Brevet FR2924350A1 — publié le 20090605

Procédé et compositions pour la vaccination par voie cutanée L'invention concerne le développement d'une méthode et d'un système de délivrance de vaccins par voie cutanée. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation d'un dispositif comportant un compartiment de condensation pour la vaccination epicutanée. L'invention concerne aussi des protocoles de vaccination épicutanée, permettant l'obtention d'une réponse immune efficace sans traitement de la peau. L'invention peut être mise en oeuvre chez tout mammifère, de préférence chez l'être humain, pour l'induction d'une réponse immune thérapeutique ou préventive contre tout type d'antigène. La majorité des pathogènes pénètrent l'organisme à travers les muqueuses ou la peau. Ainsi la peau comme les muqueuses possèdent tous les outils nécessaires pour détecter les pathogènes et se défendre. Cette ligne de défense comprend notamment un contingent de cellules présentatrices d'antigène (CPA) professionnelles résidentes. Les seules CPA présentes dans l'épiderme en conditions normales sont les cellules de Langerhans (LC), des cellules dendritiques (DC) dérivées de la moelle osseuse. Après capture de l'antigène, les LCs activées migrent dans les ganglions lymphatiques drainant où elles initient une puissante réponse immune systémique. Ainsi, la peau représente une alternative potentielle au mode d'administration par injection traditionnel pour le développement de vaccins plus efficaces. De plus, le système immunitaire de la peau peut également être une cible idéale pour l'induction d'une tolérance dans différentes pathologies telles que l'auto-immunité, la réponse aux allergènes, et éventuellement le cancer. Cependant, la couche cornée (CC), la couche la plus superficielle de la peau, est une barrière physicochimique efficace pour la pénétration de fluides, de larges molécules (polypeptides et protéines), de particules ou bien encore de microbes. Une variété de techniques ont ainsi été testées pour tenter d'obtenir une réponse immune efficace par voie épicutanée, c'est-à-dire par application d'un antigène sur la peau. Ces techniques impliquent toutes une altération physique de la couche cornée, par exemple par abrasion légère ou modérée (suite à l'application de bandes adhésives ou en utilisant du papier de verre), par application d'ultrasons ou de micro aiguilles. Ces différentes techniques ont démontré une efficacité à des degrés divers, comme étape préalable à l'application de l'antigène, pour favoriser sa pénétration dans les couches superficielles de la peau (épiderme), contenant les cellules immunologiques, et l'induction d'une réponse immune. Ainsi, il a été démontré que la co-application d'un antigène et d'un adjuvant comme la toxine du cholera (CT) ou la toxine labile de E coli (LT) sur une peau préalablement abrasée est efficace pour la génération d'une réponse immune anticorps (Glenn GM, Rao M, Matyas GR, Alving CR. Skin immunization made possible by cholera toxin. Nature. 1998. 391: 851 ; Glenn GM, Scharton-Kersten T, Vassell R, Matyas GR, Alving CR. Transcutaneous immunization with bacterial ADP-ribosylating exotoxins as antigens and adjuvants. Infect Immun. 1999. 67:1100-6.). En revanche, la simple hydratation de la peau, préalable à l'application d'un antigène, suivie ou non d'un traitement occlusif, n'a jamais donné lieu à une réponse anticorps spécifique. Celle-ci est obtenue uniquement dans le cas d'un traitement préalable de la peau conduisant à la perturbation physique de la couche cornée, ou de la co-administration de l'antigène avec un adjuvant puissant (CT ou LT). D'autres travaux ont montré par la suite que l'utilisation d'un système occlusif pour maintenir une formulation vaccinale déposée sous forme liquide sur la peau d'animaux durant une période allant de 1 à 24 heures permettait d'induire une réponse immune chez l'animal et chez l'homme, mais uniquement après traitement de la peau. Cependant les réponses induites en utilisant un contact pour une période de 0 à 24 heures ne varient pas de façon qualitative et/ou quantitative. Ainsi, sans traitement physique ou physicochimique préalable (papier de verre, éthanol, acétone, bande adhésive, glycérol), ou l'usage d'adjuvants puissants (LT ou CT) ou autre excipient facilitateur, aucune réponse anticorps spécifique de l'antigène n'est détectée. La présente invention décrit pour la première fois une méthode permettant l'induction d'une réponse immune spécifique d'antigène par voie cutanée, sans qu'il soit nécessaire d'utiliser un adjuvant (CT ou LT) ou de prétraiter ou perforer la peau. Plus particulièrement, l'invention décrit une méthode de vaccination épicutanée, efficace même en l'absence d'adjuvant, qui repose sur l'utilisation d'une formulation vaccinale sèche appliquée sur la peau dans des conditions permettant la formation d'un compartiment de condensation. L'invention montre que la création et le maintien d'une hydratation de la peau induisent une perturbation de la CC qui permet le passage d'antigènes. Par ailleurs, l'eau accumulée sous le système de délivrance permet aussi à la formulation vaccinale sèche d'être réhydratée et solubilisée, et d'entrer en contact avec la peau. Nous avons montré dans des essais pré cliniques que l'invention permettait, contrairement aux différents systèmes cutanées décrits jusqu'à présent, d'induire une réponse immune anticorps spécifique de l'immunogène, sans coadministration d'adjuvant (de type CT ou LT) ni préparation (abrasion ou perforation) de la peau. De manière particulièrement remarquable, l'invention permet le transfert cutané