Brevet FR2925492A1 — publié le 20090626

NOUVEAUX LIGANDS UTILISABLES POUR LES QUANTUM DOTS L'invention est relative à de nouveaux ligands permettant de stabiliser des nanoparticules, en particulier des nanocristaux semiconducteurs, le procédé de préparation de ces ligands, les nanoparticules stabilisées par au moins un ligand ainsi que les conjugués comprenant une nanoparticule stabilisée par au moins un ligand relié à une biomolécule. [Domaine technique] Lorsque des matériaux semi-conducteurs sont préparés sous forme de grains nanométriques, des effets quantiques apparaissent du fait de leurs faibles dimensions. Eclairés en lumière UV, ces nanocristaux émettent de la lumière dont la couleur varie en fonction de leurs tailles. Dotés de cette propriété, les nanocristaux semi-conducteurs, souvent appelés � quantum dots �, peuvent être utilisés avantageusement comme marqueurs luminescents de système biologiques pour suivre l'évolution de processus biologiques dans les cellules vivantes. Par rapport à des colorants organiques, ils présentent une meilleure résistance au photoblanchiment (c'est-à-dire la perte d'émission de fluorescence après une certaine durée d'excitation). Un nanocristal semiconducteur est donc un fluorophore photostable présentant une émission de lumière étroite dans le visible et dans le proche infra-rouge. Malgré leurs propriétés optiques attrayantes, les nanocristaux semiconducteurs n'ont été que très peu utilisés comme marqueurs en biologie. Cela est dû aux difficultés à les � solubiliser � en milieu aqueux tout en conservant trois propriétés essentielles: une bonne fluorescence, une stabilité colloïdale et une faible adsorption non spécifique. Afin d'assurer la stabilité des nanocristaux semiconducteurs dans un solvant aqueux ou organique, il est maintenant connu d'utiliser des ligands polyfonctionnels comme cela est envisagé dans J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 12142 ; J. Am. Chem. Soc. 2005, 127, 3870 ; J. Am. Chem. Soc. 2007, 129, 13987 ; J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 1274. [Art antérieur] WO 2006/036646 décrit des ligands de nanocristaux comprenant une partie pouvant s'attacher sur une surface inorganique, pouvant contenir par exemple un groupe ûSH, -NH2, P, O, P=O, une partie soluble dans l'eau et une partie contenant un groupe fonctionnel. Un exemple de ligand est celui représenté ci-dessous :35 WO 20061131662 décrit des ligands de nanocristaux pouvant être des hydroxamates ou des dérivés de l'acide hydroxamique, de agents complexants multidentates ou un ligand de formule (R,)a-R2-[(R3)b-(R4)c]d dans lequel RI peut être SR, NHR, NR2, N(0)HR, N(0)R2, PHR, PR2,... ; R2 peut être une liaison, un groupe alkénylène, hétéroalkylène, hétéroalkénylène,... ; R3 peut être un groupe alkylène, alkénylène, hétéroalkylène, ... ; R4 peut être H, un groupe carboxylate, thiocarboxylate, amine, amide, imine, alcool, thiol,.... Un exemple donné est la DL-cystéine pour laquelle R1=SH, R2=CH2, R3=CHNH2 et R4=COOH. Les publications suivantes : J. Am. Chem. Soc. 2000, 112, 12142 ; 2005, 127, 3870 ; 2005, 129, 13987 ; 2008, 130, 1274 décrivent des ligands de nanocristaux. Aucun de ces documents ne décrit ni ne suggère les ligands selon la présente invention. [Description de l'invention] Définitions On utilise pour la présente invention les définitions suivantes. • groupe alkyle : un groupe hydrocarboné aliphatique saturé linéaire ou ramifié. A titre d'exemples, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, iso-butyle, tertio-butyle, méthyl-cyclopropyle, pentyle, 2,2-diméthylpropyle, hexyle ; • groupe alkylène : un radical bivalent obtenu en enlevant un atome d'hydrogène à un groupe alkyle ; • groupe protecteur : un groupe destiné à protéger une fonction chimique de réactions chimiques indésirées introduit au cours d'une étape de protection et qui est libéré au cours d'une étape ultérieure au cours d'une étape de déprotection. On trouvera des exemples de groupements