Brevet FR2922450A1 — publié le 20090424

Utilisation de bactéries lactiques pour la prévention et/ou le traitement de pathologies cutanées L'invention a pour objet une nouvelle utilisation d'une bactérie lactique du genre Lactobacillus pour la prévention et/ou le traitement de pathologies cutanées se traduisant par des irritations ou inflammations de la peau. La demande WO 03/082307 au nom de l'INRA se rapporte à l'utilisation de l'espèce Lactobacillus farciminis pour la prévention ou le traitement de pathologies digestives. Cette utilisation repose sur la mise en évidence d'une activité sur l'inflammation du tube digestif, plus particulièrement du colon, ainsi que sur la douleur viscérale, par la production in situ, dans la lumière digestive, de monoxyde d'azote (NO). L'étude des effets de cette espèce de Lactobacillus par les inventeurs a montré que, de manière surprenante, elle était également capable d'exercer une action sur la peau extérieure, qui n'était donc pas limitée aux seules muqueuses comme enseigné par la demande WO ci-dessus. Elle s'est révélée ainsi active sur des irritations cutanées, accidentelles ou liées à des pathologies et ce même lorsqu'elle était administrée par une voie n'impliquant pas à un contact direct avec la partie à traiter. Les irritations cutanées correspondent à des réactions inflammatoires multifactorielles et sont le plus généralement caractérisées par la présence de rougeurs, de douleurs, de chaleurs et/ou d'oedèmes. Elles peuvent s'étendre sur une surface plus ou moins grande. Ces irritations peuvent être de nature accidentelle, et dues par exemple à des chocs, le contact avec certains produits, les rayonnements Ultra-Violets, etc ou être liées à des pathologies, comme le psoriasis, l'acné ou l'eczéma. Il peut s'agir aussi d'affections cutanées du type couperose ou dues aux phénomènes de vieillissement de la peau. Ces différents types d'irritations/inflammations seront désignés globalement ci-après par l'expression � pathologies cutanées � et couvrent aussi bien les applications dermatologiques et non dermatologiques, ainsi que les applications en cosmétologie. L'invention fournit donc des moyens pour prévenir et/ou traiter ces pathologies cutanées. Ce but est atteint, conformément à l'invention, par l'utilisation d'au moins une bactérie lactique de l'espèce Lactobacillus farciminis, de fragments ou de fractions de composants cellulaires, et/ou de métabolites de cette bactérie, pour élaborer une composition pour la prévention et/ou le traitement de pathologies cutanées. L.farciminis est une bactérie probiotique, c-à-d ayant un effet considéré comme positif sur la santé. Elle est présente dans différents produits alimentaires, notamment les produits carnés, comme les saucisses, ou les levains de panification. Différentes souches sont accessibles dans diverses collections de culture, notamment celles déposées à l'ATCC sous le N° 29644, à la DSMZ sous le N° 20184, à JCM sous le N° 1097, ou au CIP sous le numéro 103136 T. La composition peut comprendre, à titre de principe actif, une ou plusieurs souches de L.farmicinis ou encore au moins une souche de L.farmicinis en combinaison avec une ou plusieurs souches d'une ou plusieurs autres bactéries probiotiques, comme celles des genres Lactobacillus ou Bifidobacterium. Dans l'utilisation selon l'invention, la ou les bactéries sont présentes dans la composition sous forme vivante, ou partiellement ou totalement inactivée. La bactérie peut être entière. Il peut s'agir en variante de fragments obtenus par lyse mécanique, chimique ou enzymatique, ou de fractions de composants cellulaires extraits des lysats, avantageusement selon les techniques classiques et/ou de métabolites produits par la bactérie et isolés à partir du milieu de culture. Ces fragments, fractions et métabolites sont utilisables selon l'invention dès lors qu'ils sont actifs dans les