Brevet FR2942231A1 — publié le 20100820

DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention se rapporte au domaine de l'identification de ligands spécifiques du Facteur VIINIla humain, ces ligands étant destinés notamment à la purification et à la détection de cette protéine, ainsi qu'à leur utilisation dans le domaine médical. ART ANTERIEUR Le facteur VII (FVII) est une glycoprotéine vitamine K-dépendante qui, sous sa forme activée (FVIIa), participe au processus de coagulation en activant le facteur X et le facteur IX en présence de calcium et de facteur tissulaire. Le FVII est sécrété sous la forme d'une chaîne peptidique unique de 406 résidus d'acides aminés, dont la masse moléculaire est d'environ 50 kDa. Le FVIIa, une glycoprotéine dépendante de la vitamine K, joue donc un rôle important dans les mécanismes de la coagulation, aboutissant à la formation de caillot sanguin. Le FVlla présente l'intérêt de pouvoir agir localement en présence du facteur tissulaire libéré après lésion de tissus engendrant des hémorragies, même en l'absence de Facteur VIII ou IX. C'est pourquoi le FVlla est utilisé depuis de nombreuses années pour corriger certains troubles de la coagulation se manifestant par des saignements. Le FVII est utilisé dans le traitement des patients atteints d'hémophilie, présentant un déficit en facteur VIII (hémophilie de type A) ou en facteur IX (hémophilie de type B) , ainsi que des patients présentant d'autres déficiences des facteurs de coagulation, par exemple un déficit héréditaire en FVII. Le FVII est également préconisé dans le traitement d'accidents vasculaires cérébraux. Il est donc nécessaire de disposer de concentrés de FVIIa injectables. La méthode la plus ancienne d'obtention de concentrés de FVIIa a consisté en la purification du FVIIa à partir de protéines plasmatiques issues du fractionnement. Le document EP 0 346 241 décrit à cet effet la préparation d'une fraction enrichie en FVIIa, obtenue après adsorption puis élution d'un sous-produit du fractionnement de protéines plasmatiques contenant le FVII et le FVIIa et d'autres protéines telles les facteurs IX (FIX), X (FX) et II (FIl), notamment le prééluat du PPSB (P = prothrombine ou FIl, P = proconvertine ou FVII, S = facteur de Stuart ou FX et B = facteur antihémophilique B ou FIX). L'inconvénient de ce procédé est que le FVII obtenu contient encore quelques traces d'autres facteurs de coagulation. De même, le document EP 0 547 932 décrit un procédé de fabrication d'un concentré de FVIIa de haute pureté essentiellement dépourvu des facteurs vitamine K dépendants et du FVIII. Le FVII obtenu par ce procédé, malgré sa pureté, présente une activité thrombogénique résiduelle. Dans les années 1980, l'ADN codant pour le facteur VII humain a été isolé (Hagen et al.(1986) ; Proc. Natl . Acad. Sci. USA ; Apr 83 (8) : 2412-6) et la protéine correspondante a été exprimée dans les cellules de mammifères BHK (Baby Hamster Kidney) (document EP 0 200 421) . La demande de brevet FR 06 04872 déposée par la Demanderesse décrit également la production de FVlla dans un animal transgénique. Ces méthodes de production permettent d'obtenir des protéines sécurisées en terme de contamination par des virus ou d'autres agents pathogènes. De plus, de tels procédés permettent d'obtenir des protéines dont la séquence primaire, c'est-à-dire un enchaînement identique entre les différents acides aminés, est identique à la séquence primaire humaine. Toutefois, quelle que soit la source initiale de Facteur VIINIla, les procédés mis en oeuvre génèrent des compositions enrichies en Facteur VIINIla humain comprenant des substances contaminantes. Pour les procédés de purification du Facteur VIINIla à partir de plasma humain, il serait très avantageux de disposer d'un produit final notamment exempt, ou quasi-exempt d'activité thrombogénique résiduelle. Pour les procédés d'obtention de Facteur VIINIla humain recombinant purifié, il est essentiel de disposer d'un produit final notamment exempt, ou quasi-exempt, de protéines cellulaires indésirables. En particulier, pour les compositions de Facteur V11N11a humain purifié à partir de fluides biologiques provenant de mammifères transgéniques, il est important de disposer d'un produit final exempt, ou quasi-exempt, de Facteur VIINIla produit par ailleurs naturellement par ces mammifères transgéniques, susceptible d'être immunogène chez l'homme. Pour atteindre cet objectif, il est nécessaire de disposer de moyens efficaces et spécifiques de purification du Facteur VIINIla humain à partir d'un échantillon comprenant ledit Facteur VIINIla, qui puissent être produits facilement et de manière reproductible. RESUME DE L'INVENTION II est fourni selon l'invention des acides nucléiques monobrin ayant au moins 35 15 nucléotides de longueur et se liant spécifiquement au facteur VIINIla humain. La présente invention concerne aussi divers composés se liant spécifiquement au facteur VIINIla humain, qui comprennent dans leur structure au moins un acide nucléique défini ci-dessus. Elle est également relative à des complexes entre un acide nucléique ou un 5 composé tels que définis ci-dessus et (ii) un facteur VIINIla humain. Cette invention a également trait à un support pour l'immobilisation du Facteur VIINIla humain, caractérisé en ce qu'il comprend un matériau support solide sur lequel sont greffés une pluralité d'acides nucléiques ou de composés tels que définis ci-dessus. to L'invention a aussi pour objet un procédé pour l'immobilisation du facteur VIINIla humain sur un support, comprenant une étape au cours de laquelle on met en contact un échantillon comprenant du Facteur VIINIla humain avec un support tel que défini ci-dessus. L'invention est aussi relative à un procédé pour la purification du Facteur 15 VIINIla humain comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact un échantillon comprenant du Facteur VIINIla humain avec un acide nucléique ou avec un support tel que défini ci-dessus, afin de former un complexe entre (i) ledit acide nucléique ou ledit support et (ii) le Facteur VIINIla humain, et 20 b) libérer le Facteur VIINIla humain à partir du complexe former à l'étape a) et récupérer le Facteur VIINIla humain purifié L'invention concerne aussi un procédé pour détecter la présence de Facteur VIINIla humain dans un échantillon comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact un acide nucléique ou un support tel que défini ci-dessus 25 avec ledit échantillon; et b) détecter la formation de complexes entre (i) ledit acide nucléique ou ledit support et (ii) le Facteur VIINIla La présente invention a également trait à des utilisations médicales préventives ou curatives des acides nucléiques tels que définis ci-dessus. 30 DESCRIPTION DES FIGURES La Figure 1 illustre les résultats d'un calcul du modèle de repliement d'un acide nucléique de l'invention (Mapt2). On a utilisé le le programme d'odinateur mFold , selon des paramètres identiques à ceux utilisés pour obtenir la structure 35 rreprésentée à la figure 1, à savoir les conditions suivantes : (i) ADN à séquence linéaire, (ii) température de repliement : 25'0, (iii) conditions ioniques : [Na+] : 150 mM; [Mg++] : 4 mM, (iv) type de correction : Oligomère, (v) nombre du pourcentage de � suboptimality � : 2, (vi) limite supérieure du nombre de repliements calculés : 50, (vii) distance maximale entre deux paires de bases : pas de limite, et (viii) utilisation des valeurs par défaut pour les autres paramètres. La Figure 2 illustre les courbes de liaison d'une diversité d'acides nucléiques de l'invention (Mapt2, Mapt3 et Mapt7) au Facteur VII humain plasmatique immobilisé sur un support, dans un essai selon la technique de résonnance plasmonique de surface. En abscisse : le temps, exprimé en secondes; en ordonnées, signal de résonance, exprimé en Unités de résonance arbitraires. La Figure 3 illustre les courbes de liaison du Facteur VII humain plasmatique, utilisé à diverses concentrations, sur un acide nucléique de l'invention (Mapt2) immobilisé sur un support, dans un essai selon la technique de résonnance plasmonique de surface. En abscisse : le temps, exprimé en secondes; en ordonnées, signal de résonance, exprimé en Unités de résonance arbitraires. La Figure 4 illustre la courbe de liaison (i) du facteur VII humain recombinant à un acide nucléique de l'invention (Mapt2) immobilisé sur un support, puis (ii) la courbe de liaison d'un anticorps monoclonal anti-FVII humain au complexe acide nucléique immobilisé/FVII formé en (i), dans un essai selon la technique de résonnance plasmonique de surface. En abscisse : le temps, exprimé en secondes; en ordonnées, signal de résonance, exprimé en Unités de résonance arbitraires. La Figure 5 illustre une courbe de saturation d'un support sur lequel est immobilisé une acide nucléique de l'invention (Mapt2), avec le Facteur VII humain plasmatique injecté de manière continue au cours du temps. Essai selon la technique de résonnance plasmonique de surface. En abscisse : le temps, exprimé en secondes; en ordonnées, signal de résonance, exprimé en Unités de résonance arbitraires. La Figure 6 illustre des courbes de cinétique de liaison du Facteur VII humain plasmatique sur un acide nucléique de l'invention (Mapt2) immobilisé sur un support, dans un essai selon la technique de résonnance plasmonique de surface. En abscisse : le temps, exprimé en secondes; en ordonnées, signal de résonance, exprimé en Unités de résonance arbitraires La Figure 7 illustre les courbes de liaison de protéines Facteur VII d'origines diverses sur un acide nucléique de l'invention (Mapt2) immobilisé sur un support, 35 dans un essai selon la technique de résonnance plasmonique de surface. En abscisse : le temps, exprimé en secondes; en ordonnées, signal de résonance, exprimé en Unités de résonance arbitraires La Figure 8 illustre les courbes de liaison du facteur VII humain plasmatique et du Facteur VII recombinant de lapin sur un acide nucléique de l'invention (Mapt2) immobilisé sur un support, dans un essai selon la technique de résonnance plasmonique de surface. En abscisse : le temps, exprimé en secondes; en ordonnées, signal de résonance, exprimé en Unités de résonance arbitraires. La Figure 9 illustre la structure d'un composé de liaison spécifique au Facteur VIINIla humain comprenant un aptamère selon l'invention (Mapt2) couplé à une chaîne espaceur de PEG, la chaîne espaceur étant elle-même couplée à une molécule de biotine. La Figure 10 illustre un alignement de divers aptamères se liant spécifiquement au Facteur VIINIla humain sélectionnés à la fin d'un cycle de mise en oeuvre d'un procédé de type SELEX. Les séquences représentées sur la figure 10 sont, du haut vers le bas de la figure, respectivement les séquences SEQ ID N° 87 à SEQ ID N°100. La figure 11 illustre un profil de chromatographie obtenu lors de la mise en oeuvre du procédé de purification d'un Facteur VII humain recombinant produit dans le lait de lapine avec le support d'affinité dans lequel sont immobilisés des aptamères nucléiques anti-FVII humain. En abscisse ; le temps ; en ordonnées : la valeur d'absorbance (D.O.) à 254 nanomètres. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION II est fourni selon l'invention de nouveaux moyens aptes à se lier de manière spécifique au Facteur VIINIla humain, de taille réduite, faciles et peu onéreux à synthétiser, et qui peuvent être employés dans tous les domaines d'application dans lesquels de tels moyens sont utiles, y compris pour la purification du Facteur VIINIla humain, pour la détection du Facteur VIINIla humain et pour l'utilisation en tant que principe actif de médicaments destinés à la prévention ou au traitement des troubles de la coagulation. Plus précisément, la demanderesse a construit une famille d'acides nucléiques monobrin aptes à se lier de manière spécifique au Facteur VIINIla humain, qui ont en commun de nombreuses caractéristiques structurelles, qui seront détaillées plus loin dans la présente description. Comme cela sera détaillé plus loin, la famille d'acides nucléiques de l'invention, qui sont aptes à se lier de manière spécifique au Facteur VIINIla humain, consistent en des acides nucléiques simple brin, préférentiellement de type ADN, lesquels, du fait de certaines caractéristiques structurelles apportées par leur séquence nucléotidique, sont capables d'adopter des conformations dans l'espace qui contribuent à leur conférer leurs propriétés de liaison au Facteur VIINIla précitées. De manière générique, les acides nucléiques de l'invention peuvent aussi être appelés �aptamères � nucléotidiques, en référence à un terme couramment utilisé par l'homme du métier pour désigner ce type de molécules. On connaît déjà dans l'état de la technique des aptamères nucléiques capables de se lier à diverses protéines impliquées dans la voie de la coagulation sanguine, y compris des aptamères liant le Facteur de Willebrand (Demande PCT n° WO 2008/150495), des aptamères liant l'alpha-thr ombine (demande de brevet euopéen n° EP 1 972 693) ou la thrombine (Zhao et a I., 2008, Anal Chem, Vol. 80(19) : 7586-7593), des aptamères liant le Facteur IX/lXa (Subash et al., 2006, Thromb Haemost, Vol. 95 : 767-771; Howard et al., 2007, Atherioscl Thromb Vasc Biol, Vol. 27 : 722-727; Demande PCT n°WO 2002/096 926; Brevet aux Etats-Unis n° US 7,312,325), des aptamères liant le Facteur X/ Xa ( Demande PCT n° WO 2002/096926; Brevet aux Etats-Unis n°US 7,312,325) . Des aptamères nucléiques se liant au facteur VIINIla humain ont aussi été décrits dans l'état de la technique (Rusconi et al., 2000, Thromb Haemost, Vol. 84(5) : 841-848; Layzer et al., 2007, Spring, Vol. 17 : 1-11 La présente invention a pour objet un acide nucléique ayant au moins 15 nucléotides de longueur et se liant spécifiquement au Facteur VIINIla humain. Dans la présente description, un acide nucléique simple brin se liant spécifiquement au Facteur VIINIla humain peut aussi être désigné � aptamère nucléique �, � aptamère �, � aptamère se liant au Facteur VIINIla humain � ou encore � aptamère anti-FVIINIla humain �. Par Facteur VIINIla humain, on englobe un Facteur VIINIla humain d'origine naturelle et un Facteur VIINIla humain recombinant. Au sens de la présente description, un Facteur VIINIla humain est considéré en référence à sa séquence en acides aminés, c'est-à-dire indépendamment du fait que la protéine soit glycosylée ou non glycosylée, et, si la protéine est glycosylée, quel que soit le type de glycosylation. Comme cela sera également illustré plus en détail ultérieurement, certains modes de réalisation des acides nucléiques se liant spécifiquement au Facteur VIINIla humain de l'invention possèdent diverses caractéristiques structurelles communes, y inclus une séquence comprenant, de l'extrémité 5' vers l'extrémité 3', successivement (i) une séquence nucléotidique spécifique invariable d'environ 20 nucléotides de longueur, suivie de (ii) une séquence nucléotidique variable d'environ 40 à 50 nucléotides de longueur, suivie de (iii) une séquence nucléotidique spécifique invariable d'environ 20 nucléotides de longueur. On précise que les séquences nucléotidiques variables (ii) peuvent posséder entre elles une très forte identité de séquence en nucléotides. La demanderesse a donc construit une famille d'aptamères nucléiques se liant spécifiquement au Facteur VIINIla humain dont elle a pu montrer l'existence de relations entre (i) les caractéristiques structurelles communes et (ii) la ou les caractéristiques fonctionnelles communes. D'un point de vue structurel, la famille d'acides nucléiques, ou aptamères nucléiques, se liant spécifiquement au Facteur VIINIla humain de l'invention comprend au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec l'acide nucléique de formule (I) suivante : 5'-[SEQ ID N°t]x-[SEQ ID N°X]-[SEQ ID N2]y-3' (I) , dans laquelle : - �SEQ ID Na X � consiste en un acide nucléique ch oisi dans le groupe constitué des acides nucléiques de séquences SEQ ID N°3 à SEQ ID N85 et SEQ ID N`87 à SEQ ID N°100, - � x � est un entier égal à 0 ou 1, et - � y � est un entier égal à 0 ou 1. Dans certains modes de réalisation, l'acide de séquence SEQ ID N'X a une longueur de 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40,41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, ou 50 nucléotides. Dans d'autres modes de réalisation, l'acide nucléique de séquence SEQ ID NEC a une longueur de 43, 44, 45, 46, 47, 48 ou 49 nucléotides de longueur. Dans certains autres modes de réalisation préférés, l'acide nucléique de séquence SEQ ID NEC a une longueur de 43, 44 ou 45 nucléotides de longueur. Comme déjà mentionné précédemment, l'acide nucléique de formule (I) a au moins 15 nucléotides de longueur. Dans certains modes de réalisation, l'acide nucléique de formule (I) a au moins 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40,41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80 ou 81 nucléotides de longueur, ce qui englobe les acides nucléiques possédant exactement chacune des longueurs spécifiées. Dans certains modes de réalisation, du procédé d'obtention des aptamères de formule (I), les cycles successifs de sélection réalisés pour construire la famille d'acides nucléiques d'intérêt se liant spécifiquement au Facteur VIINIIa humain ont abouti à isoler et caractériser, à chaque étape successive de sélection, des ensembles et sous-ensembles d'aptamères nucléiques comprenant, à leurs extrémités, 5' et 3', respectivement les séquences SEQ ID N°1 et SEQ ID N'2, encadrant structurellement une séquence variable SEQ ID N'X. Dans la famille principale d'aptamères nucléiques de l'invention, l'ensemble des séquences variables SEQ ID N'X ont, entre elles une identité de séquence en nucléotides d'au moins 40%. Cela signifie que, pour la séquence SEQ ID N° X, les contraintes de structure, pour conserver la propriété de liaison au Facteur VIINIla humain, sont beaucoup moindres que les contraintes de structure pour les séquences localisées respectivement aux extrémités 5' et 3' de ces aptamères nucléiques. Lorsque l'entier � x � est égal à 0 et l'entier � y � est égal à 1, les aptamères nucléiques de l'invention, englobent les acides nucléiques comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec l'acide nucléique de formule (1-1) suivante 5' -[SEQ ID N°X]-[SEQ ID N'2] -3' (I-1), Lorsque l'entier � x � est égal à 1 et l'entier � y � est égal à 0, les aptamères nucléiques de l'invention, englobent les acides nucléiques comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec l'acide nucléique de formule (1-2) suivante 5'-[SEQ ID N°1] -[SEQ ID N°X]-3' (I-2) Lorsque l'entier � x � est égal à 0 et l'entier � y � est égal à 0, les aptamères nucléiques de l'invention, englobent les acides nucléiques comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec l'acide nucléique de formule (I-3) suivante : 5'-[SEQ ID N°X]-3' (l-3) Les aptamères nucléiques ci-dessus englobent donc les acides nucléiques comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec un acide nucléique choisi dans le groupe constitué des acides nucléiques de séquences SEQ ID N8 à SEQ ID N85 et SEQ IDN87àSEQIDNI00. De manière générale, un premier polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec un second polynucléotide ou acide nucléique possède au moins 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 100% d'identité en nucléotides avec ledit second polynucléotide ou acide nucléique. Dans certains modes de réalisation d'un acide nucléique de l'invention comprenant la séquence SEQ ID N° X, ladite séquence SEQ ID N° X est choisie dans le groupe constitué des acides nucléiques ayant au moins 15 nucléotides consécutifs d'une séquence possédant au moins 40% d'identité en nucléotides avec au moins l'une des séquences SEQ ID N°3 à SEQ ID N °85 et SEQ ID N'87 à SEQ ID N°100. Dans certains modes de réalisation d'un acide nucléique de l'invention comprenant la séquence SEQ ID N° X, ladite séquence SEQ ID N° X est choisie dans le groupe constitué des acides nucléiques possédant au moins 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 100% d'identité en nucléotides avec au moins l'une des séquences SEQ ID N°3 à SEQ ID N°85 et SEQ ID N87 à SEQ ID N°100. Il résulte de ce qui précède que la présente invention englobe une famille 30 d'acides nucléiques monobrin ayant au moins 15 nucléotides consécutifs de l'enchaînement de formule (I) défini ci-dessus. Le � pourcentage d'identité � entre deux séquences d'acides nucléiques, au sens de la présente invention, est déterminé en comparant les deux séquences alignées de manière optimale, à travers une fenêtre de comparaison. La partie de la séquence nucléotidique dans la fenêtre de comparaison peut ainsi comprendre des additions ou des délétions (par exemple des � gaps �) par rapport à la séquence de référence (qui ne comprend pas ces additions ou ces délétions) de manière à obtenir un alignement optimal entre les deux séquences. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions auxquelles une base nucléique identique est observé pour les deux séquences comparées, puis en divisant le nombre de positions auxquelles il y a identité entre les deux bases nucléiques par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison, puis en multipliant le résultat par cent afin d'obtenir le pourcentage d'identité en nucléotides des deux séquences entre elles. L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé de manière informatique à l'aide d'algorithmes connus. De manière tout à fait préférée, le pourcentage d'identité de séquence est déterminé à l'aide du logiciel CLUSTAL W (version 1.82) les paramètres étant fixés comme suit : (1) CPU MODE = ClustalW mp ; (2) ALIGNMENT = � full � ; (3) OUTPUT FORMAT = � aln w/numbers � ; (4) OUTPUT ORDER = � aligned � ; (5) COLOR ALIGNMENT = � no � ; (6) KTUP (word size) = �default � ; (7) WINDOW LENGTH = � default � ; (8) SCORE TYPE _ � percent � ; (9) TOPDIAG = � default � ; (10) PAIRGAP = � default � ; (11) PHYLOGENETIC TREE/TREE TYPE = � none � ; (12) MATRIX = � default � ; (13) GAP OPEN = � default � ; (14) END CAPS = � default � ; (15) GAP EXTENSION = � default � ; (16) GAP DISTANCES = � default � ; (17) TREE TYPE = � cladogram � et (18) TREE GRAP DISTANCES = � hide �. Sur la base de la structure d'un acide nucléique de l'invention qui est représentée sur la figure 1, l'homme du métier peut aisément déterminer les séquences spécifiques possibles pour la séquence SEQ ID N° X , au sein de l'ensemble du nombre fini des enchaînements de nucléotides possibles. A titre illustratif et pour certains modes de réalisation d'un aptamère nucléique de l'invention, l'homme du métier peut aisément, sur la base de la définition structurelle ci-dessus des aptamères nucléiques de formule (I), générer de manière automatique, par exemple à l'aide d'un calculateur numérique dont la mémoire est chargée avec un ensemble d'instructions approprié, l'ensemble des séquences SEQ ID N 'X possibles. Le cas échéant, l'h omme du métier peut ensuite déterminer automatiquement, à l'aide dudit calculateur numérique, respectivement (i) celles des séquences dont le modèle de structure dans l'espace est similaire ou identique à celle de l'aptamère nucléique de la figure 1, et (ii) celles dont la structure de l'aptamère nucléique est distincte de celle de l'aptamère nucléique de la figure 1. Les aptamères nucléiques ayant une structure dans l'espace similaire ou identique à celle de l'aptamère nucléique de la figure 1 englobent ceux qui comprennent l'enchaînement de boucles et de tiges qui a été décrit précédemment pour cet aptamère nucléique. Pour déterminer la structure dans l'espace d'un acide nucléique de formule (I), l'homme du métier peut notamment, sur la base de la description de sa séquence en nucléotides, générer un modèle structurel en utilisant le programme d'ordinateur mFold� décrit par Zuker (2003, Nucleic Acids Research, Vol. 231(13) 3406-3413), et qui peut aussi être utilisé à l'adresse Web suivante http://mfold.bioinfo.rpi.edu/. Préférentiellement, on utilise le programme d'ordinateur mFold , selon des paramètres identiques à ceux utilisés pour obtenir la structure représentée à la figure 1, à savoir les conditions suivantes : (i) ADN à séquence linéaire, (ii) température de repliement : 25'0, (iii) conditions ioniques : [Na+] : 150 mM; [Mg++] 4 mM, (iv) type de correction : Oligomère, (v) nombre du pourcentage de � suboptimality � : 2, (vi) limite supérieure du nombre de repliements calculés : 50, (vii) distance maximale entre deux paires de bases : pas de limite, et (viii) utilisation des valeurs par défaut pour les autres paramètres. Puis, l'homme du métier réalise une étape de comparaison entre (i) le modèle de structure de l'aptamère de la figure 1 et (ii) le modèle de structure de l'aptamère de formule (I) qui vient d'être généré, et il sélectionne positivement l'aptamère de formule (I) qui vient d'être généré si son modèle structurel est identique ou similaire à celui de l'aptamère représenté à la figure 1. Dans tous les cas, afin de confirmer la sélection positive de l'aptamère de formule (I) nouvellement généré, l'homme du métier peut vérifier ses propriétés de liaison au Facteur VIINIIa humain, par exemple selon l'une des méthodes spécifiées dans la présente description, en particulier dans les exemples. Dans certains modes de réalisation préférés d'un aptamère nucléique de l'invention, ledit aptamère nucléique comprend au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 80% d'identité en nucléotides avec l'acide nucléique de formule (I), ce qui englobe les aptamères comprenant 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 100% d'identité en nucléotides avec ledit acide nucléique de formule (I). Dans des modes de réalisation préférés d'un acide nucléique de formule (I) la séquence SEQ ID NEC possède au moins 80% d'identité en nucléotides avec au moins l'une des séquences SEQ ID N°3 à SEQ ID N°8 5 et SEQ ID N'87 à SEQ ID N°100, ce qui englobe les séquences possédant au moins 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 100% d'identité en nucléotides avec au moins l'une des séquences SEQ ID N°3 à SEQ ID N°85 et SEQ ID N 87 à SEQ ID N°100. Dans d'autres modes de réalisation préférés d'un acide nucléique de formule (I) la séquence SEQ ID NEC est choisie dans le grou pe constitué des séquences SEQ ID N°3 à SEQ ID N°85 et SEQ ID N'87 à SEQ ID N°100. Selon l'invention, un acide nucléique se liant au Facteur VIINIla humain consiste en un acide nucléique monobrin capable de former un complexe avec le Facteur VIINIla humain, lorsqu'il est mis en contact avec ce dernier. Les acides nucléiques se liant au Facteur VIINIla humain englobent donc ceux pour lesquels on peut détecter des complexes avec le Facteur VIINIla humain après une étape préalable de mise en contact desdits partenaires respectivement nucléique et protéique. La détection de complexes formés entre un acide nucléique se liant au Facteur VIINIla humain peut être aisément réalisée par l'homme du métier, par exemple en mettant en oeuvre une technique de détection par résonance plasmonique de surface, y compris la technique Biacore�, comme cela est illustré dans les exemples. L'homme du métier peut aussi aisément détecter la formation de complexes entre un acide nucléique d'intérêt et le Facteur VIINIla humain par des techniques classiques du type ELISA, comme cela est également illustré dans les exemples. Comme cela est illustré dans les exemples, un acide nucléique de formule (I) possède une forte capacité de liaison à tout type de Facteur VIINIla humain. En particulier, un acide nucléique de formule (I) se lie à la fois au Facteur VIINIla humain naturel et au Facteur VIINIla humain recombinant. Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, le demandeur pense que les résultats présentés dans les exemples montrent qu'un acide nucléique de formule (I) selon l'invention possède une forte capacité à se lier à des facteurs VIINIla humains ayant des types distincts de glycosylation. En d'autres termes, le demandeur pense qu'un acide nucléique de formule (I) est capable de se lier efficacement, non seulement au Facteur VIINIla provenant de sources naturelles, y compris le plasma humain, mais également à un Facteur VIINIla humain recombinant produit dans un animal transgénique, préférentiellement un mammifère transgénique, de différentes espèces, y compris le lapin, dont les types de glycosylation peuvent différer, même légèrement du type de glycosylation du Facteur VIINIla humain produit naturellement dans le plasma sanguin. Selon l'invention, un acide nucléique se liant � spécifiquement � au Facteur VIINIla humain consiste en un acide nucléique possédant une capacité à se lier au Facteur VIINIla humain supérieure à sa capacité à se lier à toute autre protéine, y compris aux Facteurs VIINIla codés par le génome d'un mammifère non humain, tels que le Facteur VIINIla de lapin. Au sens de la présente description, un premier acide nucléique possède une capacité à se lier au Facteur VIINIla humain, supérieure à celle d'un second acide nucléique, lorsque, en utilisant l'une quelconque des techniques de détection de liaison ci-dessus, et dans les mêmes conditions d'essai, une valeur de signal de liaison supérieure statistiquement significative est obtenue avec le premier acide nucléique, par rapport à celle obtenue avec les seconds acides nucléiques. De manière illustrative, lorsque la technique de détection de liaison utilisée est la technique Biacore�, comme dans les exemples, un premier acide nucléique possède une capacité à se lier au Facteur VIINIla humain, supérieure à celle d'un second acide nucléique, lorsque la valeur de signal de résonance pour le premier acide nucléique, quelle que soit l'unité de mesure de résonance exprimée, est statistiquement supérieure à la valeur de signal de résonance mesurée pour le second acide nucléique. Deux valeurs de mesure � statistiquement � distinctes englobent deux valeurs qui ont entre elles un écart supérieur à l'erreur de mesure de la technique de détection de liaison utilisée. Comme cela est illustré dans les exemples, on a testé la capacité des acides nucléiques de l'invention à se lier spécifiquement au Facteur VIINIla humain. De manière générale, un acide nucléique de formule (I) possède une valeur de constante de dissociation pour le facteur VIINIIA humain d'au plus 500 nM, mieux d'au plus 200 nM. On a montré que les acides nucléiques de formule (I) ont une capacité à se lier au Facteur VIINIla humain qui est significativement supérieure à leur capacité de liaison à n'importe quel Facteur VIINIla provenant d'un mammifère non humain. En particulier, alors qu'un acide nucléique de formule (I) possède une forte capacité à se lier à tout type de Facteur VIINIla humain, y compris naturel ou recombinant, il a une capacité faible ou nulle à se lier à un Facteur VIINIla codé par le génome d'un mammifère non humain, y compris un Facteur VIINIla de lapin. Cette caractéristique avantageuse d'un acide nucléique de formule (I) est illustrée dans les exemples notamment avec l'acide nucléique de séquence SEQ ID N° 86, qui consiste en un acide nucléique de formul e (I) dans lequel la séquence SEQ ID N'X consiste en la séquence SEQ ID N°85 et dont la structure, après son couplage avec du PEG et de la biotine, est représentée sur la figure 9. Ainsi, pour l'acide nucléique de formule (I) de séquence SEQ ID N°86, on a déterminé selon la technique Biacore�, que la valeur de capacité de liaison au Facteur VIINIla humain, exprimée comme la constante de dissociation Kd, est d'environ 100 nM. De plus, ledit acide nucléique de formule (I) possède une capacité de liaison du même ordre de grandeur à la fois au Facteur VIINIla humain plasmatique et à un Facteur VIINIla humain recombinant, par exemple produit chez un lapin transgénique. On a aussi montré dans les exemples que les complexes entre un acide nucléique de formule (I) et un Facteur VIINIla humain sont stoechiométriques, c'est à dire que le rapport du nombre de molécules d'acide nucléique de formule (I) au nombre de molécules de Facteur VIINIla humain complexées est d'environ 1::1, et peut être plus particulièrement de 1::1. Ainsi, selon un autre aspect, la capacité d'un acide nucléique de formule (I) à de lier � spécifiquement � au Facteur VIINIla humain peut aussi être exprimé comme le rapport des constantes de dissociation Kd, respectivement pour le Facteur VII/Vlla humain et un Facteur VIINIla non humain. Selon encore une autre caractéristique d'un acide nucléique de formule (I) selon l'invention, la capacité dudit acide nucléique à se lier spécifiquement au Facteur VIINIla humain peut aussi être exprimée par la condition (A) suivante : Kd humain/Kd non-humain Ainsi, pour un acide nucléique se liant spécifiquement au Facteur VIINIla humain selon l'invention, le rapport Kd humain/Kd non-humain est préférentiellement inférieur à 0,01, mieux inférieur à 0,001. Ces caractéristiques de spécificité de la liaison d'un acide nucléique de formule (I) selon l'invention au Facteur VIINIla humain illustrent que les acides nucléiques aptamères de l'invention peuvent être avantageusement utilisés pour discriminer entre un Facteur VIINIla humain et un Facteur VIINIla provenant d'un mammifère non humain, par exemple un Facteur VIINIla de lapin. En particulier, un acide nucléique de formule (I) selon l'invention peut être avantageusement utilisé dans un moyen de purification d'un Facteur VIINIla humain, y compris à partir d'un milieu de départ complexe susceptible de contenir un Facteur VIINIla provenant d'un mammifère non humain. Notamment, un acide nucléique de formule (I) peut être utilisé dans un moyen de purification du Facteur VIINIla recombinant dans un fluide biologique d'un lapin transgénique pour le Facteur VIINIla humain, ledit fluide biologique étant susceptible de contenir un Facteur VIINIla produit naturellement par le lapin. Comme cela est illustré dans les exemples, une autre caractéristique d'un acide nucléique de formule (I) est son aptitude, dans un complexe avec le Facteur VIINIla humain, à libérer le Facteur VIINIla humain par incubation dudit complexe avec un agent chélateur de cations métalliques. On a notamment montré que les molécules de Facteur VIINIla complexées avec un acide nucléique de formule (I) sont libérées desdits complexes par mise en contact avec un agent chélateur de cations métalliques tel que I'EDTA. Ainsi, selon encore un autre aspect, la liaison d'un acide nucléique de formule (I) selon l'invention au facteur VIINIla humain peut être dissociée par mise en contact avec un agent chélateur des cations métalliques, y compris par mise en contact avec de I'EDTA. Cette caractéristique additionnelle d'un acide nucléique de formule (I) selon l'invention est particulièrement avantageuse pour l'utilisation dudit acide nucléique dans un moyen de purification du Facteur VIINIla humain. En effet, dans un telle application pour la purification, le Facteur VIINIla humain, immobilisé dans un complexe avec un acide nucléique de formule (I), peut ensuite être récupéré sous forme purifiée par simple mise en contact ou incubation avec un agent chélateur des cations métalliques, donc sans nécessiter l'emploi de substances connues pour dénaturer, au moins partiellement, le Facteur VIINIla humain, comme les conditions acides ou l'urée. Pour son utilisation dans un moyen de purification du Facteur VIINIla humain, un acide nucléique de formule (I) selon l'invention est préférentiellement immobilisé sur un support solide. Ledit support solide englobe des particules solides, des supports de chromatographie, etc. Les techniques d'immobilisation d'acides nucléiques d'intérêt sur des types très variés de supports solides sont bien connues par l'homme du métier. Le support solide peut être une colonne de chromatographie d'affinité to composée d'un gel dérivé de l'agarose, de la cellulose ou d'un gel synthétique tel qu'un dérivé acrylamide, méthacrylate ou polystyrène, une puce telle qu'une puce adaptée à la résonance plasmonique de surface, une membrane telle qu'une membrane polyamide, polyacrylonitrile ou polyester ou encore une bille magnétique ou paramagnétique. 15 Pour son utilisation dans un moyen de purification du Facteur VIINIla humain, un acide nucléique de formule (I) selon l'invention est préférentiellement inclus dans une structure chimique comprenant également un moyen espaceur et, le cas échéant, un moyen d'immobilisation sur un support solide. Ainsi, la présente invention est également relative à un composé se liant 20 spécifiquement au facteur VIINIla humain, caractérisé en ce qu'il est de formule (II) suivante : [SPAC]- [NUCL] (Il), dans laquelle : - [SPAC] signifie une chaîne espaceur, et - [NUCL] signifie un acide nucléique se liant spécifiquement au Facteur VIINIla 25 humain comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec l'acide nucléique de formule (I). Le composé ci-dessus constitue un mode de réalisation particulier d'un moyen de purification du Facteur VIINIla humain. 