Brevet FR2951085A1 — publié le 20110415

La présente invention concerne l'identification et l'utilisation de composés capables d'inverser la réaction de glycation des protéines et se rapporte ainsi au domaine du traitement des désordres provoqués par la glycation des protéines. D'une façon générale, les protéines réagissent toutes avec des sucres réducteurs au cours d'une réaction passive, spontanée, ne faisant pas intervenir d'enzyme, pour donner des composés condensés, de façon plus ou moins irréversible. Cette réaction est la réaction de Maillard, dont les mécanismes ont été décrits pour la première fois par J.E. Hodge en 1953 (Hodge J.E. J. Agric. Food Chem., 1953, 1, 928-943). Cette réaction donne naissance à des composés réarrangés multiples tels que les corps d'Amadori. Lorsque cette réaction est portée jusqu'à son terme, sont alors formés des produits de glycation avancée ou AGE (Advanced Glycation Endproducts) (Monnier V.M. Archives of Biochemistry and Biophysics 419 (2003) 1-15). Cette réaction est universelle ; elle se produit de façon plus ou moins intense selon les sucres impliqués et le nombre de radicaux aminés libres présents sur la protéine. Elle est amplifiée par la chaleur et dépend de la concentration des sucres présents dans le milieu. La réaction de glycation comprend trois étapes : 1- La formation d'une base de Schiff résultant de la fixation d'un sucre réducteur (principalement le glucose, le ribose ou le fructose) ou d'un aldéhyde sur les résidus aminés d'une protéine, généralement, la lysine et la fraction N-terminale ; 2- Un réarrangement moléculaire, appelé réarrangement d'Amadori, résultant d'une isomérisation de la base de Schiff. Le taux de formation de bases de Schiff et des produits d'Amadori est proportionnel à la concentration en sucre ; 3- L'accumulation lente et irréversible, par réarrangements, transferts d'hydrogène et formation d'intermédiaires très réactifs, de produits terminaux de glycation (AGE) ou produits de Maillard qui correspondent à des protéines glyquées condensées, c'est-à-dire, liées entre elles. Le taux de formation de ces composés est indépendant de la concentration en sucre du milieu mais dépend du taux de renouvellement protéique. Les deux premières étapes peuvent être inversées en baissant le niveau de glycémie. En revanche, la troisième progresse quel que soit le niveau de glycémie. La réaction de glycation est plus intense lors d'une hyperglycémie et touche ainsi plus particulièrement les individus diabétiques. Au cours de la glycation, les phénomènes de condensation liant plusieurs protéines entre elles altèrent leurs fonctionnalités ; la glycation conduit notamment à la rigidification des protéines de structure comme le collagène et l'élastine. Cette réaction se produit dans tout organisme et conduit à l'accumulation d'AGE au cours du temps ; ces composés ont d'ailleurs été décrits comme marqueurs de l'âge biologique d'un individu (Pageon H., et al. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2005, 1043, 529-532 ; Sel! D.R. et al. FASEB Journal, 2000, 14, 145-156). Les protéines sont normalement éliminées par des protéases qui assurent ainsi leur renouvellement ; cependant, les protéines sont d'autant moins sensibles à l'effet des protéases que leur glycation est avancée ce qui explique l'accumulation de protéines glyquées dans les tissus et la dégradation fonctionnelle des organes dans lesquels ces protéines sont localisées. En altérant la structure et la fonction des protéines, la glycation 20 conduit à des dysfonctionnements provoquant ou exacerbant des désordres pathologiques. II est donc d'une grande importance d'identifier des molécules capables de réaliser la réversion de la glycation in vivo, afin de couper les liaisons liant les protéines glyquées condensées et de permettre aux tissus de retrouver leurs 25 propriétés d'origine. Diverses molécules antioxydantes sont connues aujourd'hui pour inhiber en amont la réaction de glycation qui comporte une phase oxydative. Ainsi, par exemple, certains polyphénols ont été