Brevet FR2915683A1 — publié le 20081107

FORMULATIONS PHARMACEUTIQUES AUTO-PRECIPITANTES POUR LA LIBÉRATION MODIFIÉE DE PRINCIPE ACTIF DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne de nouvelles formulations pharmaceutiques pour la libération prolongée de principe(s) actif(s) -PA-, en particulier protéinique(s) et peptidique(s). La demande concerne également les applications, notamment thérapeutiques, de ces formulations pharmaceutiques. Ces formulations pharmaceutiques actives concernent aussi bien la thérapeutique humaine que vétérinaire. La référence PA utilisée dans tout le présent exposé, vise au moins un principe actif. ETAT DE LA TECHNIQUE Dans le domaine de la libération prolongée des PAs pharmaceutiques notamment des peptides/protéines thérapeutiques, on cherche très souvent à reproduire au mieux chez le patient, une concentration plasmatique en peptide ou en protéine proche de la valeur observée chez le sujet sain. Cet objectif se heurte à la faible durée de vie des protéines dans le plasma qui conduit à injecter de façon répétée la protéine thérapeutique. La concentration plasmatique en protéine thérapeutique présente alors un profil "en dents de scie" caractérisé par des pics élevés de concentration et des minima de concentration très bas. Les pics de concentration, très supérieurs à la concentration basale chez le sujet sain, ont des effets nocifs très marqués du fait de la toxicité élevée des protéines thérapeutiques telles que certaines cytokines. Par ailleurs, les minima de concentration sont inférieurs à la concentration nécessaire pour avoir un effet thérapeutique, ce qui entraîne une mauvaise couverture thérapeutique du patient et des effets secondaires graves à long terme. Aussi, pour reproduire chez le patient une concentration plasmatique en protéine thérapeutique proche de la valeur idéale pour le traitement du patient, il importe que la formulation pharmaceutique considérée permette de libérer la protéine thérapeutique sur une durée prolongée, de façon à limiter les variations de concentration plasmatique au cours du temps. Par ailleurs, cette formulation active doit, de préférence, satisfaire au cahier des 35 charges suivant, déjà connu de l'homme de l'art : 1 - libération prolongée d'une protéine thérapeutique active et non dénaturée, par exemple humaine ou synthétique, de sorte que la concentration plasmatique est maintenue au niveau thérapeutique ; 2 û viscosité à l'injection suffisamment basse pour être aisément injectable; 3 - forme biocompatible et biodégradable présentant un excellent profil de toxicité et de tolérance. Pour tenter d'atteindre ces objectifs, l'une des meilleures approches proposées dans l'art antérieur fut de développer des formes à libération prolongée de protéine(s) thérapeutique(s) constituées par des suspensions, liquides et peu visqueuses de nanoparticules chargées en protéines thérapeutiques. Ces suspensions ont permis l'administration aisée de protéines thérapeutiques natives. Ainsi, la société Flamel Technologies a proposé une voie, dans laquelle la protéine thérapeutique est associée à des nanoparticules d'un copolyaminoacide comprenant des groupements hydrophobes et des groupements hydrophiles. La demande de brevet US 2006/0099264 divulgue des polyaminoacides amphiphiles comprenant des unités aspartique et/ou des unités glutamiques, au moins une partie de ces unités étant porteuses de greffons comportant au moins un motif alpha-tocophérol, e.g. : (polyglutamate ou polyaspartate greffé par l'alpha tocophérol d'origine synthétique ou naturelle). Ces homopolyaminoacides "modifiés hydrophobes" forment spontanément dans l'eau une suspension colloïdale de nanoparticules, lesquelles sont aptes à s'associer aisément en suspension aqueuse à pH 7,4, avec au moins une protéine active (insuline). La durée de libération in vivo de la (ou les) protéine(s) active(s) (e.g. insuline) "vectorisée" par les suspensions selon US 2006/0099264 gagnerait à être augmentée. L'augmentation de la durée de libération a été partiellement obtenue par les formes pharmaceutiques décrites dans la demande PCT WO-A-05/051416. Dans cette demande, est divulguée une suspension colloïdale de nanoparticules (0,001-0,5 m) de poly(L-glutamate de sodium) modifiée hydrophobe et injectée à une concentration telle qu'après injection sous cutanée, il se forme in situ chez le patient un gel au contact de l'albumine endogène. La protéine est alors lentement libérée sur une période typique d'une semaine. Cependant, lorsque la concentration en protéine thérapeutique à administrer est relativement élevée, comme c'est le cas par exemple pour l'hormone de croissance humaine, la durée de libération est limitée à quelques jours. La durée de libération de ces formes gagnerait à être encore augmentée. Une autre voie également suivie pour prolonger la durée de libération in vivo du PA 35 après injection sous cutanée est d'utiliser une formulation liquide à la température d'injection, mais qui gélifie lorsque la température s'élève à 37 C. 3 Ainsi les demandes PCT WO-A-99/18142 & WO-A-00/18821 concernent des solutions aqueuses de polymères qui contiennent un PA sous forme dissoute ou colloïdale, qui sont administrables à des animaux à sang chaud, notamment par injection et qui forment un dépôt gélifié in vivo, car la température physiologique est supérieure à leur température de gélification. Le gel ainsi formé libère le PA de façon prolongée. Ces polymères biodégradables particuliers sont des triblocs ABA ou BAB avec A = polylactiquecoglycolique (PLAGA) ou polylactique (PLA) et B = PolyEthylèneGlycol. Les températures de transformation liquide gel de ces polymères triblocs sont par exemple de 36, 34, 30 et 26 C. A l'instar des polymères (A) selon l'US-B-6 143 314, l'hydrolyse de ces polymères triblocs ABA ou BAB in vivo conduit à des acides qui peuvent ne pas être correctement tolérés localement. La demande de brevet PCTIFR2006/002443, de la demanderesse, décrit des polyglutamates modifiés par des dérivés de l'histidine et des groupements hydrophobes et leurs applications. Notamment, il est décrit que ces polymères sont solubles à pH acide et précipitent à pH neutre. Ils permettent de préparer des formulations pour la libération d'un principe actif tel qu'une protéine thérapeutique. Dans le cadre de la mise au point d'une formulation liquide aqueuse auto- précipitante pour la libération prolongée utilisant de tel polymères, il a été trouvé de façon inattendue qu'une formulation satisfaisant le cahier des charges exigeant, ne peut être obtenue que sous certaines conditions particulières. Par exemple, le polymère pGluHisOEt alpha-tocophérol décrit dans la demande PCTIFR2006/002443 formulé à pH 5,5 et à 45 mg/mL de polymère ne conduit pas au résultat attendu. Ce n'est qu'après de longues études que la demanderesse a eu le mérite d'identifier des formulations de polymères cationiques (PO) qui permettent de satisfaire au cahier des charges d'un système auto-précipitant et de proposer des conditions particulières pour les sélectionner. Ces polymères (PO), sont sélectionnés soit parmi les polymères décrits dans la demande PCT/FR2006/002443 ou soit parmi une nouvelle famille de polymères comportant des groupements cationiques et porteurs de groupements hydrophobes. BREVE DESCRIPTION DE L'INVENTION L'un des objectifs de l'invention est de proposer de nouvelles formulations à base de polymères polyglutamates modifiés par des dérivés d'aminoacides cationiques et porteurs35 4 de groupements latéraux hydrophobes, chargées en principe actif (PA), libérant le principe actif (PA) sur une durée prolongée de plusieurs jours, voire plusieurs semaines. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles formulations liquides à base de polymères polyglutamates modifiés par des dérivés d'aminoacides cationiques et porteurs de groupements latéraux hydrophobes, chargées en principe actif (PA) dont la composition et la concentration permettent de maximiser la durée de libération du principe actif (PA) après administration sous cutanée. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles formulations liquides à base de polymères polyglutamates modifiés par des dérivés d'aminoacides cationiques et porteurs de groupements latéraux hydrophobes, chargées en principe actif (PA) dont la composition est telle qu'elle permet de libérer le principe actif (PA) sur plusieurs jours voire plusieurs semaines avec la concentration la plus faible possible en polymère. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles formulations liquides à base de polymères polyglutamates modifiés par des dérivés d'aminoacides cationiques et porteurs de groupements latéraux hydrophobes, chargées en principe actif (PA) dont la composition et la concentration permettent de l'injecter facilement à travers une aiguille de petite dimension. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles formulations liquides à base de polymères polyglutamates modifiés par des dérivés d'aminoacides cationiques et porteurs de groupements latéraux hydrophobes stables en solution aqueuse. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles formulations à base de polymères polyglutamates modifiés par des dérivés d'aminoacides cationiques et porteurs de groupements latéraux hydrophobes aptes à être conservées sous forme lyophilisée. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles formulations à base de polymères polyglutamates modifiés par des dérivés d'aminoacides cationiques et porteurs de groupements latéraux hydrophobes facilement redispersables après lyophilisation. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles formulations à base de polymères polyglutamates modifiés par des dérivés d'aminoacides cationiques et porteurs de groupements latéraux hydrophobes, chargées en principe actif (PA) et stables sous forme lyophilisée. Un autre objectif de l'invention est de proposer de nouvelles formulations à base de polymères polyglutamates modifiés par des dérivés d'aminoacides cationiques et porteurs de groupements latéraux hydrophobes, libérant une protéine ayant préservé son activité biologique. Un autre objectif de l'invention est de proposer une formulation pharmaceutique solide pour la libération prolongée de principe actif (PA) en particulier une forme poudre sèche, par exemple pour inhalation et administration pulmonaire. Un autre objectif de l'invention est de proposer un nouveau procédé de préparation d'une formulation pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), cette formulation étant en particulier une des formulations décrites ci-dessus. Un autre objectif de l'invention est de proposer un nouveau procédé de préparation de médicaments mettant en oeuvre ces formulations pharmaceutiques. Pour atteindre ces objectifs, il est du mérite de la demanderesse d'avoir su, après de longues et coûteuses recherches, identifier les formulation à base de polymères polyglutamates modifiés par des dérivés d'aminoacides cationiques et porteurs de groupements latéraux hydrophobes" qui optimisent la libération prolongée de protéines et de peptides thérapeutiques. D'où il s'ensuit que l'invention concerne tout d'abord une formulation pharmaceutique aqueuse pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), aisément injectable, par exemple par voie parentérale, comprenant au moins un principe actif (PA) et une suspension aqueuse, à base de particules colloïdales d'un polymère (PO), caractérisée en ce qu'elle satisfait aux quatre conditions