Brevet FR2941960A1 — publié le 20100813

TITRE DE L'INVENTION Procédés pour tester la régulation thermique d'un thermocycleur pour PCR, et moyens pour leur mise en oeuvre DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention se rapporte au domaine de la calibration thermique des appareils thermocycleurs pour la réalisation de réactions PCR, par des moyens physiques ou des moyens biologiques. to ART ANTE RIEUR La technique d'amplification d'acides nucléiques par réaction en chaîne à la polymérase (PCR, pour � Polymerase Chain Reaction �) est un procédé dont l'utilisation est quasi-incontournable dans le domaine de la génétique moléculaire, y compris dans les domaines aussi divers que le diagnostic médical, l'analyse d'ADN 15 dans le domaine médico-légal, la détection de micro-organismes pathogènes pour l'homme, l'animal ou les plantes, la recherche en biologie moléculaire, etc. La réaction PCR consiste en une réaction enzymatique in vitro thermocontrôlée d'amplification du nombre de copies d'un acide nucléique présent initialement dans un échantillon. Comme cela est connu, la réaction PCR met en 20 oeuvre un mélange réactionnel comprenant des acides nucléiques amorces et une ADN polymérase thermorésistante, ledit mélange réactionnel étant soumis à des cycles réactionnels multi-étapes thermo-régulés. Classiquement, un cycle de réaction PCR comprend successivement (i) une étape de dénaturation de molécules d'ADN double-brin réalisée à une température spécifique, proche de 95°C, (ii) une 25 étape d'hybridation des amorces nucléotidiques réalisée à une température spécifique, proche de 60°C, puis (iii) une étape d'élongation réalisée à une température spécifique, proche de 72°C. Les réactions PCR sont réalisées dans des appareils spécifiquement conçus, les thermocycleurs. Les thermocycleurs sont équipés de moyens de 30 régulation précise de la température du mélange réactionnel au cours du temps, à chaque étape (i), (ii) et (ii) ci-dessus, pour chaque cycle d'amplification PCR compris dans le test en cours de réalisation. L'un des éléments principaux d'un thermocycleur consiste en un bloc thermique, constitué de plusieurs éléments thermiquement régulés indépendamment les uns des autres, comprenant une 35 pluralité d'emplacements ou � puits � destinés à recevoir des tubes de mélange réactionnel. Comme cela est connu, un contrôle d'une très grande précision de la température du milieu réactionnel pendant la totalité de la durée d'une réaction PCR est essentielle pour l'obtention de résultats fiables et reproductibles. Par exemple, une dérive négative de température, par rapport à la température sélectionnée, pendant l'étape de dénaturation peut entraîner une dénaturation incomplète de l'ADN et/ou entraîner une dégradation au moins partielle de l'ADN polymérase thermorésistante. Egalement, une dérive négative de température pendant l'étape d'hybridation peut entraîner un mésappariement, y compris une hybridation non- spécifique, des amorces nucléotidiques sur l'ADN à amplifier, ce qui est susceptible d'entraîner des résultats faussement positifs. Inversement, une dérive positive de température au moment de l'étape d'élongation peut entrainer une absence d'appariement des amorces avec l'ADN cible, ce qui est susceptible de générer des résultats faussement négatifs. De plus, une dérive positive ou négative de température au moment de l'étape d'élongation peut entraîner une réduction de l'activité catalytique de l'ADN polymérase de nature à provoquer une réduction du rendement de la réaction PCR. Comme cela est illustré ci-dessus, la reproductibilité des conditions thermiques dans lesquelles sont effectuées les réactions PCR est essentielle pour la signification biologique des résultats des tests réalisés, et la possibilité de comparer les résultats de tests distincts. De nombreux auteurs ont observé que la régulation thermique des thermocycleurs PCR, aussi précis soient-ils, est suffisamment variable pour entraîner un défaut de reproductibilité des résultats obtenus : (i) pour un même test, sur des thermocycleurs distincts, y compris sur des thermocycleurs distincts du même modèle commercial, (ii) entre des tests réalisés de manière séparée dans le temps, sur un même thermocycleur, et même (iii) entre des tests réalisés simultanément dans le temps dans le même 30 thermocycleur, dans des tubes réactionnels disposés de manière géographiquement éloignée à la surface du bloc thermique. Cette hétérogénéité dans la régulation thermique précise des mélanges réactionnels utilisés au cours de la réaction PCR, qui est susceptible d'entraîner l'obtention de résultats faussement positifs ou faussement négatifs, selon les types de dérives thermiques, est préoccupante notamment dans le domaine de la réalisation de tests pour le diagnostic médical de maladies. Afin de surmonter ces inconvénients techniques, des dispositifs de mesure de la régulation thermique des thermocycleurs PCR ont été décrits, capables de détecter des variabilités locales de température dans les puits de réception des tubes réactionnels du bloc thermique. La possibilité de détecter cette variabilité thermique dans des localisations données d'un bloc thermique rend possible une opération de contrôle fin de la régulation thermique du thermocycleur, ou opération de � calibrage � thermique du thermocycleur. io Les opérations de calibrage thermique des thermocycleurs deviennent dans tous les cas requises pour les laboratoires utilisateurs de thermocycleurs qui sont demandeurs d'accréditations officielles délivrées par des organismes d'Etat. Un type de dispositif de mesure de la régulation thermique de thermocycleurs PCR connu est le système TAS� commercialisé par la société 15 Quanta Biotech. Ce système consiste en un support plan, de surface similaire à celle d'un bloc thermique de thermocycleur, sur lequel peuvent être fixées, selon le choix de l'utilisateur, une ou plusieurs sondes thermiques. Le support équipé de la ou des sondes est posé sur la partie supérieure du bloc thermique, la ou les sondes étant alors introduites dans les puits correspondants du bloc thermique. Puis, le 20 thermocycleur est mis en route selon un programme prédéterminé, notamment pour les valeurs de consigne de température aux différentes étapes d'un cycle d'amplification et pour les valeurs de durée de montée ou de descente en température jusqu'aux valeurs de consigne. Simultanément, le signal généré par chacune des sondes thermiques du dispositif TAS� est transmis à une unité 25 électronique qui enregistre l'évolution des valeurs de température au cours du temps, dans chaque puits du bloc thermique dans lequel est introduit une sonde. Les résultats de mesure permettent de repérer les défauts de régulation thermique du thermocycleur testé et (i) soit simplement prendre ces défauts en considération lors de l'exécution ultérieure de réactions PCR, (ii) soit de procéder à un réglage fin 30 du système de régulation thermique du thermocycleur, c'est-à-dire de procéder à un � calibrage � de celui-ci. Un autre système de mesure très similaire est commercialisé sous les noms DRIFTCON� et DRIFTCON� RF par la société éponyme. Ce système diffère du système précédent notamment par une transmission des données générées par les sondes thermiques par voie hertzienne 35 et non par voie filaire. Un autre système de mesure, basé sur le même principe que celui décrit ci-dessus, est constitué d'une pluralité de sondes thermiques qui peuvent être introduites dans les puits d'un microplaque d'essai d'un type adapté au thermocycleur testé. La microplaque d'essai équipée d'une ou plusieurs sondes thermiques est placée sur le bloc thermique du thermocycleur et l'appareil est mis en fonctionnement selon des cycles prédéfinis par l'utilisateur. Les données de température générées par les sondes sont ensuite enregistrées puis analysées. Un tel système de mesure est par exemple commercialisé sous le nom CYCLERtestO par la société Anachem. On a également décrit un système d'évaluation de la performance des thermocycleurs pour PCR comprenant une pluralité de tubes contenant un micro-volume d'eau dans lesquels sont introduites des sondes thermiques reliées à un moyen d'acquisition de données (Kim et al., 2008, BioTechniques , Vol. 44 (n°4) : 495-505). Au moins certains des systèmes de mesure connus paraissent satisfaisants pour pallier l'existence de variabilités thermiques des thermocycleurs par un calibrage. Néanmoins, il existe toujours un besoin pour des systèmes de mesure de la régulation thermique de thermocycleurs PCR, alternatifs ou améliorés par rapport 20 aux systèmes connus. DESCRIPTION DES FIGURES La Figure 1 est un schéma d'un mode de réalisation particulier d'un capteur de mesure de température utilisé selon l'invention. La Figure 1A représente le 25 capteur et la Figure 1B illustre la passage des moyens de liaison (15) vers l'extérieur du capteur. La Figure 2 est un schéma d'une variété de configurations de positionnement des capteurs de mesure sur un bloc thermique de thermocycleur PCR conformément à diverses prescriptions, respectivement . 30 - figure 2A : issue de la bibliographie (Schoder et aI, 2003 et 2005), - figure 2B : issue d'un rapport d'analyse réalisés par la société Driftcon / Genotronics, - figure 2C : issue d'une publication interne à l'INRA (Hachet et al, 2005), - figure 2D : issue d'un rapport d'analyse réalisés par la société Applied Biosystems, 35 - figure 2E : issue de la norme ISO n° XP CEN ISO/TS 20836 2005, - figure 2F : issue de l'observation du système commercialié par 1a société Aviso - figure 2G : issue d'une procédure interne antérieure non confidentielle mais non publiée, - figure 2H : Issue de recommandations du Service Après Vente de la société 5 Thermo Electro Corporation La Figure 3 est un schéma d'un mode de réalisation du positionnement des capteurs de mesure sur un bloc thermique de thermocycleur pour PCR La Figure 4 est un schéma d'un système de mesure de la régulation d'un bloc thermique de thermocycleur. 