Brevet FR2933304A1 — publié le 20100108

COMPOSITION SYNERGIQUE OSTEOGENIQUE La présente invention concerne le domaine des formulations ostéogéniques et plus particulièrement des formulations des protéines ostéogéniques appartenant à la famille des Bone Morphogenetic Proteins, BMPs. Les Bone Morphogenetic Proteins (BMPs) sont des facteurs de croissance impliqués dans les mécanismes d'ostéoinduction. Les BMPs appelées également Osteogenic Proteins (OPs) ont été initialement caractérisées par Urist en 1965 (Urist MR. Science 1965; 150, 893). Ces protéines isolées à partir d'os cortical ont la capacité d'induire la formation d'os chez un grand nombre d'animaux (Urist MR. Science 1965; 150, 893). La présente invention concerne l'association à une Bone Morphogenic Protein, BMP, d'un autre facteur de croissance ayant des pouvoirs chémo-attractant et angiogénique tel que le Platelet Derived Growth Factor, PDGF, pour favoriser la formation osseuse. Cette association entraine une synergie entre les deux facteurs de croissance et permet de créer une masse osseuse supérieure à celle obtenue avec un seul de ces facteurs de croissance y compris à des doses plus faibles que celles communément utilisées. Il est connu de l'homme de l'art que les BMPs permettent de différentier les cellules souches en ostéoblastes capables de générer de l'os. Deux produits thérapeutiques sont commercialisés pour des applications ostéogéniques : x Infuse (Medtronic) qui est une formulation de BMP-2 pour la fusion des vertèbres lombaires et des fractures de type non-union du tibia. x OP1 (Stryker), produit à base de BMP-7 également pour la fusion des vertèbres lombaires. Une équipe universitaire japonaise dont les travaux ont été publiés dans le British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery, 2003, 41, 173-178, a établi que chez le rat, du PDGF-BB et de la BMP-2 sont sécrétés lors du processus de cicatrisation d'une fracture de la mandibule. Il est admis que le PDGF-BB n'est pas un facteur de différentiation cellulaire, ce qui est confirmé par le fait que le PDGF-BB ne permet pas de créer des formations osseuses sur un site ectopique. Toutefois, un produit à base de PDGF-BB a été développé par BioMimetic pour la régénération osseuse dans le cas de maladie périodontale. Dans la demande W02007/092622, l'association du PDGF à d'autres facteurs de croissance est évoquée sans que cette évocation ne soit supportée par aucun résultat ni exemple. Une autre équipe japonaise a publié dans le Journal of Bone and Minerai Research, 2002, 17, 2, 257-265, que le PDGF-BB a un rôle dans le processus de remodelage osseux mais qu'il est responsable : x d'un surcroît d'activité des ostéoclastes, responsables de la dégradation de l'os x d'une inhibition des ostéoblastes responsables de la formation de l'os. Aucun de ces travaux n'a enseigné qu'un effet synergique du point de vue de l'ostéosynthèse puisse être obtenu pour une formulation associant un facteur de croissance de chacune des deux familles précitées. Il est du mérite de la demanderesse d'avoir obtenu de façon surprenante, une formulation à base de BMP et de PDGF qui se révèle favoriser, de façon synergique, l'ostéosynthèse. L'invention concerne ainsi une composition synergique ostéogénique comprenant au moins un facteur de croissance ostéogénique, et au moins un facteur de croissance, ayant un pouvoir chémo-attractant, et angiogénique. 25 30 On entend par facteur de croissance ostéogéniques ou BMP, seule ou en combinaison, une BMP choisie dans le groupe des BMPs (Bone Morphogenetic Proteins) thérapeutiquement actives. Plus particulièrement les protéines ostéogéniques sont choisies dans le groupe constitué par la BMP-2 (Dibotermine-alpha), la BMP-4, la BMP-7 (Eptotermine-alpha), la BMP-14 et le GDF-5 seul ou en combinaison. Les BMP utilisées sont des BMP recombinantes humaines, obtenues selon les techniques connues de l'homme de l'art ou achetées auprès de fournisseurs comme par exemple la société Research Diagnostic Inc. (USA). On entend par facteurs de croissance chémo-attractants et angiogéniques une protéine choisie dans le groupe constitué par le PDGF, le VEGF ou le FGF, seuls ou en combinaison. L'invention concerne ainsi une composition synergique ostéogénique comprenant au moins un facteur de croissance ostéogénique, et au moins un facteur de croissance, ayant un pouvoir chémo-attractant et angiogénique, le PDGF. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition synergique comprenant au moins une protéine ostéogénique choisie dans le groupe constitué par la BMP-2 (Dibotermine-alpha), la BMP-4, la BMP-7 (Eptotermine-alpha), la BMP-14 et le GDF-5 seul ou en combinaison et au moins un facteur de croissance ayant un pouvoir chémo-attractant et angiogénique, le PDGF. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant au moins de la BMP-2 et du PDGF-BB. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant au moins de la BMP-7 et du PDGF-BB.35 L'invention concerne ainsi une composition synergique ostéogénique comprenant au moins un facteur de croissance ostéogénique, et au moins un facteur de croissance, ayant un pouvoir chémo-attractant, et angiogénique, le VEGF. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition synergique comprenant au moins une protéine ostéogénique choisie dans le groupe constitué par la BMP-2 (Dibotermine-alpha), la BMP-4, la BMP-7 (Eptotermine-alpha), la BMP-14 et le GDF-5 seul ou en combinaison et au moins un facteur de croissance, ayant un pouvoir chémo-attractant, et angiogénique, le VEGF. L'invention concerne ainsi une composition synergique ostéogénique comprenant au moins un facteur de croissance ostéogénique, et au moins un facteur de croissance, ayant un pouvoir chémo-attractant, et angiogénique, le FGF. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition synergique comprenant au moins une protéine ostéogénique choisie dans le groupe constitué par la BMP-2 (Dibotermine-alpha), la BMP-4, la BMP-7 (Eptotermine-alpha), la BMP-14 et le GDF-5 seul ou en combinaison et au moins un facteur de croissance, ayant un pouvoir chémo-attractant, et angiogénique, le FGF. Dans un autre mode de réalisation, la formation d'os est d'autant plus favorisée que les facteurs de croissance sont formulés avec un polymère amphiphile capable de former des complexes avec lesdits facteurs de croissance. L'invention concerne ainsi une composition synergique telle que précédemment définie caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un polysaccharide anionique choisi dans le groupe constitué par les polysaccharides anioniques fonctionalisés par des dérivés hydrophobes choisis parmi les dérivés des dextrans portant des substituts hydrophobes tels que le tryptophane et les dérives du tryptophane. Selon l'invention le dextran fonctionnalisé peut répondre aux formules générales suivantes : Formule I • R étant une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, 10 tels que O, N ou/et S, et ayant au moins une fonction acide • F étant soit un ester, un thioester, un amide, un carbonate, un carbamate, un éther, un thioéther ou une amine, • AA étant un reste amino-acide hydrophobe, L ou D, produit du couplage entre l'amine de l'amino-acide et un acide porté par le 15 groupement R, ledit amino-acide hydrophobe étant choisi parmi les dérivés du tryptophane, tels que le tryptophane, le tryptophanol, le tryptophanamide, le 2-indole éthylamine et leurs sels de cation alcalin. i représente la fraction molaire de substituant F-R-[AA]n par unité 20 glycosidique et est comprise entre 0,1 et 2, n représente la fraction molaire des R substitués par AA et est comprise entre 0,05 et 1. Lorsque R n'est pas substitué par AA, alors le ou les acides du groupement R sont des carboxylates de cation, alcalin de préférence comme 25 Na, K, ledit dextran étant amphiphile à pH neutre. Dans un mode de réalisation le cation alcalin est Na+.5 Dans un mode de réalisation, F est soit un ester, un carbonate, un carbamate ou un éther. Dans un mode de réalisation, le polysaccharide selon l'invention 5 est un carboxymethyl dextran (DMC) de formule IV. R=H o R = *0 Na Formule IV ou l'acide correspondant. 