Brevet FR2923839A1 — publié le 20090522

PRODUCTION DE PLANTES CLEISTOGAMES. L'invention est relative à de nouveaux moyens d'obtention et d'identification de plantes cléistogames, notamment de Brassicacées. La famille des Brassicacées, également dénommées crucifères, comprend de nombreuses plantes d'intérêt agronomique. On citera notamment des plantes du genre Brassica, auxquelles appartiennent notamment les choux, le colza, la navette, la moutarde, les navets, etc. D'autres plantes à usage alimentaire, telles que le cresson, la roquette, les radis, le raifort, ainsi que des plantes ornementales, telles que les giroflées, appartiennent également à cette famille. Enfin Arabidopsis thaliana, qui est une plante modèle largement utilisée pour les études génétiques et de biologie moléculaire, appartient également à la famille des Brassicacées. La Brassicacée dont la culture est la plus répandue est le colza (Brassica napus) issu d'un croisement naturel entre le chou (Brassica oleracea) et la navette (Brassica rapa). Le colza est cultivé notamment pour la production d'huile, pour l'alimentation animale, et depuis peu pour la production de biocarburant. Cette plante fait continuellement l'objet de recherches visant à son amélioration génétique, que ce soit par les techniques classiques de sélection variétale, ou plus récemment, par transgénèse. Le colza est une espèce de type allogame ; son pollen peut être transporté par le vent ou les insectes pollinisateurs sur des distances de plusieurs kilomètres, ce qui occasionne des difficultés lorsque l'on souhaite limiter une fécondation croisée entre différentes variétés de colza, par exemple lors de la sélection de lignées pures, ou de la production de semences. En outre, le colza est capable de s'hybrider avec des crucifères sauvages, telles que la ravenelle, ce qui pose un problème supplémentaire lors de la culture en champ de colzas génétiquement modifiés. Des mutants cléistogames de colza, permettant d'éviter cette dissémination du pollen, sont décrits dans le Brevet EP1037522 au nom de l'INRA. Ces mutants présentent des fleurs complètes, mais qui ne s'ouvrent pas à l'anthèse. Après un développement normal, les fleurs restent en général fermées jusqu'à la chute des pétales, qui a lieu après la fécondation. L'analyse génétique du caractère cléistogame a montré qu'il est contrôlé par un gène majeur (Clgl) semidominant, à effet additif. Ce gène n'avait toutefois pas été identifié jusqu'à présent, et la sélection des plantes contenant l'allèle mutant ne pouvait s'effectuer que sur la base de leur phénotype. Les plantes hétérozygotes pour la mutation qui présentent des fleurs incomplètement ouvertes, peuvent être difficiles à identifier, d'autant que l'expression de ce caractère est influencée par le fonds génétique et l'environnement. Les Inventeurs ont maintenant identifié le gène 15 Clgl du colza et mis en évidence la mutation responsable du caractère cléistogame. La séquence d'un fragment d'ADN génomique de colza (isolé de la variété Darmor Nain-bzh) contenant un allèle sauvage du gène Cigl est représentée dans la liste de 20 séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 1, et la séquence polypeptidique déduite est représentée sous le numéro SEQ ID NO: 2. La séquence d'un fragment d'ADN génomique de colza (isolé de la variété Primor-C1g) contenant un allèle du gène Clgl portant la mutation responsable du phénotype 25 cléistogame est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 3 , et la séquence polypeptidique déduite est représentée sous le numéro SEQ ID NO: 4 . Le produit de traduction déduit du gène Clgl 30 présente un degré élevé d'homologie avec le produit du gène At4g34100 d'Arabidopsis. La mutation responsable du phénotype cléistogame est une transversion C -> T en position 2157 de la séquence SEQ ID NO: 1, qui induit le remplacement de l'acide aminé proline en position 325 de la séquence SEQ ID NO: 2 par 35 l'acide aminé