Brevet FR2917621A1 — publié le 20081226

La présente invention concerne l'utilisation d'hétérocycles oxygénés choisis parmi les xanthones et les biflavonoïdes pour la préparation d'une composition destinée à agir comme agent anti-coccidien, les coccidies étant avantageusement choisies dans le groupe constitué par Eimeria, Isospora, Toxoplasma, Besnoitia et Neospora. En particulier, la composition est destinée à la prévention ou au traitement de coccidioses chez l'homme ou l'animal. Avantageusement, une telle composition est destinée à être administrée par voie orale. La présente invention a également pour objet un nouveau composé de formule (Ia), la laurentinone A. L'extrême variété des microorganismes, la variété de leurs cycles, et la nécessité, dans la majorité des cas, d'avoir recours à l'hôte spécifique pour leur étude, font de la microbiologie un monde complexe, qui explique partiellement la faiblesse de nos connaissances actuelles et la nécessité de nouvelles stratégies pour la thérapeutique. Ajouté aux nombreuses maladies humaines, le coût des pertes dues aux maladies infectieuses dans le domaine vétérinaire est considérable. En plus d'une mortalité élevée dans les élevages, les agents infectieux en question induisent un retard de croissance des animaux infectés. Il faut ajouter à ces coûts, la nécessaire et coûteuse mise en place de stratégies de prévention. D'après des données récentes, les additifs alimentaires à action préventive, les produits anti-infectieux et les antiparasitaires représentent respectivement 14,3%, 17% et 27,5% du marché de la médecine vétérinaire. Si nos moyens de traitement ont permis d'éradiquer certaines maladies infectieuses, les principales n'ont pas disparu et l'apparition de chimiorésistances incite à la recherche de nouvelles molécules. Ceci est d'autant plus vrai que les molécules principales doivent être retirées du marché en accord avec les nouvelles législations européenne et internationale en termes de toxicité humaine. Les coccidioses animales en particulier sont un grave problème en pathologie animale, que ce soit pour la volaille, le bétail ou la cuniculture. Elles sont dues à des protozoaires du Phylum des Apicomplexa, de la classe des Sporozoa. Dans l'industrie aviaire, les coccidioses causent des pertes économiques considérables (800 millions US$ aux USA par an en 2002). Une douzaine d'espèces parasitent le poulet. Les plus communes sont : Eimeria tenella (diarrhée sanguinolente caecale), Eimeria necatrix (diarrhée sanguinolente intestinale) et Eimeria acervulina, ainsi que Eimeria maxima (coccidiose chronique intestinale). Le nombre d'espèces pour la dinde est de sept, dont les plus importantes sont : Eimeria meleagrimitis (localisée dans le jéjunum) et Eimeria adenoeides (localisée dans l'iléon inférieur, les caeca et le rectum). Pour ces volailles, les animaux plus sensibles sont ceux qui sont en croissance et les jeunes adultes. Les animaux infectés, consommant moins d'aliments et d'eau, sont diarrhéiques, et peuvent devenir émaciés et déshydratés. Le taux de production d'oeufs est réduit chez les pondeuses. La coccidiose caecale peut produire des déjections sanglantes et l'anémie, souvent suivie de la mort. La coccidiose intestinale peut être confondue avec le syndrome hémorragique d'anémie et d'autres maladies entériques. Dans le bétail, les eimerioses sont provoquées par une quinzaine d'espèces, dont les plus fortement pathogènes sont Eimeria bovis et Eimeria zuernii, et plus occasionnellement Eimeria auburnensis. Ce sont des parasites intestinaux (intestin grêle, caecum, côlon), causant de graves diarrhées qui sont hémorragiques quand l'espèce E. zuernii est impliquée. Ce sont les jeunes veaux âgés de 1 à 6 mois qui sont les animaux les plus sensibles ; cependant, les individus plus âgés (1 à 2 ans) peuvent être affectés. Les pertes annuelles sont de l'ordre de 100 millions US$ aux USA. Les coccidioses en cuniculture (lapin) sont également importantes. Les espèces responsables sont au niveau intestinal : Eimeria intestinalis et Eimeria flavescens, et au niveau hépatique : Eimeria stiedai. Les diarrhées entraînent chute de poids et mortalité. Il est difficile, sinon impossible, d'empêcher la coccidiose par la seule hygiène. Il est nécessaire d'ajouter une drogue coccidiostatique à l'alimentation qui prévient la croissance des coccidies dans la région digestive et leur multiplication. Les coccidioses demeurent un problème important en aviculture, malgré les molécules efficaces présentes sur le marché (problème de chimiorésistance) et le lancement sur le marché d'un vaccin atténué (Paracox). Le problème augmente en raison de l'évolution de la législation européenne au sujet de l'utilisation des additifs et de la pression des consommateurs. Le toxoplasme, quant à lui, est un parasite intracellulaire obligatoire responsable d'avortement chez la brebis et la femme, ainsi que de problèmes très graves pour le foetus ou chez l'immunodéprimé tel le sidéen (toxoplasmose cérébrale mortelle). L'infestation est réalisée par ingestion d'ookystes produits par le chat ou par celle de la viande (mouton, boeuf). Il est à noter que, dans les pays occidentaux développés, 50 à 60% des humains sont parasités par le toxoplasme sous forme de micro-kystes dans les muscles et le cerveau. Or, il a été montré des troubles du comportement aussi bien chez les rongeurs (expérimentalement) que chez les humains (analyse de dossiers psychologiques et psychiatriques ; Nature). De nombreuses molécules ont été étudiées, mais elles ne traitent le plus souvent que les symptômes dus à la forme de multiplication ou sont relativement cytotoxiques. Il convient donc de rechercher des molécules à effet anti-kystique étant non cytotoxiques. Il est important de noter que la physiologie et le métabolisme des coccidies appartenant aux genres Toxoplasma et Eimeria sont similaires. Au-delà de la préservation de la santé des animaux, l'enjeu majeur de la médecine vétérinaire est la garantie de la sécurité des hommes. Il s'agit d'éviter toute transmission de microbes ou de résidus médicamenteux par des aliments d'origine animale, tout en empêchant la propagation de zoonoses préjudiciables à la santé humaine. Grâce aux médicaments vétérinaires, l'homme a réussi à enrayer, voire à éradiquer des maladies graves comme la tuberculose et la fièvre aphteuse. De nouveaux produits permettent aussi de mieux