reconnus comme pouvant être utilisés comme des inhibiteurs de la réaction de glycation des protéines (Monnier V.M. 30 Archives of Biochemistry and Biophysics 419 (2003) 1-15). D'autres molécules qui comportent un radical aminé telles que l'aminoguanidine, la carnosine (monopeptide de la viande rouge) et la pyridoxamine, inhibent de façon compétitive la réaction de glycation en se substituant au radical aminé des protéines impliquées dans la glycation. Des composés ont été décrits comme permettant la décondensation des AGE, il s'agit notamment de composés thiazolium décrits dans la Demande Internationale WO 96/22095 comme capables de reverser la réaction de glycation in vitro et dans des études de pharmacologie animale. La Demande Internationale WO 2009/0007412 et le Brevet US 6,787,566 décrivent l'utilisation, pour déglyquer les protéines, de molécules appartenant à diverses familles chimiques parmi lesquelles est cité l'acide caféique (acide 3,4-dihydroxycinnamique). Delpierre et al. ont également décrit l'implication d'une enzyme, la fructosamine 3-kinase, dans la réaction de déglycation des protéines (Biochemical Society Transaction, 2003, vol. 31, part 6) ; l'induction de son activité permettrait donc la déglycation des protéines. L'invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un composé de formule générale (I) : OH (I) dans laquelle les radicaux R, à R5 représentent un atome d'hydrogène ou une fonction hydroxyle, et tels qu'au moins deux des radicaux R, à R5 représentent simultanément une fonction hydroxyle ; à l'exclusion de l'acide 3,4-dihydroxycinnamique ; leurs sels, esters et dérivés physiologiquement acceptables ; pour induire une déglycation des protéines glyquées condensées. En effet, l'invention se rapporte à une sélection de composés qui présentent une très bonne activité de déglycation des protéines (voir l'exemple 5) ; cette activité est comparable à celle d'un composé de référence pour cette activité, l'acide 5-aminosalicylique, et est tout à fait surprenante compte tenu du faible pouvoir déglyquant de l'acide 3,4-dihydroxycinnamique (voir le Tableau I de l'exemple 5). Les composés selon l'invention dérivés d'acide cinnamique peuvent être préparés comme décrit dans la Demande Internationale WO 03/024911 ; les dérivés d'acide cinnamique peuvent être hydrogénés pour conduire aux dérivés d'acide phénylpropionique comme décrit dans la thèse d'A. Betrow (février 2005, Département de chimie de l'Université de Rome La Sapienza). L'invention se rapporte également aux sels et esters physiologiquement acceptables de ces composés tels que des sels d'anions monovalents (Na, K...) ou des esters d'alcools (éthyl, propyl, benzyl,...), éventuellement des phénates (Na, K...), ou aux dérivés des fonctions phénol (méthoxy, éthoxy...) ou encore aux dérivés condensés obtenus par condensation de deux composés de formule générale (I) tel que l'acide rosmarinique. Par physiologiquement acceptable, on entend compatible avec l'administration à un sujet, de préférence un mammifère, par toute voie d'administration. Selon une variante préférée de l'invention, lesdits composés selon l'invention sont tels que deux radicaux R, à R5 représentent une fonction hydroxyle. Ces composés sont notamment : Composé 1. acide 3,4-dihydroxyphénylpropionique (CAS 1078-61-1) vendu par la Société Aldrich (référence : 10,260-1). HO OH OH Composé 2. acide 2,4-dihydroxyphénylpropionique (CAS 5631-68-5) vendu par la Société Fluka (référence : 37870). OH HO OH Composé 3. acide 2,4-dihydroxycinnamique (CAS 614-86-8) vendu par la Société 20 Aldrich (référence : 663158). OH HO OH Composé 4. acide 2,5-dihydroxycinnamique (CAS 636-01-1) ; ce composé peut être synthétisé par traitement en milieu alcalin de la 6-hydroxycoumarine (voir l'exemple 3), il est également vendu par la Société Aldrich (référence : 64,266-5). 