Brevet FR2943544A1 — publié le 20101001

La présente invention vise à proposer de nouveaux systèmes vésiculaires et notamment de type capsules à enveloppe lipidique solide. Des systèmes de type nanocapsules ou nanogouttelettes dont la taille varie de 50 à 500 nanomètres et formés d'un coeur liquide ou semi-solide, enveloppé d'une 5 membrane externe, sont déjà connus. Par exemple, le brevet US 5,961,970 propose à titre de véhicule d'actifs, des émulsions huile-dans-eau à échelle submicronique, c'est-à-dire des mini-émulsions dont les gouttelettes possèdent un noyau hydrophobe de nature lipidique et sont stabilisées en surface par des tensioactifs amphiphiles et/ou non ioniques à l'image des tensioactifs de 10 type phospholipides. Le brevet US 5,576,016 décrit des macroémulsions dont les gouttelettes sont formées d'un noyau lipidique solide et qui sont stabilisées par une enveloppe phospholipidique. EP 1 265 698, WO 09/001019 et FR 2 916 974, quant à eux, décrivent des nanocapsules à coeur liquide et écorce solide de nature lipidique, pouvant être obtenues à partir d'une microémulsion préparée par la technique d'inversion de phase par 15 effet thermique (émulsion PIT). Ces systèmes nanoparticulaires sont, pour l'essentiel, dédiés à l'encapsulation d'un actif qui, en fonction de sa nature, hydrophile, hydrophobe ou hydrodispersible, sera présent dans le coeur ou dans l'écorce. Au sens de la présente invention, on entend par � encapsulation d'un actif�, 20 son incorporation au niveau du coeur ou de l'écorce d'une nanocapsule, suivant sa nature, hydrophile, hydrophobe ou hydrodispersible. Toutefois, ces systèmes vésiculaires ne se prêtent pas simultanément au transport d'une grande variété d'actifs et/ou à une maîtrise totale de leur capacité de relargage et/ou de ciblage. En effet, ces systèmes ne permettent l'encapsulation que 25 d'actifs de poids moléculaire relativement bas, en particulier de poids moléculaire inférieur ou égal à environ 5 000 daltons. Par ailleurs, il serait avantageux de pouvoir renforcer la structure capsulaire de ces nanocapsules pour prévenir par exemple tout relargage intempestif de l'actif qu'elles véhiculent ou encore accroître la résistance de leur enveloppe aux milieux biologiques agressifs à l'image, par exemple, des sucs gastriques. Il pourrait 30 être, en outre, particulièrement intéressant de pouvoir facilement les fonctionnaliser en surface en vue, par exemple, de les dédier à une cible spécifique. Ainsi, il pourrait être particulièrement intéressant de mettre à profit des ligands de type galactose pour diriger ces nanocapsules vers le récepteur exprimé par les hépatocytes ou de type peptide arginineglycine-aspartate RGD pour cibler les intégrines aV(33 exprimés par certaines tumeurs fortement vascularisées. L'invention vise précisément à proposer un mode de fonctionnalisation de ces systèmes vésiculaires permettant de leur conférer les avantages précités. De manière inattendue, les inventeurs ont constaté que la surface externe de nanocapsules peut se prêter à une telle fonctionnalisation sous réserve que celle-ci soit réalisée dans des conditions spécifiques. Contre toute attente, la fonctionnalisation en surface de ces nanocapsules n'affecte pas leur stabilité et n'entraîne pas leur désagrégation, comme confirmé dans les exemples ci-après par les mesures en diffusion dynamique de la lumière ou par l'imagerie par microscopie électronique à transmission. Ainsi, la présente invention vise, selon un premier de ses aspects, une capsule de type coeur/écorce lipidique solide fonctionnalisée en surface avec au moins un composé contenant au moins une fonction amine caractérisée en ce que l'architecture coeur/écorce lipidique non fonctionnalisée est à l'échelle nanométrique et en ce que ledit composé est lié de manière covalente via une réaction de transacylation à ladite écorce lipidique solide. Selon un autre de ces aspects, la présente invention vise un procédé utile pour la fonctionnalisation de nanocapsules à écorce lipidique solide, ledit procédé comprenant au moins les étapes consistant à : i) disposer de nanocapsules à écorce lipidique solide, ii) mettre en contact lesdites nanocapsules avec une solution aqueuse alcaline, de manière à activer leur surface pour une réaction de transacylation, iii) mettre en présence le milieu ii) avec au moins un composé contenant au 25 moins une fonction amine pour former, par transacylation, lesdites capsules attendues et, le cas échéant, iv) neutraliser les capsules fonctionnalisées ainsi obtenues, et v) isoler lesdites capsules fonctionnalisées. Certes, EP 0 693 963 décrit la préparation de particules dont l'écorce est dite 30 � gélifiée �, à partir de polysaccharides estérifiés, présents dans l'écorce de la particule considérée, et aptes à réagir avec une polyamine via une réaction de transacylation. Toutefois, outre leur nature très différente de celles considérées selon l'invention, les particules de départ subissant une réaction de transacylation, possèdent une taille allant de quelques micromètres à 10 millimètres. Or, les particules de taille plus réduite, notamment à l'échelle nanométrique possèdent avantageusement une grande stabilité colloïdale. Les nanoparticules ainsi fonctionnalisées résistent à la floculation ou à l'agrégation et ont une durée de vie plus longue. Au sens de la présente invention, on entend par �nanocapsules fonctionnalisées �, des nanocapsules à écorce lipidique solide, dont la surface possède une structure modifiée par rapport à la surface des nanocapsules à un état non fonctionnalisé, cette structure modifiée étant notamment le résultat d'un greffage en surface d'au moins un ou plusieurs composés portant au moins une fonction