Brevet FR2924615A1 — publié le 20090612

Hydrogel cohésif biodégradable L'invention concerne le domaine des hydrogels biodégradables réticulés ayant des applications en esthétique, par exemple ou en médecine. Parmi les applications esthétiques on citera par exemple le comblement des ridules, rides et défauts cutanés et l'augmentation des volumes. Parmi les applications médicales on citera par exemple l'injection périurétrale pour le traitement de l'incontinence urinaire par insuffisance sphinctérienne, l'injection post chirurgicale pour éviter les adhésions péritonéales notamment ; l'injection pour remplacement de liquides biologiques déficients (dans les articulations notamment pour remplacer le liquide synovial déficient), et l'injection suite à une chirurgie de la presbytie par incisions sclérales au laser. Dans toutes ces applications les hydrogels utilisés doivent présenter des propriétés optimisées en terme de rémanence in vivo, de rhéologie et en terme de viscosité pour garantir une bonne � injectabilité, � ces hydrogels étant appliqués par injection à l'aide d'aiguilles de tailles variables selon les applications, mais qui doivent rester les plus fines possibles afin de minimiser les réactions post-injection. L'optimisation de ces différentes propriétés conduit à des compromis souvent peu satisfaisants car elles sont parfois incompatibles. En effet pour augmenter la rémanence in-vivo il convient d'augmenter le taux de réticulation, mais en augmentant le taux de réticulation on diminue nécessairement l' � injectabilité �. De nombreuses solutions ont été proposées et parmi celles-ci on citera les compositions à base de particules permanentes ou très lentement biodégradables dispersées dans un vecteur d'injection, par exemple les particules de PMMA (polyméthacrylate de méthyle) dans un gel de collagène (Artecoll), les particules d'hydrogel acrylique dans un gel de hyaluronate de sodium réticulé (Dermalive, Dermadeep), les particules d'acide polylactique ou polylactide (PLA) dans un vecteur aqueux (New Fill, Sculptra, le PLA étant résorbé en 1 à 4 ans en fonction de la taille des particules). Ces implants sont sujets à controverse du fait des effets secondaires potentiels dus aux particules solides surtout si elles ne sont pas rondes et si elles ont un caractère permanent. Parmi les complications répertoriées on peut citer les inflammations, les oedèmes et les granulômes. On peut également citer les implants biodégradables à base de polysaccharides réticulés ou non, essentiellement à base de hyaluronate de sodium. Pour contourner ces inconvénients, dans la plupart des documents de l'art antérieur par exemple dans la demande FR2865737 déposée par ANTEIS SA ou dans FR2861734 déposée par CORNEAL Industrie SA les produits décrits sont obtenus par une réticulation mise en oeuvre sur un mélange de polymères, pour obtenir des mélanges présentant les propriétés de rémanence in vivo, de rhéologie et de viscosité souhaitées. Une autre solution est le recours aux réseaux polymères interpénétrés IPN (Interpenetrating Polymer Network) ou réseaux polymères semiinterpénétrés (semi IPN) qui permettent d'optimiser les propriétés et d'obtenir des compositions présentant les propriétés visées comme par exemple dans la demande WO 2005/061611 déposée par INNOMED qui décrit des compositions de réseaux semiinterpénétrés de polysaccharides obtenus par réticulation d'au moins un polysaccharide en présence d'au moins un autre polysaccharide qui n'est pas soumis à une réticulation, ou dans le brevet US 6 224 893 déposé par le MIT (Massachusetts Institute of Technology) qui décrit des compositions formées d'au moins deux polysaccharides qui sont réticulés ensuite par exemple par irradiation, les polymères étant réticulés indépendamment les uns des autres mais en étant interpénétrés pour former des IPN. Cependant ces différentes solutions ne sont pas complètement satisfaisantes. S'agissant des gels biphasiques les inconvénients en terme de réactions secondaires ont été décrits dans la littérature, et leur niveau d'injectabilité est irrégulier du fait de la taille des particules qui peut être difficile à maîtriser. De plus, les mécanismes principaux impliqués dans la dégradation de gels de polysaccharides réticulés sont essentiellement surfaciques et aléatoires, ceci d'autant plus sur les produits biphasiques présentant une surface de dégradation plus importante. Mais ils présentent l'avantage de permettre une reproductibilité de la rhéologie par ajustement des proportions des différentes phases en fonction des propriétés des produits mis en oeuvre. S'agissant des produits obtenus par mise en oeuvre d'une réticulation sur un mélange comme ceux décrits