protéger le bétail contre les infections de toutes sortes. Cependant, en dépit de nombreux succès engrangés, le besoin de nouveaux médicaments innovateurs ou de nouveaux additifs alimentaires dans le cadre de la médecine vétérinaire reste important. La demanderesse a découvert de manière surprenante que des hétérocycles oxygénés choisis parmi les xanthones et les biflavonoïdes pouvaient être utilisés en tant qu'agents anti-coccidiens, en particulier dans la prévention ou le traitement de maladies parasitaires du type coccidioses, telles que l'eimeriose ou encore la toxoplasmose, chez l'homme ou l'animal. Ces hétérocycles oxygénés sont des composés naturels qui peuvent être extraits de plantes, et qui présentent l'avantage d'être non cytotoxiques. En particulier, les xanthones sont des métabolites secondaires que l'on retrouve dans les plantes supérieures, les lichens et les champignons. Des xanthones C et O glycosides ont été mises en évidence (Hostettmann et al, Phytochemistry, 1977, 481). Les plantes appartenant à la famille des Guttiféracées sont connues pour élaborer des xanthones oxygénées, et plus particulièrement des xanthones isoprénylées (Banerjii 1994). Une série de xanthones isoprénylées isolées de Moracées ont été caractérisées et leurs activités mises en évidence (effet hypotensif, antirhinoviral, et antitumoral ( Hano et al 1990, Planta Medica, 478). Les xanthones ont été étudiées d'un point de vue chimiotaxonomique, mais aussi pour leurs propriétés biologiques et pharmacologiques (Cardona et al, 1990, Phytochemistry, 3003). Il a ainsi été montré que certaines de ces xanthones ont des propriétés antivirale, cardiotonique, antimicrobienne, ou antihépatotoxique (Banerji et al 1994). En outre, les xanthones et leurs dérivés sont bronchodilatateurs dans le traitement de l'asthme (Balasubramanian 1988). Cependant, les xanthones n'ont jamais été décrites jusqu'à présent comme agents anti-coccidiens, pour prévenir ou traiter les coccidioses, en particulier provoquées par les micro-organismes parasitaires Eimeria, Isospora, Toxoplasma, Besnoitia et Neospora. La présente invention a ainsi pour objet l'utilisation d'hétérocycles oxygénés choisis parmi les xanthones et les biflavonoïdes pour la préparation d'une composition destinée à agir comme agent anti-coccidien, les coccidies étant choisies dans le groupe constitué par Eimeria, Isospora, Toxoplasma, Besnoitia et Neospora. Par le terme de "xanthone", on entend au sens de la présente invention, les composés de formule : Par le terme de "biflavonoïde", on entend au sens de la présente invention, les composés de formule : ou Dans un mode de réalisation particulier de la présente invention, les hétérocycles oxygénés sont des xanthones répondant à la formule générale (I) (I) dans laquelle chacun des radicaux RI à R6 représente indépendamment un atome d'hydrogène, un radical hydroxy (OH), un radical alcoxy avantageusement en C1 à C6, un radical alkyle, linéaire ou ramifié, avantageusement en C1 à C6, ou un radical alcène linéaire ou ramifié, avantageusement en C1 à C6, ou bien RI et R2 forment ensemble un cycle, tel qu'un dérivé pyranique ou furanique, éventuellement substitué par au moins un groupe alkyle avantageusement en C1 à C6.15 Selon un exemple de réalisation de la présente invention, chacun des radicaux R1 à R6 représente indépendamment un atome d'hydrogène, un radical hydroxy, un radical alcoxy en C1 à C6, tel qu'un méthoxy, ou un radical alcène linéaire ou ramifié, avantageusement en C1 à C6, typiquement en C1 à C5. Parmi les composés de formule (I) de la présente invention, on peut citer les composés préférés suivants : R1, R2, R3 et R5 représentent un atome d'hydrogène ; R4 représente un radical hydroxy ; et R6 représente un radical alcoxy, avantageusement un radical méthoxy. R1 et R6 représentent un radical alcène ramifié, avantageusement en C1 à C5, tel qu'un groupe prényle ; R2 représente un radical hydroxy ; R3 et R4 représentent un atome d'hydrogène ; et R5 représente un radical alcoxy, avantageusement un radical méthoxy. R1, R4 et R6 représentent un radical alcène ramifié, avantageusement en C1 à C5, tel qu'un groupe prényle ; R3 représente un atome d'hydrogène ; et R2 et R5 représentent un radical hydroxy. Selon un autre exemple de réalisation de la présente invention, R1 et R2 forment ensemble un cycle tel qu'un dérivé pyranique ou furanique, avantageusement substitué par au moins un groupe alkyle, typiquement en C1 à C6. Dans cet exemple de réalisation, R3 représente avantageusement un radical alcène linéaire ou ramifié, avantageusement en C1 à C6, typiquement en C1 à C5 ; et R4, R5 et R6 représentent avantageusement chacun indépendamment un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy. Parmi les composés de formule (I) de la présente invention, on peut citer le composé préféré suivant : R1 et R2 forment ensemble un cycle pyranique, avantageusement substitué par au moins un groupe méthyle, en particulier substitué par un groupe gem diméthyle, typiquement en position 2 ; R3 représente un radical alcène ramifié, tel qu'un groupe 1,1-diméthyl-2-propène ; R4 représente un radical hydroxy ; et R5 et R6 représentent un atome d'hydrogène. Avantageusement, le composé (I) a la formule suivante : O OH HO Dans un autre mode de réalisation particulier de la présente invention, les 5 hétérocycles oxygénés sont des biflavonoïdes répondant à la formule générale (II) OH HO OH OH (II) dans laquelle le radical R représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy. 10 Les xanthones et biflavonoïdes selon la présente invention sont avantageusement des composés naturels, extraits à partir de plantes, typiquement des végétaux d'origine africaine. De manière particulièrement avantageuse selon la présente invention, les hétérocycles oxygénés du type xanthones et biflavonoïdes sont extraits de plantes choisies dans le groupe constitué par Vismia laurentii, Pentadesma grandifolia, 15 Allanblackia monticola, Allanblackia floribunda, et Allanblackia gabonensis. Dans le cadre de la présente invention, on peut utiliser avantageusement comme agents anti-coccidiens les xanthones ou biflavonoïdes tels que définis ci-dessus, ou bien des extraits contenant de tels composés. 