Brevet FR2937337A1 — publié le 20100423

La présente invention est dans le domaine cosmétique, et plus particulièrement dans la cosmétique appliquée à la peau. Elle s'inscrit plus généralement dans le cadre de la prévention et du traitement du vieillissement chronologique et du photovieillissement de la peau. L'invention repose sur l'identification, par les inventeurs, de gènes spécifiquement modulés au sein du derme et de l'épiderme en réponse à la DHEA (Dehydoépiandrostérone). Ces gènes constituent donc une signature génique. L'invention concerne tout particulièrement diverses utilisations de cette signature génique caractéristiques de l'effet de la DHEA sur la peau. Le vieillissement est un processus biologique complexe qui s'accompagne, au niveau de la peau, de modifications morphologiques sous l'action combinée de facteurs intrinsèques et extrinsèques. Avec l'âge, la qualité de l'architecture de la peau se détériore sous l'action d'effets synergiques dus au vieillissement chronologique, à des facteurs environnementaux, au photovieillissement et au déficit oestrogénique caractéristique de la ménopause. Les modifications de la peau induites par le vieillissement hormonal s'apparentent à celles observées au cours du vieillissement chronologique : augmentation de la sécheresse de la peau, perte d'élasticité et de fermeté et augmentation du nombre de rides. Tous ces changements sont accélérés par la perte de production des stéroïdes sexuels (Punnonen et al, 1987, Jemec and Serup, 1989). La Dehydoépiandrostérone (DHEA) est le stéroïde dont la concentration plasmatique est la plus élevée chez l'homme et la femme. La zone réticulée de la corticosurrénale produit de grandes quantités de précurseurs inactifs, à savoir: la forme libre DHEA et la forme sulfoconjuguée (DHEA-S). Ces deux formes sont en interconversion métabolique permanente. Ces précurseurs sont ensuite convertis en androgènes et oestrogènes actifs dans les tissus périphériques (Labrie et al, 1988; Labrie, 1991; Labrie et al, 2005). La DHEA est essentiellement un précurseur androgénique. En effet, une étude récente, effectuée chez la femme ménopausée, a montré qu'après une administration exogène de DHEA, cette dernière était transformée préférentiellement en androgènes plutôt qu'en oestrogènes (Labrie et al, 2007). La concentration plasmatique de la DHEA et de ses dérivés évolue au cours de la vie. Les concentrations les plus élevées s'observent entre 18 et 45 ans avec une décroissance avec l'âge. La décroissance la plus importante est observée d'une part aux alentours de 20-30 ans et d'autre part vers 50-60 ans avec très peu de changements au-delà de 60 ans. II est intéressant de noter que dans la tranche d'âge 50-60 ans, la concentration de DHEA s'est effondrée d'environ 70% par rapport aux pics observées chez les 20-30 ans (Labrie et al, 1997a). Ainsi, cette diminution de la sécrétion de la DHEA montre le rôle important de la DHEA dans les nombreux problèmes associés à l'âge et la ménopause. Chez la femme âgée après la ménopause, qui montre une diminution des concentrations plasmatiques des oestrogènes et des androgènes, l'administration topique ou systémique de la DHEA bénéficie donc d'un très grand intérêt dans la lutte contre le vieillissement. De manière encore plus intéressante, la DHEA pourrait être administrée plus tôt si on prend en considération sa chute assez précoce chez la femme au cours du vieillissement. Des études antérieures ont permis de montrer qu'une supplémentation de DHEA exogène à des taux physiologiques permet la biosynthèse d'androgènes et d'oestrogènes. Toutes les enzymes de la stéroïdogénèse sont donc présentes dans la peau humaine produisant ainsi la machinerie enzymatique nécessaire à la production locale de stéroïdes sexuels actifs (Dihydrotestostérone (DHT); 17R-estradiol (E2)) à partir du précurseur inactif de la DHEA sécrété par la corticosurrénale. Les androgènes et oestrogènes actifs ainsi synthétisés dans les tissus périphériques spécifiques exercent leur action au sein des mêmes cellules responsables de leur formation avec un relargage minime des stéroïdes actifs dans la circulation systémique (Labrie et al, 1991; Gingras et al, 2003; Labrie et al, 2005). Dans une étude récente (Labrie et al, 2007), la quantification des niveaux sériques des stéroïdes a montré une augmentation de la DHEA et de ses métabolites après application topique de DHEA chez des femmes ménopausées. Un plateau sérique a été atteint dès une semaine après administration montrant un retour à des taux physiologiques comparables à ceux observés chez la femme non ménopausée. Des études in vitro et in vivo ont montré que la DHEA et le DHEA-S étaient impliqués dans la régulation et la synthèse du collagène et des métalloprotéinases de la matrice extracellulaire sur des fibroblastes dermiques (Lee et al, 2000) et sur la peau humaine (Shin et al, 2005). L'effet de la DHEA sur la production de sébum a été montré de façon évidente dans plusieurs études et plus particulièrement chez les sujets âgés de plus de 70 ans généralement en hypo séborrhée. (Labrie et al, 1997b). Ce résultat est très probablement relié au fait que les glandes sébacées contiennent toutes les enzymes de la stéréoïdogénèse nécessaires à la transformation de la DHEA en DHT, androgène majeur qui stimule l'activité de la glande sébacée (Labrie et al, 2000). Enfin, une étude randomisée en double aveugle, impliquant 280 sujets de 60 à 79 ans stratifiés selon le sexe et l'âge, a montré que l'administration per os de 50 mg par jour de DHEA versus placebo pendant 1 an (Beaulieu et al, 2000) provoquait des effets cutanés suggérant que la DHEA pourrait avoir un effet bénéfique sur l'atrophie cutanée, les rides, la sécheresse de la peau et les taches pigmentaires associées au vieillissement chronologique ou au photovieillissement. De nombreux brevets ont été déposés en vue d'applications cosmétiques et dermatologiques de la DHEA et de ses dérivés dans le domaine de la cosmétique et de la dermatologie, ils concernent des compositions cosmétiques ou dermatologiques les contenant pour réguler la pigmentation de la peau et des cheveux et/ou pour prévenir ou traiter le vieillissement de la peau (atrophie dermique, peau sèche, éclat de la peau, rides, photovieillissement ...). Cependant, aucune étude n'a porté sur les aspects moléculaires de l'effet de la DHEA sur la peau, ni sur l'exploitation de ces aspects, notamment dans la recherche de molécules mimétiques de la DHEA. En effet, jusqu'à présent, très peu de données sont disponibles concernant les modifications géniques induites par la DHEA sur la peau. Aussi, l'objectif des présents inventeurs a été de rechercher si une augmentation des taux de DHEA circulants pouvait avoir une signature au niveau génique. Cette étude a révélé que l'application topique de DHEA modifiait l'expression de gènes dans les deux compartiments de la peau, à savoir le derme et l'épiderme. S'il était soupçonné que le traitement par la DHEA induisait des modification au niveau dermique, la demanderesse a découvert de façon surprenante et inattendue que l'application topique de DHEA provoquait des modifications d'expression génique qui ne se limitait pas au derme mais impliquait