ou améliorant la pousse et/ou la santé des cheveux. 25 30 7. Utilisation selon l'une des revendications précédentes pour lutter contre l'alopécie. 2951946 -19-' 8. Utilisation cosmétique d'un hydrolysat peptidique tel que défini dans l'une des revendications 1 à 3, en tant qu'agent actif, pour renforcer les structures du follicule de cheveu. 9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que l'agent actif augmente l'expression de la kératine 14 et de la kératine K17 dans les cellules de la gaine externe du follicule de cheveu. 10. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que l'agent actif augmente 10 l'expression du collagène IV et de la protéine CD34 dans la paroi des vaisseaux sanguins du follicule de cheveu. 1 1. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que l'agent actif augmente l'expression du collagène I dans la gaine conjonctive et la papille dermique du 15 follicule de cheveu. 12. Procédé de traitement cosmétique destiné à lutter contre les agressions extérieures du cheveu, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la zone à traiter une composition telle que définie dans l'une des revendications 1 à 7. 13. Procédé de traitement cosmétique destiné à restaurer et/ou stimuler la pousse du cheveu, ou lutter contre la chute du cheveu, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la zone à traiter une composition telle que définie dans l'une des revendications 1 à 7. 25 14. Utilisation d'un hydrolysat peptidique de levure tel que défini dans l'une des revendications 1 à 3, en tant qu'agent actif capable de renforcer et protéger le follicule de cheveu, pour la préparation d'une composition dermato-pharmaceutique destinée à stimuler la pousse du cheveu ou prévenir la chute du cheveu liée à un état 30 pathologique. 15. Utilisation selon la revendication précédente caractérisée en ce que les états pathologiques sont la pelade, les effets secondaires de traitements médicamenteux, certaines infections ou inflammations du cuir chevelu. 20