20 Les xanthones et biflavonoïdes utilisés selon la présente invention peuvent également avoir été synthétisés chimiquement. Avantageusement, la composition selon la présente invention est destinée à la prévention ou au traitement de coccidioses, telles que les eimerioses ou toxoplasmoses, chez l'homme ou l'animal. En particulier, cette composition peut être utilisée pour prévenir ou traiter les maladies parasitaires du bétail, par exemple des bovins, des lapins, des porcs, ou des oiseaux, par exemple de la volaille telle que les poulets ou les dindes. Avantageusement, la composition de la présente invention est destinée à être administrée par voie orale. La composition selon la présente invention peut en particulier se présenter sous forme de comprimé, gélule, poudre, granule, solution ou suspension orale. Avantageusement, la composition de la présente invention est une composition pharmaceutique, une composition alimentaire telle qu'un aliment, une nourriture ou une boisson, un complément alimentaire ou un additif alimentaire. La composition selon la présente invention peut contenir des excipients acceptables, ainsi que des additifs conventionnels. La présente invention a également pour objet un nouveau composé répondant à la formule suivante (Ia), la laurentinone A : OH (Ia) Les figures et exemples suivants sont donnés à titre non limitatif et illustrent la présente invention. La Figure 1 représente l'étude de la cytotoxicité in vitro sur lignée cellulaire humaine des produits EVL9 (concentration : 0,01 mg/mL et 0,005 mg/mL) et PG2 (concentration : 0,01 mg/mL et 0,005 mg/mL). La Figure 2 représente l'étude de la cytotoxicité in vitro sur lignée cellulaire humaine des produits AM5 (concentration : 5 g/mL), AFR6 (concentration : 5 g/mL et 10 g/mL), AFR 7 (concentration : 5 g/mL et 10 g/mL), AFR8 (concentration : 5 g/mL et 10 g/mL), EAFR (concentration : 10 g/mL), EFAM (concentration : 5 g/mL et 10 g/mL), et ERAM (concentration : 5 g/mL et 10 g/mL). La Figure 3 représente l'activité antiparasitaire des produits ERPG (concentration : 0,02 mg/mL et 0,01 mg/mL), et ETVL (concentration : 0,02 mg/mL, 0,01 mg/mL et 0,002 mg/mL), sur cellules infestées. La Figure 4 représente l'activité antiparasitaire de PG2 (concentration : 0,005 mg/mL, 0,01 mg/mL) sur cellules infestées. La Figure 5 représente l'activité antiparasitaire de EVL9 (concentration : 0,005 mg/mL et 0,01 mg/mL) sur cellules infestées. La Figure 6 représente l'activité antiparasitaire de AM5 (concentration : 5 g/mL), AFR6 (concentration : 5 g/mL), AFR7 (concentration : 5 g/mL et 10 g/mL), AFR8 (concentration : 5 g/mL et 10 g/mL), EAFR (concentration :10 g/mL), EFAM (concentration : 5 g/mL et 10 g/mL), et ERAM (concentration : 5 g/mL et 10 g/mL), sur cellules infestées. La Figure 7 représente les pourcentages de croissance des poulets pour les produits ayant un effet coccidiostatique, tels EFAM, EAGC, AM5, AFR8, et PG2, sur une période de 26 jours. Les pourcentages sont calculés par rapport au témoin non inoculé et non traité (ce témoin = 100% de croissance des poulets). Pour le témoin inoculé non traité, il y a eu 55% de mortalité. La Figure 8 représente les pourcentages de croissance des poulets pour les produits ayant un effet coccidiostatique, tels EFAM, ERAM, ERPG, et ETVL, sur une période de 48 jours. Les pourcentages sont calculés par rapport au témoin non inoculé et non traité (ce témoin = 100% de croissance des poulets). Pour le témoin inoculé non traité, il y a eu 55% de mortalité. La Figure 9 représente le taux de mortalité lors des essais coccidiostatiques.30 Exemples : Exemple 1 : Préparation de composés de formule (I) : 1,5,6-trihydroxy-8-méthoxyxanthone : laurentinone A (EVL9) R1, R2, R3 et R5=H;R4=OH,etR6=OCH3 La laurentinone A a été extraite de la plante Vismia laurentii. Vismia laurentii est un arbuste de 1,5 à 3 m pouvant atteindre 15 m de hauteur, qu'on retrouve dans la forêt africaine, en général et plus précisément au Sénégal, Libéria, Ghana, Nigeria, Côte d'Ivoire, Sierra Leone et au Cameroun. Extraction Des tiges de Vismia laurentii, récoltées au Cameroun, ont été découpées, séchées, puis broyées. La poudre obtenue, 3 kg, a été extraite par macération à température ambiante pendant 48 heures dans le méthanol (10 L). Après filtration, la solution résultante a été concentrée par évaporation sous pression réduite pour donner 150 g d'un résidu visqueux de couleur marron qui constitue l'extrait ETVL. Ce dernier est caractérisé sur la base de la chromatographie sur couche mince de gel de silice dans l'hexaneûacétate d'éthyle 75 : 25, et révélé à l'UV et à l'acide sulfurique. Isolement : Cet extrait ETVL a été soumis à une chromatographie flash sur gel de silice (Merck 60, 70-230 Mesh) et élué avec un mélange hexane-AcOEt de polarité croissante. 50 fractions de 250 ml chacune ont été collectées et réunies sur la base de la C.C.M., conduisant ainsi à 5 séries dénommées Sl-S5. Traitement de la série : La série S2 (9 g), obtenue de la chromatographie flash par élution à l'aide du mélange hex-AcOEt (3/1), a été à son tour soumise à une chromatographie sur colonne de gel de silice (70-230 mesh) en utilisant le mélange HexaneûAcOEt comme gradient d'élution. Un total de 105 fractions, d'une capacité de 150 ml chacune, a été collecté et rassemblé sur la base de la C.C.M. 10 Les fractions F53-63, obtenues à partir de la fraction S2 par élution avec le mélange HexaneûAcOEt (4/1), ont été rassemblées et soumises de nouveau à une chromatographie sur colonne de gel de silice, éluées avec un mélange HexaneûAcOEt de polarité croissante. 40 fractions de 15 ml chacune ont été collectées. De la fraction F28-33, éluée avec le mélange HexaneûAcOEt (85/15), le composé EVL9 précipite à température ambiante sous forme de poudre jaune (18 mg). Structure de EVL9 ou laurentinone A : La laurentinone A a été obtenue sous forme d'une poudre jaune orangée. Il fond dans le mélange hexaneûacétate d'éthyle, et donne en solution dans le méthanol une réaction positive au chlorure ferrique, indiquant la présence en son sein d'hydroxyles phénoliques. La formule brute C14H10O6 a été déduite de son spectre de masse à haute résolution ESI-TOF en mode positif, sur lequel on observe le pic de l'ion pseudomoléculaire [M+H]+ à m/z 275,0586, correspondant à la formule C14H11O6 et renfermant 10 degrés d'insaturation. Le spectre UV de ce composé pris dans le méthanol présente cinq maxima d'absorption à ~,max 204, 237, 266, 331 et 410, caractéristiques des xanthones tétraoxygénées (Terreaux et al., 1995 ; Imuna et al., 1996). La présence au sein de la