Brevet FR2959820A1 — publié le 20111111

Procédé de dosage d'un analyte dans un milieu liquide L'invention concerne un procédé de dosage d'un analyte dans un milieu liquide par réaction de cet analyte avec des ligands portés par des particules magnétiques. On connaît, par le document WO 2009/034271-A1, un procédé de dosage dans lequel on applique au milieu liquide une série de cycles d'application et de coupure d'un champ magnétique pour provoquer la formation d'amas de particules magnétiques formés par pontage lors de la réaction analyte-ligands. Chaque application du champ se traduit par une augmentation du nombre de liaisons analyte-ligands et chaque coupure du champ cause une dispersion des particules non liées. Durant le procédé, le nombre et la taille d'amas de particules liées croissent provoquant une augmentation de la turbidité du milieu. Les mesures de la densité optique du milieu liquide après chaque coupure du champ magnétique permettent, moyennant un étalonnage préalable, de calculer la concentration de l'analyte dans le milieu liquide. La présente invention a pour objet des perfectionnements à ce procédé connu, permettant d'étendre les capacités d'analyse à différents milieux, d'améliorer le rapport signal à bruit, de réduire la durée du dosage et d'obtenir très rapidement un diagnostic sur la présence d'un agent recherché et une évaluation de sa concentration, et de permettre le multiplexage de la mesure de façon à mesurer la présence ou l'absence simultanée de plusieurs analytes. La présente invention exploite le fait que les amas de particules liées qui sont créés par les liaisons analytes-ligands ont une forme anisotrope. L'illustration la plus simple est l'amas de plus petite taille qui est un doublet composé de deux billes collées l'une à l'autre dans le cas d'un analyte moléculaire. Cette anisotropie microscopique à l'échelle des amas donne lieu à une anisotropie macroscopique, à l'échelle de la solution, dès que celle-ci est soumise à un champ magnétique orientant les amas selon les lignes de champ. Cette anisotropie peut être mesurée par un procédé optique. Selon l'art antérieur, le champ magnétique utilisé sert uniquement à provoquer la création rapide d'amas et par conséquent à faire avancer de façon efficace la réaction en créant des liaisons analyte-ligands, le champ magnétique étant toujours coupé au moment de la mesure. La présente invention se distingue de l'art antérieur en ce qu'un ou des champs magnétiques sont également utilisés lors de la mesure. Ce ou ces champs sont identiques ou non à celui utilisé pour faire avancer la réaction. Dans la suite de la description, on appellera champ de réaction le champ magnétique permettant de faire avancer la réaction et champ de mesure le ou les champs magnétiques utilisés pour la mesure. La présente invention propose donc un procédé de dosage d'un analyte dans un milieu liquide par réaction de cet analyte avec des ligands portés par des particules magnétiques, la réaction provoquant la formation d'amas de particules magnétiques par pontage lors de la réaction analyteligands, et par mesure d'un paramètre représentatif d'une propriété optique du milieu liquide, caractérisé en ce qu'il consiste à faire agir sur le milieu liquide un champ magnétique de mesure, à mesurer l'amplitude ou les variations du paramètre induites par la présence, les variations ou la coupure du champ magnétique de mesure et à en déduire la concentration de l'analyte dans le milieu liquide. Ce champ magnétique de mesure ou ses variations d'intensité et/ou d'orientation, provoquent des orientations, des désorientations ou des changements d'orientation des amas anisotropes magnétiques formés par pontage lors de la réaction analyte-ligands, qui modifient le paramètre représentatif d'une propriété optique du milieu liquide. La mesure des modifications de ce paramètre permet de déduire la concentration de l'analyte dans le milieu liquide. Le paramètre mesuré peut être la transmission optique du milieu liquide (turbidimétrie ou mesure de densité optique), ou les propriétés polarimétriques de ce milieu. On mesure donc, selon l'invention, uniquement la réponse optique du milieu à un champ magnétique de mesure. Par opposition aux techniques antérieures, cela permet d'éliminer automatiquement la plus grande partie du bruit lié à la mesure. Ce bruit est dû par exemple à la sédimentation du milieu, à la variation des caractéristiques optiques de particules ou de substances présentes dans le milieu et interférant avec la mesure, aux modifications de la réponse optique des particules magnétiques non liées. Dans la mesure selon l'invention, ces interférents sont neutralisés car ils ne réagissent pas, ou pas avec les mêmes constantes de temps, au champ magnétique de mesure. Le phénomène observé, lors