Brevet FR2960974A1 — publié le 20111209

PROCÉDÉ DE DÉTECTION DE RUPTURE DE MEMBRANES DESCRIPTION Domaine technique La présente invention se rapporte à un procédé de détection de rupture des membranes foetales et à un dispositif de mise en oeuvre du dit procédé. La présente invention trouve, notamment une application dans le domaine médical, le domaine diagnostique, en particulier dans le domaine obstétrique. Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ([ ]) renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte. Etat de la technique Durant la grossesse, les femmes peuvent être soumises à différents facteurs et/ou évènements susceptibles de mettre en danger la grossesse. La rupture des membranes foetales fait partie de ces évènements, en particulier lorsque la rupture des membranes est prématurée. L'origine de cette rupture est variable. Il peut s'agir, par exemple, d'un traumatisme direct ou indirect comme un coup porté au niveau abdominal, accident de circulation, rapports sexuels, etc. Elle peut être due également à une fragilité membranaire endogène (déficience en collagène, malnutrition, tabagisme), une grossesse gémellaire, un hydramnios, une complication liée à une amnioscopie, à la pose d'un laminaire au cours d'une interruption volontaire de grossesse (IVG). Elle peut être également d'origine infectieuse et due à une Chorioamniotite, une vulvo-vaginite ou une endométrite. Enfin, dans 60% des cas la cause de la rupture est inconnue. La rupture des membranes foetales entraîne un écoulement du liquide amniotique et représente une « porte ouverte » à tous les agents pathologiques : bactéries, virus etc. Ces agents peuvent infecter, par exemple le contenu utérin, le foetus. Par ailleurs, la perte de liquide amniotique entraîne une diminution de l'espace disponible pour le développement du foetus. Cette diminution peut, lorsque la rupture a lieu avant le délai de 24 semaines d'aménorrhées, mettre en péril le pronostic vital du foetus entraînant une fausse couche et/ou conduisant à la naissance d'un bébé non viable. 1 o Après ce délai de 24 semaines, le pronostic vital de l'enfant est toujours mis en cause aboutissant à un accouchement prématuré et/ou une infection du foetus pouvant conduire au déclenchement volontaire de l'accouchement. Par ailleurs, la diminution du volume du liquide amniotique peut provoquer des problèmes de malformation, atrophie des membres, 15 anomalie de développement de différentes parties du corps. Le diagnostique de la rupture des membranes foetales est essentiellement clinique. Il s'agit d'un examen au spéculum par lequel est visualisé un écoulement de liquide amniotique. Ce test diagnostique est un test peu sensible, peu adapté au diagnostic des microruptures et qui ne 20 permet pas de détecter rapidement et facilement la rupture des membranes et qui est surtout lié à la capacité du praticien de pouvoir identifier/visualiser l'écoulement du liquide. Il existe également d'autres tests, par exemple le test à la nitrazine ou le test à la diamine oxydase permettant de détecter une 25 rupture des membranes foetales. Cependant, ces tests ne sont pas fiables et peuvent entraîner l'obtention de résultats faux négatifs (les patientes pour lesquelles le résultat est un faux négatif présentent donc une grossesse à risque et ne sont pas pris en charge et/ou traitées) et faux positifs (les patientes pour 30 lesquelles le résultat est faux positif ne présentent pas de grossesse à risque et peuvent être prise en charge de la même façon qu'une femme avec rupture avec notamment le risque d'un déclenchement de l'accouchement inutile). Le test à la Nitrazine, indicateur de pH, est soumis à de nombreuses interférences notamment celles du sang, du sperme, d'antiseptiques ou d'infections vaginales. Le test à la diamine oxydase fait appel à des techniques de mise en évidence basées sur la radioimmunologie et donc peu pratiques. Sa sensibilité varie de 84 à 91 %. Sa spécificité est limitée par l'interférence du sang. Des tests diagnostics basés sur la détection de la protéine 1 de liaison au facteur de croissance insulinomimétique (Insulin-like growth factor-binding protein 1 : IGFBP1) par des anticorps spécifiques dans un prélèvement vaginal ou cervical ont été également développés et commercialisés. Cette protéine est présente dans le liquide amniotique à une concentration 100 à 1000 fois supérieure à celle du sérum maternel (Rutanen et al. Radioimmunoassy of placenta protein 12: levels in amniotic fluid, cord blood and serum of healthy adults, pregnant women and patients with trophoblastic disease. Am. J. Obstet. Gynecol. 1982 [1]). Des exemples de tests de l'art antérieur utilisant ce marqueur sont, par exemple des tests immunologiques décrits dans le brevet européen EP 0 565 541. Cependant, ces tests ne sont pas fiables car ils peuvent fournir des résultats faux négatifs qui sont dus par exemple, à une concentration faible d'IGFBPI dans le liquide amniotique, à un effet crochet, à une dégradation de la protéine dans le vagin et/ou in-vitro, ou à un effet matrice. Ils peuvent aussi générer des résultats faussement positifs qui sont dus par exemple, à la présence résiduelle d'IGFBPI provenant d'autres milieux biologiques que le liquide amniotique, notamment le sang ou les cellules déciduales du col lorsque celui-ci est mature. Des tests diagnostics basés sur la détection de l'alpha foeto protéine (AFP) par des anticorps spécifiques dans un prélèvement vaginal ou cervical ont été également décrits. Un exemple de test de l'art antérieur utilisant ce marqueur est décrit dans l'article de Rochelson (Rochelson et al. Rapid assay: possible application in the diagnosis of premature