30 La � chaîne espaceur � désignée [SPAC] dans le composé de formule (Il) peut être de tout type connu. Ladite chaîne espaceur a pour fonction d'éloigner physiquement l'acide nucléique [NUCL] de la surface du support solide sur lequel ledit composé peut être immobilisé et de permettre une mobilité relative de l'acide nucléique [NUCL], par rapport à la surface du support solide sur lequel il peut être 35 immobilisé. La chaîne espaceur limite ou évite que des encombrements stériques, dus à une trop grande proximité du support solide avec l'acide nucléique de formule (I), gênent les évènements de liaison entre ledit acide nucléique et des molécules de Facteur VIINIIa humain susceptibles d'être mises en contact avec celui-ci. Dans le composé de formule (Il), la chaîne espaceur est liée préférentiellement à l'extrémité 5' ou à l'extrémité 3' de l'acide nucléique [NUCL]. Avantageusement la chaîne espaceur est liée à la fois à une extrémité de l'aptamère et au support solide. Cette construction avec espaceur a pour avantage de ne pas immobiliser directement l'aptamère sur le support solide. De préférence la chaîne espaceur est un oligonucléotide non spécifique ou du Polyéthylène Glycol (PEG). Lorsque la chaîne espaceur consiste en un oligonucléotide non spécifique, ledit oligonucléotide comprend avantageusement au moins 5 nucléotides de longueur, de préférence entre 5 et 15 nucléotides de longueur. Dans les modes de réalisation d'un composé de formule (Il) dans lesquels la chaîne espaceur consiste en un Polyéthylène Glycol, ladite chaîne espaceur 15 englobe un polyéthylène glycol de type PEG(C18). Pour immobiliser l'aptamère directement sur le support solide, ou sur la chaîne espaceur, l'acide nucléique [NUCL] peut être modifié chimiquement avec différents groupements chimiques tels que des groupements permettant d'immobiliser ledit acide nucléique de façon covalente, tels que des thiols, des 20 amines ou tout autre groupement capable de réagir avec des groupements chimiques présents sur le support solide. Dans certains modes de réalisation, la chaîne espaceur est-elle-même apte à être immobilisée sur le support solide, le cas échéant après modification de ladite chaîne espaceur avec un ou plusieurs groupements chimiques appropriés. Dans encore d'autres modes de réalisation, la 25 chaîne espaceur est liée à un composé permettant l'immobilisation du composé d'intérêt comprenant l'aptamère nucléique sur le support mobile. Ainsi, la présente invention est également relative à un composé se liant spécifiquement au facteur VIINIIa humain, caractérisé en ce qu'il est de formule (III) suivante : 30 [FIX]-[SPAC]- [NUCL] (III), dans laquelle : - [FIX] signifie un composé d'immobilisation sur un support, - [SPAC] signifie une chaîne espaceur, et - [NUCL] signifie un acide nucléique se liant spécifiquement au Facteur VIINIla humain comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec l'acide nucléique de formule (I). Le composé de formule (III) ci-dessus constitue un mode de réalisation d'un moyen de purification du Facteur VIINIIa humain. Ledit moyen de purification du Facteur VIINlIa humain de formule (Il) ou de formule (III) se présente préférentiellement sous une forme liée à un support solide. Dans le composé de formule (III) le composé [FIX] consiste en un composé choisi parmi (i) un composé capable de former une ou plusieurs liaisons covalente avec le matériau de surface d'un support solide et (ii) un composé capable de se lier spécifiquement sur le support solide par l'intermédiaire de liaison faibles non covalentes, y compris des liaisons hydrogènes, des forces électrostatiques ou des forces de Van der Waals. Le premier type de composé [FIX] englobe les agents de couplage bifonctionnels, comme le glutaraldéhyde, le SIAB ou encore le SMCC. Le composé SIAB, décrit par Hermanson G.T. (1996, Bioconjugate techniques, San Diego : Academic Press, pp 239-242), est le composé de formule (I) suivante : (I) Le composé SIAB comprend deux groupes réactifs, respectivement un groupe iodoacétate et un groupe ester Sulfo-NHS, ces groupes réagissant respectivement sur des groupes amino et sulfhydryl. Le composé SMCC, qui est décrit par Samoszuk M.K. et al. (1989, Antibody, Immunoconjugates Radiopharm., 2(11: 37-46), est le composé de formule (Il) suivante : (II) Le composé SMCC comprend deux groupes réactifs, respectivement un groupe ester Sulfo-NHS et un groupe maléimide, qui réagissent respectivement avec un groupe amino et un groupe sulfhydryl. Le second type de composé [FIX] englobe la biotine, qui est capable de se lier de manière spécifique non covalente à des molécules d'avidine ou de streptavidine présentes sur le support solide. Dans certains modes de réalisation, une fois immobilisé sur le support solide via la chaîne espaceur, l'aptamère est avantageusement modifié à son extrémité libre (extrémité non liée à l'espaceur) grâce à, et sans s'y limiter, un nucléotide chimiquement modifié (tel que 2'-O-methyl ou 2'-fluoropyrimidine, 2'-ribopurine, phosphoramidite), un nucléotide inversé ou un groupement chimique (PEG, polycations, cholestérol). Ces modifications permettent de protéger certains aptamères des dégradations enzymatiques. Le support solide peut être une colonne de chromatographie d'affinité composée d'un gel dérivé de l'agarose, de la cellulose ou d'un gel synthétique tel qu'un dérivé acrylamide, méthacrylate ou polystyrène, une puce telle qu'une puce adaptée à la résonance plasmonique de surface, une membrane telle qu'une membrane polyamide, polyacrylonitrile ou polyester, une bille magnétique ou paramagnétique. La présente invention est également relative à un complexe entre : (i) une substance choisie parmi un acide nucléique de formule (I), un composé de formule (Il) et un composé de formule (III), et (ii) un Facteur VIINIla humain. La présente invention a aussi pour objet un support pour l'immobilisation du Facteur VIINIla humain, caractérisé en ce qu'il comprend un matériau support solide sur lequel sont greffées une pluralité de molécules consistant chacune en, ou comprenant chacune, un aptamère nucléique, lesdites molécules étant choisies parmi (a) un acide nucléique de formule (I), (b) un composé de formule (Il) et (c) un composé de formule (III). Le support ci-dessus peut être utilisé pratiquement dans toutes les applications pour lesquelles on cherche à immobiliser le Facteur VIINIla humain, ce qui englobe les applications à des fins de purification du Facteur VIINIla et les applications à des fins de détection du Facteur VIINIla humain. La réalisation de supports sur lesquels sont immobilisés des aptamères nucléiques de l'invention se liant spécifiquement au Facteur VIINIla humain sont largement illustrés dans les exemples, dans lesquels les aptamères de l'invention sont utilisés notamment comme agents de capture du FVIINIIa humain, utilisables pour la purification ou pour la détection du FVIINIla humain dans des échantillons. La présente invention concerne donc aussi un procédé pour l'immobilisation du facteur VIINIla humain sur un support, comprenant une étape au cours de laquelle on met en contact un échantillon comprenant du Facteur VIINIla humain avec un support solide sur lequel a été préalablement immobilisée une substance choisie parmi un acide nucléique de formule (I), un composé de formule (Il) et un composé de formule (III). Ledit procédé peut comprendre, selon les objectifs techniques poursuivis, une étape additionnelle de récupération des molécules de Facteur VIINIla humain immobilisées, complexées avec les molécules d'acides nucléiques de formule (I). L'étape additionnelle de récupération du Facteur VIINIla consiste préférentiellement en une étape de mise en contact des complexes de Facteur VIINIla avec les acides nucléiques de formule (I) avec un agent chélateur des cations métalliques, tel que l'EDTA. La présente invention a encore pour objet un procédé pour la purification du Facteur VIINIla humain comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact un échantillon comprenant du Facteur VIINIla humain avec un acide nucléique de formule (I), un composé de formule (Il), un composé de formule (III) ou avec un support solide tel que défini dans la présente description, afin de former un complexe entre (i) ledit acide nucléique ou ledit support et (ii) le Facteur VIINIla humain, et b) libérer le Facteur VIINIla humain à partir du complexe former à l'étape a) et récupérer le Facteur VIINIla humain purifié. Pour la réalisation de procédés de purification de protéine par chromatographie d'affinité en utilisant des supports solides sur lesquels sont immobilisés les aptamères d'intérêt, l'homme du métier peut se référer aux travaux décrits par Romig et al. (1999, J Chomatogr B Biomed Sci Api, Vol. 731(2) : 275- 284). De plus, la fabrication d'un support d'affinité comprenant un aptamère nucléique de l'invention et la réalisation d'un procédé de purification du Facteur Vil humain avec ledit support d'affinité est illustré dans les exemples. De manière générale, les supports solides sur lesquels peuvent être immobilisés les aptamères de l'invention englobe tout type de support ayant la structure et la composition retrouvée communément pour les supports de filtre, de support de silicium pour des puces, des membranes, etc. Les supports solides englobent notamment les résines, les résines pour colonne de chromatographie d'affinité, les billes de polymères, les billes magnétiques, etc. Les supports solides englobent aussi notamment les matériaux à base de verre ou de métal, tels que l'acier, l'or, l'argent, l'aluminium, le cuivre, le silicium, le verre, la céramique. Les supports solides englobent aussi notamment des matériaux polymères, tels qu'un polyéthylène, un polypropylène, un polyamide, un fluorure de polyvinylidène, et des combinaisons de ceux-ci. Le support solide peut être revêtu avec un matériau facilitant l'attachement, la fixation, la formation de complexes, l'immobilisation ou l'interaction avec les aptamères. Dans certains modes de réalisation, le support solide est une lame de verre dont la surface est revêtue d'une couche d'or, d'une couche ayant subi un traitement par carboxyméthylation, d'une couche de dextran, de collagène, d'avidine, de streptavidine, etc. De cette manière, les aptamères selon l'invention peuvent être immobilisés sur le support solide par l'intermédiaire d'un revêtement d'attachement, comme par exemple décrit ci-dessus, soit par réaction chimique avec création de liaisons covalentes, soit par association par des liaisons non covalentes telles que des liaisons hydrogène, des forces électrostatiques, des forces de Van der Waals, etc. Les exemples décrivent des modes de réalisation de supports solides sur lesquels sont immobilisés, par des liaisons non covalentes, les aptamères de l'invention. Dans les exemples, on décrit notamment des supports solides consistant en une lame de verre revêtue d'une couche de molécules de streptavidine, et des aptamères de l'invention conjugués à une molécule de biotine qui sont immobilisé sur le support par association non covalente biotine/streptavidine. Dans les exemples, on décrit aussi des supports solides consistant en un matériau de polystyrène revêtu d'une couche de molécules de streptavidine, et des aptamères de l'invention conjugués à une molécule de biotine qui sont immobilisé sur le support par association non covalente biotine/streptavidine. Dans certains modes de réalisation, les aptamères de l'invention peuvent être immobilisés sur un support solide adapté pour la chromatographie d'affinité, l'électrochromatographie et l'électrophorèse capillaire, comme décrit par exemple par Ravelet et al. (2006, J Chromatogr A, Vol. 117(1) : 1-10), Connor et al. (2006, J Chromatogr A, Vol. 111(2) : 115-119), Cho et al. (2004, Electrophoresis, Vol. 25 (21- 22) : 3730-3739) ou encore Zhao et al. (2008, Anal Chem, Vol. 80(10) : 3915-3920). Un aptamère de formule (I) ayant au moins 15 nucléotides de longueur et se liant spécifiquement au Facteur VIINIIA humain, un composé de formule (Il), ou un composé de formule (III), peut être aussi avantageusement utilisé comme agent de capture du FVIINlla humain, dans des procédés et dispositifs de détection ou de diagnostic. Selon encore un autre aspect, la présente invention concerne aussi un procédé pour détecter la présence de Facteur VIINIIa humain dans un échantillon comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact (i) un acide nucléique de formule (I), un composé de formule (Il) ou un composé de formule (III) ou un support solide sur lequel sont immobilisés une pluralité de molécules dudit acide nucléique ou dudit composé, avec (ii) ledit échantillon; et b) détecter la formation de complexes entre (i) ledit acide nucléique de formule (I), ledit composé de formule (Il) ou ledit composé de formule (III) ou ledit support et (ii) le Facteur VIINIIa. Les exemples de la présente demande de brevet fournissent divers modes de réalisation de procédés de détection du FVIINlla humain avec des aptamères de l'invention préalablement immobilisés sur un support solide. Pour la réalisation d'un procédé de détection selon l'invention, le support solide utilisé peut être un support solide choisi parmi les supports solides décrits précédemment en relation avec le procédé de purification du Facteur VIINIIa humain. Pour la réalisation d'un procédé ou d'un dispositif de détection du Facteur VIINIla humain, l'homme du métier peut se référer notamment aux techniques décrites dans la demande de brevet européen n°EP 1 972 693, la demande PCT n° WO 2008/038696, la demande PCT n°WO 2008/025830, o u encore la demande PCT n°WO 2007/0322359. Dans certains modes de réalisation, l'étape b) de détection de la formation de complexes entre (i) ledit acide nucléique ou ledit support solide et (ii) le Facteur VIINIla humain peut être réalisé par mesure du signal de résonance plasmonique de surface, comme cela est décrit dans les exemples. Dans certains autres modes de réalisation, l'étape b) de détection de la formation de complexes entre (i) ledit acide nucléique ou ledit support solide et (ii) le Facteur VIINIla humain peut être réalisée par la mise en contact desdits complexes éventuellement formés avec un ligand du Facteur VIINIla humain, ledit ligand étant détectable. Dans les exemples, on décrit ces modes de réalisation dans lesquels on utilise, comme ligand détectable du Facteur VIINIla humain, des anticorps monoclonaux ou polyclonaux anti-FVIINIla humain, marqués avec une enzyme, en l'occurrence la peroxydase de raifort, comme cela est conventionnellement utilisé dans les tests de type ELISA. Avantageusement, l'échantillon comprenant, ou susceptible de comprendre, du Facteur VIINIla humain consiste en un échantillon