Brevet FR2944970A1 — publié le 20101105

Procédé de préparation d'extraits polyphénoliques à partir de feuilles d'épinards La présente invention a pour objet un nouveau procédé de préparation d'extraits polyphénoliques concentrés et purifiés à partir de feuilles d'épinards. L'épinard (Spinacia oleracea) est une plante potagère, annuelle ou bisannuelle, de la famille des Chénopodiacées. Cette plante est couramment cultivée et consommée dans l'alimentation habituelle. En usage traditionnel, l'épinard est considéré, entre autres, comme un fortifiant, revitalisant, tonifiant musculaire, notamment des muscles cardiaques. Sa richesse en carotènes, vitamines (C, E), minéraux et oligo-éléments (notamment magnésium, fer, calcium, potassium) font de lui une excellente indication contre la fatigue générale et les états dépressifs. L'épinard est également traditionnellement utilisé pour ses propriétés antianémiques. Les feuilles de l'épinard renferment des polyphénols de types flavonols et flavanols sous forme simple ou polymérisée. Ces polyphénols sont connus comme étant de bons anti-oxydants et anti-inflammatoires. La présente invention a ainsi pour but de fournir un procédé de préparation d'extraits d'épinards concentrés riches en polyphénols. La présente invention a également pour but de fournir des extraits d'épinards présentant une teneur élevée en polyphénols, lesdits extraits étant donc destinés à des applications pour l'amélioration des performances des muscles striés, chez l'humain ou l'animal. La présente invention concerne un procédé de préparation d'un extrait concentré d'épinard, sous forme liquide ou sèche, avec un titre en polyphénols supérieur ou égal à 50%, comprenant une étape de purification d'un extrait brut d'épinard sous forme liquide, par une technique d'extraction liquide-liquide avec une huile alimentaire. Selon un mode de réalisation préféré, l'huile alimentaire est choisie dans le groupe constitué de l'huile d'olive, de tournesol, de pépins de raisin, de poisson, et de leurs mélanges. Ainsi, le procédé selon la présente invention comprend les étapes suivantes : ù on ajoute de l'huile alimentaire à l'extrait brut sous forme liquide, pour obtenir un extrait brut liquide additionné d'huile alimentaire, ù on soumet ledit extrait brut liquide additionné d'huile alimentaire à une étape de concentration sous vide et sous agitation, pour obtenir une phase huileuse surnageante comprenant les pigments chlorophylliens et caroténoïdes et une phase aqueuse comprenant les composés hydrosolubles (glucides, protides, composés phénoliques simples ou complexes...), et ù on isole séparément la phase huileuse et la phase aqueuse. L'étape d'extraction de l'extrait brut liquide de l'invention avec de l'huile alimentaire permet d'obtenir un extrait raffiné présentant un titre élevé en principe(s) actif(s). Pour ce faire, on soumet ledit extrait brut à une étape de purification. Cette étape de purification est réalisée en combinant deux étapes. La première étape a pour vocation d'éliminer les composés colorants de type chlorophylles, tout en obtenant un produit valorisable en tant que colorant vert alimentaire de haute qualité, les pigments ayant été préservés des phénomènes de dégradation par oxydation se produisant généralement en cours de concentration, par ce moyen. L'extrait brut sous forme liquide est additionné d'une huile alimentaire ordinaire, de type huile d'olive, de tournesol, de pépins de raisin, de poisson, ou toute autre huile alimentaire de caractéristique identique, dans des proportions allant de 1 /1 à 1 /1000 en fonction de la concentration en chlorophylles désirée. L'extrait brut liquide additionné d'huile est ensuite notamment concentré sous vide et sous agitation, par un matériel de type évapo-concentrateur, ou boule à vide. Cette étape permettra en