5 HO OH OH Composé 5. acide rosmarinique (CAS 20283-92-5) ; ce composé est commercialisé par la Société Aldrich (référence : 536954) ; il peut également être utilisé sous forme d'extrait aqueux de feuilles de Menta piperita ou encore être préparé selon la synthèse décrite par Huang et al. (Chinese Chemical Letters 2005 Vol. 16, No. 6, pp 763-766). OH HO HO L'invention se rapporte plus particulièrement à l'utilisation d'au moins un composé selon l'invention pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de dysfonctionnements ou de pathologies induites et/ou exacerbées par la glycation des protéines. Les troubles associés à la glycation des protéines, qu'ils soient normaux, c'est-à-dire corrélés au vieillissement physiologique, ou pathologiques, comme c'est le cas dans le diabète, sont très variés et de gravité diverse. Ces dysfonctionnements ou pathologies sont induits par une altération des fonctions des protéines. Les protéines connues pour voir leur fonction altérée par la glycation sont notamment le collagène, l'élastine, la fibronectine, la tubuline, la cristalline, la myéline, la laminine, l'actine, l'hémoglobine et l'albumine ; de façon plus générale, on peut citer toutes les enzymes dont la fonctionnalité est altérée par la glycation. Le vieillissement conduit de façon passive à une glycation accrue des protéines à faible renouvellement. Le diabète conduit à un résultat identique en raison de la glycémie élevée des sujets diabétiques. Dans ces deux cas, on observe un affaiblissement des organes dont les fonctionnalités dépendent du tissu conjonctif, le système vasculaire notamment. C'est ainsi que la maladie diabétique se voit généralement associée à des angiopathies diverses, particulièrement au niveau oculaire et rénal. Une conséquence de la glycation des protéines est la perte d'élasticité des vaisseaux sanguins et lymphatiques qui conduit à toutes les formes de désordres vasculaires. Ainsi les composés selon l'invention trouvent un intérêt particulier pour limiter la perte et/ou restaurer l'élasticité des vaisseaux sanguins et/ou lymphatiques et permettre ainsi de restaurer et/ou d'améliorer le fonctionnement vasculaire sanguin et/ou lymphatique, en particulier chez les sujets sensibles pour lesquels la glycation des protéines est plus élevée, c'est-à-dire, les sujets âgés et/ou diabétiques. Les composés selon l'invention sont également utiles pour le traitement des désordres vasculaires notamment des angiopathies associées aux maladies telles que les accidents vasculaires cérébraux, les néphropathies telles qu'une insuffisance rénale ou une urémie trop élevée, l'insuffisance respiratoire, les cardiopathies, l'artériosclérose éventuellement accompagnée d'athéromes, les thromboses, la dégénérescence maculaire, les rétinopathies, en particulier, diabétiques, la cataracte. Les composés selon l'invention sont encore utiles pour lutter contre la perte et/ou restaurer l'élasticité des tendons et/ou des cartilages et ainsi prévenir et/ou traiter la diminution de mobilité due à l'inflammation et/ou des douleurs articulaires. Les composés selon l'invention peuvent être utilisés pour l'amélioration du fonctionnement des fonctions nerveuses en permettant l'élimination des AGE qui présentent un effet neurotoxique. En particulier, ces composés présentent un intérêt dans le traitement de la maladie d'Alzheimer. La présente invention se rapporte encore aux composés de formule générale (I), leurs sels, esters et dérivés des fonctions phénol physiologiquement acceptables pour une utilisation comme médicament et aux médicaments comprenant au moins un composé de formule générale (I), leurs sels, esters et dérivés des fonctions phénol physiologiquement acceptables dans au moins un véhicule physiologiquement acceptable. L'utilisation des composés selon l'invention, et plus particulièrement des composés de formule générale (I), leurs sels, esters et dérivés des fonctions phénol physiologiquement acceptables, peut également avoir une finalité cosmétique afin de prévenir et/ou lutter contre la perte de souplesse et/ou d'élasticité de la peau ; cette utilisation cosmétique permet ainsi d'éviter le relâchement de la peau et permet l'amélioration de l'aspect de surface de la peau. L'invention se rapporte