Brevet FR2912657A1 — publié le 20080822

UTILISATION DE LACTOBACILLUS CASEI POUR RENFORCER LA PROTECTION INDUITE PAR LA VACCINATION ANTI-GRIPPALE. L'invention est relative à l'utilisation de Lactobacillus casei pour potentialiser la réponse humorale induite par la vaccination antigrippale chez des sujets âgés et ainsi renforcer la protection contre la grippe après vaccination. Les virus influenza (virus de la grippe) représentent une cause majeure d'infections respiratoires. Les épidémies hivernales de grippe affectent 1 à 5% de la population, avec des taux d'infection très importants chez les enfants et des complications mortelles chez les personnes âgées. La vaccination annuelle contre l'influenza est recommandée par les autorités de santé (en accord avec l'OMS) chez les sujets de plus de 65 ans, les personnes vivant en EHPAD (Établissement d'Hébergement pour Personnes Âgées Dépendantes) ou les sujets fragilisés par des pathologies lourdes. Même dans les cas où la vaccination ne prévient pas la maladie, elle permet de diminuer la sévérité, la durée, le risque de complication (surinfection, hospitalisation, mort) associés à la grippe. Néanmoins, alors que la vaccination antigrippale confère chez la majeure partie des sujets adultes (70% à 90%), un niveau d'anticorps considéré comme protecteur (taux d'anti-Hémagglutinine supérieur ou égal à 40 ; OMS Weekly epidemiological record, N 33, p.283, 19 August 2005) il n'en va pas de même chez les personnes âgées, où ce niveau d'anticorps n'est atteint que chez 30 à 40% des sujets (COX et al., Scand. J. Immunol., 59, 1-15, 2004). Cette réponse sub-optimale des personnes âgées au vaccin anti-grippal est due aux défauts fonctionnels du système immunitaire qui sont liés à l'âge et/ou à l'état physiologique du sujet (DENG et al., J. Immunol., 172, 3437-46, 2004; KANG et al., J. Immunol., 173, 673-81, 2004). Une façon d'améliorer la réponse immunitaire est d'administrer des substances immuno-stimulantes qui jouent le rôle d'adjuvant. Ainsi, de nouveaux vaccins contenant des adjuvants (comme MF59 qui consiste en des gouttelettes stables de taille Il a été précédemment observé (Demande PCT WO 2001/089541) que l'administration de Lactobacillus casei pouvait renforcer la réponse immunitaire cellulaire (médiée par les lymphocytes T) vis-à-vis de divers micro-organismes pathogènes, parmi lesquels le virus de la grippe. En revanche, les éventuels effets de Lactobacillus casei sur l'immunité humorale, qui est impliquée dans la protection conférée par la vaccination anti-grippale, demeuraient mal connus. Les Inventeurs ont entrepris d'étudier l'effet ce l'ingestion de Lactobacillus casei sur l'évolution des taux d'anticorps sériques spécifiques induits par la vaccination anti-grippale chez les personnes âgées. Ils ont constaté une augmentation de ces taux d'anticorps, aboutissant notamment à une augmentation de la fréquence de séroconversion, et de la fréquence de séroprotection. On définit comme séroprotection la présence, chez un individu, d'anticorps sériques dirigés contre un virus de la grippe, en quantité supérieure ou égale à un seuil de protection. Ce seuil de protection est défini comme un titre en anticorps sériques anti-Hémagglutinine, mesuré en inhibition de l'hémagglutination (IHA), supérieur ou égal à 40. La fréquence de séroprotection , chez une population, correspond à la proportion de personnes chez lesquelles une séroprotection est observée. Il est généralement admis qu'un taux d'anticorps mesurés IHA et supérieur ou égal à 40 était relié à une protection contre la souche impliquée et retrouvée dans le vaccin (COX N.J. End al., Lancet, 1999:354:1277-82). On définit ici comme séroconversion , l'augmentation, chez un individu, de la quantité d'anticorps sériques dirigés contre un virus de la grippe, consécutive à la vaccination contre ledit virus, le niveau d'anticorps post-vaccination étant au moins égal à 4 fois le niveau d'anticorps mesuré avant vaccination. La fréquence de séroconversion , chez une population, correspond à la proportion de personnes chez lesquelles une séroconversion 2.5 est observée. Les Inventeurs ont en outre constaté que les effets positifs de l'ingestion de Lactobacillus casei sur ]'évolution des taux d'anticorps sériques induits par la vaccination anti-grippale apparaissent particulièrement 30 marqués chez certaines catégories de personnes âgées, à savoir celles présentant le plus faible niveau de dépendance, et celles appartenant au sexe féminin. Le niveau de dépendance a été défini en utilisant la grille de classification AGGIR (Autonomie 35 Gerontologie Groupes Iso-Ressources ; (VETEL et