liquide qui contient le Facteur VIINIla humain, y compris un échantillon liquide comprenant le Facteur VIINIla humain et qui est susceptible de contenir aussi des molécules de Facteur VIINIla d'un mammifère non humain. Dans certains modes de réalisation du procédé de purification ou du procédé de détection ci-dessus, ledit échantillon consiste en une solution biologique, tels qu'un fluide corporel, une cellule, un broyat cellulaire, un tissu, un broyat tissulaire, un organe ou un organisme entier. Dans certains modes de réalisation du procédé de purification ou du procédé de détection ci-dessus, ledit échantillon consiste en une solution biologique liquide provenant d'un animal tel que du sang, un dérivé du sang (dérivé sanguin), du lait de mammifère ou un dérivé du lait de mammifère. Ledit échantillon peut consister en du plasma, du cryoprécipité du plasma, du lait clarifié ou leurs dérivés. Dans des modes de réalisation particulièrement préférés du procédé de purification ou du procédé de détection ci-dessus, ledit échantillon provient d'un animal transgénique pour le Facteur VIINIla humain. Avantageusement la solution est du lait de mammifère ou un dérivé du lait de mammifère transgénique pour le Facteur VIINIla humain. Au sens de l'invention, les animaux transgéniques englobent (i) les mammifères non humains tels que les vaches, les chèvres, les lapins, les porcs, les singes, les rats ou les souris, (ii) les oiseaux ou encore (iii) les insectes tels que les moustiques, les mouches ou les vers à soie. Dans certains modes de réalisation préférés, l'animal transgénique pour le Facteur VIINIla humain est un mammifère transgénique non humain, de manière tout à fait préférée une lapine transgénique pour le Facteur VIINIla humain. Avantageusement, le mammifère transgénique produit le Facteur VIINIla recombinant dans ses glandes mammaires, du fait de l'insertion dans son génome d'une cassette d'expression comprenant acide nucléique codant le Facteur VIINIla humain qui est placé sous le contrôle d'un promoteur spécifique permettant l'expression de la protéine transgénique dans le lait dudit mammifère transgénique. Une méthode de production du Facteur VIINIla humain dans le lait d'un animal transgénique peut comporter les étapes suivantes : une molécule d'ADN comprenant un gène codant le Facteur VIINIla humain, ledit gène étant sous le contrôle d'un promoteur d'une protéine sécrétée naturellement dans le lait (tels que le promoteur de la caséine, de la béta-caséine, de la lactalbumine, de la bétalactoglobuline ou le promoteur WAP) est intégrée dans un embryon d'un mammifère non humain. L'embryon est ensuite placé dans une femelle de mammifère de la même espèce. Une fois que le mammifère issu de l'embryon s'est suffisamment développé, la lactation du mammifère est induite, puis le lait collecté. Le lait contient alors le Facteur VIINIla humain. Un exemple de procédé de préparation de protéine dans le lait d'une femelle de mammifère autre que l'être humain est donné dans le document EP 0 527 063, dont l'enseignement peut être repris pour la production de la protéine de l'invention. Un plasmide contenant le promoteur WAP (Whey Acidic Protein) est fabriqué par introduction d'une séquence comportant le promoteur du gène WAP, ce plasmide étant réalisé de manière à pouvoir recevoir un gène étranger placé sous la dépendance du promoteur WAP. Le plasmide contenant le promoteur et le gène codant pour la protéine de l'invention sont utilisés pour obtenir des lapines transgéniques, par microinjection dans le pronucléus mâle d'embryons de lapines. Les embryons sont ensuite transférés dans l'oviducte de femelles hormonalement préparées. La présence des transgènes est révélée par la technique de Southern à partir de l'ADN extrait des lapereaux transgéniques obtenus. Les concentrations dans le lait des animaux sont évaluées à l'aide de tests radioimmunologiques spécifiques. D'autres documents décrivent des procédés de préparation de protéines dans le lait d'une femelle de mammifère autre que l'homme. On peut citer, sans s'y limiter les documents US 7,045,676 (souris transgénique) et EP 1 739 170. (production de facteur von Willebrand dans un mammifère transgénique). Selon d'autres aspects de la présente invention, un acide nucléique ayant au moins 15 nucléotides de longueur et se liant spécifiquement au Facteur VIINIla humain peut être utilisé in vivo, dans des situations physiologiques nécessitant de provoquer une inhibition de l'activation du Facteur X par le Facteur Vlla, par exemple en inhibant la formation d'un complexe fonctionnel Facteur VII/Facteur tissulaire (� Tissue Factor �). En d'autres termes, un acide nucléique aptamère tel que défini dans la présente description peut aussi être utilisé, à titre préventif ou curatif, en tant que principe actif anticoagulant d'un médicament. En particulier, un acide nucléique aptamère tel que défini dans la présente description peut être utilisé comme principe actif préventif ou curatif anticoagulant, notamment pour le traitement de troubles de la coagulation incluant les thromboses veineuses, les thromboses artérielles, les thromboses post-chirurgicales, les troubles associés aux pontages coronariens (CABG), les accidents vasculaires cérébraux, les angioplasties coronariennes percutanées transdermiques (PTCA), les métastases tumorales, les réactions inflammatoires non-sévères ou sévères, les chocs septiques, l'hypotension, le syndrome de détresse respiratoire aigu (ARDS), les embolismes pulmonaires, la coagulation intravasculaire disséminée (DIC), les resténoses vasculaires, le dépôt de plaquettes, l'infarctus du myocarde, l'angiogénèse, et tout traitement prohylactique d'hommes ou de femmes ayant un risque de développer une thrombose. La présente invention a aussi pour objet une composition pharmaceutique comprenant un acide nucléique ayant au moins 15 nucléotides de longueur se liant spécifiquement au facteur VIINIIa humain tel que défini dans la présente description, en combinaison avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. La quantité d'acide nucléique aptamère anti-FVII/FVlla humain selon l'invention, dans une composition pharmaceutique, est adaptée pour permettre l'administration d'une quantité efficace de ce principe actif aux patients. Les gammes de doses de l'aptamère anti-FVIINIIa humain de l'invention peut être aisément déterminée par le médecin ou le pharmacien. En général, la quantité de principe actif à administrer varie avec l'âge, la condition médicale, et le sexe du patient, ainsi qu'avec le degré d'extension de la maladie ou du degré du risque de développer la maladie, et peut être aisément déterminée par l'homme du métier. En général, une composition pharmaceutique comprend une quantité d'un 35 aptamère anti-FVIINIla humain allant de 1 nanogramme à 100 milligrammes par dose unitaire, mieux allant de 100 nanogrammes à 10 milligrammes par dose unitaire. En général, une composition pharmaceutique selon l'invention comprend de 0,01% à 99,9% en poids d'un aptamère anti-FVIINIIa, ou d'une combinaison de plusieurs aptamères anti-FVIINIIa, et de 99,9% à 0,01 % en poids d'un excipient, ou d'une combinaison d'excipients, par rapport au poids total de ladite composition. Dans certains modes de réalisation, ladite composition pharmaceutique comprend 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 aptamères anti-FVI INlla distincts. Pour réaliser une composition pharmaceutique selon l'invention, l'homme du 10 métier peut avantageusement se référer à l'ouvrage de Remington. La composition pharmaceutique selon l'invention peut être utilisée pour une administration parentérale, topique ou locale et de manière prophylactique et/ou thérapeutique. Ainsi un aptamère anti-FVIINIIa humain selon la présente invention est préparé sous une forme adaptée au type d'administration choisi, par exemple 15 sous forme liquide ou sous forme lyophilisée. Les compositions pharmaceutiques d'aptamères anti-FVIINIIa humain selon la présente invention peuvent contenir un excipient et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable, de préférence aqueux. De nombreux excipients et/ou véhicules pharmaceutiquement acceptables peuvent être utilisés, par exemple, l'eau, l'eau tamponnée, une solution saline, une solution 20 de glycine et leurs dérivés ainsi que des agents nécessaires pour reproduire les conditions physiologiques comme par exemple des agents tampons et ajusteurs de pH, des surfactants comme l'acétate de sodium, le lactate de sodium, le chlorure de sodium, le chlorure de potassium, le chlorure de calcium, cette liste n'étant pas limitative. De plus, la composition pharmaceutique peut être stérilisée par des 25 techniques de stérilisation bien connues de l'homme du métier. De manière générale, pour fabriquer une composition pharmaceutique conforme à l'invention, l'homme du métier peut avantageusement se référer également à la dernière édition de la Pharmacopée Européenne, par exemple à la 5è édition de la Pharmacopée Européenne publiée en janvier 2005, ou bien encore à la 6è édition de la 30 Pharmacopée Européenne, disponible au public en juin 2007. Pour la fabrication d'une composition pharmaceutique comprenant un aptamère comme principe actif, l'homme du métier peut également se référer au contenu de la demande PCT n° WO 2007/058801, de la demande PCT n° WO 2005/084412 et la demande PCT n°WO 2004/047742. ou encore dans la demande 35 PCT n°WO 2008/150495. 30 Dans certains modes de réalisation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, le ou les principes actifs aptamères anti-FVIINIla humain peut (peuvent) être utilisé(s) seul(s) ou en combinaison avec une ou plusieurs autres molécules pharmaceutiquement actives, y compris avec un ou plusieurs autres principes actifs anticoagulants. L'invention est également relative à un acide nucléique ayant au moins 15 nucléotides de longueur se liant spécifiquement au facteur VIINIla humain, tel que défini dans la présente description, pour son utilisation en tant que médicament. L'invention a aussi trait à l'utilisation d'un acide nucléique ayant au moins 15 nucléotides de longueur se liant spécifiquement au facteur VIINIla humain, tel que défini dans la présente description, pour la fabrication d'un médicament pour le traitement des troubles de la coagulation. L'invention concerne aussi l'utilisation d'un acide nucléique ayant au moins 15 nucléotides de longueur se liant spécifiquement au facteur VIINIla humain, tel que défini dans la présente description, pour le traitement des troubles de la coagulation. L'invention a aussi pour objet une méthode de prévention ou de traitement d'un trouble de la coagulation, comprenant une étape au cours de laquelle on administre, à un patient nécessitant un traitement préventif ou curatif d'un trouble de la coagulation, une composition pharmaceutique aptamère anti-FVIINIla humain tel que défini dans la présente description. En général, on administre une dose quotidienne d'un aptamère anti-FVIINIla humain tel que défini dans la présente description allant de 1 nanogramme à 100 milligrammes, mieux allant de 100 nanogrammes à 10 milligrammes, pour un patient de 80 kgs. La présente invention est également illustrée ci-après, sans y être limitée, aux exemples suivants. EXEMPLES, Exemple 1 : Capture d'acides nucléiques aptamères selon l'invention par du Facteur VIINIla humain immobilisé sur un support. On a fabriqué un support solide sur lequel ont été immobilisées des 35 molécules de Facteur VIINIla humain purifié d'origine plasmatique. On réalise une immobilisation du Facteur Vll humain sur dextran carboxymethyl activé par NHS-EDC et se liant aux amines libres présentes sur le FVI INI la. Le Facteur VIINIIa humain est ainsi immobilisé avec un taux 5 d'immobilisation de 2743 RU (1 RU correspond approximativement à 1 pg de produit immobilisé par mm2). Des aptamères nucléiques de l'invention (pureté : 99%), respectivement l'aptamère Mapt 2 (SEQ ID N°86), l'aptamère Mapt 3 (SEQ ID N°41) et l'aptamère Mapt 7 (SEQ ID N°58), ont été dilués dans du tampo n de course (Tris 50 mM, NaCl 10 50 mM, CaCl2 10 mM, MgCl2 4 mM, pH 7,4) de manière à obtenir trois échantillons d'aptamères. Chaque échantillon a été injecté de façon séquentielle sur une même puce (support solide) contenant le FVII humain immobilisé. Des contrôles sont obtenus en injectant des blancs ne contenant que du tampon de course. Toutes les injections 15 ont été réalisées avec un débit 30p1/min pendant 60 sec, après l'injection, du tampon de course a été injecté sur la puce à un débit identique pendant 120 sec. Du tampon d'élution (EDTA, 5mM) a ensuite été injecté pendant 60 sec avec un débit de 30pl/min pour décrocher l'aptamère du FVII humain immobilisé. La puce permet d'étudier en temps réel la formation et la rupture des interactions entre le FVII 20 humain immobilisé et chacun des aptamères Mapt2, Mapt3 et Mapt 7 testés, grâce à la résonance plasmonique de surface (RPS). Une liaison sur le FVII humain immobilisé se traduit par une augmentation du signal en unité de résonance (RU) enregistré par l'appareil (Figure 2). Ces analyses sont effectuées avec l'appareil de RPS Biacore T100 (GE). La modélisation des interactions enregistrées sont 25 effectuées à l'aide du Logiciel Biaevaluation (GE). Les résultats obtenus montrent que tous les aptamères nucléiques testés se lient avec une affinité significative au Facteur VII humain plasmatique. 