amine. A des fins de simplification, ces composés peuvent également être désignés ci-après sous la dénomination composés aminés. Un tel composé peut avantageusement 15 posséder au moins deux, au moins trois, voire plus de fonctions amines. On comprend aisément que l'ancrage de telles molécules confère à la nanocapsule ainsi fonctionnalisée une taille supérieure à sa taille initiale (c'est-à-dire non fonctionnalisée). Ainsi, si les nanocapsules d'origine possèdent une taille moyenne inférieure à 150 nm, de préférence inférieure à 100 nm, de préférence encore inférieure à 20 50 nm, les capsules obtenues suite à leur fonctionnalisation peuvent posséder, pour leur part, une taille moyenne supérieure à 150 nm, voire à 200 nm. La maîtrise du procédé, et notamment du temps de réaction, permet de contrôler la taille finale des nanocapsules fonctionnalisées, qui avantageusement peut demeurer inférieure à 250 nm. Le composé aminé fixé à la surface des capsules selon l'invention peut en outre 25 être propice à la fixation d'une ou plusieurs molécules d'intérêt. Ainsi, au sens de l'invention, le terme � composé aminé � couvre soit un actif en tant que tel, dit encore molécule d'intérêt, c'est-à-dire une entité dotée d'une activité biologique, pharmacologique, cosmétique, phytosanitaire, soit une entité chimique ou biologique apte à conférer une ou plusieurs fonctionnalités complémentaires aux 30 nanocapsules, et notamment apte à renforcer leur structure externe et/ou à permettre un ciblage spécifique du/des actif(s) associé(s). Avantageusement, le composé aminé et/ou la molécule d'intérêt est de nature protéique, peptidique, nucléique, polymérique ou inorganique, voire organométallique. Au regard des nanocapsules considérées, un procédé selon l'invention s'avère tout particulièrement avantageux pour : - renforcer leur structure nanocapsulaire, - modifier leur signalétique de relargage des principes actifs encapsulés, le cas échéant, - accroître leur résistance aux milieux biologiques agressifs tels que le tube digestif, - protéger le coeur huileux contenant un ou des actifs de toute agression extérieure (oxydation, lumière), - tirer profit de ces nanoparticules pour véhiculer des molécules de haut poids moléculaire ou des polymères hydrophiles aptes à réagir après transacylation tels que des acides nucléiques, les ARNsi, les héparines et dérivés d'héparines, les protéines et polypeptides chargés négativement ou positivement, les macro-poly-anions, et/ou - permettre la présentation en surface de ces nanoparticules de molécules interagissant avec le système immunitaire. La présente invention vise également, selon un autre de ses objets, l'utilisation 20 de capsules selon l'invention pour la préparation de compositions. Ainsi, l'invention concerne l'utilisation d'au moins une capsule selon l'invention pour la préparation d'une composition à intérêt thérapeutique. La présente invention vise donc également des compositions, notamment des compositions pharmaceutiques, contenant au moins une capsule selon l'invention en 25 association avec au moins un véhicule physiologiquement acceptable. Capsules Comme indiqué précédemment, les capsules selon l'invention correspondent en fait à des nanocapsules à écorce lipidique solide fonctionnalisées en surface via un 30 procédé de transacylation. Les capsules ainsi obtenues, possèdent une taille moyenne comprise entre 70 et 250 nm. Bien entendu, des capsules de taille supérieure peuvent être obtenues en faisant varier, de manière adéquate, les paramètres du procédé. De telles variations sont bien entendu du ressort de l'homme de l'art. De telles capsules peuvent être analysées par diffusion dynamique de la lumière et diffusion des neutrons aux petits angles. Comme indiqué précédemment, l'écorce externe des capsules comporte au moins un composé aminé greffé à sa surface de manière covalente via une réaction de transacylation. Selon une première variante, ce composé aminé est, en soit, une molécule d'intérêt, telle que décrite précédemment, qu'il est intéressant de véhiculer via une capsule conforme à l'invention. Comme précisé ci-dessus, cette molécule d'intérêt peut être de nature protéique, peptidique, nucléique ou polymérique. Il peut notamment s'agir d'une protéine, de préférence choisie parmi les protéines hydrophiles ou traitées de manière à être rendues hydrophiles, c'est-à-dire solubles dans l'eau ou dispersibles dans l'eau, contenant des groupements aminés libres, des polypeptides ou des polymères. Des exemples de protéines qui peuvent être utilisées dans l'invention et qui remplissent les conditions qui consistent à être hydrophiles ou bien qui peuvent être traitées pour être hydrophiles, sont les albumines comme la sérum albumine, en particulier la sérum albumine humaine, l'ovalbumine, l'alpha-lactalbumine, des globulines, le fibrinogène, la caséine, des protéines végétales telles que les protéines du soja ou du blé, des gluténines qui de préférence auront été dégradées, des scléroprotéines solubilisées, le collagène, l'atélocollagène, la gélatine, les hydrolysats de gélatine, les peptones, l'hémoglobine, des enzymes telles que la catalase, la phosphatase alcaline, des hormones, des immunoglobulines ou des anticorps tels que les anticorps monoclonaux. Avantageusement, comme exemples de polypeptide, on peut citer le polyacide aspartique, la polyarginine ou encore la polylysine. A titre d'exemple de polymère, on peut tout particulièrement citer le polyéthylène imine. A titre d'exemple d'acide nucléique, on peut plus particulièrement citer l'ARNsi. Selon une seconde variante qui peut, le cas échéant, être inhérente à la première variante, le composé aminé est mis en oeuvre pour véhiculer un actif plus