10 Les Figures 5A, 5B et 5C illustrent les profils caractéristiques des cinétiques de température pour les étapes de dénaturation, d'hybridation et d'élongation. Les figures 5A1, 5A2 et 5A3 illustrent les profils des cinétiques de températures dans un mode de régulation thermique adapté du thermocycleur. Les figures 5B1, 5B2 et 5B3 illustrent les profils des cinétiques de températures dans un mode de régulation 15 thermique du thermocycleur comportant des excès thermique (c DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION II est fourni selon l'invention un procédé pour tester la régulation d'un bloc 25 thermique d'appareil thermocycleur pour PCR, dont les caractéristiques détaillées sont spécifiées plus loin dans la présente description. Le demandeur a observé qu'avec les systèmes connus de mesure de régulation thermique de thermocycleurs PCR, du type comprenant des sondes introduites dans les puits du bloc thermique ou d'une microplaque d'essai, une 30 variabilité dans la régulation du bloc thermique pouvait être efficacement détectée. Toutefois, les variabilités thermiques détectées avec ce type de dispositifs connus reflétaient peu les variations thermiques réelles subies par les mélanges réactionnels. D'une part, il a été observé par le demandeur que ces dispositifs mesuraient des valeurs de température du bloc thermique lui-même et non celles de 35 mélanges réactionnels. D'autre part, le volume important de ces dispositifs interdisaient la fermeture du capot du thermocycleur, ce qui entraînait des artéfacts de mesure additionnels de la température, ces artéfacts de mesure additionnels étant très importants lorsque le thermocycleur testé était équipé d'un capot chauffant. Le demandeur a également observé qu'avec les systèmes connus à tubes du type de ceux décrits par Kim et al. (2008, voir Supra), le nombre et la disposition des capteurs de température dans le bloc thermique ne permettait pas de détecter les variabilités thermiques avec suffisamment de précision. En outre, de tels systèmes présentaient l'inconvénient d'être conçus pour un type spécifique de bloc thermique, ce qui signifie qu'autant de types de système que de types de blocs thermiques étaient nécessaires pour procéder au calibrage d'une variété d'appareils. Les inconvénients ci-dessus des systèmes connus ont été résolus selon l'invention. La présente invention a pour objet un procédé pour tester la régulation d'un bloc thermique de thermocycleur pour PCR, ledit bloc thermique comprenant une pluralité d'emplacements pour tubes de mélange réactionnel et une pluralité d'éléments de régulation thermiques, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) disposer un ensemble de capteurs de mesure de température dans des emplacements pour tube de mélange réactionnel choisis dans ledit bloc thermique, lesdits capteurs de mesure de température comprenant : (i) un tube réactionnel adapté au type de bloc thermique testé, (ii) un volume choisi de liquide emplissant au moins partiellement ledit tube réactionnel (iii) une sonde thermique au moins partiellement immergée dans ledit liquide, et (iv) au moins un moyen de liaison de ladite sonde thermique à un moyen de 30 réception d'un signal généré par ladite sonde thermique, lesdits emplacements dans lesquels sont disposés les capteurs de mesure de température étant répartis sur la surface dudit bloc thermique de manière qu'au moins deux capteurs de mesure de température sont disposés dans chacun des éléments thermiques compris dans ledit bloc thermique, et b) démarrer le thermocycleur, dans des conditions normales d'utilisation, pour au moins un cycle programmé avec des valeurs de consigne de température pour une réaction PCR, et c) simultanément à l'étape b), mesurer les valeurs de température avec chacun 5 des capteurs de mesure, à une pluralité d'instants donnés. Selon la taille du bloc thermique du thermocycleur à tester, ledit bloc thermique est couramment constitué de deux à huit éléments de régulation thermique contrôlés indépendamment les uns des autres. Le demandeur a montré que le calibrage des différents éléments de régulation thermique, au sein d'un 10 même appareil thermocycleur, était imprécis, ce qui générait une variabilité des températures appliquées aux mélanges réactionnels, selon l'élément de régulation thermique dans les puits duquel étaient disposés les tubes réactionnels. C'est la raison pour laquelle, afin de surmonter cet inconvénient, on dispose, selon le procédé de l'invention, au moins deux capteurs de mesure de température 15 dans les puits de chacun des éléments de régulation thermique constitutifs du bloc thermique du thermocycleur testé, ce qui permet l'obtention d'une mesure plus fiable et reproductible de l'hétérogénéité de régulation thermique dont est susceptible d'être affecté le thermocycleur. Par � emplacements pour tubes de mélange réactionnel �, on entend 20 essentiellement, sinon exclusivement, les emplacements moulés en forme de puits pratiqués dans la structure d'un bloc thermique d'un thermocycleur pour PCR, destinés à recevoir les tubes contenant le mélange réactionnel pour réaliser une réaction PCR, lesdits tubes ayant une géométrie et un volume spécialement adaptés auxdits puits ou � emplacements �. 25 Par �capteur de mesure � de température, on entend un capteur qui possède la combinaison de caractéristiques définies ci-dessus. En référence à la figure 1, qui représente un mode de réalisation d'un capteur thermique, ledit capteur thermique comprend un tube réactionnel (1) comprenant un corps (11) et un couvercle (12). Les géométries combinées du corps (11) et du couvercle (12) 30 permettent leur emboîtement l'un dans l'autre. Lorsque le corps (11) et le couvercle (12) sont emboîtés, le volume intérieur du tube réactionnel (1) est isolé de l'atmosphère extérieure, la jonction étant étanche aux liquides et aux gaz. Le tube réactionnel (1) comprend un volume de liquide (13), dans lequel est au moins partiellement immergée une sonde thermique (14), la sonde thermique (14) étant prolongée par un moyen de liaison (15) à un moyen de réception du signal susceptible d'être généré par la sonde thermique (14), ,o, représenté sur la figure 1. Par � bloc thermique �, on entend selon l'invention le moyen chauffant d'un thermocycleur PCR comprenant les puits dans lesquels sont placés les tubes contenant le mélange réactionnel pour réaliser les réactions PCR. En général, le bloc thermique consiste en un moyen chauffant par effet Peltier. Selon les modes de réalisation, les blocs thermiques peuvent comprendre 24, 96 ou 384 puits destinés à recevoir les tubes de ménage réactionnel pour PCR. Par � élément de régulation thermique �, on entend selon l'invention l'un quelconque des éléments chauffants, en général par effet Peltier, contenus dans un bloc thermiques. Le bloc thermique d'un thermocycleur pour PCR comprend dans la majorité des cas une pluralité d'éléments de régulation thermique. En général, chaque élément de régulation thermique est régulé de manière indépendante de tous les autres. Un bloc thermique comprend couramment de deux à huit éléments de régulation thermique. Une grande partie des thermocycleurs sont équipés d'un bloc thermique comprenant 4, 6 ou 8 éléments de régulation thermique indépendants. A l'étape b), on entend par � conditions normales d'utilisation �, les conditions d'utilisation pour lesquelles ledit thermocycleur a été conçu par le constructeur. Plus précisément, les conditions normales d'utilisation englobent une utilisation du thermocycleur � capot fermé �, c'est-à-dire dans les conditions de régulation et d'isolation thermique prévues par le constructeur, en évitant tout artéfact dû aux déperditions thermiques, qui sont observés avec les systèmes connus qui sont conçus pour être utilisés avec le thermocycleur en conditions � capot ouvert �. Comme cela sera illustré en détail ultérieurement dans la description, certaines caractéristiques avantageuses des capteurs de mesure de l'invention permettent de tester tout type d'appareil thermocycleur, y compris les appareils thermocycleurs équipés de moyens automatisés de placement des tubes de mélange réactionnel au contact du bloc thermique et dans lesquels le bloc thermique est inaccessible à l'utilisateur. A l'étape b), on met en fonctionnement le thermocycleur pour au moins un cycle de réaction PCR, à savoir pour un cycle normalement prévu pour réaliser successivement (i) une étape de dénaturation de l'ADN, (ii) une étape d'hybridation d'une ou plusieurs amorces nucléotidiques et (iii) une étape d'élongation des amorces préalablement hybridées. Classiquement, les valeurs de consigne de température pour les étapes (i), (ii) et (iii) sont respectivement de 95°C, 60°C et 72°C. Une variété d'autres valeurs de consigne peuvent être choisies pour chacune des étapes (i), (ii) et (iii), du fait que l'objectif essentiel du procédé est de déterminer d'éventuelles différences entre les valeurs de consigne de température qui ont été initialement choisies pour programmer l'appareil thermocycleur et les valeurs réelles de température mesurées par les capteurs de mesure. Notamment les valeurs de consigne de température peuvent être fixées dans la programmation préalable du thermocycleur en fonction des températures que l'utilisateur envisage d'utiliser par la suite pour la réalisation effective d'un ensemble de cycles pour une réaction PCR. Comme le comprend aisément l'homme du métier, le nombre de cycles de réaction PCR programmés ou réalisés, à l'étape b) du procédé n'est pas déterminant. Simplement, le nombre de données de mesure de température croît avec le nombre de cycles de réaction PCR réalisés à l'étape b). Dans les modes de réalisation particuliers du procédé dans lesquels on réalise une pluralité de cycles programmés pour une réaction PCR, on peut alors calculer, pour chaque instant caractéristique d'un cycle, et pour la totalité des cycles réalisés, une moyenne des valeurs de température mesurées par chacun des capteurs de mesure, ce qui est susceptible d'accroître la précision du test de régulation du bloc thermique. Afin d'obtenir des résultats de test très fiables et reproductibles, on réalise à l'étape b) au moins trois cycles, mieux au moins cinq cycles programmés pour une réaction PCR. Pour l'obtention d'un résultat de test de très haute fiabilité et reproductibilité, on réalise par exemple au moins dix cycles programmés pour une réaction PCR. A l'étape c), on entend, par � pluralité d'instants donnés �, que des valeurs de mesure de température sont générées par chacun des capteurs de mesure à au moins trois instants importants de la durée d'exécution d'un cycle, respectivement (i) durant l'étape de dénaturation de l'ADN, (ii) durant l'étape d'hybridation des amorces nucléotidiques et (iii) durant l'étape d'élongation des amorces. Pour chacune des mesures précitées, l'instant de mesure est préférentiellement choisi au moment de l'étape dans lequel la valeur de température est normalement stabilisée, à savoir préférentiellement à la mi-durée de chacune de ces étapes. En général, on mesure la température ,à l'étape b) du procédé, à plus de trois instants donnés. En particulier, il est avantageux de réaliser des mesures de températures également pendant les phases de transition entre chacune des trois étapes précitées, afin de vérifier la régulation de chaque élément thermique du bloc thermique du thermocycleur également pendant les phase de variation programmée de la température, qui permet un test de la fiabilité du thermocycleur à la fois du point de vue du respect des valeurs de consigne de température et du respect des valeurs de consigne de point de départ et d'arrivée dans le temps des variations programmées de température, ainsi que du respect de la durée desdites variations programmées. Dans la pratique, on réalise, à l'étape c) du procédé, et pour chacun des capteurs, au moins une centaine de mesures de la température pendant la durée d'un cycle de réaction PCR, de sorte que la � pluralité d'instants donnés � est en général au moins égal à cent. En fait, la cadence des mesures de la température pour les capteurs est usuellement en fréquence. A l'étape c) du procédé, on réalise en général, avec chacun des capteurs une mesure des valeurs de température à une fréquence d'au moins10 mesures par secondes, avantageusement d'au moins 20 mesures par seconde et préférentiellement d'au moins 40 mesures par seconde. Préférentiellement, on dispose les capteurs de mesure, dans un même élément de régulation thermique, de telle manière qu'au moins un premier capteur de mesure soit positionné dans un puits localisé sur l'un des bords dudit élément de régulation thermique et qu'au moins un capteur de mesure soit positionné dans un puits localisé dans la partie centrale dudit élément de régulation thermique. La demanderesse a montré que, dans les dispositifs connus de mesure de la régulation des thermocycleurs, la répartition géographique des sondes thermiques sur le bloc thermique n'était pas adaptée à la réalisation de mesures dont les résultats rendent fidèlement compte de l'éventuelle hétérogénéité de la régulation thermique. La demanderesse a également montré que les prescriptions des normes en vigueur, telle que le norme ISO n° XP CEN ISO/TS 20836 2005 définissant les conditions d'essais de performance de thermocycleurs, et au moins en qui concerne les règles de localisation de sondes thermiques de test sur les blocs thermiques ne permettaient pas l'obtention de résultats reflétant fidèlement et/ou exhaustivement la régulation thermique réelle du bloc thermique testé. Cette norme introduit la notion � d'espace critique � mais de définit pas de consignes précises de localisation des sondes thermiques sur le bloc thermique. Lorsque les espaces critiques ne sont pas connus, la norme prescrit de répartir les sondes thermiques de manière aléatoire dans les puits du bloc thermique à tester. La demanderesse a aussi montré que, globalement, les puits localisés à la périphérie des blocs thermiques sont affectés d'une régulation thermique défectueuse et constituaient de ce fait un � espace critique �. On a en particulier observé selon l'invention qu'il existe un gradient de baisse des valeurs de température des mélanges réactionnels, du centre vers la périphérie des blocs thermiques. Les puits localisés dans chacun des coins du bloc thermique sont ceux pour lesquels il a été observé les défauts de régulation thermique les plus importants. On a aussi montré selon l'invention que des hétérogénéités de régulation thermique existent également dans la partie centrale du bloc thermique, du fait que la majorité des blocs thermiques comprennent une pluralité d'éléments thermiquement régulés de manière indépendante, en général de 2 à 8 éléments de régulation thermique indépendants, pour chacun desquels existe aussi un � espace critique �, en particulier pour les puits localisés à la périphérie desdits éléments de régulation thermique. En effet, les puits localisés à la périphérie d'un élément de régulation thermique donné d'un bloc thermique peut être en fait localisé dans la partie centrale dudit bloc thermique. On précise que, selon le modèle de thermocycleur considéré, la géométrie et le positionnement de chacun des éléments de régulation thermique constitutifs du bloc thermique diffèrent, de sorte qu'un schéma de disposition aléatoire de sondes thermiques sur un premier bloc thermique possédant un nombre donné d'éléments de régulation thermique a une faible probabilité de pouvoir être transposé avec succès pour tester un autre thermocycleur dont le bloc thermique comprend le même nombre d'éléments de régulation thermique. La demanderesse a montré que les prescriptions de positionnement des sondes sur le bloc thermique d'un thermocycleur à tester, y compris les prescriptions contenues dans la norme XP CEN ISO/TS 20836 2005 précitée, conduisait à un positionnement des sondes inadapté à l'obtention de résultats reflétant fidèlement la régulation du bloc thermique testé. En utilisant les règles de positionnement de sondes prescrites par la norme ISO précitée, avec une variété de thermocycleurs équipé d'un bloc thermique de 96 puits, il s'est avéré que plusieurs des configurations prescrites pour la localisation des sondes thermiques ne permettaient pas de contrôler la totalité des éléments thermiques de régulation du bloc thermique, tout particulièrement pour les blocs thermiques comprenant 8 éléments de régulation thermique. La demanderesse a aussi montré que d'autres configurations de positionnement des sondes prescrites par la norme ne permettait pas le contrôle d'un ou plusieurs des espaces critiques présents dans le bloc thermique. Les résultats d'essais réalisés par la demanderesse selon les règles contenues par la norme XP CEN ISO/TS 20836 2005 sont représentés sur la figure 2. La figure 2 représente des schémas de positionnement de sondes sur des blocs thermiques équipant une variété de modèles de thermocycleurs testés. Les carrés noirs illustrent la localisation des sondes thermiques. Les cercles illustrent, pour chaque thermocycleur testé, les zones de régulation thermique non contrôlées dans le test. A partir des résultats obtenus selon les connaissances antérieures, la demanderesse a défini, après de longues recherches, des configurations de positionnement des capteurs de mesure de température permettant de tester de manière fiable, reproductible et exhaustive la régulation thermique du bloc thermique, quel que soit le type ou le modèle de thermocycleur testé. La configuration préférentielle de positionnement des capteurs de mesure selon l'invention est illustrée dans la figure 3. Dans la configuration illustrée dans la figure 3, sont positionnés au moins deux capteurs de mesure de température par élément de régulation thermique constitutif du bloc thermique testé, et au moins un capteur de mesure de température dans chacune des zones d'espace critique. La figure 3 illustre la configuration préférentielle de positionnement des capteurs de mesure pour des blocs thermiques comprenant 96 puits. Sur la base des règles précitées, et le cas échéant de l'illustration de la figure 3, l'homme du métier peut aisément déterminer une ou plusieurs configurations optimales de positionnement des capteurs de mesure de température pour tout type de bloc thermique, y compris pour des blocs thermiques de 24, 96 ou 384 puits. La configuration préférentielle de positionnement des capteurs de mesure de température constitue un autre objet de la présente invention. Dans les schémas des blocs de 96 puits illustrés sur la figure 3, chaque colonne comprend 8 puits, qui sont numérotés par convention respectivement A, B, C, D, E, F, G et H, dans le sens allant du haut vers le bas de la figure. De plus, chaque rangée comprend 12 puits, qui sont numérotés par convention respectivement 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 et 12, dans le sens allant de la gauche vers la droite de la figure. La configuration préférentielle de positionnement des capteurs de mesure de température selon l'invention sur un bloc thermique de 96 puits consiste donc en la configuration suivante, décrite par les coordonnées de positionnement des capteurs de mesure de température :: 1A, 1H, 3C, 3F, 5A, 5E, 5H, 6C, 8B, 8E, 8G, 9A, 10F, 11C, 12A et 12H, illustrée à la figure 3. Dans certains modes de réalisation du procédé, on dispose au moins trois, quatre ou même cinq capteurs de mesure par élément de régulation thermique constitutif du bloc thermique du thermocycleur testé. Dans certains modes de réalisation avantageux, qui englobent la configuration préférentielle décrite ci-dessus, on dispose, à l'étape a) du procédé, une ensemble de 16 capteurs de mesure dans les emplacements choisis du bloc thermique. Le demandeur a montré que la disposition d'un ensemble de 16 capteurs de mesure dans des puits choisis du bloc thermique, (i) avec les conditions précitées de nombre minimum de capteurs par élément de régulation thermique, et facultativement (ii) avec les conditions de localisation des capteurs dans chacun desdits éléments de régulation thermique, constituait une disposition universelle des capteurs de mesure de la température, utilisable quel que soit le thermocycleur testé. Ainsi, selon un autre aspect du procédé de l'invention, on dispose à l'étape 20 a) au moins 16 capteurs de mesure de la température. D'autres dispositions avantageuses du procédé de l'invention sont décrites ci-après, en relation notamment avec les caractéristiques spécifiques de modes de réalisation particuliers des capteurs de mesure de la température utilisés. Dans certains modes de réalisation, la sonde thermique du capteur de 25 mesure consiste en une sonde à thermocouple d'un type connu. Ainsi, la sonde thermique est choisie notamment parmi les sondes à thermocouple de type E, J, K, N, T, R, S, B ou C, bien connues de l'homme du métier. Préférentiellement, la sonde thermique est une sonde à thermocouple de type T constituée d'un alliage de cuivre et de nickel. 