suivantes: (a) le polymère (PO) est un polyaminoacide comprenant des unités glutamiques, - certaines unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupe cationique (GC) pendant, lesdits groupes cationiques étant identiques ou différents entre eux, - d'autres unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupement hydrophobe (GH) pendant, lesdits groupes hydrophobes (GH) étant identiques ou différents entre eux, - éventuellement d'autres unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupement neutre (GN) pendant, les groupements neutres (GN) étant identiques ou différents entre eux, - éventuellement d'autres unités glutamiques étant non modifiées; (b) la valeur pHf du pH de ladite formulation est comprise entre 3,0 et 6,5; (c) pour la valeur pHf du pH, le polymère (PO) forme une solution colloïdale qui associe spontanément et de façon non covalente le principe actif (PA); (d) 1 ml de ladite formulation précipite lors d'un mélange avec un volume de 1 ml d'une solution tampon test Tp. De préférence, une telle formulation présente un facteur de précipitation Fp supérieur à 200, de préférence supérieur à 400, de préférence supérieur à 800, et plus préférentiellement encore, supérieur à 1500. L'invention concerne également une formulation pharmaceutique liquide aqueuse pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), aisément injectable, par exemple par voie parentérale, comprenant au moins un principe actif (PA) et une suspension 6 aqueuse, à base de particules colloïdales d'un polymère (PO), caractérisée en ce qu'elle satisfait aux quatre conditions suivantes: (a) le polymère (PO) est un polyaminoacide comprenant des unités glutamiques, - certaines unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupe cationique (GC) pendant, lesdits groupes cationiques étant identiques ou différents entre eux, - d'autres unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupement hydrophobe (GH) pendant, lesdits groupes hydrophobes (GH) étant identiques ou différents entre eux, - éventuellement d'autres unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupement neutre (GN) pendant, les groupements neutres (GN) étant identiques ou différents entre eux, -éventuellement d'autres unités glutamiques étant non modifiées; (b) la valeur pHf du pH de ladite formulation est comprise entre 3,0 et 6,5; (c) pour la valeur pHf du pH, le polymère (PO) forme une solution colloïdale qui associe spontanément et de façon non covalente le principe actif (PA); (d) ladite formulation présente un facteur de précipitation Fp supérieur à 200, de préférence supérieur à 400, et de préférence supérieur à 800, et plus préférentiellement encore, supérieur à 1500. Il a été montré que pour une concentration donnée en polymère, la cinétique de libération du principe actif (PA) dépend de façon notable de la composition du polymère c'est-à-dire des fractions molaires respectives en groupes cationiques, en greffons latéraux hydrophobes, et éventuellement en groupes neutres et en groupes glutamates. L'invention concerne également un procédé de préparation de formulations pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), ces formulations étant en particulier celles décrites ci-dessus, comprenant les étapes suivantes: 1) la préparation, à une valeur du pH comprise entre 3 et 6,5, d'une solution colloïdale aqueuse d'un polymère (PO)polyaminoacide comprenant des unités glutamiques, - certaines unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupe cationique (GC) pendant, lesdits groupes cationiques étant identiques ou différents entre eux, -d'autres unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupement hydrophobe (GH) pendant, lesdits groupes hydrophobes (GH) étant identiques ou différents entre eux, 7 - éventuellement d'autres unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupement neutre (GN) pendant, les groupements neutres (GN) étant identiques ou différents entre eux, - éventuellement d'autres unités glutamiques étant non modifiées; les fractions molaires respectives en groupe cationique (GC), en groupes hydrophobes (GH), éventuellement en groupes neutres (GN) et éventuellement en glutamate, étant telles que 1 ml de ladite formulation précipite lors d'un mélange avec un volume de 1 ml d'une solution tampon test Tp; et 2) l'ajout d'au moins un principe actif (PA) au polymère (PO) obtenu à l'étape 1, ledit principe actif s'associant de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale dudit polymère, ledit ajout pouvant être réalisé juste avant l'utilisation thérapeutique finale de la formulation (30 minutes avant par exemple). L'invention concerne également un procédé de préparation de médicaments, en particulier pour administration parentérale, mucosale, sous-cutanée, intramusculaire, intradermique, transdermique, intrapéritonéale, intracérébrale ou dans une tumeur, voire par voie orale, nasale, pulmonaire, vaginale ou oculaire, consistant essentiellement à mettre en oeuvre au moins une formulation telle que décrite ci-dessus. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Définitions Dans la présente description, on entend par groupement cationique un groupement greffé de façon covalente sur une unité glutamique, et comprenant une ou plusieurs fonctions amines ou un ou plusieurs ammoniums quaternaires. Dans le cas d'une fonction amine, le groupement sera principalement ionisé à tout pH au-dessous de son pKa, dans le cas d'un ammonium quaternaire, le groupement sera ionisé à tout pH. Dans la présente description, on entend par groupement neutre un groupement ne portant pas de charge pour tout pH compris entre 3 et 10, par exemple les groupements obtenus à partir de l'éthanolamine liée par l'azote, un alkylène glycol, un polyalkylène glycol. Dans la présente description, on entend par solution un mélange homogène solvant et polymère sous forme de chaîne individuelle. Dans la présente description, on entend par solution colloïdale une suspension de particules dont le diamètre moyen mesuré par le test T' est inférieur ou égal à 0,5 m. 8 Dans la présente description, on entend par "formulation aisément injectable" (par exemple par voie parentérale), une formulation présentant une viscosité dynamique à 20 C inférieure ou égale à 1000 mPa.s. De préférence, la viscosité dynamique de la formulation, mesurée à 20 C, pour un gradient de cisaillement de 1000 s -1, est préférablement inférieure ou égale à 500mPa.s., de préférence comprise entre 2 et 200 mPa.s. par exemple, comprise entre 1,0 et 100 mPa.s, voire entre 1,0 et 50 mPa.s. Dans la présente description, on entend par pHf le pH de la formulation selon l'invention. Dans la présente description, on entend par pH*, le pH de précipitation de la formulation à base de polymère PO déterminé selon le test P : Test P de mesure du pH de précipitation pH* par mesure de l'absorbance à 500 nm: Une solution de polymère PO concentrée à 1 ou 2 mg/ml et contenant 0,15 M de chlorure de sodium est portée à pH 4 par ajout d'acide acétique ou de soude 1M et est laissée sous agitation pendant 24 h. Cette solution est ensuite filtrée sur 0,8-0,2 m. On procède ensuite à la titration de cette solution par une solution 0,1 M de soude en enregistrant l'évolution de l'absorbance à 500 nm de la solution de polymère PO en fonction du pH de ladite solution sur un appareil du type Spectrometre UV Perkin Elmer Lambda 35. Le pH de précipitation pH* correspond à la valeur du pH pour laquelle l'absorbance augmente brutalement pour atteindre une valeur supérieure à 1. Dans la présente description, on entend par solution tampon test Tp, un milieu aqueux contenant 30 mg/g d'albumine bovine fraction V (Aldrich), 0,01 M de tampon phosphate, 0,0027 M de chlorure de potassium, 0,137 M de chlorure de sodium (PBS de Aldrich) et 0,015 M d'acétate d'ammonium (Aldrich). Dans la présente description, on entend par ,An, le nombre de mole de soude, nécessaire pour amener 0,5 ml de la solution colloïdale contenant 1 mg de polymère PO de pHf à pH*, obtenu par la méthode classique de titration acido basique MT: Une solution de polyélectrolyte concentrée à 2 mg/ml et contenant 0,15 M de chlorure de sodium est portée à pH 4 par ajout d'acide acétique ou de soude 1 M. On procède ensuite à la titration de cette solution par une solution 0,05M de soude en enregistrant l'évolution du pH en fonction du volume de soude rajouté. La détermination de Mn s'effectue par simple lecture du volume de soude ajouté pour passer de pHf à pH*. 9 Dans la présente description, on définit le pH physiologique comme étant par exemple égal à 7,2 0,4. Dans la présente description, on entend par polyélectrolyte un polymère porteur de groupements capables de s'ioniser dans l'eau, ce qui crée une charge sur le polymère. Dans la présente description, on entend par polyampholyte un polyélectrolyte porteur d'au moins deux types de groupements qui se dissocient respectivement en groupements anioniques et cationiques. Pour évaluer la taille des particules de la solution colloïdale du polymère PO on utilise de préférence le test T'. Le résultat du test T' est un diamètre hydrodynamique moyen. Test T' de mesure de la taille des nanoparticules par diffusion quasi-élastique de la lumière: Le diamètre hydrodynamique moyen des particules de polymère selon l'invention est mesuré selon le Mode opératoire Md défini ci-après : Les solutions de polymère sont préparées à des concentrations de 1 ou 2 mg/ml en milieu NaCl 0,15 M et laissées sous agitation pendant 24 h. Ces solutions sont ensuite filtrées sur 0,8-0,2 m, avant de les analyser en diffusion dynamique de la lumière grâce à un appareil de type Malvern Compact Goniometer System, fonctionnant avec un faisceau laser He-Ne de longueur d'onde 632,8 nm et polarisé verticalement. Le diamètre hydrodynamique des nanoparticules de polymère est calculé à partir de la fonction d'autocorrélation du champ électrique par la méthode des cumulants, comme décrit dans l'ouvrage Surfactant Science Series volume 22, Surfactant Solutions, Ed. R. Zana, chap. 3, M. Dekker, 1984. Dans la présente description, on appelle nanoparticules les particules qui ont un diamètre moyen compris entre 2 et 500 nm, selon le test T'. Test L de mesure de la libération du principe actif: Injecter 50 l de formulation dans un cube de 1,5 cm de côté de mousse polyuréthane-polyéther (PU-PE) baigné par un flux de 2,83 ml/h d'un milieu aqueux contenant 30 mg/g d'albumine bovine fraction V (Aldrich), 0,01 M de tampon phosphate, 0,0027 M de chlorure de potassium, 0,137 M de chlorure de sodium (PBS de Aldrich) et 0,015 M d'acétate d'ammonium (Aldrich). On prélève régulièrement de la phase continue dont la teneur en protéine est analysée par ELISA. On peut alors tracer le flux de protéine en divisant la concentration mesurée par le débit imposé et la masse totale de protéine relarguée en sommant celle trouvée dans chacun des prélèvements. 