Brevet FR2913886A1 — publié le 20080926

L'invention concerne l'utilisation de nanoparticules métalliques, avantageusement 5 revêtues d'une couche protectrice organique, pour le diagnostique, avantageusement en IRM, de la maladie d'Alzheimer. La maladie d'Alzheimer (AD) est une maladie neurodégénérative caractérisée par une altération de la fonction cognitive associant troubles de la mémoire, de la fonction intellectuelle et de la personnalité sans modification de l'état de conscience. AD existe 10 sous 2 formes: une forme tardive et sporadique, la plus courante, qui représente 90 à 95% des cas alors et une forme familiale (caractère autosomique dominante) qui ne représente que 5 à 10% de tous les cas connus. L'examen du cerveau de patients atteints de AD met en évidence des lésions histopathologiques bien précises qui sont les plaques séniles (SPs: seniles plaques) et les dégénérescences neurofibrillaires (NFTs: 15 neurofibrillary tangles). Les SPs sont très nombreuses dans le cortex cérébral des patients AD. Elles sont également trouvées dans la Trisomie 21 et à des taux variables, généralement faibles, au cours du vieillissement cérébral normal. A l'échelle de la microscopie optique ce sont des dépôts extracellulaires ayant une 20 structure sphérique microscopique formée d'un coeur de protéines insolubles (substance amyloïde) entouré de prolongements neuronaux dégénérés. A l'échelle de la microscopie électronique, la substance amyloïde est formée de faisceaux de filaments droits d'un diamètre de 6 à 9 nm. Ces filaments occupent le domaine extracellulaire du tissu nerveux central. A l'échelle moléculaire, ces amas protéiniques sont 25 essentiellement constitués de la forme courte du peptide bêta-amyloïde (A(340), filament polypeptidique adoptant une structure en feuillets lui conférant son caractère insoluble et probablement sa toxicité. A(3 est le produit du catabolisme d'un précurseur protéique membranaire, l'APP (amyloid protein precursor). Les dégénérescences neurofibrillaires correspondent à l'accumulation de fibrilles pathologiques dans le cytoplasme des neurones. Il s'agit donc d'une lésion intraneuronale. Ce sont surtout les cellules pyramidales du cortex cérébral associatif et de la structure hippocampique qui sont touchées par ce phénomène. L'art antérieur décrit des composés spécifiques vectorisés, notamment en imagerie de fluorescence, en IRM (Imagerie Résonance Magnétique) ou en scintigraphie, comprenant d'une part une entité signal et d'autre part un biovecteur (agent de ciblage) destiné au ciblage moléculaire spécifique d'un marqueur surexprimé dans la maladie d'Alzheimer, et en particulier de ciblage de plaques amyloïdes. Par exemple le document US2006051293 décrit des ligands de ciblage peptidiques et non peptidiques couplés à des chélates de métaux paramagnétiques ou de radionucléides. Par ailleurs le document WO02094191 mentionne des particules désignées MION (monocristallines), comprenant un noyau d'oxyde de fer, comprenant une couche de dextran et couplées à un biovecteur peptidique de ciblage de l'AD. Parmi les différents problèmes techniques à résoudre, le demandeur a recherché des composés efficaces en imagerie IRM de la maladie d'Alzheimer, de type nanoparticules métalliques, différents de l'art antérieur, et notamment des nanoparticules métalliques non vectorisées par un biovecteur de ciblage spécifique (avec l'avantage d'une synthèse moins complexe et coûteuse que les produits vectorisés). Pour cela au lieu d'utiliser le couplage à un biovecteur de ciblage, il a travaillé sur des nanoparticules présentant une captation par les macrophages qui sont associés à un mécanisme d'inflammation corrélé à l'AD, et sont capables de traverser la BHE (barrière hémato encéphalique ou blood brain barrier). Le demandeur a en particulier développé des produits présentant une captation significativement améliorée par rapport à celle des nanoparticules de l'art antérieur. L'invention concerne plus précisément l'utilisation de nanoparticules métalliques pour la préparation d'une composition de diagnostique en IRM pour le diagnostique de la maladie d'Alzheimer, ces particules comprenant un noyau recouvert d'une couche essentiellement non polymérique. Avantageusement cette couche est dépourvue de biovecteur de ciblage spécifique de l'AD. Cette couche permet de protéger le noyau. Par l'expression nanoparticule dépourvue de biovecteur de ciblage spécifique de l'AD, on entend que ces nanoparticules ne présentent pas de ligands connus de l'art antérieur (notamment des peptides ou des anticorps) pour cibler spécifiquement des marqueurs de l'AD tels que les peptides amyloïdes. Selon des réalisations ces particules dépourvue de biovecteur de ciblage peuvent comprendre des composés favorisant la captation macrophagique tels que les branches hydrophiles décrites en détail dans la demande, mais elles ne comprennent pas des biovecteurs connus de l'art antérieur pour reconnaître spécifiquement des récepteurs macrophagiques (récepteurs SRA notamment). Selon des réalisations préférées, la couche essentiellement non polymérique est anionique et choisie parmi les couches suivantes (ainsi que leurs dérivés connus) : - phosphate, phosphonate, diphosphonate, bisphosphonate, gem-bisphosphonate, diphosphate, thiophosphate, thiophosphonate, polyphosphate - sulfonate, bisulfonate - hydroxamate, arginine hydroxamate - silane, ou dérivé de silice, silanetriol, trialkoxysilane - acide aminé - mercapto, acide dimercaptosuccinique -carboxylate, acide di ou polycarboxylique aliphatique (malique, citrique, tartarique, aspartique, gluconique notamment), avantageusement un acide aliphatique comportant au moins trois fonctions -COOH, acide cyclohexanetricarboxylique, acide cyclohexanehexacarboxylique. Par l'expression couche essentiellement non polymérique, on entend des couches non polymériques telles que par exemple celles citées ci-dessus, différentes des couches polymériques connues et décrites plus loin (polysaccharidiques en particulier). Avantageusement une couche essentiellement non polymérique ne comprend aucun groupe polymérique. Toutefois, dans le cadre de la présente invention, une couche essentiellement polymérique peut comporter quelques groupes polymériques, tels que des PEG, greffés à sa surface. Le taux de greffage est dans ce cas inférieur à 50% en poids et avantageusement compris entre 1 et 25% en poids, de façon encore plus avantageuse entre 1 et 20% en poids, de façon particulièrement avantageuse, entre 1 et 15% en poids. Avantageusement ces groupes polymériques ne sont pas des polysaccharides. De plus, dans le cadre de la présente invention, une couche essentiellement non polymérique peut comprendre quelques groupes polymériques, avantageusement des PEG, intercalés entre les groupes non polymériques de la couche. Dans ce cas, une telle couche, appelée couche mixte, comprend moins de 50% en poids de groupes polymériques, avantageusement entre 1 et 25% en poids, de façon encore plus avantageuse entre 1 et 20% en poids, de façon particulièrement avantageuse, entre 1 et 15% en poids de groupes polymériques. Avantageusement ces groupes polymériques ne sont pas des polysaccharides. Préférentiellement, la couche essentiellement non polymérique comprend des groupes chimiques biphosphate ou gem-bisphosphonate. Il s'agit donc avantageusement d'une couche biphosphonate ou gem-bisphosphonate. Selon un mode de réalisation, la nanoparticule comprend en outre, greffée sur la couche essentiellement non polymérique dont elle est recouverte, des groupes non polymériques ayant un effet favorable sur la captation macrophagique et éventuellement sur la biodistribution du produit. Avantageusement de tels groupes non polymériques sont des groupes hydrophiles tels que des chaînes alcool ou aminoalcool. Par exemple il s'agit des groupes : -CH2-CH2OH, -CHOH-CH2OH, -CH-(CH2OH)2, -(CH2)m (CHOH)p-CH2OH avec m = 1 à 5, p =1 à 5 (toutes combinaisons de m et p étant possibles), du groupe désigné AAG1AA28Br de formule CH2(CHOH)4CH2OH o --CH2(CHOH)4CH2OH O Br Br CH2(CHOH)4CH2OH N CH2(CHOH)4CH2OH Selon une réalisation très avantageuse la couche est une couche gem-bisphosphonate telle que décrite en détail notamment dans le document WO 2004/058275 (couche gembisphosphonate et définitions associées de ce document incorporées par référence). Avantageusement la couche gem-bisphosphonate est de formule (II) X-L-CH(P03H2)2 décrite dans WO 2004/058275 dans laquelle : • L représente un groupe organique de liaison reliant la fonction X à la fonction gembisphosphonate ûCH(P03H2)2 ; • X représente une fonction chimique. A titre préféré, L représente un groupement divalent, par exemple choisi parmi : - un groupe aliphatique (par exemple en C1 à C5) ; alicyclique ; alicyclique aliphatique ; aromatique ; aromatique aliphatique, lesdits groupes aliphatiques, alicycliques et aromatiques pouvant être éventuellement substitués par un groupe méthyle, hydroxy, méthoxy, acétoxy, amido, ou un atome d'halogène, avantageusement un atome de chlore, d'iode ou de brome ; - un groupement -L1-NHCO-L2 où L1 et L2 sont identiques ou différents représentent un groupe aliphatique ; alicyclique ; aromatique ; alicyclique aliphatique ou aromatique aliphatique, lesdits groupes pouvant être éventuellement substitués par un groupe méthyle, hydroxy, méthoxy, acétoxy, amido ou un atome d'halogène, avantageusement un atome de chlore, d'iode ou de brome. A titre de groupes X préférés, on peut citer notamment : - COOH, -NH2, -NCS, -NH-NH2, -CHO, alkylpyrocarbonyle (-CO-O-CO-alk), acylazidyle (-CO-N3), iminocarbonate (-O-C(NH)-NHz), vinylsulfuryle (-S-CH=CH2), pyridyldisulfuryle (-S-S-Py), haloacétyle, maléimidyle, dichloro-triazinyle, halogène, les groupes COOH et ûNH2 étant particulièrement préférés. 5 H2N Les couches non polymériques autres que gem-bisphosphonate sont par exemple de formule (I) suivante X-L-Y, avec X étant une fonction chimique telle que définie ci-dessus, L étant un groupe de liaison tel que défini ci-dessus, Y étant une partie capable d'interagir avec le noyau métallique de la particule et en particulier choisi parmi les groupes phosphate, phosphonate, diphosphonate, bisphosphonate, diphosphate, thiophosphate, thiophosphonate, polyphosphate, sulfonate, bisulfonate, hydroxamate, arginine hydroxamate, silane, ou dérivé de silice, silanetriol, trialkoxysilane, acide aminé, mercapto, acide dimercaptosuccinique, carboxylate, acide di ou polycarboxylique aliphatique (malique, citrique, tartarique, aspartique, gluconique notamment), acide cyclohexane-tricarboxylique ou acide