laurentinone A d'hydroxyles phénoliques, d'un carbonyle et d'un grand nombre de carbones sp2, est corroborée par l'existence sur son spectre IR des bandes de vibration de valences caractéristiques à u3453 cm-1 (OH libre), u3115 cm-1 (OH chélaté), u1664 cm-1 (carbonyle conjugué et chélaté), u1617, 1584 cm-1 (C=C aromatiques). Son spectre de RMN 13C Jmodulé (75,45 MHz, DMSO-d6, Cf tableau 1) présente 14 signaux dus aux 14 atomes de carbone présents dans la molécule. L'analyse de ces signaux au moyen des techniques APT et HSQC permet de mettre en évidence : 9 signaux de phase négative, correspondant tous à des carbones quaternaires, parmi lesquels un signal de carbonyle à 8180,7, et six carbones oxygénés hybridés sp2 résonant entre M42,6 et 160,9 ; 5 signaux de phase positive correspondant aux carbones primaires et tertiaires, dont quatre autres signaux, tous hybridés sp2, et résonant à 895,3 ; 106,9 ; 109,5 et 136,3 étant dus aux carbones tertiaires, et un hybridé sp3 du au groupement méthoxyle et résonant à 855,9. Le spectre de RMN'H (300 MHz, DMSO-d6, Cf. tableau 1), complété par le spectre COSY 45 de ce composé, révèle la présence : - d'un hydroxyle phénolique chélaté à 812,95 (1H, s), attribuable à l'hydroxyle en position 1 ; - deux signaux échangeables tous à l'eau lourde à 8 10,25 et 9,75, attribuables aux hydroxyles phénoliques ; un système ABM de trois protons aromatiques constitués d'un triplet d'un proton à 8 7,65 ayant une constante de couplage J = 8,4 Hz et deux doublets dédoublés d'un proton chacun respectivement à 8 7,00 et 6,85, avec pour constantes de couplage J= 8,4 et1,9Hz; - un singulet d'un proton aromatique à 8 7,10 ; - et un singulet de trois protons à 8 3,90, attribuables aux protons d'un groupement méthoxyle. Tableau 1 : Données spectrales de RMN 13c et RMN ' H de la laurentinone A Attribution 13C Multiplicité 'H[m, J (Hz)] 1 160,9 s - 2 109,5 s 6,85 (dd, 8.4, 1.9) 3 136,30 s 7,65 (t, 8.4) 4 106,9 d 7,00 (dd, 8.4, 1.9) 4a 155,6 s - 5a 142,6 s - 5 133,3 d - 6 142,8 s - 7 95,3 s 7,10 (s) 8 146,2 s - 8a 111,3 s - 9 180,7 s - 9a 107,6 s - 1-OH 12,95 (s) 5-OH - - 9,75 (s) 6-OH -- 10,25 (s) Le spectre NOESY de EVL9 montre clairement que le système ABM est localisé sur le cycle A du cycle xanthonique . Le groupement méthoxyle est localisé en position 8 soit en position péri par rapport au carbonyle ((SH 3,90/ 8X 55,9) (Terreaux et al., 1995). Ceci est confirmé par le spectre HMBC. Sur le spectre NOESY de la laurentinone A, on observe que l'unique proton du cycle B est en position 7 et les deux hydroxyles phénoliques en position 5 et 6. Sur le base de toutes ces données, la structure de EVL9 ou 1,5,6-trihydroxy-8-méthoxyxanthone a été attribuée à la laurentinone A. Cette structure est décrite pour la première fois du règne végétal et dans la littérature. OH laurentinone A Exemple 2 : Préparation de composés de formule (I) : 1,3,6,7-tétrahydroxy-2,5,8-tri(3-méthylbut-2-ènyl)xanthone : garcinone E (PG2) RI, R4, et R6 = groupe prényle ; R3 = H ; et R2 et R5 = OH 20 La garcinone E a été extraite de la plante Pentadesma grandifolia. Pentadesma grandifolia est un arbre pouvant atteindre 20 mètres de hauteur et 80 centimètres de diamètre, à fût droit, cylindrique, sans contrefort à la base, qu'on retrouve en Afrique, et particulièrement au Cameroun en altitude entre 800 et 1600 m.15 Extraction et purification : Des écorces de Pentadesma grandifolia, récoltées au Cameroun, ont été découpées en petits morceaux, séchées, et broyées. La poudre obtenue, 4 kg, est macérée dans 8L de mélange chlorure de méthylèneûméthanol (1 :1) à froid pendant 48H. L'évaporation du solvant sous pression réduite a permis d'obtenir 156 g d'un résidu visqueux de couleur jaunâtre qui constitue l'extrait ERPG, caractérisé par sa C.C.M dans l'acétate d'éthyleûméthanol 75 : 25, et révélé à l'UV et à l'acide sulfurique. Isolement : Une partie de cet extrait ERPG, 90g, a été chromatographiée dans une colonne de gel de silice en utilisant comme éluant le mélange hexaneûacétate d'éthyle de polarité croissante. Les fractions de 100 mL sont collectées et réunies sur la base de la C.C.M. Ceci a permis d'obtenir neuf séries indexées de B1 à B9. La série B5, constituée des fractions 85û106 éluées avec le système hexaneacétate d'éthyle (7 :3), a été rechromatographiée dans une colonne de gel de silice, éluée avec le système hexaneûacétate d'éthyle (7,5 : 2,5). Les fractions de 100 mL sont collectées. Des fractions 34-65, PG2 cristallise sous forme de cristaux jaune-orangés et est soluble dans l'acétone. Caractérisation du composé PG2 : Le composé PG2 a été obtenu sous forme de cristaux jaune-orangés et fond à 134-136 C. Il donne une réaction positive au test au chlorure ferrique, caractéristique des hydroxyles phénoliques. Son spectre de masse ESI-TOF, à haute résolution et en mode positif, donne un ion quasi-moléculaire à m/z 465,2244 (C28H33O6), correspondant à la molécule protonée [M+H]+, ainsi que deux ions à m/z 488 et 504 correspondant respectivement aux adduits [M+Na]+ et [M+K]+. On en déduit que le composé PG2 a une masse molaire de 464, correspondant à la formule brute C28H32O6 (13 degrés d'insaturation). Le spectre infra-rouge (IR) de ce composé, enregistré sur pastille de KBr, exhibe entre autres, des bandes de vibration de valences caractéristiques d'un hydroxyle libre (v 3460 cm-'), d'un hydroxyle chélaté (v 3250 cm') et d'un carbonyle conjugué (v 1647 cm-'). On observe également sur ce spectre des bandes d'absorption correspondant aux fréquences de vibration de valence des doubles liaisons C=C des aromatiques et des oléfines (v 1650 cm-'), ainsi que celles dues aux liaisons C-O des éthers (v 1245, 1118 cm-'). Son spectre de RMN 13C Jmodulé (75,45 MHz, acétone-d6, Cf. Tableau 2) présente 28 signaux dus aux 28 atomes de carbone présents dans la molécule. L'analyse du spectre permet de mettre en évidence 18 signaux de phase négative, correspondant aux carbones secondaires et quaternaires, parmi lesquels un signal de carbonyle à M83,2, et au moins six carbones oxygénés hybridés sp2 résonant entre M44,1 et 162,9 ; 10 signaux de phase positive correspondant aux carbones primaires et tertiaires, dont six méthyles résonnant à M7,5 ;17,7 ; 18,1 ; 25,7 ; 25,8 ; 25,9 ; les quatre autres signaux, tous hybridés sp2 et résonant à 893,2 ; 123,8 ; 124,9 et 125,2, étant dus aux carbones tertiaires. Toutes ces informations, combinées avec la