al., Soins Gerontol., 23-7, 1998). Les groupes 1, 2, et 3 de la grille AGGIR regroupent des personnes fortement dépendantes ; les groupes 4 et 5 regroupent des personnes faiblement dépendantes ; le groupe 6 regroupe les personnes non-dépendantes. La présente invention a, en conséquence, pour objet l'utilisation d'une souche bactérienne de l'espèce L. casei pour la préparation d'une composition administrable par voie orale pour renforcer la protection contre la grippe après vaccination. Elle permet en outre de renforcer l'immunité humorale conférée lors d'une vaccination anti-grippale. Elle permet d'atteindre notamment un taux d'anticorps protecteurs (séroprotection). Selon un mode de mise en oeuvre préféré de la présente invention, ladite composition est destinée à être administrée à des personnes âgées de 65 ans ou plus recevant une vaccination anti-grippale. De préférence, lesdites personnes sont âgées d'au moins 70 ans. De manière particulièrement avantageuse, ladite composition est destinée à être administrée à des personnes âgées non-dépendantes, ou ne présentent qu'un faible niveau de dépendance et/ou appartenant au sexe féminin. Dans le cadre de la mise en oeuvre de la présente invention, ladite souche de L. casei peut être utilisée seule, ou en association avec d'autres bactéries lactiques de l'espèce L. casei ou d'autres espèces. Avantageusement, elle peut être utilisée en association avec des ferments du yogourt, à savoir Lactobacillus bulgaricus et Streptococcus thermophilus. De préférence, une composition préparée dans le cadre d'une utilisation conforme à l'Invention contient au moins 105, de préférence au moins 106, généralement entre 1X108 et 1,5x109 cellules de L. casei par ml. Lorsque L. casei est utilisé en association avec des ferments du yogourt, ladite composition comprend en outre avantageusement au moins 107, de préférence entre 2x108 et 1X109 cellules de S. thermophilus par ml, et au moins 5x105 et de préférence entre 4x106 et 2x107 cellules de L. bulgaricus par ml. Une souche de L. casei convenant tout particulièrement à une utilisation dans la présente invention est la souche déposée le 30 décembre 1994, auprès de la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, Paris), sous le numéro I-1518. Des compositions préparées conformément à l'invention peuvent être administrées sous forme d'aliments ou de compléments alimentaires. Il peut s'agir par exemple de produits laitiers, et notamment de produits laitiers fermentés comprenant au moins ladite souche de L. casei, éventuellement associée, comme indiqué ci-dessus, à d'autres bactéries lactiques, par exemple à des ferments du yogourt. Pour obtenir un effet optimal, ladite souche de L. casei sera de préférence administrée pendant au moins une semaine, de préférence pendant au moins 2 semaines, avantageusement pendant au moins 3 semaines, et de manière tout à fait préférée pendant au moins 4 semaines avant la vaccination antigrippale. L'administration peut ensuite être poursuivie aussi longtemps que souhaité. La quantité de L. casei administrée quotidiennement sera de préférence d'au moins 1010, avantageusement d'au moins 2 x 1010 U.F.C. de casei. Cette quantité peut être administrée en une ou plusieurs prises quotidiennes. La présente invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à un exemple non-limitatif illustrant les propriétés d'une souche de Lactobacillus casei pour renforcer l'immunité humorale induite par une vaccination anti- grippale. EXEMPLES Une étude a été effectuée afin d'évaluer l'effet de la consommation d'un produit laitier fermenté (Actimel ) contenant L. casei CNCM I-1518, sur les taux d'anticorps sériques spécifiques induits par la vaccination anti- grippale 3 semaines après vaccination (pic de la réponse entre 2 à 4 semaines post-vaccination) et 3 et 5 mois après vaccination (pour suivre l'évolution des taux d'anticorps sériques)en cessant la consommation du produit. Résumé de l'étude Cette étude est une étude pilote, multicentrique, randomisée, en double aveugle, contrôlée contre placebo. Les 86 sujets ont été répartis en 2 groupes équilibrés de 43 sujets, un groupe recevant Actimel , l'autre groupe recevant le produit contrôle (placebo). Le déroulement de cette étude est schématisé sur la Figure 1. La durée totale de l'étude a été de 178 jours. L'étude a comporté une visite de sélection (Vl) visant à sélectionner le sujet âgé. Cette visite a eu lieu 15 Bans le mois précédant la visite d'inclusion (V2). L'inclusion et la randomisation des sujets à V2 (JO) a été effectuée sur 2 semaines pour tous les sujets de tous les centres. La consommation du produit