Brevet FR2916339A1 — publié le 20081128

SONDE OPTIQUE PER-OPERATOIRE BI-SPECTRALE Le domaine de l'invention est celui des sondes optiques per-opératoires destinées à aider le chirurgien dans son geste médical. Les chirurgiens utilisent des sondes optiques positionnables au- dessus d'un patient. Les sondes optiques fonctionnent en éclairage visible pour éclairer les tissus biologiques sur lesquels les chirurgiens sont en train d'opérer. Ces sondes sont notamment utilisées pour la détection et l'élimination de certaines tumeurs. Ces sondes optiques jouent le rôle d'un microscope et elles sont classiquement reliées à un ordinateur permettant d'afficher les tissus biologiques éclairés par la sonde. A partir d'une simple image agrandie du tissu biologique, l'expérience du chirurgien est plus que nécessaire pour déterminer la différence entre un tissu sain et un tissu atteint. Lorsque les différences visuelles ne sont pas suffisamment apparentes, le chirurgien procède par biopsie sur les zones qu'il juge suspectes. Si celle-ci est positive, le chirurgien élimine une couche de tissus puis prélève à nouveau des cellules, refait une biopsie et recommence l'opération jusqu'à ce que la biopsie soit négative. Cette opération prend du temps et demeure parfois incomplète, . certaines zones atteintes étant invisibles à l'ceil nu ou insuffisamment différentiées pour être reconnues par le chirurgien. Pour améliorer ces dispositifs et faciliter la détection de zones malades, il est possible d'utiliser des marqueurs fluorescents. Ces marqueurs sont utilisés dans le domaine des analyses génétiques et immunologiques in vitro. Le principe général consiste à marquer une molécule appelée sonde avec un marqueur fluorescent. En présence de la molécule cible, cette sonde s'associe à celle-ci. La fluorescence est mesurée en excitant le marqueur à l'aide d'un faisceau de lumière possédant une longueur d'onde adaptée. Suite à cette excitation, le fluorophore se relaxe en émettant une lumière à une longueur d'onde supérieure à la longueur d'onde d'excitation. Au moyen de filtres spécifiques, il est possible de détecter, de localiser et de quantifier cette fluorescence et ainsi de déterminer la présence de la molécule cible. L'application de la fluorescence à l'imagerie in-vivo est assez récente. En effet, les tissus vivants absorbent les longueurs d'onde visibles généralement émises par fluorescence. Des progrès récents ont cependant permis d'appliquer cette technique aux tissus vivants. Ces progrès concernent essentiellement : • L'évolution des sources de lumière vers les longueurs d'onde situées dans le rouge ou le proche infrarouge. Ces longueurs d'onde traversent mieux les tissus biologiques, l'hémoglobine étant l'absorbant principal de la lumière. II est préférable que les longueurs d'onde ne soient pas supérieures à 900 nanomètres pour éviter l'absorption par l'eau ; • L'augmentation de puissance des sources des systèmes d'éclairage. Ces sources sont le plus souvent des diodes électro-luminescentes ou des diodes laser ; • L'amélioration de la sensibilité des photo-détecteurs. Aussi, des systèmes d'imagerie de fluorescence in-vivo ont été développés. Ils sont plus particulièrement destinés aux petits animaux de laboratoire comme les souris pour le suivi de l'évolution de tumeurs ou pour étudier l'efficacité de médicaments. Dans le domaine de l'humain, des prototypes de sonde utilisant la fluorescence ont été développés. Ces sondes comprennent essentiellement un laser et une caméra. On peut, par exemple, disposer la caméra au-dessus de la table d'opération. Dans ce cas, le champ de vision est très important et ne permet pas d'atteindre des résolutions élevées. On peut également utiliser des sondes de taille suffisamment petite pour tenir dans la main. Dans ce cas, la résolution est bien supérieure. Ainsi, une sonde ayant un champ de l'ordre de 8 centimètres et une distance de travail de l'ordre de 10 à 15 centimètres a une résolution inférieure à 100 microns. Dans tous les cas, l'image fournie par la caméra est renvoyée vers un moniteur qui peut être un écran d'ordinateur. Le chirurgien voit ainsi une image en fluorescence et magnifiée de la zone éclairée