de macro-molécules (principalement des polypeptides et protéines) sans aucun traitement actif, ce qui n'avait jamais été décrit dans l'état de l'art. Comme cela est illustré dans les exemples, une réponse immune particulièrement forte est observée après trois applications du vaccin selon le procédé de l'invention. Un objet de l'invention réside ainsi dans l'utilisation d'une formulation vaccinale pour la (préparation d'une composition pour la) vaccination épicutanée d'un mammifère, de préférence un humain, caractérisée en ce que la formulation vaccinale est sous forme sèche et dépourvue d'adjuvant, et en ce qu'elle est administrée par application sur la peau du mammifère au moyen d'un dispositif cutanée formant au contact de la peau un compartiment de condensation contenant la formulation vaccinale. Un autre objet de l'invention réside ainsi dans l'utilisation d'un dispositif d'administration cutanée pour la préparation d'une composition destinée à l'administration d'une formulation vaccinale comprenant un antigène, sans traitement préalable de la peau ni co-administration d'adjuvant, le dispositif d'administration cutanée contenant la formulation vaccinale sous forme sèche sans composé adjuvant, et formant au contact de la peau un compartiment de condensation contenant la formulation vaccinale, permettant ainsi la pénétration de l'antigène dans l'épiderme et l'induction d'une réponse immune en l'absence d'adjuvant ou traitement préalable de la peau. Un autre objet de l'invention réside dans l'utilisation d'un dispositif d'administration cutanée pour l'administration d'une formulation vaccinale comprenant un antigène, sans traitement préalable de la peau ni co-administration d'adjuvant, le dispositif d'administration cutanée contenant la formulation vaccinale sous forme sèche sans composé adjuvant, et formant au contact de la peau un compartiment de condensation contenant la formulation vaccinale, permettant ainsi la pénétration de l'antigène dans l'épiderme et l'induction d'une réponse immune en l'absence d'adjuvant ou traitement préalable de la peau. Un autre objet de l'invention réside dans une méthode pour induire une réponse immune spécifique d'antigène chez un mammifère, la méthode comprenant l'application sur la peau du mammifère, sans traitement préalable de la peau, d'un dispositif d'administration cutanée contenant une formulation vaccinale sous forme sèche comprenant l'antigène sans composé adjuvant, le dispositif formant au contact de la peau un compartiment de condensation contenant la formulation vaccinale, pendant une période de temps suffisante pour permettre la pénétration de l'antigène dans l'épiderme et l'induction d'une réponse immune en l'absence d'adjuvant ou de traitement préalable de la peau. Un autre objet de l'invention réside dans une méthode pour induire par voie cutanée une réponse immune spécifique d'antigène, la méthode comprenant la création et le maintien d'une hydratation locale de la peau et la mise en contact de la peau hydratée avec une formulation vaccinale sèche dépourvue d'adjuvant, pendant une période de temps suffisante pour permettre la pénétration d'antigène et l'induction d'une réponse immune. Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'une formulation vaccinale sous forme sèche pour la préparation d'un médicament pour l'induction d'une réponse immune chez un mammifère, caractérisée en ce que la formulation vaccinale est appliquée au moyen d'un dispositif cutanée sans composé adjuvant sur la peau non traitée du mammifère, pendant une période de 48 heures environ. Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'une formulation vaccinale sous forme sèche pour l'induction d'une réponse immune chez un mammifère, caractérisée en ce que la formulation vaccinale est appliquée au moyen d'un dispositif cutanée sans composé adjuvant sur la peau non traitée du mammifère, pendant une période de 48 heures environ. Un autre objet de l'invention concerne une méthode pour l'induction d'une réponse immune chez un mammifère, comprenant l'application d'une formulation vaccinale sous forme sèche au moyen d'un dispositif cutanée sans composé adjuvant sur la peau non traitée du mammifère, pendant une période de 48 heures environ. Un autre objet de l'invention concerne une composition vaccinale, caractérisée en ce qu'elle comprend un dispositif d'administration cutanée formant un compartiment de condensation après application sur la peau d'un sujet, ledit compartiment comprenant une formulation vaccinale sous forme sèche et dépourvue de tout composé adjuvant. L'invention résulte de la découverte inattendue qu'une réponse immune peut être induite par voie cutanée sur peau intacte (c'est-à-dire sans traitement perforant ou par abrasion physique et/ou chimique) et sans utilisation d'adjuvant. Cet effet a été obtenu en utilisant une formulation vaccinale sous forme sèche et en l'appliquant au moyen d'un dispositif formant un compartiment de condensation lorsqu'il est appliqué sur la peau et/ou pendant une période de temps adaptée. Sans être tenu par un mécanisme d'action particulier, il est proposé que l'hydratation de la peau permette le gonflement des cornéocytes de la couche cornée, ainsi que l'intégration de molécules d'eau entre les domaines lipidiques des espaces intercellulaires. Cette hydratation induirait par ailleurs une perturbation de l'homéostasie cutanée, se traduisant entre autre par des modifications du profil des cytokines produites, des altérations morphologiques et phénotypique des cellules de Langerhans ou bien encore par l'augmentation du nombre de cellules mononuclées dans l'épiderme. Malgré