Brevet FR2925338A1 — publié le 20090626

PEPTIDE ANPIMICROBIEN, MEDICAMENT ET COMPOSITION PHARMACEUTIQUE LE CONTENANT La présente invention concerne un nouveau peptide 5 antimicrobien. Le traitement des infections microbiennes, en particulier des infections bactériennes est toujours un enjeu majeur de nos jours. En effet, malgré l'avancée constante de la recherche et la mise sur le marché de 10 nouvelles molécules, de nouvelles résistances, notamment aux antibiotiques, apparaissent et il devient de plus en plus délicat de traiter certaines infections, notamment en milieu hospitalier avec les risques d'infections nosocomiales. 15 L'existence et l'apparition constante de bactéries de plus en plus résistantes aux antibiotiques actuels induit une importante demande de la part de l'industrie pharmaceutique et rend absolument nécessaire la découverte de nouvelles familles d'antibiotiques. 20 Depuis quelques années, la recherche s'est tournée vers une nouvelle famille de molécules antibiotiques encore peu étudiée : les peptides. Ces molécules, généralement issues d'invertébrés, sont des molécules dont la cible est la membrane bactérienne. Par 25 conséquent, pour acquérir une résistance vis-à-vis de ce type de molécules, les micro-organismes devraient changer la composition et l'organisation de leurs lipides membranaires. Cette solution coûteuse d'un point de vue évolutif explique pourquoi la résistance des 30 microorganismes vis-à-vis de ce type d'antibiotiques n'est que rarement référencée. Ainsi, au cours de recherches structurales poussées, la Demanderesse a synthétisé un nouveau peptide antimicrobien, ne présentant aucune homologie de structure primaire avec d'autres molécules décrites dans la littérature. L'activité antibactérienne de ce peptide a été testée en laboratoire : il s'agit d'un antibiotique à large spectre d'activité, inhibant la croissance de bactéries Gram+ et de bactéries Gram-. La présente invention concerne donc un peptide de 14 acides aminés dont la séquence en acides aminés est la suivante : KKKKPLFGLFFGLF (SEQ ID No. 1 dans la liste de séquences en annexe), ses dérivés et ses fragments présentant une activité antimicrobienne. A titre de � dérivés � du peptide de l'invention, on peut citer les peptides ayant subi au moins une addition, et/ou au moins une substitution, et/ou au moins une délétion d'un acide aminé, et présentant une activité antimicrobienne. Les dérivés au sens de l'invention peuvent notamment être choisis parmi les peptides dans lesquels au moins une leucine est substituée par une isoleucine. Les dérivés du peptide de l'invention peuvent être ceux dans lesquels un ou plusieurs acides aminés sont substitués par des acides aminés naturels de conformation D, des acides aminés rares notamment 1'hydroxyproline, 1'hydroxylysine, 1'allohydrolysine, la 6-N méthylysine, la N-éthylglycine, la N-méthylglycine, la N-éthylasparagine, l'allo-isoleucine, la N-méthylisoleucine, la N-méthylvaline, la pyroglutamine, l'acide amino-butyrique et les acides aminés synthétiques notamment l'ornithine, la norleucine, la norvaline, la cyclohexyl-alanine, et les oméga-acides aminés. Des dérivés particuliers du peptide de l'invention sont des peptides dans lesquels une, deux ou les trois leucine(s) est(sont) substituée(s) par une(des) isoleucine(s). L'invention couvre également les peptides dont la chaîne latérale d'un ou plusieurs des acides aminés est substituée par des groupements qui ne modifient pas l'activité antimicrobienne du peptide de l'invention. On peut citer également à titre de dérivés les peptides qui présentent une modification posttraductionnelle et/ou une modification chimique en particulier une glycosylation, une amidation, une acylation, une acétylation, une méthylation ainsi que les peptides qui portent un groupement protecteur. On entend par � groupement protecteur � selon la présente invention, tout groupement permettant d'éviter la dégradation du peptide de l'invention, comme notamment le tertiobutyloxycarbonyle et le fluorènométhoxycarbonyle. A titre de � dérivés � du peptide de l'invention, on entend également des peptides présentant au moins 70%, 75%, 85%, et/ou au moins 90% d'identité avec le peptide de