10 Au sens de l'invention, le terme "protéine" désigne aussi bien une protéine qu'un peptide, qu'il s'agisse d'un oligo ou d'un polypeptide. Cette protéine ou ce peptide peuvent être modifié ou non, par exemple, par greffage d'un ou de plusieurs groupements polyoxyéthylèniques. Au sens de l'invention, l'expression être porteur signifie que le groupement porté est pendant, c'est-à-dire que ledit groupement est un groupement latéral par rapport aux unités glutamiques et est un substituant de la fonction carbonyle en y de l'unité glutamique qui le porte. Le polyglutamate est également porteur de groupes cationiques. Ces groupes sont greffés aux unités glutamiques, de préférence par l'intermédiaire d'une liaison amide ou ester. De préférence, le polymère (PO) présente une structure pGlu(X)GH(y)GC(z)GN(i_X_y_,) avec un degré de polymérisation totale (DP) compris entre 50 et 300, de préférence compris entre 100 et 250, et plus préférentiellement encore compris entre 150 et 250. Selon une variante de l'invention, les groupements cationiques (GC) peuvent être choisis parmi les bases faibles dont le pH de demi neutralisation est inférieur à 7,0. De tels groupements cationiques (GC) sont par exemple obtenus à partir de dérivés de l'histidine choisis dans le groupe comprenant les esters d'histidine, de préférence l'ester méthylique et l'ester éthylique ; l'histidinol, l'histamine, l'histidinamide, le dérivé N-monométhyle de l'histidinamide et le dérivé N,N'-diméthyle de l'histidinamide. Dans ce cas, les valeurs x, y et z peuvent être telles que x est compris entre 0 et 45%, y est compris entre 2 et 30%, z est compris entre 40 et 98%, et 1-x-y-z est compris entre 0 et 50 %. On peut avoir également les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 0 et 45%, y est compris entre 2 et 30%, z est compris entre 40 et 60%, et 1-x-y-z est compris entre 0 et 58%. On peut avoir également les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 0 et 45%, y est compris entre 15 et 30%, z est compris entre 40 et 60%, et 1-x-y-z est compris entre 0 et 45%. Si le polymère PO ne comporte pas de groupements neutres (GN), on peut avoir les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 0 et 45%, y est compris entre 2 et 30%, et z est compris entre 40 et 98%. Selon une autre variante de l'invention, les groupements cationiques (GC) peuvent être choisis parmi ceux qui comprennent au moins un ammonium quaternaire ou au moins une base forte dont le pH de demi neutralisation est supérieur à 8,0. 11 De tels groupements cationiques (GC) peuvent être obtenus à partir des composés précurseurs suivants: une diamine linéaire de 2 à 6 carbones, de préférence la putrescine, 1' agmatine, - l'éthanolamine liée par l'oxygène, - la choline liée par l'oxygène, un dérivé ester ou amide d'un acide aminé dont la chaîne latérale est chargée positivement à pH neutre, i.e. la lysine, l'arginine, l'ornithine, lié par la fonction amine en position alpha. Dans ce cas, les valeurs x, y, et z peuvent être telles que: - x est compris entre 10 et 55%, - y est compris entre 2 et 30%, - z est supérieur ou égal à 10% et est compris entre (x-10) % et (x+15) %, - le nombre de groupements neutres correspondant au pourcentage complémentaire pour atteindre 100%, et pouvant éventuellement être égal à 0. On peut également avoir les valeurs x, y et z telles que: - x est compris entre 20 et 55%, -y est compris entre 2 et 7,5%, - z est supérieur ou égal à 20% et est compris entre (x-10) % et (x+15) %, - le nombre de groupements neutres correspondant au pourcentage complémentaire pour atteindre 100%, et pouvant éventuellement être égal à 0. On peut également choisir les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 10 et 55%, y est compris entre 2 et 30%, z est compris entre 10 et 55%, et 1-x-y-z est compris entre 0 et 60 %. On peut avoir également les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 10 et 20%, y est compris entre 2 et 30%, z est compris entre 10 et 30%, et 1-x-y-z est compris entre 20 et 78 %. On peut avoir également les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 10 et 20%, y est compris entre 15 et 30%, z est compris entre 10 et 30%, et 1-x-y-z est compris entre 20 et 65 %. Si le polymère PO ne comporte pas de groupements neutres (GN), on peut avoir les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 10 et 55%, y est compris entre 2 et 30%, et z est compris entre 40 et 60%. 12 Avantageusement, les polyaminoacides selon l'invention sont, e.g., des homopolymères d'alpha-L-glutamate ou d'alpha-L-glutamique. Les groupes cationiques utilisables pour fonctionnaliser les unités glutamates sont identiques ou différents entre eux et correspondent à : • un dérivé de l'histidine choisis dans le groupe comprenant les esters d'histidine, de préférence l'ester méthylique et l'ester éthylique, l'histidinol, l'histamine, l'histidinamide, le dérivé N-monométhyle de l'histidinamide et le dérivé N,N'-diméthyle de l'histidinamide ou à: • la formule générale suivante : L N NY3+ a dans laquelle : X=O,NH Y = indépendamment un H ou un CH3 L = un alkylène linéaire (C2 à C6) et éventuellementsubstitué par un groupe fonctionnel de type carboxyle ou dérivé. Ainsi, les groupes cationiques utilisables dans la présente invention peuvent présenter les formules suivantes: HN HN HN NH3+,CI- HN Putrescine NH3+, Cl- NMe3+,Cl- Ethanolamine Choline H dérivés de l'histidine NH3+, CI- NH Agmatine Lysine ester ou amide HN K NH3+,CI- Ornithine ester ou amide HN HN CORI Arginine ester ou amide dans lesquelles RI représente un groupement alcoxy ou alkylamino, de préférence un groupement OMe, OEt, NH2, NHCH3 ou N(CH3)2, et R2 représente un hydrogène, un 5 CH2OH ou CORI. Suivant une caractéristique préférée, les polyaminoacides comportent en moyenne au moins 3 groupements hydrophobes (GH) par chaîne de polymère. Avantageusement, au moins l'un des groupements hydrophobes GH est inclus dans 10 un greffon hydrophobe comprenant au moins une rotule (ou motif) d'espacement ("spacer") permettant de relier le groupement hydrophobe GH il une chaîne de polyglutamate (par exemple une chaîne principale û squelette-polyglutamate). Cette rotule peut comprendre, e.g. au moins une liaison covalente directe et/ou au moins une liaison amide et/ou au moins une liaison ester. Par exemple, la rotule peut être du type de celles appartenant au groupe 15 comportant notamment : les unités "acide aminé" différentes de l'unité monomérique constitutive du polyglutamate , les dérivés des aminoalcools, les dérivés des polyamines (par exemple les diamines), les dérivés des polyols (par exemple les diols) et les dérivés des hydroxyacides. Le greffage des GH sur la chaîne polyglutamate peut passer par la mise en oeuvre 5 de précurseurs de GH, aptes à se lier à la chaîne polyglulamate. Les précurseurs des GH sont, en pratique et sans que cela ne soit limitatif, choisis dans le groupe comprenant les alcools et les amines, ces composés pouvant être fonctionnalisés facilement par l'homme de l'art. Suivant une caractéristique préférée, le groupement hydrophobe GH du greffon hydrophobe comporte de 8 à 30 atomes de carbone. Ces groupements hydrophobes GH sont avantageusement et judicieusement 15 sélectionnés dans le groupe comprenant : • les alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome, • les alkylaryles ou arylalkyles en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome, 20 • et les (poly)cycliques en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome. Les rotules formant avec les GH des greffons hydrophobes, peuvent être di-, tri- ou tétravalentes (voire pentavalentes et plus). Dans le cas d'une rotule divalente, le greffon 25 hydrophobe comporte un seul groupement GH, tandis qu'une rotule trivalente confère au greffon hydrophobe un caractère bifide, c'est-à-dire que le greffon présente deux "pattes" GH. À titre d'exemple de rotule trivalente, on peut citer, entre autres, des unités "acide aminé", par exemple "acide glutamique" ou des restes polyols, par exemple glycérol. Ainsi, deux exemples avantageux mais non limitatifs de greffons hydrophobes comprenant des 30 GH bifides sont les dialkyles glycérol et les dialkyles glutamate. Les groupements hydrophobes GH peuvent être, par exemple, dérivés de groupements choisis dans le groupe comprenant : 10 15 l'octanol, le dodécanol, le tétradécanol, 1'héxadécanol, 1'octadécanol, 1'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol. Tel que cela a été défini ci-dessus, les groupements neutres (GN) peuvent être obtenus à partir de l'éthanolamine liée par l'azote, un alkylène glycol, ou un polyalkylène 5 glycol. Selon une autre variante, les polyglutamates utilisés dans la présente invention peuvent être également porteurs d'au moins un greffon de type polyalkylène (de préférence éthylène)glycol lié à une unité glutamate. De préférence, le squelette du polyglutamate selon la présente invention comprend des unités d'alpha-L-glutamate et/ou d'alpha-L-glutamique acide. De manière plus préférée encore, les polyglutamates utilisés dans la présente 15 invention répondent à la formule générale (I) suivante : R70 OOR80 10 O O p â B O R90 GH H N N H ùr O N H s D 20 25 I dans laquelle : ^ A représente indépendamment : un groupement NHR dans laquelle R représente un H, un alkyle linéaire en C2 à Cl0 ou ramifié en C3 à C10 ou un benzyle, une unité acide aminé terminale liée par l'azote et dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifiée par une amine ou un alcool répondant aux définitions NI-R et OR respectivement; 16 ^ B est un groupement de liaison divalent, trivalent ou tétravalent, de préférence choisi parmi les radicaux suivants : -0-, -NH-, -N-alkyle- (Cl à C5), un résidu d'acide aminé (de préférence naturel), un diol, un triol, une diamine, une triamine, un aminoalcool ou un hydroxyacide comportant de 1 à 6 atomes de carbone; ^ D représente un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO ou ramifié en C3 à CIO, ou un pyroglutamate; ^ les groupements hydrophobes (GH) représentent chacun indépendamment les uns des autres un radical choisi parmi : • les alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ou • les alkylaryles ou arylalkyle en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ou • les (poly)cycliques en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S); et de préférence au moins l'un des groupements hydrophobes (GH) étant obtenu 20 par greffage, à partir d'un précurseur choisi dans le groupe comprenant: 1'octanol, le dodécanol, le tétradécanol, 1'héxadécanol, 1'octadécanol, l'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol, B représentant une liaison directe; ^ R70 identiques ou différents entre eux, représentent les groupes obtenus à partir des composés suivants : - une diamine linéaire de 2 à 6 carbones, de préférence la putrescine, - l' agmatine, l'éthanolamine liée par l'oxygène, la choline liée par l'oxygène, un dérivé de l'histidine choisis dans le groupe comprenant les esters d'histidine, de préférence l'ester méthylique et l'ester éthylique ; l'histidinol, l'histamine, l'histidinamide, le dérivé N-monométhyle de l'histidinamide et le dérivé N,N'-diméthyle de l'histidinamide, - un dérivé ester ou amide d'un acide aminé dont la chaîne latérale est chargée positivement à pH neutre, i.e. la lysine, l'arginine, l'ornithine, lié par la fonction amine en position alpha; • le contre-anion du groupement R70 étant de préférence un chlorure, un sulfate, un phosphate ou un acétate; 10 15 25 30 35 17 ^ R80 représente un H ou une entité cationique, de préférence sélectionnée dans le groupe comprenant : - les cations métalliques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium ; - les cations organiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : • les cations à base d'amine, • les cations à base d'oligoamine, • les cations à base de polyamine (la polyéthylèneimine étant particulièrement préférée), • les cations à base d'acide(s) aminé(s) avantageusement choisis dans la classe comprenant les cations à base de lysine ou d'arginine, - ou les polyaminoacides cationiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant la polylysine ou l'oligolysine; ^ R90 représente les groupes obtenus à partir de l'éthanolamine liée par l'azote, un alkylène glycol, un polyalkylène glycol; ^ p, q, r et s sont des entiers positifs; ^ (p)/(p+q+r+s) est défini comme le taux de greffage molaire des groupements hydrophobes GH varie de 2 à 30 % molaire, sous condition que chaque chaîne de copolymère possède en moyenne au moins 3 greffons hydrophobes; ^ (q)/(p+q+r+s) est défini comme le taux de greffage molaire des groupements cationiques et varie de 10 à 98 % molaire; ^ (p+q+r+s) varie de 50 à 300, de préférence entre 100 et 250 ; ^ (r)/(p+q+r+s) varie de 0 à 78 % molaire; ^ (s)/(p+q+r+s) varie de 0 à 55 % molaire. Pour plus de détails sur la préparation et la synthèse de polyaminoacides de formule 30 (I) dérivés de l'histidine, on se reportera utilement à la demande de brevet FR 05 53302. Pour plus de détails sur la préparation et la synthèse de polyaminoacides de formule (I) autres que ceux dérivés de l'histidine, on se reportera utilement à la demande de brevet française déposée par la demanderesse le même jour que la présente demande et intitulée "Acides polyglutamiques fonctionnalisés par des groupes cationiques et des groupements 35 hydrophobes et leurs applications, notamment thérapeutiques". 