particulièrement considéré au regard de sa capacité de ciblage et/ou de marquage. Dans ce cas où le composé aminé est plus particulièrement considéré à ces fins, c'est-à-dire d'agent devant assurer la liaison d'une molécule d'intérêt à des nanocapsules, on peut plus particulièrement privilégier le choix de composés aminés choisis parmi les anticorps monoclonaux, les ligands RGD, les sucres aminés et la polylysine. En ce qui concerne la molécule d'intérêt figurée par l'actif, elle peut être conforme à la définition proposée ci-dessus pour le composé aminé. Il peut également s'agir, par exemple, d'une substance intéressant le diagnostic portant par exemple des entités fluorescentes, luminescentes ou phosphorescentes, ou encore d'une molécule dotée d'une activité biologique telle qu'une enzyme, une hormone, un anticorps ou l'hémoglobine. Selon encore une autre variante, le composé aminé présente un intérêt au regard de sa capacité à renforcer la résistance de surface externe nanocapsulaire. Il peut ainsi s'agir de toute molécule comportant des motifs polyéthylène glycol. Un enrobage de surface à base d'un tel composé est en effet avantageux pour conférer une rémanence vasculaire accrue en raison d'une réduction significative de la capture des nanocapsules par les macrophages hépatiques. Selon encore un autre mode de réalisation, les capsules selon l'invention sont en outre avantageuses au regard du fait qu'elles peuvent posséder au niveau de leur surface externe un certain nombre de motifs annexes réactifs, tels que par exemple des motifs amines et acides propices à des couplages à des entités annexes. De tels motifs sont avantageusement présents sur le composé aminé ayant servi à fonctionnaliser les nanocapsules. Ainsi, selon encore une autre variante de réalisation, les composés aminés considérés selon l'invention peuvent avoir pour intérêt significatif de conférer aux nanocapsules d'origine une aptitude à s'associer, via leurs motifs amines fixés par transacylation sur la surface de ces nanocapsules, avec d'autre(s) molécule(s) dotée(s), elle(s), d'intérêt en terme d'effet thérapeutique, de marquage, de ciblage et/ou de protection d'une éventuelle dégradation engendrée par le milieu environnant. Les molécules d'intérêt, susceptibles d'être liées de façon non covalente avec un composé aminé, lui-même greffé en surface de l'écorce lipidique de la capsule, peuvent être soit un actif, en particulier un actif hydrophile, plus particulièrement chargé négativement, soit une molécule dédiée à apporter une fonctionnalité complémentaire à la nanocapsule, notamment en terme de ciblage/marquage ou à des fins de renforcer la résistance et la stabilité de la nanocapsule. L'actif peut être un composé à intérêt thérapeutique, en particulier pharmaceutiquement actif, cosmétiquement actif ou actif dans un domaine phytosanitaire ou alimentaire ou nutracetique. Selon un mode réalisation préféré, cet actif est un principe pharmaceutiquement actif, tel que défini précédemment. Les nanocapsules de l'invention conviennent plus particulièrement pour l'administration des principes actifs suivants : les anti-infectieux parmi lesquels les antimycosiques, les antibiotiques ; les anticancéreux ; les immunosuppresseurs ; les principes actifs destinés au Système Nerveux Central qui doivent passer la barrière hémato-encéphalique, tels que les antiparkinsoniens, les antalgiques et plus généralement les principes actifs pour traiter les maladies neurodégénératives. Avantageusement, un tel actif peut être de nature protéique, polypeptidique, peptidique, mais peut aussi être un acide nucléique tel qu'un plasmide d'ADN ou un ARN 20 d'interférence (ou ARNsi), ou un oligonucléotide antisens ou un aptamère. Comme indiqué précédemment, les capsules selon l'invention comprennent une écorce lipidique solide. Ecorce lipidique solide 25 Cette écorce lipidique est solide et comprend au moins un composé apte à réagir avec un composé aminé via une réaction de transacylation. Il peut notamment s'agir de composés comprenant au moins une fonction ester. A ce titre, selon une variante de réalisation, l'écorce lipidique solide comprend au moins un tensioactif liposoluble ou lipophile. 30 Avantageusement, le tensioactif lipophile est solide à température ambiante. Le tensioactif lipophile est plus particulièrement à base de phospholipides qui sont avantageux au regard de leur caractère biocompatible. Parmi les phospholipides, les phosphatidylcholines (lécithines) sont tout particulièrement intéressantes. D'autres phospholipides peuvent être le phosphatidylglycérol, le phosphatidylinositol, la phosphatidylsérine, l'acide phosphatidique et la phosphatidyléthanolamine. Les dérivés phospholipides peuvent être isolés à partir de sources naturelles ou préparés par synthèse. A titre de produits commerciaux dérivant des phospholipides, on peut plus particulièrement citer : - 1'EPICURON 120� (Lukas Meyer, Allemagne) qui est un mélange d'environ 70 % de phosphatidylcholine, 12 % de phosphatidyléthanolamine, et environ 15 % d'autres phospholipides ; - l'OVOTINE 160� (Lukas Meyer, Allemagne) qui est un mélange comprenant environ 60 % de phosphatidylcholine, 18 % de phosphatidyléthanolamine, et 12 % d'autres 15 phospholipides, - un mélange de phospholipides purifiés à l'image des produits Lipoïd E75� ou Lipoïds E-80� (Lipoïd, Allemagne) qui est un mélange de phospholipides comprenant environ 80 % en poids de phosphatidylcholine, 8 % en poids de phosphatidyléthanolamine, 3,6 % en poids de lipides non polaires et 2 % de sphingomyéline. 