Brevet FR2941374A1 — publié le 20100730

Utilisation d'une association synergique d'ions hypothiocyanites et/ou hypohalites et de lactoferrine pour la préparation pour le traitement de la mucoviscidose. La mucoviscidose est une maladie génétique grave, la mutation affecte la protéine CFTR et entraîne une anomalie de transfert, notamment des ions chlorures. La viscosité du mucus est augmentée, il obstrue les bronches et bloque les 10 sécrétions enzymatiques digestives. L'expression clinique de la maladie comporte un syndrome respiratoire et un syndrome digestif. Une des principales causes de mortalité est due à la colonisation progressive des poumons par des micro-organismes tels que les Pseudomonas aeruginosa et/ou le Burkholderia cepacia ou encore le staphylocoque doré qui 15 agressent les poumons et détruisent les capacités respiratoires des malades. Des travaux scientifiques récents des Docteurs Banfi, dans Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2007, 175(9) : 967, Conner et Childers, ont mis en évidence l'absence de la production de l'ion hypothiocyanite OSCN" chez les personnes atteintes de mucoviscidose. Celui-ci est présent naturellement dans la salive et les 20 sécrétions pulmonaires et il participe au système immunitaire. Son absence pourrait expliquer l'extrême sensibilité des poumons des personnes atteintes. L'ion hypothiocyanite et/ou hypohalite est généré notamment in vivo par le système lactoperoxidase selon l'équation ci-dessous : 25 lactoperoxidase H2O2 + SCN- (and/or 1-) - OSCN- (and/or Or) Les propriétés pharmacologiques de l'ion hypothiocyanite sont connues notamment ses propriétés biocides, mais en raison de l'instabilité de cette espèce 30 chimique dont la demi-vie est d'environ 24 heures, aucune formulation permettant un traitement local pulmonaire dans des conditions satisfaisantes n'a pu être développée. On connait par exemple de WO2007134180, une composition thérapeutique agissant par action de l'ion hypothiocyanite, comprenant un système enzymatique, par exemple une oxydoréductase qui par réduction d'un substrat spécifique produit du peroxyde d'hydrogène, le substrat spécifique, par exemple du glucose, l'ion SCN-, et la lactoperoxidase. On comprend la difficulté de formulation de telles compositions thérapeutiques et les effets secondaires susceptibles d'être générés par exemple par la production in vivo, ici dans les voies respiratoires de peroxyde d'hydrogène. Dans US2002/172645, l'ion thiocyanate est administré seul pour alimenter le système lactoperoxidase endogène et former des ions hypothiocyanites in vivo ou comme dans WO2007134180 en combinaison avec le système lactoperoxydase. On connait de WO2008/003688 la démonstration d'une synergie entre l'ion hypothiocyanite et la lactoferrine. Les propriétés de la lactoferrine sont par ailleurs bien connues et notamment son action sur les biofilms et son action antiinflammatoire. Cependant à l'heure actuelle aucune formulation satisfaisante permettant un traitement local et notamment la destruction des bactéries qui se développent sur le mucus des patients atteints de mucoviscidose n'a été développée. L'invention concerne l'utilisation d'une association synergique d'au moins un ion sélectionné dans le groupe des hypothiocyanites (OSCN-) et/ou des hypohalites et de lactoferrine pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement de la mucoviscidose. Dans un mode de réalisation, l'ion est l'ion hypothiocyanite (OSCN-).. Les ions hypohalites sont choisis dans le groupe constitué par les ions hypoiodite, hypochlorite et ou hypobromite. Dans un mode de réalisation, l'ion est l'ion hypoiodite (011. Dans un autre mode de réalisation, la lactoferrine est une lactoferrine d'une pureté supérieure à 95%, substantiellement exempte d'endotoxine et avec un niveau de saturation en Fer supérieur à 15 %. L'invention concerne également une méthode de traitement thérapeutique de la mucoviscidose caractérisée en ce qu'elle comprend l'administration pour un traitement local de l'épithélium pulmonaire d'une quantité thérapeutiquement active d'une association synergique d'au moins un ion sélectionné dans le groupe des hypothiocyanites et/ou des hypohalites et de lactoferrine. En effet dans la mucoviscidose les bactéries se développent sur l'épithelium des poumons et le traitement doit être local, l'administration sera donc effectuée par voie buccale et/ou nasale et/ou tout autre voie artificielle permettant d'atteindre le poumon, par exemple trachéotomie. Dans un mode de réalisation, l'ion est l'ion hypothiocyanite (OSCN-). 