leucine. Cette mutation est située dans une région du gène qui est parfaitement (100%) conservée entre la protéine Clgl de colza et son homologue d'Arabidopsis. L'identification par les Inventeurs d'un gène impliqué dans la cléistogamie, ainsi que d'une mutation de ce gène conférant un phénotype cléistogame fournit des moyens facilitant l'obtention de plantes, notamment de Brassicacées, cléistogames, en permettant notamment de détecter la présence de ce gène dans des plantes issues de croisements ou de mutagénèse sans qu'il soit nécessaire d'attendre l'ouverture des boutons floraux, et en permettant également d'introduire ce caractère par transgénèse dans des plantes. On définit ici comme � protéine Clgl � tout polypeptide dont la séquence peptidique possède au moins 80%, de préférence au moins 85%, avantageusement au moins 90%, et de manière tout à fait préférée au moins 95% d'identité avec le polypeptide SEQ ID NO: 2, et contient la séquence suivante : DGLDDADGAEDVPFDELVGMQGPVFHL (SEQ ID NO: 5). Le gène correspondant est dénommé Clgl. Ces protéines Clgl appartiennent à la famille des protéines à doigts de zinc, et contiennent un domaine � RING-variant � et des domaines SSM4. Les domaines RING-variant et SSM4 sont connus en eux-mêmes, et sont respectivement désignés sous les références smart00744/PSSM-Id 48011 et COG5183/PSSMId 34782 dans la base de données CDD (Marchler-Bauer et al., Nucleic Acids Res., 35: D237-40, 2007). La présente invention a en conséquence pour objet une méthode pour produire une plante cléistogame, comprenant une étape consistant à inhiber totalement ou partiellement l'expression du gène codant un polypeptide Clgl, ladite plante présentant une inhibition ou réduction de l'ouverture des boutons floraux. Ladite inhibition peut être obtenue par mutation dudit gène par insertion d'un élément transposable ou d'un TDNA, par EMS, mutagénèse physique (Rayons X, UV), ou par transformation de ladite plante par un construit en anti-sens ou sur-expression, ou par un ARNi. De la même façon il est possible d'altérer totalement ou partiellement l'activité du polypeptide Clgl via des méthodes connues de l'homme du métier, et notamment par l'expression dans une plante d'un polypeptide compétitif au polypeptide Clgl endogène ou de par la surexpression d'un polypeptide qui bloquerait l'activité de la protéine Clgl endogène. De préférence ladite plante est le colza. Avantageusement ladite inhibition est obtenue par l'expression d'un polypeptide mutant résultant de la mutation d'un polypeptide Clgl tel que défini ci-dessus, ladite mutation induisant le remplacement de la proline en position 13 de la séquence SEQ ID NO: 5 par un acide aminé autre que la proline. La présente invention a également pour objet un polypeptide mutant dont l'expression dans une plante entraîne chez celle-ci une inhibition de l'ouverture des boutons floraux, caractérisé en ce qu'il résulte de la mutation d'un polypeptide Clgl tel que défini ci-dessus, ladite mutation induisant le remplacement de la proline en position 13 de la séquence SEQ ID NO: 5 par un acide aminé autre que la proline. Selon un mode de réalisation préféré de la présente invention, la proline en position 13 de la séquence SEQ ID NO: 5 est remplacée par une leucine. La présente invention a également pour objet un procédé pour déterminer si une plante contient un gène mutant dont l'expression induit une inhibition de l'ouverture des boutons floraux, caractérisé en ce qu'il comprend la détection de la présence ou de l'absence, dans du matériel biologique provenant de ladite plante, d'un polynucléotide codant pour un polypeptide mutant conforme à l'invention. La présente invention a également pour objet des outils pour la mise en oeuvre d'un procédé conforme à l'invention ; il s'agit notamment de sondes, ou de couples d'amorces d'acide nucléique permettant la détection de la mutation définie ci-dessus. Des sondes d'acide nucléique conformes à l'invention