20 Selon un mode de réalisation préféré, le tensioactif lipophile est une lécithine dont la proportion en phosphatidylcholine varie de 40 à 80 % en poids. Convient tout particulièrement comme source de phosphatidylcholine, le Lipoïd 575-3� (Lipoïd GmbH, Allemagne). Il s'agit de lécithine de soja. Cette dernière contient environ 69 % de phosphatidylcholine et 9 % de phosphatidyléthanolamine. Ce 25 constituant est le seul constituant solide à 37 °C et à température ambiante dans la formulation. On peut également utiliser le polyglycéryl-6-dioléate (Plurol�). Avantageusement, le/les tensioactif(s) précité(s) peuvent être associés à des co-tensioactifs comme par exemple d'autres phospholipides. A ce titre, les phosphatidylcholines (lécithine) sont particulièrement intéressantes. 30 D'autres phospholipides convenant à l'invention, peuvent être le phosphatidylglycérol, le phosphatidylinositol, la phosphatidylsérine, l'acide phosphatidique et la phosphatidyléthanolamine. Avantageusement, selon une variante de réalisation, l'écorce lipidique solide est formée d'au moins un système tensioactif formé d'un tensioactif liposoluble tel que défini précédemment et d'un tensioactif thermosensible, hydrophile et non ionique. Avantageusement, un tensioactif thermosensible hydrophile et non ionique est hydrophile amphiphile. Les tensioactifs émulsionnants habituellement utilisés ont un HLB (HLB = Hydrophilic Lipophilic Balance) allant de 8 à 18. Ces tensioactifs peuvent être choisis parmi les alcools gras éthoxylés, les acides gras éthoxylés, les glycérides partiels d'acides gras éthoxylés, les triglycérides d'acides 10 gras polyéthoxylés, et leurs mélanges. Comme alcools gras éthoxylés, on peut citer par exemple les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool laurylique, notamment ceux comportant de 9 à 50 groupes oxyéthylénés (Laureth-9 à Laureth-50 en noms CTFA) ; les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool béhénylique, notamment ceux comportant de 9 à 15 50 groupes oxyéthylénés (Beheneth-9 à Beheneth-50 en noms CTFA) ; les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool céto-stéarylique (mélange d'alcool cétylique et d'alcool stéarylique), notamment ceux comportant de 9 à 30 groupes oxyéthylénés (Ceteareth-9 à Ceteareth-30 en noms CTFA) ; les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool cétylique, notamment ceux comportant de 9 à 30 groupes oxyéthylénés 20 (Ceteth-9 à Ceteth-30 en noms CTFA) ; les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool stéarylique, notamment ceux comportant de 9 à 30 groupes oxyéthylénés (Steareth-9 à Steareth-30 en noms CTFA) ; les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec l'alcool isostéarylique, notamment ceux comportant de 9 à 50 groupes oxyéthylénés (Isosteareth-9 à Isosteareth-50 en noms CTFA) ; et leurs mélanges. 25 Comme acides gras éthoxylés, on peut citer par exemple les produits d'addition d'oxyde d'éthylène avec les acides laurique, palmitique, stéarique ou béhénique, et leurs mélanges, notamment ceux comportant de 9 à 50 groupes oxyéthylénés tels que les laurates de PEG-9 à PEG-50 (en noms CTFA : PEG-9 laurate à PEG-50 laurate) ; les palmitates de PEG-9 à PEG-50 (en noms CTFA : PEG-9 palmitate à PEG-50 palmitate) ; les stéarates de 30 PEG-9 à PEG-50 (en noms CTFA : PEG-9 stéarate à PEG-50 stéarate) ; les palmito-stéarates de PEG-9 à PEG-50 ; les béhénates de PEG-9 à PEG-50 (en noms CTFA : PEG-9 béhénate à PEG-50 béhénate) ; et leurs mélanges. On peut utiliser aussi des mélanges de ces dérivés oxyéthylénés d'alcools gras et d'acides gras. Ces tensioactifs peuvent également être soit des composés naturels à l'image des phospholipides ou des composés synthétiques tels que les polysorbates qui sont des esters d'acide gras de sorbitol polyéthoxylé (Tweed), les esters de polyéthylène glycol d'acide gras provenant par exemple de l'huile de ricin (Crémophor ), des acides gras polyéthoxylés, par exemple de l'acide stéarique (Simulsol M-53�), des éthers d'alcool gras polyoxyéthylénés (Brij�), des éthers non phényles polyoxyéthylénés (Triton N�), des éthers hydroxylphényle polyoxyéthylénés (Triton X�). Il peut plus particulièrement s'agir d'un 2-hydroxystéarate polyéthylène glycol et notamment celui commercialisé sous le nom Solutol� HS15 par la société BASF (Allemagne). Selon un mode de réalisation préféré, l'écorce contient au moins un système tensioactif formé d'une lécithine et d'un 2-hydroxystéarate polyéthylène glycol et 15 notamment celui commercialisé sous la dénomination Solutol� HS 15. L'écorce peut, le cas échéant, encapsuler en son sein au moins un actif. Dans ce cas, il s'agira plutôt d'un actif de nature liposoluble ou lipodispersible. Avantageusement, de tels actifs liposolubles ou lipodispersibles sont déjà présents dans les nanocapsules de départ, mises en oeuvre en étape i) du procédé de 20 préparation selon l'invention. Les capsules selon la présente invention comportent par ailleurs un coeur lipidique liquide. Coeur lipidique liquide 25 Le coeur lipidique liquide comprend au moins une phase grasse huileuse formée d'au moins un corps gras liquide ou semi-liquide à température ambiante, et en particulier d'au moins un triglycéride, d'un ester d'acide gras, ou d'un de leurs mélanges. L'ester d'acide gras peut être plus particulièrement choisi parmi les esters d'acides gras en C8 à C18, notamment en C8 à C12, et notamment le palmitate d'éthyle, 30 l'oléate d'éthyle, le myristate d'éthyle, le myristate d'isopropyle, le myristate d'octydodécyle et leurs mélanges. Les triglycérides mis en oeuvre peuvent être des triglycérides de synthèse ou des triglycérides d'origine naturelle. Les sources naturelles peuvent inclure les graisses animales ou les huiles végétales par exemple les huiles de soja ou les sources en triglycérides à longue chaîne (LCT). D'autres triglycérides d'intérêt sont composés