séquence SEQ ID No. 1 dans la liste de séquences en annexe, et présentant une activité antimicrobienne. A titre de � fragments � du peptide de l'invention, on entend des fragments d'au moins 10 acides aminés qui présentent une activité antimicrobienne. En particulier, l'invention concerne des fragments de 10, 11, 12 et 13 acides aminés qui présentent une activité antimicrobienne. L'invention concerne également un polypeptide comprenant un peptide de l'invention ou l'un de ses dérivés ou fragments. Selon l'invention, on entend par � polypeptide � un peptide de plus de 14 acides aminés, notamment de 15 à 100 acides aminés, préférentiellement de 15 à 50 acides aminés, plus préférentiellement de 15 à 30 acides aminés. L'invention concerne plus particulièrement un polypeptide comprenant un peptide de l'invention ou l'un de ses dérivés ou fragments dans lequel la queue de lysines en N-terminal est allongée, c'est-à-dire qu'elle comprend au moins une lysine supplémentaire à la suite de celles déjà présentes. De préférence, la queue de lysines est allongée en N-terminal avec 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 lysines. L'invention envisage également un polypeptide comprenant un peptide selon l'invention ou l'un de ses dérivés ou fragments dans lequel la chaîne d'acides aminés en C-terminal est allongée par une succession d'acides aminés choisis parmi la leucine, l'isoleucine, la phénylalanine et la glycine. De préférence, l'extrémité C-terminale du peptide est allongée avec 1 à 15 acides aminés choisis parmi la leucine, l'isoleucine, la phénylalanine et la glycine. L'invention porte de plus sur un polypeptide comprenant le peptide de l'invention ou l'un de ses dérivés ou fragments dans lequel l'une et/ou l'autre des extrémités dudit peptide comprend un ou plusieurs acides aminés nécessaires à son expression et/ou son ciblage dans un organisme hôte. Le polypeptide de l'invention peut présenter un peptide signal ou de transit de façon à diriger la sécrétion du peptide ou polypeptide de l'invention dans un organisme hôte. Le peptide, ses dérivés et ses fragments tout comme les polypeptides de l'invention peuvent être synthétisés chimiquement selon des techniques connues de l'homme du métier. Ces techniques sont notamment celles de la synthèse sur support polymérique du type résine, par stratégie BOC (t-Butoxycarbonyl) et/ou stratégie FMOC (9-Fluorenylmethyloxycarbonyl). L'invention concerne également un polynucléotide caractérisé en ce qu'il code le peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments ou un polypeptide de l'invention. On entend par "polynucléotide" selon la présente invention, une séquence nucléique de type ADN ou ARN, de préférence ADN, notamment double brin. L'homme du métier connaissant le code génétique et la séquence en acides aminés du peptide de l'invention est capable de synthétiser ou d'isoler un polynucléotide codant le peptide de l'invention par criblage de banques d'acide nucléique en utilisant un ou plusieurs oligonucléotides déduits à partir de la séquence en acides aminés du peptide de l'invention ou de l'un de ses dérivés ou fragments ou du polypeptide selon l'invention. L'homme du métier a également à sa disposition des logiciels informatiques capables, à partir d'une séquence d'acides aminés, de fournir des séquences nucléotidiques correspondantes (Protéine en code reverse). L'invention concerne également les polynucléotides qui comprennent des modifications au niveau d'un ou plusieurs nucléotides résultant de la dégénérescence du code génétique et qui codent pour une même séquence d'acides aminés du peptide de l'invention. L'invention a également pour objet des polynucléotides ayant une séquence nucléotidique complémentaire des polynucléotides définis ci-dessus ainsi que les ARN correspondants. La présente invention concerne également un vecteur de clonage et/ou d'expression caractérisé en ce qu'il contient un polynucléotide selon l'invention, ledit vecteur pouvant être utilisé pour transformer un organisme hôte et exprimer dans ce dernier le peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments ou un polypeptide de l'invention. De façon avantageuse, le vecteur de clonage et/ou d'expression