Brevet FR2941152A1 — publié le 20100723

La présente invention se rapporte à de nouveaux vecteurs pour l'administration intracellulaire d'acides nucléiques de petite taille, tels que des acides nucléiques capables de moduler une fonction protéique, et leur utilisation en thérapie génique. De nombreuses maladies sont associées à un défaut d'expression et/ou une expression anormale, c'est-à-dire déficiente ou excessive, d'un ou plusieurs acides nucléiques. La thérapie génique a pour principal objectif de corriger ce type d'anomalies génétiques par le biais de l'expression cellulaire in vivo ou in vitro de gènes clonés. De nombreux acides nucléiques de petite taille, tels que les ARN interférants (miRNA, siRNA, ...) sont capables de contrôler l'expression d'une protéine de manière spécifique en agissant sur l'ARNm de la protéine en question. Ils recrutent des complexes protéiques qui détruisent l'ARNm, ce qui conduit à la perte de l'expression de cette protéine ainsi que de sa fonction. Le site d'action de ces petits acides nucléiques est le cytoplasme des cellules. Or, il est difficile pour un acide nucléique de franchir la membrane cellulaire sans qu'il soit associé à un vecteur. En l'absence d'un vecteur, on peut obtenir une faible pénétration à condition d'ajouter l'acide nucléique à des concentrations très importantes qui, en plus d'être coûteuses en produit, conduisent à une extinction non spécifique de toutes les protéines de la cellule ainsi qu'à une toxicité. Les vecteurs couramment utilisés et les plus efficaces pour faire pénétrer des acides nucléiques dans le cytoplasme d'une cellule sont des molécules chimiques cationiques, de type lipide ou polymère, qui s'associent de part leur charge à l'acide nucléique et lui permettent d'entrer dans la cellule. Ces molécules sont utilisées très couramment pour faire pénétrer des acides nucléiques (ADN ou ARN, de petite ou grande taille) dans des cellules en culture ou des cellules de l'organisme. Très efficaces dans les cellules en culture, elles le sont moins dans l'organisme du fait de phénomènes de piégeage par les protéines et les cellules contenues dans le sang. Par ailleurs, il est à noter que des molécules d'acide nucléique de petite taille sont capables d'interagir avec un lipide cationique mais les complexes formés n'ont pas nécessairement les mêmes propriétés que les complexes formés avec de l'ADN de grande taille. Il a été proposé d'associer une molécule d'acide nucléique au PEI-alginate (PATNAIK et al, 2006). L'acide alginique est utilisé pour masquer les charges de PEI (polyethylenimine, qui est un polymère cationique), et ce, indépendamment de la molécule d'acide nucléique (ADN-ARN) qui est par la suite associée. La finalité de l'ajout de l'acide alginique est donc différente de celle de la présente invention, puisque dans PATNAIK et al. (2006), il ne s'agit alors pas d'aider à la formation des complexes entre le lipide cationique et la molécule d'acide nucléique de petite taille en ajoutant une macromolécule. Il a également été proposé d'utiliser un ADN double brin de grande taille (appelé ADN cargo), dont la seule fonction est d'aider à l'association du siRNA avec le vecteur (KHOURY et al., 2006). Cet ADN cargo est un ADN plasmidique, double brin, circulaire, superenroulé. Cependant, l'ADNdb cargo porte des séquences nucléotidiques susceptibles d'être transcrites par la machinerie cellulaire de la cellule recevant le vecteur, ce qui n'est pas compatible avec un développement clinique de la préparation. De plus, de tels vecteurs doivent être non toxiques et biodégradables tout en étant stables en présence de sérum, notamment pour un développement clinique. Les Inventeurs ont résolu ce problème en mettant au point une composition comprenant un certain type de macromolécule anionique et un lipide cationique en tant que vecteur d'acide nucléique de petite taille. Une telle composition permet d'améliorer la vectorisation des acides nucléiques de petite taille tout en étant non toxique, biodégradable et stable en présence de sérum. Une différence majeure entre l'ADNdb cargo et les polymères anioniques tels que l'acide alginique ou l'acide polyglutamique, est que l'ADNdb cargo possède une topologie très particulière : il s'agit d'un ADN plasmidique, double brin, circulaire, superenroulé, couramment utilisé en association avec des lipides cationiques. D'un autre côté, l'acide alginique est utilisé en général pour ses capacités à former des gels insolubles, et l'acide polyglutamique, en greffage sur des composés hydrophobes pour augmenter leur solubilité dans l'eau. Ces polymères ne possèdent pas de topologie particulière comme l'ADN plasmidique. Or, il est bien connu de l'homme de l'art que les acides nucléiques, tels que les ADN plasmidiques, sont capables de s'associer à des lipides cationiques, mais ce n'est pas du tout le cas pour tout autre polymère anionique. D'autre part, les acides nucléiques sont souvent des macromolécules double brin relativement rigides, ce qui n'est pas forcément le cas des polymères anioniques en général. Ainsi, il n'était pas évident qu'un polymère anionique non nucléotidique soit capable de former des associations ternaires avec un lipide cationique et un acide nucléique, et ainsi de conduire à une augmentation de l'effet biologique des acides nucléiques de petite taille incorporés dans ces complexes ternaires. En effet, on aurait pu imaginer qu'il se forme uniquement un mélange de complexes binaires, constitués de lipides et d'acide nucléique d'une part et de lipides et de polymère d'autre part. Ainsi, la présente invention se rapporte à une composition comprenant : (1) une macromolécule anionique à l'exception des acides nucléiques, (2) un lipide cationique, et (3) un acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides. Dans la présente invention, on entend par � macromolécule anionique � une molécule de poids moléculaire élevé présentant une charge globale négative, à l'exception des acides nucléiques. Dans le cadre de la présente invention, on entend par � acide nucléique � un polymère dont l'unité de base est le nucléotide, les différents nucléotides étant liés les uns aux autres par des liaisons phosphodiesters. Une macromolécule résulte généralement de l'assemblage, notamment par des liaisons covalentes, d'un grand nombre de groupements chimiques semblables ou différents nommés motifs de répétition. La macromolécule anionique selon la présente invention peut être un polymère ou peut être formée par autoassociation, via des liaisons hydrogènes, de monomères complémentaires. De préférence, la macromolécule anionique selon la présente invention est choisie parmi les polysaccharides anioniques, les polypeptides anioniques, les