Brevet FR2926090A1 — publié le 20090710

La présente invention concerne un procédé et un dispositif pour isoler et cultiver des cellules vivantes sur un filtre. Elle s'applique, en particulier à isoler et cultiver des cellules particulières présentes dans un liquide, notamment le sang. Certaines cellules particulières du sang, par exemple les cellules 15 tumorale ou foetale, sont en très faible proportion et doivent être décomptées pour une analyse cytologique. Cependant, par rapport au principal des autres cellules présentes dans le sang, elles présentent une plus grande dimension. Il est connu d'appliquer un tampon de fixation à base de formaldéhyde à un échantillon sanguin pour fixer les cellules recherchées, puis 20 de faire passer le liquide résultant dans un filtre poreux. Ce filtre est ensuite utilisé pour y examiner les cellules recherchées sous microscope, en laboratoire. Cependant, cette procédure ne permet pas l'obtention de cellules vivantes. Or, l'inventeur a déterminé que l'obtention de cellules vivantes 25 permettrait d'envisager l'identification de marqueurs spécifiques et d'appliquer dans de bonnes conditions des techniques de biologie moléculaire, de cytogénétique et de FISH (acronyme de � Fluorescence ln Situ Hybridization �, pour hybridation fluorescente in situ) pour le diagnostic d'anomalies génétiques dans des cellules tumorales ou trophoblastiques. 30 La présente invention vise à remédier à ces inconvénients et à répondre à ce besoin en permettant de recueillir dans des conditions compatibles avec des examens de laboratoire de routine, des cellules vivantes 1 pouvant être subséquemment cultivées dans des milieux adaptés en présence de facteurs de croissance adéquates. A cet effet, selon un premier aspect, la présente invention vise un procédé pour isoler des cellules vivantes sur un filtre, caractérisé en ce qu'il 5 comporte : - une étape d'insertion d'un liquide comportant lesdites cellules et d'un tampon de filtration sans fixateur dans un compartiment, par l'intermédiaire d'une ouverture supérieure du compartiment, ledit compartiment présentant une ouverture inférieure, entre les deux ouvertures étant positionné un filtre dont les 10 micropores ont un diamètre intermédiaire entre celui des dites cellules particulières et celui d'autres cellules, - une étape de filtration au cours de laquelle le principal du liquide et lesdites autres cellules passent à travers le filtre et - une étape de récupération du filtre et des cellules restées sur le 15 filtre. Ce procédé permet la récupération des cellules vivantes d'intérêt dans des conditions parfaitement compatibles avec leur mise en culture pour poursuivre des examens de génétiques. Cette récupération est effectuée directement sur filtre et pratiquement sans perte de cellules recherchées. On 20 recueille ainsi une grande proportion des cellules considérées, en bon état, dans des conditions compatibles avec une culture de routine en laboratoire. Selon des caractéristiques particulières, le procédé tel que succinctement exposé ci-dessus comporte, préliminairement à l'étape de filtration, une étape d'application d'un tampon de filtration sans fixateur 25 constitué d'un milieu de culture et d'un agent lytique au liquide contenant les cellules particulières. Selon des caractéristiques particulières, au cours de l'étape de filtration, on applique une aspiration par une dépression inférieure ou égale à 25 mBar en dessous du filtre. 30 Grâce à ces dispositions, la filtration est efficace et rapide et n'endommage pas les cellules vivantes à récupérer sur le filtre. Selon des caractéristiques particulières, au cours de l'étape de filtration, un embout du compartiment retient le filtre dans le compartiment et, au cours de l'étape de récupération du filtre, on retire ledit embout du compartiment, on introduit dans le compartiment un piston et on applique avec ledit piston une force sur un support dudit filtre. Cette force permet de faire sortir le support portant le filtre à l'extrémité inférieure du compartiment, et donc le filtre, du compartiment. De plus, la force ne s'exerçant pas directement sur le filtre et ne provoquant pas de surpression, les cellules portées par ce filtre ne sont pas endommagées lors de la récupération du filtre. Selon des caractéristiques particulières, au cours de l'étape de récupération, on fait passer directement le filtre depuis le compartiment à un puits de plaque et/ou un flacon de culture. On évite ainsi toute contamination ou