15 20 25 18 De préférence, les groupements hydrophobes GH et les groupes cationiques sont disposés de façon aléatoire en groupements pendants. D'une manière générale, la formule générale (I) décrite ci-dessus ne doit pas être interprétée comme représentant uniquement des copolymères séquencés (ou blocs), mais également des copolymères aléatoires ou des copolymères multiblocs. De préférence, la concentration en polymère (PO) dans la formulation selon l'invention peut être comprise entre 4 et 50 mg/ml, en particulier lorsque le principe actif (PA) est une protéine thérapeutique. Dans cette gamme de concentration, la formulation est aisément injectable par une aiguille de faible diamètre, par exemple une aiguille de Gauge 27, et même 29. Les exemples 2, 3 et 4 décrivent en détails de telles formulations. De préférence, la concentration en polymère (PO) dans la formulation selon l'invention peut être comprise entre 5 et 30 mg/ml, et plus préférentiellement encore comprise entre 5 et 15 mg/ml. Avantageusement, le rapport R de la concentration en principe actif (PA) à la concentration en polymère (PO) peut être compris entre 0,0001 et 1,5. Ce rapport R peut être également compris entre 0,01 et 1,2. Selon une variante, la formulation selon l'invention peut contenir des cations divalents Zn++ dans une proportion comprise entre 0,05 et 2 équivalents molaires par rapport à la concentration molaire en groupes cationiques (GC). Notamment, la formulation selon l'invention peut contenir des cations divalents Zn++ ajoutés dans la proportion comprise entre 0,25 et 0,75 équivalents molaires par rapport à la concentration molaire en groupes cationiques (GC), et de préférence égale à 0,5éq, plus particulièrement lorsque les groupes cationiques (GC) sont obtenus à partir de dérivés de l'histidine choisis dans le groupe comprenant les esters d'histidine, de préférence l'ester méthylique et l'ester éthylique ; l'histidinol, l'histamine, l'histidinamide, le dérivé N-monométhyle de l'histidinamide et le dérivé N,N'-diméthyle de l'histidinamide. Selon une autre variante, la formulation selon l'invention ne contient pas de cation divalent ajouté. Les polymères utilisés dans la présente invention ont une masse molaire qui se situe entre 2.000 et 200.000 g/mole, et de préférence entre 5.000 et 100 000 g/mole. Selon un mode particulièrement préféré de l'invention, lorsque les groupements cationiques (GC) sont choisis parmi les bases faibles dont le pH de demi neutralisation est inférieur à 7,0, les polymères (PO) utilisés dans l'invention présentent une structure 19 pGlu(x)GH(y)GC(z)GN(i_x_y,_z) telle que x est compris entre 0 et 20%, y est compris entre 2 et 30%, z est compris entre 60 et 95%, et 1-x-y-z est compris entre 0 et 15 %. On peut avoir également les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 0 et 20%, y est compris entre 2 et 10%, z est compris entre 75 et 95%, et 1-x-y-z est compris entre 0 et 15%. On peut avoir également les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 0 et 20%, y est compris entre 15 et 25%, z est compris entre 60 et 80%, et 1-x-y-z est compris entre 0 et 15%. Si le polymère PO ne comporte pas de groupements neutres (GN), on peut avoir les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 0 et 20%, y est compris entre 2 et 30%, et z est compris entre 60 et 95%. Selon un autre mode préféré de l'invention, lorsque les groupements cationiques (GC) sont choisis parmi ceux qui comprennent des ammoniums quaternaires ou au moins une base forte dont le pH de demi neutralisation est supérieur à 8,0, les valeurs x, y et z peuvent être telles que x est compris entre 15 et 50%, y est compris entre 2 et 30%, z est compris entre 10 et 50%, et 1-x-y-z est compris entre 10 et 55 %. On peut avoir également les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 15 et 30%, y est compris entre 2 et 30%, z est compris entre 15 et 25%, et 1-x-y-z est compris entre 40 et 55 %. On peut avoir également les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 25 et 50%, y est compris entre 2 et 30%, z est compris entre 25 et 50%, et 1-x-y-z est compris entre 10 et 30 %. Si le polymère PO ne comporte pas de groupements neutres (GN), on peut avoir les valeurs x, y et z telles que x est compris entre 10 et 55%, y est compris entre 2 et 30%, et z est compris entre 40 et 60%. Du fait d'un excès de charge cationique, le polymère PO utilisé dans l'invention est cationique et soluble à la valeur pHf du pH de la formulation. Cette charge se trouve partiellement ou totalement neutralisée à pH neutre de sorte que le polymère précipite. Sans être lié par la théorie, on peut supposer que ce phénomène de précipitation induit par une augmentation du pH résulte de la diminution de la charge globale des polymères entre le pH de formulation et le pH physiologique, et de la présence des groupements latéraux hydrophobes. Il convient de comprendre que les fonctions résiduelles carboxyliques du polyglutamate modifié sont soit neutres (forme COOH), soit ionisées (anion COO-), selon le pH et la composition. De la même façon, les fonctions amines seront principalement ionisées à tout pH 20 au-dessous de leur pKa, et les ammoniums quaternaires seront ionisés à tout pH. En solution aqueuse, le contre-cation peut être un cation métallique tel que le sodium, le calcium ou le magnésium, ou un cation organique tel que la triéthanolamine, la tris(hydroxyméthyl)-aminométhane ou une polyamine tel que la polyéthylèneimine. Le contre-anion des groupements cationiques est de préférence choisi parmi le groupe comprenant un chlorure, un sulfate, un phosphate ou un acétate. Les polyaminoacides susceptibles d'être utilisés dans la présente invention sont obtenus, par exemple, par des méthodes connues de l'homme de l'art. Tout d'abord, rappelons que pour l'obtention de polyaminoacide de type alpha, la technique la plus courante est basée sur la polymérisation d'anhydrides de N-carboxy-aminoacides (NCA), décrites, par exemple, dans l'article "Biopolymers, 1976, 15, 1869 et dans l'ouvrage de H.R. Kricheldorf "alpha Aminoacid-N-carboxy Anhydride and related Heterocycles" Springer Verlag (1987). Le dérivé de NCA est de préférence NCA-Glu-O-R3 (R3 = méthyle, éthyle ou benzyle). Les polymères sont ensuite hydrolysés dans des conditions appropriées pour obtenir le polymère sous sa forme acide. Ces méthodes sont inspirées de la description donnée dans le brevet FR-A-2 801 226 de la demanderesse. Un certain nombre de polymères utilisables selon l'invention, par exemple, de type poly(alpha-L-glutamique), poly(alpha-D-glutamique), poly(alpha-D,L-glutamate) et poly(gamma-L-glutamique) de masses variables sont disponibles commercialement. Le couplage du greffon GH avec une fonction acide du polymère est réalisé aisément par réaction du polyaminoacide en présence d'un carbodiimide comme agent de couplage et optionnellement, un catalyseur tel que le 4-diméthylaminopyridine et dans un solvant approprié tel que le diméthylformamide (DMF), la N-méthylpyrrolidone (NMP) ou le diméthylsulfoxide (DMSO). Le carbodiimide est par exemple, le dicyclohexylcarbodiimide ou le diisopropylcarbodiimide. Le taux de greffage est contrôlé chimiquement par la stoechiométrie des constituants et réactifs ou le temps de réaction. Les greffons hydrophobes fonctionnalisés par un "espaceur" sont obtenus par couplage peptidique classique ou par condensation directe par catalyse acide. Le couplage des groupes cationique et éventuellement neutres avec une fonction acide du polymère est réalisé simultanément dans une deuxième étape en présence d'un chloroformiate comme agent de couplage et dans un solvant approprié tel que le diméthylformamide, la N-méthylpyrrolidone (NMP) ou le diméthylsulfoxide (DMSO). Dans le cas où le groupe cationique contient deux fonctions amines non différenciées chimiquement (e.g. diamine linéaire), il peut être introduit sous une forme dans laquelle une des deux fonctions est protégée. Une dernière étape de clivage du groupement protecteur est alors ajoutée. 21 La chimie de polymérisation et les réactions de couplage des groupements sont classiques et bien connues de l'homme de l'art (voir par exemples les brevets ou demandes de brevet de la demanderesse cités précédemment). Des exemples de préparation de formulations selon l'invention sont détaillés dans les exemples auxquels on se reportera. Les caractéristiques de la formulation selon l'invention énoncées ci-dessus permettent à l'homme de l'art de sélectionner parmi toutes les formulations à base de polymère PO, celles qui satisfont simultanément aux conditions (a) ; (b) ; (c) et (d) et qui de ce fait répondent au mieux au cahier des charges défini en préambule. Les conditions (c) et (d) sont particulièrement sélectives. Si la formulation ne forme pas de solution colloïdale à pHf, l'homme de l'art sélectionnera un polymère présentant à cette valeur du pH, un nombre de monomères non ionisés plus important. Si au contraire, le polymère précipite, il conviendra d'augmenter le nombre de monomères ionisés à ce pH. Il est important de remarquer que de façon contre intuitive, certaines formulations conduisant à des solutions colloïdale à pHf et précipitant à pH physiologique devront cependant être écartées car ne satisfaisant pas à la condition (d). Ainsi la conditions (d) est un moyen commode pour l'homme de l'art de sélectionner les formulations selon l'invention. Il est important de remarquer que la condition (cl) implique que la formulation selon l'invention précipite pour une valeur du pH inférieure ou égale au pH physiologique. En effet, après mélange de 1 ml de la formulation acide selon l'invention et de 1 ml de la solution tampon Tp, on doit observer une précipitation à une valeur du pH inférieure ou égale au pH de la solution tampon c'est-à-dire Un deuxième mode de sélection des formulations selon l'invention est d'estimer son facteur de précipitation, Fp. Ce facteur s'évalue de la façon suivante : a) mesure du pH de précipitation, noté pH* A pHf acide compris entre 3 et 6,5, la solution colloïdale chargées en PA se présente comme un liquide limpide contenant des nanoparticules, dont le diamètre hydrodynamique moyen, mesuré par diffusion dynamique de la lumière, selon le test T', est inférieur ou égale à 0,5 m, de préférence compris entre 5 et 500 nm, de préférence encore, compris entre 10 et 80 nm. Lorsque l'on élève le pH, la solution selon l'invention doit précipiter pour une valeur de pH inférieure ou égale au pH physiologique. La valeur pH* pour laquelle la solution précipite est mesurée selon le test P. 22 b) Mesure du nombre de mole de soude, An, nécessaire pour amener 0,5 ml de la solution colloïdale contenant 1 mg de polymère PO de pHf à pH* selon la méthode MT. En notant C la concentration en polymère PO dans la formulation (exprimée en mg/g), y la fraction molaire de monomère du polymère PO portant un greffon latéral hydrophobe, le facteur de précipitation, Fp, de la formulation se calcule par la formule : Fp = y - Dans une réalisation particulière de l'invention, les formulations selon l'invention sont caractérisées par un facteur de précipitation Fp supérieur à 200, de préférence supérieur à 400, et de préférence encore, supérieur à 800, et plus préférentiellement encore supérieur à 1500. 