Brevet FR2940972A1 — publié le 20100716

-2- La présente invention se rapporte à des composés peptidiques de formule générale R1-(AA)R X1-X2- Ser ù Pro ù Leu ù Gln ù X3 - X4 -(AA)p ù R2 ainsi que leurs utilisations en cosmétique et/ou pharmaceutique afin de prévenir et corriger les effets du vieillissement et les agressions UV de la peau et des phanères. La fonction première de l'épiderme, est de constituer une barrière entre l'environnement extérieur et le milieu intérieur. C'est la couche la plus externe de l'épiderme, le stratum corneum, qui assure cette fonction. Il est composé de kératinocytes au stade ultime de leur différenciation, les cornéocytes, scellés les uns aux autre par un épais ciment intercellulaire, à la fois souple et imperméable. Cette barrière physique qu'est la peau permet au corps humain de se protéger de nombreux types d'agressions. Ces agressions peuvent avoir diverses origines intrinsèques, telles que le vieillissement chronologique ou encore des modifications biochimiques qui ont lieu lors d'états de fatigue, de stress, de changements hormonaux comme lors de la grossesse.... D'autres agressions elles, ont une origine extrinsèque telle que la pollution, le soleil, les maladies....En réponse à ces agressions, l'aspect de la peau est modifié et l'on voit apparaître alors des rides et ridules, des tâches d'hyper ou d'hypopigmentation, une sècheresse voire une déshydratation de la peau, un amincissement de l'épiderme, une élastose, des imperfections, des tâches de vieillesse.... Ces modifications sont dues à l'altération des fonctions de renouvellement cellulaire, de cohésion cellulaire, de synthèse de collagène, d'élastine et d'autres protéines et conduisent finalement à une diminution des qualités de barrière protectrice de la peau et à un aspect peu esthétique de celle-ci. Tous ces changements affectent non seulement la peau, mais également les phanères tel que les ongles et cheveux. Par exemple, les cheveux deviennent ternes, ou grisonnant, ou encore tombent de manière précoce... Afin de remédier à ces inconvénients, de nombreuses compositions cosmétiques ont été proposées ces dernières années. Ces compositions incluaient l'utilisation, seul ou en combinaison, d'agents hydratants, apaisants, anti-inflammatoires, anti-radicaux libres, anti-séborrhéiques, cicatrisants, éclaircissants, kératolytiques... Cependant, aucune de ces compositions ne permet à l'heure actuelle, de prévenir ou de corriger les effets du vieillissement d'origine intrinsèque ou extrinsèque de la peau. De manière surprenante, la Demanderesse a découvert que des composés peptidiques 35 de formule générale suivante R1-(AA)n-X1-X2- Ser ù Pro ù Leu ù Gln ù X3 - X.4 -(AA)p 2940972 -3- - R2, avaient un effet anti-vieillissement sur la peau par une action globale sur divers symptômes caractéristiques de ce dernier. Aucun document de l'art antérieur ne décrit de tels composés peptidiques afin d'obtenir un effet anti-vieillissement. En outre, ces composés peptidiques sont caractérisés par le fait qu'ils sont des agents activateurs du 5 gène Clock impliqués dans la régulation du cycle circadien. Par conséquent, la présente invention a pour objet des composés peptidiques activateurs de Clock (Circadian Locomotor Output Cycles Kaput) ainsi que leur utilisation dans des compositions cosmétiques et pharmaceutiques afin de prévenir ou corriger les signes dus au vieillissement et aux agressions UV de la peau et des phanères. 10 L'horloge circadienne est contrôlée par une boucle négative de régulation impliquant un ensemble de gènes, notamment les gènes Per-1 (Period), Clock et BMAL-1 (Brain and Muscle ARNt-like Protein). Il a été démontré que le vieillissement s'accompagne d'une modification des rythmes 15 biologiques, avec une diminution de l'amplitude et une tendance à l'avance de phase (Weinert D., Chronobiol. Int. 2000 ; 17 :261-83). En outre, il a été montré que l'horloge circadienne était altérée par ce même vieillissement. Jusqu'à présent, dans l'art antérieur, de nombreuses applications ont déjà été proposées quant à l'utilisation des nucléotides et/ou de protéines issues des gènes 20 Clock, Per-1 ou BMAL-1. On peut citer par exemple le brevet US 6 291 429 qui décrit l'utilisation du produit du gène Clock pour la resynchronisation du cycle du sommeil ou de processus physiologiques ou endocriniens, la