détérioration des cellules vivantes sur le filtre. Grâce à chacune de ces dispositions, le contenu du compartiment est maintenu à l'état stérile lors des manipulations sous une hotte à flux laminaire tel que permettant la manipulation dans des conditions stériles des cellules. Ainsi, toutes les étapes sont effectuées dans des conditions stériles adaptées à la culture cellulaire. Selon un deuxième aspect, la présente invention vise un dispositif pour recueillir des cellules présentes dans un liquide, caractérisé en ce qu'il comporte : - un moyen d'insertion du liquide et d'un tampon de filtration sans fixateur dans un compartiment, par l'intermédiaire d'une ouverture supérieure du compartiment, ledit compartiment présentant une ouverture inférieure, - un filtre positionné entre les deux ouvertures du compartiment, ledit filtre ayant des micropores d'un diamètre intermédiaire entre celui des dites cellules particulières et celui d'autres cellules, - un moyen de filtration pour faire passer, à travers un filtre, le principal du liquide et lesdites autres cellules et - un moyen de récupération du filtre et des cellules restées sur le filtre. Les avantages, buts et caractéristiques de ce dispositif étant similaires à ceux du procédé objet de la présente invention, tel que succinctement exposé ci-dessus, ils ne sont pas rappelés ici. D'autres avantages, buts et caractéristiques de la présente invention ressortiront de la description qui va suivre, faite, dans un but explicatif et nullement limitatif en regard des dessins annexés, dans lesquels : - les figures 1A à 1 F représentent, schématiquement, en coupe, des pièces d'un mode de réalisation particulier du dispositif objet de la présente invention, mises en oeuvre dans une première phase d'un mode de réalisation particulier du procédé objet de la présente invention, - les figures 2A à 2H représentent, schématiquement, en coupe, des pièces d'un mode de réalisation particulier du dispositif objet de la présente invention, mises en oeuvre dans une deuxième phase d'un mode de réalisation particulier du procédé objet de la présente invention, - les figures 3A à 3C représentent, schématiquement, en coupe, des pièces d'un mode de réalisation particulier du dispositif objet de la présente invention, mises en oeuvre dans une troisième phase d'un mode de réalisation particulier du procédé objet de la présente invention et - les figures 4A et 4B représentent, sous forme d'un logigramme, des étapes mises en oeuvre dans un mode de réalisation particulier du procédé objet de la présente invention. Comme on l'observe en regard des figures 1A à 1 F, dans le mode de réalisation illustrés dans les figures, le dispositif pour recueillir des cellules sur un filtre comporte un compartiment en forme de seringue 105 présentant une ouverture supérieure 106 et une ouverture inférieure 107. Une bague 104 est insérée dans l'ouverture inférieure 107 du compartiment 105 et serrée ou collée dans ce compartiment 105. Un support de filtre, ou cupule 108, en forme de rondelle ou bague est placée dans la bague 104 et retient le filtre 115. Le filtre 115 est micro perforé et soudé sous la cupule 108 puis inséré avec elle dans l'extrémité inférieure 107 du compartiment en forme de seringue 105. Préférentiellement, le filtre 115 est réalisé en polycarbonate avec un traitement de surface hydrophile. L'utilisation d'un tel filtre améliore le taux de retenu des cellules particulières et réduit l'adhérence des autres cellules ou de leur contenu, lorsqu'elles ont été spécifiquement lysées. Le filtre 115 présente, préférentiellement, un diamètre de pores centré sur une valeur inférieure, par exemple de 1 pm, à la valeur correspondante mise en oeuvre pour les mêmes cellules fixées, c'est-à-dire rendues rigides. Par exemple, si, pour les cellules fixées, le diamètre des pores aurait été centré sur 7,5 pm, il est ici centré sur une valeur inférieure, par exemple de 6,5 pm. Du fait de la dispersion des diamètres, pratiquement aucun pore ne possède alors un diamètre supérieur à 7 pm. Pour une application de l'invention à des cellules sanguines, le filtre présente des pores dont la densité est 50.000 et 200.000 pores/cm- 2 et, préférentiellement d'environ 105 pores/cm-2. A l'intérieur de la partie inférieure du compartiment 105 est positionnée une pièce 118 de forme intérieure conique orientée vers le bas. La pièce 118 est : - sur sa moitié supérieure, d'une forme cylindrique présentant un diamètre sensiblement égal au diamètre