30 Exemple 2 : Capture du Facteur VIINIIa humain par un acide nucléique aptamère selon l'invention, immobilisé sur un support. On a fabriqué un support solide sur lequel ont été immobilisées des molécules de l'aptamère nucléique de l'invention de séquence SEQ ID N°86, aussi désigné ici � Mapt2 �. Préalablement à sa fixation sur le support solide, l'extrémité 35 5' de l'aptamère Mapt2 a été chimiquement couplée à une chaîne espaceur constituée de 4 molécules de PEG(C18). Puis, l'extrémité libre de la chaîne espaceur, opposée à l'extrémité couplée à l'aptamère, a été couplée à une molécule de biotine. On dispose d'un support solide contenant des molécules de streptavidine immobilisées (Serie S sensor Chip SA, GE) Puis, on a mis en contact le support solide ci-dessus avec les composés aptamères ci-dessus afin d'immobiliser les acides nucléiques de séquence SEQ ID N° 86 , par association non covalente entre les molécules de streptavidine du support et les molécules de biotine des composés aptamères. L'aptamère Mapt2 est ainsi immobilisé avec un taux d'immobilisation de 983 RU (1 RU correspond approximativement à 1 pg de produit immobilisé par mm2) . Du FVII humain purifié à partir du plasma (FVII HP, pureté : 99%) a été dilué dans du tampon de course (Tris 50 mM, NaCl 50 mM, CaCl2 10 mM, MgCl2 4 mM, pH 7,4) de manière à obtenir quatre échantillons de concentration en FVII HP de 62, 125, 250 et 500 nM. Séparément, une préparation d'immunoglobulines polyvalentes (Tégéline°, commercialisée par le LFB, France) a été diluée dans du tampon de course (Tris 50 mM, NaCI 50 mM, CaCl2 10 mM, MgCl2 4 mM, pH 7,4) de manière à obtenir quatre échantillons de concentration en immunoglobulines polyvalentes de 62, 125, 250 et 500 nM. Chaque échantillon a été injecté de façon séquentielle sur une même puce (support solide) contenant l'aptamère Mapt2 immobilisé par une interaction biotinestreptavidine. Des contrôles sont obtenus en injectant des blancs ne contenant que du tampon de course. Toutes les injections ont été réalisées avec un débit 30pl/min pendant 60 sec, après l'injection, du tampon de course a été injecté sur la puce à un débit identique pendant 120 sec. Du tampon d'élution (EDTA, 5mM) a ensuite été injecté pendant 30 sec avec un débit de 30p1/min pour décrocher le FVII HP de l'aptamère..La puce permet d'étudier en temps réel la formation et la rupture des interactions entre le FVII HP, ou les immunoglobulines polyvalentes, et l'aptamère immobilisé grâce à la résonance plasmonique de surface (RPS). Une liaison sur l'aptamère immobilisé se traduit par une augmentation du signal en unité de résonance (RU) enregistré par l'appareil (Figure 3). Ces analyses sont effectuées avec l'appareil de RPS Biacore T100 (GE). La modélisation des interactions enregistrées sont effectuée à l'aide du Logiciel Biaevaluation (GE).35 Cet exemple montre que l'aptamère Mapt2, une fois immobilisé se lie spécifiquement au FVII HP, avec une affinité significative. L'aptamère Mapt2 ne se lie pas aux immunoglobulines polyvalentes. Exemple 3 : Capture du Facteur VIINIIa humain par un acide nucléique aptamère selon l'invention, immobilisé sur un support. On a fabriqué un support solide sur lequel ont été immobilisées des molécules de l'aptamère nucléique de l'invention de séquence SEQ ID N°86, aussi désigné ici � Mapt2 �. Préalablement à sa fixation sur le support solide, l'extrémité 5' de l'aptamère Mapt2 a été chimiquement couplée à une chaîne espaceur constituée de 4 molécules de PEG(C18). Puis, l'extrémité libre de la chaîne espaceur, opposée à l'extrémité couplée à l'aptamère, a été couplée à une molécule de biotine. On dispose d'un support solide contenant des molécules de streptavidine immobilisées (Serie S sensor Chip SA, GE) Puis, on a mis en contact le support solide ci-dessus avec les composés aptamères ci-dessus afin d'immobiliser les acides nucléiques de séquence SEQ ID N° 86 , par association non covalente entre les molécules de streptavidine du support et les molécules de biotine des composés aptamères. L'aptamère Mapt2 est ainsi immobilisé avec un taux d'immobilisation de 424,9 RU (1 RU correspond approximativement à 1 pg de produit immobilisé par mm2). Du FVII humain purifié à partir du plasma (FVII HP, pureté : 99%) a été dilué dans du tampon de course (Tris 50 mM, NaCl 50 mM, CaCl2 10 mM, MgCl2 4 mM, pH 7,4) de manière à obtenir un échantillon de concentration en FVII HP de 500 nM. Chaque échantillon a été injecté de façon séquentielle sur une même puce (support solide) contenant l'aptamère Mapt2 immobilisé par une interaction biotinestreptavidine. Des contrôles sont obtenus en injectant des blancs ne contenant que du tampon de course. Toutes les injections ont été réalisées avec un débit 30p1/min pendant 60 sec, après l'injection, du tampon de course a été injecté sur la puce à un débit identique pendant 120 sec. Du tampon d'élution (EDTA, 5mM) a ensuite été injecté pendant 30 sec avec un débit de 30pl/min pour décrocher le FVII HP de l'aptamère. La puce permet d'étudier en temps réel la formation et la rupture des interactions entre le FVII HP et l'aptamère immobilisé grâce à la résonance plasmonique de surface (RPS). Une liaison sur l'aptamère immobilisé se traduit par une augmentation du signal en unité de résonance (RU) enregistré par l'appareil (Figure 4). Ces analyses sont effectuées avec l'appareil de RPS Biacore T100 (GE). Afin de vérifier que le produit qui se lie à l'aptamère immobilisé est bien le FVII, une séquence d'injection comprenant (i) le FVII HP à 500nM et (ii) un anticorps monoclonal anti-FVII à 1 pM (Sigma, Ref Clone n° MC1 476/E.A.8.1) a été réalisée sur la même puce. Les conditions d'injection et d'analyse sont identiques à celle décrites précédemment. Si l'aptamère retient effectivement du FVII, l'injection d'anticorps monoclonal anti-FVII doit se traduire par une augmentation du signal en RU consécutif à la liaison des anticorps sur le FVII lui même lié à l'aptamère. En témoins des anticorps seuls sont injectés. L'augmentation de signal en RU montre bien que l'aptamère reconnaît le FVII (Figure 4). La modélisation des interactions enregistrées sont effectuée à l'aide du Logiciel Biaevaluation (GE). Les résultats de cet exemple montrent que l'aptamère, une fois immobilisé, se lie spécifiquement au FVII HP, avec une affinité significative et que le signal observé est bien du à la rétention du FVII sur l'aptamère. Exemple 4 : Stoechiométrie aptamère Mapt2/FVII humain plasmatique On a fabriqué un support solide sur lequel ont été immobilisées des molécules de l'aptamère nucléique de l'invention de séquence SEQ ID N°86, aussi désigné ici � Mapt2 �. Préalablement à sa fixation sur le support solide, l'extrémité 5' de l'aptamère Mapt2 a été chimiquement couplée à une chaîne espaceur constituée de 4 molécules de PEG(C18). Puis, l'extrémité libre de la chaîne espaceur, opposée à l'extrémité couplée à l'aptamère, a été couplée à une molécule de biotine. On dispose d'un support solide contenant des molécules de streptavidine immobilisées (Serie S sensor Chip SA, GE). Puis, on a mis en contact le support solide ci-dessus avec les composés aptamères ci-dessus afin d'immobiliser les acides nucléiques de séquence SEQ ID N° 86 , par association non covalente entre les molécules de streptavidine du support et les molécules de biotine des composés aptamères. L'aptamère Mapt2 est ainsi immobilisé avec un taux d'immobilisation de 983 35 RU (1 RU correspond approximativement à 1 pg de produit immobilisé par mm2). Du FVII humain purifié à partir du plasma (FVII HP, pureté : 99%) a été dilué dans du tampon de course (Tris 50 mM, NaCl 50 mM, CaCl2 10 mM, MgCl2 4 mM, pH 7,4) de manière à obtenir un échantillon de concentration en FVII HP de 1 NM. Chaque échantillon a été injecté de façon séquentielle sur une même puce (support solide) contenant l'aptamère Mapt2 immobilisé par une interaction biotinestreptavidine. Des contrôles sont obtenus en injectant des blancs ne contenant que du tampon de course. Toutes les injections ont été réalisées avec un débit 3Opl/min pendant 700 sec, après l'injection, du tampon de course a été injecté sur la puce à un débit identique pendant 120 sec. Du tampon d'élution (EDTA, 20mM) a ensuite été injecté pendant 30 sec avec un débit de 30p1/min pour décrocher le FVII HP de l'aptamère. La puce permet d'étudier en temps réel la formation et la rupture des interactions entre le FVII HP, et l'aptamère immobilisé grâce à la résonance plasmonique de surface (RPS). Une liaison sur l'aptamère immobilisé se traduit par une augmentation du signal en unité de résonance (RU) enregistré par l'appareil (Figure 5). Ces analyses sont effectuées avec l'appareil de RPS Biacore T100 (GE). La modélisation des interactions enregistrées sont effectuée à l'aide du Logiciel Biaevaluation (GE). Les résultats de cet exemple montrent que des quantités croissantes de FVII humain se lient à l'aptamère Mapt2 au cours du temps d'injection et que la saturation des sites aptamères par les molécules de FVII humain n'est pas encore atteinte à la fin de la durée d'injection (700 sec). Les résultats montrent qu'une grande partie des molécules d'aptamère Mapt2 immobilisées à la surface du support solide sont capables de lier le FVII humain. Ces résultats signifient que la conformation dans laquelle l'aptamère est apte à lier sa cible est suffisamment stable pour que la grande majorité des aptamères soient sous cette forme et que cette conformation n'est pas significativement altérée ou gênée par l'immobilisation. Ces résultats montrent aussi que la stoechiométrie de liaison Mapt2/FVII humain est d'environ 1/1. Pour la liaison Mapt2/FVII humain, le signal maximum attendu était de : [MW FVII/MW Mapt2]*niveau immobilisation*stoechio, avec : - MW FVII signifie le poids moléculaire du FVII humain, égal à 50 kDa - MW Mapt2 signifie le poids moléculaire de Mapt2, égal à 27 kDa, - niveau d'immobilisation est dans cet exemple de 983,3, et - steochio signifie la stoechiométrie Mapt2/FVII, qui est égale à 1. Avec la formule ci-dessus, la valeur du signal maximum attendu était de : 1820 RU. On calcule ensuite le pourcentage d'aptamères Mapt2 ayant lié une molécule de 5 Facteur Vil humain, selon la formule : Signal Mesuré/Signal Attendu, avec : - Signal Mesuré qui est égal à 1124 RU, et - Signal Attendu qui est égal à 1820 RU Selon la formule ci-dessus, le pourcentage de molécules de l'aptamère Mapt2 ayant lié une molécule de FVII humain à la fin de l'injection est de 62%. 10 Exemple 5 : Cinétique de la liaison de l'aptamère Mapt2 au FVII humain plasmatique On a fabriqué un support solide sur lequel ont été immobilisées des 15 molécules de l'aptamère nucléique de l'invention de séquence SEQ ID N°86, aussi désigné ici � Mapt2 �. Préalablement à sa fixation sur le support solide, l'extrémité 5' de l'aptamère Mapt2 a été chimiquement couplée à une chaîne espaceur constituée de 4 molécules de PEG(C18). Puis, l'extrémité libre de la chaîne espaceur, opposée à l'extrémité couplée à l'aptamère, a été couplée à une molécule 20 de biotine. On dispose d'un support solide contenant des molécules de streptavidine immobilisées (Serie S sensor Chip SA, GE) Puis, on a mis en contact le support solide ci-dessus avec les composés aptamères ci-dessus afin d'immobiliser les acides nucléiques de séquence SEQ ID 25 N° 86 , par association non covalente entre les molécules de streptavidine du support et les molécules de biotine des composés aptamères. L'aptamère Mapt2 est ainsi immobilisé avec un taux d'immobilisation de 425 RU (1 RU correspond approximativement à 1 pg de produit immobilisé par mm2) . Du FVII humain purifié à partir du plasma (FVII HP, pureté : 99%) a été dilué 30 dans du tampon de course (Tris 50 mM, NaCl 50 mM, CaCl2 10 mM, MgCl2 4 mM, pH 7,4) de manière à obtenir quatre échantillons de concentration en FVII HP de 125, 250 (en duplicate), 500 nM et 1000 mM. Chaque échantillon a été injecté de façon séquentielle sur une même puce (support solide) contenant l'aptamère Mapt2 immobilisé par une interaction biotine-35 streptavidine. Des contrôles sont obtenus en injectant des blancs ne contenant que du tampon de course. Toutes les injections ont été réalisées avec un débit 30p1/min pendant 60 sec, après l'injection, du tampon de course a été injecté sur la puce à un débit identique pendant 120 sec. Du tampon d'élution (EDTA, 20mM) a ensuite été injecté pendant 75 sec avec un débit de 30p1/min pour décrocher le FVII HP de