Brevet FR2940802A1 — publié le 20100709

La présente invention concerne une formulation stable à action rapide d'insuline recombinante humaine. Depuis la production d'insuline par génie génétique, au début des années 80, les patients diabétiques bénéficient d'insuline humaine pour se traiter. Ce produit a grandement amélioré cette thérapie puisque les risques immunologiques liés à l'utilisation d'insuline non humaine en particulier de porc se trouvent éliminés. Le génie génétique a permis une autre amélioration du traitement du diabète avec le développement d'insulines dites analogues. Ces insulines sont modifiées afin d'atteindre deux objectifs qui sont complémentaires : - d'une part, avoir une action lente et contrôlée sous 24 heures : c'est le cas de Lantus qui a une action prolongée très supérieure à celle de l'insuline humaine ; - d'autre part, une action très rapide après injection : c'est le cas des insulines Lispro (Lilly), Novolog (Novo) et Apidra (Aventis); qui ont des vitesses d'action après administration supérieures à l'insuline humaine. Le contrôle de la vitesse d'action de l'insuline est un élément crucial dans la vie des patients car ils doivent à chaque repas éviter les situations où ils pourraient se retrouver en hyperglycémie ou en hypoglycémie. Il est donc de la plus haute importance au plan médical de faire coïncider autant que faire se peut l'action de l'insuline administrée avec la production de glucose apportée par les aliments. C'est ce qui justifie aujourd'hui le succès des insulines analogues ultra rapides au dépend de l'utilisation de l'insuline humaine. Ces insulines sont modifiées sur un ou deux acides aminés pour être plus rapidement actives après une injection sous-cutanée. Ces insulines Lispro (Lilly), Novolog (Novo) et Apidra (Aventis) sont des solutions stables d'insuline avec une réponse hypoglycémiante proche en terme de cinétique de la réponse physiologique générée par le début d'un repas. Dès lors, les patients n'ont plus à prévoir leur heure de repas avant l'injection d'une insuline rapide. Ils s'injectent cette insuline au moment où ils sont prêts à manger. Ils peuvent même compléter si nécessaire cette dose à la fin de leur repas ce qui est très appréciable pour les enfants pour qui il est difficile d'ajuster la dose et de contrôler l'appétit. L'insuline humaine ne permet pas d'obtenir une réponse hypoglycémiante proche en terme de cinétique de la réponse physiologique générée par le début d'un repas, car elle s'assemble sous forme d'héxamère alors qu'elle est active sous forme de monomère et de dimère. Les équilibres de dissociation des héxamères en dimères et des dimères en monomères retardent son action de près de 20 minutes comparativement à une insuline analogue rapide, Brange J., et al, Advanced Drug Delivery Review, 35,1999, 307-335. L'insuline humaine est préparée sous forme d'héxamères pour être stable près de 2 ans à 4 C car sous forme de monomè res, elle a une très forte propension à s'aggréger puis à fibriller ce qui lui fait perdre son activité, de plus sous cette forme agrégée, elle présente un risque immunologique pour le patient. Le principe des insulines analogues dites rapides est de former des 20 hexamères pour assurer la stabilité de l'insuline mais également de favoriser la dissociation des héxamères en monomères pour obtenir une action rapide. Le principal inconvénient de ces insulines est la modification de la structure primaire de l'insuline humaine. Cette modification entraîne des 25 variations d'interaction avec les récepteurs de l'insuline présents sur un nombre très important de lignées cellulaires car il est connu que le rôle de l'insuline dans l'organisme n'est pas limité seulement à son activité hypoglycémiante. Bien que de nombreuses recherches aient été effectuées dans ce domaine, on ne sait pas déterminer à ce jour si ces insulines 30 analogues ont toutes les propriétés physiologiques de l'insuline humaine. D'autre part, le nombre de patients diabétiques augmente chaque jour. Il est de la plus haute importance de fournir aux patients atteints de cette maladie des formulations d'insuline au prix le plus bas. Il existe donc un besoin 35 réel et non satisfait d'une formulation rapide d'insuline humaine plus efficace, plus