Brevet FR2958165A1 — publié le 20111007

PROCEDE DE STIMULATION DES CAPACITES REPRODUCTIVES CHEZ LE TAUREAU ET COMPOSITION DESTINEE A LA STIMULATION DES CAPACITES REPRODUCTIVES CHEZ LE TAUREAU DOMAINE DE L'INVENTION L'invention concerne un procédé de stimulation des capacités reproductives chez le taureau. Plus précisément, le procédé selon l'invention permet de stimuler la fonction sexuelle, et notamment la libido, chez le taureau, mais aussi d'améliorer la qualité de la semence. L'invention concerne également une composition destinée à être utilisée sur les taureaux en vu de stimuler leurs capacités reproductives. L'invention trouve des applications dans le domaine de l'élevage bovin, et notamment pour la récolte de la semence des taureaux, et 15 l'insémination, directe ou artificielle, des vaches. ETAT DE LA TECHNIQUE ET PROBLEMES RENCONTRES Des études récentes ont montré que le stade oestrus, correspondant à 20 la période pendant laquelle la femelle est réceptive aux mâles et fécondable, est particulièrement brève chez la vache, de l'ordre de 6 à 12 heures. Lors de la phase oestrus, une vache sécrète des phéromones volatiles sexuelles, informant les mâles de sa disponibilité à l'accouplement. Ainsi, plusieurs études ont été conduites sur les bovins, afin de valider cette hypothèse. Ces 25 études ont permis de confirmer la présence de telles molécules dans plusieurs sécrétions, et notamment dans les sécrétions vaginales et les urines, et leur action sur le Flehmen des mâles. Ces molécules sont détectées par les mâles et leur permettent de repérer les femelles au stade oestrus. 30 Actuellement, les bovins sont le plus souvent sélectionnés en fonction de caractères spécifiques, liés à la destination de l'élevage. Ainsi, les vaches de race laitière sont sélectionnées en fonction de leur capacité de lactation, devant garantir une production constante de lait, tant en qualité qu'en quantité. De même, les races à viande sont sélectionnées pour les qualités 35 quantitatives, nutritives, gustatives, etc, de leur viande. La reproduction bovine est donc rarement laissée au hasard, les taureaux comme les vaches étant sélectionnés en fonction de critères spécifiques, liés à la destination finale de la descendance. La collecte de la semence des taureaux en centre de production de semence est une opération délicate, devant être menée rigoureusement au niveau de la collecte elle-même, de manière notamment à éviter les contaminations, mais également lors des manipulations des taureaux, en amont et en aval de la collecte. Actuellement, il n'est pas possible de mettre au point un protocole commun à tous les taureaux d'un élevage, pour garantir une collecte à peu près uniforme entre tous les individus de l'élevage. En effet, au sein d'un même élevage, les individus peuvent présenter une libido variable, tant d'un individu à un autre que, pour un même individu, d'un moment à un autre. A ce jour, il n'existe aucune méthode efficace pour stimuler la fonction sexuelle et tout particulièrement la libido des taureaux utilisés en centre d'insémination ou en élevage. Or, les troubles de la libido sont extrêmement répandus chez les taureaux et s'avèrent pénalisants pour les centres de sélection de semence. Ils peuvent se traduire par des pertes économiques non négligeables (pertes de doses, pertes de temps importantes, risques pour les bouviers). Le temps et les conditions de collecte sont donc des paramètres difficilement prévisibles pour les bouviers. De même, la qualité et la quantité de la semence sont fluctuantes d'un individu à un autre, et pour un même individu d'un moment à un autre. A ce jour, il n'existe pas de procédé efficace pour améliorer la production de la semence chez les taureaux, sinon la gestion individualisée des collectes, prenant en compte le comportement de chaque individu. EXPOSE DE L'INVENTION L'invention a pour but de résoudre tout ou partie des problèmes exposés ci-dessus. Notamment, un des buts de l'invention est d'améliorer les capacités reproductives des taureaux, afin de récupérer leur semence en vue d'inséminations ultérieures et/ou afin de procéder à un accouplement avec des femelles au stade oestrus. Les capacités reproductives s'entendent des capacités comportementales, et notamment la libido, et/ou des capacités physiologiques, et notamment la qualité et/ou la quantité de semence. Pour cela, l'invention propose d'utiliser certaines molécules, isolées initialement à partir de certaines secrétions de vache au stade oestrus, et notamment dans les urines, pour les soumettre aux taureaux avant collecte de leur semence ou avant de les présenter à des femelles en vue de la reproduction. Les inventeurs ont notamment identifié six molécules spécifiques du stade oestrus et ayant des effets sur la capacité reproductive des taureaux, à savoir le coumarin, le squalène, le 6-aminoundécane, la 2- butanone, l'acide 9-octadécénoïque et le 1,2-dichloroéthylène. Ces molécules peuvent être isolées à partir des sécrétions de vache au stade oestrus, ou être obtenues par tout autre moyen et notamment par synthèse chimique. Certaines de ces molécules sont d'ailleurs déjà disponibles dans le commerce. Les molécules selon l'invention sont des phéromones incitatrices, c'est-à-dire qui agissent sur le comportement, mais également modificatrices, c'est-à-dire qui agissent sur la biologie. Plus particulièrement, l'inhalation de ces molécules permet de réduire le temps avant la monte et l'éjaculation, et/ou d'augmenter la concentration en spermatozoïdes dans l'éjaculat. Les utilisations qui en sont faites permettent, avec une gestion environnementale équivalente de la collecte, d'augmenter la production de semence de l'ensemble des individus, avec des effets d'interaction traitement/individu négligeables. Cette amélioration de la production de semence est tout à fait intéressante sur le plan économique, en particulier pour les individus de grande valeur génétique. De plus, l'obtention d'effets similaires chez les animaux jeunes est très intéressante, notamment dans le cadre de la sélection génomique, où l'on cherche à optimiser les performances reproductives de tels individus pour accélérer le progrès génétique. L'invention propose tout particulièrement d'utiliser ces molécules en solution apte à être pulvérisée dans les naseaux des taureaux à traiter. En effet, de cette façon, les molécules sont directement en contact avec la cible, et les risques que les molécules, très volatiles, se dissipent dans l'air sont réduits. Par ailleurs, ce mode d'administration permet de doser de manière précise la quantité de phéromones inhalée par individu. BREVE DESCRIPTION DES FIGURES La figure 1 montre les profils chromatographiques comparés de la composition chimique des urines de vache au cours d'un cycle oestral ; Les figures 2A à 2F montrent les spectres ioniques expérimentaux (a), en comparaison avec les spectres de la banque NIST (b), de six composés chimiques spécifiques des stades pré-oestrus et oestrus, identifiés selon l'invention, dans les urines et mucus vaginaux des vaches ; Les figures 3A à 3C montrent les effets d'un premier exemple de traitement selon l'invention sur la libido (figure 3A), la concentration en spermatozoïdes des éjaculats en milliards de spermatozoïdes / mL (figure 3B) et sur le nombre total de spermatozoïdes en milliards, par éjaculat (figure 3C). , Les figures 4A et 4B montrent les effets du premier exemple de traitement selon l'invention sur la semence d'un groupe de taureaux à libido normale (concentration en spermatozoïdes : figure 4A ; nombre total de spermatozoïdes : figure 4B) ; La figure 5 montre les effets du premier exemple de traitement selon l'invention sur la libido d'un groupe de taureaux à faible libido initiale ; Les figures 6A et 6B montrent les effets d'un second exemple de traitement selon l'invention sur la libido (figure 6A) et sur la semence des taureaux (figure 6B), en fonction de leur libido initiale. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Les inventeurs ont identifié des molécules volatiles, présentes spécifiquement dans certaines secrétions des vaches au stade oestrus, et qui ont une action bénéfique sur la fonction reproductive des taureaux, en ce sens qu'elles sont aptes à améliorer et/ou induire la libido des taureaux, et/ou à améliorer la qualité et/ou la quantité de semence produite. Selon l'invention, le comportement sexuel, ou la libido, des taureaux prend en compte le temps de réaction, le temps de préparation sexuelle et le temps jusqu'à l'éjaculation. Le temps de réaction est défini selon l'invention comme l'intervalle entre le moment où le taureau est amené à environ 1,5m du boute-en-train et la première fausse monte. Le temps de préparation sexuelle correspond à la préparation préconisée par Amann (1976), à savoir : une fausse monte, suivie de 2 minutes d'attente active, puis deux autres fausses montes au gré du taureau, enfin, sans autre attente, la monte conduisant à l'éjaculation. L'attente active se définit par le maintien du taureau au contact du boute-en-train, les deux animaux se trouvant côte à côte. Le temps jusqu'à l'éjaculation est, lui, égal à la somme du temps de réaction et du temps de préparation sexuelle. L'invention a donc pour objet l'utilisation d'une composition comportant au moins une molécule volatile spécifique de l'oestrus chez la vache pour améliorer la fonction reproductive chez le taureau. Par vache, il faut entendre la femelle de l'espèce bovine, en âge de procréer, c'est-à-dire le plus souvent ayant plus de 18 mois. De même, par taureau, il faut entendre le mâle de l'espèce bovine, non castré et en âge de procréer. L'oestrus correspond à la période du cycle oestral, également appelée chaleurs, où a lieu l'ovulation et où la femelle accepte l'accouplement. L'oestrus est précédé par la phase pré-oestrus, et est suivi de la phase post-oestrus. Par fonction reproductive, on entend les processus comportementaux et physiologiques aboutissant à la production de semence. Selon l'invention, l'amélioration de la fonction reproductive peut consister en une amélioration de la libido, c'est-à-dire une amélioration du comportement conduisant à la production de la semence, mais également en une amélioration de la semence elle-même, ou les deux. Par amélioration, on entend un accroissement de la capacité reproductive du taureau, que se soit par réduction du temps nécessaire audit taureau pour produire la semence et/ou par augmentation de la qualité intrinsèque de la semence elle-même. Notamment, la qualité de la semence peut être améliorée par augmentation du volume produit, par augmentation de la concentration en spermatozoïdes dans ledit volume, par augmentation du nombre de spermatozoïdes motiles, etc. Selon l'invention, l'utilisation de cette composition permet d'améliorer les performances de collecte de la semence du taureau traité, ou d'augmenter les chances d'obtenir une fécondation suite à la saillie par le taureau traité d'une vache en chaleur.35 Préférentiellement, dans la composition utilisée, au moins une molécule volatile spécifique du stade oestrus chez la vache est choisie parmi le coumarin, le squalène, le 6-aminoundécane, la 2-butanone, l'acide 9-octadécénoïque et le 1,2-dichloroéthylène. Avantageusement, la composition contient au moins un mélange de coumarin et de squalène. La composition selon l'invention est avantageusement conditionnée sous forme de solution comportant du glycérol en tant que solvant des molécules volatiles. Préférentiellement, la concentration totale en molécules volatiles spécifiques du stade oestrus est comprise entre 5 pg/mL et 100 pg/mL. Par concentration totale, on entend la somme des concentrations en chacune des molécules volatiles spécifiques du stade oestrus utilisées pour réaliser la composition. De manière encore préférée, la concentration en molécules volatiles spécifiques de l'oestrus dans la composition est au moins égale à 25 pg/mL, +1- 5%. Selon des exemples d'utilisation de la composition selon l'invention, il est possible de maintenir ladite composition à la périphérie des naseaux du taureau de manière à ce que ledit taureau puisse inhaler ladite composition. Préférentiellement, la composition est conditionnée sous forme de spray de manière à pouvoir être pulvérisée directement dans les naseaux du taureau. Selon l'invention, la composition peut avantageusement être utilisée avec effet immédiat. Autrement dit, il n'y a pas de temps de latence pour que la composition agisse, et il est possible de procéder à la saillie d'une femelle ou à la récolte de la semence directement après avoir soumis le taureau à ladite composition. Avantageusement, on soumet le taureau à ladite composition avant chaque récolte de semence ou avant chaque saillie d'une vache. L'invention concerne également une composition destinée à être utilisée sur un taureau, afin d'améliorer sa fonction reproductive, caractérisée en ce qu'elle contient au moins une molécule volatile spécifique de l'oestrus chez la vache. Avantageusement, dans la composition, au moins une molécule volatile spécifique de l'oestrus chez la vache est choisie parmi le coumarin, le squalène, le 6-aminoundécane, le 2-butanone, l'acide 9-octadécénoïque et le 1,2-dichloroéthylène. La composition peut être conditionnée sous forme de solution contenant préférentiellement du glycérol en tant que solvant des molécules volatiles. En effet, le glycérol n'est pas nocif pour l'animal et n'agit pas lui-même sur la fonction reproductive du taureau. Bien entendu, tout autre solvant ou excipient, apte à diluer les