Brevet FR2928148A1 — publié le 20090904

PROCEDE DE PREPARATION DE COMBRETASTATINE La présente demande est relative à un procédé de préparation de dérivés de combrétastatine. [Le problème technique] Les combrétastatines ou dérivés du stilbène présentent une forte activité cytotoxique et sont de ce fait utilisables comme anticancéreux. Ces composés sont notamment décrits dans US 5731353, US 5561122 ou U S 6759555. US 6759555 dé crit un procédé de préparation de dérivés de combrétastatines de formule (I) : (lb) (Ic) PG désignant un groupe protecteur de la fonction amine. Les combrétastatines de formule (I) peuvent exister sous deux formes isomères (Z) et (E) mais les isomères (Z) présentent la plus forte activité cytotoxique. La publication Bioorg. Med. Chem. 2000, 8, 2417-2425 décrit également un procédé d'obtention de combrétastatines. La Demanderesse a mis au point un procédé de préparation simplifié de combrétastatines avec de bons rendements globaux et une bonne pureté. 20 [Brève description de l'invention] L'invention est relative à un procédé d'enrichissement du sel du composé amino de formule en isomère (Z), B- désignant un contre-anion, consistant : • à ajouter de d'alcool benzylique à une suspension d'un mélange des sels des 25 composés (Z)- et (E)-amino dans l'acétonitrile et • à séparer mécaniquement le sel du composé amino enrichi en isomère (Z). La proportion acétonitrile / sels des composés (Z)- et (E)-amino exprimée en poids est comprise entre 5 et 17, de préférence entre 10 et 12. La température à laquelle est conduite I0 dans laquelle A représente ùNH2 (la) ou l'un des deux groupes suivants : +H p fN/ OH PG.N 1 CHI H NH, H3C l'enrichissement est comprise de préférence entre 30 et 70°C. La proportion alcool benzylique / sels des composés (Z)- et (E)-amino exprimée en poids est comprise entre 1 et 4, de préférence entre 2 et 3. L'invention est aussi relative au couplage du sel du composé amino ainsi préparé avec un dérivé de la L-sérine doublement protégé sur les fonctions -OH et amino de formule (II) dans lequel PG désigne un groupe protecteur de la fonction amine. o Ce couplage est réalisé de préférence avec l'activateur d'acide T3P (anhydride de l'acide 0 propane phosphonique) de formule : o~.,.--o '. o P P n-Prs I I n-Pr o [Description détaillée de l'invention] Le Schéma 1 ci-dessous décrit les étapes réactionnelles (i) à (iv) d'un procédé de préparation de 15 dérivés de combrétastatine. OMe MeO. ) (1) Br McO~~~iPPh3 HO PG' OMe OMe sel du (Z)-amino sel du (E)-amino NO2 MeO MeO OMe O N/ v OH H (Z)-(IC) NH2 OMe OMe OMe + Schéma 1 étape (i) : réaction de Wittig entre le nitrométhoxybenzaldéhyde et le bromure ou chlorure de triméthoxybenzylphosphonium en présence d'une base conduisant au sel du 15 composé nitro, se présentant sous forme d'un mélange des deux isomères (Z) et (E) du 2-méthoxy-5-[2-(3,4,5-triméthoxyphényl)vinyl]nitrobenzène ((Z)-et (E)-nitro) ; étape (ii) : réduction du mélange conduisant à un mélange des composés (Z)- et (E)-amino qui 5 sont transformés en sels (B- désigne un contre-anion par exemple CI- ou SO42_), suivie d'une étape de séparation du composé (Z)-amino ; étape (iii) : couplage du sel du composé (Z)-amino avec un dérivé de la L-sérine doublement protégé sur les fonctions -OH et amino (composé de formule (Il)) conduisant au composé (Z)-(Ib). HO (III) PG désigne un groupement protecteur de la fonction amine : il peut s'agir par exemple du tert-butoxycarbonyle (BOC), du benzyloxycarbonyle (CBZ) ou du 9-fluorénylméthyloxycarbonyle (FMOC) ; étape (iv) : déprotection et ouverture du cycle conduisant au composé (Z)-(Ic). L'étape (i) est décrite dans US 5731353 ainsi que dans Bioorg. Med. Chem. 2000, 8, 2417-2425 (Schéma 1). La réaction est conduite dans un solvant organique tel que par exemple un solvant 20 aromatique (par ex. toluène) en présence d'une base, de préférence forte telle que MeONa ou NaH. Le rapport (Z)/(E) est de l'ordre de 75/25. La réduction de l'étape (ii) décrite dans US 6759555 est conduite en présence de fer en excès (plus de 2 équivalents par rapport à (la)). La réduction en présence de zinc telle que décrite dans 25 US 5525632 (ex.2, étape 2) est également possible mais elle n'est pas complète (rdt=49,3%) et elle conduit de plus à la formation d'une quantité importante de sous-produit � azo �. Le composé (Z)-amino d'une pureté suffisante est ensuite obtenu par une ou plusieurs séparation(s) compliquée(s). La séparation qui suit la réduction est réalisée par cristallisations successives. Une lèfe cristallisation permet d'éliminer le composé (E)-amino, puis une 2ème cristallisation 30 permet d'isoler le (Z)-amino (voir US 6759555, ex.1). Le couplage de l'étape (iii) est réalisé avantageusement en présence d'un activateur d'acide tel que par exemple l'EDCI (chlorure de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide), le DCC (dicyclohexylcarbodiimide), le TOTU (o-[éthoxycarbonyl]cyanométhylèneamino)-N,N,N',N'- :35 tétraméthyluronium tétrafluoroborate), le HBTU (o-benzotriazol-1-yl-N,N,N',N'-tétraméthyluronium hexafluorophosphate) ou le N,N-carbonyldiimidazole. On désigne par activateur d'acide un composé dont la fonction est d'exacerber la réactivité de la fonction acide ùOOOH pour la formation d'une liaison peptidique. Pour plus de détails sur les activateurs d'acide, on pourra se référer à la revue ChemFiles Vol.7, N°2, page 3 éditée par la société Aldrich Chemical ou bien à Tetrahedron report N°672, 2004, 60, 2447-2467, � Recent development of peptide coupling reagents in organic synthesis �. La déprotection/ouverture de cycle est réalisée par exemple par une hydrolyse acide, par exemple en présence d'acide chlorhydrique méthanolique. Procédé selon l'invention Le procédé de la présente invention reprend les mêmes étapes réactionnelles du Schéma 1 mais 10 les étapes (ii) et (iii) ont été améliorées. Dans l'invention, on utilise pour l'étape (ii), un enrichissement du sel du composé amino en isomère (Z) consistant : • à ajouter de d'alcool benzylique à une suspension d'un mélange des sels des 15 composés (Z)- et (E)-amino dans l'acétonitrile et • à séparer mécaniquement le sel du composé amino enrichi en isomère (Z). Le terme � enrichissement � signifie qu'à l'issue des deux étapes du procédé, on augmente la proportion de l'isomère (Z) par rapport à l'isomère (E) (il s'agit donc d'un procédé de séparation 20 de l'isomère (Z) à partir d'un mélange des isomères (Z) et (E)). Par rapport à une (re)cristallisation, l'enrichissement présente l'avantage d'être direct et simple à mettre en oeuvre. II permet d'obtenir le composé amino enrichi en isomère (Z) avec une faible teneur en isomère (E) résiduel (pouvant aller jusqu'à La suspension présente de préférence une proportion acétonitrile / sels des composés (Z)- et (E)-amino exprimée en poids comprise entre 5 et 17, de préférence entre 10 et 12 (c'est-à-dire que le 30 poids d'acétonitrile