sont capables de s'hybrider sélectivement, dans des conditions de stringence appropriées, soit avec un allèle du gène-cible Clgl codant pour un polypeptide mutant conforme à l'invention (également dénommé ci-après allèle Clg), soit avec un allèle sauvage (c'est-à-dire un allèle codant pour un polypeptide comprenant la séquence SEQ ID NO: 5, également dénommé ci-après allèle clg) dudit gène. Cette hybridation sélective se traduit au minimum par un signal d'hybridation significativement plus important avec l'allèle ciblé qu'avec l'autre allèle du même gène, et de préférence par la présence d'un signal d'hybridation avec l'allèle ciblé et l'absence de signal d'hybridation avec l'autre allèle. Les principes généraux de conception et d'utilisation de sondes spécifiques permettant l'analyse de polymorphismes ne concernant qu'un petit nombre de nucléotides, voire un seul nucléotide, ont été initialement décrits par SAIKI et al., (Nature, 324,163-166, 1986), et sont bien connus en eux-mêmes. Des conditions de stringence appropriées à une hybridation sélective peuvent être facilement déterminées par l'homme du métier pour un polynucléotide donné; elles dépendent notamment de la longueur du polynucléotide, de sa composition en bases, et du pourcentage de différences entre les allèles à discriminer, au niveau de la portion du gène ciblée par l'hybridation. Des amorces d'acide nucléique conformes à l'invention permettent d'amplifier, à partir de matériel génétique issu de la plante à tester, une séquence cible correspondant à une région du gène Clgl dans laquelle est localisée la mutation définie ci-dessus. La présence ou l'absence de cette mutation peut être détectée sur le produit d'amplification par diverses méthodes connues en elles-mêmes, par exemple par séquençage de celui-ci, ou par hybridation sélective avec une sonde d'acide nucléique conforme à l'invention ou par digestion avec une enzyme de restriction reconnaissant une séquence-cible présente exclusivement, soit dans le produit d'amplification issu de l'allèle sauvage, soit dans celui issu de l'allèle mutant ; on peut également effectuer une amplification sélective de l'allèle recherché, en utilisant au moins une amorce d'amplification choisie de manière à n'observer une amplification que si cet allèle est présent dans le matériel génétique analysé. A partir des informations fournies par la présente invention, l'homme du métier peut facilement obtenir des 5 sondes et amorces permettant la détection de la mutation définie ci-dessus. A titre d'exemple non-limitatif, un couple d'amorces utilisable pour la mise en oeuvre d'un procédé conforme à l'invention est constitué par les amorces 10 suivantes : T2S095 F ACGCTGATGGTGCTGAAGAAGATC (SEQ ID NO: 6) T2S095 R :: GTATTTTCCAATGCTGAGTCA (SEQ ID NO: 7) La présente invention a également pour objet des kits pour la mise en oeuvre d'un procédé conforme à 15 l'invention. Ces kits comprennent par exemple : - au moins une sonde d'acide nucléique conforme à l'invention, associée à des moyens de visualisation de l'hybridation, ou - au moins un couple d'amorces conforme à 20 l'invention, associé à des réactifs permettant la mise en œuvre d'une réaction d'amplification et/ou à des moyens de détection du produit d'amplification, et éventuellement à une ou plusieurs enzymes de restriction, ainsi que, le cas échéant, des témoins positifs et/ou des témoins négatifs 25 d'amplification. La présente invention englobe également des polynucléotides isolés comprenant une séquence codant pour un polypeptide mutant conforme à l'invention. Ces polynucléotides peuvent être par exemple des fragments d'ADN génomique, ou des 30 ADNc, codant pour ledit polypeptide mutant, isolés à partir d'une plante contenant la mutation, ou obtenus par mutagenèse dirigée à partir d'un polynucléotide codant pour une protéine Clgl de type sauvage. Avantageusement, des polynucléotides conformes à 35 l'invention sont des cassettes d'expression, dans