15 Un aspect surprenant des formulations selon l'invention est que le réseau de chaînes de polymères formé lors de la précipitation à pH physiologique, permet de ralentir la libération du principe actif (PA) sans pour autant piéger ce même principe actif (PA) au coeur des particules. Ainsi les formulations selon l'invention permettent d'obtenir à la fois 20 une libération prolongée du principe actif (PA) et une bonne biodisponibilité. Concernant le principe actif (PA), il est de préférence choisi dans le groupe comprenant: les protéines, les glycoprotéines, les protéines liées à une ou plusieurs chaînes polyalkylèneglycol [de préférence polyéthylèneglycol (PEG) : "protéines-PEGylées"], les 25 peptides, les polysaccharides, les liposaccharides, les oligonucléotides, les polynucléotides et leurs mélanges, et, plus préférentiellement encore, dans le sous-groupe des érythroproïétines, telles que l'époétine alpha, l'époétine béta, la darbépoétine. le raffimère d'hémoglobine, leurs analogues ou leurs dérivés; oxytocine, vasopressine, hormone adrénocorticotropique, 30 facteur de croissance épidermal, facteur de croissance des plaquettes (PDGF), les facteurs stimulants de l'hématopoïèse et leurs mélanges, les facteurs sanguins, tels que alteplase, tenecteplase, facteur VII(a), facteur VII; hémoglobine, les cytochromes, les albumines prolactine, luliberine, hormone relargant l'hormone lutéinisante (LHRH) en analogues, tels que leuprolide, goséréline, triptoréline, buseréline, nafaréline; antagonistes de la LHRH, 35 les concurrents de la LHRH, les hormones de croissance (GH) humaine, porcine ou bovine, le facteur relargant l'hormone de croissance, l'insuline, la somatostatine, le glucagon, les interleukines ou leurs mélanges (IL-2, IL-11, IL-12), les interférons, tels que l'interféron An. 0 Des exemples de calcul du facteur de précipitation Fp sont reportés dans les exemples.10 23 alpha, alpha-2b, bêta, bêta-la, ou y; la gastrine, la tétragastrine, la pentagastrine, l'urogastrone, la sécrétine, la calcitonine, l'enkephaline, les endomorphines, les angiotensines, l'hormone relargant la thyrotropine (TRH), le facteur nécrosant des tumeurs (TNF), le facteur de croissance des nerfs (NGF), les facteurs de croissance tels que beclapermine, trafermine, ancestim, le facteur de croissance des kératinocytes, le facteur stimulant les colonies granulocytes (G-CSF), le facteur stimulant les colonies de macrophages granulocytaires (GM-CSF), le facteur stimulant les colonies de macrophages (M-CSF), heparinase, la protéine morphogénique de l'os (BMP), hANP, le peptide ressemblant au glucagon (GLP-1), VEG-F, l'antigène recombinant de l'hépatite B (rHBsAg), la rénine, les cytokines, la bradykinine, les bacitracines, les polymixines, les colistines, la tyrocidine, les gramicidines, l'étanercept, l'imiglucérase, la drotrécogine alpha, les cyclosporines et analogies synthétiques, les modifications et fragments actifs pharmaceutiquement d'enzymes, de cytokines, d'anticorps, d'antigènes et de vaccins, les anticorps tels que rituximab, infliximab, trastuzumab, adalimumab, omalizumab, tositumomab, efalizumab, et cetuximab. D'autres principes actifs sont les polysaccharides (par exemple, l'héparine) et les oligo- ou polynucléotides, ADN, ARN, iARN, antibiotiques, et cellules vivantes. Une autre classe de principes actifs comprend les substances pharmaceutiques agissant sur le système nerveux central, par exemple, rispéridone, zuclopenthixol, fluphénazine, perphénazine, flupentixol, halopéridol, fluspirilene, quétiapine, clozapine, amisulprid, sulpirid, ziprasidone, etc. Selon une variante, le principe actif est une "petite" molécule organique hydrophobe, hydrophile ou amphiphile du type de celles appartenant à la famille des anthracyclines, des taxoïdes ou des camptothécines ou du type de celles appartenant à la famille des peptides telles que la leuprolide ou la cyclosporine et leurs mélanges. Au sens du présent exposé, une "petite" molécule est notamment une petite molécule non protéinique, par exemple exempte d'acides aminés. Selon une autre variante, le principe actif est. avantageusement choisi parmi au moins l'une des familles de substances actives suivantes : les agents de traitement de l'abus d'alcool, les agents de traitement de la maladie d'Alzheimer, les anesthésiques, les agents de traitement de l'acromégalie, les analgésiques, les antiasthmatiques, les agents de traitement des allergies, les agents anticancéreux, les anti-inflammatoires, les anticoagulants et antithrombotiques, les anti-convulsivants, les antiépileptiques, les antidiabétiques, les antiémétiques, les antiglaucomes, les antihistaminiques, les anti- infectieux, les antibiotiques, les antifongiques, les antiviraux, les antiparkinsoniens, les anti-cholinergiques, les antitussifs, les inhibiteurs de l'anhydrase carbonique, les agents cardiovasculaires, les hypolipémiants, les anti-arythmiques, les vasodilatateurs, les 24 antiangineux, les anti-hypertenseurs, les vasoprotecteurs, les inhibiteurs de cholinestérase, les agents de traitement des désordres du système nerveux central, les stimulants du système nerveux central, les contraceptifs, les promoteurs de fécondité, les inducteurs et inhibiteurs du travail utérin, les agents de traitement de la mucoviscidose, les agonistes des récepteurs de la dopamine, les agents de traitement de l'endométriose, les agents de traitement des dysfonctionnements érectiles, les agents de traitement de la fertilité, les agents de traitements des troubles gastro-intestinaux, les immunomodulateurs et les immunosuppresseurs, les agents de traitement des troubles de la mémoire, les antimigraineux, les relaxants des muscles, les analogues de nucléosides, les agents de traitement de l'ostéoporose, les parasympathomimétiques, les prostaglandines, les agents psychothérapeutiques, les sédatifs, les hypnotiques et tranquillisants, les neuroleptiques, les anxiolytiques, les psychostimulants, les antidépresseurs, les agents de traitements dermatologiques, les stéroïdes et les hormones, les amphétamines, les anorexiques, les anti-douleurs non analgésiques, les anti-épileptiques, les barbituriques, les benzodiazépines, les hypnotiques, les laxatifs, les psychotropes et toutes les associations de ces produits. La formulation selon l'invention peut être administrée par voie orale, parentérale, nasale, vaginale, oculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire, intradermique, transdermique, intrapéritonéale, intracérébrale ou buccale. Selon un autre de ses aspects, l'invention a pour objet un procédé de préparation de formulations à base de polymère PO pour la libération prolongée d'au moins un principe actif, ces formulations étant en particulier celles décrites ci-dessus, ledit procédé comprenant les étapes suivantes: 1) la préparation, à une valeur du pH comprise entre 3 et 6,5, d'une solution colloïdale aqueuse d'un polymère (PO) polyaminoacide tel que défini ci-dessus, les fractions molaires respectives en groupe cationique (GC), en groupes hydrophobes (GH), éventuellement en groupes neutres (GN) et éventuellement en glutamate, étant telles que 1 ml de ladite formulation précipite lors d'un mélange avec un volume de 1 ml d'une solution tampon test Tp; et 2) l'ajout d'au moins un principe actif (PA) au polymère (PO) obtenu à l'étape 1, ledit principe actif s'associant de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale dudit polymère (PO). Une caractéristique essentielle du procédé selonl'invention est de former des particules chargées d'actif à pHf compris en 3 et 6,5, spontanément, par simple mélange d'une solution colloïdale de particules du polymère polyélectrolyte (PO) et du principe actif (PA). 25 Les principes actifs tels que des protéines, des peptides ou des petites molécules, peuvent s'associer spontanément au polymère (PO) de type polyaminoacides. Dans une réalisation particulière de l'invention, le chargement des nanoparticules du polymère polyélectrolyte (PO) par le principe actif (PA) s'effectue par simple mélange d'une solution de principe actif (PA) avec une solution colloïdale du polymère polyélectrolyte (PO). Cette association est purement physique et n'implique pas de création de liaison covalente entre le principe actif (PA) et le polymère (PO). Sans être lié par la théorie, on peut supposer que cette association non spécifique s'effectue par interaction hydrophobe et/ou électrostatique entre le polymère (PO) et le principe actif (PA). Il est à noter qu'il n'est pas nécessaire, et souvent même non souhaitable, de lier le PA aux nanoparticules de PO par des récepteurs spécifiques de nature peptidique ou de type antigène/anticorps ou encore enzyme/substrat. Dans un mode de réalisation préféré du procédé selon l'invention, il n'est pas prévu d'étape de réticulation chimique des particules obtenues. Les particules obtenues ne sont donc pas réticulées chimiquement et libèrent néanmoins le principe actif (PA) sur une durée prolongée. Cette absence de réticulation chimique est un avantage décisif. En effet, l'absence de réticulation chimique permet d'éviter la dégradation chimique du principe actif (PA) lors de l'étape de réticulation des particules contenant le principe actif (PA). Une telle réticulation chimique est en effet généralement conduite par activations d'entités polymérisables et met en jeu des agents potentiellement dénaturants tel que les rayonnements UV, ou du glutaraldehyde. Avantageusement, le procédé selon l'invention comprend une étape de déshydratation, par exemple par lyophilisation, de la formulation liquide, afin d'obtenir une formulation sous forme de poudre sèche. La présente invention concerne également une formulation pharmaceutique solide pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), comprenant une forme poudre sèche obtenue à partir de la formulation liquide comprenant une suspension aqueuse évoquée ci-dessus. Une poudre sèche peut être obtenue en amenant la formulation liquide selon l'invention à pH égal à 7 pour la faire précipiter in vitro puis en la déshydratant par exemple par lyophilisation. Avantageusement, une telle formulation pharmaceutique solide est utilisée pour inhalation et administration pulmonaire. Selon un autre de ses aspects, l'invention a pour objet un procédé de préparation de médicaments, en particulier pour administration parentérale, mucosale, sous-cutanée, intramusculaire, intradermique, transdermique, intrapéritonéale, intracérébrale ou dans une tumeur, voire par voie orale, nasale, pulmonaire, vaginale ou oculaire, ledit procédé 26 consistant essentiellement à mettre en oeuvre au moins l'une des formulations décrites ci-dessus. BREVE DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1: Relargage in vitro d'IFN-a à partir des formulations de l'exemple 2.1 (triangles noirs), de l'exemple 2.3 (losanges noirs), de l'exemple 3 (carrés noirs), et de l'exemple 5 (trait plein). 