également à des compléments alimentaires comprenant au moins un composé selon l'invention dans au moins un véhicule physiologiquement acceptable. Un complément alimentaire est une composition alimentaire comprenant un nutriment (vitamine, minéral, métabolite...) conçue pour compléter un régime alimentaire qui n'apporterait pas une quantité suffisante dudit nutriment. Un complément alimentaire est une composition qui s'administre généralement par voie orale et qui peut par exemple se présenter sous la forme d'un comprimé, d'une capsule ou d'un liquide. La présente invention se rapporte également à l'utilisation d'un complément alimentaire selon l'invention pour induire la déglycation des protéines glyquées condensées et ainsi prévenir et/ou traiter des dysfonctionnements et/ou désordres induits par la glycation des protéines ; il pourra notamment s'agir d'améliorer le fonctionnement vasculaire sanguin et/ou lymphatique et/ou d'en prévenir sa détérioration, d'améliorer l'élasticité des tendons et/ou des cartilages et/ou d'en prévenir sa détérioration, d'améliorer le fonctionnement des fonctions nerveuses et/ou d'en prévenir sa détérioration, et de prévenir et/ou lutter contre la perte de souplesse et/ou d'élasticité de la peau et ainsi d'éviter le relâchement de la peau et/ou d'améliorer l'aspect de surface de la peau. L'homme du métier saura adapter la formulation des composés selon l'invention selon leurs propriétés physico-chimiques et leur voie d'administration. Les composés selon l'invention pourront être administrés par toute voie d'administration qui inclut notamment la voie topique, en particulier sur la peau, la voie orale, la voie parentérale, la voie pulmonaire, la voie oculaire, la voie nasale.... De préférence, lorsque les composés selon l'invention sont utilisés dans une composition pharmaceutique, ils sont administrés par voie orale. Lorsque les composés selon l'invention sont utilisés pour des applications cosmétiques, par exemple pour éviter le relâchement de la peau et améliorer l'aspect de surface de la peau, on préférera les administrer par la voie topique. Les compléments alimentaires sont de préférence utilisés par voie orale. La quantité de composé selon l'invention à administrer au mammifère dépend de l'activité propre de ce composé, activité qui peut être mesurée par des moyens qui sont exposés dans les exemples. Cette quantité dépend également du degré des désordres provoqués par la glycation ; elle dépend enfin de l'âge et du poids de l'individu à traiter. L'administration par voie orale à l'homme des composés selon l'invention peut être comprise entre 1 à 100 mg/kg de poids corporel. Dans le cas d'une administration topique, les compositions peuvent comprendre entre 0,01 et 30% (p/p) de composés selon l'invention. Le principe de la mise en évidence de l'effet déglycant d'un composé comprend la préparation d'une protéine glyquée par la mise en présence d'une protéine soluble dans l'eau dans les conditions physiologiques (par exemple, pH 7,4 et 37°C), telle que l'albumine bovine (BSA) par exemple, avec un sucre réducteur existant principalement sous forme linéaire (ribose par exemple), pendant plusieurs jours à l'étuve à 37°C ; dans le cas particulier de l'albumine bovine, la réaction de glycation provoque la formation de condensation qui conduit à la polymérisation de la protéine en formant des molécules dont le poids moléculaire est un multiple du poids moléculaire du monomère (63 KDa dans le cas de l'albumine bovine) ; - la purification de la protéine glyquée par dialyse puis sur gel (de type Sephadex) pour éliminer le sucre réducteur restant ; - la détermination du taux de protéine glyquée ; le taux de glycation de la protéine est déterminé en mesurant la quantité relative de protéine monomère restante, par rapport à la quantité totale de protéine. Cette mesure est effectuée par chromatographie de perméation de gel et détection par un détecteur évaporatif à diffusion de lumière pour éviter les erreurs liées à d'éventuelles modifications de la capacité d'absorption en