Brevet FR2927901A1 — publié le 20090828

PROCEDE DE PREPARATION DE NUCLEOTIDES ET ANALOGUES A FACON PAR SYNTHESE SUR SUPPORT SOLUBLE ET OUTILS BIOLOGIQUES PREPARES 10 La présente invention concerne un procédé de préparation de monomères 15 nucléotidiques ou de monomères d'analogues nucléotidiques sur support soluble, plus précisément une méthode de préparation de nucléotides, c'est-à-dire des nucléosides mono-, di- et triphosphatés. La synthèse chimique de nucléotides et oligonucléotides a fait l'objet de recherches intenses depuis le début des années quatre-vingt. Ainsi, en 20 1983, un procédé de synthèse d'oligonucléotides sur support solide a été mis au point par McBride et Caruthers. Cette méthode, dite � aux phosphoramidites �, utilise un support solide auquel est attaché un nucléoside. Les supports solides utilisés dans cette méthode sont des billes de verre de porosité contrôlée. Le premier nucléoside est attaché au 25 support solide via l'hydroxyle en position 3' et la synthèse progresse de l'extrémité 3' vers l'extrémité 5' de la chaîne d'acide nucléique. Plus précisément, en enlevant un groupe protecteur acide labile en position 5', on libère une fonction hydroxyle. Le groupe nucléophile terminal est alors couplé à un monomère 3'-O-phosphoramidite protégé en position 5' et 30 éventuellement sur l'hétérocycle, en présence d'un activateur. La liaison 3', 5' phosphite triester est alors oxydée pour donner un lien phosphotriester. Dans cette méthode de synthèse, on réalise successivement les étapes de déprotection, couplage, � capping � et oxydation, et elles sont répétées jusqu'à ce qu'un oligomère de la longueur désirée soit obtenu. Depuis lors, d'autres méthodes synthétiques ont utilisé des supports solides. Ainsi, ces méthodes sont décrites par Gallop et al J.Med. Chem. 37, 1233 (1994), Gold et al, Annu Rev. Biochem. 64,763 (1995) et Thompson et al Chem Rev, 96 555 (1996). Bien que l'on obtienne des résultats satisfaisants, les méthodes sur support solide présentent certains désavantages, par exemple un comportement non linéaire en termes de cinétique, une distribution irrégulière sur le support ou du fait du support, des problèmes de solvatation, un taux de couplage insuffisant ou des problèmes de synthèse dus à la nature hétérogène des conditions réactionnelles, et plus précisément du milieu réactionnel. De plus, les supports solides sont très coûteux, ce qui rend la synthèse à grande échelle très onéreuse. En outre, le rendement de synthèse en phase solide conventionnelle n'est pas toujours satisfaisant, compte tenu notamment de difficultés de purification du produit et de séparation du produit d'avec les séquences tronquées. Enfin, avec les méthodes sur support solide, le suivi réactionnel peut être difficile. D'autres méthodes alternatives ont donc été recherchées, qui mettraient en oeuvre des conditions réactionnelles plus homogènes et l'utilisation de supports polymères solubles a été proposée. Cette méthodologie est appelée � synthèse en phase liquide � (� liquid phase synthesis �) et résout certains problèmes rencontrés avec les supports solides. Ces méthodes utilisent du polyéthylène glycol (PEG) comme support soluble, comme cela apparaît dans Mutter et al Angew. Chem. /nt. Ed. Engl. 10, 811 (1971) et Bayer et al Nature (London) 237, 512 (1972). A part le PEG, d'autres supports sont connus dans la technique, notamment les PEG greffés sur polystyrène réticulé (Bayer, E. Angew. Chem. /nt. Ed. Eng130,113 (1991). On connaît aussi la synthèse de peptide sur polyéthylèneimine, le support ayant un poids moléculaire compris entre 30.000 et 40.000 (Pfaender et al ln Peptides; Proc. Eight Eur. Pep. Symp; Ann Arbor Science; North Holland p. 137 (1967) et Blecher et al Liebigs. Ann Chem, 1263 (1973)). Des copolymères polyvinyl-alcool (Bayer et al Liebigs An. Chem., 1671 (1974)) et des copolymères polyvinyl alcool-poly(1-vinyl-2-pyrrolidone) (Geckeler et al Makromol. Chem, 175, 1995 (1974)) ont également été utilisés comme support soluble pour la synthèse de peptides. Un des désavantages majeurs de ces premières synthèses peptidiques sur support soluble réside dans les rendements d'obtention du peptide attendu, qui sont bas, du fait d'un clivage incomplet et/ou de réactions annexes prédominantes. On a alors utilisé d'autres méthodes de clivage, tels que celles qui sont induites par des liaisons acide ou base labiles, des liaisons thiol labiles et le relargage photolitique des peptides après la synthèse. Une méthode récente pour synthétiser des oligopeptides, des oligosaccharides et des oligonucléotides utilisant la synthèse en phase liquide, est décrite dans WO2006096963. Le liquide ionique utilisé comme support liquide est un sel organique de type onium, par exemple un cation ammonium quaternaire hétérocyclique et un anion, par exemple Cr, Br", BF4-, PF6 , SbF6 , CuCl2 et AICI4 Des exemples de cations comprennent également des pyridines substituées et des imidazoles 1,3-disubstitués. Donga et al, J. Org. Chem. 71, 7907-7910 (2006) décrit la synthèse d'oligonucléotides sur support soluble du type liquide ionique (ILSS) avec de hauts rendements et avec une telle pureté qu'aucune étape de chromatographie n'est nécessaire pour la purification des intermédiaires avant le clivage du support. Dans cette méthode, le support ionique soluble est synthétisé à partir de N-méthylimidazole et 2-bromoéthanol puis isolé par chromatographie échangeuse d'anions. Le dérivé 3'- succinylé 5'-DMT-thymidine a été couplé au liquide ionique en utilisant de la dicyclohexylcarbodiimide (DCC) et une quantité catalytique de 4-(diméthylamino)pyridine (DMAP) dans l'acétonitrile, pour donner le nucléoside greffé au liquide ionique. Ce dernier est isolé et purifié par précipitation d'une solution éthyléther/acétate d'éthyle, traité dans le chloroforme et lavé à l'eau. Divers oligonucléotides ont été obtenus à partir du nucléoside greffé correspondant selon cette méthode. Parang et al in Organic Letters Vol. 3, No. 2 (2001) décrit un réactif supporté pour produire des monophosphates de carbohydrates et d'un nucléoside en utilisant un copolymère réticulé polystyrène-divinylbenzène fonctionnalisé par le cyanoéthyl-N,N-diisopropyl phosphoramidite comme agent de phosphitylation. Cet agent immobilisé est couplé avec des alcools en présence de 1 H-tétrazole pour produire des phosphite-triesters liés au polymère qui sont ensuite oxydés en phosphotriesters correspondants. Le dérivé phosphaté immobilisé est alors déprotégé et clivé du support solide. Le brevet américain US 6,001,966 décrit pour sa part une méthode de synthèse séquentielle en solution d'oligonucléotides, par réaction d'unités monomères. Ainsi, bien que différentes méthodes soient connues pour synthétiser des nucléotides, il reste encore des problèmes tant avec les synthèses en phase solide qu'avec les synthèses en solution, notamment des problèmes de rendements faibles et des procédures de purification longues. Pour la synthèse des nucléosides triphosphates, il y a un réel besoin pour une méthode générale qui produise des nucléosides triphosphates avec de hauts rendements et qui puisse être appliquée à de nombreux substrats (Burgess and Cook, Synthesis of Nucleoside Triphosphates, Chem Rev. 100(6) 2047-2060 (2000). On a donc besoin d'une méthode de production de monomères nucléotides ou d'analogues de nucléotide en grande quantité, à des prix de revient bas et sans étapes de purification laborieuses. Un objet de la présente demande est de résoudre ces problèmes de l'art antérieur concernant la synthèse de monomères nucléotidiques. La présente invention concerne une méthode utilisant un support soluble pour produire des nucléotides ou analogues de nucléotides. L'invention procure un procédé de préparation de monomères nucléotides ou d'analogues de nucléotides avec de hauts rendements. Selon l'invention, les monomères obtenus sont des nucléosides ou analogues de nucléosides mono-, di- et triphosphatés. Dans le procédé de préparation de monomères nucléotidiques de l'invention les étapes de purification sont très simplifiées, ce qui influe favorablement sur les rendements. La présente invention concerne également des monomères nucléotidiques et des monomères d'analogues nucléotidiques obtenus par le procédé, comme outils biologiques. Ces outils biologiques peuvent être utilisés en enzymologie, en pharmacologie ainsi que comme produit de départ pour la synthèse de molécules d'intérêt, notamment des antiviraux et/ou des anticancéreux. La présente invention concerne un procédé de préparation de nucléotides ou analogue de nucléotides monomères comportant les étapes suivantes : (1) couplage d'un support polyéthylèneglycol soluble pourvu d'au moins un bras de liaison diacide ou éther-acide et d'un nucléoside ou analogue de nucléoside monomère, via un groupe amine ou hydroxyle du nucléoside, à l'aide d'un agent de couplage; (2) au moins une phosphorylation dudit nucléoside ou analogue de nucléoside couplé au support avec un agent de phosphorylation. Le clivage du bras entre le support et le monomère peut alors avoir lieu, et permet alors la récupération du nucléotide ou analogue de nucléotide monomère. Ainsi, de façon générale, selon l'invention, on procède à l'accrochage du bras de liaison sur le support soluble de type PEG, puis on couple ce support à un nucléoside ou analogue par l'intermédiaire du bras de liaison, on phosphoryle alors le nucléoside couplé, en une ou plusieurs étapes de phosphorylation. On peut ensuite cliver le nucléotide avant de le récupérer. Ce procédé permet d'obtenir à façon des outils biologiques ou effecteurs phosphorylés (nucléosides mono-, di- et triphosphatés), nucléotides ou analogues, naturels ou non, en évitant les étapes usuelles longues, fastidieuses et onéreuses de purification. La synthèse a lieu en solution, ce qui permet un suivi réactionnel et la caractérisation des intermédiaires par des techniques usuelles. Cette technique sur support présente les avantages de purification facilitée des produits intermédiaires et finaux, le plus souvent ioniques, et permet l'élimination des réactifs utilisés en excès. A titre d'exemple, l'AraCTP commercial a un coût plus de 13 fois supérieur au prix de revient (réactif et matériel) par le procédé proposé selon l'invention. Du point de vue des rendements, le procédé de l'invention s'avère également supérieur aux procédés usuels. La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la description et des modes préférés de réalisation ainsi que des exemples qui suivent, et sur les figues annexées. La figure 1 est un schéma illustrant d'une part l'arrimage (a) de bras de liaison divers sur des supports solubles, ainsi que les supports une fois ces bras attachés, puis la fonctionnalisation d'un support soluble par couplage (b) avec un nucléoside, via la fonction amine exocyclique d'un hétérocycle R'NH2. Sur cette figure, sont également représentés (c) divers hétérocycles aminés susceptibles d'être couplés au support, dans le procédé de l'invention : un nucléoside à base purique (c-1), un nucléoside à base pyrimidique (c-2), un analogue structural à base pyrimidique modifié sur le sucre et la base (c-3), illustrant les analogues de nucléosides par modification du sucre, ainsi qu'un analogue de nucléoside à base purique (c-4) illustrant les analogues de nucléosides par modification sur la base. La figure 2 est un schéma où apparaissent, illustrées pour le cas (a-2), des étapes de phosphorylation que l'on peut mener notamment à partir des nucléosides greffés de la figure 1. Sont illustrées une diphosphorylation (d) directe et une monophosphorylation (e) pouvant être suivie, à la suite d'une étape d'activation, par une seconde monophosphorylation (g) menant à des nucléosides diphosphatés, ou encore deux monophosphorylations successives (g) ou une diphosphorylation (f), menant à des nucléosides triphosphatés. Par � monomère �, il est ici considéré que le nucléoside ou le nucléotide comporte une base, un sucre et dans le cas des nucléotides, un ou plusieurs groupe(s) phosphate(s). Sont ainsi donc exclus les oligomères. La première étape selon l'invention consiste à coupler un monomère nucléosidique sur un support soluble possédant un bras de liaison. A titre de support soluble, selon l'invention, on peut utiliser un