outre la réduction du volume de produit, ainsi que l'élimination de l'alcool dans le cas d'une extraction par mélange hydro-alcoolique. Le produit obtenu se présente sous forme d'un mélange biphasique, la phase huileuse surnageante contenant les pigments chlorophylliens et caroténoïdes préservés des phénomènes oxydatifs, la phase aqueuse comprenant l'ensemble des composés hydrosolubles tels que glucides, protides et composés phénoliques simples ou complexes. La séparation du mélange peut être améliorée par l'ajout d'une proportion d'eau suffisante. Dans le cadre du procédé de la présente invention, la phase huileuse susmentionnée est ensuite récupérée et est de préférence soumise à une ou plusieurs étapes de lavage avec de l'eau, et le cas échéant, séchée afin d'obtenir une poudre colorante. L'étape de lavage susmentionnée de la phase huileuse par de l'eau, permet d'augmenter la récupération de composés hydrosolubles éventuellement émulsifiés avec la phase huileuse. Cette phase huileuse peut directement être valorisée en tant que colorant vert alimentaire naturel, voire biologique, en partant d'épinard issus de l'agriculture biologique. Cette phase huileuse peut également être séchée par atomisation, en utilisant des supports de séchage adaptés tels que caséinates, maltodextrines, lécithines, afin d'obtenir une poudre hydrodispersible colorante. La phase aqueuse collectée telle que définie ci-dessus, contenant notamment les polyphénols, peut être séchée directement ou bien subir un second raffinage. Ainsi, selon un mode de réalisation particulier du procédé de l'invention, la phase aqueuse obtenue à l'issue de l'étape d'extraction avec l'huile alimentaire est récupérée puis séchée afin d'obtenir un extrait concentré sous forme sèche. Selon un autre mode de réalisation particulier du procédé de l'invention, la phase aqueuse obtenue à l'issue de l'étape d'extraction avec l'huile alimentaire est récupérée puis soumise à une étape de purification pour obtenir un extrait concentré purifié. Cette étape complémentaire de purification peut être effectuée par passage sur résines adsorbantes et avec élution par un solvant de type alcool, ou par extraction liquide-liquide, en utilisant un solvant non miscible à l'eau tel que l'acétate d'éthyle, le butanol ou tout autre solvant ayant une affinité avec les composés phénoliques. Les résines de chromatographie utilisées peuvent être par exemple de type échangeuse d'ions (anions ou cations), ou de type adsorption/désorption, par exemple de type copolymère divinylbenzène/styrène, polystyrénique ou polyméthacrylique, commercialisé notamment par les marques Rohm & Haas ou Mitsubishi Chemical. Le procédé de l'invention peut comprendre des étapes supplémentaires consistant à obtenir des extraits plus concentrés en principes actifs. Ainsi, l'extrait purifié obtenu à l'issue de la purification par chromatographie ou par extraction liquide-liquide avec de l'acétate d'éthyle ou du butanol peut ensuite être concentré soit par évaporation sous vide, soit par nanofiltration membranaire, afin d'obtenir un concentré contenant entre 15 et 70% de matières sèches. Enfin, ce concentré purifié peut ensuite être séché en utilisant un équipement tel que sécheur atomiseur, lyophilisateur, ou sécheur sous vide. La présente invention concerne donc également la préparation d'un extrait concentré purifié sous forme sèche, ladite forme sèche étant obtenue par séchage d'un extrait concentré purifié sous forme liquide. Selon un mode de réalisation préféré, les étapes de séchage effectuées pour obtenir des formes sèches sont effectuées par atomisation. La présente invention concerne également un procédé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que l'extrait brut d'épinard sous forme liquide est obtenu par un procédé comprenant une étape d'extraction par