présence sur le spectre de RMN 1H (300,1 MHz, acétone-d6, Cf. tableau 2) d'un signal d'un proton à M3,90, correspondant à un hydroxyle chélaté, montre que le composé PG2 est une xanthone. Sur le spectre de RMN 1H, on observe, en outre : - un signal intégrant deux protons échangeables à l'eau lourde à 89,43 et un troisième à 2,80 attribuable à trois groupements hydroxyles, - un singulet d'un proton à 6,38, attribuable à un proton aromatique, - enfin, trois ensembles de signaux attribuables aux groupements caractéristiques y,ydiméthylallyle et constitués de trois protons oléfiniques à 85,28 (m, H-2') ; 5,26 (m, H-2") et 5,25 (m, H-2"') ; trois paires de protons allyliques à 83,46 (d, J=7,12 Hz, CH2- 1') ; 3,56 (d, J=7,19 Hz, CH2-1") et 4,20 (d, J=7,35 Hz, CH2-1"') et six groupements méthyle à M,68 (s, CH3-5', 5", 5') ;1,80 (s, CH3-4"') ; 1,82 (s, CH3-4') et 1,86 (s, CH3-4"). Sur le squelette xanthonique, le premier groupement prényle occupe la position C-8, et se trouve en position péri, en raison du déblindage que subissent ces protons allyliques H-1" de la part du cône d'anisotropie paramagnétique du carbonyle, puisqu'il résone à 84,20 au lieu de ô3,2-3,40. Le deuxième groupement y,y-diméthylallyle, se trouve en position C-2 sur la base des corrélations à longue distance C, H, observées sur son spectre HMBC. En effet, sur ce spectre, les protons du CH2 allylique en position - 1' (83,46) donnent, entre autres, des tâches de corrélations 3J avec le carbone C-1 résonant à M61,5 et le carbone C-2 résonant à M11,0. Cette position est confirmée en plus par les corrélations observées sur le spectre NOESY entre les protons allyliques H- 1' et le proton de l'hydroxyle chélaté en position 1. Le proton aromatique résonant à 86,38 est donc localisé en position C-4 et présenteà la fois les tâches de corrélations 2J, 3J avec les carbones C-4a (155,2) et C-3 (163,0), le troisième groupement prényle occupe la position 5. Sur la base de toutes ces données physiques et spectrales, la structure de la 1,3,6,7-tétrahydroxy-2,5,8-tri (3-méthylbut-2-ényl)xanthone, encore appelée garcinone E, a été attribuée à PG2. Ce composé a été décrit pour la première fois par Sakai et Coll. en 1993. Tableau 2 : Données spectrales de RMN 13C et RMN'H de la garcinone E Attribution 13C Multiplicité 1H[m, J (Hz)] 1 161,5 s - 2 111,0 s - 3 163,0 s - 4 93,2 d 6,38 (s) 4a 155,2 s - 5a 153,5 s - 5 112,1 d - 6 153,2 s - 7 144,1 s - 8 109,1 s - 8a 119,2 s - 9 183,2 s - 9a 103,0 s - 1' 21,9 t 3,46 (d, 7.12) 2' 123,8 d 5,28 (t, 7.12) 3' 133,3 s - 4' 17,7 q 1,82 (s) 5' 25,7 q 1,68 (s) 1" 26,2 t 3,56 (d, 7.19) 2" 124,9 d 5,26 (t, 7.19) 3" 133,2 s - 4" 18,1 q 1,86 (s) 5" 25,9 q 1,68 (s) 1"' 23,2 t 4,20 (d, 7.35) 2"' 125,2 d 5,25 (t, 7.35) 3"' 134,5 s - 4"' 17,5 q 1,80(s) 5"' 25,8 q 1,68 (s) 1-OH - - 13,90 (s) 3-OH - - 2,80 (brs) 6,7 -OH - - 9,43 (brs) Exemple 3 : Préparation de composés de formule (I) ou (II) extraits, isolés et purifiés à partir des plantes d'Allanblackia monticola et d'Allanblackia floribunda, et préparation d'extraits à partir de la plante d'Allanblackia gabonensis Le composé (I), dans lequel RI et R6 = groupe prényle ; R2 = OH ; R3 et R4 = H ; et R5 = OCH3, a été extrait de la plante Allanblackia monticola. Il s'agit de l'amangostine (AM5). Le composé (I), dans lequel RI et R2 forment ensemble un cycle pyranique, substitué par un groupe gem diméthyle ; R3 représente le groupe 1,1-diméthyl-2-propène ; R4 = OH ; et R5 et R6 = H, a été extrait de la plante Allanblackia floribunda. Il s'agit de la macluraxanthone (AFR6). Le composé (II), dans lequel R = H, a été extrait de la plante Allanblackia floribunda. Il s'agit de la volkensiflavone (AFR7). Le composé (II), dans lequel R = OH, a été extrait de la plante Allanblackia floribunda. Il s'agit de la morelloflavone (AFR8). Allanblackia monticola est un arbre d'environ 20m de hauteur et de 60 cm de diamètre. Les écorces sont marrons avec des entailles internes jaunes et des entailles externes rouges. Les fleurs sont jaunes et dégagent une odeur caractéristique vers 11 heures de la matinée. Les fruits, plus ou moins ovoïdes ou allongés d'environ 12 cm, renferment en outre de nombreuses graines (10 à 12 graines environ par fruit). Allanblackia floribunda est un arbre atteignant 30 m de hauteur et 80 cm de diamètre avec un empattement à la base, un fût droit et cylindrique, des branches courtes, horizontales, très nombreuses formant un panache de feuillage dense. L'écorce est brune, mince, écailleuse ; la tranche cassante, rougeâtre à l'extérieur, jaune à l'intérieur, exsude un latex jaune. Les feuilles persistantes, sont opposées, simples, entières (12-25 x 5-8 cm) coriaces, luisantes en dessus à très nombreuses nervures latérales parallèles, à pétioles long de 1 à 1,5 cm. Les fleurs sont grosses (5 cm de diamètre) disposées en grappes. Elles sont de couleurs blanche, rose ou rouge de type 5 unisexuées à pédicelles long de 2,5 à 8 cm. Les fruits sont des baies allongées (20 à 50 x 8 à 15 cm), brunes claires piquetées de châtains à 5 côtes plus ou moins marquées, pendantes à l'extrémité d'un pédoncule laissant exsuder un latex jaune abondant. Les graines (2,5 x 2 cm) nombreuses (40 à 100 par fruit) et brunes sont entourées d'une pulpe gélatineuse et rosâtre. Elle renferme une matière grasse comestible (beurre de boandjo par Yokadouma) (Vivien et Faure, 1995). Allanblackia gabonensis est l'une des espèces du genre Allanblackia qui se retrouve en Afrique tropicale (Cameroun, Zaïre) entre 500 et 1750 m d'altitude. Ce sont des arbres à base à peine évasée, mais parfois avec contreforts a fût droit. Ses branches sont horizontales et retombantes. L'écorce est rougeâtre et écailleuse. La tranche rougeâtre exsude un latex jaune. Cette espèce a de petites feuilles (6 à 12 cm de long et 2,5 à 5 cm de large) obovales, cuspidées, opposées et rouges pendantes. Elle a des pédicelles épais de 2 à 6 cm de long, de grosses fleurs blanches, rouges ou roses et unisexuées. Ses fruits, globuleux ou ovoïdes, bruns clairs piquetés de châtain contiennent de 10 à 12 graines par fruit. Des écorces du tronc, racines, feuilles et fruits de Allanblackia monticola, ainsi que des racines de Allanblackia floribunda, et des fruits de Allanblackia gabonensis, ont été récoltés au Cameroun. Extraction : Obtention des extraits EAFR, EAM, EFAM, ERAM, et EAGC Les écorces du tronc, racines et feuilles de Allanblackia monticola ont été