aussi l'épiderme. L'étude a également permis de mettre en évidence les gènes dont l'expression était modifiée lors de l'application topique de DHEA et tout particulièrement les gènes SPARC, NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G. La présente invention est donc sous-tendue par l'identification de cette signature génique caractérisant l'effet de l'application topique de DHEA. Les 13 gènes constituant cette signature génique, à savoir NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBAIGBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G, sont appelés dans ce qui suit, les gènes de l'invention. Les résultats obtenus par les inventeurs ont en effet permis de mettre en évidence le fait que la DHEA pourrait s'opposer au vieillissement de la peau dû à l'âge, en agissant simultanément sur les deux compartiments de la peau, au niveau du derme en stimulant la biosynthèse et le dépôt de collagène, et au niveau de l'épiderme en modulant la différentiation des kératinocytes. Grâce à cette connaissance de la signature génique de la DHEA, la présente demande porte plus spécifiquement sur des méthodes de caractérisation de l'effet, sur la peau d'un sujet, d'un traitement par une molécule donnée, sur des méthodes de criblage de molécules mimant l'effet de la DHEA sur la peau et sur diverses méthodes visant à déterminer l'efficacité d'un traitement sur la peau. La présente invention porte également sur un procédé de criblage de molécules mimétiques de la DHEA qui moduleraient l'expression de tout ou partie des gènes décrits dans la présente invention. Cette invention s'inscrit dans le cadre de la prévention ou du traitement du vieillissement chronologique ou photovieillissement de la peau. La signature d'expression génique en réponse à la DHEA, tout particulièrement au niveau de l'épiderme, identifiée par les inventeurs, constitue en effet un avantage évident pour mesurer l'effet d'une molécule mimétique de la DHEA sur la peau. Selon un premier aspect, l'invention concerne une méthode permettant de caractériser l'effet d'un traitement par une molécule donnée sur la peau d'un patient. Afin de caractériser l'effet obtenu par ce traitement, il est observé la variation que ce traitement engendre sur l'expression d'un gène choisi parmi les gènes constituant la signature génique de la DHEA, telle qu'elle a été mise en évidence par les inventeurs, c'est-à-dire un gène choisi parmi les gènes SPARC, NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MTIX, GBAIGBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G. Une telle méthode permet notamment de déterminer si une molécule donnée produit sur la peau d'un sujet un effet semblable, similaire ou différent de l'effet obtenu par la DHEA. Selon cette méthode, la variation dans le taux d'expression de l'un des gènes de l'invention est évaluée au niveau de la peau, notamment au sein du derme et de l'épiderme, en réponse au traitement par la molécule donnée. De préférence, ladite méthode comprend l'évaluation de la variation de l'expression d'au moins deux gènes parmi les gènes constituant la signature moléculaire de la DHEA, c'est- à-dire au moins deux gènes choisis parmi SPARC, NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBAIGBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G. De préférence, la méthode comprend l'évaluation de la variation d'expression d'au moins 3 gènes, voire d'au moins 5 gènes parmi les gènes de l'invention, ladite variation étant en réponse au traitement par la molécule donnée. Selon une mise en oeuvre préférée de l'invention, la méthode comprend l'évaluation de la variation d'expression d'au moins 8 gènes parmi les gènes de l'invention. Selon une autre mise en oeuvre, la variation du niveau d'expression, en réponse au traitement, des treize gènes de l'invention est examinée. Selon d'autres mises en oeuvre préférées de la méthode, le ou les gènes dont la variation du niveau d'expression est examinée, sont choisis parmi les gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBAIGBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G. De préférence, la méthode comprend l'évaluation de la variation de l'expression d'au moins un gène, de deux ou bien de trois gènes, choisis parmi les gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G. Les gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G sont en effet les gènes exprimés principalement dans l'épiderme de la peau, et appelés dans ce qui suit les gènes � épidermiques �. Des gènes particulièrement préférés dans le cadre de l'invention sont les gènes SPARC, 20 SERPINB3, JAG1, LEP7 et SPRR2G, et tout particulièrement les gènes SERPINB3, JAG1, LEP7 et SPRR2G. Selon un autre mise en oeuvre encore, la méthode comprend d'une part l'évaluation de la variation d'expression du gène SPARC en réponse au traitement, d'autre part l'évaluation de la variation d'expression d'au moins un, voire deux ou trois gènes choisis parmi les 25 gènes dits � épidermiques �, à savoir NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBAIGBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G, en réponse au traitement. Des combinaisons plus particulièrement envisagées dans le cadre de la présente invention sont notamment : au moins un gène parmi les gènes ERBP, JAG1 et EFNA1 combiné à au moins un gène parmi les gènes LEP7, KRT1B et SPRR2G et à au moins un gène parmi les 30 gènes SERPINB3 et CLDN8, par exemple la combinaison ERBP, SPRR2G et SERPINB3 ou la combinaison EFNA1, SPRR2G et SERPINB3 ou bien : ERBP, LEP7 et SERPINB3, ou bien : ERBP, SPRR2G et CLDN8, ou bien par exemple : EFNA1, LEP7 et SERPINB3. De préférence, dans le cadre de la présente invention, la variation d'expression génique est observée spécifiquement au sein de l'épiderme du sujet. Les inventeurs ont en effet mis en lumière de manière parfaitement inattendue que la DHEA avait un effet au niveau de l'épiderme de la peau traitée. De préférence, la méthode comprend l'évaluation de la variation d'expression d'un gène au sein de l'épiderme, en réponse au traitement par une molécule donnée. Dans ce cas, le gène, dont l'expression est analysée, est de préférence un gène choisi parmi les gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G. Des gènes particulièrement préférés dans le cadre de l'invention sont les gènes SERPINB3, JAG1, LEP7 et SPRR2G. Alternativement, la méthode de l'invention peut comprendre l'évaluation de la variation d'expression d'un gène au sein du derme, en réponse au traitement par une molécule donnée. Dans un tel cas, le gène dont l'expression est analysée, est de préférence le gène SPARC. La molécule dont la présente invention permet de caractériser les effets sur la peau, peut être toute molécule chimique, connue ou nouvelle, seule ou en combinaison. II peut s'agir notamment de molécules déjà utilisées pour des applications topiques mais dont l'effet n'a jamais été caractérisé au niveau génique. II peut également d'agir de molécules générées par chimie combinatoire, et dont la structure n'est pas nécessairement élucidée. La molécule à tester peut être aussi bien une molécule naturelle que synthétique. II peut s'agir par exemple d'une molécule naturellement extraite de plantes. II peut s'agir également d'un