dans la demande FR 2 865 737 ou FR 2 861 734 ou des IPN ou semi IPN, bien que leur parfaite monophase ou l'interpénétration des réseaux garantissent une bonne rémanence in vivo et peu ou pas de réaction secondaire, ils ne permettent pas d'apporter une solution satisfaisante car la mise en oeuvre des réactions de réticulation parfois sélectives sur des mélanges notamment de polymères naturels présente des difficultés techniques en raison par exemple des variations de masse moléculaire. Ces produits ne permettent pas de garantir une reproductibilité parfaite des propriétés physiques d'un lot à l'autre d'où une industrialisation difficile. La présente invention permet de résoudre ces différents inconvénients. La présente invention consiste en un hydrogel cohésif biodégradable caractérisé en ce qu'il est constitué d'un mélange homogène de x polymères, identiques ou différents, réticulés préalablement à leur mélange, insolubles dans l'eau et miscibles entre eux, x étant compris entre 2 et 5. La cohésivité d'un gel selon l'invention s'entend de la propriété dudit gel de conserver sa stabilité et son unité sans possibilité des séparer les gels constitutifs. On entend par mélange une juxtaposition de x polymères sans création de liaison covalente entre ceux-ci. Du fait de la présence de groupements polaires et du milieu aqueux, des interactions se créent entre les différents polymères, ces interactions sont du type liaisons faibles de basse énergie faisant intervenir des forces comme par exemple des ponts hydrogène intermoléculaires voire des liaisons ioniques. Le mélange ainsi obtenu présente des propriétés comparables à celles des IPN sans être un IPN au sens de la définition de l'IUPAC en effet cette définition exclut les mélanges de réseaux préalablement réticulés. Ici, cependant les gels préalablement réticulés et cohésifs se mêlent intimement, en générant des liaisons inter-chaînes faibles entre eux. Ils deviennent indissociables l'un de l'autre, générant ainsi un réseau de gels réticulés entrelacés dont la cohésivité est voisine de celle des IPN. Un tel produit présente les avantages des réseaux IPN sans les inconvénients de mise en oeuvre de ceux-ci et permet grâce à l'utilisation d'un taux de réticulation différent pour chaque gel constitutif (ou identique si les gels ont des masses moléculaires très différentes( de créer des réseaux plus ou moins denses avant leur hydratation finale et après mélange d'obtenir un produit dont les propriétés rhéologiques pourront être � réglées � par mesure des propriétés des différents gels constitutifs avant le mélange. Les réactions de réticulation peuvent ainsi être mises en oeuvre sur des polymères isolés donc en évitant les problèmes de sélectivité. La mise en oeuvre est ainsi aisée et permet de répondre aux exigences finales tout en utilisant des produits naturels dont les propriétés, notamment la masse moléculaire, peuvent varier d'un lot à l'autre. De plus la mise en oeuvre des conditions de réticulation est simple, chaque gel étant réticulé indépendamment l'un de l'autre. Rhéologiquement parlant, le gel le plus réticulé prendra le pas sur le gel plus faiblement réticulé, et conférera donc au produit fini des caractéristiques supérieures en terme de rémanence. En revanche, le polymère plus faiblement réticulé imposera une force d'injection plus faible, garantissant une utilisation plus facile. Le mélange ainsi obtenu alliera les avantages de chacun des différents gels constitutifs en minimisant leurs inconvénients sans provoquer les effets secondaires observés avec l'utilisation des compositions à base de particules. On observera une optimisation et une synergie dans les propriétés résultantes tant en terme d'injectibilité qu'en terme de rémanence. La synergie est obtenue du fait de l'optimisation des deux paramètres qui agissent réciproquement l'un sur l'autre, la faible réticulation favorisant l'injectabilité et défavorisant la rémanence et la forte réticulation favorisant la rémanence et a contrario défavorisant l'injectabilité. Les propriétés respectives des réseaux s'ajoutent, ainsi le gel de paramètre élastique le plus élevé va induire une augmentation du paramètre élastique de l'ensemble en comparaison au gel le moins réticulé. En revanche, pour l'injectabilité, (reliée à la viscosité du produit), le gel de niveau d'injectabilité le plus faible va permettre de diminuer le niveau d'injectabilité de l'ensemble. On optimise ainsi les caractéristiques du mélange final, avec une synergie des paramètres élastique et visqueux des mélanges obtenus, adaptables en fonction des proportions respectives de chacun des gels constitutifs, et de la pathologie visée Ainsi, quelle que soit