principalement d'acides gras de longueurs moyennes encore appelés triglycérides à chaîne moyenne (MCT). Une huile à triglycérides à chaîne moyenne (MCT) est un triglycéride dans lequel la chaîne carbohydrate a de 8 à 12 atomes de carbone. De telles huiles MCT sont disponibles commercialement. A titre d'exemple de ces huiles MCT, on peut citer les TCR (nom commercial de la société industrielle des oléagineux, France, pour un mélange de triglycérides dans lequel environ 95 % des chaînes d'acides gras possèdent 8 ou 10 atomes de carbone) et le Miglyol� 812 (triglycéride commercialisé par la société Dynamit Nobel Suède, pour un mélange de triesters de glycérides d'acides caprylique et caprique). Les motifs d'acides gras de ces triglycérides peuvent être insaturés, monoinsaturés ou polyinsaturés. Les mélanges de triglycérides ayant des motifs d'acides gras variables sont également acceptables. L'indice HLB ou balance hydrophile-lipophile est tel que défini par C. Larpent dans le Traité K.342 des Editions Techniques de l'Ingenieur. Convient tout particulièrement à l'invention, le triglycéride commercialisé sous le nom Labrafac WL 1349�. Dans un mode de réalisation préféré, la phase grasse est un triglycéride d'acide gras. Comme indiqué précédemment, le coeur lipidique liquide peut, le cas échéant encapsuler en son sein un actif. Cet actif est de préférence liposoluble. Toutefois, des actifs de nature hydrosoluble ou hydrodispersible peuvent également être encapsulés dans le coeur lipidique. Dans ce cas, il devra subir une formulation préalable à son encapsulation. Par exemple, l'actif pourra se présenter sous la forme de micelles inverses ou de microémulsions, comme cela est par exemple décrit dans les documents WO 09/001019 et FR 2 916 974, respectivement. A titre illustratif et non limitatif d'actifs pouvant être encapsulés selon l'invention, on peut notamment citer la doxorubicine et leurs sels d'addition à un acide pharmaceutiquement acceptable et plus particulièrement le chlorhydrate, et des héparines de bas poids moléculaire. Procédé de préparation de capsules selon l'invention Comme indiqué précédemment, des capsules à l'état nanoparticulaire, subissent une réaction de transacylation, entre au moins un constituant de leur enveloppe lipidique solide et au moins un composé aminé. Cette réaction de transacylation correspond à une réaction d'échanges de groupement(s) acyle(s) entre un composé de l'enveloppe lipidique, de préférence un tensioactif hydrophile tel que décrit ci-dessus et le composé aminé considéré. Avantageusement, une telle réaction est simple d'exécution et ne requiert pas de manipulation délicate. La première étape de cette réaction consiste en une alcalinisation de la surface des nanocapsules pour les activer, vis-à-vis d'une réaction de transacylation, par exemple, par contact de ces nanocapsules avec au moins une solution aqueuse alcaline. Avantageusement, la quantité d'agent alcalin à ajouter pour déclencher la réaction de transacylation, à la phase aqueuse dans laquelle on disperse directement les nanocapsules, est telle que le pH de la suspension aqueuse de nanocapsules est compris entre 8 et 14, et encore de préférence entre 8 et 10. L'agent alcalin à ajouter pour déclencher la réaction de transacylation peut être par exemple choisi parmi la soude, la potasse ou un composé aminé tel que par exemple la la triéthylamine. A l'issue de la transacylation, la quantité d'agent acide ajoutée à la suspension alcaline de particules est en revanche ajustée pour que l'eau de suspension des particules 25 soit neutralisée ou amenée à un pH légèrement acide. La deuxième étape de cette réaction consiste en la mise en présence de ces nanocapsules alcalinisées avec au moins un composé aminé dans des conditions propices à la transacylation. La réaction est laissée de préférence sous agitation le temps nécessaire au déroulement de la réaction, c'est-à-dire entre 5 minutes et 30 minutes. 30 Par exemple, le temps pendant lequel les particules sont maintenues au sein de la solution alcaline pour que se développe la réaction de transacylation peut être compris entre 5 min et 1 heure, de préférence entre 5 min et 30 min, de préférence encore, il est de 15 min. Le rendement de la réaction de transacylation peut être accru par augmentation de la durée de ladite réaction de transacylation et/ou par des variations de la composition de la solution alcaline déclenchant ladite réaction de transacylation, et en particulier, par augmentation de la quantité d'agent alcalin utilisé pour préparer ladite solution alcaline. Avantageusement, il est réalisé à l'issue de la transacylation, une dernière étape de neutralisation du milieu réactionnel par ajout d'une solution d'acide chlorhydrique de concentration adaptée, généralement comprise entre 0,1 mol/litre et 6 mol/litre), le pH devant être ramené à une valeur comprise entre 7 et 7,4. L'agent acide utilisé pour neutraliser la suspension aqueuse de particules après la réaction de transacylation, peut être par exemple choisi parmi les acides organiques monocarboxyliques ou polycarboxyliques, porteurs ou non de fonctions alcool, comme l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide tartrique, l'acide succinique, l'acide malique, l'acide lactique ou un acide minéral comme l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique. Ce temps de neutralisation des particules, c'est-à-dire le temps d'agitation nécessaire après ajout de l'acide au milieu réactionnel peut être compris entre 5 min et 1 heure, de préférence entre 5 min et 30 min, de préférence encore, il est de 15 min. Les nanocapsules modifiées peuvent être ensuite purifiées selon les méthodes de purification bien connues de