contient, outre le polynucléotide codant un peptide ou un polypeptide de l'invention, au moins un élément choisi dans le groupe des promoteurs constitutifs, des promoteurs inductibles, des éléments terminateurs. De façon préférée, ledit vecteur comprend, liés entre eux de façon opérationnelle, un promoteur, un polynucléotide codant le peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments ou un polypeptide de l'invention et un élément terminateur. On entend par "liés entre eux de façon opérationnelle" selon l'invention, des éléments liés entre eux de façon à ce que le fonctionnement d'un des éléments soit affecté par celui d'un autre. A titre d'exemple, un promoteur est lié de façon opérationnelle à une séquence codante lorsqu'il est capable d'affecter l'expression de cette dernière. Les éléments régulateurs de la transcription, de la traduction et de la maturation des peptides éventuellement compris dans le vecteur sont connus de l'homme du métier et ce dernier est capable de les choisir en fonction de l'organisme hôte dans lequel l'expression ou le clonage doivent être réalisés. Le vecteur de l'invention est avantageusement choisi parmi un plasmide, un cosmide, un bactériophage et un virus, en particulier un baculovirus. De façon préférée, le vecteur de l'invention est un vecteur à réplication autonome comportant des éléments permettant son maintien et sa réplication dans l'organisme hôte comme une origine de réplication. En outre, le vecteur peut comporter des éléments permettant sa sélection dans l'organisme hôte comme, par exemple, un gène de résistance à un antibiotique ou un gène de sélection qui assurent la complémentation avec le gène respectif délété au niveau du génome de l'organisme hôte. De tels vecteurs de clonage et/ou d'expression sont bien connus de l'homme du métier et largement décrits dans la littérature. L'invention concerne également un organisme hôte caractérisé en ce qu'il est transformé à l'aide d'un vecteur de l'invention. Par organisme hôte selon la présente invention, on entend tout organisme mono ou pluricellulaire, inférieur ou supérieur, dans lequel un polynucléotide de l'invention est introduit pour la production d'un peptide ou d'un polypeptide de l'invention. L'homme du métier connaît différentes méthodes pour introduire de façon efficace un polynucléotide dans un organisme hôte et ce, afin que, dans l'organisme hôte, le peptide ou polypeptide codé par ledit polynucléotide soit produit. A titre d'exemple et de façon non exhaustive, cette méthode peut être une électroporation, une lipofection, une transformation biologique d'un végétal en utilisant Agrobacterium tumefasciens, etc... Selon une forme préférée de l'invention, l'organisme hôte est un microorganisme tel qu'une levure, une bactérie ou un champignon. La transformation de tels microorganismes permet de produire le peptide de l'invention à échelle semi-industrielle ou industrielle. L'homme du métier connaît de tels microorganismes et sait comment les transformer. Selon une autre forme de l'invention, l'organisme 25 hôte est une cellule animale telle qu'une cellule de mammifère. Selon une autre forme de l'invention, l'organisme hôte est une cellule végétale ou une plante. Par � cellule végétale � on entend, selon la 30 présente invention, toute cellule issue d'une plante et pouvant constituer des tissus indifférenciés tels que des cals, des tissus différenciés tels que des embryons, des parties de plantes, des plantes ou des semences. Par � plante �, on entend selon l'invention, tout organisme multicellulaire différencié capable de photosynthèse, en particulier des monocotylédones ou des dicotylédones, plus particulièrement des plantes de culture destinées ou non à l'alimentation animale ou humaine. L'organisme hôte selon l'invention est donc choisi parmi les microorganismes, les cellules animales, les cellules végétales et les plantes. Enfin, l'invention vise l'application des propriétés antimicrobiennes du peptide de l'invention ou de l'un de ses dérivés ou fragments ou du polypeptide de l'invention pour prévenir et/ou traiter les infections microbiennes tant chez l'homme que chez l'animal. En effet l'activité antimicrobienne, en particulier