découpées séparément en petits morceaux, séchées, puis broyées. Ceci a permis d'obtenir respectivement 3 kg d'écorce du tronc, 2,5 kg de feuilles, et 2 kg de racines. L'extraction par macération dans le mélange chlorure de méthylène-méthanol (1/1) des différentes poudres a permis d'obtenir, après évaporation sous pression réduite, 250 g d'extrait des écorces du tronc (EAM), 225 g d'extrait des feuilles (EFAM), et 115g d'extrait des racines (ERAM). Les racines de Allanblackia floribunda ont été découpées en petits morceaux, séchées, puis broyées. La poudre résultante, 5 kg, est extraite par macération successivement au mélange CH2C12-MeOH (1:1) pendant 24 heures et au MeOH pur pendant 4 heures. Chacun des extraits est concentré à sec sous pression réduite au moyen d'un évaporateur rotatif, et donne respectivement 137 g au CH2C12-MeOH et 45 g au MeOH pur, qui sont réunis sur la base de la C.C.M. analytique pour conduire à un extrait total (EAFR). Les fruits de Allanblackia gabonensis ont été débarrassés de leurs graines, et les coques ont été découpées, séchées puis broyées. La poudre (250g) ainsi obtenue a été extraite par macération à froid dans le mélange CH2C12-MeOH (1 :1) pendant 48 heures. Après concentration à sec du solvant sous pression réduite, 18g d'extrait EAGC au CH2C12-MeOH ont été obtenus. Isolement et purification du composé AM5 150 g des 250 g d'extrait brut des écorces du tronc d'Allanblackia monticola sont fractionnés sur une colonne flash contenant 200 g de silice de granulométrie 70-230 mesh. L'élution est faite au moyen d'un mélange hexane-acétate d'éthyle de polarité croissante. Les fractions de 300 ml sont collectées et réunies sur la base de la CCM. Ceci a permis d'obtenir 4 séries indexées A, B, C et D. La série B, issue des fractions 18-39 qui ont été éluées avec le système hexane- acétate d'éthyle 7,5/2,5, est constituée d'une masse visqueuse de 25 g. Elle est chromatographiée sur une colonne de silice (granulométrie 70-230 mesh) et éluée avec le mélange hexane-acétate d'éthyle de polarité croissante. 95 fractions de 150 ml chacune ont été recueillies et réunies sur la base de la CCM. Les fractions 71-80, rassemblées sur la base de la chromatographie sur couche mince, renferment 4 produits, après plusieurs chromatographies sur colonne utilisant comme éluant le système hexane-acétate 9/1. Ainsi, deux composés ont pu être isolés à l'état pur, parmi lesquels 15 mg d'une poudre jaune soluble dans l'acétone, indexée AM2, et 300 mg de cristaux jaunes, indexés AM5. Composé AM5 (a-mangostine) : Ce composé cristallise sous forme de poudre jaune ; PF = 178 - 180 C ; Masse moléculaire 410 g/mol ; Formule brute : C24H26O6. Isolement et purification des composés AFR6, AFR7 et AFR8 150 g des 182 g de l'extrait total (EAFR) d'Allanblackia floribunda ont été soumis à une chromatographie "flash" contenant 500 g de silice de granulométrie 70-230 mesh en vue d'un fractionnement, et ont été élués respectivement au chlorure de méthylène, au mélange hexane-acétate d'éthyle 50 %, à l'acétate d'éthyle pur, et enfin au mélange acétate d'éthyle-méthanol 10 %. 20 fractions de 400 ml chacune ont été collectées et réunies sur la base de la CCM. Les fractions 50 à 53, éluées avec le système hexane-acétate d'éthyle (9/1), précipitent sous forme d'une poudre jaune qui, après lavage et filtration, fournit un 10 composé pur indexé AFR6. La série B, constituée des fractions 6 à 13 qui ont été éluées avec les systèmes Hexane-AcOEt 50 % et AcOEt pur 100 %, est constituée d'une masse visqueuse de 40 g. Cette série est rechromatographiée dans une colonne de gel de silice, et éluée avec le système Hexane-AcOEt de polarité croissante. Les fractions de 150 ml sont collectées 15 et regroupées sous la base de la CCM. Les fractions 37 à 45 cristallisent après 3 jours dans le chlorure de méthylène sous forme de cristaux jaunes qui, après lavage et filtration, donnent un composé soluble à l'acétone indexé AFR7. Les fractions 50-62 cristallisent également dans le chlorure de méthylène sous 20 forme de cristaux jaunes qui, après lavage et filtration, fournissent un composé indexé AFR8. Macluraxanthone (AFR6) ^ Cristallise sous forme de cristaux jaunes 25 ^ Test au chlorure ferrique positif ^ P.F. 171 C ^ Formule brute C23H22O6 Volkensiflavone (AFR7) 30 ^ Cristallise sous forme de cristaux jaunes dans le chlorure de méthylène ^ Test au chlorure ferrique positif ^ P.F 201,6-202,8 C ^ Formule brute C30H20010 Morelloflavone (AFR8) ^ Cristallise sous forme de poudre jaune dans le chlorure de méthylène 5 ^ Test au chlorure ferrique positif ^ P.F 244,6-245,8 C ^ Formule brute C30H20011 H3CO 10 HO AFR6 HO HO OH O 15 AFR7 (R=H) OH O AFR8 (R=OH) 20 Exemple 4 : Etude de l'activité biologique des produits in vitro Exemple 4.1. Evaluation de la cytotoxicité à la sulforhodamine B des composés (I) ou (I) et des extraits contenant de tels composés selon la présente invention La sulforhodamine B (SRB) est un colorant qui se lie aux protéines, et dont l'adsorption peut être mesurée au spectrophotomètre à 550 nm (coloration rose). Pour ce test, des cellules MRCS fibroblastes humains (Biomérieux) ont été cultivés à 37 C dans une plaque 96 puits (Costar), à raison de 2.104 cellules par puits, dans 200 l de milieu MEM (Gibco), auquel 5% de sérum de veau foetal ont été ajoutés. Après 24h de culture, le milieu est changé et les extraits, dont on veut tester la toxicité, sont ajoutés après avoir été repris dans le volume de solvant approprié indiqué (diméthylsulfoxyde ou eau). Les concentrations indiquées dans les figures de la présente demande sont les concentrations finales dans les puits. On laisse 48h en culture. On fixe ensuite les cellules en ajoutant 50 l de TCA (acide trichloroacétique) froid par puits, à la surface du milieu de culture, et on laisse reposer la plaque 5 minutes à température ambiante, puis 2 heures à 4 C. Le surnageant est ensuite éliminé, et les puits sont lavés 5 fois avec 100 l d'eau (la plaque étant vidée par retournement). On laisse alors sécher la plaque. Elle peut être conservée sèche jusqu'à coloration. 