lesquelles une séquence codant pour un polypeptide mutant conforme à l'invention, ou une séquence antisens ou une séquence d'ARNi ciblant le gène C1g1, est placée sous contrôle d'un promoteur approprié. Ledit promoteur peut être le promoteur endogène du gène C1g1, ou bien un promoteur hétérologue. Dans le second cas, il n'est pas obligatoire d'utiliser un promoteur possédant le même profil d'expression que le promoteur endogène C1g1 ; on peut également utiliser un promoteur ubiquitaire et constitutif tel que le promoteur 35S du CaMV, ou un promoteur inductible ou tissu-spécifique. La présente invention englobe également des vecteurs recombinants, résultant de l'insertion d'une cassette d'expression conforme à l'invention dans un vecteur hôte approprié. Les cassettes d'expression et les vecteurs d'expression conformes à l'invention peuvent, bien entendu, comprendre en outre d'autres séquences, usuellement employées dans ce type de constructions, telles que des terminateurs de transcription, des séquences de tête (leader sequences), des sites de polyadénylation, ainsi que, le cas échéant, des séquences amplificatrices (séquences � enhancer � de transcription et de traduction). Ils peuvent également comprendre des séquences permettant le suivi de la transformation, ainsi que l'identification et/ou la sélection des cellules ou organismes transformés. Il s'agit notamment de gènes rapporteurs (par exemple celui de la beta-glucuronidase (GUS), celui de la luciférase, ou celui de la "green fluorescent protein" (GFP)), conférant à ces cellules ou organismes un phénotype aisément reconnaissable, ou bien de gènes marqueurs de sélection (par exemple gènes de résistance à un antibiotique, ou à un herbicide). Le choix du promoteur, celui du vecteur-hôte et celui des séquences additionnelles pouvant être insérées dans les cassettes et les vecteurs d'expression conformes à l'invention de régulation de l'expression, ainsi que celui du vecteur-hôte, peut être effectué, de manière classique, par l'homme du métier en fonction notamment de critères tels que les cellules et plantes-hôtes choisies, le profil d'expression souhaité dans la plante hôte, les protocoles de transformation envisagés, etc. La présente invention englobe également des cellules-hôtes génétiquement transformées par une cassette d'expression conforme à l'invention. On entend par cellule ou organisme transformé par un polynucléotide, toute cellule ou organisme dont le contenu génétique a été modifié par transfert dudit polynucléotide dans ladite cellule ou ledit organisme, quelle que soit la méthode de transfert qui a été utilisée, et de manière que l'information génétique apportée par ledit polynucléotide soit intégrée dans l'ADN chromosomique ou demeure extra- chromosomique. Les cellules hôtes peuvent être des cellules procaryotes, ou eucaryotes. Dans le cas de cellules procaryotes, il peut notamment s'agir d'Agrobactéries telles qu'Agrobacterium tumefaciens ou Agrobacterium rhizobium. Dans le cas de cellules eucaryotes, il peut s'agir notamment de cellules végétales, issues de plantes dicotylédones ou monocotylédones. La présente invention a également pour objet des plantes génétiquement transformées par au moins un polynucléotide conforme à l'invention, et notamment des plantes transgéniques comprenant dans leur génome au moins une copie d'un transgène contenant un polynucléotide conforme à l'invention. Ces plantes transgéniques présentent un phénotype cléistogame. On définit ici comme plante transgénique une plante transformée chez laquelle l'information génétique exogène apportée par le polynucléotide transformant est intégrée de manière stable dans l'ADN chromosomique, sous forme de transgène, et peut ainsi être transmise aux descendants de ladite plante. Cette définition englobe donc également les descendants des plantes résultant de la transgénèse initiale, dès lors qu'ils contiennent dans leur génome une copie du transgène. Différentes