resynchronisation du corps après un décalage horaire.... Cependant, aucun document de l'art antérieur ne décrit l'utilisation de peptides spécifiques activateurs de Clock pour prévenir ou corriger les signes du 25 vieillissement ou encore les conséquences d'agressions UV. La présente invention a pour premier objet un composé peptidique de formule (I) suivante RI-(AA)n-XI-X2- Ser ù Pro ù Leu ù Gln ù X3 - X.4 -(AA)p ù R2 30 Dans laquelle, XI représente une cystéine, une méthionine ou est égal à zéro, X2 représente une sérine, une thréonine, ou est égal à zéro, X3 représente une alanine, une glycine, une isoleucine, une leucine, une proline, une valine ou est égal à zéro, X.4 représente une asparagine, une glutamine, ou est égal à zéro. 2940972 -4- AA représente un acide aminé quelconque, ou un de ses dérivés, et n et p sont des nombres entiers compris entre 0 et 4, R1 représente la fonction amine primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi un groupement 5 acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle, R2 représente le groupe hydroxyle de la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal, libre ou substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi 10 une chaîne alkyle de C1 à C20, ou un groupement NH2, NHY ou NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de C1 à C4, ladite séquence de formule générale (1) étant constituée de 4 à 16 résidus d'acides aminés, ladite séquence de formule générale (I) pouvant comprendre des substitutions des 15 acides aminés X1 à X4 par d'autres acides aminés chimiquement équivalents. La présente invention a pour second objet une composition cosmétique ou dermopharmaceutique comprenant des composés peptidiques de formule générale (I). 20 La présente invention a pour troisième objet l'utilisation d'une composition cosmétique ou dermo- pharmaceutique comprenant des composés peptidiques de formule générale (I). Enfin, la présente invention a pour quatrième objet un procédé de traitement 25 cosmétique à l'aide d'une composition comprenant un composé peptidique de formule générale (I). Le premier objet de l'invention se rapporte à un composé peptidique de formule générale (1) suivante : 30 R1-(AA)n X1-X2- Ser ù Pro ù Leu ù Gln ù X3 - X4 -(AA)p ù R2 Dans laquelle, X1 représente une cystéine, une méthionine ou est égal à zéro, X2 représente une sérine, une thréonine, ou est égal à zéro, X3 représente une alanine, une glycine, une isoleucine, une leucine, une proline, une 35 valine ou est égal à zéro, 2940972 -5- X4 représente une asparagine, une glutamine, ou est égal à zéro. AA représente un acide aminé quelconque, ou un de ses dérivés, et n et p sont des nombres entiers compris entre 0 et 4, R1 représente la fonction amine primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou 5 substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle, R2 représente le groupe hydroxyle de la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal, libre ou substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi 10 une chaîne alkyle de C1 à C20, ou un groupement NH2, NHY ou NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de C1 à C4, ladite séquence de formule générale (I) étant constituée de 4 à 16 résidus d'acides aminés, ladite séquence de formule générale (I) pouvant comprendre des substitutions des 15 acides aminés X1 à X4 par d'autres acides aminés chimiquement équivalents. Préférentiellement, ledit peptide, est un peptide dont le nombre d'acides aminés est compris entre 4 et 16. Le composé peptidique selon l'invention est caractérisé en ce qu'il est utilisé en tant 20 que principe actif activateur de Clock. On entend par peptide � activateur de Clock�, tout peptide ou dérivé biologiquement actif capable d'augmenter l'activité de Clock, soit par augmentation de la synthèse protéique de Clock (par modulation directe ou indirecte de l'expression génique de Clock) soit par d'autres processus biologiques tels que la stabilisation de la protéine Clock ou encore la stabilisation des transcrits d'ARN 25 messager. De manière préférentielle, le composé peptidique possède au moins un groupement fonctionnel protégé par un groupement protecteur, ce groupement protecteur étant soit une acylation ou une acétylation de l'extrémité amino-terminale, soit une amidation ou 30 une estérification de l'extrémité carboxy-terminale, soit les deux. Préférentiellement, le composé peptidique présente l'une des séquences suivantes : (SEQ ID n°1) Ser û Pro û Leu û Gln -NH2 (SEQ ID n°2) Thr û Ser û Pro û Leu û Gin 35 (SEQ ID n°3) Arg ûThr û Ser û Pro û Leu û Gln ûLeu ûNH2 2940972 -6- (SEQ ID n°4) Ser - Ser û Pro û Leu û Gln ûHis -NH2 Dans un mode de réalisation particulier, la séquence du composé peptidique est la séquence SEQ ID n° 1, c'est-à-dire Ser û Pro û Leu û Gln -NH2. 