complexe de molécules ou d'une association. En effet, la méthode selon la présente invention permet également de caractériser les effets d'un traitement effectué à l'aide de plusieurs molécules associées entre elles. De préférence, il s'agit de molécules déjà autorisées pour des applications topiques ou considérées comme sans danger pour la peau. Dans le cadre de la présente invention, le traitement par une molécule donnée consiste de préférence en l'application topique de ladite molécule, sur la peau du sujet. La molécule à caractériser est de préférence conditionnée sous forme d'une crème, d'une lotion, d'un gel ou d'une huile qui est appliquée sur la peau. II est également envisageable que le traitement consiste en l'application d'un patch, comprenant la molécule à caractériser, ledit patch restant en place plusieurs minutes ou heures, ou bien l'application d'un masque. D'autres techniques ou conditionnements permettant d'appliquer la molécule sur la peau et éventuellement de favoriser sa pénétration, sont bien connues de l'homme du métier. Selon une mise en oeuvre préférée de la présente invention, la molécule dont on cherche à caractériser les effets sur la peau, est appliquée au moins un fois par jour, mais préférentiellement au moins deux fois par jour. Elle peut également être appliquée trois fois par jour. La durée du traitement n'est pas fixée dans le cadre de l'invention ; cependant, afin d'être en mesure de caractériser de manière fiable les variations d'expression d'un ou des gènes de l'invention, il est préférable que le traitement dure au moins une semaine, de préférence au moins deux semaines avant de procéder à l'évaluation de la variation d'expression du ou des gènes choisis, induite par la molécule à caractériser. Dans le cadre de l'invention, il est préféré des traitements d'une durée d'au moins un mois, de préférence au moins cinq semaines, voire au moins dix, douze, treize ou quinze semaines ou bien un trimestre. Toute zone de peau peut être traitée afin de caractériser l'effet d'un traitement selon la présente invention. Il s'agit de préférence du front, du visage, du décolleté, des faces dorsales des bras et avant-bras, des faces externes des cuisses et/ou des faces externes des jambes. Toute autre zone peut également avantageusement servir dans une méthode d'évaluation selon la présente invention. De préférence, la zone choisie est une zone à faible pilosité. Le sujet, dans le cadre de la présente invention, est de préférence un être humain, un 20 homme, une femme ou un enfant. II est particulièrement préféré que ledit sujet soit une personne âgée d'au moins 30 ans, de préférence d'au moins 45 ans. En effet, dans la mesure où la présente invention consiste notamment en l'identification de molécules dont l'effet sur la peau est comparable à celui de la DHEA, le sujet est de préférence une personne commençant à subir une baisse importante de production de 25 DHEA endogène. Les gènes constituant la signature génique sont en effet les gènes spécifiquement modulés par l'application de DHEA exogène, mais également par la production de DHEA endogène. Par conséquent, un sujet dans le cadre de la présente invention est de préférence une personne subissant un déficit en DHEA produite de manière endogène. 30 Dans ce contexte, le sujet est tout préférentiellement une femme et plus particulièrement une femme au seuil de la ménopause ou bien déjà ménopausée, par exemple une femme d'au moins 55 ans ou d'au moins 60 ans. Dans la méthode de l'invention telle que décrite précédemment, la variation de l'expression du ou des gènes choisis est quantifiée par analyse de l'ARNm transcrit au niveau de l'épiderme et/ou au niveau du derme. Comme vu précédemment, l'analyse transcriptionnelle est de préférence effectuée au niveau de l'épiderme traité par la molécule dont on cherche à caractériser les effets. Selon un mode de réalisation préféré de la méthode de l'invention, la variation du niveau de l'expression du gène choisi est normalisée par référence à l'expression d'au moins un gène choisi parmi Atp5o, les gènes codant pour la r3-actine et la X32-microglobuline, les gènes codant pour les protéines ribosomales S28 et S9, le gène codant pour la protéine ribosomale L13A, et le gène codant pour le GAPDH. L'expression des gènes est de préférence quantifiée par analyse de l'ARN messager (ARNm) transcrit au sein du derme et de l'épiderme, ou bien au sein de l'épiderme uniquement, ou au sein du derme uniquement. La quantification de l'ARNm transcrit est réalisée par exemple à l'aide de la technique de Northern Blot, dot blot, RT-PCR, hybridation sur puces à ADN, méthode SAGE ou par utilisation de cartes microfluidiques. D'autres techniques permettant la quantification de l'ARNm peuvent bien entendu être utilisées. Toutes ces techniques sont bien connues de l'homme du métier. Par exemple, des amorces pourront être utilisés pour l'analyse par RT-PCR de l'expression génique ayant les séquences illustrées dans le tableau 1 (séquences des amorces � Forward � et � Reverse �). II est également possible de quantifier le taux de transcription des gènes par l'analyse du taux de traduction et donc la quantification de protéines produites. Des techniques appropriées à cet objectif sont également bien connues de l'homme du métier. Par conséquent la signature moléculaire mise en évidence par les inventeurs se reflète également au niveau des protéines codées par les 13 gènes de l'invention. Quand l'analyse du taux de transcription des gènes de l'invention est réalisée au sein de l'épiderme, des prélèvements d'épiderme ou de peau sont réalisés par exemple par la méthode décrite dans Marionnet C. et al, 2003, (prélèvements au dermatome, qui est un instrument permettant de prélever des bandes de peau très fines, de quelques dixièmes de millimètres d'épaisseur) ou toutes autres méthodes de prélèvement (biopsies, punch, kératome ou micro-kératome...). Quand l'analyse du taux de transcription des gènes de l'invention est réalisée au niveau global du derme et de l'épiderme, les prélèvements sont de préférence réalisés par biopsie, ou toute autre technique bien connue de l'homme du métier. Selon un second aspect de l'invention, la présente demande concerne également une méthode d'évaluation de l'effet réparateur, ou effet rajeunissant, d'une molécule sur la peau d'un sujet. A cette fin, la méthode comprend la caractérisation d'un traitement par ladite molécule selon l'une des mises en oeuvre de la méthode décrite précédemment. La molécule peut être tout actif, extrait naturel, ou combinaison d'actifs par exemple. Par molécule, dans le cadre de cette invention, on entend aussi bien un ingrédient ou un actif sous une forme plus ou moins purifiée, présentant une activité intrinsèque in vitro ou in vivo, qu'une formulation comprenant un ou plusieurs de ces ingrédients et un support et des adjuvants adaptés à l'application visée. Par effet réparateur ou effet rajeunissant, ou bien effet � anti-âge �, on entend un effet identique ou similaire à l'effet obtenu par l'application de la DHEA, c'est-à-dire notamment une diminution des rides (profondeur et nombre), une peau plus ferme, présentant une meilleure élasticité, une meilleure hydratation, présentant