tests utilisés à cet égard pour L.farciminis et rapportés dans les exemples. Le terme � dérivés � sera également utilisé dans la suite de la description et les revendications pour les désigner. La ou les bactéries et/ou leurs dérivés peuvent être utilisés sous forme fraîche, congelée, lyophilisée ou séchée. La composition élaborée conformément à l'invention est avantageusement sous une forme appropriée pour une administration par voie orale ou par voie topique. Pour une administration par voie orale, ladite composition se présente sous forme de poudres, comprimés, gélules, capsules, de suspensions ou de solutions buvables. La dite composition renferme avantageusement de 106 à 1012 UFC/g, de préférence de 108 à 1010 UFC/g. Pour une administration par voie topique, ladite composition se présente sous forme de pommades, crèmes, suspensions ou solutions aqueuses, hydro-alcooliques ou huileuses, lotion, sérum, savon, émulsions de type lait, gels, microémulsions ou microparticules. Dans ces formes, la composition renferme de 105 à 1012 UFC/g, de préférence de 10' à 1010 UFC/g. Les tests réalisés avec des compositions conformes à 30 l'invention montrent leur efficacité pour prévenir et /ou traiter des pathologies cutanées. Compte tenu des effets mis en évidence dans les tests d'inflammation induite, la composition s'avère particulièrement appropriée pour la prévention et/ou le traitement d'inflammations cutanées, en particulier pour le traitement de lésions inflammatoires cutanées le cas échéant avec ulcération de l'épiderme et/ou infiltrat inflammatoire. Elles se sont également révélées de grande efficacité en cosmétologie pour prévenir et/ou traiter des inflammations cutanées de type couperose ou le vieillissement de la peau. Les compositions obtenues conformément à l'invention présentent un grand intérêt aussi bien chez l'homme que chez l'animal. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention sont donnés dans les exemples qui suivent avec référence aux figures 1 et 2, qui donnent, respectivement, les scores macroscopiques et microscopiques moyens de l'inflammation cutanée, selon les traitements subis par des groupes de souris. Exemple 1 : Effet de probiotiques sur une inflammation cutanée sur un modèle souris Les effets de L. farciminis ont été comparés à ceux obtenus avec deux autres probiotiques : Lactobacillus rhamnosus R0011 et Bifidobacterium longum R0175 (Lallemand SAS, Blagnac, France). Dans les expériences rapportées ci-après, l'inflammation a été induite par applications journalières d'acétate de phorbol 12-myristate-13 ou TPA à des souris femelles Skh-1 hairless. Le protocole suivant a été appliqué: • Conditions des traitements souris femelles, de 25 à 30g en début d'expérience, ont été utilisées et logées par 2 par cages, dans un environnement 30 contrôlé (humidité : 50+/- 10% ; température : 22°C+/- 2°C ; lumière : 21h à 9h). Les souris avaient libre accès à la nourriture (régime standard 2016(Harlan Teklad Diet, Oxon, Grande-Bretagne)) et à l'eau. Après une période d'acclimatation de 7 jours, les souris ont été pesées et divisées au hasard en 5 groupes : Groupe 1 (groupe contrôle): traitement seulement avec du serum physiologique (véhicule) Groupe 2 : induction d'une inflammation cutanée et traitement avec le véhicule Groupe 3 : induction d'une inflammation cutanée et traitement avec le probiotique Lactobacillus rhamnosus R0011, à une dose de 3,3 mg/souris /jour (correspondant à 109 UFC/jour) Groupe 4 : même traitement, mais avec Lactobacillus farciminis R1127, à 5,0mg/souris/jour ((correspondant à 109 UFC/jour) Groupe 5 : même traitement, mais avec Bifidobacterium longum R0175, à 6,0 mg/souris/jour (correspondant à 109 UFC/jour). Le TPA a été utilisé sous forme de solution dans l'acétone et appliqué chaque jour sur le dos des souris, pendant 7 jours. Les 3 probiotiques ont été préparés sous forme de solutions