Brevet FR2922109A1 — publié le 20090417

Composition pharmaceutique ou diététique pour inhiber l'absorption intestinale du sucre La présente invention concerne une nouvelle application thérapeutique ou diététique du nigella sativa. On sait que le nigella sativa, communément appelé cumin noir, fait partie de la famille des renonculacées et se présente sous la forme de graines. Le brevet US 5 653 981 a décrit le nigella sativa sous forme de composition pharmaceutique pour traiter le cancer. Le déposant a constaté, de façon surprenante, qu'un extrait aqueux de nigella sativa était utilisable en tant que composition pharmaceutique ou diététique pour inhiber ou bloquer l'absorption intestinale du sucre et notamment : en tant que médicament pour inhiber l'absorption intestinale du sucre, en tant que médicament ou composition diététique pour lutter contre la prise de poids, c'est-à-dire l'obésité, en tant que moyen ou outil pour inhiber l'absorption des sucres au cours d'études expérimentales, fondamentales ou appliquées. Cependant, l'application préférée de l'extrait aqueux de nigella sativa est le traitement du diabète. L'extrait aqueux, selon l'invention, peut renfermer en outre de l'oliva europea. De préférence, l'extrait aqueux selon l'invention 1 à 4, referme entre 1% et 99% en poids de nigella sativa par rapport au poids total de la composition ou du médicament. Cette composition ou ce médicament peut renfermer en outre de 0,0001% à 30% en poids d'oliva europea par rapport au poids total de la composition ou du médicament. La composition pharmaceutique selon l'invention peut être présentée sous forme de médicament administrable par voie orale, anale ou intraveineuse. Le diabète est une maladie permanente provoquée par l'absence de production par le corps humain d'une quantité suffisante d'insuline ou par l'incapacité du corps d'utiliser efficacement l'insuline qu'il produit. Le corps a besoin d'insuline pour transformer en énergie le sucre présent dans la nourriture. En cas de diabète, le sucre reste dans le sang et finit par s'y trouver en concentrations trop élevées. Sur une longue période, de telles concentrations peuvent mener à des complications, comme des lésions aux vaisseaux sanguins et aux reins, ainsi que des problèmes de circulation. Il existe trois types principaux de diabète : le type 1, quand le corps produit peu d'insuline ou n'en produit pas du tout. Le type 2, quand le corps produit de l'insuline sans pouvoir l'utiliser efficacement. Le diabète gestationnel, quand le corps ne peut utiliser efficacement l'insuline lors de la grossesse. Ce type de diabète disparaît après la naissance du bébé. Chez le sujet normal, la glycémie varie entre 0.8 en fin de nuit et 1,2 g/l 1h30 après un repas soit entre 4,4 - 6,7 mmol/l. Il est possible de trouver des glycémies à jeun ou après effort entre 0,6 et 0,8g/I chez des sujets jeunes et/ou très sportif mais généralement sans aucun signe d'appel. L'hypoglycémie est un taux anormalement bas de glucose dans le sang. Bien que l'hypoglycémie se manifeste souvent chez les personnes atteintes de diabète insulinodépendant, on la rencontre parfois chez certaines personnes en bonne santé et on l'étudie maintenant comme un trouble spécifique de l'organisme. L'hypoglycémie provoque des symptômes nombreux et variés, et lorsqu'elle se produit chez un diabétique, elle peut avoir des conséquences graves. Dans la plupart des autres cas, l'hypoglycémie peut être contrôlée par le régime alimentaire et par un mode de vie adapté. Le glucose constitue la principale source d'énergie de l'organisme. Pendant la digestion, le pancréas libère une hormone, le glucagon, qui transforme les glucides alimentaires en glucose, un sucre simple qui sera libéré dans le sang. Pour aider le glucose à pénétrer dans les cellules, le pancréas sécrète une deuxième hormone, l'insuline. Sans insuline, le glucose s'accumule dans le sang et ne procure pas l'énergie nécessaire aux cellules. On parle alors d'hyperglycémie et cette condition mène souvent au diabète. Si, au contraire, il y a trop d'insuline, le glucose ne suffit pas à la tâche et les cellules sont privées d'énergie. Le taux de sucre baisse et les symptômes de l'hypoglycémie peuvent se manifester. L'organisation mondiale de la santé (OMS) a défini deux principaux critères de diagnostic du diabète : 1) Le dosage de la glycémie plasmatique à jeun en laboratoire après 8 à 12 heures de jeûne. Si la glycémie à jeun est inférieure à 1,10 g/I, le sujet est "normal". Si la glycémie à jeun est supérieure à 