Brevet FR2936800A1 — publié le 20100409

La présente invention concerne de nouveaux polymères biocompatibles à base de polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles pouvant être utiles, notamment pour l'administration de principe(s) actif(s) (PA) aux hommes ou aux animaux dans un but thérapeutique et/ou prophylactique. Les alcools hydrophobes présentent un intérêt dans la formulation de principes actifs pharmaceutiques, notamment, en raison de leur biocompatibilité et de leur caractère hydrophobe permettant de moduler l'hydophobicité des polymères sur lesquels ils peuvent être greffés. Leur biocompatibilité est excellente dans la mesure où ils jouent un 15 rôle dans de nombreux processus biochimiques et sont présents sous forme estérifiée dans la plupart des tissus. Cependant, il est connu de l'homme de l'art qu'il est difficile de greffer un alcool sur un polysaccharide comportant des groupes fonctionnels 20 carboxyles puisqu'il est difficile d'être sélectif entre les fonctions hydroxyles du polysaccharide et la fonction hydroxyle de l'alcool hydrophobe. Au moment du greffage, les alcools du polymère peuvent entrer en compétition avec l'alcool du greffon si l'on ne souhaite pas avoir recours à des techniques de protection déprotection des alcools du polymère et cette réaction secondaire conduit à la 25 réticulation des chaînes de polymère. Ainsi, des alcools hydrophobes d'intérêt tel que le cholésterol n'ont pu être greffés à ce jour sur des polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles. Dellacherie et al. ont mis au point des esters de polysaccharides, 30 soit d'alginates, de hyaluronates (Pelletier, S. et al., Carbohydr.Polym. 2000, 43, 343-349.) ou de galacturonanes (Dellacherie, Edith et al., Langmuir 2001, 17, 1384-1391.) par une méthode de synthèse employant des alpha halogénures d'alkyle, bromododécane et bromooctadécane. La synthèse des esters consiste à substituer les halogénures par les carboxylates de 35 tetrabutylammonium. Cette méthode permet d'accéder à des esters d'alcools hydrophobes mais elle est limitée aux dérivés halogénés alkyliques pouvant subir une substitution nucléophile. Elle ne peut donc pas être mise en oeuvre pour greffer des alcools hydrophobes tels que le cholestérol. De plus, ces dérivés halogénés présentent des risques de toxicité et ne sont donc pas d'une mise en oeuvre sûre pour le dévelopement d'un produit pharmaceutique. D'autres chercheurs ont contourné cette difficulté en greffant des acides hydrophobes à la place des alcools hydrophobes. Nichifor et al., par exemple, ont employé l'acide cholique, un dérivé stéroïdien, pour le greffer directement sur les alcools du dextrane (Nichifor, Marieta et al., Eur.Polym.J. 1999, 35, 2125-2129.). Cette méthode contourne le problème du cholésterol en employant un dérivé présentant un acide carboxylique capable de réagir avec les alcools du polysaccharide. Cependant, l'acide cholique n'est pas approuvé par la FDA pour des injections contrairement au cholestérol et cette stratégie ne peut pas être mise en oeuvre avec des polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles. D'autres chercheurs ont employé des polysaccharides non anioniques afin de pouvoir greffer des alcools hydrophobes. Akiyoshi et al., par exemple, ont converti le cholestérol, nucléophile, en un dérivé électrophile (Biomacromolecules 2007, 8, 2366-2373). Ce dérivé électrophile du choléstérol a pu être greffé sur les fonctions alcools du pullulane ou du mannane, polysaccharides neutres. Cette stratégie ne peut également pas être mise en oeuvre avec des polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles. Une revue récente des polymères fonctionnels à base de dextrane (Heinze, Thomas et al., Adv Polym Sci 2006, 205, 199-291.) fait état de modifications par des acides hydrophobes entre autres mais ne fait pas état de dextrane fonctionnalisé par des alcools hydrophobes. La présente invention concerne de nouveaux dérivés de polysaccharides amphiphiles comportant des groupes fonctionnels carboxyles en partie substitués par au moins un dérivé d'alcool hydrophobe. Ces nouveaux dérivés de polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles ont une bonne biocompatibilité et leur