par la sonde. Un dispositif de ce type est décrit dans le brevet français FR 2 882 147 intitulé dispositif d'imagerie de fluorescence par réflexion à deux longueurs d'onde . Ce brevet décrit un dispositif comportant une amélioration supplémentaire. La source d'excitation comporte deux longueurs d'onde d'excitation, permettant de s'affranchir de l'autofluorescence des tissus vivants. Cependant, ces sondes à fluorescence comportent certains inconvénients. En effet, le chirurgien doit constamment porter son regard de son écran à la zone d'opération. De plus, ses instruments de chirurgie n'apparaissent pas en lumière fluorescente. Par conséquent, il ne peut faire correspondre précisément son geste chirurgical avec les cellules malades qu'il souhaite enlever. Le but de l'invention est de pallier aux inconvénients précédents. A cette fin, les sondes optiques à fluorescence selon l'invention possèdent un double éclairage. Le premier est nécessaire pour réaliser la fluorescence des zones marquées et obtenir une image exploitable par une caméra. Le second est nécessaire pour éclairer ou pointer, en lumière visible, les zones marquées tout en laissant dans l'ombre les zones non marquées, facilitant ainsi le travail du chirurgien. On obtient alors les avantages suivants : • Le chirurgien voit directement les zones malades en éclairage visible ; • Le confort visuel pour le chirurgien est accru. Il n'a plus besoin d'effectuer des aller-retour entre son écran d'ordinateur et le corps du patient, • La précision du geste chirurgical est améliorée ; • La durée de l'intervention chirurgicale est diminuée. Plus précisément, l'invention a pour objet une sonde optique per-opératoire comprenant au moins : • une première source de lumière émettant un premier faisceau de lumière destiné à éclairer une surface de tissus biologiques dont au moins 35 une zone dite zone marquée a été préalablement fixée par un marqueur fluorescent, ledit faisceau étant émis à une première longueur d'onde correspondant sensiblement à la longueur d'onde d'excitation du fluorophore de marquage, ledit fluorophore émettant à une seconde longueur d'onde ; • un premier dispositif optique comprenant un premier objectif et une surface photo-sensible, ledit objectif formant de la surface de tissus biologiques une première image sur la dite surface photo-sensible, le premier dispositif étant relié à des moyens de traitement de l'image issue de la surface photo-sensible ; caractérisé en ce que ladite sonde comprend également : • des moyens optiques différents du premier dispositif optique et destinés à éclairer au moins une partie de la surface de tissus biologiques. Avantageusement, cette partie de surface éclairée par les moyens optiques correspond à au moins une des zones marquées identifiée par les moyens de traitement de l'image. Avantageusement, dans un premier mode de réalisation, les moyens optiques comprennent au moins un projecteur d'images générant, sur commande d'un dispositif de commande analysant le signal issu des moyens de traitement, une seconde image à au moins une troisième longueur d'onde située dans le spectre visible, ladite seconde image étant représentative de la zone marquée et un second objectif formant de cette seconde image une troisième image sur la surface de tissus biologiques, le second dispositif étant agencé de façon que cette troisième image visible soit de même dimensions et en coïncidence avec au moins une zone marquée de la surface de tissus biologiques. Dans ce cas, les moyens optiques peuvent comprendre une optique séparatrice permettant de séparer spectralement la seconde longueur d'onde de la troisième longueur d'onde, ladite optique étant disposée de façon que les parties des axes optiques du premier objectif et du second objectif situées entre la surface de tissus biologiques et la dite optique séparatrice soient communes. Avantageusement, le premier dispositif optique comprend un premier filtre optique transparent à la seconde longueur d'onde et le projecteur d'images comprend un second filtre optique transparent à la troisième longueur d'onde. Avantageusement, dans un second mode de réalisation, les moyens optiques comprennent au moins une