intérieur du compartiment 105 et - sur sa moitié inférieure, d'une forme cylindrique présentant un diamètre sensiblement égal à celui du support 108 du filtre 115. Cette pièce 118 est en appui sur la surface supérieure du support 108 du filtre 115. La moitié inférieure de la pièce 118 possède une longueur supérieure ou égale à celle de la bague 104. La liaison entre le compartiment 105 et la pièce 118 présente ainsi un jeu 109 le long de l'axe du compartiment 105 au moins égal à la distance séparant le haut du support 108 de l'ouverture inférieure de la bague 104. De cette manière, comme exposé plus bas, lorsque la pièce 118 est mise en mouvement axial par un piston inséré dans le compartiment 105, elle pousse le support 108 jusqu'à ce qu'il soit libéré de la bague 104 et, par conséquent, du compartiment 105. A l'ouverture inférieure 107 du compartiment 105 est placé, de façon étanche, stérile et amovible, un embout, ou adaptateur, 119 qui enserre la paroi extérieure du compartiment 105 et présente une ouverture inférieure effilée de plus petit diamètre que celui du compartiment 105. Comme illustré en figure 1 D, cette ouverture inférieure effilée de l'adaptateur 119 présente une longueur suffisante pour éviter de potentielles contaminations de l'extrémité du compartiment 105 par des éclaboussures provenant d'un réservoir 112 dans lequel est réalisée la dépression. Grâce à l'usage d'un filtre 115 en polycarbonate, la dépression en question est beaucoup plus limitée que dans les systèmes de l'art antérieur, jusqu'à être quatre fois moindre, ce qui évite de détériorer les cellules que l'on vise à recueillir sur le filtre 115. Préférentiellement, une aspiration par dépression inférieure ou égale à 25 mBar est réalisée en dessous du filtre. Dans la première phase du procédé pour recueillir du matériel cellulaire, le compartiment 105, muni de l'adaptateur 119, est supporté par une platine 110 insérée dans un porte-tiroir (non représenté) comportant un compartiment relié à un réservoir 112 sous la surface inférieure de la platine 110 par laquelle une aspiration peut être effectuée. Un joint torique (non représenté) assure l'étanchéité de la liaison entre l'adaptateur ou embout 119 et la platine 110. Un joint torique (non représenté) assure l'étanchéité de la liaison entre la platine 110 et le porte tiroir. L'étanchéité offerte par ces joints toriques permet l'aspiration, dans le réservoir 112, d'une partie du contenu des compartiments 105. Lors de l'aspiration par le réservoir 112, certaines cellules particulières du liquide présent dans le compartiment 105, de plus fort diamètre, sont retenues par le filtre 115 alors que le principal du liquide, du contenu et de la paroi des cellules lysées et les cellules de plus petites dimensions que les cellules à recueillir sont aspirés en dehors du compartiment 105, à travers le filtre 115. A la fin de la première phase du procédé pour recueillir des cellules, on retire l'embout 119 de l'ouverture inférieure du compartiment 105, comme illustré en figure 1 F. On observe que ce qui a été exposé ci-dessus pour un seul compartiment 105 est, préférentiellement, effectuée simultanément pour un grand nombre de compartiments retenus ensemble par un support commun (non représenté). Lors de la deuxième phase du procédé, on insère la partie inférieure du compartiment 105 dans un adaptateur mécanique 130, puis la partie inférieure de l'adaptateur 130 dans un puits de plaque et/ou un flacon de culture 131 standard. La seule fonction de l'adaptateur 130 est d'adapter les diamètres différents de la partie inférieure du compartiment 105 et du puits de plaque et/ou du flacon de culture 131. En variante, on met en oeuvre un puits de plaque et/ou un flacon de culture dont le diamètre intérieur est supérieur ou égal au diamètre extérieur de la partie inférieure du compartiment 105 et on ne met pas en oeuvre d'adaptateur 130. Puis, comme illustré en figures 2C à 2E, on insère un piston 132 dans l'ouverture supérieure 106 du compartiment 105 et on appuie sur la partie haute du piston 132 jusqu'à ce qu'il vienne en appui sur la pièce conique 118. Le piston 132 laisse passer l'air entre sa paroi externe et la paroi interne du compartiment 105. Son déplacement n'augmente donc pas la pression à l'intérieur du compartiment 105. On évite ainsi le risque d'endommager les cellules vivantes portées par le filtre 115. On observe que, grâce à la forme conique de la pièce 118, le piston 132 n'appui pas sur le filtre 115 