son rôle de barrière, il s'établit au travers de la peau entre l'organisme et l'atmosphère, et dans les conditions physiologiques, un flux d'eau dirigé vers l'atmosphère. Ce flux est connu sous le nom de perte insensible en eau (PIE). Le procédé de l'invention, qui met en oeuvre un compartiment de condensation, contribue à isoler une partie de la peau du milieu environnant. Au cours de ce phénomène, les échanges de vapeur d'eau entre le corps et l'atmosphère sont perturbés, ce qui aboutirait à l'accumulation d'eau dans le compartiment et aussi à une augmentation de l'hydratation de la peau, de tout l'épiderme et en particulier de la couche cornée (stratum corneum) qui constitue la principale barrière à l'absorption des substances. Nos résultats suggèrent que, chez l'homme, le flux d'eau très important mesuré après retrait du compartiment de condensation reflète l'évaporation de l'eau accumulée à la surface cutanée. Le compartiment de condensation du dispositif amène au fur et à mesure du temps à la saturation en vapeur d'eau (provenant de la PIE) du volume du compartiment, puis condensation, en arrivant à un état d'équilibre. En effet, au début de l'application, ce volume n'est pas saturé en vapeur d'eau, puisqu'il contient de l'air ambiant. Une fois la saturation de l'atmosphère atteinte, l'eau à l'état de vapeur pourrait alors se condenser sous forme d'eau liquide. Cette condensation serait alors alimentée par le flux d'eau résiduel en provenance de la peau. Dans ces conditions, un état d'équilibre est obtenu qui résulte dans l'accumulation de l'eau sous le dispositif étanche (voir Figure lB). L'invention permet ainsi de résoudre les inconvénients des méthodes de vaccination épicutanée de l'art antérieur, en proposant une méthode utilisable avec tout type d'antigène, compatible avec la production de dispositifs prêts à l'emploi, et ne nécessitant pas de traitement de la peau. La forte hydratation induite dans l'épiderme, avec accumulation d'eau dans et sur la surface du stratum corneum, permet de moduler le coefficient de partage entre les molécules de vaccin et la peau en présence d'eau, de gonfler les cornéocytes ou encore d'altérer l'organisation de la phase lipidique intercellulaire. Cette modification permet la dissolution du principe actif dans les liquides présents à la surface de la peau et son passage (par diffusion passive) au travers de la peau, sans qu'il soit nécessaire de perforer ou abraser la peau. L'invention peut être mise en oeuvre avec tout dispositif d'administration cutanée formant un compartiment de condensation. Il s'agit de préférence de dispositifs de type patch, timbres ou pansements, de préférence de patchs. Le dispositif selon l'invention est typiquement de nature transdermique à diffusion passive, c'est-à-dire qu'il ne contient pas de moyens pour causer une perforation ou une abrasion de la peau. Il s'agit avantageusement d'un dispositif de type patch occlusif, comme par exemple un patch électrostatique produit selon la technologie VIASKINR décrite dans la demande de brevet WO02/071950. On désigne au sens de l'invention par compartiment l'espace laissé libre entre la peau et le fond (� backing �) du dispositif après application du dispositif sur la peau, ce backing n'étant pas collé sur la peau et laissant ainsi de la place pour l'accumulation d'une petite quantité d'eau sur la peau (voir par exemple les figures lA et lB). Les résultats obtenus montrent que l'utilisation d'un compartiment de condensation maintenant, pendant la durée de l'application, un certain degré d'hydratation due à l'expression naturelle de liquide par la peau en direction du compartiment, permet le passage d'antigènes macromoléculaires et l'induction d'une réponse spécifique. Ces résultats sont particulièrement surprenants compte tenu des données de l'art antérieur soulignant la nécessité de recourir à des adjuvants particuliers et à un traitement de la peau pour obtenir une réponse satisfaisante. Dans un mode préféré de mise en oeuvre, le dispositif est tel qu'il forme, au contact de la peau, un compartiment de condensation ayant un volume compris entre 1 et 300 mm3 par cm2 de surface du dispositif. Un tel volume correspond à une hauteur de compartiment allant de 0,01 mm à 3 mm environ. Dans un mode plus préféré, le volume du compartiment est compris entre 2 et 200 mm3 par cm2 de surface du dispositif, encore plus préférentiellement entre 2 et 100 mm3 par cm2 de surface du dispositif, correspondant à une hauteur de 0,02 à 1 mm environ. La surface de diffusion sur la peau du dispositif peut être adaptée par l'homme du métier, et est typiquement comprise entre 0,2 et 5 cm', plus généralement entre 0,5 et 3 cm'. Il n'est pas nécessaire que les parois du compartiment de condensation (le backing du dispositif) soient totalement imperméables. Au contraire, une certaine perméabilité à la vapeur d'eau dans les conditions normales de température et de pression est acceptable, comme c'est le cas pour les polyéthylènes, dès lors que cette évaporation n'empêche pas le maintien d'une atmosphère saturée en vapeur d'eau, grâce à la présence d'eau liquide dans le compartiment. Dans un mode particulier de mise en oeuvre, les parois du compartiment de condensation comprennent un matériau présentant un degré de perméabilité inférieur à 15 g/m2/24h, de préférence inférieur à 10 g/m2/24h, par exemple de l'ordre de 9 g/m2/24h, environ. De tels matériaux peuvent être choisis par exemple parmi des polymères, copolymères, plastiques, céramiques, tout matériau biocompatible (par exemple le graphite), etc. Des exemples de polymères biocompatibles sont