l'homme de l'art telle que la technique de dialyse, filtration ou les techniques chromatographiques (HPLC par exemple, colonne échangeuses d'ions, séparation par exclusion stérique). Procédé de préparation des nanocapsules de départ Au sens de l'invention le terme nanocapsules est à distinguer de nanosphères. On entend par nanocapsules des particules constituées d'un coeur liquide ou semi-liquide à température ambiante, enrobé d'un film ou écorce solide à température ambiante, par opposition à des nanosphères qui sont des particules matricielles, i.e. dont la totalité de la masse est solide. Ainsi, lorsque les nanosphères contiennent un principe pharmaceutiquement actif, celui-ci est finement dispersé dans la matrice solide. Avantageusement, les nanocapsules de l'étape i) du procédé selon l'invention possèdent une taille moyenne inférieure à 150 nm, de préférence inférieure à 100 nm, de préférence encore inférieure à 50 nm. Ces tailles peuvent être déterminées par spectroscopie à corrélation de photons, microscopie électronique à balayage, microscopie électronique à transmission en mode cryoscopique. L'épaisseur du film ou écorce solide est avantageusement comprise entre 2 à 10 nm. Elle est égale environ au dixième du diamètre des particules. Cette épaisseur peut être calculée par bilan de masse, ou visualisée par microscopie électronique à transmission par ombrage négatif ou alors par microscopie électronique à transmission en mode cryoscopique ou par diffusion des neutrons aux petits angles. Compte-tenu de leur taille, les nanocapsules de départ sont des particules lipidiques colloïdales. L'indice de polydispersité des nanocapsules de l'invention est avantageusement compris entre 5 et 15 %. Cet indice est déterminé sur l'histogramme de taille obtenu par la méthode de spectroscopie à corrélation de photons. Les nanocapsules sont chacune constituées d'un coeur essentiellement lipidique 15 liquide ou semi-liquide à température ambiante, enrobé d'une écorce essentiellement lipidique solide à température ambiante. Au sens de l'invention, l'expression � essentiellement lipidique � signifie que le noyau et l'écorce formant les nanocapsules selon l'invention sont constituées à plus de 50 % en poids, en particulier à plus de 75 % en poids, notamment à plus de 80 % en poids, 20 voire plus de 90 %, plus particulièrement plus de 95 % de leurs poids respectifs, voire en totalité d'un ou plusieurs composés lipidiques (hydrophobes). Ces pourcentages sont appréciés en considérant comme faisant partie de la phase liquide les tensioactifs qui sont présents. Au sens de l'invention, l'expression température ambiante désigne une 25 température variant de 18 à 25 °C. Les nanocapsules de départ peuvent avantageusement être obtenues selon un procédé comprenant au moins les étapes consistant à : a) disposer d'une microémulsion formulée par inversion de phase d'une émulsion et stabilisée par au moins un système tensioactif contenant au moins un tensioactif 30 liposoluble tel que défini précédemment, b) effectuer la trempe de ladite microémulsion de manière à obtenir des nanocapsules formées d'un coeur lipidique, liquide à température ambiante et enrobé d'un film lipidique solide à température ambiante. Une microémulsion convenant tout particulièrement à la formation de nanocapsule de départ comprend au moins une phase grasse huileuse, une phase aqueuse et un système tensioactif comprenant au moins un tensioactif lipophile tels que définis précédemment, et de préférence, en outre, un tensioactif thermosensible, hydrophile et non ionique. Une telle microémulsion peut par exemple être préparée de la façon suivante. L'ensemble des constituants destinés à former la microémulsion est pesé dans un récipient. Le mélange est homogénéisé, par exemple au moyen d'un Rayneri 350 tours/min, et chauffé en augmentant progressivement la température au moyen d'un bain-marie jusqu'à une température supérieure ou égale à la température d'inversion de phase T2, c'est-à-dire jusqu'à l'obtention d'une phase blanche plus visqueuse qui indique l'obtention de l'émulsion inverse. Le chauffage est alors stoppé et l'agitation maintenue jusqu'à retour à la température ambiante, en passant par la température d'inversion de phase T1, c'est-à-dire la température à laquelle se forme la microémulsion attendue, sous la forme d'une phase transparente ou translucide. Il est à noter que lorsque la température est redescendue en dessous de la zone d'inversion de Phase en Température (Ti), on obtient à nouveau l'émulsion de départ. Cette succession d'opération est avantageusement répétée et lorsque l'on est à nouveau à la température T1 d'inversion de phase, on refroidit pour former les nanocapsules attendues. Une telle technique est plus particulièrement décrite dans les documents FR 2 916 974 et EP 1 265 698 précités. Dans le cas où il est souhaité d'encapsuler un actif notamment de nature lipophile au sein du coeur lipidique, de telles nanocapsules de départ peuvent être obtenues selon un procédé de préparation similaire, comprenant deux étapes supplémentaires entre les étapes a) et b) précitées, consistant à : - disposer d'une seconde composition, distincte de ladite microémulsion et 30 formée en tout ou partie d'au moins un actif, - mettre en présence ladite microémulsion avec ladite seconde composition dans des conditions propices à l'interaction dudit actif avec ladite microémulsion. Un tel procédé est plus particulièrement détaillé dans FR 2 916 974. Alternativement, de telles nanocapsules de départ encapsulant un actif peuvent être préparées selon un procédé de préparation comprenant au moins les étapes consistant à: - disposer d'au moins une première microémulsion à caractère