100 l de sulforhodamine B (à 0,4% dans de l'acide acétique 1%) sont ajoutés dans chaque puits. La coloration dure 20 minutes. La sulforhodamine est ensuite enlevée, et les puits rincés 5 fois à l'acide acétique 1%. On solubilise alors la coloration liée aux cellules pendant 5 minutes en ajoutant l00 1 de Tris Base 10mM (pH 10,5). La densité optique est lue à 550 nm sur un lecteur de microplaques (Bio-Rad model 550). Le résultat de l'analyse de la cytotoxicité des composés EVL 9 et PG2 apparaît sur la Figure 1. Cette figure montre ainsi que les produits EVL9 (laurentinone A) et PG2 (garcinone E), aux concentrations 0,01 mg/mL et 0,005 mg/mL, ne sont pas cytotoxiques. Le DMSO à 20% utilisé comme contrôle est quant à lui toxique, puisque plus de 60% de cellules sont tuées. Le résultat de l'analyse de la cytotoxicité des produits AM5 (a-mangostine), AFR6 (macluraxanthone), AFR7 (volkensiflavone), et AFR8 (morelloflavone), ainsi que des extraits contenant de tels composés : EAFR, EFAM, ERAM, apparaît sur la Figure 2. Il apparaît ainsi que les différents produits testés, à savoir les composés AM5, AFR6, AFR7, AFR8, et les extraits contenant de tels composés ne présentent pas de cytotoxicité significative aux concentrations utilisées. Exem.le 4.2. Evaluation de l'activité antiparasitaire anticoccidienne des composés ou (II) et des extraits contenant de tels composés Afin d'évaluer l'activité antiparasitaire (anticoccidienne) des composés et/ou des 10 extraits selon la présente invention, le test ELISA a été utilisé sur la coccidie Toxoplasma gondii (souche virulente RH) par mesure de l'activité 13-galactosidase. Le test est réalisé sur la reconnaissance spécifique d'un anticorps des protéines parasitaires de surface de Toxoplasma gondii (T. gondii), ce qui permet d'évaluer la multiplication du parasite. 15 La souche de T. gondii utilisée correspond à la souche RH recombinante, un gène codant la 13-galactosidase ayant été introduit dans le génome du parasite. Des cellules MRC5 (fibroblastes humains), confluentes dans des plaques 96 puits, sont infestées par 2.104 tachyzoites (200 L) pendant 1 heure. Après lavage des puits (une fois avec du MEM supplémenté), les extraits à tester sont ensuite ajoutés à 20 la bonne concentration dans un volume de 200 L. Deux témoins sont réalisés : des cellules saines d'une part, et des cellules infestées non traitées d'autre part. Après lyse des cellules (48 à 72 heures), on centrifuge la plaque 200 g pendant 5 minutes à température ambiante. La lyse est effectuée avec 50 L de tampon de lyse 1 25 heure à 50 C. Le tampon de lyse contient : - HEPES l00 mM pH 8 - MgSO4 l mM - Triton X l00 1 % 30 - DTT 5 mM La lyse est vérifiée au microscope photonique. On ajoute 160 L de tampon de réaction, et on laisse 5 minutes à 37 C.5 Le substrat de l'enzyme est ajouté dans les puits : 40 L de chlorophénolred-BD-galactopyranoside 6,25 mM en solution dans du tampon phosphate pH 7,3. Le tampon phosphate 0,1 M pH 7,3 contient: - NaH2PO4 le pH est ajusté à 7,3. Le tampon de réaction contient : - Tampon phosphate 100 mM pH 7,3 - B mercaptoéthanol 102 mM - MgC12 9 Mm. La réaction se fait à 37 C jusqu'à obtenir une coloration rouge. La Densité Optique (DO) à 540 nm (plus grande sensibilité à 570 nm) / 420 nm est mesurée. Celle-ci traduit la quantité de (3-galactosidase présente dans le puits, ce qui révèle donc la quantité de parasites présents dans le puits. Le résultat de l'analyse de l'activité anticoccidienne des extraits ERPG et ETVL apparaît sur la Figure 3. Les concentrations utilisées sont : 0,02 mg/mL, 0,01 mg/mL et 0,002 mg/mL. Elles ont été déterminées sur la base des résultats de l'étude de la cytotoxicité. Il s'agit bien de concentrations non cytotoxiques. Ainsi, l'effet de l'extrait ERPG à 0,02 mg/mL est le suivant : 96% + /- 0% ; à 0,01 mg/mL : 74%+/-1% ; et à 0,002 mg/mL : 56%+/-3%. L'effet de l'extrait ETVL à 0,02 mg/mL est le suivant : 95% + /- 0% ; à 0,01 mg/mL : 95%+/-0% ; et à 0,002 mg/mL : 68%+/-4%. La Figure 3 montre ainsi que les produits sont efficaces aux concentrations utilisées les plus élevées. Les résultats des activités anticoccidiennes des produits PG2 (garcinone E) et EVL9 (laurentinone A) apparaissent respectivement sur les Figures 4 et 5. Pour cette étude, les produits PG2 et EVL9 sont solubilisés dans le DMSO. L'effet des solutions de DMSO a été analysé au préalable. Il en ressort que les effets antiparasitaires des produits d'origine végétale observés sont dus à l'action des - Na2HPO4 1M 1M molécules, et non à l'action du DMSO. Les concentrations utilisées pour EVL9 et PG2 sont : 0,01 mg/mL et 0,005 mg/mL. Il apparaît sur ces figures que l'effet de la molécule EVL9 à 0,005 mg/mL est le suivant : 73% + /- 4% ; à 0,01 mg/mL : 86%+/-8%. Et, l'effet de la molécule PG2 à 0,005 mg/mL est le suivant : 86% + /-2%; à 0,01 mg/mL : 91%+/-7%. Les Figures 4 et 5 montrent ainsi que les produits sont efficaces aux concentrations utilisées. Ainsi, les deux composés ont une activité antiparasitaire (anticoccidienne) forte contre T.gondii : en moyenne 85 % d'inhibition de développement pour les deux concentrations testées (3 essais). Les extraits ERPG et ETVL ont également une activité antiparasitaire (anticoccidienne) élevée contre T. gondii. Le résultat des activités anticoccidiennes des produits AM5, AFR6, AFR7, AFR8, et des extraits EAFR, EFAM, et ERAM apparaît sur la Figure 6. Les concentrations utilisées sont : AM5 : 5 g/mL, AFR6 : 5 g/mL et 10 g/mL, AFR7: 5 g/mL et 10 g/mL, AFR8: 5 g/mL et 10 g/mL, EAFR : 10 g/mL, EFAM : 5 .ig/mL et 10 g/mL, ERAM : 5 g/mL et 10 .ig/mL. La Figure 6 montre que les produits sont efficaces aux concentrations utilisées. Il apparaît ainsi que les différents produits et extraits présentent en moyenne une activité anticoccidienne comprise entre 80 et 92%. Exemple 5 : Etude de l'activité biologique des produits in vivo. L'étude de l'activité biologique des produits in vivo a été réalisée sur des lots de poussins auxquels ont été administrées des solutions préparées avec les produits suivants (200mL/jour/poulet pendant 9 jours) : 30 Extraits testés : ERPG : 0,02 mg/mL et 0,04 mg/mL ETVL : 0,02 mg/mL et 0,04 mg/mL25 EFAM : 0.02 mg/mL ERAM : 0,02 mg/mL et 0,04 mg/mL EAGC : 0,02 mg/mL et 0,03 mg/mL Molécules testées : AM5 : 0,005 mg/mL AFR8: 0,005 mg/mL PG2: 0,005 mg/mL 15 Déroulement de l'expérimentation JO : arrivée des poussins J12 : baguage, pesée, histogramme des poids, rejet des extrêmes. 