polyélectrolytes synthétiques comme le sodium polystyrène sulfonate et le carboxymethyl cellulose (CMC), les polyphosphates, les polyosides comme le chitosan et le dextran. De manière particulièrement préférée, la macromolécule anionique selon la présente invention est choisie parmi les polyphosphates, les polysaccharides anioniques et les polypeptides anioniques, encore plus préférentiellement parmi les polysaccharides anioniques et les polypeptides anioniques. Tel que défini dans la présente invention, un � polysaccharide � est formé par des séquences de saccharides connectées entre elles par des liaisons glycosidiques, et un � polysaccharide anionique � est un polysaccharide présentant une charge globale négative. Parmi les polysaccharides anioniques, on peut citer les carrhagénanes (polysaccharides sulfatés des algues rouges), les fucanes (polysaccharides sulfatés des algues brunes), les CarboxyMéthyl Dextrane Benzylamide Sulfonates ou CMDBS (polysaccharides synthétiques préparés à partir de dextrane par substitution statistique de fonctions hydroxyles par des fonctions chimiques carboxyméthyles, benzylamides, sulfonates et sulfates), et les héparanes sulfates (polysaccharides complexes, appartenant à la famille des glycosaminoglycanes). Avantageusement le polysaccharidique anionique est l'acide alginique ou l'un de ses sels, tels que le sel de sodium (SIGMA ALDRICH). L'acide alginique (CAS : 9005-32-7) est un polysaccharide colloïdal extrait de diverses variétés d'algues brunes, en particulier de Laminaria. Il a pour monomères constitutifs de l'acide alpha-L-glucuronique et beta-D-mannuronique liés par paire selon des liaisons de type 1->4. L'acide alginique est constitué en moyenne de 200 unités de base d'acides uroniques. Son poids moléculaire est généralement compris entre 10 000 et 600 000 Daltons. Tel que défini dans la présente invention, un � polypeptide � est un polymère linéaire composé d'acides aminés liés par des liaisons covalentes, et un �polypeptide anionique � est un polypeptide présentant une charge globale négative. Le polypeptide anionique peut être tout polypeptide naturel ou synthétique anionique. Il peut être un polypeptide mixte polyglutamique-polyaspartique, ou un polypeptide comportant une charge globale négative provenant d'acides aminés naturels (acide aspartique, acide glutamique) ou non naturels. Avantageusement, le polypeptidique anionique est l'acide polyglutamique ou l'un de ses sels, tels que le sel de sodium (SIGMA ALDRICH) ou l'acide polyaspartique ou l'un de ses sels. L'acide polyglutamique est un polymère soluble dans l'eau, biodégradable, comestible 5 et non toxique. De préférence, la macromolécule anionique a un poids moléculaire moyen compris entre 1000 et 1000000 Da, préférentiellement compris entre 1000 et 100000 Da encore plus préférentiellement compris entre 4300 et 56000 Da. Le poids moléculaire moyen 10 dépendra du type de polymère et de sa voie de préparation (synthèse chimique ou purification à partir de matériel biologique). Dans la présente invention, on entend par � lipide cationique �, un lipide ayant une charge globale positive. Un lipide cationique est composé d'une tête polaire cationique 15 et d'une entité hydrophobe de type chaîne lipidique ou cholestérol. De préférence, le lipide cationique est choisi parmi : - Les lipopolyamines, telles que la 2-{3-[Bis-(3-amino-propyl)-amino]- propylamino } -N-ditetradecyl carbamoyl methyl-acetamide (composé RPR209120), la 2- 13- [3-(3-Amino-propylamino)-propylamino]-propylamino } 20 N,N-dioctadecyl-acetamide (RPR120535) (Byk et al, J. Med. Chem., 41, 224-235, 1998) ou le 2,3-dioleoyloxy- N-[2(sperminecarboxamido)ethyl]-N,N-dimethyl- 1 -propane-aminium-trifluoracetate (DOSPA), le dioctadécylamine-glycine- spermine (DOGS), la dipalmitylphosphatidylethanolamine 5- carboxyspermylamide (DPPES), ainsi que toutes les lipopolyamines décrites p.2, 25 L.27 à p.4, L.19 dans la demande internationale WO 97/18185 telle que publiée, avantageusement les lipolyamines de formule choisie parmi les formules III à XII p.5, L.1 à p.7, L.9 de la demande WO 97/18185 telle que publiée, et de manière encore plus avantageuse p.8, L.29 à p.14, L.15 de la demande WO 97/18185 telle que publiée. 30 - Les ammoniums quartenaires tels que le bromure de 1,2-dimyristoyloxypropyl-3-diméthyl-hydroxy éthyl ammonium bromide (DMRIE) N-(2,3-dioleyloxypropyl]-N,N,N-trimethylammonium chloride (DOTMA), le 1,2-dioleoyloxypropyl-N,N,N-trimethylammonium chloride (DOTAP), la dimethyldioctadecylammonium bromide (DDAB), ou la 1,2-dioleyloxypropyl-3- dimethylhydroxyethylammonium bromide (DORIE), et - Les lipides comportant des têtes cationiques de type guanidine (BGTC) ou imidazole (DOTIM). De préférence, le lipide cationique est formulé soit sous forme de micelles, soit sous forme de liposomes par association avec un lipide neutre tel que la dioleyl phosphatidyl éthanolamine (DOPE achetée chez AVANTI POLAR LIPIDS), le Cholestérol, ou le (F8E 11)(C 16)OPE, de préférence la dioleyl phosphatidyl éthanolamine. Le lipide anionique peut également être formulé en réalisant des injections éthanoliques ou en le préparant avec un détergent. De préférence, les micelles sont préparées par ajout d'eau ou de tampon au lipide cationique, puis, après agitation vigoureuse le mélange est soumis à plusieurs cycles de congélation/chauffage à 55°C jusqu'à l'obtention d'une suspension claire de micelles. A titre de préparation liposomale, on peut citer la LipofectAmine (Gibco BRL), qui est préparée à partir de la DOSPA (lipopolyamine) et de la DOPE (lipide neutre). Avantageusement, le lipide cationique est présent en une quantité comprise entre 1 et 20 nmoles par �g de mélange d'acide nucléique et de macromolécule anionique, encore plus avantageusement entre 3 à 8 nmoles par �g de mélange d'acide nucléique et de macromolécule anionique, et de façon davantage préférée entre 4 et 6 nmoles par �g de mélange d'acide nucléique et de macromolécule anionique. Dans le cadre de la présente invention, on entend par � acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides� ou � acide nucléique de petite taille � un acide désoxyribonucléique (ADN), un acide ribonucléique (ARN) simple ou double brin, ou des séquences hybrides ADN/ARN de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides. Il peut s'agir de séquences d'origine naturelle ou artificielle. Ils peuvent également être obtenus par une modification chimique au niveau de leurs parties sucres, de leurs parties nucléobases ou de leur squelette internucléotidique. Parmi les modifications avantageuses dans les parties sucres, on peut notamment citer les modifications intervenant en position 2' du ribose, telles que les modifications 