Brevet FR2920776A1 — publié le 20090313

L'invention concerne l'utilisation de dérivés de purine pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des pathologies dans lesquelles un déséquilibre entre division cellulaire et apoptose est impliqué. Elle concerne également certains de ces dérivés de purine. Les pathologies dans lesquelles un déséquilibre entre division cellulaire et apoptose est impliqué sont en particulier la leucémie lymphoïde chronique et les maladies rénales telles que la polykystose. La leucémie lymphoïde chronique, LLC, est un groupe hétérogène de maladies caractérisées par l'accumulation des cellules B monoclonales CDS+ dans le sang, la moelle osseuse et les organes hématopoïétiques. Il s'agit d'une maladie dans laquelle les cellules B monoclonales ne subissent pas ou peu d'apoptose naturelle (mort cellulaire) et comportant un faible contingent de cellules B engagées dans le cycle cellulaire. En ce sens, cette maladie est une maladie quelque peu différente des maladies dans lesquelles on constate une prolifération excessive, qui n'a pas cessé, des cellules monoclonales, dans lesquelles les cellules monoclonales sont fortement engagées dans le cycle cellulaire et, dans lesquelles la résistance à l'apoptose (mort cellulaire) constitue un phénomène de pathogénécité secondaire. La LLC est communément classée en catégories séparées incluant la leucémie lymphoïde chronique des lymphocytes B et la leucémie lymphoïde chronique des lymphocytes de type T. Par LLC, on entend communément leucémie lymphoïde chronique des lymphocytes B (LLCB). La leucémie lymphoïde chronique de lignée B, appelée LLC-B, est une maladie du lymphocyte B responsable de l'accumulation de lymphocytes B de morphologie lymphocytique, exprimant des antigènes de membrane caractéristiques de la maladie, telles les molécules CD5 et CD23, dans le sang, entraînant une hyperlymphocytose, dans la moelle osseuse, entraînant une insuffisance médullaire, et dans les ganglions lymphatiques, entraînant une polydénopathie. La LLC-B a été caractérisée comme une seule entité biologique avec une évolutivité variable. La classification pronostique de Binet permet de fixer le profil évolutif de la maladie en trois stades A, B et C. Parmi les sujets au stade A de la maladie, 41% évolueront vers les stades B et C. Parmi les paramètres biologiques, le temps de doublement lymphocytaire inférieur à 6 mois, une élévation du taux de CD23 soluble ou de l'activité de la thymidine kinase sérique sont considérés de mauvais pronostic. Parmi les paramètres génétiques parfaitement identifiés de mauvais pronostic sont les formes non mutées de la maladie (gène de la chaîne lourde des immunoglobulines en position germinale en 14q32), les 2 anomalies délétionnelles des chromosomes 11 q, 17p ou les anomalies chromosomiques additionnelles de type 12q+. Les malades porteurs de LLC-B et exprimant ces caractères biologiques ont un temps de progression court : ainsi, 50% des malades non mutés ont évolué en 24 mois ; 50% des malades présentant un 17p-, un llq- ou un 12q+ ont évolué à 15 mois. Les malades de stade A exprimant ces critères biologiques de gravité, les malades de stade B et C doivent bénéficier d'une attitude thérapeutique active. Bien que les traitements actuels induisent des rémissions de la maladie, tous les malades rechutent et il existe actuellement un consensus pour dire que la LLC reste une maladie incurable. La réelle question qui se pose aujourd'hui est de définir, dans les stades A de la maladie, les malades qui présentent un potentiel biologique d'évolutivité de gravité. Le meilleur traitement de première ligne de la LLC-B reste à définir. Les analogues des purines, en particulier la fludarabine, restent de loin les plus étudiés dans la LLC-B. La fludarabine seule induit un taux de réponse globale meilleur que l'utilisation des polychimiothérapies comportant des agents alkylants et une corticothérapie. La fludarabine induit plus de rémission complète hématologique (7 à 40%) que les polychimiothérapies de type CHOP, CAP (chloraminophène). En dépit de la meilleure réponse observée avec la fludarabine le bénéfice observé sur la survie globale reste marginal. Des tentatives thérapeutiques actuelles vont vers les associations de fludarabine avec