l'application visée, l'utilisation d'aiguilles plus fines que celles généralement utilisées permettra de diminuer les réactions inflammatoires et les traumatismes post-injection. Les caractéristiques étant reproductibles, la rémanence du gel sera connue et prédictible aux facteurs de variation inter-individu près et la reproductibilité des propriétés d'injectabilité permettra une grande maîtrise du geste et l'élimination d'un certain nombre d'effets secondaires. Un hydrogel, de par sa constitution, présentera une cinétique de dégradation fonction du nombre de gels mélangés et des taux de réticulation. En effet, la cinétique de dégradation est fonction de plusieurs paramètres : le taux de réticulation, la concentration en polymère ainsi que la taille des polymères utilisés au moment de la réticulation. La cinétique de dégradation sera ralentie : en effet mélanger de manière homogène des gels de degrés de rémanence variables permettra de renforcer la rémanence globale par un effet de � dilution � des coupures aléatoires du gel par l'intermédiaire soit des radicaux libres, soit des enzymes (hyaluronidases, etc...) présentes dans le derme ou le liquide biologique remplacé. Le produit fini ainsi fabriqué sera donc plus rémanent pour des niveaux d'injectabilité équivalents, ceci tout en restant parfaitement biodégradable. La rémanence sera également optimisée du fait de l'interpénétration des réseaux, augmentant la densité de noeuds ou liaisons chimiques tout en conservant l'indépendance mécanique et chimique des 2 à x gels réticulés. Ainsi l'attaque aléatoire des radicaux libres est statistiquement plus faible par rapport à un gel monophasique simple (1 seul réseau, fragilisation des liaisons plus rapides en surface, densité de liaisons chimiques plus faible). L'accessibilité au coeur du gel sera également rendue beaucoup plus difficile pour les dégradations enzymatiques ou via les CD44. Par ailleurs, l'utilisation de différentes masses moléculaires dans chaque gel monophasique préalablement réticulé permettra de constituer des réseaux de structure ou maillage plus ou moins dense et ainsi de renforcer encore la rémanence in vivo. Dans un mode de réalisation l'hydrogel selon l'invention est caractérisé en ce que les polymères sont choisis parmi les polysaccharides. Dans un mode de réalisation l'hydrogel selon l'invention est caractérisé en ce que les polymères sont choisis dans le groupe constitué par les acides polylactiques et leurs dérivés, la N-Vinyl pyrrolidone, les acides polyvinyliques, les polyacrylamides et les polymères acryliques et dérivés biologiquement acceptables. Les polysaccharides sont choisis dans le groupe constitué par l'acide hyaluronique, le kératane, l'héparine, la cellulose et les dérivés de cellulose, l'acide alginique, le xanthane, la carraghénane, le chitosane, la chondroitine et leurs sels biologiquement acceptables. Dans un mode de réalisation au moins un des x polysaccharides est choisi dans le groupe constitué par l'acide hyaluronique et ses sels biologiquement acceptables. Dans un autre mode de réalisation l'hydrogel selon l'invention est caractérisé en ce que au moins un des x polysaccharides est choisi dans le groupe constitué par les dérivés de cellulose et leurs sels biologiquement acceptables. Dans un autre mode de réalisation l'hydrogel selon l'invention est caractérisé en ce que au moins un des x polysaccharides est choisi dans le groupe constitué par la chondroitine et ses sels biologiquement acceptables. Dans un autre mode de réalisation l'hydrogel selon l'invention est caractérisé en ce que au moins un des x polysaccharides est choisi dans le groupe constitué par le chitosane et ses sels et dérivés biologiquement acceptables. Les polysaccharides qui peuvent être mis en oeuvre dans l'hydrogel selon la présente invention sont de tout type connu dans le domaine et sont de préférence choisis parmi ceux produits par fermentation bactérienne. Généralement les polysaccharides utilisables dans le cadre de la présente invention présentent une masse moléculaire MW comprise entre environ 0,03 et environ 6 MDa, de préférence comprise entre environ 0,04 et environ 4 MDa, de préférence encore comprise entre environ 0,05 et environ 3 MDa. On préfère particulièrement l'acide hyaluronique et ses sels, en particulier ses sels acceptables du point de vue physiologique, tels que les sels de sodium, potassium, calcium, avantageusement le sel de sodium. Sont également avantageusement utilisés la chondroïtine sulfate et ses sels et les dérivés cellulosiques tel que l'hydroxypropylméthylcellulose, et les mélanges de deux ou plusieurs d'entre eux. Le hyaluronate de sodium présentant des propriétés particulièrement