ultraviolet de la protéine au cours de la glycation ; - la mise en contact de concentrations variables du produit dont on souhaite évaluer l'activité de déglycation avec une solution de protéine glyquée et purifiée comme indiqué ci-dessus ; le mélange est placé à l'étuve dans des conditions physiologiques, par exemple à 37°C et à pH 7,4, pendant plusieurs jours ; - l'évaluation de l'effet du produit à tester est ensuite déterminée en mesurant le taux de glycation de la protéine glyquée et purifiée après traitement par les concentrations variables de produit dont on souhaite évaluer l'activité de déglycation, la solution ne contenant pas de produit à tester servant de témoin. Il convient de remarquer que cette méthode conduit à une sous évaluation de l'activité déglyquante des produits car elle ne mesure que les protéines totalement décondensées et ne prend pas en compte les produits résultant d'une décondensation partielle des protéines glyquées. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfèrent à des exemples de mise en oeuvre de la présente invention. Exemple 1 : Préparation d'une solution de protéine qlyquée (l'albumine bovine sérum, ABS) REACTIFS : - Albumine bovine sérum, Fraction V 96 % Sigma A9647 ; - D (-) Ribose minimum 99,0 % Sigma R7500 ; - Acide acétique, 99,8 % pour analyses Acros référence 222140010 ; - Hydroxyde d'ammonium A.C.S. Sigma-Aldrich 22,122-8 ; - Dialysis Tubing, Benzoylated, Avg. Flat width 32 mm(1.27 in.) Sigma D7884 ; 20 - Sephadex G-50 Sigma G-50-80 ; - Eau distillée. REACTION : A - Préparation des solutions Tampon acétate d'ammonium pH = 7,4: 25 - Acide acétique concentré 0,5 ml - Eau distillée qs 100 ml - Hydroxyde d'ammonium qs pH 7,4 Solution d'albumine à 24 % (p/p) dans le tampon acétate d'ammonium pH 7,4 ; Solution de ribose à 30 % (p/p) dans le tampon acétate d'ammonium pH 7,4. 30 B - Réaction Dans un flacon fermant à vis, sont introduits 250 g de la solution d'albumine et 50 g de la solution de ribose pour avoir une concentration finale de 20% d'albumine et 5% de ribose. Le flacon est placé à l'étuve à 37°C pendant 6 jours. Une solution d'ABS glyquée présentant les caractéristiques suivantes est obtenue : - limpide brun orangé foncé ; - viscosité plus importante ; -pH=5,7; - matière sèche : 23,4 % (p/p). DIALYSE : Quatre tubes de dialyse sont remplis avec la solution d'albumine glyquée ; l'ensemble est placé dans un récipient contenant 15 litres d'eau distillée. On renouvelle l'eau distillée deux fois par jour pendant 4 jours. Caractéristiques de la solution dialysée : - limpide brun orangé foncé ; -pH=5,5; - matière sèche : 11,6 % (p/p). PASSAGE SUR SEPHADEX G 50 : On réalise une colonne de Séphadex G50 de 3 cm de diamètre et de 10 cm de hauteur dans du tampon acétate d'ammonium pH 7,4. On dépose 10 ml de la solution d'albumine glyquée dialysée sur le haut de la colonne, on élue par du tampon acétate d'ammonium pH 7,4, on récupère la fraction colorée soit environ 20 ml. La solution obtenue présente les caractéristiques suivantes : - limpide brun orangé ; - matière sèche : 4,2 % (p/p). Exemple 2: Protocole de détermination du taux de glycation de l'albumine 25 glyguée REACTIFS : - Eau Chromasolv Plus pour HPLC Sigma-Aldrich 34877 ; Acide acétique 99,8 % pour analyses Acros référence 222140010 ; - Hydoxyde d'ammonium A.C.S. Sigma-Aldrich 22,122-8. 30 MATERIEL : - Chromatographie liquide haute pression Waters Integrity System avec détecteur à barrette de diodes (Waters 996 Photodiode Array Detector) ; - Détecteur évaporatif à diffusion de lumière Sedex 55 S.E.D.E.R.E. ; - Colonne : TSK Gel Super SW3000 Tosoh Bioscience. 