un aspect extérieur plus jeune que son âge biologique. En effet, les présents inventeurs, en identifiant la signature génique caractéristique de l'effet de la DHEA, ont ainsi identifié les gènes dont la variation conduit aux effets � rajeunissants � ou � anti-âge � observés et déjà décrits obtenus avec l'application topique de DHEA. Selon cet aspect de l'invention, l'évaluation de l'effet réparateur d'un traitement par une molécule donnée, est considérée comme positive, c'est-à-dire que ledit traitement a en effet un effet réparateur, si la variation d'expression du gène choisi parmi les gènes de l'invention, est une répression de l'expression si le gène est choisi parmi les gènes NOL3, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBAIGBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G ou une stimulation de l'expression si le gène est choisi parmi les gènes SPARC, SERPINB3 et ERBP, de préférence parmi les gènes SERPINB3 et ERBP. En effet, si le traitement par la molécule à tester est une répression de l'expression d'un gène choisi parmi les gènes NOL3, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G ou une stimulation de l'expression d'un gène choisi parmi les gènes SPARC, SERPINB3 et ERBP, de préférence parmi les gènes SERPINB3 et ERBP, alors l'effet obtenu par le traitement est de même nature que le traitement avec la DHEA, tel que décrit par exemple dans la section expérimentale de la présente demande. Afin de parvenir à une évaluation fiable, il est préférable d'analyser les variations d'expression d'au moins 2, 3 voire 5 gènes parmi les gènes mentionnés De préférence, l'évaluation est considérée comme positive si la variation d'expression induite par la molécule donnée est de même nature que la variation induite par la DHEA pour au moins deux gènes choisis parmi les gènes de l'invention, notamment parmi les gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G, de préférence pour au moins cinq ou huit gènes, et de préférence pour l'ensemble des gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G, ou bien l'ensemble des treize gènes de l'invention. De préférence, la variation observée (répression ou stimulation de l'expression, selon le gène considéré choisi) a une amplitude statistiquement significative, de préférence d'au moins 10%, de préférence d'au moins 20%, par rapport au niveau d'expression basal du gène choisi. De préférence, la variation observée pour l'expression du gène choisi est d'au moins 30%. La variation du niveau de l'expression du gène choisi peut être normalisée par référence à l'expression d'au moins un gène choisi parmi Atp5o, les gènes codant pour la 3-actine et la 82-microglobuline, les gènes codant pour les protéines ribosomales S28 et S9, le gène codant pour la protéine ribosomale L13A, et le gène codant pour le GAPDH. Selon une mise en oeuvre en préférée, la variation observée dans le niveau d'expression du gène choisi est au moins égale à celle observée avec la DHEA, dans des conditions de traitement identiques. Selon une mise en oeuvre préférée de la méthode d'évaluation de l'effet réparateur, ou effet rajeunissant, d'une molécule sur la peau d'un sujet, le sujet en question est une personne connaissant un déficit en DHEA produite de manière endogène, de préférence une personne âgée d'au moins 30 ans, de préférence d'au moins 40 ou 45 ans. Il est préféré que ladite personne soit âgée d'au moins 50, 55 ou 60 ans. Un sujet tout particulièrement préféré dans le cadre de l'invention, pour mettre en oeuvre la méthode d'évaluation décrite, est une femme ménopausée ou sur le point de l'être. Grâce à cette méthode, il est ainsi possible d'évaluer la capacité de certains traitements, notamment des compositions cosmétiques pour application topique sur la peau à réaliser un � rajeunissement � de la peau. Par � rajeunissement � de la peau, on entend principalement l'amélioration de la fermeté et de l'élasticité de la peau telle que l'aspect extérieur et la résistance aux agressions de la peau redevient plus proche l'aspect et de la résistance d'une peau plus jeune. Du fait que les inventeurs ont déterminé une signature représentative de l'effet � anti-âge � de la DHEA, il est également possible, par les méthodes d'évaluation de la présente demande, d'objectiver l'action bénéfique d'un traitement, notamment d'un produit cosmétique, par exemple d'une composition cosmétique. Les méthodes d'évaluation décrites plus haut peuvent en effet être utilisées dans un protocole de test permettant de déterminer les produits susceptibles d'être qualifiés de � actifs réparateurs pour la peau � ou bien � ayant un effet anti-âge � ou � effet de rajeunissement de la peau �. Par ailleurs, au moyen de ce test, il est possible de promouvoir le produit auprès de consommateurs, en mettant en avant les résultats obtenus avec ce produit dans les méthodes d'évaluation décrites dans la présente invention. L'évaluation de l'effet � anti-âge � sera basée sur l'étude de l'expression des gènes de l'invention ou des protéines encodées par ces gènes. La présente invention fournit donc également une méthode permettant de recommander un produit en signalant son effet dans un protocole de test constitué par une méthode d'évaluation telle que décrite précédemment. L'invention a donc également pour objet une méthode pour la promotion d'un produit cosmétique consistant à faire état d'une efficacité, action ou propriété dudit produit démontrée par au moins un test opéré tel que décrit précédemment. Une telle promotion du produit pourra se faire par n'importe quel canal de communication. Elle pourra être faite notamment par la vendeuse, directement sur le point de vente, par la radio et la télévision, notamment dans le cadre de spots publicitaires. Elle pourra être faite également par le canal de la presse écrite, ou par le biais de tout autre document, en particulier à des fins publicitaires (prospectus). Elle pourra se faire également par Internet, ou par tout autre réseau informatique adéquat. Elle pourra être faite également directement sur le produit, notamment sur son packaging ou sur toute notice explicative qui peut lui être associée. Toujours grâce à l'identification par les inventeurs, d'une signature moléculaire génique de l'effet d'un traitement par la DHEA, la présente invention concerne également, selon un autre aspect, un procédé de criblage visant à identifier des molécules ayant un effet réparateur ou rajeunissant sur la peau. En effet, par l'observation des variations d'expression d'au moins un des gènes de l'invention, il est possible de caractériser l'effet du traitement par la molécule à cribler et de le comparer avec l'effet du traitement par la DHEA. Un tel procédé comprend donc une étape de caractérisation de l'effet des molécules à cribler sur la peau d'un sujet selon la méthode de caractérisation correspondant au premier aspect de la présente invention. Par le biais de ce procédé, il est ainsi possible d'identifier différentes molécules qui soient mimétiques de la DHEA, c'est-à-dire qu'elles provoquent sur la peau, un effet moléculaire très semblable à celui provoqué par la DHEA, notamment qu'elles entraînent des variations identiques ou similaires dur le niveau d'expression des gènes