hydrophobicité est facilement modulable sans altérer la biocompatibilité. Elle concerne également une méthode de synthèse permettant de résoudre les problèmes de synthèse supra cités. Cette méthode a permis d'obtenir des polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles en partie substitués par des alcools hydrophobes dont par exemple le cholestérol. L'invention concerne donc des polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles dont au moins un est substitué par un dérivé 10 d'alcool hydrophobe, noté Ah : • ledit alcool hydrophobe (Ah) étant greffé ou lié au polysaccharide anionique par un bras de couplage R, ledit bras de couplage étant lié au polysaccharide anionique par une fonction F ladite fonction F résultant du couplage entre la fonction amine du bras de liaison R et 15 une fonction carboxyle du polysaccharide anionique, et ledit bras de couplage étant lié à l'alcool hydrophobe par une fonction G résultant du couplage entre une fonction carboxyle, isocyanate, thioacide ou alcool du bras de couplage et une fonction de l'alcool hydrophobe, les fonctions carboxyles du polysaccharide anionique non substituées 20 étant sous forme de carboxylate de cation, alcalin de préférence comme Na+ ou K+. - F étant une fonction amide, - G étant soit une fonction ester, thioester, carbonate, carbamate, 25 - R étant une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée, éventuellement comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S, et ayant au moins une fonction acide, • Ah étant un reste d'un alcool hydrophobe, produit du couplage entre la 30 fonction hydroxyle de l'alcool hydrophobe et au moins une fonction électrophile portée par le groupement R. ledit polysaccharide comportant des groupes fonctionnels carboxyles étant amphiphile à pH neutre. Selon l'invention, le polysaccharide comportant des groupes fonctionnels carboxyles en partie substitués par des alcools hydrophobes est choisi parmi les polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles de formule générale I : n Formule I - dans laquelle, n représente la fraction molaire des fonctions carboxyles du polysaccharide substituées par F-R-G-Ah et est comprise entre 0,01 et 0,7, - F, R, G et Ah répondant aux définitions données ci-dessus, et lorsque la fonction carboxyle du polysaccharide n'est pas substituée par F-R- G-Ah, alors la ou les groupes fonctionnels carboxyles du polysaccharide sont des carboxylates de cation, alcalin de préférence comme Na' ou K. Dans un mode de réalisation, les polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles sont des polysaccharides naturellement porteurs de groupes fonctionnels carboxyles et sont choisis dans le groupe constitué par l'alginate, le hyaluronane, le galacturonane. Dans un mode de réalisation, les polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles sont des polysaccharides synthétiques obtenus à partir de polysaccharides comportant naturellement des groupes fonctionnels carboxyles ou à partir de polysaccharides neutres sur lesquels au Polysaccharide + carboxyle moins 15 groupes fonctionnels carboxyles pour 100 unités saccharidiques ont été greffées de formule générale Il. Polysaccharide i i Q - les polysaccharides naturels étant choisis dans le groupe des polysaccharides constitués en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,6) et/ou (1,4) et/ou (1,3) et/ou (1,2), - L étant une liaison résultant du couplage entre le bras de liaison Q 10 et une fonction ùOH du polysaccharide et étant soit une fonction ester, thioester, carbonate, carbamate ou éther, - i représente la fraction molaire des substituants L-Q par unité saccharidique du polysaccharide 15 Q étant une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S, et comportant au moins un groupe fonctionnel carboxyle, - CO2H 20 Dans un mode de réalisation le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,6). Dans un mode de réalisation, le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,6) est le dextrane. 