10 EXEMPLES 1) Synthèses: a) Comparatif : Synthèse d'un polymère polyélectrcolyte PO porteur de groupements hydrophobes, anionique (polyglutamate greffé par l'alpha-tocophérol d'origine 15 synthétique) On solubilise 15 g d'un acide alpha-L-polyglutamique de masse équivalente à environ 16 900 Da par rapport à un standard en polyoxyéthylène dans 288 ml de diméthylformamide (DMF) en chauffant à 80 C jusqu'à solubilisation du polymère. On refroidit la solution à 20 15 C et on ajoute successivement 2,5 g de D, L-alpha-tocophérol (> 98 % obtenu de Fluka ) préalablement solubilisé dans 8 ml de DMF, 280 mg de 4-dimethylaminopyridine préalablement solubilisé dans 1 ml de DMF et 1,6 g de diisopropylcarbodiimide préalablement solubilisé dans 6 ml de DMF. Après 3 heures sous agitation, le milieu réactionnel est versé dans 1200 ml d'eau contenant 15 % de chlorure de sodium et d'acide 25 chlorhydrique (pH 2). Le polymère précipité est ensuite récupéré par filtration, lavé par de l'acide chlorhydrique 0,1 N, de l'eau et par de l'éther diisopropylique. Le polymère est ensuite séché à l'étuve sous vide à 40 C. On obtient un rendement de l'ordre de 90 %. La masse molaire mesurée par la chromatographie d'exclusion stérique est de 15500 par rapport à un standard polyoxyéthylène. Le taux de tocophérol greffé, estimé par la 30 spectroscopie RMN du proton, est de 5,1 % molaire. b) Synthèse d'un polymère polyélectrolyte PO-AI cationique (polyglutamate greffé par l'alpha-tocophérol d'origine synthétique et par de l'histidinamide)5 NJ O / H2N H N m o Indices et groupements : m = 11, p = 209, q = 0, T = D,L-alpha-tocophérol (T) 3 g d'un poly(acide glutamique) de DP 220 greffé à 5% de façon statistique avec de l'alpha-tocophérol racémique sont solubilisés par chauffage à 80 C dans 38 ml de NMP. À cette solution refroidie à 0 C, sont ajoutés 2,74 g d'isobutyl chloroformate puis 2,2 mL de N-méthyl morpholine. Le milieu réactionnel est agité 10 minutes en maintenant la température à 0 C. En parallèle, 8,65 g du dichlorhydrate d'histidinamide sont suspendus dans 108 mL de NMP. 10,6 ml de triéthylamine sont ensuite ajoutés et la suspension obtenue est agitée à 20 C pendant quelques minutes puis refroidie à 0 C. On procède ensuite à l'ajout de la solution de polymère activé sur la suspension d'histidinamide. Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à 0 C, puis 1 nuit à 20 C. On ajoute ensuite 0,62 mL d'HCl 35 %, puis 83 mL d'eau. On verse ensuite la solution obtenue dans 500 mL d'eau à pH 3-4. La solution est ensuite diafiltrée contre 8 volumes d'eau salée (0,9% NaCl) et 4 volumes d'eau. La solution de polymère est ensuite concentrée jusqu'à un volume de 300 mL (la concentration en polymère est de 18 mg/g). Le pourcentage d'histidinamide greffée, déterminé par RMN 1H dans D20 est de 95 %. ç) Synthèse d'un polymère polyélectrolyte PO A2 cationique (polyglutamate greffé par l'alpha-tocophérol d'origine synthétique et par de l'hisiidinamide) H m o Indices et groupements : m = 44, p = 154, q = 22, T = D,L-alpha-tocophérol (T) 5 10 g d'un poly(acide glutamique) de DP 220 greffé à 20 % de façon statistique avec de l'alpha-tocophérol racémique sont solubilisés par chauffage à 80 C dans 125 ml de NMP. À cette solution refroidie à 0 C, sont ajoutés 5,5 g d'isobutyl chloroformate puis 4,4 mL de N-méthyl morpholine. Le milieu réactionnel est agité 10 minutes en maintenant la 10 température à 0 C. En parallèle, 12,9 g du dichlorhydrate d'histidinamide sont suspendus dans 161 mL de NMP. 15,8 ml de triéthylamine sont ensuite ajoutés et la suspension obtenue est agitée à 20 C pendant quelques minutes puis refroidie à 0 C. On procède ensuite à l'ajout de la solution de polymère activé sur la suspension d'histidinamide. Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à 0 C, puis 1 nuit à 20 C. On ajoute ensuite 15 1,46 mL d'HC1 35 %, puis 200 mL d'eau. On ajoute encore 200 mL d'eau, puis 650 mL d'éthanol, et verse ensuite dans 650 mL d'eau à pH 3--4. La solution est ensuite diafiltrée contre 8 volumes d'eau salée (0,9% NaCl) et 4 volumes d'eau. La solution de polymère est enfin concentrée jusqu'à un volume de 250 mL (la concentration en polymère est de 50 mg/g). Le pourcentage d'histidinamide greffée, déterminé par RMN 1H dans D20 est de 20 70 %. d) Synthèse d'un polymère polyélectrolyte PO-B cationique (polyglutamate greffé par l'alpha-tocophérol d'origine synthétique, par l 'éthanolamine, et par de l'argininamide) NH HN NH3+,CI' CONH2 O ONa P O q 0 • N~~OH H N H H N H 2N Indices et groupements : T = D,L-a-tocophérol, p = 11, q = 88, r = 48, s = 73 Dix grammes d'un poly(acide glutamique) de DP 220 greffé à 5 % de façon statistique avec de l'a-tocophérol racémique sont solubilisés dans 125 mL de NMP à 80 C. Cette solution est refroidie à 0 C, et 5,6 mL de chloroformiate d'iso-butyle puis 4,8 mL de N-méthyl morpholine sont ajoutés. Ce mélange réactionnel est agité 15 minutes à o c. En parallèle, 7,4 g de dichlorhydrate d'argininamide sont suspendus dans 93 mL de NMP, puis 4,7 mL de triéthylamine et 1,2 mL d'éthanolamine sont ajoutés. La suspension obtenue est agitée quelques minutes à 20 C puis refroidie à 0 C. La suspension laiteuse de polymère activé est alors additionnée à cette suspension, et le mélange réactionnel est agité pendant 2 h à 0 C, puis une nuit à 20 C. Après ajout de 2,07 mL d'une solution d'HCl 35 % puis 200 mL d'eau, le mélange réactionnel est versé goutte à goutte dans 670 mL d'eau acidifiée à pH = 3 avec HCI, en maintenant le pH vers 3 avec une solution d'HCl 1N. La solution obtenue est diafiltrée contre 8 volumes d'eau salée (0,9 %) puis 4 volumes d'eau, et concentrée jusqu'à un volume d'environ 250 mL. Les pourcentages d'argininamide et d'éthanolamine greffés, déterminés par RMN du proton dans D20, sont respectivement de 40 et 22 %. 2) Exemple 1 (comparatif): formulation à base de polymère PO ne portant pas de dérivé cationique (synthèse a) 30 On utilise le polymère PO obtenu selon la synthèse a) ci-dessus. Une solution colloïdale de polymère PO à 24 mg/g est obtenue en diluant 12,64 g de solution de PO avec 2,19 g d'eau. L'osmolarité de la solution colloïdale de PO ainsi que son pH sont ensuite ajustés à 290 mOsm et pH 6,95 en introduisant respectivement les quantités nécessaires d'une solution aqueuse de NaCl et d'une solution de NaOH. Le tableau ci-dessous regroupe les caractéristiques de la formulation obtenue: La taille des particules est mesurée selon le test T'. [PO] (mg/g) pH Osmolarité (mOsm) Taille (nm) 23,14 6,95 290 40 La formulation à base de polymère PO décrite ci-dessus ne précipite pas lors de l'ajout de 1 ml de cette dernière sur 1 ml de solution tampon Tp. 3) Exemple 2: formulation à base de polymère PO-Al 15 3.1) Exemple 2.1. concentration en PO-Al égale à 10 mg/g, contenant de l'IFN-alpha a) Préparation d'une solution colloïdale de PO-Al On utilise le polymère PO-Al obtenu selon la synthèse b) ci-dessus. 20 On dilue le PO- Al dans l'eau, et on ajuste le pH (solution appropriée de NaOH) et l'osmolarité (solution appropriée de NaCl). [PO-Al] (mg/g) pH Osmo (mOsm) 12,93 5,98 231 La solution colloïdale à base de polymère PO-Al obtenue précipite lors de l'ajout de 25 1 ml de cette dernière sur 1 ml de solution tampon Tp, et est caractérisée par un facteur de précipitation Fp égal à 860. Le polymère PO-Al est caractérisé par un pH* égal à 6,5. b) Association de la protéine au polymère PO-Al 30 On ajoute 2,18 g de la protéine IFN-a (PC-GEN) à 2,4 mg/g à 8 g de solution colloïdale de PO-Al, et on ajuste la concentration finale par dilution avec une solution de NaCl appropriée (0,18g).10 c) Association une nuit à 25 C. Le tableau ci-dessous regroupe les caractéristiques de la formulation finale : La taille des particules est mesurée selon le test T'. [polymère] (mg/g) [IFN-a] (mg/g) pH Osmo (mOsm) Taille (nm) 10 0,5 5,9 313 34 3.2) Exemple 2.2: concentration en PO AI égale à 45 mg/g On utilise le polymère PO-Al obtenu selon la synthèse b) ci-dessus. 10 On dilue le PO-Al dans l'eau, et on ajuste le pH (solution appropriée de NaOH) et l'osmolarité (solution appropriée de NaCl). [PO-Al] (mg/g) pH Osmo (mOsm) Taille (nm) 45,3 5,5 299 37 La solution colloïdale à base de polymère PO-Al obtenue ne précipite pas lors de 15 l'ajout de 1 ml de cette dernière sur 1 ml de solution tampon Tp, et est caractérisée par un facteur de précipitation Fp égal à 166. 3.3) Exemple 2.3: concentration en PO-Al égale à 10 mg/g , contenant de l'IFN-alpha et des cations Zn++ a) Préparation d'une solution colloïdale de PO-Al contenant 0,5éq. Zn++ On utilise le polymère PO-Al obtenu selon la synthèse b) ci-dessus. On dilue le PO-Al dans l'eau, et on ajuste le pH (solution appropriée de NaOH) et l'osmolarité (solution appropriée de NaCl). [PO-Al] (mg/g) pH C)smo (mOsm) 13,11 4,63 210 b) Association de la protéine au polymère PO-Al On ajoute 2,17 g de la protéine IFN-a (PC-GEN) à 2,4 mg/g à 7,96 g de solution colloïdale de PO-Al préparée à l'étape a), et on ajuste la concentration finale par 30 dilution avec une solution de NaCl appropriée (0,18 g). c) Association une nuit à 25 C 31 20 25 32 d) Ajout des cations Zn" La quantité nécessaire de solution de ZnC12 concentrée à 204 mg/g est ajoutée à la formulation précédente pour atteindre 0,5 équivalents molaires de cations Zn++ par 5 dérivé cationique présent en solution. Le tableau ci-dessous regroupe les caractéristiques de la formulation finale : La taille des particules est mesurée selon le test T'. [polymère] [IFN-a] [Zn++] pH Osmo Taille (mg/g) (mg/g) (éq.) (mOsm) (nm) 10,02 0,5 0,51 4,05 337 36 La solution colloïdale à base de polymère PO-Al obtenue précipite lors de l'ajout de 1 ml de cette dernière sur 1 ml de solution tampon Tp, et est caractérisée par un facteur de précipitation Fp égal à 860. Le polymère PO-Al contenant 0,5 équivalent molaire de cations Zn++ par dérivé cationique est caractérisé par un pH* égal à 4,8. 4) Exemple 3: formulation à base de polymère PO-A2 à 30 mg/g contenant de l'IFN-alpha a) Préparation d'une solution colloïdale de PO- A2 20 On utilise le polymère PO-A2 obtenu selon la synthèse c) ci-dessus. On dilue le PO-A2 dans l'eau, et on ajuste le pH (solution appropriée de NaOH) et l'osmolarité (solution appropriée de NaCl). [PO-A2] (mg/g) pH Osmo (mOsm) 38,52 6,04 237 La solution colloïdale à base de polymère PO- A2 obtenue précipite lors de l'ajout de 25 1 ml de cette dernière sur 1 ml de solution tampon Tp, et est caractérisée par un facteur de précipitation Fp égal à 840. Le polymère PO-A2 est caractérisé par un pH* égal à 6,5. b) Association de la protéine au polymère PO-A2 30 On ajoute de 2,18 g de la protéine IFN-a (PC-GEN) à 2,4 mg/g à 8 g de solution colloïdale de PO-A2, et on ajuste la concentration finale par dilution avec une solution de NaCl appropriée (0,18 g). 