protecteurs dans T.W.Greene et coll. � Profective Groups in Organic Synthesis �, 3rd edition, 1999, Wiley-Interscience ou dans J.F.W. McOmie �Profective Groups in Organic Chemistry�, Plenum Press, 1973. Comme exemples de groupements protecteurs, on peut citer le carbamate de tertbutyle (BOC) ou le groupement trityle. S'agissant du ligand selon l'invention, celui-ci répond à la formule générale (I) ci-dessous : ù ùALKùLù (CH2)2-(OCH2CH2)n-OCH2CH2 A SH SH (I) dans laquelle : • ALK représente un groupe (C,-C1o)alkylène ; • L représente le groupe -NH-C(=O)-X,- ou ûC(=O)-X1- rattaché à ALK par -NH ou -C(=O), dans lequel X, représente ûNH- ou -O- ; • n représente un entier compris entre 1 et 25, de préférence entre 6 et 20, encore plus préférentiellement entre 6 et 15 ; • lorsque L représente -NH-C(=O)-X,-, A représente : - un groupe -N3 ; - un groupe ûOH ; - un groupe ûNRaRb dans lequel Ra et Rb représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe (C1-C10)alkyle éventuellement substitué par au moins un groupe ûOH ou -000H ; - un groupe ûNH-C(=O)RÇ dans lequel R, représente un groupe (C1-C10)alkyle substitué par au moins un groupe ûOH ou ûCOOH ; et lorsque L représente ûC(=O)-X1-, A représente : - un groupe -N3 ; - un groupe ûNRaRb dans lequel Ra et Rb représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe (C1-C10)alkyle éventuellement substitué par un groupe û OH ou ûCOOH, le groupe ûNH2 étant exclu. Le groupe ALK représente plus particulièrement û(CH2)1_10. L et A peuvent être choisis dans le Tableau I. L représente de préférence le groupe ûNH-C(=O)-NH-. Lorsque A représente un groupe û NRaRb, Ra et Rb peuvent représenter tous deux un groupe (C1-C10)alkyle substitué par au moins un groupe ûCOOH. II peut s'agir par exemple du groupe ûN(CH2O00H)2. Procédé de préparation des composés de l'invention Le ligand de formule (I) peut être préparé selon l'une de méthodes décrites ci-dessous. cas où L = -NH-C(=O)-X1_ Les composés sont préparés selon les étapes suivantes du Schéma 1 : - étape 1 : réaction entre P1 et P2 pour donner P3 ; A désigne un groupe ûOH, -N3 ou ûNH-PG dans lequel PG désigne un groupe protecteur de la fonction ûNH2. Un exemple de groupe protecteur approprié est le ter-butoxycarbonyle (BOC) ; - étape 2 : réduction du pont disulfure de P3 pour donner P4 ; + HX1-CH2CH2-(OCH2CH2)n-CH2CH2-A P2 o ( /ALKùH X1-CH2CH2 (OCH2CH2)~ CH2CH2-A Sùs P3 O ' /ALKùNX1-CH2CH2-(OCH2CH2)n-CH2CH2-A SH SH P4 A = OH, N3 A = NH-PG ù NH2 ù�- NRaRb ou NHRc Schéma 130 La réaction de l'étape 1 (réarrangement de Curtius) est conduite en chauffant P, et P2 dans un solvant polaire en présence d'une base. Par exemple, la réaction peut être conduite dans le DMF (diméthylformamide) en présence de triéthylamine. PI est obtenu à partir de PI' par transformation de la fonction acide en fonction azoture d'acyle, par exemple à l'aide de DPPA (diphénylphosphoryl azide) : ALK fOH SùS 0 PI' /ALK,N3 SùS O PI DPPA N=N=N~ ~O 1 OPh OPh La réduction de l'étape 2 peut être conduite en présence d'un agent réducteur tel que NaBH4. Le solvant utilisé peut être un mélange alcool/eau (éthanol/eau par exemple). Les composés P2 sont des produits commerciaux ou facilement accessibles à partir de ces derniers pas des réactions connues de l'homme du métier. Les composés suivants sont par exemple facilement accessibles auprès de la société Sigma-Aldrich : A=OH et X,=OH, A=N3 et X1=NH2, A=NHBOC et X,=NH2 ou A=NH2 et X1=NH2. cas où L = -C(=0)-XI_ ALKOH ` + HX1-CH2CH2-(OCH2CH2),-CH2CH2-A SùS O PI, P2 /ALK XI-CH2CH2 (OCH2CH2),-CH2CH2-A SùS P3 O /ALK X1-CH2CH2 (OCH2CH2),-CH2CH2-A SH SH P4 A = N3 A = NH-PG NH2 ù~ NRaRb Schéma 2 Les composés sont préparés selon le Schéma 2 selon les étapes suivantes : - étape 1 : réaction entre PI' et P2 pour donner P3' ; A désigne un groupe -N3 ou ûNH-PG ; - étape 2 : réduction du pont disulfure de P3' pour donner P4'. La réaction de l'étape 1 (esterification ou amidification) est conduite de préférence en présence d'un agent de