Brevet FR2918276A1 — publié le 20090109

L'invention concerne l'utilisation d'un gel de polysaccharide(s) naturel(s) comprenant une composition aqueuse d'un ou plusieurs polysaccharide(s) et d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s) pour la préparation d'une formulation injectable de traitement des dégénérescences articulaires. Une articulation est une jonction permettant de relier deux os et de leur donner une mobilité l'un par rapport à l'autre. Les articulations synoviales sont les articulations les plus nombreuses, notamment au niveau des membres. Dans ces articulations, les os s'unissent via une cavité remplie d'un liquide à la fois visqueux et élastique appelé liquide synovial. Le liquide synovial est responsable du bon fonctionnement et de la protection des articulations. Il est notamment constitué d'un polysaccharide, l'acide hyaluronique, qui confère au liquide synovial des propriétés de viscoélasticité permettant, en fonction des contraintes imposées, une lubrification de l'articulation ou une absorption des chocs. Dans le cas des dégénérescences articulaires comme l'arthrose du genou (dégénérescences dues notamment à des facteurs comme l'obésité, l'hérédité, les traumatismes, ...), le liquide synovial se dégrade (diminution de la concentration et de la masse moléculaire de l'acide hyaluronique) et cette dégradation réduit la capacité du liquide synovial à lubrifier l'articulation et à amortir les chocs. Le traitement par viscosupplémentation consiste à injecter un gel dans l'articulation afin de remplacer le liquide synovial déficient. La viscosupplémentation peut atténuer ou enrayer la douleur et contribuer à restaurer la mobilité de l'articulation. Les produits de viscosupplémentation actuellement sur la marché sont des gels qui contiennent de l'acide hyaluronique. Ces gels peuvent être à base d'acide hyaluronique d'origine animale ou non animale et réticulés (cas de Synvisc , Durolane ) ou non réticulés (cas de Synocrom , Arthrum , Lubravisc , Structovial ). Il est bien connu de l'homme de l'art que la rémanence d'un gel à base d'acide hyaluronique est faible dans une articulation (de quelques heures à quelques jours). Cette faible rémanence s'explique en particulier par la dégradation mécanique et radicalaire du gel (les articulations arthrosées sont souvent le siège d'une forte activité radicalaire). Bien que l'efficacité thérapeutique du viscosupplément soit de plus longue durée que son temps de résidence dans l'articulation, la rémanence d'un gel à base d'acide hyaluronique dans l'articulation est un paramètre prépondérant régissant l'efficacité du produit. Ainsi, plus le gel à base d'acide hyaluronique à un temps de résidence important dans l'articulation et plus le traitement par viscosupplémentation (diminution de la douleur, gain de mobilité) est efficace. Les produits actuels de viscosupplémentation utilisés dans le traitement des dégénérescences articulaires ne possèdent que très rarement une rhéologie parfaitement adaptée aux contraintes mécaniques des articulations (Cf. exemple 6) et aucun de ces produits ne contient une molécule capable de limiter la dégradation radicalaire et ainsi d'améliorer la rémanence du gel au sein de l'articulation (et par conséquent l'efficacité thérapeutique du viscosupplément). La présente invention consiste en un viscosupplément à base de polysaccharide(s) et d'alcool(s) qui présente, dans certains cas, une rhéologie proche de celle du liquide synovial et toujours une résistance accrue à la dégradation (radicalaire et thermique) par rapport à un gel à base de polysaccharide(s) classique , c'est-à-dire un gel constitué uniquement de polysaccharide(s) en solution aqueuse (= gel à base de polysaccharide(s) sans adjonction d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s)). Utilisé dans la préparation d'une formulation injectable, il présente de nombreux intérêts dans le traitement des dégénérescences articulaires. On sait d'après la demande française n 06 00138 qu'un gel de polysaccharide naturel comprenant une solution aqueuse de polysaccharide et d'un alcool visqueux biocornpatible présente, après stérilisation, une viscosité