cyclohexanehexacarboxylique. Selon un mode de réalisation, des groupes polymères tel que des PEG ou autres polymères cités plus loin, sont greffés sur la couche essentiellement non polymérique, , le greffage de ces groupes polymériques pouvant être avantageux pour la stabilité et/ou la biodistribution du produit de contraste. Avantageusement ce greffage a lieu par liaison covalente entre les groupes de la couche, avantageusement les groupes X des couches de formule I ou II, et les groupes polymériques. Par exemple dans le cas des groupes polymériques amino PEG et des couches de formule II dans lesquelles X représente un groupe -COOH, la fonction amine des groupes amino PEG est couplée à la fonction acide du composé (II) ci-dessus. La nanoparticule comprend par exemple 0, 1, 3, 5, 10, 20, 25 % de ses groupes X (par exemple acides) couplés à un polymère tel que le PEG. Dans un autre mode de réalisation, la couche essentiellement non polymérique est une couche mixte telle que définie ci-dessus. Avantageusement, cette couche mixte est de type branche hydrophile et dérivé PEG. De telles couches mixtes ont l'intérêt d'apporter une reconnaissance et/ou une stabilité améliorées des macrophages notamment, mais sans pour autant être trop furtifs dans l'organisme, c'est à dire notamment que la couche est suffisamment reconnue par sa cible (par exemple macrophagique). Parmi les groupes PEG on pourra utiliser notamment des groupes (CH2),i, (CH2)ri CO-, - (CH2)äNH-CO- avec n = 2 à 10 , (CH2CH2O)q(CH2)rCO- , (CH2CH2O)q(CH2)rNHCO- avec q = 1-10 et r=2-10 ; par exemple PEG 300 à PEG 700. Le demandeur a aussi étudié l'utilisation pour le diagnostique de l'AD des nanoparticules revêtues avec une couche cationique ou d'autres couches anioniques telles que le citrate ou des dérivés du citrate. Toutefois les couches citrates et dérivés du citrate ne sont pas particulièrement avantageuse dans le cadre de la présente invention car leur synthèse est assez complexe. Selon un mode de réalisation, le noyau est monocristallin, de préférence à base d'un composé du fer. On a aussi étudié d'autres noyaux tels que l'or ou le tungstène. On rappelle que les particules à base d'un composé du fer comprennent avantageusement du fer (III), généralement un oxyde ou un hydroxyde de fer. Le noyau des ces particules magnétiques est composé typiquement en tout ou partie d'hydroxyde de fer ; d'oxyde de fer hydraté ; de ferrites ; d'oxydes de fer mixtes tels que des oxydes de fer mixtes de cobalt, de nickel, de manganèse, de béryllium, de magnésium, de calcium, de baryum, de strontium, de cuivre, de zinc ou de platine; ou d'un mélange de ceux-ci. Le terme de "ferrite" désigne les oxydes de fer de formule générale [x Fe2O3, y MOI], où M désigne un métal magnétisable sous l'effet d'un champ magnétique tel que Fe, Co, Ru, Mg, Mn, le métal magnétisable pouvant être éventuellement radioactif. De façon avantageuse, les particules magnétiques des compositions utilisées dans le cadre de l'invention comprennent une ferrite, notamment la maghémite (y Fe2O3) et la magnétite (Fe3O4), des ferrites mixtes de cobalt (Fe2CoO4) ou de manganèse (Fe2MnO4). Selon des réalisations, les nanoparticules comprennent un noyau polycristallin recouvert d'une couche essentiellement non polymérique. Par exemple le noyau comprend plusieurs cristaux d'oxydes de fer différents. Selon un autre mode de réalisation, les nanoparticules comprennent un noyau obtenu à partir de métal non superparamagnétique, notamment à partir d'oxyde de lanthanide comme le gadolinium ou l'europium, ou à partir d'autres cristaux mixtes dont l'obtention est décrite en détail par exemple dans WO2006/031190. Les nanoparticules ont une taille typiquement comprise entre 2 et 200 nm, avantageusement entre 10 et 60 nm, avantageusement de l'ordre de 5, 10, 20, 30, 40, 50 ou 60 nm. La couche essentiellement non polymérique forme un enrobage du noyau. Selon un autre aspect, les nanoparticules recouvertes d'une couche essentiellement non polymérique sont dépourvues de biovecteurs de ciblage spécifiques de l'AD et couplées à (avantageusement incorporées dans) un vecteur de transfert de la BHE, ce vecteur de transfert étant destiné à permettre et/ou augmenter passage de la BHE par les nanoparticules. Parmi les vecteurs de transfert on citera : - des vecteurs lipidiques tels que des liposomes, des systèmes d'émulsions, des micelles, des systèmes mixtes liposomes-micelles - des surfactants appropriés, aptes à former un enrobage ou une capsule protectrice autour de la nanoparticule métallique, par exemple choisis parmi les suivants : esters d'acides gras et glycérol, sorbitol et autres alcools multifonctionnels, glycérol monostéarate, sorbitan monolaurate, sorbitan monoléate, poloxamines, éthers de polyoxyéthylène et esters de polyoxyéthylène, triglycérides éthoxylés, phénols et diphénols éthoxylés, surfactant du Genapol, des sels métalliques d'acides gras, lauryle sulfate de sodium, dodécylsulfate de sodium, sels métalliques de sulfosuccinates, polysorbates, poloxamer, polyoxyéthylène glycols, polybutylcyanoacrylate, tween, homopolymère polylactique (PLA) et/ou hétéropolymère poly(lactique-co-glycolique) (PLGA) - des macromolécules de transport telles que des protéines en particulier des lipoprotéines Pour les liposomes on