10 Dans un mode de réalisation, le polysaccharide selon l'invention est un ester monosuccinique de dextran ou succinicaciddextran (DSA) de formule V : R=H o R = ONa o 15 ou l'acide correspondant. Dans un mode de réalisation, le polysaccharide selon l'invention est caractérisé en ce que le groupe R est choisi dans les groupes suivants : Formule V F OH OH 20 F ou leurs sels de cations alcalins. Dans un mode de réalisation, le dextran selon l'invention est caractérisé en ce que les dérivés du tryptophane sont choisis parmi les esters du tryptophane de formule II OE N H Formule II E étant un groupement pouvant être : • un alkyle linéaire ou ramifié en Cl à C8. • un alkylaryle ou un arylalkyle linéaire ou ramifié en C6 à C20. Dans un mode de réalisation le dextran selon l'invention est un carboxyméthyldextran modifié par l'ester éthylique du tryptophane de formule VI . R=H o R = *0 Na Formule VI Dans un mode de réalisation, le dextran selon l'invention est un ester monosuccinique de dextran ou succinicaciddextran (DSA) modifié par l'ester éthylique du tryptophane de formule VII : R=H O R = ONa O O CO2Et R= 7 NH O Formule VII Dans un mode de réalisation, le dextran selon l'invention est caractérisé en ce que l'amino-acide hydrophobe est la phenylalanine et ses 5 dérivés alcool, amide ou décarboxylés. Dans un mode de réalisation, le dextran selon l'invention est caractérisé en ce que les dérivés de la phenylalanine sont choisis parmi les esters de cet acide aminé de formule III. Formule III 15 E étant défini comme précédemment. Le dextran peut avoir un degré de polymérisation m compris entre 10 et 10000. 20 Dans un mode de réalisation, il a un degré de polymérisation m compris entre 10 et 1000. Dans un autre mode de réalisation, il a un degré de polymérisation m compris entre 10 et 500. 10 OE Dans un autre mode de réalisation, la formation d'os est également favorisée en présence de sels solubles de cations divalents ou multivalents. L'invention concerne une composition caractérisée en ce qu'elle comporte en outre un cation divalent choisi dans le groupe constitué par les cations du calcium ou du magnésium ou du zinc. Elle concerne une composition caractérisée en ce que le sel soluble de cation divalent est un sel de calcium dont le contre-ion est choisi parmi le chlorure, le D-gluconate, l'oxalate, l'hydroxyde, le formate, le D-saccharate, le phosphate, le carbonate, l'acétate, le sulfate, le L-ascorbate, le L-tartrate, le L-lactate, le glutamate, l'aspartate. Dans un mode de réalisation le sel soluble de cation divalent est du chlorure de calcium. Dans un mode de réalisation, elle concerne une composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle comprend en outre des cations multivalents choisis dans le groupe constitué par les cations du fer, de l'aluminium, des polymères cationiques choisis parmi la polylysine, la spermine, la protamine et la fibrine seuls ou en combinaison. L'invention concerne également une composition telle que précédemment définie caractérisée en ce quelle comporte en outre une matrice organique choisie parmi les matrices à base de collagène naturel purifié, et stérilisé de préférence réticulé. L'invention concerne également l'utilisation de compositions synergiques selon l'invention pour la préparation et la fabrication de produits pharmaceutiques destinés à la reconstruction ou régénération osseuse sous formes de compositions topiques par exemple sous forme d'implants. Les compositions synergiques selon l'invention sont préparées par solubilisation des facteurs de croissance dans une solution tamponnée à pH physiologique. Dans un mode de réalisation, une solution de polymère est additionnée à la solution de facteurs de croissance. Dans un mode de réalisation, la solution est additionnée à une matrice choisie parmi les matrices à base de collagène naturel purifié, et stérilisé de préférence réticulé. Dans un mode de réalisation d'implants, les formulations selon l'invention sont lyophilisées avant mise en oeuvre. L'invention concerne ainsi une formulation telle que précédemment définie caractérisée en ce qu'elle est sous forme de lyophilisat. On entend par lyophilisat