troisième source de lumière émettant un troisième faisceau à la première longueur d'onde, agencée de façon à éclairer le centre de la surface de tissus biologiques de façon quasi- ponctuelle. Dans ce cas, les moyens optiques peuvent comprendre une quatrième source de lumière émettant un quatrième faisceau à une quatrième longueur d'onde située dans le spectre visible, agencée de façon à éclairer le centre de la surface de tissus biologiques de façon quasi- ponctuelle en coïncidence avec le second faisceau. Avantageusement, les moyens optiques comprennent une optique séparatrice permettant de séparer spectralement la seconde longueur d'onde de la quatrième longueur d'onde, ladite optique étant disposée de façon que les parties des axes optiques du premier objectif et de la quatrième source situées entre la surface de tissus biologiques et la dite optique séparatrice soient communes. Avantageusement, les moyens optiques comprennent un imageur générant, à partir du signal issu des moyens de traitement, une seconde image à au moins une troisième longueur d'onde située dans le spectre visible, ladite seconde image étant représentative de la zone marquée et un second objectif formant de cette seconde image une troisième image sur la surface de tissus biologiques, les moyens optiques étant agencés de façon que cette troisième image visible soit de même dimensions et en coïncidence avec la surface de tissus biologiques. Avantageusement, les moyens de traitement d'images comportent des moyens de reconnaissance des zones marquées et en ce que ladite sonde comprend des moyens électroniques permettant d'activer la quatrième source de lumière lorsqu'une zone marquée est éclairée par le troisième faisceau de lumière. L'invention concerne plus généralement un appareillage médical destiné à être relié à une sonde possédant tout ou partie des moyens précédents et comprenant les moyens de traitement et le dispositif de commande de la quatrième source de lumière. Avantageusement, l'appareillage médical comprend un dispositif 35 d'affichage permettant de visualiser l'équivalent de la première image ou de la seconde image et comporte un éclairage de type scialytique émettant à des longueurs d'onde différentes d'au moins la première longueur d'onde. L'invention sera mieux comprise et d'autres avantages 5 apparaîtront à la lecture de la description qui va suivre donnée à titre non limitatif et grâce aux figures annexées parmi lesquelles : La figure 1 représente un premier mode de réalisation d'une sonde selon l'invention. La figure 2 représente une variante de ce premier mode de 10 réalisation. La figure 3 représente un second mode de réalisation d'une sonde selon l'invention. La figure 4 représente une variante de ce second mode de réalisation. 15 Sur ces différentes figures, les conventions suivantes ont été adoptées. Les flèches simples en traits minces représentent la direction des rayons lumineux et les traits pointillés les axes optiques des objectifs. Il existe principalement deux modes de réalisation de sondes 20 selon l'invention. Dans le premier mode de réalisation, on superpose à la surface de tissus biologiques que l'on cherche à opérer une image de la même zone en lumière visible. Dans un mode de réalisation plus simple, on superpose à une zone marquée un éclairage quasi-ponctuel en lumière visible permettant de bien la localiser. Bien entendu, il est possible de 25 coupler les deux dispositifs de façon à avoir à la fois un éclairage complet de la zone à opérer et un éclairage plus intense d'une zone particulière. A titre d'exemples non limitatifs, les figures 1 et 2 représentent deux variantes du premier mode de réalisation et les figures 3 et 4 représentent deux variantes du second mode de réalisation. 