molécules selon l'invention, et permettant une utilisation sans risque sur le taureau, peut être utilisée. Préférentiellement, la solution comporte les excipients nécessaires pour permettre sa pulvérisation. Selon l'invention, la solution présente avantageusement une concentration totale en molécules volatiles spécifiques du stade oestrus comprise entre 5 pg/mL et 100 pg/mL. De manière encore préférée, la concentration en molécules volatiles spécifiques de l'oestrus dans la composition est au moins égale à 25 pg/mL, +1- 5%. EXPERIMENTATIONS I- MATERIEL ET METHODES 1 û Collectes des échantillons biologiques (urines et mucus vaginaux) Afin de mettre en évidence les composés chimiques impliqués dans la détection de l'oestrus par le mâle chez les bovins, plusieurs collectes d'urine et de mucus vaginaux ont été réalisées sur des vaches de réforme ou des génisses. Dans un premier temps, deux séries de collectes ont été réalisées sur des vaches de réforme de race Prim'Holstein. Les urines ont été collectées sur des animaux synchronisés par traitement à la prostaglandine (PGF2a) au moment des mictions naturelles à trois stades du cycle, à savoir en pré-oestrus (J+1 post-PGF2a), en oestrus (J+2 post-PGF2a) et en phase lutéale (J+7 post-PGF2a). Un suivi des cycles au cours de ces collectes a été réalisé, de façon à déterminer au mieux le moment de l'oestrus, par observation journalière des animaux, associée à un dosage de la progestérone plasmatique. Des mucus vaginaux ont également été collectés par tamponnage d'une gaze sur la zone péri-vaginale lors de l'apparition de mucus vaginal. Une session de collecte a également été réalisée sur des génisses de 18 mois, au cours de leurs premiers cycles oestraux. Les échantillons urinaires ont été collectés en pré-oestrus (entre J-3 et J-1 avant l'oestrus), en oestrus et en phase lutéale (J+10) au cours de cycles naturels. La détermination des stades a été réalisée par un suivi minutieux des comportements à raison de 5 observations visuelles par jour pendant 15 min sur plus de 36 mois. Des échographies, à raison de 3 fois par semaine, y ont été associées de façon à surveiller la maturation folliculaire. Trois autres sessions de collectes ont été réalisées de la manière suivante : Six à huit vaches (races Holstein et Montbéliarde) ont été synchronisées dans leur cycle par deux injections de Prostaglandine (PGF2a) à 10 jours d'intervalle, avec une seconde injection réalisée le jour des premières collectes (JO). Des dosages plasmatiques hormonaux ont été réalisés en complément des observations visuelles et comportementales, afin de déterminer le moment de l'ovulation. Des prises de sang ont donc été effectuées toutes les 6 heures afin de doser l'hormone lutéinisante (LH) et l'oestradiol (E2) durant la semaine ayant suivi la seconde injection de prostaglandine. Les dosages de progestérone (P4) ont été effectués toutes les 24 heures. Le sérum issu de chaque prise de sang a été stocké à -80°C jusqu'au dosage de la progestérone (kit ovucheck plasma, Biovet), de l'hormone lutéinisante (kit LH DETECT, INRA de Nouzilly) et de l'oestradiol. Un suivi du développement folliculaire a été réalisé en complément, lors de l'une des collectes à raison de deux échographies par jour. Les urines ont été collectées lors de mictions spontanées à raison de deux à trois fois par jour en fonction des animaux. Au moment de la collecte, les urines ont été fractionnées dans 4 tubes de 4 ml en verre scellés par des bouchons en téflon (Supelco). Les mucus cervicaux, fluides biologiques spécifiques des chaleurs, ont également été collectés dans des flacons de 20 ml en verre fermés par des bouchons en téflon (Supelco). Dans tous les cas, les échantillons collectés ont été conservés à 4°C après collecte avant un stockage dans les 4 heures à -80°C jusqu'à leur analyse. 2 û Analyse de la composition chimique des fluides biologiques échantillonnés 2 û 1 û Extraction par solvant orqanique L'extraction chimique a été effectuée volume à volume par un solvant organique à partir de 4 mL d'urine ou de mucus vaginaux décongelés sur 10 glace. Plusieurs solvants ont été testés (dichlorométhane=DCM, pentane, hexane). Le DCM, qui présentait une capacité d'extraction d'un plus grand nombre de composés chimiques sur les premiers échantillons analysés, a été retenu. Les extractions se sont faites dans des tubes en verre fermés par 15 des bouchons à vis en téflon (Supelco) afin de minimiser les contaminations par des résidus plastiques (les phtalates). Après passage rapide au vortex, les échantillons ont sédimenté à température ambiante pendant 10 min, avant d'être centrifugés à 2500 rpm durant 20 min. Après cette centrifugation, la phase organique a été séchée 20 sur colonne de sulfate de sodium (FLUKA) avant d'être concentrée 100 fois sous flux d'azote et stockée à -20°C jusqu'aux analyses (dans les deux semaines suivant l'extraction). 2 û 2 û Identification des composés chimiques par GC/MS 25 Les extraits chimiques ont été analysés par chromatographie en phase gazeuse, couplée à une spectrométrie de masse (GC-MS) sur un appareil de type FOCUS/DSQII (Thermo Scientific) constitué d'un Focus GC couplé à un spectromètre de masse de type quadrupole (DSQII, Thermo Scientific). 30 Au cours des analyses (réalisées sur 3 ans), cinq colonnes différentes ont été utilisées pour séparer les composés extraits : une CP-sil5 CB low Bleed/MS 60 m x 0,25 pm ID x 0,25 pm (SUPELCO), une TR-1MS 30 m x 0,25 mm ID x 0,25 pm (Thermo), une 1MS-SolGel 30 m x 0,25 pm ID x 0, 25 pm (SGE), une TR-1 MS 30m x 0,25 ID x 0,25 m (Thermo), une TR-1 MS 30m x 0,25 ID x 0,25 m (Thermo) et une Equity 5 30 m x 0,25 pm ID x 0, 25 pm (SUPELCO). Des aliquots de 2 pl d'extrait ont été injectés en mode splitless (30 sec) dans un injecteur à 260°C. Le programme d'analyse utilisé a été le suivant : 30°C pendant 4 min puis 5°C/min jusqu'à 280°C, et isotherme à 280°C pendant 10 min. L'ionisation des molécules entrant dans le spectromètre de masse a été obtenue par impact électronique à 70 eV, avec une température de source de 180°C. L'identification des composés d'intérêt a été effectuée par comparaison des spectres ioniques expérimentaux obtenus avec la banque de spectres NIST. L'analyse a été focalisée sur les molécules variant au cours du cycle oestral de l'animal et plus particulièrement aux cours des stades pré-oestrus et oestrus. La figure 1 illustre la façon dont les molécules d'intérêt ont été mises en évidence. Les différents stades du cycle sont représentés sur la droite des chromatogrammes par une échelle de temps. Une étoile indique le moment de l'ovulation. Les pics surmontés d'une astérisque correspondent à des composés non spécifiques de stade, car retrouvés chez d'autre animaux en phase post-oestrus, et donc non retenus. Les