30 Selon d'autres caractéristiques avantageuses, le � liquide � contenu dans le tube réactionnel constitutif du capteur de mesure consiste en un liquide dont la composition mime celle d'un mélange réactionnel pour la réalisation d'une réaction PCR. Dans certains modes de réalisation, ledit liquide est de l'eau distillée ou déminéralisée. Dans d'autres modes de réalisation, ledit liquide est une solution 35 tampon du type de celles qui sont couramment utilisées pour réaliser des réactions PCR. Dans encore d'autres modes de réalisation, ledit liquide consiste en une huile siliconée, ou mieux une solution tampon du type pour PCR dont l'interface supérieure est surmontée d'une couche d'huile siliconée. On a en effet montré selon l'invention que la fiabilité et la reproductibilité du procédé était améliorée lorsque le liquide contenu dans le tube réactionnel constitutif du capteur de mesure de l'invention avait une composition la plus proche possible de la composition du mélange réactionnel utilisé pour la réalisation d'une réaction PCR. Selon un autre aspect préférentiel, le � volume � de liquide contenu dans le tube réactionnel du capteur de mesure est d'au moins 10 pL. On a observé selon l'invention que l'utilisation de volumes de liquide inférieurs à 10 pL était défavorables à la fiabilité et à la reproductibilité du procédé. Préférentiellement, toutefois, le volume de liquide contenu dans le tube réactionnel est similaire au volume de mélange réactionnel susceptible d'être ultérieurement utilisé pour réaliser effectivement des réactions PCR. Selon les cas, le volume de mélange réactionnel utilisé pour des réaction PCR varie de 10 pL à 50 pL. En conséquence, le volume de liquide contenu dans le tube réactionnel d'un capteur de mesure selon l'invention contient préférentiellement de 10 pL à 50 pL dudit liquide. Par � tube réactionnel �, constitutif d'un capteur de mesure de température de l'invention, on entend tout tube d'un type connu qui est couramment utilisé pour réaliser des réactions PCR, qui comprend (i) un corps cylindrique, en général à bas tronconique, et (ii) un couvercle permettant d'isoler le volume intérieur du tube de l'atmosphère extérieure, et rendre ainsi le tube étanche aux liquides et aux gaz. Comme cela sera détaillé plus loin dans la description, les capteurs de mesure de température utilisé dans le procédé sont, du fait de leurs caractéristiques structurelles, adaptables à tout type de bloc thermique de thermocycleur, quelles que soient la forme et le volume des puits. Notamment, les capteurs de mesure utilisés dans le procédé de l'invention peuvent être utilisés avec des blocs thermiques munis de puits pour tubes de mélange réactionnel de très faible volume, y compris des tubes pour des volumes de 40 pL. De manière tout à) fait préférée, le � moyen de liaison � de la sonde thermique au moyen de réception d'un signal généré par ladite sonde consiste en un câble électrique de diamètre réduit, permettant son passage entre le bord supérieur du tube réactionnel et le bord du couvercle en position fermée. Ainsi, un moyen de liaison du type câble électrique à diamètre réduit permet son passage de l'intérieur vers l'extérieur du tube, sans gêner l'obturation dudit tube par le couvercle et donc sans affecter l'étanchéité de la jonction entre les bords du tube réactionnel et les bords du couvercle en position fermée. Préférentiellement, on utilise un moyen de liaison consistant en un câble électrique ayant un diamètre d'au plus 1 millimètre de diamètre, et de manière tout à fait préférée d'un diamètre d'au plus 0,8 millimètres de diamètre. Un autre avantage résultant de l'utilisation d'un moyen de liaison d'un diamètre réduit, pour un capteur de mesure de l'invention, est le très faible encombrement de la totalité des moyens de liaison constitutifs de l'ensemble de capteurs de mesure utilisés dans le procédé de test de régulation thermique. C'est le faible encombrement de la totalité des moyens de liaison des capteurs de mesure utilisés qui contribue à la possibilité de réaliser le procédé de l'invention � dans des conditions normales � d'utilisation de l'appareil thermocycleur. En effet, le faible encombrement des moyens de liaison rend possible l'exécution du test en conditions � capot fermé �, quel que soit le type de thermocycleur testé, du fait que les moyens de liaison ne gênent pas la fermeture normale du thermocycleur. De même, le procédé de l'invention a été réalisé avec succès pour tester des thermocycleurs équipés de systèmes automatisés d'alimentation du bloc thermique avec les tubes réactionnels, pour lesquels le bloc thermique n'est pas accessible à l'utilisateur. Avec ce dernier type de thermocycleurs, la translation de l'ensemble des moyens de liaison vers l'intérieur de l'appareil, au moment de l'actionnement du mécanisme automatisé d'alimentation, ne gêne pas le déplacement des tubes réactionnels des capteurs de mesure de l'invention vers l'intérieur de l'appareil. Selon encore un autre aspect avantageux résultant de l'utilisation, dans un capteur de mesure de l'invention, d'un moyen de liaison consistant en un câble électrique ayant diamètre réduit, est que la transmission du signal électrique généré par la sonde thermique, en général une sonde à thermocouple, s'effectue sans effet de charge. Par effet de charge, il est entendu que la masse globale des thermocouples ajoutés dans les tubes réactionnels est suffisamment faible pour ne pas influencer la régulation de température du bloc thermique. Egalement, les dimensions réduites de l'ensemble sonde thermique/moyen de liaison sont adaptées à la fabrication de capteurs de mesure utilisables pour tester la régulation thermique de blocs thermiques équipés de puits pour tubes de très faibles volumes, y compris pour tubes de 40 NL. Dans ces derniers modes de réalisation, on peut utiliser alors un tube de 40pL du commerce, comme tube réactionnel constitutif du capteur de mesure de température. Dans un capteur de mesure de la température selon l'invention, la sonde thermique est maintenue en contact permanent avec le moyen de liaison, de préférence avec le câble électrique de diamètre réduit, au moyen d'une soudure appropriée, par exemple d'une soudure métallique, par exemple une soudure àl'or ou à l'argent. Dans d'autres modes de réalisation d'un capteur selon l'invention, la sonde thermique (14) et le moyen de laison (15) constituent deux parties distinctes d'un câble unique, par exemple d'un câble à thermocouple de type T en alliage Cuivre/Nickel. Dans ces modes de réalisation, l'extrémité du câble immergée dans le mélange réactionnel possède la fonction de sonde thermique (14), la partie restante du câble, localisée entre l'extrémité immergée dans le mélange réactionnel et l'extrémité destinée à être connectée à un moyen de réception du signal a une fonction de moyen de liaison (15), puisque le câble est électroconducteur. Préférentiellement, le câble électrique utilisé comme moyen de liaison résiste à une gamme de températures allant de 0°C à 104°C. Il en résulte que le capteur de mesure utilisé dans le procédé est adapté pour des tests de régulation thermique de thermocycleurs, quelles que soient les valeurs de consigne de température programmées pour la réalisation d'un cycle de réaction PCR, et en particulier quelle que soit la valeur de consigne de température programmée pour l'étape de dénaturation de l'ADN. Selon un autre aspect, le câble électrique utilisé comme moyen de liaison possède une résistance mécanique telle qu'il n'est pas altéré par les contraintes mécaniques que subit la section dudit câble intercalée entre le bord supérieur du tube réactionnel et les bords du couvercle dudit tube réactionnel. Les câbles électriques cités ci-dessus possèdent à la fois des caractéristiques de résistance thermique et de résistance mécanique requises. Selon encore un autre aspect, le moyen de liaison a, par définition, une longueur suffisante pour assurer la transmission du signal électrique généré par la sonde thermique jusqu'au moyen de réception du signal. La longueur du moyen de liaison peut être aisément adaptée par l'homme du métier, selon le type de thermocycleur à tester et le type de disposition spatiale du moyen de réception du signal, par rapport audit thermocycleur. De manière générale, il est avantageux que la longueur du moyen de liaison soit adaptée pour tester tout type de thermocycleur, dans la plupart des dispositions spatiales du moyen de réception du signal, par rapport duit thermocycleur. Dans la pratique, une longueur du moyen de liaison d'au moins 50 centimètres peut être employée dans la plupart des situations de test. Une longueur d'au moins 50 centimètres englobe des longueurs d'au moins 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 et 200 centimètres. On a montré selon l'invention que l'utilisation d'un moyen de liaison d'au moins 100 centimètres est adapté pour la fabrication de capteurs de mesure selon l'invention qui peuvent être utilisés pour tester tout type de thermocycleur PCR, y compris les thermocycleurs équipés de moyens automatiques de placement des tubes de mélange réactionnel sur le bloc thermique. La possibilité de faire passer le moyen de liaison à la jonction entre les bords supérieurs du corps tube réactionnel et les bords inférieurs du couvercle, emboîtés l'un dans l'autre en position fermée, permet l'utilisation de capteurs de mesure parfaitement adaptés au type de thermocycleur à tester, dont la fabrication est simple et qui sont d'un prix de revient réduit. En effet, le passage d'un premier test d'un thermocycleur possédant un bloc thermique équipé d'un premier type de puits donné, à un second test d'un thermocycleur équipé d'un second type de puits donné distinct du précédent, peut ne nécessiter qu'une opération de retrait de l'ensemble sonde thermique/moyen de liaison d'un premier type de tube réactionnel adapté au premier type de puits, à un second type de tube réactionnel adapté au second type de puits donné, qui sera rempli du volume choisi de liquide. En d'autres termes, la réalisation du procédé de test de régulation d'un bloc thermique selon l'invention sur différents types d'appareils thermocycleurs peut être réalisé sans nécessiter un remplacement complet du matériel constitutif d'un premier capteur de mesure requis à un second capteur de mesure requis. Ces avantages spécifiques sont procurés avec les capteurs de mesure de l'invention du fait que : - la fabrication d'un capteur de mesure selon l'invention ne requiert aucune modification