et ne risque donc pas d'endommager les cellules retenues sur ce filtre 115. De même, la pièce 118 n'appuie que sur le support 108 du filtre 115 et ne risque pas, non plus, d'endommager ces cellules. Ensuite, comme illustré en figures 2F et 2G, on poursuit l'appui sur la partie haute du piston 132 afin qu'il déplace la pièce 108 vers le bas, en mettant en oeuvre le jeu 109, et que la pièce 118 fasse sortir le support 108 de la bague 104 et du compartiment 105. Ce support 108 et le filtre 115 tombent alors dans le puits de plaque et/ou le flacon de culture 131. Préférentiellement la course du piston 132 dans le compartiment 105, qui est limitée par un épaulement supérieur du piston 132, est telle qu'en fin de course, lorsque cet épaulement est en appui sur l'ouverture supérieure 106 du compartiment 105, le jeu 109 a entièrement été utilisé par le déplacement de la pièce 118. On évite ainsi un risque d'arrachement de la bague 104 qui risquerait de tomber sur le filtre 115, dans le puits de plaque et/ou le flacon de culture 131. Enfin, on retire le compartiment 105 et l'adaptateur 130 du puits de plaque et/ou du flacon de culture 131, comme illustré en figure 2H. La culture est réalisée, de manière connue, dans le puits de plaque et/ou le flacon de culture 131. On observe que la présence du support 108 autour de la face supérieure du filtre 115, face qui porte les cellules en culture, permet d'éviter que ces cellules ne quittent le filtre 115. Lors de l'étape de mise en culture des cellules vivantes d'intérêt sur le filtre, le filtre est, par exemple, recouvert d'une mince couche de Matrigel (ou mis en contact avec une couche de Matrigel, marque déposée, préalablement mis au fond du puits de plaque et/ou du flacon de culture et sur laquelle il repose) contenant des facteurs adaptés à la croissance des cellules d'intérêt. Comme illustré en figures 3A à 3C, lorsque l'on souhaite observer les cellules, ou leur matériel génétique, on attrape le support 108, dont la saisie avec une brucelle est facilitée par la présence de trous cylindriques latéraux, ou encoches, 133 dans la face supérieure du support 108. Puis, on peut poser le support 108 et le filtre 115 sur une lame de verre 134 et on applique, sur le filtre 115, une lame de verre 135, en forme de disque de diamètre adapté à la surface supérieure libre du filtre 115. L'analyse des cellules ou de leur matériel génétique est, ensuite, effectuée de manière connue en soi. On observe que, dans une variante, l'ouverture inférieure effilée de l'adaptateur 119 reçoit, pendant une phase de mise en dépression de cette ouverture, un embout (en anglais � tip �) afin d'éviter de potentielles contaminations de l'extrémité du compartiment 105 par des éclaboussures provenant d'un réservoir 112 dans lequel est réalisée la dépression. Dans une autre variante, la pièce 118 et le support 108 ne forment qu'une seule pièce qui est destinée à être déposée dans le puits de plaque et/ou le flacon de culture. Dans ce cas, la course du piston est allongée de manière à pousser cette pièce unique jusqu'à ce qu'elle soit entièrement en dehors de l'ouverture inférieure 107 du compartiment 105. Dans des modes de réalisation, la présentation du dispositif objet de la présente invention prend la forme d'un kit comportant, dans un sachet externe, deux sachets internes : - le premier comporte le compartiment 105 dans lequel se trouvent déjà montés, la bague 104, la pièce 118, le support 108, le filtre 115 et l'embout 119 et - le second comporte le piston 132 et, éventuellement, le puits de plaque et/ou le flacon de culture 131, l'adaptateur 130 et une lame circulaire. Comme on l'observe en regard des figures 4A et 4B, dans un mode de réalisation particulier, le procédé pour recueillir des cellules sur un filtre comporte, d'abord, une étape 405 d'insertion, dans un compartiment en forme de seringue, d'une bague inférieure 104, d'une pièce 118 de forme intérieure conique orientée vers le bas et, dans la bague inférieure 104, d'un support de filtre 108 portant un filtre 115. Préférentiellement, on prévoit, en bas du compartiment 105, une butée latérale qui retient la bague 104 et on introduit, par le haut du compartiment 105, la bague 104 dans laquelle est déjà insérée le support 108, puis la pièce mobile 108. Cette pièce 118 est : - sur sa moitié supérieure, d'une forme cylindrique présentant un diamètre sensiblement égal au diamètre intérieur du compartiment 105 et -sur sa moitié inférieure, d'une forme cylindrique