méthodes d'obtention de plantes transgéniques sont bien connues en elles-mêmes de l'homme du métier. Généralement, ces méthodes impliquent la transformation de cellules végétales, la régénération de plantes à partir des cellules transformées, et la sélection des plantes ayant intégré le transgène. Des techniques très nombreuses de transformation de cellules végétales germinales ou somatiques (isolées, sous forme de cultures de tissus ou d'organe, ou sur la plante entière), et de régénération des plantes sont disponibles. Le choix de la méthode 1a plus appropriée dépend généralement de la plante concernée. Le matériel végétal (protoplastes, cals, boutures, graines, etc...) obtenu à partir des cellules transformées ou des plantes transgéniques conformes à l'invention fait également partie de l'objet de la présente invention. L'invention englobe également les produits obtenus à partir des plantes transgéniques conformes à l'invention, notamment le fourrage, le bois, les feuilles, les tiges, les racines, les fleurs et les fruits. La présente invention a également pour objet l'obtention de plantes cléistogames par croisement de plantes mutantes conformes à l'invention avec d'autres plantes ne possédant pas le caractère cléistogame. Elle englobe également les plantes résultant de ce croisement. La présente invention s'applique notamment aux plantes de la famille des Brassicacées, et plus particulièrement aux espèces du genre Brassica, et notamment au colza. Elle peut également s'appliquer à d'autres plantes dicotylédones ou des monocotylédones, et de manière particulièrement avantageuse, aux espèces allogames. La présente invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples non-limitatifs illustrant la détection de la mutation Clg, et la construction de plantes transgéniques exprimant le gène muté. EXEMPLE 1: DETECTION DE LA MUTATION Clg PAR PCR CHEZ LE COLZA Afin de développer un marqueur PCR allèle- spécifique qui permette de distinguer l'allèle sauvage clg de l'allèle muté Clg (cléistogame) et ainsi de diagnostiquer la présence de la mutation chez diverses variétés de colza, nous avons défini un couple d'amorces dont l'une a été modifiée de façon à créer dans le produit d'amplification un site de restriction Bg1II (AGATCT) s'il s'agit de la mutation Clg (mutant cléistogame). Par contre, ce site de restriction n'est pas présent s'il s'agit de l'allèle sauvage clg. La séquence de ces amorces est la suivante : T2S095 F : ACGCTGATGGTGCTGAAGAAGATC, T2S095 R : GTATTTTCCAATGCTGAGTCA Les modifications apportées pour créer le site de restriction BglII sont soulignées. Ce marqueur a été analysé sur des lignées HD de la population � B001-Clg x Yudal �, ainsi que sur des lignées quasi-isogéniques, contenant soit l'allèle sauvage clg (lignées AKAMAR, ASCONA, BRISTOL, CAPITOL, CCH 1083, EXPRESS, FALCON, GIN 3683, H 133), soit l'allèle muté Clg (lignées AKAMAR CLG, ASCONA CLG, BRISTOL CLG, CAPITOL CLG, CCH 1083 CLG, EXPRESS CLG, FALCON CLG, GIN 3683 CLG, obtenues par croisements et rétrocroisements avec la lignée mutante Primor-Clg de départ). Les résultats sont illustrés sur la Figure 1. Légende de la Figure 1 : 1: AKAMAR ; 2 : AKAMAR CLG; 3 : ASCONA ; 4 : ASCONA CLG ; 5 : BRISTOL ; 6 : BRISTOL CLG ; 7 : CAPITOL ; 8 : CAPITOL CLG ; 9 : CCH 1083 ; 10 : CCH 1083 CLG ; 11 : EXPRESS ; 12 : EXPRESS CLG ; 13 : FALCON ; 14 : FALCON CLG ; 15 : GIN 3683 ; 16 : GIN 3683 CLG ; 17 : H 133 (zeruca). L'allèle sauvage peut être distingué de l'allèle muté après digestion BglII par une différence de taille de 20 pb clairement visualisable sur un gel d'agarose de 3%. Ces résultats montrent qu'il y a une association absolue entre le profil du marqueur et le caractère cléistogame. EXEMPLE 2 CONSTRUCTION DE COLZAS TRANSGENIQUES EXPRIMANT L'ALLELE CLG Construction des vecteurs d'expression Deux vecteurs binaires ont été choisis pour les 35 constructions . 