de la mesure selon l'invention, peut être très rapide et a une durée comprise entre quelques millisecondes et quelques centaines de millisecondes, en fonction, en particulier, de la taille des amas de particules magnétiques, de la viscosité du milieu, des propriétés magnétiques des particules et de la valeur du champ. Il se produit typiquement à l'application du champ magnétique de mesure, les amas formés par pontage, alors désorientés, s'orientant selon les lignes de champ, ou aux changements d'orientation du champ magnétique lesquels provoquent une rotation des amas et par conséquence une modification des sections efficaces de ceux-ci, mais aussi à la coupure du champ magnétique, cette coupure se traduisant par une désorientation des amas formés par pontage. Avantageusement, le procédé selon l'invention consiste également à faire agir sur le milieu liquide un champ magnétique de réaction pour accélérer la réaction analyte-ligands, avant de procéder à la mesure précitée. On peut ainsi réduire beaucoup la durée de la réaction qui passe, par exemple, de plusieurs heures à quelques minutes ou dizaines de minutes. Dans un premier mode de réalisation de l'invention, le champ 30 magnétique de réaction est également le champ magnétique de mesure. Dans ce cas, c'est à l'établissement ou à la coupure du champ magnétique de réaction que l'on mesure la variation du paramètre considéré. Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le champ magnétique de mesure est différent du champ magnétique de réaction. Dans ce cas, on fait agir le champ magnétique de mesure sur le milieu liquide après la coupure du champ de réaction. Le champ magnétique de mesure peut avoir une intensité et/ou une orientation différentes de celles du champ de réaction, et être par exemple 10 perpendiculaire au champ de réaction. On peut aussi utiliser pour la mesure successivement deux champs magnétiques d'intensité et/ou d'orientation différentes. Avantageusement, la chaîne de mesure opto-électronique utilisée est optimisée afin d'augmenter le contraste de signal optique entre les 15 différentes configurations géométriques prises par les amas anisotropes et correspondant aux différentes configurations de champ magnétique de mesure utilisées. Cette optimisation consiste en particulier à sélectionner la ou les longueurs d'onde, polarisations, temps de réponse du faisceau de mesure optique en fonction des propriétés optiques, géométriques et 20 inertielles des amas anisotropes que l'on cherche à mesurer. Typiquement, le procédé peut être décomposé en plusieurs cycles élémentaires successifs, un cycle étant constitué d'une phase de réaction pendant laquelle un champ magnétique de réaction constant et uniforme permet la création d'amas magnétiques et la formation de liaisons analyte- 25 ligands, d'une phase de relaxation pendant laquelle le champ de réaction est coupé pour permettre aux amas sans liaisons ou avec des liaisons faibles de se disperser et enfin d'une phase de mesure pendant laquelle le champ magnétique de mesure est appliqué pour enregistrer la réponse optique du milieu due aux amas magnétiques anisotropes. Les mesures 30 réalisées à la fin de chaque cycle permettent de mesurer l'avancement temporel de la réaction de formation des liaisons analyte-ligands. Avantageusement, une mesure initiale est faite avant toute application de champ magnétique de réaction de façon à mesurer l'état initial de la solution. Lors de cette première mesure, l'application du ou des champs magnétiques de mesure nécessaires est brève de façon à ne pas provoquer d'avancement sensible de la réaction et pouvoir ainsi mesurer son état initial. La durée d'application est typiquement inférieure à quelques secondes. Cette mesure initiale est retranchée de celles faites en fin de chaque cycle, la différence des mesures réalisées correspondant à un nombre de pontages qui se sont formés entre la première et la dernière application du champ magnétique de réaction. De préférence, les durées d'application du champ magnétique de réaction pendant les phases de réaction des cycles sont progressivement croissantes, avantageusement de façon exponentielle, et les durées de coupure du champ pendant les phases de relaxation des cycles sont constantes. Selon une autre caractéristique de l'invention, le dernier cycle de mesure est caractérisé par une phase de relaxation longue, suivie par une dernière mesure qui permet de connaître l'avancement de la réaction en fin de procédé. La durée de cette dernière phase de relaxation est typiquement d'une ou plusieurs minutes. Cette période de relaxation permet de retirer, des amas magnétiques, les billes qui se sont liées lors des phases de réaction successives mais pour lesquelles les liaisons ne sont pas spécifiques de la réaction analyte-ligands. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, ce procédé consiste à appliquer au milieu liquide durant la phase de mesure de chaque cycle, successivement un premier champ magnétique ayant une orientation donnée, puis un second champ magnétique ayant une orientation différente, par exemple perpendiculaire à celle du premier champ magnétique, et à faire une mesure différentielle du paramètre optique entre ces deux configurations de champ magnétique. De façon optimale, la polarisation, la direction du faisceau de mesure optique et sa longueur d'onde sont optimisées pour maximiser le contraste optique entre les deux configurations magnétiques. On améliore ainsi la précision du dosage, en imposant l'orientation des amas magnétiques pour toutes les configurations utilisées pendant la mesure. Ceci permet de limiter les effets d'orientation non maitrisées sources de dysfonctionnement qui sont dus, par exemple, à des champs magnétiques externes, des effets de convection ou des effets d'hystérésis. Tous ces effets induisent des perturbations altérant la performance de la mesure. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, ce procédé consiste à placer dans le milieu liquide des particules magnétiques de différentes catégories. Ces catégories sont caractérisées par des vitesses de rotation différentes lors des modifications de champ magnétique, les particules sont pour cela différenciées par leur taille et/ou leurs propriétés magnétiques. Les particules d'une première catégorie étant fonctionnalisées avec des ligands spécifiques d'un premier analyte et celles d'une deuxième catégorie étant fonctionnalisées avec des ligands spécifiques d'un deuxième analyte, le procédé consiste à placer les deux analytes dans le milieu liquide, à appliquer un champ magnétique au milieu liquide, à mesurer un signal dû à l'orientation des doublets magnétiques correspondant au premier analyte, puis un signal dû à l'orientation des doublets magnétiques correspondant au deuxième analyte, et à déduire les concentrations des deux analytes des variations de ces signaux au cours des réactions analyte-ligands. En variante, le milieu liquide peut contenir des particules magnétiques d'une première catégorie fonctionnalisées avec des ligands spécifiques de l'analyte à doser, et des particules magnétiques d'une seconde catégorie fonctionnalisées avec des ligands ne réagissant pas avec le milieu liquide et l'analyte à doser, le procédé consistant alors à vérifier de façon complémentaire si, lors de l'application du champ magnétique, on constate ou non un signal dû à des doublets correspondant aux particules magnétiques de la seconde catégorie. Les particules magnétiques de la seconde catégorie servent alors de témoins négatifs pour le contrôle du procédé de dosage. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le paramètre considéré dont les variations sont mesurées, est la densité optique du milieu liquide. Dans une variante de réalisation de l'invention, on peut utiliser un paramètre optique plus complet comme les propriétés polarimétriques de la solution. Cette variante exploite également le fait que le signal utile n'est porté que par les amas de particules magnétiques qui ont une composante anisotrope. Le premier procédé décrit ci-dessus consiste à orienter le milieu en appliquant un champ et à enregistrer la modification de turbidimétrie correspondante. En variante, on peut appliquer le champ magnétique pour rendre la solution anisotrope et faire une mesure optique de type polarimétrique visant à quantifier le niveau d'anisotropie. L'invention sera mieux comprise et d'autres caractéristiques, détails et avantages de celle-ci apparaîtront plus clairement à la lecture de la description qui suit, faite à titre d'exemple en référence aux dessins annexés dans lesquels : - la figure 1 est un graphique représentant les variations de la densité optique d'un milieu liquide lors des cycles d'application et de coupure d'un champ magnétique dans le procédé selon l'invention ; - la figure 2 est un graphique représentant la variation des mesures du procédé selon l'invention en fonction du temps d'aimantation (durée d'application du champ magnétique). Comme déjà indiqué, le procédé selon l'invention est un perfectionnement du procédé de dosage décrit dans le document WO 2009/034271-A1 et utilise les moyens déjà décrits dans ce document, c'est- à-dire un milieu liquide contenant des particules colloïdales (ayant des dimensions comprises de préférence entre 100 et 1000 nm) d'un matériau superparamagnétique, qui peuvent s'organiser rapidement en chaînes ou en amas de particules sous l'effet d'un champ magnétique et se séparer rapidement à la fin de l'application du champ magnétique. Ces particules sont fonctionnalisées en surface avec des ligands