Brevet FR2940088A1 — publié le 20100625

TITRE Composition antitussive et son procédé de fabrication Arrière-plan de l'invention Domaine de l'invention La présente invention concerne une composition pharmaceutique et, en particulier, une composition antitussive contenant un extrait de l'espèce Morus australis Poir comme ingrédient antitussif actif et son procédé de fabrication. Description de la technique apparentée L'espèce Morus alba L. appartient au genre Moraceae. L'écorce de racine du mûrier blanc correspond à l'écorce de racine sèche de l'espèce Morus alba L., qui est connue sous la dénomination SANGBAIPI (terme restitué dans le présent document selon la norme pinyin de romanisation du chinois) en médecine chinoise traditionnelle. Dans la Pharmacopée de la médecine chinoise, l'écorce de racine de mûrier blanc est décrite comme généralement enroulée, cannelée ou à fragments plats, torsadée, de longueur et de largeur variables, et dont l'épaisseur se situe de 1,5 à 4 mm. La surface externe est blanche ou de couleur blanc-jaunâtre, relativement uniforme, présentant quelques résidus d'écailles d'écorce de couleur orange-jaune ou brun-jaune ; la surface interne est de couleur blanc-jaunâtre ou jaune-grisâtre, présentant de fines stries longitudinales. La texture est légère et tenace, 1 fortement fibreuse, ne se rompt pas aisément, mais peut être aisément déchirée dans le sens longitudinal, cette déchirure sous forme de languettes provoquant de la poussière. L'odeur est faible ; le goût est légèrement sucré. En médecine chinoise traditionnelle, le fruit du mûrier blanc est utilisé pour traiter le grisonnement précoce des cheveux, pour "tonifier" le sang et pour traiter la constipation et le diabète. L'écorce de mûrier blanc est utilisée pour traiter une respiration sifflante, un œdème et pour faciliter la miction. L'écorce de racine de mûrier blanc est utilisée en médecine chinoise traditionnelle pour des applications anti-inflammatoires, diurétiques et antitussives. Mais l'espèce Morus alba L. naturelle n'est pas répandue à Taiwan. Pour fabriquer un agent antitussif ayant un intérêt commercial, l'inventeur a essayé d'utiliser l'espèce Morus australis Poir., qui est abondante à Taiwan, dans le but de préparer une nouvelle composition antitussive. Bref résumé de l'invention L'invention propose un procédé de préparation d'une composition antitussive, comprenant l'extraction de racines (ou d'écorces de racines) de l'espèce Morus australis Poir avec de l'eau, de l'éthanol, de l'acétone, de l'acétate d'éthyle ou une combinaison de ceux-ci, de manière à obtenir un extrait brut. 2 De préférence, le procédé comprend une étape consistant à filtrer l'extrait brut sur un filtre et sur une membrane présentant une taille de pore de 5 um, de manière à obtenir un filtrat. De préférence, le procédé comprend les étapes suivantes consistant à : - charger le filtrat sur une colonne à phase 10 inversée ; - éluer la colonne à phase inversée consécutivement avec de l'eau et avec une solution à base de 35 à 95 % d'éthanol, et - collecter et sécher l'éluat éthanolique. 15 Selon un mode de mise en œuvre particulier, le procédé comprend, en outre, les étapes consistant à : - filtrer l'extrait brut sur un filtre pour obtenir un filtrat ; 20 - concentrer le filtrat 10 fois, puis ajouter une quantité égale d'eau, de manière à obtenir un concentré ; - charger le concentré sur une colonne à phase inversée ; 25 - éluer la colonne à phase inversée avec une solution d'éthanol, et - collecter et sécher l'éluat éthanolique. 