5 L'invention concerne aussi des formes homologues de ces séquences. Le terme � homologue � désigne, selon l'invention, toute séquence peptidique identique à au moins 50%, ou de préférence au moins 80%, et encore plus préférentiellement à au moins 90% de ladite séquence peptidique, choisie parmi les séquences SEQ ID n° 1 à SEQ ID n° 4. Par � séquence peptidique identique à au moins X% �, on entend 10 désigner un pourcentage d'identité entre les résidus d'acides aminés des deux séquences à comparer, obtenu après l'alignement optimal des deux séquences. L'alignement optimal est obtenu à l'aide d'algorithmes d'homologies locales tels que ceux utilisés par les logiciels informatiques BLAST P ou T BLAST N disponibles sur le site NCBI. 15 Le terme � homologue � peut également désigner un peptide qui diffère de la séquence d'un peptide de séquence SEQ ID n° 1 à SEQ ID n° 4 par la substitution d'acides aminés chimiquement équivalents, c'est-à-dire par la substitution d'un résidu par un autre possédant les mêmes caractéristiques. Ainsi, les substitutions classiques se 20 font entre Ala, Val, Leu et Ile ; entre Ser et Thr ; entre les résidus acides Asp et Glu ; entre Asn et Gln ; et entre les résidus basiques Lys et Arg ; ou entre les résidus aromatiques Phe et Tyr. Le terme � peptide � désigne un enchaînement de deux ou plusieurs acides aminés 25 liés entre eux par des liaisons peptidiques ou par des liaisons peptidiques modifiées. Par � peptide �, il faut entendre le peptide naturel ou synthétique de l'invention tel que décrit ci-dessus, ou au moins l'un de ses fragments, qu'il soit obtenu par protéolyse ou de manière synthétique, ou encore tout peptide naturel ou synthétique dont la séquence est totalement ou partiellement constituée par la séquence du peptide 30 précédemment décrit. De façon à améliorer la résistance à la dégradation, il peut être nécessaire d'utiliser une forme protégée du peptide selon l'invention. La forme de protection doit évidemment être une forme biologiquement compatible et doit être compatible avec 35 une utilisation dans le domaine des cosmétiques ou de la pharmacie. 2940972 -7- De nombreuses formes de protection biologiquement compatibles peuvent être envisagées. Elles sont bien connues de l'homme du métier comme, par exemple, l'acylation ou l'acétylation de l'extrémité amino-terminale, ou l'amidation ou l'estérification de l'extrémité carboxy-terminale. Ainsi, l'invention concerne une 5 composition telle que définie précédemment, caractérisée par le fait que le peptide de séquence SEQ ID n°1 à SEQ ID n°4 est sous forme protégée ou non. On peut utiliser une protection basée sur une substitution sur l'extrémité amino-terminale par un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle. De préférence, on utilise une protection basée sur l'amidation de 10 la fonction hydroxyle de l'extrémité carboxy-terminale par un groupement NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de C, à C4, ou l'estérification par un groupement alkyle. Il est également possible de protéger les deux extrémités du peptide. Le peptide de formule générale (I) selon l'invention peut être obtenu soit par 15 synthèse chimique classique (en phase solide ou en phase homogène liquide), soit par synthèse enzymatique (Kullman et al., J. Biol. Chem. 1980, 225, 8234), à partir d'acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés. Le peptide selon l'invention peut être d'origine naturelle ou synthétique. 20 Préférentiellement selon l'invention, le peptide est obtenu par synthèse chimique. Enfin, le principe actif peut être un peptide unique, un mélange de peptides ou de dérivés peptidiques et/ou constitués de dérivés d'acides aminés. Le composé peptidique selon l'invention peut être utilisé à titre de médicament. 