30 La figure 1 représente le schéma d'une sonde selon l'invention conçue selon le premier mode de réalisation. Elle comprend essentiellement les éléments décrits ci-dessous. Une première source de lumière 1 émet un premier faisceau de 35 lumière destiné à éclairer une surface de tissus biologiques 3 dont au moins une zone 30 dite zone marquée a été préalablement fixée par un marqueur fluorescent. Les techniques de marquage de tissus vivants sont bien connues par ailleurs et sortent du cadre de cette description. Le faisceau doit être émis à une première longueur d'onde correspondant sensiblement à la longueur d'onde d'excitation du fluorophore de marquage. Différentes sources permettent d'obtenir cet effet. Ainsi, la source peut être un laser, une diode électro-luminescente ou une lampe à incandescence. Elle peut comporter des dispositifs optiques annexes permettant de guider ou de diriger le faisceau lumineux afin d'améliorer sa répartition lumineuse sur la surface éclairée. Ainsi, à titre d'exemple, sur la figure 1, une fibre optique 2 permettant le transport de lumière de la source 1 à la zone éclairée 3 a été représentée. Sous l'effet de la lumière d'excitation, le fluorophore émet à une seconde longueur d'onde. Un premier dispositif optique de type caméra comprenant un premier objectif 4 et une surface photo-sensible 7 forme de la surface de tissus biologiques 3 une première image sur la surface photo-sensible 7. Cette surface photo-sensible peut être de type CCD, par exemple. Ce premier dispositif peut comporter un filtre 6 dont la transmission est adaptée à cette seconde longueur d'onde. On évite ainsi toute lumière parasite issue soit de la première source, soit d'autres sources lumineuses disposées dans la salle d'opération. Cette première image peut être traitée par des moyens de traitement de l'image appropriés permettant de mettre en évidence les zones marquées présentes dans l'image. Les traitements les plus simples sont les traitements d'image par seuillage d'intensité mais il est possible d'appliquer des traitements plus complexes. On citera, à titre d'exemple, les logiciels de traitement d'images Pro Plus ou Analysis. Cette image traitée est transmise à un second dispositif optique comprenant au moins : • un projecteur d'images 9 générant, à partir du signal issu des moyens de traitement, une seconde image à au moins une troisième longueur d'onde située dans le spectre visible, ladite seconde image étant représentative de la zone marquée. A titre d'exemple illustré en figure 1, on peut utiliser comme projecteur d'images une matrice d'affichage fonctionnant par transmission 9 éclairée par une source 10. Cette matrice peut être à cristaux liquides. On peut, bien entendu, utiliser des projecteur d'images fonctionnant par réflexion, comme par exemple une matrice de micro-miroirs. Il est également possible d'ajouter un filtre 11 dont la transmission soit adaptée à cette troisième longueur d'onde. Cette troisième longueur d'onde peut avantageusement être située dans le vert. Cette couleur présente le double avantage d'être située dans la zone de plus grande sensibilité de l'oeil humain et également d'assurer un excellent contraste avec la couleur rouge des tissus vivants. • un second objectif 12 forme de cette seconde image une troisième image sur la surface de tissus biologiques 3, le second dispositif étant agencé de façon que cette troisième image visible soit de même dimensions et en coïncidence avec la surface de tissus biologiques. Ainsi, les zones malades sont éclairées d'une lumière de couleur, facilitant le travail du chirurgien qui n'est pas obligé constamment de regarder un écran de visualisation. L'ensemble constitué par la première source, les premiers et second dispositif optiques peut être monté dans une structure commune. Cette structure peut être agencée de façon à être facilement manipulable par l'opérateur. Dans ce cas, la sonde a un champ de l'ordre de 8 centimètres, une distance de travail de l'ordre de 10 à 15 centimètres et une résolution inférieure à 100 microns. Dans l'exemple de la figure 1, le premier dispositif optique et le second dispositif ont des axes optiques disjoints. Cette disposition a deux inconvénients. D'une part, l'encombrement de la sonde est assez important. D'autre part, au moins un des axes optiques représentés en traits pointillés sur la figure 1 du premier ou du second dispositif optique n'est pas perpendiculaire au plan moyen de la surface de tissus biologiques, ce qui n'est pas favorable pour obtenir une image de bonne qualité, exempte d'aberrations optiques. Aussi, il est possible de pallier ces différents inconvénients