le produit ou la composition résultant d'une opération de lyophilisation. La lyophilisation est une technique de sublimation de l'eau permettant une déshydratation de la composition. Cette technique est couramment utilisée pour la conservation et la stabilisation des protéines. La réhydratation d'un lyophilisat est très rapide et permet l'obtention aisée d'une formulation prête à l'emploi, ladite formulation pouvant ête réhydratée avant l'implantation ou implantée sous sa forme déshydratée, la réhydratation intervenant alors, après implantation, par le contact avec les fluides biologiques. Les compositions ostéogéniques selon l'invention sont utilisées par implantation par exemple pour combler des défauts osseux, pour effectuer des fusions vertébrales ou des réparations maxillo-faciales ou pour le traitement de l'absence de consolidation des fractures (pseudarthrose). 25 30 35 Dans ces différentes utilisations thérapeutiques, la taille de la matrice et la quantité totale de facteurs de croissance sont fonction du volume du site à combler. Dans un mode de réalisation, pour un implant vertébral les doses de facteurs de croissance seront comprises entre 0,05 mg à 8 mg, de préférence entre 0,1 mg et 4 mg, encore de préférence entre 0,1 mg et 2 mg, alors que les doses couramment admises dans la littérature sont comprises entre 8 et 12 mg de BMP-2. S'agissant des utilisations en réparation maxillo-faciale ou dans le traitement de la pseudarthrose, par exemple, les doses administrées seront de l'ordre de la dizaine de pg. 15 Dans un mode de réalisation, les solutions de cation ont des concentrations comprises entre 0,01 et 1 M, de préférence entre 0,05 et 0,2 M. Dans un mode de réalisation les solutions de polysaccharide anionique ont des concentrations comprises entre 1 mg/ml et 2 mg/ml, de 20 préférence entre 5 et 100 mg/ml, encore de préférence entre 10 et 50 mg/ml.. L'invention concerne également l'utilisation de la composition selon l'invention comme implant osseux. 25 Dans un mode de réalisation, ladite composition pourra être utilisée en combinaison avec un dispositif prothétique du type prothèse vertébrale ou cage de fusion vertébrale. Elle concerne également les méthodes thérapeutiques et 30 chirurgicales utilisant ladite composition dans la reconstruction osseuse. L'invention concerne également le procédé de préparation des compositions selon l'invention qui comprend au moins les étapes suivantes : a) on dispose d'une matrice organique, 35 b) on imprègne ladite matrice d'une solution comprenant les deux facteurs de croissance et/ou le ou les complexes 10 polysaccharides anioniques amphiphiles facteurs de croissance et/ou le polysaccharide anionique amphiphile, c) on additionne à la matrice obtenue à l'étape b) une solution d'un sel soluble de cation au moins divalent, d) on procède éventuellement à la lyophilisation de la matrice obtenue à l'étape c). Dans un mode de réalisation à l'étape c), la solution de sel soluble de cation au moins divalent est une solution de cation divalent. Dans un mode de réalisation les sels solubles de cation divalent sont des sels de calcium dont le contre-ion est choisi parmi le chlorure, le D-gluconate, l'oxalate, l'hydroxyde, le formate, le D-saccharate, le phosphate, le carbonate, l'acétate, le sulfate, le L-ascorbate, le L-tartrate, le L-lactate, le glutamate, l'aspartate. Dans un mode de réalisation le sel soluble de cation divalent est du chlorure de calcium. L'invention est illustrée par les exemples suivants. Synthèse du Carboxymethyldextran fonctionnalisé par le sel de sodium du tryptophane (polymère 1) Etape 1: carboxyméthyldextran modifié par l'ester éthylique du 25 tryptophane Ce polymère amphiphile est synthétisé à partir d'un carboxyméthyldextran ayant un degré de substitution en carboxyméthyl par unité saccharidique de 1,0 et une masse molaire moyenne de 60 kg/mol. L'ester éthylique du tryptophane est greffé sur les acides carboxyliques de ce polymère selon une méthode 30 classique de couplage en solvant organique employant le chloroformiate d'éthyle et la N-MéthylMorpholine. Après dilution