252 poulets pesant en moyenne 275 grammes ont été ainsi retenus. Ces poulets ont été 20 répartis par lot de 6 poulets dans 42 cages, soit 18 poulets par lot (3 répétitions par lot). Chaque lot a reçu les solutions préparées selon les concentrations préconisées ci-dessus sur la base de 200 ml / jour / poulet pendant 9 jours. Les 2 lots témoins n'ont reçu que de l'eau. J19 : Les poulets ont été pesés, et 13 lots sur 14 on été infestés par des oocystes de 25 coccidies sporulés. Un lot témoin n'a pas été infesté. J25 : Contrôle de l'excrétion d'oocystes de coccidies. J26 : Après le contrôle de l'excrétion oocystes, les poulets ont été pesés, et 3 poulets ont été sacrifiés par cage et autopsiés. Les scores lésionnels ont été notés. J27 : Contrôle de l'excrétion d'oocystes. 30 En plus des critères parasitologiques (excrétion ookystale, scores lésionnels), des critères zootechniques ont été également étudiés, à savoir le gain de poids, le GMQ et l'indice de consommation. Remarque : Tous les poulets morts pendant l'essai après l'infestation, ont été 35 autopsiés. Pour tous ces poulets, la cause de la mort est la coccidiose. Ils présentaient tous des diarrhées sanguinolentes avec des scores lésionnels de +4 au niveau des intestins. 26 L'expérimentation a été menée sur deux périodes : 26 et 48 jours. Les résultats des effets coccidio statiques des extraits et des molécules selon l'invention apparaissent sur les Figures 7 et 8. Pour la Figure 7, les pourcentages de croissance des poulets sont calculés par rapport au témoin non inoculé et non traité (100% de croissance des poulets), sur une période de 26 Jours. Pour le témoin inoculé non traité, il y a eu 55% de mortalité. Pour la Figure 8, les pourcentages de croissance des poulets sont calculés par rapport au témoin non inoculé et non traité (100% de croissance des poulets), sur une période de 48 Jours. Pour le témoin inoculé non traité, il y a eu 55% de mortalité. Ces essais ont montré que les différents produits biologiques testés ont donné des résultats satisfaisants. Ainsi, pour les différents extraits testés, malgré une excrétion d'oocystes plus ou moins importante, les animaux ont gardé un appétit normal et croissant, ce qui s'est de facto répercuté sur leur poids corporel, donc leur croissance. Leurs performances ne sont pas très éloignées de celles des témoins non inoculés et non traités (Cf. Figures 7 et 8). Par contre, les témoins inoculés et non traités sont morts de coccidiose (diarrhées sanguinolentes, lésion des intestins), ou ont eu une baisse considérable de leur consommation alimentaire (Cf. Figures 7 et 8). Le taux de mortalité des poulets lors des essais coccidiostatiques apparaît sur la Figure 9. Aucune mortalité n'a été attribuée aux produits testés, ce qui confirme leur caractère non toxique. Cet essai permet de conclure que les produits testés sont non toxiques pour les poulets et présentent une activité coccidiostatique.25 REVENDICATIONS 1. Utilisation d'hétérocycles oxygénés choisis parmi les xanthones et les biflavonoïdes pour la préparation d'une composition destinée à agir comme agent anti- coccidien, les coccidies étant choisies dans le groupe constitué par Eimeria, Isospora, 5 Toxoplasma, Besnoitia et Neospora. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que les hétérocycles oxygénés sont des xanthones répondant à la formule générale (I) (I) 10 dans laquelle chacun des radicaux R1 à R6 représente indépendamment un atome d'hydrogène, un radical hydroxy, un radical alcoxy avantageusement en C1 à C6, un radical alkyle, linéaire ou ramifié, avantageusement en C1 à C6, ou un radical alcène linéaire ou ramifié, avantageusement en C1 à C6, ou bien R1 et R2 forment ensemble un cycle, tel qu'un dérivé pyranique ou furanique, 15 éventuellement substitué par au moins un groupe alkyle avantageusement en C1 à C6. 3. Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que chacun des radicaux R1 à R6 représente indépendamment un atome d'hydrogène, un radical hydroxy, un radical alcoxy tel qu'un méthoxy, ou un radical alcène linéaire ou ramifié, avantageusement en C1 à C5. 20 4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que R1, R2, R3 et R5 représentent un atome d'hydrogène ; R4 représente un radical hydroxy ; et R6 représente un radical méthoxy. 5. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que R1 et R6 25 représentent un radical alcène ramifié, avantageusement un groupe prényle ; R2 représente un radical hydroxy ; R3 et R4 représentent un atome d'hydrogène ; et R5 représente un radical méthoxy. 6. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que R1, R4 et R6 représentent un radical alcène ramifié, avantageusement un groupe prényle ; R3 représente un atome d'hydrogène ; et R2 et R5 représentent un radical hydroxy. 7. Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que R1 et R2 forment ensemble un cycle tel qu'un dérivé pyranique ou furanique, avantageusement substitué par au moins un groupe alkyle, typiquement en C1 à C6; R3 représente un radical alcène linéaire ou ramifié, avantageusement en C1 à C5, et R4, R5 et R6 représentent chacun indépendamment un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy. 8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que R1 et R2 forment ensemble un cycle pyranique, avantageusement substitué par au moins un groupe méthyle, en particulier substitué par un groupe diméthyle ; R3 représente un radical alcène ramifié, tel qu'un groupe 1,1-diméthyl-2-propène ; R4 représente un radical hydroxy ; et R5 et R6 représentent un atome d'hydrogène. 9. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que les hétérocycles oxygénés sont des biflavonoïdes répondant à la formule générale (II) (II) dans laquelle le radical R représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les hétérocycles oxygénés sont extraits de plantes choisies dans le OH20 groupe constitué par Vismia laurentii, Pentadesma grandifolia, Allanblackia monticola, Allanblackia floribunda, et Allanblackia gabonensis. 11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition est destinée à la prévention ou au traitement de coccidioses chez l'homme ou l'animal, en particulier de maladies parasitaires du bétail, par exemple des bovins, des lapins, des porcs, ou des oiseaux, par exemple de la volaille telle que les poulets ou les dindes. 12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition est destinée à être administrée par voie orale. 13. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition est une composition pharmaceutique, une composition alimentaire telle qu'un aliment ou une boisson, ou un complément alimentaire. 14. Composé répondant à la formule suivante (Ia) : OH (Ia)