présentant un diamètre sensiblement égal à celui du support 108 du filtre 115. Cette pièce 118 est en appui sur la surface supérieure du support 108 du filtre 115. La moitié inférieure de la pièce 118 possède une longueur supérieure ou égale à celle de la bague 104. La liaison entre le compartiment 105 et la pièce 118 présente ainsi un jeu 109 le long de l'axe du compartiment 105 au moins égal à la distance séparant le haut du support 108 de l'ouverture inférieure de la bague 104. De cette manière, comme exposé plus bas, lorsque la pièce 118 est mise en mouvement axial par un piston inséré dans le compartiment 105, elle pousse le support 108 jusqu'à ce qu'il soit libéré de la bague 104 et, par conséquent, du compartiment 105. Puis, au cours d'une étape 410, on solidarise un embout amovible 119, ou adaptateur, à l'extrémité distale du compartiment 105. L'embout 119, placé de façon étanche, stérile et amovible, enserre la paroi extérieure du compartiment 105 et présente une ouverture inférieure effilée de plus petit diamètre que celui du compartiment 105. Cette ouverture inférieure effilée de l'adaptateur 119 présente une longueur suffisante pour éviter de potentielles contaminations de l'extrémité du compartiment 105 par des éclaboussures provenant d'un réservoir 112 dans lequel est réalisée la dépression. Au cours d'une étape 415, on positionne l'extrémité inférieure de l'embout 119 dans une chambre de dépression. Puis, au cours d'une étape 420, on insère, dans le compartiment en forme de seringue, du liquide comportant les cellules recherchées. Ce liquide est, par exemple, du sang. Les cellules recherchées sont, par exemple, des cellules foetales ou tumorales. Au cours d'une étape 425, on insère un liquide tampon de filtration sans fixateur et un agent lytique dans le compartiment 105. Ce liquide tampon est, par exemple, un milieu de culture des cellules recherchées. Par exemple, ce tampon comporte, pour 200 ml de RPMI 1640 (marque déposée), 220 mg de saponine et 100 mg de BSA (acronyme de � Bovine Sang Albumine �). Au cours d'une étape 430, on effectue une lyse de cellules non recherchées, par exemple des globules rouges, dans le cas du sang. Au cours d'une étape 435, on met en dépression la chambre de dépression. Grâce à l'usage d'un filtre 115 en polycarbonate, la dépression en question est beaucoup plus limitée que dans les systèmes de l'art antérieur, jusqu'à être quatre fois moindre, ce qui évite de détériorer les cellules que l'on vise à recueillir sur le filtre 115. Préférentiellement, une aspiration par dépression inférieure ou égale à 25 mBar est réalisée en dessous du filtre, pour une application au sang avec des pores de filtre ayant un diamètre centré sur 6,5 pm et une densité de pores de l'ordre de 105 pores/cm2. Lors de l'aspiration par le réservoir 112, certaines cellules particulières du liquide présent dans le compartiment 105, de plus fort diamètre, sont retenues par le filtre 115 alors que le principal du liquide, du contenu et de la paroi des cellules lysées et les cellules de plus petites dimensions que les cellules à recueillir sont aspirés en dehors du compartiment 105, à travers le filtre 115. Au cours d'une étape 440, on retire l'embout 119 de l'ouverture inférieure du compartiment 105. Puis, au cours d'une étape 445, on insère la partie inférieure du compartiment 105 dans un adaptateur mécanique 130, puis la partie inférieure de l'adaptateur 130 dans un puits de plaque et/ou un flacon de culture cellulaire 131 standard. Au cours d'une étape 450, on insère un piston 132 dans l'ouverture supérieure 106 du compartiment 105 et on appuie sur la partie haute du piston 132 jusqu'à ce qu'il vienne en appui sur la pièce conique 118. On observe que ni le piston 132 ni la pièce 108 n'appuient sur le filtre 115 et ne risquent donc pas d'endommager les cellules retenues sur ce filtre 115. On poursuit l'appui sur la partie haute du piston 132 afin qu'il déplace la pièce 108 vers le bas, en mettant en oeuvre le jeu 109, et la pièce 118 fait sortir le support 108 de la bague 104 et du compartiment 105. Ce support 108 et le filtre 115 tombent alors dans le puits de plaque et/ou le flacon de culture 131 au cours d'une étape 455. Préférentiellement la course du piston 132 dans le compartiment 105, qui est limitée par un épaulement supérieur du piston 132, est telle qu'en fin de course, lorsque cet épaulement est en appui sur l'ouverture supérieure 106 du compartiment 105, le jeu 109 a entièrement été utilisé