couplage tel que par exemple le 1-ethyl-3-[3-(dimethylamino)propyl]carbodiim ide 25 hydrochloride (EDCL) de préférence en présence de diméthylaminopyridine (DMAP). Le solvant utilisé O peut être un solvant polaire tel que l'acétonitrile. L'étape 2 est quant à elle semblable à celle décrite pour le Schéma 1. Dans le cas où A désigne ûNH-PG, ces schémas incluent également (après l'étape 1 ou l'étape 2), une étape de déprotection du groupe protecteur PG pour former le groupe ûNH2. La déprotection est connue de l'homme du métier ; dans le cas du BOC, on peut utiliser un traitement du produit en milieu acide. Le groupe ûNH2 peut alors être transformé en groupe ûNRaRb ou ûNHR, par des réactions connues de l'homme du métier. Dans le cas particulier où A représente le groupe ûNRaRb dans lequel Ra et/ou Rb représente un groupe (C1-C10)alkyle substitué par au moins un -000H, tel que par exemple A = -N(CH2CO2H)2, on préfère utiliser à la place de P1 ou P1' les composés équivalents P5 et P5' comprenant les fonctions thiols protégés par un groupe protecteur PG* (PG* désigne un groupe protecteur d'une fonction thiol, comme par exemple le groupe trityle). P5 est obtenu à partir de P1' après ouverture du pont disulfure et protection des fonctions thiols ; P5' est obtenu à partir de P5 après transformation de la fonction acide en fonction azoture d'acyle (Schéma 3) : ALK /OH 0 sùs P1, SH P1 P5' SH Schéma 3 Les fonctions thiols sont ensuite libérées après déprotection. S'agissant du nanocristal semi-conducteur, celui-ci peut être l'un de ceux décrits dans WO 20061036646 ou dans WO 2006/131662. II peut s'agir notamment de nanoparticules de CdS, CdSe, CdTe, ZnS, ZnSe, ZnTe, MgTe, GaAs, GaP, GaSb, GaN, InAs, InP, InSb, InN, AlAs, AIP, AIS ou leurs mélanges. 25 Le nanocristal est de préférence de type coeur-écorce constitué d'un coeur en un 1er matériau semiconducteur et une écorce en un 2ème matériau semiconducteur à bande interdite plus large dudit 1er matériau semiconducteur car le rendement quantique de fluorescence peut être augmenté et peut dépasser 50%, devenant comparable à celui de colorants organiques. Le 1er matériau peut être 30 notamment choisi parmi les semiconducteurs IIA-VIB, IIIA-VB ou IVA-VIB en particulier CdSe ou ZnS. Le 2ème matériau peut être notamment un matériau IIA-VIB en particulier ZnS, CdS et ZnSe. Un exemple de nanocristal de type coeur-écorce comprend un coeur en CdSe et une écorce en ZnS. S'agissant de la nanoparticule, celle-ci peut être une particule colloïdale d'or ou d'argent. S'agissant de la biomolécule, celle-ci peut être par exemple un peptide, une protéine, un anticorps monoclonal ou polyclonal, éventuellement modifié, un oligonucléotide, un acide nucléique (ADN ou ARN). 35 Utilisations du ligand selon l'invention Le ligand selon l'invention permet de stabiliser en milieu aqueux un nanocristal semiconducteur ou une nanoparticule permettant d'obtenir une solution colloïdale. Le ligand peut être utilisé seul ou en combinaison avec un ou plusieurs autre(s) ligand(s) de formule (I). Il peut également être utilisé en combinaison avec un ou plusieurs autre(s) ligand(s) assurant la stabilité en milieu aqueux d'un nanocristal semiconducteur ou d'une nanoparticule. Par exemple, on peut envisager de combiner un ligand selon l'invention avec un ligand décrit dans J. Am. Chem. Soc. 2000, 112, 12142 ; 2005, 127, 3870 ; 2005, 129, 13987 ; 2008, 130, 1274 : o OH SH SH SH SH O .n NH2 SH SH o SH SH Le conjugué comprend un nanocristal semiconducteur ou une nanoparticule stabilisé par le ligand relié par le groupe terminal A à une biomolécule. Pour obtenir le conjugué, on stabilise dans une 1ère étape le nanocristal ou la nanoparticule par le ligand selon l'invention (ou la combinaison de ligands), puis on fait réagir le groupe terminal A avec la biomolécule. Il est également possible de faire réagir dans une lèfe étape le groupe terminal A avec la biomolécule, puis dans une 2ème étape de stabiliser le nanocristal ou la