1,26 g/I, le sujet est diabétique. Si la glycémie à jeun est comprise entre 1,10 et 1,26 g/I, le sujet est classé comme atteint d'hyperglycémie à jeun (intolérance au glucose). Ces sujets ne sont pas diabétiques mais sont à haut risque de le devenir en l'absence de mesures hygiéno-diététiques. Pour les valeurs limites, il est indispensable, avant de poser un diagnostic, de confirmer les premiers résultats en faisant faire un nouveau dosage quelques semaines plus tard. 2) Le dosage de la glycémie mesurée deux heures après l'administration par voie orale d'une dose d'épreuve de 75g de glucose (glycémie post prandiale). Le problème dans cette méthode est que les valeurs limites fixées (deux heures après) proviennent d'études épidémiologiques portant sur un nombre d'individus relativement faible. Le dépistage du diabète doit être ciblé c'est à dire réservé aux sujets à haut risque d'être ou de devenir diabétiques de type II. Le but est donc de repérer les sujets à risque. Le diabète de type II survient habituellement après l'âge de 40 ans. C'est donc chez des sujets ayant atteint ou dépassé cet âge qu'il doit être recherché. Doivent aussi être dépistés, les sujets ayant un membre de leur famille atteint de diabète, et les sujets hypertendus sous traitement médicamenteux fréquemment en surpoids. La prise en charge d'un patient diabétique est difficile car c'est une longue maladie. Son traitement quotidien altère profondément la qualité de vie du diabétique. Il faut qu'il soit global, dirigé contre tous les facteurs de risque, pour prévenir les complications micro et macro vasculaires de la maladie. Les outils de prise en charge sont les principes hygiéno-diététiques à savoir : - réduction de l'excès pondéral: "des régimes modérément restrictifs entraînent de meilleurs résultats à long terme et induisent moins d'effets secondaires que les restrictions alimentaires sévères" (niveau de preuve C), - répartition des nutriments: concernent à la fois les patients en surpoids et les patients à poids normal (accord d'expert). La répartition recommandée entre les apports respectifs des glucides et des lipides alimentaires doit tenir compte du profil des habitudes alimentaires du patient (niveau preuve C), - l'observance diététique: il est recommandé pour l'améliorer d'assurer un suivi diététique régulier et de coupler aux conseils diététiques des conseils d'activité physique (accord d'expert), - l'activité physique : la pratique d'une activité sportive est recommandée dans les cas où elles sont applicables (niveau de preuve C). La stratégie de prise en charge des patients est la suivante : Quand par exemple un diabète de type II est diagnostiqué, on a recours tout d'abord à un traitement non pharmacologique. Pendant 4 à 6 mois, le patient diabétique doit respecter les règles hygiéno-diététiques citées ci-dessus : régime réduisant les aliments gras, les boissons sucrées et alcoolisées, la reprise d'une activité physique régulière pendant 30 à 45 minutes, 3 à 4 jours par semaine. Ceci permettra une perte de poids et une significative réduction des valeurs glycémiques, tensionnelles et lipidiques. En cas d'échec après 4 à 6 mois, il faut alors opter pour un traitement médicamenteux. La deuxième étape consiste à la monothérapie orale. On dispose actuellement de médicaments antidiabétiques actifs par voie orale à action hypoglycémiante. Les hypoglycémiantes per os les plus connus sont: -Biguanides : ils améliorent la sensibilité à l'insuline. - Sulfamides hypoglycémiants : ils stimulent la sécrétion d'insuline et ont une activité hypoglycémiante plus marquée. - Inhibiteurs des a-glucosidases: ils ont une activité hypoglycémiante plus faible. - Insulino- secrétagogues (glinidines): ils sont surtout actifs sur l'hyperglycémie post prandiale. Ces médicaments utilisés en monothérapie permettent d'obtenir un contrôle glycémique correct qui est évalué tous les 4 mois par un dosage de l'hémoglobine glyquée (HbAlc). - l'objectif optimal à atteindre est une valeur d'HbAlc inférieure ou 5 égale à 6,5% - lorsque l'HbAlc se situe entre 6,6 et 8% sur deux contrôles successifs, une modification du traitement peut-être envisagée en fonction de l'appréciation par le clinicien du rapport avantages/inconvénients du changement de traitement envisagé 10 - lorsque l'HbAlc est supérieure à 8% sur deux contrôles successifs, une modification du traitement est recommandée (accord professionnel). La troisième étape est la bithérapie orale. En cas d'échec primaire ou secondaire de la monothérapie orale initiale, il