10 15 c) Association une nuit à 25 C. Le tableau ci-dessous regroupe les caractéristiques de la formulation finale : La taille des particules est mesurée selon le test T'. [polymère] (mg/g) [IFN-a] (mg/g) pH Osmo (mOsm) Taille (nm) 29,8 0,5 5,8 320 35 5) Exemple 4: formulation à base de polymère PO-B 5.1) Exemple 4.1: concentration en PO-B égale à 10 mg g, On utilise le polymère PO-B obtenu selon la synthèse d) ci-dessus. On dilue le PO-B dans l'eau, et on ajuste le pH (solution appropriée de NaOH) et l'osmolarité (solution appropriée de NaCl). [PO-B] (mg/g) pH Osmo (mOsm) 10,2 4,17 275 La solution colloïdale à base de polymère PO-B obtenue précipite lors de l'ajout de 1 ml de cette dernière sur 1 ml de solution tampon Tp, et est caractérisée par un facteur de précipitation Fp égal à 1150. Le polymère PO-B est caractérisé par un pH* égal à 5. 20 5.2) Exemple 4.2: concentration en PO-B égale à 45 mg/g On utilise le polymère PO-B obtenu selon la synthèse d) ci-dessus. On dilue le PO-B dans l'eau, et on ajuste le pH (solution appropriée de NaOH) et l'osmolarité (solution appropriée de NaCl). [PO-B] (mg/g) pH Osmo (mOsm) Taille (nm) 45 4 294 35 La solution colloïdale à base de polymère PO-B obtenue précipite lors de l'ajout de 1 ml de cette dernière sur 1 ml de solution tampon Tp, et est caractérisée par un facteur de précipitation Fp égal à 256. Le polymère PO-B est caractérisé par un pH* égal à 5. 6) Exemple 5 (comparatif) : préparation de particules à base de PO, contenant de l'IFN- 33 10 15 25 30 a On utilise le polymère PO obtenu selon la synthèse a) ci-dessus. Une solution colloïdale de polymère PO est obtenue en le solubilisant dans l'eau en ajustant le pH à 7,52 par ajout d'une solution de NaOH. L'osmolarité de la solution est ajustée à 108 mOsm en introduisant la quantité nécessaire d'une solution aqueuse de NaCl. La concentration en polymère PO est ajustée à 29,05 mg/g. On ajoute à la solution colloïdale de polymère PO précédente de la protéine IFN-a (PC GEN) concentrée à 2.4 mg/g. L'association est réalisée pendant une nuit à 25 C. Le tableau ci-dessous regroupe les caractéristiques des particules obtenues: 10 La taille des particules est mesurée selon le test T'. [PO] (mg/g) [IFN-a] (mg/g) pH Osmolarité (mOsm) Taille (nm) 23 0,5 7,20 300 40 7) Résultats in vitro pour les exemples 2, 3 et 5 15 Pour cela, on mesure la libération du principe actif à partir des formulations selon l'invention en utilisant le test L. La figure 1 montre le relargage dans le test L sous la forme du pourcentage de protéine relarguée au cours du temps. 20 La formulation de l'exemple comparatif 5, contenant 23 mg/g de particules de PO présente un profil de libération caractérisé par 93% de protéine libérée en 10 heures. Les formulations des exemples 2.1 et 3 présentent des profils de relargage retardés avec des libérations respectivement de 67 et 65% de la protéine injectée en 48 heures. Dans le cas des particules de l'exemple 2.3, on observe la création d'un flux de relargage 25 qui n'est pas nul à la fin de l'expérience, avec un relargage de 59% de la protéine injectée en 48 heures. 8) Résultats in vivo pour les exemples 2, 3 et 5 30 44 rats ont été séparés en 5 groupes de 8 ou 12 animaux et ont reçu en parallèle une formulation à libération immédiate IR ou une formulation à relargage prolongée correspondant à l'exemple comparatif 5 ou une des formulations des exemples de l'invention 2 et 3, à la dose de 300 tg/kg. 35 Les résultats pharmaco-cinétiques sont regroupés dans le tableau ci-dessous: Exemple N Cmax Tmax médian AUC T50%AUC RBA (%) (ng/mL) (intervalle) (ng x (hr) (heure) h/mL) IFN IR 12 100,6 05 (0,25-1) 255,9 1,5 100 (0,5) Ex 2.1 8 3,6 3 (3-24) 135,4 24.7 57 Ex 2.3 8 1.1 3 (3-24) 28.3 19.4 12 Ex 3 8 26.2 3 (3-6) 264.8 7.1 111 Ex 5 8 3,5 12 (6-24) 95,7 18,4 62 Cr,. représente la concentration plasmatique maximale moyenne en protéine sur l'ensemble des animaux Tmax médian représente la médiane du temps pour lequel la concentration plasmatique passe par son maximum AUC représente l'aire moyenne sous la courbe de la concentration plasmatique en fonction du temps T50%AUC représente le temps moyen au bout duquel l'aire sous la courbe atteint 50% de sa valeur totale. RBA représente le rapport de l'aire sous la courbe de la formulation considérée à l'aire sous la courbe de la formulation IFN IR. Toutes les formulations présentent un profil de libération prolongée accompagné d'une baisse du Cmax par rapport à l'IR. En comparaison avec l'exemple comparatif 5, la pente terminale de toutes les formulations selon la présente invention est plus faible, ce qui indique une absorption résiduelle prolongée. On notera pour les formulations de l'exemple 2.1 et 3 (PO-Al à 10 mg/g, et PO-A2 à 30 mg/g) des relargage prolongés sur plus de 5 jours (comparés à environ 3 jours pour la formulation de l'exemple comparatif 5) et présentant respectivement des RBA de 57% et environ 100%. REVENDICATIONS - 1 - Formulation pharmaceutique liquide aqueuse pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), aisément injectable, comprenant au moins un principe actif (PA) et une suspension aqueuse, à base de particules colloïdales d'un polymère (PO), caractérisée en ce qu'elle satisfait aux quatre conditions suivantes: (a) le polymère (PO) est un polyaminoacide comprenant des unités glutamiques, - certaines unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupe cationique (GC) pendant, les groupes cationiques étant identiques ou différents entre eux, - d'autres unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupement hydrophobe (GH) pendant, lesdits groupes hydrophobes (GH) étant identiques ou différents entre eux, - éventuellement d'autres unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupement neutre (GN) pendant, les groupements neutres (GN) étant identiques ou différents entre eux, -éventuellement d'autres unités glutamiques étant non modifiées; (b) la valeur pHf du pH de ladite formulation est comprise entre 3,0 et 6,5; (c) pour la valeur pHf du pH, le polymère (PO) forme une solution colloïdale qui associe spontanément et de façon non covalente le principe actif (PA); (d) 1 ml de ladite formulation précipite lors d'un mélange avec un volume de 1 ml d'une solution tampon test Tp. - 2 - Formulation selon la revendication 1, caractérisée en ce que son facteur de précipitation Fp est supérieur à 200, de préférence supérieur à 400, et de préférence supérieur à 800, et plus préférentiellement encore, supérieur à 1500. - 3 - Formulation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le polymère (PO) présente une structure pGlu(X)GH(y)GC(Z)GN(l_X_y._Z) avec un degré de polymérisation totale (DP) compris entre 50 et 300, et de préférence compris entre 100 et 250. - 4 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les groupements cationiques (GC) sont choisis parmi les bases faibles dont le pH de demi neutralisation est inférieur à 7,0. 35 - 5 - Formulation selon la revendication 4, caractérisée en ce que les groupements cationiques (GC) sont obtenus à partir des dérivés de l'histidine choisis dans le groupe comprenant les esters d'histidine, de préférence l'ester méthylique et l'ester éthylique ;30l'histidinol, l'histamine, l'histidinamide, le dérivé N-monométhyle de l'histidinamide et le dérivé N,N'-diméthyle de l'histidinamide. - 6 - Formulation selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisée en ce que x est compris entre 0 et 45%, y est compris entre 2 et 30%, z est compris entre 40 et 98%, et 1-x-y-z est compris entre 0 et 50 %. - 7 - Formulation selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisée en ce que x est compris entre 0 et 45%, y est compris entre 2 et 30%, z est compris entre 40 et 60%, et 1-x-y-z est compris entre 0 et 58%. - 8 - Formulation selon la revendication 6, caractérisée en ce que x est compris entre 0 et 45%, y est compris entre 15 et 30%, z est compris entre 40 et 60%, et 1-x-y-z est compris entre 0 et 45%. - 9 - Formulation selon la revendication 6, caractérisée en ce que le polymère PO ne comporte pas de groupements neutres (GN) et en ce que x est compris entre 0 et 45%, y est compris entre 2 et 30%, et z est compris entre 40 et 98%. 20 - 10 - Formulation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que les groupements cationiques (GC) sont choisis parmi ceux qui comprennent au moins un ammonium quaternaire ou au moins une base forte dont le pH de demi-neutralisation est supérieur à 8.0. 25 - 11 - Formulation selon la revendication 10, caractérisée en ce que les groupements cationiques (GC) sont obtenus à partir des composés précurseurs suivants : une diamine linéaire de 2 à 6 carbones, de préférence la putrescine, l' agmatine, - l'éthanolamine liée par l'oxygène, 30 - la choline liée par l'oxygène, - un dérivé ester ou amide d'un acide aminé dont la chaîne latérale est chargée positivement à pH neutre, i.e. la lysine, l'arginine, l'ornithine, lié par la fonction amine en position alpha; 35 - 12 - Formulation selon les revendications 3, 10 et 11, caractérisée en ce que: - x est compris entre 10 et 55%, - y est compris entre 2 et 30%,15- z est supérieur ou égal à 10% et est compris entre (x-10) % et (x+15) %, -le nombre de groupements neutres correspondant au pourcentage complémentaire pour atteindre 100%, et pouvant éventuellement être égal à 0. - 13 - Formulation selon les revendications 3, 10 et 11, caractérisée en ce que: - x est compris entre 20 et 55%, - y est compris entre 2 et 7,5%, - z est supérieur ou égal à 20% et est compris entre (x-10) % et (x+15) %, -le nombre de groupements neutres correspondant au pourcentage complémentaire pour atteindre 100%, et pouvant éventuellement être égal à 0. - 14 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les groupements hydrophobes (GH) sont sélectionnés dans le groupe comprenant: • les alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome, • les alkylaryles ou arylalkyles en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome, • et les (poly) cycliques en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome. - 15 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'au moins l'un des groupements hydrophobes (GH) est obtenu par greffage, à partir d'un précurseur choisi dans le groupe comprenant: l'octanol, le dodécanol, le tétradécanol, 1'héxadécanol, 1'octadécanol, l'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol. 25 - 16 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les groupements neutres (GN) sont obtenus à partir de l'éthanolamine liée par l'azote, un alkylène glycol, un polyalkylène glycol. 