sûre et moins chère que les formulations actuelles sur le marché qui sont, soit des insulines analogues rapides, soit les insulines humaines qui ont un temps d'action trop long. La société Biodel a proposé une solution à ce problème en ajoutant de l'EDTA et de l'acide citrique à l'insuline humaine Leur stratégie est donc de déstabiliser l'hexamère en se plaçant à pH acide et en complexant le Zn par l'EDTA. Cependant, une telle formulation présente plusieurs inconvénients majeurs. Le premier dû à l'acidité de la formulation est que la solution d'insuline humaine doit être préparée au moment de l'injection et cela plusieurs fois par jour, alors qu'aujourd'hui, les patients utilisent des solutions stables prêtes à l'emploi administrables par des stylos à insuline. Le second est que pour obtenir les effets recherchés, la solution testée par BIODEL est quatre fois plus diluée que le standard international qui est de 100 UI/mL pour toutes les solutions d'insuline sur le marché. Le troisième est une fréquence plus élevée des douleurs au site d'injection, douleur attribuée au volume important de liquide injecté comme révélé dans les études cliniques de phase III. La présente invention permet de résoudre les différents problèmes ci-dessus exposés puisqu'elle permet de réaliser une formulation d'insuline humaine stable à un pH compris entre 5,5 et 7,5 en solution à 100 UI/mL, ladite formulation permettant d'atteindre, après administration, un niveau plasmatique d'insuline et/ou une réduction du glucose plus rapidement qu'avec des formulations d'insuline humaine. L'invention consiste à former un complexe de l'insuline humaine avec un polymère amphiphile comportant des groupes fonctionnels carboxyles. La formation de ce complexe peut de plus être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse d'insuline et d'une solution aqueuse de 30 polymère amphiphile. L'invention concerne également le complexe entre l'insuline humaine et un polymère amphiphile comportant des groupes fonctionnels carboxyles. 35 Elle concerne également l'utilisation de ce complexe pour préparer des formulations d'insuline humaine permettant d'atteindre, après administration, un niveau plasmatique d'insuline et/ou une réduction du glucose plus rapidement que les formulations d'insuline humaine. Les formulations d'insuline humaine � rapide � sur le marché à une concentration de 600 pM (100 UI/mL) ont un délai d'action compris entre 30 et 60 minutes et un nadir glycémique compris entre 2 et 4 heures. 10 Les formulations d'insuline analogue � rapide � sur le marché à une concentration de 600 pM (100 UI/mL) ont un délai d'action compris entre 10 et 15 minutes et un nadir glycémique compris entre 60 et 90 minutes. Elle concerne plus particulièrement l'utilisation d'un complexe selon 15 l'invention pour la préparation d'une formulation d'insuline dite rapide. L'invention concerne l'utilisation du complexe selon l'invention pour préparer des formulations d'insuline humaine à une concentration voisine de 600 pM (100 UI/mL) dont le délai d'action est inférieur à 30 minutes, de 20 préférence inférieur à 20 minutes, et encore de préférence inférieur à 15 minutes. L'invention concerne l'utilisation du complexe selon l'invention pour préparer des formulations d'insuline humaine à une concentration voisine de 25 600 pM (100 UI/mL) dont le nadir glycémique est inférieur à 120 minutes, de préférence inférieur à 105 minutes, et encore de préférence inférieur à 90 minutes. Dans un mode de réalisation, le polymère amphiphile comportant 30 des groupes fonctionnels carboxyles est choisi parmi des polysaccharides fonctionnalisés constitués en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,6) et dans un mode de réalisation, le polysaccharide constitué en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,6) est un dextrane fonctionnalisé comportant des groupes fonctionnels carboxyles. 