Brevet FR2922549A1 — publié le 20090424

Domaine de l'invention La présente invention concerne de nouveaux composés et leur utilisation, notamment des composés d'antroquinonol B et d'antroquinonol C séparés d'extraits d'Antrodia camphorata et leur utili-sation pour inhiber la croissance de cellules tumorales. On rapporte tout d'abord les composés d'Antrodia camphorata qui peuvent être appliqués non seulement pour inhiber la croissance du cancer du sein, du cancer du poumon, du cancer du foie et du cancer de la prostate mais aussi dans des compositions médicales anticancéreuses destinées aux cellules des cancers susmentionnés. Etat de la technique Antrodia camphorata est également appelé Chang-Zhi, Niu Chang-Gu, champignon du camphrier rouge et analogues, qui est un champignon pérenne appartenant à l'ordre des Aphyllophorales et à la famille des Polyporaceae. Il s'agit d'une espèce endémique à Taïwan qui pousse sur le bois de coeur pourri interne de Cinnamomum kanehirae Hay. Cinnamomum kanehirai Hay est rarement distribué et illégale-ment surcoupé, ce qui fait que la croissance d'Antrodia camphorata à l'intérieur de l'arbre dans la nature est même devenue rare. Le coût d'Antrodia camphorata est très élevé en raison de la vitesse de croissance extrêmement lente de l'Antrodia camphorata naturel qui ne pousse qu'entre juin et octobre. Les sporocarpes d'Antrodia camphorata sont pérennes, sessiles, durs et boisés et exhalent une forte odeur de sassafras (arôme camphré). Les aspects sont aussi divers que des formes de plaque, de cloche, de crochet ou de tour. Ils sont de couleur rougeâtre et plats lorsqu'ils sont jeunes et ils sont fixés à la surface du bois. Puis, les bords de l'extrémité avant deviennent légèrement recourbés et s'étendent vers les parties avoisinantes. La couleur vire au rouge-brun passé ou au jaune crème-brun, avec des ostioles sur toute la surface. Cette région présente une très grande valeur médicale. En médecine traditionnelle taïwanaise, Antrodia camphorata est communément utilisée comme médicament anticancéreux protégeant le foie et comme antidote. Antrodia camphorata, comme les champignons comestibles et médicinaux généraux, est riche en nom- breux nutriments comprenant des triterpénoïdes, des polysaccharides (comme le 3-glucosane), l'adénosine, des vitamines (comme la vitamine B, l'acide nicotinique), des protéines (immunoglobulines), le superoxyde dismutase (SOD), des oligo-éléments (comme le calcium, le phosphore et le germanium, etc.), un acide nucléique, des stéroïdes et des stabilisants de la pression sanguine (comme l'acide antrodique) et analogues. On pense que ces principes physiologiquement actifs pré-sentent des effets tels que des activités antitumorales, des activités immunomodulatrices croissantes, antiallergiques, antibactériennes, hypotensives, hypoglycémiantes, hypocholestérolémiantes et analogues. Les triterpénoïdes sont les composants les plus étudiés parmi les nombreuses compositions d'Antrodia camphorata. Le terme � triterpénoïdes � regroupe les composés naturels qui contiennent 30 atomes de carbone avec les structures pentacyclique ou hexacycli- que. Le goût amer d'Antrodia camphorata vient du composant des triterpénoïdes. Trois nouveaux triterpénoïdes de type ergostane (antcine A, antcine B et antcine C) ont été isolés par Cherng et al. à partir des sporocarpes d'Antrodia camphorata (Cherng, I. H., et Chiang, H. C., 1995). Three new triterpenoids from Antrodia cinnamomea. J. Nat. Prod. 58:365 à 371). On a extrait trois nouveaux composés tels que l'acide zhankuique A, l'acide zhankuique B et l'acide zhankuique C à partir des sporocarpes d'Antrodia camphorata avec de l'éthanol par Chen et al., (Chen, C. H. et Ysang, S. W. 1995, New steroid acids from Antrodia cinnamomea: A fungus parasitic on Cinnamomum micranthum, J. Nat. Prod. 58:1655 à 1661). De plus, Cherng et al., ont également découvert trois autres nouveaux triterpénoïdes extraits des sporocarpes d'Antrodia camphorata qui sont la lactone sesquiterpénique et les composés dérivés du 2-biphényle, le 4,7-diméthoxy-5-méthyl-1,3-benzodioxole et le 2,2'-5, 5'-tétraméthoxy-3,4,3',4'-bi-méthylènedioxy-6, 6 'diméthylbiphény-le(Chiang, H. C., Wu, D. P., Cherng, I. W. et Ueng, C. H. 1995. A sesquiterpene lactone, phenyl and biphenyl compounds from Antrodia cinnamomea. Phytochemistry, 39:613 à 616). En 1996, Cherng et al. ont isolé quatre nouveaux triterpénoïdes de type ergostane (antcines E et F et antcinates de méthyle G et H) avec les mêmes procédés analytiques (Cherng I. H., Wu, D. P. et Chiang, H. C. 1996. Triterpenoids from An- trodia cinnamomea. Phytochemistry. 