2'-deoxy, 2'-fluoro, 2'-amino, 2'-thio, ou 2'-O-alkyl, en particulier 2'-O-méthyle, au lieu du groupement 2'-OH normal sur les ribonucléotides, ou encore la présence d'un pont méthylène entre les positions 2' et 4' du ribose (LNA). Concernant les nucléobases, il est possible d'utiliser des bases modifiées, telles que notamment la 5-bromo-uridine, la 5-iodo-uridine, la N3-méthyl-uridine, une 2,6-diaminopurine (DAP), la 5-méthyl-2'-deoxyCytidine, la 5-(1-propynyl)-2'-deoxy-Uridine (pdU), la 5-(1-propynyl)-2'-deoxyCytidine (pdC), ou des bases conjuguées avec du cholestérol. Enfin, des modifications avantageuses du squelette internucléotidique comprennent le remplacement de groupements phosphodiesters de ce squelette par des groupements phosphorothioate, méthylphosphonate, phosphorodiamidate, ou l'utilisation d'un squelette composé d'unités de N-(2-aminoethyl)-glycine liées par des liaisons peptidiques (PNA, Peptide Nucleic Acid). Les différentes modifications (base, sucre, squelette) peuvent bien entendu être combinées pour donner des acides nucléiques modifiés de type morpholino (bases fixées sur un cycle morpholine et liées par des groupes phosphorodiamidate) ou PNA (bases fixées sur des unités de N-(2-aminoethyl)-glycine liées par des liaisons peptidiques). De préférence, l'acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides est un acide nucléique capable de moduler une fonction protéique. Dans la présente invention, on entend par � acide nucléique capable de moduler une fonction protéique � un acide nucléique qui (1) soit augmente et/ou restaure, au moins partiellement, (2) soit inhibe et/ou retarde et/ou bloque une fonction protéique. De tels acides nucléiques sont bien connus de l'homme du métier. Il s'agit par exemple des acides nucléiques agissant sur l'expression d'un gène, tels que les oligonucléotides antisens ou les ARN interférants (miRNA, siRNA, ...). Il peut s'agir également des oligonucléotides pour le saut d'exon ou pour la modification d'épissage alternatif Il peut encore s'agir des aptamères. On entend par � oligonucléotide antisens � une séquence nucléotidique complémentaire d'une autre sequence nucléotidique, telle qu'une séquence d'ARNm, qui se fixe à cette dernière et empêche sa traduction en protéine correspondante, ou pénètre dans le noyau, se fixe à un brin d'ADN, et forme une triple hélice d'ADN, non transcriptible en ARN. On entend par � ARN interférant � un acide ribonucléique simple ou double brin, qui interfère avec un ARN messager spécifique conduisant à sa dégradation et à la diminution de sa traduction en protéine. Il s'agit notamment des petits ARN interférants (� siRNA �) et des microARN (� miRNA �). (Wu et al, 2008). On entend par �oligonucléotide pour le saut d'exon� une séquence nucléotidique spécifique d'un ARN pré-messager et capable d'interagir avec la machinerie d'épissage de sorte que l'épissage produise un ARN messager tronqué d'un ou plusieurs exons mais dont le cadre de lecture global n'est pas modifié, ce qui permet d'obtenir une protéine tronquée mais partiellement fonctionnelle (Van Ommen et al; 2008). On entend par � aptamère � un oligonucléotide modifié sélectionné à partir d'une banque aléatoire de séquences en fonction de son affinité pour un ligand biologique en vue de son utilisation thérapeutique. Les aptamères se différencient des autres séquences d'acides nucléiques par leur capacité à se replier en une structure tertiaire pour créer une poche de liaison permettant d'interagir précisément et spécifiquement avec la cible. Les aptamères possèdent de nombreuses applications thérapeutiques (Kaur et Roy, 2008). On entend par � acide nucléique pour la modification d'épissage alternatif � un acide nucléique permettant de modifier l'ARN pré-messager dans le but d'obtenir l'expression d'une protéine modifiée. De préférence, l'acide nucléique capable de moduler une fonction protéique est choisi parmi un oligonucléotide antisens, un oligonucléotide pour le saut d'exon ou un oligonucléotide pour la modification d'épissage alternatif ou un ARN interférant, encore plus préférentiellement un ARN interférant, et/ou les formes modifiées de ces acides nucléiques, telles que les formes morpholino, phosphorothioate, phosphoroamidate et 2'Omethyl. De manière encore plus préférée, ledit ARN interférant est un petit ARN interférant (� siRNA �) ou un microARN (� miRNA �), de manière préférée entre toutes un petit ARN interférant. De préférence, l'acide nucléique a une taille inférieure à 200 nucléotides, de manière encore préférée inférieure à 100 nucléotides, de manière particulièrement préférée inférieure à 50 nucléotides, et de manière encore plus préférée inférieure à 30 nucléotides. De manière préférée entre toutes, l'acide nucléique a une taille comprise entre 20 et 25 nucléotides. De préférence, lorsque l'acide nucléique de petite taille est un petit ARN interférant, celui-ci a une taille comprise entre 19 et 25 nucléotides. De préférence, lorsque l'acide nucléique de petite taille est un microARN, celui-ci a une taille comprise entre 20 et 25 nucléotides. De préférence, lorsque l'acide nucléique de petite taille est un oligonucléotide antisens, celui-ci a une taille comprise entre 13 et 25 nucléotides. De préférence, lorsque l'acide nucléique de petite taille est un oligonucléotide pour le 10 saut d'exon, celui-ci a une taille comprise entre 17 et 31 nucléotides. De préférence, lorsque l'acide nucléique de petite taille est un oligonucléotide pour la modification d'épissage alternatif, celui-ci a une taille comprise entre 15 et 30 nucléotides. De préférence, lorsque l'acide nucléique de petite taille est un aptamère, celui-ci a une 15 taille comprise entre 20 et 80 nucléotides. De préférence, la concentration en acide nucléique dans la composition selon la présente invention pour une utilisation in vitro est comprise entre 1 et 100 nM, encore plus préférentiellement entre 5 et 50 nM, et de manière préférée entre toutes entre 15 et 25 20 nM. De préférence, la concentration en acide nucléique dans la composition selon la présente invention pour une utilisation in vivo est comprise entre 0,1 à 2,5 mg/kg, encore plus préférentiellement entre 0,3 et 1 mg/kg, et de manière préférée entre toutes entre 0,4 et 0,6 mg/kg. 25 Une composition préférée selon la présente invention est telle que la macromolécule anionique est l'acide alginique, le lipide cationique est une lipopolyamine, de préférence le 2- {3-[Bis-(3-amino-propyl)-amino]-propylamino}-N-ditetradecyl carbamoyl methylacetamide (RPR209120), et l'acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 30 nucléotides est un acide nucléique capable de moduler une fonction protéique, ledit acide nucléique étant de préférence