35 Lesdits polysaccharides sont fonctionnalisés par au moins un dérivé du tryptophane, noté Trp : - ledit dérivé du tryptophane étant greffé ou lié aux polysaccharides par couplage avec une fonction acide, ladite fonction acide étant une fonction acide portée par un bras de liaison R lié au polysaccharide par une fonction F, ladite fonction F résultant du couplage entre le bras de liaison R et une fonction ûOH du polysaccharide, - F étant soit une fonction ester, thioester, amide, carbonate, carbamate, éther, thioéther ou amine, - R étant une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée, comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S, et ayant au moins une fonction carboxyle, - Trp étant un reste d'un dérivé du tryptophane, L ou D, produit du couplage entre l'amine du tryptophane et au moins un acide porté par le groupement R et/ou un acide porté par le polysaccharide comportant des groupes fonctionnels carboxyles. Selon l'invention les polysaccharides fonctionnalisés peuvent répondre aux formules générales suivantes : Formule I • le polysaccharide étant un dextrane, Polysaccharide • F résultant du couplage entre le bras de liaison R et une fonction ûOH du polysaccharide et étant soit une fonction ester, thioester, amide, carbonate, carbamate, éther, thioéther ou amine, • R étant une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée, comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S, et ayant au moins une fonction carboxyle, • Trp étant un reste d'un dérivé du tryptophane, L ou D, produit du couplage entre l'amine du dérivé du tryptophane et au moins un acide porté par le groupement R et/ou un acide porté par le polysaccharide comportant des groupes fonctionnels carboxyles, n représente la fraction molaire des R substitués par Trp et est comprise entre 0,05 et 0,7, de préférence 0,1 et 0,5, encore de préférence 0,3 et 0,4, i représente la fraction molaire des groupements F-R-[Trp]n portés 15 par unité saccharidique et est comprise entre 0 et 2, - lorsque R n'est pas substitué par Trp, alors le ou les acides du groupement R sont des carboxylates de cation, alcalin de préférence comme Na+ ou K+, 20 lesdits polysaccharides étant amphiphiles à pH neutre. Dans un mode de réalisation, F est soit un ester, un carbonate, un carbamate ou un éther. 25 Dans un mode de réalisation, le polysaccharide selon l'invention est caractérisé en ce que le groupe R est choisi dans les groupes suivants : F F O O ~~~1 O OH OH OH ou leurs sels de cations alcalins. Dans un mode de réalisation, le polysaccharide selon l'invention est caractérisé en ce que le dérivé du tryptophane est choisi dans le groupe F 30 constitué par le tryptophane, le tryptophanol, le tryptophanamide, le 2-indole éthylamine et leurs sels de cation alcalin. Dans un mode de réalisation, le polysaccharide selon l'invention 5 est caractérisé en ce que le dérivé du tryptophane est choisi parmi les esters du tryptophane de formule II OE H Formule II 10 E étant un groupement pouvant être : • un alkyle linéaire ou ramifié en Cl à C8. • un alkylaryle ou un arylalkyle linéaire ou ramifié en C6 à C20. 15 Le polysaccharide peut avoir un degré de polymérisation compris entre 10 et 3000. Dans un mode de réalisation, il a un degré de polymérisation compris entre 10 et 400. Dans un autre mode de réalisation, il a un degré de polymérisation 20 compris entre 10 et 200. Dans un autre mode de réalisation, il a un degré de polymérisation compris entre 10 et 50. Dans un mode de réalisation, l'insuline est une insuline humaine 25 recombinante telle que décrite dans la Pharmacopée Européenne. Dans un mode de réalisation, les ratios massiques polymère/insuline sont compris entre 0,1 et 5. Dans un mode réalisation, ils sont compris entre 0,5 et 2,2. 30 Dans un mode réalisation, ils sont compris entre 0,7 et 1,3. De préférence cette composition est sous forme d'une solution injectable. Dans un mode de réalisation, la concentration en insuline des solutions est de 600 pM soit 100 UI/mL. Dans un mode de réalisation, la concentration en insuline de 600 pM peut être réduite par simple dilution, en particulier pour les applications 10 pédiatriques. L'invention concerne également une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par séchage et/ou lyophilisation. Dans le cas des libérations locale et systémique, les modes d'administration envisagés sont par voie intraveineuse, sous-cutanée, intradermique, transdermique, intramusculaire, orale, nasale, vaginale, oculaire, buccale, pulmonaire etc. L'invention concerne également l'utilisation d'un complexe selon l'invention pour la formulation d'une solution d'insuline humaine de concentration de 100 UI/mL destinée aux pompes à insuline implantables ou transportables. Exemple 1 : Solution d'insuline analogue rapide à 100 UI/mL Cette solution est une solution commerciale de Novo vendue sous le nom de Novolog. Ce produit est une insuline analogue rapide. Exemple 2 : Solution d'insuline humaine à 100 UI/mL Cette solution est une solution commerciale de Novo vendue sous le nom d'Actrapid. Ce produit est une insuline humaine. 