30 - 17 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le polymère (PO) est porteur d'au moins un greffon de type polyalkylène (de préférence éthylène) glycol lié à une unité glutamate. - 18 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en 35 ce que le polyaminoacide (PO) répond à la formule générale (I) suivante: 20ORio OOR80 N H D N H ù r O -a O s H N - P B 0 O R90 GH I dans laquelle : ^ A représente indépendamment : un groupement NHR dans laquelle R représente un H, un alkyle linéaire en C2 à CIO ou ramifié en C3 à CIO ou un benzyle, - une unité acide aminé terminale liée par l'azote et dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifiée par une amine ou un alcool répondant aux définitions NHR et OR respectivement; ^ B est un groupement de liaison divalent, trivalent ou tétravalent, de préférence choisi parmi les radicaux suivants : -0-, -NH-, -N-alkyle- (Cl à C5), un résidu d'acide aminé (de préférence naturel), un diol, un triol, une diamine, une triamine, un aminoalcool ou un hydroxyacide comportant de 1 à 6 atomes de carbone; ^ D représente un H, un groupe acyle linéaire en C2 à C10 ou ramifié en C3 à CIO, ou un pyroglutamate; ^ les groupements hydrophobes GH représentent chacun indépendamment les uns des autres un radical choisi parmi : • les alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ou • les alkylaryles ou arylalkyle en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ou • les (poly)cycliques en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S); 5 10 15 20 25 35^ R70 identiques ou différents entre eux, représentent les groupes obtenus à partir des composés suivants : une diamine linéaire de 2 à 6 carbones, de préférence la putrescine, 1' agmatine, - l'éthanolamine liée par l'oxygène, la choline liée par l'oxygène, un dérivé de l'histidine choisis dans le groupe comprenant les esters d'histidine, de préférence l'ester méthylique et l'ester éthylique ; l'histidinol, l'histamine, l'histidinamide, le dérivé N-monométhyle de l'histidinamide et le dérivé N,N'-diméthyle de l'histidinamide, un dérivé ester ou amide d'un acide aminé dont la chaîne latérale est chargée positivement à pH neutre, i.e. la lysine, l'arginine, l'ornithine, lié par la fonction amine en position alpha; • le contre-anion du groupement R70 étant de préférence un chlorure, un sulfate, un phosphate ou un acétate; ^ R80 représente un H ou une entité cationique, de préférence sélectionnée dans le groupe comprenant : les cations métalliques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium ; - les cations organiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : • les cations à base d'amine, • les cations à base d'oligoamine., • les cations à base de polyamine (la polyéthylèneimine étant particulièrement préférée), • les cations à base d'acide(s) aminé(s) avantageusement choisis dans la classe comprenant les cations à base de lysine ou d'arginine, - ou les polyaminoacides cationiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant la polylysine ou l'oligolysine; ^ R90 représente les groupes obtenus à partir de l'éthanolamine liée par l'azote, un alkylène glycol, un polyalkylène glycol; ^ p, q, r et s sont des entiers positifs; ^ (p)I(p+q+r+s) est défini comme le taux de greffage molaire des groupements hydrophobes GH varie de 2 à 30 % molaire, sous condition que chaque chaîne de copolymère possède en moyenne au moins 3 greffons hydrophobes; 41 ^ (q)/(p+q+r+s) est défini comme le taux de greffage molaire des groupements cationiques et varie de 10 à 98 % molaire; ^ (p+q+r+s) varie de 50 à 300, de préférence entre 100 et 250 ; ^ (r)/(p+q+r+s) varie de 0 à 78 % molaire; (s)/(p+q+r+s) varie de 0 à 55 % molaire. - 19 - Formulation selon la revendication 18, caractérisée en ce que le groupement hydrophobe (GH) est issu d'un précurseur alcoolique choisi dans le groupe comprenant: l'octanol, le dodécanol, le tétradécanol, l'hexadécanol, l'octadécanol, l'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol, et en ce que B représente une liaison directe. - 20 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en polymère (PO) dans la formulation est comprise entre 4 et 50 mg/ml. - 21 - Formulation selon la revendication 20, caractérisée en ce que la concentration en polymère (PO) est comprise entre 5 et 30 mg/ml. - 22 - Formulation selon la revendication 21, caractérisée en ce que la concentration en 20 polymère (PO) est comprise entre 5 et 15 mg/ml. - 23 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le rapport R de la concentration en principe actif (PA) à la concentration en polymère (PO) est compris entre 0,0001 et 1,5. - 24 - Formulation selon la revendication 23, caractérisée en ce que le rapport R de la concentration en principe actif (PA) à la concentration en polymère (PO) est compris entre 0,01 et 1, 2. 30 - 25 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle contient des cations divalents Zn++ dans une proportion comprise entre 0,05 et 2 équivalents molaires par rapport à la concentration molaire en groupes cationiques (GC). - 26 - Formulation selon la revendication 25, caractérisée en ce qu'elle contient des 35 cations divalents Zn++ ajoutés dans la proportion comprise entre 0,25 et 0,75 équivalents molaires par rapport à la concentration molaire en groupes cationiques (GC), et de préférence égale à 0,5éq. 25 42 - 27 - Formulation selon la revendication 26, caractérisée en ce que les groupes cationiques (GC) sont obtenus à partir de dérivés de l'histidine choisis dans le groupe comprenant les esters d'histidine, de préférence l'ester méthylique et l'ester éthylique ; l'histidinol, l'histamine, l'histidinamide, le dérivé N-monométhyle de l'histidinamide et le dérivé N,N'-diméthyle de l'histidinamide. - 28 - Formulation selon l'une quelconque des revendications 1 à 24, caractérisée en ce qu'elle ne contient pas de cation divalent ajouté. - 29 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce le principe actif (PA) est choisi dans le groupe comprenant: les protéines, les glycoprotéines, les protéines liées à une ou plusieurs chaînes polyalkylèneglycol [de préférence polyéthylèneglycol (PEG): "protéines-PEGylées"], les peptides, les polysaccharides, les liposaccharides, les oligonucléotides, les polynucléotides et leurs mélanges, et, plus préférentiellement encore, dans le sous-groupe des érythroproïétines, telles que l'époétine alpha, l'époétine béta, la darbépoétine, le raffimère d'hémoglobine, leurs analogues ou leurs dérivés; oxytocine, vasopressine, hormone adrénocorticotropique, facteur de croissance épidermal, facteur de croissance des plaquettes (PDGF), les facteurs stimulants de l'hématopoïèse et leurs mélanges, les facteurs sanguins, tels que alteplase, tenecteplase, facteur VII(a), facteur VII; hémoglobine, les cytochromes, les albumines prolactine, luliberine, hormone relargant l'hormone lutéinisante (LHRH) en analogues, tels que leuprolide, goséréline, triptoréline, buseréline, nafaréline; antagonistes de la LHRH, les concurrents de la LHRH, les hormones de croissance (GH) humaine, porcine ou bovine, le facteur relargant l'hormone de croissance, l'insuline, la somatostatine, le glucagon, les interleukines ou leurs mélanges (IL-2, IL-11, IL-12), les interférons, tels que l'interféron alpha, alpha-2b, bêta, bêta-la, ou y; la gastrine, la tétragastrine, la pentagastrine, l'urogastrone, la sécrétine, la calcitonine, l'enkephaline, les endomorphines, les angiotensines, l'hormone relargant la thyrotropine (TRH), le facteur nécrosant des tumeurs (TNF), le facteur de croissance des nerfs (NGF), les facteurs de croissance tels que beclapermine, trafermine, ancestim, le facteur de croissance des kératinocytes, le facteur stimulant les colonies granulocytes (G-CSF), le facteur stimulant les colonies de macrophages granulocytaires (GM-CSF), le facteur stimulant les colonies de macrophages (M-CSF), heparinase, la protéine morphogénique de l'os (BMP), hANP, le peptide ressemblant au glucagon (GLP-1), VEG-F, l'antigène recombinant de l'hépatite B (rHBsAg), la rénine, les cytokines, la bradykinine, les bacitracines, les polymixines, lescolistines, la tyrocidine, les gramicidines, l'étanercept, l'imiglucérase, la drotrécogine alpha, les cyclosporines et analogies synthétiques, les modifications et fragments actifs pharmaceutiquement d'enzymes, de cytokines, d'anticorps, d'antigènes et de vaccins, les anticorps tels que rituximab, infliximab, trastuzumab, adalimumab, omalizumab, tositumomab, efalizumab, et cetuximab. - 30 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le principe actif (PA) est une "petite" molécule organique hydrophobe, hydrophile ou amphiphile. - 31 - Formulation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le principe actif (PA) est choisi parmi au moins l'une des familles de substances actives suivantes : les agents de traitement de l'abus d'alcool, les agents de traitement de la maladie d'Alzheimer, les anesthésiques, les agents de traitement de l'acromégalie, les analgésiques, les antiasthmatiques, les agents de traitement des allergies, les agents anticancéreux, les anti-inflammatoires, les anticoagulants et antithrombotiques, les anticonvulsivants, les antiépileptiques, les antidiabétiques, les antiémétiques, les antiglaucomes, les antihistaminiques, les anti-infectieux, les antibiotiques, les antifongiques, les antiviraux, les antiparkinsoniens, les anti-cholinergiques, les antitussifs, les inhibiteurs de l'anhydrase carbonique, les agents cardiovasculaires, les hypolipémiants, les anti-arythmiques, les vasodilatateurs, les antiangineux, les anti-hypertenseurs, les vasoprotecteurs, les inhibiteurs de cholinestérase, les agents de traitement des désordres du système nerveux central, les stimulants du système nerveux central, les contraceptifs, les promoteurs de fécondité, les inducteurs et inhibiteurs du travail utérin, les agents de traitement de la mucoviscidose, les agonistes des récepteurs de la dopamine, les agents de traitement de l'endométriose, les agents de traitement des dysfonctionnements érectiles, les agents de traitement de la fertilité, les agents de traitements des troubles gastro-intestinaux, les immunomodulateurs et les immunosuppresseurs, les agents de traitement des troubles de la mémoire, les antimigraineux, les relaxants des muscles, les analogues de nucléosides, les agents de traitement de l'ostéoporose, les parasympathomimétiques, les prostaglandines, les agents psychothérapeutiques, les sédatifs, les hypnotiques et tranquillisants, les neuroleptiques, les anxiolytiques, les psychostimulants, les antidépresseurs, les agents de traitements dermatologiques, les stéroïdes et les hormones, les amphétamines, les anorexiques, les anti-douleurs non analgésiques, les anti- épileptiques, les barbituriques, les benzodiazépines, les hypnotiques, les laxatifs, les psychotropes et toutes les associations de ces produits. 44 - 32 - Formulation pharmaceutique solide pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), caractérisée en ce qu'elle comprend une forme poudre sèche obtenue à partir de la formulation liquide selon l'une quelconque des revendications 1 à 31. - 33 - Procédé de préparation d'une formulation pour la libération prolongée d'au moins un principe actif (PA), cette formulation étant en particulier selon l'une quelconque des revendications 1 à 31, comprenant les étapes suivantes: 1) la préparation, à une valeur du pH comprise entre 3 et 6,5, d'une solution colloïdale aqueuse d'un polymère (PO) polyaminoacide, ledit polymère polyaminoacide (PO) comprenant des unités glutamiques: -certaines unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupe cationique (GC) pendant, lesdits groupes cationiques étant identiques ou différents entre eux, - d'autres unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupement hydrophobe (GH) pendant, lesdits groupes hydrophobes (GH) étant identiques ou différents entre eux, - éventuellement d'autres unités glutamiques étant chacune porteuse d'un groupement neutre (GN) pendant, les groupements neutres (GN) étant identiques ou différents entre eux, -éventuellement d'autres unités glutamiques étant non modifiées; les fractions molaires respectives en groupes cationiques (GC), en groupes hydrophobes (GH), éventuellement en groupes neutres (GN) et éventuellement en glutamate, étant telles que 1 ml de ladite formulation précipite lors d'un mélange avec un volume de 1 ml d'une solution tampon test Tp; et 2) l'ajout d'au moins un principe actif (PA) au polymère (PO) obtenu à l'étape 1, ledit principe actif s'associant de façon non covalente aux particules de la solution colloïdale dudit polymère.