utilisera par exemple des sphingolipides, glycolipides, glycérolipides, phospholipides, du cholestérol. On utilisera par exemple les composés suivants : phosphatidique acide, phosphatidyl choline, phosphatidylsérine, phosphatidylglycérol, phosphatidyléthano lamine, phosphatidylinositol, cardio lipide ; des phospholipides neutres comme la dipalmitoyl phosphatidylcholine (DPPC), dimyristoyl phosphatidylcholine (DMPC), dilauroyl phosphatidylcholine (DLPC), dioleyl phosphatidylcholine (DOPC), phosphatidylcholine (PC), distearoyl phosphatidylcholine (DSPC) , sphingomyeline (SM), monosialoganglioside, sulfogalactosylceramide. On peut avantageusement utiliser des liposomes pégylés. La préparation de liposomes est connue de l'art antérieur et est par exemple décrite dans US5643599, WO2006115416 par la technique habituelle avec film d'hydratation. De tels documents d'écrivant la préparation de liposomes sont incorporés par référence. Selon des variantes, les vecteurs de transfert sont capables de traverser la BHT au moins en partie via des récepteurs lipidiques. Avantageusement les vecteurs de transfert sont aptes à libérer les nanoparticules selon l'invention (appelées aussi USPIO) une fois la BHE franchie, le cas échéant après activation par exemple chimique ou physique (température, ultrasons ...). On utilisera par exemple des liposomes thermosensibles capables de libérer les USPIO et éventuellement un principe actif thérapeutique également inclus dans le liposome. Selon un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation de nanoparticules recouvertes d'une couche polymérique ou essentiellement non polymérique citées dans la demande ci-dessus, et couplées à au moins un biovecteur de ciblage spécifique de l'AD (par exemple peptide ou anticorps), ces nanoparticules étant associées à (incorporées dans ou couplées avec) un vecteur de transfert de la BHE, ce vecteur de transfert étant destiné à permettre et/ou augmenter passage de la BHE par les nanoparticules. Le vecteur de transfert est avantageusement choisi parmi des systèmes lipidiques tels que des liposomes ou des surfactants tels que ceux indiqués ci-dessus. Les produits ainsi obtenus sont particulièrement avantageux lorsque l'on utilise un biovecteur de ciblage capable de détecter de préférence de manière précoce l'AD. Parmi les biovecteurs de ciblage d'AD possibles on utilisera des benzothiazoles, les peptides (Ass,Apl par exemple) de WO 2094191. On citera également des biovecteurs de ciblage de l'AD décrits dans l'art antérieur en diagnostique ou en thérapeutique, par exemple : benzodiazépines, thiophènes, furanes, pyrrole, pyrazole, ligands limitant la formation de peptides Abeta, anticorps anti-Abeta, ligands interagissant avec des récepteurs glutamate tels que des sulfanamides, des composés de type 1-aminocyclohexane, des inhibiteurs de secrétase ; d'autres biovecteurs identifiés comme modulant un mécanisme enzymatique et/ou de synthèse lié à l'AD par exemple de ciblage de secrétases ; d'autres biovecteurs identifiés comme capable de moduler ou de suivre l'activité de neurotransmetteurs. On peut ainsi utiliser aussi des biovecteurs identifiés (peptides notamment de ciblage des plaques ou des NFT ou de précurseurs identifiés de ces plaques et NFT) comme aptes à une reconnaissance précoce de l'AD, y compris le cas échant ceux qui jusqu'à présent n'étaient pas retenus pour le diagnostique de l'AD en raison de leur difficulté ou incapacité à traverse la BHE en l'absence de ce vecteur de transfert. On peut limiter le transfert de la BHE via des cellules du système immunitaire : après avoir traversé la BHE, les nanoparticules métalliques porteuses du biovecteur de ciblage (avantageusement un biovecteur capable de reconnaître la formation à un stade précoce de plaques amyloïdes ou d'autres ligands marqueurs de l'AD) circulent dans le cerveau. L'utilisation d'USPIO avec des biovecteurs de ciblage d'AD est ainsi une voie alternative par rapport à l'utilisation de chélates par exemple avec de tels biovecteurs. On peut aussi utiliser des vecteurs de transferts porteurs de tels biovecteurs de reconnaissance, et/ou de biovecteurs facilitant le transfert de la BHE tels que via des transporteurs (OCT par exemple) et des USPIO porteurs de biovecteurs de reconnaissance de macrophages. Le cas échéant les systèmes ainsi élaborés comprennent en plus de des nanoparticules détectable en imagerie diagnostique, un agent thérapeutique contre l'AD. Le demandeur a par ailleurs étudié l'utilisation pour le diagnostique de l'AD des nanoparticules comprenant un noyau monocristallin ou polycristallin, avantageusement d'un composé du fer (et de préférence un oxyde de fer), recouvert d'une couche essentiellement non polymérique, pourvue de biovecteur spécifique de ciblage de l'AD, avantageusement de ciblage précoce de l'AD, avantageusement un peptide ou peptidomimétique, la couche essentiellement non polymérique étant choisie parmis : phosphate, phosphonate, bisphosphonate, diphosphonate, gem-bisphosphonate, diphosphate, thiophosphate, polyphosphate, thiophosphonate, sulfonate, bisulfonate hydroxamate, arginine hydroxamate, silane, ou dérivé de silice, silanetriol, trialkoxysilane, acide aminé, mercapto, acide dimercaptosuccinique, carboxylate, acide di ou polycarboxylique aliphatique, acide