notamment le Polyéthylène (PE), Polycarbonate, polyester (PET), les plastiques cellulosiques (CA, CP), le chlorure de Polyvinyle (PVC), le polyméthyl-méthacrylate (PMMA), le polyuréthane (PUR), les Silicones (PTFE) ou le Polyfluorure de vinylidène (PVDF). Des exemples de copolymères biocompatibles sont notamment le copolymère d'Éthylène -Acétate de vinyle (EVA). A titre d'examples de polymères présentant des degrés de perméabilité à la vapeur d'eau (MVTR, Moisture Vapor Transmission Rate) compatibles avec la présente invention, on peut citer notamment le CoTrari 9706 (MVTR = 26,4 g/m2/24H), le CoTrari 9720 (MVTR = 9,4 g/m2/24H) et le CoTrari 9722 (MVTR = 7,9 g/m2/24H). Dans un mode de mise en oeuvre préféré, le compartiment de condensation est formé par un disque en polymère, par exemple en polyéthylène, de forme essentiellement circulaire (le backing) et de diamètre compris entre 2 et 100 mm environ, de préférence entre 5 et 70mm environ, qui est fixé (par exemple collé) sur un anneau de matériau biocompatible, par exemple en polyéthylène, présentant un diamètre extérieur essentiellement identique à celui du disque et un diamètre interne compris entre 1 et 50, de préférence entre 2 et 20 mm environ. L'épaisseur du disque et celle de l'anneau sont comprises par exemple entre 0,01 et 2 mm environ, ce qui définit un compartiment d'une hauteur comprise entre 0,01 et 2 mm, le volume du compartiment étant petit mais jamais nul, même si la flexibilité du backing détermine, en certains endroits un contact de ce dernier avec la peau. Le disque peut être fixé sur l'anneau par tout moyen adapté. Typiquement, l'anneau est adhésif ou rendu adhésif pour permettre sa fixation au disque. Comme cela est illustré sur la Figure lA, un prototype particulier de dispositif selon l'invention est composé par : - un anneau [1] de matériel biocompatible, de diamètre variable et de hauteur de 0,01 à 2 mm environ, dépendant du volume du compartiment de condensation par cm2 de surface. Dans le mode représenté sur la figure lA, l'anneau est adhésif sur sa face externe au moins, destinée à entrer en contact avec la peau. - un disque [2] en matériel biocompatible, qui fait office de plafond du compartiment (conteneur du principe actif en forme sèche), collé sur l'anneau (par exemple à l'aide d'un adhésif). La surface du disque est typiquement de 5 mm de diamètre minimum. Le MVTR (Moisture Vapor Transmission) du disque (� backing �) est de préférence inférieur à 10g/m2/24h. - une rondelle [3] de �release liner �, protégeant la surface adhésive de l'anneau et destinée à être pelée avant application sur la peau. Cette rondelle est avantageusement un disque, qui recouvre le compartiment pour le fermer avant application du dispositif. Le compartiment formé par le dispositif est un compartiment de condensation ayant des propriétés d'hydratation. Le pouvoir hydratant se traduit par la capacité à agir sur l'intégrité de l'épiderme sous le compartiment de condensation du dispositif induisant une augmentation du degré d'hydratation de l'épiderme, avantageusement dès la première heure d'application sur la peau, allant de 30% à 100% et plus précisément de 50% à 70%. De préférence, le pouvoir hydratant du compartiment de condensation doit être tel qu'il permet d'induire, à la surface externe de l'épiderme et dans le compartiment de condensation du dispositif, une augmentation de la quantité relative en eau allant de 40% à plus de 100% à partir de la première heure d'application, et plus préférentiellement, supérieure à 50%. Dans un mode de mise en oeuvre préféré, le dispositif est maintenu sur la peau par des moyens assurant une étanchéité au compartiment de condensation. Tout moyen adhésif peut être utilisé à cet effet, y compris des matériaux de type gomme, polymère ou plastique ayant un fort pouvoir adhésif. L'invention présente l'avantage de permettre la vaccination même sur peau intacte, c'est-à-dire une peau n'ayant pas subi de traitement particulier. Au sens de l'invention, on entend par traitement de la peau tout traitement abrasif ou perforant conduisant à une destruction au moins partielle de la couche superficielle au moins de la peau. Par ailleurs, un autre avantage de l'invention est qu'elle permet d'obtenir une réponse immune importante, même sans co-administration d'adjuvant. Le terme adjuvant désigne au sens de l'invention tout composé qui exerce une action physico-chimique et/ou biologique sur la peau, facilitant la pénétration de l'antigène dans la peau, et qui augmente la réponse immunitaire contre l'antigène. Par action physico-chimique et/ou biologique, l'adjuvant tel que défini ici est un composé qui altère la perméabilité de l'épiderme par perturbation de la couche cornée, permettant ainsi le passage de l'antigène et son contact avec les cellules immunologiquement actives de l'épiderme. Des exemples de composés adjuvants sont notamment la toxine cholérique (CT) ou la LT (toxine thermolabile d'E-coli). D'autres exemples sont les transfersomes, décrits par Paul et al (Paul A, Cevc G, Bachhawat BK. Transdermal immunization with large proteins by ultradeformable drug carriers. Eur J Immunol. 