41:263 à 267). Et deux stéroïdes apparentés aux ergostanes, les acides zhankuiques D et E conjointe-ment avec trois triterpènes apparentés au lanosta, l'acide 15-alphaacétyl-déshydrosulfurénique, l'acide déshydroéburicoïque et l'acide dés-hydrosulfurénique ont été isolés par Yang et al. (Yang, S. W., Shen, Y. C. et Chen, C. H. 1996. Steroids and triterpenoids of Antrodia cinnamomea: a fungus parasitic on Cinnamomum micranthum. Phytochemistry. 41:1389 à 1392). Bien que l'on ait rapporté que les extraits d'Antrodia camphorata présentent les effets antitumoraux des expériences précédentes (comme la référence susmentionnée : Chen & Yang, 1995), d'autres expériences sont nécessaires pour identifier la composition efficace pour inhiber les tumeurs. L'application en oncothérapie produira des effets très bénéfiques si l'on trouve les compositions réellement efficaces. Résumé de l'invention Afin d'identifier les composés contenant des effets antitumoraux issus d'extraits d'Antrodia camphorata, le composé de for-mule (1) a été isolé et purifié dans la présente invention où X peut être un groupe hydroxyle (-OH) ou méthoxy (-OCH3). CH3 a'''''CR3 Lorsque X est un groupe hydroxyle, la structure est telle que présentée sur la formule (2). Le nom chimique est l'antroquinonol B ayant une formule moléculaire de C24H38O5 et une masse moléculaire de 406. eH3 '''-CH3 CH3 Lorsque X est un groupe méthoxy, la structure est telle que présentée sur la formule (3). Le nom chimique est l'antroquinonol C ayant une formule moléculaire de C25H4005 et une masse moléculaire de 5 420. CH3 OH ç~\CH3 Les composés d'antroquinonol B et d'antroquinonol C sont purifiés à partir d'une extraction aqueuse ou d'une extraction avec un solvant organique d'Antrodia camphorata. Les solvants organiques lo utilisés comprennent, mais sans s'y limiter, les alcools tels que le méthanol, l'éthanol ou le propanol, les esters tels que l'acétate d'éthyle, les alcanes tels que l'hexane ou les alcanes halogénés tels que le chlorométhane et le chloroéthane. Parmi eux, on préfère un alcool et notamment l'éthanol. 15 Les composés susmentionnés dans la présente invention peuvent être appliqués pour inhiber la croissance des cellules tumorales et peuvent être en outre utilisés comme composition médicale pour traiter le cancer et pour améliorer les effets thérapeutiques. Les composés de la présente invention peuvent être appliqués pour inhiber un éventail 20 de cellules cancéreuses comprenant le cancer du sein, le cancer du poumon, le cancer du foie et le cancer de la prostate, conduisant à un un ralentissement marqué de la prolifération des cellules cancéreuses, inhibant en outre la croissance des cellules cancéreuses et réduisant le risque de malignité. Ils peuvent être utilisés par conséquent pour le traitement du cancer du sein, du cancer du poumon, du cancer du foie, du cancer de la prostate et d'autres encore. Par ailleurs, les composés de formule (2) et/ou de for-mule (3) de la présente invention peuvent être incorporés dans des compositions médicales pour traiter le cancer du sein, le cancer du poumon, le cancer du foie et le cancer de la prostate pour inhiber la croissance des cellules tumorales. Les compositions médicales comprennent non seulement les quantités efficaces d'antroquinonol B et d'antroquinonol C mais aussi les vecteurs pharmaceutiquement acceptables. Les vecteurs comprennent, mais sans s'y limiter, des excipients tels que l'eau, des charges telles que le saccharose ou l'amidon, des liants tels que des dérivés de la cellulose, des diluants, des délitants, des activateurs d'absorption ou des édulcorants. Les compositions de la présente invention peuvent être fabriquées en mélangeant les composés d'antroquinonol B et d'antroquinonol C avec au moins l'un des vecteurs au moyen de procédés traditionnels connus dans le domaine technique pharmaceutique, qui peuvent être formulés, mais sans s'y limiter, sous forme de poudres, de comprimés, de gélules, de pastilles, de granules ou de toute autre formulation liquide. La présente invention sera davantage expliquée dans l'illustration et les exemples du mode de réalisation ci-après. Ces exem-pies ne devraient toutefois pas être considérés comme limitant le cadre de l'invention : on envisage que des