25 Dans un mode de réalisation le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4). Dans un mode de réalisation, le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4) est choisi dans le groupe constitué par le pullulane, l'alginate, le hyaluronane, le xylane, le galacturonane 30 ou une cellulose soluble dans l'eau. Dans un mode de réalisation, le polysaccharide est un pullulane. I I Dans un mode de réalisation, le polysaccharide est un alginate. Dans un mode de réalisation, le polysaccharide est un hyaluronane. Dans un mode de réalisation, le polysaccharide est un xylane. Dans un mode de réalisation, le polysaccharide est un galacturonane. Dans un mode de réalisation, le polysaccharide est une cellulose soluble dans l'eau. Dans un mode de réalisation le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,3). Dans un mode de réalisation, le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,3) est un curdlane. Dans un mode de réalisation le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,2). Dans un mode de réalisation, le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,2) est une inuline. Dans un mode de réalisation le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4) et (1,3) Dans un mode de réalisation, le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4) et (1,3) est un glucane. Dans un mode de réalisation le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4), et (1,3) et (1,2). Dans un mode de réalisation le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4), et (1,3) et (1,2) est le mannane.30 Dans un mode de réalisation, le polysaccharide selon l'invention est caractérisé en ce que le groupe Q est choisi dans les groupes suivants : L L L OH OH OH Dans un mode de réalisation, i est compris entre 0,1 et 2. Dans un mode de réalisation, i est compris entre 0,2 et 1,5. Dans un mode de réalisation, le groupement R selon l'invention est caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les acides aminés. Dans un mode de réalisation, les acides aminés sont choisis parmi les alpha acides aminés. Dans un mode de réalisation, les alpha acides aminés sont choisis parmi les alpha acides aminés naturels. Dans un mode de réalisation, les alpha acides aminés naturels sont 20 choisis parmi la leucine, l'alanine, l'iso-leucine, la glycine, la phénylalanine, le thryptophane, la valine. Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les alcools gras. Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les alcools constitués d'une chaîne alkyle insaturée ou saturée comprenant de 4 à 18 carbones. 30 Dans un mode de réalisation, l'alcool gras est choisi parmi le méristyl, le cétyl, le stéaryl, le cétéaryl, le butyl, l'oléyl, la lanoline. 25 Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les dérivés du cholestérol. Dans un mode de réalisation, le dérivé du cholestérol est le 5 cholestérol. Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les tocophérols. 10 Dans un mode de réalisation, le tocophérol est l'alpha tocophérol. Dans un mode de réalisation, l'alpha tocophérol est le racémique de l'alpha tocophérol. 15 Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les alcools porteurs de groupe aryle. Dans un mode de réalisation, l'alcool porteur de groupe aryle est choisi parmi l'alcool benzylique, l'alcool phenéthylique. 20 Le polysaccharide peut avoir un degré de polymérisation m compris entre 10 et 10000. Dans un mode de réalisation, il a un degré de polymérisation m compris entre 10 et 1000. 25 Dans un autre mode de réalisation, il a un degré de polymérisation m compris entre 10 et 500. L'invention concerne également la synthèse des polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles en partie substitués selon 30 l'invention. Ladite synthèse comprend une étape d'obtention d'un intermédiaire aminé Ah-G-R-NH2 ou d'un sel d'ammonium Ah-G-R-NH3+ dont le contre-ion est un anion choisi parmi les halogénures, les sulfates, les sulfonates, les 35 carboxylates, les et une étape de greffage de cet intermédiaire aminé sur une fonction carboxyle d'un polysaccharide, R, G et Ah répondant aux définitions données ci-dessus. Dans un mode de réalisation une étape de fonctionnalisation du polysaccharide par au moins 15 groupes fonctionnels carboxyles pour 100 unités saccharidiques est effectuée par greffage de composés de formule Q-L', L' étant une fonction anhydride, halogénure, acide carboxylique, thioacide ou isocyanate sur au moins 15 fonctions alcool