en interposant une lame séparatrice qui va combiner la lumière de fluorescence issue des tissus vivants qui est à la seconde longueur d'onde avec la lumière issue du projecteur d'images qui est à une troisième longueur d'onde différente de la seconde longueur d'onde. Une réalisation de ce type est illustré en figure 2. Cette sonde comprend les éléments décrits ci-dessous., Une première source de lumière 1 émet un premier faisceau de lumière destiné à éclairer une surface de tissus biologiques 3 à une première longueur d'onde. Sous l'effet de la lumière d'excitation, le fluorophore émet à une seconde longueur d'onde. Un premier dispositif optique de type caméra comprenant un premier objectif composé des ensembles optiques 4 et 40, une lame séparatrice 5 et une surface photo-sensible 7 forme de la surface de tissus biologiques 3 une première image sur la surface photo-sensible 7. A titre d'exemple, la lame séparatrice peut être un cube séparateur ou une lame dichroïque. Ce premier dispositif peut, de plus, comporter un filtre 6 dont la transmission est adaptée à cette seconde longueur d'onde. Sur la figure 2, la lame séparatrice est comprise entre deux ensembles optiques 4 et 40 et fonctionne en transmission. Bien entendu, il est possible d'adopter d'autres dispositions. Par exemple, on peut utiliser une seule optique disposée avant ou après la lame et la lame dichroïque peut fonctionner sur la voie caméra en transmission ou en réflexion. Comme dans le cas de la figure 1, cette première image peut être traitée par des moyens de traitement de l'image appropriés permettant de mettre en évidence les zones marquées présentes dans l'image. Cette image traitée est transmise à un second dispositif optique 25 comprenant au moins : • un projecteur d'images 9 générant, à partir du signal issu des moyens de traitement, une seconde image à au moins une troisième longueur d'onde située dans le spectre visible, ladite seconde image étant représentative de la zone marquée. Il est 30 également possible d'ajouter un filtre 11 dont la transmission soit adaptée à cette troisième longueur d'onde. • un second objectif 12 qui forme de cette seconde image, après réflexion sur la lame séparatrice 5 une troisième image sur la surface de tissus biologiques 3, le second dispositif étant agencé 35 de façon que cette troisième image visible soit de même dimensions et en coïncidence avec la surface de tissus biologiques, les parties des axes optiques du premier objectif et du second objectif situées entre la surface de tissus biologiques et l'optique séparatrice 5 soient communes. Lorsque le chirurgien bouge la sonde, la surface de tissus biologiques change. Il est très important que le délai entre le moment où l'image est captée par la caméra 7 et où elle est affichée par l'afficheur 9 soit suffisamment bref pour que l'image projetée ne présente pas de décalage perceptible avec la surface de tissus vivants. Un second mode de réalisation d'une sonde selon l'invention est décrit sur les figures 3 et 4. La sonde de la figure 3 comprend essentiellement les éléments décrits ci-dessous : Une première source de lumière 1 émettant un premier faisceau de lumière destiné à éclairer une surface de tissus biologiques 3 à une première longueur d'onde. Sous l'effet de la lumière d'excitation, le fluorophore émet à une seconde longueur d'onde. Un premier dispositif optique de type caméra comprenant un premier objectif 4 et une surface photo-sensible 7 forme de la surface de tissus biologiques 3 une première image sur la surface photo-sensible 7. Ce premier dispositif peut comporter, comme dans les modes de réalisation précédents, un filtre 6. Cette première image peut être traitée par des moyens de traitement de l'image appropriés 8 permettant de mettre en évidence les zones marquées présentes dans l'image et afficher sur un écran d'ordinateur ou un moniteur. Un second dispositif optique comprenant au moins une seconde source de lumière 13 émettant un second faisceau à la première longueur d'onde, agencée de façon à éclairer le centre de la surface de tissus biologiques de façon quasi-ponctuelle. Ce second dispositif peut comprendre une quatrième source de lumière 14 émettant