15 Dans un autre mode de réalisation, la lactoferrine est une lactoferrine d'une pureté supérieure à 95%, substantiellement exempte d'endotoxine et avec un niveau de saturation en Fer supérieur à 15 %. 20 Les compositions selon l'invention agissent par les mécanismes suivants : - la lactoferrine détruit le biofilm - l'association lactoferrine/OSCN- détruit les bactéries et/ou empêche leur croissance, elle a donc un effet bactériostatique et bactéricide. 25 L'association de la lactoferrine avec l'ion hypothiocyanite permet d'une part de réduire la concentration en hypothiocyanite pour atteindre la même efficacité antimicrobienne, d'autre part d'ajouter à l'aspect antimicrobien, l'aspect antiinflammatoire. Enfin, la lactoferrine agit comme fluidifiant vis à vis des expectorats qui sont un des problèmes majeurs dans cette pathologie. Exemples : Une composition extemporanée de traitement journalier est réalisée à l'aide d'un dispositif portable autonome, elle comprend 250 pM d'ion OSCN- , 2,4 mM d'ion SCN- et 2,6 mM de lactoferrine. La préparation ne contient ni glucose oxydase, ni lactoperoxydase, ni peroxyde d'hydrogène (la teneur est mesurée inférieure à 1 ppm). Cette préparation pourra être administrée par voie aérienne à l'aide d'un pulvérisateur et/ou nébulisateur et/ou aérosoliseur, à raison de 1 ml à 5 ml de solution par inhalation (exemple : inhalation d'une solution de 2 ml en 20 minutes) de façon à atteindre les cibles au niveau pulmonaire. Résultats pharmacologiques La solution de l'exemple a été testée in vitro sur une souche mucoïde de Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, Methycillin Resistant 15 Staphylococcus Aureus. Pseudomonas aeruginosa souche mucoide issue de patient ayant la mucoviscidose Temps de contact en heures 0 0,5 1 2 4 6 24 Controle 4,14 4,15 4,16 4,17 4,16 4,16 4,13 OSCN 500�M 4,14 3,23 3,16 2,98 2,08 1,90 1,78 OSCN 250 �M 4,14 2,93 2,89 2,82 2,15 1,79 1,51 + Lactoferrine 20 (Résultats exprimés en log CFU/ml) Burkholderia cepacia Temps de contact en heures 0 0,5 1 2 4 6 24 Controle 4,41 4,47 4,48 4,54 4,56 4,58 4,53 OSCN 500�M 4,41 3,64 3,56 3,03 2,08 1,98 1,78 OSCN 250 �M + 4,41 3,42 3,50 2,99 2,00 1,84 1,56 Lactoferrine 25 (Résultats exprimés en log CFU/ml) 10 Staphylococcus aureus résistant à la méthyciline (MRSA) Temps de contact en heures 0 0,5 1 2 4 6 24 Controle 4,15 4,17 4,18 4,17 4,22 4,20 4,24 OSCN 500�M 4,15 3,80 3,70 3,33 2,89 2,25 1,97 OSCN 250 �M + 4,15 3,63 3,60 3,21 2,72 2,08 1,66 Lactoferrine (Résultats exprimés en log CFU/ml) La solution de l'exemple a été testée in vivo sur souris contaminée avec une souche mucoïde de Pseudomonas aeruginosa. Contrai Treated Mice Jung 72h 3,1 1,5 after infection Résultats exprimés en log CFU/ml Les résultats permettent de démontrer une véritable action biocide et bactéricide vis-à-vis des souches mucoïdes testées et la diminution des doses d'ions hypothiocyanite à utiliser. REVENDICATIONS1. Utilisation d'une association synergique d'au moins un ion sélectionné dans le groupe des hypothiocyanites et/ou des hypohalites et de lactoferrine pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement de la mucoviscidose. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'ion est l'ion hypothiocyanite (OSCN-). 3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que lion est l'ion hypoiodite (OF) 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, 15 caractérisée en ce que la lactoferrine est une lactoferrine d'une pureté supérieure à 95%, substantiellement exempte de lipopolysaccharides et d'endotoxines et avec un niveau de saturation en Fer supérieur à 15 %.10