mise en présence d'épinard sous forme fraîche ou congelée avec un solvant choisi dans le groupe constitué de l'eau, de l'éthanol et de leurs mélanges. Selon un mode de réalisation préféré, l'épinard utilisé dans le cadre du procédé de l'invention provient de la plante entière, sous forme fraîche ou sèche. L'extrait brut d'épinard selon l'invention est obtenu en mettant en présence la plante, sous sa forme fraîche, ou congelée, avec un solvant, tel que de l'eau, de l'éthanol ou un mélange d'eau et d'éthanol dans des proportions pouvant aller de 100/0 à 0/100, pour une étape d'extraction, en séparant la plante et le solvant afin d'obtenir un extrait brut sous forme liquide. Afin d'obtenir un extrait brut sous forme sèche, l'extrait brut sous forme liquide est séché par exemple par élimination de l'eau dans un flux d'air chaud, par nébulisation, par évaporation, par sublimation, par déshydratation, par adsorption sur support. La présente invention concerne également un procédé de préparation d'un produit colorant, comprenant les étapes suivantes : û on ajoute de l'huile alimentaire à un extrait brut d'épinard tel que défini ci-dessus sous forme liquide, pour obtenir un extrait brut liquide additionné d'huile alimentaire, û on soumet ledit extrait brut liquide additionné d'huile alimentaire à une étape de concentration sous vide et sous agitation, pour obtenir une phase huileuse surnageante comprenant les pigments chlorophylliens et caroténoïdes et une phase aqueuse comprenant les composés hydrosolubles, û on récupère la phase huileuse pour la soumettre à une ou plusieurs étapes de lavage avec de l'eau afin d'obtenir un produit colorant liquide, et, le cas échéant, on sèche la phase huileuse lavée afin d'obtenir une poudre colorante. Ce procédé permet donc d'obtenir un produit colorant sous forme liquide ou sous forme sèche. La présente invention concerne donc également un produit colorant, sous forme liquide ou sèche, susceptible d'être obtenu selon le procédé tel que défini ci-dessus. Ledit produit colorant sous forme liquide peut ainsi être utilisé en tant que colorant alimentaire vert. La présente invention concerne également un extrait concentré d'épinard, susceptible d'être obtenu selon le procédé de préparation tel que défini ci-dessus. Les extraits concentrés de l'invention sont caractérisés en ce qu'ils présentent un titre en polyphénols totaux supérieur ou égal à 50%. La présente invention concerne également un extrait concentré d'épinard, sous forme liquide ou sèche, avec un titre en polyphénols totaux supérieur ou égal à 50%, de préférence compris de 60% à 100%, et préférentiellement de 90% à 100%. Les polyphénols sont dosés par spectrophotométrie et HPLC (par exemple selon la méthode décrite ci-après). De préférence, les extraits de l'invention comprennent majoritairement des composés polyphénoliques, et ce préférentiellement à raison d'au moins 70% en poids (par rapport au poids total de l'extrait). Parmi ces composés polyphénoliques, on retrouve essentiellement des composés de la famille des flavonoïdes et en particulier de la classe chimique des flavonols. Ainsi, les quatre grands représentants polyphénoliques entrant dans la composition des extraits d'épinards de l'invention sont les suivants : patulétine, spinacétine, jacéidine et spinatoside (sous forme simple ou glucosylée). Plus exactement, les extraits d'épinards de l'invention comprennent les composés suivants : patulétine-3-glucosyl-(1-6)-apiosyl(1-2)-glucoside, patulétine-3-glucosyl-(1-6)-glucoside, spinacétine-3-glucosyl-(1-6)-apiosyl(1-2)-glucoside, spinacétine-3-glucosyl-(1-6)-glucoside, spinacétine-3-féruloylglucosyl-(1-6)-glucoside, spinatoside, jacéidine-4'-glucuronide, 5,3',4'-trihydroxy-3-méthoxy-6:7-méthylènedioxyflavone-4'-glucuronide, 5,4'-dihydroxy-3,3'-diméthoxy-6:7-méthylènedioxyflavone-4'-glucuronide. Des acides phénoliques sont également présents dans les extraits de l'invention, notamment l'acide o-coumarique, l'acide férulique, l'acide pcoumarique et l'acide glucuronique. Les ecdystéroïdes communément appelés phytoecdystéroïdes (majoritairement 20-hydroxyecdyone) sont également présents dans les extraits de l'invention. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant un extrait d'épinard tel que défini ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. La présente invention concerne également un complément alimentaire comprenant un extrait d'épinard tel que défini ci-dessus, en association avec un véhicule acceptable. Les extraits d'épinards de l'invention sont destinés à diverses applications, notamment pour l'amélioration des performances des muscles striés chez l'humain ou l'animal. Ainsi, la consommation dudit extrait permet de réduire les composés issus du métabolisme oxydatif musculaire et des métabolites dérivés altérant la performance musculaire et augmentant le temps de récupération. La présente invention concerne également l'utilisation dudit extrait dans des préparations sous différentes formes galéniques, en vue de l'administration à l'humain ou l'animal, que ce soit sous forme médicamenteuse, ou de complémentation alimentaire, ou de produit diététique. L'application desdites préparations concerne l'ensemble des populations humaines ou animales, pour lesquelles la contribution à l'amélioration des performances musculaires et l'augmentation de la capacité de récupération présente un intérêt, comme les sportifs expérimentés, les sportifs occasionnels nécessitant une aide pour la récupération après effort, les personnes âgées ayant des difficultés pour la récupération après une activité physique et les animaux de course ou âgés. Selon un mode de réalisation préféré, la présente invention concerne les extraits d'épinard tels que définis ci-dessus pour leur utilisation pour l'amélioration des performances musculaires. La présente invention concerne également les extraits d'épinard tels que définis ci-dessus pour leur utilisation pour le traitement et la prévention des désordres musculosquelettiques. La présente invention concerne également les extraits d'épinard tels que définis ci-dessus pour leur utilisation pour le traitement et la prévention des troubles musculaires consécutifs à l'effort. LÉGENDE DE LA FIGURE La Figure 1 représente le chromatogramme UV à 280 nm d'un extrait d'épinard purifié obtenu selon le procédé de l'invention (extrait purifié n°1 ù cf. exemples). MÉTHODE DE DOSAGE DES POLYPHÉNOLS La méthode utilisée pour le dosage des polyphénols totaux est la suivante : Le système chromatographique utilisé est de marque Agilent Technologie 1100 series. Les différents polyphénols sont séparés à l'aide d'une colonne Kromasil C18, 250 mm x 4,6 mm - 5 �m, munie d'une pré-colonne de même nature. Réactifs On utilise comme solvants de l'eau Ultra-Pure Millipore, de l'acétonitrile (Chimie Plus, réf.: ACO3902500), du méthanol (Chimie Plus, réf.: ME03102500), de l'acide orthophosphorique 85% (Fisher Scientific, réf.: O/0450/PB15) et de l'acétique acétique glacial (Fisher Scientific, réf.: A/0400/PB15). Comme standards analytiques, on utilise de l'acide gallique (Extrasynthèse, réf.: 4993 S), de la catéchine (Extrasynthèse, réf.: 0976 S), de l'épicatéchine (Extrasynthèse, réf.: 0977 S), du gallate d'épicatéchine (Extrasynthèse, réf.: 0978 S), de la procyanidine B1 (Extrasynthèse, réf.: 0983) et de la procyanidine B2 (Extrasynthèse, réf.: 0984). Mode opératoire 1. Conditions chromatographiques : Les solvants d'élution sont : - solvant A : eau qualité HPLC acidifiée à pH 2,5 avec de l'acide orthophosphorique - solvant B : acétonitrile / acide acétique 90:10 Le débit de la phase mobile est de 1 mL/min. La température de la