à l'étude (Actimel 20 ou produit contrôle selon la randomisation) a débuté pour tous les sujets à JO (V2) et a duré 7 semaines (4 semaines avant vaccination et 3 semaines après). Les sujets ont été tous vaccinés contre la grippe (même lot du vaccin Vaxigrip) par injection intra- 25 musculaire dans le deltoïde à J28 (V3), soit 4 semaines après le début de la consommation du produit à l'étude. Des visites médicales ont été effectuées à J28 (V3), J49 (V4), J118 (V5), et J178 (V6). Sélection des sujets 30 Les sujets inclus dans l'étude sont des personnes âgées résidant en Établissement d'Hébergement pour Personnes Âgées Dépendantes (EHPAD). Critères d'inclusion - homme ou femme âgé (e) d'au moins 70 ans ; 35 - sujet ayant un score AGGIR compris entre 2 et 5 (bornes incluses) ; 10 - sujet ayant un taux d'anticorps inhibant l'agglutination de globules rouges de cobaye par une souche apparentée au variant A/California/7/2004 (prototype vaccinal) inférieur à 40 lors du prélèvement sanguin réalisé à la sélection (V1) ; - sujet ayant un indice de masse corporelle (IMC) compris entre 16 et 27kg/m2 (bornes incluses) ; - sujet ayant donné son consentement écrit pour sa participation à l'étude et en état de comprendre les informations fournies ; Critères de non-inclusion - sujet atteint d'une pathologie grave et évolutive pour lequel l'espérance de vie attendue est inférieure à 6 mois ; - sujet diabétique de type I ou II non équilibré ; - sujet présentant une allergie ou une hypersensibilité aux protéines du lait et/ou aux veufs ; - sujet présentant une intolérance connue au lactose ; - sujet immuno-déprimé chronique ou iatrogène notamment traité par immunosuppresseur ou corticothérapie orale pendant plus de 2 semaines au cours des deux mois précédant la sélection (V1) ; Randomisation L'allocation des sujets au groupe "Produit" ou eu groupe "Contrôle" a été définie par un tirage au sort aléatoire, équilibré entre les deux groupes qui ont été identifiés A ou B . Deux niveaux de stratification ont été déterminés suivant l'état d'autonomie des patients (reflétant aussi l'état physiologique des sujets) . les sujets ayant un score AGGIR (Autonomie Gérontologique Groupes Iso Ressources) égal à 2 ou 3 constituent la première strate et les sujets ayant un score AGGIR de 4 ou 5 constituent la seconde strate. Produits à l'étude Le produit Actimele est un produit du commerce. Le produit contrôle est un produit présentant les mêmes qualités organoleptiques, la même acidité, la même valeur énergétique, et la même texture que le produit Actimel , mais dépourvu de ferments lactiques. Les 2 produits ont été présentés en bouteilles anonymes de 100 ml, et identifiés par un code lettre (A ou B). Les caractéristiques de ces deux produits sont résumées dans le Tableau I ci-dessous. Tableau I Produit Lipides Glucides Protéines Energie Concentration en g/100g G/100g (3/100g KJ/100g principe actif (L. casei) _ Actimel 1.5 +/- 0.5 14.5 +/- 0.5 2.5 +1- 0.5 80 - 85 > 108 ufc/ml Contrôle 1.5+/-0.5 14.5+/-0.5 2.5+1-0.5 80-85 Les effets du score AGGIR , de l'IMC, de l'âge et du taux basal d'anticorps ont été également étudiés. Pour le taux d'anticorps, il est connu que ce paramètre est distribué selon une loi log-normal. Pour faire une analyse paramétrique, il est nécessaire de faire une transformation log sur les taux d'anticorps et la normalité des log de taux d'anticorps a donc été vérifiée et discutée. L'analyse paramétrique est un modèle gaussien usuel d'analyse de la variance et/ou covariance selon la rature des covariables. L'analyse de variance et/ou covariance non paramétrique (test de Friedman) est effectuée conjointement. Les co-variables suivantes ont été prises en compte dans les analyses : score AGGIR , de l'IMC, de l'âge et du taux basal d'anticorps. La comparaison des données entre les produits a été faite par un test du Chi-2 ou par un test exact de Fisher en cas de non respect des conditions d'utilisation du test du chi-2. Un modèle de régression logistique a également été réalisé pour la prise en compte des différents effets (: score AGGIR , de l'IMC, de l'âge et du taux basal d'anticorps). Cette même analyse a également été réalisée pour 25 chaque classe de la variable de stratification ( Score AGGIR ). Criteres de jugement Critère principal d'effet du produit étudié Le critère principal retenu est le taux 30 d'anticorps de la grippe à la visite 4 (J49) sur les 3 souches virales. L'expression principale de ce critère est la variation du taux d'anticorps à la visite 4 par rapport à la valeur basale. Critères secondaires d'effet du produit étudié Les critères secondaires retenus sont, pour chacune des 3 souches virales : La séroconversion (sujet ayant une augmentation d'au 5 moins 4 fois du taux d'anticorps par rapport au niveau basal) à la visite 4 (J49). La séroprotection (sujet ayant un taux d'anticorps ? 