modifications apparaîtront facile-ment à l'homme du métier, lesquelles modifications feront partie de l'esprit de l'invention et de la portée des revendications annexées. Description détaillée du mode de réalisation préféré On extrait tout d'abord avec de l'eau ou des solvants organiques le mycélium, les sporocarpes ou un mélange des deux provenant d'Antrodia camphorata pour obtenir l'extrait aqueux ou l'extrait obtenu avec des solvants organiques d'Antrodia camphorata en utilisant les procédés bien connus de la technique. Les solvants organiques corn- prennent, mais sans s'y limiter, les alcools tels que le méthanol, l'éthanol ou le propanol, les esters tels que l'acétate d'éthyle, les alcanes tels que l'hexane ou les alcanes halogénés tels que le chlorométhane et le chloroéthane. Parmi eux, on préfère un alcool et notamment l'éthanol. Les extraits aqueux ou obtenus avec des solvants organiques d'Antrodia camphorata ont été soumis à une chromatographie liquide haute performance (CLHP) à des fins de séparation et de purification. Chaque fraction a été recueillie et appliquée à un test antitumoral. Les fractions actives présentant une capacité antitumorale ont été analysées pour déterminer la composition et encore testées contre différentes cellules cancéreuses. L'approche ci-dessus a donc abouti à l'identification des composés d'antroquinonol B et d'antroquinonol C dans l'inhibition de la croissance du cancer du sein, du cancer du poumon, du cancer du foie, du cancer de la prostate et davantage. Ces composés d'Antrodia camphorata sont considérés comme étant de nouveaux composés puisqu'ils n'ont jamais été rapportés dans une quelconque littérature. On a démontré que les composés d'antroquinonol B et d'antroquinonol C avaient des effets anticancéreux en utilisant un test avec du bromure de 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,S-diphényl tétrazolium (MTT) selon le modèle de sélection des médicaments antitumoraux du National Cancer Institute (NCI) sur les taux de survie des cellules en utilisant des lignées de cellules de cancer du sein, de cancer du pou-mon, de cancer du foie et de cancer de la prostate. Les tests ci-dessus ont prouvé que l'antroquinonol B et que l'antroquinonol C réduisaient les taux de survie des lignées de cellules du cancer du sein (MCF-7 et MDA-MB-231), des lignées de cellules du cancer du poumon (A-549), des lignées de cellules du carcinome hépatocellulaire (Hep 3B et Hep G2) et des lignées de cellules du cancer de la prostate (LNCaP et DU-145), et qu'ils présentaient dans le même temps des valeurs de con-centrations inhibant 50 % de l'activité (CI50). Par conséquent, on peut utiliser l'antroquinonol B et l'antroquinonol C pour inhiber la croissance des cellules cancéreuses relatives au cancer du sein, au cancer du poumon, au cancer du foie et au cancer de la prostate qui peuvent être en outre appliqués au traitement du cancer du sein, du cancer du poumon, du cancer du foie, du cancer de la prostate et analogues. Les détails des exemples sont décrits de la façon suivante : Exemple 1 Séparation de l'antroquinonol B et de l'antroquinonol C On a placé dans un flacon 100 g de mycélium, de sporocarpes ou un mélange de ceux-ci d'Antrodia camphorata. On a ajouté la bonne quantité d'eau et d'alcool (solution d'alcool à 70-100 %) dans le flacon et on a agité à 20-25 °C pendant au moins une heure. On a filtré la solution à travers un filtre et une membrane de 0,45 �m et on a re- cueilli le filtrat sous forme d'extrait. Le filtrat d'Antrodia camphorata a été soumis à une ana-lyse par chromatographie liquide haute performance (CLHP). On a réalisé la séparation sur une colonne RP18 et la phase mobile se composait de méthanol (A) et de 0,1 à 0,5 % d'acide acétique (B), avec des condi- tions de gradient de 0 à 10 min dans 95 % à environ 20 % de (B), de 10 à 20 min dans 20 % à environ 10 % de B, de 20 à 35 min dans 10 % à environ 90 % de B, de 35 à 40 min dans 10 % à environ 95 % de B selon un débit de 1 ml/min. L'effluant de la colonne a été contrôlé avec un détecteur UV-visible. Les fractions recueillies à 21,2-21,4 min ont été recueillies et concentrées pour donner de l'antroquinonol B, un produit sous forme de poudre jaune pâle. L'analyse de ce produit a montré la formule moléculaire C24H38O5 et une masse moléculaire de 406. L'étude des spectres de RMN a montré que la RMN-1H(CDC13)6(ppm) = 1,21, 1,36, 1,67, 1,71, 1,75, 1,94, 2,03, 2,07, 2,22, 2,25, 