3 De préférence, la colonne à phase inversée est remplie d'une résine de polystyrène ou d'une résine d'échange ionique. De préférence encore, la colonne est remplie dans un rapport de 1 g de base sèche du concentré/5 g à 100 g de résine. De préférence toujours, le procédé comprend en outre 10 les étapes consistant à : - charger l'extrait brut sur une colonne à phase inversée ; - éluer la colonne à phase inversée consécutivement avec de l'eau et avec une solution d'éthanol, et 15 - collecter et sécher l'éluat éthanolique. De préférence, la colonne à phase inversée est remplie d'une résine de polystyrène ou d'une résine d'échange ionique. De préférence encore, la colonne est remplie dans un 20 rapport de 1 g de base sèche d'extrait brut/5 g à 100 g de résine. L'invention concerne également une composition antitussive, comprenant : 25 une quantité suffisante d'un extrait de l'espèce Morus australis Poir et un véhicule ou un excipient acceptable au plan pharmaceutique, l'extrait de l'espèce Morus australis Poir étant obtenu par un procédé tel qu'indiqué précédemment. 4 L'invention concerne également l'utilisation d'une composition telle qu'indiqué précédemment. L'invention propose également une composition antitussive comprenant : une quantité suffisante d'extrait de l'espèce Morus australis Poir. et un véhicule ou un excipient acceptable au plan pharmaceutique, l'extrait de l'espèce Morus australis Poir étant obtenu par extraction à l'eau, à l'éthanol, à l'acétone, à l'acétate d'éthyle ou en utilisant une combinaison de ceux-ci. L'invention propose également une composition antitussive pour traiter une toux, comprenant : une quantité suffisante d'extrait de l'espèce Morus australis Poir ; et un véhicule ou un excipient acceptable au plan pharmaceutique, l'extrait de l'espèce Morus australis Poir étant préparé selon les étapes consistant à : extraire les racines (ou les écorces de racines) de l'espèce Morus australis Poir avec de l'eau, de l'éthanol, de l'acétone, de l'acétate d'éthyle ou une combinaison de ceux-ci, de manière à obtenir un extrait brut ; filtrer l'extrait brut au moyen d'un filtre pour obtenir un filtrat ; concentrer le filtrat d'un facteur 10, puis ajouter une quantité égale d'eau pour générer un concentré ; charger le concentré sur une colonne à phase inversée ; éluer la colonne à phase inversée avec une solution d'éthanol et recueillir l'éluat éthanolique. 5 L'invention propose également un procédé pour soulager, prévenir et/ou traiter une toux, qui comprend l'administration de la composition antitussive et d'un véhicule ou d'un excipient 5 acceptable au plan pharmaceutique. On fournira ci-après une description détaillée dans les formes de réalisation suivantes et en se référant aux dessins annexés. 10 Description détaillée de l'invention La description suivante représente la meilleure forme de réalisation envisagée de l'invention. Cette description est présentée pour illustrer les principes généraux de l'invention et ne 15 sera pas considérée comme limitant celle-ci. La portée de l'invention est la mieux définie en se référant aux revendications ci-annexées. L'invention propose une composition antitussive pour soulager, prévenir et/ou traiter une 20 toux, comprenant une quantité suffisante d'extrait de l'espèce Morus australis Poir comme principe actif. L'extrait de l'espèce Morus australis Pair efficace est préparé en extrayant l'espèce Morus australis Poir avec de l'eau, de l'éthanol, de l'acétone, de 25 l'acétate d'éthyle ou une combinaison de ceux-ci. Après administration à raison de 2 g/kg de poids corporel, la toux est réduite de plus de 30 %, de préférence, de 40 % à 75 %. 