40 à la visite 4 (J49). RESULTATS 10 Sur la population ITT Taux d'anticorps Les résultats sont illustrés par la Figure 2. Ces résultats montrent que la consommation d'Actimel induit, 3 semaines après vaccination contre chacune des souches de 15 la grippe un taux d'anticorps supérieur à celui relevé dans le cas de la consommation du placebo. Séroconversion Les résultats sont illustrés par la Figure 3. Ces résultats montrent que la consommation d'Actimel induit 20 3 semaines après vaccination, une fréquence de séroconversion plus importante vis-à vis de chacune des souches de la grippe, que celle observée dans le cas de la consommation du placebo. Séroprotection 25 Les résultats sont illustrés par la Figure 4. Ces résultats montrent que la consommation d'Actimel induit, 3 semaines après vaccination contre chacune des souches de la grippe une augmentation du pourcentage de personnes protégées, par rapport à celui observé dans le cas de la 30 consommation du placebo. Cet effet montre une tendance statistique dans le cas de la souche de sérotype H1Nl. Sur les sous populations Sous population AGGIR 4-5 Taux d'anticorps Les résultats sont illustrés par la Figure 5. Ces résultats montrent que la consommation d'Actimel induit, 3 semaines après vaccination contre chacune des souches de la grippe un taux d'anticorps supérieur à celui relevé dans le cas de la consommation du placebo. Séroconversion Les résultats sont illustrés par la Figure 6. Ces résultats montrent que la consommation d'Actimel induit 3 semaines après vaccination, une fréquence de séroconversion plus importante vis-à vis de chacune des souches de la grippe, que celle observée dans le cas de la consommation du placebo. Cet effet est statistiquement significatif pour la souche de sérotype H3N2. Séroprotection Les résultats sont illustrés par la Figure 7. Ces résultats montrent que la consommation d'Actimel induit, 3 semaines après vaccination contre chacune des souches de la grippe une augmentation du pourcentage de personnes protégées, par rapport à celui observé dans le cas de la consommation du placebo. Cet effet est statistiquement significatif pour la souche de sérotype H3N2. Sous-population de sexe féminin Taux d'anticorps Les résultats sont illustrés par la Figure 8. Ces résultats montrent que la consommation d'Actimel induit, 3 semaines après vaccination contre chacune des souches de =-a grippe un taux d'anticorps supérieur à celui relevé dans -e cas de la consommation du placebo. Séroconversion Les résultats sont illustrés par la Figure 9. Ces résultats montrent que la consommation d'Actimel induit 13 semaines après vaccination, une fréquence de séroconversion plus importante vis-à vis de chacune des souches de la grippe, que celle observée dans le cas de la consommation du placebo. Cet effet est statistiquement significatif dans le cas de la souche de sérotype H1N1. Séroprotection Les résultats sont illustrés par la Figure 10. Ces résultats montrent que la consommation d'Actimel induit, semaines après vaccination contre chacune des souches de la grippe une augmentation du pourcentage de personnes protégées, par rapport à celui observé dans le cas de la consommation du placebo. Cet effet est plus accentué dans le cas des souches du groupe A (tendance statistique pour la souche H3N2), et plus particulièrement pour la souche de sérotype H1N1 (différence statistiquement significative). REVENDICATIONS 1) Utilisation d'une souche bactérienne de l'espèce L. casei pour la préparation d'une composition administrable par voie orale pour renforcer la protection contre la grippe après vaccination. 2) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite souche bactérienne permet de renforcer l'immunité humorale conférée lors d'une vaccination anti-grippale. 3) revendications composition est 2gées de 65 ans 4)Utilisation selon une 1 ou 2, caractérisée en destinée à être administrée ou plus. Utilisation selon une quelconque des ce que ladite à des personnes quelconque des ladite souche de revendications 1 à 3, caractérisé en ce que L. casei est la 5) revendications souche CNCM I-1518. Utilisation selon 1 à 4, caractérisée une quelconque des en ce que ladite composition est sous la forme d'un aliment ou d'un 20 complément alimentaire. 6) Utilisation selon une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que ladite composition est sous la forme d'un produit laitier fermenté. 25