rupture of the membranes. Obstet Gynecol 1983;62:414-418 [2])). Cependant, ce test n'est pas fiable car il peut fournir des résultats faux négatifs et faux positifs (sensibilité 93% et spécificité 94% chez des femmes à moins de 39 semaines d'aménorrhées). D'autres marqueurs de ruptures moins performants ont également été décrits comme l'hormone chorio gonadotrophine humaine (hCG) (Young-Han Kim et al. Vaginal fluid b-human chorionic gonadotropin level in the diagnosis of premature rupture of membranes. Acta Obstet Gynecol Scand 2005: 84: 802-805 [3]) ou la prolactine (PRL) (Koninckx PR et al. Prolactin concentration in vaginal fluid: a new method for diagnosing ruptured membranes. Br J Obstet Gynaecol 1981;88:607-610 [4]). Il existe donc un réel besoin de trouver un procédé de détection de rupture des membranes foetales palliant ces défauts, inconvénients et obstacles de l'art antérieur, en particulier d'un procédé avec une meilleure sensibilité et/ou une meilleure spécificité permettant de réduire les coûts et d'améliorer la détection des ruptures des membranes foetales. Description de l'invention La présente invention a précisément pour but de répondre à ces besoins et inconvénients de l'art antérieur en fournissant un procédé de détection in-vitro de rupture des membranes foetales. En particulier, la présente invention a pour objet un procédé de détection in-vitro d'une rupture des membranes foetales comprenant une étape de recherche simultanée, dans un prélèvement vaginal ou cervical, de l'alpha foeto protéine (AFP) et de la protéine 1 de liaison au facteur de croissance Insulinomimétique (IGFBP-1). Selon l'invention, la détection de l'IGFBPI peut être remplacée par la détection de l'alpha 1-microglobuline placentaire (placental alpha microglobuline 1 (PAMG-1)) ou toute autre protéine homologue à IGFBP-1 ou PAMG-1. Les inventeurs sont en effet les premiers à avoir découvert, notamment, que la détection des deux marqueurs est complémentaire et permet d'atteindre un taux de sensibilité plus élevé. En particulier, les inventeurs sont les premiers à avoir découvert que la détection simultanée des deux marqueurs que sont l'alpha fceto protéine (AFP) et la protéine 1 de liaison au facteur de croissance insulinomimétique (Insulin-like growth factor-binding protein 1) (IGFBP1) permet avantageusement d'augmenter la spécificité et la sensibilité de la détection de la rupture. Selon l'invention par prélèvement vaginal ou cervical on entend, par exemple un prélèvement effectué au niveau de la paroi du vagin d'une femme enceinte, au niveau du fornix postérieur du vagin, au niveau du col des sécrétions vaginales ou cervico-vaginales, Selon l'invention, le prélèvement peut être obtenu par tout procédé connu de l'homme du métier. Le prélèvement peut être obtenu, par exemple par pipetage à l'aide d'une pipette ou par frottement des parois de la cavité vaginale, par exemple avec un écouvillon stérile dont le bouton peut être du coton ou une fibre synthétique. Il peut s'agir par exemple de polyester, Dacron (marque déposée). Selon l'invention la recherche de l'AFP et de l'IGFBP-1 peut être effectuée, par exemple au moyen d'anticorps. La détection de chacun de ces marqueurs peut être effectuée par exemple, au moyen d'anticorps monoclonaux, d'anticorps polyclonaux, et/ou de tout anticorps disponible dans le commerce capable de se fixer spécifiquement sur l'AFP ou sur l'IGFBP-1. Selon l'invention, les anticorps dirigés contre l'AFP (anticorps anti AFP) peuvent être, par exemple des anticorps anti AFP décrits dans la demande internationale WO 2004013180, les anticorps commercialisés par la société Anticorps en Ligne (numéro de catalogue ABIN93624), les anticorps commercialisés par la société Arista Biologicals (clone 1, numéro de catalogue ABAFP-0401 ; clone 2, numéro de catalogue ABAFP-0402 ; clone 3, numéro de catalogue ABAFP-0403 ; clone 4, numéro de catalogue ABAFP-0404), les anticorps commercialisés par la société Hytest (clone 5H7, clone 4A3 et clone XA2, numéro de catalogue 4F16 ; anticorps polyclonal, numéro de catalogue ABAFP-0501) Selon l'invention, les anticorps dirigés contre l'AFP peuvent être marqués ou non. Le marquage est exposé ci-dessous. Les anticorps anti AFP utilisés en capture et ceux marqués doivent être dirigés contre des épitopes différents afin que le système sandwich puisse fonctionner. Selon l'invention, la concentration de l'anticorps anti AFP peut être par exemple de 0,1 à 100 pg/mL ou de 0,1 à 10 mg/m1. Selon l'invention, le pH de solution comprenant les anticorps anti AFP peut être de 5 à 10, de préférence de 6 à 9. Selon l'invention, les anticorps dirigés contre l'IGFBP-1 (anticorps anti IGFBP-1) peuvent être choisis par exemple dans le groupe comprenant les anticorps décrits dans les documents Rutanen et a1, Biochem Biophys Res Commun 1988 ; 152 : 208 [5] et dans Pekonen et a1, J immunoassay 1989 ; 10 : 325-337 [6], les anticorps anti IGFBP-1 commercialisés par la société Lenco technologies (numéro catalogue 1- 695, 1-746 et 1-805), les anticorps anti IGFBP-1 commercialisés par la société SIGMA ALDRICH (numéro de catalogue 1 2032, clone 33627.11), les anticorps commercialisés par la société AbD Serotech (numéro de catalogue 5345-4859X, clone 6302 (7B11) ; numéro de catalogue 5345-4809X, clone 7B10), les anticorps commercialisés par la société Hytest (numéro de catalogue 4152 ; clone A8 et clone G2 ; numéro de catalogue 41G8 ; clone G5F8 et clone C7B9), les anticorps commercialisés par la société Biospacific (numéro de catalogue A61403 ; numéro de catalogue A61400 ; numéro de catalogue A61402), les anticorps commercialisés par la société Santa Cruz (numéro de catalogue A61401136, A61400136, ou 