15 20 25 30 Exemple 3 : Préparation d'une solution d'insuline humaine à 200 Ul/mL 125,6 mg d'insuline (21,6 pmol) comprenant 470 pg de Zn2+ sont 5 mis en suspension dans 8,74 mL d'acide acétique 40 mM. La protéine est ensuite solubilisée par l'ajout de 1,35 mL d'HCI 0,1 N (pH 2,6). La concentration finale est ensuite ajustée à 200 UI/mL (1,2 mM) par ajout d'eau. Le pH final de cette solution est de 2,6 pour une concentration en 10 acide acétique de 20 mM. Cette solution limpide est filtrée sur 0,22 pm. Exemple 4 : Préparation des excipients 15 Préparation du tampon phosphate 200 mM à pH 7 Une solution A de phosphate monosodique est préparée comme suit : 1,2 g de NaH2PO4 (10 mmol) sont solubilisés dans 50 mL d'eau dans une fiole jaugée. Une solution B de phosphate disodique est préparée comme suit : 20 1,42 g de Na2HPO4 (10 mmol) sont solubilisés dans 50 mL d'eau dans une fiole jaugée. Le tampon 200 mM phosphate à pH 7 est obtenu en mélangeant 3 mL de solution A à 7 mL de solution B. Préparation d'une solution de m-crésol 130 mM La solution de m-crésol est obtenue en solubilisant 0,281 g de m-crésol (2,6 mmol) dans 20 mL d'eau dans une fiole jaugée. Préparation d'une solution d'EDTA à 50 mM La solution d'EDTA est obtenue en solubilisant 0,372 g d'EDTA (1 mmol) dans 20 mL d'eau dans une fiole jaugée. Préparation d'une solution de Tween 20 à 0,8 mM La solution de Tween 20 est obtenue en solubilisant 98 mg de 35 tween 20 (80 pmol) dans 100 mL d'eau dans une fiole jaugée. 25 30 Préparation d'une solution de Glycérine à 1,5 M La solution de Glycérine est obtenue en solubilisant 13,82 g de glycérine (150 mmol) dans 100 mL d'eau dans une fiole jaugée. Préparation des solutions de polymère amphiphiles Deux polymères amphiphiles sont employés. Le polymère 1 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium modifié par le sel de sodium du L-tryptophane obtenu à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 10 kg/mol, soit un degré de polymérisation de 39 (Pharmacosmos) selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR07.02316. La fraction molaire de méthylcarboxylate de sodium, modifiés ou non par le tryptophane, soit i dans la formule I, est de 1,03. La fraction molaire de méthylcarboxylate de sodium modifiés par le tryptophane, soit n dans la formule I, est de 0,36. La solution de polymère 1 est obtenue en solubilisant 4,03 g de polymère 1 (teneur en eau = 10%) dans 15 mL d'eau dans un tube de 50 mL. Cette solution est ensuite ajustée à pH 5,5 par une solution d'HCI 0,1 N. La solution de polymère 1 est transvasée dans une fiole jaugée de 20 25 mL et la concentration est ajustée à 145 mg/mL en complétant jusqu'au trait de jauge par de l'eau. Le polymère 2 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium modifié par le sel de sodium du L-tryptophane obtenu à partir d'un dextrane de 25 masse molaire moyenne en poids de 40 kg/mol, soit un degré de polymérisation de 154 (Pharmacosmos) selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR07.02316. La fraction molaire de méthylcarboxylate de sodium, modifiés ou non par le tryptophane, soit i dans la formule I, est de 1,03. La fraction molaire de méthylcarboxylate de sodium modifiés par le 30 tryptophane, soit n dans la formule I, est de 0,37. La solution de polymère 2 est obtenue en solubilisant 4,03 g de polymère 2 (teneur en eau = 10%) dans 15 mL d'eau dans un tube de 50 mL. Cette solution est ensuite ajustée à pH 5,5 par une solution d'HCI 0,1 N. La solution de polymère 2 est transvasée dans une fiole jaugée de 25 mL et la concentration est ajustée à 145 mg/mL en complétant jusqu'au trait de jauge par de l'eau. Exemple 5: Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 Ul/mL en présence de polymère 1 Pour un volume final de 7 mL de formulation avec un ratio