support polyéthylèneglycol (PEG) ayant au moins un bras diacide ou éther-acide de jonction. Par au moins un bras, on entend un ou deux. Plus précisément, le PEG pourvu d'au moins un bras de liaison peut avoir pour formule (I) RO-C2H4-O-PEG-O-C2H4-O-C(0)-(CH2),-COOH dans laquelle R est un groupe alkyle ou benzyle ou aryle ou -C(0)-(CH2),'- COOH et n et n', indépendamment l'un de l'autre, représentent 0 ou un entier de 1 à 10, ou (II) RO-C2H4-0-PEG-O-C2H4-0-(CH2)m-000H dans laquelle R est un groupe alkyle ou benzyle ou aryle ou û(CH2)e-000H et m et m', indépendamment l'un de l'autre, représentent 0 ou un entier de 1 à 3. De préférence selon l'invention, n ou n' dans la formule (I) est inférieur à 6 et de préférence, n ou n' dans la formule (I) est un entier allant de 0 à 4 et dans la formule (Il), m et m' sont de préférence 1 ou 2. Comme cela apparaîtra dans la description détaillée, un bras de liaison préféré est de type succinate. Dans les formules ci-dessus, le radical alkyle est de préférence linéaire ou ramifié, en C1 à C12, et le radical aryle est de préférence choisi parmi phényle, tolyle et o-tolyle. De préférence, R signifie méthyle ou benzyle. Le terme � polyéthylèneglycol � (PEG) n'est pas limité au seul polyéthylèneglycol proprement dit mais inclut tout polyéthylèneglycol dérivé, ayant par exemple des groupes hydroxyles à ses deux extrémités ou un groupe hydroxyle à l'une de ses extrémités et un groupe méthoxy à l'autre, le polyéthylèneglycol monométhyléther et le poly(oxyéthylène) glycol ou analogues. Plus généralement, tel qu'utilisé ici, � support soluble � signifie un support du type polyéthylèneglycol ayant un bras diacide ou un bras éther-acide de jonction ou deux tels bras. De préférence, le support soluble de la présente invention est un polyéthylèneglycol (PEG), polyéthyleneglycol monométhyléther ou un poly(oxyéthylene)glycol comportant au moins un bras diacide ou éther-acide. Le poids moléculaire dudit PEG selon l'invention est de préférence dans la fourchette allant d'environ 3.000 à environ 6.000. De préférence, le PEG a un poids moléculaire d'environ 4.000. Le bras diacide ou éther-acide est attaché au PEG par diverses méthodes dépendant du type de bras de liaison à fixer, la méthode générale étant illustrée dans les exemples. Par exemple, si le bras, du type succinate, doit être associé au PEG, la procédure comprend la dissolution du PEG dans un solvant, l'addition de l'anhydride d'acide correspondant, l'agitation à température ambiante, puis la concentration du mélange réactionnel sous pression réduite, et la précipitation du PEG comportant le bras diacide. Dans le cas précis du bras succinate, le promoteur du bras est l'anhydride succinique. Dans le cas d'un bras oxalate, c'est le chlorure d'oxalyle qui est utilisé. De façon plus générale, un dérivé d'acide carboxylique, anhydride ou chlorure d'acide, par exemple, peut être utilisé pour fonctionnaliser le PEG. Le bras éther-acide peut par exemple être obtenu par deux voies de synthèse impliquant l'oxydation de l'alcool terminal du support, tel qu'illustré dans les exemples ou encore par réaction du PEG avec un acrylate d'alkyle. Si le bras est l'acide éthanoïque, le procédé pour former le bras comporte par exemple l'oxydation du PEG par des sels de chrome, l'agitation du mélange à température ambiante et la précipitation du PEG modifié. L'homme du métier saura adapter la méthode d'accrochage du bras au support soluble choisi et au bras requis. Comme cela apparaît à la figure 1, le PEG peut être bifonctionnel (HO-PEG-OH), R représentant H et porter deux bras de liaison (a-2 ; a-4) ou monofonctionnel (RO-PEG-OH) et porter alors un bras de liaison (a-1 ; a-3), R représentant alkyle, benzyle ou aryle. Une fois réalisé l'accrochage du bras de liaison sur le support soluble, le support est mis en présence du nucléoside ou de l'analogue de nucléoside. Le couplage avec le support soluble peut avoir lieu par l'intermédiaire d'un groupe amine, à l'aide d'un agent de couplage et conduisant à la formation d'une liaison amide cette variante étant illustrée à la figure 1 (b) ou via un groupe hydroxyle de l'analogue nucléosidique ou du nucléoside et conduisant à la formation d'une liaison ester. De préférence, le couplage est réalisé sur l'azote exocyclique de la base du nucléoside. Il s'agit par exemple de la fonction amine exocyclique de la cytosine, parmi les bases pyrimidiques, et de l'adénine ou la guanine, parmi les bases puriques, illustrées à la figure 1 (b et c). Le procédé de couplage peut varier selon le nucléoside à coupler et le support choisi. Généralement, le PEG à bras de liaison est mélangé avec le nucléoside ou nucléoside analogue que l'on cherche à phosphoryler, et l'agent de couplage est ajouté au mélange. Le mélange réactionnel est agité pendant une durée suffisante pour obtenir le couplage, les solvents sont évaporés et le produit final précipité, éventuellement recristallisé. Par � nucléoside �, on entend ici divers composés comportant d'une part un sucre et d'autre part un hétérocycle. Les nucléosides naturels sont des substances dont l'hydrolyse donne une molécule de ribose ou de déoxyribose et un hétérocycle purique (adénine, guanine) ou pyrimidique (cytosine, uracile, thymine). Les monomères nucléosidiques, nucléosides et analogues de nucléosides de l'invention peuvent être naturels ou synthétiques. Par � analogue de nucléoside � ou � nucléoside analogue �, on entend, selon l'invention, tout nucléoside modifié, c'est-à-dire un composé possédant une analogie structurale avec un nucléoside. Les analogues peuvent ainsi comporter une ou plusieurs modifications sur le cycle osidique et/ou sur l'aglycone, les bases pyrimidique ou purique par exemple pouvant porter des modifications de leur hétérocycle. La figure 1 illustre certains de ces composés, et RI à R6 sur le cycle osidique représentant les substituants usuels des résidus osidiques naturels ou non. Ainsi, RI à R6, indépendamment l'un de l'autre, peuvent représenter H, OH, halo, un groupement alkyle, O-alkyle, alcènyle, alcynyle en CI à Ca, alkylamino, amine, hydroxylamino, azido, nitro, cyano, ou tout autre substituant susceptible de former un nucléoside modifié. A la figure 1, le nucléoside à coupler est noté R'NH2. C'est un ensemble sucre-base à amine exocyclique (NH2), et R' représente l'ensemble sucre-base, sans cette amine exocyclique NH2 de la base qui va se coupler avec le bras du support soluble (b). Dans le composé analogue modifié sur le sucre de la figure 1 (c-3), la base est pyrimidique et, dans le cycle osidique, W peut représenter CH2, CHX ou CX2 (X représentant ici halo) pour former un carbocycle, quand Y et Z sont aussi des atomes de carbone, mais W peut aussi représenter O ou S, Y et Z représentant des atomes de carbone, ou encore W et Z peuvent représenter O ou S, Y représentant CH2, ou encore Y et W peuvent représenter O ou S, Z représentant CH2. La base peut porter un halogène, X' représentant de préférence H ou F. Dans le composé analogue modifié de la figure 1 (c-4), la base est purique modifiée, W' pouvant représenter CH ou CF, et X' représentant alors H, ou représenter N, et X' peut alors représenter F par exemple. Le sucre peut-être un ribose ou un déoxyribose ou encore tout autre analogue du type arabinofuranose, par exemple. La définition des nucléosides analogues de l'invention n'est donc pas limitée aux seuls composés illustrés à la figure 1 ou par les définitions de X, X', W, W', Y, Z et RI à R6 données ci-dessus à titre illustratif non limitatif. Les nucléosides ou analogues de nucléosides utilisés comme produit de départ dans le procédé de l'invention comportent un groupe amino ou un groupe hydroxyle qui permet leur couplage au bras de liaison du support soluble. Des exemples de nucléosides comportant des bases sont par exemple l'adénosine, la guanosine, la cytidine. Ils peuvent être également les déoxynucléosides correspondants, de la déoxyadénosine, déoxyguanosine, ou déoxycytidine. Les analogues de nucléosides peuvent être modifiés sur la base, purine ou pyrimidine, et/ou sur le groupe carbohydrate (sucre). Des exemples de nucléosides et d'analogues de nucléosides plus précisément employés comme produits de départ sont donnés ci-après : 3'-O-acétyl-2'-désoxycytidine, allopurinol riboside, 2-amino-6-chloropurine riboside, 2'-désoxyuridine, cytidine, 2'-désoxycytidine, 5-aza-2'-désoxycytidine, 8-azaguanine, 8-bromoguanosine, 8-bromoguanosine, 2- chloroadénosine, 2-chloro-N6-cyclopentyladénosine, 5-chlorocytosine arabinoside, 2-chloro-2'-désoxyadénosine, 5-chloro-2'-désoxyuridine, 6-chloropurine riboside, 2'-désoxyadénosine monohydrate, 2'-désoxycytidine, 2'-désoxyguanosine monohydrate, 3'-désoxyguanosine, 2'-désoxyuridine, 2,6-diaminopurine 2'-désoxyriboside, 2',3'-didésoxyadénosine, 2',3'-didésoxycytidine, 5,6-dihydrodésoxyuridine, 6-(y,y-diméthylallylamino)purine riboside, 1,N6-éthèno-2'-désoxyadénosine, 5- hyd roxyméthyl-2'-désoxyuridine, 5-(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)-6- thioguanosine, S-(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)-6-thioinosine, 5-iodo-2'- désoxycytidine, N4-isobutyryl-2'-désoxycytidine, isocytosine, 2',3'-O-isopropylidèneguanosine, 8-mercaptoguanosine, 5-méthoxyuridine, 2'-0-méthyladénosine, 5-méthylcytidine, 2'-O-méthylcytidine, 3-méthylcytidine methosulfate, N6-méthyl-2'-désoxyadénosine, 7-méthylguanosine, N2-méthylguanosine, 6-méthylmercaptopurine riboside, 3'-O-méthyluridine, acide orotique, 2-thio-6-azauridine, 4-thiouridine, thymine 1-/3-D-arabinofuranoside, uracil 1-/3-D-arabinofuranoside, zeatine-riboside, 2',3'- didésoxy-3'-thia-fl-L-cytidine, 2',3'-didésoxy-3'-thia-fl-L-5-fluorocytidine, 9[2-(phosphonylméthoxy) propyl] adénine, 9[2-(phosphonylméthoxy) éthyl] adénine, 1-(,l3-D-ribofuranosyl)-1 H-1,2,4-triazole-3-carboxamide, $-D-2'-C-méthyl cytidine,13-D-2'-C-méthyl 5-fluorocytidine, fl-D-2'-désoxy-2'-fluoro-2'-C-méthyl cytidine, ,13-D-2'-désoxy-2',2'-difluoro cytidine, 7-déaza-/3-D-2'-C-méthyl adénosine, 7-déaza-7-fluoro-fl-D-2'-C-méthyl adénosine, 2'-désoxy-/3-L-thymidine, 2'-désoxy-,6-L-cytidine, 1-(2'-fluoro-a-L-ribofuranosyl)-uracile, 9-(fl-D-arabinofuranosyl)-2-fluoro- adénine, 9-(/3-D-arabinofuranosyl)-adénine, 1-(f3-D-arabinofuranosyl)-cytosine et analogues. Le couplage est réalisé à l'aide d'au moins un agent de couplage qui peut être choisi parmi un carbodiimide, une oxime aromatique ou les agents de couplage du type onium, c'est-à-dire par exemple ammonium, phosphonium ou uronium d'un anion nucléophile, ou leurs analogues. A titre d'exemple de carbodiimide, on peut citer le dicyclohéxylcarbodiimide (DCC) ou le diisopropylcarbodiimide (DIC). Comme oxime aromatique, on peut citer le 1- hydroxybenzotriazole (HOBt) 15 ou le 1- hydroxy-7-aza-benzotriazole (HOAt) et analogues. Comme onium, en particulier phosphonium, on peut citer l'hexafluorophosphate de (2-(1 H-benzotriazol-1-yl)-1,3,3- tétraméthyluronium (HBTU), l'hexafluorophosphate de (2-(7-aza-1 H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tétraméthyluronium (HATU) ou 20 l'hexafluorophosphate de benzotriazole-1-yl-oxy- trispyrrolidinophosphonium (PyBOP), et analogues. Un autre agent de couplage est la diméthylaminopyridine (DMAP). Les quantités utilisées dans la réaction de couplage dépendent des quantités de nucléosides ou analogues mises en jeu. Généralement, pour 1 25 à 5 éq de nucléoside, on utilise 1 à 10 éq d'agent de couplage. On peut aussi utiliser 1 à 2 éq de nucléoside, et 1 à 4 d'agent de couplage Généralement, un équivalent du support soluble comportant un ou deux bras de liaison est couplé à un ou deux équivalents du nucléoside ou analogue. 