cyclohexane-tricarboxylique, acide cyclohexanehexacarboxylique. Le demandeur a ainsi étudié le greffage à ces nanoparticules des groupes chimiques de type biovecteurs (peptides par exemple) capables de cibler des zones atteintes de maladie d'Alzheimer, ces biovecteurs étant ou non destinés à faciliter le passage de la BHE. Le demandeur a étudié aussi des composés comprenant greffées aux nanoparticules d'une part au moins un biovecteur de ciblage de zones atteintes et d'autre part au moins un ligand de passage de la BHE tel qu'un peptide ou autre composé approprié. Le demandeur a par ailleurs étudié pour le diagnostique de l'AD, des nanoparticules comprenant un noyau monocristallin recouvert d'une couche polymérique, avantageusement polysaccharidique ou polymérique non saccharidique ; le polysaccharide étant avantageusement choisi parmi le dextran, les carboxydextran, les carboxyalkyldextran, l'amidon (et ses dérivés connus, par exemple hydroxyéthyle, hydroxyméthyle) ; le polymère non saccharidique étant avantageusement un polymère ou un copolymère choisi parmi : les polyalkylène glycol notamment le polyéthylène glycol, polypropylène glycol, le polyglycérol, le polyoxyéthylène, les dérivés stéarate, les polyalkylcyanoacrylates, les composés polyvinyle, les cyclodextrines, les pectines, les glycosaminoglycans, les dérivés de cellulose et l'héparine, et les dérivés de ces divers polymères ou copolymères. Les nanoparticules peuvent comporter plusieurs couches polymériques successives. On citera en particulier comme particule intéressante pour le diagnostique de l'AD : -le VSOP (revêtement à base de citrate décrit notamment dans Prog Colloid Polym Sci,1996,100:212-216, et Journ.magn.res.imag,2000,12:905-911, EP 888 545 et perfectionnements de US2006024235 avec des ions métalliques chargés par exemple du cuivre, du gallium), les particules de type MION ( monocristalline iron oxide nanoparticle ) et CLIO, les ADMS, ainsi que les dérivés perfectionnés de ces différents composés encore au stade pré-clinique. - des particules recouvertes d'un revêtement de type polysaccharidique, dont le Sinerem (Combidex), le Ferridex, le Resovist (revêtement à base de carboxydextran, décrit notamment dans Radiology,2001, vol 221,237-243), le SHU555C (Supravist), le NC100150 (revêtement d'amidon décrit notamment dans Magn.Res.Mat in Physics, Biology and Medicine,1999,8:207-213). Les dérivés de dextran peuvent contenir au moins un groupe acide, ou plusieurs groupes fonctionnels comprenant des atomes O, N, S, P. On pourra notamment utiliser des carboxy ou polycarboxy dextran. Les dérivés carboxyliques de polysaccharides sont par exemple le dérivé carboxyméthylique (la particule est recouverte de carboxyméthyldextran le cas échéant réduit), carboxyéthylique, carboxypropylique. Ce revêtement des particules magnétiques est destiné à obtenir une stabilité des solutions colloïdales de particules magnétiques, encore dénommées ferrofluides, en milieu physiologique. Les synthèses permettant d'aboutir à ce type de particules sont connues, par exemple décrites dans Robert S. Molday and D. Mackenzie; J. of Immunological Methods (1982), 52, p 353-367 ou Chem.Commun 2003,927-937. De telles particules recouvertes sont décrites par exemple dans les documents EP 656 368, WO 98/05430, EP 450 092, EP 441 797, EP 517 740, EP 514 493. - des particules ayant comme revêtement des macromolécules polymériques telles que des protéines comme l'albumine ou des polymères de synthèse comme les méthacrylates et les organosilanes, des galactanes [Josephson L., Groman E. V., Menz E. et al; Magnetic Resonance Imaging 8; 616-637; 1990], de l'amidon [Fahlvik A. K., Holtz E., 12 Schroder U. et al; Invest. Radiol. 25; 793-797; 1990], des glycosaminoglycanes [Pfefferer D, Schimpfky C., Lawaczeck R.; SMRM--Book of abstracts 773; 1993], des chitosans, de l'amidon combiné à des PEG, des polysaccharides avec groupes fonctionnels tells que des cétones, sulfones, amino, carboxyle. - des nanoparticules décrites dans WO2006012201, WO2006/031190, US2005/0260137, WO2004/107368 (couche silane et dérivés) . Selon des réalisations, les nanoparticules sont administrées avec un agent facilitant la passage de la BHE, tel que le mannitol ou d'autres composés appropriés, en particulier lorsque le produit de contraste qui comprend les particules est administré à un stade peu avancé de la maladie AD. Selon un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation des nanoparticules citées dans la demande pour la préparation d'une composition de diagnostic destinée au suivi diagnostique de l'efficacité d'un médicament ou d'un candidat médicament contre la maladie d'Alzheimer (et une méthode de diagnostique ou de suivi diagnostique d'un traitement thérapeutique utilisant les nanoparticules ci-dessus). Selon un autre aspect l'invention concerne l'imagerie multimodale utilisant des compositions décrites ci-dessus pour l'IRM, combinée à d'autres modalités d'imagerie telles que avantageusement par exemple la MPI, l'imagerie PET avec des composés connus pour l'imagerie PET de la maladie d'Alzheimer (par exemple un biomarqueur ligand de plaques amyloïdes couplé à un chélate marqué au technicium, gallium ou autre radionucléide), le scanner aux rayons X, l'imagerie IRM avec des gadofluorines, l'imagerie