massique [polymère 1]/[insuline] de 1,0, les différents réactifs sont mélangés 10 en quantités précisées dans le tableau ci-dessous et dans l'ordre qui suit : Insuline à 200 UI/mL 3,5 mL EDTA à 50 mM 28 pL Polymère 1 à 145 mg/mL 174 pL Ajustement pH 7 avec NaOH 1 N 95 pL Tampon phosphate 200 mM pH 7 350 pL Tween 20 0,8 mM 70 pL Glycérine 1,5 M 793 pL m-crésol 130 mM 1,562 mL 20 Eau (Volume pour dilution ù volume de soude) 425 pL Le pH final est de 7 � 0,3. Cette solution limpide est filtrée sur 0,22 pm puis est placée à +4'C 25 Les exemples de 6 à 8 ont été préparés selon le même mode opératoire en faisant varier les volumes de solution de polymère pour atteindre les ratios massiques polymère/insuline indiqués dans le tableau, le type de polymère, la présence d'EDTA, le type d'agents anti-bactériens et/ou la 30 présence de Tween et de glycérine. Les solutions finales ont un pH de 7, elles sont isotoniques, limpides et filtrées sur 0,22 pm. 15 Exemple Polymère ratio massique Antibactériens Excipients EDTA Polymère/insuline (mM) (pM) 1 1.0 Crésol (29) 8 pM Tween, 200 Glycérine 6 1 1.0 Crésol (29) 8 pM Tween, 0 Glycérine 7 1 2.1 Phénol (29) 200 8 2 0.8 Crésol (29) 8 pM Tween, 200 Glycérine Exemple 9 : Cinétique d'agrégation de l'insuline Les échantillons sont placés sur un rotor à température ambiante. 5 Dans la solution préparée à l'exemple 1, des agrégats apparaissent à partir de la centième heure. Dans la solution préparée à l'exemple 5, des agrégats apparaissent seulement à partir de la trois-centième heure. Exemple 10 : Injectabilité des solutions Toutes ces solutions sont injectables avec les systèmes habituels d'injection d'insuline. Les solutions décrites dans les exemples 1, 2 et 5 à 8 sont injectées toutes aussi facilement avec des seringues à insuline avec des aiguilles de 31 Gauge. Les solutions décrites dans les exemples 1 à 2 et 5 à 8 sont injectées toutes aussi facilement avec le stylo à insuline de Novo, commercialisé sous le nom de Novopen, avec des aiguilles de 31 Gauge. Exemple 11 : Protocole de mesure de la Pharmacodynamie des solutions d'insuline 6 cochons domestiques d'environ 50 kg, préalablement cathétérisés au niveau de la jugulaire, sont mis à jeun 2 à 3 heures avant le début de l'expérience. Dans l'heure précédant l'injection d'insuline, 3 prélèvements sanguins sont réalisés afin de déterminer le niveau basal de glucose et d'insuline. L'injection d'insuline à la dose de 0.0625 UI/kg est réalisée en 25 sous-cutané au niveau du cou, sous l'oreille de l'animal. Des prélèvements sanguins sont ensuite réalisés toutes les 10 minutes sur 3 heures puis toutes les 30 minutes jusqu'à 5 heures. Après chaque prélèvement, le cathéter est rincé avec une solution diluée d'héparine. Une goutte de sang est prélevée pour déterminer la glycémie au moyen d'un glucomètre. Les courbes de pharmacodynamie du glucose sont ensuite tracées. Exemple 12 : Résultats de Pharmacodynamie des solutions d'insuline Les résultats obtenus représentés sur les courbes des figures 1 et 2 montrent que toutes les formulations de complexe selon l'invention (courbes � exemple 5 à 8 �) permettent d'obtenir un délai d'action (onset of action) inférieur à 30 minutes et un nadir inférieur à deux heures, systématiquement inférieurs à ceux des formulations d'insuline humaine (courbe � exemple 2 �) et sensiblement comparables à ceux des formulations d'insuline rapide (courbe � exemple 1 �).15 Revendications1. Complexe entre l'insuline humaine et un polymère amphiphile comportant des groupes fonctionnels carboxyles, ledit polymère amphiphile étant choisi parmi les polysaccharides fonctionnalisés constitués en majorité de liaisons glycosidiques de type (1,6) fonctionnalisés par au moins un dérivé du tryptophane, noté Trp : - ledit dérivé du tryptophane étant greffé ou lié aux polysaccharides par couplage avec une fonction acide, ladite fonction acide étant une fonction acide portée par un bras de liaison R lié au polysaccharide par une fonction F, ladite fonction F résultant du couplage entre le bras de liaison R et une fonction ûOH du polysaccharide, - F étant soit une fonction ester, thioester, amide, carbonate, 15 carbamate, éther, thioéther ou amine, - R étant une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée, comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S, et ayant au moins une fonction carboxyle, 20 - Trp étant un reste d'un dérivé du tryptophane, L ou D, produit du couplage entre l'amine du tryptophane et au moins un acide porté par le groupement R et/ou un acide porté par le polysaccharide comportant des groupes fonctionnels carboxyles. 