Brevet FR2935384A1 — publié le 20100305

PROCEDE DE DETECTION DE VIRUS DE LA ROUGEOLE, DISPOSITIF DE TEST POUR L'ESSAI MEMBRANAIRE ET KIT DE TEST POUR L'ESSAI MEMBRANAIRE DOMAINE TECHNIQUE [0001] La présente invention concerne un procédé pour détecter le virus de la rougeole dans un échantillon à l'aide d'anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole capables de se lier à des antigènes du virus de la rougeole. Par ailleurs, la présente invention concerne un dispositif de test pour l'essai membranaire de type flux latéral pour détecter le virus de la rougeole, et un kit de test pour un essai membranaire qui l'utilise. Par ailleurs, la présente invention concerne un kit de test pour l'essai membranaire de type flux continu pour détecter le virus de la rougeole. ETAT DE LA TECHNIQUE ANTÉRIEURE [0002] Le virus de la rougeole appartient au genre morbillivirus de la famille des paramyxovirus ; il s'agit d'un virus à ARN (simple brin) ayant une enveloppe de 100 à 250 nm de diamètre. En cas d'infection par le virus de la rougeole, celui-ci se multiplie d'abord dans les cellules épithéliales respiratoires, et puis principalement dans les tissus lymphoïdes du corps entier, tels que les noeuds lymphoïdes, la rate, le thymus, induisant le développement d'une lymphopénie, d'une immunosupression, etc. Le virus de la rougeole est d'une infectivité très puissante, et une fois l'homme infecté, il risque de provoquer une infection secondaire ; la détection d'une infection par le virus de la rougeole est donc cruciale. [0003] Une telle détection chez un sujet à l'aide d'anticorps dirigés contre le virus de la rougeole est connue. Par exemple, la demande WO93/22683 décrit un procédé de détection d'une immunoglobuline IgM spécifique à la rougeole, liée à un antigène de nucléoprotéine rougeoleuse recombinant contenant au moins un épitope reconnu par l'immunoglobuline IgM spécifique à la rougeole, par la mise en contact dudit antigène avec un échantillon de sérum humain. [0004] Par ailleurs, la demande WO97/07400 décrit un procédé de détection d'un virus de la rougeole contenu dans un échantillon d'un individu. Spécifiquement, un réactif de détection du virus de la rougeole dans lequel des anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole sont fixés à la surface d'un support solide minuscule est décrit comme un réactif de vérification de l'agglutination du virus dans lequel une molécule avec une affinité pour une protéine sur la couche superficielle du virus est fixée à la surface du support solide minuscule. EXPOSÉ DE L'INVENTION PROBLÈMES QUE L'INVENTION VISE À RÉSOUDRE [0005] Cependant, le procédé selon la demande WO93/22683 a des incovénients : il ne permet pas la détection précoce d'infection par le virus de la rougeole, étant donné que le titre d'anticorps IgM ne s'élève dans le corps de sujets infectés qu'au moins 3 jours environ après l'infection. De plus, la détection selon le procédé précité, effectuée pendant la période entre 2 l'infection par le virus de la rougeole et l'élévation du titre d'anticorps IgM risque de conduire à une détermination de faux négatif. [0006] D'autre part, le procédé selon la demande WO97/07400 permet la détection du virus de la rougeole en soi, mais le procédé précité requiert l'utilisation d'un contrôle positif et d'un contrôle négatif, donc l'opération nécessaire pour la détection est compliquée, et ne permet pas la détection rapide de l'infection par la rougeole. [0007] Comme décrit ci-dessus, le virus de la rougeole est d'une infectivité très puissante, ce qui exige une détection précoce de l'infection par la rougeole, et des mesures de prévention prises contre l'infection secondaire à l'aide de la détection rapide et certaine de l'infection par la rougeole. Les procédés précités selon les demandes WO93/22683 et WO97/07400 ne pouvaient pas fournir de vérification de l'infection par la rougeole qui satisfait aux exigences mentionnées ci-dessus au point de vue de la rapidité et de la certitude. [0008] La présente invention a été réalisée au vu de ces circonstances, et vise à fournir un procédé de détection du virus de la rougeole, permettant la détection plus simple et certaine que les procédés de l'art antérieur. Par ailleurs, la présente invention vise à fournir un dispositif de test pour l'essai membranaire et un kit de test pour l'essai membranaire, aptes à réaliser le procédé de détection du virus de la rougeole mentionné ci-dessus. MOYENS POUR RÉSOUDRE LES PROBLÈMES [0009] Le procédé pour détecter le virus de la rougeole selon le premier aspect de l'invention est caractérisé en ce que le virus de la rougeole contenu dans un échantillon biologique est détecté par un premier anticorps monoclonal capable de se lier à ladite nucléoprotéine du virus de la rougeole, et d'un deuxième anticorps monoclonal marqué, capable de se lier à la nucléoprotéine du virus de la rougeole, mais différent du premier anticorps monoclonal. [0010] Par ailleurs, le dispositif de test pour l'essai membranaire pour détecter le virus de la rougeole selon le deuxième aspect de l'invention comprend un support membranaire pour le développement comprenant une partie déterminante où un premier anticorps monoclonal capable de se lier à une nucléoprotéine du virus de la rougeole est fixé, et d'un membre de retention de marqueur, c'est-à-dire un deuxième anticorps monoclonal marqué, qui est capable de se lier à la nucléoprotéine du virus de la rougeole, mais différent du premier anticorps monoclonal. [0011] Par ailleurs, le kit de test pour l'essai membranaire pour détecter le virus de la rougeole selon le troisième aspect de l'invention est caractérisé en ce qu'il est équipé d'un dispositif de test pour l'essai membranaire tel que mentionné ci-dessus, et de liquide pour le traitement du sujet pour préparer un échantillon de mesure par mélange avec un échantillon biologique, contenant un surfactant non-ionique. [0012] Par ailleurs, le kit de test pour l'essai membranaire pour détecter le virus de la rougeole selon le quatrième aspect de l'invention comprend un dispositif de test avec un support membranaire contenant une partie déterminante où un premier anticorps monoclonal capable de se lier à une nucléoprotéine du virus de la rougeole est porté, et de liquide de marquage contenant un deuxième anticorps monoclonal marqué capable de se lier à la nucléoprotéine du virus de la rougeole, mais différent du premier anticorps monoclonal. EFFET DE L'INVENTION [0013] La présente invention permet de fournir un procédé de détection de virus de la rougeole, capable de détecter de manière simple et certaine le virus de la rougeole. En outre, la présente invention peut fournir un dispositif de test pour l'essai membranaire de type flux latéral capable de détecter de manière simple et certaine le virus de la rougeole, et un kit de test pour l'essai membranaire l'utilisant. En outre, la présente invention permet de fournir un kit de test pour l'essai membranaire de type flux continu capable de détecter de manière simple et certaine le virus de la rougeole. DESCRIPTION SOMMAIRE DES DESSINS [0014] Fig. 1 : la Figure 1 est une vue schématique de configuration du kit de test pour l'essai membranaire de type flux latéral (pour l'immunochromatographie).5 Fig. 2 : la Figure 2 est une vue en plan (a) et une vue de côté (b) du dispositif de test pour le kit de test pour l'essai membranaire de la Figure 1. Fig. 3 : la Figure 3 est une vue éclatée en plan d'un récipient de traitement d'un sujet. Fig. 4 : la Figure 4 est une vue illustrative d'un état d'utilisation du kit de test pour l'essai membranaire de la Figure 1. Fig. 5 : la Figure 5 est une vue illustrative d'un autre mode de réalisation du dispositif de test pour l'essai membranaire. Fig. 6 : la Figure 6 est une vue schématique de configuration du kit de test pour l'essai membranaire de type flux continu. Fig. 7 = la Figure 7 est une vue en plan (a) et une vue en coupe selon la flèche X-X (b) du dispositif de test de la Figure 6. Fig. 8 : la Figure 8 montre de nucléoprotéines qui sont tronquées partiallement. MEILLEUR MODE DE REALISATION [0015] Les "anticorps monoclonaux" selon la présente invention comprennent également des fragments d'anticorps monoclonaux et leurs dérivés. Les fragments d'anticorps monoclonaux et leurs dérivés sont illustrés spécifiquement par des fragments Fab, Fab', F(ab)2, sFv, etc. Les sous-classes d'anticorps monoclonaux ne sont pas limitées à IgG, mais elles peuvent être aussi des IgM. [0016] L'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole peut se lier à la nucléoprotéine du virus de la rougeole. La nucléoprotéine présente une antigénicité puissante par rapport aux autres protéines structurelles telles que celles des enveloppes. On considère qu'elle peut être contenue en grand nombre dans le sujet malade. De ce fait, l'utilisation des anticorps monoclonaux capables de se lier aux nucléoprotéines pourra améliorer la sensibilité pour détecter le virus de la rougeole. [0017] Les anticorps monoclonaux anti-rougeoles peuvent être obtenus en utilisant des moyens immunologiques connus, en immunisant des animaux à immuniser contre l'antigène de virus de la rougeole, et en préparant un hybridome a l'aide des cellules de l'animal immunisé. L'hybridome MV2-2649 susceptible de produire l'anticorps 2649 utilisable comme un anticorps monoclonal selon la présente invention a été déposé sous le numéro de dépôt NITE P-563, l'hybridome MV2-3241 susceptible de produire l'anticorps 3241 a été déposé sous le numéro de dépôt NITE P-564, l'hybridome MV2-3707 susceptible de produire l'anticorps 3707 a été déposé sous le numéro de dépôt NITE P-565, et l'hybridome MV3-320 susceptible de produire l'anticorps 320 a été déposé sous le numéro de dépôt NITE P-566, respectivement au � Patent Microorganisms Depositary � du � National Institute of Technology and Evaluation � (la date de dépôt: le 16 avril 2008). [0018] L'antigène de virus de la rougeole peut être obtenu par purification à partir d'un échantillon biologique d'un sujet infecté par la rougeole. Par ailleurs, l'antigène de virus de la rougeole peut être obtenu par intégration d'ADN codant la nucléoprotéine du virus de la rougeole dans un plasmide, introduction de celui-ci dans une cellule hôte, et son expression. [0019] Lors de l'immunisation d'un animal à immuniser contre l'antigène, il est préférable d'administrer également un adjuvant. L'utilisation de l'adjuvant permet d'induire une réponse immunitaire plus importante de l'animal immunisé contre l'antigène. Le genre d'adjuvant n'est pas particulièrement limité, mais on peut utiliser l'adjuvant complet de Freund (FCA), l'adjuvant incomplet de Freund (FIA), le lipide monophosphoryl A (MPL, le nom commercial: Ribi), le dimycolate de tréhalose (TDM, le nom commercial: RIBI), un mélange liquide du lipide monophosphoryl A et du dimycolate de tréhalose (MPL+TDM, le nom commercial: RIBI Adjuvant System), le vaccin anticoquelucheux (Bordetella pertussis Vaccine), le muramyl-dipeptide (MDP), l'adjuvant d'aluminium (ALUM), etc. Par ailleurs, on peut combiner et utiliser plusieurs de ces adjuvants. Il est préférable d'utiliser FCA lors de la première immunisation, et FIA et Ribi lors de la deuxième immunisation ou lors d'une immunisation ultérieure. [0020] Le plan de l'immunisation varie de façon appropriée en fonction de l'administration ou non d'un adjuvant, de la voie d'administration, du genre d'animal à immuniser. Dans ce qui suit, est exposée une procédure d'immunisation en cas d'utilisation des souris comme animal à immuniser. A titre de première immunisation, une solution d'antigène du virus de la rougeole mélangée avec l'adjuvant est injectée aux souris par voie intrapéritonéale, sous-cutanée ou intramusculaire. Le volume de la solution d'antigène du virus de la rougeole mélangée avec l'adjuvant à injecter est préférablement compris entre 0,05 ml et 1 ml, et la masse de l'antigène de la rougeole contenue est préférablement comprise entre 10 et 200 fig. Au cas où l'adjuvant ne serait pas utilisé, l'immunisation peut être effectuée avec une injection intrapéritonéale de l'antigène du virus de la rougeole aux souris en quantité plus grande que celle précisée ci-dessus. Les premières à sixième immunisations additionnelles sont effectuées toutes les 2 ou 4 semaines à compter de la date de la première immunisation. La dernière immunisation est effectuée environ 1 à 4 semaines après les immunisations additionnelles avec une injection intraveineuse de la solution d'antigène du virus de la rougeole. Environ 3 à 5 jours après la dernière immunisation, les cellules spléniques sont isolées des souris pour obtenir des cellules produisant l'anticorps. [0021] Les cellules produisant l'anticorps ainsi préparées sont fusionnées avec des cellules de myélome. La provenance des cellules de myélome n'étant pas particulièrement limitée, on peut utiliser celles obtenues à partir de souris, de