colonne est égale à 25°C. 8 5 10 15 20 Le volume d'injection est 20 �L et la détection est effectuée dans l'UV à 280 nm pour une durée d'analyse de 50 minutes. On applique le gradient suivant : Temps (min) % de solvant A % de solvant B 0 95 5 30 75 25 35 70 30 45 50 50 50 40 60 2. Solutions à préparer - solvant de solubilisation : Eau ultrapure / méthanol qualité HPLC / acide acétique glacial 75:20:5 (v/v/v) - solution de référence On pèse dans une fiole jaugée de 20 mL 5 mg d'acide gallique, 5 mg de catéchine, 5 mg d'épicatéchine, 5 mg de gallate d'épicatéchine, 2 mg de procyanidine B1 et 2 mg de procyanidine B2. On dissout l'ensemble et on complète avec du méthanol. - solution d'échantillon à analyser On pèse 100 mg d'extrait à analyser dans une fiole jaugée de 50 mL et on dissout pendant 10 minutes aux ultrasons avec le solvant de solubilisation puis on complète au volume. On filtre les solutions témoin et essai sur membrane (membranes Sartorius, 0,45�m, réf.: Minisart-RC-15). Deux prises d'essai sont effectuées par échantillon. 25 Calcul de la teneur en polyphénols La teneur en polyphénols est calculée selon la formule suivante : _AExmTxVE Tpolyphénol AT x mR xVT xdx100 T : teneur (en %) en polyphénol X de l'extrait AE : aire du pic du polyphénol X de la solution analysée AT : aire du pic du polyphénol X de la solution témoin mE : masse de la prise d'essai de la solution analysée (en mg) mT : masse de la prise d'essai du polyphénol X témoin correspondant (en mg) VT : volume dans lequel le polyphénol X a été solubilisé (en mL) VE : volume dans lequel l'extrait analysé a été solubilisé (en mL) d : facteur de dilution si nécessaire EXEMPLES I - Extraits bruts raffinés : 1.1. Extrait raffiné n °1 On extrait 100 kg de feuilles d'épinard fraîches par macération dans 300 L d'eau à 50°C pendant 2 heures. L'eau peut être additionnée d'enzymes de type cellulases et hémicellulases, ou toute autre enzyme de liquéfaction de fruits ou de légumes. Le solvant chargé (eau) est séparé de la matière solide en suspension et filtré. Le solvant chargé filtré est additionné d'huile d'olive, à raison de l kg d'huile, par kg de matière sèche dans le liquide. Le mélange solvant chargé et huile est ensuite concentré par évaporation sous vide, dans un évaporateur flot tombant. La température de chauffage est maintenue à une température inférieure à 60°C. L'opération de concentration est conduite jusqu'à réduction par 20 du volume total. Le mélange concentré huile / phase aqueuse est ensuite lavé par de l'eau adoucie, à 10°C, à raison de 1 volume d'eau par volume de mélange initial. Cette phase d'extraction liquide-liquide à l'aide d'une huile alimentaire, réalisée au cours d'une opération de concentration, permet d'éliminer de la phase aqueuse résiduelle l'ensemble des composants lipophiles, notamment les pigments, tout en préservant l'intégralité des composants polyphénoliques d'intérêt. La phase huileuse est séparée, et filtrée, et constitue une solution lipidique de pigments chlorophylliens et caroténoïdes. Celle-ci peut directement être utilisée dans des préparations colorantes alimentaires. Le concentré aqueux constitue un extrait raffiné liquide (extrait raffiné n °1), qui peut être transformé en poudre par élimination du solvant, par séchage sous vide par exemple. 