accrue qui améliore son action de rajeunissement de la peau après injection (indication : dermatologie). Or, on a trouvé de façon inattendue que pour une composition particulière d'une solution aqueuse d'un ou plusieurs polysaccharide(s) naturel(s) non réticulé(s) ou sensiblement non réticulé(s) et d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s), la stérilisation donne à ce gel des propriétés viscoélastiques tout à fait étonnantes en ce qu'elles reproduisent pratiquement les propriétés viscoélastiques du liquide synovial sain. De plus, il a été montré que la présence d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s) dans un gel à base de polysaccharide(s) réticulé(s) ou non réticulé(s) induit d'une part, une résistance accrue aux radicaux libres et d'autre part, une meilleure résistance à la dégradation lors du vieillissement (stockage du gel) par rapport à un gel de polysaccharide(s) ne contenant pas d'alcool(s) biocompatible(s). Ces propriétés (rhéologie et résistance accrue à la dégradation) confèrent à cette nouvelle formulation un intérêt majeur dans le traitement des dégénérescences articulaires. Par conséquent, selon un aspect de la présente invention, un gel injectable, prêt à l'emploi, constitué d'une solution aqueuse d'un ou plusieurs polysaccharide(s) naturel(s) non réticulé(s) ou sensiblement non réticulé(s) et d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s), possède les intérêts majeurs suivants pour une utilisation dans le traitement des dégénérescences articulaires: les propriétés viscoélastiques du gel stérile sont proches de celle du liquide synovial sain. Ainsi, le gel possède un rôle lubrifiant de l'articulation à faible contrainte de cisaillement et un rôle protecteur de l'articulation (absorption des chocs) à haute fréquence de cisaillement. La rhéologie de ce gel est donc parfaitement adaptée aux contraintes mécaniques s'exerçant dans une articulation. le gel possède une résistance accrue à la dégradation radicalaire (par rapport à un gel à base de polysaccharide(s) sans alcool biocompatible) du fait de l'activité antioxydante de l'alcool biocompatible. Cette forte résistance à la dégradation par les radicaux libres induit une plus grande rémanence du gel dans l'articulation et donc une efficacité accrue du viscosupplément. le gel possède une meilleure résistance à la dégradation lors du vieillissement (dégradation thermique en particulier). Cette résistance accrue permet d'améliorer la conservation des propriétés rhéologiques du gel lors du stockage à température ambiante et ainsi, augmenter la durée de péremption du produit. La publication MAllUCCO D. et al., Rheology of joint fluid in total knee arthroplasty patients ; Journal of Orthopaedic Research, 1157-1163, 2002, indique que la fréquence de croisement entre le module élastique G' et le module visqueux G" est égal à 0,41 0,12 Hz pour un liquide synovial sain (non arthosé) du genou. - En dessous de 0,41 Hz : G" > G', le gel est à dominante visqueuse impliquant une forte lubrification de l'articulation lorsque le patient est au repos. - En dessus de 0,41 Hz : G' > G", le gel est à dominante élastique impliquant une forte absorption des chocs lorsque le patient court ou saute. Selon la présente invention, le gel constitué d'une solution aqueuse d'un ou plusieurs polysaccharide(s) naturel(s) et d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s) possède, après stérilisation, une fréquence fo de croisement entre le module élastique G' et le module visqueux G" proche de 0,41 Hz (cf. exemple 3). Ainsi, le gel possède des propriétés viscoélastiques proches de celle du liquide synovial. De ce fait, selon la présente invention : - Au dessous de fo : G" > G', le gel est à dominante visqueuse avec une lubrification efficace de l'articulation au repos, - Au dessus de fo: G' > G", le gel est à dominante élastique avec une absorption efficace des chocs lorsque le patient court ou saute (protection de l'articulation). Une telle rhéologie est donc appropriée aux contraintes mécaniques des articulations et notamment du genou, de la hanche ou des petites articulations. Par conséquent, elle présente un grand intérêt dans