rats, d'hommes, etc., mais il est préférable d'utiliser des myélomes en provenance d'animaux qui sont de la même espèce que celui de l'animal à immuniser, et de façon plus préférée, on utilise des myélomes en provenance d'animaux qui sont de la même espèce et de la même lignée que ceux de l'animal à immuniser. Dans le cas où les souris seraient utilisés en tant que pour l'obtention de myélomes, des lignées cellulaires établies de myélome telles que les myélomes murins P3X63-Ag8, P3X-63-Ag8-U1, P3NS1-Ag4, SP2/o-Ag14, P3X63-Ag8/653 sont préférablement utilisées. Il y a des cellules de myélome qui produisent des chaînes légères d'immunoglobuline, et si telles cellules de myélome sont utilisées pour la fusion, il arrive que des chaînes lourdes d'immunoglobuline produites par les cellules produisant l'anticorps se lient avec ces chaînes légères. Il en résulte que l'utilisation de cellules de myélome qui ne produisent pas de chaînes légères d'immunoglobuline telles que P3X63-Ag8.653 et SP2/o-Ag14, etc. est plus préférable. [0022] On peut utiliser tout procédé connu de préparation d'un hybridome par la fusion des cellules produisant l'anticorps et des cellules de myélome. Par exemple, on peut citer celui avec le polyéthylène-glycol (PEG) (le procédé PEG), celui avec le virus Sendai, celui avec un dispositif d'électrofusion. Dans le cas de procédé PEG, des cellules spléniques et des cellules de myélome sont suspendues dans le rapport de mélange compris entre 1:1 et 10:1, de préférence entre 5:1 et 10:1 dans un milieu ou un tampon approprié contenant environ 30 à 60% de PEG (le poids moléculaire moyen: 1000 à 6000), pour les faire réagir pendant environ 30 secondes à 3 minutes dans des conditions de température d'environ 25°C à 37 °C et pH: 6 à 8. Après avoir terminé la réaction, les cellules sont lavées, séparées de la solution PEG, resuspendues dans un milieu hypoxanthine-thymidine (le milieu HT), etc., et semées sur une plaque à micro-titration par exemple, pour continuer la culture. [0023] Les cellules fusionnées sont cultivées dans un milieu sélectif, afin de sélectionner un hybridome. Le milieu sélectif n'est pas limitatif, à la condition que les souches de cellule mère y périssent et que les cellules fusionnées puissent seulement y proliférer. En général, un milieu hypoxanthine-aminoptérine-thymidine (le milieu HAT) est utilisé. La sélection de l'hybridome est commencée en général un jour après l'opération de la fusion en additionnant le milieu sélectif, ou en remplaçant une partie ou la moitié du milieu par le milieu sélectif, et effecuée au moyen de culture pendant 7 à 10 jours. [0024] Pour constater si l'hybridome croissant a produit un anticorps souhaité, du surnageant de culture est prélevé pour titrer les anticorps. Le titrage d'anticorps est effectué par des techniques conventionnelles. Par exemple, l'anticorps produit dans ledit surnageant peut être détecté et le titre d'anticorps peut être mesuré, en additionnant ledit surnageant dilué par paliers à un antigène rendu en phase solide pour la réaction, et en faisant réagir un anticorps secondaire (l'anticorps anti-globuline, l'anticorps anti-IgG, l'anticorps anti-IgM, etc.) marqué avec des substances fluorescentes, une enzyme ou un radio-isotope (RI) etc. Ainsi, le surnageant de culture dans chaque puits de la plaque subit un titrage, ce qui permet d'obtenir un hybridome produisant l'anticorps souhaité. [0025] Ensuite, un clone unique est isolé. Comme procédé d'isolation sont utilisés des procédés conventionnels et non limitatifs. On peut citer par exemple un procédé par dilution limitée, un procédé par gélose molle, un procédé utilisant un trieur de cellules par excitation de fluorescence, etc. En cas du procédé par dilution limitée, par exemple, l'hybridome est dilué par paliers dans le milieu jusqu'à arriver à 1 cellule/puits, semées sur une plaque de culture, et ensuite cultivé. Après la mise en culture pendant 10 jours environ, on confirme si un anticorps monoclonal d'intérêt a été produit dans le surnageant de culture à 1 colonie/puits, et de cette façon on peut isoler des clones d'hybridome d'intérêt. Les clones d'hybridome obtenus peuvent se conserver de façon semi-permanente quand ils sont congelés en présence d'un agent cryoprotecteur tel que 10% (poids/volume) de diméthylsulfoxide (DMSO) ou de glycérine, et conservés entre -196°C et -70°C. Les cellules sont réchauffées rapidement dans un bain thermostatique de l'ordre de 37°C lors de l'utilisation, et sont prêtes à être utilisées. Il est préférable de les utiliser après lavage afin d'éliminer l'effet cytotoxique de l'agent cryoprotecteur. [0026] Pour examiner la sous-classe de l'immunoglobuline de l'anticorps d'où l'hybridome est produit, on cultive l'hybridome dans des conditions classiques, et utilise un kit commercial de détermination de la classe/sousclasse de l'anticorps pour l'anticorps sécrété dans le surnageant de culture. [0027] Le procédé d'obtention d'anticorps monoclonaux à partir de l'hybridome peut être choisi de façon appropriée selon la quantité requise d'anticorps monoclonaux et la nature d'hybridome. A titre d'exemple, on peut citer un procédé d'obtention d'anticorps monoclonaux à partir d'ascite de souris auxquels l'hybridome a été transplanté, un procédé d'obtention d'anticorps monoclonaux à partir du surnageant de culture dans lequel les cellules d'hybridome ont été cultivées, etc. S'il s'agit d'un hybridome susceptible de proliférer dans la cavité abdominale murine, il permet d'obtenir des anticorps monoclonaux à partir d'ascite à concentration élevée de quelques mg/ml. L'hybridome qui n'est pas susceptible de proliférer in vivo est obtenu à partir du surnageant de la culture cellulaire. Le procédé d'obtention d'anticorps monoclonaux au moyen de la culture cellulaire est plus avantageux que celui réalisé in vivo car le risque de contamination par les immunoglobulines ou d'autres contaminants de la cavité abdominale murine est moindre et la purification en est facilitée, bien que la quantité d'anticorps produite soit moins importante que celle obtenue in vivo. [0028] Au cas où les anticorps monoclonaux seraient obtenus à partir d'ascite de souris dans laquelle l'hybridome a été transplanté, l'hybridome est transplanté dans la cavité abdominale de souris à laquelle est administrée préalablement une substance ayant une action immunosuppressive, telle que le pristane (2, 6, 10, 14-tétraméthyl pentadécane), et l'ascite accumulée est prélevée une semaine après la date de transplantation. Dans le cas d'un hybridome tel que des cellules provenant d'animaux de genre différent (tels qu'un souris et un rat) sont fusionnées, des souris nudes, des souris irradiés sont de préférence utilisées. [0029] Au cas où les anticorps seraient obtenus à partir du surnageant de culture cellulaire, on peut utiliser, par exemple, un procédé de culture tel qu'un procédé de culture par flacon tournant (spinner flask), un procédé de culture à haute densité, un procédé de culture stationnaire à utiliser pour le maintien cellulaire. Au moyen d'un de ces procédés, on obtient un surnageant de culture cultivant l'hybridome et contenant les anticorps. [0030] La purification des anticorps monoclonaux à partir de l'ascite ou du surnageant de culture peut être effectuée au moyen d'un procédé connu de purification d'immunoglobuline. Le procédé de purification d'immunoglobuline n'étant pas limité, on peut citer par exemple un procédé de fractionnement par relargage utilisant le sulfate d'ammonium ou le sulfate de sodium, un procédé de fractionnement à PEG, un procédé de fractionnement à l'éthanol, une chromatographie par échanges d'ions DEAE, un procédé par filtration sur gel, etc. [0031] En outre, dans le cas où l'anticorps monoclonal serait IgG murin, la purification par chromatographie d'affinité à l'aide d'un support relié à la protéine A, ou d'un support relié à l'immunoglobuline antimurine est possible. [0032] Les anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole ainsi préparés sont utilisables dans les essais immunologiques pour détecter le virus de la rougeole chez un sujet ou dans un échantillon préparé à partir dudit sujet. Le procédé d'immunoessais pour détecter le virus de la rougeole est de préférence celui utilisant la méthode dite sandwich comme principe de détection. Selon cette méthode un premier et un deuxième anticorps dirigés contre le virus de la rougeole sont utilisés. Cette méthode comprend une étape au cours de laquelle se forme un complexe comprenant le premier anticorps fixé à une phase solide, le deuxième anticorps marqué et le virus de la rougeole. De ce fait, le premier anticorps monoclonal anti-virus de la 14 rougeole et le deuxième anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole qui reconnaissent et qui se lient à des différents sites de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. Lors de la détection du virus de la rougeole par la méthode sandwich, on peut utiliser comme phase solide pour fixer les anticorps, celle capable de fixer les anticorps selon un procédé connu, par exemple une phase solide telle qu'une membrane, des billes, des particules, des nanoparticules, une éprouvette, une plaque à micro-titration, etc. En outre, comme substance de marquage pour marquer les anticorps, on peut utiliser une enzyme, un radio-isotope, un substance de marquage émettant la fluorescence, des particules colorantes, des particules colloïdales, etc. [0033] Parmi lesdits procédés d'essais immunologiques utilisant la méthode sandwich comme principe de détection, le procédé d'essai membranaire selon lequel une membrane est utilisée comme phase solide est préférable au vu de sa simplicité de détection, et de sa rapidité. Comme procédé d'essai membranaire, on peut citer le procédé d'essai membranaire de type flux latéral et le procédé d'essai membranaire de type flux continu. Les anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole utilisés dans les procédés de la présente invention sont applicables à un quelconque de ces procédés. [0034] Par le procédé d'essai membranaire de type flux latéral, on entend ici un procédé pour détecter un objet à mesurer, capturé dans une zone de détermination, en faisant dégoutter l'échantillon sur la membrane comprenant la zone de détermination sur laquelle la substance capturée est immobilisée, et en laissant passer l'échantillon parallèlement à la membrane. D'autre part, par procédé d'essai membranaire de type flux continu, on entend ici un procédé pour détecter un objet à mesurer capturé sur la surface de la membrane, en faisant dégoutter l'échantillon contenant l'objet à mesurer sur la membrane sur la surface de laquelle est immobilisé l'anticorps destiné à capturer l'objet à mesurer (l'antigène), et en laissant passer l'échantillon perpendiculairement à la membrane. Dans chaque procédé, l'objet à mesurer est marqué avec une substance de marquage prédeterminée. L'existence de l'objet à mesurer peut être vérifiée avec le marquage, qui apparaît ou non, sur la membrane. [0035] En outre, la présente invention fournit, comme anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole, 3 anticorps monoclonaux : un anticorps monoclonal qui reconnaît et se lie aux séquences d'acides aminés comprises entre les positions 135 à 241 d'une nucléoprotéine du virus de la rougeole de SEQ ID NO. 9 (l'anticorps 135-241), un anticorps monoclonal qui reconnaît et se lie aux séquences d'acides aminés comprises entre les positions 485 à 525 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole de SEQ ID NO. 9 (l'anticorps 485-525), et un anticorps monoclonal qui reconnaît et se lie aux séquences d'acides aminés comprises entre les positions 91 à 134 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole de SEQ ID NO. 9 (l'anticorps 91-134). Lors de la détection du virus de la rougeole par la méthode sandwich, on peut utiliser un desdits 3 anticorps monoclonaux comme deuxième anticorps à marquer, et les autres anticorps comme anticorps à fixer à la phase solide. La combinaison des anticorps utilisés n'est pas particulièrement limitée, mais l'utilisation de l'anticorps 135-241 ou de l'anticorps 485-525 comme anticorps à fixer à la phase solide, et de l'anticorps 91-134 comme deuxième anticorps à marquer est préférable au vu de perfectionnement de la sensibilité à la détection. Outre les anticorps, un troisième anticorps différent des premier et deuxième anticorps peut être fixé à la phase solide, l'anticorps 135-241 et l'anticorps 485-525 sont utilisables de manière à être fixés tous les deux à la même phase solide. Par la suite, le kit de test pour l'essai membranaire selon la présente invention est expliqué en référence aux dessins. [0036] La Figure 1 est une vue représentant un kit de test pour l'essai membranaire (ci-après appelé "le kit de test") selon le premier mode de réalisation. Ce kit de test est celui utilisé pour le procédé d'essai membranaire