antibactérienne, des dérivés et des fragments du peptide de l'invention a été mise en évidence grâce aux tests in vitro décrits ci-après dans les exemples. Les tests mis en œuvre ont révélé une activité antibactérienne à large spectre, tant sur les bactéries Gram + que sur les bactéries Gram -. Dans le cadre de la présente invention, on entend par � propriétés antimicrobiennes �, aussi bien des propriétés antibactériennes que des propriétés antivirales, antiparasitaires et antifongiques. L'invention concerne donc un médicament caractérisé en ce qu'il comprend à titre d'agent actif le peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments de l'invention ou un polypeptide de l'invention. Classiquement, on entend par � médicament �, toute substance ou composition présentée comme possédant des propriétés curatives ou préventives à l'égard des maladies humaines ou animales, ainsi que tout produit pouvant être administré à l'homme ou à l'animal en vue d'établir un diagnostic médical ou de restaurer, corriger ou modifier leurs fonctions organiques. L'invention concerne aussi une composition pharmaceutique comprenant à titre d'agent actif le peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments ou un polypeptide de l'invention et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. La composition pharmaceutique de l'invention peut en outre comprendre un autre principe actif tel qu'un autre agent antimicrobien. Par "véhicule pharmaceutiquement acceptable", on entend selon la présente invention, toute substance qui est ajoutée au peptide ou à l'un de ses dérivés ou fragments ou au polypeptide de l'invention pour favoriser leur transport, et/ou éviter leur dégradation substantielle dans ladite composition et/ou préserver leurs propriétés antimicrobiennes. Le véhicule est choisi en fonction du type d'application de la composition. Notamment, lorsque la composition est appliquée à un usage pharmaceutique en santé humaine et animale, l'homme du métier choisira le véhicule pharmaceutiquement acceptable adapté à la voie d'administration de la composition pharmaceutique de l'invention. Ainsi, les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont constituées par au moins un véhicule pharmaceutiquement acceptable et le peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments ou le polypeptide de l'invention sous forme libre ou sous forme d'un sel d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable, à l'état pur ou associé à tout autre produit pharmaceutiquement compatible. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être employées par voie orale, parentérale, rectale ou topique. A titre de compositions solides pour administration orale, on peut citer les comprimés, les capsules dures, les poudres, etc... Dans ces compositions, le peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments ou le polypeptide de l'invention sont mélangés à un ou plusieurs diluants inertes classiquement utilisés, et éventuellement à d'autres substances, tels que par exemple un lubrifiant, un colorant, un enrobage etc... A titre de compositions liquides pour administration orale ou oculaire, on peut citer les suspensions, les solutions, les émulsions, les sirops pharmaceutiquement acceptables contenant des diluants inertes classiquement utilisés, et éventuellement d'autres substances comme des produits mouillants, édulcorants, épaississants, etc... Les compositions stériles pour administration parentérale peuvent être des solutions aqueuses ou non, des suspensions ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer l'eau, le propylèneglycol, des huiles végétales ou d'autres solvants organiques convenables. Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, comme des agents mouillants, isotonisants, émulsifiants, etc... Les compositions pour l'administration topique peuvent être par exemple des crèmes, lotions, collutoires, gouttes nasales ou oculaires ou aérosols. Dans les compositions pharmaceutiques objet de la présente invention, la quantité de peptide ou de l'un de ses dérivés ou fragments ou de polypeptide objet de l'invention avantageusement utilisée est comprise entre 0,1 et 90% en poids. Cependant, il est évident que l'homme du métier saura adapter cette quantité en fonction du type de compositions pharmaceutiques et en fonction du mode d'administration desdites compositions. Par ailleurs, l'objet de l'invention s'étend également au peptide de l'invention ou à l'un de ses dérivés ou fragments, ou au polypeptide de l'invention, ou au médicament de l'invention, ou à la composition de l'invention pour la mise en oeuvre d'une méthode de traitement thérapeutique ou diagnostic du corps humain ou animal. L'invention concerne également l'utilisation du peptide de l'invention ou de l'un de ses dérivés ou fragments ou du polypeptide de l'invention pour la fabrication d'un médicament ou d'une composition pharmaceutique destiné(e) au traitement des infections microbiennes. L'objet de l'invention s'étend par ailleurs également au peptide de l'invention ou à l'un de ses dérivés ou fragments, ou au polypeptide de l'invention, ou au médicament de l'invention, ou à la composition de l'invention pour son utilisation comme antimicrobien. Au sens de l'invention, on entend par � antimicrobien � aussi bien antibactérien qu'antiviral, antiparasitaire et antifongique. La présente invention concerne également une méthode pour prévenir et/ou traiter une infection microbienne. La présente méthode comprend l'administration à un sujet d'une quantité efficace d'un peptide, ou de l'un de ses dérivés ou fragments, d'un polypeptide ou d'un polynucléotide selon la présente invention. Par sujet, on entend dans la présente invention tout animal ou tout humain pour lequel une infection microbienne et, plus particulièrement, une infection bactérienne a été diagnostiquée mais également tout animal ou tout humain susceptible de souffrir de cette infection. Par � quantité efficace � au sens de l'invention, on entend une quantité d'agent actif suffisante pour permettre de prévenir, combattre ou guérir une infection microbienne. L'invention prévoit en particulier l'administration quotidienne à un sujet d'une quantité comprise entre 50mg et 2000mg du peptide, ou de l'un de ses dérivés ou fragments, ou du polypeptide de l'invention, pendant une période comprise entre 6 et 10 jours. De manière préférée, l'invention prévoit l'administration trois fois par jour pendant huit jours d'environ 500mg du peptide, ou de l'un de ses dérivés ou fragments, ou du polypeptide de l'invention. Les exemples qui suivent permettent d'illustrer la présente invention et ne sauraient être interprétés comme limitant sa portée. Exemple 1 : Synthèse du peptide de séquence SEQ ID No. 1 On a réalisé la synthèse du peptide de séquence SEQ ID No. 1 à l'aide d'un synthétiseur automatique Pionner (Applied Biosystems) en flux continu, selon le protocole d'utilisation fourni avec l'appareil. On a utilisé une stratégie de synthèse Fmoc : l'extrémité N-terminal de chaque acide aminé est protégée par du 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc). On a de plus protégé le groupement amine de la chaîne latérale des Fmoc- lysines par un groupement t-butoxycarbonyle (Boc). On a effectué la déprotection des Fmoc-acides aminés à l'aide d'un mélange de DMF (Diméthylformamide, solution stock ne contenant aucune trace d'amines) et 20% pipéridine (solution stock pure à 99%). Par ailleurs, on a utilisé le mélange N-Hydroxybenzotriazole/O-benzotriazole-N,N,N', N'-tetramethyl-uronium-hexafluorophosphate/N- Ethyldiisopropyl amine (HOBt/TBTU/DIEA) dans des proportions (1/1/2) en solution dans le DMF (solution stock ne contenant aucune trace d'amines) comme activateur et agent de couplage . On a placé la résine (résine Wang, 1.00 g) préchargée (à - 0.2 mmol/g) par un résidu phénylalanine dans le réacteur du synthétiseur. Les couplages sont réalisés avec huit fois la stoechiométrie en aminoacide et un temps de couplage de 60 min. Après chaque étape de couplage et en fin de synthèse, l'extrémité N-terminale du dernier résidu greffé est déprotégée automatiquement par une solution à 20% de pipéridine dans le DMF. Le clivage de la résine Wang et la déprotection des groupements fonctionnels des chaînes latérales ont ensuite été réalisés simultanément par action du mélange (95 % TFA (acide trifluoroacétique), 2.5 % eau, 2.5 % TIS ou TrilsopropylSilane). On