eau-danshuile, stabilisée par au moins un tensioactif lipophile tel que défini précédemment et contenant au niveau de sa phase hydrophile au moins un actif, notamment à caractère hydrophile ou hydrodispersible tel que défini précédemment, - disposer d'au moins une seconde microémulsion, distincte de la première microémulsion, formulée par inversion de phase d'une émulsion et stabilisée par au moins un tensioactif thermosensible, non ionique et hydrophile tel que défini précédemment, - ajouter ladite première microémulsion dans ladite seconde microémulsion, dans des conditions propices à la formation d'une nouvelle microémulsion internalisant ledit actif au niveau de sa phase hydrophile, et - effectuer la trempe de ladite microémulsion obtenue à l'étape précédente, de manière à obtenir les nanocapsules attendues. La présente invention est illustrée par les exemples et figures suivants qui sont présentés à titre illustratif et non limitatif du domaine de l'invention. Figures : - Figure 1 : Evolution de la taille (en nm) des nanocapsules obtenues selon le procédé de préparation de l'invention, en fonction du volume de NaOH (1N) ajouté (en �l), en présence d'une quantité constante de sérum albumine humaine. - Figure 2 : Evolution de la taille (en nm) des nanocapsules obtenues selon le 25 procédé de préparation de l'invention, en fonction du volume de NaOH (10N) ajouté (en �l), en présence d'une quantité constante de sérum albumine humaine. - Figure 3 : Evolution de la taille (en nm) des nanocapsules obtenues selon le procédé de préparation de l'invention, en fonction du temps de réaction et pour un volume de NaOH (10N) fixe, de 500 �l), en présence d'une quantité constante de sérum albumine 30 humaine. - Figure 4 : Evolution du potentiel zeta (en mV) des nanocapsules obtenues selon le procédé de préparation de l'invention, en fonction du volume de polylysine ajouté (en �l). Dans ce qui suit, �LNC � signifie � Lipidic Nanocapsules � ou �nanocapsules lipidiques �. Exemple 1 : Préparation de nanocapsules fonctionnalisées par de l'albumine sérique humaine 1. Préparation d'une microémulsion non chargée en actif On réalise 5 g d'une émulsion contenant 75 mg de Lipoïd S75-3�, 504 mg de Labrafac WL 1349� lipophile, 504 mg de Solutol HS�, 15,383 g d'eau et 88 mg de chlorure de sodium. L'ensemble est réuni dans un même bécher et placé sous agitation magnétique. On chauffe jusqu'à atteindre une température de 85 °C. Toujours sous agitation magnétique, on laisse refroidir le système jusqu'à une température de 60 °C. Ces cycles thermiques (entre 85 °C et 60 °C) sont réalisés trois fois de façon à obtenir des microémulsions de mieux en mieux structurées. Le système est alors maintenu sous sa forme microémulsion en le stabilisant à une température comprise dans (ou au proche voisinage) de la Zone d'Inversion de Phase, en l'espèce 65 °C. 2. Obtention de LNC La microémulsion stabilisée à la température d'inversion de phase est refroidie soit brutalement soit diluée avec de l'eau froide de manière à former une suspension de LNC. 3. Fixation de l'albumine sérique humaine 10 mL de nanocapsules dites LNC sont incubés pendant 10 minutes, sous agitation, en présence de NaOH (1N) (volume variable de 0 à 2000�1). Ensuite, on ajoute 500 �l d'une solution de sérum albumine humaine à 5 % en masse. On laisse réagir 15 minutes, puis on neutralise la solution avec une solution d'acide chlorhydrique de concentration égale à 1 M, le volume dépendant du volume de soude utilisée au départ. Les résultats obtenus sont indiqués en Figure 1. Exemple 2 : Préparation de nanocapsules fonctionnalisées par de l'albumine sérique humaine Les LNC fonctionnalisées sont préparées par analogie avec le procédé décrit en exemple 1, en utilisant cette fois une solution de NaOH (10N). Les résultats obtenus sont indiqués en Figure 2. Exemple 3 : Préparation de nanocapsules fonctionnalisées par de l'albumine sérique humaine Les LNC fonctionnalisées sont préparées par analogie avec le procédé décrit en 10 exemple 2, en faisant varier cette fois le temps de réaction de 0 à 30 minutes. Les résultats obtenus sont indiqués en Figure 3. Exemple 4: Préparation de nanocapsules fonctionnalisées par de la polylysine FITC 15 On procède par analogie avec le mode de préparation de l'exemple 1, en faisant cette fois varier le volume de polylysine ajouté de 0 à 200 �l. On mesure le potentiel zeta en fonction du volume de polylysine ajouté. Les résultats obtenus sont indiqués en Figure 4. Il apparaît très clairement une dépendance entre le potentiel zeta des 20 nanocapsules lipidiques modifiées et la quantité de polylysine introduite dans le mélange réactionnel, c'est-à-dire une relation entre la quantité de polylysine fixée sur les nanocapsules lipidiques et le potentiel zeta de ces dernières, ce qui conditionne leur aptitude à fixer des molécules hydrophiles chargées négativement. De plus, il est possible de suivre au fur et à mesure des étapes de production la 25 quantité de protéines fixée sur les nanocapsules lipidiques. Le tableau I ci-dessous présente les résultats de dosage des protéines avant et après l'étape de dialyse. Le dosage est basé sur la méthode �BCA. Le �BCA est une méthode de dosage spectrophotométrique, basée sur l'absorption de la lumière par un complexe formé par les protéines à doser et le réactif 30 �BCA. Cette méthode requiert l'utilisation d'une gamme étalon réalisée à partir d'une solution de protéines de concentration connue (�BCA de PIERCE). Tableau I Echantillons n° Concentration en Echantillons n° Concentration en protéines avant protéines après dialyse en .ig par mL dialyse en .ig par mL 1 184,28 1 310 2 371,42 2 281,42 3 601,42 3 448,57 4 642,85 4 622,85 1228,57 5 530 6 1002,85 