de type flux latéral (l'immunochromatographie de type flux latéral), et est équipé d'un récipient 1 de test pour contenir l'échantillon, d'un dispositif 4 de test pour l'essai membranaire (ci-après appelé "le dispositif 4 de test") inséré au récipient 1 de test à partir d'une extrémité 4a lors de l'usage et d'un récipient 14 de traitement d'échantillon dans lequel est contenu un liquide 15 de traitement d'échantillon pour préparer l'échantillon de mesure par mélange avec l'échantillon. La Figure 2 est une vue en plan (a) et une vue de côté (b) du dispositif 4 de test de la Figure 1. [0037] Comme le montre la Figure 2, le dispositif 4 de test est équipé d'un membre 5 pour introduire l'échantillon, constitué de coton non tissé, sur un matériau 12 de base constitué par une plaque en plastique, ayant une couche adhérente sur sa surface, d'un membre 7 de retention des marqueurs, constitué par un non-tissé de fibre de verre, d'un support membranaire 9 pour la chromatographie (ci-après appelé "le support membranaire pour la chromato"), constitué par un corps poreux, et d'un membre 11 d'absorption constitué par un non-tissé de cellulose. Le membre 7 de retention de marqueur est disposé en contact avec le membre 5 pour additionner l'échantillon, il est capable de se lier spécifiquement aux antigènes de la rougeole, et possède des anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole marqués (ci-après appelés "les anticorps marqués"), et une substance de marquage de contrôle. Les anticorps marqués sont des anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole marqués avec des particules bleues de latex, et la substance de marquage de contrôle est une streptavidine marquée avec des particules rouges de latex. Le support membranaire 9 pour la (chromato) est disposé en contact avec le membre 7 de retention de marqueurs et a une partie déterminante 9A en ligne et une partie 9B de contrôle, par ordre de l'amont vers l'aval. A la partie déterminante 9A, des anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole capables de se lier spécifiquement aux antigènes de virus de la rougeole (ci-après appelés "les anticorps de capture") sont fixés, et à la partie 9B de contrôle, une biotine est fixée. Le membre 11 d'absorption est disposé en contact avec le support membranaire 9 pour la chromato. [0038] Dans le cas où le virus de la rougeole serait contenu dans l'échantillon, les anticorps marqués retenus par le membre 7 de retention de marqueurs reconnaissent un site prédéterminé du virus de la rougeole, et s'y lient par la réaction antigène-anticorps pour former des complexes virus-anticorps marqués. Ensuite, les anticorps de capture fixés à la partie déterminante 9A du support membranaire 9 pour la chromato, capture les complexes virus-anticorps marqués, en reconnaissant un autre site du virus de la rougeole. Lorsque lesdits complexes sont capturés, une ligne bleue apparaît sur la partie déterminante 9A. Par conséquent, l'existence du virus de la rougeole peut être déterminée visuellement. [0039] Par ailleurs, l'avidine n'est pas capturée par les anticorps de capture au support membranaire 9 pour la chromato, mais du fait qu'elle se lie spécifiquement à la biotine, la substance de marquage de contrôle est capturée par la biotine fixée à la partie 9B de contrôle. Une fois la substance de marquage de contrôle capturée, une ligne rouge apparaît sur la partie 9B de contrôle, donc le fait que la substance de marquage de contrôle a atteint la partie 9B de contrôle est vérifié à l'oeil. La partie 9B de contrôle se trouvant en aval de la partie déterminante 9A, le fait que l'échantillon a passé la partie déterminante 9A est vérifiable par la vérification de la ligne rouge. [0040] Le récipient 1 de test est constitué par un récipient tubulaire avec un fond en forme d'éprouvette comprenant une partie effilée 16 de réception ayant une ouverture lb, et une partie 17 de logement d'échantillon pour loger l'échantillon au fond la. [0041] Une étiquette 3 est collée sur la paroi extérieure du récipient 1 de test. L'étiquette 3 a des indications 24a, 24b indiquant respectivement la partie déterminante 9A et la partie 9B de contrôle du dispositif 4 de test dans les positions correspondantes à la partie déterminante 9A et à la partie 9B de contrôle du dispositif 4 de test lors de l'insertion du dispositif 4 de test au récipient 1 de test. Comme indiqué dans les figures les indications 24a, 24b de l'étiquette 3 sont "T" et "!" respectivement. [0042] La Figure 3 est une vue éclatée en plan d'un récipient 14 de traitement d'échantillon. Comme le montre cette figure, le récipient 14 de traitement d'échantillon est équipé d'une bouteille 141 en plastique, d'une buse 142, et d'une calotte 143. La bouteille 141 loge le liquide 15 de traitement d'échantillon à l'intérieur, et est conservée dans un état d'étanchéité de son ouverture de la bouteille 141 avec la calotte 143. La buse 142 est équipée d'une sortie de l'échantillon à son extrémité et d'un membre de filtration à son intérieur. [0043] Le membre de filtration attaché à l'intérieur de la buse 142 est un empilement d'une première feuille de filtration en fibre de verre, d'une deuxième feuille de filtration en fibre de verre avec un diamètre d'alésage membranaire plus grand que celui de la première feuille de filtration en fibre de verre, et d'un filtre en verre non-tissé, dans un ordre mentionné ci-dessus. Par ailleurs, ce membre de filtration est attaché à la buse 142 de manière que le filtre en verre vienne au côté de la partie attachée à la bouteille 141 de la buse 142, et que la première feuille de filtration en fibre de verre vienne au côté de la sortie de l'échantillon. Alors que le membre de filtration n'est pas limité à cette configuration, il est préférable d'utiliser un filtre en verre non-tissé pour éliminer des composants visqueux dans l'échantillon biologique, et d'utiliser une feuille de filtration en fibre de verre ou deux feuilles combinées de filtration en fibre de verre pour ce filtre en verre non-tissé [0044] Le liquide 15 de traitement d'échantillon est préférablement une solution aqueuse contenant un surfactant. Puisque le virus de la rougeole a une enveloppe, celle-ci est à percer avec le surfactant pour délivrer la protéine antigénique intérieure dans le liquide de traitement d'échantillon. [0045] Le type de surfactant n'est pas particulièrement limité, mais on peut utiliser ceux connus comme un surfactant anionique, un surfactant cationique, un surfactant ampholyte ou un surfactant non-ionique. [0046] Parmi les surfactants non-ioniques, on peut utiliser de préférence ceux de type polyoxyéthylénique, et de façon plus préférée de type éther. Spécifiquement, au moins un mélange choisi parmi un groupe constitué par le polyoxyéthylène alkylphényléther comme le polyoxyéthylène (9) octylphényléther, le polyoxyéthylène (10) octylphényléther, le polyoxyéthylène (9) nonylphényléther, etc., l'ester d'acide gras de polyoxyéthylène sorbitane comme le monolaurate de polyoxyéthylène sorbitane, le monooléate de polyoxyéthylène sorbitane, etc., un copolymère polyoxyéthylène/polyoxypropylène, le polyoxyéthylènealkyléther est préférable. [0047] Le surfactant ampholyte n'est pas particulièrement limité, mais le 3-[(3-cholamide-propyl)-diméthyl-ammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS) etc., sont préférables. Par ailleurs, au cas où la quantité du surfactant non-ionique additionné au liquide 15 de traitement d'échantillon serait à augmenter, le surfactant ampholyte peut être utilisé simultanément afin d'améliorer sa solubilité et de rehausser la stabilité de conservation du liquide de traitement d'échantillon. [0048] Le surfactant anionique n'est pas particulièrement limité, mais le dodecylsulfate de sodium, le dodecylsulfonate de sodium, le dodecyl-N-sarcosinate de sodium, le cholate de de sodium, le désoxycholate de de sodium, le taurodésoxycholate de sodium, etc. sont préférables. [0049] De préférence, le liquide 15 de traitement d'échantillon contient un composé d'acide thiocyanique pour eviter une réaction non-spécifique. Le composé d'acide thiocyanique n'est pas particulièrement limité s'il est soluble dans l'eau, comme, outre l'acide thiocyanique (HNCS), l'ester d'acide thiocyanique ou le thiocyanate. Comme des sels de l'acide thiocyanique, on peut citer des bases inorganiques y compris des métaux tels que le sodium, le potassium, etc. ou des bases organiques, des sels d'ammonium, etc. En outre, les hydrates et les solvates de ces sels sont compris également. Spécifiquement, on peut citer le thiocyanate de sodium, le thiocyanate de potassium, le thiocyanate d'ammonium, le thiocyanate de guanidine, etc. De préférence, le thiocyanate de potassium et le thiocyanate de guanidine 22 sont utilisés. [0050] Par ailleurs, le liquide 15 de traitement d'échantillon contient de préférence un réducteur pour réduire la viscosité de substances les échntillons biologiques (en particulier, de la sécrétion nasale, un aspirat de la cavité nasale, du liquide d'essuyage de cavité nasale, et du liquide d'essuyage de pharynx). Comme reducteur des composés du soufre préférables, on peut citer, par exemple, le mercaptoéthylamine, le chlorhydrate de mercaptoéthylamine, le mercaptoéthanol, le dithiothreitol, la cystéine, la N-acéthyle-L cystéine, le dibromhydrate de S-2 aminoéthyl isothiourée, le tris-(2-carboxyéthyl)-phosphine, le sel d'hydrosulfite, le sulfite etc. [0051] Par ailleurs, le liquide 15 de traitement d'échantillon peut contenir un chélateur pour limiter l'activité enzymatique décomposant la protéine antigénique, ou baisser la réaction non-spécifique. Comme le chélateur, on peut citer par exemple l'acide éthylènediamine tétraacétique, l'acide 1,2-cyclohexanediamine tétraacétique, l'acide hexaméthylènediamine tétraacétique, l'acide imino diacétique, l'acide hydroxyéthylimino diacétique, l'acide 1, 3-diaminopropane-2-ol tetraacétique, l'acide diéthylènetriamine pentaacétique, l'acide éthylènediamine diacétique, l'éthylènediamine diacétate d'acide dipropionique, l'acide éthylène-bis-(oxyéthylène-nitrilo) tétraacétique, l'acide éthylènediamine tétrakis (méthylènephosphonique), l'acide éthylènediamine dipropionique, l'acide hydroxyéthyl éthylènediamine triacétique, l'acide N-(2-hydroxyéthyl) éthylènediamine triacétique, l'acide 23 nitrilo triacétique, l'acide nitrilo tripropionique, l'acide nitrilo-tris (méthylène-phosphonique), 2 (hydroxyéthyl) glycine, et l'acide 1,2-diaminopropane tétraacétique, et leurs sels. [0052] Par ailleurs, le liquide 15 de traitement d'échantillon peut contenir des ions des métaux alcalins. Les ions des métaux alcalins sont illustrés par le lithium+ (Li+), le sodium+ (Na+), le potassium+ (K+), le rubidium+ (Rb+), le césium+ (Cs+), le francium+ (Fr+), mais de préférence, les ions de sodium et de potassium sont utilisés. Par ailleurs, au moins un des ions des métaux alcalins est utilisé. Les composés qui sont l'origine de tels ions des métaux alcalins ne sont pas particulièrement limités, mais on peut utiliser par exemple au moins un mélange choisi parmi un groupe constitué par le chlorure de sodium, le chlorure de potassium, hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, le sel de sodium de l'EDTA, l'azoture de sodium. L'addition des ions des métaux alcalins permet de limiter la réaction non-spécifique. La teneur en ions des métaux alcalins est de 0,3M à 2,0M, de préférence de 0,4M à 1,5M, de façon plus préférée de 0,45M à l,OM. [0053] Par ailleurs, le liquide 15 de traitement d'échantillon contient de préférence un agent tampon, on peut citer par exemple les tampons de Good comme MES, Bis-Tris, ADA, PIPES, ACES, MOPSO, BES, MOPS, TES, HEPES, DIPSO, TAPSO, POPSO,HEPPSO,EPPS,Tricine, Bicine, TAPS, CHES, CAPSO, CAPS. ADA, PIPES, ACES, MOPSO, BES, MOPS, TES, HEPES, DIPSO, TAPSO, POPSO, HEPPSO, EPPS sont préférés, et PIPES, ACES, MOPSO, BES, MOPS, TES, HEPES sont plus préférés. Le pH pour le liquide de traitement d'échantillon est de 5 à 10, de préférence de 5.5 à 9.0, de façon plus préférée de 6.0 à 8.0. [0054] L'échantillon biologique à mélanger avec le liquide 15 de traitement d'échantillon n'est pas particulièrement limité s'il est un composant biogénique prélevé à partir du sujet. On peut citer par exemple, le sang, le serum, l'urine, la sécrétion nasale, la salive, le liquide d'essuyage de cavité nasale, l'aspirat de cavité nasale ou le liquide d'essuyage de pharynx, et chez les sujets infectés par la rougeole en particulière, la salive, la sécrétion nasale, le liquide d'essuyage de cavité nasale, et le liquide d'essuyage de pharynx, dans lesquels le virus de la rougeole est facilement détecté, sont préférables. [0055] Ensuite, un exemple pour le procédé d'utilisation et de kit de test selon le présent mode de réalisation est expliqué en référence à la Figure 4. D'abord, la calotte 143 du récipient 14 de traitement d'échantillon est ouverte, un échantillon