3o A61403136) Selon l'invention, les anticorps dirigés contre l'IGFBP-1 peuvent être marqués ou non. Le marquage est exposé ci-dessous. Avantageusement, les anticorps anti IGFBP-1 utilisés en capture et les anticorps anti IGFBP-1 marqués peuvent être dirigés contre des épitopes différents. Selon l'invention, la concentration de l'anticorps anti IGFBP-1 peut être de 0,1 à 100 pg/mL ou de 0,1 à 10 mg/ml. Selon l'invention, le pH de solution comprenant les anticorps anti IGFPB-1 peut être de 5 à 10, de préférence de 6 à 9. Avantageusement, selon l'invention, la concentration de chaque anticorps et/ou le pH de chaque solution comprenant chaque anticorps peut permettre de moduler le seuil de détection des protéines AFP ou IGFBP-1. Selon l'invention, les anticorps dirigés contre AFP ou IGFBP-1 peuvent être avantageusement sous forme sèche. Selon l'invention, les anticorps dirigés contre AFP ou IGFBP-1 peuvent être marqués par tout moyen connu de l'homme du métier. Il peut s'agir par exemple d'une molécule chimique, par exemple un marqueur fluorescent, par exemple la rhodamine ou l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC), une enzyme par exemple la peroxydase du raifort, la phosphatase alcaline, la fl-galactosidase, la glucose 6-phosphate déshydrogénase, qui est révélée en présence d' un substrat spécifique par exemple le TMB (ou 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine), le 4-Méthyl-ombelliferyl phosphate, des nanoparticules colorées, par exemple des particules de latex ou de polystyrène, des particules d'or colloïdal, des liposomes, des particules de carbones ou de sélénium, des nanoparticules fluorescentes contenant par exemple des chélates de lanthanides (Europium par exemple), ou des nanoparticules magnétiques, des molécules radioactives, par exemple de l'iode 125, l'iode 133, le tritium. Selon l'invention, le marquage peut être différent en fonction de la spécificité de l'anticorps. Par exemple l'anticorps anti IGFBP-1 peut être marqué avec un marqueur, différent de celui de l'anticorps anti AFP. Avantageusement, la différence de marquage permet de détecter si l'AFP seul, l'IGFBP-1 seul et/ou l'AFP et l'IGFBP-1 sont présents dans l'échantillon grâce à la différence de marquage. Les marquages différents permettent de détecter de manière distincte l'AFP et l'IGFBP-l. Selon l'invention, les anticorps peuvent être préalablement fixés sur un support solide. Par exemple, les anticorps dirigés contre l'AFP ou l'IGFBP-1 peuvent être fixés sur une membrane, par exemple une membrane de nitrocellulose, le fond d'une plaque multi-puits et/ou toute surface connue de l'homme du métier permettant la fixation d'au moins un anticorps. Selon l'invention la quantité d'anticorps dirigés contre l'AFP ou l'IGFBP-1 fixée peut être avantageusement adaptée en fonction de l'anticorps et de la protéine recherchée. Par exemple, lorsque l'AFP est recherchée, la quantité d'anticorps fixée peut être de 0,1 à 100 pg/mL ou de 0,1 à 10 mg/mL ; lorsque l'IGFPB-1 est recherchée, la quantité d'anticorps fixée peut être de 0,1 à 100 pg/mL ou de 0,1 à 10 mg/mL. Le contrôle de la quantité d'anticorps fixée permet avantageusement d'adapter le seuil de détection de l'AFP et/ou l'IGFBP-1. En effet plus la quantité fixée est importante, plus le seuil de détection est faible. En d'autres termes, selon l'invention, les anticorps peuvent être préalablement fixés sur un support, par exemple, par dépôt ou par couplage chimique. Lorsque les anticorps sont fixés par dépôt, ils peuvent être déposés par exemple, par aspersion en une surface commune ou distincte d'anticorps anti AFP et d'anticorps anti IGFBP-1 tels que définis précédemment, puis séchage par exemple, via le procédé décrit dans Beer et al. Qualification of cellulose nitrate membranes for lateral-flow assays, IVD technology, janvier 2002.[7] Lorsque les anticorps sont fixés par couplage chimique, ils peuvent être fixés, par exemple, via le procédé décrit dans Beer et al. Qualification of cellulose nitrate membranes for lateral-flow assays, IVD technology, janvier 2002. [7] Selon l'invention, le procédé de l'invention peut comprendre en outre une étape préliminaire de dilution du prélèvement vaginal ou cervical dans une solution de dilution. La solution de dilution peut être toute solution connue de l'homme du métier pour diluer ces prélèvements. Il peut s'agir, par exemple, d'une solution physiologique, d'une solution tampon. Il peut s'agir par exemple aussi d'une solution comprenant 50mM de borate (02102391, Biosolve) 1 %BSA (AP-4510-01, Seracare Life Sciences) 0,05% triton X-100 (pH 9,3). Selon l'invention, le pH de la solution de dilution peut être de 5 à 10, de préférence de 6 à 9. Selon l'invention, la force ionique de la solution de dilution peut être de 10 à 1000 mM, de préférence de 50 à 200 mM. Selon l'invention, le procédé peut comprendre une étape de révélation. Selon l'invention, l'étape de révélation peut être effectuée par tout procédé connu de l'homme du métier. Il peut s'agir par exemple d'un procédé radioimmunologique (RIA), immunoradiométrique (IRMA), enzymmunologique (EIA), immunofluorométrique (IFMA), immunofluorimétrique en temps résolu, luminoimmunologique (LIA), immunomagnétique, ou par immunochromatographie ou immunofiltration grâce à des particules colorées (latex, polystyrène, or colloïdal). Certains de ces procédés peuvent être mis en oeuvre comme décrit dans Anne Harwood Peruski et al. Immunological Methods for Detection and Identification of Infectious Disease and Biological Warfare Agents. Clinicat and diagnostic laboratory immunology, July 2003, p. 506-513. [8] Selon l'invention, la révélation peut être par exemple directe ou indirecte. Lorsque la révélation est indirecte ou par compétition, on peut utiliser par exemple un anticorps marqué dirigé contre l'IGFBP-1 ou l'AFP tel que décrit précédemment. Lorsque la révélation est directe (système sandwich), on peut utiliser par exemple un anticorps de capture et un second anticorps marqué dirigé contre l'IGFBP-1 et un anticorps de capture et un second anticorps marqué dirigé contre l'AFP tel que décrit précédemment. Avantageusement, l'anticorps de capture et l'anticorps marqué sont dirigés contre des épitopes différents de façon à former une paire utilisable en 1 o système sandwich. De préférence, la révélation est directe. Avantageusement, l'intensité du signal du marqueur est fonction de la quantité et/ou de la concentration d'AFP et/ou d'IGFBP-1 présente dans le prélèvement. 