1) Vecteur pBINPLUS (Engelen et al., Transgenic Research 4: 288-90, 1995) avec sélection kanamycine dans les bactéries et dans les plantes. 2) Vecteur pBIB-Hygro (Becker F, Nucleic Acids Res. 18:203, 1990) avec sélection kanamycine dans les bactéries et hygromycine dans les plantes. Un insert de 5999 pb comprenant - une séquence de 895 pb avant le codon d'initiation de la traduction de Clgl, contenant le promoteur de Clgl ; - la séquence codant pour Clgl (4144 pb) ; - une séquence de 960 pb en aval du codon stop, 10 contenant la région 3'UTR du gène Clgl ; a été cloné dans chacun de ces vecteurs, au site XbaI. Cet insert est schématisé sur la Figure 2. Ces inserts ont été obtenus à partir. de deux formes alléliques 15 du gène, issues de deux plantes différentes : a- Darmor-nain-clgl issu du cultivar Darmor-nain : il s'agit d'un allèle sauvage, ne conférant pas le caractère cléistogamie b- Primor-Clgl : il s'agit de l'allèle muté conférant le 20 caractère de cléistogamie. Le Tableau I ci-dessous indique les différences (SNP) entre ces deux formes alléliques, et leurs positions sur la séquence SEQ ID NO: 1: Tableau 1 Formes SNP1 SNP2 SNP3 SNP4 SNP5 SNP6 alléliques (conférant le caractère cléistogame) Position sur Position sur Position sur Position sur Position sur Position sur SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 1: 1: 1: 1: 1: 1: 959 960 1030 1065 1096 2157 Darmor-nain- A G G C A C cIg1 Primor-CIg1 A _ G G C A T 25 L'allèle Primor-Clgl diffère de l'allèle Darmornain-clgl par le seul SNP6. Les ADNs ont été extraits à partir de clones BAC par la méthode de lyse alcaline, purifiés au chloroforme, et digérés par l'enzyme XbaI. Les fragments digérés sont séparés 30 sur un gel d'agarose 1%. Les fragments contenant le gène et son promoteur ont été ensuite découpés du gel, électro-élués et sous-clonés dans les vecteurs pBINPLUS et pBIB-Hygro. Les clones positifs ont été sélectionnés par PCR à l'aide du couple d'amorces décrit à l'Exemple 1. Au total 4 constructions ont été réalisées : a- Forme allélique Darmor-nain-clgl - Construction 1 : allèle Darmor nain-clgl dans le vecteur pBINPLUS. - Construction 2 : allèle Darmor nain-clgi dans le vecteur pBIB-Hygro. b- Forme allélique Primor-Clgl - Construction 3 : allèle Primor-Clgl dans le vecteur pBINPLUS. - Construction 4 allèle Primor-Clgl dans le vecteur pBIBHygro. Transformation des plantes Les 4 constructions décrites ci-dessus ont été transformées dans des bactéries Agrobacterium tumefaciens, souche C58. Des plantes de colza ont été transformées par ces Agrobactéries. Le génotype utilisé pour les transformations est la variété Westar, colza de printemps d'origine canadienne. Transformation Les graines de colza variété Westar sont désinfectées à l'éthanol 70% pendant 2 mn puis mises dans une solution commerciale d'eau de javel, additionnée de quelques gouttes de Tween 80 pendant 20 mn. Elles sont ensuite rincées 3 fois 5 mn avec de l'eau ultra-pure stérile. Puis elles sont mises à germer sur du milieu MS (Murashige et al., Physiol Plant 15(3): 473-497, 1962), additionné de 30 g/1 de saccharose et 8 g/1 de phytagar (Duchefa), pH 5.7 dans des boîtes de Pétri de 94 mm de diamètre. Les graines sont semées à raison de 15 graines par boite, mises à 4°C pendant 3 nuits et transférées en chambre de culture à 22/20°C, 16h/8h de photopériode avec un éclairement de 70 }mol/m2/seconde. La transformation est basée sur le protocole développé par Moloney et al. (Plant. Oeil Rep 8:238-242, 1989), et Sparrow et al. (Theor. Appl. Genet. 