25 Le second objet de la présente invention se rapporte à des compositions cosmétiques comprenant ledit composé peptidique de formule générale (I). De manière préférée, les compositions selon l'invention se présentent sous une forme adaptée à l'application par voie topique comprenant un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable. Par � cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable �, on entend des 30 milieux qui conviennent à une utilisation en contact avec la peau ou les phanères humains, sans risque de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité, de réponse allergique et autres. Préférentiellement, ledit composé peptidique est présent dans la composition à une concentration comprise entre 0,0005 et 500 ppm environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 et 5 ppm. Dans les compositions selon 35 l'invention, le composé peptidique est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs 2940972 -8- solvants cosmétiquement ou dermatologiquement acceptables, comme l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. 5 Selon encore un autre mode de réalisation avantageux, le principe actif selon l'invention est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur physiologiquement acceptable. 10 Les compositions destinées à être appliquées sur la peau peuvent se présenter sous forme de solution aqueuse ou hydroalcoolique, d'émulsion eau dans huile ou huile dans eau, de microémulsion, de gel aqueux ou anhydre, de sérum, ou encore de dispersion de vésicules, de patch, de crème, de spray, d'onguent, de pommade, de lotions, de colloïde, de solution, de suspension ou autres. Les compositions peuvent aussi être 15 appliquées sur les phanères sous forme de shampoing, de teinture ou de mascara à appliquer au pinceau ou au peigne, en particulier sur les cils, les sourcils ou les cheveux, ou encore de soins pour les ongles tels que les vernis. Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention contient en 20 outre, au moins un autre principe actif favorisant l'action dudit principe actif peptidique. On peut citer, de manière non limitative, les classes d'ingrédients suivantes : d'autres agents actifs peptidiques, des extraits de végétaux, des agents cicatrisants, anti-âge, anti-rides, apaisants, anti-radicalaire, anti-UV, des agents stimulant la synthèse de macromolécules dermiques ou le métabolisme énergétique, des 25 agents hydratants, anti-bactériens, anti-fongiques, anti-inflammatoires, anesthésiques, des agents modulants la différenciation, la pigmentation ou la dépigmentation cutanée, des agents stimulants la pousse des ongles ou des cheveux.... Préférentiellement, on utilisera un agent anti-radicalaire ou antioxydant, ou un agent stimulant la synthèse de macromolécules dermiques, ou encore un agent stimulant le métabolisme énergétique. 30 En outre, des additifs tels que des agents épaississants, émulsifiants, humectants, émollients, des parfums, des antioxydants, des agents filmogènes, chélatants, séquestrants, conditionnants....peuvent être ajoutés à la composition. Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs 35 proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses 2940972 -9- recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les 5 émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, par rapport au poids total de la composition. 10 Un troisième objet de la présente invention se rapporte à l'utilisation d'une composition selon ladite invention pour prévenir ou traiter les signes cutanés du vieillissement. Les � signes cutanés du vieillissement � incluent, mais ne se limitent pas à, toutes les manifestations visibles sur la peau causés par le vieillissement. On entend notamment, les rides, ridules, crevasses, pores élargis, imperfections, perte de fermeté, 15 décoloration, tâches de vieillesse, kératoses, perte de collagène, et autres changements du derme et de l'épiderme....Par � signes cutanés du vieillissement �, on entend également toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau et des phanères dues au vieillissement comme, par exemple, les rugosités superficielles de la couche cornée, mais également toute modification interne de la peau qui ne se traduit pas 20 systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, l'amincissement du derme ou toute autre dégradation interne de la peau. Un quatrième objet de la présente invention se rapporte à l'utilisation d'une composition selon ladite invention pour la protection de la peau contre les agressions 25 dues aux rayonnements UV. Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'une quantité efficace de principe actif peptidique selon l'invention, pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou à lutter contre les pathologies liées aux 30 processus d'oxydation. Un dernier objet de la présente invention se rapporte à un procédé de traitement cosmétique caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la peau ou les phanères à traiter une composition contenant une quantité efficace de principe actif peptidique pour prévenir ou traiter les signes cutanés du vieillissement ou protéger la peau contre 35 les agressions dues aux rayonnements UV. Par ailleurs, ce procédé de traitement 2940972 -10- cosmétique est caractérisé en ce que la composition est appliquée avant le coucher de façon à respecter le rythme circadien de la peau pour obtenir un effet rajeunissant sur la peau. En effet, durant la nuit, la peau privilégie des fonctions de renouvellement ainsi que des processus métaboliques de synthèse. Par conséquent, l'application de la 5 composition telle que revendiquée, en respectant le rythme biologique de la peau permet d'obtenir un effet rajeunissant, stimulant le renouvellement cellulaire, et régénérant. Les exemples suivants décrivent et démontrent l'efficacité de composés peptidiques 10 tels que décrits selon l'invention. La formulation cosmétique citée est représentative de l'invention mais est donnée uniquement à titre d'illustration et ne doit pas être interprétée comme une limitation de la présente invention. Exemple 1 : Mise en évidence de l'effet activateur du peptide SEQ ID n°1 sur 15 l'expression de la protéine Clock sur des fibroblastes en culture. Une étude de l'effet activateur du peptide SEQ ID n°1, a été réalisée en évaluant l'expression de la protéine Clock en western blot sur des fibroblastes en culture et en immunohistochimie par marquage de la protéine Clock par immunomarquage. La technique de western blotting est une méthode serai quantitative qui permet d'apprécier 20 le taux de protéine Clock dans les cellules dermiques. Protocole a) Etude en western blot Des fibroblastes en cultures sont cultivés dans des boîtes de diamètre 100 mm à 37°C 25 dans une atmosphère humidifiée contenant 5% de CO2 pendant 16 h en présence ou non du peptide SEQ ID n°1, dilué 1% (à partir d'une solution 10-4M). Les cellules sont rincées puis détachées du support à l'aide d'un tampon d'extraction (20mM TRIS, 150mM NaCl, 10mM EDTA, 0.2% Triton X10) en présence d'un cocktail d'inhibiteurs de protéases (Sigma). Les protéines ainsi extraites, sont centrifugées à 4°C à 10000 30 rpm, pendant avant d'être dosées par le kit de dosage des protéines BCA (Pierce). Les lysats cellulaires sont mélangés à un tampon de dénaturation et soumis à une électrophorèse SDS-PAGE. Le gel utilisé est un Nupage 4-12% (invitrogen). Les protéines sont enfin transférées sur une membrane de nitrocellulose (Pal corporation). Les membranes sont saturées dans du PBS-lait 5%, 0.1% tween 20 2 heures à 35 température ambiante, puis incubées à 4°C toute la nuit avec un anticorps primaire anti- 2940972 -11- dock au 1/1000eme (ABcam) suivie d'une incubation avec un anticorps secondaire antilapin Iggy-peroxydase dilué au 1/5000eme La révélation est effectuée par un substrat chimioluminescent. L'évaluation quantitative des protéines présentes dans les cellules est effectuée grâce au logiciel chemiimager (Alpha innotech Corporation USA). La 5 quantité des protéines est exprimée en pourcentage d'intensité lumineuse comparée à la condition contrôle qui n'ont pas eu le traitement. b) Etude en Immunohistochimie Des fibroblastes en cultures sont cultivés dans des chambres à 8 puits (labteck) à 10 37°C dans une atmosphère humidifiée contenant 5% de CO2 pendant 18 h en présence ou non du peptide SEQ ID n°1, dilué 1% (à partir d'une solution 10'4M). Des cellules non traitées sont cultivées en même temps et servent de contrôle. Le jour du marquage, les cellules sont rincées, fixées dans un mélange (2% glutaraldéhyde û 2% formaldéhyde) 3 minutes puis rincées. On applique l'anticorps primaire (ABcam) dilué 15 au 1/250ème pendant 1 heure et un anticorps secondaire au 1/50ème couplé à un fluorochrome pendant 1 heure. Les cellules sont montées entre lame et lamelle dans un milieu de montage adéquate