dans la suspension est compris entre 5 à 17 x poids des composés (Z)- et (E)-amino). La quantité d'alcool benzylique qui est ajouté est de préférence telle que la proportion alcool benzylique / sels des composés (Z)- et (E)-amino exprimée en poids est comprise entre 1 et 4, de 35 préférence entre 2 et 3 (c'est-à-dire que le poids d'alcool benzylique ajouté est compris entre 1 à 4 x poids des composés (Z)- et (E)-amino). Cette proportion permet de maintenir un rapport (Z)/(E) élevé pour le produit final. L'alcool benzylique a pour fonction de dissoudre préférentiellement le sel du composé (E)-amino. L'enrichissement est mis en oeuvre de préférence à une température comprise entre 30 et 70°C, de préférence entre 35 et 65°C. Au-delà de 70°C, le composé amino commence à se dégrader lentement. Une méthode préférée de préparation de la suspension est décrite ci-après. On réduit les composés (Z)- et (E)-nitro à l'aide de dithionite de sodium (Na2S2O4) dans un solvant qui peut être un mélange d'eau et d'alcool, par exemple un mélange eau/méthanol. Après la réduction, on introduit dans le milieu réactionnel un acide fort (par ex. HCI ou H2SO4) qui réagit avec les 1D intermédiaires de la réaction ainsi qu'avec les restes de dithionite et de disulfite. On obtient alors un mélange des sels des composés (Z)- et (E)-amino (par ex. chlorhydrate ou sulfate). On ajoute alors une base forte pour obtenir les bases libres (-NH3+ b -NH2) qui sont extraites par un solvant organique, par exemple un solvant chloré tel que le dichlorométhane (DCM). La phase organique est alors filtrée de façon à éliminer les composés insolubles, notamment les sels insolubles de la 15 dithionite. On ajoute à la phase organique un acide fort dans un alcool, puis on déplace l'alcool par de l'acétonitrile de façon à obtenir une suspension des sels des composés (Z)- et (E)-amino dans l'acétonitrile. L'acide fort peut être HCI ou H2SO4 (B- = Cl ou SO4-). Le déplacement de solvant peut se faire en ajoutant l'acétonitrile après avoir éliminé sous vide plus ou moins complètement l'alcool. L'ajout d'acétonitrile peut se faire également concomitamment avec 20 l'élimination de l'alcool sous vide. L'alcool est de préférence un alcool léger tel que le méthanol ou l'éthanol. étape (iii) : le couplage entre le sel du composé (Z)-amino et le dérivé de la L-sérine doublement protégé de formule (II), est réalisé dans un solvant organique à l'aide de l'anhydride de l'acide 25 propane phosphonique (T3P) comme activateur d'acide en présence d'une base. La fonction de la base est de piéger les espèces acides et de déplacer le sel vers la base libre. La quantité de base ajoutée est comprise entre 2 et 3 éq. par rapport au composé (Z)-amino (voir ex.1 où l'on a utilisé 2,7 éq.). Il est possible également de coupler directement le composé (Z)-amino avec la L-sérine en présence de T3P ; dans ce cas, la proportion de base ajoutée est moins importante, _;o comprise entre 1 et 2 éq. (environ 1 éq. de moins que si on part du sel) La base peut être une amine tertiaire comme par exemple la triéthylamine (TEA), la diéthanolamine (DIEA), la N-méthyl morpholine (NMM) ou la méthyl-pipéridine. Le solvant organique peut être le dichlorométhane, le toluène, la méthylisobutyl cétone (MIBK), l'acétate 35 d'éthyle, l'acétonitrile, le THF, le Me-THF ou le cyclopentylméthyl éther. Le T3P a pour formule : o~ o o n-Prs I I --n-Pr o~II\o Pr o (III) L'avantage à utiliser le T3P