1995, 25 (12) :3521-4), qui permettent de transporter un antigène dans les membranes. L'invention peut être mise en oeuvre avec toute formulation vaccinale sous forme sèche. Le terme formulation vaccinale désigne toute formulation contenant des éléments antigéniques. Il s'agit typiquement d'une formulation comprenant un ou plusieurs antigènes, par exemple de nature peptidique, polypeptidique (ou protéique), lipidique et/ou saccharidique, ou de mélanges simples ou des conjugués chimiques de ces composés. Une formulation vaccinale préférée comprend une ou plusieurs molécules antigéniques : des molécules d'une masse moléculaire supérieure à 500 Da, plus souvent des polypeptides et des protéines supérieures à 1500 Da ayant une activité ou un but vaccinal préventif ou thérapeutique, ou des molécules d'une masse moléculaire supérieure à 500 Da destinées à une action locale (thérapeutique) sur l'épiderme. Typiquement, la formulation vaccinale comprend au moins un antigène de nature peptidique ou polypeptidique. Il peut s'agir par exemple d'antigènes bactériens, d'antigènes viraux, d'antigènes tumoraux, etc, comme par exemple un antigène du virus de la Grippe, un antigène d'un virus de l'Hépatite (/ou C), un antigène de Haemophilus Influenzae, un antigène du Virus respiratoire syncytial, un antigène de Salmonelle (Shigella), ou de la tuberculose (Tiphy), ou encore des antigènes caractéristiques de maladies auto-immunes, cancer, maladie d'Alzheimer, allergies, etc. La formulation vaccinale peut comprendre en outre tout excipient ou véhicule adapté à un usage pharmaceutique, de même que tout composé à activité immuno-modulatrice, comme par exemple une cytokine, un composé ligands des récepteurs Toll, etc. La formulation vaccinale mise en oeuvre se présente sous � forme sèche �, c'est-à-dire sous une forme deshydratée, et notamment une forme de poudre, particules, agglomérats, galette, forme séchée, etc. La forme sèche peut être obtenue par lyophilisation, ou par simple évaporation. Dans un mode de mise en oeuvre particulier, la formulation vaccinale est sous forme de poudre. Dans un autre mode de mise en oeuvre particulier, la formulation vaccinale est maintenue sur une surface du dispositif, typiquement sur le backing du compartiment, par des forces de nature chimique ou physicochimique, en l'absence de matériau adhésif sur cette surface. De préférence, la formulation vaccinale est maintenue sur une surface du dispositif, typiquement sur le backing du compartiment, par des forces électrostatiques ou des forces de Van der Waals. Dans un mode normal de mise en oeuvre, le dispositif contient une quantité de formulation vaccinale comprise entre 0, l �g/cm2 et 500 �g/cm2, de préférence entre 20 �g et 300 �g par cm2, plus préférentiellement entre 20 �g et 100 �g par cm2. Il est entendu que cette quantité peut être adaptée par l'homme du métier en fonction des objectifs, de la pathologie, de la durée du traitement, du sujet, etc. L'invention permet d'induire une réponse immune significative, même en l'absence d'adjuvant et de traitement de la peau. L'invention peut être utilisée pour la vaccination préventive ou thérapeutique contre tout type d'agent pathogène (virus, parasites, bactéries, protéines, etc.), contre des cellules tumorales ou contre des antigènes du soi, ou de traitement des individus allergiques. Les résultats présentés montrent l'induction d'une réponse spécifique d'antigène, notamment d'une réponse anticorps de type IgG. L'amplitude de la réponse immune peut être adaptée en modifiant les temps de pose du dispositif, et/ou en procédant à des applications répétées. Comme cela est illustré dans les exemples, la réponse immune induite, après trois applications du vaccin de seulement 6 heures, est équivalente à celle observée pour une durée d'application de 24 heures (exemple 2). Nous avons ainsi démontré qu'une hydratation maintenue sur des périodes allant de 6 heures à 24 heures était suffisante pour développer une réponse immunitaire, même sans traitement préalable de la peau ni co-administration d'adjuvant. Par ailleurs nous avons également prolongé le période d'application à 48 et à 72 heures (exemple 5). Les résultats obtenus montrent que le temps de 48 heures donne des résultats surprenants car la réponse anticorps spécifique augmente de presque un ordre de magnitude par rapport au temps de pose de 24 heures. Une application maintenue au- delà de 48 heures, par exemple un temps de pose de 72 heures, ne semble pas contribuer à augmenter davantage la réponse anticorps. Dans un mode de mise en oeuvre préféré, l'invention comprend l'application successive au sujet de deux dispositifs au moins, de préférence trois au moins, chaque application étant espacée de 7 à 30 jours environ, de préférence de 10 à 20 jours, typiquement de 15 jours environ. De préférence, pour chaque application, le dispositif est maintenu sur la peau pendant une période de 6 à 72 heures environ, de préférence de 6 à 48h environ, plus préférentiellement de 48 heures environ. 10 Un protocole particulièrement préféré pour l'induction d'une réponse immune comprend trois applications successives au moins d'un dispositif, pendant une période de 48 heures environ, chaque application étant espacée de 15 jours environ. Dans ce qui précède, le terme � environ � désigne une variation de + ou -10% par 15 rapport à la valeur donnée. L'invention montre aussi qu'une réponse anticorps importante est obtenue par vaccination épicutanée sur peau intacte lorsque la formulation vaccinale est sous forme sèche et est appliquée pendant une ou des périodes de 48h environ, de préférence 20 pendant des périodes répétées de 48h environ. L'invention est utilisable pour la vaccination contre tout antigène, chez tout mammifère. Elle peut être mise en oeuvre chez l'enfant ou l'adulte, est essentiellement non invasive, et ne nécessite pas l'emploi d'adjuvants. D'autres aspects et avantages de la présente invention apparaitront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. 