du milieu réactionnel dans l'eau et réglage du pH à 7 par ajout de NaOH 1 N, le polymère est purifié par ultrafiltration. Le polymère final est caractérisé par : x un degré de substitution en TrpOEt par unité saccharidique de 0,45, 35 déterminé par RMN 1H dans D2O/NaOD. 15 20 x un degré de substitution en carboxylates (méthylcarboxylate) de 0,55, déterminé par dosage potentiométrique. Etape 2 : carboxyméthyldextran modifié par le tryptophane, sel de sodium 5 polymère 1 Ce polymère amphiphile est obtenu par hydrolyse basique du carboxyméthyldextran modifié par l'ester éthylique du tryptophane. De la soude 1 N (3.79 ml) est ajoutée à une solution aqueuse du carboxyméthyldextran 10 modifié par l'ester éthylique du tryptophane (64 ml à 31 mg/ml) pour atteindre pH 12,7. La solution obtenue est agitée une nuit à température ambiante. Le polymère est purifié par dialyse contre de l'eau (NaCl 0.9% et H2O). Le polymère final est caractérisé par : x un degré de substitution en TrpONa par unité saccharidique de 0,45, 15 déterminé par RMN 1H dans D2O/NaOD. x un degré de substitution en carboxylates (méthylcarboxylate, carboxylate du tryptophane) de 1,0 déterminé par dosage potentiométrique. 20 Exemple 1 : Préparation de l'implant éponge de collagène / rhBMP-2 Implant 1 : 40 pl d'une solution de rhBMP-2 à 0,5 mg/ml sont 25 introduits stérilement, dans une éponge de collagène réticulée de 200 mm3 stérile de type Helistat (Integra LifeSciences, Plainsboro, New Jersey). La solution est laissée à incuber pendant 30 minutes dans l'éponge de collagène avant utilisation. La dose de BMP-2 est de 20 pg. 30 Exemple 2 : Préparation de l'implant éponge de collagène / rhBMP-2/ PDGF-BB Implant 2 : 20 pl d'une solution de rhBMP-2 à 1,0 mg/ml ainsi que 20 pl d'une solution de rhPDGF-BB à 1,0 mg/ml sont introduits stérilement, 35 dans une éponge de collagène réticulée de 200 mm3 stérile de type Helistat (Integra LifeSciences, Plainsboro, New Jersey). La solution est laissée à incuber pendant 30 minutes dans l'éponge de collagène avant utilisation. La dose de BMP-2 ainsi que celle de PDGF-BB sont de 20 pg chacune. Exemple 3 : Préparation du complexe rhBMP-2/Polymère 1 Formulation 1 : 50 pl d'une solution de rhBMP-2 à 1,5 mg/ml sont mélangés à 100 pl d'une solution de Polymère 1 à 37,5 mg/ml. Les solutions de rhBMP-2 et de Polymère 1 sont tamponnées à pH 7,4. Cette solution est laissée à incuber deux heures à 4°C et filtrée stérilement sur 0,22 pm. Formulation 2 : 50 pl d'une solution de rhBMP-2 à 0,75 mg/ml sont mélangés à 100 pl d'une solution de Polymère 1 à 37,5 mg/ml. Les solutions de rhBMP-2 et de Polymère 1 sont tamponnées à pH 7,4. Cette solution est laissée à incuber deux heures à 4°C et filtrée stérilement sur 0,22 pm. Exemple 4 : Préparation du complexe rhPDGF-BB/ Polymère 1 Formulation 3 : 50 pl d'une solution de rhPDGF-BB à 1,5 mg/ml 20 sont mélangés à 100 pl d'une solution de Polymère 1 à 37,5 mg/ml. Les solutions de rhPDGF-BB et de Polymère 1 sont tamponnées à pH 7.4. Cette solution est laissée à incuber deux heures à 4°C et filtrée stérilement sur 0,22 pm. 25 Exemple 5 : Préparation des implants éponge collagène / complexe BMP-2/Polymère 1 en présence de chlorure de calcium lyophilisés Implant 3: 40 pl de la Formulation 1 sont introduits dans une 30 éponge de collagène réticulée de 200 mm3 stérile de type Helistat (Integra LifeSciences, Plainsboro, New Jersey). La solution est laissée à incuber pendant 30 minutes dans l'éponge de collagène avant de rajouter 100 pl d'une solution de chlorure de calcium à une concentration de 18,3 mg/ml. L'éponge est alors ensuite congelée et lyophilisée stérilement. La dose de BMP-2 est de 35 20 pg. 10 15 Exemple 6 : Préparation des implants éponge collagène / complexe BMP-2/PDGF-BB/Polymère 1 en présence de chlorure de calcium lyophilisés Implant 4 : 20 pl de la Formulation 2 ainsi que 20 pl de la Formulation 3 sont introduits dans une éponge de collagène réticulée de 200 mm3 stérile de type Helistat (Integra LifeSciences, Plainsboro, New Jersey). La solution est laissée à incuber pendant 30 minutes dans l'éponge de