15 Suivant le marqueur utilisé, la révélation peut être visuelle ou effectuée à l'aide d'un dispositif. Lorsque le marqueur est un marqueur coloré visible tel que décrit précédemment la révélation est, avantageusement visuelle. Lorsque le marqueur est, par exemple un marqueur radioactif tel que décrit 20 précédemment, la révélation sera effectuée, par exemple à l'aide d'un dispositif de mesure de radioactivité, par exemple un compteur geiger. La présente invention permet, avantageusement, de détecter l'AFP dans un prélèvement lorsque sa concentration est, par exemple, supérieure ou égale à une concentration comprise entre 2,5 et 50 ng/mL, 25 de préférence comprise entre 5 à 25 ng/mL La présente invention permet, avantageusement, de détecter l'IGFBP-1 dans un prélèvement lorsque sa concentration est supérieure ou égale à une concentration comprise entre 5 et 50 ng/mL, de préférence comprise entre 10 à 30 ng/mL. 30 Selon l'invention, le procédé de l'invention peut comprendre un ajustement d'au moins un des paramètres choisis parmi le volume de milieu tampon diluant, le pH du milieu tampon, la force ionique du milieu tampon, le dit ajustement étant commun à l'AFP et à l'IGFBP-1. Selon l'invention, le procédé de l'invention peut comprendre un ajustement d'au moins un des paramètres choisis parmi la concentration des anticorps de capture et/ou la concentration des anticorps marqués, le dit ajustement étant spécifique à l'AFP ou à l'IGFBP-1. La combinaison de l'ajustement spécifique à l'AFP et à l'IGFBP-1 et/ou de l'ajustement commun permet, avantageusement, l'obtention d'une complémentarité de détection de l'AFP et de l'IGFBP-1. La 1 o complémentarité des deux marqueurs peut être, par exemple chronologique, par exemple l'AFP peut être un marqueur préférentiel avant la 35ème semaine et l'IGFBPI peut être un marqueur préférentiel au-delà de la 37ème semaine. La complémentarité peut aussi concerner les performances de détection de chacun des marqueurs. Ainsi, selon la 15 présente invention, les seuils de détection de chacun des deux marqueurs peuvent être ajustés de façon à ce que l'AFP soit le marqueur le plus sensible et l'IGFBPI le plus spécifique et/ou réciproquement. Selon la présente invention, il est aussi possible d'ajuster, avantageusement les paramètres précités de sorte que la spécificité de 20 détection des marqueurs soit identique, c'est à dire qu'ils aient le même niveau de spécificité. Dans ce mode de réalisation, le marqueur IGFBP1 est statistiquement le plus sensible, notamment au-delà de la 37ème semaine d'aménorrhée. Selon l'invention, le procédé de l'invention permet 25 avantageusement, de part la complémentarité des deux marqueurs, de détecter une rupture de membranes foetales même si l'IGFBPI est absente, par exemple si le liquide amniotique est très peu concentré en IGFBP1 ou si l'IGFBPI a été dégradée in vivo ou in vitro comme cela a été notamment décrit dans Rutanen et al. Measurement of Insulin-like growth 30 factor binding protein-1 in cervical/vaginal secretions: comparison with the ROM-Check Membrane Immunoassay in the diagnosis of ruptured fetal membranes. Clinica Chimica Acta, 214 (1993), 73-81 [9], par la détection de l'AFP. Selon l'invention, le procédé de l'invention permet avantageusement, de part la complémentarité des deux marqueurs, d'orienter le diagnostic vers une absence de rupture en cas de résultat positif en IGFBP1 qui serait non pas dû à une fuite de liquide amniotique mais à la présence d'IGFBPI provenant de cellules déciduales du col. En effet, contrairement à l'IGFBP-1, l'AFP est une molécule très majoritairement d'origine foetale et par conséquent ne présente pas ce 1 o risque d'interférence. La présence d'IGFBPI provenant des cellules déciduales du col limite l'intérêt de l'IGFBP-1; ceci a été décrit notamment dans les articles: Rutanen et al. Decidual transformation of human extrauterine mesenchymal cells is associated with is associated with the appearance of insulin like growth factor binding protein 1. J. Clin. 15 Endocrinol. Metab. 1992 ; 72 : 27-31 [10] Rutanen et al. Evaluation of a rapid strip test for insulin-like growth factor binding protein 1 in the diagnosis of foetal ruptured membranes. Clinica Chimica Acta. 253 ; (1996) 91-101 [11]. La présente invention permet donc avantageusement de diminuer le risque de détection de faux positifs. 20 La présente invention a également pour objet un dispositif par exemple immunochromatographique pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention comprenant : - une zone (1) de dépôt d'un échantillon 25 - une zone (2) comprenant des anticorps anti IGFBP-1 et des anticorps anti AFP marqués. - une zone (3) de révélation comprenant des anticorps de capture anti AFP et des anticorps de capture anti IGFPB-1. 