biologique prélevé est additionné dans la bouteille 141, et mélangé avec le liquide 15 de traitement d'échantillon pour préparer un échantillon 13 de mesure. Et puis, la buse 142, au lieu de la calotte 143, est attachée à l'ouverture de la bouteille 141, l'échantillon 13 à tester est fourni de la sortie 46 de l'échantillon au récipient 1 de test à travers le membre 44 de filtration. Ensuite, le dispositif 4 de test est inséré au récipient 1 de test à partir de son extrémité 4a, et l'extrémité 4a est mise en contact avec le fond la du récipient 1 de test (par "le fond", on entend ici une partie ronde du récipient 1 de test). Il en résulte que le dispositif 4 de test et le récipient 1 de test sont alignés verticalement. Si on les laisse en l'état pendant environ 10 à 20 minutes, l'échantillon 13 de mesure se déplace vers le membre 5 pour additionner l'échantillon, le membre 7 de retention de marqueurs, le support membranaire 9 pour la chromato, le membre 11 d'absorption, successivement par le phénomène capillaire. Lors de passage de l'échantillon 13 de mesure à travers le membre 7 de retention de marqueurs, la substance de marquage retenue par le membre 7 de retention de marqueurs (l'anticorps monoclonal marqué anti-virus de la rougeole et la substance de marquage de contrôle) est éluée dans l'échantillon de mesure. Au cas où le virus de la rougeole serait contenu dans l'échantillon 13 de mesure, une ligne bleue apparaît sur la partie déterminante 9A sous l'action mentionnée ci-dessus. Par ailleurs, indépendamment de l'existence du virus, une ligne rouge apparaît sur la partie 9B de contrôle. [0056] Dans la description ci-dessus, l'explication est donnée sur le mode de réalisation spécifique â titre d'exemple, mais le kit de test selon la présente invention n'est pas limité à tel exemple, et est donc susceptible de modifications variées. [0057] Par exemple, on peut utiliser la fibre de verre, la fibre de cellulose, etc. au lieu du coton comme matériau pour le membre 5 pour additionner l'échantillon. Par ailleurs, on peut utiliser la fibre de cellulose au lieu de la fibre de verre comme membre 7 de retention de marqueurs. Par ailleurs, l'anticorps marqué et la substance de marquage de contrôle peuvent être marqués par des particules colorées de latex, une enzyme, un marqueur émettant la fluorescence, un marqueur magnétique, un radio-isotope, de l'or colloïdal, etc. Par ailleurs, on peut utiliser comme support membranaire 9 pour la chromato, le nylon (par exemple le nyon modifié auquel est introduit un groupe aminé ayant éventuellement un groupe carboxyl ou groupe alkyle comme substituant), le polydifluorure de vinylidene (PVDF), l'acétate de cellulose au lieu de la nitrocellulose. Par ailleurs, on peut utiliser comme le membre 11 d'absorption la fibre de verre au lieu de la fibre de cellulose. Ansi, concernant le membre 5 et pour additionner l'échantillon, le membre 7 de retention de marqueurs, le support membranaire 9 pour la chromato, et le membre 11 d'absorption, on peut utiliser, outre les non-tissés et les membres poreux, de d'autres membres ayant une structure variée, capables de révéler l'échantillon par le phénomène capillaire. [0058] En outre, bien qu'on ait illustré la configuration dans laquelle la partie déterminante 9A porte un seul anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole dans ledit mode de réalisation, la partie déterminante n'est pas limitée à telle configuration, mais elle peut posséder une autre configuration dans laquelle la partie déterminante porte au moins deux anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole. Par exemple, le dispositif 4 de test peut être fabriqué par application d'un échantillon contenant au moins deux anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole au support membranaire 9 pour la chromato. Ainsi une configuration avec la partie déterminante pourvu d'au moins deux anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole permet d'améliorer la sensibilité pour détecter le virus de la rougeole et de plus de réduire le risque de faux négatif. Par ailleurs, une configuration dans laquelle deux anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole sont portés séparément sur le support membranaire 9 pour la chromato, et au moins deux parties déterminantes sont ménagées est possible. [0059] Par ailleurs, bien qu'on ait illustré la configuration pourvue du récipient 1 de test pour loger l'échantillon 13 de mesure, et dans laquelle la vérification est effectuée par insertion du dispositif 4 de test dans le récipient 1 de test dans ledit mode de réalisation, telle configuration n'est pas limitative Une configuration n'ayant pas le récipient 1 de test est également possible. Par exemple, on peut faire dégoutter l'échantillon 13 de test préparé avec le liquide 15 de traitement d'échantillon directement vers le membre 5 pour additionner l'échantillon. Avec une telle configuration, le dispositif 4 de test est de préférence logé dans un boîtier ayant des ouvertures aux positions correspondantes à celles du support 9 pour la chromato et à celle du membre 11 d'absorption. Un exemple de telle configuration pour le dispositif 4 de test est représenté sur la Fig. 5. Comme représenté sur la Fig. 5, le logement du dispositif 4 de test dans le boîtier 40 permet d'empêcher l'échantillon à tester de fuir de chaque membre du dispositif 4 de test, et d'effectuer la vérification proprement. De plus, la pluralité d'ouvertures ménagées au boîtier 40 facilitent la vaporisation de composants liquides contenus dans l'échantillon 13 à tester et accélèrent le développement de l'échantillon à tester. Selon la configuration représentée à la Fig. 5, l'ouverture 50 ménagée à la position correspondant à celle du membre 5 pour additionner l'échantillon au boîtier 40 est réalisée en forme dite éfilée de sorte que sa dimension diminue vers l'intérieur. Avec une telle configuration, l'échatillon dégouttant vers le membre 5 pour additionner l'échantillon est accumulé à l'ouverture 50 en quantité déterminée, donc l'échantillon de test déborde rarement du dispositif 4 de test. Par ailleurs, du fait que la quantité déterminée de l'échatillon à tester est accumulée, l'échantillon à tester accumulé se développe successivement sur le dispositif 4 de test, ce qui évite d'avoir à dégoutter périodiquement une quantité faible d'échantillon à tester, et facilite la vérification. [0060] Dans la description ci-dessus, l'explication a été donnée sur un kit de test pour l'essai membranaire de type flux latéral, mais l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole selon le présent mode de réalisation est utilisable également dans un kit de test pour l'essai membranaire de type flux continu. Par la suite, le kit de test pour l'essai membranaire de type flux continu sera expliqué en référence aux dessins. [0061] La Figure 6 est une vue représentative du kit de test pour l'essai membranaire selon le deuxième mode de réalisation. Ce kit de test est celui utilisé pour le procédé d'essai membranaire de type flux continu, et est équipé d'un dispositif 31 de test et d'un récipient 36 de traitement d'échantillon pour loger un liquide 37 de traitement d'échantillon pour préparer un échantillon à tester par mélange avec l'échantillon. [0062] La Figure 7(a) est une vue en plan du dispositif 31 de test et la Figure 7(b) est une vue en coupe selon la flèche X-X. Le dispositif 31 de test est équipé d'un membre 35 d'absorption, d'un support membranaire 34, et d'un membre 32 de couverture dans l'ordre de la couche inférieure vers la couche supérieure et est constitué par empilement de celles-ci. Le membre 32 de couverture a une ouverture 33, par l'intermédiaire de laquelle une partie déterminante 34A du support membranaire 34 disposé sur la couche inférieure est exposée. Sur la partie déterminante 34A des anticorps de capture sont portés. [0063] Un récipient 36 de traitement d'échantillon a la même configuration que celle du récipient 14 de traitement d'échantillon selon le premier mode de réalisation. Le liquide 37 de traitement d'échantillon contenu dans le récipient 36 de traitement d'échantillon a les mêmes composants que ceux du liquide 15 de traitement d'échantillon selon le premier mode de réalisation, et en outre, le liquide 37 de traitement d'échantillon selon le présent mode de réalisation peut contenir des anticorps marqués. [0064] Par la suite, un exemple du procédé d'utilisation du kit de test selon le présent mode de réalisation est expliqué. D'abord, comme déjà expliqué dans le premier mode de réalisation, l'échantillon biologique est suspendu dans le liquide 37 de traitement d'échantillon pour préparer l'échantillon de mesure. Dans le cas où le virus de la rougeole est contenu dans l'échantillon biologique, les anticorps marqués contenus dans le liquide 37 de traitement d'échantillon et le virus de la rougeole se lient par la réaction antigène-anticorps, et un complexe constitué par virus de la rougeole-anticorps marqués est formé dans l'échantillon de mesure. Ensuite, l'échantillon de mesure préparé est dégoutté à l'ouverture 33 du dispositif 31 de test en quantité prédeterminée de la même manière que pour le premier mode de réalisation. Si on les laisse en l'état pendant environ 20 minutes, l'échantillon de mesure passe par le support membranaire 34 et est absorbé par le membre 35 d'absorption disposé à sa couche inférieure. Au cas où le virus de la rougeole serait contenu dans l'échantillon de mesure, l'anticorps de capture, porté par la partie déterminante 34A du support membranaire 34 reconnaît un site différent du site lié pour l'anticorps marqué et le virus de la rougeole, et se lie au virus de la rougeole pour former un complexe constitué par anticorps marqué-virus de la rougeole-anticorps de capture sur la partie déterminante 34A. De ce fait, une ligne bleue apparaît sur la partie déterminante 34A. Par conséquent, on reconnaît l'existence du virus de la rougeole par la détermination à l'oeil nu de l'apparition de la ligne bleue sur la partie déterminante 34A. [0065] Dans le présent mode de réalisation, l'anticorps marqué est logé dans le même récipient que le liquide 37 de traitement d'échantillon. Cependant, ce type de configuration n'est limitatif. Par exemple, une configuration, selon laquelle l'anticorps marqué et le liquide 37 de traitement d'échantillon sont logés dans des récipients séparés, est possible. Par ailleurs, il peut s'agir d'une configuration selon laquelle l'anticorps marqué est retenu sur le support membranaire 34 de façon à pouvoir être libéré à l'aide d'un composant liquide contenu dans l'échantillon de mesure. [0066] Comme expliqué ci-dessus, la présente invention permet de fournir un kit de test capable de détecter simplement et rapidement le virus de la rougeole à l'aide d'un anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole. En outre, le virus de la rougeole peut être détecté avec un petit nombre d'outils dans le cas du kit de test pour l'essai membranaire selon le premier mode de réalisation, avec un récipient 1 de test, un dispositif 4 de test, et un récipient 14 de traitement d'échantillon, et dans le cas du kit de test pour l'essai membranaire selon le deuxième mode de réalisation, avec un dispositif 31 de test, et un récipient 36 de traitement d'échantillon. EXEMPLES [0067] 1. Préparation d'anticorps monoclonaux 1-1. Préparation de la nucléoprotéine du virus de la rougeole A partir d'ARN extrait de chaque souche sauvage du virus de la rougeole, ADNc a été synthétisé par la réaction de transcription inverse. A partir de chaque ADNc synthétisé, un produit ADN de la nucléoprotéine du virus de la rougeole a été synthétisé par la réaction en chaîne par polymérase (PCR), le produit ADN a été intégré à un vecteur annexe du kit à l'aide du kit de réactif pour l'expression acellulaire de germe de blé ENDEXT (marque enregistrée) Wheat Germ Expression TRI-GG Kit (CellFree Sciences Co., Ltd.). La nucléoprotéine du virus de la rougeole a été exprimée, et un liquide antigénique a été préparé. A l'aide d'un séquenceur (fabriqué par la société Applied Biosystems) et d'un logiciel d'analyse de séquence (fabriqué par Hitachi Software Engineering Co., Ltd.), une analyse des séquences géniques et un analyse des séquences prévues d'acide aminé ont été effectués. Les séquences d'acide aminé de la nucléoprotéine du virus de la rougeole obtenues ici sont représentées aux SEQ ID NO. 1 à 9 de la liste de séquence. Par la suite, la nucléoprotéine du virus de la rougeole constituée par la séquence d'acide aminé de SEQ ID NO. 1 est appelée Agi, la nucléoprotéine du virus de la rougeole constituée par la séquence d'acide aminé de SEQ ID NO. 2 est appelée Ag2, et la nucléoprotéine du virus de la rougeole constituée par séquence d'acide aminé de SEQ ID NO N (SEQ ID NO N étant l'une quelconque des SEQ ID NO 1 à 9) est appelée AgN. 1-2. Immunisation des souris 100 p.L de l'adjuvant