avantageuses en raison de son recul important d'utilisation en injection intradermique, intra-articulaire, intrapéritonéale, et autres, ainsi que pour ses excellentes propriétés rhéologiques, les gels constitutifs de l'hydrogel selon l'invention .sont à base de hyaluronate de sodium. Dans un mode de réalisation les x polymères sont identiques. Dans un mode de réalisation les x polymères sont différents. Dans un mode de réalisation, l'hydrogel selon l'invention est caractérisé en ce que x est égal à 2. Selon un mode de réalisation particulier le premier des x polysaccharides est choisi dans le groupe constitué par l'acide hyaluronique et ses sels, les dérivés de cellulose et leurs sels et la xanthane et le deuxième est choisi dans le groupe constitué par la chondroïtine sulfate et ses sels, le chitosane et ses sels et dérivés, les dérivés de cellulose et leurs sels et les acides alginiques. Dans un autre mode de réalisation particulier, le premier des x polymères est choisi dans le groupe constitué par l'acide hyaluronique et ses sels, les dérivés de cellulose et leurs sels et la xanthane et le deuxième est choisi dans le groupe constitué par les acides polylactiques et leurs dérivés et les dérivés acryliques. Selon un mode de réalisation, le premier des x polymères est chosi dans le groupe du hyaluronate de sodium et le deuxième est choisi dans le groupe constitué par la chondroïtine sulfate et ses sels, le chitosane et ses sels et dérivés, les dérivés de cellulose et leurs sels et les acides alginiques. Dans l'hydrogel selon la présente invention, le rapport pondéral entre le polysaccharide fortement réticulé et le polysaccharide faiblement réticulé peut varier dans de très larges proportions, selon la nature des polysaccharides utilisés, leurs taux de réticulation respectifs, et également selon les propriétés finales visées. Généralement la proportion pondérale du gel de polysaccharide fortement réticulé dans le produit fini est comprise entre environ 0,1 et 99,9 %, préférentiellement de 5 à 50% de gel 1 présentant un taux de réticulation xl et de 50 à 95 % de gel 2 présentant un taux de réticulation x2 ou encore plus préférentiellement de 10 à 40% de gel 1 présentant un taux de réticulation xl et de 60 à 90 % de gel 2 présentant un taux de réticulation x2 . L'invention concerne également le procédé de préparation d'un hydrogel biodégradable selon l'invention ; ce procédé comprend une étape de mise au point d'un cahier des charges fixant les propriétés rhéologiques visées en fonction des applications. Pour la détermination du taux de rémanence une élasticité est visée celle-ci résultant du taux de réticulation et pour la détermination de l'injectabilité, la viscosité à taux de cisaillement élevé liée également au taux de réticulation est fixée, ces paramètres dépendant des produits de départ, notamment de leur masse moléculaire. Les taux de réticulation fixés ainsi que les proportions respectives des gels constitutifs, le procédé de préparation d'un hydrogel cohésif biodégradable selon l'invention est caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes de : - réticulation d'un premier polymère à un taux de réticulation xl - réticulation d'un deuxième polymère à un taux de réticulation x2 - mélange intime des deux polymères, - hydratation - mélange final après hydratation. L'hydratation est effectuée par exemple par immersion dans ou ajout d'une solution isotonique tamponnée. Selon un mode de réalisation le procédé comprend en outre xn étapes de réticulation d'un polymère n avant le mélange des n polymères. L'hydratation est généralement effectuée dans un milieu aqueux, par simple mélange du mélange de gels réticulés avec une solution aqueuse, avantageusement physiologique tamponnée, de manière à obtenir une concentration finale, variable dans de très larges proportions, selon la nature des polysaccharides utilisés, leurs taux de réticulation respectifs, et également selon l'utilisation envisagée. La solution tamponnée utilisable peut par exemple être une solution physiologique, osmolaire présentant un pH compris entre environ 6,8 et environ 7,5. Cette concentration finale en polysaccharides totaux est généralement comprise entre environ 5 et environ 100 mg/g, de préférence entre environ 5 et environ 50 mg/g par exemple environ 20 mg/g d'hydrogel. Le procédé de la présente invention permet ainsi d'obtenir un hydrogel cohésif biodégradable, injectable et de rémanence longue. Dans le procédé de préparation ci-dessus décrit, les deux étapes de réticulation sont réalisées dans un milieu dont la valeur de pH est identique ou différente. Chacune de ces étapes peut être effectuée en milieu acide ou basique, de préférence