un quatrième faisceau à une quatrième longueur d'onde située dans le spectre visible, agencée de façon à éclairer le centre de la surface de tissus biologiques de façon quasi-ponctuelle en coïncidence avec le troisième faisceau. Les troisième et quatrième sources peuvent être, par exemple, des lasers ou des diodes-lasers collimatées. Ce second dispositif présente de nombreux avantages. D'une part, en positionnant les faisceaux des troisième et quatrième sources au centre du champ de la sonde, on est certain que la sonde est à la distance de travail permettant une netteté optimale sur l'écran de visualisation. D'autre part, dès que le chirurgien détecte sur son écran une zone marquée, il peut actionner les troisième et quatrième source et amener la zone détectée au centre du champ où elle est alors éclairée de façon optimale à la fois en éclairage fluorescent mais également en éclairage visible. On obtient une image de bonne qualité sur l'écran de visualisation et une image bien visible par le chirurgien qui opère. Un perfectionnement intéressant de ce dispositif est que les moyens de traitement d'images comportent des moyens de reconnaissance des zones marquées et en ce que la sonde comprend des moyens permettant d'activer la quatrième source de lumière lorsqu'une zone marquée est éclairée par le troisième faisceau de lumière. La sonde décrite en figure 4 constitue une variante de la précédente. Dans cette variante, on utilise comme déjà décrit sur la sonde de la figure 2 une lame séparatrice 5 permettant de combiner les faisceaux optiques issus des sources de lumière 13 et 14. Il est possible de combiner les dispositifs décrits sur les figures 1 ou 2 avec ceux décrits sur les figures 3 ou 4 au prix d'adaptations optiques simples. On obtient alors une sonde qui peut, à la fois, projeter une image visible en coïncidence avec la surface de tissus biologiques et un spot lumineux éclairant la zone centrale des tissus. On réunit alors dans un même dispositif les différents avantages des réalisations précédentes. La sonde peut être portée soit manuellement par l'opérateur, soit portée par un bras télescopique. La sonde fait partie d'un appareillage médical qui comporte généralement ses propres sources d'éclairage ambiant. On utilise généralement, à cet effet, des éclairages de type scialytique. Il est, dans ce cas, utile d'adapter ces sources d'éclairage de façon que leurs longueurs d'onde soient si possible différentes d'au moins la première longueur d'onde et de la seconde longueur d'onde qui correspond à la longueur d'onde de fluorescence des zones marquées. Ceci est en effet nécessaire afin d'éviter que la composante de la lumière émise par le scialytique correspondant à la longueur de fluorescence ne soit réfléchie par le patient et apparaisse sur la première image réalisée au niveau de la surface photo-sensible 7. REVENDICATIONS 1. Sonde optique per-opératoire comprenant au moins : • une première source de lumière (1, 2) émettant un premier faisceau de lumière destiné à éclairer une surface (3) de tissus biologiques dont au moins une zone (30) dite zone marquée a été préalablement fixée par un marqueur fluorescent, ledit faisceau étant émis à une première longueur d'onde correspondant sensiblement à la longueur d'onde d'excitation du fluorophore de marquage, ledit fluorophore émettant à une seconde longueur d'onde ; • un premier dispositif optique comprenant un premier objectif (4) et une surface photo-sensible (7), ledit objectif formant de la surface de tissus biologiques une première image sur la dite surface photo-sensible, le premier dispositif étant relié à des moyens (8) de traitement de l'image issue de la surface photo-sensible ; caractérisé en ce que ladite sonde comprend également : des moyens optiques différents du premier dispositif optique et destinés à éclairer au moins une partie de la surface (3) de tissus biologiques, de préférence la partie de surface éclairée par les moyens optiques correspond à au moins une des zones marquées identifiée par les moyens (8) de traitement de l'image. 