25 Légende des Figures Figure 1 : A - Schéma du dispositif cutané avec compartiment de condensation: [1] anneau de matériel biocompatible, [2] disque du � backing � collé à l'aide d'un adhésif double face sur le disque, [3] rondelle de release liner à peler avant application protégeant l'adhésif. B - Schéma des flux de vapeur d'eau dans le compartiment de condensation. Figure 2 : Induction d'une réponse immune anticorps spécifique de l'antigène par voie épicutanée sur peau intacte sans co-administration d'adjuvants en utilisant un dispositif contenant un compartiment de condensation. Figure 3 : Induction d'une réponse immune anticorps anti-ovalbumine par voie épicutanée après 6 ou 24h d'application sur la peau d'un dispositif contenant un compartiment de condensation. Figure 4 : Rapport entre la quantité de vapeur d'eau entrée dans le compartiment et la quantité d'eau condensée en fonction du temps. : ^ : quantité d'eau accumulée dans le compartiment et • quantité d'eau condensée dans le compartiment. Quantité d'eau à l'état de vapeur après 20h. Quantité de vapeur d'eau qui a condensé après 20h. Figure 5 : Augmentation du pourcentage d'hydratation des différentes couches de l'épiderme (superficielle, superficielle et moyenne, épiderme entier) en fonction du temps d'application du dispositif contenant le compartiment de condensation. Figure 6 : Augmentation de la quantité d'eau accumulée à la surface de la peau en fonction du temps d'application du dispositif contenant le compartiment de condensation. Figure 7 : Potentialisation de la réponse immune anticorps anti-ovalbumine induite par voie épicutanée en prolongeant la durée d'application du dispositif contenant un compartiment de condensation sur la peau.30 Exemples Exemple 1 Préparation d'un dispositif cutanée contenant un compartiment de condensation. 5 Des dispositifs d'application cutanée possédant un compartiment de condensation ont été préparés en utilisant comme � backing � un film de polyéthylène (Origine 3M), qui est recouvert par un anneau de mousse, qui donne la hauteur souhaitée au compartiment, rendu adhésif sur les deux faces (épaisseur = 0,7 mm). Ce dispositif présente ainsi une 10 surface de diffusion sur la peau de 1 cm et un compartiment d'expansion de l'air diffusé à travers la peau de 70 mm3 (voir Figure lA). Plusieurs polymères présentant différentes perméabilités à la vapeur d'eau (MVTR, Moisture Vapor Transmission Rate) ont été utilisés, notamment le CoTrari 9706 15 (MVTR = 26,4 g/m2/24H), le CoTrari 9720 (MVTR = 9,4 g/m2/24H) et le CoTrari 9722 (MVTR = 7,9 g/m2/24H). Exemple 2 Induction d'une réponse immune anticorps spécifique de l'antigène par voie épicutanée 20 sans composé adjuvant ni traitement perforant ou abrasif de la peau. Des dispositifs d'administration cutanée contenant un compartiment de condensation, préparés selon l'exemple 1 mais d'un volume de 10mm3/cm2, chargés avec un antigène modèle l'ovalbumine (OVA) sous forme sèche, un antigène tumoral ou un vaccin 25 commercial contre la grippe, ont été appliqués durant 24 heures sur le dos de souris BALB/c femelles (n=6), tondu et épilé la veille des applications. Les applications ont été renouvelées 2 et 4 semaines après les premières. Les anticorps anti-antigènes de type IgG totales ont été dosés par ELISA dans les sérums des animaux prélevés 2 semaines après la dernière application. Les résultats présentés sur la figure 2 sont exprimés en 30 titre anticorps spécifique de l'antigène. Il s'agit pour le sera de chaque animal de l'inverse de la dilution à laquelle l'absorbance mesurée à 450 nm est égale au cut off déterminé à partir du sérum de souris naïves. Les résultats obtenus montrent l'induction d'une forte réponse immune spécifique d'antigène, et cela bien qu'aucun adjuvant n'ait été utilisé. Exemple 3 Induction d'une réponse immune anticorps anti-ovalbumine par voie épicutanée sans composé adjuvant après 6 ou 24h d'application sur la peau intacte. Des dispositifs d'administration cutanée contenant un compartiment de condensation, préparés selon l'exemple 1 mais d'un volume de 10mm3/cm2, chargés avec l'OVA sous forme sèche, ont été appliqués durant 6 ou 24 heures sur le dos de souris BALB/c femelles (n=6), tondu et épilé la veille des applications. Les applications ont été renouvelées 2 et 4 semaines après les premières. Les anticorps anti-antigènes de type IgG totales ont été dosés par ELISA dans les sera des animaux prélevés 2 semaines après la dernière application. Les résultats, présentés sur la Figure 3, sont exprimés en titre anticorps spécifique de l'antigène. Il s'agit pour le sera de chaque animal de l'inverse de la dilution à laquelle l'absorbance mesurée à 450 nm est égale au cut off déterminé à partir du sérum de souris naïves. Les résultats obtenus montrent l'induction d'une forte réponse immune spécifique d'antigène avec des temps de pose de 6 ou 24 heures. Exemple 4 Etude de la quantité et de l'état physique de d'eau disponible dans le compartiment de condensation La peau laisse s'évaporer une quantité physiologique de vapeur d'eau. Cette évaporation est exprimée par la PIE. Elle provoque une augmentation de la quantité de vapeur d'eau dans le compartiment de condensation. L'augmentation de la quantité de vapeur provoque à son tour une augmentation de la pression partielle de vapeur d'eau dans le compartiment. A partir d'une pression de 53,75 mbar à 35°C, le compartiment est en condition saturante. Au delà de cette pression, la vapeur se condense en eau liquide qui se dépose à la surface de la peau et peut remplir le compartiment de condensation. Par ailleurs, dans la composition du compartiment de condensation, le polymère du backing utilisé dans cet exemple n'est pas