est recommandé de prescrire une bithérapie orale c'est à dire d'associer entre elles deux classes 15 d'hypoglycémiants. La quatrième étape est l'insulinothérapie. Si un diabétique de type II demeure mal équilibré, il faut passer à un traitement par l'insuline. L'insulinothérapie permet d'obtenir une amélioration nette du contrôle glycémique. Si ce n'est pas le cas, on peut associer à l'insulinothérapie la 20 prescription de biguanides qui en potentialisent l'action. Les principales complications dues au diabète sont nombreuses. Parmi ces complications on peut citer: -Complications aiguës du diabète insulinodépendant. Ces sont des urgences métaboliques (malaise voire comas) par hyperglycémie et 25 acidocétose (insuline non prescrite ou insuffisamment dosée) mais aussi par hypoglycémie résultant de l'administration de quantités inadaptées d'insuline. - Complications chroniques et dégénératives des diabètes. Parmi lesquelles, la rétinopathie diabétique qui est la principale cause de cécité et 30 de troubles visuels, l'insuffisance rénale liée à la gravité et à la durée de la maladie, la cardiopathie responsable dans les pays industrialisés de 75 des décès, les neuropathies diabétiques qui sont probablement les complications les plus courantes du diabète. Selon certaines études, 50 des diabétiques voir plus en souffrent à des degrés divers, l'ulcération des 35 pieds et l'amputation. La prise de poids est aussi devenue un problème majeur de la société de consommation. Toutes les études épidémiologiques montrent que le nombre de personnes qui vivent avec le surpoids augmente régulièrement dans les pays industrialisés ainsi que dans les pays en voie de développement. Cette prise de poids est surtout la conséquence d'une mauvaise nutrition. Une alimentation riche en sucre plus particulièrement le glucose et le fructose est souvent l'un des déclencheurs de la prise de poids. Le but de l'invention est donc de proposer une nouvelle composition pharmaceutique et/ou diététique qui agit comme un bloqueur de l'absorption intestinale des sucres et de ses dérivés. Il a été trouvé de manière inattendue que l'administration par voie orale (per os) d'une quantité efficace du mélange d'un extrait aqueux nigella sativa provoquait un blocage de l'absorption intestinale des sucres. Les mêmes résultats ont été confirmés avec les études in vitro sur un morceau d'intestin en chambre de perméation d'Ussing. L'invention a donc pour objet une composition pharmaceutique et/ou diététique renfermant au moins un extrait aqueux de nigella sativa mélangé éventuellement avec un extrait aqueux de feuilles d'oliva europea. La présente invention est différente de toutes les autres inventions utilisant les extraits des graines de nigelle (nigella sativa) comme composition pharmaceutique utilisée pour stimuler les fonctions immunitaires (brevet US N° 5653981). Plusieurs compositions pharmaceutiques contenant plusieurs plantes en association avec la nigelle ont été utilisées. Mais toutes ces formulations pharmaceutiques sont faites soit avec les extraits totaux de nigelle, soient les extraits organiques ou huileux. Aucune de ces compositions ne sont faites à partir des extraits aqueux (voir également les brevets US N°6042834 et US N°6218434). Plusieurs articles scientifiques décrivent aussi l'utilisation des extraits huileux ou totaux des graines de nigelle comme antidiabétique. Il est de l'article de Otoom et al (J Herb Pharmacother. 2006, 6(2) : 31-41). Il en est de même pour l'article de Fararh KM (Res Vet Sci. 2004 Oct, 77(2) :123-9), de El-Dakhakhny M (Planta Med. 2002 may 68(5) :465-6), de Zubaida A (Annals of Saudi Medicine, vol 21, N°3-4, 2001). Les études sur les organes isolés ont montré que la composition pharmaceutique selon la présente invention inhibe l'absorption intestinale du sucre. La description ci-après montre à l'aide des chambres de perméation d'Ussing l'effet inhibiteur de la composition pharmaceutique (Biodiabétine� ou encore BioD�) selon l'invention, sur l'absorption intestinale des sucres chez le rat. Les résultats montrent que la BioD° inhibe l'absorption intestinale du glucose. Cette inhibition du glucose est dépendante de la dose et l'effet maximum est obtenu avec une concentration de 1 nano gramme d'extrait par millilitre. Matériels et méthodes utilisés Produits chimiques La Bumétanide, la Phloridzine et le glucose ont été achetés chez Sigma (St Quentin-Fallavier, France). La Biodiabétine� ou BioD� a été préparé par le laboratoire de Biotechnologie de la société Titis Business