de l'invention, et plus particulièrement les gènes � épidermiques � de l'invention, à savoir NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G. Comme explicité plus haut, l'effet réparateur ou rajeunissant de la molécule criblée, ou effet � anti-âge �, est considéré comme avéré si la molécule induit, au niveau de la peau du sujet, une variation de l'expression de l'un des gènes de l'invention qui soit de même nature que la variation de l'expression du même gène induite par la DHEA. Par � variation de l'expression de même nature que la variation de l'expression induite par la DHEA �, on entend une répression de l'expression si le gène choisi est le gène NOL3, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B ou SPRR2G et une stimulation de l'expression si le gène choisi est le gène SPARC, SERPINB3 ou ERBP, de préférence le gène SERPINB3 ou ERBP. De préférence, l'effet réparateur est considéré comme avéré si la variation d'expression induite par la molécule donnée est de même nature que la variation induite par la DHEA pour au moins deux gènes choisis parmi les gènes de l'invention, notamment parmi les gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G, de préférence pour au moins cinq ou huit gènes, et de préférence pour l'ensemble des gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G, ou bien l'ensemble des treize gènes de l'invention. De préférence, l'amplitude de la variation induite par la molécule à cribler sur le niveau d'expression d'un gène de l'invention, est statistiquement significative, de préférence, cette amplitude est d'au moins 10% du niveau d'expression basal (avant traitement), de préférence d'au moins 20%. Selon une mise en oeuvre préférée, l'amplitude de la variation est d'au moins 30%. La variation du niveau de l'expression du gène choisi peut être normalisée par référence à l'expression d'au moins un gène choisi parmi Atp5o, les gènes codant pour la R-actine et la X32-microglobuline, les gènes codant pour les protéines ribosomales S28 et S9, le gène codant pour la protéine ribosomale L13A, et le gène codant pour le GAPDH. Selon une situation préférée, la variation du niveau d'expression d'au moins un gène de l'invention induite par une molécule criblée est au moins égale voire supérieure à la variation du niveau d'expression du même gène induit par le DHEA, dans les mêmes conditions de traitement. La variation du niveau d'expression obtenue par un traitement avec de la DHEA est plus particulièrement explicitée dans la partie expérimentale de la présente demande. Le procédé de l'invention peut également être mis en oeuvre pour cribler des combinaisons de différentes molécules, afin de déterminer une combinaison dont les effets s'apparentent le plus aux effets induits par la DHEA. Selon encore un autre aspect, la présente demande concerne également un procédé de détermination de l'efficacité d'un traitement par une molécule donnée. Afin de déterminer l'efficacité dudit traitement sur la peau d'un sujet, on caractérise l'effet du traitement selon la méthode de caractérisation décrite selon le premier aspect de l'invention. On détermine de cette manière l'effet du traitement sur le niveau d'expression de l'un au moins des 13 gènes de l'invention, au sein de la peau du sujet après traitement. Un traitement est considéré comme efficace s'il agit sur la peau de telle manière à lui rendre des propriétés, notamment aspect et structure, plus proches de celles caractéristiques d'une peau � jeune �, d'une personne entre 20 et 30 ans. Comme vu précédemment, le traitement par la molécule donnée est considéré comme efficace si il est observé d'une part une répression de l'expression d'au moins un gène choisi parmi NOL3, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G ou la stimulation de l'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes SPARC, SERPINB3 et ERBP, et de préférence parmi les gènes SERPINB3 et ERBP. De préférence, le traitement est considéré comme efficace si la variation d'expression induite par la molécule donnée est de même nature que la variation induite par la DHEA pour au moins deux gènes choisis parmi les gènes de l'invention, notamment parmi les gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G, de préférence pour au moins cinq ou huit gènes, et de préférence pour l'ensemble des gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G, ou bien l'ensemble des treize gènes de l'invention. Une nouvelle fois, l'amplitude de la variation induite par le traitement sur le niveau d'expression d'un gène de l'invention, est statistiquement significative, de préférence, cette amplitude est d'au moins 10% du niveau d'expression basal (avant traitement), de préférence d'au moins 20%. Selon une mise en oeuvre préférée, l'amplitude de la variation est d'au moins 30% qu'il s'agisse de répression ou de stimulation. Comme déjà explicité, la variation du niveau de l'expression du gène choisi peut être normalisée par référence à l'expression d'au moins un gène choisi parmi Atp5o, les gènes codant pour la Fi-actine et la (32-microglobuline, les gènes codant pour les protéines ribosomales S28 et S9, le gène codant pour la protéine ribosomale L13A, et le gène codant pour le GAPDH. Pour les raisons déjà explicitées, le sujet est de préférence un être humain subissant un déficit en DHEA endogène, de préférence un être humain âgé d'au moins 30 ans, de préférence d'au moins 45 ans. Le sujet est préférentiellement âgé d'au moins 50, 55 ou 60 ans. De manière toute préférentielle, le sujet est une femme ménopausée ou sur le point de l'être. II doit être noté que les différentes méthodes et procédés selon l'invention comprennent tous une méthode de caractérisation de l'effet provoqué sur la peau par un traitement avec une molécule donnée, selon le premier aspect de l'invention. Par conséquent les différentes mises en oeuvre et paramètres préférés dans le cadre de ce premier aspect de l'invention sont également applicables à l'ensemble des autres méthodes et procédés de l'invention. Selon un dernier aspect, la présente invention concerne également une puce à ADN comprenant des sondes s'hybridant spécifiquement avec l'ADNc des gènes SPARC, NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G, de préférence des sondes s'hybridant spécifiquement avec l'ADNc des gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G. De préférence une telle puce comprend également des sondes s'hybridant avec au moins un gène choisi parmi Atp5o, les gènes codant pour la R-actine et la (32-microglobuline, les gènes codant pour les protéines ribosomales S28 et S9, le gène codant pour la protéine ribosomale L13A, et le gène codant pour le GAPDH. Mis à part des éventuels contrôles positifs ou négatifs, une puce selon l'invention ne comprend pas de sondes s'hybridant avec d'autres gènes que les gènes de l'invention et les gènes servant à la normalisation des variations des niveaux d'expression. Légende des fiqures : Fig.1 : La figure 1 illustre le fait que la DHEA stimule l'expression des collagènes 5A2 et lA1, ainsi que de SPARC. Les courbes représentent le log2 des variations d'expression (avant et après traitement) (Delta) en fonction de la dose de DHEA utilisée. Les données initiales utilisées étaient les signaux d'intensité bruts après normalisation par la méthode de RMA (Robust Multiarray Analysis). Les cercles pleins sur la courbe correspondent à une différence statistiquement significative (p Les courbes représentent le log2 des variations d'expression (avant et après traitement) (Delta) en fonction de la dose de DHEA utilisée. Les données initiales utilisées étaient les signaux d'intensité bruts après normalisation par la méthode de RMA (Robust Multiarray Analysis). Les cercles pleins sur la courbe correspondent à une différence statistiquement 5 significative (p EXEMPLES : 1. Introduction 15 L'objectif des présents inventeurs a été de rechercher si une augmentation des taux de DHEA circulants pouvait avoir une signature au niveau génique grâce à une large étude transcriptomique selon la technique Affymetrix. Cette étude clinique randomisée en double aveugle versus placebo a porté sur 60 femmes ménopausées âgées de 60 à 65 ans, de type caucasien, réparties en 5 groupes de traitement. 