30 Selon l'invention, la zone (1) de dépôt peut être une zone adaptée à l'application ou la réception du prélèvement. Cette zone peut être de toute forme connue de l'homme du métier, par exemple un réservoir, une cupule, un puits, une mèche, une surface plane Selon l'invention la zone (1) de dépôt peut être mobile et/ou liée à la zone (2) ou (3). Lorsque la zone (1) est mobile, elle peut être, par exemple, utilisée pour effectuer le prélèvement et appliquée sur la zone (2). Lorsque la zone (1) est liée à la zone (2) ou (3) celle-ci peut être plongée directement dans un récipient comprenant le prélèvement et/ou le prélèvement peut être appliqué sur cette zone. Un exemple de ce dispositif est illustré ci-dessous. Avantageusement, selon l'invention, les zones (1) et (2) sont situées sur un même support. Selon l'invention, les matériaux des zones (1) à (3) peuvent être identiques ou différents. Les matériaux peuvent être tout matériau connu de l'homme du métier, par exemple un matériau choisi dans le groupe comprenant du papier absorbant, du coton, de la cellulose, de la fibre de verre, une membrane de nitrocellulose. De préférence, la zone de dépôt (1) peut être un papier 2 0 absorbant ou de la fibre de verre. De préférence, la zone (2) comprenant des anticorps anti IGFBP-1 et des anticorps anti AFP marqués peut être de la fibre de verre. De préférence, la zone de révélation (3) peut être une membrane de nitrocellulose. 25 Selon l'invention, les anticorps de capture anti AFP ou anti IGFBP-1 peuvent être, par exemple fixés directement sur le support de la zone (3), par exemple par couplage chimique et/ou par dépôt tel que décrit précédemment. Selon l'invention, la zone de fixation de l'anticorps de capture de 30 l'AFP et de l'anticorps de capture de l'IGFBP-1 peut être identique ou différente. De préférence, la zone de fixation de l'anticorps de capture de l'AFP est différente de celle de l'anticorps de capture de l'IGFBP-1. Il peut s'agir par exemple de deux bandes parallèles comprenant chacune un anticorps de capture différent. Selon l'invention les différentes zones (1) à (3) précitées peuvent être fixées sur un support solide, par exemple sur des cartes laminées et/ou comprises dans un contenant comprenant un orifice au niveau de la zone (3) permettant la visualisation du résultat et un orifice au niveau de la zone (1) de dépôt de l'échantillon permettant le dépôt de l'échantillon. Un exemple de ce dispositif est illustré ci-dessous. Selon l'invention, le dispositif peut comprendre en outre une zone (4) d'absorption. Selon l'invention, la zone d'absorption (4) peut être n'importe quel support solide absorbant connu de l'homme du métier. Il peut s'agir, par exemple, d'un papier buvard absorbant, d'une éponge, d'un coton, d'une feutrine ou d'un textile synthétique. Avantageusement, selon l'invention, les supports des zones (1) et (2) se chevauchent à l'une de leur extrémité et l'autre extrémité de la zone (2) se chevauche avec une extrémité de la zone (3). Le chevauchement des différentes zones (1) à (3) permet avantageusement lors de l'application du prélèvement et/ou de l'immersion de l'extrémité libre de la zone (1) dans le prélèvement la migration par capillarité du prélèvement dans les différentes zones. De préférence, les zones (1) et (2) sont disposées sur un même support. Un exemple de ce dispositif est illustré ci-dessous. De préférence, la zone (4) d'absorption se chevauche avec l'extrémité libre de la zone (3). Ainsi, la zone (4) permet une migration accélérée du prélèvement à travers les différentes zones du dispositif. Avantageusement, la zone (4) permet d'absorber l'excédent de liquide du prélèvement. Selon l'invention, les différentes zones (1) à (4) peuvent être indépendamment recouvertes avec un film de protection. Il peut s'agir ; par exemple d'un film plastique, par exemple un film en chlorure de polyvinyle (PVC), un film biodégradable, par exemple un film en Polycaprolactone (PCL), en alcool Polyvinyle (PVA), en acide Polylactique (PLA). Le film permet avantageusement de protéger indépendamment les différentes zones du dispositif de l'invention. Selon l'invention, le film peut être un film unique ou plusieurs films recouvrant indépendamment une des dites zones (1) à (4). Selon l'invention, le film ou les films peuvent recouvrir partiellement le dispositif de l'invention laissant ainsi certaines zones non couvertes. Selon l'invention, le film ou les films peut (peuvent) être un (des) 1 o film(s) détachable(s) qui peut (peuvent) être enlevé(s) avant l'utilisation du dispositif. Selon l'invention, le film peut comprendre une inscription à sa surface permettant avantageusement une identification du dispositif. La présente invention a également pour objet une trousse pour la mise en oeuvre du procédé de l'invention comprenant : 15 - des anticorps de capture anti AFP et anti IGFBP-1 tels que définis précédemment - des anticorps marqués anti AFP et anti IGFP1 tels que définis précédemment. 