pics surmontés d'une flèche correspondent à des pics spécifiques des stades pré-oestrus/oestrus chez une majorité des animaux, que les composés aient été identifiés (exemple : le coumarin à la figure 1) ou non identifiés (exemple : le pic surmonté de « NI » à la figure 1). II- RESULTATS 1- Identification des molécules Une dizaine de molécules a été mise en évidence comme étant de potentiels marqueurs de l'oestrus en raison de leur présence aux stades pré-oestrus et/ou oestrus chez une majorité de vaches. Six de ces molécules, le coumarin, le 6-aminoundécane, le 1,2-dichloroéthylène, le squalène, la 2-butanone et l'acide 9-octadécénoïque, ont pu être identifiées par comparaison de leur spectre ionique (expérimental) avec ceux de la banque de spectre NIST. Les figures 2A, 2B, 2C, 2D, 2E et 2F comparent les spectres ioniques expérimentaux (a) de ces molécules avec les spectres de la banque NIST (b). Ainsi, le coumarin était présent chez 5 des 6 vaches aux stades pré- oestrus et/ou oestrus dans les urines de vache de la deuxième collecte. Lors de cette collecte, il a été mis en évidence en association avec d'autres molécules, qui ne sont pas toutes identifiées actuellement. Toutefois, le 6-aminoundécane a pu être identifié en pré-oestrus chez 5 des six vaches analysées et en oestrus chez 2 d'entre elles. Le coumarin a également été retrouvé au stade oestrus chez une vache de la première collecte. Le 1,2-dichloroéthylène a été mis en évidence lors de l'analyse de la troisième collecte réalisée au stade pré-oestrus chez la moitié des vaches étudiées et pour trois vaches sur huit en oestrus. Sa présence a également pu être détectée dans les urines de génisse au cours de leurs premières chaleurs. Le squalène est la molécule identifiée qui a été retrouvée le plus régulièrement aux stades pré-oestrus/oestrus quelle que soit la collecte. De façon intéressante, on a observé cette molécule à la fois dans les urines aux stades définis précédemment, et dans les mucus vaginaux, fluides biologiques spécifiques de l'oestrus chez la vache. L'acide 9-octadécénoïque est un acide gras qui a également été retrouvé à la fois dans certaines urines (bien que moins fréquemment que le squalène) aux stades désirés et dans les mucus vaginaux. La 2-butanone a également été identifiée de façon quasi-systématique 25 dans les mucus vaginaux des vaches collectées. 2- Préparation de compositions et conditionnements Trois molécules, disponibles commercialement, ont été utilisées pour préparer les compositions utilisées dans les exemples ci-dessous, à savoir le 30 coumarin, le squalène et le 1,2-dichloroéthylène. Pour la réalisation des compositions, l'excipient employé est une solution de glycérol/eau (50/50, v/v). Ce même excipient est utilisé comme solution témoin (Solution T). 35 2-1- Solution A La solution A contient le coumarin à une concentration finale de 25 pg/ml. Une première dilution du coumarin commercial a été réalisée dans de l'éthanol pour une concentration finale de 12,5 mg/ml, puis deux dilutions au 100ème ont été réalisées en série dans une solution d'éthanol pour arriver à une solution mère A à une concentration de 12,5 ng/ml. Un millilitre de cette dernière dilution est dilué dans 499 ml d'excipient pour obtenir la solution A finale. 2-2- Solution B La solution B contient un mélange de squalène et de 1,2-dichloroéthylène à une concentration totale de 25 pg/ml. De la même façon que précédemment, 12,5 mg des composés commerciaux ont été repris dans 1 ml d'éthanol pour obtenir une solution mère B à 12,5 mg/ml. Ces solutions mères ont été diluées au 1000ème en série 23 fois dans de l'éthanol pour arriver à une concentration de 12,5 ng/ml avant dilution finale dans l'excipient pour obtenir la solution B finale. 2-3- Solution A+B La solution A+B est obtenue par dilution de 1 ml des solutions mères A et B (à 12,5 ng/ml) dans 498 ml d'excipient. 2-4- Conditionnement Les solutions ont été conditionnées sous forme de spray, dans des pulvérisateurs utilisés en cosmétologie, en aluminium doublé d'un revêtement neutre utilisé dans l'industrie agro-alimentaire pour éviter le relarguage de substances parasites. Un tel conditionnement permet de soumettre le taureau à la composition en limitant les pertes en molécules actives, c'est-à-dire les phéromones d'intérêt, qui sont par nature très volatiles. En effet, le dépôt peut se faire directement dans les naseaux de l'animal, donc proche de la cible, à savoir le système nerveux. L'utilisation d'un pulvérisateur permet donc, par une méthode non invasive, de limiter la perte en molécules actives, de contrôler la dose fournie à l'animal, et d'être au plus proche de la cible. Autrement, il est également possible de présenter la solution dans des coupelles que l'animal reniflera et/ou léchera. Il est également possible d'utiliser la solution pour badigeonner les parties génitales, entre autres, de la vache qui doit être saillie, ou le boute-en-train utilisé dans le cadre de la récolte de la semence du taureau. EXEMPLE I I- MATERIEL ET METHODES 1- Matériel animal Un lot de dix taureaux adultes, âgés de 4 ans à 5,5 ans, de races Prim Holstein ou Normande, a été inclus dans la première étude. Ces animaux ont été recrutés dans la filière « insémination animale » dès l'âge de 2 à 3 mois et depuis n'ont jamais été en contact avec des femelles bovines. Ils ont toujours été élevés en boxes individuels (période de prétestage ou période de production) ou en lots de 4 à 6 animaux de même âge et de même sexe (période de lay-off). Les conditions d'alimentation et d'hébergement ont toujours été identiques pour les animaux de l'essai, avant et pendant l'essai. Préalablement à l'essai, les taureaux ont été répartis en 2 groupes en fonction de leur libido, définie à partir de leur comportement observé avant l'essai en salle de monte. Le groupe 1 correspond aux animaux à libido « normale », c'est-à-dire dont les temps de réaction et d'éjaculation sont conformes à ceux de l'ensemble des taureaux de la taurellerie. Le groupe 2, à « faible libido », est constitué des reproducteurs considérés comme « lents » voire « très lents » jusqu'à la manifestation d'un intérêt pour le boute-en-train et l'obtention d'un éjaculat. 2- Solution utilisée Dans cet exemple I, la solution B a été testée. La solution contenant les molécules retenues (Solution B dans le 30 tableau 1) a été conditionnée sous forme de spray expérimental, dans des pulvérisateurs. Une version témoin (solution T dans le tableau 1) a été réalisée, en utilisant uniquement l'excipient employé également pour la mise en solution des molécules actives de la solution B. Les pulvérisateurs portaient des numéros de code (1, 2) dont le sens était inconnu des taureliers, sauf de la personne chargée d'administrer le traitement en début de collecte. 