la chimiothérapie conventionnelle, par exemple fludarabine plus cyclophosphamide, notamment dans les formes réfractaires de la maladie. L'espoir de survie est seulement de 12 mois chez les patients réfractaires à la fludarabine. Ces combinaisons sont néanmoins douées d'une majoration de la toxicité du traitement, notamment hématologique. Une infection est observée chez 50% des malades traités par une association de fludarabine et de cyclophosphamide. Un sepsis documenté ou une pneumopathie est observé pendant le traitement chez 25% des malades traités, une fièvre non documentée et/ou une hospitalisation chez 25% des autres. Une révolution thérapeutique a été acquise par l'avènement des anticorps thérapeutiques. Dans la LLC-B, deux anticorps thérapeutiques émergent : le rituximab et l'alemtuzumab. Dans la LLC-B, l'activité du rituximab est handicapée par la faible expression de la cible, l'antigène CD20, sur le lymphocyte B de LLC. Le rituximab est développé dans la LLC- B en synergie avec les analogues de purines et/ou le cyclophosphamide (réponse globale de 59% observée avec l'association fludarabinecyclophosphamide-rituximab chez des malades réfractaires à la fludarabine, dont seulement 5% de réponse complète). 3 L'activité de l'alemtuzumab, dirigée contre un antigène exprimé sur les leucocytes et les lymphocytes B leucémiques de LLC, avec une grande hétérogénéité de la densité membranaire de l'antigène, est handicapée par sa forte activité immunosuppressive et l'incidence importante des réactivations des infections cytomégaliques et d'infections opportunistes en cours ou après traitement : l'anticorps présente une forte activité immunosuppressive T. La réponse hématologique à l'alemtuzumab est de 33%, l'anticorps est capable de détruire les lymphocytes B clonaux dans le sang et la moelle osseuse, mais est peu opérant dans les ganglions lymphatiques. Ces points limitent l'utilisation de l'anticorps dans cette indication. La radioimmunothérapie par anti-CD20 couplé à l'yttrium-90 (Zévalin) induit un faible pourcentage de rémission dans la LLC-B et est responsable d'une importante myélosuppression. Le brevet US 6812232 décrit des analogues de purine proches de ceux de l'invention pour leur activité d'inhibition de la prolifération cellulaire. Or, dans la LLC, la prolifération cellulaire excessive a cessé. La demande de brevet W02005/002584 propose, quant à elle, d'utiliser la Roscovitine, de préférence dans sa configuration absolue (R) dans le traitement de la leucémie lymphoïde chronique, et plus particulièrement de la leucémie lymphoïde chronique de lignée B. La Roscovitine est une purine ayant la formule suivante: HN 25 OH Or, on a maintenant découvert que des dérivés de la Roscovitine avaient une activité beaucoup plus élevée que la Roscovitine dans le traitement des pathologies dans lesquelles un déséquilibre entre division cellulaire et apoptose est impliqué et qu'ils avaient également dans certains cas une meilleurs solubilité que la Roscovitine. Ainsi, l'invention propose l'utilisation d'au moins un composé de formule I suivante : HN Z OH Formule I dans laquelle : • X est C ou N, • Y est CH3 ou OH, et • Z est H ou CH3, ou l'un de ses sels, hydrates, esters ou isomères pharmaceutiquement acceptables, pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter les pathologies dans lesquelles un déséquilibre entre division cellulaire et apoptose est impliqué. Dans une première variante de l'invention, la pathologie est la leucémie lymphoïde chronique. Plus particulièrement, la pathologie est la leucémie lymphoïde chronique de lignée B. Dans une seconde variante de l'invention, la pathologie est une maladie rénale, et plus particulièrement la polykystose. Un sel préféré pour utilisation dans la fabrication d'un médicament pour traiter les pathologies dans lesquelles un déséquilibre entre division cellulaire et apoptose est impliqué est le sel oxalate des composés de formule I. Dans un premier mode de réalisation préféré, le au moins un composé utilisé pour la fabrication d'un médicament pour traiter ces pathologies est le composé de formule I dans laquelle X est N, Y est CH3 et Z est H. Ce composé a une configuration absolue (R) et a la formule la suivante : HN N N Y ù 20 HN Nl~i \ H N N OH Formule la