20 Selon l'invention, la trousse peut comprendre en outre un moyen de prélèvement, par exemple un écouvillon, tel que défini précédemment. Selon l'invention, la trousse peut comprendre en outre un support solide sur lequel peuvent être fixés des anticorps de capture tels 25 que définis précédemment. La présente invention a également pour objet l'utilisation du dispositif selon la présente invention pour la détection de rupture de membranes foetales tel que défini précédemment. La présente invention permet avantageusement de détecter des 30 ruptures de membranes foetales quelle que soit leur importance, par exemple s'il s'agit de microruptures et/ou de macroruptures et/ou quelque soit le volume de liquide amniotique prélevé. La présente invention permet, avantageusement, de diminuer la probabilité d'obtenir des résultats faux négatifs ainsi que des résultats faux positifs. En outre, la présente invention permet avantageusement de détecter des ruptures de membranes foetales quelque soit le stade de la grossesse. La présente invention permet en outre une détection fiable 1 o quels que soient le stade de la grossesse, la variation de la concentration de l'AFP et/ou de l'IGFBP-1 dans le liquide amniotique et/ou le volume de liquide amniotique présent dans le prélèvement vaginal ou cervical. D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures 15 annexées, donnés à titre illustratif. Brève description des figures - La figure 1 représente une vue de face (A) et une vue de profil d'un dispositif selon l'invention comprenant une zone (1) en fibre de 20 verre(11), une zone (2) en fibre de verre (12) comprenant des anticorps anti IGFBP-1 et des anticorps anti AFP marqués (12), une zone (3) en membrane de nitrocellulose (13) comprenant des anticorps de capture anti AFP (17) et des anticorps de capture anti IGFPB-1 (18) et une zone (4) en papier absorbant (14), un film (15) (16) 25 - La figure 2 représente un dispositif compris dans un contenant (23) comprenant un orifice (21) au niveau de la zone (1) et un orifice (22) au nouveau de la zone (3) comprenant des anticorps de capture anti AFP (24) et des anticorps de capture anti IGFPB-1 (25). 30 EXEMPLES Exemple 1 : procédé de détection de rupture de membranes foetales grâce à un dispositif d'immunofiltration. Des anticorps anti AFP (ABAFP-0404, clone 4 Arista Biologicals) dilués à 0,75 mg/mL dans un tampon PBS ainsi que des anticorps anti IGFBP-1 (I 2032, clone 33627.11, SIGMA ALDRICH) dilués à 0,75 mg/mL dans un tampon PBS sont préparés. Les anticorps sont déposés à l'aide d'un automate de distribution de réactifs (Isoflow Dispenser, Imagene Technology Inc. (marque déposée)) sous forme de lignes parallèles sur une membrane de nitrocellulose puis séchés à l'étuve à 37°C sous atmosphère à taux d'humidité contrôlé inférieur à 30%. La membrane est ensuite découpée en multiples bandelettes d'environ 1 centimètre de large et 2,5 centimètre de long. Chaque bandelette est ensuite placée sur un support absorbant posé dans un socle en plastique. Un couvercle en plastique s'adaptant au socle est ensuite posé sur le socle et fermé par pression manuelle. Le couvercle en plastique dispose d'une fenêtre d'ouverture dont la surface est inférieure à la surface de la membrane. La membrane a été positionnée de sorte que la zone ouverte de la fenêtre du couvercle soit totalement située au dessus de la membrane. Le couvercle est conçu de façon à ce qu'il exerce une pression sur la membrane et le support absorbant afin que les différents éléments du dispositif gardent la position définie lors de la fermeture du couvercle. Un prélèvement avec un écouvillon stérile dont le bouton est du Dacron (marque déposée) est effectué sur une femme enceinte à 24 semaines d'aménorrhées. Le bouton est ensuite introduit dans un tube à vis de 5 mL (Dustcher) comprenant 2 mL d'une solution d'extraction contenant 50mM de borate (02102391, Biosolve) 1% Sérum Albumine de Bovin (BSA) (AP- 4510-01, Seracare Life Sciences) 0,05% triton X-100 (pH 9,3) et est agité par mouvements circulaires pendant 30 secondes à une minute L'écouvillon est ensuite retiré du tube. La solution d'extraction est ensuite versée dans la fenêtre du couvercle. La solution est filtrée à travers la membrane et absorbée par le support absorbant. L'AFP et/ou l'IGFBP-1 contenu(s) dans la solution d'extraction se lie(nt) avec les anticorps de capture respectifs. Lors de l'étape suivante, un réactif de révélation contenant des anticorps anti AFP le clone 3, Arista Biologicals,ABAFP-0403, et anti IGFBP-1, le clone 6302 (7B11), AbD Serotech, 5345-4859X, de paratopes différents des anticorps 1 o de capture et marqués à l'or colloïdal, se lie aux antigènes AFP et/ou IGFBP-1 capturés. Cela entraîne l'apparition d'une coloration mauve au niveau des lignes tests. Une étape de lavage avec une solution de lavage contenant par exemple du PBS 10% TWEEN-20 est réalisée par versement de la solution de lavage dans la fenêtre pour éliminer toute 15 fixation non spécifique des particules d'or colloïdal. La présence de lignes colorées mauves au niveau des lignes AFP et/ou IGFBP-1 est indicatrice de rupture des membranes foetales. Exemple 2 : Dispositif immunochromatographique pour la détection 20 de rupture de membranes foetales. Les bandelettes sont préparées à partir de cartes laminées de 30 cm X 9.5 cm (CNPC-SS12 R-032/2, MDI (marque déposée)) constituées d'un support en matière plastique recouvert d'une couche d'adhésif sur laquelle la membrane de nitrocellulose, le papier absorbant et 25 la fibre de verre sont assemblés. A l'aide d'un automate de distribution de réactifs (Isoflow Dispenser, Imagene Technology Inc. (marque déposée)), des anticorps de chèvre anti IgG de souris (ABGAM-0500, Arista Biologicals (marque déposée)) dilués à 4 mg/mL dans un tampon PBS, des anticorps anti AFP 30 (ABAFP-0404, clone 4 Arista Biologicals) dilués à 0,75 mg/mL dans un tampon PBS ainsi que des anticorps anti IGFBP-1 (I 2032, clone 33627.11, SIGMA ALDRICH (marque déposée)) dilués à 0,75 mg/mL dans un tampon PBS sont déposés avec un débit de 0,5 pl/cm sous forme de lignes parallèles espacées de 5 mm et d'une largeur de 1 à 2 mm chacune sur une membrane de nitrocellulose dont la largeur est de 25 mm (zone (1)). Après dépôt de ces moyens de recherche, ces cartes sont ensuite placées 30 minutes dans une étuve à 37°C sous atmosphère à taux d'humidité contrôlé inférieur à 30% pour les sécher. Le mélange de conjugué, c'est-à-dire une solution comprenant