spécifiques d'analytes à doser, la fonctionnalisation des particules magnétiques par les ligands étant réalisée de façon classique, comme décrit par exemple dans le document WO 03/044532-A1. Un volume déterminé d'une solution de particules colloïdales magnétiques fonctionnalisées est placé avec un échantillon d'analyte à doser dans un récipient, par exemple en matériau plastique transparent, sur lequel on fait agir un champ magnétique d'une intensité comprise par exemple entre 10 et 40 mT environ, en plaçant le récipient entre deux aimants permanents ou sur un électroaimant ou entre deux électroaimants. On mesure la densité optique du milieu liquide au moyen par exemple d'une source lumineuse telle qu'un générateur laser associé à une optique appropriée pour éclairer le récipient, et un photodétecteur tel par exemple qu'une photodiode ou un ensemble de photodétecteurs tels par exemple qu'une caméra CCD ou CMOS, dont la sortie est raccordée à des moyens de traitement de l'information qui pilotent la source lumineuse et les photodétecteurs et qui fournissent un signal de densité optique du milieu liquide. Les moyens de traitement de l'information permettent également de contrôler les moyens d'application et de coupure du champ magnétique et de synchroniser les mesures avec l'application et/ou la coupure du champ magnétique au sein du milieu liquide. Dans le procédé de dosage selon l'invention, le champ magnétique de réaction est appliqué de façon cyclique au milieu liquide contenant l'échantillon à doser, chaque cycle comprenant trois phases et ayant une durée qui est inférieure à la durée de réaction entre l'analyte et les ligands fixés sur les particules magnétiques. La première phase est caractérisée par l'application du champ magnétique de réaction et a une durée qui est supérieure au temps de formation des amas de particules magnétiques et qui croît progressivement d'un cycle au cycle suivant. Dans l'exemple de réalisation illustré par la figure 1, la durée de la phase d'application du champ magnétique de réaction est exponentiellement croissante et est par exemple de 10 secondes pour la première application du champ, de 20 secondes pour la deuxième application, de 40 secondes pour la troisième application, de 80 secondes pour la quatrième application et de 160 secondes pour la cinquième application du champ magnétique. La deuxième phase de chaque cycle est caractérisée par la coupure du champ magnétique et a une durée constante d'un cycle à l'autre, cette durée étant au moins égale ou supérieure au temps de dispersion des amas de particules et inférieure à la constante de temps de dissociation des pontages spécifiques entre les ligands et l'analyte. Dans l'exemple illustré par la figure 1, cette durée est de 20 secondes. La densité optique du milieu liquide est mesurée pendant toute la durée du procédé avec une période d'échantillonnage qui est petite par rapport à la durée des cycles et aux constantes de temps caractéristiques du système. Par exemple, l'acquisition de la densité optique est faite à haute cadence (toutes les millisecondes) à l'application du champ de mesure et à cadence plus faible (par exemple toutes les 100 millisecondes) durant les autres phases (application du champ de réaction et périodes de relaxation et stabilisation). La troisième phase de chaque cycle est une phase de mesure qui comprend l'application d'un champ magnétique au milieu liquide, à la fin de la deuxième phase précitée. Dans l'exemple de réalisation illustré en figure 1, un seul champ magnétique, perpendiculaire au faisceau de mesure optique est utilisé à la fois pour la réaction et pour la mesure. Le procédé de dosage selon cet exemple de réalisation de l'invention consiste essentiellement à mesurer la variation de la densité optique due à l'application du champ magnétique de réaction à la fin de chaque cycle. Lors de l'application du champ, les amas magnétiques jusqu'alors désordonnés du fait de l'absence de champ s'orientent parallèlement au champ et donc perpendiculairement au faisceau optique. La section efficace des particules étant plus grande en l'absence de champ, on constate une baisse de la turbidité du milieu. Cette décroissance est due à une orientation des amas anisotropes magnétiques formés par pontage lors de la réaction analyte-ligands le long des lignes de champ, cette orientation étant très rapide et ayant une durée inférieure à 100 millisecondes. Cette durée peut cependant être plus importante et par exemple de l'ordre d'une seconde ou de quelques secondes en fonction des particules magnétiques utilisées. Sur la courbe de la figure 1 qui représente la variation de la densité optique pendant l'exécution du procédé selon l'invention, la partie 10 de la courbe correspond à la valeur de la densité optique avant la