aqueuses salines physiologiques, avec administration immédiate aux animaux, à des concentrations respectives de 13,2 ; 20,0 ; et 24,0 mg/ml, par gavage par voie orale aux doses indiquées ci-dessus. Ces traitements ont commencé 2 semaines avant l'induction de l'inflammation cutanée, puis durant 1 semaine après le début de cette induction, avec l'administration d'un volume de 0,25ml de solution de probiotique/souris. Les traitements appliqués sont résumés dans le tableau 1 ci-après . Tableau 1 Groupe No. de Induction de Traitement quotidien par gavage oral souris l'inflammation cutanée (Ji à 320) Produit Jours Substance test Dose administré d'induction administrée (mg/jour) UFC/jour Véhicule 6 - - NaCl 0,9% TPA + Véhicule 6 TPA jla à J20 NaCl 0,9% - - TPA + L.rhamnosus 6 TPA J14 à J20 L.rhamnosus R0011 3.3 109 TPA + L. farciminis 6 TPA J14 à J20 L.farciminis 5.0 109 TPA + B.longum 6 TPA J14 à J20 B.longum R0175 6.0 109 Les souris ont été pesées 3 fois /semaine avant et après l'induction de l'inflammation cutanée. Leur viabilité et leur comportement ont été enregistrés tout au long des expériences, sans qu'aucune anomalie n'ait été notée. Score macroscopique de l'inflammation cutanée A J+20, une quantification de la surface de l'inflammation cutanée sur le dos et sur le ventre et une quantification du degré d'inflammation ont été effectuées pour calculer un score macroscopique global de l'inflammation cutanée pour chaque souris. Les résultats sont donnés sur la figure 1. L'examen de cette figure montre que le score macroscopique moyen varie selon le traitement appliqué, mais est toujours 15 supérieur à celui du groupe contrôle. Le groupe traité avec L.farciminis présente un score beaucoup plus faible que ceux des autres groupes. Prélèvements sanguins et isolement de sérum Les souris ont été anesthésiées à J+20 et le sang prélevé 20 par ponction cardiaque 4 h après le dernier traitement par voie orale avec des probiotiques ou un véhicule. Après avoir laissé le sang coagulé, le sérum a été récupéré sur chaque souris, congelé à 20°C et stocké à -80°C. Prélèvements cutanés 25 Les prélèvements cutanés ont été effectués sur les dos des souris, après les prélèvements sanguins, à l'endroit de l'application de la solution de TPA ou à ce même niveau pour les animaux témoins. Ces prélèvements ont été fixés et conservés dans le formol. Les analyses histopathologiques ont été réalisées sur 6 à 8 zones différentes/échantillon cutané. Le degré d'inflammation a été caractérisé pour chaque couche de peau, épiderme, derme et hypoderme de manière à définir un score global microscopique d'inflammation cutanée pour tous les échantillons analysés. Les résultats de l'analyse histopathologique des prélèvements cutanés sont résumés dans le tableau 2 ci-après : Tableau 2 Groupe Analyses histopathologiques des échantillons cutanés Véhicule Peaux sensiblement toutes normales sans lésion inflammatoire cutanées et sans infiltrat inflammatoire. TPA+Véhicule Peaux présentant sur la totalité un caractère inflammatoire lésions non spécifiques cutanées inflammatoires avec ulcération de l'épiderme et avec un infiltrat inflammatoire souvent prononcé. TPA+L.rhamnosus Peaux présentant sur la totalité un caractère inflammatoire lésions non spécifiques cutanées inflammatoires sans ulcération de l'épiderme mais avec un infiltrat inflammatoire plus ou moins prononcé. TPA+L.farciminis Peaux présentant sur la totalité un caractère inflammatoire lésions non spécifiques cutanées inflammatoires sans ulcération de l'épiderme et avec un infiltrat inflammatoire rarement prononcé. TPA+B.longum Peaux présentant sur la totalité un caractère inflammatoire lésions non spécifiques cutanées inflammatoires sans ulcération de l'épiderme mais avec un infiltrat inflammatoire plus ou moins prononcé. La figure 2 illustre les résultats obtenus concernant le score microscopique moyen de l'inflammation