spécifique du tube réactionnel qui est utilisé, puisque l'ensemble sonde thermique/moyen de liaison est simplement introduit dans ledit tube, et - la fabrication d'une série de capteurs de mesure pour des thermocycleurs d'un type distinct ne requiert pas obligatoirement l'utilisation d'autant d'ensembles sonde thermique/moyen de liaison que de capteurs de mesure désirés. Pour la fabrication d'un capteur thermique selon l'invention, l'ensemble sonde thermique/moyen de liaison est introduit dans le tube réactionnel de telle manière que l'extrémité libre de la sonde thermique, qui est opposée à l'autre extrémité en contact avec le moyen de liaison, soit au moins partiellement immergée dans le liquide contenu dans ledit tube réactionnel. Comme cela est illustré dans les exemples, la mise en oeuvre du procédé pour tester la régulation d'un bloc thermique de thermocycleur peut être appliqué avec succès pour déterminer les conditions réelles de régulation thermique de l'appareil. La demanderesse a en effet observé qu'il existe des différences significatives, parfois très importantes, au moins concernant la régulation thermique, entre les caractéristiques de performance d'un thermocycleur décrites dans la notice technique du fabricant et les caractéristiques qui ont été mesurées en conditions réelles d'utilisation, par le procédé de l'invention. Ainsi, le procédé de l'invention permet désormais à l'utilisateur d'un thermocycleur de déterminer précisément, pour la totalité des zones d'intérêt du bloc thermique testé. En particulier, grâce au procédé de l'invention, l'utilisateur est désormais informé, pour toutes les zones d'intérêt du bloc thermique testé, et pour la totalité de la durée du test comprenant un ou plusieurs cycles de réaction PCR, des écarts de température éventuels entre les valeurs de consigne initialement programmées et les valeurs réelles. En conséquence, grâce au procédé de l'invention, l'utilisateur a désormais accès non seulement aux valeurs de température réelles des étapes de dénaturation, d'hybridation et d'élongation, mais également aux valeurs de températures à une pluralité d'instants durant les phases programmées de variation de température, lorsque l'on passe successivement, dans une durée assez courte d'environ 30 secondes à 1 minute, (i) de l'étape de dénaturation à l'étape d'hybridation, (ii) de l'étape d'hybridation à l'étape d'élongation, puis (iii) de l'étape d'élongation à l'étape de dénaturation du cycle suivant de réaction PCR. Les conditions d'exécution des phases de variation de la température, qui sont communément désignées également phases de � ramping �, influent de manière significative sur les résultats finals. Or, la demanderesse a montré qu'avec de nombreux thermocycleurs, les températures réelles des mélanges réactionnels pouvaient être supérieures ou inférieures aux valeurs de consigne initialement programmées, et même, pour une même phase de � ramping �, (i) supérieure puis inférieure aux valeurs de consigne ou bien (ii) inférieure puis supérieure aux valeurs de consigne, selon l'instant de la phase de � ramping � considéré, selon l'étape du cycle de réaction PCR considéré. De manière générale, le procédé pour tester la régulation d'un bloc thermique de thermocycleur pour PCR selon l'invention permet à l'utilisateur de connaître les performances réelles d'un appareil thermocycleur pour PCR, ce qui permet à cet utilisateur d'adapter la programmation de l'appareil, et en particulier les valeurs de consigne de température, et le cas échéant également les valeurs de durée des phases de � ramping �, afin de réaliser ultérieurement les réactions PCR selon des conditions proches des conditions absolues choisies. Ainsi, le procédé pour tester la régulation d'un bloc thermique de thermocycleur pour PCR peut comprendre une étape d) additionnelle de détermination de défauts dans la régulation thermique du bloc thermique testé, et plus généralement dudit thermocycleur. Par � détermination de défauts dans la régulation thermique�, on entend essentiellement un calcul de comparaison entre (i) des valeurs de consigne avec lesquelles le thermocycleur a été programmé et (ii) les valeurs réelles de fonctionnement mesurées à l'étape c) du procédé. La comparaison entre les valeurs de consigne et les valeurs réelles mesurées permet le calcule des � performances � du thermocycleur testé. Les � performances � d'un thermocycleur pour PCR englobent (i) l'exactitude de température, (ii) l'uniformité de la température et (iii) la vitesse de � ramping �. L'exactitude de température consiste en la moyenne des valeurs de 25 température mesurées par les différents capteurs de mesure, à un instant "t" donné. L'exactitude de température peut être calculée selon la formule (I) suivante : E =Tprog ûTmoy (l), avec : - E qui signifie la valeur d'exactitude de température, par exemple exprimée en 30 degrés Celsius, - Tprog qui signifie la valeur de consigne de température programmée sur le thermocycleur, - Tmoy qui signifie la valeur moyenne de température mesurée par la totalité des capteurs de mesure audit instant � t �, qui peut aussi être exprimée en degrés 35 Celsius, étant entendu que la valeur de température moyenne Tmoy est elle-même calculée selon la formule (II) suivante : n Tsensor(i) Tmoy = E , (II) avec i=1 n _ Tsensor(i) qui signifie la valeur de mesure de température mesurée par le 5 capteur de mesure (i), et - n qui est un entier égal au nombre de capteurs de mesure de température disposés sur le bloc thermique. L'uniformité de température consiste en l'écart entre la valeur de température maximale et la valeur de température minimale mesurée par les 10 capteurs de mesure à un instant � t �. La valeur d'uniformité de température peut être calculée selon la formule (III) suivante : U = Tmax ù Tmin (III), avec - U qui est la valeur d'uniformité de température, qui peut être exprimée en degrés Celsius, 15 - Tmax qui est la valeur de température maximale mesurée par les capteurs de mesure ausit instant � t �, et - Tmin qui est la valeur de température minimale mesurée par les capteurs de mesure audit instant � t �. La vitesse de � ramping � consiste en le temps nécessaire pour passer d'un 20 valeur de température programmée à une autre. La vitesse de � ramping � peut être calculée selon la formule (IV) suivante : Avg romp rate = T~ùT2 tl-t2 (IV), avec : _ � Avg ramp rate � qui est la valeur de vitesse de � ramping �, qui peut être exprimée en degrés Celsius par seconde, 25 - T, qui est la valeur de température mesurée à l'instant et - T2 qui est la valeur mesurée à l'instant t2 L'invention a aussi pour objet un capteur de mesure de la température d'un puits de bloc thermique d'un thermocycleur PCR comprenant : 30 (i) un tube réactionnel adapté au type de bloc thermique testé, (ii) un volume choisi de liquide emplissant au moins partiellement ledit tube réactionnel (iii) une sonde thermique au moins partiellement immergée dans ledit liquide, et (iv) au moins un moyen de liaison de ladite sonde thermique à un moyen de réception d'un signal généré par ladite sonde thermique, D'autres caractéristiques avantageuses du capteur de mesure de température selon l'invention ont été détaillées précédemment dans la présente description. La présente invention a aussi pour objet un système pour tester la régulation thermique d'un appareil thermocycleur pour PCR, ledit système comprenant : a) une pluralité de capteurs de mesure de la température tels que définis ci- avant, et b) au moins un moyen de réception du signal de mesure de température généré par chacun desdits capteurs, Le système pour tester la régulation thermique d'un bloc thermique de thermocycleur pour PCR est décrit ci-après, en référence au mode de réalisation de ce système qui est illustré sur la figure 4. Ledit système comprend une pluralité de capteurs de mesure (1), dont les moyens de liaison (15) sont reliés, à leur extrémité opposée à la sonde thermique dudit capteur (1), à un moyen de réception (20) du signal de mesure de température généré par ledit capteur (1). On précise que, sur le schéma de la figure 4, les capteurs de mesure (1) sont disposés dans divers puits d'un bloc thermique (41) qui équipe le thermocycleur (40) testé. Sur la figure 4, bien que cela ne soit pas représenté de manière réaliste, on doit comprendre que, pour la mise en oeuvre du procédé de l'invention, le thermocycleur (41) est en conditions normales de marche, c'est à dire � capot fermé �, ce qui est rendu possible par le diamètre réduit, préférentiellement inférieur à 1 millimètre, de chacun des moyens de liaison (15), et donc du très faible encombrement du faisceau constitué de la pluralité des moyens de liaison (15). Le moyen de réception (20) du signal peut consister en un type quelconque de dispositif adapté à la réception d'un signal électrique généré par une sonde thermique, préférentiellement une sonde à thermocouple. Préférentiellement, on utilise un moyen de réception du signal comprenant un module de conversion du signal analogique délivré par chacune des sondes thermique en un signal numérique qui peut ensuite être traité dans un calculateur numérique approprié. Préférentiellement, on utilise un moyen de réception du signal adapté pour le traitement du signal généré par chaque capteur de mesure plusieurs fois par seconde. On utilise de préférence un moyen de réception apte à traiter le signal reçu de chaque capteur de mesure à une fréquence de d'acquisition et de traitement d'au moins 5 points de mesure par seconde, ce qui inclus au moins 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou au moins 50 points de mesure par seconde. Par définition, on choisit un moyen de réception apte à traiter le signal provenant de la totalité des capteurs de mesure de température utilisés dans le procédé. Par exemple, on peut utiliser un moyen d'acquisition du type NetDaq� 2640A commercialisé par la société Fluke, Le moyen de réception (20) du signal est relié à l'unité centrale (31) d'un calculateur numérique. Ledit calculateur numérique comprend, outre l'unité centrale (31), au moins un moyen d'entrée de données tels qu'un clavier (32) ou un dispositif de pointage (33), également reliés à l'unité centrale (31). Le calculateur numérique comprend au moins un processeur de données et 15 au moins un moyen de stockage de données. Lorsqu'on met en oeuvre le procédé pour tester la régulation