et observées au microscope à épifluorescence. Résultats : 20 Les résultats obtenus en western blot montrent que le traitement par le peptide SEQ ID n°1, dilué 1% augmente la quantité de protéine Clock présente dans les fibroblastes en culture. Les résultats sont résumés dans le tableau ci-dessous. Intensité (%) Expérience 1 Contrôle non traités 100 % 1 % traitement 179% 25 Ces résultats sont confirmés par le marquage de la protéine Clock sur les fibroblastes. En effet, on montre une augmentation de l'expression de la protéine Clock sur les fibroblastes traités. Conclusion : L'administration du peptide SEQ ID n°1 permet d'augmenter quantité de protéine Clock sur des cellules dermiques en culture. Exemple 2 : Mise en évidence de l'effet activateur du peptide SEQ ID n°1 sur l'expression de la protéine Clock et Per sur des biopsies de peaux. Une étude de l'effet activateur du peptide SEQ ID n°l, a été réalisée en évaluant l'expression des protéines Clock et Per-1 sur des biopsies de peaux ex vivo. Protocole Des études ex vivo par immunomarquage ont permis de mettre en évidence l'expression des protéines Clock et Per-1, sur des échantillons de peau. Des échantillons de peau humaine, sont mis en culture à l'interface air/liquide. Le peptide SEQ ID n°1 dilué à 1% (à partir d'une solution 10-4M) est appliqué de façon topique sur ces échantillons pendant 48 h à raison de 2 fois par 24 h. Des échantillons de peaux non traitées par le peptide SEQ ID n°1 servent de contrôle. Les échantillons de peaux sont fixés au formaldéhyde 10% et inclus dans la paraffine. Des coupes de 3�m sont réalisées au microtome. L'immunomarquage est effectué après un déparaffinage et un démasquage des sites antigéniques. L'immunomarquage s'effectue pour la protéine Clock, par un anticorps (ABcam) dilué au 1/250ème et un anticorps secondaire au 1/50ème couplé à un fluorochrome. L'immunomarquage s'effectue pour la protéine Per-1, par un anticorps polyclonal (Cosmobio) dilué au 1/100ème et un anticorps secondaire au 1/50ème couplé à un fluorochrome. Les lames sont alors montées dans un milieu adéquat et observé au microscope à épifluorescence (Nikon Eclipse E600). Résultats : Les résultats obtenus montrent que les peaux traitées avec le peptide SEQ ID n°1 expriment une quantité de protéine Clock nettement supérieure aux peaux non traitées. De même on montre que les peaux traitées avec le peptide SEQ ID n°1 expriment une quantité de protéine Per-1 supérieure aux peaux non traitées. L'évaluation semi-quantitative du marquage est effectuée par observation microscopique et résumé dans le tableau ci-dessous. -12- 2940972 -13- Non traité Traité par peptide SEQ ID n°1 dilué à 1% Marquage protéine Clock +/- ++ Marquage protéine PER-1 + + Conclusion : Le peptide SEQ ID n°1 permet, d'augmenter la quantité des protéines Clock et Per-1 sur des biopsies de peaux. 5 Exemple 3 : Mise en évidence de l'effet activateur du peptide SEQ ID n°1 sur l'expression de la protéine Clock et Per-1, sur des biopsies de peau au cours du vieillissement Une étude de l'effet activateur du peptide SEQ ID n°1, a été réalisée en évaluant 10 l'expression des protéines Clock et Per-1 sur des modèles de peaux, vieillis artificiellement en culture. L'analyse s'est effectuée après 62 h et 134 h de culture. Protocole Des études ex vivo par immunomarquage ont permis de mettre en évidence 15 l'expression des protéines Clock et Per-1, sur des échantillons de peaux vieillis en culture. Des échantillons de peau humaine, sont mis en culture à l'interface air/liquide, pendant 62 h et 134 h. Le peptide SEQ ID n°1 dilué à 1% (à partir d'une solution 10-4M).est appliqué de façon topique sur ces échantillons à raison de 2 fois par jour pendant le temps de l'expérience. 20 Des échantillons de peau non traitées par le peptide SEQ ID n°1 servent de contrôle. Les échantillons de peaux sont fixés au formaldéhyde 10% et inclus dans la paraffine. Des coupes de 3�m sont réalisées au microtome. L'immunomarquage est effectué après un déparaffinage et un démasquage des sites antigéniques. L'immunomarquage s'effectue pour la protéine Clock, par un anticorps (ABcam) dilué au 1/250ème et un 25 anticorps secondaire au 1/50eme couplé à un fluorochrome. L'immunomarquage s'effectue pour la protéine Per-1, par un anticorps polyclonal (Cosmobio) dilué au 1/100ème et un anticorps secondaire au 1/50ème couplé à un fluorochrome. 