choisi parmi un siRNA ou un oligonucléotide pour le saut d'exon ou pour la modification de l'épissage alternatif, ledit composé RPR209120 étant avantageusement formulé en liposome par association avec un lipide neutre tel que la DOPE. De préférence, la composition selon l'invention est telle que la macromolécule anionique est l'acide alginique, le lipide cationique est le composé RPR209120 et l'acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides est un petit ARN interférant, ledit composé RPR209120 étant avantageusement formulé en liposome par association avec un lipide neutre tel que la DOPE. Une autre composition préférée selon la présente invention est telle que la macromolécule anionique est l'acide polyglutamique, le lipide cationique est une lipopolyamine, de préférence le composé RPR209120, et l'acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides est un acide nucléique capable de moduler une fonction protéique, ledit acide nucléique étant de préférence choisi parmi un siRNA ou un oligonucléotide pour le saut d'exon ou pour la modification de l'épissage alternatif, ledit composé RPR209120 étant avantageusement formulé en liposome par association avec un lipide neutre tel que la DOPE. De préférence, la composition selon la présente invention est telle que la macromolécule anionique est l'acide polyglutamique, le lipide cationique est le composé RPR209120 et l'acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides est un petit ARN interférant, ledit composé RPR209120 étant avantageusement formulé en liposome par association avec un lipide neutre tel que la DOPE. Une autre composition préférée selon la présente invention est telle que la macromolécule anionique est le polyphosphate, le lipide cationique est une lipopolyamine, de préférence le composé RPR209120, et l'acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides est un acide nucléique capable de moduler une fonction protéique, ledit acide nucléique étant de préférence choisi parmi un siRNA ou un oligonucléotide pour le saut d'exon ou pour la modification de l'épissage alternatif, ledit composé RPR209120 étant avantageusement formulé en liposome par association avec un lipide neutre tel que la DOPE. De préférence, la macromolécule anionique est pré-associée à l'acide nucléique. On entend par � macromolécule anionique pré-associée � le fait que l'acide nucléique soit mis au contact de la macromolécule anionique préalablement à la mise en contact avec le lipide cationique, ce qui permet la formation d'un mélange acide nucléique/macromolécule anionique. De préférence, le rapport macromolécule anionique/acide nucléique est compris entre 0,5 et 4 (poids/poids), de préférence compris entre 1 et 2, de manière encore préférée égale à 1. Le mélange ainsi formé est ensuite mis en contact avec le lipide cationique, ce qui permet d'obtenir le complexe macromolécule anionique/acide nucléique/lipide cationique. De préférence, la mise en contact du mélange avec le lipide cationique est effectuée volume à volume. De préférence, la composition selon la présente invention est présente dans un milieu contenant des cellules à transfecter, dans des conditions telles qu'il y a: - passage du complexe macromolécule anionique/lipide cationique/acide nucléique à partir du milieu dans le cytoplasme des cellules, - relargage de l'acide nucléique impliqué dans le susdit complexe dans le cytosol et/ou le noyau des cellules. Comme indiqué ci-avant, les compositions selon l'invention peuvent être utilisées pour le transfert d'acides nucléiques dans les cellules in vivo, in vitro ou ex vivo. En particulier les compositions selon l'invention peuvent être utilisées pour transférer de manière très efficace des acides nucléiques dans de nombreux types cellulaires, et en particulier dans certains types cellulaires habituellement difficiles à transfecter. Ainsi la présente invention concerne un procédé pour transférer un acide nucléique dans des cellules, ledit procédé comprenant la mise en contact desdites cellules avec une composition selon l'invention. De préférence, ledit procédé est un procédé in vitro ou ex vivo. Les cellules peuvent être d'origine procaryote ou eucaryote, en particulier animale, végétale ou humaine. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la composition selon la présente invention comprend en outre un élément de ciblage permettant d'orienter le transfert de l'acide nucléique, tel qu'un élément de ciblage intracellulaire (noyau, etc.) et/ou extracellulaire (ciblage de certains types cellulaires/tissus). Parmi les éléments de ciblage utilisables dans le cadre de l'invention, on peut citer les sucres, les peptides, les oligonucléotides, les lipides ou les protéines. Avantageusement, il s'agit de sucres, de peptides ou de protéines tels que des anticorps ou fragments d'anticorps, des ligands de récepteurs cellulaires ou des fragments de ceux-ci, des récepteurs ou fragments de récepteurs, etc. En particulier, il peut s'agir de ligands de récepteurs de facteurs de croissance, de récepteurs de cytokines, de récepteurs de lectines cellulaires ou de récepteurs de protéines d'adhésion. On peut également citer le récepteur de la transferrine, des HDL et des LDL. L'élément de ciblage peut également être un sucre permettant de cibler les récepteurs asialoglycoprotéiques, ou encore un fragment Fab d'anticorps permettant de cibler le récepteur du fragment Fc des immunoglobulines. La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant une composition selon la présente invention et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Une telle composition pharmaceutique peut être formulée pour l'administration aux mammifères, y compris l'homme. La posologie varie selon le traitement et selon l'affection en cause. Une telle composition pharmaceutique est réalisée de façon à pouvoir être administrée par la voie sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, intranasale intraoculaire, orale, sublinguale, locale, rectale, intratumorale, intrathécale, intracérébroventriculaire, intrapéritonéale, ou par instillation dans la vessie. On utilise par exemple en tant que véhicule pharmaceutiquement acceptable des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des agents mouillants pharmacologiquement compatibles. Les doses d'acide nucléique utilisées ainsi que le nombre d'administrations peuvent être adaptées en fonction de différents paramètres, et notamment en fonction du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée, de l'acide nucléique à administrer, ou encore de la durée du traitement recherchée. La présente invention concerne de plus l'utilisation d'une composition vecteur comprenant : (1) une macromolécule anionique à l'exception