nanoparticule à l'aide du ligand attaché à la biomolécule. Lorsque le groupe terminal A du ligand comporte une fonction -COOH ou -NH2, l'accrochage à la biomolécule pourra être réalisé par l'intermédiaire d'une fonction amide après réaction avec respectivement une fonction ûNH2 ou - COOH de la biomolécule. Lorsque le groupe terminal A du ligand comporte une fonction ûN3, l'accrochage à la biomolécule pourra être réalisé par l'intermédiaire d'une réaction de cyclo-addition sur une fonction alcyne de la biomolécule. Le conjugué peut être utilisé comme sonde fluorescente en imagerie médicale ou en biologie. Ainsi, dans le cas où le conjugué comprend un anticorps comme biomolécule, il est possible de suivre sélectivement par l'intermédiaire du nanocristal semiconducteur ou de la nanoparticule la présence de l'antigène correspondant. [Exemples] Conditions expérimentales Toutes les réactions sont effectuées avec des solvants anhydres de la gamme Acros Organics AcroSeal. Les solvants utilisés pour les extractions et les chromatographies proviennent de chez SDS. Les purifications sur gel de silice sont effectuées en utilisant des cartouches de silice VWR-MERCK (Silica gel 60 ; 15-40 pm). Analyse UPLC-MS-DAD-ELSD : MS=SQD Waters ; electrospray+/- ; domaine de masse m/z=100-1100 ; UPLC-Waters ; colonne Acquity UPLC Beh C18 1,7 �m/3 mm/50 mm ; four UPLC=70°C, débit =1 ml/min ; élution avec le gradient NB suivant (en %) : 0 (95/5), 0,8 (50/50), 1,2 (0/100), 1,85 (0/100), 1,95 (95/5), 2,0 (95/5) [A : eau+0,1% acide formique et B : acétonitrile+0,1% acide formique]. détection : DAD : longueur d'onde considérée À=210-400 nm ; ELSD : Sedere SEDEX 85 ; température de nébulisation =35°C ; pression =3,7 bar En fonction des structures analysées, les solvants de dilution sont : diméthylsulfoxyde; méthanol; acétonitrile; dichlorométhane. (CH2)Z (OCH2CH2)n-OCH2CHZ A SH SH (I) Tableau 1 ex ALK L n A 1 -(CH2)4--C(=0)-NH- 6 -N(CH2COOH)2 2 -(CH2)4- -C(=O)-NH- 6 -NEt2 3 -(CH2)4--NH-C(=O)-O- 6 -OH 4 -(CH2)4- -NH-C(=0)-NH- 6 -NH-C(=O)CH2CH2COOH 5 -(CH2)4- -NH-C(=O)-NH- 6 -N(CH2COOH)2 exemple 1 Le (23-amino-3,6,9,12,15,18,21-heptaoxatricos-1-yl)carbamate de 1,1-diméthyléthyle (8,54 mmol) est placé en solution dans l'acétonitrile anhydre (48 ml). Le bromoacétate de méthyle (25,6 mmol) puis le carbonate de potassium (25,6 mmol) sont ajoutés et le milieu réactionnel est agité 12 h à température ambiante (TA). L'hydrolyse de la réaction est effectuée par ajout d'eau (25 ml) et après séparation des phases, la phase organique est extraite par de l'acétate d'éthyle (3x20 ml). Les phases organiques sont réunies, lavées par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium et séchées sur sulfate de magnésium. Après filtration et évaporation des solvants sous pression réduite, le 29-(2-méthoxy-2-oxoéthyl)-2,2-diméthyl-4-oxo-3,8,11,14,17,20,23, 26-octaoxa-5, 29-diazahéntriacontan-31-oate de méthyle (produit 1.1) est obtenu sous la forme d'une huile incolore (4,73 g ; 90%). UPLC-MS- DADELSD: (M+H)+ = 613 ; tr (temps de rétention)= 1,02 min Le composé 1.1 (7,70 mmol) est placé en solution dans le méthanol anhydre (10 ml) et la solution d'acide chlorhydrique dans le diéthyléther anhydre (20 mmol) est ajoutée. L'agitation est poursuivie 4 heures à TA puis les solvants sont évaporés. Le 1-amino-24-(2-méthoxy-2-oxoéthyl)-3,6,9,12,15,18, 21-heptaoxa-24-azahexacosan-26-oate de méthyle (composé 1.2), une huile translucide, est alors obtenu (3.96 g ; quantitatif). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+ = 513 ; tr = 0,54 min L'acide 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoïque (19,4 mmol) est solubilisé dans une solution aqueuse 0,25 M de bicarbonate de sodium (80 ml) à 0°C et le borohydrure de sodium (77,6 mmol) est additionné en plusieurs fois. A la fin de l'ajout, l'agitation est poursuivie 3 h supplémentaires tout en ramenant la température à TA. Le pH du milieu réactionnel est ensuite porté à pH 1 par ajout d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 6 M. La phase aqueuse est extraite par du toluène (3x50 ml) puis les phases organiques sont séchées sur sulfate de magnésium, filtrées et les solvants sont évaporés sous pression réduite. L'acide 6,8-disulfanyloctanoïque (composé 1.3) est obtenu sous la forme d'une huile incolore (4,04 g ; quantitatif). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+Na)+ = 231 ; tr = 0,99 min L'acide 1.3 (14,4 mmol) est placé en solution dans un mélange de dichlorométhane anhydre (60 ml) et d'acide trifluoroacétique (3 ml). Le chlorure de trityle (42,2 mmol) est ajouté et le mélange réactionnel, devenu jaune foncé, est agité 3 h à TA. Le milieu réactionnel est hydrolysé par ajout d'une solution aqueuse 1 M d'hydroxyde de sodium (30 ml) et est agité jusqu'à disparition de la coloration. Les phases sont séparées et la phase organique est lavée par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium puis séchée sur sulfate de magnésium. Après filtration et évaporation des solvants sous pression réduite, le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol ; 100:0 à 96:4). Un solide blanc, l'acide 6,8-bis(tritylsulfanyl)octanoïque (composé 1.4), est alors obtenu (7,63 g ; 76%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (C18H15)+ = 243 ; tr = 1,55 min L'acide 1.4 (6.49 mmol) est placé en solution dans l'acétonitrile anhydre (20 ml) et le 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide (13,0 mmol) est ajouté. L'ensemble est agité 15 minutes avant que le composé 1. 2 (7.79 mmol) en solution dans l'acétonitrile (10 ml) et la 4-diméthylaminopyridine (0,41 mmol) ne soient ajoutées. Le milieu réactionnel est agité 12 h à TA. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol ; 100:0 à 96:4). Le 35-(2-méthoxy-2-oxoéthyl)-10-oxo-1,1,1-triphényl-5-(tritylsulfanyl)-14,17, 20,23,26,29,32-heptaoxa-2-thia-11, 35-diazaheptatriacontan-37-oate de méthyle (composé 1.5) est obtenu sous la forme d'une huile incolore (4,30 g ; 56%). UPLC-MS- DAD-ELSD: (M)+ = 1187 ; tr = 1,53 min Le produit 1.5 (3.62 mmol) est placé en solution dans un mélange méthanol I eau (28 m l/ 12 ml) et l'hydroxyde de lithium (28,7 mmol) est ajouté. L'agitation est poursuivie 3 h à TA avant que les solvants ne soient évaporés. L'acide 35-(carboxyméthyl)-10-oxo-1,1,1-triphényl-5-(tritylsulfanyl)-14,17,20,23, 26,29,32-heptaoxa-2-thia-11,35-diazaheptatriacontan-37-oïque (composé 1.6) brut ainsi obtenu est directement mis en solution dans un mélange de dichlorométhane (32 ml) et d'acide trifluoroacétique (8,5 ml). Le triéthylsilane (0,20 mol) est ajouté et le milieu réactionnel est agité 48 heures à TA. Les solvants sont évaporés et le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle/méthanol ; 85:15 à 80:20 puis acétone/eau/méthanol ; 8/1/1 à 5/4/1). L'acide 3-(carboxyméthyl)-28-oxo-33,35-disulfanyl-6,9,12,15,18,21,24-heptaoxa-3, 27-diazapentatriacontan-1-oïque (exemple 1), une huile jaune très pâle, est obtenue (1,12 g ; 46% sur les 2 étapes). UPLC-MSDAD-ELSD: (M+H)+ = 675 ; tr = 0,85 min exemple 2 L'acide 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoïque (1,94 mmol) est placé en solution dans l'acétonitrile anhydre (8 ml) et le 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide (2,91 mmol) puis la 4-diméthylaminopyridine (0,58 mmol) sont ajoutés. Le (23-amino-3,6,9,12,15,18,21-heptaoxatricos-1-yl)carbamate de 1,1-diméthyléthyle (2,13 mmol) en solution dans l'acétonitrile anhydre (7 ml) est alors ajouté goutte à goutte et le milieu réactionnel est agité 12 h à TA. Après évaporation des solvants sous pression réduite, le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle/méthanol ; 90:10 à 86:14). Le [29-(1,2-dithiolan-3-yl)-25-oxo-3,6,9,12,15,18, 21-heptaoxa-24-azanonacos-1-yl]carbamate de 1,1-diméthyléthyle (composé 2.1) est obtenu sous la forme d'une huile jaune très pâle (950 mg ; 75%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+ = 657 ; tr = 1,35 min Le produit 2.1 (1.45 mmol) est placé en solution