des anticorps marqués, est préparé à partir des anticorps anti IGFBP-1 (5345-4859X, clone 6302 (7B11), AbD Serotech (marque déposée)) et anti-AFP (ABAFP-0403, clone 3, Arista Biologicals (marque déposée)) préalablement couplés à des particules de latex (DBK1040CB, diamètre 0.39pm, Duke Scientific Corporation (marque déposée)) selon les indications du fournisseur ou les instructions suivantes : Les particules de latex (150pL) sont lavées deux fois avec 1 mL de PBS par centrifugation pendant 30 minutes à 14000 tours par minutes (rpm) dans des tubes eppendorf (marque déposée) de 1,5 mL. A la dernière étape de lavage, les particules de latex sont remises en suspension dans la même solution. Les parties carboxylées des billes sont ensuite activées par 50 pg de N-(3-Dimethylaminopropyl)-N-ethylcarbodiimide hydro-chloride (EDC, E1769, SIGMA-ALDRICH (marque déposée)). Après 15 minutes d'activation, la solution d'anticorps est ajoutée à raison de 10pg/mg de particules de latex. La solution ainsi obtenue est délicatement agitée pendant 2h à température ambiante sur un agitateur circulaire adapté aux tubes de 1,5 mL. Une étape de centrifugation pendant 15 minutes à 14000 tours par minute permet ensuite de récupérer les particules de latex conjuguées aux anticorps. Afin d'éviter les interactions non spécifiques, le culot est repris dans 1 mL d'une solution de saturation (pH 7,4) 50mM Na2HPO4 (S7907, SIGMA ALDRICH (marque déposée)) 1% BSA (AP-4510-01, Seracare Life Sciences (marque déposée)). La solution est agitée sur l'agitateur circulaire 1 heure à température ambiante puis placée dans une étuve pendant 30 minutes à 37°C. La solution est centrifugée une dernière fois pendant 15 minutes à 14000 tours par minute. Le culot ainsi obtenu est remis en suspension dans la même solution de saturation. A 250pL de solution de conjugué IGFBP-1 (anticorps anti IGFBP-1 marqués) additionnés de 250pL de conjugué AFP (anticorps anti AFP marqués) sont ajoutés un volume de la solution de saturation (pH 7,4) 50mM Na2HPO4 (S7907, SIGMA ALDRICH (marque déposée)) 1% de d'Albumine de sérum de bovin (BSA) (AP-4510-01, Seracare Life Sciences) qsp l mL, 20% de sucrose (S8501, SIGMA ALDRICH) et 5% de tréhalose (T9531, SIGMA ALDRICH (marque déposée)). Le mélange ainsi obtenu est agité 15 minutes à température ambiante sur l'agitateur circulaire adapté aux tubes de 1,5 mL. Les anticorps ont été ainsi couplés avec les dites particules de latex et correspondent à des exemples d'anticorps marqués. Le mélange d'anticorps couplés aux microparticules de latex est ensuite vaporisé avec un débit de 4 pl/cm sur des feuilles de fibre (zone (3)) de verre de dimension 30 cm X 3,2 cm (# 8964, AHLSTROM, Arista Biologicals (marque déposée)) préalablement traitées avec une solution 0,1 M de B4Na2O7 (B3545, SIGMA ALDRICH (marque déposée)) 1% triton X-100 (X-100, SIGMA ALDRICH (marque déposée)) pH 8,4. La fixation de ce mélange de conjugués sur la feuille de fibre de verre est réalisée avec le même appareil Isoflow Dispenser (marque déposée) en se conformant aux indications du fabricant. Après vaporisation, les feuilles de fibre de verre sont séchées une demi-heure à 37°C. L'assemblage des cartes se fait par collage de la fibre de verre imprégnée de conjugué sur la partie adhésive inférieure de la carte en faisant chevaucher la feuille de fibre de verre de 1 à 3 mm sur la membrane de nitrocellulose. De la même manière, un papier de haut pouvoir d'absorption (zone 2) (absorbant pad, Ahlstrom 222, MAPDS-0100, Arista Biologicals) de dimension 30 cm X 4,2 cm est placé sur la partie supérieure de la carte et chevauche la membrane de nitrocellulose de 1 à 3 mm afin de pouvoir créer un flux de migration. Une étiquette autocollante est alors déposée sur les deux sortes de papier et ont pour fonction de protéger et d'identifier les bandelettes. La carte ainsi assemblée est découpée en bandelettes de 4 mm de largeur à l'aide d'une guillotine (GCI-800, Zeta Corporation) ou d'un appareil à multi lames circulaire (Rotary cutter, Arista Biologicals Inc). Une 1 o bandelette est représentée par le schéma ci-dessous : Exemple 3: Exemple d'utilisation d'un dispositif pour mettre en oeuvre le procédé de l'invention 1. Dans un tube à vis de 5 mL (015610, Dustcher), une solution de 15 2,5 mL de 50mM de borate (02102391, Biosolve) 1%BSA (AP-4510-01, Seracare Life Sciences) 0,05% triton X-100 (pH 9,3) a été introduite, 2. l'échantillon a été prélevé avec un écouvillon stérile dont le bouton est du Dacron (marque déposée) et déposé sur le 20 dispositif décrit dans l'exemple 2, 3. le dispositif obtenu a été introduit dans le tube à vis précité 4. le résultat est obtenu après 10 minutes de migration Le test est positif lorsqu'au moins une des deux bandes correspondant à l'AFP et à l'IGBPF-1 est colorée. 25 Lorsque que le test est positif, la véracité du test peut être vérifiée par un examen gynécologique complet permettant de confirmer ou d'infirmer le résultat. Exemple 4 : comparaison de la stabilité aux protéases de l'AFP et de 30 l'IGFBP-1 réalisée à l'aide d'un dispositif mettant en oeuvre le procédé de l'invention. Dans cet exemple le dispositif immunochromatographique décrit dans l'exemple 2 est modifié et utilise un système de marquage à l'or colloïdal pour la détection des molécules d'IGFBP-1 et d'AFP. Les paires d'anticorps anti IGFBP-1 et anti AFP ont été sélectionnées dans la liste d'anticorps présentés dans la description de l'invention. Deux microlitres et dix microlitres d'un liquide amniotique sont déposés dans deux tubes distincts contenant chacun 2,5 millilitres de solution d'extraction. Puis 200 microlitres d'urines fraiches sont ajoutés à chacun des deux tubes. Les