plutôt qu'un autre activateur d'acide est que les sous-produits du T3P sont facilement éliminables (sous-produits tous solubles dans l'eau) et qu'il s'agit d'un activateur bon marché. La réaction de couplage est conduite à la température ambiante, généralement à une température comprise entre 5°C et 25°C. La proportion de T3P par rapport au composé (Z)-amino est comprise entre 1 et 2 éq, de préférence entre 1,5 et 1,8 éq. [Exemples] 1 Exemple 1 (selon l'invention) Etape (i) : Sur un mélange à une température de 5-10°C, constitué de toluène (91,1 litres) de bromure de triméthoxybenzylphosphonium (15,35 kg, 29,33 moles) et de 4-méthoxy-3-nitrobenzaldéhyde (5,06 kg, 27,93 moles), est coulée une solution de méthylate de sodium (5,66 kg, 29,34 moles). L5 En fin de réaction, 0,32 litre (5,59 moles) d'acide acétique est coulé. Après un maintien à 20°C, le milieu est filtré. Le gâteau est lavé avec du toluène (11,1 litres). Les filtrats sont lavés plusieurs fois avec de l'eau (20,2 litres) puis concentrés sous vide. L'alcool isopropylique (87,6 litres) est alors chargé et le milieu est concentré puis refroidi. La suspension est alors filtrée à 10°C. Le produit isolé est séché sous vide (6,46 kg, 52,2%). La pureté du produit isolé est de l'ordre de 20 77,8% en (Z) et 22,1% en (E). Etape (ii) : Sur un milieu constitué de méthanol (100 ml), les composés (Z) et (E)-nitro à réduire (20 g, 0,058 mole) de dithionite de sodium (36,8 g, 0,179 mole), est coulé de l'eau (80 ml) à 50°C. Une fois la 2 réaction terminée, l'acide chlorhydrique (36,3 ml, 0,406 mole) est additionné. Le traitement est réalisé par coulée d'eau et du dichlorométhane, puis de soude jusqu'à pH=7. La phase dichlorométhane est concentrée et remplacée par l'acétonitrile. L'acide chlorhydrique méthanolique (27 ml, 0,081 mole) est coulé puis le solvant est évaporé. On obtient alors une bouillie. L'alcool benzylique (46 ml) est alors ajouté à la suspension à 45°C. Après 3C refroidissement, le milieu est alors filtré et lavé. Le produit isolé est alors séché sous vide (11,7 g, 74,4%). Ce produit présente une pureté de 99,93 % en (Z) et 0,07% en (E) (par HPLC liquide). A l'issue de l'étape (ii), on a obtenu simplement et directement le sel du composé (Z) avec une bonne pureté. 6 35 Etape (iii) : Sur un milieu constitué de dichlorométhane (500 ml), du composé-(Z) (50 g, 0,142 mole) et de la L-sérine doublement protégé de formule (II) avec PG=BOC (L-sérine-NBOC-acétonide ; 41,8 g, 0,170 mole), est coulée de la triéthylamine (53,4 ml, 0,383 mole) à 20°C puis une solution de T3P dans le DCM (154 g, 0,242 mole). Le milieu est porté au reflux puis de l'eau (500 ml) est additionnée. Après décantation et concentration, l'acide chlorhydrique méthanolique (189,5 ml, 1,136 moles) et du méthanol (189,5 ml) sont additionnés. De l'eau (300 ml) est ajoutée au milieu puis les phases sont décantées. L'acétate d'isopropyle (650 ml) est ajouté à la phase aqueuse puis la soude (115 ml, 1,150 moles) est coulée à 20°C. La phase organique décantée et lavée est concentrée sous vide puis chauffée à 65°C. Le méthanol (35 ml) puis le L'acide chlorhydrique méthanolique (47, 4 ml, 0,142 moles) sont additionnés à cette température. Après refroidissement, et filtration, le produit est isolé (49,6 g, 79,5%). Le produit final présente une pureté de 99,2%. Exemple 2 (comparatif) On reprend les conditions de l'étape (iii) mais en présence de TOTU comme activateur d'acide (1 éq. de TOTU + 5 éq. de TEA). Le rendement final n'est alors que de 71%. Revendications 1. Procédé d'enrichissement du sel du composé amino de formule NH2-f B-CH3O CH3O OCH3 OCH3 en isomère (Z), B- désignant un contre-anion, consistant : • à ajouter de d'alcool benzylique à une suspension d'un mélange des sels des composés (Z)- et (E)-amino dans l'acétonitrile et • à séparer mécaniquement le sel du composé amino enrichi en isomère (Z). 