35 CONDITIONS OPERATOIRES : - Débit de la phase mobile : 0,3 ml/mn ; - Température de la colonne : 25 °C ; - Isocratique sur 24 min : Tampon acétate d'ammonium pH = 6,0 : - Acide acétique concentré 0,5 ml - Eau distillée qs 100 ml - Hydroxyde d `ammonium qs pH= 6,0 - Longueur d'onde de détection: 280 nm ; - Volume injecté : 10 pl des échantillons dilués au 1/2,5 (VN) dans de l'eau et filtrés sur filtre 0,45 p ; - Réglages du détecteur : Gain 7 - Pression : 2,2 bar - Température 55°C. MESURE DU TAUX DE GLYCATION : Massif total : temps de rétention entre 6 et 12 min Pic albumine : 11 mn Les concentrations relatives des polymères et du monomère sont déterminées en intégrant le chromatogramme et en calculant le rapport des surfaces : St= surface total du massif protéique Sg= surface des polymères (albumine glyquée) Tg= taux de glycation de la protéine avec Tg Sg/St Exemple 3 : Synthèse de l'acide 2,5-dihydroxycinnamique (composé 4) REACTIFS : - 6-hydroxycoumarine 96 % Aldrich 64,266-5 ; - Hydroxyde de sodium en pastilles Riedel-de-Haên 06213 ; - Ethanol pur p.a. ACS Réactif Ph. Eur. Fluka 32294 ; - Acide chlorhydrique puriss p.a. plus, ?30 % Fluka 17077 ; - Papier filtre Whatmann 2V référence 1202-240 ; - Acétate d'éthyle, 99,5+ %, A.C.S. réactif Sigma-Aldrich 31,990-2 ; - Sulfate de sodium anhydre >_ 99,0 % A.C.S. réactif Sigma-Aldrich 23,859-7 ; - Eau distillée. PREPARATION DES SOLUTIONS : Hydroxyde de sodium à 10 % (pN) dans l'éthanol à 80 % (VN) : on dissout sous agitation en refroidissant 10 g d'hydroxyde de sodium en pastilles dans 20 ml d'eau distillée, puis on ajoute 80 ml d'éthanol. MODE OPERATOIRE : Dans un ballon, on place : - 6-hydroxycoumarine 4,4 g - Solution aqueuse d'hydroxyde de sodium à 10 % 100 ml On place 4,4 g de 6-hydroxycoumarine dans un ballon à laquelle on ajoute 100 ml de solution d'hydroxyde de sodium à 10 % (pN) dans l'eau distillée. On porte à ébullition sous reflux pendant 4 heures. On refroidit, le pH est alors de 12,6. On acidifie jusqu'à pH 1 par addition de 37 ml d'acide chlorhydrique concentré, on a une importante précipitation. On refroidit dans un bain d'eau glacée. On filtre sur papier. Le filtrat est transvasé dans une ampoule à décanter et extrait par 3 fois 100 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium anhydre, filtrées sur papier et évaporées à sec sous vide à 50°C. On obtient environ 1 gramme d'une poudre beige foncé dont la pureté est de 93%, déterminée par HPLC et détection par un détecteur évaporatif à diffusion de lumière. Exemple 4: Extraction par décoction d'acide rosmarinique sous forme d'un extrait de feuilles de menta piperita 4.A. Extraction REACTIFS : - Eau distillée - Papier filtre Whatman 2V référence 1202-240 MODE OPERATOIRE : Dans un ballon, sont introduits 30 g de feuilles de Menta piperita fraiche (teneur en eau : 78,6 %) préalablement broyées. On ajoute 300 ml d'eau distillée (rapport plante fraiche/solvant d'extraction : 1/10). Le mélange est porté à ébullition à reflux pendant 30 min ; refroidit ; tamisé puis filtré sur papier. On renouvelle l'opération une fois dans les mêmes conditions. 4.B. Identification et dosage de l'acide rosmarinique REACTIFS : - Acétonitrile Chromasolv® pour HPLC Sigma-Aldrich 34851 ; - Eau Chromasolv® Plus pour HPLC Sigma-Aldrich 34877 ; - Acide acétique 99,8 % pour analyses Acros référence 222140010 ; - Ethanol pur p.a. ACS réactif Ph. Eur Fluka 32294 ; - Acide rosmarinique Aldrich 536954 ; 12 - Filtres Acrodisc® 0,45 p Sigma-Aldrich Z260290. MATERIEL : - Chromatographie liquide haute pression Waters Integrity System avec détecteur à barrette de diodes (Waters 996 Photodiode Array Detector) - Colonne : Sphérisorb ODS2 Interchrom (Diamètre : 3 mm - Longueur : 250 mm - 5 p). CONDITIONS OPERATOIRES : - Débit de la phase mobile : 0,3 ml/mn ; - Température de la colonne : 25°C ; - Gradient : - A : eau à 1 % (VN) d'acide acétique - B : acétonitrile à 1 % (VN) d'acide acétique Temps A % (Volume) B % (Volume) Omin 85 15 25 min 0 100 - Longueur d'onde : 330 nm ; - Volume injecté : 10 pl. GAMME D'ETALONNAGE : On réalise une solution mère d'acide rosmarinique à environ exactement 0,12% (pN) dans de l'éthanol à 50% (VN). On dilue la solution mère au 1/5, 2/5, 3/5 et 4/5 (VN) dans le même solvant. On injecte 10 pl de ces cinq solutions après filtration sur filtre 0,45 p 20 dans les conditions décrites précédemment. A 330 nm on obtient un chromatogramme présentant un pic unique ayant un temps de rétention de 17,5 minutes. La surface