première application du champ magnétique au milieu liquide et la partie 12 de cette courbe représente la décroissance due à l'orientation des doublets à la première application du champ magnétique de réaction, au temps t1. La partie suivante 14 de la courbe correspond à la durée d'application du champ magnétique, jusqu'au temps t2 où le champ magnétique de réaction est coupé. Après une période de 20 secondes, le champ magnétique de réaction est appliqué au temps t3 et provoque une nouvelle décroissance 16 de la densité optique. La partie suivante 18 de la courbe correspond à la durée d'application du champ magnétique, qui est coupé au temps t4. Le champ magnétique est de nouveau appliqué 20 secondes plus tard, au temps t5, et provoque une nouvelle décroissance 20 de la densité optique, suivie d'une croissance 22 de la densité optique pendant la durée d'application du champ magnétique jusqu'au temps t6. L'application du champ magnétique au temps t7, 20 secondes plus tard, se traduit par une décroissance 24 de la densité optique, suivie d'une croissance 26 jusqu'au temps t8 de coupure du champ magnétique. Au temps t9, 20 secondes plus tard, le champ magnétique est appliqué une nouvelle fois, ce qui provoque une décroissance 28 de la densité optique, suivie d'une croissance 30 de cette densité pendant la durée d'application du champ magnétique, qui est coupé au temps tlO. Au temps t11, 20 ou 30 secondes plus tard, le champ magnétique est réappliqué une nouvelle fois, de façon impulsionnelle. Cela provoque une décroissance 32 de la densité optique, suivie d'une croissance et d'une décroissance 34 de la densité optique sensiblement jusqu'à la valeur atteinte immédiatement avant l'impulsion de champ magnétique au temps t11. La densité optique décroît ensuite lentement jusqu'au temps t12 où une nouvelle impulsion de champ magnétique est appliquée au milieu liquide après une période de relaxation d'environ 2 minutes. Cette seconde impulsion de champ magnétique provoque une décroissance 36 de la densité optique suivie d'une croissance et d'une décroissance 38. La période de relaxation permet une rupture des doublets non spécifiques de la réaction analyte-ligands. Dans cette configuration, aux instants t1, t3, t5, t7, t9, la mise en place du champ magnétique de mesure correspond au début de l'application du champ magnétique de réaction du cycle suivant. Aux instants t11 et t12 en revanche, le champ magnétique n'est appliqué que pour réaliser la mesure, les durées d'application sont donc courtes. Le signal de mesure selon l'invention est l'amplitude maximum de variation de la densité optique à chaque mise sous champ du milieu liquide. Cette mesure est faite à chaque mise sous champ (t1, t3, t5, ...) en soustrayant le minimum de la valeur prise par la densité optique suite à la mise sous champ de la valeur de la densité optique avant l'application du champ. La mesure faite lors de la première mise sous champ à t1 sert de référence et est soustraite des autres mesures. La variation du signal ainsi obtenu en fonction de la durée totale d'aimantation, c'est-à-dire de la durée d'application cumulée du champ magnétique, est représentée en figure 2. Le premier point A correspond à la différence des décroissances 16 et 12 de la densité optique aux instants t3 et t1 respectivement, après une durée d'application du champ magnétique de 10 secondes. Le point B correspond à la différence des décroissances 20 et 12 de la densité optique aux instants t5 et t1 respectivement, après une application du champ magnétique pendant 30 secondes. Le point C correspond à la différence des décroissances 24 et 12 de la densité optique aux instants t7 et t1 respectivement, après une durée d'application du champ magnétique de 75 secondes. Le point D correspond à la différence des décroissances 28 et 12 de la densité optique aux instants t9 et t1 respectivement, pour une durée d'application du champ magnétique de 160 secondes. Le point E correspond à la différence des décroissances 32 et 12 de la densité optique aux instants t11 et t1 respectivement, pour une durée 15 d'application du champ magnétique de 320 secondes. Le point F correspond à la différence des décroissances 36 et 12 respectivement de la densité optique aux instants t12 et t1 respectivement, c'est-à-dire à la fin du procédé. La concentration de l'analyte dans le milieu liquide peut être déduite 20 de la valeur de l'ordonnée du point F, après un étalonnage préalable, cette ordonnée correspondant au nombre de doublets formés pendant le processus d'aimantation. On peut améliorer la précision du dosage en utilisant une autre configuration qui consiste à appliquer le champ magnétique une première 25 fois dans une direction donnée, puis une seconde fois dans une direction différente, par exemple perpendiculaire