en milieu basique, par exemple à un pH compris entre 8 et14, de préférence entre 8 et 13. Les réactions de réticulation mises en oeuvre dans le précédé de l'invention sont des réactions bien connues de l'homme de l'art. Pour chaque polysaccharide et/ou agent réticulant, l'homme de l'art pourra mettre au point et optimiser les conditions de réticulations en fonction dudit polysaccharide et dudit agent réticulant : taux de réticulation, température, pH. Il est cependant précisé que les étapes de réticulation sont réalisées à pH constant, soit acide, soit basique, comme indiqué précédemment. Les agents réticulants qui interviennent dans les étapes de réticulation sont généralement des réticulants bi- ou poly-fonctionnels de différents types, et peuvent par exemple être choisis parmi la DVS (divinylsulfone) en milieu alcalin (voir US 4 582 865), les époxy bi- ou poly-fonctionnels (voir US 4 716 154), les carbodi-imides, le formaldéhyde (voir GB 2 151 244). On préfère en particulier les agents de type bi- ou poly-époxydes, les réactions se faisant en milieu basique pour générer des liaisons éther avec les fonctions ûOH du polysaccharide, ou en milieu acide ce qui donne lieu à des liaisons de type ester. La demande de brevet WO 2000/46253 utilise successivement ces deux conditions de pH afin d'optimiser la réticulation du polysaccharide. On préfère toutefois réaliser les réactions de réticulation en conditions de pH basique, puisque, en milieu aqueux, les liaisons ester, obtenues en milieu acide, sont généralement plus labiles que les liaisons éther, obtenues en milieu basique. À titre d'agent réticulant, on peut utiliser un époxyde ou ses dérivés, et notamment le 1,4-butanedioldiglycidyléther (BDDE), le diépoxy-octane ou le 1,2-bis-(2,3-époxypropyl)-2,3-éthylène. On préfère tout particulièrement utiliser le 1,4-butanedioldiglycidyléther (BDDE) pour chacune des étapes de réticulation. Il doit être compris que chacune des étapes de réticulation peut être effectuée avec un ou plusieurs agents réticulants, ceux-ci pouvant être identiques ou différents dans l'une ou l'autre des étapes, dans les conditions de pH indiquées plus haut. Après chacune des étapes de réticulation, les polysaccharides peuvent avantageusement être purifiés, selon des techniques classiques de purification (par exemple par lavage par flux d'eau continu, bains de dialyse, et autres), afin d'éliminer l'agent de réticulation résiduel n'ayant pas réagi. En outre, les étapes de réticulation peuvent avantageusement être suivies d'une étape de neutralisation (i.e. jusqu'à une valeur de pH d'environ 7), par exemple par ajout d'une quantité appropriée d'acide chlorhydrique 1 N. Dans l'hydrogel selon l'invention, les x polymères présentent des taux de réticulation différents, au moins l'un des x polymères présentant un taux de réticulation xl et au moins un des x polymères présentant un taux de réticulation x2 et xl étant supérieur à x2. Dans un mode de réalisation dans l'hydrogel selon l'invention, les x polymères présentent des taux de réticulation identiques. Etant entendu que les polymères peuvent avoir des masses moléculaires différentes. Dans un mode de réalisation xl et x2 sont compris entre 0,02 et 0,4 et de préférence entre 0,08 et 0,2. À l'issue de la réticulation, il peut être avantageux de neutraliser le gel obtenu, selon les procédés standards connus dans le domaine, et par exemple par ajout d'acide lorsque la réticulation est conduite en milieu acide, et par ajout d'une base, lorsque la réticulation est conduite en milieu acide. Le mélange obtenu à l'issue du procédé peut être éventuellement soumis à une étape d'hydratation complémentaire, afin d'obtenir un gel sous forme d'hydrogel injectable, adapté aux applications envisagées. Les applications visées sont plus particulièrement les applications communément observées dans le cadre des viscoélastiques injectables de polysaccharides utilisés ou potentiellement utilisables dans les pathologies ou traitements suivants : - injections esthétiques : de comblement des rides, défauts cutanés ou volumatrices (pommettes, mentons, lèvres) ; - traitement de l'arthrose, injection dans l'articulation en remplacement ou complément du liquide synovial déficient ; - injection péri-urétrale pour le traitement de l'incontinence urinaire par insuffisance sphinctérienne ; - injection post chirurgicale pour éviter les adhésions péritonéales 10 notamment ; -injection suite à une chirurgie de la presbytie par incisions sclérales au laser ; - injection dans la cavité vitréenne. Plus particulièrement, en chirurgie esthétique, en fonction de ses propriétés 15 viscoélastiques et de rémanence, l'hydrogel selon l'invention pourra