d'un bloc thermique de thermocycleur pour PCR, défini dans la présente description, les signaux transmis par les capteurs de mesure (1) vers le moyen de réception (20), s'ils sont de type analogiques, sont convertis en des signaux numériques. Les 20 signaux numériques ainsi générés sont préférentiellement stockés dans la mémoire du calculateur numérique. Lesdits signaux numériques consistent en une collection ou en ensemble de valeurs de température mesurées par chacun des capteurs de mesure (1) à une pluralité d'instants � t �. L'ensemble de données peur donc de présenter sous forme de matrices à deux dimensions, dans lesquelles, à chaque 25 valeur de température stockée, est associée la référence du capteur de mesure (1) qui a généré ladite valeur et l'instant � t � auquel ladite valeur a été générée. Les données de mesure ci-dessus peuvent ensuite être traitées dans le calculateur numérique. Par exemple, la mémoire du calculateur numérique peur être chargée avec un programme d'ordinateur contenant un ensemble d'instructions 30 logiques de calcul des performances du thermocycleur testé, par exemple respectivement les valeurs (i) d'exactitude de température, (ii) d'uniformité de température et (iii) de vitesse de � ramping �. On peut par exemple réaliser (i) un calcul de la performance d'un cycle de réaction PCR, évalué selon les valeurs d'exactitude et d'uniformité de température pour un cycle donné, (ii) un calcul de la 35 performance sur une pluralité de cycles de réaction PCR, c'est à dire le cas échéant sur l'ensemble des cycles d'une réaction PCR complète, ce qui donne une valeur des performances calculées sur l'ensemble des cycles appliqués et sur le nombre de capteurs de mesure (1) utilisés, ou encore (iii) un calcul de la performance de zone, qui consiste en un calcul des valeurs d'exactitude de température et d'uniformité de température à partir des données de mesures de température générées par un capteur de mesure (1) donné, sur un cycle, une pluralité de cycles, ou la totalité des cycles inclus dans une réaction PCR. Ce dernier calcul permet d'évaluer de manière optimale l'éventuelle hétérogénéité de régulation thermique d'un bloc thermique. Un programme d'ordinateur comprenant un ensemble d'instructions pour le calcul d'un ou plusieurs paramètres de performance de la régulation thermique d'un bloc thermique de thermocycleur peut être réalisé par exemple par l'écriture de macro-commandes de traitement à partir de données de mesure stockées dans le fichier numérique d'un logiciel tableur courant. Préférentiellement, on caractérise les performances du thermocycleur testé pour chaque palier de température. Ainsi, grâce au procédé de l'invention, les utilisateurs sont désormais en mesure de contrôler de manière très précise les conditions de régulation thermique des thermocycleurs et de vérifier la stabilité desdites conditions de régulation thermique, au cours du temps. Egalement, l'utilisateur, qui connaît désormais de manière précise les valeurs de dérive de température d'un thermocycleur donné, par rapport aux valeurs de consigne, est désormais en mesure de compenser les dérives de température mesurées avec le procédé et les capteurs de mesure de l'invention, pour réaliser la réaction PCR dans les conditions de température réelles identiques, ou quasi- identiques, à celles désirées. Si désiré, le procédé de test physique de la régulation d'un bloc thermique de thermocycleur PCR peut être complété par un test de calibrage biologique, bien connu de l'homme du métier. L'invention concerne aussi un procédé pour tester la régulation thermique de thermocycleur pour PCR, comprenant les étapes suivantes : a) réaliser un procédé de test de calibration physique tel que défini précédemment dans la présente description, et b) réaliser un test de calibration biologique, à l'aide d'une pluralité de paires d'amorces ayant chacune une température optimale d'hybridation connue et distincte. Pour les besoins de la présente invention, il a été mis au point spécifiquement un test de calibrage biologique, destiné à être utilisé conjointement avec le test de calibrage physique décrit précédemment, ou bien à être utilisé séparément du test de calibration physique. Le test de calibrage biologique de l'invention consiste, dans son principe, out d'abord à déterminer une température seuil pour son utilisation sur un appareil thermocycleur pour PCR donné, puis à utiliser périodiquement ledit test, à la température seuil déterminée pour ledit thermocycleur, afin d'en vérifier la régulation du bloc thermique, sur l'ensemble du bloc thermique. La température seuil à déterminer, dont les caractéristiques sont précisées plus loin, consiste en une température seuil d'hybridation d'amorces, dans une réaction PCR comprenant une pluralité de cycles de réaction PCR comprenant chacun successivement (i) une étape de dénaturation de l'ADN, (ii) une étape d'hybridation des amorces nucléiques, et (iii) une étape d'élongation des amorces. Le test de calibrage biologique de l'invention est basé sur la propriété d'une pluralité de paires d'amorces nucléiques à hybrider sur une cible ADN, chacune à une température théorique � Tm �, ou température de fusion, spécifique, la succession de paires d'amorces hybridant à des températures de fusion distantes de environ 5°C. Préférentiellement, dans le test de calibrage de l'invention, on utilise trois ou quatre paires d'amorces dont les valeurs de température d'hybridation optimales sur l'ADN cible, dans la solution réactionnelle utilisée, sont respectivement de 50°C, 55°C, 60°C et 65°C. La première étape du procédé de calibrage de l'invention consiste à déterminer, spécifiquement pour l'appareil thermocycleur testé, une valeur de � température seuil �, qui est la valeur de température d'hybridation mesurée par l'appareil à laquelle on détecte la génération, à partir de l'ADN cible, d'amplicons avec chacune des paires d'amorces utilisées. Comme mélange réactionnel, on utilise un milieu comprenant : - une solution tampon pour PCR, - un ADN cible à amplifier, -les trois ou quatre paires d'amorces ayant des températures optimales d'hybridation distinctes, et - une ADN polymérase themorésistante, par exemple une Taq polymérase. L'appareil thermocycleur à tester est préparé en programmant les températures désirées pour chacune des étapes respectives de dénaturation de l'ADN, d'hybridation des amorces nucléiques et d'élongation des amorces nucléiques. Lorsque, comme dans l'exemple 2, on utilise des amorces nucléiques contenant un marqueur fluorescent, la valeur de la � température seuil � est la Io valeur de température d'hybridation programmée dans le thermocycleur, pour laquelle on détecte simultanément de la fluorescence pour les amplicons générés par élongation de l'ADN à partir de chacune des paires d'amorces utilisées. La visualisation de l'occurrence d'une réaction d'amplification avec chaque paire d'amorces peut être effectuée par (i) migration électrophorétique sur gel de la 15 totalité de l'ADN amplifié, puis (ii) détection par fluorescence des bandes d'ADN correspondant aux amplicons générés par l'élongation de chacune des paires d'amorces nucléiques. Préférentiellement, pour l'étape de détermination de la température seuil, on met en oeuvre le thermocycleur de manière à générer un gradient de température 20 d'hybridation entre les puits successifs, afin de réaliser, avec le milieu réactionnel décrit ci-dessus, des réactions d'amplification simultanées avec une gamme de températures d'hybridation croissante pour des puits successifs distincts, ladite gamme de températures d'hybridation couvrant au moins la partie médiane de la gamme de températures d'hybridation optimale couverte par l'ensemble des paires 25 d'amorces nucléiques utilisées, c'est à dire si possible dans une gamme de températures d'hybridation programmées dans le thermocycleur allant de 57°C à 60°C. Préférentiellement, on programme l'appareil thermocycleur pour PCR pour réaliser un gradient de températures d'hybridation dont la borne inférieure est d'au 30 moins 45°C, ce qui inclut au moins 46°C, 47°C, 48°C, 49°C, 50°C, 51 °C, 52°C, 53°C, 54°C, 55°C et 56°C. Préférentiellement, on programme l'appareil thermocycleur pour PCR pour réaliser un gradient de températures d'hybridation dont la borne supérieure est d'au plus, 70°C, ce qui inclut au plus 65°C, 64°C, 63°C, 62°C et 61°C. Par exemple, le thermocycleur peut être programmé pour réaliser un gradient de températures d'hybridation allant de 57°C à 63°C. Préférentiellement, la température de dénaturation programmée dans le thermocycleur est de 95°C. s Préférentiellement, la température d'élongation programmée dans le thermocycleur est de 72°C. La valeur de � température seuil �, pour l'appareil thermocycleur pour PCR testé, est la température d'hybridation mesurée par l'appareil thermocycleur des puits pour lesquels est observée l'amplification de l'ADN cible avec chacune des 10 quatre paires d'amorces. Préférentiellement, pour mettre en oeuvre le procédé de calibrage biologique de thermorégulation d'un thermocycleur PCR, on utilise les paires d'amorces suivantes : (i) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, ayant une 15 température optimale d'hybridation de 50°C, (ii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4, ayant une température optimale d'hybridation de 55°C, (iii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°5 et SEQ ID N°6, ayant une température optimale d'hybridation de 60°C, 20 (iv) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°7 et SEQ ID N°8, ayant une température optimale d'hybridation de 65°C, La paire d'amorces de séquences SEQ ID N° 7 et SEQ ID N° 8 a été spécifiquement mise au point pour l'amplification d'un fragment de 483 paires de 25 bases sur le même gène d'un ADN humain, en particulier d'un ADN de placenta humain, avec une très grande reproductibilité. La paire d'amorces de séquences SEQ ID N° 7 et SEQ ID N° 8 constitue un objet de l'invention, ainsi que des compositions les contenant, en particulier des compositions destinées à l'utilisation dans un test de calibrage biologique de la régulation thermique d'un appareil 30 thermocycleur pour PCR. Préférentiellement, pour mettre en oeuvre le procédé de calibrage biologique de thermorégulation d'un thermocycleur PCR, on utilise de l'ADN cible de placenta humain. A titre illustratif, on peut utiliser de