collagène avant de rajouter 100 pl d'une solution de chlorure de calcium à une concentration de 18,3 mg/ml. L'éponge est alors ensuite congelée et lyophilisée stérilement. La dose de BMP-2 est de 5 pg et celle de PDGF-BB de 10 pg. Exemple 7 : Evaluation du pouvoir ostéoinductif des différentes formulations L'objectif de cette étude est de démontrer le pouvoir ostéoinductif des différentes formulations dans un modèle de formation ectopique d'os chez le rat. Des rats mâles de 150 à 250 g (Sprague Dawley OFA û SD, Charles River Laboratories France, B.P. 109, 69592 l'Arbresle) sont utilisés pour cette étude. Un traitement analgésique (buprenorphine, Temgesic�, Pfizer, France) est administré avant l'intervention chirurgicale. Les rats sont anesthésiés par inhalation d'un mélange 02 isoflurane (1-4%). La fourrure est éliminée par rasage sur une large zone dorsale. La peau de cette zone dorsale est désinfectée à l'aide d'une solution de povidone iodine (Vetedine� solution, Vetoquinol, France). Des incisions paravertébrales d'environ 1 cm sont effectuées afin de dégager les muscles dorsaux paravertébraux droit et gauche. L'accès aux muscles est effectué par incision transfaciale. Chacun des implants est placé dans une poche de telle manière qu'aucune compression sur celles-ci ne puisse être exercée. Quatre implants sont implantés par rat (deux implants par site). L'ouverture des implants est ensuite suturée au moyen d'un fil polypropylene (Prolene 4/0, Ethicon, France). La peau est refermée au moyen d'une suture non-absorbable. Les rats sont ensuite replacés dans leurs cages respectives et gardés en observation durant leur rétablissement. A 21 jours, les animaux sont anesthésiés par une injection de tiletamine-zolazepam (ZOLETIL�25-50 mg/kg, IM, VIRBAC, France). Les animaux sont ensuite euthanasiés par injection d'une dose de pentobarbital (DOLETHAL�, VETOQUINOL, France). Un observation macroscopique de chaque site est ensuite réalisée, tout signe d'intolérance locale (inflammation, nécrose, hémorrhagie) et la présence de tissu osseux et/ou cartilagineux est enregistrée et côtée selon le barème suivant : 0 : absence, 1 : faible, 2 : modéré, 3 : marqué, 4 : important. Chacun des implants est retiré de son site d'implantation et des photographies macroscopiques sont prises. La taille et le poids des implants sont ensuite déterminés. Chaque implant est ensuite conservé dans une solution de formol à 10% tamponnée. Résultats : Cette expérience in vivo permet de mesurer l'effet ostéoinducteur de la BMP-2 en plaçant l'implant dans un muscle du dos d'un rat. Ce site non osseux est dit ectopique. Les observations macroscopiques des expiants nous permettent d'évaluer la présence des tissus osseux et la masse des implants. Implant rhBMP-2 rhPDGF-BB (pg) Présence de Masse des (pg) tissus osseux implants (mg) Implant 1 20 - 3.6 37 Implant 2 20 20 3.8 68 Implant 3 20 - 3.8 267 Implant 4 5 10 3.8 401 Une dose de 20 pg de BMP-2 dans une éponge à collagène (Implant 1) permet d'obtenir au bout de 21 jours des implants ossifiés avec un poids moyen de 37 mg. Pour la même dose de BMP-2 associé à 20 pg de PDGF-BB, la masse des implants a presque doublé puisque les implants pèsent en moyenne 68 mg. Le PDGF-BB stimule donc bien l'activité ostéogénique de la BMP-2 et une activité synergique est observée. 30 Cette observation est encore plus marquée en présence d'une formulation à base de complexes de BMP-2 et de PDGF-BB et de chlorure de calcium. Un implant contenant 20 pg de BMP-2 associés à 1 mg de Polymère 1 conduit à des os d'une masse moyenne de 267 mg. Lorsque l'implant contient seulement 5 pg de BMP-2 et 10 pg de PDGF-BB associés à 1 mg de Polymère 1, la masse des os explantés est très supérieure, en moyenne de 401 mg. REVENDICATIONS1. Composition synergique ostéogénique comprenant au moins un facteur de croissance ostéogénique, et au moins un facteur de croissance, 5 ayant un pouvoir chémo-attractant, et angiogénique. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le facteur de croissance ostéogénique est choisi dans le groupe des BMPs (Bone Morphogenetic Proteins) thérapeutiquement actives. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que les protéines ostéogéniques sont choisies dans le groupe constitué par la BMP-2 (Dibotermine-alpha), la BMP-4, la BMP-7 (Eptotermine-alpha), la BMP-14 et le GDF-5 seuls ou en combinaison. 4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que le facteur de croissance chémo-attractant et angiogénique est une protéine choisie dans le groupe constitué par le PDGF, le VEGF ou le FGF, seuls ou en combinaison. 20 5. Composition synergique ostéogénique selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant au moins un facteur de croissance ostéogénique, et au moins un facteur de croissance, ayant un pouvoir chémoattractant, et angiogénique, le PDGF. 25 6. Composition synergique selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant au moins une protéine ostéogénique choisie dans le groupe constitué par la BMP-2 (Dibotermine-alpha), la BMP-4, la BMP-7 (Eptotermine-alpha), la BMP-14 et le GDF-5 seule ou en 30 combinaison et au moins un facteur de croissance, ayant un pouvoir chémoattractant, et angiogénique, le PDGF. 7. Composition synergique selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant au moins de la BMP-2 et du 35 PDGF-BB. 10 15 8. Composition synergique selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant au moins de la BMP-7 et du PDGF-BB. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un polysaccharide anionique choisi dans le groupe constitué par les polysaccharides anioniques fonctionnalisés par des dérivés hydrophobes choisis parmi les dérivés des dextrans fonctionnalisés portant des substituts hydrophobes tels que le tryptophane et les dérivés du tryptophane. 10. Composition selon la revendication 9, caractérisée en ce que le dextran fonctionnalisé répond à la formule générale suivante : Formule I • R étant une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement 20 branchée et/ou insaturée comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S, et ayant au moins une fonction acide • F étant soit un ester, un thioester, un amide, un carbonate, un carbamate, un éther, un thioéther ou une amine, • AA étant un reste amino-acide hydrophobe, L ou D, produit du 25 couplage entre l'amine de l'amino-acide et un acide porté par le groupement R, ledit amino-acide hydrophobe étant choisi parmi les dérivés du tryptophane, tels que le tryptophane, le tryptophanol, le tryptophanamide, le 2-indole éthylamine et leurs sels de cation alcalin.15i représente la fraction molaire de substituant F-R-[AA]n par unité glycosidique et est comprise entre 0,1 et 2, n représente la fraction molaire des R substitués par AA et est comprise entre 0,05 et 1. Lorsque R n'est pas substitué par AA, alors le ou les acides du groupement R sont des carboxylates de cation, alcalin de préférence comme Na, K, ledit dextran étant amphiphile à pH neutre. 11. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle comporte en outre un sel soluble de cation divalent choisi dans le groupe constitué par les cations du calcium ou du magnésium ou du zinc. 12. Composition selon la revendication 11, caractérisée en ce que le sel soluble de cation divalent est un sel de calcium dont le contre-ion est choisi parmi le chlorure, le D-gluconate, l'oxalate, l'hydroxyde, le formate, le D-saccharate, le phosphate, le carbonate, l'acétate, le sulfate, le L-ascorbate, le L-tartrate, le L-lactate, le glutamate, l'aspartate. 13. Composition selon la revendication 12, caractérisée en ce que le sel soluble de cation divalent est du chlorure de calcium. 14. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce quelle comporte en outre une matrice choisie parmi les matrices à base de collagène naturel. 15. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle comprend en outre des cations multivalents choisis dans le groupe constitué par les cations du fer, de l'aluminium, des polymères cationiques choisis parmi la polylysine, la spermine, la protamine et la fibrine seuls ou en combinaison. 16. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle est sous forme de lyophilisat.