3,68, 4,05, 5,71 et 5,56 ; RMN-13C(CDC13)6(ppm) = 12,31, 16,1, 16,12, 17,67, 25,67, 26,44, 26,74, 27,00, 39,71, 39,81, 4,027, 43,34, 59,22, 60,59, 71,8, 120,97, 123,84, 124,30, 131,32, 134,61, 135,92, 138,05, 160,45 et 197,11. Les fractions collectées à 23,7-24 min ont été recueillies et concentrées pour donner de l'antroquinonol C, un produit sous forme de poudre jaune pâle. L'analyse de ce produit a montré la formule moléculaire C25H4oO5 et une masse moléculaire de 420. L'étude des spectres de RMN a montré que la RMN-1H(CDC13)6(ppm) = 1,21, 1,36, 1,67, 1,71, 1,75, 1,94, 2,03, 2,07, 2,22, 2,25, 3,24, 3,68, 4,05, 5,12, 5,50 et 5,61 ; RMN-13C(CDC13)6(ppm) = 12,31, 16,1, 16,12, 17,67, 24,44, 26,44, 26,74, 27,00, 37,81, 39,81, 4,027, 43,34, 49,00, 59,22, 60,59, 120,97, 123,84, 124,30, 135,92, 138,05, 160,45 et 197,12. On a comparé dans la base de données des composés chimiques les structures de l'antroquinonol B et de l'antroquinonol C. Aucun composé présentant une structure similaire n'a été découvert. Ces composés sont par conséquent considérés comme étant de nouveaux composés puisqu'on ne les a jamais mentionnés auparavant. Exemple 2 Test de survie ex vivo pour déterminer les effets anti-cancer du sein On a adopté le modèle de sélection des médicaments anticancéreux du NCI pour tester l'effet anticancéreux des composés séparés de l'exemple 1 dans la présente invention. L'antroquinonol B et l'antroquinonol C séparés de l'exemple 1 ont été ajoutés dans le milieu de culture de cellules du cancer du sein humain, MCF-7 ou MDA-MB- 231, pour tester la surface des cellules tumorales. Ce test de survie a été réalisé avec le test très connu du MTT (bromure de 3-[4,5-diméthylthiazol-2-yl]-2,5-diphényltétrazolium). La lignée de cellules MCF-7 provient de cellules primaires de cancer du sein (stade précoce), sensible aux oestrogènes et est par conséquent oestrogénodépendante tandis que la lignée MDE-MB-231 n'est pas sensible aux oestrogènes et est par conséquent oestrogéno-indépendante, ce qui donne des tumeurs difficiles avec un faible taux de survie. Le test au MTT est couramment utilisé pour déterminer la prolifération cellulaire, le pourcentage de cellules viables et la cyto- toxicité. Le bromure de 3-[4,5-diméthylthiazol-2-yl]-2,5-diphényltétrazolium (MTT) est un colorant jaune qui peut être absorbé par les cellules vivantes et être réduit en cristaux de formazan bleu-violet par la succinate tétrazolium réductase dans les mitochondries. La formation de formazan peut par conséquent être utilisée pour évaluer et détermi- ner le taux de survie des cellules. Les cellules du cancer du sein humain, MCF-7 (acquises auprès du Bioresources Collection and Research Center (BCRC) avec le numéro d'accès BCRC 60436) et MDA-MB-231 (acquises auprès du National Health Research Institute (NHRI) avec le numéro d'accès CCRC 60425) ont été cultivées dans du milieu contenant du sérum de veau foetal pendant 24 heures. Les cellules ayant proliféré ont été lavées une fois avec du PBS puis traitées 1 fois avec un mélange de trypsine-EDTA et centrifugées à 1200 t/min pendant 5 minutes. On a éliminé le surnageant et le culot cellulaire a été remis en suspension dans 10 ml de milieu de culture frais en agitant doucement. On a placé les cellules dans une plaque 96 puits. On a ajouté des extraits éthanoliques totaux d'Antrodia camphorata sans purification (groupe témoin), d'antroquinonol B ou d'antroquinonol C (groupe expérimental) dans chacun des 96 puits selon les concentrations suivantes : 30, 10, 3, 1, l0 0,3, 0,1 et 0,03 �g/ml, respectivement. On a incubé les cellules à 37 °C dans un incubateur renfermant 5 % de CO2 pendant 48 heures. On a ajouté le MTT dans une concentration de 2,5 mg/ml dans chaque puits dans l'obscurité et on a incubé pendant 4 heures, en ajoutant ensuite 100 �l de tampon de lyse pour arrêter la réaction. On a lu les plaques 15 sur un lecteur ELISA à une longueur d'onde de 570 nm pour déterminer les taux de survie. Les valeurs des concentrations inhibant 50 % de l'activité (CIso) ont été également calculées et répertoriées dans le tableau 1. Tableau 1 : résultats du test de survie ex vivo pour l'inhibition des 20 cellules du cancer du sein CIso (�g/ml) Echantillons MCF 7 MDA-MB- 231 Groupe Extraits bruts 11 13 25 '81 témoin d'A. camphorata Groupe expérimental Antroquinonol B 1,94 8,72 Antroquinonol C 1,17 21,9 L'antroquinonol B et l'antroquinonol C sont capables de réduire le taux de