l'ADN de placenta humain commercialisé par la société Sigma, sous la référence n° D4642. Puis, après détermination de la température seuil pour le thermocycleur PCR testé, un essai de calibrage peut être réalisé lorsque désiré, par exemple régulièrement dans le temps ou lorsqu'un dysfonctionnement est suspecté, afin de vérifier la régulation thermique du bloc thermique dudit appareil. Préférentiellement, on vérifie la régulation thermique du bloc thermique dudit thermocycleur en programmant celui-ci pour une température identique pour la totalité des puits et en disposant des tubes du mélange réactionnel ci-dessus dans des puits répartis sur la surface dudit bloc thermique de manière qu'au moins deux tubes de mélange réactionnel sont disposés dans chacun des éléments thermiques, compris dans ledit bloc thermique. En général, chacun des éléments thermiques consiste, dans la presque totalité des appareils thermocycleurs, en chacun des éléments de chauffe à effet Peltier compris dans le bloc thermique. II résulte de l'exposé qui précède que la présente invention a également pour objet un procédé de calibrage biologique de la régulation du bloc thermique d'un appareil thermocycleur pour PCR, comprenant les étapes suivantes : a) déterminer, pour ledit appareil thermocycleur, une température seuil de calibrage, ladite température seuil de calibrage étant la température d'hybridation mesurée par le thermocycleur à laquelle est amplifié un ADN provenant de placenta humain par chacune des paires d'amorces suivantes : (i) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, (ii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4, (iii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°5 et SEQ ID N°6 et (iv) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°7 et SEQ ID N°8, en présence d'une ADN polymérase thermorésistante, et b) tester la régulation du bloc thermique dudit appareil thermocycleur, (i) en réalisant une réaction PCR, à une température d'hybridation programmée égale à la température seuil déterminée à l'étape a), puis (ii) en vérifiant que, à ladite température seuil programmée, on amplifie ledit ADN cible avec chacune des quatre paires d'amorces définies à l'étape a). Préférentiellement, on effectue l'étape b) en disposant des tubes du mélange réactionnel ci-dessus dans des puits répartis sur la surface dudit bloc thermique de manière qu'au moins deux tubes de mélange réactionnel sont disposés dans chacun des éléments thermiques, c'est-à-dire en général chacun des éléments de chauffe par effet Peltier, compris dans ledit bloc thermique. L'invention concerne aussi un procédé de calibrage biologique d'un thermocycleur pour PCR, par un test de la régulation du bloc thermique dudit appareil thermocycleur, comprenant les étapes suivantes : a) réaliser une réaction PCR, à une température d'hybridation programmée égale à une température seuil de calibrage dudit thermocycleur, ladite température seuil de calibrage étant la température d'hybridation mesurée par le thermocycleur à laquelle est amplifié un ADN provenant de placenta humain par chacune des paires d'amorces suivantes : (i) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, (ii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4, (iii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°5 et SEQ ID N°6 et (iv) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°7 et SEQ ID N°8, en présence d'une ADN polymérase thermorésistante, et b) vérifier que, à ladite température seuil programmée, on amplifie ledit ADN cible avec chacune des quatre paires d'amorces définies à l'étape a). La présente invention a aussi pour objet une composition d'amorces nucléiques pour la réalisation d'un test de calibrage biologique d'un appareil thermocycleur pour PCR, comprenant de manière combinées ou séparées les paires d'amorces nucléiques suivantes : (i) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, ayant une température optimale d'hybridation de 50°C, (ii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4, ayant une température optimale d'hybridation de 55°C, (iii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°5 et SEQ ID N°6, ayant une température optimale d'hybridation de 60°C, et (iv) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°7 et SEQ ID N°8, ayant une température optimale d'hybridation de 65°C. Préférentiellement, dans la composition ci-dessus, chaque paire d'amorces est incluse dans un récipient séparé. Préférentiellement, dans la composition ci-dessus, les amorces se présentent sous forme lyophilisée, la solution d'amorces étant utilisable, pour la réalisation d'un test de calibrage biologique d'un appareil thermocycleur PCR, après reconstitution par ajout d'eau distillée déminéralisée, ou bien d'une solution tampon appropriée, selon les cas. La présente invention est en outre illustrée, sans y être limitée, par l'exemple suivant. EXEMPLES Exemple 1 : Détermination des profils des cinétiques de température Différents tests de régulation thermique ont été réalisés, avec le procédé de °l'invention, sur plusieurs thermocycleurs du commerce, afin de mieux évaluer les profils caractéristiques des cinétiques de réaction PCR. Quels que soient les appareils testés, ce sont généralement les mêmes profils qui sont obtenus. Lorsque le mode de régulation du thermobloc est correct, les profils de température sont linéaires et parfaitement proportionnés. Le début et la fin des plateaux sont clairement identifiables sur les profils cinétiques des figures 5A1 (étape de dénaturation), 5A2 (étape d'hybridation) et 5A3 (étape d'élongation). Lorsque la régulation thermique du thermobloc est hétérogène ou imprécise, une étape transitoire est apparente au début des plateaux de température. Sa durée est plus ou moins longue. Cette étape peut se caractériser sous la forme de pics positifs ou négatifs, par rapport à la température moyenne du plateau, comme cela est illustré sur les profils cinétiques des figures 5B1 (étape de dénaturation), 5B2 (étape d'hybridation) et 5B3 (étape d'élongation). L'étape transitoire peut également se manifester sous la forme d'une montée ou d'une descente trop progressive de la température, de sorte qu'il est impossible de fixer un réel point de départ du plateau, comme cela est illustré sur les profils cinétiques des figures 5C1 (étape de dénaturation), 5C2 (étape d'hybridation) et 5C3 (étape d'élongation). Le procédé, les capteurs de mesure, et plus généralement le système de mesure de la régulation d'un bloc thermique de thermocycleur sont donc opérationnels. Il a aussi été mis au point un programme de traitement numérique des données collectées par le moyen de réception des signaux provenant des capteurs 30 de mesure. Exemple 2 : Description d'un test de calibration biologique [Stratégie 21 Le test de calibration biologique décrit ci-après a été réalisé sur la base des informations contenues dans l'article de Yang et al (Use of multiplex polymerase 29 chain reactions to indicate the accuracy of the annealing temperature of thermal cycling ; Analytical Biochemistry, Vol. 338 (2005) : 192-200) Le test cible deux gènes différents du même tissu. L'ADN cible est un ADN de placenta humain commercialisé par la société SIGMA (SIGMA-Aldrich, St. Louis, 5 MO ; référence D4642). L'article de Yang et al (2005) décrivait une réaction PCR multiplex utilisant quatre couples d'amorces. Toutefois, la demanderesse a observé que la quatrième paire d'amorces décrites par Yang et al. (2005), désignée � 482 �, n'était pas fonctionnelle 10 Le test décrit dans le présent exemple met en oeuvre trois des quatre paires d'amorces décrites par Yang et al. (2005), respectivement les paires d'amorces désignées � 200 �, � 300 � et � 400 �. La quatrième paire d'amorces, désignée � 480 �, a été mise au point spécifiquement pour l'exemple. Plus précisément, la paire d'amorces désignée 15 �480 � comprend une amorce spécifique nouvelle, l'amorce � ADN AS483 � de séquence SEQ ID N° 8, qui permet, lorsqu'elle est utilisée conjointement avec l'amorce � ADN S480 � de séquence SEQ ID N° 7, de générer un amplicon de 483 paires de bases. ^ 200: fragment à température d'hybridation optimale: 50°C 20 Séquence ADN S200 : 5' CACACTTCATATTTACCCAT 3' (SEQ ID N°1) Séquence ADN AS200 : 5' TTGTTTAATAGAGACGAAGG 3' (SEQ ID N°2) ^ 300: fragment à température d'hybridation optimale: 55°C Sequence ADN S300 : 5' ATGGACATTTACGGTAGTGG 3' (SEQ ID N°3) Séquence ADN AS300 : 5' AAGTATTTCAATGCCGGTAG 3' (SEQ ID N°4) 25• 400: fragment à température d'hybridation optimale: 60°C Séquence ADN S400 : 5' GCTAGCTGTAACTGGAGCCG 3' (SEQ ID N°5) Séquence ADN AS 400: 5' GTCTGCTGAAACTGCCAACA 3' (SEQ ID N°6) ^ 480: fragment à température d'hybridation optimale: 65°C Séquence ADN S480 : 5' GGCCTGCTGAAAATGACTGA 3' (SEQ ID Ni) 30 Séquence ADN AS483: 5' CAAAACAAAACAATATATACATTCCAA 3' (SEQ ID N°8) L'amorce AS483 est donc, dans le test spécifique de l'exemple, l'amorce complémentaire de S480 pour l'amplification d'un fragment de 483 pb sur le même 35 gène au lieu de 480pb comme initialement prévu dans l'article de Yang et aI. (2005). On ajoute 30ng (1 NI) d'ADN pur de placenta par puits. Tests en PCR point final Pour amplifier plusieurs ADN cibles dans les conditions limites d'amorçage et déceler les montées ou baisses de températures, une PCR multiplex est réalisée en Gradient de température d'hybridation. Le Gradient consiste à obtenir une température d'hybridation des amorces différentes soit sur chaque colonne, soit sur chaque ligne du bloc PCR (selon les modèles d'appareils PCR sur le marché). Tableau 1 : composition du mélanqe réactionnel C f 1 réaction PCR (�L) Tampon (10X) 1X 2,5 H2Oup - 4,83 200S (100pM) 4pM 1 200AS (100pM) 4pM 1 300S (25pM) 0,2pM 0,2 300AS (25pM) 0,2pM 0,2 400S (25pM) 0,6pM 0,6 400AS (25pM) 0,6pM 0,6 480S (100pM) 5pM 1,25 483AS (100pM) 5pM 1,25 MgCl2 (50mM) 2 mM 1 dNTPs (25mM) 0,375 mM 0,375 Taq I (5U/pL) 1 U/réaction 0,2 TOTAL 15 Matrice ADN à ajuster# 5 Volume final 20 Cf : Concentration finale; S : Sens; AS ; antisens * La quantité de cible matrice (ADN de placenta) doit être ajustée suivant la sensibilité du thermocycleur utilisé. La préparation des solutions d'amorces est une étape essentielle pour la reproductibilité de l'expérience dans le temps. On s'attache à utiliser des pipettes adaptées aux volumes à pipeter, justes et reproductibles ayant subi un contrôle métrologique récent. On prend soin