complet de Freund (FCA) a été additionné à 100 p.L de tampon phosphate (PBS) contenant 60 ug de la souche du virus de la rougeole (le nom commercial: Rubeola (Measles) Virus Infected Cell Extract) obtenue d'Advanced Biotechnologies Inc. (ci-après "la société ABI"), et après l'émulsification, 200 pL de la solution de l'antigène de virus de la rougeole mélangée avec FCA a été préparée. Par ailleurs, 200 pL de la solution de l'antigène de virus de la rougeole est mélangée avec (FIA) l'adjuvant incomplet de Freund a été préparée de même manière, qu'avec l'adjuvant incomplet de Freund (FIA). La première immunisation a été effectuée avec 200 p.L de la solution de l'antigène de virus de la rougeole mélangée avec FCA, administrée par voie intrapéritonéale aux souris femelles Balb/c âgés de 7 semaines. Après la première immunisation, les immunisations additionnelles ont été effectuées toutes les 2 semaines avec 200 pL de la solution de l'antigène de virus de la rougeole mélangée avec FIA. La dernière immunisation a été effectuée sans adjuvant, mais avec une injection intraveineuse de 500 uL de PBS contenant 50 pg d'Ag5 préparé à 1-1. au lieu de la souche de virus de la rougeole de la société ABI (Expérience immunologique 1). [0068] L'immunisation des souris a été effectuée de la même manière que dans l'essai immunologique 1, à l'exception d'Ag5 ou d'Ag8 préparé à 1 ; et 1 utilisés au lieu de la souche de virus de la rougeole de la société ABI (Expérience immunologique 2). [0069] 4 jours après la dernière immunisation, les cellules spléniques ont été isolées, et fusionnées avec les cellules murines de myélome P3X63-Ag8 653 par le procédé PEG, et l'hybridome a été préparé. [0070] 1-2. Culture de l'hybridome L'hybridome a été suspendu dans le milieu HAT à 2,5 x 106 cellules/mL, et distribué à chaque puits d'une plaque 96 puits (fabriquée par la société Corning; ci-après appelée "la plaque de culture") à 2,5 x 10' cellules/puits. La plaque de culture a été mise tranquillement dans un bain thermostatique de l'ordre de 37 °C, 8% de CO2. Le lendemain, 25 �L d'un milieu HAT ont été additionnés à chaque puits de la plaque de culture, et la culture a été prolongée. Lors de l'apparition de colonies de l'hybridome à l'issue de la culture au bout de 10 jours, un criblage de l'hybridome produisant l'anticorps monoclonal a été effectué. [0071] 1-3. Criblage de l'hybridome Le virus de la rougeole (fabriqué par la société ABI) dilué à une concentration en protéine de 0,5 pg/mL a été additionné à 0,1M de tampon phosphate (PBS, pH 7,5) contenant 0,1% NaN3 (poids/volume), et la solution du virus de la rougeole pour la sensibilisation a été préparée. 100 pL de cette solution du virus de la rougeole pour la sensibilisation ont été distribués à chaque puits d'une plaque 96 puits (fabriquée par la société NUNC) (ci-après appelée "la plaque de fixation de l'antigène"). Après sa remise en culture tranquillement à 4 °C pendant une nuit, elle a été lavée trois fois avec PBS (ci-après appelé "le premier tampon") contenant Tween 20 à la concentration de 0,05%. Après le lavage, 300 uL de PBS (ci-après appelé "le deuxième tampon") contenant BSA à la concentration de 1% (poids/volume) a été additionné à chaque puits de la plaque de fixation de l'antigène, celle-ci a été mise tranquillement pour 4 hours à 2 à 8 °C. La plaque de fixation de l'antigène a été maintenue à 2 à 8 °C jusqu'à son utilisation. [0072] Le deuxième tampon a été additionné à chaque puits de la plaque de fixation de l'antigène par 75 pL, le surnageant de culture de l'hybridome préparé au point 1-3. a été pris de chaque puits de la plaque de culture, et additionné à chaque puits de la plaque de fixation de l'antigène par 25 fL. Après l'addition du deuxième tampon et du surnageant de culture, il a été incubé pour 1 heure à la température ambiante. Après l'incubation, chaque puits de la plaque de fixation de l'antigène a été lavé avec 300 pL du premier tampon. Après le lavage, un anticorps polyclonal antisouris Ig marqué par la peroxydase de raifort (fabriqué par la société DAKO: Code No. PO447) 10 000 fois dilué avec le deuxième tampon a été additionné à chaque puits de la plaque de fixation de l'antigène par 100 pL. Après la réaction de 30 minutes à la température ambiante, chaque puits de la plaque de fixation de l'antigène a été lavé avec 300 pL du premier tampon. Après le lavage, le liquide de substrat contenant l'ortho-phénylènediamine (OPD), substrat pour POD a été additionné par 100 pL, et il a été mis tranquillement pendant 10 minutes à la température ambiante. Après l'ajout de 100 �L de liquide d'arrêt de réaction contenant 2N H2SO4 à chaque puits de la plaque de fixation de l'antigène, l'absorbance de 492 nm a été mesuré sur le liquide réactive dans chaque puits au moyen du lecteur pour microplaques (fabriqué par la société Molecular Devices). Par suite, il a été vérifié que l'hybridome préparé avait produit l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole. [0073] 2. Vérification de réactivité de l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole La réactivité de l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole produit par l'hybridome préparé au point 1. ci-dessus est vérifié par les expériences suivantes. [0074] 2-1. Test de réactivité Le liquide antigénique contenant Agl à Ag9 préparés au point 1-1. est dilué 10 fois avec le deuxième tampon. Une suspension de billes de sépharose-anticorps antisouris IgG contenant des particules liant l'anticorps antisouris IgG commercialisé et des billes de sépharose (fabriqués par la société Amersham Biosciences) à la concentration de 15% (volume/volume) est préparé. Cette suspension de billes de sépharose-anticorps antisouris IgG, le liquide antigénique dilué dans lequel le liquide antigénique contenant Agl à Ag9 est dilué respectivement avec le deuxième tampon à 0,2 à 0,5 pg/mL, et le deuxième tampon ont été mélangés en quantité équivalente, pour préparer l'échantillon antigénique. [0075] 60 pL de l'échantillon antigénique, 30 pL du liquide d'anticorps contenant anti-MV mAb selon le présent mode de réalisation dilué avec le deuxième tampon pour obtenir une concentration de 1.0 pg/mL comme celle pour l'anticorps ont été additionnés à chaque puits d'une plaque 96 puits en V (fabriquée par Sanplatec Corp.). La plaque a été agitée pendant 60 minutes à la température ambiante, puis mise tranquillement pendant 10 minutes avec les billes de sépharose ont été déposées. [0076] Ensuite, une plaque à micro-titration sensibilisée en anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole a été préparée de manière suivante. Comme l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole à sensibiliser pour la plaque à micro-titration, l'anticorps 225 produit par l'hybridome MV1-225 est utilisé. Le liquide d'anticorps contenant l'anticorps 225 a été dilué à une concentration de 10 pg/mL avec 0,1M de tampon phosphate (PBS, pH 7,5) contenant 0,1% de NaN3 (poids/volume). La solution diluée de cet anticorps 225 a été distribuée à chaque puits d'une plaque à micro-titration (fabriquée par la société NUNC) par 100 pL et mis tranquillement à 4 °C pendant une nuit. Après que chaque puits ait été lavé trois fois avec le premier tampon, 300 �L de deuxième tampon ont été déposés dans chaque puits, et l'anticorps 225 a été fixé aux puits de la plaque (ci-après, cette plaque à micro-titration est appelée "la plaque sensibilisé de l'anticorps 225"). Après la fixation, la plaque a été mise tranquillement pendant au moins 4 heures à une température allant de 2 à 8 °C. La plaque sensibilisée de l'anticorps 225 a été maintenue à cette température jusqu'à son utilisation. L'hybridome MV1-225 a été déposé au � Patent Microorganisms Depositary �, du � National Institute of Technology and Evaluation � par Sysmex Corporation sous le numéro de dépôt NITE AP-599. [0077] Ensuite, un liquide d'anticorps marqué de POD a été préparé par mélange avec le deuxième tampon de sorte que le liquide de l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole marqué par la biotine soit de 0,25 ug/ml, et que la solution peroxydase marquée de streptavidine (POD) soit de 40 mU/ml. Comme anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole marqué par la biotine, on a utilisé l'anticorps 1117 produit par l'hybridome MV1-1117. L'hybridome MV1-1117 a été déposé au � Patent Microorganisms Depositary �, du � National Institute of Technology and Evaluation � par Sysmex Corporation sous le numéro de dépôt NITE AP-600. [0078] Le deuxième tampon dans la plaque sensibilisé de l'anticorps 225 est éliminé. Après l'élimination, 50 pL du susdit liquide d'anticorps marqué de POD et 50 pL du surnageant du liquide réactif de la plaque 96 puits ont été additionnés à chaque puits de la plaque sensibilisée de l'anticorps 225, et agités pendant 60 minutes. Ensuite, chaque puits de la plaque sensibilisée de l'anticorps 225 a été lavé 3 fois avec le deuxième tampon. En fonction de la réactivité de l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole contre l'antigène, celui-ci est éventuellement contenu ou non dans le surnageant du liquide réactif de la plaque 96 puits. C'est-à-dire, dans le cas où il y aurait une réaction entre l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole selon le présent mode de réalisation et l'antigène (l'anticorps et l'antigène se lient), un complexe constitué par billes de sépharose-antisouris IgG-anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole-antigène est formé dans le liquide réactif. Ce complexe étant déposé dans les puits de la plaque 96 puits en V. A cause du poids des billes de sépharose, l'antigène n'est pas contenu dans le surnageant. D'autre part, dans le cas où il n'y aurait pas de réaction entre l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole selon le présent mode de réalisation et l'antigène (l'anticorps et l'antigène ne se lient pas), le complexe tel que mentionné ci-dessus n'est pas formé dans le liquide réactif, l'antigène n'est pas déposé et donc l'antigène est contenu dans le surnageant. Par conséquent, dans le cas où l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole selon le présent mode de réalisation ne rentre pas en réaction avec l'antigène, un complexe constitué par anticorps 225-antigène-anticorps 39 marqué de POD est formé dans les puits de la plaque sensibilisée de l'anticorps 225 par les moyens mentionnés ci-dessus. Dans le cas où l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole selon le présent mode de réalisation entre en réaction avec l'antigène, ledit complexe n'est pas formé. [0079] Ensuite, 100 �L du liquide de substrat contenant OPD, a été additionné à chaque puits de la plaque sensibilisé de l'anticorps 225 et il a été mis tranquillement pendant 10 minutes à la température ambiante. Puis, après l'ajout de 100 �L du liquide d'arrêt de réaction (contenant 2N H2SO4) à chaque puits de la plaque sensibilisé de l'anticorps 225, l'absorbance de 492 nm a été mesuré sur le liquide réactif dans chaque puits au moyen d'un lecteur pour microplaques (fabriqué par la société Molecular Device). L'absorbance obtenue ici est dénommée "absorbance A". Comme on voit par l'explication ci-dessus, l'absorbance A indique l'existence du complexe dans les puits de la plaque sensibilisée de l'anticorps 225. Si l'absorbance est plus basse, le complexe existe moins, ce qui indique que la réactivité entre l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole selon le présent exemple et l'antigène est élevée. [0080] Comme exemple de contrôle, un échantillon de contrôle utilisant le deuxième tampon au lieu de 1,0 pg/mL de liquide d'anticorps a été préparé, et l'absorbance a été mesurée à l'issue d'une expérience similaire. L'absorbance obtenue ici est dénommée "absorbance B". Par ailleurs, comme essai de contrôle, un échantillon de contrôle utilisant le deuxième tampon au lieu de 1,0 pg/mL de liquide d'anticorps et de l'échantillon antigénique a été préparé, et l'aborbance est mesurée à l'issue d'un essai similaire. L'absorbance obtenue ici est dénommée "absorbance C". [0081] Au moyen des absorbances obtenues A à c, le pouvoir absorbant de l'échantillon de mesure obtenu à l'aide de l'anticorps monoclonal anti-virus de la rougeole obtenu selon le présent mode de réalisation a été calculé avec la formule (1) suivante. Le pouvoir absorbant obtenu est indiqué dans le tableau 1, et le résultat d'estimation de la réactivité sur la base du pouvoir absorbant est indiqué dans le tableau 2. Dans le tableau 2, "+++" indique que le pouvoir absorbant calculé avec la formule (1) est 90% ou plus, "++" 50% ou plus, "+" 30% ou plus, et "ù" 30%. Le pouvoir absorbant (%) = {1 ù(A ùC)/(B ùC)} x 100 (1) Anticorps monoclonaux Antigènes utilisés Nucléoprotéines du virus de la rougeole recombinant douches d'antigène Nom de Isotypes clones d'anticorps Hl D3 H1 H1 H1 H1 D9 D5 A Type Agi Ag2 Ag3 Ag4 Ag5 Ag6 Ag' Ag8 Ag9 dantigènes