pour 100 unités saccharidiques du polysaccharide, Q et L répondant aux définitions données ci-dessus . Dans un mode de réalisation l'intermédiaire aminé de formule Ah-G-R-NH2 ou Ah-G-R-NH3+ est obtenu par réaction d'un composé de formule G'-R-NH2, G' étant une fonction acide carboxylique, isocyanate, thioacide, ou alcool avec la fonction alcool de l'alcool hydrophobe, R, G et Ah répondant aux définitions données ci-dessus. Si nécessaire dans cette étape d'obtention de l'intermédiaire aminé, les techniques de protection, déprotection bien connues de l'homme de l'art en synthèse peptidique sont utilisées. De préférence, l'étape de greffage de l'intermédiaire aminé sur une fonction acide du polysaccharide est réalisée en milieu organique. L'invention concerne également l'utilisation des polysaccharides 25 fonctionnalisés selon l'invention pour la préparation de compositions pharmaceutiques telles que décrites précédemment. L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant l'un des polysaccharides selon l'invention tel que décrit 30 précédemment et au moins un principe actif. L'invention concerne également une composition pharmaceutique selon l'invention telle que décrite précédemment caractérisée en ce que le principe actif est choisi dans le groupe constitué par les protéines, les 35 glycoprotéines, les peptides et les molécules thérapeutiques non-peptidiques.20 On entend par principe actif un produit sous forme d'entité chimique unique ou sous forme d'une combinaison ayant une activité physiologique. Ledit principe actif peut être exogène c'est à dire qu'il est apporté par la composition selon l'invention. II peut également être endogène, par exemple les facteurs de croissance qui vont être sécrétés dans une plaie pendant la première phase de cicatrisation et qui pourront être retenus sur ladite plaie par la composition selon l'invention. Selon les pathologies visées elle est destinée à un traitement local 10 ou systémique. Dans le cas des libérations locale et systémique, les modes d'administration envisagés sont par voie intraveineuse, sous-cutanée, intradermique, transdermique, intramusculaire, orale, nasale, vaginale, 15 oculaire, buccale, pulmonaire etc. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont soit sous forme liquide, en solution aqueuse, soit sous forme de poudre, d'implant ou de film. Elles comportent en outre les excipients pharmaceutiques classiques bien 20 connus de l'homme de l'art. En fonction des pathologies et des modes d'administration les compositions pharmaceutiques pourront avantageusement comporter, en outre, des excipients permettant de les formuler sous forme de gel, d'éponge, 25 de solution injectable, de solution buvable, de lyoc etc. L'invention concerne également une composition pharmaceutique selon l'invention telle que décrite précédemment, caractérisée en ce qu'elle est administrable sous forme de stent, de film ou � coating � de biomatériaux 30 implantables, d'implant. Exemple 1: Synthèse du polymère 1, dextraneméthylcarboxylate de sodium modifié par un dérivé du cholestérol L'ester cholestérique de la leucine est obtenu selon le procédé décrit dans le brevet (Kenji, M et al., US4826818). 8 g (soit 148 mmol de fonctions hydroxyles) de dextrane de masse 10 molaire moyenne en poids d'environ 40 kg/mol (Fluka) sont solubilisés dans de l'eau à 42 g/L. A cette solution sont ajoutés 15 mL de NaOH 10 N (148 mmol NaOH). Le mélange est porté à 35°C puis 23 g (198 mmol) de chloroacétate de sodium sont ajoutés. La température du milieu réactionnel est portée à 60°C à 0.5°C/min puis maintenue à 60°C pendant 100 minutes. Le milieu réactionnel 15 est dilué avec 200 mL d'eau, neutralisé à l'acide acétique et purifié par ultrafiltration sur membrane PES de 5 kD contre 6 volumes d'eau. La solution finale est dosée par extrait sec pour déterminer la concentration en polymère ; puis dosée par dosage acide/base dans de l'eau/acétone 50 / 50 (VN) pour déterminer le degré de substitution en méthylcarboxylates. 20 D'après l'extrait sec : [polymère] = 31.5 mg/g D'après le dosage acide/base : Le degré de substitution des fonctions hydroxyles par des fonctions méthylcarboxylates est de 1.04 par motif saccharidique. La solution de dextraneméthylcarboxylate de sodium est passée sur une résine Purolite (anionique) pour obtenir le dextraneméthylcarboxylique acide qui est ensuite lyophilisé pendant 18 heures. 