Corporation France (T.B.C). Préparation de tissus Les rats Sprague-Dawley adultes pesant entre 180 et 250 g ont été obtenus d'Iffa Credo Iffa (St Germain s / Arbresle, France) et ont été nourris par les aliments standard de laboratoire (UAR, Villemoisson s / Orge, France) jusqu'à la réalisation de ces études. La nourriture a été retirée 18 h avant les expériences, mais les animaux avaient l'accès libre à eau potable. Pour les études de l'électrophysiologie, les animaux ont été tués par la dislocation cervicale après anesthésie et segments d'intestin d'animaux à jeun ont été enlevés et rincés de contenu intestinal avec solution du Ringer frais. Les estomacs de tous les animaux ont été trouvés vides. Les morceaux de tissus ont été ensuite ouverts le long de la bordure mésentérique ont été montés bien aplatis entre les deux demis de chambres Ussing acryliques (Titis Business Corporation -TBC France). Etudes du courant de Court-circuit en chambres Ussing La solution du Ringer isotonique est utilisée dans les expériences est composée de (en mM) 115 NaCl, 25 NaHCO3r 1.2 MgCl2, 1.2 CaCl2, 2.4 K2HPO4 et 0.4 KH2PO4. Le pH était 7.40 à 37°C. Une préparation intestinale est montée entre deux demi chambres en plexiglas déterminant un compartiment muqueux et un compartiment séreux. Ces demi chambres, dont l'ouverture est appliquée contre la surface exposée du tissu intestinal, sont perforées en compartiments contenant le liquide de Ringer qui est une solution tamponnée à pH = 7,6 tempérée à 37°C. Le pH du liquide de Ringer et sa saturation en oxygène sont maintenus constamment par un bullage permanent de carbogène, mélange gazeux composé d'oxygène et de dioxyde de carbone dans les proportions 95% de CO2 et 5% de CO2. Le bullage assure également le brassage permanent du milieu d'incubation dans les deux compartiments. Le potentiel électrique transépithélial reflétant l'asymétrie de charges électriques entre le coté muqueux et séreux de la membrane, a été mesuré par les électrodes de calomel reliées par des ponts d'agaroses plongés dans une solution de KCI de 3 M dans 4% (w/v). Ces ponts ont été placés sur les deux côtés du tissu et sont adaptés à chaque demi chambre. Le tout est relié à un voltmètre à haute impédance. La différence de potentiel a été court-circuitée par un courant de court-circuit (Icc ou Isc) via des ponts d'agaroses à 3M de KCI placés dans chaque réservoir, adapté aux électrodes Ag-AgCI, le tout étant relié à un système de la voltage-Clamp (Titis Business Corporation ou TBC France). Isc délivré et corrigé pour résistance fluide, a été enregistré de façon continue sur un ordinateur à l'aide d'un logiciel Daqsoft (TBC France). Isc représente la somme des flux des l'ions nets transportés à travers l'épithélium en absence d'un gradient électrochimique (principalement Na+, CI-2 et HCO-3). Préparation de la Biodiabétine� Cette préparation ne concerne que les principes actifs de la BioD. Il a été omis volontairement de parler des différents excipients et lubrifiants qui rentrent dans les différentes formulations galéniques. Les exemples des excipients utilisés sont connus des hommes du métier, qui les utilisent comme liants ou lubrifiants pour fabriquer les poudres, les granulés ou autres préparations. Les exemples des excipients qui sont utilisés selon l'invention sont : le lactose, l'amidon, la dextrine, le phosphate de calcium, le carbonate de calcium, le silicate d'aluminium naturel ou synthétique, l'oxyde de magnésium, l'hydroxyde d'aluminium hydraté, le stéarate de magnésium, le bicarbonate de sodium. D'autres excipients non cités ci-dessus mais qui conviennent également sont décrits dans le � Remington's Pharmaceutical Sciences � par E.W. Martin, et peuvent être utilisés selon l'invention. En ce qui concerne les principes actifs de la BioDil est question ici de l'extrait aqueux de la nigelle sativa ou cumin noir, de l'extrait de feuille de l'olivier d'Europe (OIéa Européa).ou tout autre extrait de plante comprenant les mêmes extraits de la nigelle sativa. Exemple de préparation de l'extrait aqueux de la nigelle Les extraits des graines de nigelle séchés sont broyés de préférence à froid. La poudre et mélangée à l'eau puis et laissé à macération. La macération est ensuite filtrée puis atomisée pour obtenir une poudre fine. Le même procédé est utilisé pour obtenir la poudre des extraits aqueux des feuilles de l'Olivier. Les deux poudres sont mélangées pour obtenir le principe actif de la BioD�. A titre d'exemples non limitatifs mais portant sur un modèle de