3- Organisation générale des essais : distribution des solutions Le tableau 1 ci-dessous reprend pour chacun des groupes de taureaux les expérimentations réalisées. Les essais ont duré au total 6 semaines. Une seule personne, toujours la même, était habilitée à pulvériser les solutions dans les naseaux des 10 taureaux. Les deux premières semaines ont été consacrées à l'entraînement des taureaux au rythme de collecte, à la stabilisation des réserves spermatiques et à l'estimation du potentiel de production des individus. Elles ont permis de s'assurer de la pertinence de la répartition entre les 2 lots : 15 différence significative de libido estimée par les temps de réaction et d'éjaculation et absence de différence entre paramètres de production. Les quatre semaines suivantes ont constitué la phase expérimentale proprement dite, et ont été programmées en carré latin : chaque lot a subi alternativement la distribution du témoin et du traitement et chaque taureau a 20 été également son propre témoin. Pendant les deux semaines d'adaptation, les taureaux ont reçu uniquement le spray témoin contenant l'excipient, à raison d'une pulvérisation par naseau. Ensuite et en fonction de leur attribution dans le protocole expérimental, les animaux ont reçu soit le spray témoin soit un 25 spray expérimental. Les molécules utilisées étant très volatiles, le lot « témoin » a toujours commencé la récolte, afin de ne pas saturer l'atmosphère de la salle de collecte en molécules actives. Tous les animaux ont reçu le traitement à leur arrivée en salle de monte, qui s'est fait de façon aléatoire au sein de chaque 30 groupe. Tableau 1 : Organisation générale des essais pour les taureaux adultes Semaine 1 Semaine 2 Semaine 3 Semaine 4 Semaine 5 Semaine 6 Groupe 1 Solution T Solution T Solution T Solution B Solution T Solution B Adaptation Adaptation Expérimentation Expérimentati Expérimentati Expérimentation on on Libido normale Groupe 2 Solution T Solution T Solution B Solution T Solution B Solution T Adaptation Adaptation Expérimentation Expérimentati Expérimentati Expérimentation on on Faible libido Solution T : solution témoin, ne contenant que le solvant Solution B : solution contenant les phéromones selon l'invention et le solvant 4- Enregistrement des paramètres comportementaux Les taureaux des essais ont été soumis, pendant tous les essais, à un rythme hebdomadaire de 3 collectes d'un éjaculat : lundi, mercredi, vendredi. La préparation des taureaux s'est faite systématiquement, en respectant le schéma décrit par Amann (voir définition ci-dessus). Pour évaluer la libido, il faut donc procéder à l'enregistrement, avant la collecte de chaque éjaculat, de ces trois temps, le temps de réaction et le temps jusqu'à l'éjaculation étant mesurés au chronomètre. Le boute-en-train est resté le même au cours d'une même séance de collecte. Toutefois, si au bout de 10 minutes un taureau n'avait manifesté 15 aucune réaction, le boute-en-train a pu être changé. Le chef d'équipe a été le seul habilité à pulvériser les traitements en fonction de l'appartenance des animaux à chacun des groupes et à chronométrer les différents temps. Paramètres de libido : Les temps de réaction (Treact) et d'éjaculation 20 (Tejac) précédemment décrits ont été mesurés (en secondes) à chaque saut pour chaque taureau. Les manifestations de Flehmen, de pompage et les émissions de jets pré-spermatiques ont été enregistrées. Sur la durée de l'essai, trois personnes ont chronométré les différents temps. 25 De même, la qualité du saut a été notée : absence, faible, moyen, franc, très franc. Pour les autres aspects, les collectes se sont déroulées dans les conditions de routine en vigueur au sein de la taurellerie. 5- Évaluation des paramètres biologiques Une fois collectée à l'aide d'un vagin artificiel, la semence a été transmise directement au laboratoire pour être traitée dans les conditions habituelles de travail. Les paramètres biologiques quantitatifs, à savoir le volume (mL), la concentration (milliards de spz/ml), et le nombre total de spermatozoïdes par éjaculat (en milliards) et qualitatifs, à savoir le % de spermatozoïdes vivants et la qualité de mouvement, ou motilité, ont été enregistrés pour chaque éjaculat collecté. 6- Analyse statistique Une comparaison de chacun des groupes de taureaux, à savoir Groupes 1 et 2, pendant la période d'adaptation a été réalisée afin de s'assurer que les seules différences concernent la libido des animaux. Ensuite, une première analyse de variance Proc GLM (avec et sans semaines d'adaptation) sur la population globale a été effectuée avec le logiciel SAS et a porté sur : - les paramètres de libido, à savoir le temps de réaction et le temps jusqu'à l'éjaculation, - les paramètres biologiques, à savoir le volume, la concentration, le nombre total de spermatozoïdes, le pourcentage de spermatozoïdes vivants, la qualité du mouvement. Les facteurs de variation pris en compte dans le modèle ont été les suivants : Période, Semaine, Taureau, Traitement, Interactions 2 à 2. Une seconde analyse Proc GLM intra groupe, sans les semaines d'adaptation, a été menée afin de voir si les effets du traitement étaient similaires en fonction de la libido initiale des taureaux. Enfin, les effets du mélange sur les mâles pris individuellement ont été analysés. II- RESULTATS 1- Comparaison initiale des lots de taureaux (avant traitement) Les performances des 2 lots de taureaux (G1 : libido normale, G2 : faible libido) ont été comparées à partir de l'ensemble des paramètres enregistrés pendant la période d'adaptation. L'observation a porté sur 6 collectes, soit un total de 30 éjaculats par groupe. Les résultats obtenus sont répertoriés dans le tableau 2 ci-dessous. Tableau 2 : comparaison des moyennes et écarts-types observés pour les paramètres de libido et de production entre les 2 groupes de taureaux pendant la période d'adaptation. Treact Tejac Vol C° Nbrspz Mob G1 89±180 323±280 6.7±1.4 1.44±0.3 9.4±2.3 63±3.1 G2 320±302 780±478 7±1.6 1.45±0.32 10.3±3.4 64±3.1 p Les observations des deux groupes de taureaux permettent de constater qu'ils sont bien significativement différents pour ce qui concerne la libido. 