a alors extrait la résine du réacteur et on l'a rincée au dichlorométhane, puis séchée au dessiccateur. On l'a ensuite placée dans un ballon puis on a ajouté le cocktail de clivage fraîchement préparé et on a laissé le milieu réactionnel sous agitation pendant 3 h à température ambiante. On a ensuite récupéré la solution contenant le peptide par filtration de la résine sur fritté. Après évaporation du solvant sous pression réduite jusqu'à un volume d'environ 2 mL, on a isolé le peptide brut par précipitation dans l'éther glacé et filtration sur fritté. On l'a ensuite purifié par HPLC sur une colonne phase inverse XTerra C18 (300 x 19 mm) selon un gradient d'élution (solvant A : eau + TFA 0.1 % et solvant B acétonitrile + TFA 0.08 %) 0% B à 70% B en 20min puis 70% B à 0% B en 5 min, avec un débit de 8 mL / min. On a alors réalisé une détection W à 210 nm, puis on a contrôlé la pureté des peptides hybrides synthétisés par HPLC sur une colonne phase inverse XTerra C18 (250 x 4.6 mm) et en spectrométrie de masse par la technique ESI dans un mélange acétonitrile / eau (50 / 50). Le protocole de synthèse utilisé est résumé dans le schéma réactionnel suivant : 20% piperidine H,N DMF O O Fmoc.N H activatio HOBt, TBTU, DIEA Fmoc aa t1déprotectioi 20% piperidine, DMF ".( R H O R N N N~ TFA, TIS, H2O H H O R H O Résine cliva e OH15 Exemple 2 : Activité antibactérienne du peptide de l'invention On a mesuré la Concentration Minimale Inhibitrice de la croissance bactérienne (CMI) du peptide de l'invention pour différentes souches bactériennes. Par Concentration Minimale Inhibitrice de la croissance bactérienne (CMI) on entend la plus petite concentration de peptide qui inhibe toute culture visible d'une souche bactérienne après 18 heures de culture à 30°C. On a mis en suspension les bactéries testées (tableau 1) dans un milieu nutritif approprié de type � Poor Broth �, correspondant à une solution de bactotryptone à 10 g/1 additionnée de NaCl 5 g/1 préparée dans de l'eau ultrapure. On a alors détecté les activités antimicrobiennes par un test d'inhibition de croissance en milieu liquide dans des plaques de microtitration (Hétru, C., & Bulet, P. (1997), Strategies for the isolation and characterization of antimicrobial peptides of invertebrates, Methods in Molecular Biology, vol 78. 35-49). On a déposé 10 gl de chaque concentration de peptide de l'invention dans des plaques de microtitration en présence de 100 p1 de milieu de culture contenant les bactéries (à une concentration finale équivalente à 1 milliDO à 595 nm). L'incubation a été réalisée à 30°C pendant 18 h sous agitation. La croissance des microorganismes a été mesurée en suivant l'absorbance à 595 nm à l'aide d'un spectrophotomètre lecteur de plaque de microtitration. Le tableau 1 donne le spectre d'activité du peptide de l'invention. Il ressort de ce tableau que le peptide a une activité antibactérienne à large spectre, à la fois sur les bactéries Gram positives et sur les bactéries Gram négatives, et qu'il présente des seuils d'activité extrêmement bas parfois même inférieurs à ceux de l'ampicilline (Pseudomonas aeruginosa). Tableau 1 Spectre d'activité du peptide Bacteries CMI (gg/mL) Peptide Ampicilline Bactéries à Gram-positif Bacillus megaterium 5-10 10-20 Staphylococcus aureus 10-20 1-2,5 Bactéries à Gram-négatif Escherichia coli 5-10 1-2,5 Salmonella thyphimurium 40-80 2,5-5 Pseudomonas aeruginosa 40-80 160-320 Klebsiella pneumoniae 40-80 1- 5 Vibrio harveyi 5-10 >90 Vibrio alginolyticus 10-20 >90 Vibrio aestuarinus 5-10 1-2,5 Vibrio spendidus 5-10 >45 Exemple 3 : Activité cytotoxique du peptide de l'invention 10 On a testé l'activité cytotoxique du peptide de l'invention sur deux types cellulaires : des cellules d'ovaire d'hamster chinois (CHO-K1) et des cellules de mésothéliome murin (302-sp). On a mis les deux types de 15 cellules en présence du peptide à différentes concentrations pendant 24 heures. A l'issue de cette incubation on a réalisé un test de survie cellulaire en utilisant le kit CELL GROWTH DETERMINATION KIT, MTT BASED (SIGMA-aldrich). Le principe de ce kit repose sur 20 une mesure d'absorbance correspondant à l'activité mitochondriale des cellules vivantes.5 Le