optique, l'imagerie de fluorescence. Parmi les différentes sous indications diagnostiques du diagnostique de la maladie d'Alzheimer, on citera non seulement le diagnostique au stade avancé (typiquement avec inflammation), mais aussi à un stade précoce ou intermédiaire de manière telle qu'elles permettent d'établir ou de confirmer un niveau de risque pathologique, et le cas échéant de suivre l'efficacité d'un traitement thérapeutique précoce et/ou tardif contre la maladie (médicament ou candidat médicament encore au stade préclinique ou au stade des essais cliniques). Le demandeur a en effet identifié la captation macrophagique comme moyen d'accès aux zones pathologiques mais il est possible que d'autres mécanismes permettent ou facilitent le passage de la BHE par les nanoparticules décrites. Le diamètre hydrodynamique moyen de la structure de base des USPIO utilisées (coeur d'oxyde de fer recouvert de la couche) en solution est typiquement compris entre 2 et 500 nm. Avantageusement, au moins 90% des particules présentes, et de préférence au moins de 95% des particules présentes sont des particules individualisées, c'est à dire non agglomérées avec une ou plusieurs autres particules. Le diamètre hydrodynamique moyen auquel il est fait référence ici est le diamètre hydrodynamique moyen en nombre telque mesuré par spectroscopie de corrélation de photons, par exemple par un appareil de type Zetasizer. Les relaxivités rl et r2 d'un produit de contraste magnétique donnent la mesure de son efficacité magnétique et permettent d'apprécier son influence sur le signal enregistré. Les composés obtenus présentent des relaxivités rl et r2 avantageuses, permettant d'obtenir une forte augmentation des vitesses de relaxation des protons (RI = 1/Tl et R2 = 1/T2). Cet effet sur les vitesses de relaxation permet alors d'obtenir un bon contraste en IRM, dans les zones ciblées. La relaxivité rl est de l'ordre de 10 à 50 mMol-ls-1 et la relaxivité r2 de l'ordre de 20 à 400 mMol-ls-1, à 20 Mhz. La teneur en fer de la particule (% en poids) est de l'ordre de 20 à 60%, typiquement de 30 à 50%. La composition de diagnostique administrée comprend typiquement un type de nanoparticules mais on pourra aussi utiliser en association plusieurs nanoparticules différentes, de manière simultanée ou différée dans le temps. La présente demande fournit des exemples de modèles permettant de tester l'efficacité diagnostique du composé comprenant des nanoparticules. Les USPIO sont typiquement utilisées à une dose typiquement de 0,001 mol/kg à 10 mmol/kg en métal, par exemple de 1 mol/kg à 5 mmol/kg, par injection ou perfusion dans une artère ou une veine. Les USPIO sont typiquement sous forme de solutions colloïdales stables (ou de suspensions de particules stabilisées) et peuvent être formulées sous forme de poudres lyophilisées à associer à un solvant approprié. Leur voie d'administration est connue de l'homme du métier, typiquement intraveineuse. Les compositions de l'invention sont préférablement administrées par voie parentérale ou par voie orale, les autres voies d'administration n'étant cependant pas exclues, l'administration sous forme d'une injection intraveineuse étant particulièrement préférée. Lorsque l'administration par voie parentérale est envisagée, les compositions de l'invention se trouvent par exemple sous la forme de lyophilisats prêts à être reconstitués ou de solutés et suspensions injectables conditionnées en ampoules ou flacons ou seringues préremplies, pour perfusion veineuse lente ou injection intraveineuse en bolus. Les formes pour l'administration parentérale sont obtenues de façon conventionnelle par mélange des particules magnétiques avec des tampons, des agents stabilisants, des conservateurs, des agents solubilisants, des agents isotoniques et des agents de mise en suspension. Conformément aux techniques connues; ces mélanges sont ensuite stérilisés puis conditionnés sous la forme d'injections intraveineuses ou de lyophilisats prêts à être reconstitués dans un véhicule stérile pharmaceutiquement acceptable. Les doses unitaires seront fonction de la composition des particules magnétiques, de la voie d'administration, du type de diagnostic à établir, ainsi que du patient. Les doses unitaires seront en général de 1-10 mmol de fer pour un homme de taille moyenne (75 kg) Parmi les adjuvants pharmaceutiques on pourra citer des agents conservateurs, stabilisateurs de pH, des antioxydants. Il est intéressant de constater que de tels composés de la demande avec couche anionique ou polymérique sont également utilisables pour des indications différentes d'AD, telles que des maladies cardiovasculaires (athérome, athérosclérose...) ou inflammatoires ou cancéreuses. L'invention concerne de manière analogue l'utilisation de toute nanoparticule avec 30 couche polymérique ou non polymérique ayant une captation macrophagique d'au moins 9 g Fer/ 10' Cellules, avantageusement au moins 15 g Fer/ 10' Cellules et de préférence d'au moins 20 g Fer/ 10' Cellules. La description détaillé qui suit illustre des réalisations détaillées de composés et des 5 résultats pour le diagnostique de la maladie d'Alzheimer 1. Exemple de nanoparticule recouverte d'une couche essentiellement non polymérique : couche gem-bisphosphonate avec branche AAG1AA28Br Ce composé est obtenu comme à l'exemple 16 de WO 2004/058275. Sa formule est la suivante : nO~ P / HO OH ,AAZSBr Son procédé de préparation est donc le suivant : 10 0,853 g (7,6 10-4 mole) du composé E de l'exemple 5 de WO2004/058275 sont dissous dans 13,55 ml de l'exemple 11 de WO2004/058275 à 0,279 M/L. Le pH est ajusté à 6,2. 