l'aptamère. Ces analyses sont effectuées avec l'appareil de RPS Biacore T100 (GE). La modélisation des interactions enregistrées sont effectuée à l'aide du Logiciel Biaevaluation (GE). Les courbes de la cinétiques de liaison de l'aptamère immobilisé Mapt2 au 10 FVII humain plasmatique ont été calculées avec le module dédié du logiciel Biacore� control Software, version 1.2. Les résultats du calcul de cinétique de liaison de l'aptamère Mapt2 au FVII humain ont permis de déterminer que : - la constante de dissociation Kd de Mapt2 est de 99,9 nM, et 15 - la constante d'associtaion Ka (= 6,25.103 M-'s') de Mapt2 est de 6,25.104 Exemple 6 : Elution du FVII humain recombinant par I'EDTA On a fabriqué un support solide sur lequel ont été immobilisées des 20 molécules de l'aptamère nucléique de l'invention de séquence SEQ ID N°86, aussi désigné ici � Mapt2 �. Préalablement à sa fixation sur le support solide, l'extrémité 5' de l'aptamère Mapt2 a été chimiquement couplée à une chaîne espaceur constituée de 4 molécules de PEG(C18). Puis, l'extrémité libre de la chaîne espaceur, opposée à l'extrémité couplée à l'aptamère, a été couplée à une molécule 25 de biotine. On dispose d'un support solide contenant des molécules de streptavidine immobilisées Puis, on a mis en contact le support solide ci dessus ci-dessus avec les composés aptamères ci-dessus afin d'immobiliser les acides nucléiques de 30 séquence SEQ ID N° 86, par association non covalente entre les molécules de streptavidine du support et les molécules de biotine des composés aptamères. On a aussi fabriqué un support solide sur lequel ont été immobilisées des molécules d'un anticorps polyclonal anti-FVII biotinylé. Les supports solides avec l'aptamère Mapt2 ou avec l'anticorps polyclonal 35 anti-FVII humain consistent en des plaques de 96 puits pour test ELISA; Pour la révélation, on a utilisé un anticorps polyclonal anti-FVII humain marqué par la peroxydase de raifort. Les conditions de l'essai sont détaillées ci-dessous. - Plaque : Biobind Streptavidin coated (Thermo ref : 95029293) Tampons : - Immobilisation : Tris 50mM, NaCl 150mM, Tween 20 0,1% / pH = 7,5 Lavage Ca2+/Mg2+: Tris 50mM, NaCl 50mM, CaCl2 10mM, MgCl2 4mM, Tween 20 0,1% /pH = 7,4 - Lavaqe EDTA : EDTA 10mM dans eau PPI + Tween 20 0,1% - Liqand : Mapt 2 obtenue par synthèse chimique chez Eurogentec. Concentration pour l'immobilisation 200nM, volume = 100pl, 1h à température ambiante - Liqands témoins : Anticorps polyclonnal anti-FVII purifié sur chromatographie d'affinité FVII (R&D system, ref :BAF 2338) Concentration pour l'immobilisation 200nM, volume = 100pl, 1h à température ambiante - Echantillon : FVII humain transgénique produit chez le lapin stabilisé avec 1% BSA, lot: 479186. Concentration = 100nM, volume déposé = 100pl, 1H15 à température ambiante - Anticorps de révélation : issu du kit Asserachrom FVII:Ag (diagnostica Stago) préparé selon les recommandations du fournisseur. Volume = 100pl, 45min à température ambiante - Révélation : 100p1 par puits d'une solution d'OPD + H202 - Arrêt de la réaction : H2SO4 50p1 par puits - Lecture à 492 nm Les résultats, exprimés en D.O. à 492 nm, sont présentés dans le Tableau 1 ci-dessous. Tableau 1 Lavage : Ca2+/Mg2+ Lavage : EDTA 3,53/3,56 0,093/0,09 3,53/3,79 0,094/0,085 3,75/3,75 0,097/0,09 3,9/4,0 3,45/3,27 4,0/4,2 3,52/3,54 5 - Résultats en caractères gras : aptamère Mapt2 (SEQ ID N`86) immobilisé - Résultats en caractères normaux : anticorps polyclonal anti-FVII humain immobilisé Les résultats de cet exemple montrent que seule une fixation du FVII humain avec l'aptamère Mapt 2 permet une élution avec de l'EDTA. 10 Exemple 7 : Liaison des aptamères à différents types de Facteur VII humain On a fabriqué un support solide sur lequel ont été immobilisées des molécules de l'aptamère nucléique de l'invention de séquence SEQ ID N°86, aussi désigné ici � Mapt2 �. Préalablement à sa fixation sur le support solide, l'extrémité 5' de l'aptamère Mapt2 a été chimiquement couplée à une chaîne espaceur 15 constituée de 4 molécules de PEG(C18). Puis, l'extrémité libre de la chaîne espaceur, opposée à l'extrémité couplée à l'aptamère, a été couplée à une molécule de biotine. On dispose d'un support solide contenant des molécules de streptavidine immobilisées (Serie S sensor Chip SA, GE) 20 Puis, on a mis en contact le support solide ci-dessus avec les composés aptamères ci-dessus afin d'immobiliser les acides nucléiques de séquence SEQ ID N° 86 , par association non covalente entre les molécules de streptavidine du support et les molécules de biotine des composés aptamères. L'aptamère Mapt2 est ainsi immobilisé avec un taux d'immobilisation de 4326 RU (1 25 RU correspond approximativement à 1 pg de produit immobilisé par mm2). La partie du support solide sur laquelle est immobilisée Mapt2 est appelée cellule active. Selon la même technique, on a immobilisé sur une partie indépendante du support solide appelée cellule de référence des molécules d'acide nucléique quelconques, avec un taux d'immobilisation de 4069 RU. 30 On a utilisé différents types de Facteur Vil humain, respectivement : - du FVII humain plasmatique obtenu selon le procédé de purification Acset, - du FVII humain recombinant produit chez le lapin, - du FVII humain recombinant produit chez la chèvre, et 35 - du FVII humain recombinant (Novoseven� commercialisé par Novo) Chaque échantillon a été injecté de façon séquentielle sur la même cellule active (support solide) contenant l'aptamère Mapt2 immobilisé par une interaction biotine-streptavidine. Des contrôles sont obtenus en injectant des blancs ne contenant que du tampon de course. Des signaux correspondant au bruit de fond sont obtenus en injectant les mêmes échantillons sur la cellule de référence contenant les acides nucléiques quelconques immobilisés, ces signaux sont retranchés aux signaux obtenus sur la cellule active. Toutes les injections ont été réalisées avec un débit 30p1/min pendant 60 sec, après l'injection, du tampon de course a été injecté sur la puce à un débit identique pendant 120 sec. Du tampon d'élution (EDTA, 15mM) a ensuite été injecté pendant 30 sec avec un débit de 30p1/min pour décrocher le FVII de l'aptamère.. La puce permet d'étudier en temps réel la formation et la rupture des interactions entre le FVII et l'aptamère immobilisé grâce à la résonance plasmonique de surface (RPS). Une liaison sur l'aptamère immobilisé se traduit par une augmentation du signal en unité de résonance (RU) enregistré par l'appareil (Figure 7). Ces analyses sont effectuées avec l'appareil de RPS Biacore T100 (GE). La modélisation des interactions enregistrées sont effectuée à l'aide du Logiciel Biaevaluation (GE). Les résultats de cet exemple montrent que l'aptamère, une fois immobilisé, se lie spécifiquement à une grande variété de Facteur VII humain, y compris du Facteur VII humain plasmatique et des facteurs VII humains recombinants produits dans divers animaux transgéniques, incluant le lapin et la chèvre. Exemple 8 : Liaison spécifique des aptamères au Facteur VII humain On a fabriqué un support solide sur lequel ont été immobilisées des molécules de l'aptamère nucléique de l'invention de séquence SEQ ID N°86, aussi désigné ici � Mapt2 �. Préalablement à sa fixation sur le support solide, l'extrémité 5' de l'aptamère Mapt2 a été chimiquement couplée à une chaîne espaceur constituée de 4 molécules de PEG(C18). Puis, l'extrémité libre de la chaîne espaceur, opposée à l'extrémité couplée à l'aptamère, a été couplée à une molécule de biotine. On dispose d'un support solide contenant des molécules de streptavidine immobilisées (Serie S sensor Chip SA, GE) Puis, on a mis en contact le support solide ci-dessus avec les composés aptamères ci-dessus afin d'immobiliser les acides nucléiques de séquence SEQ ID N° 86 , par association non covalente entre les molécules de streptavidine du support et les molécules de biotine des composés aptamères. L'aptamère Mapt2 est ainsi immobilisé avec un taux d'immobilisation de 4326 RU (1 RU correspond approximativement à 1 pg de produit immobilisé par mm2). La partie du support solide sur laquelle est immobilisée Mapt2 est appelée cellule active. Selon la même technique, on a immobilisé sur une partie indépendante du support solide appelée cellule de référence des molécules d'acide nucléique quelconques, avec un taux d'immobilisation de 4069 RU. On a utilisé différents types de Facteur VII, respectivement : - du FVII humain plasmatique obtenu selon le procédé de purification Acset, - du FVII de lapin recombinant commercialisé par la société American Diagnostica (Ref 407RAB, Lot n°080818). Chaque échantillon a été injecté de façon séquentielle sur une même puce (support solide) contenant l'aptamère Mapt2 immobilisé par une interaction biotine- streptavidine. Des contrôles sont obtenus en injectant des blancs ne contenant que du tampon de course. Des signaux correspondant au bruit de fond sont obtenus en injectant les mêmes échantillons sur la cellule de référence contenant les acides nucléiques quelconques immobilisés, ces signaux sont retranchés aux signaux obtenus sur la cellule active.Toutes les injections ont été réalisées avec un débit 30pl/min pendant 60 sec, après l'injection, du tampon de course a été injecté sur la puce à un débit identique pendant 120 sec. Du tampon d'élution (EDTA, 15mM) a ensuite été injecté pendant 30 sec avec un débit de 30p1/min pour décrocher le FVII humain ou de lapin de l'aptamère.. La puce permet d'étudier en temps réel la formation et la rupture des interactions entre le FVII HP et l'aptamère immobilisé grâce à la résonance plasmonique de surface (RPS). Une liaison sur l'aptamère immobilisé se traduit par une augmentation du signal en unité de résonance (RU) enregistré par l'appareil (Figure 8). Ces analyses sont effectuées avec l'appareil de RPS Biacore T100 (GE). La modélisation des interactions enregistrées sont effectuée à l'aide du Logiciel Biaevaluation (GE). Les résultats de cet exemple montrent que l'aptamère, une fois immobilisé, est très spécifique du FVIINIIa humain et ne se lie pas au FVIINIIa de lapin. Exemple 9 : préparation d'un support d'affinité Le support d'affinité a été réalisé à partir d'un matériau de support solide consistant en une matrice sur laquelle on a greffé de la streptavidine (streptavidinagarose ù Novagen�). On a introduit un volume de 1 ml de gel dans un conteneur consistant en une colonne (i.d. 11 mm). On a lavé le gel avec de l'eau purifiée, pour éliminer le solvant de stockage Les caractéristique du qel sont : - Capacité d'adsorption de biotine : >_ 85 nanomole / ml de gel - Test fonctionnel : Capture >99% de thrombine biotinylée en 30 minutes à TA - Autres tests : Protease-free , endo/exonucléase-free, RNase-free. - Conservateur: 100 mM sodium phosphate pH7,5 + NaN3 0,02 La sortie de la colonne conditionnée (� packée �) (Hauteur de lit de gel = 1cm) est connectée à un détecteur d'absorbance équipé d'un filtre UV à 254 nm et d'un enregistreur. Les aptamères nucléiques anti-FVII humain biotinylés de séquence SEQ ID N° 86 sont solubilisés dans de l'eau purifiée à la concentration finale de 0,5 mg/0,187 ml, soit une concentration molaire finale de 0,1 mM. La solution d'aptamères nucléiques a été activée à 95CC selon I e cycle standard, pour l'immobilisation des aptamères sur le matériau support solide.. La solution d'aptamères nucléiques a été préalablement diluée par 4,8 ml d'eau purifiée puis 1,5 ml de tampon Me' (5 x concentré). Le détecteur d'absorbance est ajusté à 1 AUFS (Absorbance Unit Full Scale) et on enregistre la DO à 254 nm de cette solution à 0,575 UA254. La solution d'aptamères nucléiques biotinylés est injectée sur le gel streptavidin-agarose pré-conditionnée (� prépackée �) et mise en recirculation avec une pompe péristaltique à un débit de 2,5 ml/minute, soit un temps de contact sur le gel de 24 secondes (entrée/sortie E/S). Dans ces conditions, la DO à 254 nm se stabilise rapidement à 0,05 UA254, soit une valeur de 91% de couplage théorique, c'est-à-dire 0,455 mg d'aptamères nucléiques par millilitre de gel. Un lavage avec un tampon 10 mM CaCl2 + 4 mM MgCl2 puis en NaCl 2M est réalisé, afin d'éliminer les aptamères nucléiques qui ne sont pas fixées spécifiquement aux molécules de streptavidine greffées sur le matériau de support solide. Example 10 : Procédé de purification du Facteur Vll recombinant humain Les supports d'affinité aptamères ont été testés à partir d'une préparation purifiée en FVII/FVIIa préparée selon la technique décrite dans la demande PCT n° WO2008/099077. Préparation de l'échantillon à purifier La matière biologique de départ est du lait de lapine transgénique contenant du FVII humain recombinant. La cassette d'expression comprend le transgène FVII humain placé sous le contrôle du promoteur du gène de la 33-caseine. Brièvement, 140 millilitres de lait ont été collectés sur 2 lapines en première lactation entre le Jour 4 et le Jour 12 après