le traitement de l'arthrose par viscosupplémentation du genou ou des autres articulations. Les figures 1-5 montrent les modules visqueux et élastique de gels selon la présente invention tandis que les figures 6-9 montrent ceux de gels du commerce. Selon un autre aspect de la présente invention, le gel constitué d'une solution aqueuse d'un ou plusieurs polysaccharide(s) naturel(s) réticulé(s) ou non réticulé(s) et d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s) possède une forte résistance à la dégradation par les radicaux libres. Cette forte résistance à la dégradation par les radicaux libres est induite par la présence de l'alcool biocompatible, qui par sa propriété antioxydante, capte les radicaux libres et protège ainsi le gel à base de polysaccharide(s) (cf. exemple 4 / exemple 7). Les alcools biocompatibles, sont choisis préférentiellement dans la famille des polyols (par exemple : le glycérol, le propylène glycol, le sorbitol, le mannitol ou encore les oses cycliques tels que le glucose). Le gel de la présente invention est plus résistant à la dégradation par les radicaux libres. Par conséquent, in vivo, il conserve ses propriétés rhéologiques pendant une durée plus longue par rapport à un gel sans alcool biocompatible. Cette plus longue rémanence du gel vis-à-vis des radicaux libres est à corréler avec une meilleure efficacité du viscosupplément injecté dans l'articulation. Par ailleurs, le gel de la présente invention constitué d'une solution aqueuse d'un ou plusieurs polysaccharide(s) naturel(s) réticulé(s) ou non réticulé(s) et d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s) possède une résistance accrue à la dégradation lors du vieillissement du gel (dégradation thermique en particulier). Lors du stockage à température ambiante d'un gel à base de polysaccharide(s), les propriétés rhéologiques sont modifiées du fait de la dégradation principalement thermique du gel. L'ajout d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s) dans le gel permet de ralentir ces modifications rhéologiques en réduisant la dégradation du produit (Cf. exemple 5). L'alcool joue, dans ce cas, un rôle thermostabilisant du gel à base de polysaccharide(s). Cette résistance à la dégradation (dégradation thermique en particulier) permet d'améliorer la conservation des propriétés rhéologiques du gel lors du stockage à température ambiante et ainsi, d'augmenter la durée de péremption du produit. L'invention concerne donc l'utilisation d'un gel de polysaccharide(s) naturel(s) comprenant une solution aqueuse d'un ou plusieurs polysaccharide(s) à 1 û 100 mg/ml et d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s) à 0,0001 - 100 mg/ml. Ce gel est obtenu tout d'abord par préparation d'une solution aqueuse composée d'un ou plusieurs polysaccharide(s) et d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s) puis par stérilisation (par voie aseptique ou à l'autoclave) de cette solution, de préférence à l'autoclave. La formulation injectable ainsi obtenue est utilisée dans le traitement des dégénérescences articulaires. Le polysaccharide d'origine naturelle, seul ou en mélange, est choisi parmi l'acide hyaluronique, la chondroïtine sulfate, le kératane , le kératane sulfate, l'héparine, l'héparane sulfate, la cellulose et ses dérivés, le chitosan, les xanthanes, les alginates, et l'ensemble de leurs sels respectifs. Le polysaccharide d'origine naturelle, seul ou en mélange, est de préférence l'acide hyaluronique ou l'un de ses sels, en particulier le hyaluronate de sodium. Ce polysaccharide est préférentiellement obtenu par biofermentation mais il peut également être d'origine animale. Sa masse moléculaire est de 0,1 à 10x106Da et de préférence de 2 à 3x106Da. La concentration en polysaccharide est comprise entre 1 et 100 mg/ml et 25 préférentiellement entre 10 et 25 mg/ml dans le cas où le polysaccharide est l'acide hyaluronique ou l'un de ses sels. L'alcool biocompatible, seul ou en mélange, est choisi préférentiellement dans la famille des polyols (par exemple : le glycérol, le propylène glycol, le sorbitol, le mannitol ou encore les oses cycliques tels que le glucose). La concentration en alcool