171 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthyl-carbodiimide sont ajoutés. L'ensemble est agité à température ambiante pendant 24 heures. La solution est ultrafiltrée sur une cellule à agitation PALL ayant un seuil de coupure de 30 kD. 500 15 ml de filtrat sont éliminés. Le rétentat est ajusté à 30 ml. Le composé E :(N-N'-[bis(2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl)] 2,4,6-tribromo 5-(glycylamino)isophtlamide, désigné AAG1AA28Br (AA signifiant amino-alcool) de formule suivante : 10 15 CH2(CHOH)4CH2OH 0 CH2(CH0117~)4C(~ OH N~"y'H~2 CH2(CHOH)4CH2OH H2N~~N N~ H CH2(CHOH)4CH20H ) de l'exemple 5 de W02004/058275 est préparé selon le mode opératoire décrit dans EP 0 922 700 Al. La solution de l'exemple 11 de W02004/058275 est préparée de la façon suivante: 50 ml de l'exemple 8 de W02004/058275 à 4,73 M/L sont dilués dans 3 litres d'eau. Une solution de 1,3 g (5,24 10-3 mole) du composé A de l'exemple 1 de W02004/058275 dans 80 ml d'eau est introduite goutte à goutte. La formule du composé A de W02004/058275 est la suivante : HO\ OH HO/P ~1 ( O HOC / HO/ L'agitation est maintenue 30 min. Le floculat est isolé par décantation magnétique puis est lavé 3 fois par 3 litres d'eau. Il est remis en solution avec 700 ml d'eau à pH 11 avec QSP de NaOH [1N] puis stabilisé à pH 7,2 avec QSP de HC1 [1N]. La solution finale est filtrée sur membrane 0,22 m. Caractéristiques du composé de l'exemple 16 de W02004/058275 sont les suivantes : [Fe] = 0,132 M/L Taille PCS = 41,6 nm Poly 6 = 0,22 0 Fe = 52,3 % Masse/Masse ; P = 0,77 % Masse/Masse ; C = 5,86 % Masse/Masse ; Br = 2,65 % Masse/Masse ; Taux de greffage [composé A / Fe] = 1,33 % mole/mole Taux de greffage [composé E / Fe] = 1,18% mole/mole Taux de greffage [composé E / composé A] = 89 % II. Mise en évidence de la captation par les macrophages des nanoparticules obtenues à l'exemple I Le composé gem-bisphosphonate répond positivement au test de phagocytose sur cellules THP1 (macrophages) activées, avec une captation inattendue de l'ordre de deux fois celle du Sinerem (20 g Fer/ 10' Cellules, au lieu de 8 g Fer/ 10' Cellules pour le Sinerem ), montrée à l'aide du test suivant. Protocole - Ensemencer des flacons de 225cm2 avec des THP-1. JO - Préparer 110mL RPMI+10%SVFi + 122 L de PMA 10-4 M soit 25nM en 15 final. - Numérer les cellules THP-1 puis en centrifuger 110.106. Retirer le surnageant et reprendre le culot avec les 60 mL de milieu supplémenté en PMA. - Après homogénéisation répartir 5mL dans des puits de plaques 6 puits 20 (5mL/puits) notés 1 à 21 = THP-1 activées. Jl Dans les plaques THP-1 activées (puits 1 à 21) : ôter le surnageant et répartir 5mL/puits de PBS-10%SVFi. J2 - Gratter chaque tapis cellulaire avec un cône bleu. - Mettre la suspension dans un tube (flacon l5mL). 25 - Rincer deux fois les puits avec environ 2mL de PBS et ajouter à la suspension. - Verser la totalité de la suspension sur 5 mL de Percoll (dilué au 1/2 dans du PBS) (flacon 15mL). - Centrifuger 10 minutes à 1200 trs/min, accélération et décélération à 2, température à 20 C (SIGMA 3K15 ou MEGAFUGE 1.0R sans frein). - Récupérer délicatement les cellules de l'anneau cellulaire dans un flacon l5mL. - Compléter chaque tube à l5mL avec du PBS. - Numérer la suspension cellulaire. - Centrifuger la suspension à 1400 trs/min pendant 5 minutes, accélération et décélération à 7 (SIGMA 3K15 ou MEGAFUGE 1.0R avec frein) puis éliminer le surnageant. Conserver les culots cellulaires à -20 C pour dosage du fer par ICP-SEA. III. Exemples de modèles Alzheimer appropriés permettant de confirmer l'efficacité des nanoparticules. On utilise par exemple des modèles de souris transgéniques développant des plaques A(3 et des NFTs, et décrits dans : - "Tau and transgenic animals models" J. Gôtz. Brain Research Reviews. (2001) - "Animal models of cognitive dysfunction." S. K. Tayebati. Mech. of Ageing and Dev. (2006) ; - "Transgenic mouse models of AD : how useful have they been for therapeutic development ?"K. Duff and S. Suleman. Briefing in Functional Genomics and Proteomics (2004) ; - "Triple-transgenic model of AD with plaques and tangles : intracellular A(3 and synaptic dysfunction". S. Oddo et al. Neuron. (2003) ; - le modèle APP Tg2576, Hsiao et al, Science, 1996 ; - des modèles décrits dans J.Alzheimer.Dis, 9, 135-149, Mice models transgenic approaches, 2006, Games. On utilise par exemple des modèles de rats transgéniques obtenus après incorporation 30 de protéine Tau capable de générer les symptômes de la maladie d'Alzheimer. On utilise par exemple des modèles de lapin utilisant l'injection d'aluminium-maltolate (agent neurotoxique) engendrant la formation d'agrégats de neurofilaments intraneuronaux Tau positifs, immunopositifs à A(3, et décrits dans : A new insight on Al-maltolate-treated aged rabbit as Alzheimer's animal model . N. M. Bharathi et al. Brain Research Reviews. (2006). On utilise par exemple des modèles de primates décrits dans : - Alzheimer's A(3 vaccination of Rhesus monkeys (Macaca mulatta)." S. Gandy et al. 10 Mech. of Ageing and Dev. (2004) ; "Emerging prospects for the disease-modifying treatment of AD". L. C. Walker et al. Bioch. Pharmacol. (2005) ; Revendications 1. Utilisation de nanoparticules métalliques pour la préparation d'une composition de diagnostique en IRM de la maladie d'Alzheimer. 2. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que les nanoparticules comprennent un noyau recouvert d'une couche essentiellement non polymérique et dépourvue de biovecteur de ciblage. 10 3. Utilisation selon la revendication 2 caractérisée en ce que le noyau est monocristallin et en ce que la couche est essentiellement non polymérique et est choisie parmi : - phosphate, phosphonate, bisphosphonate, diphosphonate, gem-bisphosphonate, diphosphate, thiophosphate, thiophosphonate, polyphosphate 15 - sulfonate, bisulfonate - hydroxamate, arginine hydroxamate - silane, ou dérivé de silice, silanetriol, trialkoxysilane - acide aminé - mercapto, acide dimercaptosuccinique 20 - carboxylate, acide di ou polycarboxylique aliphatique, acide cyclohexanetricarboxylique, acide cyclohexanehexacarboxylique. 4. Utilisation selon la revendication 3 caractérisée en ce que la couche essentiellement non polymérique est une couche bisphosphonate ou gem-25 bisphosphonate. 5. Utilisation selon la revendication 3 caractérisée en ce que la couche essentiellement non polymérique est une couche carboxylate ou acide di ou polycarboxylique, avantageusement une couche acide malique, citrique, tartarique, 30 ou gluconique.5 6. Utilisation selon la revendication 2 à 5 caractérisée en ce que des groupes hydrophiles, avantageusement des chaînes alcool ou aminoalcool, sont greffés sur la couche essentiellement non polymérique.,. 7. Utilisation selon la revendication 4 à 6 caractérisée en ce que la couche essentiellement non polymérique est de formule (II) X-L-CH(PO3H2)2, dans laquelle L représente un groupe organique de liaison reliant la fonction X à la fonction gem-10 bisphosphonate ûCH(PO3H2)2 choisi parmi : - un groupe aliphatique, alicyclique ; alicyclique aliphatique ; aromatique ; aromatique aliphatique, lesdits groupes aliphatiques, alicycliques et aromatiques pouvant être éventuellement substitués par un groupe méthyle, hydroxy, méthoxy, acétoxy, amido, ou un atome d'halogène; 15 - un groupe -L1-NHCO-L2 où L1 et L2, identiques ou différents, représentent un groupe aliphatique ; alicyclique ; aromatique ; alicyclique aliphatique ou aromatique aliphatique, lesdits groupes pouvant être éventuellement substitués par un groupe méthyle, hydroxy, méthoxy, acétoxy, amido ou un atome d'halogène ; X représente un groupe COOH, -NH2, -NCS, -NH-NH2, -CHO, alkylpyrocarbonyle, 20 acylazidyle, iminocarbonate, vinylsulfuryle, pyridyldisulfuryle, haloacétyle, maléimidyle, dichloro-triazinyle ou un atome d'halogène, 8. Utilisation selon la revendication 2 à 7 caractérisée en ce que des groupes polymériques, avantageusement des PEG, sont greffés sur la couche essentiellement 25 non polymérique.. 9. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 8 caractérisée en ce que les nanoparticules sont incorporées dans un vecteur de transfert de la BHE. 30 10. Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que les nanoparticules sontrecouvertes d'une couche polymérique ou essentiellement non polymérique, sont couplées à au moins un biovecteur de ciblage de l'AD, et sont incorporées dans un vecteur de transfert de la BHE. 11. Utilisation selon la revendication 10 caractérisée en ce que les nanoparticules sont recouvertes d'une couche essentiellement non polymérique, sont couplées à au moins un biovecteur de ciblage précoce de l'AD, et sont incorporées dans un vecteur de transfert de la BHE. 12. Utilisation selon l'une des revendications 9 à 11 caractérisée en ce que le vecteur de transfert de la BHE est apte à libérer les nanoparticules après activation physique ou chimique. 13. Utilisation selon la revendication 11 ou 12 caractérisée en ce que la couche essentiellement non polymérique est choisie parmi : phosphate, phosphonate, bisphosphonate, diphosphonate, gem-bisphosphonate, diphosphate, thiophosphate, polyphosphate, thiophosphonate, sulfonate, bisulfonate hydroxamate, arginine hydroxamate, silane, ou dérivé de silice, silanetriol, trialkoxysilane, acide aminé, mercapto, acide dimercaptosuccinique, carboxylate, acide di ou polycarboxylique aliphatique, acide cyclohexane-tricarboxylique, acide cyclohexanehexacarboxylique. 14. Utilisation selon l'une des revendications 9 à 13 caractérisée en ce que le vecteur de transfert de la BHE est un liposome ou un surfactant. 15. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 14 caractérisée en ce que les nanoparticules sont administrées avec un agent facilitant la passage de la BHE. 16. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 15 caractérisée en ce que l'imagerie IRM du composé est combinée à au moins une autre modalité d'imagerie,avantageusement l'imagerie optique, l'imagerie PET, le scanner RX. 17. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 15, caractérisé en ce que la composition est destinée au suivi diagnostique de l'efficacité d'un médicament ou 5 d'un candidat médicament contre la maladie d'Alzheimer.