MV2-2649 IgG1/x 88,0 92,2 87,1 100,0 97,8 96,9 85,6 99,2 82,0 MV2-3707 IgG1/x 57,4 93,1 97,2 100,0 69,5 99,1 89,7 100,0 100,0 Pouvoir MV2-3241 IgG2a/x 55,1 94,3 97,2 100,0 74,2 100,0 92,5 100,0 100,0 absorbant MV3-320 IgG2b/x 100,0 99,6 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 Anticorps monoclonaux Antigènes utilisés Nom de Nucléoprotéines du virus de la rougeole recombinant douches d'antigène clones Isotypes H1 D3 H1 H1 H1 Hl D9 D5 A Type d'anticorps Agi Ag2 Ag3 Ag4 Ag5 Ag6 Ag7 Ag8 d'antigènes MV2-2649 IgGl/K ++ +++ +++ +++ +++ +++ ++ +++ ++ MV2-3707 IgGl/x ++ +++ +++ +++ ++ +++ ++ +++ +++ Réactivité MV2-3241 IgG2a/x ++ +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ +++ MV3-320 IgG2b/x +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ [0084] Comme le montrent les tableaux 1 et 2, l'anticorps 2649, l'anticorps 3707, l'anticorps 3241 et l'anticorps 320 obtenus selon le présent mode de réalisation ont tous représentés une réactivité élevée avec toutes les nucléoprotéines du virus de la rougeole Agi à Ag9. Il en résulte que les anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole selon le présent mode de réalisation sont capables de se lier aux nucléoprotéines du virus de la rougeole, et la réactivité n'est pas diminuée par la mutation par substitution d'une partie de la séquence d'acide aminé de la nucléoprotéine. [0085] 3. Criblage des sites de fixation des anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole aux antigènes de virus de la rougeole Les sites de fixation des anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole selon le présent mode de réalisation aux nucléoprotéines du virus de la rougeole sont criblés par les essais suivants. [0086] 3-1. Préparation de l'échantillon antigénique Le liquide antigénique contenant la nucléoprotéine du virus de la rougeole Ag3 préparé au point 1-1 ci-dessus est dilué avec le deuxième tampon jusqu'à 0,15 ug/mL pour préparer l'échantillon antigénique contenant Ag3. [0087] 3-2. Test d'inhibition La plaque sensibilisée avecl'anticorps 225 est préparée de même 44 manière que celle décrite à l'étape 2-1 ci-dessus. 100 p.L de l'échantillon antigénique contenant Ag3 a été additionné à chaque puits de la plaque sensibilisé avec l'anticorps 225, et agités pendant 30 minutes. Ensuite, chaque puits de la plaque sensibilisé avec l'anticorps 225 a été lavé 3 fois avec le premier tampon. [0088] Le liquide d'anticorps marqué de POD a été préparé par mélange avec le deuxième tampon de sorte que le liquide de l'anticorps 3707 marqué par la biotine soit de 0,5 pg/ml, et que la solution peroxydase marquée de streptavidine (POD) soit de 40 mU/ml. [0089] 50 pL du liquide d'anticorps dans lequel l'anticorps 2649 obtenu selon le présent exemple est dilué jusqu'à la concentration de 10 ug/mL avec le deuxième tampon, et 50 pL du susdit liquide d'anticorps marqué de POD ont été additionnés à chaque puits de la plaque sensibilisé avec l'anticorps 225, et agités pendant 60 minutes à la température ambiante. Après l'agitation, la plaque sensibilisée avec l'anticorps 225 a été lavé 3 fois avec le premier tampon. [0090] Ensuite, 100 �L du liquide de substrat contenant OPD a été additionné à chaque puits de la plaque sensibilisé avec l'anticorps 225 et il a été mis tranquillement 10 minutes à la température ambiante. Après l'ajout de 100�L de liquide d'arrêt de réaction (contenant 2N H2SO4) à chaque puits de la plaque sensibilisé avec l'anticorps 225 pL, l'absorbance de 492 nm a été mesuré au moyen du lecteur pour microplaques. L'absorbance obtenue ici est dénommée "absorbance D". [0091] Un échantillon de contrôle utilisant le deuxième tampon au lieu de 10 p.g/mL de liquide d'anticorps a été préparé, et l'absorbance a été mesurée comme lors du cas précédent. L'absorbance obtenue ici est dénommée "absorbance E". Par ailleurs, un échantillon de contrôle utilisant le deuxième tampon au lieu de 10 pg/mL de liquide d'anticorps et de l'échantillon antigénique a été préparé, et l'aborbance est mesurée comme lors de cas précédent. L'absorbance obtenue ici est dénommée "absorbance F". [0092] Au moyen des absorbances obtenues D à F, le pouvoir absorbant de l'échantillon de mesure dans le susdit exemple expérimental a été calculé avec la formule (2) suivante. Et sur la base du pouvoir absorbant obtenu, l'homologie des sites de fixation de l'anticorps 2649 et de l'anticorps 3707 à la nucléoprotéine du virus de la rougeole a été estimée. Le pouvoir absorbant obtenu est indiqué dans le tableau 3, et le résultat d'estimation de l'homologie sur la base du pouvoir absorbant est indiqué dans le tableau 4. Dans le tableau 4, "+++" indique que le pouvoir absorbant calculé avec la formule (2) est 90% ou plus, "++" 50% ou plus, "+" 30% ou plus, et "û" 30%. Les exemples ci-dessus montrent que plus le pouvoir absorbant calculé avec la formule (2) est élevée, plus l'homologie des sites de fixation de l'anticorps 2649 et de l'anticorps 3707 à la nucléoprotéine du virus de la rougeole est élevée. Le pouvoir absorbant (%) = {1 ù(D ùF)/(E ùF)} x 100 (2) [0093] Cette expérience a été effectuée avec les combinasons de l'anticorps contenu dans 10 pg/mL du liquide d'anticorps selon ledit exemple expérimental et de l'anticorps marqué par la biotine. Toutes ces combinaisons peuvent être choisies parmi l'anticorps 2649, l'anticorps 3707, l'anticorps 3241, et l'anticorps 320. [0094] Tableau 3 Anticorps Anticorps de marquage Nom de clones Isotype MV2-2649 MV2-3707 MV2-3241 MV3-320 Nom de clones d'anticorps 1\/1V2-2649 IgGllx 83,8 16,6 17,7 81,6 Pouvoir absorbant MV2-3707 IgGllx -3,1 93,2 100,0 -0,3 MV2-3241 IgG2a/x 8,4 91,4 99,3 -3,6 MV3-320 IgG2b/x 54,.7 56,4 48,7 99,6 [0095] Tableau 4 Anticorps Anticorps de marquage Nom de clones Isotype MV2-2649 MV2-3707 MV2-3241 MV3-320 Nom de clones d'anticorps MV2-2649 IgGlIx ++ ù ù ++ Reactivite MV2-3707 IgG1/x ù +++ +++ ù MV2-3241 IgG2a/x ù +++ +++ ù MV3-320 IgG2b/x ++ ++ + +++ [0096] A partir des résultats du tableau 3 et du tableau 4, il a été suggéré que l'anticorps 2649 et l'anticorps 3707 possèdent des sites de fixation ayant une homologie faible avec la nucléoprotéine du virus de la rougeole, et que les deux anticorps sont tels qu'ils reconnaissent des sites différents de la nucléoprotéine du virus de la rougeole, et capables de s'y lier. Par ailleurs, il en était de même avec les combinasons de l'anticorps 2649 et de l'anticorps 3241, de l'anticorps 320 et l'anticorps 3707, et de l'anticorps 320 et l'anticorps 3241. [0097] Les résultats obtenus ci-dessus montrent que l'utilisation d'anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole dans le présent exemple en combinaison particulière permet de lier les anticorps monoclonaux antivirus de la rougeole au niveau du premier site de fixation et au niveau du deuxième site, différents l'un de l'autre, à la nucléoprotéine du virus de la rougeole, et de détecter le virus de la rougeole par la méthode sandwich. [0098] 4. Préparation du dispositif de test Au moyen des anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole selon le présent exemple, le dispositif de test pour l'essai membranaire de type flux latéral comme indiqué à la Fig. 1 a été préparé. Dispositif de test 1 L'anticorps 320 a été utilisé comme premier anticorps monoclonal retenu par le membre 7 de retention de marqueur. L'anticorps 2649 et l'anticorps 3707 sont utilisés comme deuxième anticorps monoclonal porté par la partie déterminante 9A du support membranaire 9 pour la chromato. D'abord, comme indiqué sur la Fig. 1, le liquide d'anticorps contenant l'anticorps 3707 dilué à une concentration de 2,0 mg IgG/mL avec le tampon phosphate (pH 7,0) a été appliqué à la partie déterminante 9A du support membranaire 9 pour la chromato, constituée par une membrane de nitrocellulose, au moyen d'un applicateur d'anticorps (la société BioDot) a une largeur de 1 mm, et avec un décalage de 1 mm. Le liquide d'anticorps contenant l'anticorps 2649 a été appliqué également, et le séchage a été effectué à 50 °C pendant 30 minutes. Le support membranaire 9 pour la chromato après le séchage a été trempé dans le tampon phosphate (pH 7,0) contenant BSA et l'anticorps a été fixé au support membranaire 9 pour la chromato. Et puis, il a été lavé avec un liquide de lavage (le tampon phosphate (pH 7,0) contenant SDS), et séché à 40 °C pendant 120 minutes pour obtenir le support membranaire 9 pour la chromato. [0099] Ensuite, l'anticorps 320 a été mélangés avec des particules colorées bleues de latex de polystyrène (la dimension des particules : 0,3 pm), suspendu dans le tampon dispersif (le tampon phosphate (pH 7,0) contenant BSA et le sucrose), pour préparer la suspension de particules de latex sensibilisées de l'anticorps 320. La concentration de l'anticorps 320 est celle de 200 pg IgG dans 1 mL de 1% suspension de particules de latex. Cette suspension de particules de latex sensibilisées de l'anticorps 320 a été additionnée à des supports en fibre de verre, séchée avec un séchoir sous vide, pour obtenir le membre 7 de retention de marqueurs. Quant au membre 5 pour additionner l'échantillon, au membre 11 d'absorption, et au matériau 12 de base, les membres tels que décrits ci-dessus ont été utilisés pour obtenir le dispositif 1 de test. Un dispositif 2 de test a été obtenu de la même manière que celle décrite ci-dessus, à l'exception de l'anticorps 3241, utilisé au lieu de l'anticorps 3707 comme anticorps porté par la partie déterminante 9A du support membranaire 9 pour la chromato. [0100] 5. Test de performance 5-1. Test de détection du virus de la rougeole mis en culture Le test de détection du virus de la rougeole dans l'échantillon a été effectué en utilisant le dispositif 1 de test et le dispositif 2 de test préparés au point 4. Le liquide de virus dans cet exemple de test est préparé à partir de deux virus sauvages de la rougeole indiqués dans le tableau 5 ci-dessous qui ont été cultivés avec la cellule Vero/SLAM. Les virus obtenus ont été dilués avec le tampon phosphate de sodium (pH 7.0) contenant 1% BSA et utilisés comme liquide de virus. La souche IC-B et la souche Edmonston sont des souches sauvages de virus de la rougeole respectivement. La séquence d'acide aminé de la souche IC-B est celle représentée par la SEQ ID NO. 10. Par ailleurs, la séquence d'acide aminé de la souche Edmonston est celle représentée par SEQ ID NO. 9. La concentration du virus dans les liquides de virus a été déterminée par le procédé plaque, et sa valeur quantitative est exprimée en PFU. La concentration du virus dans chaque liquide de virus est présentée dans le Tableau 5. Le PFU (plaque-forming unit) est une unité pour indiquer le nombre de virus calculé à partir du nombre de cellules infectées par le virus, vérifié avec la plaque formée par les cellules infectées après avoir infecté les cellules dans un état confluent de 100% par le virus. En outre, le PFU est exprimé en indication logarithmique dans le tableau 5. [0101] Ensuite, 150 pL de liquide de virus d'une concentration prédéterminée a été additionné à et mélangé avec 800 pL de tampon phosphate (pH 7,3) contenant 0,3% (poids/volume) de NP-40 (polyoxyéthylène (9) octylphényléther) pour obtenir l'échantillon antigénique. On fait dégoutter environ 200 pL de l'échantillon antigénique dans une éprouvette en verre. Celle-ci a été mise pendant 10 minutes environ dans un état selon lequel un côté supérieur (le membre 1 pour additionner l'échantillon) du dispositif 1 de test préparé avec le procédé mentionné ci-dessus a été imbibé dans l'éprouvette en verre. Par la suite, la coloration par les particules de latex dans la partie déterminante 9A a été déterminée à l'oeil nu. La détermination a été estimée comme "+" en cas de coloration visible ou "û" en cas de coloration invisible. Le résultat est indiqué dans le tableau 5. 51 [0102] Tableau 5 Vous Dispositif 1 de Dispositif 2 de test test Nom des Log (PFU/mL) MV2-2649 MV2-2649 Anticorps 1 du souches de virus côté de capture MV2 3707 MV2-3241 Anticorps 2 du côté de capture MV3-320 Anticorps du côté de marquage 2.60E+04 + + 1.30E+04 + + IC B 6.40E+03 + + 3.20E+03 + û 1.60E+03 + û 8.00E+02 Réactivité 1.60E+04 + + Edmonston 7.90E+03 + + 4.00E+03 + û 2.00E+03 û û [0103] Comme indiqué dans le tableau 5. Dans le cas où la concentration de virus dans l'echantillon antigénique est plus élevée que celle prédéterminée, la coloration est observée sur les parties déterminantes 9A du dispositif 1 de test et du dispositif 2 de test, et le virus de la rougeole a été détecté. Il en est établi que les kits de test pour l'essai membranaire selon le présent mode de réalisation permettent de détecter le virus de la rougeole de façon certaine. De plus, la forme sauvage du virus de la rougeole est détectable également. [0104] 5-2. Test de détection du virus de la rougeole dans un échantillon biologique obtenu à partir d'un sujet. 