de ce pic est calculée en intégrant de vallée à vallée. On établit une droite de type linéaire : de la surface en fonction des 25 concentrations en étalon. IDENTIFICATION ET DOSAGE : On injecte 10 pl des deux décoctions aqueuses de menthe fraiche après filtration sur filtre 0,45 p. On obtient des chromatogrammes présentant un pic ayant un 30 temps de rétention et un spectre UV similaire à celui de l'acide rosmarinique. Par report des surfaces des pics obtenus sur la courbe d'étalonnage on en déduit la teneur en acide rosmarinique de la menthe. Le rendement d'extraction en % par rapport à la plante sèche est compris entre 32,4 et 31,01% ; le rendement en acide rosmarinique en % par rapport à la plante sèche : 3,95 û 3,79% et la teneur en acide rosmarinique de la matière sèche : 12,2 û 12,23%. Exemple 5 : détermination du pouvoir déglycant des produits testés REACTIFS : - Albumine glyquée (AIbG) préparée selon l'exemple 1 ; - Eau Chromasolv® Plus pour HPLC Sigma-Aldrich 34877 ; - Acide acétique 99,8 % pour analyses Acros référence 222140010 ; - Hydoxyde d'ammonium A.C.S. Sigma-Aldrich 22,122-8. PREPARATION DES REACTIFS : - l'acide acétique est dilué au 1/5 (VN) dans l'eau ; - l'hydroxyde d'ammonium est dilué au 1/2 (VN) dans l'eau. PRODUITS A TESTER : - Composé 1 : acide 3,4-dihydroxyphénylpropionique (CAS 1078-61-1). Produit 15 Aldrich (ref. 10,260-1) - Composé 2 : acide 2,4-dihydroxyphénylpropionique (CAS 5631-68-5). Produit Fluka (ref. 37870) - Composé 3 : acide 2,4-dihydroxycinnamique (CAS 614-86-8). Produit Aldrich (ref 663158) 20 - Composé 4 : acide 2,5-dihydroxycinnamique (CAS 636-01-1). Produit synthétisé par traitement en milieu alcalin de 6-hydroxycoumarine, selon exemple 3. - Composé 5 : acide rosmarinique (CAS 20283-92-5). Produit Aldrich (ref. 536954) - Acide caféique. Produit Sigma C0625 ; - Acide 5-aminosalicylique. Produit Sigma A3537. 25 Pour chaque produit à tester, est préparée une solution à 1% (p/p) dans d'albumine glyquée en réajustant le pH à 7,4 par addition d'hydroxyde d'ammonium. On réalise une solution d'albumine glyquée sans produit à tester pour servir de témoin. 30 MODE OPERATOIRE : Les solutions sont placées pendant 5 jours à 37°C. On mesure le taux de glycation TgO de l'albumine sans produit à tester. On détermine ensuite le taux de glycation Tg de l'albumine en 35 solution dans les échantillons. L'effet déglycant en pour cent Edg d'un produit à tester est donné Edg = ((TgO - Tg) / TgO)) X 100 RESULTATS: Produit testé Edg Composé 1. Acide 3,4-dihydroxyphenylpropionique 16,6 % Composé 2. Acide 2,4-dihydroxyphenylpropionique 13,0 % Composé 3. Acide 2,4-dihydroxycinnamique 16,9 % Composé 4. Acide 2,5-dihydroxycinnamique 14,0 % Composé 5. Acide rosmarinique 18,7 % Acide caféique 9,1 % Acide 5-aminosalicylique 18,3% TABLEAU I Il ressort de ce Tableau I que les composés selon l'invention présentent une très bonne activité de déglycation ; cette activité est comparable à celle de l'acide 5-aminosalicylique qui est un composé connu pour avoir une activité de déglycation élevée et est utilisé dans ces essais comme composé de référence. Ces essais montrent également que l'activité des composés selon l'invention était totalement inattendue compte tenu de l'activité déglyquante faible de l'acide caféique. par: REVENDICATIONS1. Utilisation d'au moins un composé de formule générale (I) : OH (I) dans laquelle les radicaux R, à R5 représentent un atome d'hydrogène ou une fonction hydroxyle, et tels qu'au moins deux des radicaux R, à R5 représentent simultanément une fonction hydroxyle ; à l'exclusion de l'acide 3,4-dihydroxycinnamique ; leurs sels, esters et dérivés physiologiquement acceptables ; pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de dysfonctionnements ou de pathologies induites et/ou exacerbées par la glycation des protéines. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que les dysfonctionnements ou pathologies sont corrélées au vieillissement physiologique et/ou au diabète. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, pour limiter la perte et/ou restaurer l'élasticité des vaisseaux sanguins et/ou lymphatiques. 