30 8 g de dextraneméthylcarboxylique acide (37 mmol fonction méthylcarboxylique acide) sont solubilisés dans le DMF à 45 g/L puis refroidis à 0°C. 0,73 g de l'ester cholestéryl de la leucine, sel d'acide partoluènesulfonique (1 mmol) est mis en suspension dans du DMF à 100 g/L. 0,11 g de triéthylamine (1 mmol) est ensuite ajoutée à cette suspension. Une 35 fois la solution de polymère à 0°C, 0,109 g (1 mmol) de NMM et 0.117 g (1 mmol) de EtOCOCI sont ensuite ajoutés. Après 10 min de réaction, la 25 suspension de leucinate de cholestérol est ajoutée. Le milieu est ensuite maintenu à 4°C durant 15 minutes. Le milieu est ensuite chauffé à 30°C. Une fois à 30°C, le milieu est ensuite coulé dans une solution de 3,76 g de NMM (37 mmol) à 5 g/L sous vive agitation. La solution est ultrafiltrée sur membrane PES 10 kD contre 10 volumes de solution NaCI 0.9% puis 5 volumes d'eau. La concentration de la solution de polymère est déterminée par extrait sec. Une fraction de solution est lyophilisée et analysée par RMN 1H dans D2O pour déterminer le DS en L leucinate de cholesterol greffé. D'après l'extrait sec : [polymère modifié] = 12,9 mg/g D'après la RMN 1H : La fraction molaire des acides modifiés par le leucinate de cholesterol par unité saccharidique est de 0,03. Exemple 2: Synthèse du polymère 2, dextranesuccinate de sodium modifié par un dérivé du cholestérol L'ester cholestérique de la leucine est obtenu selon le procédé décrit dans le brevet (Kenji, M et al., US4826818). Le dextranesuccinate de sodium est obtenu à partir du dextrane 40 selon la méthode décrite dans l'article de Sanchez-Chaves et al. (Sanchez-Chaves, Manuel et al., Polymer 1998, 39 (13), 2751-2757.) Le taux de fonctions acides par unité glycosidique (i) est de 1.46 d'après la RMN 1H dans D2O/NaOD. La solution de dextranesuccinate de sodium est passée sur une résine Purolite (anionique) pour obtenir le dextranesuccinique acide qui est ensuite lyophilisé pendant 18 heures. 30 7.1 g de dextranesuccinique acide (23 mmol) sont solubilisés dans le DMF à 44 mg/mL. La solution est refroidie à 0°C. 0,77 g de l'ester cholestéryque de la leucine, sel d'acide paratoluènesulfonique (1 mmol) est mis en suspension dans du DMF à 100 g/L. 0,12 g de triéthylamine (1 mmol) est ensuite ajouté à cette suspension. Une fois la solution de polymère à 0°C, 35 0.116 g (1 mmol) de NMM et 0.124 g (1 mmol) de EtOCOCI sont ensuite ajoutés. Après 10 min de réaction, la suspension de leucinate de cholesterol 25 est ajoutée. Le milieu est ensuite maintenu à 4°C durant 15 minutes. Le milieu est ensuite chaufé à 30°C. Une fois à 30°C, le milieu est ensuite coulé dans une solution de 3.39 g de NMM (33 mmol) à 5 g/L sous vive agitation. La solution est ultrafiltrée sur membrane PES 10 kD contre 10 volumes de solution NaCl 0.9% puis 5 volumes d'eau. La concentration de la solution de polymère est déterminée par extrait sec. Une fraction de solution est lyophilisée et analysée par RMN 1H dans D2O pour déterminer le DS en leucinate de cholesterol greffé. D'après l'extrait sec : [polymère modifié] = 17,5 mg/g D'après la RMN 1H : La fraction molaire des acides modifiés par le leucinate de cholesterol par unité saccharidique est de 0,05. Exemple 3: Synthèse du Pullulanesucciniquecarboxylate de sodium modifié par le leucinate de cholestérol L'ester cholestérique de la leucine est obtenu selon le procédé décrit dans le brevet (Kenji, M et al., US4826818). 10 g de pullulane de masse molaire moyenne en poids d'environ 20 100 kg/mol (Fluka) est solubilisé dans le DMSO à une concentration de 400 mg/g à 60°C. Cette solution est équilibrée à 40°C puis deux solutions de DMF contenant 9.27 g d'anhydride succinique (371 mg/mL) et 9.37 g de NMM (375 mg/mL) sont ajoutées à la solution de pullulane. Le temps de réaction est de 240 min à partir de l'ajout de la solution de NMM. La solution ainsi obtenue 25 est diluée dans 1 L d'eau et ultrafiltrée sur membrane en PES de 10 kD contre de une solution de chlorure de sodium à 0.9% puis contre de l'eau bidistillée. La concentration en pullulanesucciniquecarboxylate de sodium dans la solution finale est déterminée par extrait sec et le produit sec est analysé par RMN 1H dans D2O NaOD pour déterminer le taux de fonctions hydroxyles converties en 30 ester succinique par unité saccharidique. D'après l'extrait sec : [pullulanesucciniquecarboxylate] = 15.8 mg/g D'après la RMN 1H :La fraction molaire des alcools porteur d'un succinate de sodium par unité saccharidique est de 1.35. 