20 Ainsi, les temps de réaction et d'éjaculation sont en moyenne de 320 secondes et 780 secondes pour le groupe 2, contre 89 secondes et 323 secondes pour le groupe 1, ce qui est conforme aux attentes. En revanche, les paramètres de production et notamment les données quantitatives sont comparables entre les deux lots. 25 2- Analyse de l'influence des traitements 2-1- Sur l'ensemble des taureaux10 L'influence du traitement a été analysée dans un premier temps sur l'ensemble des taureaux indépendamment de leur groupe d'affectation initiale. L'analyse a porté sur la période des 4 semaines expérimentales. Les paramètres de libido et de production des 60 éjaculats « témoins » et des 60 éjaculats « phéromones » ont été comparés. Les résultats sont présentés dans le tableau 3 ci-dessous, qui montre les paramètres de libido et de production des éjaculats récoltés avec ou sans traitement, tous taureaux confondus. Tableau 3 : Comparaison des paramètres de libido et de production des éjaculats récoltés pendant la période expérimentale N Treact Tejac Vol C° Nbrspz Mob Te 60 310±383 707±637 7 ±1.4 1.47 ±0.2 10.2 ±2.2 63. ±4 Ph+ 60 232± 342 615 ±518 7.2± 1.4 1.56 ±0.22 11.1± 2.4 64± 4 A -77sec - 91 secs +0.15 +0.09 +0.9 -25% -13% +2% +6% 9% p =0,08 =0,06 NS =0,008 0,02 N : nombre d'éjaculats A : différence entre les 2 variables p : probabilité sur 1 que l'événement observé soit dû au hasard Sur l'ensemble des 10 taureaux de l'essai, l'utilisation des molécules se traduit par une réduction des temps de réaction (Treact) et d'éjaculation 20 (Tejac) de respectivement 25% et 13% (figure 3A). Parallèlement la concentration (C°) et le nombre total de spermatozoïdes récoltés par éjaculat (Nbrspz) sont améliorés de 6% (p=0,008) et 9% (p=0,02) respectivement (figures 3B et 3C) tandis que le volume ne varie pas de façon significative (+2%). 25 Pour tous les paramètres analysés, l'effet individuel « taureau » a été significatif. L'effet individuel « taureau » s'entend du comportement propre à chaque animal et susceptible d'influencer les paramètres mesurés. Aucune interaction « taureau*traitement » n'a été mise en évidence. Tous les taureaux présentent une amélioration plus ou moins marquée grâce au traitement, ladite amélioration étant due au seul traitement. 2-2- Sur les taureaux à libido « normale » (G1) Afin de comparer l'effet des molécules sur les taureaux à libido normale, une analyse statistique (Proc GLM, SAS) a été réalisée au sein du groupe pendant la période expérimentale. Les facteurs de variation retenus ont été l'effet individuel « taureau », le traitement et leur interaction 2 à 2. Les résultats sont présentés dans le tableau 4 ci-dessous. Tableau 4 : Comparaison des paramètres de libido et de production des éjaculats récoltés pendant la période expérimentale sur les taureaux du 15 groupe 1 N Treact Tejac Vol C° Nbrspz Mob Solution T 30 45± 36 271 ±140 7.07 ±1.3 1.42± 0.21 10± 2.2 63 ±3.6 Solution B 30 38 ±32 255± 64 7.13 ±1.1 1.56± 0.23 11.1± 2.3 64 ±3.8 p P 25 2-2- Sur les taureaux à « faible » libido (G2) Le modèle appliqué au groupe G1 l'a ensuite été à l'autre lot de taureaux G2. Les résultats globaux sont présentés dans le tableau 5 ci-dessous. Tableau 5 : Comparaison des paramètres de libido et de production des éjaculats récoltés pendant la période expérimentale sur les taureaux du groupe 2 N Treact Tejac Vol C° Nbrspz Mob Solution T 30 575± 389 1143± 642 7± 1.4 1.52 ±0.27 10.4± 2.3 63.5 ±4.3 Solution B 30 427± 398 977± 522 7.2 ±1.6 1.55± 0.21 11.1 ±2.5 64 ±4.1 A -148 sec -165 sec 0.23 +0.03 +0.67 -26% -14% +3% +3% +6% p P=0,1 P=0,07 NS NS NS NS L'effet individuel « taureau » apparaît significatif pour tous les paramètres. 10 Le traitement, lui, n'influence que les paramètres de libido (figure 5) : gain de 26% pour Treact (p=0,1) et de 14% pour Tejac (p=0,07). L'interaction « taureau*traitement » tend à être significative (p=0,09) pour la concentration. Cette observation tient au fait qu'un taureau sur les 5 du groupe voit sa concentration en spermatozoïdes baisser de façon nette du 15 fait du traitement (1,76 milliards de spz/ml en témoin versus 1,55milliards/ml avec les phéromones) alors que pour les autres individus le traitement induit une augmentation de cette donnée mais dans des proportions moindres. Les autres paramètres ne semblent pas influencés. 20 2-4- Sur l'effet individuel « taureau » Les effets « taureau » ont été analysés pour chaque individu et chaque paramètre en fonction du traitement et sont présentés dans les tableaux 6 et 7 ci-dessous. 25 Tableau 6 : Effet du traitement pour chaque taureau du groupe 1 sur les paramètres de libido et de production5 Animal Traitement Treact Tejac Vol C° Nbrspz Mob Vagan Solution T 53 349 7 1.6 11.2 64 Solution B 59 323 6.3 1.8 (a) 11.8 65 Valier Solution T 59 262 7.6 1.4 10.7 63.3 Solution B 71.2 262 7.4 1.5 11 64.2 Valrus Solution T 25.3 239 6.9 1.4 9.8 63 Solution B 20 255 7.5 1.5 11.2 65 Vathi Solution T 58 281 6.2 1.5 9.2 62 Solution B 21 (b) 209 (c) 7.3 d 1.6 (e) 12 (f) 62 Volcain Solution T 29 224 7.7 1.2 9.1 62.5 Solution B 18 223 7.1 1.3 9.4 63 a :p=0,07 ; b: p=0,06 ; c: p=0,03 ; d : p=0,005 ; e : p=0,05 ; f: p=0,003 Dans le groupe 1, on observe que 2 taureaux sur 5 voient leur temps de réaction augmenter sous l'effet du traitement. Toutefois, sous l'effet du traitement, le temps de réaction cumulé pour les 5 animaux est diminué par rapport au témoin (189,2 secondes avec traitement contre 224,3 secondes sans traitement, soit un gain de temps de 15,6%). Le temps d'éjaculation est amélioré pour 2 animaux dont un de façon significative (p=0,03), il ne change pas pour 2 autres et tend à augmenter pour le dernier. En cumul, le traitement permet de diminuer de 6,1% le temps d'éjaculation des 5 taureaux confondus (1356 secondes sans traitement, contre 1272 secondes avec traitement). Tableau 7 : Effet du traitement pour chaque taureau du groupe 2 sur les paramètres de libido et de production Animal Traitement Treact Tejac Vol C° Nbrspz Mob vador Solution T 581 1144 8 1.6 12.4 65 Solution B 564 1032 7.6 1.7 13.7 67 vanzi Solution T 316 709 6 1.4 9.6 62.5 Solution B 321 817 7.2 1.5 11 62.5 Virtel Solution T 1099 2237 5 1.7 8.8 61 Solution B 633 1630 5.1 1.6 7.7 60 Voladi Solution T 472 910 7 1.7 11.7 65 Solution B 392 834 7.2 1.7 12 67 Vosac Solution T 405 713 8.4 1.14 9.6 64 Solution B 225 571 8.5 1.29 11 63 Dans le groupe 2, le traitement permet un gain cumulé de 25,7% sur le temps de réaction, et de 14,5% sur le temps d'éjaculation, soit respectivement 738 et 829 secondes pour les 5 taureaux. Cela signifie que le traitement permet de gagner 13 minutes 48 secondes sur le temps total passé en salle de monte lorsque les 5 taureaux font partie de la même session de monte. EXEMPLE II I- MATERIEL ET METHODES 1- Matériel animal Vingt jeunes taureaux de race montbéliarde, âgés de 15 à 18 mois et faisant partie d'un lot d'animaux en contrôle de fonction sexuelle (CFS) ont été inclus dans la seconde étude. Ces taureaux, recrutés en fermes à l'âge de 2 à 3 mois, ont été élevés ensuite dans des conditions identiques et sans contact avec des femelles. En l'absence de données préalables de libido, ils ont été répartis de façon aléatoire en deux lots J et K de 10 individus. 