des acides nucléiques, et (2) un lipide cationique tel que défini ci-dessus, pour la préparation d'une composition destinée à la délivrance intracellulaire d'acide nucléique. La présente invention concerne également l'utilisation d'une composition vecteur comprenant une macromolécule anionique et un lipide cationique en tant que vecteur pharmaceutiquement acceptable d'un acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides, tel qu'un ARN interférant. La macromolécule anionique, le lipide et l'acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides, sont tels que définis ci-dessus. La présente invention concerne en outre une composition selon l'invention pour son utilisation en tant que médicament. De préférence, ledit médicament est destiné au traitement d'une pathologie associée à un dysfonctionnement d'une fonction protéique. Dans la présente invention, on entend par � pathologie associée à un dysfonctionnement d'une fonction protéique �, une pathologie liée à une ou plusieurs protéines dont la fonction est perturbée (catalyse, transport, communication, signalisation, reconnaissance, structure, ...). Ladite pathologie peut être choisie parmi les maladies inflammatoires, telles que la polyarthrite, les rhumatismes, les cancers, les infections virales telles que l'hépatite, les infections parasitaires ou microbiennes, les maladies autoimmunes telles que le lupus érythémateux, la fibrose cardiaque ou hépatique, les maladies monogéniques liées à des mutations dominantes telles que la Chorée de Huntington, l'achondroplasie, la sclérose latérale amyotrophique ou la maladie de Lou Gehrig, les pathologies liées à un saut d'exon telles que la myopathie de Duchenne et la polymyosite, les maladies neurodégénératives telles que la maladie d'Alzheimer. De préférence, la pathologie est choisie parmi la polyarthrite, les rhumatismes, les cancers, l'hépatite, le lupus érythémateux, la fibrose cardiaque ou hépatique, la Chorée de Huntington, l'achondroplasie, la sclérose latérale amyotrophique ou la maladie de Lou Gehrig, la myopathie de Duchenne et la polymyosite, et la maladie d'Alzheimer. De manière particulièrement préférée, la pathologie est choisie parmi la polyarthrite, l'hépatite, le lupus érythémateux, la fibrose cardiaque ou hépatique, la myopathie de Duchenne ou la polymyosite. Ces diverses pathologies pourront être traitées à l'aide des acides nucléiques de petite taille tels que définis dans la présente invention présents dans la composition, lesquels acides nucléiques sont capables de moduler une fonction protéique. A titre d'exemple, les fonctions protéiques pouvant être modulées à l'aide d'acides nucléiques de petite taille selon la présente invention sont celles liées à : - TNFalpha, IL-1, IL-6, IL-18, Akt, GG2-1, ASC pour la polyarthrite rhumatoïde, - interféron-alpha et IL-10 pour le lupus érythémateux, - TNFalpha pour la polymyosite, - TNF alpha pour la maladie de Crohn, - aux gènes viraux lors d'une infection virale comme la région de Core du virus de l'hépatite B, - aux gènes EMCV-IRES (� encephalomyocarditis virus-internal ribosome entry site �), NS3 et NS5B, (� non-structural protein 3 et 5B �), NA (neuraminidase) dans l'hépatite C, - aux gènes de la caspase 8 et Fas dans l'insuffisance hépatique aiguë (ALF), - aux gènes TGF, PDGF et TNF dans la fibrose hépatique, - aux gènes VEGF, VEGFR1, VEGFR2 dans la dégénérescence maculaire liée à l'âge (AMD), - aux gènes VEGF, VEGFR1, VEGFR2 dans la rétinopathie diabétique, - aux gènes VEGF, VEGFR1, VEGFR2 dans les cancers (stratégies antiangiogénèse et antivasculaire), - au gène FGFR3 dans l'achondroplasie, - au gène SOD1 dans la sclérose latérale amyotrophique, - au gène HD dans la chorée de Huntington, - au gène de la dystrophine dans la myopathie de Duchenne (par saut d'exon), - au gène de la (3-secrétase (BACE1) dans la maladie d'Alzheimer. Selon un dernier aspect, la présente invention se rapporte à un procédé de préparation d'une composition selon la présente invention, comprenant : a) une étape de mise en contact de la macromolécule anionique telle que définie ci-dessus avec l'acide nucléique tel que défini ci-dessus, pour la formation d'un mélange, b) une étape de mise en contact du lipide cationique tel que défini ci-dessus avec le mélange obtenu à l'étape a), pour la préparation de la composition. La présente invention se rapporte également à une méthode de traitement d'une pathologie associée à un dysfonctionnement d'une fonction protéique par administration au sujet à traiter d'une composition selon l'invention. L'invention sera mieux comprise à la lecture des exemples et des figures qui suivent. LEGENDE DES FIGURES La figure 1 représente le pourcentage d'inhibition de l'expression de la luciférase par différentes formulations de siRNA en présence ou non d'une macromolécule anionique. La figure 2 représente le pourcentage d'inhibition de l'expression de la luciférase par différentes formulations de siRNA en fonction de la quantité de macromolécule anionique présente. La figure 3 représente le pourcentage d'inhibition de l'expression de la luciférase par différentes formulations de siRNA en fonction du degré de polymérisation de la macromolécule anionique. La figure 4 représente le pourcentage d'inhibition de l'expression de la luciférase par différentes formulations de siRNA en fonction du type de vecteur (micelle/liposome) et 20 de la présence ou non de sérum. La figure 5 représente le pourcentage d'inhibition de l'expression de la luciférase par différentes formulations de siRNA en fonction du lipide cationique utilisé en présence et en l'absence de sérum. La figure 6 représente le pourcentage d'inhibition du taux de TNFalpha dans le sang 25 chez la souris. EXEMPLES Exemple 1 : Matériels et méthodes Le composé 2- {3-[Bis-(3-amino-propyl)-amino]-propylamino}-N-ditetradecyl 30 carbamoyl methyl-acetamide (RPR209120) est synthétisé au laboratoire selon le protocole décrit dans le brevet US 6,171,612. Le composé RPR120535 (2-{3-[3-(3-Amino-propylamino)-propylamino]-propylamino}-N, N-dioctadecyl-acetamide), est synthétisé au laboratoire selon le protocole décrit dans l'article Byk et al. (1998, J. Med. Chem., 41, 224-235). Le RPR209120 et la DOSPA (GIBCO BRL) sont des lipopolyamines, préparées en liposome avec la DOPE. Le DMRIE (GIBCO BRL) est un ammonium quaternaire (1,2-dimyristyloxypropyl-3-dimethyl-hydroxy ethyl ammonium bromide), préparé en liposome avec du cholestérol (DMRIE-C). La dioleyl phosphatidyl ethanolamine (DOPE) a été achetée chez AVANTI POLAR LIPIDS. Préparation des liposomes cationiques 209120/DOPE Le lipide RPR209120 (2-{3-[Bis-(3-amino-propyl)-amino]-propylamino}-N- ditetradecyl carbamoyl methyl-acetamide), synthétisé au laboratoire