108:1249-1255, 2004) pour le colza. Les pétioles des cotylédons sont excisés à partir des plantules 7 jours après leur mise en germination. Ils sont ensuite trempés dans la suspension d'Agrobacterium puis repiqués sur le milieu de coculture (milieu de germination contenant 2 mg.l-1 de benzyl amino purine) à raison de 10 explants/boîte. Les boîtes sont ensuite placées en chambre de culture sur une étagère non éclairée, pendant 72h. Puis les explants sont transférés sur le milieu de sélection (milieu de co-culture additionné de 400 mg/1 de TimentinR (mélange de ticarcilline et d'acide clavulanique) et 25 mg/1 de kanamycine comme agents sélectifs). Les expiants sont repiqués toutes les 3 semaines sur le même milieu. Régénération des plantes transformées Les bourgeons verts qui apparaissent sur les cals à la base des explants sont excisés et repiqués en flacons de 150 ml sur le milieu d'enracinement (milieu Murashige et Skoog/2) contenant 50 mg/1 d'IBA (acide indolbutyrique), 10 g/1 de saccharose, 0.8% de phytagar, 400mg/1 de TimentinR et 50 mg/1 de kanamycine. Ils sont repiqués régulièrement sur le même milieu jusqu'à ce que les racines se développent. Les plantules enracinées sont alors repiquées en mini-serre, dans des mottes de substrat favorisant le développement des racines. Revendications 1) Méthode pour produire une plante cléistogame comprenant une étape consistant à inhiber totalement ou partiellement l'expression du gène codant un polypeptide possédant au moins 80% d'identité avec le polypeptide SEQ ID NO: 2 et contenant la séquence suivante: DGLDDADGAEDVPFDELVGMQGPVFHL (SEQ IL) NO: 5), ladite plante présentant une inhibition ou réduction de l'ouverture des boutons floraux. 2) Méthode selon la revendication 1 caractérisée en ce que la plante est le colza. 3) Méthode selon une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que l'=inhibition est obtenue par mutation dudit gène par insertion d'un élément transposable ou d'un T-DNA, par EMS, mutagénèse physique (Rayons X, UV), ou transformation de ladite plante par un construit en anti-sens ou sur expression, ou RNAi. 4) Méthode selon une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que l'inhibition est obtenue par l'expression d'un polypeptide mutant résultant de la mutation d'un polypeptide possédant au moins 80% d'identité avec le polypeptide SEQ ID NO: 2 et contenant la séquence suivante: DGLDDADGAEDVPFDELVGMQGPVFHL (SEQ ID NO: 5), ladite mutation induisant le remplacement de la proline en position 13 de la séquence SEQ ID NO: 5 par un acide aminé autre que la proline. 5) Polypeptide mutant dont l'expression dans une plante entraîne chez celle-ci une inhibition de l'ouverture des boutons floraux, caractérisé en ce qu'il résulte de la mutation d'un polypeptide possédant au moins 80% d'identité avec le polypeptide SEQ ID NO: 2 et contenant la séquence suivante: DGLDDADGAEDVPFDELVGMQGPVFHL (SEQ ID NO: 5), ladite mutation induisant le remplacement de la proline en position 13 de la séquence SEQ ID NO: 5 par un acide aminé autre que la proline. 6) Polynucléotide codant pour un polypeptide mutant selon la revendication 5. 7) Procédé pour déterminer si une plante contient un gène mutant dont. l'expression induit une inhibition del'ouverture des boutons floraux, caractérisé en ce qu'il comprend la détection. de la présence ou de l'absence, dans du matériel biologique provenant de ladite plante, d'un polynucléotide codant pour un polypeptide mutant selon la revendication 5. 8) Sonde d'acide nucléique utilisable pour la détection d'un polynucléotide codant un polypeptide mutant selon la revendication 5. 9) Couple d'amorces oligonucléotidiques utilisables 10 pour la détection d'un polynucléotide codant un polypeptide mutant selon la revendication 5. 10) Couple d'amorces selon la revendication 9 constitué par les amorces suivantes : T2S095 F : ACGCTGATGGTGCTGAAGAAGATC (SEQ ID NO: 6) 15 T2S095 R : GTATTTTCCAATGCTGAGTCA (SEQ ID NO: 7) 11) Cassette d'expression recombinante comprenant un polynucléotide selon la revendication 6 placé sous contrôle d'un promoteur approprié. 12) Vecteur recombinant résultant de l'insertion, 20 dans un vecteur-hôte approprié, d'une cassette d'expression selon la revendication 11. 13) Cellule-hôte génétiquement transformée par une cassette d'expression selon la revendication 11. 14) Plante transgénique comprenant un transgène 25 contenant une cassette d'expression selon la revendication 11.