6 L'invention propose également un procédé pour préparer une composition antitussive, comprenant l'extraction des racines (ou d'écorces de racines) de l'espèce Morus australis Poir avec de l'eau, de 5 l'éthanol, de l'acétone, de l'acétate d'éthyle ou une combinaison de ceux-ci, de manière à obtenir un extrait brut. Le découpage des racines de l'espèce Morus australis (ou d'écorces de racines) est fait par la 10 Demanderesse elle-même. Concernant les étapes de fabrication, celles-ci comprennent l'ouverture, par découpage vertical, des racines de l'espèce Morus australis Poir, l'écorçage de la racine, puis le séchage des racines découpées. 15 Dans une forme de réalisation, l'extrait brut de l'espèce Morus australis Poir peut être consécutivement filtré sur un filtre, puis sur une membrane présentant une taille de pore dans la plage de 2 à 10 pm, de préférence, de 5 pm, ce qui donne un 20 filtrat. Dans une autre forme de réalisation, le filtrat peut être chargé sur une colonne à phase inversée, puis la colonne à phase inversée éluée avec de l'eau et, de manière consécutive, avec une solution 25 à base de 35 à 95 % d'éthanol, ce qui permet de collecter l'éluat éthanolique. Dans une autre forme de réalisation, l'extrait brut peut être filtré pour donner un filtrat. On peut concentrer le filtrat 10 fois et 7 ajouter ensuite une quantité égale d'eau pour obtenir un concentré. Le concentré peut être chargé sur une colonne à phase inversée et la colonne à phase inversée éluée avec une solution éthanolique de manière à collecter l'éluat éthanolique. Dans une forme de réalisation, l'extrait brut peut être chargé sur une colonne à phase inversée, la colonne à phase inversée éluée, de manière séquentielle, avec de l'eau, puis avec une solution éthanolique, de manière à collecter l'éluat éthanolique. La taille de pore du filtre n'est pas limitée. En général, la taille de pore peut se situer dans la plage de mailles d'environ 100 à 500 mesh, de préférence, d'environ 350 mesh. La colonne destinée à la phase inversée peut être remplie d'une résine de polystyrène ou d'une résine d'échange ionique, notamment une résine de type Diaion HP20, une résine de type Amberlite XAD-7HP ou une résine de type MCI GEL CHP20P. La colonne peut être remplie dans le rapport de 1 g de base sèche d'extrait brut (ou de concentré)/5 g à 100 g de résine. L'invention propose également une composition pharmaceutique pour soulager, prévenir et/ou traiter une toux, comprenant une quantité suffisante de la composition antitussive de l'invention et un véhicule ou un excipient acceptable au plan pharmaceutique. 8 EXEMPLE EXEMPLE 1 : Modèle d'évaluation L'activité antitussive de divers extraits de l'espèce Morus australes Poir est évaluée dans le présent document selon le procédé décrit par Winter C. A et coll. (J. Pharmacol. Exp. Ther. 112:99, 1954) avec modification. On utilise des cochons d'Inde mâles et femelles Duncan Hartley, pesant 450 � 50 g. Chaque cochon d'Inde est placé dans une chambre hermétique de 4 litres, équipée d'un nébuliseur à ultrasons permettant d'injecter un produit irritant provoquant une toux par aérosol. Un microphone est installé pour amplifier les sons émis par les cobayes lorsqu'ils toussent. Les animaux sont exposés à une solution pulvérisée sous forme d'aérosol à 10 % d'acide citrique pendant 10 secondes et on sélectionne ceux qui présentent des quintes de 9 à 15 toux au cours des 5 minutes suivantes. Le lendemain, on administre aux animaux un solvant, c'est-à-dire de l'eau distillée, ou des extraits, par voie orale, à raison de deux administrations par jour (à 10:00 h du matin et à 4 h de l'après-midi). Les animaux sont à nouveau exposés à une solution d'acide citrique à 10 % sous forme d'aérosol pendant 60 minutes après administration de la seconde dose. L'activité d'inhibition due aux extraits, de la toux induite par l'acide citrique, est évaluée