35 La solution de pullulanesucciniquecarboxylate de sodium est acidifiée sur une résine Purolite (anionique) puis est ensuite lyophilisée pendant 18 heures. g de pullulanesucciniqueacide sont solubilisés dans le DMF à 5 51 mg/mL. La solution est refroidie à 0°C. 0,08 g de NMM et 0,08 g de EtOCOCI sont ensuite ajoutés. Après 10 min de réaction, une suspension contenant 0,51 g de l'ester cholestéryl de la leucine, sel d'APTS et 0,08 g de TEA dans 5,1 mL de DMF est ajoutée. Le temps de greffage est de 20 min après l'introduction du dérivé cholestérol. Le milieu est ensuite chauffé à 30°C puis coulé dans une solution aqueuse de NMM (2,09 g à 5 mg/mL). La solution obtenue est diluée en ajoutant 100 mL d'eau puis diafiltrée sur membrane PES de 10 kD contre de une solution de chlorure de sodium à 0.9% puis contre de l'eau bidistillée. La concentration en pullulanesucciniquecarboxylate de sodium modifié par le leucinate de cholestérol dans la solution finale est déterminée par extrait sec et le produit sec est analysé par RMN 1H dans D2O NaOD pour déterminer le taux de fonctions acides converties en amide de leucinate de cholestérol. D'après l'extrait sec : [polymère modifié] = 2.9 mg/g D'après la RMN 1 H : La fraction molaire des acides modifiés par le leucinate de cholesterol par unité saccharidique est de 0,04. Exemple 4: Synthèse du Pullulanesucciniquecarboxylate de sodium modifié par l'alalinate d'alcool cétylique L'ester cétylique de l'alanine est obtenu selon le procédé décrit dans le brevet (Kenji, M et al., US4826818). Une solution de pullulanesucciniquecarboxylate de sodium obtenue 30 comme décrit à lexemple 3 est acidifiée sur une résine Purolite (anionique) puis est ensuite lyophilisée pendant 18 heures. 5 g de pullulanesucciniqueacide sont solubilisés dans le DMF à 51 mg/mL. La solution est refroidie à 0°C. 0,32 g de NMM (3,2 mmol) et 0,32 g 35 de EtOCOCI (3,2 mmol) sont ensuite ajoutés. Après 10 min de réaction, une suspension contenant 1,55 g de l'ester cétylique de l'alanine, sel d'acide25 paratoluènesulfonique (3,2 mmol) et 0,32 g de TEA (3,2 mmol) dans 20,4 mL de DMF est ajoutée. Le temps de greffage est de 20 min après l'introduction du dérivé alcool cétylique. Le milieu est ensuite chauffé à 30°C puis coulé dans une solution aqueuse de NMM (8,36 g à 5 mg/mL). La solution obtenue est diluée en ajoutant 100 mL d'eau puis diafiltrée sur membrane PES de 10 kD contre de une solution de chlorure de sodium à 0.9% puis contre de l'eau bidistillée. La concentration en pullulanesucciniquecarboxylate de sodium modifié par l'alalinate d'alcool cétylique dans la solution finale est déterminée par extrait sec et le produit sec est analysé par RMN 1H dans D2O NaOD pour déterminer le taux de fonctions acides modifiées par l'ester cétylique de l'alanine. D'après l'extrait sec : [polymère modifié] = 5.2 mg/g D'après la RMN 1H : La fraction molaire des acides modifiés par l'ester 15 cétylique de l'alanine par unité saccharidique est de 0,18. Exemple 5: Synthèse de dextraneméthylcarboxylate de sodium modifié par un dérivé du dodécanol 20 L'ester dodécanoique de l'alanine est obtenu selon le procédé décrit dans le brevet (Kenji, M et al., US4826818). Une solution de dextraneméthylcarboxylate de sodium obtenue comme décrite à l'exemple 1 est passée sur une résine Purolite (anionique) pour 25 obtenir le dextraneméthylcarboxylique acide qui est ensuite lyophilisé pendant 18 heures. 