dans le méthanol anhydre (2 ml) et la solution d'acide chlorhydrique dans le diéthyléther anhydre (4,16 mmol) est ajoutée. L'agitation est poursuivie 2 h à TA puis les solvants sont évaporés. Une huile translucide, le N-(23-amino-3,6,9,12,15,18,21-heptaoxatricos-1-yl)-5-(l,2-dithiolan-3-yl) pentanamide (composé 2.2) est alors obtenue (770 mg ; 96%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+= 557 ; tr = 0,81 min Le produit 2.2 (1,02 mmol) est placé en solution dans l'acétonitrile anhydre (5,7 ml). L'iodure d'éthyle (3,07 mmol) puis le carbonate de potassium (3,07 mmol) sont ajoutés et le milieu réactionnel est agité 12 h à TA. L'hydrolyse de la réaction est effectuée par ajout d'eau (5 ml) et après séparation des phases, la phase organique est extraite par de l'acétate d'éthyle (3x5 ml). Les phases organiques sont réunies, lavées par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium et séchées sur sulfate de magnésium. Après filtration et évaporation des solvants sous pression réduite, le 5-(1,2-dithiolan-3-yl)-N-(24-éthyl-3,6,9,12,15,18, 21-heptaoxa-24-azahexacos-1-yl)pentanamide (composé 2.3) est obtenu (huile incolore ; 430 mg ; 69%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+ = 613 ; tr = 0,92 min Le produit 2.3 est placé en solution dans un mélange éthanol / eau (4 ml / 1 ml) à 0°C et le borohydrure de sodium (2,81 mmol) est additionné en plusieurs fois. A la fin de l'ajout, l'agitation est poursuivie 1 h à TA. Le milieu réactionnel est hydrolysé par ajout d'eau (5 ml), les phases sont séparées et la phase aqueuse est extraite par du chloroforme (3x10 ml). Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées et les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le N-(24-éthyl-3,6,9,12,15,18,21-heptaoxa-24-azahexacos-1-yl)-6, 8-disulfanyloctanamide (exemple 2) est obtenu sous la forme d'une huile incolore (400 mg ; 93%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+ = 615 ; tr = 0,95 min exemple 3 L'acide 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoïque (0,49 mmol) et le dodecaéthylène glycol (0,73 mmol) sont placés en solution dans le diméthylformamide anhydre (3 ml) et la triéthylamine (0,97 mmol). L'azoture de diphénylphosphine (0,73 mmol) est ajouté et le milieu réactionnel est chauffé à 80°C pendant 6 h. L'hydrolyse de la réaction est effectuée par ajout d'une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium (25 ml), les phases sont séparées et la phase organique est extraite par du chloroforme (3x10 ml). Les phases organiques sont réunies, lavées à l'eau, séchées sur sulfate de magnésium et filtrées. Après évaporation des solvants, le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhanelméthanol ; 99:1 à 90:10). Le [4-(1,2-dithiolan-3-yl)butyl]carbamate de 35-hydroxy-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undécaoxapentatriacont-1-yle (composé 3.1) est obtenu sous la forme d'une huile jaune (126 mg ; 35%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+= 750 ; tr = 1,08 min Le produit 3.1 (0,17 mmol) est placé en solution dans un mélange éthanol / eau (0,9 ml / 0,2 ml) et le borohydrure de sodium (0,20 mmol) est additionné. L'agitation est poursuivie 1 h à TA puis le milieu réactionnel est hydrolysé par ajout d'eau (2 ml). Les phases sont séparées et la phase aqueuse est extraite par du chloroforme (3x5 ml). Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées et les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le (5,7-disulfanylheptyl)carbamate de 35-hydroxy-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undécaoxapentatriacont-1-yle (exemple 3) est obtenu sous la forme d'une huile jaune (115 mg ; 91%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M)+= 752 ; tr = 1,10 min exemple 4 L'acide 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoïque (0,70 mmol) est placé en solution dans un mélange diméthylformamide (4,0 ml) / triéthylamine (1,40 mmol). La température du milieu réactionnel est portée à 80°C avant que