biocompatible est comprise entre 0,0001 et 100 mg/ml et préférentiellement entre 15 et 45 mg/mi. La solution aqueuse utilisée est préférentiellement une solution tamponée. La composition de cette solution tampon est choisie afin d'avoir les propriétés physico-chimiques et rhéologiques désirées. Préférentiellement, la solution tampon choisie est une solution tampon phosphate. La formulation selon la présente invention est utilisée par injection dans l'articulation à viscosupplémenter et la dose injectée peut être comprise entre 0,1 et 20 ml en fonction de la nature de l'articulation traitée. Quand le ou les polysaccharide(s) sont non réticulé(s), ou sensiblement non réticulé(s), d'une part, la rhéologie du gel est parfaitement adaptée aux contraintes mécaniques s'exerçant dans une articulation car proche de celle du liquide synovial et d'autre part, la durée d'action du viscosupplément est prolongée du fait de l'action anti-radicalaire de l'alcool biocompatible (induisant une augmentation de la rémanence du gel dans l'articulation). Enfin, la résistance accrue à la dégradation principalement thermique du gel permet une meilleure conservation des propriétés rhéologiques du gel lors du stockage à température ambiante et ainsi une augmentation de la durée de péremption du produit. A titre illustratif, on donne ci-dessous 2 formulations de gels viscoélastiques que l'on peut préparer selon la présente invention : - Gel viscoélastique à base d'acide hyaluronique et de glycérol Solution stérile composée de 20 mg/ml d'acide hyaluronique (MM = 2,5x106 D) et de 20 mg/ml de glycérol dans du tampon phosphate. - Gel viscoélastique à base d'acide hyaluronique et de sorbitol Solution stérile composée de 20 mg/ml d'acide hyaluronique (MM = 2,5x106 D) et de 40 mg/ml de sorbitol dans du tampon phosphate. Exemples : Des exemples sont proposés afin d'illustrer l'invention mais ne sont nullement limitatifs de ladite invention. Exemple 1 : Préparation de formulations selon la présente invention Les formulations selon la présente invention sont préparées : en mélangeant le ou les polysaccharide(s) et le ou les alcool(s) biocompatible(s) dans une solution de tampon phosphate en remplissant le gel dans des seringues en verre et en effectuant une stérilisation de ces seringues à la chaleur humide (T = 121 C) Formulation A : mg d'acide hyaluronique à 2,5x106 D mg de glycérol - Qsp 1 ml de tampon phosphate 15 Formulation B : 20 mg d'acide hyaluronique à 2,5x106 D 20 mg de glycérol - Qsp 1 ml de tampon phosphate Formulation C : 20 - 20 mg d'acide hyaluronique à 2,5x106 D mg de propylène glycol - Qsp 1 ml de tampon phosphate Formulation D : mg d'acide hyaluronique à 2,5x106 D - 15 mg de mannitol - Qsp 1 ml de tampon phosphate 8 5 10 Formulation E : - 20 mg d'acide hyaluronique à 2,5x106 D 40 mg de sorbitol Qsp 1 ml de tampon phosphate Exemple 2 : Propriétés physico-chimiques des formulations de l'exemple 1 pH (à température ambiante) Formulation pH A 7,0 B 7,2 C 7,1 D 7,0 E 7,1 osmolarité Formulation Osmolarité (mOsm/kg) A 335 B 322 C 324 D 315 E 326 Les formulations A, B, C, D et E sont isotoniques et possèdent un pH neutre. Exemple 3 : Propriétés rhéologiques des formulations de l'exemple 1 Les propriétés viscoélastiques des formulations A, B, C, D et E sont caractérisées en mesurant l'évolution du module visqueux (G") et du module élastique (G') en fonction de la fréquence (voir figures 1 à 5). Pour ces 5 formulations, on constate que la fréquence de croisement du module G' et du module G" est proche de celle du liquide synovial sain. Le tableau ci-dessous donne les valeurs de fréquence de croisement fc pour chaque formulation et pour le liquide synovial sain. Formulation Fréquence de croisement (Hz) A 0,50 B 0,32 C 0,32 D 0,32 E 0,33 Liquide synovial sain 0,41 0,12 (publication de Mazzucco D. et al.) Comme décrit dans la présente invention : - Au dessous de fc : G" > G', le gel est à dominante visqueuse avec une lubrification efficace de l'articulation au repos, - Au dessus de fc: G' > G", le gel est à dominante élastique avec une absorption efficace des chocs lorsque le patient court ou saute Exemple 4: Résistance à la dégradation par