de la manière suivante : inhibition (%) = 9 [(nombre de toux avant administration) - (nombre de toux après administration)]/(nombre de toux avant administration) x 100 Préparation d'un échantillon et évaluation antitussive 5 de ce dernier EXEMPLE 2 : Extraction à l'eau et séparation sur colonne Un kilogramme d'écorces de racines sèches de l'espèce Morus australis Poir est porté à ébullition 10 et soumis au reflux à deux reprises avec 10 L d'eau pendant 1 heure, ce qui donne les extraits bruts, respectivement. Les extraits bruts sont ensuite filtrés sur un tamis de 350 mesh, puis les filtrats sont recueillis, respectivement. Les résidus sont 15 respectivement mélangés à 10 fois la quantité d'eau en poids et sont soumis à une seconde procédure d'extraction (1 heure), puis sont filtrés sur un tamis de 350 mesh pour donner un autre filtrat. Les deux filtrats sont combinés, puis filtrés sur une membrane 20 de 5 pm de porosité, ce qui donne des extraits aqueux, respectivement. 2.1 Séparation sur colonne (1) Les extraits aqueux précités sont séparés sur une colonne Diaion HP20 (Diaion, Mitsubishi 25 Chemistry Inc.), respectivement, le rapport de la base sèche de l'extrait à la résine étant de 1/30. Après que l'on a chargé les extraits sur les colonnes, les colonnes Diaion HP20 sont successivement éluées en utilisant 4 fois la quantité d'eau d'osmose inverse 10 (RO) et 3 fois la quantité d'une solution à base de 35 à 95 % d'éthanol en volume, ce qui permet d'obtenir des éluats éthanoliques (échantillons 1-1 à 1-6), respectivement. Les éluats éthanoliques sont concentrés et lyophilisés pour éliminer l'éthanol des éluats et pour obtenir des poudres sèches. Le rendement des éluats mentionnés ci-dessus est présenté dans le tableau I. L'évaluation de l'effet antitussif des éluats indiqués ci-dessus est représentée dans le tableau II. Tableau I N° Rapport de la Concentration Rende- d'échantillon base sèche à d'éthanol (%) ment (%) la résine ~2-1 1:31 35 4,0 2-2 1:29 50 3,5 2-3 1:29 60 - 2-4 1:29 95 4,2 2-5 1:35 50 4,2 2-6 1:41 50 6,4 Rendement : (poids d'éluat/poids d'écorces de racines) x 100 % Tableau II N° Quantité administrée Taux d'échantillon (dosage par poids d'inhibition corporel) ( %) 1-1 2 g/kg 46 1-2 2 g/kg 61 1-3 2 g/kg 50 1-4 2 g/kg 40 1-5 2 g/kg 43 1-6 2 g/kg 69 2.2 Séparation sur colonne (2) Les extraits aqueux indiqués ci-dessus sont séparés sur une colonne Diaion HP20 (Diaion, Mitsubishi Chemistry Inc.), respectivement, le rapport li de la base sèche de l'extrait à la résine étant de 1/20 à 1/30. Après que l'on a chargé les extraits sur les colonnes, les colonnes Diaion HP20 sont successivement éluées en utilisant 2 à 4 fois la quantité d'eau RO et 2 à 3 fois la quantité d'une solution d'éthanol à 50 % en volume, respectivement, ce qui permet d'obtenir des éluats éthanoliques (échantillons 1-7 à 1-14). Les éluats éthanoliques sont ensuite concentrés et lyophilisés pour éliminer l'éthanol des éluats, ce qui donne des poudres sèches. Le rendement des éluats précités est présenté dans le tableau III. L'évaluation de l'effet antitussif des éluats précités est représentée dans le tableau IV. Tableau III N° Porosi- Rapport Volume Volume Rende- d'échan- té de de la d'eau d'étha- ment tillon la base d'élu- nol (%) membra- sèche à tion d'élu- ne la résine tion 1-7 5 pm ,1:30 4 fois 3 fois 3,7 1-8 '5 pm 1:25 2,5 2 fois 3,8 fois 1-9 5 pm 1:20 4 fois 3 fois 3,8 1-10 5 pm 1:20 4 fois 3 fois 4,2 1-11 5 pm 1:23 2 fois 3 fois 5,0 1-12 1:24 ,2 fois 3 fois 2,3 1-13 1:19 2 fois 3 fois 1,4 1-14 - 1:20 2 fois 3 fois 1,5 Rendement (poids d'éluat/poids d'écorces de racines) x 100 % 12 2940088 Tableau IV N° Quantité administrée Taux d'échantillon (dosage