être utilisé : - pour le comblement des rides fines, moyennes ou profondes, et être injecté avec des aiguilles de diamètre fin (27 Gauge par exemple) ; - comme volumateur avec une injection par des aiguilles de diamètre plus important, de 22 à 26 Gauge ; dans ce cas, son caractère cohésif permettra de 20 garantir son maintien à l'emplacement de l'injection. L'hydrogel selon l'invention trouve également une application importante en chirurgie articulaire et en chirurgie dentaire pour le comblement des poches parodontales par exemple. Ces exemples d'utilisation ne sont nullement limitants, l'hydrogel selon la 25 présente invention étant plus largement prévu pour : - combler des volumes ; - générer des espaces au sein de certains tissus, favorisant ainsi leur fonctionnement optimal ; - remplacer des liquides physiologiques déficients. 30 L'hydrogel selon l'invention peut également trouver une application tout à fait intéressante en tant que matrice de relargage d'un (ou plusieurs) principe(s) actif(s) au préalable dispersé(s) en son sein. Par principe actif on entend tout produit actif sur le plan pharmacologique : principe actif médicamenteux, antioxydant, antiseptique, etc... De manière pratique, l'hydrogel selon l'invention, de préférence après purification et hydratation en hydrogel, peut être conditionné, par exemple dans des seringues, et stérilisé selon tout moyen connu en soi (par exemple par autoclavage) pour commercialisation et/ou utilisation directe. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un kit comprenant un hydrogel selon l'invention, conditionné en seringue stérile. Les caractéristiques des gels selon l'invention sont mises en évidence dans les exemples ci-après. Exemples Taux de réticulation : Les taux de réticulation x dans les exemples qui suivent sont définis par : x = nombre de moles de réticulant introduites dans le milieu réactionnel / nombre total de motifs disaccharides introduits dans le milieu réactionnel. Exemple 1 : Réticulation Gel 1 Étape a) : Hydratation de fibres de hyaluronate de sodium sous forme de gel non réticulé Des fibres de hyaluronate de sodium de qualité injectable (1 g ; masse moléculaire : environ 2.7 MDa ; sont pesées dans un récipient. Une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium à 1% dans l'eau (7,4 g) est ajouté, le tout est homogénéisé pendant environ 1 heure à la spatule, à température ambiante et 900 mm Hg. Étape b) : Réticulation Du BDDE (65 mg) est ajouté au gel de hyaluronate de sodium (NaHA) non réticulé obtenu à l'étape précédente, le tout étant homogénéisé à la spatule pendant environ 30 minutes à température ambiante et 900 mm Hg. L'ensemble est ensuite placé au bain-marie à 50°C pendant 2h20 afin d'obtenir un taux de réticulation X1 d'environ 0,14. Etape c) : Neutralisation, purification Le gel final réticulé est ensuite neutralisé par ajout d'HCI 1 N, et placé dans un bain de tampon phosphate pour stabiliser le pH et permettre son hydratation, ou gonflement jusqu'à 30 mg/g de HA. On obtient ainsi un hydrogel de NaHa réticulé par la voie classiquement utilisée :G1 de concentration en HA environ 30 mg/g. Une partie du gel est conservée à cette concentration, l'autre est diluée par ajout de tampon phosphate pour obtenir 20mg/g de HA au final, ce gel est ensuite homogénéisé avant d'être rempli en seringues qui sont stérilisées par autoclavage : seringues de gel G1 à 20 mg/g stériles. Réticulation Gel 2 Étape a) : Hydratation de fibres de hyaluronate de sodium sous forme de gel non réticulé Des fibres de hyaluronate de sodium de qualité injectable (1 g ; masse moléculaire : environ 1.5 MDa ; sont pesées et préalablement séchées dans un récipient. Une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium à 10/0 dans l'eau (6,3 g) est ajouté, le tout est homogénéisé pendant environ 1 heure à la spatule, à température ambiante et 900 mm Hg. Étape b) : Réticulation Du BDDE (43 mg) est ajouté au gel de hyaluronate de sodium (NaHA) non réticulé obtenu à l'étape précédente, le tout étant homogénéisé à la spatule, à température ambiante et pression atmosphérique pendant environ 30 minutes. L'ensemble est ensuite placé au bain-marie à 50°C pendant 2h20, afin d'obtenir un taux de réticulation X2 d'environ 0.09. Etape c) : Neutralisation, purification Le gel final réticulé est ensuite neutralisé par ajout d'HCI 1 N, et placé dans un bain de tampon phosphate pour stabiliser le pH et permettre son hydratation, ou gonflement jusqu'à 30 mg/g de HA. On obtient ainsi un hydrogel de NaHa réticulé par la voie classiquement utilisée : G2 de concentration en HA environ 30 mg/g. Exemple 2 Mélange des Gel 1 et gel 2 en proportion 10% G1 ù 90% G2 Mélanges des gels G1 et G2 à 10% - 90% 18g de gel G2 à 30 mg/g sont pesés, et 2 g de gel G1 obtenu en fin d'étape c) précédente (G1 à 30 mg/g) y sont ajoutés. 