à la première et en mesurant la variation de densité optique entre ces deux configurations. De façon préférentielle, le faisceau optique est parallèle à une des deux directions magnétiques utilisées. Cette deuxième configuration est plus complexe que 30 la première mais est également plus sensible car elle permet de mesurer la contribution de tous les amas magnétiques anisotropes présents dans la solution, tandis que la première n'est pas sensible aux amas dont l'orientation initiale est déjà perpendiculaire au faisceau optique avant l'application du champ. Dans une variante de réalisation, l'invention prévoit d'utiliser des particules magnétiques d'une première catégorie qui sont fonctionnalisées avec des ligands spécifiques de l'analyte à doser, et des particules magnétiques d'une seconde catégorie qui sont fonctionnalisées avec des ligands ne réagissant pas avec le milieu liquide et l'analyte à doser. Ces deux catégories sont différenciées par leur réponse rotationnelle sous champ magnétique. Un exemple de réalisation peut être d'utiliser des billes de tailles différentes, 200nm et 500 nm par exemple, tout en maintenant les propriétés magnétiques identiques. Lors de l'application du champ magnétique, on mesure dans un premier temps la réponse de la population de billes de petite taille puis dans un deuxième temps celle des billes de grosse taille. On vérifie si on constate ou non une variation de la densité optique correspondant aux particules de la seconde catégorie. On peut ainsi détecter des signaux qui sont des « faux positifs » c'est-à-dire des signaux produits lorsqu'il n'y a pas de réaction analyte-ligands et qui sont cependant considérés comme représentant cette réaction. Ainsi, lorsque l'application du champ magnétique ne permet pas de constater une variation de la densité optique correspondant aux particules magnétiques de la seconde catégorie, on peut valider la mesure réalisée sur la variation de densité optique correspondant aux particules de la première catégorie. Dans le cas contraire, il faut annuler cette mesure. Selon encore une autre variante de l'invention, on utilise des particules magnétiques de différentes catégories, qui sont caractérisées par la taille des particules et/ou par leurs propriétés magnétiques, les particules d'une première catégorie étant fonctionnalisées avec des ligands spécifiques d'un premier analyte et celles d'une deuxième catégorie étant fonctionnalisées avec des ligands spécifiques d'un deuxième analyte. Ces particules et les deux analytes étant placés dans le milieu liquide, on applique un champ magnétique au milieu liquide et on mesure un signal dû à l'orientation des doublets magnétiques correspondant au premier analyte, puis le signal dû à l'orientation des doublets correspondant au deuxième analyte, et on déduit les concentrations de ces deux analytes à partir des variations de ces signaux au cours des réactions analyteligands, en procédant comme indiqué ci-dessus. Pour mesurer la quantité d'amas anisotropes formés, on peut utiliser un paramètre optique plus complet que la densité optique comme les propriétés polarimétriques de la solution. La mesure consiste à caractériser tout ou partie des coefficients des matrices de Jones ou de Mueller de la solution. Ces mesures sont plus complexes à mettre en oeuvre qu'une simple mesure de transmission optique qui est suffisante pour la turbidimétrie. Elles peuvent être utilisées dans une architecture utilisant plusieurs configurations de champ magnétique comme décrit précédemment mais également dans une configuration n'utilisant qu'un seul champ identique à ou confondu avec celui utilisé pour la phase de réaction. L'homme de l'art trouvera dans la technique de nombreuses méthodes de mesure de référence comme celles utilisées dans le domaine de la caractérisation des couches minces par ellipsométrie par exemple. On peut citer celle consistant à rendre anisotrope la solution en appliquant un champ magnétique perpendiculaire au faisceau optique de mesure puis à mesurer la variation de transmission de la solution en fonction de la polarisation du faisceau incident et/ou de la polarisation de l'analyseur utilisé devant le détecteur. Les moyens utilisés classiquement pour fixer la polarisation du faisceau incident et sélectionner la composante de la polarisation mesurée sur le détecteur sont usuellement des polariseurs linéaires fixes ou tournants, des modulateurs de phase électro-optiques ou photoélastiques, des lames à retard fixes ou tournantes. Revendications1. Procédé de dosage d'un analyte dans un milieu liquide par réaction de cet analyte avec des ligands portés par des particules magnétiques, la réaction provoquant la formation d'amas de particules magnétiques par pontage lors de la réaction analyte-ligands, et par mesure d'un paramètre représentatif d'une propriété optique du milieu liquide, caractérisé en ce qu'il consiste à faire agir sur le milieu liquide un champ magnétique de mesure, à mesurer l'amplitude ou les variations du paramètre induites par la présence, les variations ou la coupure du champ magnétique de mesure et à en déduire la concentration de l'analyte dans le milieu liquide. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste à mesurer le paramètre ou sa variation à partir de l'application ou de la modification du champ magnétique, sur une durée inférieure ou égale à une seconde. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il consiste également à faire agir sur le milieu liquide un champ magnétique de réaction pour accélérer la réaction analyte-ligands, avant de procéder à la mesure précitée. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le champ magnétique de réaction est également le champ magnétique de mesure. 5. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le champ magnétique de mesure est différent du champ de réaction. 6. Procédé selon l'une des revendications 3 à 5, comprenant plusieurs cycles d'application et de coupure du champ magnétique de réaction, caractérisé en ce que la mesure du paramètre ou de sa variation est faite par application du champ de mesure lors de chaque cycle après coupure du champ magnétique de réaction, la concentrationde l'analyte étant déduite de la variation de la mesure entre le premier et le dernier des cycles précités. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le dernier cycle d'application du champ magnétique de réaction est suivi d'une période de relaxation sans application de champ magnétique suffisamment longue pour permettre aux liaisons non spécifiques de l'interaction analyte-ligands de se défaire, cette période de relaxation étant suivie d'une mesure du paramètre ou de sa variation par application du champ magnétique de mesure, la concentration de l'analyte étant déduite de la différence entre cette mesure et celle réalisée lors du premier cycle. 8. Procédé selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que les durées d'application du champ magnétique de réaction pendant les cycles sont progressivement croissantes. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que les durées d'application du champ magnétique de réaction pendant les cycles sont exponentiellement croissantes. 10. Procédé selon l'une des revendications 5 à 8, caractérisé en ce que les durées de coupure du champ magnétique de réaction pendant les cycles sont constantes. 11. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer au milieu liquide successivement un premier champ magnétique de mesure ayant une intensité et une orientation données, puis un second champ magnétique de mesure ayant une intensité et/ou une orientation différentes, les orientations étant par exemple perpendiculaires, et à faire la mesure de la variation du paramètre entre les deux applications de champ magnétique. 12. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il consiste à utiliser comme paramètre de mesure la densité optique du milieu liquide. 13. Procédé selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé en ce qu'il consiste à utiliser comme paramètre de mesure les propriétés polarimétriques du milieu liquide. 14. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il consiste à placer dans le milieu liquide des particules magnétiques de différentes catégories, les catégories étant différenciées par la taille des particules et/ou par leur propriétés magnétiques, les particules d'une première catégorie étant fonctionnalisées avec des ligands spécifiques d'un premier analyte, celles d'une deuxième catégorie étant fonctionnalisées avec des ligands spécifiques d'un deuxième analyte, à placer les deux analytes dans le milieu liquide, à appliquer un champ magnétique de mesure au milieu liquide, à mesurer un signal dû à l'orientation des amas magnétiques correspondant au premier analyte, puis un signal dû à l'orientation des amas magnétiques correspondant au deuxième analyte, et à déduire les concentrations des deux analytes des variations de ces signaux au cours des réactions analyte-ligands. 15. Procédé selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce que le milieu liquide contient des particules magnétiques d'une première catégorie fonctionnalisées avec des ligands spécifiques de l'analyte à doser, et des particules magnétiques d'une seconde catégorie fonctionnalisées avec des ligands ne réagissant pas avec le milieu liquide et l'analyte à doser, le procédé consistant à vérifier si, lors de l'application du champ magnétique de mesure, on constate ou non une variation du paramètre précité due à des amas correspondant aux particules magnétiques de la seconde catégorie.