par poids d'inhibition corporel) (%) 1-7 2 g/kg 48 1-8 2 g/kg 46 1-9 2 g/kg 69 1-10 2 g/kg '57 2 g/kg 2 g/kg 2 g/kg 1-14 Remarque : les échantillons 1-13 et 1-14 ont été combinés dans le rapport pondéral 1:1. EXEMPLE 3 : Extraction à l'éthanol à 95 % 5 Un kilogramme d'écorces de racines sèches de l'espèce Morus australis Poir est porté à ébullition, puis soumis au reflux à deux reprises en utilisant 10 L d'une solution d'éthanol à 95 % pendant 1 heure, de manière à obtenir un extrait brut. L'extrait brut 10 est ensuite filtré sur un tamis de 350 mesh et le filtrat est recueilli. Les résidus sont respectivement mélangés à 10 fois la quantité d'eau en poids en vue d'une seconde procédure d'extraction (1 heure), puis le tout est filtré sur un tamis de 350 mesh, ce qui 15 donne un autre filtrat. Les deux filtrats sont combinés de manière à obtenir un extrait éthanolique (échantillon 2-1). L'extrait éthanolique est concentré et lyophilisé de manière à obtenir une poudre sèche. Le rendement et l'évaluation de l'effet antitussif de l'extrait sont présentés dans le tableau V. 74 39 48 13 2940088 Tableau V N° Rendement (%) Quantité Taux d'échan- administrée d'inhibition tillon (dosage par (%) poids corporel) 3-1 9,2 2 g/kg 33 Rendement : (poids d'éluat/poids d'écorces de racines) x 100 % EXEMPLE 4 : Extraction à l'éthanol à 95 % et 5 séparation sur colonne On utilise de l'écorce de racine sèche de l'espèce Morus australis Poir. Un kilogramme d'écorces de racines sèches de l'espèce Morus australis Poir est porté à ébullition, puis soumis au reflux à deux 10 reprises en utilisant 10 L d'une solution d'éthanol à 95 % pendant 1 heure, ce qui donne des extraits bruts. Les extraits bruts sont ensuite filtrés sur un tamis de 350 mesh et les filtrats sont recueillis, respectivement. Les résidus sont mélangés à 10 fois la 15 quantité d'eau en poids en vue d'une seconde procédure d'extraction (1 heure), puis sont filtrés sur un tamis de 350 mesh, ce qui donne d'autres filtrats. Les deux filtrats sont combinés pour donner des extraits éthanoliques, respectivement. 20 Les extraits éthanoliques sont concentrés 10 fois sous pression réduite, puis on ajoute une quantité égale d'eau en poids pour obtenir des concentrés, respectivement. Les extraits mentionnés ci-dessus sont 25 séparés sur des colonnes Diaion HP20 (Diaion, 14 Mitsubishi Chemistry Inc.), respectivement, le rapport de la base sèche du concentré à la résine étant de 1/20. Après que l'on a chargé les concentrés sur les colonnes, on élue les colonnes Diaion HP20 avec 2 fois la quantité d'une solution d'éthanol à 50 %, en volume, respectivement, ce qui donne des éluats 3-1 à 3-3). Les éluats éthanoliques (échantillons éthanoliques sont ensuite concentrés et lyophilisés donner des pour éliminer l'éthanol des éluats et poudres sèches. Le rendement et l'évaluation de l'effet antitussif des extraits indiqués ci-dessus sont présentés dans le tableau VI. Tableau VI N° Rapport Rendement Quantité Taux d'échan- de la (%) administrée d'inhibition tillon base (dosage par (%) sèche à poids la corporel) résine 3-1 ,1:20 6,3 0,5 g/L 55 '1 g/L 61 2 g/kg 63 3-2 1:20 7,3 2 g/kg 48 3-3 1:20 5,6 2 g/kg 48 Rendement : (poids d'éluat/poids d'écorces de racines) 15 x 100 % EXEMPLE 5 : Extraction à l'acétate d'éthyle On utilise de l'écorce de racine sèche de l'espèce Morus australis Poir. Un kilogramme d'écorces de racines de l'espèce Morus australis Poir est porté 20 à ébullition, puis est soumis au reflux à deux reprises en utilisant 10 L d'une solution d'acétate d'éthyle pendant 1 heure, ce qui donne un extrait15 brut. L'extrait brut est ensuite filtré sur un tamis de 350 mesh et le filtrat est recueilli. Le résidu est