les radicaux libres des formulations de l'exemple 1 Pour montrer que la présence d'un alcool biocompatible dans un gel à base de polysaccharide(s) permet de réduire la dégradation d'un gel par les radicaux15 libres, on a comparé la résistance à la dégradation par les radicaux libres de gels à base d'acide hyaluronique / alcool biocompatible (formulations de l'exemple 1) et la résistance à la dégradation par les radicaux libres d'un gel à base d'acide hyaluronique sans adjonction d'alcool biocompatible (formulation F de l'exemple 5)). Le test de dégradation est effectué en ajoutant un oxydant dans le gel à tester, en homogénéisant à la spatule pendant 1 minute et en mesurant la valeur du paramètre tanô=G"/G' à 0,7Hz (paramètre caractéristique des propriétés viscoélastiques du gel) à différents temps (t = 0, 15 min et 30 min) On constate que ce paramètre augmente au cours du temps, synonyme d'une déstructuration progressive du gel. Les valeurs mesurées pour les formulations B, C, D,E et F sont données dans le tableau ci-dessous. Formulation Tanb (t = 0 min) Tanb (t = 15 min) A Tanb (%) B 1,10 3,34 + 204 % C 1, 08 3,13 + 205 % D 1,19 4,63 + 289% E 1,08 2,57 + 138% F 1,41 6,56 + 365 % Comme décrit dans la présente invention, chaque formulation B, C, D et E possède une résistance aux radicaux libres plus importante que celle du gel sans alcool biocompatible (formulation F). Par conséquent, les alcools biocompatibles protègent le gel de façon efficace contre la dégradation par les radicaux libres. Exemple 5 : Etude de vieillissement accéléré d'une formulation avec et sans alcool Deux formulations sont mises en vieillissement accéléré à l'étuve à 40 C : formulation B de l'exemple 1: solution à base d'acide hyaluronique et de glycérol formulation F sans adjonction d'alcool (préparée dans des conditions 5 identiques à la formulation B de l'exemple 1) - 20 mg d'acide hyaluronique à 2,5x106 D - Qsp 1 ml de tampon phosphate Une mesure de la viscosité zéro (viscosité à cisaillement nul) et une 10 détermination de la fréquence fc de croisement entre le module élastique G' et le module visqueux G" est effectuée à 3 temps (t = 0, 7 jours, 26 jours) Les résultats obtenus sont données dans le tableau ci-dessous : Nombre de jours Formulation Viscosité Variation de fo (Hz) Variation de fc de vieillissement zéro viscosité par rapport à à 40 C zéropar rapport à to (%) to (%) B 252 / 0,32 / O jour F 192 / 0,39 / Formulation B *ND / 0,32 0 % 7 jours F *ND / 0,39 0 % Formulation B 210 - 17 % 0,37 + 16 % 26 jours _ F 143 -26% 0,50 +28% *ND : non déterminé On constate que lors du vieillissement accéléré, la perte de viscosité zéro et le 15 décalage de la fréquence de croisement fc sont moins importants dans le cas de la formulation B (formulation selon la présente invention) que dans le cas de la formulation classique (formulationF)) Exemple 6: Comparaison de la rhéologie de 4 produits commerciaux de 20 viscosupplémentation et d'une formulation obtenue selon la présente invention Les produits testés sont les suivants : Produit Concentration en acide Masse moléculaire de Méthode de stérilisation hyaluronique (mg/ml) l'acide hyaluronique (Da) P11 10 2,2ù2,7.106 Stérilisation à la vapeur d'eau P22 10 2,2 ù 2,7.106 Stérilisation à la vapeur d'eau P3i 10 1.106 Stérilisation par filtration P44 10 4.106 N D6 Formulation A 15 2,5.106 Stérilisation à la chaleur de l'exemple 1 (+ 20 mg/ml de glycérol) humide 1 P1 : Synocrom (fabricant : CROMA PHARMA) 2 P2 : Structovial (fabricant : CROMA PHARMA) P3 : Fermathron (fabricant: HYALTECH) 4 P4 : Lubravisc (fabricant: BOHUS BIOTECH) 5 ND : non déterminé Pour les 5 gels testés, les figures 6 ù 9 donnent les modules visqueux (G") et élastique (G') en fonction de la fréquence. On constate que seul le gel selon l'exemple 1 présente une fréquence de croisement (0,50 Hz) voisine de celle du liquide synovial sain (0,41 Hz). Le tableau ci-dessous regroupe les valeurs des fréquences de croisement ff pour les produits P1 à P4 et pour la formulation A de l'exemple 1. Produit fc (hz) Formulation A de l'exemple 1 0,50 P1 5,8 P2 5, 0 P3 6,3 P4 0,09 13 On sait d'après la publication de Mazzucco D. et al. (citée