10 g de tampon phosphate sont ajoutés et les 2 gels sont placés sous agitation mécanique lente pendant 1 h. Le mélange ainsi obtenu est un gel homogène à 20mg/g de HA, composé de 2 réseaux interpénétrés, ce gel est alors conditionné en seringues et autoclavé. Exemple 3 Mélange des Gels 1 et 2 en proportion 50% - 50% Les gels obtenus en fin d'étape c) de chaque exemple ci-dessus : gel 1 réticulé à xi environ 0.14 et G2 réticulé à X2 environ 0.09, tous deux de concentration environ 30 mg/g de HA sont pesés : 10 g de G1 + 10g de G2. 10g de tampon phosphate sont également ajoutés et les 2 gels sont placés sous agitation mécanique lente pendant 1h. Le mélange ainsi obtenu est un gel homogène à 20mg/g de HA, 20 composé de 2 réseaux interpénétrés, ce gel est alors conditionné en seringues et autoclavé. Exemple 4 : Caractérisation des gels des exemples let 2: • gel G1 réticulé à xi, 25 ^ mélange 10% G1 et 90% G2 réticulé à X2, • mélange 50% G1 et 50% G2, Ces 3 produits finaux étant tous les 3 à une concentration finale de 20mg/g en HA. 30 Caractérisation de la force d'extrusion ou � injectabilité � : Cet essai est réalisé sur les gels remplis en seringues (toutes identiques) et stérilisés, avec des aiguilles 27G1/2 (du même lot), sur un banc de traction Mecmesin avec une vitesse de compression de 13 mm/min. Les résultats des forces d'extrusion de chacun des exemples 1, 2 et 3 sont donnés dans le tableau ci-dessous : Gel testé Injectabilité (N) Gel 1 37 10% Gel 1 + 90% Gel 2 21 50% Gel 1 + 50% Gel 2 31 On observe bien une injectabilité plus faible des réseaux interpénétrés de gels réticulés par rapport au gel G1 seul. Test de dégradation Ces différents gels ont également été caractérisés par un test de dégradation in vitro à la température. Ce test permet de simuler la rémanence ultérieure in vivo des gels injectés en intra-dermique. Il a été mis au point sur la base du descriptif du test de rémanence décrit dans le brevet FR2861734. Les gels ont tous été placés en étuve à 93°C pendant un temps suffisamment long pour obtenir un aspect dégradé du gel, dont les caractéristiques rhéologiques sont suivies pour chaque temps de dégradation : caractérisation du G' et du tan delta à 25°C à une fréquence de 1 Hz (dans la zone viscoélastique linéaire) avec un rhéomètre à contrainte imposée (TA AR2000ex) et une géométrie 4cm-2°. L'indice de rémanence correspond à la durée nécessaire pour obtenir l'aspect dégradé du gel (qui correspond à un tan delta de 0,60), il est fixé à 1 pour le gel 1. Gel testé Indice de rémanence Gel 1 1 10% Gel 1 + 90% Gel 2 2 50% Gel 1 + 50% Gel 2 2,2 On observe une dégradation plus importante pour le gel 1 seul en comparaison aux deux réseaux interpénétrés de gels préalablement réticulés. Ainsi pour une injectabilité inférieure et donc une meilleure maîtrise du geste chirurgical, les taux de dégradation des réseaux interpénétrés de gels20 obtenus selon l'invention sont plus faibles, garantissant un temps de rémanence in vivo supérieur. Exemple 4 : 5 Afin de vérifier la cohésivité des hydrogels selon l'invention, des essais de centrifugation manuelle de 3 fois 5 minutes ont été réalisés sur les mélanges 10/90 et 50/50 à 20 mg/g de NaHA obtenus aux exemples précédents. En comparaison, un produit de type � biphasique �, tel que décrit dans l'art 10 antérieur a été réalisé suivant le mode opératoire du brevet EPO466300 avec 50% de particules de NaHa réticulés, dispersées dans 50% de visqueux de NaHA non réticulé, les 2 phases ayant été préalablement hydratées dans du tampon phosphate, à 20 mg/g de NaHa. Les produits selon l'invention obtenus aux exemples précédents ne 15 montrent aucune décantation, le produit si on l'éjecte après les centrifugations a toujours un aspect homogène. En revanche, le produit de type � biphasique � après centrifugation montre des particules décantées en fond de seringue. Si on éjecte le produit de la seringue, le visqueux sort le premier, puis les particules qui n'ont aucune 20 cohésivité entre elles, agglomérées en fond de seringue, et qui rendent l'injectabilité particulièrement difficile. REVENDICATIONS 1. Hydrogel cohésif biodégradable caractérisé en ce que : - il est constitué d'un mélange homogène de x polymères, identiques ou différents, réticulés préalablement à leur mélange, insolubles dans l'eau, miscibles entre eux, - x est compris entre 2 et 5. 2. Hydrogel selon la revendication 1, caractérisé en ce que les x polymères présentent des taux de réticulation différents, au moins l'un des x polymères présentant un taux de réticulation xl et au moins un des x polymères présentant un taux de réticulation x2, xl étant supérieur ou égal à x2. 