tableau 2 donne l'activité cytotoxique du peptide de l'invention exprimée en pourcentage de viabilité cellulaire. Le peptide de l'invention ne présente une cytotoxité que pour la dose de 640pg/mL, soit une dose 8 à 128 fois plus élevée que les concentrations actives sur les bactéries (Tableau 1). Tableau 2 Activité cytotoxique du peptide de l'invention exprimée en pourcentage de viabilité cellulaire Doses pg/mL cellules CHO cellules 302-sp 10 69,83% 100,97% 40 69,83% 110,24% 160 54,50% 85,85% 640 6,33% 9,27% Exemple 4 : Activité hémolytique du peptide de l'invention On a réalisé des tests hémolytiques sur des érythrocytes obtenus à partir de sang de lapin. On a rincé trois fois les érythrocytes dans du tampon phosphate salin (NaCl 137mM ; KC1 2,7mM ; Na2HPO4 10mM ; KH2PO4 2mM, pH 7,4) puis on les a repris dans ce même tampon afin d'obtenir une solution érythrocytaire à 1%. On a mis les érythrocytes ainsi préparés en présence de différentes concentrations du peptide de l'invention pendant 1 heure à 37°C. Après centrifugation, on a mesuré l'absorbance du surnageant à 415nm afin de déterminer le pourcentage d'hémolyse en se référant au 100% d'hémolyse obtenu avec 1% triton. 5 Les tests réalisés n'ont révélé aucun effet hémolytique du peptide de l'invention pour les doses testées. Tableau 3 Activité hémolytique du peptide de l'invention sur des érythrocytes de lapins exprimée en pourcentage d'hémolyse Doses ug/mL Hémolyse % 10 1,92% 40 2,95% 160 6,65% REVENDICATIONS 1. Peptide dont la séquence en acides aminés est 5 SEQ ID No.1, ses dérivés et ses fragments présentant une activité antimicrobienne. 2. Peptide selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdits dérivés sont choisis parmi les peptides ayant subi au moins une addition, et/ou au moins une 10 substitution, et/ou au moins une délétion d'un acide aminé, notamment parmi les peptides dans lesquels au moins une leucine est substituée par une isoleucine. 3. Peptide selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que lesdits dérivés 15 présentent une modification post-traductionnelle et/ou une modification chimique, notamment une glycosylation, une amidation, une acylation, une acétylation, une méthylation, et/ou portent un groupement protecteur. 4. Peptide selon l'une quelconque des 20 revendications 1 à 3, caractérisé en ce que lesdits dérivés présentent au moins 70%, 75%, 85%, et/ou au moins 90% d'identité avec le peptide de séquence SEQ ID No. 1. 5. Peptide selon l'une quelconque des 25 revendications 1 à 4, caractérisé en ce que lesdits fragments sont choisis parmi les peptides d'au moins 10 acides aminés présentant une activité antimicrobienne. 6. Polypeptide comprenant un peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments selon l'une quelconque des 30 revendications 1 à 5. 7. Polynucléotide caractérisé en ce qu'il code un peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou un polypeptide selon la revendication 6. 8. Vecteur de clonage et/ou d'expression caractérisé en ce qu'il contient un polynucléotide selon la revendication 7. 9. Organisme hôte, à l'exception de l'être humain, 5 transformé à l'aide d'un vecteur selon la revendication 8. 10. Médicament caractérisé en ce qu'il comprend à titre d'agent actif un peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 5 ou un polypeptide selon la revendication 6. 11. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend à titre d'agent actif un peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou un polypeptide selon la 15 revendication 6 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 12. Peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, pour la mise en oeuvre d'une méthode de traitement thérapeutique 20 ou diagnostic du corps humain ou animal. 13. Utilisation d'un peptide ou de l'un de ses dérivés ou fragments selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou d'un polypeptide selon la revendication 6 pour la fabrication d'un médicament ou 25 d'une composition pharmaceutique destiné(e) au traitement des infections microbiennes. 14. Peptide ou l'un de ses dérivés ou fragments selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, pour une utilisation comme antimicrobien.