totalement imperméable et laisse s'échapper une certaine quantité de vapeur définie par sa perméabilité à la vapeur d'eau (Moisture Vapor Transmission Rate, MVTR). Ainsi, dans ce système, il existe un équilibre entre d'une part la quantité d'eau qui entre dans le compartiment sous forme de vapeur d'eau et celle qui en sort soit par transmission au travers du film polymère, soit par condensation. Ces différentes quantités ont été évaluées de la manière suivante : Q1 = PIE*S*t Q2 = MVTR*S'*t Q = Q1-Q2 P = nRT/V Avec Q, = masse de vapeur à chaque temps qui entre dans le compartiment ; Q2 = quantité de vapeur d'eau qui s'est échappé du polymère ; Q = quantité de vapeur d'eau restant dans le compartiment ; P = pression dans le compartiment ; S = surface de libération de la vapeur d'eau à travers la peau ; S' = surface de libération de la vapeur d'eau à travers le polymère ; t = le temps. Les quantités d'eau avant et après 20 heures d'application du compartiment de condensation ont été évaluées par des mesures de PIE sur des peaux prélevées des dos de rats hairless. Les déterminations ont été faites en comparaison avec les zones de la peau non soumisses au dispositif. Les fragments de peau ont été montés sur des cellules de diffusion de Franz. Dans le compartiment receveur, un tampon PBS pH = 7,4 permet de conserver la peau dans un état d'hydratation comparable à l'état physiologique. Quand les cellules de Franz sont prêtes, elles sont placées dans un bain marie à 37°C et conservées ainsi pendant deux heures avant toutes autres manipulations, de manière à équilibrer la température à celle des flux physiologiques. Les résultats, présentés sur la figure 4, montrent que l'eau introduite sous forme de vapeur dans le compartiment commence à se condenser assez rapidement après l'application du dispositif. D'après ces résultats, qui expriment les données initiales et finales du système, les quantités de vapeur d'eau et d'eau liquide calculées au bout de 20 heures sont, respectivement, de 1,08 mg/cm2 d'eau liquide et de 0,3 mg/cm2 sous forme de vapeur d'eau. D'après l'examen visuel au cours de l'expérience l'eau paraît s'accumuler sous forme liquide à la surface de la peau. Exemple 5 Augmentation du pourcentage d'hydratation des différentes couches de l'épiderme (superficielle, superficielle et moyenne, épiderme entier) au cours du temps après application du dispositif à compartiment de condensation. L'Hydrascan� est un appareil de mesure de l'hydratation de l'épiderme mis au point par la société Dermscan�. Le principe des mesures est basé sur le transfert thermique de passage (TTT) : une pulsation de chaleur constante est générée par un stimulateur proche du détecteur thermique et est propagée à travers l'épiderme. Chaque changement de température dans la peau est proportionnel à la quantité d'eau dans la peau (Girard P., Beraud A. and Sirvent A. û Study of three complementary techniques for measuring cutaneous hydration in vivo in human subjects: NMR spectroscopy, transient thermal transfer and corneometry û application to xerotic skin and cosmetics. û Skin Research and Technology, 2000, 6: 205-213). Les mesures sont données en mW/°C (c'est la conductance thermique, qui mesure la faculté de conduire la chaleur entre deux points, en fonction de la différence de t° entre 20 ces deux points). L'appareil permet de mesurer l'hydratation dans l'épiderme en distinguant 3 couches : la couche superficielle, la couche intermédiaire et la couche profonde de l'épiderme. Cette étude a été réalisée sur un groupe de 15 volontaires : femmes 18-50 ans, 25 caucasiennes, peau normale, dispositif avec compartiment de condensation de 70 mm3 appliqué sur l'avant bras à 28°C. La cinétique d'hydratation a été effectuée avec des mesures d'Hydrascan à temps : OH, 1H, 2H, 3H et 4H. Les déterminations d'hydratation de l'épiderme sous le compartiment de condensation ont été réalisées à chaque temps en comparaison avec une détermination sur une zone de la peau non soumisse à 30 l'application du compartiment de condensation. Les résultats obtenus sont présentés sur la Figure 5 et montrent une augmentation du degré d'hydratation dans le compartiment de condensation, dès la première heure d'application, hydratation qui peut être maintenue au cours du temps. Exemple 6 Augmentation de l'hydratation à la surface de la peau au cours du temps après l'application du dispositif à compartiment de condensation. Cette étude a été réalisée sur un groupe de 15 volontaires : femmes 18-50 ans, caucasiennes, peau normale, dispositif avec compartiment de condensation de 70 mm3 appliqué sur l'avant bras à 26°C. La détermination de la perte insensible en eau (PIE) a été effectuée avec un Tewameter 210 (Courage and Khazaka Electronic Gmbh., Kdln, Germany). La détermination de la quantité d'eau accumulée sous le compartiment de condensation, donc sur la peau, a été calculée par des mesures de PIE enregistrées chaque seconde pendant 90 secondes une fois que le dispositif a été enlevé. Les aires sous la courbe ont été calculées pour chaque temps de mesure. Les mesures ont été réalisées à Oh 1h, 2h, 3h et 4h après l'application du compartiment de condensation. Les résultats obtenus sont présentés sur la Figure 6 et montrent une augmentation de la quantité d'eau accumulée à la surface de la peau au cours du traitement. Exemple 7 Potentialisation de la réponse immune anticorps anti-ovalbumine induite par voie épicutanée en prolongeant la durée d'application sur la peau. Des dispositifs contenant un compartiment de condensation, préparés selon l'exemple 1 mais d'un volume de 10mm3/cm2, chargés avec l'OVA sous