30 Par � nucléotide �, on entend ici des monomères constitués d'un hétérocycle et d'un sucre et d'au moins un groupe phosphorylé. Les nucléotides produits selon le procédé de la présente demande incluent des nucléosides mono-, di- ou triphosphates. Les nucléotides peuvent ainsi être naturels ou bien synthétiques. A l'issue de l'étape ou des étapes de phosphorylation décrites plus bas, et après le clivage, on obtient selon l'invention des nucléotides et analogues de nucléotides modifiés sur le sucre ou la base, comme l'étaient les nucléosides ou analogues de nucléoside de départ, et aussi des nucléotides pouvant être modifiés sur le ou les phosphates. Par exemple, les analogues de nucléotides modifiés sur la base peuvent être les suivants : 2'-désoxyinosine 5'-triphosphate, 2-amino-2- désoxyadénosine 5'-triphosphate, 5-aminoallyl-2'-désoxycytidine 5'- triphosphate, 5-fluorocytidine 5'-monophosphate, 2-fluoroadénosine 5'- monopohosphate, 5-iododésoxyuridine 5'-triphosphate, 5- trifluorométhylthymidine 5'-triphosphate, 5-(2-chloroéthyl) désoxyuridine 5'- triphosphate, 5-éthyldésoxyuridine 5'-triphosphate, (E)-5-(2-bromovinyl) désoxyuridine 5'-triphosphate, 5-fluorodésoxyuridine 5'-triphosphate, 6- thlopurine riboside 5'-triphosphate, 2-chlorodésoxyadénosine 5'-triphosphate, 5-azacytidine 5'-triphosphate, 3-déazauridine 5'-triphosphate, thiazofurine 5'-triphosphate, ribavirine 5'-triphosphate, allopurinol riboside 5'-triphosphate, Formycine B 5'-triphosphate, 8-bromoguanosine 5'- triphosphate, 8-mercaptoguanosine 5'-triphosphate, 7-méthyl-8-oxoguanosine 5'-triphosphate, 7-thia-8-oxoguanosine 5'-triphosphate, et analogues. Des exemples de nucléosides triphosphates modifiés sur la partie sucre sont les suivants : 2',3'-didésoxyadénosine 5'-triphosphate, 2',3'- désoxycytidine 5'-triphosphate, 2'amino-2'-désoxyadénosine 5'- triphosphate et analogues. Par exemple, des analogues de nucléotides modifiés à la fois sur la base et le résidu osidique peuvent être les suivants : arabinosyl-5-azacytosine 5'-triphosphate, 2-fluoroarabinofuranosyladénosine 5'-triphosphate, 1-(beta-L-ribofuranosyl)-2-isopropylamino-5,6-dichlorobenzimidazole 5'-triphosphate, 7-déaza-2'-C-méthyladénosine 5'-triphosphate, 2-amino-9-beta-D-arabinofuranosyl-6-méthoxy-9H-purine 5'-triphosphate, 1-(beta-L-2-fluoro-2-desoxyarabinofuranosyl)-5-méthyluracile 5'-triphosphate. Des exemples de nucléosides modifiés sur le phosphate sont les suivants : 2',3'-didésoxyadénosine 5'-O-(1-thiotriphosphate), 2',3'-didésoxycytidine-5'-O-(1-thiotriphosphate), 2',3'-didésoxyguanosine-5'-O-(1-thiotriphosphate), 2'-désoxyadénosine-5'-O-(1-thiotriphosphate), 2'-désoxycytidine-5'-O-(1-thiotriphosphate), 2'-désoxyguanosine-5'-O-(1-thiotriphosphate), 2'-désoxythymidine-5'-O-(1-thiotriphosphate), adénosine-5'-O-(1-thiotriphosphate), cytidine-5'-O-(1-thiotriphosphate), guanosine-5'-O-(1-thiotriphosphate), adénosine 3',5' cyclique monophosphate et analogues. La synthèse des monophosphates et diphosphates correspondants est aussi possible selon l'invention, comme cela apparaîtra par la suite, et dans les exemples. Partant d'un nucléoside ou analogue fixé au support soluble, le nucléoside est mono-, di- ou triphosphorylé en une ou deux ou trois étapes de phosphorylation. Comme cela apparaît à la figure 2, pour parvenir à un monophosphate, on procède à une monophosphorylation (e). Pour parvenir à un monomère diphosphaté, on procède à une diphosphorylation. Celle-ci peut être menée directement en une étape avec un agent diphosphorylant (d), ou en deux étapes de monophosphorylation successives (e) puis (g), la seconde monophosphorylation (g) pouvant être activée. Pour parvenir à un monomère triphosphaté, on procède à une triphosphorylation. Celle-ci peut être menée par diphosphorylation (d) avec un agent diphosphorylant, puis monophosphorylation ou encore par monophosphorylation (e), suivie par une diphosphorylation (f) ou suivie par deux monophophorylations successives (g). De préférence les secondes phosphorylations sont activées. Pour réaliser la phosphorylation, on utilise un agent de phosphorylation. Selon la nature et la réactivité de cet agent, une activation préalable peut être nécessaire. Pour la monophosphorylation du nucléoside sur support polymère, à une solution du nucléoside sur support polymère dans un solvant approprié, on ajoute un agent de phosphorylation du type oxychlorure de phosphore et on extrait et/ou on isole par précipitation le nucléoside monophosphate supporté. Pour la phosphorylation du nucléoside monophosphate sur support polymère, du nucléoside monophosphate supporté est dissous dans un solvant approprié, activé puis mis en présence d'agent phosphorylant du type phosphate de tributylammonium et le composé attendu est précipité. Pour la diphosphorylation du nucléoside monophosphate sur support polymère, le nucléoside monophosphate sur support polymère dans un solvant approprié est activé, puis mis en présence d'agent phosphorylant du type pyrophosphate de tributylammonium et le produit attendu précipité. Les agents de phosphorylation peuvent être choisis parmi les composés de type Z'=PX13, où Z' est O, S ou Se, pour une monophosphorylation, ou pour une diphosphorylation, W'[(P=Z')X']2 où W' est O, NH, CH2, CHOH, CHNH2, CHCH3, CHX2 ou CX22 et Z' est O, S ou Se, et X' et X2 représentant halo, ou analogues appropriés. D'autres agents de phosphorylation Z'=P(O-)3 et W'[(P=O)(O-)2]2 où W' et Z' ont la signification ci-dessus capables de mono- et diphosphoryler sont moins efficaces et peuvent nécessiter une activation du nucléoside ou de l'analogue de nucléoside. Comme exemple d'agent de phosphorylation, on peut citer particulièrement les dérivés du phosphore (III) ou les dérivés du phosphore (V). Sont appropriés les agents de phosphorylation du type de l'oxychlorure de phosphore, pour une monophosphorylation, par exemple choisi parmi l'oxychlorure de phosphore, le trichlorure de thiophosphate, le 4-nitrophényl dichlorophosphate, le O-(2-chlorophényl) dichlorothiophosphate, l'aminométhyl phosphonique acide, l'aminométhyl (méthyl) phosphonique acide, la 2-chloro-1,3,2-dioxaphospholane, la 2-chloro-2-oxo-1,3,2-dioxaphospholane, la 2-chloro-4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin-4-one, le baryum 2-cyoanoéthylphosphate, le diéthylchlorothiophosphate, le diméthylchlorothiophosphate, le méthyl-phosphorodichloridate, le phényldichlorophosphate, le méthyldichlorophosphite et le diphénylphosphite et analogues et aussi le 2-chlorophénylphosphorodichloridate, le 4-chlorophényl-phosphorodichloridate, le diphényl-chlorophosphate et le dibenzyl-N,N-diisopropylphosphoramidite. Sont préférés selon l'invention, l'oxychlorure de phosphore, le trichlorure de thiophosphate, le 4-nitrophényl dichlorophosphate, le phosphate de tributylammonium et le diphénylphosphite. Parmi les agents de diphosphorylation du type pyrophosphate de tributylammonium, on peut citer l'acide étidronique, les sels de l'imidodiphosphate, l'imino di(méthyl phosphonique acide), le tétrachlorure de pyrophosphoryle, le méthyl bis(dichlorophosphonate), l'acide méthylène bisphosphonique. Sont préférés selon l'invention, le pyrophosphate de tributylammonium et l'acide méthylène bisphosphonique. Les quantités d'agents de phosphorylation utilisées dépendent de leur réactivité. De façon générale, 10 à 30 équivalents d'agents phosphorylants sont utilisés pour 1 à 2 équivalents du nucléoside couplé au support, de préférence, 15 à 30 équivalents d'agents phosphorylants. Comme agents d'activation, on peut citer par exemple le mésitylsulfonylnitrotriazole (MSNT), le mésitylsulfonyltriazole (MST), le chlorure de mésitylsulfonyle (MSCI), le chlorure de tri-isopropylsulfonyle (TPSCI), le système Tf2O/diméthylaminopyridine (DMAP), le 1,1-carbonyldiimidazole (CDI) et similaires. Les agents d'activation sont utilisés dans des quantités de l'ordre de 1 à 10 équivalents, de préférence 3 à 6 équivalents. Dans une étape ultérieure à la phosphorylation, le support soluble peut être dissocié du nucléotide ou de l'analogue du nucléotide obtenu, ceci étant réalisé en utilisant un agent de clivage. Toute base ou tout nucléophile peut-être utilisé comme agent de clivage. Par exemple, on peut utiliser de l'ammoniaque, de l'hydroxyde de sodium, du méthylate de sodium, du méthanol ammoniacal ou du cyanure de potassium et analogues. Selon l'invention, de façon générale, on utilise un excès de base: Les nucléotides clivés de leur support tels que produits par le procédé de la présente demande peuvent ensuite être isolés selon toute méthode de l'art. On peut utiliser la chromatographie liquide (LC) ou HPLC, par exemple sur colonne en phase inverse. Ils peuvent être également purifiés par .dialyse, notamment lorsque le résidu issu du clivage n'a pas été éliminé précédemment. La dialyse peut être réalisée par toute méthode convenable, par exemple sur membrane d'ester de cellulose. De façon générale, pour les bras bifonctionnels, de type succinate, le bras clivé se sépare avec le substrat. Ceci peut rendre une dialyse avantageuse pour purifier. En revanche, pour les bras du type ether-acide, le bras restant sur le support, la dialyse peut ne pas être nécessaire. Comme indiqué ci-dessus, les nucléotides et analogues obtenus peuvent être utiles à titre d'effecteurs, d'outils biologiques pour la recherche, le diagnostic ou encore toute application thérapeutique ou pré-clinique. Bien que l'invention soit ici décrite dans ses modalités préférées, le spécialiste appréciera les équivalents, modifications, substitutions, omissions ou variantes possibles sans sortir pour autant du champ de l'invention. Exemple 1 : Polyéthylèneglycol-bis-succinate, PEG4000-bis-succinate 20g (4,76 mmol) de PEG40oo ont été co-évaporés avec de la pyridine anhydre et dissous dans 160 ml de pyridine. 5 g (49,90 mmol) d'anhydride succinique et 0,30 g (2,49 mmol) de diméthylaminopyridine ont été ajoutés et le mélange agité pendant deux jours à température ambiante. La solution 10 a été concentrée sous pression réduite, co-évaporée avec du toluène et dissous dans un minimum de dichiorométhane. Le précipité brun formé a été éliminé par filtration. Le filtrat a été concentré sous pression réduite et dissous dans un mélange dichiorométhane / N,N-diméthylformamide (3/7, v/v). Le PEG bis-succinate a été précipité par addition d'un excès de 15 diéthyléther froid. Le précipité a été filtré, lavé au diéthyléther et séché sous vide sur pastilles de KOH pour donner du PEG bis-succinate sous forme d'un solide blanc (18,14 g, 86 %). RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) 8 4.18 (m, 2H, (OCH2a)PEG), 3.40-3.75 (m, (OCH2)PEG), 2.57 (s, 4H, CH2Säcc). RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) S 173.9, 172.2 (s, C=OSäcc), 70.5 (s, (OCH2)PEG), 68.9 (s, (OCH2)PEG), 64.2 (s, (OCH2a)PEG), 29.3, 28.9 (s, CH2SUcc). Exemple 2 : Poly(oxyéthylène)40oo bis (2-hydroxyacétique acide) 1 g de PEG4000 (0,25 mmol) est dissous dans 10 ml d'acétone et 0,85 ml de réactif de Jones (1 mmol de CrO3) est ajouté. A la fin de l'addition, les sels 25 de chrome bleu-vert précipitent dans le milieu réactionnel. Le mélange a été agité à température ambiante pendant 16h. La réaction a été stoppée 20 par ajout de 0,15 ml d'isopropanol et 0,10 g de charbon actif, et l'agitation a été poursuivie pendant 3h. Le charbon actif a alors été éliminé par filtration sur un entonnoir de Buckner et le filtrat a été concentré sous pression réduite. Le résidu a été dissous dans un minimum de dichiorométhane et précipité par ajout d'un excès de diéthyléther froid. Le précipité a été filtré, lavé au diéthyléther, puis séché sous vide sur pastilles de KOH pour donner le produit attendu sous forme d'un solide blanc (3,26 g, 81 %). IR 1643 cm-1(000H), 3418 cm-1(OH). RN 13C (CDCI3, 75 MHz) 8 171.6 (s, C=O), 70.8 (s, (OCH2a)pEG), 70.4 (s, (OCH2)pEG), 68.5 (s, (OCH2OOOH)PEG). Exemple 3 : Méthode A: Couplage du PEG bifonctionnalisé et du nucléoside Une solution du nucléoside ou de l'analogue de nucléoside (2eq.) dans du N,N-diméthylformamide (30 ml) est ajoutée à une solution de PEG comportant deux bras de liaison (0,95 mmol, 1 eq), par exemple le PEG bis-succcinate, dans du dichlorométhane (70 ml). On ajoute du N,N- dicyclohexylcarbodiimide (3,79 mmol, 4 eq) et du N-hydroxylbenzotriazole (1,89 mmol, 2 eq) et le mélange résultant est agité à 60°C pendant 7h. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le résidu obtenu dissous dans un minimum de dichlorométhane et laissé à reposer à 4°C toute une nuit. La dicyclohexylurée précipitée est séparée par filtration. Le filtrat est concentré sous pression réduite et dissous dans du N,N-diméthylformamide (40 ml). La solution résultante est éliminée lentement à du diéthyléther froid en excès en volume. Le précipité est filtré et lavé au diéthyléther. Le produit final est recristallisé dans l'alcool éthylique absolu (40 ml) et séché sous vide sur pastilles de KOH . Exemple 4: Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(l-D-arabinofuranosyl)-cytosyl) succinate] 5 10 Le couplage entre du PEG-bis-succinate (4 g, 0,95 mmol) et le nucléoside araC (0,46 g, 1,89 mmol) a été réalisé par la méthode A de l'exemple 3. Le composé a été obtenu sous forme d'un solide blanc (3,65 g, 83 %). Rf (CH2Cl2 / MeOH, 7/3, v/v) : 0.7. RMN 1H (D20, 200 MHz) S 8.16 (d, J6_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.26 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 6.10 (d, J1'_2' = 4.6 Hz, 1H, H1,), 4.34 (t, J2'_3' = 4.6 Hz, 1H, Hz), 4.16 (m, 2H, (OCH2a)pEG), 4.02-3.92 (m, 2H, H3. H4'), 3.73 (m, 2H, 2H5,), 3.70-3.33 (m, (OCH2)pEG), 2.76-2.62 (m, 4H, CH2sUcc)• RMN 13C (D20, 75 MHz) 8 174.6, 174.5 (2s, C=OSäcc), 162.5 (s, C4), 156.7 (s, C2), 146.7 (s, C6), 97.3 (s, C5), 87.1 (s, Cl,), 84.0 (s, C4'), 75.4 (s, Cz), 75.2 (s, C3'), 69.6 (s, (OCH2)pEG), 68.4 (s, (OCH2/3)pEG), 64.1 (s, (OCH2a)pEG), 60.7 (s, C5'), 31.5, 28.5 (2s, CH2su,c). Exemple 5: Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(2'-désoxy-/3-D-ribofu ranosyl)-cytosyl) succinate] PEG NH O2 N HO 0 OH 15 Le couplage entre du PEG-bis-succinate (4,84 g, 1,15 mmol) et la 2'- 20 désoxycytidine (0,52 g, 2,30 mmol) a été réalisé par la méthode A de l'exemple 3. Le composé a été obtenu sous forme d'un solide blanc (4,60 g, 87 %). 10 Rf (CH2Cl2 / MeOH, 6/4, v/v) : 0.9. RMN 1H (D2O, 300 MHz) S 8.25 (d, J6_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.27 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 6.13 (t, Jl'-2'a = Jl'-2'b = 6.2 Hz, 1H, H1,), 4.30 (m, 1H, H3'), 4.19 (m, 2H, (OCH2a)pEG), 4.04 (m, 1H, H4,), 3.85-3.50 (m, 2H5 (OCH2)PEG), 2.80-2.65 (m, 4H, CH2succ), 2.43 (m, 1H, H2,a), 2.23 (m, 1H, H2'b). RMN 13C (D2O, 100 MHz) S 174.5, 174.4 (2s, C=Osucc), 162.4 (s, C4), 156.7 (s, C2), 145. 5 (s, C6), 97.7 (s, C5), 87.4 (s, C1'), 87.3 (s, C4'), 70.2 (s, C3'), 69.6 (s, (OCH2)PEG), 68.4 (s, (OCH2/3)PEG), 64.1 (s, (OCH2a)pEG), 61.0 (s, Cs), 40.1 (s, C2'), 31.5, 28.4 (2s, CH2succ)• Exemple 6 : Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(/3-D-ribofuranosyl)-cytosyl) succinate] PEG~ 1~ ~~ ~NW Ho-- OH Le couplage entre le PEG-bis-succinate (5 g, 1,20 mmol) et la cytidine (0,58 g, 2,4 mmol) a été réalisé par la méthode A de l'exemple 3 et le composé obtenu sous forme d'un solide blanc (4.80 g, 87 %). Rf (CH2Cl2 / MeOH, 6/4, v/v) : 0.,9. RMN 1H (D2O, 200 MHz) 6 8.26 (d, J6..5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.26 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 5.79 (d, J1'_2' = 2.7 Hz, 1H, H1'), 4.19-4.14 (m, 2H, (OCH2a)pEG), 4.06 (d, J2'_1' = 2.7 Hz, 1H, H2'), 3.98-3.25 (m, H3. H4. 2Hs (OCH2)PEG), 2.64-2. 76 (m, 4H, CH2succ)• RMN (D2O, 100 MHz) 6 174.6, 174.5 (2s, C=Osucc), 13c 162.6 (s, C4), 156.9 (s, C2), 145.6 (s, CO, 97.8 (s, C5), 91.3 (s, Cl,), 83.8 (s, C4'), 74.5 (s, C3'), 69.5 (s, (OCH2)pEG), 68.6 (s, C2'), 68.4 (s, (OCH2/33)PEG), 64.1 (s, (OCH2a)pEG), 60.1 (s, Cs), 31.5, 28.4 (2s, CH2succ). 10 15 Exemple 7: Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(2',3'-didésoxy-$-D-ribofuranosyl)cytosyl) succinate] Le couplage entre 0,25 g de PEG-bis-succinate (0,06 mmol) et 0,025 g de 2',3'-didésoxycytidine (0,12 mmol) a été réalisé par la méthode A de l'exemple 3. Le composé a été obtenu sous forme d'un solide blanc (0,23 g, 87 %). Rf (CH2Cl2 / MeOH, 8/2, v/v) : 0.8. RMN 1H (D2O, 300 MHz) S 8.33 (d, JEi_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.26 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 5.97 (dd, J1'-2'a = 6.6 Hz, Jl'-2'b = 2.0 Hz, 1H, H1,), 4.20 (m, 3H, (OCH2a)pEG H4'), 3.86-3.81 (m, 2H, 2H5,), 3.73-3.62 (m, OCH2)pEG), 2.79-2.65 (m, 4H, CH2SUcc), 2.45 (m, 1H, H2'a), 2.05 (m, 1H, H2'b), 1.97 (m, 1H, H3'a), 1. 65 (m, 1H, H3'b). RMN 13C (D2O, 100 MHz) 8 174.6, 174.5 (2s, C=OSäcc), 162.4 (s, C4), 156.9 (s, C2), 145.7 (s, C6), 97.4 (s, C5), 88.3 (s, C1), 83.3 (s, C4.), 69.6 (s, (OCH2)pEG), 68.4 (s, (OCH2$)PEG), 64.1 (s, (OCH2a)pEG), 62.3 (s, CS), 32.5 (s, C2'), 31.5, 28.5 (2s, CH2Succ), 24.1 (s, C3'). Exemple 8: Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(2',3'-didésoxy-3'-thia-,6-D-ribofuranosyl)-cytosyl) succinate] PEG H N PEG 20 Le couplage entre 1 g de PEG-bis-succinate (0,23 mmol) et 0,10 g de 3TC (0,47 mmol) a été réalisé par la méthode A de l'exemple 3. Le composé a été obtenu sous forme d'un solide blanc (0.88 g, 80 %). Rf (CH2Cl2 / MeOH, 8/2, v/v) : 0.8. RMN 'H (D20, 300 MHz) 6 8.42 (d, J6_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.25 (d, J5.6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 6.24 (dd, Jl'_2'a = 2.7 Hz, J1'_2'b = 5.4 Hz, 1H, H1'), 5.31 (t, J4'_5' = 3.6 Hz, 1H, H4'), 4.20-4.17 (m, (OCH2a)pEG), 3.99 (dd, J5'a_4' = 3 Hz, J5a'-5'b = 12.9 Hz, 1H, H5,a), 3.90-3.34 (m, OCH2)pEG H5'b H2'a), 3.22 (dd, J2'b_l' _ 2.4 Hz, J2'b_2'a = 12.6 Hz, 1H, H2'b), 2.79-2.65 (m, 4H, CH2succ)• RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 174.6, 174.5 (2s, C=OSucc), 162.6 (s, C4), 156.6 (s, C2), 146.1 (s, CO, 97.3 (s, C5), 88.0 (s, C1�, 87.9 (s, C4'), 69.6 (s, (OCH2)PEG), 68.4 (s, (OCH2f3)PEG), 64.1 (s, (OCH2a)PEG), 61.5 (s, C5'), 38.0 (s, C2'), 31.5, 28.5 (2s, CH2succ). Exemple 9: Poly(oxyéthylène)4000 Bis[4-N-(1-,6-D-arabinofuranosyl)-cytosyl) 2-hydroxyacétamide] Le couplage entre 0,5 g de PEG-bis(OCH2-COOH) (0,12mmol) et 0,06 g d'araC (0,24 mmol) a été réalisé par la méthode A de l'exemple 3. Le 15 composé a été obtenu sous forme d'un solide blanc (0,46 g, 82 %). Rf (CH2Cl2 / MeOH, 6.5/3.5, v/v) : 0.9 RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.22 (d, J6_5 = 7.0 Hz, 1H, H6), 7.32 (d, J5_6 = 7.0 Hz, 1H, H5), 6.14 (s, 1H, H1'), 4.38 (m, 1H, H2,), 4.22 (m, 2H, (OCH2O00H)PEG), 4.05 (m, 3H, H3, (OCH2a)pEG), 4.05-3.20 (m, H4' 2H5'(OCH2)PEG). RMN 130 (D20, 100 MHz) 8 172.3 (s, C=0), 162.1 (s, C4), 156.5 (s, C2), 147.0 (s, C6), 97.3 (s, C5), 87.2 (s, Cl,), 84.3 (s, C4'), 75.5 (s, C2'), 75.2 (s, C3'), 70.6 (s, (OCH2 a)pEG), 70.0 (s, (OCH2)PEG), 60.5 (s, OCH2OOOH)PEG), 60.4 (s, C5�. Exemple 10 : Méthode B : Monophosphorylation du nucléoside sur support polymère A une solution du PEG-O-bis(succinyl-nuc!éoside), en fait le nucléoside sur support polymère (1 eq), dans du triéthylphosphate (6 ml) chauffé à 40°C ou dans de l'acétonitrile à 5°C, de l'oxychlorure de phosphore en excès est ajouté et le mélange est agité pendant 1 h. L'excès d'oxychlorure de phosphore est hydrolysé par addition d'une solution tampon de bicarbonate de triéthylammonium aqueux (1M, pH= 7) (25 ml) et le mélange est concentré sous pression réduite. Le résidu est dissous dans le dichlorométhane (180 ml) et la phase organique lavée à l'eau. La phase aqueuse subit plusieurs extractions au dichlorométhane. Les phases organiques sont combinées et évaporées sous pression réduite. Le monophosphate supporté est précipité à partir d'une solution de dichlorométhane, par addition d'un excès de diéthyléther froid. Le précipité est filtré, lavé au diéthyléther et séché sous vide sur KOH. Exemple 11 : Poly(éthylèneglycol)4o0o Bis[4-N-(1-($-D-arabinofuranosyl)-cytosyl-5'-monophosphate) succinate] sels de tri-éthylammonium La monophosphorylation de 3 g (0,64 mnol) de PEG-O-bis(succinyl-araC) de l'exemple 4 a été réalisée en utilisant la méthode B de l'exemple 10 et a donné le composé sous forme d'un solide blanc (2,99 g, 92 %). traraCMp : 18.9 min tx monophosphorylation : 97 %. (D20, 300 MHz) 8 8.34 (d, JE_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.10 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 6.18 (d, J1'_2' = 5.0 Hz, 1H, Hl,), 4.42 (m, 1H, H2'), 4.19 (m, 2H, (OCH2a)PEG), 4.10-4.15 (m, 4H, 25 HPLC RMN 1H 5 10 H3, H4' 2H5'), 3.30-3.90 (m, (OCH2)PEG), 3.10 (q, J = 7.3 Hz, 6H, (CH3CH7)3NH), 2.62-2. 85 (m, 4H, CH2succ), 1.18 (t, J = 7.3 Hz, 9H, (CH3CH2)3NH). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 174.7, 174.4 (s, C=Osucc), 159.0 (s, C4), 148.1 (s, C2), 145.2 (s, C6), 96.9 (s, C5), 87.0 (s, Cl,), 82.3 (d, Jc4'_P = 8.0 Hz, C4'), 75.8 (s, C2'), 74.1 (s, C3'), 69.6 (s, (OCH2)PEG), 68.4 (s, (OCH2il3)pEG), 64.1 (s, OCH2a)PEG), 63.6 (s, C5'), 46.6 (s, (CH3CH2)3NH), 31.6, 28.3 (s, CH2su,c), 8.2 (s, (CH3CH2)3NH). RMN 31P (D20, 121 MHz) 8 0,26 (s). Exemple 12: Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(2'-désoxy-,6-D- ribofu ranosyl)-cytosyl-5'-monophosphate) succinate] sels de tri- éthylammonium -La monophosphorylation de 1 g (0,21 mmol) de PEG-O-bis(succinyl-dC) de l'exemple 5 a été réalisée en utilisant la méthode B de l'exemple 10 avec 30 eq d'oxychlorure de phosphore (0,59 ml, 6,49 mmol). Le composé a été obtenu sous forme de solide blanc (0,93 g, 86 %). HPLC trdCMP : 13.07 min tXmonophosphorylation : 80 %. RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.38 (d, Jfi-5 = 7. 5 Hz, 1H, H6), 7.16 (d, J5-6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 6.17 (t, J1'-2'a = Jl'-2'b = 6.1 Hz, 1H, H1.), 4.45 (m, 1H, H3'), 4.19 (m, 2H, (OCH2a)pEG), 4.11-3.95 (m, 3H, H4, 2H5.), 3.95-3.35 (m, (OCH2)PEG), 3.10 (q, J = 7.2 Hz, 6H, (CH3CH2)3NH), 2.82-2.62 (m, 4H, CH2succ), 2.48 (m, 1H, H2'a), 2.25 (m, 1H, H2'b), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 9H, (CH3CH2)3NH). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 174.7, 174.5 (2s, C=Osucc), 161.5 (s, C4), 155.2 (s, C2), 146.5 (s, C6), 97.5 (s, C5), 87.5 (s, C1), 86.3 (d, J04'-P = 8.0 Hz, C4.), 70.4 (s, C3.), 69.6 (s, (OCH2)PEG), 68.4 (s, (OCH ;e)PEG), 64.2 (s, (OCH2a)PEG), 64.1 (d, Jcs'-P = 8.0 Hz, C5'), 46.6 (s, (CH3CH,)3NH), 40.1 (s, C2'), 31.6, 28.4 (2s, CH2succ), 8.2 (s, (CH3CH2)3NH). PEG I I H NEt3+ 0- OH L RMN 31P (D2O, 121 MHz) 6 0.19 (s). Exemple 13: Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(,Q-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-monophosphate) succinate] sels de tri-éthylammonium 10 15 La monophosphorylation de 0,50 g de PE_G-O-bis(succ-C) (0,11 mmol) de l'exemple 6 a été réalisée en utilisant la méthode B de l'exemple 10, avec 30 eq d'oxychlorure de phosphore (0,29 g, 3,30 ml). Le composé a été obtenu sous forme d'un solide blanc (4,80 g, 89 %). HPLC trcMP : 14.17 min tX monophosphorylation : 96 %. RMN 1H (D2O, 300 MHz) 8 8.59 (d, J6.5 = 7.8 Hz, 1H, H6), 7.10 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 5.97 (s, 1H, H1,), 4.91-4.12 (m, 7H, H2. H3' H4. 2H5, (OCH2a)PEG), 3.94-3.47 (m, (OCH2)PEG), 3.20 (q, J = 7.2 Hz, 6H, (CH3CH2)3NH), 2.95-2. 75 (m, 4H, CH2sico), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 9H, (CH3CH2)3NH). RMN 13C (D2O, 100 MHz) 6 174.7, 174.4 (2s, C=Os.), 161.1 (s, C4), 154.0 (s, C2), 147.3 (s, C6), 97.3 (s, C5), 91.1 (s, Cl,), 86.4 (d, JC4'_P = 8.0 Hz, C4'), 74.3 (s, C2'), 69.6 (s, C3' (OCH2)PEG), 68.4 (s, (OCH213)PEG), 64.1 (s, (OCH2a)PEG), 64.0 (s, C5'), 46.6 (s, (CH3CH2)3NH), 31.6, 28.2 (2s, CH2succ), 8.2 (s, (CH3CH2)3NH). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 6 0.12 (s). Exemple 14: Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(2',3'-didésoxy-/3-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-monophosphate) succinate] sels de tri-éthylammonium 20 La monophosphorylation de 0,04 g de PEG-O-bis(succinyl-ddC) (0,09 mmol) de l'exemple 7 a été réalisée par la méthode B de l'exemple 10, en utilisant 30 eq d'oxychlorure de phosphore (0,24 ml, 2,70 mmol), en présence de tamis moléculaire activé (3A). Le composé attendu a été obtenu sous forme d'un solide blanc (0,41 g, 96 %). RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.49 (d, J6_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.13 (d, J5_6 = 7.3 Hz, 1H, H5), 5.98 (d, J1 _2' = 5.1 Hz, 1H, H1'), 4.35 (m, 1H, H4'), 4.18-3.92 (m, 4H, (OCH2a)PEG 2H5,), 3.85-3.36 (m, OCH2)PEG), 3.10 (q, J = 7.2 Hz, 6H, (CH3CH2)3NH), 2.79-2.68 (m, 4H, CH2su,c), 2.46 (m, 1H, H2'a), 2.08 (m, 1H, H2'b), 1.97 (m, 1H, H3,a), 1.83 (m, 1H, H3'b), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 9H, (CH3CH2)3NH). RMN 31P (D20, 121 MHz) 8 0.37 (s). Exemple 15 : Méthode C: Diphosphorylation : phosphorylation du nucléoside monophosphate sur support polymère Une suspension de PEG-O-bis(succinyl-nucléoside monophosphate) (1 eq) dans de la tributylamine (2,50 ml) est agitée pendant 10 min à température ambiante. On ajoute du diéthyléther froid (50 ml) et le précipité est filtré, lavé au diéthyléther et séché sous vide sur pastilles de KOH toute une nuit. Le nucléoside monophosphate sur support polymère est dissous dans du N,N-diméthylformamide anhydre (3,75 ml) et on ajoute du 1,1'-carbonyldiimidazole (0,59 mmol, 6 eq). Le mélange réactionnel est agité pendant 2h à température ambiante, et traité avec du méthanol anhydre (0,10 ml). Après 15 minutes d'agitation, une solution de phosphate de tributylammonium dans du N,N-diméthylformamide anhydre (1M, 1,49 mmol, 15 eq) est ajoutée et la suspension agitée pendant 24h à température ambiante. Le mélange est traité avec un volume égal de méthanol, puis concentré sous pression réduite. Le résidu est précipité au diéthyléther froid (50 ml). Le précipité est filtré et lavé au diéthyléther. Une chromatographie sur colonne en phase inverse RP18 du produit brut est effectuée (gradient acétonitrile : 0 à 70 %, dans l'eau). Exemple 16 : Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(fl-D-arabinofuranosyl)-cytosyl-5'-diphosphate) succinate] sels de tri-butylammonium 15 La diphosphorylation de 0,5 g (0,09 mmol) de PEG-O-bis(succ-CMP) a été réalisée en utilisant la méthode C de l'exemple 15 et a conduit au composé sous forme d'un solide blanc (0,36 g, 66 %) après lyophilisation. RMN 1H (D2O, 300 MHz) S 8.24 (d, JEi_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.27 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 6.17 (d, Jr-2' = 5.1 Hz, 1H, H1'), 4.42 (t, J2'_1' = J2'_3' = 5.1 Hz, 1H, Hz), 4.28-4.05 (m, 6H, H3. H4' 2H5, (OCH2a)pEG), 3.89-3.35 (m, (OCH2)PEG), 2.92 (t, J = 7.7 Hz, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 2.80-2.68 (m, 4H, CH2su,c), 1.54 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 1.29 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 0.81 (t, J = 7.2 Hz, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 13C (D2O, 100 MHz) â 174.6, 174.4 (2s, C=Osucc), 162.5 (s, C4), 156.8 (s, C2), 146.8 (s, C6), 97.6 (s, C5), 86.6 (s, Cl,), 82.0 (d, JC4'_p = 9.0 Hz, C4'), 75.1 (s, C2'), 74.3 (s, C3'), 69.6 (s, (OCH2)PEG), 68.4 (s, (OCH2a)pEG), 64.1 (s, (OCH2a)pEG), 64.1 (s, C5'), 52.6 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 31.6, 28.4 (2s, CH2succ), 25.2 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 19.2 (s, CH3CH2CH2CH2)3NH), 12.8 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 6 -10.44 (m, Pb.), -11.03 (m, Pa). oH 10 Exemple 17: Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(2'-désoxy-$-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-diphosphate) succinate] sels de tri-butylammonium 10 La diphosphorylation de 0,30 g du PEG-O-bis(succ-dCMP) (0,06 mmol) a été réalisée en utilisant la méthode C de l'exemple 15 et a conduit au composé sous forme d'un solide blanc (0, 28 g. 81 %) après lyophilisation. RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.36 (d, J6_5 = 7. 5 Hz, 1H, H6), 7.29 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 6.22 (t, Jl'_2a = Jl'-2'b = 6.3 Hz, 1H, H1,), 4.52 (m, 1H, H3'), 4.24-4.09 (m, 5H, H422H5, (OCH2a)pEG), 3.89-3.56 (m, (OCH2)pEG), 3.13 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 2.80-2.68 (m, 4H, CH2succ), 2.50 (ddd, J2'a = 6.0 Hz, J2'a _3' = 3.8 Hz, J2'a ..2'b = 13.8 Hz, 1H, H2,a), 2.28 (m, 1H, H2'b), 1.59 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 1.31 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 0.86 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 174.7, 174.5 (2s, C=0s.), 162.4 (s, C4), 156.8 (s, C2), 145.8 (s, C6), 98.3 (s, C5), 87.3 (s, Cl,), 86.0 (d, JC4'_P = 8.0 Hz, C4'), 70.4 (s, C3'), 69.6 (s, (OCH2)pEG), 68.4 (s, (OCH2/3)pEG), 64.9 (d, Jcs,-P = 6.0 Hz, C5'), 64.1 (s, (OCH2a)pEG), 52.7 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 39.9 (s, C2'), 31.6, 28.5 (2s, CH2succ), 25. 8 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 19.2 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 12.7 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 31P (D20, 121 MHz) 8 -10.69 (d, Jp_a = 19.3 Hz, Pu), -11.26 (d, JQ_s = 17.3 Hz, Pa). 15 Exemple 18 2 OH PEG ~.o Il Il HO- --0ùTù0-- o- 0-HBu3N+ HBu3N+ PEG NH ~.,N2 HOùkrùO--QùO Il0- I10-I IBu3N+ HBu3N+ 20 La diphosphorylation de 0,55g du PEG-O-succ-CMP (0,11 mmol) a été réalisée en utilisant la méthode C de l'exemple 15. Un mélange (comprenant le dérivé 2',3' carbonate correspondant) a été obtenu sous forme d'un solide blanc (0,34 g, 60 %) après lyophilisation. Poly(éthylène glycol)4000 Bis[4-N-(1-(,r33-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-diphosphate) succinate], sels de tri-butylammonium RMN 1H (D2O, 300 MHz) 8 8.32 (d, J6_5 = 6.9 Hz, 1H, H6), 7.25 (d, J5_6 = 6.9 Hz, 1H, H5), 5.88 (d, J1'_2' = 1.8 Hz, 1H, H1.), 4.30-4.07 (m, 7H, H2, H3. H4, 2H5, (OCH2a)pEG), 3.88-3.33 (m, (OCH2)pEG), 3.09 (m, 12H, ((CH3CH2CH2CH2)3NH), 2.84-2.62 (m, 4H, CH2su,c), 1.54 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 1.30-1.15 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 0.92-0.68 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 -10.79 (m, Pu), -11.85 (m, Pa). Poly(éthylène glycol)4000 Bis[4-N-(1-(2',3'-carbonyl-$-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-diphosphate) succinate], sels de tri-butylammonium RMN 1H (D2O, 300 MHz) 8 8.12 (d, J6_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.24 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 5.98 (s, 1H, H1'), 5.53, 5.46 (dd, J2'_3' = J3'_2' = 7.5 Hz, J2'_1 = J3.-4. = 1.8 Hz, 2H, H2' H3'), 4.84 (m, 1H, H4,) 4.07-4.30 (m, 4H, 2H5'a (OCH2a)pEG), 3.88-3.33 (m, (OCH2)pEG), 3.09 (m, 12H, ((CH3CH2CH2CH2)3NH), 2.84-2.62 (m, 4H, CH2succ), 1.54 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 1.30-1.15 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 0.68-0.92 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 -10.79 (m, Pu), -11.85 (m, Pu). Exemple 19 : Méthode D : Triphosphorylation ; diphosphorylation du nucléoside monophosphate sur support polymère Une suspension de PEG-O-bis(succinyl-nucléoside monophosphate) (1 eq) dans la tributylamine (2,50 ml) est agitée pendant 10 min à température ambiante. On ajoute du diéthyléther froid (50 ml) et le précipité est filtré, lavé et séché sous vide sur des pastilles de KOH toute une nuit. Le nucléoside monophosphate sur support polymère est dissous dans du N,N-diméthylformamide anhydre (3,75 ml) et on ajoute du 1,1-carbonyldiimidazole (0,59 mmol, 6 eq). Le mélange réactionnel est agité durant 2h à température ambiante et traité avec du méthanol anhydre (0,10 ml). Après 15 min, on ajoute une solution de tributylamonium pyrophosphate dans du N,N-diméthylformamide (1M, 1,49 mmol, 15 eq) anhydre. La suspension est agitée pendant 24h à température ambiante. Le mélange a été traité avec un volume égal de méthanol, puis concentré sous pression réduite. Le résidu précipite dans du diéthyléther froid (50 ml). Le précipité est filtré et lavé au diéthyléther. Une chromatographie sur colonne en phase inverse RP18 du produit brut est effectuée avec un gradient acétonitrile : 0 à 70 % dans l'eau. Exemple 20: Poly(éthylèneglycol)400o Bis[4-N-(1-(,l3-D-arabinofuranosyl)-cytosyl-5'-triphosphate) succinate] sels de tri-butylammonium La triphosphorylation de 0,50 g du PEG-O-bis(succ-araCMP) (0,09 mmol) a été réalisée en utilisant la méthode D de l'exemple 19 et a fourni le 20 composé sous forme d'un solide blanc (0,43 g, 69 %) après lyophilisation. RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.29 (d, J6_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.17 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 6.17 (d, = 5.1 Hz, 1H, H1,), 4.41 (t, = J2'_3' = 5.1 Hz, 1H, H2'), 4.27-4.05 (m, 6H, H3. H4. 2H5, (OCH2a)pEG), 3.88-3.30 (m, (OCH2)PEG), 3.03 (t, J = 7.4 Hz, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 2.87-2.65 (m, 4H, CH2succ), 1.57 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 1.27 (m, 18H, (CH3CH CH2CH2)3NH), 0.83 (t, J = 7.1 Hz, 27H, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 174.7, 174.5 (2s, C=Osucc), 161.5 (s, C4), 155.1 (s, C2), 147.6 (s, C6), 97.2 (s, C5), 86.6 (s, C1'), 82.0 (d, JC4'_p = 9.0 Hz, C4'), 75.2 (s, C2'), 74.0 (s, C3,), 69.6 (s, (OCH2)pEG), 68.4 (s, (OCH2l3)pEG), 64.2 (s, (OCH2a)pEG), 64.1 (d, JC5'_P = 8.0 Hz, C5'), OH PEG Il Il II HO-Ir-O-r-O- I -0-- 0- 0-OHBu3N+HBu3N+ HBu3N+15 52.6 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 31.6, 28.4 (2s, CH2succ), 25.2 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 18.3 (s, CH3CH2CH2CH2)3NH), 12.8 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 31P (D2O, 121 MHz) S -10.94 (d, Jv_a = 19.43 Hz, Pv), - 11.32 (d, JQ_p = 19.43 Hz, Pa), -23.28 (t, J,9_ v = J$_a = 19.43 Hz, Pu). Exemple 21: Poly(éthylèneglycol)400o Bis[4-N-(1-(2'-désoxy-$-D-ribofu ranosyl)-cytosyl-5'-triphosphate) succinate] sels de tri-butylammonium 10 La triphosphorylation de 0,30g du PEG-O-bis(succ-dCMP) (0,06 mmol) a été réalisée en utilisant la méthode D de l'exemple 19 et a fourni le composé sous forme d'un solide blanc (0,27 g, 73 %) après lyophilisation. RMN 1H (D2O, 300 MHz) S 8.35 (d, J6_5 = 7. 5 Hz, 1H, H6), 7.17 (d, J5.6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 6.17 (t, J1'-2'a = 6.3 Hz, 1H, H1'), 4.51 (m, 1H, H3'), 4.21-4.13 (m, 5H, H4' 2H5, (OCH2a)pEG), 3.89-3.31 (m, (OCH2)PEG), 3.17-2.95 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 2.79-2. 62 (m, 4H, CH2suac), 2.47 (m, 1H, H2'a), 2.26 (m, 1H, H2'b), 1.59-1.45 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 1.40-1.25 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 0.90-0.75 (m, 27H, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 13C (D2O, 100 MHz) S 174.8, 174.6 (2s, C=Osucc), 161.8 (s, C4), 155.4 (s, C2), 146.3 (s, C6), 98.0 (s, C5), 87.4 (s, Cl,), 86.2 (s, C4'), 70.3 (s, C3'), 69.6 (s, (OCH2)PEG), 68.4 (s, (OCH2a)pEG), 65.2 (s, C5'), 64.1 (s, (OCH2a)pEG), 52.6 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 40.0 (s, C2'), 31.6, 28.4 (2s, CH2succ), 25.2 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 19.1 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 12.8 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 31p (D2O, 121 MHz) S -10.73 (d, Jve = 20.6 Hz, Pv), -11.34 oM5 33 (d, Ja_p = 19.4 Hz, Pa), -22.81 (m, Pa). Exemple 22 : Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(,l3-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-triphosphate) succinate] sels de tri-butylammonium PEG ; Y NH 0 z ~ ~N HO- I -O-r-O-1 -O- 0- 0-OHBu3N+HBu3N+ HBu3N+ OH OH La triphosphorylation de 0,30 g du PEG-O-bis(succ-CMP) (0,11 mmol) a été réalisée en utilisant la méthode D de l'exemple 19. Un mélange (1/1) du composé attendu et du dérivé 2',3' carbonate correspondant, a été 15 obtenu sous forme d'un solide blanc (0, 26 g, 70 %) après lyophilisation. - Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-($-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'- triphosphate) succinate] sels de tri-butylammonium RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.30 (d, J6_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.22 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 5.87 (d, J1.2' = 2.8 Hz, 1H, H1'), 4.25-4.14 (m, 7H, H2' H3, H4' H5, (OCH2Q)PEG), 3.97- 3.25 (m, (OCH2)pEG), 3.14-2.98 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH7)3NH), 2.74-2.60 (m, 4H, CH2su.), 1.63-1.48 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 1.13-1.35 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 0.86-0.78 (m, 27H, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 31P (D20, 81 MHz) 8 -10.65 (m, P,,), -12.10 (m, Pa), -22.94 (m, Pu). Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(2',3'-carbonyl-$-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-triphosphate) succinate] sels de tri-butylammonium RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.12 (d, J6_5 = 7.6 Hz, 1H, H6), 7.21 (d, J5_6 = 7.6 Hz, 1H, H5), 5.97 (s, 1H, H1'), 5.50 (m, 2H, H2. H3'), 4.86 (m, 1H, H4.), 4.25-4.14 (m, 4H, 2H5, 10 (OCH2a)pEG), 3.97-3.25 (m, (OCH2)PEG), 3.14-2.98 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 2.74-2.60 (m, 4H, CH2succ), 1.63-1.48 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 1.35-1.13 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 0.86-0.78 (m, 27H, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 31P (D2O, 81 MHz) -10.65 (m, P,,), -12.10 (m, Pa), - 22.94 (m, P,i). Exemple 23: Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(113-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-triphosphate) succinate] sels de tri-éthylammonium et carbonyldiimidazolium La triphosphorylation de 0,32 g du PEG-O-bis(succ-CMP) (0,06 mmol) a été réalisée en utilisant la méthode D de l'exemple 19. L'activation a été réalisée avec du carbonyldiimidazole (3 eq) durant 30 min seulement. Le 15 composé du titre a été obtenu sous forme d'un solide blanc (0,17 g, 42 %) après lyophilisation. RMN 1H (D2O, 300 MHz) S 8.60 (s, 2H, N=CH-N), 8.31 (d, J6-5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.38 (s, 4H, N=CH=CH), 7.23 (d, J5-6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 5.89 (d, J1'_2' = 2.8 Hz, 1H, H1'), 4.28-4.19 (m, 7H, H2. H3, H4, 2H5, (OCH2a)pEG), 3.86-3.34 (m, (OCH2)PEG), 3.10 (q, J = 7.3 Hz, 6H, (CH3CH2)3NH), 2.79-2.62 (m, 4H, CH2succ), 1.18 (t, J = 7.3 Hz, 9H, (CH3CH2)3NH). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 -10.75 (d, J,,_fl = 19.4 Hz, Py), -11.37 (d, Jae = 19.4 Hz, Pa), -23.08 (t, J,g_,, = Ja_a = 19.4 Hz, Pu). 10 Exemple 24: Poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(2',3'-didésoxy-/3-D-ribofu ranosyl)-cytosyl-5'- triphosphate) succinate] sels de tributylammonium 10 La triphosphorylation de 0,36 g du PEG-O-bis(succ-ddCMP) (0,07 mmol) a été réalisée en utilisant la méthode de l'exemple 19. Le composé du titre a été obtenu sous forme d'un solide blanc (0,27 g, 60 %) après lyophilisation. RMN 1H (D2O, 300 MHz) 8 8.47 (d, J6_5 = 7.2 Hz, 1H, H6), 7.09 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 5.97 (m, 1H, H1,), 4.36 (m, 1H, H4'), 4.26 (m, 1H, H5'a), 4.18 (m, 2H, (OCH2a)pEG), 4.08 (m, 1H, H5'b), 3.83-3.35 (m, (OCH2)pEG), 3.02 (t, J = 7.4 Hz, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 2.81-2.65 (m, 4H, CH25ucc), 2.44 (m, 1H, H2'a), 2.15-1.80 (m, 2H, H2'b H3'a), 1.82 (m, 1H, H3'b), 1.56 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 1.28 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 0.82 (t, J = 7.1 Hz, 27H, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 13C (D2O, 100 MHz) : 174.8, 174.5 (2s, C=Osucc), 161.0 (s, C4), 155.0 (s, C2), 144.8 (s, C(3), 97.3 (s, C5), 88.6 (s, Cl,), 81.8 (s, C4,), 69.6 (s, (OCH2)pEG), 68.4 (s, (OCH2iS)pEG), 66.0 (s, Cs), 64.1 (s, (OCH2a)pEG), 52.6 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 32.5 (s, C2'), 31.6, 28.4 (2s, CH2succ), 25. 2 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 23.8 (s, C3'), 19.2 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 12.8 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 -11.00 (m, P, Pa), -22. 85 (m, PB). 15 Exemple 25: poly(éthylèneglycol)4000 Bis[4-N-(1-(2',3'-didésoxy-/3-D- ribofu ranosyl)-cytosyl-5'-d isphosphate)succinate], sels de tributylammonium La diphosphorylation du PEG-O-bis(succ-ddCMP) (0.20 g, 0.04 mmol) a été réalisée en utilisant la méthode C de l'exemple 15. Le composé du titre a été obtenu sous forme d'un solide blanc (0.18 g, 80 %) après 10 lyophilisation. RMN 1H (D2O, 300 MHz) 8 8.35 (d, Jfi_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 7.21 (d, J5-6 = 7.3 Hz, 1H, H5), 5.94 (d, J1'_2' = 5.6 Hz, 1H, H1'), 4.31 (m, 1H, H4'), 4.16 (m, 3H, (OCH2a)PEG H5'a), 4.03-3.93 (m, 1H, H5'b), 3.80-3.33 (m, OCH2)PEG), 3.00 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 2.74-2.62 (m, 4H, CH2succ), 2.37 (m, 1H, H2'a), 2.00 (m, 2H, H2'b H3'a), 1.77 (m, 1H, H3'b), 1.55 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 1.23 (m, 12H, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 0.80 (m, 18H, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 13C (D2O, 100 MHz) 8 174.6, 174.4 (2s, C=Osucc), 162.2 (s, C4), 155.8 (s, C2), 146.0 (s, C6), 97.7 (s, C5), 88.2 (s, C�), 81.7 (s, C4'), 69.6 (s, (OCH2)pEG), 68.4 (s, (OCH2/)PEG), 66.2 (s, Cs), 64.1 (s, (OCH2a)pEG), 52.6 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 32.6 (s, C2'), 31.5, 28.4 (2s, CH2succ), 25.2 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 24.1 (s, C3'), 19.3 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH), 12.8 (s, (CH3CH2CH2CH2)3NH). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 -10.29 (m, Pu), -10.97 (m, Pu). Exemple 26 : Méthode E : Clivage du nucléotide de son support Le nucléotide supporté (0,05 mmol, leq) est dissous dans l'ammoniaque concentré (2 ml). La solution est agitée à température ambiante pendant 15 1h, puis évaporée sous pression réduite. On réalise la purification par chromatographie sur colonne en phase inverse RP18 (isocratique eau) puis une dialyse sur membranes d'ester de cellulose. Exemple 27 : 1-(fl-D-arabinofuranosyl)-cytosine-5'-monophosphate, sel d'ammonium La méthode E de l'exemple 26 a été appliquée à 0,15 g du PEG-O-bis(succinyl-araCMP) (0,02 mmol). La purification par chromatographie sur colonne du produit brut a donné un mélange d'araCMP et de succinamide dans un rapport 93/7 (15 mg). Le succinamide a été éliminé par dialyse dans l'eau (2 ml) toute une nuit et l'araCMP (13 mg, 68 %) a été obtenu sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H2O/NH4OH, 6/2/2, v/v/v) : 0.2. RMN 1H (D2O, 300 MHz) 8 7.88 (d, J6_5 = 7.6 Hz, 1H, H6), 6.11 (d, Ji'-2' = 5.3 Hz, 1H, H1'), 6.02 (d, J5_6 = 7.6 Hz, 1H, H5), 4.34 (t, = J2'_3' = 5.3 Hz 1H, H2'), 4.11-3.96 (m, 4H, H3, H422H5'). RMN 31P (D2O, 121 MHz) S 0.45 (s). UV (H2O) Àmax 272 nm (s 7100), Amin 247 nm (s 4100). LC/MS (M-NH4+) m/z : 322 tr : 11.7 min purity : 97 %. Exemple 28 : 1-(,13-D-arabinofuranosyl)-cytosine-5'-diphosphate, sels 10 d'ammonium La méthode E de l'exemple 26 a été appliquée à 0,34 g du PEG-O-bis(succinyl-araCDP) (0,05 mmol). La purification du produit brut sur colonne de chromatographie a donné un mélange de araCDP et de 15 succinamide dans le rapport 88/12 (55 mg). Un échantillon de 10 mg du mélange a été dissous dans l'eau (2 ml) et purifié par dialyse toute une 37 nuit. L'araCDP (8,5 mg, 96 %) a été obtenu sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H2O/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.3. RMN 1H (D2O, 300 MHz) 8 7.85 (d, J6_5 = 7.6 Hz, 1H, H6), 6.14 (d, J1.2 = 5.4 Hz, 1H, H1'), 6.03 (d, J5_6 = 7.6 Hz, 1H, H5), 4.35 (t, J2'_1 = J2'..3' = 5.4 Hz, 1H, H2'), 4.20-4.10 (m, 3H, H3. 2H5'), 4.00 (m, 1H, H4�. RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 -10.42 (d, J,a_a = 20.6 Hz, Pa), - 11.10 (d, Ja_p = 20.6 Hzä Pa). UV (H2O) Àmax 274 nm (s 7900), Amin 246 nm (s 3800). LC/MS (M+H-2NH4+) : m/z : 402 tr : 13.36 min purity : 86.7 %. Exemple 29 : 1-(fl-D-arabinofuranosyl)-cytosine-5'-triphosphate sels 5 d'ammonium La méthode E de l'exemple 26 a été appliquée à 0,43 g du PEG-O-bis(succinyl-araCTP) (0,07 mmol). La purification sur colonne de chromatographie a donné un mélange d'araCTP et de succinamide dans 10 le rapport 95/5 (68 mg). Un échantillon du mélange (8,5 mg) a été dissous dans l'eau (2 ml) et purifié par dialyse toute une nuit. AraCTP (8 mg, 92 %) a été obtenu sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H2O/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.2. RMN 1H (D2O, 300 MHz) 8 7.85 (d, J6..5 = 7.6 Hz, 1H, H6), 6.14 (d, = 5.4 Hz, 1H, H1'), 6.04 (d, J5_6 = 7.6 Hz, 1H, H5), 4.35 (t, J2'_1' = J2'.3' = 5.4 Hz, 1H, H2'), 4.20-4.12 (m, 3H, H3. 2H5')1 4.01 (m, 1H, H4,). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 -10.45 (d, ,./,,_a = 18.2 Hz, Pr), -11.20 (d, Ja_a = 19.4 Hz, Pa), -22.96 (t, 4Y = JQ_a = 18.2 Hz, Pu). 39 UV (H20) Âmax 273 nm (s 8700), Amin 246 nm (E 4500). LC/MS (M+2H-3NH4+) : m/z : 482 tr : 19.25 min purity : 83.3 %. Exemple 30 : 1-(2'-désoxy-/3-D-ribofuranosyl)-cytosine-5'-monophosphate sel d'ammonium La méthode E de l'exemple 26 a été appliquée à 0,14 g du PEG-O-bis(succinyl-dCMP) (0,03 mmol). La purification sur colonne de chromatographie a donné un mélange de dCMP et de succinamide dans le rapport 86/14 (17 mg). Un échantillon du mélange (10 mg) a été dissous dans l'eau (2 ml) et purifié par dialyse toute une nuit. Le dCMP (8,6 mg, 73 %) a été obtenu sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 6/2/2, v/v/v) : 0.5. RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.07 (d, J6_5 = 7.8 Hz, 1H, H6), 6.19 (t, Jl'-2'a = Jl'-2'b = 6.5 Hz, 1H, H1'), 6.09 (d, J5_6 = 7.8 Hz, 1H, H5), 4.45 (m, 1H, H3'), 4.12 (m, 1H, H4'), 4.04-3.90 (m, 2H, 2H5'), 2.44-2.32 (ddd, J2'a _1' = 6.2 Hz, J2'a -3' = 3. 7 Hz, J2'a -2' = 14.1 Hz, 1 Hä H2•a ), 2.27-2.18 (m, 1H, H2'b). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 161.8 (s, C4), 151.7 (s, C2), 143.3 (s, C6), 95.5 (s, C5), 86.4 (s, C1'), 86.0 (d, JC4'_p = 8.0 Hz, C4'), 70.7 (s, C3'), 64.4 (d, JC5'_p = 5.0 Hz, C5'), 39.5 (s, C2'). RMN 31P (D20, 121 MHz) 8 0.23 (s). UV (H20) Âmax 273 nm (E 9100), Àmin 246 nm (e 4800). LC/MS (M-NH4+) : m/z : 306 tr : 11.23 min purity : 92.5 %. Exemple 31 : 1-(2'-désoxy-,3-D-ribofuranosyl)-cytosine-5'-diphosphate, sels d'ammonium La méthode E de l'exemple 26 a été appliquée à 0,21 g du PEG-O-bis(succinyl-dCDP) (0,03 mmol). La purification sur colonne de chromatographie a donné un mélange de dCDP et de succinamide dans le rapport 90/10 (27 mg). Un échantillon du mélange (10 mg) a été dissous dans l'eau (2 ml) et purifié par dialyse toute une nuit. 9 mg de dCDP (86 %) ont été obtenus sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H2O/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.6. RMN 1H (D2O, 300 MHz) 8 8.08 (d, J6_5 = 7.8 Hz, 1H, H6), 6.19 (t, J1'_ 2'a = Jl'-2'b = 6.6 Hz, 1H, H1'), 6.16 (d, J5_6 = 7.8 Hz, 1H, H5), 4.52 (m, 1H, H3'), 4.16-4.06 (m, 3H, H4. 2H5'), 2.43-2.34 (ddd, J2'a _1' = 6.3 Hz, J2'a _3' = 3.6 Hz, J2'a _2' = Hz, 1H, H2'a ), 2.27-2.18 (m, 1H, H2'b). RMN 13C (D2O, 100 MHz) â 160.5 (s, C4), 147.9 (s, C2), 143.9 (s, C6), 95.4 (s, C5), 86.5 (s, C1'), 86.0 (s, C4'), 70.6 (s, C3'), 64.9 (s, C5'), 39.5 (s, C2'). RMN 31P (D2O, 121 MHz) S -10.68 (d, Ja_o = 19.3 Hz, Pfl), -11.25 (d, Jo_a = 16.5 Hz, Pa). UV (H2O) Àmax 273 nm (s 9100), Àmin 246 nm (s 4600). LC/MS (M+H-2NH4+) : m/z : 386 tr : 13.89 min purity : 77.4 %. Exemple 32 : 1-(2'-désoxy-$-D-ribofuranosyl)-cytosine-5'-triphosphate, sels d'ammonium La méthode E de l'exemple 26 a été appliquée à 0;25 g du PEG-O-bis(succinyl-dCTP) (0,04 mmol). La purification sur colonne de 40 chromatographie a donné un mélange de dCTP et de succinamide dans le rapport 94/6 (30 mg). Un échantillon de 10 mg du mélange a été dissous dans l'eau (2 ml) et purifié par dialyse toute une nuit. 9 mg dCTP (70 %) ont été obtenus sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.6. RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.04 (d, J6_5 = 7.8 Hz, 1H, H6), 6.23 (t, J1_ 2'a = Jl'_2'b = 6.3 Hz, 1H, H1'), 6.18 (d, J5_6 = 7.8 Hz, 1H, H5), 4.56 (m, 1H, H3'), 4.17 (m, 3H, H4, 2H5'), 2.45-2.37 (ddd, J2'a _ 1, = 6.0 Hz, J2'a _3' = 3.3 Hz, J2'a -2' = 14.4 Hz, 1H, H2'a ), 2.34-2.23 (m, 1H, H2'b). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 143.2 (s, C6), 95.8 (s, C5), 86.4 (s, Cl,), 86.7 (s, C4'), 70.6 (s, C3'), 65.2 (s, C5'), 39.5 (s, C2'). RMN 31P (D20, 121 MHz) 8 -9.62 (m, P,,), -11.07 (d, Ja_,, = 16.4 Hz, Pa), -21.93 (m, Pu). UV (H20) Àmax 273 nm (s 10100), Àmin 245 nm (s 4300). LC/MS (M+2H-3NH4+) : m/z : 466 tr : 18.81 purity : 84.5 %. Exemple 33 : 1-(,13-D-ribofuranosyl)-cytosine-5'-monophosphate, sel d'ammonium La méthode E de l'exemple 26 a été appliquée à 0,13 g du PEG-O- 10 bis(succinyl-CMP) (0,02 mmol). La purification sur colonne de chromatographie a donné 17 mg d'un mélange de CMP et de succinamide dans le rapport 80/20. Un échantillon de 10 mg du mélange a été dissous dans l'eau (2 ml) et purifié par dialyse toute une nuit. Le CMP (7 mg, 82 %) a été obtenu sous forme d'un solide blanc après 15 lyophilisation. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 6/2/2, v/v/v) : 0.3. RMN 1H (D20, 400 MHz) 8 7.98 (d, J6_5 = 7.7 Hz, 1H, H6), 6.08 (d, J5.6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 5.89 (d, J1'_2' = 2.6 Hz, 1H, H1'), 4.28-4.18 (m, 3H, H2. H3. H4'), 4.17-3.94 (m, 2H, 2H5').5 RMN 13C (D2O, 100 MHz) 8 163.6 (s, C4), 154.4 (s, C2), 142.3 (s, C6), 96.0 (s, C5), 89.4 (s, Cil 83.0 (d, JC4'_F = 9.0 Hz, C4'), 74.3 (s, C2'), 69.2 (s, C3'), 63.7 (d, JCS'_P = 5.0 Hz, Cs). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 0.29 (s). LC/MS (M-NH4+) : m/z : 322 tr : 10.20 min purity : 86 %. Exemple 34 : 1-(/3-D-ribofuranosyl)-cytosine-5'-diphosphate, sels d'ammonium 0,5 ml de triéthylamine ont été ajoutés à une solution de 0,20 g du PEG-O-bis(succinyl-CDP) (0,03 mmol.) dans un mélange éthanol/eau (6 ml, 1/1, v/v). Le mélange a été agité à température ambiante durant 3h et concentré sous pression réduite. Le résidu a été traité selon la méthode E de l'exemple 25. La chromatographie sur colonne du produit a donné un mélange de CDP et de succinamide dans le rapport 95/5 (30 mg). Un échantillon (10,5 mg) du mélange a été dissous dans l'eau (2 ml) et purifié par dialyse sur membranes d'ester de cellulose toute une nuit. 9 mg de CDP (93 %) ont été obtenus sous forme d'un solide blanc après lyophilisation, contaminé par 7 % d'un sous-produit identifié comme l'analogue cytidine 5'-diphosphate-2,3'-monophosphate cyclique. Rf (iPrOH/H2O/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.4. RMN 1H (D2O, 300 MHz) 8 7.85 (d, J6_5 = 7.5 Hz, 1H, H6), 5.98 (d, J5_6 = 7.8 Hz, 1H, H6), 5.83 (d, = 3.9 Hz, 1H, H1), 4.24-4.00 (m, 5H, H2. H3, H422Hs). RMN 13C (D2O, 75 MHz) 8 163.1 (s, C4), 154.2 (s, C2), 140.5 (s, C6), 94.8 (s, Cs), 87.8 (s, C1'), 81.3 (d, JC4'_p = 9.1 Hz, C4'), 72.7 (s, C2'), 67.7 (s, C3'), 62.9 (d, Jcs'_P = 5.4 Hz, Cs). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 -10.21 (d, J~_a = 20.3 Hz, Pa), -11.13 (d, Jv_a = 20.3 Hz, Pa). UV (H20) Àmax 270 nm (s 10500), Àmin 241 nm (s 6700). LC/MS (M+H-2NH4+) : m/z : 402 tr : 14.15 min purity : 71.8 %. Exemple 35 : 1-(,6-D-ribofuranosyl)-cytosine-5'-triphosphate, sels d'ammonium 0,5 ml de triéthylamine ont été ajoutés à une solution de 0,19 g du PEGO-bis(succinyl-CTP) (0,03 mmol) dans un mélange éthanol/eau (6 ml, 1/1, v/v). Le mélange a été agité à température ambiante durant 3h et concentré sous pression réduite. Le résidu traité selon la méthode E de l'exemple 25, La chromatographie du produit sur colonne a donné 24 mg d'un mélange de CTP et de succinamide dans le rapport 80/20. Un échantillon (16 mg) du mélange a été dissous dans l'eau (2 ml) et purifié par dialyse sur membranes d'ester de cellulose toute une nuit. 13 mg de CTP (81 %) ont été obtenus sous forme d'un solide blanc après lyophilisation, contaminé par 10 % d'un sous-produit identifié comme l'analogue cytidine-2',3' monophosphate cyclique-5'-triphosphate. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.3. RMN 1H (D20, 300 MHz) 5 7.94 (d, J6_5 = 7.7 Hz, 1H, H6), 6.10 (d, J5_6 = 7.7 Hz, 1H, H5), 5.88 (d, J1'_2' = 4.2 Hz, 1H, H1'), 4.31-4.11 (m, 5H, H2, H3. H4.2Hs). RMN 13C (D20, 75 MHz) S 162.2 (s, C4), 152.8 (s, C2), 142.9 (s, C6), 95.9 (s, C5), 89.2 (s, Cl,), 83.1 (d, Jc4'_P = 9.3 Hz, C4'), 74.3 (s, C2'), 69.1 (s, C3'), 64.5 (d, Jcs'_p = 5.0 Hz, Cs). RMN 31P (D20, 121 MHz) S -9.72 (d, ,ly_a = 19.1 Hz, Pr), -11.22 (d, Ja_ fl = 19.4 Hz, Pa), -22.69 (t, Js_y = Js_a = 19.4 Hz, P4. UV (H20) Àmax 270 nm (s 12500), Amin 228 nm (s 5300). LC/MS (M+2H-3NH4+) : m/z : 482 tr : 17.74 purity : 75.9 %. 10 Exemple 36 : 1-(2',3'-didésoxy-$-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-triphosphate), sels d'ammonium La méthode E de I exemple 26 a été appliquée au PEG-O-bis(succinyl- ddCTP) (0.20 g, 0.03 mmol). La purification sur colonne chromatographique a conduit à un mélange du composé attendu ddCTP et de succinamide dans un rapport 92/8 (30 mg). Un échantillon de 10.5 mg du mélange a été dissous dans l'eau (2 ml) et purifié par dialyse toute une nuit. ddCTP (9.50 mg, 67 %) est obtenu sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.7 RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.02 (d, J6_6 = 7.5 Hz, 1H, H6), 6.08 (d, J5_6 = 7.5 Hz, 1H, H5), 6.02 (dd, J1'_2'a = 6.6 Hz, Jl'-2'b = 2.0 Hz, 1H, H1,), 4.34 (m, 1H, H4'), 4.25 (m, 1H, Hsa), 4.08 (m, 1H, H5'b), 2.43-2.33 (m, 1H, H2,a), 2.10-1.97 (m, 2H, H2'b H3'a), 1.95-1.96 (m, 1H, H3'b). RMN 13C (D20, 75 MHz) 8 164.9 (s, C4), 155.4 (s, C2), 145.0 (s, C6), 97.1 (s, C5), 89.2 (s, Cil 82.8 (d, JC4'_ p = 8.5 Hz, C4'), 68.3 (d, Jc4'- P = 5.4 Hz, Cs), 33.9 (s, C2'), 26.1 (s, C3'). RMN 31P (D20, 121 MHz) 8 - 9.76 (d, Jv_Q = 19.3 Hz, Pv), -10.90 (d, Ja_p = 18.9 Hz, Pa), -22.38 (t, Ja_v = J,a_a = 18.9 Hz, P,l). UV (H20) Àmax 279 nm (E 11277), Amin 242 nm (s 2283). LC/MS (M+2H-3NH4+) : m/z : 450 tr : 16.7 purity : 76 % Exemple 37 : 1-(2',3'-didésoxy-/3-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-monophosphate), sel d'ammonium Il II II HOùI'ùOùi'ùOù1'ùO NH4+O_ NH4- NH4+O- NH2 15 La méthode E de l'exemple 26 a été appliquée au PEG-O-succinyl-ddCMP (0.16 g, 0.03 mmol). La purification sur colonne chromatographique a conduit à un mélange du composé attendu ddCMP et de succinamide dans un rapport 86/14 (17 mg). Le succinamide est éliminé par dialyse d'une nuit réalisée dans l'eau (2 ml). ddCMP (14 mg, 79 %) est obtenu sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.3 RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 8.06 (d, J6_5 = 7.6 Hz, 1H, H6), 6.02 (d, J5..6 = 7.6 Hz, 1H, H5), 5.93 (dd, J1'_2'a = 6.6 Hz, J1'_2'b = 2.7 Hz, 1H, H1'), 4.27 (m, 1H, H4'), 4.07 (m, 1H, H5'a), 3.88 (m, 1H, H5'b), 2.37-2.32 (m, 1 H, H2,a), 2.07-1.83 (m, 3H, H2'b H3'a H3'b). RMN 13C (D20, 75 MHz) 8 162.3 (s, C4), 151.6 (s, C2), 143.3 (s, C6), 94.8 (s, Cs), 87.3 (s, Cil 81.2 (d, Jc4'_ p = 8.4 Hz, C4'), 65.2 (d, Jcs'_ p = 5.0 Hz, C5'), 32.0 (s, C2'), 24.0 (s, C3'). RMN 31P (D20, 121 MHz) 8 0.42 (s). UV (H20) Àmax 279 nm (s 12276), 'min 245 nm (s 2408). LC/MS (M-NH4+) : m/z : 290 tr : 10.75 purity : 93 % Exemple 38 : 1-(2',3'-didésoxy-16-D-ribofuranosyl)-cytosyl-5'-10 diphosphate), sels d'ammonium NH2 %N ~' N O NI-(440- NH4+o- La méthode E de l'exemple 26 a été appliquée au PEG-O-succinyl-ddCDP (0.18 g, 0.03 mmol). ). La purification sur colonne chromatographique a conduit à un mélange du composé attendu ddCDP et de succinamide dans un rapport 92/8 (17 mg). Un échantillon de 16 mg du mélangea été dissous 15 20 dans l'eau (2 ml) et purifié par dialyse toute une nuit. ddCDP (14.8 mg, 66 %) est obtenu sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.5 RMN 1H (D20, 300 MHz) 6 8.10 (d, J6_5 = 7.6 Hz, 1H, H6), 6.09 (d, J5-6 = 7.6 Hz, 1H, H5), 5.95 (dd, Jr-2'a = 6.6 Hz, J1'_2'b = 2.7 Hz, 1H, H1'), 4.30 (m, 1H, H4,), 4.18 (m, 1H, Hs'a), 3.99 (m, 1H, Hs'b), 2.45-2.30 (m, 1H, H2'a), 2.10-1.80 (m, 3H, H2'b H3'a H3'b). RMN 13C (D20, 75 MHz) 8 161.7 (s, C4), 151.8 (s, C2), 143.6 (s, C6), 94.8 (s, C5), 87.4 (s, Cil 81.2 (d, JC4'_ p = 8.3 Hz, C4'), 66.1 (s, C5 ), 32.0 (s, C2'), 24.1 (s, C3'). RMN 31P (D20, 81 MHz) 8 - 10.72 (m, Pu), -11.03 (m, Po). UV (H20) Àmax 275 nm (E 9803), Amin 245 nm (E 3514). LC/MS (M+H-2NH4+) : m/z : 370 tr : 14.6 purity : 72 % Exemple 39 : comparatif : Méthode F: Monophosphorylation d'un nucléoside ou analogue de nucléoside en solution: A une suspension de nucléoside (1 éq) dans le triéthylphosphate (2 ml) à 0°C, on a ajouté de l'oxychlorure de phosphore (2 eq). Le mélange a été agité à 0°C pendant 4h, puis 3h à température ambiante. L'excès d'oxychlorure de phosphore a été hydrolysé par addition lente d'une solution aqueuse d'un tampon au bicarbonate de triéthylammonium (1M, pH= 7) (5 ml). La purification a été réalisée par chromatographie sur colonne DEAE-cellulose, Sephadex avec un gradient linéaire de tampon bicarbonate de triéthylamonium aqueux (0-1M). Les sels de phosphate résiduels ont été supprimés par chromatographie en phase inverse RP18 (isocratique eau). Exemple 40 : 1-(fl-D-arabinofuranosyl)-cytosine-5'-monophosphate, sel de sodium OH i N O HOù i ùOù ! 0 OH Na+ O' NH220 La monophosphorylation de l'AraC (0,2 g, 0,82 mmol) a été réalisée selon la méthode F (exemple 36). L'araCMP a été obtenu sous forme d'un solide blanc (0,2 g, 70%) après échange d'ions sur Dowex Na+ et lyophylisation. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 6/2/2, v/v/v) : 0.2. RMN 1H (D20, 400 MHz) 8 8.01 (d, J6_5 = 7.8 Hz, 1H, H6), 6.13 (d, J1'_2' = 5. 4 Hz, 1H, H1,), 6.12 (d, J5_6 = 7.8 Hz, 1H, H5), 4.39 (t, J2'_1' = J2'- 3' = 5.4 Hz, 1H, Hz), 4.15-4.08-(m, 2H, H3. Hs'a), 4.06-4.00 (m, 2H, H4, H5'b). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 161.2 (s, C4), 151.0 (s, C2), 144.4 (s, C6), 94. 7 (s, C5), 85.5 (s, Cl,), 81.5 (d, JC4'_p = 9.0 Hz, C4'), 75.3 (s, C2'), 73.5 (s, C3'), 63.1 (d, Jcs'_P = 4.0 Hz, Cs). RMN 31P (D20 121 MHz) 8 0. 80 (s). UV (H20) Àmax 272 nm (E 8100), Àmin 247 nm (s 4900). LC/MS (M-Na+) : m/z : 322 tr : 12.82 min purity : 97.7 %. Exemple 41 : 1-(/3-D-ribofuranosyl)-cytosine-5'-monophosphate, sel de triéthylammonium 15 La monophosphorylation de la cytidine (0,20 g, 0,82 mmol) a été réalisée par la méthode F. La purification sur colonne en phase inverse RP18 (isocratique/eau) a donné le CMP (0,13 g, 36 %), sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 6/2/2, v/v/v) : 0.3. RMN 1H (D20, 400 MHz) 8 7.91 (d, J6_5 = 7.6 Hz, 1H, H6), 6.02 (d, J5_6 = ('LN 0fI H04--OHNEt3+t]' OH OH NH210 7.6 Hz, 1H, H5), 5.88 (d, J1'_2. = 3.5 Hz, 1H, H1.), 4.22-4.15 (m, 3H, H2. H3, H4.), 4.04-4.11 (m, 1H, H5'a), 3.94-4.01 (m, 1H, H5 b), 3.10 (q, J = 7.3 Hz, 6H, (CH3CH2)3NH), 1.17 (t, J = 7.3 Hz, 9H, (CH3CH2)3NH). RMN 31P (D20, 121 MHz) 8 0.46 (s). UV (H20) Àmax 272 nm (s 10238), Amin 247 nm (s 6530). LC/MS (M-HNEt3+) : m/z : 322 tr : 10.7 min purity : 99 % . Exempe 42 : 1-(2'-désoxy-fl-D-ribofuranosyl)-cytosine-5'-monophosphate, sel de triéthylammonium 10 La monophosphorylation de la 2'-désoxycytidine (sous forme chlorhydrate) (0,20 g, 0,76 mmol) a été réalisée par la méthode F avec les modifications suivantes : le mélange a été agité à 15°C au lieu de 0°C pendant 4h, puis 3h à température ambiante. La purification sur colonne en phase inverse RP18 (isocratique/eau) a donné le dCMP (0,15 g, 48 %) 15 sous forme d'un solide blanc après lyophilisation et une faible quantité de 5'3'dCMP (0.05 g, 11 %) a également été isolée sous forme de solide blanc. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 6/2/2, v/v/v) : 0.5 RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 7.96 (d, J6_5 = 7.7 Hz, 1H, H6), 6.20 (t, J1'-2'a = Jl'-2'b = 6.6 Hz, 1H, H1'), 6.06 (d, J5.6 = 7.7 Hz, 1H, H5), 4.45 (m, 1H, H3'), 4.11 (m, 1H, H4,), 4.03-3.90 (m, 2H, 2H5,), 3.10 (q, J = 7.3 Hz, 6H, (CH3CH2)3NH), 2.40-2.31 (ddd, J2'a _1' = 6.1 Hz, J2'a _3' = 3.7 Hz, J2'a _2' = 14.1 Hz, 1H, H2'a ), 2.26-2.16 (m, 1H, H2'b), 1.19 (t, J = 7.3 Hz, 9H, (CH3CH2)3NH). OH5 49 RMN 31P (D20, 121 MHz) S 0.27 (s) UV (H20) Àmax 271 nm (s 9700), Àmin 247 nm (s 6100). LC/MS (M-HNEt3+) : m/z : 306 tr : 11.9 min purity : 100 %. Exemple 43: 1(f-D arabinofuranosyl)-cytosine-5'-diphosphate, sels de sodium A une solution d'araCMP sous forme de son sel de mono(triéthylammonium) (0,10 g, 0,23 mmol) dans l'eau (1,80 ml) est ajoutée de la tributylamine (0,46 mmol, 2 eq). Le mélange a été agité pendant 30 min à température ambiante. Les solvants ont été évaporés 15 sous pression réduite. Après une co-évaporation à l'éthanol puis à la pyridine anhydre, le monophosphate est séché toute la nuit sous vide sur P205. On ajoute 0,23g (1,41mmol) de 1,1'-carbonyldiimidazole à une suspension de ce monophosphate dans 5 ml de N,N-diméthylformamide. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 h à 20 température ambiante et traité au méthanol anhydre (0,10ml, 2,50mmol) pour décomposer l'excès de 1,1'-carbonyldiimidazole. Après 15 minutes, on ajoute une solution (1M, 1,41 ml, 1,41 mmol) de tributylammonium phosphate dans le N,N-diméthylformamide. La suspension est agitée pendant 24h à température ambiante puis filtrée. 25 Le filtrat est traité par un volume égal de méthanol et concentré sous pression réduite. Après purification sur colonne DEAE-Sephadex (gradient linéaire de TEAB, 0-1M), les sels de phosphate résiduels sont alors éliminés par 0 OII HOùPù04--0 I Nat & Na+ 0' OH 10 chromatographie en phase inverse RP18 (isocratique/eau). L'araCDP(45mg, 42%) a été obtenu sous forme d'un solide blanc après échange d'ions sur DOWEX Na+ et lyophilisation. Rf (iPrOH/H2O/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.3. RMN 1H (D2O, 400 MHz) 8 7.85 (d, J6_5 = 7.6 Hz, 1H, H6), 6.17 (d, J1,_2' = 5.6 Hz, 1H, H1'), 6.03 (d, J5_6 = 7.6 Hz, 1H, H5), 4.37 (t, = J2'..3' = 5.6 Hz, 1H, H2'), 4.22 (t, J3'_2' = 6.0 Hz, 1H, H3'), 4.17 (m, 2H, 2H5,), 4.01 (m, 1H, H4'). RMN 130 (D2O, 100 MHz) 8 166.1 (s, C4), 157.4 (s, C2), 142.7 (s, C6), 95.7 (s, C5), 85.1 (s, Cl,), 81.1 (d, Jc4'_P = 9.0 Hz, C4'), 75.3 (s, C2'), 73.6 (s, C3'), 63.6 (d, JcS_p = 5.0 Hz, C5'). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 -8.46 (m, Pu), -10.84 (m, Pu). UV (H2O) Àmax 271 nm (s 9100), Àmin 247 nm (s 5700). LC/MS (M+H-2Na+) : m/z : 402 tr : 15.8 min purity : 84.5 % Exemple 44: Comparatif : Méthode G : Triphosphorylation de nucléosides en solution G I : méthode � one pot � A une suspension du nucléoside désiré (1 eq) dans le triéthylphosphate (2 ml) à 0°C, on a ajouté de l'oxychlorure de phosphore (1,64 mmol, 2 eq). Le mélange a été agité à 0°C pendant 4h. Une solution de tributylammonium pyrophosphate dans du N,N-diméthyformamide anhydre (1M, 4.11 mmol, 5eq) a été ajoutée, ainsi que de la tributylamine (0,90 mmol, 1,1 eq). Le mélange a été vigoureusement agité pendant 5 min et une solution d'un tampon de bicarbonate de triéthylammonium (1M, 30 ml) a été ajouté lentement. Les solvants ont été évaporés sous pression réduite. La purification a été réalisée par chromatographie sur colonne DEAE-Sephadex, élution avec un gradient linéaire de tampon bicarbonate de triéthylamonium (0-1 M). Les sels de pyrophosphate résiduels ont été éliminés par chromatographie en phase inverse RP18 (isocratique/eau). G2 : méthode avec activation au carbonyldiimidazole: A une solution du monophosphate requis sous forme de son sel mono(triethylammonium) (1eq) dans l'eau (1,80 ml) est ajoutée de la tributylamine (0,46 mmol, 2 eq). Le mélange a été agité pendant 30mn à temperature ambiante. Les solvants ont été évaporés sous pression réduite. Après co-évaporation à l'éthanol puis à la pyridine anhydre, le monophosphate a été séché toute une nuit sous vide sur P205. A une suspension de ce monophosphate dans le DMF (5ml) on a ajouté du 1,1'-carbonyldiimidazole (1,41 mmol, 6eq). Le mélange réactionnel a été agité durant 2h à température ambiante et traité avec du méthanol anhydre (2,30 mmol, 10eq) pour décomposer l'excès de carbonyldiimidazole. Après 15min, on a ajouté une solution de tributylammonium pyrophosphate dans du N,N-diméthylformamide (1 M, 1,41 mmol, 6 eq) anhydre. La suspension a été agitée pendant 24h à température ambiante, puis filtrée. Le filtrat a été traité avec un volume égal de méthanol, puis concentré sous pression réduite. La purification a été réalisée par chromatographie sur colonne DEAE-Sephadex, élution avec un gradient linéaire de tampon bicarbonate de triéthylamonium (0-1M). Les sels de phosphate résiduels ont été supprimés par chromatographie en phase inverse RP18 (isocratique/eau). Exemple 45 : AraCTP 20 25 La triphosphorylation de l'araCMP (0,20 g. 0,82 mmol) a été réalisée selon la méthode G1 décrite ci-dessus. L'araCTP a été obtenu sous forme d'un solide blanc (0,045 mg, 10%) après échange d'ions sur DOWEX Na' et lyophilisation. 30 La triphosphorylation de l'araC (0,10 g, 0,23 mmol) a également été réalisée selon la méthode G2 décrite ci-dessus. Après deux purifications OH 0 0 o II IIlI HOùPùOùP-- OùL Na+ O' Na+ 0- Na+ O' sur colonne DEAE-Sephadex et sur une colonne en phase inverse RP18, I'araCTP (0.015 mg, 11 %) a été obtenu sous forme d'un solide blanc après échange d'ions sur Dowex puis lyophilisation. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 5.5/3.5/1., v/v/v) : 0.2. RMN 1H (D20, 400 MHz) 8 7.84 (d, J6_5 = 7.6 Hz, 1H, H6), 6.17 (d, Ji'-2' = 5.4 Hz, 1H, H1,), 6.03 (d, J5_6 = 7.6 Hz, 1H, H5), 4.37 (t, J2'_1 = J2'_ 3' = 5.4 Hz, 1H, H2'), 4.25-4.16 (m, 3H, H3. 2H5.), 4.03 (m, 1H, H4,). RMN 13C (D20, 100 MHz) 8 166.0 (s, C4), 157.3 (s, C2), 142.8 (s, C6), 95.7 (s, C5), 85.3 (s, Cil 81.1 (d, JC4'_p = 9.0 Hz, C4'), 75.4 (s, C2'), 73.6 (s, C3'), 64.0 (d, Jc5'_p = 5.0 Hz, C5'). RMN 31P (D20, 121 MHz) 8 -9.55 (d, Jre = 19.4 Hz, Pr), -11.12 (d, Ja_s = 19.4 Hz, Pa), -22.69 (t, JQ_,, = J~~ a = 19.4 Hz, P4. UV (H20) Amax 271 nm (E 10800), Amin 245 nm (s 6600). LC/MS (M+2H-3Na+) : m/z : 482 tr : 18.5 min purity : 84.7 % 5 Exemple 46 : CTP 0 !0'II 0 HO-P-O- ILO-F-O-- 0' 0- HNEt3+ HNEt3+ HNEt3+ 10 La triphosphorylation du CMP sous forme de son sel mono(triéthylammonium) (0,10 g, 0,23 mmol) été réalisée selon la méthode G2. Une purification sur colonne DEAE-Sephadex puis en 15 phase inverse RP18 (isocratique/eau) a conduit au CTP (0,70 g, 37 %) obtenu sous forme d'un solide blanc après lyophilisation. Rf (iPrOH/H20/NH4OH, 5.5/3.5/1, v/v/v) : 0.3. RMN 1H (D20, 300 MHz) 8 7.97 (d, J6-5 = 7.7 Hz, 1H, H6), 6.10 (d, J5-6 = 7.7 Hz, 1H, H5), 5.88 (d, J1'_2' = 4.3 Hz, 1H, H1') 4.30-4.12 (m, 5H, H2. H3. H4. 2H5'), 3.09 (q, J = 7.3 Hz, 18H, (CH3CH2)3NH), 1.17 (t, J = 7.3 Hz, 27H, (CH3CH2)3NH). RMN 13C (D20, 75 MHz) 8 163.4 (s, C4), 154.1 (s, C2), 142.5 (s, C6), 96.1 (s, C5), 89.1 (s, Cl,), 83.0 (d, Jc4'_P = 12.0 Hz, C4'), 74.3 (s, C2'), 69.2 (s, C3'), 64.5 (d, Jc5,_P = 7.0 Hz, C5,), 46.62 (s, (CH3CH2)3NH), 8.18 (s, (CH3CH2)3NH). RMN 31P (D2O, 121 MHz) 8 -10.78 (d, Jv_,g = 19.4 Hz, Pr), -11.36 (d, Ja_,g _ 20.6 Hz, Pa), -23.20 (t, JQl, = JQ_a = 19.4 Hz, Pu). UV (H2O) Àmax 272 nm (s 12500), Àmin 242 nm (s 7200). LC/MS (M+2H-3HNEt3+) : m/z : 482 tr : 17.1 min purity : 97.1 % REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de nucléotides ou analogue de nucléotides monomères comportant les étapes suivantes : (1) couplage d'un support polyéthylèneglycol soluble pourvu d'au moins un bras de liaison diacide ou éther-acide et d'un nucléoside ou analogue de nucléoside monomère, sur un groupe amine ou hydroxyle du nucléoside, à l'aide d'un agent de couplage; (2) au moins une étape de phosphorylation dudit nucléoside ou analogue de nucléoside couplé audit support avec un agent de phosphorylation. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit support polyéthylèneglycol pourvu d'au moins un bras de liaison diacide ou éther-acide a pour formule (I) RO-C2H4-O-PEG-O-C2H4-O-C(0)-(CH2)ä-COOH dans laquelle R est un groupe alkyle, benzyle ou aryle ou un groupe C(0)-(CH2)ä y-COOH et n et n', indépendamment l'un de l'autre, représentent 0 ou un entier de 1 à 10, ou (II) RO-C2H4-0-PEG-O-C2H4-0-(CH2)m COOH dans laquelle R est un groupe alkyle, benzyle ou aryle ou un groupe (CH2),,'-000H et m et m', indépendamment l'un de l'autre, représentent un entier de 1 à 3. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ledit support polyéthylèneglycol est pourvu d'au moins un bras de liaison diacide de formule (I) et n dans la formule (I) est inférieur à 6. 4. Procédé selon l'une des revendications 2 ou 3, caractérisé en ce que n ou n' dans la formule (I) est un entier de 0 à 4. 5. Procédé selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que R est un radical alkyle linéaire ou ramifié en C1 à 012 ou benzyle ou un radical aryle choisi parmi phényle, tolyle et o-tolyle. 6. Procédé selon l'une des revendications 2 à 5, caractérisé en ce que R est un radical méthyle ou benzyle. 7. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le nucléoside ou analogue de nucléoside possède une amine exocyclique. 8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que le couplage est réalisé entre une amine exocyclique du nucléoside ou analogue de nucléoside et un PEG comportant un ou deux bras succinate. 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que ledit support polyéthylèneglycol pourvu d'au moins un bras diacide a pour formule PEG-[O-C(0)-(CH2)2-COOH]2. 10. Procédé selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que le couplage est réalisé à l'aide d'au moins un agent de couplage choisi parmi la diméthylaminopyridine, une carbodiimide, une oxime aromatique ou les agents de couplage du type onium, ammonium, phosphonium ou uronium. 11. Procédé selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le couplage est réalisé à l'aide d'au moins un agent de couplage choisi parmi le dicyclohéxylcarbodiimide (DCC), le diisopropylcarbodiimide (DIC), et la diméthylaminopyridine (DMAP). le 1-hydroxybenzotriazole (HOBt), le 1- hydroxy-7-aza-benzotriazole (HOAt), l'hexafluorophosphate de (2-(1 H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3- tétraméthyluronium (HBTU), l'hexafluorophosphate de (2-(7-aza-1 H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tétraméthyluronium (HATU) et I' hexafluorophosphate de benzotriazole-l-yl-oxy-tris- pyrrolidinophosphonium (PyBOP). 12. Procédé selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que le couplage est réalisé à l'aide de diméthylaminopyridine. 13. Procédé selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que le support soluble est un PEG de poids moléculaire allant de 3000 à 6000, de préférence environ 4000. 14. Procédé selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce que le nucléoside ou analogue de nucléoside couplé au support est mono -, di-ou triphosphorylé en une, deux ou trois étapes de phosphorylation. 15. Procédé selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que la phosphorylation est réalisée à l'aide d'un dérivé du phosphore (III) ou d'un dérivé du phosphore (V), en présence d'un agent d'activation ou en absence d'un agent d'activation. 16. Procédé selon l'une des revendications 1 à 15, caractérisé en ce que la phosphorylation est réalisée à l'aide d'un agent de phosphorylation choisi parmi les oxychlorures de phosphore, les trialkylammonium pyrophosphates et les tétraalkylammonium phosphates. 17. Procédé selon l'une des revendications 1 à 16, caractérisé en ce que la phosphorylation est réalisée à l'aide d'un agent de phosphorylation choisi parmi l'oxychlorure de phosphore, le trichlorure de thiophosphate, le 4-nitrophényl dichlorophosphate, le phosphate de tributylammonium, le O-(2-chlorophényl) dichlorothiophosphate, l'aminométhyl phosphonique acide, l'aminométhyl (méthyl) phosphonique acide, la 2-chloro-1,3,2-dioxaphospholane, la 2-chloro-2-oxo-1,3,2-dioxaphospholane, la 2-chloro-4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin-4-one, le 2-chlorophénylphosphorodichloridate, le 4-chlorophényl-phosphorodichloridate, le baryum 2- cyoanoéthylphosphate, le diéthylchlorothiophosphate, le diméthylchlorothiophosphate, le diphényl-chlorophosphate, le méthyl- phosphorodichloridate, le phényl-dichlorophosphate, le dibenzyl-N,N- diisopropylphosphoramidite, le méthyldichlorophosphite et le diphénylphosphite ou parmi le pyrophosphate de tributylammonium, l'acide étidronique, les sels de l'imidodiphosphate, l'imino di(méthyl phosphonique acide), le tétrachlorure de pyrophosphoryle, le méthyl bis(dichlorophosphonate) et l'acide méthylène bisphosphonique. 18. Procédé selon l'une des revendications 1 à 17, caractérisé en ce que la phosphorylation est réalisée à l'aide d'un agent de phosphorylation choisi parmi l'oxychlorure de phosphore, le trichlorure de thiophosphate, le 4-nitrophényl dichlorophosphate, le diphénylphosphite et le phosphate de tributylammonium. 19. Procédé selon l'une des revendications 1 à 17, caractérisé en ce que la phosphorylation est réalisée à l'aide de pyrophosphate de tributylammonium ou l'acide méthylène bisphosphonique. 20. Procédé selon l'une des revendications 1 à 17, caractérisé en ce que la phosphorylation est réalisé à l'aide d'oxychlorure de phosphore. 21. Procédé selon l'une des revendications 1 à 15, caractérisé en ce que la phosphorylation est une monophosphorylation ou une diphosphorylation du nucléoside ou analogue de nucléoside à l'aide d'un dérivé du phosphore (V) en l'absence d'activateur. 22. Procédé selon l'une des revendications 1 à 20, caractérisé en ce que le nucléoside ou analogue de nucléoside monophosphaté supporté obtenu après une étape de monophosphorylation subit une diphosphorylation ou une ou deux étapes de monophosphorylation, à l'aide d'un agent d'activation. 23. Procédé selon l'une des revendications 1 à 20 ou 22, caractérisé en ce que la phosphorylation est activée, l'agent d'activation étant choisi parmi le mésitylsulfonylnitrotriazole (MSNT), le mésitylsulfonyletriazole (MST), le chlorure de mésitylsulfonyle (MSCI), le chlorure de triisopropylesulfonyle (TPSCI), le système Tf20/ 4- diméthylaminopyridine (DMAP) et le 1,1-carbonyldiimidazole (CDI). 24. Procédé selon l'une des revendications 1 à 23, caractérisé en ce que le clivage du bras de liaison est réalisé après phosphorylation, en utilisant une base. 25. Procédé selon l'une des revendications 1 à 24, caractérisé en ce que le clivage du bras de liaison est réalisé en utilisant une base choisie parmi NH40H, MeONa, NH3MeOH. 26. Procédé selon l'une des revendications 1 à 25, caractérisé en ce que l'on récupère en outre le nucléotide ou analogue. 27. Nucléotides ou analogues de nucléotides obtenus par le procédé selon l'une des revendications 1 à 26, en tant qu'outils biologiques.