52 En utilisant le dispositif 1 de test et le dispositif 2 de test préparés au point 4, une expérience de détection du virus de la rougeole dans l'échantillon biologique prélevé des sujets a été effectué. Alors qu'au point 5-1, on a utilisé les dispositifs obtenus par application de deux liquides d'anticorps à appliquer à la partie déterminante 9A sur les positions différentes, dans le présent exemple, le dispositif a été préparé par application de deux liquides mixtes d'anticorps à la partie déterminante 9A. [0105] A partir de chaque sujet déterminé positif à l'infection par la rougeole, au moyen de criblage selon le procédé RT-PCR, le liquide récupéré du pharynx a été prélevé avec un coton-tige. Ce coton-tige est imbibé dans 75 pL de 1% (poids/volume) de solution SDS, et le liquide récupéré du pharynx est élué dans la solution SDS. La concentration de virus dans la solution a été calculée par comparaison de la valeur Ct obtenue selon le procédé en temps réel de PCR avec celle du l'échantillon, dont la concentration est déjà connue, quantifiée selon le procédé décrit au point 5-1. [0106] Ensuite, la susdite solution SDS a été additionnée à et mélangée avec 800 pL de tampon phosphate (pH 7,3) contenant 0,3% (poids/volume) de NP-40 (polyoxyéthylène (9) octylphényléther) pour obtenir l'échantillon antigénique. Au moyen de cet échantillon antigénique, et sur la base de la procédure et de la condition de détermination décrites à 5-1, la coloration par les particules de latex dans la partie déterminante 9A a été déterminée. Le résultat de cette détermination est indiqué dans le tableau 6. [0107] Tableau 6 Vis Dispositif 1 de Dispositif 2 de test test Nom des Log (PFU/mL) MV2-2649 MV2-2649 Anticorps 1 du souches de virus côté de capture MV2-3707 MV2-3241 Anticorps 2 du côté de capture MV3-320 Anticorps du côté de marquage Spécimen 1 1,31E+00 + + Spécimen 2 3,67E+00 + + Spécimen 3 1,23E+00 + + Spécimen 4 2,76E+00 + + Réactivité Spécimen 5 4,62E+00 + + Spécimen 6 4,16E+00 + + [0108] Comme indiqué au Tableau 6, le virus de la rougeole dans les échantillons biologiques à partir des sujets est détectable avec les deux anticorps des dispositif 1 et 2 de test préparés selon le présent exemple. Ce résultat a permis d'établir que le virus de la rougeole dans des échantillons biologiques obtenus à partir de sujets est détectable de façon certaine avec les dispositifs de test selon le présent exemple. Par ailleurs, ce résultat a permis d'établir que le virus de la rougeole est détectable par un procédé simple de détermination à l'oeil nu, au moyen de préparation d'échantillon de mesure par prélèvment de l'échantillon à partir des sujets, et l'utilisation de cet échantillon et du dispositif de test pour l'essai membranaire. [0109] 6. Analyse d'épitope Les sites de reconnaissance d'antigène des anticorps monoclonaux anti-virus de la rougeole selon le présent exemple dirigés contre la nucléoprotéine du virus de la rougeole sont détectés par les tests suivants. [0110] 6-1. Préparation de la nucléoprotéine du virus de la rougeole partiallement délétée. Un vecteur pour l'expression de la protéine de fusion S-transférase glutathion (ci-après appelée "GST"), pGEX-4T-3 (fabriqué par la société GE Healthcare) a été utilisé comme matrice pour effectuer la réaction en chaîne par polymérase (PCR) au moyen d'une amorce de SEQ ID NO. 11 contenant une séquence de reconnaissance par l'enzyme de restriction Notl (ci-après appelée "la séquence Notl") et d'une amorce de SEQ ID NO. 12 contenant une séquence de reconnaissance par l'enzyme de restriction BamHI (ci-après appelée "la séquence BamHI"), et il en a resulté une synthèse d'ADNc auquel la séquence Notl a été intégrée en amont, et la séquence BamHl a été intégrée en aval de la séquence GST. [0111] L'ADNc synthétisé a été traité avec l'enzyme de restriction Notl et l'enzyme de restriction BamHl. De même, un vecteur annexe du kit de réactif pour l'expression acellulaire de germe de blé ENDEXT (marque enregistrée) Wheat Germ Expression TRI-GG Kit (CellFree Sciences Co., Ltd.), a été traité avec l'enzyme de restriction Notl et l'enzyme de restriction BamHl. [0112] Les produits obtenus à partir de traitement par enzymes de restriction ont été ligaturés l'un à l'autre afin de construire un vecteur pour l'expression acellulaire de germe de blé contenant la séquence GST. [0113] A partir de l'ARN extrait de souches Edmonston du virus de la rougeole, ADNc a été synthétisé par la réaction de transcription inverse. A partir de l'ADNc synthétisé du virus de la rougeole, une PCR a été effectuée au moyen d'une amorce de SEQ ID NO. 14 et d'une amorce de SEQ ID NO. 13 contenant une séquence de reconnaissance par l'enzyme de restriction XhoI (ci-après appelée "la séquence XhoI"). Ensuite, en utilisant un produit PCR obtenu comme matrice, la PCR a été effectuée au moyen de l'amorce de SEQ ID NO. 13 et d'une amorce de SEQ ID NO. 15 contenant une séquence Notl. Il en a resulté une synthèse d'un produit ADN contenant la séquence Xhol en amont, et la séquence NotI en aval de la séquence de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0114] Le produit ADN ainsi synthétisé a été traité avec l'enzyme de restriction Xhol et l'enzyme de restriction Notl. De même, un vecteur pour l'expression acellulaire de germe de blé contenant la séquence GST a été traité avec l'enzyme de restriction Xhol et l'enzyme de restriction Notl. Les produits obtenus à partir du traitement par enzymes de restriction ont été ligaturés l'un à l'autre afin de construire un vecteur pour l'expression acellulaire de germe de blé contenant la séquence de la nucléoprotéine du virus de la rougeole et la séquence GST (ci-après appelé "le vecteur 56 d'expression de la nucléoprotéine d'une longueur entière"). A partir du vecteur d'expression de la nucléoprotéine d'une longueur entière ainsi construite, la nucléoprotéine d'une longueur entière a été exprimée au moyen du kit de réactif pour l'expression acellulaire de germe de blé ENDEXT (marque enregistrée) Wheat Germ Expression TRI-GG Kit (CellFree Sciences Co., Ltd.). [0115] Pour l'analyse des sites reconnaissant l'antigène de l'anticorps 2649, de l'anticorps 3707, de l'anticorps 3241, et de l'anticorps 320, les nucléoprotéines Truncates-1 à 4 qui sont des nucléoprotéines partiallement tronquées obtenues par l'élimination des résidus au niveau C-terminal sur la longueur entière du virus de la rougeole, ont été préparées par l'intermédiaire du procédé mentionné ci-dessous. Les nucléoprotéines préparées qui sont partiallement tronquées sont représentées schématiquement sur la Fig. 8. [0116] Sur la base du vecteur d'expression de la nucléoprotéine d'une longueur entière, au moyen d'une amorce de SEQ ID NO. 16, d'une amorce de SEQ ID NO. 17, et du KOD plus Mutagenesis Kit (fabriqué par la société Toyobo) selon sa notice d'utilisation, la circonférence entière du plasmide a été amplifiée sauf les acides aminés en position 399 au niveau C-terminal (la position 525) de la nucléoprotéine du virus de la rougeole afin de construire un vecteur pour l'expression de Truncate-1. A partir du vecteur d'expression de Truncate-1 ainsi construit, Truncate-1 a été exprimé au moyen du kit de réactif pour l'expression acellulaire de germe de blé ENDEXT (marque enregistrée) Wheat Germ Expression TRI-GG Kit (CellFree Sciences Co., Ltd.). Il en resulte une nucléoprotéine déficiente en acide aminé en position 399 au niveau C-terminal. [0117] Truncate-2 a été obtenue de la même manière que Truncate-1 à l'exception d'une amorce de SEQ ID NO. 18, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 17. Il en resulte une nucléoprotéine déficiente en acide aminé en position 321 au niveau C-terminal de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0118] Truncate-3 a été obtenue de la même manière que Truncate-1 à l'exception d'une amorce de SEQ ID NO. 19, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 17. Il en resulte une nucléoprotéine déficiente en acide aminé en position 242 au niveau C-terminal de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0119] Truncate-4 a été obtenue de la même manière que Truncate-1 à l'exception d'une amorce de SEQ ID NO. 20, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 17. Il en resulte une nucléoprotéine déficiente en acide aminé en position 135 au niveau C-terminal de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0120] Ensuite, Truncate-5 déficiente en acide aminé au niveau N-terminal en position 398 de la nucléoprotéine a été préparée. [0121] Truncate-5 a été obtenue de la même manière que pour la nucléoprotéine d'une longueur entière en préparation du vecteur d'expression avec l'amorce de SEQ ID NO. 21, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 13. L'amorce de SEQ ID NO. 21 est celle correspondant à des séquences de base en aval de la base 1195 du ADNc de la nucléoprotéine du virus de la rougeole, et celle contenant la séquence Xhol. [0122] Pour l'analyse plus détaillée des sites reconnaissants l'antigène de l'anticorps 2649, de l'anticorps 3707, de l'anticorps 3241, et de l'anticorps 320, des nucléoprotéines déficientes en site Truncates-6 à 14 ont été préparées. La nucléoprotéine déficiente en site ainsi préparée est représentée schématiquement à Fig. 8. [0123] Sur la base du vecteur d'expression de la nucléoprotéine d'une longueur entière, au moyen d'une amorce de SEQ ID NO 22, d'une amorce de SEQ ID NO 23, et du KOD plus Mutagenesis Kit (fabriqué par la société Toyobo) la circonférence entière du plasmide a été amplifiée sauf les acides aminés au niveau N-terminal à la position 44 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole afin de construire un vecteur d'expression de Truncate-6. A partir du vecteur pour d'expression de Truncate-6 ainsi construit, Truncate-6 a été exprimé au moyen du kit de réactif pour l'expression acellulaire de germe de blé ENDEXT (marque enregistrée) Wheat Germ Expression TRIGG Kit (CellFree Sciences Co., Ltd.). Il en a resulté une nucléoprotéine déficiente en acide aminé en position 44 au niveau N-terminal. 59 [0124] Truncate-7 a été obtenue de la même manière que Truncate-6 à l'exception d'une amorce de SEQ ID NO. 24, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 22, et d'une amorce de SEQ ID NO. 25, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 23. Il en resulte une nucléoprotéine déficiente en acide aminé aux positions 45 à 90 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0125] Truncate-8 a été obtenue de la même manière que Truncate-6 à l'exception d'une amorce de SEQ ID NO. 26, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 22, et d'une amorce de SEQ ID NO. 27, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 23. Il en resulte une nucléoprotéine déficiente en acide aminé aux positions 91 à 134 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0126] Truncate-9 a été obtenue de la même manière que Truncate-6 à l'exception d'une amorce de SEQ ID NO. 28, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 22, et de l'amorce de SEQ ID NO. 20, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 23. Il en resulte une nucléoprotéine déficiente en acide aminé aux positions 135 à 170 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0127] Truncate-10 a été obtenue de même manière que Truncate-6 à l'exception d'une amorce de SEQ ID NO 29, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO 22, et d'une amorce de SEQ ID NO 30, utilisée au lieu de 60 l'amorce de SEQ ID NO 23. Il en a resulté une nucléoprotéine déficiente en acide aminé aux positions 171 à 206 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0128] Truncate-11 a été obtenue de la même manière que Truncate-6 à l'exception d'une amorce de SEQ ID NO. 31, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 22, et d'une amorce de SEQ ID NO. 32, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 23. Il en a resulté une nucléoprotéine déficiente en acide aminé aux positions 207 à 241 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0129] Truncate-12 a été obtenue de la même manière que Truncate-6 à l'exception d'une amorce de SEQ ID NO. 33, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 22, et de l'amorce de SEQ ID NO. 17, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 23. Il en resulte une nucléoprotéine déficiente en acide aminé aux positions 399 à 441 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0130] Truncate-13 a été obtenud de la même manière que Truncate-6 à l'exception d'une amorce de SEQ ID NO. 34, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 22, et d'une amorce de SEQ ID NO. 35, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 23. Il en resulte une nucléoprotéine déficiente en acide aminé aux positions 442 à 484 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0131] Truncate-14 a été obtenue de même manière que Truncate-6 à l'exception de l'amorce de SEQ ID NO. 16, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 22, et d'une amorce de SEQ ID NO. 36, utilisée au lieu de l'amorce de SEQ ID NO. 23. Il en resulte une nucléoprotéine déficiente en acide aminé aux positions 485 à 525 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole. [0132] Les nucléoprotéines d'une longueur entière et Truncates-1 à 14 ainsi obtenus sont purifiées comme protéines liées à GST au moyen de Glutation Sepharose 4B 50% (fabriqué par la société GE Healthcare). [0133] Le plasmide dans lequel la séquence GST était additionnée au vecteur annexe du kit pour l'expression acellulaire de germe de blé a été incorporé en tant que contrôle négatif, et après sa transcription et sa traduction, une protéine a été purifiée. La protéine ainsi obtenue a été utilisée en tant que contrôle négatif de sites reconnaissant l'antigène. [0134] 6-2. Analyse de sites reconnaissant l'antigène Chacun des liquides antigéniques, la nucléoprotéine d'une longueur entière et Truncates-1 à 14 obtenus aux points 6-1. a été dilué avec le deuxième tampon pour préparer des échantillons antigéniques. [0135] Une plaque à micro-titration à laquelle l'anticorps anti-GST (fabriqué par la société GE Healthcare) se liait a été préparée de manière suivante. [0136] Le liquide d'anticorps anti-GST a été dilué à la concentration de 5 pg/mL avec 0,1M de tampon phosphate (PBS, pH 7,5) contenant 0,1% de NaN3 (poids/volume). 