2- Solution utilisée La solution A+B a été utilisée et conditionnée sous forme de spray expérimental, dans des pulvérisateurs. Une version témoin (solution T dans le tableau 8) a été réalisée, en utilisant uniquement le solvant employé également pour la mise en solution des molécules actives de la solution A+B. Les pulvérisateurs portaient des numéros de code (1, 2) dont le sens était inconnu des taureliers, sauf de la personne chargée d'administrer le traitement en début de collecte. 3- Organisation générale des essais : distribution des solutions Le tableau 8 ci-dessous reprend, pour chacun des groupes de taureaux, les expérimentations réalisées. L'essai a duré 5 semaines, dont une d'adaptation pendant laquelle tous les animaux ont reçu la solution témoin et n'ont été prélevés qu'une seule fois. La solution a été conditionnée sous forme de spray, comme dans l'exemple I précédent. L'administration des solutions a eu lieu systématiquement en début de collecte, sur l'ensemble des taureaux sous forme d'une double pulvérisation 10 du mélange par naseau. Les molécules utilisées étant très volatiles, le lot « témoin » a toujours commencé la récolte, afin de ne pas saturer l'atmosphère de la salle de collecte en molécules actives. Tous les animaux ont reçu le traitement à leur arrivée en salle de monte, qui s'est fait de façon aléatoire au sein de chaque 15 groupe. Tableau 8 : Organisation générale des essais pour les taureaux adultes Semaine 1 Semaine 2 Semaine 3 Semaine 4 Semaine 5 Groupe J Solution T Solution T Solution A+B Solution T Solution A+B Adaptation Expérimentation Expérimentation Expérimentation Expérimentation Groupe K Solution T Solution A+B Solution T Solution A+B Solution T Adaptation Expérimentation Expérimentation Expérimentation Expérimentation 20 4- Enregistrement des paramètres comportementaux et de production Pendant toute la période expérimentale de l'essai, soit 4 semaines, tous les animaux ont été soumis à un rythme de 2 collectes hebdomadaires d'un éjaculat (2*1). La préparation des taureaux et du boute-en-train, ainsi que le mode 25 d'administration de la solution et de récupération des éjaculats, ont été les mêmes que pour l'exemple I. Les observations et l'enregistrement des paramètres de libido et de production sont les mêmes que pour l'exemple I. II- RESULTATS 1- Analyse des effets du traitement, du groupe, du taureau intra-groupe et de leurs interactions Les valeurs moyennes obtenues pour chaque paramètre mesuré sur l'ensemble des 20 taureaux confondus et en fonction du traitement sont présentées dans le tableau 9 ci-dessous. Elles concernent les 4 semaines de la période expérimentale. Tableau 9 : valeurs moyennes des paramètres mesurés en fonction du traitement, tous taureaux confondus Traitement effectifs Treact Tejac Vol C° Nbspz Mob Solution T 80 33,5 347 3,36 1,01 3,39 56,34 Solution A+B 80 31,1 297 3,23 1,09 3,45 56,02 p NS P EXEMPLE III I- MATERIEL ET METHODES 1- Matériel animal Un lot de dix taureaux adultes, âgés de 4 ans à 5,5 ans, de races Prim Holstein ou Normande, a été inclus dans la première étude. Ces animaux ont été recrutés dans la filière « insémination animale » dès l'âge de 2 à 3 mois et depuis n'ont jamais été en contact avec des femelles bovines. Ils ont toujours été élevés en boxes individuels (période de pré-testage ou période de production) ou en lots de 4 à 6 animaux de même âge et de même sexe (période de lay-off). Les conditions d'alimentation et d'hébergement ont toujours été identiques pour les animaux de l'essai, avant et pendant l'essai. Comme pour l'exemple I, les taureaux ont été divisés en deux lots en fonction de leur libido : Groupe N « libido normale » et Groupe L « faible libido ». 2- Solutions utilisées La solution A a été utilisée et conditionnée sous forme de spray expérimental, dans des pulvérisateurs. Une version témoin (solution T dans le tableau 10) a été réalisée, en utilisant uniquement l'excipient employé également pour la mise en solution des molécules actives de la solution A. Les pulvérisateurs portaient des numéros de code (1, 2) dont le sens était inconnu des taureliers, sauf de la personne chargée d'administrer le traitement en début de collecte. 3- Organisation générale des essais : distribution des solutions Le tableau 10 ci-dessous reprend pour chacun des groupes de taureaux les expérimentations réalisées. L'essai a duré au total 6 semaines. Les semaines se sont organisées comme pour l'exemple I. Tableau 10 : Organisation générale des essais pour les taureaux adultes Semaine Semaine Semaine 3 Semaine 4 Semaine 5 Semaine 6 1 2 Groupe N Solution T Solution T Solution T Solution A Solution T Solution A Adaptation Adaptation Expérimentation Expérimentation Expérimentation Expérimentation Libido normale Groupe L Solution T Solution T Solution A Solution T Solution A Solution T Adaptation Adaptation Expérimentation Expérimentation Expérimentation Expérimentation Faible libido La solution a été conditionnée sous forme de spray, comme dans 10 l'exemple I précédent. L'administration des solutions a eu lieu systématiquement en début de collecte sur l'ensemble des taureaux sous forme d'une double pulvérisation du mélange par naseau. Les molécules utilisées étant très volatiles, le lot « témoin » a toujours 15 commencé la récolte, afin de ne pas saturer l'atmosphère de la salle de collecte en molécules actives. Tous les animaux ont reçu le traitement à leur arrivée en salle de monte, qui s'est fait de façon aléatoire au sein de chaque groupe. 20 4- Enregistrement des paramètres comportementaux Le rythme des collectes, la préparation des taureaux et l'enregistrement des paramètres comportementaux ont été réalisés dans des conditions identiques à celles de l'exemple I. 25 5- Évaluation des paramètres biologiques5 La collecte de la semence a été réalisée dans des conditions identiques à celles décrites pour l'exemple I. Les paramètres biologiques quantitatifs et qualitatifs ont été enregistrés comme dans l'exemple I. II- RESULTATS 1- Comparaison initiale des taureaux 1-1 Comparaison entre les qroupes de taureaux 10 Les performances des deux lots de taureaux (Groupe N et Groupe L) ont été comparées à partir de l'ensemble des paramètres enregistrés pendant la période d'adaptation. L'observation a porté sur 5 collectes de 2 éjaculats (rang 1 et rang 2), soit 42 éjaculats pour le groupe N et 47 éjaculats pour le groupe L, en raison 15 de refus de sauts et de données manquantes. Les résultats sont présentés dans le tableau 11 ci-dessous, et correspondent à l'ensemble des éjaculats prélevés quel que soit le rang de collecte: 20 Tableau 11 : comparaison des moyennes et écarts-types observés pour les paramètres de libido et de production entre les 2 groupes de taureaux pendant la période d'adaptation. Treact Tejac Vol C° Nbrspz Mob Groupe N 139±357 378±361 5.2±1.61.21 ±0.48 6.3±3.4 84.5±3.3 Groupe L 895± 1041 1368 ± 1176 6,4 ± 3 1.37 ± 0.5 8.9 ± 5.3 84.5 ± 3.6 p Du fait de ces différences entre groupes, la suite de l'analyse 10 statistique s'est faite séparément entre les 2 lots de taureaux, excepté pour les paramètres qualitatifs qui ne différent pas. 2-2 Comparaison entre les ranqs d'éjaculat des taureaux Les analyses ont ensuite été faites en intégrant le facteur « rang d'éjaculat ». 