5 g de dextraneméthylcarboxylique acide (23,2 mmol fonction méthylcarboxylique acide) sont solubilisés dans le DMF à 45 g/L puis refroidis 30 à 0°C. 1,99 g de l'ester dodécanoique de l'alanine, sel d'acide partoluènesulfonique (4,6 mmol) est mis en suspension dans du DMF à 100 g/L. 0,47 g de triéthylamine (4,6 mmol) est ensuite ajoutée à cette suspension. Une fois la solution de polymère à 0°C, 2,35 g (23,2 mmol) de NMM et 2,52 g (23,2 mmol) de EtOCOCI sont ensuite ajoutés. Après 10 min de 35 réaction, la suspension de l'ester dodécanoique de l'alanine est ajoutée. Le milieu est ensuite maintenu à 4°C durant 15 minutes. Le milieu est ensuite chauffé à 30°C. Une fois à 30°C, une solution d'imidazole (3,2 g dans 9,3 mL d'eau) est ajoutée dans le milieu réactionnel. La solution de polymère est ultrafiltrée sur membrane PES 10 kD contre 10 volumes de solution NaCl 0.9% puis 5 volumes d'eau. La concentration de la solution de polymère est déterminée par extrait sec. Une fraction de solution est lyophilisée et analysée par RMN 1H dans D2O pour déterminer le DS en ester dodécanoique de l'alanine greffé. D'après l'extrait sec : [polymère modifié] = 22 mg/g D'après la RMN 1H : La fraction molaire des acides modifiés par l'ester dodécanoique de l'alanine par unité saccharidique est de 0,19. REVENDICATIONS1. Polysaccharide comportant des groupes fonctionnels carboxyles dont au moins un est substitué par un dérivé d'alcool hydrophobe, noté Ah • ledit alcool (Ah) étant greffé ou lié au polysaccharide anionique par un bras de couplage R, ledit bras de couplage étant lié au polysaccharide anionique par une fonction F ladite fonction F résultant du couplage entre la fonction amine du bras de liaison R et une fonction carboxyle du polysaccharide anionique, et ledit bras de couplage étant lié à l'alcool hydrophobe par une fonction G résultant du couplage entre une fonction carboxyle, isocyanate, thioacide ou alcool du bras de couplage et une fonction de l'alcool hydrophobe, les fonctions carboxyles du polysaccharide anionique non substituées étant sous forme de carboxylate de cation, alcalin de préférence comme Na' ou K+ • - F étant une fonction amide, - G étant soit une fonction ester, thioester, carbonate, carbamate, - R étant une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée, éventuellement comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S, et ayant au moins une fonction acide, • Ah étant un reste d'un alcool hydrophobe, produit du couplage entre la fonction hydroxyle de l'alcool hydrophobe et au moins une fonction électrophile portée par le groupement R. ledit polysaccharide comportant des groupes fonctionnels carboxyles étant amphiphile à pH neutre. 2. Polysaccharide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les polysaccharides comportant des groupes fonctionnelscarboxyles dont au moins un est substitué par un dérivé d'alcool hydrophobe, de formule générale I : n Formule I - dans laquelle, n représente la fraction molaire des fonctions carboxyles du polysaccharide substituées par F-R-G-Ah et est comprise entre 0,01 et 0,7, -.F, R, G et Ah répondant aux définitions données ci-dessus, et lorsqu'une ou des fonctions carboxyles du polysaccharide ne sont pas substituée par F-R-G-Ah, alors la ou les fonctions carboxyles du polysaccharide sont des carboxylates de cation, alcalin de préférence comme Na' ou K. 3. Polyssacharide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le polyssacharide anionique est naturellement porteur de fonctions acides et est choisi dans le groupe constitué par l'alginate, le hyaluronane, le galacturonane. Polysaccharide + carboxyle 4. Polyssacharide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le polysaccharide anioniques est un polysaccharide anionique synthétique obtenu à partir d'un polyssacharide naturel anionique ou non anionique (neutre) sur lequel au moins une fonction acide a été greffée de formule générale Il. Polysaccharide Q I I - le polysaccharide naturel étant choisi dans le groupe des polysaccharides constitués en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,6) et/ou (1,4) et/ou (1,3) et/ou (1,2), - L étant une liaison résultant du couplage entre le bras de liaison Q et une fonction ûOH du polysaccharide neutre ou anionique, étant soit une 15 fonction ester, thioester, carbonate, carbamate ou éther, - Q étant une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S, et ayant au moins une fonction acide, CO2H 20 5. Polysaccharide selon la revendication 4, caractérisé en ce que le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,6). 