2. Procédé selon la revendication 1 dans lequel B- désigne Cr ou SO42-. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2 dans lequel la proportion acétonitrile / sels des composés (Z)- et (E)-amino exprimée en poids est comprise entre 5 et 17, de préférence entre 10 et 12. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3 dans lequel la température à laquelle est conduit l'enrichissement est comprise entre 30 et 70°C. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4 dans lequel la proportion alcool benzylique / 20 sels des composés (Z)- et (E)-amino exprimée en poids est comprise entre 1 et 4, de préférence entre 2 et 3. 6. Procédé de préparation d'une combrétastatine de formule (Z)-(Ic) : (Z)-(Ic) 25 consistant à : • coupler le sel du composé (Z)-amino préparé selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1 à 5 avec un dérivé de la L-sérine doublement protégé de formule O (Il) dans lequel PG désigne un groupe protecteur de la fonction HOamine de façon à obtenir le OMecomposé de formule (Z)-(Ib) : MeO 1,) • puis à déprotéger et ouvrir le cycle de (Z)-(Ib). 7. Procédé selon la revendication 6 dans lequel le couplage est réalisé en présence d'un activateur d'acide. 8. Procédé selon la revendication 7 dans lequel l'activateur d'acide est le T3P de formule O'O O P/ n-Pr'I Inn-Pr O\I I\-Pr O (III) 9. Procédé de préparation d'une combrétastatine de formule (Z)-(Ic) : (Z)-oc) consistant à : • enrichir un sel du composé amino de formule : en isomère (Z), B- désignant un contre-anion, par : a) ajout d'alcool benzylique à une suspension d'un mélange des sels des composés (Z)- et (E)-amino dans l'acétonitrile et b) séparation mécanique du sel du composé amino enrichi en isomère (Z),• coupler le sel enrichi de l'étape précédente avec un dérivé de la L-sérine doublement o PG protégé de formule (Il) dans lequel PG désigne un groupe protecteur de la fonction amine en présence de T3P de formule O~ P ____ o n-Prs l I n-Pr O O ri \ n-Pr o de façon à obtenir le composé de formule (Z)-(Ib) : OMe MeO OMe o ^ \O (Z)-(Ib) PG~N / • puis à déprotéger et ouvrir le cycle de (Z)-(Ib). 10. Procédé selon la revendication 6 à 9 dans lequel PG représente le BOC, le CBZ ou le 0 FMOC. 11. Procédé de préparation d'une combrétastatine de formule (Z)-(Ic) : (Z)-oc) consistant à : 15 • coupler en présence de T3P le sel du composé (Z)-amino MeO OMe OMe NH3+ B- MeOdans lequel B- désigne un contre-anion avec un dérivé de la L-sérine doublement protégé o PG' de formule (II) dans lequel PG désigne un groupe protecteur de la fonction amine de façon à obtenir le composé de formule (Z)-(I)) : OMe OMe o N' \O H (Z)-(Ib) PG~N • puis à déprotéger et ouvrir le cycle de (Z)-(Ib). 12. Utilisation du T3P de formule o- o~ ~o n-Pr~I Inn-Pr OII\ Pr o (III) pour réaliser le couplage entre le sel du composé (Z)-amino de 10 formule : MeO NH3+ B- dans lequel B- désigne un contre-anion avec un dérivé de la L-sérine doublement protégé o de formule amine. (II) dans lequel PG désigne un groupe protecteur de la fonction 15