4. Utilisation selon la revendication 3, pour restaurer et/ou améliorer le fonctionnement vasculaire sanguin et/ou lymphatique. 5. Utilisation selon la revendication 3 ou 4 pour prévenir et/ou traiter les angiopathies associées aux maladies telles que les accidents vasculaires cérébraux, les néphropathies telles qu'une l'insuffisance rénale ou une urémie trop élevée, l'insuffisance respiratoire, les cardiopathies, l'artériosclérose éventuellement accompagnée d'athéromes, les thromboses, la dégénérescence maculaire, les rétinopathies, en particulier, diabétiques, la cataracte. 6. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, pour lutter contre la perte d'élasticité des tendons et/ou des cartilages. 7. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, pour améliorer les fonctions nerveuses. 8. Utilisation cosmétique d'au moins un composé de formule générale (I) :OH (1) dans laquelle les radicaux R, à R5 sont un atome d'hydrogène ou une fonction hydroxyle, et tels qu'au moins deux des radicaux R, à R5 sont simultanément une fonction hydroxyle ; à l'exclusion de l'acide 3,4-dihydroxycinnamique ; leurs sels, esters et dérivés physiologiquement acceptables ; pour prévenir et/ou lutter contre la perte de souplesse et/ou d'élasticité de la peau et/ou éviter le relâchement de la peau et/ou améliorer l'aspect de surface de la peau. 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que lesdits composés de formule générale (I), leurs sels, esters et dérivés physiologiquement acceptables sont tels que deux des radicaux RI à R5 représentent une fonction hydroxyle. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que lesdits composés de formule générale (I), leurs sels, esters et dérivés physiologiquement acceptables sont sélectionnés dans le groupe constitué par : Composé 1. acide 3,4-dihydroxyphénylpropionique ; Composé 2. acide 2,4-dihydroxyphénylpropionique ; Composé 3. acide 2,4-dihydroxycinnamique ; Composé 4. acide 2,5-dihydroxycinnamique ; Composé 5. acide rosmarinique. 11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ledit composé, sel, ester ou dérivé physiologiquement acceptable est administré par voie topique, orale, parentérale, pulmonaire, oculaire, nasale. 12. Composé de formule générale (I) : OH (I)dans laquelle les radicaux R, à R5 sont un atome d'hydrogène ou une fonction hydroxyle, et tels qu'au moins deux des radicaux R, à R5 sont simultanément une fonction hydroxyle ; à l'exclusion de l'acide 3,4-dihydroxycinnamique, leurs sels, esters et dérivés des fonctions phénol physiologiquement acceptables, pour une utilisation comme médicament. 13. Médicament comprenant au moins un composé de formule générale (I) : (1) dans laquelle les radicaux R, à R5 sont un atome d'hydrogène ou une fonction 10 hydroxyle, et tels qu'au moins deux des radicaux R, à R5 sont simultanément une fonction hydroxyle ; à l'exclusion de l'acide 3,4-dihydroxycinnamique, leurs sels, esters et dérivés des fonctions phénol physiologiquement acceptables dans au moins un véhicule physiologiquement acceptable. 14. Complément alimentaire comprenant au moins un composé de 15 formule générale (I) : (1) dans laquelle les radicaux R, à R5 sont un atome d'hydrogène ou une fonction hydroxyle, et tels qu'au moins deux des radicaux R, à R5 sont simultanément une fonction hydroxyle ; à l'exclusion de l'acide 3,4-dihydroxycinnamique, leurs sels, 20 esters et dérivés physiologiquement acceptables. 15. Utilisation d'un complément alimentaire selon la revendication 14, pour améliorer le fonctionnement vasculaire sanguin et/ou lymphatique et/ou d'en prévenir sa détérioration ; d'améliorer l'élasticité des tendons et/ou des cartilages et/ou d'en prévenir sa détérioration ; d'améliorer le fonctionnement des fonctions 25 nerveuses et/ou d'en prévenir sa détérioration ; et/ou de prévenir et/ou lutter contre la perte de souplesse et/ou d'élasticité de la peau et ainsi d'éviter le relâchement de la peau et/ou d'améliorer l'aspect de surface de la peau.