2. Sonde optique per-opératoire selon la revendication 1 , caractérisé en ce que les moyens optiques comprennent au moins un projecteur d'images (9, 10) générant, sur commande d'un dispositif de commande analysant le signal issu des moyens de traitement, une seconde image à au moins une troisième longueur d'onde située dans le spectre visible, ladite seconde image étant représentative de la zone marquée et un second objectif (12) formant de cette seconde image une troisième image sur la surface de tissus biologiques, le second dispositif étant agencé de façon que cette troisième image visible soit de même dimensions et en coïncidence avec au moins une zone marquée de la surface de tissus biologiques. 3. Sonde optique per-opératoire selon la revendication 2, caractérisé en ce que les moyens optiques comprennent une optique séparatrice (5) permettant de séparer spectralement la seconde longueur d'onde de la troisième longueur d'onde, ladite optique (5) étant disposée de façon que les parties des axes optiques du premier objectif et du second objectif situées entre la surface de tissus biologiques et la dite optique séparatrice soient communes. 4. Sonde optique per-opératoire selon l'une des revendications 10 précédentes, caractérisé en ce que le premier dispositif optique comprend un premier filtre optique (6) transparent à la seconde longueur d'onde. 5. Sonde optique per-opératoire selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que le projecteur d'images comprend un second filtre 15 optique (11) transparent à la troisième longueur d'onde. 6. Sonde optique per-opératoire selon la revendication 1 , caractérisé en ce que les moyens optiques comprennent au moins une troisième source de lumière (13) émettant un troisième faisceau à la 20 première longueur d'onde, agencée de façon à éclairer le centre de la surface de tissus biologiques de façon quasi-ponctuelle. 7. Sonde optique per-opératoire selon la revendication 6, caractérisé en ce que les moyens optiques comprennent une quatrième 25 source de lumière (14) émettant un quatrième faisceau à une quatrième longueur d'onde située dans le spectre visible, agencée de façon à éclairer le centre de la surface de tissus biologiques de façon quasi-ponctuelle en coïncidence avec le second faisceau. 30 8. Sonde optique per-opératoire selon la revendication 7, caractérisé en ce que les moyens optiques comprennent une optique séparatrice (5) permettant de séparer spectralement la seconde longueur d'onde de la quatrième longueur d'onde, ladite optique étant disposée de façon que les parties des axes optiques du premier objectif et de laquatrième source situées entre la surface de tissus biologiques et la dite optique séparatrice soient communes. 9. Sonde optique per-opératoire selon l'une des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que les moyens optiques comprennent un imageur générant, à partir du signal issu des moyens de traitement, une seconde image à au moins une troisième longueur d'onde située dans le spectre visible, ladite seconde image étant représentative de la zone marquée et un second objectif formant de cette seconde image une troisième image sur la surface de tissus biologiques, les moyens optiques étant agencés de façon que cette troisième image visible soit de même dimensions et en coïncidence avec la surface de tissus biologiques. 10. Sonde optique per-opératoire selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisé en ce que les moyens de traitement d'images comportent des moyens de reconnaissance des zones marquées et en ce que ladite sonde comprend des moyens électroniques permettant d'activer la quatrième source de lumière lorsqu'une zone marquée est éclairée par le troisième faisceau de lumière. 11. Appareillage médical destiné à être relié à une sonde selon l'une des revendications 1 à 10, comprenant lesdits moyens de traitement et le dispositif de commande de la quatrième source de lumière. 12. Appareillage médical selon la revendication 11, comprenant un dispositif d'affichage permettant de visualiser l'équivalent de la première image ou de la seconde image. 13. Appareillage médical selon l'une des revendications 11 ou 12, 30 caractérisé en ce qu'il comporte un éclairage de type scialytique émettant à des longueurs d'onde différentes d'au moins la première longueur d'onde.