réalisation de la formulation. Le principe actif de la BioD�.peut être réalisé avec une concentration de l'extrait aqueux de nigelle sativa qui varie entre 0,1 à 99% et une concentration de l'extrait aqueux des feuilles de l'olivier de 0,1 à 50%. Tout autre extrait aqueux de plante contenant les extraits de la nigelle peut être utilisé à la place de l'extrait des feuilles de l'olivier. Effet de la BioD� sur l'inhibition de transport du glucose Après la stabilisation des paramètres électriques des tissus, la BioD� a été introduite à différentes concentrations dans les compartiments séreux et muqueux des préparations, alors que le glucose n'a été introduit que dans les compartiments muqueux. Pour éviter la pression osmotique engendrée par l'introduction du D-Glucose dans le compartiment muqueux, les mêmes concentrations de mannitol ont été ajoutées dans le côté séreux de la préparation. Les variations des paramètres électriques sont ensuite relevées puis enregistrés sur l'ordinateur. Statistiques Les résultats, montrés sur les figures annexées, sont rapportés en moyenne (M) de mesures plus l'écart type de ma moyenne (M f ETM). Toutes les déterminations ont été faites avec une moyenne d'au moins de 6 morceaux de tissu (n). L'analyse de la variance a été effectuée d'après la procédure du modèle linéaire suivi du test de Duncan grâce au logiciel SAS (SAS Institute, Cary, NC,). La figure 1 montre que l'extrait aqueux de la nigelle sativa, utilisée à une concentration de 200pg/ml inhibe l'absorption intestinale du glucose, lorsqu'elle est introduite dans le côté muqueux et séreux. La figure 2 montre que l'extrait aqueux de la nigelle sativa, utilisée à une concentration de 200pg/ml inhibe l'absorption intestinale du glucose, avec une même amplitude que lorsqu'on utilise 0,5 mg/ml de phloridzine. La figure 3 montre que l'effet de l'extrait aqueux de la nigelle sativa, sur l'inhibition de l'absorption du glucose est dépendant de la dose, utilisée à une concentration de 200pg/ml inhibe l'absorption intestinale du glucose, avec une même amplitude que lorsqu'on utilise 0,5 mg/ml de phloridzine. Les figures 4 et 5 montrent que l'effet de l'extrait aqueux de la nigelle sativa, sur l'inhibition de l'absorption du glucose est non seulement dépendant de la dose, mais aussi que cet effet est biphasique. L'inhibition maximale est obtenue avec une concentration de lng/ml. L'inhibition de 50 (IC50) de l'absorption intestinale du glucose est obtenue avec une concentration de lpg/ml. La figure 6 montre que l'extrait aqueux de la nigelle sativa, utilisée à une concentration de 10ng/ml inhibe avec même amplitude l'effet de 10mM ou de 50 mM de glucose. Cette figure montre que l'effet inhibiteur de la nigelle concerne plusieurs transporteurs différents de glucose. La figure 7 montre que l'effet inhibiteur de l'extrait aqueux de la nigelle sativa, utilisée à une concentration de 10ng/ml, est plus important du côté séreux que du côté muqueux. REVENDICATIONS 1) Extrait aqueux de nigella sativa pour son application en tant que composition pharmaceutique ou diététique pour inhiber l'absorption intestinale du sucre. 2) Extrait aqueux selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est appliqué en tant que médicament pour inhiber l'absorption intestinale du sucre. 3) Extrait aqueux selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il est appliqué en tant que médicament ou composition diététique pour lutter contre la prise de poids. 4) Extrait aqueux selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il est appliqué en tant que médicament antidiabétique. 5) Extrait aqueux selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est appliqué en tant que moyen pour inhiber l'absorption des sucres au cours d'études expérimentales fondamentales ou appliquées. 6) Extrait aqueux selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il renferme en outre de l'oliva europea. 7) Extrait aqueux selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que ladite composition ou ledit médicament renferme entre 1% et 99% en poids de nigella sativa par rapport au poids total de la composition ou de médicament. 8) Extrait aqueux selon la revendication 7, caractérisé en ce que ladite composition ou ledit médicament renferme en outre de 0,001% à 30% en poids d'oliva europea par rapport au poids total de la composition ou de médicament. 9) Extrait aqueux selon l'une des revendications 7 à 8, caractérisé en ce qu'il est présenté sous forme de médicament administrable par voie orale, anale ou intraveineuse.