cutanée des souris des différents groupes. L'étude de ces résultats met en évidence l'effet favorable de L.farciminis sur l'inflammation cutanée. En effet, le score macroscopique moyen est nettement plus faible que celui observé avec les autres groupes. Dosages des cytokines pro- et anti-inflammatoires Après décongélation des sera, les 8 cytokines pro- et anti-inflammatoires suivantes ont été dosées simultanément en utilisant la technique Bio-Plex : IL-1R, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, GM-CSF, IFN-y et TNF-a. Les dosages ont été effectués en double. Les résultats obtenus montrent une réduction, par rapport au groupe 2 (traité par TPA+ véhicule), de la secrétion de cytokines pro-inflammatoires IL-1R, IL-2, GM-CSF, IFN-y et TNF-a et une augmentation de la secrétion de cytokines anti-inflammatoires IL-4, IL-5, IL-10. Exemple 2 : composition pour voie orale Gélules : Lactobacillus farciminis 108 UFC/g amidon de pomme de terre 150 mg Stéarate de magnésium 0,02 mg Exemple 3 : composition pour voie topique 15 Pommade : Lactobacillus farciminis sous forme de poudre 5,00 vaseline officinale : qsp 100% Cette préparation a été testée par trois volontaires souffrant 20 d'eczéma sur les avant-bras ou les plis du coude. Après 7 jours d'application bi-quotidienne de la préparation sur un seul côté, l'autre côté servant de � témoin �, deux personnes ont rapporté une amélioration très significative de la partie traitée par rapport à l'état antérieur et par rapport au côté 25 non traité. Pour la troisième personne, l'amélioration a été plus modérée, mais néanmoins notable. Revendications 1 - Utilisation d'au moins une bactérie lactique de l'espèce Lactobacillus farciminis, de fragments ou de fractions de composants cellulaires, et/ou de métabolites de cette bactérie, pour élaborer une composition pour la prévention et/ou le traitement de pathologies cutanées. 2 - Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite composition comprend à titre de principe actif, une ou plusieurs souches de L.farmicinis ou encore au moins une souche de L.farmicinis en combinaison avec une ou plusieurs souches d'une ou plusieurs autres bactéries probiotiques, comme celles des genres Lactobacillus ou Bifidobacterium. 3 - Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que la ou les bactéries sont présentes dans la composition sous forme vivante, ou partiellement ou totalement inactivée. 4 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la ou les bactéries et/ou levures dérivées sont sous forme fraîche, congelée, lyophilisée ou séchée. 5 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que ladite composition se présente sous une forme appropriée pour une administration par voie orale ou par voie topique. 6 - Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que, pour une administration par voie orale, laditecomposition se présente sous forme de poudres, comprimés, gélules, capsules, de suspensions ou de solutions buvables. 7 - Utilisation selon la revendication 6, caractérisée en 5 ce que, ladite composition renferme de 106 à 1012 UFC/g, de préférence de 108 à 1010 UFC/g. 8 - Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que, pour une administration par voie topique, ladite 10 composition se présente sous forme de pommades, crèmes, suspensions ou solutions aqueuses, hydro-alcooliques ou huileuses, lotion, sérum,savon, émulsions de type lait, gels, microémulsions ou microparticules. 15 9 - Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que, ladite composition renferme de 105 à 1012 UFC/g, de préférence de 10' à 1010 UFC/g. 10 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 20 1 à 9, en dermatologie ou en cosmétologie. 11 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, pour le traitement de lésions inflammatoires cutanées le cas échéant avec ulcération de l'épiderme et/ou infiltrat 25 inflammatoire.