bandelettes sont ensuite déposées dans les 1 o solutions d'extraction selon les modalités décrites dans l'exemple 3 ci-dessus. Les tubes contenant la solution d'extraction sont ensuite placés à 37°C et sont testés à 24 heures, 48 heures et 6 jours. L'échantillon de liquide amniotique a été sélectionné par sa propriété de générer des signaux de départ (au temps TO) d'intensité identique sur les bandes AFP 15 et IGFBP-1. Sur le tube contenant deux microlitres de liquide amniotique, après 24 heures d'incubation, le signal IGFBP-1 a baissé de façon significative tandis que le signal AFP n'a que très légèrement baissé. Après 48 heures d'incubation, le signal IGFBP-1 a disparu alors que 20 l'intensité du signal AFP n'a pas évolué par rapport à la lecture précédente de 24 heures. A 6 jours, le signal AFP reste visible et inchangé tandis que le signal IGFBP-1 reste absent. Sur le tube contenant dix microlitres de liquide amniotique, après 24 heures d'incubation, les signaux IGFBP-1 et AFP restent 25 inchangés. Après 48 heures d'incubation, le signal IGFBP-1 a baissé alors que le signal AFP n'a pas évolué. A 6 jours, le signal AFP reste inchangé tandis que le signal IGFBP-1 s'est très fortement atténué et n'est plus apparent que sous forme de trace. Listes des références 1. Rutanen et al. Radioimmunoassay of placenta protein 12 : levels in amniotic fluid, cord blood and serum of healthy adults, pregnant women and patients with trophoblastic disease. Am. J. Obstet. Gynecol. 1982 2. Rochelson et al Rapid assay: possible application in the diagnosis of premature rupture of the membranes. Obstet Gynecol 1983; 62:414-418 3. Young-Han Kim et al. Vaginal fluid b-human chorionic gonadotropin level in the diagnosis of premature rupture of membranes. Acta Obstet Gynecol Scand 2005: 84: 802-805 4. Koninckx PR et al. Prolactin concentration in vaginal fluid: a new method for diagnosing ruptured membranes. Br J Obstet Gynaecol 1981;88:607-610 5. Rutanen et al, "Monoclonal antibodies to the 27-34K insulin-like growth factor binding protein" Biochem Biophys Res Commun 1988 ; 152 : 208 6. Pekonen et al, "A monoclonal antibody-based immunoradiometric assay for low molecular weight insulin-like growth factor binding protein/placental protein 12", J immunoassay 1989 ; 10 : 325-337 7. Beer et al. Qualification of cellulose nitrate membranes for lateral- flow assays, IVD technology, janvier 2002. 8. Anne Harwood Peruski et al. Methods for Detection and Identification of Infectious Disease and Biological Warfare Agents. Clinical and diagnostic laboratory immunology, July 2003, p. 506-513 9. Rutanen et al. Measurement of Insulin-like growth factor binding protein-1 in cervical/vaginal secretions : comparison with the ROM-Check Membrane Immunoassay in the diagnosis of ruptured fetal membranes. Clinica Chimica Acta, 214 (1993), 73-81 10. Rutanen et al. Decidual transformation of human extrauterine mesenchymal cells is associated with is associated with the appearance of insulin like growth factor binding protein 1. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1992 ; 72 : 27-31 11. Rutanen et al. Evaluation of a rapid strip test for insulin-like growth factor binding protein 1 in the diagnosis of foetal ruptured membranes. Clinica Chimica Acta. 253 ; (1996) 91-101 REVENDICATIONS1. Procédé de détection in-vitro d'une rupture de membranes foetales comprenant une étape de recherche simultanée, dans un prélèvement de sécrétions vaginales ou cervicales, de l'alpha foeto protéine (AFP) et de la protéine 1 de liaison au facteur de croissance Insulinomimétique (IGFBP-1). 2. Procédé selon la revendication 1 dans lequel la recherche est 1 o effectuée avec au moins un anticorps de capture dirigé contre l'AFP et avec au moins un anticorps de capture dirigé contre l'IGFBP-1. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2 dans lequel la recherche est effectuée à partir d'un prélèvement de sécrétions 15 vaginales ou cervicales dilué dans une solution tampon. 4. Procédé selon la revendication 3 dans lequel le procédé comprend l'ajustement d'au moins un des paramètres choisis parmi le volume, le pH, la force ionique du milieu tampon, ledit ajustement étant 20 commun à l'AFP et à l'IGFBP-1. 5. Procédé selon la revendication 3 dans lequel le procédé comprend l'ajustement d'au moins un des paramètres choisis parmi la concentration des anticorps de capture et/ou la concentration des 25 anticorps marqués, ledit ajustement étant spécifique à l'AFP ou à l'IGFBP-1. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5 dans lequel le pH de la solution tampon est de 5 à 10. 30 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, dans lequel les anticorps de capture anti AFP et anti IGFBP-1 sont sous forme sèche. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 dans lequel ladite étape de recherche comprend une étape de révélation effectuée avec au moins un anticorps marqué anti AFP et au moins un anticorps marqué anti IGFBP1. 9. Dispositif de mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 comprenant : une zone (1) de dépôt d'un échantillon une zone (2) comprenant des anticorps anti IGFBP-1 et des anticorps anti AFP marqués. une zone (3) de révélation comprenant des anticorps de capture dirigé contre l'AFP et des anticorps de capture dirigé contre l'IGFPB-1. 10. Dispositif selon la revendication 9 dans lequel la zone de dépôt (1) est soit un papier absorbant soit un support en fibre de verre. 11. Dispositif selon la revendication 9 ou 10 dans lequel la zone de révélation (3) est une membrane de nitrocellulose. 12. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 9 à 11 dans lequel la zone (2) est un support en fibre de verre.