2940972 -14- Les lames sont alors montées dans un milieu adéquat et observées au microscope à épifluorescence (Nikon Eclipse E600). Résultats : 5 Les résultats obtenus montrent que le marquage de la protéine Clock (essentiellement épidermique) est augmenté après 62 h de culture, par rapport aux lames témoins non traitées. De même, l'expression de la protéine Per-1 est augmentée après 62 h de traitement. Ce marquage perdure dans le temps puisqu'au bout de 134 h, le marquage de la protéine Clock est fortement augmenté par rapport aux peaux témoins non 10 traitées. Le tableau ci-dessous donne une évaluation visuelle du marquage. Non traité Traité par peptide SEQ ID n° 1 dilué à 1% Marquage Clock 62 h + ++ 134 h + ++ Marquage Per-1 62 h +/- ++ 134 h +1- + Conclusion : Le peptide SEQ ID n°1 permet, d'augmenter la quantité des protéines Clock et Per-1 15 sur des biopsies de peau traitées et vieillies artificiellement en culture. Exemple 4 : Mise en évidence de l'effet protecteur du peptide SEQ ID n°1 sur des biopsies de peau au cours du vieillissement Parallèlement une étude de l'effet protecteur du peptide SEQ ID n°1, a été réalisée en 20 évaluant en immunohistologie au moyen d'une coloration de coupes de peau les dommages causés un vieillissement de 62 h et 134 h. Protocole Des échantillons de peau humaine, sont mis en culture à l'interface air/liquide. Le 25 peptide SEQ ID n°1 dilué à 1% (à partir d'une solution 10-4M).est appliqué de façon topique sur ces échantillons pendant 62 h et 134 h. L'application est renouvelée 2 fois par jour pendant le temps de l'expérience. Des échantillons de peau non traitées servent 2940972 -15- de contrôle pendant le temps de l'expérience. Les échantillons de peaux sont fixés au formaldéhyde 4% et inclus dans la paraffine. Des coupes de 3�m sont réalisées au microtome. Une coloration des tissus est faite par l'hématoxyline (qui colore les noyaux en bleu-noir) et l'éosine qui est spécifique de la coloration des cytoplasmes. La 5 structure morphologique des biopsies est alors appréciée au microscope à transmission. Résultats : Les résultats obtenus montrent que les peaux non traitées avec le peptide SEQ ID n°1 sont endommagées, les cellules sont vacuolées, les cellules paraissent endommagées 10 avec des cellules dont les noyaux sont très condensés (signes apoptotiques). Au contraire les peaux traitées avec le peptide SEQ ID n°1 ont une structure morphologique bien conservée, les dégâts dus au vieillissement sont moins visibles. Pour les 2 expériences 62 et 134 h le peptide SEQ ID n°1 protège les biopsies de peaux du vieillissement. 15 Conclusion : Le peptide SEQ ID n°1 permet de mettre en évidence un effet protecteur sur la morphologie structurale des biopsies de peaux soumises à un vieillissement artificiel en culture. Exemple 7 : Préparation d'une composition Crème protection solaire: Noms commerciaux Noms INCI % massique PHASE A Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Pemulen TRI Acrylates/C 10-30 Alkyl 0,40 Acrylate Crosspolymer Glycerine Glycerin 3,00 Nipastat Sodium Sodium Methylparaben (and) 0,15 Sodium Ethylparaben (and) Sodium Butyl paraben (and) 20 2940972 -16- Noms commerciaux Noms INCI % massique Sodium Propylparaben (and) Sodium Isobutylparaben PHASE B Parsol MCX Ethylhexyl Methoxycinnamate 7,50 Eusolex 4360 Benzophenone-3 3,00 Parsol 1789 Butyl 2,00 Methoxydibenzoylmethane Myritol 318 Caprylic/Capric Triglyceride 4,00 Emulgade SEV Hydrogenated Palm Glycerides 5,00 (and) Ceteareth-20 (and) Ceteareth-12 (and) Cetearyl Alcohol Propylparaben Propylparaben 0,15 Nacol 16-98 Cetyl Alcohol 1,00 PHASE C TEA Triethanolamine 0.20 PHASE D Peptide SEQ ID n°2 3 ppm Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément entre 70°C et 75°C. La phase B est émulsionnée dans la phase A sous agitation. La phase C est ajoutée, à 45°C, en augmentant l'agitation. La phase D est ensuite additionnée 5 lorsque la température se situe en dessous de 40°C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C sous vive agitation. REVENDICATIONS1. Composé peptidique de formule générale suivante (I) : R1-(AA)ri X1-X2- Ser û Pro û Leu û Gln û X3 - X4 -(AA)p û R2 Dans laquelle, X1 représente une cystéine, une méthionine ou est égal à zéro, X2 représente une sérine, une thréonine, ou est égal à zéro, X3 représente une alanine, une