3. Hydrogel selon la revendication 1, caractérisé en ce que les x polymères présentent des taux de réticulation identiques. 4. Hydrogel selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les polymères sont choisis parmi les polysaccharides. 5. Hydrogel selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les polymères sont choisis dans le groupe constitué par les acides polylactiques et leurs dérivés, la N Vinyl pyrrolidone, les acides polyvinyliques, les polyacrylamides et les polymères acryliques et dérivés biologiquement acceptables. 6. Hydrogel selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que les polysaccharides sont choisis dans le groupe constitué par l'acide hyaluronique, le kératane, l'héparine, la cellulose et les dérivés de cellulose, l'acide alginique, le xanthane, la carraghénane, le chitosane et la chondroitine et leurs sels biologiquement acceptables. 7. Hydrogel selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et 6, caractérisé en ce que les x polysaccharides sont choisis dans le groupe constitué par l'acide hyaluronique et ses sels biologiquement acceptables. 8. Hydrogel selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et 6, caractérisé en ce que au moins un des x polysaccharides est choisi dans le groupe constitué par les dérivés de cellulose et leurs sels biologiquement acceptables. 9. Hydrogel selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et 6, caractérisé en ce que au moins un des x polysaccharides est choisi dans le groupe constitué par la chondroitine et ses sels biologiquement acceptables 10. Hydrogel selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et 6, caractérisé en ce que au moins un des x polysaccharides est choisi dans le groupe constitué par le chitosane et ses sels biologiquement acceptables. 11. Hydrogel selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que x est égal à 2. 12. Hydrogel selon la revendication 11, caractérisé en ce que le premier des x polymères est l'acide hyaluronique et le deuxième est choisi dans le groupe constitué par la chondroïtine sulfate et ses sels, le chitosane et ses sels et dérivés, les dérivés de cellulose et leurs sels et les acides alginiques. 13. Hydrogel la revendication 11, caractérisé en ce que le premier des x polysaccharides est choisi dans le groupe constitué par l'acide hyaluronique et ses sels, les dérivés de cellulose et leurs sels et la xanthane et le deuxième est choisi dans le groupe constitué par la chondroïtine sulfate et ses sels, le chitosane et ses sels et dérivés, les dérivés de cellulose et leurs sels et les acides alginiques. 14. Hydrogel selon la revendication 11, caractérisé en ce que, le premier des x polymères est choisi dans le groupe constitué par l'acide hyaluronique et ses sels, les dérivés de cellulose et leurs sels et la xanthane et le deuxième est choisi dans le groupe constitué par les acides polylactiques et leurs dérivés et les dérivés acryliques. 15. Procédé de préparation d'un hydrogel cohésif biodégradable selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les 25 étapes de : - réticulation d'un premier polymère à un taux de réticulation xl - réticulation d'un deuxième polymère à un taux de réticulation x2 - mélange intime des deux polymères, - hydratation 30 -mélange final après hydratation. 16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce qu'il comprend en outre xn étapes de réticulation d'un polymère n avant le mélange des n polymères. 17. Procédé selon l'un des revendications 15 à 16, caractérisé en ce que les réticulations sont effectuées par action d'un agent réticulant polyfonctionnel choisi dans le groupe des époxy bi ou poly fonctionnels, de la divinyl sulfone, des carbodiimides ou du formadéhylde. 18. Procédé selon l'une des revendications 15 à 17, caractérisé en ce que le l'agent réticulant mis en oeuvre dans les étapes de réticulation sont identiques ou différents. 19. Procédé selon l'une des revendications 15 à 18, caractérisé en ce que le taux de réticulation xl est supérieur ou égal au taux de réticulation x2. 20. Procédé selon l'une des revendications 15 à 19, caractérisé en ce que les taux de réticulation sont compris entre 0,02 et 0,4, de préférence entre 0,08 et 0,2. 21. Utilisation d'un hydrogel selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, pour utilisation en viscosupplémentation. 22. Utilisation d'un hydrogel selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, pour utilisation dans le comblement des rides. 23. Kit comprenant un hydrogel selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, conditionné en seringue stérile.