survie des cellules MCF-7 oestrogénodépendantes du cancer du sein comme on le voit d'après le résultat du tableau 1. La valeur de CIso de l'antroquinonol B concernant les cellules MCF-7 a 25 chuté à 1,94 �g/ml, qui était de 82,56 % inférieure à celle des extraits bruts d'Antrodia camphorata (11,13 tg/ml). Et la valeur de CIso d'antroquinonol C concernant les cellules MCF-7 a chuté à 1,17 �g/ml, qui était 89,49 % inférieure à la valeur des extraits bruts d'Antrodia camphorata (11,13 �g/ ml) . On peut par conséquent appliquer 30 l'antroquinonol B et l'antroquinonol C d'Antrodia camphorata pour inhi- ber la croissance des cellules MCF-7 oestrogénodépendantes du cancer du sein. Par ailleurs, l'antroquinonol B et l'antroquinonol C sont capables de réduire le taux de survie des cellules MDA-MB-231 oestro-génodépendantes du cancer du sein. Les valeurs de CI50 de l'antroquinonol B et de l'antroquinonol C concernant les cellules MDAMB-231 étaient de 8,72 �g/ml et de 21,9 �g/ml, respectivement, va- leurs qui étaient de 66,21 % et de 15,15 % inférieures à celles des ex-traits bruts d'Antrodia camphorata (25,81 �g/ml). Les concentrations d'antroquinonol B et d'antroquinonol C nécessaires à la concentration inhibant 50 % de l'activité des cellules MDA-MB-231 ont été toutes ré-duites comparé à celles des extraits bruts dans le groupe témoin et on a découvert un meilleur effet inhibiteur dans l'antroquinonol B. On peut par conséquent appliquer l'antroquinonol B et l'antroquinonol C d'An- trodia camphorata pour inhiber la croissance des cellules MDA-MB-231 oestrogénodépendantes du cancer du sein. Exemple 3 Test de survie ex vivo pour déterminer les effets anti-cancer du poumon On a adopté le modèle de sélection des médicaments an- ticancéreux du NCI pour tester l'effet anti-cancer du poumon de l'antroquinonol B et de l'antroquinonol C dans la présente invention. Les antroquinonols séparés de l'exemple 1 ont été ajoutés dans le milieu de culture des cellules A549 du cancer du poumon humain avec le test au MTT susmentionné pour analyser les taux de survie des cellules du cancer du poumon. On a obtenu les cellules A549 du cancer du poumon humain auprès du Bioresources Collection and Research Center (BCRC) du Food Industry Research and Development Institute portant le numéro d'accès du BCRC 60074. Les cellules A549 ont été cultivées dans un milieu contenant du sérum de veau foetal pendant 24 heures. Les cellules ayant proliféré ont été lavées une fois avec du PBS puis traitées 1 fois avec un mélange de trypsine-EDTA et centrifugées à 1200 t/min pendant 5 minutes. On a éliminé le surnageant et le culot cellulaire a été remis en suspension dans 10 ml de milieu de culture frais en agi- tant doucement. On a placé les cellules dans une plaque 96 puits. On a ajouté des extraits éthanoliques totaux d'Antrodia camphorata sans purification (groupe témoin), d'antroquinonol B ou d'antroquinonol C (groupe expérimental) dans chacun des 96 puits selon les concentrations suivantes : 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 et 0,03 gg/ml, respectivement. On a incubé les cellules à 37 °C dans un incubateur renfermant 5 % de CO2 pendant 48 heures. On a ajouté le MTT dans une concentration de 2, 5 mg/ml dans chaque puits dans l'obscurité et on a incubé pendant 4 heures, en ajoutant ensuite 100 �l de tampon de lyse pour arrêter la réaction. On a lu les plaques sur un lecteur ELISA à une longueur d'onde de 570 nm pour déterminer les taux de survie. Les valeurs des concentrations inhibant 50 % de l'activité (CI5o) ont été également calculées et répertoriées dans le tableau 2. Tableau 2 : résultats du test de survie ex vivo pour l'inhibition des cellules du cancer du poumon Échantillons CI50 (�g/ml) A549 Groupe Extraits bruts 13 21 témoin d'Antrodia campho rata Groupe expérimental Antroquinonol B 11,9 Antroquinonol C 8,21 D'après le résultat du tableau 2, l'antroquinonol B et l'antroquinonol C peuvent réduire efficacement les taux de survie de la lignée de cellules A549 du cancer du poumon humain. Les valeurs de CI50 de l'antroquinonol B et de l'antroquinonol C concernant les cellules A549 étaient de 11,9 gg/ml et de 8,21 gg/ml, respectivement, valeurs qui étaient de 9,92 % et de 37,85 % inférieures à celles des extraits bruts d'Antrodia camphorata (13,21 gg/ml). L'antroquinonol B et l'antroquinonol C présentaient tous deux des valeurs de CI50 réduites comparé au groupe témoin et on a découvert un meilleur