1.2. Extrait raffiné n°2 On extrait 100 kg de feuilles d'épinard fraîches par macération dans de l'éthanol 30% vol à 50°C pendant 2 heures. Le solvant chargé (éthanol) est séparé de la matière solide en suspension et filtré. Le solvant filtré est additionné d'huile de pépins de raisin, à raison de 1 L d'huile par kg de matière sèche. Un antioxydant alimentaire de type vitamine E naturelle peut être ajouté au mélange. Le mélange est ensuite désalcoolisé par distillation, et concentration sous vide poussé. Le concentré obtenu est séparé en deux, par collecte de la phase huileuse contenant les pigments chlorophylliens et caroténoïdes. La phase aqueuse est collectée séparément. Cette phase d'extraction liquide-liquide à l'aide d'une huile alimentaire, réalisée au cours d'une opération de concentration, permet d'éliminer de la phase aqueuse résiduelle l'ensemble des composants lipophiles notamment les pigments, tout en préservant l'intégralité des composants polyphénoliques d'intérêt. La phase huileuse concentrée en pigments peut directement être utilisée après filtration comme colorant alimentaire vert. Elle peut également être séchée sur un support composé de maltodextrines, caséines, et lécithines de soja, afin d'obtenir une poudre colorante verte, hydrodispersible. Le concentré aqueux constitue un extrait raffiné liquide (extrait raffiné n°2), qui peut être transformé en extrait brut en poudre par élimination du solvant, par séchage sous vide ou atomisation par exemple. 1.3. Extrait raffiné n°3 On extrait 100 kg de feuilles d'épinard fraîches par macération dans de l'éthanol 90% vol à 50°C pendant 2 heures. On répète 3 fois l'opération et toutes les fractions liquides collectées sont réunies. Le solvant chargé (éthanol) est séparé de la matière solide en suspension puis filtré. Le solvant filtré est additionné d'huile de pépins de raisin, à raison de 1 L d'huile par kg de matière sèche. Un antioxydant alimentaire de type vitamine E naturelle peut être ajouté au mélange. Le mélange est ensuite désalcoolisé par distillation, et concentration sous vide poussé. Le concentré obtenu est séparé en deux, par collecte de la phase huileuse contenant les pigments chlorophylliens et caroténoïdes. La phase aqueuse est collectée séparément. Cette phase d'extraction liquide-liquide à l'aide d'une huile alimentaire, réalisée au cours d'une opération de concentration, permet d'éliminer de la phase aqueuse résiduelle l'ensemble des composants lipophiles notamment les pigments, tout en préservant l'intégralité des composants polyphénoliques d'intérêt. La phase huileuse concentrée en pigments peut directement être utilisée après filtration comme colorant alimentaire vert. Elle peut également être séchée sur un support composé de maltodextrines, caséines, et lécithines de soja, afin d'obtenir une poudre colorante verte, hydrodispersible. Le concentré aqueux constitue un extrait raffiné liquide (extrait raffiné n°2), qui peut être transformé en extrait brut en poudre par élimination du solvant, par séchage sous vide ou atomisation par exemple. II - Extraits purifiés : 11.1. Extrait purifié n °1 On soumet l'extrait raffiné n°2 à une étape de purification par chromatographie sur résine de type divinylstyrènebenzène (XAD 16 de Rohm & Haas), permettant un procédé d'adsorption/désorption adapté aux polyphénols. Les composés adsorbés sont désorbés de la résine par un lavage de celle-ci à l'aide d'une solution hydro-alcoolique à 60% volume, à 35°C. L'éluat ainsi obtenu constitue alors l'extrait purifié, qui peut également être conservé sous forme liquide ou sèche. La composition de cet extrait purifié est indiquée à la Figure 1. Ainsi, cet extrait comprend les composés suivants : acide férulique (pic n °1) ; patulétine-3-glucosyl-(1-6)-apiosyl(1-2)-glucoside (pic n °2) ; patulétine-3-glucosyl-(1-6)-glucoside (pic n°3) ; spinacétine-3-glucosyl-(1-6)-apiosyl(1-2)-glucoside (pic n °4) ; spinacétine-3-glucosyl-(1-6)-glucoside (pic n°5) ; spinacétine-3-féruloylglucosyl-(1-6)- glucoside (pic n°6) ; spinatoside (pic n°8) ; jacéidine-4'-glucuronide (pic n°9) ; 5,3',4'-tihydroxy-3-méthoxy-6:7-méthylènedioxyflavone-4'-glucuronide (pic n °10) et 5,4'-dihydroxy-3,3'-diméthoxy-6:7-méthylènedioxyflavone-4'- glucuronide (pic n °11).30 11.2. Extrait purifié n °2 On soumet l'extrait raffiné n°3 à une étape de purification par extraction liquide-liquide à l'aide d'acétate d'éthyle. L'acétate d'éthyle collecté contient la fraction polyphénolique d'intérêt, 5 qui constitue alors l'extrait purifié, qui peut également être conservé sous forme liquide ou sèche. 