50 �L de la solution diluée de cet anticorps anti-GST ont été distribués à chaque puits d'une plaque à micro-titration (fabriquée par la société NUNC) et mis ensuite à 4 °C pendant une nuit. Après le levage de chaque puits trois fois avec le premier tampon, 300 �L de deuxième tampon ont été distribués à chaque puits, pour effectuer un blocage (ci-après, cette plaque à micro-titration est appelée "la plaque liée avec l'anticorps anti-GST"). Après le blocage, la plaque a été mise tranquillement pendant au moins 4 heures à 2 à 8 °C. La plaque liant avec l'anticorps anti-GST a été maintenue à 2 à 8 °C jusqu'à son utilisation. [0137] Le deuxième tampon dans la plaque liant l'anticorps anti-GST a été éliminé. Après l'élimination, 50 uL de chaque échantillon antigénique, ladite nucléoprotéine pleine longueur et les Truncates-1 à 14 ont été additionnées à chaque puits de la plaque liant l'anticorps anti-GST, et agité pendant 30 minutes. Ensuite, chaque puits de la plaque liant l'anticorps anti-GST a été lavé 3 fois avec le deuxième tampon. [0138] Ensuite, l'anticorps 2649, l'anticorps 3707, l'anticorps 3241, et l'anticorps 320 ont été dilués avec le deuxième tampon de sorte qu'ils soient de 10 pg/ml, pour préparer chaque liquide réactionnel d'anticorps. 50 pL de chaque liquide réactionnel d'anticorps ont été additionnés à chaque puits de la plaque liant l'anticorps anti-GST, et agité pendant 30 minutes. 63 Ensuite, chaque puits de la plaque liant l'anticorps anti-GST a été lavé 3 fois avec le deuxième tampon. [0139] Une solution de l'anticorps anti-IgG murin lié avec la peroxydase (POD) (fabriquée par la société DAKO Cytomation) a été diluée avec le deuxième tampon de sorte qu'elle soit de 20 mU/ml, pour préparer un liquide d'anticorps anti-IgG murin lié avec POD. 50 pL du liquide d'anticorps anti-IgG murin lié avec POD ont été additionnés à chaque puits de la plaque liant l'anticorps anti-GST, et agité pendant 30 minutes. Ensuite, chaque puits de la plaque liant l'anticorps anti-GST a été lavé 3 fois avec le deuxième tampon. [0140] Ensuite, 100 �L du liquide de substrat contenant OPD ont été additionné à chaque puits de la plaque liant l'anticorps anti-GST et elle a été mise tranquillement durant 10 minutes à température ambiante. Après l'ajout de 100 �L du liquide d'arrêt de réaction (contenant 2N H2SO4) à chaque puits de la plaque liant l'anticorps anti-GST, l'absorbance de 492 nm a été mesuré au moyen du lecteur pour microplaques. [0141] L'absorbance obtenue est indiqué dans le tableau 7, et le résultat d'estimation de chaque anticorps contre chaque antigène de la nucléoprotéine d'une longueur totale et de Truncates-1 à 14 sur la base de l'absorbance est indiqué dans le tableau 8. Dans le tableau 8, "+++" indique l'absorbance d'au moins 1,5, "++" celle d'au moins 0,5 et inférieure à 1,5, "+" celle d'au moins une valeur de 3SD pour le contrôle négatif et inférieur à 0,5, et "-" celle d'au plus une valeur de 3SD pour le contrôle négatif. [0142] Table 7-1 Anticorps Antigènes Nom longueur Truncate- Truncate- Truncate- Truncate- Truncate- Nom de Isotypes entière 1 2 3 4 5 d'antigènes clones Sans 399-525 321-525 242-525 135-525 1-398 Sites déficit ficients MV2- IgG1/x 3,476 3,215 1,636 3,454 0,038 0,203 2649 MV3 IgG1/x 3,678 0,014 0,012 0,015 0,017 3,580 3707 MV2 Absorbance 3241 IgG2a/x 3,882 0,165 0,127 0,121 0,021 3,749 MV3 IgG2b/x 3,412 3,405 3,643 3,533 2,543 0,009 320 Table 7-2 Anticorps Antigènes Nom Truncate- Truncate- Truncate- Truncate- Truncate- Truncate- Nom de Isotypes 6 7 8 9 10 11 d'antigènes clones 1-44 45-90 91-134 135-170 171-206 207-241 Sites déficients MV2 IgGl/x 0,245 0,249 0,210 0,201 0,255 0,236 2649 MV3 IgGl/x 3,580 3,670 3,537 3,423 3,555 3,502 3707 Absorbance MV2 IgG2a/x 3,787 3,933 3,735 3,583 3,731 3,655 3241 MV3 IgG2b/x 0,724 0,892 0,016 0,475 3,307 3,237 320 [0144] Table 7-3 Anticorps Antigènes Nom de Truncate-12 Truncate-13 Truncate-14 Nom d'antigènes clones Isotypes Sites 399-441 442-484 485-525 déficients MV2-2649 IgGl/x 3,399 2,625 2,235 MV3-3707 IgGl/x 3,444 2,596 0,012 Absorbante MV2-3241 IgG2a/x 3,555 2,689 0,130 MV3-320 IgG2b/x 3,264 2,195 2,252 [0145] Table 7-4 Anticorps Sans anticorps Nom de clones Isotypes Vecteur d'expression acellulaire de germe de blé seulement Absorbance 3SD MV2-2649 IgGl/x 0,031 0,050 MV3-3707 IgGl/x 0,012 0,016 MV2-3241 IgG2a/x 0,012 0,015 MV3-320 IgG2b/x 0,013 0,019 Table 8-1 Anticorps Antigènes de om Isotypes longueur Truncate- Truncate- Truncate- Truncate- Truncate- Nom entière 1 2 3 4 5 d'antigènes Sans Sites clones déficit 399-525 321-525 242-525 135-525 1-398 défi déficients MV2 IgGl/x +++ +++ +++ +++ - + 2649 MV3 IgGl/x +++ û û û û +++ 3707 Réactivité MV2 IgG2a/x +++ + + + û +++ 3241 MV3 IgG2b/x +++ +++ +++ +++ +++ û 320 66 Table 8-2 Anticorps Antigènes Nom Truncate- Truncate- Truncate- Truncate- Truncate- Truncate- Nom de Isotypes 6 7 8 9 10 11 d'antigènes clones 1-44 45-90 91-134 135-170 171-206 207-241 Sites déficients MV2 IgGl/x + + + + + + 2649 MV3 IgG l/x +++ +++ +++ +++ +++ +++ 3707 MV2 IgG2a/x +++ +++ +++ +++ +++ +++ Réactivité 3241 MV3 IgG2b/x ++ ++ ù + +++ +++ 320 [0148] Table 8-3 Anticorps Antigènes Nom de Truncate-12 Truncate-13 Truncate-14 Nom d'antigènes clones Isotypes 399-441 442-484 485-525 Sites déficients MV2-2649 IgGl/x +++ +++ +++ MV3-3707 IgGl/x +++ +++ ù MV2-3241 IgG2a/x +++ +++ + Réactivité MV3-320 IgG2b/x +++ +++ +++ [0149] A partir des résultats du tableau 7 et du tableau 8, il a été suggéré que l'anticorps 2649 reconnaît les séquences d'acide aminé de 135 à 241 résidus. Il a été suggéré que l'anticorps 3707 et l'anticorps 3241 reconnaissent les séquences d'acide aminé de 485 à 525 résidus. En outre, il a été suggéré que l'anticorps 320 reconnaisse les séquences d'acide aminé de 91 à 134 résidus. RÉFÉRENCES [0150] 1 Récipient de test la Fond du récipient de test 67 lb Ouverture 3 Étiquette 4 Dispositif de test pour l'essai membranaire 4a Extrémité du dispositif de test Membre d'ajout de l'échantillon 7 Membre de retention de marqueurs 9 Support membranaire pour la chromatographie 9A Partie déterminante 9B Partie de contrôle 11 Membre d'absorption 12 Matériau de base 13 Échantillon de mesure 14 Récipient de traitement d'échantillon 15 Liquide de traitement d'échantillon 31 Dispositif de test 32 Membre de couverture 33 Ouverture 34 Support membranaire 34A Partie déterminante 35 Membre d'absorption REVENDICATIONS1. Procédé de détection de virus de la rougeole, dans lequel le virus de la rougeole contenu dans un échantillon biologique est détecté à l'aide d'un premier anticorps monoclonal capable de se lier à une nucléoprotéine du virus de la rougeole, et d'un deuxième anticorps monoclonal marqué capable de se lier à la nucléoprotéine du virus de la rougeole, mais différent du premier anticorps monoclonal. 2. Procédé de détection du virus de la rougeole selon la revendication 1, comprenant en outre une étape de préparation d'un échantillon de mesure par mélange d'un échantillon biologique et d'un liquide de traitement d'échantillon contenant un surfactant non-ionique, pour la détection du virus de la rougeole contenu dans l'échantillon de mesure. 3. Procédé de détection du virus de la rougeole selon la revendication 1 ou 2, dans lequel l'échantillon biologique est choisi parmi un groupe constitué par la salive, les sécrétions nasales, le liquide récupéré de la cavité nasale, l'aspirat de cavité nasale, et le liquide récupéré du pharynx. 4. Procédé de détection du virus de la rougeole selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 dans lequel le premier anticorps monoclonal est un des anticorps monoclonaux choisi parmi un groupe constitué par un anticorps monoclonal qui reconnaît et se lie aux séquences d'acide aminé aux positions 135 à 241 d'une nucléoprotéine du virus de la rougeole de SEQ ID NO. 9, un anticorps monoclonal qui reconnaît et se lie aux séquences d'acide aminé aux positions 485 à 525 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole de SEQ ID NO. 9, et un anticorps monoclonal qui reconnaît et se lieaux séquences d'acide aminé aux positions 91 à 134 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole de SEQ ID NO. 9, et le deuxième anticorps monoclonal est un autre anticorps monoclonal choisi parmi ledit groupe. 5. Procédé de détection du virus de la rougeole selon la revendication 4 dans lequel le premier anticorps monoclonal est l'anticorps monoclonal qui reconnaît et se lie aux séquences d'acide aminé aux positions 135 à 241 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole de SEQ ID NO. 9 ou l'anticorps monoclonal qui reconnaît et se lie aux séquences d'acide aminé aux positions 485 à 525 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole de SEQ ID NO. 9, et le deuxième anticorps monoclonal est l'anticorps monoclonal qui reconnaît et se lie aux séquences d'acide aminé aux positions 91 à 134 de la nucléoprotéine du virus de la rougeole de SEQ ID NO. 9. 6. Dispositif de test pour l'essai membranaire pour détecter le virus de la rougeole en ce qu'il est équipé d'un support membranaire pour développement comprenant une partie déterminante où un premier anticorps monoclonal capable de se lier à une nucléoprotéine du virus de la rougeole est fixé, et d'un membre de retention de marque pour retenir un deuxième anticorps monoclonal marqué, capable de se lier à la nucléoprotéine du virus de la rougeole, mais différent du premier anticorps monoclonal. 7. Dispositif de test pour l'essai membranaire selon la revendication 6, dans lequel la partie déterminante porte en outre un troisième anticorps monoclonal, capable de se lier à la nucléoprotéine du virus de la rougeole, mais différent du premier et du deuxième anticorps monoclonaux. 8. Kit de test pour l'essai membranaire pour détecter le virus de larougeole en ce qu'il est équipé d'un dispositif de test pour l'essai membranaire selon la revendication 6 ou 7, et d'un liquide de traitement de l'échantillon contenant un surfactant non-ionique, et pour préparer l'échantillon de mesure par mélange avec l'échantillon biologique. 9. Kit de test pour l'essai membranaire selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il est équipé en outre d'un récipient de test capable de continuer l'échantillon de mesure et dans lequel le dispositif de test pour l'essai membranaire peut être mis en oeuvre pour l'essai membranaire est capable de s'insérer. 10. Kit de test pour l'essai membranaire pour détecter le virus de la rougeole comprenant un dispositif de test avec un support membranaire comprenant une partie déterminante sur laquelle un premier anticorps monoclonal capable de se lier à une nucléoprotéine du virus de la rougeole est fixé, et d'un liquide de marquage contenant un deuxième anticorps monoclonal marqué, capable de se lier à la nucléoprotéine du virus de la rougeole, mais différent du premier anticorps monoclonal. 11. Kit de test pour l'essai membranaire selon la revendication 10 dans lequel la partie déterminante porte en outre un troisième anticorps monoclonal, capable de se lier à la nucléoprotéine du virus de la rougeole, mais différent du premier et du deuxième anticorps monoclonaux. 12. Kit de test pour l'essai membranaire selon la revendication 10 ou 11 dans lequel le liquide de marquage contient en outre un surfactant non-ionique. 13. Hybridome choisi parmi un groupe constitué par les numéros de dépôt NITE P-563, NITE P-564, NITE P-565 et NITE P-566 qui ont été déposé au � Patent Microorganisms Depositary �, du � National Institute of Technology and Evaluation �. 14. Anticorps monoclonal produit avec l'hybridome selon la revendication 13.