plus haut) que la fréquence de croisement du liquide synovial sain (0,41 Hz) est en dessous des fréquences observées dans le genou lors de la marche (0,7 Hz) et de la course (3 Hz). Pour les produits P1 à P3, la fréquence de croisement est bien supérieure à 3 Hz et par conséquent, les produits ne présentent pas une forte élasticité permettant l'absorption des chocs lorsque le genou est en mouvement. Le produit P4 a une très faible fréquence de croisement, le module élastique est supérieur au module visqueux sur toute la gamme de fréquence 0,1 ù 10 Hz. Par conséquent, l'élasticité est importante lorsque le genou est en mouvement mais la lubrification de l'articulation est peu efficace lorsque le patient est au repos. Exemple 7 : Cas d'une formulation à base de polysaccharide réticulé et d'un alcool La formulation est préparée de la manière suivante : préparation d'un gel à base de poysaccharide(s) réticulé avec alcool(s) biocompatible(s). La réticulation du biopolymère est réalisée selon les techniques bien connues de l'homme de l'art (par exemple, US4973683, EP1303542, EP0939086, EP0839159, US4716154, US5676964, US6703444, US4605691, EP0272300, EP1611160, EPO408731). remplissage du gel dans des seringues en verre et stérilisation de ces seringues à l'autoclave (T = 121 C) Soit FI, un gel à base d'acide hyaluronique (HA : MM = 2.4x106 Da, 10 mg/ml) réticulé à 10/0 (masse/masse) à l'aide du BDDE 2g de sorbitol est ajouté dans 10 g de gel A. Le tout est mélangé à l'aide d'une spatule pendant 10 minutes. Soit F2 le gel ainsi obtenu. Le gel F1 et le gel F2 sont remplis dans des seringues en verre puis stérilisés dans la même charge d'autoclave à 121 C. Un test de résistance à la dégradation par les radicaux libres est effectué comme décrit dans l'exemple 4. On constate que le gel à base d'acide hyaluronique réticulé contenant du sorbitol (gel F2) possède une résistance à la dégradation par les radicaux libres supérieure à celle du gel à base d'acide hyaluronique réticulé ne contenant pas de sorbitol (gel F1). Par conséquent, un gel à base de polysaccharide(s) réticulé(s) ou non réticulé(s) contenant un alcool biocompatible possède une résistance à la dégradation par les radicaux libres supérieure à celle d'un gel à base de polysaccharide(s) réticulé(s) ou non réticulé(s) ne contenant pas d'alcool biocompatible. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un gel de polysaccharide(s) d'origine naturelle comprenant une composition aqueuse d'un ou plusieurs polysaccharide(s) à 1 ù 100 mg/ml et d'un ou plusieurs alcool(s) biocompatible(s) à 0,0001 mg/ml , obtenu par préparation d'une solution aqueuse d'un ou plusieurs polysaccharide(s) et d'un ou plusieurs alcool(s) puis par stérilisation de cette solution, pour la préparation d'une formulation injectable utilisée dans le traitement des dégénérescences articulaires . 2. Utilisation d'un gel de polysaccharide(s) selon la revendication 1, dans laquelle le ou les polysaccharides sont non réticulés ou sensiblement non réticulés. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle la concentration en polysaccharide(s) est de 10 à 25 mg/ml et la concentration en alcool(s) est de 15 à 45 mg/ml. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle le polysaccharide, seul ou en mélange, est de l'acide hyaluronique (ou l'un des ses sels) ayant une masse moléculaire de 0,1 à 10x106Da et l'alcool, seul ou en mélange, est le glycérol , le propylène glycol, le sorbitol, le mannitol ou le glucose. 5. Utilisation selon la revendication 4, dans laquelle l'acide hyaluronique a une masse moléculaire de 2 à 3x106Da 6. Utilisation selon l'une ou l'autre des revendications 4 et 5, dans laquelle la concentration en acide hyaluronique est de 20 mg/ml et celle en glycérol est de 20 mg/ml. 7. Utilisation selon l'une ou l'autre des revendications 4 et 5, dans laquelle la concentration en acide hyaluronique est de 20 mg/ml et celle en sorbitol est de 40 mg/ml. 8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 où la stérilisation est effectuée à l'autoclave. 16 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 où la formulation obtenue est injectée à raison de 0,1 à 20 ml