20 Les conditions d'éligibilité incluaient notamment l'absence de tout traitement hormonal substitutif dans les 6 mois précédant l'étude, l'absence de dérèglement endocrinien et de traitement avec des agents abaissant les lipides ou le glucose. Après avoir signé le consentement écrit, chaque sujet éligible a été randomisé dans l'un des 5 groupes de traitement de l'émulsion DHEA aux concentrations: 0% (placebo), 0,1%, 25 0,3%, 1% ou 2% pendant treize semaines. Le traitement consistait en l'application de la crème 2 fois par jour (le matin entre 6 00 et 9:30 et le soir entre 18 :00 et 21:30) sur le front et le visage (côté droit) pour 0,3 ml, le décolleté (0,3), les faces dorsales bras et avant-bras (0,3 mlx2), les faces externes des cuisses (0,6 ml x2) et les faces externes des jambes (0,3 ml x2) pour une dose totale de 3,0 ml de DHEA. 30 Deux biopsies ont été obtenues à partir des cuisses de chacune des patientes, l'une avant et la seconde après le traitement. Les biopsies ont été réalisées sur la face externe des cuisses à 8 cm à la verticale sous le trochanter, en utilisant le côté gauche ou droit pour l'échantillon avant traitement et le côté opposé après 13 semaines de traitement. Afin de recueillir les biopsies à l'emporte-pièce, une anesthésie locale a été pratiquée et un morceau cylindrique de peau de 2 mm de diamètre a été prélevé. Les biopsies ont été immédiatement immergées et conservées dans de l'azote liquide jusqu'à l'extraction d'ARN. 2. Méthodologie Analyse par Hybridation Olidonucléotidique à haute densité L'ARN total a été extrait en présence de Trizol (Invitrogen) à partir de chaque biopsie. Les échantillons ont été traités selon la version Il du protocole Affymetrix de marquage d'échantillon de petite taille. Ce protocole repose sur le principe de 2 cycles de synthèse d'ADNc (ADN complémentaire) et d'une réaction de transcription in vitro pour l'amplification et la marquage de l'ARNc. L'ARNc marqué a été isolé en utilisant une colonne RNeasy mini kit (QIAGEN). L'ARNc purifié était fragmenté à 200-30 mer en utilisant un tampon de fragmentation. La qualité de l'ARN total, de la synthèse d'ARNc de l'amplification et de la fragmentation de l'ARNc ont été vérifiées par électrophorèse capilllaire (Bioanalizer 2100, Technologies Agilent). Quinze microgrammes d'ARNc fragmenté a été hybridé en double exemplaire pendant 16 heures à 45°C avec une rotation constante, en utilisant la puce oligonucléotidique humaine U133 Plus 2.0 (Genechip, Affymetrix GeneChip Fluidic Station 450 ; protocole EukGE-WSv5-450). Le marquage a été réalisé à l'aide de la streptavidinephycoérythrine conjuguée (SAPE) (Molecular Probes), suivi d'une amplification avec un anticorps anti-streptavidine biotinylé (laboratoires Vector) et par un second tour de SAPE. Les puces ont été analysées en utilisant un scanner GeneChip 3000 G7 (Affymetrix) permettant une analyse à haute résolution. Les puces comprenaient 1 300 000 motifs oligonucléotidiques uniques couvrant plus de 47 000 transcrits et variants, lesquels, représentent approximativement 39 000 des gènes humains les mieux caractérisés. Les images des puces ont été extraites avec le logiciel GeneChip Operating et analysées avec le Kit Limma. Le contrôle qualité des puces a été réalisé au moyen du logiciel AffyQCReport ; ce contrôle est nécessaire pour pouvoir comparer les résultats entre chaque expérience. La suppression du bruit de fond et la normalisation de l'intensité du signal pour chacune des sondes ont été réalisées en utilisant la méthode de l'Analyse Multivariée Robuste (AMR). L'analyse a été réalisée en utilisant l'interface � affylmGUl Graphical User � pour le Kit Limma miccroarray. Analyse RT-gPCR La synthèse des ADNc a été effectuée par transcription inverse, à 50°C pendant 2 heures, à partir de l'ARN total dans un volume de réaction de 50 ul en présence de 30 ng d'oligo- (d)Tprimers, 300 U de Superscript III Rnase H-reverse transcriptase (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA), 500 pM deoxynucleotides triphosphate, 5 mM dithiothreitol, et 34 U d'inhibiteur de RNase (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ). La réaction a été stoppée en ajoutant 1 ug de RNAse A à 37°C pendant 30 minutes, puis l'ADNc a été purifié à l'aide du PCR purification Kit (QIAGEN, Valencia, CA). Les réactions de PCR en temps réel ont été réalisées en triplicats en utilisant le kit LightCycler FastStart DNA Master Plus SYBRGreen (Roche Diagnostics). Le réactif LightCycler FastStart DNA Master Plus SYBRGreen I a été utilisé selon les recommandations du manufacturier. Les conditions de PCR utilisées ont été les suivantes : 50 cycles de dénaturation à 95°C pendant 10 secondes, annealing 59-65°C pendant 5 secondes, élongation à 72°C pendant 10-12 secondes et lecture à 78°C pendant 3 secondes. Le gène de ménage (housekeeping gene) Atp5o a été utilisé comme gène de référence. Les amorces utilisées sont décrites dans le tableau 1. La spécificité de l'amplification a été vérifiée par analyse de la courbe de fusion selon les recommandations du manufacturier. La quantification a été obtenue en utilisant le calcul de la dérivée seconde et de double correction et les résultats ont été analysés avec le programme LightCycler 3.5 (Roche). Seuls les gènes d'intérêt validés par RT-qPCR ont été retenus dans le cadre de la présente invention. 