mise bas. Le titre moyen en FVII amidolytique (FVII biologiquement activable) dans le lait collecté est de 928 Ul/ml. Les laits sont conservés à une température de -80'0. Pour l'essai, les laits de lapine sont décongelés au bain-marie à la température de 37C, puis sont dilués par une solut ion de Citrate de Sodium pour une concentration finale en protéines de 62 g/I à un pH de 7,5. Le traitement par le citrate de sodium permet la déstabilisation des micelles phosphocalciques de caséines. La solution protéique riche en lipides du lait est ensuite clarifiée sur une séquence de filtres, respectivement (i) filtre profondeur de 15 à 0,5 pm de seuil de porosité puis (i) filtre membrane à 0,2 pm. Un volume de 360 ml de solution filtrée ayant un titre en FVII de 198 Ul/ml, soit 36 mg de FVII transgénique, est pré-purifié sur un gel de chromatographie MEP-HyperCel� (Pall BioSepra) d'un volume de 16 mL. Ce gel de capture permet d'éliminer 95% des protéines du lait, dont la plus grande partie des caséines, tout en conservant 60% de la quantité de FVII initiale. Une quantité de 17,5 mg de FVII de faible pureté (û5%) obtenu à la fin de l'étape ci-dessus est purifiée par chromatographie d'échanges d'ions, en utilisant un gel de Q-sepharose� XL (GE Healthcare) d'un volume de 20 mL, Le FVII humain est élué avec un volume de 78 ml de tampon comprenant 5 mM de chlorure de calcium. La concentration en FVII amydolitique est de 337 Ul/ml, soit 0,17 mg de FVII/ml et la concentration en protéines totales est estimée à 0,18 mg/ml par mesure de DO à 280 nm et El% = 13, soit une pureté en FVII de 94%. Les protéines résiduelles provenant du lait de lapine sont difficilement séparables du FVII à ce stade, soit parce qu'il existe des homologies de structures telles que des protéines à GLA-domaines ou à domaine EGF, ou bien des homologies physico-chimiques (charge ionique et/ou taille moléculaire proche). Les techniques classiques permettent une amélioration de la pureté jusqu'à 99,95% par des techniques orthogonales (combinaison de séparation sur gel d'hydroxyapatite et par chromatographie d'exclusion de taille). Cependant, pour l'injection répétée à l'homme, la charge en protéines exogènes admises pour les protéines de recombinaison génétique ne doit pas dépasser 50 ppm soit une pureté > 99,995%. Une telle pureté ne semble atteignable qu'après purification sur matrice d'affinité. Etape de purification du FVII recombinant humain sur le support d'affinité de 20 l'invention Un volume de 6 ml de la solution de FVII humain purifié (1,1 mg de FVII) obtenue à la fin de l'étape précédente est utilisé pour l'étape de purification à un haut niveau de pureté du FVII humain recombinant avec le support d'affinité de l'invention. 25 La solution de FVII obtenue à l'étape précédente, préalablement ajustée à 4 mM MgCl2 et 10 mM CaCl2 et pH 7,5, est injectée sur le gel Aptamère-agarose (support d'affinité) avec une pompe péristaltique à un débit de 0,1 ml/minute soit un temps de contact avec le support d'affinité de 10 minutes (E/S). Après injection, le gel est lavé en tampon tris 50 mM + NaCl 50mM + 4 mM 30 MgCl2 + 10 mM CaCl2 à pH 7,5. Un volume de 10 ml de solution non adsorbé est collecté. Le FVII est élué par un tampon tris 50mM + EDTA 10 mM à pH 7,5. La collecte du pic d'élution est réalisée suivant le profil de DO. Selon les calculs molaires, la quantité d'aptamères nucléiques immobilisés 35 dans le support d'affinité est de 17 nanomoles, ce qui correspond, pour une interaction mole à mole avec les molécules de FVII, à une capacité absolue du support d'affinité de 0,9 mg de FVII. La figure 11 illustre un profil de chromatographie du FVII humain 5 recombinant produit dans le lait de lapine, avec un suivi en continu des valeurs d'absorbance (D.O.) à 254 nanomètres. Sur la Figure 11, l'inflexion (2) de la courbe d'absorption, après le moment de l'injection (1) illustre le début de la saturation du support d'affinité avec le FVII humain recombinant. Au temps (3) l'injection de FVII humain recombinant est 10 stoppée. Pour illustrer l'échelle linéaire des temps sur la Figure 1, on indique que la durée entre le temps de début d'injection (1) et le temps de fin d'injection (2) est de 10 minutes. Le support d'affinité continue de se saturer avec la protéine de la coagulation d'intérêt : des complexes entre (i) les aptamères nucléiques anti-FVII du support d'affinité et (ii) les molécules de FVII humain recombinant initialement 15 contenues dans la composition à purifier ont été formés. Après passage de la composition à purifier, on procède à une étape de lavage (6) de la colonne avec le tampon de lavage spécifié précédemment. Puis on réalise l'étape d'élution, par injection au temps (4) de la solution tampon comprenant une concentration finale de 10 mM en EDTA. Le pic d'absorption illustre la libération du FVII humain 20 recombinant à partir des complexes Aptamères nucléiques/FVII recombinant. On note que les molécules de FVII humain recombinant sont libérées rapidement et donc dans un faible volume. En conséquence, grâce au support d'affinité de l'invention, on obtient une solution d'élution de forte concentration en protéine FVII humain recombinant. Au temps (5), on a réalisé une étape de régénération du 25 support d'affinité, avec un tampon Tris à 50 mM. Le pic d'absorbance visible en (7) correspond aux substances libérées du support d'affinité du fait de l'étape de régénération Capacité dynamique d'absorption du support d'affinité 30 Le tableau 1 ci-dessous présente les résultats de l'essai, qui montrent une capacité dynamique d'adsorption de 0,45 à 0,49 mg/ml des matrices d'affinité soit 50 à 55% de ligands bio-disponibles. En EDTA, on calcule un rendement dynamique d'élution d'environ 75%. 35 Tableau 1 : bilan FVII recombinant humain et Protéines totales des essais de matrices Aptamères-agarose: FVII recombinant Protéines (total mg) DBC DE(%) (mg/m)l Départ 2228 100% 1,42 100% Final Non 924 41% 0,57 40% adsorbé éluat ' 971 44% 0,61 43% 0,49 74% Résultats 85% 83% , pondéraux Départ : échantillon de départ Final : composition des fractions BDC : capacité dynamique d'absorption (pour � Dynamic Binding Capacity �) DE: Rendement dynamique d'élution (pour � Dynamic Elution �) ; qui représente le rapport entre le FVII recombinant élué et le FVII recombinant adsorbé, exprimé en pourcentage lo Capacité de séparation spécifique du support d'affinité Les supports d'affinité ont été évalués en spécificité par un dosage ELISA spécifique des protéines du lait de lapines. 15 Les résultats sont représentés dans le Tableau 2 ci-dessous. Tableau 2 : bilan de la spécificité des supports d'affinité : (total FVII recombinant Protéines du lait de RMP % pureté mg) (ppm) FVII lapine (RMP) Départ 1,11 100% 16992 100% 16782 98,32% Final Non 0,46 41 % 14590 40% 34738 96,53% adsorbé éluat 0,49 44% 217 43% 492 99 ,95% Résultats 85% 83% pondéraux Les résultats du Tableau 2 ci-dessus montrent que l'on obtient une moyenne de 2 logo d'élimination des Aptamères-agarose portant la pureté du FVII humain transgénique de 98,3% à 99,95%. Ceci montre une bonne spécificité des aptamères vis-à-vis du FVII humain et très peu d'interactions aux protéines résiduelles du lait de lapines. Une amélioration est possible par des lavages intermédiaires avant élution par des solutions telles que NaCl 2M et/ou Propylène Glycol ou Ethylène Glycol à 50% si dans ces conditions le FVII ne s'élue pas. Les résultats de l'exemple 10 illustrent les excellentes caractéristiques des supports d'affinité sur gel Aptamère-agarose avec une capacité dynamique d'adsorption d'au moins 1 mg de FVII par mg de ligand avec un rendement d'élution d'au moins 75%. La spécificité est également bien établie avec une nette amélioration de la pureté (û99,95%), une élimination de 2 log10 des RMP � rabbit milk proteins � résiduelles. Le taux final s'établit à environ 500 ppm sur ces 2 essais non optimisés. REVENDICATIONS, 1. Acide nucléique se liant spécifiquement au Facteur VIINIIa humain, ledit acide nucléique comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec l'acide nucléique de formule (I) suivante : 5'-[SEQ ID N°1]x-[SEQ ID N°X]-[SEQ ID N'2]y-3' (I) , dans laquelle : - �SEQ ID N° X � consiste en un acide nucléique ch oisi dans le groupe constitué des acides nucléiques de séquences SEQ ID N3 à SEQ ID N85 et SEQ ID N87 à SEQ ID N°100, - � x � est un entier égal à 0 ou 1, et - � y � est un entier égal à 0 ou 1. 2. Acide nucléique selon la revendication 1, caractérisé en ce que la séquence SEQ ID N° X est choisie dans le groupe constitué des ac ides nucléiques possédant au moins 40% d'identité en nucléotides, mieux au moins 80% d'identité en nucléotides, avec au moins l'une des séquences SEQ ID N°3 à SEQ ID N°85 et SEQ ID N87 à SEQ ID N°100. 3. Acide nucléique selon la revendication 2, caractérisé en ce que la séquence SEQ ID N'X est choisie dans le groupe constitué des séq uences SEQ ID N°3 à SEQ ID N°85 et SEQ ID N87 à SEQ ID N°100. 4. Acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec un acide nucléique choisi dans le groupe constitué des acides nucléiques de séquences SEQ ID N3 à SEQ ID N85 et SEQ ID N'87 à SEQ ID N°100 5. Acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend la séquence SEQ ID N86. 15 6. Acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il possède une capacité à se lier spécifiquement au Facteur VIINIla humain exprimée par la condition (A) suivante : Kd humain/Kd non-humain 7. Acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il possède une valeur de constante de dissociation pour le facteur VIINIIA humain d'au plus 500 nM, mieux d'au plus 200 nM. 8. Acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce sa liaison au facteur VIINIla humain peut être dissociée par mise en contact avec un agent chélateur des cations métalliques. 20 9. Composé se liant spécifiquement au facteur VIINIla humain, caractérisé en ce qu'il est de formule (Il) suivante : [SPAC]- [NUCL] (II), dans laquelle : - [SPAC] signifie une chaîne espaceur, et - NUCL signifie un acide nucléique se liant spécifiquement au Facteur VIINIla 25 humain comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide ayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec l'acide nucléique de formule (I) tel que défini dans la revendication 1. 10. Composé se liant spécifiquement au facteur VIINIla humain, caractérisé en ce 30 qu'il est de formule (III) suivante : [FIX]-[SPAC]- [NUCL] (III), dans laquelle : - [FIX] signifie un composé d'immobilisation sur un support, - [SPAC] signifie une chaîne espaceur, et - NUCL signifie un acide nucléique se liant spécifiquement au Facteur VIINIla 35 humain comprenant au moins 15 nucléotides consécutifs d'un polynucléotideayant au moins 40% d'identité en nucléotides avec l'acide nucléique de formule (I) tel que défini dans la revendication 1. 11. Complexe entre (i) un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 8 ou un composé selon l'une des revendications 9 et 10 et (ii) un facteur VIINIla humain. 12. Support pour l'immobilisation du Facteur VIINIla humain, caractérisé en ce qu'il comprend un matériau support solide sur lequel sont greffés une pluralité d'acides nucléiques selon l'une des revendications 1 à 8 ou de composés selon l'une des revendications 9 et 10. 13. Procédé pour l'immobilisation du facteur VIINIla humain sur un support, comprenant une étape au cours de laquelle on met en contact un échantillon comprenant du Facteur VIINIla humain avec un support selon la revendication 12. 14. Procédé pour la purification du Facteur VIINIla humain comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact un échantillon comprenant du Facteur VIINIla humain avec un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 8, ou avec un composé selon l'une des revendications 9 et 10, ou avec un support selon la revendication 12, afin de former un complexe entre (i) ledit acide nucléique, ou ledit composé, ou ledit support et (ii) le Facteur VIINIla humain, et b) libérer le Facteur VIINIla humain à partir du complexe formé à l'étape a) et récupérer le Facteur VIINIla humain purifié. 15. Procédé pour détecter la présence de Facteur VIINIla humain dans un échantillon comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 8 ou avec un composé selon l'une des revendications 9 et 10 ou avec un support selon la revendication 12 avec ledit échantillon; et b) détecter la formation de complexes entre (i) ledit acide nucléique, ou ledit composé, ou ledit support et (ii) le Facteur VIINIla. 16. Composition pharmaceutique comprenant un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, en combinaison avec un plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. 17. Acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, pour son utilisation comme médicament. 18. Utilisation d'un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, pour la fabrication d'un médicament pour le traitement des troubles de la 10 coagulation. 15