mélangé à 10 fois la quantité d'eau en poids en vue d'une seconde procédure d'extraction (1 heure), puis sont filtrés sur un tamis de 350 mesh, ce qui donne un autre filtrat. Les deux filtrats sont combinés, puis filtrés sur une membrane d'une porosité de 5 pm, de manière à obtenir un extrait d'acétate d'éthyle (échantillon 4-1). L'extrait est concentré sous pression réduite et séché pour donner une poudre sèche. Le rendement et l'évaluation de l'effet antitussif de l'extrait sont présentés dans le tableau VII. Tableau VII N° Rendement Quantité Taux d'échantillon (%) administrée d'inhibition (dosage par (%) poids corporel) 4-1 2,1 ~2 g/kg 48 Rendement : (poids d'éluat/poids d'écorces de racines) x 100 % Si l'invention a été décrite à titre d'exemple et sous forme de modes de réalisation préférés, il est entendu que l'invention n'est pas limitée aux formes de réalisation divulguées. Au contraire, elle est censée comprendre diverses modifications et des aménagements similaires (d'une manière évidente pour l'homme du métier). Par suite, on accordera à la portée des revendications ci- annexées l'interprétation la plus large, de manière 16 qu'elle englobe toutes ces modifications et ces aménagements similaires. 17 REVENDICATIONS1. Procédé pour préparer une composition antitussive, comprenant l'extraction d'écorces de racines de l'espèce Morus australis Poir avec de l'eau, de l'éthanol, de l'acétone, de l'acétate d'éthyle ou une combinaison de ceux-ci, de manière à obtenir un extrait brut. 2. Procédé selon la revendication 1, comprenant en outre une étape consistant à filtrer l'extrait brut sur un filtre et sur une membrane présentant une taille de pore de 5 pm, de manière à obtenir un filtrat. 3. Procédé selon la revendication 2, comprenant en outre les étapes suivantes consistant à : - charger le filtrat sur une colonne à phase inversée ; - éluer la colonne à phase inversée consécutivement avec de l'eau et avec une solution à base de 35 à 95 % d'éthanol, et - collecter et sécher l'éluat éthanolique. 4. Procédé selon la revendication 1, comprenant, en outre, les étapes consistant à : - filtrer l'extrait brut sur un filtre pour obtenir un filtrat ; 18- concentrer le filtrat 10 fois, puis ajouter une quantité égale d'eau, de manière à obtenir un concentré ; - charger le concentré sur une colonne à phase inversée ; - éluer la colonne à phase inversée avec une solution d'éthanol, et - collecter et sécher l'éluat éthanolique. 5. Procédé selon la revendication 4, dans lequel la colonne à phase inversée est remplie d'une résine de polystyrène ou d'une résine d'échange ionique. 6. Procédé selon la revendication 5, dans lequel la colonne est remplie dans un rapport de 1 g de base sèche du concentré/5 g à 100 g de résine. 7. Procédé selon la revendication 1, comprenant en outre les étapes consistant à : - charger l'extrait brut sur une colonne à phase inversée ; - éluer la colonne à phase inversée consécutivement avec de l'eau et avec une solution d'éthanol, et - collecter et sécher l'éluat éthanolique. 8. Procédé selon la revendication 7, dans lequel la colonne à phase inversée est remplie d'une résine de polystyrène ou d'une résine d'échange ionique. 19. Procédé selon la revendication 8, dans lequel la colonne est remplie dans un rapport de 1 g de base sèche d'extrait brut/5 g à 100 g de résine. 10. Composition antitussive, comprenant : une quantité suffisante d'un extrait de l'espèce Morus australis Poir et un véhicule ou un excipient acceptable au plan pharmaceutique, l'extrait de l'espèce Morus australis Poir étant obtenu par un procédé selon l'une des revendications 1 à 9. il. Utilisation d'une composition selon la revendication 10, contre la toux. 20