selon le protocole décrit dans le brevet US 6,171,612 et la DOPE (dioleyl phosphatidyl éthanolamine) achetée chez AVANTI POLAR LIPIDS, sont dissous dans du chloroforme en quantité équimolaire dans un petit ballon. Le solvant organique est évaporé sous vide à 20°C en utilisant un évaporateur rotatif de type Heidolph de façon à former un film lipidique au fond du ballon. Le film est séché pendant 2h puis hydraté avec de l'eau pour préparation injectable (ppi) pendant 4h à 20°C puis une nuit à 4°C pour former des vésicules multilamellaires de grandes tailles. La suspension est soumise à une sonication (115V, 80W, 50-60Hz, appareil LABORATORY SUPPLIES) jusqu'à obtenir une suspension homogène de liposomes présentant un diamètre de 80-100 nm. Préparation des acides nucléiques Les siRNAs synthétiques sont achetés chez QIAGEN. Ils sont hybridés selon les recommandations du fabricant avant toute utilisation. Les siRNAs sont en solution dans le tampon fourni par le fabricant à une concentration de 100�M. Séquences du brin sens : Luc 5'CUUACGCUGAGUACUUCGA3' (ciblé vers la luciférase) : SEQ ID NO : 1. CTLE 5'UUCUCCGAACGUGUCACGU3' (aucune cible) : SEQ ID NO : 2. TNFalpha 5'GACAACCAACUAGUGGUGCTT3' (ciblé vers le TNFalpha de souris) : SEQ ID NO : 3. L'ADN plasmidique est le plasmide pSL301 (Invitrogen), qui ne comporte pas de 30 cassette d'expression eucaryotique. Il est produit chez E. coli et purifié sur des colonnes QIAGEN. Les oligonucléotides synthétiques sont achetés chez EUROGENTEC. Ils sont fournis en solution à 100�M. Leur séquence est telle qu'ils peuvent s'hybrider pour former une macromolécule de grande taille par répétition de leur motif (oligol: 5'ATGTACTTAGCTAGT3' (SEQ ID NO : 4), oligo2 : 5'TACATACTAGCTAAG3' (SEQ ID NO : 5)). Les macromolécules anioniques L'acide poly-L-glutamique (sel de sodium) ou APG est acheté chez SIGMA ALDRICH: (1) APG-60k, degré de polymérisation 371, poids moléculaire moyen 56000, (2) APG-4k, degré de polymérisation 28, poids moléculaire moyen 4300. L'acide alginique (sel de sodium) est acheté chez SIGMA ALDRICH. Les macromolécules anioniques sont préparées en solution dans l'eau à une 10 concentration de 5 mg/ml. Préparation des lipoplexes (complexes acide nucléique / lipide cationique et complexes macromolécule anionique / acide nucléique / lipide cationique) Les lipoplexes sont préparés en mélangeant volume à volume une suspension de liposomes cationiques ou de micelles cationiques (à la concentration appropriée dans du 15 NaCI 150mM) à une solution d'acides nucléiques (ADN plasmidique, siRNA) préparée également dans du NaCl 150mM. Le mélange se fait sous forte agitation. Lorsqu'un ADN plasmidique cargo ou une macromolécule anionique est ajouté à la formulation, ils sont mélangés avec les siRNAs dans du NaCl 150 mM avant le mélange volume à volume avec les liposomes cationiques ou les micelles cationiques. Les lipoplexes 20 préparés avec la LipofectAMINE ou le DMRIE-C sont préparés comme décrit ci-dessus mais le NaCl 150mM est remplacé par de l'OptiMEM (INVITROGEN). Détermination de la taille et du potentiel Zêta des complexes La taille et le potentiel Zêta des liposomes et des particules ont été déterminés à l'aide du Zetasizer 3000 (MALVERN). Les liposomes et lipoplexes sont préparés dans du 25 NaCl 150mM à une concentration finale en siRNA (pour les lipoplexes) de 700nM. Lignée cellulaire Une lignée de mélanome de souris (B16-FO, ATCC, CRL-6322) a été modifiée pour exprimer de manière constitutive un gène rapporteur, la luciférase de luciole (Luc+, PROMEGA) sous le contrôle du promoteur du virus SV40. Après électroporation des 30 cellules en présence du plasmide portant le gène luc+ et un gène de résistance à la généticine, les cellules sont sélectionnées pour leur résistance à la généticine, puis une lignée cellulaire clonale est obtenue par dilution limite des cellules résistantes et exprimant la luciférase. Les cellules sont maintenues en culture dans du DMEM contenant du Glutamax (FISHER BIOBLOCK), 10% sérum de veau foetal, de la streptomycine (100 �g/ml) et de la pénicilline (100 U/ml) à 37°C en présence de 5% de CO2. Transfection La veille, les cellules B16-Luc sont ensemencées en plaques 24-puits à la densité de 40 000 cellules par puits. Le jour même, les cellules sont rincées avec du DMEM puis mises en incubation dans le milieu de transfection. Le milieu de transfection contient les lipoplexes préparés comme indiqué ci-dessus et dilués au dixième dans du milieu de culture des cellules lorsque la transfection est réalisée en présence de sérum ou dans du DMEM lorsque la transfection est réalisée en absence de sérum. Dans ce dernier cas, 10% de sérum est ajouté au milieu de transfection 4h après le début de la transfection. Les cellules sont mises en incubation à 37°C en présence de 5% de CO2. 24h après le début de la transfection, le milieu de transfection est remplacé par du milieu de culture frais puis les cellules sont mises en incubation pour une période supplémentaire de 24h. Dosages de l'activité luciférase et des protéines A la fin de la transfection, les cellules sont rincées deux fois dans du PBS puis lysées avec 2001.11 de Cell Culture Lysis Reagent (PROMEGA). Après récupération du lysat et centrifugation pour éliminer les débris cellulaires, l'activité luciférase est mesurée sur le lysat après ajout du substrat (Luciferase Assay Substrate, PROMEGA) et lecture de la lumière émise à l'aide d'un lecteur de microplaque équipé pour la luminescence (WALLAC VICTOR, PERKIN ELMER). L'activité obtenue, exprimée en cps (coups par seconde) est normalisée par la concentration en protéines présentes dans le lysat et déterminée par un test au BCA (INTERCHIM). Exemple 2 : Méthodes d'évaluation des macromolécules anioniques Les tests cellulaires sont réalisés sur une lignée de cellules de souris qui expriment de façon continue une protéine � rapportrice �, c'est-à-dire dont l'activité est facile à mesurer avec précision et de manière reproductible. Il s'agit de la luciférase qui émet de la lumière, facilement mesurable, lorsqu'on lui fournit sa molécule substrat, la luciférine. Les cellules exprimant la luciférase sont mises en présence de différentes préparations contenant un siRNA capable d'inhiber spécifiquement l'expression de cette luciférase associée à un vecteur. La lumière émise par ces cellules 48h après le traitement est mesurée et comparée avec des cellules n'ayant subi aucun traitement. Les compositions comprenant le liposome cationique, l'acide nucléique et la macromolécule anionique sont préparées pour des concentrations allant de 3 à 8 nmoles de lipide cationique par .tg d'acide nucléique et de macromolécule anionique, la concentration finale utilisée en siRNA est de 20nM. Des compositions préparées dans les mêmes conditions mais contenant un siRNA contrôle (sans activité d'inhibition) sont testés en parallèle de chaque expérience afin d'observer l'activité non spécifique. Dans la majorité des cas présentés ci-dessous, ces compositions ne conduisent à aucune inhibition de l'activité luciférase. Exemple 3 : Identification de la macromolécule anionique Protocole 0,3 gg de siRNA spécifique de la luciférase sont mélangés avec 0,3 tg de différentes macromolécules anioniques (ADN, APG = acide polyglutamique, AA = acide alginique) puis associés au liposome cationique RPR209120/DOPE (4 nmoles de lipide cationique/�g de mélange (siRNA+ macromolécule anionique)), avant d'être placés au contact des cellules pendant 24h. L'activité luciférase est mesurée 48h après le traitement. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport à des cellules n'ayant reçu aucun traitement. Le traitement est réalisé soit dans le milieu naturel complet des cellules (+ sérum), soit en enlevant momentanément le sérum, source de protéines essentielles pour la croissance des cellules (- sérum). La seconde condition est souvent utilisée car elle permet d'éliminer l'interférence des protéines du sérum avec les préparations mais elle est très éloignée des conditions dans un organisme. La première condition est donc plus proche des conditions attendues dans un organisme. Résultats Les résultats sont présentés sur la figure 1. On constate que les formulations avec une macromolécule anionique sont aussi efficaces en présence de sérum qu'en absence de sérum alors que la formulation sans macromolécule anionique n'est efficace qu'en absence de sérum, ce qui justifie d'ajouter une macromolécule anionique à la formulation pour obtenir une formulation susceptible d'être efficace dans l'organisme. De plus, les deux types de macromolécules anioniques permettent une augmentation de l'extinction de gène équivalente entre eux. Cette extinction est spécifique car aucune extinction n'est obtenue quand le siRNA ciblé 20 vers la luciférase est remplacé par un siRNA contrôle, n'ayant aucune cible. Exemple 4 : Effet de la quantité de macromolécule anionique ajoutée Protocole 0,3 �g de siRNA spécifique de la luciférase sont mélangés avec différentes quantités d'acide polyglutamique (APG) c'est-à-dire 0,15, 0,3, 0,6 et 1,2 �g d'APG puis associés au liposome cationique RPR209120/DOPE (4 nmoles de lipide cationique/�g de mélange siRNA+ macromolécule anionique), avant d'être placés au contact des cellules pendant 24h. L'activité luciférase est mesurée 48h après le traitement. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport à des cellules n'ayant reçu aucun traitement. Résultats Les résultats, présentés sur la figure 2, montrent l'effet de la quantité de macromolécule ajoutée sur l'inhibition. On obtient sensiblement la même efficacité avec un rapport poids/poids siRNA/macromolécule de 1/0,5 à 1/2. Pour un rapport de 1/4, la diminution de l'inhibition peut être expliquée par la toxicité des formulations sur les cellules, qui comprennent 4 fois plus de lipides que dans le cas du rapport 1/1. Exemple 5 : Effet de la taille de la macromolécule anionique 0,3 �g de siRNA spécifique de la luciférase sont mélangés avec 0,3 �g de différents macromolécules anioniques (ADN, APG-60k (degré polymérisation 371, poids moléculaire moyen 56000), APG-4k (degré polymérisation 28, poids moléculaire moyen 4300) puis associés au liposome cationique RPR209120/DOPE (4 nmoles de lipide cationique/�g de mélange siRNA+ macromolécule anionique), avant d'être placés au contact des cellules pendant 24h. L'activité luciférase est mesurée 48h après le traitement. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport à des cellules n'ayant reçu aucun traitement. Résultats Les résultats, présentés sur la figure 3, montrent que le pourcentage d'inhibition est indépendant du degré de polymérisation de la macromolécule anionique. Exemple 6 : Effet du mode de préparation du vecteur lipidique Protocole 0,3 �g de siRNA spécifique de la luciférase sont mélangés avec 0,3 �g de différentes macromolécules anioniques (ADN, APG, AA) puis associés au lipide cationique RPR120535 préparé en liposome (par association avec un lipide neutre comme la DOPE) ou en micelles (4 nmoles de lipide cationique/�g de mélange siRNA+ macromolécule anionique), avant d'être placés au contact des cellules pendant 24h. L'activité luciférase est mesurée 48h après le traitement. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport à des cellules n'ayant reçu aucun traitement. Résultats Les résultats, présentés sur la figure 4, montrent que l'ajout de macromolécule anionique dans la formulation permet d'obtenir une bonne efficacité d'inhibition de la luciférase, que le lipide cationique soit préparé sous forme de liposome ou sous forme de micelles. Exemple 7 : Effet du type de lipide cationique Protocole 0,3 tg de siRNA spécifique de la luciférase sont mélangés avec 0,3 �g de différentes macromolécules anioniques (ADN, APG, AA) puis associés à différents lipides cationiques aux conditions optimales de transfection pour chacun (RPR209120/DOPE, 4 nmoles / gg de mélange siRNA + macromolécule anionique ; LipofectAmine et DMRIE-C, 5pi / �g de mélange (siRNA+ macromolécule anionique) avant d'être placés au contact des cellules pendant 24h. L'activité luciférase est mesurée 48h après le traitement. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport à des cellules n'ayant reçu aucun traitement. Résultats Les résultats, présentés sur la figure 5, montrent que l'addition d'une macromolécule anionique pour augmenter l'efficacité d'inhibition de l'expression d'un gène est applicable à d'autres lipides cationiques que le RPR209120. La Lipofectamine n'est pas efficace en présence de sérum, phénomène déjà démontré dans la littérature et bien connu. Le DMRIE est moins efficace que le RPR209120. Exemple 8 : Effet de la macromolécule anionique sur un modèle animal Protocole Des souris Swiss femelles âgées de 5 semaines sont traitées par une injection intra- péritonéale de Lipopolysaccharides (LPS d'E coli, Sigma Aldrich) en NaCl 150mM selon une dose de 4mg/kg. Un prélèvement du sang dans le sinus rétro-orbital est réalisé 1h30 plus tard. Le dosage du TNFalpha présent dans le sang est réalisé sur 100111 de sérum à l'aide du kit de dosage DuoSet Mouse TNFalpha (R&D Systems). 24h avant le traitement par les LPS, les souris reçoivent en intrapéritonéale 51.tg de siRNAs formulés en lipoplexes avec le liposome cationique RPR209120/DOPE (6 nmoles de lipide cationique / �g de (siRNA+ macromolécule anionique)). Il est soit formulé seul, soit après pré-association avec l'acide polyglutamique (PGLA) ou l'acide alginique (AA) avant l'association avec le liposome cationique. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition par rapport à des souris traitées avec la même formulation contenant un siRNA contrôle. Résultats La figure 6 montre les taux d'inhibition obtenus. Les résultats montrent qu'un prétraitement des souris par des siRNA dirigés contre le TNFalpha permet de diminuer ce taux de TNFalpha dans le sang. La diminution observée est améliorée par la présence de la macromolécule anionique dans la formulation. Exemple 9 : Conclusion L'ajout d'une macromolécule anionique à un siRNA avant formulation en lipoplexes avec un lipide cationique permet d'en améliorer l'efficacité d'inhibition de gène de manière significative, à la fois sur des cellules en culture mais également chez l'animal. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES PATNAIK et al., PEI-alginate nanocomposites as efficient in vitro gene transfection agents ; Journal of Control Release, 2006, 114(3):398-409 KHOURY et al., Efficient new cationic liposome formulation for systemic delivery of small interfering RNA silencing tumor necrosis factor alpha in experimental arthritis. Arthritis Rheum. 2006 Jun;54(6):1867-77. WU et al; Let me count the ways: mechanisms of gene regulation by miRNAs and siRNAs. Mol Cell. 2008 Jan 18;29(1):1-7. Review VAN OMMEN et al; The therapeutic potential of antisense-mediated exon skippingCurr Opin Mol Ther. 2008 Apr;10(2):140-9. Review KAUR et ROY, Therapeutic applications of aptamers, Expert Opin Investig Drugs. 2008 Jan;17(1):43-60. Review. Demande internationale WO 97;18185 telle que publiée le 22 mai 1997 (Rhone-Poulenc 15 Rorer). Brevet américain US 6,171,612 délivré le 9 janvier 2001 (Aventis Pharma). 23 REVENDICATIONS1. Composition comprenant : (1) une macromolécule anionique à l'exception des acides nucléiques, (2) un lipide cationique, et (3) un acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides. 2. Composition selon la revendication 1, dans laquelle la macromolécule anionique est choisie dans le groupe constitué par les polysaccharides anioniques et les polypeptides anioniques. 3. Composition selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le polysaccharide anionique est l'acide alginique. 4. Composition selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le polypeptide anionique est l'acide polyglutamique. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que la macromolécule anionique a un poids moléculaire moyen compris entre 1000 et 1000000 Da, de préférence compris entre 1000 et 100000 Da, et encore plus préférentiellement compris entre 4300 et 56000 Da. 6. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le lipide cationique est choisi parmi les lipopolyamines, telles que la 2-{3-[Bis-(3- amino-propyl)-amino]-propylamino}-N-ditetradecyl carbamoyl methyl-acetamide, la 2-{3-[3-(3-Amino-propylamino)-propylamino]-propylamino } -N,N-dioctadecyl-acetamide ou le 2,3-dioleoyloxy- N-[2(sperminecarboxamido)ethyl]-N,N-dimethyl- 1 -propane- aminium-trifluoracetate, le dioctadécylamidoglycyl spermine, la 5-carboxyspermylamide de la palmitoylphosphatidylethanolamine, les ammoniums quartenaires tels que le bromure de 1,2-dimyristyloxypropyl-3-diméthyl-hydroxy éthyl ammonium, N-[1-(2,3-dioleyloxy) propyl]-N,N,N-trimethylammonium chloride, le 1,2-_dimyristoyl-_3-_trimethylammonium propane, 1,2-dioleoyl-3-_trimethylammonium propane, la dimethyldioctadecylammonium bromide, ou la dioleoyloxypropyldimethylhydroxyethylammonium bromide, et les lipides comportant des têtes cationiques de type guanidine ou imidazole. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le lipide cationique est formulé soit sous forme de micelles, soit sous forme de liposomes par association avec un lipide neutre tel que la dioleyl phosphatidyl éthanolamine, le Cholestérol, ou le (F8E11)(C16)OPE. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que l'acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides est un acide nucléique capable de moduler une fonction protéique, tel qu'un oligonucléotide antisens, un oligonucléotide pour le saut d'exon ou un ARN interférant et/ou une forme modifiée d'un tel acide nucléique, telle que la forme morpholino, phosphorothioate, phosphoroamidate ou 2' 0-méthyl. 9. Composition selon la revendication 8, dans laquelle l'acide nucléique capable de moduler une fonction protéique est un ARN interférant, de préférence un microARN ou un petit ARN interférant. 10. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle la macromolécule anionique est l'acide polyglutamique, le lipide cationique est le 2- {3- [Bis-(3-amino-propyl)-amino]-propylamino}-N-ditetradecyl carbamoyl methylacetamide et l'acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides est un petit ARN interférant. 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle la macromolécule anionique est l'acide alginique, le lipide cationique est le 2-{3-[Bis-(3-amino-propyl)-amino]-propylamino}-N-ditetradecyl carbamoyl methyl-acetamide et l'acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides est un petit ARN interférant. 12. Procédé pour transférer in vitro ou ex vivo un acide nucléique dans des cellules, ledit procédé comprenant la mise en contact desdites cellules avec une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11. 13. Composition pharmaceutique comprenant une composition telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 14. Composition vecteur comprenant : (1) une macromolécule anionique à l'exception des acides nucléiques, et (2) un lipide cationique, pour utilisation en tant que vecteur pharmaceutiquement acceptable d'un acide nucléique de taille inférieure ou égale à 200 nucléotides. 15. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 pour son utilisation en tant que médicament. 16. Composition selon la revendication 15, pour son utilisation en tant que médicament destiné au traitement d'une pathologie associée à un dysfonctionnement d'une fonction protéique. 17. Composition selon la revendication 16, dans laquelle la pathologie est choisie parmi la polyarthrite, les rhumatismes, les cancers, l'hépatite, le lupus érythémateux, la fibrose cardiaque ou hépatique, la Chorée de Huntington, l'achondroplasie, la sclérose latérale amyotrophique ou la maladie de Lou Gehrig, la myopathie de Duchenne et la polymyosite, et la maladie d'Alzheimer. 18. Procédé de préparation d'une composition telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, comprenant : a) une étape de mise en contact de la macromolécule anionique avec l'acide nucléique pour la formation d'un mélange, b) une étape de mise en contact du lipide cationique avec le mélange obtenu à l'étape a), pour la préparation de la composition.