effet inhibiteur dans l'antroquinonol B. Par conséquent, on peut appliquer l'antroquinonol B et l'antroquinonol C d'Antrodia camphorata pour inhi- ber la croissance des cellules A549 du cancer du poumon. Exemple 4 Test de survie ex vivo pour déterminer les effets anti-cancer du foie On a employé le modèle de sélection des médicaments anticancéreux du NCI pour tester l'effet anti-cancer du foie de l'antroquinonol B et de l'antroquinonol C dans la présente invention. Les antroquinonols séparés de l'exemple 1 ont été ajoutés dans le milieu de culture des cellules Hep 3B ou Hep G2 du cancer du foie humain pour analyser les taux de survie des cellules tumorales. On a obtenu les cellules Hep 3B du cancer du foie (BCRC 60434) et Hep G2 (BCRC 60025) auprès du Bioresources Collection and Research Center (BCRC) du Food Industry Research and Development Institute. Les cellules Hep 3B et Hep G2 du cancer du foie humain ont été cultivées dans du milieu contenant du sérum de veau foetal pendant 24 heures. Les cellules ayant proliféré ont été lavées une fois avec du PBS puis traitées 1 fois avec un mélange de trypsine-EDTA et centrifugées à 1200 t/min pendant 5 minutes. On a éliminé le surnageant et le culot cellulaire a été remis en suspension dans 10 ml de mi-lieu de culture frais en agitant doucement. On a placé les cellules dans une plaque 96 puits. On a ajouté des extraits éthanoliques totaux d'Antrodia camphorata sans purification (groupe témoin), d'antroquinonol B ou d'antroquinonol C (groupe expérimental) dans chacun des 96 puits selon les concentrations suivantes : 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 et 0,03 �g/ml, respectivement. On a incubé les cellules à 37 °C dans un incubateur renfermant 5 % de CO2 pendant 48 heures. On a ajouté le MTT dans une concentration de 2,5 mg/ml dans chaque puits dans l'obscurité et on a incubé pendant 4 heures, en ajoutant ensuite de 100 �l de tampon de lyse pour arrêter la réaction. On a lu les plaques sur un lecteur ELISA à une longueur d'onde de 570 nm pour dé-terminer les taux de survie. Les valeurs des concentrations inhibant 50 % de l'activité (CI50) ont été également calculées et répertoriées dans le tableau 3. Tableau 3 : résultats du test de survie ex vivo pour l'inhibition des cellules du cancer du foie Echantillons CI50 (�g/ml) Hep 3B Hep G2 Groupe Extraits bruts 5,10 18,63 témoin d'Antrodia camphorata Groupe expérimental Antroquinonol B 1,21 3, 32 Antroquinonol C 1,32 5,12 D'après le résultat du tableau 3, l'antroquinonol B et 30 l'antroquinonol C peuvent réduire efficacement les taux de survie des lignées de cellules Hep 3B et Hep G2 du cancer du foie humain. La va- leur de Cl50 de l'antroquinonol B concernant les cellules Hep 3B était de 1,21 �g/ml, valeur qui était de 76,27 % inférieure à celle d'extraits bruts d'Antrodia camphorata (5,10 �g/ml). La valeur de Cl50 de l'antroquinonol C concernant les cellules Hep 3B était de 1,32 �g/ml, valeur qui était de 74,12 % inférieure à celle des cellules des extraits bruts d'Antrodia camphorata. Les deux composés ont présenté tous deux des valeurs de Cl50 notablement réduites comparé au groupe témoin dans les cellules Hep 3B. Les valeurs de Cl50 de l'antroquinonol B et de l'antroquinonol C concernant les cellules Hep G2 étaient de 3,32 �g/ml et de 5,12 �g/ml, respectivement, valeurs qui étaient de 82,18 % et de 72,52 % inférieures à celles des extraits bruts d'Antrodia camphorata (18,63 �g/ml). Les deux composés ont présenté des valeurs de Cl50 remarquablement réduites comparé au groupe témoin dans les cellules Hep G2. Par conséquent, on peut appliquer l'antroquinonol B et l'antroquinonol C d'Antrodia camphorata pour inhiber la croissance des cellules du cancer du foie. De plus, les cellules du cancer du foie traitées à l'antroquinonol B ont présenté des valeurs de Cl50 inférieures à celles des cellules traitées à l'antroquinonol C, c'est-à-dire qu'une concentra- tion inférieure d'antroquinonol B a été nécessaire pour inhiber la croissance des cellules Hep 3B et Hep G2 du cancer du foie. L'antroquinonol B a présenté de meilleurs effets d'inhibition comparé à l'antroquinonol C concernant la croissance des cellules du cancer du foie. Exemple 5 Test de survie ex vivo pour déterminer les effets anti-cancer de la prostate On a également employé le modèle de sélection des médicaments anticancéreux du NCI pour tester l'effet anti-cancer des antro- quinonols dans la présente