l'azoture de diphénylphosphine (1,06 mmol) ne soit ajouté. A la fin du dégagement gazeux, le (23-amino-3,6,9,12,15,18,21-heptaoxatricos-1-yl)carbamate de 1,1-diméthyléthyle (1,06 mmol) en solution dans 0,5 ml de diméthylformamide est ajouté et le milieu réactionnel est agité 12 h à 80°C. Après refroidissement à TA, le milieu réactionnel est hydrolysé par ajout d'une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium (50 ml). La phase aqueuse est extraite par du chloroforme (3x30 ml). Les phases organiques sont réunies, lavées par de l'eau et séchées sur sulfate de magnésium. Après filtration et évaporation des solvants, le brut de la réaction est purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhanelméthanol ; 98:2 à 95:15). Le [30-(1,2-dithiolan-3-yl)-25-oxo-3,6,9,12,15,18,21-heptaoxa-24, 26-diazatriacont-1-yl]carbamate de 2-méthylpropan-2-yle (composé 4.1) est obtenu sous la forme d'une huile jaune pâle (412 mg ; 87%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+ = 672 ; tr = 1,21 min Le produit 4.1 (0,61 mmol) est placé en solution dans le méthanol anhydre (1,7 ml) et la solution d'acide chlorhydrique dans le diéthyléther anhydre (1,7 mmol) est ajoutée. L'agitation est poursuivie 4 heures à TA puis les solvants sont évaporés. Une huile jaune pâle, le 1-(23-amino-3,6,9,12,15,18,21-heptaoxatricos-1-yl)-3-[4-(1, 2-dithiolan-3-yl)butyl]urée (composé 4.2), est alors obtenue (360 mg ; quantitatif). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+ = 572 ; tr = 0,73 min Le produit 4.2 (0,63 mmol) est placé en solution dans la pyridine anhydre (4,7 ml) et l'anhydride succinique (1,07 mmol) est ajouté. Le milieu réactionnel est agité 48 h à TA. Après évaporation des solvants, le brut de la réaction est purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol ; 98:2 à 90:10). L'acide 1-(1,2-dithiolan-3-yl)-6,32-dioxo-10,13,16,19,22,25,28-heptaoxa-5,7, 31-triazapentatriacontan-35-oïque (composé 4.3) est obtenu sous la forme d'une huile incolore (321 mg ; 76%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+ = 672 ; tr = 0,90 min Le produit 4.3 (0,24 mmol) est placé en solution dans un mélange éthanol / eau (1,5 ml / 1,5 ml) et la tri(2-carboxyéthyl)phosphine (0,35 mmol) est ajoutée. Le mélange réactionnel est agité 2 h à TA et, après évaporation des solvants, le brut réactionnel est purifié par HPLC préparative. L'acide 4,30-dioxo-36,38-disulfanyl-8,11,14,17,20,23,26-heptaoxa-5,29, 31-triazaoctatriacontan-1-oïque (exemple 4) est obtenu sous forme d'une huile incolore (68,3 mg ; 43%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+ = 674 ; tr = 0, 92 min Exemple 5 L'acide 1.4 (0,39 mmol) est placé en solution dans un mélange diméthylformamide (2,0 ml) / triéthylamine (0,78 mmol). La température du milieu réactionnel est portée à 80°C avant que l'azoture de diphénylphosphine (0,58 mmol) ne soit ajouté. A la fin du dégagement gazeux, le produit 1.2 (0,58 mmol) en solution dans 0,4 ml de diméthylformamide est ajouté et le milieu réactionnel est agité 12 h à 80°C. Après refroidissement à TA, le milieu réactionnel est hydrolysé par ajout d'une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium (20 ml). La phase aqueuse est extraite par du chloroforme (3x20 ml). Les phases organiques sont réunies, lavées par de l'eau et séchées sur sulfate de magnésium. Après filtration et évaporation des solvants, le brut de la réaction est purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol ; 98:2 à 90:10). Le 36-(2-méthoxy-2-oxoéthyl)-11-oxo-1,1,1-triphényl-5-(tritylsulfanyl)-15,18, 21,24,27,30,33-heptaoxa-2-thia-10,12,36-triazaoctatriacontan-38-oate de méthyle (composé 5.1) est obtenu sous la forme d'une huile jaune pâle (240 mg ; 51%). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M)+ = 1202 ; tr = 1,57 min Le produit 5.1 (0,18 mmol) est placé en solution dans un mélange méthanol I eau distillée (1,4 ml 10,6 ml) et l'hydroxyde de lithium (1,42 mmol) est ajouté. L'agitation est poursuivie 3 h à TA avant que les solvants ne soient évaporés. L'acide 36-(carboxyméthyl)-11-oxo-1,1,1-triphényl-5-(tritylsulfanyl)-15,18,21,24, 27,30,33-heptaoxa-2-thia-10,12,36-triazaoctatriacontan-38-oïque (composé 5.2) brut ainsi obtenu est directement mis en solution dans un mélange de dichlorométhane (1,5 ml) et d'acide trifluoroacétique (0,4 ml). Le triéthylsilane (9,94 mmol) est ajouté et le milieu réactionnel est agité 48 h à TA. Les solvants sont évaporés et le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle/méthanol ; 85:15 à 80:20 puis acétone/eau/méthanol ; 8/1/1 à 5/4/1). L'acide 3-(carboxyméthyl)-28-oxo-34,36-disulfanyl-6,9,12,15,18,21,24-heptaoxa-3, 27,29-triazahexatriacontan-1- oïque (exemple 5) est alors obtenu sous la forme d'une huile incolore (20 mg ; 16% sur les 2 étapes). UPLC-MS-DAD-ELSD: (M+H)+ = 690 ; tr = 0,85 min40 REVENDICATIONS 1. Composé de formule (I) : (CH2)2-(OCH2CH2)n-OCH2CH2-A SH SH (I) dans laquelle : • ALK représente un groupe (C,-C10)alkylène ; • L représente le groupe -NH-C(=O)-X1- ou ùC(=O)-X1- rattaché à ALK par -NH ou -C(=0), dans lequel X, représente ùNH- ou -O- ; • n représente un entier compris entre 1 et 25, de préférence entre 6 et 20, encore plus 10 préférentiellement entre 6 et 15 ; • lorsque L représente -NH-C(=O)-X,-, A représente : - un groupe -N3 ; - un groupe ùOH ; - un groupe ùNRaRb dans lequel Ra et Rb représentent indépendamment l'un de l'autre un 15 atome d'hydrogène ou un groupe (C,-C1o)alkyle éventuellement substitué par au moins un groupe ùOH ou -000H ; - un groupe ùNH-C(=O)Rc dans lequel R, représente un groupe (C,-C10)alkyle substitué par au moins un groupe ùOH ou -000H ; 20 et lorsque L représente ùC(=O)-X,-, A représente : - un groupe -N3 ; - un groupe ùNRaRb dans lequel Ra et Rb représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un groupe (C,-C1o)alkyle éventuellement substitué par un groupe ù OH ou ùCOOH, le groupe ùNH2 étant exclu. 25 2. Composé selon la revendication 1 dans lequel ALK représente ù(CH2)1_10. 3. Composé selon la revendication 2 dans lequel ALK représente ù(CH2)4. 30 4. Composé selon la revendication 1 à 3 dans lequel A représente -N(CH2O00H)2, -NH-C(=O)CH2CH2000H ou - NEt2. 5. Composé selon la revendication 1 dans lequel ALK représente ù(CH2)4-, n vaut 6 et L et A sont respectivement : 35 • -C(=O)-NH- et -N(CH2000H)2 ; • -C(=0)-NH- et -NEt2 ; - NH-C(=O)-O- et ùOH ; -NH-C(=O)-NH- et -NH-C(=0)CH2CH2O00H ; • -NH-C(=0)-NH- et -N(CH2O00H)2. 6. Utilisation du composé selon l'une des revendications 1 à 5 pour stabiliser en milieu aqueux un nanocristal semiconducteur ou une nanoparticule. 7. Utilisation selon la revendication 6 dans laquelle le nanocristal semiconducteur est une nanoparticule de CdS, CdSe, CdTe, ZnS, ZnSe, ZnTe, MgTe, GaAs, GaP, GaSb, GaN, InAs, InP, InSb, InN, AIAs, AIP, AIS. 8. Utilisation selon la revendication 6 dans laquelle le nanocristal semiconducteur est de type coeur-écorce constitué d'un coeur en un 1er matériau semiconducteur et une écorce en un 2ème matériau semiconducteur à bande interdite plus large dudit 1e` matériau semiconducteur. 9. Utilisation selon la revendication 8 dans laquelle le nanocristal de type coeur-écorce comprend un coeur en CdSe et une écorce en ZnS. 10. Utilisation selon la revendication 6 dans laquelle la nanoparticule est une particule colloïdale d'or ou d'argent. 11. Conjugué comprenant un nanocristal semiconducteur tel que défini à l'une des 20 revendications 6 à 9 ou une nanoparticule telle que définie à la revendication 6 ou 10 stabilisé(e) par un composé tel que défini à l'une des revendications 1 à 5 relié à une biomolécule par le groupe terminal A du composé. 12. Conjugué selon la revendication 11 dans lequel la biomolécule est un peptide, une protéine, 25 un anticorps monoclonal ou polyclonal, éventuellement modifié, un oligonucléotide, un acide nucléique. 13. Utilisation d'un conjugué tel que défini à la revendication 11 ou 12 comme sonde fluorescente en imagerie médicale ou en biologie. 30