15 20 25 30 REVENDICATIONS1. Procédé de préparation d'un extrait concentré d'épinard, sous forme liquide ou sèche, avec un titre en polyphénols supérieur ou égal à 50%, comprenant une étape de purification d'un extrait brut d'épinard sous forme liquide, par une technique d'extraction liquide-liquide avec une huile alimentaire, de préférence choisie dans le groupe constitué de l'huile d'olive, de tournesol, de pépins de raisin, de poisson, et de leurs mélanges. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : ù on ajoute de l'huile alimentaire à l'extrait brut sous forme liquide, pour obtenir un extrait brut liquide additionné d'huile alimentaire, ù on soumet ledit extrait brut liquide additionné d'huile alimentaire à une étape de concentration sous vide et sous agitation, pour obtenir une phase huileuse surnageante comprenant les pigments chlorophylliens et caroténoïdes et une phase aqueuse comprenant les composés hydrosolubles, et ù on isole séparément la phase huileuse et la phase aqueuse. 6. Procédé selon la revendication 2, dans lequel la phase huileuse est récupérée puis soumise à une ou plusieurs étapes de lavage avec de l'eau, et le cas échéant, séchée afin d'obtenir une poudre colorante. 7. Procédé selon la revendication 2, dans lequel la phase aqueuse est récupérée puis soumise à une étape de purification pour obtenir un extrait concentré purifié. 8. Procédé selon la revendication 4, dans lequel l'étape de purification est effectuée par passage de l'extrait concentré sur une résine de chromatographie, notamment une résine échangeuse d'ions ou une résine de type adsorption/désorption, ou par extraction liquide-liquide en utilisant unsolvant non miscible à l'eau, de préférence choisi dans le groupe constitué de l'acétate d'éthyle et du butanol. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, pour la préparation d'un produit colorant, comprenant les étapes suivantes : ù on ajoute de l'huile alimentaire à l'extrait brut sous forme liquide, pour obtenir un extrait brut liquide additionné d'huile alimentaire, ù on soumet ledit extrait brut liquide additionné d'huile alimentaire à une étape de concentration sous vide et sous agitation, pour obtenir une phase huileuse surnageante comprenant les pigments chlorophylliens et caroténoïdes et une phase aqueuse comprenant les composés hydrosolubles, ù on récupère la phase huileuse pour la soumettre à une ou plusieurs étapes de lavage avec de l'eau afin d'obtenir un produit colorant liquide, et, le cas échéant, on sèche la phase huileuse lavée afin d'obtenir une poudre colorante. 7. Produit colorant, sous forme liquide ou sèche, susceptible d'être obtenu selon la revendication 6. 8. Extrait concentré d'épinard, susceptible d'être obtenu selon l'une quelconque des revendications 1 à 5. 9. Extrait concentré d'épinard, sous forme liquide ou sèche, avec un 25 titre en polyphénols totaux supérieur ou égal à 50%, de préférence compris de 60% à 100%, et préférentiellement de 90% à 100%. 10. Composition pharmaceutique comprenant un extrait d'épinard selon la revendication 8 ou 9, en association avec un véhicule 30 pharmaceutiquement acceptable. 11. Complément alimentaire comprenant un extrait d'épinard selon la revendication 8 ou 9, en association avec un véhicule acceptable. 512. Extrait d'épinard selon la revendication 8 ou 9, pour son utilisation pour l'amélioration des performances musculaires. 13. Extrait d'épinard selon la revendication 8 ou 9, pour son utilisation pour le traitement et la prévention des désordres musculosquelettiques ou des troubles musculaires consécutifs à l'effort. 10