invention. L'antroquinonol B et l'antroquinonol C séparés de l'exemple 2 ont été ajoutés dans le milieu de culture des cellules LNCaP ou DU-145 du cancer de la prostate humain et on a analysé les taux de survie des cellules du cancer de la prostate avec le test au MTT susmentionné. Les cellules LNCaP pro- viennent des cellules épithéliales de la prostate et dépendent des andro- gènes à leur stade précoce et sont donc des cellules cancéreuses androgénodépendantes. Les cellules DU-145 sont des cellules du cancer de la prostate de type récurrent dont la croissance ne dépend pas des androgènes : elles sont par conséquent androgéno-indépendantes. Jusqu'à ce jour, on ne connaît pas de traitement efficace pour ce cancer de la prostate de type récurrent. On a commandé auprès du NHRI les deux souches LNCaP et DU-145 portant les numéros d'accès CCRC 60088 et CCRC 60348, respectivement. Les cellules LNCaP et DU-145 du cancer de la prostate humain ont été cultivées dans du milieu contenant du sérum de veau foetal pendant 24 heures. Les cellules ayant proliféré ont été lavées une fois avec du PBS puis traitées 1 fois avec un mélange de trypsine-EDTA et centrifugées à 1200 t/min pendant 5 minutes. On a éliminé le surnageant et le culot cellulaire a été remis en suspension dans 10 ml de mi- lieu de culture frais en agitant doucement. On a placé les cellules dans une plaque 96 puits. On a ajouté des extraits éthanoliques totaux d'Antrodia camphorata sans purification (groupe témoin), d'antroquinonol B ou d'antroquinonol C (groupe expérimental) dans chacun des 96 puits selon les concentrations suivantes : 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 et 0,03 �g/ml, respectivement. On a incubé les cellules à 37 °C dans un incubateur renfermant 5 % de CO2 pendant 48 heures. On a ajouté le MTT dans une concentration de 2,5 mg/ml dans chaque puits dans l'obscurité et on a incubé pendant 4 heures, en ajoutant ensuite 100 �l de tampon de lyse pour arrêter la réaction. On a lu les plaques sur un lecteur ELISA à une longueur d'onde de 570 nm pour déterminer les taux de survie. Les valeurs des concentrations inhibant 50 % de l'activité (Clso) ont été également calculées et répertoriées dans le tableau 4. Tableau 4 : résultats du test de survie ex vivo pour l'inhibition des cellules du cancer de la prostate Échantillons CIso (�g/ml) LNCaP DU-145 Groupe Extraits bruts 11 49 41 '39 témoin d'Antrodia camphorata Groupe expérimental Antroquinonol A 5,67 10,12 Antroquinonol J 8,72 12,21 D'après le résultat du tableau 4, les taux de survie des cellules LNCaP et DU-145 ont été efficacement réduits par les activités de l'antroquinonol B ou de l'antroquinonol C. Les valeurs de Cl50 de l'antroquinonol B et de l'antroquinonol C concernant les cellules LNCaP étaient de 5,67 �g/ml et de 8,72 �g/ml, respectivement, valeurs qui étaient de 50,65 % et de 24,11 % inférieures à la valeur de Cl50 du groupe témoin (11,49 �g/ml). Les valeurs de Cl50 de l'antroquinonol B et de l'antroquinonol C concernant les cellules DU-145 ont été de 10,12 �g/ml et de 12,21 �g/ml, respectivement, valeurs qui étaient de 75,55 % et de 70,5 % inférieures à la valeur de CI50 du groupe témoin (41,39 �g/ml). Par conséquent, les valeurs des concentrations inhibant 50 % de l'activité (CI5o) de ces deux antroquinonols d'Antrodia camphorata ont été notablement réduites concernant les cellules LNCaP et DU-145 du cancer de la prostate comparé aux extraits bruts dans le groupe témoin. De plus, les cellules LNCaP du cancer de la prostate traitées à l'antroquinonol B ont présenté des valeurs de Cl50 bien inférieures à celles des cellules traitées à l'antroquinonol C, c'est-à-dire qu'on a dé-couvert un meilleur effet inhibiteur dans l'antroquinonol B pour inhiber les cellules du cancer de la prostate. Par ailleurs, l'antroquinonol B et l'antroquinonol C peu- vent tous deux inhiber efficacement la croissance des cellules LNCaP et DU-145 du cancer de la prostate avec deux caractéristiques différentes. Par conséquent, on peut appliquer l'antroquinonol B et l'antroquinonol C pour inhiber non seulement la croissance des cellules LNCaP androgéno-dépendantes du cancer de la prostate mais aussi celle des cellules DU-145 androgéno-indépendantes du cancer de la prostate. Ceci est bénéfique pour la thérapie du cancer de la prostate et du cancer récurrent de la prostate. En résumé, l'antroquinonol B et l'anthroquinonol C purifiés à partir d'extraits d'Antrodia