Dans un second mode de réalisation tout particulièrement préféré de 5 l'invention, le au moins un composé a la configuration absolue (S). Ce composé a la formule Ib suivante : HN Nl ù \ HN N N OH Formule Ib 10 Ceci est particulièrement surprenant car, dans l'art antérieur, ce sont généralement les composés de configuration absolue (R) qui permettent d'obtenir les meilleurs résultats. Dans un troisième mode de réalisation tout particulièrement préféré de 15 l'invention, le au moins un composé de formule la ou Ib est sous la forme de son sel oxalate. Dans un quatrième mode de réalisation préféré de l'invention, le au moins un composé utilisé pour la fabrication d'un médicament pour traiter les pathologies dans lesquelles un déséquilibre entre division cellulaire et apoptose est impliqué est le 20 composé de formule I dans laquelle X est C, Y est CH3, et Z est H. Ce composé a la formule le suivante : HN OH Formule le Ce composé peut être utilisé aussi bien sous sa configuration absolue (S) 5 ou (R) que sous la forme de mélange de celles-ci. Dans un cinquième mode de réalisation préféré de l'invention, le au moins un composé utilisé est le composé de formule I dans laquelle X est N, Y est OH, et Z est H. Ce composé a la formule Id suivante : HN N HN e--- N HO 10 OH Formule Id De la même façon que pour le composé de formule Ic, le composé Id peut être utilisé aussi bien lorsque sous sa configuration (S) ou (R) que sous la forme de 15 mélange de celles-ci. Dans un sixième mode de réalisation préféré de l'invention, le au moins un composé utilisé est le composé de formule I dans laquelle X est N, Y est CH3, et Z est CH3. Ce composé a la formule le suivante: HN OH Formule le Dans un septième mode de réalisation préféré de l'invention, le au moins un composé utilisé est le sel oxalate du composé de formule Ie. Ce composé a la formule If suivante: OOCCOOH HN OH Formule If Les sels, hydrates, esters des composés de formule Ia, ainsi que les isomères des composés de formule le et Id peuvent également avantageusement être utilisés. En particulier, les esters des composés de formule I font également partie de l'invention. Les esters préférés des composés de formule I sont les esters acylés tels que les esters acétyle, nicotinyle et les esters d'aminoacides de série L ou de série D. D'autres esters préférés sont formés à partir d'aminoacides tels que la valine ou la leucine. Les esters particulièrement préférés ont les formules II-1 à II-4 suivantes : HN HN NN 1 N HN/\ N N H2 N Formule II-1 H2 N Formule II-2 HN N1 N H2 N Formule II-3 formule I. H2 N Formule II-4 En effet, ces esters sont des précurseurs (prodrugs) des produits de Leur utilisation dans la fabrication d'un médicament destiné à traiter les pathologies dans lesquelles un déséquilibre entre division cellulaire et apoptose est impliqué est également un objet de l'invention. L'invention sera mieux comprise et d'autres caractéristiques et avantages de celle-ci apparaîtront plus clairement à la lecture de la description explicative qui suit et qui est faite en référence aux figures dans lesquelles : - la figure 1 jointe montre l'induction de la mort cellulaire par le composé de formule Ia, et le sel oxalate du composé de formule la dans des cellules de leucémie lymphoïde chronique, en comparaison à l'induction de la mort cellulaire induite par la Roscovitine, - la figure 2 montre l'induction de la mort cellulaire par les composés de formule le et If dans les cellules de leucémie lymphoïde chronique. Les effets de la Roscovitine et du composé de formule Ia, de son sel oxalate ont été testés à diverses concentrations, dans des dosages de kinase. Ces tests ont été effectués comme suit : Tampons tampon A: 10 mM MgC12, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 25 mM Tris-HC1 pH 7.5, 50 �g héparine/ml. tampon C: 60 mM glycérophosphate, 15 mM p-nitrophénylphosphate, 25 10 mM MOPS (pH 7.2), 5 mM EGTA, 15 mM MgC12, 1 mM DTT, 1 mM sodium vanadate, 1 mM phénylphosphate. Préparation et dosage des kinases Les activités kinases ont été dosées dans le tampon A ou C, à 30 °C, et une concentration finale d'ATP de 15 �M. Des contrôles sont effectués avec des dilutions 15 appropriées de diméthylsulfoxide. CDKI/cyclin B (ovocytes en phase M d'étoile de mer, native) et CDK5/p25 (humaine, recombinante) ont été préparés et dosés comme décrit dans Leclerc S. et al., J Biol Chem 2001;276:251-60.). Le dosage est effectué avec 1 mg histone H1/ml, en présence de 15 �M [y-33P] ATP (3,000 Ci/mmole; 10 mCi/ml) dans un volume final de 20 30 pl. Après 30 min. d'incubation à 30°C, des aliquots de 25 .il de surnageant ont été déposés sur des papiers 2.5 x 3 cm pièces de phosphocellulose Whatman P8, puis, 20 sec. plus tard, les filtres ont été lavés 5 fois dans une solution de 10 ml acide phosphorique/litre. Les filtres sont ensuite comptés en présence de 1 ml ACS (Amersham) CDK2/cyclin A et CDK2/cyclin E (humain, recombinante, exprimées en 25 cellules d'insecte) sont dosées comme CDK1. CDK9/cyclin T (humain, recombinante, exprimées en cellules d'insecte) est dosée comme CDKI/cyclin B, avec un fragment pRB (AA773-928) (3.5 �g/dosage) comme substrat. GSK-3a//3 (cerveau de porc, native, purifiée par affinité) est dosée 30 comme CDKI/cyclin B, mais dans le tampon A et avec un substrat GSK-3 spécifique (GS-1: YRRAAVPPSPSLSRHSSPHQSpEDEEE) (Bach S. et al., J Biol Chem 2005; 280: 31208-19). CKI S/e (cerveau de porc, native, purifiée par affinité) est dosée comme CDKI/cyclin B, mais dans le tampon A et avec un substrat spécifique, 35 RRKHAAIGSpAYSITA (Reinhardt J. et al. Protein Expr & Purif 2007;54:101-9). DYRK1A (humain, recombinante, exprimées en cellules E. coli) est dosée comme CDKl/cyclin B. 10 Les valeurs de concentrations inhibitrices moyennes Cl50 ont été calculées à partir des courbes dose-réponse et sont reportées en �M dans le tableau I suivant: Kinase (R)-Roscovitine Composé de Composé de formule la formule lb Forme (R) Forme (S) CDK1/cycline B 0.33 0.09 0.15 CDK2/cycline A 0.21 0.072 0.080 CDK2/cycline E 0.17 0.041 0.060 CDK5/p25 0.28 0.11 0.12 CDK7/cycline H 0.80 1.10 - CDK9/cycline T 0.23 0.18 0.11 CK1 4.00 0.40 0.61 DYRK 1 A 3.00 3.60 0.9 Erk2 11.00 3.60 2.1 GSK-3a4(3 60.00 12.0 > 30.00 Tableau I On voit à partir du tableau I que pour toutes les protéines kinases, le composé de formule Ib de configuration (S) présente des activités inhibitrices des différentes kinases qui sont proches des activités de la Roscovitine et qui sont légèrement inférieures aux activités du composé de formule Ia, c'est-à-dire de son homologue de configurations absolue (R). Cependant, lorsque le composé de formule Ia, ainsi que son sel oxalate et des composés de formule le et If, ont été testés sur des cellules de leucémie lymphoïde chronique de lignée B prélevées chez des patients ayant ce type de leucémie lymphoïde chronique, on constate que, de façon surprenante, ces composés ont une activité inductrice de l'apoptose sur les cellules de la LLC qui sont très supérieures, de 50 à 100 fois supérieure, à l'activité de la Roscovitine, comme on le voit en figures 1 et 2. Les composés de formule Ib à If per se sont également des objets de l'invention. Les esters des composés de formule I font également partie de l'invention. Les esters préférés des composés de formule I sont les esters acylés tels que les esters acétyle, nicotinyle et les esters d'aminoacides de série L ou de série D. Les esters préférés sont formés à partir d'aminoacides tels que la valine ou la leucine. Les esters particulièrement préférés ont les formules II-1 à II-4 suivantes : HN N~~N HN /---- N H2 N HN Formule Il-1 Formule II-2 HN N~~N HN e--- N H2 N H2 N HN Formule II-3 Formule II-4 En effet, ces esters sont des précurseurs (prodrugs) des produits de formule I. Ainsi, les composés de l'invention sont particulièrement efficaces pour une utilisation pour la fabrication d'un médicament pour traiter la leucémie lymphoïde chronique. Ils sont également particulièrement appropriés pour administration dans une méthode de traitement de patients affectés d'une leucémie lymphoïde chronique. Ils sont également particulièrement efficaces pour une utilisation dans la fabrication d'un médicament pour traiter les maladies rénales, et en particulier la polykystose. De la même façon, ils sont particulièrement appropriés pour une administration dans une méthode de traitement de patients affectés d'une maladie rénale, et en particulier d'une polykystose. 