forme sèche, ont été appliqués durant 24 ou 48 heures sur le dos de souris BALB/c femelles (n=6), tondu et épilé la veille des applications. Les applications ont été renouvelées 2 et 4 semaines après les premières. Les anticorps anti-OVA de type IgG totales ont été dosés par ELISA dans les sera des animaux prélevés 2 semaines après la dernière application. Les résultats, présentés sur la figure 7, sont exprimés en titre anticorps spécifique de l'antigène. Il s'agit pour le sera de chaque animal de l'inverse de la dilution à laquelle l'absorbance mesurée à 450 nm est égale au cut off déterminé à partir du sérum de souris naïves. Les résultats montrent une réponse anticorps spécifique particulièrement prononcée pour des temps de pose de 48 heures. Revendications 1. Utilisation d'une formulation vaccinale pour la préparation d'une composition pour la vaccination épicutanée d'un mammifère, de préférence un humain, caractérisée en cc que la formulation vaccinale est sous forme sèche et dépourvue d'adjuvant, et en ce qu'elle est administrée par application sur la peau intacte du mammifère au moyen d'un dispositif cutanée formant au contact de la peau un compartiment de condensation contenant la formulation vaccinale. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en cc que ladite formulation vaccinale comprend un antigène et en ce que ledit dispositif cutané permet la pénétration de l'antigène dans l'épiderme et l'induction d'une réponse immune en l'absence d'adjuvant ou traitement préalable de la peau. 3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les parois du compartiment de condensation comprennent un matériau présentant un degré de perméabilité inférieur à 10 g/m2/24h environ. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le compartiment de condensation possède un volume compris entre 1 et 300 mm3/em2 de surface du dispositif, de préférence entre 2 et 100 mm3 par cm2 de surface. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le compartiment de condensation permet d'induire une augmentation du degré d'hydratation dans le compartiment de condensation et à la surface externe de l'épiderme de 50% au moins après une heure d'application. 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le dispositif est maintenu sur la peau par des moyens adhésifs. 7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la formulation vaccinale est sous forme de poudre. 2122 8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la formulation vaccinale est maintenue sur une surface du dispositif par des forces de nature chimique ou physicochimique, en l'absence de matériau adhésif sur cette surface. 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la formulation vaccinale est maintenue sur une surface du dispositif par des forces électrostatiques ou des forces de Van der Waals. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en cc que le dispositif contient une quantité de formulation vaccinale comprise entre 0,1 p.g et 500 lig par cm2 de surface, de préférence entre 20 tg et 300 tg par cm2 de surface, plus préférentiellement entre 20 gg et 100 �g par cm2 de surface. l i. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la formulation vaccinale comprend au moins un antigène de nature peptidique ou polypeptidique ou des conjugués polypeptidique avec des composants de différente nature chimique. 12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend I'application successive au sujet de deux dispositifs au moins, de préférence trois au moins, chaque application étant espacée de 7 à 30 jours environ, de préférence de 10 à 20 jours, typiquement de 15 jours environ. 13. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que pour chaque application, le dispositif est maintenu sur la peau pendant une période de 6 à 72 heures environ, de préférence de 6 à 48h environ, plus préférentiellement de 48 heures environ. 14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en cc qu'elle comprend trois applications successives au moins d'un dispositif, pendant une période de 48 heures environ, chaque application étant espacée de 15 jours environ. 15. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour la préparation d'un vaccin pour l'induction d'une réponse immunitaire contre et spécifique d'antigène.16. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour la préparation d'un vaccin pour l'induction d'une réponse anticorps de type 1gG. 17. Composition vaccinale, caractérisée en ce qu'elle comprend un dispositif d'administration cutanée formant un compartiment de condensation après application sur la peau d'un sujet, ledit compartiment de condensation comprenant une formulation vaccinale sous forme sèche et dépourvue de tout composé adjuvant. 18. Composition selon la revendication 17, caractérisée en ce que la formulation vaccinale est sous forme de poudre. 19. Composition selon la revendication 18, caractérisée en ce que la formulation vaccinale est maintenue sur une surface du compartiment de condensation au moyen de forces électrostatiques. 20. Utilisation d'une composition vaccinale selon l'une quelconque des revendications 17 à 19 pour la préparation d'un médicament pour l'induction d'une réponse immune chez un mammifère, caractérisée en ce que ledit dispositif d'administration cutanée est appliqué sur la peau non traitée du mammifère, pendant une période de 48 heures environ. 21. Utilisation selon l'une des revendications 1-16 et 20, caractérisée en ce que la formulation vaccinale comprend en outre, ou est co-administrée avec un composé immunomodulateur, choisi de préférence parmi une cytokine et un ligand de récepteur Toll.