2-2-1- Comparaison entre les éjaculats de rang 1 des taureaux des deux groupes Les résultats obtenus pour chaque groupe de taureaux sont présentés dans le tableau 12 ci-dessous. Tableau 12 : comparaison des paramètres de libido et de production entre les 2 groupes de taureaux pour les éjaculats de rang 1 Treact Tejac Vol C° Nbspz Mob Groupe L 1248 1724 7,1 1,65 11,65 85 N=22 Groupe N 68,3 339,4 5,25 1,37 7,24 85 N=23 p 0,0001 0,0001 0,02 0,05 0,004 NS 25 Les différences observées entre les 2 groupes sur l'ensemble des éjaculats récoltés se retrouvent de façon plus marquée pour les éjaculats de rang 1. Les paramètres de libido sont très significativement différents puisqu'on passe d'un temps de réaction moyen de 1 minute 8 secondes pour 30 le groupe N, à 20 minutes et 48 secondes pour les animaux « lents », et d'un 15 20 temps d'éjaculation moyen de 5 minutes 39 secondes pour les taureaux à libido « normale », à 28 minutes et 44 secondes en moyenne pour ceux du groupe L. Les paramètres quantitatifs du spermogramme sont également significativement différents entre les groupes, en faveur du groupe L, tandis que les paramètres qualitatifs (% mobiles) sont identiques. 2-2-2- Comparaison entre les éjaculats de rang 2 des taureaux des deux groupes Les résultats obtenus pour chaque groupe de taureaux sont présentés dans le tableau 13 ci-dessous. Tableau 13 : comparaison des paramètres de libido et de production entre les 2 groupes de taureaux pour les éjaculats de rang 2 Treact Tejac Vol C° Nbspz Mob Groupe L 508 976 5,64 1,06 5,92 82,2 N=22 Groupe N 207 415 5,24 1,05 5,47 82,3 N=23 p 0,1 0,02 NS NS NS NS Pour les éjaculats de rang 2, les différences entre groupes s'estompent et seuls les paramètres de libido tendent à être significativement 20 différents (Treact, p 3- Influence des traitements 3-1- Effets du traitement en fonction du qroupe sur les éjaculats de ranq 1 30 3-1-1- Groupe N (taureaux à libido normale)15 Dans ce groupe, le traitement a un effet positif sur les paramètres de production tandis que les paramètres de libido ne sont pas significativement modifiés. L'effet « taureau » ne ressort que pour les caractères quantitatifs du spermogramme et aucune interaction « taureau*traitement » (Toro*trait dans le tableau 14) n'apparaît. Ces résultats sont présentés dans le tableau 14. Tableau 14 : Moyennes des paramètres de libido et de production et analyse de facteurs de variation pendant la période expérimentale. Groupe N. (n=30 observations par traitement) Treact Tejac Vol C° Nbspz Mob Taureau NS NS P Ainsi, le traitement réduit le temps d'éjaculation par taureau de 393 secondes soit 6 minutes 33 secondes. Ces données sont résumées dans le tableau 15. Tableau 15 : Moyennes des paramètres de libido et de production et analyse 25 de facteurs de variation pendant la période expérimentale. Treact Tejac Vol C° Nbspz Mob Taureau P L'influence du taureau ne se fait ressentir que sur les paramètres quantitatifs du spermogramme tandis qu'aucune interaction « taureau*traitement » ne ressort (tableau 16). Tableau 16 : Moyennes des paramètres de libido et de production et analyse de facteurs de variation pendant la période expérimentale, 2ème éjaculat. Treact Tejac Vol C° Nbspz Mob Taureau NS NS P Tableau 17 : Moyennes des paramètres de libido et de production et analyse de facteurs de variation pendant la période expérimentale, 2ème éjaculat. Treact Tejac Vol C° Nbspz Mob Taureau P REVENDICATIONS1- Utilisation d'une composition comportant au moins une molécule volatile spécifique de l'oestrus chez la vache pour améliorer la fonction reproductive chez le taureau. 2- Utilisation d'une composition selon la revendication 1, pour améliorer la libido du taureau. 3- Utilisation d'une composition selon la revendication 1, pour améliorer la production de semence du taureau. 4- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la composition contient au moins une molécule parmi le coumarin, le squalène, le 6-aminoundécane, la 2-butanone, l'acide 9-octadécénoïque et le 1,2-dichloroéthylène. 5- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que la composition est conditionnée sous forme de solution comportant au moins du glycérol en tant que solvant des molécules volatiles. 6- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la concentration totale en molécules volatiles spécifiques de l'oestrus 20 dans la composition est comprise entre 5 pg/mL et 100 pg/mL. 7- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que la concentration en molécules volatiles spécifiques de l'oestrus dans la composition est au moins égale à 25 pg/mL, +1- 5%. 8- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce 25 que la composition est maintenue à la périphérie des naseaux du taureau de manière à ce que ledit taureau puisse inhaler ladite composition. 9- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que la composition est conditionnée en spray de manière à pouvoir être pulvérisée dans les naseaux du taureau. 30 10- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu'on procède à la saillie d'une femelle ou à la récolte de la semence directement après avoir soumis le taureau à ladite composition. 11- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce qu'on soumet le taureau à ladite composition avant chaque récolte de 35 semence ou avant chaque saillie. 12- Composition destinée à être utilisée sur un taureau, afin d'améliorer sa fonction reproductive, caractérisée en ce qu'elle contient au moins une molécule volatile spécifique de l'oestrus chez la vache. 13- Composition selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'elle contient au moins une molécule parmi le coumarin, le squalène, le 6-aminoundécane, la 2-butanone, l'acide 9-octadécénoïque et le 1,2-d ichloroéthylène. 14- Composition selon l'une des revendications 12 à 13, caractérisée en ce qu'elle contient du glycérol en tant que solvant des molécules volatiles. 15- Composition selon l'une des revendications 12 à 14, caractérisée en ce qu'elle comporte les excipients nécessaires pour permettre une pulvérisation de ladite composition. 16- Composition selon l'une des revendications 12 à 15, caractérisée en ce que la concentration totale en molécules volatiles spécifiques de l'oestrus de la vache est comprise entre 5 pg/mL et 100 pg/mL. 17- Composition selon l'une des revendications 12 à 16, caractérisée en ce que la concentration totale en molécules volatiles spécifiques de l'oestrus de la vache est au moins égale à 25 pg/mL, +1- 5%.20