également de préparer un lot unique de chaque amorce à partir duquel on prélève des fractions aliquotes. Chaque fraction aliquote issue du lot de départ est utilisée pour un usage unique. Les concentrations finales des amorces ont été établies après avoir étudié et comparé les différentes concentrations en MgCl2, amorces ainsi que différentes Taq polymerases. Le programme PCR utilisé est décrit dans le tableau 2 le suivant : Tableau 2 : paramètres de la réaction PCR 95°C 5' x1 95°C 30" x 30 gradient 57 à 63°C 30" 30" 5' xi * La quantité de cible matrice (ADN de placenta) doit être ajustée suivant la sensibilité du thermocycleur utilisé. Les thermocycleurs de 1" génération (avant 2006) ont une température de "ramping" max de 3°C/sec, alors que ceux de 2ème génération (après 2006) ont une 15 température de ramping max de 4°C/sec. 72°C 72°C10 Tableau 3 : Exemple de schéma de bloc pour qradient: 3.1 Thermocycleur A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A Plac D10 Plac D10 Plac D10 B Plac D10 NTC 1 Plac D10 Plac D10 C Plac D10 Plac D10 Plac D10 D Plac D10 Plac D10 Plac D10 E Plac D10 Plac Dl0 Plac D10 F Plac D10 Plac Dl0 Plac D10 G Plac D10 Plac Dl0 Plac D10 H Plac D10 NTC 2 Plac Dl0 Plac D10 60°C 59,8 59,5 58,9 58,2 57,6 57,2 57 3.2. Thermocycleur B 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 B NTC 1 NTC 2 C D Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 E F G Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 Plac D10 H 57°C 57,1 57,5 58 58,7 59,4 60,2 60,9 61,5 NTC : Témoin négatif sans ADN (pour � No Template Control �). Plac D10 : 30ng d'ADN de Placenta dilué 10 fois. Les résultats sont représentés sur les figures 6 (thermocycleur A) et 7 15 (thermocycleur B), qui consistent en des clichés de migration des amplicons sur gel d'agarose à 2%. La migration par électrophorèse est réalisée à 120 Volts. Sur la figure 6, le point limite où les 4 bandes sont présentes à même intensité est à 58°C. On obtient 0,7°C avant seulement 3 bandes nettes (480, 400 et 200pb) et 0,7°C après seulement 2 bandes nettes (480 et 400 pb). Ce test est sensible à une augmentation de température et à une diminution de 5 température, à 0,7°C près. Sur la figure 7, le point limite où les 4 bandes sont présentes à même intensité est entre 58,9 et 58,2°C. On obtient 0,7°C avant seulement 1 bande nette (400pb) et 0,7°C après seulement 1 bande nette (200pb). La bande à 300 pb est très faible et 10 celle à 480 pb n'apparaît pas. Ce test est différent d'un appareil à l'autre et d'un fabriquant à l'autre. En se basant sur le mélange réactionnel décrit plus haut, l'utilisateur doit établir une carte de contrôle pour chaque appareil à contrôler et déterminer ainsi la température seuil de 15 l'appareil à laquelle on observe au moins 2 des 4 bandes. La mise au point de cette carte de contrôle se réalise par ajustement de la concentration en matrice ADN, étant donné que le mélange réactionnel est optimisé pour avoir un bon équilibre entre les 4 cibles. Une fois cette carte établie, et cette température seuil déterminée, l'utilisateur peut se limiter à réaliser une réaction PCR sur toute la plaque à cette température seuil, par exemple trimestriellement, ou bien lorsqu'il observe un résultat anormal. 25 Le gradient n'est nécessaire que pour la mise au point du test. 20 REVENDICATIONS1. Procédé pour le calibrage de la régulation d'un bloc thermique de thermocycleur pour PCR, ledit bloc thermique comprenant une pluralité d'emplacements pour tubes de mélange réactionnel et une pluralité d'éléments de régulation thermiques, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) disposer un ensemble de capteurs de mesure de température dans des emplacements pour tube de mélange réactionnel choisis dans ledit bloc thermique, lesdits capteurs de mesure de température comprenant : (i) un tube réactionnel adapté au type de bloc thermique testé, (ii) un volume choisi de liquide emplissant au moins partiellement ledit tube réactionnel (iii) une sonde thermique au moins partiellement immergée dans ledit liquide, 15 et (iv) au moins un moyen de liaison de ladite sonde thermique à un moyen de réception d'un signal généré par ladite sonde thermique, lesdits emplacements dans lesquels sont disposés les capteurs de mesure de température étant répartis sur la surface dudit bloc thermique de manière qu'au 20 moins deux capteurs de mesure de température sont disposés dans chacun des éléments thermiques compris dans ledit bloc thermique, et b) démarrer le thermocycleur, dans des conditions normales d'utilisation, pour au moins un cycle programmé avec des valeurs de consigne de température pour une réaction PCR, et 25 c) simultanément à l'étape b), mesurer les valeurs de température avec chacun des capteurs de mesure, à une pluralité d'instants donnés. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les capteurs de mesure de la température sont disposés, dans un même élément de régulation thermique, 30 de telle manière qu'au moins un premier capteur de mesure soit positionné dans un puits localisé sur l'un des bords dudit élément de régulation thermique et qu'au moins un second capteur de mesure soit positionné dans un puits localisé dans la partie centrale dudit élément de régulation thermique. 2 2941960 3. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'à l'étape a) sont disposés au moins 16 capteurs de mesure. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les 5 coordonnées de positionnement des capteurs de mesure sur un bloc thermique de 96 puits comprenant 8 colonnes numérotées de A à H et 12 rangées numérotées de 1 à 12 sont les suivantes : 1A, 1H, 3C, 3F, 5A, 5E, 5H, 6C, 8B, 8E, 8G, 9A, 10F, 11C, 12A et 12H. 10 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ledit capteur de mesure de température comprend une sonde à thermocouple de type T. 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le moyen de liaison du capteur de mesure consiste en un câble électrique d'un diamètre inférieur 15 à 1 millimètre. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape d) de détermination de défauts dans la régulation thermique dudit bloc thermique. 20 8. Procédé pour tester la régulation thermique de thermocycleur pour PCR, comprenant les étapes suivantes : a) réaliser un procédé de test de calibration physique selon l'une des revendications 1 à 7, et 25 b) réaliser un test de calibration biologique, à l'aide d'une pluralité de paires d'amorces ayant chacune une température optimale d'hybridation connue et distincte. 9. Capteur de mesure de la température d'un puits de bloc thermique d'un 30 thermocycleur PCR comprenant : (i) un tube réactionnel adapté au type de bloc thermique testé, (ii) un volume choisi de liquide emplissant au moins partiellement ledit tube réactionnel (iii) une sonde thermique au moins partiellement immergée dans ledit liquide, 35 et 3 2941960 (iv) au moins un moyen de liaison de ladite sonde thermique à un moyen de réception d'un signal généré par ladite sonde thermique, 10. Système pour tester la régulation thermique d'un appareil thermocycleur pour 5 PCR, ledit système comprenant : a) une pluralité de capteurs de mesure de la température tels que définis selon l'une des revendications 1 à 6, et b) au moins un moyen de réception du signal de mesure de température généré par chacun desdits capteurs, 10 11. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'étape b) comprend les étapes suivantes : b1) déterminer, pour ledit appareil thermocycleur, une température seuil de calibrage, ladite température seuil de calibrage étant la température d'hybridation mesurée par le thermocycleur à laquelle est amplifié un ADN provenant de placenta humain par chacune des paires d'amorces suivantes : (i) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, (ii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4, (iii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°5 et SEQ ID N°6 et (iv) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°7 et SEQ ID N°8, en présence d'une ADN polymérase thermorésistante, et b2) tester la régulation du bloc thermique dudit appareil thermocycleur, (i) en réalisant une réaction PCR, à une température d'hybridation programmée égale à la température seuil déterminée à l'étape b1), puis (ii) en vérifiant que, à ladite température seuil programmée, on amplifie ledit ADN cible avec chacune des quatre paires d'amorces définies à l'étape b1). 12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'on effectue l'étape b2) en disposant des tubes du mélange réactionnel ci-dessus dans des puits répartis sur la surface dudit bloc thermique de manière qu'au moins deux tubes de mélange réactionnel sont disposés dans chacun des éléments thermiques compris dans ledit bloc thermique. 13. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'étape b) comprend les étapes suivantes : 4 2941960 b1) réaliser une réaction PCR, à une température d'hybridation programmée égale à une température seuil de calibrage dudit thermocycleur, ladite température seuil de calibrage étant la température d'hybridation mesurée par le thermocycleur à laquelle est amplifié un ADN provenant de placenta humain par 5 chacune des paires d'amorces suivantes : (i) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, (ii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4, (iii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°5 et SEQ ID N°6 et (iv) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°7 et SEQ ID N°8, en présence d'une ADN polymérase thermorésistante, et lo b2) vérifier que, à ladite température seuil programmée, on amplifie ledit ADN cible avec chacune des quatre paires d'amorces définies à l'étape b1). 14. Composition d'amorces nucléiques pour la réalisation de l'étape b) du procédé selon la revendication 8, comprenant de manière combinées ou séparées les paires 15 d'amorces nucléiques suivantes : (i) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, ayant une température optimale d'hybridation de 50°C, (ii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4, ayant une température optimale d'hybridation de 55°C, 20 (iii) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°5 et SEQ ID N°6, ayant une température optimale d'hybridation de 60°C, et (iv) une paire d'amorces de séquences SEQ ID N°7 et SEQ ID N°8, ayant une température optimale d'hybridation de 65°C. 25 15. Paire d'amorces de séquences SEQ ID N° 7 et SEQ ID N° 8.