25 2. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce que le polysaccharide est choisi parmi les polysaccharides de formule I : Formule 1 Polysaccharidedans laquelle, • le polysaccharide étant un dextrane, • F résultant du couplage entre le bras de liaison R et une fonction ûOH du polysaccharide et étant soit une fonction ester, thioester, amide, carbonate, carbamate, éther, thioéther ou amine, • R étant une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée, comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S, et ayant au moins une fonction carboxyle, • Trp étant un reste d'un dérivé du tryptophane, L ou D, produit du couplage entre l'amine du dérivé du tryptophane et au moins un acide porté par le groupement R et/ou un acide porté par le polysaccharide comportant des groupes fonctionnels carboxyles, n représente la fraction molaire des R substitués par Trp et est 15 comprise entre 0,05 et 0,7, de préférence 0,1 et 0,5, encore de préférence 0,3 et 0,4, i représente la fraction molaire des groupements F-R-[Trp]n portés par unité saccharidique et est comprise entre 0 et 2, 20 - lorsque R n'est pas substitué par Trp, alors le ou les acides du groupement R sont des carboxylates de cation, alcalin de préférence comme Na+ ou K+, lesdits polysaccharides étant amphiphiles à pH neutre. 25 3. Complexe selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que F est soit un ester, un carbonate, un carbamate ou un éther.15 4. Complexe selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que le groupe R est choisi dans les groupes suivants : F OH OH ou leurs sels de cations alcalins. 5. Complexe selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que le dérivé du tryptophane est choisi dans le groupe constitué par le tryptophane, le tryptophanol, le tryptophanamide, le 2-indole éthylamine et leurs sels de cation alcalin. 6. Complexe selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que le dérivé du tryptophane est choisi parmi les esters du tryptophane de formule II Formule II OE E étant un groupement pouvant être : • un alkyle linéaire ou ramifié en Cl à C8. • un alkylaryle ou un arylalkyle linéaire ou ramifié en C6 à C20. 7. Complexe selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que l'insuline est une insuline humaine recombinante..8. Complexe selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que les ratios massiques polymère/insuline sont compris entre 0,1 et 5, de préférence entre 0,5 et 2.2 et encore de préférence ils sont compris entre 0,7 et 1,3. 9. Complexe selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 caractérisé en ce que les ratios massiques polymère/insuline sont compris entre 0,7 et 1,3. 10. Composition pharmaceutique comprenant au moins un complexe selon l'une quelconque des revendications 1 à 9. 11. Composition selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'elle est sous forme d'une solution injectable. 12. Composition selon l'une quelconque des revendications 10 à 11 caractérisée en ce que la concentration des solutions est 600 pM soit 100 Ul/ml. 20 13. Utilisation d'un complexe selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 pour la préparation d'une formulation d'insuline humaine à une concentration voisine de 600 pM (100 UI/mL) dont le délai d'action est inférieur à 30 minutes, de préférence inférieur à 20 minutes, et encore de préférence inférieur à 15 minutes. 25 14. Utilisation d'un complexe selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 pour la préparation d'une formulation d'insuline humaine à une concentration voisine de 600 pM (100 Ul/ml) dont le nadir glycémique est inférieur à 120 minutes, de préférence inférieur à 105 minutes, et encore de 30 préférence inférieur à 90 minutes. 15. Utilisation d'un complexe selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 pour la préparation d'une formulation d'insuline à 100 Ul/ml destinée aux pompes à injection.15