12 Il apparaîtra clairement à l'homme du métier comprendra aisément que les composés de l'invention peuvent être utilisés en mélange entre eux, de deux ou plus, et également en association avec d'autres composés ayant une activité thérapeutique dans le traitement de la leucémie lymphoïde chronique ou des maladies rénales telle que la polykystose, et/ou en association avec tout excipient pharmaceutiquement acceptable pour la fabrication d'un médicament et que ces associations et mélanges font également partie de l'invention. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'au moins un composé de formule I suivante : HN Z OH Formule I dans laquelle : • X est C ou N, • Y est CH3 ou OH, et • Z est H ou CH3 ou l'un de ses sels, hydrates, esters, ou isomères pharmaceutiquement acceptables, pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter les pathologies dans lesquelles un déséquilibre entre division cellulaire et apoptose est impliqué. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la pathologie est une maladie rénale. 3. Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que la pathologie est la polykystose. 4. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la pathologie est la leucémie lymphoïde chronique. 5. Utilisation selon la revendication 4, caractérisée en ce que la leucémie lymphoïde chronique est la leucémie lymphoïde chronique de lignée B. 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le sel pharmaceutiquement acceptable est un sel oxalate. 7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le au moins un composé est le composé de formule I dans laquelle X est N, Y est CH3, et Z est H, de formule la suivante: N HN/\ N YHN N 1 HN ---- N OH Formule Ia, ou un de ses sels, hydrates ou esters pharmaceutiquement acceptables. 8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, 5 caractérisée en ce que le au moins un composé est le composé de formule I dans laquelle X est N, Y est CH3, et Z est H, de configuration absolue (S) de formule lb suivante : HN 10 Formule Ib, ou l'un de ses sels, hydrates ou esters pharmaceutiquement acceptables. 9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que le au moins un composé est le sel oxalate du composé de formule Ib. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le au moins un composé est le composé de formule I dans laquelle X est N, Y est OH, et Z est H, de formule le suivante : N 1 HN/\ N OH HN 15 N i HN/\ N N OH Formule Ic,15 ou un de ses sels, hydrates, ou isomères pharmaceutiquement acceptables. 11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le au moins un composé est le composé de formule I dans laquelle X 5 est C, Y est CH3, et Z est H de formule Id suivante : HN N HN/\ N HO OH Formule Id, ou un de ses sels, hydrates, esters, ou isomères pharmaceutiquement 10 acceptables. 12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6caractérisée en ce que le au moins un composé est le composé de formule I dans laquelle X est N, Y est CH3, et Z est CH3, de formule le suivante: HN 15 OH Formule le ou un de ses sels, hydrates, ou esters pharmaceutiquement acceptables. 13. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et 12 caractérisée en ce que le au moins un composé est le sel oxalate du composé de formule I dans laquelle X est N. Y est CH3, et Z est CH3, de formule If suivante:N+ù OOCCOOH / H HN OH Formule If 14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, 5 caractérisée en ce que le au moins un composé est un ester choisi parmi les composés de formules II-1 à II-4 suivantes: HN HN N----N HNNN H2 N O H2 N N HNN~\-- N Formule II-1 Formule II-2 HN N HN N HNN O O O H2 N Formule II-3H2 N Formule II-4 O 15. Composés de formule Ib suivante : HN N HN/\ -N IH Formule Ib, ou les sels, hydrates, ou esters de ceux-ci. 16. Composés de formule le suivante : HN NI~~ \ HN N OH Formule Ic, ou les sels, hydrates, esters ou isomères de ceux-ci. 17. Composés de formule Id suivante : HN N 1 HN /--N HO OH Formule Id, ou les sels, hydrates, esters, ou isomères de ceux-ci.18 18. Composé de formule le suivante : OH Formule le ou les sels, hydrates, ou esters de celui-ci. 19. Composé de formule If suivante: N OOCCOOH / H HN 10 OH Formule If 20. Composés caractérisés en ce qu'ils ont les formules II-1 à II-4 suivantes :HN N N HN--"--''- HN Formule II-1 Formule II-2 0 n Nl ù N HN/\ N HN O O H2 N Formule II-3 H2 N Formule II-4