camphorata peuvent efficacement inhi- ber la croissance du cancer du sein, du cancer du poumon, du cancer du foie et du cancer de la prostate. Ces composés peuvent être incorporés dans des compositions médicales pour traiter les cellules cancéreuses susmentionnées. Les compositions médicales comprennent non seulement les composés d'antroquinonol B et d'antroquinonol C mais aussi les vecteurs pharmaceutiquement acceptables. Les vecteurs com- prennent, mais sans s'y limiter, des excipients tels que l'eau, des charges telles que le saccharose ou l'amidon, des liants tels que des dérivés de la cellulose, des diluants, des délitants, des activateurs d'absorption ou des édulcorants. La composition de l'invention peut être préparée en mélangeant les composés d'antroquinonol B et d'antroquinonol C avec au moins l'un des vecteur au moyen de procédés traditionnels connus dans le domaine technique pharmaceutique pouvant être formulées, mais sans s'y limiter, sous forme de poudres, de comprimés, de gélules, de pastilles, de granules ou de toute autre formulation liquide.10 REVENDICATIONS 1 °) Composé selon la formule suivante, dans lequel X est un groupe hydroxyle (-OH) ou méthoxy (-OCH3). CH3 CH3 2°) Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé est isolé à partir d'Antrodia camphorata. 3°) Composé selon la revendication 1, 1 o caractérisé en ce que le composé est l'antroquinonol B lorsque x est un groupe hydroxyle (OH). 4°) Composé selon la revendication 3, 15 caractérisé en ce que le composé antroquinonol B est isolé à partir d'Antrodia camphorata. 5°) Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que 20 le composé est l'antroquinonol C lorsque x est un groupe méthoxy (OCH3). 6°) Composé selon la revendication 5, caractérisé en ce que 25 le composé antroquinonol C est isolé à partir d'Antrodia camphorata. 7°) Composé selon la revendication 3 utilisé pour inhiber la croissance des cellules cancéreuses, dans lequel les cellules cancéreuses sont lescellules du cancer du sein, les cellules du cancer du foie ou les cellules du cancer de la prostate. 8°) Composé selon la revendication 7, caractérisé en ce que les cellules du cancer du sein sont choisies dans le groupe constitué par la lignée de cellules MCF-7 du cancer du sein et par la lignée de cellules MDA-MB-231 du cancer du sein. 9°) Composé selon la revendication 7, caractérisé en ce que les cellules du cancer du foie sont choisies dans le groupe constitué par la lignée de cellules Hep 3B du cancer du foie et par la lignée de cellules Hep G2 du cancer du foie. 10°) Composé selon la revendication 7, caractérisé en ce que les cellules du cancer de la prostate sont choisies dans le groupe constitué par la lignée de cellules LNCaP du cancer de la prostate et par la lignée de cellules DU 145 du cancer de la prostate. 11 °) Composition médicale utilisée pour inhiber la croissance de cellules tumorales, qui comprend un composé selon la revendication 3 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable, dans laquelle les cellules tumo- rales sont choisies dans le groupe constitué par le cancer du sein, le cancer du foie et le cancer de la prostate. 12°) Composé selon la revendication 5 utilisé pour inhiber la croissance de cellules cancéreuses, dans lequel les cellules cancéreuses sont les cellules du cancer du sein, les cellules du cancer du foie ou les cellules du cancer de la prostate. 13°) Composé selon la revendication 12, caractérisé en ce que les cellules du cancer du sein sont choisies dans le groupe constitué parla lignée de cellules MCF-7 du cancer du sein et la lignée de cellules MDA-MB-231 du cancer du sein. 14°) Composé selon la revendication 12, caractérisé en ce que les cellules du cancer du foie sont choisies dans le groupe constitué par la lignée de cellules Hep 3B du cancer du foie et la lignée de cellules Hep G2 du cancer du foie. 15°) Composé selon la revendication 12, caractérisé en ce que les cellules du cancer de la prostate sont choisies dans le groupe constitué par la lignée de cellules LNCaP du cancer de la prostate et la lignée de cellules DU 145 du cancer de la prostate. 16°) Composition médicale utilisée pour inhiber la croissance de cellules tumorales, qui comprend un composé selon la revendication 5 et un vecteur pharmaceutiquement acceptable, dans laquelle les cellules tu-morales sont choisies dans le groupe constitué par le cancer du sein, le cancer du foie et le cancer de la prostate.25