par le déplacement de la pièce 118. On évite ainsi un risque d'arrachement de la bague 104 qui risquerait de tomber sur le filtre 115, dans le puits de plaque et/ou le flacon de culture 131. Au cours d'une étape 460, on retire le compartiment 105 et l'adaptateur 130 du puits de plaque et/ou du flacon de culture 131. Au cours d'une étape 465, la culture est réalisée, de manière connue, dans le puits de plaque et/ou le flacon de culture 131. On observe que la présence du support 108 autour de la face supérieure du filtre 115, face qui porte les cellules en culture, permet d'éviter que ces cellules ne quittent le filtre 115. Lors de l'étape de mise en culture des cellules vivantes d'intérêt sur le filtre, le filtre est, par exemple, recouvert d'une mince couche de Matrigel (ou mis en contact avec une couche de Matrigel préalablement mis au fond du puits de plaque et/ou du flacon de culture et sur laquelle il repose) contenant des facteurs adaptés à la croissance des cellules d'intérêt. Au cours d'une étape 470, on attrape le support 108, avec une brucelle, par le biais des encoches 133. Au cours d'une étape 475, on poser le support 108 et le filtre 115 sur une lame de verre 134. Au cours d'une étape 480, on applique, sur le filtre 115, une lame de verre 135 (ou un gel de protection) /un milieu de montage aqueux de protection en forme de disque de diamètre adapté à la surface supérieure libre du filtre 115. L'analyse des cellules ou de leur matériel génétique est, ensuite, effectuée de manière connue en soi, au cours d'une étape 485. La mise en oeuvre de la présente invention permet d'éviter des prélèvements risqués de cellules, par exemple de cellules du liquide amniotiques tout en permettant des cultures, par exemple pour une amniocentèse. De plus, du fait de la forme en réservoir du support 108 du filtre 115, on peut réaliser directement dans ce support des réactions d'immunocytochimie ou d'hybridation fluorescente in situ (� FISH �).20 REVENDICATIONS 1 - Procédé pour isoler des cellules vivantes sur un filtre, caractérisé en ce qu'il comporte : - une étape d'insertion d'un liquide comportant lesdites cellules et d'un tampon de filtration sans fixateur dans un compartiment, par l'intermédiaire d'une ouverture supérieure du compartiment, ledit compartiment présentant une ouverture inférieure, entre les deux ouvertures étant positionné un filtre dont les micropores ont un diamètre intermédiaire entre celui des dites cellules particulières et celui d'autres cellules, - une étape de filtration au cours de laquelle le principal du liquide et lesdites autres cellules passent à travers le filtre, - une étape de récupération du filtre et des cellules restées sur le filtre. 2 û Procédé selon la revendication1, caractérisé en ce qu'il comporte, préliminairement à l'étape de filtration, une étape d'application d'un tampon de filtration et d'un agent lytique et sans fixateur constitué d'un milieu de culture au liquide contenant les cellules particulières. 3 û Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que, au cours de l'étape de filtration, on applique une aspiration par dépression inférieure ou égale à 25 mBar en dessous du filtre. 4 û Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que, au cours de l'étape de filtration, un embout du compartiment retient le filtre dans le compartiment et, au cours de l'étape de récupération du filtre, on retire ledit embout du compartiment, on introduit dans le compartiment un piston et on applique avec ledit piston une force sur un support dudit filtre. 5 û Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que, au cours de l'étape de récupération, on fait passer directement le filtre depuis le compartiment à un puits de plaque et/ou un flacon de culture. 6 - Dispositif pour recueillir des cellules présentes dans un liquide, caractérisé en ce qu'il comporte :- un moyen d'insertion du liquide et d'un tampon de filtration avec un agent lytique et sans fixateur dans un compartiment, par l'intermédiaire d'une ouverture supérieure du compartiment, ledit compartiment présentant une ouverture inférieure, - un filtre positionné entre les deux ouvertures du compartiment, ledit filtre ayant des micropores d'un diamètre intermédiaire entre celui des dites cellules particulières et celui d'autres cellules, - un moyen de filtration pour faire passer, à travers un filtre, le principal du liquide et lesdites autres cellules et - un moyen de récupération du filtre et des cellules restées sur le filtre.