3. Résultats : De façon attendue, (Shin et aI, 2005), l'expression de certains gènes de la famille du collagène a été stimulée par le traitement à la DHEA, aux différentes doses utilisées (voir tableau 2). Les inventeurs ont de plus montré que la transcription du gène SPARC (ostéonectine) est 25 elle aussi stimulée, ce qui est en accord avec son rôle dans le processus de maturation des fibres de collagène (Alexander et al, 1991). Voir le tableau 2 et la figure 1. Tableau 1 : amorces utilisées pour les expériences de RT-PCR Nom du gène et symbole GenBank Région Amorce � forward � (5'-.3') Amorce � reverse � (5'•3') Nb de bases (bp) Claudine 8 / CLDN8 NM_199328 571-759 TACTTAGGATGGACCACGGCA (SEQ ID ACACAACTACACATACTGACTTCTGGA 189 N°1) (SEQ ID N°16) Collagène, type I, alpha 1 / N M_000088 4698-4870 AACCGAACATGACCAAAAACCAAAA GGGCAGCATTGGGGTTTCATAA (SEQ 173 COL1A1 (SEQ ID N°2) ID N°17) Collagène, type V, alpha 2 / NM_000393 4630-4890 AGCGGAATGGAAATGTGGGCA (SEQ ID TGCAGGATCAGCCATTACTTCAAGAG 261 COL5A2 N°3) (SEQ ID N°18) Ephrine-A1/ EFNA1 N M_004428 1100-1343 GAGAGAGCCAGGATGCCCAGAT (SEQ GCTACACTCTAAGAACAGGTTGGCACA 244 ID N°4) (SEQ ID N°19) Protéine ligand du récepteur aux NM_014597 1848-2093 CTGCAGAAAGCCGTCATTACACCT GGGGAAGCCATCTCTATCATTTTT (SEQ 246 estrogènes (Estrogen receptor binding protein) ERBP (SEQ ID N°5) ID N°20) Glucosidase beta acide / N M_000157 1953-2199 AAAAGATCAGTAAGCCCCAGTGT (SEQ CCTGATGCTGACACTGCTGCT (SEQ ID 247 G BANG BAP ID N°6) N°21) Jagged 1 (Alagille syndrome) / AK023793 3339-3510 AGGTTGGGGTGCTGATTTAGTG (SEQ AATAAACACCTCGAGCTCAAGCA(SEQ 172 JAG1 ID N°7) ID N°22) Kératine 1B / KRT1B BCO33366 864-1096 CCTAAGCTCTGCATCATAACCACTCT CACAGCTACAGAGAACAGAAGGCA 233 (SEQ ID N°8) (SEQ ID N°23) Protéine 7 enveloppe tardive AF005081 26-305 TCCTTGCCAGAGCTATTATGTTCA (SEQ AATTCCCAAACAGCAGCACCC (SEQ ID 280 (Late envelope protein 7) / LEP7 ID N°9) N°24) Métallothioneine 1X/ MT1X N M_005952 12-232 GCGTGTTTTCCTCTTGATCGGG (SEQ ID GCTGCACTTGTCTGACGTCCCT (SEQ 221 N°10) ID N°25) Protéine nucléolaire 3 (Nucleolar N M_003946 753-1001 GGATAGGACCTGGGATGCTGCT (SEQ GGGTGCAGCCTGGACTCCTAA (SEQ ID 249 protein 3; inhibiteur de l'apoptose avec un domaine CARD) / NOL3 ID N°11) N°26) Plasmolipine (Plasma membrane N M_015993 928-1152 ACGGGGGATCTGAGGCTGTGT (SEQ ID ACGGTGTTTAAAGGAAGGAGAGTGGTT 225 proteolipid) / PLLP N°12) (SEQ ID N°27) Protéine sécrétée, acide, riche en N M_003118 1804-2056 AGGGACTGCCAGGCTGTTTCA (SEQ ID TGAAATGCTTGGAGGTGAACGAGT 253 cystéine (osteonectine) / SPARC N°13) (SEQ ID N°28) Nom du gène et symbole GenBank Région Amorce � forward � Amorce � reverse � (5'--^3') Nb de bases (bp) Inhibiteur de la protéinase sérine 60005224 1036-1154 GCGGTCTCGTGCTATCTGGA (SEQ ID ATTAGTTGAAGTAGGTGATGATCCGAA 119 (ou cystéine) B3 / SERPINB3 N°14) (SEQ ID N°29) Protéine 2G riche en petite proline N M_0010142 TGAAACAACAAGATCCAGTGGCT (SEQ AACACACTTGCTCTCAGGATAGGA SPRR2G 91 278-511 ID N°15) (SEQ ID N°30) 234 Cold inducible RNA Binding N M_001280 430-592 GAGGAGGGGACCGAGGCTATG TTGTGTGTAGCGTAACTGTCGTAACTG 163 protein / CIRBP (SEQ ID N°31) (SEQ ID N°32) Déoxyribonucléase 1- like 3 / NM_004944 950-1158 CACCACCCCAGAGACATCCGTTA (SEQ CCGTGGTGTCCTCTTGGTCCC (SEQ ID 209 DNASEI L3 ID N°33) N°34) Eukaryotic elongation factor-2 NM_013302 2792-3020 TGCACACCACCACACTCAGCTAAT AGGGTACACACTGAACTTTGGAACTAA 229 kinase / EEF2KL (SEQ ID N°35) (SEQ ID N°36) Kinetochore associated 2 / N M_006101 1549-1760 TGGAGGATACTTTAGAACAATTGAATG TTCACTGAGCCCCTGGTTAACA (SEQ ID 212 KNTC2L (SEQ ID N°37) N°38) RAR-related orphan receptor C / NM_005060 2771-3031 GTGGAGAAGGAAGCAGATGTGAT (SEQ GTTGGGGTTTATGTTTACTCAGATGAA 261 RORCL ID N°39) (SEQ ID N°40) Ribonucleotide reductase M2 NM_001034 1435-1678 TTACCAACTAGCCACACCATGAAT (SEQ TGGCTGTGCTGGTTAAAGGACT (SEQ 244 polypeptide / RRM2 ID N°41) ID N°42) Calgranuline A (S100 calcium N M_002964 82-335 GAACTCTATCATCGACGTCTACCACAA ACTCTTTGTGGCTTTCTTCATGGCT 254 bindung protein A8) / Si 00A8/M R P8 (SEQ ID N°43) (SEQ ID N°44) Calgranuline B (S100 calcium NM_002965 56-334 AAATGTCGCAGCTGGAACGCA (SEQ ID CCTCGTGCATCTTCTCGTGGGA (SEQ 279 bindung protein A9) / ID N°46) S100A9/MRP14 N°45) Protéine à doigt de zinc 677 / AK026366 233-463 GCCCACACAATATGACCTCGG (SEQ ID TCCCTGTACAAGGCCCTCTGG (SEQ ID 231 ZNF677 N°47) N°48) Tableau 2 : Modulation de l'expression de gènes � dermiques �. Nom du gène dosage A Niveau de modulation Valeur p Collagen, Type V, alpha 2 DHEA 1% • 1,51 0,002 COL5A2 DHEA 2% • 1,44 0,0004 Collagen, Type I, alpha 1 DHEA 1% • 3,69 La colonne A correspond à l'analyse par hybridation oligonucléotidique à haute densité. Les deux dernières colonnes présentent les résultats de l'analyse RT-qPCR. De façon surprenante et inattendue, l'expression de certains gènes spécifiquement exprimés dans l'épiderme a aussi été modulée par le traitement à la DHEA. De façon intéressante, ces gènes sont associés au programme de différenciation épidermique et leur expression est majoritairement réprimée. Parmi ces gènes, comme illustré dans le tableau 3 et les figures 2 et 3, on peut citer: - Inhibiteur de la protéinase Sérine (ou cystéine) B3 - SERPINB3 Son expression est étroitement reliée à la différentiation cellulaire à la fois dans les cellules normales et les cellules squameuses malignes (Takeda et al. 2002). SERPIN B3 peut agir en tant qu'inhibiteur de protéase afin de moduler la réponse immune � host � contre les cellules tumorales. - Protéine ligand du Récepteur aux estrogènes - ERBP II s'agit d'une protéine nucléaire qui interagit notamment avec ERa et qui se lie aussi à PPARy, RXRa et ER (3. dont la localisation des récepteurs 13 et leur haute expression ont été montrées dans les kératinocytes épidermaux chez l'homme (Taylor et al, 2000, Thorton et al, 2003). - Jagged 1 ù JAG1 Jagged 1 est le ligand des multiples récepteurs de Notch 1 et impliqué dans la signalisation 25 de Notch (Lindsell et aI, 1995). Dans la peau humaine, une augmentation du taux de Notch et de Jagged 1 a été démontrée au début de la différenciation. - Claudine 8 - CLDN8 Les claudines sont localisées dans les cellules de la couche granuleuse de l'épiderme et au niveau des jonctions serrées (Brandner et al, 2002) où elles jouent un rôle majeur et pour certaines claudines, dans la formation de la fonction barrière de la peau. - Protéine 7 (enveloppe tardive) - LEP7 Lep7 est induit dans la différentiation terminale des kératinocytes et localisé plus tardivement dans l'enveloppe (Zhao et aI, 1997). - Métallothionine 1X ù MT1X Ligand des métaux lourds, la métallothionéine joue un rôle dans la détoxification des métaux lourds et des radicaux libres. - Glucosidase beta acide û GBA/GBAP Ce gène code pour une protéine membranaire lysosomale qui clive la liaison beta glucosidique du glycosylcéramide, un intermédiaire dans le métabolisme glycolipidique. Des mutations de ce gène sont la cause de la maladie de Gaucher caractérisée par une accumulation lysosomale. - Ephrine-A1 ù EFNA1 Cette protéine fait partie de la famille des récepteurs des tyrosines kinases et est impliquée dans la signalisation cellulaire. Leur implication dans les processus de développement est bien connue. Ephrinl est exclusivement exprimé dans l'épiderme. Ces molécules ont des fonctions importantes dans l'homéostasie de la peau. Des auteurs ont rapporté que la diminution de son expression pourrait contribuer à la carcinogénèse de tumeurs de la peau (Guo et al, 2006). - Plasmolipine - PLLP Cette protéine semble être impliquée dans la myélinisation. Elle pourrait aussi induire la formation de ponts ioniques K+ dépendants. - Kératine 1B û KRT1 B Il s'agit d'une kératine du cytosquelette, exprimée presque exclusivement dans la peau et qui contribue à son intégrité structurale. Elle appartient à la famille des filaments intermédiaires. Il s'agit d'un marqueur de la différentiation précoce des kératinocytes (Green et al, 1982). - Protéine 2G riche en petite proline - SPRR2G Ces protéines sont des constituants de l'enveloppe cornée. - Protéine nucléolaire 3 - NOL 3 (Unigene AK092623, RefSeq NM_003946, PM 24 kDa): L'isoforme 1 (essentiellement localisée dans le noyau et le nucleole) est impliquée