25 6. Polysaccharide selon la revendication 5, caractérisé en ce que le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,6) est le dextrane. 7. Polysaccharide selon la revendication 4, caractérisé en ce 30 que le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4). 8. Polysaccharide selon la revendication 7, caractérisé en ce que le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4) est choisi dans le groupe constitué par le pullulane, l'alginate, le hyaluronane, le xylane, le galacturonane ou une cellulose soluble dans l'eau. 9. Polysaccharide selon la revendication 4, caractérisé en ce que le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,3). 10. Polysaccharide selon la revendication 9, caractérisé en ce que le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,3) est un curdlane. 11. Polysaccharide selon la revendication 4, caractérisé en ce 15 que le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,2). 12. Polysaccharide selon la revendication 11, caractérisé en ce que le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type 20 (1,2) est une inuline 13. Polysaccharide selon la revendication 4, caractérisé en ce que le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4) et (1,3) 14. Polysaccharide selon la revendication 13, caractérisé en ce que, le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4) et (1,3) est un glucane. 30 15. Polysaccharide selon la revendication 4, caractérisé en ce que le polysaccharide est constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4), et (1,3) et (1,2). 16. Polysaccharide selon la revendication 15, caractérisé en ce 35 que le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,4), et (1,3) et (1,2) est le mannane. 25 17. Polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 4 à 16, caractérisé en ce que le groupe Q est choisi dans les groupes suivants : L L L OH OH OH 18. Polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, caractérisé en ce que le groupement R est choisi parmi les acides aminés. 19. Polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, caractérisé en ce que le groupement R est choisi parmi les alpha acides aminés. 15 20. Polysaccharide selon la revendication 19, caractérisé en ce que les alpha acides aminés sont choisis parmi les alpha acides aminés naturels dont la leucine, l'alanine, l'iso-leucine, la glycine, la phénylalanine, le thryptophane ou la valine. 20 21. Polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 20, caractérisé en ce que l'alcool hydrophobe est choisi parmi les alcools gras. 22. Polysaccharide selon la revendication 20, caractérisé en ce 25 que l'alcool hydrophobe est choisi parmi les alcools constitué d'une chaîne alkyle insaturée ou saturée comprenant de 4 à 18 carbones. 23. Polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 21, caractérisé en ce que l'alcool gras est choisi parmi le méristyl, le cétyl, 30 le stéaryl, le cétéaryl, le butyl, l'oléyl, la lanoline. 24. Polysaccharide selon la revendication 20, caractérisé en ce que l'alcool hydrophobe est le cholestérol.10 25. Polysaccharide selon la revendication 20, caractérisé en ce que l'alcool hydrophobe est choisi parmi les tocophérols, de préférence l'alpha-tocophérol. 26. Polysaccharide selon la revendication 20, caractérisé en ce que l'alcool hydrophobe est choisi parmi les alcools porteurs de groupe aryle. 27. Polysaccharide selon la revendication 26, caractérisé en ce 10 que l'alcool porteur de groupe aryle est choisi parmi l'alcool benzylique, l'alcool phenéthylique. 28. Utilisation d'un polysaccharide fonctionnalisés selon l'une quelconque des revendications précédentes pour la préparation de 15 compositions pharmaceutiques telles que décrites précédemment 29. Composition pharmaceutique comprenant un polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 28 et au moins un principe actif. 30. Composition pharmaceutique selon la revendication 29, caractérisée en ce qu'elle est administrable par voie orale, nasale, vaginale, buccale. 25 31. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 29 ou 30, caractérisée en ce que le principe actif est choisi dans le groupe constitué par les protéines, les glycoprotéines, les peptides et les molécules thérapeutiques non-peptidiques. 20