glycine, une isoleucine, une leucine, une proline, une valine ou est égal à zéro, X4 représente une asparagine, une glutamine, ou est égal à zéro. AA représente un acide aminé quelconque, ou un de ses dérivés, et n et p sont des nombres entiers compris entre 0 et 4, R1 représente la fonction amine primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle, R2 représente le groupe hydroxyle de la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal, libre ou substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi une chaîne alkyle de C1 à C70, ou un groupement NH2, NHY ou NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de C1 à C4, ladite séquence de formule générale (I) étant constituée de 4 à 16 résidus d'acides aminés, ladite séquence de formule générale (1) pouvant comprendre des substitutions des acides aminés XI à X4 par d'autres acides aminés chimiquement équivalents. 2. Composé peptidique selon la revendication 1, caractérisé en ce que le peptide de formule générale (I) possède au moins un groupement fonctionnel protégé par un groupement protecteur, ce groupement protecteur étant soit une acétylation de l'extrémité amino-terminale, soit une amidation ou une estérification de l'extrémité carboxy-terminale, soit les deux. 3. Composé peptidique selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il correspond à une des formules suivantes : 2940972 -18- (SEQ ID n°1) Ser û Pro û Leu û Gln -NH2 (SEQ ID n°2) Thr û Ser û Pro û Leu û Gln (SEQ ID n°3) Arg ûThr û Ser û Pro û Leu û Gln ûLeu ûNH2 (SEQ ID n°4) Ser - Ser û Pro û Leu û Gln ûHis -NH2 4. Composé peptidique selon la revendication précédente caractérisé en ce qu'il correspond à la séquence (SEQ ID n°1). 5. Composé peptidique selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce 10 qu'il est utilisé à titre de médicament. 6. Composition cosmétique comprenant à titre de principe actif ledit composé peptidique selon l'une des revendications 1 à 4. 15 7. Composition cosmétique selon la revendication 6, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme adaptée à l'application par voie topique comprenant un milieu cosmétiquement acceptable. 8. Composition selon l'une des revendications 6 ou 7, caractérisée en ce que ledit 20 composé peptidique est présent dans la composition à une concentration comprise entre 0,0005 et 500 ppm environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 et 5 ppm. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisée en ce 25 que ledit principe actif peptidique est solubilisé dans un ou plusieurs solvants, comme l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. 30 10. Composition selon l'une quelconque des revendications 6 à 9, caractérisée en ce qu'elle contient en outre, au moins un autre principe actif favorisant l'action dudit principe actif peptidique. 5 5 2940972 -19- 11. Composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce que ledit principe actif est un agent anti-radicalaire ou antioxydant, ou un agent stimulant la synthèse de macromolécules dermiques, ou encore un agent stimulant le métabolisme énergétique. 12. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 6 à 11, caractérisée en ce que ladite composition permet de prévenir ou de traiter les signes cutanés du vieillissement. 10 13. Utilisation d'une composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce que ladite composition permet de protéger la peau contre les agressions dues aux rayonnements UV. 14. Utilisation d'une quantité efficace de principe actif peptidique, tel que défini dans 15 l'une des revendications 1 à 5, pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à prévenir ou à lutter contre les pathologies liées aux processus d'oxydation. 15. Procédé de traitement cosmétique caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la peau ou les phanères à traiter une composition contenant une quantité efficace de 20 principe actif peptidique, tel que défini dans l'une des revendications 1 à 4, pour prévenir ou traiter les signes cutanés du vieillissement ou protéger la peau contre les agressions dues aux rayonnements UV. 16. Procédé de traitement cosmétique, tel que défini dans la revendication précédente, 25 caractérisé en ce que la composition est appliquée avant le coucher de façon à respecter le rythme circadien de la peau pour obtenir un effet rajeunissant sur la peau.