dans la maturation des ARN (isoforme 1) et I'isoforme 2 (cytoplasmique) est impliquée dans l'inhibition de l'apoptose en interagissant, via un domaine CARD (CAspase Recruitment Domain) avec la caspase 2 et la caspase 8. Du fait qu'une part importante de ces gènes est associée, d'une manière ou d'une autre, à la différentiation des kératinocytes, leur répression sous l'effet de l'application topique de DHEA pourrait être associée à un retard dans la différentiation des kératinocytes. Il semble, au vu de cette étude, que la DHEA agisse à l'encontre des effets de vieillissement de la peau dû à l'âge, en stimulant au niveau du derme, la biosynthèse de collagène et en modulant, au niveau de l'épiderme, la différentiation des kératinocytes. Tableau 3 : Modulation de l'expression des gènes � épidermiques � : Nom du gène dosage A Résultats RT-qPCR modulation Valeur p Inhibiteur de la protéinase Sérine (ou cystéine) B3 DHEA 1% • 6,77 Labrie F, Bélanger A, Cusan L, Gomez JL, Candas B. Marked decline in serum concentrations of adrenal C19 sex steroid precursors and conjugated androgen metabolites during aging. J Clin Endocrinol Metab. 82(8):2396-402, 1997a. Labrie, F., Diamond, P., Cusan, L., Gomez, J.L., and Bélanger, A. Effect of 12-month 5 DHEA replacement therapy on bone, vagina, and endometrium in postmenopausal women. J. Clin. Endocrinol. Metab., 82: 3498-3505, 1997b. Labrie, F., Luu-The, V., Labrie, C., Pelletier, G., and El-Alfy, M. Intracrinology and the skin. 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Cell. 24;80(6):909-17, 1995. 20 Marionnet, C., Bernerd, F., Dumas, A., Verrecchia, F., Mollier, K., Compan, D., Bernard, B., Lahfa, M., Leclaire, J., Medaisko, C., Mehul, B., Seite, S., Mauviel, A., and Dubertret, L.; Modulation of gene expression induced in human epidermis by environmental stress in vivo. J Invest Dermatol; 121: 1447-1458, 2003. Punnonen et al, Ann Chir Gynaecol, suppl 202 :39-41 ; 1987. 25 Shin, M.H., Rhie, G.E., Park, C.H., Kim, K.H., Cho, K.H., Eun, H.C., and Chung, J.H. Modulation of collagen metabolism by the topical application of dehydroepiandrosterone to human skin. J Invest Dermatol, 124: 315-23, 2005. Takeda A, Higuchi D, Takahashi T, Ogo M, Baciu P, Goetinck PF, Hibino T. Overexpression of serpin squamous cell carcinoma antigens in psoriatic skin. J Invest 30 Dermatol.; 118(1):147-54, 2002 Taylor AH, Al-Azzawi F. Immunolocalisation of oestrogen receptor beta in human tissues. J Mol Endocrinol. ; 24(1):145-55, 2000. Thornton MJ, Taylor AH, Mulligan K, AI-Azzawi F, Lyon CC, O'Driscoll J, Messenger AG. Oestrogen receptor beta is the predominant oestrogen receptor in human scalp skin. Exp Dermatol.; 12(2):181-90, 2003. Zhao XP, Elder JT. Positional cloning of novel skin-specific genes from the human 5 epidermal differentiation complex. Genomics.; 45(2):250-8, 1997. REVENDICATIONS1. Méthode de caractérisation de l'effet cosmétique, sur la peau d'un sujet, d'un traitement par une molécule donnée, comprenant l'évaluation de la variation, induite par ledit traitement, de l'expression d'au moins un gène choisi parmi les gènes SPARC, NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MTIX, GBAIGBAP, EFNA1, PLLP, KRT1 B et SPRR2G au niveau de la peau dudit sujet. 2. Méthode de caractérisation selon la revendication 1, comprenant l'évaluation de la variation de l'expression d'au moins deux gènes choisis parmi les gènes SPARC, NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1 B et SPRR2G, de préférence d'au moins trois gènes. 3. Méthode selon la revendication 1, comprenant l'évaluation de la variation de l'expression du gène SPARC et d'au moins un gène choisi parmi les gènes NOL3, SERPINB3, ERBP, JAG1, CLDN8, LEP7, MTIX, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1 B et SPRR2G. 4. Méthode selon la revendication 1, où ladite variation est observée au niveau de l'épiderme du sujet. 5. Méthode selon la revendication 1, où ledit traitement consiste en l'application topique de la molécule sur la peau du sujet. 6. Méthode selon la revendication 5, où la molécule est appliquée au moins deux fois par jour, durant au moins deux semaines, avant l'évaluation de la variation d'expression du gène choisi, induite par la molécule. 7. Méthode selon l'une des revendications 1 à 6, où ledit sujet est un être humain. 8. Méthode selon la revendication 7, où ledit sujet est âgé d'au moins 30 ans, de préférence d'au moins 45 ans. 9. Méthode selon la revendication 7, où ledit sujet est une femme, de préférence 35 une femme ménopausée. 2630 27 10. Méthode selon l'une des revendications 1 à 9 où ladite variation d'expression est normalisée à l'aide du niveau d'expression d'un gène choisi parmi Atp5o, les gènes codant pour la f3-actine et la X32-microglobuline, les gènes codant pour les protéines ribosomales S28 et S9, le gène codant pour la protéine ribosomale L13A , et le gène codant pour le GAPDH. 11. Méthode d'évaluation de l'effet réparateur d'une molécule sur la peau d'un sujet comprenant la caractérisation de l'effet d'un traitement par ladite molécule par une méthode selon l'une des revendications 1 à 10. 12. Méthode selon la revendication 11, où l'évaluation est considérée comme positive si la variation d'expression du gène choisi est une répression de l'expression si le gène est choisi parmi les gènes NOL3, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBAIGBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G ou une stimulation de l'expression si le gène est choisi parmi les gènes SPARC, SERPINB3 et ERBP. 13. Méthode selon la revendication 11, où la variation observée de l'expression du 20 gène choisi est d'au moins 30%. 14. Méthode selon la revendication 11, ledit sujet est une personne âgée d'au moins 30 ans, de préférence au moins 45 ans. 25 15. Méthode selon la revendication 14 où le sujet est une femme, de préférence une femme ménopausée. 16. Procédé de criblage de molécules ayant un effet réparateur sur la peau, comprenant la caractérisation de l'effet desdites molécules sur la peau d'un sujet 30 par une méthode selon l'une des revendications 1 à 10. 17. Procédé selon la revendication 16, où l'effet réparateur est avéré si la variation d'expression du gène choisi est une répression d'au moins 30% de l'expression si le gène est choisi 35 parmi les gènes NOL3, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBAIGBAP, EFNA1, PLLP, KRT1B et SPRR2G ou 15 1015 28 une stimulation d'au moins 30% de l'expression si le gène est choisi parmi les gènes SPARC, SERPINB3 et ERBP. 18. Procédé de détermination de l'efficacité sur la peau d'un sujet, d'un traitement par une molécule donnée, comprenant la caractérisation de l'effet du traitement par une méthode selon l'une des revendications 1 à 10. 19. Procédé selon la revendication 18, où le traitement par la molécule donnée est considéré comme efficace si la variation d'expression du gène choisi est: une répression d'au moins 30% de l'expression si le gène est choisi parmi les gènes NOL3, JAG1, CLDN8, LEP7, MT1X, GBA/GBAP, EFNA1, PLLP, KRT1 B et SPRR2G ou une stimulation d'au moins 30% de l'expression si le gène est choisi parmi les gènes SPARC, SERPINB3 et ERBP. 20. Procédé selon la revendication 18, où ledit sujet est une femme ménopausée.