6 504,28 7 1274,28 7 982,85 Exemple 5 : Utilisation de nanocapsules fonctionnalisées par de la polylysine FITC pour la complexation d'ARNsi 5 Les nanocapsules fonctionnalisées par de la polylysine FITC sont préparées par analogie avec le mode de préparation de l'exemple 1 en présence de 0,5 �l de LNCs de 50 nm et 400 gl de PLL-FITC. L'ensemble est dialysé, filtré et son pH ajusté à 7,4. Ces particules fonctionnalisées par de la polylysine FITC sont ensuite mises en présence avec différents volumes (2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15 et 20 �l) d'ARNsi (20 pb soit 16 000 Daltons) de concentration 0,001 mmol/ml. L'ensemble des mélanges ainsi préparés est caractérisé sur gel électrophorétique. A des fins comparatives, il est également réalisé le gel électrophorétique de l'ARNsi seul, et celui d'un standard de PCR 20 pb représentatif de bas poids moléculaire. On note que, pour tous les mélanges formés à partir de, respectivement, de 2�l à 15 gl de la solution d'ARNsi, un unique spot figure sur le gel électrophorétique, correspondant à l'ARNsi complexé. En revanche, au-delà de 15 �l, on ne constate plus qu'une complexation partielle de l'ARNsi. Il apparaît donc qu'au-delà de 15 �l d'ARNsi (0,001 mmole/ml) la 20 capacité de fixation des LNC est dépassée. REVENDICATIONS1. Capsule de type coeur/écorce lipidique solide fonctionnalisée en surface avec au moins un composé contenant au moins une fonction amine, caractérisé en ce que l'architecture coeur/écorce lipidique est à l'échelle nanométrique et en ce que ledit composé est lié de manière covalente via une réaction de transacylation à ladite écorce lipidique solide. 2. Capsule selon la revendication précédente dans laquelle le composé aminé greffé en surface de celle-ci est par ailleurs lié de manière non covalente à une molécule d'intérêt. 3. Capsule selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle le composé aminé et/ou la molécule d'intérêt est de nature protéique, peptidique, nucléique, polymérique ou inorganique, voire organométallique. 4. Capsule selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle le composé aminé est une protéine choisie en particulier parmi l'albumine, la gélatine, les polypeptides, en particulier l'acide polyaspartique, la polyarginine, la polylysine ou un polymère synthétique, en particulier un polyéthylène imine. 5. Capsule selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 dans laquelle le composé aminé et/ou la molécule d'intérêt est une molécule d'acide nucléique, en particulier un ARNsi. 6. Capsule selon l'une quelconque des revendications précédentes dont l'écorce lipidique comprend au moins un tensioactif liposoluble. 7. Capsule selon la revendication précédente dans laquelle le tensioactif liposoluble est choisi parmi les phospholipides, les lécithines et les phosphatidylcholines. 8. Capsule selon l'une quelconque des revendications précédentes, dont l'écorce lipidique solide est formée d'au moins un système tensioactif comprenant un tensioactif lipophile et, en outre, un tensioactif thermosensible, non ionique et hydrophile. 9. Capsule selon la revendication précédente dans laquelle le tensioactif thermosensible, non ionique et hydrophile est choisi parmi les phospholipides, les esters d'acide gras de sorbitol polyéthoxylé, les esters de polyéthylène glycol d'acide gras, des acides gras polyéthoxylés, des éthers d'alcool gras polyoxyéthylénés, des éthers nonphényles polyoxyéthylénés, des éthers hydroxylphényle polyoxyéthylénés et un 2-hydroxystéarate polyéthylène glycol. 10. Capsule selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle le composé aminé est greffé en surface de celle-ci via un procédé de transacylation à partir d'une lécithine, présente dans l'écorce lipidique. 11. Capsule selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant un coeur lipidique liquide. 12. Capsule selon la revendication précédente dans laquelle le coeur lipidique liquide comprend au moins une phase grasse huileuse formée d'au moins un corps gras liquide ou semi-liquide, en particulier au moins un triglycéride, un ester d'acide gras, ou un de leurs mélanges. 13. Capsule selon l'une quelconque des revendications précédentes dont l'architecture coeur/écorce lipidique à l'échelle nanométrique encapsule au moins un actif dans le coeur et/ou l'écorce. 14. Procédé utile pour la fonctionnalisation de nanocapsules à écorce lipidique solide, ledit procédé comprenant au moins les étapes consistant à : i) disposer de nanocapsules à écorce lipidique solide, ii) mettre en contact lesdites nanocapsules avec une solution aqueuse alcaline, de manière à activer leur surface pour une réaction de transacylation, iii) mettre en présence le milieu ii) avec au moins un composé contenant au moins une fonction amine, pour former, par transacylation, lesdites capsules attendues et, le cas échéant, iv) neutraliser les capsules fonctionnalisées ainsi obtenues, et v) isoler lesdites capsules fonctionnalisées. 15. Procédé selon la revendication précédente dans lequel le composé aminé est un composé choisi parmi ceux mentionnés en revendications 3 à 5. 16. Procédé selon l'une des revendications 14 ou 15, dans lequel la réaction de transacylation met en oeuvre une alcalinisation par une solution de soude. 17. Capsules susceptibles d'être obtenues par le procédé selon l'une des revendications 14 à 16. 18. Utilisation d'au moins une capsule selon l'une quelconque des revendications 1 à 13 pour la préparation d'une composition à intérêt thérapeutique, cosmétique ou nutracetique. 19. Composition contenant au moins une capsule selon l'une quelconque des 5 revendications 1 à 13 en association avec au moins un véhicule physiologiquement acceptable.